WO2009122719A1 - 耐熱性を付与する薬剤及び組成物 - Google Patents

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nucleic acid
heat
metal
heat resistance
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堀米綾子
村田麻衣
山内恒治
高瀬光徳
武田安弘
橋本潤一
小嶋郁美
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森永乳業株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to a nucleic acid and lactoferrin containing a nucleic acid as an active ingredient, an agent for imparting heat resistance to lactoferrin, and a nucleic acid / lactoferrin mass ratio of 0.09 to 6.3. It relates to the composition containing this.
  • the present invention also relates to a composition containing nucleic acid and metal as active ingredients, imparting heat resistance to lactoferrin, and a composition containing nucleic acid, metal and lactoferrin, wherein the metal / lactoferrin molar ratio is 0.04 to Also present in compositions where the mass ratio of nucleic acid / lactoferrin is 0.09 to 6.3. Furthermore, there is also a method for heat-sterilizing lactoferrin, which includes a step of adding an agent for imparting heat resistance to lactoferrin, which contains nucleic acids and metals as active ingredients.
  • Nucleic acids are biopolymers that exist in the cell nucleus of living organisms, in which nucleotides composed of bases, sugars, and phosphates are linked by phosphate ester bonds. Nucleic acids are roughly classified into deoxyribonucleic acid (DNA) having 2-deoxyribose and ribonucleic acid (RNA) having ribose depending on the difference in sugar. These are deeply involved in the storage of genetic information and the transmission of information in the cells of the living body. In addition, it is known that DNA and RNA are both composed of two nucleotide chains having four bases and having a double helix structure.
  • nucleic acids affects cell metabolism, immune function, brain function, lipid metabolism, etc., and has a whitening effect.
  • foods and drinks, health foods, pharmaceutical raw materials and the like containing nucleic acids are manufactured and sold.
  • a prostaglandin heat-stabilized composition obtained by mixing a biologically active prostaglandin and RNA or DNA is known [for example, Patent Document 1].
  • the method for producing this composition comprises crystallizing prostaglandins in an aqueous solution of pH 7 to 8 containing RNA or DNA such that the weight ratio is usually 10 to 1000, preferably 50 to 400, with respect to 1 of prostaglandins. It is added in the form of powder or solution.
  • composition containing hot spring water as a main ingredient which contains liposomes of stabilized hot spring water in a DNA gel
  • Patent Document 2 a composition containing hot spring water as a main ingredient, which contains liposomes of stabilized hot spring water in a DNA gel
  • Lactoferrin is an iron-binding protein contained in tears, saliva, peripheral blood, milk and the like in vivo, and has an antibacterial action against harmful bacteria, an iron absorption promoting action from the intestinal tract, an immunostimulating action, It has been reported that it has various physiological activities such as cell proliferation action, anti-inflammatory action, and bifidobacteria growth effect.
  • Lactoferrin has the above-mentioned excellent physiological activity and is a protein contained in mammalian breast milk and the like, and is extremely safe and can be taken with peace of mind. Thus, lactoferrin is used in various products, such as blended with various foods and beverages, processed foods, pharmaceuticals, etc., and infant formula containing lactoferrin is also released.
  • the lactoferrin solution is stable to heating in the range of 1.0 to 6.5, particularly in the range of pH 2.0 to 6.0 [eg, Patent Document 3].
  • lactoferrin has come to be blended into various foods, processed foods, pharmaceuticals and the like because of its excellent physiological activity and safety.
  • heat sterilization is widely used as a simple and reliable sterilization method.
  • lactoferrin is unstable to heat, and lactoferrin deactivated by heat denaturation cannot be expected to have an effective physiological effect. This has been a major limitation in the manufacture of products.
  • various methods have been developed for the purpose of improving the thermal stability of lactoferrin.
  • Patent Document 3 there is a method of reducing the loss of lactoferrin activity due to heat denaturation by adjusting the pH of lactoferrin to a range of 1.0 to 6.5 and sterilizing by heating.
  • the pH of lactoferrin to a range of 1.0 to 6.5
  • the manufacturing process is complicated.
  • heating under acidic conditions is a concern for other active ingredients in the product.
  • Patent Document 4 it is disclosed as a preferred embodiment that soybean polysaccharides, xanthan gum and the like are used as stabilizers in a weight ratio of 0.5 to 100 times with respect to lactoferrins.
  • blending a large amount of stabilizer is a major limitation in producing foods to which lactoferrin is added. That is, when gums such as soybean polysaccharide and xanthan gum are blended, the viscosity increases and affects the physical properties of the product. Therefore, it is difficult to add such a large amount.
  • the concentration of lactoferrin shown in the test example of Patent Document 4 is limited to a relatively low concentration in the range of 8 mg% to 20 mg%, and the effect when lactoferrin is increased is not shown.
  • Patent Document 5 discloses that 3 to 500 M of a plurality of types of metal ions are added to lactoferrin 1 M in a molar ratio for stabilization.
  • the addition amount of metal ions is preferably small from the viewpoint of suppressing oxidation of foods and drinks containing fats and oils.
  • the addition amount of a metal ion is small also from a viewpoint of reducing the odor peculiar to metals.
  • the method for preventing heat denaturation of lactoferrin even when heated that is, the method for improving the heat stability of lactoferrin is limited by the amount and appearance of raw materials, flavor, viscosity, pH, color tone, etc.
  • the amount of protein added is limited.
  • maintaining heat stability at a neutral pH with low heat stability has been a problem.
  • a method for improving the thermal stability of lactoferrin there is a demand for a simple method that exerts the effect of improving the thermal stability and does not limit the product design even if the amount of raw materials other than lactoferrin is small. It was.
  • an object of the present invention is to provide a method for improving the thermal stability of lactoferrin, that is, a method for heat-stabilizing lactoferrin, and in particular, a method for heat-stabilizing lactoferrin at a neutral pH. There is to do.
  • the inventors have conducted intensive research and found that when nucleic acid is mixed with lactoferrin, the heat resistance of lactoferrin is significantly improved. This improvement in heat resistance, that is, thermal stabilization, was effectively exhibited even when lactoferrin was at a pH in the vicinity of neutrality. That is, the inventors have found that the above object can be achieved by using nucleic acid as a heat stabilizer (heat stabilizer) added to lactoferrin, and reached the present invention. Further, it has been found that when nucleic acid and a small amount of metal are mixed with lactoferrin, the heat resistance of lactoferrin is further improved as compared with the case where only nucleic acid is mixed with lactoferrin.
  • the first invention of the present application that solves the above-mentioned problems is a drug that imparts heat resistance to lactoferrin, comprising nucleic acid as an active ingredient.
  • the first invention of the present application preferably has a molecular weight of the nucleic acid of 60 to 1200 kilodalton, that the nucleic acid is derived from a white egg, and that imparts heat resistance in a pH range of 6 to 9. It is an aspect.
  • the second invention of the present application is a drug that imparts heat resistance to lactoferrin, comprising nucleic acids and metals as active ingredients.
  • the nucleic acid is used in a mass ratio of 0.09 to 6.3 with respect to lactoferrin 1
  • the metal is used in a molar ratio of 0.04 to 3.0 with respect to lactoferrin 1.
  • the molecular weight of the nucleic acid is 60 to 1200 kilodalton
  • the nucleic acid is derived from a white child
  • the metal is at least one metal selected from iron, zinc, and copper. It is a further preferred aspect that the metal is copper.
  • the third invention of the present application is a composition containing nucleic acid and lactoferrin, which contains nucleic acid and lactoferrin, and has a nucleic acid / lactoferrin mass ratio of 0.09 to 6.3.
  • the third invention of the present application has preferable embodiments in which heat resistance is imparted to lactoferrin and the molecular weight of the nucleic acid is 60 to 1200 kilodaltons.
  • a fourth invention of the present application is a composition containing a nucleic acid, a metal and lactoferrin, wherein the weight ratio of nucleic acid / lactoferrin is 0.09 to 6.3, and the molar ratio of metal / lactoferrin is 0.04 to 3 A composition that is 0.0.
  • heat resistance is imparted to lactoferrin
  • the molecular weight of the nucleic acid is 60 to 1200 kilodaltons
  • the metal is at least one metal selected from iron, zinc, and copper. This is a preferred embodiment. It is a further preferred aspect that the metal is copper.
  • the fifth invention of the present application is a pharmaceutical product containing the composition of the third invention of the present application or the composition of the fourth invention of the present application.
  • 6th invention of this application is the food / beverage products which mix
  • 7th invention of this application is the feed which mix
  • the eighth invention of the present application is a method for heat-sterilizing lactoferrin, comprising a step of adding a drug imparting heat resistance to lactoferrin containing nucleic acid as an active ingredient.
  • the eighth invention of the present application is that the nucleic acid is used in a mass ratio of 0.09 to 6.3 with respect to lactoferrin 1, the nucleic acid has a molecular weight of 60 to 1200 kilodaltons, Is preferably derived from a white child.
  • the ninth invention of the present application is a method for heat sterilizing lactoferrin, which comprises a step of adding an agent for imparting heat resistance to lactoferrin, which contains nucleic acids and metals as active ingredients.
  • the nucleic acid is used in a mass ratio of 0.09 to 6.3 with respect to lactoferrin 1
  • the metal is used in a molar ratio of 0.04 to 3.0 with respect to lactoferrin 1. That the nucleic acid has a molecular weight of 60 to 1200 kilodalton, that the nucleic acid is derived from a white child, and that the metal is one or more metals selected from iron, zinc, and copper. This is a preferred embodiment. It is a further preferred aspect that the metal is copper.
  • an object of the present invention is to provide a drug that enhances the thermal stability of lactoferrin.
  • Another object of the present invention is to provide a lactoferrin composition imparted with heat stability.
  • the present invention also resides in pharmaceuticals, foods and drinks, and feeds that contain a lactoferrin composition with enhanced thermal stability. Furthermore, this invention exists also in the method of heat-sterilizing lactoferrin using the chemical
  • lactoferrin can be sterilized at high temperature without causing denaturation, aggregation, precipitation and the like. Further, even at neutral pH where lactoferrin has low thermal stability, it can be sterilized at high temperature without impairing its function.
  • the present invention includes the following [1] to [9].
  • [4] The drug according to any one of [1] to [3], which imparts heat resistance in a pH range of 6 to 9.
  • a composition comprising a nucleic acid and lactoferrin, comprising the nucleic acid and lactoferrin, wherein the mass ratio of nucleic acid / lactoferrin is 0.09 to 6.3.
  • [7] [6] A pharmaceutical product comprising the composition described in [6].
  • Food / beverage products which mix
  • the present invention also includes the following [11] to [28].
  • the drug according to [11] which is used at a rate of 0.0.
  • a composition comprising a nucleic acid, a metal and lactoferrin, wherein the mass ratio of nucleic acid / lactoferrin is 0.09 to 6.3, and the molar ratio of metal / lactoferrin is 0.04 to 3.0.
  • [22] [6] to [20] A food and drink comprising the composition according to any one of [20] to [20].
  • a method for heat-sterilizing lactoferrin comprising a step of adding an agent for imparting heat resistance to lactoferrin, which comprises nucleic acids and metals as active ingredients.
  • the nucleic acid is used in a mass ratio of 0.09 to 6.3 with respect to lactoferrin 1, and the metal is used in a molar ratio of 0.04 to 3.0 with respect to lactoferrin 1.
  • the method described in 1. [26] The method according to [24] or [25], wherein the molecular weight of the nucleic acid is 60 to 1200 kilodaltons. [27] The method according to any one of [24] to [26], wherein the nucleic acid is derived from a white child. [28] The method according to any one of [24] to [27], wherein the metal is copper.
  • the present invention also includes the following [31] to [32].
  • [31] A lactoferrin heat stabilizer containing a nucleic acid as an active ingredient.
  • [32] A lactoferrin heat stabilizer comprising nucleic acid.
  • the present invention since heat stability (heat resistance) can be imparted to lactoferrin, the present invention provides a heat stabilizer for lactoferrin, a heat stability imparting agent for lactoferrin, and a heat stabilizer for lactoferrin.
  • heat resistance imparting agent for lactoferrin also present in lactoferrin heat stabilizer, lactoferrin heat stability imparting agent, lactoferrin heat resistance agent, lactoferrin heat resistance imparting agent, lactoferrin sterilization aid, and lactoferrin heat sterilization aid .
  • the present invention also includes the following [33] to [36].
  • [33] The lactoferrin heat stabilizer according to any of [31] to [32], which is for pH in the range of pH 6-9.
  • [34] The lactoferrin heat stabilizer according to any of [31] to [32], which is heat-stabilized within a pH range of 6 to 9.
  • [35] The lactoferrin heat stabilizer according to any of [31] to [34], wherein the nucleic acid has a molecular weight of 60 to 1200 kilodaltons.
  • the heat stabilization of lactoferrin according to the present invention is effective in all pH ranges, and is also effective in the pH range near neutrality where heat stabilization has been difficult in the past.
  • the pH in the neutral vicinity that can be preferably carried out is, for example, in the range of pH 6 to 9, pH 6 to 8, pH 6.5 to 9, pH 6.5 to 8, pH 6.5 to 7. Examples include a range of 5, a range of pH 7 to 9, and a range of pH 7 to 8. Therefore, the present invention is for pH 6-9, pH 6-8, pH 6.5-9, pH 6.5-8, pH 6.5-7.5, pH 7-9, pH 7-8. Also in lactoferrin heat stabilizer.
  • the heat stabilizer of this invention can also contain a pH control component in addition to a nucleic acid. That is, the present invention also resides in a lactoferrin heat stabilizer containing, as active ingredients, a pH adjusting component for adjusting the pH to the above-mentioned range and a nucleic acid.
  • nucleic acid of the present invention a crude nucleic acid extract or a crudely purified product can be used, and it is not necessary to use a nucleic acid having a specific sequence, and nucleic acids having a wide range of molecular weights can be used.
  • nucleic acid a nucleic acid and / or a salt thereof can be used. Examples of the salt include sodium salt and potassium salt.
  • the present invention also includes the following [37] to [40].
  • [37] The lactoferrin heat stabilizer according to any of [31] to [36], which further contains a metal in addition to the nucleic acid.
  • the lactoferrin heat stabilizer of the present invention can further contain a metal in addition to the nucleic acid. This can further improve the thermal stability of lactoferrin. In this case, since a small amount of metal may be added, there is no fear that the flavor of the product is damaged by the metal odor.
  • a metal and / or a salt thereof can be used as the metal. Examples of the salt include chloride, sulfate, phosphate, gluconate and the like.
  • the mass ratio of copper and nucleic acid is calculated by converting the copper into a simple substance, and the value of the mass ratio of copper (mass) / nucleic acid (mass).
  • it can be used in the range of 0 to 1 ⁇ 10 ⁇ 2 , 0 to 1 ⁇ 10 ⁇ 3 , 0 to 1 ⁇ 10 ⁇ 4 , and for example, 1 ⁇ 10 ⁇ 6 to 1 ⁇ 10 ⁇ 2 , It can be used in the range of 1 ⁇ 10 ⁇ 6 to 1 ⁇ 10 ⁇ 3 , 1 ⁇ 10 ⁇ 6 to 1 ⁇ 10 ⁇ 4 .
  • the present invention also includes the following [41] to [45].
  • [41] A lactoferrin composition comprising a nucleic acid and lactoferrin.
  • [42] A lactoferrin composition containing a nucleic acid and lactoferrin, wherein the lactoferrin is heat-stabilized.
  • a heat-stabilized lactoferrin composition comprising the lactoferrin heat stabilizer according to any of [31] to [40] and lactoferrin.
  • the contained lactoferrin is heat-stabilized, and heat treatment for the purpose of heat sterilization and the like can be suitably performed without inactivating the lactoferrin by heat denaturation. Therefore, the lactoferrin composition of the present invention can be suitably used as a raw material for pharmaceuticals, foods and drinks, etc. for which heat sterilization is commonly used.
  • the present invention also includes the following [46] to [54].
  • [46] Use of nucleic acids to heat stabilize lactoferrin.
  • [47] Use of nucleic acids to heat sterilize lactoferrin.
  • [48] A method of heat-stabilizing lactoferrin by adding a nucleic acid to lactoferrin.
  • the method for heat stabilizing lactoferrin according to the present invention can be suitably carried out as a pretreatment prior to heat treatment for heat sterilization or the like of lactoferrin or a composition containing lactoferrin. it can.
  • the present invention is also in the following [55].
  • [55] A method for heat sterilizing lactoferrin, The step of adding the lactoferrin heat stabilizer according to any of [31] to [40] to lactoferrin to heat-stabilize the lactoferrin; A step of heat-sterilizing the heat-stabilized lactoferrin, Including a method.
  • the heat stabilization of lactoferrin by the lactoferrin heat stabilizer is also exerted on the isolated lactoferrin and also on the lactoferrin in the lactoferrin-containing composition mixed with other components. Therefore, the heat stabilization method and the heat sterilization method described above include the heat stabilization method of the lactoferrin-containing composition and the heat sterilization method of the lactoferrin-containing composition, respectively.
  • heat resistance can be imparted to lactoferrin in a weakly acidic to weakly alkaline pH range, specifically pH 6-9.
  • a weakly acidic to weakly alkaline pH range specifically pH 6-9.
  • many food-drinks containing protein, feed, a pharmaceutical, etc. can be sterilized, without impairing the physical property and function of lactoferrin.
  • foods and drinks including heating such as food groups such as jelly, pudding, ice cream, yogurt, juice, milk drinks, sports drinks, soups, baked foods, powdered milk, infant formulas, and liquid foods It can be used suitably for goods.
  • compositions of the third and fourth inventions of the present application the effect is exerted even if the amount of nucleic acid or nucleic acid and metal used is very small with respect to lactoferrin.
  • the composition containing the nucleic acid and lactoferrin in the present invention, or the composition containing the nucleic acid, metal and lactoferrin can be blended in foods and drinks, feeds, pharmaceuticals and the like.
  • lactoferrin can be effectively ingested without being denatured. According to the method of heat-sterilizing the lactoferrin of the eighth invention and the ninth invention of the present application, lactoferrin can be heat-sterilized without heat denaturation.
  • the present invention includes an embodiment using a metal. Even when a metal is used, the effect is exhibited with a very small amount of use, so there is no concern about the occurrence of a metal odor, and it can be used without problems even when the addition of metal is not preferred.
  • the utilization of the nucleic acid derived from a baby used in the present invention can be proposed as an effective method of using a baby that has been mostly discarded so far.
  • lactoferrin can be heat-stabilized.
  • the heat-stabilized lactoferrin has minimal inactivation due to heat denaturation even when heat-sterilized. Therefore, according to the present invention, in order to heat sterilize lactoferrin, there is no need for complicated steps such as once the pH is acidified and then heat sterilized to neutralize the pH again. There is no need to add as much stabilizer as possible.
  • lactoferrin is also added to products such as pudding and jelly for which addition of lactoferrin has been difficult, and its activity is increased. It can be fully demonstrated. Products such as pudding and jelly are suitable for infants and elderly people who have difficulty swallowing because of the advantage of easy swallowing. Lactoferrin is a component particularly suitable for weak infants and elderly people because of its various activities. Therefore, products such as pudding and jelly to which lactoferrin has been added have been awaited even in the field of childcare and nursing care, but are conventionally difficult to manufacture. As described above, according to the present invention, a lactoferrin-added product that has been difficult in the past can be suitably produced.
  • the present invention is not limited to the following preferred embodiments, and can be freely modified within the scope where the present invention can be implemented.
  • the percentage is expressed by mass (mg) / volume (ml) unless otherwise specified.
  • the specific gravity of the purified water used as a solvent for the sample is close to 1, the percentage can be expressed as a weight percent concentration [mass (mg) / mass (mg)].
  • the lactoferrin imparted with “heat resistance” in the present invention indicates that the lactoferrin after heating retains the three-dimensional structure peculiar to lactoferrin as before heating, or various physiological activities are not lost. “Heat resistance” can also be referred to as “thermal stability”. Specifically, it is possible to evaluate the lactoferrin having “heat resistance” in the present invention by measuring the unsaturated iron binding ability of lactoferrin. From the viewpoint of maintaining the structure, it is possible to evaluate lactoferrin having “heat resistance” by measuring lactoferrin molecular weight by SDS electrophoresis and visually confirming aggregation and precipitation of lactoferrin as heat resistance indicators. is there.
  • “heat resistance” in the present invention can be evaluated by measuring the lactoferrin content before and after heating by a latex agglutination method based on an antigen-antibody reaction, and evaluating the residual rate of lactoferrin based on the measured value.
  • the lactoferrin activity can be sufficiently exhibited in foods and drinks containing lactoferrin.
  • the lactoferrin residual rate is preferably 20% or more, more preferably 25% or more, more preferably 30% or more, and further preferably 35% or more.
  • nucleic acid that imparts heat resistance to lactoferrin refers to DNA (deoxyribonucleic acid), RNA (ribonucleic acid), and mixtures thereof.
  • DNA or RNA may be in a double-stranded or single-stranded state.
  • the nucleic acid has a molecular weight of 5 kilodaltons to 12,000 kilodaltons, preferably 60 kilodaltons to 1200 kilodaltons.
  • the nucleic acid used in the present invention may be a nucleic acid chemically synthesized by a conventional method, or may be a nucleic acid extracted from natural products such as animals such as humans, cows, mice, and fish, plants, and bacteria. .
  • nucleic acids derived from natural products nucleic acids extracted from the white larvae (testis) of fish such as salmon, herring, trout and cod are particularly preferred.
  • the nucleic acid a nucleic acid and / or a salt thereof can be used. Examples of the salt include sodium salt and potassium salt.
  • nucleic acid reagents can be used as the nucleic acid in the present invention.
  • the nucleic acid reagent may contain a nucleic acid and / or a salt thereof, and preferably contains 60 to 100% of the nucleic acid in the reagent. More preferably, 80 to 100% of nucleic acid is contained, and 90 to 100% of nucleic acid is particularly preferred.
  • the purity of the DNA in the nucleic acid reagent was determined by dissolving 100 mg of the DNA-containing reagent in 100 ml of purified water and setting the wavelength to 260 nm with a spectrophotometer (trade name: NanoDrop ND-1000, manufactured by Nanodrop). It is possible to measure.
  • the nucleic acid reagent may be mixed with inorganic salts in addition to the nucleic acid and / or its salt.
  • the salt to be mixed may be any salt as long as it is a commonly used salt. , Potassium salt, calcium salt, magnesium salt, ammonium salt, pyridinium salt and the like.
  • the lactoferrin that is heat-stabilized in the present invention is a commercially available product, such as colostrum, transitional milk, normal milk, end milk, etc. of mammals (eg, human, cow, buffalo, horse, goat, sheep). Lactoferrin separated from conventional skim milk, whey, etc. by ion exchange chromatography, etc., apolactoferrin from which iron has been removed from lactoferrin by conventional methods, and some metals such as iron, copper, zinc, manganese, etc. Alternatively, either fully chelated metal unsaturated lactoferrin or metal saturated lactoferrin can be used. In addition, recombinant fungi obtained by recombinant DNA technology, human lactoferrin produced by recombinant dairy cows (transgenic cows) and the like can also be used in the present invention.
  • metals examples include various metals and salts thereof, and specific examples include iron, copper, zinc, manganese, cobalt, nickel, aluminum, and salts thereof. .
  • the metal specifically, iron sulfate, copper sulfate, zinc sulfate, manganese sulfate, nickel sulfate, aluminum sulfate and the like can be used, and chlorides of these metals. , Phosphates, gluconates and the like can be used.
  • iron, copper, and zinc are preferable, and copper is most preferable.
  • metal reagents can be used as the metal in the present invention, and the metal reagent may contain a metal and / or a salt thereof, for example, a metal salt.
  • medical agent which is this invention 1st invention and 2nd invention can provide heat resistance to lactoferrin and can suppress the modification
  • heat resistance is imparted to lactoferrin at the time of heat sterilization, and the structure and activity of lactoferrin can be retained even after heating. be able to.
  • the heat stabilizer of the present invention can be used in this way.
  • medical agent (heat stabilizer) of this invention can also be used as a disinfection adjuvant and a heat disinfection adjuvant.
  • the pH of the lactoferrin is from a weakly acidic region where heat is unstable to an alkaline pH.
  • the heat stability can be enhanced, and the pH range that can be suitably implemented includes a pH range of 6 to 10, a pH range of 6 to 9, particularly a pH range of 6 to 8.
  • a drug containing a nucleic acid as an active ingredient or a drug containing a nucleic acid and a metal as active ingredients (heat stabilizer) imparts heat resistance to lactoferrin in the pH range of 6 to 10. Therefore, when lactoferrin is sterilized by heating as in the prior art, it is not necessary to adjust the pH to an acidic range of neutral or lower in advance. Further, by adding a nucleic acid or a nucleic acid and a metal to lactoferrin, there is also an effect that lactoferrin can be easily sterilized even in a neutral to alkaline range. That is, according to the present invention, heat treatment that has been impossible in the past can be performed. Therefore, in the range of pH 6 to 9, the bactericidal effect on lactoferrin and the bactericidal auxiliary effect can be enhanced.
  • the drug that imparts heat resistance using the nucleic acid of the present invention as an active ingredient provides lactoferrin with heat resistance in an alkaline region that has been an unstable environment against heat.
  • it can be heated without requiring pH adjustment by adding it to pharmaceuticals, foods, and feeds in which neutral to alkaline regions containing lactoferrin are preferred. Sterilization can be performed.
  • a pH adjusting component may be added to the heat stabilizer of the present invention.
  • a pH adjusting component may be anything as long as it has a buffering capacity for stabilizing the pH when lactoferrin is heat-treated within the above preferred range.
  • organic acid and / or organic acid Salts can be used, for example, commercially available food additives such as citric acid, lactic acid, malic acid, succinic acid, tartaric acid, glutamic acid, arginic acid and the like, and citric acid Salt (eg, trisodium citrate, tripotassium citrate, etc.), lactate (eg, sodium lactate, etc.), malate (eg, sodium malate, etc.), succinate (eg, monosodium succinate, succinate) Acid disodium, etc.), tartrate (eg, sodium tartrate, potassium hydrogen tartrate, etc.), glutamate (eg, sodium glutamate) Um, potassium glutamate, etc.), alginates (e.g., it is possible to use a combination of at least one or more kinds of salts selected from the group consisting of arginine hydrochloride, etc.) and the like. All of these salts are widely used as food additives and pharmaceutical ingredients, and are commercially available and easily available
  • the effective amount of nucleic acid necessary for imparting heat resistance (thermal stabilization) to lactoferrin may be added to lactoferrin 1 in a mass ratio of 0.09 to 6.3.
  • it is added in the range of 0.1 to 6.0, preferably added to lactoferrin in the range of 0.10 to 5.7, and added in the range of 0.09 to 4.2.
  • it is added in the range of 0.09 to 2.1, preferably 0.09 to 1.0, and more preferably 1.0.
  • the amount of nucleic acid added to lactoferrin 1 is in the range of 0.19 to 6.3, preferably in the range of 0.2 to 6.0, preferably 0.0.
  • It can be in the range of 21 to 5.7, or can be in the range of 0.28 to 6.3, preferably in the range of 0.3 to 6.0, preferably in the range of 0.31 to 5.7. Or in the range of 0.38 to 6.3, preferably in the range of 0.4 to 6.0, preferably in the range of 0.42 to 5.7, or 0.47 to 6. 3, preferably 0.5 to 6.0, preferably 0.52 to 5.7, or 0.9 to 6.3, preferably 1 to 6. It can be in the range of 0, preferably in the range of 1 to 5.7, or in the range of 1.9 to 6.3, preferably Can range from 2.0 to 6.0, preferably from 2.1 to 5.7, or from 3.8 to 6.3, preferably from 4.0 to 6.0.
  • the nucleic acid is preferably added in a mass ratio of 0.19 to 4.2 with respect to lactoferrin, preferably in the range of 0.21 to 3.8. More preferably, it is added.
  • the effective amount of metal necessary for imparting heat resistance to lactoferrin is preferably 0.04 to 3, more preferably 0.04 to 2, in molar ratio to lactoferrin 1.
  • 0.04 to 1 is more preferable, 0.04 to 0.5 is more preferable, 0.04 to 0.4 is more preferable, and 0.04 to 0.3 is preferable.
  • 0.04 to 0.2 is more preferable, 0.04 to 0.1 is more preferable, and 0.04 to 0.09 is most preferable.
  • the mass ratio is 0. It is preferable to add in the range of 0.09 to 6.3.
  • nucleic acids and metals when producing a composition containing lactoferrin, specifically, pharmaceuticals, foods, and feeds, when nucleic acids and metals are used for the purpose of preventing heat denaturation of lactoferrin by a heat sterilization process, Is preferably added in a mass ratio of 0.09 to 6.3, and the metal is preferably used in a mass ratio of 0.04 to 3.
  • composition is a composition containing nucleic acid and lactoferrin, which contains nucleic acid and lactoferrin, and has a nucleic acid / lactoferrin mass ratio of 0.09 to 6.3.
  • the nucleic acid reagent used as the nucleic acid in the present invention may be DNA, RNA, a mixture thereof, or a mixture of these with a salt.
  • the lactoferrin reagent used as lactoferrin in the present invention may be a mixture with salts such as human origin and bovine origin.
  • the composition according to the fourth aspect of the present invention is a composition containing nucleic acid, metal and lactoferrin, wherein the nucleic acid / lactoferrin mass ratio is 0.09 to 6.3, and the metal / lactoferrin molar ratio. Is a composition having 0.04 to 3.0.
  • Any nucleic acid reagent can be used as the nucleic acid used in the composition of the fourth invention as long as it is a nucleic acid reagent that can be used in the drug of the present invention.
  • the effective amount of nucleic acid necessary for imparting heat resistance to lactoferrin is as described above.
  • the effective amount of metal necessary for imparting heat resistance to lactoferrin is preferably 0.04 to 3, more preferably 0.04 to 2, more preferably 0.04 to 2, in terms of molar ratio to lactoferrin 1. It is more preferably 04 to 1, further preferably 0.04 to 0.5, and more preferably 0.04 to 0.09.
  • the lactoferrin used as the composition of the present invention can be any lactoferrin reagent that can be used for the drug of the present invention, but preferably has not been modified by heating or sterilization. . This is because the effect of the present invention is exhibited by heating lactoferrin as a composition with a nucleic acid and a metal.
  • [Pharmaceuticals] 5th invention of this invention is the pharmaceutical which mix
  • a pharmaceutical form it can be formulated and administered in various forms by a known method, and can be administered orally in a preferred embodiment.
  • nucleic acid and lactoferrin are mixed, or nucleic acid, metal and lactoferrin are used in a mixed state.
  • nucleic acid and lactoferrin or nucleic acid, metal and lactoferrin using any additive such as a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the content of lactoferrin in the formulation is not particularly limited. Although it is considered that there are almost no side effects due to nucleic acid and lactoferrin, the content of nucleic acid is usually 0.01 to 60% by mass, preferably 1 to 30% by mass, and the content of lactoferrin is usually 0. It is 1 to 60% by mass, preferably 10 to 50% by mass.
  • the metal content is usually 0 to 1 ⁇ 10 ⁇ 1 mass%, preferably 0 to 1 ⁇ 10 ⁇ 2 mass%, or usually 1 ⁇ 10 ⁇ 8 to 1 ⁇ 10 ⁇ 1 mass%, preferably 1 ⁇ . 10 ⁇ 8 to 1 ⁇ 10 ⁇ 2 mass%.
  • additives such as excipients, binders, disintegrants, lubricants, stabilizers, flavoring agents, diluents, solvents for injections, and the like can be used.
  • Specific preparations include tablets (including sugar-coated tablets, enteric-coated tablets, and buccal tablets), powders, capsules (including enteric capsules and soft capsules), granules (including those coated), and pills. , Troches, encapsulated liposomes, solutions, or pharmaceutically acceptable sustained release formulations thereof.
  • Carriers and excipients used in these preparations include lactose, glucose, sucrose, mannitol, potato starch, corn starch, calcium carbonate, calcium phosphate, calcium sulfate, crystalline cellulose, licorice powder, gentian powder, etc.
  • Examples thereof include starch, gelatin, syrup, polyvinyl alcohol, polyvinyl ether, polyvinyl pyrrolidone, hydroxypropyl cellulose, ethyl cellulose, methyl cellulose, carboxymethyl cellulose and the like.
  • disintegrant examples include starch, agar, gelatin powder, sodium carboxymethyl cellulose, carboxymethyl cellulose calcium, crystalline cellulose, calcium carbonate, sodium bicarbonate, and sodium alginate.
  • a lubricant magnesium stearate, hydrogenated vegetable oil, and macrogol, etc.
  • a colorant red No. 2, yellow No. 4, and blue No. 1, etc. that are allowed to be added to pharmaceuticals, Each can be illustrated.
  • Tablets and granules are sucrose, hydroxypropylcellulose, purified shellac, gelatin, sorbitol, glycerin, ethylcellulose, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose phthalate acetate, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, methyl methacrylate, if necessary It can also be coated with a methacrylic acid polymer or the like.
  • the pharmaceutical composition to be used in combination may be contained as an active ingredient in the drug of the present invention, or may be commercialized as a separate drug without being contained in the drug of the present invention.
  • composition of the present invention examples include, for example, soft drinks, milk drinks, etc., or concentrated stock solutions and preparations of lactoferrin powder, lactoferrin aqueous solutions (syrups, etc.) and the like together with the nucleic acids of the present invention.
  • noodles such as buckwheat, udon, harusame, gyoza
  • Such foods and drinks include, for example, lactoferrin (including forms such as lactoferrin powder and lactoferrin aqueous solution (syrup, etc.), saccharides such as nucleic acid, dextrin, and starch; proteins such as gelatin, soy protein, and corn protein; alanine, It can be produced by blending amino acids such as glutamine, arginine and isoleucine; polysaccharides such as cellulose and gum arabic; and fats and oils such as soybean oil and medium chain fatty acid triglycerides.
  • lactoferrin including forms such as lactoferrin powder and lactoferrin aqueous solution (syrup, etc.
  • saccharides such as nucleic acid, dextrin, and starch
  • proteins such as gelatin, soy protein, and corn protein
  • alanine It can be produced by blending amino acids such as glutamine, arginine and isoleucine; polysaccharides such as
  • the feed to which the composition according to the present invention is added is not particularly limited as long as it contains nucleic acid and lactoferrin, or nucleic acid, metal and lactoferrin.
  • lactoferrin contains corn, wheat, barley, rye, Cereals such as milo; vegetable oils such as soybean oil, rapeseed oil, coconut oil, and linseed oil; cocoons such as bran, wheat straw, rice bran, and defatted rice bran; manufactured cocoons such as corn gluten meal and corn jam meal
  • Animal feeds such as fish meal, skim milk powder, whey, yellow grease, tallow, etc .
  • yeasts such as toll yeast, brewer's yeast
  • mineral feeds such as tricalcium phosphate and calcium carbonate
  • fats and oils simple amino acids
  • Can be manufactured examples of the form of the feed include pet food, livestock feed, and fish feed.
  • test method implemented in the test example of the present invention is as follows. That is, as an index for determining the heat resistance of the lactoferrin of the present invention, the unsaturated iron binding ability (UIBC value) by lactoferrin, SDS electrophoresis, latex agglutination method, and visual confirmation of aggregation / precipitation reaction were performed.
  • UIBC value unsaturated iron binding ability
  • the measurement of unsaturated iron binding ability can be performed using a commercially available measurement kit or the like, for example, using an unsaturated binding ability kit (manufactured by Nitto Boseki Co., Ltd., trade name: N-Test UIBC). it can.
  • the measurement method was as follows: 1 ml of ferric ammonium sulfate as an iron test solution was added to a test tube, and 0.2 ml of a sample was added. After thoroughly mixed and allowed to stand at room temperature for 5 minutes, 1 ml of 2-nitroso-5- (N-propyl-N-sulfopropylamino) -phenol (Nitroso-PSAP) was added as a reducing / coloring reagent. This was mixed well, and the absorbance was measured at a wavelength of 760 nm using purified water as a control. Absorbance was determined by the following equation.
  • UIBC value ( ⁇ g / dL) (ARb ⁇ AS) / ARb ⁇ 500
  • ARb Absorbance of reagent blank
  • AS Absorbance of specimen
  • the UIBC value of lactoferrin before heating is 100%
  • the UIBC value of lactoferrin after heating is preferably 10 to 100%, and particularly preferably 30 to 100%. And when UIBC value was such a preferable range, it was judged that "heat resistance" was favorable.
  • SDS electrophoresis SDS electrophoresis was performed on the heat-treated lactoferrin. From the results of electrophoresis, after analyzing the band pattern of lactoferrin, the presence or absence of a band corresponding to lactoferrin was confirmed, and the presence or absence of heat resistance of lactoferrin was judged. The evaluation method is as follows. Of these, the evaluations of “ ⁇ ” and “ ⁇ ” were judged to be “good heat resistance”. ⁇ : A lactoferrin band is confirmed. (Triangle
  • the lactoferrin content was measured by a latex agglutination method as an index for determining the heat resistance of lactoferrin.
  • the latex agglutination method of the present invention is a latex agglutination turbidimetric method using an anti-lactoferrin antibody (rabbit) sensitized latex.
  • the latex method latex particles bound with an anti-lactoferrin antibody are used.
  • the lactoferrin in the sample exhibits an antigen-antibody reaction with the anti-lactoferrin antibody bound to the latex particles, resulting in aggregation.
  • the change in absorbance was measured at a certain wavelength for this aggregation, and this was converted to the content of lactoferrin.
  • the content of lactoferrin was measured before and after heating the sample.
  • a method for measuring lactoferrin by the latex agglutination method a method using a commercially available kit (manufactured by Fujitex Co., Ltd., bovine lactoferrin latex test) is a preferred example.
  • Test Example 1 The purpose of this test was to examine the relationship between pH and temperature ranging from weakly acidic to alkaline in terms of the effect of nucleic acid on imparting heat resistance to lactoferrin.
  • sample obtained by dissolving 100 mg of a nucleic acid reagent (manufactured by Nissei Bio Inc., trade name: DNA sodium) as nucleic acid and 100 mg of a lactoferrin reagent (trade name: MLF-1) as lactoferrin in 100 ml of purified water
  • a test sample was obtained.
  • a control sample was prepared by dissolving 100 mg of a lactoferrin reagent (trade name: MLF-1 manufactured by Mirai) in 100 ml of purified water.
  • DNA sodium used as a nucleic acid reagent is a high-molecular-weight DNA concentrated powder made from salmon roe, and has a DNA content of 90% or more.
  • the molecular weight of the DNA sodium was measured by electrophoresis, it was 100 to 2000 bp (base pair: base pair number), and was converted to a molecular weight in the range of 60 to 1200 kilodaltons.
  • the lactoferrin purity in the lactoferrin reagent was determined by measuring the protein concentration by the Kjeldahl method and the lactoferrin content in the protein by the high performance liquid chromatography method. As a result, it was calculated by the above method to be 95.3% (protein composition The ratio was 97.8% and the lactoferrin ratio in the protein was 97.4%).
  • the lactoferrin purity of the lactoferrin reagent is 95.3%.
  • add 0.1N hydrochloric acid solution or 0.1N sodium hydroxide solution to adjust the pH to 6, 7, 8, 9, 10, 11, and 12, respectively. Each was created.
  • SDS electrophoresis is performed using a laboratory chip type fully automated electrophoresis system Experion TM (manufactured by Bio-Rad), and the band pattern of lactoferrin after electrophoresis is analyzed according to the evaluation method. did. About the lactoferrin reagent after heat processing, SDS electrophoresis was implemented. From the results of electrophoresis, after analyzing the band pattern of lactoferrin, the presence or absence of a band corresponding to lactoferrin was confirmed, and the presence or absence of heat resistance of lactoferrin was judged. The evaluation method is as follows. ⁇ : A lactoferrin band is confirmed. (Triangle
  • Tables 1 and 2 show the results of examining the heat resistance of lactoferrin in a lactoferrin / nucleic acid mixed solution (test sample).
  • Table 2 shows the results of examining the heat resistance of a lactoferrin single solution (control sample).
  • the aggregation and precipitation of lactoferrin was confirmed to be cloudy or aggregated / precipitated in the pH range of 7 to 9 even when heated at 80 ° C., and it was confirmed that the heat resistance was lowered.
  • the SDS electrolysis was performed in the pH range of 6 to 10 regardless of the heating temperature of 80 to 120 ° C. In electrophoresis, a lactoferrin band was confirmed.
  • the aggregation and precipitation reaction of lactoferrin no aggregation / precipitation was observed in the solution under any conditions of heating temperature of 80 to 120 ° C. and pH of 6 to 12, and the solution was transparent. As a result, it was revealed that the heat resistance of lactoferrin was maintained by the nucleic acid in the pH 6-12 region.
  • Test Example 2 The purpose of this test was to examine the relationship between the mixing ratio of nucleic acid and lactoferrin for the effect of imparting heat resistance to lactoferrin by the nucleic acid.
  • nucleic acid reagent / lactoferrin reagent The mass ratio of nucleic acid reagent / lactoferrin reagent to purified water is 0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 1, 2, 4, 6 Samples to which a nucleic acid and a lactoferrin reagent were added were prepared. The same nucleic acid reagent and lactoferrin reagent as those used in Test Example 1 were used. In addition, each sample was adjusted to a pH of 6, 7, 8, and 9 by adding a 0.1N hydrochloric acid solution or a 0.1N sodium hydroxide solution, and used as test samples.
  • the unsaturated iron binding capacity was measured using an unsaturated binding capacity kit (trade name: N-Test UIBC, manufactured by Nitto Boseki Co., Ltd.). First, 1 ml of ferric ammonium sulfate was introduced into a test tube as an iron test solution, and 0.2 ml of a sample was introduced. After thoroughly mixed and allowed to stand at room temperature for 5 minutes, 1 ml of 2-nitroso-5- (N-propyl-N-sulfopropylamino) -phenol (Nitroso-PSAP) was added as a reducing / coloring reagent. This was mixed well, the absorbance was measured at a wavelength of 760 nm using purified water as a control, and the unsaturated iron binding ability was calculated.
  • an unsaturated binding capacity kit (trade name: N-Test UIBC, manufactured by Nitto Boseki Co., Ltd.).
  • Tables 3 to 6 show the results of examining the heat resistance of lactoferrin at each mass ratio of nucleic acid reagent / lactoferrin reagent at pH 6.
  • Table 4 shows heat resistance at pH 7
  • Table 5 shows heat resistance at pH 8
  • Table 6 shows heat resistance at pH 9, respectively.
  • the nucleic acid / lactoferrin in Tables 3 to 6 are mixing ratios based on the reagents used in this test.
  • the unsaturated iron binding ability (UIBC value) of lactoferrin is 50% or more when the mass ratio of nucleic acid reagent / lactoferrin reagent is 0.2-2.
  • the effect of imparting heat resistance to lactoferrin by nucleic acid is effective when the mass ratio of the nucleic acid reagent to the lactoferrin reagent is 0.1-6.
  • the purity of the nucleic acid reagent used in the test example was 90 to 100%, and the purity of the lactoferrin reagent was 95.3% from the measurement result. Therefore, when the purity of the nucleic acid reagent was 100%, The minimum value 0.1 of the mass ratio of lactoferrin is 0.10 and the maximum value 6 is 6.3.
  • the purity of the nucleic acid reagent is 90%, the minimum value 0.1 of the mass ratio of nucleic acid / lactoferrin is 0.00.
  • the maximum value 6 is 5.7.
  • sample A sample was prepared by adding a nucleic acid reagent and a lactoferrin reagent so that the mass ratio of nucleic acid reagent / lactoferrin reagent was 0.5 with respect to purified water. Moreover, the sample which added soybean polysaccharide and the lactoferrin reagent so that the mass ratio of soybean polysaccharide / lactoferrin reagent might be set to 0.5 with respect to purified water was prepared. Each sample was adjusted to a pH of 9 using 0.1N sodium hydroxide solution and used as a test sample.
  • Test Example 4 The purpose of this test was to show that the drug having nucleic acid and metal which is one embodiment of the present invention has a remarkable effect.
  • Test method A plurality of the above samples were prepared, and copper gluconate (manufactured by Tomita Pharmaceutical Co., Ltd.) was weighed to be 0 ⁇ M, 0.55 ⁇ M, and 1.10 ⁇ M as copper, and added to each sample.
  • lactoferrin (LF) content of each sample to which copper gluconate was added was measured by a latex agglutination method.
  • heat treatment was performed at 80 ° C. for 10 minutes in a water bath (manufactured by TAITEC).
  • the sample after the heat treatment was immediately cooled in ice water.
  • the content of lactoferrin was measured by a latex agglutination method.
  • the conditions of pH and sterilization temperature of this test were set to numerical values that would be used as indicators when actually used as food or drink.
  • the residual ratio of lactoferrin was 26.5%, compared with the residual ratio when only nucleic acid was added. It was 123%. Furthermore, in the sample to which copper was added in a molar ratio of copper / lactoferrin of 0.09, the residual rate of lactoferrin was 35.7%, which was 165% compared to the residual rate when only nucleic acid was added.
  • the heat resistance of the lactoferrin is enhanced in the weakly acidic region to the alkaline region of the pH without heating and deactivation. Can be sterilized.
  • lactoferrin heat stabilizer when lactoferrin is added to products such as foods, drinks, feeds, and pharmaceuticals that require a sterilization process, it can be directly heat sterilized at the final stage of the manufacturing process, thereby providing a simple manufacturing method. .

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Abstract

　有効成分として核酸を含有するラクトフェリン熱安定化剤を、ラクトフェリンに添加することによって、ラクトフェリンに熱安定性を付与する。熱安定化されたラクトフェリンは、中性近傍領域のｐＨにおいても活性を維持したまま加熱殺菌が可能となる。

Description

耐熱性を付与する薬剤及び組成物
　本発明は、核酸を有効成分とする、ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤、及び核酸とラクトフェリンとを含有し、核酸／ラクトフェリンの質量比が０．０９～６．３である、核酸とラクトフェリンとを含有する組成物に関する。
　また、本発明は、核酸及び金属を有効成分とする、ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤、及び核酸、金属及びラクトフェリンを含有する組成物であって、金属／ラクトフェリンのモル比が０．０４～３．０であり、核酸／ラクトフェリンの質量比が０．０９～６．３である組成物にもある。さらには、ラクトフェリンを加熱殺菌する方法であって、核酸及び金属を有効成分とする、ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤を添加する工程を含むことを特徴とする方法にもある。
　核酸は、生物の細胞核中に存在し、塩基と糖、リン酸からなるヌクレオチドがリン酸エステル結合で連なった生体高分子である。核酸には、糖の違いによって２－デオキシリボースを持つデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）と、リボースを持つリボ核酸（ＲＮＡ）とに大別される。これらは生体の細胞内における遺伝情報の保存や、情報の伝達に深く関わっている。
　また、ＤＮＡ、ＲＮＡは共に４種の塩基を構成要素とし、二重らせん構造を有する二本のヌクレオチド鎖からなることが知られている。
　近年、核酸の摂取が、細胞代謝、免疫機能、脳機能、脂質代謝等に影響を及ぼすこと、美白効果を奏すること等が知られている。また、これらの効果を利用して、核酸を配合した飲食品、健康食品、医薬品原料等が製造、販売されている。
　例えば、生物活性プロスタグランジンと、ＲＮＡまたはＤＮＡとを混合してなるプロスタグランジン熱安定化組成物が知られている［例えば、特許文献１］。この組成物の製造方法は、プロスタグランジンの１に対し、重量比で通常１０～１０００、好ましくは５０～４００になるようなＲＮＡまたはＤＮＡを含むｐＨ７～８の水溶液にプロスタグランジンを結晶、粉末、あるいは溶液の形で加えるものである。
　また、ＤＮＡゲル中に安定化された温泉水のリポソームを含有することを特徴とする、温泉水を主剤とする組成物が知られている［例えば、特許文献２］。
　しかし、核酸が蛋白質に対して耐熱性を付与することは知られていなかった。
　ラクトフェリン（ＬＦ）は、生体内では、涙、唾液、末梢血、乳等に含まれている鉄結合性蛋白質であり、有害細菌に対する抗菌作用、腸管からの鉄の吸収促進作用、免疫賦活作用、細胞増殖作用、抗炎症作用、ビフィズス菌増殖効果等、種々の生理活性を有していることが報告されている。
　ラクトフェリンは、上述の優れた生理活性を有すると同時に、ほ乳類の母乳等に含まれるタンパク質であり、極めて安全性が高く、安心して摂取することができるものである。そこで、ラクトフェリンは種々の飲食品、加工食品、医薬品等に配合され、ラクトフェリン入り乳幼児用調製粉乳も発売される等、様々な製品に利用されている。
　しかし、ラクトフェリンは熱に不安定であり、特に中性のｐＨ領域では、６２．５℃で３０分間の加熱によりほぼ失活し、７０℃で１５分間の加熱により完全に失活することが知られており［例えば、非特許文献１］、加熱による変性によって鉄結合能が減少すること等が報告されている［例えば、非特許文献２］。
　一方、ラクトフェリン溶液のｐＨを１．０～６．５の範囲、特にｐＨ２．０～６．０の範囲で加熱に対して安定であることが開示されている［例えば、特許文献３］。
　従来、ラクトフェリンの熱安定性を強化したものとして、大豆多糖類やキサンタンガム等を安定剤として含有したラクトフェリン組成物が報告されている［例えば、特許文献４］。
特許昭６０－１９７４２号公報 特許第３２３０２３９号公報 特許第２６８８０９８号公報 特開２００４－３５２６６９公報 特許３２２３９５８号 ジャーナル・オブ・ペディアトリックス(Journal・of・Pediatrics)、第９０巻、第２９ページ、１９７７年 アドバンシス・イン・エクスペリメンタル・メディシン・アンド・バイオロジー（Advances in Experimental Medicine and Biology）、第３５７巻、第２１９ページ、１９９４年
　上述のように、ラクトフェリンは、その優れた生理活性と安全性から、種々の飲食品、加工食品、医薬品等に配合されるようになってきた。これらの製品の製造においては、加熱殺菌が簡便且つ確実な殺菌方法として広く使用されている。しかし、上述のように、ラクトフェリンは熱に対して不安定であり、熱変性して失活したラクトフェリンは有効な生理作用を期待できない。このことが、製品の製造において大きな制約となっていた。そこで、従来から、ラクトフェリンの熱安定性向上を目的として、種々の方法が開発されてきた。
　上述した特許文献３の知見に従えば、ラクトフェリンのｐＨを１．０～６．５の範囲に調製して加熱殺菌することによって、熱変性によるラクトフェリン活性の損失を減らす方法がある。しかし、中性のｐＨ領域である製品を、いったん酸性のｐＨ領域とすることは製造工程を複雑にするという欠点がある。さらに、酸性条件下の加熱は、製品中の他の活性成分に対する影響が懸念される。
　上述した特許文献４では、ラクトフェリン類に対し、安定剤として大豆多糖類やキサンタンガム等を、重量比で０．５～１００倍を使用することを好ましい態様として開示している。しかし、安定剤を多量に配合することは、ラクトフェリンを添加する食品を製造する上で大きな制約となる。すなわち、大豆多糖類やキサンタンガム等のガム類を配合すると、粘度が増加して製品の物性に影響を与える為、このように大量に添加することは困難である。さらに、特許文献４の試験例で示されたラクトフェリン類の濃度は８ｍｇ％～２０ｍｇ％の範囲という比較的低濃度に限定されており、ラクトフェリンを高濃度とした場合における効果は示されていない。
　上述した特許文献５では、安定化のために、モル比でラクトフェリン１Ｍに対し、複数種の金属イオンを３～５００Ｍ添加することを開示している。しかし、金属イオンは油脂の酸化促進効果を有することから、油脂等を含有する飲食品等の酸化抑制の観点から、金属イオンの添加量は少ないことが好ましい。また、金属特有の臭気を低減させる観点からも、金属イオンの添加量は少ないことが好ましい。
　このように、加熱した場合にもラクトフェリンを熱変性させない方法、すなわち、ラクトフェリンの熱安定性を向上させる方法については、原料の使用量や外観、風味、粘度、ｐＨ、色調などによって配合割合が制限され、蛋白質の添加量が制限されることが問題となっていた。特にラクトフェリンについては、熱安定性の低い中性域のｐＨでの熱安定性保持が問題となっていた。さらに、ラクトフェリンの熱安定性を向上する方法については、ラクトフェリン以外の原料が少量であっても、熱安定性向上効果を発揮し、製品設計等を制限することのない簡便な方法が望まれていた。
　従って、本発明の目的は、ラクトフェリンの熱安定性を向上する方法、すなわち、ラクトフェリンを熱安定化する方法を提供することにあり、特に中性領域のｐＨにおいてラクトフェリンを熱安定化する方法を提供することにある。
　発明者らは鋭意研究により、核酸をラクトフェリンに混合すると、ラクトフェリンの耐熱性が顕著に向上することを見出した。この耐熱性の向上、すなわち熱安定化は、ラクトフェリンが中性近傍領域のｐＨにある場合にも、有効に発揮されるものであった。すなわち、核酸を熱安定化剤（耐熱化剤）としてラクトフェリンに添加して使用することによって、上記目的が達成されることを見出して、本発明に到達した。
　また、核酸及び少量の金属をラクトフェリンに混合すると、核酸のみをラクトフェリンに混合した場合と比較して、ラクトフェリンの耐熱性がさらに向上することを見出した。
　前記課題を解決する本願第一の発明は、核酸を有効成分とする、ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤、である。
　また、本願第一の発明は、核酸の分子量が６０～１２００キロダルトンであること、核酸が白子由来であること、及び、ｐＨが６～９の範囲において耐熱性を付与すること、をそれぞれ好ましい態様としている。
　　本願第二の発明は、核酸及び金属を有効成分とする、ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤、である。
　また、本願第二の発明は、核酸がラクトフェリン１に対して質量比で０．０９～６．３の割合で使用され、金属がラクトフェリン１に対してモル比で０．０４～３．０使用されることを好ましい態様としている。また、核酸の分子量が６０～１２００キロダルトンであること、核酸が白子由来であること、金属が鉄、亜鉛、銅から選ばれるいずれか１種以上の金属であることを好ましい態様としている。金属は銅であることをさらに好ましい態様としている。
　本願第三の発明は、核酸とラクトフェリンとを含有し、核酸／ラクトフェリンの質量比が０．０９～６．３である、核酸とラクトフェリンを含有する組成物、である。また、本願第三の発明は、ラクトフェリンに耐熱性が付与されていること、核酸の分子量が６０～１２００キロダルトンであること、を好ましい態様としている。
　本願第四の発明は、核酸、金属及びラクトフェリンを含有する組成物であって、核酸／ラクトフェリンの重量比が０．０９～６．３であり、金属／ラクトフェリンのモル比が０．０４～３．０である組成物である。
　本願第四の発明は、ラクトフェリンに耐熱性が付与されていること、核酸の分子量が６０～１２００キロダルトンであること、金属が鉄、亜鉛、銅から選ばれるいずれか１種以上の金属であることを好ましい態様としている。金属は銅であることをさらに好ましい態様としている。
　本願第五の発明は、本願第三の発明又は本願第四の発明の組成物を配合した医薬品である。
　本願第六の発明は、本願第三の発明又は本願第四の発明の組成物を配合した飲食品である。
　本願第七の発明は、本願第三の発明又は本願第四の発明の組成物を配合した飼料である。
　本願第八の発明は、ラクトフェリンを加熱殺菌する方法であって、核酸を有効成分とする、ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤を添加する工程を含むことを特徴とする方法、である。
　本願第八の発明は、核酸が、ラクトフェリン１に対して質量比で０．０９～６．３の割合で使用されるものであること、核酸の分子量が６０～１２００キロダルトンであること、核酸が白子由来であること、を好ましい態様としている。
　本願第九の発明は、ラクトフェリンを加熱殺菌する方法であって、核酸及び金属を有効成分とする、ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤を添加する工程を含むことを特徴とする方法、である。
　本願第九の発明は、核酸がラクトフェリン１に対して質量比で０．０９～６．３の割合で使用され、金属がラクトフェリン１に対してモル比で０．０４～３．０の割合で使用されるものであること、核酸の分子量が６０～１２００キロダルトンであること、核酸が白子由来であること、金属が鉄、亜鉛、銅から選ばれるいずれか１種以上の金属であることを好ましい態様としている。金属は銅であることをさらに好ましい態様としている。
　すなわち、本発明は、ラクトフェリンの熱安定性を増強する薬剤を提供することを目的とするものである。
　また、本発明は、熱安定性の付与されたラクトフェリン組成物を提供することにもある。
　本発明は、熱安定性の増強されたラクトフェリン組成物を含有する医薬品、飲食品、飼料にもある。
　さらには、本発明は、ラクトフェリンの熱安定性を増強する薬剤を用いた、ラクトフェリンを加熱殺菌する方法にもある。
　本発明により、ラクトフェリンを、変性、凝集、沈殿等を生じさせることなく、高温殺菌することが可能となる。また、ラクトフェリンの熱安定性の低い中性域のｐＨにおいても、その機能を損なうことなく高温殺菌することができる。
　従って、本発明は、次の［１］～［９］にある。
［１］
　核酸を有効成分とする、ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤。
［２］
　核酸の分子量が６０～１２００キロダルトンである［１］の薬剤。
［３］
　核酸が白子由来である［１］又は［２］に記載の薬剤。
［４］
　ｐＨが６～９の範囲において、耐熱性を付与する［１］～［３］のいずれか一項に記載の薬剤。
［５］
　核酸とラクトフェリンとを含有し、核酸／ラクトフェリンの質量比が０．０９～６．３である、核酸とラクトフェリンとを含有する組成物。
［６］
　ラクトフェリンに耐熱性が付与されている［５］に記載の組成物。
［７］
　［５］又は［６］に記載された組成物を配合した医薬品。
［８］
　［５］又は［６］に記載された組成物を配合した飲食品。
［９］
　［５］又は［６］に記載された組成物を配合した飼料。
　さらに、本発明は、次の［１１］～［２８］にもある。
［１１］
　核酸及び金属を有効成分とする、ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤。
［１２］
　ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤であって、核酸がラクトフェリン１に対して質量比で０．０９～６．３の割合で使用され、金属がラクトフェリン１に対してモル比で０．０４～３．０の割合で使用されることを特徴とする、［１１］に記載の薬剤。
［１３］
　核酸の分子量が６０～１２００キロダルトンである［１１］又は［１２］に記載の薬剤。
［１４］
　核酸が白子由来である［１１］～［１３］のいずれか一項に記載の薬剤。
［１５］
　金属が銅である［１１］～［１４］のいずれか一項に記載の薬剤。
［１６］
　核酸、金属及びラクトフェリンを含有する組成物であって、核酸／ラクトフェリンの質量比が０．０９～６．３であり、金属／ラクトフェリンのモル比が０．０４～３．０である組成物。
［１７］
　ラクトフェリンに耐熱性が付与されている［１６］に記載の組成物。
［１８］
　核酸の分子量が６０～１２００キロダルトンである［１６］又は［１７］に記載の組成物。
［１９］
　核酸が白子由来である［１６］～［１８］のいずれか一項に記載の組成物。
［２０］
　金属が銅である［１６］～［１９］のいずれか一項に記載の組成物。
［２１］
　［６］～［２０］のいずれか一項に記載の組成物を配合した医薬品。
［２２］
　［６］～［２０］のいずれか一項に記載の組成物を配合した飲食品。
［２３］
　［６］～［２０］のいずれか一項に記載の組成物を配合した飼料。
［２４］
　ラクトフェリンを加熱殺菌する方法であって、核酸及び金属を有効成分とする、ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤を添加する工程を含むことを特徴とする方法。
［２５］
　核酸がラクトフェリン１に対して質量比で０．０９～６．３の割合で使用され、金属がラクトフェリン１に対してモル比で０．０４～３．０使用されるものである、［２４］に記載の方法。
［２６］
　核酸の分子量が６０～１２００キロダルトンである、［２４］又は［２５］に記載の方法。
［２７］
　核酸が白子由来である［２４］～［２６］のいずれか一項に記載の方法。
［２８］
　金属が銅である［２４］～［２７］のいずれか一項に記載の方法。
　さらに、本発明は、次の［３１］～［３２］にもある。
［３１］
　有効成分として核酸を含有する、ラクトフェリン熱安定化剤。
［３２］
　核酸からなる、ラクトフェリン熱安定化剤。
　本発明によれば、ラクトフェリンに対して、熱安定性（耐熱性）を付与することができるので、本発明は、ラクトフェリン用熱安定化剤、ラクトフェリン用熱安定性付与剤、ラクトフェリン用耐熱化剤、及びラクトフェリン用耐熱性付与剤にもあり、ラクトフェリン熱安定化剤、ラクトフェリン熱安定性付与剤、ラクトフェリン耐熱化剤、ラクトフェリン耐熱性付与剤、ラクトフェリン殺菌補助剤、及びラクトフェリン加熱殺菌補助剤にもある。
　さらに、本発明は、次の［３３］～［３６］にもある。
［３３］
　ｐＨ６～９の範囲のｐＨ用である、［３１］～［３２］の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤。
［３４］
　ｐＨ６～９の範囲で熱安定化するための、［３１］～［３２］の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤。
［３５］
　核酸が、６０～１２００キロダルトンの分子量を有する、［３１］～［３４］の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤。
［３６］
　核酸が、白子から抽出された核酸である、［３１］～［３５］の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤。
　本発明によるラクトフェリンの熱安定化は、あらゆるｐＨ領域において有効であり、従来は熱安定化が困難であった中性近傍領域のｐＨにおいても有効である。好適に実施可能な中性近傍領域のｐＨとしては、例えば、ｐＨ６～９の範囲、ｐＨ６～８の範囲、ｐＨ６．５～９の範囲、ｐＨ６．５～８の範囲、ｐＨ６．５～７．５の範囲、ｐＨ７～９の範囲、ｐＨ７～８の範囲を挙げることができる。従って、本発明は、ｐＨ６～９用、ｐＨ６～８の範囲、ｐＨ６．５～９用、ｐＨ６．５～８用、ｐＨ６．５～７．５用、ｐＨ７～９用、ｐＨ７～８用の、ラクトフェリン熱安定化剤にもある。また、このような好ましいｐＨの範囲にあることを確実とするために、本発明の熱安定化剤は、核酸に加えて、ｐＨ調節成分を含有させることもできる。すなわち、本発明は、上記好ましいｐＨの範囲とするためのｐＨ調節成分と、核酸とを有効成分として含有するラクトフェリン熱安定化剤にもある。
　本発明の核酸としては、核酸の粗抽出物あるいは粗精製物を使用することができ、特定の配列の核酸である必要はなく、広範な分子量の範囲の核酸を使用することができる。核酸としては、核酸及び／又はその塩を使用することができる。塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等を例示することができる。
　さらに、本発明は、次の［３７］～［４０］にもある。
［３７］
　核酸に加えて、さらに金属を含有する、［３１］～［３６］の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤。
［３８］
　金属が、鉄、亜鉛及び銅からなる群から選択された１種以上である、［３７］に記載のラクトフェリン熱安定化剤。
［３９］
　金属が、銅である、［３７］に記載のラクトフェリン熱安定化剤。
［４０］
　ラクトフェリン殺菌補助剤である、［３１］～［３９］の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤。
　本発明のラクトフェリン熱安定化剤は、核酸に加えて、さらに金属を含有させることができる。これによって、さらにラクトフェリンの熱安定性を向上させることができる。この場合に添加する金属は少量でよいために、製品の風味を金属臭で損ねる心配はない。金属としては、金属及び／又はその塩を使用することができる。塩としては、例えば、塩化物、硫酸塩、リン酸塩、グルコン酸塩等を例示することができる。好適な実施の一態様において、金属として銅を使用した場合に、銅と核酸との質量比は、銅を単体に換算して、銅（質量）／核酸（質量）の質量比の値を、例えば、０～１×１０－２、０～１×１０－３、０～１×１０－４の範囲で使用することができ、また、例えば、１×１０－６～１×１０－２、１×１０－６～１×１０－３、１×１０－６～１×１０－４の範囲で使用することができる。
　さらに、本発明は、次の［４１］～［４５］にもある。
［４１］
　核酸とラクトフェリンとを含有する、ラクトフェリン組成物。
［４２］
　核酸とラクトフェリンとを含有する、ラクトフェリンが熱安定化されたラクトフェリン組成物。
［４３］
　核酸とラクトフェリンとを含有し、さらに金属を含有する、［４１］～［４２］の何れかに記載のラクトフェリン組成物。
［４４］
　［３１］～［４０］の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤と、ラクトフェリンとを含有する、熱安定化されたラクトフェリン組成物。
［４５］
　核酸とラクトフェリンとを、核酸（質量）／ラクトフェリン（質量）の質量比の値が０．０９～６．３の範囲で含有する、［４１］～［４４］の何れかに記載のラクトフェリン組成物。
　本発明のラクトフェリン組成物は、含有されるラクトフェリンが熱安定化されており、熱変性によってラクトフェリンが失活することなく、加熱殺菌等を目的とした加熱処理を、好適に行うことができる。従って、本発明のラクトフェリン組成物は、加熱殺菌等が常用される医薬品、飲食品等の原材料として、好適に使用することができる。
　さらに、本発明は、次の［４６］～［５４］にもある。
［４６］
　ラクトフェリンを熱安定化するための、核酸の使用。
［４７］
　ラクトフェリンを加熱殺菌するための、核酸の使用。
［４８］
　ラクトフェリンに核酸を添加することによって、ラクトフェリンを熱安定化する方法。
［４９］
　ラクトフェリンに核酸を添加する工程、
を含んでなる、ラクトフェリンを熱安定化する方法。
［５０］
　ラクトフェリンを熱安定化するための、核酸及び金属の使用。
［５１］
　核酸に加えて、さらに金属を添加する、［４８］に記載の方法。
［５２］
　ラクトフェリンに核酸を添加する工程の前又は後に、
　ラクトフェリンに金属を添加する工程、
を含むか、あるいは、
　ラクトフェリンに核酸を添加する工程として、
　ラクトフェリンに核酸と金属とを添加する工程、
を含む、［４９］に記載の方法。
［５３］
　［３１］～［４０］の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤をラクトフェリンに添加して、ラクトフェリンを熱安定化する方法。
［５４］
　［３１］～［４０］の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤をラクトフェリンに添加する工程、
を含む、ラクトフェリンを熱安定化する方法。
　本発明によるラクトフェリンの熱安定化方法は、好ましい実施の態様において、ラクトフェリン又はラクトフェリンを含有する組成物を、加熱殺菌等を目的とする加熱処理を行う前の、前処理として好適に実施することができる。
　従って、本発明は、次の［５５］にもある。
［５５］
　ラクトフェリンを加熱殺菌する方法であって、
　［３１］～［４０］の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤を、ラクトフェリンに添加して、ラクトフェリンを熱安定化する工程、
　熱安定化されたラクトフェリンを加熱殺菌する工程、
を含む、方法。
　ラクトフェリン熱安定化剤によるラクトフェリンの熱安定化は、単離されたラクトフェリンに対しても発揮され、他の成分と混合されてなるラクトフェリン含有組成物の中のラクトフェリンに対しても発揮される。従って、上述した熱安定化方法、及び加熱殺菌方法は、それぞれ、ラクトフェリン含有組成物の熱安定化方法、及びラクトフェリン含有組成物の加熱殺菌方法を含むものである。
　本願第一の発明及び第二の発明の薬剤によれば、弱酸性から弱アルカリ性のｐＨ範囲、具体的にはｐＨ６～９において、ラクトフェリンに対して耐熱性を付与することができる。このため、該ｐＨ範囲であれば、蛋白質を含む多くの飲食品、飼料、医薬品等の殺菌処理を、ラクトフェリンの物性、機能を損なうことなく実施することができる。
　例えば、飲食品としては、ゼリー、プリン、アイスクリーム、ヨーグルト、ジュース、乳飲料、スポーツドリンク、スープ、焼成食品、粉乳、育児用調製粉乳、及び流動食等の食品群等、加熱工程を含む飲食品に好適に使用することができる。
　また、本願第三の発明及び第四の発明である組成物によれば、核酸又は核酸及び金属の使用量がラクトフェリンに対して極めて少量でも効果を発揮するため、製品の組成や物性に影響を与えずに、飲食品や飼料、医薬品等に、本発明における核酸とラクトフェリンとを含有する組成物、又は核酸、金属及びラクトフェリンを含有する組成物を配合することができる。
　本願第五の発明の医薬品、本願第六の発明の飲食品、本願第七の発明の飼料によれば、変性させることなく、ラクトフェリンを効果的に摂取することができる。
　本願第八の発明及び第九の発明のラクトフェリンを加熱殺菌する方法によれば、熱変性させることなく、ラクトフェリンを加熱殺菌することができる。
　また、本願発明は、金属を使用する態様が含まれる。金属を使用する場合においても、ごく少量の使用で効果を発揮するため、金属臭が発生する心配もなく、金属の添加が好ましくない場合にも問題なく使用することができる。
　さらには、本発明で使用した白子由来の核酸の利用は、これまで大部分が廃棄されていた白子の有効な利用方法として提起することもできる。
　このように、本発明によれば、ラクトフェリンを熱安定化することができる。熱安定化されたラクトフェリンは、加熱殺菌処理をした場合にも、熱変性による失活が最小限となっている。そのために、本発明によれば、ラクトフェリンの加熱殺菌のために、ｐＨをいったん酸性とした後に加熱殺菌処理を行って再びｐＨを中性とする等の複雑な工程は必要なく、物性に影響を与えるほどの大量の安定剤を添加する必要もない。
　また、本発明によれば、その製品製造工程上、加熱が必須であるために、ラクトフェリンの添加が困難であったプリンやゼリー等の製品に対しても、ラクトフェリンを添加して、その活性を十分に発揮させることができる。プリンやゼリー等の製品は、嚥下容易という長所から、嚥下困難な幼児や高齢者にも適している。また、ラクトフェリンは、その種々の活性から、身体の弱い幼児や高齢者に、特に適した成分である。従って、ラクトフェリンが添加されたプリンやゼリー等の製品は、育児や介護の現場でも待ち望まれるものであったが、従来は製造が困難なものであった。本発明によれば、このように、従来は困難であったラクトフェリン添加製品を、好適に製造することができる。
　次に、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の実施可能な範囲内で自由に変更することができる。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り、質量（ｍｇ）／容積（ｍｌ）による表示である。また、試料の溶媒として使用する精製水の比重は１に近いので、百分率は重量パーセント濃度［質量（ｍｇ）／質量（ｍｇ）］と表示することもできる。
［耐熱性（熱安定性）］
　本発明における「耐熱性」が付与されたラクトフェリンとは、加熱後のラクトフェリンが、加熱前と同様にラクトフェリン特有の立体構造を保持し、若しくは様々な生理活性が失われないことを示す。尚、「耐熱性」は「熱安定性」と換言することもできる。
　具体的には、ラクトフェリンによる不飽和鉄結合能を測定することによって、本発明における「耐熱性」を有するラクトフェリンを評価することが可能である。
　また、構造の保持という観点で、耐熱性の指標として、ＳＤＳ電気泳動によるラクトフェリン分子量測定や、目視によるラクトフェリンの凝集・沈殿を確認することも「耐熱性」を有するラクトフェリンとして評価することが可能である。
　さらには、本発明における「耐熱性」は、抗原抗体反応に基づくラテックス凝集法にて加熱前後のラクトフェリン含有量を測定し、該測定値に基づいたラクトフェリンの残存率で評価することができる。本発明におけるラクトフェリン残存率は、
「ラクトフェリン残存率（％）＝（加熱後のラクトフェリン含有量／加熱前のラクトフェリン含有量）×１００」
と定義される。
　ラクトフェリン残存率は２０％以上あれば、ラクトフェリンを含有する飲食品等において、ラクトフェリンの活性を十分に発揮できる。ラクトフェリン残存率は、２０％以上が好ましく、２５％以上がより好ましく、３０％以上がより好ましく、３５％以上がさらに好ましい。
［核酸］
　本発明において、ラクトフェリンに耐熱性を付与する核酸とは、ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）、ＲＮＡ（リボ核酸）やこれらの混合物を指す。ＤＮＡやＲＮＡは、二本鎖または一本鎖の状態であってもよい。好適な実施の一態様において、核酸の分子量は、５キロダルトン～１２，０００キロダルトン、好ましくは６０キロダルトン～１２００キロダルトンとすることができる。
　本発明において使用する核酸は、常法により化学合成された核酸であっても良いし、ヒト、ウシ、マウス、魚類などの動物や植物、細菌等の天然物から抽出した核酸を用いてもよい。天然物由来の核酸として用いられるものとしては、サケ、ニシン、マス、タラ等の魚類の白子（精巣）等から抽出された核酸が特に好ましい。核酸としては、核酸及び／又はその塩を使用することができる。塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等を例示することができる。
　本発明における核酸として、種々の核酸試薬を使用することができ、核酸試薬は、核酸及び／又はその塩を含んでもよく、試薬中に６０～１００％の核酸が含まれていることが好ましく、８０～１００％の核酸が含まれていることがより好ましく、９０～１００％の核酸が含まれていることが特に好ましい。
　ここで、核酸試薬中のＤＮＡの純度は、ＤＮＡを含む試薬１００ｍｇを精製水１００ｍｌに溶解し、分光光度計（ナノドロップ社製、商品名：NanoDrop ND-1000）で波長を２６０ｎｍに設定して測定することが可能である。
　尚、核酸試薬には、核酸及び／又はその塩に加えて無機塩類を混合しても良く、混合される塩類としては、通常用いられる塩類であればいずれの塩類であっても良く、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩、ピリジニウム塩等を例示することができる。
［ラクトフェリン］
　本発明で熱安定化されるラクトフェリンは、市販品の他、哺乳類（例えば、ヒト、ウシ、水牛、ウマ、ヤギ、ヒツジ等）の初乳、移行乳、常乳、末期乳等、これらの処理物である脱脂乳、ホエイ等からイオン交換クロマトグラフィー等の常法により分離したラクトフェリン、ラクトフェリンから常法により鉄を除去したアポラクトフェリン、アポラクトフェリンに鉄、銅、亜鉛、マンガン等の金属を一部又は完全にキレートさせた金属不飽和ラクトフェリン、または金属飽和ラクトフェリンのいずれであっても使用することができる。
　また、組換えＤＮＡ技術により得られる組換え真菌、組換え乳牛（トランスジェニック・カウ）等により生産されるヒト・ラクトフェリン等も、同様に本発明に使用することができる。
　本発明で熱安定化されるラクトフェリンとして、種々のラクトフェリン試薬を使用することができ、ラクトフェリン試薬は、その純度として、試薬中に３０～１００％のラクトフェリンが含まれていることが好ましく、７０～１００％のラクトフェリンが含まれていることがより好ましく、８５～１００％のラクトフェリンが含まれていることが特に好ましい。
　また、ラクトフェリンの純度は、例えば以下の式によって算出することができる。
　ラクトフェリン純度（％）＝蛋白質の組成比率 × 蛋白質中のラクトフェリン比率
［金属］
　本発明で使用可能な金属としては、種々の金属及びこれらの塩を挙げることができ、具体的には、鉄、銅、亜鉛、マンガン、コバルト、ニッケル、アルミニウムやこれらの塩類を挙げることができる。好適な実施の一態様において例示すれば、金属として、具体的には、硫酸鉄、硫酸銅、硫酸亜鉛、硫酸マンガン、硫酸ニッケル、硫酸アルミニウム等を使用することができ、これらの金属の塩化物や燐酸塩、グルコン酸塩等を使用することができる。
　金属の中では、鉄、銅、亜鉛が好ましく、銅が最も好ましい。
　尚、本発明における金属として、種々の金属試薬を使用することができ、金属試薬は、金属及び／又はその塩を含んでもよく、例えば、金属塩を例示することができる。
［薬剤（熱安定化剤）］
　本願第一の発明および第二の発明である薬剤は、ラクトフェリンに耐熱性を付与し、ラクトフェリンの加熱殺菌時の変性を抑制することができるので、ラクトフェリンに好適に使用することができる。また、ラクトフェリンを配合した医薬品、飲食品、飼料等に配合することにより、加熱殺菌時にラクトフェリンに耐熱性が付与され、加熱後でもラクトフェリンの構造や活性を保持することができるので、好適に使用することができる。本発明の熱安定化剤は、このように使用することができる。このように、本発明の薬剤（熱安定化剤）は殺菌補助剤及び加熱殺菌補助剤として使用することもできる。
［ｐＨ］
　ラクトフェリンの熱安定性が高まる、すなわち、核酸、又は核酸と金属によりラクトフェリンに耐熱性が付与されるｐＨ環境として、好適な実施の態様において、ラクトフェリンが熱に不安定な弱酸性域からアルカリ性のｐＨ範囲において熱安定性を高めることが可能であり、好適に実施可能であるｐＨ範囲として、ｐＨが６～１０の範囲、さらにｐＨ６～９の範囲、特にｐＨ６～８の範囲を挙げることができる。
　本発明において、核酸を有効成分とする薬剤（熱安定化剤）、又は核酸と金属を有効成分とする薬剤（熱安定化剤）は前記ｐＨ６～１０の範囲においてラクトフェリンに耐熱性を付与することができるので、従来のようにラクトフェリンを加熱殺菌する際に、予めｐＨを中性以下の酸性域に調整する必要はない。また、ラクトフェリンに核酸又は核酸と金属を添加することによって、中性域からアルカリ性域であっても、簡便にラクトフェリンの殺菌を行うことが可能であるという効果も兼ね備えている。すなわち、本発明によれば従来は不可能であったような加熱処理が可能になるために、ｐＨ６～９の範囲において、ラクトフェリンに対する殺菌効果、及び殺菌の補助効果を高めることが可能である。
　このように、本発明の核酸を有効成分とする耐熱性を付与する薬剤（熱安定化剤）は、ラクトフェリンが、従来、熱に対して不安定な環境であったアルカリ性域で耐熱性を付与できる効果を有するのであって、ラクトフェリンに対する新たな加熱殺菌方法を提供するとともに、ラクトフェリンを含む中性からアルカリ性域が好まれる医薬品、食品、飼料に添加することによって、ｐＨ調整を必要とせずに加熱殺菌を行うことができる。
　また、上述したような好ましいｐＨの範囲にあることを確実とするために、本発明の熱安定化剤に、ｐＨ調節成分を添加することもできる。このようなｐＨ調節成分としては、ラクトフェリンを加熱処理する際のｐＨを上記好ましい範囲に安定させるための緩衝能があればどのようなものであってもよく、例えば有機酸及び／又は有機酸の塩類を使用することができ、例えば、市販食品添加物のクエン酸、乳酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、グルタミン酸、アルギニン酸等からなる群より選択される少なくとも１種以上の酸、及びクエン酸塩（例えば、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム等）、乳酸塩（例えば、乳酸ナトリウム等）、リンゴ酸塩（例えば、リンゴ酸ナトリウム等）、コハク酸塩（例えば、コハク酸一ナトリウム、コハク酸二ナトリウム等）、酒石酸塩（例えば、酒石酸ナトリウム、酒石酸水素カリウム等）、グルタミン酸塩（例えば、グルタミン酸ナトリウム、グルタミン酸カリウム等）、アルギニン酸塩（例えば、アルギニン塩酸塩等）等からなる群より選択される少なくとも１種以上の塩類の組み合わせを使用することが可能である。これらの塩類はいずれも食品添加物や医薬成分として広く利用されており、また市販されており容易に入手可能である。
［有効量］
　本発明において、ラクトフェリンに耐熱性を付与する（熱安定化する）ために必要な核酸の有効量は、ラクトフェリン１に対し、質量比で０．０９～６．３の範囲で添加されることが好ましく、０．１～６．０の範囲で添加されることが好ましく、０．１０～５．７の範囲でラクトフェリンに添加されることが好ましく、０．０９～４．２の範囲で添加されることが好ましく、０．０９～２．１の範囲で添加されることが好ましく、０．０９～１．０であることが好ましく、１．０であることがさらに好ましい。
　好適な実施の一態様において、核酸の添加量は、ラクトフェリン１に対して、質量比で、０．１９～６．３の範囲、好ましくは０．２～６．０の範囲、好ましくは０．２１～５．７の範囲とすることができ、あるいは０．２８～６．３の範囲、好ましくは０．３～６．０の範囲、好ましくは０．３１～５．７の範囲とすることができ、あるいは０．３８～６．３の範囲、好ましくは０．４～６．０の範囲、好ましくは０．４２～５．７の範囲とすることができ、あるいは０．４７～６．３の範囲、好ましくは０．５～６．０の範囲、好ましくは０．５２～５．７の範囲とすることができ、あるいは０．９～６．３の範囲、好ましくは１～６．０の範囲、好ましくは１～５．７の範囲とすることができ、あるいは１．９～６．３の範囲、好ましくは２．０～６．０の範囲、好ましくは２．１～５．７の範囲とすることができ、あるいは３．８～６．３の範囲、好ましくは４．０～６．０の範囲、好ましくは４．２～５．７の範囲とすることができる。
　特に、ｐＨが６～９の範囲にあっては、核酸は、ラクトフェリンに対して質量比が０．１９～４．２の範囲で添加されることが好ましく、０．２１～３．８の範囲で添加される
ことがさらに好ましい。
　また、ラクトフェリンに耐熱性を付与するために必要な金属の有効量は、ラクトフェリン１に対してモル比で０．０４～３であることが好ましく、０．０４～２であることがより好ましく、０．０４～１であることがより好ましく、０．０４～０．５であることがより好ましく、０．０４～０．４であることがより好ましく、０．０４～０．３であることがより好ましく、０．０４～０．２であることがより好ましく、０．０４～０．１であることがより好ましく、０．０４～０．０９であることが最も好ましい。
　従って、ラクトフェリンを含む組成物、具体的にはラクトフェリンを含む医薬品、食品、飼料を製造する際には、加熱殺菌工程によるラクトフェリンの熱変性を防止する目的で核酸を使用する場合、質量比で０．０９～６．３の範囲で添加することが好ましい。
　また、ラクトフェリンを含む組成物、具体的には医薬品、食品、飼料を製造する際には、加熱殺菌工程によるラクトフェリンの熱変性を防止する目的で核酸及び金属を使用する場合、ラクトフェリンに対して核酸を質量比で０．０９～６．３の範囲で添加し、金属を質量比で０．０４～３を使用することが好ましい。
　これらにより、耐熱性を有する核酸とラクトフェリンとを含有する組成物、または耐熱性を有する核酸、金属及びラクトフェリンを含有する組成物を配合した医薬品、食品、飼料を製造することが可能である。
［組成物］
　本発明の第三の発明である組成物は、核酸とラクトフェリンとを含有し、核酸／ラクトフェリンの質量比が０．０９～６．３である、核酸とラクトフェリンとを含有する組成物である。
　本発明において核酸として使用される核酸試薬は、ＤＮＡ、ＲＮＡやこれらの混合物、あるいはこれらと塩類との混合物であっても良い。
　また、本発明においてラクトフェリンとして使用されるラクトフェリン試薬は、ヒト由来、ウシ由来等、塩類との混合物であっても良い。
　　本発明の第四の発明である組成物は、核酸、金属及びラクトフェリンを含有する組成物であって、核酸／ラクトフェリンの質量比が０．０９～６．３であり、金属／ラクトフェリンのモル比が０．０４～３．０である組成物である。
　第四の発明である組成物に使用される核酸は、本発明の薬剤に使用できる核酸試薬であれば、いかなるものも使用することができる。ラクトフェリンに耐熱性を付与するために必要な核酸の有効量は、上述した通りであり、例えば、ラクトフェリン１に対して質量比で０．０９～６．３であることが好ましく、０．０９～４．２であることがより好ましく、０．０９～２．１であることがより好ましく、０．０９～１．０であることがより好ましく、１．０であることが好ましい。
　また、第四の発明である組成物に使用される金属としては、本発明の薬剤に使用できる金属試薬であれば、いかなるものでも使用することができる。ラクトフェリンに耐熱性を付与するために必要な金属の有効量は、ラクトフェリン１に対してモル比で０．０４～３であることが好ましく、０．０４～２であることがより好ましく、０．０４～１であることがより好ましく、０．０４～０．５であることがさらに好ましく、０．０４～０．０９であることが好ましい。
　また、本発明の組成物として使用されるラクトフェリンは、本発明の薬剤に使用できるラクトフェリン試薬であれば、如何なるものも使用することができるが、加熱や殺菌による変性が既に生じていないものが好ましい。ラクトフェリンを、核酸及び金属との組成物として加熱することによって、本発明の効果が発揮されるからである。
［医薬品］
　本発明の第五の発明は、本発明の組成物を配合した医薬品である。医薬品の形態としては、公知の方法により種々の態様に製剤化して投与することができ、好適な実施の態様において経口投与することができる。製剤化する際には、核酸とラクトフェリンを混合するか、核酸、金属及びラクトフェリンを混合した状態で使用される。
　例えば、核酸とラクトフェリン、又は核酸、金属及びラクトフェリンを薬学的に許容され得る賦形剤等の任意の添加剤を用いて製剤化することにより製造できる。製剤化する場合、製剤中のラクトフェリンの含有量は特に限定されるものではない。基本的に核酸及びラクトフェリンによる副作用はほとんどないと考えられるが、核酸の含有量としては、通常０．０１～６０質量％、好ましくは１～３０質量％、ラクトフェリンの含有量としては、通常０．１～６０質量％、好ましくは１０～５０質量％である。金属の含有量としては、通常０～１×１０－１質量％、好ましくは０～１×１０－２質量％、あるいは通常１×１０－８～１×１０－１質量％、好ましくは１×１０－８～１×１０－２質量％である。
　製剤化にあたっては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、注射剤用溶剤等の添加剤を使用できる。具体的な製剤として、錠剤（糖衣錠、腸溶性コーティング錠、バッカル錠を含む。）、散剤、カプセル剤（腸溶性カプセル、ソフトカプセルを含む。）、顆粒剤（コーティングしたものを含む。）、丸剤、トローチ剤、封入リポソーム剤、液剤、又はこれらの製剤学的に許容され得る徐放製剤等を例示することができる。
　これらの製剤に用いる担体及び賦形剤としては、乳糖、ブドウ糖、白糖、マンニトール、馬鈴薯澱粉、トウモロコシ澱粉、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、結晶セルロース、カンゾウ末、ゲンチアナ末など、結合剤としては例えば澱粉、ゼラチン、シロップ、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース等を例示することができる。
　また、崩壊剤としては、澱粉、寒天、ゼラチン末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、及びアルギン酸ナトリウム等を、それぞれ例示することができる。
　更に、滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、水素添加植物油、及びマクロゴール等、着色剤としては医薬品に添加することが許容されている赤色２号、黄色４号、及び青色１号等を、それぞれ例示することができる。
　錠剤及び顆粒剤は、必要に応じ白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、精製セラック、ゼラチン、ソルビトール、グリセリン、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、フタル酸セルロースアセテート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルメタクリレート、及びメタアクリル酸重合体等により被膜することもできる。
　また、併用する医薬組成物は、本発明の薬剤中に有効成分として含有させてもよいし、本発明の薬剤中には含有させずに別個の薬剤として組み合わせて商品化してもよい。
［飲食品］
　本発明の組成物を添加した飲食品の形態としては、例えば、ラクトフェリン粉末やラクトフェリン水溶液（シロップ等）等を本発明の核酸とともに配合した清涼飲料、乳飲料等又はこれらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末；加工乳、発酵乳等の乳製品；経腸栄養食；調製粉乳、液状調製乳；機能性食品等が挙げられ、さらに、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、餃子の皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物、パン等を挙げることができる。
　このような飲食品は、例えば、ラクトフェリン（ラクトフェリン粉末やラクトフェリン水溶液（シロップ等）等の形態を含む）に、核酸、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、アルギニン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等を配合することにより、製造することができる。
　また、飲食品の好適な形状としては、液状、タブレット状のサプリメント等を例示することができる。
［飼料］
　本発明に係る組成物を添加した飼料は、核酸とラクトフェリン、又は核酸、金属及びラクトフェリンを含有するものであれば特に限定されるものではなく、例えば、ラクトフェリンに、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦、マイロ等の穀類；大豆油粕、ナタネ油粕、ヤシ油粕、アマニ油粕等の植物性油粕類；フスマ、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類；コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類；魚粉、脱脂粉乳、ホエイ、イエローグリース、タロー等の動物性飼料類；トラル酵母、ビール酵母等の酵母類；第三リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料；油脂類；単体アミノ酸；糖類等を配合することにより製造できる。飼料の形態としては、例えば、ペットフード、家畜飼料、養魚飼料等が挙げられる。
　本発明の試験例で実施した試験方法は次の通りである。
　すなわち本発明のラクトフェリンの耐熱性を判定する指標としては、ラクトフェリンによる不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ値）、ＳＤＳ電気泳動、ラテックス凝集法、目視による凝集・沈殿反応の確認の各々によって行った。
［不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ値）］
　ラクトフェリン分子が鉄分子をキレート結合する機能、いわゆる鉄結合能は、ラクトフェリンの生理機能の一つとしてよく知られ、ラクトフェリンが変性せずに存在していることの指標とされてきた［例えば、特許第2835902号］。
　試験方法は、検体に既知過剰量の鉄を加え、遊離ラクトフェリンを飽和させる。これに還元・呈色試薬にて残余鉄量を測定し、既知過剰鉄量から差し引いて不飽和鉄結合能を求めるものである。不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ値）の測定は、市販の測定キット等を使用することができ、例えば、不飽和結合能キット（日東紡績社製、商品名：Ｎ－テストＵＩＢＣ）を用いることができる。
　測定方法は、試験管に鉄試液として硫酸第二鉄アンモニウムを１ｍｌ投入し、試料０．２ｍｌを投入した。よく混和して室温で５分放置した後に、還元・呈色試薬として2-ニトロソ-5-(N-プロピル-N-スルフォプロピルアミノ)-フェノール（Nitroso-PSAP）１ｍｌを投入した。これをよく混和し、精製水を対照として波長７６０ｎｍで吸光度を測定した。吸光度は以下の式によって求めた。
　ＵＩＢＣ値（μｇ/ｄＬ）＝（ＡＲｂ－ＡＳ）／ＡＲｂ×５００
　　　ＡＲｂ：試薬ブランクの吸光度
　　　ＡＳ　：検体の吸光度
　尚、本発明においては、加熱前のラクトフェリンのＵＩＢＣ値を１００％とした時、加熱後のラクトフェリンのＵＩＢＣ値は１０～１００％であることが好ましく、３０～１００％であることが特に好ましい。そして、ＵＩＢＣ値がこのような好ましい範囲であるとき、「耐熱性」が良好であると判断した。
［ＳＤＳ電気泳動］
　加熱処理したラクトフェリンについて、ＳＤＳ電気泳動を実施した。電気泳動の結果から、ラクトフェリンのバンドパターンを解析後、ラクトフェリンに相当するバンドの有無を確認し、ラクトフェリンの耐熱性の有無を判断した。評価方法は下記の通りである。このうち、「○」と「△」の評価であったものを「耐熱性良好」であると判断した。
　○：ラクトフェリンのバンドが確認される。
　△：ラクトフェリンのバンドが僅かに確認される。
　×：ラクトフェリンのバンドが確認できない。
［ラテックス凝集法］
　本発明の試験例においては、ラクトフェリンの耐熱性を判定する指標として、ラテックス凝集法によるラクトフェリン含有量の測定を行った。
　本発明のラテックス凝集法は、抗ラクトフェリン抗体（ウサギ）感作ラテックスを用いたラテックス凝集比濁法である。ラテックス法では、ラテックス粒子に抗ラクトフェリン抗体を結合したものを使用する。試料中のラクトフェリンは、ラテックス粒子に結合した抗ラクトフェリン抗体と抗原抗体反応を示し、凝集を生じる。この凝集を一定波長にて吸光度変化を測定し、これを換算してラクトフェリンの含有量とした。ラクトフェリンの含有量は試料の加熱前後に測定した。
　ラテックス凝集法によるラクトフェリンの測定方法としては、市販のキット（フジテックス株式会社製、ウシラクトフェリンラテックステスト）を用いて測定する方法が好適な例として挙げられる。
［目視による凝集・沈殿反応の確認］
　加熱後のラクトフェリンの凝集、沈殿について目視により確認し、以下の評価方法に従って評価した。
　－：凝集・沈殿は確認されず、透明である。
　±：凝集・沈殿は確認されないが、白濁している。
　＋：凝集・沈殿が確認される。
　次に実施例を示して本発明を詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
［試験例１］
　この試験は、核酸による、ラクトフェリンに耐熱性を付与する効果について、弱酸性からアルカリ性の範囲のｐＨと温度との関係を検討することを目的とした。
（１）試料の調製
　精製水１００ｍｌに核酸として核酸試薬（日生バイオ社製、商品名：ＤＮＡナトリウム）１００ｍｇとラクトフェリンとしてラクトフェリン試薬（ミライ社製、商品名：ＭＬＦ－１）１００ｍｇを溶解した試料を試験試料とした。また、精製水１００ｍｌにラクトフェリン試薬（ミライ社製、商品名：ＭＬＦ－１）１００ｍｇを溶解した溶液を対照試料とした。
　ここで、核酸試薬として使用したＤＮＡナトリウム（日生バイオ社製）は、サケの白子を原料とした高分子ＤＮＡ濃縮粉末であり、ＤＮＡ含有量は９０％以上のものを使用した。当該ＤＮＡナトリウムは、電気泳動法によって分子量を測定したところ、１００～２０００ｂｐ（base pair：塩基対数）であり、分子量換算すると、６０～１２００キロダルトンの範囲に含まれるものであった。
　また、ラクトフェリン試薬におけるラクトフェリン純度は、蛋白質濃度をケルダール法によって測定し、蛋白質中のラクトフェリン含量を高速液体クロマトグラフィー法によって測定した結果、前記の方法で算出したところ、９５．３％（蛋白質の組成比率：９７．８％、蛋白質中のラクトフェリン比率：９７．４％）であった。以下、断りのない限り、ラクトフェリン試薬のラクトフェリン純度は９５．３％である。
　各試料は、それぞれ０．１Ｎ塩酸溶液、又は０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を添加して、ｐＨが６、７、８、９、１０、１１、及び１２となるように試験試料及び対照試料についてそれぞれ作成した。
（２）試験方法
　各試料をガラス管に４ｍｌずつ分注し、それぞれ８０～１２０℃の範囲で５分間加熱処理した。尚、８０℃、９０℃の加熱はウォーターバス（ＨＡＡＫＥ社製）を使用し、１００℃、１１０℃、１２０℃の加熱についてはオートクレーブ（ＴＯＭＹ社製）を使用した。加熱後のラクトフェリンの凝集、沈殿について目視により確認し、以下の評価方法に従って評価した。
　 －：凝集・沈殿は確認されず、透明である。
　 ±：凝集・沈殿は確認されないが、白濁している。
　 ＋：凝集・沈殿が確認される。
　また、他のラクトフェリンの耐熱性を検討する指標としては、ラボチップ型全自動電気泳動システムExperionTM（バイオラッド社製）によりＳＤＳ電気泳動を行って、泳動後のラクトフェリンのバンドパターンを評価方法に従って解析した。
　加熱処理後のラクトフェリン試薬について、ＳＤＳ電気泳動を実施した。電気泳動の結果から、ラクトフェリンのバンドパターンを解析後、ラクトフェリンに相当するバンドの有無を確認し、ラクトフェリンの耐熱性の有無を判断した。評価方法は下記の通りである。
　○：ラクトフェリンのバンドが確認される。
　△：ラクトフェリンのバンドが僅かに確認される。
　×：ラクトフェリンのバンドが確認できない。
（３）試験結果
　本試験の結果は表１及び表２に示すとおりである。表１は、ラクトフェリン・核酸混合溶液（試験試料）におけるラクトフェリンの耐熱性を検討した結果である。表２は、ラクトフェリン単独溶液（対照試料）による耐熱性を検討した結果である。
　その結果、表２から明らかなように、ラクトフェリン単独（対照試料）溶液では、加熱温度が９０℃以上であると、ＳＤＳ電気泳動でラクトフェリンのバンドが確認できなくなってしまうｐＨ領域が一部確認された。また、ラクトフェリンの凝集、沈殿は、８０℃の加熱であっても、ｐＨ７～９の範囲で白濁または凝集・沈殿が確認され、耐熱性が低下していることが確認された。
　これに対して、表１から明らかなように、ラクトフェリン・核酸混合溶液（試験試料）では、加熱温度が８０～１２０℃のいずれの条件であっても、ｐＨが６～１０の範囲でＳＤＳ電気泳動においてラクトフェリンのバンドが確認された。
　また、ラクトフェリンの凝集、沈殿反応については、加熱温度が８０～１２０℃、ｐＨが６～１２のいずれの条件であっても、溶液に凝集・沈殿は確認されず、透明な状態であった。
　その結果、ｐＨ６～１２の領域において、核酸によりラクトフェリンの耐熱性が維持されていることが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
［試験例２］
　この試験は、核酸によるラクトフェリンに耐熱性を付与する効果について、核酸とラクトフェリンとの混合比の関係を検討することを目的とした。
（１）試料の調製
　精製水に対し、核酸試薬／ラクトフェリン試薬の質量比が、０、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、４、６となるようにそれぞれ核酸とラクトフェリン試薬を添加した試料を調製した。尚、核酸試薬及びラクトフェリン試薬は前記試験例１と同様のものを使用した。
　また、各試料は、０．１Ｎ塩酸溶液、又は０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を添加して、ｐＨが６、７、８、９となるようにそれぞれ調整して、試験試料とした。
（２）試験方法
　各試験試料は、ウォーターバス（ＨＡＡＫＥ社製）内で、８０℃で５分間保温して加熱処理を行った。
　加熱処理後の試料は、以下の方法により、ラクトフェリンによる不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ値）を測定した。
　不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ値）の測定は、不飽和結合能キット（日東紡績社製、商品名：Ｎ－テストＵＩＢＣ）を用いた。
　まず、試験管に鉄試液として硫酸第二鉄アンモニウムを１ｍｌ投入し、試料０．２ｍｌを投入した。よく混和して室温で５分放置した後に、還元・呈色試薬として2-ニトロソ-5-(N-プロピル-N-スルフォプロピルアミノ)-フェノール（Nitroso-PSAP）１ｍｌを投入した。これをよく混和し、精製水を対照として波長７６０ｎｍで吸光度を測定し、不飽和鉄結合能を算出した。
（３）試験結果
　本試験の結果は表３～表６に示すとおりである。表３はｐＨ６における核酸試薬／ラクトフェリン試薬の各質量比でのラクトフェリンの耐熱性を検討した結果である。同様に表４はｐＨ７における耐熱性、表５はｐＨ８における耐熱性、表６はｐＨ９における耐熱性をそれぞれ示している。尚、表３～表６中の核酸／ラクトフェリンは本試験で使用した試薬に基づく混合比率である。
　その結果、ｐＨ６～９のいずれの条件においても、ラクトフェリンと核酸が共存する条件（核酸試薬／ラクトフェリン試薬の質量比＝０．１～６）において、ラクトフェリンの不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ値）がラクトフェリン単独に比して上昇し、耐熱性が高められていることが明らかとなった。
　中でも、核酸試薬／ラクトフェリン試薬の質量比が０．２～２においてラクトフェリンの不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ値）は５０％以上を示すことが明らかとなった。
　よって、核酸によるラクトフェリンに耐熱性を付与する効果は、核酸試薬とラクトフェリン試薬の質量比が０．１～６において有効であることが明らかとなった。
　ここで、試験例において使用した核酸試薬の純度は９０～１００％であり、ラクトフェリン試薬の純度は測定結果より９５．３％であったことから、核酸試薬の純度が１００％のとき、核酸／ラクトフェリンの質量比の最小値０．１は０．１０、最大値６は６．３であり、核酸試薬の純度が９０％のとき、核酸／ラクトフェリンの質量比の最小値０．１は０．０９となり、最大値６は５．７である。
　従って、本発明における核酸によるラクトフェリンに耐熱性を付与する効果は、核酸／ラクトフェリンの質量比が、少なくとも０．０９～６．３の範囲で好適に発揮されることが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
［試験例３］
　この試験は、本発明の薬剤による耐熱性付与効果が従来技術と比較して顕著なことを明らかにすることを目的とした。本発明の薬剤の対照薬剤としては、特許文献５（特開２００４－３５２６６９）を参照し、ラクトフェリンの安定化に使用されていた大豆多糖類（三栄源エフ・エフ・アイ社製。商品名：SM-MN-3300）を用いた。また、核酸試薬とラクトフェリン試薬は前記試験例１と同様のものを使用した。
（１）試料の調製
　精製水に対し、核酸試薬／ラクトフェリン試薬の質量比が０．５となるように核酸試薬とラクトフェリン試薬を添加した試料を調製した。また、精製水に対し、大豆多糖類／ラクトフェリン試薬の質量比が０．５となるように大豆多糖類とラクトフェリン試薬を添加した試料を調製した。
　各試料は、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨが９になるように調整し、試験試料とした。
（２）試験方法
　各試験試料は、ウォーターバス（ＨＡＡＫＥ社製）内で、８０℃で５分間保温して加熱処理を行った。
　加熱処理後の試料は、前記試験例２に記載されたラクトフェリンの不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ値）を測定することにより、ラクトフェリンの耐熱性について検討した。
（３）試験結果
　本試験の結果は表７に示す通りである。ラクトフェリン・核酸試薬混合溶液では加熱後のラクトフェリンにおける不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ値）は８２．９％であった。一方、ラクトフェリン・大豆多糖類混合溶液では、同じ条件で１２．７％であった。よって、ラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤の有効成分としては、大豆多糖類に比して、核酸の方が耐熱性付与効果が高いことが確認された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
［試験例４］
　この試験は本発明の一態様である核酸及び金属を有する薬剤が顕著な効果を有することを示すことを目的とした。
（１）試料の調製
　精製水１００ｍｌに核酸試薬（日生バイオ社製、商品名：ＤＮＡナトリウム、分子量１３０～１５０キロダルトン）１０ｍｇとラクトフェリン試薬（ミライ社製、商品名：ＭＬＦ－１）１００ｍｇを溶解した。さらに、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を添加してｐＨを７．４に調製し、これを試験試料とした。一方、ラクトフェリン試薬のみを溶解し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を添加してｐＨを７．４に調製したものを対照試料とした。
　尚、使用した拡散試薬の純度は９０～１００％であり、ラクトフェリン試薬の純度は９４．７％（蛋白質構成比率９７．５％、蛋白質中のＬＦ比率９７．１％）であった。
（２）試験方法
　上記試料を複数調製し、グルコン酸銅（富田製薬社製）を銅として０μＭ、０．５５μＭ、１．１０μＭとなるように計量し、各試料に添加した。
　次に、グルコン酸銅を添加した各試料を、ラテックス凝集法により、ラクトフェリン（ＬＦ）含有量を測定した。続いてウォーターバス（ＴＡＩＴＥＣ社製）内で、８０℃、１０分間の加熱処理を行った。加熱処理後の試料は、直ちに氷水中で冷却した。冷却後、ラテックス凝集法によりラクトフェリンの含有量を測定した。ラクトフェリンの残存率は、『ラクトフェリン残存率＝（加熱後のラクトフェリン含有量／加熱前のラクトフェリン含有量）×１００％』
として計算した。
　尚、本試験のｐＨや殺菌温度の条件は、実際に飲食品として用いるときの指標となるような数値に設定した。
（３）試験結果
　本試験の結果を表８に示した。表８ではラクトフェリンをＬＦと表記した。
　核酸及び銅を添加しない試料では、ラクトフェリン残存率はわずかに４．５％であった。一方、核酸を、核酸／ラクトフェリンの重量比にて０．１となるように添加した場合、ラクトフェリン残存率は２１．６％となった。
　さらに、核酸の添加に加え、銅を、銅／ラクトフェリンのモル比として０．０４添加した試料では、ラクトフェリンの残存率は２６．５％となり、核酸のみを添加した場合の残存率と比較すると、１２３％であった。さらに、銅を、銅／ラクトフェリンのモル比として０．０９添加した試料では、ラクトフェリンの残存率は３５．７％となり、核酸のみを添加した場合の残存率と比較すると、１６５％であった。
　このことから、ラクトフェリンと少量の核酸の存在下、さらに銅を添加することにより、ラクトフェリンの残存率が顕著に向上することが明らかとなった。
　なお、銅の代わりに、鉄（鉄として、硫酸第一鉄）、亜鉛（亜鉛として、グルコン酸亜鉛）を用いて試験を行った結果、同様にラクトフェリンの残存率の向上が確認された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　本発明のラクトフェリンに耐熱性を付与する薬剤（ラクトフェリン熱安定化剤）によれば、ｐＨの弱酸性域からアルカリ性域において、ラクトフェリンの耐熱性を増強させ、熱変性や失活をさせることなく加熱殺菌することができる。また、殺菌工程が必要な飲食品、飼料、医薬品等の製品にラクトフェリンを添加する際にラクトフェリンを加えることによって、製造工程の最終段階で直接加熱殺菌が可能であり、簡便な製造方法を提供できる。

Claims (14)

  1. 　有効成分として核酸を含有する、ラクトフェリン熱安定化剤。
  2. 　ｐＨ６～９の範囲のｐＨ用である、請求項１に記載のラクトフェリン熱安定化剤。
  3. 　核酸が、白子から抽出された核酸である、請求項１～２の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤。
  4. 　核酸に加えて、さらに金属を含有する、請求項１～３の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤。
  5. 　金属が、鉄、亜鉛及び銅からなる群から選択された１種以上である、請求項４に記載のラクトフェリン熱安定化剤。
  6. 　ラクトフェリン殺菌補助剤である、請求項１～５の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤。
  7. 　請求項１～６の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤と、ラクトフェリンとを含有する、熱安定化されたラクトフェリン組成物。
  8. 　核酸とラクトフェリンとを、核酸（質量）／ラクトフェリン（質量）の質量比の値が０．０９～６．３の範囲で含有する、請求項７に記載のラクトフェリン組成物。
  9. 　請求項１～６の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤をラクトフェリンに添加して、ラクトフェリンを熱安定化する方法。
  10. 　ラクトフェリンを加熱殺菌する方法であって、
    　請求項１～６の何れかに記載のラクトフェリン熱安定化剤を、ラクトフェリンに添加して、ラクトフェリンを熱安定化する工程、
    　熱安定化されたラクトフェリンを加熱殺菌する工程、
    を含む、方法。
  11. 　ラクトフェリンに核酸を添加することによって、ラクトフェリンを熱安定化する方法。
  12. 　核酸に加えて、さらに金属を添加する、請求項１１に記載の方法。
  13. 　ラクトフェリンを熱安定化するための、核酸の使用。
  14. 　ラクトフェリンを加熱殺菌するための、核酸の使用。
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