JPH0769886A - 抗う蝕、歯周病剤およびこれを含有する口腔用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 う蝕原因菌であるストレプトコッカス・ミュ
ータンス、ストレプトコッカス・ソブリヌス並びに歯周
病原因菌であるポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾ
バクテリウム・ヌクレイタムの生育を著しく阻害する作
用を有し、う蝕および歯周病に対し有効に作用する抗う
蝕、歯周病剤を提供する。 【構成】 一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ） 【化１】 （式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_５は独立して水素原子またはヒ
ドロキシル基、Ｒ_３、Ｒ_４は独立して水素原子、ヒドロ
キシル基またはアセトキシル基を表す。）で表されるジ
テルペン誘導体を有効成分とする抗う蝕、歯周病剤並び
にこれを含有する口腔用組成物である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、う蝕原因菌であるスト
レプトコッカス・ミュータンス、ストレプトコッカス・
ソブリヌス並びに歯周病原因菌であるポルフィロモナス
・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレイタムの生
育を著しく阻害する作用を有し、う蝕および歯周病に対
して有効に作用する抗う蝕、歯周病剤並びにこれを含有
する口腔用組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】う蝕および歯周病は、口腔内の二大疾患
であり、いずれも特定の細菌による感染症であることが
示されている。なかでもストレプトコッカス・ミュータ
ンス、ストレプトコッカス・ソブリヌスはヒトのう蝕病
巣や歯垢の中に見出だされ、う蝕発生において重要な役
割をはたす。本菌種はショ糖から菌体外酵素によってグ
ルカンとよばれる粘着性の高い高分子多糖体を産生し、
歯のエナメル質表層に強く定着し歯垢を形成する。歯垢
に生息する微生物群は糖代謝により酸を産生し、う蝕が
誘発される。一方、歯周病は作用因子、環境および宿主
からなる多因性疾患である。

【０００３】この中で最も病因的な役割を果たすのは細
菌であり、近年の研究によりいくつかの病原菌およびそ
の病原性因子等が報告されている。中でもポルフィロモ
ナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレイタム
は、歯周炎患者の歯周ポケットから高頻度に分離される
ことから、歯周病の中で最も多い成人性歯周炎の病原菌
として有力視されている。う蝕および歯周病を予防する
ためには、病巣において本菌類の生育を阻害することが
重要であり、本菌類に対して有効な抗菌性物質の応用が
効果的である。従来では、テトラサイクリン、ミノサイ
クリン等の抗生物質が用いられてきた。しかし、これら
の抗生物質は作用が強力である反面、耐性菌の出現、副
作用等から日常的な利用に適しているとはいえないもの
であった。

【０００４】藤田等は、延命草から抽出したジテルペノ
イドがすぐれた制癌作用を有することを開示している
（特公昭６４−４５１５）。

【０００５】本発明者等は、既に副作用等の心配のな
い、古くより用いられている天然物である延命草（ヒキ
オコシ、クロバナヒキオコシ）の抽出物が、う蝕、歯周
病原因菌に対して強い抗菌活性を有することを見出し特
許出願をした（特願平３−１４０７９３号）。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】さらに、この副作用の
心配のない天然物である延命草の抽出物を精査し、う
蝕、歯周病原因菌に対し抗菌活性を有する物質を得る目
的で、多年研究を重ねた結果、強力な抗菌活性を有する
活性本体として、ジテルペン誘導体を単離することに初
めて成功し、本発明を完成させたものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】従って、本発明によれ
ば、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）

【化４】

【０００８】

【化５】

【０００９】

【化６】

【００１０】（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_５は独立して水素
原子またはヒドロキシル基、Ｒ_３、Ｒ_４は独立して水素
原子、ヒドロキシル基またはアセトキシル基を表す。）
で表されるジテルペン誘導体を有効成分とする抗う蝕、
歯周病剤が提供される。さらに、本発明は、上記の抗う
蝕、歯周病剤を含有する口腔用組成物を提供する。

【００１１】本発明品は、延命草より抽出単離されたジ
テルペン誘導体を有効成分とし、う蝕原因菌であるスト
レプトコッカス・ミュータンス、ストレプトコッカス・
ソブリヌス並びに歯周病原因菌であるポルフィロモナス
・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレイタムの生
育を抑える効果を有する抗う蝕、歯周病剤である。

【００１２】本発明の原料となる延命草は、古くより民
間薬として用いられているものであるが、延命草から単
離されたテルペン誘導体類について、う蝕、歯周病原因
菌に対する抗菌活性は知られておらず、本発明によって
初めて明らかにされたものである。

【００１３】本発明の化合物は、概説すれば次のように
して延命草から抽出製造することができる。延命草を、
ｎ−ヘキサン、エーテル、ベンゼン、ジクロロメタン、
クロロホルム、酢酸エチル、エタノール、メタノール、
水等の少なくとも一つの溶媒により抽出し、これを減圧
濃縮して粗エキスを得る。これをカラムクロマトグラフ
ィーに付し、分離精製を行い、化合物１−１４を単離す
ることができる。カラムクロマトグラフィーとしては吸
着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー等を用
いてもよく、高速液体クロマトグラフィー、薄層クロマ
トグラフィーなどの技法を用いてもよい。

【００１４】本発明の用途については、安全性が高いこ
とから、チューインガム、キャンディー、錠菓、含そう
剤および練り歯磨きなどの口腔用組成物に配合し、日常
的な利用が可能である。本発明品を口腔用組成物に添加
する場合、０．００１−１０重量％となるように添加す
るのが好適である。

【００１５】

【実施例】以下に、実施例をあげて本発明について説明
するが、これらの実施例は本発明の範囲を制限するもの
ではない。

【００１６】実施例１（延命草からジテルペン誘導体類
の単離） 延命草１．９ｋｇにエタノール２０リットルを加え、室
温で約１０日間抽出した後濾過し、濾液と残渣とに分離
した。濾液を減圧下濃縮し、粗エキス６０ｇを得た。こ
の粗エキスに水を加え分散させた後、ｎ−ヘキサンおよ
びエーテルにより順次分配を行い、ｎ−ヘキサン可溶画
分（２０ｇ）およびエーテル可溶画分（２５ｇ）を得
た。このエーテル可溶画分をシリカゲル（ワコーゲルＣ
−２００、和光純薬）１ｋｇを充填したカラムに吸着さ
せた。

【００１７】このカラムをジクロロメタン−メタノール
（５０：１−５：１）混液にて溶出させ、分画を行っ
た。ＴＬＣプレート（６０Ｆ２５４、メルク）を用いて
ジクロロメタン−メタノール（１０：１）混合溶媒で展
開した時、Ｒｆ価０．３−０．６付近にＵＶ吸収があり
１０％硫酸により茶色のスポットを呈する画分を画分１
（１０．５ｇ）とし、Ｒｆ価０．１５−０．３付近にＵ
Ｖ吸収があり１０％硫酸により茶色のスポットを呈する
画分を画分２（６．２ｇ）とした。

【００１８】画分１を高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬ
Ｃ）用のオクタデシルシラン型（ＯＤＳ）分取カラム
（センシュー化学）を用いて、メタノール−水（５０：
５０−１００：０）で溶出させ、２４０ナノメーターの
ＵＶ吸収をモニターしながら各ピークを分取した。

【００１９】それぞれのピークをさらにＨＰＬＣ用ＯＤ
Ｓ分取カラムを用いてアセトニトリル−水（３０：７０
−５０：５０）で精製することにより、本発明品である
化合物１（３２ｍｇ）、２（５１ｍｇ）、３（７４ｍ
ｇ）、４（２１０ｍｇ）、５（４０ｍｇ）、６（１５３
ｍｇ）、８（１４４ｍｇ）、９（１３ｍｇ）、１０（１
５ｍｇ）、１１（３０６ｍｇ）、１２（７１ｍｇ）、１
３（２６ｍｇ）、１４（９９ｍｇ）を得ることができ
た。

【００２０】画分２をＨＰＬＣ用のシリカゲル分取カラ
ム（センシュー化学）を用いて、ジクロロメタン−メタ
ノール（９３：７）で精製することにより本発明品であ
る化合物７（３０００ｍｇ）を得ることができた。

【００２１】単離した各化合物のジテルペン誘導体の置
換基を表１に示す。それら化合物名を表２に示す。

【００２２】

【表１】

【００２３】

【表２】

【００２４】実施例２（う蝕原因菌に対する抗菌活性試
験） 実施例１で示した方法により調製した本発明品につい
て、う蝕原因菌に対する抗菌活性試験を行った。

【００２５】供試菌株 ストレプトコッカス・ミュータンス・イングブリット
株、ＬＡ７株 ストレプトコッカス・ソブリヌス６７１５株、Ｂ１３株

【００２６】試験方法 供試菌株をブレイン・ハ−ト・インフュージョン液体培
地に接種し、３７℃で２４時間培養する。培養液の濁度
を０．８（ＯＤ５５０ナノメーター）になるように調製
し菌液とした。ブレイン・ハート・インフュージョン寒
天培地１０ｍｌと各々の菌液１ｍｌとをシャーレ中で混
合し、試験菌プレートを調製した。試料規定量を添加し
たペーパーディスク（厚手８ｍｍ、アドバンテック）を
試験菌プレート上に静置した。３７℃で２４時間培養し
た後、ディスクの回りに生ずる阻止円の有無を判定し、
抗菌活性の強さを測定した。対照物質として口腔内殺菌
剤として知られているオイゲノールを用いて、本発明品
との抗菌活性の比較を行った。

【００２７】試験結果 試験結果を表３に示した。本発明品はいずれも強い抗菌
活性を示し、一つのディスクあたり５０マイクログラム
以下の添加で阻止円を形成した。オイゲノールはいずれ
の菌株に対しても５０マイクログラムで阻止円が見られ
なかった。

【００２８】

【表３】

【００２９】実施例３（歯周病原因菌に対する抗菌活性
試験） 実施例１で示した方法により調製した本発明品につい
て、う歯周病原因菌に対する抗菌活性試験を行った。

【００３０】供試菌株 ポルフィロモナス・ジンジバリスＦＤＣ３８１株、ＡＴ
ＣＣ３３２７７株 フゾバクテリウム・ヌクレイタムＡＴＣＣ２５５８６株

【００３１】試験方法 供試菌株をトリプチケイス・ソイ液体培地^＊に接種し、
３７℃で４８時間嫌気培養（ＣＯ_２：Ｈ_２：Ｎ_２＝１：
１：８）を行つた。培養液の濁度を０．８（ＯＤ５５０
ナノメーター）になるように調製し菌液とした。血液平
板培地^＊＊上にそれぞれの菌液１００μｌを均一に塗布
したものを、試験菌プレートとした。試料規定量を添加
したペーパーディスク（厚手８ｍｍ、アドバンテック）
を試験菌プレート上に静置した。３７℃で４８時間嫌気
培養した後、ディスクの回りに生じた阻止円の有無を判
定し、抗菌活性の強さを測定した。同様に、対照物質と
してオイゲノールを用いて本発明品との抗菌活性の比較
を行った。

【００３２】＊トリプチケイス・ソイ液体培地 トリプチケイス・ソイ・ブロス ３０ｇ ヘミン ５ｍｇ メナジオン ０．５ｍｇ 精製水 １０００ｍｌ ＊＊血液平板培地 トリプチケイス・ソイ・アガー ４０ｍｇ ヘミン ５ｍｇ メナジオン ０．５ｍｇ 馬脱線維血液 １００ｍｌ 精製水 ９００ｍｌ

【００３３】試験結果 試験結果を表４に示した。本発明品はいずれも強い抗菌
活性を示し、一つのディスクあたり５０マイクログラム
以下の添加で阻止円を形成した。オイゲノールはいずれ
の菌株に対しても５０マイクログラムで阻止円が見られ
なかった。

【００３４】

【表４】

【００３５】実施例４−１〜４−５ 実施例１で示した方法により調製した本発明品を用い
て、次の処方によりチューインガム、キャンディー、錠
菓含そう剤および練り歯磨きの口腔用組成物を製造し
た。

【００３６】

【００３７】

【００３８】

【００３９】

【００４０】

【００４１】

【発明の効果】本発明の抗う蝕、歯周病剤は、延命草抽
出物中のジテルペン誘導体が有効成分として含有してい
るので、う蝕原因菌および歯周病原因菌であるとされて
いるストレプトコッカス・ミュータンス、ストレプトコ
ッカス・ソブリヌス並びにポルフィロモナス・ジンジバ
リス、フゾバクテリウム・ヌクレイタム等に対し優れた
抗菌活性を示し、これらの菌の生育を抑制し、う蝕およ
び歯周病の予防や疾病の軽減に優れた効果を上げる。

【００４２】また、延命草抽出物中のジテルペン誘導体
は安全性が高いことから、これを添加含有する抗う蝕、
歯周病剤は、テトラサイクリン、ミノサイクリン等の抗
生物質を使用したときに見られるような副作用の心配が
なく、チューインガム、キャンディー、錠菓含そう剤お
よび練り歯磨きなどの口腔用組成物に添加して常用する
ことができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 493/04 １０６ Ｃ // Ａ２３Ｇ 3/00 １０１ 3/30 Ｃ０７Ｄ 311/96 (72)発明者 竹谷 孝一 東京都八王子市南大沢５−６−５−110 (72)発明者 森田 博史 東京都八王子市めじろ台２−８−５

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ） 【化１】 【化２】 【化３】 （式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_５は独立して水素原子またはヒ
   ドロキシル基、Ｒ_３、Ｒ_４は独立して水素原子、ヒドロ
   キシル基またはアセトキシル基を表す。）で表されるジ
   テルペン誘導体を有効成分とする抗う蝕、歯周病剤。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の抗う蝕、歯周病剤を含
   有する口腔用組成物。