WO2007082475A1 - Nouveau composé diterpène ent-kaurène et ses dérivés, leur préparation et leur utilisation - Google Patents

Nouveau composé diterpène ent-kaurène et ses dérivés, leur préparation et leur utilisation Download PDF

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WO2007082475A1
WO2007082475A1 PCT/CN2007/000187 CN2007000187W WO2007082475A1 WO 2007082475 A1 WO2007082475 A1 WO 2007082475A1 CN 2007000187 W CN2007000187 W CN 2007000187W WO 2007082475 A1 WO2007082475 A1 WO 2007082475A1
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derivative
formula
diterpene
methanol
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PCT/CN2007/000187
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Hongmin Liu
Wenchen Zhu
Chenggong Zhu
Qingduan Wang
Yu Ke
Zhenzhong Liu
Xuebin Yan
Jianye Zhang
Hongli Qu
Original Assignee
Furen Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Zhengzhou University
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/94—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with rings other than six-membered or with ring systems containing such rings
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Definitions

  • the present invention relates to a series of organic compounds and a preparation method thereof, and more particularly to an enantioxene diterpenoid compound and a derivative thereof, and an extraction, a preparation method thereof and use thereof. Background technique
  • the Rubescens plant of the genus Lamiaceae is rich in diterpenoids. More than 500 diterpenoids have been isolated and identified from this genus, many of which have an enantio-kauriene structure. Diterpenoids were found to have antibacterial activity, cytotoxic activity, antitumor activity, inhibition of mitochondrial oxidative phosphorylation, insect feeding activity, plant growth regulator activity, anti-inflammatory and cardiovascular system activities.
  • ⁇ -ring exo-methylenecyclopentanone units have been identified as active centers for anti-tumor studies (a, S Ttanaba and H Nishikawa, Jpn J Bact, 1954, (9), 475; b, TArai, Y Koyama , T Suenaga and T Morita, J Antibiotics Ser, 1963, A16, 132; c, I Kubo, M Taniguchi, Y Satomura and T Kubota, Agr Biol Chem, 1974, 38, 1261; d, T Arai, Y Koyama, T Morita and H Kaji, Chemotherapy, 1961, 9, 403; f, I Kubo , M Taniguchi and T Kubota, Rev Latinoamer Quim, 1978, (9), 157 ).
  • Rubescensine A is the representative of this type of structure. At present, the research on Rubescensine A is active. The Zhang Yimu research group of Henan Medical University and the Fujita research team of Japan have done a lot of pharmacological experiments. It is proved that Rubescensine A has exact anti-tumor activity in vitro and in vivo, and its anti-tumor spectrum is also wide. It has obvious effects on human nasopharyngeal carcinoma cells, human liver cancer cells, human cervical cancer cells, esophageal cancer cells, etc. Killing effect.
  • Another object of the present invention is to provide a method for synthesizing the diterpene compound and a derivative thereof.
  • a further object of the present invention is to provide an application of the diterpene compound and its derivatives.
  • the technical solution of the present invention is as follows:
  • the invention adopts Jiyuan Dongling grass as a raw material, and obtains an enantiomerized kauriene diterpenoid under the condition of certain extraction of the poultry, which is a new undiscovered natural diterpene.
  • the part of the winter grass is soaked with an organic solvent, soaked at 40-60 ° C for 3 hours to 3 days, and then concentrated to remove 85 ⁇ 90% solvent, the concentrated liquid is passed through the LSA-10 type.
  • the macroporous adsorption resin and the silica gel were separated by repeated column chromatography to obtain the enantiomer of the enantiomer, and the pure product was obtained by recrystallization.
  • the extraction solvent used is one of ethanol, methanol, isopropanol, acetone, ethyl acetate or petroleum ether;
  • the solvent used for recrystallization is methanol, ethanol, acetonitrile, acetone, ethyl acetate, tetrahydrofuran or isopropanol.
  • the compound of the formula (II) is specifically prepared by the following method:
  • the enantiomerous kauriene dioxime ( I ) isolated by the present invention is dissolved in an organic solvent in the presence of an acid catalyst at 0 to 100 °
  • an acid catalyst at 0 to 100 °
  • a condensation reaction with a hydroxy compound is carried out, and the molar ratio of the reactant is 1:100 or the hydroxy compound is simultaneously used as a reaction solvent; the reaction is carried out for 1 to 72 hours.
  • the solvent was evaporated to dryness, and the compound was obtained by recrystallization to give the compound of formula (II).
  • the organic solvent used is one of nitromethane, acetonitrile, ethanol, methanol, isopropanol, 1,2-dichloroethane, trichloroethane, dichloromethane, chloroform, dioxane or tetrahydrofuran.
  • the catalyst used in the condensation reaction is one of hydrochloric acid, ammonium chloride, sulfuric acid, ammonium sulfate, p-toluenesulfonic acid; the solvent used for recrystallization is acetonitrile, ethanol, methanol, acetone, One of tetrahydrofuran, isopropanol or ethyl acetate.
  • the derivative of the enantiomer of the enantiomer of the present invention represented by the enantiomer of the enantiomer of the present invention, can be reacted with an amine compound to give a compound of the formula (in).
  • the compound of the formula (III) is produced by the following method:
  • the enantiomer of the enantiomers of the present invention (I) or the derivative of the formula ( ⁇ ) is dissolved in an organic solvent, in an acid
  • it is reacted with an amine compound, and the molar ratio of the reactant is 1:1 to 20;
  • the reaction temperature is controlled at 10 to 90 ° C;
  • the reaction time is 2 to 72 hours, and the reaction is stopped by thin layer chromatography until the disappearance of the raw material .
  • the solvent is evaporated to dryness, and the product is isolated by recrystallization or column chromatography.
  • the solvent used is one of nitrodecane, acetonitrile, ethanol, methanol, isopropanol, 1,2-dichloroethane, trichloroethane, dichloromethane, chloroform, tetrahydrofuran or dioxane
  • the catalyst used in the addition reaction is one of hydrochloric acid, ammonium chloride, sulfuric acid, ammonium sulfate, p-toluenesulfonic acid; the solvent used for recrystallization is acetonitrile, ethanol, methanol, acetone, tetrahydrogen
  • the compound of the formula (W) is produced by the following method:
  • the enantiomer of the enantiomers of the invention (II) or the derivative of the formula (II) obtained in the present invention is dissolved in an organic solvent in the presence of a base catalyst.
  • Reaction with an acid anhydride or acid halide the molar ratio of the reactant is 1:1 ⁇ 20;
  • the reaction temperature is controlled at 0 ⁇ 90 ° C;
  • the reaction time is 1 ⁇ 72 hours, monitored by thin layer chromatography until the disappearance of the raw material, steaming
  • the solvent is dried and the product is isolated by recrystallization or column chromatography.
  • the organic solvent used is one of nitromethane, acetonitrile, 1,2-dichloroethane, trichloroethane, dichloromethane, chloroform, tetrahydrofuran, dioxane, pyridine or triethylamine;
  • the catalyst used in the reaction is one or two of sodium methoxide, sodium ethoxide, sodium hydroxide, potassium hydroxide, potassium fluoride, pyridine, diethylamine, triethylamine or 4-N,N-dimethylaminopyridine.
  • the solvent used for recrystallization is one of acetonitrile, ethanol, methanol, acetone, tetrahydrofuran, isopropanol or ethyl acetate.
  • the enantiomers of the present invention can be used as an anti-inflammatory drug, an anti-tumor drug and an immunomodulator; and can also be used as a glycosidase inhibitor; as a drug against other diseases; It is used as an intermediate for various pharmaceuticals; it is used as an intermediate for chiral synthesis and organic synthesis.
  • the method for synthesizing the enantioxene diterpenoid and its derivative according to the present invention is simple and easy, the conditions are mild, and the yield of the obtained product is high.
  • the enantiomeric carbachene diterpenoid extracted by this method has ⁇ -ring exomethylcyclopentanone units which have been confirmed to have various activities, and has a 7-20 semi-acetal structure, 20-position semi-condensed Aldehyde hydroxyl groups are very active, and 11 ⁇ -OH and 14 ⁇ -OH may also act as binding sites for specific enzymes in tumor cells to enhance anticancer activity.
  • the preliminary bioactive screening revealed that the enantiomers of the kauriene diterpenoids and the derivatives synthesized therefrom have high anti-inflammatory, anti-tumor and immunomodulatory activities, and glycosidase inhibitory activity, and the present invention is anti-tumor
  • the drug provides more alternative compounds, and also provides more ways for the development of Chinese herbal medicine Rubescens. It is believed that with the development of biomedical science, the present invention will have a better application prospect. detailed description
  • Example 1 Extraction and Separation of Enantiomeric Kauriadien Diterpenoids (Jiyuan Oridonin A)
  • the aboveground part (3 kg) of dried Rubescens was placed in a soaking pot, and 70% acetone was added at 50 °C. 40 L, extracted for 3 hours. After the end of the extraction, the extract was concentrated to about 3 L, and the concentrate was roughly divided on a LSA-10 macroporous resin column, partially concentrated by 30% acetone, and then subjected to column chromatography, followed by acetone as a solvent. Recrystallization is the enantiomeric kauriene diterpene.
  • the experimental data are as follows:
  • the enantiomers of the enantiomers (174 mg, 0.5 mmol) prepared above were dissolved in ethanol (20 mL), and 5 mg of p-toluenesulfonic acid was added thereto, and the mixture was reacted at 25 ° C for 3 hours. After completion of the reaction, the reaction mixture was concentrated, and methanol was recrystallized to give 190 g of the compound of formula (II), yield 95%.
  • the experimental data is as follows.
  • Example 5 Preparation of a derivative of the formula (III) (03 ⁇ 403 ⁇ 4, R 2 is C 6 H 5 )
  • the enantiomer of the enantiomeric diterpene derivative (200 mg, 0.5 mmol) obtained in the preparation of Example 2 was dissolved.
  • aniline 56 mg (0.6 mmol) was added, and then the catalyst p-toluenesulfonic acid (2 mg) was added, and the mixture was stirred at 50 ° C for 24 hours. After completion of the reaction, the reaction mixture was concentrated, and methanol was crystallised to yield 210 mg of the compound of formula (?).
  • the experimental data is as follows:
  • Example 6 The derivative represented by the formula (III) was prepared to be a glucosyl group, and R 2 was C 6 H 13 )
  • the enantiomer of the enantiomeric diterpene derivative (255 mg, 0.5 mmol) obtained in the preparation of Example 2 was dissolved.
  • tetrahydrofuran 15 mL
  • n-hexylamine 60 mg (0.6 mmol)
  • the catalyst p-toluenesulfonic acid (2 mg) was added and stirred at 50 ° C for 10 hours. After the completion of the reaction, the reaction mixture was concentrated, and methanol was crystallized to give 210 mg of the compound of formula (III), yield 71%.
  • the experimental data is as follows:
  • This experimental example is to investigate the activity of the compound of the present invention against esophageal cancer Ecl09 cells.
  • the activity test method was as follows: Human esophageal cancer Ecl09 cells (Henan Institute of Medical Sciences) as target cells, using RPMI 1640 medium (GIBCO) containing 10% fetal bovine serum (TBD) at 37 degrees, 5 % C0 2 to cultivate.
  • the cells in the logarithmic growth phase were inoculated with 6 ⁇ 10 3 cells in each well of a 96-well plate, and after 24 h of culture, different concentrations of the compound sylvestre orchard A (the compound obtained in Example 1) were added to the corresponding wells. Samples of Derivative 1 and Derivative 2 were continued for 48 h, and the drug solution was carefully aspirated and washed 3 times with serum-free RPMI 1640 medium.
  • This experimental example is to investigate the glycosidase inhibitory activity of the compound of the present invention.
  • the present invention extracts and separates enantiomers of diazepam by using Jiyuan orchard as a raw material, and then condenses with a hydroxy compound to obtain various acetal derivatives; The reaction is carried out to obtain various amino derivatives; it is reacted with an acid halide or an acid anhydride to obtain various acylated derivatives.
  • the enantiomers of the present invention can be used as an anti-inflammatory drug, an antitumor drug and an immunomodulator; and can also be used as a glycosidase inhibitor; as a drug against other diseases; as a medicine Used as an intermediate for the product; used as an intermediate for chiral synthesis and organic synthesis.

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Description

T/CN2007/000187 新对映贝壳杉烯类二萜化合物及其衍生物、 其制备方法和用途 技术领域
本发明涉及系列有机化合物及其制备方法，尤其涉及对映贝壳杉 烯类二萜化合物及其衍生物和其提取、 制备方法及用途。 背景技术
系唇形科香茶菜属植物的冬凌草中含有丰富的二萜成分，迄今为 止从该属植物中已经分离鉴定出 500余个二萜，其中许多具有对映- 贝壳杉烯型结构的二萜被发现具有抗菌活性、 细胞毒活性、 抗肿瘤活 性、 抑制线粒体的氧化磷酸化作用、 昆虫据食活性、 植物生长调节剂 活性、 抗炎以及心血管系统等方面的活性。 （a、 S Ttanaba and H Nishikawa, Jpn J Bact, 1954， (9), 475； b、 M Yamaguchi, M Taniguchi, I Kubo and T Kubota, Agr Biol Chem, 1977, 41， 2475; c、 T Arai, Y Koyama, T Suenaga and T Morita, Chemotherapy, 1962, 10, 197; d、 M Taniguchi, M Yamaguchi, I Kubo and T Kubota, Agr Bioi Chem, 1979, 43, 71; e、 李琦， 陈正， 刘洁， 孙汉董， 林中文， 中国药理学通报， 1992, 8(1), 3; f、 李惠兰， 王懋德， 张肇玖， 中药通报， 1988, 18(10), 46 )因此研究开发该属植物， 特别是具有良好抗肿瘤活性的对映贝壳 杉烯类二萜具有重要的理论和实用价值。
含有 α -环外亚甲基环戊酮单元的对映-贝壳杉烯型二萜结构如
Figure imgf000003_0001
其中， α -环外亚甲基环戊酮单元经研究被确定为抗肿瘤的活性中心 ( a、 S Ttanaba and H Nishikawa, Jpn J Bact, 1954, (9), 475; b、 TArai, Y Koyama, T Suenaga and T Morita, J Antibiotics Ser, 1963, A16, 132; c、 I Kubo, M Taniguchi, Y Satomura and T Kubota, Agr Biol Chem, 1974, 38, 1261; d、 T Arai, Y Koyama, T Morita and H Kaji, Chemotherapy, 1961, 9, 403; f、 I Kubo, M Taniguchi and T Kubota, Rev Latinoamer Quim, 1978, (9), 157 )。 冬凌草甲素是这类结构的代表， 目前以对冬凌 草甲素的研究较为活跃， 河南医科大学的张覃沐研究小组， 日本的 Fujita研究小组等都对其做了大量的药理实验工作， 证明冬凌草甲素 具有确切的体外、 体内抗胂瘤活性， 其抗瘤谱也较广， 对人体鼻咽癌 细胞、 人体肝癌细胞、 人体子宫颈癌细胞、 食管癌细胞等均有明显的 杀伤作用。 但是由于冬凌草甲素的稳定性不好， 水溶性较差， 而冬凌 草甲素提取液不易进行质量控制， 使冬凌草的开发受到一定的限制。 我们曾以冬凌草甲素为原料合成了一系列糖苷和酯类化合物 （专利 号: ZL99101179.3 )， 在以前研究工作的基础上利用冬凌草含量较高 的抗肿瘤活性好的二萜成分， 开发出新的药物化合物， 对开发我国中 草药冬凌草具有很高的应用价值及现实意义。我们在不破坏其活性中 心的基础上合成和发现更多的抗肿瘤活性更高、毒性更低、性质更优 越的衍生物。 发明内容
本发明的目的是提供一种从冬凌草中提取出的新的二萜化合物 及该二萜化合物的系列衍生物。
本发明的另一目的在于提供该二萜化合物的提取、其衍生物的合 成方法。
本发明的再一目的在于提供该二萜化合物及其衍生物的应用。 为实现本发明目的， 本发明技术方案如下：
本发明以济源冬凌草为原料， 在一定提取分禽条件下， 得到对映 贝壳杉烯类二萜， 它是一个新的未见报导的天然二萜。
本发明对映贝壳杉烯类二萜结构式如下所示：
Figure imgf000005_0001
其通过如下方法提取分离提纯：将冬凌草地上部分用有机溶剂浸 泡， 于 40~60°C下， 浸泡 3小时 ~3天， 然后浓缩除去 85 ~ 90%溶剂， 浓缩液经 LSA-10型大孔吸附树脂和硅胶反复柱层析分离即得到该对 映贝壳杉烯类二萜， 经重结晶得到其纯品。
其中， 所用提取溶剂为乙醇、 甲醇、 异丙醇、 丙酮、 乙酸乙酯或 石油醚中的一种； 重结晶所用溶剂为甲醇、 乙醇、 乙腈、 丙酮、 乙酸 乙酯、 四氢呋喃或异丙醇中的一种。
将上述所得的对映贝壳杉烯类二萜（ I )与羟基化合物反应得到 式 （Π) 所示的化合物。
Figure imgf000005_0002
R=CnH2n+1 (n=1-12) ,CH2CH2OH ,CH2GH2Ci,
CH2CH(OH)CH2OH,CH2CH2CH2OH, , CH2CH(OH)CH3, CH2COOH ' 葡萄糖基， 半乳糖基， 木糖基， 甘露糖基等
(II) 式 （II)所示化合物具体通过如下方法制备： 将本发明分离得到 的对映贝壳杉烯类二萜 （ I ) 溶于有机溶剂中， 在酸催化剂存在下， 于 0~100°C条件下与羟基化合物进行缩合反应， 反应物的摩尔比例 为 1: 1 100或以羟基化合物同时做反应溶剂； 反应 1~72小时。 反 应结束后蒸干溶剂， 重结晶得式 （II) 所示化合物。
其中， 所用有机溶剂为硝基甲烷、 乙腈、 乙醇、 甲醇、 异丙醇、 1, 2-二氯乙烷、 三氯乙烷、 二氯甲烷、 氯仿、 二氧六环或四氢呋喃 中的一种； 缩合反应所用催化剂为盐酸、 氯化铵、 硫酸、 硫酸铵、 对 甲基苯磺酸中的一种； 重结晶所用溶剂为乙腈、 乙醇、 甲醇、 丙酮、 四氢呋喃、 异丙醇或乙酸乙酯中的一种。
将本发明的对映贝壳杉烯类二萜 （ I )或式 （Π )所示其衍生 ^ 与胺基化合物反应得到式 （in) 所示化合物。
Figure imgf000006_0001
=H ,CnH2n+1 (n=1 -12),CH2CH2OH,CH2CH2CI
CH2CH(OH)CH2OH,CH2CH2CH2OH，
CH2CH(OH)CH3, CH2COOH
葡萄糖基， 半乳糖基， 木糖基， 甘露糖基等
R2=CnH2n+i (n=1 -12), o,m,p-CI-C6H5,
o,m,p-Br-C6H5,o,m,p-F-C6H5,C6H5
(III) 式 （III)所示化合物通过如下方法制备： 将本发明制得的对映贝 壳杉烯类二萜 （ I )或式 （Π )所示其衍生物溶于有机溶剂中， 在酸 催化剂存在下与胺基化合物反应， 反应物摩尔比例为 1:1 ~ 20； 反应 温度控制在 10 ~ 90°C ; 反应时间为 2 ~ 72小时， 经薄层层析法监测至 原料消失结束反应。 蒸干溶剂， 重结晶或柱层析分离得产物。
其中， 所用溶剂为硝基曱烷、 乙腈、 乙醇、 甲醇、 异丙醇、 1 , 2-二氯乙烷、 三氯乙烷、 二氯甲烷、 氯仿、 四氢呋喃或二氧六环中的 一种； 加成反应所用催化剂为盐酸、 氯化铵、 硫酸、 硫酸铵、 对甲基 苯磺酸中的一种； 重结晶所用溶剂为乙腈、 乙醇、 甲醇、 丙酮、 四氢
Figure imgf000006_0002
R1=H,CnH2n+1(n=1-12),CH2CH2OH,CH2CH2CI
CH2CH(OH)CH2OH,GH2CH2CH2OH,
CH2CH(OH)CH3, CH2COOH
葡萄糖基， 半乳糖基， 木糖基， 甘露糖基等
R2,R3=H或' C C 的酰基 式 （W)所示化合物通过如下方法制备： 将本发明制得的对映贝 壳杉烯类二萜 （ I )或式 （II )所示其衍生物溶于有机溶剂中， 在碱 催化剂存在下与酸酐或酰卤反应， 反应物摩尔比例为 1:1 ~ 20； 反应 温度控制在 0 ~ 90°C ; 反应时间为 1 ~ 72小时， 经薄层层析法监测至原 料消失结束反应， 蒸干溶剂， 再经重结晶或柱层析分离得产物。
其中， 所用有机溶剂为硝基甲烷、 乙腈、 1 , 2-二氯乙烷、 三氯 乙烷、 二氯甲烷、 氯仿、 四氢呋喃、 二氧六环、 吡啶或三乙胺中的一 种； 酰化反应所用催化剂为甲醇钠、 乙醇钠、 氢氧化钠、 氢氧化钾、 氟化钾、 吡啶、 二乙胺、 三乙胺或 4-N, N-二甲基氨基吡啶中的一种 或两种； 重结晶所用溶剂为乙腈、 乙醇、 甲醇、 丙酮、 四氢呋喃、 异 丙醇或乙酸乙酯中的一种。
本发明所述的对映贝壳杉烯类二萜及其衍生物可作为抗炎药、抗 胂瘤药和免疫调节剂使用； 还可作为糖苷酶抑制剂使用； 作为抗其它 疾病的药物使用； 作为各种医药品的中间体使用； 作为手性合成和有 机合成的中间体使用。
本发明所述的对映贝壳杉烯类二萜及其衍生物的合成方法简单 易行， 条件温和， 所得产物收率较高。
采用该方法所提取的对映贝壳杉烯类二萜具有经研究确证有各 种活性的 α -环外亚甲基环戊酮单元， 并有 7, 20位半缩醛结构， 20 位半缩醛羟基很活泼， 11 β -OH和 14 β -OH也有可能作为与肿瘤细胞 中特殊酶的结合位点而起增强抗癌活性的作用。经初步生物活性筛选 发现对映贝壳杉烯类二萜及以其为底物合成的衍生物均有较高的抗 炎、 抗肿瘤和免疫调节活性， 以及糖苷酶抑制活性， 本发明为抗肿瘤 药物提供了更多的备选化合物，同时也为我国中草药冬凌草的开发提 供了更多的途径， 相信随着生物医药科学的发展， 本发明将具较好的 应用前景。 具体实施方式
以下实施例用于说明本发明， 但不用来限制本发明的范围。
实施例 1 提取分离对映贝壳杉烯类二萜 （济源冬凌草素 A ) 将冬凌草干燥的地上部分（3 kg )置于浸泡釜中， 于 50 °C下， 加入 70 %的丙酮 40 L,提取 3小时。提取结束后，浓缩提取液至约 3 L, 将此浓缩液于 LSA-10型大孔树脂柱上粗分， 30 %丙酮洗脱部分浓缩 后再反复经柱层析，然后采用丙酮作为溶剂进行重结晶即得对映贝壳 杉烯类二萜， 实验数据如下：
白色粉末状固体； Mp 211 ~ 212 °C; [a]D25一 80.3° (MeOH, c 0.22); raaxMeOH nm (logs): 233(3.96); IR vmaxKBr cm"1 :3590, 3394, 2932, 1722, 1646, 1334， 1254, 1096, 1032 and 990; HR-ESIMS m/z: 371.1829 [M+Na]+ for C2。H2805 (cacld. 371.1834); 1H-NMR光谱数据（400 MHz, DMSO-d6): 2.02(1H, d， J=12.0 Hz, H-la)， 1.29(1H, m, Η-1β), 1.36(2H, br s, H-2)， 1.06(1H， m， H-3a), 1.42(1H， d, J=13.4, Η-3β), 1.15(1H, overlap, Η-5β), 1.52(1H， m， H-6a), 2.63(1H, t， J=12.0 Hz, Η-6β), 3.94(1H, d， J=2.9 Hz, Η-7β)， 1.14(1H, d， J=8.4 Hz, Η-9β), 4.60(1H, q, J=8.4 Hz, H-lla), 2.56(1H, m, H-12 ), 1.25(1H, m, Η-12β), 2.78(1H， d, J=9.1 Hz, H-13a), 4.74(1H, s， H-14a)， 5.77(1H, s， H-17a), 5.35(1H, s, H-17b), 0.82(3H, s， H-18), 0.90(3H， s, H-19), 5.69(1H, s, H-20); 13C-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 206.2, 152.9， 115.9， 92.5， 69.6， 64.9, 63.4, 57.7, 56.4, 48.5, 42.8， 42.1, 40.7, 39.6, 33.9, 33.0, 30.7, 24.7, 21.0, 18.0。
实施例 2 制备式 （II ) 所示的衍生物 （R= CH2C¾ )
将上述制得的对映贝壳杉烯类二萜 (174 mg, 0.5 mmol)溶于乙醇 (20mL)中， 加入 5 mg的对甲基苯磺酸， 25 °C反应 3小时。 反应结束后 浓缩反应液， 甲醇重结晶，得到式（II )所示衍生物 190 g, 收率 95 %。 实验数据如下. - 白色棱柱状晶体； Mp 183.2 - 185.8 °C ; [a]D25 ~42.0° (c MeOH, 0.22); maxMeOH nm (logs): 233(3.99); IR vraaxKBr cm"1:3347, 2958, 2933, 1724, 1645, 1361， 1263, 1099, 1025, 994 and 935; HR-ESIMS m/z: 399.2145 [M+Na]+ for C22¾205 (cacld. 399.2147); -NMR光谱数据 (400 MHz, CDC13): 2.03(1H, d, J=11.2 Hz, H-la), 1.37(1H, overlap, H-Ιβ), 1.51(2H, br s， H-2), 1.13(1H， m， H-3a), 1.48(1H, d, J=13.2, Η-3β)， 1.34(1H， overlap, Η-5β), 1.69(1H, m, H-6a), 2.79(1H, overlap, Η-6β), 4.07(1H, d, J=4.0 Hz, Η-7β), 1.41(1H, d, J=9.6 Hz, Η-9β), 4.41(1H， q, J=8.8 Hz, H-lla), 2.58(1H, overlap, H-12a), 1.25(1H, overlap, Η-12β), 2.97(1H, d, J=9.4 Hz, H-13a), 4.85(1H, s, H-14a)， 6.03(1H, s, H-17a), 5.41(1H, s, H-17b), 0.86(3H, s, H-18), 0.96(3H， s, H-19), 5.21(1H, s, H-20), 3.84(1H， m, H-21a), 3.42(1H, m， H-21b), 1.23(3H, s, H-22); 13C-NMR (400 MHz, CDC13): δ 205.3, 150.8, 117.5, 99.8, 71.5， 66.3, 65.2， 63.9, 58.1, 56.8， 48.4, 42.0, 41.4， 40.5， 39.8, 34.0, 32.8, 30.5, 24.6, 20.9， 18.2， 15.4。
实施例 3 制备式 （II ) 所示的衍生物 （R= ( CH2 ) 7CH3 )
将上述制得的对映贝壳杉烯类二萜（174 mg, 0.5 mmol)溶于 THF(20 mL)中， 加入正辛醇 (400 mg, 3.1 mmol)和 5 mg的对甲基苯磺 酸， 25 °C反应 36小时。 反应结束后浓缩反应液， 甲醇重结晶， 得到 式 （II ) 所示的衍生物 145 mg， 收率 63 %。 实验数据如下：
白色棱柱状晶体； Mp 198.5 - 201.3 °C ; [a]D25 ~40.8° (c MeOH, 0.25); maxM&OH nm (logs): 235(3.92); IR vmaxKBr cm"1 :3354, 2961， 2925, 1730, 1645, 1358, 1267, 1094, 1019， 991 and 933; HR-ESIMS m/z: 481.2935 [M+Na]+ for C28H4205 (cacld. 481.2930); ^-NMR光谱数据 (400 MHz, CDCI3): 2.01(1H， d， J=11.2 Hz, H-la), 1.35(1H, overlap, Η-1β)， 1.49(2H, br s, H-2), 1.11(1H, m, H-3a), 1.46(1H, d， J=13.2, Η-3β), 1.32(1H， overlap, Η-5β), 1.67(1H, m, H-6a), 2.77(1H, overlap, H- 6β)， 4.05(1H, d, J=4.0 Hz, Η-7β)， 1.38(1H, d， J=9.6 Hz, Η-9β), 4.40(1H， q， J=8.8 Hz, H-lla), 2.58(1H, overlap, H-12a), 1.23(1H, overlap, Η-12β), 2.95(1H, d, J=9.4 Hz, H-13 ), 4.83(1H, s, H-14a), 6.01(1H, s， H-17a), 5.40(1H, s, H-17b), 0.82(3H， s, H-18), 0.92(3H, s, H-19), 5.21(1H, s， H-20), 3.82(1H, m, H-21a), 3.39(1H， m， H-21b), 1.21(3H, s, H-22); 13C-NMR (400 MHz, CDC13): δ 205.4， 150.8, 117.7, 99.9, 71.7, 66.4， 65.4, 64.0, 58.3, 57.1, 48.6， 42.2, 41.5， 40.7， 40.1, 34.2, 32.9, 30.7, 24.8, 21.1, 18.4， 15.6。
实施例 4 制备式 （II ) 所示的衍生物 （R- HuOs )
将上述制得的对映贝壳杉烯类二萜（174 mg, 0.5 mmol)溶于
THF(20 mL)中， 加入无水葡萄糖 (900 mg, 5 mmol)和 5 mg的对甲基苯 磺酸， 25 °C反应约 3天。 反应结束后氯仿萃取， 浓缩萃取液， 甲醇重 结晶， 得到式（II )所示的衍生物 142 mg， 收率 55 %。 实验数据如下： 白色粉末状固体； Mp 165.5 - 169.0 °C; [a]D25—53.8。（c MeOH, 0.27); λ纖 MeOH nm (logs): 233(4.10); IR vmaxKBr cm-1:3392, 2970， 2929, 1732, 1646， 1371， 1272， 1088， 1013， 985 and 931; HR-ESIMS m/z: 533.2357 [M+Na]+ for C26H38O10 (cacld. 533.2363); ^-NMR光谱数据 (400 MHz, DMSO): 2.07(1H， d, J=11.2 Hz, H-la), 1.40(1H, overlap, Η-1β)， 1.55(2H, br s, H-2), 1.18(1H, m, H-3 ), 1.53(1H, d, J=13.2, Η-3β): 1.38(1H, overlap, Η-5β), 1.73(1H, m, H-6a), 2.84(1H, overlap, Η-6β)， 4.11(1H, d， J=4.0 Hz, Η-7β)， 1.45(1H, d， 3=9.6 Hz, Η-9β), 4.45(1H, q, J=8.8 Hz, H-lla), 2.64(1H, overlap, H-12a), 1.29(1H, overlap, Η-12β), 3.03(1H, d, J=9.4 Hz, H-13a), 4.90(1H, s, H-14a), 6.08(1H, s, H-17a), 5.43(1H, s, H-17b), 0.88(3H, s, H-18), 0.96(3H, s， H-19), 5.25(1H, s, H-20), 3.81 (1H， d, J=11.6Hz, H-6，)， 3.59 (IH, dd, J=11.2, 4.8Hz, H-6，)， 3.35-3.17 (4H, m, H-3，， H-4，， H-5，， H-2'); 13C-NMR (400 MHz, CDC13): 206.9, 153.1, 116.1， 99.8, 92.7, 77.5， 73.5, 71.8， 70.0， 69.8, 65.4, 63.6, 63.1, 57.9, 56.6， 48.7, 43.0， 42.3, 40.9, 39.7, 34.0, 33.1, 30.9, 24.9， 21.2, 18.1。
实施例 5 制备式 （III) 所示的衍生物 （ 为0¾0¾, R2为 C6H5 ) 将实施例 2制备所得的对映贝壳杉烯类二萜衍生物 (200 mg, 0.5 mmol)溶于四氢呋喃 (15 mL)中， 加入苯胺 56 mg ( 0.6 mmol ), 再加入 催化剂对甲基苯磺酸（2 mg ), 于 50 °C下搅拌 24小时。 反应结束后浓 缩反应液， 甲醇结晶， 得到式（ΠΙ)所示的衍生物 210 mg, 收率 89 %。 实验数据如下：
白色粉末状固体； Mp 175.5 - 177.5 °C ; [α]°25—72.3° (c MeOH, 0.22); XmaxM&OR nm (logs): 230(3.95); IR vmaxKBr cm"1 :3595, 3452, 2955, 1747， 1589, 1512， 1453， 1376, 1273, 702; HR-ESIMS m/z: 492.2730 [M+Na]+ for C28H39N05 (cacld. 492.2726); ^-NMR光谱数据 (400 MHz, DMSO-d6): 2.03(1H, d， J=12.0 Hz, H-la), 1.27(1H, m, Η-1β): 1.36(2H, overlap, H-2)， 1.07(1H, m， H-3a), 1.45(1H, d， J=13.4, Η-3β), 1·15(1Η， d, J=12Hz, Η-5β), 1.54(1H, m, H-6a)， 2.65(1H， overlap, Η-6β)， 3.98(1H, m, Η-7β), 1.10(1H， s, Η-9β), 4.57(1H, q, J=8.4 Hz, H-lla), 2.44(1H, m， H-12a)， 1.23(1H, m， Η-12β), 2.89(1H, m， J=9.1 Hz, H-13a), 4.64(1H， s, H-14 )5 3.56(1H, m, H-16), 4.00(1H, m， H-17a), 3.49(1H， m， H-17b), 0.83(3H, s， H-18), 0.90(3H, s， H-19), 5.63(1H， s， H-20), 3.81， 3.37(each 1H， m, H-21), 1.20(3H, s, H-22)， 6.56(2H， d, J=8.0 Hz, H- 2，)， 7.06(2H, t， J=8.0 Hz, H-3，)， 6.50(1H, t, J=7.2 Hz, H-4，)； 13C-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 206.2, 149.0， 129.1, 115.5, 112.1, 98.6, 67.3, 65.6,
64.2, 63.1, 57.8， 55.6， 49.0, 43.2, 40.1， 39.8， 38.5, 37.8， 34.0, 33.3, 30.8, 28.7, 24.9, 21.3, 18.2, 16.2。
实施例 6 制备式 （III) 所示的衍生物 为葡萄糖基, R2为 C6H13 ) 将实施例 2制备所得的对映贝壳杉烯类二萜衍生物 (255 mg, 0.5 mmol)溶于四氢呋喃 (15 mL)中， 加入正己胺 60 mg ( 0.6 mmol ), 再加 入催化剂对甲基苯磺酸（2 mg ), 于 50 °C下搅拌 10小时。 反应结束后 浓缩反应液，甲醇结晶，得到式（III)所示的衍生物 210 mg， 收率 71 % 实验数据如下：
白色粉末状固体； Mp 154.6 - 157.2 °C ; [a]D25 —75.5° (c MeOH, 0.25); λ MeOH nm (logs): 235(4.05); IR v KBr οτα^ βθΐ, 3395, 3460, 2975, 1753, 1646, 1607 1371, 1272, 991 and 942; HR-ESIMS m/z: 634.3562 [M+Na]+ for C32H53NO10 (cacld. 634.3567); 1H-NMR 光 谱数据 （400 MHz, DMSO-d6): 2.05(1H, d J=12.0 Hz, H-la), 1.29(1H, m, Η-1β), 1.38(2H, overlap, H-2), 1.09(1H, m H- 3a), 1.46(1H d, J=13.4: Η-3β), 1.17(1H, d, J=12Hz, Η-5β), 1.57(1H, m, H-6a), 2.67(1H, overlap, Η-6β), 4.00(1H m Η-7β), 1.12(1H s Η-9β), 4.59(1H, q, J=8.4 Hz, H-lla), 2.45(1H, m, H-12a)， 1.26(1H m H- 12β)， 2.90(1H, m, J=9.1 Hz, H-13 ), 4.66(1H, s, H-14a), 3.58(1H, m H-16), 4.02(1H, m, H-17a)， 3.51(1H, m, H-17b), 0.85(3H, s, H-18), 0.92(3H, s H-19), 5.25(1H, s H-20), 3.83 (1H, d, J=11.6Hz H-6'), 3.62 (1H, dd, J=11.2, 4.8Hz H-6'), 3.38-3.15 (4H m H-3 H-4 H-5 H-2'), 2.58(2H, m H-l "), 1.45(2H, m, H-2"), 1.31-1.36(6H, m, H-3", H-4", H5"), 0.98 (3H, t J=7.0Hz, H-6"); 13C-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 207.0 99.9, 92.7, 77.6, 73.5 71.8 70.0, 69.8, 65.4, 63.6, 63.1, 57.9, 56.6, 53.4, 50.1, 43.0, 42.3 41.0, 40.5, 39.8, 39.7, 34.0, 33.2, 31.6, 30.9, 30.8 26.9, 25.0, 22.9, 21.2, 18.1, 14.2
实施例 7 制备式 （IV ) 所示的衍生物 （ 为 、 R3为 C2H30 ) 将对映贝壳杉烯类二萜 （174 g, 0.5 mmol)溶于吡啶 (20 mL)中，加 入乙酸酐 2 ml ( 21 mmol ), 于 80 °。搅拌反应 10小时； 冰水浴降温至 20 V , 加入饱和 NaHC03水溶液搅拌， 直至无气泡放出为止； 用乙酸 乙酯萃取 3次， 将有机层用水反复洗涤， 再用无水 NaS04干燥； 减压 蒸干溶剂， 用乙醇：水（3:1 )重结晶， 得白色固体 183 mg, 产率 81 % 7 000187 实验数据如下：
白色粉末状固体； Mp 163.5 - 166 °C ; [a]D25 一 68.5° (c MeOH, 0.25); maxMeOH nm (logs): 235(4.02); IR vmaxKBr cm"1 :3592, 3352, 2964 2938, 1738, 1734, 1724 1648, 1361, 1284, 1247 1157, 1118 1081, 1040 and 1007; HR-ESIMS m/z: 455.2049 [M+Na]+ for C24H3207 (cacld. 455.2046); ^-NMR 光谱数据（400 MHz, CDC13): 2.01(1H, d, J=11.2 Hz, H-lot)， 1.38(1H, overlap, H-Ιβ), 1.53(2H, br s H-2), 1.09(1H m, H-3a), 1.51(1H, d, J=13.2, Η-3β), 1.35(1H, overlap, Η-5β), 1.69(1H m H-6 ), 2.75(1H, overlap, Η-6β), 4.09(1H, d, J=4.0 Hz, Η-7β), 1.40(1H, d, J=9.6 Hz, Η-9β), 4.56(1H, q, J=8.8 Hz, H-ll ), 2.61(1H, overlap, Η-12α), 1.25(1H overlap, Η-12β), 3.01(1H, d, J=9.4 Hz, H-13a), 4.93(1H, s H-14a), 6.05(1H, s H-17a), 5.45(1H, s H-17b), 0.86(3H, s， H-18), 0.96(3H, s H-19)， 5.67(1H, s, H-20), 2.15(3H, s H-22), 2.08(3H, s H-24); 13C- NMR (400 MHz, CDC13): δ 205.8, 170.5, 169.3, 148.5 114.9, 93.2, 68.5, 64.1 62.5, 58.2, 56.2, 47.8 42.5 41.6, 41.2, 39.9, 33.3, 33.0, 30.7, 24.7, 21.0, 20.5, 19.9, 18.3
实施例 8 制备式 （IV) 所示的衍生物 （1^为'( 113, R2为 C8H150, R3 为 H )
将对映贝壳杉烯类二萜 （181 mg, 0.5 mmol)溶于吡啶 (20 mL)中， 加入正辛酸（145 mg, l mmol ), 于 80°C搅拌反应 24小时； 冰水浴降温 至 20 V , 加入饱和 NaHC03水溶液搅拌， 直至无气泡放出为止； 用乙 酸乙酯萃取 3次， 将有机层用水反复洗涤， 再用无水 NaS04干燥； 减 压蒸干溶剂，用乙醇：水（4:1 )重结晶，得白色固体 170 mg,产率 70 % 实验数据如下：
白色针状晶体； Mp 231 ~ 234°C ; [a]D25—55.8 （c MeOH, 0.22); λ MeOH nm (logs): 242(4.15); IR v KBr cm-1: 3603, 3426, 2939 1733, 1718 1644 1263, 1106, 1032, 942, 747 and 615; HR-ESIMS m/z: 511.3028 [M+Na]+ for C29H4406 (cacld. 511.3036); ^-NMR光谱数据 (400 MHz, CDCls): 1.98 (IH, d, J=12.0 Hz, H-1 ), 1.34 (IH, dd， J-12.0: 4.0 Hz, H-1 β ), 1.36 (2H， br s, H-2), 1.42 (IH, d, J=13.2 Hz， H-3 ), 1.07 (IH, dt， J=13.2, 4.0 Hz, H-3 β )， 1.19 (1H， m, H-5 β ), 1.57 (IH, m， H-6 a ), 2.66 (IH, t, J=12.6 Hz, H-6 β ), 3.98 (IH, d， J=2.8Hz, H-7 β )， 1.17 (IH, d, J=9.2Hz, H-9 β ), 4.41 (IH, q, J=8.8Hz H-ll a ), 2.58 (IH, dt: J=14.0, 9.2 Hz, H-12 a ), 1.25 (IH, dd， J=14.0, 8.4 Hz, H-12 β ), 2.80 (IE d, J=9.2Hz, H-13 a )， 4.49 (IH, s, H-14 a)， 5.78， 5.36 (each IH, s， H-17), 0.90 (3H, s, H-18), 0.93 (3H, s, H-19), 5.01 (1H， s， H-20)， 3.32 (3H， s, H-21), 2.23(2H, m, H-2'), 1.67(2H, m， H-3'), 1.28-1.33(8H, m， H-4，-H7，)， 0.91 (3H, t， J=6.8Hz, H-8，)； 13C匪 R (CDC13): 206.0, 175.2: 152.6， 116.1, 100.6, 69.7, 65.3, 63.3, 57.5， 56.4, 55.1, 48.6, 42.7, 42.0， 40.6, 39.6, 34.6, 33.9, 32.9, 32.2, 30.3, 29.4， 29.4, 25.5， 24.5, 23.1, 20.9, 18.0, 15.0。
实验例 1
本实验例在于研究本发明所述化合物抗食管癌 Ecl09细胞活性。
表 1 本发明所述化合物抗食管癌 Ecl09细胞活性
Figure imgf000014_0001
活性测试方法如下： 以人食管癌 Ecl09细胞（河南省医学科学研 究所） 为靶细胞， 用含 10 %胎牛血清 （TBD ) 的 RPMI 1640培养基 ( GIBCO )在 37度， 5 %C02下培养。 取对数生长期的细胞于 96 孔板 的每个孔中接种 6xl03个细胞，培养 24 h后， 向相应孔内加入不同浓度 的化合物济源冬凌草素 A (实施例 1获得的化合物）， 衍生物 1和衍生 物 2样品，继续培养 48 h,小心吸去药液，用不含血清的 RPMI 1640 培 养液洗 3遍。 每孔加入含 0.2 mg/mL MTT的培养基 200 37 °C 孵 育 4 h, 吸去上清液，加入 200 u LDMSO, 振荡 lO min,在 ELISA酶标 仪上比色测定对照组和各加样组的 OD值， 测定波长为 570 nm, 参考 波长为 450 nm。 计算各加药浓度处理的药物对细胞的抑制率， 据细胞 抑制曲线计算药物的半抑制浓度 IC50 ( μ g/mL )0
结论： 济源冬凌草素 A和它的 20-甲氧基、 20-乙氧基衍生物体外 对 Ecl09细胞具有较高的细胞毒活性， 以济源冬凌草素 A的活性最好。 实验例 2
本实验例在于研究本发明所述化合物的糖苷酶抑制活性。
表 2本发明所述化合物对糖苷酶的抑制性
化合物 （X-葡萄糖苷酶 β-葡萄糖苷酶 济源冬凌草素 A 26.3 25.0
衍生物 1式 （ II ) (R=CH3) 31.0 24.2
衍生物 2式 （ II ) (R=C¾CH3) 33.5 26.7
*抑制活性在化合物浓度为 1 mM下测定。
糖苷酶抑制活性的测定： 在 96孔板中每孔加入 40μ1 的药物 （初 筛用 0.067 Μ磷酸钾缓冲液配制成 0.25 mM含 10 % DMSO 的溶液； IC50 测定釆用 0.067 M磷酸钾缓冲液配制成一系列浓度梯度的含 10' % DMSO 的溶液）和 40 μΐ 0.1 u/ml的糖苷酶（baker's yeast, 美国 Sigma 公司）， 37 °C 保温 40 min后， 每孔加入 2.5 mM反应底物对硝基苯糖 苷 20 μΐ, 37 °C保温 5 min后加入终止缓冲液 0.1 M Na2C03 100 μΐ, 于 405 nm 比色测定 OD值。 阴性对照用含 10 % DMSO的 0.067 M磷酸盐 缓冲液代替药物。抑制率 = ( 1 -药品 OD值 /阴性对照 OD值） x l00 %, IC50通过作图求出。
结论： 济源冬凌草素 A和它的 20-甲氧基、 20-乙氧基衍生物体外 对 a-葡萄糖苷酶和 β-葡萄糖苷酶具有一定的抑制活性。 工业实用性
本发明以济源冬凌草为原料进行提取分离获得对映贝壳杉烯类 二萜， 然后其与羟基化合物缩合得到各种缩醛衍生物； 其与胺基化合 物反应得到各种氨基衍生物； 其与酰卤、 酸酐反应得到各种酰基化衍 生物。 本发明对映贝壳杉烯类二萜及其衍生物可作为抗炎药、 抗肿瘤 药和免疫调节剂使用； 还可作为糖苷酶抑制剂使用； 作为抗其它疾病 的药物使用； 作为各种医药品的中间体使用； 作为手性合成和有机合 成的中间体使用。

Claims

权 利 求 书
1、 一种对映贝壳杉烯类二萜， 其特征在于， 其有如下结构式:
Figure imgf000017_0001
( I )
2、 如权利要求 1所述的对映贝壳杉烯类二萜的衍生物， 其特征在 于， 其有如下结构通式：
Figure imgf000017_0002
R=CnH2n+1 (n=1 - 12),CH2CH2OH,CH2CH2CI,
CH2CH(OH)CH2OH,CH2CH2CH2OH,
CH2CH(OH)CH3, CH2COOH
葡萄糖基， 半乳糖基， 木糖基， 甘露糖基 -
( II )
3、 如权利要求 1所述的对映贝壳杉烯类二萜的衍生物， 其特征在 于， 其有如下结构通式:
Figure imgf000017_0003
R1=H,CnH2n+1 (n=1 -12),CH2CH20H,CH2CH2CI
CH2CH OH)CH2OH，CH2CH2CH2OH，
CH2CH(OH)CH3, CH2COOH
葡萄糖基， 半乳糖基， 木糖基， 甘露糖基'
R2=CnH2n+1 (n=1 -12), o,m,p-CI-C6H5l
o,m,p-Br-C6H5,o,m,p-F-C6H5,C6H5
(III)
4、 如权利要求 1所述的对映贝壳杉烯类二萜的衍生物， 其特征在 于， 其有如下结构通式:
Figure imgf000018_0001
R1=H,CnH2n+1 (n=1 -12),CH2CH2OH,CH2CH2C!
CH2CH(OH)CH2OH,CH2CH2CH2OH,
CH2CH(OH)CH3> CH2COOH
葡萄糖基， 半乳糖基， 木糖基， 甘露糖基
^^ ！^！或 ^^的酰基
( IV)
5、 如权利要求 1 所述的对映贝壳杉烯类二萜的提取方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 将冬凌草地上部分用有机溶剂浸泡， 其中所 用提取溶剂为乙醇、 甲醇、 异丙醇、 丙酮、 乙酸乙酯或石油醚中的一 种； 于 40 ~ 60 °C下， 浸泡 3小时 ~ 3天， 然后浓缩除去 85 ~ 90 %溶剂， 浓缩液经 LSA-10型大孔吸附树脂和硅胶反复层析分离， 再经重结晶， 其中重结晶所用溶剂为甲醇、 乙醇、 乙腈、 丙酮、 乙酸乙酯、 四氢呋 喃或异丙醇中的一种。
6、如权利要求 2所述的对映贝壳杉烯类二萜衍生物的合成方法， 其特征在于， 包括如下步骤： 将式（ I )对映贝壳杉烯二萜溶于有机 溶剂中， 其中所用有机溶剂为硝基甲烷、 乙腈、 乙醇、 甲醇、 异丙醇、 1， 2-二氯乙烷、 三氯乙烷、 二氯甲垸、 氯仿、 二氧六环或四氢呋喃 中的一种， 在酸性催化剂存在下， 于 0 ~ 100 °C条件下与羟基化合物 进行缩合反应， 反应物的摩尔比例为 1: 1 ~ 100或以羟基化合物同时 做反应溶剂；反应时间为 1 ~ 72小时，反应结束后蒸干溶剂，重结晶， 其中重结晶所用溶剂为乙腈、 乙醇、 甲醇、 丙酮、 四氢呋喃、 异丙醇 或乙酸乙酯中的一种。
7、 如权利要求 3所述的对映贝壳杉烯类二萜衍生物的合成方法， 其特征在于， 包括如下步骤： 将式（ I )对映贝壳杉烯二萜或式（ II· ) 所示衍生物溶于有机溶别中，其中所用溶剂为销基甲烷、 乙腈、 乙醇、 甲醇、 异丙醇、 1， 2-二氯乙垸 三氯乙垸、 二氯甲烷、 氯仿、 四氢 呋喃或二氧六环中的一种， 在酸性催化剂存在下与胺基化合物反应， 反应物摩尔比例为 1: 1 ~ 20； 反应温度控制在 10 ~ 90 °C ; 反应时间 为 2 ~ 72小时， 经薄层层析法监测至原料消失结束反应， 蒸干溶剂， 重结晶或柱层析分离得式 （III)所示化合物， 其中重结晶所用溶剂为 乙腈、 乙醇、 甲醇、 丙酮、 四氢呋喃、 异丙醇或乙酸乙酯中的一种。
8、 如权利要求 4所述的对映贝壳杉烯类二萜衍生物的合成方法， 其特征在于，包括如下步骤： 将式（ I )对映贝壳杉烯二萜或式（ II ) 所示衍生物溶于有机溶剂中， 其中所用有机溶剂为硝基甲烷、 乙腈、 1, 2-二氯乙垸、 三氯乙垸、 二氯甲垸、 氯仿、 四氢呋喃、 二氧六环、 吡啶或三乙胺中的一种，在碱性催化剂存在下与酸酐或酰卤反应， 反 应物摩尔比例为 1: 1 ~ 20；反应温度控制在 0 - 90 °C ;反应时间为 1 ~ 72小时， 经薄层层析法监测至原料消失结束反应， 蒸干溶剂， 再经重 结晶或柱层析分离，其中重结晶所用溶剂为乙腈、 乙醇、 甲醇、丙酮、 四氢呋喃、 异丙醇或乙酸乙酯中的一种。
9、如杈利要求 6或 7或 8所述的对映贝壳杉烯类二萜衍生物的合成 方法， 其特征在于， 所用酸性催化剂为盐酸、 氯化铵、 硫酸、 硫酸铵 或对甲基苯磺酸中的一种； 所用碱性催化剂为甲醇钠、 乙醇钠、 氢氧 化钠、 氢氧化钾、 氟化钾、 吡啶、 二乙胺、 三乙胺或 4-Ν,Ν-二甲基氨 基吡啶中的一种。
10、 如杈利要求 1-9所述的对映贝壳杉烯类二萜及其衍生物在制 备抗炎药、 抗肿瘤药或免疫调节剂， 以及糖苷酶抑制剂中的应用。
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