KR101294238B1

KR101294238B1 - 림프구 내 유전자 도입용 재조합 바이러스 벡터

Info

Publication number: KR101294238B1
Application number: KR1020127018909A
Authority: KR
Inventors: 야수코 모리; 켄지로 타다가키; 마사야 타케모토; 미치아키 타카하시; 코우이치 야마니시
Original assignee: 사이단호진한다이비세이부쯔뵤우겐큐우카이
Priority date: 2004-05-06
Filing date: 2005-04-28
Publication date: 2013-08-07
Also published as: JPWO2005108581A1; US7820436B2; US8148060B2; EP1743942A1; JP5410477B2; AU2005240902B2; CN1981040B; CA2565509A1; US20080226677A1; AU2005240902A1; KR20120088004A; CN1981040A; EP1743942A4; US20090253208A1; KR101234062B1; US20110070651A1; WO2005108581A1; KR20060123666A; JP4796958B2; JP2011234726A

Abstract

재조합 헤르페스바이러스; 이의 제조방법; 및 재조합 헤르페스바이러스를 포함한 약학적 조성물을 제공하고자 한다. 또 헤르페스바이러스 게놈 유전자 및 BAC 벡터 서열을 포함한 벡터; 이러한 벡터를 포함한 세포; 헤르페스바이러스 게놈과의 상동성 재조합이 가능한 단편; 및 BAC 벡터 서열을 포함한 핵산 카세트를 제공하고자 한다. 이러한 목적은 BAC 벡터 서열을 이용한 재조합 헤르페스바이러스의 제조방법의 개발에 의해 달성되었다.

Description

림프구 내 유전자 도입용 재조합 바이러스 벡터{Recombinant virus vector for gene introduction in lymphocyte}

본 발명은 림프계 세포 내로 원하는 유전자를 도입하기 위한 재조합 바이러스 벡터 특히, BAC(E. coli 인공 염색체)를 이용하여 제조된 재조합 인간 헤르페스바이러스 벡터 및 이러한 바이러스 벡터를 포함한 약학적 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 인간 헤르페스바이러스 게놈 유전자 및 BAC 벡터 서열을 포함한 벡터 및 이러한 벡터를 포함한 세포에 관한 것이다. 또한 본 발명은 재조합 인간 헤르페스바이러스의 제조방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 헤르페스바이러스 게놈으로의 상동적 재조합이 가능한 단편 및 BAC 벡터 서열을 포함한 핵산 카세트에 관한 것이다.

림프계 세포와 관련된 다양한 질병 즉, 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염을 치료하기 위해 림프계 세포의 유전자 치료를 위한 기술의 수립에 대한 요구가 존재하였다. 그러나 원하는 유전자를 림프계 세포 내로 도입시키는 만족스러운 벡터 시스템이 개발되지 않았다.

헤르페스바이러스(HHV)는 헤르페스바이러스과(Herpesviridae)의 바이러스에 속하는 바이러스이다. 제6형 및 제7형 인간 헤르페스바이러스 모두는 헤르페스바이러스과의 β헤르페스바이러스아과이고, 이는 돌발성 발진의 원인이다(비-특허 문헌-1 및 비-특허 문헌 2). HHV-6은 2개의 주, HHV-6A 및 HHV-6B를 포함한다. HHV-6은 유아기에 발생하고 발열의 감소 전후에 갑작스런 고열 및 발진을 유도하는 바이러스성 감염 질환이다. 감염 환자의 예후는 일반적으로 양호하다. HHV-7 감염은 HHV-6 감염 이후에 발생하는 경향이 있다(비-특허 문헌 3). 따라서 HHV-7에 의해 유발되는 돌발성 발진은 2차 돌발성 발진으로 임상적으로 경험된다. HHV-6 및 HHV-7의 혈청역학적 조사는 대부분의 소아가 2∼3세 이전에 HHV-6 및 HHV-7에 대한 항체에 양성이됨을 증명하였다.

HHV-7은 건강한 사람의 말초 혈액의 CD4⁺ T 림프계 세포를 배양하는 동안 세포변성 효과가 관찰된 1990년에 Frankel et al.에 의해 새롭게 발견된 헤르페스바이러스이다(비-특허 문헌 4). 본 바이러스는 인간 말초 혈액의 단핵 세포로부터 분리되었다. HHV-6 및 HHV-7 모두는 CD4⁺ T 림프계 세포 친화성 바이러스이다. HHV-7은 세포 표면 상의 수용체 CD4를 통해 T 세포를 감염시킨다. HHV-7은 인간 T 림프계 세포 내에서만 생장할 수 있다. 따라서 HHV-7은 인간 T 림프계 세포의 유전자 변형에 사용될 수 있는 바이러스이다.

HHV-7 게놈은 약 145 kbp의 이중-나선 DNA이다. 전체 염기 서열은 Nicholas et al.에 의해 측정되었다. 적어도 101개 유전자가 상기 게놈 내에 존재하는 것으로 알려졌다(비-특허 문헌 5).

그러나 현재 HHV-7을 이용하여 T 림프계 세포 내로 유전자를 도입하는 것은 불가능하다. 이는 T 림프계 세포만을 감염시키는 것이 가능한 헤르페스바이러스 즉, 재조합 HHV-7 바이러스의 제조 기술이 개발되지 않았고 T 림프계 세포 내로 벡터를 효과적으로 도입시키는 기술이 수립되지 않았기 때문이다. 따라서 HHV-7 및 HHV-6 재조합 바이러스를 이용하여 T 림프계 세포 내로 원하는 유전자를 도입시키는 기술에 대한 요구가 존재한다.

더욱이 이들 바이러스 특히 HHV-7 바이러스는 건강한 인체에 부작용이 없는 것으로 판단된다. 다양한 바이러스(즉, 볼거리)의 항원성 결정소를 포함한 유전자는 HHV-7의 바이러스 게놈 내로 도입되고 감염된 세포에 의해 발현되면 HHV-7는 백신으로서 유용한 것으로 판단된다. 그러나 HHV-7가 백신으로 사용되는 경우 품질관리 및 품질보증 측면에서 본 바이러스의 유전형이 바이러스 계대배양시 변화되지 않는 것이 바람직하다. 따라서 재조합 바이러스가 백신으로 사용되는 경우 단일 재조합 유전형 바이러스로 유래의 바이러스를 안정하게 공급하는 것이 필요하다. 이러한 목적을 위해 단일 유전형을 지닌 HHV-7 재조합 바이러스가 요구되었다.

더욱이 T 림프계 세포주 SupT1 세포와 T 림프계 세포 친화성 인간 헤르페스바이러스(HHV-6A(U1102주, HHV-7(MRK, MSO주)의 HIV 감염 사이의 상호 관계가 조사되었다. 세포의 수용체 CD4에 결합하는 HHV-7주는 SupT1 세포 내에서 만족스러운 생장을 나타낸다. 그러나 감염은 SupT1/HIV 세포에 대해 수립될 수 없었다. 이와는 대조적으로 HHV-6A주는 HIV-지속성 감염(SuptT1/HIV)으로 SupT1 세포를 감염시키고 명백한 CPE를 나타냄이 인식되었다(비-특허 문헌 6).

Non-Patent Document 1:Yamanishi K. et al., Identification of human herpesvirus 6 as a causal agent for exanthem subitum, Lancet 1988; i: 1065-1067

Non-Patent Document 2: Tanaka K. et al., Human herpesvirus 7: Another causal agent for roseola (exanthem subitum), J. Pediatr., 1994; 125: 1-5

Patent Document 3: Tanaka K. et al., Seroepidemiological study of human herpesvirus-6 and -7 in children of different ages and detection of these two viruses in throat swabs by polymerase chain reaction, Journal of Medical Virology, 1996; 48: 88-94

Non-Patent Document 4: Frankel N. et al., Isolation of a new herpesvirus from human CD4+ T cells, ProNAS USA, 87: 749-752, ProNAS USA, 87: 749-752, 1990

Non-Patent Document 5: John N. et al., Journal of Virology, Sep. 1996, 5975 to 5989

Non-Patent Document 6: Masao Yamada et al., HIV Jizokukansen SupT1 Saibo heno HHV-6 oyobi -7 Choufukukannsen no Kokoromi (Attempt for HHV-6 and -7 Superinfection to HIV Persistent Infection Sup-T1 Cell), Title No. 122, Titles and Abstracts of the 7th Annual Meeting of the Japanese Society for AIDS Research, 1993, Tokyo

본 발명의 목적은 림프계 세포 내로 원하는 유전자를 도입하기 위한 재조합 바이러스 벡터 특히, BAC(E. coli 인공 염색체)를 이용하여 제조된 재조합 인간 헤르페스바이러스 벡터 및 이러한 바이러스 벡터를 포함한 약학적 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 또다른 목적은 인간 헤르페스바이러스 게놈 유전자 및 BAC 벡터 서열을 포함한 벡터 및 이러한 벡터를 포함한 세포를 제공하는 것이다. 또한 본 발명의 또다른 목적은 재조합 인간 헤르페스바이러스의 제조방법을 제공하는 것이다. 또한 본 발명의 또다른 목적은 헤르페스바이러스 게놈으로의 상동적 재조합이 가능한 단편 및 BAC 벡터 서열을 포함한 핵산 카세트를 제공하는 것이다.

이를 달성하기 위해 본 발명은 재조합 HHV-7, 그의 제조방법 즉, BAC(E. coli 인공 염색체)를 이용한 단일 바이러스로부터의 재조합 HHV-7 또는 HHV-6의 제조방법을 제공한다.

이상적인 HIV 백신은 모든 형태의 HIV에 대해 완전한 장기-지속성 보호를 제공할 수 있다. 한편, 통상의 불활성화 HIV 백신은 하기 기술된 이점 및 단점을 지닌다.

재조합 백신의 제조방법은 일반적인 기술을 이용한다. 그러나 면역원성을 유지하기 어렵기 때문에(면역원성이 낮기 때문) 높은 항원성 부하 및 보강제의 빈번한 주입이 요구된다. 안전성은 가장 큰 관심사이다. 천연 또는 재조합 서브유니트를 포함한 서브유니트 백신은 안전하다. 그러나 이러한 서브유니트 백신은 서브유니트의 선택 및 낮은 면역원성으로 인해 한정적이다.

본 발명은 통상의 백신에 의해 획득될 수 없는 효과를 실현할 수 있다. 이러한 효과는 HIV 감염 전후의 예방 및 치료 기능이다. 이는 그의 타겟 면역 세포(CD4⁺ T 세포)에 결합하기 위해 HIV가 이용하는 동일한 메커니즘을 이용하여 재조합 헤르페스바이러스 자체에 의해 달성된다.

통상적으로 HIV 백신을 제조하는 것은 어렵다. 이 이유는 하기에 기술될 것이다. HIV는 감염 세포 내에 도입된다. 더욱이 HIV는 일반적으로 백신에 의해 활성화되는 며역 세포 자체를 공격한다. HIV가 세포를 감염시키는 경우 헤120은 CD4에 결합한다. CD4는 HIV가 감염시키는 면역 세포(T 세포)의 표면 상에 존재하는 수용체이다. CD4는 세포의 입구로 설멸될 수 있다. HIV의 생장은 CD4⁺ 세포 표면에 결합하는 HHV-7 또는 세포에 진입하는 HHV-6에 의해 억제될 수 있다.

상기-기술된 원리를 이용함으로서 본 발명은 HIV 감염의 예방을 위한 약학적 조성물 및 HIV 감염의 치료를 위한 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명을 완성하기 위해 본 발명은 BAC 벡터 서열을 이용한 재조합 헤르페스바이러스의 제조방법을 개발하였다.

따라서 본 발명은 하기를 제공한다.

1. 림프계 세포 내로의 유전자 전달을 위한 재조합 헤르페스바이러스

2. 항목 1에 있어서, BAC 벡터 서열을 포함함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

3. 항목 2에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열의 적어도 일부가 헤르페스바이러스 게놈의 비-필수 영역 내로 삽입됨을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

4. 항목 3에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-7의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스:

유전자 H1의 ORF 내 영역, 유전자 DR1의 ORF 내 영역, 유전자 DR2의 ORF 내 영역, 유전자 H2의 ORF 내 영역, 유전자 DR6의 ORF 내 영역, 유전자 DR7의 ORF 내 영역, 유전자 H3의 ORF 내 영역, 유전자 H4의 ORF 내 영역, 유전자 U2의 ORF 내 영역, 유전자 U3의 ORF 내 영역, 유전자 U4의 ORF 내 영역, 유전자 U5/7의 ORF 내 영역, 유전자 U8의 ORF 내 영역, 유전자 U10의 ORF 내 영역, 유전자 U12의 ORF 내 영역, 유전자 U13의 ORF 내 영역, 유전자 U15의 ORF 내 영역, 유전자 U16의 ORF 내 영역, 유전자 U17Ex의 ORF 내 영역, 유전자 U17의 ORF 내 영역, 유전자 U17a의 ORF 내 영역, 유전자 U18의 ORF 내 영역, 유전자 U19의 ORF 내 영역, 유전자 U20의 ORF 내 영역, 유전자 U21의 ORF 내 영역, 유전자 U23의 ORF 내 영역, 유전자 U24의 ORF 내 영역, 유전자 U24a의 ORF 내 영역, 유전자 U25의 ORF 내 영역, 유전자 U26의 ORF 내 영역, 유전자 U28의 ORF 내 영역, 유전자 U32의 ORF 내 영역, 유전자 U33의 ORF 내 영역, 유전자 U34의 ORF 내 영역, 유전자 U35의 ORF 내 영역, 유전자 U36의 ORF 내 영역, 유전자 U37의 ORF 내 영역, 유전자 U40의 ORF 내 영역, 유전자 U42의 ORF 내 영역, 유전자 U44의 ORF 내 영역, 유전자 U45의 ORF 내 영역, 유전자 U46의 ORF 내 영역, 유전자 U47의 ORF 내 영역, 유전자 U49의 ORF 내 영역, 유전자 U50의 ORF 내 영역, 유전자 U51의 ORF 내 영역, 유전자 U52의 ORF 내 영역, 유전자 U55A의 ORF 내 영역, 유전자 U55B의 ORF 내 영역, 유전자 U58의 ORF 내 영역, 유전자 U59의 ORF 내 영역, 유전자 U62의 ORF 내 영역, 유전자 U63의 ORF 내 영역, 유전자 U64의 ORF 내 영역, 유전자 U65의 ORF 내 영역, 유전자 U67의 ORF 내 영역, 유전자 U68의 ORF 내 영역, 유전자 U69의 ORF 내 영역, 유전자 U70의 ORF 내 영역, 유전자 U71의 ORF 내 영역, 유전자 U75의 ORF 내 영역, 유전자 U76의 ORF 내 영역, 유전자 H5의 ORF 내 영역, 유전자 U79의 ORF 내 영역, 유전자 H6의 ORF 내 영역, 유전자 U80의 ORF 내 영역, 유전자 U81의 ORF 내 영역, 유전자 U84의 ORF 내 영역, 유전자 U85의 ORF 내 영역, 유전자 U91의 ORF 내 영역, 유전자 H7의 ORF 내 영역, 유전자 U95의 ORF 내 영역, 유전자 H8의 ORF 내 영역, 유전자 H1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR2의 ORF 인접 영역, 유전자 H2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR6의 ORF 인접 영역, 유전자 DR7의 ORF 인접 영역, 유전자 H3의 ORF 인접 영역, 유전자 H4의 ORF 인접 영역, 유전자 U2의 ORF 인접 영역, 유전자 U3의 ORF 인접 영역, 유전자 U4의 ORF 인접 영역, 유전자 U5/7의 ORF 인접 영역, 유전자 U8의 ORF 인접 영역, 유전자 U10의 ORF 인접 영역, 유전자 U12의 ORF 인접 영역, 유전자 U13의 ORF 인접 영역, 유전자 U15의 ORF 인접 영역, 유전자 U16의 ORF 인접 영역, 유전자 U17Ex의 ORF 인접 영역, 유전자 U17의 ORF 인접 영역, 유전자 U17a의 ORF 인접 영역, 유전자 U18의 ORF 인접 영역, 유전자 U19의 ORF 인접 영역, 유전자 U20의 ORF 인접 영역, 유전자 U21의 ORF 인접 영역, 유전자 U23의 ORF 인접 영역, 유전자 U24의 ORF 인접 영역, 유전자 U24a의 ORF 인접 영역, 유전자 U25의 ORF 인접 영역, 유전자 U26의 ORF 인접 영역, 유전자 U28의 ORF 인접 영역, 유전자 U32의 ORF 인접 영역, 유전자 U33의 ORF 인접 영역, 유전자 U34의 ORF 인접 영역, 유전자 U35의 ORF 인접 영역, 유전자 U36의 ORF 인접 영역, 유전자 U37의 ORF 인접 영역, 유전자 U40의 ORF 인접 영역, 유전자 U42의 ORF 인접 영역, 유전자 U44의 ORF 인접 영역, 유전자 U45의 ORF 인접 영역, 유전자 U46의 ORF 인접 영역, 유전자 U47의 ORF 인접 영역, 유전자 U49의 ORF 인접 영역, 유전자 U50의 ORF 인접 영역, 유전자 U51의 ORF 인접 영역, 유전자 U52의 ORF 인접 영역, 유전자 U55A의 ORF 인접 영역, 유전자 U55B의 ORF 인접 영역, 유전자 U58의 ORF 인접 영역, 유전자 U59의 ORF 인접 영역, 유전자 U62의 ORF 인접 영역, 유전자 U63의 ORF 인접 영역, 유전자 U64의 ORF 인접 영역, 유전자 U65의 ORF 인접 영역, 유전자 U67의 ORF 인접 영역, 유전자 U68의 ORF 인접 영역, 유전자 U69의 ORF 인접 영역, 유전자 U70의 ORF 인접 영역, 유전자 U71의 ORF 인접 영역, 유전자 U75의 ORF 인접 영역, 유전자 U76의 ORF 인접 영역, 유전자 H5의 ORF 인접 영역, 유전자 U79의 ORF 인접 영역, 유전자 H6의 ORF 인접 영역, 유전자 U80의 ORF 인접 영역, 유전자 U81의 ORF 인접 영역, 유전자 U84의 ORF 인접 영역, 유전자 U85의 ORF 인접 영역, 유전자 U91의 ORF 인접 영역, 유전자 H7의 ORF 인접 영역, 유전자 U95의 ORF 인접 영역, 유전자 H8의 ORF 인접 영역

5. 항목 4에 있어서, 상기 비-필수 영역은 유전자 U24의 ORF 인접 영역 또는 유전자 U24a의 ORF 인접 영역임을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

6. 항목 3에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-6A 또는 HHV-6B의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스:

유전자 LT1의 ORF 내 영역, 유전자 DR1의 ORF 내 영역, 유전자 DR2의 ORF 내 영역, 유전자 DR3의 ORF 내 영역, 유전자 DR4의 ORF 내 영역, 유전자 DR5의 ORF 내 영역, 유전자 DR6의 ORF 내 영역, 유전자 DRHN1의 ORF 내 영역, 유전자 DR7의 ORF 내 영역, 유전자 DRHN2의 ORF 내 영역, 유전자 DR8의 ORF 내 영역, 유전자 LJ1의 ORF 내 영역, 유전자 U1의 ORF 내 영역, 유전자 U2의 ORF 내 영역, 유전자 U3의 ORF 내 영역, 유전자 U4의 ORF 내 영역, 유전자 U5의 ORF 내 영역, 유전자 U6의 ORF 내 영역, 유전자 U7의 ORF 내 영역, 유전자 U8의 ORF 내 영역, 유전자 U9의 ORF 내 영역, 유전자 U10의 ORF 내 영역, 유전자 U12EX의 ORF 내 영역, 유전자 U12의 ORF 내 영역, 유전자 U13의 ORF 내 영역, 유전자 U15의 ORF 내 영역, 유전자 U16의 ORF 내 영역, 유전자 U17의 ORF 내 영역, 유전자 U18의 ORF 내 영역, 유전자 U19의 ORF 내 영역, 유전자 U20의 ORF 내 영역, 유전자 U21의 ORF 내 영역, 유전자 U22의 ORF 내 영역, 유전자 U23의 ORF 내 영역, 유전자 U24의 ORF 내 영역, 유전자 U25의 ORF 내 영역, 유전자 U26의 ORF 내 영역, 유전자 U28의 ORF 내 영역, 유전자 U32의 ORF 내 영역, 유전자 U33의 ORF 내 영역, 유전자 U34의 ORF 내 영역, 유전자 U35의 ORF 내 영역, 유전자 U36의 ORF 내 영역, 유전자 U37의 ORF 내 영역, 유전자 U40의 ORF 내 영역, 유전자 U42의 ORF 내 영역, 유전자 U44의 ORF 내 영역, 유전자 U45의 ORF 내 영역, 유전자 U46의 ORF 내 영역, 유전자 U47의 ORF 내 영역, 유전자 U49의 ORF 내 영역, 유전자 U50의 ORF 내 영역, 유전자 U51의 ORF 내 영역, 유전자 U52의 ORF 내 영역, 유전자 U55의 ORF 내 영역, 유전자 U58의 ORF 내 영역, 유전자 U59의 ORF 내 영역, 유전자 U61의 ORF 내 영역, 유전자 U62의 ORF 내 영역, 유전자 U63의 ORF 내 영역, 유전자 U64의 ORF 내 영역, 유전자 U65의 ORF 내 영역, 유전자 U67의 ORF 내 영역, 유전자 U68의 ORF 내 영역, 유전자 U69의 ORF 내 영역, 유전자 U70의 ORF 내 영역, 유전자 U71의 ORF 내 영역, 유전자 U75의 ORF 내 영역, 유전자 U76의 ORF 내 영역, 유전자 U78의 ORF 내 영역, 유전자 U79의 ORF 내 영역, 유전자 U80의 ORF 내 영역, 유전자 U81의 ORF 내 영역, 유전자 U83의 ORF 내 영역, 유전자 U84의 ORF 내 영역, 유전자 U85의 ORF 내 영역, 유전자 U88의 ORF 내 영역, 유전자 U91의 ORF 내 영역, 유전자 U92의 ORF 내 영역, 유전자 U93의 ORF 내 영역, 유전자 HN2의 ORF 내 영역, 유전자 U94의 ORF 내 영역, 유전자 U95의 ORF 내 영역, 유전자 U96의 ORF 내 영역, 유전자 LT1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR3의 ORF 인접 영역, 유전자 DR4의 ORF 인접 영역, 유전자 DR5의 ORF 인접 영역, 유전자 DR6의 ORF 인접 영역, 유전자 DRHN1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR7의 ORF 인접 영역, 유전자 DRHN2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR8의 ORF 인접 영역, 유전자 LJ1의 ORF 인접 영역, 유전자 U1의 ORF 인접 영역, 유전자 U2의 ORF 인접 영역, 유전자 U3의 ORF 인접 영역, 유전자 U4의 ORF 인접 영역, 유전자 U5의 ORF 인접 영역, 유전자 U6의 ORF 인접 영역, 유전자 U7의 ORF 인접 영역, 유전자 U8의 ORF 인접 영역, 유전자 U9의 ORF 인접 영역, 유전자 U10의 ORF 인접 영역, 유전자 U12EX의 ORF 인접 영역, 유전자 U12의 ORF 인접 영역, 유전자 U13의 ORF 인접 영역, 유전자 U15의 ORF 인접 영역, 유전자 U16의 ORF 인접 영역, 유전자 U17의 ORF 인접 영역, 유전자 U18의 ORF 인접 영역, 유전자 U19의 ORF 인접 영역, 유전자 U20의 ORF 인접 영역, 유전자 U21의 ORF 인접 영역, 유전자 U22의 ORF 인접 영역, 유전자 U23의 ORF 인접 영역, 유전자 U24의 ORF 인접 영역, 유전자 U25의 ORF 인접 영역, 유전자 U26의 ORF 인접 영역, 유전자 U28의 ORF 인접 영역, 유전자 U32의 ORF 인접 영역, 유전자 U33의 ORF 인접 영역, 유전자 U34의 ORF 인접 영역, 유전자 U35의 ORF 인접 영역, 유전자 U36의 ORF 인접 영역, 유전자 U37의 ORF 인접 영역, 유전자 U40의 ORF 인접 영역, 유전자 U42의 ORF 인접 영역, 유전자 U44의 ORF 인접 영역, 유전자 U45의 ORF 인접 영역, 유전자 U46의 ORF 인접 영역, 유전자 U47의 ORF 인접 영역, 유전자 U49의 ORF 인접 영역, 유전자 U50의 ORF 인접 영역, 유전자 U51의 ORF 인접 영역, 유전자 U52의 ORF 인접 영역, 유전자 U55의 ORF 인접 영역, 유전자 U58의 ORF 인접 영역, 유전자 U59의 ORF 인접 영역, 유전자 U61의 ORF 인접 영역, 유전자 U62의 ORF 인접 영역, 유전자 U63의 ORF 인접 영역, 유전자 U64의 ORF 인접 영역, 유전자 U65의 ORF 인접 영역, 유전자 U67의 ORF 인접 영역, 유전자 U68의 ORF 인접 영역, 유전자 U69의 ORF 인접 영역, 유전자 U70의 ORF 인접 영역, 유전자 U71의 ORF 인접 영역, 유전자 U75의 ORF 인접 영역, 유전자 U76의 ORF 인접 영역, 유전자 U78의 ORF 인접 영역, 유전자 U79의 ORF 인접 영역, 유전자 U80의 ORF 인접 영역, 유전자 U81의 ORF 인접 영역, 유전자 U83의 ORF 인접 영역, 유전자 U84의 ORF 인접 영역, 유전자 U85의 ORF 인접 영역, 유전자 U88의 ORF 인접 영역, 유전자 U91의 ORF 인접 영역, 유전자 U92의 ORF 인접 영역, 유전자 U93의 ORF 인접 영역, 유전자 HN2의 ORF 인접 영역, 유전자 U94의 ORF 인접 영역, 유전자 U95의 ORF 인접 영역, 유전자 U96의 ORF 인접 영역

7. 항목 6에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-6의 유전자 U5의 ORF 인접 영역 또는 HHV-6의 유전자 U8의 ORF 인접 영역임을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

8. 항목 3에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 재조합 단백질 의존적 재조합 서열을 포함함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

9. 항목 3에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 선별 마커를 포함함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

10. 항목 9에 있어서, 상기 선별 마커는 약제 선별 마컴임을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

11. 항목 9에 있어서, 상기 선별 마커는 녹색 형광 단백질을 인코드하는 유전자임을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

12. 항목 3에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 야생주로부터 유래함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

13. 항목 3에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 변이주로부터 유래함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

14. 항목 3에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-7 KHR주로부터 유래함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

15. 항목 3에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-6A U1102주 또는 HHV-6B HST주로부터 유래함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

16. 항목 3에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 서열번호: 401에 나타난 서열을 포함함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스

17. 항목 1의 바이러스를 포함한 약학적 조성물

18. 항목 17에 있어서, 상기 조성물은 백신 형태임을 특징으로 하는 약학적 조성물

19. 인간 헤르페스바이러스 필수 유전자 및 BAC 벡터 서열을 포함한 벡터

20. 항목 19에 있어서, 상기 벡터가 포유류 세포 내로 도입시 포유류 세포가 재조합 헤르페스바이러스를 생성함을 특징으로 하는 벡터

21. 항목 20에 있어서, 헤르페스바이러스 게놈 유래의 서열이 BAC 벡터 서열에 결합하는 부분은 헤르페스바이러스 게놈의 비-필수 영역 내에 존재함을 특징으로 하는 벡터

22. 항목 21에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-7의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 벡터:

23. 항목 22에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-7의 유전자 U24의 ORF 인접 영역 또는 HHV-7의 유전자 U24a의 ORF 인접 영역임을 특징으로 하는 벡터

24. 항목 21에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-6의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 벡터:

25. 항목 24에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-6의 유전자 U5의 ORF 인접 영역 또는 HHV-6의 유전자 U8의 ORF 인접 영역임을 특징으로 하는 벡터

26. 항목 19에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 재조합 단백질 의존적 재조합 서열을 포함함을 특징으로 하는 벡터

27. 항목 21에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 선별 마커를 포함함을 특징으로 하는 벡터

28. 항목 27에 있어서, 상기 선별 마커는 약제 선별 마커임을 특징으로 하는 벡터

29. 항목 27에 있어서, 상기 선별 마커는 녹색 형광 단백질을 인코드하는 유전자임을 특징으로 하는 벡터

30. 항목 21에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 야생주로부터 유래함을 특징으로 하는 벡터

31. 항목 21에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 변이주로부터 유래함을 특징으로 하는 벡터

32. 항목 21에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-7 KHR주로부터 유래함을 특징으로 하는 벡터

33. 항목 21에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-6A U1102주 또는 HHV-6B HST주로부터 유래함을 특징으로 하는 벡터

34. 항목 21에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 서열번호: 401에 나타난 서열을 포함함을 특징으로 하는 벡터

35. 항목 21의 벡터를 포함한 세포

36. 항목 35에 있어서, 상기 세포는 박테리아 세포임을 특징으로 하는 세포

37. 항목 36에 있어서, 상기 박테리아 세포는 E. coli임을 특징으로 하는 박테리아 세포

38. 항목 35에 있어서, 상기 세포는 포유류 세포임을 특징으로 하는 세포

39. 항목 38에 있어서, 상기 포유류 세포는 인간으로부터 유래함을 특징으로 하는 포유류 세포

40. 항목 38의 포유류 세포에 의해 생성된 바이러스

41. 항목 40의 바이러스를 포함한 약학적 조성물

42. 항목 41에 있어서, 상기 조성물은 백신 형태임을 특징으로 하는 약학적 조성물

43. 헤르페스바이러스 게놈 필수 유전자 및 BAC 벡터 서열을 포함한 벡터를 포유류 숙주 세포 내로 도입시키는 단계; 및

상기 포유류 숙주 세포를 배양하여 재조합 헤르페스바이러스를 제조하는 단계를 포함한 재조합 헤르페스바이러스의 제조 방법

44. 항목 43에 있어서, 상기 포유류 숙주 세포는 인간으로부터 유래함을 특징으로 하는 방법

45. 항목 43에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 적어도 2 이상의 재조합 단백질 의존적 재조합 서열을 포함함을 특징으로 하는 방법

46. 항목 45에 있어서, 2개의 재조합 단백질 의존적 재조합 서열 사이의 재조합 단계를 더욱 포함함을 특징으로 하는 방법

47. 항목 43에 있어서, 헤르페스바이러스 게놈 유래의 서열이 BAC 벡터 서열에 결합되는 부분이 헤르페스바이러스 게놈의 비-필수 영역 내에 존재함을 특징으로 하는 방법

48. 항목 47에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-7의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 방법:

49. 항목 48에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-7의 유전자 U24의 ORF 인접 영역 또는 HHV-7의 유전자 U24a의 ORF 인접 영역임을 특징으로 하는 방법

50. 항목 47에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-6의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 방법:

51. 항목 50에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-6의 유전자 U5의 ORF 인접 영역 또는 HHV-6의 유전자 U8의 ORF 인접 영역임을 특징으로 하는 방법

52. 항목 43에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 재조합 단백질 의존적 재조합 서열임을 포함함을 특징으로 하는 방법

53. 항목 43에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 선별 마커 포함함을 특징으로 하는 방법

54. 항목 53에 있어서, 상기 선별 마커는 약제 선별 마커임을 특징으로 하는 방법

55. 항목 53에 있어서, 상기 선별 마커는 녹색 형광 단백질을 인코드하는 유전자임을 특징으로 하는 방법

56. 항목 43에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 야생주로부터 유래함을 특징으로 하는 방법

57. 항목 43에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 변이주로부터 유래함을 특징으로 하는 방법

58. 항목 43에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-7 KHR주로부터 유래함을 특징으로 하는 방법

59. 항목 43에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-6A U1102주 또는 HHV-6B HST주로부터 유래함을 특징으로 하는 방법

60. 항목 43에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 서열번호: 401에 나타난 서열을 포함함을 특징으로 하는 방법

61. 항목 43의 방법에 의해 제조된 바이러스

62. 항목 61의 바이러스를 포함한 약학적 조성물

63. 항목 62에 있어서, 상기 조성물은 백신 형태임을 특징으로 하는 약학적 조성물

64. 벡터를 박테리아 숙주 세포 내로 도입시키는 단계;

적어도 하나 이상의 돌연변이를 지니고 헤르페스바이러스 게놈의 일부로 구성된 단편을 포함한 플라스미드 벡터를 상기 박테리아 숙주 세포 내로 도입시키는 단계;

상기 박테리아 숙주 세포를 배양하는 단계;

상기 배양된 박테리아 숙주 세포로부터 BAC 서열을 지닌 벡터를 분리하는 단계를 포함한 항목 19의 벡터 내로의 돌연변이 도입방법

65. 벡터를 박테리아 숙주 세포 내로 도입시키는 단계;

적어도 하나 이상의 돌연변이를 지니고 헤르페스바이러스 게놈의 일부로 구성된 첫 번째 단편을 포함한 첫 번째 플라스미드 벡터를 상기 박테리아 숙주 세포 내로 도입시키는 단계;

적어도 하나 이상의 돌연변이를 지니고 헤르페스바이러스 게놈의 일부로 구성된, 상기 첫 번째 단편과 다른 두 번째 단편을 포함한 두 번째 플라스미드 벡터를 상기 박테리아 숙주 세포 내로 도입시키는 단계;

상기 박테리아 숙주 세포를 배양하는 단계;

66. 박테리아 세포 내에서 헤르페스바이러스 게놈과 재조합될 수 있는 첫 번째 단편, BAC 벡터 서열 및 박테리아 세포 내에서 헤르페스바이러스 게놈과 재조합될 수 있는 두 번째 단편을 포함하고, BAC 서열의 양 말단이 각각 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편에 결합된 핵산 카세트

67. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 적어도 1 kb임을 특징으로 하는 핵산 카세트

68. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 적어도 1.5 kb임을 특징으로 하는 핵산 카세트

69. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 적어도 2 kb임을 특징으로 하는 핵산 카세트

70. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 헤르페스바이러스 게놈 서열과 적어도 80% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트

71. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 헤르페스바이러스 게놈 서열과 적어도 85% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트

72. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 헤르페스바이러스 게놈 서열과 적어도 90% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트

73. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 헤르페스바이러스 게놈 서열과 적어도 95% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트

74. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 헤르페스바이러스 HHV-7 게놈의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택됨을 특징으로 하는 핵산 카세트:

75. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 헤르페스바이러스 HHV-7 게놈의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 영역과 독립적으로 적어도 80% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트:

76. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 헤르페스바이러스 HHV-7 게놈의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 영역과 독립적으로 적어도 85% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트:

77. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 헤르페스바이러스 HHV-7 게놈의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 영역과 독립적으로 적어도 90% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트:

78. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 헤르페스바이러스 HHV-7 하기 게놈의 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 영역과 독립적으로 적어도 95% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트:

79. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 헤르페스바이러스 HHV-6 게놈의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택됨을 특징으로 하는 핵산 카세트:

80. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 헤르페스바이러스 HHV-6 게놈의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 영역과 독립적으로 적어도 80% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트:

81. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 헤르페스바이러스 HHV-6 게놈의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 영역과 독립적으로 적어도 85% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트:

82. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 헤르페스바이러스 HHV-6 게놈의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 영역과 독립적으로 적어도 90% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트:

83. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 헤르페스바이러스 HHV-6 게놈의 하기 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 영역과 독립적으로 적어도 95% 이상 동일함을 특징으로 하는 핵산 카세트:

84. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 다른 영역으로부터 유래함을 특징으로 하는 핵산 카세트

85. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 독립적으로 HHV-7의 유전자 U24의 ORF 인접 영역 또는 HHV-7의 유전자 U24a의 ORF 인접 영역으로부터 유래함을 특징으로 하는 핵산 카세트

86. 항목 66에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 독립적으로 HHV-6의 유전자 U5의 ORF 인접 영역 또는 HHV-6의 유전자 U8의 ORF 인접 영역으로부터 유래함을 특징으로 하는 핵산 카세트

87. 항목 66에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 재조합 단백질 의존적 재조합 서열을 포함함을 특징으로 하는 핵산 카세트

88. 항목 66에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 선별 마커를 포함함을 특징으로 하는 핵산 카세트

89. 항목 88에 있어서, 상기 선별 마커는 약제 선별 마커임을 특징으로 하는 핵산 카세트

90. 항목 88에 있어서, 상기 선별 마커는 녹색 형광 단백질을 인코드하는 유전자임을 특징으로 하는 핵산 카세트

91. 항목 66에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 야생주로부터 유래함을 특징으로 하는 핵산 카세트

92. 항목 66에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 변이주로부터 유래함을 특징으로 하는 방법

93. 항목 66에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-7 KHR주로부터 유래함을 특징으로 하는 방법

94. 항목 66에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-6A U1102주 또는 HHV-6B HST주로부터 유래함을 특징으로 하는 방법

95. 항목 66에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 서열번호: 401에 나타난 서열을 포함함을 특징으로 하는 방법

96. 항목 66에 있어서, 서열번호: 1에 나타난 핵산 서열을 지님을 특징으로 하는 핵산 카세트

97. 항목 4의 재조합 헤르페스바이러스를 포함한 HIV의 예방, 치료 또는 예후용 약학적 조성물

98. 항목 4의 재조합 헤르페스바이러스를 포함한 HIV의 예방용 약학적 조성물

99. 항목 6의 재조합 헤르페스바이러스를 포함한 HIV의 예방, 치료 또는 예후용 약학적 조성물

100. 항목 6의 재조합 헤르페스바이러스를 포함한 HIV의 예방용 약학적 조성물

본 발명은 재조합 헤르페스바이러스 및 그의 제조방법을 제공한다. 예를 들어 본 발명은 BAC(E. coli 인공 염색체)를 이용한 단일 바이러스주로부터의 재조합 헤르페스바이러스의 제조방법 및 본 방법에 의해 제조된 재조합 헤르페스바이러스를 제공한다. 또한 본 발명은 재조합 헤르페스바이러스를 포함한 약학적 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 헤르페스바이러스 게놈 유전자 및 BAC 벡터 서열을 포함한 벡터, 이러한 벡터를 포함한 세포 및 헤르페스바이러스 게놈과의 상동적 재조합이 가능한 단편 및 BAC 벡터 서열을 포함한 핵산 카세트를 제공한다.

또한 HHV-7은 건강한 인체에 부작용이 없는 것으로 알려져 있다. 따라서 다양한 바이러스성 단백질 중 백신으로서 기능하는 것으로 알려진 단백질을 선택하고 그 단백질이 발현될 수 있도록 이를 재조합 HHV-7 내에 도입시키는 것이 가능하다. 따라서 바이러스 백신이 제조될 수 있다.

또한 본 발명의 재조합 HHV-7 및 HHV-6을 포함한 HIV 감염의 예방, 치료 및/또는 예후용 약학적 조성물이 제공된다.

도 1은 HHV-7 게놈 내로의 BAC 벡터의 삽입을 나타내는 개략도이다.
도 2는 본 발명의 재조합 HHV-7를 이용하여 숙주 세포 내로 도입된 GFP의 발현을 나타낸 것이다.
서열목록의 개요
서열번호: 1, JI주 게놈 서열
서열번호: 2, H1, 아미노산 1-170의 5'→3' 방향 33 내지 542 아미노산 서열
서열번호: 3, DR2, 아미노산 1-401의 5'→3' 방향 898 내지 2100 아미노산 서열
서열번호: 4, H2, 아미노산 1-80의 5'→3' 방향 2267 내지 2506 아미노산 서열
서열번호: 5, DR6, 아미노산 1-163의 5'→3' 방향 2562 내지 3050 아미노산 서열
서열번호: 6, DR7, 아미노산 1-263의 5'→3' 방향 3122 내지 3910 아미노산 서열
서열번호: 7, U10, 아미노산 1-452의 5'→3' 방향 14608 내지 15963 아미노산 서열
서열번호: 8, U12, 아미노산 1-347의 5'→3' 방향 18396 내지 19436 아미노산 서열
서열번호: 9, U13, 아미노산 1-99의 5'→3' 방향 19521 내지 19817 아미노산 서열
서열번호: 10, U14, 아미노산 1-649 의 5'→3' 방향 19885 내지 21831 아미노산 서열
서열번호: 11, U17a, 아미노산 1-90의 5'→3' 방향 24318 내지 24587 아미노산 서열
서열번호: 12, U30, 아미노산 1-939 의 5'→3' 방향 37362 내지 40178 아미노산 서열
서열번호: 13, U31, 아미노산 1-2060의 5'→3' 방향 40179 내지 46358 아미노산 서열
서열번호: 14, U36, 아미노산 1-486의 5'→3' 방향 아미노산 서열 49118 내지 50575
서열번호: 15, U37, 아미노산 1-260의 5'→3' 방향 50577 내지 51356 아미노산 서열
서열번호: 16, U44, 아미노산 1-204의 5'→3' 방향 67143 내지 67754 아미노산 서열
서열번호: 17, U46, 아미노산 1-87의 5'→3' 방향 68930 내지 69190 아미노산 서열
서열번호: 18, U49, 아미노산 1-240의 5'→3' 방향 73003 내지 73722 아미노산 서열
서열번호: 19, U51, 아미노산 1-295의 5'→3' 방향 75304 내지 76188 아미노산 서열
서열번호: 20, U53, 아미노산 1-513의 5'→3' 방향 76957 내지 78495 아미노산 서열
서열번호: 21, U58, 아미노산 1-776의 5'→3' 방향 87563 내지 89890 아미노산 서열
서열번호: 22, U62, 아미노산 1-76의 5'→3' 방향 92017 내지 92244 아미노산 서열
서열번호: 23, U64, 아미노산 1-440의 5'→3' 방향 92829 내지 94148 아미노산 서열
서열번호: 24, U67, 아미노산 1-347의 5'→3' 방향 95984 내지 97024 아미노산 서열
서열번호: 25, U69, 아미노산 1-547의 5'→3' 방향 97371 내지 99011 아미노산 서열
서열번호: 26, U70, 아미노산 1-481의 5'→3' 방향 99013 내지 100455 아미노산 서열
서열번호: 27, U73, 아미노산 1-788의 5'→3' 방향 101693 내지 104056 아미노산 서열
서열번호: 28, U77, 아미노산 1-821의 5'→3' 방향 108435 내지 110897 아미노산 서열
서열번호: 29, H5, 아미노산 1-167의 5'→3' 방향 112811 내지 11331 아미노산 서열
서열번호: 30, U79, 아미노산 1-234의 5'→3' 방향 113502 내지 114203 아미노산 서열
서열번호: 31, H6, 아미노산 1-83의 5'→3' 방향 114257 내지 114505 아미노산 서열
서열번호: 32, U80, 아미노산 1-211의 5'→3' 방향 114557 내지 115189 아미노산 서열
서열번호: 33, U91, 아미노산 1-168의 5'→3' 방향 129122 내지 129625 아미노산 서열
서열번호: 34, H7, 아미노산 1-428의 5'→3' 방향 130829 내지 132112 아미노산 서열
서열번호: 35, U95, 아미노산 1-941의 5'→3' 방향 133382 내지 136204 아미노산 서열
서열번호: 36, H1, 아미노산 1-170의 5'→3' 방향 139080 내지 139589 아미노산 서열
서열번호: 37, DR2, 아미노산 1-401의 5'→3' 방향 139945 내지 141147 아미노산 서열
서열번호: 38, H2, 아미노산 1-80의 5'→3' 방향 141314 내지 141553 아미노산 서열
서열번호: 39, DR6, 아미노산 1-163의 5'→3' 방향 141609 내지 142097 아미노산 서열
서열번호: 40, DR7, 아미노산 1-263의 5'→3' 방향 142169 내지 142957 아미노산 서열
서열번호: 41, DR1, 아미노산 1-153의 5'→3' 방향 368 내지 826 핵산 서열
서열번호: 42, DR1, 아미노산 1-153의 5'→3' 방향 368 내지 826 아미노산 서열
서열번호: 43, U50, 아미노산 1-555의 5'→3' 방향 73538 내지 75202 핵산 서열
서열번호: 44, U50, 아미노산 1-555의 5'→3' 방향 73538 내지 75202 아미노산 서열
서열번호: 45, U59, 아미노산 1-348의 5'→3' 방향 89838 내지 90881 핵산 서열
서열번호: 46, U59, 아미노산 1-348의 5'→3' 방향 89838 내지 90881 아미노산 서열
서열번호: 47, U63, 아미노산 1-212의 5'→3' 방향 92216 내지 92851 핵산 서열
서열번호: 48, U63, 아미노산 1-212의 5'→3' 방향 92216 내지 92851 아미노산 서열
서열번호: 49, U65, 아미노산 1-331의 5'→3' 방향 94111 내지 95103 핵산 서열
서열번호: 50, U65, 아미노산 1-331의 5'→3' 방향 94111 내지 95103 아미노산 서열
서열번호: 51, U68, 아미노산 1-115의 5'→3' 방향 97024 내지 97368 핵산 서열
서열번호: 52, U68, 아미노산 1-115의 5'→3' 방향 97024 내지 97368 아미노산 서열
서열번호: 53, U71, 아미노산 1-74의 5'→3' 방향 100392 내지 100613 핵산 서열
서열번호: 54, U71, 아미노산 1-74의 5'→3' 방향 100392 내지 100613 아미노산 서열
서열번호: 55, U74, 아미노산 1-660의 5'→3' 방향 104007 내지 105986 핵산 서열
서열번호: 56, U74, 아미노산 1-660의 5'→3' 방향 104007 내지 105986 아미노산 서열
서열번호: 57, DR1, 아미노산 1-153의 5'→3' 방향 139415 내지 139873 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 58, DR1 아미노산 1-153의 5'→3' 방향 139415 내지 139873 아미노산 서열
서열번호: 59, JI주의 게놈 서열(상보 스트랜드)
서열번호: 60, H3, 아미노산 1-83의 3'→5' 방향 3976 내지 4224 아미노산 서열
서열번호: 61, H4, 아미노산 1-99의 3'→5' 방향 4449 내지 4745 아미노산 서열
서열번호: 62, U2, 아미노산 1-360의 3'→5' 방향 6338 내지 7417 아미노산 서열
서열번호: 63, U3, 아미노산 1-385의 3'→5' 방향 7578 내지 8732 아미노산 서열
서열번호: 64, U4, 아미노산 1-543의 3'→5' 방향 8754 내지 10382 아미노산 서열
서열번호: 65, U5/7, 아미노산 1-866의 3'→5' 방향 10407 내지 13004 아미노산 서열
서열번호: 66, U8, 아미노산 1-363의 3'→5' 방향 13174 내지 14262 아미노산 서열
서열번호: 67, U11, 아미노산 1-756의 3'→5' 방향 15982 내지 18249 아미노산 서열
서열번호: 68, U15, 아미노산 1-107의 3'→5' 방향 22244 내지 22564 아미노산 서열
서열번호: 69, U17, 아미노산 1-89의 3'→5' 방향 23570 내지 23836 아미노산 서열
서열번호: 70, U18, 아미노산 1-296의 3'→5' 방향 24713 내지 25600 아미노산 서열
서열번호: 71, U19, 아미노산 1-326의 3'→5' 방향 25945 내지 26922 아미노산 서열
서열번호: 72, U21, 아미노산 1-431의 3'→5' 방향 28202 내지 29494 아미노산 서열
서열번호: 73, U23, 아미노산 1-172의 3'→5' 방향 29903 내지 30418 아미노산 서열
서열번호: 74, U24, 아미노산 1-83의 3'→5' 방향 30524 내지 30772 아미노산 서열
서열번호: 75, U25, 아미노산 1-321의 3'→5' 방향 30936 내지 31898 아미노산 서열
서열번호: 76, U27, 아미노산 1-365의 3'→5' 방향 32857 내지 33951 아미노산 서열
서열번호: 77, U28, 아미노산 1-807의 3'→5' 방향 34064 내지 36484 아미노산 서열
서열번호: 78, U29, 아미노산 1-287의 3'→5' 방향 36487 내지 37347 아미노산 서열
서열번호: 79, U32, 아미노산 1-91의 3'→5' 방향 46355 내지 46627 아미노산 서열
서열번호: 80, U34, 아미노산 1-259의 3'→5' 방향 47992 내지 48768 아미노산 서열
서열번호: 81, U35, 아미노산 1-105의 3'→5' 방향 48805 내지 49119 아미노산 서열
서열번호: 82, U38, 아미노산 1-1013의 3'→5' 방향 51363 내지 54401 아미노산 서열
서열번호: 83, U40, 아미노산 1-722의 3'→5' 방향 56832 내지 58997 아미노산 서열
서열번호: 84, U41, 아미노산 1-1132의 3'→5' 방향 59000 내지 62395 아미노산 서열
서열번호: 85, U42, 아미노산 1-527의 3'→5' 방향 62772 내지 64352 아미노산 서열
서열번호: 86, U43, 아미노산 1-862의 3'→5' 방향 64501 내지 67086 아미노산 서열
서열번호: 87, U45, 아미노산 1-380의 3'→5' 방향 67759 내지 68898 아미노산 서열
서열번호: 88, U47, 아미노산 1-314의 3'→5' 방향 69638 내지 70579 아미노산 서열
서열번호: 89, U48, 아미노산 1-691의 3'→5' 방향 70817 내지 72889 아미노산 서열
서열번호: 90, U52, 아미노산 1-255의 3'→5' 방향 76185 내지 7694 아미노산 서열
서열번호: 91, U54, 아미노산 1-456의 3'→5' 방향 78503 내지 79870 아미노산 서열
서열번호: 92, U55A, 아미노산 1-428의 3'→5' 방향 79918 내지 81201 아미노산 서열
서열번호: 93, U55B, 아미노산 1-431의 3'→5' 방향 81285 내지 82577 아미노산 서열
서열번호: 94, U56, 아미노산 1-294의 3'→5' 방향 82630 내지 83511 아미노산 서열
서열번호: 95, U57, 아미노산 1-1346의 3'→5' 방향 83514 내지 87551 아미노산 서열
서열번호: 96, U72, 아미노산 1-347의 3'→5' 방향 100636 내지 1016735 아미노산 서열
서열번호: 97, U76, 아미노산 1-641의 3'→5' 방향 106667 내지 108589 아미노산 서열
서열번호: 98, U81, 아미노산 1-255의 3'→5' 방향 115184 내지 115948 아미노산 서열
서열번호: 99, U82, 아미노산 1-247의 3'→5' 방향 116038 내지 116778 아미노산 서열
서열번호: 100, U84, 아미노산 1-311의 3'→5' 방향 117111 내지 118043 아미노산 서열
서열번호: 101, U85, 아미노산 1-281의 3'→5' 방향 118071 내지 118913 아미노산 서열
서열번호: 102, U86, 아미노산 1-1206의 3'→5' 방향 119091 내지 122708 아미노산 서열
서열번호: 103, U89, 아미노산 1-1083의 3'→5' 방향 125420 내지 128668 아미노산 서열
서열번호: 104, U90, 아미노산 1-92의 3'→5' 방향 128776 내지 129051 아미노산 서열
서열번호: 105, H8, 아미노산 1-91의 3'→5' 방향 136307 내지 136579 아미노산 서열
서열번호: 106, U99, 아미노산 1-106의 3'→5' 방향 138375 내지 138692 아미노산 서열
서열번호: 107, U100, 아미노산 1-83의 3'→5' 방향 138751 내지 138999 아미노산 서열
서열번호: 108, H3, 아미노산 1-83의 3'→5' 방향 143023 내지 143271 아미노산 서열
서열번호: 109, H4, 아미노산 1-99의 3'→5' 방향 143496 내지 143792 아미노산 서열
서열번호: 110, U17Ex, 아미노산 1-331의 3'→5' 방향 22772 내지 23547 및 23620 내지 23836 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 111, U17Ex, 아미노산 1-331의 3'→5' 방향 22772 내지 23547 및 23620 내지 23836 아미노산 서열
서열번호: 112, U60-U66, 아미노산 1-664의 3'→5' 방향 90878 내지 92005 및 95122 내지 95985 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 113, U60-U66, 아미노산 1-664의 3'→5' 방향 90878 내지 92005 및 95122 내지 95985 아미노산 서열
서열번호: 114, U20, 아미노산 1-392의 3'→5' 방향 27036 to 28211 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 115, U20, 아미노산 1-392의 3'→5' 방향 27036 내지 28211 아미노산 서열
서열번호: 116, U24a, 아미노산 1-118의 3'→5' 방향 30776 내지 31129 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 117, U24a, 아미노산 1-118의 3'→5' 방향 30776 내지 31129 아미노산 서열
서열번호: 118, U26, 아미노산 1-294의 3'→5' 방향 31988 내지 32869 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 119, U26, 아미노산 1-294의 3'→5' 방향 31988 내지 32869 아미노산 서열
서열번호: 120, U33, 아미노산 1-478의 3'→5' 방향 46608 내지 48041 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 121, U33, 아미노산 1-478의 3'→5' 방향 46608 내지 48041 아미노산 서열
서열번호: 122, U39, 아미노산 1-823의 3'→5' 방향 54401 내지 56869 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 123, U39, 아미노산 1-823의 3'→5' 방향 54401 내지 56869 아미노산 서열
서열번호: 124, U75, 아미노산 1-257의 3'→5' 방향 105973 내지 106743 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 125, U75, 아미노산 1-257의 3'→5' 방향 105973 내지 106743 아미노산 서열
서열번호: 126, U98, 아미노산 1-169의 3'→5' 방향 137945 내지 138451 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 127, U98, 아미노산 1-169의 3'→5' 방향 137945 내지 138451 아미노산 서열
서열번호: 128, U1102주의 게놈 서열
서열번호: 129, DR1, 아미노산 1-98의 5'→3' 방향 501 내지 794 아미노산 서열
서열번호: 130, DR4, 아미노산 1-101의 5'→3' 방향 2746 내지 3048 아미노산 서열
서열번호: 131, DR6, 아미노산 1-104의 5'→3' 방향 4725 내지 5036 아미노산 서열
서열번호: 132, DR7, 아미노산 1-364의 5'→3' 방향 5629 내지 6720 아미노산 서열
서열번호: 133, DR8, 아미노산 1-111의 5'→3' 방향 7237 내지 7569 아미노산 서열
서열번호: 134, U1, 아미노산 1-124의 5'→3' 방향 8245 내지 8616 아미노산 서열
서열번호: 135, U6, 아미노산 1-83의 5'→3' 방향 14619 내지 14867 아미노산 서열
서열번호: 136, U10, 아미노산 1-437의 5'→3' 방향 17604 내지 18914 아미노산 서열
서열번호: 137, U12, 아미노산 1-319의 5'→3' 방향 21856 내지 22812 아미노산 서열
서열번호: 138, U13, 아미노산 1-107의 5'→3' 방향 22898 내지 23218 아미노산 서열
서열번호: 139, U14, 아미노산 1-610의 5'→3' 방향 23316 내지 25145 아미노산 서열
서열번호: 140, U30, 아미노산 1-1083의 5'→3' 방향 41884 내지 45132 아미노산 서열
서열번호: 141, U31, 아미노산 1-2078의 5'→3' 방향 45150 내지 51383 아미노산 서열
서열번호: 142, U36, 아미노산 1-485의 5'→3' 방향 54252 내지 55706 아미노산 서열
서열번호: 143, U37, 아미노산 1-265의 5'→3' 방향 55710 내지 56504 아미노산 서열
서열번호: 144, U44, 아미노산 1-214의 5'→3' 방향 73446 내지 74087 아미노산 서열
서열번호: 145, U46, 아미노산 1-85의 5'→3' 방향 75291 내지 75545 아미노산 서열
서열번호: 146, U49, 아미노산 1-253의 5'→3' 방향 80277 내지 81035 아미노산 서열
서열번호: 147, U51, 아미노산 1-302의 5'→3' 방향 82574 내지 83479 아미노산 서열
서열번호: 148, U53, 아미노산 1-529의 5'→3' 방향 84281 내지 85867 아미노산 서열
서열번호: 149, U58, 아미노산 1-773의 5'→3' 방향 93924 내지 96242 아미노산 서열
서열번호: 150, U62, 아미노산 1-86의 5'→3' 방향 98427 내지 98684 아미노산 서열
서열번호: 151, U64, 아미노산 1-443의 5'→3' 방향 99260 내지 100588 아미노산 서열
서열번호: 152, U67, 아미노산 1-354의 5'→3' 방향 102458 내지 103519 아미노산 서열
서열번호: 153, U69, 아미노산 1-563의 5'→3' 방향 103866 내지 105554 아미노산 서열
서열번호: 154, U70, 아미노산 1-489의 5'→3' 방향 105562 내지 107028 아미노산 서열
서열번호: 155, U73, 아미노산 1-781의 5'→3' 방향 108325 내지 110667 아미노산 서열
서열번호: 156, U77, 아미노산 1-825의 5'→3' 방향 115100 내지 117574 아미노산 서열
서열번호: 157, U79, 아미노산 1-345의 5'→3' 방향 120164 내지 121198 아미노산 서열
서열번호: 158, U83, 아미노산 1-98의 5'→3' 방향 123528 내지 123821 아미노산 서열
서열번호: 159, U88, 아미노산 1-414의 5'→3' 방향 131034 내지 132275 아미노산 서열
서열번호: 160, 추정 단백질 U90, 아미노산 1-72의 5'→3' 방향 136266 내지 136481 아미노산 서열
서열번호: 161, U91, 아미노산 1-115의 5'→3' 방향 136485 내지 136829 아미노산 서열
서열번호: 162, U95, 아미노산 1-1122의 5'→3' 방향 142941 내지 146306 아미노산 서열
서열번호: 163, DR1, 아미노산 1-98의 5'→3' 방향 151734 내지 152027 아미노산 서열
서열번호: 164, DR4, 아미노산 1-101의 5'→3' 방향 153979 내지 154281 아미노산 서열
서열번호: 165, DR6, 아미노산 1-104의 5'→3' 방향 155958 내지 156269 아미노산 서열
서열번호: 166, DR7, 아미노산 1-364의 5'→3' 방향 156862 내지 157953 아미노산 서열
서열번호: 167, DR8, 아미노산 1-111의 5'→3' 방향 158470 내지 158802 아미노산 서열
서열번호: 168, DR2, 아미노산 1-621의 5'→3' 방향 791 내지 2653 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 169, DR2, 아미노산 1-621의 5'→3' 방향 791 내지 2653 아미노산 서열
서열번호: 170, U12 엑손 1-2, 아미노산 1-348의 5'→3' 방향 21680 내지 21710 및 21800 내지 22812 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 171, U12 엑손 1-2, 아미노산 1-348의 5'→3' 방향 21680 내지 21710 및 21800 내지 22812 아미노산 서열
서열번호: 172, U50, 아미노산 1-556의 5'→3' 방향 80812 내지 82479 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 173, U50, 아미노산 1-556의 5'→3' 방향 80812 내지 82479 아미노산 서열
서열번호: 174, U59, 아미노산 1-351의 5'→3' 방향 96239 내지 97291 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 175, U59, 아미노산 1-351의 5'→3' 방향 96239 내지 97291 아미노산 서열
서열번호: 176, U63, 아미노산 1-217의 5'→3' 방향 98632 내지 99282 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 177, U63, 아미노산 1-217의 5'→3' 방향 98632 내지 99282 아미노산 서열
서열번호: 178, U65, 아미노산 1-336의 5'→3' 방향 100545 내지 101552 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 179, U65, 아미노산 1-336의 5'→3' 방향 100545 내지 101552 아미노산 서열
서열번호: 180, U68, 아미노산 1-115의 5'→3' 방향 103519 내지 103863 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 181, U68, 아미노산 1-115의 5'→3' 방향 103519 내지 103863 아미노산 서열
서열번호: 182, U71, 아미노산 1-78의 5'→3' 방향 106965 내지 107198 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 183, U71, 아미노산 1-78의 5'→3' 방향 106965 내지 107198 아미노산 서열
서열번호: 184, U74, 아미노산 1-663의 5'→3' 방향 110636 내지 112624 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 185, U74, 아미노산 1-663의 5'→3' 방향 110636 내지 112624 아미노산 서열
서열번호: 186, U80, 아미노산 1-199의 5'→3' 방향 121170 내지 121766 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 187, U80, 아미노산 1-199의 5'→3' 방향 121170 내지 121766 아미노산 서열
서열번호: 188, DR2', 아미노산 1-621의 5'→3' 방향 152024 내지 153886 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 189, DR2', 아미노산 1-621의 5'→3' 방향 152024 내지 153886 아미노산 서열
서열번호: 190, U1102주의 게놈 서열(상보적 스트랜드)
서열번호: 191, DR5, 아미노산 1-146의 3'→5' 방향 154967 내지 155404 아미노산 서열
서열번호: 192, DR3, 아미노산 1-193의 3'→5' 방향 153634 내지 154212 아미노산 서열
서열번호: 193, RJ1, 아미노산 1-144의 3'→5' 방향 151140 내지 151571 아미노산 서열
서열번호: 194, U100, 아미노산 1-190의 3'→5' 방향 149868 내지 150437 아미노산 서열
서열번호: 195, U99, 아미노산 1-94의 3'→5' 방향 149485 내지 149766 아미노산 서열
서열번호: 196, U98, 아미노산 1-217의 3'→5' 방향 148741 내지 149391 아미노산 서열
서열번호: 197, U97, 아미노산 1-90의 3'→5' 방향 147808 내지 148077 아미노산 서열
서열번호: 198, U96, 아미노산 1-100의 3'→5' 방향 146641 내지 146940 아미노산 서열
서열번호: 199, U94, 아미노산 1-491의 3'→5' 방향 141394 내지 142866 아미노산 서열
서열번호: 200, U93, 아미노산 1-198의 3'→5' 방향 138531 내지 139124 아미노산 서열
서열번호: 201, U92, 아미노산 1-148의 3'→5' 방향 138049 내지 138492 아미노산 서열
서열번호: 202, U90, 아미노산 1-95의 3'→5' 방향 135664 내지 135948 아미노산 서열
서열번호: 203, U89, 아미노산 1-840의 3'→5' 방향 133091 내지 135610 아미노산 서열
서열번호: 204, U86, 아미노산 1-716의 3'→5' 방향 125989 내지 128136 아미노산 서열
서열번호: 205, U85, 아미노산 1-291의 3'→5' 방향 124981 내지 125853 아미노산 서열
서열번호: 206, U84, 아미노산 1-343의 3'→5' 방향 123925 내지 124953 아미노산 서열
서열번호: 207, U82, 아미노산 1-251의 3'→5' 방향 122653 내지 123405 아미노산 서열
서열번호: 208, U81, 아미노산 1-256의 3'→5' 방향 121810 내지 122577 아미노산 서열
서열번호: 209, U78, 아미노산 1-110의 3'→5' 방향 118709 내지 119038 아미노산 서열
서열번호: 210, U75, 아미노산 1-250의 3'→5' 방향 112659 내지 113408 아미노산 서열
서열번호: 211, U72, 아미노산 1-345의 3'→5' 방향 107278 내지 108312 아미노산 서열
서열번호: 212, U66, 아미노산 1-306의 3'→5' 방향 101569 내지 102486 아미노산 서열
서열번호: 213, U60, 아미노산 1-323의 3'→5' 방향 97288 내지 9825 아미노산 서열
서열번호: 214, U57, 아미노산 1-1346의 3'→5' 방향 89875 내지 93912 아미노산 서열
서열번호: 215, U56, 아미노산 1-297의 3'→5' 방향 88983 내지 89873 아미노산 서열
서열번호: 216, U55, 아미노산 1-433의 3'→5' 방향 87505 내지 88803 아미노산 서열
서열번호: 217, U54, 아미노산 1-459의 3'→5' 방향 86051 내지 87427 아미노산 서열
서열번호: 218, U52, 아미노산 1-259의 3'→5' 방향 83498 내지 84274 아미노산 서열
서열번호: 219, U48, 아미노산 1-695의 3'→5' 방향 78034 내지 80118 아미노산 서열
서열번호: 220, U47, 아미노산 1-652의 3'→5' 방향 75912 내지 77867 아미노산 서열
서열번호: 221, U45, 아미노산 1-377의 3'→5' 방향 74088 내지 75218 아미노산 서열
서열번호: 222, U43, 아미노산 1-861의 3'→5' 방향 70823 내지 73405 아미노산 서열
서열번호: 223, U42, 아미노산 1-515의 3'→5' 방향 69054 내지 70598 아미노산 서열
서열번호: 224, U41, 아미노산 1-1133의 3'→5' 방향 64222 내지 67620 아미노산 서열
서열번호: 225, U40, 아미노산 1-727의 3'→5' 방향 62034 내지 64214 아미노산 서열
서열번호: 226, U38, 아미노산 1-1013의 3'→5' 방향 56550 내지 59588 아미노산 서열
서열번호: 227, U35, 아미노산 1-107의 3'→5' 방향 53933 내지 54253 아미노산 서열
서열번호: 228, U33, 아미노산 1-471의 3'→5' 방향 51723 내지 53135 아미노산 서열
서열번호: 229, U32, 아미노산 1-89의 3'→5' 방향 51455 내지 51721 아미노산 서열
서열번호: 230, U29, 아미노산 1-300의 3'→5' 방향 41457 내지 42356 아미노산 서열
서열번호: 231, U28, 아미노산 1-805의 3'→5' 방향 39020 내지 41434 아미노산 서열
서열번호: 232, U26, 아미노산 1-296의 3'→5' 방향 36922 내지 37809 아미노산 서열
서열번호: 233, U25, 아미노산 1-317의 3'→5' 방향 35864 내지 36814 아미노산 서열
서열번호: 234, 불명1, 아미노산 1-58의 3'→5' 방향 35674 내지 35847 아미노산 서열
서열번호: 235, U24, 아미노산 1-88의 3'→5' 방향 35392 내지 35655 아미노산 서열
서열번호: 236, U23, 아미노산 1-237의 3'→5' 방향 34375 내지 35085 아미노산 서열
서열번호: 237, U22, 아미노산 1-203의 3'→5' 방향 33739 내지 34347 아미노산 서열
서열번호: 238, U21, 아미노산 1-434의 3'→5' 방향 32340 내지 33641 아미노산 서열
서열번호: 239, U20, 아미노산 1-423의 3'→5' 방향 31069 내지 32337 아미노산 서열
서열번호: 240, U19, 아미노산 1-390의 3'→5' 방향 29649 내지 30818 아미노산 서열
서열번호: 241, U18, 아미노산 1-294의 3'→5' 방향 28508 내지 29389 아미노산 서열
서열번호: 242, U16, 아미노산 1-286의 3'→5' 방향 26259 내지 27116 아미노산 서열
서열번호: 243, U15, 아미노산 1-111의 3'→5' 방향 25660 내지 25992 아미노산 서열
서열번호: 244, U11, 아미노산 1-871의 3'→5' 방향 18966 내지 21578 아미노산 서열
서열번호: 245, U9, 아미노산 1-105의 3'→5' 방향 17238 내지 17552 아미노산 서열
서열번호: 246, U8, 아미노산 1-357 의 3'→5' 방향 16021 내지 17091 아미노산 서열
서열번호: 247, U7, 아미노산 1-343의 3'→5' 방향 14908 내지 15936 아미노산 서열
서열번호: 248, U5, 아미노산 1-445의 3'→5' 방향 13214 내지 14548 아미노산 서열
서열번호: 249, U4, 아미노산 1-536의 3'→5' 방향 11485 내지 13092 아미노산 서열
서열번호: 250, U3, 아미노산 1-374의 3'→5' 방향 10155 내지 11276 아미노산 서열
서열번호: 251, U2, 아미노산 1-367의 3'→5' 방향 8716 내지 9816 아미노산 서열
서열번호: 252, LJ1, 아미노산 1-322의 3'→5' 방향 7467 내지 8432 아미노산 서열
서열번호: 253, DR5, 아미노산 1-146의 3'→5' 방향 3734 내지 4171 아미노산 서열
서열번호: 254, DR3, 아미노산 1-193의 3'→5' 방향 2401 내지 2979 아미노산 서열
서열번호: 255, LT1, 아미노산 1-113의 3'→5' 방향 1 내지 338 아미노산 서열
서열번호: 256, U16 엑손 1-2, 아미노산 1-313의 3'→5' 방향 26259 내지 27034 및 27187 내지 27349 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 257, U16 엑손 1-2, 아미노산 1-313의 3'→5' 방향 26259 내지 27034 및 27187 내지 27349 아미노산 서열
서열번호: 258, U17, 아미노산 1-134의 3'→5' 방향 26948 내지 27349 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 259, U17, 아미노산 1-134의 3'→5' 방향 26948 내지 27349 아미노산 서열
서열번호: 260, U39, 아미노산 1-831의 3'→5' 방향 59588 내지 62080 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 261, U39, 아미노산 1-831의 3'→5' 방향 59588 내지 62080 아미노산 서열
서열번호: 262, U34, 아미노산 1-277의 3'→5' 방향 53086 내지 53916 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 263, U34, 아미노산 1-277의 3'→5' 방향 53086 내지 53916 아미노산 서열
서열번호: 264, U27, 아미노산 1-394의 3'→5' 방향 37797 내지 38978 아미노산 서열
서열번호: 265, U27, 아미노산 1-394의 3'→5' 방향 37797 내지 38978 아미노산 서열
서열번호: 266, U61, 아미노산 1-116의 3'→5' 방향 98231 내지 98578 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 267, U61, 아미노산 1-116의 3'→5' 방향 98231 내지 98578 아미노산 서열
서열번호: 268, U76, 아미노산 1-663의 3'→5' 방향 113317 내지 115305 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 269, U76, 아미노산 1-663의 3'→5' 방향 113317 내지 115305 아미노산 서열
서열번호: 270, U87, 아미노산 1-831의 3'→5' 방향 127551 내지 130043 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 271, U87, 아미노산 1-831의 3'→5' 방향 127551 내지 130043 아미노산 서열
서열번호: 272, HST주의 게놈 서열
서열번호: 273, DR1, 아미노산 1-89의 5'→3' 방향 576 내지 842 아미노산 서열
서열번호: 274, DR2, 아미노산 1-648의 5'→3' 방향 1027 내지 2970 아미노산 서열
서열번호: 275, DR6, 아미노산 1-104의 5'→3' 방향 5025 내지 5336 아미노산 서열
서열번호: 276, DR7, 아미노산 1-213의 5'→3' 방향 6512 내지 7150 아미노산 서열
서열번호: 277, D, 아미노산 1-245의 5'→3' 방향 7928 내지 8662 아미노산 서열
서열번호: 278, U1, 아미노산 1-152의 5'→3' 방향 8929 내지 9384 아미노산 서열
서열번호: 279, U6, 아미노산 1-86의 5'→3' 방향 15395 내지 15652 아미노산 서열
서열번호: 280, U10, 아미노산 1-504의 5'→3' 방향 18386 내지 19897 아미노산 서열
서열번호: 281, U13, 아미노산 1-108의 5'→3' 방향 23699 내지 24022 아미노산 서열
서열번호: 282, U14, 아미노산 1-606의 5'→3' 방향 24136 내지 25953 아미노산 서열
서열번호: 283, U30, 아미노산 1-1083의 5'→3' 방향 42839 내지 46087 아미노산 서열 53 direction, , amino acid sequence of amino acids
서열번호: 284, U31, 아미노산 1-2078의 5'→3' 방향 46105 내지 52338 아미노산 서열
서열번호: 285, U36, 아미노산 1-483의 5'→3' 방향 55212 내지 56660 아미노산 서열
서열번호: 286, U37, 아미노산 1-265의 5'→3' 방향 56664 내지 57458 아미노산 서열
서열번호: 287, U44, 아미노산 1-232의 5'→3' 방향 74335 내지 75030 아미노산 서열
서열번호: 288, U46, 아미노산 1-85의 5'→3' 방향 76180 내지 76434 아미노산 서열
서열번호: 289, U49, 아미노산 1-253의 5'→3' 방향 81342 내지 82100 아미노산 서열
서열번호: 290, U51, 아미노산 1-302의 5'→3' 방향 83642 내지 84547 아미노산 서열
서열번호: 291, U53, 아미노산 1-529의 5'→3' 방향 85350 내지 86936 아미노산 서열
서열번호: 292, U58, 아미노산 1-773의 5'→3' 방향 95048 내지 97366 아미노산 서열
서열번호: 293, U59, 아미노산 1-347의 5'→3' 방향 97375 내지 98415 아미노산 서열
서열번호: 294, U62, 아미노산 1-88의 5'→3' 방향 99551 내지 99814 아미노산 서열
서열번호: 295, U64, 아미노산 1-443의 5'→3' 방향 100390 내지 101718 아미노산 서열
서열번호: 296, U67, 아미노산 1-354의 5'→3' 방향 103591 내지 104652 아미노산 서열
서열번호: 297, U69, 아미노산 1-564의 5'→3' 방향 104999 내지 106690 아미노산 서열
서열번호: 298, U70, 아미노산 1-489의 5'→3' 방향 106698 내지 108164 아미노산 서열
서열번호: 299, U73, 아미노산 1-781의 5'→3' 방향 109475 내지 111817 아미노산 서열
서열번호: 300, U77, 아미노산 1-825의 5'→3' 방향 116250 내지 118724 아미노산 서열
서열번호: 301, U79, 아미노산 1-346의 5'→3' 방향 121322 내지 122359 아미노산 서열
서열번호: 302, U80, 아미노산 1-101의 5'→3' 방향 122640 내지 122942 아미노산 서열
서열번호: 303, U83, 아미노산 1-114의 5'→3' 방향 124657 내지 124998 아미노산 서열
서열번호: 304, U91, 아미노산 1-115의 5'→3' 방향 138630 내지 138974 아미노산 서열
서열번호: 305, U95, 아미노산 1-1213의 5'→3' 방향 144230 내지 147868 아미노산 서열
서열번호: 306, DR1R, 아미노산 1-89의 5'→3' 방향 153618 내지 153884 아미노산 서열
서열번호: 307, DR2R, 아미노산 1-648의 5'→3' 방향 154069 내지 156012 아미노산 서열
서열번호: 308, DR6R, 아미노산 1-104의 5'→3' 방향 158067 내지 158378 아미노산 서열
서열번호: 309, DR7R, 아미노산 1-213의 5'→3' 방향 159554 내지 160192 아미노산 서열
서열번호: 310, U12, 아미노산 1-354의 5'→3' 방향 22479 내지 22511 및 22589 내지 23617 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 311, U12, 아미노산 1-354의 5'→3' 방향 22479 내지 22511 및 22589 내지 23617 아미노산 서열
서열번호: 312, U50, 아미노산 1-556의 5'→3' 방향 81877 내지 83544 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 313, U50, 아미노산 1-556의 5'→3' 방향 81877 내지 83544 아미노산 서열
서열번호: 314, U63, 아미노산 1-219의 5'→3' 방향 99756 내지 100412 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 315, U63, 아미노산 1-219의 5'→3' 방향 99756 내지 100412 아미노산 서열
서열번호: 316, U65, 아미노산 1-336의 5'→3' 방향 101675 내지 102682 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 317, U65, 아미노산 1-336의 5'→3' 방향 101675 내지 102682 아미노산 서열
서열번호: 318, U68, 아미노산 1-115의 5'→3' 방향 104652 내지 104996 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 319, U68, 아미노산 1-115의 5'→3' 방향 104652 내지 104996 아미노산 서열
서열번호: 320, U71, 아미노산 1-82의 5'→3' 방향 108101 내지 108346 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 321, U71, 아미노산 1-82의 5'→3' 방향 108101 내지 108346 아미노산 서열
서열번호: 322, U74, 아미노산 1-663의 5'→3' 방향 111786 내지 113774 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 323, U74, 아미노산 1-663의 5'→3' 방향 111786 내지 113774 아미노산 서열
서열번호: 324, HST주의 게놈 서열(상보적 스트랜드)
서열번호: 325, DRHN2R, 아미노산 1-157의 3'→5' 방향 160278 내지 160748 아미노산 서열
서열번호: 326, DRHN1R, 아미노산 1-170의 3'→5' 방향 158065 내지 158574 아미노산 서열
서열번호: 327, DR3R, 아미노산 1-201의 3'→5' 방향 155760 내지 156362 아미노산 서열
서열번호: 328, RJ1, 아미노산 1-116의 3'→5' 방향 153060 내지 153407 아미노산 서열
서열번호: 329, U100, 아미노산 1-130의 3'→5' 방향 151529 내지 151918 아미노산 서열
서열번호: 330, U99, 아미노산 1-94의 3'→5' 방향 151115 내지 151396 아미노산 서열
서열번호: 331, U98, 아미노산 1-165의 3'→5' 방향 150376 내지 150870 아미노산 서열
서열번호: 332, HN2, 아미노산 1-55의 3'→5' 방향 149749 내지 149913 아미노산 서열
서열번호: 333, U97, 아미노산 1-100의 3'→5' 방향 149352 내지 149651 아미노산 서열
서열번호: 334, U94, 아미노산 1-491의 3'→5' 방향 142683 내지 144155 아미노산 서열
서열번호: 335, HN1, 아미노산 1-271의 3'→5' 방향 141543 내지 142355 아미노산 서열
서열번호: 336, U90, 아미노산 1-92의 3'→5' 방향 137810 내지 138085 아미노산 서열
서열번호: 337, U89, 아미노산 1-959의 3'→5' 방향 134808 내지 137684 아미노산 서열
서열번호: 338, U86, 아미노산 1-1514의 3'→5' 방향 127176 내지 131717 아미노산 서열
서열번호: 339, U85, 아미노산 1-293의 3'→5' 방향 126160 내지 127038 아미노산 서열
서열번호: 340, U84, 아미노산 1-343의 3'→5' 방향 125104 내지 126132 아미노산 서열
서열번호: 341, U82, 아미노산 1-251의 3'→5' 방향 123829 내지 124581 아미노산 서열
서열번호: 342, U81, 아미노산 1-256의 3'→5' 방향 122986 내지 123753 아미노산 서열
서열번호: 343, U76, 아미노산 1-663의 3'→5' 방향 114467 내지 116455 아미노산 서열
서열번호: 344, U75, 아미노산 1-126의 3'→5' 방향 113379 내지 113756 아미노산 서열
서열번호: 345, U72, 아미노산 1-345의 3'→5' 방향 108428 내지 109462 아미노산 서열
서열번호: 346, U66, 아미노산 1-306의 3'→5' 방향 102702 내지 103619 아미노산 서열
서열번호: 347, U60, 아미노산 1-323의 3'→5' 방향 98412 내지 99380 아미노산 서열
서열번호: 348, U57, 아미노산 1-1346의 3'→5' 방향 90999 내지 95036 아미노산 서열
서열번호: 349, U56, 아미노산 1-297의 3'→5' 방향 90107 내지 90997 아미노산 서열
서열번호: 350, U55, 아미노산 1-493의 3'→5' 방향 88628 내지 90106 아미노산 서열
서열번호: 351, U54, 아미노산 1-460의 3'→5' 방향 87171 내지 88550 아미노산 서열
서열번호: 352, U52, 아미노산 1-200의 3'→5' 방향 84744 내지 85343 아미노산 서열
서열번호: 353, U48, 아미노산 1-695의 3'→5' 방향 79099 내지 81183 아미노산 서열
서열번호: 354, U47, 아미노산 1-739의 3'→5' 방향 76617 내지 78833 아미노산 서열
서열번호: 355, U45, 아미노산 1-377의 3'→5' 방향 74977 내지 76107 아미노산 서열
서열번호: 356, U43, 아미노산 1-861의 3'→5' 방향 71712 내지 74294 아미노산 서열
서열번호: 357, U42, 아미노산 1-517의 3'→5' 방향 69937 내지 71487 아미노산 서열
서열번호: 358, U41, 아미노산 1-1133의 3'→5' 방향 65176 내지 68574 아미노산 서열
서열번호: 359, U40, 아미노산 1-727의 3'→5' 방향 62988 내지 65168 아미노산 서열
서열번호: 360, U38, 아미노산 1-1013의 3'→5' 방향 57504 내지 60542 아미노산 서열
서열번호: 361, U35, 아미노산 1-106의 3'→5' 방향 54893 내지 55210 아미노산 서열
서열번호: 362, U33, 아미노산 1-471의 3'→5' 방향 52683 내지 54095 아미노산 서열
서열번호: 363, U32, 아미노산 1-90의 3'→5' 방향 52412 내지 52681 아미노산 서열
서열번호: 364, U29, 아미노산 1-300의 3'→5' 방향 42412 내지 43311 아미노산 서열
서열번호: 365, U28, 아미노산 1-805의 3'→5' 방향 39975 내지 42389 아미노산 서열
서열번호: 366, U26, 아미노산 1-296의 3'→5' 방향 37883 내지 38770 아미노산 서열
서열번호: 367, U25, 아미노산 1-317의 3'→5' 방향 36825 내지 37775 아미노산 서열
서열번호: 368, U24, 아미노산 1-89의 3'→5' 방향 36350 내지 36616 아미노산 서열
서열번호: 369, U23, 아미노산 1-300의 3'→5' 방향 35326 내지 36225 아미노산 서열
서열번호: 370, U21, 아미노산 1-501의 3'→5' 방향 33291 내지 34793 아미노산 서열
서열번호: 371, U20, 아미노산 1-435의 3'→5' 방향 31984 내지 33288 아미노산 서열
서열번호: 372, U19, 아미노산 1-390의 3'→5' 방향 30592 내지 31761 아미노산 서열
서열번호: 373, U18, 아미노산 1-295의 3'→5' 방향 29443 내지 30327 아미노산 서열
서열번호: 374, U17, 아미노산 1-87의 3'→5' 방향 28003 내지 28263 아미노산 서열
서열번호: 375, U16, 아미노산 1-144의 3'→5' 방향 27172 내지 27603 아미노산 서열
서열번호: 376, U15, 아미노산 1-111의 3'→5' 방향 26559 내지 26891 아미노산 서열
서열번호: 377, U11, 아미노산 1-859의 3'→5' 방향 19801 내지 22377 아미노산 서열
서열번호: 378, U8, 아미노산 1-412의 3'→5' 방향 16806 내지 18041 아미노산 서열
서열번호: 379, U7, 아미노산 1-375의 3'→5' 방향 15678 내지 16802 아미노산 서열
서열번호: 380, U5, 아미노산 1-444의 3'→5' 방향 14002 내지 15333 아미노산 서열
서열번호: 381, U4, 아미노산 1-536의 3'→5' 방향 12276 내지 13883 아미노산 서열
서열번호: 382, U3, 아미노산 1-387의 3'→5' 방향 10891 내지 12051 아미노산 서열
서열번호: 383, U2, 아미노산 1-434의 3'→5' 방향 9467 내지 10768 아미노산 서열
서열번호: 384, LJ1, 아미노산 1-172의 3'→5' 방향 8292 내지 8807 아미노산 서열
서열번호: 385, DRHN2, 아미노산 1-157의 3'→5' 방향 7236 내지 7706 아미노산 서열
서열번호: 386, DRHN1, 아미노산 1-170의 3'→5' 방향 5023 내지 5532 아미노산 서열
서열번호: 387, DR3, 아미노산 1-201의 3'→5' 방향 2718 내지 3320 아미노산 서열
서열번호: 388, LT1, 아미노산 1-116의 3'→5' 방향 18 내지 365 아미노산 서열
서열번호: 389, U9, 아미노산 1-105의 3'→5' 방향 18022 내지 18336 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호.: 390, U9, 아미노산 1-105의 3'→5' 방향 18022 내지 18336 아미노산 서열
서열번호: 391, U22, 아미노산 1-203의 3'→5' 방향 34690 내지 35298 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 392, U22, 아미노산 1-203의 3'→5' 방향 34690 내지 35298 아미노산 서열
서열번호: 393, U27, 아미노산 1-392의 3'→5' 방향 38758 내지 39933 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 394, U27, 아미노산 1-392의 3'→5' 방향 38758 내지 39933 아미노산 서열
서열번호: 395, U34, 아미노산 1-277의 3'→5' 방향 54046 내지 54876 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 396, U34, 아미노산 1-277의 3'→5' 방향 54046 내지 54876 아미노산 서열
서열번호: 397, U39, 아미노산 1-831의 3'→5' 방향 60542 내지 63034 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 398, U39, 아미노산 1-831의 3'→5' 방향 60542 내지 63034 아미노산 서열
서열번호: 399, U61, 아미노산 1-171의 3'→5' 방향 99355 내지 99867 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열
서열번호: 400, U61, 아미노산 1-171의 3'→5' 방향 99355 내지 99867 아미노산 서열
서열번호: 401, BAC 벡터 서열
서열번호: 402, 프라이머 BAC7-E1
서열번호: 403, 프라이머 BAC7-E2
서열번호: 404, 프라이머 BAC7-E3
서열번호: 405, 프라이머 BAC7-E4

이하, 본 발명을 상세히 설명한다. 본 명세서를 통해 단수형의 표현은 특별히 기술되지 않는 한 복수의 개념을 포함함이 이해되어야 한다. 또한 여기서 사용된 용어는 특별히 기술되지 않는 한 통상적으로 사용되는 정의를 지님이 이해되어야 한다. 따라서 특별히 정의되지 않는 한 모든 과학적 및 기술적 용어는 본 발명에 속하는 분야의 당업자에 의해 일반적으로 사용되는 것과 동일한 의미를 지닌다. 반박이 있는 경우 본 명세서(정의를 포함)가 우선된다.

(용어 정의)

여기서 사용된 용어의 정의는 하기와 같이 기술된다.

여기서 사용된 "헤르페스바이러스"라는 용어는 특별히 기술하지 않는 한 HHV-6A, HHV-6B 및 HHV-7 모두 및 그들의 야생형 및 재조합형 모두를 포함한다. 여기서 사용된 "HHV-6"라는 용어는 특별히 기술하지 않는 한 HHV-6A 및 HHV-6B 및 그들의 야생형 및 재조합형 모두를 포함한다.

여기서 사용된 헤르페스바이러스와 관련한 "필수 유전자"라는 용어는 헤르페스바이러스의 생장에 필수적인 유전자를 나타낸다. 또한 헤르페스바이러스와 관련한 "비-필수 유전자"라는 용어는 헤르페스바이러스의 생장에 필수적이지 않은 유전자를 나타내고 이들이 없는 경우에도 헤르페스바이러스가 생장할 수 있다.

(인간 헤르페스바이러스 7: HHV-7)

인간 헤르페스바이러스 7(HHV-7)의 비-필수 유전자의 예는 유전자 H1, 유전자 DR1, 유전자 DR2, 유전자 H2, 유전자 DR6, 유전자 DR7, 유전자 H3, 유전자 H4, 유전자 U2, 유전자 U3, 유전자 U4, 유전자 U5/7, 유전자 U8, 유전자 U10, 유전자 U12, 유전자 U13, 유전자 U15, 유전자 U16, 유전자 U17Ex, 유전자 U17, 유전자 U17a, 유전자 U18, 유전자 U19, 유전자 U20, 유전자 U21, 유전자 U23, 유전자 U24, 유전자 U24a, 유전자 U25, 유전자 U26, 유전자 U28, 유전자 U32, 유전자 U33, 유전자 U34, 유전자 U35, 유전자 U36, 유전자 U37, 유전자 U40, 유전자 U42, 유전자 U44, 유전자 U45, 유전자 U46, 유전자 U47, 유전자 U49, 유전자 U50, 유전자 U51, 유전자 U52, 유전자 U55A, 유전자 U55B, 유전자 U58, 유전자 U59, 유전자 U62, 유전자 U63, 유전자 U64, 유전자 U65, 유전자 U67, 유전자 U68, 유전자 U69, 유전자 U70, 유전자 U71, 유전자 U75, 유전자 U76, 유전자 H5, 유전자 U79, 유전자 H6, 유전자 U80, 유전자 U81, 유전자 U84, 유전자 U85, 유전자 U91, 유전자 H7, 유전자 U95 및 유전자 H8을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다.

바이러스 게놈 내 유전자가 필수 유전자인 경우 바이러스는 그 유전자의 부재시 생장할 수 없다. 따라서 바이러스 게놈 내 임의의 유전자를 결실시키고 바이러스의 생장을 검출함으로서 그 유전자가 필수 유전자인지 또는 비-필수 유전자인지 여부를 결정하는 것이 가능하다.

상기 기술된 비-필수 영역의 ORF 내 영역 및/또는 ORF 인접 영역은 BAC 벡터에 삽입시키기 위한 타겟으로 사용될 수 있다. 이러한 바람직한 타겟의 예는 유전자 U24의 ORF 내 또는 인접 영역 및 유전자 U24a 내 또는 인접 영역을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다. ORF 인접 영역 및 유전자 U24 및 U24a 인접 영역이 더욱 바람직하다.

여기서 사용된 헤르페스바이러스와 관련한 "야생주"라는 용어는 인공적으로 변형되지 않고 자연으로부터 분리된 헤르페스바이러스주를 나타낸다. 야생주의 예는 JI주를 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다. JI주의 핵산 서열은 서열번호: 1에 나타나 있다. JI주 내 각각의 ORF의 코드된 폴리펩타이드의 아미노산 잔기수는 하기에 기술되어 있다:

ORF 명칭 리딩 프레임 방향 게놈 상의 사이트 아미노산 잔기수

H1 5'→3' 방향 33 내지 542 아미노산 1-170

DR1 5'→3' 방향 368 내지 826 아미노산 1-153

DR2 5'→3' 방향 898 내지 2100 아미노산 1-401

H2 5'→3' 방향 2267 내지 2506 아미노산 1-80

DR6 5'→3' 방향 2562 내지 3050 아미노산 1-163

DR7 5'→3' 방향 3122 내지 3910 아미노산 1-263

H3 3'→5' 방향 3976 내지 4224 아미노산 1-83

H4 3'→5' 방향 4449 내지 4745 아미노산 1-99

U2 3'→5' 방향 6338 내지 7417 아미노산 1-360

U3 3'→5' 방향 7578 내지 8732 아미노산 1-385

U4 3'→5' 방향 8754 내지 10382 아미노산 1-543

U5/7 3'→5' 방향 10407 내지 13004 아미노산 1-866

U8 3'→5' 방향 13174 내지 14262 아미노산 1-363

U10 5'→3' 방향 14608 내지 15963 아미노산 1-452

U11 3'→5' 방향 15982 내지 18249 아미노산 1-756

U12 5'→3' 방향 18396 내지 19436 아미노산 1-347

U13 5'→3' 방향 19521 내지 19817 아미노산 1-99

U14 5'→3' 방향 19885 내지 21831 아미노산 1-649

U15 3'→5' 방향 22244 내지 22564 아미노산 1-107

U17Ex 3'→5' 방향 22772 내지 23547 아미노산 1-331

및 23620 내지 23836

U17 3'→5' 방향 23570 내지 23836 아미노산 1-89

U17a 5'→3' 방향 24318 내지 24587 아미노산 1-90

U18 3'→5' 방향 24713 내지 25600 아미노산 1-296

U19 3'→5' 방향 25945 내지 26922 아미노산 1-326

U20 3'→5' 방향 27036 내지 28211 아미노산 1-392

U21 3'→5' 방향 28202 내지 29494 아미노산 1-431

U23 3'→5' 방향 29903 내지 30418 아미노산 1-172

U24 3'→5' 방향 30524 내지 30772 아미노산 1-83

U24a 3'→5' 방향 30776 내지 31129 아미노산 1-118

U25 3'→5' 방향 30936 내지 31898 아미노산 1-321

U26 3'→5' 방향 31988 내지 32869 아미노산 1-294

U27 3'→5' 방향 32857 내지 33951 아미노산 1-365

U28 3'→5' 방향 34064 내지 36484 아미노산 1-807

U29 3'→5' 방향 36487 내지 37347 아미노산 1-287

U30 5'→3' 방향 37362 내지 40178 아미노산 1-939

U31 5'→3' 방향 40179 내지 46358 아미노산 1-2060

U32 3'→5' 방향 46355 내지 46627 아미노산 1-91

U33 3'→5' 방향 46608 내지 48041 아미노산 1-478

U34 3'→5' 방향 47992 내지 48768 아미노산 1-259

U35 3'→5' 방향 48805 내지 49119 아미노산 1-105

U36 5'→3' 방향 49118 내지 50575 아미노산 1-486

U37 5'→3' 방향 50577 내지 51356 아미노산 1-260

U38 3'→5' 방향 51363 내지 54401 아미노산 1-1013

U39 3'→5' 방향 54401 내지 56869 아미노산 1-823

U40 3'→5' 방향 56832 내지 58997 아미노산 1-722

U41 3'→5' 방향 59000 내지 62395 아미노산 1-1132

U42 3'→5' 방향 62772 내지 64352 아미노산 1-527

U43 3'→5' 방향 64501 내지 67086 아미노산 1-862

U44 5'→3' 방향 67143 내지 67754 아미노산 1-204

U45 3'→5' 방향 67759 내지 68898 아미노산 1-380

U46 5'→3' 방향 68930 내지 69190 아미노산 1-87

U47 3'→5' 방향 69638 내지 70579 아미노산 1-314

U48 3'→5' 방향 70817 내지 72889 아미노산 1-691

U49 5'→3' 방향 73003 내지 73722 아미노산 1-240

U50 5'→3' 방향 73538 내지 75202 아미노산 1-555

U51 5'→3' 방향 75304 내지 76188 아미노산 1-295

U52 3'→5' 방향 76185 내지 76949 아미노산 1-255

U53 5'→3' 방향 76957 내지 78495 아미노산 1-513

U54 3'→5' 방향 78503 내지 79870 아미노산 1-456

U55A 3'→5' 방향 79918 내지 81201 아미노산 1-428

U55B 3'→5' 방향 81285 내지 82577 아미노산 1-431

U56 3'→5' 방향 82630 내지 83511 아미노산 1-294

U57 3'→5' 방향 83514 내지 87551 아미노산 1-1346

U58 5'→3' 방향 87563 내지 89890 아미노산 1-776

U59 5'→3' 방향 89838 내지 90881 아미노산 1-348

U60-U66 3'→5' 방향 90878 내지 92005 아미노산 1-664

및 95122 내지 95985

U62 5'→3' 방향 92017 내지 92244 아미노산 1-76

U63 5'→3' 방향 92216 내지 92851 아미노산 1-212

U64 5'→3' 방향 92829 내지 94148 아미노산 1-440

U65 5'→3' 방향 94111 내지 95103 아미노산 1-331

U67 5'→3' 방향 95984 내지 97024 아미노산 1-347

U68 5'→3' 방향 97024 내지 97368 아미노산 1-115

U69 5'→3' 방향 97371 내지 99011 아미노산 1-547

U70 5'→3' 방향 99013 내지 100455 아미노산 1-481

U71 5'→3' 방향 100392 내지 100613 아미노산 1-74

U72 3'→5' 방향 100636 내지 101676 아미노산 1-347

U73 5'→3' 방향 101693 내지 104056 아미노산 1-788

U74 5'→3' 방향 104007 내지 105986 아미노산 1-660

U75 3'→5' 방향 105973 내지 106743 아미노산 1-257

U76 3'→5' 방향 106667 내지 108589 아미노산 1-641

U77 5'→3' 방향 108435 내지 110897 아미노산 1-821

H5 5'→3' 방향 112811 내지 113311 아미노산 1-167

U79 5'→3' 방향 113502 내지 114203 아미노산 1-234

H6 5'→3' 방향 114257 내지 114505 아미노산 1-83

U80 5'→3' 방향 114557 내지 115189 아미노산 1-211

U81 3'→5' 방향 115184 내지 115948 아미노산 1-255

U82 3'→5' 방향 116038 내지 116778 아미노산 1-247

U84 3'→5' 방향 117111 내지 118043 아미노산 1-311

U85 3'→5' 방향 118071 내지 118913 아미노산 1-281

U86 3'→5' 방향 119091 내지 122708 아미노산 1-1206

U89 3'→5' 방향 125420 내지 128668 아미노산 1-1083

U90 3'→5' 방향 128776 내지 129051 아미노산 1-92

U91 5'→3' 방향 129122 내지 129625 아미노산 1-168

H7 5'→3' 방향 130829 내지 132112 아미노산 1-428

U95 5'→3' 방향 133382 내지 136204 아미노산 1-941

H8 3'→5' 방향 136307 내지 136579 아미노산 1-91

U98 3'→5' 방향 137945 내지 138451 아미노산 1-169

U99 3'→5' 방향 138375 내지 138692 아미노산 1-106

U100 3'→5' 방향 138751 내지 138999 아미노산 1-83

H1 5'→3' 방향 139080 내지 139589 아미노산 1-170

DR1 5'→3' 방향 139415 내지 139873 아미노산 1-153

DR2 5'→3' 방향 139945 내지 141147 아미노산 1-401

H2 5'→3' 방향 141314 내지 141553 아미노산 1-80

DR6 5'→3' 방향 141609 내지 142097 아미노산 1-163

DR7 5'→3' 방향 142169 내지 142957 아미노산 1-263

H3 3'→5' 방향 143023 내지 143271 아미노산 1-83

H4 3'→5' 방향 143496 내지 143792 아미노산 1-99.

상기-기술된 표에서 "5'→3' 방향"은 ORF가 서열번호: 1의 핵산 서열과 동일한 방향을 지님을 나타낸다. "3'→5' 방향"은 ORF가 서열번호: 1의 핵산 서열에 대한 역방향을 지님을 나타낸다. ORF의 핵산 서열 및/또는 아미노산 서열에 대한 서열 상동체를 확인함으로서 당업자는 JI주 이외의 주 게놈 내 ORF를 용이하게 확인할 수 있다.

HHV-7 게놈 내 각각의 ORF에 의해 코드되는 유전자 생성물의 특징이 하기 표 1 내지 3에 기술되어 있다.

(인간 헤르페스바이러스 6A; HHV-6A)

인간 헤르페스바이러스 6A (HHV-6A)의 비-필수 유전자의 예는 유전자 LT1, 유전자 DR1, 유전자 DR2, 유전자 DR3, 유전자 DR4, 유전자 DR5, 유전자 DR6, 유전자 DRHN1, 유전자 DR7, 유전자 DRHN2, 유전자 DR8, 유전자 LJ1, 유전자 U1, 유전자 U2, 유전자 U3, 유전자 U4, 유전자 U5, 유전자 U6, 유전자 U7, 유전자 U8, 유전자 U9, 유전자 U10, 유전자 U12EX, 유전자 U12, 유전자 U13, 유전자 U15, 유전자 U16, 유전자 U17, 유전자 U18, 유전자 U19, 유전자 U20, 유전자 U21, 유전자 U22, 유전자 U23, 유전자 U24 , 유전자 U25, 유전자 U26, 유전자 U28, 유전자 U32, 유전자 U33, 유전자 U34, 유전자 U35, 유전자 U36, 유전자 U37, 유전자 U40, 유전자 U42, 유전자 U44, 유전자 U45, 유전자 U46, 유전자 U47, 유전자 U49, 유전자 U50, 유전자 U51, 유전자 U52, 유전자 U55, 유전자 U58, 유전자 U59, 유전자 U61, 유전자 U62, 유전자 U63, 유전자 U64, 유전자 U65, 유전자 U67, 유전자 U68, 유전자 U69, 유전자 U70, 유전자 U71, 유전자 U75, 유전자 U76, 유전자 U78, 유전자 U79, 유전자 U80, 유전자 U81, 유전자 U83, 유전자 U84, 유전자 U85, 유전자 U88, 유전자 U91, 유전자 U92, 유전자 U93, 유전자 HN2, 유전자 U94, 유전자 U95 및 유전자 U96을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다.

상기 기술된 비-필수 영역의 ORF 내 영역 및/또는 ORF 인접 영역은 BAC 벡터에 삽입시키기 위한 타겟으로 사용될 수 있다. 이러한 바람직한 타겟의 예는 유전자 U5의 ORF 내 또는 인접 영역 및 유전자 U8 내 또는 인접 영역을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다. ORF 인접 영역 및 유전자 U5 및 U8 인접 영역이 더욱 바람직하다.

여기서 사용된 HHV-6A와 관련한 "야생주"라는 용어는 인공적으로 변형되지 않고 자연으로부터 분리된 HHV-6A주를 나타낸다. 야생주의 예는 U1102주를 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다. U1102주의 핵산 서열은 서열번호: 128에 나타나 있다. U1102주 내 각각의 ORF의 코드된 폴리펩타이드의 아미노산 잔기수는 하기에 기술되어 있다:

LT1 3'→5' 방향 1 내지 338 아미노산 1-113

DR1 5'→3' 방향 501 내지 794 아미노산 1-98

DR2 5'→3' 방향 791 내지 2653 아미노산 1-621

DR3 3'→5' 방향 2401 내지 2979 아미노산 1-193

DR4 5'→3' 방향 2746 내지 3048 아미노산 1-101

DR5 3'→5' 방향 3734 내지 4171 아미노산 1-146

DR6 5'→3' 방향 4725 내지 5036 아미노산 1-104

DR7 5'→3' 방향 5629 내지 6720 아미노산 1-364

DR8 5'→3' 방향 7237 내지 7569 아미노산 1-111

LJ1 3'→5' 방향 7467 내지 8432 아미노산 1-322

U1 5'→3' 방향 8245 내지 8616 아미노산 1-124

U2 3'→5' 방향 8716 내지 9816 아미노산 1-367

U3 3'→5' 방향 10155 내지 11276 아미노산 1-374

U4 3'→5' 방향 11485 내지 13092 아미노산 1-536

U5 3'→5' 방향 13214 내지 14548 아미노산 1-445

U6 5'→3' 방향 14619 내지 14867 아미노산 1-83

U7 3'→5' 방향 14908 내지 15936 아미노산 1-343

U8 3'→5' 방향 16021 내지 17091 아미노산 1-357

U9 3'→5' 방향 17238 내지 17552 아미노산 1-105

U10 5'→3' 방향 17604 내지 18914 아미노산 1-437

U11 3'→5' 방향 18966 내지 21578 아미노산 1-871

U12 엑손 1-2

5'→3' 방향 21680 내지 21710 아미노산 1-348

및 21800 내지 22812

U12 5'→3' 방향 21856 내지 22812 아미노산 1-319

U13 5'→3' 방향 22898 내지 23218 아미노산 1-107

U14 5'→3' 방향 23316 내지 25145 아미노산 1-610

U15 3'→5' 방향 25660 내지 25992 아미노산 1-111

U16 엑손 1-2

3'→5' 방향 26259 내지 27034 아미노산 1-313

및 27187 내지 27349

U16 3'→5' 방향 26259 내지 27116 아미노산 1-286

U17 3'→5' 방향 26948 내지 27349 아미노산 1-134

U18 3'→5' 방향 28508 내지 29389 아미노산 1-294

U19 3'→5' 방향 29649 내지 30818 아미노산 1-390

U20 3'→5' 방향 31069 내지 32337 아미노산 1-423

U21 3'→5' 방향 32340 내지 33641 아미노산 1-434

U22 3'→5' 방향 33739 내지 34347 아미노산 1-203

U23 3'→5' 방향 34375 내지 35085 아미노산 1-237

U24 3'→5' 방향 35392 내지 35655 아미노산 1-88

3'→5' 방향 35674 내지 35847 아미노산 1-58

U25 3'→5' 방향 35864 내지 36814 아미노산 1-317

U26 3'→5' 방향 36922 내지 37809 아미노산 1-296

U27 3'→5' 방향 37797 내지 38978 아미노산 1-394

U28 3'→5' 방향 39020 내지 41434 아미노산 1-805

U29 3'→5' 방향 41457 내지 42356 아미노산 1-300

U30 5'→3' 방향 41884 내지 45132 아미노산 1-1083

U31 5'→3' 방향 45150 내지 51383 아미노산 1-2078

U32 3'→5' 방향 51455 내지 51721 아미노산 1-89

U33 3'→5' 방향 51723 내지 53135 아미노산 1-471

U34 3'→5' 방향 53086 내지 53916 아미노산 1-277

U35 3'→5' 방향 53933 내지 54253 아미노산 1-107

U36 5'→3' 방향 54252 내지 55706 아미노산 1-485

U37 5'→3' 방향 55710 내지 56504 아미노산 1-265

U38 3'→5' 방향 56550 내지 59588 아미노산 1-1013

U39 3'→5' 방향 59588 내지 62080 아미노산 1-831

U40 3'→5' 방향 62034 내지 64214 아미노산 1-727

U41 3'→5' 방향 64222 내지 67620 아미노산 1-1133

U42 3'→5' 방향 69054 내지 70598 아미노산 1-515

U43 3'→5' 방향 70823 내지 73405 아미노산 1-861

U44 5'→3' 방향 73446 내지 74087 아미노산 1-214

U45 3'→5' 방향 74088 내지 75218 아미노산 1-377

U46 5'→3' 방향 75291 내지 75545 아미노산 1-85

U47 3'→5' 방향 75912 내지 77867 아미노산 1-652

U48 3'→5' 방향 78034 내지 80118 아미노산 1-695

U49 5'→3' 방향 80277 내지 81035 아미노산 1-253

U50 5'→3' 방향 80812 내지 82479 아미노산 1-556

U51 5'→3' 방향 82574 내지 83479 아미노산 1-302

U52 3'→5' 방향 83498 내지 84274 아미노산 1-259

U53 5'→3' 방향 84281 내지 85867 아미노산 1-529

U54 3'→5' 방향 86051 내지 87427 아미노산 1-459

U55 3'→5' 방향 87505 내지 88803 아미노산 1-433

U56 3'→5' 방향 88983 내지 89873 아미노산 1-297

U57 3'→5' 방향 89875 내지 93912 아미노산 1-1346

U58 5'→3' 방향 93924 내지 96242 아미노산 1-773

U59 5'→3' 방향 96239 내지 97291 아미노산 1-351

U60 3'→5' 방향 97288 내지 98256 아미노산 1-323

U61 3'→5' 방향 98231 내지 98578 아미노산 1-116

U62 5'→3' 방향 98427 내지 98684 아미노산 1-86

U63 5'→3' 방향 98632 내지 99282 아미노산 1-217

U64 5'→3' 방향 99260 내지 100588 아미노산 1-443

U65 5'→3' 방향 100545 내지 101552 아미노산 1-336

U66 3'→5' 방향 101569 내지 102486 아미노산 1-306

U67 5'→3' 방향 102458 내지 103519 아미노산 1-354

U68 5'→3' 방향 103519 내지 103863 아미노산 1-115

U69 5'→3' 방향 103866 내지 105554 아미노산 1-563

U70 5'→3' 방향 105562 내지 107028 아미노산 1-489

U71 5'→3' 방향 106965 내지 107198 아미노산 1-78

U72 3'→5' 방향 107278 내지 108312 아미노산 1-345

U73 5'→3' 방향 108325 내지 110667 아미노산 1-781

U74 5'→3' 방향 110636 내지 112624 아미노산 1-663

U75 3'→5' 방향 112659 내지 113408 아미노산 1-250

U76 3'→5' 방향 113317 내지 115305 아미노산 1-663

U77 5'→3' 방향 115100 내지 117574 아미노산 1-825

U78 3'→5' 방향 118709 내지 119038 아미노산 1-110

U79 5'→3' 방향 120164 내지 121198 아미노산 1-345

U80 5'→3' 방향 121170 내지 121766 아미노산 1-199

U81 3'→5' 방향 121810 내지 122577 아미노산 1-256

U82 3'→5' 방향 122653 내지 123405 아미노산 1-251

U83 5'→3' 방향 123528 내지 123821 아미노산 1-98

U84 3'→5' 방향 123925 내지 124953 아미노산 1-343

U85 3'→5' 방향 124981 내지 125853 아미노산 1-291

U86 3'→5' 방향 125989 내지 128136 아미노산 1-716

U87 3'→5' 방향 127551 내지 130043 아미노산 1-831

U88 5'→3' 방향 131034 내지 132275 아미노산 1-414

U89 3'→5' 방향 133091 내지 135610 아미노산 1-840

U90 3'→5' 방향 135664 내지 135948 아미노산 1-95

추정 단백질 U90

5'→3' 방향 136266 내지 136481 아미노산 1-72

U91 5'→3' 방향 136485 내지 136829 아미노산 1-115

U92 3'→5' 방향 138049 내지 138492 아미노산 1-148

U93 3'→5' 방향 138531 내지 139124 아미노산 1-198

U94 3'→5' 방향 141394 내지 142866 아미노산 1-491

U95 5'→3' 방향 142941 내지 146306 아미노산 1-1122

U96 3'→5' 방향 146641 내지 146940 아미노산 1-100

U97 3'→5' 방향 147808 내지 148077 아미노산 1-90

U98 3'→5' 방향 148741 내지 149391 아미노산 1-217

U99 3'→5' 방향 149485 내지 149766 아미노산 1-94

U100 3'→5' 방향 149868 내지 150437 아미노산 1-190

RJ1 3'→5' 방향 151140 내지 151571 아미노산 1-144

DR1 5'→3' 방향 151734 내지 152027 아미노산 1-98

DR2 5'→3' 방향 152024 내지 153886 아미노산 1-621

DR3 3'→5' 방향 153634 내지 154212 아미노산 1-193

DR4 5'→3' 방향 153979 내지 154281 아미노산 1-101

DR5 3'→5' 방향 154967 내지 155404 아미노산 1-146

DR6 5'→3' 방향 155958 내지 156269 아미노산 1-104

DR7 5'→3' 방향 156862 내지 157953 아미노산 1-364

DR8 5'→3' 방향 158470 내지 158802 아미노산 1-111.

상기-기술된 표에서 "5'→3' 방향"은 ORF가 서열번호: 128의 핵산 서열과 동일한 방향을 지님을 나타낸다. "3'→5' 방향"은 ORF가 서열번호: 128의 핵산 서열에 대한 역방향을 지님을 나타낸다. ORF의 핵산 서열 및/또는 아미노산 서열에 대한 서열 상동체를 확인함으로서 당업자는 J1102주 이외의 주 게놈 내 ORF를 용이하게 확인할 수 있다.

여기서 사용된 "변이주"라는 용어는 돌연변이유발, 다수의 계대배양 등으로 인해 돌연변이를 지닌 헤르페스바이러스를 나타낸다. 헤르페스바이러스주의 돌연변이유발은 무작위 돌연변이유발 또는 사이트-특이적 돌연변이유발이다.

(인간헤르페스바이러스 6B; HHV-6B)

HHV-6A와 실질적으로 동일한 게놈 구조를 지닌 HHV-6B의 것으로 판단되는 비-필수 유전자의 예는 유전자 LT1, 유전자 DR1, 유전자 DR2, 유전자 DR3, 유전자 DR4, 유전자 DR5, 유전자 DR6, 유전자 DRHN1, 유전자 DR7, 유전자 DRHN2, 유전자 DR8, 유전자 LJ1, 유전자 U1, 유전자 U2, 유전자 U3, 유전자 U4, 유전자 U5, 유전자 U6, 유전자 U7, 유전자 U8, 유전자 U9, 유전자 U10, 유전자 U12EX, 유전자 U12, 유전자 U13, 유전자 U15, 유전자 U16, 유전자 U17, 유전자 U18, 유전자 U19, 유전자 U20, 유전자 U21, 유전자 U22, 유전자 U23, 유전자 U24 , 유전자 U25, 유전자 U26, 유전자 U28, 유전자 U32, 유전자 U33, 유전자 U34, 유전자 U35, 유전자 U36, 유전자 U37, 유전자 U40, 유전자 U42, 유전자 U44, 유전자 U45, 유전자 U46, 유전자 U47, 유전자 U49, 유전자 U50, 유전자 U51, 유전자 U52, 유전자 U55, 유전자 U58, 유전자 U59, 유전자 U61, 유전자 U62, 유전자 U63, 유전자 U64, 유전자 U65, 유전자 U67, 유전자 U68, 유전자 U69, 유전자 U70, 유전자 U71, 유전자 U75, 유전자 U76, 유전자 U78, 유전자 U79, 유전자 U80, 유전자 U81, 유전자 U83, 유전자 U84, 유전자 U85, 유전자 U88, 유전자 U91, 유전자 U92, 유전자 U93, 유전자 HN2, 유전자 U94, 유전자 U95 및 유전자 U96을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다.

여기서 사용된 HHV-6B와 관련한 "야생주"라는 용어는 인공적으로 변형되지 않고 자연으로부터 분리된 HHV-6B주를 나타낸다. 야생주의 예는 HST주를 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다. HST2주의 핵산 서열은 서열번호: 272에 나타나 있다. HST주 내 각각의 ORF의 코드된 폴리펩타이드의 아미노산 잔기수는 하기에 기술되어 있다:

LT1 3'→5' 방향 18 내지 365 아미노산 1-116

DR1 5'→3' 방향 576 내지 842 아미노산 1-89

DR2 5'→3' 방향 1027 내지 2970 아미노산 1-648

DR3 3'→5' 방향 2718 내지 3320 아미노산 1-201

DRHN1 3'→5' 방향 5023 내지 5532 아미노산 1-170

DR6 5'→3' 방향 5025 내지 5336 아미노산 1-104

DR7 5'→3' 방향 6512 내지 7150 아미노산 1-213

DRHN2 3'→5' 방향 7236 내지 7706 아미노산 1-157

D 5'→3' 방향 7928 내지 8662 아미노산 1-245

LJ1 5'→3' 방향 8292 내지 8807 아미노산 1-172

U1 5'→3' 방향 8929 내지 9384 아미노산 1-152

U2 3'→5' 방향 9467 내지 10768 아미노산 1-434

U3 3'→5' 방향 10891 내지 12051 아미노산 1-387

U4 3'→5' 방향 12276 내지 13883 아미노산 1-536

U5 3'→5' 방향 14002 내지 15333 아미노산 1-444

U6 5'→3' 방향 15395 내지 15652 아미노산 1-86

U7 3'→5' 방향 15678 내지 16802 아미노산 1-375

U8 3'→5' 방향 16806 내지 18041 아미노산 1-412

U9 3'→5' 방향 18022 내지 18336 아미노산 1-105

U10 5'→3' 방향 18386 내지 19897 아미노산 1-504

U11 3'→5' 방향 19801 내지 22377 아미노산 1-859

U12 5'→3' 방향 22479 내지 22511 아미노산 1-354

및 22589 내지 23617

U13 5'→3' 방향 23699 내지 24022 아미노산 1-108

U14 5'→3' 방향 24136 내지 25953 아미노산 1-606

U15 3'→5' 방향 26559 내지 26891 아미노산 1-111

U16 3'→5' 방향 27172 내지 27603 아미노산 1-144

U17 3'→5' 방향 28003 내지 28263 아미노산 1-87

U18 3'→5' 방향 29443 내지 30327 아미노산 1-295

U19 3'→5' 방향 30592 내지 31761 아미노산 1-390

U20 3'→5' 방향 31984 내지 33288 아미노산 1-435

U21 3'→5' 방향 33291 내지 34793 아미노산 1-501

U22 3'→5' 방향 34690 내지 35298 아미노산 1-203

U23 3'→5' 방향 35326 내지 36225 아미노산 1-300

U24 3'→5' 방향 36350 내지 36616 아미노산 1-89

U25 3'→5' 방향 36825 내지 37775 아미노산 1-317

U26 3'→5' 방향 37883 내지 38770 아미노산 1-296

U27 3'→5' 방향 38758 내지 39933 아미노산 1-392

U28 3'→5' 방향 39975 내지 42389 아미노산 1-805

U29 3'→5' 방향 42412 내지 43311 아미노산 1-300

U30 5'→3' 방향 42839 내지 46087 아미노산 1-1083

U31 5'→3' 방향 46105 내지 52338 아미노산 1-2078

U32 3'→5' 방향 52412 내지 52681 아미노산 1-90

U33 3'→5' 방향 52683 내지 54095 아미노산 1-471

U34 3'→5' 방향 54046 내지 54876 아미노산 1-277

U35 3'→5' 방향 54893 내지 55210 아미노산 1-106

U36 5'→3' 방향 55212 내지 56660 아미노산 1-483

U37 5'→3' 방향 56664 내지 57458 아미노산 1-265

U38 3'→5' 방향 57504 내지 60542 아미노산 1-1013

U39 3'→5' 방향 60542 내지 63034 아미노산 1-831

U40 3'→5' 방향 62988 내지 65168 아미노산 1-727

U41 3'→5' 방향 65176 내지 68574 아미노산 1-1133

U42 3'→5' 방향 69937 내지 71487 아미노산 1-517

U43 3'→5' 방향 71712 내지 74294 아미노산 1-861

U44 5'→3' 방향 74335 내지 75030 아미노산 1-232

U45 3'→5' 방향 74977 내지 76107 아미노산 1-377

U46 5'→3' 방향 76180 내지 76434 아미노산 1-85

U47 3'→5' 방향 76617 내지 78833 아미노산 1-739

U48 3'→5' 방향 79099 내지 81183 아미노산 1-695

U49 5'→3' 방향 81342 내지 82100 아미노산 1-253

U50 5'→3' 방향 81877 내지 83544 아미노산 1-556

U51 5'→3' 방향 83642 내지 84547 아미노산 1-302

U52 3'→5' 방향 84744 내지 85343 아미노산 1-200

U53 5'→3' 방향 85350 내지 86936 아미노산 1-529

U54 3'→5' 방향 87171 내지 88550 아미노산 1-460

U55 3'→5' 방향 88628 내지 90106 아미노산 1-493

U56 3'→5' 방향 90107 내지 90997 아미노산 1-297

U57 3'→5' 방향 90999 내지 95036 아미노산 1-1346

U58 5'→3' 방향 95048 내지 97366 아미노산 1-773

U59 5'→3' 방향 97375 내지 98415 아미노산 1-347

U60 3'→5' 방향 98412 내지 99380 아미노산 1-323

U61 3'→5' 방향 99355 내지 99867 아미노산 1-171

U62 5'→3' 방향 99551 내지 99814 아미노산 1-88

U63 5'→3' 방향 99756 내지 100412 아미노산 1-219

U64 5'→3' 방향 100390 내지 101718 아미노산 1-443

U65 5'→3' 방향 101675 내지 102682 아미노산 1-336

U66 3'→5' 방향 102702 내지 103619 아미노산 1-306

U67 5'→3' 방향 103591 내지 104652 아미노산 1-354

U68 5'→3' 방향 104652 내지 104996 아미노산 1-115

U69 5'→3' 방향 104999 내지 106690 아미노산 1-564

U70 5'→3' 방향 106698 내지 108164 아미노산 1-489

U71 5'→3' 방향 108101 내지 108346 아미노산 1-82

U72 3'→5' 방향 108428 내지 109462 아미노산 1-345

U73 5'→3' 방향 109475 내지 111817 아미노산 1-781

U74 5'→3' 방향 111786 내지 113774 아미노산 1-663

U75 3'→5' 방향 113379 내지 113756 아미노산 1-126

U76 3'→5' 방향 114467 내지 116455 아미노산 1-663

U77 5'→3' 방향 116250 내지 118724 아미노산 1-825

U79 5'→3' 방향 121322 내지 122359 아미노산 1-346

U80 5'→3' 방향 122640 내지 122942 아미노산 1-101

U81 3'→5' 방향 122986 내지 123753 아미노산 1-256

U82 3'→5' 방향 123829 내지 124581 아미노산 1-251

U83 5'→3' 방향 124657 내지 124998 아미노산 1-114

U84 3'→5' 방향 125104 내지 126132 아미노산 1-343

U85 3'→5' 방향 126160 내지 127038 아미노산 1-293

U86 3'→5' 방향 127176 내지 131717 아미노산 1-1514

U89 3'→5' 방향 134808 내지 137684 아미노산 1-959

U90 3'→5' 방향 137810 내지 138085 아미노산 1-92

U91 5'→3' 방향 138630 내지 138974 아미노산 1-115

HN1 3'→5' 방향 141543 내지 142355 아미노산 1-271

U94 3'→5' 방향 142683 내지 144155 아미노산 1-491

U95 5'→3' 방향 144230 내지 147868 아미노산 1-1213

U97 3'→5' 방향 149352 내지 149651 아미노산 1-100

HN2 3'→5' 방향 149749 내지 149913 아미노산 1-55

U98 3'→5' 방향 150376 내지 150870 아미노산 1-165

U99 3'→5' 방향 151115 내지 151396 아미노산 1-94

U100 3'→5' 방향 151529 내지 151918 아미노산 1-130

RJ1 3'→5' 방향 153060 내지 153407 아미노산 1-116

DR1R 5'→3' 방향 153618 내지 153884 아미노산 1-89

DR2R 5'→3' 방향 154069 내지 156012 아미노산 1-648

DR3R 3'→5' 방향 155760 내지 156362 아미노산 1-201

DRHN1R 3'→5' 방향 158065 내지 158574 아미노산 1-170

DR6R 5'→3' 방향 158067 내지 158378 아미노산 1-104

DR7R 5'→3' 방향 159554 내지 160192 아미노산 1-213

DRHN2R 3'→5' 방향 160278 내지 160748 아미노산 1-157

상기-기술된 표에서 "5'→3' 방향"은 ORF가 서열번호: 272의 핵산 서열과 동일한 방향을 지님을 나타낸다. "3'→5' 방향"은 ORF가 서열번호: 272의 핵산 서열에 대한 역방향을 지님을 나타낸다. ORF의 핵산 서열 및/또는 아미노산 서열에 대한 서열 상동체를 확인함으로서 당업자는 HST주 이외의 주 게놈 내 ORF를 용이하게 확인할 수 있다.

(HHV-6A 및 HHV-6B의 ORF의 코드된 단백질)

HHV-6A 및 HHV-6B 내의 각각의 ORF에 의해 코드되는 유전자 생성물의 특징이 하기 표 4 내지 6에 기술되어 있다. 표에 HHV-6A의 U1102주 및 HHV-6B의 HST주의 각 ORF의 아미노산 잔기 길이가 나타나 있다.

여기서 사용된 헤르페스바이러스와 관련한 "야생주"라는 용어는 인공적으로 변형되지 않고 자연으로부터 분리된 헤르페스바이러스주를 나타낸다.

여기서 사용된 "단백질", "폴리펩타이드", "올리고펩타이드"라는 용어는 동일한 의미를 지니고 어떠한 길이를 지닌 아미노산 폴리머를 나타낸다.

여기서 사용된 "폴리뉴클레오타이드", "올리고뉴클레오타이드" 및 "핵산"이라는 용어는 동일한 의미를 나타내고 어떠한 길이를 지닌 뉴클레오타이드 폴리머이다. 나타내지 않는 한 특정 핵산 서열은 명백히 나타낸 서열뿐만 아니라 그의 통상으로-변형된 변이체(즉, 축퇴성 코돈 치환) 및 상보 서열을 함축적으로 포함한다. 상세하게는, 축퇴성 코돈 치환은 하나 이상의 선택된(또는 전부) 코돈의 세 번째 위치가 혼합된-염기 및/또는 디옥시이노신(deoxyinosine) 잔기로 치환된 서열을 생성함으로서 제조된다(Batzer et al ., Nucleic Acid Res. 19:5081(1991); Ohtsuka et al ., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985); Rossolini et al ., Mol. Cell. Probes 8:91-98(1994)).

여기서 사용된 "유전자"라는 용어는 유전 형질을 한정하는 요소를 나타낸다. 유전자는 일반적으로 염새체 상의 제공된 서열 내에 배열된다. 단백질의 1차 구조를 한정하는 유전자는 구조 유전자로 명명된다. 구조 유전자의 발현을 조절하는 유전자는 조절 유전자로 명명된다. 여기서 사용된 "유전자"는 "폴리뉴클레오타이드", "올리고뉴클레오타이드", "핵산" 및 "핵산 분자" 및/또는 "단백질", "폴리펩타이드", "올리고펩타이드" 및 "펩타이드"를 나타낸다. 여기서 사용된 유전자와 관련한 "오픈 리딩 프레임" 또는 "ORF"라는 용어는 3개 염기의 간격에서 유전자의 염기 서열을 절단함으로서 수득된 3개 프레임 중 하나인 리딩 프레임을 나타내고, 시작 코돈 및 도중에 종결 코돈을 나타내지 않는 특정 길이를 지니고, 실제로 단백질을 코딩하는 가능성을 지닌다. 헤르페스바이러스 게놈의 전체 염기 서열이 측정되었고 적어도 101개 유전자로 확인되었다. 유전자 각각은 오픈 리딩 프레임(ORF)을 지니는 것으로 알려졌다.

여기서 사용된 헤르페스바이러스 게놈 내 유전자와 관련한 "ORF 내 영역"이라는 용어는 헤르페스바이러스 게놈의 유전자 내 ORF를 구성하는 염기가 존재하는 영역을 나타낸다.

여기서 사용된 헤르페스바이러스 게놈 내 유전자와 관련한 "ORF 인접 영역"은 헤르페스바이러스 게놈의 유전자 내 ORF 부근에 존재하는 염기가 존재하고 유전자 또는 다른 유전자의 ORF 내 영역에 상응하지 않는 영역을 나타낸다.

여기서 사용된 유전자의 "상동성"이라는 용어는 2 이상의 유전자 서열 사이의 동일성 비율을 나타낸다. 따라서 제공된 2 유전자 사이의 상동성이 클수록 그들 서열 사이의 동일성 또는 유사성이 커진다. 2 유전자가 상동성을 지니는지 여부는 서열을 직접 비교하거나 스트린전트 조건 하에 하이브리디제이션 방법에 의해 측정된다. 2 유전자 서열이 서로 직접 비교되는 경우 이들 유전자 상동성은 유전자가 DNA 서열인 경우 대표적으로 서로에 대해 적어도 50% 이상의 동일성, 바람직하게는 적어도 70% 이상의 동일성, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 지닌다.

여기서 염기 서열의 유사성 비교 및 상동성 계산은 디폴트 파라미터로 BLAST(서열 분석 기구)를 이용하여 수행된다.

여기서 사용된 유전자, 폴리뉴클레오타이드, 폴리펩타이드 등의 "발현"이라는 용어는 유전자 등이 또다른 형태로 변화되는 생체 내에서 미리 결정된 작용에 의해 영향 받음을 나타낸다. 바람직하게는 "발현"이라는 용어는 유전자, 폴리뉴클레오타이드 등이 전사되고 폴리펩타이드로 번역되는 것을 나타낸다. 본 발명의 하나의 실시태양에서 유전자는 mRNA로 전사된다. 더욱 바람직하게는 이들 폴리펩타이드는 후-번역 처리 변형을 지닌다.

여기서 아미노산은 통상적으로 알려진 3 문자 기호에 의해 또는 IUPAC-IUB Biochemical Numenclature Commission에 의해 추천된 1 문자 기호에 의해 표기된다. 유사하게는 뉴클레오타이드는 통상적으로 수용된 단일-문자 코드로 표기된다.

여기서 사용된 "단편"이라는 용어는 참고 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드(n 길이의)의 전체 길이에 대한 1∼n-1 범위의 서열 길이를 지닌 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 나타낸다. 단편의 길이는 목적에 따라 적당히 변화될 수 있다. 예를 들어 폴리펩타이드의 경우 단편 길이의 하한선은 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50 이상의 뉴클레오타이드를 포함한다. 여기에 기술되지 않은 정수로 표기된 길이(즉, 11 등)는 하한선으로 적당하다. 예를 들어 폴리뉴클레오타이드의 경우 단편 길이의 하한선은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 600, 700, 800, 900, 1000 이상의 뉴클레오타이드를 나타낸다. 여기에 기술되지 않은 정수로 표기된 길이(즉, 11 등)는 하한선으로 적당하다.

BAC 벡터 내 유전자에 의해 인코드된 폴리펩타이드는 그의 상응하는 자연 발생적 폴리펩타이드와 실직적으로 동일한 기능을 지니는 한 적어도 하나 이상(즉, 하나 또는 수개)의 아미노산 치환, 첨가 및/또는 결실을 지닌다.

여기서 사용된 "당 사슬"이라는 용어는 적어도 하나 이상의 당 단위(모노사카라이드 및/또는 그의 유도체)의 시리즈로 구성된 화합물을 나타낸다. 2 이상의 당 단위가 결합되면 당 단위는 글리코시드 결합으로 인한 탈수응축(dehydrocondensation)에 의해 결합된다. 이러한 당 사슬의 예는 생물체 내에 포함된 폴리사카라이드(글루코스, 갈락토스, 만노스, 푸코스, 자일로스, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민, 시알산 및 그의 복합체 및 유도체) 및 분해된 폴리사카라이드, 복합 생물 분자로부터 분해되거나 유도된 당 사슬(즉, 당단백질, 프로테오글리칸, 글리코사미노글리칸, 당지질 등) 등을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다. 따라서 "당 사슬"이라는 용어는 여기서 "폴리사카라이드", "탄수화물" 및 "탄화수소"와 상호 교환 가능하게 사용된다. 상술하지 않는 한 여기서 사용된 "당 사슬"이라는 용어는 당 사슬 및 당 사슬-함유 물질 모두를 포함한다.

제공된 아미노산이 유사한 소수성 지수를 지닌 또다른 아미노산으로 치환되는 경우 수득된 단백질은 그의 기원 단백질과 유사한 생물학적 기능을 여전히 지님(즉, 단백질이 동등한 효소 활성을 지님)이 잘 알려져 있다. 이러한 아미노산 치환에 있어서 소수성 지수는 바람직하게는 ±2 이내, 더욱 바람직하게는 ±1 이내 및 더욱 더 바람직하게는 ±0.5 이내이다. 이러한 소수성에 기반한 아미노산 치환이 효과적임은 당분야에서 이해된다. 친수성 지수도 본 발명의 아미노산 서열의 변형에 유용하다. 미국특허 제4,554,101호에 기술된 바와 같이 아미노산 잔기는 하기 친수성 지수를 제공한다: 아르기닌 (+3.0); 라이신 (+3.0); 아스파르트산 (+3.01); 글루탐산 (+3.01); 세린 (+0.3); 아스파라긴 (+0.2); 글루타민 (+0.2); 글리신 (0); 트레오닌 (-0.4); 프롤린 (-0.51); 알라닌 (-0.5); 히스티딘 (-0.5); 시스테인 (-1.0); 메티오닌 (-1.3); 발린 (-1.5); 류신 (-1.8); 이소류신 (-1.8); 티로신 (-2.3); 페닐알라닌 (-2.5); 및 트립토판 (-3.4). 아미노산이 유사한 친수성 지수를 지닌 또다른 아미노산으로 치환되고 생물학적 등가를 여전히 제공할 수 있음이 이해된다. 이러한 아미노산 치환에 있어서 친수성 지수는 바람직하게는 ±2 이내, 더욱 바람직하게는 ±1 이내 및 더욱 더 바람직하게는 ±0.5 이내이다.

여기서 사용된 "보존성 치환"이라는 용어는 치환되는 아미노산 및 치환시키는 아미노산이 유사한 친수성 지수 및/또는 소수성 지수를 지닌 아미노산 치환을 나타낸다. 예를 들어 보존성 치환은 ±2 이내, 바람직하게는 ±1 이내, 더욱 바람직하게는 ±0.5 이내의 친수성 또는 소수성 지수를 지닌 아미노산 사이에서 수행된다. 보존성 치환의 예는 당분야에 잘 알려진 하기 잔기쌍 각각에서의 치환을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다: 아르기닌 및 라이신; 글루탐산 및 아스파르트산; 세린 및 트레오닌; 글루타민 및 아스파라긴; 및 발린, 류산 및 이소류신.

여기서 사용된 "변이체"라는 용어는 기원 물질과 일부 다른 폴리펩타이드, 폴리뉴클레오타이드 등과 같은 물질을 나타낸다. 이러한 변이체의 예는 치환 변이체, 첨가 변이체, 결실 변이체, 절단 변이체, 대립유전성 변이체 등을 포함한다. 이러한 변이체의 예는 하나 또는 수개 치환, 첨가 및/또는 결실을 지닌 뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 또는 적어도 하나 이상의 치환, 첨가 및/또는 결실을 지닌 뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다. 여기서 사용된 "대립유전자"라는 용어는 두 유전자가 서로 식별되는 상응하는 유전자에 대해 동일한 좌위에 위치한 유전적 변이체를 나타낸다. 따라서 여기서 사용된 "대립유전성 변이체"라는 용어는 제공된 유전자와 대립유전성 관계를 지닌 변이체를 나타낸다. 이러한 대립유전성 변이체는 일반적으로 상응하는 대립유전자와 동일하거나 매우 유사한 서열을 지니고, 다른 생물학적 활성을 거의 지니지 않고 일반적으로 거의 동일한 활성을 지닌다. 여기서 사용된 "종 상동체" 또는 "상동체"라는 용어는 제공된 종의 제공된 유전자와 아미노산 또는 뉴클레오타이드 상동성(바람직하게는 적어도 60% 이상, 더욱 바람직하게는 적어도 80% 이상, 적어도 85% 이상, 적어도 90% 이상, 적어도 95% 이상의 상동성)을 지닌 것을 나타낸다. 이러한 종 상동체를 수득하는 방법은 본 명세서의 기술로부터 명백히 이해된다. "오르쏠로그(ortholog)"(또한 오르쏠로거스(orthologous) 유전자로도 명명됨)라는 용어는 동일 조상 유래의 다른 종 내의 유전자(종분화에 기인)를 나타낸다. 예를 들어 다유전자 구조를 지닌 헤모글로빈 유전자 패밀리의 경우 인간 및 마우스 α-헤모글로빈 유전자는 오르쏠로그인 반면 인간 α-헤모글로빈 유전자와 인간 β-헤모글로빈 유전자는 파랄로그(유전자 중복으로부터 유발된 유전자)이다. 오르쏠로그는 분자 계통발생도의 평가에 유용하다. 일반적으로 다른 종 내의 오르쏠로그는 그의 기원 종과 유사한 기능을 지닌다. 따라서 본 발명의 오르쏠로그는 본 발명에 유용하다.

여기서 사용된 "보존성(또는 보존적으로 변형된) 변이체"라는 용어는 아미노산과 핵산 서열 모두에 적용된다. 특정 핵산 서열에 대해 보존적으로 변형된 변이체는 동일하거나 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 인코드하는 핵산을 나타낸다. 유전자 코드의 축퇴로 인해 많은 기능적으로 동일한 핵산은 어떠한 제공된 단백질을 인코드한다. 예를 들어 코돈 GCA, GCC, GCG 및 GCU는 모두 아미노산 알라닌을 인코드한다. 따라서 알라닌이 코돈에 의해 지정된 모든 위치에서 코돈은 인코드되는 폴리펩타이드를 변화시키지 않고 상응하는 어떠한 코돈으로도 변경될 수 있다. 이러한 핵산 변이는 보존적으로 변형된 변이의 하나의 종을 나타내는 "침묵 변이"이다. 여기서 폴리펩타이드를 인코드하는 모든 핵산 서열은 핵산의 모든 간으한 침묵 변이도 나타낸다. 당업자는 핵산 내 각각의 코돈(일반적으로 메티오닌만을 위한 코돈인 AUG 및 일반적으로 트립토판만을 위한 코돈인 TGG를 제외하고)은 기능적으로 동일한 분자를 산출하도록 변형될 수 있다. 따라서 폴리펩타이드를 인코드하는 핵산의 각각의 침묵 변이는 각각 나타내는 서열에 포함된다. 바람직하게는 이러한 변형은 폴리펩타이드의 고급 구조에 크게 영향을 미치는 것이 가능한 아미노산인 시스테인의 치환을 방지하면서 수행된다.

기능적으로 동등한 폴리펩타이드를 인코드하는 유전자를 포함한 BAC 벡터를 제조하기 위해 아미노산 첨가, 결실 또는 변형이 아미노산 치환에 추가하여 수행될 수 있다. 아미노산 치환(들)은 1∼10개 아미노산, 바람직하게는 1∼5개 아미노산, 더욱 바람직하게는 1∼3개 아미노산의 다른 아미노산으로의 대치와 같은 원시 펩타이드의 적어도 하나 이상의 아미노산의 다른 아미노산으로의 대치를 나타낸다. 아미노산 첨가(들)는 원시 펩타이드 사슬 내로의 1∼10개 아미노산, 바람직하게는 1∼5개 아미노산, 더욱 바람직하게는 1∼3개 아미노산의 첨가와 같은 원시 펩타이드 사슬 내로의 적어도 하나 이상의 아미노산의 첨가를 나타낸다. 아미노산 결실(들)은 1∼10개 아미노산, 바람직하게는 1∼5개 아미노산, 더욱 바람직하게는 1∼3개 아미노산의 결실과 같은 적어도 하나 이상의 아미노산의 결실을 나타낸다. 아미노산 변형은 아미드화, 카르복실화, 황산화, 할로겐화, 절단, 지질화, 알킬화, 당화, 인산화, 수산화, 아실화(즉, 아세틸화) 등을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다. 치환되거나 첨가되는 아미노산은 자연 발생적 또는 비자연 발생적 아미노산 또는 아미노산 아날로그이다. 자연 발생적 아미노산이 바람직하다.

여기서 사용된 폴리펩타이드의 핵산 형태는 폴리펩타이드의 단백질 형태를 발현하는 것이 가능한 핵산 분자를 나타낸다. 이러한 핵산 분자는 발현되는 폴리펩타이드가 자연 발생적 폴리펩타이드와 실질적으로 동일한 활성을 지니는 한 결실되거나 또다른 염기로 치환된 부분 또는 대안으로 또다른 핵산 서열 내로 삽입되는 부분의 핵산 서열을 지닌다. 대안으로, 또다른 핵산은 핵산 분자의 5' 말단 및/또는 3' 말단에 결합된다. 핵산 분자는 스트린전트 조건 하에서 폴리펩타이드를 인코드하는 유전자에 하이브리다이즈 가능하고 폴리펩타이드와 실질적으로 동일한 기능을 지닌 폴리펩타이드를 인코드하는 핵산 분자이다. 이러한 유전자는 당분야에 알려져 있고 본 발명에서 이용 가능하다.

이러한 핵산은 잘 알려진 PCR 기술에 의해 수득될 수 있고, 대안으로 화학적으로 합성될 수 있다. 이들 방법은 예를 들어 사이트-특이적 돌연변이유발, 하이브리디제이션 등과 결합된다.

여기서 사용된 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드에 대한 "치환, 첨가 또는 결실"이라는 용어는 원시 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드에 대한 아미노산 또는 그의 치환체 또는 뉴클레오타이드 또는 그의 치환체의 치환, 첨가 또는 결실을 나타낸다. 이는 사이트-특이적 돌연변이유발 기술 등을 포함한 당분야에 잘 알려진 기술에 의해 달성된다. 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드는 어떠한 수(>0)의 치환, 첨가 또는 결실도 지닌다. 그 수는 변이체가 의도된 기능을 유지시키는 치환, 첨가 또는 결실의 수를 지닌 변이체 만큼 클 수 있다. 예를 들어 이러한 수는 하나 또는 수개 또는 전체 길이의 20% 또는 10% 이내 또는 100개 이하, 50개 이하 또는 25개 이하이다.

폴리머의 구조(즉, 폴리펩타이드 구조)는 다양한 수준에서 기술된다. 이러한 구조는 일반적으로 예를 들어 Alberts et al ., Molecular Biology of the Cell (3rd Ed., 1994) 및 Cantor and Schimmel, Biophysical Chemistry Part I: The Conformation of Biological Macromolecules (1980)에서 기술되어 있다. 본 발명에서 이용 가능한 일반적인 분자생물학 기술은 Ausubel F. A. et al . eds. (1988), Current Protocols in Molecular Biology, Wiley, New York, NY; Sambrook J. et al., (1987) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY 등을 참고하여 당업자에 의해 용이하게 수행될 수 있다.

본 명세서 내에 유전자 기술시 "벡터"는 목적 폴리뉴클레오타이드 서열을 표적 세포로 전달할 수 있는 작용제를 나타낸다. 이러한 벡터의 예는 자가 복제가 가능하거나 숙주 세포(즉, 원핵세포, 효모, 동물세포, 식물세포, 곤충세포, 전체 동물 및 전체 식물)의 염색체 내로 도입되는 것이 가능한 벡터를 포함하고 본 발명의 폴리뉴클레오타이드의 전사에 적당한 자리에서 프로모터를 포함한다.

"BAC 벡터"라는 용어는 E. coli의 F 플라스미드를 이용하여 제조된 플라스미드 및 E. coli와 같은 박테리아에서 약 300 kb 이상의 큰 크기의 DNA 단편을 안정하게 유지시키고 생장할 수 있는 벡터를 나타낸다. BAC 벡터는 적어도 BAC 벡터의 복제를 위해 필수적인 영역을 포함한다. 이러한 영역의 예는 F 플라스미드의 복제 기점(oriS) 및 그의 변이체를 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다.

여기서 사용된 "BAC 벡터 서열"이라는 용어는 BAC 벡터의 기능에 필수적인 서열을 포함한 서열을 나타낸다. 선택적으로는 BAC 벡터 서열은 "재조합 단백질-의존적 재조합 서열" 및/또는 "선별 마커"를 더욱 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 핵산의 "재조합"이라는 용어는 "상동재조합"이라는 용어와 호환하여 사용이 가능하며 2개의 다른 상동 핵산분자가 만나는 것으로 개시되어 크로스오버가 발생하여 핵산의 새로운 재조합이 발생하는 것을 말한다. 본 명세서에서 상동 재조합은 "재조합 단백질-의존적 재조합" 및 "재조합 단백질-비의존적 재조합" 모두를 포함한다. "재조합 단백질-의존적 재조합"이라는 용어는 재조합 단백질 존재하에서 발생하지만 재조합 단백질-비존재하에서는 발생하지 않는 상동 재조합을 말한다. "재조합 단백질-비의존적 재조합"이라는 용어는 재조합 단백질의 존재의 유무에 상관없이 발생하는 상동 재조합을 말한다. 본 명세서에서 사용되는 "재조합 단백질-의존성 재조합 서열"이라는 용어는 재조합 단백질-의존적 재조합을 발생시키는 서열을 말하고 "재조합 단백질-비의존성 재조합 서열"이라는 용어는 재조합 단백질-비의존적 재조합을 발생시키는 서열을 말한다. 재조합 단백질-의존성 재조합 서열은 재조합 단백질 존재하에서는 재조합을 발생시키지만 재조합 단백질 비존재하에서는 재조합을 발생시키지 않는다. 재조합 단백질은 바람직하게는 재조합 단백질-의존성 재조합 서열에 특이적으로 작용하고 재조합 단백질-의존성 재조합 서열 이외의 서열에는 작용하지 않는다.

대표적인 재조합 단백질-의존성 재조합 서열과 재조합 단백질의 쌍의 예로는 다음과 같지만 다음의 것들로 제한하는 것은 아니다: 박테리아파지 P1 유래 loxP(P의 크로스오버의 위치)서열과 Cre(순환 재조합) 단백질의 조합, Flp 단백질과 FRT 배위의 조합, φC31과 attB 또는 attP과의 조합(Thorpe, Helena M.; Wilson, Stuart E.; Smith, Margaret C.M., Control of directionality in the site-specific recombination system of the Streptomyces phage φC31., Molecular Microbiology (2000), 38(2), 232-241.), 레솔바제와 res 부위의 조합(Sadowski P., Site-specific recombinases: changing partners and doing the twist, J. Bacteriol., February 1986; 165(2) 341-7) (일반적으로 Sauer B., Site-specific recombination: developments and applications., Curr. Opin. Biotechnol., 1994 Oct; 5(5): 521-7을 참조)

본 명세서에서 사용되는 "선별마커"라는 용어는 BAC 벡터를 함유하는 숙주세포를 선별하여 지표로써의 기능을 하는 유전자를 말한다. 선별마커로써는 형광마커, 발광마커 및 약제 선별마커를 들 수 있지만 이들로 제한하는 것은 것이다. "형광마커"라는 용어는 녹색형광 단백질(GFP)과 같은 형광 단백질을 코딩하는 유전자를 들 수 있지만 이들로 제한하는 것은 아니다. "발광마커"로써는 루시페라제(luciferase)와 같은 발광 단백질을 코딩하는 유전자를 들 수 있지만 이들로 제한하는 것은 아니다. "약제 선별마커"로써는 하기로 이루어진 군에서 선별된 단백질을 코딩하는 유전자를 들 수 있지만 이들로 제한하는 것이 아니다: 디히드로폴레이트 환원효소유전자(dihydrofolate reductase gene), 글루타민 합성효소 유전자, 아스파라긴산 트랜스미나제(aspartic acid transaminase), 메탈로시오네인(metallothionein, MT), 아데노신 디아미나제(adenosine deaminase, ADA), 아데노신 디아미나제(AMPD1, 2), 크산틴-구아닌-포스포리보실 트랜스퍼라제(xanthine-guanine-phosphoribosyl transferase), UMP 합성효소, P-글리코프로테인(P-glycoprotein), 아스파라긴 합성효소 및 오르니틴 디카르복실라제(ornithine decarboxylase). 이들의 약제 선별마커와 사용되는 약제의 조합은 예를 들면 하기와 같다: 디히드로폴레이트 환원효소유전자(DHFR)와 메소트랙사이토(methotrexate, MTX)의 조합, 글루타민 합성효소(GS) 유전자와 메티오닌 설폭시민( methionine sulfoximine, Msx)의 조합, 아스파라긴산 트랜스미나제(AST) 유전자와 N-포스포아세틸-L아스파라긴산(PALA)의 조합, MT 유전자와 카드뮴(Cd² ⁺)의 조합, 아데노신 디아미나제(ADA) 유전자와 아데노신, 아라노신(alanosine) 또는 2'-디옥시코포마이신(deoxycoformycin)과의 조합, 아데노신 디아미나제(AMPD1, 2) 유전자와 아데닌, 아자세린(azaserine) 또는 코포마이신과의 조합, 크산틴-구아닌-포스포리보실 트랜스퍼라제 유전자와 마이코페놀산(mycophenolic acid)의 조합, UMP 합성효소 유전자와 6-아카울리신(azaulysine) 또는 파이라조퓨란(pyrazofuran)과의 조합, P-글리코프로테인(P-gp, MDR) 유전자와 다양한 약제의 조합, 아스파라긴 합성효소(AS) 유전자와 β-아스파틸히드록사믹산(aspartyl hydroxamic acid) 또는 알비지인(albizziin)과의 조합, 오르티딘 디카르복실라제(ornithine decarboxylase, ODC) 유전자와 α-디플루오로메틸-오르니틴(difluoromethyl-ornithine (DFMO)

본 명세서에서 사용되는 "발현 벡터"라는 용어는 구조유전자 및 그의 발현을 조절하는 프로모터에 첨가하여 다양한 조절 인자가 숙주세포 내에서 작동할 수 있는 상태로 연결되어 있는 핵산서열을 말한다. 조절 인자는 바람직하게는 터미네이터, 약제 내성 유전자(예를 들면 카나마이신 내성 유전자, 하이그로마신 내성 유전자 등)와 같은 선별마커 및 인핸서를 포함할 수 있다. 생물(예를 들면 식물)의 발현 벡터의 형태 및 사용되는 조절 인자의 종류가 숙주세포에 상응하여 변화될 수 있다는 것은 당업자에게 공지되어 있는 사항이다. 식물의 경우 본 발명에 이용되는 식물의 발현 벡터는 T-DNA 영역을 더욱 포함할 수 있다. T-DNA 영역는 특히 아그로박테리아를 이용하여 그 식물을 형질전환하는 경우에 유전자의 도입의 효과를 높인다.

본 명세서에서 사용하는 "재조합 벡터"라는 용어는 목적 폴리뉴클레오타이드 서열을 목적 세포에 이동시키는 것이 가능한 벡터를 말한다. 이와 같은 벡터로써는 원핵세포, 효모, 동물세포, 식물세포, 곤충세포, 동물개체 및 식물개체 등의 숙주세포에서 자가복제가 가능하고 또는 염색체 내로 통합되는 것이 가능하여 본 발명의 폴리뉴클레오타이드의 전사에 적합한 위치에 프로모터를 함유하고 있는 것이 예시된다.

"터미네이터"라는 용어는 유전자의 단백질을 코드하는 영역의 하류에 위치하고 DNA가 mRNA에 전사될 때 전사의 결합, 폴리A서열의 부가에 관여하는 배열이다. 터미네이터는 mRNA의 안정성에 관여하영 유전자의 발현량에 영향을 미친다고 알려져 있다. 터미네이터로써는 포유동물 유래 터미네이터, CaMV35S 터미네이터, 노파린(nopaline) 합성효소 유전자의 터미너에터(Tnos), 타바코PR1a 유전자의 터미네이터 등을 들 수 있지만 이들로 한정하는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용되는 "프로모터"라는 용어는 유전자의 전사의 개시부위를 결정하고 그 빈도를 직접적으로 조절하는 DNA의 ORF 상류 영역을 말하고 RNA 폴리머라제가 결합하여 전자를 시작하는 염기서열이다. 프로모터의 영역은 통상 추정 단백질 코딩 영역의 첫 번째 엑손의 상류 약 2kbp 이내의 영역이 많기 때문에 DNA 분석 소프트웨어를 이용하여 게놈 염기서열내의 단백질 코딩 영역을 예측하면 프로모터 영역을 추정하는 것이 가능하다. 추정 프로모터 영역은 구조 유전자마다 변동되고 통상은 구조 유전자의 상류에 있지만 이들로 제한하지 않으며 구조 유전자의 하류에도 존재할 수 있다. 바람직하게는 추정 프로모터 영역은 첫 번째 엑손 번역 시작점에서 상류 약 2kbp 이내에 존재한다.

본 명세서에서 본 발명의 프로모터의 발현이 "구성적(constitutive)"이라는 것은 생물의 모든 조직에서 그 생물의 발현이 어느 단계에 있어도 거의 일정한 양으로 발현되는 성질을 말한다. 구체적으로는 본 명세서의 실시예와 동일한 조건에서 노던블롯 분석을 하였을 때 예를 들면 임의의 시점에서(예를 들면 2시점 이상(예를 들면 5일째 및 15일째) 동일하거나 또는 대응하는 부위의 어느 시점에서도 거의 같은 정도의 발현량을 볼 수 있을 때 본 발명의 정의로써 발현이 구성적이다라고 말한다. 구성적 프로모터는 통상의 성장환경에 있는 생물의 항상성 유지에 역할을 다하고 있다고 생각된다. 이들의 성질은 생물의 임의의 부분에서 RNA를 추출하여 노던블롯 분석으로 발현량을 분석하는 것 또는 발현된 단백질을 웨스턴블롯에 의해 정량하는 것으로 결정하는 것이 가능하다.

"인핸서"라는 용어는 목적 유전자의 발현효율을 높이기 위해 이용될 수 있다. 동물세포에서 사용할 경우 인핸서로써는 SV40 프로모터 내의 상류측의 서열을 함유하는 인핸서 영역이 바람직하다. 인핸서는 여러 개를 사용할 수 있지만 1개가 사용되어도 좋고 사용되지 않아도 좋다.

본 명세서에서 사용되는 "작동가능하게 연결된"이라는 용어는 원하는 서열의 발현(작동)이 있는 전사번역 조절서열(예를 들면, 프로모터, 인핸서 등) 또는 번역 조절서열의 제어하에 배치되는 것을 말한다. 프로모터가 유전자에 작동가능하게 연결되기 위해서는 통상 그 유전자의 바로 상류에 프로모터가 배치되지만 반드시 인접하여 배치될 필요는 없다.

본 발명에서 사용하는 용어 "형질전환", "형질도입" 및 "트랜스팩션"은 특히 언급하지 않는 한 호환하여 사용되는 것이 가능하며 숙주세포로의 핵산의 도입을 의미한다. 형질전환방법으로써는 숙주세포에 DNA를 도입하는 방법이면 어느 것이라도 이용하는 것이 가능하며, 예를 들면 전기천공법, 파티클 건(particle gun)(유전자 총)을 이용하는 방법, 인산칼슘법 등의 다양한 공지의 기술을 들 수 있다.

"형질전환체"라는 용어는 형질전환에 의해 제조된 세포 등의 생명체 전부 또는 일부를 말한다. 형질전환체로써는 원핵세포, 효모, 동물세포, 식물세포, 곤충세포 등을 들 수 있다. 형질전환체는 그 대상에 의존하여 형질전환세포, 형질전환조직, 형질전환숙주 등으로도 부르며 본 명세서에서는 이들의 형태를 모두 포함하지만 특정 문맥에서 특정 형태를 가르킬 수 있다.

원핵세포의 예는 에스케리키아속(Escherichia), 세라티아속(Serratia), 바실러스속(Bacillus), 브레비박테리움속(Brevibacterium), 코리네박테리움속(Corynebacterium), 미크로박테리움속(Microbacterium), 슈도모나스속(Pseudomonas) 등 즉, Escherichia coli XL1-Blue, Escherichia coli XL2-Blue, Escherichia coli DH1, Escherichia coli MC1000, Escherichia coli KY3276, Escherichia coli W1485, Escherichia coli JM109, Escherichia coli HB101, Escherichia coli No.49, Escherichia coli W3110, Escherichia coli NY49, Escherichia coli BL21(DE3), Escherichia coli BL21(DE3)pLysS, Escherichia coli HMS174(DE3), Escherichia coli HMS174(DE3)pLysS, Serratia ficaria, Serratia fonticola, Serratia liquefaciens, Serratia marcescens, Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens, Brevibacterium ammmoniagenes, Brevibacterium immariophilum ATCC14068, Brevibacterium saccharolyticum ATCC14066, Corynebacterium glutamicum ATCC13032, Corynebacterium glutamicum ATCC14067, Corynebacterium glutamicum ATCC13869, Corynebacterium acetoacidophilum ATCC13870, Microbacterium ammoniaphilum ATCC15354, Pseudomonas sp.D-0110 등의 원핵세포를 포함한다.

동물세포로써는 제대혈단핵구, 말초혈단핵구 및 Sup-T1 세포 등을 들 수 있다.

본 명세서에서 "동물"이라는 용어는 그의 가장 광범위한 의미로 사용되고 척추동물 및 무척추동물을 포함한다. 동물의 예는 포유강, 조강, 파충강, 양서강, 어강, 곤충강, 연형강 등을 들 수 있으나 이러한 것들로 제한하는 것은 아니다

본 명세서에서 생물의 "조직"이라는 용어는 세포의 집단이며 그 집단에서 일정한 동일한 작용을 갖는 것을 말한다. 따라서 조직은 기관의 일부라고 할 수 있다. 기관내에서는 동일한 움직임을 갖는 세포를 갖는 것이 많지만 미묘하게 다른 움직임을 갖는 것이 혼재하는 것도 있기 때문에 본 명세서에서 조직은 일정한 특성을 공유하는 한 다양한 세포를 혼재하고 있는 있어도 좋다.

본 명세서에서 "기관"이라는 용어는 단일 독립적 형태를 지니고 하나 이상의 조직이 함께 결합되어 특정 기능을 수행하게 되는 구조체를 형성한 것을 말한다. 식물에서 기관의 예는 캘러스, 뿌리, 잎자루, 줄기, 잎, 꽃, 종자, 배아싹, 배아, 열매 등을 들 수 있으나 이들로 제한하는 것은 아니다. 동물에 있어서 기관의 예는 위, 간, 창자, 췌장, 폐, 기도, 코, 심장, 동맥, 정맥, 임파절(림프계), 흉선, 난소, 눈, 귀, 혀, 피부 등을 들 수 있으나 이들로 제한하는 것은 아니다.

본 명세서에서 "트랜스제닉"이라는 용어는 특정 유전자를 어느 생물로 도입하거나 또는 그와 같은 유전자가 도입된 생물(즉, 식물 또는 동물(마우스 등)을 포함)을 말한다.

본 발명의 생물이 동물인 경우 트랜스제닉 생물은 마이크로인젝션법(미량주입법), 바이러스 벡터법, 배아줄기(ES)세포법, 정자 벡터법, 염색체 단편 도입법(트랜스소믹법), 에피솜법 등을 이용하여 트랜스제닉 동물의 제조기술을 사용하여 제조하는 것이 가능하다. 이와 같은 트랜스제닉 동물 제조기술은 해당분야에 잘 알려져 있다.

본 명세서에서 사용된 "스크니링"이라는 용어는 목적하는 어느 특정 성질을 갖는 물질, 숙주세포, 바이러스 등을 특정 조작 및/또는 평가방법으로 다수의 후보로부터 선별하는 것을 말한다. 본 발명에서는 원하는 활성을 갖는 스크리닝에 의해 얻어진 바이러스 또는 본 발명의 범위 내에 포함된 것이 이해된다.

본 명세서에서 "칩" 또는 "마이크로칩"이라는 용어는 다목적 기능을 지니고 시스템의 일부를 구성하는 마이크로 집적회로를 나타내는데 상호 교환 가능하게 사용된다. 칩의 예는 DNA 칩, 단백질 칩 등을 들 수 있으나 이들로 제한하는 것은 아니다.

본 명세서에서 "어레이"라는 용어는 하나 이상(예를 들면, 1000 이상 등)의 표적 물질을 포함하는 조성물(예를 들면, DNA, 단백질, 세포 등)이 정렬되어 배치된 패턴 또는 패턴을 갖는 기판(예를 들면, 칩)을 말한다. 어레이 중 작은 기판(예를 들면, 10×10 mm 등)상에 패턴화되어 있는 것을 마이크로어레이라고 하지만 본 명세서에서는 마이크로어레이와 어레이라는 용어는 상호 교환 가능하게 사용된다. 따라서 상기 기판보다 큰 기판에 패턴화된 물질도 마이크로어레이로 표기되기도 한다. 예를 들어 어레이는 자신의 고형상 표면 또는 그의 필름에 고정되어 있는 원하는 세포의 세트로 구성된다. 어레이는 바람직하게는 적어도 10²개 이상, 더욱 바람직하게는 10³개 이상, 더욱 더 바람직하게는 10⁴개, 더욱 더 바람직하게는 10⁵개 이상의 동일하거나 다른 형태의 항체를 포함한다. 이들 세포는 바람직하게는 125×80 mm, 더욱 바람직하게는 10×10 mm 표면 상에 놓인다. 어레이는 96-웰 미량 역가판, 384-웰 미량 역가판, 슬라이드글라스 정도의 크기의 미량 역가판 등을 포함하나 이들로 제한하는 것은 아니다. 고정되는 조성물은 하나 또는 다수 형태의 표적 물질을 포함한다. 이러한 표적 물질 형태의 수는 제한 없이 1부터 약 10종류, 약 100종류, 약 500종류 및 약 1,000종류를 포함한 많은 스팟의 범위이다.

상기 기술된 바와 같이 일반적으로 물질 당 10⁸개 이하, 또다른 실시태양의 경우 10⁷개 이하, 10⁶개 이하, 10⁵개 이하, 10⁴개 이하, 10³개 이하, 10²개 이하의 생물 분자를 포함한 어떠한 수의 표적 물질(예를 들면, 항체와 같은 단백질)도 고형상 표면 또는 필름 상에 제공된다. 10⁸개 이하의 생물 분자 표적 물질을 포함한 조성물은 기재 상에 제공된다. 이러한 경우 기재의 크기는 바람직하게는 작은 것이다. 특히 표적 물질(예를 들면, 항체와 같은 단백질) 조성물을 포함한 조성물의 스팟 크기는 단일 생물 분자의 크기만큼 작은 것이다(예를 들면, 1∼2 nm 등급). 일부의 경우 기재의 최소 면적은 기재 상의 생물 분자의 수에 기반하여 결정된다.

생물 분자의 "스팟"은 어레이 상에 제공된다. 본 명세서에서 사용된 "스팟"이라는 용어는 표적 물질의 포함한 조성물의 특정 세트를 나타낸다. 본 명세서에서 사용된 "스팟팅"이라는 용어는 기재 또는 플레이트 상에 표적 물질을 포함한 조성물 스팟의 제조 실행을 나타낸다. 스팟팅은 예를 들어 피펫팅 또는 대안으로 자동장치를 이용한 어떠한 방법으로도 수행된다. 이들 방법은 당분야에 잘 알려져 있다.

본 명세서에서 사용된 "어드레스"라는 용어는 다른 특정 위치와 구분되는 기재 상의 특정 위치를 나타낸다. 어드레스는 스팟과 적당히 결합된다. 어드레스는 각각의 어드레스의 물질이 다른 어드레스의 물질과 구분되는 어떠한 구분 가능한 형태도 지닐 수 있다(예를 들면, 광학적). 어드레스를 한정하는 형태는 제한 없이 예를 들어 환형, 타원형, 정사각형, 직사각형 또는 불규칙한 형태이다. 따라서 "어드레스"라는 용어는 추상적 개념을 나타내는데 사용되는 반면 "스팟"이라는 용어는 구체적 개념을 나타내는데 사용된다. 서로 구분할 필요가 없는 한 "어드레스" 및 "스팟"이라는 용어는 여기서 상호 교환 가능하게 사용된다.

특히 각각의 어드레스의 크기는 기재의 크기, 기재 상의 어드레스 수, 표적 물질 및/또는 이용 가능한 반응제를 포함한 조성물의 양, 미량 역가판의 크기 및 어레이에 사용되는 어떠한 방법에 요구되는 분석 수준에 따라 달라진다. 각각의 어드레스의 크기는 예를 들어 어드레스가 어레이에 적합한 어떠한 크기도 가능하나 1∼2 nm부터 수 센티미터의 범위가 된다.

어드레스를 한정하는 공간 배열 및 형태는 마이크로어레이가 특정 적용에 적합하도록 고안된다. 어드레스는 조밀하게 배열되거나 드문드문 분포되거나 분석되는 물질의 특정 형태에 적당한 원하는 패턴으로 하위 분류된다.

본 발명에서 사용된 "지지체"라는 용어는 세포, 박테리아, 바이러스, 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드를 전달할 수 있는 물질을 나타낸다. 이러한 지지체는 공유결합 또는 비공유결합을 통해 여기서 사용된 생물 분자에 결합하는 것이 가능하거나 이러한 능력을 지니도록 유도된 고형 물질로 이루어진다.

지지체에 사용되는 물질의 예는 제한 없이 유리, 규산염, 실리콘, 세라믹, 이산화규소, 플라스틱, 금속(합금 포함), 자연 발생적 및 합성 폴리머(예를 들면, 폴리스티렌, 셀룰로스, 키토산, 덱스트란 및 나일론) 등과 같은 고형 표면을 형성하는 것이 가능한 어떠한 물질도 포함한다. 바람직하게는 지지체는 소수성 결합을 생성하는 부분을 포함한다. 지지체는 다수의 물질로 이루어진 층으로 형성될 수 있다. 예를 들어 지지체는 유리, 석영 유리, 알루미나, 사파이너, 고토감람석, 탄화규소, 산화규소, 질화규소 등과 같은 무기 절연 물질로 제조된다. 지지체는 폴리에틸렌, 에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리이소부틸렌, 폴리에틸렌 테레프탈레이트, 불포화폴리에스테르, 불소-함유 수지, 염화폴리비닐, 염화폴리비닐리덴, 아세트산폴리비닐, 폴리비닐알코올, 폴리비닐아세탈, 아크릴 수지, 폴리아크릴로니트릴, 폴리스티렌, 아세탈 수지, 폴리카보네이트, 폴리아미드, 페놀 수지, 요소 수지, 에폭시 수지, 멜라민 수지, 스티렌-아크릴로니트릴 공중합체, 아크릴로니트릴-부타디엔-스티렌 코폴리머, 실리콘 수지, 산화폴리페닐렌, 폴리술폰 등과 같은 유기 물질로 제조된다. 선택적으로 블럿팅에 사용되는 니트로셀룰로스 필름, 나일론 필름, PVDF 필름 등이 지지체 재료로 사용될 수 있다.

본 발명의 헤르페스바이러스는 감염성 질환의 치료, 예방 및/또는 요법용 약제적 조성물의 성분으로 사용될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 약제와 관련한 "유효량"이라는 용어는 약제가 의도된 유효성을 나타내게 하는 양을 나타낸다. 본 명세서에서 사용된 최소 농도에 상응하는 유효량은 최소 유효량을 나타낸다. 이러한 최소 유효량은 해당분야에 잘 알려져 있다. 일반적으로 약제의 최소 유효량은 당업자에 의해 적당하게 측정되었거나 측정될 수 있다. 이러한 유효량의 측정은 실질적인 투여, 동물 모델의 이용 등에 의해 달성될 수 있다. 또한 본 발명은 이러한 유효량의 측정에 유용하다.

여기서 사용된 "약제적으로 수용가능한 캐리어(carrier)"라는 용어는 약학용 약제 또는 농업용 화학제(예를 들면, 동물 약제)의 제조에 사용되고, 유효 성분 상에 역효과를 지니지 않는 물질을 나타낸다. 이러한 약제적으로 수용가능한 캐리어의 예는 항산화제, 보존제, 착색제, 향미제, 희석제, 유화제, 현탁제, 용매, 필러(filler), 충전제, 완충액, 전달 매개체, 부형제 및 농업용 또는 약학용 애주번트(adjuvant)를 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다.

본 발명의 치료방법에 사용되는 약학용 약제의 형태 및 양은 사용 목적, 표적 질환(형태, 경중도 등), 피험자의 연령, 크기, 성별 및 병력, 피험자의 투여 사이트의 형태 등의 관점에서 본 발명의 방법에 의해 수득된 정보(예를 들면, 질환 관련 정보)에 기반하여 당업자에 의해 용이하게 측정될 수 있다. 또한 피험자(환자)에게 본 발명의 모니터 방법을 수행하는 빈도는 사용 목적, 표적 질환(형태, 경중도 등), 피험자의 연령, 크기, 성별 및 병력, 치료의 진전에 따라 당업자에 의해 용이하게 측정된다. 질환 상태 모니터의 빈도는 수개월 당 1회(예를 들면, 주 당 1회 내지 월 당 1회)를 포함한다. 바람직하게는 모니터링은 진전을 참고로 주 당 1회 내지 월 당 1회로 수행된다.

본 명세서에서 사용된 "지시서"라는 용어는 의사, 환자와 같은 투여를 수행하는 사람에 대한 본 발명의 방법의 처방을 나타낸다. 지지서는 방사선 치료 직후 또는 직전(예를 들면, 24시간 이내 등)과 같이 본 발명의 약물을 언제 투여하는지를 설명한다. 지지서는 본 발명이 실시되는 국가의 감독관청(즉, 일본의 후생노동성, 미국의 식품의약국 등)에 의해 정의된 포맷에 따라 준비되고 지지서가 감독관청에 의해 승인됨을 명백히 기술한다. 지지서는 소위 약제사용설명서(package insert)이며 일반적으로 종이 매체로 제공된다. 지시서는 제한적인 것은 아니고 전자 매체(즉, 인터넷 상에 제공되는 웹사이트, 전자우편 등)의 형태로 제공된다.

본 발명의 치료시 필요에 따라 2개 또는 그 이상의 약제가 사용된다. 2개 또는 그 이상의 약제가 사용되는 경우 이들 약제는 유사한 특성을 지니거나 유사한 기원으로부터 유래하고, 또는 선택적으로 다른 특성을 지니거나 다른 기원으로부터 유래한다. 본 발명의 방법은 2개 또는 그 이상의 약제를 투여하는 방법의 약물 저항성 수준에 대한 정보를 수득하는데 사용될 수 있다.

본 발명에서 특정 당 사슬 구조의 분석 결과가 유사한 형태의 생물체, 배양 세포, 조직, 동물(예를 들면, 인간에 대응하는 마우스) 등에 대한 질환 수준과 상호 관련되면 상응하는 당 사슬 구조는 질환 수준과 상호 관련될 수 있음은 당업자에 의해 인식될 것이다. 이러한 문제는 예를 들어 참고문헌에 포함된 "Doubutsu Baiyosaibo Manual (Animal Culture Cell Manual), Seno et al . eds., Kyoritsu shuppan, 1993"에 기술되어 있다.

사용된 일반 기술

본 명세서에서 사용된 기술은 따로 기술되지 않는 한 본 본 발명의 기술적 범위 내에 존재한다. 이들 기술은 당 사슬 과학, 유체공학, 미세기계가공, 유기화학, 생화학, 유전공학, 분자생물학, 미생물학, 유전학 분야 및 관련 분야에 일반적으로 사용된다. 기술은 하기 기술된 문헌 및 여기서 언급된 문헌 내에 상세히 기술되어 있다.

미세기계가공은 예를 들어 Campbell, S.A. (1996), The Science and Engineering of Microelectronic Fabrication, Oxford University Press; Zaut, P.V. (1996), Micromicroarray Fabrication: a Practical Guide to Semiconductor Processing, Semiconductor Services; Madou, M.J. (1997), Fundamentals of Microfabrication, CRC1 5 Press; Rai-Choudhury, P. (1997), Handbook of Microlithography, Micromachining & Microfabrication: Microlithography; 및 참고문헌에 포함된 관련 부분에 기술되어 있다.

여기서 사용된 분자생물학 기술, 생화학 기술 및 미생물학 기술은 잘 알려져 있고 해당분야에서 일반적으로 사용되며 예를 들어 Maniatis, T. et al . (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor and its 3rd Ed. (2001); Ausubel, F.M. et al . eds, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., NY, 10158 (2000); Innis, M.A. (1990), PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press; Innis, M.A. et al . (1995), PCR Strategies, Academic Press; Sninsky, J.J. et al . (1999), PCR Applications: Protocols for Functional Genomics, Academic Press; Gait, M.J. (1985), Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Gait, M.J. (1990), Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein, F. (1991), Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Adams, R.L. et al . (1992), The Biochemistry of the Nucleic Acids, Chapman & Hall; Shabarova, Z. et al . (1994), Advanced Organic Chemistry of Nucleic Acids, Weinheim; Blackburn, G.M. et al . (1996), Nucleic Acids in Chemistry and Biology, Oxford University Press; Hermanson, G.T. (1996), Bioconjugate Techniques, Academic Press; Method in Enzymology 230, 242, 247, Academic Press, 1994; Special issue, Jikken Igaku (Experimental Medicine) "Idenshi Donyu & Hatsugenkaiseki Jikkenho (Experimental Method for Gene introduction & Expression Analysis"), Yodo-sha, 1997 등에 기술되어 있다. 이러한 각각의 문헌은 본 명세서에서 관련 부분(또는 가능하면 전체)이 참고로써 사용되었다.

(바람직한 실시태양의 설명)

이하 본 발명은 바람직한 실시태양을 기재할 것이지만 이 실시태양은 본 발명의 예시이며 본 발명의 범위는 이와 같은 바람직한 실시태양으로 한정되는 것이 아님을 이해되어야만 한다. 당업자 또는 하기의 바람직한 실시태양을 참고로 하여 본 발명의 범위에 있는 변화, 변경 등을 용이하게 행하는 것이 이해되어야만 한다.

첫째 측면에 있어서 본 발명은 재조합 헤르페스바이러스를 제공한다. 바람직하게는 이 헤르페스바이러스는 그 게놈 서열 중에 BAC 벡터 서열을 포함한다. BAC 벡터 서열을 포함하는 헤르페스바이러스를 구축하는 것에 의해 BAC 분자로써 세균에 있어서 헤르페스바이러스를 취급하는 것이 가능해진다. 사용된 BAC 벡터 서열은 바람직하게는 F 플라스미드 유래의 복제 개시점을 포함하지만 F 플라스미드 유래의 복제 개시점 이외의 서열이어도 좋고 300 kb 이상의 서열을 세균 인공 염색체로써 세균 세포 내에 지니며 증식시키는 것이 가능한 한 임의의 복제 개시점을 이용하는 것이 가능하다. 임의의 리플리케이션 개시점을 이용하는 것도 가능하다. 본 발명의 BAC 벡터는 세균 숙주세포, 바람직하게는 대장균 세포에 지니고 및/또는 증식하는 것이 가능하다. 바람직하게는 이 BAC 벡터의 일부는 헤르페스바이러스의 비 필수영역내의 삽입되어 헤르페스바이러스 게놈을 포함하는 BAC로써 조작하는 것이 가능하다. 이 헤르페스바이러스 게놈을 포함하는 BAC는 포유동물 세포에 도입된 경우 재조합 헤르페스바이러스를 생산, 증식하는 것이 가능하다. 재조합 헤르페스바이러스의 숙주세포로는 야생형 헤르페스바이러스주가 증식할 수 있는 임의의 포유동물 세포를 사용할 수 있다. 바람직하게는 이러한 숙주세포는 인간 유래의 것이고 제한하는 것은 아니지만 예를 들면 제대혈단핵구, 말초혈단핵구 및 SupT1 세포이다.

(인간 헤르페스바이러스 게놈을 포함하는 BAC 벡터의 제조방법)

인간 헤르페스바이러스(예를 들면 HHV-6A, HHV-6B 또는 HHV-7)게놈과 BAC 벡터를 이용하여 인간 헤르페스바이러스 게놈을 포함하는 BAC 벡터를 제조하기 위해서는 상동적 재조합을 사용하는 방법 등 다양한 공지된 방법을 사용할 수 있다.

상동적 재조합을 이용하는 방법으로서는 인간 헤르페스바이러스 게놈과 상동인 서열을 연결한 선형 BAC 벡터 서열을 지니는 핵산을 사용하는 방법을 들 수 있다.

인간 헤르페스바이러스 게놈과 상동인 서열을 연결한 선형 BAC 벡터 서열을 지니는 핵산을 이용하는 인간 헤르페스바이러스 게놈을 포함하는 BAC 벡터의 대표적인 제조 방법은 (1) 이 핵산을 인간 헤르페스바이러스 게놈과 함께 적절한 숙주 내에 도입시키고, (2) 숙주세포를 배양하여 선형 BAC 벡터 서열에 연결된 상동 서열과 인간 헤르페스바이러스 게놈 서열의 사이에서 상동 재조합을 일으켜, (3) 이 상동 재조합에 의해 생성된 BAC 벡터 서열을 도입한 인간 헤르페스바이러스 게놈 서열을 포함하는 숙주 세포를 선별하고, (4) 이 숙주세포를 배양하고 환형 바이러스 DNA를 추출하는 공정을 포함한다. 상기 방법에서 사용된 숙주세포로써는 제대혈단핵구, 말초혈단핵구 및 SupT1 세포를 들 수 있지만 이들로 제한하는 것은 아니다.

포유동물 숙주내에 BAC 벡터를 도입하는 방법으로써는 한정되는 것은 아니지만 인산칼슘법, 전기천공법, 리포펙션법을 들 수 있지만 이들로 제한되는 것은 아니다. Amaxa사 또는 Bio-Rad사의 전기천공법은 T 세포에 다량의 유전자를 좋은 효율로 도입하는 것이 가능한 방법이다. 예를 들면 Amaxa사의 전기천공은 다음의 조건 하에서 수행된다. 예를 들면 세포세정 완충액(우태혈청이 없는 RPMI-1640 배지)으로 2회 세포를 세정한 후 전기천공 완충액(제조업자에 의해 공급된 뉴클레오펙터 용액)에 현탁시킨다. 1 ㎍의 플라스미드 DNA가 세포 현탁액에 첨가되고 잘 섞은 후 큐벳트에 넣었다. 적당한 프로그램을 이용하여 실온에서 전기천공이 수행되었다.

또한 인간 헤르페스바이러스 게놈과 BAC 서열을 이용하여 인간 헤르페스바이러스 게놈을 포함하는 BAC를 제조하기 위해서는 상동 재조합을 이용할 것 없이 핵산의 제어효소단편을 이용하는 등 다양한 공지의 방법을 사용하는 것도 가능하다.

HHV-7게놈 내에서 BAC 벡터 서열을 도입하기 위한 비필수 영역은 하기의 영으로 구성된 군으로부터 선택된다: 유전자 H1의 ORF 내 영역, 유전자 DR1의 ORF 내 영역, 유전자 DR2의 ORF 내 영역, 유전자 H2의 ORF 내 영역, 유전자 DR6의 ORF 내 영역, 유전자 DR7의 ORF 내 영역, 유전자 H3의 ORF 내 영역, 유전자 H4의 ORF 내 영역, 유전자 U2의 ORF 내 영역,유전자 U3의 ORF 내 영역, 유전자 U4의 ORF 내 영역, 유전자 U5/7의 ORF 내 영역, 유전자 U8의 ORF 내 영역, 유전자 U10의 ORF 내 영역, 유전자 U12의 ORF 내 영역, 유전자 U13의 ORF 내 영역, 유전자 U15의 ORF 내 영역, 유전자 U16의 ORF 내 영역, 유전자 U17Ex의 ORF 내 영역, 유전자 U17의 ORF 내 영역, 유전자 U17a의 ORF 내 영역, 유전자 U18의 ORF 내 영역, 유전자 U19의 ORF 내 영역, 유전자 U20의 ORF 내 영역, 유전자 U21의 ORF 내 영역, 유전자 U23의 ORF 내 영역, 유전자 U24의 ORF 내 영역, 유전자 U24a의 ORF 내 영역, 유전자 U25의 ORF 내 영역, 유전자 U26의 ORF 내 영역, 유전자 U28의 ORF 내 영역, 유전자 U32의 ORF 내 영역, 유전자 U33의 ORF 내 영역, 유전자 U34의 ORF 내 영역, 유전자 U35의 ORF 내 영역, 유전자 U36의 ORF 내 영역, 유전자 U37의 ORF 내 영역, 유전자 U40의 ORF 내 영역, 유전자 U42의 ORF 내 영역, 유전자 U44의 ORF 내 영역, 유전자 U45의 ORF 내 영역, 유전자 U46의 ORF 내 영역, 유전자 U47의 ORF 내 영역, 유전자 U49의 ORF 내 영역, 유전자 U50의 ORF 내 영역, 유전자 U51의 ORF 내 영역, 유전자 U52의 ORF 내 영역, 유전자 U55A의 ORF 내 영역, 유전자 U55B의 ORF 내 영역,유전자 U58의 ORF 내 영역,유전자 U59의 ORF 내 영역, 유전자 U62의 ORF 내 영역, 유전자 U63의 ORF 내 영역, 유전자 U64의 ORF 내 영역, 유전자 U65의 ORF 내 영역, 유전자 U67의 ORF 내 영역, 유전자 U68의 ORF 내 영역, 유전자 U69의 ORF 내 영역, 유전자 U70의 ORF 내 영역, 유전자 U71의 ORF 내 영역, 유전자 U75의 ORF 내 영역, 유전자 U76의 ORF 내 영역, 유전자 H5의 ORF 내 영역, 유전자 U79의 ORF 내 영역, 유전자 H6의 ORF 내 영역, 유전자 U80의 ORF 내 영역, 유전자 U81의 ORF 내 영역, 유전자 U84의 ORF 내 영역, 유전자 U85의 ORF 내 영역, 유전자 U91의 ORF 내 영역, 유전자 H7의 ORF 내 영역, 유전자 U95의 ORF 내 영역, 유전자 H8의 ORF 내 영역, 유전자 H1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR2의 ORF 인접 영역, 유전자 H2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR6의 ORF 인접 영역, 유전자 DR7의 ORF 인접 영역, 유전자 H3의 ORF 인접 영역, 유전자 H4의 ORF 인접 영역, 유전자 U2의 ORF 인접 영역, 유전자 U3의 ORF 인접 영역, 유전자 U4의 ORF 인접 영역, 유전자 U5/7의 ORF 인접 영역, 유전자 U8의 ORF 인접 영역, 유전자 U10의 ORF 인접 영역, 유전자 U12의 ORF 인접 영역, 유전자 U13의 ORF 인접 영역, 유전자 U15의 ORF 인접 영역, 유전자 U16의 ORF 인접 영역, 유전자 U17Ex의 ORF 인접 영역, 유전자 U17의 ORF 인접 영역, 유전자 U17a의 ORF 인접 영역, 유전자 U18의 ORF 인접 영역, 유전자 U19의 ORF 인접 영역, 유전자 U20의 ORF 인접 영역, 유전자 U21의 ORF 인접 영역, 유전자 U23의 ORF 인접 영역, 유전자 U24의 ORF 인접 영역, 유전자 U24a의 ORF 인접 영역, 유전자 U25의 ORF 인접 영역, 유전자 U26의 ORF 인접 영역, 유전자 U28의 ORF 인접 영역, 유전자 U32의 ORF 인접 영역, 유전자 U33의 ORF 인접 영역, 유전자 U34의 ORF 인접 영역, 유전자 U35의 ORF 인접 영역, 유전자 U36의 ORF 인접 영역, 유전자 U37의 ORF 인접 영역, 유전자 U40의 ORF 인접 영역, 유전자 U42의 ORF 인접 영역, 유전자 U44의 ORF 인접 영역, 유전자 U45의 ORF 인접 영역, 유전자 U46의 ORF 인접 영역, 유전자 U47의 ORF 인접 영역, 유전자 U49의 ORF 인접 영역, 유전자 U50의 ORF 인접 영역, 유전자 U51의 ORF 인접 영역, 유전자 U52의 ORF 인접 영역, 유전자 U55A의 ORF 인접 영역, 유전자 U55B의 ORF 인접 영역, 유전자 U58의 ORF 인접 영역, 유전자 U59의 ORF 인접 영역, 유전자 U62의 ORF 인접 영역, 유전자 U63의 ORF 인접 영역, 유전자 U64의 ORF 인접 영역, 유전자 U65의 ORF 인접 영역, 유전자 U67의 ORF 인접 영역, 유전자 U68의 ORF 인접 영역, 유전자 U69의 ORF 인접 영역, 유전자 U70의 ORF 인접 영역, 유전자 U71의 ORF 인접 영역, 유전자 U75의 ORF 인접 영역, 유전자 U76의 ORF 인접 영역, 유전자 H5의 ORF 인접 영역, 유전자 U79의 ORF 인접 영역, 유전자 H6의 ORF 인접 영역, 유전자 U80의 ORF 인접 영역, 유전자 U81의 ORF 인접 영역, 유전자 U84의 ORF 인접 영역, 유전자 U85의 ORF 인접 영역, 유전자 U91의 ORF 인접 영역, 유전자 H7의 ORF 인접 영역, 유전자 U95의 ORF 인접 영역, 유전자 H8의 ORF 인접 영역.

바람직하게는 HHV-7에서 이 비필수 영역은 유전자 U24, 유전자 U24a, 유전자 25 및 유전자 26의 ORF 영역 또는 이들의 ORF 인접영역이다. 그 이유는 유전자 U24, 유전자 24a, 유전자 25 및 유전자 26은 HHV-7게놈 위에서 연속하는 비필수 유전자이기 때문에 상동 재조합을 위한 핵산을 설계하기가 용이하기 때문이다.

본 발명에서 사용된 BAC 벡터 서열은 바람직하게는 재조합 단백질-의존성 재조헙 서열 및/또는 선별마커를 포함한다. 바람직하게는 선별마커 서열은 약제 선별마커 및/또는 녹색 형광 단백질을 코딩하는 유전자이다. 그 이유는 간편하게 원하는 유전자의 존재를 확인할 수 있기 때문이다.

본 발명의 또 다른 측면에 있어서, 상기 바이러스를 제조하기 위해 사용되는 벡터 및 상기 바이러스의 제조 방법을 제공한다. 본 발명의 또 다른 측면에 있어서, 상기 바이러스를 포함하는 약학적 조성물 및 바이러스 형태인 약학적 조성물을 제공한다.

본 명세서의 재조합 인간 헤르페스바이러스는 원하는 항원 단백질을 도입하는 것이 가능하다. 따라서 예를 들면 백신과 같은 기능을 하는 것으로 알려진 항원이 도입될 때 본 발명의 백신 벡터로써 사용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면에 있어서, 본 발명의 백신을 생산하기 위해 벡터에 변이를 도입하는 방법이 제공된다. 이 방법은 하기의 공정: 벡터를 세균숙주세포에 도입하는 공정; 인간 헤르페스바이러스 게놈의 일부로 구성된 프래그먼트를 포함하는 플라스미드벡터를 세균숙주세포에 도입하는 공정, 여기에서 프래그먼트는 적어도 한 개의 변이를 갖는다; 세균숙주세포를 배양하는 공정; 배양된 세균숙주세포로부터 BAC 백터 서열을 갖는 벡터를 분리하는 공정을 포함한다. 상기 방법에서는 세균숙주세포에서 본 발명의 백신을 생산하기 위한 벡터와 인간 포상바이러스 게놈의 일부로 구성된 프래그먼트를 포함하는 플라스미드 벡터 사이에서 상동 재조합이 일어나, 그 결과 본 발명의 백신을 생산하기 위한 벡터가 인간 헤르페스바이러스 게놈의 일부로 구성된 프래그먼트 위에 변이를 갖는다.

상기 방법에서 벡터를 세균숙주세포에 도입하는 공정으로써 전기천공법 등 다양한 공지의 방법을 사용할 수 있다. 같은 방법으로 인간 헤르페스바이러스 게놈의 일부로 구성된 프래그먼트를 포함하는 플라스미드 벡터를 세균숙주세포에 도입할 수 있다. 또한 이 프래그먼트에 변이를 도입하는 방법으로써 PCR을 이용하는 변이도입방법이 공지되어 있고 예를 들면 교정기능을 갖지 않는 내열성 폴리머라제를 4개의 뉴클레오타이드의 1개가 적은 것을 이용하는 것으로 임의로 변이를 도입할 수 있다. 또한 변이염기서열을 갖는 프라이머를 이용하여 PCR을 행하는 것으로 원하는 위치에 원하는 변이를 도입하는 것도 가능하다. 이 세균세포를 배양하는 것에 의해 본 발명의 백신을 생산하기 위한 벡터와 인간 헤르페스바이러스 게놈의 일부로 구성된 프래그먼트를 포함하는 플라스미드 벡터 사이에서 상동 재조합이 일어나, 그 결과 본 발명의 벡터를 생산하기 위한 벡터가 인간 헤르페스바이러스 게놈의 일부로 구성된 프래그먼트 위에 변이를 갖는다. 세균숙주세포로부터 BAC 벡터 서열을 제조하기 위해서는 알칼리법과 같은 다양한 공지의 방법 및 시판되는 키트를 사용하는 것도 가능하다.

본 발명의 다른 측면에서 본 발명의 백신을 생산하기 위해 벡터에 변이를 도입하는 방법이 제공된다. 이 방법은 하기의 공정: 벡터를 세균숙주세포에 도입하는 공정; 인간 헤르페스바이러스 게놈의 일부로 구성된 첫 번째 프래그먼트를 포함하는 첫 번째 플라스미드 벡터를 세균숙주세포에 도입하는 공정, 여기에서 첫 번째 프래그먼트는 적어도 한 개의 변이를 갖는다; 인간 헤르페스바이러스 게놈의 일부로 구성된 두 번째 프래그먼트를 포함하는 두 번째 플라스미드 벡터를 세균숙주세포에 도입하는 공정, 여기에서 두 번째 프래그먼트는 적어도 한 개의 변이를 지니며 따라서 두 번째 프래그먼트는 첫 번째 프래그먼트와는 상이하다; 세균숙주세포를 배양하는 공정; 배양한 세균숙주소포로부터 BAC 벡터 서열을 갖는 벡터를 분리하는 공정을 포함한다.

본 발명의 하나의 측면에 있어서, 본 발명의 백신을 제조하기 위해 사용될 수 있는 핵산 카세트가 제공된다. 이 핵산 카세트는 바람직하게는 숙주세포 내에서 인간 헤르페스바이러스 게놈과 상동 재조합할 수 있는 첫 번째 프래그먼트, BAC 벡터 서열 및 숙추세포 내에서 인간 헤르페스바이러스 게놈과 상동 재조합할 수 있는 두 번째 프래그먼트를 포함하는 핵산 카세트이고 여기에서 BAC 서열의 양끝은 각각 첫 번째 프래그먼트 및 두 번째 프래그먼트와 연결되어 있다. 여기에서 첫 번째 프래그먼트 및 두 번째 프래그먼트는 바람직하게는 적어도 1 kb, 적어도 1.5 kb, 적어도 2kb이다. 이 첫 번째 프래그먼트 및 두 번째 프래그먼트는 인간 헤르페스바이러스 게놈의 서열에 대해 바람직하게는 적어도 80% 동일, 적어도 85% 동일, 적어도 90& 동일, 적어도 95% 동일하다.

바람직하게는 이 첫 번째 및 두 번째 프래그먼트는 인간 헤르페스바이러스 게놈의 상이한 영역에 유래한다. 첫 번째 및 두 번째 프래그먼트는 각각 독립하고 유전자 U24의 ORF 인접 영역 또는 유전자 U24a의 ORF 인접 영역 유래이어도 좋다. 바람직하게는 상동 재조합을 제어하고 따라서 원하는 유전자를 간편하게 검출하기 위해 BAC 벡터 서열은 재조합 단백질-의존성 재조합 서열 및/또는 선별마커를 포함한다. 이 선별마커는 약제 선별마커이어도 좋고 녹색 형광 단백질과 같은 형광 단백질을 코딩하는 유전자이어도 좋다. 대표적으로는 이 BAC 벡터 서열은 서열번호 401에 기재된 핵산서열을 갖는다.

HHV-7의 경우 바람직하게는 첫 번째 및 두 번째의 프래그먼트가 각각 독립적으로 HHV-7 게놈 하기의 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 영역 유래이거나 또는 하기의 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 영역과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 동일하다: 유전자 H1의 ORF 내 영역, 유전자 DR1의 ORF 내 영역, 유전자 DR2의 ORF 내 영역, 유전자 H2의 ORF 내 영역, 유전자 DR6의 ORF 내 영역, 유전자 DR7의 ORF 내 영역, 유전자 H3의 ORF 내 영역, 유전자 H4의 ORF 내 영역, 유전자 U2의 ORF 내 영역,유전자 U3의 ORF 내 영역, 유전자 U4의 ORF 내 영역, 유전자 U5/7의 ORF 내 영역, 유전자 U8의 ORF 내 영역, 유전자 U10의 ORF 내 영역, 유전자 U12의 ORF 내 영역, 유전자 U13의 ORF 내 영역, 유전자 U15의 ORF 내 영역, 유전자 U16의 ORF 내 영역, 유전자 U17Ex의 ORF 내 영역, 유전자 U17의 ORF 내 영역, 유전자 U17a의 ORF 내 영역, 유전자 U18의 ORF 내 영역, 유전자 U19의 ORF 내 영역, 유전자 U20의 ORF 내 영역, 유전자 U21의 ORF 내 영역, 유전자 U23의 ORF 내 영역, 유전자 U24의 ORF 내 영역, 유전자 U24a의 ORF 내 영역, 유전자 U25의 ORF 내 영역, 유전자 U26의 ORF 내 영역, 유전자 U28의 ORF 내 영역, 유전자 U32의 ORF 내 영역, 유전자 U33의 ORF 내 영역, 유전자 U34의 ORF 내 영역, 유전자 U35의 ORF 내 영역, 유전자 U36의 ORF 내 영역, 유전자 U37의 ORF 내 영역, 유전자 U40의 ORF 내 영역, 유전자 U42의 ORF 내 영역, 유전자 U44의 ORF 내 영역, 유전자 U45의 ORF 내 영역, 유전자 U46의 ORF 내 영역, 유전자 U47의 ORF 내 영역, 유전자 U49의 ORF 내 영역, 유전자 U50의 ORF 내 영역, 유전자 U51의 ORF 내 영역, 유전자 U52의 ORF 내 영역, 유전자 U55A의 ORF 내 영역, 유전자 U55B의 ORF 내 영역,유전자 U58의 ORF 내 영역,유전자 U59의 ORF 내 영역, 유전자 U62의 ORF 내 영역, 유전자 U63의 ORF 내 영역, 유전자 U64의 ORF 내 영역, 유전자 U65의 ORF 내 영역, 유전자 U67의 ORF 내 영역, 유전자 U68의 ORF 내 영역, 유전자 U69의 ORF 내 영역, 유전자 U70의 ORF 내 영역, 유전자 U71의 ORF 내 영역, 유전자 U75의 ORF 내 영역, 유전자 U76의 ORF 내 영역, 유전자 H5의 ORF 내 영역, 유전자 U79의 ORF 내 영역, 유전자 H6의 ORF 내 영역, 유전자 U80의 ORF 내 영역, 유전자 U81의 ORF 내 영역, 유전자 U84의 ORF 내 영역, 유전자 U85의 ORF 내 영역, 유전자 U91의 ORF 내 영역, 유전자 H7의 ORF 내 영역, 유전자 U95의 ORF 내 영역, 유전자 H8의 ORF 내 영역, 유전자 H1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR2의 ORF 인접 영역, 유전자 H2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR6의 ORF 인접 영역, 유전자 DR7의 ORF 인접 영역, 유전자 H3의 ORF 인접 영역, 유전자 H4의 ORF 인접 영역, 유전자 U2의 ORF 인접 영역, 유전자 U3의 ORF 인접 영역, 유전자 U4의 ORF 인접 영역, 유전자 U5/7의 ORF 인접 영역, 유전자 U8의 ORF 인접 영역, 유전자 U10의 ORF 인접 영역, 유전자 U12의 ORF 인접 영역, 유전자 U13의 ORF 인접 영역, 유전자 U15의 ORF 인접 영역, 유전자 U16의 ORF 인접 영역, 유전자 U17Ex의 ORF 인접 영역, 유전자 U17의 ORF 인접 영역, 유전자 U17a의 ORF 인접 영역, 유전자 U18의 ORF 인접 영역, 유전자 U19의 ORF 인접 영역, 유전자 U20의 ORF 인접 영역, 유전자 U21의 ORF 인접 영역, 유전자 U23의 ORF 인접 영역, 유전자 U24의 ORF 인접 영역, 유전자 U24a의 ORF 인접 영역, 유전자 U25의 ORF 인접 영역, 유전자 U26의 ORF 인접 영역, 유전자 U28의 ORF 인접 영역, 유전자 U32의 ORF 인접 영역, 유전자 U33의 ORF 인접 영역, 유전자 U34의 ORF 인접 영역, 유전자 U35의 ORF 인접 영역, 유전자 U36의 ORF 인접 영역, 유전자 U37의 ORF 인접 영역, 유전자 U40의 ORF 인접 영역, 유전자 U42의 ORF 인접 영역, 유전자 U44의 ORF 인접 영역, 유전자 U45의 ORF 인접 영역, 유전자 U46의 ORF 인접 영역, 유전자 U47의 ORF 인접 영역, 유전자 U49의 ORF 인접 영역, 유전자 U50의 ORF 인접 영역, 유전자 U51의 ORF 인접 영역, 유전자 U52의 ORF 인접 영역, 유전자 U55A의 ORF 인접 영역, 유전자 U55B의 ORF 인접 영역, 유전자 U58의 ORF 인접 영역, 유전자 U59의 ORF 인접 영역, 유전자 U62의 ORF 인접 영역, 유전자 U63의 ORF 인접 영역, 유전자 U64의 ORF 인접 영역, 유전자 U65의 ORF 인접 영역, 유전자 U67의 ORF 인접 영역, 유전자 U68의 ORF 인접 영역, 유전자 U69의 ORF 인접 영역, 유전자 U70의 ORF 인접 영역, 유전자 U71의 ORF 인접 영역, 유전자 U75의 ORF 인접 영역, 유전자 U76의 ORF 인접 영역, 유전자 H5의 ORF 인접 영역, 유전자 U79의 ORF 인접 영역, 유전자 H6의 ORF 인접 영역, 유전자 U80의 ORF 인접 영역, 유전자 U81의 ORF 인접 영역, 유전자 U84의 ORF 인접 영역, 유전자 U85의 ORF 인접 영역, 유전자 U91의 ORF 인접 영역, 유전자 H7의 ORF 인접 영역, 유전자 U95의 ORF 인접 영역, 유전자 H8의 ORF 인접 영역.

바람직하게는 첫 번째 및 두 번째 프래그먼트는 인간 헤르페스바이러스 게놈의 상이한 영역에 유래한다. 첫 번째 및 두 번째 프래그먼트는 각각 독립적으로 유전자 U24의 ORF 인접 영역 또는 유전자 U24a의 ORF 인접 영역 유래이어도 좋다. 바람직하게는 상동 재조합을 억제하여 원하는 유전자를 간편하게 검출하기 위해 BAC 백터 서열은 재조합 단백질-의존성 재조합 서열 및/또는 선별마커를 포함한다. 이 선별마커는 약제 선별마커이어도 좋고 녹색 형광 단백질과 같은 형광 단백질을 코딩하는 유전자이어도 좋다. 대표적으로 이 BAC 벡터 서열은 서열번호 104에 기재된 핵산 서열을 갖는다.

(외래 유전자를 포함하는 재조합 헤르페스바이러스의 제조)

본 발명의 방법을 이용하여 외래 유전자를 도입한 헤르페스바이러스 게놈을 갖는 헤르페스바이러스를 간편하게 제조할 수 있다.

이와 같은 변이 도입은 예를 들면 HHV-7에 대해서 하기의 방법을 이용하여 수행할 수 있다:

대장균 내에 (a) HHV-7-U21-27-BAC 플라스미드(HHV-7 게놈 및 BAC 벡터 서열을 포함하는 플라스미드) 및 (b) 변이 외래 유전자를 코딩하는 핵산으로써 원하는 외래 유전자에 그 외래 유전자의 양끝에 연결한 헤르페스바이러스 게놈의 부분서열을 갖는 셔틀 벡터 또는 PCR 산물과 같은 핵산을 도입한다. HHV-7-U21-27-BAC 플라스미드와 그 셔틀 벡터 또는 PCR 산물 사이에서 상동 재조합을 일으키는 것에 의해 HHV-7-U21-27-BAC 플라스미드에 외래 유전자 변이를 도입할 수 있다. 또한 트랜스포좀을 이용하는 것에 의해서도 원하는 핵산서열에 임의로 변이를 도입할 수 있다. 그리고 외래 유전자가 도입된 HHV-7-U21-27-BAC 플라스미드는 대장균 내에 용이하게 선택 및 증폭시킬 수 있다. 그리고 나서 외래 유전자를 갖는 HHV-7-U21-27-BAC로부터 바이러스를 산출시키는 것에 의해 재조합 헤르페스바이러스를 얻을 수 있다(Markus Wagner, TRENDS in Microbilogy, Vol. 10, No. 7, July 2002). 그 구체적 설명은 하기와 같다.

(1) 외래 유전자 핵산을 포함하는 온도 민감성 셔틀 벡터를 이용하는 방법:

첫 번째로 셔틀벡터가 HHV-7-U21-27-BAC 플라스미드와 연결되어 있는 공동삽입체를 생성하기 위해 셔틀 벡터와 HHV-7-U21-27-BAC 플라스미드를 첫 번째 상동적 영역을 통해 재조합시킨다. 다음으로 셔틀 벡터의 복제 기원이 온도 민감성이므로 셔틀 플라스미드가 제거된다. 두 번째 재조합 사건에서 공동삽입체 부분이 제거된다. 두 번째 재조합 사건이 첫 번째 상동적 영역을 통해 발생하는 경우 재조합에 사용한 HHV-7-U21-27-BAC와 동일한 서열을 갖는 플라스미드가 생성된다. 이에 반해 두 번째 재조합 사건이 첫 번째 상동 영역과는 상이한 두 번째 상동 영역을 통해 발생하는 경우 셔틀 벡터 위에 포함된 외래 유전자를 갖는 변형된 HHV-7-U21-27-BAC 플라스미드를 얻을 수 있다. 첫 번째 상동 영역과 두 번째 상동 영역이 거의 같은 길이인 경우 두 번째 재조합 사건이 두 번째 상동 영역에서 일어날 확률은 두 번째 재조합 사건이 첫 번째 상동 영역에서 일어날 확률과 거의 같다. 따라서 얻어진 HHV-7-U21-27-BAC 플라스미드의 약 1/2이 재조합에 이용된 서열과 동일한 서열을 갖는 플라스미드이고 약 1/2이 셔틀 벡터에 도입한 외래 유전자를 갖는 플라스미드이다.

(2) 선형 DNA 프래그먼트를 이용하는 경우:

이 방법에서는 예를 들면 프로파지 Rac 유래의 recET의 재조합 기능을 이용하거나 또는 박테리아파지λ 유래의 redαβ의 재조합 기능을 이용하여 선형 DNA 프래그먼트를 이용해 환형 HHV-7-U21-27-BAC 분자에 변이를 도입한다. 구체적으로는 표적서열에 인접하는 선별마커 및 상동서열을 포함하는 선형 DNA 프래그먼트를 HHV-7-U21-27-BAC와 함께 상동 재조합을 발생시킬 수 있는 대장균에 도입한다. 대장균 내에서의 선형 DNADML 분해를 피하기 위해서 엑소뉴클레아제가 없는 대장균을 사용하거나 또는 박테리아파지 유래의 엑소뉴클레아제 억제제인 redγ(gam)을 발현시키는 것이 바람직하다. 선형 DNA는 그 양 끝에 HHV-7-U21-27-BAC 내에 도입하는 것이 가능하다. 그 상동 영역을 통해서 상동 재조합을 발생시키는 것에 의해 선형 DNA 프래그머트 내 원하는 서열을 HHV-7-U21-27-BAC 내에 도입할 수 있다. recET 또는 redαβ 재조합 기능을 사용하는 경우 이들의 재조합 기능은 25∼25 뉴클레오타이드 길이 정도의 상동 서열에 의해 상동 재조합을 발생시키는 것이므로 recA 매개성 상동 재조합보다도 간편하게 사용할 수 있다.

(3) 트랜스포좀을 이용하는 경우:

트랜스포좀 엘리먼트(elecment)가 대장균 내 핵산에 임의로 삽입되는 기능을 이용한다. 예를 들면 원하는 외래 유전자를 포함하는 트랜스포좀 엘리먼트와 HHV-7-U21-27-BAC를 대장균에 도입하고 HHV-7-U21-27-BAC 내에 임의로 트랜스포좀 엘리먼트를 삽입하는 것에 의해 외래 유전자를 삽입한 HHV-7-U21-27-BAC를 발생시킨다.

상기 외래 유전자를 포함하는 재조합 HHV-7의 제조방법은 HHV-6에도 적용할 수 있다.

(본 발명의 재조합 HHV-7에 의한 HIV 치료의 효과(감염예방효과))

HIV는 CD4⁺T세포에 감염된다. CD4⁺T세포를 HHV-7에서 처리한 경우에 HIV 감겸을 예방, 치료하는 것은 공지되어 있다(Lusso et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 91, 3872-3876, April 1994). 이 치료효과는 T세포상의 CD4를 수용체로써 HHV-7이 CD4⁺T세포에 감염되는 것에 의해서도 얻을 수 있다. 따라서 본 발명의 방법에 의해 CD4⁺T세포에 대한 감염능을 갖는 재조합 HHV-7를 제조하여 그 HHV-7을 HIV의 예방 및/또는 치료에 사용할 수 있다.

본 발명의 HHV-7의 HIV 감염예방효과는 목적 세포에 있어서 HIV 증식능을 HHV-7이 예방하는지 아는지를 예측하는 것에 의해 측정할 수 있다. 이 측정에서 사용된 목적 세포로써는 예를 들면 말초혈단핵구 CD4⁺T세포, Sup-T1세포와 같은 세포를 들 수 있지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 보다 상세하게는 예를 들면 다음과 같은 순서로 측정할 수 있다.

미리 목적세포에 0.1의 MOI(감염다중도)로 HHV-7을 감염시키고 37℃에서 24∼72시간 배양한 후에 HIV를 첨가하여 30분∼2시간 정도 인큐베이션시킨다. 그 후 충분히 세포를 세정하고 다시 인큐베이트시킨다. 4일간 배양한 후 배양배지 내에 방출된 HIV 유래 항원을 정량한다. 대조군으로써는 HHV-7에 의해 감염을 받지 않는 세포에 대해서 동일한 조건에서 HIV을 감염시키고 배양배지 내에 방출된 항원을 측정한다. HIV 유래 항원으로써는 P24를 들 수 있지만 이들로 제한하는 것은 아니다. 이 항원의 양이 HIV 증식의 지표가 되므로 이 항원의 양이 대조군과 비교하여 적은 경우에는 HHV-7에 의한 HIV 감염예방효과가 설명된다.

본 발명의 HHV-7의 HIV 감염치료효과는 목적세포에서 HIVDML 증식능을 HHV-7이 제어하는지 아닌지를 측정하는 것에 의해 결정할 수 있다. 이 측정에서 사용되는 목적세포로써는 예를 들면 말초혈단핵구, CD4⁺T세포, Sup-T1세포와 같은 세포를 들 수 있으나 이들로 제한하는 것은 아니다. 보다 상세하게는 예를 들면 하기와 같은 순서에 의해 측정할 수 있다.

목적세포에 HIV 및 HHV-7(0.1∼0.01의 MOI)을 동시에 감염시킨다. 그 후 30분∼2시간 정도 감염세포를 인큐베이션시키고 그 후 세포를 충분히 세정하여 다시 세포를 인큐베이션시킨다. 대조군으로써는 HHV-7을 이용하지 않고 HIV 만에 의해 감염을 실행한 세포를 이용한다. 4일간 배양한 후 배양배지 내의 HIV 유래 항원을 측정한다. HIV 유래의 항원으로써는 P24를 들 수 있지만 이들로 제한하는 것은 아니다. 이 항원이 양이 HIV 증식의 지표가 되므로 이 항원의 양이 대조군과 비교하여 적은 경우에는 HIV 증식의 제어효과, 즉 HHV-7에 의한 HIV 감염치료효과가 설명된다.

(본 발명의 재조합 HHV-7, HHV-6에 의한 HIV 치료)

본 발명의 재조합 HHV-7 또는 HHV-6을 이용하여 HIV를 치료할 수 있다. 예를 들면 재조합 HHV-7에 HIV 유전자의 사일랜서 유전자(silencer gene)를 도입하고 그 재조합 HHV-7을 HIV 환자에게 투여한다. HIV 감염된 CD4⁺T세포가 재조합 HHV-7로 감염될 때 HIV 생산을 억제시키고 그 결과 HIV 감염의 치료효과가 나타난다.

선택적으로 기회간염이 CMV(사이토메갈로 바이러스)에 의해 발생하는 것으로부터 CMV 항원을 결합한 재조합 HHV-7을 이용하여 CMV에 대한 방어기능을 강화할 수도 있다.

(처방)

본 발명은 또한 유효량의 치료제/예방체의 피험체로의 투여/접종에 의해 환자 또는 병자(예를 들면 감염증)의 처치 및/또는 예방의 방법을 제공한다. 치료제/예방제는 약학적으로 수용 가능한 캐리어형(예를 들면 멸균 캐리어)과 조합한 본 발명의 조성물을 의미한다.

치료제/예방제를 각각 환자의 임상상태(특히 치료제/예방제 단독처리의 부작용), 전달부위, 투여방법, 투여계획 및 당업자에 공지의 다른 인자를 고려하여 의료실시기준(good medical practice, GMP)를 준수하는 방식으로 처방 및 투약한다. 따라서 본 명세서에서 목적하는 "유효량"은 이와 같은 고려 후 결정된다.

일반적인 제안으로써 용량당, 비경구적으로 투여된 치료제/예방제의 합계 약학적 유효량은 환자체중의 약 1 ㎍/㎏/일∼10 ㎎/㎏/일의 범위이지만 상기와 같이 이들의 치료적 재량에 위임된다. 더욱 바람직하게는 본 발명의 세포생리활성물질에 대해서 이 용량은 적어도 0.01 ㎎/㎏/일, 더욱 바람직하게는 인체에 대해서 약 0.01 ㎎/㎏/일과 1 ㎎/㎏/일 사이이다. 연속투여하는 경우 대표적으로 치료제/예방제를 약 1 ㎍/㎏/시간∼약 50 ㎍/㎏/시간의 투여속도로 1일에 1∼4회 주사하거나 또는 연속피하주입(예를 들면 미니펌프를 이용)의 어느 것에 의해 투여된다. 정맥내용 백(bag) 용액도 또한 사용할 수 있다. 변화를 관찰하기 위해 필요한 처리기간 및 응답이 발생하는 처리 후의 간격은 원하는 효과에 반응하여 변화하며 나타난다.

치료제/예방제를 경구적, 직장내, 비경구적, 인트라시스테멀리(intracistemally), 질내, 복강내, 국소적(가루, 연고, 겔, 점적제 또는 경피 패치에 의해), 입안 혹은 경구 또는 비강 스프레이로써 투여할 수 있다. "약학적으로 수용 가능한 캐리어"라는 용어는 비독성 고체, 반도체 또는 액체의 충진재, 희석제, 캡슐제 또는 임의의 형태의 처방 보조제를 말한다. 본 명세서에서 사용하는 용어 "비경구적"은 정맥내, 근육내, 복강내, 흉골내, 피하 및 관절내의 주사 및 주입을 포함하는 투여 양식을 말한다.

본 발명의 치료제/예방제는 또한 서방형(sustained-release) 시스템에 의해 적절하게 투여된다. 서방형 치료제/예방체의 적당한 예는 경구적, 직장내, 비경구적, 인트라시스테멀리, 질내, 복강내, 국소적(가루, 연고, 겔, 점적제 또는 경피 패치에 의해), 입안 혹은 경구 또는 비강 스프레이로써 투여할 수 있다. "약학적으로 수용 가능한 캐리어"라는 용어는 비독성 고체, 반도체 또는 액체의 충진재, 희석제, 캡슐제 또는 임의의 형태의 처방 보조제를 말한다. 본 명세서에서 사용하는 용어 "비경구적"은 정맥내, 근육내, 복강내, 흉골내, 피하 및 관절내의 주사 및 주입을 포함하는 투여 양식을 말한다.

비경구투여를 위한 하나의 실시태양에 있어서 일반적으로 치료제/예방제는 그 원하는 정도의 순도로 약학적으로 수용 가능한 캐리어, 즉 사용할 투약량 및 농도에서 투여 받는 자에 대해 독성이 없고 제형의 다른 성분과 적합한 것과 단위 투여량의 주사 가능한 형태(용액, 현탁액 또는 에멀젼)로 혼합하는 것에 의해 처방된다. 예를 들면 이 제형은 바람직하게는 산화제 및 치료제/예방제에 대해 유해한 것이 알려져 있는 다른 화합물을 포함하지 않는다.

일반적으로 치료제/예방제를 액체 캐리어 또는 미세분해고체 캐리어 혹은 이 모두를 균일하고 조밀하게 접촉시켜 제형을 제조한다. 다음으로 필요하다면 생성물을 원하는 제형의 형태로 만든다. 바람직하게는 캐리어는 비경구적 캐리어이고, 보다 바람직하게는 투여 받는 자의 혈액과 등장인 용액이다. 이와 같은 캐리어 용액의 예로는 물, 생리식염수, 링겔 용액 및 덱스트로즈 수용액을 들 수 있다. 비휘발성유 및 올레인산에틸과 같은 비수성 용액 또한 리포솜과 마찬가지로 본 명세에서 유용하다.

캐리어는 등장성 및 화학 안정성을 높이는 물질과 같은 미량의 첨가제를 적절하게 함유한다. 이와 같은 물질은 사용할 투약량 및 농도에서 투여 받는 자에 대해 독성이 없으며 이와 같은 물질로는 인산염, 시트르산염, 숙신산염, 아세트산 및 그 외 유기산 또는 그의 염과 같은 완충제; 아스코르빈산과 같은 항산화제; 저분자량(약 10잔기 보다 적은) 폴리펩티드(예를 들면 폴리아르기닌 또는 트리펩티드); 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역 글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 고분자; 글리신, 글루타민산, 아스파라긴산 또는 아르기닌과 같은 아미노산; 셀룰로스 또는 그 유도체, 포도당, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 2당류 및 그 외 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 만니톨 또는 솔비톨과 같은 당알코올; 나트륨과 같은 반대이온; 및/또는 폴리솔베이트, 폴록사머(poloxamer) 또는 PEG와 같은 비이온성 계면활성제를 들 수 있다.

치료적 투여에 이용되어야만 하는 임의의 약제는 유효성분으로 바이러스 이외의 생물·바이러스를 포함하지 않은 상태, 즉 무균상태일 수 있다. 멸균 여과막(예를 들면 0.2 마이크론 멤브레인)에서 여과하는 것에 의해 무균상태는 용이하게 달성된다. 일반적으로 치료제/예방제는 멸균 접근 포트(access port)를 갖는 용기, 예를 들면 피하용 주사침으로 뚫을 수 있는 스톱퍼(stopeer)가 부착된 정맥내용 용액백 또는 바이알(vial)에 넣어진다.

치료제/예방제는 통상 단독용량 또는 복수용량용기 예를 들면 밀봉 앰플 또는 바이알에 수용액 또는 재구성하기 위해 동결건조제형으로 저장된다. 동결건조제형의 예로는 10 ㎖의 바이알에 멸균여과한 1%(w/v) 치료제/예방제 수용액 5 ㎖를 충진하고 그 후 얻어진 혼합물을 동결건조한다. 동결건조한 치료제/예방제를 주사용 정균수를 이용하여 재구성하여 주입용액을 제조한다.

본 발명은 또한 본 발명의 치료제/예방제의 하나 이상의 성분을 만족하는 하나 이상의 용기를 구비하는 약학적 팩(pack) 또는 키트를 제공한다. 의약품 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부기관이 인정한 형식의 통지가 이와 같은 용기에 부착될 수 있고 이 통지는 사람에게의 투여에 대한 제조, 사용 또는 판매에 관한 정부기관에 의한 승인을 나타낸다. 또한 치료제/예방제를 다른 치료용 화합물과 조합하여 사용할 수 있다.

본 발명의 치료제/예방제는 단독 또는 다른 치료제/예방제와 조합하여 투여될 수 있다. 본 발명의 치료제/예방제와 조합하여 투여될 수 있는 치료제/예방제로는 화학요법제, 항생물질, 스테로이드 및 비스테로이드 항염증제, 종래의 면역 치료제/예방법, 그 외 사이토카인 및/또는 증식인자를 들 수 있지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 조합은 예를 들면 혼합물로써 동시에; 동시에 또는 병행이 아닌 따로 따로; 또는 연속적으로 투여될 수 있다. 이는 조합된 약제가 치료용 혼합물로써 동시에 투여된다는 것을 제시 및/또는 조합된 약제가 따로따로 그러나 동시에 예를 들면 동일한 개체에 따로 따로 정맥라인을 통해 투여되는 순서를 포함한다. "조합"의 투여는 첫 번째, 연속하여 두 번째로 투여되는 화합물 또는 약제의 하나의 각각의 투여를 더욱 포함한다.

특정 실시태양에 있어서 본 발명의 치료제/예방제는 항레트로바이러스약제, 뉴클레오시드 역전사효소 억제제, 비뉴클레오시드 역전사효소 억제제 및/또는 프로테아제 억제제와의 조합으로 투여된다.

더욱 실시태양에서 있어서 본 발명의 치료제/예방제는 항생물질과 조합하여 투여된다. 사용될 수 있는 항생물질로는 아미노글루코시드계 항생물질, 폴리엔계 항생물질, 페니실린계 항생물질, 세펨(cephem)계 항생물질, 펩타이드계 항생물질, 마이크로라이드(microride)계 항생물질 및 테트라사이클린(tetracycline)계 항생물질을 들 수 있지만 이들로 제한하는 것은 아니다.

더욱 실시태양에서 있어서 본 발명의 치료제/예방제는 단독 또는 함염증제와 조합하여 투여된다. 본 발명의 치료제/예방제와 동시에 투여될 수 있는 항염증제로는 글루코코르티코이드 및 비스테로이드 항염증제, 아미노아릴카본산 유도체, 아릴아세트산 유도체, 아릴부틸산 유도체, 아릴카르복실산, 아릴프로피온산(arylpropionic acid) 유도체, 파이라졸(pyrazole), 파이라졸론(pyrazolone), 살리실산 유도체, 티아진카르복사미드(thiazinecarboxamide), 3-아세트아미도캅프론산(acetamidocaproic acid), S-아데노실메티오닌(adenosylmethionine), 3-아미노-4-하이드록시부틸산(3-amino-4hydroxybutyric acid), 아믹세트린(amixetrine), 벤다작(bendazac), 벤지드아민(benzydamine), 부콜롬(bucolome), 디펜피르아미드(difenpiramide), 디타졸(ditazol), 에모르파존(emorfazone), 구아이아줄렌(guaiazulene), 나부메톤(nabumetone), 니메술라이드(nimesulide), 오르고테인(orgotein), 옥사세프롤(oxaceprol), 파라닐린(paranyline), 퍼이속살(perisoxal), 피폭심(pifoxime), 프로쿠아존(proquazone), 프록사졸(proxazole) 및 테니답(tenidap) 등을 들 수 있지만 이들로 제한하는 것은 아니다.

더욱 실시태양에 있어서 본 발명의 치료제/예방제는 그 외 치료 요법(regimen) 또는 예방 용법(예를 들면 방사선치료)과 조합하여 투여된다.

이하 실시예를 통해 본 발명을 상세히 설명하지만 본 발명은 이들로 한정되는 것은 아니다.

(실시예)

(실시예 1)

(재조합 헤르페스바이러스의 제조)

(1: BAC 플라스미드의 제조)

플라스미드 PHA-2는 Markus Wagner 및 Ulrich H. Koszinowski(Adler et al., (2000), J. Virol. 74: 6964-74)에 의해 제공된 것을 사용하였다. 재조합 바이러스를 제조하기 위해 BAC 벡터의 삽입장소로써 유전자 U21, 유전자 U23, 유전자 U24, 유전자 U24a, 유전자 U25, 유전자 U26에 확장된 약 4000 bp의 영역의 중앙을 선택하였다. 그 이유는 이와 같은 비필수 영역으로의 외래핵산의 삽입은 헤르페스바이러스의 증식에 악영향을 주지 않는다고 예상되기 때문이다. HHV-7 게놈으로의 BAC 벡터의 투입의 스킴을 모식적으로 도 1에 나타낸다.

헤르페스바이러스 KHR주의 게놈 DNA를 주형으로 각각 프라이머 BAC7-E1(ATGCGGCCGCGCGAGTGATAGGTACTTTCT)(서열번호 : 402) and BAC7-E2 (GCTTAATTAATATATAAGTCCTTCAATAGC)(서열번호 : 403), and primers BAC7-E3 (GCTTAATTAACATGCTCTGCAATGCAAGCC)(서열번호 : 404) and BAC7-E4 (ATGCGGCCGCAAATAGCCTTTGCTCATAGC)(서열번호 : 405)를 이용하여 증식된다.

(2: 상동 재조합에 의한 재조합 바이러스의 제조)

제조한 플라스미드 pHA-2/HHV7-U21-27은 선별마커로써 구아민포스폴리보실트랜스퍼라제(guanine phosphoribosyl transferase, gpt) 유전자를 함유하고 있다. 또한 두 개의 loxP 서열의 사이에 있는 BAC 벡터 서열을 함유하고 있기 때문에 Cre 재조합효소를 작용시키는 것에 의해 loxP 서열의 사이에 있는 BAC 벡터 서열을 좋은 효율로 제거할 수 있다. 또한 녹색 형광 단백질(GFP)의 형광에 의해 BAC 벡터 서열을 포함하는 플라스미드가 도입된 세포를 용이하게 확인할 수 있다.

이 플라스미드를 NotI 다이제스트에 의해 선형화한다. 2 ㎍의 선형화된 pHA-2/HHV7-U21-27을 Nucleofection unit(Amaxa)을 이용하여 25 ㎠ 플라스틱 플라스크 내에서 배양된 제대혈단핵구 내에 전기청공법에 의해 트랜스팩션한다. 트랜스팩션 1일 후 트랜스팩션한 세포에 헤르페스바이러스 KHR주를 감염시킨다.

12.5 ㎍/㎖의 마이코페놀산 및 100 ㎍/㎖의 크산틴을 이용하여 gpt 유전자에 의한 유전자 바이러스의 선택을 행하였다. 제대혈단핵구에 헤르페스바이러스에 의한 전형적인 세포변성효과(CPE)가 관찰되었고 이 중 몇 개는 형광현미경으로 GFP 발현을 확인할 수 있었다. 이 결과 pHA-2/HHV7-U21-U27이 도입된 제대혈단핵구에 헤르페스바이러스가 감염됐다는 것을 나타낸다. GFP 양성감염세포를 7일간 배양한 후 새롭게 분리되고 배양된 제대혈단핵구와 공배양하는 것에 의해 감염시킨 결과 마이코페놀산 및 크산틴 존재하에서 GFP 발현세포의 비율이 증가하였다. 이는 헤르페스바이러스게놈에 BAC 벡터가 삽입되어 재조합 바이러스가 생산되어 있다는 것을 나타낸다(도 2).

(3: 재조합 바이러스의 부양화 및 대장균으로의 도입)

재조합 바이러스를 gpt 유전자에 의해 마이코페놀산 및 크산틴에 의한 약제선별을 이용하여 부양화하였다. 이 재조합 바이러스를 SupT1 세포에 감염시키고 6시간 후에 세포를 회수하고 환형 DNA를 추출하였다. SupT1 세포로부터 회수한 환형 DNA를 대장균에 유전자도입하였다. 약제가 들어있는 플레이트에 대장균을 흩뿌리고 플레이트에 발현한 콜로니로부터 DNA를 추출하였다. 감염세포로부터 허트법(Hirt, (1967), J. M. Biol, 26: 365-9)에 의해 환형 바이러스 DNA를 추출하였다. 추출한 DNA를 세포융합장치(gene pulser)(Bio-Rad사)를 이용하여 전기천공법(0.2 ㎝ 큐벳, 2.5 kV)에 의해 대장균 DH10B에 도입하였고 형질전환하였다. 이것을 17 ㎍/㎖의 클로람페니콜(chloramphenicol)을 함유하는 한천 상에서 선별하고 HHV-7U21-27-BAC을 함유하는 대장균을 얻었다.

(4: E. coli 내 HHV-7-U21-27-BAC 플라스미드의 안정성)

키트가 첨부된 프로토콜에 따라 균체로부터 NucleoBond PC 100 kit (Macherey-Nagel)를 이용하여 HHV-7U21-27-BAC를 추출하였다. 얻어진 2개의 클론을 각각 제한효소 EcoRI를 이용하여 다이제스트하였다.

(5: HHV-7-U21-27-BAC로부터 바이러스의 생산)

HHV-7-U21-27-BAC DNA(1 ㎍)을 25 ㎠ 플라스틱 플라스크 내에서 배양된 제대혈단핵구(5×10⁶∼10⁷개)에 대해 전기천공법을 이용하여 유전자도입을 행하였다. 전기천공법은 뉴클레오팩터 키트(Amaxa사)를 이용하여 사용법에 따라 T8의 조건에서 행하였다. 전기천공 후 유전자 도입된 단핵구를 PHA(phytohemagglutinin)가 들어있는 배지에서 3∼7일간 배양하였다.

전기천공 3∼7일 후 제대혈단핵구를 회수하고 새롭게 PHA에서 자극된 제대혈단핵구(5×10⁶∼10⁷개)와 동시에 공생배양되었다. 이 때 PHA를 포함하지 않는 배지에서 배양하고 배지에는 약제(MPA, 크산틴)를 넣었다. 공생배양 후 2∼3일째에 바이러스의 생산이 관찰되었다.

(6: BAC 벡터 서열의 절단)

동경의과치과대학의 야마구치 야스시에 의해 Cre 재조합효소를 발현하는 재조합 아테노바이러스(AxCANCre)가 제공되었다(Tanaka M. et al., J. Virol., 2003 Jan; 77(2): 1382-1391). 재조합 아데노바이러스를 제대혈단핵구에 MOI100에서 감염시켰다. 바이러스를 2시간 흡착시킨 후 PBS(-)에서 세포를 세척하고 5% FCS를 함유하는 RPMI 배지에서 배양하였다. 재조합 인간 헤르페스바이러스를 재조합 아데노바이러스 감염 24시간 후에 제대혈단핵구에 중복감염시켰다. 대조를 이용한 실험으로 재조합 아데노바이러스에 의해 Cre 재조합효소가 발연되었고 HHV-7U21-27-BAC의 게놈 보다 BAC 벡터 서열이 좋은 효율로 절단된 것을 확인하였다. 얻어진 인간 헤르페스바이러스의 DNA 서열의 결과로부터 HHV-7U21-27-BAC로부터 BAC 벡터서열이 절단된 것이라는 것을 확인하였다.

(실시예 2)

(재조합 헤르페스바이러스의 특징부여)

(1: 재조합 바이러스의 증식)

실시예 1에 나타난 방법에 따라 제조한 재조합 헤르페스바이러스의 증식을 확인하였다.

제대혈단백구에 재조합 바이러스를 감염시키고 7일까지 배양하였다. 그 후 바이러스 감염 제대혈단핵구를 SupT1 세포와 혼합 배양하였다(37℃에서 40분 동안, 3000 rpm으로 흔듦) 감염세포를 형광현미경으로 관찰했을 때 GFP 발현과 세포변성효과를 나타내는 세포를 확인할 수 있었다. 이 결과 본 발명의 재조합 헤르페스바이러스가 세포 사이에서 복제하고 있는 것을 나타내고 증식능을 유지한다는 것을 나타낸다.

(2: 재조합 바이러스의 증식성의 비교)

재조합 바이러스의 증식성을 야생형 바이러스와 비교하는 방법으로써는 하기에 설명하는 TCID 50법에 덧붙여:(1) 형광항체법에서 비감염세포 내 바이러스 후기(later) 단백질의 발현을 조사하고 그 발현을 지표로써 비감염세포에 대하여 바이러스 감염을 조사하는 것으로 바이러스 증식을 검출하는 방법; (2) 감염세포와 비감염세포를 혼합하고 비감염세포에서 후기 단백질의 발현을 조사하여 그 발현을 지표로써 비감염세포에 대하여 바이러스의 감염을 조사하는 것으로 바이러스 증식을 검출하는 방법; (3)감염세포와 비감염세포를 혼합하는 것으로 비감염세포에서 GFP의 발현을 조사하여 그 발현을 지표로써 비감염세포에 대하여 바이러스의 감염을 조하나는 것으로 바이러스 증식을 검출하는 방법; 및 (4) 바이러스 감염에 의해 일어나는 세포변성효과를 지표로써 바이러스 증식을 검출하는 방법을 들 수 있지만 이들로 제한하는 것은 아니다. 이하, TCID 50법을 설명하지만 본 발명의 재조합 바이러스에 대한 실험방법은 TCID 50으로 제한하는 것은 아니다.

(2.1: TCID 50법)

HHV-7(KHR주)과 얻어진 재조합 헤르페스바이러스의 재조합단핵구 혹은 SupT1 세포에서의 증식성의 비교를 Median tissue culture infectious dose(TCID50)법을 이용하여 행하였다. 제대혈단핵구에 동일한 역가(titer)의 KHR주 및 재조합 바이러스를 감염 후 0일부터 7일까지 배양한 후 새로운 제대혈단핵구 또는 SupT1 세포에 감염시킨 증식성에 대해서 비교한다. TCID법에서 역가를 측정한다.

(실시예 3)

본 발명의 방법을 이용하여 HIV 사일렌서(silencer) 유전자(예를 들면 HIV의 유전자에 대한 안티센스핵산)을 도입한 헤르페스바이러스게놈을 갖는 헤르페스바이러스를 하기의 공정에 의해 간편하게 제조한다.

HIV 사일런스 유전자의 상류에 HIV의 LTR의 U3 부위의 NFκB/Sp1 부위를 작동 가능하게 연결하고 또한 그 양 끝에 HHV-7의 비필수 유전자에 인접한 영역을 연결한 셔틀 벡터를 제조한다. 대장균에 셔틀벡터 및 HHV-7U21-27-BAC 플라스미드(HHV-7게놈 및 BAC 백터 서열을 포함하는 플라스미드)를 도입한다. 그 결과 대장균 내에 HHV-7-U21-27-BAC 플라스미드와 셔틀벡터의 사이에서 상동 재조합이 일어나 셔틀벡터 내에 포함되어 있는 외래 유전자(HIV 사일런스 유전자)가 HHV-7U21-27-BAC 플라스미드에 도입된 공동 삽입체를 만들어낸다.

다음으로 셔틀벡터의 복제 기원이 온도감응성이기 때문에 셔틀 플라스미드가 제거된다. 두 번째 재조합 사건에서 공동으로 삽입된 부분이 제거된다. 두 번째 재조합 사건이 첫 번째 상동적 영역을 통해 발생하는 경우 재조합에 사용한 HHV-7U21-27-BAC와 동일한 서열을 갖는 플라스미드가 형성된다. 이에 대해 두 번째 재조합 사건이 첫 번째 상동 영역과는 상이한 두 번째 상동 영역을 통해 발생하는 경우 셔틀 벡터 상에 포함된 외래 유전자를 갖는 변형된 HHV-7U21-27-BAC 플라스미드가 얻어진다. 첫 번째 상동 영역과 두 번째 상동 영역이 거의 같은 길이인 경우 두 번째 재조합 사건이 두 번째 상동 영역에서 일어날 확률은 두 번째 재조합 사건이 첫 번째 상동 영역에서 일어날 확률과 거의 갖다. 이 때문에 얻어진 HHV-7U21-27-BAC 플라스미드의 약 1/2이 재조합에 이용한 서열과 동일한 서열을 갖는 플라스미드이고 약 1/2이 셔틀 벡터에 도입한 외래 유전자를 갖는 플라스미드이다.

이 HIV 사일런스를 포함하는 플라스미드를 이용하여 재조합 HHV-7 바이러스를 제조한다. 이 재조합 바이러스는 HIV 감염을 치료에 사용할 수 있다.

(실시예 4)

(재조합 헤르페스바이러스주 백신의 제조)

본 발명에 따라 하기의 방법을 이용하여 원하는 백신항원을 코딩하는 유전자를 결합한 돌연변이형 재조합 헤르페스바이러스를 제조하여 백신으로써 사용할 수 있다.

(백신의 제조)

배양면적 210 ㎡의 Roux 병 20개의 Sup-T1 세포 배양에 실시예 1에서 얻어진 재조합 헤르페스바이러스를 접종한 후 배양한다. 배양종료 후 배양액을 버리고 각 Roux 병 내의 감염세포를 200 ㎖의 PBS(-)에서 2회 세정한다. 이어서 20 ㎖의 0.03%(w/v) EDTA-3Na를 각 Roux 병 내의 감염세포에 넣고 세포를 Roux 병 내의 벽면으로부터 박리시켜 부유시킨다. 각 Roux 병 내의 감염세포 부유액을 풀(pool)로써 콜레트(collet)하고 2,000 rpm으로 10분간 4℃에서 원심분리하여 감염세포의 펠렛을 채취한다. 이것을 100 ㎖의 PBS(-)에 재부유시킨 후 동결해동을 1회 행한다. 다음으로 얼음수조에서 초음파처리(20 KHz, 150 mA, 0.3 초/㎖) 후, 3,000 rpm에서 20분간, 4℃에서 원심분리하여 세포에서 방출된 바이러스를 함유하는 상청액을 채취하여 이를 라이브(live) 백신 원액으로 한다. 이 원액으로부터 테스트용으로 30 ㎖을 채취하고 남은 원액 70 ㎖에 PBS(-)에 용해한 슈크로스 및 젤라틴 가수분해물을 백신 안정화제로 최종 농도가 5%(w/v) 및 2.5%(w/v)가 되도록 첨가 혼합하여 140 ㎖의 라이브 백신 최종 벌크를 제조한다. 이 최종 벌크로부터 테스트용으로 30 ㎖을 채취한 후 남은 벌크를 3 ㎖용 바이알에 0.5 ㎖씩 넣어 동결건조 후 질소가스를 충진하고 공기가 새지 않도록 밀봉하였다. 이 라이브 백신 앰플들은 4℃에서 정장하고 사용 직전에 주사용 증류수 0.5 ㎖을 첨가하여 건조 내용물을 완전하게 용해하여 사용한다. 한편 채취한 상기 백신 원액과 최종 벌크 및 앰플 20개에 대해 에세이를 행하였다. 에세이는 안전성, 유효성 및 균질성을 확인하고 라이브 백신으로써의 적합성을 확인하기 위해 후생성고시 제195호에 규정된 생물학적제제기준(1989년) 및 동일한 규정의 기준 "재조합 침강 B형간염 백신(효모유래"을 고려하고 실시한다. 이 에세이 결과 상기 앰플은 그 바이러스 함량이 2×10⁴PFU(플라그(plgue)-형성 단위)/0.5 ㎖이었고 상기 기준에 규정 각종시험에 합격한 경우 적합성을 만족한 라이브 백신으로써 그 후 사용에 제공되었다.

(실시예 5)

(HIV 감염예방)

본 발명의 재조합 HHV-7이 HIV 감염예방효과를 갖는 것을 Lusso 등(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 91, 3872 to 3876, April 1994)의 방법을 이용하여 확인한다.

건강한 성인의 말초혈에서 CD8, CD14, CD19, CD20 및 CD56에 대해 마우스모노클로날 항체(예를 들면 Becton Dickinson사제) 및 항마우스 IgG 항혈청(예를 들면 Dynal, Great Neck, NY)을 이용하여 음성면역 자석선별에 의해 CD4⁺ T세포를 선별한다. 이 세포를 정제 피토헤마글로티닌(phytohemagglutinin)(예를 들면 Wellacome사) 1 ㎍/㎖을 이용하여 정제하고 부분정제 IL-2(예를 들면 Boehringer Mannheim) 10단위/㎖ 존재 하에서 증식시킨는 것으로 CD4⁺ T세포를 제조한다.

본 발명의 HHV-7에 의한 HIV 감염예방효과는 CD4⁺ T세포 내 HIV 증식능을 HHV-7이 제어하는지 아닌지를 결정하는 것으로 측정할 수 있다. 보다 상세하게는 하기 순서를 이용한다.

10⁶개의 CD4⁺ T세포에 0.01∼0.1의 MOI에서 HHV-7을 감염시키고 37℃에서 48시간 동안 배양한 후에 HIV(첨가하는 양은 10⁵ cpm의 역전사효소를 갖는 HIV)를 첨가하고 37℃에서 1시간 정도 인큐베이션한다. 그 후 충분히 세포를 세정하고 24웰 플레이트에서 다시 한번 인큐베이션한다. 이 세정 후의 인큐베이션에서는 IL-2(10 단위/㎖)을 배양배지에 첨가한다. 4일간 배양한 후(세포의 생존률이 80%를 넘는다) 배양배지 내의 방출된 p24 단백질을 ELISA를 이용하여 정량한다. 대조군으로는 HHV-7에 의한 감염을 받지 않는 세포에 대해 동일한 조건에서 HIV를 감염시켜 배양배지 내에 방출된 p24 단백질을 측정한다. 이 p24 단백질의 양이 HIV 증식의 지표가 되므로 p24 단백질의 양이 대조군과 비교하여 적은 경우에는 HHV-7에 의해 HIV 감염예방효과가 증명된다.

(실시예 6)

(HIV 감염치료)

HHV-7은 HIV가 감염될 때 표적(입구)이 되는 CD4를 표적으로 하므로 HIV 감염예방에 이용할 수 있는 것이 증명된다. 이에 반해 HHV-6은 HHV-7 및 HIV와 같이 CD4⁺ T세포에 감염되는 바이러스이지만 그 표적으로 하는 단백질이 HHV-7이나 HIV와는 상이하다. 그 때문에 HHV-6는 예를 들면 자살유전자 등의 HIV 감염치료에 저절한 유전자를 HIV 감염세포에 도입하는 것으로 HIV 감염의 유전자 치료용 벡터로써 사용할 수 있다. 보다 구체적으로는 하기 방법을 이용할 수 있다.

실시예 5와 동일한 방법을 이용하여 CD4⁺ T세포를 제조한다. 10⁶개의 CD4⁺ T세포에 HIV를 첨가하여 37℃에서 1시간 정도 인큐베이션한다. 그 후 충분히 세포를 세정한다. 이 HIV 감염세포에 대해서 1의 MOI에서 HHV-6(HIV의 LTR을 활성화하는 유전자를 결여시키는 HHV-6 재조합 바이러스)을 감염시켜 IL-2(10 단위/㎖)을 배양배지에 첨가하고 37℃에서 1시간 정도 인큐베이션한다. 배양 후 배양배지중에 방출된 p24 단백질을 ELISA를 이용하여 정량한다. 대조군으로써는 HHV-6 처리를 하지 않는 HIV 감염세포를 이용하여 배양배지 중에 방출된 p24 단백질을 측정한다. 이 p24 단백질의 양이 HIV 증식의 지표가 되므로 이 p24 단백질의 양이 대조군과 비교하여 적은 경우에는 HHV-6에 의해 HIV 감염치료효과가 증명된다.

이상과 같이 본 발명의 바람직한 실시태양을 이용하여 본 발명을 예시해왔지만 본 발명은 특허청구범위에 의해서만 그 범위가 해석되어야만 하는 것이 이해된다. 본 명세서에서 인용한 특허, 특허출원 및 문헌은 그 내용자체가 구체적으로 본 명세서에 기재되어 있는 것과 같이 그 내용이 본 명세서에 대해서 참고로써 채용되어야만 하는 것이 이해된다.

본 발명에 의해 예를 들면 BAC(E. coli 인공염색체)를 이용하여 단일 바이러스주로부터 재조합 헤르페스바이러스를 제조하는 방법 그 방법에 의해 제조된 재조합 헤르페스바이러스가 제공된다. 또한 본 발명에 의해 재조합 헤르페스바이러스를 포함하는 약학적조성물이 제공된다.

한편 본 발명에 의해 헤르페스바이러스 게놈 유전자와 BAC 벡터서열을 함유하는 벡터 및 이와 같은 벡터를 함유하는 세포 또한 헤르페스바이러스 게놈과 상동 재조합할 수 있는 프래그먼트 및 BAC 벡터서열을 포함하는 핵산 카세트가 제공된다.

또한 HIV 감염예방 및 HIV 감염치료를 위한 재조합 헤르페스바이러스를 함유하는 약학적 조성물 역시 제공된다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

BAC(Bacterial artificial chromosome) 벡터 서열이 헤르페스바이러스 게놈의 생존 비-필수 영역 내로 삽입된 BAC 벡터 서열을 포함하는 림프계 세포 내로의 유전자 전달을 위한 재조합 헤르페스바이러스에 있어서,
상기 생존 비-필수 영역은
HHV-6A 또는 HHV-6B의 유전자 LT1의 ORF 내 영역, 유전자 DR1의 ORF 내 영역, 유전자 DR2의 ORF 내 영역, 유전자 DR3의 ORF 내 영역, 유전자 DR4의 ORF 내 영역, 유전자 DR5의 ORF 내 영역, 유전자 DR6의 ORF 내 영역, 유전자 DRHN1의 ORF 내 영역, 유전자 DR7의 ORF 내 영역, 유전자 DRHN2의 ORF 내 영역, 유전자 DR8의 ORF 내 영역, 유전자 LJ1의 ORF 내 영역, 유전자 U1의 ORF 내 영역, 유전자 U2의 ORF 내 영역, 유전자 U3의 ORF 내 영역, 유전자 U4의 ORF 내 영역, 유전자 U5의 ORF 내 영역, 유전자 U6의 ORF 내 영역, 유전자 U7의 ORF 내 영역, 유전자 U8의 ORF 내 영역, 유전자 U9의 ORF 내 영역, 유전자 U10의 ORF 내 영역, 유전자 U12EX의 ORF 내 영역, 유전자 U12의 ORF 내 영역, 유전자 U13의 ORF 내 영역, 유전자 U15의 ORF 내 영역, 유전자 U16의 ORF 내 영역, 유전자 U17의 ORF 내 영역, 유전자 U18의 ORF 내 영역, 유전자 U19의 ORF 내 영역, 유전자 U20의 ORF 내 영역, 유전자 U21의 ORF 내 영역, 유전자 U22의 ORF 내 영역, 유전자 U23의 ORF 내 영역, 유전자 U24의 ORF 내 영역, 유전자 U25의 ORF 내 영역, 유전자 U26의 ORF 내 영역, 유전자 U28의 ORF 내 영역, 유전자 U32의 ORF 내 영역, 유전자 U33의 ORF 내 영역, 유전자 U34의 ORF 내 영역, 유전자 U35의 ORF 내 영역, 유전자 U36의 ORF 내 영역, 유전자 U37의 ORF 내 영역, 유전자 U40의 ORF 내 영역, 유전자 U42의 ORF 내 영역, 유전자 U44의 ORF 내 영역, 유전자 U45의 ORF 내 영역, 유전자 U46의 ORF 내 영역, 유전자 U47의 ORF 내 영역, 유전자 U49의 ORF 내 영역, 유전자 U50의 ORF 내 영역, 유전자 U51의 ORF 내 영역, 유전자 U52의 ORF 내 영역, 유전자 U55의 ORF 내 영역, 유전자 U58의 ORF 내 영역, 유전자 U59의 ORF 내 영역, 유전자 U61의 ORF 내 영역, 유전자 U62의 ORF 내 영역, 유전자 U63의 ORF 내 영역, 유전자 U64의 ORF 내 영역, 유전자 U65의 ORF 내 영역, 유전자 U67의 ORF 내 영역, 유전자 U68의 ORF 내 영역, 유전자 U69의 ORF 내 영역, 유전자 U70의 ORF 내 영역, 유전자 U71의 ORF 내 영역, 유전자 U75의 ORF 내 영역, 유전자 U76의 ORF 내 영역, 유전자 U78의 ORF 내 영역, 유전자 U79의 ORF 내 영역, 유전자 U80의 ORF 내 영역, 유전자 U81의 ORF 내 영역, 유전자 U83의 ORF 내 영역, 유전자 U84의 ORF 내 영역, 유전자 U85의 ORF 내 영역, 유전자 U88의 ORF 내 영역, 유전자 U91의 ORF 내 영역, 유전자 U92의 ORF 내 영역, 유전자 U93의 ORF 내 영역, 유전자 HN2의 ORF 내 영역, 유전자 U94의 ORF 내 영역, 유전자 U95의 ORF 내 영역, 유전자 U96의 ORF 내 영역, 유전자 LT1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR3의 ORF 인접 영역, 유전자 DR4의 ORF 인접 영역, 유전자 DR5의 ORF 인접 영역, 유전자 DR6의 ORF 인접 영역, 유전자 DRHN1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR7의 ORF 인접 영역, 유전자 DRHN2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR8의 ORF 인접 영역, 유전자 LJ1의 ORF 인접 영역, 유전자 U1의 ORF 인접 영역, 유전자 U2의 ORF 인접 영역, 유전자 U3의 ORF 인접 영역, 유전자 U4의 ORF 인접 영역, 유전자 U5의 ORF 인접 영역, 유전자 U6의 ORF 인접 영역, 유전자 U7의 ORF 인접 영역, 유전자 U8의 ORF 인접 영역, 유전자 U9의 ORF 인접 영역, 유전자 U10의 ORF 인접 영역, 유전자 U12EX의 ORF 인접 영역, 유전자 U12의 ORF 인접 영역, 유전자 U13의 ORF 인접 영역, 유전자 U15의 ORF 인접 영역, 유전자 U16의 ORF 인접 영역, 유전자 U17의 ORF 인접 영역, 유전자 U18의 ORF 인접 영역, 유전자 U19의 ORF 인접 영역, 유전자 U20의 ORF 인접 영역, 유전자 U21의 ORF 인접 영역, 유전자 U22의 ORF 인접 영역, 유전자 U23의 ORF 인접 영역, 유전자 U24의 ORF 인접 영역, 유전자 U25의 ORF 인접 영역, 유전자 U26의 ORF 인접 영역, 유전자 U28의 ORF 인접 영역, 유전자 U32의 ORF 인접 영역, 유전자 U33의 ORF 인접 영역, 유전자 U34의 ORF 인접 영역, 유전자 U35의 ORF 인접 영역, 유전자 U36의 ORF 인접 영역, 유전자 U37의 ORF 인접 영역, 유전자 U40의 ORF 인접 영역, 유전자 U42의 ORF 인접 영역, 유전자 U44의 ORF 인접 영역, 유전자 U45의 ORF 인접 영역, 유전자 U46의 ORF 인접 영역, 유전자 U47의 ORF 인접 영역, 유전자 U49의 ORF 인접 영역, 유전자 U50의 ORF 인접 영역, 유전자 U51의 ORF 인접 영역, 유전자 U52의 ORF 인접 영역, 유전자 U55의 ORF 인접 영역, 유전자 U58의 ORF 인접 영역, 유전자 U59의 ORF 인접 영역, 유전자 U61의 ORF 인접 영역, 유전자 U62의 ORF 인접 영역, 유전자 U63의 ORF 인접 영역, 유전자 U64의 ORF 인접 영역, 유전자 U65의 ORF 인접 영역, 유전자 U67의 ORF 인접 영역, 유전자 U68의 ORF 인접 영역, 유전자 U69의 ORF 인접 영역, 유전자 U70의 ORF 인접 영역, 유전자 U71의 ORF 인접 영역, 유전자 U75의 ORF 인접 영역, 유전자 U76의 ORF 인접 영역, 유전자 U78의 ORF 인접 영역, 유전자 U79의 ORF 인접 영역, 유전자 U80의 ORF 인접 영역, 유전자 U81의 ORF 인접 영역, 유전자 U83의 ORF 인접 영역, 유전자 U84의 ORF 인접 영역, 유전자 U85의 ORF 인접 영역, 유전자 U88의 ORF 인접 영역, 유전자 U91의 ORF 인접 영역, 유전자 U92의 ORF 인접 영역, 유전자 U93의 ORF 인접 영역, 유전자 HN2의 ORF 인접 영역, 유전자 U94의 ORF 인접 영역, 유전자 U95의 ORF 인접 영역, 유전자 U96의 ORF 인접 영역으로 구성된 군
으로부터 선택됨을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스
제 1항에 있어서, 상기 생존 비-필수 영역은 HHV-6A 또는 HHV-6B 유전자 U5의 ORF 인접 영역 또는 HHV-6A 또는 HHV-6B 유전자 U8의 ORF 인접 영역임을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스
제 1항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 loxP 부위, FRT 부위, attB 부위, attP 부위 또는 res 부위에서 선택된 재조합 단백질 의존적 재조합 서열을 포함함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스
제 1항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 선별 마커를 포함함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스
제 4항에 있어서, 상기 선별 마커는 약제 선별 마커임을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스
제 4항에 있어서, 상기 선별 마커는 녹색 형광 단백질을 인코드하는 유전자임을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스
제 1항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 야생주로부터 유래함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스
제 1항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 변이주로부터 유래함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스
제 1항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-6A U1102주 또는 HHV-6B HST주로부터 유래함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스
제 1항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 서열번호: 401에 나타난 서열을 포함함을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스
제 1항의 바이러스를 포함하는 HIV 치료 또는 예방용 약학적 조성물
제 11항에 있어서, 상기 조성물은 백신 형태임을 특징으로 하는 약학적 조성물
벡터를 포유류 세포 내로 도입시 포유류 세포가 재조합 헤르페스바이러스를 생성하는 벡터로서, 헤르페스바이러스 게놈 유래의 서열이 BAC 벡터 서열에 결합하는 부분은 헤르페스바이러스 게놈의 생존 비-필수 영역 내에 존재함을 특징으로 하는 인간 헤르페스바이러스 생존 필수 유전자 및 BAC 벡터 서열을 포함한 벡터에 있어서,
상기 생존 비-필수 영역은
HHV-6A 또는 HHV-6B의 유전자 LT1의 ORF 내 영역, 유전자 DR1의 ORF 내 영역, 유전자 DR2의 ORF 내 영역, 유전자 DR3의 ORF 내 영역, 유전자 DR4의 ORF 내 영역, 유전자 DR5의 ORF 내 영역, 유전자 DR6의 ORF 내 영역, 유전자 DRHN1의 ORF 내 영역, 유전자 DR7의 ORF 내 영역, 유전자 DRHN2의 ORF 내 영역, 유전자 DR8의 ORF 내 영역, 유전자 LJ1의 ORF 내 영역, 유전자 U1의 ORF 내 영역, 유전자 U2의 ORF 내 영역, 유전자 U3의 ORF 내 영역, 유전자 U4의 ORF 내 영역, 유전자 U5의 ORF 내 영역, 유전자 U6의 ORF 내 영역, 유전자 U7의 ORF 내 영역, 유전자 U8의 ORF 내 영역, 유전자 U9의 ORF 내 영역, 유전자 U10의 ORF 내 영역, 유전자 U12EX의 ORF 내 영역, 유전자 U12의 ORF 내 영역, 유전자 U13의 ORF 내 영역, 유전자 U15의 ORF 내 영역, 유전자 U16의 ORF 내 영역, 유전자 U17의 ORF 내 영역, 유전자 U18의 ORF 내 영역, 유전자 U19의 ORF 내 영역, 유전자 U20의 ORF 내 영역, 유전자 U21의 ORF 내 영역, 유전자 U22의 ORF 내 영역, 유전자 U23의 ORF 내 영역, 유전자 U24의 ORF 내 영역, 유전자 U25의 ORF 내 영역, 유전자 U26의 ORF 내 영역, 유전자 U28의 ORF 내 영역, 유전자 U32의 ORF 내 영역, 유전자 U33의 ORF 내 영역, 유전자 U34의 ORF 내 영역, 유전자 U35의 ORF 내 영역, 유전자 U36의 ORF 내 영역, 유전자 U37의 ORF 내 영역, 유전자 U40의 ORF 내 영역, 유전자 U42의 ORF 내 영역, 유전자 U44의 ORF 내 영역, 유전자 U45의 ORF 내 영역, 유전자 U46의 ORF 내 영역, 유전자 U47의 ORF 내 영역, 유전자 U49의 ORF 내 영역, 유전자 U50의 ORF 내 영역, 유전자 U51의 ORF 내 영역, 유전자 U52의 ORF 내 영역, 유전자 U55의 ORF 내 영역, 유전자 U58의 ORF 내 영역, 유전자 U59의 ORF 내 영역, 유전자 U61의 ORF 내 영역, 유전자 U62의 ORF 내 영역, 유전자 U63의 ORF 내 영역, 유전자 U64의 ORF 내 영역, 유전자 U65의 ORF 내 영역, 유전자 U67의 ORF 내 영역, 유전자 U68의 ORF 내 영역, 유전자 U69의 ORF 내 영역, 유전자 U70의 ORF 내 영역, 유전자 U71의 ORF 내 영역, 유전자 U75의 ORF 내 영역, 유전자 U76의 ORF 내 영역, 유전자 U78의 ORF 내 영역, 유전자 U79의 ORF 내 영역, 유전자 U80의 ORF 내 영역, 유전자 U81의 ORF 내 영역, 유전자 U83의 ORF 내 영역, 유전자 U84의 ORF 내 영역, 유전자 U85의 ORF 내 영역, 유전자 U88의 ORF 내 영역, 유전자 U91의 ORF 내 영역, 유전자 U92의 ORF 내 영역, 유전자 U93의 ORF 내 영역, 유전자 HN2의 ORF 내 영역, 유전자 U94의 ORF 내 영역, 유전자 U95의 ORF 내 영역, 유전자 U96의 ORF 내 영역, 유전자 LT1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR3의 ORF 인접 영역, 유전자 DR4의 ORF 인접 영역, 유전자 DR5의 ORF 인접 영역, 유전자 DR6의 ORF 인접 영역, 유전자 DRHN1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR7의 ORF 인접 영역, 유전자 DRHN2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR8의 ORF 인접 영역, 유전자 LJ1의 ORF 인접 영역, 유전자 U1의 ORF 인접 영역, 유전자 U2의 ORF 인접 영역, 유전자 U3의 ORF 인접 영역, 유전자 U4의 ORF 인접 영역, 유전자 U5의 ORF 인접 영역, 유전자 U6의 ORF 인접 영역, 유전자 U7의 ORF 인접 영역, 유전자 U8의 ORF 인접 영역, 유전자 U9의 ORF 인접 영역, 유전자 U10의 ORF 인접 영역, 유전자 U12EX의 ORF 인접 영역, 유전자 U12의 ORF 인접 영역, 유전자 U13의 ORF 인접 영역, 유전자 U15의 ORF 인접 영역, 유전자 U16의 ORF 인접 영역, 유전자 U17의 ORF 인접 영역, 유전자 U18의 ORF 인접 영역, 유전자 U19의 ORF 인접 영역, 유전자 U20의 ORF 인접 영역, 유전자 U21의 ORF 인접 영역, 유전자 U22의 ORF 인접 영역, 유전자 U23의 ORF 인접 영역, 유전자 U24의 ORF 인접 영역, 유전자 U25의 ORF 인접 영역, 유전자 U26의 ORF 인접 영역, 유전자 U28의 ORF 인접 영역, 유전자 U32의 ORF 인접 영역, 유전자 U33의 ORF 인접 영역, 유전자 U34의 ORF 인접 영역, 유전자 U35의 ORF 인접 영역, 유전자 U36의 ORF 인접 영역, 유전자 U37의 ORF 인접 영역, 유전자 U40의 ORF 인접 영역, 유전자 U42의 ORF 인접 영역, 유전자 U44의 ORF 인접 영역, 유전자 U45의 ORF 인접 영역, 유전자 U46의 ORF 인접 영역, 유전자 U47의 ORF 인접 영역, 유전자 U49의 ORF 인접 영역, 유전자 U50의 ORF 인접 영역, 유전자 U51의 ORF 인접 영역, 유전자 U52의 ORF 인접 영역, 유전자 U55의 ORF 인접 영역, 유전자 U58의 ORF 인접 영역, 유전자 U59의 ORF 인접 영역, 유전자 U61의 ORF 인접 영역, 유전자 U62의 ORF 인접 영역, 유전자 U63의 ORF 인접 영역, 유전자 U64의 ORF 인접 영역, 유전자 U65의 ORF 인접 영역, 유전자 U67의 ORF 인접 영역, 유전자 U68의 ORF 인접 영역, 유전자 U69의 ORF 인접 영역, 유전자 U70의 ORF 인접 영역, 유전자 U71의 ORF 인접 영역, 유전자 U75의 ORF 인접 영역, 유전자 U76의 ORF 인접 영역, 유전자 U78의 ORF 인접 영역, 유전자 U79의 ORF 인접 영역, 유전자 U80의 ORF 인접 영역, 유전자 U81의 ORF 인접 영역, 유전자 U83의 ORF 인접 영역, 유전자 U84의 ORF 인접 영역, 유전자 U85의 ORF 인접 영역, 유전자 U88의 ORF 인접 영역, 유전자 U91의 ORF 인접 영역, 유전자 U92의 ORF 인접 영역, 유전자 U93의 ORF 인접 영역, 유전자 HN2의 ORF 인접 영역, 유전자 U94의 ORF 인접 영역, 유전자 U95의 ORF 인접 영역, 유전자 U96의 ORF 인접 영역으로 구성된 군
으로부터 선택됨을 특징으로 하는 벡터
제 13항에 있어서, 상기 비-필수 영역은 HHV-6A 또는 HHV-6B 유전자 U5의 ORF 인접 영역 또는 HHV-6A 또는 HHV-6B 유전자 U8의 ORF 인접 영역임을 특징으로 하는 벡터
제 13항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 loxP 부위, FRT 부위, attB 부위, attP 부위 또는 res 부위에서 선택된 재조합 단백질 의존적 재조합 서열을 포함함을 특징으로 하는 벡터
제 13항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 선별 마커를 포함함을 특징으로 하는 벡터
제 16항에 있어서, 상기 선별 마커는 약제 선별 마커임을 특징으로 하는 벡터
제 16항에 있어서, 상기 선별 마커는 녹색 형광 단백질을 인코드하는 유전자임을 특징으로 하는 벡터
제 13항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 야생주로부터 유래함을 특징으로 하는 벡터
제 13항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 변이주로부터 유래함을 특징으로 하는 벡터
제 13항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-6A U1102주 또는 HHV-6B HST주로부터 유래함을 특징으로 하는 벡터
제 13항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 서열번호: 401에 나타난 서열을 포함함을 특징으로 하는 벡터
제 13항의 벡터를 포함한 세포
제 23항에 있어서, 상기 세포는 박테리아 세포임을 특징으로 하는 세포
제 24항에 있어서, 상기 박테리아 세포는 E. coli임을 특징으로 하는 박테리아 세포
제 23항에 있어서, 상기 세포는 포유류 세포임을 특징으로 하는 세포
제 26항에 있어서, 상기 포유류 세포는 인간으로부터 유래함을 특징으로 하는 포유류 세포
제 26항의 포유류 세포에 의해 생성된 바이러스
제 28항의 바이러스를 포함하는 HIV 치료 또는 예방용 약학적 조성물
제 29항에 있어서, 상기 조성물은 백신 형태임을 특징으로 하는 약학적 조성물
헤르페스바이러스 게놈 생존 필수 유전자 및 BAC 벡터 서열을 포함한 벡터를 포유류 숙주 세포 내로 도입시키는 단계; 및
상기 포유류 숙주 세포를 배양하여 재조합 헤르페스바이러스를 제조하는 단계를 포함하는 재조합 헤르페스바이러스의 제조 방법에 있어서,
상기 헤르페스바이러스 게놈 유래의 서열이 BAC 벡터 서열에 결합되는 부분이 헤르페스바이러스 게놈의 생존 비-필수 영역 내에 존재하고,
상기 생존 비-필수 영역은
HHV-6A 또는 HHV-6B 유전자의 유전자 LT1의 ORF 내 영역, 유전자 DR1의 ORF 내 영역, 유전자 DR2의 ORF 내 영역, 유전자 DR3의 ORF 내 영역, 유전자 DR4의 ORF 내 영역, 유전자 DR5의 ORF 내 영역, 유전자 DR6의 ORF 내 영역, 유전자 DRHN1의 ORF 내 영역, 유전자 DR7의 ORF 내 영역, 유전자 DRHN2의 ORF 내 영역, 유전자 DR8의 ORF 내 영역, 유전자 LJ1의 ORF 내 영역, 유전자 U1의 ORF 내 영역, 유전자 U2의 ORF 내 영역, 유전자 U3의 ORF 내 영역, 유전자 U4의 ORF 내 영역, 유전자 U5의 ORF 내 영역, 유전자 U6의 ORF 내 영역, 유전자 U7의 ORF 내 영역, 유전자 U8의 ORF 내 영역, 유전자 U9의 ORF 내 영역, 유전자 U10의 ORF 내 영역, 유전자 U12EX의 ORF 내 영역, 유전자 U12의 ORF 내 영역, 유전자 U13의 ORF 내 영역, 유전자 U15의 ORF 내 영역, 유전자 U16의 ORF 내 영역, 유전자 U17의 ORF 내 영역, 유전자 U18의 ORF 내 영역, 유전자 U19의 ORF 내 영역, 유전자 U20의 ORF 내 영역, 유전자 U21의 ORF 내 영역, 유전자 U22의 ORF 내 영역, 유전자 U23의 ORF 내 영역, 유전자 U24의 ORF 내 영역, 유전자 U25의 ORF 내 영역, 유전자 U26의 ORF 내 영역, 유전자 U28의 ORF 내 영역, 유전자 U32의 ORF 내 영역, 유전자 U33의 ORF 내 영역, 유전자 U34의 ORF 내 영역, 유전자 U35의 ORF 내 영역, 유전자 U36의 ORF 내 영역, 유전자 U37의 ORF 내 영역, 유전자 U40의 ORF 내 영역, 유전자 U42의 ORF 내 영역, 유전자 U44의 ORF 내 영역, 유전자 U45의 ORF 내 영역, 유전자 U46의 ORF 내 영역, 유전자 U47의 ORF 내 영역, 유전자 U49의 ORF 내 영역, 유전자 U50의 ORF 내 영역, 유전자 U51의 ORF 내 영역, 유전자 U52의 ORF 내 영역, 유전자 U55의 ORF 내 영역, 유전자 U58의 ORF 내 영역, 유전자 U59의 ORF 내 영역, 유전자 U61의 ORF 내 영역, 유전자 U62의 ORF 내 영역, 유전자 U63의 ORF 내 영역, 유전자 U64의 ORF 내 영역, 유전자 U65의 ORF 내 영역, 유전자 U67의 ORF 내 영역, 유전자 U68의 ORF 내 영역, 유전자 U69의 ORF 내 영역, 유전자 U70의 ORF 내 영역, 유전자 U71의 ORF 내 영역, 유전자 U75의 ORF 내 영역, 유전자 U76의 ORF 내 영역, 유전자 U78의 ORF 내 영역, 유전자 U79의 ORF 내 영역, 유전자 U80의 ORF 내 영역, 유전자 U81의 ORF 내 영역, 유전자 U83의 ORF 내 영역, 유전자 U84의 ORF 내 영역, 유전자 U85의 ORF 내 영역, 유전자 U88의 ORF 내 영역, 유전자 U91의 ORF 내 영역, 유전자 U92의 ORF 내 영역, 유전자 U93의 ORF 내 영역, 유전자 HN2의 ORF 내 영역, 유전자 U94의 ORF 내 영역, 유전자 U95의 ORF 내 영역, 유전자 U96의 ORF 내 영역, 유전자 LT1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR3의 ORF 인접 영역, 유전자 DR4의 ORF 인접 영역, 유전자 DR5의 ORF 인접 영역, 유전자 DR6의 ORF 인접 영역, 유전자 DRHN1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR7의 ORF 인접 영역, 유전자 DRHN2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR8의 ORF 인접 영역, 유전자 LJ1의 ORF 인접 영역, 유전자 U1의 ORF 인접 영역, 유전자 U2의 ORF 인접 영역, 유전자 U3의 ORF 인접 영역, 유전자 U4의 ORF 인접 영역, 유전자 U5의 ORF 인접 영역, 유전자 U6의 ORF 인접 영역, 유전자 U7의 ORF 인접 영역, 유전자 U8의 ORF 인접 영역, 유전자 U9의 ORF 인접 영역, 유전자 U10의 ORF 인접 영역, 유전자 U12EX의 ORF 인접 영역, 유전자 U12의 ORF 인접 영역, 유전자 U13의 ORF 인접 영역, 유전자 U15의 ORF 인접 영역, 유전자 U16의 ORF 인접 영역, 유전자 U17의 ORF 인접 영역, 유전자 U18의 ORF 인접 영역, 유전자 U19의 ORF 인접 영역, 유전자 U20의 ORF 인접 영역, 유전자 U21의 ORF 인접 영역, 유전자 U22의 ORF 인접 영역, 유전자 U23의 ORF 인접 영역, 유전자 U24의 ORF 인접 영역, 유전자 U25의 ORF 인접 영역, 유전자 U26의 ORF 인접 영역, 유전자 U28의 ORF 인접 영역, 유전자 U32의 ORF 인접 영역, 유전자 U33의 ORF 인접 영역, 유전자 U34의 ORF 인접 영역, 유전자 U35의 ORF 인접 영역, 유전자 U36의 ORF 인접 영역, 유전자 U37의 ORF 인접 영역, 유전자 U40의 ORF 인접 영역, 유전자 U42의 ORF 인접 영역, 유전자 U44의 ORF 인접 영역, 유전자 U45의 ORF 인접 영역, 유전자 U46의 ORF 인접 영역, 유전자 U47의 ORF 인접 영역, 유전자 U49의 ORF 인접 영역, 유전자 U50의 ORF 인접 영역, 유전자 U51의 ORF 인접 영역, 유전자 U52의 ORF 인접 영역, 유전자 U55의 ORF 인접 영역, 유전자 U58의 ORF 인접 영역, 유전자 U59의 ORF 인접 영역, 유전자 U61의 ORF 인접 영역, 유전자 U62의 ORF 인접 영역, 유전자 U63의 ORF 인접 영역, 유전자 U64의 ORF 인접 영역, 유전자 U65의 ORF 인접 영역, 유전자 U67의 ORF 인접 영역, 유전자 U68의 ORF 인접 영역, 유전자 U69의 ORF 인접 영역, 유전자 U70의 ORF 인접 영역, 유전자 U71의 ORF 인접 영역, 유전자 U75의 ORF 인접 영역, 유전자 U76의 ORF 인접 영역, 유전자 U78의 ORF 인접 영역, 유전자 U79의 ORF 인접 영역, 유전자 U80의 ORF 인접 영역, 유전자 U81의 ORF 인접 영역, 유전자 U83의 ORF 인접 영역, 유전자 U84의 ORF 인접 영역, 유전자 U85의 ORF 인접 영역, 유전자 U88의 ORF 인접 영역, 유전자 U91의 ORF 인접 영역, 유전자 U92의 ORF 인접 영역, 유전자 U93의 ORF 인접 영역, 유전자 HN2의 ORF 인접 영역, 유전자 U94의 ORF 인접 영역, 유전자 U95의 ORF 인접 영역, 유전자 U96의 ORF 인접 영역으로 구성된 군
으로부터 선택됨을 특징으로 하는 재조합 헤르페스바이러스의 제조 방법
제 31항에 있어서, 상기 포유류 숙주 세포는 인간으로부터 유래함을 특징으로 하는 방법
제 31항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 loxP 부위, FRT 부위, attB 부위, attP 부위 또는 res 부위에서 선택된 2 이상의 재조합 단백질 의존적 재조합 서열을 포함함을 특징으로 하는 방법
제 33항에 있어서, 상기 제조 방법은 2개의 재조합 단백질 의존적 재조합 서열 사이의 재조합 단계를 더욱 포함함을 특징으로 하는 방법
제 31항에 있어서, 상기 생존 비-필수 영역은 HHV-6A 또는 HHV-6B 유전자 U5의 ORF 인접 영역 또는 HHV-6A 또는 HHV-6B 유전자 U8의 ORF 인접 영역임을 특징으로 하는 방법
제 31항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 loxP 부위, FRT 부위, attB 부위, attP 부위 또는 res 부위에서 선택된 재조합 단백질 의존적 재조합 서열임을 포함함을 특징으로 하는 방법
제 31항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 선별 마커 포함함을 특징으로 하는 방법
제 37항에 있어서, 상기 선별 마커는 약제 선별 마커임을 특징으로 하는 방법
제 37항에 있어서, 상기 선별 마커는 녹색 형광 단백질을 인코드하는 유전자임을 특징으로 하는 방법
제 31항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 야생주로부터 유래함을 특징으로 하는 방법
제 31항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 변이주로부터 유래함을 특징으로 하는 방법
제 31항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-6A U1102주 또는 HHV-6B HST주로부터 유래함을 특징으로 하는 방법
제 31항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 서열번호: 401에 나타난 서열을 포함함을 특징으로 하는 방법
제 31항의 방법에 의해 제조된 바이러스
제 44항의 바이러스를 포함하는 HIV 치료 또는 예방용 약학적 조성물
제 45항에 있어서, 상기 조성물은 백신 형태임을 특징으로 하는 약학적 조성물
벡터를 박테리아 숙주 세포 내로 도입시키는 단계;
적어도 하나 이상의 돌연변이를 지니고 헤르페스바이러스 게놈의 생존 비-필수 유전자 영역에 삽입된 BAC 벡터 서열로 구성된 단편을 포함하는 플라스미드 벡터를 상기 박테리아 숙주 세포 내로 도입시키는 단계;
상기 박테리아 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
상기 배양된 박테리아 숙주 세포로부터 BAC 서열을 지닌 벡터를 분리하는 단계;
를 포함하는 제 13항의 벡터 내로의 변이 도입방법
벡터를 박테리아 숙주 세포 내로 도입시키는 단계;
적어도 하나 이상의 돌연변이를 지니고 헤르페스바이러스 게놈의 생존 비-필수 유전자 영역에 삽입된 BAC 벡터 서열로 구성된 첫 번째 단편을 포함하는 첫 번째 플라스미드 벡터를 상기 박테리아 숙주 세포 내로 도입시키는 단계;
적어도 하나 이상의 돌연변이를 지니고 헤르페스바이러스 게놈의 생존 비-필수 유전자 영역에 삽입된 BAC 벡터 서열로 구성된 상기 첫 번째 단편과 상이한 두 번째 단편을 포함하는 두 번째 플라스미드 벡터를 상기 박테리아 숙주 세포 내로 도입시키는 단계;
상기 박테리아 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
상기 배양된 박테리아 숙주 세포로부터 BAC 서열을 지닌 벡터를 분리하는 단계;
를 포함하는 제 13항의 벡터 내로의 변이 도입방법
박테리아 세포 내에서 헤르페스바이러스 게놈과 재조합될 수 있는 첫 번째 단편, BAC 벡터 서열 및 박테리아 세포 내에서 헤르페스바이러스 게놈과 재조합될 수 있는 두 번째 단편을 포함하고, BAC 서열의 양 말단이 각각 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편에 결합된 핵산 카세트에 있어서,
상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은
헤르페스바이러스 HHV-6 게놈의 유전자 LT1의 ORF 내 영역, 유전자 DR1의 ORF 내 영역, 유전자 DR2의 ORF 내 영역, 유전자 DR3의 ORF 내 영역, 유전자 DR4의 ORF 내 영역, 유전자 DR5의 ORF 내 영역, 유전자 DR6의 ORF 내 영역, 유전자 DRHN1의 ORF 내 영역, 유전자 DR7의 ORF 내 영역, 유전자 DRHN2의 ORF 내 영역, 유전자 DR8의 ORF 내 영역, 유전자 LJ1의 ORF 내 영역, 유전자 U1의 ORF 내 영역, 유전자 U2의 ORF 내 영역, 유전자 U3의 ORF 내 영역, 유전자 U4의 ORF 내 영역, 유전자 U5의 ORF 내 영역, 유전자 U6의 ORF 내 영역, 유전자 U7의 ORF 내 영역, 유전자 U8의 ORF 내 영역, 유전자 U9의 ORF 내 영역, 유전자 U10의 ORF 내 영역, 유전자 U12EX의 ORF 내 영역, 유전자 U12의 ORF 내 영역, 유전자 U13의 ORF 내 영역, 유전자 U15의 ORF 내 영역, 유전자 U16의 ORF 내 영역, 유전자 U17의 ORF 내 영역, 유전자 U18의 ORF 내 영역, 유전자 U19의 ORF 내 영역, 유전자 U20의 ORF 내 영역, 유전자 U21의 ORF 내 영역, 유전자 U22의 ORF 내 영역, 유전자 U23의 ORF 내 영역, 유전자 U24의 ORF 내 영역, 유전자 U25의 ORF 내 영역, 유전자 U26의 ORF 내 영역, 유전자 U28의 ORF 내 영역, 유전자 U32의 ORF 내 영역, 유전자 U33의 ORF 내 영역, 유전자 U34의 ORF 내 영역, 유전자 U35의 ORF 내 영역, 유전자 U36의 ORF 내 영역, 유전자 U37의 ORF 내 영역, 유전자 U40의 ORF 내 영역, 유전자 U42의 ORF 내 영역, 유전자 U44의 ORF 내 영역, 유전자 U45의 ORF 내 영역, 유전자 U46의 ORF 내 영역, 유전자 U47의 ORF 내 영역, 유전자 U49의 ORF 내 영역, 유전자 U50의 ORF 내 영역, 유전자 U51의 ORF 내 영역, 유전자 U52의 ORF 내 영역, 유전자 U55의 ORF 내 영역, 유전자 U58의 ORF 내 영역, 유전자 U59의 ORF 내 영역, 유전자 U61의 ORF 내 영역, 유전자 U62의 ORF 내 영역, 유전자 U63의 ORF 내 영역, 유전자 U64의 ORF 내 영역, 유전자 U65의 ORF 내 영역, 유전자 U67의 ORF 내 영역, 유전자 U68의 ORF 내 영역, 유전자 U69의 ORF 내 영역, 유전자 U70의 ORF 내 영역, 유전자 U71의 ORF 내 영역, 유전자 U75의 ORF 내 영역, 유전자 U76의 ORF 내 영역, 유전자 U78의 ORF 내 영역, 유전자 U79의 ORF 내 영역, 유전자 U80의 ORF 내 영역, 유전자 U81의 ORF 내 영역, 유전자 U83의 ORF 내 영역, 유전자 U84의 ORF 내 영역, 유전자 U85의 ORF 내 영역, 유전자 U88의 ORF 내 영역, 유전자 U91의 ORF 내 영역, 유전자 U92의 ORF 내 영역, 유전자 U93의 ORF 내 영역, 유전자 HN2의 ORF 내 영역, 유전자 U94의 ORF 내 영역, 유전자 U95의 ORF 내 영역, 유전자 U96의 ORF 내 영역, 유전자 LT1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR3의 ORF 인접 영역, 유전자 DR4의 ORF 인접 영역, 유전자 DR5의 ORF 인접 영역, 유전자 DR6의 ORF 인접 영역, 유전자 DRHN1의 ORF 인접 영역, 유전자 DR7의 ORF 인접 영역, 유전자 DRHN2의 ORF 인접 영역, 유전자 DR8의 ORF 인접 영역, 유전자 LJ1의 ORF 인접 영역, 유전자 U1의 ORF 인접 영역, 유전자 U2의 ORF 인접 영역, 유전자 U3의 ORF 인접 영역, 유전자 U4의 ORF 인접 영역, 유전자 U5의 ORF 인접 영역, 유전자 U6의 ORF 인접 영역, 유전자 U7의 ORF 인접 영역, 유전자 U8의 ORF 인접 영역, 유전자 U9의 ORF 인접 영역, 유전자 U10의 ORF 인접 영역, 유전자 U12EX의 ORF 인접 영역, 유전자 U12의 ORF 인접 영역, 유전자 U13의 ORF 인접 영역, 유전자 U15의 ORF 인접 영역, 유전자 U16의 ORF 인접 영역, 유전자 U17의 ORF 인접 영역, 유전자 U18의 ORF 인접 영역, 유전자 U19의 ORF 인접 영역, 유전자 U20의 ORF 인접 영역, 유전자 U21의 ORF 인접 영역, 유전자 U22의 ORF 인접 영역, 유전자 U23의 ORF 인접 영역, 유전자 U24의 ORF 인접 영역, 유전자 U25의 ORF 인접 영역, 유전자 U26의 ORF 인접 영역, 유전자 U28의 ORF 인접 영역, 유전자 U32의 ORF 인접 영역, 유전자 U33의 ORF 인접 영역, 유전자 U34의 ORF 인접 영역, 유전자 U35의 ORF 인접 영역, 유전자 U36의 ORF 인접 영역, 유전자 U37의 ORF 인접 영역, 유전자 U40의 ORF 인접 영역, 유전자 U42의 ORF 인접 영역, 유전자 U44의 ORF 인접 영역, 유전자 U45의 ORF 인접 영역, 유전자 U46의 ORF 인접 영역, 유전자 U47의 ORF 인접 영역, 유전자 U49의 ORF 인접 영역, 유전자 U50의 ORF 인접 영역, 유전자 U51의 ORF 인접 영역, 유전자 U52의 ORF 인접 영역, 유전자 U55의 ORF 인접 영역, 유전자 U58의 ORF 인접 영역, 유전자 U59의 ORF 인접 영역, 유전자 U61의 ORF 인접 영역, 유전자 U62의 ORF 인접 영역, 유전자 U63의 ORF 인접 영역, 유전자 U64의 ORF 인접 영역, 유전자 U65의 ORF 인접 영역, 유전자 U67의 ORF 인접 영역, 유전자 U68의 ORF 인접 영역, 유전자 U69의 ORF 인접 영역, 유전자 U70의 ORF 인접 영역, 유전자 U71의 ORF 인접 영역, 유전자 U75의 ORF 인접 영역, 유전자 U76의 ORF 인접 영역, 유전자 U78의 ORF 인접 영역, 유전자 U79의 ORF 인접 영역, 유전자 U80의 ORF 인접 영역, 유전자 U81의 ORF 인접 영역, 유전자 U83의 ORF 인접 영역, 유전자 U84의 ORF 인접 영역, 유전자 U85의 ORF 인접 영역, 유전자 U88의 ORF 인접 영역, 유전자 U91의 ORF 인접 영역, 유전자 U92의 ORF 인접 영역, 유전자 U93의 ORF 인접 영역, 유전자 HN2의 ORF 인접 영역, 유전자 U94의 ORF 인접 영역, 유전자 U95의 ORF 인접 영역, 유전자 U96의 ORF 인접 영역으로 구성된 군
으로부터 독립적으로 선택됨을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 적어도 1 kb임을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 적어도 1.5 kb임을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 적어도 2 kb임을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편은 서로 다른 영역으로부터 유래함을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편 각각은 독립적으로 HHV-6의 유전자 U5의 ORF 인접 영역 또는 HHV-6의 유전자 U8의 ORF 인접 영역으로부터 유래함을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 loxP 부위, FRT 부위, attB 부위, attP 부위 또는 res 부위에서 선택된 재조합 단백질 의존적 재조합 서열을 포함함을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 선별 마커를 포함함을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 56항에 있어서, 상기 선별 마커는 약제 선별 마커임을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 56항에 있어서, 상기 선별 마커는 녹색 형광 단백질을 인코드하는 유전자임을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 야생주로부터 유래함을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 변이주로부터 유래함을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 상기 헤르페스바이러스 게놈은 HHV-6A U1102주 또는 HHV-6B HST주로부터 유래함을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 상기 BAC 벡터 서열은 서열번호: 401에 나타난 서열을 포함함을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 49항에 있어서, 헤르페스바이러스 게놈은 서열번호: 1에 나타난 핵산 서열을 지님을 특징으로 하는 핵산 카세트
제 1항의 재조합 헤르페스바이러스를 포함하는 HIV의 예방, 치료 또는 예후(prognosis)용 약학적 조성물
제 1항의 재조합 헤르페스바이러스를 포함한 HIV의 예방용 약학적 조성물