WO2013162016A1 - 新規カルバメート糖脂質およびその用途 - Google Patents

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卓哉 田代
森　謙治
汐崎　正生
克 谷口
渡会　浩志
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独立行政法人理化学研究所
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    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues

Definitions

  • the present invention relates to a novel carbamate glycolipid and use thereof. More specifically, the present invention relates to a 6-carbamate glycolipid having a carbamate at the 6-position of a sugar, a production method thereof, and a pharmaceutical use thereof.
  • the immune system has a skillful monitoring function for distinguishing between normal cells and abnormal cells in the living body and eliminating only abnormal cells. However, if the monitoring function breaks down, abnormal cells that are born due to mutation or the like cannot be excluded, allowing existence and proliferation in vivo. This proliferated abnormal cell mass is a tumor, that is, a cancer.
  • Cancer treatment methods are mainly cancer removal by surgery or use of anticancer drugs.
  • these treatment methods often impose a physical burden on the patient due to the surgical operation or the scars due to the side effects of anticancer drugs.
  • Immunotherapy is a treatment method that attacks cancer cells by increasing the number of immune cells of the patient and activating them. Compared to surgical operation, the physical burden on the patient associated with the treatment is small, and the influence of the treatment on the patient's social life can be minimized. There is also a treatment that uses both immunotherapy and surgery. Since the tumor is removed after immunotherapy, the physical burden on the patient is reduced. In addition, since only a few surgical marks are required, the mental burden is greatly reduced.
  • NK T cells Natural killer (hereinafter referred to as NK) T cells are immune cells belonging to a novel lymphocyte lineage that show different characteristics from other lymphocyte lineages (T, B, NK cells). Since cytotoxic perforin granules are present in NKT cells, they are related to NK cells (Non-patent Document 1). However, since NKT cells express not only NK cell markers but also T cell receptors (TCR), they are a new group of cells that are decisively different (Non-patent Document 2). NKT cells are Th-1 type cytokines (mainly interferon (IFN) - ⁇ ) produced by helper T (Th) -1 type cells that enhance the immunostimulatory effect, and Th-2 type that enhances the immunosuppressive effect.
  • IFN interferon
  • Th-2 helper T
  • Non-patent Document 3 It has the ability to produce both Th-2 type cytokines (mainly interleukin (IL) -4) produced by cells (Non-patent Document 3). That is, since NKT cells can induce both activation and calming of the immune system, it is suggested that NKT cells may play a role in regulating the balance of the immune system (Non-patent Document 4). Therefore, if the function of NKT cells can be controlled, it becomes possible to treat various diseases caused by abnormal balance of the immune system, particularly cancer.
  • Th-2 type cytokines mainly interleukin (IL) -4
  • NKT cells The most noticeable characteristic of NKT cells is that the ⁇ chain of TCR expressed in NKT cells is the same in all individuals among a single species. This indicates that all NKT cells possessed by living organisms of the same species recognize and activate the same substance. This ⁇ chain is V ⁇ 24 in humans and V ⁇ 14 in mice, and has very high homology between both species. Only a very limited number of ⁇ -chains paired with ⁇ -chains are known. For this reason, this TCR is also called “non-variable TCR”. In addition, TCR of T cells recognizes protein fragments, whereas TCR of NKT cells recognizes glycolipids.
  • glycosphingolipids The existence of various types of glycosphingolipids is known in the living body. In general glycosphingolipids in vivo, various sugars or sugar chains are ⁇ -bonded to ceramide and exist in cell membranes of various organs.
  • glycosphingolipids in which the sugar is ⁇ -bonded to ceramide are known to have a strong immunostimulatory action and antitumor activity.
  • ⁇ -Galactosylceramide typified by Agerasfins is a glycolipid isolated from an extract of Agelas mauritianus, a kind of sponge, and has been reported to strongly activate NKT cells (Non-patent Document 5).
  • APC antigen-presenting cells
  • DC dendritic cells
  • MHC major histocompatibility complex
  • NKT cells are activated by recognizing the thus-presented complex of CD1d protein and ⁇ -galactosylceramide using TCR, and initiate various immune responses.
  • KRN7000 (compound 1, ⁇ -GalCer) developed by Kirin Brewery Co., Ltd. shows a very strong antitumor activity, and further, the corresponding ⁇ -form ( ⁇ -GalCer) It has been clarified that no immunostimulatory activity is observed (Patent Document 1, Non-Patent Document 6).
  • KRN7000 is a glycosphingolipid in which galactose is bonded in an ⁇ -configuration to ceramide formed by acylating a sphingosine base with a long-chain fatty acid.
  • NKT cells activated by administration of KRN7000 produce IFN- ⁇ , a cytokine that induces immunostimulatory activity and is useful for cancer treatment, and at the same time, IL-, a cytokine that induces an immunosuppressive action. 4 is produced at the same time.
  • the functions of the two are offset, and there is a problem that a sufficient effect on cancer treatment cannot be obtained.
  • Non-patent Document 8 ⁇ -C-GalCer, a glycolipid that strongly activates mouse NKT cells and preferentially produces IFN- ⁇ .
  • ⁇ -C-GalCer hardly induces cytokine production against human NKT cells, and is considered difficult to apply clinically.
  • compounds that exhibit strong activity in human systems have been developed to solve this problem (Non-patent Document 8).
  • Non-patent Document 9 a crystal structure analysis of human CD1d / KRN7000 / TCR was reported (Non-patent Document 9). Reports have shown that the sugar moiety of KRN7000 is presented towards the TCR on the outside of CD1d, while the ceramide moiety is trapped in the large hydrophobic pocket of CD1d. It was also found that the oxygen atom on the pyran ring and the 6-position hydroxyl group of the sugar of KRN7000 did not form a hydrogen bond with any amino acid residue of CD1d or TCR.
  • RCAI-56 compound 3
  • RCAI-61 compound 4
  • the compound is easier to prepare than RCAI-56, and a large amount of IFN. It was found to induce the production of - ⁇ (Non-patent Document 11).
  • RCAI-56 and RCAI-61 are expected to be clinically applied because they exhibit strong activity in both mouse and human (in vitro) systems.
  • RCAI-56 since the synthesis of RCAI-56 requires multiple steps and the synthesis of RCAI-61 involves complex sugar modifications, it can be more easily prepared, but is equivalent to RCAI-56 and RCAI-61. Development of novel analogs having more immunostimulatory activity is desired. Furthermore, since RCAI-61 has a problem of low solubility in water, improvement in solubility in water is desired.
  • Patent Document 6 and Non-Patent Document 15 disclose a synthetic glycolipid having a carbamate at the 6-position as a KRN7000 derivative. In addition, many analogs in which the 6-position hydroxyl group is converted to an amide bond have been reported (Patent Documents 7 to 9, Non-Patent Documents 16 to 22).
  • the present invention has been made in view of such circumstances, and the problem to be solved is a novel compound effective as an antitumor active agent or a vaccine adjuvant, an intermediate useful for the synthesis of the compound, and a method for producing them. Is to provide. Moreover, it aims at providing the pharmaceutical containing this novel compound.
  • an analog obtained by converting a sugar moiety 6-position hydroxyl group of a glycolipid into a carbamate has a specific immunomodulatory ability, cancer
  • the present inventors have found that it is extremely effective in treating infectious diseases and has a strong adjuvant activity, and has completed the present invention.
  • R 1 and R 2 are the same or different and each represents a hydrogen atom, an alkyl group, a hydroxyl group, an alkoxy group, or an aryl group which may have a substituent, and R 1 and R 2 together with an adjacent nitrogen atom To form a 5-6 membered ring;
  • R 3 represents a hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms;
  • R 4 represents a hydrocarbon group having 1 to 30 carbon atoms, or a salt thereof.
  • R 1 is a hydrogen atom, a C 1 ⁇ 6 alkyl group, a hydroxyl group, C 1 ⁇ 6 alkoxy group, or may have a substituent group C 6 ⁇ 12 aryl group, the above-mentioned [1] described Compound or salt thereof.
  • R 2 is a hydrogen atom, a C 1 ⁇ 6 alkyl group, a hydroxyl group, C 1 ⁇ 6 alkoxy group, or may have a substituent group C 6 ⁇ 12 aryl group, the above-mentioned [1] described Compound or salt thereof.
  • R 3 is C 1 ⁇ 20 alkyl group, C 2 ⁇ 20 alkenyl or C 2 ⁇ 20 alkynyl group, compound or a salt thereof of [1], wherein.
  • R 4 is C 1 ⁇ 30 alkyl group, C 2 ⁇ 30 alkenyl or C 2 ⁇ 30 alkynyl group, compound or a salt thereof of [1], wherein.
  • a medicament comprising the compound or salt thereof according to any one of [1] to [7] above.
  • a selective IFN- ⁇ production inducer comprising the compound or salt thereof according to any one of [1] to [7] above.
  • a selective IFN- ⁇ production inducer comprising the compound according to any one of [1] to [7] above or a salt thereof, wherein the selective IFN- ⁇ production inducer is used in the form of pulsed dendritic cells. Agent to do.
  • a selective IFN- ⁇ production inducer comprising the human dendritic cell according to [11] above. [13] Formula (II)
  • a 1 to A 5 are the same or different and represent a hydroxyl-protecting group
  • R 1 and R 2 are the same or different and each represents a hydrogen atom, an alkyl group, a hydroxyl group, an alkoxy group, or an aryl group which may have a substituent, and R 1 and R 2 together with an adjacent nitrogen atom To form a 5-6 membered ring
  • R 3 represents a hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms), or a salt thereof.
  • R 1 and R 2 are the same or different, a hydrogen atom, C 1 ⁇ 6 alkyl group, a hydroxyl group, C 1 ⁇ 6 alkoxy group, or may have a substituent group C 6 ⁇ 12 aryl group
  • R 3 is C 1 ⁇ 20 alkyl group, C 2 ⁇ 20 alkenyl or C 2 ⁇ 20 alkynyl group, compound or a salt thereof of the above-mentioned [13], wherein.
  • the glycolipid developed by the present invention in which the 6-position hydroxyl group of the sugar moiety is converted to a carbamate bond is very easy to synthesize and induces the production of cytokines that are biased toward IFN- ⁇ rather than KRN7000. Therefore, the present invention can provide a drug effective for inducing cancer treatment and adjuvant action, a method for producing the same, and a use thereof. Furthermore, IFN- ⁇ production can be further enhanced by pulsing dendritic cells with the glycolipid of the present invention and administering the dendritic cells.
  • FIG. 2 is a graph showing changes in IFN- ⁇ concentration in mouse plasma after the indicated time has elapsed after intravenous administration of glycolipid (KRN7000 or RCAI-123) to mice. It is a graph which shows the change of the IL-4 density
  • FIG. 6 shows changes in IL-4 concentration in mouse plasma after the indicated time period after intravenous administration of dendritic cells pulsed with glycolipid (KRN7000 or RCAI-121, RCAI-122, RCAI-131) to mice. It is a graph.
  • IL-4 concentration in mouse plasma after the indicated time after intravenous administration of dendritic cells pulsed with glycolipids KRN7000 or RCAI-132, RCAI-139, RCAI-140, RCAI-141) It is a graph which shows the change of. In the plasma of mice at the indicated time after intravenous administration of dendritic cells pulsed with glycolipids (KRN7000 or RCAI-123, RCAI-124, RCAI-137, RCAI-138, RCAI-140) to mice. It is a graph which shows the change of IL-4 density
  • FIG. 6 shows changes in the concentration of IL-12 in mouse plasma after lapse of the indicated time after intravenous administration of dendritic cells pulsed with glycolipid (KRN7000 or RCAI-121, RCAI-122, RCAI-131) to mice. It is a graph.
  • mice In the plasma of mice at the indicated time after intravenous administration of dendritic cells pulsed with glycolipids (KRN7000 or RCAI-123, RCAI-124, RCAI-137, RCAI-138, RCAI-140) to mice. It is a graph which shows the change of IL-12 density
  • X represents an alkylene group or —NH—.
  • the “alkylene group” is, for example, a linear or branched alkylene group having 1 to 8 carbon atoms, specifically methylene, ethylene, trimethylene, tetramethylene, pentamethylene, hexamethylene, heptamethylene, octamethylene, Examples include propylene, ethylethylene, dimethylmethylene, dimethyltrimethylene and the like.
  • R 1 and R 2 are the same or different and each represents a hydrogen atom, an alkyl group, a hydroxyl group, an alkoxy group, or an aryl group which may have a substituent, and R 1 and R 2 together with an adjacent nitrogen atom To form a 5- to 6-membered ring.
  • Alkyl group for example, C 1 ⁇ 24, more preferably C 1 ⁇ 16, more preferably C 1 ⁇ 10, particularly preferably a straight-chain or branched alkyl group of C 1 ⁇ 6, specifically Are methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl Examples include heptadecyl and octadecyl.
  • the alkyl group for R 1 and R 2 is preferably a C 1-6 alkyl group (eg, methyl, ethyl).
  • Alkoxy group for example, C 1 ⁇ 24, more preferably C 1 ⁇ 16, more preferably C 1 ⁇ 10, particularly preferably a straight-chain or branched alkoxy group C 1 ⁇ 6, specifically Examples include methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, tert-butoxy and the like.
  • the alkoxy group for R 1 and R 2 is preferably a C 1-6 alkoxy group (eg, methoxy).
  • aryl group in the "which may have a substituent aryl group", for example, C 6 - 14, more preferably a monocyclic - tricyclic aryl group C 6 ⁇ 12, specifically Include phenyl, naphthyl, anthryl, phenanthryl, and the like.
  • aryl groups for R 1 and R 2 is a C 6 ⁇ 12 aryl group (e.g., phenyl).
  • aryl group may have include a halogen atom (eg, chlorine atom, fluorine atom, bromine atom, iodine atom); an alkyl group (eg, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, hexyl); halogenoalkyl group (eg, trifluoromethyl); alkoxy group (eg, methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, tert-butoxy) Hydroxyl group; amino group; alkylamino group (eg, methylamino, dimethylamino, ethylamino, diethylamino); cycloalkylamino group and the like.
  • the position and number of substituents are not particularly limited, and one to the maximum number of substituents that can be
  • the 5- to 6-membered ring that R 1 and R 2 may form together with the adjacent nitrogen atom is, for example, a 5- to 6-membered nitrogen-containing saturated heterocyclic ring, specifically, pyrrolidine, Examples include piperidine, morpholine, thiomorpholine, piperazine and the like. Pyrrolidine, piperidine, and morpholine are preferred.
  • R 3 represents a hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms.
  • the "hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms" C 1-20 alkyl group, C 2 ⁇ 20 alkenyl, C 2 ⁇ 20 alkynyl group, C 3 ⁇ 20 cycloalkyl group, C 3 ⁇ 20 cycloalkenyl group is a concept also includes aryl group of C 6 ⁇ 20, linear, may be in any form of branched and cyclic, and may be saturated hydrocarbons unsaturated hydrocarbon group with a group, an unsaturated A bond may be present either in the molecule or at the end.
  • R 3 C 1 ⁇ 20 alkyl group, C 2 ⁇ 20 alkenyl, and C 2 ⁇ 20 alkynyl groups are preferable, C 12 ⁇ 14 alkyl group is more preferable.
  • Specific examples of R 3 include —C 14 H 29 and the like.
  • R 4 represents a hydrocarbon group having 1 to 30 carbon atoms.
  • the "hydrocarbon group having 1 to 30 carbon atoms" C 1-30 alkyl group, C 2 ⁇ 30 alkenyl, C 2 ⁇ 30 alkynyl group, C 3 ⁇ 30 cycloalkyl group, C 3 ⁇ 30 cycloalkenyl group is a concept also includes C 6 ⁇ 30 aryl group, a linear, branched and may be in any form of an annular, also may be an unsaturated hydrocarbon group with a saturated hydrocarbon group, unsaturated bonds May be present either in the molecule or at the end.
  • R 4 C 1 ⁇ 30 alkyl group, C 2 ⁇ 30 alkenyl, and C 2 ⁇ 30 alkynyl group, more preferably from C 10 ⁇ 30 alkyl group, more preferably C 15 ⁇ 25 alkyl group .
  • R 4 include —C 16 H 33 , —C 24 H 49, and the like.
  • the hydrocarbon group represented by R 3 and R 4 may have a substituent.
  • substituents include a halogen atom (preferably a chlorine atom and a fluorine atom); methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, tert-butoxy and the like Alkoxy groups (preferably having 1 to 24 carbon atoms, more preferably 1 to 16 carbon atoms, still more preferably 1 to 10 carbon atoms, particularly preferably 1 to 4 carbon atoms); aryloxy groups such as phenoxy (preferably carbon atoms) 6-14); hydroxyl group; amino group; alkylamino group such as methylamino, dimethylamino, ethylamino and diethylamino; cycloalkylamino group; alkylcarbonylamino group such as acetamide; cycloalkylcarbonylamino group; benzoylamino and the like An
  • an alkyl moiety is examples thereof include an alkyl-carbonyl group which is a linear or branched alkyl group having 1 to 24 carbon atoms; a carbamoyl group; and an electron-withdrawing group such as trifluoromethyl.
  • the position and number of substituents are not particularly limited, and one to the maximum number of substituents that can be substituted may be present at substitutable positions. When one or more substituents are present, they may be the same or different.
  • acyl group refers to, for example, a formyl group; an alkyl-carbonyl group (for example, a linear or branched alkyl group having an alkyl moiety of 1 to 24 carbon atoms (preferably 1 to 12 carbon atoms).
  • alkyl-carbonyl group eg, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, valeryl, pivaloyl, hexanoyl
  • a cycloalkyl-carbonyl group eg, a cycloalkyl moiety is a cycloalkyl group having 3 to 10 carbon atoms
  • Alkenyl-carbonyl group for example, alkenyl-carbonyl group (for example, acryloyl, methacryloyl) in which the alkenyl moiety is a linear or branched alkenyl group having 2 to 12 carbon atoms)
  • aryl- A carbonyl group eg an aryl moiety having An aryl group having to 14, aryl - carbonyl group (e.g., benzoyl, naphthoyl) refers to such.
  • the aryl group in the aryl-carbonyl group represents, for example, a monocyclic to tricyclic aromatic hydrocarbon group, and specific examples thereof include phenyl, naphthyl, anthryl, and phenanthryl.
  • acyl group formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, benzoyl, naphthoyl and the like are preferable, and acetyl and benzoyl are more preferable.
  • alkyl moiety of the alkylamino group and alkylcarbonylamino group examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl.
  • Examples of the cycloalkyl part of the cycloalkylamino group and cycloalkylcarbonylamino group include cycloalkyl groups such as cyclopentyl and cyclohexyl (preferably having 3 to 24 carbon atoms, more preferably 3 to 16 carbon atoms, still more preferably 3 carbon atoms). To 10 and particularly preferably 3 to 6 carbon atoms.
  • Examples of the alkoxy moiety of the alkoxycarbonyl group include those similar to the alkoxy group.
  • substituents are further substituted at a substitutable position among halogen, alkyl group, cycloalkyl group, alkenyl group, alkynyl group, phenyl group, alkoxy group, hydroxyl group, amino group, alkylamino group and cycloalkylamino group. May be substituted with at least one of the above.
  • Examples of the halogen, alkoxy group, alkylamino group and cycloalkylamino group are the same as those described above.
  • alkyl group examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, Examples include alkyl groups such as pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl (preferably having 1 to 24 carbon atoms, more preferably 1 to 16 carbon atoms, still more preferably 1 to 10 carbon atoms, and particularly preferably 1 to 4 carbon atoms).
  • the Examples of the cycloalkyl group include cycloalkyl groups such as cyclopentyl and cyclohexyl (preferably having 3 to 24 carbon atoms, more preferably 3 to 16 carbon atoms, still more preferably 3 to 10 carbon atoms, and particularly preferably 3 to 6 carbon atoms). ) Is exemplified.
  • Examples of the alkenyl group include alkenyl groups such as vinyl, propenyl and butenyl (preferably having 2 to 24 carbon atoms, more preferably 2 to 16 carbon atoms, still more preferably 2 to 10 carbon atoms, and particularly preferably 2 to 4 carbon atoms). ) Is exemplified.
  • alkynyl group examples include alkynyl groups such as ethynyl, propargyl, butynyl and pentynyl (preferably having 2 to 24 carbon atoms, more preferably 2 to 16 carbon atoms, still more preferably 2 to 10 carbon atoms, and particularly preferably 2 carbon atoms).
  • alkynyl groups such as ethynyl, propargyl, butynyl and pentynyl (preferably having 2 to 24 carbon atoms, more preferably 2 to 16 carbon atoms, still more preferably 2 to 10 carbon atoms, and particularly preferably 2 carbon atoms).
  • a 1 to A 5 are the same or different and each represents a hydrogen atom or a hydroxyl-protecting group.
  • the “hydroxyl protecting group” include benzyl, 4-methoxybenzyl (ie, p-methoxybenzyl (PMB)), methoxyethoxymethyl, tetrahydropyranyl, trimethylsilyl (TMS), t-butyldimethylsilyl (TBS or TBDMS), t-butyldiphenylsilyl (TBDPS), t-butoxycarbonyl, trichloroethoxycarbonyl, acetyl, pivaloyl and the like.
  • ⁇ -isomer is adopted among stereoisomers derived from the cyclic structure of sugar (galactopyranose).
  • compound (I) and compound (II) have a stereoisomer derived from a structure other than the sugar cyclic structure (for example, an asymmetric carbon other than the sugar cyclic structure)
  • both isomers are It is included in the present invention and may be a mixture (including a racemate) of any ratio of two or more isomers.
  • two or more optical isomers may be used.
  • the asymmetric carbon to which —NHC ( ⁇ O) X—R 4 is bonded is preferably S configuration, and the asymmetric carbon to which OH is bonded adjacent to the asymmetric carbon to which —NHC ( ⁇ O) X—R 4 is bonded is R Arrangement is preferred.
  • the asymmetric carbon to which R 3 is bonded is preferably R configuration.
  • Compound (II) includes optical isomers derived from asymmetric carbon other than the sugar ring structure. In the present invention, two or more kinds of optical isomers may be used. It may be a mixture (including a racemate) of any ratio of the optically active isomers.
  • the asymmetric carbon to which N 3 is bonded is preferably S configuration.
  • the asymmetric carbon to which —OA 4 is bonded is preferably in the R configuration.
  • the asymmetric carbon to which —OA 5 is bonded is preferably R configuration.
  • the salt of compound (I) and compound (II) is preferably a pharmaceutically acceptable salt, such as hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, sulfate, nitrate, phosphate, etc.
  • a pharmaceutically acceptable salt such as hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, sulfate, nitrate, phosphate, etc.
  • Inorganic acid salts organic acid salts such as succinate, fumarate, acetate, methanesulfonate and toluenesulfonate
  • alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt
  • alkali such as magnesium salt and calcium salt Earth metal salts
  • ammonium salts such as ammonium salts and alkylammonium salts.
  • Compounds (I) and (II) can be produced according to the method described in the following scheme or a method analogous thereto, but is not limited thereto, and can be appropriately modified as desired. Such modifications include alkylation, acylation, amination, imination, halogenation, reduction, oxidation and the like, and reactions or methods usually used in the art are used. In this case, depending on the type of functional group, it is effective in terms of production technology to replace the functional group with an appropriate protecting group (a group that can be easily converted into the functional group) at the raw material or intermediate stage. There is.
  • A represents a hydroxyl-protecting group
  • L represents a leaving group
  • other symbols have the same meanings as described above.
  • Examples of the hydroxyl-protecting group represented by A include the same as those described above for A 1 to A 5 .
  • Examples of the leaving group represented by L include trichloroacetimidoyloxy, phosphate [-OP (O) (OPh) 2 etc.], halogen (Br, F etc.) and the like.
  • Step 1 is a step of protecting the hydroxyl group at the 6-position of compound A1.
  • compound A1 is reacted with a protecting reagent in an organic solvent in the presence of a base.
  • the base include amino compounds such as pyridine, 2,6-lutidine and triethylamine.
  • the protective reagent an organosilicon reagent is suitable, and for example, tert-butyldimethylsilyl trifluoromethanesulfonate, tert-butyldimethylsilyl chloride and the like can be used.
  • the solvent any solvent that does not inhibit this reaction may be used.
  • the solvent examples include N, N-dimethylformamide (DMF), tetrahydrofuran (THF), hexamethylphosphoric triamide (HMPA). Alternatively, a mixed solvent thereof or the like is used.
  • the amount of the base used is usually 1 to 2 equivalents relative to compound A1.
  • the amount of the protective reagent to be used is generally 1 to 5 equivalents, preferably 1 to 2 equivalents, per hydroxyl group of Compound A1.
  • the amount of the solvent to be used is generally 10 to 50 times volume, preferably 10 to 20 times volume with respect to Compound A1. This step is preferably performed in the presence of a catalyst such as 4- (N, N-dimethylamino) pyridine (DMAP). The amount of catalyst used is sufficient.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 20 ° C. to room temperature, preferably 0 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually 1 to 48 hours, preferably 12 to 24 hours.
  • the reaction solution is concentrated under reduced pressure, and the residue is purified by column chromatography, whereby compound A2 can be obtained in high yield.
  • the raw material compound A1 can be synthesized by a method known in the literature (Carbohydr. Res., 1979, 73, 273).
  • Step 2 is a step in which the hydroxyl group at the 1-position of compound A2 is converted to a leaving group L to obtain compound A3.
  • the leaving group is trichloroacetimidoyloxy
  • compound A3 can be obtained by reacting compound A2 with trichloroacetonitrile in the presence of a base.
  • the amount of trichloroacetonitrile to be used is generally 1 to 10 equivalents relative to compound A2.
  • the base include cesium carbonate, diazabicycloundecene (DBU), diazabicyclononene (DBN), and the like.
  • the amount of the base to be used is generally 0.01-2 equivalents relative to compound A2.
  • the solvent examples include dichloromethane, diethyl ether, THF, and the like.
  • the amount of the solvent to be used is generally 0.5-100 ml with respect to 1 mmol of compound A2.
  • the reaction temperature is usually 0 to 50 ° C., preferably room temperature, and the reaction time is usually 30 minutes to 24 hours.
  • Compound A3 can be isolated by a conventional method. For example, the compound A3 is diluted with a solvent, washed with water, a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, a saturated saline solution, etc., dried over anhydrous potassium carbonate, filtered, and concentrated. A3 can be obtained. If necessary, it may be further purified.
  • Step 3 is a step of obtaining compound A5 by reacting compound A3 and compound A4 in the presence of trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate and molecular sieves.
  • the starting compound A4 can be synthesized by a method known in the literature (Eur. J. Org. Chem., 1998, 291).
  • the amount of compound A3 to be used is generally 0.1-10 equivalents relative to compound A4.
  • the amount of trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate used is usually 0.01 to 3 equivalents relative to compound A3.
  • the amount of molecular sieve used is usually 1 to 2 g with respect to 1 mmol of compound A3.
  • Examples of the solvent include dichloromethane, trichloromethane, THF, dioxane, ethyl acetate and the like.
  • the amount of the solvent to be used is generally 1 to 100 ml with respect to 1 mmol of compound A3.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 78 to 60 ° C., and the reaction time is usually 0.1 to 24 hours.
  • Compound A5 can be isolated by a conventional method. For example, after completion of the reaction, compound A5 can be isolated by concentrating the reaction solution under reduced pressure and purifying the residue by column chromatography.
  • Step 4 is a step of deprotecting the hydroxyl-protecting group at the 6-position.
  • the deprotection method is selected from known methods depending on the type of protecting group.
  • the protecting group A is a TBS group
  • compound A5 is reacted with tetrabutylammonium fluoride or an acid in a solvent.
  • the acid strong acids such as trifluoroacetic acid, p-toluenesulfonic acid and hydrochloric acid are preferably used.
  • the amount of the acid used is usually a catalytic amount to 10 equivalents, preferably 1 to 2 equivalents, relative to compound A5.
  • the amount of tetrabutylammonium fluoride used is usually 2 to 20 equivalents relative to compound A5.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 20 to 60 ° C., preferably room temperature, and the reaction time is usually 1 to 24 hours, preferably 2 to 12 hours.
  • the solvent a water-soluble solvent is preferable, and tetrahydrofuran is particularly preferable.
  • the amount of the solvent to be used is generally 1 to 100 times the volume of Compound A5.
  • Step 5 is a step of obtaining compound A9 by reacting compound A6 with compound A8 in the presence of a base.
  • the raw material compound A8 can be synthesized by a method known in the literature (Synthesis, 1993, 103).
  • the amount of compound A8 to be used is generally 1-10 equivalents, preferably 1-5 equivalents, relative to compound A6.
  • Examples of the base include pyridine and triethylamine, and pyridine is preferable.
  • the amount of the base to be used is generally 1 to 10 equivalents relative to compound A6.
  • As the solvent any solvent that does not inhibit this reaction may be used.
  • the solvent examples include N, N-dimethylformamide (DMF), tetrahydrofuran (THF), hexamethylphosphoric triamide (HMPA).
  • a mixed solvent thereof or the like is used.
  • a mixed solvent of THF and DMF is preferred.
  • the amount of the solvent to be used is generally 0.5 to 100 ml with respect to 1 mmol of compound A6.
  • the reaction temperature is ⁇ 20 ° C. to room temperature, preferably 0 to 4 ° C., and the reaction time is usually 30 minutes to 24 hours. After completion of the reaction, the reaction mixture is concentrated under reduced pressure, and the residue is purified by column chromatography to give compound A9 in high yield.
  • Step 6 is a step of obtaining Compound A10 by reacting Compound A9 with Compound A14 in the presence of a base.
  • Compound A10 is included in compound (II).
  • the raw material compound A14 varies depending on R 1 and R 2 , but can be usually synthesized by a method known in the literature or is commercially available.
  • the amount of compound A14 to be used is generally 1-10 equivalents, preferably 2 equivalents, relative to compound A9.
  • Examples of the base include 4- (dimethylamino) pyridine (DMAP), diisopropylethylamine, DABCO and the like.
  • the amount of the base to be used is generally 1 to 10 equivalents, preferably 5 equivalents, relative to compound A9.
  • the solvent examples include N, N-dimethylformamide (DMF), THF, HMPA, or a mixed solvent thereof.
  • the amount of the solvent to be used is generally 0.5 to 50 ml with respect to 1 mmol of compound A9.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 20 to 60 ° C., preferably room temperature, and the reaction time is usually 10 minutes to 24 hours. After completion of the reaction, the reaction mixture is concentrated under reduced pressure, and the residue is purified by column chromatography, whereby compound A10 can be obtained in high yield.
  • Step 7 is a step in which the azide group in compound A10 is reduced and converted to an amino group to obtain compound A11.
  • compound A10 is reacted with a reducing agent and then a base in an organic solvent.
  • the reducing agent include phosphine compounds such as trimethylphosphine, tributylphosphine, and triphenylphosphine. Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction.
  • N, N-dimethylformamide (DMF), tetrahydrofuran (THF), hexamethylphosphoric triamide (HMPA), or these A mixed solvent or the like is used.
  • the amount of the reducing agent to be used is generally 1 to 5 equivalents, preferably 1 to 2 equivalents, per azide group of compound A10.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 20 to 60 ° C., preferably room temperature, and the reaction time is usually 1 to 48 hours, preferably 12 to 24 hours.
  • a basic aqueous solution such as an aqueous sodium hydroxide solution
  • the compound A11 can be isolated and purified by a conventional method. For example, extraction is performed with a solvent such as ethyl acetate. The obtained organic layer is washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, saturated brine, and dried over anhydrous potassium carbonate and the like. After filtration of the solution, the filtrate can be concentrated under reduced pressure and the residue can be purified by column chromatography.
  • Step 8 is a step of acylating the amino group of compound A11 to obtain compound A13.
  • compound A11 is reacted with compound A12 in a solvent, if necessary, in the presence of a base.
  • Compound A12 as a raw material compound can be synthesized by a method known in the literature (Org. Lett., 2006, 8, 3375).
  • the solvent is not particularly limited as long as it does not inhibit this reaction.
  • a halogen solvent for example, dichloromethane, chloroform
  • a base may be added as necessary. Examples of the base include pyridine and triethylamine, and triethylamine is preferable.
  • the amount of the solvent to be used is generally 5 to 100 times, preferably 20 to 50 times, the volume of Compound A11.
  • the amount of the base to be used is generally 10-50 equivalents, preferably 10-20 equivalents, relative to compound A11.
  • the amount of compound A12 to be used is generally 1 to 20 equivalents, preferably 1 to 2 equivalents, relative to compound A11.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 20 ° C. to room temperature, preferably 0 to 4 ° C., and the reaction time is usually 1 to 24 hours, preferably 6 to 12 hours. After completion of the reaction, the compound A13 can be isolated and purified by a conventional method.
  • the reaction solution is diluted with water and extracted with an ether solvent such as diethyl ether or an ester solvent such as ethyl acetate.
  • an ether solvent such as diethyl ether or an ester solvent such as ethyl acetate.
  • the obtained organic layer is washed with a saturated aqueous copper sulfate solution, then washed with water, saturated brine, and the like, and dried over anhydrous magnesium sulfate or the like. After filtration of the solution, the filtrate is concentrated under reduced pressure, and the residue is purified by column chromatography or the like, whereby compound A13 can be obtained.
  • Step 9 is a step of obtaining compound A (compound (I)) by deprotecting hydroxyl-protecting groups A 1 to A 5 of compound A13.
  • the deprotection method is selected from known methods depending on the type of protective group.
  • compound A13 is reacted in a solvent in the presence of hydrogen and a reduction catalyst.
  • the solvent a mixed solvent of an alcohol solvent and a halogen solvent is preferable, and a mixed solvent of ethanol and chloroform is more preferable.
  • the amount of the solvent to be used is generally 10 to 100 times volume, preferably 10 to 50 times volume, of Compound A13.
  • the reduction catalyst examples include palladium hydroxide, palladium hydroxide-activated carbon, platinum oxide, Raney nickel and the like.
  • the amount of the reduction catalyst used is usually a sufficient amount for the compound A13.
  • the reaction time is usually 1 to 24 hours, preferably 12 to 24 hours.
  • the reaction temperature is 0 ° C. to room temperature, preferably room temperature. After completion of the reaction, the reaction solution is filtered, the filtrate is concentrated under reduced pressure, and the residue is purified by column chromatography, whereby the target compound A can be obtained in good yield.
  • Step 10 is a step of obtaining a compound G1 by carbonylation of the hydroxyl group at the 6-position of compound A6 and further bonding with piperidine. Specifically, compound A6 is reacted with a carbonylating reagent in a solvent and reacted with piperidine after the reaction.
  • a carbonylating reagent for example, phosgene, or a dimer, trimer, chlorocarbonate, or the like thereof is used.
  • the solvent is not particularly limited as long as it does not inhibit this reaction.
  • a halogen solvent for example, methylene chloride, dichloromethane, chloroform
  • a base may be added as necessary.
  • Examples of the base include pyridine and triethylamine, and pyridine is preferable.
  • the amount of the solvent to be used is generally 5 to 100 times, preferably 20 to 50 times, the volume of Compound A6.
  • the amount of the base to be used is generally 1-50 equivalents, preferably 2-20 equivalents, relative to compound A6.
  • the reaction temperature is usually 0 to 50 ° C., preferably room temperature, and the reaction time is usually 30 minutes to 24 hours.
  • Compound G1 can be isolated by a conventional method. For example, after completion of the reaction, compound G1 can be isolated by concentrating the reaction solution under reduced pressure and purifying the residue by column chromatography.
  • Step 11 is a step of converting compound G1 to compound G.
  • Compound G is included in compound (I). This step is carried out in the same manner as in Steps 7 to 9, except that the starting compound is compound G1 instead of compound A10.
  • Scheme 4
  • Step 12 is a step of obtaining compound N2 by carbamoylamination of the amino group of compound A11.
  • compound A11 is reacted with compound N1 in a solvent, if necessary, in the presence of a base.
  • the raw material compound N1 can be synthesized by a known method or can be obtained commercially.
  • the solvent is not particularly limited as long as it does not inhibit this reaction.
  • a halogen solvent for example, dichloromethane, chloroform
  • a base may be added as necessary. Examples of the base include pyridine and triethylamine.
  • the amount of the solvent to be used is generally 5 to 100 times, preferably 20 to 50 times, the volume of Compound A11.
  • the amount of the base to be used is generally 10-50 equivalents, preferably 10-20 equivalents, relative to compound A11.
  • the amount of compound N1 to be used is generally 1-20 equivalents, preferably 1-10 equivalents, relative to compound A11.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 20 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually 1 to 24 hours.
  • the compound N2 can be isolated and purified by a conventional method. For example, the reaction solution is diluted with water and extracted with an ether solvent such as diethyl ether or an ester solvent such as ethyl acetate.
  • the obtained organic layer is washed with a saturated aqueous copper sulfate solution, then washed with water, saturated brine, and the like, and dried over anhydrous magnesium sulfate or the like. After filtering the solution, the filtrate is concentrated under reduced pressure, and the residue is purified by column chromatography or the like to obtain compound N2.
  • Step 13 is a step of converting Compound N2 to Compound N.
  • Compound N is included in compound (I). This step is carried out in the same manner as in Step 9, except that the starting compound is compound N2 instead of compound A13.
  • NKT cells are activated to selectively and preferentially induce IFN- ⁇ production. It becomes possible to do.
  • the increase in production of IL-4 is suppressed, so that it is possible to prevent or treat cancer or infectious diseases without aggravating the disease state.
  • the carbamate group of the glycolipid of the present invention is less metabolized than the amide group, and can activate NKT cells for a long time and strongly.
  • NKT cells can be strongly activated even with a small amount of administration, and the production amount of IFN- ⁇ can be increased.
  • a more powerful IFN- ⁇ production-inducing action can be obtained by pulsing the carbamate glycolipid of the present invention to human dendritic cells and administering the dendritic cells to a subject.
  • the human dendritic cell used here is not particularly limited as long as it is a human-derived dendritic cell (hDC) that can activate NKT cells via the carbamate glycolipid of the present invention, and myeloid dendritic cells ( DC1) and lymphoid dendritic cells (DC2) may be used, but DC1 is preferred.
  • hDC may be prepared by any method known per se, and can be isolated from human epidermis, T cell region of lymphoid tissue, peripheral non-lymphoid tissue, imported lymph, dermis, etc. Monocytes, myeloid cells, and the like can be separated from human peripheral blood and the like by density gradient centrifugation and cultured in the presence of GM-CSF and IL-4 for about 7 to about 10 days.
  • the hDC pulse by the carbamate glycolipid of the present invention may be performed by a well-known and conventional technique.
  • a medium containing the carbamate glycolipid of the present invention at a concentration of about 100 to about 200 ng / ml for example, RPMI-1640 medium, etc.
  • culturing hDC for about 12 to about 48 hours.
  • the pulse may be performed by adding the glycolipid of the present invention to the medium in the process of culturing and maturing the immature hDC in the presence of GM-CSF and IL-4.
  • the presence or absence of NKT cells and the degree thereof can be measured by any method known per se.
  • the activation of NKT cells is evaluated using the amount of cytokine produced by activated NKT cells as an index. can do.
  • Cytokines produced by activated NKT cells include IFN- ⁇ , IL-4, GM-CSF, IL-10 and the like.
  • the glycolipid of the present invention selectively induces the production of IFN- ⁇ . .
  • the production of cytokines in NKT cells can be measured using, for example, an antibody against the cytokines.
  • the activation of NKT cells can be evaluated by a conventional immunoassay such as ELISA method, RIA method, FIA method, EIA method using cell culture supernatant.
  • anti-cytokine antibody is used.
  • a method is used in which an NKT cell-containing sample is brought into contact with an immobilized solid phase, and cytokines bound to the solid phase after solid-liquid separation are detected and counted by a sandwich method using a labeled anti-cytokine antibody.
  • the labeling agent include enzymes, fluorescent substances, luminescent substances, dyes, and radioisotopes.
  • a biotinylated anti-cytokine antibody and (strept) avidin bound with a labeling agent may be used.
  • An assay system using an enzyme such as alkaline phosphatase as a labeling agent is known as ELISPOT for detection of cytokine-producing cells.
  • the disease that can be prevented or treated by the carbamate glycolipid of the present invention is not particularly limited as long as a preventive or therapeutic effect is expected directly or indirectly by increasing production of IFN- ⁇ .
  • Various cancers eg, breast cancer, colon cancer, lung cancer, prostate cancer, esophageal cancer, stomach cancer, liver cancer, biliary tract cancer, spleen cancer, etc.
  • kidney cancer bladder cancer, uterine cancer, testicular cancer, thyroid cancer, pancreatic cancer, brain tumor, ovarian cancer, skin cancer, blood tumor (eg, adult T cell leukemia, chronic myelogenous leukemia, malignant lymphoma, etc.)); various infections Diseases such as viral diseases (eg, hepatitis B virus, hepatitis C virus, viral hepatitis due to hepatitis D virus, herpes syndrome, acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), etc.), bacterial infections (eg, drugs Resistant TB, such as atypical mycobacterial infections), mycoses (e.g., such as candidiasis) and the like.
  • viral diseases eg, hepatitis B virus, hepatitis C virus, viral hepatitis due to hepatitis D virus, herpes syndrome, acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), etc.
  • bacterial infections eg, drugs Resistant TB, such as atypical my
  • the carbamate glycolipid of the present invention can be used in combination with other drugs, for example, existing anticancer drugs, antiviral drugs, antibacterial drugs, antifungal drugs, etc., as long as the medicinal effects are not impaired.
  • the administration time is not limited, and these may be administered simultaneously to the administration subject or may be administered with a time difference.
  • the dose can be appropriately selected based on the clinically used dose.
  • the compounding ratio of the carbamate glycolipid of the present invention and the concomitant drug can be appropriately selected according to the administration subject, administration route, target disease, symptom, combination and the like.
  • Examples of existing anticancer agents include chemotherapeutic agents, hormonal therapeutic agents, and immunotherapeutic agents.
  • chemotherapeutic agents include alkylating agents (eg, cyclophosphamide, ifosfamide, nimustine, ranimustine, carbocon etc.), antimetabolites (eg, methotrexate, 5-fluorouracil, tegafur, carmofur, UFT, doxyfluridine, cytarabine, Enocitabine, mercaptopurine, mercaptopurine riboside, thioguanine, etc.), anticancer antibiotics (eg, mitomycin, adriamycin, daunorubicin, epirubicin, pirarubicin, idarubicin, bleomycin, peomycin, actinomycin, etc.), plant-derived anticancer agents (eg, vincristine) Vinblastine, vindesine, etoposide, camptothec
  • hormone therapy agents include corticosteroids (eg, prednisolone, prednisone, dexamethasone, cortisone acetate, etc.), estrogens (eg, estradiol, ethinylestradiol, phosfestol, chlorotrianicene, etc.), antiestrogens (eg, , Epithiostanol, mepithiostan, tamoxifen, clomiphene, etc.), luteinizing hormone drugs (eg, hydroxyprogesterone caproate, didrogesterone, medroxyprogesterone, norethisterone, norethindrone, etc.), LHRH derivatives (eg, leuprorelin acetate, etc.) It is done.
  • corticosteroids eg, prednisolone, prednisone, dexamethasone, cortisone acetate, etc.
  • estrogens eg, estradiol
  • immunotherapeutic agents include microorganisms or bacterial components (eg, muramyl dipeptide derivatives, picibanil, etc.), polysaccharides having immunopotentiating activity (eg, lentinan, schizophyllan, krestin, etc.), cytokines obtained by genetic engineering techniques ( Examples include interferon, interleukin 2 (IL-2), interleukin 12 (IL-12), tumor necrosis factor (TNF), etc., colony stimulating factors (eg, granulocyte colony stimulating factor, erythropoietin, etc.) .
  • IL-2 interleukin 2
  • IL-12 interleukin 12
  • TNF tumor necrosis factor
  • colony stimulating factors eg, granulocyte colony stimulating factor, erythropoietin, etc.
  • antiviral agents examples include nucleic acid synthesis-inhibiting antiviral agents (eg, acyclovir, ganciclovir, vidarabine, foscarnet, zidovudine, lamivudine, didanosine, etc.), intracellular entry-suppressing antiviral agents (eg, amantadine, zanamivir) , Oseltamivir, etc.), host-type defense-enhanced antiviral drugs (eg, interferon, isoprinosine, etc.).
  • nucleic acid synthesis-inhibiting antiviral agents eg, acyclovir, ganciclovir, vidarabine, foscarnet, zidovudine, lamivudine, didanosine, etc.
  • intracellular entry-suppressing antiviral agents eg, amantadine, zanamivir
  • Oseltamivir Oseltamivir, etc.
  • Antibacterial agents include, for example, penicillin antibiotics (eg, sawacillin, passestosine, yamacillin, vacacill, bixillin, pentrex, etc.), cephem antibiotics (eg, keflex, kefral, cefson, tomilon, cefspan, pansporin, etc.), Macrolide antibiotics (eg, erythrosine, claris, claricid, lurid, josamycin, etc.), tetracycline antibiotics (eg, minomycin, vibramycin, hydramycin, redamycin, etc.), fosfomycin antibiotics (eg, fosmicin, yucosin, etc.) Aminoglycoside antibiotics (eg, kanamycin), new quinolone antibacterial agents (eg: clabit, taravid, baccidal, toxosacin, ozex, etc.).
  • penicillin antibiotics eg, sawacillin, passesto
  • antifungal agents examples include polyene antifungal agents (eg, tricomycin, amphotericin B, nystatin, etc.), imidazole antifungal agents (eg, econazole, miconazole, clotrimazole, etc.), triazole antifungal agents (eg, : Fluconazole, itraconazole, etc.), allylamine antifungal agents (eg, butenafine, terbinafine hydrochloride, etc.), flucytosine (5-FC) antifungal agents (eg, flucytosine, etc.) and the like.
  • polyene antifungal agents eg, tricomycin, amphotericin B, nystatin, etc.
  • imidazole antifungal agents eg, econazole, miconazole, clotrimazole, etc.
  • triazole antifungal agents eg, : Fluconazole, itraconazole, etc.
  • the carbamate glycolipid of the present invention When the carbamate glycolipid of the present invention is administered to humans, it is mixed with itself or a pharmacologically acceptable carrier, excipient, diluent, etc., and orally administered (for example, powder, granule, tablet) , Capsules), parenteral agents (for example, injections), suppositories (for example, rectal suppositories, vaginal suppositories) and the like, and can be safely administered orally or parenterally.
  • pharmacologically acceptable carrier for example, powder, granule, tablet
  • Capsules for example, parenteral agents
  • suppositories for example, rectal suppositories, vaginal suppositories
  • vaginal suppositories vaginal suppositories
  • the injection examples include subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, and infusion.
  • the glycolipid of the present invention is solubilized (for example, ⁇ -cyclodextrins), a dispersant (for example, carboxymethylcellulose, sodium alginate), a preservative (for example, methylparaben, propylparaben, benzyl alcohol, chlorobutanol). ), Isotonic agents (for example, sodium chloride, glycerin, sorbitol, glucose) and the like, and can be made into an aqueous injection according to a conventional method. Moreover, it can also be dissolved, suspended or emulsified in vegetable oils (for example, olive oil, sesame oil, peanut oil, cottonseed oil, corn oil), propylene glycol, etc. to make oily injections.
  • vegetable oils for example, olive oil, sesame oil, peanut oil, cottonseed oil, corn oil
  • Oral administration agents can be added to the carbamate glycolipids of the present invention, for example, excipients (eg, lactose, sucrose, starch), disintegrants (eg, starch, calcium carbonate), binders (eg, starch, gum arabic, carboxy (Methylcellulose, polyvinylpyrrolidone, hydroxypropylcellulose) or lubricant (eg, talc, magnesium stearate, polyethylene glycol) and the like are added as appropriate and compression molded, and then coated with hydroxypropylmethylcellulose as necessary. It can also be manufactured.
  • the suppository can be produced by mixing the carbamate glycolipid of the present invention and a non-irritating excipient (for example, polyethylene glycol, glyceride of higher fatty acid).
  • the dose of the carbamate glycolipid of the present invention varies depending on age, body weight, symptoms, dosage form, administration method, administration period, etc. For example, per patient (adult, body weight about 60 kg), usually 0.1 per day. ⁇ 1 mg / kg, preferably 0.5 to 1 mg / kg, more preferably 0.8 to 1 mg / kg is orally or parenterally administered in 1 to several divided doses.
  • the carbamate glycolipid of the present invention can be pulsed into dendritic cells and the dendritic cells can be administered to a patient. Therefore, the present invention provides a selective IFN- ⁇ production inducer containing dendritic cells pulsed with the carbamate glycolipid of the present invention.
  • the agent can be produced as an oral / parenteral preparation by mixing an effective amount of the hDC pulsed with the carbamate glycolipid of the present invention with a pharmaceutically acceptable carrier according to conventional means.
  • the agent is usually produced as a parenteral preparation such as an injection, a suspension, an infusion.
  • Examples of pharmaceutically acceptable carriers that can be included in the parenteral preparation include isotonic solutions (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.) containing physiological saline, glucose and other adjuvants, and the like.
  • An aqueous liquid for injection can be mentioned.
  • the agent of the present invention includes, for example, a buffer (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer), a soothing agent (eg, benzalkonium chloride, procaine hydrochloride, etc.), a stabilizer (eg, human serum albumin, Polyethylene glycol, etc.), preservatives, antioxidants and the like.
  • hDC pulsed with the carbamate glycolipid of the present invention is suspended in the aqueous solution so as to be about 5 ⁇ 10 6 to about 1 ⁇ 10 7 cells / ml. Just do it. Since the preparation thus obtained is stable and has low toxicity, it can be safely administered to humans.
  • the subject of administration is preferably the patient from whom hDC is derived (that is, autotransplantation), but is not limited to this as long as it is predicted to be compatible with the administered hDC.
  • the method of administration is not particularly limited and can be administered orally or parenterally, but is preferably injection or infusion, intravenous administration, subcutaneous administration, intradermal administration, intramuscular administration, intraperitoneal administration, affected area Direct administration etc. are mentioned.
  • the dose of the agent of the present invention varies depending on the administration subject, target organ, symptom, administration method, etc., but usually in an adult patient (with a body weight of 60 kg), for example, parenteral administration, Conveniently, about 6 ⁇ 10 5 to about 1 ⁇ 10 7 cells as hDC dose are administered about 4 to about 8 times at intervals of about 1 to about 2 weeks.
  • Compound 1 can be synthesized by a method known in the literature (Carbohydr. Res., 1979, 73, 273). To a solution of compound 1 (6.03 g, 13.4 mmol) and triethylamine (9.3 mL, 67 mmol) in N, N-dimethylformamide (120 mL), tert-butyldimethylsilyl chloride (2.21 g, 14.7 mmol) and 4- (N , N-dimethylamino) pyridine (163 mg, 1.33 mmol) was added at 0 ° C. The reaction mixture was stirred at room temperature for 15 hours, water was added, and the mixture was extracted with ethyl acetate.
  • IR (film): ⁇ max 3420 (br m, OH), 1610 (w), 1585 (w), 1495 (m), 1255 (m, t-Bu, Si-Me), 1100 (br s, CO ), 840 (br s), 735 (br s), 700 (s) cm -1 .
  • Compound 4 can be synthesized by a method known in the literature (Eur. J. Org. Chem., 1998, 291). To a suspension of compound 4 (1.51 g, 2.88 mmol), compound 3 (2.6 g) obtained in the above process and molecular sieve (4A, powder, 9.3 g) in anhydrous dichloromethane (50 mL) was added trifluoromethanesulfonic acid. Trimethylsilyl (26 ⁇ L, 0.14 mmol) was added at 40 ° C. (oil bath temperature). The reaction mixture was stirred at 40 ° C. (oil bath temperature) for 15 minutes, then cooled to room temperature and filtered.
  • IR (film): ⁇ max 2100 (s, N 3 ), 1605 (w), 1585 (w), 1495 (m), 1255 (m, t-Bu, Si-Me), 1105 (br s, CO ), 1060 (br s, CO), 840 (br s), 735 (s), 700 (s) cm -1 .
  • IR (film): ⁇ max 3480 (br m, OH), 2100 (s, N 3 ), 1605 (w), 1585 (w), 1500 (m), 1100 (br s, CO), 1060 (br s, CO), 735 (br s), 700 (s) cm -1 .
  • Compound 8 can be synthesized by a method known in the literature (Synthesis, 1993, 103). To a solution of compound 6 (1.05 g, 1.10 mmol) and pyridine (444 ⁇ L, 5.49 mmol) in tetrahydrofuran-N, N-dimethylformamide (1: 1, 40 mL), compound 8 (589 mg, 3.32 mmol) was added at 0 ° C. Added below. The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours, water was added, and the mixture was extracted with ethyl acetate.
  • Compound 12 can be synthesized by a method known in the literature (Org. Lett., 2006, 8, 3375). To a solution of compound 11 (151 mg, 0.151 mmol) and triethylamine (105 ⁇ L, 0.757 mmol) in anhydrous dichloromethane (10 mL) was added a solution of compound 12 (70 mg, 0.17 mmol) in anhydrous dichloromethane (2 mL) at 0 ° C. added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours, water was added, and the mixture was extracted with ethyl acetate.
  • Test Example 1 Carbamate glycolipid biological activity test ⁇ -GalCer (KRN7000), RCAI-123, RCAI-124, RCAI-137, RCAI-138, RCAI-148, RCAI-149, RCAI-121, RCAI-122, A dimethyl sulfoxide (DMSO) solution at a concentration of 1 mg / mL was prepared for each of RCAI-131, RCAI-132, RCAI-139, RCAI-140, RCAI-141, and RCAI-150.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • Phosphate buffer containing 0.5% tween20 (Bio-Rad) is added to the above DMSO solution so that when 200 ⁇ L is administered per mouse into the tail vein, the dose is 100 ⁇ g / kg body weight. (Invitrogen) was diluted 5-fold, and further diluted 20-fold with a phosphate buffer.
  • KRN7000 ⁇ -GalCer
  • FIG. 2 shows the measurement results (average value) and standard deviation (STDEV) of the content of IL-4 in plasma immediately before administration and 3, 6, and 12 hours after administration.
  • the measurement results (average value) and standard deviation (STDEV) of the content of IL-12 in plasma immediately before administration and 3, 6, and 12 hours after administration are shown in FIG. From the above results, RCAI-123 induced the production of IFN- ⁇ to the same extent as ⁇ -GalCer (KRN7000), but induced a smaller amount of IL-4 than ⁇ -GalCer (KRN7000). , It was shown to have cytokine production-inducing activity biased toward IFN- ⁇ . That is, a novel compound has been developed that can induce the production of cytokines biased toward the Th1-type by converting the 6-position hydroxyl group of the sugar moiety of ⁇ -GalCer (KRN7000) into a carbamate bond.
  • Test Example 2 Bioactivity test of dendritic cells pulsed with carbamate glycolipid (preparation of dendritic cells) Bone marrow cells were collected from the femur of C57BL / 6J mice, and hemolyzed with red blood cell lysing buffer (SIGMA), and then mononuclear cells were prepared. Furthermore, Fc ⁇ receptor positive cells were removed by panning using human ⁇ -globulin (SIGMA), and undifferentiated cells were concentrated.
  • SIGMA red blood cell lysing buffer
  • Concentrated undifferentiated mononuclear cells were grown at 37 ° C., 5% CO 2 in RPMI 1640 (10% FBS) medium (Invitrogen) containing GM-CSF (R & D) at a density of 2.7 ⁇ 10 5 / cm 2 and a concentration of 5 ng / mL. The cells were cultured for 5 days under the condition 2 to induce differentiation into cells containing CD11c-positive dendritic cells.
  • the cells were suspended in 400 ⁇ L of RPMI 1640 (10% FBS), 100 ⁇ L of CD11c microbeads (Milltenyi biotech) was added, and incubated at 4 ° C. for 15 minutes. . After washing with MACS buffer, CD11c-positive dendritic cells were collected by positive selection using LS column. The collected dendritic cells are cultured at a density of 3.1 ⁇ 10 5 / cm 2 in an RPMI 1640 (10% FBS) medium containing glycolipid at a concentration of 100 ng / mL for 24 hours under conditions of 37 ° C. and 5% CO 2. The pulsed glycolipid.
  • the glycolipid solution was prepared by first preparing a 1 mg / mL dimethyl sulfoxide (DMSO) solution. This was diluted 5-fold with a phosphate buffer (Invitrogen) containing 0.5% tween 20 (Bio-Rad), and further diluted 2-fold with a phosphate buffer. Dendritic cells pulsed with glycolipids are washed with phosphate buffer, prepared with phosphate buffer to a concentration of 2.5 ⁇ 10 6 cells / mL, and 200 ⁇ L, that is, 5 ⁇ 10 5 cells is added to C57BL / Six mice were injected into the tail vein (3 mice per group).
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • glycolipids carbamates of RCAI-121, RCAI-122, RCAI-123, RCAI-124, RCAI-131, RCAI-132, RCAI-137, RCAI-138, RCAI-139, RCAI-140 and RCAI-141 Glycolipid was used as a control substance ⁇ -GalCer (KRN7000).
  • 80 ⁇ L of blood was collected from the inferior venous plexus immediately before administration and 1, 3, 6, 12, 24, 32, 48, 60, and 72 hours after administration to prepare plasma.
  • the content of IFN- ⁇ in plasma immediately before administration and 1, 3, 6, 12, 24, 32, 48, 60, 72 hours after administration was measured by sandwich ELISA (ENDOGEN).
  • the measurement results (average value) of IFN- ⁇ production and the standard deviation (STDEV) are shown in FIGS.
  • the content of IL-4 in plasma immediately before administration and 1, 3, 6, 12, 24, 32, 48, 60, 72 hours after administration was measured using the Cytometric Bead Array (CBA), one of the ELISA methods. ) System (BD Biosciences).
  • the measurement results (average value) of IL-4 production and the standard deviation (STDEV) are shown in FIGS.
  • the content of IL-12 in plasma immediately before administration and 1, 3, 6, 12, 24, 32, 48, 60, 72 hours after administration was measured with a CBA system (BD Biosciences).
  • the measurement results (average value) of IL-12 production and the standard deviation (STDEV) are shown in FIGS. From the above results, it is possible to selectively induce stronger IFN- ⁇ production by pulsing the carbamate glycolipid of the present invention into dendritic cells and administering the pulsed dendritic cells to a living body.
  • a glycolipid developed by the present invention in which the 6-position hydroxyl group of the sugar moiety is converted to a carbamate bond is very easy to synthesize and induces the production of cytokines that are biased toward IFN- ⁇ rather than KRN7000. Therefore, the present invention can provide a drug effective for inducing cancer treatment and adjuvant action, a method for producing the same, and a use thereof. Furthermore, IFN- ⁇ production can be further enhanced by pulsing dendritic cells with the glycolipid of the present invention and administering the dendritic cells.

Abstract

　本発明は、抗腫瘍活性剤あるいはワクチンアジュバントとして有効な新規化合物及び該化合物の合成に有用な中間体並びにそれらの製造方法の提供、ならびにかかる新規化合物を含有する医薬を提供することを目的とする。　式(Ｉ) （式中、各記号の定義は明細書中に記載の通り）で表されるカルバメート糖脂質、及び該糖脂質をパルスした樹状細胞。

Description

新規カルバメート糖脂質およびその用途
　本発明は、新規カルバメート糖脂質及びその用途に関する。より詳細には、本発明は、糖の６位にカルバメートを有する６－カルバメート糖脂質、その製造方法、及びその医薬用途に関する。
　免疫系には、生体において自己の正常細胞と異常細胞とを区別し、異常細胞のみを排除するための巧みな監視機能が存在する。しかしその監視機能が破綻すると、突然変異等によって生まれる異常細胞を排除することが出来ず、生体内での存在ならびに増殖を許してしまう。この増殖してしまった異常細胞塊が腫瘍、即ち癌である。
　癌の治療法は、外科手術による癌の摘出、あるいは抗癌剤の使用が主である。しかしながらこれらの治療法は患者にとって、摘出手術や抗癌剤の副作用による身体的な、あるいは手術痕による精神的な負担をかけることが少なくない。
　その様な背景の中、免疫療法による治療が注目を集めている。免疫療法は、患者自身の免疫細胞数を増やし、さらに活性化することにより癌細胞を攻撃するという治療法である。外科的手術に比べ、治療に伴う患者への身体的負荷が小さい上、治療に伴う患者の社会生活への影響は最小限に留めることが出来る。また、免疫療法と外科手術を併用する治療法も行われている。免疫療法によって腫瘍を小さくしてから摘出するため、患者への身体的負荷は軽減される。また手術痕もわずかですむため、精神的な負担も大幅に軽減される。
　ナチュラルキラー（以下ＮＫ）Ｔ細胞は、他のリンパ球系列（Ｔ，Ｂ，ＮＫ細胞）と異なる特徴を示す、新規リンパ球系列に属する免疫細胞である。ＮＫＴ細胞内には細胞障害性パーフォリン顆粒が存在することからＮＫ細胞と類縁である（非特許文献１)。しかしＮＫＴ細胞は、ＮＫ細胞マーカーのみならずＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をも発現していることから、決定的に異なる新たな細胞群である（非特許文献２)。ＮＫＴ細胞は、免疫賦活作用を亢進させるヘルパーＴ（Ｔｈ）－１型細胞によって産生されるＴｈ－１型サイトカイン（主にインターフェロン（ＩＦＮ）－γ）と、免疫抑制作用を亢進させるＴｈ－２型細胞によって産生されるＴｈ－２型サイトカイン（主にインターロイキン（ＩＬ）－４）の両方を産生する能力を有している（非特許文献３）。即ちＮＫＴ細胞は免疫系の活性化も沈静化も誘導することができることから、免疫系のバランス調節役を担っている可能性が示唆されている（非特許文献４）。従ってＮＫＴ細胞の働きを制御することができれば、免疫系のバランス異常によって引き起こされる様々な疾患、特に癌を治療することが可能となる。
　ＮＫＴ細胞の特性として最も着目されているのは、ＮＫＴ細胞に発現しているＴＣＲのα鎖が、ある１つの種の間では全個体で同一であるという点である。これは即ち、同種間の生物が持つＮＫＴ細胞は全て同一の物質を認識して活性化されるということを示している。このα鎖はヒトではＶα２４、マウスではＶα１４であり、両種間で非常に高い相同性を持っている。また、α鎖と対をなすβ鎖もごく限られた種類しか知られていない。このため、このＴＣＲは「不可変型ＴＣＲ」とも呼ばれている。また、Ｔ細胞のＴＣＲが蛋白断片を認識するのに対して、ＮＫＴ細胞のＴＣＲは糖脂質を認識することも特徴的である。
　生体内には、様々な種類のスフィンゴ糖脂質の存在が知られている。生体内の一般的なスフィンゴ糖脂質は、様々な糖あるいは糖鎖がセラミドにβ－結合しており、様々な器官の細胞膜中に存在している。
　一方、糖がセラミドにα－結合しているスフィンゴ糖脂質が、強力な免疫賦活作用および抗腫瘍活性を有することが知られている。アゲラスフィン類に代表されるα－ガラクトシルセラミドは、海綿の一種であるAgelas mauritianusの抽出液より単離された糖脂質であり、ＮＫＴ細胞を強く活性化することが報告された（非特許文献５）。α－ガラクトシルセラミドは、樹状細胞（ＤＣ）などに代表される抗原提示細胞（ＡＰＣ）に取り込まれた後、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子に類似したＣＤ１ｄタンパク質によって細胞膜上に提示される。ＮＫＴ細胞は、こうして提示されたＣＤ１ｄタンパク質とα－ガラクトシルセラミドとの複合体を、ＴＣＲを用いて認識することにより活性化され、様々な免疫反応を開始する。
　これまでに様々な類縁体が合成され、その構造と活性との相関関係が調査されてきている。一連の合成類縁体の中ではキリンビール株式会社によって開発されたＫＲＮ７０００（化合物１、α－ＧａｌＣｅｒ）が非常に強い抗腫瘍活性を示すこと、さらには、対応するβ－体（β－ＧａｌＣｅｒ）には免疫賦活活性は見られないことが明らかとなっている（特許文献１、非特許文献６）。なおＫＲＮ７０００は、スフィンゴシン塩基が長鎖脂肪酸によりアシル化されて形成されたセラミドに、ガラクトースがα－配置で結合したスフィンゴ糖脂質である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　近年、このようなＮＫＴ細胞の機能に着目し、ＫＲＮ７０００を有効成分として含有する癌の治療薬が開発されている。しかしながら、ＫＲＮ７０００の投与によって活性化されたＮＫＴ細胞は、癌治療のために有用であり免疫賦活活性を誘導するサイトカインであるＩＦＮ－γを産生すると同時に、免疫抑制作用を誘導するサイトカインであるＩＬ－４も同時に産生してしまう。その結果、両者の働きが相殺されてしまい、癌治療に対する効果が十分に得られないという問題があった。
　辻らのグループは、マウスのＮＫＴ細胞を強力に活性化し、ＩＦＮ－γを優先的に産生させる糖脂質、α－Ｃ－ＧａｌＣｅｒを開発した（化合物２、特許文献２、非特許文献７）。しかしながら、α－Ｃ－ＧａｌＣｅｒはヒトのＮＫＴ細胞に対してはサイトカイン産生を殆ど誘導しないため、臨床応用は難しいと考えられている。近年、この問題を解決すべく、ヒトの系でも強い活性を示す化合物が開発されている（非特許文献８）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
　２００７年、ヒトのＣＤ１ｄ／ＫＲＮ７０００／ＴＣＲの結晶構造解析が報告された（非特許文献９）。報告によると、ＫＲＮ７０００の糖部分はＣＤ１ｄの外側にＴＣＲに向けて提示されており、一方セラミド部分はＣＤ１ｄの大きな疎水性ポケットにはまりこんでいることが明らかとなった。また、ＫＲＮ７０００の糖のピラン環上酸素原子や６位水酸基は、ＣＤ１ｄおよびＴＣＲのいずれのアミノ酸残基とも水素結合を形成していないことがわかった。
　一方、我々は独自に、カルバ糖を有する新規合成糖脂質、ＲＣＡＩ－５６（化合物３）を開発し、当該化合物がＮＫＴ細胞を強力に活性化して多量のＩＦＮ－γの産生を誘導することを見出した（非特許文献１０）。さらに我々は、糖脂質の糖部分の６－位水酸基を修飾した新規合成糖脂質、ＲＣＡＩ－６１（化合物４）を開発し、当該化合物がＲＣＡＩ－５６よりも調製が容易で、かつ多量のＩＦＮ－γの産生を誘導することを見出した（非特許文献１１）。ＲＣＡＩ－５６やＲＣＡＩ－６１はマウスならびにヒト（in vitro）の系に於いても強い活性を示すことから臨床応用が期待されている。
　しかし、ＲＣＡＩ－５６の合成は多段階を要し、ＲＣＡＩ－６１の合成は複雑な糖の修飾を伴うことから、より簡便に調製が可能でありながら、ＲＣＡＩ－５６やＲＣＡＩ－６１と同等あるいはそれ以上の免疫賦活活性を有する新規類縁体の開発が望まれている。さらに、ＲＣＡＩ－６１には水への溶解性が低いという問題点があるので、水への溶解性の改善が望まれている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
　２００６年にＳａｖａｇｅらによって、ＫＲＮ７０００の糖部分の６－位水酸基をアセトアミド基へと変換した糖脂質、ＰＢＳ－５７（化合物５）が開発され、当該化合物はＤＭＳＯへの溶解性が向上している上に、ＫＲＮ７０００よりも強い活性を示す（非特許文献１２）。さらに近年、この化合物が強いアジュバント活性を示すことが報告された（特許文献３～５）。さらに、Ｃａｌｅｎｂｅｒｇｈらによって、ＫＲＮ７０００の糖部分の６－位水酸基をベンズアミドへと変換した糖脂質（化合物６）が開発された（非特許文献１３）。ベンズアミド類縁体はＩＬ－４の産生誘導活性が弱いため、相対的に大きく偏ったＩＦＮ－γの産生を誘導する。ただしいずれの報告においても、６－位をアミド基へと変換した類縁体を合成するためには６位水酸基を爆発性のあるアジド基へと変換する工程を経るため、工業的規模で合成する際には安全性が問題となる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
　糖部分ではなくアシル側鎖を修飾した類縁体も数多く合成され、その活性が調査されている。２０１０年にＷｏｎｇらはアシル側鎖上に芳香環を有する類縁体の開発を報告した（非特許文献１４）。ＣＤ１ｄの疎水性ポケット内部の芳香環を有するアミノ酸残基とのπ－πスタッキング相互作用によってリガンドとＣＤ１ｄとの親和性が高められた糖脂質、７ＤＷ８－５（化合物７）は、ＫＲＮ７０００よりも強いアジュバント活性を誘導することが報告されている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
　特許文献６及び非特許文献１５には、ＫＲＮ７０００誘導体として、６－位にカルバメートを有する合成糖脂質が開示されている。
　他にも、６－位の水酸基をアミド結合に変換した類縁体が数多く報告されている（特許文献７～９、非特許文献１６～２２）。
国際公開第９８／４４９２８号 国際公開第０３／１０５７６９号 国際公開第２０１０／０２３４９８号 国際公開第２０１０／０４０７１０号 米国特許出願公開第２００９／０１６２３８５号明細書 米国特許出願公開第２００９／０２７５４８３号明細書 国際公開第２００８／０８０９２６号 国際公開第２００７／１１８２３４号 国際公開第２００４／０９４４４４号
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 5690-5693 J. Immunol. 1995, 155, 2972-2983 J. Immunol. 1998, 161, 3271-3281 Science, 1997, 278, 1623-1626 Science, 1997, 278, 1626-1629 J. Med. Chem. 1995, 38, 2176-2187 J. Exp. Med. 2003, 198, 1631-1641 Immunology, 2009, 127, 216-225 Nature, 2007, 448, 44-49 Bioorg. Med. Chem. 2009, 17, 6360-6373 Tetrahedron Lett. 2008, 49, 6827-6830 J. Immunol. Method, 2006, 312, 34-39 J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 16468-16469 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2010, 107, 13010-13015 J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 12348-12354 EMBO Journal, 2011, 30, 2294-2305 J. Org. Chem., 2011, 76, 320-323 Immunity 2009, 31, 60-71 Tetrahedron 2009, 65, 6390-6395 Bioorg. Med. Chem. Lett. 2008, 18, 3052-3055 Nature Immunol., 2007, 8, 1105-1113 Org. Lett., 2002, 4, 1267-1270
　本発明はこのような実情に鑑みてなされたものであり、その解決しようとする課題は抗腫瘍活性剤あるいはワクチンアジュバントとして有効な新規化合物及び該化合物の合成に有用な中間体並びにそれらの製造方法を提供することにある。また、かかる新規化合物を含有する医薬を提供することを目的とする。
　発明者らは、上記課題を解決するため研究を重ねた結果、糖脂質の糖部分６－位水酸基をカルバメートへと変換した類縁体が、特異的な免疫調節能を有していること、癌ならびに感染症の治療に極めて有効であること、強いアジュバント活性を有していることを見出し、本発明を完成するに到った。
　即ち、本発明は、以下を提供する。
［１］式(Ｉ)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
（式中、
Ｘはアルキレン基あるいは－ＮＨ－を示し；
Ｒ１及びＲ２は同一又は異なって、水素原子、アルキル基、水酸基、アルコキシ基、又は置換基を有していても良いアリール基を示し、Ｒ１及びＲ２は、隣接する窒素原子と一緒になって５～６員環を形成してもよく；
Ｒ３は炭素数１～２０の炭化水素基を示し；
Ｒ４は炭素数１～３０の炭化水素基を示す）で表される化合物、又はその塩。
［２］Ｘがメチレンあるいは－ＮＨ－である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［３］Ｒ１が水素原子、Ｃ１～６アルキル基、水酸基、Ｃ１～６アルコキシ基、又は置換基を有していても良いＣ６～１２アリール基である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［４］Ｒ２が水素原子、Ｃ１～６アルキル基、水酸基、Ｃ１～６アルコキシ基、又は置換基を有していても良いＣ６～１２アリール基である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［５］Ｒ１及びＲ２が隣接する窒素原子と一緒になって形成してもよい５～６員環が、５～６員の含窒素飽和複素環である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［６］Ｒ３がＣ１～２０アルキル基、Ｃ２～２０アルケニル基又はＣ２～２０アルキニル基である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［７］Ｒ４がＣ１～３０アルキル基、Ｃ２～３０アルケニル基又はＣ２～３０アルキニル基である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［８］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩を含有する、医薬。
［９］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩を含有する、選択的ＩＦＮ－γ産生誘導剤。
［１０］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩を含有する、選択的ＩＦＮ－γ産生誘導剤であって、樹状細胞にパルスした形態で用いることを特徴とする剤。
［１１］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩をパルスしたヒト樹状細胞。
［１２］上記［１１］記載のヒト樹状細胞を含有する、選択的ＩＦＮ－γ産生誘導剤。
［１３］式(ＩＩ)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
（式中、
Ａ１～Ａ５は同一又は異なって、水酸基の保護基を示し； 
Ｒ１及びＲ２は同一又は異なって、水素原子、アルキル基、水酸基、アルコキシ基、又は置換基を有していても良いアリール基を示し、Ｒ１及びＲ２は、隣接する窒素原子と一緒になって５～６員環を形成してもよく；
Ｒ３は炭素数１～２０の炭化水素基を示す）で表される化合物、又はその塩。
［１４］Ｒ１及びＲ２が同一又は異なって、水素原子、Ｃ１～６アルキル基、水酸基、Ｃ１～６アルコキシ基、又は置換基を有していても良いＣ６～１２アリール基であるか、Ｒ１及びＲ２が隣接する窒素原子と一緒になって５～６員の含窒素飽和複素環を形成してもよい、上記［１３］記載の化合物又はその塩。
［１５］Ｒ３がＣ１～２０アルキル基、Ｃ２～２０アルケニル基又はＣ２～２０アルキニル基である、上記［１３］記載の化合物又はその塩。
［１６］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩の有効量を、その投与が必要な対象に投与することを含む、選択的にＩＦＮ－γの産生を誘導する方法。
［１７］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩の有効量を、その投与が必要な対象に投与することを含む、選択的にＩＦＮ－γの産生を誘導する方法であって、当該化合物又はその塩を樹状細胞にパルスする工程を含む方法。
　糖脂質の糖部分の６－位水酸基を疎水性官能基であるアルキルエーテルへと変換した類縁体は、ＫＲＮ７０００よりもＩＦＮ－γに偏ったサイトカインの産生を誘導するが、溶解性が低いことが問題であった。一方で、カルバメート基はアルキル基よりも親水性である。さらに、水酸基からカルバメート基へは容易に変換することができる。アミド基の場合の様に、爆発の恐れのある試薬の使用や官能基を経由することも無い。
　したがって、本発明によって開発された、糖部分の６－位水酸基をカルバメート結合に変換した糖脂質は、合成が非常に容易である上にＫＲＮ７０００よりもＩＦＮ－γに偏ったサイトカインの産生を誘導することができるため、本発明は癌治療ならびにアジュバント作用を誘導する上で有効な薬剤、その製造方法およびその用途を提供することができる。
　さらに本発明の糖脂質を樹状細胞にパルスし、その樹状細胞を投与することにより、ＩＦＮ－γ産生をより増強することができる。
糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１２３）をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＦＮ－γ濃度の変化を示すグラフである。 糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１２３）をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＬ－４濃度の変化を示すグラフである。 糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１２３）をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＬ－１２濃度の変化を示すグラフである。 糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１２１、ＲＣＡＩ－１２２、ＲＣＡＩ－１３１）をパルスした樹状細胞をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＦＮ－γ濃度の変化を示すグラフである。 糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１３２、ＲＣＡＩ－１３９、ＲＣＡＩ－１４０、ＲＣＡＩ－１４１）をパルスした樹状細胞をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＦＮ－γ濃度の変化を示すグラフである。 糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１２３、ＲＣＡＩ－１２４、ＲＣＡＩ－１３７、ＲＣＡＩ－１３８、ＲＣＡＩ－１４０）をパルスした樹状細胞をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＦＮ－γ濃度の変化を示すグラフである。 糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１２１、ＲＣＡＩ－１２２、ＲＣＡＩ－１３１）をパルスした樹状細胞をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＬ－４濃度の変化を示すグラフである。 糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１３２、ＲＣＡＩ－１３９、ＲＣＡＩ－１４０、ＲＣＡＩ－１４１）をパルスした樹状細胞をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＬ－４濃度の変化を示すグラフである。 糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１２３、ＲＣＡＩ－１２４、ＲＣＡＩ－１３７、ＲＣＡＩ－１３８、ＲＣＡＩ－１４０）をパルスした樹状細胞をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＬ－４濃度の変化を示すグラフである。 糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１２１、ＲＣＡＩ－１２２、ＲＣＡＩ－１３１）をパルスした樹状細胞をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＬ－１２濃度の変化を示すグラフである。 糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１３２、ＲＣＡＩ－１３９、ＲＣＡＩ－１４０、ＲＣＡＩ－１４１）をパルスした樹状細胞をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＬ－１２濃度の変化を示すグラフである。 糖脂質（ＫＲＮ７０００又はＲＣＡＩ－１２３、ＲＣＡＩ－１２４、ＲＣＡＩ－１３７、ＲＣＡＩ－１３８、ＲＣＡＩ－１４０）をパルスした樹状細胞をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＬ－１２濃度の変化を示すグラフである。
　以下、本発明をその好適な実施形態に即して詳細に説明する。
　先ず、本明細書において使用する式中の記号の定義を説明する。
　Ｘはアルキレン基あるいは－ＮＨ－を示す。「アルキレン基」は、例えば、炭素数１～８の直鎖又は分岐状のアルキレン基であり、具体的にはメチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、ヘプタメチレン、オクタメチレン、プロピレン、エチルエチレン、ジメチルメチレン、ジメチルトリメチレン等が挙げられる。
　Ｒ１及びＲ２は同一又は異なって、水素原子、アルキル基、水酸基、アルコキシ基、又は置換基を有していても良いアリール基を示し、Ｒ１及びＲ２は、隣接する窒素原子と一緒になって５～６員環を形成してもよい。
　「アルキル基」は、例えば、Ｃ１～２４、より好ましくはＣ１～１６、更に好ましくはＣ１～１０、特に好ましくはＣ１～６の直鎖又は分岐状のアルキル基であり、具体的にはメチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル等が挙げられる。Ｒ１及びＲ２のアルキル基として好ましくはＣ１～６アルキル基（例、メチル、エチル）である。
　「アルコキシ基」は、例えば、Ｃ１～２４、より好ましくはＣ１～１６、更に好ましくはＣ１～１０、特に好ましくはＣ１～６の直鎖又は分岐状のアルコキシ基であり、具体的には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ等が挙げられる。Ｒ１及びＲ２のアルコキシ基として好ましくはＣ１～６アルコキシ基（例、メトキシ）である。
　「置換基を有していても良いアリール基」における「アリール基」とは、例えば、Ｃ６～１４、より好ましくはＣ６～１２の単環～三環性のアリール基であり、具体的には、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリル等が挙げられる。Ｒ１及びＲ２のアリール基として好ましくはＣ６～１２アリール基（例、フェニル）である。該「アリール基」が有していても良い置換基としては、ハロゲン原子（例、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子）；アルキル基（例、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル）；ハロゲノアルキル基（例、トリフルオロメチル）；アルコキシ基（例、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ）；水酸基；アミノ基；アルキルアミノ基（例、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ）；シクロアルキルアミノ基等が挙げられる。置換基の位置及び数は特に限定されず、置換可能な位置に、１個～置換可能な最大数の置換基を有していても良い。
　Ｒ１及びＲ２が、隣接する窒素原子と一緒になって形成してもよい５～６員環は、例えば、５～６員の含窒素飽和複素環であり、具体的には、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、ピペラジン等が挙げられる。好ましくはピロリジン、ピペリジン、及びモルホリンである。
　Ｒ３は炭素数１～２０の炭化水素基を示す。「炭素数１～２０の炭化水素基」とは、Ｃ１～２０アルキル基、Ｃ２～２０アルケニル基、Ｃ２～２０アルキニル基、Ｃ３～２０シクロアルキル基、Ｃ３～２０シクロアルケニル基、Ｃ６～２０のアリール基をも包含する概念であり、直鎖状、分岐状及び環状のいずれの形態であってもよく、また飽和炭化水素基でも不飽和炭化水素基でもよく、不飽和結合を分子内及び末端のいずれに有していても良い。中でも、Ｒ３としては、Ｃ１～２０アルキル基、Ｃ２～２０アルケニル基、及びＣ２～２０アルキニル基が好ましく、Ｃ１２～１４アルキル基が更に好ましい。Ｒ３としては、具体的には、例えば、－Ｃ１４Ｈ２９等が挙げられる。
　Ｒ４は炭素数１～３０の炭化水素基を示す。「炭素数１～３０の炭化水素基」とは、Ｃ１～３０アルキル基、Ｃ２～３０アルケニル基、Ｃ２～３０アルキニル基、Ｃ３～３０シクロアルキル基、Ｃ３～３０シクロアルケニル基、Ｃ６～３０アリール基をも包含する概念であり、直鎖状、分岐状及び環状のいずれの形態であってもよく、また飽和炭化水素基でも不飽和炭化水素基でもよく、不飽和結合を分子内及び末端のいずれに有していても良い。中でも、Ｒ４としては、Ｃ１～３０アルキル基、Ｃ２～３０アルケニル基、及びＣ２～３０アルキニル基が好ましく、Ｃ１０～３０アルキル基が更に好ましく、Ｃ１５～２５アルキル基が更に好ましい。Ｒ４としては、具体的には、例えば、－Ｃ１６Ｈ３３、－Ｃ２４Ｈ４９等が挙げられる。
　Ｒ３及びＲ４で示される炭化水素基は、置換基を有していても良い。Ｒ３及びＲ４で示される炭化水素基が置換基を有する場合、置換基としては、ハロゲン原子（好ましくは塩素原子、フッ素原子）；メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ等のアルコキシ基（好ましくは炭素数１～２４、より好ましくは炭素数１～１６、更に好ましくは炭素数１～１０、特に好ましくは炭素数１～４）；フェノキシ等のアリールオキシ基（好ましくは炭素数６～１４）；水酸基；アミノ基；メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ等のアルキルアミノ基；シクロアルキルアミノ基；アセトアミド等のアルキルカルボニルアミノ基；シクロアルキルカルボニルアミノ基；ベンゾイルアミノ等のアリールカルボニルアミノ基（好ましくは、アリール部分の炭素数が６～１４のアリール基である、アリールカルボニルアミノ基）等の電子供与性基、更にはカルボキシル基；アルコキシカルボニル基；アシル基（アシル基としては後述の通りである。好ましくはアルキル部分が炭素数１～２４の直鎖又は分岐状のアルキル基である、アルキル－カルボニル基）；カルバモイル基；トリフルオロメチル等の電子求引性基が例示される。置換基の位置及び数は特に限定されず、置換可能な位置に、１個～置換可能な最大数の置換基を有していても良い。置換基が１以上存在する場合には、それらは同一であっても異なっていても良い。
　本明細書において「アシル基」とは、例えば、ホルミル基；アルキル－カルボニル基（例えば、アルキル部分が、炭素数１～２４（好ましくは炭素数１～１２）の直鎖若しくは分岐状のアルキル基である、アルキル－カルボニル基（例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ピバロイル、ヘキサノイル））；シクロアルキル－カルボニル基（例えば、シクロアルキル部分が、炭素数３～１０のシクロアルキル基である、シクロアルキル－カルボニル基）；アルケニル－カルボニル基（例えば、アルケニル部分が炭素数２～１２の直鎖若しくは分岐状のアルケニル基である、アルケニル－カルボニル基（例えば、アクリロイル、メタクリロイル））；アリール－カルボニル基（例えば、アリール部分が、炭素数６～１４のアリール基である、アリール－カルボニル基（例えば、ベンゾイル、ナフトイル））等をいう。アリール－カルボニル基におけるアリール基とは、例えば、単環～３環式芳香族炭化水素基を示し、具体的に例えば、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリルが例示される。中でも、アシル基としては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、ナフトイル等が好ましく、アセチル、ベンゾイルがより好ましい。
　上記アルキルアミノ基、アルキルカルボニルアミノ基のアルキル部分としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル等の直鎖又は分岐状のアルキル基（好ましくは炭素数１～２４、より好ましくは炭素数１～１６、更に好ましくは炭素数１～１０、特に好ましくは炭素数１～４）が例示される。
　上記シクロアルキルアミノ基、シクロアルキルカルボニルアミノ基のシクロアルキル部分としては、シクロペンチル、シクロヘキシル等のシクロアルキル基（好ましくは炭素数３～２４、より好ましくは炭素数３～１６、更に好ましくは炭素数３～１０、特に好ましくは炭素数３～６）が例示される。
　上記アルコキシカルボニル基のアルコキシ部分としては上記アルコキシ基と同様のものが例示される。
　上記した置換基は、置換可能な位置に、更に、ハロゲン、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、フェニル基、アルコキシ基、水酸基、アミノ基、アルキルアミノ基及びシクロアルキルアミノ基のうちの少なくとも１種で置換されていても良い。
　該ハロゲン、アルコキシ基、アルキルアミノ基、シクロアルキルアミノ基としては上記と同様のものが例示される。
　該アルキル基としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル等のアルキル基（好ましくは炭素数１～２４、より好ましくは炭素数１～１６、更に好ましくは炭素数１～１０、特に好ましくは炭素数１～４）が例示される。
　該シクロアルキル基としては、シクロペンチル、シクロヘキシル等のシクロアルキル基（好ましくは炭素数３～２４、より好ましくは炭素数３～１６、更に好ましくは炭素数３～１０、特に好ましくは炭素数３～６）が例示される。
　該アルケニル基としては、ビニル、プロペニル、ブテニル等のアルケニル基（好ましくは炭素数２～２４、より好ましくは炭素数２～１６、更に好ましくは炭素数２～１０、特に好ましくは炭素数２～４）が例示される。
　該アルキニル基としては、エチニル、プロパルギル、ブチニル、ペンチニル等のアルキニル基（好ましくは炭素数２～２４、より好ましくは炭素数２～１６、更に好ましくは炭素数２～１０、特に好ましくは炭素数２～４）が例示される。
　Ａ１～Ａ５は、同一又は異なって水素原子又は水酸基の保護基を示す。「水酸基の保護基」としては、例えば、ベンジル、４－メトキシベンジル（即ち、ｐ－メトキシベンジル（ＰＭＢ））、メトキシエトキシメチル、テトラヒドロピラニル、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ又はＴＢＤＭＳ）、ｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔ－ブトキシカルボニル、トリクロロエトキシカルボニル、アセチル、ピバロイル等が挙げられる。
　本発明においては、糖（ガラクトピラノース）の環状構造に由来する立体異性体の中でα－体を採用する。
　化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）が糖の環状構造以外の構造（例えば、糖の環状構造以外の部分の不斉炭素等）に由来する立体異性体を有する場合には、いずれの異性体も本発明に包含され、２種以上の異性体の任意の割合の混合物（ラセミ体を含む）であっても良い。
　特に、化合物（Ｉ）には、糖の環状構造以外の部分の不斉炭素に由来する光学異性体が存在するが、本発明においては、単一の光学活性体であっても、２種以上の光学活性体の任意の割合の混合物（ラセミ体を含む）であっても良い。－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ－Ｒ４が結合する不斉炭素はＳ配置が好ましく、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ－Ｒ４が結合する不斉炭素に隣接しＯＨが結合する不斉炭素はＲ配置が好ましい。Ｒ３が結合する不斉炭素はＲ配置が好ましい。
　また、化合物（ＩＩ）には、糖の環状構造以外の部分の不斉炭素に由来する光学異性体が存在するが、本発明においては、単一の光学活性体であっても、２種以上の光学活性体の任意の割合の混合物（ラセミ体を含む）であっても良い。Ｎ３が結合する不斉炭素はＳ配置が好ましい。－ＯＡ４が結合する不斉炭素は、Ｒ配置が好ましい。－ＯＡ５が結合する不斉炭素はＲ配置が好ましい。
　化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）の塩としては、薬学的に許容され得る塩が好ましく、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩；コハク酸塩、フマル酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩等の有機酸塩；ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩、アルキルアンモニウム塩等のアンモニウム塩等を挙げることができる。
　本発明における好適な化合物（Ｉ）の具体例を表１に示すが、これらに限定されるものではない。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　次に、本発明の化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の製造方法について説明する。
　化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）は下記スキームに記載の方法又はこれに準ずる方法に従って製造することが可能であるが、これらに限定されるものではなく、所望に応じて適宜修飾できる。かかる修飾としては、アルキル化、アシル化、アミノ化、イミノ化、ハロゲン化、還元、酸化等が挙げられ、通常当分野で用いられる反応又は方法が利用される。その際、官能基の種類によっては、当該官能基を原料もしくは中間体の段階で適当な保護基（容易に当該官能基に転化可能な基）に置き換えておくことが製造技術上効果的な場合がある。保護基の化学的特性、その導入の手法、及びその除去は例えばT. Greene and P. Wuts “Protective Groups in Organic Synthesis” (3rded.), John Wiley & Sons NY (1999)に詳述されている。
　原料化合物は、特に述べない限り、市販されているものを容易に入手できるか、あるいは、自体公知の方法又はこれらに準ずる方法に従って製造することができる。
　本発明化合物の合成スキームを以下に示す（詳細な反応は実施例に準じる）。尚、スキーム中、具体的な基、化合物で記載されている場合があるが、代替可能な基、化合物が用いられ得ることは当業者には明らかである。
スキーム１
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
（各式中、Ａは水酸基の保護基を示し、Ｌは脱離基を示す。その他の記号は前述と同義を示す。）
　Ａで示される水酸基の保護基は、Ａ１～Ａ５について前述したものと同様なものが挙げられる。Ｌで示される脱離基としては、例えばトリクロロアセトイミドイルオキシ、リン酸エステル［－ＯＰ（Ｏ）（ＯＰｈ）２など］、ハロゲン（Ｂｒ、Ｆなど）等が挙げられる。
［工程１］
　工程１は、化合物Ａ１の６位の水酸基を保護する工程である。具体的には化合物Ａ１を塩基の存在下、有機溶媒中で保護試薬と反応させる。塩基としてはピリジン、２，６－ルチジン、トリエチルアミン等のアミノ化合物が挙げられる。保護試薬としては、有機ケイ素試薬が好適であり、例えば、トリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド等が使用できる。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよく、溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）、若しくはこれらの混合溶媒等が用いられる。塩基の使用量は、化合物Ａ１に対し、通常１～２当量である。保護試薬の使用量は、化合物Ａ１の水酸基１個当り、通常１～５当量、好ましくは１～２当量である。溶媒の使用量は、化合物Ａ１に対して通常１０～５０倍容量、好ましくは１０～２０倍容量である。本工程では好ましくは、４－（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）等の触媒の存在下で行う。当該触媒の使用量は触媒量で十分である。
　反応温度は通常－２０℃～室温、好ましくは０℃～室温であり、反応時間は通常１～４８時間、好ましくは１２～２４時間である。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製することで化合物Ａ２を高収率で得ることができる。
　原料化合物Ａ１は、文献既知の手法（Carbohydr. Res., 1979, 73, 273）により合成することができる。
［工程２］
　工程２は、化合物Ａ２の１位の水酸基を脱離基Ｌに変換し、化合物Ａ３を得る工程である。例えば脱離基が、トリクロロアセトイミドイルオキシである場合、塩基の存在下、化合物Ａ２にトリクロロアセトニトリルを反応させて、化合物Ａ３を得ることができる。
　トリクロロアセトニトリルの使用量は化合物Ａ２に対し通常１～１０当量である。塩基としては、例えば、炭酸セシウム、ジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）、ジアザビシクロノネン（ＤＢＮ）等が挙げられる。塩基の使用量は、化合物Ａ２に対し、通常０．０１～２当量である。溶媒としては、例えば、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ＴＨＦ等が挙げられる。溶媒の使用量は、化合物Ａ２　１ｍｍｏｌに対し、通常０．５～１００ｍｌである。反応温度は、通常０～５０℃、好ましくは室温であり、反応時間は通常３０分～２４時間である。
　化合物Ａ３は常法によって単離することができ、例えば、溶媒によって希釈し、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水等で洗浄し、無水炭酸カリウム等で乾燥、濾過、濃縮することにより化合物Ａ３を得ることができる。必要により、更に精製しても良い。
［工程３］
　工程３は、化合物Ａ３と化合物Ａ４とを、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル、モレキュラーシーブの存在下、反応させて化合物Ａ５を得る工程である。原料化合物Ａ４は、文献既知の手法（Eur. J. Org. Chem., 1998, 291）により合成することができる。
　化合物Ａ３の使用量は、化合物Ａ４に対して、通常０．１～１０当量である。トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルの使用量は、化合物Ａ３に対して、通常０．０１～３当量である。モレキュラーシーブの使用量は、化合物Ａ３　１ｍｍｏｌに対して、通常１～２ｇである。溶媒としては、例えば、ジクロロメタン、トリクロロメタン、ＴＨＦ、ジオキサン、酢酸エチル等が挙げられる。溶媒の使用量は、化合物Ａ３　１ｍｍｏｌに対して、通常１～１００ｍｌである。反応温度は、通常－７８～６０℃、反応時間は、通常０．１～２４時間である。
　化合物Ａ５は、常法によって単離することができ、例えば、反応終了後、反応液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製することで化合物Ａ５を単離することができる。
［工程４］
　工程４は、６位の水酸基の保護基を脱保護する工程である。脱保護方法は、保護基の種類により公知の方法から選択されるが、例えば保護基ＡがＴＢＳ基の場合は、溶媒中で化合物Ａ５をテトラブチルアンモニウムフルオリドまたは酸と反応させる。
　酸としては、トリフルオロ酢酸、ｐ－トルエンスルホン酸、塩酸等の強酸が好適に使用される。酸の使用量は、化合物Ａ５に対して通常触媒量～１０当量、好ましくは１～２当量である。
　テトラブチルアンモニウムフルオリドの使用量は、化合物Ａ５に対して通常２当量～２０当量である。
　反応温度は通常－２０～６０℃、好ましくは室温であり、反応時間は通常１～２４時間、好ましくは２～１２時間である。
　溶媒としては水溶性溶媒が好ましく、テトラヒドロフランが特に好ましい。溶媒の使用量は、化合物Ａ５に対して通常１～１００倍容量である。
　反応終了後、極性の異なる溶媒を用いたカラムクロマトグラフィーによりα－体である化合物Ａ６及びβ－体である化合物Ａ７へと分離精製する。
スキーム２
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
（各式中、各記号は前述と同義を示す。）
［工程５］
　工程５は、塩基の存在下、化合物Ａ６と化合物Ａ８とを反応させて化合物Ａ９を得る工程である。原料化合物Ａ８は、文献既知の手法（Synthesis, 1993, 103）により合成することができる。
　化合物Ａ８の使用量は、化合物Ａ６に対して、通常１～１０当量、好ましくは１～５当量である。
　塩基としては、例えば、ピリジン、トリエチルアミン等が挙げられ、ピリジンが好ましい。塩基の使用量は、化合物Ａ６に対し、通常１～１０当量である。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよく、溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）、若しくはこれらの混合溶媒等が用いられる。ＴＨＦとＤＭＦの混合溶媒が好ましい。溶媒の使用量は、化合物Ａ６　１ｍｍｏｌに対し、通常０．５～１００ｍｌである。反応温度は、－２０℃～室温、好ましくは０～４℃であり、反応時間は通常３０分～２４時間である。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製することで化合物Ａ９を高収率で得ることができる。
［工程６］
　工程６は、塩基の存在下、化合物Ａ９と化合物Ａ１４とを反応させて化合物Ａ１０を得る工程である。化合物Ａ１０は化合物（ＩＩ）に包含される。原料化合物Ａ１４は、Ｒ１及びＲ２によって異なるが、通常文献既知の手法により合成することができるか、商業的に入手可能である。
　化合物Ａ１４の使用量は、化合物Ａ９に対して、通常１～１０当量であり、好ましくは２当量である。
　塩基としては、例えば、４－（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＡＢＣＯ等が挙げられる。塩基の使用量は、化合物Ａ９に対して、通常１～１０当量であり、好ましくは５当量である。溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ＴＨＦ、ＨＭＰＡ、若しくはこれらの混合溶媒等が挙げられる。溶媒の使用量は、化合物Ａ９　１ｍｍｏｌに対して、通常０．５～５０ｍｌである。反応温度は、通常－２０～６０℃、好ましくは室温で、反応時間は通常１０分～２４時間である。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製することで化合物Ａ１０を高収率で得ることができる。
［工程７］
　工程７は、化合物Ａ１０中のアジド基を還元してアミノ基へ変換し、化合物Ａ１１を得る工程である。具体的には化合物Ａ１０を、有機溶媒中で還元剤、次いで塩基と反応させる。還元剤としては、トリメチルホスフィン、トリブチルホスフィン、トリフェニルホスフィン等のホスフィン化合物が挙げられる。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよく、例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）、若しくはこれらの混合溶媒等が用いられる。還元剤の使用量は、化合物Ａ１０のアジド基１個当り、通常１～５当量、好ましくは１～２当量である。反応温度は通常－２０～６０℃、好ましくは室温であり、反応時間は通常１～４８時間、好ましくは１２～２４時間である。反応終了後、水酸化ナトリウム水溶液等の塩基性水溶液で処理を行った後、化合物Ａ１１の単離精製は、常法により行うことができる。例えば、酢酸エチル等の溶媒で抽出する。得られた有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水等で洗浄し、無水炭酸カリウム等で乾燥する。溶液をろ過後、ろ液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製することができる。
［工程８］
　工程８は、化合物Ａ１１のアミノ基をアシル化して化合物Ａ１３を得る工程である。具体的には、化合物Ａ１１を溶媒中で、必要により塩基存在下で化合物Ａ１２と反応させる。原料化合物の化合物Ａ１２は文献既知の手法（Org. Lett., 2006, 8, 3375）により合成することができる。
　溶媒としては、本反応を阻害しないものであれば特に限定さないが、例えばハロゲン溶媒（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム）が好適に使用される。
　必要に応じて塩基を添加してもよい。当該塩基としては、ピリジン、トリエチルアミン等が挙げられ、トリエチルアミンが好適である。
　溶媒の使用量は、化合物Ａ１１に対して通常５～１００倍容量、好ましくは２０～５０倍容量である。
　塩基の使用量は、化合物Ａ１１に対して通常１０～５０当量、好ましくは１０～２０当量である。
　化合物Ａ１２の使用量は、化合物Ａ１１に対して通常１～２０当量、好ましくは１～２当量である。
　反応温度は通常－２０℃～室温、好ましくは０～４℃であり、反応時間は通常１～２４時間、好ましくは６～１２時間である。
　反応終了後、化合物Ａ１３の単離精製は、常法により行うことができる。例えば、反応液を水で希釈し、ジエチルエーテル等のエーテル溶媒、酢酸エチル等のエステル溶媒等で抽出する。得られた有機層を、ピリジンを塩基として用いた場合は飽和硫酸銅水溶液で洗浄した後、水、飽和食塩水等で洗浄し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥する。溶液をろ過後、ろ液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー等により精製することにより化合物Ａ１３を得ることができる。
［工程９］
　工程９は、化合物Ａ１３の水酸基の保護基Ａ１～Ａ５を脱保護して化合物Ａ（化合物（Ｉ））を得る工程である。脱保護方法は保護基の種類により公知の方法から選択されるが、例えば、ベンジル基の場合は、化合物Ａ１３を溶媒中で水素及び還元触媒の存在下に反応させる。
　溶媒としては、アルコール溶媒とハロゲン溶媒との混合溶媒が好適であり、より好ましくはエタノールとクロロホルムとの混合溶媒である。溶媒の使用量は、化合物Ａ１３に対して通常１０～１００倍容量、好ましくは１０～５０倍容量である。
　還元触媒としては、水酸化パラジウム、水酸化パラジウム－活性炭、酸化白金、ラネーニッケル等が挙げられる。還元触媒の使用量は、化合物Ａ１３に対して通常触媒量で十分である。
　反応時間は通常１～２４時間、好ましくは１２～２４時間である。反応温度は０℃～室温、好ましくは室温である。
　反応終了後、反応液をろ過し、ろ液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製することにより目的とする化合物Ａを収率よく得ることができる。
スキーム３
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
［工程１０］
　工程１０は、化合物Ａ６の６位の水酸基をカルボニル化し、さらにピペリジンと結合させて化合物Ｇ１を得る工程である。具体的には、化合物Ａ６を溶媒中で、カルボニル化試薬と反応させ、反応後ピペリジンと反応させる。
　カルボニル化試薬としては、例えば、ホスゲン、またはその二量体、三量体、クロル炭酸エステル等が用いられる。
　溶媒としては、本反応を阻害しないものであれば特に限定さないが、例えばハロゲン溶媒（例えば、塩化メチレン、ジクロロメタン、クロロホルム）が好適に使用される。
　必要に応じて塩基を添加してもよい。当該塩基としては、ピリジン、トリエチルアミン等が挙げられ、ピリジンが好適である。
　溶媒の使用量は、化合物Ａ６に対して通常５～１００倍容量、好ましくは２０～５０倍容量である。
　塩基の使用量は、化合物Ａ６に対して通常１～５０当量、好ましくは２～２０当量である。
　反応温度は、通常０～５０℃、好ましくは室温で、反応時間は通常３０分～２４時間である。
　化合物Ｇ１は、常法によって単離することができ、例えば、反応終了後、反応液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製することで化合物Ｇ１を単離することができる。
［工程１１］
　工程１１は化合物Ｇ１を化合物Ｇに変換する工程である。化合物Ｇは化合物（Ｉ）に包含される。
　当該工程は出発化合物を化合物Ａ１０の代わりに化合物Ｇ１とすること以外は、工程７～９と同様にして行う。
スキーム４
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
［工程１２］
　工程１２は、化合物Ａ１１のアミノ基をカルバモイルアミノ化して化合物Ｎ２を得る工程である。具体的には、化合物Ａ１１を溶媒中で、必要により塩基存在下で化合物Ｎ１と反応させる。原料化合物の化合物Ｎ１は既知の手法により合成することができるし、商業的にも入手可能である。
　溶媒としては、本反応を阻害しないものであれば特に限定さないが、例えばハロゲン溶媒（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム）が好適に使用される。
　必要に応じて塩基を添加してもよい。当該塩基としては、ピリジン、トリエチルアミン等が挙げられる。
　溶媒の使用量は、化合物Ａ１１に対して通常５～１００倍容量、好ましくは２０～５０倍容量である。
　塩基の使用量は、化合物Ａ１１に対して通常１０～５０当量、好ましくは１０～２０当量である。
　化合物Ｎ１の使用量は、化合物Ａ１１に対して通常１～２０当量、好ましくは１～１０当量である。
　反応温度は通常－２０℃～室温であり、反応時間は通常１～２４時間である。
　反応終了後、化合物Ｎ２の単離精製は、常法により行うことができる。例えば、反応液を水で希釈し、ジエチルエーテル等のエーテル溶媒、酢酸エチル等のエステル溶媒等で抽出する。得られた有機層を、ピリジンを塩基として用いた場合は飽和硫酸銅水溶液で洗浄した後、水、飽和食塩水等で洗浄し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥する。溶液をろ過後、ろ液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー等により精製することにより化合物Ｎ２を得ることができる。
［工程１３］
　工程１３は化合物Ｎ２を化合物Ｎに変換する工程である。化合物Ｎは化合物（Ｉ）に包含される。
　当該工程は出発化合物を化合物Ａ１３の代わりに化合物Ｎ２とすること以外は、工程９と同様にして行う。
　本発明に係る化合物（Ｉ）又はそれらの塩（以下、「本発明のカルバメート糖脂質」ともいう）を投与することにより、ＮＫＴ細胞を活性化してＩＦＮ－γ産生を選択的、優先的に誘導することが可能となる。しかも従来のα－ガラクトシルセラミドとは異なりＩＬ－４の産生増加が抑制されているので、病状を悪化させることなく癌又は感染症等の予防又は治療が可能になる。本発明の糖脂質が有するカルバメート基はアミド基に比べて代謝されにくく、ＮＫＴ細胞を長時間かつ強力に活性化させることが可能である。さらに、α－ガラクトシルセラミドに比べて、少量の投与でもＮＫＴ細胞を強力に活性化でき、ＩＦＮ－γの産生量を増大させることが可能である。
　本発明のカルバメート糖脂質をヒト樹状細胞にパルスし、該樹状細胞を対象に投与することにより、より強力なＩＦＮ－γ産生誘導作用を得ることができる。ここで使用されるヒト樹状細胞は、本発明のカルバメート糖脂質を介してＮＫＴ細胞を活性化し得るヒト由来の樹状細胞（ｈＤＣ）であれば特に制限はなく、ミエロイド系の樹状細胞（ＤＣ１）、リンパ系の樹状細胞（ＤＣ２）のいずれであってもよいが、好ましくはＤＣ１である。ｈＤＣは自体公知のいかなる方法によって調製されてもよく、ヒトの表皮、リンパ系組織のＴ細胞領域、末梢非リンパ系組織、輸入リンパ、真皮などから分離することもできるが、好ましくは、例えば、ヒト末梢血等から密度勾配遠心法などにより単球、骨髄球などを分離し、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４存在下で約７～約１０日間培養して、調製することができる。
　本発明のカルバメート糖脂質によるｈＤＣのパルスは周知慣用の手法により行えばよく、例えば、本発明のカルバメート糖脂質を約１００～約２００ｎｇ／ｍｌの濃度で含有する培地（例えば、ＲＰＭＩ－１６４０培地等）中で、ｈＤＣを約１２～約４８時間培養することにより実施することができる。当該パルスは、上記未成熟のｈＤＣをＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４存在下で培養・成熟させる過程で、培地に本発明の糖脂質を添加することにより行ってもよい。
　ＮＫＴ細胞の活性化の有無およびその程度は、自体公知のいかなる方法によっても測定することができるが、例えば、活性化したＮＫＴ細胞が産生するサイトカインの量を指標として、ＮＫＴ細胞の活性化を評価することができる。活性化したＮＫＴ細胞が産生するサイトカインとしては、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０等が挙げられるが、本発明の糖脂質は選択的にＩＦＮ－γの産生を誘導する。
　ＮＫＴ細胞におけるサイトカインの産生は、例えば、該サイトカインに対する抗体を用いて測定することができる。例えば、細胞培養上清を用いてＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ法、ＦＩＡ法、ＥＩＡ法などの慣用のイムノアッセイによりＮＫＴ細胞の活性化を評価することもできるが、好ましい一実施態様においては、抗サイトカイン抗体を固定化した固相にＮＫＴ細胞含有試料を接触させ、固液分離後に固相に結合したサイトカインを、標識した抗サイトカイン抗体を用いてサンドイッチ法により検出・計数する方法が用いられる。標識剤としては酵素、蛍光物質、発光物質、色素、放射性同位元素などが挙げられる。ビオチン化した抗サイトカイン抗体と標識剤を結合した（ストレプト）アビジンとを用いてもよい。標識剤としてアルカリフォスファターゼ等の酵素を用いたアッセイ系は、ＥＬＩＳＰＯＴの名で、サイトカイン産生細胞の検出用として知られている。
　本発明のカルバメート糖脂質により予防又は治療可能な疾患としては、ＩＦＮ－γの産生増大によって直接的または間接的に予防又は治療的効果が期待されるものであれば特に限定はなく、例えば、哺乳動物（例えば、マウス、ネコ、ウシ、イヌ、ウマ、ヤギ、サル、ヒト）の各種癌（例えば、乳癌、大腸癌、肺癌、前立腺癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、胆道癌、脾臓癌、腎癌、膀胱癌、子宮癌、精巣癌、甲状腺癌、膵臓癌、脳腫瘍、卵巣癌、皮膚癌、血液腫瘍（例、成人Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、悪性リンパ腫など）など）；各種感染症、例えば、ウイルス性疾患（例、Ｂ型肝炎ウイスル、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスによるウイルス性肝炎、ヘルペス症、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）など）、細菌感染症（例、薬剤耐性結核、非定形抗酸菌感染症など）、真菌症（例、カンジダ症など）等が挙げられる。
　また、本発明のカルバメート糖脂質は、その薬効を損なわない限り、他の薬剤、例えば、既存の抗癌剤、抗ウイルス薬、抗菌剤、抗真菌剤などと併用することができる。この際、投与時期は限定されず、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、本発明のカルバメート糖脂質と併用薬の配合比は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状、組み合わせ等に応じて適宜選択することができる。
　既存の抗癌剤としては、例えば、化学療法剤、ホルモン療法剤、免疫療法剤などが挙げられる。
　化学療法剤としては、例えばアルキル化剤（例、サイクロフォスファミド、イフォスファミド、ニムスチン、ラニムスチン、カルボコン等）、代謝拮抗剤（例、メソトレキセート、５－フルオロウラシル、テガフール、カルモフール、ＵＦＴ、ドキシフルリジン、シタラビン、エノシタビン、メルカプトプリン、メルカプトプリンリボシド、チオグアニン等）、抗癌性抗生物質（例、マイトマイシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、イダルビシン、ブレオマイシン、ペプロマイシン、アクチノマイシン等）、植物由来抗癌剤（例、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、エトポシド、カンプトテシン、イリノテカン等）、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、エストラムスチン等が挙げられる。
　ホルモン療法剤としては、例えば副腎皮質ホルモン薬（例、プレドニゾロン、プレドニゾン、デキサメタゾン、酢酸コルチゾン等）、エストロゲン薬（例、エストラジオール、エチニルエストラジオール、ホスフェストロール、クロロトリアニセン等）、抗エストロゲン薬（例、エピチオスタノール、メピチオスタン、タモキシフェン、クロミフェン等）、黄体ホルモン薬（例、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、ジドロゲステロン、メドロキシプロゲステロン、ノルエチステロン、ノルエチンドロン等）、ＬＨＲＨ誘導体（例、酢酸リュープロレリン等）等が挙げられる。
　免疫療法剤としては、例えば微生物又は細菌成分（例、ムラミルジペプチド誘導体、ピシバニール等）、免疫増強活性のある多糖類（例、レンチナン、シゾフィラン、クレスチン等）、遺伝子工学的手法で得られるサイトカイン（例、インターフェロン、インターロイキン２（ＩＬ－２）、インターロイキン１２（ＩＬ－１２）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）等）、コロニー刺激因子（例、顆粒球コロニー刺激因子、エリスロポエチン等）等が挙げられる。
　抗ウイルス薬としては、例えば、核酸合成阻害型抗ウイルス薬（例：アシクロビル、ガンシクロビル、ビダラビン、ホスカルネット、ジドブジン、ラミブジン、ジダノシン等）、細胞内進入抑制型抗ウイルス薬（例：アマンタジン、ザナミビル、オセルタミビル等）、宿主感染防御能亢進型抗ウイルス薬（例：インターフェロン、イソプリノシン等）等が挙げられる。
　抗菌剤としては、例えば、ペニシリン系抗生物質（例：サワシリン、パセトシン、ヤマシリン、バカシル、ビクシリン、ペントレックス等）、セフェム系抗生物質（例：ケフレックス、ケフラール、セフゾン、トミロン、セフスパン、パンスポリン等）、マクロライド系抗生物質（例：エリスロシン、クラリス、クラリシッド、ルリッド、ジョサマイシン等）、テトラサイクリン系抗生物質（例：ミノマイシン、ビブラマイシン、ヒドラマイシン、レダマイシン等）、ホスホマイシン系抗生物質（例：ホスミシン、ユーコシン等）、アミノグリコシド系抗生物質（例：カナマイシン等）、ニューキノロン系抗菌剤（例：クラビット、タリビッド、バクシダール、トスキサシン、オゼックス等）等が挙げられる。
　抗真菌薬としては、例えば、ポリエン系抗真菌薬（例：トリコマイシン、アムホテリシンＢ、ナイスタチン等）、イミダゾール系抗真菌薬（例：エコナゾール、ミコナゾール、クロトリマゾール等）、トリアゾール系抗真菌薬（例：フルコナゾール、イトラコナゾール等）、アリルアミン系抗真菌薬（例：ブテナフィン、塩酸テルビナフィン等）、フルシトシン（５－ＦＣ）系抗真菌薬（例：フルシトシン等）等が挙げられる。
　本発明のカルバメート糖脂質をヒトに投与する場合、それ自体又はそれを薬理学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤等と混合し、経口投与剤（例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤）、非経口投与剤（例えば、注射剤）、坐剤（例えば、直腸坐剤、膣坐剤）等の医薬組成物として経口的又は非経口的に安全に投与することができる。これらの製剤は、従来公知の方法により製造することができる。
　注射剤としては、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射又は点滴剤等が挙げられる。注射剤は、本発明の糖脂質を可溶化剤（例えば、β－シクロデキストリン類）、分散剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム）、保存剤（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコール、クロロブタノール）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、グリセリン、ソルビトール、ブドウ糖）等とともに常法にしたがって水性注射剤にすることもできる。また、植物油（例えば、オリーブ油、ゴマ油、ラッカセイ油、綿実油、コーン油）、プロピレングリコール等に溶解、懸濁又は乳化して油性注射剤にすることもできる。
　経口投与剤は、本発明のカルバメート糖脂質に、例えば、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、デンプン）、崩壊剤（例えば、デンプン、炭酸カルシウム）、結合剤（例えば、デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース）又は滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール）等を適宜添加して圧縮成形し、次いで必要に応じてヒドロキシプロピルメチルセルロース等のコーティングを施すことにより製造することもできる。坐剤は、本発明のカルバメート糖脂質と、非刺激性の賦形剤（例えば、ポリエチレングリコール、高級脂肪酸のグリセライド）とを混合して製造することができる。
　本発明のカルバメート糖脂質の投与量は、年齢、体重、症状、剤形、投与方法、投与期間などにより異なるが、例えば、患者（成人、体重約６０ｋｇ）一人あたり、通常、１日０．１～１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．５～１ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．８～１ｍｇ／ｋｇを１回から数回に分けて経口又は非経口投与される。
　ＩＦＮ－γ産生を誘導する為に、本発明のカルバメート糖脂質を樹状細胞にパルスし、該樹状細胞を患者に投与することもできる。従って、本願発明は、本発明のカルバメート糖脂質をパルスした樹状細胞を含有する選択的ＩＦＮ－γ産生誘導剤を提供する。
　該剤は、常套手段にしたがって、本発明のカルバメート糖脂質でパルスした有効量の上記ｈＤＣを医薬として許容される担体と混合するなどして、経口／非経口製剤として製造することができる。該剤は、通常は、注射剤、懸濁剤、点滴剤等の非経口製剤として製造される。当該非経口製剤に含まれ得る医薬上許容される担体としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ－ソルビトール、Ｄ－マンニトール、塩化ナトリウムなど）などの注射用の水性液を挙げることができる。本発明の剤は、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤、酸化防止剤などと配合しても良い。該剤を水性懸濁液剤として製剤化する場合、上記水性液に約５×１０６～約１×１０７細胞／ｍｌとなるように、本発明のカルバメート糖脂質でパルスしたｈＤＣを懸濁させればよい。このようにして得られる製剤は、安定で低毒性であるので、ヒトに対して安全に投与することができる。投与対象はｈＤＣの由来する患者本人であること（即ち、自家移植）が好ましいが、投与されるｈＤＣに対して適合性があることが予測されるヒトであれば、これに限定されない。投与方法は特に限定されず、経口又は非経口的に投与することができるが、好ましくは注射もしくは点滴投与であり、静脈内投与、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、患部直接投与などが挙げられる。本発明の剤の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、通常、成人の患者（体重６０ｋｇとして）においては、例えば、非経口投与の場合、１回につきｈＤＣ量として約６×１０５～約１×１０７細胞を、約１～約２週間隔で、約４～約８回投与するのが好都合である。
　以下、本発明を実施例、試験例によって更に具体的に説明するが、本発明は以下に限定されるものではない。
実施例１：ＲＣＡＩ－１２３（化合物Ａに包含される）の合成および精製方法
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
化合物２の合成
　化合物１は文献既知の手法(Carbohydr. Res., 1979, 73, 273)により合成することができる。化合物１(6.03 g, 13.4 mmol)およびトリエチルアミン(9.3 mL, 67 mmol)のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド(120 mL)溶液に、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド(2.21 g, 14.7 mmol)と４－（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）ピリジン(163 mg, 1.33 mmol)を０℃下で加えた。反応混合物を室温下で１５時間撹拌した後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順に洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濾液を減圧濃縮して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(80 g, ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１)により精製し、化合物２(7.04 g, 93%, α－体：β－体＝約３：２の混合物)を無色油状物として得た。
IR (film): νmax = 3420 (br m, OH), 1610 (w), 1585 (w), 1495 (m), 1255 (m, t-Bu, Si-Me), 1100 (br s, C-O), 840 (br s), 735 (br s), 700 (s) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 7.38-7.19 (15H, m), 5.26 (0.6H, dd, J = 4.0, 2.0 Hz, α-1-H), 4.65 (0.4H, t, J = 7.0 Hz, β-1-H), 2.94 (0.4H, d, J = 7.0 Hz, β-OH), 2.86 (0.6H, d, J = 2.0 Hz, α-OH), 0.88 (9H, s, t-Bu), 0.04 (3H, s, SiMe), 0.03 (3H, s, SiMe) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C33H44O6SiNa): 587.2799; Found: 587.2799.
化合物３の合成
　化合物２(2.02 g, 3.58 mmol)のジクロロメタン(50 mL)溶液に、トリクロロアセトニトリル(3.65 mL, 36.1 mmol)と炭酸セシウム(590 mg, 1.81 mmol)を室温下で加えた。反応混合物を室温下で１６時間撹拌した後、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水炭酸カリウムで乾燥した。濾過後、濾液を減圧濃縮して溶媒を留去し、目的とする化合物３(2.6 g, α－体：β－体＝約２：１の混合物)を橙色油状物として得た。この化合物は、これ以上精製せずに次の操作に用いた。
IR (film): νmax = 3340 (w, NH), 1730 (m, C=O), 1670 (s, C=N), 1605 (w), 1590 (w), 1500 (m), 1255 (m, t-Bu, Si-Me), 1105 (br s, C-O), 1060 (br s, C-O), 840 (s), 735 (s), 700 (s) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.61 (0.33H, s, β-NH), 8.51 (0.67H, s, α-NH), 7.38-7.25 (15H, m), 6.51 (0.67H, d, J = 3.5 Hz, α-1-H), 5.75 (0.33H, d, J = 8.0 Hz, β-1-H), 0.87 (3H, s, β-t-Bu), 0.86 (6H, s, α-t-Bu), 0.04 (1H, s, β-SiMe), 0.03 (1H, s, β-SiMe), 0.01 (2H, s, α-SiMe), 0.00 (2H, s, α-SiMe) ppm.
化合物５の合成
　化合物４は文献既知の手法(Eur. J. Org. Chem., 1998, 291)により合成することができる。化合物４(1.51 g, 2.88 mmol)、上記の過程で得られた化合物３(2.6 g)およびモレキュラーシーブ(４Ａ，粉末，9.3 g)の無水ジクロロメタン(50 mL)懸濁液に、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル(26μL, 0.14 mmol)を４０℃（オイルバス温度）下で加えた。反応混合物を４０℃（オイルバス温度）下で１５分間撹拌した後、室温まで冷却し、濾過した。濾過後、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、有機層を無水炭酸カリウムで乾燥した。濾過後、濾液を減圧濃縮して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(50 g, ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１)により精製し、化合物５(2.69 g, 87%, α－体：β－体＝約３：１の混合物)を無色油状物として得た。
IR (film): νmax = 2100 (s, N3), 1605 (w), 1585 (w), 1495 (m), 1255 (m, t-Bu, Si-Me), 1105 (br s, C-O), 1060 (br s, C-O), 840 (br s), 735 (s), 700 (s) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 4.89 (0.75H, d, J = 3.5 Hz, α-1’-H), 4.34 (0.25H, d, J = 7.5 Hz, β-1’-H), 0.88 (3H, t, J = 6.5 Hz, 18-H3), 0.87 (2.25H, s, β-t-Bu), 0.86 (6.75H, s, α-t-Bu), 0.019 (0.75H, s, β-SiMe), 0.016 (0.75H, s, β-SiMe), 0.009 (2.25H, s, α-SiMe), 0.002 (2.25H, s, α-SiMe) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C65H91N3O8SiNa): 1092.6468; found: 1092.6464.
化合物６、７の合成
　上述の過程で得られた化合物５(2.69 g, 2.51 mmol, α－体：β－体＝約３：１の混合物)のテトラヒドロフラン(50 mL)溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオリドのテトラヒドロフラン溶液(1.0 M, 5.0 mL, 5.0 mmol)を室温下で加えた。反応混合物を室温下で３時間撹拌した後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順に洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濾液を減圧濃縮して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(30 g)により精製し、化合物６(α－体，ヘキサン：酢酸エチル＝５：１， 1.67 g, 70%)と化合物７(β－体，ヘキサン：酢酸エチル＝３：１， 612 mg, 25%)をそれぞれ無色油状物として得た。
α－体：nD 24= 1.5171.
[α]D 25= +24.8 (c = 1.00, CHCl3).
IR (film): νmax = 3480 (br m, OH), 2100 (s, N3), 1605 (w), 1585 (w), 1500 (m), 1100 (br s, C-O), 1060 (br s, C-O), 735 (br s), 700 (s) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 7.41-7.20 (25H, m), 4.96 (1H, d, J = 12 Hz), 4.91 (1H, d, J = 3.0 Hz), 4.87 (1H, d, J = 12 Hz), 4.81 (1H, d, J = 12 Hz), 4.75 (1H, d, J = 12 Hz), 4.70 (1H, d, J = 12 Hz), 4.66 (1H, d, J = 12 Hz), 4.63 (1H, d, J = 12 Hz), 4.61 (1H, d, J = 12 Hz), 4.57 (1H, d, J = 12 Hz), 4.50 (1H, d, J = 12 Hz), 4.66 (1H, dd, J = 10, 3.5 Hz), 3.99-3.95 (2H, m), 3.85 (1H, br s), 3.75-3.68 (4H, m), 3.63 (1H, dd, J = 12, 3.5 Hz), 3.64-3.60 (1H, m), 3.40 (1H, ddd, J = 12, 8.5, 5.0 Hz), 1.69-1.60 (2H, m), 1.57-1.50 (2H, m), 1.44-1.34 (1H, m), 1.34-1.21 (22H, m), 0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C59H77N3O8Na): 978.5603; found: 978.5601.
β－体：
nD 24= 1.5177.
[α]D 25= -0.48 (c = 1.02, CHCl3).
IR (film): νmax = 3460 (br m, OH), 2100 (s, N3), 1605 (w), 1585 (w), 1495 (m), 1090 (br s, C-O), 735 (br s), 700 (s) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 7.47-7.21 (25H, m), 4.96 (1H, d, J = 12 Hz), 4.94 (1H, d, J = 12 Hz), 4.81 (1H, d, J = 12 Hz), 4.79 (1H, d, J = 12 Hz), 4.74 (1H, d, J = 12 Hz), 4.68 (1H, d, J = 12 Hz), 4.65 (1H, d, J = 12 Hz), 4.64 (1H, d, J = 12 Hz), 4.57 (1H, d, J = 12 Hz), 4.51 (1H, d, J = 12 Hz), 4.34 (1H, d, J = 8.0 Hz), 4.12 (1H, dd, J = 10, 7.5 Hz), 3.89-3.84 (2H, m), 3.77 (1H, dd, J = 10, 3.0 Hz), 3.78-3.75 (1H, m), 3.72-3.65 (2H, m), 3.62 (1H, br quint., J = 4.0 Hz), 3.51 (1H, dd, J = 10, 3.0 Hz), 3.45 (1H, ddd, J = 11, 8.5, 4.0 Hz), 3.30 (1H, br t, J = 6.5 Hz), 1.71-1.63 (1H, m), 1.58-1.50 (2H, m), 1.44-1.34 (2H, m), 1.33-1.22 (22H, m), 0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C59H77N3O8Na): 978.5603; found: 978.5595.
化合物９の合成
　化合物８は文献既知の手法(Synthesis, 1993, 103)により合成することができる。化合物６(1.05 g, 1.10 mmol)とピリジン(444 μL, 5.49 mmol)のテトラヒドロフラン－Ｎ，Ｎ―ジメチルホルムアミド(1:1, 40 mL)溶液に、化合物８(589 mg, 3.32 mmol)を０℃下で加えた。反応混合物を室温下で１６時間撹拌した後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を、水、飽和硫酸銅水溶液、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順に洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濾液を減圧濃縮して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(30 g, ヘキサン：酢酸エチル＝５：１)により精製し、化合物９(1.23 g, quant.)を無色油状物として得た。
nD 22= 1.5171.
[α]D 22= +26.4 (c = 1.03, CHCl3).
IR (film): νmax = 2100 (s, N3), 1815 (s, C=O), 1790 (s, C=O), 1750 (br s, C=O), 1605 (w), 1585 (w), 1495 (m), 1230 (br s), 1100 (br s, C-O), 740 (br s), 700 (s) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 7.40-7.22 (25H, m), 4.97 (1H, d, J = 12 Hz), 4.90 (1H, d, J = 3.5 Hz), 4.88 (1H, d, J = 12 Hz), 4.78 (1H, d, J = 12 Hz), 4.76 (1H, d, J = 12 Hz), 4.68 (1H, d, J = 12 Hz), 4.66 (1H, d, J = 12 Hz), 4.63 (1H, d, J = 12 Hz), 4.58 (1H, d, J = 12 Hz), 4.57 (1H, d, J = 12 Hz), 4.52 (1H, d, J = 12 Hz), 4.32 (1H, dd, J = 11, 7.5 Hz), 4.04 (1H, dd, J = 10, 3.0 Hz), 4.01 (1H, dd, J = 11, 5.0 Hz), 4.01-3.96 (2H, m), 3.94-3.91 (1H, m), 3.83-3.81 (1H, m), 3.78-3.69 (3H, m), 3.63-3.60 (1H, m), 2.76 (4H, s), 1.70-1.62 (1H, m), 1.59-1.51 (1H, m), 1.44-1.35 (1H, m), 1.35-1.20 (23H, m), 0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C64H80N4O12Na): 1119.5670; found: 1119.5671.
化合物１０の合成
　化合物９(122 mg, 0.111 mmol)とジイソプロピルエチルアミン(97 μL, 0.557 mmol)のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド(5 mL)溶液に、ジメチルアミン塩酸塩(18 mg, 0.221 mmol)を室温下で加えた。反応混合物を室温下で１７時間撹拌した後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順に洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濾液を減圧濃縮して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(30 g, ヘキサン：酢酸エチル＝５：１)により精製し、化合物１０(101 mg, 89%)を無色油状物として得た。
nD 24= 1.5178.
[α]D 26= +24.6 (c = 1.04, CHCl3).
IR (film): νmax = 2300 (s, N3), 1710 (s, C=O), 1605 (w), 1500 (m), 1100 (br s, C-O), 1060 (br s, C-O), 735 (br s), 700 (s) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 7.40-7.19 (25H, m), 4.96 (1H, d, J = 12 Hz), 4.91 (1H, d, J = 4.0 Hz), 4.87 (1H, d, J = 12 Hz), 4.79 (1H, d, J = 12 Hz), 4.74 (1H, d, J = 12 Hz), 4.68 (1H, d, J = 12 Hz), 4.66 (1H, d, J = 12 Hz), 4.62 (1H, d, J = 12 Hz), 4.60 (1H, d, J = 12 Hz), 4.57 (1H, d, J = 12 Hz), 4.49 (1H, d, J = 12 Hz), 4.13 (1H, dd, J = 11, 7.0 Hz), 4.09-4.06 (2H, m), 3.99 (1H, dd, J = 10, 3.0 Hz), 3.97 (1H, dd, J = 10, 2.0 Hz), 3.93 (1H, br t, J = 7.0 Hz), 3.86-3.85 (1H, m), 3.74 (1H, dd, J = 6.5, 4.5 Hz), 3.70 (1H, dd, J = 10, 6.5 Hz), 3.69-3.65 (1H, m), 3.61 (1H, quint.-like, J = 4.0 Hz), 2.84 (3H, s), 2.70 (3H, s), 1.70-1.62 (1H, m), 1.57-1.50 (2H, m), 1.44-1.35 (1H, m), 1.33-1.20 (22H, m), 0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C62H82N4O9Na): 1049.5980; found: 1049.5964.
化合物１１の合成
　化合物１０(217 mg, 0.211 mmol)の無水テトラヒドロフラン(10 mL)溶液に、トリメチルホスフィンのテトラヒドロフラン溶液(1.0 M, 1.1 mL, 1.1 mmol)を０℃下で加えた。反応混合物を室温下で１５時間撹拌した後、水酸化ナトリウム水溶液(1.0 M, 2.2 mL, 2.2 mmol)を加えた。室温下でさらに６時間撹拌した後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で順に洗浄した後、無水炭酸カリウムで乾燥した。濾過後、濾液を減圧濃縮して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＮＨシリカ、30 g, ヘキサン：酢酸エチル＝１：１)により精製し、化合物１１(161 mg, 76%)を無色油状物として得た。
nD 24= 1.5173.
[α]D 24= +24.3 (c = 1.02, CHCl3).
IR (film): νmax = 3380 (w, NH), 1710 (br s, C=O), 1600 (w), 1500 (m), 1140 (br s, C-O), 1100 (br s, C-O), 1060 (br s, C-O), 735 (br s), 695 (s) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 7.40-7.23 (25H, m), 4.96 (1H, d, J = 12 Hz), 4.90 (1H, d, J = 3.5 Hz), 4.86 (1H, d, J = 12 Hz), 4.78 (1H, d, J = 12 Hz), 4.75 (1H, d, J = 12 Hz), 4.70 (1H, d, J = 12 Hz), 4.66 (1H, d, J = 12 Hz), 4.63 (1H, d, J = 12 Hz), 4.61 (1H, d, J = 12 Hz), 4.54 (1H, d, J = 12 Hz), 4.50 (1H, d, J = 12 Hz), 4.14-4.07 (2H, m), 4.07 (1H, dd, J = 10, 4.0 Hz), 3.96-3.92 (3H, m), 3.87 (1H, br s), 3.72-3.69 (1H, m), 3.55-3.52 (1H, m), 3.39 (1H, br t, J = 9.0 Hz), 3.19-3.15 (1H, m), 2.83 (3H, s), 2.68 (3H, s), 1.72-1.62 (1H, m), 1.62-1.51 (2H, m), 1.51-1.42 (1H, m), 1.34-1.20 (22H, m), 0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+H]+ (C62H85N2O9): 1001.6255; found: 1001.6241.
化合物１３の合成
　化合物１２は文献既知の手法(Org. Lett., 2006, 8, 3375)により合成することができる。化合物１１(151 mg, 0.151 mmol)とトリエチルアミン(105 μL, 0.757 mmol)の無水ジクロロメタン(10 mL)溶液に、化合物１２(70 mg, 0.17 mmol)の無水ジクロロメタン(2 mL)溶液を０℃下で加えた。反応混合物を室温下で１８時間撹拌した後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順に洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濾液を減圧濃縮して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(30 g, ヘキサン：酢酸エチル＝４：１)により精製し、化合物１３(183 mg, 88%)を無色固体として得た。
[α]D 24= +18.4 (c = 1.08, CHCl3).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 7.40-7.21 (25H, m), 5.98 (1H, d, J = 8.5 Hz), 4.96 (1H, d, J = 12 Hz), 4.90 (1H, d, J = 4.0 Hz), 4.83 (1H, d, J = 12 Hz), 4.79 (1H, d, J = 12 Hz), 4.78 (1H, d, J = 12 Hz), 4.76 (1H, d, J = 12 Hz), 4.64 (2H, d, J = 12 Hz), 4.58 (1H, d, J = 12 Hz), 4.51 (1H, d, J = 12 Hz), 4.45 (1H, d, J = 12 Hz), 4.20-4.15 (1H, m), 4.11 (2H, d, J = 6.5 Hz), 4.07 (1H, dd, J = 10, 4.0 Hz), 3.93-3.85 (4H, m), 3.84 (1H, dd, J = 7.5, 2.5 Hz), 3.74 (1H, dd, J = 11, 4.0 Hz), 3.49 (1H, dt, J = 8.5, 2.5 Hz), 2.83 (3H, s), 2.73 (3H, s), 1.99 (1H, quint., J = 7.5 Hz), 1.92 (1H, quint., J = 7.5 Hz), 1.69-1.40 (6H, m), 1.40-1.18 (66H, m), 0.88 (6H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C88H134N2O10Na): 1401.9936; found: 1401.9930.
ＲＣＡＩ－１２３の合成
　化合物１３(179 mg, 0.130 mmol)のエタノール－クロロホルム(4:1, 10 mL)溶液に、水酸化パラジウム－活性炭(20%, wet, 44 mg)を室温下で加えた。水素雰囲気下、室温下で１５時間撹拌した後、クロロホルム－メタノール混合溶媒(5:1)で希釈した。濾過後、濾液を減圧濃縮して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(6 g, クロロホルム：メタノール＝２５：２)により精製し、ＲＣＡＩ－１２３(101 mg, 84%)を無色粉末として得た。
Mp 130-132℃.
[α]D 26= +49.8 (c = 0.30, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3420 (br s, OH), 3280 (w, NH), 1690 (br s, C=O), 1640 (s, C=O), 1545 (br m), 1210 (br m), 1150 (br m, C-O), 1080 (br s, C-O), 720 (m) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 8.47 (1H, d, J = 8.5 Hz), 5.50 (1H, d, J = 4.0 Hz), 5.27-5.22 (1H, m), 4.82 (1H, dd, J = 11, 7.0 Hz), 4.74 (1H, dd, J = 11, 5.0 Hz), 4.64 (1H, dd, J = 11, 5.0 Hz), 4.59 (1H, dd, J = 9.5, 4.0 Hz), 4.46 (1H, dd, J = 7.0, 6.0 Hz), 4.37-4.26 (5H, m), 2.82 (3H, s), 2.81 (3H, s), 2.31-2.24 (1H, m), 1.96-1.85 (2H, m), 1.84-1.78 (2H, m), 1.72-1.63 (1H, m), 1.47-1.16 (66H, m), 0.85 (6H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C53H104N2O10Na): 951.7589; found: 951.7597.
実施例２：ＲＣＡＩ－１２４（化合物Ｂ）の合成および精製方法
　ＲＣＡＩ－１２４を、実施例１と同様の方法により合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１２４の物性値を以下に示す。
Mp 146-147℃.
[α]D 27= +44.2 (c = 0.32, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3340 (br s, OH, NH), 1700 (br s, C=O), 1640 (s, C=O), 1550 (br s), 1275 (br s), 1160 (br m, C-O), 1070 (br s, C-O), 720 (m) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 8.51 (1H, d, J = 9.0 Hz), 7.75 (1H, q, J = 4.0 Hz), 5.49 (1H, d, J = 4.0 Hz), 5.22-5.17 (1H, m), 4.91 (1H, dd, J = 11, 7.5 Hz), 4.78 (1H, dd, J = 11, 4.5 Hz), 4.62 (1H, dd, J = 11, 4.5 Hz), 4.59 (1H, dd, J = 9.5, 4.0 Hz), 4.54 (1H, dd, J = 7.5, 4.5 Hz), 4.40-4.29 (4H, m), 4.26 (1H, br t, J = 9.0 Hz), 2.87 (3H, d, J = 4.0 Hz), 2.48-2.38 (2H, m), 2.31-2.22 (1H, m), 1.96-1.84 (2H, m), 1.84-1.74 (2H, m), 1.72-1.62 (1H, m), 1.46-1.16 (66H, m), 0.85 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.84 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C52H102N2O10Na): 937.7432; found: 937.7422．
実施例３：ＲＣＡＩ－１３７（化合物Ｃ）の合成および精製方法
　ＲＣＡＩ－１３７は、実施例１と同様の方法により合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１３７の物性値を以下に示す。
Mp 177-179℃.
[α]D 27= +43.1 (c = 0.33, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3340 (br s, OH, NH), 1730 (br s, C=O), 1640 (br s, C=O), 1540 (br m), 1280 (br m), 1130 (br s, C-O), 1080 (br s, C-O), 1040 (br s, C-O), 720 (m) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 11.26 (1H, br s), 11.05 (1H, s), 8.55 (1H, d, J = 8.5 Hz), 5.46 (1H, d, J = 3.5 Hz), 5.20-5.15 (1H, m), 5.00 (1H, dd, J = 11, 7.5 Hz), 4.85 (1H, dd, J = 11, 4.5 Hz), 4.62 (1H, dd, J = 11, 4.5 Hz), 4.59 (1H, dd, J = 10, 4.5 Hz), 4.59-4.44 (1H, m), 4.36-4.25 (5H, m), 2.51-2.39 (2H, m), 2.28-2.21 (1H, m), 1.96-1.84 (2H, m), 1.84-1.74 (2H, m), 1.72-1.63 (1H, m), 1.46-1.16 (66H, m), 0.85 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.84 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C51H100N2O11Na): 939.7225; found: 939.7247.
実施例４：ＲＣＡＩ－１３８（化合物Ｄ）の合成および精製方法
　ＲＣＡＩ－１３８は、実施例１と同様の方法により合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１３８の物性値を以下に示す。
Mp 140-142℃.
[α]D 27= +45.2 (c = 0.31, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3320 (br s, OH, NH), 1730 (br s, C=O), 1645 (br s, C=O), 1630 (s, C=O), 1545 (m), 1270 (br m), 1130 (br m, C-O), 1070 (br s, C-O), 720 (m) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 11.69 (1H, s), 8.51 (1H, d, J = 8.5 Hz), 5.50 (1H, d, J = 3.5 Hz), 5.24-5.19 (1H, m), 4.97 (1H, dd, J = 11, 8.0 Hz), 4.81 (1H, dd, J = 11, 4.5 Hz), 4.63 (1H, dd, J = 10, 4.5 Hz), 4.59 (1H, dd, J = 10, 4.0 Hz), 4.53 (1H, dd, J = 7.0, 4.5 Hz), 4.34-4.25 (5H, m), 3.85 (3H, s), 2.42 (2H, dt, J = 7.5, 3.0 Hz), 2.30-2.23 (1H, m), 1.96-1.84 (2H, m), 1.84-1.75 (2H, m), 1.71-1.62 (1H, m), 1.47-1.16 (66H, m), 0.846 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.845 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C52H102N2O11Na): 953.7381; found: 953.7346.
実施例５：ＲＣＡＩ－１４８（化合物Ｅ）の合成および精製方法
　ＲＣＡＩ－１４８は、実施例１と同様の方法により合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１４８の物性値を以下に示す。
Mp 138-140℃.
[α]D 27= +42.8 (c = 0.30, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3340 (br s, OH, NH), 1700 (br s, C=O), 1640 (br s, C=O), 1545 (br s), 1270 (br m), 1140 (br m, C-O), 1080 (br s, C-O), 1040 (br s, C-O), 720 (w) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 8.46 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.78 (1H, t, J = 5.0 Hz), 5.48 (1H, d, J = 3.5 Hz), 5.19-5.14 (1H, m), 4.90 (1H, dd, J = 11, 7.5 Hz), 4.77 (1H, dd, J = 11, 5.0 Hz), 4.61 (1H, dd, J = 11, 5.0 Hz), 4.58 (1H, dd, J = 10, 3.5 Hz), 4.54 (1H, dd, J = 7.5, 5.0 Hz), 4.37-4.29 (4H, m), 4.25 (1H, br t, J = 8.5 Hz), 3.38-3.32 (2H, m), 2.46-2.38 (2H, m), 2.28-2.20 (1H, m), 1.95-1.84 (2H, m), 1.84-1.76 (2H, m), 1.72-1.61 (1H, m), 1.48-1.16 (66H, m), 1.14 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.849 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.846 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C53H104N2O10Na): 951.7589; found: 951.7573.
実施例６：ＲＣＡＩ－１４９（化合物Ｆ）の合成および精製方法
　ＲＣＡＩ－１４９は、実施例１と同様の方法により合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１４９の物性値を以下に示す。
Mp 151-153℃.
[α]D 27= +45.2 (c = 0.31, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3310 (br s, OH, NH), 1680 (br s, C=O), 1645 (br s, C=O), 1540 (br m), 1285 (m), 1140 (m, C-O), 1080 (br s, C-O), 1045 (br m, C-O), 720 (w) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 8.45 (1H, d, J = 9.0 Hz), 5.53 (1H, d, J = 3.5 Hz), 5.28-5.23 (1H, m), 4.84 (1H, dd, J = 11, 7.5 Hz), 4.77 (1H, dd, J = 11, 5.0 Hz), 4.64 (1H, dd, J = 11, 5.5 Hz), 4.59 (1H, dd, J = 9.5, 4.0 Hz), 4.50 (1H, dd, J = 7.5, 5.5 Hz), 4.37-4.28 (4H, m), 4.35 (1H, dd, J = 7.5, 4.0 Hz), 3.34-3.20 (4H, m), 2.49-2.39 (2H, m), 2.32-2.25 (1H, m), 1.96-1.86 (2H, m), 1.82 (2H, dquint., J = 7.5, 2.5 Hz), 1.72-1.64 (1H, m), 1.48-1.16 (66H, m), 1.07 (4H, br s), 0.850 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.848 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C55H108N2O10Na): 979.7902; found: 979.7913.
実施例７：ＲＣＡＩ－１２１（化合物Ｇに包含される）の合成および精製方法
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
化合物１’の合成
　上記の過程で得られた化合物６(250 mg, 0.261 mmol)とピリジン(106 μL, 1.31 mmol)の無水ジクロロメタン(10 mL)溶液に、トリホスゲン(52 mg, 0.175 mmol)を０℃下で加えた。反応混合物を室温下で１時間撹拌した後、ピペリジン(129 μL, 1.30 mmol)を加えた。室温下でさらに１５時間撹拌した後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を、水、１Ｍ塩酸、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順に洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濾液を減圧濃縮して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(30 g, ヘキサン：酢酸エチル＝６：１)により精製し、化合物１’(267 mg, 96%)を無色油状物として得た。
nD 24= 1.5173.
[α]D 24= +25.6 (c = 1.02, CHCl3).
IR (film): νmax = 2100 (s, N3), 1700 (s, C=O), 1605 (w), 1585 (w), 1495 (m), 1265 (s), 1235 (s), 1100 (br s, C-O), 1060 (br s, C-O), 735 (br s), 700 (s) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 7.39-7.22 (25H, m), 4.96 (1H, d, J = 12 Hz), 4.91 (1H, d, J = 3.5 Hz), 4.87 (1H, d, J = 12 Hz), 4.79 (1H, d, J = 12 Hz), 4.74 (1H, d, J = 12 Hz), 4.68 (1H, d, J = 12 Hz), 4.63 (1H, d, J = 12 Hz), 4.61 (1H, d, J = 12 Hz), 4.57 (1H, d, J = 12 Hz), 4.49 (1H, d, J = 12 Hz), 4.16-4.06 (3H, m), 3.99 (1H, dd, J = 10, 2.5 Hz), 3.98-3.92 (2H, m), 3.85 (1H, br s), 3.76-3.65 (3H, m), 3.63-3.60 (1H, m), 3.43-3.17 (4H, m), 1.71-1.63 (1H, m), 1.58-1.22 (31H, m), 0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C65H86N4O9Na): 1089.6293; found: 1089.6301.
ＲＣＡＩ－１２１の合成および精製方法
　化合物１０からＲＣＡＩ－１２３への変換と同様の方法により、化合物１’から化合物ＲＣＡＩ－１２１を合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１２１の物性値を以下に示す。
Mp 126-128℃.
[α]D 27= +45.0 (c = 0.30, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3380 (br s, OH, NH), 1685 (br s, C=O), 1645 (br s, C=O), 1540 (br m), 1265 (m), 1240 (m), 1150 (br m, C-O), 1080 (br s, C-O), 1040 (br m, C-O), 720 (br m) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 8.49 (1H, d, J = 8.5 Hz), 5.52 (1H, d, J = 4.0 Hz), 5.29-5.24 (1H, m), 4.86 (1H, dd, J = 11, 7.5 Hz), 4.79 (1H, dd, J = 11, 5.0 Hz), 4.65 (1H, dd, J = 11, 5.5 Hz), 4.60 (1H, dd, J = 9.5, 4.0 Hz), 4.49 (1H, dd, J = 7.0, 5.5 Hz), 4.37-4.27 (4H, m), 4.35 (1H, dd, J = 7.0, 4.0 Hz), 3.43 (4H, br s), 2.50-2.40 (2H, m), 2.32-2.24 (1H, m), 1.97-1.85 (2H, m), 1.82 (2H, dquint., J = 7.5, 3.0 Hz), 1.72-1.63 (1H, m), 1.58-1.18 (72H, m), 0.85 (6H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C56H108N2O10Na): 991.7902; found: 991.7896.
実施例８：ＲＣＡＩ－１２２（化合物Ｈ）の合成および精製方法
　ＲＣＡＩ－１２２は、実施例７と同様の方法により合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１２２の物性値を以下に示す。
Mp 149-152℃.
[α]D 27= +43.8 (c = 0.33, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3300 (br s, OH, NH), 1690 (br s, C=O), 1640 (br s, C=O), 1540 (br m), 1250 (br m), 1080 (br s, C-O), 1040 (br m, C-O), 865 (m) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 8.48 (1H, d, J = 8.5 Hz), 5.52 (1H, d, J = 4.0 Hz), 5.26-5.21 (1H, m), 4.90 (1H, dd, J = 11, 8.0 Hz), 4.77 (1H, dd, J = 11, 4.5 Hz), 4.65 (1H, dd, J = 11, 5.0 Hz), 4.60 (1H, dd, J = 10, 4.5 Hz), 4.50 (1H, dd, J = 8.0, 5.0 Hz), 4.38 (1H, dd, J = 9.5, 3.5 Hz), 4.38-4.34 (1H, m), 4.32-4.26 (2H, m), 4.31 (1H, dd, J = 11, 5.0 Hz), 2.48-2.39 (2H, m), 2.30-2.23 (1H, m), 1.96-1.85 (2H, m), 1.81 (2H, dquint., J = 7.5, 3.5 Hz), 1.73-1.63 (1H, m), 1.47-1.16 (66H, m), 0.849 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.847 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C55H106N2O11Na): 993.7694; found: 993.7693.
実施例９：ＲＣＡＩ－１３１（化合物Ｉ）の合成および精製方法
　ＲＣＡＩ－１３１は、実施例７と同様の方法により合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１３１の物性値を以下に示す。
Mp 119-120℃.
[α]D 27= +41.1 (c = 0.32, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3340 (br s, OH, NH), 1685 (br s, C=O), 1645 (br s, C=O), 1540 (br m), 1080 (br s, C-O), 1040 (br s, C-O), 720 (m) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 8.50 (1H, d, J = 8.5 Hz), 5.52 (1H, d, J = 3.5 Hz), 5.28-5.23 (1H, m), 4.86 (1H, dd, J = 11, 7.0 Hz), 4.79 (1H, dd, J = 11, 4.5 Hz), 4.67 (1H, dd, J = 10, 5.0 Hz), 4.63-4.59 (1H,m), 4.51 (1H, br t, J = 6.0 Hz), 4.39-4.27 (5H, m), 3.42-3.27 (4H, m), 2.58-2.38 (2H, m), 2.31-2.24 (1H, m), 1.96-1.86 (2H, m), 1.81 (2H, dquint., J = 7.5, 3.5 Hz), 1.72-1.63 (1H, m), 1.63-1.30 (4H, m), 1.46-1.16 (66H, m), 0.85 (6H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C55H106N2O10Na): 977.7745; found: 977.7779.
実施例１０：ＲＣＡＩ－１３２（化合物Ｊ）の合成および精製方法
　ＲＣＡＩ－１３２は、実施例７と同様の方法により合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１３２の物性値を以下に示す。
Mp 149-151℃.
[α]D 26= +41.7 (c = 0.31, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3340 (br s, OH, NH), 1710 (br s, C=O), 1645 (br s, C=O), 1605 (w), 1545 (br s), 1505 (w), 1240 (br m), 1150 (br m, C-O), 1070 (br s, C-O), 720 (w) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 10.56 (1H, s), 8.51 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.96 (2H, br d, J = 7.5 Hz), 7.36 (2H, t, J = 7.5 Hz), 7.06 (1H, t, J = 7.5 Hz), 5.49 (1H, d, J = 3.5 Hz), 5.19-5.14 (1H, m), 5.00 (1H, dd, J = 11, 8.0 Hz), 4.78 (1H, dd, J = 11, 4.0 Hz), 4.62-4.56 (1H, m), 4.61 (1H, dd, J = 11, 5.5 Hz), 4.57 (1H, dd, J = 8.0, 4.0 Hz), 4.38-4.30 (4H, m), 4.30-4.24 (1H, m), 2.43 (2H, dt, J = 7.0 Hz), 2.27-2.20 (1H, m), 1.97-1.86 (2H, m), 1.84-1.74 (2H, m), 1.71-1.62 (1H, m), 1.46-1.16 (66H, m), 0.853 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.849 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C57H104N2O10Na): 999.7589; found: 999.7600.
実施例１１：ＲＣＡＩ－１３９（化合物Ｋ）の合成および精製方法
　ＲＣＡＩ－１３９は、実施例７と同様の方法により合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１３９の物性値を以下に示す。
Mp 154-156℃.
[α]D 26= +42.2 (c = 0.31, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3360 (br s, OH, NH), 1705 (br s, C=O), 1665 (br s, C=O), 1530 (br s), 1250 (s), 1150 (m, C-O), 1070 (br s, C-O), 830 (m), 760 (m) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 10.44 (1H, s), 8.55 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.88 (2H, br d, J = 7.0 Hz), 7.00 (2H, d, J = 9.0 Hz), 5.50 (1H, d, J = 4.0 Hz), 5.21-5.15 (1H, m), 5.01 (1H, dd, J = 12, 8.0 Hz), 4.80 (1H, dd, J = 12, 4.0 Hz), 4.64-4.56 (3H, m), 4.38-4.31 (4H, m), 4.27 (1H, br t, J = 7.0 Hz), 3.65 (3H, s), 2.44 (2H, dt, J = 7.0, 2.0 Hz), 2.28-2.21 (1H, m), 1.96-1.85 (2H, m), 1.85-1.75 (2H, m), 1.71-1.62 (1H, m), 1.46-1.16 (66H, m), 0.849 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.846 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C58H106N2O11Na): 1029.7694; found: 1029.7670.
実施例１２：ＲＣＡＩ－１４０（化合物Ｌ）の合成および精製方法
　ＲＣＡＩ－１４０は、実施例７と同様の方法により合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１４０の物性値を以下に示す。
Mp 149-150℃.
[α]D 27= +39.4 (c = 0.31, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3320 (br s, OH, NH), 1710 (br s, C=O), 1645 (br s, C=O), 1545 (br s), 1240 (br m), 1075 (br s, C-O), 1040 (m, C-O), 820 (m) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 10.49 (1H, s), 8.56 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.87 (2H, br d, J = 7.0 Hz), 7.16 (2H, d, J = 8.5 Hz), 5.49 (1H, d, J = 3.5 Hz), 5.20-5.14 (1H, m), 5.00 (1H, dd, J = 11, 7.5 Hz), 4.78 (1H, dd, J = 11, 4.0 Hz), 4.64-4.56 (3H, m), 4.39-4.31 (4H, m), 4.27 (1H, br t, J = 6.5 Hz), 2.44 (2H, t, J = 7.0 Hz), 2.27-2.17 (1H, m), 2.20 (3H, s), 1.96-1.85 (2H, m), 1.85-1.74 (2H, m), 1.71-1.62 (1H, m), 1.46-1.16 (66H, m), 0.849 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.846 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C58H106N2O10Na): 1013.7745; found: 1013.7739.
実施例１３：ＲＣＡＩ－１４１（化合物Ｍ）の合成および精製方法
　ＲＣＡＩ－１４１は、実施例７と同様の方法により合成・精製した。
　ＲＣＡＩ－１４１の物性値を以下に示す。
Mp 163-165℃.
[α]D 29= +36.1 (c = 0.30, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3400 (br s, OH), 3300 (br m, NH), 1710 (br s, C=O), 1640 (br s, C=O), 1620 (br s, C=O), 1545 (br s), 1330 (s), 1245 (br m), 1165 (m, C-O), 1130 (br s, C-O), 1070 (br s, C-O), 840 (m) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 10.97 (1H, s), 8.60 (1H, d, J = 8.5 Hz), 8.03 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.65 (2H, d, J = 8.5 Hz), 5.50 (1H, d, J = 4.0 Hz), 5.18-5.13 (1H, m), 5.03 (1H, dd, J = 11, 8.5 Hz), 4.78 (1H, dd, J = 11, 3.5 Hz), 4.61 (1H, dd, J = 9.5, 3.5 Hz), 4.61-4.58 (2H, m), 4.40-4.32 (4H, m), 4.26 (1H, dd, J = 8.5, 2.5 Hz), 2.44 (2H, t, J = 7.0 Hz), 2.26-2.19 (1H, m), 1.95-1.85 (2H, m), 1.83-1.73 (2H, m), 1.71-1.61 (1H, m), 1.46-1.16 (66H, m), 0.849 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.845 (3H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C58H103N2O10F3Na): 1067.7463; found: 1067.7469.
実施例１４：ＲＣＡＩ－１５０（化合物Ｎに包含される）の合成および精製方法
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
化合物２’’の合成
　上記の過程で得られた化合物１１(119 mg, 0.119 mmol)のクロロホルム(5 mL)溶液に、市販のヘキサデシルイソシアナート(化合物１’’, 111 μL, 0.357 mmol)を０℃下で加えた。反応混合物を室温下で１４時間撹拌した後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順に洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濾液を減圧濃縮して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(30 g, ヘキサン：酢酸エチル＝３：１)により精製し、化合物２’’(147 mg, 97%)を無色固体として得た。
Mp 79.5-81.0℃.
[α]D 26= +21.3 (c = 1.02, CHCl3).
IR (KBr): νmax = 3420 (m, NH), 3340 (m, NH), 1710 (s, C=O), 1650 (s, C=O), 1545 (s), 1495 (m), 1290 (m), 1190 (br s, C-O), 1100 (br s, C-O), 1060 (br s, C-O), 740 (br s), 695 (s) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 7.39-7.15 (25H, m), 5.13 (1H, br s), 4.98 (1H, d, J = 12 Hz), 4.90 (1H, br d, J = 9.0 Hz), 4.84 (1H, d, J = 12 Hz), 4.81 (1H, d, J = 4.0 Hz), 4.78 (1H, d, J = 12 Hz), 4.74 (1H, d, J = 12 Hz), 4.73 (1H, d, J = 12 Hz), 4.68 (1H, d, J = 12 Hz), 4.62 (1H, d, J = 12 Hz), 4.58 (1H, d, J = 12 Hz), 4.57 (1H, d, J = 12 Hz), 4.48 (1H, d, J = 12 Hz), 4.17 (1H, dd, J = 11, 5.0 Hz), 4.09-4.03 (3H, m), 3.99 (1H, br t, J = 6.5 Hz), 3.96-3.88 (1H, m), 3.90 (1H, dd, J = 10, 3.0 Hz), 3.86 (1H, br s), 3.74 (1H, dd, J = 8.0, 3.0 Hz), 3.68 (1H, dd, J = 11, 3.0 Hz), 3.59 (1H, dt, J = 8.0, 3.0 Hz), 3.07-3.01 (2H, m), 2.84 (3H, s), 2.73 (3H, s), 1.72-1.53 (3H, m), 1.50-1.40 (1H, m), 1.40-1.18 (52H, m), 0.88 (6H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C79H117N3O10Na): 1290.8637; found: 1290.8606.
ＲＣＡＩ－１５０の合成および精製方法
　化合物１３からＲＣＡＩ－１２３への変換と同様の方法により、化合物２’’からＲＣＡＩ－１５０を合成・精製した。
　化合物ＲＣＡＩ－１５０の物性値を以下に示す。
Mp 140-142℃.
[α]D 27= +52.8 (c = 0.32, pyridine).
IR (KBr): νmax = 3480 (br s), 3440 (br m), 3350 (br s), 1690 (s, C=O), 1670 (s, C=O), 1620 (s, C=O), 1590 (br m), 1215 (m), 1080 (br s, C-O) cm-1.
1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5): δ = 6.79 (1H, t, J = 5.5 Hz), 6.70 (1H, d, J = 9.0 Hz), 5.51 (1H, d, J = 4.0 Hz), 5.12-5.08 (1H, m), 4.81 (1H, dd, J = 11, 7.5 Hz), 4.71 (1H, dd, J = 11, 5.0 Hz), 4.61 (1H, dd, J = 10, 5.0 Hz), 4.57 (1H, dd, J = 9.0, 3.5 Hz), 4.41 (1H, dd, J = 7.0, 5.0 Hz), 4.36 (1H, dd, J = 10, 3.5 Hz), 4.30-4.22 (4H, m), 3.52-3.39 (2H, m), 2.81 (6H, br s), 2.30-2.22 (1H, m), 1.92-1.80 (2H, m), 1.68-1.60 (1H, m), 1.57 (2H, quint., J = 7.0 Hz), 1.44-1.16 (48H, m), 0.85 (6H, t, J = 7.0 Hz) ppm.
HR-ESIMS: Calcd for [M+Na]+(C44H87N3O10Na): 840.6289; found: 840.6276.
試験例１：カルバメート糖脂質の生物活性試験
　α－ＧａｌＣｅｒ（ＫＲＮ７０００）、ＲＣＡＩ－１２３、ＲＣＡＩ－１２４、ＲＣＡＩ－１３７、ＲＣＡＩ－１３８、ＲＣＡＩ－１４８、ＲＣＡＩ－１４９、ＲＣＡＩ－１２１、ＲＣＡＩ－１２２、ＲＣＡＩ－１３１、ＲＣＡＩ－１３２、ＲＣＡＩ－１３９、ＲＣＡＩ－１４０、ＲＣＡＩ－１４１、ならびにＲＣＡＩ－１５０のそれぞれについて、１ｍｇ／ｍＬの濃度のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液を調製した。１匹のマウスにつき２００μＬを尾静脈内に投与した際、投与量が１００μｇ／ｋｇ体重になるように、上記のＤＭＳＯ溶液を０．５％のｔｗｅｅｎ２０（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を含有するリン酸緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて５倍に希釈し、さらにリン酸緩衝液を用いて２０倍に希釈した。
　１群３匹のＣ５７ＢＬ／６マウスに、調製したＲＣＡＩ－１２３、ＲＣＡＩ－１２４、ＲＣＡＩ－１３７、ＲＣＡＩ－１３８、ＲＣＡＩ－１４８、ＲＣＡＩ－１４９、ＲＣＡＩ－１２１、ＲＣＡＩ－１２２、ＲＣＡＩ－１３１、ＲＣＡＩ－１３２、ＲＣＡＩ－１３９、ＲＣＡＩ－１４０、ＲＣＡＩ－１４１、およびＲＣＡＩ－１５０の溶液２００μＬをそれぞれ尾静脈内に注射した（１匹あたり約２μｇ投与）。対照物質としてα－ＧａｌＣｅｒ（ＫＲＮ７０００）を用い、同様の方法により投与量が１００μｇ／ｋｇ体重となるように調製したα－ＧａｌＣｅｒ（ＫＲＮ７０００）の溶液２００μＬを尾静脈内に注射した。投与直前、および投与後１、３、６、１２、２４、３２、４８、６０、および７２時間経過後の血液を眼下静脈叢より８０μＬ採取し、血漿を調製した。
　ＲＣＡＩ－１２３の投与直前、および投与後の血漿中の各サイトカインの含有量を、ＥＬＩＳＡ法の１つであるＣｙｔｏｍｅｔｒｉｃ　Ｂｅａｄ　Ａｒｒａｙ　（ＣＢＡ）システム（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。
　投与直前、および１、３、６、１２、２４、３２、４８、６０、７２時間経過後の血漿中のＩＦＮ－γの含有量の測定結果（平均値）及びその標準偏差（ＳＴＤＥＶ）を図１に示す。投与直前、および投与後３、６、１２時間経過後の血漿中のＩＬ－４の含有量の測定結果（平均値）及びその標準偏差（ＳＴＤＥＶ）を図２に示す。投与直前、および投与後３、６、１２時間経過後の血漿中のＩＬ－１２の含有量の測定結果（平均値）及びその標準偏差（ＳＴＤＥＶ）を図３に示す。
　上記結果より、ＲＣＡＩ－１２３はα－ＧａｌＣｅｒ（ＫＲＮ７０００）と同程度のＩＦＮ－γの産生を誘導する一方で、α－ＧａｌＣｅｒ（ＫＲＮ７０００）に比べて少量のＩＬ－４の産生を誘導したことから、ＩＦＮ－γに偏ったサイトカイン産生誘導活性を有することが示された。即ち、α－ＧａｌＣｅｒ（ＫＲＮ７０００）の糖部分６－位水酸基をカルバメート結合へと変換することによって、Ｔｈ１型に偏ったサイトカインの産生を誘導できる新規化合物が開発された。
試験例２：カルバメート糖脂質をパルスした樹状細胞の生物活性試験
（樹状細胞の調製）
　Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス大腿骨より骨髄細胞を採取し、red blood cell lysing buffer（ＳＩＧＭＡ）で溶血後、単核球を調製した。更にhuman γ-globulin （ＳＩＧＭＡ）を用いてＦｃγ受容体陽性細胞をパニング法により除去し、未分化な細胞を濃縮した。
　濃縮した未分化単核球を２．７×１０５／ｃｍ２の密度で５ｎｇ／ｍＬ濃度のＧＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ）を含むＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ）培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で３７℃、５％ＣＯ２の条件下、５日間培養することにより、ＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を含む細胞に分化誘導させた。
　分化誘導した細胞から目的のＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を回収するために、細胞を４００μＬのＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ）に懸濁、１００μＬのCD11c microbeads（Ｍｉｌｌｔｅｎｙｉ　ｂｉｏｔｅｃｈ）を加え、４℃で１５分間インキュベートした。MACS bufferで洗浄後、ＬＳ　ｃｏｌｕｍｎを用いてポジティブセレクションによりＣＤ１１ｃ陽性である樹状細胞を回収した。
　回収した樹状細胞は３．１×１０５／ｃｍ２の密度で１００ｎｇ／ｍＬ濃度の糖脂質を含むＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ）培地で３７℃、５％ＣＯ２の条件下、２４時間培養することで糖脂質をパルスした。糖脂質溶液の調製は始めに１ｍｇ／ｍＬ濃度のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液を調製した。これを０．５％のｔｗｅｅｎ２０（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を含有するリン酸緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて５倍に希釈し、さらにリン酸緩衝液を用いて２倍に希釈した。
　糖脂質をパルスした樹状細胞は、リン酸緩衝液で洗浄後、２．５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬ濃度になるようにリン酸緩衝液で調製し、２００μＬすなわち５×１０５ｃｅｌｌｓをＣ５７ＢＬ／６マウスの尾静脈内に注射した（１群３匹）。
　糖脂質としては、ＲＣＡＩ－１２１、ＲＣＡＩ－１２２、ＲＣＡＩ－１２３、ＲＣＡＩ－１２４、ＲＣＡＩ－１３１、ＲＣＡＩ－１３２、ＲＣＡＩ－１３７、ＲＣＡＩ－１３８、ＲＣＡＩ－１３９、ＲＣＡＩ－１４０及びＲＣＡＩ－１４１のカルバメート糖脂質を、対照物質としてα－ＧａｌＣｅｒ（ＫＲＮ７０００）を用いた。
　投与直前、および投与後１、３、６、１２、２４、３２、４８、６０、および７２時間経過後の血液を眼下静脈叢より８０μＬ採取し、血漿を調製した。
　投与直前、および投与後１、３、６、１２、２４、３２、４８、６０、７２時間経過後の血漿中のＩＦＮ－γの含有量を、サンドウイッチＥＬＩＳＡ法（ＥＮＤＯＧＥＮ）により測定した。ＩＦＮ－γ産生量の測定結果（平均値）及びその標準偏差（ＳＴＤＥＶ）を図４～６に示す。
　投与直前、および投与後１、３、６、１２、２４、３２、４８、６０、７２時間経過後の血漿中のＩＬ－４の含有量を、ＥＬＩＳＡ法の１つであるCytometric Bead Array （ＣＢＡ）システム（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。ＩＬ－４産生量の測定結果（平均値）及びその標準偏差（ＳＴＤＥＶ）を図７～９に示す。
　投与直前、および投与後１、３、６、１２、２４、３２、４８、６０、７２時間経過後の血漿中のＩＬ－１２の含有量を、ＣＢＡシステム（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。ＩＬ－１２産生量の測定結果（平均値）及びその標準偏差（ＳＴＤＥＶ）を図１０～１２に示す。
　上記結果より、本発明のカルバメート糖脂質を樹状細胞にパルスし、そのパルスされた樹状細胞を生体に投与することにより、より強力なＩＦＮ－γ産生を選択的に誘導することができる。
　本発明によって開発された、糖部分の６－位水酸基をカルバメート結合に変換した糖脂質は、合成が非常に容易である上にＫＲＮ７０００よりもＩＦＮ－γに偏ったサイトカインの産生を誘導することができるため、本発明は癌治療ならびにアジュバント作用を誘導する上で有効な薬剤、その製造方法およびその用途を提供することができる。
　さらに本発明の糖脂質を樹状細胞にパルスし、その樹状細胞を投与することにより、ＩＦＮ－γ産生をより増強することができる。
　本出願は、日本で出願された特願２０１２－１０１３８４（出願日２０１２年４月２６日）を基礎としておりそれらの内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims (17)

  1. 　式(Ｉ)
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式中、
    Ｘはアルキレン基あるいは－ＮＨ－を示し；
    Ｒ１及びＲ２は同一又は異なって、水素原子、アルキル基、水酸基、アルコキシ基、又は置換基を有していても良いアリール基を示し、Ｒ１及びＲ２は、隣接する窒素原子と一緒になって５～６員環を形成してもよく；
    Ｒ３は炭素数１～２０の炭化水素基を示し；
    Ｒ４は炭素数１～３０の炭化水素基を示す）で表される化合物、又はその塩。
  2. 　Ｘがメチレンあるいは－ＮＨ－である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  3. 　Ｒ１が水素原子、Ｃ１～６アルキル基、水酸基、Ｃ１～６アルコキシ基、又は置換基を有していても良いＣ６～１２アリール基である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  4. 　Ｒ２が水素原子、Ｃ１～６アルキル基、水酸基、Ｃ１～６アルコキシ基、又は置換基を有していても良いＣ６～１２アリール基である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  5. 　Ｒ１及びＲ２が隣接する窒素原子と一緒になって形成してもよい５～６員環が、５～６員の含窒素飽和複素環である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  6. 　Ｒ３がＣ１～２０アルキル基、Ｃ２～２０アルケニル基又はＣ２～２０アルキニル基である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  7. 　Ｒ４がＣ１～３０アルキル基、Ｃ２～３０アルケニル基又はＣ２～３０アルキニル基である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  8. 　請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩を含有する、医薬。
  9. 　請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩を含有する、選択的ＩＦＮ－γ産生誘導剤。
  10. 　請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩を含有する、選択的ＩＦＮ－γ産生誘導剤であって、樹状細胞にパルスした形態で用いることを特徴とする剤。
  11. 　請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩をパルスしたヒト樹状細胞。
  12. 　請求項１１記載のヒト樹状細胞を含有する、選択的ＩＦＮ－γ産生誘導剤。
  13. 　式(ＩＩ)
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     （式中、
    Ａ１～Ａ５は同一又は異なって、水酸基の保護基を示し； 
    Ｒ１及びＲ２は同一又は異なって、水素原子、アルキル基、水酸基、アルコキシ基、又は置換基を有していても良いアリール基を示し、Ｒ１及びＲ２は、隣接する窒素原子と一緒になって５～６員環を形成してもよく；
    Ｒ３は炭素数１～２０の炭化水素基を示す）で表される化合物、又はその塩。
  14. 　Ｒ１及びＲ２が同一又は異なって、水素原子、Ｃ１～６アルキル基、水酸基、Ｃ１～６アルコキシ基、又は置換基を有していても良いＣ６～１２アリール基であるか、Ｒ１及びＲ２が隣接する窒素原子と一緒になって５～６員の含窒素飽和複素環を形成してもよい、請求項１３記載の化合物又はその塩。
  15. 　Ｒ３がＣ１～２０アルキル基、Ｃ２～２０アルケニル基又はＣ２～２０アルキニル基である、請求項１３記載の化合物又はその塩。
  16. 　請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩の有効量を、その投与が必要な対象に投与することを含む、選択的にＩＦＮ－γの産生を誘導する方法。
  17. 　請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩の有効量を、その投与が必要な対象に投与することを含む、選択的にＩＦＮ－γの産生を誘導する方法であって、当該化合物又はその塩を樹状細胞にパルスする工程を含む方法。
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