KR100531503B1 - 천연원료를 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 종래의 화장료 조성물에 금앵자, 선학초, 오매, 대황, 소나무껍질로부터 얻은 천연원료 추출물을 함유하는 것으로 여드름, 미백 및 주름개선효과를 나타내는 화장료 조성물에 관한 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 화장료 조성물의 천연원료는 금앵자, 선학초, 오매, 대황, 소나무껍질을 초임계추출법으로 추출한 것이며 이들 추출물을 다시 피부 침투가 용이한 나노좀으로 안정화시킨 것을 특징으로 한다.

Description

천연원료를 포함하는 화장료 조성물{COSMETICS COMPOSITIONS COMPRISING NATURAL MATERIALS}

본 발명은 기능성화장품 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 금앵자, 선학초, 오매, 대황, 소나무껍질로부터 얻은 천연원료를 초임계 추출법에 따라 추출한 추출물을 함유하는 기능성 화장품 조성물에 관한것으로 여드름, 미백효과, 주름 개선 효과를 나타내기 위한 화장료 조성물에 관한 것이며 또한 본 발명은 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 여드름 및 미백 및 주름개선효과를 지닌 화장료 조성물에 관한 것이다.

여드름은 피지 관련 질환으로 남성호르몬에 기인한 과잉 피지에 의해 발생하는 것으로, 구체적으로는 남성호르몬에 의해 피지가 생성되고 모공각화가 유발되어 피지가 모공밖으로 배출되지 못해 미세면포가 형성되며, 피지 내에 존재하는 혐기성 상재균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)가 작용하여 여드름이 발생한다.

또한 피부에는 그램 양성균주인 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 스트렙토코커스 파이오진스(Streptococcus pyogenes), 마이크로코커스 루터스(Mycrococcus luteus)와 코리네박테리움 제로시스(Corynebacterium xerosis), 그램음성균주인 대장균(Escherichia coli)과 슈도모나스 아우루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 효모인 칸디다 알비칸스(Candida albicans)와 말라쎄지아 푸푸(Malassezia furfur) 및 곰팡이인 트리코피톤 멘타그로피티스(Trichophyton Mentagrophytes)가 상재하고 있으며, 이들 중 스타필로커스 아우레우스, 스타필로코커스 에피더미디스 및 스트렙토코커스 파이오진스 등은 피부에 화농성 감염증이나 농피증(cellulitis) 또는 일반적 염증을 유발할 수 있는 대표적인 균주이다.

일반적으로, 여드름이나 염증과 같은 피부질환 치료를 위해서는 화학적으로 비타민A유도체, 트리클로산(triclosan),아젤린산(azelaic acid)등을 바르거나 벤졸퍼옥사이드(Benzolperoxide)제의 도포약을 바르기도 하지만 이 경우 병변증상에 따라 피부에 많은 자극을 줄 수 있기 때문에 피부의 상태와 여드름의 증상에 따라 전문의와 상담 후 선택사용 하여야하며, 항균제를 이용한 살균치료법으로서 테트라사이클린(tetracycline)과 같은 항균물질을 사용하고 있다. 그러나 이러한 항균물질은 내성균을 유발시키고, 광과민작용 등의 부작용을 일으키는등 많은 문제점을 야기시켜 왔다. 또한, 피부각질을 용해시키는 피부 박피법에 사용되는 트리클로로 아세트 산(trichrolo acetic acid)및 글리코릭산(glycolic acid)도 피부과민반응을 일으키거나 각질이 용해되어 피부가 거칠어 보일 수도 있는 단점을 가지고 있다. 따라서 여드름 및 염증방지를 위해 피부에 안전한 화학적 원료들 이외에 천연 항균작용 또는 천연물유래의 원료에 의한 저자극성 화장품개발이 필요한 실정이다.

일반적으로, 사람은 햇빛을 받으면 피부색이 검게 변한다. 이것은 자외선으로부터 신체를 보호하기 위한 기작이다. 즉, 자외선을 받으면, 멜라닌 형성 세포인 멜라노사이트 내에서 타이로시나제(tyrosinase) 효소가 촉진되어 흑색의 멜라닌 색소가 생성되고 방출되어 표피세포에 분포함으로써 피부가 검게 되어 자외선을 차단하게 된다. 그러나 멜라닌 색소의 과다한 형성 및 침착은 피부의 흑화, 기미, 주근깨 등의 외관상의 문제를 유발한다. 이에 따라 이들의 피부 증상을 막기 위해 미백 화장료가 요구되는 것이다.

멜라닌은 생물에 따라 다양한 종류가 있으며, 주로 타이로시나제의 작용에 의하여 생합성되는 것으로 보고되고 있다. 타이로시나제는 구리와 결합한 금속단백질 효소로서, 동물, 식물, 미생물 및 사람 등에 넓게 분포되어 있고 타이로신(tyrosine)을 디하이드록시 페닐알라닌(도파, dihydroxyl-L-phenylalanine, L-DOPA), 디하이드록시 페닐알라닌를 도파퀴논(dopaquinone)으로 변환시키는 작용을 한다. 도파퀴논은 도파크롬(dopachrome)으로, 도파크롬은 디하이드로시인돌(dihydroxyindole)로 전환되고 디하이드로시인돌의 산화적 중합 및 단백질과 결합을 통해 최종적으로 멜라닌을 합성한다.

현재까지 알려진 타이로시나제 저해제로는 하이드로퀴논(hydroquinone), 하이드록시아니솔(hydroxyanisole), 아스코르빈산(ascorbic acid) 유도체, 코지산(kojic acid), 아제락산(azelaic acid), 코티코스테로이드(corticosteroids), 레티노이드(retinoids), 알부틴(arbutin) 등이 있으나, 안전성과 경제성 등의 문제점으로 사용에 있어서 어려움이 있다. 특히, 하이드록시아니솔 및 하이드로퀴논 등은 강력한 멜라닌 생성 저해활성은 있으나 동시에 색소세포의 변성 또는 치사를 유발하고 세포 본래의 기능을 손상시키는 등의 부작용을 나타낸다. 그리고 코지산은 사용 중의 변색, 물질자체의 불안정성 등의 문제점이 있다. 이와같이 타이로시나제 저해제가 많이 개발되어 현재 화장품이나 의약품에 사용되고 있지만, 불충분한 미백효과, 피부에 대한 안정성 문제, 화장료에 배합시 제형 및 안정성 문제 등으로 인해 그 사용이 제한되고 있다.

한편, 주름은 근육운동에 의해 만성적인 변형을 받는 부위에 국소적으로 형성, 정착되는 피부의 형태, 구조 변화라고 말할 수 있고, 이러한 생리 변화만이 아니라 보다 미세한 피부 내부 구조의 변화나 물성 변화와 함께 주름 형성 메카니즘을 검토하는 것도 실제적인 주름형성기구의 이해를 위해서는 중요하다고 말할 수 있다.

이와 관련하여, 광노화에 따른 피부 내부 구조 변화로서는, 표피, 진피의 비후화나 비정상적인 탄력섬유증물질(elastotic material)의 축적, 또는 탄성섬유의 입체구조 변화 등이 보고되고 있다. 또한, 피부구조의 주요 구성 성분인 골격이라고 하는 콜라겐에 대해서는 콜라겐 섬유의 미세섬유화, 섬유형태의 약화 등이 밝혀지고 있다(Zheng P. and kligman L.H.,uvA-induced ultrastructural changes in hairless mouse skin: A comparison to uvB-induced damage., J.Invest.dermatol.,100,194-199(1993)). 그렇지만, 이것들이 묶여 형성된 콜라겐 섬유다발에 대해서는, 피부의 상처 치료 과정의 연구 등을 통하여 피부의 강인성 등에 큰 영향을 미치는 것이 알려져 있으나, 광노화에 의한 구조 변화와 피부물성의 변화, 주름형성에의 영향에 대하여 지금까지 충분한 검토가 이루어지지 않았다.

최근 피부 노화 연구의 주류를 이루는 것은 오존층의 파괴등으로 인한 태양광의 직간접적인 영향에 대한 연구이며, 이런 광에 의한 주름형성의 영향을 측정하기 위하여 여러 가지 물질들을 사용하여 콜라겐 섬유에 미치는 영향을 활발히 연구 중이다.

상기한 바와 같은 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명은 피부자극이 없으면서도 여드름 방지, 미백, 및 주름 개선효능이 우수하면서도 피부에 대한 안전성을 구비하며 화장료와의 배합시에도 안정성을 갖는 천연원료 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기한 바와 같은 목적을 구현하기 위하여 본 발명은 천연원료를 포함하는 화장료 조성물로서, 금앵자, 선학초, 오매, 대황 및 소나무 껍질로 이루어진 그룹에서 선택된 적어도 하나의 천연원료와 NAG(N-acetyl-D-glucosamine)를 포함하고, 상기 천연원료와 상기 NAG는 피부침투가 용이하도록 나노좀으로 안정화된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 천연원료는 금앵자, 선학초, 오매, 대황 및 소나무껍질을 포함하고, 그 중량비가 각각 0.9~ 1.1 : 0.9~1.1: 1.3~1.7 : 0.9~1.1 :0.4~0.6이고, 바람직하게는 1: 1: 1.5: 1: 0.5일 수 있다.

상기 화장료 조성물에서, 상기 천연원료와 상기 NAG는 각각 중량비로 1:0.01 내지 1:20이고, 바람직하게는 1:0.1내지 1:10 이며, 상기 나노좀의 총중량에 대해 5~20 중량%일 수 있다.

상기 화장료 조성물에서, 상기 나노좀은 상기 화장료 조성물 총중량에 대해 0.1~20중량%, 바람직하게는 0.1~10중량%일 수 있다.

상기 화장료 조성물에서, 상기 천연원료는 초임계추출법에 의해 추출된 것일 수 있다.

상기 화장료 조성물에서, 상기 천연원료는 초임계가스추출법에 의해 추출된 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.

여기서 초임계 추출법이란 일정한 고압 및 고온(임계점)을 넘어서면 특정 물질이 유체상태가 되는데 이 상태에서 독성이나 잔류 물질 없이 인간에게 이로운 유효 성분만을 고순도로 분리, 정제해 내는 것이다. 초임계유체에 의한 추출은 용매로서 임계온도(critical temperature, Tc)와 임계압력(critical pressure, Pc)의 부근이나 그 이상의 상태인 초임계유체를 이용한다. 초임계유체는 기체와 액체의 물성을 절충한 특성을 나타내는데, 밀도는 액체의 밀도에 가깝고, 점도는 기체의 점도에 가까우며, 확산계수는 액체의 확산계수보다 약 100배정도 크게 나타난다. 따라서 높은 용해도와 빠른 물질전달 속도를 나타낸다. 또한 간단히 온도와 압력을 변화시키거나 보조용매(modifier)의 사용으로 용매력(solvent power)을 자유자제로 조절할 수 있으므로 목적물을 선택적으로 분리할 수 있다. 일반적으로 사용되고 있는 초임계유체로 이산화탄소를 꼽을 수 있는데, 이것은 임계온도가 낮아서 열에 불안정한 물질의 분리정제에 용이하다. 한편, 초임계유체 용매는 제품으로부터 쉽게 제거될 수 있으므로 유기용매 추출시 문제가 되는 환경오염을 방지할 수 있고 또한 그 가격이 저렴하므로 매우 환경친화적이며 경제적인 추출방법이라고 할 수 있다. 즉, 이러한 초임계 추출법의 장점은 첫째, 용매 대신에 인체에 무해한 이산화탄소를 이용하기 때문에 피부에 무독성이다. (잔류 유기용매 및 중금속 없음) 둘째, 저온에서 공정이 이루어짐으로 천연식물 및 생약재의 신선함을 그대로 전해줄 수 있다(Activity 연장, 열로 인한 변성을 막음). 셋째, 추출과정을 최대한 단순화하여 생화학적으로 안정할 수 있다(산소차단, 미생물 오염방지).

리포좀은 일반적으로 인지질로 만들어진다. 이러한 인지질은 소수성의 긴 탄화수소 사슬과 친수성의 극성기로 이루어져 있으며, 소수성의 긴 탄화수소는 스핑고신 유도체 또는 글리세롤 유도체로 되어 있다. 다른 한쪽은 콜린, 에탄올 아민, 세린, 이노시톨 또는 글리세롤과 에스테르 결합을 이루고 있다. 인지질은 이러한 분자구조에 의해 물 매체 속에서 규칙적으로 배치된 구조, 즉 미셀이나 라멜라 구조를 형성한다.

리포좀은 또한 생체막과 그 구조가 비슷하여 막 모델계 및 생리학적 물질의 전달 매개체 등으로써 많이 연구되고 있으며(R. Sundler. D. Papahadjpovlos, Biochim. Biophys. Acta, 648.743(1981)), 여러 가지 피부 유효 성분을 포집시킴으로써 피부에 전달을 용이하게 하여 이들 유효 성분의 효과를 더욱 증대시키고자 로션이나 크림 같은 유화계 제품(특허출원 제 92-2287호)에 주로 사용되고 있다.

이하 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

금앵자(Rosa laevigata Michx,,장미과)의 꽃받침과 열매에는 유기산(사과산,레몬산), 타닌질, 정유, 비타민C, 수지, 사포닌의 성분이 있으며 동의 치료에선 꽃받침과 열매를 강장,수렴,설사멎이약으로 유정,유뇨,오줌을 자주눌 때, 만성염과 설사에 쓴다.

선학초(Agrimonia pilosa Ledebour,장미과)의 전초에는 비타민K, 타닌질, 정유, 루테올린-7-글루코사이드, 아피게닌-7-글루코사이드, 아그리모놀, 쿠마린, 알칼로이드가 있으며,뿌리에는 약81%의 카테콜타닌, 아그리모노사이드, 엘라그산, 사포닌있다 잎에는 피로카테킨타닌질, 수지, 스테롤, 아스코르브산이 있다. 동의 치료에선 전초를 강장약, 피멎이약, 수렴약, 염증약으로 토혈, 각혈, 하혈, 피오줌, 대하, 적리 백리, 설사에 쓴다.

오매(MUME FRUCTUS)는 매화나무(Prunus mume sieb.et Zucc.장미과)의 열매로서 배아픔, 게우기, 설사등에 쓴다.

대황(Rheum coreanum Nakai, 여뀌과)의 뿌리와 뿌리줄기에는 안트라퀴논유도체, 알로에에모딘, 피스시온, 크리소파놀안트론이 있으며, 잎에는 루틴과 유기산, 아스코르빈산이 있고 많은 양의 칼륨염이 있다. 건위작용과 설사멎이작용, 설사작용이 있다.

소나무껍질(Pine bark, 소나무과)에는 16%까지의 탄닌질, 안토시안, 피마르산, 베타-시토스테롤,글루코타닌이 있으며 기름에 풀리는 물질에는 아라히딜알코올(에이코자놀),테트라코자놀이 있다.

금앵자, 선학초, 오매, 대황은 대한약전외한약(생약)규격집(식품의약품안전청고시 제 2003-21호)의 등재원료를 사용하였으며, 소나무껍질은 자연에서 자라는 것을 채취하였다. 또한 NAG는 SIGMA사의 것을 구입하여 사용하였다.

여드름방지 및 미백, 주름개선효과는 위의 천연원료를 초임계추출법으로 추출한 추출물 중에서 1종이상의 추출물을 함유시킨 나노좀에 의한 것으로 확인되었다.

또한, 복합물 A 및 NAG를 중량비로 1 : 0.01 내지 1 : 20, 바람직하기로는 1 : 0.1 내지 1 : 10로 혼합한다.

안정화시킨 나노리포좀은, 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ~ 20 중량%로 함유하는 것이 바람직하다. 0.1 중량% 미만이면 유효한 효과를 기대하기 힘들고, 20중량%를 초과해도 뚜렷한 효능의 상승이 나타나지 않는다. 따라서, 0.1 ~ 20중량%가 바람직하며, 0.1 ~ 10 중량%가 더욱 바람직하다. 나노좀을 총중량에 대하여 0.1중량% 미만으로 첨가하면 여드름억제효과 및 미백효과와 주름 개선효과를 기대하기 어려우며, 20중량%를 초과하여 첨가해도 뚜렷한 효능 효과의 상승이 보이지 않으며 나노좀 안정도에도 문제가 생기며 비경제적이다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[실시예1]

[제조예1]

- 금앵자, 선학초, 오매, 대황, 소나무껍질추출방법-

먼저 1,3BG(Butylene Glycol)와 에탄올을 같은 질량 비율로 혼합한 후 교반 시켜서 단일상이 되도록 하였으며, 이를 초임계 이산화탄소를 이용한 추출공정에 사용되어질 공용매로 사용한다. 금앵자는 중량의 변화가 없을 때 까지 건조하여 분쇄기를 이용하여 직경 0.3㎝이하의 크기로 분쇄한다. 분쇄된 금앵자와 공용매를 약 1:2의 질량비로 혼합하여 약 30분간 교반한 후 금앵자와 공용매 혼합물을 내부용적 1.5L의 초임계 추출조에 투입하여 밀봉 후 고압 기체 펌프를 이용하여 이산화탄소를 공급함으로 압력을 높인다. 추출조 내부의 온도를 약 분당 섭씨0.5도의 속도로 섭씨 약40도까지 승온하여 약 50분간 유지시킨다. 다시 이산화탄소를 공급하면서 추출물을 방출시키고 상압으로 감압하여 이산화탄소와 금앵자 추출물이 분리되도록 하며 이산화탄소는 대기로 방출시키고, 금앵자 추출물은 포집기로 회수하여 본 발명에 사용하였다.

금앵자 대신 선학초, 오매, 대황, 소나무껍질 각각을 투입하여 위 동일공정으로 각각의 선학초,오매,대황,소나무껍질추출물을 얻는다.

[제조예2]

제조예1의 각각의 추출물 금앵자: 선학초: 오매: 대황: 소나무껍질을 중량비로서 1 : 1: 1.5: 1: 0.5로 혼합("복합물A")하여 나노좀화 하였다.

[제조예3]

복합물A와 NAG를 중량비로서 1: 0.5로 혼합하여 나노좀화 하였다.

[비교예1]

제조예1의 대상물질(금앵자, 선학초, 오매, 대황, 소나무껍질) 각각을 분쇄기를 이용하여 직경 0.3㎝이하의 크기로 분쇄한 후, 에탄올추출법에 의한 대상물질 각각의 추출물들을 본 발명의 비교대상물질로 사용하였다

[비교예2]

비교예1의 각각의 추출물 금앵자:선학초:오매: 대황: 소나무껍질을 중량비로서 1 : 1: 1.5: 1: 0.5로 혼합("복합물B")하여 나노좀화하였다.

[비교예3]

복합물B와 NAG를 중량비로서 1: 0.5로 혼합하여 나노좀화 하였다.

[실험예1]

균주에 대한 생장억제효과 비교

세균의 생장 저지 효과를 종래의 화장료 성분과 비교하기 위하여, 제조예2 및 비교예1, 비교예2에서 얻어진 대상물질과, 종래의 화장료 조성물 중에서 여드름 및 피부염증 억제효과를 가진 것으로 알려진 살리실산, 로비좀아크네(Rovisome acnes), 피코싸카라이드 안티아크네(Phycosaccharide antiacne), 트리클로산(Triclosan), 아젤라익산(Azelaic acid) 및 피토스핑고신(Phytosphingoshine)에 대하여 실험하였다.

트립틱 소이 한천{TSA(Tryptic soy agar); Difco co.}을 고체 평판한 고체평판배지에 각각의 균 1x10⁷ ea/ml를 도말한 후 정중앙에 각각의 시료를 20㎕씩 떨어뜨리고 자연 건조시켰다. 각각의 시료는 100배 희석하여 10g/ℓ의 농도로 사용하였다. 자연 건조후 섭씨37도에서 24시간 배양하여 투명한 저지환의 생성 유,무를 측정하였다.

그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

균주에 대한 생장억제효과 실험결과

No	대상물질	S. aureus(ATCC 65389)	S. epidermis(ATCC 12228)	S. pyogens(ATCC 21059)	P. acnes(ATCC 6919)	Pseudomonas. aeruginosa
1	금앵자(비교예1)	+/-	+	-	-	+/-
2	선학초(비교예1)	-	+/-	-	+/-	-
3	오매(비교예1)	+/-	-	+/-	-	+/-
4	대황(비교예1)	-	+/-	+/-	+/-	+/-
5	소나무 껍질(비교예1)	-	-	+/-	-	-
6	살리실산	+	++	-	+/-	-
7	로비좀아크네	+	+	-	+	+/-
8	피코싸카라이드 안티아크네	+/-	+	-	+	-
9	트리클로산	++	+	++	+++	+/-
10	아젤라익산	-	+/-	-	+	-
11	피토스핑고신	+	+	+/-	+	-
13	제조예 2	++	++++	+++	+++	+++
15	비교예 2	+/-	++	+/-	+	+/-

- : 저지환 생성 못함, +/- : 저지환 생성 후 균주 성장, +,++ :약한 저지환 생성, +++,++++ : 강한 저지환 생성

표 1의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 종래의 원료들은 5가지 균주 중 일부의 균주에 영향을 미치며, 그 중 트리클로산이 가장 강한 효과를 나타내었다. 하지만 최근의 소식(미국미네소타대학 크리스토퍼 맥네일박사:2002-4-17,보건/연합뉴스)에 의하면 트리클로산이 햇빛에 노출되면 독성물질인 다이옥신으로 전환된다고 밝혔다.

반면, 에탄올 추출법에 의해 추출한 천연원료를 단독으로 처리한 경우에는 거의 저지환이 생성되지 못하거나, 저지환이 생성되더라도 균주가 성장하는 것을 알 수 있고, 에탄올 추출법에 의해 추출한 천연원료를 혼합한 비교예2도 거의 저지환이 생성되지 못하거나 저지환이 생성되더라도 약하게 생성되는 것을 알 수 있으나. 초임계 추출법에 의하여 추출한 천연원료를 모두 혼합하여 처리한 제조예2의 경우에는 5가지 균주 모두에 강한 저지환을 생성시켰다.

따라서, 본 발명에 따르는 화장료 조성물은 피부상재균에 의한 염증 및 여드름을 치료 또는 예방하기 위해 화장료에 사용되는 원료들에 비해 탁월한 효과를 가짐을 알 수 있다. 또한 자연유래 원료를 사용하기 때문에 상기 종래의 화장료성분과 달리 피부자극이나 부작용이 없어 안전한 장점이 있다.

(실시예2, 비교예 4)

생약성분 및 NAG함유 화장료의 제조

동종업계에서 보편적으로 사용되는 조성을 이용하여 표 2의 중량비의 조성에 따라, 유성 및 수성성분과 계면활성제 등과 실시예1의 제조예3 혼합물을 각각 혼합하여 호모믹서기로 교반한 후 가열 및 냉각하여 균일 혼합된 화장료를 제조하였다. 또한 비교예 2를 이용하여 실시예2와 동일한 조성으로 비교예 4의 화장료를 제조하였다.

화장료 조성물의 조성(중량비)

원료명	실시예2	비교예4
폴리 솔베이트-60	1.5	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.5	0.5
스테아린산	1.0	1.0
스쿠알란	5.0	5.0
세로 스테아릴알콜	2.0	2.0
세릴옥타노에이트	5.0	5.0
카보머	0.15	0.15
트리에탄올아민	0.2	0.2
글리세린	5.0	5.0
제조예 3혼합물	8
비교예 3혼합물		8
방부제	적량	적량
정제수	합 100	합 100

(실험예 2)

피부 탄력효과 실험

온도 섭씨22~24도, 상대습도 55% 조건에서 20세 이상의 건강한 여성 60명(평균연령 29.5세)을 6 그룹으로 나누고, 실시예2, 비교예 4의 화장료 조성물을 각각 눈가를 중심으로 12주간 도포(2회/일)한 후, 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 시험 결과는 하기 표 3에 Cutometer SEM 575의 각 시험 그룹별 평균값인 ΔR5값[R5(12주)-R5(0주)] 값으로 기재하였는데, R5 값은 실탄성 계수를 나타내는 값으로 1에 가까워지면 보다 탄력도가 우수함을 나타낸다.

또한 개선도는 하기 수식1에 의해 계산하였다.

개선도(%) = ( ΔR5 / 도포전 ) X 100

피부탄력도 측정실험결과(12주)

	도포전	도포후	피부탄력증강효과(ΔR5)	개선도(%)
실시예 2	0.74	1.16	0.42	56.76
비교예 4	0.71	0.81	0.1	14.08

상기 표 3에 따르면, 제조예 3 혼합물을 함유한 실시예 2를 사용한 경우, 피부 탄력이 비교예 3에 비해 42.68%증가했다. 따라서, 본 발명에 따른 제조예 3을 안정화시킨 나노리포좀을 함유한 화장료는, NMF(Natural Moisturizing Factor)의 구성성분을 사용하거나 나노리포좀으로 안정화되지 않는 경우보다, 피부탄력을 효과적으로 증진시킴을 알 수 있다. NAG가 주름 방지를 위하여 화장품의 주름 개선효과를 위하여 사용되지만 이것은 초임계 추출법에 의한 추출물과 NAG와의 배합이 두성분의 상가(相加) 효과 이상의 상승효과가 있음을 알 수 있다.

(실험예 3)

피부 수분량 측정

섭씨22~24도, 상대습도 55%, 공기의 흐름이 없는 실내에서 건강한 여성 70명(평균연령 29.5세)을 대상으로 각각 10명씩 7그룹으로 분리하였다. 실시예 2 및 비교예 4의 화장료를 각 그룹마다 눈가를 중심으로 얼굴 전체에 하루 2회 6주간 도포하게 하였다. Skicon-200(IBS Co. Japan)을 이용하여, 도포 전, 후에 볼 부위의 수분량을 측정하여 보습효과의 지속성을 측정하였다. 그 결과를 하기 표 4에 각 시험그룹별 평균값으로 나타내었다.

개선도는 다음 수식2에 따라 계산하였다.

피부수분량 측정결과

	시험전	도포 6주 후	개선도 (%)
실시예 2	630 ±10	890 ±10	41.27
비교예 4	630 ±10	635 ±10	0.78

상기 표에 따르면, 제조예3을 안정화시킨 실시예2를 사용하는 경우 비교예4에 비하여 피부 수분량의 개선효과가 큼을 알 수 있다. 이 때 제조예3의 나노리포좀의 배합비율을 여러 가지로 실험한 결과, 중량비 0.1~20%의 나노리포좀을 사용하는 것이 바람직하였다. 더욱 바람직하게는 나노리포좀의 총중량에 대하여 5∼20중량%가 좋으며, 20중량%를 초과하면 나노좀 안정도에 문제가 생기며 비경제적이다.또한 여기서도 초임계 추출법에 의한 추출물과 NAG와의 배합이 두성분의 상가(相加) 효과 이상의 상승효과가 있음을 알 수 있다.

(실험예 4)

인체첩포실험

천연물질을 함유한 화장료 조성물이 피부자극, 기타 부작용이 없음을 확인하기 위하여, 상기 실시예2와 비교예 4의 크림제형을 대상으로 인체에 대한 첩포실험(Patch test)을 실시하였다.

검사는 건강한 성인 남,여 30명으로 등 부위에 핀쳄버(Finn chamber)를 이용하여 알루미늄 원판속에 화장제품을 직접 넣거나 종이 디스크에 묻혀서 40㎕를 처리하여 이를 스켄포어 테잎(scanpore tape)으로 피부에 고정시키고, 24시간 후 첩포를 떼어내고, 그 뒤 4시간 후 결과를 판정하였다.

결과는 홍반과 부종의 정도에 따라 수치로 나타내며, 판정기준은 국제접촉피부염 연구위원회 (International Contact Dermatitis Research Group;ICDRG)의 기준에 의한다(Wooding et al, 1967; Rietschell, 1982; Fischer & Maibach, 1984; Aberer et al, 1993).

판정기준은 다음과 같다.

0 : 발적없음

1 : 발적(erythema)

2 : 발적 및 구진(papules)

3 : 발적, 구진 및 소수포(vesicles)

4 : 심한 부종 및 소수포

상기 판정기준에 따라 판정한 점수에 근거하여 하기 수식3에 따라 자극도를 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.

자극도(%) = (양성반응을 나타내는 반응도 / 자체모집단의 반응도) X 100

자극도 계산결과

	비교예4	실시예2
자극도(%)	5.0	0.02

상기 표 5의 결과에서 알 수 있듯이, 실시예2의 경우 피부염증 또는 기타 자극은 없었다.

(실험예 5)

천연 원료함유 화장료의 동물 임상실험

실시예2 및 비교예 4를 사용하여 여드름 및 일반 염증에 대한 동물 임상효과 실험을 실시하였다.

무모마우스(Hairless Mouse; 이하 "실험동물"이라 함)(6주령, 암컷) 10마리의 등부위를 2구획하고 아라키돈산(Arachidonic acid; 시그마사제)으로 염증을 초기 유발하여 육안으로 관찰한 후, 4가지 균주 2 x 10⁵ea를 2-3일 간격으로 200㎕씩 누적 도포하여 여드름 및 염증유발 동물 모델을 구성하였다.

구성모델의 왼쪽에 실시예 2의 샘플을, 오른쪽에 비교예 4의 샘플을 매일 2 ㎎/㎠로 도포하였다. 여드름 및 염증이 유발되었을 때 환부에서 농양을 채취한 후 배양하여 동일 균주임을 동정하였다.

본 발명에 사용된 균주와 동일한 균주에 의해 발생된 환부에 크림제형의 화장료를 왼쪽에 실시예 2의 샘플을, 오른쪽에 비교예 4의 샘플을 매일 2 ㎎/㎠로 한달 동안 도포하여 매일 관찰하면서 그 효과를 측정하였다.

본 임상실험 효과의 판정은 자체적으로 하기 표 6과 같이 기준을 설정하여 관찰자 2-3명이 그 기준에 대한 점수 또는 등급을 결정하여 상대적인 비교를 실시하였다.

임상실험효과 판정기준

	환부 상태	효과
1	정상적으로 치유	우수
2	환부가 중간이거나 더 이상 진행안됨	보통
3	환부가 크거나 염증이 더욱 진행	없음

표 6의 기준에 따라 한달 경과 후 실험동물의 환부에 대한 육안판정을 한 결과를 동물모델의 마리수로 표 7에 나타내었다.

동물임상실험 육안 판정결과

제형/효과(마리수)	효과우수	효과보통	효과없음	계
실시예 2	8	2	-	10
비교예 4	-	1	9	10

상기 표 7의 결과에서 알 수 있듯이, 10마리의 실험동물 중 80%가 실시예2의 제형에서 우수한 효과를 나타내었고, 비교예 4의 경우 90%가 효과가 없는 것으로 나타났다.

따라서 여드름 및 염증이 유발된 환부에 대한 임상실험 결과, 본 발명에 따른 천연원료가 첨가된 화장료 조성물에서 여드름 및 염증완화 효과가 탁월함을 알 수 있다.

(실험예 7)

나노입자의 크기별 경피흡수 측정

화학결합에 의하여 형광물질을 부가시킨 PMMA 고분자를 이용하여 각각 50nm, 80nm, 120nm 및 500nm의 크기를 갖는 나노입자를 제조하고, 암컷 무모 기니아 피그의 피부에 도포하고 이어서, 일정시간이 경과한 후 피부 단면을 잘라 경피 흡수된 나노입자에서 방출되는 형광을 측정하였다.

형광 PMMA 고분자 나노입자는 폴리메틸메타아크릴레이트-co-메타아크릴산(메틸메타아크릴레이트와 메타크릴산의 몰비는 84:16)의 메타아크릴산의 카르복실기에 형광분자를 공유결합시켜 제조하였다.

그 제조법을 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

34g의 폴리메틸메타아크릴레이트-co-메타아크릴산을 150ml의 무수분 메틸렌클로라이드에 녹인 뒤, 132mg의 디시클로헥실카보디이미드와 74mg의 N-하이드록시숙신이미드를 첨가하여 카르복실기를 활성화시켰다. 1시간동안 교반한 뒤, 222mg의 플루오레신아민을 첨가하여 플루오레신아민의 1차 아민과 활성화된 카르복실기가 반응하여 아미드결합을 형성하게 함으로써, 고분자 사슬에 형광분자가 공유결합하게 하였다. 반응은 상온, 암실조건에서 5시간동안 진행시켰다. 반응 후 형성되는 부산물인 디사이클로헥실우레아를 0.45㎛ 나일론 필터를 통해 제거한 뒤, 디에틸에테르에 침전시켜 반응시약 및 미반응 잔류물들을 일차적으로 제거하였다. 이어서, 이를 과량의 3차 증류수에서 하루동안 방치하여 나머지 잔류물들을 제거한 뒤, 40도에서 진공오븐을 이용하여 건조하였다. 그 결과, 형광물질이 부가된 50nm, 80nm, 120nm, 500nm의 크기를 갖는 PMMA 나노입자를 제조하였다.

크기별 나노입자 경피흡수시험을 위하여 8주령 암컷 무모 기니아 피그(strain IAF/ HA-hrBR)를 이용하였다. 기니아 피그의 복부부위의 피부를 절취하여 프라즈-타입 디퓨젼 셀(Franz-type diffusion cells(Lab Fine Instruments, Korea))에 장착하여 실험하였다. 프라즈-타입 디퓨젼 셀의 수용 용기(5ml)에는 50 mM 인산염 완충액(pH 7.4, 0.1M NaCl)을 넣어주었다. 디퓨젼 셀은 섭씨32도를 유지해주면서 600 rpm으로 혼합, 분산시켜주었으며, 각 크기별로 제조된 형광 PMMA나노입자가 10％(w/v) 분산된 용액 50㎕를 각각의 도너(donor) 용기에 넣어주었다. 미리 예정한 시간(평균 12시간)에 따라 흡수 확산시켜 주었으며, 흡수 확산이 일어나는 피부의 면적은 0.64 cm² 가 되게 하였다. 나노입자의 흡수 확산이 끝난 후에는, 건조된 Kimwipes 혹은 에탄올 10ml로 피부위에 남아있는 흡수되지 못한 나노입자를 씻어주고, 피부의 단면을 절개하여 피부단면에 흡수된 형광 PMMA나노입자의 분포를 측정하였다.

나노입자의 피부내 분포측정 결과를 하기 표 8에 나타내었으며, 도 1에 사진을 표기 하였다.

나노입자의 피부내 분포 측정결과

나노입자의 평균 크기	경피흡수 도달부위
50nm	35㎛
80nm	17㎛
120nm	12㎛
500nm	7㎛

표 8에서, 나노입자의 경피흡수는 평균 입경에 크게 의존함을 확인할 수 있었다. 평균 직경 50nm정도의 크기를 가지는 나노입자는 표피를 통과하여, 진피층 상단까지 흡수, 확산되었으며, 입자의 크기가 500nm를 초과하는 경우에는 나노입자는 피부표면에 머물게 되며, 더 이상 피부내부로의 흡수가 일어나지 않았다. 평균 직경 50nm 내외의 나노입자는 피부의 세포간 지질 사이로 확산되어 들어가고, 고분자의 소수성은 이러한 경피흡수를 촉진해주는 효과가 있는 것으로 판단된다. 따라서, 경피흡수가 잘 안되거나 불안정한 유효 활성성분을 평균 입경 50nm 내외의 나노입자에 포집시켜 주는 경우, 나노입자를 통한 피부 내부로의 전달을 통해 활성성분의 경피흡수 전달이 가능함을 알 수 있었다.

상술한 바와 같이 본 발명에 따른 천연원료를 포함하는 화장료 조성물은 피부에 상재하여 여드름 및 염증유발에 관여하는 미생물 및 세균의 생장을 억제함으로써 피부염증 및 여드름 유발을 억제할 뿐만 아니라 여드름 및 염증완화 효과가 탁월하며 피부의 탄력을 증강시키며 보습효과를 개선시키고, 피부자극 및 기타 부작용이 없으며 경피흡수 전달이 가능한 화장료 조성물을 제공한다.

도1은 본 발명에 따르는 화장료 성분의 피부단면에 흡수된 형광 나노입자의 분포를 나타내는 도면.

Claims (5)

1. 천연원료를 포함하는 화장료 조성물에 있어서,

   상기 화장료 조성물은 금앵자, 선학초, 오매, 대황 및 소나무 껍질로 이루어진 그룹에서 선택된 적어도 하나의 천연원료와 NAG(N-acetyl-D-glucosamine)를 포함하고, 상기 천연원료와 상기 NAG는 피부침투가 용이하도록 나노좀으로 안정화된 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물
2. 제 1항에 있어서,

   상기 천연원료는 금앵자, 선학초, 오매, 대황 및 소나무껍질을 포함하고, 그 중량비가 각각 0.9~ 1.1 : 0.9~1.1: 1.3~1.7 : 0.9~1.1 :0.4~0.6인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,

   상기 천연원료와 상기 NAG는 각각 중량비로 1:0.01 내지 1:20인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
4. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,

   상기 나노좀은 상기 화장료 조성물 총중량에 대해 0.1~20중량%인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
5. 제1항 또는 제2항에 있어서,

   상기 천연원료는 초임계가스추출법에 의해 추출된 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.