WO2005054181A1

WO2005054181A1 - 抗癌剤の新規標的タンパク質および対応する新規抗癌剤（スプナール）

Info

Publication number: WO2005054181A1
Application number: PCT/JP2004/018108
Authority: WO
Inventors: Akito Tanaka; Akira Yamazaki; Takeshi Tsutsumi; Tomohiro Terada; Masayuki Haramura
Original assignee: Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd.
Priority date: 2003-12-01
Filing date: 2004-11-30
Publication date: 2005-06-16
Also published as: US20110189789A1; JPWO2005054181A1; EP1690852A1; US20070082955A1; US7659426B2

Abstract

ＫＳＲＰまたはその機能的断片と特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物ならびに該化合物のスクリーニング方法を提供する。ＫＳＲＰは、抗癌剤の新規標的タンパク質であり、かかるタンパク質の発現や活性を制御し得る化合物およびそれを含む医薬組成物は増殖性疾患、特に抗癌剤として非常に有用である。当該新規標的タンパク質の提供により、従来説明のつかなかった抗癌作用のメカニズムが解明され得る。

Description

明細書

抗癌剤の新規標的タンパク質および対応する新規抗癌剤（スブナール）技術分野

本発明は、新規な創薬ターゲットに関する。より詳しくは、スリンダク及びその誘導体等の非ステロイド性消炎 ' 鎮痛剤（N S A I D s ) による家族性大腸腺腫症（FAP) への有効性を担うと考えられるターグット分子に関する。本発明はまた、当該ターゲット分子に特異的に結合する化合物に関する。背景技術

ヒトゲノムの塩基配列が解読されるのに伴い、研究の対象はゲノム創薬、創薬ターゲットの探索 · 同定へと移行している。その中で、元来非ステロイド性消炎 · 鎮痛剤として汎用されてきたスリンダク（S u l i n d a c ) および誘導体、あるいはセレコキシプ（C e 1 e c o X i b ) 等の非ステロイド性消炎 .鎮痛剤（NS A I D s ; N o n _ s t e r o i d a 1 a n t i — i n i l a mm a t o r y d r u g s ) か当初予想もされなかった家族性大腸腺腫症（F A P ; F a m i 1 i a a d e n o m a t o u s p o l y p o s i s ) 等の癌の領域においても有効性を示すという注目すべき報告がある力これらの化合物の癌領域での有効性を担うと考えられるターゲット同定もその一つである。

これまで、このメ力ニズムとしては主にこれら N S A I D s特異的タ一ゲットであるシクロォキシゲナ一ゼ（ C 〇 X ) ( C O X 1、 C O X 2 ) の寄与が考えられてきた（C a n c e r R e s e a r c h， 5 7 , p . 2 4 5 2 - 2 4 5 9 ( 1 9 9 7 ) 参照）。しかしながら、スリンダクゃぁる種のスリンダク誘導体（具体的にはスリンダクスルホン）は C OX 1 や C OX 2に対して弱い阻害作用しか示さなレヽ（C a n c e r R e s e a r c h, 5 7, p . 2 9 0 9 - 2 9 1 5 ( 1 9 9 7 ) 参照）。

このような COXに対する活性が弱く、その抗癌作用への関与が否定的であるスリンダク誘導体（スリンダクスルホン等）の FA Pへの有効性に関しては、現在ホスホジエステラーゼ 5 (P D E 5 ) 阻害作用との関係が示唆され、インビトロ、インビボの研究室レベルでの実験がなされてきた（C a n c e r R e s e a r c h, 5 7, p . 2 4 5 2 - 2 4 5 9 ( 1 9 9 7 ) 参照）。しかしながら、これら誘導体による臨床における抗癌作用の全てを説明するには不十分な点も残されており、その真のメ力二ズムの解明が待たれていた。発明の開示

本発明はスリンダクおよびその誘導体、セレコキシブ等の N S A I D sによる家族性大腸腺腫症への有効性を担うと考えられるターゲットを同定し、当該ターゲットを用いて家族性大腸腺腫症等の疾患の治療に有用な化合物のスクリ一二ング方法ならびに該スクリ一ユングによって得られる化合物を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究し、スリンダクおよびその誘導体、セレコキシブ等の N S A I D sが有する抗癌作用（臨床有効性）のメカニズムを説明し得るターゲットの探索を行った。その結果、 K S R P (KH— t y p e s p l i c i n g r e g u l a t o r y p r o t e i n) と呼ばれる mRNAのスプライシングを制御.するタンパク質がこれらの誘導体の抗癌作用を説明するのに十分な新規創薬ターゲットであることを見出し (表 1 )、かかるターゲットあるいは該タ一ゲットを発現する細胞を用いて、増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患等の疾患の治療に有用な化合物のスクリ一-ング方法を開発し、候補化合物を得て本発明を完成するに至った。 (表 1 )

X：作用弱い、 o：明確な阻害作用あ即ち本発明は下記の通りである。

〔 1〕一般式（ I ) または一般式（ I I ) で表わされる化合物またはその医薬上許容され得る塩：

(式中、 Xは

であり；

環 Aは、置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基または飽和もしくは不飽和の複素環基であり；

環 Bは、さらに 1乃至 4個の置換基を有していてもよいベンゼン環であり；

R ₁は置換されていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいァリール基、置換アミド基または置換されていてもよいアミノ基であり； R ₂〜R ₄は同一または異なって、水素原子、飽和もしくは不飽和の炭化水素基あるいは飽和もしくは不飽和の複素環基である（1 ₃ぉょび1 ₄は結合して環を形成してもよい）〕、伹し以下の化合物は除く。

〔2〕式 ( I ) で表わされる化合物が式 ( I ，）で表わされる化合物である、上記〔 1〕記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩

(式中、環 A' は、置換されていてもよい飽和もしくは不飽和の複素環基であり；それ以外の記号は上記〔 1〕と同義である）。

〔3〕一般式（ I ') 中、環 A' が、飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基、飽和もしくは不飽和の複素環基、カルボキシル基、置換アミド基および置換されていてもよい低級アルキル基からなる群より選択される少なくとも 1つの置換基で置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基または飽和もしくは不飽和の複素環基である、上記〔2〕記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩。

〔4〕一般式（ I ') 中、環 A' が、飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基、および飽和もしくは不飽和の複素環基からなる群より選択されるいずれか 1つの置換基と、カルボキシル基、置換アミド基および置換されていてもよい低級アルキル基からなる群より選択されるいずれか 1つの置換基を有する飽和もしくは不飽和の複素環基である、上記〔2〕記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩。

〔 5〕一般式（ I I ) 中、 R₃および R₄が結合して形成される環が、力ルポキシル基、置換アミド基および置換されていてもよい低級アルキル基からなる群より選択される少なくとも 1つの置換基を有していてもよい飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基または飽和もしくは不飽和の複素環基である、上記〔 1〕記載の化合物またはその医薬上許容され得る。

〔 6〕一般式（ I I ) 中、 R₃および R₄が結合して形成される環が、力ルポキシル基、置換アミド基および置換されていてもよい低級アルキル基からなる群より選択される少なくとも 1つの置換基を有していてもよい飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基である上記〔5〕記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩。

〔 7〕飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基がィンデンである、上記〔 6 ] 記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩。

〔8〕上記〔 1〕 ~ 〔7〕のいずれかに記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩を有効成分として含有する医薬組成物。

〔9〕増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療用である、上記〔8〕記載の医薬組成物。

〔 1 0〕配列番号 2のアミノ酸配列を有するタンパク質と特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物。

〔 1 1〕配列番号 2のアミノ酸配列において、 1または 2以上のァミノ酸を欠失、置換若しくは付加してなるアミノ酸配列を有し且つ以下の特徴を有するタンパク質と特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物；

(i) 式 1化合物と結合する

(ii) 式 2化合物と結合しない。

〔 1 2〕配列番号 3のアミノ酸配列を有するタンパク質と特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物。

〔 1 3〕配列番号 3のアミノ酸配列において、 1または 2以上のァミノ酸を欠失、置換若しくは付加してなるアミノ酸配列を有し且つ以下の特徴を有するタンパク質と特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物；

(i) 式 1化合物と結合する

(ii) 式 2化合物と結合しない。

〔 1 4〕増殖性疾患、炎症性疾患おょぴ脳疾患からなる群より選択される疾患の治療用である、上記〔 1 0〕〜〔 1 3〕のいずれかに記載の医薬組成物。

〔 1 5〕増殖性疾患が、家族性大腸腺腫症、食道癌、小細胞肺癌、前立腺癌、乳癌、非小細胞性癌および卵巣癌からなる群より選択される少なくとも 1種である、上記〔 1 4〕記載の医薬組成物。

〔 1 6〕 K S R Pと特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物。

〔 1 7〕 K S R Pの発現を制御する化合物を有効成分として含有する医薬組成物。

〔 1 8〕 K S R Pの活性を制御する化合物を有効成分として含有する医薬組成物。

〔 1 9〕増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療用である、上記〔 1 6〕〜〔 1 8〕のいずれかに記載の医薬組成物。〔2 0〕増殖性疾患が、家族性大腸腺腫症、食道癌、小細胞肺癌、前立腺癌、乳癌、非小細胞性癌および卵巣癌からなる群より選択される少なくとも 1種である、上記〔 1 9〕記載の医薬組成物。

〔2 1〕増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物をスクリ一ユングする為の方法であって、以下の工程を含む方法；

( 1 ) KS R Pまたはその機能的断片を試験化合物に接触させる工程、

(2) 該試験化合物が、 K S R Pまたはその機能的断片に特異的に結合するか否かを判定する工程、および

(3) 上記（2) の工程において K S R Pまたはその機能的断片に特異的に結合する試験化合物を選択する工程。

〔2 2〕増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物をスクリ一ユングする為の方法であって、以下の工程を含む方法；

( 1 ) 配列番号 2のアミノ酸配列を有するタンパク質またはその機能的断片を試験化合物に接触させる工程、

(2) 該試験化合物が、該タンパク質またはその機能的断片に特異的に結合するか否かを判定する工程、および

(3) 上記（2) の工程において該タンパク質またはその機能的断片に特異的に結合する試験化合物を選択する工程。

〔2 3〕増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物をスクリ一ユングする為の方法であって、以下の工程を含む方法；

( 1 ) 配列番号 2のアミノ酸配列において、 1または 2以上のアミノ酸を欠失、置換または付加してなるアミノ酸配列を有し且つ以下の特徴 (i) 式 1化合物と結合する

(ϋ) 式 2化合物と結合しない

を有するタンパク質またはその機能的断片を試験化合物に接触させるェ程、

( 2) 該試験化合物が、該タンパク質またはその機能的断片に特異的に結合するか否かを判定する工程、および

( 3) 上記（2) の工程において該タンパク質またはその機能的断片に特異的に結合する試験化合物を選択する工程。

〔2 4〕増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物をスクリーユングする為の方法であって、以下の工程を含む方法；

( 1 ) 配列番号 3のアミノ酸配列を有するタンパク質またはその機能的断片を試験化合物に接触させる工程、

〔2 5〕増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物をスクリ一-ングする為の方法であって、以下の工程を含む方法；

( 1 ) 配列番号 3のアミノ酸配列において、 1または 2以上のアミノ酸を欠失、置換または付加してなるアミノ酸配列を有し、且つ以下の特徴 ( i) 式 1化合物と結合する

( i i) 式 2化合物と結合しない

( 2 ) 該試験化合物が、該タンパク質またはその機能的断片に特異的に結合するか否かを判定する工程、および

( 3 ) 上記（2 ) の工程において該タンパク質またはその機能的断片に特異的に結合する試験化合物を選択する工程。

〔2 6〕上記〔2 1〕〜〔2 5〕のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物。図面の簡単な説明

図 1は、各化合物の K S R P結合の特異性を調べた結果を示している。 K S R Pと特異的に結合する化合物を固定化した固相担体上には 1回目の固定化樹脂処理で速やかに K S R Pが結合する。スリンダクスルファィドを固定した樹脂以外の 4化合物を固定化した樹脂には K S R Pが結合した。発明を実施するための最良の形態 K S R P (KH— t y p e s p l i c i n g r e g u l a t o r y p r o t e i n)は、別名 F B P 2 (F U S E b i n d i n g p r o t e i n 2) とも称され、当初 c 一 my cの発現に重要な働きをする F B P (FU S E b i n d i n g r o t e i n) に類似したタンパク質として 1 9 9 6年に N I Hの D. L e v e n sによつて発見され（ J . B i o l . C e m. , 2 7 1 (4 9) , ρ . 3 1 6 7 9 - 3 1 6 8 7 ( 1 9 9 6))、その後、増殖作用に関与する c— s r cのスプラィシング ·バリアント成熟に必須なタンパク質として 1 9 9 7年に別グループによって別個に発見されたタンパク質である（G e n e & D e v e l o p m e n t , 1 1， . 1 0 2 3 - 1 0 3 6 ( 1 9 9 7 ))。また、近年では細胞をアポトーシスに導く際に重要となるカスパーゼー 3， 7の基質タンパク質として同定され（P r o t e i n & P e p t i d e L e t t ., 9 ( 6 )， p . 5 1 1 — 5 1 9 ( 2 0 0 2))、また J u r a k a t細胞を F a s抗原にてアポトーシスに導く際に関するプロテオーム解析においても顕著な変化を示すタンパク質として同定される（ J . B i o l . C h e m. , 2 7 6 ( 2 8 ) ， p . 2 6 0 44— 2 6 0 5 0 ( 2 0 0 1 )) 等、注目を集めているタンパク質である。より具体的には配列番号 2のァミノ酸配列で表わされる 7 1 1個のアミノ酸からなるタンパク質である（ァクセッション N o . NP— 0 0 3 6 7 6 )。本発明において K S R Pとしては、（i) 式 1化合物と結合し、（ii) 式 2化合物とは結合しない

という特徴を有するタンパク質であれば必ずしも配列番号 2のアミノ酸配列のみで表わされる必要はなく、配列番号 2のアミノ酸配列を有するタンパク質、配列番号 2のアミノ酸配列において、 1または 2以上のァミノ酸を欠失、置換または付加してなるアミノ酸配列を有するタンパク質であってもよい。より具体的には配列番号 2のアミノ酸配列と 6 0 % 以上、 7 0 %以上、 8 0 %以上、好ましくは 9 0 %以上、特に好ましくは 9 5 %以上の相同性を有するアミノ酸配列で表わされるタンパク質であり、配列番号 2のアミノ酸配列中、 4 0アミノ酸以上、好ましくは 7 0アミノ酸以上、特に好ましくは 1 0 0アミノ酸以上の連続したァミノ酸を含むタンパク質（ポリペプチド）であることがいっそう好ましい。本明細書中、「相同性」とは、二つのポリペプチド配列の間の配列相関性の程度を意味するものである。相同性は容易に算出することができる。二つのポリぺプチド配列間の相同性を測定する方法は数多く知られており、「相同性」（「同一性」とも言われる）なる用語は、当業者には周知である。二つの配列の相同性を測定するのに用いる一般的な方法には、 M a r t i n , J . B i s h o p ( E d . ) , G u i d e t o Hu g e C o m p u t e r s , A c a d e m i c P r e s s , S a n D i e o , ( 1 9 9 4 ) ; C a r i 1 1 o , H. &L i p m a n， D.， S I AM J . A p 1 i e d Ma t h., 4 8 : 1 0 7 3 ( 1 9 8 8 ) 等に開示されているものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。相同性を測定するための好ましい方法としては、試験する二つの配列間の最も大きな適合関係部分を得るように設計したものが挙げられる = このような方法は、コンピュータープログラムとして組み立てられているものが挙げられる。二つの配列間の相同性を測定するための好ましいコンピュータープログラム法としては、 G C G プログラムパッケージ (D e v e r e u x , J . e t a l . , N u c l e i c A c i d s R e s e a r c h , 1 2 ( 1 ) : 3 8 7 ( 1 9 8 4))、 B L A S T P、 F A S T A等が挙げられるが、これらに限定されるものでなく、当該分野で公知の方法を使用することができる。

さらに、本発明においてはスリンダク誘導体等の一連の N S A I D s のターゲットであり得るならば、（i) 式 1化合物と結合し、（ii) 式 2化合物とは結合しないという特徴を有する範囲内で K S R Pの断片であつてもよく、以下このような断片を K S R Pの機能的断片ともいう。機能的断片としては、具体的には、配列番号 3のアミノ酸配列で表わされるタンパク質や、（i) 式 1化合物と結合し、（ii) 式 2化合物とは結合しないという特徴を保持し且つ、配列番号 3のアミノ酸配列において、 1または 2以上のアミノ酸を欠失、置換または付加してなるアミノ酸配列からなるタンパク質等が挙げられる。

いずれの態様も、特段のことわりのない限り本発明における K S R P に包含される。

「特異的に結合する」とは、ァゴニストあるいはアンタゴニストに対する特異的受容体、基質に対する酵素、そして例えば F K 5 0 6 (リガンド）に対する F K 5 0 6結合タンパク質（ターゲット分子）や、ステロイドホルモンに対するステロイドホルモン受容体（例 = d e a m a t h a s o riと g l u c o c o r t i c o i d r e c e p t o rノ、抗がん剤 t r a p o x i nに対する H D A C等の関係に例示されるものであり、 K d、 K a等の数値として、競合実験等により確認することができる。実施例にて後述するが、具体的数値として表わす以外に電気泳動法等の視覚的手段により確認することもできる。

本発明は K S R P (配列番号 2のアミノ酸配列を有するタンパク質、配列番号 2のァミノ酸配列において、 1または 2以上のァミノ酸を欠失、置換または付加してなるァミノ酸配列を有し且つ（i ) 式 1化合物と結合し、（i i ) 式 2化合物とは結合しないという特徴を有するタンパク質等）およびその機能的断片（例えば配列番号 3のアミノ酸配列を有するタンパク質、配列番号 3のアミノ酸配列において、 1または 2以上のァミノ酸を欠失、置換または付加してなるアミノ酸配列を有し且つ（i ) 式 1化合物と結合し、（i i ) 式 2化合物とは結合しないという特徴を有するタンパク質等）に特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物を提供する。かかる化合物は新規な抗癌ターゲットである K S R P と結合することにより K S R Pの発現を制御し、および/またはその活性を制御することが可能であり、従って K S R Pが関与する種々の疾患の予防や治療に有用である。例えば卵巣癌や非小細胞癌、乳癌等への適用が報告されているタキソールも K S R Pと結合する（後述：実施例参照）。 K S R Pが関与する種々の疾患としては、上述したような従来の報告により、増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患等が例示されるが、 K S R Pがかかる疾患の.治療に有用な化合物のスクリ一ユングに利用可能なターゲットであるという報告はない。「増殖性疾患」とは、細胞の異常な増殖を特徴とし、その増殖が発症や病状の進行に関連していると考えられる疾患であり、例えば、家族性大腸腺腫、食道癌、小細胞肺癌、前立腺癌、乳癌、非小細胞性癌等が挙げられる。「炎症性疾患」とは、外因性あるいは内因性の急性あるいは慢性の疾患であり、急性疾患の場合には発熱、発赤、腫脹、疼痛および機能障害の 5主徴を伴う。「脳疾患」とは脳において観察される、外因性あるいは内因性の機能障害を意味する。

さらに、 K S R Pが、増殖性疾患、炎症性疾患おょぴ脳疾患等の新規の創薬ターゲットとなり得るという本発明において見出された知見によれば、直接 K S R Pと結合しなくても直接的あるいは間接的に作用して結果的に K S R Pの発現や活性を制御する化合物もまた増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患の治療に有用であるといえる。

本発明に有効成分として含められる化合物としては具体的には一般式 ( I ) または一般式（ I I ) で表わされる化合物またはその医薬上許容され得る塩が例示される。

(式中、 Xは

であり；

R Xは置換されていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいァリール基、置換アミド基または置換されていてもよいアミノ基であり；

R ₂〜R ₄は同一または異なって、水素原子、飽和もしくは不飽和の炭化水素基あるいは飽和もしくは不飽和の複素環基である（1 ₃ぉょぴ1 ₄は結合して環を形成してもよい）〕、但し以下の化合物は除く。

本明細書中、「飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基」とは、炭素数 3 乃至 1 8の飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基、具体的には、例えば、脂環式炭化水素基、芳香族炭化水素基等が挙げられる'。

該「脂環式炭化水素基」としては、例えば 3乃至 1 0個の炭素原子から構成される単環式または縮合多環式の基、具体的にはシク口アルキル基、シクロアルケニル基およびこれらと炭素数 6乃至 1 4のァリール基

(例えば、ベンゼン等）等との 2または 3環式縮合環等が挙げられる。該「シクロアルキル基」としては、例えばシクロプロピル、シクロプチノレ、シク口ペンチノレ、シク口へキシノレ等の炭素数 3乃至 6のシクロアノレキル基等が、該「シクロアルケ-ル基」としては、例えばシクロプロぺニル、シクロブテニル、シク口ペンテュル、シク口へキセニル等炭素数 3乃至 6のシクロアルケニル基等が挙げられる。

該「芳香族炭化水素基」としては、例えば 6乃至 1 8個の炭素原子から構成される単環式芳香族炭化水素基、縮合多環式芳香族炭化水素基等が挙げられ、具体的には、フエニル、 1—ナフチル、 2—ナフチル、 2 一インデュル、 2 —アンスリル等の炭素数 6乃至 1 4のァリール基が挙げられる。

本明細書中、「飽和もしくは不飽和の複素環基」とは、例えば窒素原子を 1〜 2個含む 5〜 6員単環式の基、窒素原子を 1〜 2個と酸素原子を 1個もしくは硫黄原子を 1個含む 5〜 6員単環式の基、酸素原子を 1個もしくは硫黄原子を 1個含む 5員単環式の基、窒素原子 1 〜 4個を含み、 6員環と 5または 6員環が縮合した二環式の基等が挙げられ、具体的には、例えば、ピリジル、チェニル、ォキサジァゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、ィソチアゾリル、ォキサゾリル、イソォキサゾリル、フリノレ、ピロリノレ、キノリノレ、キナゾリ二ノレ、プリ二ノレ、ビラゾリノレ、チォフエニル等が挙げられる。

「置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基または飽和もしくは不飽和の複素環基」の置換基としては、特に限定されないが、例えば、飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基（前述と同義）、飽和もしくは不飽和の複素環基（前述と同義）、ハロゲン原子（後述）、力ルポキシル基、置換アミド基（後述）、置換されていてもよい低級アルキル基（後述）等が挙げられる。これらの置換基は、該環状炭化水素基もしくは複素環基上に化学的に許容される範囲において置換される。ただし、置換基の数が 2個以上の場合は同一または相異なっていてもよい。好ましくは置換されていてもよい飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基 (前述と同義）および置換されていてもよい飽和もしくは不飽和の複素環基（前述と同義）からなる群より選択されるいずれか 1つの置換基（例えばメチルフエニル）と、ハロゲン原子（後述）、カルボキシル基、置換アミド基（後述）および置換されていてもよい低級アルキル基（後述）からなる群より選択されるいずれか 1つの置換基（例えばトリフルォロメチル）との 2個の置換基を有する。

「ハロゲン原子 j としては、例えばフッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。

「置換アミド基」としては、 N置換アミド基または N， N ' ジ置換ァミド基が挙げられ具体的には低級アルキル基（後述）で置換されたアミド基等が挙げられる。

本明細書中、「低級アルキル基」としては、例えば、炭素数 1乃至 6の直鎖状、分枝状または環状のアルキル基を示し、具体的にはメチル、ェチル、 n—プロピル、イソプロピル、ブチル、イソプチル、 s e c —ブチノレ、 t e r t—プチノレ、ペンチノレ、へキシノレ、シク口プロピノレ、シクロブチル等が挙げられる。「置換されていてもよい低級アルキル基」における「置換基」としては、カルボキシル基、置換ァミド基（前述と同義）、シァノ基、ハロゲン原子（前述と同義）等が挙げられる。

ベンゼン環 Bが有していてもよい 1乃至 4個の置換基は、化合物が K S R Pとの結合性を維持している、および/または K S R Pの発現を制御、 K S R Pの活性を制御し得る限りは特に限定されず、同一であっても異なっていてもよい。例えば、飽和もしくは不飽和の炭化水素基（後述）あるいは飽和もしくは不飽和の複素環基（前述と同義）である。本明細書中、「ァリール基」としては、前述の「芳香族炭化水素基」と同様なものが挙げられる。「置換されていてもよいァリール基」における「置換基」としては、特に限定されないが、例えば、飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基（前述と同義）、飽和もしくは不飽和の複素環基（前述と同義）、ハロゲン原子（前述と同義）、アミノ基、カルボキシル基、置換アミド基（前述と同義）、置換されていてもよい低級アルキル基（前述と同義）等が挙げられる。「置換されていてもよいアミノ基」における「置換基」としては、低級アルキル基（前述と同義）、低級アルカノィル基（例えばホルミル、ァセチル、プロピオニル等の炭素数 1乃至 6のアルカノィル基）等が挙げられる。

「飽和もしくは不飽和の炭化水素基」としては、飽和もしくは不飽和の鎖式炭化水素基または飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基（前述と同義）等が挙げられる。「飽和もしくは不飽和の鎖式炭化水素基」としては例えば、炭素数 1乃至 1 0の直鎖状または分枝状鎖式炭化水素基等を示し、具体的には、例えばアルキル基、アルケニル基、アルキニル基等が挙げられる。これらの中で特にアルキル基が好ましい。該「アルキル基」としては、例えばメチル、ェチル、 n —プロピル、イソプロピル、ブチノレ、ィソプチノレ、 s e c—ブチノレ、 t e r tーブチノレ、 n—ペンチノレ、イソペンチノレ、ネオペンチノレ、 n 一へキシノレ、ィソへキシノレ等の炭素数 1乃至 1 0のアルキル基等が挙げられる。該「アルケニル基」としては、例えばビニノレ、 1 —プロぺニノレ、ァリノレ、イソプロぺニノレ、 1 - ブテュル、 2 —ブテ-ノレ、 3 —ブテニノレ、イソブテニノレ、 s e c —プテニル等の炭素数 2乃至 1 0のアルケニル基等が挙げられる。該「アルキニル基」としては、例えばェチュル、 1 一プロピエル、プロパルギル等の炭素数 2乃至 1 0のアルキニル基等が挙げられる。

R ₃および R ₄が結合して形成してもよい環とは、具体的には飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基（前述と同義）または飽和もしくは不飽和の複素環基（前述と同義）であり、当該環は、ハロゲン原子（前述と同義）、カルボキシル基、置換アミド基（前述と同義）、置換されていてもよい低級アルキル基（前述と同義）等で置換されていてもよい。

本発明の一般式（ I ) または一般式（ I I ) で表わされる化合物は、その基本骨格あるいは置換基の種類に基づく特徴を利用し、種々の公知の合成方法を適用して製造することができる。例えばアルキル化、ァシル化、アミノ化、イミノ化、ハロゲン化、還元、酸化、縮合等が挙げられ、通常当分野で用いられる反応または方法が利用できる。

本発明の一般式（ I ) または一般式（ I I ) で表わされる化合物等の K S R Pまたはその機能的断片に結合し得る化合物は、ヒトを含め、サノレ、ゥマ、ゥシ、ヒッジ、ィヌ、ネコ、ゥサギ、マウス、ラット、モルモットなどの哺乳動物に対して優れた抗癌作用、抗炎症作用および Zまたは脳機能障害改善作用を有し、従って抗癌剤等の増殖性疾患治療剤、炎症性疾患治療剤ならびに脳疾患治療剤として有用である。対象となる疾患については上記した通りである。

同様に K S R Pまたはその機能的断片に結合し得るスプナールも、各種哺乳動物に対して優れた抗癌作用、抗炎症作用および/または脳機能障害改善作用を有し、従って抗癌剤等の増殖性疾患治療剤、炎症性疾患治療剤ならびに脳疾患治療剤として有用である（対象となる疾患については上記した通りである）。特にスプナ一ルは抗癌剤として好適である。以下一般式（ I ) や一般式（ I I ) で表わされる化合物、スプナール、それ以外の K S R Pまたはその機能的断片に結合し得る化合物を総称して本発明化合物と称することもある。

本発明化合物は、医薬上許容され得る塩を形成していてもよく、該塩としては酸付加塩、例えば無機酸塩（例えば、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩等）、有機酸塩（例えば、酢酸塩、トリフルォロ酢酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、プロピオン酸塩、クェン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、シユウ酸塩、メタンスルホン酸塩、 p — トルエンスルホン酸塩等）等が挙げられる。

尚、本発明化合物またはその塩は水和物等の溶媒和物であってもよレ、。本発明化合物が、増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療薬として使用される場合には、一般的な医薬製剤として調製され、経口または非経口的に投与される。経口的に投与する場合、通常当分野で用いられる投与形態で投与することができる。非経口的に投与する場合には、局所投与剤（経皮剤等）、直月昜投与剤、注射剤、経鼻剤等の投与形態で投与することができる。経口剤または直腸投与剤としては、例えばカプセル、錠剤、ピル、散剤、ドロップ、カシエ剤、座剤、液剤等が挙げられる。注射剤としては、例えば、無菌の溶液又は懸濁液等が挙げられる。局所投与剤としては、例えば、クリーム、軟膏、ローション、経皮剤（通常のパッチ剤、マトリクス剤）等が挙げられる。

上記の剤形は当分野で通常行われている手法により、薬学的に許容される賦形剤、添加剤とともに製剤化され得る。薬学的に許容される賦形剤、添加剤としては、担体、結合剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。

薬学的に許容される担体としては、例えば、炭酸マグネシウム、ステ了リン酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、ぺクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウム力ノレボキシメチルセルロース、低融点ワックス、カカオバター等が挙げら; る。

さらに、錠剤は必要に応じて通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、腸溶性コーティング錠、フィルムコーティング錠あるいは二層錠、多層錠とすることができる。散剤は、薬学的に許容される散剤の基剤と共に製剤化される。基剤としては、タルク、ラタトース、澱粉等が挙げられる。ドロップは水性又は非水性の基剤と一種またはそれ以上の薬学的に許容される拡散剤、懸濁化剤、溶解剤等と共に製剤化できる。カプセルは、有効成分となる化合物を薬学的に許容される担体と共に中に充填することにより製造できる。当該化合物は薬学的に許容される賦形剤と共に混合し、または賦形剤なしでカプセルの中に充填することができる。カシ剤も同様の方法で製造できる。本発明を座剤として調製する場合、植物油（ひまし油、オリープ油、ピーナッツ油等）や鉱物油（ワセリン、白色ヮセリン等）、口ゥ類、部分合成もしくは全合成グリセリン脂肪酸ェステル等の基剤と共に通常用いられる手法によって製剤化される。

注射用液剤としては、溶液、懸濁液、乳剤等が挙げられる。例えば、水溶液、水一プロピレングリコール溶液等が挙げられる。液剤は、水を含んでも良い、ポリエチレンダリコールおよび zまたはプロピレングリコールの溶液の形で製造することもできる。

経口投与に適切な液剤は、有効成分となる化合物を水に加え、着色剤、香料、安定化剤、甘味剤、溶解剤、増粘剤等を必要に応じて加え製造することができる。また経口投与に適切な液剤は、当該化合物を分散剤とともに水に加え、粘重にすることによつても製造できる。増粘剤としては、例えば、薬学的に許容される天然または合成ガム、レジン、メチルセノレロース、ナトリゥムカノレボキシメチノレセノレロースまたは公知の懸濁化剤等が挙げられる。

局所投与剤としては、上記の液剤おょぴ、クリーム、エアロゾル、スプレー、粉剤、ローション、軟膏等が挙げられる。上記の局所投与剤は、有効成分となる化合物と薬学的に許容される希釈剤および担体と混合することによって製造できる。軟膏およびクリームは、例えば、水性または油性の基剤に増粘剤および/またはゲル化剤を加えて製剤化する。該基剤としては、例えば、水、液体パラフィン、植物油等が挙げられる。增粘剤としては、例えばソフトパラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリノレアルコール、プロピレングリコーノレ、ポリエチレングリコール、ラノリン、水素添加ラノリン、蜜蠟等が挙げられる。局所投与剤には、必要に応じて、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピノレ、クロ口タレゾール、ベンザノレコニゥムクロリド等の防腐剤、細菌増殖防止剤を添加することもできる。ローションは、水性又は油性の基剤に、一種類またはそれ以上の薬学的に許容される安定剤、懸濁化剤、乳化剤、拡散剤、増粘剤、着色剤、香料等を加えることができる。投与量、投与回数は使用する化合物の種類、患者の症状、年齢、体重、投与形態等によって異なり、それらに応じて適宜設定する。

本発明はまた、 K S R Pまたはその機能的断片（各用語の定義は上述の通り）と特異的に結合し得るか否かを指標として、 K S R Pが関与する種々の疾患、例えば増殖性疾患、炎症性疾患、脳疾患等の疾患の治療に有用な化合物のスクリ一ユングを行うことができる。ここで K S R P またはその機能的断片は、精製あるいは未精製のタンパク質（ポリぺプチド）またはその（機能的）断片として用いることもできるし、細胞内で発現した状態で使用することもできる。 K S R Pまたはその（機能的）断片は、（1 )それらを産生する細胞の培養物または組織を原料として単離精製する方法、（2)化学的に合成する方法または（3)遺伝子組換え技術等により K S R Pまたはその（機能的）断片を発現するように操作された細胞から精製する方法等の公知手法を適宜用いることによって取得することができる。

本発明の K S R Pまたはその（機能的）断片の単離精製は、例えば以下のようにして行うことができる。すなわち K S R Pまたはその（機能的）断片を発現している組織、あるいは適当な液体培地中で K S R Pまたはその（機能的）断片を発現している細胞を培養して得られる培養物から公知の方法で抽出、精製される。当該抽出、精製の方法は目的生成物の存在する画分に応じて適宜公知の手法が用いられる。

具体的には次のようにして行なわれる。まず、組織あるいは培養物をそのまま濾過又は遠心分離等の常法に付して組織もしくは細胞あるいは上清を回収する。細胞中に所望するタンパク質が蓄積されている場合には、当該回収した細胞を適当な緩衝液剤中に懸濁して、さらに界面活性剤を適当な濃度で加えて膜を可溶化する。界面活性剤としてはドデシル硫酸ナトリゥム（ S D S )、セチルトジメチルアンモニゥムブロマイド（C T A B ) 等が挙げられるが、これらは強力なタンパク質変性作用を有するので、タンパク質が生物活性を持つように折り畳まれるためには、例えば T r i t o n X— 1 0 0等の穏やかな非イオン性界面活性剤を用いることが好ましい。次いで得られる粗抽出液を、必要ならば界面活性剤の存在下で、一般に用いられる方法を適宜組み合わせることによって該タンパク質またはその機能的断片を単離精製する。塩析、溶媒沈澱法等の溶解度を利用する方法、透析、限外濾過、ゲル濾過、 S D S— P A G E等の分子量の差を利用する方法、イオン交換ク口マトグラフィ一等の荷電を利用する方法、ァフィ二ティークロマトグラフィ一等の特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィー等の疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動等の等電点の差を利用する方法等が挙げられる。より具体的には、例えば、減圧濃縮、凍結乾燥、常用の溶媒による抽出、 p H調整、陰イオン交換樹脂または陽イオン交換樹脂、非イオン性吸着樹脂等の常用の吸着剤による処理、結晶化、再結晶化等の慣用の方法によって分離、精製することができる。

化学合成による本発明の K S R Pまたはその（機能的）断片の製造は、例えば配歹 ίΐ番号 2あるいは 3に示されるアミノ酸配列情報を基に、ぺプチド合成機を用いて合成あるいは半合成することにより行うことができる。

また、遺伝子組換え技術等により K S R Pまたはその（機能的）断片を発現するように操作された細胞から取得する場合には、具体的には以下のよう〖こして行う。

まず、 K S R Pまたはその機能的断片をコードする遺伝子を機能的に含有する発現ベクターを調製する。

K S R Pまたはその機能的断片をコードする遺伝子はいかなる方法で得られるものであってもよい。例えば、 m R N Aから調製される相補 D N A ( c D N A ) . ゲノミックライブラリーから調製されるゲノミック D NA、化学的に合成される D N A、 RN A又は D NAを錶型として P C R法により増幅させて得られる DN A及びこれらの方法を適当に組み合わせて構築される DNA等が含まれる。例えば配列番号 1 (ァクセッシヨン N o . NM_0 0 3 6 8 5 ) に示される塩基配列から実質的になる D N Aの全部または一部を含む D N A、配列番号 1の塩基番号 4 7 2〜 2 2 2 6から実質的になる DN Aの全部または一部を含む DN A等が例示される。

ここで、「実質的になる DNA」とは、上記特定の塩基配列からなる D N Aに加えて、ストリンジェントな条件（本発明では、塩基配列において約 6 0 %以上、好ましくは約 8 0 %以上、より好ましくは約 90 %以上の相同性を有する D N Aがハイブリダイズし得る条件をいい、ストリンジエンシーはハイプリダイズ反応や洗浄の際の温度、塩濃度等を適宜変化させることにより調節することができる）において、上記の特定塩基配列からなる D N Aとハイブリダィズし得る塩基配列からなる D N A を意味する。ストリンジェントな条件は、所望する相同性やオリゴヌクレオチドの長さ等をもとに適宜当分野で利用されている計算式に当てはめて算出することができる。例えば、 4 2 °Cでのハイブリダィゼーション、及ぴ 1 X S S C、 0. 1 %の S D Sを含む緩衝液による 4 2 °Cでの洗浄処理や、 6 5 °Cでのハイブリダイゼーション、及ぴ 0. 1 X S S C， 0. 1 %の S D Sを含む緩衝液による 6 5°Cでの洗浄処理等が例示される。

得られた D N Aを原核細胞および/または真核細胞の各種の宿主内で複製保持または自律増殖できるプラスミドベクターおよびファージべクター等に適当な制限酵素部位を利用して揷入することによって KS R P またはその機能的断片をコードする遺伝子を機能的に含有する発現べクターを得ることができる。

ここで「機能的に」とは、そのベクターに適合する宿主細胞内で該遺伝子（DNA) が転写され、それにコードされるタンパク質が産生され得るように該遺伝子が配置されていることを意味する。好ましくは、プ口モーター領域、開始コドン、 K S R Pまたはその機能的断片をコードする遺伝子、終止コドンおよびターミネータ一領域が連続的に配列された発現カセットを有するベクターである。形質転換体選択のためには選択マーカー遺伝子をさらに含有することが好ましい。

例えば哺乳動物細胞を形質転換する場合、動物ウィルス、例えば S V 4 0、 R S V、 MM L V等のプロモーターおよびポリアデニル化シグナルが制限酵素部位、好ましくはマルチクローユング部位を介して連結したプラスミドに、 p S V 2— n e o、 p S V 2— d h f r等のプラスミド由来の選択マーカー遺伝子（ネオマイシン耐性遺伝子、ジヒドロ葉酸還元酵素等）.を挿入したプラスミドが使用できる。

宿主細胞は使用する発現べクターに適合し、形質転換され得るものであれば特に限定されず、本発明の技術分野において通常使用される天然細胞或いは人工 ή勺に樹立された組換え細胞等種々の細胞が利用できる。具体的には、大 S昜菌、枯草菌等の細菌、酵母等の真菌類、動物細胞または昆虫細胞等が例示される。好ましくは哺乳動物細胞、特にラット由来細胞、ハムスター由来細胞（C HO、 B HK等）、マウス由来細胞（C O P、 L、 C 1 2 7 、 S p 2 0、 N S— 1、 N I H T 3等）、サル由来細胞（C O S l、 C O S 3、 C O S 7、 C V 1、 V e l o等）およぴヒト由来細胞（H e 1 a、 2倍体線維芽細胞由来細胞、ミエローマ細胞、 N a m a 1 w a , J u r k a t細胞等）が挙げられる。

発現べクターの宿主細胞への導入は従来公知の方法を用いて行うことができる。'例えば、哺乳動物細胞に導入する場合、リン酸カルシウム共沈澱法、プロトプラスト融合法、マイクロインジェクション法、エレクトロポレーション法、リソソーム法等が挙げられる。

K S R Pまたはその機能的断片は上記のごとく調製される発現べクタ一を含む形質転換体を培養することによっても製造することができる。培地は、宿生細胞（形質転換体）の生育に必要な炭素源、無機もしくは有機窒素源を含んでいることが好ましい。炭素源としては、例えばダルコース、デキストリン、可溶性デンプン、ショ糖等が、窒素源としては、例えばアンモニゥム塩、硝酸塩、アミノ酸、コーンスチープ ' リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、馬鈴薯抽出液等が例示される。また所望により他の栄養素〔例えば、無機塩（塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウム等）、ビタミン類、抗生物質 (テトラサイクリン、ネオマイシン、カナマイシン、アンピシリン等）〕を含んでいてもよヽ。

培養は当分野において知られている方法により行われる。培養条件はタンパク質の発現が可能な条件であって、例えば温度、培地の p Hおよび培養時間は当該タンパク質が大量に生産されるように適宜選択される _c 例えば、宿主が動物細胞である場合、培地としては例えば約 5〜 2 0 % のゥシ胎児血清（F C S ) を含む最小必須培地（M E M)、ダルベッコ変法イーグル培地（D M E M)、 R P M I — 1 6 4 0培地、 1 9 9培地等を用いることができる。培地の p Hは約 6〜 8であることが好ましく、培養は通常 3 0〜 4 0 °Cで約 1 5〜 7 2時間行われ、必要により通気ゃ攪拌を行うこともできる。

本発明の K S R Pまたはその機能的断片は上記培養により得られる培養物から、前述の S R Pまたはその機能的断片を発現している細胞あるいは組織からの抽出 ·単離'精製と同様にして採取することができる。かくして得られた K S R Pまたはその機能的断片と、試験化合物との接触処理は、通常当分野で実施されている結合実験に準じて行うことができる。具体的には K S R Pまたはその機能的断片、あるいは試験化合物のいずれかを固相担体に固定化し、 K S R Pまたはその機能的断片を固定化した場合には試験化合物を含有する溶液を、試験化合物を固相担体に固定化した場合には K S R Ρまたはその機能的断片を含有する溶液 (精製タンパク質溶液あるいは細胞抽出液や組織抽出液などの粗精製タンパク質溶液）を、該固相担体に接触させる。カラム法やバッチ法等が利用できる。

試験化合物が K S R Ρまたはその機能的断片に特異的に結合するか否かを判定する工程は、試験化合物と K S R Ρまたはその機能的断片とを接触させる工程をどのようにして行ったかによつて適宜変更し得るが、例えば試験化合物が固定化された固相担体（例えばビーズ樹脂）を充填してなるカラムを用いた場合、続く K S R Pまたはその機能的断片を含有する溶液（試料）の添加により、両者の間に特異的な親和性がある場合には K S R Ρ分子が固相担体上に結合する（特異的な親和性がない場合には結合しない）。結合した K S R Ρまたはその機能的断片を緩衝液の極性を変える、あるいは過剰の試験化合物をさらに加える等の処理によつて固相上から解離させ、その後同定したり、あるいは固相上の試験化合物と結合した状態でそのまま界面活性剤等によって抽出して同定したりすることもできる。同定方法としては具体的には電気泳動法、免疫学的反応を用いたィムノプロッティングゃ免疫沈降法、クロマトグラフィ一、マススぺクトラム、アミノ酸シーケンス、 N M R等の公知の手法により、またこれらの方法を組み合わせて実施する。 K S R Pまたはその機能的断片が固相上に捕捉されるかあるいは力ラムの素通り画分中に含まれるか否か、あるいはその程度等を測定することによって、試験化合物が K S R Ρに特異的に結合し得るか否かを判定し、結合する化合物を選択する。

また、本工程は自動化されていてもよい。例えば 2次元電気泳動で得られた種々の分子のデータを直接読み取り、既存のデータベースに基づいて分子の同定を行うことも可能である。

さらに、 K S R Ρまたはその機能的断片を細胞内で発現した状態で使用する場合には、 R I標識や蛍光標識等の各種のラベリング技術を駆使して K S R Pまたはその機能的断片と試験化合物との結合の有無、結合の程度を測定することもできる。本発明のスクリ一ユング方法における「KS RPまたはその機能的断片と試験化合物との接触」にはこのような態様も含まれる。細胞と試験化合物との接触条件は使用する細胞や K S R Pまたはその機能的断片の細胞内での発現状況等の要因により適宜設定される。また、 K S R Pまたはその機能的断片が細胞内で発現しているか否かは抗体等を用いて予め確認しておくことが好ましい。実施例

以下、製造例、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定されるものではない。

製造例 1 ：スリンダクスルフアイド固定化樹脂（A) の合成

TO Y Oパール (A F— Am i n o— 6 5 0 M) (6 00 l , 6 0 ^ m o 1 ； TO SHO、 C a t . NO= 0 8 0 3 9)、スリンダクスノレファイド（20. 4 m g , 6 0 w m o 1 ; S I GMA, C a t . NO. = S - 3 1 3 1 ), WS CD ( 1 1. 6 ^ 1 , 6 6 /z m o l ; (株）ぺプチド研究所、 C a t . N P = 1 0 2 0 ;水溶性カルボジィミド）、 HO B t ( 9. 7 m g , 7 2 πι ο 1 ; 1—ヒドロキシべンゾトリアゾール）をカロえ、室温にて一昼夜攪拌した。樹脂を DMF (ジメチルホルムァミド）にて 5回洗浄後、ニンヒドリンテストを行った結果、収率 9 3 %にて目的の化合物を得た。

引き続き、 2 0 %無水酢酸 DMF溶液 5 m 1 を加え 30分間室温にて攪拌し、残りのアミノ基をァセチル基にてキヤッビングした。 2 0 %ェタノール溶液 5 m 1 にて洗浄し、目的の化合物（A) を得た。

製造例 2 ：スリンダク固定化樹脂（B) の合成

(B)

TOYOパーノレ（AF— Am i n o) (6 0 0 1， 6 0 ju m o l )、スリンダク（ 2 1 . 4m g， 6 0 μ m o 1 ； S I GMA C a t . NO = S— 8 1 3 9 )、 WS.CD ( 1 1. 6 μ 1 , 6 6 m o l )、 HO B t (9. 7 m g , 7 2 m o 1 ) を加え、室温にて一昼夜攪拌した。樹脂を DM Fにて 5回洗浄後、ニンヒドリンテストを行った結果、収率 9 2 % にて目的の化合物を得た。

引き続き、 2 0 %無水酢酸 DMF溶液 5 m 1 を加え 3 0分間室温にて攪拌し、残りのアミノ基をァセチル基にてキヤッビングした。 2 0 %ェタノール溶液 5 m 1 にて洗浄し、目的の化合物（B) を得た。

製造例 3 ：スリンダクスルホン固定化樹脂（C) の合成

(C)

T O Y Oパール（A F— A i n o ) ( 6 0 0 μ 1 , 6 0 μ τα ο 1 ), スリンダクスノレホン（ 2 2. 3 m g , 6 0 i m o l ； S I GMA C a t . NO = S _ 1 4 3 8)、 WS C D ( l l . 6 μ \ , 6 6 m o 1 ), HO B t ( 9. 7 m g , 7 2 z m o l ) を加え、室温にて一昼夜攪拌した。樹脂を DMFにて 5回洗挣後、ニンヒドリンテストを行った結果、収率 8 7 %にて目的の化合物を得た。

引き続き、 2 0。/。無水酢酸 DMF溶液 5 m 1 を加え 3 0分間室温にて攪拌し、残りのアミノ基をァセチル基にてキヤツビングした。 2 0 %ェタノール溶液 5 m 1にて洗浄し、目的の化合物（C) を得た。

製造例 4 ：セレコキシプ誘導体固定化樹脂（D— 2 ) の合成

(D— 1) (D-2)

T O YOパール（A F— Am i n o )、化合物 D— 1 ( J . M e d . C h e m. 1 9 9 7 , 4 0， 1 3 4 7 — 1 3 6 5の記載に従い合成）（2 1 . 4 m g , 6 0 1110 1 )、 W S C D ( 1 1 . 6 ^ 1 , 6 6 / m o l )、 H O B t (9. 7 m g , 7 2 ^ m o l ) を加え、室温にて一昼夜攪拌した。樹脂を DMFにて 5回洗浄後、ニンヒドリンテストを行った結果、収率 9 2 %にて目的の化合物を得た。

引き続き、 2 0 %無水酢酸 DMF溶液 5 m 1 を加え 3 0分間室温にて攪拌し、残りのアミノ基をァセチル基にてキヤッビングした。 2 0 %ェタノール溶液 5 m 1 にて洗浄し、目的の化合物（D— 2 ) を得た。

製造例 5 ：タキソール固定化樹脂（E) の合成

'タキソー Jレ

タキツーゾレ

(E) タキソール（ 3 5 m g , 4 1 ^ m o 1 ； WA K O , C a t . NO = 1 6 3 - 1 8 6 1 4 ) をァセトニトリル（ 2 m l ) に溶解し、 0でに冷却した後、フォスゲン/ トノレェン溶液（ 1. 2 4 mm o 1 / m 1 、 3. 3 m l ) 及ぴジィソプロピルェチルァミン（ 4 2 1 ， 2 4 0 ^ m o 1 ) を加えた。反応液を室温で 1時間攪拌した後、溶媒を減圧留去した。残渣をァセトニトリルに溶角？し、この溶液を TOY Oパール（T S K g e 1 AF— a m i n o ; 1 0 0 μ 1 中に 0. O l mm o l のァミンが存在） 1 0 0 w 1 に加えて、更にジイソプロピルェチルァミン（4 2 1 , 2 4 0 m 0 1 ) を加えて終夜室温で振とうした。反応終了後、樹脂をァセトニトリル、蒸留水の順に十分に洗浄した後、飽和炭酸水素ナトリゥム水（ 1. 2 m l ) を加えて室温で 3 0分間振とうし、その後、樹脂を蒸留水、ァセトニトリの順に十分に洗浄した。ニンヒドリンテストよりタキソールの導入率は約 7 5 %であった。この樹脂に無水酢酸 ZD MF ( 1 / 4 ) の混合溶液（ 1. O m l ) を加えて室温で 3 0分間振とうした。反応終了後、樹脂を DMF及び 2 0エタノール水で十分に洗浄してタキソール固定化樹脂（E) を得た。

実施例 1

( 1— 1 ) ラット脳ライセートの調製

ラットの脳（ 2. 4 g ) を混合液 A ( 2 5 mM T r i s —HC l H 8. 0 , 0. 5 % Tw e e n 2 0 , 3 0 0 / M D C C ( 2 4 m l ； N, N—ジェチルジチォカルバメートナトリウム））に混ぜ、ホモジネートを作成し、 9， 0 0 0 r p mで 1 0分間遠心分離した。遠心分離上清を取り、 5 0 , 0 0 0 r p mで更に 3 0分間遠心分離した。こうして得られた上清をライセートとして使用した。なお、実験はすべて 4°Cあるいは氷上で行った。

( 1 - 2) 結合実験

製造例 1〜 5で調製した各試験^ f匕合物が固定化された固定化樹脂および実施例 1 ( 1— 1 ) で調製したラット脳ライセートを用い、下記に示す手順で結合実験を行った。

樹脂（ 1 0 μ 1 ) とライセート（ 1 m l ) を 4°Cで約 1時間、静かに振とうした。その後、.遠心分離操作を行い、各々の上澄みを注意深く採集した。そして、各上澄み液を再びフレッシュな化合物結合樹脂（ 1 0 β 1 ) と混合した。この時、分離した化合物結合樹脂を 1回目の結合実験樹脂として 4 °Cにて静かに保存しておく。 3時間ほど静かに撹拌した後に、遠心分離操作を行い、上澄み液を除去した。こうして 2回目の結合実験で得られた化合物結合樹脂と 1回目で得られた樹脂とを混合液 A にて 5回程度丁寧に洗浄し、樹脂上に結合するタンパク質以外を出来る限り除いた。こうして得られた各 f匕合物結合樹脂に 2 5 1 の S D S用 l o a d i n g b u f f e r ( n a k a 1 a ι C a t . N O = 3 0 5 6 6— 2 2、電気泳動用 s a m p l e b u f f e r s o 1 u t i o n w i t h 2— ME ( 2— m e r c a p t o e t h a n o 1 ) ( 2 x ) f o r SD S PAGE) を加え、 2 5 で 1 0分間撹拌した。こうして得られたサンプル液を市販の S D Sゲル（B i o R a d r e a d y G e l J , 1 5 % S D S， C a t . NO= 1 6 1 - J 3 4 1 ) で分離し、その S D Sゲルを解析した（図 1 )。 1回目で得られた結合樹脂上に結合するタンパク質を含むサンプル液の電気泳動像（図 1中、便宜上（一）と標記）、および 2回目で得られた結合樹脂上に結合するタンパク質を含むサンプル液の電気泳動像（図 1中、便宜上（+ ) と標記）とを比較した。

その結果、スリンダクスルファイドを固定した樹脂以外の 4化合物を固定化した樹脂に MAR T A 1 (K S R Pと高い相同性を有するラットのタンノク質。 h o mo l o g y = 9 8 %。 J . N e u r o c h e m., 8 2 ( 5), 1 0 3 9 - 4 6 ( 2 00 2 )) が結合し、しかもその結合は、化合物結合樹脂との 1回目の結合実験で顕著に確認され、 2回目の結合実験では殆ど観察されないことから特異的な結合であることが示された _c なお、宿主細胞に発現させたヒト型の K S R Pタンパク質（部分タンパク質 1 2 7— 7 1 1 ；配列番号 3) を用いた場合にも同様の結果を得ることが出来た。産業上の利用可能性

これまで得られてきた N S A I D s誘導体が元来抗炎症作用を指標としスクリーニングされ創出されてきたことから、より抗癌作用と一致した挙動を示す K S R Pに対する作用を指標として再スクリーニングすることにより、抗炎症作用のみならず癌に対しても有用な化合物を得ることができる。本出願は、日本で出願された特願 2 0 0 3— 4 0 1 1 3 2 (出願日： 2 0 0 3年 1 2月 1 日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims

請求の範囲

1. 一般式（ I ) または一般式（ I I ) で表わされる化合物またはその医薬上許容され得る塩：

(式中、 xは

であり；

環 Aは、置換されていてもよい、飽和もしく ίま不飽和の環状炭化水素基または飽和もしくは不飽和の複素環基であり；

環 Βは、さらに 1乃至 4個の置換基を有してレヽてもよいベンゼン環であり S

R！は置換されていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいァリール基、置換アミド基または置換されていてもよいアミノ基であり；

R _¾〜R₄は同一または異なって、水素原子、飽和もしくは不飽和の炭化水素基あるいは飽和もしくは不飽和の複素環基である（1 ₃ぉょび1 ₄は結合して環を形成してもよい）〕、但し以下の化合物は除く。

2 . 式（ I )で表わされる化合物が式（ I ' ) で表わされる化合物である、請求の範囲 1記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩：

(式中、環 A ' は、置換されていてもよい飽和もしくは不飽和の複素環基であり；それ以外の記号は請求の範囲 1 と同義である）。

3 . 一般式（ I ' ) 中、環 A ' 力飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基、飽和もしくは不飽和の複素環基、カルボキシル基、置換アミド基および置換されていてもよい低級アルキル基からなる群より選択される少なくとも 1つの置換基で置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基または飽和もしくは不飽和の複素環基である、請求の範囲 2 記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩。

4 . 一般式（ I ' ) 中、環 A ' 力 S、飽和もしくは不飽^！の環状炭化水素基、および飽和もしくは不飽和の複素環基からなる群より選択されるいずれか 1つの置換基と、カルボキシル基、置換アミド基および置換されていてもよい低級アルキル基からなる群より選択されるいずれか 1つの置換基を有する飽和もしくは不飽和の複素環基である、請求の範囲 2記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩。

5 . —般式（ I I ) 中、 R ₃および R ₄が結合して汗成される環が、カルボキシル基、置換アミド基および置換されていてもよい低級アルキル基からなる群より選択される少なくとも 1つの置換基を有していてもよい飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基または飽和もしくは不飽和の複素環基である、請求の範囲 1記載の化合物またはその医薬上許容され得る

6 . —般式（ I I ) 中、 R ₃および R ₄が結合して形成される環が、カルボキシル基、置換アミド基および置換されていてもよい低級アルキル基からなる群より選択される少なくとも 1つの置換基を有していてもよい飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基である請求の範囲 5記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩。

7 . 飽和もしくは不飽和の環状炭化水素基がインデンである、請求の範囲 6記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩。

8 . 請求の範囲 1〜 7のいずれか 1項に記載の化合物またはその医薬上許容され得る塩を有効成分として含有する医薬組成物。

9 . 増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療用である、請求の範囲 8記載の医薬組成。

1 0 . 配列番号 2のアミノ酸配列を有するタンパク質と特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物。

1 1 . 配列番号 2のアミノ酸配列において、 1または 2以上のアミノ酸を欠失、置換若しくは付加してなるアミノ酸配列を有し且つ以下の特徴を有するタンパク質と特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物；

(i) 式 1化合物と結合する

(ii) 式 2化合物と結合しない

1 2. 配列番号 3のアミノ酸配列を有するタンパク質と特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物。

1 3. 配列番号 3のアミノ酸配列において、 1または 2以上のアミノ酸を欠失、置換若しくは付加してなるアミノ酸配列を有し且つ以下の特徴を有するタンパク質と特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物；

(i) 式 1化合物と結合する

(ii) 式 2化合物と結合しない

4. 増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療用である、請求の範囲 1 0〜 1 3のいずれか 1項に記載の医薬組成物。

1 5. 増殖性疾患が、家族性大腸腺腫症、食道瘙、小細胞肺癌、前立腺癌、乳癌、非小細胞性癌および卵巣癌からなる群より選択される少なくとも 1種である、請求の範囲 1 4記載の医薬組成物。

1 6. K S R Pと特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物。

1 7. K S R Pの発現を制御する化合物を有効成分として含有する医薬組成物。

1 8. KS RPの活性を制御する化合物を有効成分として含有する医薬組成物。

1 9. 増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療用である、請求の範囲 1 6〜 1 8のいずれか 1項に記載の医薬組成物。

2 0. 増殖性疾患が、家族性大腸腺腫症、食道瘙、小細胞肺癌、前立腺癌、乳癌、非小細胞性癌および卵巣癌からなる群より選択される少なくとも 1種である、請求の範囲 1 9記載の医薬組成物。

2 1. 増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物をスクリーニングする為の方法であって、以下の工程を含む方法；

( 1 ) K S R Pまたはその機能的断片を試験化合物に接触させる工程、

( 2) 該試験化合物が、 KS R Pまたはその機能的断片に特異的に結合するか否かを判定する工程、および

( 3) 上記（2) の工程において KS R Pまたはその機能的断片に特異的に結合する試験化合物を選択する工程。

2 2. 増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物をスクリ一エングする為の方法であって、以下の工程を含む方法；

( 1 ) 配列番号 2のァミノ酸配列を有するタンパク質またはその機能的断片を試験化合物に接触させる工程、

2 3. 増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物をスクリ一ユングする為の方であって、以下の工程を含む方法； .

( 1 ) 配列番号 2のアミノ酸配列において、 1または 2以上のアミノ酸を欠失、置換または付加してなるアミノ酸配列を有し且つ以下の特徴

(i) 式 1化合物と結合する

(ii) 式 2化合物と結合しない

2 4. 増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物をスクリ一二ングする為の方法であって、以下の工程を含む方法；

( 3) 上記（2 ) の工程において該タンパク質またはその機能的断片に特異的に結合する試験化合物を選択する工程。

2 5. 増殖性疾患、炎症性疾患および脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物をスクリ一二ングする為の方法であって、以下の工程を含む方法；

( 1 ) 配列番号 3のアミノ酸配列において、 1 または 2以上のアミノ酸を欠失、置換または付加してなるアミノ酸配列を有し、且つ以下の特徴

(i) 式 1化合物と結合する

(ii) 式 2化合物と結合しなレ、

( 2 ) 該試験化合物が、該タンパク質またはその機能的断片に特異的に結合するか否かを判定する工程、および ( 3 ) 上記（2 ) の工程において該タンパク質またはその機能的断片に特異的に結合する試験化合物を選択する工程。

2 6 . 請求の範囲 2 1〜 2 5のいずれか 1項に記載のスクリーユング方法によつて得られる増殖性疾患、炎症性疾患およぴ脳疾患からなる群より選択される疾患の治療に有用な化合物。