WO2007086597A1 - スラブ型電気泳動用ゲル - Google Patents

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WO2007086597A1
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slab
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PCT/JP2007/051651
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English (en)
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Inventor
Kenichi Mitsui
Original Assignee
Riken
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704—Details; Accessories
    • G01N27/44747—Composition of gel or of carrier mixture

Definitions

  • the present invention relates to a slab type electrophoretic gel that can be easily subjected to staining or plotting, for example, after electrophoresis, while holding the support of the gel and, optionally, the formwork.
  • polyacrylamide gels which have a plastic film as a support and are easy to handle
  • gels used for electrophoresis polyacrylamide gels, which have a plastic film as a support and are easy to handle
  • the product is easy to handle, it is used for horizontal plate electrophoresis, and since the electrophoresis apparatus used is large, it can be used with the slap electrophoresis gel that is usually used frequently. In comparison, it lacks versatility.
  • the gel after electrophoresis, the gel must be peeled off from the film with a special instrument in order to transfer it to the membrane, and the peeled thin gel is extremely difficult to handle.
  • Patent Document 1 discloses a precast type gel structure for electrophoresis.
  • Patent Document 2 discloses an electrophoresis support having improved adhesion to an electrophoresis gel film.
  • Patent Document 3 discloses a gel cassette for electrophoretic analysis used for measurement of DNA base sequence by electrophoresis.
  • Patent Document 4 discloses a gel support tube formed from a selectively permeable porous polymer used for electrophoresis (particularly two-dimensional electrophoresis).
  • Agarose gels are often used for nucleic acid electrophoresis, and low-concentration polyacrylamide gels are useful for separating large molecular weight proteins, but both have low gel strength and are difficult to perform normal slap electrophoresis.
  • Patent Document 1 JP 2004-132907 A
  • Patent Document 2 U.S. Pat.No. 4,415,428
  • Patent Document 3 Japanese Patent Laid-Open No. 10-239277
  • Patent Document 4 US Pat. No. 6,833,060 Specification Disclosure of Invention
  • the present invention provides a slab type electrophoresis gel that can be easily subjected to staining or blotting after electrophoresis, while holding the gel support and, optionally, the formwork.
  • the purpose is to provide.
  • a gel supported on one or both sides by a mesh-like member is rich in flexibility and strength. Furthermore, based on this, two gel frames, a mesh-like member arranged on one or both surfaces of the two gel frames, a spacer arranged between the gel frames, and a spacer width between the gel frames.
  • the present invention was completed by finding a slab-type electrophoresis gel comprising a running gel disposed on the surface and supported by a gel frame and a mesh-like member.
  • the present invention includes the following.
  • a slab-type gel for gel electrophoresis wherein the gel-like member for supporting the gel and the gel are integrally formed. gel.
  • a mesh-like member for supporting the gel is disposed on one or both sides of the slab gel used for gel electrophoresis.
  • the gel solution is gelled in a state where the gel solution is in contact with the mesh-like member.
  • a mesh-like member disposed on one or both surfaces of the two gel frames
  • a spacer disposed between the gel frames
  • a running gel arranged in the width of the spacer between the gel frames
  • a slab electrophoresis gel wherein the running gel is supported by the gel frame and a mesh-like member.
  • the polymer is a polymer selected from the group consisting of polyester, nylon, polypropylene, Teflon and polyethylene,
  • (1 3) a step of arranging a mesh-like member on one or both surfaces of two gel frames, a step of arranging a spacer between the gel frames, and aligning the two gel frames, and between the gel frames Producing a running gel across the width of the spacer,
  • the running gel is supported by the gel frame and the mesh-like member (7)
  • the method for producing a slab-type electrokinetic gel according to (7) is described.
  • FIG. 1 shows the preparation of a slab electrophoresis gel according to the present invention.
  • Figure 2 shows the creation of a mesh with formwork.
  • 5 Cutting plate
  • 6 Flat plate
  • 7a, 7b, 7c, 7d Double-sided tape
  • 8 Mesh cloth
  • 9a, 9b PET plate for spacers
  • Figure 3 shows the results of semi-drive lotting on PVDF membrane.
  • FIG. 4 shows the results of CBB staining.
  • Figure 5 shows the results of silver staining.
  • the gel for slab electrophoresis of the present invention is characterized in that a mesh-like member is disposed on a slab gel surface used for gel electrophoresis, and the gel is supported by them.
  • the present invention is a slab type gel provided for gel electrophoresis, wherein the mesh-like member for supporting the gel and the gel are configured in a body.
  • the mesh-like member for supporting the gel and the gel are configured in a body.
  • a slab electrophoresis gel according to the present invention comprises two gel frames 1a and lb, a mesh 2 arranged on one or both surfaces of the gel frames la and 1b, and a gel. Including spacers 3 a and 3 b arranged between frame 1 a and gel frame 1 b, and a running gel arranged in the width of the spacer between gel frame 1 a and gel frame 1 b. .
  • the size of the gel frame in the vertical and horizontal directions is preferably the same as the corresponding size of the glass plate for a slab type electrophoresis apparatus.
  • the material of the gel frame is not particularly limited, and examples thereof include glass and polymers (for example, polyethylene terephthalate (PET) and other polyesters, Teflon, nylon, polypropylene, and polyethylene).
  • PET polyethylene terephthalate
  • One gel frame has a window cut out according to the migration surface, specifically according to the number of wells of the stacking gel and the migration distance of the sample.
  • the other gel frame has a cut in accordance with the size of the comb in addition to the same cutout window as above (gel frame 1 b in FIG. 1) 0
  • the term “mesh-like member” means 1) physically supporting the gel, and 2) allowing the sample subjected to electrophoresis to selectively pass in the surface direction during operations such as plotting. It is not particularly limited as long as it is a planar member having a fine gap. Furthermore, it is more preferable that it is made of a material that does not substantially pass an electric current applied during electrophoresis or the like because there is no risk of hindering sample migration. As an example of a more preferable mesh-like member, a mesh, a porous material, or a nonwoven fabric made of a material that does not substantially pass an electric current applied during electrophoresis or the like can be given.
  • the mesh-like member to be selected is appropriately selected depending on the purpose and method of gel electrophoresis, but the mesh is most preferable from the viewpoint of the efficiency of surface plotting, and from the viewpoint of maintaining the shape of the gel.
  • a porous membrane made of a material such as foam plastic is most preferable.
  • the mesh-like member is formed integrally with the gel.
  • the mesh-like member may be arranged in the center of the gel or may be arranged on at least one surface of the gel. In terms of ease of production and ease of use, it is generally more preferable that the mesh-like member is disposed on at least one surface of the gel.
  • the mesh-like member is arranged on the gel surface means that the mesh-like member is arranged near the gel surface (that is, the mesh-like member is substantially arranged on the gel surface). State that can be regarded as being present).
  • the method for integrally configuring the mesh-like member and the gel is not particularly limited.
  • the gel solution is gelled (hardened) in a state where the gel solution and the mesh-like member are in contact with each other. Therefore, it can be easily manufactured.
  • the mesh-like member When the mesh-like member is used in combination with a gel frame, the mesh-like member is adjacent to the gel on the inner or outer surface of the gel frame, preferably the inner surface on which the running gel is formed. Arranged.
  • the mesh-like member can be placed on one or both of the two gel frames.
  • the number of mesh-like members is one or more, and a plurality of mesh-like members may be stacked as long as they do not adversely affect electrophoresis or plotting.
  • the mesh-like member is effective for supporting the gel together with the gel frame, and also enables the transfer of proteins and peptides to the membrane for plotting.
  • the mesh-like member has an opening that allows the protein peptide in the sample to be subjected to electrophoresis to permeate, and prevents the produced gel from permeating. Opening means pores of a large size to a fine size, and if it is porous, it can usually be defined by the pore size.
  • the size is not particularly limited. For example, 0.2 ⁇ n! ⁇ 4,000 m, preferably 5.0 / m to 4,000 / m, particularly preferably 100 ⁇ n! If the mesh-like material is porous, the average pore size is 0.22 ⁇ ⁇ ! It can be set to ⁇ 0.45 ⁇ or more.
  • the thickness of the mesh-like member is, for example, 50 ⁇ to 2,500 / ⁇ , preferably 60 ⁇ ! ⁇ 200 ⁇ ⁇ .
  • the material of the mesh-like member may be any material that imparts the above characteristics, such as cloth, polymer (for example, polyethylene Examples include phthalate (PET) and other polyesters, nylon, polypropylene, Teflon and polyethylene), and PET is particularly preferable.
  • PET polyethylene
  • PET polyethylene
  • PET polypropylene
  • PET is particularly preferable.
  • a commercially available mesh cloth such as PET105 (material: PET, mesh opening: 105 ⁇ , mesh 145 / inch, manufactured by Semitec Co., Ltd. (Osaka, Japan)) is used. can do.
  • the mesh-like member and the gel are preferably configured in a body.
  • the spacer can be arranged between the gel frames to prepare a space in which the running gel is formed.
  • the thickness of the spacer is the thickness of the running gel.
  • the material of the spacer may be the same as or different from the gel frame, such as glass or polymer.
  • the running gel or the stacking gel is, for example, a polyacrylamide gel prepared from acrylamide and ⁇ , ⁇ , and -methylenebisacrylamide.
  • the acrylamide concentration of the running gel can be appropriately selected according to the molecular weight of the peptide protein in the sample to be subjected to electrophoresis.
  • the running gel is not limited to a gel having a uniform atalyl concentration, but may be a gradient gel having a gradient in acrylamide concentration.
  • the size and thickness of the gel of the present invention are not particularly limited, and may be any size and thickness depending on the purpose of use.
  • the shape of the gel is usually a quadrangle (for example, a rectangle and a square), and includes a shape of an elongated strip (for example, a width of 1 to 10 mm).
  • a mesh-like member is disposed on one or both surfaces of two gel frames.
  • the mesh-like member can be fixed to the gel frame using, for example, double-sided tapes 4 a, 4 b, 4 c, and 4 d shown in FIG.
  • a spacer is placed between the gel frames on which the mesh-like members are arranged, and the two gel frames are joined together, so that a running gel (and a stacking gel if necessary) is used.
  • the formwork is prepared.
  • the spacer can be fixed to the gel frame and the mesh-like member with, for example, a double-sided tape.
  • the mold is placed on a glass plate for a slab type electrophoresis apparatus. Pinch and pour the running gel solution across the width of the formwork spacer.
  • the side piece and the bottom should be sufficiently sealed with waterproof tape, and both sides should be pressed with double clips.
  • the running gel solution can be poured directly or across the width of the formwork spacer using, for example, a Pasteur pipette. In this way, the slab electrophoresis gel according to the present invention can be produced by solidifying the running gel in the mold.
  • a stacking gel solution can be poured on top of the runging gel, and a suitable comb can be inserted at that time to prepare a stacking gel.
  • the stacking gel solution can be poured in the same manner as the running gel solution described above. After solidification, the comb may be pulled out of the gel or held as it is. The well formed at this time is used as the electrophoresis sample well.
  • the slab electrophoresis gel according to the present invention thus produced can be removed from the glass plate for a slab electrophoresis apparatus and wrapped in Saran wrap, for example, and stored refrigerated until use. At the time of use, a suitable container is filled with water, and the slab electrophoresis gel according to the present invention can be quickly and once again sandwiched in a glass plate for a slab electrophoresis apparatus in water.
  • the slab electrophoresis gel according to the present invention produced as described above, one or both surfaces of a running gel (and a stacking gel as required) are supported by a mesh-like member. Furthermore, the support is strengthened by a gel frame as needed. As described above, since the gel is supported by the mesh-like member and / or the gel frame, the slab-type electrophoresis gel according to the present invention has higher physical strength than the slab-type gel that is usually used, It is easy to handle.
  • the gel solution is gelled (hardened) in a state where the gel solution and the mesh-like member are in contact with each other, thereby forming a mesh-like on one or both surfaces of the slab type gel. It is possible to adopt a configuration in which the members are fixed (integrated). According to this configuration, the gel penetrates into the fine gaps of the mesh-like member. Since the gel and the mesh-like member are firmly fixed, there is also an effect that the mesh-like member is not likely to peel from the gel surface. .
  • the slab electrophoresis gel according to the present invention does not peel off the gel from the slab electrophoresis apparatus glass plate as in the prior art. It can be removed and used as it is for staining (for example, coomasie brilliant blue (CBB) staining or silver staining) or plotting.
  • staining for example, coomasie brilliant blue (CBB) staining or silver staining
  • CBB coomasie brilliant blue
  • the slab electrophoresis gel support that is, mesh-like member
  • the slab electrophoresis gel according to the present invention when supplied as a precast gel, unlike a commercially available precast gel, the gel is not sandwiched between glass plates but is surrounded by a gel frame. As a result, the cost can be kept low.
  • the slab-type electrophoresis gel according to the present invention can be supplied in close contact with a membrane (for example, PVDF membrane) for putting through a gel frame, from electrophoresis to plotting. Operation is easier and easier.
  • the slab type gel (gel for slab type electrophoresis) in the present invention refers to a plate-like gel, and the surface of the gel during electrophoresis is in an arbitrary direction (generally, horizontal direction or vertical direction). It can be used by being fixed to.
  • the gel of the present invention When storing the gel of the present invention, for example, it is packaged with a polymer film, or sealed in a polymer bag, and stored in a cool and dark place under sufficient humidity not to dry.
  • Double-sided tapes 7 a, 7 b, 7 c, 7 d with a width of l cm were applied to the four edges of the rectangular cutout window of the flat plate 6.
  • 10 cm (W) x 9 cm (H) mesh cloth 8 material: PET, mesh opening 105 / im, mesh 145 / inch, product name PET105, Semitech, Osaka
  • flat plate 6 Affixed to double-sided tapes 7a, 7b, 7c, and 7d so as to close the rectangular window along both sides and bottom of the paper.
  • a gel supported by a mesh with a mold (hereinafter referred to as “mesh gel with a mold”: slab electrophoresis gel according to the present invention) was produced. After gelation, the glass plate was removed, the mesh gel with mold was taken out, wrapped in Saran wrap, and refrigerated until use. At the time of use, water was put in a suitable container, and the mesh gel with a mold was quickly put in close contact with the glass plate for a slab type electrophoresis apparatus in water.
  • a gel plate with a mesh gel with a mold or a regular gel without a mesh with a mold (hereinafter referred to as “reference gel”) on a mini-slab type electrophoresis apparatus (SE-8010, SIC Marisol, Tokyo)
  • the equipped gel plate was set.
  • a mesh gel with a mold or a control gel was first immersed in a CBB staining solution having the composition shown in Table 5 below and shaken at room temperature for 30 minutes.
  • a CBB decolorizing solution having the composition shown in Table 6 below was added to a mesh gel with a mold or The procedure of immersing the control gel, adding Kimwipe and shaking at room temperature for 15 minutes, changing to a new decolorizing solution, and then changing the solution every time shaking for 30 minutes was repeated several times.
  • a mesh gel with a mold or a control gel was first soaked in 50% methanol / 0.375 M NaCl / 10% glycerol and shaken at room temperature for 1 hour. Next, a mesh gel with a mold or a control gel was immersed in a solution C of a silver staining solution having the composition shown in Table 7 below for 15 minutes.
  • Glycerol 10ml strength 13 made to 100ml with ultra pure water W After washing with water for 5 minutes, a mesh gel with a mold or a control gel was immersed in a developer solution D having the composition shown in Table 8 and shaken until an image appeared (about 15 minutes). After the appearance of the image, lightly rinse the meshed mesh gel or control gel with water, and store in 10% EDTA / 40% methanol / 10% acetic acid / 0, 375M NaCl / 10% glycerol mouth. did.
  • Figures 3 to 5 show photographs comparing the results of semi-drive blotting, CBB dyeing and silver dyeing on PVDF membranes as described above for the mesh gel with formwork and the control gel. Show.
  • Figure 3 shows the results of semi-drive lotting on PVDF membrane.
  • the photograph in ( a ) shows the blotting of the control gel.
  • the photograph (b) shows the blotting of the mesh gel with formwork. All the electrophoretic images are molecular weight markers (Precision Prestinma).
  • FIG. 4 shows the results of CBB staining.
  • the photograph in (a) shows the CBB staining result of the control gel.
  • each electrophoresis image of 1, 2, 8, 9, 10 lanes from the left side is a molecular weight marker (Precision Prestained marker), while from the left side, 3, 4, 5, 6, 7 lanes.
  • Electrophoretic images are protein samples of various concentrations (100,000 xg centrifugation supernatant from mouse brain).
  • the migration images of 1, 2, 7, 8, 9 lanes from the left are molecular weight markers (precise prestained markers), while the swimming images of 3, 4, 5, 6 lanes from the left Protein samples of various concentrations (100,000 xg centrifugation supernatant from mouse brain).
  • Figure 5 shows the results of silver staining.
  • the photograph (a) shows the result of silver staining of the control gel.
  • the photograph (b) shows the result of silver staining of the mesh gel with formwork.
  • the migration images of 1, 5, and 6 lanes from the left are molecular weight markers (Precision Prestinma), while the migration images of 2, 3, and 4 lanes are from the left.
  • Protein sample 100,000 xg centrifugation supernatant from mouse brain).
  • control gel ordinary gel
  • the mesh gel with formwork gel for slab electrophoresis according to the present invention
  • a slab electrophoresis gel that can be easily subjected to staining or plotting while holding a support and optionally a formwork after electrophoresis.

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Abstract

この発明は、ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルであって、当該ゲルを支持するためのメッシュ様部材と当該ゲルとが一体的に構成されてなることを特徴とするスラブ型電気泳動用ゲルに関する。ゲルとメッシュ様部材の一体構造を保持したまま、染色またはブロッティングに供することができるという利点を有する。

Description

スラブ型電気泳動用ゲル
技術分野
本発明は、 例えば電気泳動後、 ゲルの支持体、 および場合により型枠、 を保持 したまま、 容易に染色又はプロッティングに供することができるスラブ型電気泳 動用ゲルに関する。
明 背景技術
従来、 分子生物学分野では、 タンパク質や書核酸を移動度の違いによって分離す る電気泳動が行われている。 当該電気泳動では、 分子篩としてゲルが用いられて いる。.
電気泳動に使用するゲルとして、 ポリアクリルアミ ドゲルをプラスチックフィ ルムを支持体として固着させ、 取り扱い易くしたものが既に市販されている。 し かしながら、 当該製品は、 取り扱い易いものの、 水平平板型電気泳動用であり、 また使用する泳動装置も大型のものであるので、 通常頻繁に使用されているスラ プ型電気泳動用ゲルと比較して、'汎用性に欠ける。 また、 電気泳動後、 メンプレ ンに転写するには特殊な器具でゲルをフィルムから剥離させなければならず、 そ の剥離した薄ゲルは極めて扱いにくレ、。
また、 スラブ型電気泳動用ゲルとして市販されているプレキャストゲルパッケ ージは、 品質が一定で、 保存性も良い。 しかしながら、 当該ゲルはガラス板に挟 んだ状態で供給されるので、 コストがかかる。 特許文献 1には、 プレキャスト型 の電気泳動用ゲル構造体が開示されている。
一方、 特許文献 2には、 電気泳動用ゲルフィルムに対する接着が改善された電 気泳動用支持体が開示されている。また、特許文献 3には、電気泳動法による DNA 塩基配列の測定に用いる電気泳動分析用ゲル ·カセットが開示されている。
さらに、 特許文献 4には、 電気泳動（特に、 2 次元電気泳動）に使用する選択的 に透過性な多孔性ポリマーから形成されたゲル支持体チューブが開示されている。 ァガロースゲルは核酸の電気泳動に多用され、 低濃度のポリアク リルアミ ドゲ ルは大分子量のタンパク質の分離に有用だが、 共にゲル強度が低く、 通常のスラ プ型電気泳動の実施は困難である。
従来、 電気泳動後、 ゲルの支持体、 および場合により型枠、 を保持したまま、 容易に染色又はプロッティングに供することができるスラブ型電気泳動用ゲルは 知られていなかった。
特許文献 1 特開 2004-132907号公報
特許文献 2 米国特許第 4, 415, 428号明細書
特許文献 3 特開平 10-239277号公報
特許文献 4 米国特許第 6， 833， 060号明細書 発明の開示
本発明は、 上述した実情に鑑み、 例えば電気泳動後、 ゲルの支持体、 および場 合により型枠、 を保持したまま、 容易に染色又はブロッテイングに供することが できるスラブ型電気泳動用ゲルを提供することを目的とする。
上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、 まず、 メッシュ様部材により 片面又は両面を支持されたゲルが柔軟性と強度に富むことを見いだした。 さらに それを基に、 2つのゲル枠と該 2つのゲル枠の一方又は双方の面に配置したメッ シュ様部材とゲル枠間に配置したスぺーサ一とゲル枠間のスぺーサ一幅に配置し たランニングゲルとを含み、 該ランニングゲルがゲル枠及びメッシュ様部材によ り支持されたスラブ型電気泳動用ゲルを見出し、 本発明を完成するに至った。 本発明は以下を包含する。
( 1 ) ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルであって、 当該ゲルを支持するた めのメッシュ様部材と当該ゲルとが一体的に構成されてなることを特徴とするス ラブ型電気泳動用ゲル。
( 2 ) ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルの一方又は双方の面に、 当該ゲル を支持するためのメッシュ様部材が配置されてなることを特徴とする （1 ) 記載 のスラブ型電気泳動用ゲル。
( 3 ) ゲル溶液とメッシュ様部材とを接触させた状態で当該ゲル溶液をゲル化 することにより、 スラブ型ゲルの一方又は双方の面にメッシュ様部材が固着され ていることを特徴とする、 （2) 記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
(4) 上記ゲルの幅が 1〜10 匪であることを特徴とする、 （1) 記載のスラブ 型電気泳動用ゲル。
( 5 )上記メッシュ様部材の目開きが 0.2/ m〜4， 000 μ mであることを特徴とす る、 （1) 記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
(6) 上記メッシュ様部材の材質がポリマーであることを特徴とする、 （1) 記 載のスラブ型電気泳動用ゲル。
(7) 2つのゲル枠と、
前記 2つのゲル枠の一方又は双方の面に配置したメッシュ様部材と、
前記ゲル枠間に配置したスぺーサ一と、
前記ゲル枠間のスぺーサ一幅に配置したランニングゲルと、
を含み、 前記ランニングゲルが前記ゲル枠及ぴメッシュ様部材により支持されて いることを特徴とする、 スラブ型電気泳動用ゲル。
(8) 上記ランニングゲルの上部に、 スタツキングゲルをさらに含むことを特 徴とする、 （7) 記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
( 9 )上記メッシュ様部材の目開きが 0.2 m〜4, 000 μ mであることを特徴とす る、 (7) 記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
(1 0) 上記メッシュ様部材の材質がポリマーであることを特徴とする、 （7) 記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
(1 1) 上記ポリマーがポリエステル、 ナイロン、 ポリプロピレン、 テフロン 及びポリエチレンから成る群から選択されるポリマーであることを特徴とする、
(1 0) 記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
(1 2) 上記ゲルの幅が 1〜10 mmであることを特徴とする、 （7) 記載のスラ ブ型電気泳動用ゲル。
(1 3)2つのゲル枠の一方又は双方の面にメッシュ様部材を配置する工程と、 前記ゲル枠間にスぺーサーを配置し、 前記 2つのゲル枠を合わせる工程と、 前記ゲル枠間のスぺーサ一幅にランニングゲルを作製する工程と、
を含み、 前記ランニングゲルが前記ゲル枠及びメッシュ様部材により支持されて いることを特徴とする、 （7 ) 記載のスラブ型電気^動用ゲルの製造方法。
( 1 4 ) 上記ランニングゲルの上部に、 スタツキングゲルを作製する工程をさ らに含むことを特徴とする、 （1 3 ) 記載の製造方法。
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願 2006-16852 号の明細書 およぴノまたは図面に記載される内容を包含する。 図面の簡単な説明
図 1は、 本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルの作製を示す。 （1 a、 l b ：ゲ ノレ枠； 2 ：メッシュ ； 3 a、 3 b : スぺーサー； 4 a、 4 b、 4 c、 4 d ：両面 テープ）
図 2は、 型枠付メッシュの作製を示す。 （5 ：切込プレート ； 6 .：平プレート ； 7 a、 7 b、 7 c、 7 d ：両面テープ； 8 ： メッシュクロス ； 9 a、 9 b ： スぺ 一サー用 PETプレート ；）
図 3は、 PVDF膜へのセミ ドライブロッテイングの結果を示す。 （（a) ：対照ゲル のプロッティング、 (b) ：型枠付メッシュゲノレのブロッティング）
図 4は、 CBB染色の結果を示す。 （（a) ：対照ゲルの CBB染色結果、 （b) ：型枠付 メッシュゲルの CBB染色結果）
図 5は、 銀染色の結果を示す。 （（a) ：対照ゲルの銀染色結果、 （b) ：型枠付メッ シュゲルの銀染色結果） 発明を実施するための最良の形態
以下、 本発明を詳細に説明する。
本発明のスラブ型電気泳動用ゲルは、 ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲル面 にメッシュ様部材を配置し、 それらにより、 ゲルが支持されていることを特徴と する。
すなわち、 本発明は、 ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルであって、 当該ゲ ルを支持するためのメッシュ様部材と当該ゲルとがー体的に構成されてなること を特徴とするスラブ型電気泳動用ゲルを特徴とする。
本発明において、 メッシュ様部材は、 ゲルの一方又は双方の面に配置される。 本発明のゲルを、 図面を参照しながら、 さらに具体的に説明する。 本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、 図 1に示すように、 2 つのゲル枠 1 a、 l bと、 ゲル枠 l a、 1 bの一方又は双方の面に配置したメッシュ 2と、 ゲ ル枠 1 aとゲル枠 1 bとの間に配置したスぺーサー 3 a、 3 bと、 ゲル枠 1 aと ゲル枠 1 bとの間のスぺーサ一幅に配置したランニングゲルとを含む。
なお、 以下の説明ではゲル枠を設けたもののみを詳述するが、 ゲル枠及ぴスぺ 一サーを持たずメッシュ様部材のみを有するゲルとすることもでき、 その製法は 本法に準じる。 また、 以下の説明ではメッシュ様部材のうちメッシュを用いる場 合を詳述するが、 それ以外の素材を利用する場合も本法に準じる。
ゲル枠の縦方向及ぴ横方向のサイズは、 スラブ型電気泳動装置用ガラスプレー トの対応するサイズと同等であることが好ましい。 ゲル枠の材質としては、 特に 限定されないが、 ガラス、 ポリマー（例えば、 ポリエチレンテレフタラート（PET) 及びその他のポリエステル、 テフロン、 ナイロン、 ポリプロピレン並びにポリェ チレン）等が挙げられる。 一方のゲル枠は、泳動面に合わせて、具体的にはスタツ キングゲルのゥエルの数に準じた幅とサンプルの泳動距離とに合わせて切り抜い た窓を有する。 また、 他方のゲル枠は、 上記と同様の切り抜き窓の他に、 コーム の大きさに合わせた切込を有する（図 1のゲル枠 1 b ) 0
本発明において 「メッシュ様部材」 とは、 1 ) ゲルを物理的に支持するととも に、 2 ) 電気泳動に供されたサンプルがプロッティング等の作業の際に面方向に 選択的に通過可能な微細な隙間を有する面状の部材であれば特に限定されるもの ではない。 さらに、 電気泳動等の際に印加される電流を実質的に通すことのない 材料から構成されるものが、 サンプルの泳動を阻害する虞がなくより好ましい。 より好ましいメッシュ様部材の一例としては、 電気泳動等の際に印加される電流 を実質的に通すことのない材料から構成されるメッシュ、 多孔質、 不織布が挙げ られる。 いずれのメッシュ様部材を選択するかについてはゲル電気泳動の目的、 方法などにより適宜選択されるが、 面方向のプロッティングの効率の観点ではメ ッシュが最も好ましく、 ゲルの形状の維持の観点では発泡性ブラスチック等の材 料からなる多孔質メンブレンが最も好ましい。
本発明の好ましい形態として、 メッシュ様部材はゲルと一体的に構成される。 ここで 「メッシュ様部材とゲルとがー体的に構成される」 とは、 メッシュ様部材 が有する微細な隙間にゲルが咬み込むことで両者が一体不可分な状態となってい る構成をさす。 両者が一体的に構成されている限りにおいては、 メッシュ様部材 がゲルの中心部に配されていてもよく、 ゲルの少なくとも一方の面に配されてい てもよい。 作製の容易さや使い勝手の点では、 メッシュ様部材がゲルの少なくと も一方の面に配されていることが一般的により好ましい。なお、 「メッシュ様部材 がゲルの面に配されている」 とは、 メッシュ様部材がゲルの面近傍に配されてい る状態 （つまり、 メッシュ様部材が実質的にゲルの面に配されているとみなせる 状態） も含む。
なお、 メッシュ様部材とゲルとを一体的に構成する方法は特に限定されるもの ではないが、 例えば、 ゲル溶液とメッシュ様部材とを接触させた状態で当該ゲル 溶液をゲル化する （固める） ことにより容易に作製可能である。
また、 メッシュ様部材がゲル枠との組み合わせで用レ、られる場合には、 当該メ ッシュ様部材はゲル枠の内側面又は外側面、 好ましくはランニングゲルが作製さ れる内側面にゲルと隣接して配置される。 また、 メッシュ様部材は、 2 つのゲル 枠の一方又は双方に配置することができる。 メッシュ様部材の数は、 1 又は複数 であり、 電気泳動やプロッティングに悪影響を及ぼさない限り、 複数のメッシュ 様部材を重ねてもよい。 本発明において、 メッシュ様部材は、 ゲル枠とともにゲ ルを支持するために有効であり、 且つプロッティングのためにメンプレンへのタ ンパク質やペプチドの移動も可能にする。 従って、 メッシュ様部材は、 電気泳動 に供するサンプル中のタンパク質ゃぺプチドが透過でき、 且つ作製されるゲルが 透過しないような目開きを有する。 目開きとは、 大きなサイズの孔から微細なサ ィズの孔を意味し、 多孔質であれば通常、 ポアサイズによって定義することがで きる。 そのサイズは、 特に限定はされないが、 例えば、 0. 2 μ n！〜 4， 000 m、 好ま しくは 5. 0 / m〜4，000 / m、 特に好ましくは 100 μ n！〜 200 μ mとし、 メッシュ様部 材が多孔質であれば、 その平均ポアサイズを、 0. 22 μ η！〜 0. 45 μ ηι以上とすること ができる。 また、 メッシュ様部材の厚さは、 例えば、 50 μ πι〜2，500 / ηι、 好ましく は 60 μ η！〜 200 μ ηιとする。 さらに、 メッシュ様部材の材質としては、 上記特性を 付与するいずれの材質でもよく、 例えば、 布、 ポリマー（例えば、 ポリエチレンテ レフタラート（PET)及びその他のポリエステル、 ナイロン、 ポリプロピレン、 テフ ロン並びにポリエチレン）等が挙げられるが、 特に PETが好ましい。 なお、 本発明 で使用するメッシュ様部材として、 例えば PET105 (材質： PET、 目開き ： 105 μ πι、 メッシュ 145/inch、 株式会社セミテック（大阪、 日本）製）のような市販のメッシ ュクロスを使用することができる。
なお、 メッシュ様部材がゲル枠との組み合わせで用いられる場合にも上述の通 り、 メッシュ様部材とゲルとがー体的に構成されていることが好ましい。
スぺーサ一は、 ゲル枠間に配置することで、 ランニングゲルが形成される空間 を用意することができる。 一般に、 スぺーサ一の厚さ（スぺーサ一幅）が、 そのま まランニングゲルの厚さとなる。 スぺーサ一の材質は、 ゲル枠と同じであっても よいし、 異なってもよく、 例えば、.ガラス、 ポリマーなどである。
本発明において、 ランニングゲル又はスタツキングゲルは、 例えば、 アクリル アミ ドと Ν, Ν，-メチレンビスァクリルアミ ドとから作製されるポリアクリルアミ ドゲルである。 ランニングゲルのァクリルアミ ド濃度は、 電気泳動に供するサン プル中のぺプチドゃタンパク質の分子量に応じて適宜選択することができる。 ま た、 ランニングゲルは、 アタリルァミ ド濃度が均一なゲルだけでなく、 アクリル アミ ド濃度に勾配をつけたグラジェントゲルであってもよい。
本発明のゲルのサイズ及ぴ厚さは、 特に制限はなく、 使用目的に応じて任意の サイズ及び厚さとしうる。 また、 ゲルの形状は、 通常、 四角形 （例えば、 長方形 および正方形） であり、 細長いス トリ ップ形状 （例えば、 幅 1〜： 10膽） の形状も 含む。
本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルの製造方法（以下、単に「本発明に係る製 造方法」 という）では、まず 2つのゲル枠の一方又は双方の面にメッシュ様部材を 配置する。 メッシュ様部材は、例えば、 図 1に示す両面テープ 4 a、 4 b、 4 c、 4 dを用いてゲル枠に固定させることができる。
次いで、 本発明に係る製造方法では、 メッシュ様部材を配置したゲル枠間にス ぺーサ一を配置し、 2つのゲル枠を合わせることで、 ランニングゲル（及ぴ必要に 応じてスタツキングゲル）のための型枠を作製する。 スぺーサ一は、例えば両面テ ープなどでゲル枠及ぴメッシュ様部材に固定することができる。 さらに、ゲル枠とメッシュ様部材とスぺーサ一とを含む型枠（以下、単に「型枠」 又は 「型枠付メッシュ」 という）作製後、 スラブ型電気泳動装置用ガラスプレート で型枠を挟み、型枠のスぺーサ一幅にランニングゲル溶液を注ぎ入れる。その際、 スラブ型電気泳動装置用ガラスプレートは、 側片と底辺とを防水テープで十分に 密閉し、さらに両側をダブルクリップ等で押さえておく。ランニングゲル溶液は、 直接又は例えばパスツールピぺットを使用して型枠のスぺーサ一幅に注ぎ入れる ことができる。 このようにして、 型枠中にランニングゲルを固めることで、 本発 明に係るスラブ型電気泳動用ゲルを作製することができる。
さらに、 必要に応じて、 ランユングゲル上部にスタツキングゲル溶液を注ぎ入 れ、 その際に適当なコーム（くし）を差し込み、 スタツキングゲルを作製すること ができる。 スタツキングゲル溶液は、 上述したランニングゲル溶液と同様に注ぎ 入れることができる。 固化後、 コームはゲルから引き抜いてもよいし、 そのまま 保持されてもよい。 このとき形成されるゥエルは泳動サンプルゥエルとして使用 さ; る。
このようにして作製された本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、 スラブ型 電気泳動装置用ガラスプレートから外して、 例えばサランラップに包み使用時ま で冷蔵保存することができる。 使用時には、 適当な容器に水を張り、 水中で迅速 に再度、 本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルをスラブ型電気泳動装置用ガラス プレートに挟み込み、 スラブ型電気泳動に供することができる。
以上のようにして作製した本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、 ランニン グゲル（及び必要に応じてスタツキングゲル）の一方又は双方の面がメッシュ様部 材によって支持されている。 さらに、 必要に応じてゲル枠によってその支持は強 化されている。 このように、 メッシュ様部材及び/又はゲル枠によりゲルが支持さ れていることにより、 本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、 通常使用される スラブ型ゲルよりも物理的強度が高く、 また取り扱いが容易である。
また、 上述のように、 本発明では例えば、 ゲル溶液とメッシュ様部材とを接触 させた状態で当該ゲル溶液をゲル化する （固める） ことにより、 スラブ型ゲルの 一方又は双方の面にメッシュ様部材が固着された （一体化された） 構成をとるこ とが出来る。 この構成によれば、 メッシュ様部材が有する微細な隙間にゲルが侵 入し、 ゲルとメッシュ様部材とがより強固に固着されるので、 メッシュ様部材が ゲル面から剥離する虞もないという効果も奏する。 .
また、 電気泳動後、 本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、 従来のようにス ラプ型電気泳動装置用ガラスプレートからゲルを剥離することなく、 スラブ型電 気泳動装置用ガラスプレートカ ら外して、そのまま染色（例えば、 クーマシーブリ リアントプルー（coomasie brilliant blue； CBB)染色や銀染色）又はプロッティン グに供することができる。 染色やブロッテイングでは、 本発明に係るスラブ型電 気泳動用ゲルの支持体 （すなわち、 メッシュ様部材）、 および場合により型枠、 は 保持される。
さらに、 本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルをプレキャストゲルとして供給 する場合、 従来市販されているプレキャストゲルと異なり、 ガラス板に挟んだ状 態ではなく、 ゲル枠に囲まれた裸のゲルパッケージとして供給でき、 コストを低 く抑えることができる。 あるいは、 本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルを、 プ 口ッティング用のメンブレン（例えば、 PVDF膜)とゲル枠を介して密着させて供給 することも可能であり、 電気泳動からプロッティングまでの操作がより簡便に行 うこと力 Sできる。
なお、 言うまでもないが本発明におけるスラブ型ゲル （スラブ型電気泳動用ゲ ル）は平板状のゲルを指し、電気泳動時にはゲルの面を任意の方向（一般的には、 水平方向又は垂直方向） に固定して使用することが出来る。
本発明のゲルを保存するときには、例えば、ポリマー製フィルムで包装するか、 あるいはポリマー製バッグに入れて密封し、 乾燥しない程度の十分な湿度下で冷 暗所に保存する。
以下、 実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、 本発明の技術的範囲は これら実施例に限定されるものではない。
〔実験方法〕
(1) 型枠付メッシュの作製
型枠付メッシュの作製を図 2に基づいて説明する。
10 cm (幅（W) ) 10 cm (高さ（H) )正方形のポリエチレンテレフタラート（PET) プレート （0, 5 mm厚） を 2枚用意した。 これら 2枚のプレートについて、 三辺よ り 1 cm、 残りの一辺より 2 cmの位置に 8 cm (W) x 7 cm (H)の長方形を切り抜い た。 一方のプレートはさらに、 2 cm幅の余白面を上にして立てたとき、 両端から 各 1 cmの位置に、 上端から 1 cmの垂直幅で 8 cm (W) 1 cm (H)の長方形を切 り抜いた。 このプレートを切込プレート 5と呼ぶ。 また、 他方のプレートを平プ レート 6と呼ぶことにする。
平プレート 6の長方形切り抜き窓の四縁に l cm幅の両面テープ 7 a、 7 b、 7 c、 7 dを施した。 次いで、 10 cm (W) x 9 cm (H)のメッシュクロス 8 (材質： PET、 目開き 105 /i m、 メッシュ 145/inch、 製品名 PET105、 （株） セミテック、 大 阪） を、 平プレート 6の両側辺と底辺に合わせて長方形窓をふさぐように両面テ ープ 7 a、 7 b、 7 c、 7 dに貼り付けた。 さらに、 1 cm (W) x 10 cm (H) x 0. 1 cm (奥行（D) )のスぺーサー用 PETプレート 9 a、 9 bの 2枚の縁をそれぞれ切込 プレート 5の両端に上下を合わせて両面テープで貼り付け、 切込が上方になるよ うにして平プレート 6上のメッシュクロス 8に重ねることで、 型枠付メッシュを 完成させた。
(2) ゲルの作製
上記（1)で得られた型枠付メッシュと同型同大のミニスラブ型電気泳動装置用 ガラスプレート ( lram又は 2mm厚) でこの型枠付メッシュを挟み、 側辺と底辺を 防水テープで十分に密閉し、 両側をダブルクリップで押さえ、 全体を安定して垂 直に立たせ、 以下の表 1に示す組成から成るランニングゲル溶液を流し込んだ。
表 1
ランニングゲル溶液 ( 12. 5%ゲル)
30%ァクリルアミ ド溶液 6. 25ml
1%メチレンビスアタリルァミ ド溶液 1. 6 ml
1M Tri s-HCl (pH 8. 8)溶液 5. 625ml
20% SDS 75 μ 1
10%過硫酸ァンモユウム溶液 ΙΒΟ μ Ι
蒸留水 1. 3ml
TEMED 7. 5 μ ΐ ランニングゲル溶液の注入後、 水又はプタノールを重層して静置し、 ゲル化さ せた （約 15分）。
次に、 ランニングゲルの上部に、 以下の表 2に示す組成から成るスタツキング ゲル溶液を流し込んだ。
表 2
スタツキンングゲル溶液 （5%ゲル)
30°/。ァクリルアミ ド溶液 . 835 μ 1
1%メチレンビスァク リルァミ ド溶液 650 μ 1
1M Tris-HCl (pH 6. 8)溶液 625 μ 1
20% SDS 25 l
10%過硫酸アンモニゥム溶液 100 /■( 1
蒸留水 2. 765ml
TEMED 2. 5 jU 1 スタツキングゲル溶液の注入後、 厚さ 0. 75mm のコームをさしてゲル化させた (約 10分）。 このようにして、 型枠付メッシュに支持されたゲル（以下、 「型枠付 メッシュゲル」 という ：本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲル）を作製した。 ゲル化後、 ガラスプレートを外して、 型枠付メッシュゲルを取り出し、 サラン ラップに包み使用時まで冷蔵保存が可能であった。 使用時は、 適当な容器に水を 張り、 水中で素早く型枠付メッシュゲルをスラブ型電気泳動装置用ガラスプレー トで挟んで密着させた。
(3) 型枠付きメッシュゲルを用いた電気泳動
ミニスラブ型電気泳動装置 （SE-8010、 （株） SICマリソル、 東京） に型枠付メッ シュゲルを備えたゲルプレート又は型枠付メッシュなしの通常のゲル（以下、 「対 照ゲル」 という）を備えたゲルプレートをセットした。
—方、 タンパク質試料（マウス脳由来の 100, 000 xg遠心分離上清）（5 /χ §) 5 μ 1 又は分子量マーカー（プレシジョン plusスタンダード、 （株） 日本パイオラッドラ ボラトリーズ、 東京） 5 1に、 5 Xサンプルバッファー（組成： 0. 25M Tris-HCl (pH
6. 8)、 10% SDS, メルカプトエタノール 3/10容、 50%グリセロール、 1%BPB 数 W 200 滴） 2 z l及ぴ蒸留水 3 1を加え、 95°Cで 3分間煮沸した。 得られたサンプルを、 上述のゲルプレートの各ゥヱルに添加した。
次いで、 これらゲルプレートを用いて、 以下の表 3に示す組成から成る泳動パ ッファー中にて 40mAで 60分間電気泳動した。 泳動バッファー組成
Tris 15. 15g
グリシン 72. 05g
SDS 5g
蒸留水 メスアップ
量 5L
(4) PVDF膜へのセミドライブロッテイング
8 cm (W) X 7 cm (H)に切った濾紙 6枚と PVDF膜を用意した。 以下の表 4に示す 組成から成るプロッティングバッファーに十分浸した濾紙 3枚を重ねてセミ ドラ イブロッタ（AE6677、 （株）アト一、東京）の陰極プレート上に置き、上記（3)で電気 泳動した型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを、 枠内に濾紙がちょうどはまるよう に重ねた。
次いで、 アルコール浸潤後、 プロッティングバッファーに十分浸しておいた PVDF膜を空気が入らないようにゲルに密着させて重ねた。 さらに、 残りの濾紙 3 枚を重ねた。 ガラスピぺットの腹などを利用して、濾紙の上を軽くしごき、濾紙/ ゲル/膜の間の空気を追い出した。
最後に、 陽極プレートをかぶせ、 150mAにて 1時間通電させた。 プロッティングバッファ一組成
Tr.is 15. 14g
グリシン 72. 07g
メタノール 1L
蒸留水 メスアップ
全量 4L
(5) クーマシープリ リアントブルー（coomassie brill iant blue； CBB)染色及ぴ銀 染色
上記（3)で電気泳動した型枠付メッシュゲル又は対照ゲルの両端をメタルフリ 一クリップ （プラスチック製） で押さえた。 染色、 脱色中のゲルの伸縮変形に伴 うゆがみを低減させるために、 ここで使用する通常のバッファー全てに 0. 375M Tris塩または 0. 375M NaClおよび 10%グリセロールを含ませて使用した。
(5-1) CBB染色
CBB 染色は、 まず型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを以下の表 5に示す組成か ら成る CBB染色液に浸して、 室温で 30分間振盪した。
表 5
CBB染色液
CBB-R250
メタノール
酢酸
1. 5M Tris塩または NaCl
グリセ口一ノレ
超純水
全量 1000ml 次いで、 以下の表 6に示す組成から成る CBB脱色液に型枠付メッシュゲル又は 対照ゲルを浸し、キムワイプを添えて室温で 15分間振盪後、新しい脱色液に交換 し、 以後 30分間振盪するごとに液交換するという操作を数回繰り返した。
表 6
CBB脱色液
メタノール 400ml
酢酸 100ml
1. 5M Tris塩または NaCl 250ml
グリセ口ール 100ml
超純水 150ml
全量 1000ml 十分脱色されてバンドが明瞭になるまで振盪、 液交換を繰り返した後、 型枠付 メッシュゲル又は対照ゲルを水で軽くリンスしてから、 40%メタノール/ 10%酢酸 /0. 375M NaCl/10%グリセロール液中に保存した。
(5-2) 銀染色
銀染色は、 まず型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを 50%メタノール /0. 375M NaCl/10%グリセロールに浸し、室温で 1時間振盪した。 次いで、 以下の表 7に示 す組成から成る銀染色液の溶液 Cに型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを 15分間浸 した。
表 7
銀染色液
溶液 A 硝酸銀 0. 8gを 4mlの超純水に溶かしたもの
溶液 B 0. 36%水酸化ナトリウム 21mlと
14. 8Mアンモニア水 1. 4mlを混合したもの
溶液 C 溶液 Bをポルテックスにかけながら
溶液 Aを滴下した後、 1. 5M NaClを 25ml、
グリセロールを 10ml力 13え、 超純水で 100mlにしたもの W 水で 5分間洗浄した後、 次いで表 8に示す組成から成る現像液の溶液 Dに型枠 付メッシュゲル又は対照ゲルを浸し、像が現れるまで（約 15分間）振盪した。像が 現れた後、 型枠付メ ッシュゲル又は対照ゲルを水で軽く リ ンスした後、 10%EDTA/40%メタノール /10%酢酸 /0, 375M NaCl/10%グリセ口ールに浸して保存 した。
表 8
現像液
溶液 D 1%クェン酸 2. 5mlと 38%ホルムアルデヒド
0. 25mlを混合し、 1. 5M NaCl を 12. 5ml、
グリセロールを 50ml加え、 超純水で 500ml
にしたもの
(6)メッシュゲルの物理的強度
上記（2)で作製した型枠付メッシュゲルのメッシュゲル部分又は対照ゲルの上 端と下端とを合わせるように軽く折り曲げ、 屈曲部分を少しずつ押していき、 ど のくらい強く押すとゲルが割れて壊れるか否かを観察した。
〔実験結果〕
上述のように行った PVDF膜へのセミ ドライブロッテイング、 CBB染色及ぴ銀染 色の結果について、 型枠付メッシュゲルの場合と対照ゲルの場合とを比較した写 真を図 3〜 5に示す。
図 3は、 PVDF 膜へのセミ ドライブロッテイングの結果を示す。 （a)の写真は、 対照ゲルのブロッティングを示す。 （b)の写真は、型枠付メッシュゲルのブロッテ ィングを示す。泳動像はいずれも分子量マーカー（プレシジョンプレスティンドマ 一力一）である。
図 4は、 CBB染色の結果を示す。 (a)の写真は、対照ゲルの CBB染色結果を示す。
(b)の写真は、 型枠付メッシュゲルの CBB染色結果を示す。 （a)において、 左側よ り 1、 2、 8、 9、 10 レーンの各泳動像が、 分子量マーカー（プレシジョンプレステ インドマーカー）であり、 一方、 左側より 3、 4、 5、 6、 7 レーンの泳動像が各種濃 度のタンパク質試料（マウス脳由来の 100， 000 xg遠心分離上清）である。また、（b) において、 左側より 1、 2、 7、 8、 9 レーンの各泳動像が、 分子量マーカー（プレシ ジョンプレスティンドマーカー）であり、 一方、 左側より 3、 4、 5、 6 レーンの泳 動像が各種濃度のタンパク質試料（マウス脳由来の 100， 000 xg遠心分離上清）であ る。
図 5は、銀染色の結果を示す。 （a)の写真は、対照ゲルの銀染色結果を示す。 （b) の写真は、 型枠付メッシュゲルの銀染色結果を示す。 （a)及び (b)において、 左側 より 1、 5、 6 レーンの泳動像が、 分子量マーカー（プレシジョンプレスティンドマ 一力一）であり、 一方、 左側より 2、 3、 4 レーンの泳動像がタンパク質試料（マウ ス脳由来の 100, 000 xg遠心分離上清）である。
図 3〜 5に示すように、型枠付メッシュゲル (本発明に係るスラブ型電気泳動用 ゲル）を用いた泳動後の染色像及ぴプロッティング結果は、対照ゲル（通常のゲル） を用いた場合と比較して、 全く同様の感度と分解能を示しており、 型枠付メッシ ュゲルを従来のゲルと全く同じ目的で用いることができることが判った。
さらに、 ゲルの物理的強度比較では、 対照ゲルは折りたたんだ後、 ごくわずか な圧力ですぐに割れてしまったが、 一方、 メッシュゲルはほぼ完全に折りたたん でも、 壌れずに元に戻すことができた。 産業上の利用可能性
本発明によれば、電気泳動後、支持体およぴ場合により型枠、を保持したまま、 容易に染色又はプロッティングに供することができるスラブ型電気泳動用ゲルが 提供される。
本明細書で引用した全ての刊行物、 特許おょぴ特許出願をそのまま参考として 本明細書にとり入れるものとする。

Claims

請求の範囲
1 . ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルであって、 当該ゲルを支持するた めのメッシュ様部材と当該ゲルとがー体的に構成されてなることを特徴とするス ラブ型電気泳動用ゲル。
2 . ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルの一方又は双方の面に、 当該ゲル を支持するためのメッシュ様部材が配置されてなることを特徴とする請求項 1に 記載のスラプ型電気泳動用ゲル。
3 . ゲル溶液とメッシュ様部材とを接触させた状態で当該ゲル溶液をゲル化 することにより、 スラブ型ゲルの一方又は双方の面にメッシュ様部材が固着され ていることを特徴とする請求項 2記載のスラプ型電気泳動用ゲル。
4 . 上記ゲルの幅が 1〜10醒であることを特徴とする、 請求項 1記載のスラ ブ型電気泳動用ゲル。
5 . 上記メッシュ様部材の目開きが 0. 2 μ ιη〜4， 000 μ ΐηであることを特徴とす る、 請求項 1記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
6 . 上記メッシュ様部材の材質がポリマーであることを特徴とする、 請求項 1記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
7 . 2つのゲル枠と、
前記 2つのゲル枠の一方又は双方の面に配置したメッシュ様部材と、
前記ゲル枠間に配置したスぺーサ一と、
前記ゲル枠間のスぺーサ一幅に配置したランニングゲルと、
を含み、 前記ランニングゲルが前記ゲル枠及びメッシュ様部材により支持されて いることを特徴とするスラブ型電気泳動用ゲル。
8 . 上記ランニングゲルの上部に、 スタツキングゲルをさらに含むことを特 徵とする、 請求項 7記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
9 . 上記メッシュ様部材の目開きが 0. ！〜 4， 000 μ πιであることを特徴とす る、 請求項 7記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
1 0 . 上記メッシュ様部材の材質がポリマーであることを特徴とする、 請求 項 7記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
1 1 . 上記ポリマーがポリエステル、 ナイロン、 ポリプロピレン、 テフロン 及ぴポリエチレンから成る群から選択されるポリマーであることを特徴とする、 請求項 1 0記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
1 2 . 上記ゲルの幅が 1〜： 10匪であることを特徴とする、 請求項 7記載のス ラブ型電気泳動用ゲル。
1 3 . 2つのゲル枠の一方又は双方の面にメッシュ様部材を配置する工程と、 前記ゲル枠間にスぺーサーを配置し、 前記 2つのゲル枠を合わせる工程と、 前記ゲル枠間のスぺーサ一幅にランニングゲルを作製する工程と、
を含み、 前記ランニングゲルが前記ゲル枠及びメッシュ様部材により支持されて いることを特徴とする、 請求項 7記載のスラプ型電気泳動用ゲルの製造方法。
1 4 . 上記ランニングゲルの上部に、 スタツキングゲルを作製する工程をさ らに含むことを特徴とする、 請求項 1 3記載の製造方法。
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