JPH04143651A

JPH04143651A - スラブ型電気泳動装置用ゲル保持体

Info

Publication number: JPH04143651A
Application number: JP2267598A
Authority: JP
Inventors: Toshihisa Oshima; 敏久大島; Hiroaki Nakagawa; 裕章中川; Hirofumi Akano; 裕文赤野; Kichiya Kawamura; 川村　吉也
Original assignee: Nakano Vinegar Co Ltd
Current assignee: Nakano Vinegar Co Ltd
Priority date: 1990-10-05
Filing date: 1990-10-05
Publication date: 1992-05-18

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕この発明は、スラブ型電気泳動装置用ゲル保持体に係り
、特に、試料ゲルの大蓋分取可能なゲル保持体の構造に
関する。

〔従来技術〕

周知のように、スラブ型電気泳動法（ゲルを垂直または
縦にして泳動する電気泳動法をいう、以下間し、）は、
ディスク型電気泳動法に比べ、操作性・解像力等におい
て優れ、蛋白質や酵素、ベブタイトの大量分取に特に優
れていると共に、部核酸や熱処理の難しい生理活性物質
の分離に適していることから生化学分野の各種研究にお
いても汎用されている。

ところで、かかるスラブ型電気泳動装置に用いられるゲ
ル保持体は、従来、２枚のガラス板を対向配置し、その
間にゲル厚を規定するスペーサを介在せしめて重ね合せ
たものか使用されている。

このゲル保持体を構成する２枚のガラス板とスペーサは
、その内側表面が平滑に仕上られており、これら各部材
によって画成されたゲル収納部内において、分取に利用
されるゲルか使用される。

（発明が解決しようとする課題）ところで、分取すべきゲルの総量は、スペーサの幅寸法
によって決定されるわけであるか、かかる従来のゲル保
持体によれば、スペーサの幅寸法を増大させてガラス板
の間隔を広げても、精製される泳動ゲル自身の重さか増
大することによって、当該ゲルか下方に流出するため、
一定量以上は試料ゲルを分取できない、という問題を膚
していた。即ち、従来のゲル保持体では、２枚のガラス
板の間隔が１ｃｍを越えるとゲルが脱落し、それ以上の
厚さてのゲルを用いた分取が困難となる、という問題を
有していた。

この発明は、かかる現状に鑑み創案されたものであって
、その目的とするところは、スペーサの幅寸法を従来の
機構の限界点である１ｃｍとしても、ゲルかゲル保持体
から流出することかなく、泳動ゲルを大量に分取するこ
とがてきるスラブ型電気泳動装置用ゲル保持体を提供し
ようとするものである。

（Ｓ題を解決するための構成）上記目的を達成するため、この発明に係るスラブ型電気
泳動装置用ゲル保持体にあっては、ゲルを挟持する板体
間に形成されたゲル収納部に、ゲルの落下を防とする突
起体を形成したことを特徴とするものである。

また、この発明に係るスラブ型電気泳動装置用ゲル保持
体は、その実施に際し、上記ゲル収納部の間隔を、５　
ｍ　ｍ以上とし、また、突起体をゲル収納部の垂直面部
に形成し、或は、突起体を網状に形成してゲル収納部の
最下辺部に配設して上記目的を実現しようとするもので
ある。

（作用）それ故、この発明に係るスラブ型電気泳動装置用ゲル保
持体によれば、ゲル収納部に収納され分取されるゲルは
、該ゲル収納部に形成された突起体との保合により下方
への脱落が阻止され、その自重が増加しても落下流出す
ることがない、従って、ゲルを挟持する板体間の間隔が
、従来の機構の限界点である１ｃｍ以上となっても、ゲ
ル収納部内に収納されたケルは、その形状を保持したま
ま精製される。

（実施例）以下、添付図面に示す一実施例に基き、この発明の詳細
な説明する。

ＩＪＳ１図は、この発明の一実施例に係るスラブ型電気
泳動装置に用いられるゲル保持体ｌを示している。

このゲル保持体ｌは、−辺が約１６ｃｍ程度の寸法を有
し、厚さが０．５ｃｍ程度のガラス板２と、このガラス
板２と同程度の寸法を有し、その上端部に０字状の切り
込み４を有するガラス板３と、を備え、これらのガラス
板２，３の間に約１．５ｃｍの幅寸法を有するアクリル
製のスペーサ５を挟んでゲル収納部１０が形成されてお
り、第２図に示すように、上部辺を除いて三方をブック
テープ１１で固定して構成されている。

一方、上記スペーサ５は、ガラス板２の左右両端部６．
７及び下端部８の端縁から約０．５ｃｍ程度内側に位置
するように配置されており、前記ブックテープ１１との
間に間隙を形成してゲルを固化させる段階においてゲル
の流出が防止されるように構成されている。

そして、上記スペーサ５の左右内側下方には。

ゲルを係止し保持するための突起、即ち、ゲルストッパ
１５，１６，１７．１８か形成されている。

これらの各ゲルストッパ１５乃至１８は、第１図におい
て断面略三角形状に示しているが、この発明にあっては
これに限定されるものではなく、ゲルの下方への落下を
防止することができる形状、例えば、断面コ字状・断面
半円形状・連続する波状その他適宜の形状を適用するこ
とができる。また、これらの各ゲルストッパ１５乃至１
８の張出寸法は、スペーサ５の幅寸法で決定される分離
用ゲルの総量に応じて適宜設定変更するのか望ましい、
このとき、ゲルストッパの数も分離用ゲルの総量に応し
て適数とすることもでき、また、その配置位置も下方に
限定されず、例えば、上部に配置してゲルを吊持するよ
うに構成することもてきる。この場合、配置位置か上部
になるにつれて分離ゲルに対する保持強度か低下するの
で、この場合には１例えば、ゲルストッパの張り出し面
積を大きくして対応するのが望ましい。

また、ゲルの落下を防止するためのゲルストッパは、ス
ペーサ５偏に設ける場合に限定されるものではなく、ガ
ラス板２．３に直接形成することもてきる。

さらに、この発明に係る分離ゲル落下防止用のゲルスト
ッパには、その形状が網目状に形成されたものも含まれ
、この網目状のゲルストッパはゲル収納部１０の最下辺
に配置される。

次に、上記実施例に係るゲル保持体１を用いて、脱水素
酵素の分離精製を行う場合について説明する。

尚、第１図で示したように、このゲル保持体ｌによれば
１．５ｃｍ（最大５ｃｍ以上も可能であるか、２ｃｍ以
上の場合には、ゲル保持体を複数枚重ねてユニット化し
て実施することもてきる。）のゲルを調製することか可
能であり、また、使用する緩衝液やゲル溶液の組成は、
所謂Ｄａｖ　ｉ　ｓ法に従って調製されるものとする。

分離ゲルを製造するときには、先ず、ゲル製造台に前記
ゲル保持体ｌをセットし１次に、ブックテープ１１とス
ペーサ５の間に１．５〜２％の寒天を流し入れて固化さ
せ、精製しようとする分離用ゲルかゲル化する間に流出
するのを防止する。

このとき、分離用ゲルの保存溶液は、法衣１に示した割
合で混合する。

（以下、余白）表調製用スラブ型電気泳動装置用ゲルの組成この混合液を
アスピレータで脱気した後、気泡が発生しないようにゲ
ル収納部ｌＯに注ぎ込セ。

このとき、ゲルの高さは約９．５ｃｍである。水を静か
に重層後（高さ約２ｍｍ）、３７°Ｃの温水中で約３０
分浸漬させてゲル化させる。

そして、木を除いた後、濃縮ゲル溶液を分離用ゲルの上
に流し込み、蛍光灯または太陽光等の紫外線を当ててゲ
ル化させ、完全にゲル化した後、ゲル保持体ｌの下側部
分のブックテープ１１をカッタ等で切り取り、先に固化
させた寒天及びスペーサ５を外して、ｌ７Ｊ３図に示ず
ように泳動槽２０にストッパ２１を介して取り付ける。

次に、泳動用緩衝液を下部、上部の緩衝液槽２２．２３
に充填する。酵素試料液に約１０％グリセリンと数滴の
マーカ（プロモフニソールブルー・ＢＰＢ）を加え混合
する。

このようにして得られた試料液を、ピペットを用いて濃
縮用ゲル上に静かに重層する。−度に添加できる試料は
３０〜６０　ｍ　ｌで、その試料液槽の高さは約２ｃｍ
である。試料の量が多いときには一定時間泳動させ、試
料がある程度濃縮ゲル中に入ったときに試料液を２０〜
５０　ｍ　ｌ　＜り返し追加してゆくことによって５０
Ｓ−１００ｍｆＬの試料液を泳動できる。泳動は、酵素
の失活を防止するためにＯ℃〜４℃の低温で行う、マー
カかゲル内に入るまでには約４０　ｍ　Ａ、それ以後は
６０〜８０　ｍ　Ａの電流で数時間泳動する。尚、第３
図において符号２４はアノード電極、２５はカソード電
極、２６は上側泳動用緩衝液、２７は試料溶液、２８は
濃縮ゲル、２９は下側泳動用緩衝液、３０は分離用ゲル
である。

泳動後、マーカが分離用ゲル３０の下端から数ｍｍの位
置まで達したときに泳動を止め、素早く泳動プレートの
片方のガラス板３を取り外し、分離用ゲル３０の一端を
約５　ｍ　ｍの幅で切り取る。そして、このゲル断片を
、ガラストレイに入れたＯ、ＬＭ）リス塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ８，０）、１ｍＭ　　ＮＡＤ、５ｍＭ基質、０．４ｍ
Ｍフェナジンメトサル７ｘ−ト、０−５ｍＭ　　ＩＮＴ
にトラテトラツリウムブルーでも良い）を含む反応液５
　ｍ　ｌに浸し、３７℃乃至５０℃で数分間活性染色を
行う、赤紫色の活性ハントか現われたら、このゲル片を
取り出し、元のゲルの位置に戻す。

そして、第４図に示すように、活性ハンドの位置のゲル
３３を水平に１．５ｃｍ幅て切り取る。

尚、第４図中、符号３５は活性バンド、３６゜３７は切
断位置、３８はマーカ（ＢＰＢ）である。

このゲル片３３を、先程と同様に活性染色し、現われた
直線状の活性バンドの部分のみを残して他の部分を取り
除く、第５図の符号４０．４１かその切断位置である。

次に、活性染色されたゲルを細かく切り（約５ｍｍ幅）
、緩衝液（ＰＨ７，２）とともにホラター型テフロンホ
モジナイザー（容量５０　ｍ　ｌ　）を用いて水冷しな
がら磨砕する。このゲル磨砕液を遠心分離（２０，００
０ｘｇ、　Ｉ　０分間、４℃）して上清みに酵素抽出液
を得る。また、沈殿したゲルに少量の緩衝液を加えて懸
濁後、再度遠心分離を行い、２回目の酵素抽出液を得る
。かかるｍＩｌ法によれば、脱水素酵素だけでなく、Ｎ
ＡＤ。

ＮＡＤＰ等、活性染色が可能な他の多くの酵素の精製に
適用することができる。＃ｆに、表２及び表３に示すよ
うな好熱菌の酵素のように熱安定性の高い酵素の精製に
は良好な分離手段となる。

（以下、余白）表０イシン脱水素酵素及びアラニン脱水素酵素の精製※尚
、上記表２の調製泳動は、本発明の電気泳動性による。

表グリセリン脱水素酵素の精製 ※１１回目び２回目の調製泳動は、本発明の電気法動性による。

尚、上記実施例では、ゲル収納部１０の間隔を１　。

５ｃｍ以上とした場合を例にとり説明したか、この発明
にあってはゲル収納部１０の間隔を５ｍｍ以上とし、従
来のゲル保持体では保持することかできない程度に粘度
の低いゲルでも上記ゲルストッパを適宜配置することで
保持することもてきる。

〔発明の効果〕

以上説明したように、この発明に係るスラブ型電気泳動
装置用ゲル保持体によれば、板体間に形成したゲル収納
部に突起体を形成したので、ゲル収納部の間隔を従来の
ゲル保持体よりも大きく形成しても試料ゲルが落下流出
せず、−回の泳動性精製によるゲルの分取量を大幅に増
加させることかできる。

また、この発明は、その応用として分子篩クロマトグラ
フィーであるセファデックスやＤＥＡＥのゲル濾過にも
代替でき、分離能に優れた活性部の回収が一度の活性染
色ででき、非常に簡便な操作で酵素等の生理活性物質が
一度に大量に分取・精製することかできる、という画期
的な方法を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図はこの発明の一実施例に係るスラブ型電気泳動装
置用ゲル保持体の構成を示す分解斜視図、第２図は同ゲ
ル保持体の組立状態を示す説明図、第３図は同ゲル保持
体を電気泳動装置に取り付けた状態を示す部分断面側面
図、第４図及び第５図は分離用ゲルの精製段階を例示す
る説明図である。（符号の説明）

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ゲルを挟持する板体間に形成されたゲル収納部に
、ゲルの落下を防止する突起体を形成したことを特徴と
するスラブ型電気泳動装置用ゲル保持体。
（２）ゲル収納部の間隔を、５ｍｍ以上としたことを特
徴とする請求項１に記載のスラブ型電気泳動装置用ゲル
保持体。
（３）突起体は、ゲル収納部の垂直面部に形成されてい
ることを特徴とする請求項１に記載のスラブ型電気泳動
装置用ゲル保持体。
（４）突起体は、網状に形成され、ゲル収納部の最下辺
部に配設されていることを特徴とする請求項１に記載の
スラブ型電気泳動装置用ゲル保持体。