ES2617510T3

ES2617510T3 - Nuevo carbamato de glicolípido y uso del mismo

Info

Publication number: ES2617510T3
Application number: ES13782299.5T
Authority: ES
Inventors: Takuya Tashiro; Kenji Mori; Masao Shiozaki; Masaru Taniguchi; Hiroshi Watarai
Original assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Current assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Priority date: 2012-04-26
Filing date: 2013-04-26
Publication date: 2017-06-19
Anticipated expiration: 2033-04-26
Also published as: JP6192120B2; JPWO2013162016A1; US9493497B2; CN104379592A; MY171201A; CA2871584A1; CA2871584C; WO2013162016A1; KR102099764B1; US20150152128A1; EP2842961A4; HK1207648A1; KR20150022783A; EP2842961B1; EP2842961A1; IL235326B; SG11201406924UA; CN104379592B

Abstract

Un compuesto representado por la fórmula (I)**Fórmula** donde X es un grupo alquileno o -NH-; R1 y R2 son iguales o diferentes y cada uno es un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo, un grupo hidroxi, un grupo alcoxi, o un grupo arilo que opcionalmente tiene sustituyente(s), R1 y R2 opcionalmente forman, junto con el átomo de nitrógeno adyacente, un anillo de 5 o 6 miembros; R3 es un grupo hidrocarburo que tiene de 1-20 átomos de carbono; y R4 es un grupo hidrocarburo que tiene de 1-30 átomos de carbono, o una sal del mismo.

Description

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R1 y R2 son iguales o diferentes y cada uno es un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo, un grupo hidroxilo, un grupo alcoxi, o un grupo arilo que opcionalmente tiene sustituyente(s). R1 y R2 forman opcionalmente un anillo de 5 o 6 miembros junto con el átomo de nitrógeno adyacente.

El "grupo alquilo" es, por ejemplo, un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada C1-24, más preferiblemente un C1-16, aún más preferiblemente C1-10, con especial preferencia C1-6. Ejemplos específicos incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, tridecilo, tetradecilo, pentadecilo, hexadecilo, heptadecilo, octadecilo y similares. Se prefiere como el grupo alquilo para R1 o R2 un grupo alquilo C1-6 (por ejemplo, metilo, etilo).

El "grupo alcoxi" es, por ejemplo, un grupo alcoxi de cadena lineal o ramificada C1-24, más preferiblemente un C1-16, aún más preferiblemente C1-10, con especial preferencia C1-6. Ejemplos específicos incluyen metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, terc-butoxi y similares. Se prefiere como grupo alcoxi para R1 o R2 un grupo alcoxi C1-6 (por ejemplo, metoxi).

El "grupo arilo" en el "grupo arilo que tiene opcionalmente sustituyente(s)" es, por ejemplo, un grupo arilo monocíclico-tricíclico C6-14, más preferiblemente C6-12. Ejemplos específicos incluyen fenilo, naftilo, antrilo, fenantrilo y similares. Se prefiere como el grupo arilo para R1 o R2 un grupo arilo C6-12 (por ejemplo, fenilo). Ejemplos del sustituyente que el "grupo arilo" opcionalmente tiene incluyen un átomo de halógeno (por ejemplo, un átomo de cloro, átomo de flúor, átomo de bromo, átomo de yodo); un grupo alquilo (por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, hexilo); un grupo halogenoalquilo (por ejemplo, trifluorometilo); un grupo alcoxi (por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, terc-butoxi); un grupo hidroxi; un grupo amino; un grupo alquilamino (por ejemplo, metilamino, dimetilamino, etilamino, dietilamino); un grupo cicloalquilamino y similares. La posición y el número de los sustituyentes no están particularmente limitados, y un número máximo de sustituyentes adecuados puede estar presente en la(s) posición(es) sustituibles.

El anillo de 5 o 6 miembros opcionalmente formado por R1 y R2 junto con el átomo de nitrógeno adyacente es, por ejemplo, un heterociclo saturado de 5 o 6 miembros que contiene nitrógeno, que es específicamente pirrolidina, piperidina, morfolina, tiomorfolina , piperazina o similares. El preferido es pirrolidina, piperidina o morfolina.

R3 es un grupo hidrocarburo que tiene de 1-20 átomos de carbono. El "grupo hidrocarbonado que tiene de 1-20 átomos de carbono" es un concepto que abarca un grupo alquilo C1-20, un grupo alqueniloC2-20, un grupo alquinilo C220, un grupo cicloalquilo C3-20, un grupo cicloalquenilo C3-20, e incluso un grupo arilo C6-20, que puede ser lineal, ramificado o cíclico, o puede ser un grupo hidrocarburo saturado o un grupo hidrocarburo insaturado, y que opcionalmente tiene un enlace insaturado en la molécula o en posición terminal. Entre estos, son preferidos como R3 un grupo alquilo C1-20, un grupo alquenilo C2-20, y un grupo alquinilo C2-20, y más preferido es un grupo alquilo C12-14. Como R3, específicamente, se pueden mencionar -C14H29 y similares.

R4 es un grupo hidrocarburo que tiene de 1-30 átomos de carbono. El "grupo hidrocarbonado que tiene de 1-30 átomos de carbono" es un concepto que abarca un grupo alquilo C1-30, un grupo alquenilo C2-30, un grupo alquinilo C2-30, un grupo cicloalquilo C3-30, un grupo cicloalquenilo C3-30, e incluso un grupo arilo C6-30, que puede ser lineal, ramificado o cíclico, o puede ser un grupo hidrocarburo saturado o un grupo hidrocarburo insaturado, y opcionalmente tiene un enlace insaturado en la molécula o en la terminal. Entre estos, se prefieren como R4 un grupo alquilo C1-30, un grupo alquenilo C2-30, y un grupo alquinilo C2-30, más preferido es un grupo alquilo C10-30, y aún más preferido es un grupo alquilo C15-25. Ejemplos específicos de R4 incluyen -C16H33, -C24H49 y similares.

El grupo hidrocarburo de R3 o R4 opcionalmente tiene sustituyente(s). Cuando el grupo hidrocarburo de R3 o R4 tiene sustituyente(s), los ejemplos del sustituyente incluyen un grupo donador de electrones tal como un átomo de halógeno (preferiblemente un átomo de cloro, átomo de flúor); un grupo alcoxi (preferiblemente C1-24, más preferiblemente C1-16, aún más preferiblemente C1-10, con especial preferencia C1-4), tal como metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, terc-butoxi y similares; un grupo ariloxi (preferiblemente C6-14), tal como fenoxi y similares; un grupo hidroxi; un grupo amino; un grupo alquilamino tal como metilamino, dimetilamino, etilamino, dietilamino y similares; un grupo cicloalquilamino; un grupo alquilcarbonilamino tal como acetamida y similares; un grupo cicloalquilcarbonilamino; un grupo arilcarbonilamino (preferiblemente, un grupo arilcarbonilamino en donde el resto arilo es un grupo arilo que tiene un número de carbonos de 6 a 14), tal como benzoilamino y similares, y similares, además, un grupo aceptor de electrones tal como un grupo carboxilo; un grupo alcoxicarbonilo; un grupo acilo (grupo acilo es como se menciona a continuación, preferiblemente un grupo alquilcarbonilo en donde el resto alquilo es un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene un número de carbonos de 1 a 24); un grupo carbamoilo; trifluorometilo y similares. La posición y el número de los sustituyentes no están particularmente limitados, y de uno a un número adecuado máximo de sustituyentes puede(n) estar presente(s) en la(s) posición(es) sustituible(s). Cuando uno o más sustituyentes están presentes, pueden ser iguales o diferentes.

El "grupo acilo" en la presente memoria es, por ejemplo, un grupo formilo; un grupo alquilcarbonilo (por ejemplo, un grupo alquilcarbonilo en donde el resto alquilo es un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene un número de carbonos de 1 a 24 (preferiblemente de 1 a 12) (por ejemplo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, valerilo, pivaloilo, hexanoilo)); un grupo cicloalquilcarbonilo (por ejemplo, un grupo cicloalquilcarbonilo en donde el resto cicloalquilo es un grupo cicloalquilo que tiene un número de carbonos de 3 a 10); un grupo alquenilcarbonilo (por ejemplo, un grupo

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alquenilcarbonilo en donde el resto alquenilo es una cadena lineal o ramificada que tiene un número de carbonos de 2 a 12 (por ejemplo, acriloilo, metacriloilo)); un grupo arilcarbonilo (por ejemplo, un grupo arilcarbonilo en donde el resto arilo es un grupo arilo que tiene un número de carbonos de 6 a 14 (por ejemplo, benzoilo, naftoilo)) y similares. El grupo arilo del grupo arilcarbonilo es, por ejemplo, un grupo hidrocarburo aromático monocíclico-tricíclico, y ejemplos específicos incluyen fenilo, naftilo, antrilo y fenantrilo. De estos son preferibles como el grupo acilo, formilo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, benzoilo, naftoilo y similares, y acetilo y benzoilo son más preferibles.

Ejemplos del resto alquilo de los antes mencionados grupo alquilamino y grupo alquilcarbonilamino incluyen un grupo alquilo lineal o ramificado (número preferible de carbono de 1-24, número de carbonos más preferible de 1-16, el número de carbonos aún más preferible de 1-10, particularmente preferible número de carbonos de 1-4) tal como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, tridecilo, tetradecilo, pentadecilo, hexadecilo, heptadecilo, octadecilo y similares.

Ejemplos del resto cicloalquilo del grupo cicloalquilamino y el grupo cicloalquilcarbonilamino anteriormente mencionados incluyen un grupo cicloalquilo (número de carbonos preferido de 3-24, número de carbonos más preferido de 3-16, siendo el número de carbono más preferido de 3-10, número de carbonos particularmente preferido de 3-6), tales como ciclopentilo, ciclohexilo y similares.

Ejemplos del resto alcoxi del grupo alcoxicarbonilo mencionado anteriormente incluyen aquellos similares al grupo alcoxi anteriormente mencionado.

Los sustituyentes mencionados anteriormente pueden estar sustituidos además en la(s) posición(es) sustituibles con al menos un tipo de halógeno, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo alquenilo, un grupo alquinilo, un grupo fenilo, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo amino, un grupo alquilamino y un grupo cicloalquilamino.

Los ejemplos del halógeno, grupo alcoxi, grupo alquilamino y grupo cicloalquilamino incluyen aquellos similares a los anteriores.

Ejemplos del grupo alquilo incluyen un grupo alquilo (número de carbonos preferido de 1-24, número de carbonos más preferidos de 1-16, número de carbonos todavía más preferido de 1-10, número de carbonos particularmente preferido de 1-4) tal como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, tridecilo, tetradecilo, pentadecilo, hexadecilo, heptadecilo, octadecilo y similares.

Ejemplos del grupo cicloalquilo incluyen un grupo cicloalquilo (número de carbonos preferido de 3-24, número de carbonos más preferido de 3-16, número de carbonos todavía más preferido de 3-10, número de carbonos particularmente preferido de 3-6), tales como ciclopentilo, ciclohexilo y similares.

Los ejemplos del grupo alquenilo incluyen un grupo alquenilo (número de carbonos preferido de 2-24, número de carbonos más preferido de 2-16, número de carbonos todavía más preferido de 2-10, número de carbonos particularmente preferido de 2-4) tales como vinilo, propenilo, butenilo y similares.

Ejemplos del grupo alquinilo incluyen un grupo alquinilo (número preferido de carbono de 2-24, número de carbonos más preferido de 2-16, número de carbonos todavía más preferido de 2-10, número de carbonos particularmente preferido de 2-4) tales como etinilo, propargilo, butinilo, pentinilo y similares.

A1-A5 son iguales o diferentes y cada uno es un átomo de hidrógeno o un grupo protector de hidroxi. Los ejemplos del "grupo protector de hidroxi" incluyen bencilo, 4-metoxibencilo (es decir, p-metoxibencilo (PMB)), metoxietoximetilo, tetrahidropiranilo, trimetilsililo (TMS), t-butildimetilsililo (TBS o TBDMS), t-butildifenilsililo (TBDPS), t-butoxicarbonilo, tricloroetoxicarbonilo, acetilo, pivaloilo y similares.

En la presente invención, de entre los estereoisómeros derivados de la estructura cíclica de azúcar (galactopiranosa) se emplea la configuración α.

Cuando el compuesto (I) y el compuesto (II) tienen un estereoisómero derivado de una estructura distinta de la estructura cíclica de azúcar (por ejemplo, un carbono asimétrico etc en una parte distinta de la estructura cíclica de azúcar), cualesquiera isómeros están también comprendidos en la presente invención, que puede ser una mezcla (incluyendo el racemato) de dos o más clases de isómeros en cualquier proporción.

Particularmente, el compuesto (I) contiene un isómero óptico derivado del carbono asimétrico de una parte distinta de la estructura cíclica de azúcar. En la presente invención, el compuesto (I) puede ser una sola forma ópticamente activa o una mezcla de dos o más tipos de formas ópticamente activas en cualquier proporción (incluyendo los racematos). El carbono asimétrico al cual -NHC(=O)XR4 está unido está preferiblemente en una configuración S, y el carbono asimétrico adyacente al carbono asimétrico unido a -NHC(=O)XR4, al que el OH está unido, está preferiblemente en una configuración R. El carbono asimétrico al cual R3 está unido está preferiblemente en una configuración R.

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orgánico se usa adecuadamente como reactivo protector; por ejemplo, trifluorometanosulfonato de tercbutildimetilsililo, cloruro de terc-butildimetilsililo y similares pueden ser utilizados. El disolvente puede ser cualquiera siempre que no inhiba la reacción. Como disolvente, se utilizan N,N-dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF), triamida del ácido hexametilfosfórico (HMPA), un disolvente mixto de los mismos y similares. La cantidad de la base a ser usada es generalmente de 1-2 equivalentes con relación al compuesto A1. La cantidad del reactivo protector a ser usado es generalmente de 1-5 equivalentes, preferiblemente 1-2 equivalentes, por cada grupo hidroxi del compuesto A1. La cantidad del disolvente a ser usada es generalmente de 10-50 veces en volumen, preferiblemente de 10-20 veces en volumen, con relación al compuesto A1. Este paso se lleva a cabo preferiblemente en presencia de un catalizador tal como 4-(N,N-dimetilamino)piridina (DMAP) y similares. Una cantidad catalítica es suficiente como la cantidad del catalizador a utilizar.

La temperatura de reacción es normalmente de -20° C a temperatura ambiente, preferiblemente de 0° C a temperatura ambiente; el tiempo de reacción es normalmente de 1 a 48 horas, preferiblemente de 12 a 24 horas. Después de la terminación de la reacción, el líquido de reacción se concentra a presión reducida, y el residuo se purifica por cromatografía en columna, con lo que el compuesto A2 se puede obtener en un alto rendimiento.

El compuesto de A1 de material de partida se puede sintetizar por un método conocido a partir de este documento (Carbohydr. Res., 1979, 73, 273).

[Etapa 2]

En la etapa 2, el grupo hidroxi en posición 1 del compuesto A2 se convierte en el grupo saliente L para dar el compuesto A3. Por ejemplo, cuando el grupo saliente es tricloroacetoimidoiloxi, el compuesto A3 se puede obtener haciendo reaccionar el compuesto A2 con tricloroacetonitrilo en presencia de una base.

La cantidad de tricloroacetonitrilo a ser usada es generalmente de 1-10 equivalentes con respecto al compuesto A2. Ejemplos de la base incluyen el carbonato de cesio, diazabicicloundeceno (DBU), diazabiciclononeno (DBN) y similares. La cantidad de base a ser usada es generalmente de 0,01-2 equivalentes con relación al compuesto A2. Los ejemplos del disolvente incluyen diclorometano, éter dietílico, THF y similares. La cantidad de disolvente a ser usada es generalmente de 0,5-100 ml por 1 mmol de compuesto A2. La temperatura de reacción es generalmente de 0 a 50° C, preferiblemente a temperatura ambiente, y el tiempo de reacción es generalmente de 30 minutos-24 horas.

El compuesto A3 se puede aislar por un método convencional. Por ejemplo, el compuesto A3 puede obtenerse diluyendo con un disolvente, lavando con agua, solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, salmuera saturada y similares, y secando sobre carbonato potásico anhidro y similares, lo que es seguido por filtración y concentración. Cuando sea necesario, puede llevarse a cabo una purificación adicional.

[Etapa 3]

En el Etapa 3, el compuesto A3 se hace reaccionar con el compuesto A4 en presencia de trifluorometanosulfonato de trimetilsililo y tamices moleculares para dar el compuesto A5. El material de partida A4 se puede sintetizar por un método conocido a partir de este documento (Eur. J. Org. Chem., 1998, 291).

La cantidad de compuesto A3 a ser usada es generalmente de 0,1-10 equivalentes con respecto al compuesto A4. La cantidad de trifluorometanosulfonato de trimetilsililo a ser usada es generalmente de 0,01-3 equivalentes con relación al compuesto A3. La cantidad de tamices moleculares a ser usada es generalmente de 1-2 g por 1 mmol de compuesto A3. Ejemplos del disolvente incluyen diclorometano, triclorometano, THF, dioxano, acetato de etilo y similares. La cantidad de disolvente a ser usada es generalmente de 1-100 ml por 1 mmol de compuesto A3. La temperatura de reacción es generalmente de -78 a 60° C, y el tiempo de reacción es generalmente de 0,1 a 24 horas.

El compuesto A5 se puede aislar por un método convencional. Por ejemplo, después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se concentra a presión reducida, y el residuo se purifica por cromatografía en columna, por medio de lo cual se puede aislar el compuesto A5.

[Etapa 4]

En la etapa 4, el grupo protector del hidroxi en posición 6 se desprotege. El método de desprotección se selecciona de métodos conocidos según el tipo del grupo protector. Por ejemplo, cuando el grupo protector A es un grupo TBS, el compuesto A5 se hace reaccionar con fluoruro de tetrabutilamonio o un ácido en un disolvente.

Como ácido, se usa preferiblemente un ácido fuerte tal como el ácido trifluoroacético, ácido p-toluenosulfónico, ácido clorhídrico y similares. La cantidad de ácido a ser utilizada es generalmente de una cantidad catalítica a 10 equivalentes, preferiblemente de 1 a 2 equivalentes, con relación al compuesto A5.

La cantidad de fluoruro de tetrabutilamonio a ser usada es generalmente de 2 equivalentes-20 equivalentes con relación al compuesto A5.

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La temperatura de reacción es generalmente de -20 a 60° C, preferiblemente a temperatura ambiente, y el tiempo de reacción es generalmente de 1-24 horas, preferiblemente de 2-12 horas.

Preferidos como el disolvente es un disolvente soluble en agua, y tetrahidrofurano es particularmente preferible. La cantidad de disolvente a ser usada es generalmente de 1-100 veces el volumen con relación al compuesto A5.

Después de la terminación de la reacción, la mezcla de reacción se somete a cromatografía en columna usando disolventes con diferente polaridad, con lo que se separa y se purifica el compuesto A6 (forma α) y el compuesto A7 (forma β).

Esquema 2

Etapa 5 Etapa 6 Etapa 7

A10: (compuesto (II))

Etapa 8 Etapa 9

A: (compuesto (I))

en donde cada símbolo es como se ha definido anteriormente.

[Etapa 5]

En la etapa 5, el compuesto A6 se hace reaccionar con el compuesto A8 en presencia de una base, para dar el compuesto A9. El compuesto de material de partida A8, se puede sintetizar por un método conocido a partir de este documento (Síntesis, 1993, 103).

La cantidad de compuesto A8 a ser utilizada es generalmente de 1-10 equivalentes, preferiblemente de 1-5 equivalentes, con relación al compuesto A6.

Ejemplos de la base incluyen la piridina, trietilamina y similares, y la piridina es preferible. La cantidad de la base a ser usada es generalmente de 1-10 equivalentes con respecto al compuesto A6. Se puede utilizar cualquier disolvente siempre que éste no inhiba la reacción, y como disolvente se utilizan, N,N-dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF), triamida del ácido hexametilfosfórico (HMPA), un disolvente mixto de los mismos y similares. Un disolvente mixto de THF y DMF es preferible. La cantidad de disolvente a ser usada es generalmente de 0,5-100 ml por 1 mmol de compuesto A6. La temperatura de reacción es de -20° C a la temperatura ambiente, preferiblemente de 0-4° C, y el tiempo de reacción es generalmente de 30 minutos a 24 horas. Después de la terminación de la reacción, la mezcla de reacción se concentra a presión reducida, y el residuo se purifica por cromatografía en columna para dar el compuesto A9 en un alto rendimiento.

[Etapa 6]

En la etapa 6, el compuesto A9 se hace reaccionar con el compuesto A14 en presencia de una base para dar el compuesto A10. El compuesto A10 está abarcado en el compuesto (II). El compuesto de material de partida A14, varía en función de R1 y R2, y puede ser generalmente sintetizado por un método conocido a partir de un documento

o está disponible comercialmente.

La cantidad de compuesto A14 a ser utilizada es generalmente de 1-10 equivalentes, preferiblemente 2 equivalentes, con relación al compuesto A9.

Ejemplos de la base incluyen 4-(dimetilamino)piridina (DMAP), diisopropiletilamina, DABCO y similares. La cantidad de la base a ser usada es generalmente de 1-10 equivalentes, preferiblemente 5 equivalentes, con respecto al compuesto A9. Los ejemplos del disolvente incluyen N,N-dimetilformamida (DMF), THF, HMPA, un disolvente mixto de los mismos y similares. La cantidad de disolvente a ser usada es generalmente de 0,5-50 ml por 1 mmol de

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El tiempo de reacción es generalmente de 1-24 horas, preferiblemente de 12-24 horas. La temperatura de reacción es generalmente de 0° C-temperatura ambiente, preferiblemente temperatura ambiente.

Después de la terminación de la reacción, se filtra el líquido de reacción, el filtrado se concentra a presión reducida, y el residuo se purifica por cromatografía en columna, con lo que se puede obtener el compuesto deseado A con un buen rendimiento.

Esquema 3

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[Etapa 10]

En la etapa 10, el grupo hidroxilo en posición 6 del compuesto A6 se convierte en carbonilo, y se une además a 10 piperidina para dar el compuesto G1. Para ser más específicos, el compuesto A6 se hace reaccionar con un reactivo de carbonilación en un disolvente y, después de la reacción, se hace reaccionar con piperidina.

Como reactivo de carbonilación, se utilizan fosgeno, un dímero o trímero del mismo, clorocarbonato y similares.

El disolvente no está particularmente limitado siempre que éste no inhiba la reacción. Por ejemplo, se utilizan preferiblemente disolventes de halógeno (por ejemplo, cloruro de metileno, diclorometano, cloroformo).

15 Se puede añadir una base como sea necesario. Ejemplos de la base incluyen la piridina, trietilamina y similares, y la piridina es preferible.

La cantidad de disolvente a ser usado es generalmente de 5-100 veces el volumen, preferiblemente de 20-50 veces el volumen, con relación al compuesto A6.

La cantidad de la base a ser usada es generalmente de 1-50 equivalentes, preferiblemente de 2-20 equivalentes, 20 con respecto al compuesto A6.

La temperatura de reacción es generalmente de 0 a 50° C, preferiblemente a temperatura ambiente, y el tiempo de reacción es generalmente de 30 minutos a 24 horas.

El compuesto G1 se puede aislar por un método convencional. Por ejemplo, después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se concentra a presión reducida, y el residuo se purifica por cromatografía en 25 columna, por medio de la cual el compuesto G1 puede ser aislado.

[Etapa 11]

En la etapa 11, el compuesto G1 se convierte en el compuesto G. El compuesto G está abarcado por el compuesto (I).

Este paso se realiza de la misma manera que en los pasos 7-9, excepto que el compuesto de partida es el 30 compuesto G1 en lugar del compuesto A10.

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Ejemplos de los fármacos terapéuticos hormonales incluyen las hormonas adrenocorticales (por ejemplo, la prednisolona, prednisona, dexametasona, acetato de cortisona, etc.), los estrógenos (por ejemplo, el estradiol, etinilestradiol, fosfestrol, clorotrianiseno, etc.), los antiestrógenos (por ejemplo, el epitiostanol, mepitiostano, tamoxifeno, clomifeno, etc.), las hormonas luteinizantes (por ejemplo, el caproato de hidroxiprogesterona, la didrogesterona, medroxiprogesterona, noretisterona, noretindrona, etc.), los derivados de la LHRH (por ejemplo, el acetato de leuprorelina, etc.) y similares.

Ejemplos de los fármacos inmunoterapéuticos incluyen componentes derivados de los microorganismos o de las bacterias (por ejemplo, derivados de muramil dipéptido, picibanil, etc.), polisacáridos que tienen una actividad inmunopotenciadora (por ejemplo, el lentinan, esquizofilan, krestin, etc.), las citoquinas de ingeniería genética (por ejemplo, los interferones, la interleucina 2 (IL-2), interleucina 12 (IL-12), factor de necrosis tumoral (TNF), etc.), los agentes estimulantes de colonias (por ejemplo, el factor estimulante de colonias de granulocitos, eritropoyetina, etc.) y similares.

Ejemplos de los fármacos antivirales incluyen fármacos antivirales inhibidores de la síntesis de ácido nucleico (por ejemplo, el aciclovir, ganciclovir, vidarabina, foscarnet, zidovudina, lamivudina, didanosina, etc.), fármacos antivirales inhibidores de la invasión intracelular (por ejemplo, la amantadina, zanamivir, oseltamivir etc.), fármacos antivirales que potencian la capacidad de profilaxis del hospedante (por ejemplo, el interferón, isoprinosina, etc.), y similares.

Ejemplos de los fármacos antibacterianos incluyen antibióticos de penicilina (por ejemplo, la sawacilina, pasetocina, yamacilina, bacacil, viccillin, pentrex etc.), antibióticos de cefem (por ejemplo, el keflex, kefral, cefzon, tomiron, cefspan, pansporin etc.), antibióticos macrólidos (por ejemplo, la eritrosina, clarith, klaricid, rulid, josamicina etc.), antibióticos de tetraciclina (por ejemplo, la minomicina, vibramicina, hidramicina, ledermicina etc.), antibióticos de fosfomicina (por ejemplo, la fosmicina, eukocina etc.), antibióticos aminoglucósidos (por ejemplo, la kanamicina, etc.), fármacos antibacterianos de las nuevas quinolonas (por ejemplo, cravit, Tarivid, baccidal, tosuxacina, ozex etc.), y similares.

Ejemplos del agente antifúngico incluyen fármacos antifúngicos de polieno (por ejemplo, la tricomicina, anfotericina B, nistatina, etc.), fármacos antifúngicos de imidazol (por ejemplo, el econazol, miconazol, clotrimazol, etc), fármacos antifúngicos de triazol (por ejemplo, el fluconazol, itraconazol, etc.), fármacos antifúngicos de alilamina (por ejemplo, butenafina, clorhidrato de terbinafina, etc.), fármacos antifúngicos de flucitosina (5-FC) (por ejemplo, flucitosina, etc.), y similares.

Cuando el carbamato de glicolípido de la presente invención se administra a un ser humano, puede administrarse de forma segura por vía oral o parenteral, tal como está o después de ser mezclado con un vehículo, excipiente, diluyente y similares farmacológicamente aceptables, en forma de composiciones farmacéuticas, tales como preparaciones orales (por ejemplo, polvos, gránulos, comprimidos, cápsulas), preparaciones parenterales (por ejemplo, inyecciones), y supositorios (por ejemplo, supositorios rectales, supositorios vaginales). Estas preparaciones se pueden producir por métodos conocidos convencionalmente.

Ejemplos de la inyección incluyen inyecciones subcutáneas, inyecciones intravenosas, inyecciones intramusculares, inyecciones intraperitoneales, infusiones de goteo y similares. Una inyección puede prepararse en forma de inyección acuosa por tratamiento del glicolípido de la presente invención en presencia de un agente solubilizante (por ejemplo, beta-ciclodextrinas), un agente dispersante (por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginato de sodio), un conservante (por ejemplo, metilparabeno, propilparabeno, alcohol bencílico, clorobutanol), un agente isotonificante (por ejemplo, cloruro de sodio, glicerol, sorbitol, glucosa) y similares por un método convencional. Una inyección puede prepararse también como una inyección oleosa disolviendo, suspendiendo o emulsionando el glicolípido de la presente invención en un aceite vegetal (por ejemplo, aceite de oliva, aceite de sésamo, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de maíz), propilenglicol y similares.

También se puede producir una preparación oral por adición del carbamato de glicolípido de la presente invención a, por ejemplo, un excipiente (por ejemplo, la lactosa, sacarosa, almidón), un desintegrante (por ejemplo, el almidón, carbonato de calcio), un aglutinante (por ejemplo, el almidón, goma árabiga, carboximetilcelulosa, polivinilpirrolidona, hidroxipropilcelulosa) o un lubricante (por ejemplo, el talco, estearato de magnesio, polietilenglicol) y similares, como sea apropiado, moldeando la mezcla por compresión y, a continuación, en caso necesario, recubriendo la mezcla con hidroxipropilmetilcelulosa y similares. Un supositorio puede ser producido mezclando el carbamato de glicolípido de la presente invención con un excipiente no irritante (por ejemplo, polietilenglicol, glicéridos de ácidos grasos superiores).

La dosis del carbamato de glicolípido de la presente invención varía dependiendo de la edad, peso corporal, síntomas, forma de dosificación, método de administración, duración de la administración y similares; por ejemplo, a un paciente (adulto, peso aproximado de 60 kg), se administra una dosis diaria de 0,1 a 1 mg/kg, preferiblemente de 0,5 a 1 mg/kg, más preferiblemente de 0,8 a 1 mg/kg, por vía oral o parenteral en una sola o varias porciones divididas.

En un intento de inducir la producción de IFN-γ, también es posible pulsar las células dendríticas con el carbamato de glicolípido de la presente invención, y administrar las células dendríticas a los pacientes. Por lo tanto, la presente

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por cromatografía en columna de gel de sílice (30 g) para dar el compuesto 6 (forma α, hexano:acetato de etilo = 5:1, 1,67 g, 70%) y el compuesto 7 (forma β, hexano:acetato de etilo = 3:1, 612 mg, 25%) cada uno como un aceite incoloro.

forma α: nD24 = 1,5171.

[α]D25 = 24,8 (c = 1,00, CHCl3).

IR (película): ν max = 3480 (ancho, medio, OH), 2100 (fuerte, N3), 1605 (débil), 1585 (débil), 1500 (medio), 1100 (ancho, fuerte, CO), 1060 (ancho, fuerte, CO), 735 (ancho, fuerte), 700 (fuerte) cm-1 .

1H-RMN (500 MHz, CDCl3): δ = 7,41-7,20 (25H, m), 4,96 (1H, d, J = 12 Hz), 4,91 (1H, d, J = 3,0 Hz), 4,87 (1H, d, J = 12 Hz), 4,81 (1H, d, J = 12 Hz), 4,75 (1H, d, J = 12 Hz), 4,70 (1H, d, J = 12 Hz), 4,66 (1H, d, J = 12 Hz), 4,63 (1H, d, J = 12 Hz), 4,61 (1H, d, J = 12 Hz), 4,57 (1H, d, J = 12 Hz), 4,50 (1H, d, J = 12 Hz), 4,66 (1H, dd, J = 10, 3,5 Hz), 3,99-3,95 (2H, m), 3,85 (1H, ancho, s), 3,75-3,68 (4H, m), 3,63 (1H, dd, J = 12, 3,5 Hz), 3,64-3,60 (1H, m), 3,40 (1H, ddd, J = 12, 8,5, 5,0 Hz), 1,69-1,60 (2H, m), 1,57-1,50 (2H, m), 1,44-1,34 (1H, m), 1,34-1,21 (22H, m), 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz) ppm.

HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C59H77N3O8Na): 978,5603; encontrado: 978,5601.

forma ß:

nD 24 = 1,5177.

[α]D25= -0,48 (c = 1,02, CHCl3).

IR (película): νmax = 3460 (ancho, medio, OH), 2100 (fuerte, N3), 1605 (débil), 1585 (débil), 1495 (medio), 1090 (ancho, fuerte, CO), 735 (ancho, fuerte), 700 (fuerte) cm-1 .

1H-RMN (500 MHz, CDCl3): δ = 7,47-7,21 (25H, m), 4,96 (1H, d, J = 12 Hz), 4,94 (1H, d, J = 12 Hz), 4,81 (1H, d, J = 12 Hz), 4,79 (1H, d, J = 12 Hz), 4,74 (1H, d, J = 12 Hz), 4,68 (1H, d, J = 12 Hz), 4,65 (1H, d, J = 12 Hz), 4,64 (1H, d, J = 12 Hz), 4,57 (1H, d, J = 12 Hz), 4,51 (1H, d, J = 12 Hz), 4,34 (1H, d, J = 8,0 Hz), 4,12 (1H, dd, J = 10, 7,5 Hz), 3,89-3,84 (2H, m), 3,77 (1H, dd, J = 10, 3,0 Hz), 3,78-3,75 (1H, m), 3,72-3,65 (2H, m), 3,62 (1H, ancho, quintuplete, J = 4,0 Hz), 3,51 (1H, dd, J = 10, 3,0 Hz), 3,45 (1H, ddd, J = 11, 8,5, 4,0 Hz), 3,30 (1H, ancho, t, J = 6,5 Hz), 1,71-1,63 (1H, m), 1,58-1,50 (2H, m), 1,44-1,34 (2H, m), 1,33-1,22 (22H, m), 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz) ppm.

HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C59H77N3O8Na): 978,5603; encontrado: 978,5595.

Síntesis del compuesto 9

El compuesto 8 se puede sintetizar por un método conocido por medio de este documento (Síntesis, 1993, 103). Se añadió a una solución del compuesto 6 (1,05 g, 1,10 mmoles) y piridina (444 µl, 5,49 mmoles) en tetrahidrofuranoN,N-dimetilformamida (1:1, 40 ml) el compuesto 8 (589 mg, 3,32 mmoles) a 0° C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas, se añadió agua, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó sucesivamente con agua, solución acuosa saturada de sulfato de cobre, agua, solución acuosa saturada de bicarbonato sódico y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de la filtración, el filtrado se concentró a presión reducida, y se evaporó el disolvente. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (30 g, hexano:acetato de etilo = 5:1) para dar el compuesto 9 (1,23 g, cuantitativamente) en forma de un aceite incoloro.

nD22 = 1,5171.

[α]D22 = 26,4 (c = 1,03, CHCl3).

IR (película): ν max = 2100 (fuerte, N3), 1815 (fuerte, C=O), 1790 (fuerte, C=O), 1750 (ancho, fuerte, C=O), 1605 (débil), 1585 (débil), 1495 (medio), 1230 (ancho, fuerte), 1100 (ancho, fuerte, C-O), 740 (ancho, fuerte), 700 (fuerte)

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cm.

1H-RMN (500 MHz, CDCl3): δ = 7,40-7,22 (25H, m), 4,97 (1H, d, J = 12 Hz), 4,90 (1H, d, J = 3,5 Hz), 4,88 (1H, d, J = 12 Hz), 4,78 (1H, d, J = 12 Hz), 4,76 (1H, d, J = 12 Hz), 4,68 (1H, d, J = 12 Hz), 4,66 (1H, d, J = 12 Hz), 4,63 (1H, d, J = 12 Hz), 4,58 (1H, d, J = 12 Hz), 4,57 (1H, d, J = 12 Hz), 4,52 (1H, d, J = 12 Hz), 4,32 (1H, dd, J = 11, 7,5 Hz), 4,04 (1H, dd, J = 10, 3,0 Hz), 4,01 (1H, dd, J = 11, 5,0 Hz), 4,01-3,96 (2H, m), 3,94-3,91 (1H, m), 3,83-3,81 (1H, m), 3,78-3,69 (3H, m), 3,63-3,60 (1H, m), 2,76 (4H, s), 1,70-1,62 (1H, m), 1,59-1,51 (1H, m), 1,44-1,35 (1H, m), 1,35-1,20 (23H, m), 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz) ppm.

HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C64H80N4O12Na): 1119,5670; encontrado: 1119,5671.

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1H-RMN (500 MHz, CDCl3): δ = 7,40-7,21 (25H, m), 5,98 (1H, d, J = 8,5 Hz), 4,96 (1H, d, J = 12 Hz), 4,90 (1H, d, J = 4,0 Hz), 4,83 (1H, d, J = 12 Hz), 4,79 (1H, d, J = 12 Hz), 4,78 (1H, d, J = 12 Hz), 4,76 (1H, d, J = 12 Hz), 4,64 (2H, d, J = 12 Hz), 4,58 (1H, d, J = 12 Hz), 4,51 (1H, d, J = 12 Hz), 4,45 (1H, d, J = 12 Hz), 4,20-4,15 (1H, m), 4,11 (2H, d, J = 6,5 Hz), 4,07 (1H, dd, J = 10, 4,0 Hz), 3,93-3,85 (4H, m), 3,84 (1H, dd, J = 7,5, 2,5 Hz), 3,74 (1H, dd, J = 11, 4,0 Hz), 3,49 (1H, dt, J = 8,5, 2,5 Hz), 2,83 (3H, s), 2,73 (3H, s), 1,99 (1H, quintuplete, J = 7,5 Hz), 1,92 (1H, quintuplete, J = 7,5 Hz), 1,69-1,40 (6H, m), 1,40-1,18 (66H, m), 0,88 (6H, t, J = 7,0 Hz) ppm.

HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C88H134N2O10Na): 1401,9936; encontrado: 1401,9930. Síntesis de RCAI-123 Se añadió a una solución del compuesto 13 (179 mg, 0,130 mmoles) en etanol-cloroformo (4:1, 10 ml), hidróxido de

paladio-carbono activado (20%, húmedo, 44 mg) a temperatura ambiente. Bajo una atmósfera de hidrógeno, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, y se diluyó con un disolvente mixto de cloroformometanol (5:1). Después de la filtración, el filtrado se concentró a presión reducida, y se evaporó el disolvente. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (6 g, cloroformo:metanol = 25:2) para dar RCAI-123 (101 mg, 84%) como un polvo incoloro.

Punto de fusión 130-132° C [α]D26 = +49,8 (c = 0,30, piridina). IR (KBr): νmax = 3420 (ancho, fuerte, OH), 3280 (débil, NH), 1690 (ancho, fuerte, C=O), 1640 (fuerte, C=O), 1545

(ancho, medio), 1210 (ancho, medio), 1150 (ancho, medio, C-O), 1080 (ancho, fuerte, C-O), 720 (medio) cm-1 . 1H-RMN (500 MHz, piridina-d5): δ = 8,47 (1H, d, J = 8,5 Hz), 5,50 (1H, d, J = 4,0 Hz), 5,27-5,22 (1H, m), 4,82 (1H, dd, J = 11, 7,0 Hz), 4,74 (1H, dd, J = 11, 5,0 Hz), 4,64 (1H, dd, J = 11, 5,0 Hz), 4,59 (1H, dd, J = 9,5, 4,0 Hz), 4,46 (1H,

dd, J = 7,0, 6,0 Hz), 4,37-4,26 (5H, m), 2,82 (3H, s), 2,81 (3H, s), 2,31-2,24 (1H, m), 1,96-1,85 (2H, m), 1,84-1,78 (2H, m), 1,72-1,63 (1H, m), 1,47-1,16 (66H, m), 0,85 (6H, t, J = 7,0 Hz) ppm. HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C53H104N2O10Na): 951,7589; encontrado: 951,7597. Ejemplo 2: Síntesis y método de purificación de RCAI-124 (compuesto B) RCAI-124 se sintetizó y se purificó por un procedimiento similar al del Ejemplo 1. Las propiedades físicas de RCAI-124 se muestran a continuación. Punto de fusión 146-147° C. [α]D27 = 44,2 (c = 0,32, piridina). IR (KBr): νmax = 3340 (ancho, fuerte, OH, NH), 1700 (ancho, fuerte, C=O), 1640 (fuerte, C=O), 1550 (ancho, fuerte),

1275 (ancho, fuerte), 1160 (ancho, medio, C-O), 1070 (ancho, fuerte, C-O), 720 (medio) cm-1 . 1H-RMN (500 MHz, piridina-d5): δ = 8,51 (1H, d, J = 9,0 Hz), 7,75 (1H, q, J = 4,0 Hz), 5,49 (1H, d, J = 4,0 Hz ), 5,225,17 (1H, m), 4,91 (1H, dd, J = 11, 7,5 Hz), 4,78 (1H, dd, J = 11, 4,5 Hz), 4,62 (1H, dd, J = 11, 4,5 Hz), 4,59 (1H, dd, J = 9,5, 4,0 Hz), 4,54 (1H, dd, J = 7,5, 4,5 Hz), 4,40-4,29 (4H, m), 4,26 (1H, ancho, t, J = 9,0 Hz), 2,87 (3H, d, J = 4,0

Hz), 2,48-2,38 (2H, m), 2,31-2,22 (1H, m), 1,96-1,84 (2H, m), 1,84-1,74 (2H, m), 1,72-1,62 (1H, m), 1,46-1,16 (66H, m), 0,85 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,84 (3H, t, J = 7,0 Hz) ppm. HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C52H102N2O10Na): 937,7432; encontrado: 937,7422. Ejemplo 3: Síntesis y método de purificación de RCAI-137 (compuesto C) Se sintetizó y se purificó RCAI-137 por un procedimiento similar al del Ejemplo 1. Las propiedades físicas de RCAI-137 se muestran a continuación. Punto de fusión 177-179° C. [α]D27 = 43,1 (c = 0,33, piridina). IR (KBr): νmax = 3340 (ancho, fuerte, OH, NH), 1730 (ancho, fuerte, C=O), 1640 (ancho, fuerte, C=O), 1540 (ancho,

medio), 1280 (ancho, medio), 1130 (ancho, fuerte, C-O), 1080 (ancho, fuerte, C-O), 1040 (ancho, fuerte, C-O), 720

(medio) cm-1 . 1H-RMN (500 MHz, piridina-d5): δ = 11,26 (1H, ancho, s), 11,05 (1H, s), 8,55 (1H, d, J = 8,5 Hz), 5,46 (1H, d, J = 3,5 Hz), 5,20-5,15 (1H, m), 5,00 (1H, dd, J = 11, 7,5 Hz), 4,85 (1H, dd, J = 11, 4,5 Hz), 4,62 (1H, dd, J = 11, 4,5 Hz), 4,59

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(1H, dd, J = 10, 4,5 Hz), 4,59-4,44 (1H, m), 4,36-4,25 (5H, m), 2,51-2,39 (2H, m), 2,28-2,21 (1H, m), 1,96-1,84 (2H, m), 1,84-1,74 (2H, m), 1,72-1,63 (1H, m), 1,46-1,16 (66H, m), 0,85 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,84 (3H, t, J = 7,0 Hz) ppm. HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C51H100N2O11Na): 939,7225; encontrado: 939,7247. Ejemplo 4: Síntesis y método de purificación de RCAI-137 (compuesto D) Se sintetizó y se purificó RCAI-138 por un procedimiento similar al del Ejemplo 1. Las propiedades físicas de RCAI-138 se muestran a continuación. Punto de fusión 140-142° C.

[δ]D27 = 45,2 (c = 0,31, piridina). IR (KBr): ν max = 3320 (ancho, fuerte, OH, NH), 1730 (ancho, fuerte, C=O), 1645 (ancho, fuerte, C=O), 1630 (fuerte, C=O), 1545 (medio), 1270 (ancho, medio), 1130 (ancho, medio, C-O), 1070 (ancho, fuerte, C-O), 720 (medio) cm-1 .

1H-RMN (500 MHz, piridina-d5): δ = 11,69 (1H, s), 8,51 (1H, d, J = 8,5 Hz), 5,50 (1H, d, J = 3,5 Hz), 5,24-5,19 (1H, m), 4,97 (1H, dd, J = 11, 8,0 Hz), 4,81 (1H, dd, J = 11, 4,5 Hz), 4,63 (1H, dd, J = 10, 4,5 Hz), 4,59 ( 1H, dd, J = 10, 4,0 Hz), 4,53 (1H, dd, J = 7,0, 4,5 Hz), 4,34-4,25 (5H, m), 3,85 (3H, s), 2,42 (2H, dt, J = 7,5, 3,0 Hz), 2,30-2,23 (1H, m), 1,96-1,84 (2H, m), 1,84-1,75 (2H, m), 1,71-1,62 (1H, m), 1,47-1,16 (66H, m), 0,846 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,845 (3H, t, J = 7,0 Hz) ppm.

HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C52H102N2O11Na): 953,7381; encontrado: 953,7346. Ejemplo 5: Síntesis y método de purificación de RCAI-148 (compuesto E) Se sintetizó y se purificó RCAI-148 por un procedimiento similar al del Ejemplo 1. Las propiedades físicas de RCAI-148 se muestran a continuación. Punto de fusión 138-140° C. [δ]D27 = 42,8 (c = 0,30, piridina). IR (KBr): νmax = 3340 (ancho, fuerte, OH, NH), 1700 (ancho, fuerte, C=O), 1640 (ancho, fuerte, C=O), 1545 (ancho,

fuerte), 1270 (ancho, medio), 1140 (ancho, medio, C-O), 1080 (ancho, fuerte, C-O), 1040 (ancho, fuerte, C-O), 720

(débil) cm-1 . 1H-RMN (500 MHz, piridina-d5): δ = 8,46 (1H, d, J = 8,5 Hz), 7,78 (1H, t, J = 5,0 Hz), 5,48 (1H, d, J = 3,5 Hz ), 5,195,14 (1H, m), 4,90 (1H, dd, J = 11, 7,5 Hz), 4,77 (1H, dd, J = 11, 5,0 Hz), 4,61 (1H, dd, J = 11, 5,0 Hz), 4,58 (1H, dd, J = 10, 3,5 Hz), 4,54 (1H, dd, J = 7,5, 5,0 Hz), 4,37-4,29 (4H, m), 4,25 (1H, ancho, t, J = 8,5 Hz), 3,38-3,32 (2H, m), 2,46-2,38 (2H, m), 2,28-2,20 (1H, m), 1,95-1,84 (2H, m), 1,84-1,76 (2H, m), 1,72-1,61 (1H, m), 1,48-1,16 (66H, m), 1,14 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,849 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,846 (3H, t, J = 7,0 Hz) ppm.

HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C53H104N2O10Na): 951,7589; encontrado: 951,7573. Ejemplo 6: Síntesis y método de purificación de RCAI-149 (compuesto F) Se sintetizó y se purificó RCAI-149 por un procedimiento similar al del Ejemplo 1. Las propiedades físicas de RCAI-149 se muestran a continuación. Punto de fusión 151-153° C. [α]D27 = 45,2 (c = 0,31, piridina). IR (KBr): νmax = 3310 (ancho, fuerte, OH, NH), 1680 (ancho, fuerte, C=O), 1645 (ancho, fuerte, C=O), 1540 (ancho,

medio), 1285 (medio), 1140 (medio, C-O), 1080 (ancho, fuerte, CO), 1045 (ancho, medio, C-O), 720 (débil) cm-1 . 1H-RMN (500 MHz, piridina-d5): δ = 8,45 (1H, d, J = 9,0 Hz), 5,53 (1H, d, J = 3,5 Hz), 5,28-5,23 (1H, m), 4,84 (1H, dd, J = 11, 7,5 Hz), 4,77 (1H, dd, J = 11, 5,0 Hz), 4,64 (1H, dd, J = 11, 5,5 Hz), 4,59 (1H, dd, J = 9,5, 4,0 Hz), 4,50 (1H, dd, J = 7,5, 5,5 Hz), 4,37-4,28 (4H, m), 4,35 (1H, dd, J = 7,5, 4,0 Hz), 3,34-3,20 (4H, m), 2,49-2,39 (2H, m), 2,32-2,25

(1H, m), 1,96-1,86 (2H, m), 1,82 (2H, d, quintuplete, J = 7,5, 2,5 Hz), 1,72-1,64 (1H, m ), 1,48-1,16 (66H, m), 1,07 (4H, ancho, s), 0,850 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,848 (3H, t, J = 7,0 Hz) ppm. HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C55H108N2O10Na): 979,7902; encontrado: 979,7913.

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1H-RMN (500 MHz, piridina-d5): δ = 10,44 (1H, s), 8,55 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,88 (2H, ancho, d, J = 7,0 Hz), 7,00 (2H, d, J = 9,0 Hz), 5,50 (1H, d, J = 4,0 Hz), 5,21-5,15 (1H, m), 5,01 (1H, dd, J = 12, 8,0 Hz), 4,80 (1H, dd, J = 12, 4,0 Hz), 4,64-4,56 (3H, m), 4,38-4,31 (4H, m), 4,27 (1H, ancho, t, J = 7,0 Hz), 3,65 (3H, s), 2,44 (2H, dt, J = 7,0, 2,0 Hz), 2,282,21 (1H, m), 1,96-1,85 (2H, m), 1,85-1,75 (2H, m), 1,71-1,62 (1H, m), 1,46-1,16 (66H, m), 0,849 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,846 (3H, t, J = 7,0 Hz) ppm.

HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C58H106N2O11Na): 1029,7694; encontrado: 1029,7670. Ejemplo 12: Síntesis y método de purificación de RCAI-140 (compuesto L) RCAI-140 se sintetizó y se purificó por un procedimiento similar al del Ejemplo 7. Las propiedades físicas de RCAI-140 se muestran a continuación. Punto de fusión 149-150° C. [α]D27 = 39,4 (c = 0,31, piridina). IR (KBr): νmax = 3320 (ancho, fuerte, OH, NH), 1710 (ancho, fuerte, C=O), 1645 (ancho, fuerte, C=O), 1545 (ancho,

fuerte), 1240 (ancho, medio), 1075 (ancho, fuerte, C-O), 1040 (medio, C-O), 820 (medio) cm-1 . 1H-RMN (500 MHz, piridina-d5): δ = 10,49 (1H, s), 8,56 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,87 (2H, ancho, d, J = 7,0 Hz), 7,16 (2H, d, J = 8,5 Hz), 5,49 (1H, d, J = 3,5 Hz), 5,20-5,14 (1H, m), 5,00 (1H, dd, J = 11, 7,5 Hz), 4,78 (1H, dd , J = 11, 4,0 Hz), 4,64-4,56 (3H, m), 4,39-4,31 (4H, m), 4,27 (1H, ancho, t, J = 6,5 Hz), 2,44 (2H, t, J = 7,0 Hz ), 2,27-2,17 (1H, m),

2,20 (3H, s), 1,96-1,85 (2H, m), 1,85-1,74 (2H, m), 1,71-1,62 (1H, m), 1,46-1,16 (66H, m), 0,849 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,846 (3H, t, J = 7,0 Hz) ppm. HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C58H106N2O10Na): 1013,7745; encontrado: 1013,7739. Ejemplo 13: Síntesis y método de purificación de RCAI-141 (compuesto M) RCAI-141 se sintetizó y se purificó por un procedimiento similar al del Ejemplo 7. Las propiedades físicas de RCAI-141 se muestran a continuación. Punto de fusión 163-165° C. [α]D29 = 36,1 (c = 0,30, piridina). IR (KBr): νmax = 3400 (ancho, fuerte, OH), 3300 (ancho, medio, NH), 1710 (ancho, fuerte, C=O), 1640 (ancho, fuerte,

C=O), 1620 (ancho, fuerte, C=O), 1545 (ancho, fuerte), 1330 (fuerte), 1245 (ancho, medio), 1165 (medio, C-O), 1130

(ancho, fuerte, C-O), 1070 (ancho, fuerte, C-O), 840 (medio) cm-1 . 1H-RMN (500 MHz, piridina-d5): δ = 10,97 (1H, s), 8,60 (1H, d, J = 8,5 Hz), 8,03 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,65 (2H, d, J = 8,5 Hz), 5,50 (1H, d, J = 4,0 Hz), 5,18-5,13 (1H, m), 5,03 (1H, dd, J = 11, 8,5 Hz), 4,78 (1H, dd, J = 11, 3,5 Hz), 4,61 (1H, dd, J = 9,5, 3,5 Hz), 4,61-4,58 (2H, m), 4,40-4,32 (4H, m), 4,26 (1H, dd, J = 8,5, 2,5 Hz), 2,44 (2H, t, J = 7,0 Hz), 2,26-2,19 (1H, m), 1,95-1,85 (2H, m), 1,83-1,73 (2H, m), 1,71-1,61 (1H, m), 1,46-1,16 (66H, m), 0,849 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,845 (3H, t, J = 7,0 Hz) ppm.

HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C58H103N2O10F3Na): 1067,7463; encontrado: 1067,7469. Ejemplo 14: Síntesis y método de purificación de RCAI-150 (abarcado en el compuesto N)

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sodio y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de la filtración, el filtrado se concentró a presión reducida, y se evaporó el disolvente. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (30 g, hexano:acetato de etilo = 3:1) para dar el compuesto 2'' (147 mg, 97%) como un sólido incoloro.

Punto de fusión 79,5-81,0° C.

[α]D26 = 21,3 (c = 1,02, CHCl3).

IR (KBr): νmax = 3420 (m, NH), 3340 (m, NH), 1710 (fuerte, C=O), 1650 (fuerte, C=O), 1545 (fuerte), 1495 (medio), 1290 (medio), 1190 (ancho, fuerte, C-O), 1100 (ancho, fuerte, C-O), 1060 (ancho, fuerte, C-O), 740 (ancho, fuerte), 695 (fuerte) cm-1 .

1H-RMN (500 MHz, CDCl3): δ = 7,39-7,15 (25H, m), 5,13 (1H, ancho, s), 4,98 (1H, d, J = 12 Hz), 4,90 (1H, ancho, d, J = 9,0 Hz), 4,84 (1H, d, J = 12 Hz), 4,81 (1H, d, J = 4,0 Hz), 4,78 (1H, d, J = 12 Hz), 4,74 (1H, d, J = 12 Hz), 4,73 (1H, d, J = 12 Hz), 4,68 (1H, d, J = 12 Hz), 4,62 (1H, d, J = 12 Hz), 4,58 (1H, d, J = 12 Hz ), 4,57 (1H, d, J = 12 Hz), 4,48 (1H, d, J = 12 Hz), 4,17 (1H, dd, J = 11, 5,0 Hz), 4,09-4,03 (3H, m), 3,99 (1H, ancho, t, J = 6,5 Hz), 3,96-3,88 (1H, m), 3,90 (1H, dd, J = 10, 3,0 Hz), 3,86 (1H, ancho, s), 3,74 (1H, dd, J = 8,0, 3,0 Hz), 3,68 (1H, dd, J = 11, 3,0 Hz), 3,59 (1H, dt, J = 8,0, 3,0 Hz), 3,07-3,01 (2H, m), 2,84 (3H, s), 2,73 (3H, s), 1,72-1,53 (3H, m), 1,50-1,40 (1H, m), 1,40-1,18 (52H, m), 0,88 (6H, t, J = 7,0 Hz) ppm.

HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C79H117N3O10Na): 1290,8637; encontrado: 1290,8606.

Síntesis y método de purificación de RCAI-150

RCAI-150 se sintetizó y se purificó a partir del compuesto 2'' por un método similar al de la conversión del compuesto 13 a RCAI-123.

Las propiedades físicas del compuesto RCAI-150 se muestran a continuación.

Punto de fusión 140-142° C.

[α]D27 = 52,8 (c = 0,32, piridina).

IR (KBr): νmax = 3480 (ancho, fuerte), 3440 (ancho, medio), 3350 (ancho, fuerte), 1690 (fuerte, C=O), 1670 (fuerte, C=O), 1620 (fuerte, C=O), 1590 (ancho, medio), 1215 (medio), 1080 (ancho, fuerte, C-O) cm-1 .

1H-RMN (500 MHz, piridina-d5): δ = 6,79 (1H, t, J = 5,5 Hz), 6,70 (1H, d, J = 9,0 Hz), 5,51 (1H, d, J = 4,0 Hz ), 5,125,08 (1H, m), 4,81 (1H, dd, J = 11, 7,5 Hz), 4,71 (1H, dd, J = 11, 5,0 Hz), 4,61 (1H, dd, J = 10, 5,0 Hz), 4,57 (1H, dd, J = 9,0, 3,5 Hz), 4,41 (1H, dd, J = 7,0, 5,0 Hz), 4,36 (1H, dd, J = 10, 3,5 Hz), 4,30-4,22 (4H, m), 3,52-3,39 (2H, m), 2,81 (6H, ancho, s), 2,30-2,22 (1H, m), 1,92-1,80 (2H, m), 1,68-1,60 (1H, m), 1,57 (2H, quintuplete, J = 7,0 Hz), 1,441,16 (48H, m), 0,85 (6H, t, J = 7,0 Hz) ppm.

HR-ESIMS: Calculado para [M+Na]+ (C44H87N3O10Na): 840,6289; encontrado: 840,6276.

Ejemplo Experimental 1: Prueba de actividad biológica del carbamato de glicolípido

Se prepararon soluciones de cada uno de α-GalCer (KRN7000), RCAI-123, RCAI-124, RCAI-137, RCAI-138, RCAI148, RCAI-149, RCAI-121, RCAI-122, RCAI-131, RCAI-132, RCAI-139, RCAI-140, RCAI-141 y RCAI-150 en dimetilsulfóxido (DMSO) a una concentración de 1 mg/ml. Las soluciones de DMSO antes mencionadas se diluyeron 5 veces con Tween 20 (Bio-Rad) al 0,5% que contenía tampón de fosfato (Invitrogen) y se diluyeron 20 veces más con tampón de fosfato, de manera que la dosis se convirtió en 100 µg/kg de peso corporal cuando se administró 200 µl por ratón en la vena de la cola.

A tres ratones C57BL/6 por grupo se les inyectó cada solución preparada (200 µl) de RCAI-123, RCAI-124, RCAI137, RCAI-138, RCAI-148, RCAI-149, RCAI-121, RCAI-122, RCAI-131, RCAI-132, RCAI-139, RCAI-140, RCAI-141 o RCAI-150 en la vena de la cola (administración de aproximadamente 2 µg por ratón). Como sustancia de control, se utilizó α-GalCer (KRN7000), y una solución (200 µl) de α-GalCer (KRN7000) preparada de la misma manera tal que la dosis que se inyectó fue de 100 µg/kg de peso corporal en la vena de la cola. Se recogió sangre del plexo venoso orbital (80 µl) inmediatamente antes de la administración, y después de un tiempo de 1, 3, 6, 12, 24, 32, 48, 60 y 72 horas, y se preparó el plasma.

Se midió el contenido de cada citoquina en el plasma inmediatamente antes y después de la administración de RCAI-123 por el sistema de serie de cuentas de citometría (Cytometric Bead Array (CBA)) (BD Biosciences), que es uno de los métodos de ELISA.

Los resultados de la medición (promedio) y la desviación estándar del mismo (STDEV) del contenido de IFN-γ en el plasma inmediatamente antes de la administración, y después de un tiempo de 1, 3, 6, 12, 24, 32, 48, 60 y 72 horas se muestran en la figura 1. Los resultados de la medición (promedio) y la desviación estándar del mismo (STDEV) del contenido de IL-4 en plasma inmediatamente antes de la administración, y después de un tiempo de 3, 6 y 12

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horas de la administración se muestran en la figura 2. Los resultados de la medición (promedio) y la desviación estándar de la misma (STDEV) del contenido de IL-12 en el plasma inmediatamente antes de la administración, y después de un lapso de 3, 6 y 12 horas de la administración se muestran en la figura 3.

Los resultados anteriormente mencionados muestran que RCAI-123 indujo la producción de IFN-γ en el mismo grado que α-GalCer (KRN7000), pero que indujo una cantidad pequeña de producción de IL-4 en comparación con α-GalCer (KRN7000), lo que indica que RCAI-123 tiene una actividad de inducción de la producción de citoquinas con sesgo a IFN-γ. Es decir, mediante la conversión del grupo hidroxi en posición 6 del resto de azúcar a un enlace de carbamato, se ha desarrollado un nuevo compuesto capaz de inducir la producción de citoquinas con sesgo al tipo Th1.

Ejemplo Experimental 2: Prueba de actividad biológica de las células dendríticas pulsadas con carbamato de glicolípido

(preparación de células dendríticas)

Se recogieron células de médula ósea del fémur de ratones C57BL/6J, hemolizadas con tampón de lisis de glóbulos rojos (SIGMA), y se prepararon células mononucleares. Además, se eliminaron las células positivas al receptor Fcγ según un método de cribado utilizando γ-globulina humana (SIGMA) para concentrar las células no diferenciadas.

Las células mononucleares no diferenciadas concentradas a una densidad de 2,7 × 105/cm2 se cultivaron en medio RPMI1640 (10% FBS) (Invitrogen) que contenía 5 ng/ml de GM-CSF (R&D) en condiciones de 37° C, 5% de CO2 durante 5 días para inducir la diferenciación en células que contenían células dendríticas CD11c positivas.

Para recuperar las células dendríticas CD11c-positivas diana de las células de diferenciación inducida, las células se suspendieron en 400 µl de RPMI1640 (10% FBS), se añadieron 100 µl de cuentas CD11c (Milltenyi Biotech), y la mezcla se incubó a 4° C durante 15 minutos. La mezcla se lavó con tampón MACS y las células dendríticas CD11c positivas fueron recuperadas por selección positiva utilizando una columna LS.

Las células dendríticas recuperadas se pulsaron con el glicolípido por medio del cultivo a una densidad de 3,1 × 105/cm2 en medio RPMI1640 (10% FBS) que contenía glicolípido a una concentración de 100 ng/ml en las condiciones de 37° C, 5% de CO2 durante 24 horas. Para la preparación de la solución de glicolípido, se preparó primero una solución de dimetilsulfóxido (DMSO) a una concentración de 1 mg/ml. La solución se diluyó 5 veces con tampón de fosfato (Invitrogen) que contenía 0,5% de Tween 20 (Bio-Rad), y se diluyó adicionalmente 2 veces con tampón de fosfato.

Las células dendríticas pulsadas con glicolípido se lavaron con tampón de fosfato, se ajustaron a una concentración de 2,5 x 106 células/ml con tampón de fosfato, y se inyectó 200 µl, es decir, 5 x 105 células, en la vena de la cola de ratones C57BL/6 (tres ratones por grupo).

En cuanto al glicolípido, se usaron los carbamatos de glicolípido RCAI-121, RCAI-122, RCAI-123, RCAI-124, RCAI131, RCAI-132, RCAI-137, RCAI-138, RCAI-139, RCAI-140 y RCAI-141, y se utilizó α-GalCer (KRN7000) como la sustancia de control.

Se recogió sangre (80 µl) del plexo orbital venoso inmediatamente antes de la administración, y después de un tiempo de 1, 3, 6, 12, 24, 32, 48, 60 y 72 horas de la administración, y se preparó el plasma.

El contenido de IFN-γ en el plasma inmediatamente antes de la administración, y después de un lapso de 1, 3, 6, 12, 24, 32, 48, 60 y 72 horas de la administración se midió por un método sándwich de ELISA (ENDOGEN). Los resultados de la medición (promedio) de la cantidad de producción de IFN-γ y la desviación estándar de la misma (STDEV) se muestran en las figuras 4-6.

El contenido de IL-4 en el plasma inmediatamente antes de la administración, y después de un lapso de 1, 3, 6, 12, 24, 32, 48, 60 y 72 horas de la administración se midió por el sistema de serie de cuentas de citometría (Cytometric Bead Array (CBA)) (BD Biosciences), que es uno de los métodos de ELISA. Los resultados de la medición (promedio) de la cantidad de producción de IL-4 y la desviación estándar del mismo (STDEV) se muestran en las figuras 7-9.

El contenido de IL-12 en el plasma inmediatamente antes de la administración, y después de un lapso de 1, 3, 6, 12, 24, 32, 48, 60 y 72 horas de la administración se midió por el sistema de CBA (BD Biosciences). Los resultados de la medición (promedio) de la cantidad de producción de IL-12 y la desviación estándar del mismo (STDEV) se muestran en las figuras 10-12.

Los resultados anteriormente mencionados muestran que puede inducirse selectivamente una producción de IFN-γ más fuerte por pulsación de las células dendríticas con el carbamato de glicolípido de la presente invención y administración de las células dendríticas pulsadas al cuerpo vivo.

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Claims

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