WO2012073713A1 - 液体クロマトグラフ、液体クロマトグラフ用試料導入装置、および液体クロマトグラフ用試料導入装置の洗浄方法 - Google Patents

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needle
cleaning
cleaning liquid
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裕志 鈴木
公彦 石井
植田　充彦
清水　克敏
関　良明
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株式会社 日立ハイテクノロジーズ
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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    • G01N1/02—Devices for withdrawing samples
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/24—Automatic injection systems
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/10—Devices for transferring samples or any liquids to, in, or from, the analysis apparatus, e.g. suction devices, injection devices
    • G01N35/1095—Devices for transferring samples or any liquids to, in, or from, the analysis apparatus, e.g. suction devices, injection devices for supplying the samples to flow-through analysers
    • G—PHYSICS
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    • G01N35/10—Devices for transferring samples or any liquids to, in, or from, the analysis apparatus, e.g. suction devices, injection devices
    • G01N35/1004—Cleaning sample transfer devices

Definitions

  • the present invention relates to a liquid chromatograph, a liquid chromatograph sample introduction device, and a cleaning method for a liquid chromatograph sample introduction device.
  • a mobile phase (eluent) is sucked by a pump device, and the mobile phase is sent to a column together with a sample introduced by an automatic sample introduction device.
  • the sample introduced into the column is separated into each component and detected by various detectors.
  • HPLC high performance liquid chromatograph
  • it is required to perform analysis under a high pressure of 20 MPa to 40 MPa at the maximum.
  • Such an HPLC pump apparatus is required to be able to supply a mobile phase accurately and precisely even under high pressure.
  • the automatic sample introduction device draws the sample liquid from the sample holding container arranged in the sample rack with the needle, stores the sample in the sample storage loop, and automatically injects the sample into the mobile phase channel of the liquid chromatograph. It is a device for doing.
  • an automatic sample introduction apparatus having a pretreatment function such as diluting a sample before injecting into the mobile phase flow path or mixing and labeling the sample and the reaction reagent is often used.
  • the injection method in such an automatic sample introduction device includes a direct injection method in which a needle and a sample storage loop are incorporated into a part of a mobile phase channel under high pressure (for example, see Patent Document 1 and Patent Document 2), Only the sample storage loop is roughly divided into two types, a loop injection method (see, for example, Patent Document 3 and Patent Document 4) incorporated into a part of the mobile phase flow path under high pressure.
  • the sample temporarily stored in the needle and sample storage loop is pushed to the column by the mobile phase at the start of analysis, and the inside of the needle and sample storage loop is always flushed by the mobile phase during analysis. Therefore, there is an advantage that the sucked sample can be introduced into the column without waste, and another means for cleaning the inside of the needle contaminated with the sample is not required.
  • the needle in the loop injection method, since the needle is outside the mobile phase flow path under high pressure during the analysis, the needle can be moved and the sample can be measured even during the analysis. Since a structure for maintaining liquid tightness between the inlet and the inlet is unnecessary, there is an advantage that sample pretreatment can be performed during analysis. On the other hand, since another means for cleaning the inside of the needle and its process are required, there is a disadvantage that the time required for sample injection becomes longer than that in the direct injection method.
  • the cleaning liquid itself does not hold strongly in the column and reaches the detector in a state of being almost passed.
  • the difference of the light absorption is detected with a detector, and is recorded on a chromatogram. This ghost peak due to the cleaning liquid becomes a problem particularly when a very small amount of sample is analyzed with high sensitivity.
  • the dilution of the sample solution is promoted in the above-described sample introduction process,
  • the sample lysate has a wider bandwidth and is stored in the sample storage loop.
  • the peak width of the chromatogram of the sample component detected by the detector is also widened. That is, there is a problem that the analysis time becomes longer because the resolution of the target component is deteriorated, and the processing capability as a chromatographic apparatus is lowered.
  • the peak height of the chromatogram of the sample component is also reduced, there is a problem that the sensitivity as a liquid chromatograph is also lowered.
  • An object of the present invention is to provide a liquid chromatograph, a liquid chromatograph sample introduction device, which can prevent detection of a ghost peak and improve the resolution of a chromatogram, thereby preventing a long analysis time. And a method for cleaning a liquid chromatograph sample introduction device.
  • the present invention provides a first flow path switching means that has a sample storage loop and switches whether the sample storage loop is connected to the mobile phase flow path or disconnected from the mobile phase flow path.
  • a needle that sucks and discharges the sample
  • a measuring means that measures the sample by sucking and discharging the sample to the needle
  • a cleaning liquid feeding means that sends the cleaning liquid
  • a second that switches between at least two types of cleaning liquids
  • the flow path switching means, the third flow path switching means for switching the connection between the needle and the metering means, and the connection between the needle and the cleaning liquid feeding means, the first flow path switching means, Control means for controlling the operation of the weighing means, the cleaning liquid feeding means, the second flow path switching means, and the third flow path switching means.
  • the present invention is configured to inject the entire amount of the sample into the sample storage loop and inject the cleaning liquid into the flow path from the sample storage loop to the sample injection port.
  • the detection of a ghost peak is prevented and the resolution of the chromatogram is improved, so that the liquid chromatograph, the liquid chromatograph sample introducing device, which can prevent the analysis time from being increased with high sensitivity, And a method for cleaning a liquid chromatograph sample introduction apparatus.
  • FIG. 1 is a schematic configuration diagram of a liquid chromatograph apparatus using a loop injection type automatic sample introduction apparatus which is an embodiment of the present invention.
  • the sample holding container 1 is installed on the sample rack 14.
  • the needle 2 is moved between the sample holding container 1, the washing tank 10, and the sample injection port 3 of the 6-port 2-position injection valve 8 by a needle moving mechanism (not shown).
  • the 6-port 2-position injection valve 8 has six ports and a flow path that communicates two adjacent ports among them, and in the injection position, as shown in the figure, the port P1 Port P6, port P2 and port P3, and port P4 and port P5. Further, the pump device 7 is connected to the port P1, the column 6 is connected to the port P2, the sample storage loop 5 is connected between the ports P3 and P6, the sample inlet 3 is connected to the port P4, and the drain 22 for discharging the waste liquid is connected to the port P5.
  • the column 6 is connected to the detector 30 by piping, and the detector 30 detects the separated sample supplied from the column 6 and sends a detection signal to a data processing device (not shown).
  • the 6-port 2-position injection valve 8 can take another position by rotating 60 degrees.
  • port P1 and port P2, port P3 and port P4, and port P5 and port P6 communicate with each other.
  • the pump device 7, the port P1, the port P2, and the column 6 are communicated in this order, and the mobile phase flows to the column without being injected into the mobile phase sent from the pump device 7.
  • the needle 2, the sample inlet 3, the port P4, the port P3, the sample storage loop 5, the port P6, the port P5, and the drain 22 are communicated in this order, and the sample sucked by the needle 2 from the sample holding container 1 is sample injected. It is injected from the inlet 3 and the sample storage loop 5 is filled with the sample.
  • the sample held in the sample storage loop 5 is pushed into the column 6 by the mobile phase sent from the pump device 7. Further, in order to clean the needle 2 when the sample is changed, the needle 2 is positioned in the cleaning tank 10, and the cleaning liquid is allowed to flow from the cleaning pump device 15 to the needle 2 via the syringe valve 16. In addition, the injection valve 8 is cleaned by positioning the needle 2 to the sample inlet 3.
  • the cleaning pump device 15, the syringe valve 16, the plunger cleaning flow path 17, the three-way valve 18, the cleaning liquid container 20, the cleaning liquid container 21, the degassing device 24, and the degassing device 25 are collectively referred to as a cleaning unit.
  • the five-port four-position syringe valve 16 has five ports, and four types of passages indicated by solid lines and broken lines in the figure are provided to communicate between the two ports.
  • the port P1 communicates with the washing tank 10, the port P2 communicates with the needle 2, the port P3 communicates with the syringe 11 for measuring the sample, and the port P4 communicates with the plunger washing flow path 17 for washing the plunger of the pump device 7.
  • the port P5 communicates with the cleaning pump device 15. Then, four positions can be taken by rotating 45 degrees. In the first position, the port P5 communicates with the port P1, and the port P2 communicates with the port P3. In the second position, port P5 communicates with port P2, and port P3 communicates with port P4. The third position is indicated by a solid line in the figure, and only the port P5 and the port P3 communicate with each other. In the fourth position, only the port P5 and the port P4 communicate.
  • the cleaning liquid A is held in the cleaning liquid container 20 and the cleaning liquid B is held in the cleaning liquid container 21, and the cleaning liquid A or the cleaning liquid B is selected by the three-way valve 18 via the degassing devices 24 and 25.
  • the salt contained in the mobile phase deposited on the plunger surface of the pump device 7 can be washed by communicating the plunger cleaning channel 17 and the pump device 7.
  • the needle 2 When the syringe valve 16 is in a position where the ports P1 and P5 and the ports P2 and P3 communicate with each other, the needle 2 is connected to the syringe 11 for measuring the sample via the buffer tube 13, and the syringe 11 By operating up and down, the liquid in the pipe from the needle 2 to the syringe 11 is sucked and discharged.
  • FIG. 2 is a functional diagram showing a control target of the operation control unit 201 that controls a mechanism for operating a valve or the like of the liquid chromatograph apparatus.
  • the operation control unit 201 includes a processor that executes a control program stored in a memory (not shown) in advance, and includes a needle moving mechanism 202, a syringe operating mechanism 203, a cleaning unit operating mechanism 204, a syringe valve operating mechanism 205, and a three-way valve operating mechanism.
  • an operation command is sent to the injection valve operation mechanism 207.
  • the movement and suction / discharge operation of the syringe 11 are controlled by the syringe operation mechanism 203.
  • the cleaning unit is operated by the cleaning unit operation mechanism 204.
  • the syringe valve 16 is operated by a syringe valve operating mechanism 205.
  • the three-way valve 18 is operated by a three-way valve operating mechanism 206.
  • the injection valve 8 is operated by an injection valve operating mechanism 207.
  • the loop injection method in the present embodiment is also referred to as a total injection method because the entire amount of the sample sucked from the needle 2 is sent to the sample storage loop 5 of the injection valve 8 and reaches the column 6 for separating the sample.
  • the following terms are arranged.
  • vi injection volume, net sample introduction amount into mobile phase flow path.
  • vf Feed volume.
  • vd Dead volume, from sample inlet to injection valve.
  • va Air volume, the volume of the air layer before and after the sample.
  • the setting of whether to sandwich va before and after the sample can be selected by an automatic sample introduction apparatus.
  • FIG. 1 above shows a flow path in which the automatic sample introduction apparatus is initialized and is in an idle state.
  • a mobile phase in which no sample is injected flows from the pump device 7 to the column 6 through the sample storage loop 5 of the injection valve 8.
  • the cleaning liquid container 20 that holds the cleaning liquid A is connected to the syringe 11 via the three-way valve 18, the cleaning pump device 15, and the port P 3 that communicates with the port P 5 of the syringe valve 16. It has been washed.
  • the needle 2 is positioned above the cleaning tank 10 so that the liquid dripped from the needle 2 is received by the cleaning tank 10.
  • FIG. 3 is a schematic configuration diagram of the liquid chromatograph apparatus as in FIG. 1 and shows a state in which the inside of the buffer tube 13 and the needle 2 is replaced with the cleaning liquid B held in the cleaning liquid container 21 and is cleaned.
  • the needle 2 is moved to the sample injection port 3 and communicated with the port P4 of the injection valve 8.
  • the syringe valve 16 is rotated 45 degrees clockwise with respect to the state shown in FIG. 1 so as to connect the port P5 and the port P2 and to switch to the position where the port P3 and the port P4 are communicated.
  • the three-way valve 18 is switched to the cleaning liquid container 21 that holds the cleaning liquid B.
  • the cleaning liquid B is sent to the syringe valve 16, the buffer tube 13, the needle 2 and the injection valve 8 by the cleaning pump device 15, and the inside of the port P 5 communicating with the port P 4 of the injection valve 8 is also cleaned, and the cleaning liquid B is discharged from the drain 22. Is done.
  • FIG. 4 is a schematic configuration diagram of the liquid chromatograph apparatus as in FIG. 1, and shows a state in which the outside of the needle 2 is cleaned with the cleaning liquid A in the cleaning tank 10.
  • the position of the port of the injection valve 8 is not changed, and the syringe valve 16 is rotated 45 degrees clockwise relative to the state of FIG. 3 so that the port P5 and the port P1 communicate with each other, and the port P2 and the port P3 are connected. Switch to the position to communicate.
  • the cleaning liquid A in the cleaning liquid container 20 is sent to the cleaning tank 10 via the syringe valve 16 by the cleaning pump device 15, the needle 2 is immersed in the cleaning liquid A in the cleaning tank 10, sucked by the syringe 11, and the syringe valve 16 or needle 2 is filled with the cleaning liquid A.
  • the amount of suction is vf + vd, that is, the sum of the feed volume and dead volume. Further, the outside of the needle 2 is washed by immersing the needle 2 in the washing tank 10.
  • FIG. 5 is a schematic configuration diagram of the liquid chromatograph apparatus as in FIG. 1, and shows a step of sucking a sample.
  • the needle 2 is moved from the washing tank 10 to the sample holding container 1 without changing the positions of the ports of the syringe valve 16 and the injection valve 8, but air is moved by the syringe 11 during the movement. To suck. The suction amount is half of the air volume va.
  • the needle 2 is moved to the sample holding container 1 and the sample is sucked by the syringe 11.
  • the suction amount is the injection volume vi.
  • FIG. 6 is a schematic configuration diagram of the liquid chromatograph apparatus as in FIG. 1, and shows a state in which the outside of the needle 2 is washed with the washing liquid A after the sample is sucked.
  • the needle 2 is moved from the sample holding container 1 to the washing tank 10 without changing the positions of the ports of the syringe valve 16 and the injection valve 8. Air is sucked in half of va.
  • the cleaning liquid A is sent to the cleaning tank 10 by the cleaning pump device 15 to clean the outside of the needle 2.
  • the cleaning liquid A that has overflowed in the cleaning tank 10 is discharged from the drain 23.
  • FIG. 7 is a schematic configuration diagram of the liquid chromatograph apparatus as in FIG. 1, and shows a state where the needle 2 is moved to the sample inlet 3 of the injection valve 8. As shown in FIG. 7, without changing the positions of the ports of the syringe valve 16 and the injection valve 8, the needle 2 is moved to the sample injection port 3 of the injection valve 8, and preparation for injecting the sample from the port P4 to the injection valve 8 is performed. do.
  • FIG. 8 is a schematic configuration diagram of the liquid chromatograph apparatus as in FIG. 1, and shows a state in which the pressure in the sample storage loop 5 is released.
  • the inside of the sample storage loop 5 is connected to the pump device 7 and forms a mobile phase flow path, so that the pressure is higher than the atmospheric pressure.
  • the position of the port of the syringe valve 16 is not changed, the injection valve 8 is rotated 60 degrees counterclockwise, and the sample storage loop 5 of the injection valve 8 is removed from the mobile phase flow path of the pump device 7.
  • the pressure in the sample storage loop 5 is released from the drain 22 to atmospheric pressure by disconnecting and disconnecting the sample storage loop 5 under high pressure from the mobile phase flow path.
  • FIG. 9 is a schematic configuration diagram of the liquid chromatograph apparatus as in FIG. 1, and shows a process of sending the sample sucked by the needle 2 to the injection valve 8.
  • the sample inside the needle 2 is pushed from the port P4 of the injection valve 8 by pushing out the cleaning liquid A and the air in the syringe 11 without changing the positions of the ports of the syringe valve 16 and the injection valve 8. It is sent to the sample storage loop 5 inside the injection valve 8.
  • the amount pushed out by the syringe 11 is an amount vf + vi + vd + va that is a sum of the feed volume, the injection volume, the dead volume, and the air volume.
  • the cleaning liquid A of volume vf sucked in the step of FIG. 4 is sent to the injection valve 8, so that the entire amount of the sample is passed through the sample storage loop 5. Can be satisfied.
  • FIG. 10 is a schematic configuration diagram of the liquid chromatograph apparatus as in FIG. 1, and shows a process of introducing the sample held in the sample storage loop 5 into the mobile phase flow path.
  • the injection valve 8 is rotated clockwise by 60 degrees, and the port P 3 of the sample storage loop 5 is connected to the port P 2 connected to the column 6.
  • the port P6 of the sample storage loop 5 is communicated with the port P1 connected to the pump device 7, and the mobile device flows to the sample storage loop 5 by the pump device 7 and is sent to the column 6 together with the sample.
  • the syringe 11 is moved to the top dead center, and the liquid in which the cleaning liquid A in the needle 2 and the remainder of the sample are mixed is supplied from the sample injection port 3 to the ports P4 and P5 of the injection valve 8. To the drain 22.
  • FIG. 11 is a schematic configuration diagram of the liquid chromatograph apparatus as in FIG. 1, and shows a process of cleaning the inside of the needle 2 with the cleaning liquid A.
  • the syringe valve 16 is rotated 45 degrees counterclockwise to switch to a position where the ports P5 and P2, and the ports P3 and P4 communicate with each other.
  • the cleaning liquid A held in the cleaning liquid container 20 by the cleaning pump device 15 is sent to the needle 2 via the syringe valve 16 and the inside of the needle 2 is cleaned with the cleaning liquid A.
  • the cleaning liquid A is discharged from the drain 22.
  • the syringe valve 16 After completion of the cleaning of the needle 2 shown in FIG. 11, the syringe valve 16 is rotated 45 degrees counterclockwise, and the port P5 and the port P3 of the syringe valve 16 are communicated to shift to the idle state shown in FIG. . Further, the needle 2 is moved above the cleaning tank 10.
  • FIG. 12 is a schematic configuration diagram of the liquid chromatograph apparatus as in FIG. 1 and is executed after the cleaning of the needle 2 shown in FIG. 10 when the cleaning of the plunger of the pump device 7 is set in advance. It is a process.
  • the syringe valve 16 is rotated 90 degrees counterclockwise to switch to a position where the port P5 and the port P4 communicate with each other.
  • the three-way valve 18 is switched and connected to the cleaning liquid container 21, the cleaning liquid B is sucked by the cleaning pump device 15, and the pump device 7 (not shown) is drawn from the plunger cleaning channel 17.
  • the cleaning time is set in advance, and when completed, the syringe valve 16 is rotated 45 degrees clockwise to shift to the idle state shown in FIG.
  • FIGS. 13A, 13B, 14A, and 14B are graphs showing examples of chromatograms.
  • FIG. 13A shows the result of the conventional apparatus configuration
  • FIG. 13B shows the result of the apparatus configuration of the present invention.
  • the analysis conditions are: 60 ppm methyl paraben for the sample, methanol for the sample solution, 60% aqueous methanol solution for the mobile phase, methanol for the cleaning solution A, 60% aqueous methanol solution for the cleaning solution B, the flow rate of the mobile phase is 1 ml / min, and the column is ODS.
  • FIG. 13A is a chromatogram when the step shown in FIG. 3 is not carried out
  • FIG. 13B is a chromatogram when the step shown in FIG. 3 is carried out
  • the chromatogram shown in FIG. Before this peak, a ghost peak caused by the washing solution A methanol, which is caused by the difference in absorbance between the 60% aqueous methanol solution and the washing solution A methanol, is detected.
  • FIG. 13B in the process shown in FIG. 3, the inside of the pipe including the buffer tube 13 and the needle 2 is replaced with a 60% methanol aqueous solution of the cleaning liquid B, so that the chromatogram shown in FIG. The ghost peak is completely gone.
  • FIG. 14A shows the result of the conventional apparatus configuration
  • FIG. 14B shows the result of the apparatus configuration of the present invention.
  • the analysis conditions are: 60 ppm methyl paraben for the sample, 60% methanol aqueous solution for the sample solution, 60% methanol aqueous solution for the mobile phase, 60% methanol aqueous solution for the cleaning solution, distilled water for the cleaning solution B, and 1 ml / min of the mobile phase flow rate.
  • the column is ODS, the dimensions are 4.6 mm ID ⁇ 150 mm L, the particle size is 5 ⁇ m, the column temperature is 40 ° C., the absorbance detection wavelength is 265 nm, and the injection volume is 10 microliters.
  • 14A is a chromatogram when the process shown in FIG.
  • FIG. 14B is a chromatogram when the process shown in FIG. 3 is performed.
  • the sample solution is easily dissolved in the 60% methanol solution of the cleaning solution A, it is diluted in the sample introduction process and reaches the column with a wide bandwidth in the analysis flow path. As a result, it is detected by the detector.
  • the peak width of methyl paraben is widened.
  • the peak height of methyl paraben is also decreased.
  • the chromatogram of FIG. 14B in which the process shown in FIG. 3 is performed the inside of the pipe including the buffer tube 13 and the needle 2 is replaced with the cleaning liquid B distilled water, so that the peak width of methyl paraben is narrowed. In addition, the peak height is also increased by about 17%, and high sensitivity of the liquid chromatograph is obtained.
  • the cleaning solution is added to the actual sample solution.
  • the sample is stored in the sample storage loop.
  • high sensitivity can be obtained without degrading the resolution of the chromatogram or by improving the resolution.

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Abstract

　試料貯留ループを移動相流路に接続するか切り離すかを切り替える第１の流路切り替え手段と、試料を吸引し吐出するニードルと、ニードルへの試料の吸引と吐出とを試料を計量して行う計量手段と、洗浄液を送る洗浄液送り手段と、少なくとも二種の洗浄液を切り替える第２の流路切り替え手段と、ニードルと計量手段との接続およびニードルと洗浄液送り手段との接続を切り替える第３の流路切り替え手段と、第１の流路切り替え手段、計量手段、洗浄液送り手段、第２の流路切り替え手段、第３の流路切り替え手段の動作を制御する制御手段とを備え、試料貯留ループに試料の全量を注入するとともに試料貯留ループから試料注入口までの流路に洗浄液を注入するように構成した液体クロマトグラフ。

Description

液体クロマトグラフ、液体クロマトグラフ用試料導入装置、および液体クロマトグラフ用試料導入装置の洗浄方法
　本発明は、液体クロマトグラフ、液体クロマトグラフ用試料導入装置、および液体クロマトグラフ用試料導入装置の洗浄方法に関する。
　液体試料分析装置の一種類である液体クロマトグラフにおいては、ポンプ装置により移動相（溶離液）が吸入され、移動相は自動試料導入装置により導入された試料とともにカラムへと送られる。カラムに導入された試料は各々の成分に分離され、各種の検出器により検出される。一般に、高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）と呼ばれる装置分野においては、最大２０ＭＰａ～４０ＭＰａの高圧力下で分析を行うことが要求される。このようなＨＰＬＣ用ポンプ装置においては、高圧力下でも正確に且つ精密に移動相を供給できることが要求される。
　また、自動試料導入装置は、サンプルラックに並べられた試料保持容器からニードルによって試料液を吸引後、試料貯留ループに試料を貯留し、液体クロマトグラフの移動相流路中に試料を自動で注入するための装置である。また、移動相流路中に注入する前に試料を希釈する、試料と反応試薬とを混合してラベル化する等の前処理機能が備わった自動試料導入装置も多く使用されている。
　このような自動試料導入装置における注入方式は、ニードルおよび試料貯留ループが、高圧下にある移動相流路の一部に組み込まれるダイレクトインジェクション方式（例えば、特許文献１、特許文献２参照）と、試料貯留ループのみが、高圧下にある移動相流路の一部に組み込まれるループインジェクション方式（例えば、特許文献３、特許文献４参照）の２種類に大別される。
　ダイレクトインジェクション方式は、ニードルおよび試料貯留ループ内に一時的に貯留された試料が、分析開始時に移動相によってカラムへと押し流されるとともに、分析中はニードルおよび試料貯留ループの内部が移動相によって常時フラッシングされるため、吸引した試料を無駄なくカラムに導入でき、試料で汚染されたニードルの内部を洗浄するための別の手段を必要としないといった利点がある。
　一方、分析中、ニードルが移動相流路の一部に組み込まれる原理上から、高圧下でニードルと試料保持容器の試料注入口との間の液密性を保持する構造が必要であり、前処理の希釈や混合といった試料のハンドリングには適していないという欠点を有する。
　これに対し、ループインジェクション方式は、分析中、ニードルが高圧下の移動相流路外にあるため、分析中であってもニードルの移動や試料計量が可能であり、ニードルと試料保持容器の試料注入口との間の液密性を保持する構造が不要であることから、分析中に試料の前処理が実施できるという利点がある。一方、ニードル内部を洗浄する別の手段とその工程が必要となるため、ダイレクトインジェクション方式に比べて、試料注入に要する時間が長くなるという欠点がある。
　このように、上述した２種類の注入方式は互いに利点と欠点とを有することから、分析の目的用途に応じて、いずれかの方式を選択できることが望ましい。
特開平１－２４８０５５号公報 特開２００６－２９２６４１号公報 特開平６－２３５７２２号公報 特開昭６１－１１４１４３号公報
　上述したループインジェクション方式の試料導入ユニットにおいて、試料を全量無駄なくカラムに導入したい場合、カラムに導入する試料を試料貯留ループ内に一次的に貯留する過程において、実際の試料溶解液の他に洗浄液も同時に試料貯留ループ内に貯留されることになる。即ち、結果的に洗浄液がカラムへ導入されることになるため、従来技術においては、次のような課題がある。
　第１に、移動相と洗浄液とで異なる溶媒を用いた場合、洗浄液自身はカラム内に強く保持されずほぼ素通りした状態で、検出器に到達する。ここで、移動相と洗浄液との光吸収に関する波長特性が異なる場合、その光吸収の差分が検出器にて検出され、クロマトグラム上に記録される。この洗浄液によるゴーストピークは、特に微量試料を高感度で分析する場合に問題となる。
　第２に、移動相と洗浄液とで同じ溶媒を用いた場合においても、特に、試料成分の洗浄液への溶解性が高い場合は、上述した試料導入過程において試料溶解液の希釈化が促進され、試料溶解液はより広いバンド幅となって、試料貯留ループ内に貯留される。その結果、試料溶解液はより広いバンド幅を持って、カラムへと到達することになるため、検出器で検出する試料成分のクロマトグラムのピーク幅も広がる結果をもたらす。即ち、目的成分の分離度が悪化するため分析時間が長くなり、クロマトグラフ装置としての処理能力が低下するという問題がある。また、同時に、試料成分のクロマトグラムのピーク高さも減少することになるため、液体クロマトグラフとしての感度も低下するという問題がある。
　本発明の目的は、ゴーストピークの検出を防止し、クロマトグラムの分離度を向上させることで、高感度で、分析時間が長くなることを防止できる液体クロマトグラフ、液体クロマトグラフ用試料導入装置、および液体クロマトグラフ用試料導入装置の洗浄方法を提供することである。
　上記目的を達成するため、本発明は、試料貯留ループを有し、上記試料貯留ループを上記移動相流路に接続するか、上記移動相流路から切り離すかを切り替える第１の流路切り替え手段と、試料を吸引し、吐出するニードルと、上記ニードルへの試料の吸引と吐出とを試料を計量して行う計量手段と、洗浄液を送る洗浄液送り手段と、少なくとも二種の洗浄液を切り替える第２の流路切り替え手段と、上記ニードルと上記計量手段との接続と、上記ニードルと上記洗浄液送り手段との接続とを切り替える第３の流路切り替え手段と、上記第１の流路切り替え手段、上記計量手段、上記洗浄液送り手段、上記第２の流路切り替え手段、及び上記第３の流路切り替え手段の動作を制御する制御手段とを備える。
　また、本発明は、上記試料貯留ループに試料の全量を注入し、上記試料貯留ループから試料注入口までの流路に洗浄液を注入するように構成したものである。
　本発明によれば、ゴーストピークの検出を防止し、クロマトグラムの分離度を向上させることで、高感度で、分析時間が長くなることを防止できる液体クロマトグラフ、液体クロマトグラフ用試料導入装置、および液体クロマトグラフ用試料導入装置の洗浄方法が提供される。
　本発明の他の目的、特徴及び利点は添付図面に関する以下の本発明の実施例の記載から明らかになるであろう。
本発明の実施例であるループインジェクション方式の自動試料導入装置を用いた液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。 動作制御部の制御対象を示す機能図である。 図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。 図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。 図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。 図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。 図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。 図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。 図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。 図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。 図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。 図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。 クロマトグラムの一例を示すグラフである。 クロマトグラムの一例を示すグラフである。 クロマトグラムの一例を示すグラフである。 クロマトグラムの一例を示すグラフである。
　以下、本発明の実施形態について、添付図面を参照して説明する。
〔実施例〕
　図１は、本発明の実施例であるループインジェクション方式の自動試料導入装置を用いた液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。試料保持容器１はサンプルラック１４上に設置される。ニードル２は、試料保持容器１と、洗浄槽１０と、６ポート２ポジションのインジェクションバルブ８の試料注入口３との間を、図示しないニードル移動機構により移動される。
　６ポート２ポジションのインジェクションバルブ８は、６個のポートと、それらの中の２個の隣りあったポートを連通する流路とを有し、インジェクトポジションでは、図に示すように、ポートＰ１とポートＰ６、ポートＰ２とポートＰ３、ポートＰ４とポートＰ５とが連通されている。また、ポートＰ１にポンプ装置７、ポートＰ２にカラム６、ポートＰ３とポートＰ６間に試料貯留ループ５、ポートＰ４に試料注入口３、ポートＰ５に廃液を排出するドレイン２２が接続されている。また、カラム６は検出器３０に配管で接続され、検出器３０でカラム６から供給される分離された試料を検出し、図示しないデータ処理装置へ検出信号を送る。
　６ポート２ポジションのインジェクションバルブ８は、６０度回転させることによって、もう一つのポジションをとることができる。ロードポジションでは、図１中に破線で示すように、ポートＰ１とポートＰ２、ポートＰ３とポートＰ４、ポートＰ５とポートＰ６が連通される。
　ロードポジションでは、ポンプ装置７、ポートＰ１、ポートＰ２、カラム６の順番で連通され、ポンプ装置７から送られる移動相に試料が注入されることなく、移動相はカラムへ流れる。また、ニードル２、試料注入口３、ポートＰ４、ポートＰ３、試料貯留ループ５、ポートＰ６、ポートＰ５、ドレイン２２の順番で連通され、試料保持容器１からニードル２で吸引された試料が試料注入口３から注入され、試料貯留ループ５が試料で満たされる。
　インジェクトポジションでは、試料貯留ループ５に保持された試料が、ポンプ装置７から送られる移動相によってカラム６へ押し流される。また、試料を変更した場合にニードル２を洗浄するため、ニードル２を洗浄槽１０へ位置付け、洗浄ポンプ装置１５からシリンジバルブ１６を介してニードル２へ洗浄液を流す。また、そのニードル２を試料注入口３へ位置付けることで、インジェクションバルブ８の洗浄を行う。洗浄ポンプ装置１５、シリンジバルブ１６、プランジャ洗浄流路１７、三方バルブ１８、洗浄液容器２０、洗浄液容器２１、脱気装置２４、脱気装置２５をまとめて洗浄ユニットと称する。
　５ポート４ポジションのシリンジバルブ１６は、５個のポートを有し、図中に実線および破線で示す４種類の位置の通路が設けられ、２個のポート間が連通される。ポートＰ１は洗浄槽１０と連通し、ポートＰ２はニードル２と連通し、ポートＰ３は試料を計量するシリンジ１１と連通し、ポートＰ４はポンプ装置７のプランジャを洗浄するプランジャ洗浄流路１７と連通し、ポートＰ５は洗浄ポンプ装置１５と連通している。そして、４５度ずつ回転させることによって、４つのポジションをとることができる。第１のポジションはポートＰ５とポートＰ１、およびポートＰ２とポートＰ３とが連通する。第２のポジションは、ポートＰ５とポートＰ２、およびポートＰ３とポートＰ４とが連通する。第３のポジションは、図中実線で示されたもので、ポートＰ５とポートＰ３のみが連通する。第４のポジションは、ポートＰ５とポートＰ４のみが連通する。
　洗浄液はその用途により例えば２種類が用意され、洗浄液Ａが洗浄液容器２０に、洗浄液Ｂが洗浄液容器２１に保持され、脱気装置２４、２５を介し、三方バルブ１８で洗浄液Ａと洗浄液Ｂのどちらかが洗浄ポンプ装置１５で吸引され、シリンジバルブ１６、バッファチューブ１３からニードル２へ送られる。プランジャ洗浄流路１７とポンプ装置７とを連通することで、ポンプ装置７のプランジャ表面に析出する移動相内に含まれた塩を洗浄することができる。
　シリンジバルブ１６が、ポートＰ１とポートＰ５、およびポートＰ２とポートＰ３が連通しているポジションにあるとき、ニードル２はバッファチューブ１３を介して、試料を計量するシリンジ１１に接続され、シリンジ１１が上下に操作されることによって、ニードル２からシリンジ１１までの配管内の液体の吸引と吐出を行う。
　図２は、液体クロマトグラフ装置のバルブ等の動作する機構を制御する動作制御部２０１の制御対象を示す機能図である。動作制御部２０１は、図示しないメモリに予め保持された制御プログラムを実行するプロセッサを有し、ニードル移動機構２０２、シリンジ動作機構２０３、洗浄ユニット動作機構２０４、シリンジバルブ動作機構２０５、三方バルブ動作機構２０６、インジェクションバルブ動作機構２０７に動作指令を送出する。
　シリンジ１１は、シリンジ動作機構２０３により、その移動及び吸引吐出動作が制御される。洗浄ユニットは、洗浄ユニット動作機構２０４により動作される。シリンジバルブ１６は、シリンジバルブ動作機構２０５により動作される。三方バルブ１８は、三方バルブ動作機構２０６により動作される。インジェクションバルブ８は、インジェクションバルブ動作機構２０７により動作される。
　次に、試料注入工程を説明する。本実施例におけるループインジェクション方式は、ニードル２から吸引した試料を全量、インジェクションバルブ８の試料貯留ループ５に送り込み、試料を分離するカラム６に到達させるため、全量注入方式とも呼ばれる。ここで、次のような用語の取り決めを行う。
　ｖｉ：インジェクションボリューム、移動相流路への正味の試料導入量である。
　ｖｆ：フィードボリューム。
　ｖｄ：デッドボリューム、試料注入口からインジェクションバルブまで。
　ｖａ：エアボリューム、試料前後の空気層の容積である。
　ここで、ｖａを試料前後に挟むか否かの設定は、自動試料導入装置によって選択することが可能である。
　前出の図１は、自動試料導入装置が初期化され、アイドル状態である流路を示している。試料が注入されていない移動相が、ポンプ装置７からインジェクションバルブ８の試料貯留ループ５を介して、カラム６へと流れている。一方、洗浄液Ａを保持する洗浄液容器２０が三方バルブ１８、洗浄ポンプ装置１５、シリンジバルブ１６のポートＰ５に連通するポートＰ３を介してシリンジ１１に接続されることによって、シリンジ１１内が洗浄液Ａで洗浄されている。また、ニードル２は、洗浄槽１０の上方に位置し、ニードル２から滴下する液を洗浄槽１０で受けるようにしている。
　図３は、図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図であり、洗浄液容器２１に保持された洗浄液Ｂによりバッファチューブ１３とニードル２の内部が置換されて洗浄される状態を示している。ニードル２を試料注入口３に移動させ、インジェクションバルブ８のポートＰ４に連通させる。また、シリンジバルブ１６を、図１の状態に対して時計回りに４５度回転させて、ポートＰ５とポートＰ２とを連通させるとともに、ポートＰ３とポートＰ４とを連通させるポジションに切り替える。さらに、三方バルブ１８を、洗浄液Ｂを保持する洗浄液容器２１に切り替える。そして、洗浄ポンプ装置１５により洗浄液Ｂをシリンジバルブ１６、バッファチューブ１３、ニードル２、インジェクションバルブ８へ送り、インジェクションバルブ８のポートＰ４に連通するポートＰ５内も洗浄し、洗浄液Ｂがドレイン２２から排出される。
　図４は、図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図であり、ニードル２の外側が洗浄槽１０内の洗浄液Ａで洗浄される状態を示している。インジェクションバルブ８のポートの位置は変えず、シリンジバルブ１６を、図３の状態に対して時計回りに４５度回転させて、ポートＰ５とポートＰ１とを連通させるとともに、ポートＰ２とポートＰ３とを連通させるポジションに切り替える。洗浄ポンプ装置１５により洗浄液容器２０内の洗浄液Ａをシリンジバルブ１６を介して洗浄槽１０へ送り、ニードル２を洗浄槽１０内の洗浄液Ａに浸漬し、シリンジ１１で吸引してシリンジバルブ１６やニードル２を含む配管内を洗浄液Ａで満たす。吸引する量は、ｖｆ＋ｖｄ、すなわちフィードボリュームとデッドボリュームを合せた量である。また、ニードル２を洗浄槽１０へ浸漬することで、ニードル２の外側を洗浄する。
　図５は、図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図であり、試料を吸引する工程を示している。図５に示すように、シリンジバルブ１６とインジェクションバルブ８のポートの位置は変えずに、ニードル２を洗浄槽１０から試料保持容器１へ移動させるが、その移動の最中に、シリンジ１１により空気を吸引させる。その吸引量は、エアボリュームｖａの半分である。次に、ニードル２を試料保持容器１へ移動させてシリンジ１１により試料を吸引する。その吸引量は、インジェクションボリュームｖｉである。
　図６は、図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図であり、試料吸引後にニードル２の外側を洗浄液Ａで洗浄する状態を示している。図６に示すように、シリンジバルブ１６とインジェクションバルブ８のポートの位置は変えずに、ニードル２を試料保持容器１から洗浄槽１０へ移動させるが、その移動中に、シリンジ１１は、エアボリュームｖａの半分だけ空気を吸引する。ニードル２を洗浄槽１０に移動後、洗浄ポンプ装置１５により洗浄液Ａを洗浄槽１０へ送り、ニードル２の外側を洗浄する。洗浄槽１０でオーバフローした洗浄液Ａはドレイン２３から排出される。
　図７は、図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図であり、ニードル２をインジェクションバルブ８の試料注入口３へ移動させた状態を示している。図７に示すように、シリンジバルブ１６とインジェクションバルブ８のポートの位置は変えずに、ニードル２をインジェクションバルブ８の試料注入口３へ移動させ、ポートＰ４からインジェクションバルブ８へ試料を注入する準備をする。
　図８は、図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図であり、試料貯留ループ５内の圧力抜きを行う状態を示している。試料貯留ループ５内は、図７までに示す状態では、ポンプ装置７に接続されて移動相流路となっているので、その圧力は大気圧よりも高くなっている。図８に示すように、シリンジバルブ１６のポートの位置は変えず、インジェクションバルブ８を反時計回りに６０度回転させて、インジェクションバルブ８の試料貯留ループ５をポンプ装置７の移動相流路から切り離し、高圧下にある試料貯留ループ５を移動相流路から切り離すことで、試料貯留ループ５内の圧力がドレイン２２から大気圧に開放される。
　図９は、図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図であり、ニードル２に吸引された試料をインジェクションバルブ８へ送る工程を示している。図９に示すように、シリンジバルブ１６とインジェクションバルブ８のポートの位置は変えずに、シリンジ１１内の洗浄液Ａと空気を押し出すことで、ニードル２の内部の試料がインジェクションバルブ８のポートＰ４からインジェクションバルブ８の内部の試料貯留ループ５へ送られる。シリンジ１１で押し出す量は、フィードボリュームとインジェクションボリュームとデッドボリュームとエアボリュームとを合せた量ｖｆ＋ｖｉ＋ｖｄ＋ｖａである。そして、図５の工程で吸引したボリュームｖｉの試料が送られた後に、図４の工程で吸引したボリュームｖｆの洗浄液Ａがインジェクションバルブ８へ送られるので、試料貯留ループ５内を試料の全量で満たすことができる。
　図１０は、図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図であり、試料貯留ループ５に保持された試料を移動相流路へ導入する工程を示している。図１０に示すように、シリンジバルブ１６のポートの位置は変えずに、インジェクションバルブ８を時計回りに６０度回転させ、試料貯留ループ５のポートＰ３を、カラム６に接続しているポートＰ２と連通させ、試料貯留ループ５のポートＰ６を、ポンプ装置７に接続しているポートＰ１と連通させ、ポンプ装置７により移動相を試料貯留ループ５へ流し、試料とともにカラム６へ送る。一方、次の工程の準備のため、シリンジ１１を上死点まで移動させて、ニードル２内の洗浄液Ａと試料の残りが混合した液を試料注入口３からインジェクションバルブ８のポートＰ４、ポートＰ５からドレイン２２へ排出する。
　図１１は、図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図であり、ニードル２内を洗浄液Ａで洗浄する工程を示している。図１１に示すように、インジェクションバルブ８のポートの位置は変えずに、シリンジバルブ１６を反時計回りに４５度回転させ、ポートＰ５とポートＰ２、およびポートＰ３とポートＰ４が連通するポジションに切り替える。洗浄ポンプ装置１５により洗浄液容器２０に保持された洗浄液Ａをシリンジバルブ１６を経由してニードル２へ送り、ニードル２内を洗浄液Ａで洗浄する。洗浄液Ａはドレイン２２から排出される。
　図１１に示したニードル２の洗浄の終了後、シリンジバルブ１６を反時計回りに４５度回転させ、シリンジバルブ１６のポートＰ５とポートＰ３を連通させて、図１に示したアイドル状態へ移行させる。また、ニードル２を洗浄槽１０の上方へ移動させる。
　図１２は、図１と同じく液体クロマトグラフ装置の概略構成図であり、ポンプ装置７のプランジャの洗浄を予め設定しておいたときに、図１０に示したニードル２の洗浄の後に実行される工程である。シリンジバルブ１６を反時計回りに９０度回転させ、ポートＰ５とポートＰ４とを連通させるポジションに切り替える。洗浄液Ａでなく、洗浄液Ｂでプランジャを洗浄する場合は、三方バルブ１８を切り替えて洗浄液容器２１に接続し、洗浄液Ｂを洗浄ポンプ装置１５で吸引してプランジャ洗浄流路１７から図示しないポンプ装置７のプランジャへ送る。洗浄時間は予め設定されており、終了したらシリンジバルブ１６を時計回りに４５度回転させ、図１に示すアイドル状態へ移行させる。
　図１３Ａ、図１３Ｂ、図１４Ａ、図１４Ｂはクロマトグラムの一例を示すグラフである。図１３Ａは、従来の装置構成による結果、図１３Ｂは本発明の装置構成による結果である。分析条件は、試料が６０ｐｐｍメチルパラベン、試料溶解液がメタノール、移動相が６０％メタノール水溶液、洗浄液Ａがメタノール、洗浄液Ｂが６０％メタノール水溶液、移動相の流量が１ミリリットル／分、カラムがＯＤＳで、寸法４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍｍＬ、粒径５μｍ、カラム温度が４０℃、吸光度検出波長が２６５ｎｍ、注入量が１０マイクロリットルである。図１３Ａは、図３に示す工程を実施しなかった場合のクロマトグラム、図１３Ｂは図３の工程を実施した場合のクロマトグラムであり、図１３Ａに示すクロマトグラムには、目的成分であるメチルパラベンのピークの前に、移動相６０％メタノール水溶液と洗浄液Ａメタノールとの吸光度差によって生じた、洗浄液Ａメタノール起因によるゴーストピークが検出されている。これに対して、図１３Ｂでは、図３に示した工程で、バッファチューブ１３とニードル２を含む配管内部を、洗浄液Ｂの６０％メタノール水溶液にて置換したことにより、図１３Ｂに示すクロマトグラムでのゴーストピークが完全に無くなっている。
　図１４Ａは、従来の装置構成による結果、図１４Ｂは本発明の装置構成による結果である。分析条件は、試料が６０ｐｐｍメチルパラベン、試料溶解液が６０％メタノール水溶液、移動相が６０％メタノール水溶液、洗浄液Ａが６０％メタノール水溶液、洗浄液Ｂが蒸留水、移動相の流量が１ミリリットル／分、カラムがＯＤＳで、寸法が４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍｍＬ、粒径５μｍ、カラム温度が４０℃、吸光度検出波長が２６５ｎｍ、注入量が１０マイクロリットルである。図１４Ａは、図３に示す工程を実施しなかった場合のクロマトグラム、図１４Ｂは、図３に示す工程を実施した場合のクロマトグラムであり、図１４Ａのクロマトグラムでは、目的成分であるメチルパラベンの試料溶解液が、洗浄液Ａ６０％メタノール水溶液に溶解し易いために、試料導入過程において希釈化され、分析流路内で広いバンド幅を有したままカラムへと到達された結果、検出器で検出したメチルパラベンのピーク幅が広がっている。また、メチルパラベンのピーク高さも減少している。これに対し、図３に示した工程を実施した図１４Ｂのクロマトグラムでは、バッファチューブ１３とニードル２を含む配管内部を、洗浄液Ｂ蒸留水にて置換したので、メチルパラベンのピーク幅が狭くなり、且つ、ピーク高さも約１７％増加する結果となっており、液体クロマトグラフの高感度化が得られている。
　以上のように、ループインジェクション方式において、試料を全量無駄なくカラムに導入したい場合、カラムに導入する試料を試料貯留ループ内に一次的に貯留する過程において、実際の試料溶解液の他に洗浄液も同時に試料貯留ループ内に貯留されるが、本発明の実施例によれば、洗浄液の貯留量を少なくすることができるので、クロマトグラム上のゴーストピークを無くし、ピーク幅の広がりを防止することができ、クロマトグラムの分離度を悪化させることなく、あるいは分離度を向上させて高感度化を得ることができる。
　以上述べたように、本発明によれば、高感度で、分析時間が長くなることを防止できる液体クロマトグラフ及び液体クロマトグラフ用試料導入装置が提供される。
　上記記載は実施例についてなされたが、本発明はそれに限らず、本発明の精神と添付の請求の範囲の範囲内で種々の変更および修正をすることができることは当業者に明らかである。
　１　試料保持容器
　２　ニードル
　３　試料注入口
　５　試料貯留ループ
　６　カラム
　７　ポンプ装置
　８　インジェクションバルブ
　１０　洗浄槽
　１１　シリンジ
　１３　バッファチューブ
　１４　サンプルラック
　１５　洗浄ポンプ装置
　１６　シリンジバルブ
　１７　プランジャ洗浄流路
　１８　三方バルブ
　２０，２１　洗浄液容器
　２２，２３　ドレイン
　２４，２５　脱気装置
　２０１　動作制御部
　２０２　ニードル移動機構
　２０３　シリンジ動作機構
　２０４　洗浄ユニット動作機構
　２０５　シリンジバルブ動作機構
　２０６　三方バルブ動作機構
　２０７　インジェクションバルブ動作機構

Claims (9)

  1. 　試料貯留ループを有し、該試料貯留ループを移動相の流路に接続するか切り離すかを切り替える第１の流路切り替え手段と、
    　試料を吸引し吐出するニードルと、
    　前記ニードルへの前記試料の吸引と吐出とを該試料を計量して行う計量手段と、
    　洗浄液を送る洗浄液送り手段と、
    　前記洗浄液は少なくとも二種であり、該少なくとも二種の洗浄液を切り替える第２の流路切り替え手段と、
    　前記ニードルと前記計量手段との接続、および前記ニードルと前記洗浄液送り手段との接続を切り替える第３の流路切り替え手段と、
    　前記第１の流路切り替え手段、前記計量手段、前記洗浄液送り手段、前記第２の流路切り替え手段、前記第３の流路切り替え手段の動作を制御する制御手段とを備えることを特徴とする液体クロマトグラフ。
  2. 　請求項１の液体クロマトグラフにおいて、前記第１の流路切り替え手段が前記ニードルに接続される試料注入口を有し、前記試料貯留ループに前記試料の全量が注入されるとともに前記試料貯留ループから前記試料注入口までの流路に前記少なくとも二種の洗浄液の一方が注入されることを特徴とする液体クロマトグラフ。
  3. 　請求項２の液体クロマトグラフにおいて、前記ニードルが、前記第１の流路切り替え手段の前記試料貯留ループから前記試料注入口までの流路に注入される前記洗浄液とは異なる洗浄液で洗浄されることを特徴とする液体クロマトグラフ。
  4. 　請求項１の液体クロマトグラフにおいて、前記ニードルが、前記移動相と同じ成分の洗浄液で洗浄されることを特徴とする液体クロマトグラフ。
  5. 　請求項１の液体クロマトグラフにおいて、前記ニードルが、前記移動相と異なる成分の洗浄液で洗浄されることを特徴とする液体クロマトグラフ。
  6. 　移動相流路に注入された試料を分離して成分を検出する液体クロマトグラフに用いられる液体クロマトグラフ用試料導入装置において、
    　試料貯留ループを有し、該試料貯留ループを前記移動相流路に接続するか切り離すかを切り替える第１の流路切り替え手段と、
    　前記試料を吸引し吐出するニードルと、
    　前記ニードルへの前記試料の吸引と吐出とを前記試料を計量して行う計量手段と、
    　洗浄液を送る洗浄液送り手段と、
    　前記洗浄液は少なくとも二種であり、該少なくとも二種の洗浄液を切り替える第２の流路切り替え手段と、
    　前記ニードルと前記計量手段との接続と、前記ニードルと前記洗浄液送り手段との接続とを切り替える第３の流路切り替え手段と、
    　前記第１の流路切り替え手段、前記計量手段、前記洗浄液送り手段、前記第２の流路切り替え手段、および前記第３の流路切り替え手段の動作を制御する制御手段と
    を備えたことを特徴とする液体クロマトグラフ用試料導入装置。
  7. 　請求項６の液体クロマトグラフ用試料導入装置において、前記第１の流路切り替え手段は試料注入ポートを有し、前記試料貯留ループを前記移動相流路に接続するか前記試料注入ポートに接続するかを切り替えることを特徴とする液体クロマトグラフ用試料導入装置。
  8. 　請求項６の液体クロマトグラフ用試料導入装置において、前記試料貯留ループに接続され、該試料貯留ループ内に貯留された試料を該試料貯留ループから排出させるポンプ手段をさらに備えることを特徴とする液体クロマトグラフ用試料導入装置。
  9. 　移動相の流路に注入された試料を分離して成分を検出する液体クロマトグラフに用いられる液体クロマトグラフ用試料導入装置の洗浄方法において、
    　洗浄液は第１の洗浄液と第２の洗浄液とを有しており、
    　試料容器から前記試料を吸引し吐出するニードルに前記第１の洗浄液を送って該ニードルの内側を洗浄する工程と、
    　前記ニードルを洗浄槽に浸漬して該ニードルの外側を洗浄する工程と、
    　前記試料を計量しながら前記ニードル内に該試料を吸引する工程と、
    　前記ニードル内に吸引した前記試料を第１の流路切り替え手段の試料貯留ループに供給する工程と、
    　前記試料貯留ループに貯留された前記試料を前記移動相の流路に供給する工程と、
    　前記ニードルの内側を前記第２の洗浄液で洗浄する工程と
    を備えることを特徴とする液体クロマトグラフ用試料導入装置の洗浄方法。
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