WO2005108581A1

WO2005108581A1 - リンパ球細胞へ遺伝子導入するための組換えウイルスベクター

Info

Publication number: WO2005108581A1
Application number: PCT/JP2005/008250
Authority: WO
Inventors: Yasuko Mori; Kenjiro Tadagaki; Masaya Takemoto; Michiaki Takahashi; Kouichi Yamanishi
Original assignee: The Reseach Foundation For Microbial Diseses Of Osaka University
Priority date: 2004-05-06
Filing date: 2005-04-28
Publication date: 2005-11-17
Also published as: KR20060123666A; AU2005240902A1; JPWO2005108581A1; JP2011234726A; JP5410477B2; AU2005240902B2; US20120129263A1; EP1743942A1; CA2565509A1; US20090253208A1; US8148060B2; CN1981040B; EP1743942A4; CN1981040A; US20080226677A1; KR101294238B1; US7820436B2; JP4796958B2; KR20120088004A; US20110070651A1

Abstract

　組換えヘルペスウイルス、およびその製造方法、ならびに組換えヘルペスウイルスを含む薬学的組成物を提供すること、さらに、ヘルペスウイルスゲノム遺伝子とＢＡＣベクター配列とを含むベクター、およびそのようなベクターを含む細胞、ならびにヘルペスウイルスゲノムと相同組換えし得るフラグメント、およびＢＡＣベクター配列を含む核酸カセットを提供することが課題である。　ＢＡＣベクター配列を用いる組換えヘルペスウイルス製造方法を開発することによって上記課題を解決した。

Description

明細書

リンパ球細胞へ遺伝子導入するための組換えウィルスベクター

技術分野

[0001] 本発明は、リンパ球細胞へ所望の遺伝子を導入するための組換えウィルスベクター、特に BAC (大腸菌人工染色体)を用いて調製した組換えヒトヘルぺスウィルスべクター、およびそのようなウィルスベクターを含む薬学的組成物に関する。さらに、本発明は、ヒトヘルぺスウィルスゲノム遺伝子と BACベクター配列とを含むベクター、ならびにそのようなベクターを含む細胞に関する。さら〖こ、本発明は、組換えヒトヘルぺスウィルスを製造する方法に関する。また、本発明は、ヘルぺスウィルスゲノムと相同組換えし得るフラグメント、および BACベクター配列を含む核酸カセットに関する。背景技術

[0002] リンパ球細胞を標的とする種々の疾患、例えば、ヒト免疫不全ウィルス (HIV)感染の治療のために、リンパ球細胞に対して遺伝子治療を行うための技術の確立が望まれているが、いまだ、リンパ球細胞に所望の遺伝子を導入するためのベクター系として十分なものは開発されてヽなヽ。

[0003] ヘルぺスウィルス (herpesvirus ;HHV)とは、ヘルぺスウィルス科に属するウィルスの総称である。ヒトヘルぺスウィルス 6あるいは 7 (HHV— 6あるいは HHV— 7)は、いずれもへルぺスウィルス科 13ヘルぺスウィルス亜科に属する 2本鎖 DNAウィルスであり、突発性発疹（Exanthom subitum)の原因ウィルスである。（非特許文献 1および非特許文献 2) HHV— 6には HHV— 6Aおよび HHV— 6Bの 2つの株が存在する。乳児期に罹患することが多ぐ突然の高熱と解熱前後の発疹を特徴とするウィルス感染症で、予後は一般に良好である。 HHV— 7は HHV— 6よりも遅れて感染する傾向がある（非特許文献 3)ため、 HHV— 7による突発性発疹は臨床的には二度目の突発性発疹として経験されることが多い。 HHV—6、 HHV— 7の血清疫学調査からは、 2〜3歳頃までにほとんどの小児が抗体陽性となることが判明しており、不顕性感染は 20〜40%と報告されている。

HHV— 7は、 1990年に Frenkelらが健常人末梢血の CD4+Tリンパ球を培養しているときに細胞変性効果が起こって新たに見、だされたヘルぺスウィルスである（非特許文献 4)。ヒト末梢血単核球カゝら分離されたウィルスであり、 HHV— 6、—7はともに CD4+Tリンパ球向性ウィルスである。 HHV- 7が感染する際の細胞側レセプターは CD4であり、ヒト Tリンパ球においてのみ増殖可能である。ゆえにヒト Tリンパ球の遺伝子改変に使用し得るウィルスである。

[0004] HHV—7のゲノムは、二本鎖 DNAであって、約 145kbp力らなる。全塩基配列は、 Nicholasらによって決定されており、ゲノム上には少なくとも 101の遺伝子が存在することが知られている。（非特許文献 5)

しかし、 HHV— 7を用いての Tリンパ球系細胞への遺伝子導入は不可能な現状であった。なぜなら、 Tリンパ球細胞へのみに感染し得るヘルぺスウィルスすなわち、 H HV— 7ウィルスの組換え体を作製する技術が開発されて、な力つたこと、それら Tリンパ球細胞へのベクター導入法が確立されていなかったからである。そこで、 HHV 7あるいは HHV— 6組換えウィルスを用いて、 Tリンパ球細胞に所望の遺伝子を導入する方法の確立が望まれて、る。

[0005] また、これらウィルス、特に HHV— 7ウィルスは、健常人に害を及ぼさないとされて V、るため、様々なウィルス (たとえばムンブス）の抗原決定部位を含む遺伝子をウィルスゲノムに組み込み、 HHV-7で発現させることにより、ワクチンとしての有用性があると考えられる。しかし、ワクチンとして用いる場合、その継代培養とともに、遺伝子型が変化することは、品質管理及び品質保証の点から、好ましくない。そのため、ワクチンとして組換えウィルスを使用する場合は、単一の組換え遺伝子型由来のウィルスを安定的に供給する必要がある。そのため、単一の遺伝子型を有する HHV— 7組換えウィルスを作製する方法の開発が望まれてヽる。

さらに、 Tリンパ球細胞株 SupTl細胞における HIV感染と Tリンパ球向性ヒトヘルべスウィルス（HHV— 6A (U1102株)、 HHV— 7(MRK：、 MSO株)）との相互関係について検討されている。 CD4が細胞側のレセプターである HHV— 7株は、 SupTl 細胞では良好な増殖を示すものの、 SupTlZHIV細胞には感染を成立できなかつた。これに対して、 HHV— 6A株は、 HIV持続感染 SupTl (Sup—TlZHIV)細胞に感染し明瞭な CPEを認めて、る（非特許文献 6)。特許文献 1 : Yamanishi Kら" Identification of human herpesvirus 6 a s a casual agent for exanthem subitum. "Lancet 1988 ;i: 1065〜10り 7頁

非特許文献 2 : Tanaka Kら " Human herupesvirus 7： Another casual ag ent for roseola (exanthem subitum) J pediatr. 1994 ; 125 : 1〜； D貞非特許文献 3 :Tnanaka— Taya K 'Seroepidemiological study of human herpesvirus— 6 and —7 in children of different ages and detectio n of those two viruses in throat swabs by polymerase chain react ion" Jounal of Medical Virology. 1996 ;48 : 88〜94頁

非特許文献 4 : Frankel Nら、 "Isolation of a new herpesvirus from hum an CD4+T cells. "ProNAS USA 87 : 749- 752, ProNAS USA 87 : 7 49 - 752, 1990

非特許文献 5 :John N.ら、 Journal of Virology, Sep. 1996, 5975〜5989頁非特許文献 6 :山田雅夫ら HIV持続感染 Sup— T1細胞への HHV— 6および 7重複感染の試み、演題番号 122、第 7回日本エイズ学会総会演題抄録集、 1993年、東京

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0006] 本発明の課題は、リンパ球細胞へ所望の遺伝子を導入するための組換えウィルスベクター、特に BAC (大腸菌人工染色体)を用いて調製した組換えヒトヘルぺスウイルスベクター、およびそのようなウィルスベクターを含む薬学的組成物を提供することにある。また、本発明の課題は、ヒトヘルぺスウィルスゲノム遺伝子と BACベクター配列とを含むベクター、ならびにそのようなベクターを含む細胞を提供することにある。さら〖こ、本発明の課題は、組換えヒトヘルぺスウィルスを製造する方法を提供することにある。また、本発明は、ヘルぺスウィルスゲノムと相同組換えし得るフラグメント、および BACベクター配列を含む核酸カセットを提供することにある。

[0007] そのために、本発明においては、組換え HHV— 7、およびその製造方法、例えば、 BAC (大腸菌人工染色体)を用い、単一のウィルス株力組換え HHV— 7または HHV— 6を作製する方法が、提供される。

理想的な HIVワクチンは、全ての型の HIVに対して完全かつ長期の保護を示すことである。しかし、従来の不活ィ匕 HIVワクチンの利点及び欠点のいくつかは以下のとおりである。

リコンビナントワクチンの製造方法は常法を駆使するが、免疫原性を維持することが困難なため (低免疫原性のため）、高い抗原負荷、アジュバントと頻回接種が要求される。そして、その安全性が最大の関心事である。また、ネーティブまたはリコンビナントのサブユニットのどちらかを含むサブユニットワクチンは安全である力もしれない力サブユニットの選択及び免疫原性が低いことから制限を受ける。

本願では、従来のワクチンでは不可能だった効果を実現できる。 HIVの感染前後で予防、治療する働きである。ターゲットとなる免疫細胞 (CD4+T細胞）に HIVが取りつく際のメカニズムを、組換えへルぺスウィルスそのものが利用する力もである。

従来、 HIVに対するワクチンを作るのは困難であつたのには、以下の理由がある。 HI Vは細胞と一体ィ匕してしまうのにカ卩えて、普通ならワクチンによって活性ィ匕する免疫細胞そのものを攻撃する力もである。 HIVカ^つの細胞に感染するとき、 gpl20は C D4に結合する。 CD4は、 HIVが感染する免疫細胞 (T細胞)の表面にある受容体で、細胞の玄関口といえる。 HHV— 7は CD4+細胞表面で、 HHV— 6は細胞内にはいることで、 HIVの増殖を抑制できる。

[0008] この原理を利用して、本発明にお、て、 HIV感染予防のための薬学的組成物、および HIV感染治療のための薬学的組成物が提供される。

課題を解決するための手段

[0009] 本発明者らは、 BACベクター配列を用いる組換えへルぺスウィルス製造方法を開発することによって、本発明を完成した。

[0010] 従って、本発明は以下を提供する。

1. リンパ球細胞へ遺伝子導入するための組換えへルぺスウィルス。

2. BACベクター配列を含む、項目 1に記載の組換えへルぺスウィルス。

3.ヘルぺスウィルスゲノムの非必須領域内に前記 BACベクター配列の少なくとも一部が挿入されている、項目 2に記載の組換えへルぺスウィルス。 4.前記非必須領域が、 HHV— 7の以下の領域力もなる群力も選択される、項目 3に記載の組換えへルぺスウィルス：

遺伝子 HIの ORF内の領域、遺伝子 DR1の ORF内の領域、遺伝子 DR2の ORF内の領域、遺伝子 H2の ORF内の領域、遺伝子 DR6の ORF内の領域、遺伝子 DR7 の ORF内の領域、遺伝子 H3の ORF内の領域、遺伝子 H4の ORF内の領域、遺伝子 U2の ORF内の領域、遺伝子 U3の ORF内の領域、遺伝子 U4の ORF内の領域、遺伝子 U5Z7の ORF内の領域、遺伝子 U8の ORF内の領域、遺伝子 U10の ORF 内の領域、遺伝子 U12の ORF内の領域、遺伝子 U13の ORF内の領域、遺伝子 U1 5の ORF内の領域、遺伝子 U16の ORF内の領域、遺伝子 U17Exの ORF内の領域、遺伝子 U17の ORF内の領域、遺伝子 U17aの ORF内の領域、遺伝子 U18の OR F内の領域、遺伝子 U19の ORF内の領域、遺伝子 U20の ORF内の領域、遺伝子 U21の ORF内の領域、遺伝子 U23の ORF内の領域、遺伝子 U24の ORF内の領域、遺伝子 U24aの ORF内の領域、遺伝子 U25の ORF内の領域、遺伝子 U26の O RF内の領域、遺伝子 U28の ORF内の領域、遺伝子 U32の ORF内の領域、遺伝子 U33の ORF内の領域、遺伝子 U34の ORF内の領域、遺伝子 U35の ORF内の領域、遺伝子 U36の ORF内の領域、遺伝子 U37の ORF内の領域、遺伝子 U40の O RF内の領域、遺伝子 U42の ORF内の領域、遺伝子 U44の ORF内の領域、遺伝子 U45の ORF内の領域、遺伝子 U46の ORF内の領域、遺伝子 U47の ORF内の領域、遺伝子 U49の ORF内の領域、遺伝子 U50の ORF内の領域、遺伝子 U51の O RF内の領域、遺伝子 U52の ORF内の領域、遺伝子 U55Aの ORF内の領域、遺伝子 U55Bの ORF内の領域、遺伝子 U58の ORF内の領域、遺伝子 U59の ORF内の領域、遺伝子 U62の ORF内の領域、遺伝子 U63の ORF内の領域、遺伝子 U64の ORF内の領域、遺伝子 U65の ORF内の領域、遺伝子 U67の ORF内の領域、遺伝子 U68の ORF内の領域、遺伝子 U69の ORF内の領域、遺伝子 U70の ORF内の領域、遺伝子 U71の ORF内の領域、遺伝子 U75の ORF内の領域、遺伝子 U76の ORF内の領域、遺伝子 H5の ORF内の領域、遺伝子 U79の ORF内の領域、遺伝子 H6の ORF内の領域、遺伝子 U80の ORF内の領域、遺伝子 U81の ORF内の領域、遺伝子 U84の ORF内の領域、遺伝子 U85の ORF内の領域、遺伝子 U91の O RF内の領域、遺伝子 H7の ORF内の領域、遺伝子 U95の ORF内の領域、遺伝子 H8の ORF内の領域、遺伝子 HIの ORFに隣接する領域、遺伝子 DR1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR2の ORFに隣接する領域、遺伝子 H2の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR6の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR7の ORFに隣接する領域、遺伝子 H3の ORFに隣接する領域、遺伝子 H4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U3の ORFに隣接する領域、遺伝子 U4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U5Z7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U8の ORFに隣接する領域、遺伝子 U10の ORFに隣接する領域、遺伝子 U12の ORFに隣接する領域、遺伝子 U13の ORFに隣接する領域、遺伝子 U15の ORFに隣接する領域、遺伝子 U16の ORFに隣接する領域、遺伝子 U17Exの ORFに隣接する領域、遺伝子 U17 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U 17aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U18の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U19の ORFに隣接する領域、遺伝子 U20の ORFに隣接する領域、遺伝子 U21の ORFに隣接する領域、遺伝子 U23の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U25の ORFに隣接する領域、遺伝子 U26の ORFに隣接する領域、遺伝子 U28の ORFに隣接する領域、遺伝子 U32の ORFに隣接する領域、遺伝子 U33の ORFに隣接する領域、遺伝子 U34の ORFに隣接する領域、遺伝子 U35の ORFに隣接する領域、遺伝子 U36の ORFに隣接する領域、遺伝子 U37の ORFに隣接する領域、遺伝子 U40の ORFに隣接する領域、遺伝子 U42の ORFに隣接する領域、遺伝子 U44の ORFに隣接する領域、遺伝子 U45の ORFに隣接する領域、遺伝子 U46の ORFに隣接する領域、遺伝子 U47の ORFに隣接する領域、遺伝子 U49の ORFに隣接する領域、遺伝子 U50の ORFに隣接する領域、遺伝子 U51の ORFに隣接する領域、遺伝子 U52の ORFに隣接する領域、遺伝子 U55Aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U55Bの ORFに隣接する領域、遺伝子 U58の ORFに隣接する領域、遺伝子 U59の ORFに隣接する領域、遺伝子 U62の ORFに隣接する領域、遺伝子 U63の ORFに隣接する領域、遺伝子 U64の ORFに隣接する領域、遺伝子 U6 5の ORFに隣接する領域、遺伝子 U67の ORFに隣接する領域、遺伝子 U68の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U69の ORFに隣接する領域、遺伝子 U70の ORFに隣接する領域、遺伝子 U71の ORFに隣接する領域、遺伝子 U75の ORFに隣接する領域、遺伝子 U76の ORFに隣接する領域、遺伝子 H5の ORFに隣接する領域、遺伝子 U79の ORFに隣接する領域、遺伝子 H6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U80 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U81の ORFに隣接する領域、遺伝子 U84の ORF に隣接する領域、遺伝子 U85の ORFに隣接する領域、遺伝子 U91の ORFに隣接する領域、遺伝子 H7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U95の ORFに隣接する領域、および遺伝子 H8の ORFに隣接する領域。

5.前記非必須領域が、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域または遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域である、項目 4に記載の組換えへルぺスウィルス。

6.前記非必須領域が、 HHV— 6Aまたは HHV— 6Bの以下の領域からなる群から選択される、項目 3に記載の組換えへルぺスウィルス：

遺伝子 LT1の ORF内の領域、遺伝子 DR1の ORF内の領域、遺伝子 DR2の ORF 内の領域、遺伝子 DR3の ORF内の領域、遺伝子 DR4の ORF内の領域、遺伝子 D R5の ORF内の領域、遺伝子 DR6の ORF内の領域、遺伝子 DRHN1の ORF内の領域、遺伝子 DR7の ORF内の領域、遺伝子 DRHN2の ORF内の領域、遺伝子 DR 8の ORF内の領域、遺伝子 LJ1の ORF内の領域、遺伝子 U1の ORF内の領域、遺伝子 U2の ORF内の領域、遺伝子 U3の ORF内の領域、遺伝子 U4の ORF内の領域、遺伝子 U5の ORF内の領域、遺伝子 U6の ORF内の領域、遺伝子 U7の ORF内の領域、遺伝子 U8の ORF内の領域、遺伝子 U9の ORF内の領域、遺伝子 U10の ORF内の領域、遺伝子 U12EXの ORF内の領域、遺伝子 U12の ORF内の領域、遺伝子 U13の ORF内の領域、遺伝子 U15の ORF内の領域、遺伝子 U16の ORF 内の領域、遺伝子 U17の ORF内の領域、遺伝子 U18の ORF内の領域、遺伝子 U1 9の ORF内の領域、遺伝子 U20の ORF内の領域、遺伝子 U21の ORF内の領域、遺伝子 U22の ORF内の領域、遺伝子 U23の ORF内の領域、遺伝子 U24の ORF 内の領域、遺伝子 U25の ORF内の領域、遺伝子 U26の ORF内の領域、遺伝子 U2 8の ORF内の領域、遺伝子 U32の ORF内の領域、遺伝子 U33の ORF内の領域、遺伝子 U34の ORF内の領域、遺伝子 U35の ORF内の領域、遺伝子 U36の ORF 内の領域、遺伝子 U37の ORF内の領域、遺伝子 U40の ORF内の領域、遺伝子 U4 2の ORF内の領域、遺伝子 U44の ORF内の領域、遺伝子 U45の ORF内の領域、遺伝子 U46の ORF内の領域、遺伝子 U47の ORF内の領域、遺伝子 U49の ORF 内の領域、遺伝子 U50の ORF内の領域、遺伝子 U51の ORF内の領域、遺伝子 U5 2の ORF内の領域、遺伝子 U55の ORF内の領域、遺伝子 U58の ORF内の領域、遺伝子 U59の ORF内の領域、遺伝子 U61の ORF内の領域、遺伝子 U62の ORF 内の領域、遺伝子 U63の ORF内の領域、遺伝子 U64の ORF内の領域、遺伝子 U6 5の ORF内の領域、遺伝子 U67の ORF内の領域、遺伝子 U68の ORF内の領域、遺伝子 U69の ORF内の領域、遺伝子 U70の ORF内の領域、遺伝子 U71の ORF 内の領域、遺伝子 U75の ORF内の領域、遺伝子 U76の ORF内の領域、遺伝子 U7 8の ORF内の領域、遺伝子 U79の ORF内の領域、遺伝子 U80の ORF内の領域、遺伝子 U81の ORF内の領域、遺伝子 U83の ORF内の領域、遺伝子 U84の ORF 内の領域、遺伝子 U85の ORF内の領域、遺伝子 U88の ORF内の領域、遺伝子 U9 1の ORF内の領域、遺伝子 U92の ORF内の領域、遺伝子 U93の ORF内の領域、遺伝子 HN2の ORF内の領域、遺伝子 U94の ORF内の領域、遺伝子 U95の ORF 内の領域、遺伝子 U96の ORF内の領域、遺伝子 LT1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR2の ORFに隣接する領域、遺伝子 D R3の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR4の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR5の O RFに隣接する領域、遺伝子 DR6の ORFに隣接する領域、遺伝子 DRHN1の ORF に隣接する領域、遺伝子 DR7の ORFに隣接する領域、遺伝子 DRHN2の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR8の ORFに隣接する領域、遺伝子 LJ1の ORFに隣接する領域、遺伝子 U1の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U3の ORFに隣接する領域、遺伝子 U4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U5の O RFに隣接する領域、遺伝子 U6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U8の ORFに隣接する領域、遺伝子 U9の ORFに隣接する領域、遺伝子 U10の ORFに隣接する領域、遺伝子 U12EXの ORFに隣接する領域、遺伝子 U12の ORFに隣接する領域、遺伝子 U13の ORFに隣接する領域、遺伝子 U15 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U16の ORFに隣接する領域、遺伝子 U17の ORF に隣接する領域、遺伝子 U18の ORFに隣接する領域、遺伝子 U19の ORFに隣接する領域、遺伝子 U20の ORFに隣接する領域、遺伝子 U21の ORFに隣接する領域、遺伝子 U22の ORFに隣接する領域、遺伝子 U23の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域、遺伝子 U25の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2 6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U28の ORFに隣接する領域、遺伝子 U32の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U33の ORFに隣接する領域、遺伝子 U34の ORFに隣接する領域、遺伝子 U35の ORFに隣接する領域、遺伝子 U36の ORFに隣接する領域、遺伝子 U37の ORFに隣接する領域、遺伝子 U40の ORFに隣接する領域、遺伝子 U42の ORFに隣接する領域、遺伝子 U44の ORFに隣接する領域、遺伝子 U45の ORFに隣接する領域、遺伝子 U46の ORFに隣接する領域、遺伝子 U47の ORFに隣接する領域、遺伝子 U49の ORFに隣接する領域、遺伝子 U50の ORFに隣接する領域、遺伝子 U51の ORFに隣接する領域、遺伝子 U52の ORFに隣接する領域、遺伝子 U55の ORFに隣接する領域、遺伝子 U58の ORFに隣接する領域、遺伝子 U59の ORFに隣接する領域、遺伝子 U61の ORFに隣接する領域、遺伝子 U62の ORFに隣接する領域、遺伝子 U63の ORFに隣接する領域、遺伝子 U64の ORFに隣接する領域、遺伝子 U65の ORFに隣接する領域、遺伝子 U67の ORFに隣接する領域、遺伝子 U68の ORFに隣接する領域、遺伝子 U69の ORFに隣接する領域、遺伝子 U70の ORFに隣接する領域、遺伝子 U71の ORFに隣接する領域、遺伝子 U75の ORFに隣接する領域、遺伝子 U76の ORFに隣接する領域、遺伝子 U78の ORFに隣接する領域、遺伝子 U79の ORFに隣接する領域、遺伝子 U80の ORFに隣接する領域、遺伝子 U81の ORFに隣接する領域、遺伝子 U83の ORFに隣接する領域、遺伝子 U84の ORFに隣接する領域、遺伝子 U85の ORFに隣接する領域、遺伝子 U88の ORFに隣接する領域、遺伝子 U91の ORFに隣接する領域、遺伝子 U92の ORFに隣接する領域、遺伝子 U93の ORFに隣接する領域、遺伝子 HN2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U94の ORFに隣接する領域、遺伝子 U95の ORFに隣接する領域、および遺伝子 U96の ORFに隣接する領域。

7.前記非必須領域が、 HHV— 6の遺伝子 U5の ORFに隣接する領域または HHV 6の遺伝子 U8の ORFに隣接する領域である、項目 4に記載の組換えヘルぺスゥイノレス。 8.前記 BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、項目 3に記載の組換えへルぺスウィルス。

9.前記 BACベクター配列が選択マーカーを含む、項目 3に記載の組換えへルぺスウィルス。

10.前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、項目 9に記載の組換えへルぺスゥイノレス。

11.前記選択マーカーが緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、項目 3に記載の組換えへルぺスウィルス。

12.前記へルぺスウィルスゲノムが野生株由来である、項目 3に記載の組換えヘルぺスゥイノレス。

13.前記へルぺスウィルスゲノムが変異株由来である、項目 3に記載の組換えヘルぺスゥイノレス。

14.前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 7 KHR株由来である、項目 3に記載の組換えへルぺスウィルス。

15.前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 6 A U1102株、または HHV— 6B HS T株由来である、項目 3に記載の組換えへルぺスウィルス。

16.前記 BACベクター配列が配列番号 401に記載の配列を有するベクターである、項目 3に記載の組換えへルぺスウィルス。

17.項目 1に記載のウィルスを含有する薬学的組成物。

18.ワクチンの形態である、項目 17に記載の薬学的組成物。

19.ヒトヘルぺスウィルス必須遺伝子と BACベクター配列とを含む、ベクター。

120.哺乳動物細胞に導入された場合、該哺乳動物細胞が組換えへルぺスウィルスを産生する、項目 19に記載のベクター。

21.前記へルぺスウィルスゲノム由来の配列が前記 BACベクター配列と連結する部位力該ヘルぺスウィルスゲノムの非必須領域内である、項目 120に記載のベクター

22.前記非必須領域が、以下の HHV— 7の領域力もなる群力選択される、項目 2 1に記載のベクター：遺伝子 HIの ORF内の領域、遺伝子 DR1の ORF内の領域、遺伝子 DR2の ORF内の領域、遺伝子 H2の ORF内の領域、遺伝子 DR6の ORF内の領域、遺伝子 DR7 の ORF内の領域、遺伝子 H3の ORF内の領域、遺伝子 H4の ORF内の領域、遺伝子 U2の ORF内の領域、遺伝子 U3の ORF内の領域、遺伝子 U4の ORF内の領域、遺伝子 U5Z7の ORF内の領域、遺伝子 U8の ORF内の領域、遺伝子 U10の ORF 内の領域、遺伝子 U12の ORF内の領域、遺伝子 U13の ORF内の領域、遺伝子 U1 5の ORF内の領域、遺伝子 U16の ORF内の領域、遺伝子 U17Exの ORF内の領域、遺伝子 U17の ORF内の領域、遺伝子 U17aの ORF内の領域、遺伝子 U18の OR F内の領域、遺伝子 U19の ORF内の領域、遺伝子 U20の ORF内の領域、遺伝子 U21の ORF内の領域、遺伝子 U23の ORF内の領域、遺伝子 U24の ORF内の領域、遺伝子 U24aの ORF内の領域、遺伝子 U25の ORF内の領域、遺伝子 U26の O RF内の領域、遺伝子 U28の ORF内の領域、遺伝子 U32の ORF内の領域、遺伝子 U33の ORF内の領域、遺伝子 U34の ORF内の領域、遺伝子 U35の ORF内の領域、遺伝子 U36の ORF内の領域、遺伝子 U37の ORF内の領域、遺伝子 U40の O RF内の領域、遺伝子 U42の ORF内の領域、遺伝子 U44の ORF内の領域、遺伝子 U45の ORF内の領域、遺伝子 U46の ORF内の領域、遺伝子 U47の ORF内の領域、遺伝子 U49の ORF内の領域、遺伝子 U50の ORF内の領域、遺伝子 U51の O RF内の領域、遺伝子 U52の ORF内の領域、遺伝子 U55Aの ORF内の領域、遺伝子 U55Bの ORF内の領域、遺伝子 U58の ORF内の領域、遺伝子 U59の ORF内の領域、遺伝子 U62の ORF内の領域、遺伝子 U63の ORF内の領域、遺伝子 U64の ORF内の領域、遺伝子 U65の ORF内の領域、遺伝子 U67の ORF内の領域、遺伝子 U68の ORF内の領域、遺伝子 U69の ORF内の領域、遺伝子 U70の ORF内の領域、遺伝子 U71の ORF内の領域、遺伝子 U75の ORF内の領域、遺伝子 U76の ORF内の領域、遺伝子 H5の ORF内の領域、遺伝子 U79の ORF内の領域、遺伝子 H6の ORF内の領域、遺伝子 U80の ORF内の領域、遺伝子 U81の ORF内の領域、遺伝子 U84の ORF内の領域、遺伝子 U85の ORF内の領域、遺伝子 U91の O RF内の領域、遺伝子 H7の ORF内の領域、遺伝子 U95の ORF内の領域、遺伝子 H8の ORF内の領域、遺伝子 HIの ORFに隣接する領域、遺伝子 DR1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR2の ORFに隣接する領域、遺伝子 H2の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR6の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR7の ORFに隣接する領域、遺伝子 H3の ORFに隣接する領域、遺伝子 H4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U3の ORFに隣接する領域、遺伝子 U4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U5Z7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U8の ORFに隣接する領域、遺伝子 U10の ORFに隣接する領域、遺伝子 U12の ORFに隣接する領域、遺伝子 U13の ORFに隣接する領域、遺伝子 U15の ORFに隣接する領域、遺伝子 U16の ORFに隣接する領域、遺伝子 U17Exの ORFに隣接する領域、遺伝子 U17 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U 17aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U18の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U19の ORFに隣接する領域、遺伝子 U20の ORFに隣接する領域、遺伝子 U21の ORFに隣接する領域、遺伝子 U23の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U25の ORFに隣接する領域、遺伝子 U26の ORFに隣接する領域、遺伝子 U28の ORFに隣接する領域、遺伝子 U32の ORFに隣接する領域、遺伝子 U33の ORFに隣接する領域、遺伝子 U34の ORFに隣接する領域、遺伝子 U35の ORFに隣接する領域、遺伝子 U36の ORFに隣接する領域、遺伝子 U37の ORFに隣接する領域、遺伝子 U40の ORFに隣接する領域、遺伝子 U42の ORFに隣接する領域、遺伝子 U44の ORFに隣接する領域、遺伝子 U45の ORFに隣接する領域、遺伝子 U46の ORFに隣接する領域、遺伝子 U47の ORFに隣接する領域、遺伝子 U49の ORFに隣接する領域、遺伝子 U50の ORFに隣接する領域、遺伝子 U51の ORFに隣接する領域、遺伝子 U52の ORFに隣接する領域、遺伝子 U55Aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U55Bの ORFに隣接する領域、遺伝子 U58の ORFに隣接する領域、遺伝子 U59の ORFに隣接する領域、遺伝子 U62の ORFに隣接する領域、遺伝子 U63の ORFに隣接する領域、遺伝子 U64の ORFに隣接する領域、遺伝子 U6 5の ORFに隣接する領域、遺伝子 U67の ORFに隣接する領域、遺伝子 U68の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U69の ORFに隣接する領域、遺伝子 U70の ORFに隣接する領域、遺伝子 U71の ORFに隣接する領域、遺伝子 U75の ORFに隣接する領域、遺伝子 U76の ORFに隣接する領域、遺伝子 H5の ORFに隣接する領域、遺伝子 U79の ORFに隣接する領域、遺伝子 H6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U80 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U81の ORFに隣接する領域、遺伝子 U84の ORF に隣接する領域、遺伝子 U85の ORFに隣接する領域、遺伝子 U91の ORFに隣接する領域、遺伝子 H7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U95の ORFに隣接する領域、および遺伝子 H8の ORFに隣接する領域。

23.前記非必須領域が、 HHV— 7の遺伝子 U24の ORFに隣接する領域または H HV— 7の遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域である、項目 22に記載のベクター。

24.前記非必須領域が、以下の HHV— 6の領域力もなる群力選択される、項目 2 1に記載のベクター：

25.前記非必須領域が、 HHV— 6の遺伝子 U5の ORFに隣接する領域または HH V—6の遺伝子 U8の ORFに隣接する領域である、項目 24に記載のベクター。 26. 前記 BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、項目 19に記載のベクター。

27.前記 BACベクター配列が選択マーカーを含む、項目 21に記載のベクター。 28.前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、項目 27に記載のベクター。

29.前記選択マーカーが緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、項目 27に記載のベクター。

30.前記へルぺスウィルスゲノムが野生株由来である、項目 21に記載のベクター。

31.前記へルぺスウィルスゲノムが変異株由来である、項目 21に記載のベクター。

32.前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 7 KHR株由来である、項目 21に記載のベクター。

33.前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 6 A U1102株、または HHV— 6B HS T株由来である、項目 21に記載のベクター。

34.前記 BACベクター配列が配列番号 401に記載の配列を有するベクターである、項目 21に記載のベクター。

35.項目 21に記載のベクターを含む、細胞。

36.細菌である、項目 35に記載の細胞。

37. E. coliである、項目 36に記載の細菌。

38.哺乳動物細胞である、項目 35に記載の細胞。

39.ヒト由来の細胞である、項目 38に記載の哺乳動物細胞。

40.項目 38に記載の哺乳動物細胞によって産生された、ウィルス。

41.項目 40に記載のウィルスを含有する薬学的組成物。

42.ワクチンの形態である、項目 41に記載の薬学的組成物。

43.組換えへルぺスウィルスの製造方法であって、以下の工程：

ヘルぺスウィルスゲノム必須遺伝子と BACベクター配列とを含むベクターを、哺乳動物宿主細胞に導入する工程；および

該哺乳動物宿主細胞を培養して、組換えへルぺスウィルスを産生させる工程、を包含する、方法。

44.前記哺乳動物宿主細胞がヒト由来の細胞である、項目 43に記載の方法。

45.前記 BACベクター配列が少なくとも 2つの組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、項目 43に記載の方法。

46.項目 45に記載の方法であって、前記 2つの組換えタンパク質依存性組換え配列間での組換えを起こす工程をさらに包含する、方法。

47.前記へルぺスウィルスゲノム由来の配列が前記 BACベクター配列と連結する部位力該ヘルぺスウィルスゲノムの非必須領域内である、項目 43に記載の方法。

48.前記非必須領域が、以下の HHV— 7の領域力もなる群力も選択される、項目 4 7に記載の方法：

49.前記非必須領域が、 HHV— 7の遺伝子 U24の ORFに隣接する領域または H HV - 7の遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域である、項目 48に記載の方法。

50.前記非必須領域が、以下の HHV— 6の領域力もなる群力も選択される、項目 4 7に記載の方法：

遺伝子 LT1の ORF内の領域、遺伝子 DR1の ORF内の領域、遺伝子 DR2の ORF 内の領域、遺伝子 DR3の ORF内の領域、遺伝子 DR4の ORF内の領域、遺伝子 D R5の ORF内の領域、遺伝子 DR6の ORF内の領域、遺伝子 DRHN1の ORF内の領域、遺伝子 DR7の ORF内の領域、遺伝子 DRHN2の ORF内の領域、遺伝子 DR 8の ORF内の領域、遺伝子 LJ1の ORF内の領域、遺伝子 U1の ORF内の領域、遺伝子 U2の ORF内の領域、遺伝子 U3の ORF内の領域、遺伝子 U4の ORF内の領域、遺伝子 U5の ORF内の領域、遺伝子 U6の ORF内の領域、遺伝子 U7の ORF内の領域、遺伝子 U8の ORF内の領域、遺伝子 U9の ORF内の領域、遺伝子 U10の ORF内の領域、遺伝子 U12EXの ORF内の領域、遺伝子 U12の ORF内の領域、遺伝子 U13の ORF内の領域、遺伝子 U15の ORF内の領域、遺伝子 U16の ORF 内の領域、遺伝子 U17の ORF内の領域、遺伝子 U18の ORF内の領域、遺伝子 U1 9の ORF内の領域、遺伝子 U20の ORF内の領域、遺伝子 U21の ORF内の領域、遺伝子 U22の ORF内の領域、遺伝子 U23の ORF内の領域、遺伝子 U24の ORF 内の領域、遺伝子 U25の ORF内の領域、遺伝子 U26の ORF内の領域、遺伝子 U2 8の ORF内の領域、遺伝子 U32の ORF内の領域、遺伝子 U33の ORF内の領域、遺伝子 U34の ORF内の領域、遺伝子 U35の ORF内の領域、遺伝子 U36の ORF 内の領域、遺伝子 U37の ORF内の領域、遺伝子 U40の ORF内の領域、遺伝子 U4 2の ORF内の領域、遺伝子 U44の ORF内の領域、遺伝子 U45の ORF内の領域、遺伝子 U46の ORF内の領域、遺伝子 U47の ORF内の領域、遺伝子 U49の ORF 内の領域、遺伝子 U50の ORF内の領域、遺伝子 U51の ORF内の領域、遺伝子 U5 2の ORF内の領域、遺伝子 U55の ORF内の領域、遺伝子 U58の ORF内の領域、遺伝子 U59の ORF内の領域、遺伝子 U61の ORF内の領域、遺伝子 U62の ORF 内の領域、遺伝子 U63の ORF内の領域、遺伝子 U64の ORF内の領域、遺伝子 U6 5の ORF内の領域、遺伝子 U67の ORF内の領域、遺伝子 U68の ORF内の領域、遺伝子 U69の ORF内の領域、遺伝子 U70の ORF内の領域、遺伝子 U71の ORF 内の領域、遺伝子 U75の ORF内の領域、遺伝子 U76の ORF内の領域、遺伝子 U7 8の ORF内の領域、遺伝子 U79の ORF内の領域、遺伝子 U80の ORF内の領域、遺伝子 U81の ORF内の領域、遺伝子 U83の ORF内の領域、遺伝子 U84の ORF 内の領域、遺伝子 U85の ORF内の領域、遺伝子 U88の ORF内の領域、遺伝子 U9 1の ORF内の領域、遺伝子 U92の ORF内の領域、遺伝子 U93の ORF内の領域、遺伝子 HN2の ORF内の領域、遺伝子 U94の ORF内の領域、遺伝子 U95の ORF 内の領域、遺伝子 U96の ORF内の領域、遺伝子 LT1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR2の ORFに隣接する領域、遺伝子 D R3の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR4の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR5の O RFに隣接する領域、遺伝子 DR6の ORFに隣接する領域、遺伝子 DRHN1の ORF に隣接する領域、遺伝子 DR7の ORFに隣接する領域、遺伝子 DRHN2の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR8の ORFに隣接する領域、遺伝子 LJ1の ORFに隣接する領域、遺伝子 U1の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U3の ORFに隣接する領域、遺伝子 U4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U5の O RFに隣接する領域、遺伝子 U6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U8の ORFに隣接する領域、遺伝子 U9の ORFに隣接する領域、遺伝子 U10の ORFに隣接する領域、遺伝子 U12EXの ORFに隣接する領域、遺伝子 U12の ORFに隣接する領域、遺伝子 U13の ORFに隣接する領域、遺伝子 U15 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U16の ORFに隣接する領域、遺伝子 U17の ORF に隣接する領域、遺伝子 U18の ORFに隣接する領域、遺伝子 U19の ORFに隣接する領域、遺伝子 U20の ORFに隣接する領域、遺伝子 U21の ORFに隣接する領域、遺伝子 U22の ORFに隣接する領域、遺伝子 U23の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域、遺伝子 U25の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2 6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U28の ORFに隣接する領域、遺伝子 U32の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U33の ORFに隣接する領域、遺伝子 U34の ORFに隣接する領域、遺伝子 U35の ORFに隣接する領域、遺伝子 U36の ORFに隣接する領域、遺伝子 U37の ORFに隣接する領域、遺伝子 U40の ORFに隣接する領域、遺伝子 U42の ORFに隣接する領域、遺伝子 U44の ORFに隣接する領域、遺伝子 U45の ORFに隣接する領域、遺伝子 U46の ORFに隣接する領域、遺伝子 U47の ORFに隣接する領域、遺伝子 U49の ORFに隣接する領域、遺伝子 U50の ORFに隣接する領域、遺伝子 U51の ORFに隣接する領域、遺伝子 U52の ORFに隣接する領域、遺伝子 U55の ORFに隣接する領域、遺伝子 U58の ORFに隣接する領域、遺伝子 U59の ORFに隣接する領域、遺伝子 U61の ORFに隣接する領域、遺伝子 U62の ORFに隣接する領域、遺伝子 U63の ORFに隣接する領域、遺伝子 U64の ORFに隣接する領域、遺伝子 U65の ORFに隣接する領域、遺伝子 U67の ORFに隣接する領域、遺伝子 U68の ORFに隣接する領域、遺伝子 U69の ORFに隣接する領域、遺伝子 U70の ORFに隣接する領域、遺伝子 U71の ORFに隣接する領域、遺伝子 U75の ORFに隣接する領域、遺伝子 U76の ORFに隣接する領域、遺伝子 U78の ORFに隣接する領域、遺伝子 U79の ORFに隣接する領域、遺伝子 U80の ORFに隣接する領域、遺伝子 U81の ORFに隣接する領域、遺伝子 U83の ORFに隣接する領域、遺伝子 U84の ORFに隣接する領域、遺伝子 U85の ORFに隣接する領域、遺伝子 U88の ORFに隣接する領域、遺伝子 U91の ORFに隣接する領域、遺伝子 U92の ORFに隣接する領域、遺伝子 U93の ORFに隣接する領域、遺伝子 HN2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U94の ORFに隣接する領域、遺伝子 U95の ORFに隣接する領域、および遺伝子 U96の ORFに隣接する領域。 51.前記非必須領域が、 HHV— 6の遺伝子 U5の ORFに隣接する領域または HH V— 6の遺伝子 U8の ORFに隣接する領域である、項目 50に記載の方法。

52.前記 BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、項目 43 に記載の方法。

53.前記 BACベクター配列が選択マーカーを含む、項目 43に記載の方法。

54.前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、項目 53に記載の方法。

55.前記選択マーカーが緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、項目 53に記載の方法。

56.前記へルぺスウィルスゲノムが野生株由来である、項目 43に記載の方法。

57.前記へルぺスウィルスゲノムが変異株由来である、項目 43に記載の方法。

58.前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 7 KHR株由来である、項目 37に記載の方法。

59.前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 6 A U1102株、または HHV— 6B HS T株由来である、項目 37に記載の方法。

60.前記 BACベクター配列が配列番号 401に記載の配列を有するベクターである、項目 43に記載の方法。

61.項目 43に記載の方法によって製造されたウィルス。

62.項目 61に記載のウィルスを含有する薬学的組成物。

63.ワクチンの形態である、項目 62に記載の薬学的組成物。

64.項目 19に記載のベクターに変異を導入する方法であって、以下の工程：該ベクターを細菌宿主細胞に導入する工程；

ヘルぺスウィルスゲノムの一部力なるフラグメントを含むプラスミドベクターを該細菌宿主細胞に導入する工程であって、ここで、該フラグメントは少なくとも 1つの変異を有する、工程；

該細菌宿主細胞を培養する工程；

該培養した細菌宿主細胞から、 BACベクター配列を有するベクターを単離するェ程、

を包含する、方法。 65.項目 19に記載のベクターに変異を導入する方法であって、以下の工程：該ベクターを細菌宿主細胞に導入する工程；

ヘルぺスウィルスゲノムの一部力なる第 1のフラグメントを含む第 1のプラスミドべクターを該細菌宿主細胞に導入する工程であって、ここで、該第 1のフラグメントは少なくとも 1つの変異を有する、工程；

ヘルぺスウィルスゲノムの一部力なる第 2のフラグメントを含む第 2のプラスミドべクターを該細菌宿主細胞に導入する工程であって、ここで、該第 2のフラグメントは少なくとも 1つの変異を有し、そして該第 2のフラグメントは該第 1のフラグメントとは異なる、工程；

該細菌宿主細胞を培養する工程；

を包含する、方法。

66.細菌細胞内においてへルぺスウィルスゲノムと相同組換えし得る第 1のフラグメント、 BACベクター配列、および細菌細胞内においてへルぺスウィルスゲノムと相同組換えし得る第 2のフラグメントを含む核酸カセットであって、ここで、該 BAC配列の両端の各々がそれぞれ第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントと連結する、核酸力セット。

67.前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが少なくとも lkbである、項目 66 に記載の核酸カセット。

68.前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが少なくとも 1. 5kbである、項目 66に記載の核酸カセット。

69.前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが少なくとも 2kbである、項目 66 に記載の核酸カセット。

70.前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが、ヘルぺスウィルスゲノムの配列に対して、少なくとも 80%同一である、項目 66に記載の核酸カセット。

71.前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが、ヘルぺスウィルスゲノムの配列に対して、少なくとも 85%同一である、項目 66に記載の核酸カセット。 72.前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが、ヘルぺスウィルスゲノムの配列に対して、少なくとも 90%同一である、項目 66に記載の核酸カセット。

73.前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが、ヘルぺスウィルスゲノムの配列に対して、少なくとも 95%同一である、項目 66に記載の核酸カセット。

74.項目 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 7ゲノムの以下の領域力もなる群力も選択される領域由来である、核酸カセット：

75.項目 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 7ゲノムの以下の領域力もなる群力も選択される領域と少なくとも 80%同一である、核酸カセット：

76.項目 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 7ゲノムの以下の領域力もなる群力も選択される領域と少なくとも 85%同一である、核酸カセット：

遺伝子 HIの ORF内の領域、遺伝子 DR1の ORF内の領域、遺伝子 DR2の ORF内の領域、遺伝子 H2の ORF内の領域、遺伝子 DR6の ORF内の領域、遺伝子 DR7 の ORF内の領域、遺伝子 H3の ORF内の領域、遺伝子 H4の ORF内の領域、遺伝子 U2の ORF内の領域、遺伝子 U3の ORF内の領域、遺伝子 U4の ORF内の領域、遺伝子 U5Z7の ORF内の領域、遺伝子 U8の ORF内の領域、遺伝子 U10の ORF 内の領域、遺伝子 U 12の ORF内の領域、遺伝子 U13の ORF内の領域、遺伝子 U1 5の ORF内の領域、遺伝子 U16の ORF内の領域、遺伝子 U17Exの ORF内の領域、遺伝子 U17の ORF内の領域、遺伝子 U17aの ORF内の領域、遺伝子 U18の OR F内の領域、遺伝子 U19の ORF内の領域、遺伝子 U20の ORF内の領域、遺伝子 U21の ORF内の領域、遺伝子 U23の ORF内の領域、遺伝子 U24の ORF内の領域、遺伝子 U24aの ORF内の領域、遺伝子 U25の ORF内の領域、遺伝子 U26の O RF内の領域、遺伝子 U28の ORF内の領域、遺伝子 U32の ORF内の領域、遺伝子 U33の ORF内の領域、遺伝子 U34の ORF内の領域、遺伝子 U35の ORF内の領域、遺伝子 U36の ORF内の領域、遺伝子 U37の ORF内の領域、遺伝子 U40の O RF内の領域、遺伝子 U42の ORF内の領域、遺伝子 U44の ORF内の領域、遺伝子 U45の ORF内の領域、遺伝子 U46の ORF内の領域、遺伝子 U47の ORF内の領域、遺伝子 U49の ORF内の領域、遺伝子 U50の ORF内の領域、遺伝子 U51の O RF内の領域、遺伝子 U52の ORF内の領域、遺伝子 U55Aの ORF内の領域、遺伝子 U55Bの ORF内の領域、遺伝子 U58の ORF内の領域、遺伝子 U59の ORF内の領域、遺伝子 U62の ORF内の領域、遺伝子 U63の ORF内の領域、遺伝子 U64の ORF内の領域、遺伝子 U65の ORF内の領域、遺伝子 U67の ORF内の領域、遺伝子 U68の ORF内の領域、遺伝子 U69の ORF内の領域、遺伝子 U70の ORF内の領域、遺伝子 U71の ORF内の領域、遺伝子 U75の ORF内の領域、遺伝子 U76の ORF内の領域、遺伝子 H5の ORF内の領域、遺伝子 U79の ORF内の領域、遺伝子 H6の ORF内の領域、遺伝子 U80の ORF内の領域、遺伝子 U81の ORF内の領域、遺伝子 U84の ORF内の領域、遺伝子 U85の ORF内の領域、遺伝子 U91の O RF内の領域、遺伝子 H7の ORF内の領域、遺伝子 U95の ORF内の領域、遺伝子 H8の ORF内の領域、遺伝子 HIの ORFに隣接する領域、遺伝子 DR1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR2の ORFに隣接する領域、遺伝子 H2の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR6の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR7の ORFに隣接する領域、遺伝子 H3の ORFに隣接する領域、遺伝子 H4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U3の ORFに隣接する領域、遺伝子 U4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U5Z7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U8の ORFに隣接する領域、遺伝子 U10の ORFに隣接する領域、遺伝子 U12の ORFに隣接する領域、遺伝子 U13の ORFに隣接する領域、遺伝子 U15の ORFに隣接する領域、遺伝子 U16の ORFに隣接する領域、遺伝子 U17Exの ORFに隣接する領域、遺伝子 U17 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U 17aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U18の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U19の ORFに隣接する領域、遺伝子 U20の ORFに隣接する領域、遺伝子 U21の ORFに隣接する領域、遺伝子 U23の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U25の ORFに隣接する領域、遺伝子 U26の ORFに隣接する領域、遺伝子 U28の ORFに隣接する領域、遺伝子 U32の ORFに隣接する領域、遺伝子 U33の ORFに隣接する領域、遺伝子 U34の ORFに隣接する領域、遺伝子 U35の ORFに隣接する領域、遺伝子 U36の ORFに隣接する領域、遺伝子 U37の ORFに隣接する領域、遺伝子 U40の ORFに隣接する領域、遺伝子 U42の ORFに隣接する領域、遺伝子 U44の ORFに隣接する領域、遺伝子 U45の ORFに隣接する領域、遺伝子 U46の ORFに隣接する領域、遺伝子 U47の ORFに隣接する領域、遺伝子 U49の ORFに隣接する領域、遺伝子 U50の ORFに隣接する領域、遺伝子 U51の ORFに隣接する領域、遺伝子 U52の ORFに隣接する領域、遺伝子 U55Aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U55Bの ORFに隣接する領域、遺伝子 U58の ORFに隣接する領域、遺伝子 U59の ORFに隣接する領域、遺伝子 U62の ORFに隣接する領域、遺伝子 U63の ORFに隣接する領域、遺伝子 U64の ORFに隣接する領域、遺伝子 U6 5の ORFに隣接する領域、遺伝子 U67の ORFに隣接する領域、遺伝子 U68の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U69の ORFに隣接する領域、遺伝子 U70の ORFに隣接する領域、遺伝子 U71の ORFに隣接する領域、遺伝子 U75の ORFに隣接する領域、遺伝子 U76の ORFに隣接する領域、遺伝子 H5の ORFに隣接する領域、遺伝子 U79の ORFに隣接する領域、遺伝子 H6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U80 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U81の ORFに隣接する領域、遺伝子 U84の ORF に隣接する領域、遺伝子 U85の ORFに隣接する領域、遺伝子 U91の ORFに隣接する領域、遺伝子 H7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U95の ORFに隣接する領域、および遺伝子 H8の ORFに隣接する領域。 77.項目 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 7ゲノムの以下の領域力もなる群力も選択される領域と少なくとも 90%同一である、核酸カセット：

78.項目 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 7ゲノムの以下の領域力もなる群力も選択される領域と少なくとも 95%同一である、核酸カセット：

79.項目 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 6ゲノムの以下の領域力もなる群力も選択される領域由来である、核酸カセット：

遺伝子 LT1の ORF内の領域、遺伝子 DR1の ORF内の領域、遺伝子 DR2の ORF 内の領域、遺伝子 DR3の ORF内の領域、遺伝子 DR4の ORF内の領域、遺伝子 D R5の ORF内の領域、遺伝子 DR6の ORF内の領域、遺伝子 DRHN1の ORF内の領域、遺伝子 DR7の ORF内の領域、遺伝子 DRHN2の ORF内の領域、遺伝子 DR 8の ORF内の領域、遺伝子 LJ1の ORF内の領域、遺伝子 U1の ORF内の領域、遺伝子 U2の ORF内の領域、遺伝子 U3の ORF内の領域、遺伝子 U4の ORF内の領域、遺伝子 U5の ORF内の領域、遺伝子 U6の ORF内の領域、遺伝子 U7の ORF内の領域、遺伝子 U8の ORF内の領域、遺伝子 U9の ORF内の領域、遺伝子 U10の ORF内の領域、遺伝子 U12EXの ORF内の領域、遺伝子 U12の ORF内の領域、遺伝子 U13の ORF内の領域、遺伝子 U15の ORF内の領域、遺伝子 U16の ORF 内の領域、遺伝子 U17の ORF内の領域、遺伝子 U18の ORF内の領域、遺伝子 U1 9の ORF内の領域、遺伝子 U20の ORF内の領域、遺伝子 U21の ORF内の領域、遺伝子 U22の ORF内の領域、遺伝子 U23の ORF内の領域、遺伝子 U24の ORF 内の領域、遺伝子 U25の ORF内の領域、遺伝子 U26の ORF内の領域、遺伝子 U2 8の ORF内の領域、遺伝子 U32の ORF内の領域、遺伝子 U33の ORF内の領域、遺伝子 U34の ORF内の領域、遺伝子 U35の ORF内の領域、遺伝子 U36の ORF 内の領域、遺伝子 U37の ORF内の領域、遺伝子 U40の ORF内の領域、遺伝子 U4 2の ORF内の領域、遺伝子 U44の ORF内の領域、遺伝子 U45の ORF内の領域、遺伝子 U46の ORF内の領域、遺伝子 U47の ORF内の領域、遺伝子 U49の ORF 内の領域、遺伝子 U50の ORF内の領域、遺伝子 U51の ORF内の領域、遺伝子 U5 2の ORF内の領域、遺伝子 U55の ORF内の領域、遺伝子 U58の ORF内の領域、遺伝子 U59の ORF内の領域、遺伝子 U61の ORF内の領域、遺伝子 U62の ORF 内の領域、遺伝子 U63の ORF内の領域、遺伝子 U64の ORF内の領域、遺伝子 U6 5の ORF内の領域、遺伝子 U67の ORF内の領域、遺伝子 U68の ORF内の領域、遺伝子 U69の ORF内の領域、遺伝子 U70の ORF内の領域、遺伝子 U71の ORF 内の領域、遺伝子 U75の ORF内の領域、遺伝子 U76の ORF内の領域、遺伝子 U7 8の ORF内の領域、遺伝子 U79の ORF内の領域、遺伝子 U80の ORF内の領域、遺伝子 U81の ORF内の領域、遺伝子 U83の ORF内の領域、遺伝子 U84の ORF 内の領域、遺伝子 U85の ORF内の領域、遺伝子 U88の ORF内の領域、遺伝子 U9 1の ORF内の領域、遺伝子 U92の ORF内の領域、遺伝子 U93の ORF内の領域、遺伝子 HN2の ORF内の領域、遺伝子 U94の ORF内の領域、遺伝子 U95の ORF 内の領域、遺伝子 U96の ORF内の領域、遺伝子 LT1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR2の ORFに隣接する領域、遺伝子 D R3の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR4の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR5の O RFに隣接する領域、遺伝子 DR6の ORFに隣接する領域、遺伝子 DRHN1の ORF に隣接する領域、遺伝子 DR7の ORFに隣接する領域、遺伝子 DRHN2の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR8の ORFに隣接する領域、遺伝子 LJ1の ORFに隣接する領域、遺伝子 Ulの ORFに隣接する領域、遺伝子 U2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U3の ORFに隣接する領域、遺伝子 U4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U5の O RFに隣接する領域、遺伝子 U6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U8の ORFに隣接する領域、遺伝子 U9の ORFに隣接する領域、遺伝子 U10の ORFに隣接する領域、遺伝子 U12EXの ORFに隣接する領域、遺伝子 U12の ORFに隣接する領域、遺伝子 U13の ORFに隣接する領域、遺伝子 U15 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U16の ORFに隣接する領域、遺伝子 U17の ORF に隣接する領域、遺伝子 U18の ORFに隣接する領域、遺伝子 U19の ORFに隣接する領域、遺伝子 U20の ORFに隣接する領域、遺伝子 U21の ORFに隣接する領域、遺伝子 U22の ORFに隣接する領域、遺伝子 U23の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域、遺伝子 U25の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2 6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U28の ORFに隣接する領域、遺伝子 U32の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U33の ORFに隣接する領域、遺伝子 U34の ORFに隣接する領域、遺伝子 U35の ORFに隣接する領域、遺伝子 U36の ORFに隣接する領域、遺伝子 U37の ORFに隣接する領域、遺伝子 U40の ORFに隣接する領域、遺伝子 U42の ORFに隣接する領域、遺伝子 U44の ORFに隣接する領域、遺伝子 U45の ORFに隣接する領域、遺伝子 U46の ORFに隣接する領域、遺伝子 U47の ORFに隣接する領域、遺伝子 U49の ORFに隣接する領域、遺伝子 U50の ORFに隣接する領域、遺伝子 U51の ORFに隣接する領域、遺伝子 U52の ORFに隣接する領域、遺伝子 U55の ORFに隣接する領域、遺伝子 U58の ORFに隣接する領域、遺伝子 U59の ORFに隣接する領域、遺伝子 U61の ORFに隣接する領域、遺伝子 U62の ORFに隣接する領域、遺伝子 U63の ORFに隣接する領域、遺伝子 U64の ORFに隣接する領域、遺伝子 U65の ORFに隣接する領域、遺伝子 U67の ORFに隣接する領域、遺伝子 U68の ORFに隣接する領域、遺伝子 U69の ORFに隣接する領域、遺伝子 U70の ORFに隣接する領域、遺伝子 U71の ORFに隣接する領域、遺伝子 U75の ORFに隣接する領域、遺伝子 U76の ORFに隣接する領域、遺伝子 U78の ORFに隣接する領域、遺伝子 U79の ORFに隣接する領域、遺伝子 U80の ORFに隣接する領域、遺伝子 U81の ORFに隣接する領域、遺伝子 U83の ORFに隣接する領域、遺伝子 U84の ORFに隣接する領域、遺伝子 U85の ORFに隣接する領域、遺伝子 U88の ORFに隣接する領域、遺伝子 U91の ORFに隣接する領域、遺伝子 U92の ORFに隣接する領域、遺伝子 U93の ORFに隣接する領域、遺伝子 HN2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U94の ORFに隣接する領域、遺伝子 U95の ORFに隣接する領域、および遺伝子 U96の ORFに隣接する領域。

80.項目 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 6ゲノムの以下の領域力もなる群力も選択される領域と少なくとも 80%同一である、核酸カセット：

81.項目 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 6ゲノムの以下の領域力もなる群力も選択される領域と少なくとも 85%同一である、核酸カセット：

82.項目 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 6ゲノムの以下の領域力もなる群力も選択される領域と少なくとも 90%同一である、核酸カセット：

遺伝子 LT1の ORF内の領域、遺伝子 DR1の ORF内の領域、遺伝子 DR2の ORF 内の領域、遺伝子 DR3の ORF内の領域、遺伝子 DR4の ORF内の領域、遺伝子 D R5の ORF内の領域、遺伝子 DR6の ORF内の領域、遺伝子 DRHN1の ORF内の領域、遺伝子 DR7の ORF内の領域、遺伝子 DRHN2の ORF内の領域、遺伝子 DR 8の ORF内の領域、遺伝子 LJ1の ORF内の領域、遺伝子 U1の ORF内の領域、遺伝子 U2の ORF内の領域、遺伝子 U3の ORF内の領域、遺伝子 U4の ORF内の領域、遺伝子 U5の ORF内の領域、遺伝子 U6の ORF内の領域、遺伝子 U7の ORF内の領域、遺伝子 U8の ORF内の領域、遺伝子 U9の ORF内の領域、遺伝子 U10の ORF内の領域、遺伝子 U12EXの ORF内の領域、遺伝子 U12の ORF内の領域、遺伝子 U13の ORF内の領域、遺伝子 U15の ORF内の領域、遺伝子 U16の ORF 内の領域、遺伝子 U17の ORF内の領域、遺伝子 U18の ORF内の領域、遺伝子 U1 9の ORF内の領域、遺伝子 U20の ORF内の領域、遺伝子 U21の ORF内の領域、遺伝子 U22の ORF内の領域、遺伝子 U23の ORF内の領域、遺伝子 U24の ORF 内の領域、遺伝子 U25の ORF内の領域、遺伝子 U26の ORF内の領域、遺伝子 U2 8の ORF内の領域、遺伝子 U32の ORF内の領域、遺伝子 U33の ORF内の領域、遺伝子 U34の ORF内の領域、遺伝子 U35の ORF内の領域、遺伝子 U36の ORF 内の領域、遺伝子 U37の ORF内の領域、遺伝子 U40の ORF内の領域、遺伝子 U4 2の ORF内の領域、遺伝子 U44の ORF内の領域、遺伝子 U45の ORF内の領域、遺伝子 U46の ORF内の領域、遺伝子 U47の ORF内の領域、遺伝子 U49の ORF 内の領域、遺伝子 U50の ORF内の領域、遺伝子 U51の ORF内の領域、遺伝子 U5 2の ORF内の領域、遺伝子 U55の ORF内の領域、遺伝子 U58の ORF内の領域、遺伝子 U59の ORF内の領域、遺伝子 U61の ORF内の領域、遺伝子 U62の ORF 内の領域、遺伝子 U63の ORF内の領域、遺伝子 U64の ORF内の領域、遺伝子 U6 5の ORF内の領域、遺伝子 U67の ORF内の領域、遺伝子 U68の ORF内の領域、遺伝子 U69の ORF内の領域、遺伝子 U70の ORF内の領域、遺伝子 U71の ORF 内の領域、遺伝子 U75の ORF内の領域、遺伝子 U76の ORF内の領域、遺伝子 U7 8の ORF内の領域、遺伝子 U79の ORF内の領域、遺伝子 U80の ORF内の領域、遺伝子 U81の ORF内の領域、遺伝子 U83の ORF内の領域、遺伝子 U84の ORF 内の領域、遺伝子 U85の ORF内の領域、遺伝子 U88の ORF内の領域、遺伝子 U9 1の ORF内の領域、遺伝子 U92の ORF内の領域、遺伝子 U93の ORF内の領域、遺伝子 HN2の ORF内の領域、遺伝子 U94の ORF内の領域、遺伝子 U95の ORF 内の領域、遺伝子 U96の ORF内の領域、遺伝子 LT1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR2の ORFに隣接する領域、遺伝子 D R3の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR4の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR5の O RFに隣接する領域、遺伝子 DR6の ORFに隣接する領域、遺伝子 DRHN1の ORF に隣接する領域、遺伝子 DR7の ORFに隣接する領域、遺伝子 DRHN2の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR8の ORFに隣接する領域、遺伝子 LJ1の ORFに隣接する領域、遺伝子 U1の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U3の ORFに隣接する領域、遺伝子 U4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U5の O RFに隣接する領域、遺伝子 U6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U8の ORFに隣接する領域、遺伝子 U9の ORFに隣接する領域、遺伝子 U10の ORFに隣接する領域、遺伝子 U12EXの ORFに隣接する領域、遺伝子 U12の ORFに隣接する領域、遺伝子 U13の ORFに隣接する領域、遺伝子 U15 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U16の ORFに隣接する領域、遺伝子 U17の ORF に隣接する領域、遺伝子 U18の ORFに隣接する領域、遺伝子 U19の ORFに隣接する領域、遺伝子 U20の ORFに隣接する領域、遺伝子 U21の ORFに隣接する領域、遺伝子 U22の ORFに隣接する領域、遺伝子 U23の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域、遺伝子 U25の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2 6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U28の ORFに隣接する領域、遺伝子 U32の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U33の ORFに隣接する領域、遺伝子 U34の ORFに隣接する領域、遺伝子 U35の ORFに隣接する領域、遺伝子 U36の ORFに隣接する領域、遺伝子 U37の ORFに隣接する領域、遺伝子 U40の ORFに隣接する領域、遺伝子 U42の ORFに隣接する領域、遺伝子 U44の ORFに隣接する領域、遺伝子 U45の ORFに隣接する領域、遺伝子 U46の ORFに隣接する領域、遺伝子 U47の ORFに隣接する領域、遺伝子 U49の ORFに隣接する領域、遺伝子 U50の ORFに隣接する領域、遺伝子 U51の ORFに隣接する領域、遺伝子 U52の ORFに隣接する領域、遺伝子 U55の ORFに隣接する領域、遺伝子 U58の ORFに隣接する領域、遺伝子 U59の ORFに隣接する領域、遺伝子 U61の ORFに隣接する領域、遺伝子 U62の ORFに隣接する領域、遺伝子 U63の ORFに隣接する領域、遺伝子 U64の ORFに隣接する領域、遺伝子 U65の ORFに隣接する領域、遺伝子 U67の ORFに隣接する領域、遺伝子 U68の ORFに隣接する領域、遺伝子 U69の ORFに隣接する領域、遺伝子 U70の ORFに隣接する領域、遺伝子 U71の ORFに隣接する領域、遺伝子 U75の ORFに隣接する領域、遺伝子 U76の ORFに隣接する領域、遺伝子 U78の ORFに隣接する領域、遺伝子 U79の ORFに隣接する領域、遺伝子 U80の ORFに隣接する領域、遺伝子 U81の ORFに隣接する領域、遺伝子 U83の ORFに隣接する領域、遺伝子 U84の ORFに隣接する領域、遺伝子 U85の ORFに隣接する領域、遺伝子 U88の ORFに隣接する領域、遺伝子 U91の ORFに隣接する領域、遺伝子 U92の ORFに隣接する領域、遺伝子 U93の ORFに隣接する領域、遺伝子 HN2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U94の ORFに隣接する領域、遺伝子 U95の ORFに隣接する領域、および遺伝子 U96の ORFに隣接する領域。 83.項目 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 6ゲノムの以下の領域力もなる群力も選択される領域と少なくとも 95%同一である、核酸カセット：

84.項目 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが異なる領域に由来する、核酸カセット。

85.前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立して、 HHV— 7の遺伝子 U24の ORFに隣接する領域または HHV— 7の遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域由来である、項目 66に記載の核酸カセット。

86.前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立して、 HHV— 6の遺伝子 U5の O RFに隣接する領域または HHV— 6の遺伝子 U8の ORFに隣接する領域である、項目 66に記載の核酸カセット。

87.前記 BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、項目 66 に記載の核酸カセット。

88.前記 BACベクター配列が選択マーカーを含む、項目 66に記載の核酸カセット。 89.前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、項目 88に記載の核酸カセット。

90.前記選択マーカーが緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、項目 88に記載の核酸カセット。

91.前記へルぺスウィルスゲノムが野生株由来である、項目 66に記載の核酸カセッ

92.前記へルぺスウィルスゲノムが変異株由来である、項目 66に記載の核酸カセッ

93.前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 7 KHR株由来である、項目 66に記載の核酸カセット。

94.前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 6 A U1102株、または HHV— 6B HS T株由来である、項目 66に記載の核酸カセット。

95.前記 BACベクター配列が配列番号 401に記載の核酸配列を有する、項目 66に記載の核酸カセット。

96.配列番号 1に記載の核酸配列を有する、項目 66に記載の核酸カセット。

97.項目 4に記載の組換えへルぺスウィルスを含有する HIVの予防、処置、または予後のための薬学的組成物。

98.項目 4に記載の組換えへルぺスウィルスを含有する HIVの予防のための薬学的組成物。

99.項目 6に記載の組換えへルぺスウィルスを含有する HIVの予防、処置、または予後のための薬学的組成物。

100.項目 6に記載の組換えへルぺスウィルスを含有する HIVの予防のための薬学的組成物。

発明の効果

本発明によって、組換えへルぺスウィルス、およびその製造方法が提供される。例えば、本発明によって、 BAC (大腸菌人工染色体)を用い、単一のウィルス株力ゝら組換えへルぺスウィルスを作製する方法、およびその方法によって作製された組換えヘルぺスウィルスが提供される。また、本発明によって、組換えへルぺスウィルスを含む薬学的組成物がまた提供される。 [0012] さらに、本発明によって、ヘルぺスウィルスゲノム遺伝子と BACベクター配列とを含むベクター、およびそのようなベクターを含む細胞、ならびにヘルぺスウィルスゲノムと相同組換えし得るフラグメント、および BACベクター配列を含む核酸カセットが提供される。

[0013] さらに、 HHV— 7は、健常人には害を及ぼさないことが公知であるため、様々なウイルスのタンパク質の中で、ワクチンとして作用することが公知のタンパク質を組換え H HV— 7中に組み込んで発現されることによって、ウィルスワクチンを作製することが可能となる。

[0014] また、本発明の組換え HHV—7および HHV— 6を含む、 HIV感染の予防、処置、および Zまたは予後のための薬学的組成物が提供される。

図面の簡単な説明

[0015] [図 1]図 1は、 HHV— 7ゲノムへの BACベクターの挿入を模式的に示した図である。

[図 2]図 2は、本発明の組換え HHV— 7によって宿主細胞内に導入された GFPの発現を示す結果である。

配列表の説明

[0016] 配列番号 1、JI株のゲノム配列

配列番号 2、 HI 5，- 3'方向 33〜542 アミノ酸 1-170のアミノ酸配列配列番号 3、 DR2 5，- →3 '方向 898〜2100 アミノ酸 1-401のアミノ酸配列配列番号 4、 H2 5，- 3'方向 2267〜2506 アミノ酸 1-80のアミノ酸配列配列番号 5、 DR6 5，- →3 '方向 2562〜3050 アミノ酸 1-163のアミノ酸配列配列番号 6、 DR7 5，- →3 '方向 3122〜3910 アミノ酸 1-263のアミノ酸配列配列番号 7、 U10 5，- →3，方向 14608^15963 アミノ酸 1-452のアミノ酸配列配列番号 8、 U12 5，- →3，方向 18396^19436 アミノ酸 1-347のアミノ酸配列配列番号 9、 U13 5，- →3，方向 1952Γ19817 アミノ酸 1-99のアミノ酸配列

3'方向 19885〜21831 アミノ酸 1-649のアミノ酸配列 >3 '方向 24318〜24587 アミノ酸 1-90のアミノ酸配列 3'方向 37362〜40178 アミノ酸 1-939のアミノ酸配列 3，方向 40179〜46358 アミノ酸 1-2060のアミノ酸配列配列番号 14、 U36 5，-→3，方向 49118へ 50575 アミノ酸 1-486のアミノ酸配列配列番号 15、 U37 5，- →3 '方向 50577へ 51356 アミノ酸 1-260のアミノ酸配列配列番号 16、 U44 5，- →3 '方向 67143へ 67754 アミノ酸 1-204のアミノ酸配列配列番号 17、 U46 5，- →3 '方向 6893( 69190 アミノ酸 1-87のアミノ酸配列配列番号 18、 U49 5，- →3 '方向 73003へ 73722 アミノ酸 1-240のアミノ酸配列配列番号 19、 U51 5，- →3 '方向 75304へ 76188 アミノ酸 1-295のアミノ酸配列配列番号 20、 U53 5，- →3 '方向 76957へ 78495 アミノ酸 1-513のアミノ酸配列配列番号 21、 U58 5，- →3 '方向 87563へ 89890 アミノ酸 1-776のアミノ酸配列配列番号 22、 U62 5，- →3 '方向 92017へ 92244 アミノ酸 1-76のアミノ酸配列配列番号 23、 U64 5，- →3 '方向 92829へ 94148 アミノ酸 1-440のアミノ酸配列配列番号 24、 U67 5，- →3 '方向 95984へ 97024 アミノ酸 1-347のアミノ酸配列配列番号 25、 U69 5，- →3，方向 97371へ 99011 アミノ酸 1-547のアミノ酸配列配列番号 26、 U70 5，- →3 '方向 99013へ 100455 アミノ酸 1-481のアミノ酸配列配列番号 27、 U73 5，- →3，方向 101693 "104056アミノ酸 1-788のアミノ酸配列配列番号 28、 U77 5，- →3 '方向 108435 "110897アミノ酸 1-821のアミノ酸配列配列番号 29、 H5 5，— >3，方向 112811 "113311アミノ酸 1-167のアミノ酸配列配列番号 30、 U79 5，- →3，方向 113502 "114203アミノ酸 1-234のアミノ酸配列配列番号 31、 H6 5，— >3，方向 114257 "114505アミノ酸 1-83のアミノ酸配列配列番号 32、 U80 5，- →3 '方向 114557 〜115189アミノ酸 1-211のアミノ酸配列配列番号 33、 U91 5，- →3，方向 129122 "129625アミノ酸 1-168のアミノ酸配列配列番号 34、 H7 5，— >3，方向 130829 "132112アミノ酸 1-428のアミノ酸配列配列番号 35、 U95 5，- →3 '方向 133382 "136204アミノ酸 1-941のアミノ酸配列配列番号 36、 HI ' 5，- →3 '方向 13908C "139589アミノ酸 1-170のアミノ酸配列配列番号 37、 DR2 ' 5，- →3 '方向 139945〜141147アミノ酸 1-401のアミノ酸配列配列番号 38、 H2， 5，- →3 '方向 141314〜141553アミノ酸 1-80のアミノ酸配列配列番号 39、 DR6， 5，- →3 '方向 141609〜142097アミノ酸 1-163のアミノ酸配列配列番号 40、 DR7' 5，- →3，方向 142169〜142957アミノ酸 1-263のアミノ酸配列配列番号 41、 DR1 5，- →3 '方向 368〜826 アミノ酸 1-153をコードする核酸配列配列番号 42、 DR1 5 >3 '方向 368〜826 アミノ酸 1-153のアミノ酸配列配列番号 43、 U50 5 >3 '方向 73538〜75202 アミノ酸 1-555をコードする核酸配列

配列番号 44、 U50 5 >3 '方向 73538〜75202 アミノ酸 1-555のアミノ酸配列配列番号 45、 U59 5 >3 '方向 89838〜90881 アミノ酸 1-348をコードする核酸配列

配列番号 46、 U59 5 >3 '方向 89838〜90881 アミノ酸 1-348のアミノ酸配列配列番号 47、 U63 5 >3 '方向 92216〜92851 アミノ酸 1-212をコードする核酸配列

配列番号 48、 U63 5 >3 '方向 92216〜92851 アミノ酸 1-212のアミノ酸配列配列番号 49、 U65 5 >3 '方向 9411广 95103 アミノ酸 1-331をコードする核酸配列

配列番号 50、 U65 5 >3 '方向 94111〜95103 アミノ酸 1-331のアミノ酸配列配列番号 51、 U68 5 >3 '方向 97024〜97368 アミノ酸 1-115をコードする核酸配列

配列番号 52、 U68 5 >3 '方向 97024〜97368 アミノ酸 1-115のアミノ酸配列配列番号 53、 U71 5 >3 '方向 100392〜100613アミノ酸 1-74をコードする核酸配列

配列番号 54、 U71 5 >3，方向 100392〜100613アミノ酸 1-74のアミノ酸配列配列番号 55、 U74 5 >3 '方向 104007〜105986アミノ酸 1-660をコードする核酸配列

配列番号 56、 , U74 5 '→3 '方向 104007〜105986アミノ酸 1-660のアミノ酸配列配列番号 57、 , DR1 ' 5 '→3 '方向 139415〜139873アミノ酸 1-153をコードする核酸配列

配列番号 58、 , DR1 ' 5，→3，方向 139415〜139873アミノ酸 1-153のアミノ酸配列配列番号 59、 , JI株のゲノム配列湘補鎖）

配列番号 60、 , H3 3，→5，方向 3976〜4224 アミノ酸 1-83のアミノ酸配列配列番号 61、 , H4 3 '→5 '方向 4449〜4745 アミノ酸 1-99のアミノ酸配列配列番号 62、 U2 3，- '方向 6338〜7417 アミノ酸 1-360のアミノ酸配列配列番号 63、 U3 3，- W方向 7578〜8732 アミノ酸 1-385のアミノ酸配列配列番号 64、 U4 3，- 5 '方向 8754〜10382 アミノ酸 1-543のアミノ酸配列配列番号 65、 U5/7 3，- →5 '方向 10407〜13004 アミノ酸 1-866のアミノ酸配列配列番号 66、 U8 3，- '方向 13174へ 14262 アミノ酸 1-363のアミノ酸配列配列番号 67、 U11 3，- →5 '方向 15982' 18249 アミノ酸 1- -756のアミノ酸配列配列番号 68、 U15 3，- →5 '方向 22244' 22564 アミノ酸 1- -107のアミノ酸配列配列番号 69、 U17 3，- →5 '方向 23570' 3836 アミノ酸 1- -89のアミノ酸配列配列番号 70、 U18 3，- →5 '方向 24713' 25600 アミノ酸 1- -296のアミノ酸配列配列番号 71、 U19 3，- →5 '方向 25945' 26922 アミノ酸 1- -326のアミノ酸配列配列番号 72、 U21 3，- →5 '方向 28202' 29494 アミノ酸 1- -431のアミノ酸配列配列番号 73、 U23 3，- →5 '方向 29903' 30418 アミノ酸 1- -172のアミノ酸配列配列番号 74、 U24 3，- →5 '方向 30524' 30772 アミノ酸 1- -83のアミノ酸配列配列番号 75、 U25 3，- →5 '方向 30936' 31898 アミノ酸 1- -321のアミノ酸配列配列番号 76、 U27 3，- →5 '方向 32857' 33951 アミノ酸 1- -365のアミノ酸配列配列番号 77、 U28 3，- →5 '方向 34064' 36484 アミノ酸 1- -807のアミノ酸配列配列番号 78、 U29 3，- →5 '方向 36487' 37347 アミノ酸 1- -287のアミノ酸配列配列番号 79、 U32 3，- →5 '方向 46355' 46627 アミノ酸 1- -91のアミノ酸配列配列番号 80、 U34 3，- →5 '方向 47992' 48768 アミノ酸 1- -259のアミノ酸配列配列番号 81、 U35 3，- →5 '方向 48805' 49119 アミノ酸 1- -105のアミノ酸配列配列番号 82、 U38 3，- →5 '方向 51363' 4401 アミノ酸 1- -1013のアミノ酸配列配列番号 83、 U40 3，- →5 '方向 56832' 58997 アミノ酸 1- -722のアミノ酸配列配列番号 84、 U41 3，- →5 '方向 59000' 62395 アミノ酸 1- -1132のアミノ酸配列配列番号 85、 U42 3，- →5 '方向 62772' 64352 アミノ酸 1- -527のアミノ酸配列配列番号 86、 U43 3，- →5 '方向 6450Γ 67086 アミノ酸 1- -862のアミノ酸配列配列番号 87、 U45 3，- →5 '方向 67759' 68898 アミノ酸 1- -380のアミノ酸配列配列番号 88、 U47 3，- →5 '方向 69638' 0579 アミノ酸 1- -314のアミノ酸配列配列番号 89、 U48 3，- →5 '方向 70817' 2889 アミノ酸 1- -691のアミノ酸配列配列番号 90、 U52 3，- 5 '方向 76185〜76949 アミノ酸 1-255のアミノ酸配列配列番号 91、 U54 3，- 5 '方向 78503〜79870 アミノ酸 1-456のアミノ酸配列配列番号 92、 U55A 3，- →5 '方向 79918〜81201 アミノ酸 1-428のアミノ酸配列配列番号 93、 U55B 3，- →5 '方向 81285〜82577 アミノ酸 1-431のアミノ酸配列配列番号 94、 U56 3，- 5 '方向 82630〜83511 アミノ酸 1-294のアミノ酸配列配列番号 95、 U57 3，- 5 '方向 83514〜87551 アミノ酸 1-1346のアミノ酸配列配列番号 96、 U72 3，- 5 '方向 100636〜101676アミノ酸 1-347のアミノ酸配列配列番号 97、 U76 3，- 5 '方向 106667〜108589アミノ酸 1-641のアミノ酸配列配列番号 98、 U81 3，- 5，方向 115184〜115948アミノ酸 1-255のアミノ酸配列配列番号 99、 U82 3，— 5，方向 116038〜116778アミノ酸 1-247のアミノ酸配列配列番号 100、 U84 3，- →5 '方向 11711广 118043アミノ酸 1-311のアミノ酸配列配列番号 101、 U85 3，- →5 '方向 11807广 118913アミノ酸 1-281のアミノ酸配列配列番号 102、 U86 3，- →5 '方向 11909广 122708アミノ酸 1-1206のアミノ酸配列配列番号 103、 U89 3，- →5 '方向 125420〜128668アミノ酸 1-1083のアミノ酸配列配列番号 104、 U90 3，- →5 '方向 128776〜129051アミノ酸 1-92のアミノ酸配列配列番号 105、 H8 3，- 5，方向 136307〜136579アミノ酸 1-91のアミノ酸配列配列番号 106、 U99 3，- →5 '方向 138375〜138692アミノ酸 1-106のアミノ酸配列配列番号 107、 U100 3，- →5 '方向 13875广 138999アミノ酸 1-83のアミノ酸配列配列番号 108、 H3 ' 3，- →5 '方向 143023〜143271アミノ酸 1-83のアミノ酸配列配列番号 109、 H4' 3，- →5 '方向 143496〜143792アミノ酸 1-99のアミノ酸配列配列番号 110、 U17Ex 3 '→5 '方向 22772〜23547および 23620〜23836 アミノ酸 1-331をコードする核酸配列

配列番号 111、 U17Ex 3 '→5 '方向 22772〜23547および 23620〜23836 アミノ酸 1-331のアミノ酸配列

配列番号 112、 U60-U663 '→5 '方向 90878〜92005および 95122〜95985アミノ酸 1-664をコードする核酸配列

配列番号 113、 U60-U663 '→5 '方向 90878〜92005および 95122〜95985アミノ酸 1-664のアミノ酸配列配列番号 114、 U20 3，-→5 '方向 27036^28211 アミノ酸 1-392をコードする核酸配列

配列番号] L 15、 U20 3，- →5 '方向 27036^28211 アミノ酸 1-392のアミノ酸配列配列番号] L 16、 U24a 3， →5 '方向 30776^31129 アミノ酸 1-118をコードする核酸配列

配列番号] L 17、 U24a 3， →5 '方向 30776^31129 アミノ酸 1-118のアミノ酸配列配列番号] L 18、 U26 3，- →5 '方向 31988^32869 アミノ酸 1-294をコードする核酸配列

配列番号] L 19、 U26 3，- →5 '方向 31988^32869 アミノ酸 1-294のアミノ酸配列配列番号] L20、 U33 3，- →5 '方向 46608^48041 アミノ酸 1-478をコードする核酸配列

配列番号] L21、 U33 3，- →5 '方向 46608^48041 アミノ酸 1-478のアミノ酸配列配列番号] L22、 U39 3，- →5 '方向 5440广 56869 アミノ酸 1-823をコードする核酸配列

配列番号] L23、 U39 3，- →5 '方向 5440广 56869 アミノ酸 1-823のアミノ酸配列配列番号] L24、 U75 3，- →5 '方向 105973〜106743アミノ酸 1-257をコードする核酸配列

配列番号] L25、 U75 3，- →5 '方向 105973〜106743アミノ酸 1-257のアミノ酸配列配列番号] L26、 U98 3，- →5 '方向 137945〜138451アミノ酸 1-169をコードする核酸配列

配列番号] L27、 U98 3，- →5，方向 137945〜138451アミノ酸 1-169のアミノ酸配列配列番号] L28、 Ul 102株のゲノム配列

配列番号] L29、 DR1、 5，— >3 '方向、 501〜794、アミノ酸 1-98のアミノ酸配列

配列番号] L30、 DR4、 5，— >3 '方向、 2746〜3048、ァミノ酸 1-101のアミノ酸配列配列番号] L31、 DR6、 5，— >3 '方向、 4725〜5036、ァミノ酸 1-104のアミノ酸配列配列番号] L32、 DR7、 5，— >3 '方向、 5629〜6720、ァミノ酸 1-364のアミノ酸配列配列番号] L33、 DR8、 5，— >3 '方向、 7237〜7569、ァミノ酸 1-111のアミノ酸配列配列番号] L34、 Ul、 5，→3，方向、 8245〜8616、アミノ酸 1-124のアミノ酸配列配列番号] L35 U6、 5，→3，方向、 14619〜14867、アミノ酸 1-83のアミノ酸配列配列番号] L36 U10、 5 ' - →3，方向、 17604へ 18914、アミノ酸 1-437のアミノ酸配列配列番号] L37 U12、 5，- →3，方向、 21856へ 22812、アミノ酸 1-319のアミノ酸配列配列番号] L38 U13、 5 ' - →3，方向、 22898へ 23218、アミノ酸 1-107のアミノ酸配列配列番号] L39 U14、 5，- →3，方向、 23316へ 25145、アミノ酸 1-610のアミノ酸配列配列番号] L40 U30、 5 ' - →3，方向、 4188 45132、アミノ酸 1-1083のアミノ酸配列配列番号] L41 U31、 5，- →3，方向、 45150へ 51383、アミノ酸 1-2078のアミノ酸配列配列番号] L42 U36、 5 ' - →3，方向、 54252へ 55706、アミノ酸 1-485のアミノ酸配列配列番号] L43 U37、 5，- →3，方向、 55710へ 56504、アミノ酸 1-265のアミノ酸配列配列番号] L44 U44、 5 ' - →3，方向、 73446へ 74087、アミノ酸 1-214のアミノ酸配列配列番号] L45 U46、 5，- →3，方向、 7529Γ 75545、アミノ酸 1-85のアミノ酸配列配列番号] L46 U49、 5 ' - →3，方向、 80277へ 81035、アミノ酸 1-253のアミノ酸配列配列番号] L47 U51、 5，- →3，方向、 82574へ 83479、アミノ酸 1-302のアミノ酸配列配列番号] L48 U53、 5 ' - →3，方向、 8428Γ 85867、アミノ酸 1-529のアミノ酸配列配列番号] L49 U58、 5，- →3，方向、 9392 96242、アミノ酸 1-773のアミノ酸配列配列番号] L50 U62、 5 ' - →3，方向、 98427へ 98684、アミノ酸 1-86のアミノ酸配列配列番号] L51 U64、 5，- →3，方向、 9926( 100588、アミノ酸 1-443のアミノ酸配列配列番号] L52 U67、 5 ' - →3，方向、 102458 〜103519、アミノ酸 1-354のアミノ酸配列配列番号] L53 U69、 5，- →3，方向、 103866 〜105554、アミノ酸 1-563のアミノ酸配列配列番号] L54 U70、 5 ' - →3，方向、 105562 〜107028、アミノ酸 1-489のアミノ酸配列配列番号] L55 U73、 5，- →3，方向、 108325 〜110667、アミノ酸 1-781のアミノ酸配列配列番号] L56 U77、 5 ' - →3，方向、 115100 〜117574、アミノ酸 1-825のアミノ酸配列配列番号] L57 U79、 5，- →3，方向、 120164 〜121198、アミノ酸 1-345のアミノ酸配列配列番号] L58 U83、 5 ' - →3，方向、 123528 〜123821、アミノ酸 1-98のアミノ酸配列配列番号] L59 U88、 5，- →3，方向、 131034 "132275,アミノ酸 1-414のアミノ酸配列配列番号] L60 仮想タンノ、。ク質 U90、 5，→3，方向、 136266〜136481、アミノ酸 1-72のアミノ酸配列

配列番号 161 U91、 5，→3，方向、 136485〜136829、アミノ酸 1-115のアミノ酸配列配列番号 162、 U95、 5，→3，方向、 142941〜146306、アミノ酸 1-1122のアミノ酸配列配列番号 163、 DR1、 5，→3，方向、 151734〜152027、アミノ酸 1-98のアミノ酸配列配列番号 164、 DR4、 5，→3，方向、 153979〜154281、アミノ酸 1-101のアミノ酸配列配列番号 165、 DR6、 5，→3，方向、 155958〜156269、アミノ酸 1-104のアミノ酸配列配列番号 166、 DR7、 5，→3，方向、 156862〜157953、アミノ酸 1-364のアミノ酸配列配列番号 167、 DR8、 5，→3，方向、 158470〜158802、アミノ酸 1-111のアミノ酸配列配列番号 168、 DR2、 5 '→3 '方向、 79广 2653、アミノ酸 1-621をコードする核酸配列配列番号 169、 DR2、 5，→3，方向、 791〜2653、アミノ酸 1-621のアミノ酸配列配列番号 170、 U12ェキソン 1- 2、 5，→3，方向、 21680〜21710および 21800〜22812、ァミノ酸 1-348をコードする核酸配列

配列番号 171、 U12ェキソン 1-2、 5，→3，方向、 21680〜21710および 21800〜22812、ァミノ酸 1-348のアミノ酸配列

配列番号 172 U50、 5 '→3 '方向、 80812^82479,アミノ酸 1-556をコードする核酸配列

配列番号 173 U50、 '方向、 80812^82479,アミノ酸 1-556のアミノ酸配列配列番号 174 U59、 '方向、 96239^97291,アミノ酸 1-351をコードする核酸配列

配列番号 175 U59、 '方向、 96239^97291,アミノ酸 1-351のアミノ酸配列配列番号 176 U63、 '方向、 98632^99282,アミノ酸 1-217をコードする核酸配列

配列番号 177 U63、方向、 98632〜99282、アミノ酸 1-217のアミノ酸配列配列番号 178 U65、方向、 100545〜101552、アミノ酸 1-336をコードする核酸配列

配列番号 179 U65、方向、 100545〜101552、アミノ酸 1-336のアミノ酸配列配列番号 180 U68、方向、 103519〜103863、アミノ酸 1-115をコードする核酸配列

配列番号 181 U68、方向、 103519〜103863、アミノ酸 1-115のアミノ酸配列配列番号 182 U71、方向、 106965〜107198、アミノ酸 1-78をコードする核酸配列

配列番号 183 U71、 5，→3，方向、 106965〜107198、アミノ酸 1-78のアミノ酸配列配列番号 184 U74、 5'→3 '方向、 110636〜112624、アミノ酸 1-663をコードする核酸配列

配列番号 185 U74、 5，→3，方向、 110636〜112624、アミノ酸 1-663のアミノ酸配列配列番号 186 U80、 5，→3，方向、 121170〜121766、アミノ酸 1-199をコードする核酸配列

配列番号 187 3'方向、 121170〜121766、アミノ酸 1-199のアミノ酸配列配列番号 188 3'方向、 152024〜153886、アミノ酸 1-621をコードする核酸配列

配列番号 189 DR2'、 5，→3，方向、 152024〜153886、アミノ酸 1-621のアミノ酸配列配列番号 190 U1102株のゲノム配列 (相補鎖）

配列番号 191 DR5、 3，→5，方向、 154967〜155404、アミノ酸 1-146のアミノ酸配列配列番号 192 DR3、 3，→5，方向、 153634〜154212、アミノ酸 1-193のアミノ酸配列配列番号 193 RJ1、 3，→5，方向、 151140〜151571、アミノ酸 1-144のアミノ酸配列配列番号 194 U100、 3，→5，方向、 149868〜150437、アミノ酸 1-190のアミノ酸配列配列番号 195 U99、 3，- →5，方向、 149485" "149766、アミノ酸 1- -94のアミノ酸配列配列番号 196 U98、 3，- →5，方向、 14874Γ "149391、アミノ酸 1- -217のアミノ酸配列配列番号 197 U97、 3，- →5，方向、 147808" 148077,アミノ酸 1- -90のアミノ酸配列配列番号 198 U96、 3，- →5，方向、 14664Γ "146940、アミノ酸 1- -100のアミノ酸配列配列番号 199 U94、 3，- →5，方向、 141394" 142866,アミノ酸 1- -491のアミノ酸配列配列番号 200 U93、 3，- →5，方向、 13853Γ "139124、アミノ酸 1- -198のアミノ酸配列配列番号 201 U92、 3，- →5，方向、 138049" "138492、アミノ酸 1- -148のアミノ酸配列配列番号 202 U90、 3，- →5，方向、 135664" "135948、アミノ酸 1- -95のアミノ酸配列配列番号 203 U89、 3，- →5，方向、 13309Γ 35610、アミノ酸 1- -840のアミノ酸配列配列番号 204 U86、 3，- →5，方向、 125989" "128136、アミノ酸 1- -716のアミノ酸配列配列番号 205 U85、 3，- →5，方向、 12498Γ "125853、アミノ酸 1- -291のアミノ酸配列配列番号 206 U84、 3，- →5，方向、 123925" "124953、アミノ酸 1- -343のアミノ酸配列配列番号 207、 U82、 3，-→5 '方向、 122653〜123405、アミノ酸 1-251のアミノ酸配列配列番号 208、 U81、 3，- →5 '方向、 121810^122577,アミノ酸 1-256のアミノ酸配列配列番号 209、 U78、 3，- →5 '方向、 118709〜119038、アミノ酸 1-110のアミノ酸配列配列番号 210、 U75、 3，- →5 '方向、 112659〜113408、アミノ酸 1-250のアミノ酸配列配列番号 211、 U72、 3，- →5 '方向、 107278^108312,アミノ酸 1-345のアミノ酸配列配列番号 212、 U66、 3，- →5 '方向、 101569〜102486、アミノ酸 1-306のアミノ酸配列配列番号 213、 U60、 3，- →5 '方向、 97288^98256,アミノ酸 1-323のアミノ酸配列配列番号 214、 U57、 3，- →5 '方向、 89875^93912,アミノ酸 1-1346のアミノ酸配列配列番号 215、 U56、 3，- →5 '方向、 88983〜89873、アミノ酸 1-297のアミノ酸配列配列番号 216、 U55、 3，- →5 '方向、 87505^88803,アミノ酸 1-433のアミノ酸配列配列番号 217、 U54、 3，- →5 '方向、 8605广 87427、アミノ酸 1-459のアミノ酸配列配列番号 218、 U52、 3，- →5 '方向、 83498^84274,アミノ酸 1-259のアミノ酸配列配列番号 219、 U48、 3，- →5 '方向、 78034〜80118、アミノ酸 1-695のアミノ酸配列配列番号 220、 U47、 3，- →5 '方向、 75912^77867,アミノ酸 1-652のアミノ酸配列配列番号 221、 U45、 3，- →5 '方向、 74088^75218,アミノ酸 1-377のアミノ酸配列配列番号 222、 U43、 3，- →5 '方向、 70823^73405,アミノ酸 1-861のアミノ酸配列配列番号 223、 U42、 3，- →5 '方向、 69054〜70598、アミノ酸 1-515のアミノ酸配列配列番号 224、 U41、 3，- →5 '方向、 64222^67620,アミノ酸 1-1133のアミノ酸配列配列番号 225、 U40、 3，- →5 '方向、 62034^64214,アミノ酸 1-727のアミノ酸配列配列番号 226、 U38、 3，- →5 '方向、 56550〜59588、アミノ酸 1-1013のアミノ酸配列配列番号 227、 U35、 3，- →5 '方向、 53933〜54253、アミノ酸 1-107のアミノ酸配列配列番号 228、 U33、 3，- →5 '方向、 51723〜53135、アミノ酸 1-471のアミノ酸配列配列番号 229、 U32、 3，- →5 '方向、 51455^51721,アミノ酸 1-89のアミノ酸配列配列番号 230、 U29、 3，- →5 '方向、 41457^42356,アミノ酸 1-300のアミノ酸配列配列番号 231、 U28、 3，- →5 '方向、 39020〜41434、アミノ酸 1-805のアミノ酸配列配列番号 232、 U26、 3，- →5 '方向、 36922^37809,アミノ酸 1-296のアミノ酸配列配列番号 233、 U25、 3，- →5 '方向、 35864〜36814、アミノ酸 1-317のアミノ酸配列配列番号 234、 Unknown!, 3 '→5 '方向、 35674^35847,アミノ酸 1-58のアミノ酸配列配列番号 235、 U24、 3，-→5，方向、 35392〜35655、アミノ酸 1- -88のアミノ酸配列配列番号 236、 U23、 3，- →5，方向、 34375^35085,アミノ酸 1- -237のアミノ酸配列配列番号 237、 U22、 3，- →5，方向、 33739^34347,アミノ酸 1- -203のアミノ酸配列配列番号 238、 U21、 3，- →5，方向、 32340^33641,アミノ酸 1- -434のアミノ酸配列配列番号 239、 U20、 3，- →5，方向、 31069^32337,アミノ酸 1- -423のアミノ酸配列配列番号 240、 U19、 3，- →5，方向、 29649^30818,アミノ酸 1- -390のアミノ酸配列配列番号 241、 U18、 3，- →5，方向、 28508^29389,アミノ酸 1- -294のアミノ酸配列配列番号 242、 U16、 3，- →5，方向、 26259^27116,アミノ酸 1- -286のアミノ酸配列配列番号 243、 U15、 3，- →5，方向、 25660^25992,アミノ酸 1- -111のアミノ酸配列配列番号 244、 Ul l、 3，- →5，方向、 18966〜21578、アミノ酸 1- -871のアミノ酸配列配列番号 245、 U9、 3，- →5，方向、 17238" "17552、アミノ酸 1- -105のアミノ酸配列配列番号 246、 U8、 3，- →5，方向、 1602Γ "17091、アミノ酸 1- -357のアミノ酸配列配列番号 247、 U7、 3，- →5，方向、 14908" "15936、アミノ酸 1- -343のアミノ酸配列配列番号 248、 U5、 3，- →5，方向、 13214" "14548、アミノ酸 1- -445のアミノ酸配列配列番号 249、 U4、 3，- →5，方向、 11485" "13092、アミノ酸 1- -536のアミノ酸配列配列番号 250、 U3、 3，- →5，方向、 10155" "11276、アミノ酸 1- -374のアミノ酸配列配列番号 251、 U2、 3，- →5，方向、 8716〜9816、ァミノ酸 1-367のアミノ酸配列配列番号 252、 LJ1、 3 '→5 '方向、 7467〜8432、アミノ酸 1-322のアミノ酸配列配列番号 253、 DR5、 3 '→5 '方向、 3734〜4171、アミノ酸 1-146のアミノ酸配列配列番号 254、 DR3、 3 '→5 '方向、 240广 2979、アミノ酸 1-193のアミノ酸配列配列番号 255、 LT1、 3 '→5 '方向、广 338、アミノ酸 1-113のアミノ酸配列

配列番号 256、 U16ェキソン 1-2、 3，→5，方向、 26259〜27034および 27187〜27349、ァミノ酸 1-313をコードする核酸配列

配列番号 257、 U16ェキソン 1-2、 3，→5，方向、 26259〜27034および 27187〜27349、ァミノ酸 1-313のアミノ酸配列

配列番号 258、 U17、 3 '→5 '方向、 26948〜27349、アミノ酸 1-134をコードする核酸配列

配列番号 259、 U17、 3 '→5 '方向、 26948〜27349、アミノ酸 1-134のアミノ酸配列配列番号 260 U39、 3 '→5 '方向、 59588^62080,アミノ酸 1-831をコードする核酸配列

配列番号 261 U39、 3 '→5 '方向、 59588^62080,アミノ酸 1-831のアミノ酸配列配列番号 262 U34、 3 '→5 '方向、 53086^53916,アミノ酸 1-277をコードする核酸配列

配列番号 263 5 '方向、 53086〜53916、アミノ酸 1-277のアミノ酸配列配列番号 264 5 '方向、 37797^38978,アミノ酸 1-394をコードする核酸配列

配列番号 265 5 '方向、 37797^38978,アミノ酸 1-394のアミノ酸配列配列番号 266 5 '方向、 9823广 98578、アミノ酸 1-116をコードする核酸配列

配列番号 267 U61、 3，→5，方向、 98231〜98578、アミノ酸 1-116のアミノ酸配列配列番号 268 U76、 3 '→5 '方向、 113317〜115305、アミノ酸 1-663をコードする核酸配列

配列番号 269 U76、 3，→5，方向、 113317〜115305、アミノ酸 1-663のアミノ酸配列配列番号 270 U87、 3 '→5 '方向、 12755广 130043、アミノ酸 1-831をコードする核酸配列

配列番号 271 U87、 3，→5，方向、 127551〜130043、アミノ酸 1-831のアミノ酸配列配列番号 272 HST株のゲノム配列

配列番号 273 DR1、 5 '→3 '方向、 576〜842、アミノ酸 1-89のアミノ酸配列配列番号 274 DR2、 5 '→3 '方向、 1027〜2970、アミノ酸 1-648のアミノ酸配列配列番号 275 DR6、 5 '→3 '方向、 5025〜5336、アミノ酸 1-104のアミノ酸配列配列番号 276 DR7、 5，→3，方向、 6512〜7150、アミノ酸 1-213のアミノ酸配列配列番号 277 D、 5 '→3 '方向、 7928〜8662、アミノ酸 1-245のアミノ酸配列配列番号 278 Ul、 5，→3，方向、 8929〜9384、アミノ酸 1-152のアミノ酸配列配列番号 279 U6、 5 '→3 '方向、 15395〜15652、アミノ酸 1-86のアミノ酸配列配列番号 280 U10、 5，→3，方向、 18386〜19897、アミノ酸 1-504のアミノ酸配列配列番号 281 U13、 5，→3，方向、 23699〜24022、アミノ酸 1-108のアミノ酸配列配列番号 282、 U14、 5 >3 '方向、 24136〜 25953、アミノ酸 1-606のアミノ酸配列配列番号 283、 U30、 5 >3 '方向、 42839" 46087、アミノ酸 1-1083のアミノ酸配列配列番号 284、 U31、 5 >3 '方向、 46105" 52338、アミノ酸 1-2078のアミノ酸配列配列番号 285、 U36、 5 >3 '方向、 55212" 56660、アミノ酸 1-483のアミノ酸配列配列番号 286、 U37、 5 >3 '方向、 56664" 57458、アミノ酸 1-265のアミノ酸配列配列番号 287、 U44、 5 >3 '方向、 74335" 75030、アミノ酸 1-232のアミノ酸配列配列番号 288、 U46、 5 >3 '方向、

76434、アミノ酸 1-85のアミノ酸配列配列番号 289、 U49、 5 >3 '方向、 81342" 82100、アミノ酸 1-253のアミノ酸配列配列番号 290、 U51、 5 >3 '方向、 83642" 84547、アミノ酸 1-302のアミノ酸配列配列番号 291、 U53、 5 >3 '方向、 85350" 86936、アミノ酸 1-529のアミノ酸配列配列番号 292、 U58、 5 >3 '方向、 95048" 97366、アミノ酸 1-773のアミノ酸配列配列番号 293、 U59、 5 >3 '方向、 97375" 98415、アミノ酸 1-347のアミノ酸配列配列番号 294、 U62、 5 >3 '方向、 9955Γ 99814、アミノ酸 1-88のアミノ酸配列配列番号 295、 U64、 5 >3 '方向、 100390 "101718,アミノ酸 1-443のアミノ酸配列配列番号 296、 U67、 5 >3 '方向、 103591 〜104652、アミノ酸 1-354のアミノ酸配列配列番号 297、 U69、 5 >3 '方向、 104999 〜106690、アミノ酸 1-564のアミノ酸配列配列番号 298、 U70、 5 >3 '方向、 106698 〜108164、アミノ酸 1-489のアミノ酸配列配列番号 299、 U73、 5 >3 '方向、 109475 〜111817、アミノ酸 1-781のアミノ酸配列配列番号 300、 U77、 5 >3 '方向、 116250 〜118724、アミノ酸 1-825のアミノ酸配列配列番号 301、 U79、 5 >3 '方向、 121322 〜122359、アミノ酸 1-346のアミノ酸配列配列番号 302、 U80、 5 >3 '方向、 122640 "122942,アミノ酸 1-101のアミノ酸配列配列番号 303、 U83、 5 >3 '方向、 124657 〜124998、アミノ酸 1-114のアミノ酸配列配列番号 304、 U91、 5 >3 '方向、 138630 〜138974、アミノ酸 1-115のアミノ酸配列配列番号 305、 U95、 5 >3 '方向、 144230 〜147868、アミノ酸 1-1213のアミノ酸配列配列番号 306、 DR1R、 5， →3，方、 153618〜153884、アミノ酸 1-89のアミノ酸配列配列番号 307、 DR2R、 5， →3，方、 154069〜156012、アミノ酸 1-648のアミノ酸配列配列番号 308、 DR6R、 5， →3，方、 158067^158378,アミノ酸 1-104のアミノ酸配列配列番号 309、 DR7R、 5， →3，方、 159554〜160192、アミノ酸 1-213のアミノ酸配列配列番号 310、 U12、 5 '→3 方向、 22479〜22511ぉょび22589〜23617、アミノ酸 1-354 をコードする核酸配列

配列番号 311、 U12、 5 '→3 方向- 22479〜22511ぉょび22589〜23617、アミノ酸 1-354 のアミノ酸配列

配列番号 312、 U50 5 '→3 '方向、 81877^83544,アミノ酸 1-556をコードする核酸配列

配列番号 313 U50、方向、 81877^83544,アミノ酸 1-556のアミノ酸配列配列番号 314 U63、方向、 99756^100412,アミノ酸 1-219をコードする核酸配列

配列番号 315 U63、方向、 99756^100412,アミノ酸 1-219のアミノ酸配列配列番号 316 U65、方向、 101675^102682,アミノ酸 1-336をコードする核酸配列

配列番号 317 U65、方向、 101675 102682.アミノ酸 1-336のアミノ酸配列配列番号 318 U68、方向、 104652^104996.アミノ酸 1-115をコードする核酸配列

配列番号 319 U68、方向、 104652^104996.アミノ酸 1-115のアミノ酸配列配列番号 320 U71、方向、 10810广 108346.アミノ酸 1-82をコードする核酸配列

配列番号 321 U71、方向、 10810广 108346.アミノ酸 1-82のアミノ酸配列配列番号 322 U74、方向、 111786^113774.アミノ酸 1-663をコードする核酸配列

配列番号 323 U74、 5，→3，方向、 111786〜113774、アミノ酸 1-663のアミノ酸配列配列番号 324 HST株のゲノム配列 (相補鎖）

配列番号 325 DRHN2R、 3，→5，方向、 160278〜160748、アミノ酸 1-157のアミノ酸配列

配列番号 326 DRHN1R、 3，→5，方向、 158065〜158574、アミノ酸 1-170のアミノ酸配列

配列番号 327、 DR3R、 3，→5，方向、 155760〜156362、アミノ酸 1-201のアミノ酸配列配列番号 328. J1、3，- >5 '方向、 153060〜153407、アミノ酸 1-116のアミノ酸配列配列番号 329. U100、 3 '→5 '方向、 151529〜151918、アミノ酸 1-130のアミノ酸配列配列番号 330. U99、 3，- 5 '方向、 151115〜151396、アミノ酸 1- -94のアミノ酸配列配列番号 331. U98、 3，- 5 '方向、 150376〜150870、アミノ酸 1- 165のアミノ酸配列配列番号 332. HN2、 3 ' >5 '方向、 149749^149913,アミノ酸 1 - 55のアミノ酸配列配列番号 333. U97、 3，- 5 '方向、 149352〜149651、アミノ酸 1- 100のアミノ酸配列配列番号 334. U94、 3，- 5 '方向、 142683〜144155、アミノ酸 1- 491のアミノ酸配列配列番号 335. 匪、 3，- >5 '方向、 141543〜142355、アミノ酸 1 -271のアミノ酸配列配列番号 336. U90 5 '方向、、 137810〜138085、アミノ酸 1- -92のアミノ酸配列配列番号 337. U89 方向、、 134808〜137684、アミノ酸 1- -959のアミノ酸配列配列番号 338. U86 方向、、 127176^131717,アミノ酸 1- 1514のアミノ酸配列配列番号 339. U85 方向、、 126160^127038,アミノ酸 1- -293のアミノ酸配列配列番号 340. U84 方向、、 125104〜126132、アミノ酸 1- -343のアミノ酸配列配列番号 341. U82 方向、、 123829〜124581、アミノ酸 1- -251のアミノ酸配列配列番号 342. U81 方向、、 122986^123753,アミノ酸 1- -256のアミノ酸配列配列番号 343. U76 方向、、 114467^116455,アミノ酸 1- -663のアミノ酸配列配列番号 344. U75 方向、、 113379〜113756、アミノ酸 1- 126のアミノ酸配列配列番号 345. U72 方向、、 108428〜109462、アミノ酸 1- -345のアミノ酸配列配列番号 346. U66 方向、、 102702〜103619、アミノ酸 1- 306のアミノ酸配列配列番号 347. U60 方向、、 98412^99380 アミノ酸 1-323のアミノ酸配列配列番号 348. U57 方向、、 90999^95036 アミノ酸 1-1346のアミノ酸配列配列番号 349. U56 方向、、 90107^90997 アミノ酸 1-297のアミノ酸配列配列番号 350. U55 方向、、 88628^90106 アミノ酸 1-493のアミノ酸配列配列番号 351. U54 方向、、 8717Γ88550 アミノ酸 1-460のアミノ酸配列配列番号 352. U52 方向、、 84744^85343 アミノ酸 1-200のアミノ酸配列配列番号 353. U48 方向、、 79099^81183 アミノ酸 1-695のアミノ酸配列配列番号 354. U47 方向、、 76617^78833 アミノ酸 1-739のアミノ酸配列配列番号 355. U45 方向、 74977^76107 アミノ酸 1-377のアミノ酸配列配列番号 356、 U43、 3，-→5，方向、 71712 74294、アミノ酸 1- -861のアミノ酸配列配列番号 357、 U42、 3，- →5，方向、 69937' 1487、アミノ酸 1- -517のアミノ酸配列配列番号 358、 U41、 3，- →5，方向、 65176' 68574、アミノ酸 1- -1133のアミノ酸配列配列番号 359、 U40、 3，- →5，方向、 62988' 65168、アミノ酸 1- -727のアミノ酸配列配列番号 360、 U38、 3，- →5，方向、 57504' 60542、アミノ酸 1- -1013のアミノ酸配列配列番号 361、 U35、 3，- →5，方向、 54893' 5210、アミノ酸 1- -106のアミノ酸配列配列番号 362、 U33、 3，- →5，方向、 52683' 4095、アミノ酸 1- -471のアミノ酸配列配列番号 363、 U32、 3，- →5，方向、 52412' 52681、アミノ酸 1- -90のアミノ酸配列配列番号 364、 U29、 3，- →5，方向、 42412' 3311、アミノ酸 1- -300のアミノ酸配列配列番号 365、 U28、 3，- →5，方向、 39975' 2389、アミノ酸 1- -805のアミノ酸配列配列番号 366、 U26、 3，- →5，方向、 37883' 38770、アミノ酸 1- -296のアミノ酸配列配列番号 367、 U25、 3，- →5，方向、 36825' 37775、アミノ酸 1- -317のアミノ酸配列配列番号 368、 U24、 3，- →5，方向、 36350' 36616、アミノ酸 1- -89のアミノ酸配列配列番号 369、 U23、 3，- →5，方向、 35326' 36225、アミノ酸 1- -300のアミノ酸配列配列番号 370、 U21、 3，- →5，方向、 3329Γ 34793、アミノ酸 1- -501のアミノ酸配列配列番号 371、 U20、 3，- →5，方向、 31984' 33288、アミノ酸 1- -435のアミノ酸配列配列番号 372、 U19、 3，- →5，方向、 30592' 31761、アミノ酸 1- -390のアミノ酸配列配列番号 373、 U18、 3，- →5，方向、 29443' 30327、アミノ酸 1- -295のアミノ酸配列配列番号 374、 U17、 3，- →5，方向、 28003' 28263、アミノ酸 1- -87のアミノ酸配列配列番号 375、 U16、 3，- →5，方向、 27172' 27603、アミノ酸 1- -144のアミノ酸配列配列番号 376、 U15、 3，- →5，方向、 26559' 26891、アミノ酸 1- -111のアミノ酸配列配列番号 377、 Ul l、 3，- →5，方向、 1980Γ 22377、アミノ酸 1- -859のアミノ酸配列配列番号 378、 U8、 3，一 >5 '方向、 16806"： 18041、アミノ酸 1-412のアミノ酸配列配列番号 379、 U7、 3 '→5 '方向、 15678〜16802、アミノ酸 1-375のアミノ酸配列配列番号 380、 U5、 3，→5，方向、 14002〜15333、アミノ酸 1-444のアミノ酸配列配列番号 381、 U4、 3，→5，方向、 12276〜13883、アミノ酸 1-536のアミノ酸配列配列番号 382、 U3、 3，→5，方向、 10891〜12051、アミノ酸 1-387のアミノ酸配列配列番号 383、 U2、 3，→5，方向、 9467〜10768、アミノ酸 1-434のアミノ酸配列配列番号 384. LJ1、 3 '→5 '方向、 8292〜8807、アミノ酸 1-172のアミノ酸配列配列番号 385. DRHN2、 3，→5，方向、 7236〜7706、アミノ酸 1-157のアミノ酸配列配列番号 386. DRHN1、 3 '→5 '方向、 5023〜5532、アミノ酸 1-170のアミノ酸配列配列番号 387. DR3、 3，→5，方向、 2718〜3320、アミノ酸 1-201のアミノ酸配列配列番号 388. LT1、 3 '→5 '方向、 18〜365、アミノ酸 1-116のアミノ酸配列

配列番号 389. U9、 3 '→5 '方向、 18022^18336,アミノ酸 1-105をコードする核酸配列配列番号 390. U9、 3，→5，方向、 18022〜18336、アミノ酸 1-105のアミノ酸配列配列番号 391. U22、 3 '→5 '方向、 34690^35298,アミノ酸 1-203をコードする核酸配列

配列番号 392. U22、 3，→5，方向、 34690〜35298、アミノ酸 1-203のアミノ酸配列配列番号 393. U27、 3 '→5 '方向、 38758^39933,アミノ酸 1-392をコードする核酸配列

配列番号 394. U27、 3，→5，方向、 38758〜39933、アミノ酸 1-392のアミノ酸配列配列番号 395. U34、 3 '→5 '方向、 54046〜54876、アミノ酸 1-277をコードする核酸配列

配列番号 396. U34、 3，→5，方向、 54046〜54876、アミノ酸 1-277のアミノ酸配列配列番号 397. U39、 3 '→5 '方向、 60542^63034,アミノ酸 1-831をコードする核酸配列

配列番号 398. U39、 3，→5，方向、 60542〜63034、アミノ酸 1-831のアミノ酸配列配列番号 399. U61、 3 '→5 '方向、 99355〜99867、アミノ酸 1-171をコードする核酸配列

配列番号 400. U61、 3 '→5 '方向、 99355〜99867、アミノ酸 1-171のアミノ酸配列配列番号 401、 BACベクター配列

配列番号 402、プライマー BAC7— E1

配列番号 403、プライマー BAC7— E2

配列番号 404、プライマー BAC7— E3

配列番号 405、プライマー BAC7— E4

発明を実施するための最良の形態 [0017] 以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書 (定義を含めて)が優先する。

[0018] (用語の定義）

以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。

[0019] 本明細書において使用される場合、用語「ヘルぺスウィルス」とは、 HHV— 6A、 H HV— 6B、および HHV— 7の全てを包含し、かつ、特に言及されない限り、これらゥィルスの野生型、組換え型のいずれをも含む。また、本明細書において使用される場合、用語「： HHV— 6」は、 HHV— 6八ぉょび1111¥—68を包含し、かつ、特に言及されない限り、これらウィルスの野生型、組換え型のいずれをも含む。

[0020] 本明細書にぉヽて使用される場合、ヘルぺスウィルスの「必須遺伝子」とは、ヘルぺスウィルスが増殖するために必須の遺伝子をいう。また、ヘルぺスウィルスの「非必須遺伝子」とは、ヘルぺスウィルスが増殖するために必須ではない遺伝子であり、たとえ欠損したとしても、ヘルぺスウィルスが増殖し得る遺伝子を！、う。

[0021] (ヒトヘルぺスウィルス 7 ; HHV— 7)

ヒトヘルぺスウィルス 7 (HHV— 7)の非必須遺伝子としては、例えば、以下が挙げられる力これらに限定されない：遺伝子 HI、遺伝子 DR1、遺伝子 DR2、遺伝子 H 2、遺伝子 DR6、遺伝子 DR7、遺伝子 H3、遺伝子 H4、遺伝子 U2、遺伝子 U3、遺伝子 U4、遺伝子 U5Z7、遺伝子 U8、遺伝子 U10、遺伝子 U12、遺伝子 U13、遺伝子 U15、遺伝子 U16、遺伝子 U17Ex、遺伝子 U17、遺伝子 U17a、遺伝子 U18 、遺伝子 U19、遺伝子 U20、遺伝子 U21、遺伝子 U23、遺伝子 U24、遺伝子 U24 a、遺伝子 U25、遺伝子 U26、遺伝子 U28、遺伝子 U32、遺伝子 U33、遺伝子 U3 4、遺伝子 U35、遺伝子 U36、遺伝子 U37、遺伝子 U40、遺伝子 U42、遺伝子 U4 4、遺伝子 U45、遺伝子 U46、遺伝子 U47、遺伝子 U49、遺伝子 U50、遺伝子 U5 1、遺伝子 U52、遺伝子 U55A、遺伝子 U55B、遺伝子 U58、遺伝子 U59、遺伝子 U62、遺伝子 U63、遺伝子 U64、遺伝子 U65、遺伝子 U67、遺伝子 U68、遺伝子 U69、遺伝子 U70、遺伝子 U71、遺伝子 U75、遺伝子 U76、遺伝子 H5、遺伝子 U 79、遺伝子 H6、遺伝子 U80、遺伝子 U81、遺伝子 U84、遺伝子 U85、遺伝子 U9 1、遺伝子 H7、遺伝子 U95、および遺伝子 H8。

[0022] ウィルスゲノム中の遺伝子が必須遺伝子である場合、その遺伝子の欠損によってゥィルスは増殖できなくなる。従って、ウィルスゲノム中の任意の遺伝子を欠損して、そのウィルスの増殖を検出することによって、その遺伝子が必須遺伝子か非必須遺伝子かを決定することができる。

[0023] 上記非必須遺伝子の ORF内の領域および Zまたは ORFに隣接する領域は、 BA Cベクター挿入の標的として使用することができる。好ましい標的は、例えば、遺伝子 U24の ORF内もしくは ORFに隣接する領域、または遺伝子 U 24aの ORF内もしくは ORFに隣接する領域であり、よし好ましくは、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域または遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域であるが、これらに限定されな、。

[0024] 本明細書にぉ、てへルぺスウィルスの「野生株」とは、人工的な改変を受けて!/ヽない、天然より単離されたヘルぺスウィルス株をいう。野生株の例としては、 JI株が挙げられる力これに限定されない。この JI株の核酸配列を配列番号 1に記載する。この JI 株の各 ORFの読み枠の方向、ゲノム上の位置、およびコードされるポリペプチドのァミノ酸残基数は、以下のとおりである。

ORF名読み枠の方向ゲノム上の位置アミノ酸残基数

HI 5，- →3，方向 33〜542 アミノ酸 1 - 170

DR1 5，- →3 '方向 368へ -826 アミノ酸 1 - 153

DR2 5，- →3 '方向 898へ -2100 アミノ酸 1 -401

H2 5，- →3，方向 2267' -2506 アミノ酸 1 -80

DR6 5，- →3 '方向 2562- -3050 アミノ酸 1 - 163

DR7 5，- →3 '方向 3122' -3910 アミノ酸 1 - 263

H3 3，- →5，方向 3976' -4224 アミノ酸 1 -83

H4 3，- →5，方向 4449' -4745 アミノ酸 1 - 99 U2 3，-→5 '方向 6338〜 7417 アミノ酸 1- -360

U3 3，- →5 '方向 7578〜 8732 アミノ酸 1- -385

U4 3，- →5 '方向 8754〜 10382 アミノ酸 1- -543

U5/7 3， →5 '方向 10407 〜 13004 ア酸 1- -866

U8 3，- →5 '方向 13174- -14262 ア酸 1- 363

U10 5，- 3 方向 14608- -15963 ア酸 1— 452

Ull 3，- 5 方向 15982- -18249 ア酸 1— 756

U12 5，- 3 方向 18396- -19436 ア酸 1— 347

U13 5，- 3 方向 19521- -19817 ア酸 1— 99

U14 5，- 3 方向 19885- -21831 ア酸 1— 649

U15 3，- 5 方向 22244- -22564 ア酸 1— 107

U17Ex 3，- 5，方向

22772- 23547および 23620' -23836 ア酸 1— 331

U17 3，- 5 方向 23570- -23836 ア酸 1— 89

U17a 5，— 3'方向 24318- -24587 アミノ酸 1— 90

U18 3，- 5 方向 24713- -25600 ア酸 1— 296

U19 3，- 5 方向 25945- -26922 ア酸 1— 326

U20 3，- 5 方向 27036- -28211 ア酸 1— 392

U21 3，- 5 方向 28202- -29494 ア酸 1— 431

U23 3，- 5 方向 29903- -30418 ア酸 1— 172

U24 3，- 5 方向 30524- -30772 ア酸 1— 83

U24a 3，— 5'方向 30776- -31129 アミノ酸 1— 118

U25 3，- 5 方向 30936- -31898 ア酸 1— 321

U26 3，- 5 方向 31988- -32869 ア酸 1— 294

U27 3，- 5 方向 32857- -33951 ア酸 1— 365

U28 3，- 5 方向 34064- -36484 ア酸 1— 807

U29 3，- 5 方向 36487- -37347 ア酸 1— 287

U30 5，— 3 方向 37362- -40178 ア酸 1— 939 U31 5，-→3 方向 40179- -46358 アミノ酸 1 - 2060

U32 3，- →5 方向 46355- -46627 アミノ酸 1 - 91

U33 3，- →5 方向 46608- -48041 アミノ酸 1 -478

U34 3，- →5 方向 47992- -48768 アミノ酸 1 - 259

U35 3，- →5 方向 48805- -49119 アミノ酸 1 - 105

U36 5' - →3 方向 49118- -50575 アミノ酸 1 -486

U37 5，- →3 方向 50577- -51356 アミノ酸 1 - 260

U38 3，- →5 方向 51363- -54401 アミノ酸 1 - 1013

U39 3，- →5 方向 54401- -56869 アミノ酸 1 -823

U40 3，- →5 方向 56832- -58997 アミノ酸 1 - 722

U41 3，- →5 方向 59000- -62395 アミノ酸 1 - 1132

U42 3，- →5 方向 62772- -64352 アミノ酸 1 - 527

U43 3，- →5 方向 64501- -67086 アミノ酸 1 -862

U44 5，- →3 方向 67143- -67754 アミノ酸 1 - 204

U45 3，- →5 方向 67759- -68898 アミノ酸 1 - 380

U46 5，- →3 方向 68930- -69190 アミノ酸 1 -87

U47 3，- →5 方向 69638- -70579 アミノ酸 1 - 314

U48 3，- →5 方向 70817- -72889 アミノ酸 1 -691

U49 5' - →3 方向 73003- -73722 アミノ酸 1 - 240

U50 5，- →3 方向 73538- -75202 アミノ酸 1 - 555

U51 5，- →3 方向 75304- -76188 アミノ酸 1 - 295

U52 3，- →5 方向 76185- -76949 アミノ酸 1 - 255

U53 5，- →3 方向 76957- -78495 アミノ酸 1 - 513

U54 3，- →5 方向 78503- -79870 アミノ酸 1 -456

U55A 3， →5 '方向 79918- -81201 アミノ酸 1 -428

U55B 3，- →5 '方向 81285- -82577 アミノ酸 1 -431

U56 3，- →5 方向 82630- -83511 アミノ酸 1 - 294

U57 3，- →5 方向 83514- -87551 アミノ酸 1 - 1346 U58 5，-→3 '方向 87563へ -89890 アミノ酸 1 - 776

U59 5，- →3 '方向 89838へ -90881 アミノ酸 1 - 348

U60- -U66 3， →5 '方向

90878〜 92005および 95122〜95985 アミノ酸 1 -664

U62 5，- →3 '方向 92017へ -92244 アミノ酸 1 - 76

U63 5，- →3 '方向 92216へ -92851 アミノ酸 1 - 212

U64 5，- →3 '方向 92829へ -94148 アミノ酸 1 -440

U65 5，- →3 '方向 94111へ -95103 アミノ酸 1 - 331

U67 5，- →3 '方向 95984へ -97024 アミノ酸 1 - 347

U68 5，- →3 '方向 97024へ -97368 アミノ酸 1 - 115

U69 5，- →3 '方向 97371へ -99011 アミノ酸 1 - 547

U70 5，- →3 '方向 99013へ -100455 ア酸 1 -481

U71 5，- →3 '方向 100392' -100613 アミノ酸 1 - 74

U72 3，- →5 '方向 100636' -101676 アミノ酸 1 - 347

U73 5，- →3 '方向 101693' -104056 アミノ酸 1 - 788

U74 5，- →3 '方向 104007' -105986 アミノ酸 1 -660

U75 3，- →5 '方向 105973' -106743 アミノ酸 1 - 257

U76 3，- →5 '方向 106667' -108589 アミノ酸 1 -641

U77 5，- →3 '方向 108435' -110897 アミノ酸 1 -821

H5 5，- →3 '方向 112811- -113311 ア酸 1 - 167

U79 5，- →3 '方向 113502' -114203 アミノ酸 1 - 234

H6 5，- →3 '方向 114257- -114505 ア酸 1 -83

U80 5，- →3 '方向 114557- -115189 アミノ酸 1 - 211

U81 3，- →5 '方向 115184' -115948 アミノ酸 1 - 255

U82 3，- →5 '方向 116038' -116778 アミノ酸 1 - 247

U84 3，- →5 '方向 117111' -118043 アミノ酸 1 - 311

U85 3，- →5 '方向 118071' -118913 アミノ酸 1 - 281

U86 3，- →5 '方向 119091' -122708 アミノ酸 1 - 1206 U89 3，-→5 方向 125420- -128668 アミノ酸 1 - 1083

U90 3，- →5 方向 128776- -129051 アミノ酸 1 - - 92

U91 5，- →3 方向 129122- -129625 アミノ酸 1 - 168

H7 5，- →3 '方向 130829- -132112 ア酸 1 - -428

U95 5，- →3 方向 133382- -136204 アミノ酸 1 - - 941

H8 3， →5 '方向 136307- -136579 ア酸 1 - - 91

U98 3，- →5 方向 137945- -138451 アミノ酸 1 - 169

U99 3，- →5 方向 138375- -138692 アミノ酸 1 - 106

moo 3，- →5 方向 138751- -138999 アミノ酸 1— 83

HI ' 5，- →3，方向 139080へ -139589 ア酸 1— 170

DR1， 5，- →3，方向 139415- -139873 アミノ酸 1— 153

DR2' 5，- →3，方向 139945- -141147 アミノ酸 1— 401

H2' 5，- →3，方向 141314へ -141553 ア酸 1— 80

DR6' 5，- →3，方向 141609 -142097 アミノ酸 1— 163

DR7' 5，- →3，方向 142169 -142957 アミノ酸 1— 263

H3' 3，- →5'方向 143023へ -143271 ア酸 1— 83

H4' 3，- →5'方向 143496へ -143792 ア酸 1— 99。

[0025] 上記の表で、「5'→3 '方向」とは、 ORFが配列番号 1の核酸配列と同一の方向にあることを示し、「3'→5 '方向」とは、 ORFが配列番号 1の核酸配列と逆の方向にあることを示す。上記 ORFの核酸配列および Zまたはアミノ酸配列と相同な配列を同定することによって、当業者は、 JI株以外の株由来のゲノム中の ORFを同定することを容易になし得る。

[0026] HHV— 7ゲノム中の各 ORFにコードされる遺伝子産物の特徴は、以下の表 1〜3 のとおりである。

[0027] [表 1-1] 表 1： HHV- 7の非必須遺伝子

ORF アミノ酸残基特徴

H 1 169 ―

DR1 152 US22遺伝子ファミリー、 DR1/6ホモログ

DR2 400 US22遺伝子ファミリ一

H2 79 ―

DR6 161 US22遺伝子ファミリ一、 DR1/6ホモログ

DR7 262 US22遺伝子ファミリー、転写活性化因子

H3 82 ―

H4 98 ―

U2 359 US22遺伝子ファミリ一

U3 384 US22遺伝子ファミリ一

U4 542 ―

U5/7 865 US22遺伝子ファミリ一

U8 362 US22遺伝子ファミリ一

U10 451 ―

U12 346 GCRホモログ、ケモカインレセプター

U13 98

U15 106

U16 264 IE-B 転写活性化因子（U17 にスプライシングされる）

U17Ex 72 ΪΕ-Β 転写活性化因子（U16 にスプライシングされる）

U17 88

U17a 89

U18 295 !E-B, HC V IE 糖タンパク質ホモログ

U20 391 !g通伝十ファ =：リー;■

U21 430 糖タンパク質

U23 171 糖タンパク質、 EHV 1 gjホモログ

U24 82 糖タンパク質

U24a 117

U25 320 US22遺伝子ファミリー、転写活性化因子

U26 293 1-2] U28 806 リボヌクレオチドリダクタ一ゼ (ラージサブユニット）

U32 90

U33 477 ビリオンタンパク質

U34 258 ビリオンタンパク質？

U35 104

U36 485 ビリオンタンパク質と考えられる

U37 259

U40 721 輸送タンパク質

U42 526 転写活性化因子

U44 203

U45 379 dUTPァ一ゼ

U46 86

U47 31 3

U49 239 融合タンパク質

U50 554 ビリオンタンパク質

U51 294 GCR、ォピオイドホモログ

U52 254

U55A 427 複製機能？

U55B 430

U58 775

U59 347

U62 75

U63 21 1

U64 439

U65 330

U67 346

U68 1 14

U69 546 ホスホトランスフェラ一ゼ

U70 480 アルカリェキソヌクレア一ゼ

U71 73

U75 256

U76 640 ビリオンタンパク質？

H5 1 66

U79 233 HCM 複製、スプライシングされる (UL1 1 2/1 13)

H6 82 HHV-6の U79の C末端のホモログ

U80 210 HCMV複製、スプライシングされる（UL1 1 2/1 13) ] U81 ゥラシル- DNA グリコシラーゼ

U84 310 HCMVにおいてスプライシングされる

U85 280 OX-2 糖タンパク質のホモログ

U91 1 67

H7 427 Oral反復

U95 940 MCMV IE2ホモログ， US22遺伝子ファミリ一

H8 90

[0030] [表 2]

表 2：ウィルス複製に関与する HHV— 7遺伝子

ORF アミノ酸残基特徴

長

U27 364 ポリメラーゼ促進因子

U38 1 ,012 DNAポリメラーゼ

U41 1 ,1 31 —本鎖 DNA結合タンパク質

U43 861

U73 787 オリジン結合タンパク質（OBP)

U74 659 ヘリ力一ゼノプライマーゼ複合体

U77 820 ヘリカーゼ

U86 1 ,205 IE- A、 HCMV IE2に対する相同性

U89 1 ,082 IE-A転写活性化因子

U90 91 IE- A、 HHV- 6中のェキソン

[0031] [表 3]

表 3：ウィルス粒子の形成に関与する HHV— 7遺伝子

ORF アミノ酸残基特徴

U1 1 755 構造リン酸化タンパク質

U14 648 HCMV UL25/35遺伝子ファミリー

U29 286 マイナ一キヤプシドタンパク質（mCP)

U30 938 キヤプシドアセンブリ、ミオシン

ウィルス粒子の一部であるキヤプシドの会合、形成に関わる因子

U31 2,059 ラージテグメントタンパク質

U39 822 糖タンパク質 B (_gB)

U48 690 糖タンパク質 H (gH)

U53 512 プロテア一ゼアセンブリタンパク質

U54 455 テグメントタンパク質転写活性化因子

U56 293 キヤプシドタンパク質

U57 1 ,345 主要キヤプシドタンパク質（MCP)

U60 394 後期にスプライシングされる (U60/66)

DNA パッケージングに関与するタンパク質

U66 309 後期にスプライシングされる (U60/66)

DNA パッケージングに関与するタンパク質

U72 346 膜内在性タンパク質（gM)

U82 246 糖タンパク質 L (gL)

U98 168 HHV-6 gQと相同なタンパク質

U99 105 HHV-6 gQと相同なタンパク質

U100 82 HHV-6 gQと相同なタンパク質

(ヒトヘルぺスウィルス 6 A； HHV - 6 A)

ヒトヘルぺスウィルス 6 (HHV— 6A)の非必須遺伝子としては、例えば、以下が挙げられる力これらに限定されない：遺伝子 LT1、遺伝子 DR1、遺伝子 DR2、遺伝子 DR3、遺伝子 DR4、遺伝子 DR5、遺伝子 DR6、遺伝子 DRHN1、遺伝子 DR7、遺伝子 DRHN2、遺伝子 DR8、遺伝子 IJ1、遺伝子 Ul、遺伝子 U2、遺伝子 U3、遺伝子 U4、遺伝子 U5、遺伝子 U6、遺伝子 U7、遺伝子 U8、遺伝子 U9、遺伝子 U 10、遺伝子 U12EX、遺伝子 U12、遺伝子 U13、遺伝子 U15、遺伝子 U16、遺伝子 U17、遺伝子 U18、遺伝子 U19、遺伝子 U20、遺伝子 U21、遺伝子 U22、遺伝子 U23、遺伝子 U24、遺伝子 U25、遺伝子 U26、遺伝子 U28、遺伝子 U32、遺伝子 U33、遺伝子 U34、遺伝子 U35、遺伝子 U36、遺伝子 U37、遺伝子 U40、遺伝子 U42 遺伝子 U44 遺伝子 U45 遺伝子 U46 遺伝子 U47 遺伝子 U49、遺伝子 U50 遺伝子 U51 遺伝子 U52 遺伝子 U55 遺伝子 U58 遺伝子 U59、遺伝子 U61 遺伝子 U62 遺伝子 U63 遺伝子 U64 遺伝子 U65 遺伝子 U67、遺伝子 U68 遺伝子 U69 遺伝子 U70 遺伝子 U71 遺伝子 U75 遺伝子 U76、遺伝子 U78 遺伝子 U79 遺伝子 U80 遺伝子 U81 遺伝子 U83 遺伝子 U84、遺伝子 U85 遺伝子 U88 遺伝子 U91 遺伝子 U92 遺伝子 U93 遺伝子 HN2、遺伝子 U94 遺伝子 U95 および遺伝子 U96

[0032] ウィルスゲノム中の遺伝子が必須遺伝子である場合、その遺伝子の欠損によってゥィルスは増殖できなくなる。従って、ウィルスゲノム中の任意の遺伝子を欠損して、そのウィルスの増殖を検出することによって、その遺伝子が必須遺伝子か非必須遺伝子かを決定することができる。

[0033] 上記非必須遺伝子の ORF内の領域および Zまたは ORFに隣接する領域は、 BA Cベクター挿入の標的として使用することができる。好ましい標的は、例えば、遺伝子 U5の ORF内もしくは ORFに隣接する領域、または遺伝子 U8の ORF内もしくは OR Fに隣接する領域であり、よし好ましくは、遺伝子 U5の ORFに隣接する領域または遺伝子 U8の ORFに隣接する領域である力これらに限定されない。

[0034] 本明細書において HHV— 6Aの「野生株」とは、人工的な改変を受けていない、天然より単離された HHV— 6A株をいう。野生株の例としては、 U1102株が挙げられる 1S これに限定されない。この U1102株の核酸配列を配列番号 128に記載する。この U1102株の各 ORFの読み枠の方向、ゲノム上の位置、およびコードされるポリべプチドのアミノ酸残基数は、以下のとおりである。

ORF名読み枠の方向ゲノム上の位置アミノ酸残基数

LT1 3 - 5'方向 1 338 アミノ酸 1— 113

DR1 5 - →3 '方向 501 -794 アミノ酸 1— 98

DR2 5 - →3 '方向 791 -2653 ア酸 1— 621

DR3 3 - →5 '方向 2401' -2979 ア酸 1— 193

DR4 5 - →3 '方向 2746' -3048 ア酸 1— 101

DR5 3 - →5 '方向 3734' -4171 ア酸 1— 146 DR6 5，-→3 '方向 4725へ -5036 アミノ酸 1 -104

DR7 5，- →3 '方向 5629へ -6720 アミノ酸 1 -364

DR8 5，- →3 '方向 7237へ -7569 アミノ酸 1 111

LJ1 3，—5'；方向 7467〜8432 ア酸 1- -322

Ul 5，- →3 '方向 8245へ -8616 アミノ酸 1 -124

U2 3，- →5 '方向 8716へ -9816 アミノ酸 1 -367

U3 3，- →5 '方向 10155' -11276 アミノ酸 1 -374

U4 3，- →5 '方向 11485' -13092 アミノ酸 1 -536

U5 3，- →5 '方向 13214' -14548 アミノ酸 1 -445

U6 5，- →3 '方向 14619' -14867 アミノ酸 1 -83

U7 3，- →5 '方向 14908' -15936 アミノ酸 1 -343

U8 3，- →5 '方向 16021' -17091 アミノ酸 1 -357

U9 3，- →5 '方向 17238- -17552 アミノ酸 1 -105

U10 5，- →3^: '方向 17604- -18914 アミノ酸 1- -437

Ull 3，- →5^: '方向 18966- -21578 アミノ酸 1- -871

U12ェキソン 1 2

5，- →3，方向 21680- 、21710および 2180O -22812 アミノ酸 1— 348

U12 5，- →3' '方向 21856- -22812 アミノ酸 1 -319

U13 5，- →3' '方向 22898- -23218 アミノ酸 1 -107

U14 5，- →3' '方向 23316- -25145 アミノ酸 1 -610

U15 3，- →5' '方向 25660- -25992 アミノ酸 1 -111

U16ェキソン 1 2

3'→5 '方向 26259~27034*5jt^27187~27349 アミノ酸 1— 313

U16 3，- →5： '方向 26259- -27116 アミノ酸 1 -286

U17 3，- '方向 26948- -27349 アミノ酸 1 -134

U18 3，- →5： '方向 28508- -29389 アミノ酸 1 -294 U19 3，-→5 '方向 29649- -30818 アミノ酸 1 - 390

U20 3，- →5 '方向 31069- -32337 アミノ酸 1 -423

U21 3，- →5 '方向 32340- -33641 アミノ酸 1 -434

U22 3，- →5 '方向 33739- -34347 アミノ酸 1 - 203

U23 3，- →5 '方向 34375- -35085 アミノ酸 1 - 237

U24 3，- →5 '方向 35392- -35655 アミノ酸 1 -88

3，- →5 '方向 35674- -35847 アミノ酸 1 - 58

U25 3，- →5 '方向 35864- -36814 アミノ酸 1 - 317

U26 3，- →5 '方向 36922- -37809 アミノ酸 1 - 296

U27 3，- →5 '方向 37797- -38978 アミノ酸 1 - 394

U28 3，- →5 '方向 39020- -41434 アミノ酸 1 -805

U29 3，- →5 '方向 41457- -42356 アミノ酸 1 - 300

U30 5' - →3 '方向 41884- -45132 アミノ酸 1 - 1083

U31 5，- →3 '方向 45150- -51383 アミノ酸 1 - 2078

U32 3，- →5 '方向 51455- -51721 アミノ酸 1 -89

U33 3，- →5 '方向 51723- -53135 アミノ酸 1 -471

U34 3，- →5 '方向 53086- -53916 アミノ酸 1 - 277

U35 3，- →5 '方向 53933- -54253 アミノ酸 1 - 107

U36 5' - →3 '方向 54252- -55706 アミノ酸 1 -485

U37 5，- →3 '方向 55710- -56504 アミノ酸 1 - 265

U38 3，- →5 '方向 56550- -59588 アミノ酸 1 - 1013

U39 3，- →5 '方向 59588- -62080 アミノ酸 1 -831

U40 3，- →5 '方向 62034- -64214 アミノ酸 1 - 727

U41 3，- →5 '方向 64222- -67620 アミノ酸 1 - 1133

U42 3，- →5 '方向 69054- -70598 アミノ酸 1 - 515

U43 3，- →5 '方向 70823- -73405 アミノ酸 1 -861

U44 5，- →3 '方向 73446- -74087 アミノ酸 1 - 214

U45 3，- →5 '方向 74088- -75218 アミノ酸 1 - 377 U46 5，-→3，方向 75291へ -75545 アミノ酸 1 -85

U47 3，- →5，方向 75912へ -77867 アミノ酸 1 -652

U48 3，- →5，方向 78034へ '80118 アミノ酸 1 -695

U49 5'- →3，方向 80277へ -81035 アミノ酸 1 -253

U50 5，- →3，方向 80812へ -82479 アミノ酸 1 -556

U51 5，- →3，方向 82574へ -83479 アミノ酸 1 -302

U52 3，- →5，方向 83498へ -84274 アミノ酸 1 -259

U53 5，- →3，方向 84281へ -85867 アミノ酸 1 -529

U54 3，- →5，方向 86051へ -87427 アミノ酸 1 -459

U55 3，- →5，方向 87505へ '88803 アミノ酸 1 -433

U56 3，- →5，方向 88983へ -89873 アミノ酸 1 -297

U57 3，- →5，方向 89875へ -93912 アミノ酸 1 — 1346

U58 5'- →3，方向 93924へ -96242 アミノ酸 1 -773

U59 5，- →3，方向 96239へ -97291 アミノ酸 1 -351

U60 3，- →5，方向 97288へ -98256 アミノ酸 1 -323

U61 3，- →5，方向 98231へ -98578 アミノ酸 1 -116

U62 5'- →3，方向 98427へ '98684 アミノ酸 1 -86

U63 5，- →3，方向 98632へ -99282 アミノ酸 1 -217

U64 5'- →3，方向 99260へ 100588 アミノ酸 1 -443

U65 5，- →3，方向 100545- -101552 アミノ酸 1 -336

U66 3，- →5，方向 101569- -102486 アミノ酸 1 -306

U67 5'- →3，方向 102458- -103519 アミノ酸 1 -354

U68 5，- →3，方向 103519- -103863 アミノ酸 1 -115

U69 5'- →3，方向 103866' -105554 アミノ酸 1 -563

U70 5，- →3，方向 105562- -107028 アミノ酸 1 -489

U71 5，- →3，方向 106965- -107198 アミノ酸 1 -78

U72 3，- →5，方向 107278- -108312 アミノ酸 1 -345

U73 5，- →3，方向 108325- -110667 アミノ酸 1 -781 U74 5，-→3'方向 110636- -112624 アミノ酸 1 -663

U75 3，- →5'方向 112659- -113408 アミノ酸 1 - 250

U76 3，- →5'方向 113317- -115305 アミノ酸 1 -663

U77 5，- →3'方向 115100- -117574 アミノ酸 1 -825

U78 3，- →5'方向 118709- -119038 アミノ酸 1 - 110

U79 5' - →3'方向 120164- -121198 アミノ酸 1 - 345

U80 5，- →3'方向 121170- -121766 アミノ酸 1 - 199

U81 3，- →5'方向 121810- -122577 アミノ酸 1 - 256

U82 3，- →5'方向 122653- -123405 アミノ酸 1 - 251

U83 5，- →3'方向 123528- -123821 アミノ酸 1 - 98

U84 3，- →5'方向 123925- -124953 アミノ酸 1 - 343

U85 3，- →5'方向 124981- -125853 アミノ酸 1 - 291

U86 3，- →5'方向 125989- -128136 アミノ酸 1 - 716

U87 3，- →5'方向 127551- -130043 アミノ酸 1 -831

U88 5，- →3'方向 131034- -132275 アミノ酸 1 -414

U89 3，- →5'方向 133091- -135610 アミノ酸 1 -840

U90 3，- →5'方向 135664- -135948 アミノ酸 1 - 95 仮想タンパク質 U90

5，- →3 '方向 136266- -136481 アミノ酸 1 - 72

U91 5，- →3'方向 136485- -136829 アミノ酸 1 - 115

U92 3，- →5'方向 138049- -138492 アミノ酸 1 - 148

U93 3，- →5'方向 138531- -139124 アミノ酸 1 - 198

U94 3，- →5'方向 141394- -142866 アミノ酸 1 -491

U95 5，- →3'方向 142941- -146306 アミノ酸 1 - 1122

U96 3，- →5'方向 146641- -146940 アミノ酸 1 - 100

U97 3，- →5'方向 147808- -148077 アミノ酸 1 - 90

U98 3，- →5'方向 148741- -149391 アミノ酸 1 - 217

U99 3，- →5'方向 149485- -149766 アミノ酸 1 - 94 moo 3，-→5 '方向 149868- -150437 ア酸 1- -190

RJl 3，— >5 '方向 151140へ '151571 ア酸 1 - - 144

DRl 5，- →3 '方向 151734- -152027 アミノ酸 1 - 98

DR2 5，- →3 '方向 152024- -153886 アミノ酸 1 -621

DR3 3，- →5 '方向 153634- -154212 アミノ酸 1 - 193

DR4 5，- →3 '方向 153979- -154281 アミノ酸 1 - 101

DR5 3，- →5 '方向 154967- -155404 アミノ酸 1 - 146

DR6 5，- →3 '方向 155958- -156269 アミノ酸 1 - 104

DR7 5，- →3 '方向 156862- -157953 アミノ酸 1 - 364

DR8 5，- →3 '方向 158470- -158802 アミノ酸 1 — 111。

[0035] 上記の表で、「5'→3 '方向」とは、 ORFが配列番号 128の核酸配列と同一の方向にあることを示し、「3'→5 '方向」とは、 ORFが配列番号 128の核酸配列と逆の方向にあることを示す。上記 ORFの核酸配列および Zまたはアミノ酸配列と相同な配列を同定することによって、当業者は、 U1102株以外の株由来のゲノム中の ORFを同定することを容易になし得る。

[0036] 本明細書において「変異株」とは、野生株であるウィルス株に、変異誘発、多数回の継代培養などによって変異誘発をしたヘルぺスウィルス株を、う。ヘルぺスウィルス株に変異誘発する場合、この変異誘発は、ランダムな変異導入であっても、部位特異的変異導入であってもよ、。

[0037] (ヒトヘルぺスウィルス 6B ;HHV—6B)

HHV— 6Aとほぼ同一のゲノム構造を有する HHV— 6Bの場合も、以下に列挙する遺伝子が、非必須遺伝子であると考えられる力これらに限定されない：遺伝子 LT 1、遺伝子 DR1、遺伝子 DR2、遺伝子 DR3、遺伝子 DR4、遺伝子 DR5、遺伝子 DR 6、遺伝子 DRHN1、遺伝子 DR7、遺伝子 DRHN2、遺伝子 DR8、遺伝子 LJ1、遺伝子 Ul、遺伝子 U2、遺伝子 U3、遺伝子 U4、遺伝子 U5、遺伝子 U6、遺伝子 U7 、遺伝子 U8、遺伝子 U9、遺伝子 U10、遺伝子 U12EX、遺伝子 U12、遺伝子 U13 、遺伝子 U15、遺伝子 U16、遺伝子 U17、遺伝子 U18、遺伝子 U19、遺伝子 U20 、遺伝子 U21、遺伝子 U22、遺伝子 U23、遺伝子 U24、遺伝子 U25、遺伝子 U26 、遺伝子 U28、遺伝子 U32、遺伝子 U33、遺伝子 U34、遺伝子 U35、遺伝子 U36

、遺伝子 U37、遺伝子 U40、遺伝子 U42、遺伝子 U44、遺伝子 U45、遺伝子 U46

、遺伝子 U47、遺伝子 U49、遺伝子 U50、遺伝子 U51、遺伝子 U52、遺伝子 U55

、遺伝子 U58、遺伝子 U59、遺伝子 U61、遺伝子 U62、遺伝子 U63、遺伝子 U64

、遺伝子 U65、遺伝子 U67、遺伝子 U68、遺伝子 U69、遺伝子 U70、遺伝子 U71

、遺伝子 U75、遺伝子 U76、遺伝子 U78、遺伝子 U79、遺伝子 U80、遺伝子 U81

、遺伝子 U83、遺伝子 U84、遺伝子 U85、遺伝子 U88、遺伝子 U91、遺伝子 U92

、遺伝子 U93、遺伝子 HN2、遺伝子 U94、遺伝子 U95、および遺伝子 U96。

[0038] ウィルスゲノム中の遺伝子が必須遺伝子である場合、その遺伝子の欠損によってゥィルスは増殖できなくなる。従って、ウィルスゲノム中の任意の遺伝子を欠損して、そのウィルスの増殖を検出することによって、その遺伝子が必須遺伝子か非必須遺伝子かを決定することができる。

[0039] 上記非必須遺伝子の ORF内の領域および Zまたは ORFに隣接する領域は、 BA Cベクター挿入の標的として使用することができる。好ましい標的は、例えば、遺伝子 U5の ORF内もしくは ORFに隣接する領域、または遺伝子 U8の ORF内もしくは OR Fに隣接する領域であり、よし好ましくは、遺伝子 U5の ORFに隣接する領域または遺伝子 U8の ORFに隣接する領域である力これらに限定されない。

[0040] 本明細書において HHV— 6Bの「野生株」とは、人工的な改変を受けていない、天然より単離されたヘルぺスウィルス株をいう。 HHV— 6B野生株の例としては、 HST 株が挙げられる力これに限定されない。この HST株の核酸配列を配列番号 272に記載する。この HST株の各 ORFの読み枠の方向、ゲノム上の位置、およびコードされるポリペプチドのアミノ酸残基数は、以下のとおりである。

ORF名読み枠の方向ゲノム上の位置アミノ酸残基数

LT1 3'→5 '方向 18〜365 アミノ酸 1— 116

DR1 5'→3 '方向 576~842 アミノ酸 1— 89

DR2 5'→3 '方向 1027~2970 アミノ酸 1— 648

DR3 3'→5 '方向 2718~3320 アミノ酸 1— 201

DRHN1 3'→5 '方向 5023~5532 アミノ酸 1— 170 DR6 5，-→3 '方向 5025へ -5336 アミノ酸 1 -104

DR7 5'- →3 '方向 6512へ -7150 アミノ酸 1 -213

DRHN2 3， →5 '方向 7236- -7706 アミノ酸] L-157

D 5'- →3，方向 7928へ -8662 アミノ酸 1 -245

LJ1 3，→ '5'方向 8292〜8807 アミノ酸 1- -172

Ul 5，- →3，方向 8929へ -9384 アミノ酸 1 -152

U2 3，- →5 '方向 9467へ -10768 アミノ酸 1 -434

U3 3，- →5 '方向 10891' -12051 ア酸 1 -387

U4 3，- →5 '方向 12276- -13883 ア酸 1 -536

U5 3，- →5 '方向 14002' -15333 ア酸 1 -444

U6 5，- →3，方向 15395- -15652 ア酸 1 -86

U7 3，- →5 '方向 15678- -16802 ア酸 1 -375

U8 3，- →5 '方向 16806' -18041 ア酸 1 -412

U9 3，- →5 '方向 18022' -18336 ア酸 1 -105

U10 5，- →3，方向 18386- -19897 ア酸 1 -504

Ull 3，- →5 '方向 19801- -22377 ア酸 1 -859

U12 5，- →3，方向 22479- 〜22511および 22589へ -23617 アミノ酸 1— 354

U13 5，- →3，方向 23699- -24022 ア酸 1 -108

U14 5，- →3，方向 24136- -25953 ア酸 1 -606

U15 3，- →5 '方向 26559- -26891 ア酸 1 -111

U16 3，- →5 '方向 27172- -27603 ア酸 1 -144

U17 3，- →5 '方向 28003- -28263 ア酸 1 -87

U18 3，- →5 '方向 29443- -30327 ア酸 1 -295

U19 3，- →5 '方向 30592- -31761 ア酸 1 -390

U20 3，- →5 '方向 31984- -33288 ア酸 1 -435

U21 3，- →5 '方向 33291- -34793 ア酸 1 -501

U22 3，- →5 '方向 34690- -35298 ア酸 1 -203 U23 3，-→5，方向 35326- -36225 ア酸 1 -300

U24 3，- →5，方向 36350- oolo ア酸 1 -89

U25 3，- →5，方向 36825- -37775 ア酸 1 -317

U26 3，- →5，方向 37883- -38770 ア酸 1 -296

U27 3，- →5，方向 38758- -39933 ア酸 1 -392

U28 3，- →5，方向 39975- -42389 ア酸 1 -805

U29 3，- →5，方向 42412- -43311 ア酸 1 -300

U30 5'- →3，方向 42839- -46087 ア酸 1 -1083

U31 5，- →3，方向 46105- -52338 ア酸 1 -2078

U32 3，- →5，方向 52412- -52681 ア酸 1 -90

U33 3，- →5，方向 52683- -54095 ア酸 1 -471

U34 3，- →5，方向 54046- -54876 ア酸 1 -277

U35 3，- →5，方向 54893- -55210 ア酸 1 -106

U36 5'- →3，方向 55212- ^5Ό6Ό0 ア酸 1 -483

U37 5，- →3，方向 56o64ハ -57458 ア酸 1 -265

U38 3，- →5，方向 57504- -60542 ア酸 1 -1013

U39 3，- →5，方向 60542- -63034 ア酸 1 -831

U40 3，- →5，方向 62988- -65168 ア酸 1 -727

U41 3，- →5，方向 65176- -68574 ア酸 1 -1133

U42 3，- →5，方向 69937- -71487 ア酸 1 -517

U43 3，- →5，方向 71712- -74294 ア酸 1 -861

U44 5，- →3，方向 74335- -75030 ア酸 1 -232

U45 3，- →5，方向 74977- -76107 ア酸 1 -377

U46 5，- →3，方向 76180- -76434 ア酸 1 -85

U47 3，- →5，方向 76617- -78833 ア酸 1 -739

U48 3，- →5，方向 79099- -81183 ア酸 1 -695

U49 5'- →3，方向 81342- -82100 ア酸 1 -253

U50 5，- →3，方向 81877- -83544 ア酸 1 -556 U51 5，-→3，方向 83642へ -84547 アミノ酸 1 -302

U52 3，- →5，方向 84744へ -85343 アミノ酸 1 -200

U53 5，- →3，方向 85350へ -86936 アミノ酸 1 -529

U54 3，- →5，方向 87171へ -88550 アミノ酸 1 -460

U55 3，- →5，方向 88628へ -90106 アミノ酸 1 -493

U56 3，- →5，方向 90107へ -90997 アミノ酸 1 -297

U57 3，- →5，方向 90999へ -95036 アミノ酸 1 -1346

U58 5'- →3，方向 95048へ -97366 アミノ酸 1 -773

U59 5，- →3，方向 97375へ -98415 アミノ酸 1 -347

U60 3，- →5，方向 98412へ -99380 アミノ酸 1 -323

U61 3，- →5，方向 99355へ -99867 アミノ酸 1 -171

U62 5'- →3，方向 99551へ -99814 アミノ酸 1 -88

U63 5，- →3，方向 99756へ -100412 ア酸 1 -219

U64 5'- →3，方向 100390' -101718 アミノ酸 1 -443

U65 5，- →3，方向 101675' -102682 アミノ酸 1 -336

U66 3，- →5，方向 102702' -103619 アミノ酸 1 -306

U67 5'- →3，方向 103591' -104652 アミノ酸 1 -354

U68 5，- →3，方向 104652' -104996 アミノ酸 1 -115

U69 5'- →3，方向 104999' 〜106690 アミノ酸 1 -564

U70 5，- →3，方向 106698' -108164 アミノ酸 1 -489

U71 5，- →3，方向 108101' -108346 アミノ酸 1 -82

U72 3，- →5，方向 108428' -109462 アミノ酸 1 -345

U73 5'- →3，方向 109475' -111817 アミノ酸 1 -781

U74 5，- →3，方向 111786' -113774 アミノ酸 1 -663

U75 3，- →5，方向 113379' -113756 アミノ酸 1 -126

U76 3，- →5，方向 114467' -116455 アミノ酸 1 -663

U77 5'- →3，方向 116250' -118724 アミノ酸 1 -825

U79 5，- →3，方向 121322' -122359 アミノ酸 1 -346 U80 5，- 3'方向 122640 -122942 アミノ酸 1- -101

U81 3，- 5'方向 122986- -123753 アミノ酸 1- -256

U82 3，- 5'方向 123829- -124581 アミノ酸 1- -251

U83 5，- 3'方向 124657- -124998 アミノ酸 1- -114

U84 3，- 5'方向 125104- -126132 アミノ酸 1- -343

U85 3，- 5'方向 126160 -127038 アミノ酸 1- -293

U86 3，- 5'方向 127176- -131717 アミノ酸 1- -1514

U89 3，- 5'方向 134808 -137684 アミノ酸 1- -959

U90 3，- 5'方向 137810 -138085 アミノ酸 1- -92

U91 5，- 3'方向 138630 -138974 アミノ酸 1- -115

HN1 3，_ →5 '方向 141543- -142355 アミノ酸 1- -271

U94 3，- 5'方向 142683- -144155 アミノ酸 1- -491

U95 5，- 3'方向 144230- -147868 アミノ酸 1- -1213

U97 3，- 5'方向 149352- -149651 アミノ酸 1- -100

HN2 3，_ →5 '方向 149749- -149913 アミノ酸 1- -55

U98 3，- 5'方向 150376- -150870 アミノ酸 1- -165

U99 3，- 5'方向 151115- -151396 アミノ酸 1- -94

moo 3，-5'方向 151529- -151918 アミノ酸 1- 130

RJ1 3，→ 5'方向 - L53060〜 153407 アミノ酸 1 116

DR1R 5，- →3，方向 153618- -153884 ア酸 1- -89

DR2R 5，- →3，方向 154069- -156012 ア酸 1- -648

DR3R 3，- →5 '方向 155760- -156362 ア酸 1- -201

DRHN1R 3， →5 '方向 158065 〜158574 アミノ酸 1 -170

DR6R 5，- →3，方向 158067- -158378 ア酸 1- -104

DR7R 5，- →3，方向 159554- -160192 ア酸 1- -213

DRHN2R 3， →5 '方向 160278 〜160748 アミノ酸 1 157。

上記の表で、「5'→3 '方向」とは、 ORFが配列番号 272の核酸配列と同一の方向にあることを示し、「3'→5 '方向」とは、 ORFが配列番号 272の核酸配列と逆の方向にあることを示す。上記 ORFの核酸配列および Zまたはアミノ酸配列と相同な配列を同定することによって、当業者は、 HST株以外の株由来のゲノム中の ORFを同定することを容易になし得る。

[0042] (HHV—6Aおよび HHV—6Bの ORFにコードされるタンパク質）

HHV— 6Aおよび HHV— 6Bゲノム中の各 ORFにコードされる遺伝子産物の特徴は、以下の表 4〜6のとおりである。以下の表では、 HHV—6Aの U1102株および H HV— 6Bの HST株における各 ORFのアミノ酸残基長を表中に示した。

[0043] [表 4-1]

表 4: HHV— 6の非必須遺伝子

ORF 特徴

U1102 1 HST

LT1 112/ ' 115

DR1 971 '88 US22 遺伝子ファミリ一

DR2 620/ ' 647 US22 遺伝子ファミリ一

DR3 192/ ' 200

DR4 100に

DR5 145に

DR6 1031 ' 103 US22 遺伝子ファミリ一

DRHN1 — / 169

DR7 363 / ' 212 US22 遺伝子ファミリー、転写活性化因子

DRHN2 —/ 156

DR8 110/ ' 244

LJ1 3211 ' 172

U1 123/ ' 151

U2 366 / '433 US22 遺伝子ファミリ一

U3 373 / '386 US22 遺伝子ファミリ一

U4 5351 ' 535

U5 444/ '443

U6 82/ '85

U7 342 / '374 US22 遺伝子ファミリ一

U8 356 / '411 US22 遺伝子ファミリ一

U9 104/ ' 104

U10 436 / ' 503

U12EX 347 / '353 U12ェキソン 1

U12 318/ '305 U12ェキソン 2、 CG-ケモカインレセプタ一

U13 106/ ' 107

U15 110/ ' 110

U16 143 / ' 143 IE - B、転写活性化因子、 US22 遺伝子ファミリ

U17 133, /86 IE - B

U18 2931294 IE-B、HCMV1E 糖タンパク質との相同性

U19 389 / '389 IE-B

U20 4221 ' 434 糖タンパク質、 Ig鎖 Cドメイン

4-2] U21 433 / ¹500

U22 202 / '202 糖タンパク質

U23 236 99 糖タンパク質

U24 87 , ,88

U25 316/ '316 US22 遺伝子ファミリ一、転写活性化因子

U28 804 '804 リボヌクレオチドリダクタ一ゼ (ラージサブュニッ卜）

U33 470/ ' 470 キヤプシドタンパク質

U34 276 ,276 ビリオンタンパク質の可能性ビリオンタンパク質の可能性

U40 726 , ' 726 輸送タンパク質

U42 514 '516 転写活性化因子

U44 213 '231

U45 376 / '376 dUTPァ一ゼ

U49 252 / ' 252 融合タンパク質

U50 555 , ' 555 ビリオンタンパク質

U51 301 / '301 GCR、ォピオイドのホモログ

U52 258 ,

U55 432 92

U58 772 / ' 772

U59 350/ 50

U61 115 ¹170

U62 85 ' 87

U63 216 / ¹218

U64 442 / 442

U65 335 35

U67 353 , '353

U69 562 / ' 563 ガンシクロビルキナ一ゼ、

保存されたホスホトランスフェラ一ゼ ] U70 488 / '488 アルカリエキソヌクレア一ゼ

U71 77 '81

U75 249 / ' 249

U76 662 / ' 662

U78 109 /—

U79 344/ '345 HGMV複製、スプライシングされる (UL112/113)

U80 198/ ' 203 HGMV複製、スプライシングされる (U!J1²/¹¹3)

U81 255 ' 255 ゥラシルー DMA グリコシラーゼ

U83 97/ 113 ケモカイン

U84 342 / ' 342 HC Vにスプライシングされる

U85 290/ ¹292 OX-2 糖タンパク質に対する相同性

U88 413し

U91 114 / 114

U92 147し

U93 197 /_

HN2 _/ 270

U94 490/ 90 プロウィルス複製、転写活性化

U95 1,121 ' 1,197 MGMVIE2 ホモログ、 US22 遺伝子ファミリ一

U96 99,に

[0046] [表 5]

表 5:ウィルス複製に関与する HHV— 6遺伝子

アミノ酸残基長

ORF 特徴

U1102 /HST

U27 393 / ' 391 DNAポリメラ一ゼ促進因子

U38 1,012 / ' 1,012 DNA ポリメラ一ゼ

U41 1,132/ ' 1,132 —本鎖 DMA—結合タンパク質

U43 860/ '860 ヘリカーゼ Zプライマーゼ複合体

U73 780/ ' 780 オリジン結合タンパク質（OBP)

U74 662 / ' 662 ヘリ力一ゼ/プライマ一ゼ複合体

U77 824/ ' 824 ヘリカーゼ/プライマーゼ複合体

U86 1,351 / ' 1,513 IE-A_S HCMV IE2に対する相同性

U89 839 / ' 958 E-A、転写活性化因子

U90 94/ ' 89 IE-A中のェキソン

HN1 _/ 32 IE A中のェキソン

[0047] [表 6] 表 6 :ウィルス粒子の形成に関与する HHV— 6遺伝子

y ノ^^

ORF 特徴

U1 102 / HST

U1 1 870 / 858 ρρ100、主要抗原性構造タンパク質

U14 609 / 610 HCMV UL25/35 遺伝子ファミリ一

U29 299 / 299 マイナーキヤプシドタンパク質（mCP)

U30 1 ,082 / 1 ,082 キヤプシドアセンブリ、ミオシン（ウィルス粒子の

—部であるキヤプシドの会合、形成に関わる因子

U31 2,077 / 2,077 ラ一ンテクメントタンノク貧

U39 830 / 830 糖タンパク質 B (gB)

U48 694 / 694 糖タンパク質 H (gH)

U53 528 / 528 プロテア一ゼノアセンブリタンパク質

U54 458 / 459 テグメントタンパク質転写活性化因子

U56 296 / 296 キヤプシドタンパク質

U57 1 ,345 / 1 ,345 主要キヤプシドタンパク質（MCP)

U60 322 / 322 後期にスプライシングされる (U60/66)

DNA パッケージングに関与するタンパク質

U66 305 / 305 後期にスプライシングされる (U60/66)

DNA パッケージングに関与するタンパク質

U72 344 / 344 膜内在性タンパク質（gM)

U82 250 / 250 糖タンパク質 gL)

U97 89 ^ 99 糖タンパク質 Q (gQ) ェキソン

HN3 — / 55 gQ ェキソン

U98 21 6 / 1 64 gQ ェキソン

U99 93 / 93 gQ ェキソン

U100 189 / 129 gQ ェキソンウィルスゲノム中の遺伝子が必須遺伝子である場合、その遺伝子の欠損によってゥィルスは増殖できなくなる。従って、ウィルスゲノム中の任意の遺伝子を欠損して、そのウィルスの増殖を検出することによって、その遺伝子が必須遺伝子か非必須遺伝子かを決定することができる。

[0048] 本明細書にぉ、てへルぺスウィルスの「野生株」とは、人工的な改変を受けて!/ヽない、天然より単離されたヘルぺスウィルス株をいう。

[0049] 本明細書において「変異株」とは、野生株であるウィルス株に、変異誘発、多数回の継代培養などによって変異誘発をしたヘルぺスウィルス株を、う。ヘルぺスウィルス株に変異誘発する場合、この変異誘発は、ランダムな変異導入であっても、部位特異的変異導入であってもよ、。

[0050] 本明細書において使用される用語「タンパク質」「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。

[0051] 本明細書において使用される用語「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいう。他にそうではないと示されなければ、特定の核酸配列はまた、明示的に示された配列と同様に、その保存的に改変された改変体 (例えば、縮重コドン置換体 )および相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、 1 またはそれ以上の選択された (または、すべての）コドンの 3番目の位置が混合塩基および/またはデォキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る（Batzerら、 Nucleic Acid Res. 19： 5081 (1991) ; Ohtsukaら、 J. Biol. Chem. 260 : 2605— 2608 (1985) ;Rossoliniら、 Mol. Cell. Probes 8 : 91— 9 8 (1994) )。

[0052] 本明細書において「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいう。通常染色体上に一定の順序に配列してヽる。タンパク質の一次構造を規定する遺伝子を構造遺伝子といい、その発現を左右する領域を調節エレメントという。本明細書では、「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」ならびに Zあるいは「タンパク質」「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」をさすことがある。本明細書にぉ、て遺伝子の「オープンリーディングフレーム」または「ORF」とは、遺伝子の塩基配列を 3塩基ずつに区切った時の 3通りの枠組の 1つであって、開始コドンを有し、そして途中に終止コドンが出現せずある程度の長さを持ち、実際にタンパク質をコードする可能性のある読み枠をいう。ヘルぺスウィルスゲノムは、その全塩基配列が決定されており、少なくとも 101個の遺伝子が同定されており、その遺伝子の各々がオープンリーディングフレーム（ORF)を有することが公知である。

[0053] 本明細書において、ヘルぺスウィルスゲノム内の遺伝子の「ORF内の領域」とは、ヘルぺスウィルスゲノム内にある遺伝子において ORFを形成する塩基の存在する領域をいう。 [0054] 本明細書において、ヘルぺスウィルスゲノム内の遺伝子の「ORFに隣接する領域」とは、ヘルぺスウィルスゲノム内にある遺伝子にお!/、て ORFの近傍にある塩基の存在する領域であって、その遺伝子または他の遺伝子の ORF内の領域に該当しない領域をいう。

[0055] 本明細書において遺伝子の「相同性」とは、 2以上の遺伝子配列の、互いに対する同一性の程度をいう。従って、ある 2つの遺伝子の相同性が高いほど、それらの配列の同一性または類似性は高い。 2種類の遺伝子が相同性を有する力否かは、配列の直接の比較、または核酸の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダィゼーシヨン法によって調べられ得る。 2つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間で DNA配列力代表的には少なくとも 50%同一である場合、好ましくは少なくとも 70%同一である場合、より好ましくは少なくとも 80%、 90%、 95%、 96%、 97%、 98 %または 99%同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。

[0056] 本明細書では塩基配列の同一性の比較および相同性の算出は、配列分析用ツールである BLASTを用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。

[0057] 本明細書にぉ、て遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなどの「発現」とは、その遺伝子など力 Sインビボで一定の作用を受けて、別の形態になることをいう。好ましくは、遺伝子、ポリヌクレオチドなど力転写および翻訳されて、ポリペプチドの形態になることをいうが、転写されて mRNAが作製されることもまた発現の一態様であり得る。より好ましくは、そのようなポリペプチドの形態は、翻訳後プロセシングを受けたものであり得る。

[0058] アミノ酸は、その一般に公知の 3文字記号力、または IUPAC— IUB Biochemica 1 Nomenclature Commissionにより推奨される 1文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に受け入れられた 1文字コードにより言及され得る。

[0059] 本明細書にぉ、て、「フラグメント」とは、全長のポリペプチドまたはポリヌクレオチド（長さが n)に対して、 l〜n— 1までの配列長を有するポリペプチドまたはポリヌクレオチドをいう。フラグメントの長さは、その目的に応じて、適宜変更することができ、例えば、その長さの下限としては、ポリペプチドの場合、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 15, 2 0、 25、 30、 40、 50およびそれ以上のアミノ酸が挙げられ、ここで具体的に列挙していない整数で表される長さ (例えば、 11など)もまた、下限として適切であり得る。また、ポリヌクレオチドの場合、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 15, 20、 25、 30、 40、 50、 75、 100 、 200、 300、 400、 500、 600、 600、 700、 800、 900、 1000およびそれ以上のヌクレオチドが挙げられ、ここで具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、 11など)もまた、下限として適切であり得る。

[0060] BACベクター内の遺伝子がコードするポリペプチドは、天然型のポリペプチドと実質的に同一の作用を有する限り、アミノ酸配列中の 1以上 (例えば、 1または数個）のアミノ酸が置換、付加および Zまたは欠失していてもよぐ糖鎖が置換、付加および Zまたは欠失して、てもよ、。

[0061] 本明細書において使用する場合、「糖鎖」とは、単位糖 (単糖および Zまたはその誘導体）が 1つ以上連なってできたィ匕合物をいう。単位糖が 2つ以上連なる場合は、各々の単位糖同士の間は、グリコシド結合による脱水縮合によって結合する。このような糖鎖としては、例えば、生体中に含有される多糖類 (グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、 N—ァセチルダルコサミン、 N—ァセチルガラタトサミン、シアル酸ならびにそれらの複合体および誘導体)の他、分解された多糖、糖タンパク質、プロテオダリカン、グリコサミノダリカン、糖脂質などの複合生体分子から分解または誘導された糖鎖など広範囲なものが挙げられるがそれらに限定されな、。したがって、本明細書では、糖鎖は、「多糖 (ポリサッカリド)」、「糖質」、「炭水化物」と互換可能に使用され得る。また、特に言及しない場合、本明細書において「糖鎖」は、糖鎖および糖鎖含有物質の両方を包含する。

[0062] あるアミノ酸を、同様の疎水性指数を有する他のアミノ酸により置換して、そして依然として同様の生物学的機能を有するタンパク質 (例えば、酵素活性において等価なタンパク質)を生じさせ得ることが当該分野で周知である。このようなアミノ酸置換において、疎水性指数が ± 2以内であることが好ましぐ ± 1以内であることがより好ましぐおよび ±0. 5以内であることがさらにより好ましい。疎水性に基づくこのようなァミノ酸の置換は効率的であることが当該分野において理解される。親水性指標もまた、改変体作製において考慮される。米国特許第 4、 554、 101号に記載されるように、以下の親水性指数がアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（ + 3. 0)；リジン ( + 3. 0)；ァスパラギン酸（ + 3. 0± 1)；グルタミン酸（ + 3. 0± 1)；セリン（ + 0. 3)；ァスパラギン（ + 0. 2)；グルタミン（ + 0. 2)；グリシン（0)；スレオニン（一0. 4)；プロリン（一0. 5 ± 1)；ァラニン（一0. 5)；ヒスチジン（一0. 5)；システィン（一1. 0)；メチォニン（一1. 3) ;バリン（ー1. 5) ;ロィシン（ー1. 8)；イソロイシン（一1. 8) ;チロシン（ - 2. 3)；フエ-ルァラニン（一2. 5)；およびトリプトファン（一3. 4)。アミノ酸が同様の親水性指数を有しかつ依然として生物学的等価体を与え得る別のものに置換され得ることが理解される。このようなアミノ酸置換において、親水性指数が ± 2以内であることが好ましぐ ± 1以内であることがより好ましぐおよび ±0. 5以内であることがさらにより好ましい。

[0063] 本発明にお、て、「保存的置換」とは、アミノ酸置換にぉ、て、元のアミノ酸と置換されるアミノ酸との親水性指数または Zおよび疎水性指数が上記のように類似して、る置換をいう。保存的置換の例は、当業者に周知であり、例えば、次の各グループ内での置換：アルギニンおよびリジン；グルタミン酸およびァスパラギン酸；セリンおよびスレオニン；グルタミンおよびァスパラギン；ならびにパリン、ロイシン、およびイソロイシン、などが挙げられるがこれらに限定されない。

[0064] 本明細書において、「改変体」とは、もとのポリペプチドまたはポリヌクレオチドなどの物質に対して、一部が変更されているものをいう。そのような改変体としては、置換改変体、付加改変体、欠失改変体、短縮 (truncated)改変体、対立遺伝子変異体などが挙げられる。対立遺伝子 (allele)とは、同一遺伝子座に属し、互いに区別される遺伝的改変体のことをいう。従って、「対立遺伝子変異体」とは、ある遺伝子に対して、対立遺伝子の関係にある改変体をいう。「種相同体またはホモログ (homolog)」とは、ある種の中で、ある遺伝子とアミノ酸レベルまたはヌクレオチドレベルで、相同性（好ましくは、 60%以上の相同性、より好ましくは、 80%以上、 85%以上、 90%以上、 95%以上の相同性)を有するものをいう。そのような種相同体を取得する方法は、本明細書の記載から明らかである。「オルソログ（ortholog)」とは、オルソロガス遺伝子 (orthologous gene)ともいい、二つの遺伝子がある共通祖先からの種分化に由来する遺伝子をいう。例えば、多重遺伝子構造をもつヘモグロビン遺伝子ファミリーを例にとると、ヒトとマウスの αヘモグロビン遺伝子はオルソログである力ヒトの αへモグロビン遺伝子と /3ヘモグロビン遺伝子はパラログ (遺伝子重複で生じた遺伝子)である。オルソログは、分子系統樹の推定に有用であることから、本発明のオルソログもまた、本発明において有用であり得る。

[0065] 「保存的（に改変された)改変体」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に改変された改変体とは、同一のまたは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸をいい、核酸がアミノ酸配列をコードしない場合には、本質的に同一な配列をいう。遺伝コードの縮重のため、多数の機能的に同一な核酸が任意の所定のタンパク質をコードする。例えば、コドン GCA、 GCC、 GCG、および GCUはすべて、アミノ酸ァラニンをコードする。したがって、ァラニンがコドンにより特定される全ての位置で、そのコドンは、コードされたポリペプチドを変更することなぐ記載された対応するコドンの任意のものに変更され得る。このような核酸の変動は、保存的に改変された変異の 1つの種である「サイレント改変（変異）」である。ポリペプチドをコードする本明細書中のすべての核酸配列はまた、その核酸の可能なすべてのサイレント変異を記載する。当該分野において、核酸中の各コドン（通常メチォニンのための唯一のコドンである AUG、および通常トリプトファンのための唯一のコドンである TGGを除く）が、機能的に同一な分子を産生するために改変され得ることが理解される。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異は、記載された各配列において暗黙に含まれる。好ましくは、そのような改変は、ポリペプチドの高次構造に多大な影響を与えるアミノ酸であるシスティンの置換を回避するようになされ得る。

[0066] 本明細書中において、機能的に等価なポリペプチドをコードする遺伝子を含む BA Cベクターを作製するために、アミノ酸の置換のほかに、アミノ酸の付加、欠失、または修飾もまた行うことができる。アミノ酸の置換とは、もとのペプチドを 1つ以上、例えば、 1〜10個、好ましくは 1〜5個、より好ましくは 1〜3個のアミノ酸で置換することをいう。アミノ酸の付加とは、もとのペプチド鎖に 1つ以上、例えば、 1〜10個、好ましくは 1〜5個、より好ましくは 1〜3個のアミノ酸を付加することをいう。アミノ酸の欠失とは、もとのペプチドから 1つ以上、例えば、 1〜10個、好ましくは 1〜5個、より好ましくは 1〜3個のアミノ酸を欠失させることをいう。アミノ酸修飾は、アミド化、カルボキシルイ匕、硫酸化、ハロゲン化、アルキル化、グリコシル化、リン酸化、水酸化、ァシル化（例えば、ァセチル化)などを含む力これらに限定されない。置換、または付加されるァミノ酸は、天然のアミノ酸であってもよぐ非天然のアミノ酸、またはアミノ酸アナログでもよい。天然のアミノ酸が好ましい。

[0067] 本明細書において使用されるポリペプチドの核酸形態は、そのポリペプチドのタンパク質形態を発現し得る核酸分子をいう。この核酸分子は、発現されるポリペプチドが天然型のポリペプチドと実質的に同一の活性を有する限り、上述のようにその核酸の配列の一部が欠失または他の塩基により置換されていてもよぐあるいは他の核酸配列が一部挿入されていてもよい。あるいは、 5'末端および Zまたは 3'末端に他の核酸が結合していてもよい。また、ポリペプチドをコードする遺伝子をストリンジェントな条件下でハイブリダィズし、そのポリペプチドと実質的に同一の機能を有するポリペプチドをコードする核酸分子でもよい。このような遺伝子は、当該分野において公知であり、本発明にお、て利用することができる。

[0068] このような核酸は、周知の PCR法により得ることができ、化学的に合成することもできる。これらの方法に、例えば、部位特異的変位誘発法、ハイブリダィゼーシヨン法などを組み合わせてもよい。

[0069] 本明細書にぉ、て、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの「置換、付加または欠失」とは、もとのポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対して、それぞれアミノ酸もしくはその代替物、またはヌクレオチドもしくはその代替物力置き換わること、付け加わることまたは取り除かれることをいう。このような置換、付加または欠失の技術は、当該分野において周知であり、そのような技術の例としては、部位特異的変異誘発技術などが挙げられる。置換、付加または欠失は、 1つ以上であれば任意の数でよぐそのような数は、その置換、付加または欠失を有する改変体において目的とする機能が保持される限り、多くすることができる。例えば、そのような数は、 1または数個であり得、そして好ましくは、全体の長さの 20%以内、 10%以内、または 100個以下、 50個以下、 25個以下などであり得る。

[0070] 高分子構造 (例えば、ポリペプチド構造）は種々のレベルの構成に関して記述され得る。この構成の一般的な議論については、例えば、 Albertsら、 Molecular Biolo gy of the Cell (第 3版、 1994)、ならびに、 Cantorおよび Schimmel、 Biophysi cal Chemistry Part I : The Conformation of Biological Macromolecul es (1980)を参照。本発明において利用され得る一般的な分子生物学的手法としては、 Ausubel F. A.ら編（1988)、 Current Protocols in Molecular Biolog y、 Wiley, New York, NY; Sambrook Jら（1987) Molecular Clonin g : A Laboratory Manual, 2nd Ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NYなどを参酌して当業者であれば容易に実施をすることができる。

[0071] 本明細書において遺伝子について言及する場合、「ベクター」とは、目的のポリヌクレオチド配列を目的の細胞へと移入させることができるものをいう。そのようなベクターとしては、原核生物細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、動物個体および植物個体等の宿主細胞にぉ、て自律複製が可能である力、または染色体中への組込みが可能で、本発明のポリヌクレオチドの転写に適した位置にプロモーターを含有しているものが例示される。

[0072] 「BACベクター」とは、大腸菌の Fプラスミドをもとにして作製されたプラスミドで、約 3 OOkb以上の巨大なサイズの DNA断片をも大腸菌などの細菌内で安定に保持し増殖させることが可能なベクターである。 BACベクターは、少なくとも BACベクターの複製に必須の領域を含む。その複製に必須の領域としては、例えば、 Fプラスミドの複製開始点である oriSまたはその改変体が挙げられる。

[0073] 本明細書において「BACベクター配列」とは、 BACベクターとしての機能に必須の配列を含む配列をいう。必要に応じて、 BACベクター配列は、「組換えタンパク質依存性組換え配列」および Zまたは「選択マーカー」をさらに含み得る。

[0074] 本明細書において核酸の「組換え」とは、用語「相同組換え」と互換可能に使用され、 2つの異なる相同な核酸分子の会合によって開始し、乗り換えが起こり、核酸の新しい組み合わせが生じることをいう。本明細書において使用する場合、相同組換えには、「組換えタンパク質依存的組換え」および「組換えタンパク質非依存的組換え」の両方が含まれる。「組換えタンパク質依存的組換え」とは、組換えタンパク質存在下において生じるが、組換えタンパク質非存在下では生じない、相同組換えをいう。「組換えタンパク質非依存的組換え」とは、組換えタンパク質の存在の有無に関わらずに生じる、相同組換えをいう。本明細書において「組換えタンパク質依存性組換え配列」とは、組換えタンパク質依存的組換えを生じる配列をいい、「組換えタンパク質非依存性組換え配列」とは、組換えタンパク質非依存的組換えを生じる配列をいう。組換えタンパク質依存性組換え配列は、組換えタンパク質存在下では、組換えを生じるが、組換えタンパク質非存在下では、組換えを生じない。組換えタンパク質は、好ましくは、組換えタンパク質依存性組換え配列に特異的に作用し、組換えタンパク質依存性組換え配列以外の配列には作用しな、。

[0075] 代表的な組換えタンパク質依存性組換え配列と、組換えタンパク質との対としては、以下が挙げられる力これらに限定されない:バタテリオファージ P1由来の 1οχΡ (1ο cus of crossover oi PiJ目歹 [Jと Cre (cyclization recombination)タンノヽク質との組み合わせ、 Flpタンパク質と FRT部位との組み合わせ、 φ 031と attB, attPとの糸且み合わせ（Thorpe, Helena M. ； Wilson, Stuart E. ； Smith, Margaret C. M.、 Control of directionality in the site― specific recombinatio n system of the Streptomyces phage C31.、 Molecular Microbiolo gy (2000) , 38 (2) , 232— 241. )、リソノレノーゼと res咅 M立との糸且み合わせ（Sado wski P. , Site— specific recombinases： changing partners and doing the twist. J. Bacteriol. , 1986年 2月； 165 (2) 341— 7) (一般的には、 Sauer B. Site— specific recombination： developments and applications. , し urr Opin Biotechnol. 1994 Oct ; 5 (5) : 521— 7.を参照のこと）。

[0076] 本明細書において使用する場合、「選択マーカー」とは、 BACベクターを含む宿主細胞を選択する指標として機能する遺伝子をいう。選択マーカーとしては、蛍光マーカー、発光マーカー、および薬剤選択マーカーが挙げられるが、これらに限定されない。「蛍光マーカー」としては、緑色蛍光タンパク質 (GFP)のような蛍光タンパク質をコードする遺伝子が挙げられるが、これらに限定されない。「発光マーカー」としては、ルシフェラーゼのような発光タンパク質をコードする遺伝子が挙げられる力これらに限定されない。「薬剤選択マーカー」としては、以下力もなる群力も選択されるタンパク質をコードする遺伝子が挙げられるが、これらに限定されない:ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、グルタミンシンセターゼ遺伝子、ァスパラギン酸トランスアミナーゼ、メタ口チォネイン（MT)、アデノシンデァミナーゼ（ADA)、アデノシンデァミナーゼ (AMP D1, 2)、キサンチンーグァニン一ホスホリボシルトランスフェラーゼ、 UMPシンターゼ、 P グリコプロテイン、ァスパラギンシンテターゼ、およびオル-チンデカルボキシラーゼ。これら薬剤選択マーカーと使用される薬剤との組み合わせは、例えば、以下のとおりである：ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子（DHFR)とメソトレキセート（MTX)との組み合わせ、グルタミンシンセターゼ（GS)遺伝子とメチォニンスルホキシミン（Msx) との組み合わせ、ァスパラギン酸トランスアミナーゼ (AST)遺伝子と N ホスホンァセチル L ァスパラギン酸（N - phosphonacetyl— L— aspartate) (PALA)との糸且み合わせ、 MT遺伝子とカドミウム（Cd2+)との組み合わせ、アデノシンデァミナーゼ (ADA)遺伝子とアデノシン、ァラノシン、 2，ーデォキシコホルマイシンとの組み合わせ、アデノシンデアミナーゼ（AMPD1, 2)遺伝子とアデニン、ァザセリン、コホルマイシンとの糸且み合わせ、キサンチンーグァニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子と、マイコフェノール酸との組み合わせ、 UMPシンターゼ遺伝子と 6—ァザゥリジン、ピラゾフラン（pyrazofuran)との組み合わせ、 P グリコプロテイン（P— gp, MDR) 遺伝子と多剤薬剤との組み合わせ、ァスパラギンシンテターゼ (AS)遺伝子と |8—ァスパルチルヒドロキサム酸またはアルビジイン（albizziinn)との組み合わせ、オル- チンデカルボキシラーゼ（ODC)遺伝子と α—ジフルォロメチルーオル-チン（DFM 0)。

本明細書において使用する場合、「発現ベクター」は、構造遺伝子およびその発現を調節するプロモーターにカ卩えて種々の調節エレメントが宿主の細胞中で作動し得る状態で連結されている核酸配列をいう。調節エレメントは、好ましくは、ターミネータ一、薬剤耐性遺伝子 (例えば、カナマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子など）のような選択マーカーおよび、ェンハンサーを含み得る。生物（例えば、植物 )の発現ベクターのタイプおよび使用される調節エレメントの種類力宿主細胞に応じて変わり得ることは、当業者に周知の事項である。植物の場合、本発明に用いる植物の発現ベクターはさらに T—DNA領域を有し得る。 T— DNA領域は、特にァグロバクテリゥムを用いてその植物を形質転換する場合に遺伝子の導入の効率を高める。

[0078] 本明細書において使用する場合、「組換えベクター」とは、目的のポリヌクレオチド配列を目的の細胞へと移入させることができるベクターをいう。そのようなベクターとしては、原核細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、動物個体および植物個体等の宿主細胞において自立複製が可能、または染色体中への組込みが可能で、本発明のポリヌクレオチドの転写に適した位置にプロモーターを含有しているものが例示される。

[0079] 「ターミネータ一」は、遺伝子のタンパク質をコードする領域の下流に位置し、 DNA が mRNAに転写される際の転写の終結、ポリ A配列の付加に関与する配列である。ターミネータ一は、 mRNAの安定性に関与して遺伝子の発現量に影響を及ぼすことが知られている。ターミネータ一としては、 CaMV35Sターミネータ一、ノパリン合成酵素遺伝子のターミネータ一（Tnos)、タバコ PRla遺伝子のターミネータ一が挙げられるが、これに限定されない。

[0080] 本明細書において用いられる「プロモーター」とは、遺伝子の転写の開始部位を決定し、またその頻度を直接的に調節する DNAの ORF上流の領域をいい、 RNAポリメラーゼが結合して転写を始める塩基配列である。プロモーターの領域は、通常、推定タンパク質コード領域の第 1ェキソンの上流約 2kbp以内の領域であることが多いので、 DNA解析用ソフトウェアを用いてゲノム塩基配列中のタンパク質コード領域を予測すれば、プロモータ領域を推定することはできる。推定プロモーター領域は、構造遺伝子ごとに変動するが、通常構造遺伝子の上流にあるが、これらに限定されず、構造遺伝子の下流にもあり得る。好ましくは、推定プロモーター領域は、第一ェキソン翻訳開始点から上流約 2kbp以内に存在する。

[0081] 本明細書において、本発明のプロモーターの発現が「構成的」であるとは、生物のすべての糸且織にお!、て、その生物の発生の!/、ずれの段階にあってもほぼ一定の量で発現される性質をいう。具体的には、本明細書の実施例と同様の条件でノーザンプロット分析したとき、例えば、任意の時点で (例えば、 2点以上 (例えば、 5日目および 15日目））の同一または対応する部位のいずれにおいても、ほぼ同程度の発現量がみられるとき、本発明の定義上、発現が構成的であるという。構成的プロモーターは、通常の生育環境にある生物の恒常性維持に役割を果たしていると考えられる。これらの性質は、生物の任意の部分力 RNAを抽出してノーザンプロット分析で発現量を分析することまたは発現されたタンパク質をウェスタンプロットにより定量することにより決定することができる。

[0082] 「ェンノ、ンサ一」は、目的遺伝子の発現効率を高めるために用いられ得る。動物細胞において使用する場合、ェンノヽンサ一としては、 SV40プロモーター内の上流側の配列を含むェンノヽンサ一領域が好ましい。ェンノヽンサ一は複数個用いられ得るが 1 個用いられてもよいし、用いなくともよい。

[0083] 本明細書において使用する場合、「作動可能に連結された (る）」とは、所望の配列の発現 (作動）がある転写翻訳調節配列 (例えば、プロモーター、ェンハンサーなど）または翻訳調節配列の制御下に配置されることをいう。プロモーターが遺伝子に作動可能に連結されるためには、通常、その遺伝子のすぐ上流にプロモーターが配置される力必ずしも隣接して配置される必要はない。

[0084] 本発明において使用する場合、用語「形質転換」、「形質導入」および「トランスフエクシヨン」は、特に言及しない限り互換可能に使用され、宿主細胞への核酸の導入を意味する。形質転換方法としては、宿主細胞に DNAを導入する方法であればいずれも用いることができ、例えば、エレクト口ポレーシヨン法、パーティクルガン (遺伝子銃）を用いる方法、リン酸カルシウム法などの種々の周知の技術が挙げられる。

[0085] 「形質転換体」とは、形質転換によって作製された細胞などの生命体の全部または一部をいう。形質転換体としては、原核細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞等が例示される。形質転換体は、その対象に依存して、形質転換細胞、形質転換組織、形質転換宿主などともいわれ、本明細書においてそれらの形態をすベて包含するが、特定の文脈において特定の形態を指し得る。

[0086] 原核細胞としては、ェシエリヒア属、セラチア属、バチルス属、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属、ミクロバクテリウム属、シユードモナス属等に属する原核細胞、例ば、 Escherichia coll XL 1— Blue、 Escherichia coll XL2— Blue、 Esch erichia coli DH1、 Escherichia coli MC1000、 Escherichia coli KY327 6、 Eschericnia coli W1485、 Escherichia coli JM109、 Escherichia coli HB101、 Escherichia coli No. 49、 Escherichia coli W3110、 Escherich ia coli NY49、 Escherichia coli BL21 (DE3) , Escherichia coli BL21 (D E3) pLysSゝ Escherichia coli HMS 174 (DE3)、 Escherichia coli HMS 17 4 (DE3) pLysS、 Serratia ficaria、 Serratia fonticola、 Serratia liquefacien s、 Serratia marcescens、 Bacillus subtilis、 Bacillus amyloliquefaciens、 B revibacterium ammmoniagenes、 Brevibacterium immariophilum ATCC 14068、 Brevibacterium saccharolyticumATCCl4066、 Corynebacterium glutamicum ATCし丄 3032、 Corynebacterium glutamicum ATCC 1406 7、 Corynebacterium glutamicum ATCし 13869、 Corynebacterium aceto acidophilum ATCし 13870、 Microbacterium ammoniaphilum ATCC 153 54、 Pseudomonas sp. D— 0110など力例示される。

[0087] 動物細胞としては、臍帯血単核球、末梢血単核球、および Sup-Tl細胞などを挙げることができる。

[0088] 本明細書において「動物」は、当該分野において最も広義で用いられ、脊椎動物および無脊椎動物を含む。動物としては、哺乳綱、鳥綱、爬虫綱、両生綱、魚綱、昆虫綱、蠕虫綱などが挙げられるがそれらに限定されない。

[0089] 本明細書において、生物の「組織」とは、細胞の集団であって、その集団において一定の同様の作用を有するものをいう。従って、組織は、臓器 (器官）の一部であり得る。臓器 (器官）内では、同じ働きを有する細胞を有することが多いが、微妙に異なる働きを有するものが混在することもあることから、本明細書において組織は、一定の特性を共有する限り、種々の細胞を混在して有してヽてもよヽ。

[0090] 本明細書において、「器官 (臓器)」とは、 1つ独立した形態をもち、 1種以上の組織が組み合わさって特定の機能を営む構造体を形成したものをいう。植物では、カルス、根、茎、幹、葉、花、種子、胚芽、胚、果実などが挙げられるがそれらに限定されない。動物では、胃、肝臓、腸、脾臓、肺、気管、鼻、心臓、動脈、静脈、リンパ節 (リンパ管系）、胸腺、卵巣、眼、耳、舌、皮膚等が挙げられるがそれらに限定されない。

[0091] 本明細書において、「トランスジニック」とは、特定の遺伝子をある生物に組み込むことまたはそのような遺伝子が組み込まれた生物（例えば、植物または動物（マウスなど）を含む）をいう。

[0092] 本発明の生物が、動物の場合、トランスジヱニック生物は、マイクロインジェクション法 (微量注入法）、ウィルスベクター法、 ES細胞法 (胚性幹細胞法）、精子ベクター法、染色体断片を導入する方法 (トランスゾミック法)、ェピゾーム法などを利用したトランスジエニック動物の作製技術を使用して作製することができる。そのようなトランスジェニック動物の作成技術は当該分野において周知である。

[0093] 本明細書において使用される場合、「スクリーニング」とは、目的とするある特定の性質をもつ物質、あるいは宿主細胞またはウィルスなどを、特定の操作および Zまたは評価方法で多数の候補力も選抜することをいう。本発明では、所望の活性を有するスクリーニングによって得られたウィルスもまた、本発明の範囲内に包含されることが理解される。

[0094] 本明細書において「チップ」または「マイクロチップ」は、互換可能に用いられ、多様の機能をもち、システムの一部となる超小型集積回路をいう。チップとしては、例えば、 DNAチップ、プロテインチップ、細胞チップなどが挙げられるがそれらに限定されない。

[0095] 本明細書において「アレイ」とは、 1以上 (例えば、 1000以上）の標的物質を含む組成物（例えば、 DNA、タンパク質、細胞）が整列されて配置されたパターンまたはパターンを有する基板 (例えば、チップ)そのものをいう。アレイの中で、小さな基板 (例えば、 10 X 10mm上など）上にパターン化されているものはマイクロアレイというが、本明細書では、マイクロアレイとアレイとは互換可能に使用される。従って、上述の基板より大きなものにパターン化されたものでもマイクロアレイと呼ぶことがある。例えば、アレイはそれ自身固相表面または膜に固定されている所望の細胞のセットで構成される。アレイは好ましくは同一のまたは異なるウィルスを含む細胞を少なくとも 10²個、より好ましくは少なくとも 10³個、およびさらに好ましくは少なくとも 10⁴個、さらにより好ましくは少なくとも 10⁵個を含む。これらの細胞は、好ましくは表面が 125 X 80mm、より好ましくは 10 X 10mm上に配置される。形式としては、 96ウェルマイクロタイタープレート、 384ウェルマイクロタイタ一プレートなどのマイクロタイタープレートの大きさのものから、スライドグラス程度の大きさのものが企図される。固定される標的物質を含む組成物は、 1種類であっても複数種類であってもよい。そのような種類の数は、 1個〜スポット数までの任意の数であり得る。例えば、約 10種類、約 100種類、約 500種類、約 1000種類の標的物質を含む組成物が固定され得る。

[0096] 基板のような固相表面または膜には、上述のように任意の数の標的物質 (例えば、細胞のような生体分子）が配置され得るが、通常、基板 1つあたり、 10⁸個の生体分子まで、他の実施形態において 10⁷個の生体分子まで、 10⁶個の生体分子まで、 10⁵個の生体分子まで、 10⁴個の生体分子まで、 10³個の生体分子まで、または 10²個の生体分子までの個の生体分子が配置され得るが、 10⁸個の生体分子を超える標的物質を含む組成物が配置されていてもよい。これらの場合において、基板の大きさはより小さいことが好ましい。特に、標的物質を含む組成物（例えば、細胞）のスポットの大きさは、単一の生体分子のサイズと同じ小ささであり得る（これは、 l— 2nmの桁であり得る）。最小限の基板の面積は、いくつかの場合において基板上の生体分子の数によって決定される。

[0097] アレイ上には、生体分子の「スポット」が配置され得る。本明細書において「スポット」とは、標的物質を含む組成物の一定の集合をいう。本明細書において「スポッティング」とは、ある標的物質を含む組成物のスポットをある基板またはプレートに作製することをいう。スポッティングはどのような方法でも行うことができ、例えば、ピぺッティングなどによって達成され得、あるいは自動装置で行うこともでき、そのような方法は当該分野にお、て周知である。

[0098] 本明細書において使用される用語「アドレス」とは、基板上のユニークな位置をいい、他のユニークな位置から弁別可能であり得るものをいう。アドレスは、そのアドレスを伴うスポットとの関連づけに適切であり、そしてすベての各々のアドレスにおける存在物が他のアドレスにおける存在物力も識別され得る（例えば、光学的）、任意の形状を採り得る。アドレスを定める形は、例えば、円状、楕円状、正方形、長方形であり得る力、または不規則な形であり得る。したがって、「アドレス」は、抽象的な概念を示し、「スポット」は具体的な概念を示すために使用され得るが、両者を区別する必要がない場合、本明細書においては、「アドレス」と「スポット」とは互換的に使用され得る。

[0099] 各々のアドレスを定めるサイズは、とりわけ、その基板の大きさ、特定の基板上のァドレスの数、標的物質を含む組成物の量および Zまたは利用可能な試薬、微粒子のサイズおよびそのアレイが使用される任意の方法のために必要な解像度の程度に依存する。大きさは、例えば、 1— 2nm力数 cmの範囲であり得る力そのアレイの適用に一致した任意の大きさが可能である。

[0100] アドレスを定める空間配置および形状は、そのマイクロアレイが使用される特定の適用に適合するように設計される。アドレスは、密に配置され得、広汎に分散され得る力、または特定の型の分析物に適切な所望のパターンへとサブグループィ匕され得る。

[0101] 本明細書において使用される場合、「支持体」とは、細胞、細菌、ウィルス、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドを担持することができる物質を、う。支持体の材料としては、共有結合かまたは非共有結合のいずれかで、本発明において使用される細胞などに結合する特性を有する力またはそのような特性を有するように誘導体化され得る、任意の固体材料が挙げられる。

[0102] 支持体として使用するための材料には、固体表面を形成し得る任意の物質が使用され得る力例えば、ガラス、シリカ、シリコン、セラミック、二酸化珪素、プラスチック、金属 (合金も含まれる）、天然および合成のポリマー（例えば、ポリスチレン、セルロース、キトサン、デキストラン、およびナイロン)以下が挙げられるがそれらに限定されない。好ましくは、支持体は、疎水性結合を行う部分を含む。支持体は、複数の異なる材料の層カゝら形成されていてもよい。例えば、ガラス、石英ガラス、アルミナ、サフアイァ、フォルステライト、炭化珪素、酸化珪素、窒化珪素などの無機材料を使用できる。また、ポリエチレン、エチレン、ポリプロピレン、ポリイソブチレン、ポリエチレンテレフタレート、不飽和ポリエステル、含フッ素榭脂、ポリ塩化ビニル、ポリ塩ィ匕ビユリデン、ポリ酢酸ビュル、ポリビュルアルコール、ポリビュルァセタール、アクリル榭脂、ポリアタリ口-トリル、ポリスチレン、ァセタール榭脂、ポリカーボネート、ポリアミド、フエノール榭脂、尿素樹脂、エポキシ榭脂、メラミン榭脂、スチレン'アクリロニトリル共重合体、ァクリロ-トリルブタジエンスチレン共重合体、シリコーン榭脂、ポリフエ-レンオキサイド、ポリスルホン等の有機材料を用いることができる。あるいは、支持体として、ニトロセルロース膜、 PVDF膜など、ブロッテイングに使用される膜を用いることもできる。 [0103] 本発明のへルぺスウィルスは、感染症の処置、予防、および Zまたは治療のための薬学的組成物の成分としても使用することが可能である。

[0104] 本明細書にぉ、て薬剤の「有効量」とは、その薬剤が目的とする薬効を発揮することができる量をいう。本明細書において、そのような有効量のうち、最小の濃度を最小有効量ということがある。そのような最小有効量は、当該分野において周知であり、通常、薬剤の最小有効量は当業者によって決定されている力または当業者は適宜決定することができる。そのような有効量の決定には、実際の投与のほか、動物モデルなどを用いることも可能である。本発明はまた、このような有効量を決定する際に有用である。

[0105] 本明細書において「薬学的に受容可能なキャリア」は、医薬または動物薬のような農薬を製造するときに使用される物質であり、有効成分に有害な影響を与えないものをいう。そのような薬学的に受容可能なキャリアとしては、例えば、以下が挙げられるがそれらに限定されない:抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、賦形剤および Zまたは農学的もしくは薬学的アジュバント。

[0106] 本発明の処置方法において使用される薬剤の種類および量は、本発明の方法によって得られた情報 (例えば、疾患に関する情報)を元に、使用目的、対象疾患 (種類、重篤度など)、患者の年齢、体重、性別、既往歴、投与される被検体の部位の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明のモ- タリング方法を被検体 (または患者）に対して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など)、患者の年齢、体重、性別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。疾患状態をモニタリングする頻度としては、例えば、毎日数ケ月に 1回（例えば、 1週間に 1回 1ヶ月に 1回）のモニタリングが挙げられる。 1週間一 1ヶ月に 1回のモニタリングを、経過を見ながら施すことが好ましい。

[0107] 本明細書において「指示書」は、本発明の治療方法などを医師、患者など投与を行う人に対して記載したものである。この指示書は、本発明の医薬などを例えば、放射線治療直後または直前 (例えば、 24時間以内など）に投与することを指示する文言が記載されている。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁 (例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局 (FDA)など)が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書 (package insert)であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば、電子媒体 (例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール)のような形態でも提供され得る。

[0108] 必要に応じて、本発明の治療では、 2種類以上の薬剤が使用され得る。 2種類以上の薬剤を使用する場合、類似の性質または由来の物質を使用してもよぐ異なる性質または由来の薬剤を使用してもよい。このような 2種類以上の薬剤を投与する方法のための疾患レベルに関する情報も、本発明の方法によって入手することができる。

[0109] 本発明では、いったん類似の種類 (例えば、ヒトに対するマウスなど）の生物、培養細胞、組織などに関し、ある特定の糖鎖構造の分析結果と、疾患レベルとが相関付けられた場合、対応する糖鎖構造の分析結果と、疾患レベルとが相関付けることができることは、当業者は容易に理解する。そのような事項は、例えば、動物培養細胞マ -ュアル、瀬野ら編著、共立出版、 1993年などに記載され支持されており、本明細書にぉ、てこのすべての記載を援用する。

[0110] (本明細書において用いられる一般的技術）

本明細書において使用される技術は、そうではないと具体的に指示しない限り、当該分野の技術範囲内にある、糖鎖科学、マイクロフルイデイクス、微細加工、有機化学、生化学、遺伝子工学、分子生物学、微生物学、遺伝学および関連する分野における周知慣用技術を使用する。そのような技術は、例えば、以下に列挙した文献および本明細書にぉ、て他の場所お、て引用した文献にぉ、ても十分に説明されてヽる。

[0111] 微細加工については、例えば、 Campbell, S. A. (1996) . The Science and

Engineering of Microelectronic Fabrication, Oxford University Pres s ;Zaut, P. V. (,1996) . Micromicroarray Fabrication： a Practical Guide to Semiconductor Processing, Semiconductor Services ; Madou, M. J. ( 1997) . Fundamentals of Microfabrication, CRC1 5 Press ;Rai—Choud hury, P. (1997) . Handbook of Microlithography, Micromachining , & Microfabrication: Microlithographyなどに記載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。

[0112] 本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法、糖鎖科学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、 Maniatis, T. et al. (1989) . Molecular Cloning： A Laboratory Manual , Cold Spring Harborおよびその 3rd Ed. (2001)； Ausubel, F. M. , et al. eds, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc. , NY, 10158 (2000) ;Innis, M. A. (1990) . PCR Protocols : A Guide to Methods and Applications, Academic Press ;Innis, M. A. et al. ( 1995) . PCR Strategies, Academic Press ; Sninsky, J. J. et al. (1999) . P CR Applications： Protocols for Functional Genomics, Academic Press ； Gait, M. J. (1985) . Oligonucleotide Synthesis : A Practical Approach , IRL Press ; Gait, M. J. (1990) . Oligonucleotide Synthesis : A Practical

Approach, IRL Press ; Eckstein, F. (1991) . Oligonucleotides and Ana logues : A Practical Approac , IRL Press ; Adams, R. L. et al. (1992) . The Biochemistry of the Nucleic Acids, Chapman & Hall; Shabarov a, Z. et al. (1994) . Advanced Organic Chemistry of Nucleic Acids, Weinheim ; Blackburn, G. M. et al. (1996) . Nucleic Acids in Chemistr y and Biology, Oxford University Press； Hermanson, G. T. (1996) . Bi oconjugate Techniques, Academic Press ; Method in Enzymology 230 、 242、 247、 Academic Press, 1994 ;別冊実験医学「遺伝子導入 &発現解析実験法」羊土社、 1997などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分 (全部であり得る）が参考として援用される。

[0113] (好ましい実施形態の説明）

以下に好ましい実施形態の説明を記載するが、この実施形態は本発明の例示であり、本発明の範囲はそのような好ましい実施形態に限定されないことが理解されるべきである。当業者はまた、以下のような好ましい実施例を参考にして、本発明の範囲内にある改変、変更などを容易に行うことができることが理解されるべきである。

[0114] 1つの局面において、本発明は、組換えへルぺスウィルスを提供する。好ましくは、このへルぺスウィルスは、そのゲノム配列中に BACベクター配列を含む。 BACベタター配列を含むヘルぺスウィルスゲノムを構築することによって、 BAC分子として細菌内においてへルぺスウィルスゲノムを取り扱うことが可能となる。使用される BAC クタ一配列は、好ましくは、 Fプラスミド由来の複製開始点を含むが、 Fプラスミド由来の複製開始点以外の配列であってもよぐ 300kb以上の配列を細菌人工染色体として細菌細胞内において保持および増殖させることが可能である限り、任意の複製開始点を利用することができる。本発明の BACベクターは、細菌宿主細胞、好ましくは、大腸菌細胞において保持、および Zまたは増幅することが可能である。好ましくは、この BACベクターの一部は、ヘルぺスウィルスゲノムの非必須領域内に挿入され、ヘルぺスウィルスゲノムを含む BACとして操作が可能になる。このへルぺスウィルスゲノムを含む BACは、哺乳動物細胞に導入された場合、組換えへルぺスウィルスを産生、増殖することが可能である。組換えへルぺスウィルスの宿主細胞としては、野生型へルぺスウィルス株が増殖し得る任意の哺乳動物細胞を使用することができる。好ましくは、この宿主細胞は、ヒト由来であり、限定されることはないが、例えば、臍帯血単核球、末梢血単核球、および SupTl細胞である。

[0115] (ヒトヘルぺスウィルスゲノムを含む BACベクターの作製方法）

ヒトヘルぺスウィルス（例えば、 HHV—6A、 HHV—6B、または HHV— 7)ゲノムと、 BACベクターを用いて、ヒトヘルぺスウィルスゲノムを含む BACベクターを作製するためには、相同組換えを用いる方法など、種々の周知の方法を使用することが可能である。

[0116] 相同組換えを用いる方法としては、ヒトヘルぺスウィルスゲノムと相同な配列を連結した直鎖状 BACベクター配列を有する核酸を用いる方法が挙げられる。

[0117] ヒトヘルぺスウィルスゲノムと相同な配列を連結した直鎖状 BACベクター配列を有する核酸を用いる、ヒトヘルぺスウィルスゲノムを含む BACベクターの作製方法は、代表的には、（1)その核酸を、ヒトヘルぺスウィルスゲノムとともに、適切な宿主内に導入し、（2)宿主細胞を培養して、直鎖状 BACベクター配列に連結された相同配列と、ヒトヘルぺスウィルスゲノム配列との間で相同組換えを起こし、（3)この相同組換えによって生じた、 BACベクター配列を組み込んだヒトヘルぺスウィルスゲノム配列を含む宿主細胞を選択し、（4)その宿主細胞を培養して、環状ウィルス DNAを抽出する、という工程を包含する。上記方法において用いられる宿主細胞としては、臍帯血単核球、末梢血単核球、および SupTl細胞が挙げられる力これらに限定されな Vヽ（各種ヒトヘルぺスウィルスに適切な宿主細胞につ!、て、ご教示願!、ます）。

[0118] 哺乳動物宿主内に BACベクターを導入する方法としては、限定されることはないが、リン酸カルシウム法、エレクト口ポレーシヨン法、リポフエクシヨン法、が挙げられる力これらに限定されな、。 Amaxa社ある!/、は Bio- Rad社のエレクト口ポレーシヨン法は、 T細胞に、多量の遺伝子を効率よく導入できる方法である。例えば、 Amaxa社のェレクト口ポレーシヨンの条件としては、例えば、細胞洗浄緩衝液 (RPMI— 1640培地または Opri— MEM培地）で 2回細胞を洗浄した後、エレクト口ポレーシヨン緩衝液 ( RPMI— 1640に 10mM グルコース、 0. ImM DTT)に懸濁し、 4mmの電極間隔を有するキュベットに細胞懸濁液を入れ、 10 g プラスミド DNAを添カ卩し、室温にて、キャパシタコンデンサ値 = 970 FD、電圧 0. 15kV〜0. 3kV (例えば、 0. 2 0KV〜0. 26KV)にてエレクト口ポレーシヨンを行なう。

[0119] また、ヒトヘルぺスウィルスゲノムと、 BAC配列を用いて、ヒトヘルぺスウィルスゲノムを含む BACを作製するためには、相同組換えを用いることなぐ核酸の制限酵素断片を用いるなどの、種々の周知の方法を使用することも可能である。

[0120] HHV— 7ゲノム内において、 BACベクター配列を導入するための非必須領域は、以下の領域からなる群から選択される：

遺伝子 HIの ORF内の領域、遺伝子 DR1の ORF内の領域、遺伝子 DR2の ORF内の領域、遺伝子 H2の ORF内の領域、遺伝子 DR6の ORF内の領域、遺伝子 DR7 の ORF内の領域、遺伝子 H3の ORF内の領域、遺伝子 H4の ORF内の領域、遺伝子 U2の ORF内の領域、遺伝子 U3の ORF内の領域、遺伝子 U4の ORF内の領域、遺伝子 U5Z7の ORF内の領域、遺伝子 U8の ORF内の領域、遺伝子 U10の ORF 内の領域、遺伝子 U12の ORF内の領域、遺伝子 U13の ORF内の領域、遺伝子 U1 5の ORF内の領域、遺伝子 U16の ORF内の領域、遺伝子 U17Exの ORF内の領域、遺伝子 Ul 7の ORF内の領域、遺伝子 U17aの ORF内の領域、遺伝子 U18の OR F内の領域、遺伝子 U19の ORF内の領域、遺伝子 U20の ORF内の領域、遺伝子 U21の ORF内の領域、遺伝子 U23の ORF内の領域、遺伝子 U24の ORF内の領域、遺伝子 U24aの ORF内の領域、遺伝子 U25の ORF内の領域、遺伝子 U26の O RF内の領域、遺伝子 U28の ORF内の領域、遺伝子 U32の ORF内の領域、遺伝子 U33の ORF内の領域、遺伝子 U34の ORF内の領域、遺伝子 U35の ORF内の領域、遺伝子 U36の ORF内の領域、遺伝子 U37の ORF内の領域、遺伝子 U40の O RF内の領域、遺伝子 U42の ORF内の領域、遺伝子 U44の ORF内の領域、遺伝子 U45の ORF内の領域、遺伝子 U46の ORF内の領域、遺伝子 U47の ORF内の領域、遺伝子 U49の ORF内の領域、遺伝子 U50の ORF内の領域、遺伝子 U51の O RF内の領域、遺伝子 U52の ORF内の領域、遺伝子 U55Aの ORF内の領域、遺伝子 U55Bの ORF内の領域、遺伝子 U58の ORF内の領域、遺伝子 U59の ORF内の領域、遺伝子 U62の ORF内の領域、遺伝子 U63の ORF内の領域、遺伝子 U64の ORF内の領域、遺伝子 U65の ORF内の領域、遺伝子 U67の ORF内の領域、遺伝子 U68の ORF内の領域、遺伝子 U69の ORF内の領域、遺伝子 U70の ORF内の領域、遺伝子 U71の ORF内の領域、遺伝子 U75の ORF内の領域、遺伝子 U76の ORF内の領域、遺伝子 H5の ORF内の領域、遺伝子 U79の ORF内の領域、遺伝子 H6の ORF内の領域、遺伝子 U80の ORF内の領域、遺伝子 U81の ORF内の領域、遺伝子 U84の ORF内の領域、遺伝子 U85の ORF内の領域、遺伝子 U91の O RF内の領域、遺伝子 H7の ORF内の領域、遺伝子 U95の ORF内の領域、遺伝子 H8の ORF内の領域、遺伝子 HIの ORFに隣接する領域、遺伝子 DR1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR2の ORFに隣接する領域、遺伝子 H2の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR6の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR7の ORFに隣接する領域、遺伝子 H3の ORFに隣接する領域、遺伝子 H4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U3の ORFに隣接する領域、遺伝子 U4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U5Z7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U8の ORFに隣接する領域、遺伝子 U10の ORFに隣接する領域、遺伝子 U12の ORFに隣接する領域、遺伝子 U13の ORFに隣接する領域、遺伝子 U15の ORFに隣接する領域、遺伝子 U16の ORFに隣接する領域、遺伝子 U17Exの ORFに隣接する領域、遺伝子 U17 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U 17aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U18の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U19の ORFに隣接する領域、遺伝子 U20の ORFに隣接する領域、遺伝子 U21の ORFに隣接する領域、遺伝子 U23の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U25の ORFに隣接する領域、遺伝子 U26の ORFに隣接する領域、遺伝子 U28の ORFに隣接する領域、遺伝子 U32の ORFに隣接する領域、遺伝子 U33の ORFに隣接する領域、遺伝子 U34の ORFに隣接する領域、遺伝子 U35の ORFに隣接する領域、遺伝子 U36の ORFに隣接する領域、遺伝子 U37の ORFに隣接する領域、遺伝子 U40の ORFに隣接する領域、遺伝子 U42の ORFに隣接する領域、遺伝子 U44の ORFに隣接する領域、遺伝子 U45の ORFに隣接する領域、遺伝子 U46の ORFに隣接する領域、遺伝子 U47の ORFに隣接する領域、遺伝子 U49の ORFに隣接する領域、遺伝子 U50の ORFに隣接する領域、遺伝子 U51の ORFに隣接する領域、遺伝子 U52の ORFに隣接する領域、遺伝子 U55Aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U55Bの ORFに隣接する領域、遺伝子 U58の ORFに隣接する領域、遺伝子 U59の ORFに隣接する領域、遺伝子 U62の ORFに隣接する領域、遺伝子 U63の ORFに隣接する領域、遺伝子 U64の ORFに隣接する領域、遺伝子 U6 5の ORFに隣接する領域、遺伝子 U67の ORFに隣接する領域、遺伝子 U68の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U69の ORFに隣接する領域、遺伝子 U70の ORFに隣接する領域、遺伝子 U71の ORFに隣接する領域、遺伝子 U75の ORFに隣接する領域、遺伝子 U76の ORFに隣接する領域、遺伝子 H5の ORFに隣接する領域、遺伝子 U79の ORFに隣接する領域、遺伝子 H6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U80 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U81の ORFに隣接する領域、遺伝子 U84の ORF に隣接する領域、遺伝子 U85の ORFに隣接する領域、遺伝子 U91の ORFに隣接する領域、遺伝子 H7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U95の ORFに隣接する領域、および遺伝子 H8の ORFに隣接する領域。

好ましくは HHV— 7において、この非必須領域は、遺伝子 U24、遺伝子 U24a、遺伝子 25、および遺伝子 26の ORF領域、またはこれら ORFに隣接する領域である。なぜなら、遺伝子 U24、遺伝子 U24a、遺伝子 25、および遺伝子 26は、 HHV— 7ゲノム上で連続する非必須遺伝子であるため、相同組換えのための核酸を設計し易い力である。

[0122] 本発明において使用される BACベクター配列は、好ましくは、組換えタンパク質依存性組換え配列、および Zまたは選択マーカーを含む。好ましくは、選択マーカー配列は薬剤選択マーカー、および Zまたは緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子である。なぜなら、簡便に所望の遺伝子の存在を確認できるからである。

[0123] 本発明のさらなる局面において、上記ウィルスを製造するために使用されるべクタ一、および上記ウィルスの製造方法もまた提供される。本発明の別の局面において、上記ウィルスを含む薬学的組成物、およびワクチンの形態である薬学的組成物が提供される。

[0124] 本明細書の組換えヒトヘルぺスウィルスは、所望の抗原タンパク質を導入することが可能である。従って、例えば、ワクチンとして作用することが公知の抗原を導入する場合は、本発明のベクターをワクチンベクターとして使用することが可能である。

[0125] 本発明のさらなる局面において、本発明のワクチンを産生するためのベクターに変異を導入する方法が提供される。この方法は、以下の工程:ベクターを細菌宿主細胞に導入する工程;ヒトヘルぺスウィルスゲノムの一部カゝらなるフラグメントを含むプラスミドベクターを該細菌宿主細胞に導入する工程であって、ここで、該フラグメントは少なくとも 1つの変異を有する、工程；該細菌宿主細胞を培養する工程；該培養した細菌宿主細胞から、 BACベクター配列を有するベクターを単離する工程、を包含する。上記方法においては、細菌宿主細胞内において、本発明のワクチンを産生するためのベクターとヒトヘルぺスウィルスゲノムの一部からなるフラグメントを含むプラスミドベクターとの間で相同組換えが起こり、その結果、本発明のワクチンを産生するためのベクターが、ヒトヘルぺスウィルスゲノムの一部力なるフラグメント上の変異を有する。

[0126] 上記の方法において、ベクターを細菌宿主細胞に導入する工程としては、エレクト口ポレーシヨンなどの種々の周知の方法を使用することが可能である。同様にして、ヒトヘルぺスウィルスゲノムの一部からなるフラグメントを含むプラスミドベクターを細菌宿主細胞に導入することができる。また、このフラグメントに変異を導入する方法としては、 PCRを用いる変異導入方法が周知であり、例えば、プルーフリーディング機能を有さな、耐熱性ポリメラーゼを 4つのヌクレオチドの 1つが少な!/、条件で用いることによって、ランダムに変異を導入することが可能である。また、変異塩基配列を有するプライマーを用いて PCRを行うことによって、所望の位置に所望の変異を導入することも可能である。この細菌細胞を培養することによって、本発明のワクチンを産生するためのベクターとヒトヘルぺスウィルスゲノムの一部からなるフラグメントを含むプラスミドベクターとの間で相同組換えが起こり、その結果、本発明のワクチンを産生するためのベクターが、ヒトヘルぺスウィルスゲノムの一部からなるフラグメント上の変異を有する。細菌宿主細胞力も BACベクター配列を調製するためには、アルカリ法のような種々の周知の方法および市販のキットを使用することが可能である。

[0127] 本発明の別の局面において、本発明のワクチンを産生するためのベクターに変異を導入するさらなる方法が提供される。この方法は、以下の工程:該ベクターを細菌宿主細胞に導入する工程;ヒトヘルぺスウィルスゲノムの一部カゝらなる第 1のフラグメントを含む第 1のプラスミドベクターを該細菌宿主細胞に導入する工程であって、ここで、該第 1のフラグメントは少なくとも 1つの変異を有する、工程;ヒトヘルぺスウィルスゲノムの一部力なる第 2のフラグメントを含む第 2のプラスミドベクターを該細菌宿主細胞に導入する工程であって、ここで、該第 2のフラグメントは少なくとも 1つの変異を有し、そして該第 2のフラグメントは該第 1のフラグメントとは異なる、工程;該細菌宿主細胞を培養する工程;該培養した細菌宿主細胞から、 BACベクター配列を有するベクタ一を単離する工程、を包含する。

[0128] 本発明の一つの局面において、本発明のワクチンを製造するために使用され得る核酸カセットが提供される。この核酸カセットは、好ましくは、宿主細胞内においてヒトヘルぺスウィルスゲノムと相同組換えし得る第 1のフラグメント、 BACベクター配列、および宿主細胞内にぉ、てヒトヘルぺスウィルスゲノムと相同組換えし得る第 2のフラグメントを含む核酸カセットであって、ここで、該 BAC配列の両端の各々がそれぞれ第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントと連結している。ここで、第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントは、好ましくは、少なくとも lkb、少なくとも 1. 5kb、少なくとも 2kbである。この第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントは、ヒトヘルぺスウィルスゲノムの配列に対して、好ましくは、少なくとも 80%同一、少なくとも 85%同一、少なくとも 90%同一、少なくとも 95%同一である。

[0129] 好ましくは、この第 1および第 2のフラグメントは、ヒトヘルぺスウィルスゲノムの異なる領域に由来する。この第 1および第 2のフラグメントは、各々独立して、遺伝子 U24 の ORFに隣接する領域または遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域由来であってもよい。好ましくは、相同組換えを制御し、そして所望の遺伝子を簡便に検出するために、 BACベクター配列は組換えタンパク質依存性組換え配列、および Zまたは選択マーカーを含む。この選択マーカーは薬剤選択マーカーであっても、緑色蛍光タンノク質のような蛍光タンパク質をコードする遺伝子であってもよい。代表的には、この BACベクター配列は、配列番号 401に記載の核酸配列を有する。

[0130] HHV— 7の場合、好ましくは、この第 1および第 2のフラグメントが、各々独立して H HV— 7ゲノムの以下の領域力なる群力選択される領域由来である力、以下の領域力もなる群力選択される領域と少なくとも 80%、 85%、 90%、 95%同一である：遺伝子 HIの ORF内の領域、遺伝子 DR1の ORF内の領域、遺伝子 DR2の ORF内の領域、遺伝子 H2の ORF内の領域、遺伝子 DR6の ORF内の領域、遺伝子 DR7 の ORF内の領域、遺伝子 H3の ORF内の領域、遺伝子 H4の ORF内の領域、遺伝子 U2の ORF内の領域、遺伝子 U3の ORF内の領域、遺伝子 U4の ORF内の領域、遺伝子 U5Z7の ORF内の領域、遺伝子 U8の ORF内の領域、遺伝子 U10の ORF 内の領域、遺伝子 U12の ORF内の領域、遺伝子 U13の ORF内の領域、遺伝子 U1 5の ORF内の領域、遺伝子 U16の ORF内の領域、遺伝子 U17Exの ORF内の領域、遺伝子 U17の ORF内の領域、遺伝子 U17aの ORF内の領域、遺伝子 U18の OR F内の領域、遺伝子 U19の ORF内の領域、遺伝子 U20の ORF内の領域、遺伝子 U21の ORF内の領域、遺伝子 U23の ORF内の領域、遺伝子 U24の ORF内の領域、遺伝子 U24aの ORF内の領域、遺伝子 U25の ORF内の領域、遺伝子 U26の O RF内の領域、遺伝子 U28の ORF内の領域、遺伝子 U32の ORF内の領域、遺伝子 U33の ORF内の領域、遺伝子 U34の ORF内の領域、遺伝子 U35の ORF内の領域、遺伝子 U36の ORF内の領域、遺伝子 U37の ORF内の領域、遺伝子 U40の O RF内の領域、遺伝子 U42の ORF内の領域、遺伝子 U44の ORF内の領域、遺伝子 U45の ORF内の領域、遺伝子 U46の ORF内の領域、遺伝子 U47の ORF内の領域、遺伝子 U49の ORF内の領域、遺伝子 U50の ORF内の領域、遺伝子 U51の O RF内の領域、遺伝子 U52の ORF内の領域、遺伝子 U55Aの ORF内の領域、遺伝子 U55Bの ORF内の領域、遺伝子 U58の ORF内の領域、遺伝子 U59の ORF内の領域、遺伝子 U62の ORF内の領域、遺伝子 U63の ORF内の領域、遺伝子 U64の ORF内の領域、遺伝子 U65の ORF内の領域、遺伝子 U67の ORF内の領域、遺伝子 U68の ORF内の領域、遺伝子 U69の ORF内の領域、遺伝子 U70の ORF内の領域、遺伝子 U71の ORF内の領域、遺伝子 U75の ORF内の領域、遺伝子 U76の ORF内の領域、遺伝子 H5の ORF内の領域、遺伝子 U79の ORF内の領域、遺伝子 H6の ORF内の領域、遺伝子 U80の ORF内の領域、遺伝子 U81の ORF内の領域、遺伝子 U84の ORF内の領域、遺伝子 U85の ORF内の領域、遺伝子 U91の O RF内の領域、遺伝子 H7の ORF内の領域、遺伝子 U95の ORF内の領域、遺伝子 H8の ORF内の領域、遺伝子 HIの ORFに隣接する領域、遺伝子 DR1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR2の ORFに隣接する領域、遺伝子 H2の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR6の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR7の ORFに隣接する領域、遺伝子 H3の ORFに隣接する領域、遺伝子 H4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U3の ORFに隣接する領域、遺伝子 U4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U5Z7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U8の ORFに隣接する領域、遺伝子 U10の ORFに隣接する領域、遺伝子 U12の ORFに隣接する領域、遺伝子 U13の ORFに隣接する領域、遺伝子 U15の ORFに隣接する領域、遺伝子 U16の ORFに隣接する領域、遺伝子 U17Exの ORFに隣接する領域、遺伝子 U17 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U 17aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U18の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U19の ORFに隣接する領域、遺伝子 U20の ORFに隣接する領域、遺伝子 U21の ORFに隣接する領域、遺伝子 U23の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U25の ORFに隣接する領域、遺伝子 U26の ORFに隣接する領域、遺伝子 U28の ORFに隣接する領域、遺伝子 U32の ORFに隣接する領域、遺伝子 U33の ORFに隣接する領域、遺伝子 U34の ORFに隣接する領域、遺伝子 U35の ORFに隣接する領域、遺伝子 U36の ORFに隣接する領域、遺伝子 U37の ORFに隣接する領域、遺伝子 U40の ORFに隣接する領域、遺伝子 U42の ORFに隣接する領域、遺伝子 U44の ORFに隣接する領域、遺伝子 U45の ORFに隣接する領域、遺伝子 U46の ORFに隣接する領域、遺伝子 U47の ORFに隣接する領域、遺伝子 U49の ORFに隣接する領域、遺伝子 U50の ORFに隣接する領域、遺伝子 U51の ORFに隣接する領域、遺伝子 U52の ORFに隣接する領域、遺伝子 U55Aの ORFに隣接する領域、遺伝子 U55Bの ORFに隣接する領域、遺伝子 U58の ORFに隣接する領域、遺伝子 U59の ORFに隣接する領域、遺伝子 U62の ORFに隣接する領域、遺伝子 U63の ORFに隣接する領域、遺伝子 U64の ORFに隣接する領域、遺伝子 U6 5の ORFに隣接する領域、遺伝子 U67の ORFに隣接する領域、遺伝子 U68の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U69の ORFに隣接する領域、遺伝子 U70の ORFに隣接する領域、遺伝子 U71の ORFに隣接する領域、遺伝子 U75の ORFに隣接する領域、遺伝子 U76の ORFに隣接する領域、遺伝子 H5の ORFに隣接する領域、遺伝子 U79の ORFに隣接する領域、遺伝子 H6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U80 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U81の ORFに隣接する領域、遺伝子 U84の ORF に隣接する領域、遺伝子 U85の ORFに隣接する領域、遺伝子 U91の ORFに隣接する領域、遺伝子 H7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U95の ORFに隣接する領域、および遺伝子 H8の ORFに隣接する領域。

[0131] 好ましくは、この第 1および第 2のフラグメントは、ヒトヘルぺスウィルスゲノムの異なる領域に由来する。この第 1および第 2のフラグメントは、各々独立して、遺伝子 U24 の ORFに隣接する領域または遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域由来であってもよい。好ましくは、相同組換えを制御し、そして所望の遺伝子を簡便に検出するために、 BACベクター配列は組換えタンパク質依存性組換え配列、および Zまたは選択マーカーを含む。この選択マーカーは薬剤選択マーカーであっても、緑色蛍光タンノク質のような蛍光タンパク質をコードする遺伝子であってもよい。代表的には、この BACベクター配列は、配列番号 401に記載の核酸配列を有する。

[0132] (外来遺伝子を含む組換えへルぺスウィルスの調製）本発明の方法を用いて、外来遺伝子を導入したヘルぺスウィルスゲノムを有するへルぺスウィルスを、簡便に調製することが可能である。

そのような変異導入は、例えば、 HHV— 7に関して、以下の方法を用いて行うことができる：

大腸菌内に、（a) HHV— 7— U21— 27— BACプラスミド（HHV— 7ゲノム、および BACベクター配列を含むプラスミド）、および (b)変異外来遺伝子をコードする核酸として、所望の外来遺伝子ならびにその外来遺伝子の両端に連結したヘルぺスウィルスゲノムの部分配列を持つシャトルベクターまたは PCR産物のような核酸を導入する。 HHV—7—U21— 27— BACプラスミドと、そのシャトルベクターまたは PCR産物との間で相同組換えを起こすことによって、 HHV— 7— U21— 27— BACプラスミドに外来遺伝子変異を導入することができる。また、トランスポゾンを用いることによつても、所望の核酸配列をランダムに変異を導入することが可能である。そして、外来遺伝子が導入された HHV - 7-U21 - 27- BACプラスミドは、大腸菌内で容易に選択および増幅させることができる。そして、外来遺伝子を持つ HHV— 7— U21— 27— BACからウィルスを産出させることによって、組換えへルぺスウィルスを得ることができる（Markus Wagnerゝ TRENDS in Microbilogy, Vol. 10、 No. 7、 2002年 7月）。その具体例を以下に列挙する：

(1)外来遺伝子核酸を含む温度感受性シャトルベクターを用いる場合；

第 1に、シャトルベクターと HHV— 7— U21— 27— BACプラスミドを、第 1の相同的領域を介して、組換えさせ、シャトルベクターと HHV— 7— U21— 27— BACプラスミドとが連結した、共挿入体を生じる。次に、シャトルベクターの複製オリジンが温度感受性であることから、シャトルプラスミドが除かれる。第 2の組換え事象において、共挿入された部分が取り除かれる。第 2の組換え事象が、第 1の相同的領域を介して生じる場合、組換えに使用した HHV— 7— U21— 27— BACと同一の配列を有するプラスミドが生成される。これに対して、第 2の組換え事象が、第 1の相同領域とは異なる第 2の相同領域を介して生じる場合、シャトルベクター上に含まれた外来遺伝子を有する改変型 HHV - 7-U21 - 27- BACプラスミドが得られる。第 1の相同領域と、第 2の相同領域とがほぼ同じ長さである場合、第 2の組換え事象が第 2の相同領域で起こる確率は、第 2の組換え事象が第 1の相同領域で起こる確率とほぼ同じである。そのため、得られる HHV— 7— U21— 27— BACプラスミドの、約 2分の 1が組換えに用いた配列と同一の配列を有するプラスミドであり、約 2分の 1がシャトルベクターに導入した外来遺伝子を有するプラスミドである。

(2)直鎖状 DNAフラグメントを用いる場合；

この方法では、例えば、プロファージ Rac由来の recETの組換え機能を用いるか、またはバタテリオファージ λ由来の red o; |8の組換え機能を利用し、直鎖状 DNAフラグメントを用いて、環状 HHV— 7— U21— 27— BAC分子に変異を導入する。具体的には、標的配列に隣接する選択マーカーおよび相同配列を含む直鎖状 DNA フラグメントを、 HHV— 7— U21— 27— BACとともに、相同組換えを生じ得る大腸菌に導入する。大腸菌内での直鎖状 DNAの分解を避けるために、エタソヌクレアーゼ欠損の大腸菌を使用するか、またはバタテリオファージ由来のエタソヌクレアーゼ阻害剤である red γ (gam)を発現させることが好ましい。直鎖状 DNAは、その両端に H HV— 7— U21— 27— BACプラスミドと相同な領域を有する。その相同な領域を介して相同組換えを生じることによって、直鎖状 DNAフラグメント内の所望の配列を H HV— 7— U21— 27— BAC内に導入することができる。 recET、または red a j8組換え機能を使用する場合、これらの組換え機能は、 25〜50ヌクレオチド程度の長さの相同配列によって相同組換えを生じることから、 recA媒介性相同組換えよりも、簡便に使用することができる。

(3)トランスポゾンを用いる場合；

トランスポゾンエレメントが大腸菌内の核酸にランダムに挿入する機能を用いる。例えば、所望の外来遺伝子を含むトランスポゾンエレメントと HHV— 7— U21— 27— B ACを大腸菌に導入し、 HHV - 7-U21 - 27- BAC内にランダムにトランスポゾンエレメントを挿入することによって、外来遺伝子を挿入した HHV— 7— U21— 27— B ACを生じる。

[0134] 上記の外来遺伝子を含む外来遺伝子を含む組換え HHV— 7の調製方法は、 HH

V— 6にも適用することが可能である。

[0135] (本発明の組換え HHV— 7による HIVの治療の効果 (感染予防効果)） HIVは、 CD4+T細胞に感染する。 CD4+T細胞を HHV— 7で処置した場合に、 H IV感染を予防、治療することが公知である（Lussoら、 Proc. Natl. Acad. Sci. US A vol. 91、 3872〜3876頁、 1994年 4月）。この治療効果は、 T細胞上の CD4をレセプターとして HHV— 7が CD4+T細胞に感染することによってもたらされる。従つて、本発明の方法によって、 CD4+T細胞に対する感染能を保持する組換え HHV— 7を作製し、その HHV— 7を HIVの予防および Ζまたは治療に使用することが可能である。

[0136] 本発明の HHV— 7の HIV感染予防効果は、標的細胞における HIV増殖能を ΗΗ V— 7が予防する力否かを測定することによって測定することができる。この測定において使用される標的細胞としては、例えば、末梢血単核球、 CD4+細胞、 Sup—Tl 細胞のような細胞が挙げられる力これらに限定されない。より詳細には、例えば、以下の手順によって測定可能である。

[0137] 予め標的細胞に、 0. 1の MOI (感染多重度）で HHV— 7を感染させ、 37°Cで 24 〜72時間培養した後に、 HIVを添加して、 30分〜 2時間程度インキュベートする。その後、十分に細胞を洗浄し、再度インキュベートする。 4日間培養後、培養培地中に放出された HIV由来の抗原を定量する。コントロールとしては、 HHV— 7による感染を受けていない細胞に対して、同一の条件で HIVを感染させ、培養培地中に放出された抗原を測定する。 HIV由来の抗原としては、 p24が挙げられる力これらに限定されない。この抗原の量力 HIV増殖の指標となるので、この抗原の量がコントロールと比較して少ない場合には、 HHV— 7による HIV感染予防効果が実証される。

[0138] 本発明の HHV— 7の HIV感染治療効果は、標的細胞における HIVの増殖能を H HV— 7が抑制する力否かを測定することによって決定することができる。この測定において使用される標的細胞としては、例えば、末梢血単核球、 CD4+T細胞、 Sup-T 1細胞のような細胞が挙げられるが、これらに限定されない。より詳細には、例えば、以下の手順によって測定可能する。

[0139] 標的細胞に HIVおよび、 HHV— 7 (0. 1〜0. 01の MOI)を同時に感染させる。この同時感染後に、 30分〜 2時間程度、感染細胞をインキュベートし、その後細胞を十分に洗浄し、再度細胞をインキュベートする。コントロールとしては、 HHV—7を用いずに HIVのみによる感染を行った細胞を用いる。 4日間培養後、培養培地中の HI V由来の抗原を測定する。 HIV由来の抗原としては、 p24が挙げられる力これに限定されない。この抗原の量力 HIV増殖の指標となるので、この抗原の量がコント口ールと比較して少ない場合には、 HIV増殖の抑制効果、すなわち、 HHV—7による HIV感染治療効果が実証される。

[0140] (本発明の糸且換え HHV— 7、 HHV— 6による HIV '治療）

本発明の糸且換え HHV— 7あるいは HHV— 6を用いて HIVを処置することが可會である。例えば、組換え HHV— 7に HIV遺伝子のサイレンサー遺伝子を導入し、その組換え HHV— 7を HIV患者に投与する。 HIV感染した CD4+T細胞に組換え HH V— 7が感染することによって、 HIV産生を抑制させ、その結果、 HIV感染の治療効果が奏される。

[0141] あるいは、日和見感染が CMV (サイトメガロウィルス）によって生じることから、 CMV 抗原を組み込んだ組換え HHV— 7を用いて、 CMVに対する防御機能を強化することも可能である。

[0142] (処方）

本発明はまた、有効量の治療剤'予防剤の被験体への投与'接種による、疾患または障害 (例えば、感染症)の処置および Zまたは予防の方法を提供する。治療剤'予防剤は、薬学的に受容可能なキャリア型 (例えば、滅菌キャリア）と組み合せた、本発明の組成物を意味する。

[0143] 治療剤'予防剤を、個々の患者の臨床状態 (特に、治療剤'予防剤単独処置の副作用）、送達部位、投与方法、投与計画および当業者に公知の他の因子を考慮に入れ、医療実施基準（GMP = good medical practice)を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において目的とする「有効量」は、このような考慮を行つて決定される。

[0144] 一般的提案として、用量当り、非経口的に投与される治療剤'予防剤の合計薬学的有効量は、患者体重の、約 1 g/kg/日〜： LOmgZkgZ日の範囲にあるが、上記のようにこれは治療的裁量に委ねられる。さらに好ましくは、本発明の細胞生理活性物質について、この用量は、少なくとも 0. OlmgZkgZ日、最も好ましくはヒトに対して約 0. 01mg/kg/日と約 lmgZkgZ日との間である。連続投与する場合、代表的には、治療剤'予防剤を約 1 μ gZkgZ時間〜約 50 ;ζ gZkgZ時間の投薬速度で 1日に 1〜4回の注射かまたは連続皮下注入 (例えばミニポンプを用いる）のいずれかにより投与する。静脈内用バッグ溶液もまた使用し得る。変化を観察するために必要な処置期間および応答が生じる処置後の間隔は、所望の効果に応じて変化するよつである。

[0145] 治療剤 ·予防剤を、経口的、直腸内、非経口的、槽内（intmcistemally)、膣内、腹腔内、局所的 (粉剤、軟膏、ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔スプレーとして投与し得る。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、被包材または任意の型の処方補助剤をいう。本明細書で用いる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。

[0146] 本発明の治療剤 ·予防剤はまた、徐放性システムにより適切に投与される。徐放性治療剤 ·予防剤の適切な例は、経口的、直腸内、非経口的、槽内（intmcistemally )、膣内、腹腔内、局所的 (粉剤、軟膏、ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔スプレーとして投与され得る。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、被包材または任意の型の処方補助剤をいう。本明細書で用いる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。

[0147] 非経口投与のために、 1つの実施態様において、一般に、治療剤'予防剤は、それを所望の程度の純度で、薬学的に受容可能なキャリア、すなわち用いる投薬量および濃度でレシピエントに対して毒性がなぐかつ処方物の他の成分と適合するものと、単位投薬量の注射可能な形態 (溶液、懸濁液または乳濁液)で混合することにより処方される。例えば、この処方物は、好ましくは、酸化、および治療剤 ·予防剤に対して有害であることが知られて、る他の化合物を含まな、。

[0148] 一般に、治療剤 ·予防剤を液体キャリアまたは微細分割固体キャリアあるいはその両方と均一および緊密に接触させて処方物を調製する。次に、必要であれば、生成物を所望の処方物に成形する。好ましくは、キャリアは、非経口的キャリア、より好ましくはレシピエントの血液と等張である溶液である。このようなキャリアビヒクルの例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液が挙げられる。不揮発性油およびォレイン酸ェチルのような非水性ビヒクルもまた、リボソームと同様に本明細書において有用である。

[0149] キャリアは、等張性および化学安定性を高める物質のような微量の添加剤を適切に含有する。このような物質は、用いる投薬量および濃度でレシピエントに対して毒性がなぐこのような物質としては、リン酸塩、クェン酸塩、コハク酸塩、酢酸および他の有機酸またはその塩類のような緩衝剤；ァスコルビン酸のような抗酸化剤；低分子量（約 10残基より少ない）ポリペプチド (例えば、ポリアルギニンまたはトリペプチド）；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビュルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシン、グルタミン酸、ァスパラギン酸またはアルギニンのようなアミノ酸;セルロースまたはその誘導体、ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、および他の炭水化物; EDTAのようなキレート剤；マン-トールまたはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような対イオン；および Zまたはポリソルベート、ポロキサマーもしくは PEGのような非イオン性界面活性剤が挙げられる。

[0150] 治療的投与に用いられるべき任意の薬剤は、有効成分としてのウィルス以外の生物 ·ウィルスを含まない状態、すなわち、無菌状態であり得る。滅菌濾過膜 (例えば 0 . 2ミクロンメンブレン)で濾過することにより無菌状態は容易に達成される。一般に、治療剤'予防剤は、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下用注射針で穿刺可能なストッパー付の静脈内用溶液バッグまたはバイアルに配置される。

[0151] 治療剤 ·予防剤は、通常、単位用量または複数用量容器、例えば、密封アンプルまたはバイアルに、水溶液または再構成するための凍結乾燥処方物として貯蔵される。凍結乾燥処方物の例として、 10mlのバイアルに、滅菌濾過した 1% (WZV)治療剤 •予防剤水溶液 5mlを充填し、そして得られる混合物を凍結乾燥する。凍結乾燥した治療剤 ·予防剤を、注射用静菌水を用いて再構成して注入溶液を調製する。

[0152] 本発明はまた、本発明の治療剤'予防剤の 1つ以上の成分を満たした一つ以上の容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、このような容器に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造、使用または販売に関する政府機関による承認を表す。さらに、治療剤 ·予防剤を他の治療用化合物と組み合わせて使用し得る。

[0153] 本発明の治療剤 ·予防剤は、単独または他の治療剤 ·予防剤と組み合わせて投与され得る。本発明の治療剤 ·予防剤と組み合わせて投与され得る治療剤 ·予防剤としては、化学療法剤、抗生物質、ステロイドおよび非ステロイドの抗炎症剤、従来の免疫治療剤'予防剤、他のサイト力インおよび Zまたは増殖因子が挙げられるが、これらに限定されない。組み合わせは、例えば、混合物として同時に；同時にまたは並行してだが別々に；あるいは経時的のいずれかで投与され得る。これは、組み合わされた薬剤が、治療用混合物として共に投与されるという提示、およびまた、組み合わされた薬剤が、別々にしかし同時に、例えば、同じ個体に別々の静脈ラインを通じて投与される手順を含む。「組み合わせて」の投与は、一番目、続いて二番目に与えられる化合物または薬剤のうち 1つの別々の投与をさらに含む。

[0154] 特定の実施態様において、本発明の治療剤'予防剤は、抗レトロウイルス薬剤、ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、および Z またはプロテーアーゼインヒビターとの組み合わせで投与される。

[0155] さらなる実施態様において、本発明の治療剤'予防剤は、抗生物質と組み合わせて投与される。使用され得る抗生物質としては、アミノグリコシド系抗生物質、ポリェン系抗生物質、ペニシリン系抗生物質、セフエム系抗生物質、ペプチド系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質が挙げられるが、これらに限定されない。

[0156] さらなる実施態様において、本発明の治療剤'予防剤は、単独または抗炎症剤と組み合わせて投与される。本発明の治療剤 ·予防剤とともに投与され得る抗炎症剤としては、ダルココルチコイドおよび非ステロイド抗炎症剤、アミノアリールカルボン酸誘導体、ァリール酢酸誘導体、ァリール酪酸誘導体、ァリールカルボン酸、ァリールプロピオン酸誘導体、ピラゾール、ピラゾロン、サリチル酸誘導体、チアジンカルボキサミド、 e—ァセトアミドカプロン酸、 S—アデノシルメチォニン、 3—アミノー 4—ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン（amixetrine)、ベンダザック、ベンジドアミン、ブコローム、ジフェンピラミド、ジタゾール、ェモルファゾン、グアイァズレン、ナブメトン、二メスリド、オルゴテイン、ォキサセプロール、パラ二リン、ペリゾキサル、ピフォキシム、プロキアゾン、プロキサゾール、およびテニダップが挙げられる力これらに限定されない。

[0157] さらなる実施形態において、本発明の治療剤'予防剤は、他の治療レジメまたは予防レジメ (例えば、放射線治療）と組み合わせて投与される。

[0158] 以下に実施例等により本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例 1

[0159] (組換えへルぺスウィルスの調製）

(1 : BACプラスミドの調製）

プラスミド PHA— 2は、 Markus Wagnerおよび Ulrich H. Koszinowski (Adl erら、（2000)、 J. Virol 74 : 6964— 74)より分与されたものを使用した。組換えゥィルスを作製するために、 BACベクターの挿入箇所として、遺伝子 U21、遺伝子 U2 3、遺伝子 U24、遺伝子 U 24aゝ遺伝子 U25、遺伝子 U26にわたる約 4000bpの領域の中央を選択した。なぜなら、このような非必須領域への外来核酸の挿入は、ヘルぺスウィルスの増殖に悪影響を与えな!/、と予想されたからである。 HHV- 7ゲノムへの BACベクターの挿入のスキームを模式的に図 1に示す。

[0160] ヘルぺスウィルス KHR株のゲノム DNAを铸型として、それぞれ、プライマー BAC7

号 403)、ならびにプライマー BAC7— E3 (GCTTAATTAACATGCTCTGCAA TGCAAGCC) (配列番号 404)および BAC7— E4 (ATGCGGCCGCAAATAG CCTTTGCTCATAGC) (配列番号 405)を用いて増幅した。

[0161] (2：相同組換えによる組換えウィルスの調製）

作製したプラスミド pHA— 2/HHV7— U21— 27は、選択マーカーとしてグァニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（gpt)遺伝子を含んでいる。また、 2つの ΙοχΡ配列に挟まれた BACベクター配列を含んで、るため、 Creリコンビナーゼを作用させることにより、 ΙοχΡ配列に挟まれた BACベクター配列を効率よく除去することが可能である。また、緑色蛍光タンパク質 (GFP)の蛍光によって、 BACベクター配列を含むプラスミドが導入された細胞を容易に確認することが可能である。

[0162] このプラスミドを Notl消化によって線状化した。 2 μ gの線状化された ρΗΑ— 2/Η 1^ 71；21—27を、？^^160£6 1011 unit (Amaxa)を用いて、 25cm²プラスチックフラスコ中で培養された臍帯血単核球中にエレクト口ポレーシヨンによりトランスフエクシヨンした。トランスフエクシヨンの 1日後、トランスフエクシヨンした細胞に、ヘルぺスゥィルス KHR株を感染させた。

[0163] 12. 5 gZmlのマイコフェノール酸および 100 gZmlのキサンチンを用いて gpt 遺伝子による組換えウィルスの選択を行った。臍帯血単核球にヘルぺスウィルスによる典型的な細胞変性効果 (CPE)が見られ、そのうちのいくつかは蛍光顕微鏡下で G FP発現を確認することができた。この結果は、 pHA—2ZHHV7U21—U27が導入された臍帯血単核球にヘルぺスウィルスが感染したことを示す。 GFP陽性感染細胞を 7日間培養後、新たに分離'培養した臍帯血単核球と共培養することによって感染させた結果、マイコフェノール酸およびキサンチン存在下で GFP発現細胞の割合が増加した。このことはへルぺスウィルスゲノムに BACベクターが挿入され、組換えゥィルスが産生して、ることを示す（図 2)。

[0164] (3 :組換えウィルスの富化と大腸菌への導入）

組換えウィルスを gpt遺伝子によるマイコフェノール酸およびキサンチンによる薬剤選択によって富化した。その組換えウィルスを SupTl細胞に感染させ、 6時間後に細胞を回収し、環状 DNAを抽出した。 SupTl細胞から回収した環状 DNAを大腸菌に遺伝子導入した。薬剤のはいったプレートに大腸菌を播き、プレートに出現したコ口-一から、 DNAを抽出した。感染細胞から、ハート法（Hirt、 (1967)J. M. Biol 26 : 365- 9)により環状ウィルス DNAを抽出した。抽出した DNAを、ジーンパルサ一（Bio— Rad社）を用いて、エレクト口ポレーシヨン法（0. 2cmキュベット、 2. 5kV) により大腸菌 DH10Bに導入し、形質転換した。これを、 17 g/mlのクロラムフエ- コールを含む寒天上にて選択して、 HHV—7U21— 27— BACを含む大腸菌を得た。

[0165] (4 :E. coliにおける HHV— 7— U21— 27— BACプラスミドの安定性）

キット添付のプロトコールに従って、菌体より、 NucleoBond PC 100キット（Mach erey— Nagel社）を使用して、 HHV— 7U21— 27— BACを抽出した。得られた 2つのクローンをそれぞれ制限酵素 EcoRIによって消化した。

[0166] (5 :HHV— 7— U21— 27— BACからのウィルスの産生）

HHV- 7U21 - 27-BAC DNA(1 μ g)を、 25cm²プラスチックフラスコ内で培養された、臍帯血単核球（5 X 10⁶〜10⁷個）に対して、エレクト口ポレーシヨン法によつて遺伝子導入を行った。エレクト口ポレーシヨンは、 Amaxa社の nucleofactor kitを用いて、マニュアルに従い T8の条件で行った。エレクト口ポレーシヨンの後、遺伝子導入された単核球を PHA (phytohemagglutinin)入りの培地で 3〜7日間培養した

[0167] エレクト口ポレーシヨン 3〜7日後、臍帯血単核球を回収し、新たに PHAで刺激された臍帯血単核球（5 X 10⁶〜10⁷個）とともに共生培養した。この時、 PHAを含まない培地で培養し、培地には薬剤 (MPA、キサンチン)を入れた。共生培養後、 2〜3日でウィルスの産生が見られた。

[0168] (6 : BACベクター配列の切り出し）

東京医科歯科大学、川口寧氏により Creコンビナーゼを発現する組み換えアデノウィルス（AxCANCre)が分与された（Tanaka Mら、 J. Virol. 2003 Jan ; 77 (2) : 1 382— 1391)。組み換えアデノウイルスを臍帯血単核球に MOI 100で感染させた。ウィルスを 2時間吸着させた後、 PBS (—）で細胞を洗い、 5%FCSを含む RPMI培地にて培養した。組み換えヒトヘルぺスウィルスを組み換えアデノウイルス感染 24時間後に臍帯血単核球に重感染させた。対照を用いた実験により組み換えアデノウィルスにより Creリコンビナーゼが発現され、 1111¥—71；21—27—：6八じのゲノムょり8 ACベクター配列が効率よく切り出されたことを確認した。得られたヒトヘルぺスウィルスの DNAシークェンスの結果からは、 HHV— 7U21— 27— BACから BACベクタ一配列が切り出されたものであることを確認した。

実施例 2 [0169] (組換えへルぺスウィルスの特徴付）

( 1：組み換えウィルスの増殖）

実施例 1に記載の方法に従って調製した組換えへルぺスウィルスの増殖を確認した。

臍帯血単核球に組み換えウィルスを感染させ、 7日まで培養した。その後ウィルス感染臍帯血単核球を SupTl細胞と混合培養した。（3000回転、 37°C、 40分遠心法にて混合した。）感染細胞を蛍光顕微鏡下で観察したところ、 GFP発現と細胞変性効果を伴った細胞を確認することができた。この結果は、本発明の組換えヘルぺスゥィルスが細胞間で伝播してヽることを示し、増殖能を保持することを示す (データ示さず)。

[0170] (2 :組み換えウィルスの増殖性の比較）

組み換えウィルスの増殖性を、野生型ウィルスと比較する方法としては、以下に記載する TCID50法に加えて：（1)蛍光抗体法にて非感染細胞におけるウィルス後期タンパクの発現を調べ、その発現を指標として非感染細胞に対するウィルスの感染を調べることによって、ウィルス増殖を検出する方法；（2)感染細胞と非感染細胞を混合し、非感染細胞での後期タンパクの発現を調べ、その発現を指標として非感染細胞に対するウィルスの感染を調べることによって、ウィルス増殖を検出する方法；（3) 感染細胞と非感染細胞を混合することによって非感染細胞での GFPの発現を調べ、その発現を指標として非感染細胞に対するウィルスの感染を調べることによって、ゥィルス増殖を検出する方法;および (4)ウィルス感染によって起こる細胞変性効果を指標として、ウィルス増殖を検出する方法が挙げられるが、これらに限定されない。以下に、 TCID50法を説明する力本願発明の組換えウィルスについての試験方法は、 TCID50法に限定されるものではない。

[0171] (2. 1 :TCID50法）

HHV- 7 (KHR株）と、得られた組換えへルぺスウィルスの臍帯血単核球あるいは SupTl細胞での増殖性の比較を Median tissue cltureinfectious dose (TCI D50)法を用いて行う。臍帯血単核球に同じ力価の KHR株、および組み換えウィルスを感染後 0から 7日まで培養した後、新しい臍帯血単核球または SupTl細胞に感染させ増殖性につ!、て比較する。 TCID法にて力価を測定する。

実施例 3

[0172] 本発明の方法を用いて、 HIVサイレンサー遺伝子（例えば、 HIVの遺伝子に対するアンチセンス核酸）を導入したヘルぺスウィルスゲノムを有するヘルぺスウィルスを、以下の工程によって簡便に調製する。

[0173] HIVサイレンサー遺伝子の上流に、 HIVの LTRの U3部位の NF κ BZSpl部位を作動可能に連結し、さらに、その両端に HHV— 7の非必須遺伝子に隣接する領域を連結したシャトルベクターを調製する。大腸菌に、シャトルベクター、および HH V- 7U21 - 27— BACプラスミド（HHV— 7ゲノム、および BACベクター配列を含むプラスミド）を導入する。その結果、大腸菌内で、 HHV— 7— U21— 27— BACプラスミドとシャトルベクターとの間で相同組換えが起こり、シャトルベクター内に含まれて、た外来遺伝子（HIVサイレンサー遺伝子）力 HHV- 7U21 - 27— BACプラスミドに導入された共挿入体を生じる。

[0174] 次に、シャトルベクターの複製オリジンが温度感受性であることから、シャトルプラスミドが除かれる。第 2の組換え事象において、共挿入された部分が取り除かれる。第 2 の組換え事象が、第 1の相同的領域を介して生じる場合、組換えに使用した HHV— 7U21— 27— BACと同一の配列を有するプラスミドが生成される。これに対して、第 2の組換え事象が、第 1の相同領域とは異なる第 2の相同領域を介して生じる場合、シャトルべクター上に含まれた外来遺伝子を有する改変1111¥—71；21—27— 8八じプラスミドが得られる。第 1の相同領域と、第 2の相同領域とがほぼ同じ長さである場合、第 2の組換え事象が第 2の相同領域で起こる確率は、第 2の組換え事象が第 1の相同領域で起こる確率とほぼ同じである。そのため、得られる HHV— 7U21— 27— BACプラスミドの、約 2分の 1が組換えに用いた配列と同一の配列を有するプラスミドであり、約 2分の 1がシャトルベクターに導入した外来遺伝子を有するプラスミドである

[0175] この HIVサイレンサーを含むプラスミドを用いて、組換え HHV— 7ウィルスを調製する。この組換えウィルスは、 HIV感染の処置に使用することができる。

実施例 4 [0176] (組換えへルぺスウィルス株ワクチンの作製）

本発明に従い、以下の方法を用いることによって、所望のワクチン抗原をコードする遺伝子を組み込こんだ変異型組換えへルぺスウィルスを調製し、ワクチンとして使用することが可能である。

[0177] (ワクチンの製造）

培養面積 210cm²のルー瓶 20本の Sup— T1細胞培養に、実施例 1で得た組換えヘルぺスウィルスを接種の後、培養する。培養終了後、培養液を捨て、各ルー瓶内の感染細胞を 200 mlの PBS (—）にて 2回洗浄する。次いで、 20mlの 0. 03% (w/ V) EDTA 3Naを各ルー瓶内の感染細胞に重層し、細胞をルー瓶内壁面から剥離させ浮遊させる。各ルー瓶内の感染細胞浮遊液をプールし、 2, OOOrpmにて 10分間、 4°Cで遠心し、感染細胞のペレットを採取する。これを 100mlの PBS (―)に再浮遊の後、凍結融解を 1回、行う。次に、氷水浴中で超音波処理（20KHz、 150mA, 0. 3秒 Zml)後、 3, OOOrpmで 20分間、 4°Cで遠心し、細胞遊離ウィルスを含有の上清を採取し、これを生ワクチン原液とする。この原液力も検定用として 30mlをサンプリングし、残りの原液 70mlに、 PBS (—）に溶解したサッカロース及びゼラチン加水分解物をワクチン安定化剤として最終濃度が 5% (wZv)及び 2. 5% (w/v)になるよう添加混合し、 140mlの生ワクチン最終バルタを調製する。この最終バルタ力ゝら検定用として 30mlをサンプリングの後、残りバルタを 3ml容のバイャル瓶に 0. 5mlずつ分注し、凍結乾燥の後、窒素ガスを充填しゴム栓で封をしバイャル瓶内部を気密密閉する。この生ワクチン小分品は、 4°Cで保存し、使用の直前に注射用蒸留水 0. 5mlを添加し乾燥内容物を完全に溶解し用いる。一方、サンプリングした上記のワクチン原液と最終バルタ、及び小分品 20本につき、検定試験を行う。この検定試験は、安全性、有効性及び均質姓を確認し、生ワクチンとしての適格性を確定するため、厚生省告示第 195号に規定の生物学的製剤基準（1989年)、かつ、同じく規定の基準「組換え沈降 B型肝炎ワクチン (酵母由来)」をも考慮し、実施する。この検定試験の結果、上記の小分品は、そのウィルス含量が 2 X 10⁴PFU (プラーク形成単位) /0 . 5mlであり、かつ、上記基準に規定の各種試験に合格した場合、適格性を備えた生ワクチンとしてその後の使用に供する。実施例 5

[0178] (HIV感染予防）

本発明の組換え HHV— 7が、 HIV感染予防効果を有することを、 Lussoら（Proc. Natl. Acad. Sci. USA vol. 91、 3872〜3876頁、 1994年 4月）の方法を用いて確認する。

[0179] 健常成人の末梢血から、 CD8、 CD14、 CD19、 CD20および CD56に対するマウスモノクローナル抗体（例えば、 Becton Dickinson社製）、ならびに抗マウス IgG抗血清（例えば、 Dynal社、 Great Neck, NY)を用いて、ネガティブ免疫磁石選択によって CD4+T細胞を選択する。この細胞を、精製フイトへマダルチュン (例えば、 We llacome社） 1 μ gZmlを用いて精製し、部分精製 IL 2 (例えば、 Boehringer Ma nnheim社） 10単位 Zml存在下で増殖させることによって、 CD4+T細胞を調製する

[0180] 本発明の HHV— 7による HIV感染予防効果は、 CD4+T細胞における HIV増殖能を HHV— 7が抑制する力否かを決定することによって測定することができる。より詳細には、以下の手順を用いる。

[0181] 10⁶個の CD4+T細胞に、 0. 01〜0.1の MOIで HHV—7を感染させ、 37°Cで 48時間培養した後に、 HIV (添加する量としては、 10⁵cpmの逆転写酵素を有する HIV) を添加して、 37°Cで 1時間程度インキュベートする。その後、十分に細胞を洗浄し、 2 4ゥエルプレート中で再度インキュベートする。この洗浄後のインキュベートにおいては、 IL 2 (10単位 Zml)を培養培地に添加する。 4日間の培養後（細胞の生存率が 80%を超える）、培養培地中に放出される p24タンパク質を ELISAによって定量する。コントロールとしては、 HHV— 7による感染を受けていない細胞に対して、同一の条件で HIVを感染させ、培養培地中に放出された p24タンパク質を測定する。この p 24タンパク質の量力 HIV増殖の指標となるので、この p24タンパク質の量がコント口ールと比較して少な、場合には、 HHV— 7による HIV感染予防効果が実証される。実施例 6

[0182] (HIV感染治療）

HHV- 7は、 HIVが感染する際の標的（玄関口）となる CD4を標的とすることから、 HIV感染予防に用いることができることが実証されている。これに対して、 HHV-6 は、 HHV—7および HIVと同様に CD4+T細胞に感染するウィルスである力その標的とするタンパク質は、 HHV— 7や HIVとは異なる。そのため、 HHV—6は、例えば、自殺遺伝子などの HIV感染治療に適切な遺伝子を HIV感染細胞に導入することによって、 HIV感染の遺伝子治療用ベクターとして使用することができる。より具体的には、以下の方法を用いることができる。

[0183] 実施例 5と同様の方法を用いて、 CD4+T細胞を調製する。 10⁶個の CD4+T細胞に、 HIVを添加して、 37°Cで 1時間程度インキュベートする。その後、十分に細胞を洗浄する。この HIV感染細胞に対して、 1の MOIで HHV—6 (HIVの LTRを活性する遺伝子を欠除させた HHV-6組変えウィルス）を感染させ、 IL— 2 (10単位 Zml)を培養培地に添加し、 37°Cで 1時間程度インキュベートする。培養後、培養培地中に放出される P24タンパク質を ELISAによって定量する。コントロールとしては、 HHV 6処理を行なわな、HIV感染細胞を用いて、培養培地中に放出された p24タンパク質を測定する。この p24タンパク質の量力 HIV増殖の指標となるので、この p24タンパク質の量がコントロールと比較して少ない場合には、 HHV— 6による HIV感染治療効果が実証される。

[0184] 以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきた力本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。

産業上の利用可能性

[0185] 本発明によって、例えば、 BAC (大腸菌人工染色体)を用い、単一のウィルス株から組換えへルぺスウィルスを作製する方法、およびその方法によって作製された組換えへルぺスウィルスが提供される。また、本発明によって、組換えへルぺスウィルスを含む薬学的組成物がまた提供される。

[0186] さらに、本発明によって、ヘルぺスウィルスゲノム遺伝子と BACベクター配列とを含むベクター、およびそのようなベクターを含む細胞、ならびにヘルぺスウィルスゲノムと相同組換えし得るフラグメント、および BACベクター配列を含む核酸カセットが提供される。

また、 HIV感染予防、および HIV感染治療のための、組換えへルぺスウィルスを含む薬学的組成物もまた、提供される。

Claims

請求の範囲

[1] リンパ球細胞へ遺伝子導入するための組換えへルぺスウィルス。

[2] BACベクター配列を含む、請求項 1に記載の組換えへルぺスウィルス。

[3] ヘルぺスウィルスゲノムの非必須領域内に前記 BACベクター配列の少なくとも一部が挿入されて、る、請求項 2に記載の組換えへルぺスウィルス。

[4] 前記非必須領域が、 HHV— 7の以下の領域力なる群力選択される、請求項 3に記載の組換えへルぺスウィルス：

[5] 前記非必須領域が、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域または遺伝子 U24aの OR Fに隣接する領域である、請求項 4に記載の組換えへルぺスウィルス。

[6] 前記非必須領域が、 HHV— 6Aまたは HHV—6Bの以下の領域力なる群力選択される、請求項 3に記載の組換えへルぺスウィルス：

[7] 前記非必須領域が、 HHV— 6の遺伝子 U5の ORFに隣接する領域または HHV— 6 の遺伝子 U8の ORFに隣接する領域である、請求項 4に記載の組換えへルぺスウイノレス。

[8] 前記 BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、請求項 3〖こ記載の組換えへルぺスウィルス。

[9] 前記 BACベクター配列が選択マーカーを含む、請求項 3に記載の組換えへルぺスウィルス。

[10] 前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、請求項 9に記載の組換えヘルぺスゥイノレス。

[11] 前記選択マーカーが緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、請求項 3に記載の組換えへルぺスウィルス。

[12] 前記へルぺスウィルスゲノムが野生株由来である、請求項 3に記載の組換えへルぺスゥイノレス。

[13] 前記へルぺスウィルスゲノムが変異株由来である、請求項 3に記載の組換えへルぺスゥイノレス。

[14] 前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 7 KHR株由来である、請求項 3に記載の組換えへルぺスウィルス。

[15] 前記へルぺスウィルスゲノムが HHV—6A U1102株、または HHV— 6B HST株由来である、請求項 3に記載の組換えへルぺスウィルス。

[16] 前記 BACベクター配列が配列番号 401に記載の配列を有するベクターである、請求項 3に記載の組換えへルぺスウィルス。

[17] 請求項 1に記載のウィルスを含有する薬学的組成物。

[18] ワクチンの形態である、請求項 17に記載の薬学的組成物。

[19] ヒトヘルぺスウィルス必須遺伝子と BACベクター配列とを含む、ベクター。

[20] 哺乳動物細胞に導入された場合、該哺乳動物細胞が組換えへルぺスウィルスを産生する、請求項 19に記載のベクター。 [21] 前記へルぺスウィルスゲノム由来の配列が前記 BACベクター配列と連結する部位が、該ヘルぺスウィルスゲノムの非必須領域内である、請求項 120に記載のベクター。

[22] 前記非必須領域が、以下の HHV— 7の領域力なる群力選択される、請求項 21 に記載のベクター：

[23] 前記非必須領域が、 HHV— 7の遺伝子 U24の ORFに隣接する領域または HHV— 7の遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域である、請求項 22に記載のベクター。

[24] 前記非必須領域が、以下の HHV— 6の領域力なる群力選択される、請求項 21 に記載のベクター：

前記非必須領域力 HHV— 6の遺伝子 U5の ORFに隣接する領域または HHV—6 の遺伝子 U8の ORFに隣接する領域である、請求項 24に記載のベクター。

[26] 前記 BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、請求項 19に記載のベクター。

[27] 前記 BACベクター配列が選択マーカーを含む、請求項 21に記載のベクター。

[28] 前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、請求項 27に記載のベクター。

[29] 前記選択マーカーが緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、請求項 27に記載のベクター。

[30] 前記へルぺスウィルスゲノムが野生株由来である、請求項 21に記載のベクター。

[31] 前記へルぺスウィルスゲノムが変異株由来である、請求項 21に記載のベクター。

[32] 前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 7 KHR株由来である、請求項 21に記載のベクター

[33] 前記へルぺスウィルスゲノムが HHV—6A U1102株、または HHV— 6B HST株由来である、請求項 21に記載のベクター。

[34] 前記 BACベクター配列が配列番号 401に記載の配列を有するベクターである、請求項 21に記載のベクター。

[35] 請求項 21に記載のベクターを含む、細胞。

[36] 細菌である、請求項 35に記載の細胞。

[37] E. coliである、請求項 36に記載の細菌。

[38] 哺乳動物細胞である、請求項 35に記載の細胞。

[39] ヒト由来の細胞である、請求項 38に記載の哺乳動物細胞。

[40] 請求項 38に記載の哺乳動物細胞によって産生された、ウィルス。

[41] 請求項 40に記載のウィルスを含有する薬学的組成物。

[42] ワクチンの形態である、請求項 41に記載の薬学的組成物。

[43] 組換えへルぺスウィルスの製造方法であって、以下の工程：

該哺乳動物宿主細胞を培養して、組換えへルぺスウィルスを産生させる工程、を包含する、方法。 [44] 前記哺乳動物宿主細胞がヒト由来の細胞である、請求項 43に記載の方法。

[45] 前記 BACベクター配列が少なくとも 2つの組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、請求項 43に記載の方法。

[46] 請求項 45に記載の方法であって、前記 2つの組換えタンパク質依存性組換え配列間での組換えを起こす工程をさらに包含する、方法。

[47] 前記へルぺスウィルスゲノム由来の配列が前記 BACベクター配列と連結する部位が

、該ヘルぺスウィルスゲノムの非必須領域内である、請求項 43に記載の方法。

[48] 前記非必須領域が、以下の HHV— 7の領域力なる群力選択される、請求項 47 に記載の方法：

[49] 前記非必須領域が、 HHV— 7の遺伝子 U24の ORFに隣接する領域または HHV— 7の遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域である、請求項 48に記載の方法。

[50] 前記非必須領域が、以下の HHV— 6の領域力なる群力選択される、請求項 47 に記載の方法：

遺伝子 LT1の ORF内の領域、遺伝子 DR1の ORF内の領域、遺伝子 DR2の ORF 内の領域、遺伝子 DR3の ORF内の領域、遺伝子 DR4の ORF内の領域、遺伝子 D R5の ORF内の領域、遺伝子 DR6の ORF内の領域、遺伝子 DRHN1の ORF内の領域、遺伝子 DR7の ORF内の領域、遺伝子 DRHN2の ORF内の領域、遺伝子 DR 8の ORF内の領域、遺伝子 LJ1の ORF内の領域、遺伝子 U1の ORF内の領域、遺伝子 U2の ORF内の領域、遺伝子 U3の ORF内の領域、遺伝子 U4の ORF内の領域、遺伝子 U5の ORF内の領域、遺伝子 U6の ORF内の領域、遺伝子 U7の ORF内の領域、遺伝子 U8の ORF内の領域、遺伝子 U9の ORF内の領域、遺伝子 U10の ORF内の領域、遺伝子 U12EXの ORF内の領域、遺伝子 U12の ORF内の領域、遺伝子 U13の ORF内の領域、遺伝子 U15の ORF内の領域、遺伝子 U16の ORF 内の領域、遺伝子 U 17の ORF内の領域、遺伝子 U18の ORF内の領域、遺伝子 U1 9の ORF内の領域、遺伝子 U20の ORF内の領域、遺伝子 U21の ORF内の領域、遺伝子 U22の ORF内の領域、遺伝子 U23の ORF内の領域、遺伝子 U24の ORF 内の領域、遺伝子 U25の ORF内の領域、遺伝子 U26の ORF内の領域、遺伝子 U2 8の ORF内の領域、遺伝子 U32の ORF内の領域、遺伝子 U33の ORF内の領域、遺伝子 U34の ORF内の領域、遺伝子 U35の ORF内の領域、遺伝子 U36の ORF 内の領域、遺伝子 U37の ORF内の領域、遺伝子 U40の ORF内の領域、遺伝子 U4 2の ORF内の領域、遺伝子 U44の ORF内の領域、遺伝子 U45の ORF内の領域、遺伝子 U46の ORF内の領域、遺伝子 U47の ORF内の領域、遺伝子 U49の ORF 内の領域、遺伝子 U50の ORF内の領域、遺伝子 U51の ORF内の領域、遺伝子 U5 2の ORF内の領域、遺伝子 U55の ORF内の領域、遺伝子 U58の ORF内の領域、遺伝子 U59の ORF内の領域、遺伝子 U61の ORF内の領域、遺伝子 U62の ORF 内の領域、遺伝子 U63の ORF内の領域、遺伝子 U64の ORF内の領域、遺伝子 U6 5の ORF内の領域、遺伝子 U67の ORF内の領域、遺伝子 U68の ORF内の領域、遺伝子 U69の ORF内の領域、遺伝子 U70の ORF内の領域、遺伝子 U71の ORF 内の領域、遺伝子 U75の ORF内の領域、遺伝子 U76の ORF内の領域、遺伝子 U7 8の ORF内の領域、遺伝子 U79の ORF内の領域、遺伝子 U80の ORF内の領域、遺伝子 U81の ORF内の領域、遺伝子 U83の ORF内の領域、遺伝子 U84の ORF 内の領域、遺伝子 U85の ORF内の領域、遺伝子 U88の ORF内の領域、遺伝子 U9 1の ORF内の領域、遺伝子 U92の ORF内の領域、遺伝子 U93の ORF内の領域、遺伝子 HN2の ORF内の領域、遺伝子 U94の ORF内の領域、遺伝子 U95の ORF 内の領域、遺伝子 U96の ORF内の領域、遺伝子 LT1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR1の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR2の ORFに隣接する領域、遺伝子 D R3の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR4の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR5の O RFに隣接する領域、遺伝子 DR6の ORFに隣接する領域、遺伝子 DRHN1の ORF に隣接する領域、遺伝子 DR7の ORFに隣接する領域、遺伝子 DRHN2の ORFに隣接する領域、遺伝子 DR8の ORFに隣接する領域、遺伝子 LJ1の ORFに隣接する領域、遺伝子 U1の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U3の ORFに隣接する領域、遺伝子 U4の ORFに隣接する領域、遺伝子 U5の O RFに隣接する領域、遺伝子 U6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U7の ORFに隣接する領域、遺伝子 U8の ORFに隣接する領域、遺伝子 U9の ORFに隣接する領域、遺伝子 U10の ORFに隣接する領域、遺伝子 U12EXの ORFに隣接する領域、遺伝子 U12の ORFに隣接する領域、遺伝子 U13の ORFに隣接する領域、遺伝子 U15 の ORFに隣接する領域、遺伝子 U16の ORFに隣接する領域、遺伝子 U17の ORF に隣接する領域、遺伝子 U18の ORFに隣接する領域、遺伝子 U19の ORFに隣接する領域、遺伝子 U20の ORFに隣接する領域、遺伝子 U21の ORFに隣接する領域、遺伝子 U22の ORFに隣接する領域、遺伝子 U23の ORFに隣接する領域、遺伝子 U24の ORFに隣接する領域、遺伝子 U25の ORFに隣接する領域、遺伝子 U2 6の ORFに隣接する領域、遺伝子 U28の ORFに隣接する領域、遺伝子 U32の OR Fに隣接する領域、遺伝子 U33の ORFに隣接する領域、遺伝子 U34の ORFに隣接する領域、遺伝子 U35の ORFに隣接する領域、遺伝子 U36の ORFに隣接する領域、遺伝子 U37の ORFに隣接する領域、遺伝子 U40の ORFに隣接する領域、遺伝子 U42の ORFに隣接する領域、遺伝子 U44の ORFに隣接する領域、遺伝子 U45の ORFに隣接する領域、遺伝子 U46の ORFに隣接する領域、遺伝子 U47の ORFに隣接する領域、遺伝子 U49の ORFに隣接する領域、遺伝子 U50の ORFに隣接する領域、遺伝子 U51の ORFに隣接する領域、遺伝子 U52の ORFに隣接する領域、遺伝子 U55の ORFに隣接する領域、遺伝子 U58の ORFに隣接する領域、遺伝子 U59の ORFに隣接する領域、遺伝子 U61の ORFに隣接する領域、遺伝子 U62の ORFに隣接する領域、遺伝子 U63の ORFに隣接する領域、遺伝子 U64の ORFに隣接する領域、遺伝子 U65の ORFに隣接する領域、遺伝子 U67の ORFに隣接する領域、遺伝子 U68の ORFに隣接する領域、遺伝子 U69の ORFに隣接する領域、遺伝子 U70の ORFに隣接する領域、遺伝子 U71の ORFに隣接する領域、遺伝子 U75の ORFに隣接する領域、遺伝子 U76の ORFに隣接する領域、遺伝子 U78の ORFに隣接する領域、遺伝子 U79の ORFに隣接する領域、遺伝子 U80の ORFに隣接する領域、遺伝子 U81の ORFに隣接する領域、遺伝子 U83の ORFに隣接する領域、遺伝子 U84の ORFに隣接する領域、遺伝子 U85の ORFに隣接する領域、遺伝子 U88の ORFに隣接する領域、遺伝子 U91の ORFに隣接する領域、遺伝子 U92の ORFに隣接する領域、遺伝子 U93の ORFに隣接する領域、遺伝子 HN2の ORFに隣接する領域、遺伝子 U94の ORFに隣接する領域、遺伝子 U95の ORFに隣接する領域、および遺伝子 U96の ORFに隣接する領域。

[51] 前記非必須領域が、 HHV— 6の遺伝子 U5の ORFに隣接する領域または HHV— 6 の遺伝子 U8の ORFに隣接する領域である、請求項 50に記載の方法。

[52] 前記 BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、請求項 43〖こ記載の方法。

[53] 前記 BACベクター配列が選択マーカーを含む、請求項 43に記載の方法。

[54] 前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、請求項 53に記載の方法。

[55] 前記選択マーカーが緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、請求項 53に記載の方法。

[56] 前記へルぺスウィルスゲノムが野生株由来である、請求項 43に記載の方法。

[57] 前記へルぺスウィルスゲノムが変異株由来である、請求項 43に記載の方法。

[58] 前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 7 KHR株由来である、請求項 37に記載の方法。

[59] 前記へルぺスウィルスゲノムが HHV—6A U1102株、または HHV— 6B HST株由来である、請求項 37に記載の方法。

[60] 前記 BACベクター配列が配列番号 401に記載の配列を有するベクターである、請求項 43に記載の方法。

[61] 請求項 43に記載の方法によって製造されたウィルス。

[62] 請求項 61に記載のウィルスを含有する薬学的組成物。

[63] ワクチンの形態である、請求項 62に記載の薬学的組成物。

[64] 請求項 19に記載のベクターに変異を導入する方法であって、以下の工程：

該ベクターを細菌宿主細胞に導入する工程；

ヘルぺスウィルスゲノムの一部力なるフラグメントを含むプラスミドベクターを該細菌宿主細胞に導入する工程であって、ここで、該フラグメントは少なくとも 1つの変異を有する、工程；該細菌宿主細胞を培養する工程；

を包含する、方法。

[65] 請求項 19に記載のベクターに変異を導入する方法であって、以下の工程：

該ベクターを細菌宿主細胞に導入する工程；

該細菌宿主細胞を培養する工程；

を包含する、方法。

[66] 細菌細胞内においてへルぺスウィルスゲノムと相同組換えし得る第 1のフラグメント、 BACベクター配列、および細菌細胞内にお!、てへルぺスウィルスゲノムと相同組換えし得る第 2のフラグメントを含む核酸カセットであって、ここで、該 BAC配列の両端の各々がそれぞれ第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントと連結する、核酸カセッ

[67] 前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが少なくとも lkbである、請求項 66に記載の核酸カセット。

[68] 前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが少なくとも 1. 5kbである、請求項 66 に記載の核酸カセット。

[69] 前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが少なくとも 2kbである、請求項 66に記載の核酸カセット。 [70] 前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが、ヘルぺスウィルスゲノムの配列に対して、少なくとも 80%同一である、請求項 66に記載の核酸カセット。

[71] 前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが、ヘルぺスウィルスゲノムの配列に対して、少なくとも 85%同一である、請求項 66に記載の核酸カセット。

[72] 前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが、ヘルぺスウィルスゲノムの配列に対して、少なくとも 90%同一である、請求項 66に記載の核酸カセット。

[73] 前記第 1のフラグメントおよび第 2のフラグメントが、ヘルぺスウィルスゲノムの配列に対して、少なくとも 95%同一である、請求項 66に記載の核酸カセット。

[74] 請求項 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメント力各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 7ゲノムの以下の領域からなる群力選択される領域由来である、核酸カセット：

請求項 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメント力各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 7ゲノムの以下の領域からなる群力選択される領域と少なくとも 80%同一である、核酸カセット：

請求項 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメント力各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 7ゲノムの以下の領域からなる群力選択される領域と少なくとも 85%同一である、核酸カセット：

請求項 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメント力各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 7ゲノムの以下の領域からなる群力選択される領域と少なくとも 90%同一である、核酸カセット：

請求項 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメント力各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 7ゲノムの以下の領域からなる群力選択される領域と少なくとも 95%同一である、核酸カセット：

請求項 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメント力各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 6ゲノムの以下の領域からなる群力選択される領域由来である、核酸カセット：

請求項 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメント力各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 6ゲノムの以下の領域からなる群力選択される領域と少なくとも 80%同一である、核酸カセット：

請求項 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメント力各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 6ゲノムの以下の領域からなる群力選択される領域と少なくとも 85%同一である、核酸カセット：

請求項 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメント力各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 6ゲノムの以下の領域からなる群力選択される領域と少なくとも 90%同一である、核酸カセット：

請求項 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメント力各々独立してヘルぺスウィルス HHV— 6ゲノムの以下の領域からなる群力選択される領域と少なくとも 95%同一である、核酸カセット：

[84] 請求項 66に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第 1および第 2のフラグメントが異なる領域に由来する、核酸カセット。

[85] 前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立して、 HHV—7の遺伝子 U24の ORF に隣接する領域または HHV - 7の遺伝子 U24aの ORFに隣接する領域由来である、請求項 66に記載の核酸カセット。

[86] 前記第 1および第 2のフラグメントが、各々独立して、 HHV— 6の遺伝子 U5の ORF に隣接する領域または HHV— 6の遺伝子 U8の ORFに隣接する領域である、請求項 66に記載の核酸カセット。

[87] 前記 BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、請求項 66〖こ記載の核酸カセット。

[88] 前記 BACベクター配列が選択マーカーを含む、請求項 66に記載の核酸カセット。

[89] 前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、請求項 88に記載の核酸カセット。

[90] 前記選択マーカーが緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、請求項 88に記載の核酸カセット。

[91] 前記へルぺスウィルスゲノムが野生株由来である、請求項 66に記載の核酸カセット。

[92] 前記へルぺスウィルスゲノムが変異株由来である、請求項 66に記載の核酸カセット。

[93] 前記へルぺスウィルスゲノムが HHV— 7 KHR株由来である、請求項 66に記載の核酸カセット。

[94] 前記へルぺスウィルスゲノムが HHV—6A U1102株、または HHV— 6B HST株由来である、請求項 66に記載の核酸カセット。

[95] 前記 BACベクター配列が配列番号 401に記載の核酸配列を有する、請求項 66に記載の核酸カセット。

[96] 配列番号 1に記載の核酸配列を有する、請求項 66に記載の核酸カセット。

[97] 請求項 4に記載の組換えへルぺスウィルスを含有する HIVの予防、処置、または予後のための薬学的組成物。

[98] 請求項 4に記載の組換えへルぺスウィルスを含有する HIVの予防のための薬学的組成物。

[99] 請求項 6に記載の組換えへルぺスウィルスを含有する HIVの予防、処置、または予後のための薬学的組成物。

[100] 請求項 6に記載の組換えへルぺスウィルスを含有する HIVの予防のための薬学的組成物。