WO2004075905A1

WO2004075905A1 - 筋肉増強剤および筋肉減衰の予防または治療剤

Info

Publication number: WO2004075905A1
Application number: PCT/JP2004/002269
Authority: WO
Inventors: Miho Komatsu; Toshikazu Kamiya
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.
Priority date: 2003-02-26
Filing date: 2004-02-26
Publication date: 2004-09-10
Also published as: EP1604671A4; CA2517290A1; JPWO2004075905A1; EP1604671A1; US20060189566A1

Abstract

本発明によれば、シチジン二リン酸コリンまたはその塩を含有する筋肉増強剤、筋肉衰弱の予防または治療作剤、筋肉増強用または筋肉衰弱の予防若しくは治療用の飲食品または飼料、および筋肉増強用または筋肉衰弱の予防若しくは治療用の飲食品添加剤または飼料用添加剤を提供することができる。

Description

明細書

筋肉増強剤およぴ筋肉減衰の予防または治療剤

技術分野

本発明は、筋肉増強剤および筋肉減衰の予防または治療剤に関する。また本発明は、筋肉増強用および筋肉減衰の予防または治療用の飲食品、飼料、飲食品添加剤または飼料添加剤に関する。

背景技術

運動能力の向上を目指す運動選手は、筋肉を増強するためのトレーニングや食事療法に取り組んでいる。筋肉の増強による効果は運動能力の向上だけでなく、基礎代謝の活性化や脂肪の燃焼促進作用が期待される。筋肉増強剤としては、成長ホルモン

(Growth Horaone ;以下 GHと略す）の効果が検討されている [Sports Medicine , 24 > 366 (1997 ) ] が、成長ホルモンは、ドーピングの問題や、筋肉以外にも作用するために副作用の問題がある。食事療法としては、筋肉の材料となるタンパク質、アミノ酸の摂取が奨励されている。

整形外科的疾患または事故や病気の場合には、安静加療時の不活動により筋萎縮がおきる。宇宙のような無重力下では抗重力筋の萎縮が起きる等、筋肉は萎縮および筋量減少を起こすことが知られている。

また、上記以外の場合でも、高齢者では、加齢に伴う老人性筋萎縮がおき、寝たきりになりやすいことから、筋肉強化が望まれる場合がある。筋肉減衰の予防法としては、日頃からの適度な運動をあげることができる。しかし安静加療時には運動は制限され、活動量の少ない老人に運動を負荷することは大きな負担になる。運動に伴う生理的適応現象として知られている筋肥大は、その生理化学的機構は未だ明らかではない。また、筋肉減衰の治療剤として確立されたものはない。

筋肉増強剤または筋肉減衰を効果的に予防若しくは治療するための薬剤、あるいは筋肉を増強する、または筋肉減衰を効果的に予防若しくは治療することが可能な飲食品、飲食品添加剤、動物用飼料または動物用飼料添加剤の開発が求められている。シチジンニリン酸コリン (以下、 C D P—コリンと略す) は、生体内においては神絰伝達物質であるァセチルコリンゃ、細胞膜の構成成分であるホスファチジルコリンの基質である [J . Biol . Chem. , 222 , 193 ( 1956 ) ] 。 C D Ρ -コリンは細胞膜のホスファチジルコリンに取り込まれることでァラキドン酸等の遊離脂肪酸の生成を抑える [Neurochemical Research; 6 , 821 (1981 )] ことから、虚血時などに見られるホスファチジルコリンからの遊離脂肪酸生成による障害は CD P-コリンの摂取により抑制されうる。これらの作用により、 CDP—コリンは脳代謝賦活薬として用いられており、脳卒中予後の改善、アルヅハイマー病、パーキンソン病、緑内障等多くの薬理効果が報告されている [Methods & Findings in Experimental & Clinical

Pharmacology, ϋ, 1(1995)および Ophthalmology, 106, 1126 (1999 )] が、筋肉に対する作用については、これまで全く知られていない。

発明の開示

本発明の目的は、筋肉増強剤または筋肉減衰の予防若しくは治療剤を提供することにある。また本発明の目的は、筋肉増強用または筋肉減衰の予防若しくは治療用の飲食品、飼料、飲食品添加剤または飼料添加剤を提供することにある。

本発明は、以下の（1) 〜（40) に関する。

(1) CDP—コリンまたはその塩を含有する筋肉増強剤。

( 2 ) 筋肉が骨格筋である上記（ 1 ) の筋肉増強剤。

(3) CD P—コリンまたはその塩を含有する筋肉増強用飲食品。

(4) CDP—コリンまたはその塩を添加してなる筋肉増強用飲食品。

(5) 筋肉が骨格筋である上記（3) または（4) の筋肉増強用飲食品。

(6) CDP—コリンまたはその塩を含有する筋肉増強用飼料。

(7) CDP—コリンまたはその塩を添加してなる筋肉増強用飼料。

(8) 筋肉が骨格筋である上記（6) または（7) の筋肉増強用飼料。

(9) CD P—コリンまたはその塩を含有する筋肉増強用食品添加剤。

(10) CDP—コリンまたはその塩を添加してなる筋肉増強用食品添加剤。

(11) 筋肉が骨格筋である上記（ 9 )または（ 10 )の筋肉増強用飲食品添加剤。

(12) CDP—コリンまたはその塩を含有する筋肉増強用飼料添加剤。

(13) CDP—コリンまたはその塩を添加してなる筋肉増強用飼料添加剤。

(14) 筋肉が骨格筋である上記 (12)または（13)の筋肉増強用食品添加剤。

(15) CD P—コリンまたはその塩を有効量、動物に投与することを特徴とする筋肉増強方法。 (16) 動物がヒト以外の動物である上記（15) の方法。

(17) ヒト以外の動物が、家畜、家禽または養殖魚である上記（16) の方法。

(18) C DP—コリンまたはその塩を含有する筋肉減衰の予防または治療剤。

(19) 筋肉が骨格筋である上記（18) の筋肉減衰の予防または治療剤。

(20) CD P—コリンまたはその塩を含有する筋肉減衰の予防または治療用飲食

ΡΡο

(21) CDP—コリンまたはその塩を添加してなる筋肉減衰の予防または治療用

(22) 筋肉が骨格筋である上記 (20) または (2 1) の筋肉減衰の予防または治療用飲食品。

(23) C DP—コリンまたはその塩を含有する筋肉減衰の予防または治療用飼料 c (24) CDP—コリンまたはその塩を添加してなる筋肉減衰の予防または治療用飼料。

(25) 筋肉が骨格筋である上記（23) または（24) の筋肉減衰の予防または治療用飼料。

(26) CDP—コリンまたはその塩を含有する筋肉減衰の予防または治療用食品添加剤。

(27) CDP—コリンまたはその塩を添カ卩してなる筋肉減衰の予防または治療用食品添加剤。

(28) 筋肉が骨格筋である上記 (26) または（27) の筋肉減衰の予防または治療用食品添加剤。

(29) CD P—コリンまたはその塩を含有する筋肉減衰の予防または治療用飼料添加剤。

(30) CDP—コリンまたはその塩を添加してなる筋肉減衰の予防または治療用飼料添加剤。

(31) 筋肉が骨格筋である上記 (29) または (30) の筋肉減衰の予防または治療用食品添加剤。

(32) CDP—コリンまたはその塩を有効量、動物に投与することを特徴とする筋肉減衰の予防または治療方法。 (33) 動物がヒト以外の動物である上言 3 (32) の方法。

(34) ヒト以外の動物が、家畜、家禽または養殖魚である上記（33) の方法。

(35) 筋肉増強剤、または筋肉増強用の飲食品、飼料、食品添加剤若しくは飼料添加剤の製造のためのシチジンニリン酸コリンまたはその塩の使用。

(36) 筋肉減衰の予防若しくは治療剤、または筋肉減衰の予防若しくは治療用の飲食品、飼料、食品添加剤若しくは飼料添加剤の製造のためのシ CDP—コリンまたはその塩の使用。

本発明の CDP-コリンまたはその塩を含有する筋肉増強剤、または筋肉減衰の予防若しくは治療剤としては、 CDP -コリンまたはその塩をそれそれ単独で含有する筋肉増強剤または筋肉減衰の予防若しくは治療剤、 CD P—コリンおよびその塩を一緒に含有する筋肉増強剤または筋肉減衰の予防若しくは治療剤、または CD P—コリンの塩を 1種類以上同時に含有する筋肉増強剤または筋肉減衰の予防若しくは治療剤をあげることができる。

CD P-コリンを取得する方法としては、化学的に合成する方法、発酵生産する方法などをあげることができる。また、 CD P-コリンは市販品を購入することにより取得することもできる。

CD P-コリンを化学的に合成する方法としては、 J.Biol. Chem. , 222, 185 (1956) に記載の方法、または公知の化学合成技術の組み合わせによつて合成することができる。

C DP-コリンを発酵生産により取得する方法としては、 Biosci, Biotech.

Biochem,, 61> 956(1997)記載の方法をあげることができる。

また、 CDP-コリンは、シグマ一アルドリヅチ社等より購入することもできる。本発明の CDP-コリンまたはその塩を含有する筋肉増強剤、および筋肉減衰の予防または治療剤は、必要に応じて薬理学的に許容される一種もしくはそれ以上の担体、更に必要に応じて他の治療のための有効成分を含有していてもよい。

本発明の筋肉増強剤、および筋肉減衰の予防または治療剤は、 CDP-コリンまたはその塩を必要に応じ担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られている方法により製造することができる。本発明の製剤としては、経口剤および非経口剤をあげることができ、より好ましくは経口剤、および静脈内、腹膜内もしくは皮下投与可能な非経口剤をあげることがでさる。

本発明の製剤を経口剤として製剤化する際には、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることができる。

経口剤の剤形としては、錠剤、散剤、顆粒剤、乳剤、シロップ剤、カプセル剤等があげられる。例えば、経口剤の剤形が、錠剤、散剤、顆粒剤等の場合には、乳糖、白糖、プドウ糖、蔗糖、マンニトール、ソルビトール等の糖類、バレイショ、コムギ、トウモロコシ等の澱粉、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム等の無機物、カンゾゥ末、ゲンチアナ末等の植物末等の賦形剤、澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、カルメロ一スナトリウム、カルメロースカルシゥム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリゥム、アルギン酸ナトリゥム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコン油等の滑沢剤、ポリビニールアルコ一ル、ヒドロキシプロビルセルロース、メチルセル口一ス、ェチルセルロース、カルメロ一ス、ゼラチン、澱粉のり液等の結合剤、脂肪酸ェステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤などを添加して、製剤化することがでさる。

経口剤の剤形がシロップ剤等の液体調製物である場合は、水、蔗糖、ソルビトール、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコ一ル等のグリコール類、ごま油、ォリーブ油、大豆油等の油類、 P—ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、パラォキシ安息香酸メチル等のパラォキシ安息香酸誘導体、安息香酸ナトリゥム等の保存剤、ストロベリーフレーバ一、ペパーミント等のフレーバー類などを添加して、製剤化することができる。 - 非経口剤の剤形としては注射剤等があげられる。注射剤の場合には、塩溶液、ブドゥ糖溶液または塩水とプドゥ糖溶液の混合物からなる担体など、血液と等張である溶液を用いて製剤化することができる。

また、非経口剤に、前述の防腐剤、保存剤、界面活性剤等を添加することもできる。本発明の筋肉増強剤および筋肉減衰の予防または治療剤を動物、好ましくは哺乳動物に投与する際の投与量および投与回数は、ヒトに投与する場合、投与形態、ヒトの年齢、体重、または治療すべき症状の性質もしくは重篤度により異なるが、 CDP— コリンの量として、経口の場合、成人一人当り通常 0. lmg〜50 g、好ましくは lmg〜l 0 g、より好ましくは 10mg〜l gを一日一回ないし数回投与する。静脈内投与などの非経口投与の場合、成人一人当り通常 0. lmg〜50 g、好ましくは lmg〜l 0 g、より好ましくは 10mg〜l gを一日一回ないし数回投与する。また、非ヒト動物、好ましくは非ヒト哺乳動物に投与する場合は、非ヒト動物の年齢、種類、または症状の性質もしくは重篤度により異なるが、体重 1 kg当たり、 0. 1 mg〜l 0 g、好ましくは lmg〜5 g'、より好ましくは 10mg'〜l gを一日一回ないし数回を投与する。また、静脈内投与などの非経口投与の場合、体重 lkg当たり 0. 0 lmg〜l 0 g、好ましくは 0. lmg〜： L gを一日一回ないし数回投与する。

本発明の食品添加剤は、上記で説明した経口剤と同様な方法により調製することができる。食品添加剤は、通常、必要に応じて他の食品添加剤を混合または溶解し、例えば粉末、顆粒、ペレット、錠剤、各種液剤の形態に加工製造される。

食品添加剤としては、例えば食品添加物表示ハンドブック（日本食品添加物協会、平成 9年 1月 6日発行）に記載されている甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色料、漂白料、防かび剤、ガムべ一ス、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物などの添加物をあげることができる。また、前述の錠剤等に例示した担体を添加してもよい。

添加物としては、以下のような添加物があげられる。

甘味料としては、アスパルテーム、カンゾゥ、ステビア、キシロース、ラカン力などがあげられる。

着色料としては、カロチノィドゃゥコン色素、フラボノィド、カラメル色素、シコン色素、スピルリナ色素、葉緑素、ムラサキイモ色素、ムラサキヤマイモ色素、シソ色素、ブルーべリ一色素などがあげられる。

保存料としては、亜硫酸ナトリウム、安息香酸類、ウド抽出物、エゴノギ抽出物、力ワラョモギ抽出物、ソルビン酸類、プロピオン酸類、などがあげられる。増粘安定剤としては、アラビアガムゃキサンタンガムなどのガム類、アルギン酸類、キチン、キトサン、イダチアロエ抽出物、グァーガム、ヒドロキシプロピルセルロースヽカゼインナトリウム、コーンスターチ、カルボキシメチルセルロース類、ゼラチン、寒天、デキストリン、メチルセル口一ス、ポリビニルアルコール、微小繊維状セルロース、微結晶セルロース、海藻セルロース、ポリアクリル酸ソ一ダ、ポリリン酸ナトリウム、カラギ一ナン、酵母細胞壁、コンニヤクイモ抽出物、ナ夕デココ、マンナンなどがあげられる。

酸化防止剤としては、ビタミン C類、エチレンジァミン四酢酸ナトリウム、ェチレンジアミン四酢酸力ルシゥム、エリソルビン酸、オリザノール、カテキン、ケルセチン、クロ一プ抽出物、酵素処理ルチン、リンゴ抽出物、ゴマ油抽出物、ジブチルヒドロキシトルエン、ウイキヨゥ抽出物、セィヨウヮサビ抽出物、セリ抽出物、チヤ抽出物、テンペ抽出物、ドクダミ抽出物、トコトリエノ一ル、トコフエロール類、ナ夕ネ油抽出物、生コーヒー豆抽出物、ヒマヮリ種子、フェルラ酸、プチルヒドロキシァ二ソール、ブルーベリ一葉抽出物、プロポリス抽出物、へゴ .イチヨウ抽出物、ヘスぺレチスコショウ抽出物、ホウセン力抽出物、没食子酸、ャマモモ抽出物、ュ一カリ抽出物、ローズマリー抽出物などがあげられる。

発色料としては、亜硝酸ナトリウムなどがあげられる。

漂白料としては、亜硫酸ナトリウムなどがあげられる。

防かび剤としてはオルトフエニルフエノ一ルなどがあげられる。

ガムべ一スとしては、ァセチルリシノ一ル酸メチル、ウルシロウ、エステルガム、エレミ樹 β旨、ォゥリキユウリロウ、ォゾケライト、ォポパナックス樹旨、カウリガム、カルナゥバロウ、グァャク樹脂、グヅ夕力チュウ、グッ夕ハンカシ、グヅ夕ペル力、グリセリン脂肪酸エスエル、ゲイロウ、コパォババルサム、コ一パル樹脂、ゴム、コメヌカロウ、サトウキビロウ、シエラヅク、ジエルトン、ショ糖脂肪酸エステル、ソルバ、ソルビ夕ン酸脂肪酸エステル、タルク、炭酸カルシウム、ダンマル樹脂、チクル、チルテ、ヅヌ一、低分子ゴム、パラフィンワックス、ファーバルサム、プロピレングリコール脂肪酸エステル、粉末パルプ、粉末モミガラ、ホホバロウ、ポリイソプチレン、ポリプテン、マイクロクリスタルワックス、マスチック、マッサランドチヨコレート、ミヅロウ、リン酸カルシウムなどがあげられる。 . 苦味料としては、イソアルファ一苦味酸、カフェイン、力ワラタケ抽出物、キナ抽出物、キハダ抽出物、ゲンチアナ抽出物、香辛料抽出物、酵素処理ナリンジン、ジャマイ力カツシァ抽出物、デォブ口ミン、ナリンジン、ビガキ抽出物、ニガョモギ抽出物、ヒキォコシ抽出物、ヒメマツタケ抽出物、ボラペット、メチルチオアデノシン、レイシ抽出物、オリ一プ茶、ダイダイ抽出物、ホップ抽出物、ョモギ抽出物などがあ (7られる。

酵素としては、アミラーゼ、トリプシン、レンネット、乳酸菌などがあげられる。光沢剤としては、ウルシロウ、モクロウなどがあげられる。

酸味料としては、アジピン酸、ィタコン酸、クェン酸類、コハク酸類、酢酸ナトリゥム、酒石酸類、二酸化炭素、乳酸、フィチン酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸などがあげられる。

調味料としては、ァスパラギン、ァスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、ァラニン、イソロイシン、グリシン、セリン、シスチン、チロシン、ロイシン、プロリンなどのアミノ酸、ィノシン酸ナトリウム、ゥリジル酸ナトリウム、グァニル酸ナトリウム、シチジル酸ナトリウム、リボヌクレオチドカルシウム、リボヌクレオチドナトリウムなどの核酸、クェン酸、コハク酸などの有機酸、塩ィ匕カリウム、塩水湖水低塩ナトリゥム液、粗製海水塩化力リゥム、ホエイソルト、リン酸三力リゥム、リン酸水素二力リゥム、リン酸ニ水素力リゥム、リン酸水素ニナトリウム、リン酸ニ水素ナトリウム、リン酸三ナトリウム、クロレラ抽出物などがあげられる。

乳化剤としては、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビ夕ンまたはショ糖の脂肪酸エステル、およびレシチンなどがあげられる。

強化剤としては、亜鉛塩類、ビタミン C類、各種アミノ酸、 5—アデニル酸、塩ィ匕鉄、ヘスペリジン、各種焼成カルシウム、各種未焼成カルシウム、ジベンゾィルチアミン、水酸化カルシウム、炭酸カルシウム、チアミン塩酸塩、デュナリエラカロチン、トコフエロール、ニコチン酸、ニンジンカロチン、パ一ム油カロチン、パントテン酸カルシウム、ビ夕ミン A、ヒドロキシプロリン、ピロリン酸ニ水素カルシウム、ピロリン酸第一鉄、ピロリン酸第二鉄、フェリチン、ヘム鉄、メナキノン、葉酸、リボフラビンなどがあげられる。製造用剤としては、ァセトンゃイオン交換樹脂などの加工助剤、イチジク葉抽出物、イナワラ灰抽出物、カオリン、グリセリン脂肪酸エステル、クヮ抽出物、骨灰、シソ抽出物、ショウガ抽出物、各種タンニン、パフィァ抽出物、ブドウ種子抽出物、エタノールなどがあげられる。

香料としては、バニラエッセンスなどがあげられる。

香辛料抽出物としては、トウガラシエキスなどがあげられる。

なお、上記各種添加物は、本発明の筋肉増強剤および筋肉減衰の予防または治療剤に添 !][1することもできる。

本発明の飲食品としては、飲食品中に C D P—コリンまたはその塩を添加した飲食品をあげることができる。

本発明の飲食品は、飲食品中に C D P—コリンまたはその塩を添加する以外は、一般的な飲食品の製造方法を用いることにより、加工製造することができる。

本発明の飲食品は、例えば流動層造粒、攪拌造粒、押し出し造粒、転動造粒、気流造粒、圧縮成形造粒、解砕造粒、噴霧造粒、噴射造粒等の造粒方法、パンコーティング、流動層コーティング、ドライコ一ティング等のコーティング方法、パフドライ、過剰水蒸気法、フォームマツト方法、マイクロ波加熱方法等の膨化方法、押出造粒機やエキストルーダ一等の押出方法等を用いて製造することもできる。

本発明の飲食品は、ジュース類、清涼飲料水、茶類、乳酸菌飲料、発酵乳、冷菓、バター、チーズ、ヨーグルト、加工乳、脱脂乳等の乳製品、ハム、ソーセージ、ハンバーグ等の畜肉製品、蒲鲜、竹輪、さつま揚げ等の魚肉練り製品、だし巻き、卵豆腐等の卵製品、クッキ一、ゼリー、チューインガム、キャンデー、スナック菓子等の菓子類、パン類、麵類、漬物類、燻製品、干物、佃煮、塩蔵品、スープ類、調味料等、いずれの形態のものであってもよい。

また、本発明の飲食品は、例えば粉末食品、シ一ト状食品、瓶詰め食品、缶詰食品、レトルト食品、カプセル食品、夕ブレット状食品、流動食品、ドリンク剤等の形態のものであってもよい。

本発明の飲食品は、筋肉増強用または筋肉減衰の予防若しくは治療用健康食品、または機能性食品等の飲食品として用いることができる。本発明の飲食品には、上記本発明の飲食品添加剤に添加することができる食品添加剤、例えば甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色料、漂白料、防かび剤、ガムペース、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物等が添加されてもよい。

本発明の飲食品中への C D P—コリンまたはその塩、あるいは本発明の食品添加剤の飲食品への添加量は、飲食品の種類、当該飲食品の摂取により期待する効果等に応じて適宜選択されるが、 C D P—コリンまたはその塩として、通常は 0 . 0 0 1〜 1 0 0重量％、好ましくは 0 . 0 1〜8 0重量％、特に好ましくは 0 . 1〜6 0重量％含有するように添加される。

本発明の飲食品の経口投与量、すなわち摂取量は、摂取形態、摂取者の年齢、体重等に応じて異なるが、通常成人に対し一日あたり C D P—コリンまたはその塩として、 0 . l m g〜 5 0 g、好ましくは l m ：〜 1 0 g、より好ましくは 1 O m g：〜 1 gであり、 1日に 1回または数回に分けて摂取する。摂取期間は、特に限定はないが、通常は 1日間〜 5年間、好ましくは 2週間〜 1年間である。

本発明の飼料添加剤は、本発明の経口剤と同様な方法により調製することができる。飼料添加剤は、通常、必要に応じて他の飼料添加物を混合または溶解し、例えば粉末、顆粒、ペレット、錠剤、各種液剤の形態に加工製造される。

飼料添加物としては、上記本発明の飲食品添加剤に添加することができる食品添カロ剤、例えば甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色料、漂白料、防かび剤、ガムべ一ス、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物等をあげることができる。

本発明の飼料は、哺乳類、鳥類、は虫類、両生類、魚類等の動物に対する筋肉増強用または筋肉減衰の予防若しくは治療用の飼料であれば、例えばィヌ、ネコ、ラットおよびマウス等のペット用飼料、ゥシ、ゥマ、ブ夕等の家畜用飼料、ニヮトリ、七面鳥等の家禽用飼料、タイ、ハマチ等の養殖魚用飼料等、いずれの飼料であってもよいが、ぺット用飼料または家禽用飼料として好適に用いることができる。

本発明の飼料は、飼料中に C D P—コリンまたはその塩、あるいは本発明の飼料添加剤を添加する以外は、一般的な飼料の製造方法を用いることにより加工製造することができる。飼料としては、穀物類、そうこう類、植物性油かす類、動物性飼料、その他の飼料、精製品、またはこれらの混合物等をあげることができる。

穀物類としては、例えばマイ口、小麦、大麦、えん麦、らい麦、玄米、そば、あわ、きび、ひえ、とうもろこし、大豆等をあげることができる。

そうこう類としては、例えば米ぬか、脱脂米ぬか、ふすま、末粉、小麦、胚芽、麦ぬか、ペレット、トウモロコシぬか、トウモロコシ胚芽等をあげることができる。植物性油かす類としては、例えば大豆油かす、きな粉、亜麻仁油かす、綿実油かす、落花生油かす、サフラワー油かす、やし油かす、パーム油かす、胡麻油かす、ひまわり油かす、菜種油かす、カポック油かす、芥子油かす等があげられる。

動物性飼料としては、例えば北洋ミール、輸入ミール、ホールミール、沿岸ミール等の魚粉、フィッシュソルブル、肉粉、肉骨粉、血粉、分解毛、骨粉、家畜用処理副産物、フェザーミール、蚕よう、脱脂粉乳、カゼイン、乾燥ホェ一等をあげることができる。

その他の飼料としては、アルフアルファ、ヘイキューブ、アルフアルファリ一フミール、ニセアカ^ア粉末等の植物茎葉類、コーングルテン、ミール、コーングルテンフィード、コーンステ一プリカ一等のトウモロコシ加工工業副産物、デンプン等のデンプン加工品、酵母、ビールかす、麦芽根、アルコールかす、しょう油かす等の発酵工業産物、柑橋加工かす、豆腐かす、コーヒーかす、'ココァかす等の農産製造副産物、キヤヅサバ、そら豆、グアミ一ル、海藻、ォキアミ、スピルリナ、クロレラ、鉱物等をあげることができる。

精製品としては、カゼイン、アルブミン等のタンパク質、アミノ酸、スターチ、セルロース、蔗糖、グルコース等の糖質、ミネラル、ビタミン等があげられる。

本発明の飼料は、例えば流動層造粒、攪拌造粒、押し出し造粒、転動造粒、気流造粒、圧縮成形造粒、解砕造粒、噴霧造粒、噴射造粒等の造粒方法、パンコーティング、流動層コ一ティング、ドライコ一ティング等のコ一ティング方法、パフドライ、過剰水蒸気法、フォームマツト方法、マイクロ波加熱方法等の膨化方法、押出造粒機ゃェキストルーダ一等の押出方法等を用いて製造することもできる。

本発明の飼料中への C D P—コリンまたはその塩、あるいは飼料添加剤の添加量は、飼料の種類、当該飼料の摂食により期待する効果等に応じて適宜選択されるが、 C D P—コリンまたはその塩として、通常は 0. ひ 01〜100重量％、好ましくは 0. 01〜80重量％、特に好ましくは 0. 1〜60重量％である。

本発明の飼料の経口投与量、すなわち摂取量は、摂取形態、摂取動物の種類、該動物の年齢、体重等に応じて異なるが、動物に対し一日あたり CD P—コリンまたはその塩として、通常、体重 1 kg当たり、 0. Img〜； L 0 g、好ましくは lmg〜5 g'、より好ましくは 1 Omg〜l gであり、 1曰に 1回または数回に分けて摂取する。摂取期間は、特に限定はないが、通常は 1日間〜 5年間、好ましくは 2週間〜 1年間である。 .

試験例 1 C D P—コリンの筋肉増強作用

被験動物として、 9週齢の Fisher344系雌ラット (S 1 c株式会社より購入）を 1 3頭用いた。ラヅトは、 7:00-19:00を明期とする明暗サイクルのもと、温度が 22°C に制御された室内で、自由摂水、自由摂食で 3日間、予備飼育した。予備飼育では、第 1、 2および 3表にその組成が示される A I N— 93 M飼料に基づいて調製した飼料を与えた。予備飼育終了後、ラットを 2群に分けて、 7頭には対照群として対照飼料を与え、残りの 6頭には表 1に示した組成を有する C D P—コリン（協和発酵工業株式会社製）含有飼料（以下、 CDP-コリン飼料という）を与えて 1日間飼育した。その後、ペントバルビ夕一ル麻酔下でラット右後肢をギプスで固定し、上記環境下でさらに 1週間飼育した後、ラットを下記各項目に示す分析に供した。

第 1表飼料組成

3 lS 7o )

' 組成

対照飼料（AIN-93M) UUP - リノ: 6口」料一ノスターナ

し JJ --iリノ 1. (JU ノレグ刀セイン 14, 00 14。ϋϋ ノ'ノレノア b」—ンスタ―丁 ■ 15.50 15.50 クフーユー ¾g 10.00

精製大豆油 , 00 4.00 セノレ D——スノヽウタ—— 5.00 5, 00

^不フノレ^ヅクス 3.50

ヒタノ^ックス 1.00 1.00

L一シスチン 0.18 • 0.18 重酒石酸コリン 0.25 • 0.25 第 3ブチルヒドロキノン 0.0008 0.0008 計 100.00 100.00

第 2表ミネラフレミックス糸且成

第 3表ビタミンミックス組成

( 1 ) 体重

体重測定は、ペントパルビタールでラヅトを麻酔し、ギプスを取り外した後に行つた。結果を第 4表に示す。表中、 ηは試験に供したラット頭数を示す。

第 4表体重

数値は（平均）士（標準偏差）で示した。第 4表に示したように、摂取飼料の違いによる体重差は認められなかった。

( ) 筋湿重量

被験筋には、ラヅト後肢下腿に位置するヒラメ筋、および足底筋の 2つの筋を用いた。ヒラメ筋は、全筋繊維数の 8 0〜 9 0 %が遅筋繊維よりなる、下肢における代表的な遅筋型骨格筋であり、足底筋は、全筋繊維数の約 9 5 °/。が速筋繊維よりなる典型的な速筋型骨格筋である。

体重測定後のラットを屠殺した後、左右両後肢下腿のヒラメ筋および足底筋を速やかに摘出し、生理食塩水で洗浄した後、余分な結合組織および腱、神経等を除去してからヒラメ筋および足底筋の筋湿重量を測定した。個体ごとにギプス非固定筋湿重量を 100としたときのギプス固定筋湿重量の割合を求め、減少分を萎縮率として表した _c ヒラメ筋湿重量を第 5表に、足底筋湿重量を第 6表に示す。

第 5表ヒラメ筋湿重量

数値は（平均）土（標準偏差）で示した。第 6表足底筋湿重量

数値は（平均）士（標準偏差）で示した。第 5表に示したように、ヒラメ筋では固定肢及び非固定肢の筋湿重量のいずれも、摂取飼料の違いによる差は認められなかつたが、第 6表に示したように、足底筋では、 C D P—コリン摂取群の固定肢の湿重量は対照群に比べ有意に高く、萎縮率は有意に低かった。

( 3 ) 体重あたりの筋湿重量

体重当たりの筋湿重量は、ヒラメ筋および足底筋の各々左右の筋湿重量を測定し、その値を体重で割って算出した。体重当たりの筋湿重量は、各筋湿重量に対する体重の違い'による影響を排除し、体重当たりの筋肉量を反映している。体重当たりのヒラメ筋湿重量を第 7表に、体重当たりの足底筋湿重量を第 8表に示す。第 7表体重当たりのヒラメ筋湿重量

数値は（平均）士（標準偏差）で示した。第 8表体重当たりの足底筋湿重量

数値は（平均）土（標準偏差）で示した。第 7表に示したように、体重当たりのヒラメ筋湿重量には、摂取飼料および固定の有無による違いは認められなかつたが、第 8表に示したように、体重当たりの足底筋重量は、 C D P—コリン群の固定肢において対照群に比ぺ有意に高かった。

第 6表および第 8表に示した結果から、 C D P—コリンは速筋型骨格筋である足底筋の重量を增加させることが明らかとなった。 ' ( 4 )筋肉中のタンパク質含量

筋肉中のタンパク質含量は、 1 . 15%の塩化カリウム溶液中でヒラメ筋を細切後、ガラスホモジナイザーでホモジネ一トを作成し、該ホモジネートを適宜希釈した後、 BI0 RAD社の Protein Assay kitを用いて測定した。なお、検量線は 2mg/mlの B S A溶液を使用して作成した。測定結果を第 9表に示す。

第 9表ヒラメ筋のタンパク質含量

数値は（平均）土（標準偏差）で示した ₍ 第 9表に示したように、ヒラメ筋のタンパク質含量は、 CDP—コリン群の非固定群において対照群に比ぺ有意に高かった。

(5) 筋漿タンパク質分解速度 .

秤量したヒラメ筋を、 95%C0₂-5%0₂ガス通気下のクレブスへンゼレィト重炭酸緩衝液中で 30分間プレインキュベートした後、新しい該緩衝液に移して 2時間のィンキュベーシヨンを行った。該緩衝液のチロシン濃度を測定することにより筋漿タンパク質分解速度を算出した。

チロシン濃度は、' Waalkesらの 1-二トロソ- 2-ナフトールを用いる蛍光法 [J. Lab. Clin. Med., 50, 733(1957)] (励起波長 435皿、蛍光波長 545醒) によって測定した。検量線は、標準液として調製した 5雇 ol/mlのチロシン溶液を適宜希釈したものを使用して、その濃度と蛍光強度の関係をプロットして作成した。作成した検量線を用い、被験緩衝液の蛍光強度から該緩衝液中のチロシン農度を求めた。結果を第 10表に示す。

第 10表ヒラメ筋の筋漿タンパク質分角军速度

数値は（平均）土（標準偏差）で示した。第 10表に示したように、 CD P—コリン群のギプス非固定群では、ヒラメ筋の筋漿タンパク質分解速度は、対照群に比べて有意に低かった。

第 5、 7、 9および 10表に示した結果から、 CDP—コリンは、ヒラメ筋重量を変ィ匕させることなく、タンパク質含量を増加させ、筋漿夕ンパク質分解速度を抑制することが明らかとなった。

試験例 2 in vitroにおける CDP—コリンの細胞内夕ンパク質増加作用

( 1 ) マウス筋芽細胞由来 C2C12細胞の培養

C2C12細胞は、大日本製薬（株）より購入した。培養は、 Craigらの方法 [Methods in Cell Biology, 52, 85 (1998 )] に準じて行った。増殖用培地は、 500mlの D- MEM 培地（GIBC0社製； Cat, No.11885- 084) に 50mlの FBS(GIBC0社製； Cat.No. 10099- 141)に、，5mlのぺニシリン-ストレプトマイシン（GIBC0社製； Cat. No.15 0- 122)を添加して調製した。分化用培地は、 500mlの D- MEM培地に 10ml の非働化ゥマ血清（GIBC0社製； Cat. No.26050-088)、 5mlのペニシリン-ストレプトマイシンを添加して調製した。 C2C12細胞は、 15mlの増殖用培地が入った 75cm²フラスコに播種して培養し、コンフルェントになる前に継代した。培養には co₂インキュぺ一夕を用い、 C0₂濃度 5% 、湿度 100%の条件下で培養した。

増殖用培地で 5xl0⁴cell/mlに希釈した細胞懸濁液を、 I型コラーゲンコート 96 穴プレート（ IWAKI； Cat . No .4860-010)の各穴に 100 zlずつ加えた。均一に増殖していること確認した後、分化用培地に交換した。 3日間培獰して顕微鏡で筋管形成を確認した後、 CD P—コリン含有 PBS (-)溶液を、終濃度が lmg/mlまたは 0.1mg/mlになるように培地に添加して培養した。対照群は CD P—コリン含有 PBS (-)溶液の代わりに PBS (-)溶液を添加し、 3日間培養した後、細胞内タンパク質量を測定した。 ( 2 ) 細胞内夕ンパク質量の測定

Oliverらの方法 [Journal of Cell Science, 92> 513 (1989 )] に基づいて細胞内タンパク質量を測定した。培養終了後、コラーゲンコートプレートから培地を取り除き、 0.15mol/Lの塩化ナトリウム溶液で洗浄した。各穴にホルマリン溶液

(10%ホルマリンを含有する 0.15mol/Lの塩化ナトリゥム溶液）を 100〃1ずつ加えた。 30分間以上放置した後、ホルマリン溶液を取り除き、 1%メチレンプル一溶液 [1% メチレンブルーを含有する 10mmol/Lのホウ酸緩衝液（pH8.5) ] を 100〃1加えた。 30分間室温で放置した後、 10腿 ol/Lのホウ酸緩衝液で 4回洗浄して水気をふき取つた。 100 zlのエタノール塩酸溶液（エタノールと 0.1mol/Lの塩酸を 1 ： 1で含む溶液）を加えて軽く振とうし、適宜希釈した後、マイクロプレートリーダーで 650 の吸収を測定した。細胞内蛋白質増加率は、 CDP—コリン添加前（d 0)の値を 0 とし、 3日間の培養後 (d 3) の対照区（ CD P—コリン無添加区）の細胞内タンパク質濃度を 100として、 3日間培養後の試験区（CDP—コリン添加区）の値を算出した。結果を第 11表に示す。第 1 1表 C2C12細胞の細胞内質増加率

数値は（平均）土（標準偏差）で示した。第 1 1表に示したように、 C D Ρ—コリンの濃度依存的に、 C2C12細胞内タンパク質量が増加することが示された。

C D P—コリンの摂取によりギプス固定肢の筋肉重量が増加したことから、廃用性筋萎縮において C D P—コリンが筋肉増強または筋肉減衰の予防若しくは治療作用を有することが確認された。

また、ギプス非固定肢では固定肢のような筋萎縮は見られないが、片足の固定により日常生活に制限が生じて運動量が低下しており、筋肉の質的低下状態にあると考えられる。したがって C D P—コリン摂取による非固定肢の筋タンパク質量の増加は、筋肉の維持に必要なタンパク質の減少が抑制されたこと意味し、 C D P—コリンには老化や運動不足による筋肉減衰の予防または治療作用があることが確認された。以下、実施例に基づいて本発明を詳述する。ただし、下記実施例は本発明の範囲を制限するものではない。

発明を実施するための最良の形態

実施例 1 C D P—コリン含有筋肉増強剤および筋肉減衰の予防または治療剤の製造

下記の各成分を混合することにより筋肉増強剤および筋肉減衰の予防または治療剤を製造した。

C D P -コリン 4 9 g

ノ、°インデックス # 3 (松谷化学工業株式会社製） 4 9 g

ピロリン酸第 2鉄 0 . 1 g

ホスカル E F C (日興ファインプロダクツ社製） 1 g ビタミンミックス（メルク社製） l g

実施例 2 C D P—コリン塩酸塩含有筋肉増強剤および筋肉減衰の予防または治療剤の製造

下記各成分を混合することにより筋肉増強剤および筋肉減衰の予防または治療剤を製造した。

CD P—コリン塩酸塩 49 g

'パインデックス #3 (松谷化学工業株式会社製） 49 g

ピロリン酸第 2鉄 0. 1 g

ホスカル EFC (日興ファインプロダクヅ社製) 1

ビタミンミックス（メルク社製） 1 g

実施例 3 CD P—コリン含有筋肉増強用および筋肉減衰の予防または治療用飼料下記各成分を混合することにより筋肉増強用および筋肉減衰の予防または治療用のィヌ用飼料であるクッキー 30個分を製造する。

CD P—コリン 0. 5 g

ゴルコサミン 0. 5 g

^一 h ¾.——フレ 35. 0 g

コーンスターチ 40. 0 g

チキンエキス 5. 0 g

酵母エキス 5. O g

植物油脂 5. 0 g

乳酸カルシウム 1. g

塩化ナトリウム 1. O g

リン酸水素ナトリウム 0. 5 g

炭酸マグネシウム 0. 5 g

硫酸鉄 0. 1 g

ビ夕ミン B 1 . 0005 g

ビタミン B 2 . 0005 g

ビタミン E 0. 00 1

0. 005 g ビタミン A 2000 I U

ビタミン D 150 IU

水分 ' 6. 3 g

産業上の利用可能性

本発明により、筋肉増強剤、筋肉衰弱の予防または治療作剤、筋肉増強用または筋肉衰弱の予防若しくは治療用の飲食品または飼料、および筋肉増強用または筋肉衰弱の予防若しくは治療用の飲食品添加剤または飼料用添加剤が提供される。

Claims

1. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を含有する筋肉増強剤。

2. 筋肉が骨格筋である請求項 1記載の筋肉増強剤。

3. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を含有する筋肉増強用飲食品。

4. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を添加してなる筋肉増強用飲食品。

5. 筋肉が骨格筋である請求項 3または 4記載の筋肉増強用飲食品。

6. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を含有する筋肉増強用飼料。

7. シチジン二リン酸コリンまたはその塩を添加してなる筋肉増強用飼料。

8. 筋肉が骨格筋である請求項 6または 7記載の筋肉増強用飼料。

9. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を含有する筋肉増強用食品添加剤。

10. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を添加してなる筋肉増強用食品添加剤 _c

11. 筋肉が骨格筋である請求項 9または 1◦記載の筋肉増強用食品添加剤。

12. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を含有する筋肉増強用飼料添加剤。

13. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を添加してなる筋肉増強用飼料添加剤 _c

14. 筋肉が骨格筋である請求項 1 2または 1 3記載の筋肉増強用食品添加剤。

15. シチジン二リン酸コリンまたはその塩を有効量、動物に投与することを特徴とする筋肉増強方法。，

16. 動物がヒト以外の動物である請求項 1 5記載の方法。

17. ヒト以外の動物が、家畜、家禽または養殖魚である請求項 1 6記載の方法。

18. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を含有する筋肉減衰の予防または治療剤。

19. 筋肉が骨格筋である請求項 1 8記載の筋肉減衰の予防または治療剤。

20. シチジン二リン酸コリンまたはその塩を含有する筋肉減衰の予防または治療用飲食品。

21. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を添加してなる筋肉減衰の予防または治療用飲食品。

22. 筋肉が骨格筋である請求項 2 0または 2 1記載の筋肉減衰の予防または治療用飲食 B口 o

23. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を含有する筋肉減衰の予防または治療用飼料。

24. シチジン二リン酸コリンまたはその塩を添加してなる筋肉減衰の予防または治療用飼料。 .

25. 筋肉が骨格筋である請求項 2 3または 2 4記載の筋肉減衰の予防または治療用飼料。

26. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を含有する筋肉減衰の予防または治療用食品添加剤。

27. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を添加してなる筋肉減衰の予防または治療用食品添加剤。

28. 筋肉が骨格筋である請求項 2 6または 2 7記載の筋肉減衰の予防または治療用食品添加剤。

29. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を含有する筋肉減衰の予防または治療用飼料添加剤。

30. シチジンニリン酸コリンまたはその塩を添加してなる筋肉減衰の予防または治療用飼料添加剤。

31.. 筋肉が骨格筋である請求項 2 9または 3 0記載の筋肉減衰の予防または治療用食品添加剤。

32. シチジン二リン酸コリンまたはその塩を有効量、動物に投与することを特徴とする筋肉減衰の予防または治療方法。

33. 動物がヒト以外の動物である請求項 3 2記載の方法。

34. ヒト以外の動物が、家畜、家禽または養殖魚である請求項 3 3記載の方法。

35. 筋肉増強剤、または筋肉増強用の飲食品、飼料、食品添加剤若しくは飼料添加剤の製造のためのシチジンニリン酸コリンまたはその塩の使用。

36. 筋肉減衰の予防若しくは治療剤、または筋肉減衰の予防若しくは治療用の飲食品、飼料、食品添加剤若しくは飼料添加剤の製造のためのシチジン二リン酸コリンまたはその塩の使用。