WO2009100605A1

WO2009100605A1 - 一种治疗消渴病的药物组合物及其制备方法

Info

Publication number: WO2009100605A1
Application number: PCT/CN2008/001878
Authority: WO
Inventors: Jie Pan; Jipeng Chen; Fei Hong; Zhiqiang Lin
Original assignee: Zhangzhou Pien Tze Huang Pharmaceutical Co., Ltd
Priority date: 2008-01-30
Filing date: 2008-11-14
Publication date: 2009-08-20
Also published as: GB2469220B; CA2710862C; CN101496829A; CN101496829B; GB2469220A; GB201009713D0; CA2710862A1

Description

一种治疗消渴病的药物组合物及其制备方法技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，特别涉及一种治疗消渴病的药物组合物及其制备方法和质量控制方法。

背景技术

消渴病（糖尿病）的发病率在国内外日益增加，它严重地危害人们的健康甚至生命。据了解，目前全世界糖尿病患者 2亿多人，其中 85%是老年糖尿病患者；我国有 3千万糖尿病患者，仅次于美国，而且正以每年 75万新患者的速度递增。因此，糖尿病早已被国家列为 "九五" 重大疑难病之一，而目前中药降糖药的疗效不尽如人意，而治疗消渴病常用的拜唐苹等药能够导致肠胃胀气，肠鸣等副作用，因此，开展对消渴病的防治研究很有必要。

发明内容

本发明的一个目的在于公开一种治疗消渴病的药物组合物；本发明的另一个目的在于公开该药物组合物的制备方法和质量控制方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明药物组合物的原料组成为：

蚕沙 6000-8000重量份甘草 100-200重量份。

本发明药物组合物的原料组成优选为：

蚕沙 7150重量份甘草 137. 5重量份。

本发明药物组合物的原料组成优选为：

蚕沙 6150重量份甘草 187. 5重量份。

本发明药物组合物的原料组成优选为：

蚕沙 7850重量份甘草 117. 5重量份。

本发明药物组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂、胶嚢剂、散剂、软胶嚢剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、緩释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

本发明药物组合物的制备方法还可以包括：取蚕沙，加入蚕沙 2-6倍量的 50%-70%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 1-3次，每次 0. 5- 1. 5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇> 将除去乙醇后的滤液加热浓缩或在温度 80°C以下减压浓缩至相对密度为 0. 95- 1. 1 0 (在温度 55 °C时测），得浓缩液，加入水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 A, 上清液加热浓缩或在温度 80 °C下减压浓缩至相对密度为 1. 00-1. 15 (在温度 55 °C时测）的稠膏 A，备用；另取甘草，用甘草 8- 15倍量水煎煮 1-3次，每次 1-3小时，合并煎液，放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至相对密度为 1. 00-1. 15 (在温度 55 °C测）的稠膏 B，备用；合并稠膏 A与稠膏 B, 按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶嚢剂、散剂、软胶嚢剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、緩释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

或取蚕沙，加入蚕沙 2-6倍量的 50%- 70%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 1-3次，每次 0. 5-1. 5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，将除去乙醇后的滤液加热浓缩或在温度 80°C以下减压浓缩至相对密度为 0. 95-1. 1 0 (在温度 55 °C时测），得浓缩液，加入水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 A, 上清液加热浓缩或在温度 80 °C下减压浓缩至相对密度为 1. 00-1. 15 (在温度 55 °C时测）的稠膏 A，备用；另取甘草，用甘草 8-15倍量水煎煮 1-3次，每次 1-3小时，合并煎液，放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至相对密度为 1. 00-1. 15 (在温度 55 °C测）的稠膏 B, 备用；合并稠膏 A与稠膏 B, 加入适量的 P _环糊精或微粉硅胶，喷雾干燥后，加入适量的羟丙纤维素 L- HPC或其他常规辅料，混匀，制粒，按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶嚢剂、散剂、软胶嚢剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、緩释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

本发明药物组合物的制备方法优选为：

取蚕沙，加入蚕沙 4倍量的 60%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 2次，每次 1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，将除去乙醇后的滤液加热浓缩或在温度 80 °C以下减压浓缩至相对密度为 1. 01 ~ 1. 06 (在温度 55 °C时测）的浓缩液，加入浓缩液 1倍量的水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 A，浓缩至相对密度为 1. 06-1. 15 (在温度 55°C时测）的稠膏 A，备用；另取甘草，用甘草 10倍量水煎煮 2次，每次 2小时，合并煎液，放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至相对密度为 1. 04-1. 15 (在温度 55 °C时测）的稠膏 B，备用；合并稠膏 A与稠膏 B, 加入 20%蚕沙干膏量的 β—环糊精或微粉硅胶，喷雾干燥后，加入 1%药粉量的羟丙纤维素 L-HPC, 混匀，按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶嚢剂、散剂、软胶嚢剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、緩释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

本发明药物组合物的质量控制方法包括如下鉴别和 /或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

Α、取本发明药物组合物 0. 4-0. 6g，加无水乙醇 4- 6ml， 40-80°C水浴回流 20- 40分钟，放置，取上清液，置水浴上蒸至 0. 5-1. 5ml，作为供试品溶液；另取 β-谷醇作对照品，加无水乙醇制成 0. 0005- 0. 0015g/ml的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 0. 001-0. 003ml , 分别点于同一硅胶 G薄层板上，以 18-21： 0. 3-0. 7 的三氯甲烷：丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%- 15%磚钼酸溶液，于 100-110°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B、用高效液相色谱法进行鉴别，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0. 2«101 /1醋酸铵-冰醋酸=50-70： 30-50: 0. 5-1. 5为流动相；检测波长为 250nm_; 理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于 2000; 精密称定甘草酸单铵盐对照品 0. 005-0. 015g, 置 50ml量瓶中，用上述流动相溶解并稀释至刻度，摇勾，即得，每 1ml 含甘草酸单铵盐 0. 0001-0. 0003g, 折合甘草酸为 0. 00019-0. 00020g, 制成对照品溶液；取本发明药物组合物 1. 0- 3. 0g，置 25ml 的量瓶中，加上述流动相 18-22ml , 以功率 250W，频率 50KHz进行超声处理 20-40分钟，取出，放冷，加流动相至刻度，摇勾，离心，取上清液，制成供试品溶液，；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 0. 005-0. 015ml , 注入液相色讲仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色语峰。

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈一二甲基甲酰胺一0. 025mol/L醋酸钠 =15-25: 0. 1-1: 75-85的溶液为流动相；检测波长为 390nra; 理论板数按派可林酸峰计算应不低于 2500; 精密称定派可林酸对照品 0. 004-0. 006g, 置 50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取 0. 5-1. 5ml，置 10ml具塞试管中，加水 0. 5-1. 5ml , 加 0. 8% 2， 4一二硝基氟苯乙腈溶液 1- 3ml和 0. 5mol/L 碳酸氢钠溶液 l-3ml，于 60°C水浴中 0. 5-1.、5小时，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用 0. 2mol/L、 pH7. 0的磷酸盐緩沖液分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述碑酸盐緩冲液稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液；精密称定本发明药物组合物 0. 3-0. 5g，置 10ml具塞试管中，加水充分振摇后，于 50-70°C水浴中加热 20-40分钟，取出，放冷，移至 10ml 量瓶中，用水分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；以每分钟 12000转离心 5-15分钟，精密量取上清液 l-3ml，置 10ml 具塞试管中，加 0. 8%2，4—二硝基氟苯乙腈溶液 l-3ral 和 0. 5mol/L碳酸氢钠溶液 l-3ml ,于 50-70°C水浴中 0. 5-1. 5小时，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用 0. 2mol/L、 pH7. 0磷酸盐緩冲液分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述磷酸盐緩沖液稀释至刻度，摇勾，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液 0. 004-0. 006ml与供试品溶液 0. 005- 0. 015ml , 注入液相色语仪，测定，即得；本药物组合物按日服用剂量计含蚕沙以派可林酸 C₆H_nN0₂计，不得少于 0. 0001-0. 0003g。

本发明药物组合物的质量控制方法优选如下鉴别和 /或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

A、取本发明药物组合物 0. 5g，加无水乙醇 5ml， 60°C水浴回流 30 分钟，放置，取上清液，置水浴上蒸至 lml，作为供试品溶液；另取 β- 谷甾醇作对照品，加无水乙醇制成 0. 001g/ml的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试猃，吸取上述两种溶液各 0. 002ml，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以 19. 5: 0. 5的三氯甲烷：丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%磷钼酸溶液，于 105 °C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

B、用高效液相色谱法进行鉴别，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 60: 40: 1 的甲醇 - 0. 2raol/L醋酸铵 -冰醋酸为流动相；检测波长为 250nm; 理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于 2000; 精密称定甘草酸单铵盐对照品 0. Olg, 置 50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，每 lml含甘草酸单铵盐 0. 0002g,折合甘草酸为 0. 0001959g, 制成对照品溶液；取本发明药物组合物 2g, 置 25ml的量瓶中，加上述流动相 20ml，以功率 250W, 频率 50KHz进行超声处理 30分钟，取出，放冷，加流动相至刻度，摇勾，离心，取上清液，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 0. 01ml , 注入液相色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅浣键合硅胶为填充剂；以 21 : 0. 5: 79的乙腈一二曱基曱酰胺一 0. 025mol /L醋酸钠溶液为流动相；检测波长为 390nra; 理论板数按派可林酸峰计算应不低于 2500; 精密称定派可林酸对照品 0. Olg, 置 100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取 lml , 置 10ml具塞试管中，加水 lml , 加 0. 8% 2，4一二硝基氟苯乙腈溶液 2ml和 0. 5mol /L碳酸氢钠溶液 2ml，于 60°C水浴中 1小时，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用 0. 2mo l /L、 pH7. 0的磷酸盐緩沖液分 3次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述磷酸盐緩沖液稀释至刻度，摇勾，制成对照品溶液；精密称定本发明药物组合物 0. 4g，置 10ml 具塞试管中，加水 5ml，充分振摇后，于 60°C水浴中加热 30 分钟，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用水分 3次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇；以每分钟 12000转离心 10分钟，精密量取上清液 2ml , 置 10ml具塞试管中，加 0. 8%2, 4—二硝基氟苯乙腈溶液 2ml和 0. 5mo l /L碳酸氢钠溶液 2ml , 于 60°C水浴中 1小时，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用 0. 2mol /L、 pH7. 0磷酸盐緩沖液分 3 次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述磷酸盐緩沖液稀释至刻度，摇匀，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液 0. 005ml 与供试品溶液 0. 01ml , 注入液相色语仪，测定，即得；本发明药物组合物按每日服用剂量计含蚕沙以派可林酸 C₆H„N0₂计，不得少于 0. 0002g_o

本发明所述的重量份与体积份的关系为克 /毫升。

本发明药物组合物质量控制方法可以应用于组合物的各种剂型 ,如片剂、胶嚢剂、散剂、软胶嚢剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、緩释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂等临床可接受的剂型，由于不同剂型的制剂其中所含的相当生药量是相同的，因此各个剂型在进行盾量控制时，所选用样品量可统一折算为相当生药量，本质量控制方法以相当生药量 65 g (每日服用剂量）为每单位制剂，每单位制剂也可以为每片、每粒、每支或每丸等。

附图说明

图 1 MC正常小鼠蔗糖负荷后血糖曲线的影响

图 2 MC对正常小鼠淀粉负荷后血糖曲线的影响

图 3 MC对四氧嘧啶高血糖小鼠蔗糖负荷后血糖曲线的影响图 4 MC对四氧嘧啶高血糖小鼠淀粉负荷后血糖曲线的影响图 5 MC对健康志愿受试者馒头实验后血糖曲线的影响

图 6 MC对四氧嘧啶高血糖大鼠尿糖的影响

图 Ί MC对四氧嘧啶高血糖大鼠肾重体重指数的影响

图 8正常大鼠腎脏、肾小球及肾曲管均未见病变 X 50

图 9 四氧嘧啶高血糖大鼠组部分肾曲管上皮细胞肿大呈空泡状 X

50

图 10 MC组大鼠肾曲管未见明显病变 X 50

实验证明本发明药物组合物比各原料药单独使用效果更好，两药合用具有协同作用，除有降血糖作用外，尚有改善肠胀气的作用。发明药物组合物长期给药（4周）后，能明显改善四氧嘧啶高血糖大鼠多食多饮等一般状况；能使血糖、血清果糖胺明显下降；使血清胆固醇含量明显下降，血清甘油三酯水平也有所降低；使血清 NAG酶活性明显下降，说明对微血管并发症有改善作用；使坐骨神经中山梨醇含量明显减少，提示对糖尿病的慢性神经病变有改善作用；增加红细胞 GSH含量，增强机体的抗氧化能力；还可明显降低肾重、体重指数，减少血清肌酐水平，緩解肾小管上皮细胞内的糖原沉积；另外，本发明药物组合物在体外抑制 α-葡萄糖苷酶的活性较强，而对 α-淀粉酶没有抑制作用，说明本发明药物组合物能够降低双糖水解吸收入血引起的血糖升高，而其胃肠道副反应发生率相比同类产品低。

下面实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

下述实验例 1-8均采用以下受试药物及实验动物：

受试药物： 1、采用实施例 1制备的本发明药物组合物浸膏粉，简称 MC，中国医学科学院药物研究所提供，批号： 96102 , 每克浸膏粉相当于 16. 7g生药；用水将 MC浸膏粉溶解； 2、拜唐苹（ Acarbose ): 德国 Bayer药厂出品，批号为 264086D_o

动物：昆明种小鼠，京动管质字（ 1994 )第 029号； wi s tar大鼠，京动管质字（ 1994 )第 030号，均购自中国医学科学院动物研究所繁育厂，小鼠 22— 25g, 大鼠 180— 250g，性别：雄性，每组动物数: 10只。

四氧嘧啶高血糖小鼠、大鼠模型：给正常动物静脉注射四氧嘧啶（小鼠 90-100 mg/kg, 大鼠 45-50 mg/kg ), 给药 72小时后预测血糖（葡萄糖氧化酶法），选用血糖值在 11. 1 inmo l /L以上者进行实验。

实验例 1 MC对正常小鼠蔗糖负荷后血糖升高的影响

正常小鼠 5组，每组 10只，实验前禁食过夜，以一组 4. 0 g/kg 的口服蔗糖溶液作为对照组，一组口服蔗糖与拜唐苹 Acarbose 10 rag/kg作为阳性对照药组，其余三组分别口服蔗糖与不同剂量的 MC0. 45 g/kg, 0. 9 g/kg, 1. 8 g/kg; 测定 0 min及给药后 30 min、 60 min、 120min时的血糖值，见图 1 , 表 1 : 表 1. MC对正常小鼠蔗糖负荷后血糖峰值、峰值时间和曲线面积的影响

( mean土 SD, n=10 )

组另¹ J 血糖峰值（隱 ol /L ) 峰值时间（ min. ) AUC ( mmol /L

对照组 9. 0 ± 1. 6 30 12. 9 ± 2· 8

MC 0. 45 7. 6 ± 0. 6 60 12. 2 ± 1. 9

MC 0. 9 6. 8 ± 1. 9 * 60 10. 6 ± 3· 0

MC 1. 8 5. 4士 1. 3 " 60 9. 2 ± 2. 2 **

拜唐苹 5. 0土 1. 6 "* 120 9· 2 ± 2. 7 **

AUC 为血糖曲线下面积；与对照组比较 * Ρ<0. 05, ** Ρ<0. 01, *** ρ<0. 001 ; MC剂量为 g/kg。

实验表明， MC 能减少正常小鼠口服蔗糖后的血糖曲线下面积，使血糖峰值明显下降并后移，与拜唐苹的作用基本一致，且呈一定量效关系。

实猃例 2 MC对正常小鼠淀粉负荷后血糖升高的影响

正常小鼠 50只，均分为 5组，禁食过夜，一组以可溶性淀粉 3. 0 g/kg 灌胃作为对照组，一组口服淀粉与拜唐苹 10 mg/kg作为阳性药对照，另三组分别口服淀粉与不同剂量的 MC ( 0. 45 g/kg, 0. 9 g/kg, 1. 8 g/kg ), 测定 0 min及给药后 30 min、 60 rain, 120 min时的血糖值，结果见图 2，表 2 :

表 2. MC对正常小鼠淀粉负荷后血糖峰值、峰值时间和曲线面积的影响（mean土 SD， n=10 )

组另 4 血糖峰值峰值时间（ min. ) AUC ( mmol/L . hr )

( mmol/L )

对照组 9. 4 ± 2. 1 30 12. 0 ± 2. 6

MC 0. 45 6. 8 ±1. 4 ** 60 10. 6 ± 1. 6

MC 0. 9 6. 2 ± 0. 6 " 60 10. 3 ± 1. 6

MC 1. 8 4. 4 ±0. 4 *** 120 8. 3 ± 1. 4 ***

拜唐苹 4. 2 ±0. 5 *** 30 8. 1 ± 1. 1 ***

AUC为血糖曲线下面积；与对照组比较 ** P<0. 01 , * ** p<0. 001 ; MC剂量为 g/kg。

结果说明， MC 能使正常小鼠口服淀粉负荷后血糖峰值明显降低并后移，使血糖曲线下面积明显减少，呈一定量效关系。

实验例 3 MC对正常小鼠葡萄糖负荷后血糖升高的影响正常小鼠 4组，每组 10只，禁食过夜，一组以葡萄糖 4.0 g/kg 灌胃作为对照组，一组以葡萄糖与拜唐苹（10 mg/kg)灌胃作为阳性药对照组，其余两组分别灌胃葡萄糖与不同剂量的 MC( 0.45g/kg, 1.8 g/kg)，测定 0 min 及给药后 30 rain, 60 rain, 120 min时的血糖值，见表 3: 表 3. MC对正常小鼠'葡萄糖负荷后血糖峰值、峰值 B†间和曲线下面积的影响（mean土 SD, n=10)

组另血糖峰值 ( mi nol/L) 峰值时间 AUC (画 ol/L . hr)

( min. )

对照组 10.2 ± 1.9 30 14.6 ± 2.1

MC 0.45 9.7 ± 1.3 30 14.2 ± 1· 8

MC 1.8 9.4 士 1.9 30 14.8 ± 1.7

拜唐苹 10.7 ± 2.4 30 15.1 ± 2.6

AUC为血糖曲线下面积； MC剂量为 g/kg。

结果表明， MC 和拜唐苹类似，对正常小鼠口服葡萄糖负荷后的血糖升高无明显影响。说明该药物不直接影响葡萄糖自肠道的吸收。

实验例 4 MC对四氧嘧啶高血糖小鼠蔗糖负荷后血糖升高的影响四氧嘧啶高血糖小鼠 5组，每组 10只，禁食过夜，一组以蔗糖 4.0 g/kg 灌胃作为对照组，一组以蔗糖与拜唐苹（10mg/kg)灌胃作为阳性药对照，其余组分别灌胃蔗糖与不同剂量的 MC ( 0.6 g/kg, 1.2 g/kg, 1.8 g/kg), 测定 0 min及给药后 30 rain, 60 min, 120 min时的血糖值，见图 3, 表 4。

表 4. MC对四氧嘧啶高血糖小鼠蔗糖负荷后血糖峰值、峰值时间和曲线下面积的影响（ mean ± SD, n= :10)

组另¹ j 血糖峰值（睡 ol/L ) 峰值时间 AUC( mmol/L. hr)

( rain. )

对照组 22.6 ± 1.7 30 39.0 ± 4.2

MC 0.6 19.3 ± 2.7 *» 60 34.2 ± 4.8 *

MC 1.2 60 30.8± 2.8 ***

MC 1.8 14.8±1.8 ♦** 60 28.2土 4.8 ***

拜唐苹 17.3+2.6 *** 60 30.7土 4.3 ***

AUC为血糖曲线下面积；与对照组比较 * P<0.05, ** P<0.01, *** p<0.001; MC剂量为 g/kg。

实验表明，不同剂量的 MC，可明显减少四氧嘧啶高血糖小鼠口服蔗糖负荷后血糖的升高，明显减少血糖曲线下面积，使血糖峰值后移，其作用与拜唐苹类似。

实验例 5 MC对四氧嘧啶高血糖小鼠淀粉负荷后血糖升高的影响

四氧嘧啶高血糖小鼠 5组，每组 10只，禁食过夜，一组以淀粉（ 3.0 g/kg)灌冒作为对照组，一组给淀粉和拜唐苹（10 mg/kg ), 其余组给淀粉和不同剂量的 C ( 0.6 g/kg, 1.2 g/kg, 1.8 g/kg), 测定 Omin 及给药后 30 rain, 60 rain, 120 min时的血糖值，见图 4，表 5。

表 5. MC对四氧嘧啶高血糖小鼠淀粉负荷后血糖峰值、峰值时间和曲线下面积的影响（mean 土 SD,

组另' J 血糖峰值（ mmol/L ) 峰值时间（ min. ) ' AUC (mmol/L. hr ) 对照组 24.4 ± 1.3 30 40.6 ± 4.4

MC 0,6 23.0 ± 2.9 60 36.6 ± 5.9

MC 1.2 21.3 ± 3.1 ** 60 35.9 ± 4.6 *

MC 1.8 19.3+2.2 *** 60 32.9±3.9 *** 拜唐苹 17.0±2.9 *** 60

结果说明，不同剂量的 MC, 能抑制四氧嘧啶高血糖小鼠口服淀粉负荷后血糖的升高，减少血糖曲线下面积，使血糖峰值后移。

实验例 6 MC对健康自愿受试者馒头试臉后血糖升高的影响

自愿受试者 7名（本研究所工作人员），男性 2名，女性 5名，年龄为 25— 62岁。第一次试验，清晨空腹，每人吃 100 g馒头（本所食堂提供）作为自身对照；第二次试验随机服用 MC 1.5 g/人（ 4人）， 3.0 g/人（ 3人）与 100g馒头同服，并测定空腹（Omin)及食馒头后 30min、 60 min, 120 min时的血糖值。两次实验间隔 1周，结果见图 5和表 6。表 6. MC对健康志愿受试者馒头试验后血糖峰值、峰值时间和曲线下面

积的影响（mean 土 SD)

大剂量（3.0 g/A) 小剂量（ ϊ~5 g/人)

给药前给药后给药前给药后

- J 3 4 4

血糖峰值（睡 ol/L) 6·8± 1.4 4.6+0.5 » 6· 5± 1.5 5.4 ± 0.9 » 峰值时间（ min. ) 30 60 30 60

AUC (mmol/L. hr) 12.2± 1.9 8.8±0.5* 11.5 ±3.1 10.0 ± 1.2 AUC为血糖曲线下面积；自身前后比较 * P< 0. 05, * P * 0. 05 初步结果说明， MC 能使正常人馒头试验后血糖峰值降低，并减少血糖曲线下面积，使峰值后移，并呈量效关系。

实验例 7 MC对四氧嘧啶高血糖大鼠尿糖的影响：

三组四氧嘧啶高血糖大鼠，每组 10只，一组进食高蔗糖饲料作为高血糖对照，第二、三组分别进食含不同剂量 MC的高蔗糖饲料（折合剂量为 0. 6 g/kg， 1. 2 g/kg ), 第四组为正常大鼠（10只）进食正常饲料作为正常对照组。两周后用代谢笼收集尿液测 6小时尿糖含量，同时也收集第四组正常大鼠尿液进行测定，作为比较，结果见图 6。

结果表明：正常大鼠尿中未测出葡萄糖， MC能明显降低四氧嘧啶高血糖大鼠的尿糖含量，并呈一定量效关系。

实验例 8 MC对四氧嘧啶高血糖大鼠一般状况、血糖、血脂、果糖胺、血 N-乙酰 -β-D氨基葡萄糖苷酶（简称 NAG酶）活性、组织山梨醇含量、红细胞 GSH含量、血清尿素氮及肌酑含量以及肾脏病理变化等的影响三组四氧嘧啶高血糖大鼠，每组 1 0只，第一组进食高蔗糖饲料作为高血糖对照，第二、三组分别进食含不同剂量 MC的高蔗糖饲料（折合剂量为 0. 6 g/kg， 1. 2 g/kg ), 第四组为正常大鼠（1 0只）进食正常饲料作为正常对照组。每天观察动物一般状况，记录进食量和进水量， 4周后处死动物取血、晶状体、坐骨神经等组织，测定血糖、血脂、果糖胺、血 NAG酶活性、组织山梨醇含量、红细胞 GSH含量、血清尿素氮及肌酐含量等生化指标，并观察肾脏病理变化，结果如下：

1.摄食量和饮水量的变化，表 7 :

表 7. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠摄食量、饮水量的影响（raean士 SD ) 组另 ij 摄食量（ g/只 /天）饮水量（ ml /只 /

天）

正常大鼠 22. 6 ± 3. 3 19. 5 ± 3. 4

高血糖大鼠 125. 3 ± 15· 1 1 18. 6 ± 19. 6

MC 0. 6 99. 0 ± 6. 0 " 61. 2 ± 11. 2 * * *

MC 1. 2 179. 8土 12. 1 ** * 39. 4 ± 4. 9 » * * 与高血糖大鼠组比较 ** P<0. 01， * * * P<0. 001 ; MC剂量为 g/kg 2. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠血糖、果糖胺的影响，表 8 :

果糖胺是血浆蛋白质（以白蛋白为主）与葡萄糖分子在非酶糖化过程中经过分子重排形成的醛酮缩合物。由于白蛋白浓度在体内的稳定性，故血清果糖胺水平亦比较稳定。它反映 1 - 2周内的血糖水平。表 8. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠血糖、果糖胺的影响（ mean ± SD， n=l 0 ) 组别血糖（ mmol /L ) 果糖胺

未禁食禁食 ( mmol/L )

正常大鼠 5. 4 ± 0. 2 3. 4 ± 0. 5 1. 60 + 0. 12

高血糖大鼠 25. 9 ± 3. 6 16. 5 ± 2. 1 2. 64 土 0. 16

C 0. 6 19. 1+3. 4 «** 10. 4±3. 5 *** 2. 20 土 0. 24 ***

MC 1. 2 10. 9±4. 4 *** 8. 3 土 3. 7 «** 2. 00 土 0. 16 ***

与高血糖大鼠组比较 *** P<0. 001 ; MC剂量为 g/kg

3. MC对血脂的影响，表 9 :

高血糖动物常伴有高血脂，降低血糖可使高血脂有所改善。血脂用酶方法测定，试剂盒购自北京中生生物工程高技术公司。

表 9. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠血脂的影响（mean±SD， n=1 0 ) 组另' J 血脂（ mmol /L )

甘油三酯总胆固醇

正常大鼠 0. 98 土 0. 21 2. 54 + 0. 21

高血糖大鼠 1. 83 土 1. 00 2. 78 ± 0. 24

MC 0. 6 1. 70 士 0. 58 2. 31 + 0. 17 *

MC 1. 2 1. 16 士 0. 30 * 2. 44 ± 0. 28 *

与高血糖大鼠组比较， * P<0. 05, * P«0. 05 MC; 剂量为 g/kg 4. MC对血清 NAG酶活性的影响，表 1 0:

NAG酶是广泛存在于肾实质的一种溶酶体酶，与尿液白蛋白排量和视网膜微血管病变程度关系密切，映微血管病变的敏感指标。随着微血管病变加重， NAG酶活性增加。

表 10. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠血清 NAG酶活性的影响

(mean 士 SD, n=1 0 )

组另' J 血清 6酶( iu ) 正常大鼠 48. 3 ± 5. 9

高血糖大鼠 88. 0 ± 28. 1

MC 0. 6 67. 5 ± 17. 0

MC 1. 2 52. 9 ± 13. 7 ** 与高血糖大鼠组比较 ** P<0. 01 ; MC剂量为 g/kg

5. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠晶状体和坐骨神经中山梨醇含量的影响，表 11 :

山梨醇途径与糖尿病的慢性并发症的发生和发展有着密切的关系。组织中山梨醇含量的升高程度，可直接反映山梨醇途径代谢的活跃程度。测定用亚砷酸钠-变色酸方法。

表 11. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠晶状体、坐骨神经中山梨醇含量的影响（mean ± SD, n=10 )

组另' J 山梨醇（ μιηοΐ/g 组织）

晶状体坐骨神经

正常大鼠 1. 35 ± 0. 12 2. 44 ± 0. 23

高血糖大鼠 3. 56 土 0. 78 9. 54 士 1. 93

MC 0. 6 3. 47 士 0. 55 5. 71 士 1. 02 ***

MC 1. 2 3. 39 士 0. 82 4. 15 ± 1. 11 *** 与高血糖大鼠组比较 *** P<0. 001 ; MC剂量为 g/kg

6. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠红细胞中还原型谷光甘肽（ GSH )含量的影响，表 12 :

自由基学说是从分子生物学水平来解释某些糖尿病慢性并发症的发生和发展的重要理论之一。高血糖状态下，红细胞的 GSH常处于较低水平，因此测定组织细胞中的 GSH, 可了解机体抵御自由基损害能力的强弱。

表 12. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠红细胞 GSH含量的影响

(mean ± SD, n=10 )

组另' J GSH ( mmol/L ) Ρ值正常大鼠 0. 95 土 0· 16

高血糖大鼠 0. 61 ± 1· 16

MC 0. 6 1. 02 土 0. 19 <0. 01

MC 1. 2 1. 322 ± 0· 32 <0. 01

Ρ值为与高血糖大鼠组比较； MC剂量为 g/kg

7. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠的肾重、体重指数的影响，图 7 : 糖尿病肾脏肥大及高滤过现象是其出现最早的肾脏病理生理改变。能否控制糖尿病肾脏肥大常是本病治疗有无成效的标志之一。 8. MC 对四氧嘧啶高血糖大鼠血清尿素氮、肌酐含量的影响（表

13 )：

测定血中尿素氮、肌酐水平可推测肾功能的变化。血清尿素氮、肌酐含量升高，则表示肾功能异常。方法用北京中生生物工程高技术公司的试剂盒法。

表 13. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠血清尿素氮、肌酐含量的影响

(mean土 SD， n=10 )

组别尿素氮（隱 1 /L ) 肌酐（ μιηοΙ /L )

正常大鼠 6. 64 土 1. 36 47. 74 ± 6. 19 高血糖大鼠 5. 39 士 0. 71 84. 86土 14. 14

MC 0. 6 5. 75 士 0. 75 76. 91+ 23. 87

MC 1. 2 5. 82 土 1. 39 53. 04± 13. 26 * 与高血糖大鼠组比较 * P<0. 01 ; MC剂量为 g/kg

9. MC对四氧嘧啶高血糖大鼠肾脏病理变化的影响：

实验各组大鼠肾脏用 10 %福尔马林固定，常规切片，苏木素伊红染色，光镜观察。正常大鼠腎脏结构正常（见图 8 ), 未见任何病变；高血糖组大鼠部分肾脏的腎曲管上皮细胞肿大呈空泡状，细胞内糖原在制片过程中被溶解后，细胞膜清晰可见（见图 9 ); MC组大鼠腎曲管见不到此种改变（见图 10 )。糖原性 ' 病变系由增多的血糖通过' 小球后被肾曲管上皮细胞吸收所致，血糖及尿糖减少后，病变可以减轻。实验说明， MC在降低血糖及尿糖的同时，对肾曲管病变亦有所改善。

上述实验结果说明， MC长期给药（ 4周）后，能明显改善四氧嘧啶高血糖大鼠多食多饮等一般状况；能使血糖、血清果糖胺明显下降；使血清胆固醇含量明显下降，血清甘油三酯水平也有所降低；使血清 NAG 酶活性明显下降，说明对微血管并发症有改善作用；使坐骨神经中山梨醇含量明显减少，提示对糖尿病的慢性神经病变有改善作用；增加红细胞 GSH含量，增强机体的抗氧化能力；还可明显降低肾重、体重指数，减少血清肌酐水平，緩解¹ 小管上皮细胞内的糖原沉积。

实验例 9: 实施例 1制备的本发明药物组合物体外实验

1、实验药品：受试样品：实施例 1制备的本发明药物组合物，简称 MC;

阳性对照药：拜唐苹（Acarbose )、奥利司他（ Or l i s ta t )。

2、实验动物：正常 wi s tar大鼠， 250-300 g，用于提取肠粘膜 α-葡萄糖苷酶。

3、方法与结果：

(1) MC对 α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用：

以蔗糖或麦芽糖为底物，拜唐苹（ Acarbose)为阳性对照药，测定 MC对大鼠肠粘膜 α-蔗糖酶和麦芽糖酶活性的抑制作用，计算 IC₅。；以淀粉为底物，拜唐苹（Acarbose)为阳性对照药，测定 MC对 α-淀粉酶活性的抑制作用，结果如表 14所示：

表 14 MC对 α-葡萄糖苷酶在体外抑制的 IC₅。 ( μ g/ml ) 样品 α-庶糖酶 α-麦芽糖酶 α- -淀粉

MC 2.53 4.05 >100

Acarbose 0.255 0.076 0.80

结果表明： MC在体外抑制 α- -葡萄糖苷酶的活性较强，对 α-蔗糖和麦芽糖酶的抑制 IC50分别为 2.53 μ g/ml和 4.05 g/ral; 对 α-淀粉酶活性无抑制作用。

(2) MC对脂肪酶活性的抑制作用：

以三油酸甘油酯为底物，奥利司他（Orlistat)为阳性对照药，受试样品 MC分别与猪胰脂肪酶和脂蛋白脂肪晦反应，由三油酸甘油酯释放油酸的幹放率来判定样品对脂肪酶的抑制活性。结果见表 15:

表 15 MC对脂肪酶活性的抑制率

样品终浓度（ μ g/ml ) 胰脂肪酶脂蛋白脂肪酶

MC 10 0 0

Orlistat 10 100% 100% 结果显示 MC对脂肪酶几乎没有抑制作用。

4、实验结论：

实验结果显示，样品 MC对 α-蔗糖酶和麦芽糖酶活性有非常强的抑制作用，抑制 IC50分别为 2.53 /1111和4.05 μ g/ml; 对 α-淀粉酶没有抑制作用。说明 MC仅抑制双糖水解酶而不抑制 α-淀粉酶的活性，大大减少了进入到小肠下端的未被完全水解的淀粉及寡糖的量，仅有部分残余的双糖进入到小肠下端，降低双糖水解吸收入血引起的血糖升高，其胃肠道副反应发生率相比拜唐苹低。 MC 对脂肪酶无抑制作用，说明 MC不能直接影响脂肪自肠道的吸收。

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例 1: 胶嚢剂的制备

蚕沙 7. 15kg 甘草 0. 1375kg

取蚕沙，加入蚕沙 4倍量的 60%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 2次，每次 1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 01 ~ 1. 06的浓缩液，加入 1倍量的水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 A，浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 06-1. 15 的稠膏 A, 备用；另取甘草，用甘草 10倍量水煎煮 2次，每次 2小时，合并煎液，放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 04-1. 15的稠膏 B, 备用；合并稠膏 A与稠膏 B，加入 20%蚕沙干膏量的 β—环糊精，喷雾干燥后，加入 1%药粉量的羟丙纤维素 L- HPC, 混匀，干燥，制粒，整粒，装入胶嚢，即得 1000粒，每次 2-4粒，每日三次。

实施例 2: 片剂的制备

蚕沙 7. 15kg 甘草 0. 1375kg

取上述两味药材，按照常规方法，加入常规辅料，制成片剂。

实施例 3: 颗粒剂的制备

蚕沙 6. 15kg 甘草 0. 1875kg

取上述两味药材，按照常规方法，加入常规辅料，制成颗粒剂。

实施例 4: 丸剂的制备

蚕沙 7. 85 kg 甘草 0. 1175 kg

取上述两味药材，按照常规方法，加入常规辅料，制成丸剂。

实施例 5: 蜜炼膏剂的制备

蚕沙 7. 15kg 甘草 0. 1375kg

取上述两味药材，按照常规方法，加入常规辅料，制成蜜炼膏剂。实施例 6: 口服液体制剂的制备蚕沙 6. 15kg 甘草 0. 1875kg

取上述两味药材，按照常规方法，加入常规辅料，制成口服液体制剂。

实施例 7: 注射制剂的制备

蚕沙 7. 85 kg 甘草 0. 1175 kg

取上述两味药材，按照常规方法，加入常规辅料，制成注射制剂。实施例 8: 本发明药物组合物胶嚢剂的含量测定方法和鉴别方法

鉴别： A、取实施例 1制备的本发明药物组合物胶嚢剂内容物 0. 5g, 加无水乙醇 5ml， 60°C水浴回流 30分钟，放置，取上清液，置水浴上蒸至 lml , 作为供试品溶液；另取 β-谷醇作对照品，加无水乙醇制成 0. 001g/ml的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 0. 002ml , 分别点于同一硅胶 G薄层板上，以 19. 5: 0. 5的三氯曱烷：丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%磷钼酸溶液，于 105 °C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

B、用高效液相色谱法进行鉴别，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 60: 40: 1 的甲醇 -0. 2mol /L醋酸铵 -冰醋酸为流动相；检测波长为 250nm; 理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于 2000; 精密称定甘草酸单铵盐对照品 0. Olmg,置 50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，每 lml 含甘草酸单铵盐 0. 0002mg , 折合甘草酸为 0. 0001959g, 制成对照品溶液；取实施例 1制备的本发明药物组合物胶嚢剂内容物 2g，置 25ml的量瓶中，加上述流动相 20ml，以功率 250W, 频率 50KHz进行超声处理 30分钟，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，离心，取上清液，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 0. 005ml，注入液相色傳仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；

含量测定：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 21 : 0. 5: 79的乙腈一二曱基曱酰胺一0. 025mol /L醋酸钠溶液为流动相；检测波长为 390nm; 理论板数按派可林酸峰计算应不低于 2500; 精密称定派可林酸对照品 0. 001g，置 100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇勾；精密量取 1ml , 置 10ml 具塞试管中，加水 lml，加 0. 8% 2， 4一二硝基氟苯乙腈溶液 2ml和 0. 5raol/L碳酸氢钠溶液 2ml，于 60°C水浴中 1小时，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用 0. 2raol/L、 pH7. 0的磷酸盐緩沖液分 3次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述碑酸盐緩沖液稀释至刻度，摇勾，制成对照品溶液；精密称定实施例 1制备的本发明药物组合物胶嚢剂内容物 0. 4g,置 10ml具塞试管中，加水 5ml , 充分振摇后，于 60°C水浴中加热 30分钟，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用水分 3次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；以每分钟 12000转离心 10分钟，精密量取上清液 2ml , 置 10ml具塞试管中，加 0. 8 2, 4—二硝基氟苯乙腈溶液 2ml和 0. 5mol /L碳酸氢钠溶液 2ml , 于 60°C水浴中 1 小时，取出，放冷，移至 10ml 量瓶中，用 0. 2mol/L、 pH7. 0磷酸盐緩冲液分 3次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述磷酸盐緩冲液稀释至刻度，摇，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液 0. 005ml 与供试品溶液 0. 01ml , 注入液相色谱仪，测定，即得；本发明药物组合物按日服用剂量 5. 0g 计含蚕沙以派可林酸 C₆H_uN0₂计，不得少于 0. 0018g_o

实施例 9: 本发明药物组合物散剂的鉴别方法

A、取本发明药物组合物散剂 0. 4g, 加无水乙醇 6ml , 40°C水浴回流 4G分钟，放置，取上清液，置水浴上蒸至 0. 5ml , 作为供试品溶液；另取 β一谷醇作对照品，加无水乙醇制成 0. 0015g/ml的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 0. 001ml , 分别点于同一硅胶 G薄层板上，以 21: 0. 3的三氯甲烷：丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 15%磷钼酸溶液，于 100°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B、用高效液相色谱法进行鉴别，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇 -0. 2mol/L醋酸铵-冰醋酸 =50: 50: 0. 5为流动相；检测波长为 250nm; 理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于 2000; 精密称定甘草酸单铵盐对照品 0. 005g，置 50ml量瓶中，用上述流动相溶解并稀释至刻度，摇勾，即得，每 1ml 含甘草酸单铵盐 0. 0003g，折合甘草酸为 0. 00019g, 制成对照品溶液；取本发明药物组合物散剂 3. Og, 置 25ml 的量瓶中，加上述流动相 18ml，以功率 250W, 频率 50KHz进行超声处理 20分钟，取出，放冷，加流动相至刻度，摇勾，离心，取上清液，制成供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 0. 015ral , 注入液相色语仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

实施例 10: 本发明药物组合物颗粒剂的含量测定方法

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈一二甲基甲酰胺一 0. 025mo l /L醋酸钠 =15: 1: 75的溶液为流动相；检测波长为 390nm; 理论板数按派可林酸峰计算应不低于 2500; 精密称定派可林酸对照品 0. 006g，置 50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取 0. 5ml , 置 10ml具塞试管中，加水 1. 5ml，加 0. 8% 2， 4 一二硝基氟苯乙腈溶液 1ml和 0. 5mo l /L碳酸氢钠溶液 3ml , 于 60°C水浴中 0. 5小时，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用 0. 2mo l /L、 pH7. 0 的磷酸盐緩沖液分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述麟酸盐緩沖液稀释至刻度，摇勾，制成对照品溶液；精密称定本发明药物组合物颗粒剂 0. 5g , 置 10ml具塞试管中，加水适量，充分振摇后，于 50°C水浴中加热 40分钟，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用水分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇勾；以每分钟 12000 转离心 5 分钟，精密量取上清液 3ml , 置 10ml具塞试管中，加 0. 8%2， 4一二硝基氟苯乙腈溶液 1ml和 0. 5mo l /L碳酸氢钠溶液 3ml，于 50°C水浴中 1. 5 小时，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用 0. 2mo l /L、 pH7. 0磷酸盐緩沖液分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述磷酸盐緩冲液稀释至刻度，摇勾，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液 0. G04ml与供试品溶液 0. 015ml , 注入液相色傅仪，测定，即得；本药物组合物按日服用剂量 5. Og计含蚕沙以派可林酸 C₆HuN0₂计，不得少于 0. 0018g_o 实施例 11 : 本发明药物组合物片剂的含量测定方法和鉴别方法

鉴别： A、取实施例 2制备的本发明药物组合物片剂 0. 5g，加无水乙醇 5g, 60°C水浴回流 30分钟，放置，取上清液，置水浴上蒸至 lml , 作为供试品溶液；另取 β_谷甾醇作对照品，加无水乙醇制成 0. OOlg/ral 的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试猃，吸取上述两种溶液各 0. 002ml , 分别点于同一硅胶 G薄层板上，以 19. 5: 0. 5的三氯曱烷：丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%磷钼酸溶液，于 105 °C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色语相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 21: 0. 5: 79的乙腈一二曱基甲酰胺一 0. 025mol/L醋酸钠溶液为流动相；检测波长为 390nm; 理论板数按派可林酸峰计算应不低于 2500; 精密称定派可林酸对照品 0. 005g，置 50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取 lml，置 10ml具塞试管中，加水 lml , 加 0. 8% 2, 4一二硝基氟苯乙腈溶液 2ml和 0. 5mol/L碳酸氢钠溶液 2体积份，于 60Ό水浴中 1小时，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用 0. 2mol/L、 pH7. 0 的磷酸盐緩沖液分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述碼酸盐緩冲液稀释至刻度，摇勾，制成对照品溶液；精密称定实施例 2制备的本发明药物组合物片剂 0. 4g，置 10ml具塞试管中，加水适量，充分振摇后，于 60°C水浴中加热 30分钟，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用水分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇勾；以每分钟 12000转离心 10分钟，精密量取上清液 2ml , 置 10ml具塞试管中，加 0. 8%2, 4一二硝基氟苯乙腈溶液 2ml和 0. 5mol /L碳酸氢钠溶液 2ml , 于 60°C水浴中 1小时，取出，放冷，移至 10ml量瓶中，用 0. 2mol /L、 pH7. 0 磷酸盐緩沖液分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述碑酸盐緩沖液稀释至刻度，摇勾，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液 0. 005ml 与供试品溶液 0. 01ml , 注入液相色谱仪，测定，即得；本发明药物组合物按日服用剂量 5. 0g 计含蚕沙以派可林酸 C₆H„N0₂计，不得少于 0. 0018g_o

实施例 12: 片剂的制备

蚕沙 7. 15kg 甘草 0. 1375kg

取蚕沙，加入蚕沙 4倍量的 60%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 2次，每次 1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 01 ~ 1. 06的浓缩液，加入 1倍量的水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 A,浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 06-1. 15 的稠膏 A，备用；另取甘草，用甘草 10倍量水煎煮 2次，每次 2小时，合并煎液，放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 04-1. 15的稠膏 B, 备用；合并稠膏 A与稠膏 B，加入常规辅料，按常规方法，制成片剂。

实施例 13: 颗粒剂的制备

蚕沙 6. 15kg 甘草 0. 1875kg

取蚕沙，加入蚕沙 4倍量的 60%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 2次，每次 1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 01 - 1. 06的浓缩液，加入 1倍量的水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 A，浓缩至温度 55 'C、相对密度为 1. 06-1. 15 的稠膏 A，备用；另取甘草，用甘草 10倍量水煎煮 2次，每次 2小时，合并煎液，放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 04-1. 15的稠膏 B, 备用；合并稠膏 A与稠膏 B, 加入常规辅料，按常规方法，制成颗粒剂。

实施例 14: 丸剂的制备

蚕沙 7. 85 kg 甘草 0. 1175 kg

取蚕沙，加入蚕沙 4倍量的 60%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 2次，每次 1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 01 ~ 1. 06的浓缩液，加入 1倍量的水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 A,浓缩至温度 55 Γ、相对密度为 1. 06-1. 15 的稠膏 A, 备用；另取甘草，用甘草 10倍量水煎煮 2次，每次 2小时，合并煎液，放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 04-1. 15的稠膏 B，备用；合并稠膏 A与稠膏 B, 加入常规辅料，按常规方法，制成丸剂。

实施例 15: 蜜炼膏剂的制备

蚕沙 7. 15kg 甘草 0. 1375kg 取蚕沙，加入蚕沙 4倍量的 60%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 2次，每次 1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 01 ~ 1. 06的浓缩液，加入 1倍量的水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 A,浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 06-1. 15 的稠膏 A，备用；另取甘草，用甘草 10倍量水煎煮 2次，每次 2小时，合并煎液，放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 04- 1. 15的稠膏 B，备用；合并稠膏 A与稠膏 B, 加入常规辅料，按常规方法，制成蜜炼膏剂。

实施例 16: 口服液体制剂的制备

蚕沙 6. 15kg 甘草 0. 1875kg

取蚕沙，加入蚕沙 4倍量的 60%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 2次，每次 1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 01 ~ 1. 06的浓缩液，加入 1倍量的水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 A,浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 06-1. 15 的稠膏 A, 备用；另取甘草，用甘草 10倍量水煎煮 2次，每次 2小时，合并煎液，放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 04-1. 15的稠膏 B，备用；合并稠膏 A与稠膏 B, 加入常规辅料，按常规方法，制成口服液体制剂。

实施例 17: 注射制剂的制备

蚕沙 7. 85 kg 甘草 0. 1175 kg

取蚕沙，加入蚕沙 4倍量的 60%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 2次，每次 1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至温度 55 Ό、相对密度为 1. 01 ~ 1. 06的浓缩液，加入 1倍量的水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 Α,浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 06-1. 15 的稠膏 A, 备用；另取甘草，用甘草 10倍量水煎煮 2次，每次 2小时，合并煎液，放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至温度 55 °C、相对密度为 1. 04-1. 15的稠膏 B, 备用；合并稠膏 A与稠膏 B, 加入常规辅料，按常规方法，制成注射制剂。

Claims

权利要求

1、一种药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为：蚕沙 6000-8000重量份甘草 100-200重量份。

2、如权利要求 1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为：

蚕沙 7150重量份甘草 137. 5重量份。

3、如权利要求 1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为：

蚕沙 6150重量份甘草 187. 5重量份。

4、如权利要求 1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为：

蚕沙 7850重量份甘草 117. 5重量份。

5、如权利要求 1、 2、 3或 4所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂、胶嚢剂、散剂、软胶嚢剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、緩释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

6、如权利要求 1、 2、 3或 4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

取蚕沙，加入蚕沙 2-6倍量的 50%- 70%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 1-3次，每次 0. 5-1. 5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，将除去乙醇后的滤液加热浓缩或在温度 80°C以下减压浓缩至 55 °C时测相对密度为 0. 95-1. 10, 得浓缩液，加入水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 A，上清液加热浓缩或在温度 80Ό以下减压浓缩至 ⁵⁵ °C时测相对密度为 1. 00-1. 15 的稠膏 A,备用；另取甘草，用甘草 8 - 15 倍量水煎煮 1-3次，每次 1-3小时，合并煎液，放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至 55 °C时测相对密度为 1. 00-1. 15的稠膏 B,备用；合并稠膏 A与稠膏 B, 按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶嚢剂、散剂、软胶嚢剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、緩释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

7、如权利要求 6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

取蚕沙，加入蚕沙 4倍量的 60%乙醇，浸渍过夜，緩慢加热至沸，回流 2次，每次 1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，将除去乙醇后的滤液加热浓缩或在温度 80 °C以下减压浓缩至 55。C时测相对密度为 1. 01 ~ 1. 06的浓缩液，加入浓缩液 1倍量的水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液 A, 浓缩至 55 °C时测相对密度为 1. 06-1. 15的稠膏 A, 备用；另取甘草，用甘草 10倍量水煎煮 2次，每次 2小时，合并煎液,放置过夜使沉淀，取上清液 B浓缩至 55 °C时测相对密度为 1. 04-1. 15 的稠膏 B, 备用；合并稠膏 A与稠膏 B, 按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶嚢剂、散剂、软胶嚢剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、緩释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

8、如权利要求 1、 2、 3或 4所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和 /或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

A、取本发明药物组合物 0. 4-0. 6重量份，加无水乙醇 4-6体积份， 40-80°C水浴回流 20-40分钟，放置，取上清液，置水浴上蒸至 0. 5-1. 5 体积份，作为供试品溶液；另取醇作对照品，加无水乙醇制成 0. 0005-0. 0015 重量份 /体积份的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 0. 001- 0. 003体积份，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以 18-21 : 0. 3-0. 7的三氯甲烷：丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%-15%磷钼酸溶液，于 100-110°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色语相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B、用高效液相色谱法进行鉴别，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以曱醇-0. 211101 /1醋酸铵-冰醋酸=50-70： 30-50: 0. 5-1. 5为流动相；检测波长为 250nm; 理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于 2000; 精密称定甘草酸单铵盐对照品 0. 005-0. 015重量份，置 50体积份量瓶中，用上述流动相溶解并稀释至刻度，摇勾，即得，每 1体积份含甘草酸单铵盐 0. 0001-0. 0003重量份，折合甘草酸为 0. 00019-0. 00020重量份，制成对照品溶液；取本发明药物组合物 1. 0-3. 0重量份，置 25体积份的量瓶中，加上述流动相 18- 22体积份，以功率 250W, 频率 50KHz进行超声处理 20-40分钟，取出，放冷，加流动相至刻度，摇勾，离心，取上清液，制成供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 0. 005-0. 015体积份，注入液相色傅仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色借峰；

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈一二甲基甲酰胺一0. 025mol /L醋酸钠 =15-25: 0. 1-1: 75-85的溶液为流动相；检测波长为 390nm; 理论板数按派可林酸峰计算应不低于 2500; 精密称定派可林酸对照品 0. 004-0. 006重量份，置 50体积份量瓶中，加水稀释至刻度，摇句；精密量取 0. 5-1. 5体积份，置 10体积份具塞试管中，加水 0. 5-1. 5体积份，力。 0. 8% 2， 4一二硝基氟苯乙腈溶液 1-3体积份和 0. 5mol/L碳酸氢钠溶液 1-3体积份，于 6G°C水浴中 0. 5-1. 5小时，取出，放冷，移至 10体积份量瓶中，用 0. 2mol/L、 pH7. 0的磷酸盐緩沖液分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述碑酸盐緩沖液稀释至刻度，摇勾，制成对照品溶液；精密称定本发明药物组合物 0. 3-0. 5重量份，置 10体积份具塞试管中，加水充分振摇后，于 50- 70°C水浴中加热 20-40分钟，取出，放冷，移至 10体积份量瓶中，用水分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇勾；以每分钟 12000转离心 5-15分钟，精密量取上清液 1-3体积份，置 10体积份具塞试管中，加 0. 8%2，4一二硝基氟苯乙腈溶液 1-3 体积份和 0. 5mol/L碳酸氢钠溶液 1-3体积份，于 50- 70°C水浴中 0. 5-1. 5小时，取出，放冷，移至 10体积份量瓶中，用 0. 2mol/L、 pH7. 0磷酸盐緩冲液分数次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述麟酸盐緩沖液稀释至刻度，摇匀，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液 0. 004-0. 006体积份与供试品溶液 0. 005-0. 015体积份，注入液相色语仪，测定，即得；本药物组合物按日服用剂量计含蚕沙以派可林酸 C₆H_nN0₂计，不得少于

0. 0001-0. 0003重量份。

9、如权利要求 8所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和 /或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

A、取本发明药物组合物 0. 5重量份，加无水乙醇 5体积份， 60°C 水浴回流 30分钟，放置，取上清液，置水浴上蒸至 1体积份，作为供试品溶液；另取 β-谷醇作对照品，加无水乙醇制成 0. 001重量份 /体积份的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 0. 002体积份，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以 19. 5: 0. 5的三氯甲烷：丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%磷钼酸溶液，于 105 。(加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色语相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

Β、用高效液相色谱法进行鉴别，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 60: 40: 1 的甲醇 - 0. 2mol /L醋酸铵 -冰醋酸为流动相；检测波长为 250nm; 理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于 2000; 精密称定甘草酸单铵盐对照品 0. 01重量份，置 50体积份量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，每 1体积份含甘草酸单铵盐 0. 0002重量份，，折合甘草酸为 0. 0001959重量份，制成对照品溶液；取本发明药物组合物 2重量份，置 25体积份的量瓶中，加上述流动相 20体积份，以功率 250W, 频率 50KHz进行超声处理 30分钟，取出，放冷，加流动相至刻度，摇勾，离心，取上清液，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 0. 005体积份，注入液相色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色语峰；

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 21: 0. 5: 79的乙腈一二曱基甲酰胺一 0. 025mo l /L醋酸钠溶液为流动相；检测波长为 390nm; 理论板数按派可林酸峰计算应不低于 2500; 精密称定派可林酸对照品 0. 01重量份，置 100体积份量瓶中，加水稀释至刻度，摇勾；精密量取 1体积份，置 10体积份具塞试管中，加水 1 体积份，加 0. 8% 2， 4一二硝基氟苯乙腈溶液 2体积份和 0. 5mo l /L碳酸氢钠溶液 2体积份，于 60°C水浴中 1小时，取出，放冷，移至 10体积份量瓶中，用 0. 2mo l /L、 pH7. 0的磷酸盐緩沖液分 3次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述磷酸盐緩沖液稀释至刻度，摇勾，制成对照品溶液；精密称定本发明药物组合物 0. 4重量份，置 10体积份具塞试管中，加水 5体积份，充分振摇后，于 60°C水浴中加热 30分钟，取出，放冷，移至 10体积份量瓶中，用水分 3次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇勾；以每分钟 12000转离心 10分钟，精密量取上清液 2体积份，置 10体积份具塞试管中，加 0. 8%2, 4一二硝基氟苯乙腈溶液 2体积份和 0. 5mo l /L碳酸氢钠溶液 2体积份，于 60°C水浴中 1小时，取出，放冷，移至 10体积份量瓶中，用 0. 2mo l /L、 pH7. 0磷酸盐緩冲液分 3次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加上述磷酸盐緩沖液稀释至刻度，摇匀，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液 0. 005体积份与供试品溶液 0. 01体积份，注入液相色语仪，测定，即得；本发明药物组合物按日服用剂量计含蚕沙以派可林酸 C₆H_nN0₂计，不得少于 0. 0002重量份。

10、如权利要求 1、 2、 3或 4所述的药物组合物在制备治疗糖尿病的药物中的应用。

11、如权利要求 10所述的应用，所述治疗糖尿病是指改善多食多饮症状。

12、如权利要求 10所述的应用，所述治疗糖尿病是能使血糖、血清果糖胺明显下降。

13、如权利要求 10所述的应用，所述治疗糖尿病是使血清胆固醇含量及血清甘油三酯水平降低。

14、如权利要求 10所述的应用，所述治疗糖尿病是使血清 NAG酶活性下降，改善微血管并发症。

15、如权利要求 10所述的应用，所述治疗糖尿病是使坐骨神经中山梨醇含量减少，改善糖尿病的慢性神经病变。

16、如权利要求 10所述的应用，所述治疗糖尿病是增加红细胞 GSH 含量，增强机体的抗氧化能力。

17、如权利要求 1 0所述的应用，所述治疗糖尿病是降低肾重、体重指数，减少血清肌酐水平，緩解肾小管上皮细胞内的糖原沉积。

18、如权利要求 1、 2、 3或 4所述的药物组合物在治疗糖尿病中的应用。

19、如权利要求 18所述的应用，所述治疗糖尿病是指改善多食多饮症状。

20、如权利要求 18所述的应用，所述治疗糖尿病是能使血糖、血清果糖胺明显下降。

21、如权利要求 18所述的应用，所述治疗糖尿病是使血清胆固醇含量及血清甘油三酯水平降低。

22、如权利要求 18所述的应用，所述治疗糖尿病是使血清 NAG酶活性下降，改善微血管并发症。

23、如权利要求 18所述的应用，所述治疗糖尿病是使坐骨神经中山梨醇含量减少，改善糖尿病的慢性神经病变。

24、如权利要求 18所述的应用，所述治疗糖尿病是增加红细胞 GSH 含量，增强机体的抗氧化能力。

25、如权利要求 18所述的应用，所述治疗糖尿病是降低肾重、体重指数，减少血清肌酐水平，緩解肾小管上皮细胞内的糖原沉积。

26、如权利要求 18所述^应用，所述治疗糖尿病是抑制 α-葡萄糖苷酶的活性。