WO2005009454A1

WO2005009454A1 - 歯周病治療用及び／又は予防用組成物

Info

Publication number: WO2005009454A1
Application number: PCT/JP2004/011210
Authority: WO
Inventors: Yuuzou Tsuchida; Mitsuo Kawabe; Kunitomo Watanabe; Kotarou Tsuchida
Original assignee: Hououdou Co., Ltd.
Priority date: 2003-07-29
Filing date: 2004-07-29
Publication date: 2005-02-03
Also published as: US20080014292A1; EP1649864A4; US8343556B2; EP1649864B1; CN1832751B; JPWO2005009454A1; DE602004029367D1; CN1832751A; KR100828656B1; HK1092061A1; US20130101529A1; KR20060038955A; JP4731323B2; KR20080033546A; KR100884362B1; US20060127330A1; EP1649864A1

Abstract

　ササエキスを含有する歯周病治療用及び／又は予防用組成物、ササエキス及び有機酸を含有する歯周病治療用及び／又は予防用組成物。

Description

明細書

歯周病治療用及び Z又は予防用組成物技術分野

本発明は、ササエキスを含有する歯周病治療用及び/又は予防用組成物に関する。背景技術

う歯に Streptococcus mutansが深く関与していることは古くから知られている。

また、歯周疾患は、歯周ポケットにおける歯周病関連微生物の異常増殖が関係している。歯周病 ¾連微生物には、 Actinobacillus actinomycetemcomitans , forphyromonas gingivalis, Bacteroides for thy thus, Prevotella intermedia, Fusobacterium nucleatum, Capnocytophaga spp., corroding organisms (Wolinella spp. Campylobacter gracilis, Eikenella corrodens), Eubacterium spp., Treponema spp.などがあり、それらが種々の程度に関係していることが知られている。中でも、現時点では前 2菌種（ Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gin ivaas) の重要' I'生か高いとされている。

また、 Candida albicansは "鵞ロ瘡" の病原菌として知られるが、近年口腔内での Candida spp.の異常増殖と歯周疾患との関連性を指摘する意見が聞かれる。

ところで、ササエキスは古くから抗菌性を有することが知られている。例えば、創傷感染症の原因菌となる細菌である黄色ブドウ球菌、綠膿菌、大腸菌に対する抗菌効果や、胃潰瘍の原因菌とされるピロリ菌に対する抗菌効果が報告されている。本発明者らは先に、ササエキスを固形分濃度で 1〜1 0質量％、好ましくは 2〜8質量％、さらに好ましくは 3〜7質量％含有させることにより、従来の低濃度の場合にはほとんど認められなかったァトピ一等に対する改善効果、止痒効果が顕著に発現し、また創傷治癒効果も著しく向上することを見出した（例えば、 WO 02/07745)。

しかし、ササエキスが全ての細菌に対して有効な抗菌活性を有するかどうかは知られていないし、細菌に対して抗菌活性を有する天然抽出物がカンジダ等の力ビに対しても抗菌活性を有するかどうかは一般に知られていない。発明の開示

従って本発明の目的は、歯周病の予防及び Z又は治療に有用な組成物を提供することである。

本発明は、ササエキスを含有する歯周病治療用及び/又は予防用組成物を提供するものである。

本発明はまた、ササエキス及び有機酸を含有する歯周病治療用及び/又は予防用組成物を提供するものである。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は好ましくはクリームの形態にある。

この明細書において「歯周病」とは、歯周ポケットにおける歯周病関連微生物の異常増殖が関係しているとされる「歯周疾患」のみならず、 Streptococcus m utansが深く関与しているとされる「う歯」も包含するものとする。従って本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は「歯周疾患」及び「う歯」の治療用及び/又は予防用組成物を包含するものである。図面の簡単な説明

図 1は、ササエキス（TWEBS) 不含培地上で発育した菌苔の走査型電子顕微鏡 (SEM)写真（1 5 0 0 O x ) である。図 2は、ササエキス（TWEBS) 0 . 2 %存在下の培地上で発育した菌苔の走査型電子顕微鏡（SEM)写真（ 1 5 0 0 0 X ) である。

図 3は、ササエキス（TWEBS) 不含培地上で発育した菌苔の走査型電子顕微鏡 (SEM)写真（3 0 0 O x ) である。 .

図 4は、ササエキス（TWEBS) 0 . 2 %存在下の培地上で発育した菌苔の走査型電子顕微鏡（SEM)写真（3 0 0 O x ) である。発明を実施するための最良の形態

本発明者は、ササエキスの各種菌類に対する抗菌効果を探索し、ササエキスを固形分で 1〜5 0質量％、好ましくは 2〜2 5質量％、さらに好ましくは 4〜1 5質量％含有するものが、歯周病関連微生物（Actinobacillus actinomycetem- comitans, Porpnyromonas gingivalis, Bacteroides forth thus, Prevotelia intermedia, F sobacteiium nucleatum, Capnocytophaga spp., corroding organisms (W olinella spp. Campylobacter gracilis, Eikenella corrodens), Eubacterium spp., Treponema spp.など) ヽ及び Streptococcus等のう歯関連細菌、カンジダ等の力ビ類に対して顕著な抗菌効果を有すること、ササエキスにリンゴ酸等の有機酸を含有させることにより、抗菌性が顕著に向上することを見出し、本発明を完成するに至ったものである。ササエキスの固形分濃度が 1質量％未満では目的とする歯周病治療及び/又は予防効果の発現が不充分であり、一方、 5 0質量％を超えると、刺激が強くなり過ぎて好ましくない。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物の有効成分であるササエキスの原料として使用するササは、特に限定されず、ササ属（Sasa) に属するすべてのササが例示される。例えば、クマイザサ、クマザサ、チシマザサ、ォクャマザサ、ェゾミヤマザサ、チマキザサ、ャヒコザサ、ォォバザサ、ミヤマザサ、センダイザサ、ユカヮザサ、ァボイザサ、ォヌカザサ等が挙げられる。これらのうち、市販品の具体例としてはクマイザサ、クマザサ（チュウゴクザサ、ヒダザサ）等が挙げられる。例えば、北海道天塩山系で 7〜1 0月に採取されたクマイザサ、 ,クマザザの水抽出物等が好ましい。

本発明に使用するササエキスは、ササの生葉又は乾燥葉、好ましくは乾燥葉を、 1 0 0〜1 8 0 °Cの水で、常圧又は加圧抽出して得られるものが好ましい。

抽出方法は特に限定されないが、例えば、特許第 3 2 1 2 2 7 8号（特開平 1 1 - 1 9 6 8 1 8号公報）に記載された方法を使用することができる。さらに具体的には、加圧熱水抽出機により 1 0 0〜： 1 8 0 °C！、 5〜3 0分処理してエキスを抽出し、該エキスを水分分離器により含水固形分（含水率 4 0〜 7 0 %) と分離し、次に飽和水蒸気加熱処理機により該含水固形分を 1 0 0 °C〜 2 0 0 °Cで 5 分〜 6 0分処理した後、再度加圧熱水抽出機により 1 0 0 °C〜 1 8 0 °Cで 5〜 3 0分処理してエキスを抽出させ、第 1回目と第 2回目のエキスを合わせて使用する。また、ササ乾燥葉を例えば、 6 0〜1 0 0 °Cの水で 3 0分〜 1 2時間程度抽出して得られるエキスも使用できる。

ササエキスを固形分で 5 0質量％含有する市販品としては、株式会社鳳凰堂製「TWE B S」、株式会社クロロランド 'モシリ製「A H S S」がある。

こうして得られるササエキスは硫黄成分を含有しており、その含有量は硫黄に換算して、ササエキスの固形分 1 gあたり約 4〜1 0 m g、通常は約 6〜9 m g である。硫黄成分のうち主たる成分は含硫アミノ酸と考えられる。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は、ササエキス由来の硫黄成分を、硫黄に換算して 1 0 0 g当り、好ましくは 4〜5 0 0 m g、さらに好ましくは 8〜2 5 0 mg、最も好ましくは 1 6 ~ 1 5 O m g含有する。

また、ササエキスはタンニンを含んでおりその含有量はササエキスの固形分に対して 5〜1 5質量％程度である。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は、ササ夕ンニンを固形分濃度で好ましくは 0 . 0 5〜7 . 5質量％、さらに好ましくは 0 . 1〜6質量％含有することが望ましい。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は、ササエキスのみを有効成分とするものであっても良いし、これに適量の有機酸を併用することにより、その抗菌 ¾1果をさらに向上させることができる。このような有機酸としては、リンゴ酸、クェン酸、乳酸、シユウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酢酸、安息香酸、フエニル酢酸、サリチル酸、フヱノール類等が挙げられる。特にリンゴ酸が好ましい。

有機酸の使用量は、本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物中、好ましくは 0 . 0 1〜5質量％、さらに好ましくは 0 . 0 2〜3質量％、最も好ましくは 0 . 0 5〜； 1 . 5質量％である。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は、ササエキス、又はササェキスと有機酸のみから構成されていても良いし、これを他の成分、担体と混合しても良い。本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物の剤型は、液体状、固体状、気体状いずれでも良い。本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は、経口、非経口投与いずれの投与形態で投与してもよい。経口投与形態としては錠剤、丸剤、粉剤、液剤、チューインガム、飴、チョコレート、パン、クッキー、そば、うどん、等の食品形態が、非経口投与形態としては、歯磨き、嗽剤、局所投与剤（クリーム、軟膏等）等が挙げられる。局所投与剤の剤型の例としては、本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物を、天然繊維又は合成繊維製のガ —ゼ等の担体に含浸させたものが挙げられる。これらのうちクリーム、軟膏等の形態は、歯周病患部やう歯に直接塗布するのに適しており好ましい。

本発明の種々の剤型の歯周病治療用及び/又は予防用組成物の製造には、所定量の上記ササエキスのほか、通常の医薬組成物、化粧品、皮膚用組成物、口腔組成物（歯磨き、嗽薬）等に使用される油性成分等の基材成分、保湿剤、防腐剤等を使用することができる。

歯周病治療用及び/又は予防用組成物に使用する水は、水道水、天然水、精製水等、特に限定されないが、一般にイオン交換水等の高純度の水が好ましい。油性成分としては、スクヮラン、牛脂、豚脂、馬油、ラノリン、蜜蠟等の動物性油、ォリーブ油、グレープシード油、パ一ム油、ホホバ油、胚芽油（例えば、米胚芽油）等の植物性油、流動パラフィン、高級脂肪酸エステル（例えば、パルミチン酸ォクチル、ノレミチン酸イソプロビル、ミリスチン酸ォクチルドデシル）、シリコーン油等の合成油、半合成油が挙げられる。

油性成分は、皮膚の保護、ェモリエント性付与効果（皮膚表面を薄膜で覆い、乾燥を防ぐと共に、柔軟性、弾力性を与える効果）、さっぱり感等の要求性能に合わせて適宜組み合わせて用いられる。スクヮラン、ォリーブ油及びミリスチン酸ォクチルドデシルの組合せは好ましい例の一つである。

歯周病治療用及び/又は予防用組成物の硬さ、流動性を調節するために、ステアリン酸、ステアリルアルコール、ベへニン酸、セ夕ノール、ワセリン等の固体油が用いられ、好ましくはステアリン酸とセ夕ノ一ルが組み合わせて用レヽられる。本発明の歯周病治療用及び Z又は予防用組成物をクリーム組成物として製造するためには、ササエキス、水、油性成分をクリーム状にするためのクリーム化剤が用いられる。クリーム化剤は、特に限定されないが、モノステアリン酸グリセリンと自己乳化型モノステアリン酸グリセリン（モノステアリン酸グリセリンに乳化剤を添加したもの）とを組み合わせて使用するのが一般的である。本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物には、さらに必要に応じて安定化剤、保湿剤（湿潤剤）、創傷治瘛剤、防腐剤、界面活性剤、粘結剤、発泡剤、甘味剤、清涼剤、研磨剤等を含有させることができる。

安定化剤としては、カルボキシビ二ルポリマーと水酸ィ匕カリウムの組合せ、ジステアリン酸ポリエチレングリコール、リン酸マグネシウム等が挙げられる。特に、セスキステアリン酸ポリエチレングリコール（ジステアリン酸ポリエチレングリコールとモノステアリン酸ポリエチレングリコールの 1 ： 1混合物）（ポリエチレングリコールの分子量は 1◦ 0 0〜 2万）は、安定性が高く、水と油に分離することがなく、また、クリーム組成物として皮膚に塗布する際の硬さを効果的に調節することができるので好ましい。

保湿剤（湿潤剤）としては、ヒアルロン酸ナトリウム、コラーゲン、アロエェキス ' (特に、木立アロエ由来のアロエエキス（2 ) が好ましい）、尿素、 1 , 3 —プチレングリコール、グリセリン、トレハロース、ソルビトール、アミノ酸、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等が挙げられる。

創傷治癒剤としては、アラントイン、グリチルリチン酸ジカリウム、カンゾゥエキス、ョモギエキス等が挙げられる。

防腐剤は、ササエキス自体に抗菌作用があるため補助的に用いられるものである。例えば、安息香酸ナトリウム、パラヒドロキシ安息香酸低級アルキルエステル（例えば、メチル、ェチル、プロピル又はブチルエステル等のパラベンと称されるもの）、プロピオン酸ナトリウム、混合脂肪酸エステル（カプリン酸グリセリル、ラウリン酸ポリグリセリル一 2、ラウリン酸ポリグリセリル— 1 0の混合物）、フヱノキシエタノール、感光素 2 0 1号（黄色色素）、 1 , 2—ペンタンジオール等が挙げられるが、パラベン、混合脂肪酸エステル、 1 , 2—ペンタンジオールが好ましい。

界面活性剤としては、例えば、 N—ァシルー L一グルタミン酸ナトリウム、ポ -ト等が挙げられる。粘結剤としてはカルボキシメチルセルロースナトリウム等が、発泡剤としてはラウリル硫酸ナトリウム、ラウロイルグルタミン酸ナトリウム、ラウロイルサルコシンナトリウム等が、甘味剤としてはキシリトール、ソルビト一ル、サヅカリンナトリウム等が、清涼剤としてはハツ力油等が、研磨剤としてはリン酸カルシゥム、リン酸水素カルシウム、シリカ等が挙げられる。

さらに必要により、香り成分、例えば、オレンジオイル、レモンオイル、トウヒ油、香料等を含有させてもよい。

以上の各成分に、水、及び必要により有機酸を加えて全体で 1 0 0質量％とする。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物をクリーム組成物として製造する場合の各成分の好ましい配合量（質量％) を、以下の表 1に示す。水分以外の各成分の配合量は水分を除いたものの質量％である。

成分好ましい範囲より好ましい範囲最も好ましい範囲ササエキス：!〜 5 0 2〜 2 5 4〜1 5 液体状油性成分 6〜3 0 2〜2 0 5〜1 5 固体状油性成分 2〜3 5 3〜2 5 5〜1 5 クリーム化剤 1〜6 1 . 5〜4 1 . 6〜3 安定化剤 0〜2 0〜1 . 5 0〜1

保湿剤 0〜1 0 0 . 0 5〜5 0 . 1〜5 創傷治癒剤 0〜2 0 . 0 5〜1 0 . 1〜0 . 5 香り成分 0〜5 0〜3 0〜1

有機酸 0 . 0 1〜5 0 . 1〜3 0 . 5〜1 . 5 水残部残部残部以上の各成分を、攪拌翼と好ましくは乳化器を備えた加熱混合釜に投入し、 7 0〜 9 0 °Cで 1〜 2時間攪拌混合し、本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物を得る。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は、クリーム組成物の他、軟膏、液状、ジエル状、ゲル状、エアゾール、その他の形態で使用することができるが、クリーム組成物の形態が簡便で効果も大きい。また、半固体又は液体の形態としてもよい。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は、適量、例えば、クリーム組成物として適用する場合、 0 . 1〜： L g程度を、 1曰 1〜5回、通常は 1〜3回程度、. 患部、例えば、歯周病患部や、う歯の歯根、歯周部に塗布すればよい。塗布量、塗布回数は症状の程度に合わせ適宜増減すればよい。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は、経口摂取する場合、ササェキス固形分として体重 l k g当たり 0 . 0 1〜0 . l g程度を 1日 1〜5回、通常は 1〜3回程度摂取するのが適当である。摂取量、摂取回数は症状に合わせ適宜増減すればよい。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は、非経口摂取する場合、ササエキス固形分として体重 l k g当たり 0 . 0 1〜0 . 1 程度を1日1〜5回、通常は 1〜3回程度摂取するのが適当である。摂取量、摂取回数は症状に合わせ適宜増減すればよい。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物の有効成分であるササエキスは笹属の抽出物であり、そのし 2 5質量％水溶液はヒトの胎児腎臓由来の 2 9 3 細胞に対して毒性を示さない。

本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物は、ササエキスを固形分で 1〜 5 0質量％含有しており、歯周病関連微生物、カンジダ菌、等に対する顕著な抗菌 '効果を示す。本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物の好ましい実施態様は以下のとおりである。

1 . ササエキス（固形分で 1〜5 0質量％) 、水、油性成分及びクリーム化剤を含む歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

2 . 油性成分が、動物性油、植物性油、合成油及び半合成油からなる群から選ば + れた少なくとも 1種である上記 1記載の歯周病治療用及び Z又は予防用組成物。

3 . 油性成分が、スクヮラン、牛脂、豚脂、馬油、ラノリン、蜜蠟、オリ一ブ油、グレープシード油、パ一ム油、ホホバ油、胚芽油、流動パラフィン、パルミチン酸ォクチル、ノレミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ォクチレドデシル、シリコーン油、ステアリン酸、ステアリルアルコール、ベへニン酸、セ夕ノール、及びヮセリンからなる群から選ばれた少なくとも 1種である上記 1記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

4 . クリ—ム化剤が、モノステアリン酸グリセリンと自己乳化型モノステアリン酸グリセリンとの組み合わせである上記 1〜 3のいずれか 1項記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

5 . さらに有機酸、安定化剤、保湿剤、創傷治癒剤、防腐剤及び界面活性剤からなる群から選ばれた少なくとも 1種の成分を含有する上記 1〜4のいずれか 1項記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

6 . 安定化剤が、カルボキシビ二ルポリマーと水酸化カリウムの組合せ、及びジステアリン酸ポリエチレングリコールからなる群から選ばれた少なくとも 1種である上記 5記載の歯周病治療用及び Z又は予防用組成物。

7 . 保湿剤が、ヒアルロン酸ナトリウム、コラーゲン、アロエエキス、尿素、 1 , 3—ブチレングリコ一ル、グリセリン、トレハロース、ソルビトール、アミノ酸、及びピロリドンカルボン酸ナトリゥムからなる群から選ばれた少なくとも 1種である上記 5記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

8 . 創傷治癒剤が、アラントイン、グリチルリチン酸ジカリウム、カンゾウエキス、及びョモギエキスからなる群から選ばれた少なくとも 1種である上記 5記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

9 . 防腐剤が、安息香酸ナトリウム、パラヒドロキシ安息香酸低級アルキルエステル、プロピオン酸ナトリウム、混合脂肪酸エステル、フエノキシエタノール、

1， 2—ペンタンジオール及び黄色色素からなる群から選ばれた少なくとも 1種である上記 5記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。 '

1 0 . さらに、オレンジオイル、レモンオイル、トウヒ油、及び香料からなる群から選ばれた少なくとも 1種の成分を含有する上記 5記載の歯周病治療用及び/ 又は予防用組成物。

1 1 . ササエキス、水、油性成分、クリーム化剤、安定化剤、保湿剤、創傷治癒剤、防腐剤及び界面活性剤を含有する歯周病治療用及び/又は予防用組成物において、油性成分が、スクヮラン、牛脂、豚脂、馬油、ラノリン、蜜蠟、オリ一ブ油、グレープシード油、パーム油、ホホバ油、胚芽油、流動パラフィン、パルミチン酸ォクチル、ノルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ォクチルドデシル、シリコーン油、ステアリン酸、ステアリルアルコール、ベへニン酸、セ夕ノール、及びワセリンからなる群から選ばれた少なくとも 1種であり、クリーム化剤が、モノステアリン酸グリセリンと自己乳化型モノステアリン酸グリセリンとの組み合わせであり、安定化剤が、カルボキシビ二ルポリマーと水酸ィ匕カリウムの組合せ、及びジステアリン酸ポリエチレングリコ一ルからなる群から選ばれた少なくとも 1種であり、保湿剤が、ヒアルロン酸ナトリウム、コラーゲン、アロエェキ. ス、尿素、 1 , 3—プチレングリコ一ル、グリセリン、トレハロース、ソルビト —ル、アミノ酸、及びピロリドンカルボン酸ナトリゥムからなる群から選ばれた少なくとも 1種であり、創傷治癒剤が、アラントイン、グリチルリチン酸ジカリゥム、カンゾゥエキス、及びョモギエキスからなる群から選ばれた少なくとも 1 種であり、防腐剤が、安息香酸ナトリウム、パラヒドロキシ安息香酸低級アルキルエステル、プロピオン酸ナトリウム、混合脂肪酸エステル、フエノキシタール、及び黄色色素からなる群から選ばれた少なくとも 1種であり、界面活性剤が N— ァシルー L—グル夕ミン酸ナトリゥムである上記歯周病治療用及び/又は予防用組成物 o

1 2 . さらに、オレンジオイル、レモンオイル、トウヒ油、及び香料からなる群から選ばれた少なくとも 1種の成分を含有する上記 1 1記載の歯周病治療用及び /又は予防用組成物。

1 3 . ササエキス、水、スクヮラン、才リーブ油、モノステアリン酸グリセリン、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン、カルボキシビ二ルポリマー、水酸化力リウム、尿素、 1， 3—プチレングリコール、アラントイン、パラヒドロキシ安息香酸低級アルキルエステル、ステアリン酸、 N—ァシル— L—グル夕ミン酸ナトリウム、レモンオイルを含有する上記 1記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

1 4 . ササエキス、水、スクヮラン、オリープ油、ミリスチン酸ォクチルドデシル、セ夕ノール、モノステアリン酸グリセリン、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン、カルボキシビ二ルポリマ一、水酸化カリウム、尿素、 1， 3—ブチレングリコール、アラントイン、混合脂肪酸エステル、ステアリン酸、 N—ァシル —L一グルタミン酸ナトリウム、オレンジオイルを含有する上記 1記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

1 5 . セスキステアリン酸ポリエチレングリコ一ルを含有する上記 1〜1 4のいずれか 1項記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

1 6 . 有機酸が、リンゴ酸、クェン酸、乳酸、シユウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酢酸、安息香酸、フエニル酢酸、サリチル酸、及びフエノール類からなる群から選ばれたる少なくとも 1種である上記 1〜1 5のいずれか 1項記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

1 7 . 有機酸が、リンゴ酸である上記 1 6記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物 o

1 8 . リン酸水素カルシウム、水、ソルビトール、グリセリン、ササエキス、シリカ、セルロースガム、ラウリル硫酸ナトリウム、キシリトール、ハツ力油、リン酸マグネシウム、ラウロイルサルコシンナトリウム、サッカリンナトリウムを含む上記 1記載の歯周病治療用及び Z又は予防用組成物。

1 9 . リン酸水素カルシウム、水、ソルビトール、グリセリン、ササエキス、シリカ、セルロースガム、ラウロイルグル夕ミン酸ナトリウム、キシリトール、ノヽヅカ油、リン酸マグネシウム、ラウロイルザルコシンナトリウムを含む上記 1記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

2 0 . 水、ソルビトール、グリセリン、ササエキス、セルロースガム、ラウロイルグルタミン酸ナトリウム、キシリトール、ハツ力油、リン酸マグネシウム、ラゥロイルザルコシンナトリウムを含む上記 1記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。次に、参考例、実施例及び試験例を示し、本発明をさらに詳細に説明する。参考例 1 ササエキスの製造

北海道天塩山系で 9月に採集されたササの乾燥葉を、加圧熱水抽出夕ンクに入れ、 1 2 5 °Cで 1 0分処理し、冷却水で熱水を 8 0 °C程度まで冷却し、エキスと含水固形分をスクリユープレスで分離して、含水率を約 5 0質量％とした。次に、約 5 0質量％含水固形分をォ一トクレーブに入れ、 1 8 0 °Cで 1 0分、飽和水蒸気による加圧熱処理を行った。処理した含水固形分を、再度加圧熱水抽出タンクに入れて 110°Cで 5分処理してエキスを抽出させた。第 1回目と第 2回目のェキスを合わせ、珪藻土濾過し、固形分 50質量％となるまで減圧濃縮し、 110 〜130°Cの流動殺菌処理をしてササエキスを得た。

このササエキス中の硫黄含有量は 3850〃g/ml (7. 7mg/固形分 1 g)であった。参考例 2

ササエキス（Bambuseae Sasa) (株式会社鳳凰堂製「TWEBS」）の成分を分析したところ下記の結果が得られた。

水 59. 5質量％

8. 6

0. 6

ミネラル 9. 0

炭水化物 19. 8

タンニン 2. 5 実施例 1〜4

下記の表 2に示す成分を表 2に示す質量比で混合し、攪拌翼と乳化器を備えた加熱混合釜に投入し、 80°Cで 2時間攪拌混合し、本発明の歯周病治療用及び/ 又は予防用組成物を得た。固形分濃度 8質量％のササエキス（参考例 1で製造した固形分 50質量％のササエキスを水で希釈したもの）の添加量は実施例 1〜4 においてそれぞれ、 12. 5、 25、 37. 5、及び 75質量％ (従って、ササエキス固形分の含有量は、 1、 2、 3、及び 6質量％、硫黄含有量は、歯周病治療用及び/又は予防用組成物 100g中、 7. 7mg、 15. 4mg、 23. 1 mg及び 46. 2mgである）。表 2

実施例 5

下記の表 3に示す成分を表 3に示す質量比で混合し、実施例 1〜4と同様にして、本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物を得た。

5 表 3

この歯周病治療用及び Z又は予防用組成物 1 0 0 g中の硫黄は、 4 6 2 mgである。

6 実施例 6

下記の表 4に示す成分を表 4に示す質量比で混合し、攪袢翼と乳化器を備えた加熱混合釜に投入し、 80°Cで 2時間攪拌混合し、本発明の歯周病治療用及び/ 又は予防用組成物を得た。

表 4

.のクリームの pHは 6. 00であった c

7 実施例 7

下記の表 5に示す成分を表 5に示す質量比で混合し、攪拌翼と乳化器を備えた加熱混合釜に投入し、 80°Cで 2時間攪拌混合し、本発明の歯周病治療用及び/ 又は予防用組成物クリームを得た。

表 5

このクリームの ρΗは 4. 68であった。実施例 8

下記の表 6に示す成分を表 6に示す質量比で混合し、本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物（歯磨き組成物）を得た。表 6

実施例 9〜： 1 1

実施例 7においてササエキス（固形分含有量 5 0質量％) の量を 1 6質量％、

9 実施例 1 3

下記の表 8に示す成分を表 8に示す質量比で混合し、本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物（歯磨き組成物）を得た。表 8

試験例 1

試験液として、株式会社鳳凰堂製「TWEBS」（ササエキスを固形分濃度で 5 0質量％、リンゴ酸を 1質量％含む pH約 5.0の溶液）を使用した。希釈には滅菌蒸留水を使用した。細菌については、 4, 2, 1, 0.5%と 2倍希釈で、 Candid aについては、 8, 7， 6, 5, 4， 3, 2, 1%と変化させて、 MICを測定し 2 0質量％及び 3 0質量％とし、精製水の量を調整した他は同様にしてササェキス固形分含有量が 8質量％、 1 0質量％及び 1 5質量％の本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物クリームを得た。実施例 1 2

下記の表 7に示す成分を表 7に示す質量比で混合し、本発明の歯周病治療用及び/又は予防用組成物（歯磨き組成物）を得た。表 7

2 0 た。

GAM寒天培地を感受性測定用培地として寒天平板希釈法により最小発育阻止濃度 (MIC) を測定した。通性菌は 2 4時間の好気培養後に、嫌気性菌は 4 8 時間の嫌気培養後に判定を実施した。接種菌量は spotあたり約 10⁶個程度とした。必要に応じて、 2 NNaOH水溶液または 10%塩化水素氷溶液を使用して、培地 p Hの調整を実施した。

Candida spp.は、マイコセル寒天培地 ( B D ) で 48時間培養して得た被験菌株の集落を使用して、 M Hbroth (Difco) 中に McFarland#lの濁度の菌液を調整し、その 1白金耳 (10〃 1 )を試験液含有平板系列に画線塗抹法により接種した。 1白金耳には、約 10⁶の細菌を含む。 35°Cで、 24時間培養後、発育の有無を肉眼で観察した。発育が認められた場合（+ ) と判定した。

また、 MIC精度管理用菌株として、 Escherichia coli ATCC25922、 Staphylo coccus aureus ATCC25923を使用した。

う歯関連細菌として Streptococcus mutans GTC218を用いた。対照菌として、う歯とは関係がないと考えられている口腔、咽頭など上気道の病原菌 Streptococ cus pyogenes ATCC19615, Streptococcus pneumoniae ATCC6305を含むグラム陽性球菌 5株を用ゝた。好気的に培養した血液寒天培地上の純培養菌を実験に使用した。

歯周病関連微生物としては、 Porphyromonas gingivalis ATCC33277, Prevotella intermedia ATCC25611, Bacteroides forthythus, Fusobacterium nucleatum ATC025586 , Actinobacillus actinomycetemcomitans , Capnocytop aga ohraceus GAI-5586を用レ、た。 Brucella HK血液寒天培地上の純培養菌を得、使用した。培養は、嫌気性グローブボックスを使用した。

Candida albicansおよび Candida glabrataの合計 13株を使用した。これらは、 2002年に各種臨床材料から分離され、岐阜大学医学部附属嫌気性菌実験施設に保存されていた株である。

結果を表 9〜 1.1に示す _c 表 9 う歯関連細菌とその他の非関連球菌群に対する抗菌力 0⁶ ■ ml

表 10 歯周病関連細菌に対する抗菌力 10⁷ · m

細菌名ササエキス試験ササエキス試験液の MIC(pH7) 液の MIC(pH6)

Porphyromonas gingivalis ATCC33277 0. 5 ND

Prevotella intermedia ATCC25611 1. 0 2. 0

Bacteroides forthythus NT NT

Fusobacterium nucleatum ATCC25586 2. 0 2. 0 .

Actinobacillus actiiiomycetemcomitans NT NT

Capnocytophaga ohraceus GAI-5586 2. 0 0. 5

Campylobacter gracilis NT NT C. albicansおよび C. glaburataに対する抗真菌作用 10〔 m

まとめ

本発明のササエキスは、酸性条件下（pH6.0〜5.0) で、 S. nrntansの発育を 2 %で阻止した。今回試験した歯周病関連微生物 4菌種の発育をも，同条件下で 2 %で阻止した。また、 Candida spp.の発育を 5 %で阻止した。試験例 2

TWEBSのサブ TVEICの濃度による Porphyromonas gingivalis(Pg菌)の菌体外分泌物量の減少

歯垢とは、歯の表面に形成されたバイオフィルムを示す用語である。このバイオフィルムは、細菌由来のポリマ一やだ液由来のポリマ一 (Eps: Extracellular p olysaccharide substances または glycocalyx)の中に埋もれて生存している複数の細菌の集団である。歯の表面のバイオフィルムは、口腔粘膜や舌の粘膜表面のノ Wオフイルムと比較して、はがれにくいのが特徴で、各種殺菌性の物質の作用も受けにくいことから、歯周病の原因として極めて重要と理解されている。治療のためには、その破壊が重要であるとされ、研究が進んでいる。

ところで、 Pg菌は歯周病との関連でもっとも重要な嫌気性菌の一つで、強力なプロテァ一ゼを産生し、歯肉の破壊に重要な役割を演じていることがわかつている。 Pg菌は、菌体外に glycocalyx (グライコカリヅクス）を産生する。また、 P g菌のプロテアーゼは、べシクルによって、菌体外に放出される。

試験例 1に示したように、 TWEBSは、 Pg菌に極めて強い抗菌作用を示し、 0. 5%の濃度で発育を阻止することが分かった。この試験例では、； Pg菌のグライコ力リヅクス産生に及ぼす TWEBSの影響を検討した。実験方法

使用菌株： Porphyromonas gingival is ATCC33277

TWEBSの本菌株に対する最小発育阻止濃度（MIC) は、 0.5%以下である。培地：変法 GAM寒天培地（ニヅスィ）を用いた。

培養：ァネロパヅク（スギヤマゲン）を用いる嫌気性培養法を用いた。

方法： Pg菌を TWEBSの subMIC濃度を含む変法 GAM寒天培地に発育させ、その菌苔を電子顕微鏡 (SEM,TEM) で観察した。

A. 変法 GAM寒天培地で発育した菌苔の肉眼的観察

1 ) TWEBSの 0.2%存在下で発育した菌苔と、 TWEBS不含の培地で発育した菌苔を、コンラ一ジ棒集菌した。 TWEBSの 0.2%存在下で発育した菌苔は、不含培地で発育した菌苔に比べて、明らかに粘稠性が低かった。固定液中での拡散性においても、顕著な差異が認められた。 B. TWEBSの 0.2%存在下で発育した菌苔の走査型電子顕微鏡 (SEM) での観察

1 ) TWEBS不含培地中で発育した菌の周囲には、グライコ力リックス様の分泌物の存在が大量認められ、そのグライコカリヅクスに菌体が被われている像がいたるところで観察された（図 1と図 3 ) 。

2 ) TWEBSの 0.2%を含む培地表面で増殖した Pg菌の周囲には、グライコカリックス様の分泌物が少なく、グライコカリックスに菌体が被われているような像は極めて少なかった。菌体の周囲の分泌物の量は少なく。菌体が露出した像が観察された（図 2と図 4 ) 。

pg菌体の周囲には、ベジクル様の構造物の存在が観察された。まとめ

TWEBSは、 0.5%以下の低い濃度で Pg菌の増殖を阻止すること（MIC 0.5%) が、試験例 1から明らかであるが、試験例 2から、 TWEBSは、 MICより低い濃度であるいわゆる subMIC(0.2 %)の濃度で Pg菌のグライコカリックスと考えられる菌体外物質の産生あるレヽは放出を抑制していることがわかる。産業上の利用可能性 '

本発明の組成物は、歯周ポケットにおける歯周病関連微生物の異常増殖が関係しているとされる「歯周疾患」及び Streptococcus mutansが深く関与しているとされる「う歯」等の歯周病の治療用及び/又は予防用組成物として有用である。

Claims

請求の範囲

1 . ササエキスを含有する歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

2 . さらに有機酸 ¾含有する請求項 1記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。

3 . クリ一ムの形態にある請求項 1又は 2記載の歯周病治療用及び/又は予防用組成物。