EA029531B1

EA029531B1 - Соединения, ингибирующие глутаминазу, и содержащие эти соединения фармацевтические композиции и их применение

Info

Publication number: EA029531B1
Application number: EA201590997A
Authority: EA
Inventors: Рене М. Лемье; Джанета Поповичи-Мюллер; Франческо Дж. Салитуро; Джеффри О. Сондерз; Джереми Трэвинс; Шуньци Янь
Original assignee: Аджиос Фармасьютикалз, Инк.
Priority date: 2012-11-21
Filing date: 2013-11-21
Publication date: 2018-04-30
Also published as: US20150299152A1; IL238959A; MX369691B; CA2892089A1; IL238959A0; AU2013347933B2; SG11201504022RA; HK1213889A1; EP2922832A1; CN105263915A; JP6333280B2; US20140142146A1; US20180370930A1; WO2014081925A1; US9303002B2; EP2922832B1; US10414740B2; JP2016500107A; AU2013347933A1; CN105263915B

Abstract

В изобретении описываются соединения формулы (I), где все заместители такие, как в формуле изобретения, которые ингибируют глутаминазу, и композиции, содержащие эти соединения. Также в данном документе описываются способы применения соединений, которые ингибируют глутаминазу, в лечении рака.

Description

изобретение относится к соединениям и композициям, содержащим соединения, которые ингибируют глутаминазу. Кроме того, настоящее изобретение относится к применению соединений, которые ингибируют глутаминазу, в лечении рака.

Уровень техники изобретения

Раковые клетки при выработке клеточной энергии и биохимических промежуточных продуктов для биосинтеза липидов и нуклеотидов зависят в первую очередь от гликолиза, тогда как большинство "нормальных клеток" в зрелых тканях используют аэробное дыхание. Это фундаментальное отличие в клеточном метаболизме между раковыми клетками и нормальными клетка носит название эффект Варбурга. В результате данного отличия пируват, образуемый при гликолизе, превращается в молочную кислоту, а не в ацетил-СоА и, впоследствии, цитрат, используемый в обычном цикле трикарбоновых кислот. При компенсации этих энергетических изменений и для поддержания цикла трикарбоновых кислот раковые клетки рассчитывают на метаболизм глутамина, который достигается благодаря повышению активности глутаминазы. Использование этого явления может обеспечиваться путем ингибирования данной повышенной активности глутаминазы.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли:

где X представляет собой -8(0)- или -8О₂-;

каждый из Υ и Ζ независимо представляет собой -8-, -СН=, -СН=СН-, -СН=СК¹-, -СК?=СК?-, -0-, -Ν= или -ΝΗ- при условии, что (1) для каждого кольца по меньшей мере один из Υ и Ζ не представляет собой -СН= и (2) если один из представляет собой -8- и Υ в том же кольце представляет собой п, тогда Ζ в том же кольце не представляет собой -СН=;

каждый из К¹ и К² независимо представляет собой С1-6алкилен-К⁴, -Ν(Κ³)-Κ⁴, -И(К³)-С(О)-К⁴, -С(ОЖК³)-К⁴, -П(К³)-С(О)-О-К⁴, -Ν(Κ³)^(0)-Ν(Κ³)-Κ⁴, -О-С(ОЖК³)-К⁴, -\(к')-С(О)-С алкиленСП >)-К⁴. -^К³)-С(О)-С1.6алкилен-^К³)-С(О)-К⁴ или -№К^1а)-С(О)-С1 С-№К’’)-С(О)-К⁴

каждый К³ независимо представляет собой водород, С_1-6алкил или арил;

каждый К⁴ независимо представляет собой С_1-6алкил, С_2-6алкенил, арил, гетероарил, аралкил, гетероаралкил, гетероциклилалкил, гетероциклил, С_3-7циклоалкил или циклоалкилалкил, каждый из которых замещен 0-3 вариантами К⁵, или два смежных фрагмента К⁵, взятые вместе с атомами, к которым они прикреплены, образуют гетероциклил, гетероарил, циклоалкил или арил;

каждый К⁵ независимо представляет собой оксо(=О), С1-6алкил, С1-6галогеналкил, С1-6алкокси, циано, галоген, -ОН, -8Н, -ОСР3, -8О2-С1-6алкил, -ИО2, -И(К⁷)-С(О)-С1-6алкил, -И(К⁶)₂, -О-С(О)-С_1-6алкил, С_3-7циклоалкил, (С_3-7циклоалкил)алкил, арил, арилокси, -С(О)-арил, гетероарил, аралкил, гетероаралкил, гетероциклилалкил или гетероциклил, где каждый из арила, гетероарила или гетероциклила дополнительно замещен 0-3 вариантами К⁷;

каждый К⁶ независимо представляет собой водород, фтор, ОН или С_1-6алкил;

каждый К⁷ независимо представляет собой водород, С1-6алкил, -ОН, -8Н, циано, галоген, -СР3, -ОСР3, -8О2-С1-6алкил, -ЛО2, -^К⁷)-С(О)-С1-6алкил, -Ν(^)₂ или С_1-6алкокси;

т составляет 1, 2 или 3; п составляет 1, 2 или 3; о составляет 1, 2 или 3; р составляет 1, 2 или 3;

при условии, что соединение формулы (I) не представляет собой:

или

где термин "алкил" относится к неразветвленной или разветвленной углеводородной цепи, содержащей от 1 до 6 атомов углерода;

термин "арил" относится к моноциклической, бициклической или трициклической ароматической углеводородной кольцевой системе;

термин "гетероарил" относится к 5-14-членной ароматической кольцевой системе с 1-3 гетероатомами в кольце, которые независимо выбраны из О, Ν и 8; и

термин "гетероциклил" относится к 3-14-членным неароматическим кольцевым структурам, включающим один-четыре гетероатома, независимо выбранных из О, Ν и 8.

В предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фар- 1 029531

мацевтически приемлемая соль, где X представляет собой -8(0)-.

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где X представляет собой -80₂-.

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый из К¹ и К² независимо представляет собой -Ν(Κ³)-Κ⁴, -0(0)-Ν(Κ³)-Κ⁴, -Ν(Κ³)-0(0)-0-Κ⁴ или -Ν(Κ³)-0(0)-Ν(Κ³)-Κ⁴.

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где т и п, оба, составляют 2.

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где по меньшей мере один из Υ и Ζ представляет собой -СН=СН-, -СН=СК¹- или -СК¹=СК¹-.

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый представляет собой -8-, каждый Υ представляет собой -Ν= и каждый Ζ представляет собой -Ν=.

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый представляет собой -СН=, каждый Ζ представляет собой -0- и каждый Υ представляет собой -Ν=.

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где о составляет 1 и р составляет 1.

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый из К¹ и К² представляет собой -^К³)-С(0)-0-К⁴, где К³представляет собой водород.

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где К¹ и К² являются одинаковыми.

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение представляет собой соединение формулы (II)

В наиболее предпочтительном варианте указанного выше соединения формулы (II) К¹ и К² являются одинаковыми.

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение представляет собой соединение формулы (III)

- 2 029531

В еще одном предпочтительном варианте предложено соединение или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение выбрано из группы, состоящей из:

- 3 029531

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль которое представляет собой

В другом предпочтительном варианте предложено соединение указанной выше формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой

Еще одним объектом изобретения является фармацевтическая композиция, обладающая способностью ингибировать глутаминазу, содержащая любое из указанных выше соединений формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

Еще одним объектом изобретения является применение любого из указанных выше соединений формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака у нуждающегося в этом субъекта.

Причем в частном случае воплощения настоящего изобретения рак характеризуется ΐ) низким уровнем экспрессии Е-кадгерина по сравнению с эталонным стандартом, ΐΐ) высоким уровнем экспрессии виментина по сравнению с эталонным стандартом или ΐΐΐ) низким или пониженным уровнем экспрессии пируваткарбоксилазы.

- 4 029531

В частности, рак представляет собой рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, рак молочной железы, гепатоцеллюлярную карциному, остеосаркому, разновидности липом, хондросаркому или мезотелиому.

Подробное описание

Особенности конструкции и расположение компонентов, изложенные в следующем описании или проиллюстрированные в графических материалах, не предусмотрены для ограничения. Варианты осуществления можно осуществлять на практике или выполнять различными способами. Также формулировки и терминология, применяемые в данном документе, служат для целей описания и не должны считаться ограничивающими. Считается, что применение "включающий", "содержащий" или "имеющий", "содержащий в себе", "заключающий" и их вариации в данном документе, предусмотрены для охвата позиций, перечисленных после них и их эквивалентов, а также дополнительные позиции.

Соединения

В данном документе описаны соединения и композиции, которые ингибируют глутаминазу. Соединения, которые ингибируют глутаминазу, можно применять для лечения нарушений, таких как неопластические нарушения (например, рак).

В определенных вариантах осуществления иллюстративные соединения формулы (I) включают соединения, описанные в таблице и в примерах. Соединение, описанное в данном документе, можно тестировать в отношении его способности ингибировать глутаминазу, например, с помощью анализа, как описано в примерах. Для простоты активность ингибирования этих соединений представлена как 1С₅₀, протестированная в анализе из примера А или примера В в таблице. Иллюстративные соединения показаны в таблице. Как показано, "А" относится к ингибитору глутаминазы с 1С₅₀ <100 нМ. "В" относится к ингибитору глутаминазы с 1С₅₀ от 100 до 500 нМ. "С" относится к ингибитору глутаминазы с 1С₅₀ от 500 до 1000 нМ. "Ό" относится к ингибитору глутаминазы с 1С₅₀ от 1 до 10 мкМ. "Е" относится к данным, которые отсутствуют.

№ соединения	Структура	1С50
1	У, гР ,ν-ν ν-ν Уо ην-Α X Λ >~νη	И
2	О ,0 о О \_-4 Ν-м м-Ν %_/ ΗΝ-Α X _ _ Λ %ΝΗ	В
3	О О О О ___Ι'Χ-ΝΗ^	И

- 5 029531

4	Ч	ΗΝ-	Ν'Ν л £	ΧδΧ 0' '0	и Ч ΰ Ζ—ΝΗ χ^-δ	Α
5	о.		Ν'Ν -4 ϊ δ^χ-	''''''δ''"'⁴	ν-ν °р5~^ 1 ΡνΗ х^З	С
6	ч	ΗΝ-	Ν'Ν 4 к δ^⁴"--		Ν-, УР // /-ΝΗ Χ'δ	С
7	ч	ΗΝ-	Ν'Ν -С ΐ δ^-	''"'"δ'""''' II 0	У-Ч Л %-ΝΗ Χ^δ	Β
8	<ъ °^ΗΝ	ν-ν 4 ϊ δ^	'Х'Х'"	ΐ. Ρ Γρη '\χ^Λ'5^/^	С
9	ч	"X	Ν'Ν < ΐ 5'Χ-'		ρ ΐν_Νίπ^ Аз⁷	ϋ
10	ч		Ν'Ν \ ϊ		„-ΝДЧ Χ'δ⁷	Β
11	ч		Ν'Ν -< ΐ		ο Ρ м-Ν ρζ Τί Ρνη χ^δ	Β
12	ч	-4 ^ν~ν ην4 X δ ^		У	ϋ

- 6 029531

13	Ο^° ν-_{ν ν}-ν уО ΗΝ-Ч X I '%ΝΗ 0' '0	Α
14	ΗΝ-Ч X I >-ΝΗ δ^-'Άδ;\^δ ο' 'ο	Α
15	%-" ° ⁰ Ό ОэХ ν-ν ν-ν ΗΝ—< Η _{л л} Л у— ΝΗ ο' 'ο	Β
16	Оу »-_Ν Оз	ϋ
17	0 /° °, 0 /ЦГ^-мн^ II 0	Β
18	С) о о О \Х Ν-Ν Ν-Ν %м^? / ΗΝ—+ X . X %ΝΗ \	ϋ
19	ΟχΟ ν-ν ν-ν ΗΝ—\ £ _Λ 7 χ—ΝΗ З^^ХзХ^^З 0' '0	Α
20	\_/ \_У ν~_{ν ν}-ν ΑΧ Λχ ΗΝ-Ч X _ _ Λ ΧΝΗ	ϋ
21	ООл /? ‘л /—00 \_/ \_У ν-_{ν ν}-ν ΑΧ ΑΧ ΗΝ-Ч X _ _ X Χνη ο' 'ο	Α
22	У~\>А ν-ν ν-ν ΧοηνΧ χ _λ χ Χνη δ-^-^Αχ-^δ ο' 'ο	Β

- 7 029531

23	_/ ρ 0 \_ οΑ Ν~Ν ν-Ν 0_ο ^Ζ 0' '0	С
24	Α Г'цР’ ό ^Η	ϋ
25	Ο 0 ^ΗΝ4 (Ь,	Ώ
26	Ο 0 о С" ++ Ν-_Ν Ν'Ν У-/ ην—( η 11 >-ΝΗ	В
27	Ο 0 7 ,Ν'ν ην—\ Η $ η ^Ν'^Ν Оз*¹	Α
28	Ο ,0 \-< ν-ν ΗΝ—< Η 3 η ^Ν'" <^0	Α
29	^^νη₂ ^-0, 0гД^° θ'" '0	Α
30	'°^0_χ__χΑ^°' 0' '0	Α

- 8 029531

31	__ о' "о	А
32	О о 0 О \_А Ν-ν Ν'Ν ΗΝ-< ί с X >~ΝΗ	ϋ
33	__ 0' "0	В
34	'Αχί,Χφ__ϊχΚΑ""	А
35	ОМДн-и ^5-уУ^ <Э'⁸''о	В
36	^νη₂ θχ_τ__ ъ' Ъ	А
37	О о Ν-Ν ^Ν'^Ν	А
38	^нох Ьо \_А Ν-Ν ΗΝ—< Τ 3 Н ^Ν'^Ν <Гу% он	В

- 9 029531

39	I _ Ν ⁰ Ν-Μ ΗΝ—\ 1 5 Η у-Ν ν-ν η \—< \ ⁰ Ту-/ ⁴Ν	А
40	ο^ΑτΟ 0	А
41	\ Ν Ν^/% °4 Τ-Ν Ρ ⁷ ъ Й V / С- 2— Ν Ν \	ϋ
42	^Νά 0 Μ ν-ν ^ΗΝ ΑΆ/χ^ν⁵ Ν Ν-ν )ι νο ⁰ Ϋ	В
43	0 О~С/ ν-_ν "^{Ν ο>}Ύ0 ο	В
44	Ом,--. Ън ν-ν	ϋ
45	АЛ—\ Ρ \=Γ4 ,ν~ν Ън ^Н°\^ч ν-ν^Ζ	А
46	Ύμ° ,ν-ν ΗΝ—< Τ _Λ 5 Η ₃А/х/^ 0 ν-ν АЛЛ V ⁰ ί ο-γ	В

- 10 029531

47	СО° АО ν-_ν ηνΟ 1 5 н Ν-Ν ΓΧν ⁰ ο	Α
48	Ο,· <Ο ν-ν ην—\ 1 ~ ^3 Η ₅^₃ ν ον ^ν'^ν <Γν	Α
49	° V \-Ο Ν'Ν ^ΗΝΟ Ο ~ 3 Η 0 СГ	Β
50	Ν / ηνΟ Ο ,3 Η , ₅Λ/<Ο ον ν Ν—\ ъ	Β
51	ΟνΟ ⁰ν/А-Ч Ν-Ν ^ΗΝ'\₃Ο__Χ^_Χ^_Χ3 Η ν-ν ^Χ—4 7 ° V/	Β
52	^СА Λίο/ν^ν Η / ^δ> С1	Β
53	/ 0 Ζλ-\ /? Α=/Μ Ο^Ν ^ΗΝ—ХдО^-ч^^О Η Ν-Ν ΟΧΟ. ί ο χχ Ο /	Α

- 11 029531

54	/УЛ-а 9 ^ν'ν ν-ν %—4 " 0 ^-Ν	С
55	0 ν~ν ΗΝ-/ 1-^8 Η ^"\-Χ ο	Α
56	0-4° »-» ΗΝ-< ^Η ⁸ °"^% ,ΓΥλ,	В
57	Ο/». ^ΗΝΆ_δΛ^-χ <""<³ Ν Ν-Ν ΑΆ-Όκ о 1Γ % Ν -=/	Α
58	>° 0 / ^χο °Λ	ϋ
59	Ο"Μ° ,»-Ν ΗΝ—\ ^Η Ν-Ι^” )	ϋ
60	Ό Л~~У Ν г Ώ ° 4==/ \_1 ν-_ν ΗΝ—с 4. ___ 5 η >-\-χ /=Χ ^ν'^ν ο^νΟ ΝχοΛ-/	Α
61	Η __Ν \~~7. $ Ο /==/ Υ_/ Ν-_ν "° м-^к/чхчА^ ₀ν-ν \—/)> Η	Α

- 12 029531

62	ЗлА Ν-~ ° / ην-К X	___ 8 Н . о\0 ,° Ν-Ν -\ ⁰ о	Β
63	/ ^х°лэ /°	-УУ“ /°	Α
64		Щ Н Ύ У%Л Ν-Ν о	Β
65	_/Л-О /? 471 8—	'^44у>о-р^г'	ϋ
66	"Нити	"οΥν 7 ν-ν /7®-Л 0 ^Χ0"\	Β
67	34-44		ϋ
68	0 -А 0 ^ΗΝΆ // м __	_ κ Η V/ Ε\_Α Η ν-ν 1Γ ν-ν ° γ0	ϋ
69	0/ \-Ч Ν-Ν 5'^Л''-'''~'Щ^/	-4 II X ΝΗ \7"5	Β

- 13 029531

70	\-νη ~ ΗΝ—< Η $ Η ν-ν У"⁴—χ Ρ 0 Ν-\ Η ^χ	ϋ
71	,Ν. ΗΝ 'Ν Ν=< /? ν_ν ΗΝ—< Λ _{Λ Λ} 3 Η >-^Νν-4 ν-ν Α\=ν ° %>	В
72	ν-ν зБ^^у У-Ν θ ^Ν~^Ν У^-	в
73	Б-, Б° 3— ^Ь 0	с
74	^чо о Р \А Μ "'Ν ΗΝ—χ к 3 Н Б\ ν~ν У%-Ау °\	в
75	/ ΗΝ—< Л _л з Н ₅-^ν у,м Ν-Ν /7^х-° а 0 /	в
76	""''“Ад’ Ч-И БА^-хуи Ν-Ν Б-. „ ° УА0	в
77	^ΝΗ Ν-Μ Υ,'\2/^Ν_ )г-А ι ААА $ 5 0	ϋ

- 14 029531

78	С1. >=Ν О 7 ^'’ην-Ν'Κ^.; η 3^^^ у-М ^Ν~^Ν °У%^М%	С
79	уАг°-° _7-~ ' «Η—<Μ -/ ν-ν ^Χ	ϋ
80	'=-/ ,ν-ν ν-ν Γ\—. ⁰ ο	С
81	ΗΝ—\ Η 5 Η Ν-ν 7\==\ ° ο	Β
82	ΗΝ—\ 1 3 Η 3^^^ ^Ν ν-ν /Г\—х ° ο	Β
83	^ру>_? ΗΝ—Κ X 3 Η 3^^^ У-Ν ^Ν'^{Ν 0} <У Ε	Α
84	Я+° "-Ν "'Ν ΓΗ	ϋ

- 15 029531

85	о ΛΆ-4 ν~ν \=/ ΗΝ-< К _	_ К Н ν-ν о ζ\	Β
86	О О	С ν-\ /^С\| ^Ν'^Ν ο^χΛ	Α
87	Н ° У=/ Ν-_ν ΗΝ-< ί	ν-ν #\__/ \ ° ГуУ ⁴Ν Η	Α
88	Η-/ "-Ν X _		С
89	0 н ΗΝ ΝΗ оЩ ν-_ν ΗΝ—< 31	Ύ,τχγ ην,νη Ύ 0	Β
	СЯд-й	_ в η χνΟ ν-ν /I ο	Β
90
91	Чх+х	. _ 5 η С1. >\ _Ν'ν гми	Β
92	^РзС-О о ^Ρ^ΗΝ-<'3___	^Ν'^Ν О^Х-СЕз	ϋ

- 16 029531

93	Ол_/ ν-_ν ΗΝ—< « _л 5 Η \-Ν 0%-ρ 0	Β
94	0 __Μ ν~_ν ΗΝ—Τ 5 Η ν-ν /Г ο	С
95	η _π 0	С
96	Хд Ν-ν ^Ν'^Ν _ΟΥ><	ϋ
97	Ν—ίί _____ я / / у-М Ν-Ν "ТТЛ ° θ	ϋ
98	0 -4 ,^'Ν ΗΝ-—γ X _{Λ Λ} 5 Η >-^Νν-χ Ν-Ν ⁰ Ο	Β
99	Χ° Ο-Ν ^НМ"\_>Л_х/х_чХ-_>ХХ,^ Ν-θ' ⁰ Ο	ϋ
100	X У-Л с ο ^Ν'^Ν Η ул	Β

- 17 029531

101	/ Л° °\ у-Ν Ν-Ν П ⁴ 0 /	С
102	Ν-Ν П ⁴⁷ О	с
103	О- „ \—ΝΗ Р О^Г Л" ΗΝ—\ Я _{л л} з Н ”'" 0%-^	с
104	^сум³ _7~ν ΗΝ-\ н \|РгГ	ϋ
105	ΑΑϊ н ν-ν 1Г^ о	ϋ
106	-°\_3° Лк /? \=/ХЦ ,ν-ν ΗΝ—\ IV 5 Н Ν-чГ АМГ/ У> °"	в
107	/ —N Ν-Ν ΗΝ—< V ,5 Н ^3>Х^^Х/ЭГ Α^Ν\-χ ^Ν'^{Ν 0} Ν-/	в

- 18 029531

108	0-4° ΗΝ-Χ X ОН	νΡ 1%мьГ	ϋ
109	С1—ΡΧ— О О	_ _ Я Н . бМб Г>С1 ^Ν'^Ν сз °Άχ	ϋ
110	ЛХ7 о \=/ Μ Χν ΗΝ-< X	МуЧЭ	ϋ
	О		в
111	о—\ Р χχϊ з—	_ в Н ^Ν ν-ν /Ά-о ° ϋ
112	9 0 ^<*^Λ'ην-<3^	~ к Н "бУХ, ,° Ν-Ν Х\Х ° о	в
113	Ъ о _Ν ^ΗΝ-Χ'Χ/^	5 Н V Μ-Ν ^Ν'^Ν °^о С1	в
114	Я ,°	я Н ^ν'^ν <ГК	в
115	^Р° л ην-\ И	Я Н ν-ν О М	с

- 19 029531

116	Η 04 ° ^4 Ν'Ν ΗΝ-\ X___-Я η ⁸ "Α+ρ Η	Α
117	Ν-ν ир+хх/хД η Ν-ν \--χ „ ⁰ θ' ^-0	С
118	^Ч°Ъ „ ^4 /+Ν Ν-Ν 'Л 0	Β
119	’Ъ 0 сО-4 ν-ν \ ΗΝ—< X χχ χχ ^3 Η \ ΑΧ ρ ^Ν'^Ν <ΓΚ /°	Α
120	0Э Ο \—ΰ ν~_ν ΠΝ'^Χ^χχχ^χΧχδ Η	Α
121	0+-ν ηνΧ И _{λ λ} з η ₃Χ^γ ^Ν ν-ν	Β
122	н /~3ι _Μ-^Ν ο /^ΝΧ Ν-Ν \ 0 ^Ν\\ ν^-\ / % 0 ^χ "Λ Λν^³μι^ ^Η	Α

- 20 029531

- 21 029531

Соединения, описанные в данном документе, можно получать с применением ряда методик синтеза, таких как описываемые в примерах, предусмотренных в данном документе. Как может понимать квалифицированный специалист в данной области, способы синтеза соединений формул в данном документе будут очевидны для рядовых специалистов в данной области техники. Кроме того, различные стадии синтеза можно осуществлять в другой последовательности или для получения требуемых соединений. Трансформации с помощью синтетической химии и методология защитных групп (присоединение и снятие защиты), применимые при синтезе соединений, описанных в данном документе, известны из уровня техники и включают, например, такие как описываемые в К. Ьагоск, СотргеЬепкйе 0гдашс Тгапк&гтайопк, УСН РиЬ118Йег8 (1989); Т.У. Сгеепе апй Р.С.М. Уйк, Рго1есйуе Сгоирк ίη 0гдашс 8уп1Не818, 2"'¹ Ей., 1оЬп Уйеу & 8опк (1991); Ь. Иекег апй М. Иекег, Иекег апй Некег'к Кеадейк £ог 0гдашс 8уйЬе818, 1оЬп Уйеу & 8опк (1994) и Ь. Рациейе, ей., Епсус1орей1а о£ Кеадейк £ог 0гдайс 8уййе818, 1ойп Уйеу & 8опк (1995) и их последующие издания.

Соединения, предусмотренные в данном документе, могут содержать один или несколько центров асимметрии и, таким образом, существуют в виде рацематов и рацемических смесей, отдельных энантиомеров, индивидуальных диастереоизомеров и диастереоизомерных смесей. Все такие изомерные формы этих соединений прямо включены в объем изобретения. Если не указано иное, когда соединение называют или изображают структурой без указания стереохимии и оно имеет один или несколько хиральных центров, понятно, что представлены все возможные стереоизомеры соединения. Соединения, предусмотренные в данном документе, могут также содержать связи (например, углерод-углеродные связи) или заместители, которые могут ограничивать вращение в кольце, например ограничения в результате присутствия кольца или двойной связи. Соответственно, все цис/транс- и Ε/Ζ-изомеры прямо включены.

Соединения, предусмотренные в данном документе (например, формулы (I)), также могут содержать одно или несколько изотопных замещений. Например, Н может находиться в изотопной форме, в том числе ¹Н, ²Н (Ό или дейтерий) и ³Н (Т или тритий); С может находиться в любой изотопной форме, в том числе ¹²С, ¹³С и ¹⁴С; О может находиться в любой изотопной форме, в том числе ¹⁶О и ¹⁸О и т.п. Соединения, предусмотренные в данном документе, также могут быть представлены в нескольких таутомерных формах, в таких случаях прямо включены все таутомерные формы соединений, описанных в данном документе, даже в том случае, когда может быть представлена только единственная таутомерная форма (например, алкилирование кольцевой системы может приводить к алкилированию в нескольких сайтах; все такие продукты реакции прямо включены). Все такие изомерные формы таких соединений прямо включены. Все кристаллические формы соединений, описанные в данном документе, прямо включены.

Соединения, предусмотренные в данном документе, включают соединения как таковые, а также их соли и их пролекарства, в соответствующих случаях. Соль, например, может формироваться анионом и положительно заряженным заместителем (например, амино) на соединении, описанном в данном документе. Подходящие анионы включают хлорид, бромид, йодид, сульфат, нитрат, фосфат, цитрат, метансульфонат, трифторацетат и ацетат. Подобным образом, соль также может формироваться катионом и отрицательно заряженным заместителем (например, карбоксилатом) на соединении, описанном в данном документе. Подходящие катионы включают ион натрия, ион калия, ион магния, ион кальция и катион аммония, такой как ион тетраметиламмония. Примеры пролекарств включают сложные эфиры и другие фармацевтически приемлемые производные, которые при введении субъекту способны давать активные соединения.

Соединения, предусмотренные в данном документе, можно модифицировать путем прикрепления соответствующих функциональных групп для улучшения избранных биологических свойств, например, нацеливания на конкретную связь. Такие модификации известны в данной области техники и включают такие, которые повышают биологическое проникновение в данный биологический компартмент (например, кровь, лимфатическую систему, центральную нервную систему), повышают пероральную биодоступность, повышают растворимость для обеспечения возможности введения путем инъекции, изменяют метаболизм и изменяют скорость экскреции.

Соединения, описанные в данном документе, можно применять в качестве платформ или остовов, которые можно использовать в методиках комбинаторной химии для получения производных и/или химических библиотек соединений. Такие производные и библиотеки соединений имеют биологическую активность и применимы для идентификации и разработки соединений, обладающих конкретной активностью. Методики комбинирования, пригодные для использования соединений, описанных в данном документе, известны в данной области техники и приведены в качестве примера 0ЬгесЙ, Ό. апй Уй1а1дгойо, 1.М., 8ойй-8ирройей СотЫпа1ойа1 апй Рага11е1 8уйЬек18 о£ 8та11-Мо1еси1аг-Уе1дЙ Сотроипй ЫЬгапек. Регдатоп-Е1кеу1ег 8аепсе Ь1тНей (1998), и включают такие, как методики "расщепления и объединения" или "параллельного" синтеза, методики твердофазного синтеза и жидкофазного синтеза и методики кодирования (см., например, С/апик, А.У., Сигг. 0рш. СЬет. Вю., (1997) 1, 60. Таким образом, один вариант осуществления относится к способу применения соединений, описанных в данном документе, для получения производных или химических библиотек, включающему 1) обеспечение основы,

- 22 029531

состоящей из ряда лунок; 2) обеспечение одного или нескольких соединений, идентифицированных с помощью способов, описанных в данном документе, в каждой лунке; 3) обеспечение дополнительного одного или нескольких химических веществ в каждой лунке; 4) выделение полученного одного или нескольких продуктов из каждой лунки. Альтернативный вариант относится к способу применения соединения, описанных в данном документе, которые можно применять для получения производных или химических библиотек, включающему 1) обеспечение одного или нескольких соединений, описанных в данном документе, прикрепленных к твердой подложке; 2) обработку одного или нескольких соединений, идентифицированных с помощью способов, описанных в данном документе, прикрепленных к твердой подложке, одним или несколькими дополнительными химическими веществами; 3) выделение полученного одного или нескольких продуктов из твердой подложки. В способах, описанных выше, "метки", или идентификатор, или маркирующие фрагменты можно прикреплять и/или отсоединять от соединений, описанных в данном документе или их производных, для облегчения отслеживания, идентификации или выделения требуемых продуктов или их промежуточных соединений. Такие фрагменты известны в данной области техники. Химические вещества, применяемые в вышеупомянутых способах, могут включать, например, растворители, реагенты, катализаторы, реагенты для присоединения защитной группы и снятия защитной группы и т.п. Примерами таких химических веществ являются представленные в различных текстах по синтетической химии и химии защитных групп и научных трудах, на которые ссылаются в данном документе.

Определения

Термин "галоген" относится к любому радикалу фтора, хлора, брома или йода.

Термин "алкил" относится к углеводородной цепи, которая может представлять собой неразветвленную цепь или разветвленную цепь, содержащую указанное число атомов углерода. Например, С₁-С₁₂-алкил указывает на то, что группа может содержать в себе от 1 до 12 (включительно) атомов углерода. Термин "алкил" включает алкенил, который содержит ненасыщенную связь в углеводородной цепи. Термин "галогеналкил" относится к алкилу, в котором один или несколько атомов водорода заменены на галоген, и включает алкильные фрагменты, в которых все атомы водорода были заменены на галоген (например, перфторалкил).

Термины "арилалкил" или "аралкил" относятся к алкильному фрагменту, в котором атом водорода алкила заменен на арильную группу. Аралкил включает группы, в которых более одного атома водорода были заменены арильной группой. Примеры "арилалкила" или "аралкила" включают бензильную, 2-фенилэтильную, 3-фенилпропильную, 9-флуоренильную, бензгидрильную и тритильную группы.

Термин "алкилен" или "циклоалкилен" относится к двухвалентному алкилу или циклоалкилу например -СН₂-, -СН₂СН₂- и -СН₂СН₂СН₂-.

Термин "алкокси" относится к -О-алкильному радикалу. Термин "галогеналкокси" относится к алкокси, у которого один или несколько атомов водорода заменены на галоген, и он включает алкоксифрагменты, в которых все атомы водорода были заменены на галоген (например, перфторалкокси).

Термин "арил" относится к моноциклической, бициклической или трициклической ароматической углеводородной кольцевой системе, где любой атом в кольце, способный к замещению, может быть замещен (например, одним или несколькими заместителями). Примеры арильных фрагментов включают без ограничений фенил, нафтил и антраценил. Если не указано иное, любой атом в кольце в ариле может быть замещен одним или несколькими заместителями.

Используемый в данном документе термин "циклоалкил" включает циклические, бициклические, трициклические или полициклические неароматические углеводородные группы с 3-12 атомами углерода. Любой замещаемый атом в кольце может быть замещен (например, одним или несколькими заместителями). Термин "циклоалкил" включает циклоалкенил, который содержит ненасыщенную связь в кольце. Циклоалкильные группы могут содержать конденсированные или спирокольца. Конденсированные кольца представляют собой кольца, у которых есть общий атом углерода. Примеры циклоалкильных фрагментов включают без ограничений циклопропил, циклогексил, метилциклогексил, адамантил и норборнил.

Используемый в данном документе термин "циклоалкилалкил" относится к алкильной группе, замещенной циклоалкильной группой.

Термины "гетероциклил" или "гетероциклическая группа" относится к 3-14-членным неароматическим кольцевым структурам (например, 3-14-членным кольцам, более предпочтительно 3-7-членным кольцам), причем эти кольцевые структуры включают один-четыре гетероатома, независимо выбранных из О, N и 8. Гетероциклил или гетероциклические группы могут содержать конденсированные или спирокольца. Гетероциклы также могут представлять собой полициклы, при этом каждая группа имеет, например, 5-7 членов в кольце. Термин "гетероциклил" или "гетероциклическая группа" включает насыщенные и частично насыщенные гетероциклильные структуры. Гетероатом, необязательно, может являться точкой прикрепления гетероциклильного заместителя.

Термин "гетероарил" относится к 5-14-членной (т.е. 5-8-членной моноциклической, 8-12-членной бициклической или 11-14-членной трициклической) ароматической кольцевой системе с 1-3 гетероатомами в кольце, в случае моноциклической, 1-6 гетероатомами в кольце в случае бициклической или 1-9

- 23 029531

гетероатомами в кольце в случае трициклической, при этом указанные гетероатомы в кольце независимо выбраны из О, Ν и 8 (например, 1-3, 1-6 или 1-9 гетероатомов Ν, О или 8 в кольце в случае моноциклической, бициклической или трициклической соответственно). Любой замещаемый атом в кольце может быть замещен (например, одним или несколькими заместителями).

Бициклические и трициклические кольцевые системы, содержащие один или несколько гетероатомов и как ароматические, так и неароматические кольца, где точка прикрепления от кольцевой системы к остальной части молекулы проходит через неароматическое кольцо, считаются гетероциклильными группами. Бициклические или трициклические кольцевые системы, в которых арил или гетероарил конденсирован с циклоалкилом или гетероциклилом и точка прикрепления от кольцевой системы к остальной части молекулы проходит через ароматическое кольцо, считаются арильными или гетероарильными группами.

Применяемый в данном документе термин "гетероциклилалкил" относится к алкильной группе, замещенной гетероциклической группой.

Применяемые в данном документе термины "гетаралкил" и "гетероаралкил" относятся к алкильной группе, замещенной гетероарильной группой. Гетероатомы в кольце соединений, предусмотренных в данном документе, включают Ν-О, 8(О) и 8(О)₂.

Арильные, гетероарильные, циклоалкильные и гетероциклильные группы, либо отдельно, либо как часть группы (например, арильная часть аралкильной группы), необязательно замещены при одном или нескольких замещаемых атомах, если не указано иное, заместителями, независимо выбранными из: гало>0’

гена, -С=И, С₁-С₄-алкила, =О, -ОК⁰, -ОК⁰', -8К^Ъ, -8К⁰, -Щ-СталкилЖКУК⁰),

-Ы<К^Ь)(К^Ь’), -О-(С1-С4-алкил)-Н(К^ь)(К^ь), -О-(С·-Снпки.П-МК )(К -(С1-С4-алкил)-О-(С1-С4

(С₁ -С₄-алкил)-И(К^Ъ)(К^Ъ’)

(С₁ -С₄-алкил)-С(О)-И(К^Ъ)(К^Ъ),

алкил)-И(К^Ъ)(К^Ъ), -(С1 -С4-алкил)-О-(С1 -С4-алкил)-(К^Ъ)(К^Ъ’), -С (О'1-\(К )(К ),

^К^Ъ)(К^Ъ), -(С1-С4-алкил)-С(О)-И(К^Ъ)(К^Ъ’), -ОК^Ъ’, К^Ъ’, -С(О)(С1-С4-алкил), -С(О)К^Ъ’, -С(ОЖК^Ъ’)(К°), -И(К^Ъ)С(О)(К^Ъ), -Ы(К^Ъ)С(О)(К^Ъ’), -Ы(К^ъ)8О2(К^ъ), -8О_;\(К )(К -\(К )8О_;(К ) и -8О_;\(К )(К где любой

алкильный заместитель необязательно дополнительно замещен одним или несколькими из -ОН, -О-(С₁-С₄-алкила), галогена, -ИН₂, -ХН(С₁-С₄-алкила) или -ИЩ-Щ-алкила)^

каждый К^Ъ независимо выбран из водорода и -С₁-С₄-алкила или

два К^Ъ, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 4-8-членный гетероциклил, необязательно содержащий один дополнительный гетероатом, выбранный из Ν, 8 и О; и

каждый К^Ъ независимо выбран из С₃-С₇-карбоциклила, фенила, гетероарила и гетероциклила, где одно или несколько замещаемых положений на указанном фенильном, циклоалкильном, гетероарильном или гетероциклическом заместителе необязательно замещено одним или несколькими из -(С₁-С₄-алкила), -(С₁-С₄-фторалкила), -ОН, -О-(С₁-С₄-алкила), -О-(С₁-С₄-фторалкила), галогена, -НН₂, -ХН(С₁-С₄-алкила) или -К(С1-С₄-алкила)2.

Гетероциклильные группы, либо отдельно, либо как часть группы, необязательно замещены на одном или нескольких любых замещаемых атомах азота оксо(=О), -С₁-С₄-алкилом или фтор-замещенным С₁-С₄-алкилом.

Термин "замещенный" относится к замене атома водорода на другую группу.

Термин "селективный" означает по меньшей мере в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 раз, 6 раз или 10 раз большее ингибирование глутаминазы, чем других мишеней.

Используемый в данном документе термин "ингибитор" означает средство, которое измеримо замедляет, останавливает, уменьшает или инактивирует ферментативную активность глутаминазы с понижением до уровня, который является меньшим, чем нормальные уровни активности глутаминазы. Ингибиторы глутаминаза могут быть пептидами или нуклеиновыми кислотами (например, глутамат). Средство можно оценивать для определения того, является ли оно ингибитором, путем измерения либо непосредственно, либо опосредованно активности глутаминазы при воздействии средства. Активность средства можно измерять, например, по отношению к контрольному веществу. В некоторых случаях измеряемая активность средства означает ингибирование глутаминазы.

"Получать" или "получение" в качестве терминов, применяемых в данном документе, касается получения физического объекта или значения, например числового значения, путем "непосредственного получения" или "опосредованного получения" физического объекта или значения. "Непосредственное получение" означает осуществление процесса (например, осуществление синтетического или аналитического способа) с получением физической объекта или значения "Опосредованное получение" означает получение физического объекта или значения от другой стороны или источника (например, лаборатории третьей стороны, которая непосредственно получает физический объект или значение). Непосредственное получение физического объекта включает осуществление процесса, который включает физическое изменение физического вещества, например, исходного материала. Иллюстративные изменения включают получение физического объекта из двух или более исходных материалов, разрезание или фрагментирование вещества, отделение или очистку вещества, объединение двух или более отдельных объектов в смесь, осуществление химической реакции, которая включает разрушение или формирование ковалентной или нековалентной связи. Непосредственное получение значения включает осуществление процесса, который включает физическое изменение образца или другого вещества, например осуществление ана- 24 029531

литического процесса, который включает физическое изменение вещества, например образца, аналита или реагента (иногда в данном документе называется "физическим анализом"), осуществление аналитического способа, например, способа, включающего одно или несколько из следующего: отделение или очистку вещества, например аналита, или его фрагмента, или другого производного от другого вещества; объединение аналита, или его фрагмента, или другого производного с другим веществом, например буфером, растворителем или реактивом; или изменение структуры аналита, или его фрагмента, или другого производного, например, путем разрушения или формирования ковалентной или нековалентной связи между первым и вторым атомом аналита; или путем изменения структуры реагента, или его фрагмента, или другого производного, например, путем разрушения или формирования ковалентной или нековалентной связи между первым и вторым атомами реагента.

"Получение образца" в качестве термина, применяемого в данном документе, означает получение образца, например образца ткани или образца нуклеиновой кислоты, путем "непосредственного получения" или "опосредованного получения" образца. "Непосредственное получение образца" означает осуществление процесса (например, осуществление физического способа, такого как хирургическая операция или извлечение) с получением образца. "Опосредованное получение образца" означает получение образца от другой стороны или источника (например, лаборатории третьей стороны, которая непосредственно получает образец). Непосредственное получение образца включает осуществление процесса, который включает физическое изменение физического вещества, например исходного материала, такого как ткань, например ткань в пациенте-человеке или ткань, которую предварительно выделили у пациента. Иллюстративные изменения включают получение физического объекта из исходного материала, отрезание или соскабливание ткани; отделение или очистку вещества (например, образца ткани или образца нуклеиновой кислоты); объединение двух или более отдельных объектов в смесь, осуществление химической реакции, которая включает разрушение или формирование ковалентной или нековалентной связи. Непосредственное получение образца включает осуществление процесса, который включает физическое изменение образца или другого вещества, например, как описано выше.

Применяемая в данном документе "низкая" экспрессия Е-кадгерина по сравнению с эталонным стандартом относится к низкому, пониженному или отсутствующему уровню экспрессии Е-кадгерина по сравнению с уровнем экспрессии Е-кадгерина в эпителиальной клетке, как охарактеризовано с помощью способов известных из уровня техники, например, в какой-либо из следующих ссылок: (УаисН е! а1., (2005), С1ш. Сапсег Кек 11:24; Зауадпег е! а1., (2010), Апп. Опсо1. 21(кирр1 7): νίί89; ТЫегу е! а1., (2002), №Цигс Ре\1е\ук Сапсег 2(6):442).

Применяемый в данном документе "высокий" уровень виментина по сравнению с эталонным стандартом относится к высокому или повышенному уровню экспрессии виментина по сравнению с уровнем экспрессии виментина в эпителиальной клетке, как охарактеризовано с помощью способов, известных из уровня техники, например, в какой-либо из следующих ссылок: (УаисН е! а1., (2005), СИп. Сапсег Кек 11:24; Зауадпег е! а1., (2010), Апп Опсо1. 21 (кирр1 7): νίί89; ТЫегу е! а1., (2002), Ыа!иге Ре\1е\ук Сапсег 2(6):442).

Применяемый в данном документе "низкий" или "пониженный" уровень экспрессии пируваткарбоксилазы по сравнению с эталонным стандартом относится к низкому, пониженному или отсутствующему уровню экспрессии пируваткарбоксилазы по сравнению с уровнем экспрессии пируваткарбоксилазы в эпителиальной клетке, как охарактеризовано с помощью способов известных из уровня техники, например, в какой-либо из следующих ссылок: (УаисН е! а1., (2005) СИп. Сапсег Кек. 11:24; Зауадпег е! а1., (2010), Апп Опсо1. 21(кирр1 7): ун89; ТЫегу е! а1., (2002), Ыа!ше Кеу1еук Сапсег 2(6):442).

Применяемые в данном документе "рак" и "опухоль" являются синонимическими терминами. Термин "рак" или "опухоль" относятся к присутствию клеток, обладающих характерными признаками, типичными для вызывающих рак клеток, такими как неконтролируемая пролиферация, бессмертие, метастатический потенциал, быстрый рост и скорость пролиферации и определенными характерными морфологическими признаками. Раковые клетки часто находятся в форме опухоли, но такие клетки могут существовать отдельно внутри животного, или могут представлять собой не образующую опухоль раковую клетку, такую как лейкозная клетка. Клетки могут обладать характерными признаками, типичными для мезенхимной клетки, например, как охарактеризовано в какой-либо из следующих ссылок: (УаисН е! а1., (2005), СИп. Сапсег Кек 11:24; Зауадпег е! а1., (2010), Апп. Опсо1. 21(кирр1 7): νίί89; ТЫегу е! а1., (2002), Ыа!иге Ре\1е\ук Сапсег 2(6):442).

Сокращения Ме, Е!, РН, Т£, Νί, Тк, Мк представляют метил, этил, фенил, трифторметансульфонил, нонафторбутансульфонил, п-толуолсульфонил и метансульфонил соответственно. Более подробный перечень сокращений, используемых рядовыми химиками-органиками в области техники, приведен в первом номере каждого тома 1оита1 оί ОгдаЫс СНешННу; этот перечень, как правило, представлен в виде таблицы, озаглавленной Стандартный перечень сокращений. Сокращения, содержащиеся в указанном перечне, и все сокращения, используемые рядовыми химиками-органиками в области техники, тем самым, включены посредством ссылки.

- 25 029531

Способы оценки соединений

Активность глутаминазы можно отслеживать путем выявления выработки одного из продуктов реакции, глутамата или аммиака. В некоторых вариантах осуществления измеряют выработку глутамата, поскольку аммиак является продуктом любой из ряда биологических реакций.

Выработку глутамата можно измерять с помощью любого из ряда стандартных способов, известных в данной области техники, например, способы химического и хроматографического выявления и сопряженные ферментные анализы, в которых используют ΝΑΌΗ и глутаматдегидрогеназу. Концентрации внеклеточного глутамата также можно измерять ίη νίνο с применением способов микродиализа, известных в данной области техники. Одним подходящим способом измерения глутамата является основанный на микротитрации двухстадийный анализ, в котором глутамат, образованный на начальной стадии, количественно дезаминируют с помощью глутаматдегидрогеназы с получением эквивалентного количества ΝΑΌΗ (СоЕГгсу с1 а1., 1977; Куаттс с1 а1., 1985), который затем можно выявлять с помощью спектрофотометрии.

Способы лечения

В одном варианте осуществления предусмотрено применение для лечения или предупреждения заболевания, состояния или нарушения, как описано в данном документе (например, лечение), включающее введение соединения, фармацевтически приемлемой соли соединения или фармацевтической композиции, содержащей соединение, описанное в данном документе (например, соединение формулы (I) или в табл. 1).

Соединения и композиции, описанные в данном документе, можно вводить в клетки в культуре, например, ίη νίίτο или ех νίνο, или субъекту, например, ίη νίνο для лечения, предупреждения и/или диагностики ряда нарушений, в том числе описываемых в данном документе ниже.

Применяемый в данном документе термин "лечить" или "лечение" определяется как применение или введение соединения, отдельно или в комбинации со вторым соединением, субъекту, например пациенту, или применение или введение соединения в выделенную ткань или клетку, например, клеточную линию от субъекта, например пациента, который имеет нарушение (например, нарушение, описываемое в данном документе), симптом нарушения или предрасположенность к нарушению, с целью излечения, исцеления, облегчения, ослабления, изменения, вылечивания, уменьшения интенсивности, улучшения или воздействия на нарушение, один или несколько симптомов нарушения или предрасположенность к нарушению (например, для предупреждения по меньшей мере одного симптома нарушения или отсрочки проявления по меньшей мере одного симптома нарушения).

Применяемое в данном документе количество соединения, эффективное для лечения нарушения или "терапевтически эффективное количество", относится к количеству соединения, которое является эффективным при введении в виде одной дозы или нескольких доз субъекту при обработке клетки или при излечении, облегчении, ослаблении или улучшении состояния субъекта с нарушением, превышающим то, что ожидается при отсутствии такой обработки.

Применяемое в данном документе количество соединения, эффективное для предупреждения нарушения, или "профилактически эффективное количество" соединения относится к количеству, эффективному, при введении в виде одной или нескольких доз, субъекту в предупреждении или отсрочки случая проявления или повторного появления нарушения или симптома нарушения.

Термины "пациент" и "субъект" являются синонимичными, и как применяется в данном документе, относятся к животному, как правило, человеку (т.е. мужчине или женщине любой возрастной группы, например, пациенту детского возраста или взрослому пациенту или другому млекопитающему, такому как приматы (например, макаки-крабоеды, макаки-резусы); имеющим коммерческое значение млекопитающим, таким как крупный рогатый скот, свиньи, лошади, овцы, козы, кошки и/или собаки; и/или птицам, в том числе имеющим коммерческое значение птицам, таким как куры, утки, гуси и/или индейки, которые будут или были объектом лечения, наблюдения и/или эксперимента. Если термин применяется в связи с введением соединения или лекарственного средства, тогда пациент был объектом лечения, наблюдения и/или введения соединения или лекарственного средства.

Виды рака.

Способы, описанные в данном документе, можно применять в случае любого рака, например, описываемых Национальным институтом рака. Рак можно оценивать для определения того, можно ли применять способ, описанный в данном документе. Иллюстративные виды рака могут включать без ограничений рак легкого, например немелкоклеточный рак легкого; рак молочной железы, например трижды негативный рак молочной железы; или гепатоцеллюлярную карциному, остеосаркому, виды липом, хондросаркому или мезотелиому. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из рака толстой кишки, почечно-клеточной карциномы, острого миелоидного лейкоза (АМЬ), меланомы и множественной миеломы.

Рак может представлять собой первичную опухоль, т.е. располагаться в анатомической локализации инициации опухолевого роста. Рак также может быть метастатическим, т.е. появляться, по меньшей мере, во второй анатомической локализации, отличающейся от анатомической локализации инициации опухолевого роста. Рак может представлять собой рецидив рака, т.е. рак, который появляется вновь по- 26 029531

сле лечения и после периода времени, в течение которого рак не выявляли. Рецидив рака может анатомически располагаться в месте исходной опухоли, например анатомически вблизи исходной опухоли; регионарно относительно исходной опухоли, например, в лимфоузле, расположенном вблизи исходной опухоли; или отдаленно относительно исходной опухоли, например, анатомически в области, удаленной от исходной опухоли.

Композиции и пути введения.

Композиции, установленные в данном документе, включают соединения, установленные в данном документе (например, соединение, описанное в данном документе), а также дополнительные терапевтические средства, в случае наличия, в количествах, эффективных для обеспечения модулирования заболевания или симптомов заболевания, в том числе описываемых в данном документе.

Термин "фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество" относится к носителю или вспомогательному веществу, которое можно вводить субъекту, вместе с соединением, предусмотренным в данном документе, и которое не подавляет его фармакологическую активность и является нетоксичным при введении в дозах, достаточных для доставки терапевтического количества соединения.

Фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества и среды, которые можно применять в фармацевтических композициях, предусмотренных в данном документе, включают без ограничений ионообменные смолы, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, самоэмульгирующиеся системы лекарственной доставки (8ΕΌΌ8), такие как ά-α-токоферол-полиэтиленгликоль 1000-сукцинат, поверхностно-активные вещества, применяемые в фармацевтических лекарственных формах, такие как виды Твина или другие аналогичные полимерные матрицы для доставки, сывороточные белки, такие как человеческий сывороточный альбумин, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, смеси неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протамина сульфат, двузамещенный фосфорнокислый натрий, фосфорнокислый калий, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, карбоксиметилцеллюлоза натрия, полиакрилаты, воски, блок-сополимеры полиэтилена и полиоксиэтилена, полиэтиленгликоль и ланолин. Циклодекстрины, такие как α-, β- и γ-циклодекстрин, или химически модифицированные производные, такие как гидроксиалкилциклодекстрины, в том числе 2- и 3-гидроксипропил-в-циклодекстрины, или другие солюбилизированные производные также можно успешно применять для улучшения доставки соединений формул, описанных в данном документе.

Фармацевтические композиции, предусмотренные в данном документе, можно вводить перорально, парентерально, путем ингаляционного распыления, путем местного нанесения, ректально, назально, буккально, вагинально или посредством имплантированного депо, предпочтительно, путем перорального введения или введения инъекцией. Фармацевтические композиции, предусмотренные в данном документе, могут содержать любые традиционные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества или среды. В некоторых случаях рН состава можно доводить с помощью фармацевтически приемлемых солей, оснований или буферов для улучшения стабильности составленного соединения или его формы доставки. Применяемый в данном документе термин "парентеральный" включает подкожную, внутрикожную, внутривенную, внутримышечную, интраартикулярную, внутриартериальную, внутрисуставную, внутригрудинную, интратекальную, внутриочаговую и внутричерепную инъекцию или техники инфузии.

Фармацевтические композиции могут быть в форме стерильного инъекционного препарата, например, в виде стерильной инъекционной водной или маслянистой суспензии. Эту суспензию можно составлять согласно методикам, известным в данной области техники, с применением подходящих диспергирующих или смачивающих средств (таких как, например, Твин 80) и суспендирующих средств. Стерильный инъекционный препарат также может представлять собой стерильный инъекционный раствор или суспензию в нетоксичном, подходящем для парентерального введения разбавителе или растворителе, например, в виде раствора в 1,3-бутандиоле. Среди подходящих сред и растворителей, которые можно использовать, маннит, вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. В дополнение, в качестве растворителя или суспендирующей среды традиционно используют стерильные нелетучие масла. С этой целью можно использовать любое мягкое нелетучее масло, в том числе синтетические моноили диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, применимы в получении инъекционных препаратов, равно как и природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно в виде их полиоксиэтилированных вариантов. Эти растворы или суспензии на основе масла также могут содержать длинноцепочечный спиртовой разбавитель или диспергирующее вещество, или карбоксиметилцеллюлозу, или подобные диспергирующие средства, которые обычно применяют в составлении фармацевтически приемлемых лекарственных форм, таких как эмульсии и/или суспензии. Другие обычно применяемые поверхностноактивные вещества, такие как виды Твина или Спана, и/или другие подобные эмульгирующие средства или усилители биодоступности, которые обычно применяют в производстве фармацевтически приемле- 27 029531

мых твердых, жидких или других лекарственных форм, также можно применять для целей составления.

Фармацевтические композиции, предусмотренные в данном документе, можно вводить перорально в любой подходящей для перорального введения лекарственной форме, в том числе без ограничений капсулах, таблетках, эмульсиях и водных суспензиях, дисперсиях и растворах. В случае таблеток для перорального применения обычно применяемые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Также, как правило, добавляют смазывающие средства, такие как стеарат магния. Для перорального введения в форме капсулы применимые разбавители включают лактозу и сухой кукурузный крахмал. Если водные суспензии и/или эмульсии вводят перорально, активный ингредиент может быть суспендирован или растворен в масляной фазе, объединенной с эмульгирующими и/или суспендирующими средствами. В случае необходимости можно добавлять определенные подслащивающие, и/или ароматизирующие, и/или окрашивающие средства.

Фармацевтические композиции, предусмотренные в данном документе, также можно вводить в форме суппозиториев для ректального введения. Эти композиции можно получать путем смешивания соединения, предусмотренного в данном документе, с подходящим нераздражающим наполнителем, который является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре и, следовательно, будет плавиться в прямой кишке с высвобождением активных компонентов. Такие материалы включают без ограничений масло какао, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.

Местное введение фармацевтических композиций, предусмотренных в данном документе, применимо, если требуемое лечение подразумевает области или органы, легко доступные при местном нанесении. Для местного нанесения на кожу фармацевтическую композицию следует составлять с подходящей мазью, содержащей активные компоненты, суспендированные или растворенные в носителе. Носители для местного применения соединений, предусмотренных в данном документе, включают без ограничений минеральное масло, жидкий вазелин, белый вазелин, пропиленгликоль, соединение полиоксиэтилена-полиоксипропилена, эмульгирующий воск и воду. Альтернативно, фармацевтическую композицию можно составлять с подходящим лосьоном или кремом, содержащими активное соединение, суспендированное или растворенное в носителе с помощью подходящих эмульгирующих средств. Подходящие носители включают без ограничений минеральное масло, сорбитанмоностеарат, полисорбат 60, воск сложных цетиловых эфиров, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду. Фармацевтические композиции, предусмотренные в данном документе, также можно местно наносить в отношении нижней части кишечника с помощью состава ректального суппозитория или в подходящем составе в виде клизмы. Также включены местные трансдермальные пластыри.

Фармацевтические композиции, предусмотренные в данном документе, можно вводить с помощью назального аэрозоля или ингаляции. Такие композиции получают согласно методикам, хорошо известным в области техники фармацевтических составов, и можно готовить в виде растворов в физиологическом растворе, используя бензиловый спирт или другие подходящие консерванты, усилители всасывания для улучшения биодоступности, фторуглероды, и/или другие солюбилизирующие или диспергирующие средства, известные из уровня техники.

Если композиции, предусмотренные в данном документе, содержат комбинацию соединения формул, описанных в данном документе, и одного или нескольких дополнительных терапевтических или профилактических средств, как соединение, так и дополнительное средство должны присутствовать при уровнях дозировки от приблизительно 1 до 100% и более предпочтительно от приблизительно 5 до 95% дозировки, обычно вводимой при схеме монотерапии. Дополнительные средства можно вводить отдельно, как часть схемы с несколькими дозами, от соединений, предусмотренных в данном документе. Альтернативно, эти средства могут составлять часть единой лекарственной формы, смешанные вместе с соединениями, предусмотренными в данном документе, в единой композиции.

Соединения, описанные в данном документе, например, можно вводить путем инъекции, внутривенно, внутриартериально, подкожно, внутрибрюшинно, внутримышечно или подкожно или перорально, буккально, назально, трансмукозально, местно, в виде офтальмологического препарата или путем ингаляции, с дозировкой в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 100 мг/кг массы тела, альтернативно, с дозировками от 1 до 1000 мг/доза, каждые 4-120 ч или согласно требованиям конкретного лекарственного средства. Способы в данном документе подразумевают введение эффективного количества соединения или композиции соединения для достижения требуемого или заявленного эффекта. Как правило, фармацевтические композиции, предусмотренные в данном документе, будут вводиться от приблизительно 1 до приблизительно 6 раз в день или, альтернативно, в качестве длительной инфузии. Такое введение можно применять в качестве хронической или острой терапии. Количество активного ингредиента, который можно комбинировать с материалами носителя для получения единой лекарственной формы, будет варьировать в зависимости от реципиента лечения и конкретного способа введения. Типичный препарат будет содержать от приблизительно 5 до приблизительно 95% активного соединения (вес./вес.). Альтернативно, такие препараты содержат от приблизительно 20 до приблизительно 80% активного соединения.

Могут потребоваться более низкие или более высокие дозы, чем упомянутые выше. Специфичные дозировки и схемы лечения для любого конкретного пациента будут зависеть от ряда факторов, в том

- 28 029531

числе активности специфичного используемого соединения, возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола, пищевого рациона, времени введения, скорости экскреции, комбинации лекарственных средств, тяжести и течения заболевания, состояния или симптомов, предрасположенности пациента к заболеванию, состоянию или симптомам и заключения лечащего врача.

При улучшении состояния пациента, при необходимости, можно вводить поддерживающую дозу соединения, композиции или комбинации, предусмотренных в данном документе. В дальнейшем дозировку или частоту введения или и то, и другое можно снижать в зависимости от симптомов до уровня, при котором улучшенное состояние сохраняется, при этом симптомы были облегчены до требуемого уровня. Однако пациентам может требоваться прерывистое лечение в течение длительного времени до какого-либо повторного появления симптомов заболевания.

Отбор и мониторинг пациентов.

Соединения, описанные в данном документе, могут ингибировать глутаминазу. Соответственно, пациента и/или субъекта можно отбирать для лечения с применением соединения, описанного в данном документе, вначале путем проведения оценки пациента и/или субъекта для определения, нуждается ли субъект в ингибировании глутаминазы, и если определено, что субъект нуждается в ингибировании глутаминазы, тогда путем введения субъекту соединения, описанного в данном документе.

Оценку субъекта в отношении необходимости ингибирования глутаминазы можно проводить с применением способов, известных из уровня техники, например путем измерения у пациента присутствия и/или активности глутаминазы. В некоторых вариантах осуществления активность и/или уровень глутаминазы оценивают в злокачественном новообразовании.

У пациента, получающего соединение, описанное в данном документе, можно проводить мониторинг, например, в отношении улучшения состояния и/или побочных действий. Улучшение состояния пациента можно оценивать, например, путем отслеживания роста, отсутствия роста или регрессии рака (например, опухоли). В некоторых вариантах осуществления пациента оценивают с применением радиологического анализа или оценки показателей гемолиза.

Пациента и/или субъекта можно отбирать для лечения с применением соединения, описанного в данном документе, необязательно, путем получения образца от пациента; оценки образца для определения, характеризуется ли образец ί) низким уровнем экспрессии Е-кадгерина по сравнению с эталонным стандартом, ίί) высоким уровнем экспрессии виментина по сравнению с эталонным стандартом и/или ίίί) низким или пониженным уровнем экспрессии пируваткарбоксилазы по сравнению с эталонным стандартом; и если определено, что пациент имеет низкий уровень экспрессии Е-кадгерина по сравнению с эталонным стандартом или высокий уровень экспрессии виментина по сравнению с эталонным стандартом, тогда пациенту вводят соединение, описанное в данном документе.

В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии Е-кадгерина сравнивают с эталонным стандартом, где эталонный стандарт представляет собой уровень экспрессии Е-кадгерина в эпителиальной клетке, как охарактеризовано в какой-либо из следующих ссылок: (Уаисй е! а1., (2005), Сйп. Сапсег Рев. 11:24; 8ауадпет е! а1., (2010), Апп Опсо1. 21(вирр1 7): νίί89; ТЫету е! а1., (2002), №!ите Ре\эе\ув Сапсег, 2(6):442). В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии Е-кадгерина является низким, пониженным или отсутствует по сравнению с эталонным стандартом. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии Е-кадгерина измеряют путем оценки уровня РНК, которая кодирует Е-кадгерин. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии Е-кадгерина оценивают по уровню белковой экспрессии Е-кадгерина. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии Е-кадгерина по меньшей мере на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80 или 90% меньше, чем уровень эталонного стандарта. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии Е-кадгерина понижен по меньшей мере в 1,5, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100 раз в экспрессии по сравнению с эталонным стандартом.

В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии виментина сравнивают с эталонным стандартом, где эталонный стандарт представляет собой уровень экспрессии виментина в эпителиальной клетке, как охарактеризовано в какой-либо из следующих ссылок: (Уаисй е! а1., (2005), Сйп. Сапсег Рев. 11:24; 8ауадпет е! а1., (2010), Апп Опсо1. 21(вирр1 7): уй89; ТЫету е! а1., (2002), №-Ииге Ре\эе\ув Сапсег, 2(6):442). В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии виментина измеряют путем оценки уровня РНК, которая кодирует виментин. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии виментина оценивают по уровню белковой экспрессии виментина. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии виментина по меньшей мере на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80 или 90% больше, чем уровень эталонного стандарта. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии виментина повышен по меньшей мере в 1,5, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100 раз в экспрессии по сравнению с эталонным стандартом.

В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии пируваткарбоксилазы является низким или пониженным по сравнению с эталонным стандартом, где эталонный стандарт представляет собой уровень экспрессии пируваткарбоксилазы в эпителиальной клетке, как охарактеризовано в какой-либо из следующих ссылок: (Уаисй е! а1., (2005), Сйп. Сапсег Рев. 11:24; 8ауадпет е! а1., (2010), Апп. Опсо1. 21(вирр1 7): νίί89; ТЫету е! а1., (2002), №-Ииге Реу1еув Сапсег, 2(6):442). В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии пируваткарбоксилазы является высоким или повышенным по сравнению с

- 29 029531

эталонным стандартом. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии пируваткарбоксилазы измеряют путем оценки уровня РНК, которая кодирует пируваткарбоксилазу. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии пируваткарбоксилазы оценивают по уровню белковой экспрессии пируваткарбоксилазы. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии пируваткарбоксилазы по меньшей мере на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80 или 90% больше, чем уровень эталонного стандарта. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии пируваткарбоксилазы повышен по меньшей мере в 1,5, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100 раз в экспрессии по сравнению с эталонным стандартом.

Образец от пациента.

Термины "образец от пациента", "образец от субъекта" и "образец" применяются в данном документе взаимозаменяемо. Образец от пациента может представлять собой ткань, или биологическую жидкость, или продукт организма. Образцы ткани могут включать фиксированные, залитые парафином, свежие или замороженные образцы. Например, образец ткани может включать биопсию, мазок из ротовой полости. Иллюстративные ткани включают ткани легкого, молочной железы, головного мозга, нервную ткань, почки, яичника, щитовидной железы, поджелудочной железы, толстой кишки, предстательной железы, лимфоузла, кожи, фолликулов волос и ногтей. Иллюстративные образцы включают образцы, полученные из солидных опухолей. Иллюстративные биологические жидкости включают кровь, плазму, мочу, лимфу, слезы, пот, слюну, сперму и спинномозговую жидкость. Иллюстративные продукты организма включают выдыхаемый воздух.

Ткань, жидкость или продукт можно отбирать у пациента и анализировать. Оценка может включать одно или несколько из следующих: осуществление анализа ткани, жидкости или продукта; запрос анализа ткани, жидкости или продукта; запрос результатов анализа ткани, жидкости или продукта; или получение результатов анализа ткани, жидкости или продукта.

Образец ткани, жидкости или продукта можно анализировать в отношении уровня экспрессии гена, описанного в данном документе, например, гена Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы. Образец ткани, жидкости или продукта можно анализировать в отношении уровня экспрессии белка, описанного в данном документе, например, Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы. Образец ткани, жидкости или продукта можно анализировать в отношении уровня генной экспрессии гена или нескольких генов предварительно выбранного сигнального пути или фенотипического пути, например пути эпителиальномезенхимального перехода, пути Е-кадгерина, пути виментина или пути пируваткарбоксилазы. Образец ткани, жидкости или продукта можно анализировать в отношении уровня белковой экспрессии белка или нескольких белков предварительно выбранного сигнального пути или фенотипического пути, например, пути эпителиально-мезенхимального перехода, пути Е-кадгерина, пути виментина или пути пируваткарбоксилазы.

Способы оценки образцов.

Уровень экспрессии гена, описанного в данном документе, например гена Е-кадгерина, виментина и пируваткарбоксилазы, можно оценивать с применением любого из большого числа хорошо известных способов выявления экспрессии транскрибированной молекулы, гена, белка, мРНК, геномной ДНК или кДНК. Г енную экспрессию можно измерять или отслеживать путем измерения генного транскрипта, например мРНК, путем измерения количества транслированного белка или путем измерения активности генного продукта; любое из которых можно измерять с применением стандартных методик, известных специалисту в данной области. Неограничивающие примеры таких способов включают способы гибридизации нуклеиновых кислот, способы обратной транскрипции нуклеиновых кислот, способы амплификации нуклеиновых кислот, иммунологические способы выявления белков, способы очистки белков, анализы функции или активности белка.

Е-кадгерин.

Ген Е-кадгерина локализован на 16-й хромосоме человека. Е-кадгерин представляет собой классический кадгерин из суперсемейства кадгеринов. Закодированный белок Е-кадгерин представляет собой кальций-зависимый гликопротеин клеточной адгезии, состоит из пяти внеклеточных кадгериновых повторов, трансмембранного участка и высококонсервативного цитоплазматического хвоста. Мутации в этом гене были связаны с раком, в том числе раком желудка, молочной железы, толстой и прямой кишок, щитовидной железы и яичника. Полагают, что потеря функции Е-кадгерина способствует прогрессированию рака путем повышения пролиферации, инвазии и/или метастазирования. Эктодомен этого белка опосредует бактериальную адгезию к клеткам млекопитающих, а цитоплазматический домен требуется для интернализации. Идентифицированные варианты транскрипта Е-кадгерина обусловлены мутацией в сайтах сплайсинга консенсусной последовательности.

Виментин.

Ген виментина локализован на 10-й хромосоме человека и кодирует представителя семейства белков промежуточных филаментов. Промежуточные филаменты, вместе с микротрубочками и актиновыми микрофиламентами, образуют клеточный цитоскелет, который помогает поддерживать форму клетки и целостность цитоплазмы, а также стабилизировать взаимодействия в цитоскелете. Функциями виментина также являются опосредывание иммунных ответов, контроль транспорта холестерина, образующегося из

- 30 029531

липопротеинов низкой плотности, из лизосом к сайтам эстерификации, а также роль организатора ряда критических белков, вовлеченных в прикрепление, миграцию и передачу сигнала в клетке.

Пируваткарбоксилаза (РС).

Ген РС локализован на 11-й хромосоме человека и кодирует белок пируваткарбоксилазу, который катализирует карбоксилирование пирувата в оксалоацетат. Активный фермент является гомотетрамером, расположенным в виде тетраэдра, который локализован исключительно в митохондриальном матриксе. Пируваткарбоксилаза вовлечена в несколько клеточных процессов, в том числе глюконеогенез, липогенез, секрецию инсулина и синтез нероймедиатора глутамата. Мутации в этом гене были ассоциированы с дефицитом пируваткарбоксилазы. Были идентифицированы варианты транскриптов с альтернативным сплайсингом с отличающимися 5' ИТК, но кодирующие тот же белок.

Молекулы нуклеиновой кислоты.

Способы, описанные в данном документе, могут относиться к оценке образца в отношении экспрессии гена, описанного в данном документе, например гена Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы; на основе выделенных нуклеиновых кислот, которые соответствуют гену, описанному в данном документе, например, с помощью уровня мРНК Е-кадгерина; уровня мРНК виментина; уровня мРНК пируваткарбоксилазы. Предполагается, что применяемый в данном документе термин "нуклеиновая кислота" или "молекула нуклеиновой кислоты" включает молекулы ДНК (например, кДНК или геномную ДНК), и молекулы РНК (например, мРНК), и аналоги ДНК или РНК, полученные с применением аналогов нуклеотидов. Молекула нуклеиновой кислоты может быть однонитевой или двухнитевой.

"Выделенной" молекулой нуклеиновой кислоты является такая, которая отделена от других молекул нуклеиновой кислоты, которые присутствуют в природном источнике молекулы нуклеиновой кислоты. "Выделенная" молекула нуклеиновой кислоты может не содержать последовательности (такие как кодирующие белок последовательности), которые в норме фланкируют нуклеиновую кислоту (т.е. последовательности, расположенные на 5'- и З'-концах нуклеиновой кислоты) в геномной ДНК организма, из которого получена нуклеиновая кислота. "Выделенная" молекула нуклеиновой кислоты, такая как мРНК, может фактически не содержать другой клеточный материал или другие загрязняющие белки из источника клеток или тканей, из которого получена нуклеиновая кислота.

Молекулу нуклеиновой кислоты, описанную в данном документе, можно выделять с применением стандартных методик молекулярной биологии и информации о последовательности, доступной в записях баз данных, известных специалистам в данной области. Для применения всей или части таких последовательностей нуклеиновых кислот молекулы нуклеиновой кислоты, описанные в данном документе, можно выделять с применением стандартных методик гибридизации и клонирования (например, как описано в БашЪтоок с1 а1., еб., Мо1еси1аг С1ошид: А ЬаБогаФту Мапиа1, 2^пб еб., Со1б Брттд НагЬог ЬаЪогаФгу Рте88, Со1б Бртшд НагЬог, ΝΥ, 1989).

Молекулу нуклеиновой кислоты, описанную в данном документе, можно амплифицировать с применением в качестве матрицы кДНК, мРНК или геномной ДНК и подходящих олигонуклеотидных праймеров согласно стандартным методикам ПЦР-амплификации. Амплифицированные таким образом молекулы нуклеиновой кислоты можно клонировать в подходящий вектор и охарактеризовать при помощи анализа последовательности ДНК. Более того, олигонуклеотиды, соответствующие всей молекуле нуклеиновой кислоты или ее части, можно получать при помощи стандартных методик синтеза, например, с применением автоматизированного ДНК-синтезатора.

Выделенная молекула нуклеиновой кислоты может предусматривать молекулу нуклеиновой кислоты, которая имеет нуклеотидную последовательность, комплементарную нуклеотидной последовательности нуклеиновой кислоты, соответствующей гену, описанному в данном документе, или нуклеотидной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, который соответствует гену, описанному в данном документе. Молекула нуклеиновой кислоты, которая комплементарна данной нуклеотидной последовательности, представляет собой молекулу, которая в достаточной степени комплементарна данной нуклеотидной последовательности, так что она может гибридизироваться с данной нуклеотидной последовательностью, при этом с формированием стабильного дуплекса.

Молекула нуклеиновой кислоты, описанная в данном документе, может предусматривать только часть последовательности нуклеиновой кислоты. Такие молекулы нуклеиновой кислоты можно применять, например, в качестве зонда или праймера. Зонд/праймер может представлять собой один или несколько фактически очищенных олигонуклеотидов. Зонды на основе последовательности молекул нуклеиновой кислоты, описанных в данном документе, можно применять для выявления транскриптов или геномных последовательностей, соответствующих генам, описанным в данном документе. Зонд может содержать группу-метку, например радиоизотоп, флуоресцентное соединение, фермент или кофактор фермента. Такие зонды можно применять как часть диагностического тестового набора для идентификации клеток или тканей, которые экспрессируют белок, в частности, путем измерения уровней молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок в образце из клеток от пациента, например, путем выявления уровней мРНК.

- З1 029531

Способы выявления экспрессии гена.

Способы выявления и/или количественного определения генного транскрипта, например мРНК или полученной из нее кДНК, могут включать без ограничений анализы с помощью саузерн-блоттинга, нозерн-блоттинга, полимеразной цепной реакции (РСК) и матрицы с зондами. Способы выявления и/или количественного определения генного транскрипта, например мРНК или полученной из нее кДНК, могут включать без ограничений способы на основе гибридизации, например гибридизацию с зондом, который является специфичным в отношении генного транскрипта, например мРНК или полученной из нее кДНК. Уровень генного транскрипта, например мРНК или полученной из нее кДНК, можно анализировать путем нанесения образца, или мРНК или полученной из нее кДНК, или амплифицированной из нее на микроматрицу с нуклеиновыми кислотами или матрицу-чип.

Уровень генного транскрипта, например мРНК или полученной из нее кДНК, можно анализировать с помощью способа на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР), например с помощью количественной ПЦР, количественной ПЦР в режиме реального времени, ПРЦ в режиме реального времени, ПЦР с обратной транскрипцией, ПЦР с обратной транскрипцией в режиме реального времени. Уровень генного транскрипта, например мРНК или полученной из нее кДНК, можно анализировать с помощью способа на основе секвенирования, например с помощью количественного РНК-секвенирования.

Уровень генного транскрипта, например мРНК, можно определять при помощи ίη 8ΐΙι.ι или ίη νίίτο способов, известных из уровня техники. Для ίη νίίτο способов любую методику выделения РНК, которая не является селективной в отношении выделения мРНК, можно использовать для очистки РНК из образца, например из клеток образца (см., например, Ли8иЬе1 с1 а1., ей., СиггсШ РгоЮсоЕ ίη Мо1еси1аг Βίοίοβν. ίοΐιη \УПеу & δοη8, Ыете ΥοιΊν 1987-1999). Кроме того, большое количество образцов ткани можно легко обрабатывать с применением методик, хорошо известных специалистам в данной области, таких как, например, одностадийный способ выделения РНК по Οιοιικ:ζγη8ΐ<ί (1989, патент США № 4843155). Для ίη 8Йи способов мРНК не требуется выделять из клеток перед выявлением. В таких способах клетку или образец ткани можно готовить/обрабатывать с применением известных гистологических способов. Затем образец можно иммобилизировать на подложке, и затем обеспечить контакт с зондом, который может гибридизоваться с мРНК, которая кодирует генный транскрипт, представляющий интерес.

Определения могут быть основаны на абсолютном уровне экспрессии; нормализованном уровне экспрессии или относительном уровне экспрессии генного транскрипта, например, мРНК. Уровни экспрессии можно нормализовать путем корректировки абсолютного уровня экспрессии генного транскрипта путем сравнения его уровня экспрессии с уровнем экспрессии другого гена, который стабильно экспрессируется, например, гена домашнего хозяйства, который экспрессируется постоянно. Подходящие гены для нормализации включают гены домашнего хозяйства, такие как ген гистона Н3 или ген актина. Нормализация обеспечивает возможность сравнения уровня экспрессии в одном образце относительно другого образца, например, в первом образце, взятом у пациента, со вторым образцом, взятым у того же пациента, например, из другой ткани или в другой момент времени; или между образцами из различных источников, например, образца от пациента одного пациента с образцом от пациента другого пациента.

Уровень экспрессии можно получать в виде относительного уровня экспрессии. Относительный уровень экспрессии можно определять путем сравнения абсолютного уровня экспрессии генного транскрипта, например мРНК, с эталонным стандартом. Эталонный стандарт может включать уровень экспрессии генного транскрипта, представляющего интерес, в генотипически или фенотипически определенном образце. Эталонный стандарт может представлять собой уровень экспрессии генного транскрипта, представляющего интерес, например, гена Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы, в клетке, генотипически или фенотипически охарактеризованной как эпителиальная клетка. Эпителиальную клетку можно характеризовать, как в какой-либо из следующих ссылок: (Υ;·ιιι:1ι еί а1., (2005), С1ш. С;тсег Ке8. 11:24; δανα^τ еί а1., (2010), Αηη Οη:ο1. 21(8ирр1 7): νίί89; ТЫету еί а1., (2002), ЫаЩге Кеу1е^8 Сагоет, 2(6):442).

Уровень экспрессии генного транскрипта, описанного в данном документе, например гена Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы, можно измерять по меньшей мере в два момента времени для определения того, произошло ли изменение в уровне экспрессии. Например, уровень экспрессии можно измерять до и после лечения с помощью соединения, описанного в данном документе, или в один или несколько моментов времени, пока лечение с помощью соединения, описанного в данном документе, продолжается. Если обнаружено, что уровень экспрессии понижен, например, пониженная экспрессия Е-кадгерина по сравнению с эталонным стандартом и/или повышенная экспрессия виментина по сравнению с эталонным стандартом; у субъекта можно проводить лечение с помощью соединения, описанного в данном документе. Эталонный стандарт может представлять собой уровень экспрессии генного транскрипта, представляющего интерес, в охарактеризованной эпителиальной клетке. Эпителиальную клетку можно характеризовать с помощью способов, известных из уровня техники, как, например, в какой-либо из следующих ссылок: (Υ;ηι:1ι еί а1., (2005), С1ш. Сансе!· Ке8. 11:24; §аνа§ηе^ еί а1., (2010), Αηη Οη:ο1. 21(8ирр1 7): νίί89; ТЫету еί а1., (2002), ЫаЫге Кеу!е\т8 Сагает, 2(6):442).

- 32 029531

Белки.

Способы, описанные в данном документе, могут относиться к оценке образца в отношении экспрессии гена, описанного в данном документе, например гена Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы; на основе выделенных белков, которые соответствуют гену, описанному в данном документе, например, с помощью уровня белка Е-кадгерина; уровня белка виментина; уровня белка пируваткарбоксилазы. Это также может включать оценку биологически активных частей, вариантов, изоформ или их сплайсвариантов. Нативный полипептид, соответствующий белку, представляющему интерес, можно выделять из образца с помощью подходящей схемы очистки с применением стандартных методик очистки белка, известных специалистам в данной области.

"Выделенный" или "очищенный" белок или его биологически активная часть фактически не содержат клеточного материала или других загрязняющих белков из источника клетки или ткани, из которого получен белок. Выражение "фактически не содержит клеточный материал" включает препараты белка, в которых белок отделяют от клеточных компонентов клетки, из которой он выделен. Биологически активные части полипептида могут включать аминокислотные последовательности, в достаточной степени идентичные или полученные из аминокислотной последовательности белка, которые включают меньше аминокислот, чем белок полной длины, и проявляют по меньшей мере одну активность соответствующего белка полной длины. Как правило, биологически активные части подразумевают домен или мотив по меньшей мере с одной активностью соответствующего белка.

Способы выявления экспрессии белка.

С помощью любого из ряда средств, хорошо известных специалистам в данной области, можно выявлять и количественно определять уровень экспрессии белка или полипептида. Способы выявления и/или количественного определения белка или полипептида, описанного в данном документе, например Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы, могут включать без ограничений биохимические способы, такие как электрофорез, капиллярный электрофорез, высокоэффективную жидкостную хроматографию (НРЬС), тонкослойную хроматографию (ТЬС), гипердиффузионную хроматографию и т.п., или различные иммунологические анализы, такие как реакции преципитации в жидкости или геле, иммунодиффузия (одинарная или двойная), иммуноэлектрофорез, радиоиммунологический анализ (ΡΙΑ). твердофазные иммуноферментные анализы (ЕЫЗА), иммунофлуоресцентные анализы, вестерн-блоттинг, иммуногистохимия, ίη Ши гибридизация, клеточная сортировка с активацией флуоресценции (РАС8) и т.п. Квалифицированный специалист в данной области может легко адаптировать известные способы выявления белка/антитела для применения в определении того, экспрессирует ли клетка белок или полипептид, описанные в данном документе.

Белок или полипептид можно выявлять с применением иммунологического анализа. Как применяется в данном документе, иммунологические анализы включают анализы, в которых используют антитело для специфического связывания с белком или полипептидом. Иммунологический анализ может характеризоваться по выявлению специфичного связывания белка или полипептида с антителом, в противоположность применению других физических или химических свойств для выделения, нацеливания и количественного определения полипептида. Полипептид можно выявлять и/или количественно определять с применением любого из ряда широко известных анализов иммунологического связывания (см., например, патенты США № 4366241; 4376110; 4517288 и 4837168). Для обзора общих иммунологических анализов, см. также Αδαί (1993), Ме1ЬоЙ8 ίη Се11 Βίοίοβν Уо1ите 37: АпИЬоШек ίη Се11 Вю1о§у, Асайепис Рге88, 1пс. №\υ Уогк; ЗШез & Тегг (1991), Ва81С апй СЬшса1 1ттипо1оду 7* ЕйШоп. Иммунологические анализы для выявления и/или количественного определения белка или полипептида могут иметь большое количество форматов, хорошо известных специалистам в данной области.

Антитело, способное к связыванию с белком или полипептидом, например антитело с детектируемой меткой (либо непосредственно, либо опосредованно меченное), соответствующее белку или полипептиду, описанным в данном документе, например Е-кадгерину, виментину, пируваткарбоксилазе, можно применять для выявления белка или полипептида. Антитела могут быть поликлональными или моноклональными. Можно применять интактное антитело или его фрагмент, например РаЬ или Р(аЬ')₂. Предполагается, что термин "меченый", по отношению к зонду или антителу, охватывает непосредственное мечение зонда или антитела путем присоединения, т.е. физического связывания детектируемого вещества с зондом или антителом, а также опосредованное мечение зонда или антитела путем реагирования с другим реагентом, который непосредственно помечен. Примеры опосредованного мечения включают выявление первичного антитела с применением вторичного антитела с флуоресцентной меткой и конечного мечения ДНК-зонда с помощью биотина, так что его можно выявлять с помощью стрептавидина с флуоресцентной меткой. Антитело также может быть меченным, например, антителом с радиоактивной меткой, хромофорной меткой, флуорофорной меткой или ферментной меткой. Применяют производное антитела, например антитело, конъюгированное с субстратом, или с белком или лигандом из пары белок-лиганд, например биотин-стрептавидин, или фрагмент антитела, например одноцепочечное антитело, гипервариабельный домен выделенного антитела и т.д., который специфично связывается с белком, описанным в данном документе, например, Е-кадгерином, виментином, пируваткарбоксилазой, таким как белок, кодируемый открытой рамкой считывания, соответствующей генному транскрипту бел- 33 029531

ка или полипептида, описанного в данном документе, например Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы, или таким как белок или полипептид, который подвергся всей или части его нормальной посттрансляционной модификации.

Белки из клеток можно выделять с применением методик, хорошо известных специалистам в данной области. Используемые способы выделения белка могут представлять собой, например, описываемые в Нат1о№ аиб Байе (Нат1оте аиб Байе, 1988, АийЪоЛек: А БаЪогаЮгу Мапиа1, Со1б Бртшд НатЬот БаЪогаЮгу Ргезз, Со1б Бртшд НагЪог, Ыете Уогк).

Уровень экспрессии можно получать в виде относительного уровня экспрессии. Относительный уровень экспрессии можно определять путем сравнения абсолютного уровня экспрессии белка с эталонным стандартом. Эталонный стандарт может включать уровень экспрессии белка, представляющего интерес, в генотипически или фенотипически определенном образце. Эталонный стандарт может представлять собой уровень экспрессии белка, представляющего интерес, например Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы, в клетке, генотипически или фенотипически охарактеризованной как эпителиальная клетка. Эпителиальную клетку можно характеризовать с помощью способов, известных из уровня техники, как, например, описано в какой-либо из следующих ссылок: (УаисЬ е! а1., (2005), С1ш. Сапсег Рез. 11:24; Бауадпет е! а1., (2010), Апп Опсо1. 21(зирр1 7): νίί89; ТЫегу е! а1., (2002), ЫаЫте Ре\ае\\'8 Сапсег, 2(6):442).

Уровень экспрессии белка или полипептида, описанных в данном документе, например Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы, можно измерять по меньшей мере в два момента времени для определения того, произошло ли изменение в уровне экспрессии. Например, уровень экспрессии можно измерять до и после лечения с помощью соединения, описанного в данном документе, или в один или несколько моментов времени, пока лечение с помощью соединения, описанного в данном документе, продолжается. Если обнаружено, что уровень экспрессии понижен, например пониженная экспрессия Е-кадгерина по сравнению с эталонным стандартом и/или повышенная экспрессия виментина по сравнению с эталонным стандартом; у субъекта можно проводить лечение с помощью соединения, описанного в данном документе.

Наборы.

В данном документе также описаны наборы, содержащие средства для анализа уровня генной экспрессии гена, описанного в данном документе, например гена Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы. Например, набор может включать средство, способное взаимодействовать с продуктом генной экспрессии гена, описанного в данном документе, например гена Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы. Набор может включать несколько средств, способных взаимодействовать с продуктами генной экспрессии нескольких генов, описанных в данном документе, например генами Е-кадгерина, виментина, пируваткарбоксилазы. Средство может включать без ограничений антитело, несколько антител, олигонуклеотид или несколько олигонуклеотидов. Продукт генной экспрессии может включать без ограничений транскрибируемую молекулу, молекулу РНК, полипептид, белок, геномную ДНК или кДНК.

Дополнительно, набор может необязательно включать реагенты для осуществления анализов, описанных в данном документе. Например, набор может включать буферы, растворители, стабилизаторы, консерванты, колонки для очистки, реагенты для выявления и ферменты, которые могут понадобиться для выделения нуклеиновых кислот из образца от пациента, амплификации образцов, например, с помощью цРТ-РСР. и нанесения образцов на средство, описанное выше; или для выделения белков из образца от субъекта и нанесения образцов на средство, описанное выше; или реагенты для непосредственного нанесения образца от субъекта на средство, описанное выше. Набор также может включать образцы для положительного и отрицательного контроля, например контрольные образцы нуклеиновой кислоты (например, образец нуклеиновой кислоты от субъекта без рака, или образец неопухолевой ткани, или от субъекта, который не получал противоракового лечения, или другие тестовые образцы для тестирования в то же самое время, что и образцы от субъекта). Набор также может включать инструктивный материал, который может предоставлять руководство для сбора и обработки образцов от пациента, применения образцов в анализе уровня генной экспрессии и для интерпретации результатов анализа.

Компоненты набора могут предусматриваться в любой форме, например жидкой, сухой, полусухой или в лиофилизированной форме или в форме для хранения в замороженном состоянии. Как правило, компоненты набора предусмотрены в форме, которая является стерильной. Если реагенты предусмотрены в виде жидкого раствора, жидкий раствор, как правило, представляет собой водный раствор, например стерильный водный раствор. Если реагенты предусмотрены в сухой форме, растворение, как правило, осуществляют путем добавления подходящего растворителя. Растворитель, например стерильный буфер, необязательно, может быть предусмотрен в наборе.

Набор может включать один или несколько контейнеров для компонентов набора в концентрации, подходящей для применения в анализах уровня генной экспрессии, или с инструкциями для разбавления при применении в анализе. Набор может содержать отдельные контейнеры, разделители или компартменты для компонентов анализа и справочный материал. Например, образцы для положительного и отрицательного контроля могут содержаться в склянке или флаконе, классификационная таблица, применимая в клинической практике, может быть запаяна в стерильную пластиковую упаковку, и справочный

- 34 029531

материал может содержаться в пластиковом файле или пакете. Набор может включать несколько (например, упаковку) индивидуальных контейнеров, причем каждый содержит одну или несколько единичных форм (например, для применения в одном анализе) средства. Контейнеры набора могут быть воздухонепроницаемыми и/или водонепроницаемыми. Контейнер может иметь наклейку для применения.

Набор может включать справочный материал для осуществления и интерпретации анализа. Набор также может предусматривать указания в отношении того, куда сообщать результаты анализа, например, в центр лечения или поставщику медицинских услуг. Набор может включать формы для сообщения результатов анализа генной активности, описанного в данном документе, и адрес и контактную информацию, относящуюся к тому, куда посылать такие формы или другую сопутствующую информацию; или адрес ИКЬ (унифицированный указатель ресурсов) для сообщения результатов в базе данных онлайн или онлайн-приложении (например, приложение). В другом варианте осуществления справочный материал может включать указания, касающиеся того, должен ли пациент получать лечение с помощью средства против раковых стволовых клеток, в зависимости от результатов анализа.

Справочный материал наборов не ограничивается этой формой. Во многих случаях справочный материал, например инструкции, предусмотрен в печатном виде, например, отпечатанный текст, графический материал и/или фотография, например, этикетка или отпечатанный лист. Однако справочный материал также может предусматриваться в других форматах, таких как машиночитаемый материал, видеозапись или аудиозапись. Справочный материал набора может представлять собой контактную информацию, например физический адрес, адрес электронной почты, веб-сайт или номер телефона, где пользователь может получить содержательную информацию об анализе генной активности и/или его применении в способах, описанных в данном документе. Справочный материал также может предусматриваться в любой комбинации форматов.

Образец от субъекта может быть направлен к поставщику анализа, например поставщику услуг (такой как учреждение третьей стороны) или поставщику медицинских услуг, который оценивает образец в анализе и предоставляет результаты измерений. Например, поставщик анализа может получать образец от субъекта, такой как образец ткани или образец плазмы, крови или сыворотки, и оценивать образец с применением анализа, описанного в данном документе, и определять, что субъект является кандидатом на получение лечения с помощью ингибитора, как описано в данном документе. Поставщик анализа может информировать поставщика медицинских услуг, что субъект является кандидатом на лечение с помощью ингибитора, как описано в данном документе, и кандидату вводят ингибитор, как описано в данном документе. Поставщик анализа может предоставлять результаты оценки и, необязательно, заключения, касающиеся одного или нескольких из диагноза, прогноза или соответствующих параметров терапии, например, поставщику медицинских услуг, или пациенту, или страховой компании в любом подходящем формате, таком как по почте или в электронном виде, или через базу данных онлайн. Информация, собранная и предоставленная поставщиком анализа, может храниться в базе данных.

Примеры

Пример А.

В этом примере ферментативную активность глутаминазы измеряют посредством анализа сопряженных конечных точек. Г лутамин и фосфат добавляют к ОЛС в концентрации, равной Кт и АС₅₀ соответственно, и концентрацию ОАС регулируют для обеспечения линейной реакции в течение 60 мин. Вырабатываемый глутамат превращается в 2-00 при помощи кинетического избытка глутаматдегидрогеназы. Эту вторую стадию конфигурируют из расчета 2Х Кт для ΝΑΌ, поскольку избыток ΝΑΌ является ингибирующим. Однако кинетический избыток третьего сопряженного фермента, диафоразы, регенерирует ΝΑΌ из ΝΑΌΗ для поддержания постоянной концентрации ΝΑΌ в течение времени проведения анализа. Диафораза, также добавляемая в кинетическом избытке, окисляет ΝΑΌΗ, выработанную с помощью 0ΌΗ, обратно в ΝΑΌ с сопутствующим восстановлением резазурина в сильно флуоресцентный резофурин. Резофурин при измерении после этого анализа блокируют с помощью 3Ό3 при Ех544/Ет590. Снижение сигнала указывает на ингибирование какого-либо компонента сопряженной ферментной системы. Для возможных успешных результатов проводили обратный скрининг в отношении ΟΌΗ/диафораза отдельно для удаления успешных результатов с сопряженной ферментной системой во втором анализе.

- 35 029531

1. Материалы.

В8А

диафораза

ΕΌΤΑ

глутаматдегидрогеназа

глутамин

НЕРЕЗ (рН 8,5)

№С1

ΝΑΟ

резазурин

додецилсульфат

натрия

фосфат натрия (рН 8,5)

§1§ша № 3294 (без протеаз)

\ΥθΓΐ1ιίη£ΐοη Епгуте Е8004330. Ресуспендировать из расчета 10 мг/мл в сЫНгО и хранить при -80°С.

§1§та Е6758 или эквивалентная §1§та 07882

§1§та 03126 или эквивалентный

§1§та Η3375 или эквивалентный, до рН 8,5 с помощью ΝαΟΗ

§1§та 87653 или эквивалентный

81§та N7004; примечание: порошок будет разлагаться в ингибитор при хранении вне эксикатора. Приобретать небольшие партии и готовить в виде основных растворов и хранить при -80°С.

81§ша 199303

81§ша Б4390 или эквивалентный

Готовить из одноосновного (88282) и двухосновного (87907) растворов от 81§ша или эквивалентных; 1 М основная конечная концентрация приготовлена из 1 М основных растворов каждого из двухосновного и одноосновного

растворов

2. Буферы.

2Х буфер (300 мМ ΝαΟΙ, 100 мМ НЕРЕ8 рН 8,5, 0,1% Β8Α, 0,5 мМ КОТЛ, 100 мМ фосфат натрия рН 8,5).

5Х субстратная смесь (конечная концентрация буфера 1Х с 13 мМ глутамина, 100 мкМ резаурина, 50 мкг/мл диафоразы).

1,2Х ферментная смесь (конечная концентрация буфера 1Х с 0,875 мкг/мл ОАС, 1,56 мМ ΝΑΏ, 6,25 единиц/мл ΟΏΗ).

Стоп-смесь (6% 8Ώ8 в άάΗ₂Ο).

Процедура реакции:

1) добавьте 1 мкл соединения в 100% ΏΜ8Ο;

2) добавьте 40 мкл ферментной смеси и инкубируйте в течение 60 минут при комнатной температуре;

3) добавьте 10 мкл субстратной смеси для начала реакции;

4) остановите реакцию с помощью 25 мкл 6% 808 и считывайте при Ех544 Ет 590.

Пример В.

В этом примере способность соединения ингибировать систему в сопряженном ферментном анализе НТ8-способа с глутаминазой, который подразумевает глутаматдегидрогеназу и диафоразу, тестируют посредством анализа сопряженных конечных точек. Глутамат добавляют из расчета Кт к ООН, которая затем осуществляет восстановительное дезамидирование с выработкой 2ОО. ΝΑΏ добавляют в систему из расчета 2Х Кт, и его превращение в ΧΛΟΗ отслеживают при помощи активности диафоразы. Диафораза, добавляемая в большом кинетическом избытке к ООП, превращает ΧΛΟΗ обратно в ΧΛΟ для поддержания постоянных уровней ΧΛΟ в реакции, при этом, в то же самое время восстанавливая резазурин в сильно флуоресцирующий резофурин. Резофурин при измерении после этого анализа блокируют с помощью 8Ώ8 при Ех544/Ет590. Снижение сигнала указывает на ингибирование какого-либо компонента сопряженной ферментной системы.

- 36 029531

1. Материалы.

ΒδΑ

диафораза

ΕΌΤΑ

глутаматдегидрогеназа глутаминовая кислота ΗΕΡΕδ (рН 8,5)

№С1

ΝΑΟ

δίβΐητ № 3294 (без протеаз)

ХУоНЫпдЮп Епгуте Εδ004330. Ресуспендировать из расчета 10 мг/мл в άάΕΕΟ и хранить при -80°С. δίβίτίΒ Е6758 или эквивалентная

δίβΟΒ 07882

δΐβππι 01251 или эквивалентная

δίβΐητ Н3375 или эквивалентный, до рН 8,5 с

помощью №0Н

δίβίτίΒ δ7653 или эквивалентный

δίβΐπτΝ7004; примечание: порошок будет

разлагаться в ингибитор при хранении вне

эксикатора. Приобретать небольшие партии и

готовить в виде основных растворов и хранить при 80°С.

резазурин δίβΐητ 199303

додецилсульфат δίβΐητ Е4390 или эквивалентный

натрия

2. Буферы.

2Х буфер (300 мМ ИаС1, 100 мМ ΗΕΡΕδ рН 8,5, 0,1% ΒδΑ, 0,5 мМ ΕΏΤΑ, 100 мМ фосфат рН 8,5).

2Х субстратная смесь (конечная концентрация буфера 1Х с 40 мкМ резазурина, 1,8 мМ глутамата, 20 мкг/мл диафоразы).

10Х ΝΑΏ-смесь (конечная концентрация буфера 1Х, 12,5 тМХАО).

2,5Х ферментная смесь (конечная концентрация буфера 1Х, фермент ООН, как определено для соответствующей линейности; например, 0,05 единиц/мл, как описано в данном документе, с получением конечной концентрации 0,02 единиц/мл).

Процедура реакции:

1) добавьте 1 мкл соединения в 100% ΏΜδΟ;

2) добавьте 20 мкл ферментной смеси и инкубируйте в течение 60 минут при комнатной температуре;

3) добавьте 5 мкл ΝΑΏ-смеси;

4) добавьте 25 мкл субстратной смеси для начала реакции;

5) остановите реакцию с помощью 25 мкл 6% δϋδ и считывайте при Ех544 Ет 590. Пример 1.

Схема 1

5,5'-(Тио-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-2-амин) (Ы2):

ΊΓ Ύ />"^ΝΗ2

Ν'^{Ν ν}-ν

Смесь 3,3'-тиодипропановой кислоты (1 экв.) и тиосемикарбазида (2 экв.) помещали в РОС1₃(10-кратный) и перемешивали при 90°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали на лед. Полученную смесь фильтровали и затем с помощью КОН доводили до рН 14. Смесь фильтровали, промывали водой и сушили с получением требуемого продукта Е2, который без очистки применяли на следующей стадии.

Общая процедура синтеза соединений (Ы3).

Диамин Е2 (1 экв.) помещали в ΏΜΕ и охлаждали до 0°С. Затем добавляли ΡΥΒΟΡ (3 экв.) с последующим добавлением [ΉΡΕΑ (3 экв.) и перемешивали в течение 10 мин. Добавляли соответствующую кислоту (3 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Протекание реакции отслеживали с помощью ^СΜδ. После завершения реакции в реакционную смесь добавляли воду и перемешивали в течение 10 мин. Смесь фильтровали через воронку Бюхнера, промывали водой и сушили. Неочищенный продукт очищали с помощью стандартных способов с получением требуемых продуктов (Ы3).

- 37 029531

(5):

Следующее соединение синтезировали в соответствии с общей процедурой, описываемой для Г3. ХХ-(5,5'-(Тио-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-циклогексилацетамид)

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ80-й₆) δ: 0,90-1,30 (т, 12Н), 1,55-1,82 (т, 10Н), 2,36 (ί, 4Н), 2,96 (ί, 4Н), 3,25 (ί, 4Н), 12,38 (Ьгз, 2Н).

Масса (М++23): 559,30.

Пример 2.

Схема 2

Общая процедура получения карбамата (^5)

Диамин Г2 (1 экв.) помещали в ОСМ и добавляли пиридин (2 экв.) с последующим добавлением соответствующего хлорформиата (3 экв.) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Протекание реакции отслеживали с помощью БСМ8. После завершения реакции в смесь добавляли воду и экстрагировали с помощью ОСМ. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и выпаривали до сухости. Неочищенный продукт очищали с помощью стандартных способов с получением чистого карбамата (^5).

Следующее соединение синтезировали в соответствии с общей процедурой, описываемой для Г5:

Дифенил-(5,5'-(тио-бис-(этан-2,1 -диил))-бис-( 1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))дикарбамат (1):

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ80-й₆) δ: 2,95 (ί, 4Н), 3,24 (ί, 4Н), 7,22-7,32 (т, 6Н), 7,40-7,50 (т, 4Н), 12,62 (з, 2Н).

Масса (М++23): 551,15.

Дициклогексил-(5,5'-(тио-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))дикарбамат (8)

А'1) ГУ

ην№ И _ _ II ΝΗ

5·"^——^^5

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ80-й₆) δ: 1,22-1,55 (т, 12Н), 1,65-1,78 (т, 4Н), 1,82-1,90 (т, 4Н), 2,92 (ί, 4Н), 3,22 (ί, 4Н), 4,84-4,90 (т, 2Н), 11,92 (з, 2Н).

Масса (М++1): 541,15.

Пример 3.

Схема 3

1,1'-(5,5'-(Тио-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(3-метил-3-фенилмочевина)

(18):

Диамин Г2 (1 экв.) помещали в ТНГ, охлаждали до -50°С и в смесь добавляли Ь1НМП8 (2 экв.) и перемешивали в течение 30 мин. Затем в реакционную смесь добавляли хлорангидрид метил(фенил)карбаминовой кислоты (4 экв.) в ТНГ и доводили до комнатной температуры, перемешивая в течение ночи. Протекание реакции отслеживали с помощью ТУС. После завершения реакции реакционную смесь гасили с помощью насыщенного раствора хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью стандартных способов с получением требуемого продукта 18.

- 38 029531

4Н).

¹Н ЯМР (400 МГц, ΏΜδΟ-ά₆) δ: 2,85 (ί, 4Н), 3,15 (ί, 4Н), 3,28 (з, 6Н), 7,22-7,30 (т, 6Н), 7,34-7,40 (т,

Масса (М++1): 555,25.

Пример 4.

5,5'-(Тио-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(Х-фенэтил-1,3,4-тиадиазол-2-амин) (9). Х,№-(5,5'-(Тио-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-фенилацетамид) 3

(1 экв.) в ТНР добавляли в перемешанную суспензию МАРШ (2,5 экв.) в ТНР при 0°С и кипятили с обратным холодильником в течение 4 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ЬСМ8. Реакцию гасили путем осторожного добавления насыщенного раствора ^П₄С1 с последующим добавлением этилацетата и полученный материал фильтровали через прокладку из целита. Слой целита дополнительно промывали этилацетатом. Полученный фильтрат выпаривали при пониженном давлении и очищали с помощью стандартных способов с получением 9:

¹Н ЯМР (400 МГц, ΏΜδΟ-φ,+ТРА) δ: 2,84 (ц, 8Н), 3,08 (ί, 4Н), 3,48 (ς, 4Н), 7,19-7,36 (т, 10Н), 7,66 (т, 2Н).

Масса (М++23): 519,15. Пример 5.

Схема 5

Общая процедура синтеза соединений (1-13).

Соответствующий аналог сульфида (1 экв.) помещали в ТНР, по каплям добавляли т-СРВА (0,9 экв.) в ТНР:Н₂О (6:1) при 0°С и перемешивали при той же температуре в течение 10 мин. Протекание реакции отслеживали с помощью ТЬС. После завершения реакции реакционную смесь гасили с помощью водн. раствора ^аНСО₃ и растворитель выпаривали до сухости. К остатку добавляли воду, экстрагировали этилацетатом, промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью стандартных способов с получением требуемых продуктов (1-13).

Следующее соединение синтезировали в соответствии с общей процедурой, описываемой для 1-13.

Х,№-(5,5'-(Сульфинил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-фенилацетамид) (7):

¹Н ЯМР (400 МГц, ΏΜδΟ-ά₆) δ: 3,18 (ί, 2Н), 3,20-3,40 (т, 6Н), 3,80 (з, 4Н), 7,20-7,38 (т, 10Н), 12,62 (Ьгз, 2Н).

Масса (М++1): 541,20.

- 39 029531

НР-(5,5'-(Сульфинил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(пиридин-2ил)ацетамид) (17):

¹Н ЯМР (400 МГц, ΏΜδΘ-бб) δ: 3,18 (ί, 4Η), 3,30-3,42 (т, 4Η), 4,00 (δ, 4Η), 7,26 (ί, 2Η), 7,40 (Е, 2Η), 7,78 (ί, 2Η), 8,48-8,52 (т, 2Η).

Масса (М++1): 543,10.

Пример 6.

Схема 6

3,3'-Сульфонилдипропановая кислота (1-14):

о о

А

о о

но

он

3,3'-Тиодипропановую кислоту (1 экв.) помещали в ΤΗΡ и в нее медленно добавляли помещенный в воду оксон (2 экв.) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТЬС. После завершения реакции в реакционную смесь добавляли воду и экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и выпаривали до сухости с получением неочищенного продукта 1-14.

5,5'-(сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-2-амин) (1-15):

3,3'-Сульфонилдипропановую кислоту (1 экв.) и тиосемикарбазид (2 экв.) помещали в РРА и кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. рН реакционной смеси доводили до 14 с применением водн. раствора ΚΟΗ, перемешивали в течение 30 мин. и фильтровали. Полученный материал растирали в порошок с диэтиловым эфиром и сушили с получением названного соединения 1-15.

Общая процедура синтеза соединений (1-16).

Диамин 1-16 (1 экв.) помещали в ΏΜΡ, охлаждали до 0°С и добавляли ΡΥΒΟΡ (3 экв.) с последующим добавлением ΏΙΡΕΑ (3 экв.) и перемешивали в течение 10 мин. Затем в реакционную смесь добавляли соответствующую кислоту (3 экв.) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Протекание реакции отслеживали с помощью ЬСМЗ. После завершения реакции в реакционную смесь добавляли воду и перемешивали в течение 10 мин. Смесь фильтровали через воронку Бюхнера и сушили. Неочищенный продукт очищали с помощью стандартных способов с получением требуемых соединений (1-16).

Следующее соединение синтезировали в соответствии с общей процедурой, описываемой для 1-16.

НР-(5,5'-(Сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-фенилацетамид)

(4):

¹Н ЯМР (400 МГц, ΏΜ3Ο-Ε6) δ: 3,45 (ί, 4Η), 3,70 (ί, 4Η), 3,80 (δ, 4Η), 7,20-7,38 (т, 10Н), 12,75 (δ,

2Η).

Масса (М++1): 557,1.

- 40 029531

Х,Х'-(5,5'-(Сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(пиридин-2ил)ацетамид) (13):

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 3,45 (ΐ, 4Н), 3,68 (ΐ, 4Н), 4,00 (δ, 4Н), 7,25 (ΐ, 2Н), 7,40 (ά, 2Н), 7,78 (ΐ, 2Н), 8,50 (δ, 2Н) 12,75 (δ, 2Н).

Масса (М++1): 559,15.

Х,Х'-(5,5'-(Сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(пиридин-3ил)ацетамид) (14):

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 3,42 (ΐ, 4Н), 3,68 (ΐ, 4Н), 3,88 (δ, 4Н), 7,38 (ΐ, 2Н), 7,76 (ά, 2Н), 8,428,55 (т, 4Н), 12,78 (Ьгз, 2Н).

Масса (М++1): 559,1.

Х,Х'-(5,5'-(2,2'-Сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(3фенилпропанамид) (21):

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 2,80 (ΐ, 4Н), 2,95 (ΐ, 4Н), 3,45 (ΐ, 4Н), 3,70 (ΐ, 4Н), 7,10 - 7,32 (т, 10Н), 12,5 (Ьгз, 2Н).

Масса (М++1): 585,3.

Общая процедура получения карбамата (1-17).

5,5'-(Сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-2-амин) (1 экв.) помещали в Ό0Μ и в него добавляли пиридин (2 экв.) с последующим добавлением соответствующего хлорформиата (2 экв.) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Протекание реакции отслеживали с помощью ΓΟΜ8. После завершения реакции в реакционную смесь добавляли воду и экстрагировали с помощью Ό0Μ. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и выпаривали до сухости. Неочищенный продукт очищали с помощью стандартных способов с получением требуемых соединений (1-17).

Следующее соединение синтезировали в соответствии с общей процедурой, описываемой для 1-17.

Диизопропил-(5,5'-(сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))дикарбамат (23):

2Н).

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 1,25 (ά, 12Н), 3,42 (ΐ, 4Н), 3,65 (ΐ, 4Н), 4,88-4,98 (т, 2Н), 12,00 (δ, Масса (М++1): 493,10.

Диизобутил-(5,5'-(сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))дикарбамат (22):

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 0,90 (ά, 12Н), 1,85-1,98 (т, 2Н), 3,42 (ΐ, 4Н), 3,65 (ΐ, 4Н), 3,98 (ά, 4Н), 12,10 (δ, 2Н).

Масса (М++1): 521,00.

Пример 7.

Схема 7

- 41 029531

Общая процедура синтеза соединений (Σ-19).

Подходящий карбамат (1 экв.) помещали в ацетон и в него медленно добавляли помещенный в воду оксон (2,5 экв.) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТЬС. После завершения реакции ацетон выпаривали при пониженном давлении. В реакционную смесь добавляли воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и выпаривали до сухости. Неочищенный остаток очищали с помощью стандартных способов с получением требуемых продуктов (1-19).

Следующее соединение синтезировали в соответствии с общей процедурой, описываемой для 1-19.

Дибензил-(5,5'-(сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))дикарбамат (19):

2Н).

Ή ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά₆) δ: 3,45 (ΐ, 4Н), 3,70 (ΐ, 4Н), 5,24 (δ, 4Н), 7,34-7,44 (т, 10Н), 12,22 (δ, Масса (М++1): 589,1.

Ди-трет-бутил (5,5'-(сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))дикарбамат

(15):

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά₆) δ: 1,45 (δ, 18Н), 3,45 (ΐ, 4Н), 3,70 (ΐ, 4Н), 11,82 (δ, 2Н). Масса (Μ++1): 521,15.

Пример 8.

Схема 8

5,5'-(Пентан-1,5 -диил)-бис-( 1,3,4-тиадиазол-2-амин) (1-5 0):

η₂ν-< г Ύ >-νη₂

ν-ν Ν-_ν ^Ζ

Названное соединение синтезировали из пимелиновой кислоты 1-49, следуя общей процедуре, описанной для соединения 1-2.

Общая процедура синтеза соединений (1-51).

Диамин 1-50 (1 экв.) помещали в ΌΜΓ и охлаждали до 0°С. Затем добавляли ΡΥΒΟΡ (3 экв.) с последующим добавлением ΌΙΡΕΑ (3 экв.) и перемешивали в течение 10 мин. Добавляли соответствующую кислоту (3 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Протекание реакции отслеживали с помощью ΙΑΜδ. После завершения реакции в реакционную смесь добавляли воду и перемешивали в течение 10 мин. Реакционную смесь подготавливали и очищали с помощью стандартных способов с получением требуемых продуктов (Ι-51).

Следующее соединение синтезировали в соответствии с общей процедурой, описываемой для Ι-51.

Ы,Ы'-(5,5'-(Пентан-1,5-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-фенилацетамид) (2):

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά6) δ: 1,40 (ΐ, 2Н), 1,70 (ΐ, 4Н), 2,94 (ΐ, 4Н), 3,80 (δ, 4Н), 7,22-7,40 (т, 10Н), 12,64 (δ, 2Н).

Масса (М++1): 507,25.

Ы,Ы'-(5,5'-(Пентан-1,5-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(пиридин-3-ил)ацетамид) (10):

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά6) δ: 1,36 (ΐ, 2Н), 1,70 (т, 4Н), 2,96 (ΐ, 4Н), 3,92 (δ, 4Н), 7,50 (ΐ, 2Н), 7,90 (ά, 2Н), 8,50-8,60 (т, 4Н), 12,70 (δ, 2Н).

Масса (М++23): 531,25.

- 42 029531

Н№-(5,5'-(Пентан-1,5-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(пиридин-2-ил)ацетамид) (11):

'Н ЯМР (400 МГц, [)ΜδΟ-0..) δ: 1,43 (I, 2Н), 1,72 (т, 4Н), 2,99 (I, 4Н), 4,0 (δ, 4Н), 7,26 (I, 2Н), 7,40 (0, 2Н), 7,80 (I, 2Н), 8,50 (0, 2Н), 12,65 (δ, 2Н).

Масса (М++23): 531,10.

Н№-(5,5'-(Пентан-1,5-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(3-фенилпропанамид) (20):

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-Об) δ: 1,40 (ΐ, 2Н), 1,74 (ΐ, 4Н), 2,80 (ΐ, 4Н), 2,88 - 3,0 (т, 8Н), 7,15 - 7,34 (т, 10Н), 12,40 (Ъг§, 2Н).

Масса (М++1): 535,05.

Н№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3ил)ацетамид) (127):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-Об) δ: 1,75 (т, 4Н), 3,00 (т, 4Н), 3,98 (δ, 4Н), 7,10-7,13 (т, 2Н), 7,60 (0, 2Н), 7,76-7,77 (т, 2Н), 8,30-8,32 (т, 2Н), 11,22 (δ, 2Н), 11,82 (δ, 2Н).

Масса (М++1): 573,2.

Н№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(1Н-индазол-3-ил)ацетамид)

(126):

н

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-06) δ: 12,88 (δ, 2Н), 7,74-7,76 (0, 2Н), 7,48-7,49 (0, 2Н), 7,32-7,35 (ΐ, 2Н), 7,07-7,09 (ΐ, 2Н), 4,14 (δ, 4Н), 2,98 (δ, 4Н), 1,73 (δ, 4Н).

Масса (М+1): 573,3.

Н№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(1Н-пирроло[2,3-с]пиридин-3ил)ацетамид) (125):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-06) δ: 12,51-12,61 (т, 2Н), 11,45-11,48 (0, 2Н), 8,68-8,72 (0, 2Н), 8,09-8,12 (0, 2Н), 7,53-7,56 (ΐ, 4Н), 3,91 (δ, 4Н), 2,98-3,02 (ΐ, 4Н), 1,69-1,74 (0, 4Н).

Масса (М+1): 573,2.

Н№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(1Н-пирроло[3,2-с]пиридин-3ил)ацетамид) (124):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-06) δ: 12,66 (δ, 2Н), 11,41 (δ, 2Н), 8,86 (δ, 2Н), 8,15-8,16 (0, 2Н), 7,35-7,37 (ΐ, 4Н), 3,96 (δ, 4Н), 2,99 (δ, 4Н), 1,74 (δ, 4Н).

Масса (М+1): 573,2.

- 43 029531

Ни-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(1Н-индол-4-ил)ацетамид) (123):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ80-ά₆) δ: 1,73 (т, 4Н), 2,98 (т, 4Н), 4,00 (8, 4Н), 6,54 (8, 2Н), 6,94 (ά, 2Н), 7,04 (ί, 2Н), 7,30-7,33 (т, 4Н), 11,13 (₈, 2Н), 12,55 (₈, 2Н).

Масса (М++1): 571,3.

НМ-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(1-метил-1Н-индазол-3ил)ацетамид) (122):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Θ-ά6) δ: 1,74 (т, 4Н), 3,00 (т, 4Н), 4,00 (8, 6Н), 4,15 (8, 4Н), 7,12 (ί, 2Н), 7,40 (ί, 2Н), 7,59 (ά, 2Н), 7,76 (ά, 2Н).

Масса (М++1): 601,3.

К,М-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(1-метил-1Н-индол-3ил)ацетамид) (130):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ80-ά₆) δ: 1,72 (ί, 4Н), 2,98 (ί, 4Н), 3,75 (8, 6Н), 3,88 (8, 4Н), 7,02 (ί, 2Н), 7,14 (ί, 2Н), 7,26 (8, 2Н), 7,39 (ά, 2Н), 7,57 (ά, 2Н), 12,61 (8, 2Н).

Масса (М++1): 599,3.

Пример 9.

Схема 9

Этил 5-(5-амино-1,3,4-тиадиазол-2-ил)пентаноат (1-70):

о

Смесь 6-этокси-6-оксогексановой кислоты (1,0 экв.) и тиосемикарбазида (1,0 экв.) помещали в Р0С1з (3,3 экв.) и перемешивали при 80°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали на лед. Полученную смесь фильтровали и затем с помощью КОН доводили до

- 44 029531

рН 8. Полученный материал промывали водой и сушили с получением требуемого продукта (1-70). Этот материал использовали без очистки на следующей стадии.

Общая процедура синтеза соединений (1-71):

Затем к раствору этил-5-(5-амино-1,3,4-тиадиазол-2-ил)пентаноата (1 экв.) и ТЕА (3 экв.) в ЭСМ добавляли соответствующий хлорид (1,2 экв.) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученную смесь концентрировали т уасио, гасили водой, фильтровали, промывали водой и сушили с получением требуемых продуктов (1-71).

Общая процедура синтеза соединений (1-72):

К раствору соединений (1-71) (1 экв.) в МеОН/ТНР затем добавляли ЫОН (2 экв., 4н.) и перемешивали при 40°С в течение 1 ч. Полученную смесь концентрировали т уасио, доводили рН до 3-4, фильтровали и сушили с получением требуемых продуктов (1-72).

Общая процедура синтеза соединений (1-73):

Смесь соединений (1-72) (1,0 экв.) и тиосемикарбазида (1,0 экв.) помещали в РОС1₃ (3,3 экв.) и перемешивали при 80°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали на лед. Полученную смесь фильтровали и затем с помощью КОН доводили до рН 8. Полученную смесь промывали водой и сушили с получением требуемых продуктов (1-73), которые использовали без очистки на следующей стадии.

Общая процедура синтеза соединений (1-74):

Смесь соединения (1-73) (1 экв.) соответствующей кислоты (1,2 экв.), НАТИ (1,5 экв.) и Э1РЕА (2,0 экв.) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученную смесь очищали с помощью стандартных процедур с получением требуемых продуктов.

Следующее соединение синтезировали в соответствии с общей процедурой, описываемой для 1-74.

Ν-(5-(4-(5 -Ацетамидо-1,3,4-тиадиазол-2-ил)бутил)-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-метил-1Нбензо[б]имидазол-5-карбоксамид (128):

²Н ЯМР (500 МГц, ЭМЗО-б₆) δ: 1,81(к, 4Н), 2,15(к, 3Н), 2,54 (к, 3Н), 3,04-3,06 (т, 4Н), 7,52-7,61 (т, 1Н), 7,90-7,94(1, 1Н), 8,24-8,37 (ά, 1Н), 12,39 (к, 1Н), 12,56-12,64 (ά, 1Н), 12,80 (к, 1Н).

Масса (М++Н): 457,1.

Ν-(5-(4-(5 -Ацетамидо-1,3,4-тиадиазол-2-ил)бутил)-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-(5-метокси-1 Н-индол-3 ил)ацетамид (129):

О Ν—N \\

_ // \\ Л-

²Н ЯМР (500 МГц, ЭМЗО-а₆) δ: 1,74 (к, 4Н), 2,15 (к, 3Н), 2,98 (!, 4Н), 3,74 (к, 3Н), 3,84 (к, 2Н), 6,716,74 (т, 1Н), 7,08 (ά, 1Н) 7,23-7,25 (ά, 2Н), 10,82 (к, 1Н).

Масса (М++Н): 486,1.

- 45 029531

П-(5-(4-(5-Ацетамидо-1,3,4-тиадиазол-2-ил)бутил)-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-(3,4диметоксифенил)ацетамид (118):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆) δ: 1,73-1,76 (т, 4Н), 2,15 (δ, 3Н), 3,00 (ά, 4Н), 3,72 (ί, 8Н), 6,82-6,94 (т, 3Н), 12,39 (δ, 1Н), 12,60 (δ, 1Н).

Масса (м++Н): 477,2.

И-(5-(4-(5-Ацетамид о-1,3,4-тиад иазол-2-ил)бутил)-1,3,4-тиад иазол-2-ил)-2-фенилацетамид (131):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Θ-ά6) δ: 1,75 (ί, 4Н), 2,15 (δ, 3Н), 3,07 (ί, 4Н), 3,79 (δ, 2Н), 7,32-7,33 (т, 5Н), 12,5 (δ, 2Н).

Масса (М++Н): 417,1.

Пример 10.

Октандикарбоновая кислота (1-59):

10% палладий на угле (10 вес.%) добавляли в раствор окт-4-индикарбоновой кислоты 1-56 в этаноле. Смесь дегазировали аргоном и затем перемешивали в атмосфере Н₂ в течение 14 ч. Смесь фильтровали через целит и концентрировали с получением октандикарбоновой кислоты.

5,5'-(Гексан-1,6-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-2-амин) (1-60):

Названное соединение синтезировали из октандикарбоновой кислоты 1-59 и тиосемикарбазида в соответствии с общей процедурой, описываемой для соединения 1-2.

Соединения 1-61 синтезировали в соответствии с общей процедурой, описываемой для 1-3. П,П'-(5,5'-(Гексан-1,6-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-фенилацетамид) (12):

Названное соединение синтезировали из 5,5'-(гексан-1,6-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-2-амина) 1-60 в соответствии с общей процедурой, описываемой для соединения 1-61.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆) δ: 1,36 (ί, 4Н), 1,64 (ί, 4Н), 2,94 (ί, 4Н), 3,89 (δ, 4Н), 7,20-7,36 (т, 10Н), 12,62 (δ, 2Н).

- 46 029531

Масса (М++23): 543,10.

Х,Х'-(5,5'-(Гексан-1,6-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(пиридин-2-ил)ацетамид) (16):

Названное соединение синтезировали из 5,5'-(гексан-1,6-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-2-амина) Σ-60 в соответствии с общей процедурой, описываемой для соединения 1-61.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΘ-ά₆) δ: 1,38 (ΐ, 4Н), 1,70 (ΐ, 4Н), 2,95 (ΐ, 4Н), 4,0 (з, 4Н), 7,30 (ΐ, 2Н), 7,41 (ά, 2Н), 7,78 (ΐ, 2Н), 8,50 (ά, 2Н), 12,68 (з, 2Н).

Масса (М++23): 545,20.

Пример 11.

Схема 11

4-((Карбоксиметил)тио)бутановая кислота (1-81):

О О

ЛхчаА

но

он

Этил-4-((2-этокси-2-оксоэтил)тио)бутаноат 1-80 помещали в 50% водн. НС1 и кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТЬС. После завершения реакции реакционную смесь доводили до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный материал растирали в порошок с диэтиловым эфиром, фильтровали и сушили с получением требуемого продукта 1-81.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΘ-ά₆) δ: 1,9-2,0 (т, 2Н), 2,4-2,5 (ΐ, 2Н), 2,8-2,9 (ΐ, 2Н), 3,2-3,3 (ΐ, 2Н), 11,0 (Ьгз, 2Н).

5-(3 -(((5-Амино-1,3,4-тиадиазол-2-ил)метил)тио)пропил)-1,3,4-тиадиазол-2-амин (1-82):

νη₂

Названное соединение синтезировали из 4-((карбоксиметил)тио)бутановой кислоты 1-81 в соответствии с общей процедурой, описываемой для 1-2.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΘ-ά₆) δ: 1,9-2,0 (т, 2Н), 2,5-2,6 (ΐ, 2Н), 2,8-2,9 (ΐ, 2Н), 3,9 (з, 2Н), 7,0 (Ьгз, 2Н), 7,1 (Ьгз, 2Н).

2-Фенил-Ы-(5-(3-(((5-(2-фенилацетамидо)-1,3,4-тиадиазол-2-ил)метил)тио)пропил)-1,3,4-тиадиазол2-ил)ацетамид (6):

Названное соединение синтезировали из 5-(3-(((5-амино-1,3,4-тиадиазол-2-ил)метил)тио)пропил)1,3,4-тиадиазол-2-амина 1-82 в соответствии с общей процедурой, описываемой для 1-3.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΘ-ά₆) δ: 1,95 (ΐ, 2Н), 2,58 (ΐ, 2н), 3,0 (ΐ, 2Н), 3,80 (з, 4Н), 4,12 (з, 2Н), 7,20 7,40 (т, 10Н), 12,70 (ά, 2Н).

Масса (М++1) 524,85.

- 47 029531

Пример 12.

5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-( 1,3,4-тиадиазол-2-амин) (1-95):

η₂ν-4_+

Смесь глутаровой кислоты (1 экв.) и тиосемикарбазида (2 экв.) помещали в Р0С1₃ (10-кратный) и перемешивали при 90°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали на лед. Полученную смесь фильтровали и затем с помощью Κ0Η доводили до рН 14. Полученный материал фильтровали, промывали водой и сушили с получением требуемого продукта 1-95. Этот материал использовали без очистки на следующей стадии.

+№-(5,5'-(Пропан-1,3-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(пиридин-3-ил)ацетамид) (26):

Диамин 1-95 (1 экв.) помещали в ΌΜΡ и охлаждали до 0°С. Затем добавляли ΗΑΤυ (2,5 экв.) с последующим добавлением ΌΙΡΕΑ (3 экв.) и перемешивали в течение 10 мин. Добавляли соответствующую кислоту (2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Протекание реакции отслеживали с помощью ЬСМ8. После завершения реакции в реакционную смесь добавляли воду и перемешивали в течение 10 мин. Полученную смесь очищали с помощью стандартных способов с получением требуемого продукта (26).

Ίΐ ЯМР (500 МГц, ΌΜ80-ά₆) δ: 2,094-2,152 (т, 2Η), 3,030-3,059 (ΐ, 4Η), 3,865 (δ, 4Η), 7,348-7,736 (т, 2Η), 8,468-8,512 (т, 2Η), 12,719 (Ьгз, 2Η).

Масса (М++1): 481,2.

Пример 13.

5(Е)-5,5'-(Бут-2-ен-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-2-амин) (Ι-96):

Смесь (Е)-гекс-3-ендикарбоновой кислоты (1 экв.) и тиосемикарбазида (2 экв.) помещали в Р0С1₃(10-кратный) и перемешивали при 90°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали на лед. Полученную смесь фильтровали и затем с помощью Κ0Η доводили до рН 14. Реакционную смесь фильтровали, промывали водой и сушили с получением требуемого продукта Ι-96. Этот материал использовали без очистки на следующей стадии.

(Е)-+№-5,5'-(Бут-2-ен-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(пиридин-3-ил)ацетамид)

(27):

- 48 029531

Диамин 1-96 (1 экв.) помещали в ΌΜΡ и охлаждали до 0°С. Затем добавляли НАТИ (2,5 экв.) с последующим добавлением ΌΙΡΕΑ (3 экв.) и перемешивали в течение 10 мин. Добавляли соответствующую кислоту (2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Протекание реакции отслеживали с помощью БСМЗ. После завершения реакции в реакционную смесь добавляли воду и перемешивали в течение 10 мин. Реакционную смесь подготавливали и очищали с помощью стандартных способов с получением требуемого продукта (27).

¹Н ЯМР (500 МГц, ПМЗО-б) δ: 3,744-3,753 (б, 4Н), 3,855 (б, 4Н), 5,851-5,856 (ί, 2Н), 7,350-7,375 (т, 2Н), 7,719-7,734 (т, 2Н), 8,473-8,509 (т,4Н), 12,664 (Ьгб, 2Н).

Масса (М++1): 493,1.

Н№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(пиридин-3-ил)ацетамид) (28):

Соединение (27) (1 экв.) помещали в МеОН. Систему, заполненную водородом и с добавлением Рб/С (0,1 экв.), перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Протекание реакции отслеживали с помощью БСМЗ. После завершения реакции неочищенный продукт очищали с помощью стандартных способов с получением требуемого продукта (28).

¹Н ЯМР (500 МГц, ОМЗО-сР) δ: 1,70-1,80 (т, 4Н), 2,97-3,03 (т, 4Н), 3,86 (б, 4Н), 7,352-7,736 (т, 2Н), 8,474-8,514 (т, 2Н), 12,664 (Ьгб, 2Н).

Масса (М++1): 495,2.

Пример 14.

Схема 14

5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-2-амин) (Ι-97):

Смесь адипиновой кислоты (1 экв.) и тиосемикарбазида (2 экв.) помещали в РОС1₃ (10-кратный) и перемешивали при 90°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали на лед. Полученную смесь фильтровали и затем с помощью КОН доводили до рН 14. Смесь фильтровали, промывали водой и сушили с получением требуемого продукта Ι-97, который применяли без очистки на следующей стадии.

Общая процедура синтеза соединений (1-98).

Способ А.

Диамин Ι-97 (1 экв.) помещали в ОМР и охлаждали до 0°С. Затем добавляли НАТИ (3 экв.) с последующим добавлением ΌΙΡΕΑ (3 экв.) и перемешивали в течение 10 мин. Добавляли соответствующую кислоту (3 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Протекание реакции отслеживали с помощью БСМЗ. После завершения реакции в реакционную смесь добавляли воду и перемешивали в течение 10 мин. Смесь подготавливали и очищали с помощью стандартных способов с получением требуемых продуктов (1-98).

Способ В.

Смесь диамина Ι-97 (1 экв.), КСООК' (4 экв.), СН₃О№ (4 экв.) в ОМР в герметичном сосуде облучали в СВЧ-реакторе от Вкладе Зтйй Зуи1йеБ1Б при 100°С в течение 1 ч. Реакцию отслеживали с помощью БСМЗ. После завершения реакции неочищенный продукт очищали с помощью стандартных способов с получением требуемых продуктов (1-98).

- 49 029531

Следующие соединения синтезировали в соответствии с общей процедурой, описываемой для 1-98. N,N'-(5,5'-(Пентан-1,5-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-фенилацетамид) (37):

¹Н ЯМР (500 МГц, БМ8О-б₆) δ: 1,75 (ί, 4Н), 3,00 (ί, 4Н), 3,80 (δ, 4Н), 7,25-7,28 (т, 2Н), 7,30-7,34 (т, 8Н), 12,64 (δ, 2Н).

Масса (М++1): 493,1.

N,N'-(5,5'-(Буτан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-τиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(4-гидроксифенил)ацеτамид)

(38):

¹Н ЯМР (500 МГц, БМ8О-б6) δ: 1,74 (ί, 4Н), 2,97 (ί, 4Н), 3,62 (δ, 4Н), 6,68 (б, 4Н), 7,08 (б, 4Н). Масса (М++1): 525,2.

N,N'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(5-оксо-5-фенилпентанамид) (40):

¹Н ЯМР (500 МГц, БМ8О-б₆) δ: 1,77 (ί, 4Н), 1,92-1,98 (т, 4Н), 2,54-2,57 (т, 4Н), 3,02 (ί, 4Н), 3,10 (ί, 4Н), 7,52 (ί, 4Н), 7,63 (ί, 2Н), 7,96 (б, 4Н), 12,40 (δ, 2Н).

Масса (М++1): 605,3.

N,N'-(5,5'-(Буτан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-τиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(3-меτилизоксазол-5ил)ацетамид) (42):

¹Н ЯМР (500 МГц, БМ8О-б₆) δ: 1,77 (ί, 4Н), 2,22(δ, 6Н), 3,03 (ί, 4Н), 4,07 (δ, 4Н), 6,30 (δ, 2Н), 12,77 (δ, 2Н).

Масса (М++1): 503,2.

N,N'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(6-метокси-3-оксо-2,3-дигидро1Н-инден-1-ил)ацетамид) (43):

¹Н ЯМР (500 МГц, БМ8О-б₆) δ: 1,78 (ί, 4Н), 2,37(б, 1Н), 2,40 (б, 1Н), 2,69 (б, 1Н), 2,72 (б, 1Н), 2,82 (б, 1Н), 2,86 (б, 1Н), 3,03 (ί, 4Н), 3,12(б, 1Н), 3,15 (б, 1Н), 3,74-3,78 (т, 2Н), 3,84 (δ, 6Н), 6,99 (б, 1Н), 7,00 (б, 1Н), 7,18 (б, 2Н), 7,56 (δ, 1Н), 7,58 (δ, 1Н), 12,50 (δ, 2Н.

Масса (М++1): 661,3.

- 50 029531

Н^-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(2-гидроксифенил)пропанамид)

(45):

¹Н ЯМР (500 МГц, ОМЗО-ф;) δ: 1,77 (!, 4Н), 2,71 (!, 4Н), 2,84 (!, 4Н), 3,01 (!, 4Н), 6,69 (!, 2Н), 6,77 (ά, 2Н), 7,00 (!, 2Н), 7,04 (ά, 2Н).

Масса (М++1): 553,3.

Ди-трет-бутил 2,2'-(5,5'-(бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(азандиил)-бис-(2оксоэтан-2,1 -диил)-бис-(метилкарбамат) (46):

¹Н ЯМР (500 МГц, ЭМВО-ф;) δ: 1,29 (в, 9Н), 1,41 (в, 9Н), 1,78 (!, 4Н), 2,86 (в, 3Н), 2,88 (в, 3Н), 3,03 (!, 4Н), 4,09 (в, 2Н), 4,12 (в, 2Н), 12,51 (в, 2Н).

Масса (М++1): 599,3.

Н^-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(пиридин-2-ил)ацетамид) (47):

¹Н ЯМР (500 МГц, ЭМЗО-ф») δ: 1,76 (!, 4Н), 3,00 (!, 4Н), 3,99 (в, 4Н), 7,27(ά, 1Н), 7,28 (ά, 1Н), 7,38 (в, 1Н), 7,40 (в, 1Н), 7,76 (!, 2Н), 8,48 (ά, 2Н).

Масса (М++1): 495,1.

Н^-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(3-(фуран-2-ил)пропанамид) (49):

¹Н ЯМР (500 МГц, ОМЗО-ф;) δ: 1,76 (!, 4Н), 2,79 (!, 4Н), 2,94 (!, 4Н), 3,01 (!, 4Н), 6,10 (ά, 2Н), 6,34 (в, 2Н), 7,51 (в, 2Н), 12,46 (в, 2Н).

Масса (М++1): 501,2.

Н^-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(4-(1-оксоизоиндолин-2ил)фенил)пропанамид) (50):

¹Н ЯМР (500 МГц, ОМЗО-ф;) δ: 1,45-1,45 (ά, 6Н), 1,73 (в, 4Н), 2,99 (в, 4Н), 4,01-4,02 (ά, 2Н), 5,00 (в, 4Н), 7,42-7,43 (ά, 4Н), 7,53-7,56 (т, 2Н), 7,65-7,68 (!, 4Н), 7,86-7,87 (ά, 4Н), 12,61 (в, 2Н).

Масса (М++1): 783,7.

- 51 029531

Ы,Ы'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(нафтален-1-ил)ацетамид) (51):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-ά6) δ: 1,72 (ί, 4Н), 2,98 (ί, 4Н), 4,30 (з, 4Н), 7,48-7,54 (т, 8Н), 7,86 (ά, 2Н), 7,94 (ά, 2Н), 8,05 (ά, 2Н), 12,82 (з, 2Н).

Масса (М++1): 593,3.

Ы,Ы'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(4-хлорфенил)пропанамид) (52):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-ά6) δ: 1,43 (з, 3Н), 1,45 (з, 3Н), 1,74 (ί, 4Н), 3,00 (ί, 4Н), 3,99-4,04 (т, 2Н), 7,38-7,42 (т, 8Н), 12,64 (з, 2Н).

Масса (м++1): 589,2.

Ы,Ы'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(3-(3-метоксифенил)пропанамид)

(53):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-ά6) δ: 1,77 (ί, 4Н), 2,77 (ί, 4Н), 2,89 (ί, 4Н), 3,01 (ί, 4Н), 3,72 (з, 6Н), 6,746,80 (т, 6Н), 7,19 (ί, 2 Н), 12,41 (з, 2Н).

Масса (М++1): 581,3.

Ы,Ы'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(3-(пиридин-3-ил)пропанамид) (54):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-ά₆) δ: 1,76 (з, 4Н), 2,79-2,82 (ί, 4Н), 2,93-3,01(т, 8Н), 7,30-7,32 (т, 2Н), 7,65-7,66 (ά, 2Н), 8,40-8,46 (ί, 4Н), 12,43 (з, 2Н).

Масса (М++1): 523,7.

Ы,Ы'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(бензо^][1,3]диоксол-5ил)ацетамид) (55):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-ά₆) δ: 1,74 (з, 4Н), 3,00 (з, 4Н), 3,69 (з, 4Н), 5,98 (з, 4Н), 6,76-6,89 (т, 6Н), 12,58 (з, 2Н).

Масса (М++1): 581,7.

Ы,Ы'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(бензо^]изоксазол-3ил)ацетамид) (60):

- 52 029531

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-ЕД δ: 1,75 (δ, 4Η), 3,01 (δ, 4Η), 4,34 (δ, 4Η), 7,39-7,42 (ί, 2Η), 7,65-7,68 (ί, 2Η), 7,51-7,76 (Е, 2Η), 7,87-7,89 (Е, 2Η), 12,94 (Е, 2Η).

Масса (М++1): 575,7.

Н№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(5-метокси-1Н-индол-3ил)ацетамид) (61):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-ЕД δ: 1,73-1,75 (Е, 4Η), 2,97 (δ, 4Η), 3,72-3,73 (Е, 6Η), 3,82 (Е, 4Η), 6,716,73 (т, 2Η), 7,08 (δ, 2Η), 7,23-7,24 (Е, 4Η), 10,80 (δ, 2Η), 12,66 (δ, 2Η).

Масса (М++1): 631,7.

Р№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-метил-4-оксо-4-фенилбутанамид)

(62):

¹Н ЯМР (500 МГц, ϋΜδΟ-Е») δ: 1,21 (δ, 3Η), 1,22 (δ, 3Η), 1,76 (ί, 4Η), 3,01 (ί, 4Η), 3,20-3,24 (т, 4Η), 3,52-3,58 (т, 2 Η), 7,53 (ί, 4Η), 7,65 (ί, 2Η), 7,98 (Е, 4Η), 12,54 (δ, 2Η).

Масса (М++1): 605,3.

Н№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(3,4-диметоксифенил)ацетамид)

(63):

¹Н ЯМР (500 МГц, ϋΜδΟ-Е») δ: 1,74 (ί, 4Η), 2,98 (ί, 4Η), 3,69 (δ, 4Η), 3,72 (δ, 6Η), 3,74 (δ, 6Н), 6,82 (Е, 1Η), 6,83 (Е, 1Η), 6,88 (δ, 1Η), 6,90 (δ, 1Η), 6,93 (Е, 2Н), 12,59 (δ, 2Н).

Масса (М++1): 613,3.

Н№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))дициклопент-3-енкарбоксамид (64):

¹Н ЯМР (500 МГц, ϋΜδΟ-φ») δ: 1,77 (ί, 4Η), 2,52-2,57 (т, 6Η), 2,61-2,66 (т, 4Η), 3,00 (ί, 4Η), 5,67 (δ, 4Η), 12,43 (δ, 2Η).

Масса (М++1): 445,2.

Диэтил-4,4'-(5,5'-(бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(азандиил)-бис-(4оксобутаноат) (66):

¹Н ЯМР (500 МГц, ϋΜδΟ-Е») δ: 1,14-1,17 (ί, 6Η), 1,76 (δ, 4Η), 2,61-2,64 (ί, 4Η), 2,71-2,73 (ί, 4Η), 3,01 (δ, 4Η), 4,02-4,07 (т, 4Η), 12,46 (δ, 2Η).

Масса (М++1): 513,7.

- 53 029531

Х,Х'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(1Н-тетразол-5-ил)ацетамид)

(71):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-6₆) δ: 1,77 (з, 4Н), 3,02 (з, 4Н), 3,97 (з, 4Н).

Масса (М++1): 477,7.

Х,Х'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(6-оксогептанамид) (72):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-6₆) δ: 1,43-1,49 (т, 4Н), 1,52-1,57 (т, 4Н), 1,76 (ί, 4Н), 2,07 (з, 6Н), 2,45 (ί, 8Н), 3,01 (ί, 4Н), 12,36 (з, 2Н).

Масса (М++1): 509,3.

Х,Х'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(2-метоксифенил)ацетамид)

(132):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-6₆) δ: 1,77 (з, 4Н), 3,03 (з, 4Н), 3,79 (з, 6Н), 4,86 (з, 4Н), 6,86-7,02 (т, 8Н), 12,59 (з, 2Н).

Масса (М++1): 585,7.

Х,Х'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(4-(4-метоксифенил)бутанамид)

(75):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-6₆) δ: 1,76 (з, 4Н) 1,84-1,87 (ί, 4Н), 2,43-2,46 (ί, 4Н), 2,51-2,54 (т, 4Н), 3,00-3,01 (б, 4Н), 3,71 (з, 6Н), 6,82-6,84 (б, 4Н), 7,10-7,11 (б, 4Н), 12,35 (з, 2Н).

Масса (М++1): 609,7.

Диэтил-5,5'-(5,5'-(бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(азандиил)-бис-(5оксопентаноат) (76):

¹Н ЯМР (500 МГц, ЭМБО-б₆) δ: 1,16-1,18 (б, 6Н), 1,76 (з, 4Н), 1,80-1,86 (т, 4Н), 2,32-2,35 (ί, 4Н), 2,48 (з, 4Н), 3,01 (з, 4Н), 4,02-4,06 (т, 4Н), 13,39 (з, 2Н).

Масса (М++1): 541,7.

- 54 029531

Х№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(6-хлорпиридин-3-ил)ацетамид)

(78):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 1,74 (з, 4Η), 3,01 (з, 4Η), 3,89 (з, 4Η), 7,49-7,50 (ά, 2Η), 7,79-7,81 (т, 2Η), 8,34 (ά, 2Η), 12,70 (з, 2Η).

Масса (М++1): 584,7.

Н№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(4-циклогексилбутанамид) (80):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 0,8-0,9 (ά, 4Η), 1,15-1,22 (т, 12Η), 1,57-1,65 (т, 14Η), 1,76 (з, 4Η), 2,40-2,42 (ά, 4Η), 3,01-3,02 (ά, 4Η), 12,33 (з, 2Η).

Масса (М++1): 581,7.

(3Е,3'Е)-Х№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(4-фенилбут-3-енамид)

(81):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 1,76 (т, 4Η), 3,01 (т, 4Η), 3,42 (т, 4Η),6,37 (ΐά, 2Н), 6,55 (ά, 2Η), 7,24 (т, 2Η), 7,32 (т, 4Η), 7,42 (т, 4Η), 12,51 (Ьгз, 2Η).

Масса (М++1): 545,3.

Н№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(4-фенилбутанамид) (82):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά6) δ: 1,77 (Ьгз, 4Η), 1,90 (т, 4Η), 2,47 (ΐ, 4Η), 2,60 (ΐ, 4Н), 3,01 (Ьгз, 4Η), 7,16-7,29 (т, 10Н), 12,35 (Ьгз, 2Η).

Масса (М++1): 549,3.

Н№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(3,4-дифторфенил)ацетамид)

(83):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 1,74 (Ьгз, 4Η), 3,00 (Ьгз, 4Η), 3,82 (з, 4Η), 7,15 (т, 2Н), 7,39 (т, 4Η), 12,67 (§, 2Η).

Масса (М++1): 565,2.

Х№-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))ди-1-нафтамид (85):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 1,89 (Ьгз, 4Η), 3,14 (Ьгз, 4Η), 7,60 (т, 6Η), 7,90 (т, 2Η), 8,04 (т, 2Η), 8,15 (т, 2Η), 8,23 (т, 2Η), 13,09 (Ьгз, 2Η).

Масса (М++1): 565,2.

- 55 029531

НК'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(2-хлорфенил)ацетамид) (86):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 1,76 (Ьг8, 4Н), 3,01 (Ьг8, 4Н), 3,99 (8, 4Н), 7,33-7,45 (т, 8Н), 12,71 (Ьг8, 2Н).

Масса (М++1): 561,2.

К,К'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(1Н-индол-3-ил)ацетамид) (87):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 1,73 (8, 4Н), 2,98 (8, 4Н), 3,88 (8, 4Н), 6,97-7,00 (ί, 2Н), 7,06-7,09 (ί, 2Н), 7,28 (8, 2Н), 7,35-7,36 (й, 2Н), 7,55-7,56 (й, 2Н), 10,96 (8, 2Н), 12,58 (8, 2Н).

Масса (Μ++1): 571,7.

К,К'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-метил-2-фенилпропанамид) (88):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο^6) δ: 1,60 (8, 12Н), 1,77 (Ьг8, 4Н), 3,01 (Ьг8, 4Н), 7,25-7,37 (т, 10Н), 11,97 (Ьг8, 2Н).

Масса (М++1): 549,3.

К,К'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(2,5-диоксоимидазолидин-4ил)ацетамид) (89):

о

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο^6) δ: 1,76 (Ьг8, 4Н), 2,77-2,81 (ΑΒς, 2Н), 2,90-2,94 (ΑΒς, 2Н), 3,01 (Ьг8, 4Н), 4,35 (ί, 2Н), 7,93 (8, 2Н), 10,66 (Ьг8, 2Н), 12,53 (Ьг8, 2Н).

Масса (Μ++1): 537,2.

К,К'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))дициклогексанкарбоксамид (90):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-йб) δ: 1,16-1,28 (т, 6Н), 1,35-1,42 (т, 4Н), 1,64 (Ьгй, 2Н), 1,72-1,82 (т, 12Н), 2,54 (т, 2Н), 3,00 (Ьг8, 4Н), 12,30 (Ьг8, 2Н).

Масса (М++1): 477,3.

НК'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(3-(2-хлорфенил)пропанамид) (91):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜδΟ-йб) δ: 1,76 (8, 4Н), 2,76-2,79 (ί, 4Н), 3,01-3,04 (ί, 8Н), 7,24-7,29 (т, 2Н), 7,34-7,35 (т, 2Н), 12,42 (8, 2Н).

Масса (М++1):589,7.

- 56 029531

Ы,Ы'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-( 1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(3-оксо-1,3дигидроизобензофуран-1 -ил)ацетамид) (93):

'Н ЯМР (500 МГц, ΏΜ80-ά₆) δ: 12,61 (8, 2Н), 7,74-7,87 (т, 4Н), 7,73-7,74 (ά, 2Н),7,61-7,64 (ί, 2Н), 6,02-6,04 (т, 2Н), 3,05 (8, 4Н), 2,91-2,96 (т, 2Н), 1,79-1,80 (ά, 4Н).

Масса (М+1): 605,2.

Ы,Ы'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))диацетамид (94):

'Н ЯМР (500 МГц, ΏΜ80-ά₆) δ: 1,77 (ί, 4Н), 2,16 (8, 6Н), 3,01 (ί, 4Н), 12,39 (8, 2Н.

Масса (Μ++1): 341,1.

Ы,Ы'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))дициклопентанкарбоксамид (95):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΏΜ80-ά₆) δ: 1,59 (т, 4Н), 1,59-1,72 (т, 8Н), 1,76 (8, 4Н), 1,85-1,90 (т, 4Н), 2,512,96 (т, 2Н), 3,01 (8, 4Н), 12,38 (8, 2Н).

Масса (М⁺+1): 449,7.

Ы,Ы'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(3-(3,4,5триметоксифенил)пропанамид) (101):

'Н ЯМР (500 МГц, ΏΜ80-ά₆) δ: 1,77 (т, 4Н), 2,76 (ί, 4Н), 2,86 (ί, 4Н), 3,01 (т, 4Н), 3,61 (8, 6Н), 3,72 (8, 12Н), 6,53 (8, 4Н), 12,40 (Ьг8, 2Н).

Масса (М++1):701,3.

Ы,Ы'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))дициклобутанкарбоксамид (102):

'Н ЯМР (500 МГц, ΏΜ80-ά₆) δ: 1,81-1,94 (т,6Н), 1,96-1,98 (ί, 2Н), 2,10-2,25 (т, 6Н), 3,01 (8, 4Н), 3,33-3,40 (т, 2Н), 12,26 (8, 2Н).

Масса (М⁺+1): 421,7.

Ы,Ы'-(2,2'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(азандиил)-бис-(2-оксоэтан-2,1диил))дибензамид (103):

'Н ЯМР (500 МГц, ΏΜ80-ά₆) δ: 8,59 (8, 2Н), 8,94-8,96 (ί, 2Н), 7,88-7,90 (ί, 4Н), 7,48-7,58 (т, 6Н), 4,18-4,19 (ά, 4Н), 3,03 (8, 4Н), 1,77 (8, 4Н).

Масса (М+1): 579,3.

- 57 029531

\.\'-(5.5'-(Б\ган-1.4-диил)-бис-(1.3.4-тиадиазол-5.2-диил))-бис-(3-(2.3диметоксифенил)пропанамид) (106):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά6) δ: 12,41 (δ, 2Н), 6,97-6,98 (т, 2Н), 6,89-6,90 (т, 2Н), 6,76-6,78 (т, 2Н), 3,79 (δ, 6Н), 3,71 (δ, 6Н), 3,00-3,01 (ά, 4Н), 2,87-2,90 (ΐ, 4Н), 2,70-2,73 (ΐ, 4Н), 1,76 (δ, 4Н).

Масса (М+1): 641,3.

Х,Х'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(4(диметиламино)фенил)ацетамид) (107):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 12,55 (δ, 2Н), 7,12-7,13 (ά, 4Н), 6,66-6,68 (ά, 4Н), 3,63 (δ, 4Н), 2,982,99 (ά, 2Н), 2,85 (δ, 12Н), 1,73 (δ, 4Н).

Масса (М+1): 579,3.

Х,Х'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(3-феноксипропанамид) (111):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 12,57 (δ, 2Н), 7,26-7,29 (т, 4Н), 6,92-6,95 (т, 6Н), 4,26-4,28 (ΐ, 4Н), 3,01-3,02 (ά, 4Н), 2,93-2,96 (ΐ, 4Н), 1,77 (δ, 4Н).

Масса (М+1): 553,3.

Х,Х'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(4-оксо-4-фенилбутанамид) (112):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 1,75 (δ, 4Н), 2,82-2,85 (ΐ, 4Н), 3,00 (δ, 4Н), 3,39-3,41 (ΐ, 4Н), 7,53-7,56 (ΐ, 4Н), 7,64 (т, 2Н), 7,98-8,00 (ΐ, 4Н), 12,50 (δ, 2Н).

Масса (м++1):577,7.

НХ'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(4-хлорфенил)ацетамид) (113):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 1,74 (δ, 2Н), 3,00 (δ, 4Н), 3,81 (δ, 4Н), 7,33-7,40 (т, 8Н), 12,66 (δ, 2Н). Масса (М++1):562,7.

Х,Х'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(3-метилбутанамид) (115):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ: 0,92 (ά, 12Н), 1,77 (т, 4Н), 2,08 (т, 4Н), 2,34 (ά, 4Н), 3,02 (т, 4Н), 12,38 (δ, 2Н).

Масса (М++1): 425,3.

- 58 029531

К,К'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-( 1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-о-толилацетамид) (114):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆) δ: 12,66 (δ, 2Н), 7,14-7,24 (т, 8Н), 3,83 (δ, 4Н), 2,99-3,00 (ί, 4Н), 2,25 (δ, 6Н), 1,74 (δ, 4Н).

Масса (М+1): 521,3.

К,К'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(2-метил-1Н-индол-3ил)ацетамид) (116):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆) δ: 12,59 (δ, 2Н), 10,87 (δ, 2Н), 7,46-7,48 (ά, 2Н), 7,22-7,24 (ά, 2Н), 6,906,99 (т, 4Н), 3,82 (δ, 4Н), 2,97 (δ, 4Н), 2,37 (δ, 6Н), 1,72 (δ, 4Н).

Масса (М+1): 599,2.

К,К'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(4-(бензилокси)фенил)ацетамид)

(117):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆) δ: 12,64 (δ, 2Н), 7,31-7,45 (т, 10Н), 7,21-7,25 (ί, 2Н), 6,88-6,99 (т, 6Н), 5,08 (δ, 4Н), 3,75 (δ, 4Н), 3,00 (δ, 4Н), 1,75 (δ, 4Н).

Масса (М+1): 705,3.

К,К'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(2,4-диметоксифенил)ацетамид)

(119):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆) δ: 1,75 (Ьгз, 4Н), 3,00 (Ьгз, 4Н), 3,68 (δ, 4Н), 3,71 (δ, 6Н), 3,75 (δ, 6Н), 6,48 (άά, 2Н), 6,54 (ά, 2Н), 7,10 (ά, 2Н), 12,49 (Ьгз, 2Н).

Масса (М++1): 613,3.

К,К'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-м-толилацетамид) (120):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆) δ: 1,74 (т, 4Н), 2,29 (δ, 6Н), 3,00 (т, 4Н), 3,74 (δ, 4Н), 7,06-7,13 (т, 6Н), 7,21 (т, 2Н), 12,65 (Ьгз, 2Н).

Масса (М++1): 521,3.

К,К'-(5,5'-(Бутан-1,4-диил)-бис-( 1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-циклогексилацетамид) (121):

¹Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆) δ: 0,95 (т, 4Н), 1,10-1,25 (т, 6Н), 1,58-1,65 (т, 10Н), 1,76 (т, 6Н), 2,33 (ά, 4Н), 3,00 (т, 4Н), 12,36 (Ьгз, 2Н).

Масса (М++1): 505,3.

- 59 029531

Пример 15.

Схема 15

3,3'-Сульфонилдипропановая кислота (Ι-14):

Смесь 3,3'-тиодипропановой кислоты (1 экв.) и оксона (2,93 экв.) помещали в ТНР, МеОН, Н₂О (1:1:1) и перемешивали при Γΐ в течение 8 ч. Реакционную смесь доводили до рН 5 с использованием НС1, затем экстрагировали с помощью ЕЮАс. Органический слой концентрировали ίη уасио с получением требуемого продукта Ι-14, который использовали без очистки на следующей стадии.

5,5'-(2,2'-Сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-2-амин) (Ι-15):

Смесь 3,3'-сульфонилдипропановой кислоты (1 экв.) и тиосемикарбазида (2 экв.) помещали в РОС1₃(10-кратный) и перемешивали при 90°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали на лед. Полученную смесь фильтровали и затем с помощью КОН доводили до рН

14. Смесь фильтровали, промывали водой и сушили с получением требуемого продукта Ι-15, который использовали без очистки на следующей стадии.

Общая процедура синтеза соединений (Ι-16).

Диамин Ι-15 (1 экв.) помещали в ОМР и охлаждали до 0°С. Затем добавляли НАТИ (3 экв.) с последующим добавлением ΌΙΡΕΑ (3 экв.) и перемешивали в течение 10 мин. Добавляли соответствующую кислоту (3 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Протекание реакции отслеживали с помощью ЬСМ8. После завершения реакции в реакционную смесь добавляли воду и перемешивали в течение 10 мин. Смесь фильтровали через воронку Бюхнера, промывали водой и сушили. Неочищенный продукт очищали с помощью стандартных процедур с получением требуемых продуктов Ι-16.

Следующее соединение синтезировали в соответствии с общей процедурой, описываемой для Ι-16.

К,К'-(5,5'-(2,2'-Сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(3,4диметоксифенил)ацетамид) (30):

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О-Й6) δ: 3,51-3,53 (т, 4Н), 3,67-3,74 (т, 20Н), 6,83-6,94 (т, 6Н), 12,64 (Ьгз,

2Н).

Масса (М++Н): 677,2.

К,К'-(5,5'-(2,2'-Сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(4метоксифенил)ацетамид) (31):

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О-Й6) δ: 3,42 (т, 18Н), 6,87-6,88 (й, 4Н), 7,21-7,23 (й, 4Н).

Масса (М++Н): 617,1.

К,К'-(5,5'-(2,2'-Сульфонил-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-(тетрагидро2Н-пиран-2-ил)ацетамид) (33):

¹Н ЯМР (400 МГц, БМ8О-й₆) δ: 1,36 (т, 2Н), 1,46 (т, 6Н), 1,60 (т, 2Н), 1,76 (т, 2Н), 2,60 (т, 4Н), 3,29 (т, 2Н), 3,46 (т, 4Н), 3,71 (т, 6Н), 3,82 (т, 2Н), 9,29 (Ьгз, 2Н).

- 60 029531

Масса (М++Н): 573,2. Пример 16.

Н№-(5,5'-(2,2'-Тио-бис-(этан-2,1-диил))-бис-(1,3,4-тиадиазол-5,2-диил))-бис-(2-метил-1Нбензо[д]имидазол-6-карбоксамид) (34):

Диамин 1-2 (1 экв.) помещали в БМР и охлаждали до 0°С. Затем добавляли НАТИ (3 экв.) с последующим добавлением Б1РЕА (3 экв.) и перемешивали в течение 10 мин. Добавляли соответствующую кислоту (3 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Протекание реакции отслеживали с помощью ЬСМ8. После завершения реакции в реакционную смесь добавляли воду и перемешивали в течение 10 мин. Смесь фильтровали через воронку Бюхнера, промывали водой и сушили. Неочищенный продукт очищали с помощью стандартных способов с получением требуемого продукта 34.

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМЗО-дб) δ: 2,51-2,54 (ά, 6Н), 3,01-3,04 (!, 4Н), 3,32-3,34 (!, 4Н), 7,52-7,58 (ά, 2Н), 7,91-7,92 (ά, 2Н), 8,25-8,37 (ά, 2Н), 12,56 (Ьгк, 4Н).

Масса (М++Н): 605,2.

Пример 17.

Общая процедура получения соединения 1-144а-Ь:

В перемешанный раствор метил-2-(4-гидроксифенил)ацетата 1-142 (2,4 ммоль) в ТНР (6 мл) добавляли трифенилфосфин (3,6 ммоль) с последующим подходящим Вос-аминоспиртом 1-143а-Ь (3,6 ммоль), □РАО (3,6 ммоль) в 3 мл ТНР за период 30 мин и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью стандартных способов с получением требуемого продукта.

- 61 029531

1-144а (η=1): ' Н ЯМР (400 МГц, ТЕЛ) δ: 1,4 (δ, 9Н), 3,4 (ΐ, 2Н), 3,5 (δ, 2Н), 3,7 (δ, 3Н), 4,0 (ΐ, 2Н), 5,0 (Ьг δ, 1Н), 6,8 (ά, 2Н), 7,2 (ά, 2Н).

Общая процедура получения соединения 1-145а-Ь:

В перемешанную суспензию сложного метилового эфира 1-144а-Ь (2,1 ммоль) в ТНЕ и воды (1:1, 20 мл) добавляли гидроксид лития (4,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 4 ч. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и подкисляли водным раствором лимонной кислотой. Раствор экстрагировали в этилацетате, промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который использовали без очистки на следующей стадии.

1-145а (η=1): ¹Н ЯМР (400 МГц, ТЕА) δ: 1,4 (δ, 9Н), 3,4 (ΐ, 2Н), 3,5 (δ, 2Н), 4,0 (δ, 2Н), 5,0 (Ьг δ, 1Н), 6,8 (ά, 2Н), 7,2 (ά, 2Н).

Ы-(5-(2-((2-(5-Амино-1,3,4-тиадиазол-2-ил)этил)сульфонил)этил)-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2фенилацетамид (Ι-146):

В перемешанный раствор Ы-(5-(2-((2-(5-амино-1,3,4-тиадиазол-2-ил)этил)тио)этил)-1,3,4-тиадиазол2-ил)-2-фенилацетамида Ι-139 (1,2 ммоль) в ацетоне и воде (2:1, 4,5 мл) добавляли оксон (1,8 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью стандартных способов с получением требуемого продукта.

Расчетная ΕδΜδ для С1₆Н₁₈Ы₆О^₃: 438,54, наблюдаемая: 438,10 (М+).

Общая процедура получения соединения 1-147а-Ь:

В перемешанный раствор Ы-(5-(2-((2-(5-амино-1,3,4-тиадиазол-2-ил)этил)сульфонил)этил)-1,3,4тиадиазол-2-ил)-2-фенилацетамида Ι-146 (1 экв.) в ΌΜΕ при 0°С добавляли подходящий амин 1-145а-Ь (1 экв.), ΌΙΡΕΑ (1,5 экв.) с последующим добавлением НАТИ (1,5 экв.) и перемешивали в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Протекание реакции отслеживали с помощью ТЕС. После завершения реакции в реакционную смесь добавляли воду и перемешивали в течение 10 мин. Смесь фильтровали через воронку Бюхнера, промывали водой и сушили. Неочищенный продукт очищали с помощью стандартных способов с получением требуемых продуктов Е147а-Ь.

Ы47а: ¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά6) δ: 1,4 (δ, 9Н), 3,2-3,4 (т, 4Н), 3,4-3,5 (т, 4Н), 3,6-3,7 (т, 6Н), 3,8 (δ, 2Н), 3,9 (ΐ, 2Н), 7,0 (ά, 2Н), 7,2 (ά, 2Н), 7,3-7,4 (т, 5Н).

Общая процедура получения соединения Е148а-Ь:

В перемешанный раствор Е147а-Ь (0,27 ммоль) в дихлорметане (15 мл) при 0°С добавляли трифторуксусную кислоту (0,6 мл) и перемешивали в течение 3 ч. при комнатной температуре. После завершения реакции смесь концентрировали при пониженном давлении и нейтрализовали аммиаком, фильтровали и промывали с помощью ΜеΟН и сушили с получением требуемого продукта.

- 62 029531

2-(4-(2-Аминоэтокси)фенил)-N-(5-(2-((2-(5-(2-фенилацетамидо)-1,3,4-тиадиазол-2ил)этил)сульфонил)этил)-1,3,4-тиадиазол-2-ил)ацетамид (29):

¹Н ЯМР (400 МГц, ТРА) δ: 3,8 (т, 2Н), 3,82-4,0 (т, 8Н), 4,1-4,2 (т, 4Н), 4,4 (т, 2Н), 7,0 (б, 2Н), 7,327,52 (т, 8Н).

Масса (М++1): 616,3.

2-(4-(3-Аминопропокси)фенил)-N-(5-(2-((2-(5-(2-фенилацеτамидо)-1,3,4-τиадиазол-2ил)этил)сульфонил)этил)-1,3,4-тиадиазол-2-ил)ацетамид (36):

¹Н ЯМР (400 МГц, ТРА) δ: 2,3 (δ, 2Н), 3,59 (δ, 2Н), 3,8-3,9 (т, 8Н), 3,9-4,0 (т, 6Н), 4,23 (т, 2Н), 6,97,0 (т, 4Н), 7,2-7,4 (т, 5Н), 11,45 (Ъг δ, 2Н).

Масса (М++1): 630,4.

Описывая таким образом некоторые аспекты некоторых вариантов осуществления, следует понимать, что различные изменения, модификации и улучшения будут абсолютно очевидными специалистам в данной области. Предполагается, что такие изменения, модификации и улучшения являются частью настоящего раскрытия, и предполагается, что они находятся в пределах сущности и объема настоящего изобретения. Соответственно, вышеизложенное описание и графические материалы приведены только в качестве примера.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль:

где X представляет собой -8(О)- или -8О₂-;

каждый из Ш, Υ и Ζ независимо представляет собой -8-, -СН=, -СН=СН-, -СН=СК¹-, -СК¹=СК¹-, -О-, -Ν= или -ЛН- при условии, что (1) для каждого кольца по меньшей мере один из Ш, Υ и Ζ не представляет собой -СН= и (2) если один из Ш представляет собой -8- и Υ в том же кольце представляет собой Ν, тогда Ζ в том же кольце не представляет собой -СН=;

каждый из _К1

и К² независимо представляет собой С₁.₆алкилен-К⁴, -Н(К³)-К.⁴, -Н(К³)-С(О)-К⁴, -С(())-\(1П-Г -К(К³)-С(О)-О-К⁴, -К(К³)-С(О)-К(К³)-К⁴, -О-С(О)-МК³)-К⁴, -N(К³)-С(О)-С1.6алкиленС(О)-К⁴, -N(К³)-С(О)-С1.6алкилен-N(К³)-С(О)-К⁴ или -К(К^3а)-С(О)-СН2-К(К³)-С(О)-К⁴;

каждый К³ независимо представляет собой водород, С_1-6алкил или арил;

каждый К⁴ независимо представляет собой С_1-6алкил, С₂.₆алкенил, арил, гетероарил, аралкил, гетероаралкил, гетероциклилалкил, гетероциклил, С₃_7циклоалкил или циклоалкилалкил, каждый из которых замещен 0-3 вариантами К⁵, или два смежных фрагмента К⁵, взятые вместе с атомами, к которым они прикреплены, образуют гетероциклил, гетероарил, циклоалкил или арил;

каждый К⁵ независимо представляет собой оксо(=О), С1-6алкил, С1.6галогеналкил, С1.6алкокси, циано, галоген, -ОН, -8Н, -ОСР3, -8О2-С1.6алкил, -КО2, -N(К⁷)-С(О)-С1.₆алкил, -К(К.⁶)₂, -О-С(О)-С_1-6алкил, С₃.₇циклоалкил, (С₃.₇циклоалкил)алкил, арил, арилокси, -С(О)-арил, гетероарил, аралкил, гетероаралкил, гетероциклилалкил или гетероциклил, где каждый из арила, гетероарила или гетероциклила дополнительно замещен 0-3 вариантами К⁷;

каждый К⁶ независимо представляет собой водород, фтор, ОН или С_1-6алкил;

каждый К⁷ независимо представляет собой водород, С1-6алкил, -ОН, -8Н, циано, галоген, -СР3, -ОСР3, -8О2-С1-6алкил, -КО2, -N(К⁷)-С(О)-С1.₆алкил, -Ν(Ε.⁶)₂ или С_1-6алкокси;

т составляет 1, 2 или 3;

п составляет 1, 2 или 3 при условии, что сумма п и т составляет от 2 до 4;

- 63 029531

о составляет 1, 2 или 3;

р составляет 1, 2 или 3,

при условии, что соединение формулы (I) не представляет собой:

или

где термин "алкил" относится к неразветвленной или разветвленной углеводородной цепи, содержащей от 1 до 6 атомов углерода;

термин "арил" относится к моноциклической, бициклической или трициклической ароматической углеводородной кольцевой системе;

термин "гетероарил" относится к 5-14-членной ароматической кольцевой системе с 1-3 гетероатомами в кольце, которые независимо выбраны из О, Ν и 8; и

термин "гетероциклил" относится к 3-14-членным неароматическим кольцевым структурам, включающим один-четыре гетероатома, независимо выбранных из О, Ν и 8.
2. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где X представляет собой -8(0)-.
3. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где X представляет собой -80₂-.
4. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый из К¹ и К² независимо представляет собой -\(№-К\ -С(0ЖК³)-К⁴, ^(К³)-С(0)-0-К⁴ или -\(1П-С(0)-\(1П-№
5. Соединение по п.4 или его фармацевтически приемлемая соль, где т и п, оба, составляют 2.
6. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где по меньшей мере один из У, Υ и Ζ представляет собой -СН=СН-, -СН=СК¹- или -СК¹=СК¹-.
7. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый У представляет собой -8-, каждый Υ представляет собой -Ν= и каждый Ζ представляет собой -Ν=.
8. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый У представляет собой -СН=, каждый Ζ представляет собой -0- и каждый Υ представляет собой -Ν=.
9. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где о составляет 1 и р составляет

1.
10. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый из К¹ и К² представляет собой -М(К³)-С(0)-0-К⁴, где К³ представляет собой водород.
11. Соединение по п.10 или его фармацевтически приемлемая соль, где К¹ и К² являются одинаковыми.
12. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение представляет собой соединение формулы (II)
13. Соединение по п.12 или его фармацевтически приемлемая соль, где К¹ и К² являются одинаковыми.
14. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, где соединение представляет собой соединение формулы (III)
15. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из:

- 64 029531

- 65 029531
17. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой
18. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой
19. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой
20. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой
21. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой
22. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой
23. Фармацевтическая композиция, обладающая способностью ингибировать глутаминазу, содержащая соединение формулы (I) по любому из пп.1-22 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.
24. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-22 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака у нуждающегося в этом субъекта.
25. Применение по п.24, где рак характеризуется ΐ) низким уровнем экспрессии Е-кадгерина по сравнению с эталонным стандартом, ΐΐ) высоким уровнем экспрессии виментина по сравнению с эталонным стандартом или ΐΐΐ) низким или пониженным уровнем экспрессии пируваткарбоксилазы.
26. Применение по п.24, где рак представляет собой рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, рак молочной железы, гепатоцеллюлярную карциному, остеосаркому, разновидности липом, хондросаркому или мезотелиому.

О