WO2007116432A1

WO2007116432A1 - キャノロールまたはそのプロドラッグ（ｐｄ）を含む抗炎症剤および癌予防剤ならびにこれらを含む医薬、化粧品および食品

Info

Publication number: WO2007116432A1
Application number: PCT/JP2006/306617
Authority: WO
Inventors: Hiroshi Maeda; Tetsuya Tsukamoto; Masae Tatematsu
Original assignee: Aichi Prefecture
Priority date: 2006-03-30
Filing date: 2006-03-30
Publication date: 2007-10-18
Also published as: JPWO2007116432A1; US8865775B2; EP2014283A1; TW200735857A; JP5222131B2; US20090163600A1; EP2014283A4; US20120122995A1; CA2659767A1

Abstract

　本発明によって、4－ビニル－2，6－ジメトキシフェノール（式１）またはそのＰＤを含む、抗炎症剤または癌予防剤が提供される。

Description

明細書

キヤノロールまたはそのプロドラッグ (PD)を含む抗炎症剤および癌予防剤ならびにこれらを含む医薬、化粧品および食品

技術分野

[0001] 本発明は、キヤノロールまたはそのプロドラッグ (PD)を含む抗炎症剤および癌予防剤ならびにこれらを含む医薬、化粧品および食品に関する。

背景技術

[0002] 抗炎症剤とは、炎症性サイト力インや炎症メディエータ (プロスタグランジン類等の生成を抑える物質である。抗炎症剤としては、アスピリンゃテプレノン等が知られている。

また、癌予防剤とは、発癌物質の摂取や慢性観戦による発癌を予防する物質であり、現在著名なものは知られていない。

[0003] 一方、本発明者らは、各種種子原油または種子油脂成分中の、生体に障害性 (例えば、 DNA切断や細胞毒性)を示す過酸化脂質由来の過酸化脂質ラジカル (LOO · と表記)を中和する成分について研究を進めた結果、ナタネ原油中から、芳香族化合物であるキヤノロール（4ービ-ルー 2, 6—ジメトキシフエノール。図 1)を見出した（T . Sawa et al, し ancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention, 7, 1007-1012 (1998)、 H. Kuwahara et al, J. Agric. Fd. Chem., 52, 4380—4387 (2004)、 D. Wakamatsu et al , Biosci., Biotech., Biochem., 69, 1568-1574 (2005)、 A. Kanazawa et al, Eur. J. Lipi d Science Tech., 104, 439-447 (2002)、 W02003/030888)。

そして、本発明者らは、キヤノロールが生体に有害な LOO 'に対して、強い消去活性を示すことも確認した。

[0004] キヤノロールは、上記のとおり LOO ·に対する中和活性を有することから、医薬成分、化粧品成分および食品成分としての利用が考えられた。

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0005] しかしながら、これまで、キヤノロールまたはその PDがこれらの成分として用いられた場合において、実際に所期の効果を奏することは知られていな力つた。また、キヤノロールが広く知られていないこと、およびその市販品がない等の問題により、キヤノロールまたはその PDを有効成分とする医薬、化粧品または食品は実現されていなかつた o

[0006] また、従来の抗炎症剤や癌予防剤は、いずれもその効果と副作用との関係から、必ずしも満足なものとはいえない。そのため、より優れた抗炎症剤、癌予防剤の開発に対する高、要求が存在し続けて、る。

課題を解決するための手段

[0007] 本発明者らは、上記課題に鑑みキヤノロールの利用方法を探索した結果、キヤノロールに炎症および癌に対する高い治療効果または予防活性があることを見出し、さらに研究を進めて本発明を完成するに至った。より具体的には、本発明者らは、細菌 (へリコパクター 'ピロリ、ピロリ菌）を感染させたスナネズミを用いた動物における慢性感染モデルの系によって胃癌発生に対する予防効果を検討したところ、キヤノロールを含む食餌投与群において、上記感染後のスナネズミにおいて、ピロリ菌が起す胃' 十二指腸の炎症に対してキヤノロールの投与による強い抑制作用がみられ、さらに研究を進めた結果、本発明を完成するに至ったのである。

[0008] すなわち、本発明は、（1) 4 ビュル 2, 6 ジメトキシフエノール

[化 1]

に関する。

(2)また、本発明は、胃 ·十二指腸炎、胃，十二指腸潰瘍、胃炎、気管支炎、リウマチ、肝炎、大腸炎、結膜炎、肺炎、脾炎、口内炎、咽頭炎および火傷からの 1種または 2種以上に対する処置のための、前記抗炎症剤に関する。

(3)さらに、本発明は、 8—ォキソデォキシグアノシンの生成抑制、 COX—2の活性阻害、 NO合成酵素 (iNOS)の活性阻害、 NOの生成抑制の 1種または 2種によって炎症を抑制する、前記抗炎症剤に関する。

(4)また、本発明は、パーォキシナイトライトによる変異原性抑制によって発癌を予防する、前記癌予防剤に関する。

(5)また、本発明は、さらに医薬用の賦形剤を含む、前記抗炎症剤または癌予防剤（医薬)に関する。

(6)また、本発明は、さらに化粧品成分 (化粧品成分)を含む、前記抗炎症剤または癌予防剤 (化粧品）に関する。

(7)さらに、本発明は、化粧品成分を含み、皮膚老化、細胞傷害および日焼け力の 1種または 2種以上に対する処置のための、前記抗炎症剤または癌予防剤に関する

(8)また、本発明は、クリーム、錠剤、カプセル、油剤化製剤、水溶性薬剤 (水可溶化物)またはェマルジヨンの形態を有する前記抗炎症剤または癌予防剤（医薬または化粧品）に関する。

(9)そして本発明は、さらに食品成分を含む、前記抗炎症剤または癌予防剤 (食品）に関する。

[0010] これまで、炎症の処置または癌の予防と LOOに対する中和活性との関係について、明確な知見はなぐまた、キヤノロールには上記のとおり実用的な利用方法が確立していな力つた。力かる背景があったにもかかわらず、本発明は、キヤノロールの LO 0 ·に対する中和活性を用いて、抗炎症剤および癌予防剤を提供することに成功したのである。また、本発明によって、化粧品や癌予防活性を有する食品も提供される。発明の効果

[ooii] 本発明によって、十分な抗炎症活性および Zまたは癌予防活性を有し、かつ副作用力、さい抗炎症剤および癌予防剤、さらにこれらを含む医薬、化粧品および食品が提供される。

本発明に用いられる有効成分であるキヤノロールは、以下のような点にぉ、て優れている：

( 1)油脂に易溶性 (脂溶性)であり、高ヽ抗ラジカル活性を有する； (2)脂溶性であるため生体内で細胞膜への親和性が高く、水溶性抗ラジカル剤が作用し難い脂質の豊富な細胞膜や臓器中でも有効に作用する；

(3)菜種原油の抽出物力得られる天然由来の成分であるため、原料面や安全面で有利であると同時に、比較的簡単な構造のため合成も容易である；

(4)従来の菜種脱脂粕より抽出した抗酸化剤は難脂溶性であるのに対して、菜種原油から抽出したものであり、油脂に溶け易いため、食用油やその他油脂組成物の抗酸化剤として利用し易い。

したがって、本発明の抗炎症剤および癌予防剤、さらにこれらを含む医薬、化粧品および食品は、製造しやすさ、製造コスト、生物活性、安全性、投与'摂取のしゃすさにおいても、従来のものを上回る格別な効果を奏する。

また、本発明の抗炎症剤のうち、胃'十二指腸炎、胃'十二指腸潰瘍、胃炎、気管支炎、リウマチ、肝炎、大腸炎、結膜炎、肺炎、膝炎、口内炎、咽頭炎および火傷からの 1種または 2種以上に対する処置のために用い得るものは、広範な種類の炎症の処置に用いることができると、つた効果を奏する。

さらに、本発明の抗炎症剤のうち、 8—ォキソデォキシグアノシンの生成抑制、 COX —2の活性阻害、 iNOSの活性阻害 (NOの生成抑制）、さらにサイト力インの誘導の抑制の 1種または 2種によって炎症を抑制するものは、種々の作用機構を有することによって、広範な種類の炎症の処置に用いることができるといった効果を奏する（参考文献:フラボノイド等の植物性成分によるサイト力イン生成の抑制について J. K. Ku ndu, Y. J. Surh, Mutation Res. 591, 123—146(2005))。

また、本発明の癌予防剤のうち、パーォキシナイトライトによる変異原性抑制によつて発癌を予防する剤は、癌予防剤としての効果を奏する。

また、本発明の抗炎症剤または癌予防剤のうち、さらに医薬用の賦形剤を含むもの (医薬）は、疾病の処置を容易に行えるといった効果を奏する。

また、本発明の抗炎症剤または癌予防剤のうち、さらに化粧品成分を含むものは、化粧品として用いられて抗炎症作用および Zまたは癌予防効果を奏する。

さらに、本発明の抗炎症剤または癌予防剤であって化粧品成分を含むもののうち、皮膚老化、細胞傷害および日焼け力の 1種または 2種以上に対する処置のためのものは、広範な種類の炎症に対する処置を、一般の化粧品と同様な処置方法によつて行うことができるといった効果を奏する。

また、本発明の抗炎症剤または癌予防剤（医薬または化粧品）のうち、クリーム、錠剤、カプセル、油剤化製剤、水溶性薬剤 (水可溶ィ匕物)またはェマルジヨンの形態を有するものは、疾病等の処置をさらに容易に行えると、つた効果を奏する。

そして本発明の抗炎症剤または癌予防剤のうち、さらに食品成分を含むものは、通常の食品と同様に摂取することによって抗炎症作用および Zまたは癌予防効果を奏する。

図面の簡単な説明

[0013] [図 1]キヤノロールの構造を示す図である。

[図 2]本発明の抗炎症剤の抗炎症作用を示す図である。

[図 3A]COX— 2による免疫染色後の病理所見を示す図である。

[図 3B]iNOSによる免疫染色後の病理所見を示す図である。

[図 4]本発明の抗炎症剤の、マクロファージからの NO生成の抑制を示す図である。

[図 5]本発明の抗炎症剤の、マクロファージの生存に与える影響を示す図である。

[図 6]本発明の癌予防剤の、 ONOO—による遺伝子損傷に対する効果を示す図である。

[図 7A]ONOO_を持続的に攪拌下に注入した後の株を示す図である。

[図 7B]変異株を示す図である。

[図 7C]本発明の癌予防剤の、変異株の発現に対する抑制効果を示す図である。発明を実施するための最良の形態

[0014] 本発明の抗炎症剤および癌予防剤ならびにこれらを含む医薬、化粧品および食品は、キヤノロールまたはその PDを含むものであれば、その組成や形態は限定されない。なお、キヤノロールまたはその PDの入手は、例えば W02003/030888に記載の方法に従い、菜種の抽出によって行うことができる。また、キヤノロールは、自体公知の方法によって、シナピン酸（3, 5—ジメトキシー 4ーヒドロキシ桂皮酸）やフエノールから合成することも可能である。

これらのキヤノロールまたはそれらの PDを含む抗炎症剤および癌予防剤ならびにこれらを含む医薬、化粧品および食品に含まれるキヤノロールの量は、目的に応じて改変される。例えば、抗炎症剤においては、 0. 1〜5%を含む各種剤型が好ましぐより好ましくは 0. 1〜3%を含む各種剤型である。

[0015] 本発明の抗炎症剤においては、追カ卩の成分としてカンファー、スクラルフアート、サリチル酸メチル、テプレノン等を含有してもよい。テプレノンを含有するものが好ましい

[0016] 本発明の抗炎症剤は、各種炎症に対して抗炎症作用を有する。炎症の例としては、胃 ·十二指腸炎、胃 ·+二指潰瘍、胃炎、気管支炎、リウマチ、肝炎、大腸炎、結膜炎、肺炎、脾炎、口内炎、咽頭炎および火傷力の 1種または 2種以上が挙げられる。本発明の抗炎症剤は、とくに胃'十二指腸炎に対して優れた作用を示すことから、本発明の抗炎症剤は、これらの炎症に対する使用が好ましい。

[0017] 本発明の癌予防剤においては、追カ卩の成分としてスクラルフアートゃテプレノンを含有してちょい。

[0018] 本発明の癌予防剤は、各種癌に対して予防作用を有する。癌の例としては、胃癌、大腸癌、肝癌、胆嚢癌、胆管癌、食道癌、肺癌からの 1種または 2種以上が挙げられる。

本発明の癌予防剤は、とくに胃癌の発生予防について優れた作用を示すことから、本発明の癌予防剤は、これらの癌に対する使用が好ましい。

[0019] 本発明の抗炎症剤または癌予防剤は、一般的な補助成分として、水、有機溶媒、乳化剤及び油類等を含み得る。他の成分は、用途によって適宜改変される。

[0020] 本発明の抗炎症剤または癌予防剤を含む医療用組成物、すなわち医薬は、キヤノロールまたはその PDを有効成分とする抗炎症剤または癌予防剤であって、ヒト医薬または獣医薬として効果的に用いることができる。本発明の医薬を製剤化する場合に好適な医薬用の賦形剤は、経腸 (例えば経口）、非経口または局所投与に好適で、前記化合物と反応しない有機または無機物質、例えば水、植物油、ベンジルアルコール、アルキレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセローノレトリアセテート、ゼラチン、乳糖またはデンプンなどの炭水化物、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはワセリンである。 [0021] 経口投与に好適なのは、特に錠剤、ピル、被覆錠剤、カプセル、粉末、顆粒、シロップ、ジュース、溶液、懸濁液またはドロップであり、直腸投与に好適なのは坐剤であり、非経口投与に好適なのは、溶液、好ましくはオイルベースのまたは水性の溶液、さらにまた懸濁液、エマルシヨンまたは移植片であり、そして局所適用に好適なのは、軟膏、クリームまたはパウダーであり、またはパッチで経皮的になされるものである。

[0022] 本発明の医薬の投与形態としては、キヤノロールが経口投与において活性を発現すること、および投与の簡便さの観点力経口投与が好ましい。力かる経口投与は対象自身によって極めて簡便に行えるため、通院の手間が省けるなどのコンプライアンスの向上の観点からも好適である。

[0023] キヤノロールおよびその PDは、凍結乾燥してもよぐ精製した凍結乾燥物を、例えば、注射製剤の製造に使用してもよい。示された前記製剤は、滅菌してもよぐおよび Zまたは、潤滑剤、保存剤、安定剤などの助剤、および Zまたは、湿潤剤、乳化剤

、浸透圧を変更するための PD、緩衝物質、着色剤および風味剤、および Zまたは、多数のさらなる活性成分、例えば 1種または 2種以上のビタミンを含んでもょ、。エアロゾルまたはスプレーの形態での投与のための好適な製剤は、例えば、薬学的に許容し得る溶媒中の式 Iで表される活性成分の溶液、懸濁液またはェマルジヨンである。

[0024] 一般的に、本発明の医薬は、好ましくは用量単位あたり、有効成分の量として 1〜5 OOmg、特に好ましくは 5〜： LOOmgの用量で投与される。日量は、体重 lkgあたり約 0 . 01〜： LOOmgであり、好ましくは体重 lkgあたり約 0. l〜80mgであり、特に好ましくは体重 lkgあたり約 l〜70mgである。し力しながら、各患者への具体的な用量は、広範な因子、例えば、用いられる具体的な化合物の有効性、年齢、体重、健康の一般状態、性別、食餌、投与の時間および方法、排泄率、医薬の組合せおよび治療が適用される特定の疾患の重篤度に左右される。経口投与が好まし、。

[0025] したがって、本発明はさらにまた、本発明の医薬の製造、特に非化学的方法によるものへの使用に関する。この場合、これらの医薬の有効成分であるキヤノロールおよびその PDは、少なくとも 1種の固形、液状および Zまたは半液状賦形剤または助剤と共に、そして、所望ならば 1種または 2種以上のさらなる活性成分との組合せで好適な用量形態に変換することができる。

本発明の抗炎症剤または癌予防剤に加重して、化粧品成分を含む組成物、すなわち化粧品は、各種炎症に対して抗炎症作用および Zまたは美容作用を有する。炎症の例としては、皮膚老化、細胞傷害および日焼け力の 1種または 2種以上が挙げられる。本発明の化粧品は、とく〖こ日焼け、紫外線'熱線による炎症予防に対して優れた作用を示すことから、本発明の化粧品は、これらの炎症に対する使用が好ましいなお、本発明において「プロドラッグ」（以下「PD」と表記）とは、そのままの形では不活性であるが、生体内で薬物代謝酵素によって化学的変化を受けて初めて活性を示す薬物を意味する。キヤノロールの PDとして、本発明に用いられるものは限定されないが、下記式によって表されるプロドラッグが例示される：

[化 2]

(式中、 Rは炭素数 1〜24のカルボキシル残基を示す。 ) o

Rは、好ましくは炭素数 1〜24の脂肪酸残基、アミノ酸残基、ペプチドスぺーサ一、糖残基、有機酸残基であり、より好ましくは CH CO—、 C H CO—、 NH CH CO—

3 2 5 2 2

、 NH CH (R' ) CO— (R'はアミノ酸側鎖残基を示す)である。

2

上記ペプチドスぺーサ一の好ましい例としては、 Gly—Phe— Leu—Glyを挙げることがでさる。

上記糖残基の好ましい例としては、グルクロン酸、ゥロン酸、ァスコルビン酸、シアル酸、ヒアル酸、ヒアロウロン酸等の糖類の糖残基を挙げることができる。また、上記有機酸残基の好ましい例としては、リンゴ酸、クェン酸、シユウ酸、マロン酸、コハク酸等の有機酸類の有機酸残基を挙げることができる。

これらのァシル基とのエステルやアミド結合、およびスぺーサーペプチドは、体内のエステラーゼ、アミダーゼ、カテブシン'ぺプチダーゼによって加水分解され、元の薬剤キヤノロールを放出する。

本発明においては、 PDを用いることによって、キヤノロールをより効率的にその作用部位に送達せしめ、あるいはより容易に親油性の剤型を作製することができるため好ましい。

[0027] 本発明の化粧品においては、追カ卩の成分としてベータカロテンのようなカロテン、トコフエロール、ビタミン Cおよびその誘導体、メラニン、クロロフィル、リグ-ン、フチン酸、コウジ酸、 BHT (ブチルヒドロキシトルエン）を含有してもよい。ベータカロテンおよび Zまたはトコフエロールを含有するものが好まし、。

力かる化粧品成分としては、例えば賦形剤、香料、色材、他の有効成分などがあげられる。

前記賦形剤としては、たとえばォリーブ油、ミツロウ、ラノリン、キャンデリラロウ、スクヮラン、パラフィン、ステアリン酸、セタノール、ミリスチン酸オタチルドデシル、トリ（カプリル'力プリン酸)グリセリンなどの油脂類;アルギン酸ナトリウム、デキストリン、カルボンキシメチルセルロースナトリウム、カノレボキシビニノレポリマー、ポリビニルアルコールなどの水溶性高分子化合物；プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどの多価アルコール類；ブドウ糖、ソルビトール、マルチトールなどの糖類；ソルビタンモノステアリン酸エステル、ポリオキシエチレングリセリンモノステアリン酸エステルポリオキシエチレンノユルフェ-ルエーテルなどの界面活性剤などがあげられ、これらの成分は単独でまたは 2種以上を混合して用いられる。

[0028] 1つまたは複数の香料がそれらの嗜好性を高めるために本明細書の実施形態として推奨される。いずれかの天然または合成フレーバーを本発明に用い得る。例えば、 1つまたは複数の植物および Zまたは果実フレーバーを本発明に用い得る。本発明にお、ては、力かるフレーバーは合成または天然フレーバーであってよ!/、。

の組み合わせは好まし、。

また、香料は多様なフレーバーの混合物を含むことができる。所望する場合、香料におけるフレーバーを乳化液滴に形成することができ、それはその後飲料組成物または濃縮物に分散させる。典型的に、香料は濃縮物または抽出物として、または合成的に生成されたフレーバーエステル類、アルコール類、アルデヒド類、テルペン類、セスキテルペン類などの形態にぉ、て簡便に入手可能である。

[0029] 前記色材としては、たとえば赤色 2号、青色 1号などのタール系色素、タルク、マイ力、酸ィ匕チタンなどの無機色素などがあげられる。

また、前記他の有効成分は、本発明の化粧品の用途に応じて適宜選択されるが、力かる有効成分の具体的としては、たとえばビタミン E、ビタミン C、ビタミン Dなどのビタミン類;カンゾゥ抽出物、アロエ抽出物、ブラセンターなどの動植物抽出成分;ジブチルヒドロキシトルエンなどの抗酸化剤；ィプシロンアミノカプロン酸、トラネキサム酸などの抗プラスミン剤；パラメトキシ桂皮酸ェチルへキシルエステル、ォキシベンゾンなどの紫外線吸収剤などがあげられる。

[0030] これら化粧品成分の各配合量は目的とする化粧品によって異なり、用途に応じて適宜調整されるのが好ましい。

[0031] また、本発明の化粧品の形態の例としては、クリーム、錠剤、カプセル、油剤化製剤、水溶性薬剤（水可溶化物）またはェマルジヨンが挙げられる。

[0032] 本発明の抗炎症剤または癌予防剤に加重して、各種食品成分を含む組成物、すなわち食品は、キヤノロールを含むことによって、抗癌作用および Zまたは抗炎症作用を有する。また、本発明の食品は、キヤノロールとともに、少なくとも 1種の食品成分を含む。食品成分の例としては、タンパク質、炭水化物、脂肪、ビタミンおよびミネラルが挙げられる。

ビタミンおよびミネラルの非限定的な例としては、ナイァシン、チアミン、葉酸、パントテン酸、ビ才チン、ビタミン A、ビタミン C、ビタミン B、ビタミン B、ビタミン B、ビタミン

2 3 6

B 、ビタミン D、ビタミン E、ビタミン K、鉄、亜鉛、銅、リン、ヨウ素、クロム、モリブデン

12

、およびフッ化物が挙げられる。好ましくは、さらにビタミンまたはミネラルが利用される場合、ビタミンまたはミネラルは、ナイァシン、チアミン、葉酸、ヨウ素、ビタミン Α、ビタミンじ、ビタミン Β、ビタミン Β 、ビタミン D、ビタミン E、鉄、亜鉛およびカルシウムか

6 12

ら選択される。好ましくは、少なくとも 1つのビタミン力ビタミン C、ビタミン B、ビタミン

6

B 、ビタミン E、パントテン酸、ナイァシン、およびピオチンの中から選択される。また

12

、好ましくは当該組成物はビタミン C並びにビタミン B、ビタミン B 、ビタミン E、パンテトン酸、ナイァシン、およびピオチン力選択される 1つまたは複数の他のビタミン類を含む。

[0033] 本発明の食品は、炭水化物甘味料並びに天然及び Z又は人工のノンカロリー Z低カロリー甘味料を包含する、 1つまたは複数の甘味料の有効量を含有することができる。しかも通常含有する。本発明の飲料に使用される甘味料の量は典型的に、使用される特定の甘味料と望ましい甘味強度によって決まる。ノンカロリー Z低カロリー甘味料について、この量は、個々の甘味料の甘味強度によって変化する。

本発明の食品は、いかなる炭水化物甘味料、好ましくは単糖類、及び Z又は-糖類によって甘味付けすることができる。甘味付けられた飲料は典型的に、甘味料約 0 . 1 %〜約 20%、最も好ましくは約 6%〜約 14%を含む。これらの糖は、固形、又は液体の形状で含有され得るが、典型的に、好ましくはシロップ剤、最も好ましくは高フルクトースコーンシロップ剤のような濃縮シロップ剤として飲料中に組み込まれる。本発明の飲料を調製するためには、これらの糖甘味料は、ある程度までは例えば、フルーッジュース構成成分及び Z又はフレーバ等の飲料のその他の構成成分によって提供することができる。

[0034] (実施例）

実施例（1)胃炎抑制作用に関する作用。

6週齢スナネズミに対し、 MNU (発癌剤の N—メチルニトロソ'ゥレア）を 10 ppm含む飲料水を一週間与え、 Q ヽでピロリ菌（Helicobacter pylori. ATCC 43504株）を経口感染させる群、あるいは先にピロリ菌 1 X 10⁸個 CFUを感染後、 MNIX10 ppmを 1週間投与の)系において、マウス用 AIN— 93G飼料中のキヤノロールが重量比 0.1%になるようにした群 (キヤノロール食餌投与群）と同じ飼料組成のキヤノロールなしの普通食投与群を作成し、 52週にわたり飼育実験した（X. Cao et al, Jpn. J. Cancer Res., 93, 12 93 - 1298 (2002)、 N. Shimizu, et al, Cancer Res., 60, 1512— 1514 (2000) )。スナネズミは群 10匹を供試した。

その結果、 12週間キヤノロール入り食餌で飼育したスナネズミの摘出胃の病理学検討では、図 2に示すとおり (A)のキヤノロール食群では (B)の普通食群より、胃上皮の炎症像が著明に抑えられた。このことによりキヤノロールに顕著な抗炎症作用があることが明らかになった。

[0035] 実施例（2)キヤノロールによる炎症局所にみられる 8—ォキソデォキシグアノシン (8— OHdG)の生成抑制

8 OHdGは生体内で炎症性細胞由来の活性酸素を生ぜしめ、該活性酸素が DNA と反応する結果生ずる炎症性障害のマーカーの一つである。実施例（1)と同様な条件で、 12週後に各群の胃の摘出標本に対して抗 8 OHdG抗体を用いて、 8 OHdG の生成量を通常の酵素抗体免疫法で検討したところ、表 1に示すとおり、キヤノロール力 OHdGの生成に対して抑制作用を示す一方、抗菌作用は認められなかった。したがって、キヤノロ一ルカ 8— OHdGの生成に対する抑制作用を有することから、抗炎症作用、すなわち胃炎の抑制作用を有することが明らかになった。

[0036] [表 1] 表 1 . 各群のピロリ菌感染スナネズミ胃組織における 8— O H G生成およぴ半胃中のピロリ菌数（C F U)

8-OHdG抗原量 (比）ピロリ菌 CFU/半胃キヤノロ一ル群 19.6±5.5* 4.42 ±0.2 炎症対照群 (キヤノ 29.8 ± 7.6 4·54±0.3 ロールなし）

*印は Pく 0.05で有意であることを示す。

[0037] 実施例（3)ピロリ菌感染スナネズミ胃組織における好中球の浸潤と過形成の抑制の検討

上記実施例 (1)の 12週投与後の標本を作成し、通常のへマトキシリン'ェォシンの染色後、胃標本を作成し、顕微鏡下にて評価した。その結果を表 2に示した。

[0038] [表 2] 表 2 . 各群のピロリ菌感染スナネズミ胃組織における好中球浸潤と過形成グループ（各好中球浸潤過形成 n=10) 前胃胃体部前胃胃体部キヤノロール群 1.2±0.4* 0.9±0.2* 0.7±0.2* 炎症対照群（キヤ 2.9±0.3 1.5±0.1 2.2 ±0.3 1.2±0.1 ノロールなし）

*印は Pく 0.01で有意であることを示す。 [0039] 表 2に示すとおり、前胃、胃体部ともにキヤノロール食餌投与群の方が有意 (P< 0.01 )に胃炎を抑えた。

[0040] 実施例 (4)ピロリ菌感染胃病変におけるシクロォキゲナーゼ 2 (COX-2)の誘導と誘導型 NO合成酵素 (iNOS)の酵素活性定量

上記実験例（1)の 12週後の標本を用い、実施例（2)に準じ、酵素抗体法により両酵素蛋白の発現量を定量した。なお、炎症時に誘導される COX— 2および iNOSは炎症反応を発現するための代表的な酵素である。すなわち、 COX— 2はプロスタグラジン Eなどのプロスタノイド系の炎症メディエーターを、また iNOSは一酸化窒素 (NO)を

2

生成するところ、前記炎症メディエーターおよび NOは、いずれも炎症を惹起する本体である。さらに炎症の場に生成する活性酸素 0—と NOの両者は直ちに反応し、より

2

化学反応性の強、パーォキシナイトライト（ONOCT)となる (後述)。

[0041] 図 3Aが COX— 2、図 3Bが iNOSの免疫染色後の病理所見である。それら各々の抗体を用いた免疫染色から両酵素を定量すると表 3のようになる。

[0042] [表 3] 表 3 . ピロリ菌感染モデルによる炎症性酵素の誘導とキヤノロール食による抑制

前胃胃体部

グループ COX-2 ― iNOS ― COX-2 iNOS _ キヤノロ一ノレ食餌 0.9±0.2* 0.9±0.1* 0.6±0.2* 0.5±0.1* 投与群 ( n =10)

炎症対照群 (キヤノ 2.2±0.2 1.7±0.2 1.0±0.2 0.8±0.2 ロールなし）

— ( n二 10)

* 印は、上群と下群の間の値に有意差（Pく 0.01) あ^

[0043] 実施例（5)キヤノロールのマクロファージからの NO生成の抑制

次に、炎症性に浸出してくる腹腔マクロファージに対し、 in vitroで細菌（大腸菌）外膜リポ多糖 (LPS) (1 g/ml)とインターフェロン 'ガンマ一 0. 1 g/ml)を処理し、それによりマクロファージから放出される炎症メディエーターである NO量を NO—と NO

3 2

—として、常法 (グリース法）を用い定量した (著者名： Stuehr DJ, et al, J. Exp. Med., 1 69, 1543-55 (1989) (図 4)。即ち、 6週齢の雌性 BALB/Cマウス（SPF)に対し 10%プロテオースペプトン 1 mlの腹腔内投与により滲出する腹腔滲出マクロファージを腹腔刺針により採取し、加熱非動化した 10%のゥシ胎児血清存在下に遠心分離し、洗浄し、プラスチックマイクロプレート（96穴）（住友ベークライト社製、 Cat No.MS— 8096F) に、腹腔マクロファージ（1 X 10⁵ cells/well)、 LPS (1 μ g/ml)とマウスインターフェロンガンマ（IFN— γ ) (1 g/ml)およびキヤノロール (5, 12.5, 25, 50, 100 M)を分注し、 24時間， 37°C, 5%CO 95%空気で培養し、上清中の亜硝酸および硝酸イオンを上述

2

グリース法により定量した。その結果を図 4に示した。なお、培地は RPMI— 1640に 10 %の非働化ゥシ胎児血清をカ卩えたものを用いた。また、対照として、 LPSのみ、あるいは LPSと IFN— yのみで処理し、キヤノロール無添力卩の群を用いた。縦軸は硝酸ィォンと亜硫酸イオンの総量である。

[0044] またこの時、キヤノロールのマクロファージの生存に与える影響をみたところ、概ね 1 00 Μ以下では無毒であり、キヤノロール有効範囲では 10〜100 Μであった (図 5) 。一方、キヤノロールは 800 Μ以上ではマクロファージに細胞毒性がある力その有効濃度域の 100 Μ以下では細胞毒性がなぐ薬剤としての使用に適することが明らかになつた（図 5)。

[0045] 実施例（6)キヤノロールのパーォキシナイトライトの毒力中和能

炎症局所では炎症反応の一環としてパーォキシナイトライト（ONOCT)が過剰に生成し、それによる生体の細胞に対する毒性が病因論の一つでもある。この培養細胞に対する ΟΝΟΟ—の毒性に対して、キヤノロールが防御作用を示すことが考えられた。そこでヒト気道（HBE140)およびヒト胚腎臓上皮細胞 ΗΕΚ293を各々に（1 X 10⁵ cells /well)になるように 96穴マイクロプレート調整したパーォキシナイトライト（ONOCT)の発生試薬である同仁化学製の SIN- 1 [ (3— (4 morpholynyl) sydononimine HC1) ] (10 0 Μ)の存在下にキヤノロールがあり (5, 12.5, 25, 50, 100 Μ)またはキヤノロールなしのコントロール群を用いて、上記による細胞の生存率を ΜΤΤ法を用い定量した。その結果を図 6に示した。このとき、 SIN— 1の培養液中の略の半減期は 6時間であつた。

図 6に示すとおり、本願発明の抗炎症剤は、 12.5〜50 _iu Mで有意にONOO^_の腎上皮細胞 293に対する毒力中和作用を見出した。 [0046] 実施例（7)ピロリ菌感染と発癌剤メチルニトロソ尿素 (MNU)投与したスナネズミにおける胃癌発生抑制作用

実施例 (1)〜(4)に準じてスナネズミを 20週以上飼育し、 57週頃に麻酔下に開腹し、胃を摘出、固定し、そのパラフィン標本を常法により作成し、パラフィンセクションの切片を HE (へマトキシリン'ェォシン）により染色後検鏡した。その時 carcinoma (癌)と判定された例を、各スナネズミごとに計数した結果を表 4に示す。キヤノロール 0.1%含有食において、発癌率は、コントロール（キヤノロールなし）群の 41%に対し、キヤノロ一ル群は 15%と、有意に（64%)に抑制していた。これは図 6に示したサルモネラのパーォキシナイトライト ONOO—による変異原性抑制作用にみられる、 ONOO—による遺伝子損傷をキヤノロールが抑えることと軌を一にすることを示している。

[0047] [表 4]

表 4 キヤノロールの発癌抑 H効果 ^a) 発生腫揚 (Carcinoma) スナネズミ

実験群処置分化

匹数/群未^ヒ

型 m %) 抑制率

(%)

NpMHV→ Cannlol +

G 40 5 1 6/40 ( 15. 0) 64. 0

ΒΗΤ

H 33 Np-mw→ BUT 11 2 13/33 (39. 4) 6. 5

I 36 Νρ- Μί 15 0 15/36 (41. 7) 0

Broth→ Canolol +

J 5 0 0 0/5 (0) 一

BHT a⁾砂ネズミにピロリ菌 (Hp)感染後メチルニトロソゥレア (MNU)を lOppm飲料水で与え、その 1週間後に飼料中 0.1%キヤノロール入り試験食に切り替え飼育した。表は約 57週間後に解剖したマウスの胃の病理所見の数値ィ匕データ。

[0048] 実施例（8)

1 X 10⁸個 (CFU)のサルモネラ菌 TA102を無菌的に容器 (ビーカー)にとり、それに対し、培地中に ONOO—を 1〜800 /ζ Μになるように ONOO—を持続的に攪拌下に注入した（図 7Α)。経時的にサルモネラ菌の一定量をとり、平板寒天を含むシャーレで培養した。このとき変異株のみが選択的に生育する Amesの培地を用いた。図 7Bが、その時生ずる変異株である。 4 M以上で変異株が急速に生ずる力キヤノロールの 8 /z M以上存在下に、これら変異株は出現しな力つた（図 7C)。つまり、 ONOO—により生ずる DNA損傷とそれによる変異株の出現をキヤノロールが抑えることを示し、癌予防になると考えられた。

[0049] 以上はキヤノロールが発癌予防剤になることを in vivoおよび in vitroで示す例であるこれらの一連の実験より、キヤノロールの ONOO—による細胞毒性に対する防御力が明ら力となった。したがって、キヤノロールを含む組成物は、抗炎症剤、癌予防剤として用いることができる。

したがって、キヤノロールは生体に投与することによって、抗炎症剤、癌予防剤として医薬に用いられるば力りでなぐ化粧品、食品の成分としても用いることができる。以下に、キヤノロールを含む医薬、化粧品、食品の代表的な処方を示す。

[0050] 実施例（9)クリーム剤：キヤノロール含有抗炎症クリーム (軟膏）

通常の油脂（各種植物性 ·動物性）、ラノリン、ワセリン、ココナッツオイル、パーム油、ツバキ油、その他水素添加植物油脂、グリセリンなどにあるいはこれらの混合物に対し、通常用いられる抗酸化剤（例、 BHT: (2, 6—ジ十ブチル -4-メチルフエノール： t-ブチル化ヒドロキシトルエン）、あるいは α -トコフエロール、あるいはビタミン Cなどの誘導体などを 0.001〜0.1%、好ましくは 0.01%入れ、そのものにキヤノロールを 0.01〜5 .0%、好ましくは 0.3〜3.0%含有させたものを、皮膚などの患部に塗布し、塗り込み使用する。このとき、各種糖エステルなど乳化剤やレシチンおよび防腐剤等を適量加えることがでさる。

[0051] 実施例（10)

キヤノロール含有乳化液および溶液製剤、微量の抗酸化剤（例えば、アルコビン酸パルミチール誘導体、あるいはその PD、 BHTなど）を含む水溶液 10 mlに、キヤノロールをエタノールまたはプロパノール、またイソプロパノール 10 mlに対し 0.1〜10g溶解し、混和し、薬液とする。適量、加湿、超音波をカ卩えるとよい。このときキヤノロールはアルコール、またはその水溶液中に 0.1〜50%含有する。

[0052] 実施例（ 11 )油剤 (カプセルィ匕油剤）

キヤノロールを大豆油、ごま油、なたね油、ォリーブ油、中鎖脂肪酸、リノール酸、ッバキ油、けし油などに 0.1〜50%になるように溶解し油剤化できる。そのものをソフトゲルカプセル等に 1個あたりキヤノロールを 0.1〜0.5g充鎖する。そのカプセルを、 1日あたり 1〜10錠経口的に抗炎症剤として服用することができる。

[0053] 実施例（12)錠剤

キヤノロールを含有する錠剤として服用する。通常の日本薬局法に指定された錠剤用基材、乳糖、マルトース、各種デンプン、セルロース、キチン、キトサン、へミセル口ース、ポリビュルアルコール、ポリエチレングリコール、リン酸カルシウムなどに対し、 B HTなど上記の一般的抗酸化剤を 0.01〜0.1%含むエタノールに対し、キヤノロールを 1〜50%溶解したもの、あるいはキヤノロールそのものを錠剤用基材に添加、均一になるまで攪拌し、そのものを減圧乾燥しエタノールを除き、打錠して作成する。 1錠あたり 1〜500 mgのものを得る。治療、予防目的にはこの錠剤を 1日 3回毎食後に 3〜5 錠服用することができる。

[0054] 実施例（13)水溶性注射剤

キヤノロール 100 mlを 1 mlのアルコール（エタノールなど）に溶解し、その 50〜100倍量の蒸留水、生理食 PD水、 5%グルコース液、 8%重炭酸ソーダ水、マ二トール液、乳糖液、あるいはイントラリピッドなど高栄養補液、ビタミン混液、およびアミノ酸混液などの点滴用薬液、補液等に上記のキヤノロールを加え、注射剤とすることもできる。また、キヤノロールを各種ミセル化剤によりミセル、あるいはシクロデキストリン包合体となし、あるいはレシチン、スフインゴミエリン、 -ッコールなど糖エステルを加え乳化懸濁液となし、あるいはイントラリピッドなどの高カロリー補液に添加し、または水溶性注射とする。キヤノロールの濃度は lmlあたり、 l〜300mg、好ましくは 50〜80 mg/mlとして注射剤とすることもできる。

[0055] 実施例（14)デポ製剤

コレステロール、ラノリン、ワセリン、パーム油、その他上記実施例に示した各種固型油脂で、好ましくは 37°C前後で軟ィ匕する油脂に対し、上記実施例と同様にキヤノロ一ルを含有させ通常の直腸内留置の形状のものを作成し、腸溶型デポ製剤として用いることがでさる。

[0056] 実施例（15) キヤノロール溶液に賦形剤、香料、色材、他の有効成分を含有せしめ、適切な剤型に製剤化することによって、化粧品とする。

[0057] 実施例（16)

各種食品、飲料水、ドリンク剤、ビスケット類に BHTあるいはビタミン Cにカ卩えて、キヤノロールを前記食品に 0.01%〜2.0%含有した食品とする。該食品を摂取することにより発癌を抑制することができる。すなわち、該食品は癌の化学予防剤として用いる。

業十.の利用可能件

[0058] 本発明の抗炎症剤および癌予防剤、さらにこれらを含む医薬、化粧品および食品は、十分な抗炎症活性および Ζまたは癌予防活性を有する上に、製造しやすさ、製造コスト、生物活性、安全性、投与 *摂取のしゃすさにおいても、従来のものを上回る格別な効果を奏する。したがって、本発明は、医薬産業、化粧品産業および食品産業ならびに関連産業の発展に寄与するところ大である。

Claims

請求の範囲

4—ビュル一 2, 6—ジメトキシフエノール

またはそのプロドラッグを含む、抗炎症剤または癌予防剤。

[2] 胃 ·十二指腸炎、胃，十二指腸潰瘍、胃炎、気管支炎、リウマチ、肝炎、大腸炎、結膜炎、肺炎、膝炎、口内炎、咽頭炎および火傷力の 1種または 2種以上に対する処置のための、請求項 1に記載の抗炎症剤。

[3] 8—ォキソデォキシグアノシンの生成抑制、 COX— 2の活性阻害、 iNOSの活性阻害、 NOの生成抑制およびサイト力インの誘導の抑制の 1種または 2種によって炎症を抑制する、請求項 1または 2に記載の抗炎症剤。

[4] パーォキシナイトライトによる変異原性抑制によって発癌を予防する、請求項 1に記載の癌予防剤。

[5] さらに医薬用の賦形剤を含む、請求項 1〜4のいずれかに記載の抗炎症剤または癌予防剤。

[6] さらに化粧品成分を含む、請求項 1〜4のいずれかに記載の抗炎症剤または癌予防剤。

[7] 皮膚老化、細胞傷害および日焼け力の 1種または 2種以上に対する処置のための、請求項 6に記載の抗炎症剤または癌予防剤。

[8] クリーム、錠剤、カプセル、油剤化製剤、水溶性薬剤（水可溶化物）またはェマルジヨンの形態を有する、請求項 1〜7のいずれかに記載の抗炎症剤または癌予防剤。

[9] さらに食品成分を含む、請求項 1〜4のいずれかに記載の抗炎症剤または癌予防剤。