JP2014166182A - 組換え水痘帯状疱疹ウイルス - Google Patents
組換え水痘帯状疱疹ウイルス Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014166182A JP2014166182A JP2014057800A JP2014057800A JP2014166182A JP 2014166182 A JP2014166182 A JP 2014166182A JP 2014057800 A JP2014057800 A JP 2014057800A JP 2014057800 A JP2014057800 A JP 2014057800A JP 2014166182 A JP2014166182 A JP 2014166182A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- orf
- region
- varicella
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
- A61K39/25—Varicella-zoster virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16761—Methods of inactivation or attenuation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/50—Vectors for producing vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2820/00—Vectors comprising a special origin of replication system
- C12N2820/55—Vectors comprising a special origin of replication system from bacteria
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【解決手段】水痘帯状疱疹ウイルスゲノム遺伝子と大腸菌人工染色体(BAC)ベクター配列とを含むベクター、及びベクターを含む細胞、並びに水痘帯状疱疹ウイルスゲノムと相同組換えし得るフラグメント、更にはBACベクター配列を含む核酸カセットを作成し、BACベクター配列を用いる単一ウイルス株からの組換え水痘帯状疱疹ウイルスワクチンの製造方法。
【選択図】なし
Description
evised 1993:WHO Technical Report Series,No.848,pp.22−38,1994)。このOka株は、典型的な水痘を呈した患児から、分離されたウイルス(Oka原株)を、ヒト胎児肺細胞を用いて34℃で12代、モルモット胎児細胞を用いて11代継代した後、ヒト二倍体細胞で数代継代して得られたものである。Oka原株は、強い病原性を有するのに対して、Okaワクチン株(Oka株)は、健常児に接種してもほとんど副作用は認められない。そのため、Oka株は、病原性のほとんどないワクチン株として有用である。
分離した水痘ウイルス新鮮野外株と上記Oka株に由来のワクチン株との間のウイルス学的相違の解析が必要となり、免疫学および遺伝子工学等を駆使した解析が、既に種々試みられている。例えば、水痘ウイルス株間での遺伝子構造やDNA塩基配列の違い(Jou
rnalof General Virology,59,660−668,1986;同前,67,1759−1816,1986)、制限酵素Pst Iサイトの有無(Jap
aneseJournal of Experimental Medicine,59,
233−237,1989)、PCR(Polymerase Chain Reaction)を用いるRFLP(RestrictionFragment Length Polymorphism)に基づく判定(Journal of Virology,66,1016−1020,1992)、上記PstIサイトの有無とRFLPとの組合わせ(Journal of Clinical Microbiology,33,658−6
60,1995)等による試行が報告されている。しかし、これらはいずれも、新鮮野外株とOka株に由来のワクチン株とを鑑別するための条件を提起しているものであるが、Oka株自体の遺伝的多様性の問題から、信頼性に欠け、確定的ではなく、そのため、ワクチンの品質管理において問題がある。更に、水痘ウイルスのgene14領域を用いる水痘ウイルスOka株の同定方法(米国特許第6,093,535号)や、gene62領域を用いる弱毒生水痘ワクチン用ウイルス株の同定方法(国際公開番号WO00/50603)等も知られているが、いずれの技術も、水痘ウイルスOka株(強毒親株)、これより派生したワクチン株(弱毒Oka株)、及びOka株以外の水痘ウイルス株の三者間の相違の検定を可能にしたものの、弱毒生水痘ワクチンの品質管理及び品質保証のための製剤基準としては必ずしも十分ではない。
1.組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
2.BACベクター配列を含む、項目1に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
3.水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの非必須領域内に前記BACベクター配列の少なくとも一部が挿入されている、項目2に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
4.前記非必須領域が、以下の領域からなる群から選択される、項目3に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス:
遺伝子7のORF内の領域、遺伝子8のORF内の領域、遺伝子9のORF内の領域、遺伝子10のORF内の領域、遺伝子11のORF内の領域、遺伝子12のORF内の領域、遺伝子13のORF内の領域、遺伝子14のORF内の領域、遺伝子15のORF内の領域、遺伝子17のORF内の領域、遺伝子18のORF内の領域、遺伝子19のORF内の領域、遺伝子38のORF内の領域、遺伝子39のORF内の領域、遺伝子46のORF内の領域、遺伝子47のORF内の領域、遺伝子48のORF内の領域、遺伝子49のORF内の領域、遺伝子50のORF内の領域、遺伝子56のORF内の領域、遺伝子57のORF内の領域、遺伝子58のORF内の領域、遺伝子59のORF内の領域、遺伝子61のORF内の領域、遺伝子63のORF内の領域、遺伝子64のORF内の領域、遺伝子65のORF内の領域、遺伝子66のORF内の領域、遺伝子67のORF内の領域、遺伝子68のORF内の領域、遺伝子69のORF内の領域、遺伝子70のORF内の領域、遺伝子7のORFに隣接する領域、遺伝子8のORFに隣接する領域、遺伝子9のORFに隣接する領域、遺伝子10のORFに隣接する領域、遺伝子11のORFに隣接する領域、遺伝子12のORFに隣接する領域、遺伝子13のORFに隣接する領域、遺伝子14のORFに隣接する領域、遺伝子15のORFに隣接する領域、遺伝子17のORFに隣接する領域、遺伝子18のORFに隣接する領域、遺伝子19のORFに隣接する領域、遺伝子38のORFに隣接する領域、遺伝子39のORFに隣接する領域、遺伝子46のORFに隣接する領域、遺伝子47のORFに隣接する領域、遺伝子48のORFに隣接する領域、遺伝子49のORFに隣接する領域、遺伝子50のORFに隣接する領域、遺伝子56のORFに隣接する領域、遺伝子57のORFに隣接する領域、遺伝子58のORFに隣接する領域、遺伝子59のORFに隣接する領域、遺伝子61のORFに隣接する領域、遺伝子63のORFに隣接する領域、遺伝子64のORFに隣接する領域、遺伝子65のORFに隣接する領域、遺伝子66のORFに隣接する領域、遺伝子67のORFに隣接する領域、遺伝子68のORFに隣接する領域、遺伝子69のORFに隣接する領域、および遺伝子70のORFに隣接する領域。
5.前記非必須領域が、遺伝子11のORFに隣接する領域または遺伝子12のORFに
隣接する領域である、項目4に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
6.水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの遺伝子62のORF内の領域に前記BACベクター配列の少なくとも一部が挿入されている、項目2に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
7.前記BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、項目2に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
8.前記BACベクター配列が選択マーカーを含む、項目2に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
9.前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、項目8に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
10.前記選択マーカーがグリーン蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、項目2に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
11.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムが野生株由来である、項目2に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
12.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムが変異株由来である、項目2に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
13.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムがOkaワクチン株由来である、項目2に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
14.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムが遺伝子62および遺伝子6に変異を有する、項目2に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
15.前記遺伝子62が、配列番号5の塩基配列において、少なくとも以下(a)〜(d)の塩基置換:
(a)2110番塩基がG;
(b)3100番塩基がG;
(c)3818番塩基がC;および
(d)4006番塩基がG、
ならびに前記遺伝子6が、配列番号8の塩基配列において、少なくとも5745番塩基がGである塩基置換、
を有する、項目14に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
16.前記BACベクター配列が配列番号7に記載の配列を有するベクターである、項目2に記載の組換え水痘帯状疱疹ウイルス。
17.項目1に記載のウイルスを含有する薬学的組成物。
18.ワクチンの形態である、項目17に記載の薬学的組成物。
19.遺伝子62以外の水痘帯状疱疹ウイルスゲノム必須遺伝子とBACベクター配列とを含む、ベクター。
20.さらに遺伝子62を含む、項目19に記載のベクター。
21.哺乳動物細胞に導入された場合、該哺乳動物細胞が水痘帯状疱疹ウイルスを産生する、項目19に記載のベクター。
22.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノム由来の配列が前記BACベクター配列と連結する部位が、該水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの非必須領域内である、項目19に記載のベクター。
23.前記非必須領域が、以下の領域からなる群から選択される、項目22に記載のベクター:
遺伝子7のORF内の領域、遺伝子8のORF内の領域、遺伝子9のORF内の領域、遺伝子10のORF内の領域、遺伝子11のORF内の領域、遺伝子12のORF内の領域、遺伝子13のORF内の領域、遺伝子14のORF内の領域、遺伝子15のORF内の領域、遺伝子17のORF内の領域、遺伝子18のORF内の領域、遺伝子19のORF内の領域、遺伝子38のORF内の領域、遺伝子39のORF内の領域、遺伝子46のORF内の領域、遺伝子47のORF内の領域、遺伝子48のORF内の領域、遺伝子49のORF内の領域、遺伝子50のORF内の領域、遺伝子56のORF内の領域、遺伝子57のORF内の領域、遺伝子58のORF内の領域、遺伝子59のORF内の領域、
遺伝子61のORF内の領域、遺伝子63のORF内の領域、遺伝子64のORF内の領域、遺伝子65のORF内の領域、遺伝子66のORF内の領域、遺伝子67のORF内の領域、遺伝子68のORF内の領域、遺伝子69のORF内の領域、遺伝子70のORF内の領域、遺伝子7のORFに隣接する領域、遺伝子8のORFに隣接する領域、遺伝子9のORFに隣接する領域、遺伝子10のORFに隣接する領域、遺伝子11のORFに隣接する領域、遺伝子12のORFに隣接する領域、遺伝子13のORFに隣接する領域、遺伝子14のORFに隣接する領域、遺伝子15のORFに隣接する領域、遺伝子17のORFに隣接する領域、遺伝子18のORFに隣接する領域、遺伝子19のORFに隣接する領域、遺伝子38のORFに隣接する領域、遺伝子39のORFに隣接する領域、遺伝子46のORFに隣接する領域、遺伝子47のORFに隣接する領域、遺伝子48のORFに隣接する領域、遺伝子49のORFに隣接する領域、遺伝子50のORFに隣接する領域、遺伝子56のORFに隣接する領域、遺伝子57のORFに隣接する領域、遺伝子58のORFに隣接する領域、遺伝子59のORFに隣接する領域、遺伝子61のORFに隣接する領域、遺伝子63のORFに隣接する領域、遺伝子64のORFに隣接する領域、遺伝子65のORFに隣接する領域、遺伝子66のORFに隣接する領域、遺伝子67のORFに隣接する領域、遺伝子68のORFに隣接する領域、遺伝子69のORFに隣接する領域、および遺伝子70のORFに隣接する領域。
24.前記連結する部位が、遺伝子11のORFに隣接する領域または遺伝子12のORFに隣接する領域である、項目23に記載のベクター。
25.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノム由来の配列が前記BACベクター配列と連結する部位が、水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの遺伝子62のORF内の領域内である、項目19に記載のベクター。
26.前記BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、項目19に記載のベクター。
27.前記BACベクター配列が選択マーカーを含む、項目19に記載のベクター。
28.前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、項目27に記載のベクター。
29.前記選択マーカーがグリーン蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、項目27に記載のベクター。
30.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムが野生株由来である、項目19に記載のベクター。
31.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムが変異株由来である、項目19に記載のベクター。
32.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムがOkaワクチン株由来である、項目19に記載のベクター。
33.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムが遺伝子62および遺伝子6に変異を有する、項目19に記載のベクター。
34.前記遺伝子62が、配列番号5の塩基配列において、少なくとも以下(a)〜(d)の塩基置換:
(a)2110番塩基がG;
(b)3100番塩基がG;
(c)3818番塩基がC;および
(d)4006番塩基がG、
ならびに前記遺伝子6が、配列番号8の塩基配列において、少なくとも5745番塩基がGである塩基置換、
を有する、項目33に記載のベクター。
35.前記BACベクター配列が配列番号7に記載の配列を有するベクターである、項目19に記載のベクター。
36.項目19に記載のベクターを含む、細胞。
37.細菌である、項目36に記載の細胞。
38.E.coliである、項目37に記載の細菌。
39.哺乳動物細胞である、項目36に記載の細胞。
40.ヒト由来の細胞である、項目39に記載の哺乳動物細胞。
41.項目39に記載の哺乳動物細胞によって産生された、ウイルス。
42.項目41に記載のウイルスを含有する薬学的組成物。
43.ワクチンの形態である、項目42に記載の薬学的組成物。
44.組換え水痘帯状疱疹ウイルスの製造方法であって、以下の工程:
遺伝子62以外の水痘帯状疱疹ウイルスゲノム必須遺伝子とBACベクター配列とを含むベクターを、哺乳動物宿主細胞に導入する工程;および
該哺乳動物宿主細胞を培養して、組換え水痘帯状疱疹ウイルスを産生させる工程、
を包含する、方法。
45.前記ベクターがさらに遺伝子62を含む、項目44に記載の方法。
46.前記哺乳動物宿主細胞がヒト由来の細胞である、項目44に記載の方法。
47.前記BACベクター配列が少なくとも2つの組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、項目44に記載の方法。
48.項目47に記載の方法であって、前記2つの組換えタンパク質依存性組換え配列間での組換えを起こす工程をさらに包含する、方法。
49.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノム由来の配列が前記BACベクター配列と連結する部位が、該水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの非必須領域内である、項目44に記載の方法。50.前記非必須領域が、以下の領域からなる群から選択される、項目49に記載の方法:
遺伝子7のORF内の領域、遺伝子8のORF内の領域、遺伝子9のORF内の領域、遺伝子10のORF内の領域、遺伝子11のORF内の領域、遺伝子12のORF内の領域、遺伝子13のORF内の領域、遺伝子14のORF内の領域、遺伝子15のORF内の領域、遺伝子17のORF内の領域、遺伝子18のORF内の領域、遺伝子19のORF内の領域、遺伝子38のORF内の領域、遺伝子39のORF内の領域、遺伝子46のORF内の領域、遺伝子47のORF内の領域、遺伝子48のORF内の領域、遺伝子49のORF内の領域、遺伝子50のORF内の領域、遺伝子56のORF内の領域、遺伝子57のORF内の領域、遺伝子58のORF内の領域、遺伝子59のORF内の領域、遺伝子61のORF内の領域、遺伝子63のORF内の領域、遺伝子64のORF内の領域、遺伝子65のORF内の領域、遺伝子66のORF内の領域、遺伝子67のORF内の領域、遺伝子68のORF内の領域、遺伝子69のORF内の領域、遺伝子70のORF内の領域、遺伝子7のORFに隣接する領域、遺伝子8のORFに隣接する領域、遺伝子9のORFに隣接する領域、遺伝子10のORFに隣接する領域、遺伝子11のORFに隣接する領域、遺伝子12のORFに隣接する領域、遺伝子13のORFに隣接する領域、遺伝子14のORFに隣接する領域、遺伝子15のORFに隣接する領域、遺伝子17のORFに隣接する領域、遺伝子18のORFに隣接する領域、遺伝子19のORFに隣接する領域、遺伝子38のORFに隣接する領域、遺伝子39のORFに隣接する領域、遺伝子46のORFに隣接する領域、遺伝子47のORFに隣接する領域、遺伝子48のORFに隣接する領域、遺伝子49のORFに隣接する領域、遺伝子50のORFに隣接する領域、遺伝子56のORFに隣接する領域、遺伝子57のORFに隣接する領域、遺伝子58のORFに隣接する領域、遺伝子59のORFに隣接する領域、遺伝子61のORFに隣接する領域、遺伝子63のORFに隣接する領域、遺伝子64のORFに隣接する領域、遺伝子65のORFに隣接する領域、遺伝子66のORFに隣接する領域、遺伝子67のORFに隣接する領域、遺伝子68のORFに隣接する領域、遺伝子69のORFに隣接する領域、および遺伝子70のORFに隣接する領域。
51.前記非必須領域が、遺伝子11のORFに隣接する領域または遺伝子12のORFに隣接する領域である、項目50に記載の方法。
52.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノム由来の配列が前記BACベクター配列と連結する部位が、該水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの遺伝子62のORF内の領域である、項目44に記載の方法。
53.前記BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、項目44に記載の方法。
54.前記BACベクター配列が選択マーカーを含む、項目44に記載の方法。
55.前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、項目54に記載の方法。
56.前記選択マーカーがグリーン蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、項目54に記載の方法。
57.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムが野生株由来である、項目44に記載の方法。
58.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムが変異株由来である、項目44に記載の方法。
59.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムがOkaワクチン株由来である、項目44に記載の方法。
60.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムが遺伝子62および遺伝子6に変異を有する、項目44に記載の方法。
61.前記遺伝子62が、配列番号5の塩基配列において、少なくとも以下(a)〜(d)の塩基置換:
(a)2110番塩基がG;
(b)3100番塩基がG;
(c)3818番塩基がC;および
(d)4006番塩基がG、
ならびに前記遺伝子6が、配列番号8の塩基配列において、少なくとも5745番塩基がGである塩基置換、
を有する、項目60に記載の方法。
62.前記BACベクター配列が配列番号7に記載の配列を有するベクターである、項目44に記載の方法。
63.項目44に記載の方法によって製造されたウイルス。
64.項目63に記載のウイルスを含有する薬学的組成物。
65.ワクチンの形態である、項目64に記載の薬学的組成物。
66.項目19に記載のベクターに変異を導入する方法であって、以下の工程:
該ベクターを細菌宿主細胞に導入する工程;
水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの一部からなるフラグメントを含むプラスミドベクターを該細菌宿主細胞に導入する工程であって、ここで、該フラグメントは少なくとも1つの変異を有する、工程;
該細菌宿主細胞を培養する工程;
該培養した細菌宿主細胞から、BACベクター配列を有するベクターを単離する工程、を包含する、方法。
67.項目19に記載のベクターに変異を導入する方法であって、以下の工程:
該ベクターを細菌宿主細胞に導入する工程;
水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの一部からなる第1のフラグメントを含む第1のプラスミドベクターを該細菌宿主細胞に導入する工程であって、ここで、該第1のフラグメントは少なくとも1つの変異を有する、工程;
水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの一部からなる第2のフラグメントを含む第2のプラスミドベクターを該細菌宿主細胞に導入する工程であって、ここで、該第2のフラグメントは少なくとも1つの変異を有し、そして該第2のフラグメントは該第1のフラグメントとは異なる、工程;
該細菌宿主細胞を培養する工程;
該培養した細菌宿主細胞から、BACベクター配列を有するベクターを単離する工程、を包含する、方法。
68.細菌細胞内において水痘帯状疱疹ウイルスゲノムと相同組換えし得る第1のフラグメント、BACベクター配列、および細菌細胞内において水痘帯状疱疹ウイルスゲノムと相同組換えし得る第2のフラグメントを含む核酸カセットであって、ここで、該BAC配列の両端の各々がそれぞれ第1のフラグメントおよび第2のフラグメントと連結する、核
酸カセット。
69.前記第1のフラグメントおよび第2のフラグメントが少なくとも1kbである、項目68に記載の核酸カセット。
70.前記第1のフラグメントおよび第2のフラグメントが少なくとも1.5kbである、項目68に記載の核酸カセット。
71.前記第1のフラグメントおよび第2のフラグメントが少なくとも2kbである、項目68に記載の核酸カセット。
72.前記第1のフラグメントおよび第2のフラグメントが、水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの配列に対して、少なくとも80%同一である、項目68に記載の核酸カセット。
73.前記第1のフラグメントおよび第2のフラグメントが、水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの配列に対して、少なくとも85%同一である、項目68に記載の核酸カセット。
74.前記第1のフラグメントおよび第2のフラグメントが、水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの配列に対して、少なくとも90%同一である、項目68に記載の核酸カセット。
75.前記第1のフラグメントおよび第2のフラグメントが、水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの配列に対して、少なくとも95%同一である、項目68に記載の核酸カセット。
76.項目68に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第1および第2のフラグメントが、各々独立して水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの以下の領域からなる群から選択される領域由来である、核酸カセット:
遺伝子7のORF内の領域、遺伝子8のORF内の領域、遺伝子9のORF内の領域、遺伝子10のORF内の領域、遺伝子11のORF内の領域、遺伝子12のORF内の領域、遺伝子13のORF内の領域、遺伝子14のORF内の領域、遺伝子15のORF内の領域、遺伝子17のORF内の領域、遺伝子18のORF内の領域、遺伝子19のORF内の領域、遺伝子38のORF内の領域、遺伝子39のORF内の領域、遺伝子46のORF内の領域、遺伝子47のORF内の領域、遺伝子48のORF内の領域、遺伝子49のORF内の領域、遺伝子50のORF内の領域、遺伝子56のORF内の領域、遺伝子57のORF内の領域、遺伝子58のORF内の領域、遺伝子59のORF内の領域、遺伝子61のORF内の領域、遺伝子62のORF内の領域、遺伝子63のORF内の領域、遺伝子64のORF内の領域、遺伝子65のORF内の領域、遺伝子66のORF内の領域、遺伝子67のORF内の領域、遺伝子68のORF内の領域、遺伝子69のORF内の領域、遺伝子70のORF内の領域、遺伝子7のORFに隣接する領域、遺伝子8のORFに隣接する領域、遺伝子9のORFに隣接する領域、遺伝子10のORFに隣接する領域、遺伝子11のORFに隣接する領域、遺伝子12のORFに隣接する領域、遺伝子13のORFに隣接する領域、遺伝子14のORFに隣接する領域、遺伝子15のORFに隣接する領域、遺伝子17のORFに隣接する領域、遺伝子18のORFに隣接する領域、遺伝子19のORFに隣接する領域、遺伝子38のORFに隣接する領域、遺伝子39のORFに隣接する領域、遺伝子46のORFに隣接する領域、遺伝子47のORFに隣接する領域、遺伝子48のORFに隣接する領域、遺伝子49のORFに隣接する領域、遺伝子50のORFに隣接する領域、遺伝子56のORFに隣接する領域、遺伝子57のORFに隣接する領域、遺伝子58のORFに隣接する領域、遺伝子59のORFに隣接する領域、遺伝子61のORFに隣接する領域、遺伝子62のORFに隣接する領域、遺伝子63のORFに隣接する領域、遺伝子64のORFに隣接する領域、遺伝子65のORFに隣接する領域、遺伝子66のORFに隣接する領域、遺伝子67のORFに隣接する領域、遺伝子68のORFに隣接する領域、遺伝子69のORFに隣接する領域、および遺伝子70のORFに隣接する領域。
77.項目68に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第1および第2のフラグメントが、各々独立して水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの以下の領域からなる群から選択される領域と少なくとも80%同一である、核酸カセット:
遺伝子7のORF内の領域、遺伝子8のORF内の領域、遺伝子9のORF内の領域、遺伝子10のORF内の領域、遺伝子11のORF内の領域、遺伝子12のORF内の領域、遺伝子13のORF内の領域、遺伝子14のORF内の領域、遺伝子15のORF内
の領域、遺伝子17のORF内の領域、遺伝子18のORF内の領域、遺伝子19のORF内の領域、遺伝子38のORF内の領域、遺伝子39のORF内の領域、遺伝子46のORF内の領域、遺伝子47のORF内の領域、遺伝子48のORF内の領域、遺伝子49のORF内の領域、遺伝子50のORF内の領域、遺伝子56のORF内の領域、遺伝子57のORF内の領域、遺伝子58のORF内の領域、遺伝子59のORF内の領域、遺伝子61のORF内の領域、遺伝子62のORF内の領域、遺伝子63のORF内の領域、遺伝子64のORF内の領域、遺伝子65のORF内の領域、遺伝子66のORF内の領域、遺伝子67のORF内の領域、遺伝子68のORF内の領域、遺伝子69のORF内の領域、遺伝子70のORF内の領域、遺伝子7のORFに隣接する領域、遺伝子8のORFに隣接する領域、遺伝子9のORFに隣接する領域、遺伝子10のORFに隣接する領域、遺伝子11のORFに隣接する領域、遺伝子12のORFに隣接する領域、遺伝子13のORFに隣接する領域、遺伝子14のORFに隣接する領域、遺伝子15のORFに隣接する領域、遺伝子17のORFに隣接する領域、遺伝子18のORFに隣接する領域、遺伝子19のORFに隣接する領域、遺伝子38のORFに隣接する領域、遺伝子39のORFに隣接する領域、遺伝子46のORFに隣接する領域、遺伝子47のORFに隣接する領域、遺伝子48のORFに隣接する領域、遺伝子49のORFに隣接する領域、遺伝子50のORFに隣接する領域、遺伝子56のORFに隣接する領域、遺伝子57のORFに隣接する領域、遺伝子58のORFに隣接する領域、遺伝子59のORFに隣接する領域、遺伝子61のORFに隣接する領域、遺伝子62のORFに隣接する領域、遺伝子63のORFに隣接する領域、遺伝子64のORFに隣接する領域、遺伝子65のORFに隣接する領域、遺伝子66のORFに隣接する領域、遺伝子67のORFに隣接する領域、遺伝子68のORFに隣接する領域、遺伝子69のORFに隣接する領域、および遺伝子70のORFに隣接する領域。
78.項目68に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第1および第2のフラグメントが、各々独立して水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの以下の領域からなる群から選択される領域と少なくとも85%同一である、核酸カセット:
遺伝子7のORF内の領域、遺伝子8のORF内の領域、遺伝子9のORF内の領域、遺伝子10のORF内の領域、遺伝子11のORF内の領域、遺伝子12のORF内の領域、遺伝子13のORF内の領域、遺伝子14のORF内の領域、遺伝子15のORF内の領域、遺伝子17のORF内の領域、遺伝子18のORF内の領域、遺伝子19のORF内の領域、遺伝子38のORF内の領域、遺伝子39のORF内の領域、遺伝子46のORF内の領域、遺伝子47のORF内の領域、遺伝子48のORF内の領域、遺伝子49のORF内の領域、遺伝子50のORF内の領域、遺伝子56のORF内の領域、遺伝子57のORF内の領域、遺伝子58のORF内の領域、遺伝子59のORF内の領域、遺伝子61のORF内の領域、遺伝子62のORF内の領域、遺伝子63のORF内の領域、遺伝子64のORF内の領域、遺伝子65のORF内の領域、遺伝子66のORF内の領域、遺伝子67のORF内の領域、遺伝子68のORF内の領域、遺伝子69のORF内の領域、遺伝子70のORF内の領域、遺伝子7のORFに隣接する領域、遺伝子8のORFに隣接する領域、遺伝子9のORFに隣接する領域、遺伝子10のORFに隣接する領域、遺伝子11のORFに隣接する領域、遺伝子12のORFに隣接する領域、遺伝子13のORFに隣接する領域、遺伝子14のORFに隣接する領域、遺伝子15のORFに隣接する領域、遺伝子17のORFに隣接する領域、遺伝子18のORFに隣接する領域、遺伝子19のORFに隣接する領域、遺伝子38のORFに隣接する領域、遺伝子39のORFに隣接する領域、遺伝子46のORFに隣接する領域、遺伝子47のORFに隣接する領域、遺伝子48のORFに隣接する領域、遺伝子49のORFに隣接する領域、遺伝子50のORFに隣接する領域、遺伝子56のORFに隣接する領域、遺伝子57のORFに隣接する領域、遺伝子58のORFに隣接する領域、遺伝子59のORFに隣接する領域、遺伝子61のORFに隣接する領域、遺伝子62のORFに隣接する領域、遺伝子63のORFに隣接する領域、遺伝子64のORFに隣接する領域、遺伝子65のORFに隣接する領域、遺伝子66のORFに隣接する領域、遺伝子67のORFに
隣接する領域、遺伝子68のORFに隣接する領域、遺伝子69のORFに隣接する領域、および遺伝子70のORFに隣接する領域。
79.項目68に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第1および第2のフラグメントが、各々独立して水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの以下の領域からなる群から選択される領域と少なくとも90%同一である、核酸カセット:
遺伝子7のORF内の領域、遺伝子8のORF内の領域、遺伝子9のORF内の領域、遺伝子10のORF内の領域、遺伝子11のORF内の領域、遺伝子12のORF内の領域、遺伝子13のORF内の領域、遺伝子14のORF内の領域、遺伝子15のORF内の領域、遺伝子17のORF内の領域、遺伝子18のORF内の領域、遺伝子19のORF内の領域、遺伝子38のORF内の領域、遺伝子39のORF内の領域、遺伝子46のORF内の領域、遺伝子47のORF内の領域、遺伝子48のORF内の領域、遺伝子49のORF内の領域、遺伝子50のORF内の領域、遺伝子56のORF内の領域、遺伝子57のORF内の領域、遺伝子58のORF内の領域、遺伝子59のORF内の領域、遺伝子61のORF内の領域、遺伝子62のORF内の領域、遺伝子63のORF内の領域、遺伝子64のORF内の領域、遺伝子65のORF内の領域、遺伝子66のORF内の領域、遺伝子67のORF内の領域、遺伝子68のORF内の領域、遺伝子69のORF内の領域、遺伝子70のORF内の領域、遺伝子7のORFに隣接する領域、遺伝子8のORFに隣接する領域、遺伝子9のORFに隣接する領域、遺伝子10のORFに隣接する領域、遺伝子11のORFに隣接する領域、遺伝子12のORFに隣接する領域、遺伝子13のORFに隣接する領域、遺伝子14のORFに隣接する領域、遺伝子15のORFに隣接する領域、遺伝子17のORFに隣接する領域、遺伝子18のORFに隣接する領域、遺伝子19のORFに隣接する領域、遺伝子38のORFに隣接する領域、遺伝子39のORFに隣接する領域、遺伝子46のORFに隣接する領域、遺伝子47のORFに隣接する領域、遺伝子48のORFに隣接する領域、遺伝子49のORFに隣接する領域、遺伝子50のORFに隣接する領域、遺伝子56のORFに隣接する領域、遺伝子57のORFに隣接する領域、遺伝子58のORFに隣接する領域、遺伝子59のORFに隣接する領域、遺伝子61のORFに隣接する領域、遺伝子62のORFに隣接する領域、遺伝子63のORFに隣接する領域、遺伝子64のORFに隣接する領域、遺伝子65のORFに隣接する領域、遺伝子66のORFに隣接する領域、遺伝子67のORFに隣接する領域、遺伝子68のORFに隣接する領域、遺伝子69のORFに隣接する領域、および遺伝子70のORFに隣接する領域。
80.項目68に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第1および第2のフラグメントが、各々独立して水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの以下の領域からなる群から選択される領域と少なくとも95%同一である、核酸カセット:
遺伝子7のORF内の領域、遺伝子8のORF内の領域、遺伝子9のORF内の領域、遺伝子10のORF内の領域、遺伝子11のORF内の領域、遺伝子12のORF内の領域、遺伝子13のORF内の領域、遺伝子14のORF内の領域、遺伝子15のORF内の領域、遺伝子17のORF内の領域、遺伝子18のORF内の領域、遺伝子19のORF内の領域、遺伝子38のORF内の領域、遺伝子39のORF内の領域、遺伝子46のORF内の領域、遺伝子47のORF内の領域、遺伝子48のORF内の領域、遺伝子49のORF内の領域、遺伝子50のORF内の領域、遺伝子56のORF内の領域、遺伝子57のORF内の領域、遺伝子58のORF内の領域、遺伝子59のORF内の領域、遺伝子61のORF内の領域、遺伝子62のORF内の領域、遺伝子63のORF内の領域、遺伝子64のORF内の領域、遺伝子65のORF内の領域、遺伝子66のORF内の領域、遺伝子67のORF内の領域、遺伝子68のORF内の領域、遺伝子69のORF内の領域、遺伝子70のORF内の領域、遺伝子7のORFに隣接する領域、遺伝子8のORFに隣接する領域、遺伝子9のORFに隣接する領域、遺伝子10のORFに隣接する領域、遺伝子11のORFに隣接する領域、遺伝子12のORFに隣接する領域、遺伝子13のORFに隣接する領域、遺伝子14のORFに隣接する領域、遺伝子15のORFに隣接する領域、遺伝子17のORFに隣接する領域、遺伝子18のORFに隣接す
る領域、遺伝子19のORFに隣接する領域、遺伝子38のORFに隣接する領域、遺伝子39のORFに隣接する領域、遺伝子46のORFに隣接する領域、遺伝子47のORFに隣接する領域、遺伝子48のORFに隣接する領域、遺伝子49のORFに隣接する領域、遺伝子50のORFに隣接する領域、遺伝子56のORFに隣接する領域、遺伝子57のORFに隣接する領域、遺伝子58のORFに隣接する領域、遺伝子59のORFに隣接する領域、遺伝子61のORFに隣接する領域、遺伝子62のORFに隣接する領域、遺伝子63のORFに隣接する領域、遺伝子64のORFに隣接する領域、遺伝子65のORFに隣接する領域、遺伝子66のORFに隣接する領域、遺伝子67のORFに隣接する領域、遺伝子68のORFに隣接する領域、遺伝子69のORFに隣接する領域、および遺伝子70のORFに隣接する領域。
81.項目68に記載の核酸カセットであって、ここで、前記第1および第2のフラグメントが異なる領域に由来する、核酸カセット。
82.前記第1および第2のフラグメントが、各々独立して、遺伝子11のORFに隣接する領域または遺伝子12のORFに隣接する領域由来である、項目72に記載の核酸カセット。
83.前記BACベクター配列が組換えタンパク質依存性組換え配列を含む、項目68に記載の核酸カセット。
84.前記BACベクター配列が選択マーカーを含む、項目68に記載の核酸カセット。85.前記選択マーカーが薬剤選択マーカーである、項目84に記載の核酸カセット。
86.前記選択マーカーがグリーン蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、項目68に記載の核酸カセット。
87.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムが野生株由来である、項目68に記載の核酸カセット。
88.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムが変異株由来である、項目68に記載の核酸カセット。
89.前記水痘帯状疱疹ウイルスゲノムがOkaワクチン株由来である、項目68に記載の核酸カセット。
90.前記BACベクター配列が配列番号7に記載の核酸配列を有する、項目68に記載の核酸カセット。
91.配列番号2に記載の核酸配列を有する、項目68に記載の核酸カセット。
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。
ORF番号 読み枠の方向 ゲノム上の位置 アミノ酸残基数
ORF1 3’→5’方向 589〜915 アミノ酸1−108
ORF2 5’→3’方向 1134〜1850 アミノ酸1−238
ORF3 3’→5’方向 1908〜2447 アミノ酸1−179
ORF4 3’→5’方向 2783〜4141 アミノ酸1−452
ORF5 3’→5’方向 4252〜5274 アミノ酸1−340
ORF6 3’→5’方向 5326〜8577 アミノ酸1−1083ORF7 5’→3’方向 8607〜9386 アミノ酸1−259
ORF8 3’→5’方向 9477〜10667 アミノ酸1−396
ORF9 5’→3’方向 11009〜11917 アミノ酸1−302
ORF9A 5’→3’方向 10642〜10902 アミノ酸1−87
ORF10 5’→3’方向 12160〜13392 アミノ酸1−410
ORF11 5’→3’方向 13590〜16049 アミノ酸1−819
ORF12 5’→3’方向 16214〜18199 アミノ酸1−661
ORF13 5’→3’方向 18441〜19346 アミノ酸1−301
ORF14 3’→5’方向 19431〜21113 アミノ酸1−560
ORF15 3’→5’方向 21258〜22478 アミノ酸1−406
ORF16 3’→5’方向 22568〜23794 アミノ酸1−408
ORF17 5’→3’方向 24149〜25516 アミノ酸1−455
ORF18 3’→5’方向 25573〜26493 アミノ酸1−306
ORF19 3’→5’方向 26518〜28845 アミノ酸1−775
ORF20 3’→5’方向 29024〜30475 アミノ酸1−483
ORF21 5’→3’方向 30759〜33875 アミノ酸1−1038ORF22 5’→3’方向 34083〜42374 アミノ酸1−2763ORF23 3’→5’方向 42431〜43138 アミノ酸1−235
ORF24 3’→5’方向 43212〜44021 アミノ酸1−269
ORF25 3’→5’方向 44148〜44618 アミノ酸1−156
ORF26 5’→3’方向 44506〜46263 アミノ酸1−585
ORF27 5’→3’方向 46127〜47128 アミノ酸1−333
ORF28 3’→5’方向 47052〜50636 アミノ酸1−1194ORF29 5’→3’方向 50857〜54471 アミノ酸1−1204ORF30 5’→3’方向 54651〜56963 アミノ酸1−770
ORF31 5’→3’方向 57008〜59614 アミノ酸1−868
ORF32 5’→3’方向 59766〜60197 アミノ酸1−143
ORF33 3’→5’方向 60321〜62138 アミノ酸1−605
ORF33.5 3’→5’方向 60321〜61229 アミノ酸1−301
ORF34 3’→5’方向 62171〜63910 アミノ酸1−579
ORF35 3’→5’方向 63977〜64753 アミノ酸1−258
ORF36 5’→3’方向 64807〜65832 アミノ酸1−341
ORF37 5’→3’方向 66074〜68599 アミノ酸1−841
ORF38 3’→5’方向 68668〜70293 アミノ酸1−541
ORF39 5’→3’方向 70633〜71355 アミノ酸1−240
ORF40 5’→3’方向 71540〜75730 アミノ酸1−1396ORF41 5’→3’方向 75847〜76797 アミノ酸1−316
ORF42+45 3’→5’方向
76851〜78038および81538〜82593 アミノ酸1−747
ORF43 5’→3’方向 78170〜80200 アミノ酸1−676
ORF44 5’→3’方向 80360〜81451 アミノ酸1−363
ORF46 5’→3’方向 82719〜83318 アミノ酸1−199
ORF47 5’→3’方向 83168〜84700 アミノ酸1−510
ORF48 5’→3’方向 84667〜86322 アミノ酸1−551
ORF49 5’→3’方向 86226〜86471 アミノ酸1−81
ORF50 3’→5’方向 86575〜87882 アミノ酸1−435
ORF51 5’→3’方向 87881〜90388 アミノ酸1−835
ORF52 5’→3’方向 90493〜92808 アミノ酸1−771
ORF53 3’→5’方向 92855〜93850 アミノ酸1−331
ORF54 3’→5’方向 93675〜95984 アミノ酸1−769
ORF55 5’→3’方向 95996〜98641 アミノ酸1−881
ORF56 5’→3’方向 98568〜99302 アミノ酸1−244
ORF57 3’→5’方向 99411〜99626 アミノ酸1−71
ORF58 3’→5’方向 99607〜100272 アミノ酸1−221
ORF59 3’→5’方向 100302〜101219 アミノ酸1−305
ORF60 3’→5’方向 101170〜101649 アミノ酸1−159
ORF61 3’→5’方向 103082〜104485 アミノ酸1−467
ORF62 3’→5’方向 105201〜109133 アミノ酸1−1310ORF63 5’→3’方向 110581〜111417 アミノ酸1−278
ORF64 5’→3’方向 111565〜112107 アミノ酸1−180
ORF65 3’→5’方向 112332〜112640 アミノ酸1−102
ORF66 5’→3’方向 113037〜114218 アミノ酸1−393
ORF67 5’→3’方向 114496〜115560 アミノ酸1−354
ORF68 5’→3’方向 115808〜117679 アミノ酸1−623
ORF69 3’→5’方向 117790〜118332 アミノ酸1−180
ORF70 3’→5’方向 118480〜119316 アミノ酸1−278
ORF71 5’→3’方向 120764〜124696 アミノ酸1−1310上記の表で、「5’→3’方向」とは、ORFが配列番号5の核酸配列と同一の方向にあることを示し、「3’→5’方向」とは、ORFが配列番号5の核酸配列と逆の方向にあることを示す。上記ORFの核酸配列および/またはアミノ酸配列と相同な配列を同定することによって、当業者は、Dumas株以外の株由来のゲノム中のORFを同定することを容易になし得る。
子62において、少なくとも以下(a)〜(d)の塩基置換:
(a)2110番塩基がG;
(b)3100番塩基がG;
(c)3818番塩基がC;および
(d)4006番塩基がG、
ならびに配列番号8に記載の遺伝子6において、少なくとも5745番塩基がGである塩基置換、
を有する水痘帯状疱疹ウイルスを、弱毒化ウイルスとして使用可能である。
(e)1251番塩基がG;
(f)2226番塩基がG;および
(g)3657番塩基がG
を有する弱毒水痘ウイルス株を使用することが可能である。
(h)162番塩基がC;
(i)225番塩基がC;
(j)523番塩基がC;
(k)1565番塩基がC;
(l)1763番塩基がC;
(m)2652番塩基がC;
(n)4052番塩基がC;および
(o)4193番塩基がC
を有する弱毒水痘ウイルス株を使用することが可能である。
(a)2110番塩基がG;
(b)3100番塩基がG;
(c)3818番塩基がC;
(d)4006番塩基がG;
(e)1251番塩基がG;
(f)2226番塩基がG;
(g)3657番塩基がG;
(h)162番塩基がC;
(i)225番塩基がC;
(j)523番塩基がC;
(k)1565番塩基がC;
(l)1763番塩基がC;
(m)2652番塩基がC;
(n)4052番塩基がC;および
(o)4193番塩基がC。
得る。
有しかつ依然として生物学的等価体を与え得る別のものに置換され得ることが理解される。このようなアミノ酸置換において、親水性指数が±2以内であることが好ましく、±1以内であることがより好ましく、および±0.5以内であることがさらにより好ましい。
は1〜5個、より好ましくは1〜3個のアミノ酸を付加することをいう。アミノ酸の欠失とは、もとのペプチドから1つ以上、例えば、1〜10個、好ましくは1〜5個、より好ましくは1〜3個のアミノ酸を欠失させることをいう。アミノ酸修飾は、アミド化、カルボキシル化、硫酸化、ハロゲン化、アルキル化、グリコシル化、リン酸化、水酸化、アシル化(例えば、アセチル化)などを含むが、これらに限定されない。置換、または付加されるアミノ酸は、天然のアミノ酸であってもよく、非天然のアミノ酸、またはアミノ酸アナログでもよい。天然のアミノ酸が好ましい。
Biology of the Cell(第3版、1994)、ならびに、CantorおよびSchimmel、Biophysical Chemistry Part
I:The Conformation of Biological Macromolecules(1980)を参照。本発明において利用され得る一般的な分子生物学的手法としては、Ausubel F.A.ら編(1988)、Current Protocols in Molecular Biology、 Wiley、 New York、 NY;Sambrook Jら (1987) Molecular Cloning:A Laboratory Manual,2nd Ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NYなどを参酌して当業者であれば容易に実施をすることができる。
発明のポリヌクレオチドの転写に適した位置にプロモーターを含有しているものが例示される。
recombinases: changing partners and doing the twist. J.Bacteriol.,1986年2月;165(2)341−7)(一般的には、Sauer B.Site−specific recombination: developments and applications.,Curr Opin Biotechnol.1994 Oct;5(5):521−7.を参照のこと)。
フェラーゼのような発光タンパク質をコードする遺伝子が挙げられるが、これらに限定されない。「薬剤選択マーカー」としては、以下からなる群から選択されるタンパク質をコードする遺伝子が挙げられるが、これらに限定されない:ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、グルタミンシンセターゼ遺伝子、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、メタロチオネイン(MT)、アデノシンデアミナーゼ(ADA)、アデノシンデアミナーゼ(AMPD1,2)、キサンチン−グアニン−ホスホリボシルトランスフェラーゼ、UMPシンターゼ、P−グリコプロテイン、アスパラギンシンテターゼ、およびオルニチンデカルボキシラーゼ。これら薬剤選択マーカーと使用される薬剤との組み合わせは、例えば、以下のとおりである:ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子(DHFR)とメソトレキセート(MTX)との組み合わせ、グルタミンシンセターゼ(GS)遺伝子とメチオニンスルホキシミン(Msx)との組み合わせ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ(CAD)遺伝子とN−ホスホンアセチル−L−アスパラギン酸(N−phosphonacetyl−L−aspartate)(PALA)との組み合わせ、MT遺伝子とカドミウム(Cd2+)との組み合わせ、アデノシンデアミナーゼ(ADA)遺伝子とアデノシン、アラノシン、2’−デオキシコホルマイシンとの組み合わせ、アデノシンデアミナーゼ(AMPD1,2)遺伝子とアデニン、アザセリン、コホルマイシンとの組み合わせ、キサンチン−グアニン−ホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子と、マイコフェノール酸との組み合わせ、UMPシンターゼ遺伝子と6−アザウリジン、ピラゾフラン(pyrazofuran)との組み合わせ、P−グリコプロテイン(P−gp,MDR)遺伝子と多剤薬剤との組み合わせ、アスパラギンシンテターゼ(AS)遺伝子とβ−アスパルチルヒドロキサム酸またはアルビジイン(albizziinn)との組み合わせ、オルニチンデカルボキシラーゼ(ODC)遺伝子とα−ジフルオロメチル−オルニチン(DFMO)。
析用ソフトウエアを用いてゲノム塩基配列中のタンパク質コード領域を予測すれば、プロモータ領域を推定することはできる。推定プロモーター領域は、構造遺伝子ごとに変動するが、通常構造遺伝子の上流にあるが、これらに限定されず、構造遺伝子の下流にもあり得る。好ましくは、推定プロモーター領域は、第一エキソン翻訳開始点から上流約2kbp以内に存在する。
coli JM109、Escherichia coli HB101、Escherichia coli No.49、Escherichia coli W3110、Escherichia coli NY49、Escherichia coli BL21(DE3)、Escherichia coli BL21(DE3)pLysS、Escherichia coli HMS174(DE3)、Escherich
ia coli HMS174(DE3)pLysS、Serratia ficaria、Serratia fonticola、Serratia liquefaciens、Serratia marcescens、Bacillus subtilis、Bacillus amyloliquefaciens、Brevibacterium ammmoniagenes、Brevibacterium immariophilum ATCC14068、Brevibacterium saccharolyticumATCC14066、Corynebacterium glutamicum ATCC13032、Corynebacterium glutamicum ATCC14067、Corynebacterium glutamicum ATCC13869、Corynebacterium acetoacidophilum ATCC13870、Microbacterium ammoniaphilum ATCC15354、Pseudomonas sp.D−0110などが例示される。
質をもつ物質、あるいは宿主細胞またはウイルスなどを、特定の操作および/または評価方法で多数の候補から選抜することをいう。本発明では、所望の活性を有するスクリーニングによって得られたウイルスもまた、本発明の範囲内に包含されることが理解される。
ト」は具体的な概念を示すために使用され得るが、両者を区別する必要がない場合、本明細書においては、「アドレス」と「スポット」とは互換的に使用され得る。
溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、賦形剤および/または農学的もしくは薬学的アジュバント。
本明細書において使用される技術は、そうではないと具体的に指示しない限り、当該分野の技術範囲内にある、糖鎖科学、マイクロフルイディクス、微細加工、有機化学、生化学、遺伝子工学、分子生物学、微生物学、遺伝学および関連する分野における周知慣用技術を使用する。そのような技術は、例えば、以下に列挙した文献および本明細書において他の場所おいて引用した文献においても十分に説明されている。
dbook of Microlithography,Micromachining,& Microfabrication:Microlithographyなどに記載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。
Press;Eckstein,F.(1991).Oligonucleotides and Analogues:A Practical Approac ,IRL
Press;Adams,R.L.et al.(1992).The Biochemistry of the Nucleic Acids,Chapman & Hall;Shabarova,Z.et al.(1994).Advanced Organic Chemistry of Nucleic Acids,Weinheim;Blackburn,G.M.et al.(1996).Nucleic Acids in Chemistry and Biology,Oxford University Press;Hermanson,G.T.(1996).Bioconjugate Techniques,Academic Press;Method in
Enzymology 230、242、247、Academic Press、1994;別冊実験医学「遺伝子導入&発現解析実験法」羊土社、1997などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分(全部であり得る)が参考として援用される。
以下に好ましい実施形態の説明を記載するが、この実施形態は本発明の例示であり、本発明の範囲はそのような好ましい実施形態に限定されないことが理解されるべきである。当業者はまた、以下のような好ましい実施例を参考にして、本発明の範囲内にある改変、変更などを容易に行うことができることが理解されるべきである。
クターの一部は、水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの非必須領域内に挿入され、水痘帯状疱疹ウイルスゲノムを含むBACとして操作が可能になる。この水痘帯状疱疹ウイルスゲノムを含むBACは、哺乳動物細胞に導入された場合、組換え水痘帯状疱疹ウイルスを産生、増殖することが可能である。組換え水痘帯状疱疹ウイルスの宿主細胞としては、野生型水痘帯状疱疹ウイルス株が増殖し得る任意の哺乳動物細胞を使用することができる。好ましくは、この宿主細胞は、ヒト由来であり、限定されることはないが、例えば、ヒト・MRC−5細胞、ヒト・HEL細胞、ヒト・WI−38細胞である。
水痘帯状疱疹ウイルスゲノムと、BACベクターを用いて、水痘帯状疱疹ウイルスゲノムを含むBACベクターを作製するためには、相同組換えを用いる方法など、種々の周知の方法を使用することが可能である。
遺伝子11のORF内の領域、遺伝子12のORF内の領域、遺伝子13のORF内の領域、遺伝子14のORF内の領域、遺伝子15のORF内の領域、遺伝子17のORF内の領域、遺伝子18のORF内の領域、遺伝子19のORF内の領域、遺伝子38のORF内の領域、遺伝子39のORF内の領域、遺伝子46のORF内の領域、遺伝子47のORF内の領域、遺伝子48のORF内の領域、遺伝子49のORF内の領域、遺伝子50のORF内の領域、遺伝子56のORF内の領域、遺伝子57のORF内の領域、遺伝子58のORF内の領域、遺伝子59のORF内の領域、遺伝子61のORF内の領域、遺伝子63のORF内の領域、遺伝子64のORF内の領域、遺伝子65のORF内の領域、遺伝子66のORF内の領域、遺伝子67のORF内の領域、遺伝子68のORF内の領域、遺伝子69のORF内の領域、遺伝子70のORF内の領域、遺伝子11のORFに隣接する領域、遺伝子12のORFに隣接する領域、遺伝子13のORFに隣接する領域、遺伝子14のORFに隣接する領域、遺伝子15のORFに隣接する領域、遺伝子17のORFに隣接する領域、遺伝子18のORFに隣接する領域、遺伝子19のORFに隣接する領域、遺伝子38のORFに隣接する領域、遺伝子39のORFに隣接する領域、遺伝子46のORFに隣接する領域、遺伝子47のORFに隣接する領域、遺伝子48のORFに隣接する領域、遺伝子49のORFに隣接する領域、遺伝子50のORFに隣接する領域、遺伝子56のORFに隣接する領域、遺伝子57のORFに隣接する領域、遺伝子58のORFに隣接する領域、遺伝子59のORFに隣接する領域、遺伝子61のORFに隣接する領域、遺伝子63のORFに隣接する領域、遺伝子64のORFに隣
接する領域、遺伝子65のORFに隣接する領域、遺伝子66のORFに隣接する領域、遺伝子67のORFに隣接する領域、遺伝子68のORFに隣接する領域、遺伝子69のORFに隣接する領域、および遺伝子70のORFに隣接する領域。
(a)2110番塩基がG;
(b)3100番塩基がG;
(c)3818番塩基がC;
(d)4006番塩基がG;
(e)1251番塩基がG;
(f)2226番塩基がG;
(g)3657番塩基がG;
(h)162番塩基がC;
(i)225番塩基がC;
(j)523番塩基がC;
(k)1565番塩基がC;
(l)1763番塩基がC;
(m)2652番塩基がC;
(n)4052番塩基がC;および
(o)4193番塩基がC。
ては、細菌宿主細胞内において、本発明のワクチンを産生するためのベクターと水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの一部からなるフラグメントを含むプラスミドベクターとの間で相同組換えが起こり、その結果、本発明のワクチンを産生するためのベクターが、水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの一部からなるフラグメント上の変異を有する。
遺伝子11のORF内の領域、遺伝子12のORF内の領域、遺伝子13のORF内の領域、遺伝子14のORF内の領域、遺伝子15のORF内の領域、遺伝子17のORF内の領域、遺伝子18のORF内の領域、遺伝子19のORF内の領域、遺伝子38のORF内の領域、遺伝子39のORF内の領域、遺伝子46のORF内の領域、遺伝子47のORF内の領域、遺伝子48のORF内の領域、遺伝子49のORF内の領域、遺伝子
50のORF内の領域、遺伝子56のORF内の領域、遺伝子57のORF内の領域、遺伝子58のORF内の領域、遺伝子59のORF内の領域、遺伝子61のORF内の領域、遺伝子62のORF内の領域、遺伝子63のORF内の領域、遺伝子64のORF内の領域、遺伝子65のORF内の領域、遺伝子66のORF内の領域、遺伝子67のORF内の領域、遺伝子68のORF内の領域、遺伝子69のORF内の領域、遺伝子70のORF内の領域、遺伝子11のORFに隣接する領域、遺伝子12のORFに隣接する領域、遺伝子13のORFに隣接する領域、遺伝子14のORFに隣接する領域、遺伝子15のORFに隣接する領域、遺伝子17のORFに隣接する領域、遺伝子18のORFに隣接する領域、遺伝子19のORFに隣接する領域、遺伝子38のORFに隣接する領域、遺伝子39のORFに隣接する領域、遺伝子46のORFに隣接する領域、遺伝子47のORFに隣接する領域、遺伝子48のORFに隣接する領域、遺伝子49のORFに隣接する領域、遺伝子50のORFに隣接する領域、遺伝子56のORFに隣接する領域、遺伝子57のORFに隣接する領域、遺伝子58のORFに隣接する領域、遺伝子59のORFに隣接する領域、遺伝子61のORFに隣接する領域、遺伝子62のORFに隣接する領域、遺伝子63のORFに隣接する領域、遺伝子64のORFに隣接する領域、遺伝子65のORFに隣接する領域、遺伝子66のORFに隣接する領域、遺伝子67のORFに隣接する領域、遺伝子68のORFに隣接する領域、遺伝子69のORFに隣接する領域、および遺伝子70のORFに隣接する領域。
本発明の方法を用いて、変異導入した水痘帯状疱疹ウイルスゲノムを有する変異型水痘帯状疱疹ウイルスを、簡便に調製することが可能である。
大腸菌内に、(a)VZV−BAC−DNAプラスミド、および(b)変異核酸として、任意の変異を有する水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの部分配列を持つシャトルベクターまたはPCR産物、を導入する。VZV−BAC−DNAプラスミドと、その変異核酸との間で組換えを起こすことによって、VZV−BAC−DNAプラスミドに変異を導入することができる。また、トランスポゾンを用いることによっても、ランダムに変異を導入することが可能である。そして変異が導入されたVZV−BAC−DNAプラスミドは、大腸菌内で容易に選択および増幅させることができる。そして、変異を持つVZV−BAC−DNAからウイルスを産出させることによって、組換え水痘帯状疱疹ウイルスを得ることができる(Markus Wagner、TRENDS in Microbilogy、Vol.10、No.7、2002年7月)。その具体例を以下に列挙する:
(1)変異核酸として、変異水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子を含む温度感受性シャトルベクターを用いる場合;
第1に、シャトルベクターとVZV−BAC−DNAプラスミドを、第1の相同的領域を介して、組換えさせ、シャトルベクターとVZV−BAC−DNAプラスミドとが連結した、共挿入体を生じる。次に、シャトルベクターの複製オリジンが温度感受性であることから、シャトルプラスミドが除かれる。第2の組換え事象において、共挿入された部分
が取り除かれる。第2の組換え事象が、第1の相同的領域を介して生じる場合、組換えに使用したVZV−BAC−DNAと同一の配列を有するプラスミドが生成される。これに対して、第2の組換え事象が、第1の相同領域とは異なる第2の相同領域を介して生じる場合、シャトルベクター上の変異を有する変異型VZV−BAC−DNAプラスミドが得られる。第1の相同領域と、第2の相同領域とがほぼ同じ長さである場合、第2の組換え事象が第2の相同領域で起こる確率は、第2の組換え事象が第1の相同領域で起こる確率とほぼ同じである。そのため、得られるVZV−BAC−DNAプラスミドの、約2分の1が組換えに用いた配列と同一の配列を有するプラスミドであり、約2分の1がシャトルベクターに導入した変異を有するプラスミドである。
(2)直鎖状DNAフラグメントを用いる場合;
この方法では、例えば、プロファージRac由来のrecETの組換え機能を用いるか、またはバクテリオファージλ由来のredαβの組換え機能を利用し、直鎖状DNAフラグメントを用いて、環状VZV−BAC−DNA分子に変異を導入する。具体的には、標的配列に隣接する選択マーカーおよび相同配列を含む直鎖状DNAフラグメントを、VZV−BAC−DNAとともに、相同組換えを生じ得る大腸菌に導入する。大腸菌内での直鎖状DNAの分解を避けるために、エクソヌクレアーゼ欠損の大腸菌を使用するか、またはバクテリオファージ由来のエクソヌクレアーゼ阻害剤であるredγ(gam)を発現させることが好ましい。直鎖状DNAは、その両端にVZV−BAC−DNAプラスミドと相同な領域を有する。その相同な領域を介して相同組換えを生じることによって、直鎖状DNAフラグメント内の所望の配列をVZV−BAC−DNA内に導入することができる。recET、またはredαβ組換え機能を使用する場合、これらの組換え機能は、25〜50ヌクレオチド程度の長さの相同配列によって相同組換えを生じることから、recA媒介性相同組換えよりも、簡便に使用することができる。
(3)トランスポゾンを用いる場合;
トランスポゾンエレメントが大腸菌内の核酸にランダムに挿入する機能を用いる。例えば、トランスポゾンエレメントとVZV−BAC−DNAを大腸菌に導入し、VZV−BAC−DNA内にランダムにトランスポゾンエレメントを挿入することによって、挿入変異を生じる。
本発明はまた、有効量の治療剤・予防剤の被験体への投与・接種による、疾患または障害(例えば、感染症)の処置および/または予防の方法を提供する。治療剤・予防剤は、薬学的に受容可能なキャリア型(例えば、滅菌キャリア)と組み合せた、本発明の組成物を意味する。
0.01mg/kg/日と約1mg/kg/日との間である。連続投与する場合、代表的には、治療剤・予防剤を約1μg/kg/時間〜約50μg/kg/時間の投薬速度で1日に1〜4回の注射かまたは連続皮下注入(例えばミニポンプを用いる)のいずれかにより投与する。静脈内用バッグ溶液もまた使用し得る。変化を観察するために必要な処置期間および応答が生じる処置後の間隔は、所望の効果に応じて変化するようである。
イルスを含まない状態、すなわち、無菌状態であり得る。滅菌濾過膜(例えば0.2ミクロンメンブレン)で濾過することにより無菌状態は容易に達成される。一般に、治療剤・予防剤は、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下用注射針で穿刺可能なストッパー付の静脈内用溶液バッグまたはバイアルに配置される。
(組換え水痘帯状疱疹ウイルスの調製)
(1:BACプラスミドの調製)
プラスミドPHA−2は、Markus WagnerおよびUlrich H. Koszinowski(Adlerら、(2000)、J.Virol 74:6964−74)より分与されたものを使用した。組換えウイルスを作製するために、BACベクターの挿入箇所として、水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの遺伝子11ORFと遺伝子12ORFの間の領域を選択した。なぜなら、このような非必須領域への外来核酸の挿入は、水痘帯状疱疹ウイルスの増殖に悪影響を与えないと予想されたからである。
11−12(図1C)とした。
作製したプラスミドpHA−2/VZ11−12は、選択マーカーとしてグアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(gpt)遺伝子を含んでいる。また、2つのloxP配列に挟まれたBACベクター配列を含んでいるため、Creリコンビナーゼを作用させることにより、loxP配列に挟まれたBACベクター配列を効率よく除去することが可能である。また、グリーン蛍光タンパク質(GFP)の蛍光によって、BACベクター配列を含むプラスミドが導入された細胞を容易に確認することが可能である。
組換えウイルスをgpt遺伝子によるマイコフェノール酸およびキサンチンによる薬剤選択と96ウェルプレートによる限界希釈法を用いることによって富化した。感染細胞から、ハート法(Hirt、(1967)J.M.Biol 26:365−9)により環状ウイルスDNAを抽出した。抽出したDNAを、ジーンパルサー(Bio−Rad社)を用いて、エレクトロポーレーション法(0.2cmキュベット、2.5kV)により大腸菌DH10Bに導入し、形質転換した。これを、17μg/mlのクロラムフェニコールを含む寒天上にて選択して、VZV−BAC−DNAを含む大腸菌を得た。
水痘帯状疱疹ウイルスゲノムを含むBACベクター(VZV−BAC−DNA)を含む大腸菌をLB培地で22〜24時間培養し、その培養方法にて3回継代し、最後に、クロラムフェニコールを含有するアガープレート上で選択した。継代した中から5クローンを取り出し、その各々を、LB培地にて同様の方法で大量培養し、DNAを抽出した。キット添付のプロトコルに従って、菌体より、NucleoBond PC 100キット(Macherey−Nagel社)を使用して、VZV−BAC−DNAを抽出した。得られた5つのクローンと元のVZV−BAC−DNAを、それぞれ制限酵素BamHIによって消化した。これらのアガロース電気泳動上の制限酵素パターンを確認した(結果は示さず)。5つ全てのクローンを、元のVZV BACプラスミドと比較した。その結果、アガロースゲル上で同一の制限酵素パターンが示された。これは、大腸菌中のVZVプ
ラスミドの高い安定性を示した。
BACクローン化VZV rV01(図1D)を、組換えプラスミドPHA−2/VZV11−12およびVZVウイルスの相同組換えによって、HEL細胞中で作製した。具体的には、75cm2プラスチックフラスコ内でコンフルエントまで培養したHEL細胞に対して、1μgのVZV−BAC−DNAをNucleofection unit(Amaxa社)を用いてトランスフェクションした。それらを2日後、75cm2プラスチックフラスコ内でコンフルエントになるまで培養したHEL細胞に継代した。2〜3日後に水痘帯状疱疹ウイルスによる典型的なCPEが観察された。またCPEが観察された細胞では、蛍光顕微鏡下でGFP遺伝子の発現が確認された。これにより、VZV−BAC−DNAを用いて、組換え水痘帯状疱疹ウイルスを産出できたことが、確認された。産出された組換え水痘帯状疱疹ウイルスをrV01(図1D)とした。環状BACクローン化ゲノムを大腸菌に導入することによって、VZV BACプラスミドを作製した。
名古屋大学川口寧氏によりCreリコンビナーゼを発現する組み換えアデノウイルス(AxCANCre)が分与された(Kanegaeら、(1995)Nucleic Acids Res 23:3816−21)。この組換えアデノウイルスを用いて、BACクローン化VZV rV01および組換えアデノウイルス(AxCANCre)の重複感染によって、VZV rV02(図1E;(L)は、loxP部位を表す)を、作製した。具体的には、組み換えアデノウイルスをHEL細胞にMOI(感染多重度)100で感染させた。ウイルスを2時間吸着させた後、PBS(−)で細胞を洗い、5%FCSを含むDMEM培地にて培養した。組み換え水痘ウイルスrV01を組み換えアデノウイルス感染24時間後にHEL細胞に重感染させた。対照を用いた実験により組み換えアデノウイルスによりCreリコンビナーゼが発現され、rV0lのゲノムよりBACベクター配列が効率よく切り出されたことを確認した。得られた水痘ウイルスをrV02(図1、E)とした。DNAシークエンスの結果、rV02は、rV0lからBACベクター配列が切り出されたものであることを確認した。
DNAに由来するフラグメントは、残った片側のloxP配列によって水痘帯状疱疹ウイルスOka株DNAのものと比較して大きくなっている。
(実施例2)
(組換え水痘帯状疱疹ウイルスの特徴付)
(1:組み換えウイルスの増殖性の比較)
水痘帯状疱疹ウイルスOka株と、得られた組換え水痘帯状疱疹ウイルスrV02のHEL細胞での増殖性の比較をinfectious center assay法を用いて行った(Gomiら、(2002)J.Virol 76:11447−59)。35mmディッシュのHEL細胞を、0.01PFU/細胞の多重度で、感染させ、次いで、感染細胞を洗浄した。HEL細胞に感染させた水痘帯状疱疹ウイルスOka株、rV02株を感染後0から5日まで培養しトリプシンで採取した後、新しいHEL細胞に感染させ増殖性について比較した。感性細胞の数を、初期ウイルスタイター/ディッシュに規格化し;倍数増加は、0日目において1個の感染細胞から伝播した感染細胞の数を示す。その結果を図2に示す。図2に示すように、得られた組換え水痘ウイルスrVO2はin vitroにおいて水痘ウイルスOka株(親株)と同等の増殖能を示した。
(実施例3)
(病原性の弱い変異型組換え水痘帯状疱疹ウイルス株の作製)
本発明に従い、以下の方法を用いることによって、変異型組換え水痘帯状疱疹ウイルスを調製し、変異ウイルスの中から病原性の弱い変異水痘帯状疱疹ウイルス株を得ることが可能である。
変異型組換え水痘帯状疱疹ウイルスの調製方法としては、例えば、変異遺伝子を含む核酸とVZV−BAC−DNAプラスミドとの間で相同組換えを起こすことによって、変異型組換え水痘帯状疱疹ウイルスを調製する方法が挙げられる。VZV−BAC−DNAプラスミドと相同組換えを起こすために用いられる変異遺伝子は、ランダムな変異を有していても、部位特異的な変異を有していてもよい。これら各々を用いることによって、ランダムな変異を有する変異型組換え水痘帯状疱疹ウイルスの集団、および部位特異的な変異を有する変異型組換え水痘帯状疱疹ウイルスを得ることができる。以下、その各々についてより詳細に説明する。
水痘帯状疱疹ウイルスゲノムの遺伝子62に変異を有するウイルスのいくつかが弱毒化ウイルスであることが公知である。そのため、本実施例においては、PCRを用いてランダムに変異を導入した遺伝子62を作製する。PCRを用いる変異導入方法は周知であり、例えば、プルーフリーディング機能を有さない耐熱性ポリメラーゼを4つのヌクレオチドの1つが少ない条件で用いることによって、ランダムに変異を導入することが可能である。必要に応じて、変異型62遺伝子に薬剤耐性遺伝子のようなマーカー遺伝子を連結させてもよい。
所望の部位特異的変異を導入する方法も、当該分野において周知である。例えば、所望
の変異を有するプライマーを用いてPCRを行い、その所望の変異を有する遺伝子断片を調製し、その後、その変異遺伝子断片を用いて、さらにPCRを行うことによるか、または制限酵素などの酵素処理を行うことによって、所望の変異を有する遺伝子全長を調製する。
水痘帯状疱疹ウイルスの病原性を試験する方法について、2つの方法が確立されている。
(実施例4)
(ワクチンの製造)
培養面積210cm2のルー瓶20本のMRC−5細胞培養に、実施例1で得た組換え水痘帯状疱疹ウイルスを接種の後、培養する。培養終了後、培養液を捨て、各ルー瓶内の感染細胞を200mlのPBS(−)にて2回洗浄する。次いで、20m1の0.03%(w/
v)EDTA−3Naを各ルー瓶内の感染細胞に重層し、細胞をルー瓶内壁面から剥離させ浮遊させる。各ルー瓶内の感染細胞浮遊液をプールし、2,000rpmにて10分間、4℃で遠心し、感染細胞のペレットを採取する。これを100mlのPBS(−)に再浮遊の後、凍結融解を1回、行う。次に、氷水浴中で超音波処理(20KHz、150mA、0.3秒/ml)後、3,000rpmで20分間、4℃で遠心し、細胞遊離ウイルスを含有の上清を採取し、これを生ワクチン原液とする。この原液から検定用として30mlをサンプリングし、残りの原液70mlに、PBS(−)に溶解したサッカロース及びゼラチン加水分解物をワクチン安定化剤として最終濃度が5%(w/v)及び2.5%(w/v)になるよう添加混合し、140mlの生ワクチン最終バルクを調製する。この最終バルクから検定用として30mlをサンプリングの後、残りバルクを3ml容のバイヤル瓶に0.5mlずつ分注し、凍結乾燥の後、窒素ガスを充填しゴム栓で封をしバイヤル瓶内部を気密密閉する。この生ワクチン小分品は、4℃で保存し、使用の直前に注射用蒸留水0.5mlを添加し乾燥内容物を完全に溶解し用いる。一方、サンプリングした上記のワクチン原液と最終バルク、及び小分品20本につき、検定試験を行う。この検定試験は、安全性、有効性及び均質姓を確認し、生ワクチンとしての適格性を確定するため、厚生省告示第195号に規定の生物学的製剤基準(1989年)「乾燥弱毒生水痘 ワク
チン」に準拠し、かつ、同じく規定の基準「組換え沈降B型肝炎ワクチン(酵母由来)」をも考慮し、実施する。この検定試験の結果、上記の小分品は、そのウイルス含量が2×104PFU(プラーク形成単位)/0.5mlであり、かつ、上記基準に規定の各種試験に合格した場合、適格性を備えた生ワクチンとしてその後の使用に供する。
(実施例5)
(組換え水痘帯状疱疹ウイルスワクチンの免疫原性の判定)
実施例4で製造した組換え水痘帯状疱疹ウイルスワクチン株の免疫原性を、モルモットを用いて測定する。比較対照として、Oka株生ワクチンを使用する。これ等の各ワクチンを3週令の平均体重250gのモルモット3匹にそれぞれ皮下接種する。ワクチン接種は、接種量が組換え株及びOka株生ワクチンでは、3,000PFU又は2,000PFU/モルモットになるよう各ワクチンをPBS(−)で希釈調整して行う。ワクチン接種後、4、6及び8週目に、各被接種モルモットの大腿部静脈から部分採血し、その血中抗体価を測定する。抗体価の測定には、中和試験法 (Journal of General Virology, 61, 255−269, 1982)を、採用する。組換え水痘帯状疱疹ウイルスワクチンがOka株と同程度に、VZV抗体を誘導することを確認する。これらの結果から、免疫原性が良好な組換え水痘帯状疱疹ウイルスワクチンを選択する。
配列番号2:VZ11Rプライマー
配列番号3:VZ12Fプライマー
配列番号4:VZ12Rプライマー
配列番号5:遺伝子62の配列
配列番号6:遺伝子62の配列
配列番号7:プラスミドPHA−2の配列
配列番号8:水痘帯状疱疹ウイルスDumas株
配列番号9:配列番号8の1134位〜1850位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子2)
配列番号10:配列番号8の8607位〜9386位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子7)
配列番号11:配列番号8の10642位〜10902位に5’→3’方向でコードされ
るアミノ酸配列(遺伝子9A)
配列番号12:配列番号8の11009位〜11917位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子9)
配列番号13:配列番号8の12160位〜13392位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子10)
配列番号14:配列番号8の13590位〜16049位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子11)
配列番号15:配列番号8の16214位〜18199位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子12)
配列番号16:配列番号8の18441位〜19346位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子13)
配列番号17:配列番号8の24149位〜25516位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子17)
配列番号18:配列番号8の30759位〜33875位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子21)
配列番号19:配列番号8の34083位〜42374位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子22)
配列番号20:配列番号8の44506位〜46263位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子26)
配列番号21:配列番号8の50857位〜54471位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子29)
配列番号22:配列番号8の54651位〜56963位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子30)
配列番号23:配列番号8の57008位〜59614位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子31)
配列番号24:配列番号8の59766位〜60197位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子32)
配列番号25:配列番号8の64807位〜65832位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子36)
配列番号26:配列番号8の66074位〜68599位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子37)
配列番号27:配列番号8の70633位〜71355位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子39)
配列番号28:配列番号8の71540位〜75730位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子40)
配列番号29:配列番号8の75847位〜76797位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子41)
配列番号30:配列番号8の78170位〜80200位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子43)
配列番号31:配列番号8の80360位〜81451位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子44)
配列番号32:配列番号8の82719位〜83318位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子46)
配列番号33:配列番号8の84667位〜86322位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子48)
配列番号34:配列番号8の87881位〜90388位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子51)
配列番号35:配列番号8の90493位〜92808位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子52)
配列番号36:配列番号8の95996位〜98641位に5’→3’方向でコードされ
るアミノ酸配列(遺伝子55)
配列番号37:配列番号8の110581位〜111417位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子63)
配列番号38:配列番号8の111565位〜112107位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子64)
配列番号39:配列番号8の113037位〜114218位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子66)
配列番号40:配列番号8の114496位〜115560位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子67)
配列番号41:配列番号8の115808位〜117679位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子68)
配列番号42:配列番号8の120764位〜124696位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子71)
配列番号43:配列番号8の部分配列(遺伝子27)
配列番号44:配列番号43の1位〜999位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子27)
配列番号45:配列番号8の部分配列(遺伝子47)
配列番号46:配列番号45の1位〜1530位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子47)
配列番号47:配列番号8の部分配列
配列番号48:配列番号47の1位〜243位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子49)
配列番号49:配列番号8の部分配列
配列番号50:配列番号49の1位〜732位に5’→3’方向でコードされるアミノ酸配列(遺伝子56)
配列番号51:配列番号8の配列の相補鎖配列
配列番号52:配列番号8の118480位〜119316位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の5569位〜6405位に対応する)(遺伝子70)
配列番号53:配列番号8の117790位〜118332位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の6553位〜7095位に対応する)(遺伝子69)
配列番号54:配列番号8の112332位〜112640位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の12245位〜12553位に対応する)(遺伝子65)
配列番号55:配列番号8の105201位〜109133位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の15752位〜19684位に対応する)(遺伝子62)
配列番号56:配列番号8の103082位〜104485位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の20400位〜21803位に対応する)(遺伝子61)
配列番号57:配列番号8の100302位〜101219位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の23666位〜24583位に対応する)(遺伝子59)
配列番号58:配列番号8の99411位〜99626位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の25259位〜25474位に対応する)(遺伝子57)
配列番号59:配列番号8の92855位〜93850位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の31035位〜32030位に対応する)(遺伝子53)
配列番号60:配列番号8の68668位〜70293位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の54592位〜56217位に対応する)(遺伝子38)
配列番号61:配列番号8の63977位〜64753位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の60132位〜60908位に対応する)(遺伝子35)
配列番号62:配列番号8の62171位〜63910位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の60975位〜62714位に対応する)(遺伝子34)
配列番号63:配列番号8の60321位〜62138位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の62747位〜64564位に対応する)(遺伝子33)
配列番号64:配列番号8の47052位〜50636位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の74249位〜77833位に対応する)(遺伝子28)
配列番号65:配列番号8の44148位〜44618位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の80267位〜80737位に対応する)(遺伝子25)
配列番号66:配列番号8の43212位〜44021位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の80864位〜81673位に対応する)(遺伝子24)
配列番号67:配列番号8の42431位〜43138位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の81747位〜82454位に対応する)(遺伝子23)
配列番号68:配列番号8の29024位〜30475位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の94410位〜95861位に対応する)(遺伝子20)
配列番号69:配列番号8の26518位〜28845位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の96040位〜98367位に対応する)(遺伝子19)
配列番号70:配列番号8の25573位〜26493位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の98392位〜99312位に対応する)(遺伝子18)
配列番号71:配列番号8の22568位〜23794位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の101091位〜102317位に対応する)(遺伝子16)
配列番号72:配列番号8の21258位〜22478位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の102407位〜103627位に対応する)(遺伝子15)
配列番号73:配列番号8の19431位〜21113位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の103772位〜105454位に対応する)(遺伝子14)
配列番号74:配列番号8の9477位〜10667位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の114218位〜115408位に対応する)(遺伝子8)
配列番号75:配列番号8の5326位〜8577位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の116308位〜119559位に対応する)(遺伝子6)配列番号76:配列番号8の4252位〜5274位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の119611位〜120633位に対応する)(遺伝子5)配列番号77:配列番号8の2783位〜4141位に3’→5’方向でコードされるア
ミノ酸配列(配列番号51の120744位〜122102位に対応する)(遺伝子4)配列番号78:配列番号8の1908位〜2447位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の122438位〜122977位に対応する)(遺伝子3)配列番号79:配列番号8の589位〜915位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の123970位〜124296位に対応する)(遺伝子1)
配列番号80:配列番号51の部分配列
配列番号81:配列番号80の1位〜1056位および4556位〜5740位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の46847位〜48034位および42292位〜43347位に対応する)(遺伝子42および遺伝子45)
配列番号82:配列番号51の部分配列
配列番号83:配列番号82の1位〜1305位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の123580位〜124884位に対応する)(遺伝子50)
配列番号84:配列番号51の部分配列
配列番号85:配列番号84の1位〜2307位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の122578位〜124884位に対応する)(遺伝子54)
配列番号86:配列番号51の部分配列
配列番号87:配列番号86の1位〜663位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の124222位〜124884位に対応する)(遺伝子58)
配列番号88:配列番号51の部分配列
配列番号89:配列番号88の1位〜427位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の124458位〜124884位に対応する)(遺伝子60)
配列番号90:配列番号51の部分配列
配列番号91:配列番号90の1位〜903位に3’→5’方向でコードされるアミノ酸配列(配列番号51の60321位〜61229位に対応する)(遺伝子33.5)
Claims (1)
- 本明細書に記載の発明。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014057800A JP2014166182A (ja) | 2004-03-05 | 2014-03-20 | 組換え水痘帯状疱疹ウイルス |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2004063277 | 2004-03-05 | ||
JP2004063277 | 2004-03-05 | ||
JP2014057800A JP2014166182A (ja) | 2004-03-05 | 2014-03-20 | 組換え水痘帯状疱疹ウイルス |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011271666A Division JP2012061005A (ja) | 2004-03-05 | 2011-12-12 | 組換え水痘帯状疱疹ウイルス |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014166182A true JP2014166182A (ja) | 2014-09-11 |
Family
ID=34918153
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006510728A Withdrawn JPWO2005085445A1 (ja) | 2004-03-05 | 2005-03-03 | 組換え水痘帯状疱疹ウイルス |
JP2011271666A Withdrawn JP2012061005A (ja) | 2004-03-05 | 2011-12-12 | 組換え水痘帯状疱疹ウイルス |
JP2014057800A Pending JP2014166182A (ja) | 2004-03-05 | 2014-03-20 | 組換え水痘帯状疱疹ウイルス |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006510728A Withdrawn JPWO2005085445A1 (ja) | 2004-03-05 | 2005-03-03 | 組換え水痘帯状疱疹ウイルス |
JP2011271666A Withdrawn JP2012061005A (ja) | 2004-03-05 | 2011-12-12 | 組換え水痘帯状疱疹ウイルス |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20110189233A1 (ja) |
EP (2) | EP2383343A3 (ja) |
JP (3) | JPWO2005085445A1 (ja) |
KR (1) | KR101246740B1 (ja) |
CN (2) | CN103074305B (ja) |
AU (1) | AU2005219731B2 (ja) |
CA (1) | CA2558586A1 (ja) |
WO (1) | WO2005085445A1 (ja) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080226677A1 (en) * | 2004-05-06 | 2008-09-18 | Yasuko Mori | Recombinant virus vector for gene transfer into lymphoid cells |
CA2630770A1 (en) * | 2005-11-24 | 2007-05-31 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Recombinant polyvalent vaccine |
US10166285B2 (en) * | 2006-11-09 | 2019-01-01 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Recombinant virus with diminished latency and methods of using same |
CN101967466A (zh) | 2009-07-28 | 2011-02-09 | 新泽西医学院 | Orf7缺陷型水痘病毒株、含有该毒株的疫苗及其应用 |
UA112970C2 (uk) * | 2010-08-05 | 2016-11-25 | Мерк Шарп Енд Доме Корп. | Інактивований вірус вітряної віспи, спосіб його одержання і застосування |
RU2580003C2 (ru) * | 2011-02-24 | 2016-04-10 | Могам Байотекнолоджи Рисерч Инститьют | Новые штаммы вируса ветряной оспы и противовирусная вакцина против ветряной оспы и опоясывающего лишая, в которой применяются такие штаммы |
WO2014043189A1 (en) * | 2012-09-14 | 2014-03-20 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Conditionally replication deficient herpes viruses and use thereof in vaccines |
JP2014236748A (ja) * | 2014-08-26 | 2014-12-18 | 一般財団法人阪大微生物病研究会 | 組換え多価ワクチン |
GB201818084D0 (en) * | 2018-11-06 | 2018-12-19 | Univ Oxford Innovation Ltd | Compositions and methods |
CN110845583A (zh) * | 2019-11-18 | 2020-02-28 | 维塔恩(广州)医药有限公司 | 水痘带状疱疹病毒相关抗原短肽及其应用 |
CN112870344B (zh) * | 2019-11-29 | 2022-07-19 | 北京绿竹生物技术股份有限公司 | 一种重组水痘带状疱疹病毒疫苗 |
CN115819616A (zh) * | 2021-07-28 | 2023-03-21 | 江苏瑞科生物技术股份有限公司 | 一种基因重组vzv融合蛋白及其制备方法和应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000050603A1 (fr) * | 1999-02-25 | 2000-08-31 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Gene 62 de la souche oka du virus de la varicelle attenue et procede d'identification de la souche du virus pour le vaccin de la varicelle vivant attenue a l'aide de ce gene |
WO2001056600A1 (fr) * | 2000-01-31 | 2001-08-09 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Procede de controle des qualites d'un vaccin de poxvirus attenue |
JP2004505993A (ja) * | 2000-08-03 | 2004-02-26 | ローマン・アニマル・ヘルス・ゲーエムベーハー・ウント・コー・カーゲー | 宿主細胞随伴性のヘルペスウイルスに対するワクチン接種 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5341202A (en) | 1976-09-28 | 1978-04-14 | Fuji Photo Film Co Ltd | Novel magnetic recording medium |
US4554101A (en) | 1981-01-09 | 1985-11-19 | New York Blood Center, Inc. | Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity |
ZA872705B (en) | 1986-04-22 | 1987-10-05 | Immunex Corporation | Human g-csf protein expression |
WO1997043420A1 (fr) | 1996-05-15 | 1997-11-20 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Procede d'identification de la souche oka ou souche derivee de celle-ci du virus attenue de la varicelle et acceptable comme virus attenue du vaccin contre la varicelle |
US6277621B1 (en) * | 1998-02-26 | 2001-08-21 | Medigene, Inc. | Artificial chromosome constructs containing foreign nucleic acid sequences |
US20080226677A1 (en) * | 2004-05-06 | 2008-09-18 | Yasuko Mori | Recombinant virus vector for gene transfer into lymphoid cells |
-
2005
- 2005-03-03 CN CN201210581606.XA patent/CN103074305B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2005-03-03 EP EP11153574A patent/EP2383343A3/en not_active Withdrawn
- 2005-03-03 WO PCT/JP2005/003652 patent/WO2005085445A1/ja active Application Filing
- 2005-03-03 JP JP2006510728A patent/JPWO2005085445A1/ja not_active Withdrawn
- 2005-03-03 AU AU2005219731A patent/AU2005219731B2/en not_active Ceased
- 2005-03-03 US US10/591,787 patent/US20110189233A1/en not_active Abandoned
- 2005-03-03 CN CNA2005800145230A patent/CN1950507A/zh active Pending
- 2005-03-03 KR KR1020067018048A patent/KR101246740B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2005-03-03 CA CA002558586A patent/CA2558586A1/en not_active Abandoned
- 2005-03-03 EP EP05719956A patent/EP1721981A4/en not_active Withdrawn
-
2011
- 2011-12-12 JP JP2011271666A patent/JP2012061005A/ja not_active Withdrawn
-
2012
- 2012-12-14 US US13/715,665 patent/US20130101620A1/en not_active Abandoned
-
2014
- 2014-03-20 JP JP2014057800A patent/JP2014166182A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000050603A1 (fr) * | 1999-02-25 | 2000-08-31 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Gene 62 de la souche oka du virus de la varicelle attenue et procede d'identification de la souche du virus pour le vaccin de la varicelle vivant attenue a l'aide de ce gene |
WO2001056600A1 (fr) * | 2000-01-31 | 2001-08-09 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Procede de controle des qualites d'un vaccin de poxvirus attenue |
JP2004505993A (ja) * | 2000-08-03 | 2004-02-26 | ローマン・アニマル・ヘルス・ゲーエムベーハー・ウント・コー・カーゲー | 宿主細胞随伴性のヘルペスウイルスに対するワクチン接種 |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
JPN6010055181; Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. Vol.90, 1993, p.7376-7380 * |
JPN6010055182; Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. Vol.94, 1997, p.14759-14763 * |
JPN6010055183; J. Virol. Vol.74, 2000, p.11088-11098 * |
JPN6010055184; J. Virol. Vol.77, 2003, p.1382-1391 * |
JPN6010055185; J. Virol. Vol.74, 2000, p.6964-6974 * |
JPN6010055186; J. Virol. Vol.73, 1999, p.8320-8329 * |
JPN6010055187; J. Gen. Virol. Vol.67, 1986, p.1759-1816 * |
JPN6010055188; J. Virol. Vol.76, 2002, p.11447-11459 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2012061005A (ja) | 2012-03-29 |
AU2005219731A1 (en) | 2005-09-15 |
US20130101620A1 (en) | 2013-04-25 |
EP2383343A2 (en) | 2011-11-02 |
US20110189233A1 (en) | 2011-08-04 |
EP2383343A3 (en) | 2012-01-25 |
JPWO2005085445A1 (ja) | 2007-12-13 |
CN103074305A (zh) | 2013-05-01 |
CA2558586A1 (en) | 2005-09-15 |
CN1950507A (zh) | 2007-04-18 |
KR20070009580A (ko) | 2007-01-18 |
AU2005219731B2 (en) | 2012-02-23 |
EP1721981A1 (en) | 2006-11-15 |
EP1721981A4 (en) | 2007-03-14 |
KR101246740B1 (ko) | 2013-03-26 |
CN103074305B (zh) | 2015-07-22 |
WO2005085445A1 (ja) | 2005-09-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2014166182A (ja) | 組換え水痘帯状疱疹ウイルス | |
JPWO2007060725A1 (ja) | 組換え多価ワクチン | |
US9931396B2 (en) | Koi herpesvirus vaccine | |
EP2195021B1 (en) | A recombinant koi herpesvirus (khv) or cyprinid herpesvirus 3 (cyhv-3) and a vaccine for the prevention of a disease caused by khv/cyhv-3 in cyprinus carpio carpio or cyprinus carpio koi | |
CN110628730B (zh) | 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒gp蛋白的重组猪伪狂犬病病毒及应用 | |
JP7387623B2 (ja) | 標的タンパク質を安定して発現できる組換えウイルス | |
EP2031065A1 (en) | A recombinant koi herpesvirus (KHV) or Cyprinid herpesvirus 3 (CyHV-3) and a vaccine for the prevention of a disease caused by KHV/CyHV-3 in Cyprinus carpio carpio or Cyprinus carpio koi | |
JP2014236748A (ja) | 組換え多価ワクチン | |
JP2012080893A (ja) | 組換え多価ワクチン | |
CZ20022809A3 (cs) | Koňský herpes virus |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140320 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140716 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150507 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150701 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150902 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20160104 |