WO2023190797A1 - 筋質改善用組成物 - Google Patents

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WO2023190797A1
WO2023190797A1 PCT/JP2023/013039 JP2023013039W WO2023190797A1 WO 2023190797 A1 WO2023190797 A1 WO 2023190797A1 JP 2023013039 W JP2023013039 W JP 2023013039W WO 2023190797 A1 WO2023190797 A1 WO 2023190797A1
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improving
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遥 大橋
祐介 安達
恭子 三浦
吉朗 北原
玲子 市川
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味の素株式会社
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    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues

Definitions

  • the present invention relates to techniques for improving muscle quality and related techniques.
  • the present invention may particularly relate to techniques for slowing down muscles and related techniques.
  • Muscles are made up of bundles of muscle fibers. Muscle fibers are classified into slow-twitch muscle fibers (Type I muscle fibers) and fast-twitch muscle fibers (Type II muscle fibers). Slow-twitch fibers have lower contractile force and speed than fast-twitch fibers, but they are less prone to fatigue and contribute to endurance. Therefore, increasing the amount of slow-twitch muscle in the muscle (ie, slow-twitching the muscle) is expected to provide health benefits such as, for example, improved endurance. Furthermore, slow-twitch fibers have the property of consuming energy more easily than fast-twitch fibers. Therefore, an increase in the amount of slow-twitch muscle in the muscle (ie, slow-twitch muscle) is expected to increase energy expenditure and thereby provide health benefits such as weight loss.
  • Slow-twitch muscle fibers have lower contractile force and speed than fast-twitch fibers, but they are less prone to fatigue and contribute to endurance. Therefore, increasing the amount of slow-twitch muscle in
  • Patent Document 1 A technique for promoting lipid metabolism using sn-glycero-3-phosphocholine ( ⁇ GPC) has been reported (Patent Document 1).
  • Patent Document 2 A technique for improving the mental state and body composition of mammals using Easylin has been reported (Patent Document 2).
  • the document exemplifies citicoline as an ingredient that may be used in combination with easyin.
  • Patent Document 3 A technology has been reported that uses NAD+ precursors and ATP boosters to improve mitochondrial energy production and its efficiency.
  • the same document exemplifies nutrients that protect mitochondria, such as citicoline, as ingredients that may be used in combination with NAD+ precursors and ATP boosters.
  • An object of the present invention is to provide a technique for improving muscle quality and a technique related thereto.
  • choline compounds such as sn-glycero-3-phosphocholine ( ⁇ GPC) and citicoline. completed.
  • the present invention can be exemplified as follows.
  • [1] A composition for improving muscle quality containing a choline compound.
  • [2] A composition containing a cholinergic compound for obtaining an effect based on improving muscle quality.
  • the effects based on improving muscle quality include increasing the amount of mitochondria in muscles, improving body composition, improving endurance, improving metabolism, improving balance ability, and improving muscle strength.
  • Effect effect of improving walking speed, effect of tightening the body, effect of improving basic physical strength, effect of improving training effect, effect of improving rehabilitation effect, effect of regulating target's body temperature, regulating target's blood sugar level one or more effects selected from the group consisting of: effect of regulating the blood lipid concentration of the subject; and effect of preventing, ameliorating, and/or treating undesirable muscle-related symptoms.
  • Composition one or more effects selected from the group consisting of: effect of regulating the blood lipid concentration of the subject; and effect of preventing, ameliorating, and/or treating undesirable muscle-related symptoms.
  • the symptoms include disuse muscle atrophy, neurogenic muscle atrophy, myogenic muscle atrophy, myasthenia gravis, cachexia, frailty, locomotor syndrome, metabolic syndrome, decreased basic physical strength, decreased walking speed,
  • the composition described above is one or more symptoms selected from the group consisting of lower back pain, stiff shoulders, headache, hyperglycemia, hyperlipidemia, vascular disorder, hypothermia, and sensitivity to cold.
  • the above-mentioned composition, wherein the muscle quality improvement is slow-twitching of muscles.
  • composition wherein the choline compound is one or more components selected from the group consisting of sn-glycero-3-phosphocholine, citicoline, choline, choline phosphate, phosphocholine, phosphatidylcholine, sphingomyelin, and serine. thing.
  • the composition wherein the choline compound is one or more components selected from the group consisting of sn-glycero-3-phosphocholine, citicoline, and serine.
  • the composition is a pharmaceutical composition.
  • the composition is a food composition.
  • the composition wherein the content of the choline compound is 100 ppm (w/w) to 99.9% (w/w).
  • compositions for use in conjunction with performing physical exercise improves muscle strength earlier in a subject to whom the composition is administered compared to when it is not used in combination with the performance of physical exercise.
  • a method for improving muscular quality of a subject comprising the step of administering a cholinergic compound to the subject.
  • a method for obtaining an effect based on muscle quality improvement in a subject comprising the step of administering a cholinergic compound to the subject.
  • the effects based on improving muscle quality include increasing the amount of mitochondria in muscles, improving body composition, improving endurance, improving metabolism, improving balance ability, and improving muscle strength.
  • Effect effect of improving walking speed, effect of tightening the body, effect of improving basic physical strength, effect of improving training effect, effect of improving rehabilitation effect, effect of regulating target's body temperature, regulating target's blood sugar level one or more effects selected from the group consisting of: effect of regulating the blood lipid concentration of the subject; and effect of preventing, ameliorating, and/or treating undesirable muscle-related symptoms.
  • the symptoms include disuse muscle atrophy, neurogenic muscle atrophy, myogenic muscle atrophy, myasthenia gravis, cachexia, frailty, locomotor syndrome, metabolic syndrome, decreased basic physical strength, decreased walking speed,
  • the method described above is one or more symptoms selected from the group consisting of lower back pain, stiff shoulders, headache, hyperglycemia, hyperlipidemia, vascular disorder, hypothermia, and sensitivity to cold.
  • the above method wherein the dosage of the cholinergic compound is 0.01 mg/kg body weight/day or more.
  • the above method, wherein the dosage of the cholinergic compound is 1000 mg/kg body weight/day or less.
  • a method for improving the muscle quality of cultured meat comprising the step of culturing animal cells in the presence of a cholinergic compound.
  • a method for producing cultured meat comprising the step of culturing animal cells in the presence of a choline compound.
  • the method, wherein the produced cultured meat is cultured meat with improved muscle quality.
  • the above-mentioned method, wherein the muscle quality improvement is slow-twitching of the muscle.
  • the choline compound is one or more components selected from the group consisting of sn-glycero-3-phosphocholine, citicoline, choline, choline phosphate, phosphocholine, phosphatidylcholine, sphingomyelin, and serine.
  • the choline compound is one or more components selected from the group consisting of sn-glycero-3-phosphocholine, citicoline, and serine.
  • a diagram showing changes in the expression level of the Myh7 gene due to the addition of citicoline The expression level of the Myh7 gene was shown as a relative value (mean value ⁇ standard deviation) with the expression level of the Myh7 gene in the control group set to 1 at 24, 48, and 72 hours after addition of citicoline. A significant difference test was performed by a two-group test (*: p ⁇ 0.05).
  • a significant difference test was performed by a two-group test (*: p ⁇ 0.05). Photo of grip strength measuring device for animals. A diagram showing the muscle strength of mice on the second day after the start of feeding the provided feed. Results were shown as mean ⁇ standard deviation. A significant difference test was performed using the Dunnett test (*: p ⁇ 0.05). A diagram showing the muscle strength of mice on the 8th day after the start of feeding the provided feed. Results were shown as mean ⁇ standard deviation. A significant difference test was performed using the Dunnett test (*: p ⁇ 0.05). A diagram showing changes in the expression level of the Myh7 gene due to the addition of serine.
  • the expression level of the Myh7 gene was expressed as a relative value (average value ⁇ standard deviation), with the expression level of the Myh7 gene in the control group being 1, 24 hours after the addition of serine.
  • a significant difference test was performed using the Dunnett test (*: p ⁇ 0.05).
  • a diagram showing the fat weight per body weight of mice on the 26th day after the start of feeding the provided feed. Results were shown as mean ⁇ standard deviation.
  • a multiple comparison test for the control group (2 groups) was performed using the Dunnett test (*: p ⁇ 0.05).
  • a diagram showing changes in muscle weight per mouse body weight after the start of feeding of provided feed. Results are shown as average values.
  • Results were shown as mean ⁇ standard deviation.
  • a multiple comparison test for the control group (2 groups) was performed using the Dunnett test (**: p ⁇ 0.01).
  • a multiple comparison test for the control group (2 groups) was performed using the Dunnett test (**: p ⁇ 0.01).
  • a choline compound is used as an active ingredient. Choline compounds are also called “active ingredients.”
  • muscle quality muscle quality
  • muscle quality improvement effect Utilization of the active ingredient includes administering the active ingredient to a subject and culturing animal cells in the presence of the active ingredient. That is, for example, by administering the active ingredient to a subject, muscle quality may be improved in the subject, that is, a muscle quality improving effect may be obtained. Furthermore, for example, by culturing animal cells in the presence of the active ingredient, muscle quality may be improved in muscle tissue (e.g., cultured meat) formed by the cultured cells, that is, a muscle quality improving effect may be obtained. good.
  • muscle tissue e.g., cultured meat
  • the term "improving muscle quality in cultured meat” can be used interchangeably or equivalently with the term “improving meat quality in cultured meat” or "controlling meat quality in cultured meat.”
  • muscles include skeletal muscles.
  • skeletal muscles include trunk muscles (i.e., skeletal muscles of the trunk) and limb muscles (i.e., skeletal muscles of the upper and lower limbs). Skeletal muscles include, in particular, skeletal muscles involved in maintaining posture.
  • Skeletal muscles involved in maintaining posture include trunk muscles such as neck flexors, neck extensors, erector spinae, abdominal muscles, and iliopsoas muscles, as well as gluteus maximus, quadriceps, biceps femoris, Examples include lower limb skeletal muscles such as semitendinosus, semimembranosus, tibialis anterior, gastrocnemius, and soleus.
  • the muscle quality improving effect may be obtained in one muscle, or in two or more muscles.
  • the muscle quality improving effect may be obtained, for example, in a region with a high ratio of slow twitch muscles, in a region with a high ratio of fast twitch muscles, or in both.
  • Improvements in muscle quality include slow-twitching of muscles. That is, the effect of improving muscle quality includes the effect of slowing down muscles. The effect of slow-twitching muscles is also called the “slow-twitching effect.”
  • “Slow twitch muscle” means an increase in the amount of slow twitch muscle in the muscle.
  • Amount of slow-twitch fibers in a muscle may mean the absolute amount of slow-twitch fibers in a muscle, or the relative amount of slow-twitch fibers in a muscle (i.e., the ratio of the amount of slow-twitch fibers to the muscle mass). or both. That is, the use of active ingredients may increase the absolute and/or relative amount of slow twitch fibers in the muscle.
  • Utilization of the active ingredient may at least increase the relative amount of slow twitch fibers in the muscle.
  • the total muscle mass may increase with an increase in the amount of slow twitch fibers in the muscle.
  • the amount of slow-twitch fibers includes the number of slow-twitch fibers, the cross-sectional area of slow-twitch fibers, and the volume of slow-twitch fibers.
  • the relative amount of slow-twitch fibers in a muscle is the ratio of the number of slow-twitch fibers to the number of muscle fibers in the muscle, the ratio of the cross-sectional area of slow-twitch fibers to the cross-sectional area of the muscle, and the ratio of the cross-sectional area of slow-twitch fibers to the volume of the muscle. Examples include the volume ratio of muscle fibers. "Slow twitch fibers" means Type I muscle fibers.
  • the use of active ingredients may increase, for example, one or more of the parameters exemplified above that are considered slow-twitch muscle mass. By utilizing the active ingredient, the amount of fast twitch fibers in the muscle may increase, decrease, or remain unchanged.
  • Amount of fast twitch fibers in a muscle may mean the absolute amount of fast twitch fibers in a muscle, or the relative amount of fast twitch fibers in a muscle (i.e., the ratio of the amount of fast twitch fibers to the amount of muscle). or both.
  • the use of an active ingredient may increase the absolute amount of fast twitch fibers in the muscle.
  • the active ingredient in addition to increasing the absolute amount of slow twitch fibers in a muscle, the active ingredient may increase the absolute and/or relative amount of fast twitch fibers in the muscle.
  • the active ingredient may be utilized to increase the relative amount of slow twitch fibers in the muscle while decreasing the relative amount of fast twitch fibers in the muscle.
  • the amount of fast twitch fibers includes the number of fast twitch fibers, the cross-sectional area of fast twitch fibers, and the volume of fast twitch fibers.
  • "Fast twitch fibers" means Type II muscle fibers.
  • Type II muscle fibers include Type IIa muscle fibers, Type IIb muscle fibers, and Type IIx muscle fibers.
  • Improving muscle quality also includes improving the texture and flavor of meat. That is, the effect of improving muscle quality includes the effect of improving the texture of meat and the effect of improving the flavor of meat.
  • Both improved meat texture and improved meat flavor may be obtained, for example, in edible meat (eg, edible animal meat or edible cultured meat). Both the improvement in the texture of meat and the improvement in the flavor of meat may be due to, for example, slow-twitching of muscles.
  • Improvements in the texture of meat include improvements in water retention and juiciness of meat.
  • Improving the flavor of meat includes improving the taste of meat due to an increase in the amount of free amino acids. For example, it has been reported that the ratio of slow-twitch muscle in pork shows a positive correlation with the favorable flavor of pork (Y. K.
  • the muscle quality improvement effect can be confirmed by comparing the muscle quality when the active ingredient is not used and when the active ingredient is used.
  • the slow-twitch muscle slowing effect can be confirmed by comparing the amount of slow-twitch muscle in the muscle when the active ingredient is not used and when the active ingredient is used.
  • the muscle quality is improved when using the active ingredient (for example, the amount of slow twitch fibers in the muscle is large) compared to when the active ingredient is not used, It can be judged that a muscularization effect) was obtained.
  • “At the time of utilization of the active ingredient” may mean, for example, a time point after the active ingredient is utilized in the manner described in the method of the present invention described below.
  • “When the active ingredient is not used” may simply mean, for example, a time before the active ingredient is used. That is, for example, if the muscle quality is improved after using the active ingredient (for example, the amount of slow twitch fibers in the muscle is large) compared to before the use of the active ingredient, the muscle quality improving effect (for example, It can be concluded that a slow-twitch muscle slowing effect) was obtained.
  • “when the active ingredient is not used” more precisely means, for example, the point in time after a period of time (e.g., the same period as the active ingredient) has passed without using the active ingredient. Good too.
  • muscle quality deteriorates over time (for example, the amount of slow twitch fibers in the muscle decreases)
  • muscle quality will be improved by using active ingredients
  • active ingredients For example, “the use of active ingredients causes muscles to become slow-twitch” means that the deterioration of muscle quality (e.g., a decrease in the amount of slow-twitch muscle in muscles) is reduced more than expected by the use of active ingredients. It is sufficient that the muscle quality is improved after using the active ingredient (for example, the amount of slow twitch fibers in the muscle is large) compared to before using the active ingredient.
  • "improving muscle quality” includes alleviating deterioration of muscle quality (for example, reducing the amount of slow-twitch muscle in muscles).
  • Cases in which muscle quality is expected to deteriorate over time include deterioration of muscle quality due to disease, aging, etc. (e.g., the amount of slow-twitch fibers in the muscle decreases).
  • the condition of the subject after a period of time without using the active ingredient e.g., muscle quality and amount of slow twitch fibers in the muscle
  • the condition of the subject after a period of time without using the active ingredient will depend on, for example, the subject's age and It can be inferred by taking into consideration various conditions such as health status.
  • an active ingredient is used to culture animal cells
  • the state of the muscle tissue formed by the cultured cells after a period of time without using the active ingredient is For example, it can be confirmed by culturing animal cells in the absence of the active ingredient.
  • the amount of slow-twitch muscle can be measured, for example, by a known method.
  • Techniques for measuring slow-twitch muscle mass include muscle biopsies, magnetic resonance imaging (MRI), and field tests.
  • the amount of slow-twitch muscle in the muscle when the active ingredient is used is, for example, 101% or more, 103% or more, 105% or more, when the amount of slow-twitch muscle in the muscle when the active ingredient is not used is 100%. , 110% or more, 115% or more, 120% or more, 125% or more, or 130% or more.
  • the muscle slowing effect can be confirmed using, for example, the expression of the Myh7 gene in muscle as an indicator.
  • Myh7 gene is a gene highly expressed in slow-twitch fibers.
  • effects based on improving muscle quality for example, slowing down muscle twitching
  • effects based on improving muscle quality for example, slowing down muscle twitching
  • an effect based on improvement of muscle quality for example, slowing down of muscles
  • the amount of mitochondria in the muscle can be increased by improving muscle quality (for example, slowing the muscle). That is, the effect based on improvement of muscle quality (for example, slowing down of muscle) includes the effect of increasing the amount of mitochondria in muscle.
  • the amount of mitochondria in muscle can be measured, for example, by measuring the amount of mitochondrial DNA in muscle or citrate synthase (CS) activity in muscle. That is, for example, when the amount of mitochondrial DNA in muscle or the CS activity in muscle increases, it may be determined that the amount of mitochondria in muscle has increased.
  • CS activity can be measured, for example, using a CS activity measurement kit such as Citrate Synthase Assay Kit ab239712 (abcam).
  • the target's body composition can be improved by improving muscle quality (for example, by slowing down the twitch muscles).
  • the subject's endurance can be improved by improving muscle quality (for example, by slowing down the twitch muscles).
  • muscle quality for example, slowing the muscle
  • the subject's endurance and/or the subject's metabolism can be improved.
  • muscle quality for example, slowing down the muscles
  • the target's muscle strength can be improved by improving muscle quality (for example, by making the muscles slower-twitch).
  • muscle quality for example, by making the muscles slower-twitch muscles
  • the target's muscle strength can be improved.
  • the target's walking speed can be improved by improving muscle quality (for example, slowing down the muscles).
  • effects based on improving muscle quality include improving body composition, improving endurance, improving metabolism, improving balance ability, and increasing muscle strength.
  • Body composition for example, muscle mass and fat mass
  • Body composition analyzer such as the body composition analyzer EchoMRI-100 (manufactured by Nippon Raytec Co., Ltd.).
  • Body composition can be measured using a body composition analyzer such as the body composition analyzer EchoMRI-100 (manufactured by Nippon Raytec Co., Ltd.).
  • Body composition can be measured using a body composition analyzer such as the body composition analyzer EchoMRI-100 (manufactured by Nippon Raytec Co., Ltd.).
  • Body composition for example, muscle mass and fat mass
  • EchoMRI-100 manufactured by Nippon Raytec Co., Ltd.
  • the effects of increasing the amount of mitochondria in muscles, improving body composition, improving endurance, improving metabolism, tightening the body, and improving basic physical strength are all This may be an effect based on improved energy metabolism.
  • the effect of improving balance ability, the effect of improving muscle strength, the effect of improving walking speed, the effect of improving training effect, and the effect of improving rehabilitation effect are all based on the improvement of muscle strength. could be.
  • the subject's body can be toned, for example, by improving muscle quality (for example, slowing down the muscles), particularly by improving body composition and/or improving metabolism. It also improves the basic physical strength of subjects, such as those with insufficient exercise, by improving muscle quality (e.g. slow-twitch muscles), in particular by increasing endurance, improving metabolism, and/or increasing muscle strength. It is hoped that this will be possible. Specifically, for example, if the amount of mitochondria in the muscle increases due to an increase in the amount of slow-twitch muscles, the subject's endurance, metabolism, and/or muscle strength will improve, thereby improving the subject's basic physical fitness. It is hoped that this will be possible. In addition, improved muscle quality (e.g.
  • slow-twitching of muscles can improve training effectiveness in subjects such as exercise enthusiasts and athletes, in particular by improving endurance, improving metabolism, and/or increasing muscle strength. It is hoped that this can be improved.
  • muscle quality e.g. slow-twitching muscles
  • muscle strength and/or walking speed it improves rehabilitation effects for subjects, for example, subjects with movement disorders such as gait disorders. It is hoped that this will be possible.
  • muscle quality for example, making muscles slower
  • improving metabolism it will be possible, for example, to regulate the body temperature of a subject (for example, to maintain or increase body temperature).
  • muscle quality e.g., slow-twitching of muscles
  • metabolism for example, regulating the blood sugar level of the subject (e.g., lowering blood sugar level or suppressing the increase in blood sugar level)
  • sarcoplasm e.g., slow-twitching muscles
  • metabolism e.g., regulating the blood lipid concentration of a subject (e.g., reducing blood lipid concentration or It is expected that it will be possible to suppress the increase in concentration.
  • the effects based on improving muscle quality include the effect of tightening the body, the effect of improving basic physical strength, the effect of improving training effect, the effect of improving rehabilitation effect, and the effect of improving the target's body temperature. , the effect of regulating the target's blood sugar level, and the effect of regulating the target's blood lipid concentration.
  • “Training” may mean physical training.
  • “Rehabilitation” may mean rehabilitation of physical function.
  • Improving muscle quality is expected to prevent, improve, and/or treat undesirable muscle-related symptoms in a subject, for example. That is, effects based on improvement of muscle quality (for example, slowing down of muscles) include effects of preventing, improving, and/or treating undesirable muscle-related symptoms.
  • Undesirable muscle-related symptoms may or may not be a disease. Undesirable muscle-related symptoms may develop or progress due to any cause, such as genetic factors, acquired factors, or aging.
  • Undesirable muscle-related symptoms include symptoms related to muscle atrophy and/or muscle weakness.
  • Muscle atrophy may refer to a decrease in the absolute mass of muscle. Muscle atrophy includes skeletal muscle atrophy. Muscle atrophy specifically includes slow-twitch and/or fast-twitch atrophy. Muscle atrophy particularly includes slow muscle atrophy. Muscle atrophy may, for example, result in decreased muscle strength. In other words, muscle weakness may be due to muscle atrophy, for example.
  • Symptoms related to muscle atrophy and/or muscle weakness include symptoms caused by muscle atrophy and/or muscle weakness and symptoms accompanied by muscle atrophy and/or muscle weakness. Note that symptoms related to muscle atrophy and/or muscle weakness include muscle atrophy itself and muscle weakness itself.
  • Undesirable muscle-related symptoms include, specifically, disuse muscle atrophy, neurogenic muscle atrophy, and myogenic muscle atrophy.
  • disuse muscle atrophy include muscle atrophy due to aging (sarcopenia) and muscle atrophy due to lack of muscle use.
  • Lack of muscle use includes reasons such as being bedridden, not exercising, flying in zero gravity, and immobilizing the body. Immobilization of the body includes immobilization of limbs carried out in the treatment of injuries and the like.
  • Neurogenic muscular atrophy includes amyotrophic lateral sclerosis (ALS), primary lateral sclerosis (PLS), spinal muscular atrophy (SMA), These include spinal and bulbar muscular atrophy (SBMA), acute poliomyelitis (poliomyelitis), and Guillain-Barre syndrome (GBS).
  • myogenic muscle atrophy include muscular dystrophy and polymyositis (PM).
  • undesirable muscle-related conditions include myasthenia gravis (MG), cachexia, and frailty. (frailty), locomotive syndrome (locomotive syndrome), and metabolic syndrome.
  • undesirable muscle-related symptoms include, specifically, a decrease in basic physical strength and a decrease in walking speed.
  • a decrease in basic physical strength or a decrease in walking speed may be due to aging or lack of muscle use, for example.
  • undesirable symptoms related to muscles include symptoms related to posture.
  • Posture-related symptoms include symptoms caused by poor posture.
  • Undesirable muscle-related symptoms include lower back pain, stiff shoulders, and headaches.
  • Undesirable muscle-related symptoms also include symptoms related to mitochondrial function or metabolism. Symptoms related to mitochondrial function or metabolism include symptoms caused by insufficient or reduced mitochondrial function and symptoms caused by insufficient or reduced metabolism. Undesirable muscle-related symptoms (eg, symptoms related to mitochondrial function or metabolism) include hyperglycemia, hyperlipidemia, vascular disorders, hypothermia, sensitivity to cold, and metabolic syndrome. vascular disorders include arteriosclerosis. Prevention, amelioration, and/or treatment of vascular disorders may be, for example, by prevention, amelioration, and/or treatment of hyperglycemia and/or hyperlipidemia. Prevention, amelioration, and/or treatment of vascular disorders may, for example, improve blood flow.
  • Improving muscle quality may result in one of the effects based on improving muscle quality (e.g., slow-twitching muscles) as exemplified above. Two or more of the effects based on the improvement of muscle quality (for example, slow muscle twitching) may be obtained.
  • the active ingredient may or may not be used in combination with other techniques that can achieve the effects exemplified above, such as muscle quality improvement effects.
  • Such techniques include performing physical exercises.
  • the subject to whom the active ingredient is administered may carry out physical exercise.
  • physical exercise include sports and training.
  • Specific examples of physical exercise include aerobic exercise such as walking, jogging, yoga, and swimming, and anaerobic exercise (muscle training) such as weight training, squats, and push-ups.
  • the effects of the active ingredient (for example, the above-mentioned effects such as improving muscle quality) can be further enhanced compared to when the active ingredient is used alone. May be enhanced.
  • the effects of such other techniques will be enhanced compared to when such other techniques are used alone. (effects as exemplified above) may be further enhanced.
  • the active ingredient in combination with such other techniques compared to the case where the active ingredient is used alone, for example, the effect of improving muscle strength, the effect of improving balance ability, the effect of improving training effect, The effect of improving the rehabilitation effect and/or the effect of improving walking speed may be further enhanced.
  • muscle strength may be improved earlier, for example, than when the active ingredient is used alone.
  • muscle strength may be maintained at a higher level than when the active ingredient is used alone.
  • the active ingredient may be used for therapeutic or non-therapeutic purposes. That is, all of the effects exemplified above, such as the effect of improving muscle quality, may be obtained for therapeutic purposes or non-therapeutic purposes, unless otherwise specified.
  • “Therapeutic purpose” may mean, for example, a concept that includes medical treatment, and specifically, a concept that includes treatment of the human body through treatment.
  • Non-therapeutic purpose may mean, for example, a concept that does not include medical treatment, and specifically, may mean a concept that does not include therapeutic treatment of the human body.
  • Non-therapeutic purposes include health promotion purposes.
  • Prevention of symptoms may mean, for example, preventing or delaying the onset of symptoms, or reducing the likelihood of onset of symptoms.
  • Treatment of symptoms may mean, for example, amelioration of symptoms, prevention or delay of worsening of symptoms, or prevention or delay of progression of symptoms.
  • Immprovement of symptoms may be a general term for these events that are not intended for treatment.
  • Treatment of symptoms may be a general term for these events that are intended for treatment.
  • Choline compounds collectively refers to choline and its surrounding metabolites.
  • Examples of choline compounds include sn-glycero-3-phosphocholine ( ⁇ GPC), citicoline, choline, choline phosphate, phosphocholine, phosphatidylcholine, sphingomyelin, and serine.
  • Choline compounds include ⁇ GPC, citicoline, and serine, among others. More particularly, choline compounds include ⁇ GPC.
  • As the choline compound one type of component may be used, or two or more types of components may be used in combination.
  • serine may be in the D-form, L-form, or a combination thereof.
  • the ratio of D-form and L-form in the combination is not particularly limited.
  • the proportion of the D-form or L-form in the combination may be, for example, 20-80%, 30-70%, 40-60%, or 45-55% in molar ratio.
  • Serine may especially be in the L-configuration.
  • D-form or L-form serine is selected, it is sufficient to use D-form or L-form serine as an active ingredient, and L-form or D-form serine may also be used in combination. It does not prevent
  • the active ingredient When the active ingredient can form a salt, the active ingredient may be used as a free form, as a salt, or as a combination thereof. That is, the term “active ingredient” may mean the active ingredient in free form, or a salt thereof, or a combination thereof, unless otherwise specified. "Free form” means a form that does not form a salt. Furthermore, when the active ingredient can form a hydrate, the active ingredient may be used as a non-hydrate, a hydrate, or a combination thereof. That is, the term “active ingredient” (eg, “free active ingredient” or “salt of the active ingredient”) may include non-hydrates and hydrates, unless otherwise specified. The active ingredient may be in any form such as an ion when used.
  • the salt is not particularly limited as long as it is acceptable depending on the usage of the active ingredient.
  • the salt when the active ingredient is orally ingested, the salt is not particularly limited as long as it can be orally ingested.
  • salts for acidic groups such as carboxyl groups include ammonium salts, salts with alkali metals such as sodium and potassium, salts with alkaline earth metals such as calcium and magnesium, aluminum salts, and zinc salts.
  • salts with organic amines such as triethylamine, ethanolamine, morpholine, pyrrolidine, piperidine, piperazine and dicyclohexylamine, and salts with basic amino acids such as arginine and lysine.
  • salts for basic groups such as amino groups include salts with inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, nitric acid, and hydrobromic acid, acetic acid, citric acid, benzoic acid, Maleic acid, fumaric acid, tartaric acid, succinic acid, tannic acid, butyric acid, hibenzic acid, pamoic acid, enanthic acid, decanoic acid, theocolic acid, salicylic acid, lactic acid, oxalic acid, mandelic acid, malic acid, methylmalonic acid, adipic acid
  • Examples include salts with organic carboxylic acids such as, and salts with organic sulfonic acids such as methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, and p-toluenesulfonic acid.
  • the salt one type of salt may be used, or two or more types of salts may be used in combination.
  • the active ingredient a commercially available product may be used, or one obtained by appropriately manufacturing may be used.
  • the method for producing the active ingredient is not particularly limited.
  • the active ingredient can be produced, for example, by chemical synthesis, enzymatic reaction, fermentation methods, extraction methods, or a combination thereof.
  • the active ingredient may or may not be purified to the desired degree. That is, as the active ingredient, a purified product may be used, or a material containing the active ingredient may be used.
  • Examples of active ingredients include, for example, active ingredient content of 1% (w/w) or more, 5% (w/w) or more, 10% (w/w) or more, 30% (w/w) or more, 50% (w/w) or more. % (w/w) or more, 70 % (w/w) or more, 90 % (w/w) or more, or 95 % (w/w) or more may be used.
  • the amount of active ingredients e.g. content (concentration) and usage amount
  • the amount of active ingredients shall be calculated based on the amount of the active ingredients themselves in the material. do.
  • the amount of the active ingredient e.g., content (concentration) or amount used
  • composition of the present invention is a composition containing an active ingredient (ie, a choline compound).
  • composition of the present invention can be used by administering it to a subject, for example.
  • the composition of the present invention (eg, the composition of the present invention to be utilized by administering to a subject) may be, for example, a pharmaceutical composition, a food composition, or a feed composition.
  • the compositions of the present invention which are pharmaceutical compositions, food compositions, or feed compositions, are referred to as "pharmaceutical compositions of the present invention," "food compositions of the present invention,” and “feed compositions of the present invention,” respectively. Also called.
  • the composition of the present invention can be administered to a subject, for example, in the manner described in the method of the present invention described below.
  • composition of the present invention may be administered to a subject in order to obtain the effects exemplified above, such as the effect of improving muscle quality.
  • compositions of the present invention may be used in conjunction with such techniques.
  • Compositions of the invention may be used in conjunction with, for example, performing physical exercise.
  • a subject to whom a composition of the invention is administered may engage in physical exercise.
  • “Pharmaceutical composition” may mean a composition used for pharmaceutical purposes, and specifically may mean a composition administered to a subject as a pharmaceutical.
  • the term “pharmaceutical composition” may be used interchangeably or equivalently with the term “medicament.”
  • the pharmaceutical composition may be for oral or parenteral administration.
  • Food composition may mean a composition used for food purposes, and specifically may mean a composition for human consumption.
  • the food composition may be, for example, a food or a food additive.
  • Food additive may mean a composition that is added to food. Food additives may be added, for example, when eating food. Food additives may be used, for example, as food raw materials in the production of foods. Food also includes beverages. Foods also include seasonings. Foods are not limited to general foods, but also include so-called health foods or medical foods such as nutritional supplements, functional foods, and foods for specified health uses.
  • Feed composition may mean a composition used for feed purposes, and specifically may mean a composition ingested by organisms other than humans.
  • the feed composition may be, for example, a feed or a feed additive.
  • “Feed additive” may mean a composition that is added to feed. Feed additives may be added, for example, at the time of feeding the feed. Feed additives may be used, for example, as feed ingredients in the production of feed.
  • the composition of the present invention can be used, for example, to culture animal cells. That is, the composition of the present invention may be, for example, a composition for animal cell culture.
  • the composition of the present invention which is a composition for animal cell culture, is also referred to as "the composition for animal cell culture of the present invention.”
  • the composition of the present invention can be used for culturing animal cells, for example, in the manner described in the method of the present invention described below.
  • animal cells cultured using the composition of the present invention the description regarding animal cells in the "method of the present invention” can be applied mutatis mutandis.
  • the composition of the present invention may be used, for example, in culturing animal cells in order to obtain the effects exemplified above, such as the effect of improving muscle quality.
  • the composition for animal cell culture may be, for example, a medium.
  • the culture medium include basal medium, feed medium, and perfusion medium.
  • Basal medium may mean the medium at the start of culture.
  • the basal medium is also referred to as the "initial medium.”
  • a "fed-batch medium” may mean a medium that is supplied to a culture system after the start of culture in fed-batch culture.
  • Perfusion medium may mean a medium that is supplied to a culture system after the start of culture in continuous culture (this is not limited to perfusion culture).
  • the composition for animal cell culture may be, for example, a medium additive.
  • a "medium additive” may refer to a composition that is added to a culture medium. Examples of the medium to which medium additives are added include basal medium, fed-batch medium, and perfusion medium.
  • the composition of the present invention it is possible to improve muscle quality (for example, to make muscles slow-twitch), that is, a muscle quality-improving effect (for example, slow-twitch muscle slowing effect) can be obtained.
  • a muscle quality improving effect for example, a slow muscle slowing effect
  • an effect of improving muscle quality e.g., slow-twitching effect
  • the muscle tissue e.g., cultured meat formed by the cultured cells. It's fine.
  • the composition of the present invention (for example, a food composition, a pharmaceutical composition, a feed composition, or a composition for animal cell culture) is a composition for improving muscle quality (for example, a composition for slowing muscle). It may be.
  • effects based on improvement of muscle quality may be obtained.
  • an effect based on improvement of muscle quality for example, slowing down of muscles
  • the composition of the present invention may be a composition for obtaining an effect based on improving muscle quality (for example, slowing down muscles).
  • a composition for obtaining an effect based on improving muscle quality may be an example of a composition for improving muscle quality (for example, a composition for slowing down muscles).
  • compositions for obtaining effects based on improving muscle quality include compositions for increasing the amount of mitochondria in muscles, compositions for improving body composition, compositions for improving endurance, and compositions for improving metabolism.
  • composition for improving balance ability includes compositions for improving muscle strength, composition for improving walking speed, composition for tightening the body, composition for improving basic physical strength, composition for improving training effect, composition for improving rehabilitation effect
  • Examples include compositions for regulating body temperature, compositions for regulating blood sugar levels, compositions for regulating blood lipid levels, and compositions for preventing, improving, and/or treating undesirable symptoms related to muscles.
  • composition of the present invention may consist of an active ingredient or may contain ingredients other than the active ingredient. Ingredients other than the active ingredient are also referred to as "additional ingredients.” As the additional component, one type of component may be used, or two or more types of components may be used in combination.
  • Additional components are not particularly limited as long as they do not impair the purpose of the present invention. Additional components can be selected as appropriate depending on various conditions such as the type of the composition of the present invention and how it is used. Additional components include components included in pharmaceuticals, ingredients included in foods, ingredients included in feed, and culture medium components.
  • composition of the present invention can be produced, for example, by appropriately mixing the active ingredient and optionally additional ingredients.
  • composition of the present invention may be formulated as appropriate, for example.
  • additives for example, physiologically and/or pharmacologically acceptable additives
  • Additives include excipients, binders, disintegrants, lubricants, stabilizers, flavoring agents, diluents, surfactants, and solvents.
  • the additives can be appropriately selected depending on various conditions such as the type of the composition of the present invention and how it is used.
  • Excipients include sugars or derivatives thereof such as lactose, sucrose, glucose, mannitol, and sorbitol; starches or derivatives thereof such as corn starch, potato starch, ⁇ -starch, dextrin, and carboxymethyl starch; crystalline cellulose, hydroxypropyl cellulose Cellulose or its derivatives such as , hydroxypropyl methyl cellulose, carboxy methyl cellulose, carboxy methyl cellulose calcium; Polysaccharides such as gum arabic, dextran, pullulan; Silicates such as light anhydrous silicic acid, synthetic aluminum silicate, magnesium aluminate metasilicate; Phosphorus such as calcium phosphate Examples include acid salts; carbonates such as calcium carbonate; and sulfates such as calcium sulfate.
  • sugars or derivatives thereof such as lactose, sucrose, glucose, mannitol, and sorbitol
  • starches or derivatives thereof such as corn starch, potato star
  • binders include gelatin, polyvinylpyrrolidone, and macrogol.
  • disintegrants include croscarmellose sodium, sodium carboxymethyl starch, and crosslinked polyvinylpyrrolidone.
  • lubricants include talc; stearic acid; stearates such as calcium stearate and magnesium stearate; lauryl sulfates such as sodium lauryl sulfate and magnesium lauryl sulfate; and waxes such as carnauba wax.
  • the stabilizer examples include paraoxybenzoic acid esters such as methylparaben and propylparaben; alcohols such as chlorobutanol, benzyl alcohol, and phenylethyl alcohol; benzalkonium chloride; acetic anhydride; and sorbic acid.
  • flavoring agents examples include sweeteners, acidulants, and fragrances.
  • the shape of the composition of the present invention is not particularly limited.
  • the shape of the composition of the present invention can be appropriately selected depending on various conditions such as the type of the composition of the present invention and how it is used.
  • the compositions of the invention may be in any form, such as powders, granules, flakes, tablets, capsules, pastes, liquids, etc.
  • the dosage form of the pharmaceutical composition includes solid preparations such as powders, granules, tablets, and capsules, and liquid preparations such as solutions, syrups, suspensions, and emulsions.
  • the dosage form of the pharmaceutical composition includes, in the case of parenteral administration, solid preparations such as suppositories and ointments, and liquid preparations such as injections.
  • the content and content ratio of each component (that is, the active component and optionally additional components) in the composition of the present invention are not particularly limited as long as desired effects such as muscle quality improvement effects are obtained.
  • the content and content ratio of each component in the composition of the present invention can be appropriately set, for example, depending on various conditions such as the type of the composition of the present invention and how it is used.
  • the content of the active ingredient in the composition of the present invention is more than 0% (w/w) and less than 100% (w/w).
  • the content of the active ingredient in the composition of the present invention is, for example, 100 ppm (w/w) or more, 200 ppm (w/w) or more, 500 ppm (w/w) or more, 1000 ppm (w/w) or more , 2000 ppm (w/w) or more, 5000 ppm (w/w) or more, 1 % (w/w) or more, 2 % (w/w) or more, 5 % (w/w) or more, 10 % (w) /w) or more, 20 % (w/w) or more, 30 % (w/w) or more, 50 % (w/w) or more, or 70 % (w/w) or more, and 100 % ( w/w) or less, less than 100% (w/w), 99.9% (w/w) or less, 90% (w/w
  • the content of the active ingredient in the composition of the present invention is, for example, 100 ppm (w/w) to 1000 ppm (w/w), 1000 ppm (w/w) to 1% (w/w ), 1%(w/w) to 10%(w/w), 10%(w/w) to 30%(w/w), 30%(w/w) to 50%(w/w), It may be 50%(w/w) to 70%(w/w), or 70%(w/w) to 99.9%(w/w).
  • the content of the active ingredient in the composition of the present invention is, for example, 100 ppm (w/w) to 99.9 % (w/w), 200 ppm (w/w) to 99.9 % (w/w) ), 500 ppm(w/w) ⁇ 99.9 %(w/w), 1000 ppm(w/w) ⁇ 99.9 %(w/w), 1 %(w/w) ⁇ 99.9 %(w/w), 100 ppm(w/w) to 50%(w/w), 100 ppm(w/w) to 10%(w/w), 100 ppm(w/w) to 1%(w/w), 1000 ppm (w/w) ⁇ 50 % (w/w), 1000 ppm (w/w) ⁇ 10 % (w/w), 1000 ppm (w/w) ⁇ 1 % (w/w), 1 % (w) /w) to 50%(w/w), or 1%(w/w/w
  • composition of the present invention contains two or more cholinergic compounds (i.e., two or more active ingredients), the inclusion of those two or more cholinergic compounds in the composition of the present invention
  • the amounts may be set individually or in total within the range of the content of the active ingredients in the composition of the present invention exemplified above (however, the content of the two or more choline derivatives in the composition of the present invention) The total content of compounds is not more than 100% (w/w)).
  • the "content of active ingredients in the composition of the present invention" refers to the content of those two or more choline compounds in the composition of the present invention, unless otherwise specified. shall mean the total content of species or more choline compounds.
  • each component i.e., the active ingredient and optionally additional components
  • the content of each component (i.e., the active ingredient and optionally additional components) in the composition of the present invention is set such that, for example, the dosage of each component to the subject in the method of the present invention described below is obtained. be able to.
  • each component i.e., the active ingredient and optionally additional components
  • the content of each component (i.e., the active ingredient and optionally additional components) in the composition of the present invention is set such that, for example, the concentration of each component in the medium in the method of the present invention described below is obtained. be able to.
  • compositions of the present invention may be contained in the composition of the present invention mixed with each other, each separately, or in any combination. may be separately contained in the composition of the present invention.
  • the compositions of the invention may be provided as a set of each component, each packaged separately. In such cases, the components included in the set can be used in combination as appropriate.
  • the composition of the present invention is for improving muscle quality, slowing down muscles, increasing the amount of mitochondria in muscles, improving body composition, improving endurance, improving metabolism, improving balance ability, improving muscle strength, For improving walking speed, toning the body, improving basic physical strength, improving training effects, improving rehabilitation effects, regulating body temperature, regulating blood sugar levels, regulating blood lipid concentration, preventing undesirable symptoms related to muscles.
  • the product may be provided as a product labeled with uses such as those exemplified above, such as for improvement, treatment, and/or treatment.
  • “Indication of use” includes all acts to inform consumers of the use.
  • “Indication of usage” is not limited to directly displaying the usage, but also includes displaying expressions that may remind or analogize the usage to the consumer.
  • Examples of expressions that can make consumers think of or analogize to the usages exemplified above include “athletes,” “sports enthusiasts,” “people who lack exercise,” and “people who are concerned about muscle weakness.” Examples include expressions related to recipients such as ⁇ those who are concerned about decline in endurance''.
  • the method of the present invention includes a step of utilizing an active ingredient (ie, a choline compound).
  • the active ingredient can be utilized by administering it to a subject, for example. That is, the method of the present invention may include, for example, a step of administering an active ingredient (ie, a cholinergic compound) to a subject. This process is also referred to as the "administration process.”
  • an active ingredient ie, a cholinergic compound
  • the active ingredient can be used, for example, in culturing animal cells. That is, the method of the present invention may include, for example, a step of culturing animal cells in the presence of an active ingredient (ie, a cholinergic compound). This process is also referred to as a "culture process.” Furthermore, the method of the present invention may be, for example, a method of culturing animal cells.
  • an active ingredient ie, a cholinergic compound
  • This process is also referred to as a "culture process.”
  • the method of the present invention may be, for example, a method of culturing animal cells.
  • muscle quality can be improved (e.g., slow-twitching muscles), that is, muscle quality-improving effects (e.g., slow-twitching effects). ) is obtained.
  • an effect of improving muscle quality for example, a slowing muscle slowing effect
  • an effect of improving muscle quality for example, slow-twitching effect
  • muscle tissue eg, cultured meat
  • the method of the present invention may be a method of improving muscle quality (for example, a method of slowing down muscles).
  • effects based on improvement of muscle quality may be obtained.
  • an effect based on improvement of muscle quality may be obtained in the subject.
  • the method of the present invention may be a method for obtaining effects based on improvement of muscle quality (for example, slowing down of muscles).
  • a method for obtaining an effect based on improving muscle quality may be an example of a method for improving muscle quality (for example, a method for slow-twitching a muscle).
  • Methods to obtain effects based on improving muscle quality include increasing the amount of mitochondria in muscles, improving body composition, improving endurance, and improving metabolism.
  • method how to improve balance ability, how to improve muscle strength, how to improve walking speed, how to tighten the body, how to improve basic physical strength, how to improve training effect, how to improve rehabilitation effect, how to improve body temperature.
  • muscle tissue may be produced by culturing animal cells. That is, muscle tissue may be formed by cultured cells, and muscle tissue may be manufactured using the cultured cells. Examples of muscle tissue include cultured meat. That is, the method of the present invention (for example, a method for culturing animal cells) may be a method for producing muscle tissue (for example, cultured meat). Cultured meat may consist of muscle tissue or may contain other tissues. Other tissues include adipose tissue. The produced muscle tissue (eg, cultured meat) may be muscle tissue (eg, cultured meat) with improved muscle quality.
  • administering an active ingredient to a subject can be used interchangeably or equivalently with the term "causing a subject to ingest an active ingredient.”
  • the intake of the active ingredient may be voluntary (ie free intake) or forced (ie forced intake). That is, the administration step may be, for example, a step of supplying the active ingredient (which may be incorporated into food or feed) to the subject and allowing the subject to freely ingest the active ingredient.
  • Administration may be oral or parenteral. Administration may particularly be oral. Parenteral administration includes injection, tube administration, intrarectal administration, and intranasal administration.
  • the mode of administration of the active ingredient (for example, administration subject, administration timing, administration period, administration frequency, administration amount, and other administration conditions) is not particularly limited as long as the desired effect such as muscle quality improvement effect is obtained.
  • the mode of administration of the active ingredient can be appropriately determined depending on various conditions such as the type, age, and health condition of the subject to be administered.
  • the subject to which the active ingredient is administered is not particularly limited as long as the desired effect, such as the effect of improving muscle quality, can be obtained.
  • subjects to which the active ingredient is administered include mammals. Mammals include humans, primates such as monkeys and chimpanzees, rodents such as mice, rats, hamsters, and guinea pigs, and other mammals such as rabbits, horses, cows, sheep, goats, pigs, dogs, and cats. can be mentioned. Mammals include in particular humans.
  • the conditions of the subject to whom the active ingredient is administered are not particularly limited as long as the desired effect, such as the effect of improving muscle quality, can be obtained.
  • the subject to whom the active ingredient is administered may be a male or female subject.
  • the subject to whom the active ingredient is administered may be, for example, a subject of any age, such as an infant, a child, an adult, a middle-aged or elderly person, or an elderly person.
  • the subject to whom the active ingredient is administered may be, for example, a healthy subject or an unhealthy subject. Unhealthy subjects include those exhibiting undesirable muscle-related symptoms.
  • the subject to whom the active ingredient is administered may or may not be a person who engages in physical exercise other than daily activities, such as athletes and sports enthusiasts.
  • the dosage of the active ingredient is, for example, 0.01 mg/kg body weight/day or more, 0.02 mg/kg body weight/day or more, 0.05 mg/kg body weight/day or more, 0.1 mg/kg body weight/day or more, 0.2 mg/kg body weight /day or more, 0.5 mg/kg bw/day or more, 1 mg/kg bw/day or more, 2 mg/kg bw/day or more, 5 mg/kg bw/day or more, 10 mg/kg bw/day or more, 20 mg/kg body weight/day or more, 50 mg/kg body weight/day or more, 100 mg/kg body weight/day or more, 200 mg/kg body weight/day or more, or 500 mg/kg body weight/day or more, 1000 mg/kg bw/day or less, 500 mg/kg bw/day or less, 200 mg/kg bw/day or less, 100 mg/kg bw/day or less, 50 mg/kg bw/day or less, 20 mg/kg body
  • the dosage of the active ingredient is, for example, 0.01 to 0.02 mg/kg body weight/day, 0.02 to 0.05 mg/kg body weight/day, 0.05 to 0.1 mg/kg body weight/day, 0.1 to 0.2 mg/kg. body weight/day, 0.2-0.5 mg/kg body weight/day, 0.5-1 mg/kg body weight/day, 1-2 mg/kg body weight/day, 2-5 mg/kg body weight/day, 5-10 mg/kg body weight/day, 10-20 mg/kg body weight/day, 20-50 mg/kg body weight/day, 50-100 mg/kg body weight/day, 100-200 mg/kg body weight/day, 200-500 mg/kg body weight/day, or 500-1000 mg/kg body weight/day.
  • the dosage of the active ingredient may specifically be, for example, 0.01-1000 mg/kg body weight/day, 0.05-200 mg/kg body weight/day, or 0.2-50 mg/kg body weight/day.
  • the dosage of the two or more cholinergic compounds each independently or in combination
  • the dosage range of the active ingredient may be set as exemplified above.
  • the "dose of active ingredient" shall mean the total amount of the two or more cholinergic compounds unless otherwise specified. do.
  • the administration period of the active ingredient is, for example, 1 day or more, 3 days or more, 1 week or more, 2 weeks or more, 4 weeks or more, 2 months or more, 3 months or more, 4 months or more, 6 months or more, 9 months or more, or The period may be 12 months or more, 10 years or less, 5 years or less, 1 year or less, or 6 months or less, or any consistent combination thereof.
  • the active ingredient may be administered, for example, throughout the subject's life, or during a portion of the subject's life.
  • the active ingredient may be administered, for example, at least until a desired effect, such as an effect of improving muscle quality, is achieved.
  • the active ingredient may be administered, for example, daily or once every few days.
  • the active ingredient may in particular be administered daily.
  • the dose of the active ingredient at each administration may or may not be constant.
  • the active ingredient may be administered to the subject as it is, or it may be prepared as a composition containing the active ingredient, such as a pharmaceutical composition, a food composition, or a feed composition, and then administered to the subject.
  • the description of the composition of the present invention can be applied mutatis mutandis to the composition containing the active ingredient.
  • the active ingredients may be administered alone or in combination with additional ingredients. Additional ingredients include pharmaceuticals, foods, feeds, and ingredients contained therein.
  • the description of the additional components contained in the composition of the present invention can be applied mutatis mutandis to the additional components used in the method of the present invention.
  • the active ingredient can also be administered to a subject, for example, using the composition of the present invention (specifically, by administering the composition of the present invention to the subject). That is, one embodiment of the method of the present invention may be a method comprising administering the composition of the present invention to a subject. That is, "administration of an active ingredient" also includes administration of the composition of the present invention.
  • the mode of administration of the composition of the present invention e.g., subject to administration, timing of administration, period of administration, number of administrations, amount, and other conditions related to administration
  • the mode of administration of the composition of the present invention can be appropriately determined depending on conditions such as the type, age, and health condition of the subject to be administered.
  • the description regarding the administration mode of the active ingredient can be applied mutatis mutandis. That is, the composition of the present invention may be administered, for example, to subjects such as those exemplified above. Further, the dosage of the composition of the present invention may be determined, for example, so as to obtain the dosage of the active ingredient as exemplified above. Additionally, the compositions of the invention may be administered alone or in combination with additional components.
  • the active ingredient may or may not be used in combination with other techniques that can achieve the effects exemplified above, such as muscle quality improvement effects. Accordingly, the methods of the invention may be used in conjunction with such techniques. In other words, such techniques may be implemented in the method of the invention.
  • the method of the invention may be used in conjunction with, for example, performing physical exercise. In other words, in the method of the invention, for example, physical exercise may be performed, ie the subject to whom the active ingredient is administered may perform physical exercise.
  • Animal cells are not particularly limited as long as they can form muscle tissue by culturing.
  • “Animal cells can form muscle tissue when cultured” may mean that animal cells can differentiate into muscle tissue when cultured, and specifically, animal cells can differentiate into myotube cells and muscle tissue when cultured. It may mean the ability to form an organization.
  • Examples of animal cells include stem cells such as mesenchymal stem cells, embryonic stem cells (ES cells), and induced pluripotent stem cells (iPS cells), and myoblasts. Examples of animals include mammals.
  • Mammals include humans, primates such as monkeys and chimpanzees, rodents such as mice, rats, hamsters, and guinea pigs, and other mammals such as rabbits, horses, cows, sheep, goats, pigs, dogs, and cats. can be mentioned.
  • rodents such as mice, rats, hamsters, and guinea pigs
  • other mammals such as rabbits, horses, cows, sheep, goats, pigs, dogs, and cats. can be mentioned.
  • examples of mammals include meat animals such as cows and pigs.
  • Culturing of animal cells is carried out in the presence of the active ingredient.
  • “Culture of animal cells is carried out in the presence of an active ingredient” may mean, for example, that the medium used for culturing animal cells contains the active ingredient.
  • “Culture of animal cells is carried out in the presence of an active ingredient” may mean, for example, that an active ingredient is supplied to the culture system during culturing of animal cells.
  • Culturing of animal cells may be carried out using, for example, the composition of the present invention.
  • the animal cells can be cultured in the presence of the active ingredient.
  • the composition of the present invention may be used, for example, as a culture medium for culturing animal cells. That is, for example, when the composition of the present invention is a medium, animal cells may be cultured with the composition of the present invention (ie, the medium). That is, "cultivating animal cells using the composition of the present invention” may mean, for example, culturing animal cells with the composition of the present invention, which is a medium.
  • the composition of the present invention may be used, for example, as a medium additive in culturing animal cells.
  • the composition of the present invention when the composition of the present invention is a medium additive, the composition of the present invention (i.e., the medium additive) is added to the medium, and animal cells are cultured in the medium to which the composition of the present invention has been added. It's fine. That is, "culturing animal cells using the composition of the present invention” means, for example, adding the composition of the present invention, which is a medium additive, to a medium, and culturing animal cells in the medium to which the composition of the present invention has been added. It may mean cultivating.
  • the medium composition and culture conditions are not particularly limited, as long as muscle tissue is formed by the cultured cells, except that the culture is carried out in the presence of the active ingredient.
  • the medium composition and culture conditions can be appropriately set depending on various conditions such as the type of animal cells, for example.
  • the culture may be carried out in the usual medium and conditions used for the formation of muscle tissue by differentiation of animal cells (for example, in the production of cultured meat), or alternatively, except that the culture is carried out in the presence of the active ingredient. It can be used and implemented with appropriate modifications.
  • Cultivation can be performed by batch culture, fed-batch culture, continuous culture, or a combination thereof.
  • Continuous culture includes perfusion culture and chemostat culture.
  • the medium at the start of culture is also referred to as "initial medium” or “basal medium.”
  • the medium supplied to the culture system (eg, starting medium) in fed-batch culture is also referred to as "feed medium.”
  • a medium supplied to a culture system (eg, starting medium) in continuous culture is also referred to as a “perfusion medium.”
  • supplying a fed-batch medium or a perfusion medium to a culture system in fed-batch culture or continuous culture is also simply referred to as "medium supply.”
  • Medium supply may be carried out throughout the entire period of culture, or may be carried out only during a part of the period of culture.
  • the medium supply may be carried out continuously or intermittently.
  • the culture solution may be withdrawn.
  • Withdrawal of the culture medium may be performed throughout the entire period of the culture, or may be performed only during a part of the period of the culture.
  • Withdrawing the culture solution may be performed continuously or intermittently.
  • the withdrawal of the culture solution and the supply of the culture medium may or may not be performed at the same time.
  • Cultivation may be performed three-dimensionally, for example, using a scaffold material that matches the shape of the muscle tissue to be formed (eg, cultured meat).
  • Cultivation can be carried out using, for example, a liquid medium.
  • the medium used for culture can be independently selected from, for example, a basal medium, a fed-batch medium, and a perfusion medium.
  • the medium used for culture may be a commercially available medium or an appropriately prepared medium.
  • the medium used for culture includes a medium containing essential components for culturing animal cells (for example, a carbon source, a nitrogen source, an inorganic salt, etc.).
  • a medium containing essential components for culturing animal cells for example, a carbon source, a nitrogen source, an inorganic salt, etc.
  • the media used for culture include Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), Ham's Nutrient Mixture F12, DMEM/F12 medium, McCoy's 5A medium, and minimal Minimum Essential Medium (MEM), Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM), alpha Modified Eagle's Minimum Essential Medium ( ⁇ MEM), Roswell Park Memorial Institute ( Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium, Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM), MCDB131 medium, William's Medium E, and Fischer's Medium.
  • DMEM Dulbecco's Modified Eagle's Medium
  • EM/F12 DMEM/F12 medium
  • McCoy's 5A medium McCoy's 5A medium
  • MEM minimal Minimum Essential Medium
  • EMEM Eagle's Minimum Essential Medium
  • ⁇ MEM alpha Modified Eagle's Minimum Essential Medium
  • RPMI Roswell Park Memorial Institute
  • IMDM Iscove's Modified Dulbecco
  • a culture medium for example, it may be a medium used particularly for culturing stem cells (especially pluripotent stem cells)), specifically, STEMPRO (registered trademark) hESC SFM medium (Life Technologies), mTeSR1 Medium (STEMCELL Technologies), TeSR2 medium (STEMCELL Technologies), TeSR-E8 medium (STEMCELL Technologies), Essential 8 medium (Life Technologies), HEScGRO (trademark) Serum-Free Medium for hES cells (Millipore), PluriSTEM(TM) Human ES/iPS Medium (EMD Millipore), NutriStem(R) hESC XF Medium (Biological Industries Israel Beit-Haemek), NutriStem(TM) XF/FF Culture Medium (Stemgent), AF NutriStem( (registered trademark) hESC XF medium (Biological Industries Israel Beit-Haemek), S-medium (DS Pharma Biomedical Co., Ltd.), StemFit (registered trademark) AK03N medium
  • CELLiST Basal Media BASAL3, BASAL4P, BASAL10 (Ajinomoto Co., Inc.), Opti-MEM (Thermo Fisher Scientific), RPMI 1640 (Thermo Fisher Scientific), CD293 (Thermo Fisher Scientific), CHO-S -SFMII (Thermo Fisher Scientific), CHO-SF (Sigma-Aldrich), EX-CELL CD CHO (Sigma-Aldrich), EX-CELLTM302 (Sigma-Aldrich), IS CHO-CD (Irvine Scientific), IS CHO-CDXP (Irvine Scientific) and other media for animal cell culture.
  • the medium as exemplified above may be used for culture by adding, for example, an active ingredient.
  • the medium used for culture may be, for example, the composition of the present invention (specifically, the composition of the present invention which is a medium). That is, when the composition of the present invention is a culture medium, the composition of the present invention may be used for culture as it is, or after being appropriately prepared as a liquid medium with a desired composition.
  • the composition of the present invention may be diluted with an aqueous medium such as water or an aqueous buffer to prepare a liquid medium, which may be used for culture.
  • the composition of the present invention may be used as one or more media selected from basal media, fed-batch media, and perfusion media.
  • the composition of the present invention may be used as one or both of the basal medium and the fed-batch medium.
  • the composition of the present invention may be used as one or both of the basal medium and the perfusion medium.
  • the medium used for culture may be, for example, a medium to which the composition of the present invention (specifically, the composition of the present invention as a medium additive) is added.
  • the medium to which the composition of the present invention is added may be a commercially available medium or an appropriately prepared medium.
  • the composition of the present invention may be used by being added to one or more media selected from basal media, fed-batch media, and perfusion media. That is, for example, in the case of fed-batch culture, the composition of the present invention may be used by being added to one or both of the basal medium and the fed-batch medium. Furthermore, for example, in the case of continuous culture, the composition of the present invention may be used by being added to one or both of the basal medium and the perfusion medium.
  • the medium may contain various medium components.
  • Media components include carbon sources, amino acid sources, peptides, proteins, vitamins, fatty acids, lipids, inorganic components, pH buffers, growth factors, cytokines, hormones, cell adhesion factors, extracellular matrix components, serum, antibiotics, and genes. Examples include expression inducers. Any such medium component may be essential or effective, for example, for the survival or growth of animal cells. Any of these medium components may, for example, be previously contained in the medium as exemplified above, or may be added to the medium as exemplified above.
  • carbon sources examples include sugars such as glucose, fructose, sucrose, and maltose.
  • amino acid sources include amino acids. Also, both peptides and proteins can be examples of amino acid sources.
  • Amino acids include glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, cysteine, methionine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, histidine, lysine, arginine, serine, threonine, aspartic acid, glutamic acid, asparagine, glutamine, proline, and ornithine.
  • the amino acid may be, for example, in the L form.
  • peptides examples include dipeptides and tripeptides. Specific examples of the peptide include glycylglycylglycine and soybean peptide. The description regarding amino acids can also be applied mutatis mutandis to amino acids constituting peptides.
  • proteins examples include albumin and transferrin.
  • vitamins examples include vitamin A, vitamin B1, vitamin B2, vitamin B3, vitamin B5, vitamin B6, vitamin B7, vitamin B9, vitamin B12, vitamin C, vitamin D, vitamin E, and vitamin K and their precursors. It will be done.
  • fatty acids examples include oleic acid, arachidonic acid, and linoleic acid.
  • lipids examples include cholesterol.
  • Inorganic components include sodium, potassium, calcium, magnesium, phosphorus, and various trace elements (e.g., Co, Cu, F, Fe, Mn, Mo, Ni, Se, Si, Ni, Bi, V, and Zn). It will be done.
  • Specific examples of the inorganic component include inorganic salts such as sodium chloride, potassium chloride, calcium chloride, magnesium sulfate, and sodium dihydrogen phosphate.
  • BES N,N-bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethanesulfonic acid
  • HEPES 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid
  • N-[tris(hydroxymethyl)methyl]glycine N- [tris(hydroxymethyl)methyl]glycine (tricine)).
  • Growth factors include fibroblast growth factor (FGF), hepatocyte growth factor (HGF), epidermal growth factor (EGF), and transforming growth factor (TGF)- ⁇ . , transforming growth factor (TGF)- ⁇ , vascular endothelial growth factor (VEGF), activin A, and insulin-like growth factor-1 (IGF-1).
  • FGF include basic fibroblast growth factor (bFGF).
  • Growth factors include in particular bFGF. That is, at least bFGF may be used as a medium component. That is, the medium may contain at least bFGF.
  • bFGF include bovine basic fibroblast growth factor (bbFGF).
  • Bovine basic fibroblast growth factor may refer to bovine-derived bFGF.
  • Bovine with respect to bbFGF may mean an organism of the genus Bovine.
  • Bos taurus is an example of an organism belonging to the genus Bos.
  • bbFGF is not limited to bFGF found in organisms of the genus Bos, but may also be modified versions thereof.
  • cytokines examples include interleukins.
  • Hormones include dexamethasone, hydrocortisone, estradiol, progesterone, glucagon, and insulin.
  • cell adhesion factors or extracellular matrix components include Type I collagen, Type II collagen, fibronectin, laminin, poly-L-lysine, and poly-D-lysine.
  • Antibiotics include amphotericin B, kanamycin, gentamicin, streptomycin, and penicillin.
  • compositions eg, types and/or concentrations of components contained
  • the compositions (eg, types and/or concentrations of components contained) of the starting medium, fed-batch medium, and perfusion medium may or may not be the same. That is, the types of components contained in the starting medium may or may not be the same as those contained in the fed-batch medium or perfusion medium. Further, the concentration of each component contained in the starting medium may or may not be the same as the concentration of each component contained in the fed-batch medium or perfusion medium.
  • the compositions of the starting medium and the fed-batch medium may be the same.
  • two or more fed-batch or perfusion media having different compositions eg, types and/or concentrations of components contained
  • the composition of the fed-batch or perfusion medium may or may not be the same each time.
  • all of the various components such as active ingredients may be supplied to the medium in a form that is not contained in the fed-batch medium or the perfusion medium, such as powder.
  • various components such as active ingredients may be supplied to the culture medium by adding the composition of the present invention.
  • the seeding amount of animal cells at the start of culture is, for example, 1 ⁇ 10 3 cells/mL or more, 1 ⁇ 10 4 cells/mL or more, 1 ⁇ 10 5 cells/mL or more, 1 ⁇ in terms of viable cell number. It may be 10 6 cells/mL or more, or 1 ⁇ 10 7 cells/mL or more, and 1 ⁇ 10 8 cells/mL or less, 1 ⁇ 10 7 cells/mL or less, 1 ⁇ 10 6 cells/mL or less, 1 It may be less than ⁇ 10 5 cells/mL, or less than 1 ⁇ 10 4 cells/mL, or a consistent combination thereof.
  • the seeding amount of animal cells at the start of culture is, for example, 1 ⁇ 10 3 to 1 ⁇ 10 4 cells/mL, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 5 cells/mL in terms of the number of living cells. mL, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 6 cells/mL, 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 7 cells/mL, or 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 8 cells/mL.
  • the seeding amount of animal cells at the start of culture is, for example, 1 ⁇ 10 3 to 1 ⁇ 10 8 cells/mL, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 7 cells/mL in terms of the number of living cells. mL, or 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 6 cells/mL.
  • the number of living cells can be measured using, for example, a live/dead cell autoanalyzer Vi-CELL TM XR (Beckman Coulter).
  • Cultivation may be carried out under a CO 2 -containing atmosphere, such as 5-15% CO 2 .
  • the pH of the medium may be around neutral, for example. "Near neutrality” may mean, for example, pH 6-8, pH 6.5-7.5, or pH 6.8-7.2.
  • the pH of the medium can be adjusted as necessary.
  • the pH of the culture medium is determined by various alkaline or acidic substances such as ammonia gas, aqueous ammonia, sodium carbonate, sodium bicarbonate, potassium carbonate, potassium bicarbonate, magnesium carbonate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide, magnesium hydroxide, etc. It can be adjusted using
  • the culture temperature may be, for example, 30-38°C.
  • the culture period is, for example, 0.5 days or more, 1 day or more, 2 days or more, 3 days or more, 4 days or more, 5 days or more, 6 days or more, 7 days or more, 8 days or more, 9 days or more, 10 days. 12 days or more, 15 days or more, or 20 days or more, but 60 days or less, 50 days or less, 40 days or less, 30 days or less, 25 days or less, 20 days or less, 15 days or less, 12 days
  • the period may be 10 days or less, 9 days or less, 8 days or less, or 7 days or less, or any combination thereof that is not contradictory.
  • the culture period may be, for example, 1 to 60 days, 3 to 25 days, or 5 to 20 days. Cultivation may be continued, for example, until muscle tissue (eg, cultured meat) is formed to a desired degree.
  • the concentration of the active ingredient in the medium is, for example, 0.01 mM or more, 0.02 mM or more, 0.05 mM or more, 0.1 mM or more, 0.2 mM or more, 0.5 mM or more, 1 mM or more, 2 mM or more, 5 mM or more, 10 mM or more, May be 15 mM or more, 20 mM or more, or 25 mM or more, 30 mM or less, 25 mM or less, 20 mM or less, 15 mM or less, 10 mM or less, 5 mM or less, 2 mM or less, 1 mM or less, It may be 0.5 mM or less, 0.2 mM or less, 0.1 mM or less, 0.05 mM or less, or 0.02 mM or less, or a consistent combination thereof.
  • the concentration of the active ingredient in the medium is, for example, 0.01 to 0.02 mm, 0.02 to 0.05 mm, 0.05 to 0.1 mm, 0.1 to 0.2 mm, 0.2 to 0.5 mm, 0.5 to 1 mm, 1 to 2 mm, May be 2-5 mm, 5-10 mm, 10-15 mm, 15-20 mm, 20-25 mm, or 25-30 mm.
  • the concentration of the active ingredient in the medium may be, for example, 0.01 to 30 mM, 0.02 to 15 mM, or 0.05 to 5 mM.
  • the concentrations of the two or more cholinergic compounds in the medium are The concentration of the active ingredient in the medium may be set within the range exemplified above.
  • concentration of active ingredient in the medium means the total concentration of those two or more types of choline compounds in the medium, unless otherwise specified. It shall be.
  • Various components such as active ingredients may be contained in the medium during the entire period of culture, or may be contained in the medium only during a part of the period of culture.
  • cultivation is carried out in a medium containing a certain component” or "a certain component is contained in the medium during cultivation” means that the component is contained in the medium during at least a part of the cultivation period. It is sufficient that the component is contained in the medium during the entire culture period.
  • All of the various components such as active ingredients may be contained in the medium at the start of culture, or may be supplied to the medium after the start of culture. Further, all of the various components such as the active ingredient may be contained in the medium at the time of starting the culture, and may be further supplied to the medium after the start of the culture (for example, after consumption of the active ingredient).
  • Various components such as active ingredients may be contained in the medium at the concentrations exemplified above during the entire culture period, or may be contained in the medium at the concentrations exemplified above only during a part of the culture period.
  • the concentration of a component is a certain concentration” means that the concentration of the component in the medium is within the range of concentration during at least part of the culture, and the concentration of the component in the medium is within the range for the entire period of the culture.
  • concentration be within the range for the period.
  • All of the various components such as active ingredients may be contained in the medium at the concentrations exemplified above at the start of culture, or may be supplied to the medium at the concentrations exemplified above after the start of culture.
  • all of the various components such as active ingredients are contained in the medium at the concentration exemplified above at the start of culture, and the concentration exemplified above is maintained after the start of culture (for example, after consumption of the component). may be further supplied to the medium.
  • the length of the "partial period of culture” is not particularly limited as long as the desired effect, such as the effect of improving muscle quality, can be obtained.
  • the length of "a part of the culture period” can be set as appropriate depending on various conditions such as the type of animal cells and the length of the culture period. "Part of the period” means, for example, 10% or more, 20% or more, 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% or more, 70% or more, 80% or more, 90% or more of the entire culture period. , 95% or more, 97% or more, or 99% or more.
  • “partial period” refers to, for example, 10% or more, 20% or more, 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% of the entire culture period after animal cells differentiate into myotube cells.
  • the period may be 70% or more, 80% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, or 99% or more.
  • "partial period” includes, for example, 0.5 days or more, 1 day or more, 2 days or more, 3 days or more, 4 days or more, 5 days or more, 6 days or more, 7 days or more, 8 days or more, The period may be 9 days or more, 10 days or more, 12 days or more, or 15 days or more.
  • the concentrations of various components such as active ingredients in the medium may be set to the concentrations exemplified above, for example, as average values over a specific period during culture. That is, “the culture is carried out in a medium containing a certain component at a certain concentration”, “the medium at the time of culturing contains a certain component at a certain concentration”, or “the medium at the time of culturing contains a certain component at a certain concentration”. "The concentration of a component is a certain concentration” may mean that the average concentration of the component in the medium over a particular period of time during culture is within the range of the concentration.
  • the "average value of the concentration of a certain component in the medium over a specific period during culture” is not particularly limited as long as it can grasp the fluctuation in the concentration of the component during a specific period during culture, but for example, It may refer to the average concentration of the component in the medium measured every 60 minutes, every 30 minutes, every 20 minutes, or every 10 minutes throughout a particular period of time during culture.
  • the "specific period during culture” includes the entire culture period and a part of the culture period.
  • the “partial period of culture” is as described above.
  • Various components such as active ingredients may be supplied to the medium throughout the entire culture period, or may be supplied to the medium only during a part of the culture period.
  • the "partial period of culture" is as described above. All of the various components such as the active ingredient may be supplied to the medium continuously, for example, or may be supplied to the medium intermittently. All of the various components such as active ingredients may be supplied to the culture medium every day, for example, or every few days.
  • the concentration of various components such as active ingredients in the fed-batch medium or the perfusion medium may be within the range of the concentration of the component in the medium exemplified above, for example.
  • the concentration of various components such as active ingredients in the fed-batch medium or perfusion medium may be, for example, 1 times or more, 1.1 times or more, 1.3 times or more, 1 times or more the concentration of the component in the medium exemplified above.
  • the concentration may be 5 times or more, 2 times or more, 3 times or more, 5 times or more, 7 times or more, 10 times or more, 15 times or more, or 20 times or more, and 100 times or less, 70 times or less, 50 times or more.
  • the concentration may be less than 3 times, 30 times or less, 20 times or less, 15 times or less, 10 times or less, 7 times or less, 5 times or less, 3 times or less, or 2 times or less, and any combination thereof is not contradictory. Good too.
  • the concentration of various components such as active ingredients in the fed-batch medium or perfusion medium is, for example, 1 to 2 times 1.1 to 2 times the concentration of the component in the medium exemplified above. 2 times 1.5-2 times 2-3 times 3-5 times 5-7 times 7-10 times, 10-15 times, 15-20 times, 20-30 times, 20-50 times, 20-70 times, Or it may be 20 to 100 times.
  • the concentration of various components such as active ingredients in the fed-batch medium or perfusion medium is, for example, 1 to 100 times, 2 to 50 times, or 5 to 20 times the concentration of the component in the medium exemplified above. It may be twice as much.
  • concentrations of various components such as active ingredients can be measured by, for example, known methods used for detecting or identifying compounds. Such methods include HPLC, UPLC, LC/MS, GC/MS, NMR.
  • muscle tissue eg, cultured meat
  • the present invention discloses the use of active ingredients in the above-exemplified applications. That is, the present invention provides, for example, the use of active ingredients for improving muscle quality (e.g., slow-twitching muscles) and the use of active ingredients for obtaining effects based on improving muscle quality (e.g., slow-twitching muscles). Disclose the use of the active ingredient. In addition, the present invention also relates to, for example, the use of active ingredients for the production of compositions for improving muscle quality (e.g., compositions for slowing muscle twitching), and for improving muscle quality (e.g., slowing muscle twitching). Discloses the use of active ingredients for the manufacture of compositions for obtaining the desired effects.
  • active ingredients for improving muscle quality e.g., slow-twitching muscles
  • active ingredients for obtaining effects based on improving muscle quality (e.g., slow-twitching muscles).
  • the present invention also relates to, for example, the use of active ingredients for the production of compositions for improving muscle quality (e
  • the present invention also discloses active ingredients for use in the above-mentioned applications. That is, the present invention provides, for example, an active ingredient for use in improving muscle quality (e.g., slowing down muscles) and an active ingredient used for obtaining effects based on improving muscle quality (for example, slowing down muscles). Discloses active ingredients for. In addition, the present invention also provides, for example, an active ingredient for use in the production of a composition for improving muscle quality (e.g., a composition for slowing muscle) and a composition based on improving muscle quality (e.g., slowing muscle). Active ingredients are disclosed for use in preparing compositions for obtaining benefits.
  • an active ingredient for use in improving muscle quality e.g., slowing down muscles
  • an active ingredient used for obtaining effects based on improving muscle quality for example, slowing down muscles
  • Active ingredients are disclosed for use in preparing compositions for obtaining benefits.
  • Example 1 Evaluation of the muscle quality improving effect of citicoline or ⁇ GPC in vitro using mouse cells
  • citicoline or ⁇ GPC was exposed to a C2C12 cell line differentiated into myotube cells, and Myosin heavy chain 7 ( The muscle quality-improving effects of citicoline or ⁇ GPC were evaluated using the expression changes of the Myh7) gene as an index.
  • the C2C12 cell line (DS Pharma Biomedical Co., Ltd.), which is a mouse C3H skeletal muscle myoblast cell line, was used as the myoblasts.
  • a 12-well plate with a culture area of 3.8 cm 2 was used as a plate for seeding myoblasts, and 0.16 ⁇ 10 5 myoblasts were seeded per well.
  • Myoblasts were cultured at 37°C in the presence of 5(v/v)% carbon dioxide. After confirming that cells have proliferated to about 90% of the seeded area, add differentiation induction medium (2(w/v)% horse serum, 1(w/v)% penicillin-streptomycin, and 1(w/v)% glutamine). The cells were exchanged with DMEM medium (containing DMEM medium) to induce differentiation into myotubes.
  • DMEM medium containing DMEM medium
  • the Myh7 gene is a gene that is highly expressed in slow-twitch fibers, and was used as an indicator of slow-twitch muscle. Primers of SEQ ID NOs: 1 and 2 were used as primers for the cyclophilin A gene. Primers of SEQ ID NOs: 3 and 4 were used as primers for the Myh7 gene. The expression level of the Myh7 gene was normalized with the expression level of the cyclophilin A gene.
  • Example 2 Evaluation of the muscle quality improvement effect of ⁇ GPC in vivo using mice. Muscle quality and muscle function induced by narrowing the cage area and restricting the amount of activity using C57BL/6J mice. We examine the influence of ⁇ GPC on changes in . Group mice so that their body weight, grip strength, and fat weight are uniform. A wide cage or a narrow cage is used as the breeding cage; the wide cage is 220 mm wide x 320 mm long x 165 mm high, and the narrow cage is 110 mm wide x 160 mm long x 130 mm high.
  • the control group reared in large cages was fed a diet containing 20% casein and 7% soybean oil
  • the group reared in narrow cages was fed a diet containing 20% casein and 7% lard or 20% casein. , 7% lard, and 0.2% ⁇ GPC.
  • Groups kept in narrow cages are divided into groups that receive exercise using a rotating wheel and groups that do not.
  • the group composition is shown in Table 1.
  • Muscle strength measurement Muscle strength is measured using an animal grip strength measuring machine (Chatillon) ( Figure 3). The mouse's forelimb is captured in the 1/3 area from the end of the handle part of the grip strength measuring device, and the experimenter slowly pulls the mouse's tail until the mouse releases the hand. The number when the mouse releases the hand is recorded five times in a row, and the average value is calculated as the individual's muscle strength.
  • Measurement of body temperature Measure the body surface temperature of the mouse during the test period.
  • ⁇ GPC administration will increase muscle strength, slow muscle twitching, increase mitochondrial content, decrease blood sugar level or HbA1c, decrease expression of vascular disorder markers, and/or increase body temperature. .
  • ⁇ GPC causes skeletal muscle to become slow-twitch, thereby producing an effect of improving metabolism.
  • by improving metabolism it is expected that an effect of improving blood sugar level, an effect of preventing vascular disorders, and/or an effect of increasing body temperature will be obtained.
  • ⁇ GPC In the exercise group, an increase in muscle strength, slow muscle twitching, increase in mitochondrial content, decrease in blood sugar level or HbA1c, decrease in the expression of vascular disorder markers, and/or increase in body temperature were confirmed by exercise, and these effects were confirmed by ⁇ GPC administration. It is expected that the enhancement of the effect of In other words, it is expected that ⁇ GPC promotes the slow-twitching of skeletal muscles due to exercise, thereby enhancing the metabolic improvement effect of exercise. In addition, ⁇ GPC is expected to enhance the metabolic improvement caused by exercise, thereby enhancing the effects of exercise on improving blood sugar levels, preventing vascular disorders, and/or increasing body temperature.
  • Example 3 Evaluation of the muscle quality improving effect of citicoline in vivo using mice Using C57BL/6J mice, muscle quality and improvement induced by narrowing the cage area and restricting activity for 30 days The effects of citicoline on changes in muscle function were investigated. Mice were divided into groups so that body weight, grip strength, and fat weight were uniform. A wide cage or a narrow cage was used as the rearing cage, and the wide cage was 220 mm wide x 320 mm long x 165 mm high, and the narrow cage was 110 mm wide x 160 mm long x 130 mm high.
  • the control group reared in large cages was fed a diet containing 20% casein and 7% soybean oil
  • the group reared in narrow cages was fed a diet containing 20% casein and 7% lard or 20% casein. , 7% lard, and 0.3% citicoline.
  • the groups reared in narrow cages were divided into a group that received exercise using a rotating wheel and a group that did not.
  • the group composition is shown in Table 2. The rotating wheel exercise was carried out for 5 consecutive days, with 2 days off.
  • Muscle strength was measured on the 2nd and 8th day after the start of feeding the provided feed. Muscle strength was measured using an animal grip strength measuring device (Chatillon) ( Figure 3). The mouse's forelimbs were captured in the 1/3 area from the end of the handle of the grip strength measuring device, and the experimenter slowly pulled the mouse's tail until the mouse let go. The number when the mouse released the hand was recorded five times in a row, and the average value was calculated as the individual's muscle strength.
  • mice (group 2) whose cage area was narrowed and whose activity level was restricted for 30 days compared to control mice (group 1) on both the 2nd and 8th day after the start of feeding the provided food. was declining. Furthermore, on both the 2nd and 8th day after the start of feeding the provided food, the muscle strength of the mice (group 3) that was subjected to rotating wheel exercise while restricting their activity level tended to increase compared to the group 2. was recognized. In addition, on both the 2nd and 8th day after the start of feeding the provided food, the muscle strength of the mice (group 4) that was given a rotating wheel exercise load and citicoline while restricting their activity level was significantly lower than that of the 2nd group. There was a significant increase in Therefore, it was suggested that the muscle strength-enhancing effect of exercise is further enhanced by the provision of citicoline.
  • Example 4 Evaluation of the muscle quality improving effect of serine in vitro using mouse cells
  • serine was exposed to the C2C12 cell line in myofibroblastic state, and changes in the expression of the Myosin heavy chain 7 (Myh7) gene were evaluated.
  • Myh7 Myosin heavy chain 7
  • the C2C12 cell line (DS Pharma Biomedical Co., Ltd.), which is a mouse C3H skeletal muscle myoblast cell line, was used as the myoblasts.
  • a 12-well plate with a culture area of 3.8 cm 2 was used as a plate for seeding myoblasts, and 0.16 ⁇ 10 5 myoblasts were seeded per well.
  • Myoblasts were cultured at 37°C in the presence of 5(v/v)% carbon dioxide. After confirming that cells had proliferated by approximately 90% per seeded area, a stimulation medium was added.
  • the stimulation medium is prepared by adding serine to a final concentration of 1, 3, or 10 mM in DMEM medium diluted to one-fifth of the amino acid concentration in the medium. was used.
  • Cells were collected 24 hours after adding the stimulation medium, RNA was extracted, and expression of the cyclophilin A gene and Myh7 gene was confirmed using real-time quantitative PCR.
  • As a control cells were similarly collected from a sample to which a DMEM medium in which the amino acid concentration contained in the medium was diluted to 1/5 was added instead of the stimulation medium, and the expression of the cyclophilin A gene and Myh7 gene was confirmed.
  • the cyclophilin A gene was used as an internal control gene.
  • the Myh7 gene is a gene that is highly expressed in slow-twitch fibers, and was used as an indicator of slow-twitch muscle. Primers of SEQ ID NOs: 1 and 2 were used as primers for the cyclophilin A gene. Primers of SEQ ID NOs: 3 and 4 were used as primers for the Myh7 gene. The expression level of the Myh7 gene was normalized with the expression level of the cyclophilin A gene.
  • results are shown in Figure 6.
  • the expression level of the Myh7 gene is shown as a relative value with the Myh7 gene expression level in the control group set to 1.
  • Myh7 gene expression increased in a serine concentration-dependent manner.
  • a significant increase in Myh7 gene expression was observed compared to the control group. Therefore, it was suggested that serine has the effect of improving muscle quality (specifically, slowing down muscles).
  • Example 5 Evaluation of the muscle quality improvement effect of ⁇ GPC in vivo using mice. Muscle quality and muscle function induced by narrowing the cage area and restricting the amount of activity using C57BL/6J mice. We investigated the influence of ⁇ GPC on changes in . Mice were divided into groups so that body weight, grip strength, and fat weight were uniform. A wide cage or a narrow cage was used as the rearing cage, and the wide cage was 220 mm wide x 320 mm long x 165 mm high, and the narrow cage was 110 mm wide x 160 mm long x 130 mm high.
  • the control group reared in large cages was fed a diet containing 20% casein and 7% soybean oil
  • the group reared in narrow cages was fed a diet containing 20% casein and 7% lard or 20% casein. , 7% lard, and 1% ⁇ GPC.
  • the groups reared in narrow cages were divided into a group that received exercise using a rotating wheel and a group that did not.
  • the group composition is shown in Table 3.
  • body composition fat weight per body weight and muscle weight per body weight were measured. Fat weight and muscle weight were measured as fat component amount and lean component amount, respectively, using a body composition analyzer EchoMRI-100 (manufactured by Nippon Raytec Co., Ltd.).
  • a decrease in fat mass and an increase in muscle mass are both indicators of improved body composition. Additionally, both a decrease in fat mass and an increase in muscle mass can also be indicators of body toning. In other words, the above results show that administration of aGPC has the effect of improving body composition and tightening the body, and that these effects are further enhanced by the combination of administration of aGPC and exercise. Ta.
  • CS citrate synthase
  • CS Citrate Synthase Assay Kit ab239712
  • An increase in CS activity is an indicator of an increase in mitochondrial mass. Furthermore, an increase in CS activity can also be an indicator of improved endurance, improved metabolism, and improved basic physical strength. That is, the above results showed that administration of aGPC has the effect of increasing the amount of mitochondria, improving endurance, improving metabolism, and improving basic physical strength.
  • aGPC has the effect of improving muscle strength, and also showed that muscle strength can be improved early by combining aGPC and exercise.
  • high muscle strength was maintained by a combination of exercise at 6 m/min and aGPC.
  • improved muscle strength can also be an indicator of improved balance ability, improved training effects, improved rehabilitation effects, and improved walking speed.
  • administration of aGPC alone or in combination with aGPC and exercise can improve muscle strength, balance ability, training effects, rehabilitation effects, and walking speed. It is expected that

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Abstract

筋質を改善する技術およびそれに関連する技術を提供する。ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（αGPC）やシチコリン等のコリン系化合物を利用することにより筋質を改善する。

Description

筋質改善用組成物
　本発明は、筋質を改善する技術およびそれに関連する技術に関する。本発明は、特に、筋肉を遅筋化する技術およびそれに関連する技術に関し得る。
　筋肉は、筋線維の束で構成されている。筋線維は、遅筋線維（Type I筋線維）と速筋線維（Type II筋線維）とに分類される。遅筋線維は、速筋線維と比較して、収縮力や収縮速度は低いが疲労しにくいという性質を有し、持久力に貢献する。よって、筋肉中の遅筋の量の増大（すなわち、筋肉の遅筋化）により、例えば、持久力の向上等の健康上の利益が得られると期待される。また、遅筋線維は、速筋線維と比較して、エネルギー消費しやすいという性質を有する。よって、筋肉中の遅筋の量の増大（すなわち、筋肉の遅筋化）により、エネルギー消費が増大し、以て体重減少等の健康上の利益が得られると期待される。
　ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（αGPC）を利用して脂質代謝を促進する技術が報告されている（特許文献１）。
　イージリンを利用して哺乳類の精神状態や体組成を改善する技術が報告されている（特許文献２）。同文献には、イージリンと併用されてよい成分として、シチコリンが例示されている。
　NAD＋前駆体およびATPブースターを利用してミトコンドリアのエネルギー生産やその効率を向上させる技術が報告されている（特許文献３）。同文献には、NAD＋前駆体およびATPブースターと併用されてよい成分として、シチコリン等のミトコンドリアを保護する栄養素が例示されている。
特開2014-051459 US2018-0071273 US2014-0134283
　本発明は、筋質を改善する技術およびそれに関連する技術を提供することを課題とする。
　本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（αGPC）やシチコリン等のコリン系化合物を利用することにより筋質を改善できることを見出し、本発明を完成させた。
　すなわち、本発明は、以下の通り例示できる。
［１］
　コリン系化合物を含有する、筋質改善用組成物。
［２］
　コリン系化合物を含有する、筋質改善に基づく効果を得るための組成物。
［３］
　前記筋質改善に基づく効果が、筋肉中のミトコンドリア量を増大させる効果、体組成を改善する効果、持久力を向上させる効果、代謝を向上させる効果、バランス能力を向上させる効果、筋力を向上させる効果、歩行速度を向上させる効果、体を引き締める効果、基礎体力を向上させる効果、トレーニング効果を向上させる効果、リハビリテーション効果を向上させる効果、対象の体温を調節する効果、対象の血糖値を調節する効果、対象の血中脂質濃度を調節する効果、ならびに筋肉に関連する望ましくない症状を予防、改善、および／または治療する効果からなる群より選択される１種またはそれ以上の効果である、前記組成物。
［４］
　前記症状が、廃用性筋萎縮、神経原性筋萎縮、筋原性筋萎縮、重症筋無力症、悪液質、フレイル、運動器症候群、メタボリックシンドローム、基礎体力の低下、歩行速度の低下、腰痛、肩こり、頭痛、高血糖、高脂血症、血管障害、低体温、および冷え性からなる群より選択される１種またはそれ以上の症状である、前記組成物。
［５］
　前記筋質改善が、筋肉の遅筋化である、前記組成物。
［６］
　前記コリン系化合物が、ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、シチコリン、コリン、リン酸コリン、ホスホコリン、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、およびセリンからなる群より選択される１種またはそれ以上の成分である、前記組成物。
［７］
　前記コリン系化合物が、ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、シチコリン、およびセリンからなる群より選択される１種またはそれ以上の成分である、前記組成物。
［８］
　医薬組成物である、前記組成物。
［９］
　食品組成物である、前記組成物。
［１０］
　前記コリン系化合物の含有量が、100 ppm(w/w)～99.9 %(w/w)である、前記組成物。
［１１］
　身体運動の実施と併用される、前記組成物。
［１２］
　身体運動の実施と併用された場合に、身体運動の実施と併用されない場合と比較して、前記組成物を投与する対象において早期に筋力が向上する、前記組成物。
［１３］
　コリン系化合物を対象に投与する工程を含む、対象の筋質を改善する方法。
［１４］
　コリン系化合物を対象に投与する工程を含む、対象において筋質改善に基づく効果を得る方法。
［１５］
　前記筋質改善に基づく効果が、筋肉中のミトコンドリア量を増大させる効果、体組成を改善する効果、持久力を向上させる効果、代謝を向上させる効果、バランス能力を向上させる効果、筋力を向上させる効果、歩行速度を向上させる効果、体を引き締める効果、基礎体力を向上させる効果、トレーニング効果を向上させる効果、リハビリテーション効果を向上させる効果、対象の体温を調節する効果、対象の血糖値を調節する効果、対象の血中脂質濃度を調節する効果、ならびに筋肉に関連する望ましくない症状を予防、改善、および／または治療する効果からなる群より選択される１種またはそれ以上の効果である、前記方法。
［１６］
　前記症状が、廃用性筋萎縮、神経原性筋萎縮、筋原性筋萎縮、重症筋無力症、悪液質、フレイル、運動器症候群、メタボリックシンドローム、基礎体力の低下、歩行速度の低下、腰痛、肩こり、頭痛、高血糖、高脂血症、血管障害、低体温、および冷え性からなる群より選択される１種またはそれ以上の症状である、前記方法。
［１７］
　前記コリン系化合物の投与量が、0.01 mg/kg体重/日以上である、前記方法。
［１８］
　前記コリン系化合物の投与量が、1000 mg/kg体重/日以下である、前記方法。
［１９］
　身体運動の実施と併用される、前記方法。
［２０］
　身体運動の実施と併用された場合に、身体運動の実施と併用されない場合と比較して、前記対象において早期に筋力が向上する、前記方法。
［２１］
　コリン系化合物の存在下で動物細胞を培養する工程を含む、培養肉の筋質を改善する方法。
［２２］
　コリン系化合物の存在下で動物細胞を培養する工程を含む、培養肉を製造する方法。
［２３］
　前記製造される培養肉が、筋質が改善された培養肉である、前記方法。
［２４］
　前記筋質改善が、筋肉の遅筋化である、前記方法。
［２５］
　前記遅筋化により、培養肉の食感および／または培養肉のフレーバーが向上する、前記方法。
［２６］
　前記食感の向上が、培養肉の保水性の向上および／または培養肉の多汁性の向上である、前記方法。
［２７］
　前記フレーバーの向上が、遊離アミノ酸量の増大による培養肉の呈味の向上である、前記方法。
［２８］
　前記コリン系化合物が、ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、シチコリン、コリン、リン酸コリン、ホスホコリン、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、およびセリンからなる群より選択される１種またはそれ以上の成分である、前記方法。
［２９］
　前記コリン系化合物が、ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、シチコリン、およびセリンからなる群より選択される１種またはそれ以上の成分である、前記方法。
シチコリン添加によるMyh7遺伝子の発現量の変化を示す図。Myh7遺伝子の発現量は、シチコリン添加24，48，および72時間後それぞれについて、コントロール群のMyh7遺伝子の発現量を1とする相対値（平均値±標準偏差）として示した。有意差検定は、2群間検定により実施した（＊：p<0.05）。 αGPC添加によるMyh7遺伝子の発現量の変化を示す図。Myh7遺伝子の発現量は、シチコリン添加24，48，および72時間後それぞれについて、コントロール群のMyh7遺伝子の発現量を1とする相対値（平均値±標準偏差）として示した。有意差検定は、2群間検定により実施した（＊：p<0.05）。 動物用握力測定器の写真。 供与飼料の給餌開始後2日目のマウスの筋力を示す図。結果は、平均値±標準偏差として示した。有意差検定は、Dunnett検定により実施した（＊：p<0.05）。 供与飼料の給餌開始後8日目のマウスの筋力を示す図。結果は、平均値±標準偏差として示した。有意差検定は、Dunnett検定により実施した（＊：p<0.05）。 セリン添加によるMyh7遺伝子の発現量の変化を示す図。Myh7遺伝子の発現量は、セリン添加24時間後について、コントロール群のMyh7遺伝子の発現量を1とする相対値（平均値±標準偏差）として示した。有意差検定は、Dunnett検定により実施した（＊：p<0.05）。 供与飼料の給餌開始後のマウスの体重当たりの脂肪重量の推移を示す図。結果は、平均値として示した。 供与飼料の給餌開始後26日目のマウスの体重当たりの脂肪重量を示す図。結果は、平均値±標準偏差として示した。有意差検定として、Dunnett検定によりコントロール群（2群）に対する多重比較検定を実施した（＊：p<0.05）。 供与飼料の給餌開始後のマウスの体重当たりの筋肉重量の推移を示す図。結果は、平均値として示した。 供与飼料の給餌開始後26日目のマウスの体重当たりの筋肉重量を示す図。結果は、平均値±標準偏差として示した。有意差検定として、Dunnett検定によりコントロール群（2群）に対する多重比較検定を実施した（＊：p<0.05）。 供与飼料の給餌開始後２６日目のマウスの腓腹筋のクエン酸合成酵素（CS）活性を示す図。結果は、平均値±標準偏差として示した。有意差検定として、Dunnett検定によりコントロール群（2群）に対する多重比較検定を実施した。 供与飼料の給餌開始後のマウスの筋力の推移を示す図。結果は、平均値として示した。 供与飼料の給餌開始後4日目のマウスの筋力を示す図。結果は、平均値±標準偏差として示した。有意差検定として、Dunnett検定によりコントロール群（2群）に対する多重比較検定を実施した（＊＊：p<0.01）。 供与飼料の給餌開始後25日目のマウスの筋力を示す図。結果は、平均値±標準偏差として示した。有意差検定として、Dunnett検定によりコントロール群（2群）に対する多重比較検定を実施した（＊＊：p<0.01）。
　以下、本発明を詳細に説明する。
＜１＞有効成分
　本発明においては、コリン系化合物を有効成分として利用する。コリン系化合物を「有効成分」ともいう。
　有効成分を利用することにより、筋質（筋肉の質）を改善することができる、すなわち、筋質を改善する効果が得られる。同効果を、「筋質改善効果」ともいう。有効成分の利用としては、有効成分を対象に投与することや、有効成分の存在下で動物細胞を培養することが挙げられる。すなわち、例えば、有効成分を対象に投与することにより、当該対象において筋質が改善されてよい、すなわち、筋質改善効果が得られてよい。また、例えば、有効成分の存在下で動物細胞を培養することにより、培養細胞が形成する筋組織（例えば、培養肉）において筋質が改善されてよい、すなわち、筋質改善効果が得られてよい。「培養肉における筋質の改善」の用語は、「培養肉の肉質の改善」または「培養肉の肉質の制御」の用語と代替可能または等価に使用され得る。筋肉としては、骨格筋が挙げられる。骨格筋としては、体幹筋（すなわち、体幹の骨格筋）や体肢筋（すなわち、上肢および下肢の骨格筋）が挙げられる。骨格筋としては、特に、姿勢の維持に関与する骨格筋が挙げられる。姿勢の維持に関与する骨格筋としては、頸部屈筋、頸部伸筋、脊柱起立筋、腹筋、腸腰筋等の体幹筋や、大臀筋、大腿四頭筋、大腿二頭筋、半腱様筋、半膜様筋、前脛骨筋、腓腹筋、ヒラメ筋等の下肢骨格筋が挙げられる。筋質改善効果は、１つの筋肉において得られてもよく、２つまたはそれ以上の筋肉において得られてもよい。筋質改善効果は、例えば、遅筋の比率が高い部位において得られてもよく、速筋の比率が高い部位において得られてもよく、それらの両方において得られてもよい。
　筋質の改善としては、筋肉の遅筋化が挙げられる。すなわち、筋質改善効果としては、筋肉を遅筋化する効果が挙げられる。筋肉を遅筋化する効果を、「遅筋化効果」ともいう。「筋肉の遅筋化」とは、筋肉中の遅筋の量の増大を意味する。「筋肉中の遅筋の量」とは、筋肉中の遅筋の絶対量を意味してもよく、筋肉中の遅筋の相対量（すなわち、筋肉の量に対する遅筋の量の比率）を意味してもよく、それらの両方を意味してもよい。すなわち、有効成分の利用により、筋肉中の遅筋の絶対量および／または相対量が増大してよい。有効成分の利用により、少なくとも、筋肉中の遅筋の相対量が増大してもよい。筋肉中の遅筋の量の増大に伴って筋肉の総量が増大してもよい。遅筋の量としては、遅筋線維の数、遅筋線維の断面積、遅筋線維の体積が挙げられる。すなわち、例えば、筋肉中の遅筋の相対量としては、筋肉中の筋線維の数に対する遅筋線維の数の比率、筋肉の断面積に対する遅筋線維の断面積の比率、筋肉の体積に対する遅筋線維の体積の比率が挙げられる。「遅筋線維」とは、Type I筋線維を意味する。有効成分の利用により、例えば、上記例示した遅筋の量とみなされるパラメータの１つまたはそれ以上が増大してよい。有効成分を利用することにより、筋肉中の速筋の量が増大してもよく、減少してもよく、変動しなくてもよい。「筋肉中の速筋の量」とは、筋肉中の速筋の絶対量を意味してもよく、筋肉中の速筋の相対量（すなわち、筋肉の量に対する速筋の量の比率）を意味してもよく、それらの両方を意味してもよい。一態様においては、有効成分を利用することにより、筋肉中の遅筋の絶対量および／または相対量の増大に加えて、筋肉中の速筋の絶対量が増大してよい。一態様においては、有効成分を利用することにより、筋肉中の遅筋の絶対量の増大に加えて、筋肉中の速筋の絶対量および／または相対量が増大してよい。一態様においては、有効成分を利用することにより、筋肉中の遅筋の相対量の増大に伴い、筋肉中の速筋の相対量が減少してよい。速筋の量としては、速筋線維の数、速筋線維の断面積、速筋線維の体積が挙げられる。「速筋線維」とは、Type II筋線維を意味する。Type II筋線維としては、Type IIa筋線維、Type IIb筋線維、Type IIx筋線維が挙げられる。
　筋質の改善としては、肉の食感の向上や肉のフレーバーの向上も挙げられる。すなわち、筋質改善効果としては、肉の食感を向上させる効果や肉のフレーバーを向上させる効果も挙げられる。肉の食感の向上や肉のフレーバーの向上は、いずれも、例えば、食用の肉（例えば、食肉用の動物の肉または食用の培養肉）において得られてよい。肉の食感の向上や肉のフレーバーの向上は、いずれも、例えば、筋肉の遅筋化によるものであってよい。肉の食感の向上としては、肉の保水性の向上や肉の多汁性の向上が挙げられる。肉のフレーバーの向上としては、遊離アミノ酸量の増大による肉の呈味の向上が挙げられる。例えば、豚肉中の遅筋の比率は豚肉の好ましいフレーバーと正の相関を示すとの報告がある（Y. K. Kang, et al., Meat Sci., 89, 384 (2011)；A. Karlsson, et al., J. Anim. Sci., 71, 930 (1993)）。また、豚肉中の遅筋の比率の増加により豚肉の保水性および多汁性が向上するとの報告がある（Y. K. Kang, et al., Meat Sci., 89, 384 (2011)；G. D. Kim, et al., J. Anim. Sci., 91, 5525 (2013)）。また、牛肉の呈味性を左右する遊離アミノ酸量について、遅筋の方が速筋よりも遊離アミノ酸量が多いとの報告がある（D. Mashima, et al., Anim. Sci. J., 90, 604 (2019)）。
　筋質改善効果は、有効成分の非利用時と有効成分の利用時の筋質を比較することにより確認できる。例えば、遅筋化効果は、有効成分の非利用時と有効成分の利用時の筋肉中の遅筋の量を比較することにより確認できる。すなわち、有効成分の非利用時と比較して、有効成分の利用時の筋質が改善されている（例えば、筋肉中の遅筋の量が大きい）場合に、筋質改善効果（例えば、遅筋化効果）が得られたと判断できる。「有効成分の利用時」とは、例えば、後述する本発明の方法に記載の態様で有効成分を利用した後の時点を意味してよい。「有効成分の非利用時」とは、簡便には、例えば、有効成分の利用前の時点を意味してよい。すなわち、例えば、有効成分の利用前と比較して、有効成分の利用後の筋質が改善されている（例えば、筋肉中の遅筋の量が大きい）場合に、筋質改善効果（例えば、遅筋化効果）が得られたと判断してよい。また、「有効成分の非利用時」とは、正確には、例えば、有効成分を利用せずに時間（例えば、有効成分を利用した期間と同じ期間）が経過した後の時点を意味してもよい。よって、例えば、時間経過により筋質が悪化する（例えば、筋肉中の遅筋の量が減少する）と想定される場合にあっては、「有効成分の利用により筋質が改善される」（例えば、「有効成分の利用により筋肉が遅筋化される」）とは、有効成分の利用により筋質の悪化（例えば、筋肉中の遅筋の量の減少）が想定よりも軽減されていれば足り、有効成分の利用前と比較して有効成分の利用後において筋質が改善されている（例えば、筋肉中の遅筋の量が大きい）ことを要しない。すなわち、「筋質の改善」（例えば、「筋肉の遅筋化」）には、筋質の悪化（例えば、筋肉中の遅筋の量の減少）の軽減も包含される。時間経過により筋質が悪化する（例えば、筋肉中の遅筋の量が減少する）と想定される場合としては、疾病や加齢等の筋質の悪化（例えば、筋肉中の遅筋の量の減少）をもたらし得る要因が対象に存在する場合が挙げられる。有効成分を対象に投与して利用する場合、有効成分を利用せずに時間が経過した後の対象の状態（例えば、筋質や筋肉中の遅筋の量）は、例えば、対象の年齢や健康状態等の諸条件を考慮して類推できる。有効成分を動物細胞の培養に利用する場合、有効成分を利用せずに時間が経過した後の培養細胞が形成する筋組織の状態（例えば、筋質や筋肉中の遅筋の量）は、例えば、有効成分の非存在下で動物細胞を培養することにより確認できる。遅筋の量は、例えば、公知の手法により測定することができる。遅筋の量を測定する手法としては、筋生検、磁気共鳴画像法（Magnetic Resonance Imaging；MRI）、フィールド・テストが挙げられる。有効成分の利用時の筋肉中の遅筋の量は、例えば、有効成分の非利用時の筋肉中の遅筋の量を１００％とした場合に、１０１％以上、１０３％以上、１０５％以上、１１０％以上、１１５％以上、１２０％以上、１２５％以上、または１３０％以上であってよい。また、遅筋化効果は、例えば、筋肉におけるMyh7遺伝子の発現を指標として確認できる。Myh7遺伝子は遅筋線維において高発現する遺伝子である。すなわち、有効成分の非利用時と比較して、筋肉におけるMyh7遺伝子の発現量が大きい場合に、遅筋化効果が得られたと判断できる。また、肉の食感を向上させる効果や肉のフレーバーを向上させる効果は、いずれも、例えば、専門パネルによる官能評価により確認できる。
　また、有効成分を利用することにより、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果が得られてよい。例えば、有効成分を対象に投与することにより、当該対象において筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果が得られてよい。
　筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、筋肉中のミトコンドリア量を増大させることができると期待される。すなわち、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果としては、筋肉中のミトコンドリア量を増大させる効果が挙げられる。筋肉中のミトコンドリア量は、例えば、筋肉中のミトコンドリアDNAの量または筋肉中のクエン酸合成酵素（citrate synthase；CS）活性を測定することにより、測定することができる。すなわち、例えば、筋肉中のミトコンドリアDNAの量または筋肉中のCS活性が増大した場合に、筋肉中のミトコンドリア量が増大したと判断してよい。CS活性は、例えば、Citrate Synthase Assay Kit ab239712（abcam社）等のCS活性の測定キットを用いて測定できる。
　筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、対象の体組成を改善することができると期待される。また、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、対象の持久力を向上させることができると期待される。また、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、対象の基礎代謝等の代謝を向上させることができると期待される。具体的には、例えば、遅筋の量の増大に伴って筋肉中のミトコンドリア量が増大した場合に、対象の持久力および／または対象の代謝を向上させることができると期待される。また、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、対象のバランス能力を向上させることができると期待される。また、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、対象の筋力を向上させることができると期待される。具体的には、例えば、遅筋の量の増大に伴って筋肉の総量が増大した場合に、対象の筋力を向上させることができると期待される。また、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、対象の歩行速度を向上させることができると期待される。具体的には、例えば、遅筋の量の増大に伴って筋肉の総量が増大した場合に、対象の歩行速度を向上させることができると期待される。すなわち、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果としては、体組成を改善する効果、持久力を向上させる効果、代謝を向上させる効果、バランス能力を向上させる効果、筋力を向上させる効果、歩行速度を向上させる効果が挙げられる。体組成の改善としては、筋肉量の増大や脂肪量の減少が挙げられる。体組成についての「筋肉量」とは、筋肉の絶対量を意味してもよく、筋肉の相対量（すなわち、体重に対する筋肉の重量の比率）を意味してもよく、それらの両方を意味してもよい。体組成についての「脂肪量」とは、脂肪の絶対量を意味してもよく、脂肪の相対量（すなわち、体重に対する脂肪の重量の比率）を意味してもよく、それらの両方を意味してもよい。体組成（例えば、筋肉量や脂肪量）は、例えば、体組成分析装置EchoMRI-100（日本レイテック社製）等の体組成分析装置を用いて測定できる。「バランス能力」とは、姿勢を維持または回復する能力を意味してよい。
　一態様において、筋肉中のミトコンドリア量を増大させる効果、体組成を改善する効果、持久力を向上させる効果、代謝を向上させる効果、体を引き締める効果、および基礎体力を向上させる効果は、いずれも、エネルギー代謝の向上に基づく効果であり得る。一態様において、バランス能力を向上させる効果、筋力を向上させる効果、歩行速度を向上させる効果、トレーニング効果を向上させる効果、およびリハビリテーション効果を向上させる効果は、いずれも、筋力の向上に基づく効果であり得る。
　筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、特に、体組成の改善および／または代謝の向上により、例えば、対象の体を引き締めることができると期待される。また、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、特に、持久力の向上、代謝の向上、および／または筋力の向上により、例えば、運動不足の対象等の対象の基礎体力を向上させることができると期待される。具体的には、例えば、遅筋の量の増大に伴って筋肉中のミトコンドリア量が増大した場合に、対象の持久力、代謝、および／または筋力が向上し、以て対象の基礎体力を向上させることができると期待される。また、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、特に、持久力の向上、代謝の向上、および／または筋力の向上により、例えば、運動愛好家やアスリート等の対象のトレーニング効果を向上させることができると期待される。また、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、特に、筋力の向上および／または歩行速度の向上により、例えば、歩行障害等の運動障害を有する対象等の対象のリハビリテーション効果を向上させることができると期待される。また、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、特に、代謝の向上により、例えば、対象の体温を調節する（例えば、体温を維持または上昇させる）ことができると期待される。また、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、特に、代謝の向上により、例えば、対象の血糖値を調節する（例えば、血糖値を低下させる、または血糖値の上昇を抑制する）ことができると期待される。また、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、特に、代謝の向上により、例えば、対象の血中脂質濃度を調節する（例えば、血中脂質濃度を低下させる、または血中脂質濃度の上昇を抑制する）ことができると期待される。すなわち、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果としては、体を引き締める効果、基礎体力を向上させる効果、トレーニング効果を向上させる効果、リハビリテーション効果を向上させる効果、対象の体温を調節する効果、対象の血糖値を調節する効果、対象の血中脂質濃度を調節する効果が挙げられる。「トレーニング」とは、身体トレーニングを意味してよい。「リハビリテーション」とは、身体機能のリハビリテーションを意味してよい。
　筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、例えば、対象において筋肉に関連する望ましくない症状を予防、改善、および／または治療することができると期待される。すなわち、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果としては、筋肉に関連する望ましくない症状を予防、改善、および／または治療する効果が挙げられる。筋肉に関連する望ましくない症状は、疾患であってもよく、そうでなくてもよい。筋肉に関連する望ましくない症状は、遺伝的要因、後天的要因、加齢等のいずれの原因で発症または進行するものであってもよい。
　筋肉に関連する望ましくない症状としては、筋萎縮および／または筋力低下に関連する症状が挙げられる。「筋萎縮」とは、筋肉の絶対量の減少を意味してよい。筋萎縮としては、骨格筋の萎縮が挙げられる。筋萎縮として、具体的には、遅筋および／または速筋の萎縮が挙げられる。筋萎縮としては、特に、遅筋の萎縮が挙げられる。筋萎縮により、例えば、筋力が低下してよい。言い換えると、筋力低下は、例えば、筋萎縮によるものであってよい。筋萎縮および／または筋力低下に関連する症状としては、筋萎縮および／または筋力低下に起因する症状や筋萎縮および／または筋力低下を伴う症状が挙げられる。なお、筋萎縮および／または筋力低下に関連する症状には、筋萎縮そのものや筋力低下そのものも包含される。筋肉に関連する望ましくない症状（例えば、筋萎縮および／または筋力低下に関連する症状）として、具体的には、廃用性筋萎縮、神経原性筋萎縮、筋原性筋萎縮が挙げられる。廃用性筋萎縮としては、加齢による筋萎縮（サルコペニア；sarcopenia）や、筋肉の使用不足による筋萎縮が挙げられる。筋肉の使用不足としては、寝たきり、無運動、無重力飛行、身体の固定等の理由によるものが挙げられる。身体の固定としては、怪我の治療等で実施される四肢の固定が挙げられる。神経原性筋萎縮としては、筋萎縮性側索硬化症（amyotrophic lateral sclerosis；ALS）、原発性側索硬化症（primary lateral sclerosis；PLS）、脊髄性筋萎縮症（spinal muscular atrophy；SMA）、球脊髄性筋萎縮症（spinal and bulbar muscular atrophy；SBMA）、急性灰白髄炎（poliomyelitis；ポリオ）、ギランバレー症候群（Guillain-Barre syndrome；GBS）が挙げられる。筋原性筋萎縮としては、筋ジストロフィー（muscular dystrophy）や多発性筋炎（polymyositis；PM）が挙げられる。また、筋肉に関連する望ましくない症状（例えば、筋萎縮および／または筋力低下に関連する症状）として、具体的には、重症筋無力症（myasthenia gravis；MG）、悪液質（cachexia）、フレイル（frailty）、運動器症候群（ロコモティブシンドローム；locomotive syndrome）、メタボリックシンドロームも挙げられる。また、筋肉に関連する望ましくない症状（例えば、筋萎縮および／または筋力低下に関連する症状）として、具体的には、基礎体力の低下や歩行速度の低下も挙げられる。基礎体力の低下または歩行速度の低下は、例えば、加齢または筋肉の使用不足によるものであってよい。
　また、筋肉に関連する望ましくない症状としては、姿勢に関連する症状も挙げられる。姿勢に関連する症状としては、姿勢の悪さに起因する症状が挙げられる。筋肉に関連する望ましくない症状（例えば、姿勢に関連する症状）としては、腰痛、肩こり、頭痛が挙げられる。
　また、筋肉に関連する望ましくない症状としては、ミトコンドリア機能または代謝に関連する症状も挙げられる。ミトコンドリア機能または代謝に関連する症状としては、ミトコンドリア機能の不足または低下に起因する症状や代謝の不足または低下に起因する症状が挙げられる。筋肉に関連する望ましくない症状（例えば、ミトコンドリア機能または代謝に関連する症状）としては、高血糖、高脂血症、血管障害、低体温、冷え性、メタボリックシンドロームが挙げられる。血管障害としては、動脈硬化が挙げられる。血管障害の予防、改善、および／または治療は、例えば、高血糖および／または高脂血症の予防、改善、および／または治療によるものであってよい。血管障害の予防、改善、および／または治療により、例えば、血流が改善されてよい。
　筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）により、例えば、上記例示したような筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果の１種が得られてもよく、上記例示したような筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果の２種またはそれ以上が得られてもよい。
　有効成分は、筋質改善効果等の上記例示したような効果が得られる他の技術と併用されてもよく、されなくてもよい。そのような技術としては、身体運動の実施が挙げられる。すなわち、例えば、有効成分が投与される対象が身体運動を実施してよい。身体運動としては、スポーツやトレーニングが挙げられる。身体運動として、具体的には、ウォーキング、ジョギング、ヨガ、水泳等の有酸素運動やウェイトトレーニング、スクワット、腕立て伏せ等の無酸素運動（筋肉トレーニング）が挙げられる。有効成分をそのような他の技術と併用することにより、有効成分を単独で利用する場合と比較して、有効成分による効果（例えば、筋質改善効果等の上記例示したような効果）がさらに増強されてよい。また、有効成分をそのような他の技術と併用することにより、そのような他の技術を単独で利用する場合と比較して、そのような他の技術による効果（例えば、筋質改善効果等の上記例示したような効果）がさらに増強されてよい。有効成分をそのような他の技術と併用することにより、有効成分を単独で利用する場合と比較して、例えば、筋力を向上させる効果、バランス能力を向上させる効果、トレーニング効果を向上させる効果、リハビリテーション効果を向上させる効果、および／または歩行速度を向上させる効果がさらに増強されてよい。また、有効成分をそのような他の技術と併用することにより、有効成分を単独で利用する場合と比較して、例えば、早期に筋力が向上してよい。また、有効成分をそのような他の技術と併用することにより、有効成分を単独で利用する場合と比較して、例えば、筋力が高く維持されてよい。
　有効成分は、治療目的で利用されてもよく、非治療目的で利用されてもよい。すなわち、筋質改善効果等の上記例示したような効果は、いずれも、特記しない限り、治療目的で得られてもよく、非治療目的で得られてもよい。
　「治療目的」とは、例えば、医療行為を含む概念を意味してよく、具体的には、治療による人体への処置行為を含む概念を意味してよい。
　「非治療目的」とは、例えば、医療行為を含まない概念を意味してよく、具体的には、治療による人体への処置行為を含まない概念を意味してよい。非治療目的としては、健康増進目的が挙げられる。
　「症状の予防」とは、例えば、症状の発症の防止もしくは遅延、または症状の発症の可能性の低下を意味してよい。「症状の改善」または「症状の治療」とは、例えば、症状の好転、症状の悪化の防止もしくは遅延、または症状の進行の防止もしくは遅延を意味してよい。「症状の改善」とは、特に、これらの事象であって、且つ治療目的でないものを総称してもよい。「症状の治療」とは、特に、これらの事象であって、且つ治療目的であるものを総称してもよい。
　「コリン系化合物」とは、コリンおよびその周辺代謝物を総称する。コリン系化合物としては、ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（αGPC）、シチコリン、コリン、リン酸コリン、ホスホコリン、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、セリンが挙げられる。コリン系化合物としては、特に、αGPC、シチコリン、セリンが挙げられる。コリン系化合物としては、さらに特には、αGPCが挙げられる。コリン系化合物としては、１種の成分を用いてもよく、２種またはそれ以上の成分を組み合わせて用いてもよい。
　セリンは、特記しない限り、Ｄ－体、Ｌ－体、またはそれらの組み合わせであってよい。組み合わせにおけるＤ－体とＬ－体の比率は特に制限されない。組み合わせにおけるＤ－体またはＬ－体の比率は、例えば、モル比で、２０～８０％、３０～７０％、４０～６０％、または４５～５５％であってよい。セリンは、特に、Ｌ－体であってもよい。なお、Ｄ－体またはＬ－体のセリンを選択した場合、有効成分としてＤ－体またはＬ－体のセリンが用いられることで足り、さらにＬ－体またはＤ－体のセリンが併用されることを妨げるものではない。
　有効成分が塩を形成し得る場合、有効成分は、フリー体として使用されてもよく、塩として使用されてもよく、それらの組み合わせとして使用されてもよい。すなわち、「有効成分」という用語は、特記しない限り、フリー体の有効成分、もしくはその塩、またはそれらの組み合わせを意味してよい。「フリー体」とは、塩を形成していない形態を意味する。また、有効成分が水和物を形成し得る場合、有効成分は、非水和物として使用されてもよく、水和物として使用されてもよく、それらの組み合わせとして使用されてもよい。すなわち、「有効成分」という用語（例えば、「フリー体の有効成分」や「有効成分の塩」）は、特記しない限り、非水和物および水和物を包含してよい。有効成分は、使用時にはイオン等のいずれの形態をとっていてもよい。
　塩は、有効成分の使用態様に応じて許容可能なものであれば特に制限されない。例えば、有効成分を経口摂取する場合、塩は、経口摂取可能なものであれば特に制限されない。例えば、カルボキシル基等の酸性基に対する塩としては、具体的には、アンモニウム塩、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アルミニウム塩、亜鉛塩、トリエチルアミン、エタノールアミン、モルホリン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、ジシクロへキシルアミン等の有機アミンとの塩、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸との塩が挙げられる。また、例えば、アミノ基等の塩基性基に対する塩としては、具体的には、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、臭化水素酸等の無機酸との塩、酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、コハク酸、タンニン酸、酪酸、ヒベンズ酸、パモ酸、エナント酸、デカン酸、テオクル酸、サリチル酸、乳酸、シュウ酸、マンデル酸、リンゴ酸、メチルマロン酸、アジピン酸等の有機カルボン酸との塩、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸等の有機スルホン酸との塩が挙げられる。塩としては、１種の塩を用いてもよく、２種またはそれ以上の塩を組み合わせて用いてもよい。
　有効成分としては、市販品を用いてもよく、適宜製造して取得したものを用いてもよい。有効成分の製造方法は特に制限されない。有効成分は、例えば、化学合成、酵素反応、発酵法、抽出法、またはそれらの組み合わせにより製造することができる。有効成分は、所望の程度に精製されていてもよく、そうでなくてもよい。すなわち、有効成分としては、精製品を用いてもよいし、有効成分を含有する素材を用いてもよい。有効成分としては、例えば、有効成分の含有量が1 %(w/w)以上、5 %(w/w)以上、10 %(w/w)以上、30 %(w/w)以上、50 %(w/w)以上、70 %(w/w)以上、90 %(w/w)以上、または95 %(w/w)以上の素材を用いてもよい。
　なお、有効成分の量（例えば含有量（濃度）や使用量）は、有効成分を含有する素材を用いる場合にあっては、当該素材中の有効成分そのものの量に基づいて算出されるものとする。また、有効成分の量（例えば含有量（濃度）や使用量）は、有効成分が塩または水和物を形成している場合にあっては、塩または水和物の質量を等モルのフリー体の非水和物の質量に換算した値に基づいて算出されるものとする。
＜２＞本発明の組成物
　本発明の組成物は、有効成分（すなわち、コリン系化合物）を含有する組成物である。
　本発明の組成物は、例えば、対象に投与して利用することができる。本発明の組成物（例えば、対象に投与して利用される本発明の組成物）は、例えば、医薬組成物、食品組成物、または飼料組成物であってよい。医薬組成物、食品組成物、または飼料組成物である本発明の組成物を、それぞれ、「本発明の医薬組成物」、「本発明の食品組成物」、および「本発明の飼料組成物」ともいう。本発明の組成物は、具体的には、例えば、後述する本発明の方法に記載の態様で対象に投与することができる。本発明の組成物の投与対象については、「本発明の方法」における有効成分の投与対象についての記載を準用できる。本発明の組成物は、例えば、筋質改善効果等の上記例示したような効果を得るために対象に投与してよい。
　上述の通り、有効成分は、筋質改善効果等の上記例示したような効果が得られる他の技術と併用されてもよく、されなくてもよい。よって、本発明の組成物は、そのような技術と併用されてもよい。本発明の組成物は、例えば、身体運動の実施と併用されてもよい。すなわち、例えば、本発明の組成物が投与される対象が身体運動を実施してよい。
　「医薬組成物」とは、医薬用途に用いられる組成物を意味してよく、具体的には、医薬品として対象に投与される組成物を意味してよい。「医薬組成物」の用語は、「医薬品」の用語と代替可能または等価に使用され得る。医薬組成物は、経口投与用であってもよく、非経口投与用であってもよい。
　「食品組成物」とは、食品用途に用いられる組成物を意味してよく、具体的には、ヒトが喫食する組成物を意味してよい。食品組成物は、例えば、食品であってもよく、食品添加物であってもよい。「食品添加物」とは、食品に添加して用いられる組成物を意味してよい。食品添加物は、例えば、食品の喫食時に添加されてよい。食品添加物は、例えば、食品原料として食品の製造に用いてよい。食品には、飲料も包含される。また、食品には、調味料も包含される。食品には、一般食品に限られず、栄養補助食品、栄養機能食品、特定保健用食品等の、いわゆる健康食品または医療用食品も包含される。
　「飼料組成物」とは、飼料用途に用いられる組成物を意味してよく、具体的には、ヒト以外の生物が摂食する組成物を意味してよい。飼料組成物は、例えば、飼料であってもよく、飼料添加物であってもよい。「飼料添加物」とは、飼料に添加して用いられる組成物を意味してよい。飼料添加物は、例えば、飼料の給餌時に添加されてよい。飼料添加物は、例えば、飼料原料として飼料の製造に用いてよい。
　本発明の組成物は、例えば、動物細胞の培養に利用することができる。すなわち、本発明の組成物は、例えば、動物細胞培養用組成物であってよい。動物細胞培養用組成物である本発明の組成物を、「本発明の動物細胞培養用組成物」ともいう。本発明の組成物は、具体的には、例えば、後述する本発明の方法に記載の態様で動物細胞の培養に利用することができる。本発明の組成物を利用して培養される動物細胞については、「本発明の方法」における動物細胞についての記載を準用できる。本発明の組成物は、例えば、筋質改善効果等の上記例示したような効果を得るために動物細胞の培養に利用してよい。
　動物細胞培養用組成物は、例えば、培地であってよい。培地としては、基礎培地、流加培地（feed medium）、灌流培地（perfusion medium）が挙げられる。「基礎培地」とは、培養開始時の培地を意味してよい。基礎培地を、「初発培地」ともいう。「流加培地」とは、流加培養において培養開始後に培養系に供給される培地を意味してよい。「灌流培地」とは、連続培養（これは灌流培養に限られない）において培養開始後に培養系に供給される培地を意味してよい。
　動物細胞培養用組成物は、例えば、培地添加物であってもよい。「培地添加物」とは、培地に添加して用いられる組成物を意味してよい。培地添加物が添加される培地としては、基礎培地、流加培地、灌流培地が挙げられる。
　本発明の組成物を利用することにより、筋質を改善する（例えば、筋肉を遅筋化する）ことができる、すなわち、筋質改善効果（例えば、遅筋化効果）が得られる。例えば、本発明の組成物を対象に投与することにより、当該対象において筋質改善効果（例えば、遅筋化効果）が得られてよい。また、例えば、本発明の組成物を利用して動物細胞を培養することにより、培養細胞が形成する筋組織（例えば、培養肉）において筋質改善効果（例えば、遅筋化効果）が得られてよい。すなわち、本発明の組成物（例えば、食品組成物、医薬組成物、飼料組成物、または動物細胞培養用組成物）は、筋質改善用組成物（例えば、筋肉の遅筋化用組成物）であってよい。
　また、本発明の組成物を利用することにより、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果が得られてよい。例えば、本発明の組成物を対象に投与することにより、当該対象において筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果が得られてよい。すなわち、本発明の組成物は、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果を得るための組成物であってもよい。筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果を得るための組成物は、筋質改善用組成物（例えば、筋肉の遅筋化用組成物）の一例であってよい。筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果を得るための組成物としては、筋肉中のミトコンドリア量増大用組成物、体組成改善用組成物、持久力向上用組成物、代謝向上用組成物、バランス能力向上用組成物、筋力向上用組成物、歩行速度向上用組成物、体の引き締め用組成物、基礎体力向上用組成物、トレーニング効果向上用組成物、リハビリテーション効果向上用組成物、体温調節用組成物、血糖値調節用組成物、血中脂質濃度調節用組成物、筋肉に関連する望ましくない症状の予防、改善、および／または治療用組成物が挙げられる。
　本発明の組成物は、有効成分からなるものであってもよく、有効成分以外の成分を含有していてもよい。有効成分以外の成分を、「追加成分」ともいう。追加成分としては、１種の成分を用いてもよく、２種またはそれ以上の成分を組み合わせて用いてもよい。
　追加成分は、本発明の目的を損なわない限り、特に制限されない。追加成分は、例えば、本発明の組成物の種類や使用態様等の諸条件に応じて適宜選択できる。追加成分としては、医薬品に配合される成分、食品に配合される成分、飼料に配合される成分、培地成分が挙げられる。
　本発明の組成物は、例えば、有効成分および任意で追加成分を適宜混合することにより製造することができる。
　本発明の組成物は、例えば、適宜製剤化されていてよい。製剤化にあたっては、添加剤（例えば、生理的および／または薬理的に許容される添加剤）を適宜使用してよい。添加剤としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、溶剤が挙げられる。添加剤は、例えば、本発明の組成物の種類や使用態様等の諸条件に応じて適宜選択できる。
　賦形剤としては、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、ソルビトール等の糖またはその誘導体；トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、α－デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプン等のデンプンまたはその誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロースまたはその誘導体；アラビアゴム、デキストラン、プルラン等の多糖；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等の珪酸塩；リン酸カルシウム等のリン酸塩；炭酸カルシウム等の炭酸塩；硫酸カルシウム等の硫酸塩が挙げられる。
　結合剤としては、上記賦形剤の他、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、マクロゴールが挙げられる。
　崩壊剤としては、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドンが挙げられる。
　滑沢剤としては、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸塩；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；カルナウバロウ等のワックスが挙げられる。
　安定剤としては、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸が挙げられる。
　矯味矯臭剤としては、甘味料、酸味料、香料が挙げられる。
　本発明の組成物の形状は、特に、制限されない。本発明の組成物の形状は、例えば、本発明の組成物の種類や使用態様等の諸条件に応じて適宜選択できる。本発明の組成物は、例えば、粉末、顆粒、フレーク、錠剤、カプセル、ペースト、液体等の任意の形状であってよい。例えば、医薬組成物の剤形としては、経口投与の場合、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の固形剤や、溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤が挙げられる。また、例えば、医薬組成物の剤形としては、非経口投与の場合、座剤や軟膏剤等の固形剤や、注射剤等の液剤が挙げられる。
　本発明の組成物における各成分（すなわち、有効成分および任意で追加成分）の含有量や含有量比は、筋質改善効果等の所望の効果が得られる限り、特に制限されない。本発明の組成物における各成分の含有量や含有量比は、例えば、本発明の組成物の種類や使用態様等の諸条件に応じて適宜設定できる。
　本発明の組成物における有効成分の含有量は、0 %(w/w)より多く、且つ、100 %(w/w)以下である。本発明の組成物における有効成分の含有量は、例えば、100 ppm(w/w)以上、200 ppm(w/w)以上、500 ppm(w/w)以上、1000 ppm(w/w)以上、2000 ppm(w/w)以上、5000 ppm(w/w)以上、1 %(w/w)以上、2 %(w/w)以上、5 %(w/w)以上、10 %(w/w)以上、20 %(w/w)以上、30 %(w/w)以上、50 %(w/w)以上、または70 %(w/w)以上であってもよく、100 %(w/w)以下、100 %(w/w)未満、99.9 %(w/w)以下、90 %(w/w)以下、70 %(w/w)以下、50 %(w/w)以下、30 %(w/w)以下、20 %(w/w)以下、10 %(w/w)以下、5 %(w/w)以下、2 %(w/w)以下、1 %(w/w)以下、5000 ppm(w/w)以下、2000 ppm(w/w)以下、1000 ppm(w/w)以下、または500 ppm(w/w)以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせであってもよい。本発明の組成物における有効成分の含有量は、具体的には、例えば、100 ppm(w/w)～1000 ppm(w/w)、1000 ppm(w/w)～1 %(w/w)、1 %(w/w)～10 %(w/w)、10 %(w/w)～30 %(w/w)、30 %(w/w)～50 %(w/w)、50 %(w/w)～70 %(w/w)、または70 %(w/w)～99.9 %(w/w)であってもよい。本発明の組成物における有効成分の含有量は、具体的には、例えば、100 ppm(w/w)～99.9 %(w/w)、200 ppm(w/w)～99.9 %(w/w)、500 ppm(w/w)～99.9 %(w/w)、1000 ppm(w/w)～99.9 %(w/w)、1 %(w/w)～99.9 %(w/w)、100 ppm(w/w)～50 %(w/w)、100 ppm(w/w)～10 %(w/w)、100 ppm(w/w)～1 %(w/w)、1000 ppm(w/w)～50 %(w/w)、1000 ppm(w/w)～10 %(w/w)、1000 ppm(w/w)～1 %(w/w)、1 %(w/w)～50 %(w/w)、または1 %(w/w)～10 %(w/w)であってもよい。本発明の組成物が２種またはそれ以上のコリン系化合物（すなわち、２種またはそれ以上の有効成分）を含有する場合、本発明の組成物におけるそれら２種またはそれ以上のコリン系化合物の含有量を、それぞれ独立に、あるいは合計で、上記例示した本発明の組成物における有効成分の含有量の範囲に設定してよい（ただし、本発明の組成物におけるそれら２種またはそれ以上のコリン系化合物の総含有量は100%(w/w)以下である）。なお、本発明の組成物が２種またはそれ以上のコリン系化合物を含有する場合、「本発明の組成物における有効成分の含有量」とは、特記しない限り、本発明の組成物におけるそれら２種またはそれ以上のコリン系化合物の総含有量を意味するものとする。
　また、本発明の組成物における各成分（すなわち、有効成分および任意で追加成分）の含有量は、例えば、後述する本発明の方法における各成分の対象への投与量が得られるように設定することができる。
　また、本発明の組成物における各成分（すなわち、有効成分および任意で追加成分）の含有量は、例えば、後述する本発明の方法における各成分の培地中での濃度が得られるように設定することができる。
　本発明の組成物に含有される各成分（すなわち、有効成分および任意で追加成分）は、互いに混合されて本発明の組成物に含有されていてもよく、それぞれ別個に、あるいは、任意の組み合わせで別個に、本発明の組成物に含有されていてもよい。例えば、本発明の組成物は、それぞれ別個にパッケージングされた各成分のセットとして提供されてもよい。このような場合、セットに含まれる成分は使用時に適宜併用することができる。
　本発明の組成物は、筋質改善用、筋肉の遅筋化用、筋肉中のミトコンドリア量増大用、体組成改善用、持久力向上用、代謝向上用、バランス能力向上用、筋力向上用、歩行速度向上用、体の引き締め用、基礎体力向上用、トレーニング効果向上用、リハビリテーション効果向上用、体温調節用、血糖値調節用、血中脂質濃度調節用、筋肉に関連する望ましくない症状の予防、改善、および／または治療用等の上記例示したような用途が表示された製品として提供されてよい。「用途の表示」には、需要者に対して当該用途を知らしめるための全ての行為が包含される。「用途の表示」には、当該用途を直接的に表示する場合に限られず、当該用途を需要者に想起または類推させ得る表現を表示する場合も包含される。上記例示したような用途を需要者に想起または類推させ得る表現としては、「アスリートの方」、「スポーツ愛好家の方」、「運動不足の方」、「筋力の衰えが気になる方」、「持久力の衰えが気になる方」等の投与対象に関する表現が挙げられる。
＜３＞本発明の方法
　本発明の方法は、有効成分（すなわち、コリン系化合物）を利用する工程を含む方法である。
　有効成分は、例えば、対象に投与して利用することができる。すなわち、本発明の方法は、例えば、有効成分（すなわち、コリン系化合物）を対象に投与する工程を含む方法であってよい。同工程を、「投与工程」ともいう。
　有効成分は、例えば、動物細胞の培養に利用することができる。すなわち、本発明の方法は、例えば、有効成分（すなわち、コリン系化合物）の存在下で動物細胞を培養する工程を含む方法であってよい。同工程を、「培養工程」ともいう。また、本発明の方法は、例えば、動物細胞を培養する方法であってよい。
　本発明の方法により、具体的には有効成分を利用することにより、筋質を改善する（例えば、筋肉を遅筋化する）ことができる、すなわち、筋質改善効果（例えば、遅筋化効果）が得られる。例えば、本発明の方法により、具体的には有効成分を対象に投与することにより、当該対象において筋質改善効果（例えば、遅筋化効果）が得られてよい。また、例えば、有効成分を利用して動物細胞を培養することにより、培養細胞が形成する筋組織（例えば、培養肉）において筋質改善効果（例えば、遅筋化効果）が得られてよい。すなわち、本発明の方法は、筋質を改善する方法（例えば、筋肉を遅筋化する方法）であってよい。
　また、本発明の方法により、具体的には有効成分を利用することにより、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果が得られてよい。例えば、本発明の方法により、具体的には有効成分を対象に投与することにより、当該対象において筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果が得られてよい。すなわち、本発明の方法は、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果を得る方法であってもよい。筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果を得る方法は、筋質を改善する方法（例えば、筋肉を遅筋化する方法）の一例であってよい。筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果を得る方法としては、筋肉中のミトコンドリア量を増大させる方法、体組成を改善する方法、持久力を向上させる方法、代謝を向上させる方法、バランス能力を向上させる方法、筋力を向上させる方法、歩行速度を向上させる方法、体を引き締める方法、基礎体力を向上させる方法、トレーニング効果を向上させる方法、リハビリテーション効果を向上させる方法、体温を調節する方法、血糖値を調節する方法、血中脂質濃度を調節する方法、筋肉に関連する望ましくない症状を予防、改善、および／または治療する方法が挙げられる。
　また、動物細胞の培養により筋組織が製造されてよい。すなわち、培養細胞により筋組織が形成され、以て筋組織が製造されてよい。筋組織としては、培養肉が挙げられる。すなわち、本発明の方法（例えば、動物細胞を培養する方法）は、筋組織（例えば、培養肉）の製造方法であってもよい。培養肉は筋組織からなるものであってもよく、他の組織を含むものであってもよい。他の組織としては、脂肪組織が挙げられる。製造される筋組織（例えば、培養肉）は、筋質が改善された筋組織（例えば、培養肉）であってよい。
　「有効成分を対象に投与する」の用語は、「対象に有効成分を摂取させる」の用語と代替可能または等価に使用され得る。有効成分の摂取は、自発的なもの（すなわち自由摂取）であってもよく、強制的なもの（すなわち強制摂取）であってもよい。すなわち、投与工程は、例えば、有効成分（これは食品または飼料に配合されていてよい）を対象に供給し、以て対象に有効成分を自由摂取させる工程であってよい。投与は、経口投与であってもよく、非経口投与であってもよい。投与は、特に、経口投与であってよい。非経口投与としては、注射、経管投与、直腸内投与、鼻腔内投与が挙げられる。
　有効成分の投与態様（例えば、投与対象、投与時期、投与期間、投与回数、投与量、その他投与に係る条件）は、筋質改善効果等の所望の効果が得られる限り、特に制限されない。有効成分の投与態様は、例えば、投与対象の種類、年齢、および健康状態等の諸条件に応じて適宜設定することができる。
　有効成分の投与対象は、筋質改善効果等の所望の効果が得られる限り、特に制限されない。有効成分の投与対象としては、哺乳動物が挙げられる。哺乳動物としては、ヒト、サル、チンパンジー等の霊長類、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等の齧歯類、ウサギ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ等の他の各種哺乳動物が挙げられる。哺乳動物としては、特に、ヒトが挙げられる。有効成分の投与対象の条件（例えば、性別、年齢、健康状態、その他投与対象に係る条件）は、筋質改善効果等の所望の効果が得られる限り、特に制限されない。有効成分の投与対象は、オスの被験体であってもよく、メスの被験体であってもよい。有効成分の投与対象は、例えば、幼児、小児、大人、中高年、高齢者等のいずれの年代の被験体であってもよい。有効成分の投与対象は、例えば、健常被験体であってもよく、非健常被験体であってもよい。非健常被験体としては、筋肉に関連する望ましくない症状を呈する対象が挙げられる。ヒトの場合、有効成分の投与対象は、例えば、アスリートやスポーツ愛好家等の、日常の動作以外の身体運動を実施する者であってもよく、そうでなくてもよい。
　有効成分の投与量は、例えば、0.01 mg/kg体重/日以上、0.02 mg/kg体重/日以上、0.05 mg/kg体重/日以上、0.1 mg/kg体重/日以上、0.2 mg/kg体重/日以上、0.5 mg/kg体重/日以上、1 mg/kg体重/日以上、2 mg/kg体重/日以上、5 mg/kg体重/日以上、10 mg/kg体重/日以上、20 mg/kg体重/日以上、50 mg/kg体重/日以上、100 mg/kg体重/日以上、200 mg/kg体重/日以上、または500 mg/kg体重/日以上であってもよく、1000 mg/kg体重/日以下、500 mg/kg体重/日以下、200 mg/kg体重/日以下、100 mg/kg体重/日以下、50 mg/kg体重/日以下、20 mg/kg体重/日以下、10 mg/kg体重/日以下、5 mg/kg体重/日以下、2 mg/kg体重/日以下、1 mg/kg体重/日以下、0.5 mg/kg体重/日以下、0.2 mg/kg体重/日以下、0.1 mg/kg体重/日以下、0.05 mg/kg体重/日以下、または0.02 mg/kg体重/日以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせであってもよい。有効成分の投与量は、具体的には、例えば、0.01～0.02 mg/kg体重/日、0.02～0.05 mg/kg体重/日、0.05～0.1 mg/kg体重/日、0.1～0.2 mg/kg体重/日、0.2～0.5 mg/kg体重/日、0.5～1 mg/kg体重/日、1～2 mg/kg体重/日、2～5 mg/kg体重/日、5～10 mg/kg体重/日、10～20 mg/kg体重/日、20～50 mg/kg体重/日、50～100 mg/kg体重/日、100～200 mg/kg体重/日、200～500 mg/kg体重/日、または500～1000 mg/kg体重/日であってもよい。有効成分の投与量は、具体的には、例えば、0.01～1000 mg/kg体重/日、0.05～200 mg/kg体重/日、または0.2～50 mg/kg体重/日であってもよい。２種またはそれ以上のコリン系化合物（すなわち、２種またはそれ以上の有効成分）が投与される場合、それら２種またはそれ以上のコリン系化合物の投与量を、それぞれ独立に、あるいは合計で、上記例示した有効成分の投与量の範囲に設定してよい。なお、２種またはそれ以上のコリン系化合物が投与される場合、「有効成分の投与量」とは、特記しない限り、それら２種またはそれ以上のコリン系化合物の総投与量を意味するものとする。
　有効成分の投与期間は、例えば、1日以上、3日以上、1週以上、2週以上、4週以上、2月以上、3月以上、4月以上、6月以上、9月以上、または12月以上であってもよく、10年以下、5年以下、1年以下、または6月以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。有効成分は、例えば、対象の生涯を通じて投与されてもよく、対象の生涯の一部の期間に投与されてもよい。有効成分は、例えば、少なくとも、筋質改善効果等の所望の効果が得られるまで投与してよい。有効成分は、例えば、毎日投与してもよく、数日に１回投与してもよい。有効成分は、特に、毎日投与してよい。各投与時の有効成分の投与量は、一定であってもよく、そうでなくてもよい。
　有効成分は、例えば、そのまま対象に投与されてもよく、有効成分を含有する、医薬組成物、食品組成物、または飼料組成物等の組成物として調製され、対象に投与されてもよい。有効成分を含有する組成物については、本発明の組成物の記載を準用できる。有効成分は、単独で投与されてもよく、追加成分と組み合わせて投与されてもよい。追加成分としては、医薬品、食品、飼料、およびそれらに含有される成分が挙げられる。また、本発明の方法で使用される追加成分については、本発明の組成物に含有される追加成分の記載を準用できる。
　有効成分は、例えば、本発明の組成物を利用して（具体的には、本発明の組成物を対象に投与することにより）、対象に投与することもできる。すなわち、本発明の方法の一態様は、本発明の組成物を対象に投与することを含む方法であってよい。すなわち、「有効成分の投与」には、本発明の組成物の投与も包含される。本発明の組成物の投与態様（例えば、投与対象、投与時期、投与期間、投与回数、投与量、その他投与に係る条件）は、筋質改善効果等の所望の効果が得られる限り、特に制限されない。本発明の組成物の投与態様は、例えば、投与対象の種類、年齢、および健康状態等の諸条件に応じて適宜設定することができる。本発明の組成物の投与態様については、有効成分の投与態様についての記載を準用できる。すなわち、本発明の組成物は、例えば、上記例示したような対象に投与してよい。また、本発明の組成物の投与量は、例えば、上記例示したような有効成分の投与量が得られるように設定してよい。また、本発明の組成物は、単独で投与されてもよく、追加成分と組み合わせて投与されてもよい。
　上述の通り、有効成分は、筋質改善効果等の上記例示したような効果が得られる他の技術と併用されてもよく、されなくてもよい。よって、本発明の方法は、そのような技術と併用されてもよい。言い換えると、本発明の方法において、そのような技術が実施されてよい。本発明の方法は、例えば、身体運動の実施と併用されてもよい。言い換えると、本発明の方法において、例えば、身体運動が実施されてよく、すなわち、有効成分が投与される対象が身体運動を実施してよい。
　動物細胞は、培養により筋組織を形成できる限り、特に制限されない。「動物細胞が培養により筋組織を形成できる」とは、動物細胞が培養により分化し筋組織を形成できることを意味してよく、具体的には、動物細胞が培養により筋管細胞に分化し筋組織を形成できることを意味してよい。動物細胞としては、間葉系幹細胞、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）等の幹細胞や、筋芽細胞が挙げられる。動物としては、哺乳類が挙げられる。哺乳動物としては、ヒト、サル、チンパンジー等の霊長類、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等の齧歯類、ウサギ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ等の他の各種哺乳動物が挙げられる。培養により食用の培養肉を形成する場合、哺乳動物としては、特に、ウシやブタ等の食肉用の動物が挙げられる。
　動物細胞の培養は、有効成分の存在下で実施される。「動物細胞の培養が有効成分の存在下で実施される」とは、例えば、動物細胞の培養に用いられる培地が有効成分を含有することを意味してよい。「動物細胞の培養が有効成分の存在下で実施される」とは、例えば、動物細胞の培養時に有効成分が培養系に供給されることを意味してよい。
　動物細胞の培養は、例えば、本発明の組成物を用いて実施されてよい。本発明の組成物を用いて動物細胞を培養することにより、動物細胞の培養を有効成分の存在下で実施することができる。本発明の組成物は、例えば、培地として動物細胞の培養に用いてよい。すなわち、例えば、本発明の組成物が培地である場合、本発明の組成物（すなわち、培地）で動物細胞を培養してよい。すなわち、「本発明の組成物を用いて動物細胞を培養する」とは、例えば、培地である本発明の組成物で動物細胞を培養することを意味してよい。また、本発明の組成物は、例えば、培地添加物として動物細胞の培養に用いてよい。すなわち、例えば、本発明の組成物が培地添加物である場合、本発明の組成物（すなわち、培地添加物）を培地に添加し、本発明の組成物を添加した培地で動物細胞を培養してよい。すなわち、「本発明の組成物を用いて動物細胞を培養する」とは、例えば、培地添加物である本発明の組成物を培地に添加し、本発明の組成物を添加した培地で動物細胞を培養することを意味してよい。
　培地組成や培養条件は、培養が有効成分の存在下で実施されること以外は、培養細胞により筋組織が形成される限り、特に制限されない。培地組成や培養条件は、例えば、動物細胞の種類等の諸条件に応じて適宜設定することができる。培養は、有効成分の存在下で実施されること以外は、例えば、動物細胞の分化による筋組織の形成（例えば、培養肉の製造）に利用される通常の培地および通常の条件をそのまま、あるいは適宜改変して用いて実施することができる。
　培養は、回分培養（batch culture）、流加培養（Fed-batch culture）、連続培養（continuous culture）、またはそれらの組み合わせにより実施することができる。連続培養としては、灌流培養（perfusion culture）やケモスタット培養（chemostat culture）が挙げられる。なお、培養開始時の培地を、「初発培地」または「基礎培地」ともいう。また、流加培養において培養系（例えば、初発培地）に供給される培地を、「流加培地（feed medium）」ともいう。また、連続培養（これは灌流培養に限られない）において培養系（例えば、初発培地）に供給される培地を、「灌流培地（perfusion medium）」ともいう。また、流加培養または連続培養において培養系に流加培地または灌流培地を供給することを、単に、「培地供給」ともいう。培地供給は、培養の全期間を通じて実施されてもよく、培養の一部の期間においてのみ実施されてもよい。また、培地供給は、連続的に実施されてもよく、間欠的に実施されてもよい。培養（特に、灌流培養等の連続培養）の際には、培養液の引き抜きが実施されてよい。培養液の引き抜きは、培養の全期間を通じて実施されてもよく、培養の一部の期間においてのみ実施されてもよい。培養液の引き抜きは、連続的に実施されてもよく、間欠的に実施されてもよい。培養液の引き抜きと培地供給は、同時に実施されてもよく、そうでなくてもよい。培養は、例えば、形成すべき筋組織（例えば、培養肉）の形状に合わせた足場材を用いて３次元的に実施してよい。
　培養は、例えば、液体培地を用いて実施することができる。
　培養に用いる培地は、例えば、基礎培地、流加培地、および灌流培地について、それぞれ独立に選択することができる。
　培養に用いる培地は、市販の培地であってもよく、適宜調製した培地であってもよい。
　培養に用いる培地としては、動物細胞の培養に必須の成分（例えば、炭素源、窒素源、無機塩、等）を含有する培地が挙げられる。
　培養に用いる培地として、具体的には、ダルベッコ改変イーグル培地（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）（DMEM）、ハムF12培地（Ham’s Nutrient Mixture F12）、DMEM/F12培地、マッコイ5A培地（McCoy’s 5A medium）、最小必須培地（Minimum Essential Medium）（MEM）、イーグル最小必須培地（Eagle’s Minimum Essential Medium）（EMEM）、α改変型イーグル最小必須培地（alpha Modified Eagle’s Minimum Essential Medium）（αMEM）、ロズウェルパーク記念研究所（Roswell Park Memorial Institute）（RPMI）1640培地、イスコフ改変ダルベッコ培地（Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium）（IMDM）、MCDB131培地、ウィリアム培地E（William’s Medium E）、フィッシャー培地（Fischer’s Medium）が挙げられる。
　また、培養に用いる培地（例えば、特に幹細胞（特に多能性幹細胞）の培養に用いる培地であってよい）として、具体的には、STEMPRO（登録商標）hESC SFM培地（Life Technologies社）、mTeSR1培地（STEMCELL Technologies社）、TeSR2培地（STEMCELL Technologies社）、TeSR-E8培地（STEMCELL Technologies社）、Essential 8培地（Life Technologies社）、HEScGRO（商標）Serum-Free Medium for hES cells（Millipore社）、PluriSTEM（商標）Human ES/iPS Medium（EMD Millipore社）、NutriStem（登録商標）hESC XF培地（Biological Industries Israel Beit-Haemek社）、NutriStem（商標）XF/FF Culture Medium（Stemgent社）、AF NutriStem（登録商標）hESC XF培地（Biological Industries Israel Beit-Haemek社）、S-medium（DSファーマバイオメディカル株式会社）、StemFit（登録商標）AK03N培地（味の素株式会社）、hESF9培地、hESF-FX培地、CDM培地、DEF-CS 500 Xeno-Free 3D Spheroid Culture Medium（Cellartis社）、StemFlex培地（Thermo Fisher Scientific社）等が挙げられる。
　また、その他市販の培地としては、CELLiST Basal Media BASAL3、BASAL4P、BASAL10（味の素株式会社）、Opti-MEM（Thermo Fisher Scientific）、RPMI 1640（Thermo Fisher Scientific）、CD293（Thermo Fisher Scientific）、CHO-S-SFMII（Thermo Fisher Scientific）、CHO-SF（Sigma-Aldrich）、EX-CELL CD CHO（Sigma-Aldrich）、EX-CELLTM302（Sigma-Aldrich）、IS CHO-CD（Irvine Scientific）、IS CHO-CDXP（Irvine Scientific）等の動物細胞培養用の培地が挙げられる。
　上記例示したような培地は、例えば、有効成分を添加して培養に用いてよい。
　また、培養に用いる培地は、例えば、本発明の組成物（具体的には、培地である本発明の組成物）であってよい。すなわち、本発明の組成物が培地である場合、本発明の組成物を、そのまま、あるいは適宜、所望の組成の液体培地として調製し、培養に用いてよい。例えば、本発明の組成物を水や水性緩衝液等の水性媒体で希釈して液体培地として調製し、培養に用いてよい。本発明の組成物は、基礎培地、流加培地、および灌流培地から選択される１種またはそれ以上の培地として用いられてよい。すなわち、例えば、流加培養の場合、本発明の組成物は、基礎培地および流加培地の一方または両方として用いられてよい。また、例えば、連続培養の場合、本発明の組成物は、基礎培地および灌流培地の一方または両方として用いられてよい。
　また、培養に用いる培地は、例えば、本発明の組成物（具体的には、培地添加物である本発明の組成物）が添加された培地であってもよい。本発明の組成物が添加される培地は、市販の培地であってもよく、適宜調製した培地であってもよい。本発明の組成物は、基礎培地、流加培地、および灌流培地から選択される１種またはそれ以上の培地に添加して用いられてよい。すなわち、例えば、流加培養の場合、本発明の組成物は、基礎培地および流加培地の一方または両方に添加して用いられてよい。また、例えば、連続培養の場合、本発明の組成物は、基礎培地および灌流培地の一方または両方に添加して用いられてよい。
　培地は、各種培地成分を含有していてよい。培地成分としては、炭素源、アミノ酸源、ペプチド、タンパク質、ビタミン、脂肪酸、脂質、無機成分、ｐＨ緩衝剤、成長因子、サイトカイン、ホルモン、細胞接着因子、細胞外マトリックス成分、血清、抗生物質、遺伝子発現誘導剤が挙げられる。このような培地成分は、いずれも、例えば、動物細胞の生存または増殖に必須または有効であり得る。このような培地成分は、いずれも、例えば、上記例示したような培地に予め含有されていてもよく、上記例示したような培地に添加してもよい。
　炭素源としては、グルコース、フルクトース、スクロース、マルトース等の糖類が挙げられる。
　アミノ酸源としては、アミノ酸が挙げられる。また、ペプチドおよびタンパク質は、いずれも、アミノ酸源の一例であり得る。アミノ酸としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、システイン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、セリン、トレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、プロリン、オルニチンが挙げられる。アミノ酸は、例えば、Ｌ体であってよい。
　ペプチドとしては、ジペプチドやトリペプチドが挙げられる。ペプチドとして、具体的には、グリシルグリシルグリシンや大豆ペプチドが挙げられる。アミノ酸についての記載は、ペプチドを構成するアミノ酸にも準用できる。
　タンパク質としては、アルブミンやトランスフェリンが挙げられる。
　ビタミンとしては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、およびビタミンＫやそれらの前駆体が挙げられる。
　脂肪酸としては、オレイン酸、アラキドン酸、リノール酸が挙げられる。
　脂質としては、コレステロールが挙げられる。
　無機成分としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、リン、各種微量元素（例えば、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｆ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｍｏ、Ｎｉ、Ｓｅ、Ｓｉ、Ｎｉ、Ｂｉ、Ｖ、およびＺｎ）が挙げられる。無機成分として、具体的には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、リン酸二水素ナトリウム等の無機塩が挙げられる。
　ｐＨ緩衝剤としては、炭酸水素ナトリウム、リン酸塩、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（N,N-bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethanesulfonic acid（BES））、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid（HEPES））、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（N-[tris(hydroxymethyl)methyl]glycine（Tricine））が挙げられる。
　成長因子としては、線維芽細胞増殖因子（fibroblast growth factor；FGF）、肝細胞増殖因子（hepatocyte growth factor；HGF）、上皮成長因子（epidermal growth factor；EGF）、トランスフォーミング増殖因子（TGF）－α、トランスフォーミング増殖因子（TGF）－β、血管内皮増殖因子（VEGF）、アクチビンＡ、インスリン様成長因子-1（Insulin-like growth factor-1；IGF-1）が挙げられる。FGFとしては、塩基性線維芽細胞増殖因子（basic fibroblast growth factor；bFGF）が挙げられる。成長因子としては、特に、bFGFが挙げられる。すなわち、培地成分としては、少なくとも、bFGFが用いられてよい。すなわち、培地は、少なくとも、bFGFを含有していてよい。bFGFとしては、ウシ塩基性線維芽細胞増殖因子（bovine basic fibroblast growth factor；bbFGF）が挙げられる。「ウシ塩基性線維芽細胞増殖因子（bovine basic fibroblast growth factor；bbFGF）」とは、ウシ由来（bovine-derived）のbFGFを意味してよい。bbFGFについての「ウシ（bovine）」とは、ウシ（Bos）属生物を意味してよい。ウシ（Bos）属生物としては、Bos taurusが挙げられる。bbFGFは、ウシ（Bos）属生物に見出されるbFGFに限られず、それらの改変体であってもよい。
　サイトカインとしては、インターロイキンが挙げられる。
　ホルモンとしては、デキサメサゾン、ヒドロコルチゾン、エストラジオール、プロゲステロン、グルカゴン、インスリンが挙げられる。
　細胞接着因子または細胞外マトリックス成分としては、Type I　コラーゲン、Type II　コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、ポリ－Ｌ－リシン、ポリ－Ｄ－リシンが挙げられる。
　抗生物質としては、アンホテリシンＢ、カナマイシン、ゲンタマイシン、ストレプトマイシン、ペニシリンが挙げられる。
　有効成分等の各種成分は、いずれも、初発培地、流加培地、灌流培地、またはそれらの組み合わせに含有されていてよい。すなわち、培養の過程において、有効成分等の各種成分を単独で、あるいは任意の組み合わせで、培地に供給してもよい。これらの成分は、いずれも、１回または複数回供給されてもよく、連続的に供給されてもよい。初発培地、流加培地、および灌流培地の組成（例えば、含有する成分の種類および／または濃度）は、同一であってもよく、そうでなくてもよい。すなわち、初発培地に含有される成分の種類は、流加培地または灌流培地に含有される成分の種類と、同一であってもよく、そうでなくてもよい。また、初発培地に含有される各成分の濃度は、流加培地または灌流培地に含有される各成分の濃度と、同一であってもよく、そうでなくてもよい。例えば、流加培地が灌流培養に用いられる場合に、初発培地と流加培地の組成は同一であってもよい。また、組成（例えば、含有する成分の種類および／または濃度）の異なる２種またはそれ以上の流加培地または灌流培地を用いてもよい。例えば、複数回の流加培地または灌流培地の供給が間欠的に実施される場合、流加培地または灌流培地の組成は、各回で同一であってもよく、そうでなくてもよい。また、有効成分等の各種成分は、いずれも、粉末等の、流加培地または灌流培地に含有されない形態で、培地に供給してもよい。例えば、有効成分等の各種成分は、いずれも、本発明の組成物の添加により培地に供給してもよい。
　培養開始時の動物細胞の播種量は、例えば、生細胞数に換算して、1×103 cells/mL以上、1×104 cells/mL以上、1×105 cells/mL以上、1×106 cells/mL以上、または1×107 cells/mL以上であってもよく、1×108 cells/mL以下、1×107 cells/mL以下、1×106 cells/mL以下、1×105 cells/mL以下、または1×104 cells/mL以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせであってもよい。培養開始時の動物細胞の播種量は、具体的には、例えば、生細胞数に換算して、1×103～1×104cells/mL、1×104～1×105cells/mL、1×105～1×106cells/mL、1×106～1×107cells/mL、または1×107～1×108cells/mLであってもよい。培養開始時の動物細胞の播種量は、具体的には、例えば、生細胞数に換算して、1×103～1×108cells/mL、1×104～1×107cells/mL、または1×105～1×106cells/mLであってもよい。生細胞数は、例えば、生死細胞オートアナライザーVi-CELLTMXR（ベックマン・コールター社）を用いて測定することができる。
　培養は、例えば、５～１５％ＣＯ２等のＣＯ２含有雰囲気下で実施してよい。培地のｐＨは、例えば、中性付近であってよい。「中性付近」とは、例えば、ｐＨ６～８、ｐＨ６．５～７．５、またはｐＨ６．８～７．２を意味してよい。培養中、必要に応じて培地のｐＨを調整することができる。培地のｐＨは、アンモニアガス、アンモニア水、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、炭酸マグネシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム等の各種アルカリ性または酸性物質を用いて調整することができる。培養温度は、例えば、３０～３８℃であってよい。培養期間は、例えば、０．５日以上、１日以上、２日以上、３日以上、４日以上、５日以上、６日以上、７日以上、８日以上、９日以上、１０日以上、１２日以上、１５日以上、または２０日以上であってもよく、６０日以下、５０日以下、４０日以下、３０日以下、２５日以下、２０日以下、１５日以下、１２日以下、１０日以下、９日以下、８日以下、または７日以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせであってもよい。培養期間は、具体的には、例えば、１～６０日、３～２５日、または５～２０日であってもよい。培養は、例えば、筋組織（例えば、培養肉）が所望の程度に形成されるまで継続してよい。
　培地中の有効成分濃度は、例えば、0.01 mM以上、0.02 mM以上、0.05 mM以上、0.1 mM以上、0.2 mM以上、0.5 mM以上、1 mM以上、2 mM以上、5 mM以上、10 mM以上、15 mM以上、20 mM以上、または25 mM以上であってもよく、30 mM以下、25 mM以下、20 mM以下、15 mM以下、10 mM以下、5 mM以下、2 mM以下、1 mM以下、0.5 mM以下、0.2 mM以下、0.1 mM以下、0.05 mM以下、または0.02 mM以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせであってもよい。培地中の有効成分濃度は、具体的には、例えば、0.01～0.02 mM、0.02～0.05 mM、0.05～0.1 mM、0.1～0.2 mM、0.2～0.5 mM、0.5～1 mM、1～2 mM、2～5 mM、5～10 mM、10～15 mM、15～20 mM、20～25 mM、または25～30 mMであってもよい。培地中の有効成分濃度は、具体的には、例えば、0.01～30 mM、0.02～15 mM、または0.05～5 mMであってもよい。培地が２種またはそれ以上のコリン系化合物（すなわち、２種またはそれ以上の有効成分）を含有する場合、培地におけるそれら２種またはそれ以上のコリン系化合物の濃度を、それぞれ独立に、あるいは合計で、上記例示した培地中の有効成分濃度の範囲に設定してよい。なお、培地が２種またはそれ以上のコリン系化合物を含有する場合、「培地中の有効成分濃度」とは、特記しない限り、培地におけるそれら２種またはそれ以上のコリン系化合物の総濃度を意味するものとする。
　有効成分等の各種成分は、いずれも、培養の全期間において培地に含有されていてもよく、培養の一部の期間にのみ培地に含有されていてもよい。すなわち、「培養が或る成分を含有する培地で実施される」または「培養時の培地に或る成分が含有される」とは、当該成分が培養の少なくとも一部の期間において培地に含有されていれば足り、当該成分が培養の全期間において培地に含有されていることを要しない。有効成分等の各種成分は、いずれも、例えば、培養開始時に培地に含有されていてもよく、培養開始後に培地に供給されてもよい。また、有効成分等の各種成分は、いずれも、例えば、培養開始時に培地に含有され、且つ、培養開始後（例えば、有効成分の消費後）に培地にさらに供給されてもよい。
　有効成分等の各種成分は、いずれも、例えば、培養の全期間において上記例示した濃度で培地に含有されていてもよく、培養の一部の期間にのみ上記例示した濃度で培地に含有されていてもよい。すなわち、「培養が或る成分を或る濃度で含有する培地で実施される」、「培養時の培地に或る成分が或る濃度で含有される」、または「培養時の培地における或る成分の濃度が或る濃度である」とは、培地中の当該成分の濃度が培養の少なくとも一部の期間において当該濃度の範囲内にあれば足り、培地中の当該成分の濃度が培養の全期間において当該濃度の範囲内にあることを要しない。有効成分等の各種成分は、いずれも、例えば、培養開始時に上記例示した濃度で培地に含有されていてもよく、培養開始後に上記例示した濃度となるように培地に供給されてもよい。また、有効成分等の各種成分は、いずれも、例えば、培養開始時に上記例示した濃度で培地に含有され、且つ、培養開始後（例えば、当該成分の消費後）に上記例示した濃度となるように培地にさらに供給されてもよい。
　「培養の一部の期間」の長さは、筋質改善効果等の所望の効果が得られる限り、特に制限されない。「培養の一部の期間」の長さは、動物細胞の種類や培養期間の長さ等の諸条件に応じて適宜設定できる。「一部の期間」は、例えば、培養の全期間の１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、または９９％以上の期間であってよい。また、「一部の期間」は、例えば、動物細胞が筋管細胞へ分化した後の培養の全期間の１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、または９９％以上の期間であってよい。また、「一部の期間」は、例えば、０．５日以上、１日以上、２日以上、３日以上、４日以上、５日以上、６日以上、７日以上、８日以上、９日以上、１０日以上、１２日以上、または１５日以上の期間であってもよい。
　また、培地中の有効成分等の各種成分の濃度は、いずれも、例えば、培養中の特定の期間を通じての平均値として、上記例示した濃度に設定されてもよい。すなわち、「培養が或る成分を或る濃度で含有する培地で実施される」、「培養時の培地に或る成分が或る濃度で含有される」、または「培養時の培地における或る成分の濃度が或る濃度である」とは、培養中の特定の期間を通じての培地中の当該成分の濃度の平均値が当該濃度の範囲内にあることを意味してもよい。「培養中の特定の期間を通じての培地中のある成分の濃度の平均値」とは、培養中の特定の期間における当該成分の濃度の変動を把握できるものであれば特に制限されないが、例えば、培養中の特定の期間を通じて６０分ごと、３０分ごと、２０分ごと、または１０分ごとに測定された培地中の当該成分の濃度の平均値を意味してよい。「培養中の特定の期間」としては、培養の全期間や培養の一部の期間が挙げられる。「培養の一部の期間」については、上述した通りである。
　有効成分等の各種成分は、いずれも、培養の全期間を通じて培地へ供給されてもよく、培養の一部の期間においてのみ培地へ供給されてもよい。「培養の一部の期間」については、上述した通りである。有効成分等の各種成分は、いずれも、例えば、連続的に培地へ供給されてもよく、間欠的に培地へ供給されてもよい。有効成分等の各種成分は、いずれも、例えば、毎日培地へ供給されてもよく、数日おきに培地へ供給されてもよい。
　流加培地または灌流培地中の有効成分等の各種成分の濃度は、いずれも、例えば、上記例示した培地中の当該成分の濃度の範囲であってよい。また、流加培地または灌流培地中の有効成分等の各種成分の濃度は、例えば、上記例示した培地中の当該成分の濃度の１倍以上、１．１倍以上、１．３倍以上、１．５倍以上、２倍以上、３倍以上、５倍以上、７倍以上、１０倍以上、１５倍以上、または２０倍以上の濃度であってもよく、１００倍以下、７０倍以下、５０倍以下、３０倍以下、２０倍以下、１５倍以下、１０倍以下、７倍以下、５倍以下、３倍以下、２倍以下の濃度であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせであってもよい。流加培地または灌流培地中の有効成分等の各種成分の濃度は、具体的には、例えば、上記例示した培地中の当該成分の濃度の１～２倍１．１～２倍１．３～２倍１．５～２倍２～３倍３～５倍５～７倍７～１０倍、１０～１５倍、１５～２０倍、２０～３０倍、２０～５０倍、２０～７０倍、または２０～１００倍であってもよい。流加培地または灌流培地中の有効成分等の各種成分の濃度は、具体的には、例えば、上記例示した培地中の当該成分の濃度の１～１００倍、２～５０倍、または５～２０倍であってもよい。
　有効成分等の各種成分の濃度は、いずれも、例えば、化合物の検出または同定に用いられる公知の方法により測定することができる。そのような方法としては、HPLC、UPLC、LC/MS、GC/MS、NMRが挙げられる。
　上記のようにして動物細胞を培養することにより、筋組織（例えば、培養肉）が得られる。
＜４＞有効成分の使用
　本発明は、上記例示した用途での有効成分の使用を開示する。すなわち、本発明は、例えば、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）のための有効成分の使用や、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果を得るための有効成分の使用を開示する。また、本発明は、例えば、筋質改善用組成物（例えば、筋肉遅筋化用組成物）の製造のための有効成分の使用や、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果を得るための組成物の製造のための有効成分の使用を開示する。
　また、本発明は、上記例示した用途に用いるための有効成分を開示する。すなわち、本発明は、例えば、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に用いるための有効成分や、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果を得るために用いるための有効成分を開示する。また、本発明は、例えば、筋質改善用組成物（例えば、筋肉遅筋化用組成物）の製造に用いるための有効成分や、筋質の改善（例えば、筋肉の遅筋化）に基づく効果を得るための組成物の製造に用いるための有効成分を開示する。
　以下、非限定的な実施例を参照して、本発明をさらに具体的に説明する。
実施例１　マウス細胞を用いたin vitroでのシチコリンまたはαGPCの筋質改善作用の評価
　本実施例では、シチコリンまたはαGPCを筋管細胞に分化させたC2C12細胞株に曝露し、Myosin heavy chain 7（Myh7）遺伝子の発現変動を指標としてシチコリンまたはαGPCの筋質改善作用を評価した。
筋管細胞（Myotubes）への分化誘導
　筋芽細胞（Myoblasts）として、マウスC3Hの骨格筋筋芽細胞（muscle myoblast）株であるC2C12細胞株（ＤＳファーマバイオメデカル株式会社）を用いた。筋芽細胞を播種するプレートとして、培養面積が3.8 cm2の12ウェルプレートを用い、1ウェルあたり0.16×105個の筋芽細胞を播種した。筋芽細胞は、37℃、5(v/v)%二酸化炭素存在下で培養した。播種面積あたり90％程度に細胞が増殖したのを確認後、分化誘導培地（2(w/v)% ウマ血清、1(w/v)% ペニシリン－ストレプトマイシン、および1(w/v)%グルタミンを含有するDMEM培地）に交換し、筋管細胞（Myotubes）への分化を誘導した。
シチコリンまたはαGPCによるMyh7遺伝子の発現亢進の評価
　筋管細胞への分化を確認後、シチコリンまたはαGPCを1 mMの濃度になるように分化誘導培地に添加した。シチコリンまたはαGPCを添加して24、48、および72時間後に細胞を回収し、RNAを抽出し、リアルタイム定量PCR法を用いてcyclophilin A遺伝子およびMyh7遺伝子の発現を確認した。コントロールとして、シチコリンおよびαGPCをいずれも添加しない培養液から同様に細胞を回収してcyclophilin A遺伝子およびMyh7遺伝子の発現を確認した。cyclophilin A遺伝子は、内部コントロール遺伝子として用いた。Myh7遺伝子は、遅筋線維において高発現する遺伝子であり、筋肉の遅筋化の指標として用いた。cyclophilin A遺伝子用のプライマーとしては配列番号１と２のプライマーを用いた。Myh7遺伝子用のプライマーとしては配列番号３と４のプライマーを用いた。Myh7遺伝子の発現量を、cyclophilin A遺伝子の発現量で標準化した。
結果
　結果を図１～２に示す。図中、Myh7遺伝子の発現量は、シチコリンまたはαGPC添加24，48，および72時間後それぞれについて、コントロール群のMyh7遺伝子発現量を1とする相対値として示した。1 mM シチコリン添加72時間後に、筋管細胞においてMyh7遺伝子発現が有意に亢進上昇した（図１）。また、1 mM αGPC添加48時間後および72時間後に、筋管細胞においてMyh7遺伝子発現が有意に亢進上昇した（図２）。よって、シチコリンとαGPCは、いずれも、筋質を改善する（具体的には、筋肉を遅筋化する）作用を有すると示唆された。
実施例２　マウスを用いたin vivoでのαGPCの筋質改善作用の評価
　C57BL/6Jマウスを用いて、飼育するケージの面積を狭め、活動量を制限することによって誘導される筋質および筋機能の変化に対するαGPCの影響を検討する。マウスの体重、握力、および脂肪重量が均一になるように群分けを行う。飼育ケージとしては広いケージまたは狭いケージを用い、広いケージは横220×縦320×高165 mmのものを、狭いケージは横110×縦160×高130 mmのものを用いる。実験食として、広いケージで飼育するコントロール群には20%カゼインおよび7%大豆油を含む食餌を供与し、狭いケージで飼育する群には20%カゼインおよび7%ラードを含む食餌または20％カゼイン、7％ラード、および0.2％αGPCを含む食餌を供与する。狭いケージで飼育する群は、回転車を用いた運動を付加する群と、しない群に分ける。群構成を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
筋力測定
　筋力は、動物用の握力測定機（Chatillon）（図３）を使用して測定する。握力測定機のハンドル部分の端から1/3エリアにマウスの前肢を捕まらせ、マウスが手を放すまでマウスの尾を実験者がゆっくりと引っ張る。マウスが手を離したときの数字を、5回連続で記録し、その平均値を個体の筋力として算出する。
マウス筋肉の遅筋化の確認
（１）遅筋線維で高発現するMyh7遺伝子の発現確認およびミトコンドリアDNAの定量
　マウスの腓腹筋およびひらめ筋における遅筋線維タイプ遺伝子（Myh7）の発現量およびミトコンドリアDNAの存在量をリアルタイム定量PCRを用いて確認する。
（２）遅筋線維で高発現するMyh7タンパク質の発現確認
　マウスの腓腹筋およびひらめ筋からタンパク質を抽出し、ウエスタンブロッティング法を用いて定量する。すなわち、RIPA（Radio-Immunoprecipitation Assay）バッファーによりタンパク質を抽出し、タンパク質濃度12 μg/10 μLに調整したサンプルを電気泳動に用いる。電気泳動後、膜転写し、GAPDHタンパク質およびMyh7タンパク質を抗体で標識する。化学発光イメージングによりGAPDHタンパク質およびMyh7タンパク質の発現量を測定する。Myh7タンパク質の発現量を、GAPDHタンパク質の発現量で標準化する。
（３）遅筋線維の数の変化の確認
　マウスの腓腹筋およびひらめ筋の凍結組織切片を作成し、遅筋線維および速筋線維の抗体を用いて筋線維タイプを可視化する。作成した切片における各筋線維タイプの本数を数え、遅筋線維タイプの割合を算出する。
血糖値改善の確認
　血糖値の日内変動、または、血中HbA1cを測定する。
血管障害予防の確認
　弓状動脈の血管障害（例えば動脈硬化）のマーカーとなる遺伝子（ICAM, VCAM, MCP-1, E-selectin）の発現を測定する。
体温の測定
　試験期間中のマウスの体表面温度を測定する。
結果
　運動なし群でαGPC投与による筋力の増加、筋肉の遅筋化、ミトコンドリア量の増加、血糖値またはHbA1cの低下、血管障害マーカーの発現低下、および／または体温上昇が確認されると期待される。すなわち、αGPCによって骨格筋の遅筋化が起こり、以て代謝の向上効果が得られると期待される。また、代謝の向上により、血糖値改善効果、血管障害予防効果、および／または体温の上昇効果が得られると期待される。
　運動ありの群で運動による筋力の増加、筋肉の遅筋化、ミトコンドリア量の増加、血糖値またはHbA1cの低下、血管障害マーカーの発現低下、および／または体温上昇が確認され、且つαGPC投与によるそれらの作用の増強が確認されると期待される。すなわち、αGPCによって運動による骨格筋の遅筋化が促進され、以て運動による代謝の向上効果が増強されると期待される。また、αGPCによって運動による代謝の向上が増強されることにより、運動による血糖値改善効果、血管障害予防効果、および／または体温の上昇効果が増強されると期待される。
実施例３　マウスを用いたin vivoでのシチコリンの筋質改善作用の評価
　C57BL/6Jマウスを用いて、飼育するケージの面積を狭め、活動量を30日間制限することによって誘導される筋質および筋機能の変化に対するシチコリンの影響を検討した。マウスの体重、握力、および脂肪重量が均一になるように群分けを行った。飼育ケージとしては広いケージまたは狭いケージを用い、広いケージは横220×縦320×高165 mmのものを、狭いケージは横110×縦160×高130 mmのものを用いた。実験食として、広いケージで飼育するコントロール群には20%カゼインおよび7%大豆油を含む食餌を供与し、狭いケージで飼育する群には20%カゼインおよび7%ラードを含む食餌または20％カゼイン、7％ラード、および0.3％シチコリンを含む食餌を供与した。狭いケージで飼育する群は、回転車を用いた運動を付加する群と、しない群に分けた。群構成を表２に示す。回転車運動は、5日連続実施し、2日休みを設けた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　供与飼料の給餌開始後2日目と8日目に筋力を測定した。筋力は、動物用の握力測定機（Chatillon）（図３）して測定した。握力測定機のハンドル部分の端から1/3エリアにマウスの前肢を捕まらせ、マウスが手を放すまでマウスの尾を実験者がゆっくりと引っ張った。マウスが手を離したときの数字を、5回連続で記録し、その平均値を個体の筋力として算出した。
結果
　結果を図４～５に示す。供与飼料の給餌開始後2日目と8日目のいずれにおいても、コントロールマウス（1群）に比べて、飼育するケージの面積を狭め、活動量を30日間制限したマウス（2群）の筋力は、低下していた。また、供与飼料の給餌開始後2日目と8日目のいずれにおいても、活動量を制限したうえで回転車運動負荷したマウス（3群）の筋力は、2群と比較して上昇する傾向が認められた。また、供与飼料の給餌開始後2日目と8日目のいずれにおいても、活動量を制限したうえで回転車運動負荷とシチコリンを供与したマウス（4群）の筋力は、2群と比較して有意に上昇していた。よって、運動による筋力の増強効果がシチコリン供与によってさらに増強されると示唆された。
実施例４　マウス細胞を用いたin vitroでのセリンの筋質改善作用の評価
　本実施例では、セリンを筋線維芽状態のC2C12細胞株に曝露し、Myosin heavy chain 7（Myh7）遺伝子の発現変動を指標としてセリンの筋質改善作用を評価した。
セリンによるMyh7遺伝子の発現亢進の評価
　筋芽細胞（Myoblasts）として、マウスC3Hの骨格筋筋芽細胞（muscle myoblast）株であるC2C12細胞株（ＤＳファーマバイオメデカル株式会社）を用いた。筋芽細胞を播種するプレートとして、培養面積が3.8 cm2の12ウェルプレートを用い、1ウェルあたり0.16×105個の筋芽細胞を播種した。筋芽細胞は、37℃、5(v/v)%二酸化炭素存在下で培養した。播種面積あたり90％程度細胞が増殖したのを確認後、刺激培地を加えた。セリンはDMEM培地にもともと含まれるため、刺激培地としては、培地に含まれるアミノ酸濃度を5分の1に希釈したDMEM培地に終濃度1、3、または10 mMになるようにセリンを加えたものを用いた。刺激培地を添加して24時間後に細胞を回収し、RNAを抽出し、リアルタイム定量PCR法を用いてcyclophilin A遺伝子およびMyh7遺伝子の発現を確認した。コントロールとして、刺激培地に代えて培地に含まれるアミノ酸濃度を5分の1に希釈したDMEM培地を添加したサンプルから同様に細胞を回収してcyclophilin A遺伝子およびMyh7遺伝子の発現を確認した。cyclophilin A遺伝子は、内部コントロール遺伝子として用いた。Myh7遺伝子は、遅筋線維において高発現する遺伝子であり、筋肉の遅筋化の指標として用いた。cyclophilin A遺伝子用のプライマーとしては配列番号１と２のプライマーを用いた。Myh7遺伝子用のプライマーとしては配列番号３と４のプライマーを用いた。Myh7遺伝子の発現量を、cyclophilin A遺伝子の発現量で標準化した。
結果
　結果を図６に示す。図中、Myh7遺伝子の発現量は、コントロール群のMyh7遺伝子発現量を1とする相対値として示した。セリン添加24時間後に、セリン濃度依存的にMyh7遺伝子発現が上昇した。特に、10 mMセリン添加24時間後に、コントロール群と比較して、有意なMyh7遺伝子発現の上昇が認められた。よって、セリンは、筋質を改善する（具体的には、筋肉を遅筋化する）作用を有すると示唆された。
実施例５　マウスを用いたin vivoでのαGPCの筋質改善作用の評価
　C57BL/6Jマウスを用いて、飼育するケージの面積を狭め、活動量を制限することによって誘導される筋質および筋機能の変化に対するαGPCの影響を検討した。マウスの体重、握力、および脂肪重量が均一になるように群分けを行った。飼育ケージとしては広いケージまたは狭いケージを用い、広いケージは横220×縦320×高165 mmのものを、狭いケージは横110×縦160×高130 mmのものを用いた。実験食として、広いケージで飼育するコントロール群には20%カゼインおよび7%大豆油を含む食餌を供与し、狭いケージで飼育する群には20%カゼインおよび7%ラードを含む食餌または20％カゼイン、7％ラード、および1％αGPCを含む食餌を供与した。狭いケージで飼育する群は、回転車を用いた運動を付加する群と、しない群に分けた。群構成を表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
体組成の測定
　体組成として、体重当たりの脂肪重量および体重当たりの筋肉重量を測定した。脂肪重量および筋肉重量は、体組成分析装置EchoMRI-100（日本レイテック社製）を用いて、それぞれ、脂肪成分量および除脂肪成分量として測定した。
　体重当たりの脂肪重量の測定結果を図７と８に示す。2群と比較して、2群以外の全ての群において、体重当たりの体脂肪量の割合が小さい値で推移した（図７）。飼料給餌開始26日目では、2群と比較して、3群（aGPC供与のみ）でも体重当たりの体脂肪量の割合が少なくなっており、4群（3m/min運動のみ）および6群（6m/min運動のみ）において運動強度依存的に脂肪重量が減少した（図８）。また、飼料給餌開始26日目では、5群（3m/min運動＋aGPC）および7群（6m/min運動＋aGPC）に示すように、運動とaGPCを併用すると運動強度依存的にさらに脂肪量が減少した（図８）。
　体重当たりの筋肉重量の測定結果を図９と１０に示す。2群と比較して、2群以外の全ての群において、体重当たりの筋肉量の割合が大きい値で推移した（図９）。飼料給餌開始26日目では、2群と比較して、3群（aGPC供与のみ）でも体重当たりの筋肉量の割合が多くなっており、4群（3m/min運動のみ）および6群（6m/min運動のみ）では運動強度依存的に筋肉重量が増大した（図１０）。また、飼料給餌開始26日目では、5群（3m/min運動＋aGPC）、7群（6m/min運動＋aGPC）に示すように、運動とaGPCを併用すると運動強度依存的にさらに筋肉量が増大した（図１０）。
　脂肪量の減少および筋肉量の増大は、いずれも、体組成の改善の指標である。また、脂肪量の減少および筋肉量の増大は、いずれも、体の引き締まりの指標でもあり得る。すなわち、上記結果より、aGPCの投与により体組成を改善する効果および体を引き締める効果が得られることが示され、また、aGPCの投与と運動の併用によってさらにそれらの効果が増大することが示された。
クエン酸合成酵素（CS）活性の測定
　試験最終日（飼料給餌開始26日目）にマウスの腓腹筋を採取し、Citrate Synthase Assay Kit ab239712（abcam社）を用いて、腓腹筋中のクエン酸合成酵素（CS）活性を測定した。クエン酸合成酵素（CS）は、ミトコンドリアのATP産生に関わる。
　結果を図１１に示す。2群と比較して、3群（aGPC供与のみ）、5群（3m/min運動＋aGPC）、および7群（6m/min運動＋aGPC）でCS活性が増大した。一方、2群と比較して、4群（3m/min運動のみ）および6群（6m/min運動のみ）ではCS活性の変化は認められなかった。
　CS活性の増大は、ミトコンドリア量の増大の指標である。また、CS活性の増大は、持久力の向上、代謝の向上、および基礎体力の向上の指標でもあり得る。すなわち、上記結果より、aGPCの投与によりミトコンドリア量を増大させる効果、持久力を向上させる効果、代謝を向上させる効果、および基礎体力を向上させる効果が得られることが示された。
筋力測定
　供与飼料の給餌開始後4日目と25日目に筋力を測定した。筋力は、動物用の握力測定機（Chatillon）（図３）を使用して測定した。握力測定機のハンドル部分の端から1/3エリアにマウスの前肢を捕まらせ、マウスが手を放すまでマウスの尾を実験者がゆっくりと引っ張った。マウスが手を離したときの数字を、5回連続で記録し、その平均値を個体の筋力として算出した。
　結果を図１２～１４に示す。2群と比較して、7群（6m/min運動＋aGPC）において、飼料給餌開始4日目以降、筋力が高い値で推移した（図１２）。また、5群（3m/min運動＋aGPC）と6群（6m/min運動のみ）では、飼料給餌開始11日目以降で筋力が増大した（図１２）。また、3群（aGPC供与のみ）では、飼料給餌開始18日目以降に筋力が増大した（図１２）。また、7群（6m/min運動＋aGPC）では、飼料給餌開始4から25日目にかけて、筋力が高い値で維持された。また、飼料給餌開始25日目において、2群と比較して、3群（aGPC供与のみ）、5群（3m/min運動＋aGPC）、6群（6m/min運動のみ）、および7群（6m/min運動＋aGPC）で筋力が増大した（図１４）。
　上記結果より、aGPCの投与により筋力を向上させる効果が得られることが示され、また、aGPCと運動の併用によって早期に筋力を向上させることができることが示された。特に、6m/minの運動とaGPCの併用によって高い筋力が維持されることが示された。また、筋力の向上は、バランス能力の向上、トレーニング効果の向上、リハビリテーション効果の向上、および歩行速度の向上の指標でもあり得る。すなわち、aGPCの単独投与またはaGPCと運動との併用によって筋力を向上させる効果、バランス能力を向上させる効果、トレーニング効果を向上させる効果、リハビリテーション効果を向上させる効果、および歩行速度を向上させる効果が得られると期待される。
対象の体温を調節する効果
　体脂肪とミトコンドリアの内膜のタンパク質（UCP）は、脂質代謝の調節に密接に関わっている（Edward T, et al. New Advances in Adaptive Thermogenesis: UCP1 and Beyond (2019). Cell Metabolism 29, 27-37.）。また、UCPの中でも褐色脂肪組織に存在するUCP1は、活性酸素の調節を介して体温を調節する（Saijo S, et al.  Nardilysin in adipocytes regulates UCP1 expression and body temperature homeostasis(2022). Scientific Reports 12, 3449.）。これらの報告から、αGPCによる体脂肪の改善は、UCP発現の上昇を伴っていた可能性がある。特に、褐色脂肪組織に存在するUCP1発現の上昇により、活性酸素の調節を介して体温を調節する効果が得られると推察される。また、総エネルギー代謝量、および総エネルギー消費量を基礎代謝量で除した値（PAL）は、骨格筋量と密接に関わっている（糸川嘉則ほか .栄養学総論 改定第3版 南江堂(2006) 141-164.；Susan B , et al. Energy requirements and aging(2005).Public Health Nutrition: 8, 1028-1036.）。αGPC投与による骨格筋量の増加により、総エネルギー消費量とPALが増大し、以て身体の熱産生（体温）を調節する効果が得られると推察される。
対象の血糖値を調節する効果
　筋質の改善は、筋インスリン抵抗性の改善をもたらす（Karla E, et al. Role of Skeletal Muscle in Insulin Resistance and Glucose Uptake(2021). Compr Physiol. 10, 785-809.）。筋インスリン抵抗性の改善は、筋肉における糖取り込みを正常化する。これらの報告から、αGPC投与による筋質改善により、血糖値を調節する効果が得られると推察される。
対象の血中脂質濃度を調節する効果
　αGPC投与による体脂肪の改善は、脂質代謝改善により体脂肪蓄積の抑制をもたらした結果であると考えられる。よって、αGPC投与により、血中の脂質クリアランスを改善する効果が得られると推察される。
　本発明によれば、筋質を改善する技術およびそれに関連する技術を提供できる。
＜配列表の説明＞
配列番号１～４：プライマー

Claims (29)

  1. 　コリン系化合物を含有する、筋質改善用組成物。
  2. 　コリン系化合物を含有する、筋質改善に基づく効果を得るための組成物。
  3. 　前記筋質改善に基づく効果が、筋肉中のミトコンドリア量を増大させる効果、体組成を改善する効果、持久力を向上させる効果、代謝を向上させる効果、バランス能力を向上させる効果、筋力を向上させる効果、歩行速度を向上させる効果、体を引き締める効果、基礎体力を向上させる効果、トレーニング効果を向上させる効果、リハビリテーション効果を向上させる効果、対象の体温を調節する効果、対象の血糖値を調節する効果、対象の血中脂質濃度を調節する効果、ならびに筋肉に関連する望ましくない症状を予防、改善、および／または治療する効果からなる群より選択される１種またはそれ以上の効果である、請求項２に記載の組成物。
  4. 　前記症状が、廃用性筋萎縮、神経原性筋萎縮、筋原性筋萎縮、重症筋無力症、悪液質、フレイル、運動器症候群、メタボリックシンドローム、基礎体力の低下、歩行速度の低下、腰痛、肩こり、頭痛、高血糖、高脂血症、血管障害、低体温、および冷え性からなる群より選択される１種またはそれ以上の症状である、請求項３に記載の組成物。
  5. 　前記筋質改善が、筋肉の遅筋化である、請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物。
  6. 　前記コリン系化合物が、ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、シチコリン、コリン、リン酸コリン、ホスホコリン、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、およびセリンからなる群より選択される１種またはそれ以上の成分である、請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物。
  7. 　前記コリン系化合物が、ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、シチコリン、およびセリンからなる群より選択される１種またはそれ以上の成分である、請求項１～６のいずれか１項に記載の組成物。
  8. 　医薬組成物である、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。
  9. 　食品組成物である、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。
  10. 　前記コリン系化合物の含有量が、100 ppm(w/w)～99.9 %(w/w)である、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
  11. 　身体運動の実施と併用される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の組成物。
  12. 　身体運動の実施と併用された場合に、身体運動の実施と併用されない場合と比較して、前記組成物を投与する対象において早期に筋力が向上する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の組成物。
  13. 　コリン系化合物を対象に投与する工程を含む、対象の筋質を改善する方法。
  14. 　コリン系化合物を対象に投与する工程を含む、対象において筋質改善に基づく効果を得る方法。
  15. 　前記筋質改善に基づく効果が、筋肉中のミトコンドリア量を増大させる効果、体組成を改善する効果、持久力を向上させる効果、代謝を向上させる効果、バランス能力を向上させる効果、筋力を向上させる効果、歩行速度を向上させる効果、体を引き締める効果、基礎体力を向上させる効果、トレーニング効果を向上させる効果、リハビリテーション効果を向上させる効果、対象の体温を調節する効果、対象の血糖値を調節する効果、対象の血中脂質濃度を調節する効果、ならびに筋肉に関連する望ましくない症状を予防、改善、および／または治療する効果からなる群より選択される１種またはそれ以上の効果である、請求項１４に記載の方法。
  16. 　前記症状が、廃用性筋萎縮、神経原性筋萎縮、筋原性筋萎縮、重症筋無力症、悪液質、フレイル、運動器症候群、メタボリックシンドローム、基礎体力の低下、歩行速度の低下、腰痛、肩こり、頭痛、高血糖、高脂血症、血管障害、低体温、および冷え性からなる群より選択される１種またはそれ以上の症状である、請求項１５に記載の方法。
  17. 　前記コリン系化合物の投与量が、0.01 mg/kg体重/日以上である、請求項１３～１６のいずれか１項に記載の方法。
  18. 　前記コリン系化合物の投与量が、1000 mg/kg体重/日以下である、請求項１３～１７のいずれか１項に記載の方法。
  19. 　身体運動の実施と併用される、請求項１３～１８のいずれか１項に記載の方法。
  20. 　身体運動の実施と併用された場合に、身体運動の実施と併用されない場合と比較して、前記対象において早期に筋力が向上する、請求項１３～１９のいずれか１項に記載の方法。
  21. 　コリン系化合物の存在下で動物細胞を培養する工程を含む、培養肉の筋質を改善する方法。
  22. 　コリン系化合物の存在下で動物細胞を培養する工程を含む、培養肉を製造する方法。
  23. 　前記製造される培養肉が、筋質が改善された培養肉である、請求項２２に記載の方法。
  24. 　前記筋質改善が、筋肉の遅筋化である、請求項１３～２１および２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. 　前記遅筋化により、培養肉の食感および／または培養肉のフレーバーが向上する、請求項２４に記載の方法。
  26. 　前記食感の向上が、培養肉の保水性の向上および／または培養肉の多汁性の向上である、請求項２５に記載の方法。
  27. 　前記フレーバーの向上が、遊離アミノ酸量の増大による培養肉の呈味の向上である、請求項２５または２６に記載の方法。
  28. 　前記コリン系化合物が、ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、シチコリン、コリン、リン酸コリン、ホスホコリン、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、およびセリンからなる群より選択される１種またはそれ以上の成分である、請求項１３～２７のいずれか１項に記載の方法。
  29. 　前記コリン系化合物が、ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、シチコリン、およびセリンからなる群より選択される１種またはそれ以上の成分である、請求項１３～２８のいずれか１項に記載の方法。
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