CN104557530A - 对映贝壳杉二萜衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及对映贝壳杉二萜衍生物及其制备方法和应用。本发明从红树林伴生植物卤地菊中提取、分离出一种对映贝壳杉型二萜化合物:对映-贝壳杉-16-烯-19-酸，并以此为基础进行结构改造，合成出了贝壳杉型二萜化合物的系列衍生物，贝壳杉型二萜化合物的系列衍生物的结构如通式1-4所示。本发明得到了具有α-亚甲基酮活性官能团的对映贝壳杉烯类二萜化合物，经实验研究表明，这些衍生物对多种人体肿瘤细胞具有良好的抑制活性，因此，可以用于制备抗肿瘤药物。

Description

对映贝壳杉二萜衍生物及其制备方法和应用
本申请系对映贝壳杉烯类二萜化合物的衍生物及其制备方法和应用的分案申请，原申请的申请日为2014年01月22日、申请号为201410029899.X、发明创造名称为对映贝壳杉烯类二萜化合物的衍生物及其制备方法和应用。
技术领域
本发明涉及化合物及其制备方法与应用，具体涉及对映贝壳杉二萜衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
天然产物具有复杂的骨架和立体构型、丰富的官能团，是药物先导物的主要来源之一，以此为原料实现药效基团的引入，在创造新药中占有重要的地位。
对映贝壳杉烷型二萜化合物具有广泛的生理活性，许多与其分子中具有α-亚甲基酮结构有关，近来人们在关注这些天然的或者人工合成的含有α-亚甲基酮结构单元的对映贝壳杉烷型二萜成分生物活性的同时，也开始研究其衍生物的制备和结构改造(伍旭，赵烽，刘珂，中草药，2009，40：348-352)，现有技术包括：引入酰基，或通过与某些羟基反应形成缩醛(酮)结构，或引入糖基以改善水溶性等等。本发明人从卤地菊(Wedelia prostrata(Hook.et Phn.)Hemsl.)中分离得到对映贝壳杉型二萜化合物：对映-贝壳杉-16-烯-19-酸，并以此为基础进行结构改造，合成出了具有α-亚甲基酮结构的对映贝壳杉二萜化合物，15-羰基-对映-贝壳杉-16烯-19-酸，该化合物有较强的肿瘤细胞毒活性(见中国专利，一种对映贝壳杉型二萜化合物及其制备方法和应用，申请号为：201310049613.X)。在上述基础上本发明人又进一步对分子中的羧基进行改造，引入酰胺键、酯键等基团，以制备多种对映贝壳杉烷型二萜化合物的衍生物，通过药理实验结果表明这些衍生物的抗肿瘤活性大大提高。
发明内容
本发明的目的在于提供对映贝壳杉二萜衍生物及其制备方法和应用。
本发明的目的通过如下技术方案实现：
所述的对映贝壳杉烯类二萜化合物的衍生物，其有如下结构通式：
R1＝非取代或取代的C1-C10的直链或支链的烷基、环烷基、烯丙基、炔丙基、苄基、苄基苯乙基、萘甲基、非取代或取代的直链或支链的酸、各类氨基酸
通式1
通式1所示化合物具体通过如下方法制备：
步骤1：将从卤地菊中分离得到对映贝壳杉二萜化合物:对映-贝壳杉-16-烯-19-酸,溶于有机溶剂四氢呋喃中，在催化剂过氧化叔丁醇的催化下，经氧化剂二氧化硒常温下氧化，反应时间为1-30小时，在其特定位置15位引入羟基，得到15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸；
步骤2：将15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸溶于有机溶剂四氢呋喃、吡啶、N,N-二甲基甲酰胺其中的一种或两种溶剂中，在0℃-50℃下并在二环己基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑作用下，加入相应的胺类化合物将羧基酰化，反应时间为1-24小时得到对映贝壳杉羟基化化合物的酰胺衍生物；
步骤3：将得到的对映贝壳杉羟基化化合物的酰胺衍生物溶于有机溶剂四氢呋喃、吡啶、N,N-二甲基甲酰胺其中的一种或两种溶剂中，并在常温下经温和氧化剂重铬酸吡啶盐作用下经10-15小时将羟基氧化成羰基，得到对映贝壳杉型二萜化合物的衍生物，即通式1所对应的衍生物。
所述的对映贝壳杉烯类二萜化合物的衍生物，具有如下结构通式：
R2＝非取代或取代的C1-C10的直链或支链的烷基、环烷基、烯丙基、炔丙基、苄基，苄基苯乙基、萘甲基、非取代或取代的直链或支链的酸
通式2
通式2所示化合物具体通过如下方法制备：
将对映贝壳杉二萜化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸溶于有机溶剂四氢呋喃、吡啶、N,N-二甲基甲酰胺其中的一种或两种溶剂中，加入相应的卤代烃以及碳酸钾，在常温下经催化剂碘化钾的催化，反应时间为1-10小时，将其19位羧基酯化，得到目标产物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸某酯，即通式2所对应的衍生物。
所述的对映贝壳杉烯类二萜化合物的衍生物，具有如下结构通式：
通式3所示化合物具体通过如下方法制备：
步骤1：将15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸溶于有机溶剂四氢呋喃、吡啶、N,N-二甲基甲酰胺其中的一种或两种溶剂中，加入相应的二卤代烃，碳酸钾，室温下搅拌反应0-10h，得到化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-溴代某酯；
步骤2：将所得的对映贝壳杉烷型二萜化合物溶于有机溶剂四氢呋喃、吡啶、N,N-二甲基甲酰胺其中的一种或两种溶剂中，与哌啶回流反应10h，得到对映贝壳杉烷型二萜化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-(1-哌啶基)某酯，将此化合物的15位羟基进一步氧化，得到如通式3所对应的衍生物。
所述的对映贝壳杉二萜衍生物，具有如下结构通式：
R4＝非取代或取代的C1-C10的直链或支链的饱和烃基、非取代或取代的C1-C10的直链或支链的不饱和烃基、环烷基、芳烃基、芳香杂环基团
通式4
通式4所示化合物具体通过如下方法制备：
步骤1：将天然对映贝壳杉二萜化合物的19位羧基酯化之后将其在冰浴条件下与LAH反应，所用的有机溶剂是绝对无水的THF，在氮气保护下回流反应0-200min，之后搅拌过夜，得到19-羟基-对映-贝壳杉-16-烯；
步骤2：将所得的化合物溶于有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺中，与TEA,及相应的酸酐和催化量的DMAP,室温下搅拌反应0-10h，为19-乙酰氧基-对映-贝壳杉-16-烯，再将其15位羟基化、羰基化，得到相应的目标产物，即通式4所对应的衍生物。
所述的对映贝壳杉二萜衍生物的应用：在制备抗肿瘤药物中的应用和作为抗肿瘤药物使用。
较之现有技术而言，本发明的优点在于：本发明提供了具有α-亚甲基酮活性官能团的对映贝壳杉烯类二萜化合物。从卤地菊中分离出了一个对映贝壳杉烷型二萜化合物，在其中引入α-亚甲基酮活性官能团，并以此为基础对羧基进行改造，得到对映贝壳杉烷型二萜化合物的系列衍生物。经体外抗肿瘤活性筛选表明，这些化合物有较强的细胞毒活性，可以用于制备抗肿瘤药物。
附图说明
图1为本发明对映贝壳杉烯类二萜化合物的衍生物的结构通式1；
图2为本发明对映贝壳杉烯类二萜化合物的衍生物的结构通式2；
图3为本发明对映贝壳杉烯类二萜化合物的衍生物的结构通式3；
图4为本发明对映贝壳杉烯类二萜化合物的衍生物的结构通式4；
图5为本发明实施例1至实施例6的反应方程式；
图6为本发明实施例7至实施例10的反应方程式；
图7为本发明实施例11至实施例13的反应方程式；
图8为本发明实施例14的反应方程式；
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1至实施例6的反应方程式如下：
a.SeO2,t-BuOOH,THF；b.DCC,HOBt,THF,DMF,NH2R或氨基酸甲酯盐酸盐；c.PDC,DMF
实施例1：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之一
步骤1：对映贝壳杉二萜化合物的羟基化反应：
将SeO20.12g，t-BuOOH 0.46ml,溶于THF12ml中，置于存放有磁子的干燥50ml圆底烧瓶中，搅拌加入溶于THF12.5ml的化合物W1 0.50g中，室温下反应20个小时。待反应20个小时后，向反应体系中加入溶有少量亚硫酸氢钠的饱和食盐水，乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，干燥。浓缩提取物后得化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸(W2)，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(4:1)，并加入体积为石油醚、丙酮总体积的0.3％的醋酸]。得粉末状固体0.42g，产率79.9％。
化合物W2理化数据如下：白色粉末状；mp147-148℃。EI-MS m/z:318[M]+。
步骤2：步骤1所得化合物W2的19位羧基酰化反应：
将步骤1所得的对映贝壳杉烷型二萜化合物W2 0.52g溶于无水THF10mL和无水DMF3.0mL的混合溶液中,加入DCC 0.41g,HOBt 0.31g,室温下搅拌2h。
加入正丙基胺0.46mL。加热回流反应8h,反应液静置放冷后过滤,滤液中加入水50mL,乙酸乙酯30mL提取两次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,浓缩提取液后，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(6:1)]，得粉末状固体0.28g，为化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-丙酰胺，产率46.7％.
所得对映贝壳杉型化合物理化数据测定如下:白色粉末状；EI-MS m/z:359[M]+。
步骤3：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-丙酰胺的15位羟基的羰基化反应：
将步骤2所得的对映贝壳杉烷型二萜化合物0.28g溶于DMF4mL,加入PDC 0.40g,室温下反应12h,反应液加入水15mL,乙酸乙酯10mL提3次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,蒸去溶剂。粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(8:1)]，得泡沫状固体0.14g，为对映贝壳杉烷型二萜化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-丙酰胺(W3)，产率52.0％.
化合物W3理化数据测定如下：白色泡沫状固体；mp156.4-157.6℃。EI-MS m/z:357[M]+；UV(CH3OH)λnm：246；IR(KBr)v cm-1：3386，2926，2860，1720，1638,1517,1463；1H-NMR(CDCl3，600MHz)δ:5.93(s,1H,17-Ha)，5.65(t,1H,J＝6.0Hz,-NH),5.24(s,1H,17-Hb)，3.15～3.24(m,2H,CONHCH 2 ),2.41(m,2H,J＝12Hz,14-H)，1.18(s,3H,18-CH 3 )，0.97(s,3H,20-CH 3 ),0.93(t,3H,J＝6.0Hz,CONHCH2CH2CH 3 )；
13C-NMR(CDCl3，150MHz)δ:210.7(15-C)，176.5(19-C)，149.5(16-C)，114.4(17-C)，56.6(5-C)，52.5(8-C)，51.5(9-C)，43.6(4-C)，41.1(C-CONHCH 2 )，40.2(1-C)，40.2(10-C)，38.1(13-C)，38.0(3-C)，36.4(14-C)，33.9(7-C)，32.1(12-C)，30.0(18-C)，22.6(C-CH 2 CH3)，20.6(6-C)，19.1(2-C)，18.3(11-C)，15.6(20-C)，11.5(C-CH2 CH 3 )。
实施例2：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之二
步骤1：化合物W2的19位羧基酰化反应：
将化合物W2 0.49g溶于无水THF10mL和无水DMF3.0mL的混合溶液中,加入DCC 0.40g,HOBt0.30g,室温下搅拌2h，再加入正丁基胺0.42mL。加热回流反应8h,反应液静置放冷后过滤,滤液中加入水50mL,乙酸乙酯30mL提取两次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,浓缩提取液后，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(6:1)]，得粉末状固体0.37g，为化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-丁酰胺，产率63.6％。
所得对映贝壳杉烷型二萜化合物理化数据测定如下：白色粉末状固体；EI-MS m/z:373[M]+。
步骤2：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-丁酰胺的15位羟基的羰基化反应：
将步骤1所得的对映贝壳杉烷型二萜化合物0.37g溶于DMF4mL,加入PDC 0.40g,室温下反应12h,反应液加入水15mL,乙酸乙酯10mL提3次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,蒸去溶剂。粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(8:1)]，得泡沫状固体0.17g，为对映贝壳杉烷型二萜化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-丁酰胺(W4)，产率46.0％.
所得对映贝壳杉烷型二萜化合物W4理化数据测定如下：白色泡沫状固体；EI-MSm/z:371[M]+；UV(CH3OH)λnm：283；IR(KBr)v cm-1：3375，2915，2854，1726，1632,1512,1452；
1H-NMR(CDCl3，600MHz)δ:5.93(s,1H,17-Ha)，5.62(t,1H,J＝5.0Hz，-NH),5.24(s,1H,17-Hb)，3.19～3.23(m,2H,CONHCH 2 ),1.19(s,3H,18-CH 3 )，0.97(s,3H,20-CH 3 ),0.95(t,3H,J＝8.4Hz,CONHCH2CH2CH2CH 3 )；
13C-NMR(CDCl3，150MHz)δ:210.7(15-C)，176.5(19-C)，149.5(16-C)，114.4(17-C)，56.6(5-C)，52.5(8-C)，51.5(9-C)，43.6(4-C)，40.3(C-CONHCH 2 )，40.2(1-C)，39.2(10-C)，38.1(13-C)，38.0(3-C)，36.4(14-C)，33.9(7-C)，32.1(12-C)，31.4(C-CH 2 CH2CH3)，30.0(18-C)，20.6(C-CH2 CH 2 CH3)，20.2(6-C)，19.1(2-C)，18.4(11-C)，15.6(20-C)，13.7(C-CH2 CH 3 )。
实施例3：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之三
步骤1：化合物W2的19位羧基酰化反应：
将化合物W2 0.50g溶于无水THF10mL和无水DMF3mL的混合溶液中，加入DCC0.41g,HOBt0.31g,室温下搅拌2h。加入苄胺0.50mL。加热回流反应8h,反应液静置放冷后过滤,滤液中加入水50mL,乙酸乙酯30mL提取两次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,浓缩提取液后，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(6:1)]，得粉末状固体0.28g，为化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-苄酰胺，产率43.0％。
所得对映贝壳杉烷型二萜化合物理化数据测定如下：白色粉末状固体；EI-MS m/z:407[M]+。
步骤2：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-苄酰胺的15位羟基的羰基化反应：
将步骤1所得的对映贝壳杉烷型二萜化合物0.28g溶于DMF4mL,加入PDC 0.41g,室温下反应12h,反应液加入水15mL,乙酸乙酯10mL提取3次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,蒸去溶剂。粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(8:1)]，得泡沫固体0.15g，为对映贝壳杉烷型二萜化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-苄酰胺(W5)，产率56.0％。
对映贝壳杉烷型二萜化合物W5理化数据测定如下：白色泡沫状固体；mp210.2-211.6℃。EI-MS m/z:405[M]+；UV(CH3OH)λnm:211；IR(KBr)v cm-1：3386，2920，2849，1720，1638,1517,1452,1249；
1H-NMR(CDCl3，600MHz)δ:7.26-7.35(m,5H,-CH2 Ph),5.93(s,1H,H-17Ha)，5.89(m.1H,-NH),5.24(s,1H,H-17Hb)，4.39～4.46(m,2H,-CH 2 Ph),1.22(s,3H,18-CH 3 )，0.94(s,3H,20-CH3)；
13C-NMR(CDCl3，150MHz)δ:210.7(15-C)，176.4(19-C)，149.5(16-C)，138.4(Ph-1’)，128.6(Ph-3’,5’),127.9(Ph-2’,6’)，127.4(Ph-4’)，114.4(17-C)，56.6(5-C)，52.5(8-C)，51.5(9-C)，43.7(13-C)，43.6(4-C)，40.2(1-C)，40.2(10-C)，38.0(3-C)，36.3(14-C)，33.9(7-C)，32.1(12-C)，30.0(18-C)，26.8(C-CH 2 Ph)，20.6(6-C)，19.1(2-C)，18.3(11-C)，15.7(20-C)。
实施例4：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之四
步骤1：化合物W2的19位羧基酰化反应：
将化合物W2 0.51g溶于无水THF10mL和无水DMF3.0mL的混合溶液中,加入DCC 0.40g,HOBt0.29g,室温下搅拌2h，再加入异丙基胺0.42mL。加热回流反应8h,反应液静置放冷后过滤,滤液中加入水50mL,乙酸乙酯30mL提取两次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,浓缩提取液后，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(6:1)]，得粉末状固体0.31g，为化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-异丙酰胺，产率53.8％.
所得对映贝壳杉烷型二萜化合物理化数据测定如下：白色粉末状固体；EI-MS m/z:359[M]+。
步骤2：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-异丙酰胺的15位羟基的羰基化反应：将步骤1所得的对映贝壳杉烷型二萜化合物0.31g溶于DMF4mL,加入PDC 0.40g,室温下反应12h,反应液加入水15mL,乙酸乙酯10mL提3次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,蒸去溶剂。粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(8:1)]，得泡沫状固体0.16g，为对映贝壳杉烷型二萜化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-异丙酰胺(W6)，产率51.9％.
所得对映贝壳杉烷型二萜化合物W6理化数据测定如下：白色泡沫状固体；EI-MSm/z:357[M]+；IR(KBr)v cm-1：3418，2958，2860，1724，1632,1518,1448；
1H-NMR(CDCl3，600MHz)δ:5.93(s,1H,17-Ha)，5.39(d,1H,J＝4.4Hz，-NH),5.24(s,1H,17-Hb)，4.04～4.08(m,1H,CONHCH(CH 3 ) 2 ),1.17(s,3H,18-CH 3 )，1.15(d,3H,J＝2.8HZ,CONHCH(CH3)2),1.14(d,3H,J＝2.8Hz,CONHCH(CH3)2),0.98(s,3H,20-CH 3 )；
13C-NMR(CDCl3，150MHz)δ:210.7(15-C)，175.5(19-C)，149.5(16-C)，114.4(17-C)，56.6(5-C)，52.5(8-C)，51.5(9-C)，43.4(4-C)，40.9(C-CONHCH(CH 3 ) 2 )，40.8(1-C)，40.2(10-C)，38.0(13-C)，38.0(3-C)，36.3(14-C)，33.9(7-C)，33.9(12-C)，30.0(18-C)，22.6(C-CONHCH(CH3 ) 2 )，22.4(C-CONHCH(CH3 ) 2 )，20.2(6-C)，19.0(2-C)，18.3(11-C)，15.7(20-C)。
实施例5：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之五
步骤1：化合物W2的19位羧基酰胺化反应：将W2 0.44g溶于38ml的吡啶溶液中，加入0.45g的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，0.57g的DCC，35℃条件下搅拌反应24h。反应液置于低温下过夜，抽滤，滤液用冷冻的水和乙酸乙酯提取两次，冷冻的饱和食盐水洗涤，干燥，蒸出溶剂。粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮＝9:1]，得白色粉末状固体0.58g，为对映贝壳杉烷型二萜化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-苯丙酰胺甲酯，产率88.2％。
化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-苯丙酰胺甲酯理化数据测定如下：白色粉末状固体；ESI-MS m/z:479[M]+
步骤2：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-苯丙酰胺甲酯的15位羟基的羰基化反应：将步骤1所得的0.58g产物溶于9ml的DMF中，加入1.00g的PDC,室温下搅拌反应12h。反应液加水和乙酸乙酯提取两次，饱和食盐水洗涤，干燥，蒸出溶剂，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮＝4:1]，得白色粉末状固体0.16g，为15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-苯丙酰胺甲酯(W7)，产率27.6％。
化合物W7的理化数据测定如下：白色粉末状固体；ESI-MS m/z:477[M]+，500[M+Na]+；IR(KBr)v cm-1：3408，2942，2855，1726，1643，1517；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ:7.13-7.28(m,5H,-CH2 Ph)，5.92(s,1H,17-Ha)，5.23(s,1H,17-Hb)，4.86(m,1H,CONHCHCOO)，3.75(s,3H,COOCH 3 )，3.02,3.19(m,1H,m,1H,PhCH 2 )，1.12(s,3H,18-CH3)，0.81(s,3H,20-CH3)；
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ:210.6(15-C)，176.4(19-C)，172.6(CONHCHCOOCH3)，149.6(16-C)，136.1(Ph-1’)，129.1(Ph-2’,6’)，128.7(Ph-3’,5’)，127.2(Ph-4’)，114.4(17-C)，56.5(5-C)，52.95(CONHCHCOOCH3)，52.5(8-C)，52.3(CONHCHCOOCH 3 )，51.5(9-C)，43.7(4-C)，40.2(1-C)，38.1(10-C)，37.9(13-C)，37.7(3-C)，36.6(14-C)，33.9(7-C)，32.2(12-C)，30.9(Ph-CH 2 )，29.8(18-C)，20.4(6-C)，18.4(2-C)，18.9(11-C)，15.5(20-C)，
实施例6：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之六
步骤1：化合物W2的19位羧基酰胺化反应：将W2 0.27g溶于30ml的吡啶溶液中，加入0.21g的缬氨酸甲酯盐酸盐，0.35g的DCC，35℃条件下搅拌反应20h。反应液置于低温下过夜，抽滤，滤液用冷冻的水和乙酸乙酯提取两次，冷冻的饱和食盐水洗涤，干燥，蒸出溶剂。粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮＝9:1]，得白色粉末状固体0.31g，为对映贝壳杉烷型二萜化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-缬氨酰胺甲酯，产率85.1％。
化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-缬氨酰胺甲酯理化数据测定如下：白色粉末状固体，ESI-MS m/z:431[M]+。
步骤2：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-缬氨酰胺甲酯的15位羟基的羰基化反应：将步骤1所得的0.31g产物溶于8.00ml的DMF中，加入0.75g的PDC,室温下搅拌反应14h。反应液加水和乙酸乙酯提取两次，饱和食盐水洗涤，干燥，蒸出溶剂，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮＝4:1]，得到白色粉末状固体，为化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-缬氨酰胺甲酯(W8)，产率58.1％.
化合物W8的理化数据测定如下：白色粉末状固体；ESI-MS m/z:429[M]+；IR(KBr)v cm-1：3413，2936,2866,1736,1720，1660，1506，1194；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ:6.14(d,1H,J＝8.0Hz,CONHCHCOOCH3)，5.93(s,1H,17-Ha)，5.24(s,1H,17-Hb)，3.75(s,3H,COOCH 3 )，1.22(s,3H,18-CH3)，0.95(s,3H,20-CH3)0.92(dd,6H,J＝4.0,20.0Hz,CH(CH 3 ) 2 )；
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ:210.8(15-C)，176.7(19-C)，172.9(CONHCHCOOCH3)，149.5(16-C)，114.4(17-C)，56.6(5-C)，56.7(CONHCHCOOCH3)，52.5(8-C)，52.1(CONHCHCOOCH 3 )，51.5(9-C)，43.9(4-C)，40.9(1-C)，38.1(10-C)，38.0(13-C)，36.4(3-C)，33.9(14-C)，32.1(7-C)，31.2(12-C)，30.2(18-C)，26.8(CH(CH3)2)，20.6(6-C)，18.4(2-C)，18.9(11-C)，17.9,19.1(CH(CH 3 ) 2 )，15.8(20-C)。
实施例7至实施例10的反应方程式如下：
d.PDC,DMF；e.DMF,K2CO3,BrR,KI
实施例7：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之七
化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸的19位羧基酯化反应：
将15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸0.25g溶于DMF10mL,加入无水碳酸钾0.46g,溴乙烷0.08g,催化量碘化钾,在室温下反应8h。待反应8h之后，反应液中加入水30mL,用乙酸乙酯25mL提取两次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,浓缩提取液后，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(7:1)]，得粉末状固体0.21g，为化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸乙酯(W9)，产率77.2％。
对映贝壳杉烷型二萜化合物W9理化数据测定如下：白色粉末状固体；mp148.5-149.6℃。EI-MS m/z:344[M]+；IR(KBr)v cm-1：3426，2950，2926,1728,1692,1452,1245；
1H-NMR(CDCl3，600MHz)δ:5.93(s,1H,H-17Ha)，5.24(s,1H,H-17Hb)，4.08～4.10(m,2H,-COOCH 2 ),1.28(t,3H,J＝4.8Hz,CH2CH 3 ),1.19(s,3H,18-CH 3 )，0.94(s,3H,20-CH 3 )；
13C-NMR(CDCl3，150MHz)δ:210.7(15-C)，177.3(19-C)，149.4(16-C)，114.3(17-C)，59.9(COOCH 2 ),56.0(5-C)，52.4(8-C)，51.5(9-C)，43.4(4-C)，40.1(1-C)，39.9(10-C)，38.0(13-C)，37.8(3-C)，36.4(14-C)，33.6(7-C)，32.1(12-C)，28.7(18-C)，20.0(6-C)，18.8(2-C)，18.3(11-C)，15.5(20-C),14.1(COOCH2 CH 3 )。
实施例8：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之八
化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸的19位羧基酯化反应：将15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸0.25g溶于DMF10mL,加入无水碳酸钾0.46g,溴丙烷0.097g,催化量碘化钾,在室温下反应8h。待反应8h之后，反应液中加入水30mL,用乙酸乙酯25mL提取两次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,浓缩提取液后，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(7:1)]，得粉末状固体0.19g，为化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸丙酯(W10)，产率69.2％。
对映贝壳杉烷型二萜化合物W10理化数据测定如下：黄色油状液体；EI-MS m/z:358[M]+；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ:5.93(s,1H,H-17Ha)，5.24(s,1H,H-17Hb)，3.94～4.07(m,2H,-COOCH2),1.21(s,3H,18-CH3)，0.99(t,3H,J＝4.0Hz,CH2 CH 3 ),0.93(s,3H,20-CH3)；
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ:210.6(15-C)，177.4(19-C)，149.5(16-C)，114.3(17-C)，65.7(COOCH 2 ),56.1(5-C)，52.4(8-C)，51.5(9-C)，43.7(4-C)，40.1(1-C)，39.9(10-C)，38.0(13-C)，37.8(3-C)，36.4(14-C)，33.6(7-C)，32.1(12-C)，28.7(18-C)，21.8(COOCH2 CH 2 ),20.0(6-C)，18.8(2-C)，18.3(11-C)，15.4(20-C),10.7(COOCH2CH2 CH 3 )；
实施例9：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之九
化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸的19位羧基酯化反应：将15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸0.25g溶于DMF10mL,加入无水碳酸钾0.46g,溴代正丁烷0.10g,催化量碘化钾,在室温下反应8h，待反应8h之后，反应液中加入水30mL,用乙酸乙酯25mL提取两次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,浓缩提取液后，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(7:1)]，得粉末状固体0.20g，为化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸丁酯(W11)，产率68.1％。
对映贝壳杉烷型二萜化合物W11理化数据测定如下：黄色油状液体；EI-MS m/z:372[M]+；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ:5.80(s,1H,H-17Ha)，5.13(s,1H,H-17Hb)，3.85～4.01(m,2H,-COOCH 2 ),1.07(s,3H,18-CH3)，0.83(t,3H,J＝8.0Hz，CH2CH 3 ),0.81(s,3H,20-CH3)；
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ:210.4(15-C)，177.2(19-C)，149.4(16-C)，114.2(17-C)，63.8(COOCH 2 ),56.0(5-C)，52.3(8-C)，51.4(9-C)，43.6(4-C)，40.0(1-C)，39.8(10-C)，37.9(13-C)，37.7(3-C)，36.3(14-C)，33.5(7-C)，32.0(12-C)，30.4(COOCH2 CH 2 ),28.7(18-C)，20.0(6-C)，19.3(COOCH2CH2 CH 2 ),18.8(2-C)，18.2(11-C)，15.4(20-C),13.6(COOCH2CH2CH2CH 3 )；
实施例10：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之十
化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸的19位羧基酯化反应：将15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸0.25g溶于DMF10mL,加入无水碳酸钾0.46g,溴化苄0.14g,催化量碘化钾,在室温下反应8h，待反应8h之后，反应液中加入水30mL,用乙酸乙酯25mL提取两次,合并提取液,饱和食盐水洗涤,干燥,浓缩提取液后，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(7:1)]，得粉末状固体0.27g，为化合物15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸苄酯(W12)，产率85.0％。
对映贝壳杉烷型二萜化合物W12理化数据测定如下：黄色油状液体；EI-MS m/z:406[M]+；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ:7.18～7.31(m,5H,CH2Ph),5.90(s,1H,H-17Ha)，5.24(s,1H,H-17Hb)，5.12,5.04(dd,2H,J1＝32.8J，12.0Hz CH 2 Ph),1.19(s,3H,18-CH 3 ),0.81(s,3H,20-CH3)；
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ:210.4(15-C)，176.9(19-C)，149.5(16-C)，136.1(Ph-1’)，129.0(Ph-3’,5’),128.2(Ph-2’,6’)，128.5(Ph-4’)，114.3(17-C)，65.9(COOCH 2 ),56.2(5-C)，52.4(8-C)，51.5(9-C)，43.8(4-C)，40.1(1-C)，39.9(10-C)，38.0(13-C)，37.9(3-C)，36.4(14-C)，33.7(7-C)，32.1(12-C)，28.8(18-C)，20.1(6-C)，18.9(2-C)，18.3(11-C)，15.5(20-C)。
实施例11至实施例13的反应方程式如下：
f.DMF,Br(CH2)nBr,K2CO3；g.THF,K2CO3,哌啶；h.PDC,DMF
实施例11：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之十一
步骤1：化合物W2的19位羧基酯化：将0.25g的W2溶于6.25ml的DMF中，加入0.26ml的1,2-二溴乙烷，0.27g碳酸钾，室温下搅拌反应4h。反应物加入水，乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过夜。蒸出溶剂，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(6:1)]，得粉末状固体0.32g，为化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-溴代乙酯，产率96.1％。
所得对映贝壳杉型化合物理化数据测定如下:淡黄色油状；EI-MS m/z:424[M]+。
步骤2：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-2-溴代乙酯中溴的取代反应：将步骤1所得的对映贝壳杉烷型二萜化合物0.32g溶于5.OOml的THF中，加入哌啶0.23ml，无水碳酸钾0.22g，回流反应10h。反应液加入水和乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸出溶剂。粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(6:1)],得淡黄色油状化合物0.20g，为对映贝壳杉烷型二萜化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-2-(1-哌啶基)乙酯，产率61.9％；
化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-2-(1-哌啶基)乙酯理化数据测定如下：淡黄色油状化合物；EI-MS m/z:429[M]+。
步骤3：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-2-(1-哌啶基)乙酯15位羟基的羰基化反应：将步骤2所得的15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-2-(1-哌啶基)乙酯0.20g溶于2.70ml DMF中，加入0.27g的PDC,室温下过夜反应，反应物加入水和乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸出溶剂，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(5:1)],得油状物0.07g，为15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-2-(1-哌啶基)乙酯(W13)，产率35.0％。
化合物W13的理化数据测定如下：黄色油状物；EI-MS m/z:427[M]+；IR(KBr)v cm-1：2931，2854，1721，1638，1457,1221，1162；
1H-NMR(CDCl3，600MHz)δ:5.94(s,1H,17-Ha)，5.25(s,1H,17-Hb)，4.16～4.23(m,2H,COOCH 2 )，2.62(t,2H,J＝6.0Hz,COOCH2 CH 2 )，2.45(s,4H,N(CH 2 ) 2 CH2),1.47(s,3H,18-CH3),0.97(s,3H,20-CH 3 )；
13C-NMR(CDCl3，150MHz)δ:210.8(15-C)，177.2(19-C)，149.4(16-C)，114.4(17-C)，61.6(C-COOCH 2 )，57.1(COOCH2 CH 2 )，56.1(5-C)，54.6(N(CH 2 )2CH2)，52.4(8-C)，51.5(9-C)，43.7(4-C)，40.1(1-C)，39.9(10-C)，38.0(13-C)，37.7(3-C)，36.5(14-C)，33.7(7-C)，32.2(12-C)，29.0(18-C)，25.9(N(CH2)2 (CH 2 ) 2 CH2)，24.1(N(CH2)2(CH2)2 CH 2 )，20.2(6-C)，18.9(11-C)，18.3(2-C)，15.5(20-C)。
实施例12：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之十二
步骤1：化合物W2的19位羧基酯化：将0.36g的W2溶于11ml的无水DMF中，加入0.4ml的1,3-二溴丙烷，0.34g无水碳酸钾，室温下搅拌反应6h。反应物加入水，乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠过夜干燥。蒸出溶剂，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(6:1)]，得淡黄色油状化合物0.47g，为化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-3溴代丙酯，产率94.2％。
所得对映贝壳杉型化合物理化数据测定如下:淡黄色油状化合物；EI-MS m/z:438[M]+；
步骤2：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-3-溴代丙酯中溴的取代反应：将步骤1所得的对映贝壳杉烷型二萜化合物0.47g溶于10ml的THF中，加入哌啶0.45ml，无水碳酸钾0.45g，回流反应10h。反应液加入水和乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸出溶剂,粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(6:1)],得油状化合物0.45g，为15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-3-(1-哌啶基)丙酯，产率96.3％；
化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-3-(1-哌啶基)丙酯理化数据测定如下：淡黄色油状化合物；EI-MS m/z:443[M]+；
步骤3：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-3-(1-哌啶基)丙酯15位羟基的羰基化反应：将步骤2所得的15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-3-(1-哌啶基)丙酯0.45g溶于6.00ml DMF中，加入0.59g的PDC,室温下过夜反应，反应物加入水和乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸出溶剂，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(5:1)],得油状物0.18g，为15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19酸-3-(1-哌啶基)丙酯(W14)，产率38.2％。
化合物W14的理化数据测定如下：黄色油状物；EI-MS m/z:441[M]+；IR(KBr)v cm-1：2931，2849，1721，1643，1457，1222，1156；
1H-NMR(CDCl3，600MHz)δ:5.94(s,1H,17-Ha)，5.25(s,1H,17-Hb)，4.03～4.15(m,2H,COOCH 2 )，2.38～2.45(m,6H,COOCH2CH2 CH 2 ,N(CH 2 ) 2 CH2),1.20(s,3H,18-CH3),0.97(s,3H,20-CH 3 )。
13C-NMR(CDCl3，150MHz)δ:210.8(15-C)，177.4(19-C)，149.5(16-C)，114.4(17-C)，62.8(C-COOCH 2 )，56.1(COOCH2CH2 CH 2 )，56.1(5-C)，54.6(N(CH 2 )2CH2)，52.4(8-C)，51.5(9-C)，43.7(4-C)，40.6(1-C)，40.1(10-C)，38.0(13-C)，37.7(3-C)，36.5(14-C)，33.6(7-C)，32.1(12-C)，28.7(18-C)，25.9(COOCH2 CH 2 CH2)，25.8(N(CH2)2(CH 2 )2CH2)，24.3(N(CH2)2(CH2)2 CH 2 )，20.3(6-C)，19.0(11-C)，18.6(2-C)，15.5(20-C)。
实施例13：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之十三
步骤1：化合物W2的19位羧基酯化：将0.49g的W2溶于12.5ml的无水DMF中，加入0.52ml的1,4-二溴丁烷，0.41g无水碳酸钾，室温下搅拌反应6h。反应物加入水，乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠过夜干燥。蒸出溶剂，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(6:1)]，得淡黄色油状化合物0.63g，为化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-4-溴代丁酯，产率90.5％。
所得对映贝壳杉型化合物理化数据测定如下:淡黄色油状物；EI-MS m/z:452[M]+。
步骤2：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-4-溴代丁酯中溴的取代反应：将步骤1所得的对映贝壳杉烷型二萜化合物0.63g溶于12ml的THF中，加入哌啶0.54ml，无水碳酸钾0.52g，回流反应10h。反应液加入水和乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸出溶剂。粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(6:1)],得油状化合物0.38g，为对映贝壳杉烷型二萜化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-4-(1-哌啶基)丁酯，产率60.8％。
化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-4-(1-哌啶基)丁酯理化数据测定如下：油状化合物；EI-MS m/z:457[M]+。
步骤3：化合物15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-4-(1-哌啶基)丁酯15位羟基的羰基化反应：将步骤2所得的15-羟基-对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-4-(1-哌啶基)丁酯取出其中的0.34g溶于5.00ml DMF中，加入0.45g的PDC,室温下过夜反应，反应物加入水和乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸出溶剂，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(5:1)],得油状物0.12g，为15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯-19酸-4-(1-哌啶基)丁酯(W15)，结构如图所示，产率35.1％。
化合物W15的理化数据测定如下：黄色油状物；EI-MS m/z:455[M]+；IR(KBr)v cm-1：2926，2849，1720，1671，1469，1436，1227，1151；
1H-NMR(CDCl3，600MHz)δ:5.94(s,1H,17-Ha)，5.25(s,1H,17-Hb)，4.02～4.13(m,2H,COOCH 2 )，2.39(m,6H,COOCH2CH2 CH 2 ,N(CH 2 ) 2 CH2),1.21(s,3H,18-CH3),0.96(s,3H,20-CH 3 )；
13C-NMR(CDCl3，150MHz)δ:210.7(15-C)，177.4(19-C)，149.5(16-C)，114.4(17-C)，64.1(C-COOCH 2 )，58.9(COOCH2CH2CH2 CH 2 )，56.1(5-C)，54.5(N(CH 2 )2CH2)，52.4(8-C)，51.5(9-C)，43.7(4-C)，40.1(1-C)，39.9(10-C)，38.0(13-C)，37.8(3-C)，36.5(14-C)，33.6(7-C)，32.1(12-C)，28.8(18-C)，26.7(COOCH2 CH 2 CH2CH2)，25.7(N(CH2)2(CH 2 )2CH2)，24.3(N(CH2)2(CH2)2 CH 2 )，23.5(COOCH2CH2 CH 2 CH2)，20.1(6-C)，18.8(11-C)，18.3(2-C)，15.5(20-C)。
实施例14：对映贝壳杉烯类二萜化合物衍生物的制备之十四
实施例14的反应方程式如下：
i.DMF,K2CO3,KI,CH3CH2X；j.THF,LAH；k.THF,RCOOCOR,CH3-(CH2)n-COOH,TEA,DMAP；l.THF,SeO2,t-BuOOH；m.PDC,DMF
步骤1：对映贝壳杉二萜化合物的19位羧基的酯化反应：取0.5g的W1溶于20ml的DMF溶液中，加入0.86g的无水碳酸钾，0.21ml的溴乙烷，催化量的碘化钾，室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，干燥，蒸出溶剂。粗品柱色谱纯化[石油醚：乙酸乙酯＝30:1]，得白色雪晶状固体0.49g，为对映-贝壳杉-16-烯-19-酸乙酯，产率89.7％。
所得对映-贝壳杉-16-烯-19-酸乙酯化合物理化数据测定如下：白色雪晶状固体；ESI-MSm/z:330[M]+。
步骤2：化合物对映-贝壳杉-16-烯-19-酸乙酯的还原反应：
在冰浴条件下将0.3g的LAH溶于14ml绝对无水的THF中；将步骤1)所得的0.49g对映-贝壳杉-16-烯-19-酸乙酯溶于5ml绝对无水的THF中，在冰浴条件下将对映-贝壳杉-16-烯-19-酸乙酯溶液逐滴加入到LAH溶液中，氮气保护下回流反应150min；停止加热，常温搅拌过夜。反应液冰浴下缓慢依次加入2ml冰水，2ml的15％的NaOH,6ml的冰水，16g无水硫酸钠低温搅拌片刻，抽滤，蒸出溶剂，得白色棉花状固体粉末0.43g,为19-羟基-对映-贝壳杉-16-烯。
所得化合物19-羟基-对映-贝壳杉-16-烯的理化数据测定如下：白色棉花状固体粉末；ESI-MS m/z:288[M]+；
步骤3：化合物19-羟基-对映-贝壳杉-16-烯的酯化反应：将步骤2所得的0.43g的19-羟基-对映-贝壳杉-16-烯溶于11ml的无水THF中，依次加入0.68ml的TEA,0.35ml的乙酸酐和催化量的DMAP,室温下搅拌反应8h。加入水和乙酸乙酯提取两次，饱和食盐水洗涤，干燥，蒸出溶剂，得淡黄色针状晶体0.29g，为19-乙酰氧基-对映-贝壳杉-16-烯，产率：59.2％；
所得化合物19-乙酰氧基-对映-贝壳杉-16-烯理化数据测定：淡黄色针状晶体；ESI-MSm/z:330[M]+；
步骤4：化合物19-乙酰氧基-对映-贝壳杉-16-烯的羟基化反应：将步骤3所得的0.29g的19-乙酰氧基-对映-贝壳杉-16-烯溶于13ml的THF中，加入0.06g的SeO2，0.25ml的t-BuOOH,常温搅拌20h，待反应20个小时后，向反应体系中加入溶有少量亚硫酸氢钠的饱和食盐水，乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，干燥。蒸出溶剂，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮(8:1)，并加入体积为石油醚、丙酮总体积的0.3％的醋酸]。得黄色针状结晶0.21g，为15-羟基-19-乙酰氧基-对映-贝壳杉-16-烯，产率67.7％；
所得化合物15-羟基-19-乙酰氧基-对映-贝壳杉-16-烯的理化数据测定：黄色针状晶体；ESI-MS m/z:346[M]+；
步骤5：15-羟基-19-乙酰氧基-对映-贝壳杉-16-烯的15位羟基羰基化反应：
将步骤4)所得的0.21g的15-羟基-19-乙酰氧基-对映-贝壳杉-16-烯溶于6ml的DMF中，加入0.4g的PDC,室温下搅拌过夜反应。加入水和乙酸乙酯提取两次，合并提取液，饱和食盐水洗涤，干燥，蒸出溶剂，粗品柱色谱纯化[石油醚：丙酮＝12：1]，得白色结晶0.11g，为19-乙酰氧基-15-羰基-对映-贝壳杉-16-烯(W16)，产率:52.4％；
所得W16的理化数据测定：白色晶状固体；ESI-MS m/z:344[M]+；IR(KBr)v cm-1：2932，2834，1732，1638，1446，1391，1238，1024；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ:5.93(s,1H,17-Ha)，5.25(s,1H,17-Hb)，3.86,4.21(d,1H,d,1H,J＝8.0,12.0Hz,19-CH 2 OH)，2.05(s,3H,OCOCH 3 )1.10(s,3H,18-CH 3 )，0.95(s,3H,20-CH 3 )；
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ:210.7(15-C)，171.4(CH2OCOCH3)，149.4(16-C)，114.6(17-C)，66.9(20-C)，55.7(5-C)，52.6(8-C)，52.3(9-C)，39.8(10-C)，39.5(4-C)，38.1(13-C)，36.9(3-C)，36.5(14-C)，36.1(1-C)，33.8(7-C)，32.2(12-C)，27.4(18-C)，21.0(CH2OCOCH 3 )，18.7(6-C)，18.2(11-C)，18.0(2-C)，17.9(20-C)。
实施例15：本发明所述的对映-贝壳杉烯类二萜化合物的抗肿瘤活性实验：
1)实验细胞
人结肠癌细胞株SW620、人结肠癌细胞株SW480、人胰腺癌细胞株PANC-1、人胰腺癌细胞株BxPC-3、人食管癌细胞株Eca-109、人胃癌细胞株SGC-7901、人慢性髓系白血病细胞株K562和人急性髓系白血病细胞株HL-60。
2)实验药物
本发明14种对映贝壳杉烷型二萜化合物，以培养基配制浓度为20μg/mL,再倍比稀释设置7个药物浓度。
3)抗癌活性测定：
1、对映贝壳杉型二萜化合物对人实体肿瘤细胞系的增殖抑制作用：
方法1：采用SRB法。分别取对数生长期的人实体肿瘤细胞系(结肠癌细胞系SW620、结肠癌细胞系SW480、胰腺癌细胞系PANC-1、胰腺癌细胞系BxPC-3、食管癌细胞系Eca-109和胃癌细胞系SGC-7901)细胞接种于96孔培养板上，每孔接种量分别为8000/100μL、5000/100μL、5000/100μL和5000/100μL。实验设药物实验组、阴性对照组和空白对照孔。药物实验组每孔加不同浓度的本发明所述的贝壳杉型二萜化合物溶液100μL(化合物母液用营养液稀释)，每个浓度做3个复孔；阴性对照组每孔加营养液100μL，共设6个复孔；空白对照孔只加营养液200μL，用于仪器调零。在常规培养条件下，作用48h后取出，弃上清液控干水分，每孔加100μl4℃预冷的10％三氯醋酸溶液，静置5min后于4℃处避光保存1h以上；取出培养板用双蒸水洗涤5遍，风干水分；每孔加入0.4％的SRB溶液100μl，静置染色15min；用1％醋酸溶液洗涤5遍，风干水分；每孔加入100μl 10mmol﹒L-1Tris溶液，于振荡器上振荡5min使之完全溶解。用酶标仪在492nm波长处测定吸光度值(A)。按以下公式测得存在不同药物浓度时细胞的增殖抑制率：抑制率(％)＝(1-药物干预组A492/空白对照组A492)×100％，取各复孔平均值，计算各组的增殖抑制率。用SPSS12.0进行统计学分析，并计算IC50。实验重复两次。
结果：见表1、表2和表3：
表1 3种对映贝壳杉型二萜化合物对肿瘤细胞系的IC50(单位：mg/L)
表2 5种对映贝壳杉型二萜化合物对肿瘤细胞系的IC50(单位：mg/L)
表3 6种对映贝壳杉型二萜化合物对肿瘤细胞系的IC50(单位：mg/L)
2.贝壳杉型二萜化合物对人白血病细胞系的增殖抑制作用:
方法2：采用MTT法。分别取对数生长期的人白血病细胞系(急性髓系白血病细胞系HL-60和慢性髓系白血病细胞系K562)细胞接种于96孔培养板上，每孔接种量分别为10000/100μL和10000/100μL。实验设药物实验组、阴性对照组和空白对照孔。药物实验组每孔加不同浓度的本发明所述的贝壳杉型二萜化合物溶液100μL(化合物母液用营养液稀释)，每个浓度做3个复孔；阴性对照组每孔加营养液100μL，共设6个复孔；空白对照孔只加营养液200μL，用于仪器调零。在常规培养条件下，作用48h后，每孔加入20μL MTT溶液(浓度为5mg/mL，用PBS配制，pH＝7.4)，继续培养4h，离心弃上清，每孔加二甲基亚砜(DMSO)150μL，震荡5min，待结晶完全溶解后，用酶标仪(BIO-RAD产品)在570nm波长处测定每个小孔的吸光度值(A570)，各组取平均值，计算抑制率：IR＝(1－实验组A570/对照组A570)×100％。用SPSS12.0进行统计学分析，并计算IC50。实验重复两次。
结果：见表4和表5；
表4 8种对映贝壳杉型二萜化合物对肿瘤细胞系的IC50值(单位：mg/L)
化合物 人急性髓系白血病细胞株HL-60 人慢性髓系白血病细胞K562
W3 0.60 0.19
W4 0.50 0.09
W5 0.52 0.14
W6 0.17 1.00
W9 0.32 0.72
W13 0.63 0.70
W14 0.48 0.57
W15 0.57 0.73
表5 6种对映贝壳杉型二萜化合物对肿瘤细胞系的IC50值(单位：mg/L)
化合物 人慢性髓系白血病细胞K562
W7 0.52
W8 0.40
W10 0.35
W11 0.45
W12 0.39
W16 0.61
上述实验结果表明，本发明所述的14种贝壳杉型二萜化合物对多种人实体肿瘤(结肠癌细胞SW620、结肠癌细胞SW480、胰腺癌细胞PANC-1、胰腺癌细胞BxPC-3、食管癌细胞Eca-109和胃癌细胞SGC-7901)和白血病细胞系(K562和HL-60)分别具有显著的增殖抑制作用，并呈剂量依赖性，说明这14种贝壳杉型二萜化合物分别具有抗肿瘤活性。因此，本发明所述的14种贝壳杉型二萜化合物可用于制备抗肿瘤药物。

Claims (3)

1.对映贝壳杉二萜衍生物，其特征在于，具有如下结构通式：
R4＝非取代或取代的C1-C10的直链或支链的饱和烃基、非取代或取代的C1-C10的直链或支链的不饱和烃基、环烷基、芳烃基、芳香杂环基团通式4。
2.如权利要求1所述的对映贝壳杉二萜衍生物的制备方法，其特征在于:它包括以下步骤：
步骤1：将天然对映贝壳杉二萜化合物的19位羧基酯化之后将其在冰浴条件下与LAH反应，所用的有机溶剂是绝对无水的THF，在氮气保护下回流反应0-200min，之后搅拌过夜，得到19-羟基-对映-贝壳杉-16-烯；
步骤2：将所得的化合物溶于有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺中，与TEA,及相应的酸酐和催化量的DMAP,室温下搅拌反应0-10h，为19-乙酰氧基-对映-贝壳杉-16-烯，再将其15位羟基化、羰基化，得到相应的目标产物，即通式4所对应的衍生物。
3.如权利要求1所述的对映贝壳杉二萜衍生物的应用，其特征在于：在制备抗肿瘤药物中的应用。
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