WO2004065960A1 - 新規スクリーニング方法 - Google Patents

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WO2004065960A1
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protein
salt
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Yasuaki Ito
Ryo Fujii
Shuji Hinuma
Shoji Fukusumi
Minoru Maruyama
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Takeda Pharmaceutical Company Limited
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    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/02—Screening involving studying the effect of compounds C on the interaction between interacting molecules A and B (e.g. A = enzyme and B = substrate for A, or A = receptor and B = ligand for the receptor)

Definitions

  • the present invention relates to the use of human, mouse and rat-derived G protein-coupled receptor protein (142273), a novel rat-derived G protein-coupled receptor protein (144273) and the like.
  • human, mouse and rat-derived G protein-coupled receptor protein 142273
  • a novel rat-derived G protein-coupled receptor protein 144273
  • G protein-coupled receptor proteins GPCRs
  • 7 TMRs seven transmembrane receptor proteins
  • G protein-coupled receptor proteins are present on the surface of various functional cells in living cells and organs, and are used as physiological targets as molecules that regulate the functions of those cells and organs, such as hormones, neurotransmitters and bioactive substances. Plays an important role.
  • the receptor transmits a signal into a cell through binding to a physiologically active substance, and this signal causes various reactions such as suppression of activation and activation of the cell.
  • physiological functions are regulated under the control of many hormones, hormone-like substances, neurotransmitters or bioactive substances.
  • bioactive substances exist in various parts of the body, It regulates its physiological functions through corresponding receptor proteins.
  • receptor proteins There are many unknown hormones, neurotransmitters, and other physiologically active substances in living organisms, and the structures of their receptor proteins have not been reported so far. Furthermore, it is often unknown whether subtypes exist in known receptor proteins.
  • Clarifying the relationship between substances that regulate complex functions in living organisms and their specific receptor proteins is a very important tool for drug development.
  • the functions of receptor protein genes expressed in vivo must be elucidated and expressed in an appropriate expression system. It was necessary.
  • An object of the present invention is to find a ligand for 14273, and to provide a screening method for a 14273 agonist or antagonist using the ligand. Disclosure of the invention The present inventors have conducted intensive studies and found that the endogenous ligand of human and mouse 14273 is a fatty acid.
  • 1 4 2 7 3 pituitary, adipose tissue, intestinal tissue, it is highly expressed such in colon cancer cells, fatty acid 1 4 2 7 Intracellular C a 2 + concentration increased by acting on the 3 It has been found that inhibition of intracellular cAMP production, activation of MAP kinase, suppression of adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion, suppression of glycerol production from fat cells, suppression of lipolysis, and the like occur. The present inventors have further studied based on these findings, and as a result, have completed the present invention.
  • G protein-coupled receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8, and a portion thereof
  • G protein-coupled receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8, and a portion thereof Peptide or its salt
  • a compound or its salt that changes the binding property between the receptor protein or its salt and fatty acid or its salt characterized by containing a fatty acid or its salt Cleaning kit
  • a fatty acid or a salt thereof which is obtained by using the screening method according to the above [1] or the screening kit according to the above [2], and represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8
  • a G protein-coupled receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, or SEQ ID NO: 8, a portion thereof Peptide or salt thereof
  • the receptor A compound or a salt thereof that alters the binding property between the receptor protein or a salt thereof and a fatty acid or a salt thereof, and a method for screening an agonist or an antagonist to the receptor protein or a salt thereof,
  • [5] (1) a G-protein-coupled receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8, and a portion thereof Or (2) an agonist against the receptor protein or a salt thereof, which comprises a compound or a salt thereof that changes the binding property between the receptor protein or a salt thereof and a fatty acid or a salt thereof.
  • Antagonist screening kit
  • a pharmaceutical comprising a compound or a salt thereof that changes the binding property of
  • An agonist for a G protein-coupled receptor protein or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Contains diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity , Pituitary dysfunction, cancer, memory and learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA, high neutrality Steatosis, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anorexia nervous system, secretion of intestinal hormones or cardiovascular disease (especially diabetes, hyperlipidemia, obesity, atherosclerosis, narrowing Agent for the prophylaxis or treatment of disease or myocardial
  • amino acid represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, or SEQ ID NO: 8 A stress regulator containing an agonist against a G protein-coupled receptor protein or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the sequence, an inhibitor of glycerol production from adipocytes, a decrease in blood glycerol Agent, lipolysis inhibitor or insulin resistance inhibitor,
  • An adrenal corticotropic hormone (ACTH) secretion inhibitor an adrenal corticotropic hormone (ACTH) secretion inhibitor
  • An agonist against a G protein-coupled receptor protein or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Contains ACTH-producing tumors, Cushing's disease, infectious diseases, secondary adrenocortical dysfunction, peptic ulcer, diabetes, psychiatric disorders, cataracts, glaucoma, tuberculosis, hypertension, Cushing's syndrome or atrophy of the adrenal cortex.
  • [1 2] Contains an antagonist to a G protein-coupled receptor protein or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8.
  • Diabetes glucose intolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hypolipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, Pituitary dysfunction, cancer, memory and learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA, high neutrality Steatosis, fatty liver, thermogenetic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anorexia nervosa, impaired secretion of intestinal hormones or cardiovascular diseases (especially anorexia nervosa, obesity, especially visceral fat)
  • An antagonist to a G protein-coupled receptor protein or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 A stress regulator, a glycerol production accelerator from fat cells, a blood Darceol-elevator, a lipolysis promoter or an insulin resistance promoter, [14] An antagonist to a G protein-coupled receptor protein or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Adrenal corticotropin (ACTH) secretagogue,
  • ACTH Adrenal corticotropin
  • Antagonist to G protein-coupled receptor protein or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, polymyositis, rheumatic fever, scleroderma, renal disease, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitial pneumonia, ulcerative colitis, Cholestatic acute hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis, encephalomyelitis, peripheral neuritis, multiple sclerosis, myasthenia gravis, facial paralysis, hemolytic anemia, granulocytopenia, purpura, Aplastic anemia, leukemia, malignant lymphoma, acute chronic adrenocortical dysfunction, adrenal genital syndrome, malignant exo
  • a test compound comprising a G protein-coupled receptor protein having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, or SEQ ID NO: 8 cells (e.g., CHO cells, adipocytes, a t T - 2 0 cells, 3 T 3- L 1 cells) intracellular C a 2 + level increasing activity when contacted, intracellular c AMP production suppressing activity,
  • An agonist against the receptor protein or a salt thereof which is characterized by measuring the phosphorylation or activation of MAP kinase, the activity of inhibiting the secretion of adrenocorticotropic hormone (ACTH), the activity of inhibiting glycerol production, or the activity of inhibiting lipolysis.
  • a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof comprising an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8, or Diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina pectoris, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity containing the salt , Obesity, pituitary dysfunction, cancer, memory and learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, insulina Lergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA disease, hypertriglyceridemia, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorder, anorexia nervosa Prophylactic and therapeutic agents for intestinal hormone secretion disorders or cardiovascular diseases (especially diabetes, hyperlipidemia, obesity, atherosclerosis,
  • a salt modulator containing a salt thereof, a glycerol production inhibitor from fat cells, a blood Darceol lowering agent, a lipolysis inhibitor or an insulin resistance inhibitor Or a salt modulator containing a salt thereof, a glycerol production inhibitor from fat cells, a blood Darceol lowering agent, a lipolysis inhibitor or an insulin resistance inhibitor,
  • a stress regulator comprising a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a glycerol, a glycerol production inhibitor from fat cells, a blood darcerol lowering agent, a lipolysis inhibitor or an insulin resistance inhibitor,
  • [23] encodes a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8
  • a corticotropin-stimulating hormone (ACTH) secretion inhibitor comprising a polynucleotide comprising
  • G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Tumors, Cushing's disease, infectious diseases, secondary adrenocortical dysfunction, peptic ulcer, diabetes, psychiatric disorders, cataracts, glaucoma, tuberculosis containing polynucleotides containing Prevention of sexual diseases, hypertension, Cushing's syndrome or atrophy of the adrenal cortex
  • antibodies that contain antibodies to its salts diabetes, impaired glucose tolerance, getosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetes mellitus, diabetic retinopathy, hypolipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, Dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction, cancer, memory and learning disorders, stupor fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, Hyperglycemia, high FFA, hypertribasic steatosis, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorder, anorexia, impaired secretion of intestinal hormones or cardiovascular disease (especially anorexia, obesity, I An agent for the prophylaxis or treatment of visceral fat accumulation
  • amino acid represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 A stress regulator comprising an antibody against a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the sequence, promotion of glycerol production from adipocytes Agent, blood darcerol elevating agent, lipolysis promoter or insulin resistance promoter,
  • antibodies containing antibodies to its salts diabetes, bran tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetes mellitus, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, Sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction, cancer, memory and learning disorders, kidney fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia Diagnostic agents for hyperglycemia, high FFA, high triglycerideemia, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anorexia nervosa, intestinal hormone secretion disorders or cardiovascular diseases,
  • amino acid represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, or SEQ ID NO: 8 A stress diagnostic agent comprising an antibody against a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the sequence,
  • ACTH-producing tumors containing antibodies to its salts Cushing's disease, infectious diseases, secondary adrenocortical dysfunction, peptic ulcer, diabetes, psychiatric disorders, cataracts, glaucoma, tuberculosis, hypertension, Tusing syndrome, Adrenocortical atrophy, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, polymyositis, rheumatic fever, scleroderma, renal disease, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitial pneumonia, ulcerative colitis, bile Congestive acute hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis, liver cirrhosis
  • amino acid represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, or SEQ ID NO: 8 A nucleotide sequence complementary to a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence, or a part thereof.
  • a corticotropin-stimulating hormone (ACTH) secretagogue comprising a polynucleotide comprising a nucleotide sequence complementary to or a part of a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding
  • a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, or SEQ ID NO: 8 Chronic rheumatoid arthritis, systemic erythematosus, polymyositis, rheumatic fever, scleroderma containing a polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to a polynucleotide containing an encoding polynucleotide or a part thereof , Renal disease, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitial pneumonia, ulcerative colitis, cholestatic acute hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis, cerebral myelitis, peripheral neuritis , Multiple sclerosis, myasthenia gravis, facial palsy, hemolytic anemia
  • a corticotropin (ACTH) secretion inhibitor comprising a compound or a salt thereof that increases the expression level
  • a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Tumors, Cushing's disease, infectious diseases, secondary adrenocortical dysfunction, peptic ulcer, diabetes, psychiatric disorders, cataracts, glaucoma, tuberculosis, which contain compounds that increase the expression level of ⁇ Prevention and treatment of hypertension, Cushing's syndrome or atrophy of the adrenal cortex,
  • a corticotropin (ACTH) secretagogue comprising a compound or a salt thereof that reduces the expression level of
  • a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, or SEQ ID NO: 8 Chronic rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, polymyositis, rheumatic fever, scleroderma, renal disease, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitium containing a compound that reduces the amount Pneumonia, ulcerative colitis, cholestatic acute hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis, encephalomyelitis, peripheral neuritis, multiple sclerosis, myasthenia gravis, facial palsy, hemolytic anemia , Granulocytopenia, purpura, aplastic anemia, leukemia, malignant lymphoma
  • a G protein comprising an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8, comprising a fatty acid or a salt thereof Signal transduction enhancer of coupled receptor protein,
  • a G protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, or SEQ ID NO: 8 A coupled receptor protein, a partial peptide thereof or a salt thereof;
  • an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Administering an effective amount of an agoquest to a G protein-coupled receptor protein or a salt thereof, which has the same or substantially the same amino acid sequence as diabetes or glucose tolerance.
  • a mammal a mammal, (i) a G protein conjugate containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, or SEQ ID NO: 8 Type receptor protein, its partial peptide or its salt,
  • G containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Protein-coupled receptor protein, its partial peptide or its salt, (ii) a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Or (iii) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8.
  • ACTH-producing JS ulcer Cushing's disease, infectious disease, secondary adrenocortical dysfunction, peptic ulcer, diabetes, psychiatric disorder characterized by administering an effective amount of an agonist against the contained G protein-coupled receptor protein or a salt thereof How to prevent and treat cataract, glaucoma, tuberculosis, hypertension, Cushing's syndrome or adrenocortical atrophy,
  • a mammal comprising (i) a G fragment containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8; An antibody against a protein-coupled receptor protein, a partial peptide thereof, or a salt thereof; (ii) an amino acid identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 A polynucleotide comprising a nucleotide sequence complementary to a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof or a partial sequence thereof, or (iii) SEQ ID NO: : A G protein-coupled receptor protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy
  • SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: No .: G protein-coupled receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 8, an antibody against a partial peptide or a salt thereof
  • SEQ ID NO: 1 sequence A polynucleotide containing a polynucleotide encoding a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8
  • Iii identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Characterized by administering an effective amount of an antagonist to a G protein-coupled receptor protein or a salt thereof containing the amino acid sequence of Stress adjustment method to, glycerin port Lumpur generation method for promoting from adipocytes, blood Daruse port Lumpur rise method, lip
  • G containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, or SEQ ID NO: 8 An antibody against a protein-coupled receptor protein, a partial peptide thereof, or a salt thereof; (ii) an amino acid identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 (Iii) a polynucleotide comprising a base sequence complementary to a polynucleotide-containing polynucleotide or a part thereof, which is complementary to a G protein-coupled receptor protein containing a sequence or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof; or G protein-coupled receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Quality or adrenocorticotropic hormone (
  • a G protein conjugate containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, or SEQ ID NO: 8 (Ii) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8; G protein containing A polynucleotide comprising a nucleotide sequence complementary to a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding a protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof or a polynucleotide comprising a part thereof; or (iii) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: Administering an effective amount of an antagonist to a G protein-coupled receptor protein or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 3 or SEQ ID NO: 8 Rheumatoid arthritis, systemic lupus
  • Diabetes impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, Pituitary dysfunction, cancer, memory and learning disorders, spleen exhaustion, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancerous cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA, high triglycerides , Fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anorexia nervous system, secretion of intestinal hormones or circulatory diseases (especially diabetes, hyperlipidemia, obesity, arteriosclerosis, angina or myocardium) (I) containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 for producing a preventive or therapeutic agent for infarction) G protein conjugated receptor (Ii) containing
  • an agent for suppressing adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion (i) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8
  • a G protein-coupled receptor one protein containing an amino acid sequence, a partial peptide thereof or a salt thereof, (ii) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8
  • G protein-coupled receptor containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 for producing a therapeutic agent
  • an amino acid having the same or substantially the same amino acid sequence as that represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 A polynucleotide containing a polynucleotide encoding a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof containing a noic acid sequence, or (iii) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8.
  • Use of an agonist for a G protein-coupled receptor containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 for producing a therapeutic agent
  • Diabetes impaired glucose tolerance, ketolysis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity Disorders, pituitary dysfunction, cancer, memory and learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA , Hypertribasic steatosis, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anorexia nervosa, impaired secretion of intestinal hormones or cardiovascular diseases (especially anorexia nervosa, obesity, especially visceral fat storage obesity) (I) containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 for producing a preventive or therapeutic agent
  • G protein-coupled receptor protein (Ii) contains
  • SEQ ID NO: 1 for producing a stress regulator, a glycerol production promoter from fat cells, a blood glycerol-elevating agent, a lipolysis promoter or an insulin resistance promoter Or an antibody against a G protein-coupled receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8, a partial peptide thereof or a salt thereof,
  • SEQ ID NO: 1 A G protein-coupled receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Or a polynucleotide comprising a nucleotide sequence complementary to a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a partial peptide thereof or a part thereof, or
  • SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: Use of an antagonist to a G
  • a method for producing a corticotropin-stimulating hormone (ACTH) secretagogue (i) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8
  • a polynucleotide or (iii) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8
  • an antagonist to a G protein-coupled receptions terpolymers protein comprising,
  • a G protein-coupled receptor protein or a salt thereof which has the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8
  • diabetes glucose intolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity , Obesity, pituitary dysfunction, cancer, memory-learning disorder, kidney fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA Disease, hypertriglyceridemia, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorder, anorexia dysfunction, intestinal hormone secretion disorder or cardiovascular disease (especially diabetes, hyperlipidemia, obesity, atherosclerosis, narrowing) heart , Myocardial infarction, an
  • a G protein-coupled receptor protein or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 (I) diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, Obesity, obesity, pituitary dysfunction, cancer, memory and learning disorders, victory fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA Disease, hypertriglyceridemia, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorder, anorexia nervosa, impaired secretion of intestinal hormones or cardiovascular disease (especially anorexia nervosa, obesity, especially visceral fat storage) (Ii) stress regulator,
  • [73] (1) (i) a G protein-conjugated form containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 An agonist or antagonist to the receptor protein, or (and) (ii) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8. (2) (i) diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, or a compound or a salt thereof that alters the expression level of the contained G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof.
  • Diabetic retinopathy hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction, cancer, memory learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, a Insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA disease, hypertriglyceridemia, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorder, anorexia, Prevention and treatment of intestinal hormone secretion disorders or cardiovascular diseases (especially diabetes, hyperlipidemia, obesity, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, anorexia nervosa, obesity), (ii) stress regulation Drugs, regulators of glycerol production from fat cells, regulators of blood glycerol, regulators of lipolysis, regulators of insulin resistance, (iii) regulators of adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion, (iv) tumors producing ACTH
  • a G protein-coupled receptor protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8, a partial peptide thereof or a salt thereof,
  • a polynucleotide comprising the polynucleotide encoding the G protein-coupled receptor protein according to the above [74],
  • the G protein-coupled form of [74] which comprises culturing the transformant of [78] to produce the G protein-coupled receptor protein or salt thereof of [74].
  • a method for producing a receptor protein or a salt thereof is provided.
  • a G protein-coupled receptor protein (hereinafter, referred to as a G protein-coupled receptor protein comprising an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3; (Sometimes abbreviated as 14273), when the partial peptide or a salt thereof is contacted with a fatty acid or a salt thereof, and (ii) 14273, the partial peptide or a salt thereof, and a fatty acid or a salt thereof. [1] characterized in that the comparison is made with the case of contact with the test compound. Described screening method,
  • the labeled fatty acid or a salt thereof is cultured by culturing a transformant transformed with a recombinant vector containing a DNA containing DNA encoding 14427.
  • a labeled fatty acid or a salt thereof and a test compound are brought into contact with 142473 expressed on the cell membrane of the transformant,
  • the screening method according to the above [1] which comprises measuring and comparing the amount of labeled fatty acid or a salt thereof to 142733;
  • the cell stimulating activity through 14273 was measured when the compound was brought into contact with 14273 and when the compound that activates 14273 and the test compound were brought into contact with 14273 expressed in the cell membrane of the transformant, and compared.
  • [91] (1) (i) a labeled fatty acid or a salt thereof or (ii) a labeled compound or a salt thereof that changes the binding property between the receptor protein or its salt and a fatty acid or its salt, (2) each drug and (i) a labeled fatty acid or its salt or (ii) the labeled compound or its salt, protein (I) a labeled fatty acid or a salt thereof or (ii) a cell or a cell membrane containing the labeled compound or a salt thereof, and the receptor protein when the cell is contacted with a cell or a cell membrane fraction thereof containing
  • the method according to any one of [69] to [71], wherein the amount of binding to the fraction is measured.
  • a cell containing the receptor protein comprising (i) a fatty acid or a salt thereof or (ii) a compound or a salt thereof that alters the binding property between the receptor protein or a salt thereof and a fatty acid or a salt thereof.
  • the method according to any of the above-mentioned [69] to [71], comprising measuring activation, adrenocorticotropic hormone (AC TH) secretion inhibitory activity, glycerol production inhibitory activity, or lipolysis inhibitory activity.
  • AC TH adrenocorticotropic hormone
  • [93] Contains a G protein-coupled receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, a partial peptide thereof, or a salt thereof (I) diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual function Disorders, obesity, obesity, pituitary dysfunction (eg anterior pituitary hypofunction, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion Syndrome), cancer (for example, colorectal cancer), memory-learning disorder, win JI storage fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia High FFA, high triglycerides
  • connective tissue disease eg, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, polymyositis, rheumatic fever, scleroderma
  • renal disease eg, nephrotic
  • respiratory disease eg, bronchial asthma
  • Pulmonary tuberculous pleurisy e.g, Pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitial pneumonia
  • digestive system diseases eg, ulcerative colitis, cholestatic acute hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis
  • neuromuscular diseases eg, encephalomyelitis, peripheral neuritis, multiple sclerosis, myasthenia gravis, facial paralysis
  • blood disorders eg, hemolytic anemia, granulocytopenia, purpura, aplastic anemia, leukemia, Malignant lymphoma
  • diabetes glucose intolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity , Pituitary dysfunction (eg, hypopituitarism, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (eg, , Colorectal cancer), memory and learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy or cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA Hypertribasic steatosis, fatty liver, impaired thermosteatosis
  • a G protein-coupled receptor protein or a partial peptide thereof comprising an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 SiRNA for the encoding polynucleotide,
  • siRNA (ml4i561 in Example 11) comprising a sense strand consisting of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 21 and an antisense strand consisting of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 22
  • siRNA according to the above [95]
  • a diagnostic agent comprising the si RNA according to the above [95],
  • cholelithiasis eating disorders, anorexia nervosa, intestinal hormone secretion disorders or cardiovascular diseases (especially anorexia nervosa, obesity, especially visceral lupus fat accumulation obesity)
  • a stress regulator comprising the siRNA according to the above [95], a glycerol production promoter from fat cells, a blood glycerol enhancer, a lipolysis promoter Or insulin resistance promoter,
  • An adrenal cortex-stimulating hormone (ACTH) secretagogue comprising the si RNA according to the above [95], and
  • rheumatoid arthritis systemic lupus erythematosus, polymyositis, rheumatic fever, scleroderma, renal disease, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, comprising the siRNA of the above [95] Diffuse interstitial pneumonia, ulcerative colitis, acute cholestatic hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis, cerebrospinal myelitis, peripheral neurology, multiple sclerosis, myasthenia gravis, facial palsy , Hemolytic anemia, granulocytopenia, purpura, aplastic anemia, leukemia, malignant lymphoma, acute chronic adrenocortical dysfunction, adrenal genital syndrome, malignant exophthalmia due to thyroid disease, ACTH alone deficiency, herpes rash, Provide preventive and therapeutic agents for rheum
  • Figure 1 shows the results of examining changes in intracellular C a 2 + concentration when the added pressure to the palmitic train acid (P almitoleicacid) 3 0 ⁇ . Coordinates on the vertical axis indicate the fluorescence intensity indicating the intracellular Ca 2+ concentration, and Time (sec.) On the horizontal axis indicates the time elapsed (seconds) after the sample was added. ⁇ indicates human 144273 expression CHO-K1 cells, ⁇ indicates mouse 144273 expression CHO-K1 cells, and mouth indicates control CHO-K1 cells not expressing 144273. Is shown.
  • Figure 2 shows the results of examining the change in intracellular Ca 2+ concentration when 30 ⁇ of linoleic acid was added.
  • the Counts on the vertical axis indicates the fluorescence intensity indicating the intracellular Ca 2+ concentration, and the Time (sec.) On the horizontal axis indicates the time elapsed (seconds) after sample addition.
  • ⁇ indicates 14273-expressing CHO-K1 cells, ⁇ indicates mouse 14273-expressing CHO-K1 cells, and ⁇ indicates control CHO-K1 cells not expressing 14273.
  • Figure 3 shows the results of examining the change in intracellular Ca 2+ concentration when ⁇ -linolenic acid 30 was added.
  • the vertical axis Counts indicates the fluorescence intensity indicating the intracellular Ca 2+ concentration
  • the horizontal axis Time (sec.) Indicates the time elapsed (seconds) after sample addition.
  • ⁇ indicates 14273-expressing CHO-K1 cells
  • ⁇ indicates mouse 14273-expressing CHO-K1 cells
  • ⁇ indicates CHO-K1 cells of a control that does not express 14273.
  • FIG. 4 shows the results of examining the change in intracellular Ca 2+ concentration when 30 ⁇ M of arachidonic acid was added.
  • C unts the fluorescence intensity showing intracellular C a 2 + concentration in the vertical axis, the horizontal axis T i me (se c.) Shows time after sample added pressure (in seconds).
  • ⁇ indicates 14273-expressing CHO-K1 cells
  • ⁇ indicates mouse 14273-expressing CHO-K1 cells
  • ⁇ indicates control CHO-K1 cells not expressing 14273.
  • FIG. 5 shows the results of examining the change in intracellular Ca 2+ concentration when 30 M of docosahexaenoic acid (Doc0sahe X aenoicacid, DHA) was added. Coordinates on the vertical axis indicate fluorescence intensity indicating intracellular Ca 2+ concentration, and Time (sec.) On the horizontal axis indicates elapsed time (seconds) after sample addition.
  • ⁇ indicates 14273-expressing CH0-K1 cells
  • ⁇ indicates mouse 14273-expressing CHO-K1 cells
  • ⁇ indicates CH ⁇ -K1 cells of a control that does not express 14273.
  • Figure 6 shows the distribution of 14273 mRNA expression in various human tissues.
  • Copy number / 25 ng tot RNA indicates the number of copies per 25 ng of tot RNA.
  • FIG. 7 shows the distribution of 14273 mRNA expression in various rat tissues.
  • Copy number Z ngpoly (A) + RNA is the copy per ng poly (A) + RNA. Indicates one number.
  • FIG. 8 shows the results of examining the increased expression of 144273 mRNA in the pituitary gland of rats subjected to water immersion restraint stress.
  • the horizontal axis shows the water immersion time (h).
  • Copies / ngpoly (A) + RNA on the vertical axis indicates the copy number per pyo (A) + ng RNA.
  • FIG. 9 shows the results of examining the effect of fatty acids on cAMP production in human 144273 expression CHO cells.
  • Forsko 1 in shows the case where no fatty acid was added in the presence of forskolin
  • Buty 1 icacid shows the case where butyric acid (30 M) was added in the presence of forskolin
  • DH ⁇ in the presence of forskolin
  • The% on the vertical axis represents the relative amount of cAMP production when each fatty acid was added, when the value obtained by subtracting the base from the cAMP production when stimulate
  • FIG. 10 shows the results of detecting the activation of MAP kinase in CHO cells expressing human 144273 by the addition of fatty acids.
  • CHO_hl 4 273 is the case using CHO cells expressing human 144273
  • CHO-mock is the case using CHO cells not expressing human 144273.
  • Show. ⁇ -1 ino indicates the case where ⁇ -linolenic acid was added, and methy 1 indicates the case where methyl linolenate was added.
  • the numbers (min) indicate the elapsed time (minutes) after sample addition.
  • p44 indicates the phosphorylated and activated ERK1 band.
  • p42 shows the phosphorylated and activated ER2 band.
  • FIG. 11 shows the results of examining the change in the expression of 51 4 273 receptor along with the induction of adipocyte differentiation of 3T3-L1 cells.
  • the horizontal axis indicates the number of days (days) after the induction of adipocyte differentiation of 3T3-L1 cells.
  • the copy number / 25 ngtotal RNA on the vertical axis is a value calculated by calculating the mRNA expression level of the 144273 receptor in the obtained 3T3-L1 cells as the copy number per 25 ng of Tota1 RNA. Is shown.
  • FIG. 12 shows the results of examining the fluctuation of the expression of the 14273 receptor associated with the induction of adipocyte differentiation of primary cultured preadipocytes in rats.
  • Day 0 indicates the case where cells before induction of differentiation were used
  • Day 8 indicates the case where cells 8 days after induction of differentiation were used.
  • the copy number / 25 ng total RNA on the vertical axis indicates the value calculated as the copy number per 25 ng of Total RNA 1 in the obtained primary cultured adipocytes.
  • FIG. 13 shows the results of examining the effect of fatty acids on the suppression of ACTH secretion induced by adrenocorticotropic hormone-releasing factor (CRF) from At T-20 cells.
  • CRF adrenocorticotropic hormone-releasing factor
  • b ase shows the case where no fatty acid was added in the absence of CRF.
  • CRF indicates the case where no fatty acid was added in the presence of CRF (10 nM).
  • ⁇ -LA indicates the case where ⁇ -linolenic acid was added
  • ct-LA indicates the case where ⁇ -linolenic acid was added
  • ⁇ indicates the case where butyric acid was added in the presence of CRF ( ⁇ ⁇ ).
  • FIG. 14 shows the inhibitory effect of fatty acids on lipolysis in 3T3-L1 adipocytes.
  • ⁇ -LA indicates ⁇ -linolenic acid
  • ML indicates methyl linoleate.
  • b a se shows the case where no fatty acid was added.
  • Glycerol (M) indicates the amount of glycerol produced. * Indicates that the isoproterenol-added b a se was significantly suppressed (p ⁇ 0.05). ** indicates that baso is significantly suppressed with the addition of isoproterenol (p ⁇ 0.01).
  • the G protein-coupled receptor protein (hereinafter sometimes abbreviated as 144273) of the present invention is identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8. A protein containing the same amino acid sequence.
  • 142 73 can be, for example, any cell (eg, spleen) of human mammals (eg, guinea pig, rat, mouse, mouse, egret, pig, sheep, horse, monkey, etc.). Cells, neurons, glial cells, S-extracted j3 cells, knee langerhans islets, bone marrow cells, mesangial cells, Langerhans cells, epidermal cells, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, fiber cells, muscle cells, adipocytes , Immune cells (eg, macrophages, T cells, B cells, natural killer cells, mast cells, neutrophils, basophils, eosinophils, monocytes), megakaryocytes, synovial cells, chondrocytes, bone cells, Osteoblasts, osteoclasts, mammary cells, hepatocytes or stromal cells, or precursors of these cells, stem cells or cancer cells), blood cells, or any tissue in
  • amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 examples include, for example, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:
  • amino acid sequence having about 85% or more, preferably 90% or more, more preferably about 95% or more homology with the amino acid sequence represented by 3 or SEQ ID NO: 8 is exemplified.
  • Examples of the protein of the present invention containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 include, for example, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: A protein having an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8, and substantially consisting of a protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Proteins having the same activity are preferred.
  • substantially the same activity examples include a ligand binding activity and a signal information transmitting action.
  • substantially the same means that their activities are the same in nature. Therefore, the activities such as the ligand binding activity and the signal transduction activity are equivalent (eg, about 0.01 to 10 times, preferably about 0.5 to 20 times, more preferably about 0.5 to 2 times).
  • the degree of these activities ⁇ quantitative factors such as the molecular weight of the protein may be different.
  • the activities such as the ligand binding activity and the signal transduction activity can be measured according to a method known per se, for example, according to the screening method described later.
  • 14273 includes: a) one or two or more amino acids in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 (preferably, about 1 to 30; About 10 to 10 amino acids, more preferably several (1 to 5) amino acids deleted; b) amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 An amino acid sequence obtained by adding one or more (preferably about 1 to 30, more preferably about 1 to 10, and more preferably several (1 to 5)) amino acids to the amino acid sequence; c) SEQ ID NO: 1, 1 or 2 or more (preferably about 1 to 30, more preferably about 1 to 10, more preferably several) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 Amino acid sequence in which (1 to 5)) amino acids are replaced with other amino acids Or d) be used et al are such as proteins containing Amino acid sequence combinations thereof.
  • 14273 is an N-terminal (amino terminal) at the left end and a C-terminal (carboxyl terminal) at the right end according to the convention of peptide notation.
  • 14273 including 14273 containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2, has a carboxyl group (—COOH), carboxylate (one COO—), amide (one CONH 2 ) or ester (one COOR ).
  • R in the ester e.g., methyl, Echiru, n- propyl Le, alkyl groups such as isopropyl 'pill or n- butyl, cyclo pentyl, C 3 _ 8 cycloalkyl group such as cyclohexyl, for example Hue - Le, C 6 _ 12 Ariru groups such as alpha-naphthyl, for example, benzyl, phenyl one such phenethyl - C 7, such as 2 alpha-naphthyl ten 2 alkyl group such as an alkyl group or Fei one naphthylmethyl - 14
  • the aralkyl group is used, and the bivaloyloxymethyl group generally used as an oral ester is used.
  • 14273 has a carboxyl group (or carboxylate) other than the C-terminus
  • those in which the carboxyl group is amidated or esterified are also included in 14273.
  • the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.
  • an amino group protecting group of Mechionin residues N-terminal e.g., Horuminore group, C 2 such Asechiru - such as C i-6 Ashiru groups such as 6 Arukanoi Le group
  • an amino group protecting group of Mechionin residues N-terminal e.g., Horuminore group, C 2 such Asechiru - such as C i-6 Ashiru groups such as 6 Arukanoi Le group
  • Substituent on the side chain of amino acid in the molecule for example, 1 OH, 1 SH, amino group, imidazole group , I Ndoru group, guaiacolsulfonate - those like Gino group
  • a suitable protecting group e.g., formyl group, etc.
  • Ashiru groups such as C 2 one 6 Al force Noiru group such as ⁇ Se chill
  • a sugar Complex proteins such as so-called glycoproteins, to which chains are linked are also included.
  • 14273 include, for example, 14273 derived from human having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, 14273 derived from mouse having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 (WO 2002/67868, published sequence Data pace: ACCE SSI ON XP-106 1208, XP_1 29252), rat-derived 14273 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8, and the like are used.
  • Rat-derived 14273 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8 is a novel protein.
  • the partial peptide of 14273 may be any peptide having the partial amino acid sequence of 14273 described above. Any kind of rice may be used.For example, of the 14273 protein molecules, those which are exposed outside the cell membrane and have substantially the same receptor-binding activity as 14273. Is used.
  • the partial peptide of 14273 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 is an extracellular region (hydrophilic site) in a hydrophobic plot.
  • Peptide containing a moiety that was analyzed to be in addition, a peptide partially containing a hydrophobic (Hydrophobic) site can also be used.
  • a peptide containing individual domains may be used, but a peptide containing a plurality of domains at the same time may be used.
  • the number of amino acids in the partial peptide of the present invention may be at least 20 or more, preferably 50 or more, more preferably 100 or more of the amino acid sequences constituting the receptor protein of the present invention. Is preferred.
  • a substantially identical amino acid sequence refers to an amino acid sequence having about 85% or more, preferably about 90% or more, more preferably about 95% or more homology with these amino acid sequences.
  • the partial peptide of the present invention has one or more (preferably about 1 to 10, more preferably several (1 to 5)) amino acids in the amino acid sequence, or 1 or 2 or more (preferably about 1 to 20, more preferably about 1 to 10, and more preferably several (1 to 5)) amino acids are added to the amino acid sequence; or 1 or 2 or more (preferably about 1 to 10, more preferably several, more preferably 1 ⁇ 5 amino acids) may be substituted with another amino acid.
  • the C-terminal may be any of a carboxyl group (one COOH), a carboxylate (one COO—), an amide (one CONH 2 ) or an ester (one COOR).
  • a carboxyl group that is amidated or esterified is also included in the partial peptide of the present invention.
  • the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.
  • the partial peptides of the present invention have a N-terminal methionine residue whose amino group is protected by a protecting group, and a N-terminal side is cleaved in vivo as in the case of the above-mentioned 144273.
  • Gln that has undergone pyroglutamic acid substitution, a substituent on the side chain of the amino acid in the molecule is protected with an appropriate protecting group, or a complex peptide such as a so-called sugar peptide to which a sugar chain is bound, etc. Is also included.
  • Examples of the salt of 144273 or its partial peptide include a physiologically acceptable salt with an acid or a base, and a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable.
  • Such salts include, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, Salts with succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid) are used.
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid
  • organic acids eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid
  • 144273 or a salt thereof can be produced from the above-mentioned human or mammalian cells or tissues by a method for purifying a receptor protein known per se, or encodes 144273 described below. It can also be produced by culturing a transformant containing DNA. Also, the protein can be produced by the protein synthesis method described later or according to the method.
  • human or mammalian tissues or cells are homogenized and then extracted with an acid or the like, and the extract is subjected to reverse phase chromatography, ion exchange chromatography, or the like. Purification and isolation can be carried out by combining the methods described above.
  • a commercially available resin for protein synthesis can be used.
  • resins include, for example, chloromethyl resin, hydroxymethyl resin, benzhydrylamine resin, aminomethyl resin, 4-benzyloxybenzyl alcohol resin, 4-methylbenzhydrylamine resin, PAM resin, 4-Hydroxymethylmethylphenylacetamide methyl resin, polyacrylamide resin, 4- (2 ', 4,1-dimethoxyphenylhydroxymethyl) phenoxy resin,-(2,, 4, dimethylethoxyphenyl Fmoc aminoethyl ) The phenoxy effect can be mentioned.
  • an amino acid having an ⁇ -amino group and a side chain functional group appropriately protected is condensed on the resin in accordance with the sequence of the target protein according to various known condensation methods.
  • the protein is cleaved from the resin, and at the same time, various protecting groups are removed.
  • an intramolecular disulfide bond formation reaction is carried out in a highly diluted solution to obtain the target protein or its amide.
  • carbodimids are particularly preferable.
  • the carpoimides DCC, N, N, diisopropylcarbodiimide, N-ethyl-N '-(3-dimethylaminoprolyl) carpoimide, and the like are used.
  • the ability to add the protected amino acid directly to the resin along with the racemization inhibitor additives e.g., HOBt, HOOBt
  • the racemization inhibitor additives e.g., HOBt, HOOBt
  • pre-protected as a symmetrical anhydride or HOBt ester or HOOBt ester It can be added to the resin after activating the amino acid.
  • the solvent used for activation of the protected amino acid or condensation with the resin can be appropriately selected from solvents known to be usable for the protein condensation reaction.
  • acid amides such as N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride and chloroform, trifluoromethane Alcohols such as ethanol, sulfoxides such as dimethyl sulfoxide, ethers such as pyridine, dioxane and tetrahydrofuran, nitriles such as acetonitrile and propionitrile, and esters such as methyl acetate and ethyl acetate; An appropriate mixture of these is used.
  • the reaction temperature is a known range that can be used for protein bond formation reactions.
  • the temperature is appropriately selected from the range, usually selected from the range of about 120 to 50 ° C.
  • the activated amino acid derivative is usually used in a 1.5 to 4-fold excess.
  • Examples of the protecting group for the starting amino group include Z, Boc, tertiary pentyloxycarbonyl, isobornyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl, C1-Z, Br-Z , Adamantyloxycarbonyl, trifluoroacetyl, phthaloyl, honoleminole, 2-nitrophenylsulfenyl, diphenylphosphinothioyl, Fmoc and the like.
  • the carboxyl group can be, for example, alkyl esterified (for example, methyl, ethyl, propynole, butyl, tertiary butyl, pentopenole, cyclohexinole, heptyl, cyclooctyl, 2-adamantyl, etc.) Or cyclic alkyl esterification), aralkyl esterification (e.g., benzyl estenole, 412 trobenzinole estenole, 4-methoxybenzinole estenole, 4 crobenzinole ester, benzhydryl Esthenolation), fenacinoles esteridani, benzyloxycarbonyl hydrazide, tertiary butoxycarbonyl hydrazide, trityl hydrazide and the like.
  • alkyl esterified for example, methyl, ethyl, propynole, butyl, ter
  • the hydroxyl group of serine can be protected, for example, by esterification or etherification.
  • a group suitable for this esterification for example, a lower alkanol group such as an acetyl group, an aroyl group such as a benzoyl group, a group derived from carbonic acid such as a pentinoleoxycanolebonyl group and an ethoxycarbonyl group, and the like are used.
  • a group suitable for etherification include a benzyl group, a tetrahydrobiranyl group, and a t-butyl group.
  • the protecting group of the phenolic hydroxyl group of tyrosine for example, B z 1, C 1 2 - B z 1, 2- two Torobenjiru, B r-Z, such as tertiary butyl Ru is used.
  • Histidine imidazole protecting groups include, for example, Tos, 4-methoxy 1,2,3,6-Trimethylbenzenesulfonyl, DNP, benzyloxymethinole, Bum, Boc, Trt, Fmoc and the like are used.
  • activated carboxyl groups of the raw materials include, for example, corresponding acid anhydrides, azides, active esters [alcohols (eg, pentachlorophenol, 2,4,5-trichlorophenol, 2,4- di-nitrophenol, Shianome Chino rare Bruno l' Erasmus, Nono 0 La nitrophenol, HONB, N- human Dorokishisukushimi de, N- hydroxycarboxylic phthalic imide, Ru ester], etc. used in the HOB t).
  • the corresponding phosphoric acid amide is used as an activated amino group of the raw material.
  • Methods for removing (eliminating) protecting groups include, for example, catalytic reduction in a hydrogen stream in the presence of a catalyst such as Pd-black or Pd-carbon, or hydrogen fluoride anhydride or methanesulfonic acid.
  • a catalyst such as Pd-black or Pd-carbon, or hydrogen fluoride anhydride or methanesulfonic acid.
  • Trifluoromethanesulfonic acid, and trifluoroacetic acid are treated with an acid using a mixture thereof, or treated with a base such as diisopropylethylamine, triethylamine, piperidine, piperazine, or in a liquid ammo. Reduction with sodium is also used.
  • the elimination reaction by the above-mentioned acid treatment is generally carried out at a temperature of about 120 to 40 ° C.
  • anisol for example, anisol, phenol, thioanisole, methcresolone,, ⁇ latalezonore, dimethinoles
  • a kathion scavenger such as Norefid, 1,4-butanedithiol, and 1,2-ethanedithiol.
  • the 2,4-dinitrophenyl group used as an imidazole protecting group of histidine is removed by thiophenol treatment, and the formyl group used as an indole protecting group of tryptophan is replaced with the above 1,2-ethanedithiol ', 1,
  • it is also removed by alkali treatment with dilute sodium hydroxide solution, dilute ammonia and the like.
  • the protection of the functional group which should not be involved in the reaction of the raw material and the protection group, the elimination of the protective group, the activity of the functional group involved in the reaction, and the like can be appropriately selected from known groups or known means.
  • an amide form of the protein for example, first, the a-carboxyl group of the carboxy-terminal amino acid is protected by amidation, and then the amino acid is added to the amino group side. After extending the tide (protein) chain to the desired length, the protein obtained by removing only the N-terminal ⁇ -amino protecting group of the peptide chain and the protein obtained by removing only the C-terminal carboxyl protecting group are separated. The two proteins are produced and condensed in a mixed solvent as described above. Details of the condensation reaction are the same as described above. After purifying the protected protein obtained by the condensation, all the protecting groups are removed by the above-mentioned method to obtain a desired crude protein. This crude protein is refined using various known purification means, and the main fraction is freeze-dried to obtain an amide of the desired protein.
  • ester of a protein for example, after condensing the ⁇ -force lipoxyl group of the carboxy terminal amino acid with a desired alcohol to form an amino acid ester, the ester of the desired protein is prepared in the same manner as the amide of the protein. Can be obtained.
  • the partial peptide 'of 142,73 or a salt thereof can be produced according to a known peptide synthesis method, or by cleaving 144,273 with an appropriate peptide.
  • a method for synthesizing a peptide for example, any of a solid phase synthesis method and a liquid phase synthesis method may be used. That is, the desired peptide can be produced by condensing a partial peptide or amino acid capable of constituting 144273 with the remaining portion and, if the product has a protecting group, removing the protecting group. Can be. Examples of the known condensation method and elimination of the protecting group include the methods described in the following a) to e).
  • the conventional purification method for example, solvent extraction / distillation “column chromatography” “liquid chromatography” recrystallization, etc. is combined with the part of the present invention.
  • the peptide can be purified and isolated.
  • the partial peptide obtained by the above method is an educt, it can be converted to an appropriate salt by a known method, and conversely, when it is obtained as a salt, it can be converted to an educt by a known method. can do.
  • the polynucleotide encoding 144273 may be any polynucleotide containing the nucleotide sequence (DNA or RNA, preferably DNA) encoding 144273 described above.
  • the polynucleotide is DNA such as DNA or mRNA encoding 144273, and may be double-stranded or single-stranded. In the case of double-stranded, it may be double-stranded DNA, double-stranded RNA or DNA: RNA hybrid. In the case of a single strand, it may be a sense strand (ie, a coding strand) or an antisense strand (ie, a non-coding strand).
  • the mRNA of 144273 can be used. Can be determined.
  • the DNA encoding 147273 may be any of genomic DNA, genomic DNA library, the above-described cDNA derived from cells and tissues, the above-described cDNA library derived from cells and mitogen, and synthetic DNA.
  • the vector used for the library may be any of pacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like.
  • amplification can be performed directly by Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (hereinafter abbreviated as RT-PCR method) using a preparation of total RNA or mRNA fraction from the above-mentioned cell'tissue.
  • DNA encoding 144273 for example, a DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 9, or SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: It has a nucleotide sequence that hybridizes with the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 4 or 9 under high stringent conditions, and comprises the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8. Any DNA may be used as long as it encodes a receptor protein having substantially the same activity as 14273 (eg, ligand binding activity, signal information transmission activity, etc.).
  • Examples of the DNA that can hybridize with the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 9 include, for example, the nucleotide represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 9
  • a DNA containing a nucleotide sequence having a homology of about 85% or more, preferably about 90% or more, more preferably about 95% or more with the sequence is used.
  • Hybridization can be performed by a method known per se or a method analogous thereto, for example, the method described in Molecular Cloning 2nd (J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). You can do it.
  • a commercially available library it can be performed according to the method described in the attached instruction manual. More preferably, it can be carried out under high stringent conditions.
  • the high stringent conditions include, for example, a sodium concentration of about 19 to 4
  • 0 mM preferably about 19-20 mM, and a temperature of about 50-70 ° C, preferably about 60-65 ° C.
  • the sodium concentration is about 19 mM and the temperature is about
  • DNA encoding 14273 DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 2 or the like is used.
  • a DNA encoding mouse-derived 14273 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 As a DNA encoding mouse-derived 14273 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, a DNA having the base sequence represented by SEQ ID NO: 4 and the like are used.
  • the DNA encoding rat-derived 14273 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8 includes DNA comprising the base sequence represented by SEQ ID NO: 9 Are used.
  • a polynucleotide comprising a part of the base sequence of the DNA encoding 144273 or a part of the base sequence complementary to the DNA is a polynucleotide encoding the following partial peptide of the present invention. It is used to mean not only DNA but also RNA.
  • antisense polynucleotides capable of inhibiting the replication or expression of the 144273 gene have been cloned or determined to be DNAs encoding the 144273.
  • Can be designed and synthesized based on the nucleotide sequence information of Such a polynucleotide (nucleic acid) is capable of hybridizing to the RNA of the 144273 gene and capable of inhibiting the synthesis or function of the RNA or interacting with the RNA associated with the 144273 gene. Can regulate and control the expression of the gene through the gene.
  • Polynucleotides that are complementary to the selected sequence of the 1427-related RNA and that can specifically hybridize to the 1427-related RNA are in vivo and in vitro. It is useful for regulating and controlling the expression of 73 genes, and is also useful for treating or diagnosing diseases.
  • the term "corresponding" means having homology or being complementary to a nucleotide, base sequence or a specific sequence of a nucleic acid including a gene.
  • the “correspondence” between a nucleotide, base sequence or nucleic acid and a peptide (protein) usually refers to the amino acid of the peptide (protein) specified by the nucleotide (nucleic acid) sequence or its complement. I have.
  • Antisense polynucleotides are polydeoxyribonucleotides containing D-ribose and D-ribose.
  • Polyribonucleotides other types of polynucleotides that are N-glycosides of purine or pyrimidine bases, or other polymers with non-nucleotide backbones (for example, commercially available protein nucleic acids or synthetic sequence-specific nucleic acids) Polymer) or other polymer containing a specific bond (there is a polymer containing nucleotides with a configuration that allows base pairing and attachment as found in DNA and RNA) ) And the like. They can be double-stranded DNA, single-stranded DNA, double-stranded RNA, single-stranded RNA, and even DNA: RNA hybrids, and can be unmodified polynucleotides (or unmodified oligos).
  • Nucleotides as well as those with known modifications, e.g., those with a label, capped, methylated, or one or more naturally-occurring nucleotides with analogs known in the art.
  • those with an intramolecular nucleotide modification such as those with uncharged bonds (eg, methylphosphonates, phosphotriesters, phosphoramidates, carbamates, etc.), charged or sulfur-containing bonds (eg, Those with phosphorothioate, phospholipid dithioate, etc., such as proteins (nucleases, nuclease inhibitors, toxic , Antibodies, signal peptides, poly-L-lysine, etc.) or sugars (for example, monosaccharides), etc., or those having an interactive compound (for example, atharidin, psoralen, etc.) , Chelating compounds (eg, metals, radioactive metals, boron, oxidizing metals, etc.), alky
  • Such modifications may include methylated purines and pyrimidines, acylated purines and pyrimidines.
  • Modified nucleotides and modified nucleotides may also be modified at the sugar moiety, for example, when one or more of the hydroxyl groups is a halogen and a fatty acid. It may be substituted with a group or the like, or may be converted to a functional group such as ether or amine.
  • the antisense polynucleotide (nucleic acid) of the present invention is an RNA, a DNA, or a modified nucleic acid (RNA, DNA).
  • modified nucleic acids include, but are not limited to, sulfur derivatives of nucleic acids, thiophosphoate derivatives, and polynucleoside amides, which are resistant to degradation of oligonucleoside amides.
  • the antisense nucleic acid of the present invention can be preferably designed according to the following policy. That is, to make the antisense nucleic acid more stable in the cell, to make the antisense nucleic acid more cell permeable, to have a greater affinity for the target sense strand, and to be more toxic if it is toxic. Minimize the toxicity of sense nucleic acids.
  • the antisense nuclease of the present invention may contain altered or modified sugars, bases, or bonds. It can be given in additional form. Such additional forms include polycations, such as polylysine, which act to neutralize the charge on the phosphate backbone, and lipids, which enhance interaction with cell membranes and increase nucleic acid uptake. (Eg, phospholipids, cholesterol, etc.). Preferred lipids for caloric attachment include cholesterol and its derivatives (eg, cholesteryl chromate formate, cholic acid, etc.). These can be attached to the 3, 5 or 5 'end of nucleic acids and can be attached via bases, sugars, or intramolecular nucleoside bonds.
  • additional forms include polycations, such as polylysine, which act to neutralize the charge on the phosphate backbone, and lipids, which enhance interaction with cell membranes and increase nucleic acid uptake. (Eg, phospholipids, cholesterol, etc.). Preferred lipids for caloric attachment include cholesterol
  • Other groups include cap groups that are specifically located at the 3, 5 or 5 'end of the nucleic acid to prevent degradation by nucleases such as exonuclease and RNase.
  • capping groups include, but are not limited to, hydroxyl protecting groups known in the art, including dalicol such as polyethylene glycol and tetraethylene dalicol.
  • the inhibitory activity of the antisense nucleic acid can be examined using the transformant of the present invention, the in vivo or in vitro gene expression system of the present invention, or the in vivo or in vitro translation system of a G protein-coupled receptor protein. it can.
  • the nucleic acid can be applied to cells by various methods known per se.
  • the si RNA for the polynucleotide of the present invention is a double-stranded RNA containing a part of RNA encoding 144273 and an RNA complementary thereto. Specifically, a si RNA comprising a sense strand consisting of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 21 and an antisense strand consisting of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 22 (Example 11: ml 4 i 5 6 1) is used.
  • si RNA can be designed and produced based on the sequence of the polynucleotide of the present invention according to a known method (eg, Nature, 411, 494, 2001).
  • the ribozyme containing a part of the RNA encoding 144273 can be prepared by a known method (eg, TRENDS in Molecular Medicine, Vol. 7, pp. 221, 2001) according to the sequence of the polynucleotide of the present invention. It can be designed and manufactured based on For example, it can be produced by substituting a part of a known ribozyme sequence with a part of RNA encoding 144273.
  • a part of the RNA encoding 144273 is a sequence near a consensus sequence NUX (where N represents all bases and X represents a base other than G) which can be cleaved by a known ribozyme. And so on.
  • the polynucleotide encoding the partial peptide of the present invention may be any polynucleotide as long as it contains the above-described nucleotide sequence (DNA or RNA, preferably DNA) encoding the partial peptide of the present invention.
  • a genomic DNA a genomic DNA library, the cells described above. It may be tissue-derived cDNA, the above-mentioned cells, tissue-derived cDNA library, synthetic DNA, or deviation.
  • the vector used for the library may be any of pacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like.
  • reverse transcriptase was prepared directly using the mRNA fraction prepared from the above-mentioned cells.
  • the DNA encoding the partial peptide of the present invention includes, for example, (1) a partial nucleotide sequence of a DNA having the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 9 DNA, or (2) a nucleotide sequence that hybridizes under high stringent conditions to the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: : Partial base of DNA encoding a receptor protein having substantially the same activity (eg, ligand binding activity, signal transduction activity, etc.) as 147273 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8.
  • a DNA having a sequence is used.
  • Examples of the DNA that can hybridize with the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 include, for example, the nucleotide represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 8 DNA containing a nucleotide sequence having a homology of about 85% or more, preferably about 90% or more, more preferably about 95% or more with the sequence is used.
  • Hybridization is performed by a method known per se or a method analogous thereto, for example, the method described in Molecular 'Cloning (Molecular Cloning) 2nd (J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). It can be done according to. When a commercially available library is used, it can be carried out according to the method described in the attached instruction manual. More preferably, it can be carried out under high stringent conditions.
  • the high stringency conditions include, for example, a sodium concentration of about 19 to 40 mM, preferably about 19 to 20 mM, and a temperature of about 50 to 70 ° C, preferably about 60 to 65 ° C. Are shown. In particular, when the sodium concentration is about 19 mM and the temperature is about Most preferred is at 65 ° C.
  • telomere sequence As a means for closing DNA that completely encodes 14273 or its partial peptide (hereinafter sometimes abbreviated as 14273 inclusive), PCR using a synthetic DNA primer having a partial base sequence of 14273 Or by hybridizing the DNA incorporated into an appropriate vector with a DNA fragment coding for a part or all of 14273 or using a synthetic DNA. . Hybridization can be performed, for example, according to the method described in Molecular Cloning 2nd (J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). When a commercially available library is used, it can be performed according to the method described in the attached instruction manual.
  • the DNA base sequence can be converted by ODA-PCR using PCR or a known kit, for example, Mutan TM -suer Express Km (Takara Shuzo Co., Ltd.), Mutan TM -K (Takara Shuzo Co., Ltd.), etc.
  • the method can be performed according to a method known per se, such as the LA PCR method, the Gappeddup1ex method, the Kunke1 method, or a method analogous thereto.
  • the cloned DNA encoding 14273 can be used as it is depending on the purpose, or can be used by digesting with a restriction enzyme or adding a linker if desired.
  • the DNA may have ATG as a translation initiation codon at the 5 'end, and may have TAA, TGA or TAG as a translation stop codon at the 3' end. These translation initiation codon and translation termination codon can also be added using a suitable synthetic DNA adapter.
  • the 14273 expression vector is produced, for example, by (i) cutting out a DNA fragment of interest from DNA encoding 14273, and (mouth) ligating the DNA fragment downstream of a promoter in an appropriate expression vector. can do. Plasmids derived from Escherichia coli (eg, pBR322, pBR325, pUC12, pUC13), plasmids derived from Bacillus subtilis (eg, pUB110, pTP5, pC194), plasmids derived from yeast (Eg, pSH19, pSH15), bacteriophage such as phage, retrovirus, vaccinia In addition to viruses, animal viruses such as baculovirus, pAlll, pXT1, Rc / CMV, pRc / RSV, pcDNAIZNeo, and the like are used.
  • Plasmids derived from Escherichia coli eg, pBR322, pBR32
  • the promoter used in the present invention may be any promoter as long as it is appropriate for the host used for gene expression.
  • SRa promoter when animal cells are used as a host, SRa promoter, SV40 promoter, LTR promoter, CMV promoter, HSV-TK promoter and the like can be mentioned.
  • the CMV promoter, SR ⁇ promoter and the like are preferably used.
  • the host is Eshierihia genus bacterium, trp promoter, lac promoter, re cA promoter, i P L promoter, lpp promoter, etc.
  • the host is a Bacillus, S PO 1 promoter, SP 02 promoter,
  • yeast such as the penP promoter, the PHO5 promoter, PGK promoter, GAP promoter, ADH promoter, and the like are preferred.
  • a polyhedrin promoter, a P10 promoter and the like are preferable.
  • the expression vector may contain, in addition to the above, an enhancer, a splicing signal, a poly-A addition signal, a selection marker, and an SV40 replication origin (hereinafter sometimes abbreviated as SV40 ori), if desired.
  • SV40 ori SV40 replication origin
  • the selection marker for example, dihydrofolate reductase (hereinafter sometimes abbreviated as dhfr) gene [Mesotorekise Ichito (MTX) resistance], ampicillin resistant gene (hereinafter sometimes abbreviated as Amp r), neomycin resistant gene (hereinafter sometimes abbreviated as Ne o r, G418 resistance).
  • dhfr dihydrofolate reductase
  • MTX ampicillin resistant gene
  • Ne o r neomycin resistant gene
  • the target gene can be selected using thymidine-free medium or medium.
  • a signal sequence suitable for the host is added to the N-terminal side of the receptor protein of the present invention. If the host is Escherichia, Pho A 'signal sequence, Omp A signal sequence, etc., and the host is Bacillus In the case of ⁇ -amylase 'signal sequence, subtilisin signal sequence, etc. 'Signal sequence, ⁇ -interferon ⁇ signal sequence, antibody molecule ⁇ signal sequence, etc. can be used respectively.
  • Escherichia bacteria for example, Escherichia bacteria, Bacillus bacteria, yeast, insect cells, insects, animal cells, and the like are used.
  • Escherichia examples include Escherichia coli K12, DH1 (Procedurals, Ob, The National Academy, Saab, Schenci, Saab, The U.S.A. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA), 60, 160 (1968)], JM103 (Nucleic Acids Research, 9th, 309 (1 981)), JA22 1 [Journal of Molecular Biology, 1 20, 5 17 (1 9 78)), ⁇ 10 1 [Journal Off, Molecular Biology, 4 Volume 1, 459 (1969)], C600 [Genetics, Volume 39, 440 (1954)], etc. are used. Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) MI 114 (Gene, 24, 255 (1983)), 207—21 [Journal of Biochemistry] (Journal of Biochemistry), Volume 95, 87 (1 984)].
  • yeast examples include Saccharomyces cerevisiae AH22, AH22R-1, NA87-11A, DKD-5D, 20B-12, Schizosaccharomyces porabe NC YC1191 3, NCYC 203 6, Pichia pastoris, etc. are used.
  • insect cells for example, when the virus is Ac NPV, a cell line derived from the larvae of night moth (Spodoptera frugiperda cell; Sf cell) and Trichoplusia MG1 cells derived from the midgut, High Five TM cells derived from Trichoplusia ni eggs, cells derived from Mamestra brassicae or cells derived from Estigmena acrea are used.
  • Sf cell a silkworm-derived cell line
  • Sf cells include Sf9 cells (ATCC CRL1711), Sf21 cells (Vaughn, JL et al., In Vivo, 13, 213-217, (1977)) and the like. Is used.
  • insects for example, silkworm larvae and the like are used [Maeda et al., Nature, Vol. 315, 592 (1989)].
  • animal cells examples include monkey cell COS-7, Vero, Chinese hamster cell CH ⁇ (hereinafter abbreviated as CHO cell), dhfr gene-deficient Chinese hamster cell CHO (hereinafter abbreviated as CHO (dhfr-) cell). ), Mouse L cells, mouse AtT-20, mouse myeloma cells, rat GH3, human FL cells, and human HEK293 cells.
  • Transformation of Bacillus spp. can be performed, for example, according to the method described in Molecular & General Genetics, 168, 111 (1977). it can.
  • Transformation of insect cells or insects can be performed, for example, according to the method described in Bio / Technology, 6, 47-55 (1988). To transform animal cells, for example, see Cell Engineering Separate Volume 8, New Cell Engineering Experiment Protocol. , 456 (1973). Thus, a transformant transformed with the expression vector containing the DNA encoding 144273 is obtained.
  • a liquid medium is suitable as a medium to be used for cultivation, and a carbon medium necessary for the growth of the transformant is contained therein.
  • the carbon source include glucose, dextrin, soluble starch, and sucrose.
  • examples of the nitrogen source include ammonium salts, nitrates, corn chip liquor, peptone, casein, meat extract, soybean meal, and potato extract.
  • Inorganic or organic substances such as liquids, and inorganic substances include, for example, calcium chloride, sodium hydrogen dihydrogenate, and magnesium chloride.
  • yeast extract, vitamins, growth promoting factors and the like may be added.
  • the pH of the medium is preferably about 5-8.
  • Examples of a culture medium for culturing Escherichia bacteria include, for example, M9 medium containing glucose and casamino acid [Miller, Journal “Job ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ '” Molecular Journal of Molecular Science. Experiments in Molecular Genetics), 431-43, Cold Spring Harbor Laboratory, New York 197 2].
  • an agent such as 3 ⁇ -indolylacrylic acid can be added to make the promoter work efficiently if necessary.
  • the cultivation is usually performed at about 15 to 43 ° C for about 3 to 24 hours, and if necessary, aeration and stirring may be added.
  • the cultivation is usually carried out at about 30 to 40 ° C for about 6 to 24 hours, and if necessary, aeration and stirring can be applied.
  • a medium for example, Burkholder's minimal medium [Bostian, KL et al., Processings of the National Academy of Sciences] Natl. Acad. Sci. USA, 77 volume, 4505 ( 1980 )) and 0.5% casamino SD medium containing acid [Bitter, GA et al., Professional sheathing's. O drive. The. National Academy O Breakfast, Saienshiizu 'O Breakfast' The 'Interview one SA (p roc. Natl. Acad Sci. USA)., 81, 5330 (1 984)].
  • the pH of the medium is preferably adjusted to about 5-8.
  • Cultivation is usually performed at about 20 to 35 ° C for about 24 to 72 hours, and aeration and agitation are added as necessary.
  • the medium used was 10% immobilized in Grace's Insect Medium (Grace, TCC, Nature, 195, 788 (1962)). A mixture to which additives such as sera are appropriately added is used.
  • the pH of the medium is preferably adjusted to about 6.2 to 6.4. Culture is usually carried out at about 27 ° C for about 3 to 5 days, and aeration and agitation are added as necessary.
  • the medium When culturing a transformant in which the host is an animal cell, the medium may be, for example, a MEM medium containing about 5 to 20% of fetal bovine serum [Science, 122, 501, (1952). )], DMEM medium [Virology, 8, 396 (1 595)], RPMI 1640 medium [Journal of the American Metical, Ryoshonshon (.The Journal of the American Medical Association) 199, 5 19 (1967)], 199 medium [Proceding of the Society for the Biological Medicine), 73 volumes, 1 (1950) J, etc. are used.
  • the pH is about 6-8.
  • the cultivation is usually performed at about 30 to 40 ° C for about 15 to 60 hours, and aeration and stirring are added as necessary.
  • 1427 3 can be produced in the cells of the transformant, in the cell membrane, or outside the cells.
  • Isolation and purification of 144273 from the above culture can be performed, for example, by the following method.
  • Purification of 144273 contained in the thus obtained culture supernatant or extract can be carried out by appropriately combining known separation and purification methods.
  • These known separation and purification methods include methods using solubility such as salting-out and solvent precipitation, dialysis, ultrafiltration, gel filtration, and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, mainly for molecular weight analysis.
  • Method using difference method using charge difference such as ion exchange chromatography, method using specific novelty such as affinity chromatography, hydrophobicity such as reversed phase high performance liquid chromatography, etc.
  • a method using the difference between the isoelectric points such as a method utilizing the difference in the electric field, and an isoelectric point electrophoresis method are used.
  • the thus obtained 144,273 is obtained in a free form, it can be converted to a salt by a method known per se or a method analogous thereto, and conversely, when it is obtained as a salt, a method known per se Alternatively, it can be converted into a free form or another salt by a method analogous thereto.
  • 144273 produced by the recombinant can be arbitrarily modified and the polypeptide can be partially removed by the action of an appropriate protein-modifying enzyme.
  • an appropriate protein-modifying enzyme for example, trypsin, chymotrypsin, arginine / leendopeptidase, protein kinase, dalicosidase and the like are used.
  • the activity of the thus-formed 144,273 can be measured by a binding experiment with a labeled ligand, an enzymimnoassay using a specific antibody, or the like.
  • the antibody against 144273 may be any of a polyclonal antibody and a monoclonal antibody as long as it can recognize 144273.
  • An antibody to 144273 can be produced according to a method for producing an antibody or antiserum known per se, using 144273 as an antigen.
  • 14273 is administered to mammals by itself or together with a carrier or diluent at a site where antibody production is possible upon administration.
  • Complete Freund's adjuvant / incomplete Freund's adjuvant may be administered in order to enhance the antibody-producing ability upon administration.
  • the administration is usually performed once every 2 to 6 weeks, about 2 to 10 times in total. Examples of mammals to be used include monkeys, puppies, dogs, guinea pigs, mice, rats, sheep, and goats, and mice and rats are preferably used.
  • a warm-blooded animal immunized with the antigen for example, an individual with an antibody titer is selected from a mouse, and the spleen or lymph node is collected 2 to 5 days after the final immunization.
  • monoclonal antibody-producing hybridomas can be prepared.
  • the antibody titer in the antiserum can be measured, for example, by reacting a labeled receptor protein described below with the antiserum, and then measuring the activity of the labeling agent bound to the antibody.
  • the fusion operation can be carried out according to a known method, for example, the method of Koehler and Milstein [Nature, vol. 256, p. 495 (1975)].
  • the fusion promoter include polyethylene glycol (PEG) and Sendai virus, and PEG is preferably used.
  • myeloma cells examples include NS_1, P3U1, SP2 / 0 and the like, and P3U1 is preferably used.
  • the preferred ratio between the number of antibody-producing cells (spleen cells) and the number of myeloma cells to be used is about 11 to 20: 1, and the concentration of PEG (preferably PEG1000 to PEG6000) is about 10 to 80%.
  • PEG preferably PEG1000 to PEG6000
  • the hybridoma culture supernatant is added to a solid phase (eg, a microplate) on which the antigen of the receptor protein is adsorbed directly or together with a carrier.
  • a solid phase eg, a microplate
  • an anti-immunoglobulin antibody labeled with a radioactive substance or enzyme used for cell fusion
  • the cells to be used are mice
  • an anti-mouse immunoglobulin antibody is used.
  • add protein A and detect the monoclonal antibody bound to the solid phase A method of detecting a monoclonal antibody bound to a solid phase by adding a doma culture supernatant, adding a receptor protein labeled with a radioactive substance, an enzyme, or the like, and the like.
  • the selection of the monoclonal antibody can be carried out according to a method known per se or a method analogous thereto. Usually, it can be carried out in a medium for animal cells supplemented with HAT (hypoxanthine, aminopterin, thymidine).
  • HAT hyperxanthine, aminopterin, thymidine
  • any medium can be used as long as it can grow a hybridoma.
  • RPMI 1640 medium containing 1 to 20%, preferably 10 to 20% fetal bovine serum, GIT medium containing 1 to 10% fetal bovine serum (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
  • serum-free medium for hybridoma culture SFM-101, Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.
  • the cultivation temperature is usually 20 to 40 ° C, preferably about 37 ° C.
  • the cultivation time is usually 5 days to 3 weeks, preferably 1 week to 2 weeks.
  • the culture can be usually performed under 5% carbon dioxide.
  • the antibody titer of the culture supernatant of the hybridoma can be measured in the same manner as the measurement of the antibody titer in the antiserum described above.
  • Monoclonal antibodies can be separated and purified in the same manner as normal polyclonal antibodies, such as immunoglobulin separation and purification methods (e.g., salting out, alcohol precipitation, isoelectric precipitation, electrophoresis, ion exchangers (e.g., Adsorption / desorption method using DEAE), ultracentrifugation method, gel filtration method, specific purification method in which only antibody is collected using an antigen-binding solid phase or an active adsorbent such as protein A or protein G, and the bond is dissociated to obtain the antibody.)
  • immunoglobulin separation and purification methods e.g., salting out, alcohol precipitation, isoelectric precipitation, electrophoresis, ion exchangers (e.g., Adsorption / desorption method using DEAE), ultracentrifugation method, gel filtration method, specific purification method in which only antibody is collected using an antigen-binding solid phase or an active adsorbent such as protein A or protein G, and the
  • the polyclonal antibody of the present invention can be produced by a method known per se or a method analogous thereto. For example, a complex of an immunizing antigen (142273 antigen) and a carrier protein is formed, and a mammal is immunized in the same manner as in the above-described method for producing a monoclonal antibody.
  • Antibody content for 3 The antibody can be produced by collecting and subjecting the antibody to separation and purification.
  • the mixing ratio of the carrier protein and the carrier to the hapten is determined by the antibody against the hapten immunized by cross-linking the carrier.
  • any kind may be cross-linked at any ratio.
  • ⁇ serum olenobumin, ⁇ thyroglobulin, keyhole 'limpet' hemocyanin, etc. are converted to hapten 1 by weight ratio.
  • a method of pulling at a rate of about 0.1 to 20, preferably about 1 to 5 is used.
  • various condensing agents can be used for force coupling between the hapten and the carrier, and for example, an active ester reagent containing a daltaraldehyde dicarbodiimide, a maleimide active ester, a thiol group, or a dithioviridyl group is used.
  • the condensation product is administered to a warm-blooded animal at a site where antibody production is possible or together with a carrier or diluent.
  • Complete Freund's adjuvant or incomplete Freund's adjuvant may be administered in order to enhance antibody production ability upon administration.
  • the administration can usually be performed once every about 2 to 6 weeks, for a total of about 3 to 10 times.
  • the polyclonal antibody can be collected from the blood, ascites, or the like, preferably from blood, of the mammal immunized by the above method.
  • the measurement of the polyclonal antibody titer in the antiserum can be performed in the same manner as the measurement of the antibody titer in the serum described above. Separation and purification of the polyclonal antibody can be performed according to the same method for separation and purification of immunoglobulin as in the above-described separation and purification of the monoclonal antibody.
  • Fatty acids include oleic acid (o 1 eicacid) ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ (P (Pa 1 mit ⁇ 1 eicacid) N- linoleic acid (linoleic acid), ⁇ -linolenic acid (a-I inolenic acid), ⁇ -linolenic acid , ⁇ - 1 i ⁇ ⁇ 1 e ⁇ icaci cU, arachidonic acid, arachidonic acid, docosahexaenoic acid, DHA; Among them, palmitoleic acid (Palmitoleic acid), linolenic acid (linoleic acid), ⁇ -l
  • salts of fatty acids salts with acids (eg, inorganic acids, organic acids, etc.) and bases (eg, alkali metals such as sodium and potassium; alkaline earth metals such as calcium) are used. preferable.
  • acids eg, inorganic acids, organic acids, etc.
  • bases eg, alkali metals such as sodium and potassium; alkaline earth metals such as calcium
  • a fatty acid or a salt thereof is simply abbreviated as “fatty acid”.
  • the expression of 14273 increases in the pituitary gland when stress is applied. Accordingly, 14273, DNA encoding 14273 (hereinafter sometimes abbreviated as the DNA of the present invention), an antibody against 14273 (hereinafter sometimes abbreviated as the antibody of the present invention), and an antibody against the DNA of the present invention Sense DNA (hereinafter sometimes abbreviated as antisense DNA of the present invention) has the following uses.
  • 14273 or the DNA of the present invention may be, for example, a glycerol production regulating action from adipocytes, a blood darcerol regulating action, a lipolysis regulating action, an insulin resistance regulating action, a stress regulating action, an adrenocorticotropic hormone.
  • ACT H secretion regulating action
  • a regulator of glycerol production from fat cells Nodal agent, lipolysis regulator, insulin resistance regulator, stress regulator, adrenocortical stimulating hormone (ACTH) secretion regulator, lipolysis regulator (preferably, glycerol production inhibitor from fat cells, blood darcerol decrease
  • ACTH adrenocorticotropic hormone
  • 14273 or the DNA of the present invention may be, for example, diabetic, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia (eg, high LDL-cholesterolemia, Proteinemia and hypertriglyceridemia, low HDL-cholesterolemia), arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (eg anterior pituitary function) Hypotension, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer '(eg, colorectal cancer), memory learning disability, spira Exhaustion, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA, hypertriglyceridemia, fatty liver, thermo
  • 14273 or DN II of this effort may include, for example, atherosclerosis, atherosclerotic diseases and their sequelae (e.g., atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute myocardial infarction, unstable angina).
  • atherosclerosis e.g., atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute myocardial infarction, unstable angina.
  • Coronary syndrome such as sclerosis, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), myocardial infarction, ischemic heart disease such as angina, arteriosclerosis including vascular calcification, intermittent claudication, stroke (Cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerotic vascular lesions and their sequelae [ For example, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.), and dyslipidemia and its sequelae.
  • CHD coronary artery disease
  • cerebral ischemia etc.
  • dyslipidemia and its sequelae dyslipidemia and its sequelae.
  • the DNA of the present invention may be used as an inhibitor of the secretion of adrenocorticotropic hormone (ACTH), for example, ACTH-producing tumors, Cushing's disease, infections, secondary adrenocortical dysfunction, peptic ulcer, Diabetes, psychiatric disorders, cataracts, glaucoma, tuberculosis, hypertension, Cushing's syndrome (eg, central obesity, edema, hypertension, menstrual abnormalities, extensible skin streaks, hirsutism, diabetes, full moon face, osteoporosis, Bleeding factors, psychiatric disorders, muscle atrophy, muscle weakness, hypokalemia, hypercholesterolemia, impaired glucose tolerance, leukocytosis), atrophy of the adrenal cortex, etc. Can be.
  • ACTH adrenocorticotropic hormone
  • Fatty acids bind to 143 237 to regulate glycerol production from fat cells, darcerol in blood, lipolysis, insulin resistance, stress, and corticotropin (ACTH).
  • Secretory regulation preferably, inhibition of glycerol production from adipocytes, reduction of blood Darceol, suppression of lipolysis, suppression of insulin resistance, regulation of stress, corticotropin (ACTH) (Secretion inhibitory action), etc., so that glycerol production regulator from adipocytes, blood Darceol regulator, lipolysis regulator, insulin resistance regulator, stress regulator, adrenocorticotropic hormone (ACTH)
  • Secretion regulator preferably, glycerol production inhibitor from fat cells, blood darcerol lowering agent, lipolysis inhibitor, Insulin resistance suppressing agents, stress modulator, adrenocorticotropic hormone (A C T H) secretion inhibitor is useful as.
  • fatty acids are based on the signal transduction action enhancer of 144,273 or the signal transduction action enhancer, for example, diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetes Retinopathy, hyperlipidemia, arterial sclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (e.g.
  • hypopituitarism pituitary dwarfism, urine Disintegration, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (eg, colorectal cancer), memory and learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, fat Atrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA, high neutral fat Fatty, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anorexia nervosa, intestinal hormones (eg, cholecystokinin (CCK), gastric inhibitory peptide (GIP), gastrin, glucagon-like peptide 1 1 (GLP-1), somatostatin, gastrin-releasing peptide, secretin, bathoactive intestina norepeptide, motilin, substance P, neurotensin, galanin, new mouth peptide ⁇ , enkephalins,
  • fatty acids include, for example, arteriosclerosis, atherosclerotic diseases and their sequelae (for example, acute coronary syndromes such as atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute myocardial infarction, unstable angina, etc.).
  • ischemic heart disease such as angina, venous calcification including vascular calcification, intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism) , Cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerosis, vascular lesions and their sequelae [eg, coronary artery disease (CHD), Cerebral ischemia and the like], and can be used as a preventive / therapeutic agent for diseases such as dyslipidemia and its sequelae.
  • CHD coronary artery disease
  • Cerebral ischemia and the like
  • fatty acids are used as inhibitors of adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion, such as ACTH-producing tumors, Cushing's disease, infections, secondary adrenocortical dysfunction, peptic ulcers, diabetes, psychiatric disorders, cataracts, glaucoma, tuberculosis Sexual diseases, hypertension, Tushing syndrome (eg, central obesity, edema, hypertension, menstrual abnormalities, striated skin, hirsutism, diabetes, full moon face, osteoporosis, hemorrhagic predisposition, mental disorder, muscle atrophy, It can be used as a preventive and therapeutic agent for diseases such as muscle weakness, hypocalcemia, hypercholesterolemia, impaired glucose tolerance, leukocytosis) and atrophy of the adrenal cortex.
  • ACTH adrenocorticotropic hormone
  • Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.
  • a fatty acid or 14273 is used as the medicament, it can be formulated according to a conventional method.
  • the DNA of the present invention when used as the drug, It can be carried out by a conventional method alone or after insertion into an appropriate vector such as a retrovirus vector, an adenovirus vector, or an adenovirus associated virus vector.
  • the DNA of the present invention can be administered as it is or together with an auxiliary for promoting uptake by a gene gun or a catheter such as a hydrogel catheter.
  • a) 144,273 or b) DNA of the present invention may be orally administered as tablets, capsules, elixirs, microcapsules, etc., which are sugar-coated as necessary, or water or other pharmaceuticals. It can be used parenterally in the form of an injection such as a sterile solution with a liquid that is acceptable or a suspension.
  • the DNA of the present invention is generally recognized together with known physiologically recognized carriers, flavors, excipients, vehicles, preservatives, stabilizers, binders, etc. It can be manufactured by admixing it in the unit dosage form required for preparations. The amount of the active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose in the specified range can be obtained.
  • additives that can be incorporated into tablets, capsules, etc.
  • Such leavening agents, lubricants as magnesium stearate, sweeteners such as sucrose, lactose or saccharin, and flavoring agents such as peppermint, cocoa oil or cherry are used.
  • the unit dosage form is a capsule, the above type of material can further contain a liquid carrier such as an oil or fat.
  • Sterile compositions for injection can be formulated according to standard pharmaceutical practice, such as dissolving or suspending the active substance in a vehicle such as water for injection, or naturally occurring vegetable oils such as sesame oil or coconut oil. .
  • aqueous liquid for injection examples include physiological saline, isotonic solution containing glucose and other auxiliary agents (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium salt, etc.) and the like. aid such as an alcohol (e.g., ethanol), polyalcohol (e.g., propylene click "recall, polyethylene glycol), nonionic surfactant (eg, Porisoru Pies 8 0 TM, HCO- 5 0), such as a combination
  • an oily liquid for example, For example, sesame oil, soybean oil and the like are used, and may be used in combination with solubilizers such as benzyl benzoate and benzyl alcohol.
  • the above-mentioned medicines include, for example, buffers (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer), soothing agents (eg, benzalkonium chloride, prochlorin hydrochloride, etc.), stabilizers (eg, human Serum albumin, polyethylene glycol, etc.), preservatives (eg, benzyl alcohol, phenol, etc.), antioxidants and the like may be combined.
  • buffers eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer
  • soothing agents eg, benzalkonium chloride, prochlorin hydrochloride, etc.
  • stabilizers eg, human Serum albumin, polyethylene glycol, etc.
  • preservatives eg, benzyl alcohol, phenol, etc.
  • antioxidants and the like may be combined.
  • the prepared injection solution is usually filled in a suitable ampoule.
  • the preparations obtained in this way are safe and low toxic, for example, against human mammals (eg rats, mice, puppies, sheep,
  • the dose of 14273 varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, and the like.
  • the It is about 0.1 to 10 Omg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg.
  • the single dose varies depending on the administration subject, target organ, symptoms, administration method, and the like.
  • the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.
  • the dosage of the DNA of the present invention varies depending on the administration subject, target organ, symptoms, administration method, and the like.
  • oral administration in general, for example, in a diabetic patient (with a body weight of 60 kg), About 0.1 to 10 Omg per day, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 2 Omg.
  • parenteral administration the single dose varies depending on the administration subject, target organ, symptoms, administration method, etc.
  • an injection it is usually, for example, a diabetic patient (with a body weight of 6 O kg)
  • convert to 60 kg Can be administered.
  • the DNAs and antisense DNAs of the present invention can be used as probes in humans or mammals (eg, rats, mice, rabbits, sheep, butter, pigeons, cats, dogs, monkeys, etc.). Or abnormalities (genetic abnormalities) in the DNA or mRNA encoding the partial peptide can be detected, for example, damage, mutation or decreased expression of the DNA or mRNA, increase in the DNA or mRNA or It is useful as a diagnostic agent for genes such as overexpression.
  • the above-described genetic diagnosis using the DNA or the antisense DNA of the present invention can be performed, for example, by the known Northern hybridization or PCR-SSCP method (Genomics), Vol. 5, pp. 874-8. 79 (1989), Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America (Procedings of the National Academy of Sciences of the United States of America) 86, 2766-277 (pp. 1989)).
  • Northern Hybridization detects decreased expression of 142273, for example, diseases associated with dysfunction of 142273, especially diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, and diabetic neuropathy , Diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (for example, hypopituitarism, pituitary gland Dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (eg, colorectal cancer), memory and learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, insulin Allergies, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA disease, hypertrilipidemia, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anorexia, In
  • arteriosclerosis especially diabetes, hyperlipidemia, obesity, atherosclerosis, angina, myocardial infarction
  • arteriosclerosis arteriosclerotic disease and their sequelae (e.g., atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, Acute myocardial infarction, acute coronary syndrome such as unstable angina, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), myocardial infarction, ischemic heart disease such as angina, artery including vascular calcification, etc.
  • PTCA percutaneous coronary angioplasty
  • Sclerosis intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerotic vascular lesions ⁇ their sequelae [eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.), dyslipidemia and its sequelae, abnormal secretion of adrenocorticotropic hormone (ACTH), tumors producing ACTH, tumors, infection Disease Secondary adrenocortical dysfunction, peptic ulcer, diabetes, psychiatric disorder, cataract, glaucoma, tuberculosis, hypertension, Cushing's syndrome (e.g., central obesity, edema, hypertension, menstrual abnormalities, extensible cutaneous striae, hirsutism , Diabetes, full moon face, osteoporosis, bleeding diathesis, mental disorder,
  • overexpression of 144273 is detected by Northern hybridization
  • diseases caused by overexpression of 144273 particularly diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetes Neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (for example, hypopituitarism, Pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (eg, colorectal cancer), memory learning disability, kidney fatigue, hypoglycemia , Insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA, hypertriglyceridemia, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, feeding Eating disorders, anorexia nervosa, intestinal hormones
  • arteriosclerosis Including arteriosclerosis, intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral bleeding, etc.), racne infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerotic artery Sclerotic vascular lesions and their sequelae [eg, coronary artery disease.
  • CHD cerebral ischemia, etc.
  • dyslipidemia and its sequelae abnormal secretion of adrenocorticotropic hormone (ACTH), connective tissue disorders (eg , Chronic joint Rheumatism, systemic lupus erythematosus, polymyositis, rheumatic fever, scleroderma), renal disease (eg, nephrosis), respiratory disease (eg, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitial pneumonia) , Digestive system diseases (eg, ulcerative colitis, cholestatic acute hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis), neuromuscular diseases (eg, encephalomyelitis, peripheral neuritis, multiple sclerosis, Myasthenia gravis, facial nervous system ⁇ ), blood disorders (eg, hemolytic anemia, granulocytopenia, purpura, a
  • a drug containing a compound that changes the expression level of 144273 or a salt thereof The DNA of the present invention can be used for screening a compound or a salt thereof that changes the expression level of 14273 by using it as a probe. That is, the present invention includes, for example, (i) a) blood of a non-human mammal, b) a specific organ, c) a tissue or cell isolated from an organ, or (ii) a transformant. 3. A method for screening a compound or a salt thereof that alters the expression level of 14273 by measuring the mRNA amount of 3 above.
  • the measurement of the mRNA amount of 14273 is specifically performed as follows.
  • non-human mammals for example, mice, rats, rabbits, sheep, pigs, pigs, cats, dogs, monkeys, etc., more specifically, dementia rats, obese mice, arteriosclerosis Drugs (eg, anti-dementia drugs, antihypertensive drugs, anti-cancer drugs, anti-obesity drugs, etc.) or physical stress (eg, flooding stress, electric shock, light / dark, low temperature, etc.)
  • arteriosclerosis Drugs eg, anti-dementia drugs, antihypertensive drugs, anti-cancer drugs, anti-obesity drugs, etc.
  • physical stress eg, flooding stress, electric shock, light / dark, low temperature, etc.
  • blood or specific organs eg, brain, liver, kidney, etc.
  • tissues or cells isolated from the organs are obtained.
  • the mRNA of 144273 contained in the obtained cells can be quantified by, for example, extracting mRNA from cells or the like by a usual method and using, for example, a technique such as TaqMan PCR.
  • the analysis can also be performed by performing a Northern blot by a means known per se.
  • a transformant expressing 14273 is prepared according to the above method, and the mRNA of 14273 contained in the transformant can be quantified and analyzed in the same manner.
  • Screening for a compound or a salt thereof that alters the expression level of 144273 is carried out by (i) a given time (30 minutes to 24 hours) before drug or physical stress is applied to a normal or disease model non-human mammal. Hours before, preferably 30 minutes to 12 hours before, more preferably 1 hour to 6 hours before, or after a certain time (30 minutes to 3 days, preferably 1 hour to 2 days, more preferably 1 hour to 2 days). After 24 hours) or the test compound is administered simultaneously with drug or physical stress, and after a certain period of time after administration (30 minutes to 3 days, preferably 1 hour to 2 days, more preferably 1 hour ⁇ 24 hours after the cell contains 14 27 3 m This can be done by quantifying and analyzing the amount of RNA,
  • test compound When culturing the transformant according to a conventional method, the test compound is mixed in the medium, and after culturing for a certain period of time (1 day to 7 days, preferably 1 day to 3 days, more preferably 2 days to 3 days ), The amount of 1.4273 mRNA contained in the transformant can be quantified and analyzed. '
  • Test compounds include, for example, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, and plasma.These compounds are novel compounds. Or a known compound.
  • the test compound may form a salt, and a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid) or a base (eg, an organic acid) is used as the salt of the test compound.
  • physiologically acceptable acid addition salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, etc.). Acid, conodic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).
  • the compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention is a compound or a salt thereof having an action of changing the expression level of 144273, and specifically, (a) 142 A compound or a salt thereof, which enhances the cell stimulating activity through 14473 by increasing the expression level of 73, Use a compound or salt thereof to reduce the stimulating activity.
  • the cell stimulating activity e.g., Arakidon acid release, Asechirukorin release, intracellular C a 2 + release, intracellular c AM P production, intracellular c GM P, production of inositol phosphate, changes in cell membrane potential, intracellular protein ( Eg, phosphorylation or activation of MAP kinase), activation or suppression of c-fos, pH reduction, etc.
  • Activity lipolysis inhibitory activity, etc., but in particular, intracellular Ca 2+ concentration increasing activity, intracellular cAMP production inhibition activity, MAP kinase phosphoric acid or Is preferably an activation, an activity of inhibiting secretion of adrenocorticotropic hormone (ACTH), an activity of inhibiting glycerol production, or an activity of inhibiting lipolysis.
  • intracellular Ca 2+ concentration increasing activity intracellular cAMP production inhibition activity
  • MAP kinase phosphoric acid or Is preferably an activation
  • an activity of inhibiting secretion of adrenocorticotropic hormone (ACTH) an activity of inhibiting glycerol production
  • an activity of inhibiting lipolysis preferably an activation, an activity of inhibiting secretion of adrenocorticotropic hormone (ACTH), an activity of inhibiting glycerol production, or an activity of inhibiting lipolysis.
  • ACTH adrenocorticotropic hormone
  • Compounds obtained by using the screening method of the present invention include peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, and the like, and these compounds may be novel compounds. However, a known compound may be used.
  • a salt of a compound obtained by using the screening method of the present invention a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid, etc.) or a base (eg, an organic acid, etc.) is used. Are preferred.
  • salts examples include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, Salts with formic acid, succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc. are used.
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.
  • organic acids eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid
  • Salts with formic acid succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.
  • Insulin resistance regulator preferably, Cell opening Lumpur formation inhibitor, blood Daruse port Lumpur low laxatives, lipolysis inhibitors, insulin resistance inhibitors, stress modulator, adrenocortical stimulating hormone (A C T H) secretion inhibitor
  • a C T H adrenocortical stimulating hormone
  • a compound or a salt thereof that increases the expression level of 144273 obtained by the above-mentioned screening method may be used for diseases associated with a dysfunction of 144273, such as diabetes, glucose intolerance, Ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (eg anterior pituitary gland) Hypofunction, pituitary dwarfism, Diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (for example, colorectal cancer), memory and learning disability, wisteria exhaustion, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity , Lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA disease, hypertriglyceridemia, fatty liver, thermogenic dysfunction
  • a compound or a salt thereof that increases the expression level of 144273 obtained by the above-mentioned screening method includes, for example, arteriosclerosis, arteriosclerotic diseases and their sequelae (for example, atherosclerosis, Acute coronary syndrome such as peripheral arterial occlusion, acute myocardial infarction, unstable angina, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), ischemic heart disease such as myocardial infarction and angina, vascular lime Arteriosclerosis including degeneration, delusional claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), It can be used as a preventive or therapeutic agent for atherosclerotic vascular lesions and their sequelae (eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.), dyslipid
  • a compound or a salt thereof that increases the expression level of 144273 obtained by the above-mentioned screening method can be used as an inhibitor of adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion, for example, an ACTH-producing tumor, Cushing's disease, etc.
  • ACTH adrenocorticotropic hormone
  • Infections secondary adrenocortical dysfunction, peptic ulcer, diabetes, psychiatric disorders, cataract, glaucoma, tuberculosis, hypertension, Cushing's syndrome (e.g., central obesity, edema, hypertension, menstrual abnormalities, extensible skin line Sclerosis, hirsutism, diabetes, full moon face, osteoporosis, hemorrhagic diathesis, psychiatric disorder, muscular atrophy, muscle weakness, hypokalemia, hypercholesterolemia, impaired glucose tolerance, leukemia ) Can be used as a preventive and therapeutic agent for diseases such as atrophy of the adrenal cortex.
  • Cushing's syndrome e.g., central obesity, edema, hypertension, menstrual abnormalities, extensible skin line Sclerosis, hirsutism, diabetes, full moon face, osteoporosis, hemorrhagic diathesis, psychiatric disorder, muscular atrophy, muscle weakness, hypokalemia, hypercholeste
  • Compounds or salts thereof that reduce the expression level of 144272 are, for example, regulating glycerol production from fat cells, regulating blood Darcetol, regulating lipolysis, regulating insulin resistance, Stress-regulating action, adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion-regulating action (preferably, glycerol production promotion action from fat cells, blood darcerol elevation action, lipolysis promotion action, insulin resistance promotion action, stress regulation action , Which promotes the secretion of adrenocorticotropic hormone (ACTH), etc., and regulate glycerol production from fat cells, darcerol in blood, lipolysis, insulin resistance, stress, adrenal Corticotropic hormone (ACTH) secretion regulator (preferably, glycerol production promoter from adipocytes, blood Darcelo) Increasing agent, lipolysis promoter, insulin resistance enhancer, stress modulator useful as etc. adrenocorticotropic hormone (A C T H) secretagogues).
  • ACTH a
  • a compound or a salt thereof that reduces the expression level of 144273 is a disease caused by excessive expression of 144273, such as diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, Diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina pectoris, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (e.g., anterior pituitary hypofunction, hypopituitarism) Human disease, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (eg, colorectal cancer), memory and learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, Lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA disease, high neutral lipids, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anor
  • a compound or a salt thereof that reduces the expression of 144273 can be used, for example, for atherosclerosis, atherosclerotic disease and their sequelae (for example, atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute Acute coronary syndrome such as myocardial infarction, unstable angina, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), myocardial infarction, ischemic heart disease such as angina, arteriosclerosis including vascular calcification Illness, intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), lacne infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerotic vascular lesions ⁇
  • They can be used as prophylactic and therapeutic agents for diseases such as their sequelae [eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.], dyslipidemia and their sequela
  • compounds or salts thereof that reduce the expression of 144273 may be used, for example, as adrenocorticotropin (ACTH) secretagogues, for example, for connective tissue diseases (eg, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, multiple occurrences) Myositis, rheumatic fever, scleroderma), renal disease (eg, nephrosis), respiratory disease (eg, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitial pneumonia), gastrointestinal disease (eg, , Ulcerative colitis, cholestatic acute hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis), neuromuscular diseases (for example, encephalomyelitis, peripheral neuritis, multiple sclerosis, myasthenia gravis, facial) Nerve palsy), Hematological disorders (eg, hemolytic an
  • a compound derived from the compound obtained by the above screening or a salt thereof or a salt thereof can also be used.
  • a compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention is used as a pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method.
  • the compound or its salt may be orally administered as tablets, capsules, elixirs, microcapsules, etc., if necessary, or water or other pharmaceutically acceptable tablets.
  • Sterile solution or suspension with liquid Can be used parenterally in the form of injections.
  • the compound or a salt thereof may be used together with a known physiologically acceptable carrier, flavoring agent, excipient, vehicle, preservative, stabilizer, binder, etc., in a unit dosage required for generally accepted formulation practice. It can be manufactured by mixing in the form. The amount of the active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose in the specified range can be obtained.
  • binders such as gelatin, corn starch, tragacanth, gum arabic, excipients such as crystalline cellulose, corn starch, gelatin, and alginic acid.
  • leavening agents such as magnesium stearate
  • sweeteners such as sucrose, lactose or saccharin
  • flavoring agents such as peppermint, cocoa oil or cherry are used.
  • the preparation unit form is forcepsel
  • the above-mentioned material of the type may further contain a liquid carrier such as oil and fat.
  • Sterile compositions for injection should be formulated according to standard pharmaceutical practice, such as dissolving or suspending the active individual substances in a vehicle such as water for injection, or naturally occurring vegetable oils such as sesame oil or coconut oil. Can be.
  • a vehicle such as water for injection, or naturally occurring vegetable oils such as sesame oil or coconut oil.
  • a aqueous solution for injection for example, physiological saline, isotonic solution containing pudose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mantol, sodium salt, etc.) and the like are used.
  • Suitable solubilizers such as alcohols (eg, ethanol), polyalcohols (eg, propylene glycol, polyethylene glycol), nonionic surfactants (eg, Polysorbate 80 TM , HCO-50)
  • alcohols eg, ethanol
  • polyalcohols eg, propylene glycol, polyethylene glycol
  • nonionic surfactants eg, Polysorbate 80 TM , HCO-50
  • the oily liquid for example, sesame oil, soybean oil, and the like are used, and may be used in combination with a solubilizing agent such as benzyl benzoate or benzyl alcohol.
  • the above-mentioned medicines include, for example, buffering agents (for example, phosphate buffer, sodium acetate buffer), soothing agents (for example, benzalkonium chloride, pro-active acid hydrochloride, etc.), stabilizers (for example, , Human serum albumin, polyethylene glycol, etc.), preservatives (eg, benzyl alcohol, phenol, etc.), antioxidants and the like.
  • buffering agents for example, phosphate buffer, sodium acetate buffer
  • soothing agents for example, benzalkonium chloride, pro-active acid hydrochloride, etc.
  • stabilizers for example, , Human serum albumin, polyethylene glycol, etc.
  • preservatives eg, benzyl alcohol, phenol, etc.
  • antioxidants eg, benzyl alcohol, phenol, etc.
  • the prepared injection solution is usually filled in a suitable ampoule.
  • the preparations obtained in this way are safe and low toxic, and can be used, for example, in human mammals
  • the dose of the compound or its salt that increases the expression level of 14273 varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, and the like.
  • oral administration in general, for example, a diabetic patient (with a body weight of 60 kg) ) Is about 0.1 to 100 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 2 Omg per day.
  • parenteral administration the single dose varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, etc.
  • the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.
  • the antibody of the present invention can specifically recognize 14273, it can be used for quantification of 14273 in a test solution, particularly for quantification by sandwich immunoassay.
  • test method characterized by competitively reacting the antibody of the present invention with a test solution and labeled 14273, and measuring the ratio of labeled 14273 bound to the antibody. Determination of 14273 in liquid, and
  • quantification of 14273 can be performed using a monoclonal antibody against 14273, and detection by tissue staining or the like can also be performed.
  • the antibody molecule itself may be used, or the F (ab ') 2 , Fab, or Fab fraction of the antibody molecule may be used.
  • the method of quantifying 14273 using the antibody of the present invention is not particularly limited, and may be an antibody or an antigen corresponding to the amount of antigen (for example, 144273) in the liquid to be measured. Any method that detects the amount of antibody-antigen complex by chemical or physical means and calculates this from a standard curve prepared using a standard solution containing a known amount of antigen, May be used. For example, nephelometry, a competitive method, an immunometric method, and a sandwich method are preferably used. From the viewpoint of sensitivity and specificity, it is particularly preferable to use a sandwich method described later.
  • a labeling agent used in a measurement method using a labeling substance for example, a radioisotope, an enzyme, a fluorescent substance, a luminescent substance and the like are used.
  • the radioisotope for example, [1 2 5 I], [1 3 1 I], [3 H], and [1 4 C] used.
  • the enzyme a stable enzyme having a large specific activity is preferable.
  • the fluorescent substance for example, fluorescamine, fluorescein isothiocyanate or the like is used.
  • the luminescent substance for example, noremininol, luminol derivative, luciferin, lucigenin and the like are used.
  • a biotin-avidin system can be used for binding the antibody or antigen to the labeling agent.
  • insoluble antigen or antibody physical adsorption may be used, or a method using a chemical bond usually used for insolubilizing and immobilizing 144273 or an enzyme or the like may be used.
  • the carrier include insoluble polysaccharides such as agarose, dextran, and cellulose; synthetic resins such as polystyrene, polyacrylamide, and silicon; and glass.
  • the test solution is reacted with the insolubilized monoclonal antibody of the present invention (primary reaction), and further reacted with another labeled monoclonal antibody of the present invention (secondary reaction).
  • primary reaction By measuring the activity of the labeling agent, the amount of 144273 in the test solution can be determined.
  • the primary reaction and the secondary reaction may be performed in the reverse order, simultaneously, or at different times.
  • the labeling agent and the method of insolubilization can be in accordance with those described above.
  • antibodies for solid phase or labeling One type of antibody is not necessarily used, and a mixture of two or more types of antibodies may be used for the purpose of improving measurement sensitivity and the like.
  • the monoclonal antibody of the present invention used in the primary reaction and the secondary reaction is preferably an antibody having a different binding site of 144273.
  • the antibody used in the primary reaction and the secondary reaction is, for example, when the antibody used in the secondary reaction recognizes the C-terminal of 144273, the antibody used in the primary reaction is Preferably, an antibody that recognizes other than the C-terminal, for example, the N-terminal, is used.
  • the monoclonal antibody of the present invention can be used in a measurement system other than the sandwich method, for example, a competition method, an immunometric method, or a nephrometry.
  • the antigen in the test solution and the labeled antigen are allowed to react competitively with the antibody, and then the unreacted labeled antigen (F) and the labeled antigen (B) bound to the antibody are separated.
  • B / F separation Measure the amount of either B or F to quantify the amount of antigen in the test solution.
  • a soluble antibody is used as an antibody
  • BZF separation is carried out using a polyethylene glycol, a liquid phase method using a second antibody against the antibody, or a force using an immobilized antibody as a first antibody.
  • One antibody is a soluble one, and an immobilized antibody is used as a second antibody.
  • the amount of insoluble sediment produced as a result of an antigen-antibody reaction in a gel or in a solution is measured. Even when the amount of antigen in the test solution is small and only a small amount of sediment is obtained, laser nephrometry utilizing laser scattering is preferably used.
  • the decrease in the concentration of 144273 is detected by quantifying the concentration of 144273 using the antibody of the present invention, for example, the decrease in the concentration of Diseases, such as diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, dysglycemia, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina pectoris, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity , Obesity, pituitary dysfunction (eg hypopituitarism, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome) , Cancer (eg, colorectal cancer), memory and learning disorders, spleen exhaustion, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA , Hypertrilipidemia, fatty liver, thermogenic dysfunction
  • arteriosclerosis arteriosclerotic disease and Their sequelae
  • arteriosclerosis arteriosclerotic disease and Their sequelae
  • arteriosclerosis peripheral arterial occlusion, acute myocardial infarction, acute coronary syndromes such as unstable angina, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), myocardium Infarction
  • ischemic heart disease such as angina, arteriosclerosis including vascular calcification, intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulus Sclerosis, nephropathy, Tangier's disease, etc.), atherosclerotic vascular lesions and their sequelae (eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.), dyslipidemia and its sequelae, adrenal gland Cort
  • a disease caused by overexpression of 144273 such as diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, or diabetic nerve.
  • a disease caused by overexpression of 144273 such as diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, or diabetic nerve.
  • disorders, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction e.g.
  • Atherosclerosis e.g., atherosclerosis, atherosclerotic disease and their sequelae (e.g., atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, Acute coronary artery syndrome such as acute myocardial infarction and unstable angina, re-stenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), ischemic heart disease such as myocardial infarction and angina, vascular calcification, etc.
  • PTCA percutaneous coronary angioplasty
  • ischemic heart disease such as myocardial infarction and angina
  • vascular calcification etc.
  • Arteriosclerosis intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier's disease, etc.), atherosclerotic blood vessels Lesions and their sequelae (eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.), dyslipidemia and its sequelae, adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion abnormality, connective tissue disease (eg, rheumatoid arthritis) , Systemic lupus erythematosus , Polymyositis, rheumatic fever, scleroderma), renal disease (eg, nephrosis), respiratory disease (eg, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitial pneumonia), gastrointestinal disease ( For example, ulcer
  • Screening method for agonist against 14273 Increase in intracellular Ca2 + concentration, suppression of intracellular cAMP production, activation of MAP kinase, adrenocorticotropin (ACTH) by binding of fatty acid to 14273 14273 uses these intracellular signals as indicators to search for or determine agonists other than fatty acids (including natural ligands) for 14273, because of suppression of secretion of glycerol, suppression of glycerol production from fat cells, and suppression of lipolysis. It is useful as a reagent for performing
  • the present invention is, in the case of contacting the test compound with a cell containing the 14273, intracellular C a 2+ level increasing activity 14 through 14273, intracellular C a 2 + level increasing activity, intracellular cAMP P Determination of agonist against 14273 characterized by measuring its activity to inhibit production, phosphorylation or activation of MAP kinase, activity to inhibit adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion4, activity to inhibit glycerol production, activity to inhibit lipolysis, etc. Provide a method.
  • Test compounds include known ligands (e.g., angiotensin, bombesin, cannabinoid, cholecystokinin, glutamine, serotonin, melatonin, neuropeptide Y, opioid, purine, vasoprescin, thykitocin, PACAP (e.g., , P ACAP 27, P ACAP 38), secretin, glucagon, calcitonin, adrenomedullin, somatostatin, GHRH, CRF, ACTH, GRP, PTH, VIP (Vasoactive Intestina Nore and Rerated Polypeptide), somatostatin , Dopamine, motilin, amylin, bradykinin, CGRP (calcitonin gene-related peptide), leuco triene, ha.ncreastatin, prostaglandin, thromboxane, adenosine, adrenaline, chemokine superpain Family (eg
  • the test compound may form a salt, and a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid) or a base (eg, an organic acid) is used as the salt of the test compound.
  • physiologically acceptable acid addition salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, etc.).
  • the agonist determination method of the present invention comprises the steps of: constructing an expression system of the recombinant 14273 of the present invention; and using a receptor-binding assay system using the expression system.
  • Compounds with 2+ concentration increasing activity, intracellular c AMP production inhibitory activity, MAP kinase phosphorylation or activation, adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion inhibitory activity, glycerol production inhibitory activity, or lipolysis inhibitory activity Or a method of determining its salt.
  • the present invention provides the following determination method.
  • test compound 14273 e.g., CHO cells, adipocytes,
  • a method for determining an agonist for 14273 which comprises measuring inhibitory activity, MAP kinase phosphorylation or activation, adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion inhibitory activity, glycerol production inhibitory activity, or lipolysis inhibitory activity.
  • test compound binds to 14273 it is preferable to conduct the above test after confirming that the test compound binds to 14273.
  • the cell When a cell containing 14273 is used in the agonist determination method of the present invention, the cell may be fixed with daltaraldehyde, formalin, or the like.
  • the solidification can be performed according to a known method.
  • the membrane fraction of cells containing 14273 refers to a fraction containing a large amount of cell membrane obtained by a known method after crushing cells.
  • Cells can be crushed by crushing the cells with a Potter-Elvehjem homogenizer, crushing with a Waring Blender Polytron (Kinematica), crushing with ultrasonic waves, or pressing the cells from a thin nozzle while applying pressure with a French press. Crushing by shaking.
  • fractionation by centrifugal force such as fractionation centrifugation or density gradient centrifugation is mainly used.
  • the cell lysate is centrifuged at low speed (500-3000 rpm) for a short time (typically about 1-10 minutes), and the supernatant is centrifuged at a higher speed (15000-30000 rpm) for 30 minutes-2 hours.
  • the resulting precipitate is used as a membrane fraction.
  • the membrane fraction is rich in the expressed 14273 and a large amount of B components such as cell-derived phospholipids and membrane proteins.
  • the amount of 14273 in a cell containing 14273 or a cell membrane fraction thereof is preferably 10 3 to 10 8 molecules per cell, and more preferably 10 5 to 10 7 molecules per cell.
  • the higher the expression level the higher the ligand binding activity (specific activity) per membrane fraction. become.
  • the cells through 14273 Inner C a 2 + level increasing activity, intracellular c AM P production suppressing activity, phosphorylation if activation of MA P kinase, adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion suppressing activity, Glycerol production suppressing activity or lipolysis suppressing The activity can be measured by a known method or a commercially available measurement kit. Specifically, first, cells containing 144273 are cultured on a multiwell plate or the like.
  • the agonist determination kit of the present invention contains cells containing 144273 or a cell membrane fraction thereof.
  • the agonist for 14273 determined in this way binds to 144273 and regulates the physiological function of 144273, for example, glycerol production from adipocytes.
  • Regulatory action blood darcerol control action, lipolysis control action, insulin resistance control action, stress control action, adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion control action (preferably, glycerol production suppression action from fat cells, blood glucose Serol lowering action, lipolysis inhibitory action, insulin resistance inhibitory action, stress regulating action, adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion inhibitory action, etc.
  • ACTH adrenocorticotropic hormone
  • the agonist against 144273 binds to 144273 and regulates the physiological function of 144273, such as diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, and diabetic neuropathy.
  • agonists against 144273 may include, for example, atherosclerosis, atherosclerotic diseases and their sequelae (eg, atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute myocardial infarction, unstable angina, etc.).
  • Acute coronary syndrome re-stenosis after percutaneous coronary angioplasty ( ⁇ TCA), myocardial infarction, ischemic heart disease such as angina, arteriosclerosis including vascular calcification, intermittent claudication, stroke (Cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerotic vascular lesions and their sequelae [eg, coronary artery Disease (CHD), lunar ischemia, etc.), dyslipidemia and its sequelae.
  • CHD coronary artery Disease
  • lunar ischemia etc.
  • dyslipidemia dyslipidemia and its sequelae.
  • agonists against 144273 have been reported as inhibitors of adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion, such as ACTH-producing tumors, Cushing's disease, infectious diseases, persistent adrenal insufficiency, peptic ulcers, diabetes, and mental disorders.
  • ACTH adrenocorticotropic hormone
  • disorders cataracts, glaucoma, tuberculosis, hypertension, Cushing's syndrome (e.g., central obesity, edema, hypertension, menstrual abnormalities, striated skin striae, hirsutism, diabetes, full moon face, osteoporosis, bleeding element
  • Cushing's syndrome e.g., central obesity, edema, hypertension, menstrual abnormalities, striated skin striae, hirsutism, diabetes, full moon face, osteoporosis, bleeding element
  • diseases such as psychiatric disorders, muscular atrophy, muscle weakness, hypokalemia, hypercholesterolemia, impaired glucose tolerance, leukocytosis) and atrophy of the adrenal cortex Can be used.
  • a method for screening a compound (eg, agonist, antagonist, etc.) or a salt thereof that alters the binding property of 144273 to the ligand, and alters the binding property of 144273 to the ligand Pharmaceuticals containing compounds or salts thereof
  • a fatty acid as a ligand can be used.
  • Compounds that alter the binding to 273 eg, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, etc.
  • salts thereof can be efficiently screened.
  • Such compounds include (a) a compound having a cell stimulating activity via 144273 (so-called agonist against 144273), a (mouth) a compound not having the cell stimulating activity ( A so-called antagonist to 144273), (c) a compound that enhances the binding strength between fatty acids and 144273, or (ii) decreases the binding strength between fatty acids and 144273.
  • the present invention is characterized in that a comparison is made between (i) a case in which 144273 is contacted with a fatty acid and (ii) a case in which 144273 is contacted with a fatty acid and a test compound.
  • a comparison is made between (i) a case in which 144273 is contacted with a fatty acid and (ii) a case in which 144273 is contacted with a fatty acid and a test compound.
  • the screening method of the present invention is characterized in that, in the cases (i) and (ii), for example, the amount of fatty acid binding to 144273, the cell stimulating activity, and the like are measured and compared.
  • the cell stimulating activity e.g., Arakidon acid release, Asechirukorin release, intracellular C a 2 + release, intracellular c AM P production, intracellular c GM P, production of inositol phosphate, changes in cell membrane potential, intracellular protein ( E.g., phosphorylation or activation of MAP kinase, activation of c-fos, activity that promotes or suppresses the decrease of pH, activity of suppressing secretion of adrenocorticotropic hormone (ACTH), suppression of glycerol production activity and the like lipolysis suppressing activity, among them the intracellular C a 2 + level increasing activity, intracellular c AMP production suppressing activity, phosphorylation or activation of MA P kinase, adrenocorticotropic hormone (ACTH) Secretion inhibitory activity 'I ⁇ raw, glycerol raw The activity of inhibiting the growth and the activity of inhibiting lipolysis are preferred.
  • the present invention provides
  • a) Binding of labeled fatty acid to 144,273 when the labeled fatty acid is brought into contact with 144,273 and when the labeled fatty acid and test compound are brought into contact with 144,273 A method for screening a compound or a salt thereof that changes the binding property between a fatty acid and 144273, which is characterized in that the amount is measured and compared.
  • Cells containing a labeled fatty acid, 144273 Alternatively, the labeled fatty acid and the test compound are brought into contact with the membrane fraction of the cell or the membrane fraction of the cell when the labeled fatty acid and the test compound are brought into contact with the membrane fraction of the cell. Measuring the amount of binding to the vesicles or the membrane fraction and comparing the compound or the salt thereof, which changes the binding property between the fatty acid and 144273,
  • Cells containing a compound that activates 144273 for example, fatty acids
  • 144273 eg, CHO cells, adipocytes, AtT-20 cells, 3T3-L 1 cell
  • a cell mediated by 144,273 when a compound that activates 144,273 and a test compound are contacted with a cell containing 144,273.
  • a compound that activates 144273 is brought into contact with 144273 expressed on the cell membrane by culturing a transformant containing the DNA of the present invention. And a compound that activates 144273 and a test compound are expressed on the cell membrane by culturing a transformant containing the DNA of the present invention.
  • a compound or a salt thereof, which changes the binding property between a fatty acid and 144273 which is characterized by measuring and comparing the cell-stimulating activity through the receptor when contacted with 144273. Provide a screening method.
  • a compound or a salt thereof (preferably an agonist, more preferably a synthetic agonist) that changes the binding property between the fatty acid and 144273 can be used in place of the fatty acid.
  • the compound or a salt thereof that changes the binding property between the fatty acid and 144273 can be obtained, for example, by using the fatty acid as a ligand and performing the below-described screening method of the present invention.
  • the term “fatty acid” is used to include a compound or a salt thereof that alters the binding property between fatty acid and 144273.
  • any one containing the above-mentioned 144273 may be used.
  • Cell membrane fractions of mammalian organs are preferred.
  • human-derived organs are particularly difficult to obtain, it is suitable to use human-derived organs such as 144273, which are expressed in large amounts by using a recombinant. You.
  • the above method is used to produce 144273, it is preferably carried out by expressing the DNA of the present invention in mammalian cells or insect cells.
  • the use of the phase-coupling DNA for the DNA fragment encoding the target protein portion is not necessarily limited to this.
  • a gene fragment or a synthetic DNA may be used.
  • the DNA fragment In order to introduce the DNA fragment encoding 144273 into host animal cells and express them efficiently, the DNA fragment must be expressed in a nuclear polyhedrosis virus belonging to baculovirus using insects as a host.
  • the amount and quality of the expressed receptor can be detected by a method known per se.
  • literature CNambi, P. et al. The Journal The method can be carried out according to the method described in J. Biol. Chem., 267, 19555-19559, 1992].
  • the one containing 144273 may be a 144273 purified according to a method known per se or a cell containing 144273. May be used, or a membrane fraction of cells containing 144273 may be used.
  • the cell when a cell containing 144273 is used, the cell may be immobilized with daltaraldehyde, formalin, or the like.
  • the immobilization method can be performed according to a method known per se.
  • a host cell expressing 144273 is preferable, and as the host cell, Escherichia coli, Bacillus subtilis, yeast, insect cells, animal cells and the like are preferable.
  • the cell membrane fraction refers to a cell membrane-rich fraction obtained by disrupting cells and then obtained by a method known per se.
  • the cells can be crushed by crushing the cells with a Potter-Elvehjem homogenizer, crushing with a Warlinda blender ⁇ polytron (manufactured by Kinematica), crushing by ultrasonic waves, or thinning the cells while applying pressure with a French press. Fragmentation caused by jetting from the nozzle can be mentioned.
  • centrifugal fractionation methods such as differential centrifugation and density gradient centrifugation are mainly used.
  • the cell lysate is centrifuged at a low speed (500 to 300 rpm) for a short time (typically about 1 to 10 minutes), and the supernatant is further processed to a higher speed (150 to 300 rpm). (Centrifugation at 100 rpm) for 30 minutes to 2 hours, and the resulting precipitate is used as the membrane fraction.
  • the membrane fraction contains a large amount of the expressed 144273 and membrane components such as cell-derived phospholipids and membrane proteins.
  • 1 4 The amount of 1 4 2 7 3 2 7 3 cells or membrane fractions containing is preferably from 1 0 3 to 1 0 8 molecules per cell, in 1 0 5-1 0 7 molecules Preferably, there is.
  • 14273 fraction a natural 14273 fraction or a recombinant 14273 fraction having an activity equivalent thereto is desirable.
  • equivalent activity means equivalent ligand binding activity, signal transduction action, and the like.
  • a labeled fatty acid As the labeled fatty acid, a labeled fatty acid, a labeled alanine analog, a labeled L-force lunasin, or the like is used. For example [3 Eta], 25 I], [14 C], etc. labeled fatty acids used in such [35 S].
  • a buffer suitable for screening To screen for compounds that alter the binding of fatty acids to 14273, cells or membrane fractions of cells containing 14273 are first suspended in a buffer suitable for screening. Prepare a sample.
  • the buffer may be any buffer that does not inhibit the binding between the fatty acid and 14273, such as a phosphate buffer having a pH of 4 to 10 (preferably pH 6 to 8) or a tris-monohydrochloride buffer.
  • Surfactants such as CHAPS, Tween-80 TM (Kao-Ichi Atlas), digitonin, and dexcholate can also be added to the buffer to reduce non-specific binding.
  • a protease inhibitor such as PMSF, leptin, E-64 (manufactured by Peptide Research Institute), or pepstatin can be added for the purpose of suppressing the degradation of the receptor or ligand by the protease.
  • reaction tube containing a large excess of unlabeled fatty acid to determine the amount of non-specific binding (NS B).
  • the reaction is carried out at about 0-50 ° C, preferably about 4-37 ° C, for about 20 minutes to 24 hours, preferably for about 30 minutes to 3 hours.
  • the reaction solution is filtered through a glass fiber filter, washed with an appropriate amount of the same buffer, and the radioactivity remaining on the glass fiber filter is measured with a liquid scintillation counter or a gamma counter. When the count ( ⁇ .
  • ⁇ ⁇ SB obtained by subtracting the non-specific binding amount (NSB) from the count when no antagonist is present ( ⁇ 0 ) is 100%, the specific binding amount (B—NSB)
  • a test compound with 50% or less can be selected as a candidate substance with competitive inhibition ability. Wear.
  • the cell stimulating activity via 144273 is known. It can be measured by the method or using a commercially available measurement kit.
  • cells containing 144273 are cultured on a multiwell plate or the like. Before performing screening, replace the cells with a fresh medium or an appropriate buffer that is not toxic to cells, add test compounds, etc., incubate for a certain period of time, and then extract cells or collect supernatant to generate cells.
  • the quantified product is quantified according to each method. If the production of substances that serve as indicators of cell stimulating activity (for example, Ca 2+ , c AMP, arachidonic acid, etc.) is difficult due to the presence of a cell-containing degrading enzyme, an inhibitor for the degrading enzyme is added. You may also do an assembly.
  • activities such as cAMP production suppression can be detected as a production suppression effect on cells whose basic production has been increased by forskolin or the like.
  • cells expressing the appropriate 144273 are required.
  • the cells expressing the 144273 a cell line having the natural 144273, the above-described cell line expressing the recombinant 144273, and the like are desirable.
  • Test compounds include, for example, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, and plasma.These compounds are novel compounds. Or a known compound.
  • the test compound may form a salt, and a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid) or a base (eg, an organic acid) is used as the salt of the test compound.
  • physiologically acceptable acid addition salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, etc.).
  • a salt with sulfonic acid or sulfonic acid is used.
  • test compound a compound designed to bind to the ligand binding pocket based on the atomic coordinates of the active site of 14273 and the position of the ligand binding pocket is preferably used.
  • the atomic coordinates of the active site of 14273 and the position of the ligand binding pocket can be measured by a known method or a method analogous thereto.
  • the compound that changes the binding property between the fatty acid and 14273 is an agonist or an antagonist can be confirmed by using the screening method of agonist against 14273 described above.
  • Screening kits for compounds or salts thereof that alter the binding property between fatty acids and 14273 include those containing the membrane fraction of 14273, cells containing 14273, or cells containing 14273.
  • screening kit of the present invention examples include the following. 1. Screening reagent
  • CHO cells expressing 14273 were subcultured on 12-well plates at 5 ⁇ 10 5 cells / well. C, 5% C0 2, followed by culturing for 2 days at 95% air.
  • the compound or a salt thereof obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention is a compound or a salt thereof having an action of changing the binding property between a fatty acid and 14273, and specifically, (a) G Compound having a cell stimulating activity via a protein-coupled receptor or a salt thereof (so-called agonist against 14273), (mouth) Compound having no cell stimulating activity, a compound or a salt thereof (so-called antagonist against 14273) And (2) a compound or a salt thereof that enhances the binding force between the fatty acid and 14273, or (2) a compound or a salt thereof that reduces the binding force between the fatty acid and 14273.
  • the compound obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention may be a fatty acid other than a fatty acid that is a natural ligand.
  • Compounds obtained using the screening method or screening kit of the present invention include peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, These compounds may be novel compounds or may be known compounds.
  • salts of compounds obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention salts with physiologically acceptable acids (eg, inorganic acids, etc.) and bases (eg, organic acids, etc.) are used. And especially preferred are physiologically acceptable acid addition salts.
  • physiologically acceptable acids eg, inorganic acids, etc.
  • bases eg, organic acids, etc.
  • physiologically acceptable acid addition salts include salts with inorganic acids (for example, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (for example, citrus acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, maleic acid Acid, succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).
  • inorganic acids for example, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.
  • the agonist against 144273 has the same action as the biological activity of fatty acid, which is a ligand for 144273, so it can be used as a safe and low toxic drug depending on the biological activity of fatty acids. Useful.
  • Antagonists to 144273 can suppress the physiological activity of fatty acids, which are ligands to 144273, and are therefore useful as safe and low-toxic drugs for inhibiting the physiological activities of fatty acids. is there.
  • a compound or a salt thereof that enhances the binding force between a fatty acid and 144273 can enhance the biological activity of the fatty acid which is a ligand for 144273, and therefore, depending on the biological activity of the fatty acid. It is useful as a safe and low toxic drug.
  • Compounds or salts thereof that reduce the binding force between fatty acids and 144273 can reduce the physiological activities of fatty acids that are ligands for 144273, and thus suppress the physiological activities of fatty acids It is useful as a safe and low-toxicity drug.
  • the binding force between (i) agonist or (ii) fatty acid and 144 273 obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention can be determined.
  • Compounds or salts thereof that enhance, for example, regulate glycerol production from adipocytes, regulate darcerol in blood, regulate lipolysis, regulate insulin resistance, regulate stress, regulate adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion ( Preferably, glycerol production inhibitory action from fat cells, It has a blood darcerol lowering effect, a lipolysis suppressing effect, an insulin resistance suppressing effect, a stress regulating effect, an adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion suppressing effect, etc.
  • adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion regulator preferably glycerol production inhibitor from fat cells, blood darcerol lowering agent It is useful as a lipolysis inhibitor, an insulin resistance inhibitor, a stress regulator, an inhibitor of adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion, and the like.
  • an agonist against 144273 or (ii) a compound or a salt thereof that enhances the binding force between a fatty acid and 144273 obtained using the screening method or the screening kit of the present invention
  • diabetes impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, Pituitary dysfunction (e.g., hypopituitarism, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (e.g., Colorectal cancer), memory and learning disorders, memory exhaustion, hypoglycemia, insulin insulin, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA, high triglyceride
  • an agonist against 144273 or (ii) a compound or a salt thereof that enhances the binding force between a fatty acid and 144273 obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention For example, arteriosclerosis, arteriosclerosis Acute coronary syndromes such as atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute myocardial infarction, unstable angina, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA) Squeezing, myocardial infarction, ischemic heart disease such as angina, arteriosclerosis including vascular calcification, intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene , Glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerotic vascular lesions and their sequelae (eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.
  • an agonist to 144273 or (ii) a compound that enhances the binding force between a fatty acid and 144273 obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention, or a compound thereof Salts are inhibitors of adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion, such as ACTH-producing tumors, Cushing's disease, infectious diseases, secondary adrenocortical dysfunction, peptic ulcer, diabetes, psychiatric disorders, cataracts, glaucoma, tuberculosis Sexual disorders, hypertension, Cushing's syndrome (eg, central obesity, edema, hypertension, menstrual abnormalities, striated skin, hirsutism, diabetes, full moon face, osteoporosis, bleeding predisposition, mental disorders, muscle atrophy, muscle strength It can be used as a preventive medicine for diseases such as hypotension, hypokalemia, hypercholesterolemia, impaired glucose tolerance, leukocytosis) and atrophy of the cap cortex
  • Examples of (i) an antagonist to 144273 or (ii) a compound or a salt thereof that reduces the binding force between a fatty acid and 144273 obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention include: Glycerol production regulation from fat cells, blood darcerol regulation, lipolysis regulation, insulin resistance regulation, stress regulation, adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion regulation (preferably from fat cells) Has a glycerol production promoting action, a blood darcerol increasing action, a lipolysis promoting action, an insulin resistance promoting action, a stress regulating action, an adrenal corticotropic hormone (ACTH) secretion promoting action, etc.
  • Glycerol production regulators blood Darceol regulators, lipolysis regulators, insulin resistance regulators, Stress regulator, adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion regulator (preferably glycerol production from adipocytes) It is useful as an accelerator, a blood darcerol-elevating agent, a lipolysis accelerator, an insulin resistance enhancer, a stress regulator, an adrenocorticotropin (ACTH) secretion enhancer, and the like.
  • ACTH adrenocorticotropic hormone
  • a compound or a salt thereof which can be obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention, (i) antagonist to 144273, or (ii) a binding force between fatty acid and 144273 is reduced.
  • diabetes impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina pectoris, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, Pituitary dysfunction (eg, hypopituitarism, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (eg, colon) Cancer), memory and learning disorder, knee fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA Hypertribasic stea
  • an antagonist to 144273 or (ii) a compound or a salt thereof that reduces the binding force between a fatty acid and 144273 obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention.
  • arteriosclerosis, arteriosclerosis, and their sequelae eg, atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute myocardial infarction, acute coronary syndrome such as unstable angina, percutaneous coronary movement
  • PTCA Restenosis after angioplasty
  • myocardial infarction ischemic heart disease such as angina, arteriosclerosis including vascular calcification, intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.) ), Rattan Infarct, Cerebrovascular Dementia, Gangrene, Glomerulosclerosis, Nephropathy, Tangie R disease, etc.), atherosclerotic vascular lesions and their sequelae (eg, coronary artery disease (
  • adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretagogues include, but are not limited to, connective tissue diseases (eg, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, polymyositis, rheumatic fever, scleroderma), kidney diseases (eg, nephrotic) , Respiratory diseases (eg, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitial pneumonia), digestive diseases (eg, ulcerative colitis, cholestatic acute hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis) , Liver cirrhosis), neuromuscular diseases (eg, encephalomyelitis, peripheral adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretagogues), include, but are not limited to, connective tissue diseases (eg, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythemato
  • conjugate or a salt thereof derived from the compound or a salt thereof obtained by the above screening can also be used.
  • a compound or a salt thereof obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention includes a compound or a salt thereof that alters the expression level of 144273 described below, other drugs for the above-mentioned diseases, and others.
  • Drugs for diabetes, diabetic complications, hyperlipidemia, antihypertensives, anti-obesity agents, diuretics, chemotherapeutics, immunotherapy, etc. (hereinafter referred to as concomitant drugs) Can be used in combination with
  • the administration time of the compound obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention or the concomitant drug thereof is not limited, and these may be simultaneously administered to the administration subject, Administration may be carried out at staggered times.
  • the dosage of concomitant medications should be based on the dose used clinically. And can be selected appropriately.
  • the compounding ratio of the compound or its salt obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention and the concomitant drug can be appropriately selected depending on the administration subject, administration route, target disease, symptom, combination and the like. .
  • the concomitant drug may be used in an amount of 0.01 to 100 parts by weight based on 1 part by weight of agonist.
  • insulin preparations eg, insulin preparations extracted from pigs and pig knees; human insulin preparations genetically engineered using Escherichia coli and yeast; insulin dumbbells; protamine) Insulin dumbbell; insulin fragment or derivative (eg, NS-1 etc.), insulin sensitizer (eg, pioglitazone hydrochloride, troglitazone, rhodiglitazone or its maleate, JTT—501) , MCC—5.55, YM—440, G1—2 6 2 5 7 0, KRP—297, FK—614, CS — 01,1, ( ⁇ ⁇ ) -y-[[[ 4-[(5-Methyl-12-phenyl-14-oxazolyl) methoxy] phenyl] methoxy] imino] benzenebutanoic acid, etc., ⁇ -darcosidase inhibitors (eg, voglibose, acarbose, mi
  • aldose reductase inhibitors eg, Torres Tatto, Epanorerestat, Xenarestatt, Zoponorestatt, Fidarestat (SNK-860), Minaretstatt (AR1-509), CT-112, etc.
  • Neurotrophic factors eg, NGF , NT-3, etc.
  • AGE inhibitors eg, ALT-945, pimagedin, pyratoxatin, N-phenacylthiazolidine bromide (ALT-766), EXO-226, etc.
  • active oxygen scavengers eg, Thioctic acid
  • cerebral vasodilators eg, tioprid, etc.
  • anti-hyperlipidemic agents examples include statin compounds which are cholesterol synthesis inhibitors (eg, pravastatin, simpastatin, oral pastatin, travastatin, full pastatin, cerivastatin, or salts thereof (eg, sodium salt, etc.)).
  • statin compounds which are cholesterol synthesis inhibitors (eg, pravastatin, simpastatin, oral pastatin, travastatin, full pastatin, cerivastatin, or salts thereof (eg, sodium salt, etc.)).
  • squalene synthase inhibitors or fibrate compounds having a triglyceride lowering action eg, bezafibrate, clofibrate, simfibrate, clinofibrate, etc.
  • Antihypertensive drugs include angiotensin converting enzyme inhibitors (eg, captopril, enalapril, delapril, etc.), angiotensin II antagonists (eg, oral sultan, candesartan, cilexetil, etc.), calcium antagonists (eg, mayudipine, Fendipine, amlodipine, efonidipine, dicardipine, etc.), and clonidine.
  • angiotensin converting enzyme inhibitors eg, captopril, enalapril, delapril, etc.
  • angiotensin II antagonists eg, oral sultan, candesartan, cilexetil, etc.
  • calcium antagonists eg, mayudipine, Fendipine, amlodipine, efonidipine, dicardipine, etc.
  • anti-obesity agents include central anti-obesity drugs (eg, dexfenfluamine, fenfunoramine, phentermine, sibutramine, ampuepramine, dexanfuethamine, mazindol, phenolpropanolamine, clobenzole Etc.), knee lipase inhibitors (eg, orlistat, etc.), ⁇ 3 agonists (eg, CL-1 3 6 243, SR-58 6 1 1-A, UL-TG- 307, AJ-1 966 7 , AZ 40 140, etc.), peptide anorectic drugs (eg, leptin, CNTF (ciliary neurotrophic factor), etc.), cholecystokinin agonist (eg, lynch tribute, FP L-15849, etc.), etc. Is mentioned.
  • central anti-obesity drugs eg, dexfenfluamine, fenfunoramine, phentermine, sibut
  • diuretics examples include xanthine derivatives (e.g., sodium theobromine salicylate, calcium theobromine salicylate), thiazide-based preparations (e.g., ethiazide, penchiazide in the mouth, trimethium lumetiazide, hydrochlorothiazide, hydrofluflumethiazide, benzylhydroxide) Mouth thiazide, penflutizide, Polythiazide, methyclothiazide, etc.), anti-aldosterone preparations (eg, spironolactone, triamterene, etc.), carbonic anhydrase inhibitors (eg, acetazolamide, etc.), chlorobenzenesulfonamide preparations (eg, chlorthalidone, mefluside, indapamide, etc.), Azosemide, isosorbide, ethacrynic acid, piretanide, bumet
  • Chemotherapeutic agents include, for example, alkylating agents (eg, cyclophosphamide, ifosfamide, etc.), prodrug antagonists (eg, methotrexate, 5-fluorouracil, etc.), anticancer antibiotics (eg, mitomycin, Doriamycin), plant-derived anticancer agents (eg, vincristine, vindesine, taxol, etc.), cisplatin, carboplatin, ethopoxide and the like. Of these, 5-fluorouracil derivatives such as furtulon and neofluuron are preferred.
  • alkylating agents eg, cyclophosphamide, ifosfamide, etc.
  • prodrug antagonists eg, methotrexate, 5-fluorouracil, etc.
  • anticancer antibiotics eg, mitomycin, Doriamycin
  • plant-derived anticancer agents eg, vincristine, vindesine, tax
  • immunotherapeutic agents include microbial or bacterial components (eg, muramyl dipeptide derivatives, picibanil, etc.), polysaccharides with active immunopotentiating activity (eg, lentinan, schizophyllan, krestin, etc.), and genetic engineering techniques. Cytokins (eg, interferon, interleukin (IL), etc.), lip stimulating factor (eg, granulocyte colony stimulating factor, erythropoietin, etc.), etc., among which IL-11, IL-12, IL-112 and the like are preferred.
  • IL-11, IL-12, IL-112 and the like are preferred.
  • cyclooxygenase inhibitors eg, indomethacin, etc.
  • progesterone derivatives eg, megesterol acetate
  • glycation inhibitors eg, ALT-711 etc.
  • nerve regeneration promoters eg, Y-128, VX853, prosaptide etc.
  • antidepressants eg, desipramine, amitriptyline, imipramine
  • antiepileptic drugs eg, Eg, lamotrigine
  • antiarrhythmic drugs eg, mexiletine
  • acetylcholine receptor ligands eg, ABT-594
  • endoselin receptor antagonists eg, ABT-627
  • monoamine uptake inhibitors eg, tramadol
  • narcotics sexual analgesics
  • GABA receptor agonists eg, gearbapentin
  • ⁇ 2 receptor agonists eg, clonidine
  • topical analgesics eg, capsaicin
  • protein kinase C inhibitors eg, LY-333531
  • anxiolytics eg
  • the compound or a salt thereof obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention is used as the above-mentioned pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method.
  • the compound or a salt thereof is orally acceptable as tablets, capsules, elixirs, microforces, etc., if necessary, or water or other pharmaceutically acceptable. It can be used parenterally in the form of injectable solutions, such as sterile solutions with liquid or suspensions.
  • injectable solutions such as sterile solutions with liquid or suspensions.
  • the compound or a salt thereof is required to perform a generally accepted formulation with known physiologically acceptable carriers, flavors, excipients, vehicles, pastes, stabilizers, binders, and the like. It can be manufactured by mixing in unit dosage form. The amount of the active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose in the specified range can be obtained.
  • Additives that can be incorporated into tablets, forceps, etc. include, for example, binders such as gelatin, corn starch, tragacanth, gum arabic, excipients such as crystalline cellulose, corn starch, gelatin, alginic acid, etc.
  • a swelling agent such as magnesium stearate, a sweetener such as sucrose, lactose or saccharin, a flavoring agent such as peppermint, cocoa oil or cherry, and the like are used.
  • the unit dosage form is a capsule, the above type of material can further contain a liquid carrier such as an oil or fat.
  • Sterile compositions for injection include active substances in vehicles such as water for injection, sesame oil and coconut oil.
  • aqueous solution for injection for example, physiological saline, isotonic solution containing glucose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium salt sodium, etc.) and the like are used.
  • aid such as an alcohol (e.g., ethanol), polyalcohol (e.g., propylene grayed recall, polyethylene glycol), nonionic surfactant (eg, Porisoru Pies 8 0 TM, HCO - 5 0 ) such as in combination with Is also good.
  • the oily liquid for example, sesame oil, soybean oil, and the like are used, and may be used in combination with dissolution aids such as benzyl benzoate and benzyl alcohol.
  • the above-mentioned medicines include, for example, buffering agents (for example, phosphate buffer, sodium acetate buffer), soothing agents (for example, Shiridani benzalkonium, pro-hydroin hydrochloride), stabilizers, etc. (Eg, human blood albumin, polyethylene glycol, etc.), preservatives (eg, benzyl alcohol, phenol, etc.), antioxidants and the like.
  • buffering agents for example, phosphate buffer, sodium acetate buffer
  • soothing agents for example, Shiridani benzalkonium, pro-hydroin hydrochloride
  • stabilizers etc.
  • the prepared injection solution is usually filled in a suitable ampoule.
  • the preparations obtained in this way are safe and low toxic, for example, against human mammals (eg rats, mice, puppies, sheep, pigs, puppies, cats, dogs, monkeys, etc.). Can be administered.
  • the dose of agonist for 144273 varies depending on the subject of administration, target organ, symptoms, administration method, etc.
  • oral administration in general, for example, a diabetic patient (assuming a body weight of 60 kg) , The amount is about 0.1 to about 100 mg / day, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg / day.
  • parenteral administration the single dose varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, etc.
  • an injection usually, for example, a diabetic patient (with a body weight of 60 kg)
  • a diabetic patient usually, for example, a diabetic patient (with a body weight of 60 kg)
  • the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.
  • diabetes impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, atherosclerosis, angina, myocardium Infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (for example, hypopituitarism, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, Diuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (for example, colorectal cancer), memory-learning disorder, knee fatigue, hypoglycemia, insulin insulin, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia , High FFA, high triglyceride, fatty liver, impaired thermogenesis, cholelithiasis, eating disorders, anorexia nervosa, intestinal hormones (e.g., cholecystokine (CCK), gastric inhibitor 1, lip
  • Metabolic disorders eg, acute chronic adrenocortical dysfunction, adrenal genital syndrome, malignant exophthalmia due to thyroid disease, ACTH alone deficiency
  • skin disorders eg, measles, eczema, dermatitis, shingles, psoriasis, drugs Allergy
  • prevention of anaphylactic shock etc.A method for confirming that a therapeutic agent binds to the receptor protein or a salt thereof,
  • diabetes glucose intolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, (i) diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, Angina pectoris, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (for example, hypopituitarism, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, high Prolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (for example, colorectal cancer), memory / learning disorders, victory fatigue, hypoglycemia, insulin arergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancerous cachexia, hyperinsulinemia Disease, hyperglycemia, high FFA disease, hypertriglyceridemia, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anorexia nervosa, intestinal hormones (e.g., cholecystokinin (CC
  • cardiovascular disease especially anorexia, obesity, especially visceral fat accumulation type
  • stress regulator especially anorexia, obesity, especially visceral fat accumulation type
  • glycerol production promoter from fat cells especially blood darcerol-elevating drug
  • lipolysis promoter especially lipolysis promoter
  • insulin resistance promoter e.g. a blood darcerol-elevating drug
  • atherosclerosis artery Acute coronary syndromes such as atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute myocardial infarction, unstable angina, and percutaneous coronary angioplasty (PTCA)
  • ischemic heart disease myocardial infarction
  • ischemic heart disease such as angina, arteriosclerosis including vascular calcification, intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism) Cerebral hemorrhage), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.
  • This confirmation method is used to change the binding between the aforementioned ligand and 144273.
  • the method for screening a compound or a salt thereof can be carried out by using the above-mentioned drug instead of the test compound.
  • the kit for a confirmation method of the present invention is a kit for screening a compound that changes the binding property between the ligand and 144273, wherein the kit contains the above drug in place of a test compound. .
  • the antibody of the present invention can specifically recognize 144273, it can be used for screening of a compound that changes the amount of 144273 in a cell membrane or a salt thereof.
  • Nonhuman mammal a) Blood, b) Specific organ, c) Tissues or cells isolated from the organ are ruptured, and then the cell membrane fraction is isolated and contained in the cell membrane fraction.
  • Transformants or the like that express 144273 are sectioned, and the degree of staining of the receptor protein on the cell surface is quantified by using an immunostaining method, so that the cells are expressed on the cell membrane. Confirmation of the protein in the cell membrane 3.
  • a method for screening a compound or a salt thereof that changes the amount of 3 is provided.
  • the quantification of 14273 contained in the cell membrane fraction is specifically performed as follows.
  • non-human mammals for example, mice, rats, rabbits, sheep, pigs, pigs, cats, dogs, monkeys, etc., more specifically, dementia rats, obese mice, arteriosclerosis Drugs (eg, anti-dementia drugs, antihypertensive drugs, anti-cancer drugs, anti-obesity drugs, etc.) or physical stress (eg, flooding stress, electric shock, light / dark, low temperature, etc.)
  • arteriosclerosis Drugs eg, anti-dementia drugs, antihypertensive drugs, anti-cancer drugs, anti-obesity drugs, etc.
  • physical stress eg, flooding stress, electric shock, light / dark, low temperature, etc.
  • blood or specific organs eg, brain, liver, kidney, etc.
  • tissues or cells isolated from the organs are obtained.
  • the obtained organs, tissues or cells are suspended in, for example, an appropriate buffer (for example, Tris-HCl buffer, phosphate buffer, Hess buffer, etc.), and the S-cell, tissue or cells are suspended.
  • an appropriate buffer for example, Tris-HCl buffer, phosphate buffer, Hess buffer, etc.
  • the cells are crushed, and a cell membrane fraction is obtained by using a surfactant (for example, Triton XI 00 TM , Tween 20 TM, etc.), and further using a technique such as centrifugation, filtration, or column fractionation.
  • a surfactant for example, Triton XI 00 TM , Tween 20 TM, etc.
  • the cell membrane fraction refers to a cell membrane-rich fraction obtained by disrupting cells and then obtained by a method known per se.
  • Cells can be crushed by crushing the cells with a Potter-Elvehjera homogenizer, crushing with a Perling Blender ⁇ Polytron (manufactured by Kinematica), crushing by ultrasonic waves, pressing the cells while pressing with a French press, etc. Examples include crushing caused by ejection from a thin nozzle.
  • centrifugal fractionation methods such as differential centrifugation and density gradient centrifugation are mainly used.
  • the cell lysate is centrifuged at a low speed (500-3000 rpm) for a short period of time (usually about 1-10 minutes), and the supernatant is further processed at a higher speed (1500-300 rpm). (Centrifugation at 100 rpm) for 30 minutes to 2 hours, and the resulting precipitate is used as the membrane fraction.
  • the membrane fraction contains a large amount of the expressed 144273 and membrane components such as cell-derived phospholipids and membrane proteins.
  • a transformant expressing 144273 can be prepared according to the method described above, and 144273 contained in the cell membrane fraction can be quantified.
  • test compound is administered simultaneously with the stress, and after a certain period of time after administration (30 minutes to 3 days, preferably 1 hour to 2 days, more preferably 1 hour to 24 hours), the cell membrane
  • test compound When culturing the transformant according to a conventional method, the test compound is mixed in a medium, and after culturing for a certain period of time (1 day to 7 days, preferably 1 day to 3 days, more preferably 2 days to 3 days) One day later), it can be performed by quantifying the amount of 144273 in the cell membrane.
  • non-human mammals for example, mice, rats, rabbits, sheep, pigs, pigs, cats, dogs, monkeys, etc., more specifically dementia rats, obese mice, arteriosclerosis Drugs (eg, anti-dementia drugs, antihypertensive drugs, anti-cancer drugs, anti-obesity drugs, etc.) or physical stress (eg, flooding stress, electric shock, light / dark, low temperature, etc.)
  • drugs eg, anti-dementia drugs, antihypertensive drugs, anti-cancer drugs, anti-obesity drugs, etc.
  • physical stress eg, flooding stress, electric shock, light / dark, low temperature, etc.
  • blood or specific organs eg, brain, liver, kidney, etc.
  • tissues or cells isolated from the organs are obtained.
  • the obtained organ, tissue or cell is cut into a tissue section according to a conventional method, and immunostained using the antibody of the present invention.
  • the amount of 142,73 in the cell membrane can be quantitatively or qualitatively determined. You can check. (iv) The same can be confirmed by using a transformant or the like that expresses 144273 and performing the same procedure.
  • Test compounds include, for example, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, and plasma.These compounds are novel compounds. Or a known compound.
  • the test compound may form a salt, and a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid) or a base (eg, an organic acid) is used as the salt of the test compound.
  • physiologically acceptable acid addition salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid) Succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.
  • organic acids eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid
  • Succinic acid tartaric acid, citric acid
  • the compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention is a compound or a salt thereof having an action of changing the amount of 144273 in a cell membrane.
  • Compounds obtained by using the screening method of the present invention include peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, and the like.These compounds may be novel compounds or known compounds. May be a compound of the formula:
  • the compound obtained by using the screening method of the present invention may form a salt.
  • the salt of the compound include physiologically acceptable acids (eg, inorganic acids) and bases (eg, organic acids).
  • physiologically acceptable acids eg, inorganic acids
  • bases eg, organic acids
  • a salt with an acid or the like is used, and a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable.
  • salts examples include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, etc.) , Succinic acid, tartaric acid, citric acid, lingic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.) Salts and the like are used.
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.
  • organic acids eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, etc.
  • Succinic acid tartaric acid, citric acid, lingic acid, oxalic acid
  • benzoic acid methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.
  • a compound or a salt thereof that increases the amount of 144273 in the cell membrane is useful as a safe and low-toxic prophylactic / therapeutic agent for a disease associated with the failure of 144273.
  • a compound or a salt thereof that reduces the amount of 144273 in the cell membrane is useful as a safe and low-toxic prophylactic / therapeutic agent for diseases caused by overexpression of 144273.
  • a compound or a salt thereof that increases the amount of 144273 is, for example, a glycerol production regulating action from fat cells, a blood Darcetol regulating action, a lipolysis regulating action, an insulin Resistance regulation, stress regulation, adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion regulation (preferably, suppression of glycerol production from fat cells, reduction of blood glycerol, suppression of lipolysis, suppression of insulin resistance, stress Glycerol production regulator from adipocytes, blood glycerol regulator, lipolysis regulator, insulin resistance regulator, stress regulator Adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion regulator (preferably, glycerol production inhibitor from adipocytes, blood Daruseroru lowering agent, lipolysis inhibitors, I insulin resistance suppressing agents, stress modulator, adrenocorticotropic hormone (A C T H) content ⁇ suppressant) is useful as.
  • ACTH adrenocorticotropic hormone secretion regulator
  • Compounds or salts thereof that increase the amount of 144273 are, for example, diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis.
  • Angina myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (for example, hypopituitarism, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, high Prolactinemia, antidiuretic hormone incompatibility secretion syndrome), cancer (eg, colorectal cancer), memory and learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, high Insulinemia, hyperglycemia, high FFA, high triglycerides, fatty liver, impaired thermogenic function, cholelithiasis, eating disorders, anorexia nervosa, intestinal hormones (eg, cholecystokinin (CCK), gastric inhibitors Li one peptide (GIP), gastrin, glucagon-like peptide I (1) (GLP-1), somatostatin, gastrin-releasing peptide, secretin, bathoactive
  • a compound or a salt thereof that increases the amount of 144273 can be used for, for example, arteriosclerosis, arteriosclerotic disease and their sequelae (for example, atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute myocardium).
  • Acute coronary syndrome such as infarction and unstable angina, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), myocardial infarction, ischemic heart disease such as angina, arteriosclerosis including vascular calcification , Intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral bleeding, etc.), rattan infarction, cerebral vascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerotic vascular lesions and It can be used as a preventive / therapeutic agent for diseases such as their sequelae [eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.], dyslipidemia and their sequelae.
  • PTCA percutaneous coronary angioplasty
  • compounds or salts thereof that increase the amount of 144273 may be used as inhibitors of adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion, for example, ACTH-producing tumors, Cushing's disease, infections, secondary adrenal dysfunction , Peptic ulcer, diabetes, psychiatric disorders, cataract, glaucoma, tuberculosis, hypertension, Cushing's syndrome (eg, central obesity, edema, hypertension, menstrual abnormalities, extensible cutaneous striae, hirsutism, diabetes, full moon face, Prevention of diseases such as osteoporosis, hemorrhagic predisposition, psychiatric disorders, muscle atrophy, muscle weakness, hypokalemia, hypercholesterolemia, impaired glucose tolerance, leukocytosis) and atrophy of the adrenal cortex * Can be used.
  • ACTH adrenocorticotropic hormone
  • Compounds or salts thereof that decrease the amount of 142,733 include, for example, glycerol production regulation from adipocytes, darcerol regulation in blood, lipolysis regulation, insulin resistance regulation, stress regulation, adrenal cortex stimulation Hormone (ACTH) secretion regulating action (preferably, glycerol production promotion action from fat cells, blood glycerol elevation action, lipolysis promotion action, insulin resistance promotion action, stress regulation action, adrenocorticotropic hormone (ACTH) ) Secretion promoting action) Glycerol production regulator from adipocytes, blood darcerol regulator, lipolysis regulator, insulin resistance regulator, stress regulator, adrenocorticotropic + acute hormone (ACTH) secretion regulator (preferably It is useful as an agent for promoting glycerol production from fat cells, an agent for increasing blood darcerol, an agent for promoting lipolysis, an agent for promoting insulin resistance, a stress regulator, and an agent for promoting secretion of adrenocortico
  • Compounds or salts thereof that decrease the amount of 144273 are, for example, diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis.
  • Angina myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (for example, hypopituitarism, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, high Prolactinemia, antidiuretic hormone incompatibility secretion syndrome), cancer (eg, colorectal cancer), memory and learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, high Insulinemia, hyperglycemia, high FFA, hypertriglyceridemia, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anorexia nervosa, intestinal hormones (eg, cholecystokinin (CCK), gastric insulin Bitley peptide (GIP), gastrin, glucagon-like peptide-1 (GLP-1), somatostatin, gastrin-releasing peptide, secretin, bathoactive intestinan
  • a compound or a salt thereof that reduces the amount of 144273 is, for example, arteriosclerosis, arteriosclerotic disease and their sequelae (for example, atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, Acute myocardial infarction, acute coronary syndrome such as unstable angina, re-stenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), ischemic heart disease such as myocardial infarction and angina, artery including vascular calcification Sclerosis, intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral bleeding, etc.), rattan infarction, cerebral vascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerotic blood vessels Lesions and their sequelae [eg For example, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.], dyslipidemia and its sequelae can be used as preventive and therapeutic agents.
  • arteriosclerosis arterios
  • compounds or salts thereof that reduce the amount of 144273 may be used, for example, as adrenocorticotropin (ACTH) secretagogues, for example, in connective tissue disorders (eg, rheumatoid arthritis, systemic erythematosus, multiple occurrences).
  • ACTH adrenocorticotropin
  • a compound derived from the compound obtained by the above screening or a salt thereof or a salt thereof can also be used.
  • a compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention or a salt thereof is used as a pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method.
  • the compound or a salt thereof is orally administered as a tablet, capsule, elixir, microcapsule or the like, which is sugar-coated as necessary, or water or other pharmaceutically acceptable liquid. It can be used parenterally in the form of injectables, such as sterile '[4 solutions or suspensions.
  • the compound or a salt thereof may be combined with a known physiologically acceptable carrier, flavoring agent, excipient, vehicle, preservative, stabilizer, binder, etc., in a unit dose required for generally accepted formulation practice. It can be manufactured by mixing in the form. The amount of the active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose in the specified range can be obtained.
  • additives that can be mixed with tablets, capsules, etc.
  • binders such as gelatin, corn starch, tragacanth, gum arabic, and crystalline materials.
  • Excipients such as cellulose, leavening agents such as corn starch, gelatin, alginic acid, lubricants such as magnesium stearate, sweeteners such as sucrose, lactose or saccharin, peppermint, cocoa oil or tea. Flavoring agents and the like are used.
  • the above-mentioned material of the type may further contain a liquid carrier such as oil and fat.
  • Sterile compositions for injection can be formulated according to standard pharmaceutical practice, such as dissolving or suspending the active substance in a vehicle such as water for injection, or naturally occurring vegetable oils such as sesame oil or coconut oil.
  • aqueous solutions for injection include physiological saline, isotonic solutions containing glucose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium salt, etc.), and the like. aid such as an alcohol (e.g., ethanol), polyalcohol (e.g., propylene grayed recall, polyethylene glycol), nonionic surfactant (eg, Porisoru Pies 8 0 TM, HCO - 5 0 ) such as in combination with Is also good.
  • a solubilizing agent such as benzyl benzoate or benzyl alcohol.
  • prophylactic / therapeutic agents include, for example, buffers (for example, phosphate buffer and sodium acetate buffer), soothing agents (for example, shiridani benzalkonium, pro-hydrochloride, etc.), stabilizers (for example, For example, it may be blended with human blood albumin, polyethylene glycol and the like, a preservative (eg, benzyl alcohol, phenol and the like), an antioxidant and the like.
  • buffers for example, phosphate buffer and sodium acetate buffer
  • soothing agents for example, shiridani benzalkonium, pro-hydrochloride, etc.
  • stabilizers for example, For example, it may be blended with human blood albumin, polyethylene glycol and the like, a preservative (eg, benzyl alcohol, phenol and the like), an antioxidant and the like.
  • the prepared injection solution is usually filled into a suitable ampoule.
  • the preparations obtained in this way are safe and low toxic, for example, against human mammals (eg, rats, mice, puppies, sheep, pigs, puppies, cats, dogs, monkeys, etc.). Can be administered.
  • human mammals eg, rats, mice, puppies, sheep, pigs, puppies, cats, dogs, monkeys, etc.
  • the dose of the compound or its salt that increases the amount of 144273 in the cell membrane varies depending on the administration target, the target organ, the symptoms, the administration method, and the like.
  • a single dose The dosage varies depending on the administration subject, target organ, symptoms, administration method, and the like.
  • usually in the form of an injection for example, in a diabetic patient (with a body weight of 6 O kg), about 0.01 to 1 day
  • the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.
  • neutralizing activity of an antibody against 144273 means an activity of inactivating a signal transduction function involving 144273. Therefore, when the antibody has a neutralizing activity, it can inactivate the signal transduction involving 144273, for example, the cell stimulating activity via 144273.
  • antibodies against 144273 are effective in regulating glycerol production from fat cells, regulating darcerol in blood, regulating lipolysis, regulating insulin resistance, and regulating stress.
  • Adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion regulating action preferably, glycerol production promotion action from fat cells, blood darcerol elevation action, lipolysis promotion action, insulin resistance promotion action, stress regulation action, adrenal cortex It has a stimulating hormone (ACTH) secretion-promoting action, etc., so it regulates glycerol production from fat cells, darcerol in blood, lipolysis, insulin resistance, stress, adrenal cortex
  • Stimulating hormone (ACTH) secretion regulator preferably glycerol production promoter from adipocytes, blood glucose Roll increasing agent, lipolysis promoter, insulin resistance enhancer, stress modulator, adrenocorticotropic hormone (A C T H) secretagogue agent
  • a C T H adrenocorticotropic hormone secretagogue agent
  • Antibodies to 144273 include, for example, diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis , Angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (for example, hypopituitarism, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, high Prolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (eg, colorectal cancer), memory and learning disorders, knee fatigue, hypoglycemia, in Surin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA disease, hypertrilipidemia, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anorexia, Intestinal hormones (eg, cholecystokinin (
  • Antibodies against 144273 are, for example, arteriosclerosis, arteriosclerosis, and their sequelae [eg, atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute Includes acute coronary syndrome such as myocardial infarction and unstable angina, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), ischemic heart disease such as myocardial infarction and angina, vascular calcification, etc.
  • arteriosclerosis arteriosclerosis
  • arteriosclerosis and their sequelae
  • atherosclerosis eg, atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute Includes acute coronary syndrome such as myocardial infarction and unstable angina, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), ischemic heart disease such as myocardial infarction and angina, vascular calcification, etc.
  • PTCA percutaneous coronary angioplasty
  • ischemic heart disease such as myocardial infarction and angina
  • vascular calcification etc.
  • Arteriosclerosis intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerotic blood vessels It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for diseases such as lesions and their sequelae [eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.], dyslipidemia and its sequelae.
  • diseases such as lesions and their sequelae [eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.], dyslipidemia and its sequelae.
  • antibodies to 144273 may be used, for example, as adrenergic corticotropic hormone (ACTH) secretagogues, for example, connective tissue disorders (eg, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, multiple occurrences) Myositis, rheumatic fever, scleroderma), renal disease (eg, nephrosis), respiratory disease (eg, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitial pneumonia), gastrointestinal disease (eg, Ulcerative colitis, cholestatic acute hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis), neuromuscular diseases (eg, encephalomyelitis, peripheral neuritis, multiple sclerosis, myasthenia gravis, facial nerve) Paralysis), blood disorders (eg, hemolytic anemia, granultis, granulfollib,
  • antisense DNA or siRNA of the present invention may be, for example, a glycerol production-regulating action from fat cells, a blood darcerol-modulating action, or lipolysis.
  • insulin resistance control action preferably, glycerol production promotion action from fat cells, blood darcerol increase action, lipolysis promotion action, insulin resistance promotion action Glycerol production regulator from adipocytes, darcerol regulator in blood, lipolysis regulator, insulin resistance regulator Agent, stress regulator, adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion regulator (preferably fat cells It is useful as a glycerol production enhancer, a blood darcerol enhancer, a lipolysis enhancer, an insulin resistance enhancer, a stress regulator, an adrenocorticotropic hormone (ACTH) secretion enhancer, and the like.
  • the antisense DNA or siRNA of the present invention includes, for example, diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, Myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (eg hypopituitarism, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, anti- Diuretic hormone incompatibility secretion syndrome), cancer (for example, colorectal cancer), memory and learning disorders, kidney fatigue, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, high Glycemia, high FFA, hypertribasic steatosis, fatty liver, thermogenic dysfunction, cholelithiasis, eating disorders, anorexia nervosa, intestinal hormones (e.g., chole
  • antisense DNA or siRNA of the present invention can be used, for example, for arteriosclerosis, arteriosclerotic disease and their sequelae (for example, atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute myocardial infarction, unstable constriction).
  • Acute coronary syndrome such as heart disease, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), myocardial infarction, ischemic heart disease such as angina, arteriosclerosis including blood vessel calcification, intermittent Lameness, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebral vascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerotic vascular lesions, etc. It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for diseases such as onset [eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.], dyslipidemia and its sequelae.
  • CHD coronary artery disease
  • the antisense DNA or siRNA of the present invention can be used, for example, as an adrenocorticotropin (ACTH) secretagogue, for example, for connective tissue diseases (for example, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, polymyositis, Rheumatic fever, scleroderma), kidney disease (eg, nephrosis), respiratory disease (eg, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitial pneumonia), gastrointestinal disease (eg, , Ulcerative colitis, cholestatic acute hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis), neuromuscular diseases (for example, encephalomyelitis, peripheral neuritis, multiple sclerosis, myasthenia gravis, facial nerve) Paralysis), blood disorders (eg, hemolytic anemia, granulocytopenia,
  • the antisense DNA or siRNA when used, the antisense DNA is used alone or after it is inserted into a suitable vector such as a retrovirus vector, an adenovirus vector, an adenovirus associated virus vector, and the like.
  • a suitable vector such as a retrovirus vector, an adenovirus vector, an adenovirus associated virus vector, and the like.
  • the siRNA can be administered as it is, or can be formulated with a physiologically acceptable carrier such as an adjuvant to promote uptake, and administered with a gene gun or a catheter such as a hydrogel catheter.
  • the antisense DNA or siRNA can also be used as a diagnostic oligonucleotide probe for examining the presence of the DNA of the present invention in tissues or cells and the state of its expression.
  • the present invention relates to a non-human having a foreign DNA of the present invention (hereinafter abbreviated as the foreign DNA of the present invention) or a mutant DNA thereof (sometimes abbreviated as the foreign mutant DNA of the present invention).
  • a mammal is provided.
  • the non-human mammal having the exogenous DNA of the present invention or the mutant DNA thereof (hereinafter abbreviated as the DNA transgenic animal of the present invention) is a germ cell containing an unfertilized egg, a fertilized egg, a sperm and its progenitor cells.
  • the calcium phosphate method, the electric pulse method, the ribofect It can be produced by transferring the target DNA by an agglutination method, an aggregation method, a microinjection method, a particle gun method, a DEAE-dextran method, or the like.
  • the exogenous DNA of the present invention can be transferred to somatic cells, organs of living organisms, tissue cells, and the like, and can be used for cell culture, tissue culture, and the like.
  • the DNA-transferred animal of the present invention can also be produced by fusing cells with the above-mentioned germ cells by a cell fusion method known per se.
  • Non-human mammals include, for example, horses, pigs, sheep, goats, horses, Nu, cat, monoremot, hamster, mouse, rat, etc. are used.
  • rodents are relatively short in terms of ontogeny and biological cycle in terms of the creation of disease animal model systems, and rodents that are easy to breed, especially mice (for example, pure strains such as C57BL / 6 strain and DBA2 strain, etc.)
  • mice for example, pure strains such as C57BL / 6 strain and DBA2 strain, etc.
  • mammals in a recombinant vector that can be expressed in mammals include humans and the like in addition to the above-mentioned non-human mammals.
  • the exogenous DNA of the present invention refers not to the DNA of the present invention originally possessed by a non-human mammal, but to the DNA of the present invention once isolated and extracted from a mammal.
  • DNA having a mutation (for example, mutation) in the base sequence of the original DNA of the present invention, specifically, base addition, deletion, substitution with another base, etc. DNA that has been used is used, and also includes abnormal DNA.
  • the abnormal DNA means a DNA that expresses abnormal 14273, and for example, a DNA that expresses 14273 that suppresses the function of normal 14273 is used.
  • the exogenous DNA of the present invention may be derived from a mammal of the same or different species as the animal of interest.
  • the human DNA of the present invention when transferred, it is derived from various mammals (eg, egrets, dogs, cats, guinea pigs, hamsters, rats, mice, etc.) having the DNA of the present invention with high homology 1 "
  • the DNA construct (e.g., vector, etc.) to which the human DNA of the present invention is bound is microinjected into a fertilized egg of a target mammal, for example, a mouse fertilized egg, downstream of various promoters capable of expressing the DNA of the present invention.
  • a DNA-transferred mammal that highly expresses the DNA of the present invention can be produced.
  • Examples of 14273 expression vectors include E. coli-derived plasmids, Bacillus subtilis-derived plasmids, yeast-derived plasmids, Retroviruses such as Moroni leukemia virus and animal viruses such as vaccinia virus or paculovirus are used. Among them, Escherichia coli-derived plasmid, Bacillus subtilis-derived plasmid or yeast-derived plasmid are preferably used.
  • cytomegalovirus promoter capable of high expression throughout the whole body
  • a human peptide chain elongation factor 1 (EF-1) promoter a human and a chicken / 3-actin promoter, and the like are preferable.
  • the above-mentioned vector has a sequence (generally called a terminator) that terminates transcription of a target messenger RNA in a DNA-transferred mammal.
  • a sequence of each DNA derived from a virus or various mammals can be used.
  • a SV40 terminator of a simian virus or the like is used.
  • the splicing signal of each DNA, the enhancer region, and a part of the intron of eukaryotic DNA, etc. are used to further express the target foreign DNA in the upstream and downstream of the promoter region, the promoter region and the translation region. It is also possible depending on the purpose to connect between 3 'downstream of the translation region or the translation region.
  • the normal 1473 translation region is DNA derived from liver, kidney, thyroid cells, fibroblasts derived from humans or various mammals (eg, egrets, dogs, cats, guinea pigs, hamsters, rats, mice, etc.). And all or part of genomic DNA from various commercially available genomic DNA libraries, or complementary DNA prepared by known methods from liver, kidney, thyroid cells, and fibroblast-derived RNA as raw materials. I can do it.
  • a foreign abnormal DNA can produce a translation region obtained by mutating the normal 1443 translation region obtained from the above cells or tissues by point mutagenesis.
  • the translation region can be prepared as a DNA construct that can be expressed in a transgenic animal by a conventional DNA engineering technique in which it is ligated to the downstream of the aforementioned promoter and optionally to the upstream of the transcription termination site.
  • Transfer of the exogenous DNA of the present invention at the fertilized egg cell stage is ensured to be present in all germ cells and somatic cells of the target mammal.
  • the presence of the exogenous DNA of the present invention in the germ cells of the produced animal after DNA transfer means that all the progeny of the produced animal retain the exogenous DNA of the present invention in all of the germ cells and somatic cells Means that.
  • the progeny of such an animal that inherits the exogenous DNA of the present invention has the exogenous DNA of the present invention in all of its germ cells and somatic cells.
  • the non-human mammal to which the exogenous normal DNA of the present invention has been transferred can be subcultured in a normal breeding environment as a DNA-bearing animal after confirming that the exogenous DNA is stably retained by the crossing. I can do it.
  • the transfer of the exogenous DNA of the present invention at the fertilized egg cell stage It is ensured that it is present in excess in all blasts and somatic cells.
  • Excessive presence of the exogenous DNA of the present invention in the germinal cells of the produced animal after the DNA transfer indicates that all the offspring of the produced animal have an excessive amount of the exogenous DNA of the present invention in all of the germinal and somatic cells.
  • the non-human mammal having the normal DNA of the present invention has the normal DNA of the present invention expressed therein, and finally promotes the function of endogenous normal DNA to thereby enhance the ability of the non-human mammal. It may develop hyperfunction and can be used as a model animal for the disease. For example, using the normal DNA-transferred animal of the present invention, elucidation of the pathophysiology of 14473-associated functional hypertension and diseases associated with 144273 and examination of treatment methods for these diseases Can be performed.
  • the mammal into which the exogenous normal DNA of the present invention has been transferred has an increased symptom of released 143, it is also used for a screening test for a therapeutic agent for a disease associated with 423. It is possible.
  • the non-human mammal having the exogenous abnormal DNA of the present invention was confirmed to stably retain the foreign 1 "live DNA by mating, and was subcultured in a normal breeding environment as the DNA-bearing animal.
  • the target foreign DNA can be incorporated into the above-mentioned plasmid and used as a raw material.
  • the DNA construct with the promoter can be prepared by ordinary DNA engineering techniques.
  • the transfer of the abnormal DNA of the present invention at the fertilized egg cell stage is ensured to be present in all of the germinal and somatic cells of the target mammal.
  • the presence of the abnormal DNA of the present invention means that all the offspring of the animal produced have the abnormal DNA of the present invention in all of the germinal and somatic cells.
  • Progeny of the present invention have the abnormal DNA of the present invention in all of their germ cells and somatic cells. By obtaining homozygous animals having both of the same chromosomes, and crossing the male and female animals, it is possible to breed and pass all the offspring to have the DNA.
  • the abnormal DNA of the present invention is highly expressed, and ultimately, by inhibiting the function of endogenous normal DNA,
  • 142 73 In some cases, it becomes functionally inactive refractory and can be used as a disease model animal. For example, using the abnormal DNA-transferred animal of the present invention, it is possible to elucidate the pathological mechanism of the function-inactive refractory disease of 14273 and to examine a method for treating this disease.
  • the animal with high expression of the abnormal DNA of the present invention can be used to inhibit the function of normal 1427 3 by the abnormality of the present invention in the functional inactive refractory of 1427 3 (dominant negative). Action).
  • the mammal into which the foreign abnormal DNA of the present invention has been transferred has increased free symptom of 144273, it is also used for a therapeutic drug screening test for functional inactive refractory of 144273. It is possible.
  • 14273 Investigate the clinical symptoms of the disease associated with the disease, including disease, etc., and obtain more detailed pathological findings in each organ of the disease model related to the disease. Thus, it can contribute to the development of new treatment methods and the research and treatment of secondary diseases caused by the diseases.
  • each organ is taken out from the DNA-transferred animal of the present invention, cut into small pieces, and then obtained with a protease such as trypsin to obtain the released DNA-transferred cells, and culturing the cells or culturing the strain of the cultured cells.
  • a protease such as trypsin
  • the use of the DNA-transferred animal of the present invention to develop a therapeutic agent for a disease associated with 144273 including a functional inactive refractory It is possible to provide an effective and rapid screening method for the therapeutic agent for the disease by using a test method and a quantitative method.
  • using the DNA-transferred animal of the present invention or the exogenous DNA expression vector of the present invention it is possible to examine and develop a method for treating DNA associated with a disease associated with 144273.
  • the present invention provides a non-human mammal embryonic stem cell in which the DNA of the present invention is inactivated 'and a non-human mammal deficient in expression of the DNA of the present invention.
  • a method for screening a compound or a salt thereof that promotes or inhibits promoter activity on DNA of the present invention which comprises administering a test compound to the animal according to item [7] and detecting the expression of a reporter gene.
  • a non-human mammalian embryonic stem cell in which the DNA of the present invention has been inactivated refers to a DNA of the present invention possessed by the non-human mammal, which is artificially mutated to suppress the expression ability of the DNA, or By substantially losing the activity of 144273 encoded by the DNA, the DNA does not substantially have the ability to express 14273 (hereinafter sometimes referred to as the knockout DNA of the present invention. )
  • ES cells Non-human mammalian embryonic stem cells
  • non-human mammal the same one as described above is used.
  • the method of artificially mutating the DNA of the present invention can be performed, for example, by deleting part or all of the DNA sequence by genetic engineering techniques, and inserting or substituting another DNA.
  • the knockout DNA of the present invention can be produced by, for example, shifting the reading frame of a codon or disrupting the function of a promoter or exon by these mutations.
  • non-human mammalian embryonic stem cells in which the DNA of the present invention has been inactivated include, for example, The DNA of the present invention possessed by a non-human mammal is isolated, and a neomycin resistance gene, a drug resistance gene typified by a hygromycin resistance gene, or 1 acZ ( ⁇ -galactosidase gene) Inserting a reporter gene, such as the cat (chloramphenicylacetyltransferase gene), disrupts exon function, or terminates gene transcription in the intron between exons
  • a DNA sequence e.g., the polyA addition signal
  • targeting vector 1 A DNA strand having a DNA sequence constructed as described above (hereinafter abbreviated as targeting vector 1) is introduced into the chromosome of
  • the DNA sequence on the targeting vector and the DNA sequence of the neighboring region other than the DNA of the present invention used in the preparation of the targeting vector and the Southern hybridization analysis using the DNA sequence in the vicinity thereof as a probe are used. It can be obtained by analyzing by a PCR method using primers and selecting the knockout ES cells of the present invention.
  • ES cells from which the DNA of the present invention is inactivated by the homologous recombination method or the like for example, those already established may be used as described above.
  • a newly established one may be used.
  • mouse ES cells currently 129 ES cells are generally used, but since the immunological background is not clear, it is an alternative pure immunological and genetically
  • BDFi mice C57BL / 6 and C57BL / 6 mice in which the number of eggs collected by C57BL / 6 mice and C57BLZ6 have been improved by crossing with DBA / 2 BDFi mice can be used satisfactorily, such as those established using DBA / 2 etc.
  • BDFi mice have the advantage of high number of eggs collected and their eggs are strong, and have the C57B LZ6 mouse background. Therefore, when ES cells obtained using this are used to create a disease model mouse, the genetic background can be replaced by C57BL / 6 mice by backcrossing with C57BL / 6 mice. It can be used advantageously in that respect.
  • blastocysts 3.5 days after fertilization are generally used, but efficiency is also achieved by collecting embryos at the 8-cell stage and culturing them up to blastocysts. Many early embryos can be obtained well.
  • Either male or female ES cells may be used, but male ES cells are generally more convenient for producing breeding line chimeras. It is also desirable to discriminate between males and females as soon as possible in order to reduce the complexity of culturing.
  • An example of a method for determining the sex of ES cells is a method of amplifying and detecting a gene in the sex-determining region on the Y chromosome by PCR.
  • this method conventionally, about 10 6 cells to the karyotyping
  • the primary selection of ES cells in the early stage of culture can be performed by gender discrimination. By enabling selection of male cells, the labor in the initial stage of culture can be significantly reduced.
  • the secondary selection can be performed, for example, by confirming the number of chromosomes by the G-banding method.
  • the number of chromosomes in the obtained ES cells is preferably 100% of the normal number.
  • Embryonic stem cell lines obtained in this way usually have very good proliferative potential, but must be carefully subcultured because they tend to lose their ontogenetic potential.
  • an incubator preferably 5% CO 2, 95% air or 5%
  • a suitable veider cell such as STO fibroblasts.
  • Culture at about 37 ° C in 5% CO 2, 5% CO 2, 90% air.
  • trypsin ZEDTA solution usually 00 1-0.5% trypsin Z 0 1-5 mM EDTA (preferably, about 0.1% trypsin / ImM EDTA) treatment to form single cells and inoculate them onto freshly prepared feeder cells.
  • Such subculture is usually performed every 1 to 3 days. At this time, it is desirable to observe the cells, and if morphologically abnormal cells are found, discard the cultured cells.
  • ES cells are differentiated into various types of cells, such as parietal, visceral, and cardiac muscle, by monolayer culture up to high density or suspension culture until cell clumps are formed under appropriate conditions.
  • MJ Evans and MH Kaufman Nature, Vol. 292, p. 154, 1981; GR Martin Proceedings of the National ', Academy of Sciences, USA Proc. Natl. Acad. Sci. USA) 78, 7634, 1981; TC Doetschraan et al., Giannareo ⁇ ob embryology and Experimental. Morphology, Vol. 87, p. 27, 1985]
  • the DNA expression-deficient cells of the present invention obtained by differentiating the ES cells of the present invention are It is useful in 3 or 144273 cell biology studies.
  • the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention can be distinguished from a normal animal by measuring the mRNA level of the animal using a known method and indirectly comparing the expression level. .
  • non-human mammal the same one as described above is used.
  • the targeting vector prepared as described above is introduced into a mouse embryonic stem cell or a mouse egg cell, and the DNA of the targeting vector is inactivated by the introduction.
  • the DNA of the present invention can be knocked down by homologous recombination in which the DNA sequence replaces the DNA of the present invention on the chromosome of mouse embryonic stem cells or mouse egg cells by gene homologous recombination.
  • the cells in which the DNA of the present invention has been knocked out are derived from the DNA sequence on the southern hybridization analysis or the targeting vector using the DNA sequence on or near the DNA of the present invention as a probe, and from the mouse used in the targeting vector.
  • the DNA sequence of the present invention and the DNA sequence of the neighboring region other than the DNA sequence of the present invention can be determined by analysis using the PC method with the primer being the same.
  • the DNA-inactivated cell line of the present invention is cloned by gene homologous recombination, and the cell is used at an appropriate time, for example, at the 8-cell stage.
  • the chimeric embryo is injected into a non-human mammal embryo or blastocyst, and the resulting chimeric embryo is transplanted into the uterus of the pseudo-pregnant non-human mammal.
  • the produced animal is a chimeric animal composed of both a normal cell having the DNA locus of the present invention and an artificially mutated cell having the DNA locus of the present invention.
  • all tissues are artificially obtained from the population obtained by crossing such a chimeric individual with a normal individual. It can be obtained by selecting individuals composed of cells having the DNA locus of the present invention to which a mutation has been added, for example, by judging coat color or the like.
  • the individuals obtained in this way are usually 1427 3 heterozygous individuals, which are mated with each other and are not mated with 1427 heterozygous individuals. 273 homozygous deficient individuals can be obtained.
  • a transgenic non-human mammal having a targeting vector introduced into a chromosome can be obtained by injecting a DNA solution into the egg cell nucleus by a microinjection method. Compared to non-human mammals, it can be obtained by selecting a gene having a mutation in the DNA locus of the present invention by homologous recombination.
  • the acquisition and maintenance of the germ line may be performed according to a conventional method. That is, by crossing male and female animals having the inactivated DNA, homozygous animals having the inactivated DNA on both homologous chromosomes can be obtained. The obtained homozygous animal can be efficiently obtained by rearing the mother animal in such a manner that one normal individual and a plurality of homozygous animals are obtained. By mating male and female heterozygous animals, homozygous and heterozygous zygoth animals having the inactivated DNA are bred and subcultured.
  • non-human mammalian embryonic stem cells in which the DNA of the present invention has been inactivated are very useful for producing the non-human mammal deficient in expressing the DNA of the present invention.
  • non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention lacks various biological activities that can be induced by 144273, and thus is caused by inactivation of the biological activities of 144273. It is useful for investigating the causes of these diseases and examining treatment methods.
  • (12a) A method for screening a compound having a therapeutic / preventive effect against diseases caused by DNA deficiency or damage of the present invention.
  • the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention can be used for screening of the compound of the present invention having a therapeutic / preventive effect against diseases caused by DNA deficiency or damage.
  • the present invention is characterized in that a test compound is administered to a non-human mammal deficient in expression of the DNA of the present invention, and the change in the animal is observed and measured.
  • Compounds with therapeutic and preventive effects on diseases caused by Provides a method for screening the salt.
  • Examples of the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention used in the screening method include those described above.
  • Test compounds include, for example, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, and plasma.These compounds are novel compounds. Or a known compound. .
  • the test compound may form a salt, and a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid) or a base (eg, an organic acid) is used as the salt of the test compound.
  • physiologically acceptable acid 'addition salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, etc.).
  • a non-human mammal deficient in expression of the DNA of the present invention is treated with a test compound, compared with a non-treated control animal, and changes in the organs, tissues, disease symptoms, etc. of the animal are used as indices. Therapeutic and prophylactic effects of test compounds can be tested.
  • a method of treating a test animal with a test compound for example, oral administration, intravenous injection and the like are used, and the method can be appropriately selected according to the symptoms of the test animal, properties of the test compound, and the like.
  • the dose of the test compound can be appropriately selected according to the administration method, the properties of the test compound, and the like.
  • the test compound when a test compound is administered to a test animal, the test animal's blood glucose level, blood glycemic oral level ⁇ the above-mentioned disease symptoms are about 10% or more, preferably about 30% or more, If the decrease is preferably about 50% or more, the test compound can be selected as a compound or a salt thereof having a therapeutic / preventive effect on the above-mentioned diseases.
  • the compound or a salt thereof obtained by using the screening method is a compound or a salt thereof selected from the test compounds described above, and is a disease caused by a loss or damage of 144273 (for example, diabetes, Impaired glucose tolerance, ketosis, Acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, arteriosclerosis, angina, myocardial infarction, sexual dysfunction, obesity, obesity, pituitary dysfunction (for example, anterior pituitary function) Hypotension, pituitary dwarfism, diabetes insipidus, acromegaly, Cushing's disease, hyperprolactinemia, antidiuretic hormone incompatible secretion syndrome), cancer (eg, large S cancer recruitment), memory learning disability, ⁇ Organ exhaustion, hypoglycemia, insulin allergy, lipotoxicity, lipoatrophy, cancer cachexia, hyperinsulinemia, hyperglycemia, high FFA, high triglycerides, fatty liver, thermogenic dysfunction
  • Compounds or salts thereof obtained by the screening method include, for example, arteriosclerosis, atherosclerotic diseases and their sequelae [eg, atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, acute myocardial Acute coronary syndrome such as infarction and unstable angina, re-stenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), ischemic heart disease such as myocardial infarction and angina, artery including vascular calcification Sclerosis, intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier's disease, etc.), atherosclerotic vascular lesions and They can be used as prophylactic / therapeutic agents for their sequelae (eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.), dyslipidemia and their sequelae.
  • PTCA per
  • a compound or a salt thereof obtained by using the screening method may be As an inhibitor of renal corticotropin (ACTH) secretion, e.g., # 11 producing lupus severe ulcer, Cushing's disease, infectious disease, secondary adrenocortical dysfunction, peptic ulcer, diabetes, psychiatric disorder, cataract, glaucoma, tuberculosis Disease, hypertension, Cushing's syndrome (eg, central obesity, edema, hypertension, menstrual abnormalities, striated skin, hirsutism, diabetes, full moon face, osteoporosis, hemorrhagic predisposition, mental disorders, muscle atrophy, muscle weakness , Hypokalemia, hypercholesterolemia, impaired glucose tolerance, leukocytosis) and atrophy of the adrenal cortex can be used as a preventive and therapeutic agent.
  • ACTH renal corticotropin
  • a compound derived from the compound obtained by the above screening or a salt thereof or a salt thereof can also be used.
  • Salts of compounds obtained by the screening method include salts with physiologically acceptable acids (eg, inorganic acids, organic acids, etc.) and bases (eg, alkali metals, etc.).
  • physiologically acceptable acids eg, inorganic acids, organic acids, etc.
  • bases eg, alkali metals, etc.
  • salts with inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.
  • organic acids eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid
  • Succinic acid tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.
  • a medicament containing the compound or a salt thereof obtained by the screening method can be produced in the same manner as the above-mentioned medicament containing a compound that changes the binding property between 144273 and a ligand.
  • the preparations obtained in this way are safe and low toxic and can be used, for example, in humans or mammals (e.g., rats, mice, guinea pigs, egrets, sheep, pigs, pigs, dogs, cats, dogs). , Monkeys, etc.).
  • the dose of the compound or a salt thereof varies depending on the target disease, the administration subject, the administration route, and the like.
  • a diabetic patient body weight of 60 (as kg)
  • about 0.1 to 100 mg preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg per day.
  • the single dose varies depending on the administration subject, target organ, symptoms, administration method, etc.
  • it is usually used, for example, for a diabetic patient (weight of 60 kg).
  • it is usually used, for example, for a diabetic patient (weight of 60 kg).
  • the dose can be administered in terms of the body weight per 60 kg.
  • the present invention provides a compound that promotes or inhibits the activity of a promoter for DNA of the present invention, which comprises administering a test compound to a non-human mammal deficient in expressing the DNA of the present invention and detecting the expression of a reporter gene. Or provide a method of screening for its salts.
  • the non-human mammal deficient in expressing DNA of the present invention may be a non-human mammal deficient in expressing DNA of the present invention, wherein the DNA of the present invention is inactivated by introducing a reporter gene.
  • a gene capable of expressing the reporter gene under the control of a promoter for the DNA of the present invention is used.
  • test compound examples include the same compounds as described above.
  • the reporter gene the same one as described above is used, and a j3-galactosidase gene (1 acZ), a soluble alkaline phosphatase gene or a luciferase gene is preferable.
  • a tissue that expresses 144273 originally ⁇ -galactosidase is expressed instead of 4 273. Therefore, for example, by staining with a reagent serving as a substrate for -galactosidase, such as 5-promo 4-chloro-3-indolinole- ⁇ -galactopyranoside (X-ga 1), it is easy to carry out The expression state of the animal in 3 can be observed.
  • a reagent serving as a substrate for -galactosidase such as 5-promo 4-chloro-3-indolinole- ⁇ -galactopyranoside (X-ga 1)
  • a mouse with a lack of 144273 or a tissue section thereof was After fixing with dartartaldehyde, washing with phosphate buffered saline (PBS), and reacting with a staining solution containing X-ga 1 at room temperature or around 37 ° C for about 30 minutes to 1 hour Thereafter, by washing the tissue sample with an ImM EDTA / PBS solution, the galactosidase reaction is stopped, and the coloration may be observed. Further, mRNA encoding 1 ac ⁇ may be detected according to a conventional method.
  • PBS phosphate buffered saline
  • the compound or a salt thereof obtained by using the above-mentioned screening method is a compound or a salt thereof selected from the above-mentioned test compounds, and a compound or a salt thereof which promotes or inhibits the promoter activity for DNA of the present invention.
  • a salt with a physiologically acceptable acid eg, an inorganic acid, etc.
  • a base eg, an organic acid, etc.
  • Acceptable acid addition salts are preferred.
  • Such salts include, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, Salts with maleic acid, succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc. are used.
  • the compound or its salt of the present invention which promotes promoter activity against DNA is useful as an agent for regulating central or peripheral nerve function.
  • the compound or a salt thereof that promotes or inhibits the promoter activity of the DNA of the present invention can regulate the expression of 144273 and regulate the function of 144273. It is useful as a glycerol production regulator, a blood Darceol regulator, an early fat angle regulator, an insulin resistance regulator, a stress regulator, an adrenal corticotropic hormone (ACTH) secretion regulator, and the like.
  • the compound or a salt thereof that promotes the promoter activity of the DNA of the present invention can promote the expression of 144273 and promote the function of 144273, for example, glycemic It is useful as a drug production inhibitor, a blood darcerol lowering agent, a lipolysis inhibitor, an insulin resistance inhibitor, a stress regulator, an adrenal cortex-stimulating hormone (ACTH) secretion inhibitor, and the like.
  • glycemic It is useful as a drug production inhibitor, a blood darcerol lowering agent, a lipolysis inhibitor, an insulin resistance inhibitor, a stress regulator, an adrenal cortex-stimulating hormone (ACTH) secretion inhibitor, and the like.
  • the compound of the present invention or a salt thereof that promotes promoter activity on DNA includes, for example, diseases associated with dysfunction of 144273, for example, diabetes, resistance to diabetes, and the like.
  • the compound of the present invention which promotes the activity of a promoter against DIII or a salt thereof includes, for example, arteriosclerosis, arteriosclerotic disease and sequelae thereof (for example, atherosclerosis, peripheral arterial occlusion, Acute myocardial infarction, acute coronary syndrome such as unstable angina, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), myocardial infarction, ischemic heart disease such as angina, artery including vascular calcification Sclerosis, intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebral vascular dementia, gangrene, glomerulosclerosis, nephropathy, Tangier disease, etc.), atherosclerosis Prevention of diseases such as vascular lesions and their sequelae (eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia, etc.), dyslipidemia and their sequelae. Can be used as a therapeutic agent.
  • the compound of the present invention or a salt thereof that promotes the promoter activity for DNA may be used as an inhibitor of the secretion of adrenocorticotropic hormone (ACTH), for example, A CTH-producing tumor, Cushing's disease, infectious disease, secondary adrenal dysfunction, Peptic ulcer, diabetes, mental disorder, cataract, glaucoma, tuberculosis, hypertension, Cushing's disease Hou (e.g., central obesity, edema, hypertension, menstrual abnormalities, extensible skin streaks, hirsutism, diabetes, full moon face, osteoporosis, bleeding predisposition, mental disorders, muscle atrophy, muscle weakness, hypokalemia Disease, hypercholesterolemia, impaired glucose tolerance, leukocytosis) and atrophy of the adrenal cortex.
  • ACTH adrenocorticotropic hormone
  • the compound of the present invention or a salt thereof that inhibits the promoter activity for DNA can inhibit the expression of 144273 and inhibit the function of 144273, for example, It is useful as a drug production promoter, a blood Darce ole ole stimulator, a lipolysis promoter, an insulin resistance promoter, a stress regulator, an adrenal cortex stimulating hormone (ACTH) secretion promoter, and the like.
  • a drug production promoter a blood Darce ole ole stimulator, a lipolysis promoter, an insulin resistance promoter, a stress regulator, an adrenal cortex stimulating hormone (ACTH) secretion promoter, and the like.
  • ACTH adrenal cortex stimulating hormone
  • the compound of the present invention or a salt thereof that inhibits promoter activity on DNA includes, for example, diseases associated with overexpression of 144273, such as diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, and diabetic neuropathy.
  • diseases associated with overexpression of 144273 such as diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, and diabetic neuropathy.
  • the compound of the present invention which inhibits the activity of a promoter for DIII or a salt thereof may be used, for example, in arteriosclerosis, atherosclerotic disease and their sequelae [eg, atherosclerosis, peripheral arterial occlusion] Disease, acute myocardial infarction, acute coronary syndrome such as unstable angina, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), myocardial infarction, Ischemic heart disease such as angina, arteriosclerosis including vascular calcification, intermittent claudication, stroke (cerebral infarction, cerebral embolism, cerebral hemorrhage, etc.), rattan infarction, cerebrovascular dementia, gangrene, glomerulus Atherosclerotic vascular lesions and their sequelae (eg, coronary artery disease (CHD), cerebral ischemia
  • the compound of the present invention or a salt thereof that inhibits promoter activity on DNA may be used as a corticotropin-stimulating hormone (ACTH) secretagogue, for example, for connective tissue diseases (eg, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, Myositis, rheumatic fever, scleroderma), renal disease (eg, nephrotic), respiratory disease (eg, bronchial asthma, pulmonary tuberculous pleurisy, sarcoidosis, diffuse interstitial pneumonia), gastrointestinal disease ( For example, ulcerative colitis, cholestatic acute hepatitis, fulminant hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis), neuromuscular diseases (eg, .encephalomyelitis, peripheral neuritis, multiple sclerosis, severe sclerosis) Asthenia, facial nerve palsy, blood disorders (eg, hemolytic anemia, granulocytop
  • a compound or a salt thereof derived from the compound or a salt thereof obtained by the above screening can be used in the same manner.
  • the medicament containing the compound or its salt obtained by the screening method can be used in the same manner as the above-mentioned medicament containing the compound that changes the binding property of 144273 or its salt with the ligand or its salt. Can be manufactured.
  • the preparations obtained in this way are safe and low toxic and can be used, for example, in humans or mammals (e.g., rats, mice, guinea pigs, egrets, sheep, pigs, pigs, dogs, cats, dogs). , Monkeys, etc.).
  • the dose of the compound or a salt thereof varies depending on the target disease, the administration subject, the administration route, and the like.
  • a compound or a salt thereof is orally administered, generally, for example, in a diabetic patient (as a body weight of 60 kg), about 0.1 to 10 Omg, preferably about 1.0 to 50 mg, More preferably, it is about 1.0 to 2 Omg.
  • the single dose varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, etc.
  • an injection it is usually used, for example, for a diabetic patient (body weight 6 O kg ), About 0.01 to 30 mg / day, preferably about 0.1 to 20 mg / day, more preferably about 0.1 to 10 mg / day, is administered by intravenous injection. It is convenient. In the case of other animals, the dose can be administered in terms of the body weight of 60 kg.
  • the non-human mammal deficient in expression of the DNA of the present invention is extremely useful for screening a compound or a salt thereof that promotes or inhibits the activity of a promoter for the DNA of the present invention. It can greatly contribute to investigating the causes of various diseases caused by expression deficiency or to develop therapeutic drugs.
  • DNA containing the promoter region of 144273 genes encoding various proteins are ligated downstream thereof and injected into egg cells of an animal to produce a so-called transgenic animal (transgenic animal). ) makes it possible to specifically synthesize the 144273 and examine its effects on living organisms.
  • bases and amino acids are indicated by abbreviations in the drawings in the present specification, they are based on common abbreviations in the field according to IUPAC- IUB Commission on Biochemical Nomenclature, and examples thereof are as follows. .
  • the L-form is indicated unless otherwise specified.
  • DNA Deoxyribonucleic acid
  • RNA Liponucleic acid
  • RNA messenger ribonucleic acid
  • d ATP Deoxyadenosine triphosphate
  • dTTP Deoxythymidine triphosphate
  • dGTP Deoxyguanosine triphosphate
  • CTP Deoxycytidine triphosphate
  • a 1 a Alanine
  • the amino acid sequence of human-derived 14273 is shown.
  • 1 shows the nucleotide sequence of cDNA encoding human-derived 14273.
  • Fig. 3 shows the amino acid sequence of mouse-derived 14273.
  • the nucleotide sequence of cDNA encoding mouse-derived 14273 is shown.
  • SEQ ID NO: 7 shows the nucleotide sequence of a primer used in the PCR reaction in Example 2.
  • SEQ ID NO: 8 shows the nucleotide sequence of a probe used in the PCR reaction in Example 2.
  • Fig. 3 shows the amino acid sequence of rat-derived 14273.
  • 1 shows the nucleotide sequence of cDNA encoding rat-derived 14273.
  • SEQ ID NO: 1 1 shows the nucleotide sequence of a primer used in the PCR reaction in Example 3.
  • SEQ ID NO: 1 2 shows the nucleotide sequence of a primer used in the PCR reaction in Example 3.
  • SEQ ID NO: 14 7 shows the nucleotide sequence of Primer 2 used in the PCR reaction in Example 4.
  • SEQ ID NO: 15 shows the nucleotide sequence of Primer 2 used in the PCR reaction in Example 4.
  • Example 14 shows the nucleotide sequence of a primer used in the PCR reaction in Example 8.
  • Example 14 shows the nucleotide sequence of a primer used in the PCR reaction in Example 8.
  • Example 14 shows the nucleotide sequence of a probe used in the PCR reaction in Example 8.
  • the transformant E scherichiacoli JM109 / pTAr atl 4273 obtained in Example 4 described below was obtained from April 1, 2003 at 1-1, Tsukuba East Higashi, Ibaraki Pref. Deposited with the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Organism Depositary under the deposit number F ERM BP-8361.
  • the DNA fragments coding for human and mouse 14273 are respectively WO 20
  • the DNA fragments obtained were cloned from the MTC panel (Clontech) using PCR according to the sequences described in WO 02/00678 and WO200 / 00/00611, and the resulting DNA fragment was pAKKO-l1
  • the expression plasmids were constructed by introducing the vectors into the S a1I and SpeI sites of one vector, respectively. Subsequently, these expression plasmids are transfected into CHO (dhfr-1) cells by a method known per se, and the cells into which the expression plasmids have been introduced are selected using a thymidine-free medium to stably express each receptor. Current cells were obtained.
  • the CHO-K1 cell line was cultured using Ham F-12 medium (Invitrogen) containing 10% fetal calf serum (Invitrogen) unless otherwise specified. 1 day before the transflector Ekushi Yon 0 cm 2 per 4. seeded 5 xl 0 5 cells, 3 with 5% CO 2 and adjusted to a concentration a CO 2 incubator 7. The cells were cultured in C for 15 hours or more. Transfection was performed using Lipofectamine reagent (Invitrogen) according to the method attached to the reagent. When using a 6-we11 plate for the incubator, proceed as follows. First, two 1.5-ml tubes were prepared, and 100 ⁇ l of Opti-MEM-I medium (Invitrogen) was dispensed into each tube.
  • Opti-MEM-I medium Invitrogen
  • an assay buffer was prepared for adding the fluorescent dye F1uo3-AM (DO JIN) to the cells, or for washing the cells immediately before performing FLIPR assays.
  • a solution of HB SS (Invitrogen) 100 ml with 1 M HE PES (pH 7.4) (DO JIN) 20 ml (hereinafter referred to as HB SS / HE PES solution) was added with probenecid (S igma) 710 mg was dissolved in INNaOH 5 ml, HBSS / HE PES solution 5 ml was added, and a mixed solution 10 ml was added thereto, and this solution was used as an atsey buffer.
  • F1uo3-AM was dissolved in 21 ⁇ l of DMS O (DO JIN), and an equal volume of 20% pluronic acid (Molecular Probes) was added.
  • Fluorescent dye solution was prepared by adding 10.6 ml of Atsushi buffer to which 1 ⁇ l of fetal calf serum was added. The medium was removed the transflector Ekushi subjected to Yong processing CHO- K 1 cells, 1 0 0 1 by dispensing after per well fluorescent dye solution immediately, one hour culture in a CO 2 incubator, the cells Fluorescent dye was incorporated. The cells after the culturing were washed with the above-mentioned Atsushi buffer, and then set in FLIPR.
  • a test sample to be added to the CHO-K1 cells expressing the receptor was prepared using an assay buffer, and set at the same time in FLIPR. After the above pretreatment, the change in intracellular calcium concentration after addition of various test samples was measured by FLIPR.
  • palmitoleic acid (Palmitoleic acid) (Fig. 1), linoleic acid (L inoleic acid) (Fig. 2), ⁇ / -linolenic acid — L i ⁇ ⁇ 1 e ⁇ ic acid; (Fig. 3), arachidonic acid ( CHO-K1 cells expressing human and mouse 144273 when Arachidonicacid) (Fig.
  • -AGTTCATTTCCAGTACCCTCCATCAGTGGC-3 (SEQ ID NO: 7)] is a software product dedicated to AB I PR I SM Sequence D etector based on the nucleotide sequence of human type 142773 (SEQ ID NO: 2). Designed using Express (Applied Biosystems).
  • the cDNA used as type ⁇ ⁇ was synthesized by reverse transcription using 1 ⁇ g of tota1 RNA (Clontech) derived from various human tissues using a random primer. The reverse transcription reaction was performed using Super ScRiptl (GIBCO BRL) as a reverse transcriptase according to the attached protocol.
  • the reaction solution of AB I PR I SM 7700 Sequence Dector was TaqMan Universal PGR Master Mix (Applied Biosystems) 12.5 ⁇ 1, each primer 0.9 ⁇ , and the probe 0.25 ⁇ and the cDNA solution were mixed and adjusted to 25 ⁇ 1 with distilled water.
  • the reaction at AB I PR I SM 7700 Seq u en c e De t e c t or r is 95 minutes after 2 minutes at 50 ° C and 10 minutes at 95 ° C.
  • the cycle was repeated 40 times at C ⁇ 15 seconds, 60 ° C ⁇ 1 minute.
  • Figure 6 shows the distribution of mRNA expression in various human tissues. High expression was found in the pituitary, adipose tissue, and large intestine.
  • -CAACTCCGCCCTAAACCCCATTCTGT-3 '(SEQ ID NO: 12)] is based on the nucleotide sequence of rat type 144273 (SEQ ID NO: 9), and is based on the AB I PR I SM Sequence D etector for spring It was designed using rimer Ex press (Abide Biosystems).
  • ⁇ ⁇ type cDNA is Various organs were excised from rats subjected to normal and water immersion restraint stress, and tota 1 RNA was isolated using Isogen (Futan Gene) and poly (A) + RNA was isolated using mRNA purification kit (Pharmacia). Prepared according to the manual.
  • RNA was used at 42 ° C according to the manual using RNA PCR Kit (Takara).
  • RNA PCR Kit Takara
  • AB I PR I SM 7700 S equenc e Deector's reaction mixture was 12.5 ⁇ l of TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems) and 0.9 ⁇ ⁇ of each primer.
  • the reaction on the AB I PR I SM 7700 Seqnc eDector was 95 minutes after 2 minutes at 50 ° C and 10 minutes at 95 ° C. .
  • Figure 7 shows the expression distribution of mRNA in various tissues. High expression was detected in the pituitary, lung, adipose tissue and intestinal tract. In addition, increased expression of 14273 mRNA was detected in the pituitary gland of rats subjected to water immersion restraint stress, and it was revealed that 14273 is involved in the regulation of stress (Fig. 8).
  • PCR was performed using primer 1 (SEQ ID NO: 13) and primer 2 (SEQ ID NO: 14).
  • primer 1 SEQ ID NO: 13
  • primer 2 SEQ ID NO: 14
  • Klentaq DNA Polymerase (Clontech)
  • 98 95 ° C for 2 minutes
  • 72 ° C ⁇ 1 minute an extension reaction was performed at 72 ° C * 7 minutes.
  • the amplified product was cloned into plasmid vector pCR2.1 TOPO (Inv itrogen) according to the prescription of TOP OTAC loning Kit (Inv itrogen). This was introduced into E.
  • coli JM109 (Takara Shuzo), the clones with plasmids were selected on LB agar medium containing a mp ici 1 in. Individual As a result of analyzing the nucleotide sequence of the clone, a cDNA sequence (SEQ ID NO: 9) encoding a novel G protein-coupled receptor protein was obtained. A novel receptor protein containing the amino acid sequence (SEQ ID NO: 8) derived from this cDNA was named rat 144273. The transformant was named Escherichiacoli JM109 / p TA ratl 427.
  • Human 1 4 2 7 3 expressing CHO cells were 2 0 hours at 1 X 1 0 5 / we 1 1 at a concentration of 9 6- we 1 1 P 1 ate .
  • Cells were prepared with DMEM (Invitrogen) containing say ⁇ ⁇ ⁇ A Assay Buffer (0.1 mM I BMX (Wako Pure Chemical Industries) and 0.1 mM Ro—2 0-1 724 (Biomol)).
  • Human 144,273-expressing CHO (CHO-h144,733) or CHO-mock cells prepared by a method known per se using the human 144,273 expression vector prepared in Reference Example 1 were used.
  • 3 X 10 5 / we 11 Spread in a 6-well plate at a concentration of 1 and in a serum-low concentration medium (MEM ⁇ medium without nucleic acid supplemented with 0.5% dialyzed fetal serum). Culture overnight and replace with a serum-free medium (MEM ⁇ medium without nucleic acid). And cultured overnight. After replacing the medium with a new serum-free medium and culturing for 4 hours, 30 1 ⁇ of various fatty acids were added.
  • Example 7 Changes in expression of 1427 3 receptor accompanying induction of adipocyte differentiation of 3T 3-L1 cells
  • Murine fibroblast-like cell line * 3 The change in the expression of the 14273 receptor associated with the induction of differentiation of T3-L1 cells into adipocytes was analyzed in the following manner.
  • the culture medium was 4.5% / 1 gnocose, 1.5 g / l Na 2 HCO 3 containing 10% fetus in Du1 becco's Modified Eagle Medium (DMEM, Invitrogen). Serum (Thermo Trace), 100 OU / ml penicillin, and 100 ⁇ g / ml streptomycin were used. 2.5 ⁇ Dexamethazone, 0.5 mM 3—isobuty 1— 1—mety 1 anthine, 10 g / m 1 insulin was added to 3 T 3—L 1 cells cultured to confluence in a 75 cm 2 flask.
  • c DNA was prepared by reacting 1 ⁇ g of RNA with random primers and Super Script II reverse transcriptase (GIB CO BRL) as a reverse transcriptase at 42 ° C according to the attached manual. After completion, ethanol precipitation was carried out to give 100 ⁇ l.
  • RT PCR reaction solution: TaqMan Universal PCR Master Mix (PEB iosystem) 12.5 ⁇ l, 100 ⁇ each of the primer solution to 0.05 ⁇ l, 5 0.5 ⁇ l of TaqManprobe in ⁇ , and 0 in the cDN ⁇ solution prepared above.
  • PEB iosystem TaqMan Universal PCR Master Mix
  • the total reaction volume was adjusted to 25 ⁇ l with distilled water at 5 / i.
  • a cycle of 50 ° C. for 2 minutes, 95 ° C. for 10 minutes, 95 ° C. for 15 seconds, and 60 ° C. for 1 minute was repeated 40 times.
  • the mRNA expression level of the 14273 receptor in the obtained 3T3-L1 cells was calculated as the copy number per 5 ng of tota1 RNA (FIG. 11).
  • the above-mentioned medium containing 1-methylxanthine s 10 ⁇ g / m 1 insulin was stimulated for differentiation induction for 2 days, and then cultured for 8 days in the above medium containing 10 ⁇ g / m 2 insulin.
  • Total RNA was extracted from cells before differentiation induction and cells cultured for 8 days after differentiation induction using ISOGEN (Futtsubon Gene).
  • GT— (Tamra) 1-3 (SEQ ID NO: 18) was used.
  • RT—PCR reaction was performed using TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystem) 12.5 ⁇ l, and 100 ⁇ l of each primer solution in 0.25 ⁇ l and 5 ⁇ l. 1.25 ⁇ l of the TaqMan probe and 1 ⁇ l of the cDNA solution prepared above were added, and the total reaction volume was adjusted to 25 ⁇ l with distilled water. PCR reaction at 50 ° C for 2 minutes, 95. C 'After 10 minutes, 9
  • the cycle of 5 ° C-15 seconds, 60 ° C ⁇ 1 minute was repeated 40 times.
  • the mRNA expression level of the 1427 3 receptor in the obtained primary cultured fat cells was Tota1 RNA.
  • both the primary cultured white preadipocytes and the primary cultured brown preadipocytes showed only a small expression level of the 14273 receptor before inducing differentiation into adipocytes. After induction, a significant increase in the expression level was observed. From this,
  • the 14273 receptor was thought to play an important role in adipocytes.
  • Example 9 Fatty acid-induced adrenocorticotropic hormone from AtT-20 cells (AC TH) Secretory inhibitory activity
  • the adherent substrain from the AtT / 20 cell line was cloned by the contact selection method using a poly-D-lysine-coated flask.
  • the culture medium was Du1 becco's Modified Eagle Medium (DMEM, Invitrogen) containing 4.5 g / l glucose, 10% fetal serum (ThermoTrace), 100 UZm 1%. Nisinine and 100 g / m1 streptomycin were used.
  • the effect on lipolysis was examined using a mouse fibroblast cell line 3T3-L1 cell capable of separating adipocytes.
  • the culture medium contained 4.5 gZl of glucose in DMEM (Dulbecco's ModifiedEagleMedium, Invitrogen) and 10% ⁇ fetal serum (FBS, Invitr).
  • Example 1 Mouse Mice obtained by transfection of s i RNA specific to the sequence of 1 4 2 7 3
  • mouse fusion protein expression plasmid (0.2 ⁇ g / we11) prepared by a method known per se and mouse 1 4 2 7 3 ml 4 i5 61 (Dharmacon) (20 nM), which is a specific siRNA, was added to CHO cells (4 x 10 Vwe11: 96-well plate) to Lippofectamine 2 Use of 0 0 0 reagent (Invitrogen) At the same time, and the cells were cultured for one day. The expression level of mouse 14273-GFP was detected in Enzymimnoassay as shown below.
  • ml4i561 is an siRNA that specifically suppresses mouse 14273.
  • 14273 Since the function of 14273 was found to be a receptor for fatty acids or their salts, compounds that alter the binding between fatty acids or their salts and 14273 or its partial peptides or their salts can be efficiently screened.
  • the compounds thus found are useful as preventive and therapeutic drugs for diseases such as diabetes, hyperlipidemia, obesity, and pituitary dysfunction, and as stress regulators.

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Abstract

配列番号：１、配列番号：３または配列番号：８で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩および脂肪酸を用いることにより、該レセプター蛋白質またはその塩と脂肪酸との結合性を変化させる化合物またはその塩を効率良くスクリーニングすることができる。

Description

明 細 書 新規スクリーニング方法 技術分野
本発明は、 ヒ ト、 マウスおよびラット由来の G蛋白質共役型レセプター蛋 白質 （1 4 2 7 3 ) の用途、 およびラット由来の新規な G蛋白質共役型レセ プター蛋白質 （1 4 2 7 3 ) などに関する。 背景技術
多くのホルモンや神経伝達物質などの生理活性物質は、 細胞膜に存在する特 異的なレセプター蛋白質を通じて生体の機能を調節している。 これらのレセプ ター蛋白質のうち多くは共役している guanine nucleotide-binding protein ( 以下、 G蛋白質と略称する場合がある） の活 1"生化を通じて細胞内のシグナル伝 達を行ない、 また、 7個の膜貫通領域を有する共通した構造をもっていること 力、ら、 G蛋白質共役型レセプター蛋白質 （G P C R) あるいは 7回膜貫通型レ セプター蛋白質 （7 TMR) と総称される。
G蛋白質共役型レセプター蛋白質は生体の細胞や臓器の各機能細胞表面に存 在し、 それら細胞や臓器の機能を調節する分子、 例えば、 ホルモン、 神経伝達 物質および生理活性物質等の標的として生理的に重要な役割を担っている。 レ セプターは生理活性物質との結合を介してシグナルを細胞内に伝達し、 このシ グナルにより細胞の賦活ゃ抑制といった種々の反応が惹起される。
各種生体の細胞や臓器の内の複雑な機能を調節する物質と、 その特異的レセ プター蛋白質、 特には G蛋白質共役型レセプター蛋白質との関係を明らかにす ることは、 各種生体の細胞や臓器の機能を解明し、 それら機能と密接に関連し た医薬品開発に非常に重要な手段を提供することとなる。
例えば、 生体の種々の器官では、 多くのホルモン、 ホルモン様物質、 神経伝 達物質あるいは生理活性物質による調節のもとで生理的な機能の調節が行なわ れている。 特に、 生理活性物質は生体内の様々な部位に存在し、 それぞれに対 応するレセプター蛋白質を通してその生理機能の調節を行っている。 生体内に は未知のホルモンや神経伝達物質その他の生理活性物質も多く、 それらのレセ プター蛋白質の構造に関しても、 これまで報告されていないものが多い。 さら に、 既知のレセプタ一蛋白質においてもサブタイプが存在するかどうかについ ても分かっていないものが多い。
生体における複雑な機能を調節する物質と、 その特異的レセプター蛋白質と の関係を明らかにすることは、 医薬品開発に非常に重要な手段である。 また、 レセプター蛋白質に対するァゴニスト、 アンタゴニストを効率よくスクリー二 ングし、 医薬品を開発するためには、 生体内で発現しているレセプター蛋白質 の遺伝子の機能を解明し、 それらを適当な発現系で発現させることが必要であ つた。
近年、 生体内で発現している遺伝子を解析する手段として、 cDNAの配列 をランダムに解析する研究が活発に行なわれており、 このようにして得られた c DN Aの断片配列が Expressed Sequence Tag (EST) としてデータベース に登録され、公開されている。 また最近、ゲノム DN Aの網羅的配列解析から、 多くの新規遺伝子の存在が明らかになってきている。 しかし、 これら多くの E S Tゃゲノム配列から予想された新規遺伝子は配列情報のみであり、 その機能 を推定することは困難である。
ヒト及ぴマウス由来の 14273のアミノ酸配列おょぴそれをコードする D N Aが報告されている （公開配列データベース ： ACCES S I ON XP— 06 1 208、 公開配列データベース ： ACCE S S I ON XP— 1292 52および WO 2000/0061 1号） 。 また、 14273のノックアウト マウスの体重が増加していることが報告されている (WO 2002/6786 8号） 。
本発明は、 14273に対するリガンドを見出し、 それを用いた 14273 ァゴニストまたはアンタゴニストのスクリーユング方法等を提供することを目 的とする。 発明の開示 本発明者らは、 鋭意研究を重ねた結果、 ヒトおよびマウス 1 4 2 7 3の内因 性リガンドが脂肪酸であることを見出した。 さらに、 1 4 2 7 3が下垂体、 脂 肪組織、 腸管組織、 大腸癌細胞などで高発現していること、 脂肪酸が 1 4 2 7 3に作用することにより細胞内 C a 2 +濃度上昇、 細胞内 c AM P生成抑制、 M A Pキナーゼの活性化、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制、 脂肪細 胞からのグリセロール生成抑制、 脂肪分解抑制などが起こることを見出した。 本発明者らは、 これらの知見に基づいて、 さらに研究を重ねた結果、 本発明を 完成するに至った。
すなわち、 本発明は、
[ 1 ] ( 1 ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共 役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩および （2 ) 脂肪酸ま たはその塩を用いることを特徴とする該レセプター蛋白質またはその塩と脂肪 酸またはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング 方法、
[ 2 ] ( 1 ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共 役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩おょぴ （2 ) 脂肪酸ま たはその塩を含有することを特徴とする該レセプター蛋白質またはその塩と脂 肪酸またはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニン グ用キット、
[ 3 ] 上記 [ 1 ] 記載のスクリーニング方法または上記 [ 2 ] 記載のスクリー ユング用キットを用いて得られる、 脂肪酸またはその塩と配列番号： 1、 配列 番号： 3または配列番号： 8で表わされるァミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその 塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、
[ 4 ] ( 1 ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共 役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩おょぴ （2 ) 該レセプ ター蛋白質またはその塩と脂肪酸またはその塩との結合性を変化させる化合物 またはその塩を用いることを特徴とする該レセプター蛋白質またはその塩に対 するァゴニス トまたはアンタゴニストのスクリーユング方法、
[ 5 ] ( 1 ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共 役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩および （2 ) 該レセプ ター蛋白質またはその塩と脂肪酸またはその塩との結合性を変化させる化合物 またはその塩を含有することを特徴とする該レセプター蛋白質またはその塩に 対するァゴニス トまたはアンタゴニス トのスクリーニング用キット、
[ 6 ] 上記 [ 4 ] 記載のスクリーニング方法または上記 [ 5 ] 記載のスクリー ニング用キットを用いて得られる、 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するァゴニスト またはアンタゴニスト、
[ 7 ] 脂肪酸またはその塩と配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8 で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有 する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩との結合性を変化させる化 合物またはその塩を含有してなる医薬、
[ 8 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプタ一蛋白質またはその塩に対するァゴニストを含有してなる糖尿病、 耐糖 能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網 膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレル ギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症または心筋梗塞） の予防 ·治療剤、
[ 9 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその塩に対するァゴニストを含有してなるス トレス調節 剤、 脂肪細胞からのグリセロール生成抑制剤、 血中グルセロール低下剤、 脂肪 分解抑制剤またはィンスリン抵抗抑制剤、
[ 1 0 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型 レセプター蛋白質またはその塩に対するァゴニストを含有してなる副腎皮質刺 激ホルモン (A C T H) 分泌抑制剤、
[ 1 1 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型 レセプター蛋白質またはその塩に対するァゴニストを含有してなる A C T H産 生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿 病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群また は副腎皮質の萎縮の予防 ·治療剤、
[ 1 2 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型 レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿 病網膜症、 髙脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満 症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァ レルギ一、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒 食症、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 と りわけ内臓脂肪蓄積型肥満症） の予防 ·治療剤、
[ 1 3 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型 レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴニストを含有してなるストレ ス調節剤、脂肪細胞からのグリセ口ール生成促進剤、血中ダルセ口ール上昇剤、 脂肪分解促進剤またはィンスリン抵抗促進剤、 [ 1 4 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型 レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる副腎皮 質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤、
[ 1 5 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型 レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴ-ストを含有してなる慢性関 節リゥマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎 疾患、気管支喘息、肺結核性胸膜炎、サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄 炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副 腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 尊麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまた はアナフィラキシーショックの予防 ·治療剤、
[ 1 6 ] 試験化合物を配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表さ れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋 白質共役型レセプター蛋白質を含有する細胞 （例、 C H O細胞、 脂肪細胞、 A t T - 2 0細胞、 3 T 3— L 1細胞） に接触させた場合における細胞内 C a 2 + 濃度上昇活性、 細胞内 c AMP生成抑制活性、 MA Pキナーゼのリン酸化もし くは活性化、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制活性、 グリセロール 生成抑制活性、 または脂肪分解抑制活性を測定することを特徴とする該レセプ ター蛋白質またはその塩に対するァゴニストのスクリーニング方法、
[ 1 7 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩を含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿 病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満 症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァ レルギ一、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒 食症、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症または心筋梗塞） の予防 ·治療剤、
[ 1 8 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩を含有してなるス トレ ス調節剤、脂肪細胞からめグリセ口ール生成抑制剤、血中ダルセ口ール低下剤、 脂肪分解抑制剤またはィンスリン抵抗抑制剤、
[ 1 9 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を含有してなる副腎皮 質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤、
[ 2 0 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を含有してなる A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 または副腎皮質の萎縮の予防 ·治療剤、
[ 2 1 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチドを含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァシ ドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、 高脂血症、動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学 習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、 S旨肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪 肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害ま たは循環器疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症または心 筋梗塞） の予防 ·治療剤、
[ 2 2 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチドを含有してなるストレス調節剤、 脂肪細胞からのグリセ ロール生成抑制剤、 血中ダルセロール低下剤、 脂肪分解抑制剤またはインスリ ン抵抗抑制剤、
[ 2 3 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチドを含有してなる副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌 抑制剤、
[ 2 4 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチドを含有してなる A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染 症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内 障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群または副腎皮質の萎縮の予防 '治 療剤、
[ 2 5 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするボリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチドを含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァシ ドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学 習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪 肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害ま たは循環器疾患の診断剤、 [ 2 6 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチドを含有してなるストレスの診断剤、
[ 2 7 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチドを含有してなる A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染 症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内 障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群、 副腎皮質の萎縮、 慢性関節リウ マチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍 性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒 球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮 質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単 独欠損症、 蓴麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまたはァ ナフイラキシーショックの診断剤、
[ 2 8 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質もしくはその部分ぺプチドまたはその塩に対する抗体を含有し てなる糖尿病、 耐糖能障害、 ゲトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖 尿病腎症、 糖尿病網膜症、 髙脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障 害、 肥満、肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 朦臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、脂肪萎縮、癌性悪液質、高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂 食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 とりわけ内臓脂肪蓄積型肥満症） の予防 ·治療剤、
[ 2 9 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有し てなるストレス調節剤、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成促進剤、 血中ダルセ ロール上昇剤、 脂肪分解促進剤またはィンスリン抵抗促進剤、
[ 3 0 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体を含有し てなる副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤、
[ 3 1 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有し てなる慢性関節リゥマチ、全身性エリテマトーデス、多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性 間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝 硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、顆粒球減少症、紫斑病、再生不良性貧血、 白血病、悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出 症、 A C T H単独欠損症、 奪麻疼、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤ァレ ルギーまたはアナフィラキシーショックの予防 ·治療剤、 '
[ 3 2 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体を含有し てなる糖尿病、 耐糠能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖 尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障 害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 腾臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、脂肪萎縮、癌性悪液質、 高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂 食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患の診断剤、
[ 3 3 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体を含有し てなるス トレスの診断剤、
[ 3 4 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体を含有し てなる A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 タツ シング症候群、副腎皮質の萎縮、慢性関節リゥマチ、全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サ ルコィドーシス、びまん性間質性肺炎、潰瘍性大腸炎、胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋 無力症、顔面神経麻痺、溶血性貧血、顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺 疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 荨麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯 状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまたはアナフィラキシーショックの診断剤、
[ 3 5 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリ ヌクレオチドを含有してなる糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、ァシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液 質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中†生脂肪症、 脂肪肝、 熱産 生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害または循環 器疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 とりわけ内臓脂肪蓄積型肥満症） の予防 -治 療剤、
[ 3 6 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリ ヌクレオチドを含有してなるストレス調節剤、 脂肪細胞からのグリセロール生 成促進剤、 血中ダルセロール上昇剤、 脂肪分解促進剤またはインスリン抵抗促 進剤、
[ 3 7 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分ぺプチドをコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリ ヌクレオチドを含有してなる副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤、
[ 3 8 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリ ヌクレオチドを含有してなる慢性関節リゥマチ、 全身性ェリテマトーデス、 多 発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サル コィドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、'肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋 無力症、顔面神経麻痺、溶血性貧血、顆粒球減少症、紫斑病、再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺 疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 蓴麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯 状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまたはアナフィラキシーショックの予防'治療 剤、
[ 3 9 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはそ の塩を含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病 神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗 塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 瞎臓疲 弊、 低血糖症、 インスリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高 インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能 障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患 (特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症または心筋梗塞） の予防 •治療剤、
[ 4 0 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはそ の塩を含有してなるストレス調節剤、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成抑制剤、 血中ダルセロール低下剤、 脂肪分解抑制剤またはィンスリン抵抗抑制剤、
[ 4 1 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはそ の塩を含有してなる副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤、
[ 4 2 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分べプチドの発現量を増加させる化合物またはそ の塩を含有してなる A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮 質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群または副腎皮質の萎縮の予防 ·治療剤、
[ 4 3 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分べプチドの発現量を減少させる化合物またはそ の塩を含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病 神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗 塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 勝臓疲 弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高 インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能 障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患 (特に、 拒食症、 肥満症、 とりわけ内臓脂肪蓄積型肥満症） の予防 ·治療剤、 [ 4 4 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分ぺプチドの発現量を減少させる化合物またはそ の塩を含有してなるストレス調節剤、 脂肪細胞からのグリセロール生成促進剤、 血中ダルセロール上昇剤、 脂肪分解促進剤またはィンスリン抵抗促進剤、
[ 4 5 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分べプチドの発現量を減少させる化合物またはそ の塩を含有してなる副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤、
[ 4 6 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはそ の塩を含有してなる慢性関節リゥマチ、全身性エリテマトーデス、多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシ ス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔 面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患によ る悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 蓴麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤ァレルギ一またはアナフイラキシーショックの予防 ·治療剤、
[ 4 7 ] 脂肪酸またはその塩を含有してなる配列番号： 1、 配列番号： 3また は配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ 酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質のシグナル伝達作用増強剤、
[ 4 8 ] 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能 障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 睦臓疲弊、 低血糖 症、 インスリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン 血症、 高血糖症、 高 FFA症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石 症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患 （特に、 糖 尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症または心筋梗塞） の予防 ·治療剤で ある上記 [47] 記載の剤、
[ 49 ] ストレス調節剤、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成抑制剤、 血中ダル セロール低下剤、 脂肪分解抑制剤またはインスリン抵抗抑制剤である上記 [4 7] 記載の剤、
[50] 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌抑制剤である上記 [47] 記 載の剤、
[51] AC TH産生腫瘍、 クッシング病、感染症、続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッ シング症候群または副腎皮質の萎縮の予防 ·治療剤である上記 [47] 記載の 剤、
[52] 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌抑制剤である上記 [47] 記 載の剤、
[53] 哺乳動物に対して、 （i) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 (ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分ぺプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 または (iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するァゴェストの 有効量を投与することを特徴とする糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァシド 一シス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学 習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 FFA症、 高中性脂肪症、 脂肪 肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害ま たは循環器疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症または心 筋梗塞） の予防 ·治療方法、
[ 5 4 ] 哺乳動物に対して、 （i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分べプチドまたはその塩、
(ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するァゴ-ストの 有効量を投与することを特徴とするストレス調節方法、 脂肪細胞からのグリセ ロール生成抑制方法、 血中グルセロール低下方法、 脂肪分解抑制方法またはィ ンスリン抵抗抑制方法、
[ 5 5 ] 哺乳動物に対して、 （i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 (ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プタ一蛋白質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプタ一蛋白質またはその塩に対するァゴニストの 有効量を投与することを特徴とする副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑 制方法、
[ 5 6 ] 哺乳動物に対して、 （i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分べプチドまたはその塩、 (ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するァゴニストの 有効量を投与することを特徴とする A C T H産生 JS瘍、クッシング病、感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群または副腎皮質の萎縮の予防 ·治療方 法、
[ 5 7 ] 哺乳動物に対して、 （i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に 対する抗体、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表され るァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白 質共役型レセプター蛋白質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有し てなるポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配 列番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴ ニストの有効量を投与することを特徴とする糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈 硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 脾臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪 萎縮、癌性悪液質、 高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障 害または循環器疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 とりわけ内臓脂肪蓄積型肥満症 ) の予防 ·治療方法、
[ 5 8 ] 哺乳動物に対して、 （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に 対する抗体、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表され るァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白 質共役型レセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有し てなるポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配 列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴ ニストの有効量を投与することを特徴とするストレス調節方法、 脂肪細胞から のグリセ口ール生成促進方法、 血中ダルセ口ール上昇方法、 脂肪分解促進方法 またはィンスリン抵抗促進方法、
[ 5 9 ] 哺乳動物に対して、 （i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に 対する抗体、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表され るァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白 質共役型レセプター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有し てなるポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配 列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴ ニストの有効量を投与することを特徴とする副腎皮質刺激ホルモン (A C T H ) 分泌促進方法、
[ 6 0 ] 哺乳動物に対して、 （i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分べプチドまたはその塩に 対する抗体、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表され るァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白 質共役型レセプター蛋白質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有し てなるポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配 列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴ ニストの有効量を投与することを特徴とする慢性関節リウマチ、 全身性エリテ マト一デス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核 性胸膜炎、 サルコイドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うつ 滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性 硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性 器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 蓴麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまたはアナフィラキシーショ ックの予防 ·治療方法、
[ 6 1 ] 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能 障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 瞎臓疲弊、 低血糖 症、 インスリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン 血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石 症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患 （特に、 糖 尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症または心筋梗塞） の予防 ·治療剤を 製造するための （i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表さ れるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋 白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 （i i) 配列番 号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もし くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質 またはその部分ぺプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレ ォチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表さ れるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋 白質共役型レセプター蛋白質に対するァゴニス トの使用、
[ 6 2 ] ストレス調節剤、 脂肪細胞からのグリセロール生成抑制剤、 血中ダル セロール低下剤、 脂肪分解抑制剤またはィンスリン抵抗抑制剤を製造するため の （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 （ii) 配列番号： 1、 配列 番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部 分ぺプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 また は （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質に対するァゴニストの使用、
[ 6 3 ] 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤を製造するための （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプタ 一蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分ぺプ チドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 または （iii ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプタ 一蛋白質に対するァゴニストの使用、
[ 6 4 ] A C T H産生腫瘍、 クッシング病、感染症、続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッ シング症候群または副腎皮質の萎縮の予防 ·治療剤を製造するための （ i ) 配 列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一 もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋 白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3ま たは配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分べプチド をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 または （iii) 配 列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一 もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋 白質に対するァゴニストの使用、
[ 6 5 ] 糖尿病、 耐糖能障害、 ケト一シス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能 障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖 症、 インスリンァレルギ一、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン 血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石 症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患 （特に、 拒 食症、 肥満症、 とりわけ内臓脂肪蓄積型肥満症） の予防 ·治療剤を製造するた めの （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型 レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （ii) 配列 番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一も しくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白 質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役 型レセプター蛋白質に対するアンタゴニストの使用、
[ 6 6 ] ストレス調節剤、 脂肪細胞からのグリセロール生成促進剤、 血中グル セロール上昇剤、 脂肪分解促進剤またはィンスリン抵抗促進剤を製造するため の （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （ii) 配列番 号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もし くは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質 またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレ ォチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役 型レセプター蛋白質に対するアンタゴニストの使用、
[ 6 7 ] 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤を製造するための （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプタ 一蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （ii)配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはそ の部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドと 相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌクレオチド、 または （ iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプ ター蛋白質に対するアンタゴニストの使用、
[ 6 8 ] 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リゥマチ 熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 ぴま ん性間質性肺炎、潰瘍性大腸炎、胆汁うっ滞型急性肝炎、劇症肝炎、慢性肝炎、 肝硬変、脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、重症筋無力症、顔面神経麻痺、 溶血性貧血、顆粒球減少症、紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出 症、 A C Τ Η単独欠損症、 奪麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤ァレ ルギーまたはアナフィラキシーショックの予防 ·治療剤を製造するための ( i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプタ 一蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （ii)配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはそ の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドと 相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌクレオチド、 または （ iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプ ター蛋白質に対するアンタゴニストの使用、
[ 6 9 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型 レセプター蛋白質またはその塩を用いることを特徴とする、 （i ) 糖尿病、 耐 糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病 網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 脖臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレル ギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害もしくは循環器疾患（特に、糖尿病、高脂血症、肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 拒食症、 肥満症） の予防 ·治療薬、 （ii) スト レス調節薬、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成調節薬、 血中グルセ口ール調節 薬、 脂肪分解調節薬、 インスリン抵抗調節薬、 （iii) 副腎皮質刺激ホルモン （ A C T H) 分泌調節薬、 （iv) A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続 発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結 核性疾患、高血圧、 クッシング症候群もしくは副腎皮質の萎縮の予防 ·治療薬、 または （V ) 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウ マチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性 肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神 経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性 リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪 性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 尊麻疹、 湿疹、皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーもしくはアナフィラキシーショックの予防 ·治療薬が該レセプ ター蛋白質またはその塩に結合することを確認する方法、 [ 7 0 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型 レセプター蛋白質またはその塩を用いることを特徴とする、 （i ) 糖尿病、 耐 糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病 網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 藤臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレル ギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害もしくは循環器疾患（特に、糖尿病、高脂血症、肥満、 動脈硬化、狭心症もしくは心筋梗塞） の予防 ·治療薬、 （ii) ストレス調節薬、 脂肪細胞からのグリセロール生成抑制薬、 血中グルセロール低下薬、 脂肪分解 抑制薬、 インスリン抵抗抑制薬、 （iii) 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分 泌抑制薬、 または （iv) A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副 腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾 患、 高血圧、 クッシング症候群もしくは副腎皮質の萎縮の予防 ·治療薬が該レ セプター蛋白質またはその塩に対するァゴニストであることを確認する方法、
[ 7 1 ] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型 レセプター蛋白質またはその塩を用いることを特徴とする、 （i ) 糖尿病、 耐 糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病 網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 勝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレル ギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害もしくは循環器疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 とりわ け内臓脂肪蓄積型肥満症） の予防 ·治療薬、 （ii) ストレス調節薬、 脂肪細胞 からのグリセ口ール生成促進薬、 血中ダルセ口ール上昇薬、 脂肪分解促進薬、 インスリン抵抗促進薬、 （iii) 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進薬 、 または （iv) 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リ ゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、気管支喘息、肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性 肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神 経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性 リンパ J!重、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪 性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、蓴麻疹、湿疹、皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤ァレルギ一もしくはアナフィラキシーショックの予防 ·治療薬が該レセプ ター蛋白質またはその塩に対するアンタゴニストであることを確認する方法、 [ 7 2 ] 各薬を該レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に接触さ せた場合における、 各薬と該レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその 塩との結合量を測定することを特徴とする上記 [ 6 9 ] 〜 [ 7 1 ] 記載の確認 方法、
[ 7 3 ] ( 1 ) ( i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わ されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G 蛋白質共役型レセプター蛋白質に対するァゴニストまたはアンタゴニスト、 ま たは （および） （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わ されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G 蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を変化させる 化合物またはその塩、 と （2 ) ( i ) 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァシ ドーシス、 糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学 習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪 肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害も しくは循環器疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋 梗塞、 拒食症、 肥満症） の予防 ·治療薬、 （ii) ストレス調節薬、 脂肪細胞か らのグリセロール生成調節薬、 血中グルセロール調節薬、 脂肪分解調節薬、 ィ ンスリン抵抗調節薬、 （iii) 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節薬、 (iv) A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッ シング症候群もしくは副腎皮質の萎縮の予防 ·治療薬、 または （V ) 慢性関節 リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症、 腎疾 患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄 炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副 腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 ACT H単独欠損症、 尊麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーもし くはアナフィラキシーショックの予防 ·治療薬とを組み合わせてなる医薬、
[74] 配列番号： 8で表されるアミノ酸配列からなる G蛋白質共役型レセプ ター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、
[75] 上記 [74] 記載の G蛋白質共役型レセプター蛋白質をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
[76] 配列番号： 9で表される塩基配列からなる DNA、
[77] 上記 [75] 記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、 [78] 上記 [77] 記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、 お よび
[79] 上記 [78] 記載の形質転換体を培養し、 上記 [74] 記載の G蛋白 質共役型レセプター蛋白質またはその塩を生成せしめることを特徴とする上記 [74] 記載の G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩の製造法を提供 する。
さらに、 本発明は、
[80] ( i ) 配列番号： 1または配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同 一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有することを特徴とする G蛋白質 共役型レセプター蛋白質 (以下、 14273と略記する場合もある) 、 その部 分ペプチドまたはその塩と、 脂肪酸またはその塩とを接触させた場合と、 （ii ) 14273、 その部分ペプチドまたはその塩と、 脂肪酸またはその塩おょぴ 試験ィヒ合物とを接触させた場合との比較を行なうことを特徴とする上記 [ 1 ] 記載のスクリーニング方法、
[8 1] ( i ) 標識した脂肪酸またはその塩を 142 7 3、 その部分ペプチド またはその塩に接触させた場合と、 （ii) 標識した脂肪酸またはその塩おょぴ 試験化合物を 142 7 3、 その部分べプチドまたはその塩に接触させた場合に おける、 標識した脂肪酸またはその塩の 1427 3、 その部分ぺプチドまたは その塩に対する結合量を測定し、 比較することを特徴とする上記 [1] 記載の スクリーニング方法、
[82] ( i ) 標識した脂肪酸またはその塩を 142 7 3を含有する細胞に接 触させた場合と、 （ii) 標識した脂肪酸またはその塩および試験化合物を 14 2 73を含有する細胞に接触させた場合における、 標識した脂肪酸またはその 塩の該細胞に対する結合量を測定し、 比較することを特徴とする上記 [1] 記 載のスクリーニング方法、
[8 3] ( i ) 標識した脂肪酸またはその塩を 1427 3を含有する細胞の膜 画分に接触させた場合と、 （ii) 標識した脂肪酸またはその塩および試験化合 物を 1 42 73を含有する細胞の膜画分に接触させた場合における、 標識した 脂肪酸またはその塩の該細胞の膜画分に対する結合量を測定し、 比較すること を特徴とする上記 [1] 記載のスクリーニング方法、
[84] ( i ) 標識した脂肪酸またはその塩を、 1 42 7 3をコードする DN Aを含有する D NAを含有する組換えベクターで形質転換した形質転換体を培 養することによつて当該形質転換体の細胞膜に発現した 142 7 3に接触させ た場合と、 （ii) 標識した脂肪酸またはその塩および試験化合物を当該質転換 体の細胞膜に発現した 1 42 73に接触させた場合における、 標識した脂肪酸 またはその塩の 1 42 73に対する結合量を測定し、 比較することを特徵とす る上記 [1] 記载のスクリーニング方法、
[8 5] ( i ) 1 42 73を活性化する化合物を 1 42 7 3を含有する細胞に 接触させた場合と、 (ii) 1 42 7 3を活性化する化合物およぴ試験化合物を 1 42 73を含有する細胞に接触させた場合における、 142 7 3を介した細 胞刺激活性を測定し、 比較することを特徴とする上記 [1] 記載のスクリー- ング方法、 [86] 14273を活性化する化合物を、 14273をコードする DNAを 含有する D N Aを含有する組換えべクタ一で形質転換した形質転換体を培養す ることによって当該形質転換体の細胞膜に発現した 14273に接触させた場 合と、 14273を活性化する化合物および試験化合物を当該形質転換体の細 胞膜に発現した 14273に接触させた場合における、 14273を介する細 胞刺激活性を測定し、 比較することを特徴とする上記 [1] 記載のスクリー二 ング方法、
[87] 14273を活性化する化合物が脂肪酸またはその塩である上記 [8 5] または [86] 記載のスクリーニング方法、
[88] 14273を含有する細胞またはその膜画分を含有することを特徴と する上記 [2] 記載のスクリーニング用キット、
[89] 14273をコードする DNAを含有する DNAを含有する組換えべ クタ一で形質転換した形質転換体を培養することによつて当該形質転換体の細 · 胞膜に発現した 14273を含有することを特徴とする上記 [2] 記載のスク リーユング用キット、
[90] (1) (i) 標識された脂肪酸またはその塩または （ii) 該レセプタ 一蛋白質またはその塩と脂肪酸またはその塩との結合性を変化させる標識され た化合物またはその塩を、 該レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその 塩に接触させた場合と、 （2) 各薬および （i) 標識された脂肪酸またはその 塩または （ii) 該標識された化合物またはその塩を、 該レセプター蛋白質、 そ の部分ペプチドまたはその塩に接触させた場合における、 （i) 標識された脂 肪酸またはその塩または (ii) 該標識された化合物またはその塩と、 該レセプ ター蛋白質、 その部分べプチドまたはその塩との結合量を測定することを特徴 とする上記 [69] 〜 [71] 記载の確認方法、
[91] (1) (i) 標識された脂肪酸またはその塩または （ii) 該レセプタ 一蛋白質またはその塩と脂肪酸またはその塩との結合性を変化させる標識され た化合物またはその塩を、 該レセプター蛋白質を含有する細胞またはその細胞 膜画分に接触させた場合と、 （2) 各薬および （i) 標識された脂肪酸または その塩または （ii) 該標識された化合物またはその塩を、 該レセプター蛋白質 を含有する細胞またはその細胞膜画分に接触させた場合における、 （ i ) 標識 された脂肪酸またはその塩または （ii) 該標識された化合物またはその塩と、 該レセプター蛋白質を含有する細胞またはその細胞膜画分との結合量を測定す ることを特徴とする上記 [69] 〜 [71] 記載の確認方法、
[92] (1) ( i) 脂肪酸またはその塩または （ii) 該レセプター蛋白質ま たはその塩と脂肪酸またはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩 を、 該レセプター蛋白質を含有する細胞またはその細胞膜画分に接触させた場 合と、 （2) 各薬および （i) 脂肪酸またはその塩または （ii) 該レセプター 蛋白質またはその塩と脂肪酸またはその塩との結合性を変化させる化合物また はその塩を、 該レセプター蛋白質を含有する細胞またはその細胞膜画分に接触 させた場合における、 細胞内 C a 2+濃度上昇活性、 細胞内 c AMP生成抑制活 性、 MAPキナーゼのリン酸ィヒもしくは活性化、 副腎皮質刺激ホルモン （AC TH) 分泌抑制活性、 グリセロール生成抑制活性、 または脂肪分解抑制活性を 測定することを特徴とする上記 [69] 〜 [71] 記載の確認方法、
[93] 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるァミノ酸配列と同一も しくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白 質、 その部分ペプチドまたはその塩を含有することを特徴とする、 （i) 糖尿 病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不 適合分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 勝 JI蔵疲弊、 低血糖 症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高ィンスリン 血症、 高血糖症、 高 FFA症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石 症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害もしくは循環器疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 拒食症、 肥満症） の 予防 ·治療薬、 （ii) ストレス調節薬、 脂肪細胞からのグリセロール生成調節 薬、血中ダルセロール調節薬、脂肪分解調節薬もしくはインスリン抵抗調節薬、 (iii) 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌調節薬、 （iv) ACTH産生腫 瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 （例、 中 心性肥満、 浮腫、 高血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月 顔、 骨粗しょう症、 出血性素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血 症、 高コレステロール血、 耐糖能異常、 白血球増多症） もしくは副腎皮質の萎 縮の予防。治療薬、 または （V ) 結合組織疾患 （例えば、 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症） 、 腎疾患 （例、 ネフローゼ） 、 呼吸器系疾患 （例、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィド 一シス、 びまん性間質性肺炎） 、 消化器系疾患 （例えば、 潰瘍性大腸炎、 胆汁 うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変） 、 神経 ·筋疾患 （例えば、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺） 、 血液 疾患 （例えば、溶血性貧血、 顆粒球減少症、紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫） 、 内分泌 ·代謝疾患 （例えば、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副 腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症） 、 皮 膚疾患 （例えば、 蓴麻疹、'湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギー） もしくはアナフィラキシーショックの予防'治療薬が該レセプター蛋白質また はその塩に結合することを確認するためのキット、
[ 9 4 ] 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列と同一も しくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白 質に対するァゴ-ストまたはアンタゴニストである、 （i ) 糖尿病、 耐糖能障 害、 ケトーシス、 アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体 機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨 大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合分泌症候群 ) 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリン アレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮もしくは癌性悪液質、 高インスリン血症、 高 血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食 障害、 拒食症、 腸管ホルモンの分泌障害もしくは循環器疾患 （特に、 糖尿病、 髙脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 拒食症、 肥満症） の予防 ·治 療薬、 （ii) ストレス調節薬、 脂肪細胞からのグリセロール生成調節薬、 血中 ダルセロール調節薬、 脂肪分解調節薬もしくはィンスリン抵抗調節薬、 （iii) 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌調節薬、 (iv) AC TH産生腫瘍、 ク ッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障 害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 （例、 中心性肥 満、 浮腫、 高血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨 粗しょう症、 出血性素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血症、 高 コレステロール血、 耐糖能異常、 白血球増多症） もしくは副腎皮質の萎縮の予 防-治療薬、 または （V) 結合組織疾患 （例えば、 慢性関節リウマチ、 全身性 エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症） 、 腎疾患 （例、 ネフ口 ーゼ) 、 呼吸器系疾患 (例、 気管支喘息、肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎） 、 消化器系疾患 （例えば、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型 急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変） 、神経 ·筋疾患 （例えば、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺） 、 血液疾患 （例え ば、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リン パ腫） 、 内分泌 ·代謝疾患 （例えば、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症 候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 ACTH単独欠損症） 、 皮膚疾患 （ 例えば、 蓴麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギー） もしくは アナフィラキシーショックの予防'治療薬、
[95] 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその部分ぺプチドをコードするポリヌクレオチドに対す る s i RNA、
[96] 配列番号： 21で表わされる塩基配列からなるセンス鎖と配列番号： 22で表わされる塩基配列からなるアンチセンス鎖で構成される s i RNA ( 実施例 1 1の ml 4 i 561) である上記 [95] 記載の s i RNA、
[97] 上記 [95] 記載の s i RNAを含有してなる診断薬、
[98] 上記 [95] 記載の s i RNAを含有してなる医薬、
[99] 上記 [95] 記載の s i RNAを含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高 脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機 能障害、 癌、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレルギー、 脂 肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 髙血糖症、 高 F FA症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホ ルモンの分泌障害または循環器疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 とりわけ内臓月旨 肪蓄積型肥満症） の予防 ·治療剤、
[ 1 0 0] 上記 [9 5] 記載の s i RNAを含有してなるストレス調節剤、 脂 肪細胞からのグリセ口ール生成促進剤、 血中グルセ口ール上昇剤、 脂肪分解促 進剤またはインスリン抵抗促進剤、
[ 1 0 1] 上記 [9 5] 記載の s i RNAを含有してなる副腎皮質刺激ホルモ ン （ACTH) 分泌促進剤、 および
[1 0 2] 上記 [9 5] 記載の s i RNAを含有してなる慢性関節リゥマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支 喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸 炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神 経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少 症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能 不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 ACTH単独欠損 症、 蓴麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまたはアナフィ ラキシーショックの予防 ·治療剤等を提供する。 図面の簡単な説明
図 1はパルミ トレイン酸 （P a l m i t o l e i c a c i d) 3 0 μΜを添 加したときの細胞内 C a 2 +濃度の変化を調べた結果を示す。 縦軸の C o u n t sは細胞内 C a 2+濃度を示す蛍光強度、 横軸の T i me ( s e c . ) はサンプ ル添加後の時間経過（秒） を示す。〇はヒト 1 4 2 7 3発現 CHO— K 1細胞、 △はマウス 1 4 2 7 3発現 CHO— K 1細胞、 口は 1 4 2 7 3を発現していな いコントロールの CHO— K 1細胞を示す。 図 2はリノール酸 （L i n o l e i c a c i d) 30 μΜを添加したときの 細胞内 C a 2+濃度の変化を調べた結果を示す。 縦軸の C o un t sは細胞内 C a 2+濃度を示す蛍光強度、 横軸の T ime (s e c. ) はサンプル添加後の時 間経過 （秒） を示す。 〇は 14273発現 CHO— K 1細胞、 △はマウス 14 273発現 CHO— K 1細胞、 口は 14273を発現していないコントロール の CHO— K 1細胞を示す。
図 3は γ—リノレン酸 （γ— L i n o l e n i c a c i d) 30 を添カロ したときの細胞内 C a 2+濃度の変化を調べた結果を示す。 縦軸の C o u n t s は細胞内 C a 2+濃度を示す蛍光強度、 横軸の T i me (s e c. ) はサンプル 添加後の時間経過 （秒） を示す。 〇は 14273発現 CHO— K1細胞、 △は マウス 14273発現 CHO— K 1細胞、 口は 14273を発現していないコ ントロールの CHO— K 1細胞を示す。
図 4はァラキドン酸 （Ar a c h i d o n i c a c i d) 30μΜを添カロし たときの細胞内 C a 2+濃度の変化を調べた結果を示す。 縦軸の C o u n t sは 細胞内 C a 2 +濃度を示す蛍光強度、 横軸の T i me (s e c. ) はサンプル添 加後の時間経過 （秒） を示す。 〇は 14273発現 CHO— K1細胞、 △はマ ウス 14273発現 CHO— K 1細胞、 口は 14273を発現していないコン トロールの CHO— K 1細胞を示す。
図 5はドコサへキサェン酸 (D o c 0 s a h e X a e n o i c a c i d, D HA) 30 Mを添加したときの細胞内 C a 2+濃度の変化を調べた結果を示す。 縦軸の C o u n t sは細胞内 C a 2+濃度を示す蛍光強度、 横軸の T i me (s e c. ) はサンプル添加後の時間経過 （秒） を示す。 〇は 14273発現 CH 0— K1細胞、 △はマウス 14273発現 CHO— K 1細胞、 口は 14273 を発現していないコント口ールの C H〇一 K 1細胞を示す。
図 6はヒ ト各種組織での 14273 mRN Aの発現分布を示す。 コピー数 /25 n g t o t a l RNAはt o t a l RNA 25 n g当たりのコピー数を 示す。
図 7はラット各種組織での 14273 mRN Aの発現分布を示す。 コピー数 Z n g p o l y (A) +RNAは p o l y (A) +RNA n g当たりのコピ 一数を示す。
図 8は水浸拘束ストレス負荷ラット下垂体での 1 4 2 7 3 mRNAの発現上昇 を調べた結果を示す。 横軸は水浸時間 （h) を示す。 縦軸の C o p i e s /n g p o l y (A) +RNAは p o 1 y (A) +RNA n g当たりのコピー 数を示す。
図 9はヒト 1 4 2 7 3発現 CHO細胞の c AMP産生に対する脂肪酸の影響を 調べた結果を示す。 F o r s k o 1 i nはフオルスコリン存在下で脂肪酸を添 加しなかった場合を、 B u t y 1 i c a c i dはフオルスコリン存在下に酪 酸 （ 3 0 M) を添カロした場合を、 γ— L i n o l e n o i c a c i dはフ オルスコリン存在下に γ—リノレン酸 （3 0 /zM) を添加した場合を、 L i n o l e i c a c i dはフオルスコリン存在下にリノール酸 (3 0 μ Μ) を添 加した場合を、 DH Αはフオルスコリン存在下に DHA (3 0 μΜ) を添加し た場合を、 O l e i c a c i dはフオルスコリン存在下にォレイン酸 (3 0 μΜ) を添加した場合を示す。 縦軸の％は、 フォルスコリンで刺激した時の c AMP産生量からベースを引いた値を 1 0 0%とした場合における、 各脂肪酸 添加時の c AMP産生量を相対値で表したものである。
図 1 0は脂肪酸添加によるヒト 1 4 2 7 3発現 CHO細胞での MAPキナーゼ 活性化を検出した結果を示す。 CHO_h l 4 2 7 3はヒ ト 1 4 2 7 3を発現 している CHO細胞を用いた場合を、 CHO— mo c kはヒト 1 4 2 7 3を発 現していない CHO細胞を用いた場合を示す。 γ— 1 i n oは γ—リノレン酸 を添加した場合を、 m e t h y 1はリノ一ル酸メチルを添加した場合を示す。 数字 （m i n) はサンプル添加後の経過時間 （分） を示す。 p 44はリン酸化 され活性化された ERK 1のバンドを示す。 p 4 2はリン酸化され活性化され た E R 2のバンドを示す。
図 1 1は 3 T 3— L 1細胞の脂肪細胞分化誘導に伴 51 4 2 7 3受容体の発現 変動を調べた結果を示す。 横軸は 3 T 3— L 1細胞の脂肪細胞分化誘導後の日 数 （日） を示す。 縦軸のコピー数 /2 5 n g t o t a l RNAは、 得られ た 3 T 3—L 1細胞における 1 4 2 7 3受容体の mRNA発現量を T o t a 1 RNA 2 5 n gあたりのコピー数として算出した値を示す。 図 1 2はラット初代培養前駆脂肪細胞の脂肪細胞分化誘導に伴う 1 4273受 容体の発現変動を調べた結果を示す。 D a y 0は分化誘導前の細胞を、 D a y 8は分化誘導後 8日後の細胞を用いた場合を示す。 縦軸のコピー数 /2 5 n g t o t a l RNAは、 得られた初代培養脂肪細胞における 1 42 73受容体 の mRNA発現量を T o t a 1 RNA 25 n gあたりのコピー数として算 出した値を示す。
図 1 3は脂肪酸による A t T— 20細胞からの副腎皮質刺激ホルモン放出因子 (CRF) 誘導性 ACT H分泌の抑制効果を調べた結果を示す。 b a s eは C RF非存在下で、 脂肪酸を添加しなかった場合を示す。 CRFは CRF (1 0 nM) 存在下で脂肪酸を添カ卩しなかった場合を示す。 γ— LAは γ—リノレン 酸を、 ct一 LAは α—リノレン酸を、 ΒΑは酪酸をそれぞれ CRF (Ι Ο ηΜ ) 存在下で添加した場合を示す。 ACTH (X 25 p g/m 1 ) は ACTH分 泌量を示す。 平均 +標準誤差 （n = 8) 。 * *， p < 0. 0 1 ; *, p < 0. 05 (S t u d e n t s t t e s t) 。
図 1 4は 3 T 3— L 1脂肪分化細胞における脂肪分解に対する脂肪酸の抑制 作用を示す。 γ— LAは γ—リノレン酸を、 MLはリノール酸メチルをそれ ぞれ示す。 b a s eは脂肪酸を添加しなかった場合を示す。 グリセロール（ M) はグリセロールの生成量を示す。 *はイソプロテレノール添加の b a s eに対し有意に抑制されていることを示す （p < 0. 0 5) 。 * *はイソプ ロテレノール添加の b a s eに対し有意に抑制されていることを示す (p < 0. 0 1) 。 発明を実施するための最良の形態
本発明の G蛋白質共役型レセプター蛋白質 （以下、 1 42 7 3と略記する場 合がある） は、 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされる ァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプタ 一蛋白質である。
142 73は、 例えば、 ヒトゃ哺乳動物 (例えば、 モルモット、 ラット、 マ ウス、 ゥサギ、 ブタ、 ヒッジ、 ゥシ、 サルなど） のあらゆる細胞 （例えば、 脾 細胞、神経細胞、 グリア細胞、 S萃臓 j3細胞、膝臓ランゲルハンス島、 骨髄細胞、 メサンギゥム細胞、 ランゲルハンス細胞、 表皮細胞、 上皮細胞、 内皮細胞、 繊 維芽細胞、 繊維細胞、 筋細胞、 脂肪細胞、 免疫細胞 （例、 マクロファージ、 T 細胞、 B細胞、 ナチュラルキラー細胞、 肥満細胞、 好中球、好塩基球、 好酸球、 単球） 、 巨核球、 滑膜細胞、 軟骨細胞、 骨細胞、 骨芽細胞、 破骨細胞、 乳腺細 胞、 肝細胞もしくは間質細胞、 またはこれら細胞の前駆細胞、 幹細胞もしくは ガン細胞など）や血球系の細胞、またはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、 例えば、 脳、 脳の各部位 （例、 嗅球、 扁頭核、 大脳基底球、 海馬、 視床、 視床 下部、 視床下核、 大脳皮質、 延髄、 小脳、 後頭葉、 前頭葉、 側頭葉、 被殻、 尾 状核、 脳染、 黒質） 、 脊髄、 下垂体、 胃、 藤臓、 腎臓、 肝臓、 生殖腺、 甲状腺、 胆のう、 骨髄、 副腎、 皮膚、 筋肉、 肺、 消化管 （例、 大腸、 小腸） 、 血管、 心 臓、 胸腺、 脾臓、 顎下腺、 末梢血、 末梢血球、 前立腺、 睾丸、 精巣、 卵巣、 胎 盤、 子宫、 骨、 関節、 骨格筋などに由来する蛋白質であってもよく、 また合成 蛋白質であってもよい。 特に、 14273は下垂体、 腸管や脂肪組織に高発現 している。
配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸配列 と実質的に同一のアミノ酸配列としては、 例えば、 配列番号： 1、 配列番号：
3または配列番号： 8で表わされるァミノ酸配列と約 85 %以上、 好ましくは 90 %以上、 より好ましくは約 95 %以上の相同性を有するァミノ酸配列など が挙げられる。
本発明の配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミ ノ酸配列と実質的に同一のァミノ酸配列を含有する蛋白質としては、 例えば、 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸配列と 実質的に同一のアミノ酸配列を有し、 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列 番号： 8で表わされるァミノ酸配列からなる蛋白質と実質的に同質の活性を有 する蛋白質などが好ましい。
ァミノ酸配列の相同性は、 相同性計算アルゴリズム NCB I BLAST ( Na t i o n a l C e n t e r f o r B i o t e c hn o l o g y I n f o rma t i o n B a s i c L o c a l A l i g nme n t S e a r c h To o l) を用い、 以下の条件 （期待値 = 10 ；ギヤップを許す； マトリクス =B LOSUM62 ； フイノレタリング = OFF) にて計算すること ができる。
実質的に同質の活性としては、 例えば、 リガンド結合活性、 シグナル情報伝 達作用などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの活性が性質的に同質で あることを示す。 したがって、 リガンド結合活性やシグナル情報伝達作用など の活性が同等 （例、 約 0. 01〜： 10◦倍、 好ましくは約 0. 5〜20倍、 よ り好ましくは約 0. 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの活性の程度 ゃ蛋白質の分子量などの量的要素は異なつていてもよい。
リガンド結合活性やシグナル情報伝達作用などの活性の測定は、 自体公知の 方法に準じて行なうことができるが、 例えば、 後に記載するスクリーニング方 法に従って測定することができる。
また、 14273としては、 a ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番 号： 8で表わされるアミノ酸配列中の 1または 2個以上 （好ましくは、 1〜3 0個程度、 より好ましくは 1〜 10個程度、 さらに好ましくは数個 （ 1〜 5個 ) ) のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、 b) 配列番号： 1、 配列番号： 3ま たは配列番号： 8で表わされるァミノ酸配列に 1または 2個以上（好ましくは、 1〜30個程度、 より好ましくは 1〜10個程度、 さらに好ましくは数個 （1 〜5個） ） のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、 c) 配列番号： 1、 配列番号 ： 3または配列番号： 8で表わされるァミノ酸配列中の 1または 2個以上 （好 ましくは、 1〜30個程度、 より好ましくは 1〜10個程度、 さらに好ましく は数個 ( 1〜 5個) ) のァミノ酸が他のァミノ酸で置換されたァミノ酸配列、 または d ) それらを組み合わせたァミノ酸配列を含有する蛋白質なども用いら れる。
本明細書において 14273は、 ぺプチド標記の慣例に従って、 左端が N末 端 (ァミノ末端) 、 右端が C末端 (カルボキシル末端) である。 配列番号： 2 で表わされるアミノ酸配列を含有する 14273をはじめとする 14273は、 C末端がカルボキシル基 (-COOH) 、 カルボキシレート（一COO— )、 アミ ド （一 CONH2) またはエステル （一 COOR) の何れであってもよい。 ここでエステルにおける Rとしては、 例えば、 メチル、 ェチル、 n—プロピ ル、 イソプロ'ピルもしくは n—ブチルなどの アルキル基、 例えば、 シクロ ペンチル、 シクロへキシルなどの C3_8シクロアルキル基、 例えば、 フエ-ル、 α—ナフチルなどの C6_12ァリール基、 例えば、 ベンジル、 フエネチルなどの フエニル一 — 2アルキル基もしくはひ一ナフチルメチルなどの α—ナフチル 一〇 2アルキル基などの C7— 14ァラルキル基のほ力、 経口用エステルとして 汎用されるビバロイルォキシメチル基などが用いられる。
14273が C末端以外にカルボキシル基 (またはカルボキシレート） を有 している場合、 カルボキシル基がアミ ド化またはエステル化されているものも 14273に含まれる。 この場合のエステルとしては、 例えば上記した C末端 のエステルなどが用いられる。
さらに、 14273には、 上記した蛋白質において、 N末端のメチォニン残 基のアミノ基が保護基 （例えば、 ホルミノレ基、 ァセチルなどの C2— 6アルカノィ ル基などの C i— 6ァシル基など） で保護されているもの、 N端側が生体内で切断 され生成したダルタミル基がピログルタミン酸化したもの、 分子内のアミノ酸 の側鎖上の置換基 （例えば、 一 OH、 一 SH、 アミノ基、 イミダゾール基、 ィ ンドール基、 グァ -ジノ基など） が適当な保護基 （例えば、 ホルミル基、 ァセ チルなどの C2一 6アル力ノィル基などの ァシル基など） で保護されている もの、 あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白質なども含ま れる。
14273の具体例としては、 例えば、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸 配列からなるヒ ト由来の 14273、 配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列 からなるマウス由来の 14273 (WO 2002/67868号、 公開配列デ ータペース ： ACCE S S I ON XP一 06 1208、 XP_1 29252 ) 、 配列番号： 8で表わされるァミノ酸配列からなるラット由来の 14273 などが用いられる。 配列番号： 8で表わされるアミノ酸配列からなるラット由 来の 14273は新規な蛋白質である。
14273の部分べプチド （以下、 単に部分ぺプチドと略記する場合がある ) としては、 上記した 14273の部分ァミノ酸配列を有するぺプチドであれ ば何れのもめであってもよいが、 例えば、 14273の蛋白質分子のうち、 細 胞膜の外に露出している部位であって、 14273と実質的に同質のレセプタ 一結合活性を有するものなどが用いられる。
具体的には、 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされる アミノ酸配列を有する 14273の部分ぺプチドとしては、 疎水性プロット解 祈において細胞外領域 （親水性 （Hydrophilic) 部位） であると分析された部分 を含むペプチドである。 また、 疎水性 （Hydrophobic) 部位を一部に含むぺプチ ドも同様に用いることができる。 個々のドメインを個別に含むペプチドも用い 得るが、 複数のドメィンを同時に含む部分のぺプチドでも良い。
本発明の部分ペプチドのアミノ酸の数は、 上記した本発明のレセプター蛋白 質の構成ァミノ酸配列のうち少なくとも 20個以上、 好ましくは 50個以上、 より好ましくは 100個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが好ましい。 実質的に同一のアミノ酸配列とは、 これらアミノ酸配列と約 85%以上、 好 ましくは約 90 %以上、 より好ましくは約 95 %以上の相同性を有するアミノ 酸配列を示す。
ァミノ酸配列の相同性は、 相同性計算アルゴリズム N C B I BLAST ( Na t i o n a l C e n t e r f o r B i o t e c nn o l o g y I n f o rma t i o n B a s i c Lo c a l A l i gnme n t S e a r c h To o l) を用い、 以下の条件 （期待値 = 10 ；ギヤップを許す； マトリクス =B LO SUM62 ；フィルタリング =OF F) にて計算すること ができる。
ここで、 「実質的に同質のレセプター活性」 とは、 上記と同意義を示す。 「 実質的に同質のレセプター活性」 の測定は上記と同様に行なうことができる。 また、 本発明の部分ペプチドは、 上記アミノ酸配列中の 1または 2個以上 （ 好ましくは、 1〜10個程度、 さらに好ましくは数個 （1〜5個） ) のァミノ 酸が欠失し、 または、 そのアミノ酸配列に 1または 2個以上 （好ましくは、 1 〜 20個程度、 より好ましくは 1〜10個程度、 さらに好ましくは数個 （1〜 5個） ） のアミノ酸が付カ卩し、 または、 そのアミノ酸配列中の 1または 2個以 上 （好ましくは、 1〜10個程度、 より好ましくは数個、 さらに好ましくは 1 〜5個程度） のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。
また、 本発明の部分ペプチドは C末端がカルボキシル基 （一 C O O H) 、 力 ルボキシレート （一C O O— ) 、 アミ ド （一 C O NH 2) またはエステル （一 C O O R) の何れであってもよい。 本発明の部分ペプチドが C末端以外にカルボ キシル基 （またはカルボキシレート） を有している場合、 カルボキシル基がァ ミド化またはエステル化されているものも本発明の部分べプチドに含まれる。 この場合のエステルとしては、 例えば上記した C末端のエステルなどが用いら れる。
さらに、 本発明の部分べプチドには、 上記した 1 4 2 7 3と同様に、 N末端 のメチォニン残基のァミノ基が保護基で保護されているもの、 N端側が生体内 で切断され生成した G l nがピログルタミン酸ィヒしたもの、 分子内のアミノ酸 の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、 あるいは糖鎖が結合 したいわゆる糖ぺプチドなどの複合べプチドなども含まれる。
1 4 2 7 3またはその部分ぺプチドの塩としては、 酸または塩基との生理学 的に許容される塩が挙げられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ま しい。 この様な塩としては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水 素酸、 硫酸） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息 香酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸） との塩などが用いられる。
1 4 2 7 3またはその塩は、 上記したヒトゃ哺乳動物の細胞または組織から 自体公知のレセプター蛋白質の精製方法によって製造することもできるし、 後 に記载する 1 4 2 7 3をコードする D N Aを含有する形質転換体を培養するこ とによっても製造することができる。 また、 後に記載する蛋白質合成法または これに準じて製造することもできる。
ヒトゃ哺乳動物の糸且織または細胞から製造する場合、 ヒトゃ哺乳動物の組織 または細胞をホモジナイズした後、 酸などで抽出を行ない、 該抽出液を逆相ク ロマトグラフィー、 イオン交換クロマトグラフィーなどのク口マトグラフィー を組み合わせることにより精製単離することができる。
1 4 2 7 3もしくはその部分ぺプチドまたはその塩またはそのアミド体の合 成には、 通常市販の蛋白質合成用樹脂を用いることができる。 そのような樹脂 としては、 例えば、 クロロメチル樹脂、 ヒドロキシメチル樹脂、 ベンズヒ ドリ ルァミン樹脂、 アミノメチル樹脂、 4一べンジルォキシベンジルアルコール榭 脂、 4一メチルベンズヒドリルァミン樹脂、 P AM樹脂、 4ーヒ ドロキシメチ ルメチルフエ二ルァセトァミ ドメチル樹脂、 ポリアクリルアミ ド榭脂、 4一 ( 2 ' ， 4， 一ジメ トキシフエ二ルーヒ ドロキシメチル） フエノキシ樹脂、 - ( 2， , 4， ージメ トキシフエ二ルー F m o cアミノエチル） フエノキシ榭月旨 などを挙げることができる。 このような樹脂を用い、 α—ァミノ基と側鎖官能 基を適当に保護したアミノ酸を、 目的とする蛋白質の配列通りに、 自体公知の 各種縮合方法に従い、 樹脂上で縮合させる。 反応の最後に樹脂から蛋白質を切 り出すと同時に各種保護基を除去し、 さらに高希釈溶液中で分子内ジスルフィ ド結合形成反応を実施し、 目的の蛋白質またはそのアミド体を取得する。
上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、 蛋白質合成に使用できる各種活性 化試薬を用いることができるが、 特に、 カルボジィミ ド類がよい。 カルポジィ ミド類としては、 D C C、 N, N， ージイソプロピルカルボジィミ ド、 N—ェ チルー N ' - ( 3—ジメチルァミノプロリル) カルポジイミ ドなどが用いられ る。 これらによる活性化にはラセミ化抑制添加剤 (例えば、 H O B t、 H O O B t)とともに保護ァミノ酸を直接樹脂に添加する力、 または、 対称酸無水物また は H O B tエステルあるいは H O O B tエステルとしてあらかじめ保護ァミノ 酸の活性ィ匕を行なった後に樹脂に添加することができる。
保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる溶媒としては、 蛋白質縮 合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。 例えば、 N, N—ジメチルホルムアミ ド, N, N—ジメチルァセトアミ ド, N—メチル ピロリ ドンなどの酸アミ ド類、 塩化メチレン， クロ口ホルムなどのハロゲン化 炭化水素類、 トリフルォロエタノールなどのアルコール類、 ジメチルスルホキ シドなどのスルホキシド類、 ピリジン， ジォキサン， テトラヒ ドロフランなど のェ一テル類、 ァセトニトリル， プロピオ二トリルなどの二トリル類、 酢酸メ チル， 酢酸ェチルなどのエステル類あるいはこれらの適宜の混合物などが用い られる。 反応温度は蛋白質結合形成反応に使用され得ることが知られている範 囲から適宜選択され、 通常約一 2 0〜 5 0 °Cの範囲から適宜選択される。 活性 化されたアミノ酸誘導体は通常 1 . 5〜 4倍過剰で用いられる。 ニンヒ ドリン反 応を用いたテストの結果、 縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行うことな く縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行なうことができる。 反応を繰 り返しても十分な縮合が得られないときには、 無水酢酸またはァセチルイミダ ゾールを用いて未反応ァミノ酸をァセチル化することができる。
原料のァミノ基の保護基としては、 例えば、 Z、 B o c、 ターシャリーペン チルォキシカルボニル、 ィソボルニルォキシカルボニル、 4ーメ トキシベンジ ルォキシカルボニル、 C 1— Z、 B r— Z、 ァダマンチルォキシカルボニル、 トリフルォロアセチル、 フタロイル、 ホノレミノレ、 2—二トロフエニルスルフエ エル、 ジフエニルホスフイノチオイル、 F m o cなどが用いられる。
カルボキシル基は、 例えば、 アルキルエステル化 （例えば、 メチル、 ェチル、 プロピノレ、 ブチル、 ターシャリ一ブチル、 シク口ペンチノレ、 シクロへキシノレ、 シク口へプチル、 シクロォクチル、 2ーァダマンチルなどの直鎖状、 分枝状も しくは環状アルキルエステル化) 、 ァラルキルエステル化 (例えば、 ベンジル エステノレ、 4 一二トロべンジノレエステノレ、 4ーメ トキシペンジノレエステノレ、 4 一クロ口べンジノレエステル、 ベンズヒ ドリルエステノレ化） 、 フエナシノレエステ ルイ匕、 ベンジルォキシカルポニルヒ ドラジド化、 ターシャリーブトキシカルボ ニルヒドラジド化、 トリチルヒドラジド化などによつて保護することができる。 セリンの水酸基は、 例えば、 エステル化またはエーテル化によって保護する ことができる。 このエステル化に適する基としては、 例えば、 ァセチル基など の低級アルカノィル基、 ベンゾィル基などのァロイル基、 ペンジノレオキシカノレ ボニル基、 ェトキシカルボニル基などの炭酸から誘導される基などが用いられ る。 また、 エーテル化に適する基としては、 例えば、 ベンジル基、 テトラヒ ド ロビラニル基、 t一プチル基などである。
チロシンのフエノール性水酸基の保護基としては、 例えば、 B z 1 、 C 1 2 - B z 1 、 2—二トロベンジル、 B r—Z、 ターシャリーブチルなどが用いられ る。
ヒスチジンのィミダゾールの保護基としては、 例えば、 T o s 、 4ーメ トキ シ一 2， 3 , 6—トリメチルベンゼンスルホニル、 D N P、 ベンジルォキシメ チノレ、 B u m, B o c 、 T r t 、 F m o cなどが用いられる。
原料のカルボキシル基の活性化されたものとしては、 例えば、 対応する酸無 水物、 アジド、 活性エステル 〔アルコール （例えば、 ペンタクロロフエノール、 2 ， 4 , 5—卜リクロロフエノ一ノレ、 2 , 4—ジニトロフエノール、 シァノメ チノレアノレコール、 ノヽ0ラニトロフエノール、 H O N B、 N—ヒ ドロキシスクシミ ド、 N—ヒ ドロキシフタルイミ ド、 H O B t ) とのエステル〕 などが用いられ る。 原料のァミノ基の活性ィ匕されたものとしては、 例えば、 対応するリン酸ァ ミ ドが用いられる。
保護基の除去 （脱離） 方法としては、 例えば、 P d—黒あるいは P d—炭素 などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、 また、 無水フッ化水素、 メタンスルホン酸、 トリフルォロメタンスルホン酸、 トリフルォロ酢酸あるレ、 はこれらの混合液などによる酸処理や、 ジイソプロピルェチルァミン、 トリエ チルァミン、 ピぺリジン、 ピぺラジンなどによる塩基処理、 また液体アンモ- ァ中ナトリウムによる還元なども用いられる。 上記酸処理による脱離反応は、 一般に約一 2 0〜 4 0 °Cの温度で行なわれるが、 酸処理においては、 例えば、 ァニソール、 フエノール、 チオアニソール、 メタクレゾーノレ、 ノ、°ラタレゾーノレ、 ジメチノレスノレフィ ド、 1 ， 4 _ブタンジチォ一ノレ、 1 , 2—エタンジチ才ーノレ などのようなカチォン捕捉剤の添カ卩が有効である。 また、 ヒスチジンのィミダ ゾール保護基として用いられる 2 ， 4ージニトロフエニル基はチォフエノール 処理により除去され、 トリプトファンのインドール保護基として用いられるホ ルミル基は上記の 1 , 2—エタンジチオール'、 1 ， 4ーブタンジチオールなど の存在下の酸処理による脱保護以外に、 希水酸化ナトリウム溶液、 希アンモニ ァなどによるアルカリ処理によっても除去される。
原料の反応に関与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、 およびその保 護基の脱離、 反応に関与する官能基の活性ィヒなどは公知の基または公知の手段 から適宜選択レうる。
蛋白質のアミ ド体を得る別の方法としては、 例えば、 まず、 カルボキシ末端 アミノ酸の a—カルボキシル基をアミ ド化して保護した後、 ァミノ基側にぺプ チド （蛋白質） 鎖を所望の鎖長まで延ばした後、 該ペプチド鎖の N末端の α— ァミノ基の保護基のみを除いた蛋白質と C末端のカルボキシル基の保護基のみ を除去した蛋白質とを製造し、 この両蛋白質を上記したような混合溶媒中で縮 合させる。 縮合反応の詳細については上記と同様である。 縮合により得られた 保護蛋白質を精製した後、 上記方法によりすベての保護基を除去し、 所望の粗 蛋白質を得ることができる。 この粗蛋白質は既知の各種精製手段を駆使して精 製し、 主要画分を凍結乾燥することで所望の蛋白質のアミド体を得ることがで さる。
蛋白質のエステル体を得るには、 例えば、 カルボキシ末端アミノ酸の α—力 ルポキシル基を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸エステルとした後、 蛋白 質のアミド体と同様にして、 所望の蛋白質のエステル体を得ることができる。
1 4 2 7 3の部分ぺプチド'またはその塩は、 自体公知のぺプチドの合成法に 従って、 あるいは 1 4 2 7 3を適当なぺプチダーゼで切断することによって製 造することができる。 ペプチドの合成法としては、 例えば、 固相合成法、 液相 合成法のいずれによっても良い。 すなわち、 1 4 2 7 3を構成し得る部分ぺプ チドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、 生成物が保護基を有する場合 は保護基を脱離することにより目的のぺプチドを製造することができる。 公知 の縮合方法や保護基の脱離としては、 例えば、 以下の a ) 〜e ) に記載された 方法が挙げられる。
a ) M. Bodanszkyおよび M. A. 0ndetti、 ペプチド シンセシス （Peptide
Synthesis) , Interscience Publishers, New ork (1966年)
b ) Sckroederおよぴ Lueoke、ザぺプチ K (The Peptide) , Academic Press, New- York (1965年）
c ) 泉屋信夫他、 ペプチド合成の基礎と実験、 丸善 (株） （1975年） d )矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 蛋白質の化学 IV、 205、
(1977年）
e ) 矢島治明監修、 続医薬品の開発 第 14卷ペプチド合成広川書店
また、 反応後は通常の精製法、 例えば、 溶媒抽出 ·蒸留 'カラムクロマトグ ラフィ一'液体ク口マトグラフィ一'再結晶などを組み合わせて本発明の部分 ぺプチドを精製単離することができる。 上記方法で得られる部分べプチドが遊 離体である場合は、 公知の方法によって適当な塩に変換することができるし、 逆に塩で得られた場合は、 公知の方法によって遊離体に変換することができる。
1 42 7 3をコードするポリヌクレオチドとしては、 上記した 1 42 73を コードする塩基配列 （DNAまたはRNA、 好ましくは DNA) を含有するも のであればいかなるものであってもよい。 該ポリヌクレオチドとしては、 1 4 2 73をコードする DNA、 mRNA等の RNAであり、 二本鎖であっても、 —本鎖であってもよい。 二本鎖の場合は、 二本鎖 DNA、 二本鎖 RNAまたは DNA： RN Aのハイブリッドでもよい。 一本鎖の場合は、 センス鎖 （すなわ ち、 コード鎖） であっても、 アンチセンス鎖 （すなわち、 非コード鎖） であつ てもよい。
1 4 2 73をコードするポリヌクレオチドを用いて、 例えば、 公知の実験医 学増刊 「新 PCRとその応用」 15(7)、 1997記載の方法またはそれに準じた方法 により、 1 42 73の mRN Aを定量することができる。
1 42 7 3をコードする DNAとしては、 ゲノム DNA、 ゲノム DNAライ ブラリ一、 上記した細胞 ·組織由来の c DNA、 上記した細胞 ·糸且織由来の c DNAライブラリー、 合成 DNAのいずれでもよい。 ライプラリーに使用する ベクターは、 パクテリオファージ、 プラスミド、 コスミ ド、 ファージミドなど いずれであってもよい。 また、 上記した細胞'組織より totalRNAまたは mR N A画分を調製したものを用いて直接 Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (以下、 R T— P C R法と略称する） によって増幅することもできる。 具体的には、 1 42 73をコードする DNAとしては、 例えば、 配列番号： 2、配列番号： 4または配列番号： 9で表わされる塩基配列を含有する D N A、 または配列番号： 2、 配列番号： 4または配列番号： 9で表わされる塩基配列 とハイストリンジェン卜な条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、 配列 番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸配列からな る 142 73と実質的に同質の活性 （例、 リガンド結合活性、 シグナル情報伝 達作用など） を有するレセプター蛋白質をコードする DNAであれば何れのも のでもよい。 配列番号： 2、 配列番号： 4または配列番号： 9で表わされる塩基配列とハ イブリダィズできる DN Aとしては、 例えば、 配列番号： 2、 配列番号： 4ま たは配列番号： 9で表わされる塩基配列と約 85 %以上、 好ましくは約 90 % 以上、 より好ましくは約 95 %以上の相同性を有する塩基配列を含有する DN Aなどが用いられる。
塩基配列の相同性は、 相同性計算アルゴリズム NCB I BLAST (N a t i o n a 1 Ce n t e r f o r B i o t e c nn o l o g y I n f o rma t i o n B a s i c L o c a l A l i g nme n t S e a r c h To o l) を用い、 以下の条件 （期待値 = 10 ；ギヤップを許す；フィ ルタリング =ON；マッチスコア = 1 ； ミスマッチスコア =ー3) にて計算す ることができる。
ハイブリダィゼーシヨンは、 自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、 例 えば、 モレキュラー -クローニング (Molecular Cloning) 2nd (J. Sambrook et al.， Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) に記載の方法などに従って行な うことができる。 また、 市販のライプラリーを使用する場合、 添付の使用説明 書に記載の方法に従って行なうことができる。 より好ましくは、 ハイストリン ジェントな条件に従って行なうことができる。
該ハイストリンジェントな条件とは、 例えば、 ナトリゥム濃度が約 1 9〜 4
0 mM、 好ましくは約 1 9〜 20 mMで、 温度が約 50〜 70 °C、 好ましくは 約 60〜 65 °Cの条件を示す。 特に、 ナトリゥム濃度が約 19 mMで温度が約
65 °Cの場合が最も好ましい。
より具体的には、 配列番号： 1で表わされるァミノ酸配列からなるヒト由来
14273をコードする DNAとしては、 配列番号： 2で表わされる塩基配列 からなる D N Aなどが用 1/ヽられる。
配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列からなるマウス由来 14273をコ ードする DNAとしては、 配列番号： 4で表わされる塩基配列からなる DNA などが用いられる。
配列番号： 8で表わされるアミノ酸配列からなるラット由来 14273をコ 一ドする DNAとしては、 配列番号： 9で表わされる塩基配列からなる DN A などが用いられる。
1 4 2 7 3をコードする D N Aの塩基配列の一部、 または該 D N Aと相補的 な塩基配列の一部を含有してなるポリヌクレオチドとは、 下記の本発明の部分 ぺプチドをコ一ドする D N Aを包含するだけではなく、 R N Aをも包含する意 味で用いられる。
本発明に従えば、 1 4 2 7 3遺伝子の複製または発現を阻害することのでき るアンチセンス ·ポリヌクレオチド (核酸) を、 クローンィヒした、 あるいは決 定された 1 4 2 7 3をコードする D N Aの塩基配列情報に基づき設計し、 合成 しうる。 そうしたポリヌクレオチド （核酸） は、 1 4 2 7 3遺伝子の R NAと ハイブリダイズすることができ、 該 R N Aの合成または機能を阻害することが できる力 あるいは 1 4 2 7 3関連 R N Aとの相互作用を介して 1 4 2 7 3遺 伝子の発現を調節 ·制御することができる。 1 4 2 7 3関連 R N Aの選択され た配列に相補的なポリヌクレオチド、 および 1 4 2 7 3関連 R N Aと特異的に ハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドは、 生体内および生体外で 1 4 2 7 3遺伝子の発現を調節 ·制御するのに有用であり、 また病気などの治 療または診断に有用である。 用語 「対応する」 とは、 遺伝子を含めたヌクレオ チド、 塩基配列または核酸の特定の配列に相同性を有するあるいは相補的であ ることを意味する。 ヌクレオチド、 塩基配列または核酸とペプチド （蛋白質） との間で 「対応する」 とは、 ヌクレオチド （核酸） の配列またはその相補体か ら誘導される指令にあるペプチド （蛋白質） のアミノ酸を通常指している。 1 4 2 7 3遗伝子の 5， 端ヘアピンループ、 5， 端 6—ベースペア · リピート、 5 ' 端非翻訳領域、 ポリペプチド翻訳開始コドン、 蛋白質コード領域、 O R F 翻訳開始コドン、 3， 端非翻訳領域、 3， 端パリンドローム領域、 および 3， 端ヘアピンループは好ましい対象領域として選択しうるが、 1 4 2 7 3遺伝子 内の如何なる領域も対象として選択しうる。
目的核酸と、 対象領域の少なくとも一部に相補的でハイブリダィズすること ができるポリヌクレオチドとの関係は、 対象物と 「アンチセンス」 であるとい うことができる。 了ンチセンス ·ポリヌクレオチドは、 2—デォキシ一 D—リ ボースを含有しているポリデォキシリボヌクレオチド、 D—リボースを含有し ているポリリボヌクレオチド、 プリンまたはピリミジン塩基の N—グリコシド であるその他のタイプのポリヌクレオチド、 あるいは非ヌクレオチド骨格を有 するその他のポリマー （例えば、 市販の蛋白質核酸おょぴ合成配列特異的な核 酸ポリマー） または特殊な結合を含有するその他のポリマー （伹し、 該ポリマ —は D NAや R NA中に見出されるような塩基のペアリングや塩基の付着を許 容する配置をもつヌクレオチドを含有する） などが挙げられる。 それらは、 2 本鎖 D NA、 1本鎖 D NA、 2本鎖 R NA、 1本鎖 R NA、 さらに D NA : R N Aハイプリッドであることができ、 さらに非修飾ポリヌクレオチド （または 非修飾ォリゴヌクレオチド) 、 さらには公知の修飾の付加されたもの、 例えば 当該分野で知られた標識のあるもの、 キャップの付いたもの、 メチルイヒされた もの、 1個以上の天然のヌクレオチドを類縁物で置換したもの、 分子内ヌクレ ォチド修飾のされたもの、 例えば非荷電結合 (例えば、 メチルホスホネート、 ホスホトリエステル、 ホスホルアミデート、 力ルバメートなど） を持つもの、 電荷を有する結合または硫黄含有結合 （例えば、 ホスホロチォエート、 ホスホ 口ジチォエートなど） を持つもの、 例えば蛋白質 （ヌクレアーゼ、 ヌクレア一 ゼ ·インヒビター、 トキシン、 抗体、 シグナルぺプチド、 ポリ一 Lーリジンな ど） や糖 （例えば、 モノサッカライドなど） などの側鎖基を有しているもの、 インタ一カレント化合物 (例えば、 アタリジン、 プソラレンなど) を持つもの、 キレート化合物 （例えば、 金属、 放射活性をもつ金属、 ホウ素、 酸化性の金属 など） を含有するもの、 アルキル化剤を含有するもの、 修飾された結合を持つ もの （例えば、 （¾ァノマー型の核酸など） であってもよい。 ここで 「ヌクレオ シド」 、 「ヌクレオチド」 および 「核酸」 とは、 プリンおょぴピリミジン塩基 を含有するのみでなく、 修飾されたその他の複素環型塩基をもつようなものを 含んでいて良い。こうした修飾物は、メチル化されたプリンおよびピリミジン、 ァシノレ化されたプリンおよびピリミジン、 あるいはその他の複素環を含むもの であってよい。 修飾されたヌクレオチドぉよび修飾されたヌクレオチドはまた 糖部分が修飾されていてよく、 例えば、 1個以上の水酸基がハロゲンと力 脂 肪族基などで置換されていたり、 あるいはエーテル、 ァミンなどの官能基に変 換されていてよい。 本発明のアンチセンス ·ポリヌクレオチド （核酸） は、 R NA、 D NA、 あ るいは修飾された核酸 （R N A、 D NA) である。 修飾された核酸の具体例と しては核酸の硫黄誘導体ゃチォホスフエ一ト誘導体、 そしてポリヌクレオシド ァミドゃオリゴヌクレオシドアミドの分解に抵抗性のものが挙げられるが、 そ れに限定されるものではない。 本発明のアンチセンス核酸は次のような方針で 好ましく設計されうる。 すなわち、 細胞内でのアンチセンス核酸をより安定な ものにする、 アンチセンス核酸の細胞透過性をより高める、 目標とするセンス 鎖に対する親和性をより大きなものにする、 そしてもし毒性があるならアンチ センス核酸の毒性をより小さなものにする。
こうした修飾は当該分野で数多く知られており、 例えば J. Kawakami et al.， Pharm Tech Japan, Vol. 8, pp. 247, 1992； Vol. 8, pp. 395， 1992； S. T. Crooke et al. ed. , Antisense Research and Applications, CRC Press, 1993 などに 開示がある。
本発明のアンチセンス核酵は、 変化せしめられたり、 修飾された糖、 塩基、 結合を含有していて良く、 リボゾーム、 ミクロスフエアのような特殊な形態で 供与されたり、 遺伝子治療により適用されたり、 付加された形態で与えられる ことができうる。 こうして付加形態で用いられるものとしては、 リン酸基骨格 の電荷を中和するように働くポリリジンのようなポリカチオン体、 細胞膜との 相互作用を高めたり、 核酸の取込みを増大せしめるような脂質 (例えば、 ホス ホリピド、 コレステロールなど) といつた疎水性のものが挙げられる。 付カロす るに好ましい脂質としては、 コレステロールやその誘導体 (例えば、 コレステ リルクロ口ホルメート、 コール酸など） が挙げられる。 こう したものは、 核酸 の 3， 端あるいは 5 ' 端に付着させることができ、 塩基、 糖、 分子内ヌクレオ シド結合を介して付着させることができうる。 その他の基としては、 核酸の 3 ， 端あるいは 5 ' 端に特異的に配置されたキャップ用の基で、 ェキソヌクレア ーゼ、 R N a s eなどのヌクレアーゼによる分解を阻止するためのものが挙げ られる。 こうしたキャップ用の基としては、 ポリエチレングリコール、 テトラ エチレンダリコールなどのダリコールをはじめとした当該分野で知られた水酸 基の保護基が挙げられるが、 それに限定されるものではない。 アンチセンス核酸の阻害活性は、 本発明の形質転換体、 本発明の生体内や生 体外の遺伝子発現系、 あるいは G蛋白質共役型レセプター蛋白質の生体内や生 体外の翻訳系を用いて調べることができる。 該核酸それ自体公知の各種の方法 で細胞に適用できる。
本発明のポリヌクレオチドに対する s i R NAは、 1 4 2 7 3をコードする R N Aの一部とそれに相補的な R N Aを含有する二重鎖 R N Aである。 具体的 には、 配列番号： 2 1で表わされる塩基配列からなるセンス鎖と配列番号： 2 2で表わされる塩基配列からなるアンチセンス鎖で構成される s i R NA (実 施例 1 1.の m l 4 i 5 6 1 ) などが用いられる。
s i R N Aは、 公知の方法 （例、 Nature, 411巻， 494頁， 2001年） に準じて、 本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。
1 4 2 7 3をコードする R N Aの一部を含有するリボザィムは、 公知の方法 (例、 TRENDS in Molecular Medicine, 7卷， 221頁， 2001年） に準じて、 本発 明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。 例えば、 公知のリボザィムの配列の一部を 1 4 2 7 3をコードする R N Aの一部に置換 することによって製造することができる。 1 4 2 7 3をコードする R NAの一 部としては、 公知のリボザィムによって切断され得るコンセンサス配列 N U X (式中、 Nはすべての塩基を、 Xは G以外の塩基を示す） の近傍の配列などが 挙げられる。
本発明の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドとしては、 上記した本 発明の部分ペプチドをコードする塩基配列 （D N Aまたは R N A、 好ましくは D NA) を含有するものであればいかなるものであってもよい。 また、 ゲノム D NA、 ゲノム D NAライブラリー、 上記した細胞。組織由来の c D N A、 上 記した細胞，組織由来の c D N Aライプラリー、合成 D N Aのレ、ずれでもよい。 ライブラリーに使用するベクターは、 パクテリオファージ、 プラスミ ド、 コス ミド、 ファージミドなどいずれであってもよい。 また、 上記した細胞 '組織よ り mR N A画分を調製したものを用いて直接 Reverse Transcriptase
Polymerase Chain Reaction (以下、 R T— P C R法と略称する） によって増幅 することもできる。 具体的には、 本発明の部分ペプチドをコードする DNAとしては、 例えば、 (1) 配列番号： 2、 配列番号： 4または配列番号： 9で表わされる塩基配列 を有する DNAの部分塩基配列を有する DNA、 または （2) 配列番号： 2、 配列番号： 4または配列番号： 9で表わされる塩基配列とハイストリンジェン トな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸配列からなる 1 42 7 3と実質的 に同質の活性 （例、 リガンド結合活性、 シグナル情報伝達作用など） を有する レセプター蛋白質をコードする DN Aの部分塩基配列を有する DN Aなどが用 いられる。
配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされる塩基配列とハ イブリダィズできる DN Aとしては、 例えば、 配列番号： 1、 配列番号： 3ま たは配列番号： 8で表わされる塩基配列と約 8 5 %以上、 好ましくは約 90 % 以上、 より好ましくは約 9 5 %以上の相同性を有する塩基配列を含有する D N Aなどが用いられる。
塩基配列の相同性は、 相同性計算アルゴリズム NCB I BLAST (N a t i o n a 1 C e n t e r f o r B i o t e c hn o l o g y I n r o rma t i o n B a s i c L o c a l A l i g nme n t S e a r c h To o l ) を用い、 以下の条件 （期待値- 1 0 ；ギヤップを許す；フィ ルタリング =ON ；マッチスコア = 1 ； ミスマッチスコア =_3) にて計算す ることができる。
ハイブリダィゼーションは、 自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、 例 ば、 モレキュラー 'クロ一ニンク (Molecular Cloning) 2nd (J. Sambrook et al. , Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) に記載の方法などに従って行な うことができる。 また、 市販のライブラリーを使用する場合、 添付の使用説明 書に記载の方法に従って行なうことができる。 より好ましくは、 ハイストリン ジェントな条件に従って行なうことができる。
該ハイストリンジェントな条件とは、 例えば、 ナトリウム濃度が約 1 9〜 4 0 mM、 好ましくは約 1 9〜 20 mMで、 温度が約 50〜 70 °C、 好ましくは 約 60〜 6 5 °Cの条件を示す。 特に、 ナトリゥム濃度が約 1 9 mMで温度が約 65 °Cの場合が最も好ましい。
14273またはその部分べプチド （以下、 包括的に 14273と略記する 場合がある） を完全にコードする DNAのクローユングの手段としては、 14 273の部分塩基配列を有する合成 DNAプライマーを用いて PCR法によつ て増幅するか、 または適当なベクターに組み込んだ DNAを 14273の一部 あるいは全領域をコードする DNA断片もしくは合成 DNAを用いて標識した ものとのハイブリダィゼーシヨンによって選別することができる。 ハイブリダ ィゼーションの方法は、例えば、モレキュラー'ク口一二ング (Molecular Cloning ) 2nd (J. Sambrook et al. , Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) に 载 の方法などに従って行なうことができる。 また、 市販のライブラリーを使用す る場合、 添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。
DNAの塩基配列の変換は、 PCRや公知のキット、 例えば、 Mu t a n™ - s u e r Ex p r e s s Km (宝酒造 （株） ） 、 Mu t a nTM— K (宝 酒造 （株） ） などを用いて、 ODA—LA PCR法、 Ga p p e d d u p 1 e x法、 Kunk e 1法などの自体公知の方法あるいはそれらに準じる方法に 従って行なうことができる。
クローン化された 14273をコードする DNAは目的によりそのまま、 ま たは所望により制限酵素で消化したり、 リンカ一を付加したりして使用するこ とができる。 該 DNAはその 5， 末端側に翻訳開始コドンとしての ATGを有 し、 また 3' 末端側には翻訳終止コドンとしての TAA、 TGAまたは TAG を有していてもよい。 これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、 適当な合 成 DN Aアダプターを用いて付加することもできる。
14273の発現ベクターは、 例えば、 （ィ） 14273をコードする DN Aから目的とする DNA断片を切り出し、 （口） 該 D N A断片を適当な発現べ クタ一中のプロモーターの下流に連結することにより製造することができる。 ベクターとしては、 大腸菌由来のプラスミ ド （例、 pBR322、 p BR 3 25、 pUC 12、 pUC 13) 、 枯草菌由来のプラスミド （例、 pUB 1 1 0、 pTP 5、 p C 194) 、 酵母由来プラスミド （例、 p SH19、 p SH 1 5) 、 えファージなどのバクテリオファージ、 レトロウイルス、 ワクシニア ウィルス、 バキュロウィルスなどの動物ウィルスなどの他、 pAl— l l、 p XT 1、 R c/CMV, pRc/RSV、 p c D N A I ZN e oなどが用い られる。
本発明で用いられるプロモーターとしては、 遺伝子の発現に用いる宿主に対 応して適切なプロモーターであればいかなるものでもよい。 例えば、 動物細胞 を宿主として用いる場合は、 SRaプロモーター、 SV40プロモーター、 L TRプロモーター、 CMVプロモーター、 HSV-TKプロモーターなどが挙げ られる。
これらのうち、 CMVプロモーター、 S R αプロモーターなどを用いるのが 好ましい。 宿主がェシエリヒア属菌である場合は、 t r pプロモーター、 l a cプロモーター、 r e cAプロモーター、 i PLプロモーター、 l p pプロモー ターなどが、 宿主がバチルス属菌である場合は、 S PO 1プロモーター、 SP 02プロモーター、 p e n Pプロモーターなど、 宿主が酵母である場合は、 P HO 5プロモーター、 PGKプロモーター、 GAPプロモーター、 ADHプロ モーターなどが好ましい。 宿主が昆虫細胞である場合は、 ポリヘドリンプロモ 一ター、 P 10プロモーターなどが好ましい。
発現ベクターには、 以上の他に、 所望によりェンハンサー、 スプライシンク' シグナル、 ポリ A付加シグナル、選択マーカー、 S V40複製オリジン (以下、 S V40 o r i と略称する場合がある） などを含有しているものを用いること ができる。 選択マーカーとしては、 例えば、 ジヒ ドロ葉酸還元酵素 （以下、 d h f rと略称する場合がある） 遺伝子 〔メソトレキセ一ト (MTX) 耐性〕 、 アンピシリン耐性遺伝子 （以下、 Amp rと略称する場合がある） 、 ネオマイシ ン耐性遺伝子 （以下、 Ne o rと略称する場合がある、 G418耐性） 等が挙げ られる。 特に、 CHO (dli f r一） 細胞を用いて d h f r遺伝子を選択マーカ —として使用する場合、 目的遗伝子をチミジンを含まなレ、培地によっても選択 できる。
また、 必要に応じて、 宿主に合ったシグナル配列を、 本発明のレセプター蛋 白質の N端末側に付加する。 宿主がェシェリヒァ属菌である場合は、 P h o A 'シグナル配列、 Omp A ·シグナル配列などが、 宿主がバチルス属菌である 場合は、 α—アミラーゼ'シグナル配列、 サブチリシン ·シグナル配列などが、 宿主が酵母である場合は、 MFひ ·シグナル配列、 SUC 2 ·シグナル配列な ど、 宿主が動物細胞である場合には、 インシュリン 'シグナル配列、 α—イン ターフェロン ·シグナル配列、 抗体分子 ·シグナル配列などがそれぞれ利用で きる。
このようにして構築された 14273をコードする DNAを含有するべクタ 一を用いて、 形質転換体を製造することができる。
宿主としては、 例えば、 ェシエリヒア属菌、 バチルス属菌、 酵母、 昆虫細胞、 昆虫、 動物細胞などが用いられる。
ェシェリヒア属菌の具体例としては、 ェシェリヒア 'コリ (Escherichia coli ) K 1 2 · DH 1 〔プロシージングズ ·ォブ ·ザ ·ナショナル ·アカデミー · 才ブ ·サイェンシィズ ·才ブ ·ザ ·ユーエスエー (Proc. Natl. Acad. Sci. U S A) , 6 0卷， 1 60 (1 96 8)〕 ， JM1 03 〔ヌクイレック ' ァシッズ • リサーチ （Nucleic Acids Research) ， 9卷， 309 (1 98 1)〕 ， J A2 2 1 〔ジャーナノレ ·ォブ ·モレキユラ一 · / ィォロシー (Journal of Molecular Biology) , 1 20巻, 5 1 7 (1 9 78)) ， ΗΒ 1 0 1 〔ジャーナル ·オフ、、 · モレキュラー ·バイオロジー， 4 1卷， 459 (1 9 6 9)〕 ， C 600 〔ジェ ネテイツタス （Genetics) , 3 9卷， 440 (1 9 54)〕 などが用いられる。 ノ チ /レス属菌としては、 例えば、 バチノレス 'ズブチノレス （Bacillus subtilis ) MI 1 1 4 〔ジーン， 24巻， 255 (1 98 3)〕 ， 20 7— 2 1 〔ジャー ナル ·ォブ ·バイオケミストリー (Journal of Biochemistry) ， 9 5卷, 8 7 (1 984)〕 などが用いられる。
酵母としては、 例えば、 サッカロマイセス セレビシェ (Saccharomyces cerevisiae) AH 22, AH22R一， NA 8 7 - 1 1 A, DKD— 5D、 20 B— 1 2、 シゾサッカロマイセス ボンべ (Schizosaccharomyces porabe) N C YC 1 9 1 3, NCYC 203 6、 ピキア パストリス (Pichia pastoris) な どが用いられる。
昆虫細胞としては、 例えば、 ウィルスが Ac NPVの場合は、 夜盗蛾の幼虫 由来株化細胞 （Spodoptera frugiperda cell ； S f 細胞） 、 Trichoplusia の 中腸由来の MG l細胞、 Trichoplusia niの卵由来の High Five™細胞、 Mamestra brassicae由来の細胞または Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。 ゥ ィルスが BmNP Vの場合は、 蚕由来株化細胞 （Bombyx mori N； BmN細胞） などが用いられる。 該 S f 細胞としては、 例えば、 S f 9細胞 （ATCC CRL1711 ) 、 S f 2 1細胞 （以上、 Vaughn, J.L.ら、 イン ' ヴイボ （In Vivo) ，13, 213-217, (1977)) などが用いられる。
昆虫としては、 例えば、 カイコの幼虫などが用いられる 〔前田ら、 ネィチヤ 一 (Nature) ， 3 1 5卷， 5 92 (1 98 5)〕 。
動物細胞としては、 例えば、 サル細胞 COS— 7， Ve r o, チャイニーズ ハムスター細胞 CH〇 （以下、 CHO細胞と略記） 、 d h f r遺伝子欠損チヤ ィニーズハムスター細胞 CHO (以下、 CHO (d h f r -) 細胞と略記） 、 マ ウス L細胞, マウス A t T— 20、 マウスミエローマ細胞、 ラット GH3、 ヒ ト FL細胞、 ヒ ト HEK2 9 3細胞などが用いられる。
ェシェリヒア属菌を形質転換するには、 例えば、 プロシージングズ ·ォブ · ザ ·ナショナル ·アカデミー ·ォブ ·サイェンジィズ ·オフ、' ·ザ ·ユーエスェ 一 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA) , 6 9卷， 2 1 1 0 (1 9 72) やジーン (Gene) , 1 7巻， 1 0 7 (1 982) などに記載の方法に従って行なうこと ができる。
バチルス属菌を形質転換するには、 例えば、 モレキュラー 'アンド 'ジエネ ラル'ジェネティックス (Molecular & General Genetics) , 1 68卷， 1 1 1 (1 9 7 9)などに記載の方法に従って行なうことができる。
酵母を形質転換するには、例えば、メッソズ'イン'ェンザィモ口ジー (Methods in Enzymology) , 1 94卷, 1 8 2- 1 8 7 (1 9 9 1) 、 プロシージングズ' 'ォブ ·ザ ·ナショナル 'アカデミー。ォブ ·サイェンシィズ ·ォブ 'ザ *ュ —エスエー （Proc. Natl. Acad. Sci, USA) ， 7 5卷， 1 9 29 (1 9 7 8) な どに記載の方法に従つて行なうことができる。
昆虫細胞または昆虫を形質転換するには、 例えば、 バイオ テクノロジー （ Bio/Technology) ， 6， 47- 55 (1988)などに記載の方法に従って行なうことがで さる。 動物細胞を形質転換するには、 例えば、 細胞工学別冊 8新細胞工学実験プロ トコーノレ. 2 6 3 - 2 6 7 ( 1 9 9 5 ) (秀潤社発行）、 ヴィロロジー（Virology ) ， 5 2卷， 4 5 6 ( 1 9 7 3 )に記載の方法に従って行なうことができる。 このようにして、 1 4 2 7 3をコードする D N Aを含有する発現ベクターで 形質転換された形質転換体が得られる。
宿主がェシエリヒア属菌、 バチルス属菌である形質転換体を培養する際、 培 養に使用される培地としては液体培地が適当であり、 その中には該形質転換体 の生育に必要な炭素 ¾!、 窒素源、 無機物その他が含有せしめられる。 炭素源と しては、 例えば、 グルコース、 デキストリン、 可溶性澱粉、 ショ糖など、 窒素 源としては、 例えば、 アンモニゥム塩類、硝酸塩類、 コーンスチープ'リカー、 ペプトン、 カゼイン、 肉エキス、 大豆粕、 バレイショ抽出液などの無機または 有機物質、 無機物としては、 例えば、 塩化カルシウム、 Vン酸ニ水素ナトリゥ ム、 塩化マグネシウムなどが挙げられる。 また、 酵母エキス、 ビタミン類、 生 長促進因子などを添加してもよい。 培地の p Hは約 5〜 8が望ましい。
ェシエリヒア属菌を培養する際の培地としては、 例えば、 グルコース、 カザ ミノ酸を含む M 9培地 〔ミラー （Miller) , ジャーナル'ォブ ·ェクスぺリメ ンッ ·イン 'モレキュラー ·シエネティックス (Journal of Experiments in Molecular Genetics) ， 4 3 1—4 3 3， Cold Spring Harbor Laboratory, New ■ York 1 9 7 2〕 が好ましい。 ここに必要によりプロモーターを効率よく働力せ るために、 例えば、 3 β一インドリル ァクリル酸のような薬剤を加えること ができる。
宿主がェシェリヒァ属菌の場合、 培養は通常約 1 5〜 4 3 °Cで約 3〜2 4時 間行ない、 必要により、 通気や撹拌を加えることもできる。
宿主がバチルス属菌の場合、 培養は通常約 3 0〜 4 0 °Cで約 6〜 2 4時間行 ない、 必要により通気や撹拌を加えることもできる。
宿主が酵母である形質転換体を培養する際、 培地としては、 例えば、 バーク ホールダー （Burkholder) 最小培地 〔Bostian， K. L. ら、 プロシージングズ' ォブ ·ザ ·ナショナル ·アカデミー ·ォプ ·サイェンシィズ ·ォブ ·ザ · ユー エスエー （proc. Natl. Acad. Sci. USA) , 7 7卷， 4 5 0 5 ( 1 9 8 0 )〕 や 0. 5%カザミノ酸を含有する SD培地 〔Bitter， G. A. ら、 プロシージングズ .ォブ .ザ .ナショナル ·アカデミー ·ォブ ·サイェンシィズ 'ォブ 'ザ 'ュ 一エスエー （proc. Natl. Acad. Sci. USA). , 8 1卷， 5 3 30 (1 984) ] が挙げられる。 培地の pHは約 5〜8に調整するのが好ましい。 培養は通常 約 20〜 3 5 °Cで約 24〜 72時間行ない、 必要に応じて通気や撹拌を加える。 宿主が昆虫細胞または昆虫である形質転換体を培養する際、 培地としては、 Grace' s Insect Medium (Grace, T. C. C. , ネイチヤー （Nature) ， 195， 788(1962) ) に非動化した 1 0%ゥシ血清等の添加物を適宜加えたものなどが用いられる。 培地の pHは約 6. 2〜6. 4に調整するのが好ましレ、。 培養は通常約 2 7 °C で約 3〜 5日間行ない、 必要に応じて通気や撹拌を加える。
宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、 培地としては、 例えば、 約 5〜20%の胎児牛血清を含む MEM培地 〔サイエンス （Science) , 1 22卷 ， 50 1 (1 9 5 2)〕 ， DMEM培地 〔ヴィロロジー (Virology) , 8巻， 3 96 (1 9 5 9)] , RPMI 1 640培地 〔ジャーナル ·ォブ ·ザ ·アメリカ ン ·メティカル ·了ソシェーション (.The Journal of the American Medical Association) 1 9 9巻， 5 1 9 (1 96 7)〕 ， 1 9 9培地 〔プロシージング · ォプ.ザ.ソサイエティ ·フォー.ザ.バイオロジカノレ.メディスン (Proceeding of the Society for the Biological Medicine) , 7 3卷， 1 (1 9 50)J な どが用いられる。 pHは約 6〜8であるのが好ましい。 培養は通常約 30〜4 0°Cで約 1 5〜60時間行ない、 必要に応じて通気や撹拌を加える。
以上のようにして、 形質転換体の細胞内、 細胞膜または細胞外に 1 427 3 を生成せしめることができる。
上記培養物から 1 42 73を分離精製するには、 例えば、 下記の方法により 行なうことができる。
142 73を培養菌体あるいは細胞から抽出するに際しては、 培養後、 公知 の方法で菌体あるいは細胞を集め、 これを適当な緩種 ί液に懸濁し、 超音波、 リ ゾチームおよび/または凍結融解などによつて菌体ぁるいは細胞を破壊したの ち、 遠心分離やろ過により 142 7 3の粗抽出液を得る方法などが適宜用いら れる。 緩衝液の中に尿素や塩酸グァュジンなどの蛋白質変性剤や、 トリ トン X - 1 0 0 TMなどの界面活性剤が含まれていてもよい。 培養液中に 1 4 2 7 3が 分泌される場合には、 培養終了後、 それ自体公知の方法で菌体あるいは細胞と 上清とを分離し、 上清を集める。
このようにして得られた培養上清、 あるいは抽出液中に含まれる 1 4 2 7 3 の精製は、自体公知の分離 ·精製法を適切に組み合わせて行なうことができる。 これらの公知の分離、 精製法としては、 塩析ゃ溶媒沈澱法などの溶解度を利用 する方法、 透析法、 限外ろ過法、 ゲルろ過法、 および S D S—ポリアクリルァ ミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法、 イオン交換ク 口マトグラフィーなどの荷電の差を利用する方法、 ァフイエティークロマトグ ラフィ一などの特異的新和性を利用する方法、 逆相高速液体クロマトグラフィ 一などの疎水性の差を利用する方法、 等電点電気泳動法などの等電点の差を利 用する方法などが用いられる。
かくして得られる 1 4 2 7 3が遊離体で得られた場合には、 自体公知の方法 あるいはそれに準じる方法によって塩に変換することができ、 逆に塩で得られ た場合には自体公知の方法あるいはそれに準じる方法により、 遊離体または他 の塩に変換することができる。
なお、 組換え体が産生する 1 4 2 7 3を、 精製前または精製後に適当な蛋白 質修飾酵素を作用させることにより、 任意に修飾を加えたり、 ポリペプチドを 部分的に除去することもできる。 蛋白質修飾酵素としては、 例えば、 トリプシ ン、 キモトリプシン、 アルギ二/レエンドぺプチダーゼ、 プロティンキナーゼ、 ダリコシダーゼなどが用いられる。
かくして生成する 1 4 2 7 3の活性は、 標識したリガンドとの結合実験およ ぴ特異抗体を用いたェンザィムィムノアッセィなどにより測定することができ る。
1 4 2 7 3に対する抗体は、 1 4 2 7 3を認識し得る抗体であれば、 ポリク 口ーナル抗体、 モノクローナル抗体の何れであってもよい。
1 4 2 7 3に対する抗体は、 1 4 2 7 3を抗原として用い、 自体公知の抗体 または抗血清の製造法に従つて製造することができる。
〔モノクローナル抗体の作製〕 (a) モノクローナル抗体産生細胞の作製
14273は、 哺乳動物に対して投与により抗体産生が可能な部位にそれ自 体あるいは担体、 希釈剤とともに投与される。 投与に際して抗体産生能を高め るため、 完全フロイントアジュバントゃ不完全フロイントアジュパントを投与 してもよい。投与は通常 2〜 6週毎に 1回ずつ、計 2〜10回程度行なわれる。 用いられる哺乳動物としては、 例えば、 サル、 ゥサギ、 ィヌ、 モルモット、 マ ウス、 ラット、 ヒッジ、 ャギが挙げられるが、 マウスおよぴラットが好ましく 用いられる。
モノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、 抗原を免疫された温血動物、 例えば、 マウスから抗体価の認められた個体を選択し最終免疫の 2〜 5日後に 脾臓またはリンパ節を採取し、 それらに含まれる抗体産生細胞を骨髄腫細胞と 融合させることにより、 モノクローナル抗体産生ハイプリ ドーマを調製するこ とができる。 抗血清中の抗体価の測定は、 例えば、 後記の標識化レセプター蛋 白質と抗血清とを反応させたのち、 抗体に結合した標識剤の活性を測定するこ とにより行なうことができる。 融合操作は既知の方法、 例えば、 ケーラーとミ ルスタインの方法 〔ネイチヤー （Nature) 、 256卷、 495頁 （1 975年 ) 〕 に従い実施することができる。 融合促進剤としては、 例えば、 ポリエチレ ングリコール (PEG) やセンダイウィルスなどが挙げられるが、 好ましくは PEGが用いられる。
骨髄腫細胞としては、 例えば、 N S _ 1、 P 3 U 1、 S P 2/0などが挙げ られるが、 P 3U1が好ましく用いられる。 用いられる抗体産生細胞 （脾臓細 胞） 数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は 1 1〜20 ： 1程度であり、 PE G (好ましくは、 PEG1000〜PEG6000) が 10〜 80 %程度の濃 度で添加され、 約 20〜 40 °C、 好ましくは約 30〜 37 °Cで約 1〜 10分間 インキュベートすることにより効率よく細胞融合を実施できる。
モノクローナル抗体産生ハイブリ ドーマのスクリーユングには種々の方法が 使用できるが、 例えば、 レセプター蛋白質の抗原を直接あるいは担体とともに 吸着させた固相（例、マイクロプレート） にハイプリ ドーマ培養上清を添加し、 次に放射性物質や酵素などで標識した抗免疫グロブリン抗体 （細胞融合に用い られる細胞がマウスの場合、 抗マウス免疫グロブリン抗体が用いられる） また はプロティン Aを加え、 固相に結合したモノクローナル抗体を検出する方法、 抗免疫グロプリン抗体またはプロテイン Aを吸着させた固相にハイプリ ドーマ 培養上清を添加し、 放射性物質や酵素などで標識したレセプタ一蛋白質を加え、 固相に結合したモノクローナル抗体を検出する方法などが挙げられる。
モノクローナル抗 の選別は、 自体公知あるいはそれに準じる方法に従って 行なうことができるが、 通常は HAT (ヒポキサンチン、 アミノプテリン、 チ ミジン） を添カ卩した動物細胞用培地などで行なうことができる。 選別おょぴ育 種用培地としては、 ハイプリ ドーマが生育できるものならばどのような培地を 用いても良い。 例えば、 1〜 2 0 %、 好ましくは 1 0〜 2 0 %の牛胎児血清を 含む R P M I 1 6 4 0培地、 1〜 1 0 %の牛胎児血清を含む G I T培地 （和光 純薬工業 （株） ） またはハイプリ ドーマ培養用無血清培地 （S F M—1 0 1、 日水製薬 （株） ） などを用いることができる。 培養温度は、通常 2 0〜4 0 °C、 好ましくは約 3 7 °Cである。 培養時間は、 通常 5日〜 3週間、 好ましくは 1週 間〜 2週間である。 培養は、 通常 5 %炭酸ガス下で行なうことができる。 ハイ プリ ドーマ培養上清の抗体価は、 上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして 測定できる。
( b ) モノクローナル抗体の精製
モノクローナル抗体の分離精製は、 通常のポリクローナル抗体の分離精製と 同様に免疫グロブリンの分離精製法 〔例、 塩析法、 アルコール沈殿法、 等電点 沈殿法、 電気泳動法、 イオン交換体 (例、 D E A E ) による吸脱着法、 超遠心 法、 ゲルろ過法、 抗原結合固相またはプロテイン Aあるいはプロテイン Gなど の活性吸着剤により抗体のみを採取し、 結合を解離させて抗体を得る特異的精 製法〕 に従つて行なうことができる。
〔ポリクローナル抗体の作製〕
本発明のポリクローナル抗体は、 それ自体公知あるいはそれに準じる方法に したがって製造することができる。 例えば、 免疫抗原 ( 1 4 2 7 3抗原) とキ ャリア一蛋白質との複合体をつくり、 上記のモノクローナル抗体の製造法と同 様に哺乳動物に免疫を行ない、 該免疫動物から 1 4 2 7 3に対する抗体含有物 を採取して、 抗体の分離精製を行なうことにより製造できる。
哺乳動物を免疫するために用いられる免疫抗原とキャリアー蛋白質との複合 体に関し、 キヤリァー蛋白質の種類おょぴキヤリア一とハプテンとの混合比は、 キヤリァ一に架橋させて免疫したハプテンに対して抗体が効率良くできれば、 どのようなものをどのような比率で架橋させてもよいが、 例えば、 ゥシ血清ァ ノレブミン、 ゥシサイログロブリン、 キーホール ' リンペット 'へモシァニン等 を重量比でハプテン 1に対し、 約 0 · 1〜 20、 好ましくは約 1〜 5の割合で力 プルさせる方法が用いられる。
また、 ハプテンとキャリアーの力プリングには、 種々の縮合剤を用いること ができるが、ダルタルアルデヒドゃカルボジィミド、マレイミド活性エステル、 チオール基、 ジチオビリジル基を含有する活性エステル試薬等が用いられる。 縮合生成物は、 温血動物に対して、 抗体産生が可能な部位にそれ自体あるい は担体、 希釈剤とともに投与される。 投与に際して抗体産生能を高めるため、 完全フロイントアジュバントゃ不完全フロイントアジュバントを投与してもよ い。 投与は、 通常約 2〜 6週毎に 1回ずつ、 計約 3〜 1 0回程度行なうことが できる。
ポリクローナル抗体は、上記の方法で免疫された哺乳動物の血液、腹水など、 好ましくは血液から採取することができる。
抗血清中のポリクローナル抗体価の測定は、 上記の血清中の抗体価の測定と 同様にして測定できる。 ポリクローナル抗体の分離精製は、 上記のモノクロ一 ナル抗体の分離精製と同様の免疫グロプリンの分離精製法に従って行なうこと ができる。
1 42 7 3は下垂体、 脂肪組織、 大腸癌細胞などで高発現しており、 1 42 73のリガンドの 1つは脂肪酸またはその塩である。 脂肪酸としては、 ォレイ ン酸 ( o 1 e i c a c i d) Λ ノヽレミ トレイン酸 ( P a 1 m i t ο 1 e i c a c i d) N リノ一ノレ酸 （l i n o l e i c a c i d) , ひ一リノレン酸 ( a— I i n o l e n i c a c i d) 、 γ—リノレン酸 、γ— 1 i η ο 1 e η i c a c i cU 、 ァラキドン酸 、a r a c h i d o n i c a c i d) 、 ト コサへキサェン酸 (d o c o s a h e x a e n o i c a c i d, DHA; な どが用いられ、 なかでもパルミ トレイン酸 （P a l m i t o l e i c a c i d) 、 リノーノレ酸 （l i n o l e i c a c i d) 、 α—リノレン酸 （α— 1 i n o l e n i c a c i d) 、 γ—リノレン酸 (y— l i n o l e n i c a c i d) などが好ましい。
脂肪酸の塩としては、 酸 （例、 無機酸、 有機酸など） や塩基 （例、 ナトリム、 力リゥムなどのアルカリ金属；カルシウムなどのアルカリ土類金属） などとの 塩が用いられ、 とりわけ塩基が好ましい。
以下、 本願明細書では、 脂肪酸またはその塩を単に 「脂肪酸」 と略記する。 さらに、 14273はストレスを負荷した時に、下垂体で発現量が上昇する。 従って、 14273、 14273をコードする DNA (以下、 本発明の DN Aと略記する場合がある) 、 14273に対する抗体 (以下、 本発明の抗体と 略記する場合がある) 、 本発明の DN Aに対するアンチセンス DN A (以下、 本発明のアンチセンス DNAと略記する場合がある） は、 以下の用途を有して いる。
(1) 14273の機能不全に関連する疾患の予防 ·治療剤
例えば、 生体内において 14273が減少しているために、 リガンドである 脂肪酸の生理作用が期待できない （14273の欠乏症） 患者がいる場合に、 a) 14273を該患者に投与し 14273の量を補充したり、 b) (ィ） 1 4273をコードする DNAを該患者に投与し発現させることによって、 ある いは （口） 対象となる細胞に 14273をコードする DNAを揷入し発現させ た後に、 該細胞を該患者に移植することなどによって、 患者の体内における 1 4273の量を増加させ、 リガンドの作用を充分に発揮させることができる。 具体的には、 14273または本発明の DN Aは、 例えば、 脂肪細胞からの グリセロール生成調節作用、 血中ダルセロール調節作用、 脂肪分解調節作用、 インスリン抵抗調節作用、 ス トレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （ACT H) 分泌調節作用 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセロール生成抑制作用、 血中グルセロール低下作用、 脂肪分解抑制作用、 インスリン抵抗抑制作用、 ス トレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌抑制作用） などを有 しているので、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成調節剤、 血中ダルセ口ール調 節剤、 脂肪分解調節剤、 インスリン抵抗調節剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺 激ホルモン （ACTH) 分泌調節剤、 脂肪分解調節剤 （好ましくは、 脂肪細胞 からのグリセロール生成抑制剤、 血中ダルセロール低下剤、 脂肪分解抑制剤、 インスリン抵抗抑制剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌抑制剤） などとして有用である。
また、 14273または本発明の DNAは、 例えば、 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高 脂血症 （例、 高 LDL-コレステロール血症、 高リポタンパク血症および高トリ グリセリ ド血症、 低 HDL-コレステロール血症） 、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗 塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低 下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン 血症、 抗利尿ホルモン不適合分泌症候群） 、 癌'（例えば、 大腸癌） 、 記憶学習 障害、 瞎臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌 性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 FFA症、高中性脂肪症、脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモン （例、 コレシスト キニン (CCK) 、 ガス トリックインヒビトリーぺプチド (G I P) 、 ガスト リン、 グルカゴン様ぺプチドー 1 (GLP—1) 、 ソマトスタチン、 ガストリ ン放出ペプチド、 セクレチン、 バソアクティブィンテスティナルぺプチド、 モ チリン、 サブスタンス P、 ニューロテンシン、 ガラニン、 ェユーロペプチド Y、 エンケフアリン類、 ペプチド ΥΥなど） の分泌障害、 循環器疾患などの疾患 （ 特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞） の予防 ·治療 剤またはス トレス調節剤として使用することができる。
また、 14273または本努明の DN Αは、 例えば、 動脈硬化、 動脈硬化性 疾患おょぴそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬化症、 末梢動脈閉塞 症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的冠動脈形成術 (PTCA) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化等 を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラ タネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 Ta n g i e r病など 〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変おょぴそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈疾 患 （C HD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代 異常症およびその続発症などの疾患の 予防 ·治療剤として使用することができる。
さらに、 1 4 2 7 3または本発明の D NAは、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤として、例えば、 A C T H産生腫瘍、 クッシング病、感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 （例、 中心性肥満、 浮腫、 高血圧、 月 経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨粗しょう症、 出血性素 因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血症、 高コレステロール血、 耐 糖能異常、 白血球増多症） 、 副腎皮質の萎縮などの疾患の予防 ·治療剤として 使用することができる。
脂肪酸は 1 4 2 3 7に結合して、 例えば、 脂肪細胞からのグリセロール生成 調節作用、 血中ダルセロール調節作用、 脂肪分解調節作用、 インスリン抵抗調 節作用、 ストレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節作用 (好ましくは、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成抑制作用、 血中ダルセ口ール 低下作用、 脂肪分解抑制作用、 インスリン抵抗抑制作用、 ストレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制作用） などを示すので、 脂肪細胞 からのグリセ口ール生成調節剤、 血中ダルセ口ール調節剤、 脂肪分解調節剤、 インスリン抵抗調節剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節剤 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセロール生成抑制剤、 血中ダル セロール低下剤、 脂肪分解抑制剤、 インスリン抵抗抑制剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤） などとして有用である。
また、 脂肪酸は、 1 4 2 7 3のシグナル伝達作用増強剤、 または該シグナル 伝達作用増強作用に基づいて、 例えば、 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァ シドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬 化、 狭心症、 心筋梗塞、性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、下垂体性小人症、尿崩症、先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸 癌） 、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、低血糖症、 インスリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂 肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモン （ 例、 コレシストキニン （CCK) 、 ガストリックインヒビトリーペプチド （G I P) 、 ガストリン、 グルカゴン様ペプチド一 1 (GLP— 1) 、 ソマトスタ チン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、 バソアクティブインテスティナ ノレペプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニューロテンシン、 ガラニン、 ニュ 一口ペプチド γ、 エンケフアリン類、 ペプチド ΥΥなど） の分泌障害、 循環器 疾患などの疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗 塞） の予防 ·治療剤またはストレス調節剤として使用することができる。
また、 脂肪酸は、 例えば、 動脈硬化、 動脈硬化性疾患おょぴそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定 狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的冠動脈形成術 (PTCA) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化等を含む豳脈硬化症、 間歇性 跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壌疽、 糸球体硬化症、 腎症、 Ta n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化 血管病変およびそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （CHD) 、 脳虚血など 〕 、 脂質代謝異常症およびその続発症などの疾患の予防 ·治療剤として使用す ることができる。
さらに、 脂肪酸は、 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌抑制剤として、 例えば、 ACTH産生腫瘍、 クッシング病、感染症、続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 タツ シング症候群 （例、 中心性肥満、 浮腫、 高血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨粗しょう症、 出血性素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋 力低下、 低カリゥム血症、 高コレステロール血、耐糖能異常、 白血球増多症） 、 副腎皮質の萎縮などの疾患の予防 ·治療剤として使用することができる。
糖尿病には、 インスリン依存型 ( I型) 糖尿病、 インスリン非依存型 (II型 ) 糖尿病が含まれる。
脂肪酸または 14273を上記医薬として使用する場合は、 常套手段に従つ て製剤化することができる。
一方、 本発明の DNAを上記医薬として使用する場合は、 本発明の DNAを 単独あるいはレトロウイルスベクター、 アデノウイルスベクター、 アデノウィ ルスァソシエーテッドウィルスべクターなどの適当なべクターに挿入した後、 常套手段に従って実施することができる。 本発明の D N Aは、 そのままで、 あ るいは摂取促進のための補助剤とともに、 遺伝子銃やハイドロゲルカテーテル のようなカテーテルによって投与できる。
例えば、 a ) 1 4 2 7 3または b ) 本発明の D N Aは、 必要に応じて糖衣を 施した錠剤、 カプセル剤、 エリキシル剤、 マイクロカプセル剤などとして経口 的に、 あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、 または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。 例えば、 a ) 1 4 2 7 3または b )本発明の D N Aを生理学的に認められる公知の担体、香味剤、 賦形剤、 べヒクル、 防腐剤、 安定剤、 結合剤などとともに一般に認められた製 剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができ る。 これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られる ようにするものである。
錠剤、 カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、 例えば、 ゼ ラチン、 コーンスターチ、 トラガント、 ァラビアゴムのような結合剤、 結晶性 セルロースのような賦形剤、 コーンスターチ、 ゼラチン、 アルギン酸などのよ うな膨化剤、 ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、 ショ糖、 乳糖または サッカリンのような甘味剤、 ペパーミント、 ァカモノ油またはチェリーのよう な香味剤などが用いられる。 調剤単位形態がカプセルである場合には、 上記タ ィプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。 注射のた めの無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、 胡麻油、 椰子油な どのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施 に従って処方することができる。 注射用の水性液としては、 例えば、 生理食塩 水、 ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液 （例えば、 D—ソルビトール、 D 一マンニトール、 塩ィ匕ナトリウムなど） などが用いられ、 適当な溶解補助剤、 例えば、 アルコール (例、 エタノール) 、 ポリアルコール (例、 プロピレンク" リコール、 ポリエチレングリコール） 、 非イオン性界面活性剤 （例、 ポリソル ペート 8 0 TM、 H C O— 5 0 ) などと併用してもよい。 油性液としては、 例え ば、 ゴマ油、 大豆油などが用いられ、 溶解補助剤である安息香酸ベンジル、 ベ ンジルアルコールなどと併用してもよレ、。
また、 上記医薬は、 例えば、 緩衝剤 （例えば、 リン酸塩緩衝液、 酢酸ナトリ ゥム緩衝液） 、 無痛化剤 （例えば、 塩化ベンザルコニゥム、 塩酸プロ力インな ど） 、 安定剤 （例えば、 ヒト血清アルブミン、 ポリエチレングリコールなど） 、 保存剤 （例えば、 ベンジルアルコール、 フエノールなど） 、 酸化防止剤などと 配合してもよい。 調製された注射液は通常、 適当なアンプルに充填される。 このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトゃ哺 乳動物 (例えば、 ラット、 マウス、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対して投与することができる。
14273の投与量は、 投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などにより差 異はあるが、 経口投与の場合、 一般的に例えば、 糖尿病患者 （体重 60 k gと して） においては、 一日につき約 0. 1〜10 Omg、 好ましくは約 1. 0〜5 0mg、 より好ましくは約 1. 0〜20mgである。 非経口的に投与する場合 は、 その 1回投与量は投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などによっても異 なるが、 例えば、 注射剤の形では通常例えば、 糖尿病患者 （体重 60 k gとし て） においては、 一日につき約 0. 01〜3 Omg程度、 好ましくは約 0. 1 〜20mg程度、 より好ましくは約 0. 1〜； 1 Omg程度を静脈注射により投 与するのが好都合である。 他の動物の場合も、 体重 60 k g当たりに換算した 量を投与することができる。
本発明の DN Aの投与量は、 投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などによ り差異はあるが、 経口投与の場合、 一般的に例えば、 糖尿病患者 （体重 6 O k gとして） においては、 一日につき約 0. 1〜10 Omg、 好ましくは約 1. 0 〜50mg、 より好ましくは約 1. 0〜 2 Omgである。 非経口的に投与する 場合は、 その 1回投与量は投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などによって も異なるが、 例えば、 注射剤の形では通常例えば、 糖尿病患者 （体重 6 O k g として） においては、一日につき約 0. 01〜3 Omg程度、好ましくは約 0. l〜20mg程度、 より好ましくは約 0. 1〜： L Omg程度を静脈注射により 投与するのが好都合である。 他の動物の場合も、 体重 60 k g当たりに換算し た量を投与することができる。
(2) 遺伝子診断剤
本発明の DNAおよびアンチセンス DNAは、 プローブとして使用すること により、 ヒトまたは哺乳動物 （例えば、 ラット、 マウス、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ タ、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） における 1 42 73またはその部分ぺプチ ドをコードする DNAまたは mRNAの異常 （遺伝子異常） を検出することが できるので、 例えば、 該 DNAまたは mRNAの損傷、 突然変異あるいは発現 低下や、 該 D N Aまたは m R N Aの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤 として有用である。
本発明の DNAまたはアンチセンス DNAを用いる上記の遺伝子診断は、 例 えば、 自体公知のノーザンハイブリダィゼーシヨンや P CR— S S C P法 (ゲ ノミックス （Genomics) ， 第 5卷， 8 74〜 8 79頁 （1 9 8 9年） 、 プロシ 一ジングズ ·ォブ ·ザ ·ナショナル ·アカデミー ·ォブ ·サイェンシィズ ·ォ ブ ·ュ' ~エスエー (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America) ， 第 86卷， 2766〜 2 7 70頁 （1 98 9年 ) ) などにより実施することができる。
例えば、 ノーザンハイプリダイゼーシヨンにより 1 42 73の発現低下が検 出された場合は、例えば、 1 42 7 3の機能不全に関連する疾患、特に糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿 病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満 症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩 症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合 分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレルギー、脂肪毒性、脂肪萎縮、癌性悪液質、高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 FFA症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂 食障害、 拒食症、 腸管ホルモン (例、 コレシストキニン （CCK) 、 ガストリ ックインヒビトリ—ぺプチド (G I P) 、 ガストリン、 ダル力ゴン様ぺプチド 一 1 (GL P- 1) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出べプチド、 セクレチン、 一口テンシン、 ガラニン、 ニューロペプチド Y、 エンケフアリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、循環器疾患、 ストレスなど （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞） に罹患している可能性が高い、 または将 来罹患する可能性が高いと診断することができる。 さらには、 ノーザンハイブ リダイゼーシヨンにより 1 4 2 7 3の発現低下が検出された場合は、 例えば、 動脈硬化、 動脈硬化性疾患およびそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性動脈 硬化症、末梢動脈閉塞症、急性心筋梗塞、不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的冠動脈形成術 ( P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心 疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、脳卒中 （脳梗塞、脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変おょぴそれらの続発症 〔 例えば、 冠動脈疾患 （C HD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代謝異常症およびその続 発症、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌異常、 A C T H産生腫瘍、 タツ シング病、感染症、続発性副腎皮質機能不全、消化性潰瘍、糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 （例、 中心性肥満、 浮腫、 高血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨粗し よう症、 出血个生素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血症、 高コレ ステロール血、 耐糖能異常、 白血球増多症） 、 副腎皮質の萎縮などの疾患に罹 患している可能性が高い、 または将来罹患する可能性が高いと診断することが できる。
また、 ノーザンハイプリダイゼーシヨンにより 1 4 2 7 3の発現過多が検出 された場合は、 例えば、 1 4 2 7 3の過剰発現に起因する疾患、 特に糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿 病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満 症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩 症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合 分泌症候群） 、 癌 (例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 腌臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、脂肪萎縮、癌性悪液質、高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂 食障害、 拒食症、 腸管ホルモン （例、 コレシストキニン （C C K) 、 ガストリ ックインヒビトリーぺプチド （G I P ) 、 ガストリン、 グルカゴン様ぺプチド 一 1 (G L P— 1 ) 、 ソマトスタチン、 ガス トリン放出ペプチド、 セクレチン、 パソアクティブインテスティナノレペプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニュ 一口テンシン、 ガラニン、 ニューロペプチド Y、 エンケファリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、 循環器疾患、 ストレスなど （特に、 拒食症、 肥満症、 とりわけ内臓脂肪蓄積型肥満症） に罹患している可能性が高い、 または将来罹 患する可能性が高レ、と診断することができる。 さらに、 ノーザンハイプリダイ ゼーシヨンにより 1 4 2 7 3の発現過多が検出された場合は、 例えば、 動脈硬 ィヒ、動脈硬化性疾患およびそれらの続発症〔例えば、ァテローム性動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的 冠動脈形成術 （P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出 血など） 、 ラクネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変およびそれらの続発症 〔例え ば、 冠動脈疾患.（C HD) 、脳虚血など〕 、脂質代謝異常症およびその続発症、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌異常、 結合組織疾患 （例えば、 慢性関 節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症） 、 腎疾患 （例、 ネフローゼ） 、 呼吸器系疾患 （例、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 ぴまん性間質性肺炎） 、 消化器系疾患 （例えば、 潰瘍性大 腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変） 、 神経 ·筋疾患 (例えば、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻 瘅） 、 血液疾患 （例えば、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧 血、 白血病、 悪性リンパ腫） 、 内分泌 ·代謝疾患 （例えば、 急性慢性副腎皮質 機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独 欠損症） 、 皮膚疾患 （例えば、 奪麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤 ァレルギ一) 、 アナフィラキシーショックなどの疾患に罹患している可能性が 高い、 または将来罹患する可能 I1生が高いと診断することができる。
( 3 ) 1 4 2 7 3の発現量を変化させる化合物またはその塩を含有する医薬 本発明の DNAは、 プローブとして用いることにより、 14273の発現量 を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングに用いることができる。 すなわち、 本発明は、 例えば、 （i ) 非ヒト哺乳動物の a) 血液、 b) 特定 の臓器、 c) 臓器から単離した組織もしくは細胞、 または （ii) 形質転換体等 に含まれる 142 7 3の mRN A量を測定することによる、 1 4273の発現 量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
14273の mRN A量の測定は具体的には以下のようにして行なう。
( i ) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物 （例えば、 マウス、 ラット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど、 より具体的には痴呆ラ ット、 肥満マウス、 動脈硬化ゥサギ、 担癌マウスなど） に対して、 薬剤 （例え ば、 抗痴呆薬、 血圧低下薬、 抗癌剤、 抗肥満薬など） あるいは物理的ストレス (例えば、 浸水ス トレス、 電気ショック、 明暗、 低温など） などを与え、 一定 時間経過した後に、 血液、 あるいは特定の臓器 （例えば、 脳、 肝臓、 腎臓など ) 、 または臓器から単離した組織、 あるいは細胞を得る。
得られた細胞に含まれる 1 42 7 3の mRNAは、 例えば、 通常の方法によ り細胞等から mRNAを抽出し、 例えば、 T a qMa n PCRなどの手法を 用いることにより定量することができ、 自体公知の手段によりノーザンブロッ トを行うことにより解析することもできる。
(ii) 142 73を発現する形質転換体を上記の方法に従い作製し、 該形質 転換体に含まれる 142 73の mRN Aを同様にして定量、 解析することがで さる。
1 4 2 73の発現量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングは、 ( i ) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、 薬剤あるいは物理 的ストレスなどを与える一定時間前 （ 30分前〜 24時間前、 好ましくは 30 分前〜 1 2時間前、 より好ましくは 1時間前〜 6時間前） もしくは一定時間後 (30分後〜 3日後、 好ましくは 1時間後〜 2日後、 より好ましくは 1時間後 〜 24時間後） 、 または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に試験化合物を投 与し、 投与後一定時間経過後 （ 30分後〜 3日後、 好ましくは 1時間後〜 2日 後、 より好ましくは 1時間後〜 24時間後） 、 細胞に含まれる 14 2 7 3の m R N A量を定量、 解析することにより行なうことができ、
(ii)形質転換体を常法に従い培養する際に試験化合物を培地中に混合させ、 一定時間培養後 （1日後〜 7日後、 好ましくは 1日後〜 3日後、 より好ましく は 2日後〜 3日後）、該形質転換体に含まれる 1.4 2 7 3の mR N A量を定量、 解析することにより行なうことができる。 '
試験化合物としては、 例えば、 ペプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合 成化合物、 発酵生産物、 細胞抽出液、 植物抽出液、 動物組織抽出液、 血漿など が用いられ、 これら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公知の化合物で あってもよい。
試験化合物は塩を形成していてもよく、 試験化合物の塩としては、 生理学的 に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 （例、 有機酸など） などとの塩が用 いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩とし ては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との 塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイ ン酸、 コノヽク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスル ホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩などが用いられる。
本発明のスクリ一ニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、 1 4 2 7 3の発現量を変化させる作用を有する化合物またはその塩であり、 具体的 には、 （ィ） 1 4 2 7 3の発現量を増加させることにより、 1 4 2 7 3を介す る細胞刺激活性を増強させる化合物またはその塩、 （口） 1 4 2 7 3の発現量 を減少させることにより、 該細胞刺激活性を減弱させる化合物またはその塩で める。
細胞刺激活性としては、 例えば、 ァラキドン酸遊離、 ァセチルコリン遊離、 細胞内 C a 2 +遊離、 細胞内 c AM P生成、 細胞内 c GM P生成、 イノシトール リン酸産生、 細胞膜電位変動、 細胞内蛋白質 （例、 MA Pキナーゼ） のリン酸 化または活性化、 c一 f o sの活性化、 p Hの低下などを促進する活性または 抑制する活性、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制活性、 グリセロー ル生成抑制活性、 脂肪分解抑制活性などが挙げられるが、 特に細胞内 C a 2 +濃 度上昇活性、 細胞内 c AM P生成抑制活性、 M A Pキナーゼのリン酸ィヒもしく は活性化、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制活性、 グリセロール生 成抑制活性、 または脂肪分解抑制活性が好ましい。
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物としては、 ぺプチド、 蛋白質、 非ペプチド性ィヒ合物、 合成化合物、 発酵生産物などが挙げられ、 これ ら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公知の化合物であってもよい。 本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物の塩としては、 生理学 的に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 （例、 有機酸など） などとの塩が 用いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩と しては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） と の塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレ イン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンス ルホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩などが用いられる。
上記スクリーユング方法で得られる 1 4 2 7 3の発現量を増加させる化合物 またはその塩は、 例えば、 脂肪細胞からのグリセロール生成調節作用、 血中グ ルセロール調節作用、 脂肪分解調節作用、 インスリン抵抗調節作用、 ストレス 調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節作用 （好ましくは、 脂 肪細胞からのグリセ口ール生成抑制作用、 血中ダルセ口ール低下作用、 脂肪分 解抑制作用、 インスリン抵抗抑制作用、 ストレス調節作用、 畐 ij腎皮質刺激ホル モン （A C T H) 分泌抑制作用） などを有しているので、 脂肪細胞からのダリ セロール生成調節剤、 血中ダルセロール調節剤、 脂肪分解調節剤、 インスリン 抵抗調節剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節剤 (好ましくは、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成抑制剤、 血中ダルセ口ール低 下剤、 脂肪分解抑制剤、 インスリン抵抗抑制剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺 激ホルモン (A C T H) 分泌抑制剤) などとして有用である。
また、 上記スクリ一二ング方法で得られる 1 4 2 7 3の発現量を増加させる 化合物またはその塩は、 1 4 2 7 3の機能不全に関連する疾患、 例えば、 糖尿 病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不 適合分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 藤臓疲弊、 低血糖 症、 インスリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン 血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石 症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモン （例、 コレシストキニン （C C K) 、 ガ ストリックインヒビトリーぺプチド （G I P ) 、 ガストリン、 グルカゴン様ぺ プチドー 1 (G L P—1 ) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出ペプチド、 セク レチン、 バソアクティブィンテスティナノレぺプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニューロテンシン、 力'ラニン、 ニューロペプチド Y、 エンケフアリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、循環器疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞） などに対する安全で低毒性な予防 ·治療剤また はストレス調節剤として有用である。
また、 上記スクリ一エング方法で得られる 1 4 2 7 3の発現量を増加させる 化合物またはその塩は、 例えば、 動脈硬化、 動脈硬化性疾患およびそれらの続 発症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不 安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的冠動脈形成術 （P T C A) 後の再狭 搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間 欺性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴 呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈 硬化血管病変およびそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （C HD) 、 脳虚血 など〕 、 脂質代謝異常症およびその続発症などの疾患の予防 ·治療剤として使 用することができる。 ■
さらに、 上記スクリ一-ング方法で得られる 1 4 2 7 3の発現量を増加させ る化合物またはその塩は、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤とし て、 例えば、 A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能 不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 （例、 中心性肥満、 浮腫、 高血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線 条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨粗しよう症、 出血性素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血症、 高コレステロール血、 耐糖能異常、 白血球增多症 ) 、 副腎皮質の萎縮などの疾患の予防 ·治療剤として使用することができる。
1 4 2 7 3の発現量を減少させる化合物またはその塩は、 例えば、 脂肪細胞 からのグリセ口ール生成調節作用、 血中ダルセ口ール調節作用、 脂肪分解調節 作用、インスリン抵抗調節作用、 ストレス調節作用、副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節作用 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成促進作 用、血中ダルセロール上昇作用、脂肪分解促進作用、インスリン抵抗促進作用、 ストレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進作用） などを 有しているので、 脂肪細胞からのグリセロール生成調節剤、 血中ダルセロール 調節剤、 脂肪分解調節剤、 インスリン抵抗調節剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質 刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節剤 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセ口 ール生成促進剤、 血中ダルセロール上昇剤、 脂肪分解促進剤、 インスリン抵抗 促進剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤） な どとして有用である。
また、 1 4 2 7 3の発現量を減少させる化合物またはその塩は、 1 4 2 7 3 の発現過多に起因する疾患、 例えば、 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァシ ドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 (例えば、 下 垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸 癌） 、記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレルギー、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂 肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモン （ 例、 コレシストキュン' ( C C K) 、 ガストリックインヒビトリーぺプチド (G I P ) 、 ガストリン、 グ 力ゴン様ペプチド一 1 (G L P— 1 ) 、 ソマトスタ チン、 ガス トリン放出ペプチド、 セクレチン、 バソアクティブインテスティナ ノレペプチド、 モチリン、 サブスタンス Ρ、 ニューロテンシン、 ガラニン、 ニュ 一口ペプチド γ、 エンケフアリン類、 ペプチド ΥΥなど） の分泌障害、 循環器 疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 とりわけ内臓脂肪蓄積型肥満症） などに対する 安全で低毒性な予防 ·治療剤またはストレス調節剤として有用である。 また、 1 4 2 7 3の発現量を減少させる化合物またはその塩は、 例えば、 動 脈硬化、 動脈硬化性疾患およびそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬 化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的冠動脈形成術 ( P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心 疾患、血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、脳卒中 （脳梗塞、脳塞栓、 脳出血など） 、 ラクネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変おょぴそれらの続発症 〔 例えば、 冠動脈疾患 （C HD ) 、 脳虚血など〕 、 脂質代謝異常症およびその続 発症などの疾患の予防 ·治療剤として使用することができる。
さらに、 1 4 2 7 3の発現量を減少させる化合物またはその塩は、 例えば、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤として、 例えば、 結合組織疾患 (例えば、 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマ チ熱、 強皮症） 、 腎疾患 （例、 ネフローゼ） 、 呼吸器系疾患 （例、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎） 、 消化器系疾患 （ 例えば、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変 ) 、 神経 ·筋疾患 （例えば、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無 力症、 顔面神経麻痺） 、 血液疾患 （例えば、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑 病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫） 、 内分泌 ·代謝疾患 （例えば、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出 症、 A C T H単独欠損症） 、 皮膚疾患 （例えば、 奪麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状 疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギー) 、 アナフィラキシーショックなどの予防 ·治療 剤などの医薬として有用である。
また、 上記スクリーニングで得られた化合物またはその塩から誘導される化 合物またはその塩も同様に用いることができる。
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を医薬組 成物として使用する場合、 常套手段に従って製剤化することができる。
例えば、 該ィヒ合物またはその塩は、 必要に応じて糖衣を施した錠剤、 カプセ ル剤、 エリキシル剤、 マイクロカプセル剤などとして経口的に、 あるいは水も しくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、 または懸濁液剤など の注射剤の形で非経口的に使用できる。 例えば、 該化合物またはその塩を生理 学的に認められる公知の担体、 香味剤、 賦形剤、 べヒクル、 防腐剤、 安定剤、 結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混 和することによつて製造することができる。 これら製剤における有効成分量は 指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
錠剤、 カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、 例えば、 ゼ ラチン、 コーンスターチ、 トラガント、 アラビアゴムのような結合剤、 結晶性 セルロースのような賦形剤、 コーンスターチ、 ゼラチン、 アルギン酸などのよ うな膨化剤、 ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、 ショ糖、 乳糖または サッカリンのような甘味剤、 ペパーミント、 ァカモノ油またはチェリーのよう な香味剤などが用いられる。 調剤単位形態が力プセルである場合には、 上記タ イブの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。 注射のた めの無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活个生物質、 胡麻油、 椰子油な どのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施 に従って処方することができる。 注射用の水性液としては、 例えば、 生理食塩 水、 プドウ糖やその他の補助薬を含む等張液 （例えば、 D—ソルビトール、 D 一マン-トール、 塩ィ匕ナトリウムなど） などが用いられ、 適当な溶解補助剤、 例えば、 アルコール (例、 エタノール) 、 ポリアルコール (例、 プロピレンク" リコール、 ポリエチレングリコール） 、 非イオン性界面活性剤 （例、 ポリソル ペート 8 0 TM、 H C O— 5 0 ) などと併用してもよい。 油性液としては、 例え ば、 ゴマ油、 大豆油などが用いられ、 溶解補助剤である安息香酸ベンジル、 ベ ンジルアルコールなどと併用してもよい。
また、 上記医薬は、 例えば、 緩衝剤 （例えば、 リン酸塩緩衝液、 酢酸ナトリ ゥム緩種 ί液） 、 無痛化剤 （例えば、 塩化ベンザルコニゥム、 塩酸プロ力インな ど） 、 安定剤 (例えば、 ヒト血清アルブミン、 ポリエチレングリコールなど） 、 保存剤 (例えば、 ベンジルアルコール、 フエノールなど） 、 酸化防止剤などと 配合してもよい。 調製された注射液は通常、 適当なアンプルに充填される。 このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトゃ哺 乳動物 （例えば、 ラット、 マウス、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対して投与することができる。
14273の発現量を増加させる化合物またはその塩の投与量は、 投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などにより差異はあるが、 経口投与の場合、 一般的 に例えば、 糖尿病患者 （体重 60 k gとして） においては、 一日につき約 0. 1 〜 100 m g、 好ましくは約 1. 0〜50mg、 より好ましくは約 1. 0〜 2 Omgである。 非経口的に投与する場合は、 その 1回投与量は投与対象、 対象 臓器、 症状、 投与方法などによっても異なるが、 例えば、 注射剤の形では通常 例えば、 糖尿病患者 （体重 60 k gとして） においては、 一日につき約 0. 0 1〜 30 m g程度、好ましくは約 0. 1〜 20 m g程度、 より好ましくは約 0. 1〜1 Omg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。 他の動物の場 合も、 体重 60 k g当たりに換算した量を投与することができる。
(4) 14273の定量法および診断方法
本発明の抗体は、 14273を特異的に認識することができるので、 被検液 中の 14273の定量、 特にサンドイッチ免疫測定法による定量などに使用す ることができる。
すなわち、 本発明は、
(i) 本発明の抗体と、 被検液および標識化された 14273とを競合的に反 応させ、 該抗体に結合した標識化された 14273の割合を測定することを特 徴とする被検液中の 14273の定量法、 および
(ii) 被検液と担体上に不溶化した本発明の抗体および標識化された本発明の 別の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、 不溶化担体上の標識剤の 活性を測定することを特徴とする被検液中の 14273の定量法を提供する。 上記 (ii) の定量法においては、 一方の抗体が 14273の N端部を認識す る抗体で、 他方の抗体が 14273の C端部に反応する抗体であることが望ま しレ、。
また、 14273に対するモノクローナル抗体を用いて 14273の定量を 行うことができるほか、 組織染色等による検出を行なうこともできる。 これら の目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子の F (a b')2、 F a b，、 あるいは F a b画分を用いてもよい。 本発明の抗体を用いる 1 4 2 7 3の定量法は、 特に制限されるべきものでは なく、 被測定液中の抗原量 （例えば、 1 4 2 7 3量） に対応した抗体、 抗原も しくは抗体一抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、 これを 既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定法であ れば、 いずれの測定法を用いてもよい。 例えば、 ネフロメトリー、 競合法、 ィ ムノメトリック法おょぴサンドイッチ法が好適に用いられるが、 感度、 特異性 の点で、 後述するサンドィツチ法を用いるのが特に好ましい。
標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、 例えば、 放射性同位 元素、酵素、蛍光物質、発光物質などが用いられる。 放射性同位元素としては、 例えば、 〔1 2 5 I 〕 、 〔1 3 1 I 〕 、 〔3 H〕 、 〔1 4 C〕 などが用いられる。 上記 酵素としては、 安定で比活性の大きなものが好ましく、 例えば、 β一ガラクト シダーゼ、 β一グノレコシダーゼ、 アル力リフォスファターゼ、 パーォキシダー ゼ、 リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。 蛍光物質としては、 例えば、 フル ォレスカミン、 フルォレツセンィソチオシァネートなどが用いられる。 発光物 質としては、 例えば、 ノレミノ一ノレ、 ルミノール誘導体、 ルシフェリン、 ルシゲ ニンなどが用いられる。 さらに、 抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビォチ ンーアビジン系を用いることもできる。
抗原あるいは抗体の不溶ィヒに当っては、 物理吸着を用いてもよく、 また通常 1 4 2 7 3あるいは酵素等を不溶化、 固定ィヒするのに用いられる化学結合を用 いる方法でもよい。 担体としては、 ァガロース、，デキストラン、 セルロースな どの不溶性多糖類、 ポリスチレン、 ポリアクリルアミド、 シリコン等の合成榭 脂、 あるいはガラス等があげられる。
サンドィツチ法においては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液 を反応させ ( 1次反応) 、 さらに標識化した別の本発明のモノクローナル抗体 を反応させ （2次反応） たのち、 不溶化担体上の標識剤の活性を測定すること により被検液中の 1 4 2 7 3量を定量することができる。 1次反応と 2次反応 は逆の順序に行っても、 また、 同時に行なってもよいし時間をずらして行なつ てもよレ、。 標識化剤および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができる。 また、 サンドイッチ法による免疫測定法において、 固相用抗体あるいは標識用 抗体に用いられる抗体は必ずしも 1種類である必要はなく、 測定感度を向上さ せる等の目的で 2種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。
本発明のサンドィツチ法による 1 4 2 7 3の測定法においては、 1次反応と 2次反応に用いられる本発明のモノクローナル抗体は、 1 4 2 7 3の結合する 部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。 すなわち、 1次反応および 2次反 応に用いられる抗体は、 例えば、 2次反応で用いられる抗体が、 1 4 2 7 3の C端部を認識する場合、 1次反応で用いられる抗体は、好ましくは C端部以外、 例えば N端部を認識する抗体が用いられる。
本発明のモノクローナル抗体をサンドィツチ法以外の測定システム、 例えば、 競合法、 ィムノメ トリック法あるいはネフロメ トリーなどに用いることができ る。
競合法では、 被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的に反応させ たのち、 未反応の標識抗原 (F ) と、 抗体と結合した標識抗原 （B) とを分離し (B/F分離） 、 B， Fいずれかの標識量を測定し、 被検液中の抗原量を定量 する。 本反応法には、 抗体として可溶性抗体を用い、 B Z F分離をポリエチレ ングリコール、 前記抗体に対する第 2抗体などを用いる液相法、 および、 第 1 抗体として固相化抗体を用いる力、 あるいは、 第 1抗体は可溶性のものを用い 第 2抗体として固相化抗体を用!/、る固相化法とが用いられる。
ィムノメトリック法では、 被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化 抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離する力、、 あるいは、 被検液中 の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、 次に固相化抗原を加え未反応の標 識化抗体を固相に結合させたのち、 固相と液相を分離する。 次に、 いずれかの 相の標識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。
また、 ネフロメ トリーでは、 ゲル内あるいは溶液中で抗原抗体反応の結果生 じた不溶性の沈降物の量を測定する。 被検液中の抗原量が僅かであり、 少量の 沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメ ト リ一などが好適に用いられる。
これら個々の免疫学的測定法を本発明の定量方法に適用するにあたっては、 特別の条件、 操作等の設定は必要とされない。 それぞれの方法における通常の 条件、 操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて 1 4 2 7 3の測定系を構築 すればよい。 これらの一般的な技術手段の詳細については、 総説、 成書などを 参照することができる。
例えば、入江 寛編「ラジオィムノアツセィ」 (講談社、 昭和 4 9年発行） 、 入江 寛編 「続ラジオィムノアツセィ」 （講談社、 昭和 5 4年発行） 、 石川栄 治ら編 「酵素免疫測定法」 （医学書院、 昭和 5 3年発行） 、 石川栄治ら編 「酵 素免疫測定法」 （第 2版） （医学書院、 昭和 5 7年発行） 、 石川栄治ら編 「酵 素免疫測定法」 （第 3版） （医学書院、 昭和 6 2年発行） 、 「Methods in ENZYMOLOGYJ Vol. 70 (Immunochemical Techniques (Part A) )、 同書 Vol. 73 (Immunochemical Techniques (Part B) )、 書 Vol. 74 (Immunochemical Techniques (Part C))、 同書 Vol. 84 (Immunochemical Techniques (Part D ： Selected Immunoassays) ) 同書 Vol. 92 (Immunochemical Techniques (Part E ： Monoclonal Antibodies and General Immunoassay Methods) )、 同書 Vol. 121 (Immunochemical Techniques (Part I： Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies) ) (以上、 アカデミックプレス社発行）などを参照することができる。 以上のようにして、 本発明の抗体を用いることによって、 1 4 2 7 3を感度 良く定量することができる。
さらには、 本発明の抗体を用いて 1 4 2 7 3の濃度を定量することによって、 1 4 2 7 3の濃度の減少が検出された場合、 例えば、 1 4 2 7 3の機能不全に 関連する疾患、 例えば、 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖 尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心 筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機 能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラク チン血症、 抗利尿ホルモン不適合分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌) 、 記憶 学習障害、瞎臓疲弊、低血糖症、インスリンァレルギ一、脂肪毒性、脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪 肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモン （例、 コレシ ストキニン ( C C K) 、 ガストリックインヒビトリーぺプチド (G I P ) 、 ガ ストリン、 グルカゴン様ぺプチドー 1 (G L P - 1 ) 、 ソマトスタチン、 ガス トリン放出べプチド、セクレチン、バソアクティブィンテスティナルぺプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニューロテンシン、 ガラニン、 ニューロペプチド γ、 エンケフアリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、 循環器疾患、 ス トレ ス （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞） などに罹 患している可能性が高い、 または将来罹患する可能性が高いと診断することが できる。 さらに、 本発明の抗体を用いて 1 4 2 7 3の濃度を定量することによ つて、 1 4 2 7 3の濃度の減少が検出された場合、 例えば、 動脈硬化、 動脈硬 化性疾患およびそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬化症、 末梢動脈 閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的冠動脈形 成術 （P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰 化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、脳卒中 （脳梗塞、脳塞栓、脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病な ど〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変およびそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈 疾患 （C HD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代謝異常症およびその続発症、 副腎皮質 刺激ホルモン （A C T H) 分泌異常、 A C T H産生腫痕、 クッシング病、 感染 症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内 障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 （例、 中心性肥満、 浮腫、 高血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨粗しょう症、 出血性 素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血症、 高コレステロール血、 耐糖能異常、 白血球増多症） 、 副腎皮質の萎縮などに罹患している可能性が高 い、 または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
また、 1 4 2 7 3の濃度の増加が検出された場合には、 例えば、 1 4 2 7 3 の過剰発現に起因する疾患、 例えば、 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァシ ドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例えば、 下 垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸 癌） 、 記憶学習障害、藤臓疲弊、低血糖症、 インスリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂 肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモン （ 例、 コレシストキニン （C C K) 、 ガストリックインヒビトリーペプチド （G I P ) 、 ガストリン、 グルカゴン様ペプチド一 1 (G L P— 1 ) 、 ソマトスタ チン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、 パソアクティブインテスティナ ノレペプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニューロテンシン、 ガラニン、 ニュ 一口ペプチド Y、 エンケフアリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、 循環器 疾患、 ストレス （特に、 拒食症、 肥満症、 とりわけ内臓脂肪蓄積型肥満症） な どに罹患している可能性が高い、 または将来罹患する可能性が高レ、と診断する ことができる。 さらに、 1 4 2 7 3の濃度の増加が検出された場合には、 例え ば、 動脈硬化、 動脈硬化性疾患おょぴそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性 動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症 候群、 経皮的冠動脈形成術 （P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚 血性心疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎 症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変およびそれらの 続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （C H D) 、 脳虚血など〕 、 脂質代謝異常症およ びその続発症、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌異常、 結合組織疾患 （ 例えば、 慢性関節リゥマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リゥマチ 熱、 強皮症） 、 腎疾患 （例、 ネフローゼ） 、 呼吸器系疾患 （例、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎） 、 消化器系疾患 （ 例えば、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変 ) 、 神経 ·筋疾患 （例えば、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無 力症、 顔面神経麻痺） 、 血液疾患 （例えば、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑 病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫） 、 内分泌 代謝疾患 （例えば、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出 症、 A C T H単独欠損症） 、 皮膚疾患 （例えば、 尊麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状 疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギー） 、 アナフィラキシーショックなどの疾患に罹患 している可能性が高い、 または将来罹患する可能性が高いと診断することがで さる。 (5) 14273に対するァゴニストのスクリーニング方法 脂肪酸が 14273に結合することによって、 細胞内 C a 2+濃度の上昇、 細 胞内 c AMP生成の抑制、 MAPキナーゼの活性化、 副腎皮質刺激ホルモン （ ACTH) の分泌抑制、 脂肪細胞からのグリセロール生成抑制、 脂肪分解抑制 などが見られることから、 14273はこれらの細胞内シグナルを指標として 14273に対する脂肪酸以外のァゴニスト（天然リガンドを含む）を探索し、 または決定するための試薬として有用である。
すなわち、 本発明は、 試験化合物を 14273を含有する細胞に接触させた 場合における、 14273を介した細胞内 C a 2+濃度上昇活 14、 細胞内 C a 2 + 濃度上昇活性、 細胞内 cAM P生成抑制活性、 MAPキナーゼのリン酸化もし くは活性化、 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌抑制活4、 グリセロール 生成抑制活性、 脂肪分解抑制活性などを測定することを特徴とする 14273 に対するァゴニストの決定方法を提供する。
試験化合物としては、 公知のリガンド (例えば、 アンギオテンシン、 ボンべ シン、 カナビノイ ド、 コレシストキニン、 グルタミン、 セロ トニン、 メラトニ ン、 ニューロペプチド Y、 ォピオイ ド、 プリン、 バソプレツシン、 才キシトシ ン、 PACAP (例、 P ACAP 27, P ACAP 38) 、 セクレチン、 グル 力ゴン、 カルシトニン、 アドレノメジュリン、 ソマトスタチン、 GHRH、 C RF、 ACTH, GRP、 PTH、 V I P (バソアクティブ インテスティナ ノレ アンド リ レイテッド ポリペプチド） 、 ソマトスタチン、 ドーパミン、 モチリン、 アミリン、 ブラジキニン、 CGRP (カルシトニンジーンリ レーテ イツ ドペプチド） 、 ロイコ トリエン、 ハ。ンクレアスタチン、 プロスタグランジ ン、 トロンボキサン、 アデノシン、 アドレナリン、 ケモカインスーパーフアミ リー （例、 I L— 8， GRO CK, GRO i3 , GRO γ , NAP - 2, EN Α— 78, GCP-2, P F 4, I P— 10, Mi g, PBSF/SDF— 1など の CXCケモカインサブフアミリ一； MCAF/MCP—l, MCP— 2, M CP- 3, MCP— 4， e o t a X i n, RANTE S, MI P— 1ひ、 MI P—l jS, HCC— 1， MI P-3 a/LARC、 M I P— 3 β/ELC, I -309, TARC, M I P F- 1 , M I P F— 2 / e o t a x i n— 2 , M DC, DC-CK 1/P ARC, S L Cなどの C Cケモカインサブファミリー ； l ymp h o t a c t i nなどの Cケモカインサブフアミリー； f r a c t a 1 k i n eなどの CX 3 Cケモカインサブフアミリー等） 、 ェンドセリン、 ェンテロガス トリン、 ヒスタミン、 ニューロテンシン、 TRH、 パンクレアテ イツクポリぺプタイド、 ガラニン、 リゾホスファチジン酸 （LPA) 、 スフィ ンゴシン 1一リン酸など） の他に、 例えば、 ヒトまたは哺乳動物 （例えば、 マ ウス、 ラット、 ブタ、 ゥシ、 ヒッジ、 サルなど） の組織抽出物、 細胞培養上清、 低分子合成化合物などが用いられる。 例えば、 該組織抽出物、 細胞培養上清な どを 14273に添加し、 細胞刺激活性などを測定しながら分画し、 最終的に 単一のリガンドを得ることができる。
試験化合物は塩を形成していてもよく、 試験化合物の塩としては、 生理学的 に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 （例、 有機酸など） などとの塩が用 いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩とし ては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との 塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイ ン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスル ホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩などが用いられる。
具体的には、 本発明のァゴニスト決定方法は、 本発明の組換え型 14273 の発現系を構築し、 該発現系を用いたレセプタ一結合ァッセィ系を用いること によって、 14273を介する細胞内 C a 2+濃度上昇活性、 細胞内 c AMP生 成抑制活性、 MAPキナーゼのリン酸化もしくは活性化、 副腎皮質刺激ホルモ ン (ACTH) 分泌抑制活性、 グリセロール生成抑制活性、 または脂肪分解抑 制活性を有する化合物またはその塩を決定する方法である。
より具体的には、 本発明は、 次のような決定方法を提供する。
(1) 試験化合物を 14273を含有する細胞 (例、 CHO細胞、 脂肪細胞、
AtT— 20細胞、 3T3— L 1細胞） に接触させた場合における細胞内 C a 2 +濃度上昇活性、 細胞内 c AMP生成抑制活性、 MA Pキナーゼのリン酸化もし くは活性化、 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌抑制活性、 グリセロール 生成抑制活性、 または脂肪分解抑制活性を測定することを特徴とする 1427 3に対するァゴニストの決定方法、 および
( 2 ) 試験化合物を 14273 D N Aを含有する形質転換体を培養することに よって細胞膜上に発現した 14273に接触させた場合における 14273を 介する細胞内 C a 2+濃度上昇活性、 細胞内 c AMP生成抑制活性、 MAPキナ ーゼのリン酸化もしくは活性化、 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌抑制 活性、 グリセロール生成抑制活性、 または脂肪分解抑制活性を測定することを 特徴とする 14273に対するァゴニストの決定方法を提供する。
特に、 試験化合物が 14273に結合することを確認した後に、 上記の試験 を行なうことが好ましい。
本発明のァゴニスト決定方法において、 14273を含有する細胞を用いる 場合、 該細胞をダルタルアルデヒド、 ホルマリンなどで固定ィヒしてもよい。 固 定化方法は公知の方法に従って行なうことができる。
14273を含有する細胞の膜画分としては、 細胞を破砕した後、 公知の方 法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。 細胞の破碎方法として は、 Potter— Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、 ワーリングブ レンダーゃポリ トロン （Kinematica社製） による破碎、 超音波による破碎、 フ レンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから嘖出させることによる 破砕などが挙げられる。 細胞膜の分画には、 分画遠心分離法や密度勾配遠心分 離法などの遠心力による分画法が主として用いられる。 例えば、 細胞破碎液を 低速 （500〜3000 r pm) で短時間 （通常、 約 1〜 10分) 遠心し、 上 清をさらに高速 （1 5000〜30000 r pm) で通常 30分〜 2時間遠心 し、 得られる沈澱を膜画分とする。 該膜画分中には、 発現した 14273と細 胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの B莫成分が多く含まれる。
14273を含有する細胞やその細胞膜画分中の 14273の量は、 1細胞 当たり 103〜 108分子であるのが好ましく、 105〜107分子であるのが好 適である。 なお、 発現量が多いほど膜画分当たりのリガンド結合活性 （比活性 ) が高くなり、 高感度なスクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、 同一口ットで大量の試料を測定できるようになる。
本発明のァゴニスト決定方法を実施するためには、 14273を介する細胞 内 C a 2 +濃度上昇活性、 細胞内 c AM P生成抑制活性、 MA Pキナーゼのリン 酸化もしは活性化、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制活性、 グリセ ロール生成抑制活性、 または脂肪分解抑制活性を公知の方法または市販の測定 用キットを用いて測定することができる。 具体的には、 まず、 1 4 2 7 3を含 有する細胞をマルチウエルプレート等に培養する。 ァゴニスト決定を行なうに あたっては前もつて新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当なバッファ 一に交換し、 試験化合物などを添加して一定時間インキュベートした後、 細胞 を抽出あるいは上清液を回収して、 生成した産物をそれぞれの方法に従って定 量する。 細胞刺激活性の指標とする物質 （例えば、 C a 2 +、 c AM Pなど） の 生成が、 細胞が含有する分解酵素によって検定困難な場合は、 該分解酵素に対 する阻害剤を添加してァッセィを行なってもよい。
本発明のァゴニスト決定用キットは、 1 4 2 7 3を含有する細胞またはその 細胞膜画分を含有するものである。
このようにして決定される 1 4 2 7 3に対するァゴニス トは、 1 4 2 7 3に 結合して 1 4 2 7 3の生理的機能を調節し、 例えば、 脂肪細胞からのグリセ口 ール生成調節作用、 血中ダルセロール調節作用、 脂肪分解調節作用、 インスリ ン抵抗調節作用、 ストレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌 調節作用 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセロール生成抑制作用、 血中グル セロール低下作用、 脂肪分解抑制作用、 インスリン抵抗抑制作用、 ス トレス調 節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制作用） などを示すので、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成調節剤、 血中ダルセ口ール調節剤、 脂肪分解 調節剤、 インスリン抵抗調節剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節剤 (好ましくは、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成抑制剤、 血中ダルセロール低下剤、 脂肪分解抑制剤、 インスリン抵抗抑制剤、 ス トレス 調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤） などとして有用であ る。
また、 1 4 2 7 3に対するァゴニストは、 1 4 2 7 3に結合して 1 4 2 7 3 の生理的機能を調節するので、 例えば、 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァ シドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬 ィ匕、 狭心症、 心筋梗塞、性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、下垂体性小人症、尿崩症、先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸 癌） 、 記憶学習障害、藤臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂 肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホルモン （ 例、 コレシストキニン （C C K) 、 ガストリックインヒビトリーペプチド （G I P ) 、 ガストリン、 グルカゴン様ペプチド一 1 (G L P - 1 ) 、 ソマトスタ チン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、 パソアクティブィンテスティナ ノレペプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニューロテンシン、 ガラニン、 ニュ 一口ペプチド γ、 エンケフアリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、 循環器 疾患などの疾患 （特に、 糖尿病、 髙脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞） の 予防 ·治療剤またはストレス調節剤などの医薬として使用することができる。 また、 1 4 2 7 3に対するァゴニストは、 例えば、 動脈硬化、 動脈硬化性疾 患およびそれらの続発症〔例えば、ァテローム性動脈硬化症、末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的冠動脈形成術 （Ρ T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化等を含 む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ 梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変およびそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （ C H D) 、 月 虚血など〕 、 脂質代 異常症およびその続発症などの疾患の予防 •治療剤として使用することができる。
さらに、 1 4 2 7 3に対するァゴニストは、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤として、 例えば、 A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続努性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 （例、 中心性肥満、 浮腫、 高血圧、 月 経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨粗しょう症、 出血性素 因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血症、 高コレステロール血、 耐 糖能異常、 白血球増多症） 、 副腎皮質の萎縮などの疾患の予防 ·治療剤として 使用することができる。
( 6 ) 1 4 2 7 3とリガンドとの結合性を変化させる化合物 （ァゴ二スト、 ァ ンタゴニストなど） またはその塩のスクリーニング方法、 および 1 4 2 7 3と リガンドとの結合性を変化させる化合物またはその塩を含有する医薬
1 4 2 7 3を用いるか、 または組換え型の 1 4 2 7 3発現系を構築し、 該発 現系を用いたレセプタ一結合ァッセィ系を用いることによって、 リガンドであ る脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合性を変化させる化合物 （例えば、 ぺプチド、 蛋 白質、 非ペプチド性化合物、 合成化合物、 発酵生産物など） またはその塩を効 率よくスクリーニングすることができる。
このような化合物には、 (ィ) 1 4 2 7 3を介して細胞刺激活性を有する化 合物 （いわゆる、 1 4 2 7 3に対するァゴニスト） 、 （口） 該細胞刺激活性を 有しない化合物 （いわゆる、 1 4 2 7 3に対するアンタゴニスト） 、 （ハ） 脂 肪酸と 1 4 2 7 3との結合力を増強する化合物、 あるいは （二） 脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合力を減少させる化合物などが含まれる。
すなわち、 本発明は、 （i ) 1 4 2 7 3と脂肪酸とを接触させた場合と （ii ) 1 4 2 7 3と脂肪酸および試験化合物とを接触させた場合との比較を行なう ことを特徴とする脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合性を変化させる化合物またはそ の塩のスクリ一二ング方法を提供する。
本発明のスクリーニング方法においては、 （i ) と （ii) の場合における、 例えば、 1 4 2 7 3に対する脂肪酸の結合量、 細胞刺激活性などを測定して、 比較することを特徴とする。
細胞刺激活性としては、 例えば、 ァラキドン酸遊離、 ァセチルコリン遊離、 細胞内 C a 2 +遊離、 細胞内 c AM P生成、 細胞内 c GM P生成、 イノシトール リン酸産生、 細胞膜電位変動、 細胞内蛋白質 （例、 MA Pキナーゼ） のリン酸 化または活性化、 c - f o sの活性化、 p Hの低下などを促進する活性または 抑制する活性、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制活性、 グリセロー ル生成抑制活性、 脂肪分解抑制活性などが挙げられるが、 なかでも細胞内 C a 2 +濃度上昇活性、 細胞内 c AMP生成抑制活性、 MA Pキナーゼのリン酸化また は活性化、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制活' I·生、 グリセロール生 成抑制活性、 脂肪分解抑制活性などが好ましい。
より具体的には、 本発明は、
a ) 標識した脂肪酸を、 1 4 2 7 3に接触させた場合と、 標識した脂肪酸お よび試験化合物を 1 4 2 7 3に接触させた場合における、 標識した脂肪酸の 1 4 2 7 3に対する結合量を測定し、 比較することを特徴とする脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、 b ) 標識した脂肪酸を、 1 4 2 7 3を含有する細胞または該細胞の膜画分に 接触させた場合と、 標識した脂肪酸および試験化合物を 1 4 2 7 3を含有する 細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、 標識した脂肪酸の該細 胞または該膜画分に対する結合量を測定し、 比較することを特徴とする脂肪酸 と 1 4 2 7 3との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーユング方 法、
c ) 標識した脂肪酸を、 本発明の D N Aを含有する形質転換体を培養するこ とによって細胞膜上に発現した 1 4 2 7 3に接触させた場合と、 標識した脂肪 酸および試験化合物を本発明の D NAを含有する形質転換体を培養することに よって細胞膜上に発現した 1 4 2 7 3に接触させた場合における、 標識した脂 肪酸の 1 4 2 7 3に対する結合量を測定し、 比較することを特徴とする脂肪酸 と 1 4 2 7 3との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方 法、
d ) 1 4 2 7 3を活性化する化合物 （例えば、 脂肪酸など） を 1 4 2 7 3を 含有する細胞 （例、 C H O細胞、 脂肪細胞、 A t T— 2 0細胞、 3 T 3— L 1 細胞） に接触させた場合と、 1 4 2 7 3を活性化する化合物および試験化合物 を 1 4 2 7 3を含有する細胞に接触させた場合における、 1 4 2 7 3を'介した 細胞刺激活性を測定し、 比較することを特徴とするリガンドと 1 4 2 7 3との 結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリ一二ング方法、 および
e ) 1 4 2 7 3を活性ィ匕する化合物 （例えば、 脂肪酸など） を本発明の D N Aを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した 1 4 2 7 3に接触させた場合と、 1 4 2 7 3を活性化する化合物および試験化合物を本 発明の D N Aを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現し た 1 4 2 7 3に接触させた場合における、 レセプターを介する細胞刺激活性を 測定し、 比較することを特徴とする脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合性を変化させ る化合物またはその塩のスクリ一二ング方法を提供する。
さらに、 リガンドとしては、 脂肪酸に代えて、 脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合 性を変化させる化合物またはその塩 （好ましくはァゴニスト、 より好ましくは 合成ァゴニスト） を用いることもできる。 この脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合性 を変化させる化合物またはその塩は、例えば、 リガンドとして脂肪酸を用いて、 後述する本発明のスクーニング方法を実施することによって得ることができる。 以下のスクリーニング方法においては、 脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合性を変 化させる化合物またはその塩を含めて、 単に脂肪酸と表記する。
本発明のスクリーニング方法の具体的な説明を以下にする。
まず、 本発明のスクリーユング方法に用いる 1 4 2 7 3としては、 上記した 1 4 2 7 3を含有するものであれば何れのものであってもよいが、 1 4 2 7 3 を含有する哺乳動物の臓器の細胞膜画分が好適である。 し力 し、 特にヒト由来 の臓器は入手が極めて困難なことから、 スクリーニングに用いられるものとし ては、 糸且換え体を用いて大量発現させたヒト由来の 1 4 2 7 3などが適してい る。
1 4 2 7 3を製造するには、 上記の方法が用いられるが、 本発明の D NAを 哺乳細胞や昆虫細胞で発現することにより行なうことが好ましい。 目的とする 蛋白質部分をコードする D NA断片には相捕 D NAが用いられる力 必ずしも これに制約されるものではない。 例えば、 遺伝子断片や合成 D N Aを用いても よい。 1 4 2 7 3をコードする D N A断片を宿主動物細胞に導入し、 それらを 効率よく発現させるためには、 該 D N A断片を昆虫を宿主とするバキュロウィ ルスに属する核多角体病ウィルス (nuclear polyhedros is virus； P. V ) の ポリヘドリンプロモーター、 S V 4 0由来のプロモーター、 レトロゥイノレスの プロモーター、 メタ口チォネインプロモーター、 ヒ トヒートショックプロモー ター、 サイトメガロウイ スプロモーター、 S R αプロモーターなどの下流に 組み込むのが好まし！/、。 発現したレセプターの量と質の検查はそれ自体公知の 方法で行うことができる。 例えば、 文献 CNambi, P. ら、 ザ ·ジャーナル ·ォ ブ ·パイォロジカル'ケミストリー （J. Biol. Chem. ) ， 267巻， 19555〜19559頁 ， 1992年〕 に記載の方法に従って行なうことができる。
したがって、 本発明のスクリーニング方法において、 1 4 2 7 3を含有する ものとしては、 それ自体公知の方法に従って精製した 1 4 2 7 3であってもよ いし、 1 4 2 7 3を含有する細胞を用いてもよく、 また 1 4 2 7 3を含有する 細胞の膜画分を用いてもよい。
本発明のスクリーニング方法において、 1 4 2 7 3を含有する細胞を用いる 場合、 該細胞をダルタルアルデヒド、 ホルマリンなどで固定化してもよい。 固 定化方法はそれ自体公知の方法に従って行なうことができる。
1 4 2 7 3を含有する細胞としては、 1 4 2 7 3を発現した宿主細胞をいう 力、 該宿主細胞としては、 大腸菌、 枯草菌、 酵母、 昆虫細胞、.動物細胞などが 好ましい。
細胞膜画分としては、 細胞を破砕した後、 それ自体公知の方法で得られる細 胞膜が多く含まれる画分のことをいう。 細胞の破砕方法としては、 Potter— Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、 ワーリンダブレンダーゃポ リ トロン （Kinematica社製） のよる破砕、 超音波による破碎、 フレンチプレス などで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破碎などが挙 げられる。 細胞膜の分画には、 分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠 心力による分画法が主として用いられる。 例えば、 細胞破碎液を低速 （5 0 0 〜3 0 0 0 r p m) で短時間 （通常、 約 1〜 1 0分） 遠心し、 上清をさらに高 速 （1 5 0 0 0〜3 0 0 0 0 r p m) で通常 3 0分〜 2時間遠心し、 得られる 沈澱を膜画分とする。 該膜画分中には、 発現した 1 4 2 7 3と細胞由来のリン 脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
1 4 2 7 3を含有する細胞や膜画分中の 1 4 2 7 3の量は、 1細胞当たり 1 0 3〜1 0 8分子であるのが好ましく、 1 0 5〜1 0 7分子であるのが好適である。 なお、 発現量が多いほど膜画分当たりのリガンド結合活性 (比活性) が高くな り、 高感度なスクリ一二ング系の構築が可能になるばかりでなく、 同一口ット で大量の試料を測定できるようになる。
脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合性を変化させる化合物をスクリーニングする上 記の a) 〜c) を実施するためには、 例えば、 適当な 14273画分と、 標識 した脂肪酸が必要である。
14273画分としては、 天然型の 14273画分か、 またはそれと同等の 活性を有する組換え型 14273画分などが望ましい。 ここで、 同等の活性と は、 同等のリガンド結合活性、 シグナル情報伝達作用などを示す。
標識した脂肪酸としては、 標識した脂肪酸、 あるいは標識した ァラニンァ ナログまたは標識した L一力ルノシンなどが用いられる。 例えば 〔3Η〕 、 25 I〕 、 〔14C〕 、 〔35S〕 などで標識された脂肪酸などが用いられる。 具体的には、 脂肪酸と 14273との結合性を変化させる化合物のスクリー ユングを行なうには、 まず 14273を含有する細胞または細胞の膜画分を、 スクリーニングに適したバッファーに懸濁することにより 14273標品を調 製する。 バッファーには、 pH4〜10 (望ましくは pH6〜8) のリン酸バ ッファー、 トリス一塩酸バッファーなどの、 脂肪酸と 14273との結合を阻 害しないバッファーであればいずれでもよい。 また、 非特異的結合を低減させ る目的で、 CHAPS、 Twe e n-80™ (花王一アトラス社） 、 ジギトニ ン、 デォキシコレートなどの界面活性剤をパッファーに加えることもできる。 さらに、 プロテアーゼによるレセプターやリガンドの分解を抑える目的で P M SF、 ロイぺプチン、 E—64 (ペプチド研究所製） 、 ぺプスタチンなどのプ 口テアーゼ阻害剤を添加することもできる。 0.01〜10m lの該レセプター 溶液に、一定量（5000〜500000 c pm) の標識した脂肪酸を添カ卩し、 同時に 10一4 M〜l 0— 1QMの試験化合物を共存させる。非特異的結合量（NS B) を知るために大過剰の未標識の脂肪酸を加えた反応チューブも用意する。 反応は約 0〜 50 °C、 望ましくは約 4〜 37 °Cで、 約 20分〜 24時間、 望ま しくは約 30分〜 3時間行う。 反応後、 ガラス繊維濾紙等で濾過し、 適量の同 バッファ一で洗浄した後、 ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレ ーションカウンターまたは γ一カウンターで計測する。 拮抗する物質がない場 合のカウント（Β0) から非特異的結合量 （NSB) を引いたカウント （Β。一 Ν SB) を 100%とした時、 特異的結合量 （B— NSB) 、 例えば、 50% 以下になる試験化合物を拮抗阻害能力のある候補物質として選択することがで きる。
脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合性を変化させる化合物をスクリーニングする上 記の d ) 〜e ) の方法を実施するためには、 例えば、 1 4 2 7 3を介する細胞 刺激活性を公知の方法または市販の測定用キットを用いて測定することができ る。
具体的には、 まず、 1 4 2 7 3を含有する細胞をマルチウエルプレート等に 培養する。 スクリーニングを行なうにあたっては前もって新鮮な培地あるいは 細胞に毒性を示さない適当なバッファ一に交換し、 試験化合物などを添加して 一定時間インキュベートした後、 細胞を抽出あるいは上清液を回収して、 生成 した産物をそれぞれの方法に従って定量する。 細胞刺激活性の指標とする物質 (例えば、 C a 2 +、 c AMP , ァラキドン酸など） の生成が、 細胞が含有する 分解酵素によつて検定困難な場合は、 該分解酵素に対する阻害剤を添加してァ ッセィを行なってもよい。 また、 c AMP産生抑制などの活性については、 フ オルスコリンなどで細胞の基礎的産生量を増大させておいた細胞に対する産生 抑制作用として検出することができる。
細胞刺激活性を測定してスクリ一ユングを行なうには、 適当な 1 4 2 7 3を 発現した細胞が必要である。 1 4 2 7 3を発現した細胞としては、 天然型の 1 4 2 7 3を有する細胞株、 上記の組換え型の 1 4 2 7 3を発現した細胞株など が望ましい。
試験化合物としては、 例えば、 ペプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合 成化合物、 発酵生産物、 細胞抽出液、 植物抽出液、 動物組織抽出液、 血漿など が用いられ、 これら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公知の化合物で あってもよい。
試験化合物は塩を形成していてもよく、 試験化合物の塩としては、 生理学的 に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 （例、 有機酸など） などとの塩が用 いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩とし ては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との 塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイ ン酸、 コノヽク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスル ホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩などが用いられる。
また、 試験化合物としては、 14273の活性部位の原子座標およびリガン ド結合ポケットの位置に基づいて、 リガンド結合ポケットに結合するように設 計された化合物が好ましく用いられる。 14273の活性部位の原子座標およ びリガンド結合ポケットの位置の測定は、 公知の方法あるいはそれに準じる方 法を用いて行うことができる。
脂肪酸と 14273との結合性を変化させる化合物がァゴニストかアンタゴ ニストであるかは、 上記した 14273に対するァゴニストのスクリーニンク、、 方法を用いて確認することができる。
脂肪酸と 14273との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリ一 ニング用キットは、 14273、 14273を含有する細胞、 または 1427 3を含有する細胞の膜画分を含有するものなどである。
本発明のスクリーニング用キットの例としては、 次のものが挙げられる。 1. スクリーニング用試薬
a) 測定用緩衝液おょぴ洗浄用緩衝液
Hanks' Balanced Salt Solution (ギブコネ土製） に、 0.05%のゥシ血清ァ ルブミン (シグマ社製) を加えたもの。
孔径 0.45 μπιのフィルターで濾過滅菌し、 4°Cで保存するか、 あるいは用 時調製しても良い。
b) 14273標品
14273を発現させた CHO細胞を、 12穴プレートに 5 X 105個/穴で 継代し、 37。C、 5%C02、 95 % a i rで 2日間培養したもの。
c) 標識脂肪酸
市販の 〔3H〕 、 〔125 I〕 、 〔14C〕 、 〔35 S〕 などで標識した脂肪酸 水溶液の状態のものを 4 °Cあるいは一 20DCにて保存し、 用時に測定用緩衝 液にて 1 に希釈する。
d) 脂肪酸標準液
脂肪酸を 0. 1 %ゥシ血清アルブミン （シグマ社製） を含む PBSで lmMと なるように溶解し、 一 20 °Cで保存する。 . 2. 測定法
a) 12穴組織培養用プレートにて培養した 14273発現 C HO細胞を、 測定用緩衝液 1 m 1で 2回洗浄した後、 490 1の測定用緩衝液を各穴に加 える。
b ) 10— 3〜 10—1 °Μの試験化合物溶液を 5 μ 1加えた後、標識脂肪酸を 5 μ 1加え、 室温にて 1時間反応させる。 非特異的結合量を知るためには試験化 合物の代わりに 10— 3Μの脂肪酸を 5 μ 1加えておく。
c) 反応液を除去し、 1mlの洗浄用緩衝液で 3回洗浄する。 細胞に結合し た標識リガンドを 0. 2 N N a OH— 1 % S D Sで溶解し、 4 m 1の液体シン チレーター A (和光純薬製） と混合する。
d) 液体シンチレーシヨンカウンター (ベックマン社製) を用いて放射活性 を測定し、 Percent Maximum Binding (PMB) を次の式で求める。
PMB= [ (B-NS B) / (B。一 NSB) ] X 100
PMB ： Percent Maximum Binding
B ：検体を加えた時の値
NSB ： Non-specific Binding (非特異的結合量）
B。 ：最大結合量
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られ る化合物またはその塩は、 脂肪酸と 14273との結合性を変化させる作用を 有する化合物またはその塩であり、 具体的には、 （ィ） G蛋白質共役型レセプ ターを介して細胞刺激活性を有する化合物またはその塩 （いわゆる、 1427 3に対するァゴニスト） 、 （口） 該細胞刺激活性を有しなレ、化合物またはその 塩 （いわゆる、 14273に対するアンタゴニス ト） 、 (ノ、) 脂肪酸と 142 73との結合力を増強する化合物またはその塩、 あるいは （二） 脂肪酸と 14 273との結合力を減少させる化合物またはその塩である。 本発明のスクリー ユング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物は、 天然リ ガンドである脂肪酸以外の脂肪酸であっても良い。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られ る化合物としては、 ペプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合成化合物、 発 酵生産物などが挙げられ、 これら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公 知の化合物であってもよい。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られ る化合物の塩としては、 生理学的に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 （ 例、 有機酸など） などとの塩が用いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付 加塩が好ましい。 この様な塩としては、 例えば、 無機酸 (例えば、 塩酸、 リン 酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酉乍酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ 酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩な どが用いられる。
1 4 2 7 3に対するァゴニストは、 1 4 2 7 3に対するリガンドである脂肪 酸が有する生理活性と同様の作用を有しているので、 脂肪酸が有する生理活性 に応じて安全で低毒性な医薬として有用である。
1 4 2 7 3に対するアンタゴニストは、 1 4 2 7 3に対するリガンドである 脂肪酸が有する生理活性を抑制することができるので、 脂肪酸の生理活性を抑 制するための安全で低毒性な医薬として有用である。
脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合力を増強する化合物またはその塩は、 1 4 2 7 3に対するリガンドである脂肪酸が有する生理活性を増強することができるの で、 脂肪酸が有する生理活性に応じて安全で低毒性な医薬として有用である。 脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合力を減少させる化合物またはその塩は、 1 4 2 7 3に対するリガンドである脂肪酸が有する生理活性を減少させることができ るので、 脂肪酸の生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用で ある。
具体的には、 本発明のスクリ一二ング方法またはスクリ一ユング用キットを 用いて得られる （ i ) 1 4 2 7 3に対するァゴニストまたは （ii) 脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合力を増強する化合物またはその塩は、 例えば、 脂肪細胞から のグリセロール生成調節作用、血中ダルセロール調節作用、脂肪分解調節作用、 インスリン抵抗調節作用、 ストレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節作用 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成抑制作用、 血中ダルセロール低下作用、 脂肪分解抑制作用、 インスリン抵抗抑制作用、 ス トレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制作用） などを有 しているので、 脂肪細胞からのグリセロール生成調節剤、 血中ダルセロール調 節剤、 脂肪分解調節剤、 インスリン抵抗調節剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺 激ホルモン （A C T H) 分泌調節剤 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセロー ル生成抑制剤、 血中ダルセロール低下剤、 脂肪分解抑制剤、 インスリン抵抗抑 制剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤） など として有用である。
また、 本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて 得られる （ i ) 1 4 2 7 3に対するァゴニストまたは （ii) 脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合力を増強する化合物またはその塩は、例えば、糖尿病、耐糖能障害、 ケト—シス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高 脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機 能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大 症、 クッシング病、高プロラクチン血症、抗利尿ホルモン不適合分泌症候群) 、 癌 (例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 驛臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレ ルギ一、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食 症、 腸管ホルモン (例、 コレシストキニン （C C K) 、 ガストリ ックインヒビ トリーペプチド （G I P ) 、 ガストリン、 グルカゴン様ぺプチドー 1 (G L P - 1 ) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、 パソァクテ ィブインテスティナルぺプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニューロテンシ ン、 ガラニン、 ニューロペプチド γ、 エンケフアリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、 循環器疾患などの疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬 ィ匕、 狭心症、 心筋梗塞） に対する予防 ·治療剤またはストレス調節剤として有 用である。 '
また、 本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて 得られる （i ) 1 4 2 7 3に対するァゴニストまたは （ii) 脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合力を増強する化合物またはその塩は、 例えば、 動脈硬化、 動脈硬化 性疾患およびそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬化症、 末梢動脈閉 塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的冠動脈形成 術 （P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化 等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病な ど〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変およびそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈 疾患 （C HD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代謝異常症おょぴその続発症などの疾患 の予防 ·治療剤として使用することができる。
さらに、 本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用い て得られる （i ) 1 4 2 7 3に対するァゴ-ストまたは （ii) 脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合力を増強する化合物またはその塩は、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤として、 例えば、 A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染 症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内 障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 （例、 中心性肥満、 浮腫、 高血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨粗しょう症、 出血性 素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血症、 高コレステロール血、 耐糖能異常、 白血球増多症） 、 畐帽皮質の萎縮などの疾患の予防 台療剤とし て使用することができる。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られ る （ i ) 1 4 2 7 3に対するアンタゴニストまたは （ii) 脂肪酸と 1 4 2 7 3 との結合力を減少させる化合物またはその塩は、 例えば、 脂肪細胞からのグリ セロール生成調節作用、 血中ダルセロール調節作用、 脂肪分解調節作用、 イン スリン抵抗調節作用、 ス トレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節作用 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセロール生成促進作用、 血中 ダルセロール上昇作用、 脂肪分解促進作用、 インスリン抵抗促進作用、 ストレ- ス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進作用） などを有して いるので、脂肪細胞からのグリセ口ール生成調節剤、血中ダルセ口ール調節剤、 脂肪分解調節剤、 インスリン抵抗調節剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホル モン （A C T H) 分泌調節剤 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセロール生成 促進剤、 血中ダルセロール上昇剤、 脂肪分解促進剤、 インスリン抵抗促進剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤） などとして 有用である。
また、 本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて 得られる （i ) 1 4 2 7 3に対するアンタゴニス トまたは （ii) 脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合力を減少させる化合物またはその塩は、 例えば、 糖尿病、 耐糖 能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網 膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合分泌 症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 イン スリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高 血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食 障害、 拒食症、 腸管ホルモン （例、 コレシストキニン （C C K) 、 ガストリッ クインヒビトリーぺプチド (G I P ) 、 ガストリン、 グルカゴン様ぺプチドー 1 (G L P—1 ) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、
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ド、 モチリン、 サブスタンス P 一口テンシン、 ガラニン、 ニューロペプチド Y、 エンケファリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、 循環器疾患などの疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 とり わけ内臓脂肪蓄積型肥満症） に対する予防 ·治療剤またはストレス調節剤とし て有用である。
また、 本発明のスクリーユング方法またはスクリーニング用キットを用いて 得られる （i ) 1 4 2 7 3に対するアンタゴニストまたは （ii) 脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合力を減少させる化合物またはその塩は、 例えば、 動脈硬化、 動 脈硬化性疾患およびそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬化症、 末梢 動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的冠動 脈形成術 （P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管 石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血な ど） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変およびそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （C HD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代鹡す異常症およびその続発症など の疾患の予防 ·治療剤として使用することができる。
さらに、 本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用い て得られる （i ) 1 4 2 7 3に対するアンタゴニストまたは （ii) 脂肪酸と 1 4 2 7 3との結合力を減少させる化合物またはその塩は、 例えば、 副腎皮質刺 激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤として、 例えば、 結合組織疾患 （例えば、 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮 症） 、 腎疾患 （例、 ネフローゼ） 、 呼吸器系疾患 （例、 気管支喘息、 肺結核性 胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎） 、 消化器系疾患 （例えば、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変） 、 神経 •筋疾患 （例えば、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔 面神経麻痺） 、 血液疾患 （例えば、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生 不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫） 、 内分泌'代謝疾患 （例えば、 急性慢性 副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症） 、 皮膚疾患 （例えば、 蓴麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾 癬、 薬剤アレルギー） 、 アナフィラキシーショックなどの予防 ·治療剤などの 医薬として有用である。
また、 上記スクリーニングで得られた化合物またはその塩から誘導されるィ匕 合物またはその塩も同様に用いることができる。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られ る化合物またはその塩は、 後述する 1 4 2 7 3の発現量を変化させる化合物ま たはその塩、 上記疾患に対する他の薬物や、 他の糖尿病治療剤、 糖尿病性合併 症治療剤、 高脂血症治療剤、 降圧剤、 抗肥満剤、 利尿剤、 化学療法剤、 免疫療 法剤などの薬剤 (以下、 併用薬剤と略記することがある) と組み合わせて用い ることができる。 この際、 本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング 用キットを用いて得られる化合物またはその塩おょぴ併用薬剤の投与時期は限 定されず、 これらを投与対象に対し、 同時に投与してもよいし、 時間差をおい て投与してもよい。 併用薬剤の投与量は、 臨床上用いられている用量を基準と して適宜選択することができる。 また、 本発明のスクリーニング方法またはス クリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩と併用薬剤の配合 比は、 投与対象、 投与ルート、 対象疾患、 症状、 組み合わせなどにより適宜選 択することができる。 例えば投与対象がヒ トである場合、 例えばァゴニス ト 1 重量部に対し、 併用薬剤を 0. 0 1〜1 0 0重量部用いればよい。
他の糖尿病治療剤としては、 インスリン製剤 （例、 ゥシ、 ブタの膝臓から抽 出された動物インスリン製剤；大腸菌、 イーストを用い、 遺伝子工学的に合成 したヒ トインスリン製剤；インスリン亜鈴；プロタミンインスリン亜鈴；ィン スリンのフラグメントまたは誘導体 (例、 I NS— 1等） など） 、 インスリン 感受性増強剤 （例、 塩酸ピオグリタゾン、 トログリタゾン、 ロジグリタゾンま たはそのマレイン酸塩、 J TT— 5 0 1、 MCC— 5 5 5、 YM— 44 0、 G 1— 2 6 2 5 7 0、 KRP— 2 9 7、 FK— 6 1 4、 C S _ 0 1 1、 (γ Ε) -y - [ [ [4 - [ (5—メチル一2—フエエル一 4ーォキサゾリル） メ トキ シ] フエニル] メ トキシ] ィミノ] ベンゼンブタン酸等) 、 α—ダルコシダー ゼ阻害剤 (例、 ボグリボース、 ァカルボース、 ミグリ トール、 エミダリテート 等） 、 ビグアナィ ド剤 (例、 フェンホルミン、 メ トホルミン、 ブホルミン等） 、 スルホニルゥレア剤 (例、 トルブタミ ド、 ダリベンクラミ ド、 ダリクラジド、 クロルプロパミ ド、 トラザミ ド、 ァセトへキサミ ド、 グリクロビラミ ド、 ダリ メピリ ド等） やその他のインスリン分泌促進剤 （例、 レパグリニド、 セナダリ ュド、 ミチグリニドまたはそのカルシウム塩水和物、 GL P— 1、 ナテグリニ ド等） 、 ジぺプチジルぺプチダーゼ I V阻害剤 （例、 NVP— DP P— 2 7 8、 PT— 1 0 0、 P 3 2/9 8等） 、 β 3ァゴニスト (例、 C L _ 3 1 6 24 3、 S R— 5 8 6 1 1— A、 UL— TG— 3 0 7、 A J - 9 6 7 7, A Z 4 0 1 4 0等) 、 ァミリンァゴニスト (例、 プラムリンチド等） 、 ホスホチロシンホス ファタ一ゼ阻害剤 (例、 バナジン酸等) 、 糖新生阻害剤 （例、 グリコーゲンホ スホリラーゼ阻害剤、 グルコース一 6—ホスファターゼ阻害剤、 グルカゴン拮 抗剤等） 、 S G L T (sodium-glucose cotransporter) 阻害剤 （例、 T一 1 0 9 5等） 等が挙げられる。
糖尿病性合併症治療剤としては、 アルドース還元酵素阻害剤 （例、 トルレス タツ 卜、 ェパノレレスタツト、 ゼナレスタツト、 ゾポノレレスタツト、 フィダレス タツ ト （SNK—860) 、 ミナルレスタツ ト （AR 1— 509) 、 CT— 1 1 2等） 、 神経栄養因子 （例、 NGF、 NT— 3等） 、 AGE阻害剤 （例、 A LT- 945、 ピマゲジン、 ピラ トキサチン、 N—フエナシルチアゾリ ゥムブ ロミド （ALT— 76 6) 、 EXO— 226等） 、 活性酸素消去薬 （例、 チォ クト酸等） 、 脳血管拡張剤 （例、 チォプリ ド等） 等が挙げられる。
抗高脂血剤としては、 コレステロール合成阻害剤であるスタチン系化合物 （ 例、 プラバスタチン、 シンパスタチン、 口パスタチン、 了トルバスタチン、 フ ルパスタチン、 セリバスタチンまたはそれらの塩 (例、 ナトリゥム塩等) 等） 、 スクァレン合成酵素阻害剤あるいはトリグリセリ ド低下作用を有するフィブラ 一ト系化合物 (例、ベザフイブラート、 クロフイブラート、 シムフイブラート、 クリノフィブラート等) 等が挙げられる。
降圧剤としては、 アンジォテンシン変換酵素阻害剤 （例、 カプトプリル、 ェ ナラプリル、 デラプリル等) 、 アンジォテンシン II拮抗剤 (例、 口サルタン、 カンデサルタン、 シレキセチル等） 、 カルシウム拮抗剤 (例、 マユジピン、 二 フエジピン、 アムロジピン、 エホニジピン、 二カルジピン等) 、 クロ二ジン等 が挙げられる。
抗肥満剤としては、 例えば中枢性抗肥満薬 （例、 デキスフヱンフルァミン、 フェンフノレラミン、 フエンテルミン、 シブトラミン、 アンフエプラモン、 デキ サンフエタミン、 マジンドール、 フエ-ルプロパノールァミン、 クロべンゾレ ックス等） 、 膝リパーゼ阻害薬 (例、 オルリスタツト等) 、 β 3ァゴニスト ( 例、 CL一 3 1 6 24 3、 SR— 58 6 1 1— A、 UL— TG— 30 7、 A J 一 96 7 7、 AZ 40 140等） 、 ぺプチド性食欲抑制薬 （例、 レプチン、 C NTF (毛様体神経栄養因子） 等） 、 コレシストキニンァゴニスト （例、 リン チトリブト、 FP L— 1 5849等） 等が挙げられる。
利尿剤としては、 例えばキサンチン誘導体 （例、 サリチル酸ナトリ ウムテオ ブロミン、 サリチル酸カルシウムテオブロミン等) 、 チアジド系製剤 (例、 ェ チアジド、 シク口ペンチアジド、 トリク口ルメチアジド、 ヒ ドロクロロチアジ ド、 ヒ ドロフルメチアジド、 ベンジルヒ ドロクロ口チアジド、 ペンフルチジド、 ポリチアジド、 メチクロチアジド等） 、 抗アルドステロン製剤 （例、 スピロノ ラクトン、 トリアムテレン等） 、 炭酸脱水酵素阻害剤 （例、 ァセタゾラミド等 ) 、 クロルベンゼンスルホンアミド系製剤 （例、 クロルタリ ドン、 メフルシド、 インダパミド等） 、 ァゾセミ ド、 イソソルビド、 エタクリン酸、 ピレタニド、 ブメタニド、 フロセミ ド等が挙げられる。
化学療法剤としては、 例えばアルキル化剤 （例、 サイクロフォスフアミ ド、 ィフォスフアミド等） 、 代簡ォ拮抗剤 （例、 メソトレキセート、 5—フルォロウ ラシル等） 、 抗癌性抗生物質 (例、 マイトマイシン、 了ドリアマイシン等) 、 植物由来抗癌剤 （例、 ビンクリスチン、 ビンデシン、 タキソ一ル等） 、 シスプ ラチン、 カルボプラチン、 ェトポキシドなどが挙げられる。 なかでも 5—フル ォロウラシル誘導体であるフルツロンあるいはネオフルッロンなどが好ましい。 免疫療法剤としては、 例えば微生物または細菌成分 （例、 ムラミルジぺプチ ド誘導体、 ピシバニール等） 、 免疫増強活"生のある多糖類 （例、 レンチナン、 シゾフィラン、 クレスチン等) 、 遺伝子工学的手法で得られるサイト力イン ( 例、 インターフェロン、 インターロイキン ( I L) 等） 、 コ口ニー刺激因子 ( 例、 顆粒球コロニー刺激因子、 エリスロポエチン等） などが挙げられ、 なかで も I L一 1、 I L一 2、 I L一 1 2などが好ましい。
さらに、 動物モデルや臨床で悪液質改善作用が認められている薬剤、 すなわ ち、 シクロォキシゲナーゼ阻害剤 （例、 インドメタシン等） 〔キャンサー ' リ サーチ （Cancer Reseach) 、 第 49卷、 5 93 5〜 5 9 3 9頁、 1 98 9年〕 、 プロゲステロン誘導体 （例、 メゲステロールアセテート） 〔ジャーナル ·ォブ •クリニ力ノレ ·才ンコロジー (Journal of Clinical Oncology) 、 第 1 2卷、 2 1 3〜 2 2 5頁、 1 9 94年〕 、 糖質ステロイド (例、 デキサメサゾン等） 、 メ トクロプラミ ド系薬剤、 テトラヒ ドロカンナビノール系薬剤 （文献はいずれ も上記と同様） 、 脂肪代謝改善剤 （例、 エイコサペンタエン酸等） 〔プリティ シュ .ジャーナル ·オフ、、 ·キャンサー (British Journal of Cancer) 、 第 6 8 卷、 3 14〜 3 1 8頁、 1 9 93年〕 、 成長ホルモン、 I GF_ 1、 あるいは 悪液質を誘導する因子である TNF— a、 L I F、 I L— 6、 オンコスタチン Mに対する抗体なども本発明製剤と併用することができる。 さらに、 糖化阻害剤 (例、 ALT - 711等）、 神経再生促進薬 (例、 Y - 128、 VX853、 prosaptide等）、 抗うつ薬 (例、 デシプラミン、 アミ トリプチリン、 イミプラミ ン）、 抗てんかん薬 （例、 ラモトリジン） 、 抗不整脈薬 （例、 メキシレチン） 、 ァセチルコリン受容体リガンド (例、 ABT- 594)、 ェンドセリン受容体拮抗薬 （例 、 ABT-627) 、 モノアミン取り込み阻害薬 (例、 トラマドル)、麻薬性鎮痛薬 (例、 モルヒネ）、 G A B A受容体作動薬 （例、 ギヤバペンチン） 、 α 2受容体作動薬 (例、 クロ二ジン） 、 局所鎮痛薬 （例、 カブサイシン） 、 プロテインキナーゼ C 阻害剤（例、 LY-333531)、 抗不安薬 (例、 ベンゾチアゼピン) 、 ホスホジエステ ラーゼ阻害薬 （例、 シルデナフィル） 、 ドーパミン受容体作動薬 （例、 アポモ ルフィン） なども本発明製剤と併用することができる。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られ る化合物またはその塩を上記の医薬組成物として使用する場合、 常套手段に従 つて製剤化することができる。
例えば、 該化合物またはその塩は、 必要に応じて糖衣を施した錠剤、 カプセ ル剤、 エリキシル剤、 マイクロ力プセル剤などとして経口的に、 あるいは水も しくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、 または懸濁液剤など の注射剤の形で非経口的に使用できる。 例えば、 該化合物またはその塩を生理 学的に認められる公知の担体、 香味剤、 賦形剤、 べヒクル、 Ρ方腐剤、 安定剤、 結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混 和することによって製造することができる。 これら製剤における有効成分量は 指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
錠剤、 力プセル剤などに混和することができる添加剤としては、 例えば、 ゼ ラチン、 コーンスターチ、 トラガント、 アラビアゴムのような結合剤、 結晶性 セルロースのような賦形剤、 コーンスターチ、 ゼラチン、 アルギン酸などのよ うな膨化剤、 ステアリン酸マグネシゥムのような潤滑剤、 ショ糖、 乳糖または サッカリンのような甘味剤、 ペパーミント、 ァカモノ油またはチェリーのよう な香味剤などが用いられる。 調剤単位形態がカプセルである場合には、 上記タ ィプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。 注射のた めの無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、 胡麻油、 椰子油な どのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施 に従って処方することができる。 注射用の水性液としては、 例えば、 生理食塩 水、 ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液 （例えば、 D—ソルビトール、 D —マンニトール、 塩ィヒナトリウムなど） などが用いられ、 適当な溶角?補助剤、 例えば、 アルコール (例、 エタノール) 、 ポリアルコール (例、 プロピレング リコール、 ポリエチレングリコール） 、 非イオン性界面活性剤 （例、 ポリソル ペート 8 0 TM、 H C O - 5 0 ) などと併用してもよい。 油性液としては、 例え ば、 ゴマ油、 大豆油などが用いられ、 溶解捕助剤である安息香酸ベンジル、 ベ ンジルアルコールなどと併用してもよレ、。
また、 上記医薬は、 例えば、 緩衝剤 （例えば、 リン酸塩緩衝液、 酢酸ナトリ ゥム緩種 ί液） 、 無痛化剤 （例えば、 塩ィ匕ベンザルコニゥム、 塩酸プロ力インな ど） 、 安定剤 (例えば、 ヒト血淸アルブミン、 ポリエチレングリコールなど) 、 保存剤 （例えば、 ベンジルアルコール、 フエノールなど） 、 酸化防止剤などと 配合してもよい。 調製された注射液は通常、 適当なアンプルに充填される。 このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトゃ哺 乳動物 (例えば、 ラット、 マウス、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対して投与することができる。
例えば、 1 4 2 7 3に対するァゴニストの投与量は、 投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などにより差異はあるが、 経口投与の場合、 一般的に例えば、 糖尿病患者 （体重 6 0 k gとして） においては、 一日につき約 0 . 1〜： L 0 0 m g、 好ましくは約 1 . 0〜 5 0 m g、 より好ましくは約 1 . 0〜2 O m gであ る。 非経口的に投与する場合は、 その 1回投与量は投与対象、対象臓器、症状、 投与方法などによっても異なるが、 例えば、 注射剤の形では通常例えば、 糖尿 病患者 （体重 6 0 k gとして) においては、 一日につき約 0 . 0 1〜3 O m g 程度、 好ましくは約 0 . 1〜2 O m g程度、 より好ましくは約 0 . l〜1 0 m g程度を静脈注射により投与するのが好都合である。 他の動物の場合も、 体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。
( 7 ) 各種薬物の作用メカニズムの解明方法
1 4 2 7 3を用いることによって、 各種薬物が 1 4 2 7 3を介して薬理効果 を発揮している力否かを確認することができる。
すなわち、 本発明は、
(1) 14273を用いることを特徴とする、 （ i ) 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高 脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機 能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大 症、 クッシング病、高プロラクチン血症、抗利尿ホルモン不適合分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレ ルギ一、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 FFA症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食 症、 腸管ホルモン (例、 コレシストキュン (CCK) 、 ガストリックインヒビ 1、リーぺプチド (G I P) 、 ガストリン、 ダル力ゴン様ぺプチドー 1 (GL P 一 1) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、 バソァクテ ィブインテスティナルぺプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニューロテンシ ン、 ガラニン、 ニューロペプチド Y、 エンケファリン類、 ぺプチド ΥΥなど) の分泌障害、 循環器疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 拒食症、 肥満症） の予防 ·治療薬、 （ii) ストレス調節薬、 脂肪細 胞からのグリセ口ール生成調節薬、血中ダルセ口ール調節薬、脂肪分解調節薬、 インスリン抵抗調節薬、 （iii) 動脈硬化、 動脈硬化性疾患およびそれらの続発 症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安 定狭心症等の急性冠動脈症候群、経皮的冠動脈形成術 (PTCA)後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性 跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 Ta n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化 血管病変おょぴそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （CHD) 、 脳虚血など 〕 、 脂質代謝異常症およびその続発症などの疾患の予防 ·治療薬、 （iv) 副腎 皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌調節薬 （例、 分泌抑制薬、 分泌促進薬） 、 (V) ACTH産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 タツ シング症候群 （例、 中心性肥満、 浮腫、 高血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨粗しょう症、 出血性素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋 力低下、低カリゥム血症、 高コレステロール血、 耐糖能異常、 白血球増多症） 、 副腎皮質の萎縮などの疾患の予防 ·治療薬、 または （vi) 結合,組織疾患 （例え ば、 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症） 、 腎疾患 （例、 ネフローゼ） 、 呼吸器系疾患 （例、 気管支喘息、 肺結 核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎） 、 消化器系疾患 （例え ば、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変） 、 神経 ·筋疾患 （例えば、脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺） 、 血液疾患 （例えば、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再 生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫） 、 内分泌。代謝疾患 （例えば、 急性慢 性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症） 、 皮膚疾患 （例えば、 蓴麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギー) 、 アナフィラキシーショックなどの予防 ·治療薬が該 レセプター蛋白質またはその塩に結合することを確認する方法、
( 2 ) 1 4 2 7 3を用いることを特徴とする、 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトー シス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 （i ) 糖尿病網膜症、 高 脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機 能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大 症、 クッシング病、高プロラクチン血症、抗利尿ホルモン不適合分泌症候群) 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 勝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレ ルギ一、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食 症、 腸管ホルモン (例、 コレシストキニン ( C C K) 、 ガストリ ックインヒビ トリーぺプチド (G I P ) 、 ガストリン、 グルカゴン様ぺプチドー 1 (G L P 一 1 ) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、 バソァクテ ィブインテスティナルぺプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニューロテンシ ン、 ガラニン、 ニューロペプチド γ、 エンケフアリン類、 ペプチド γ γなど） の分泌障害、循環器疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞） の予防 ·治療薬、 （ii) ストレス調節薬、 脂肪細胞からのグリセ口 ール生成抑制薬、 血中ダルセロール低下薬、 脂肪分解抑制薬、 インスリン抵抗 抑制薬、 （iii) 動脈硬化、 動脈硬化†生疾患およびそれらの続発症 〔例えば、 了 テローム性動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急 性冠動脈症候群、 経皮的冠動脈形成術 ( P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭 心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 (脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体 硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変およ びそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （C HD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代謝 異常症およびその続発症などの疾患の予防 ·治療薬、 （iv) 副腎皮質刺激ホル モン （A C T H) 分泌抑制薬、 または （V ) A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 (例、 中心性肥満、 浮腫、 高 血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨粗しょう症、 出血性素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血症、 高コレステロ一 ル血、 耐糖能異常、 白血球増多症） 、 副腎皮質の萎縮などの疾患の予防 ·治療 薬が該レセプター蛋白質またはその塩に対するァゴニストであることを確認す 'る方法、
( 3 ) 1 4 2 7 3を用いることを特徴とする、 （ i ) 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高 脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機 能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大 症、クッシング病、高プロラクチン血症、抗利尿ホルモン不適合分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糠症、 インスリンァレ ルギ一、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食 症、 腸管ホルモン (例、 コレシストキニン ( C C K) 、 ガストリ ックインヒビ トリーぺプチド （G I P ) 、 ガストリン、 グルカゴン様ぺプチドー 1 (G L P 一 1 ) 、 ソマトスタチン、 ガス トリン放出ペプチド、 セクレチン、 バソァクテ イブインテスティナノレペプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニューロテンシ ン、 ガラニン、 ニューロペプチド γ、 エンケフアリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、 循環器疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 とりわけ内臓脂肪蓄積型肥 満症） の予防 ·治療薬、 （ii) ストレス調節薬、 脂肪細胞からのグリセロール 生成促進薬、 血中ダルセロール上昇薬、 脂肪分解促進薬、 インスリン抵抗促進 薬、 （ii i) 動脈硬化、 動脈硬化性疾患およびそれらの続発症 〔例えば、 ァテロ ーム性動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の,急性冠 動脈症候群、 経皮的冠動脈形成術 （P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症 等の虚血性心疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳 梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化 症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変おょぴそ れらの続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （C H D ) 、 脳虚血など〕 、 脂質代謝異常 症およびその続宪症などの疾患の予防 ·治療薬、 （iv) 副腎皮質刺激ホルモン (A C T H) 分泌促進薬、 または （V ) 結合組織疾患 （例えば、 慢性関節リウ マチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症） 、 腎疾患 (例、 ネフローゼ） 、 呼吸器系疾患 （例、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サル コィドーシス、 びまん性間質性肺炎） 、 消化器系疾患 (例えば、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変） 、 神経 ·筋疾患 （例え ば、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺） 、 血液疾患 （例えば、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白 血病、 悪性リンパ腫） 、 内分泌 ·代謝疾患 （例えば、 急性慢性副腎皮質機能不 全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症 ) 、 皮膚疾患 （例えば、 尊麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレル ギー） 、 アナフィラキシーショックなどの予防 ·治療薬が該レセプター蛋白質 またはその塩に対するアンタゴニストであることを確認する方法、
( 4 ) 各薬を 1 4 2 7 3に接触させた場合における、 各薬と 1 4 2 7 3との 結合量を測定することを特徴とする上記 （1 ) 〜 （3 ) 記載のスクリーニング 方法を提供する。
この確認方法は、 前記したリガンドと 1 4 2 7 3との結合性を変化させる化 合物またはその塩のスクリーニング方法において、 試験化合物に代えて、 上記 の薬物を使用することによつて実施することができる。
また、 本発明の確認方法用キットは、 前記したリガンドと 1 4 2 7 3との結 合性を変化させる化合物のスクリーニング用キットにおいて、 試験化合物に代 えて、 上記の薬物を含有するものである。
このように、 本発明の確認方法を用いることによって、 市販または開発途中 の各種薬物が 1 4 2 7 3を介して薬理効果を発揮していることを確認すること ができる。
( 8 ) 細胞膜における 1 4 2 7 3またはその部分べプチドの量を変化させる化 合物またはその塩を含有する医薬
本発明の抗体は、 1 4 2 7 3を特異的に認識することができるので、 細胞膜 における 1 4 2 7 3の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーユングに 用いることができる。
すなわち本発明は、 例えば、
( i ) 非ヒト哺乳動物の a ) 血液、 b ) 特定の臓器、 c ) 臓器から単離した 組織もしくは細胞等を破壌した後、 細胞膜画分を単離し、 細胞膜画分に含まれ る 1 4 2 7 3を定量することによる、 細胞膜における 1 4 2 7 3の量を変化さ せる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
(ii) 1 4 2 7 3を発現する形質転換体等を破壊した後、 細胞膜画分を単離 し、 細胞膜画分に含まれる 1 4 2 7 3を定量することによる、 細胞膜における
1 4 2 7 3の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
(ii i) 非ヒト哺乳動物の a ) 血液、 b ) 特定の臓器、 c ) 臓器から単離した 組織もしくは細胞等を切片とした後、 免疫染色法を用いることにより、 細胞表 層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、 細胞膜上の該蛋 白質を確認することによる、 細胞膜における 1 4 2 7 3の量を変化させる化合 物またはその塩のスクリーエング方法を提供する。
(iv) 1 4 2 7 3を発現する形質転換体等を切片とした後、 免疫染色法を用 いることにより、 細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化すること により、 細胞膜上の該蛋白質を確認することによる、 細胞膜における 1 4 2 7 3の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
細胞膜画分に含まれる 1 4 2 7 3の定量は具体的には以下のようにして行な 。
( i ) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物 （例えば、 マウス、 ラット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど、 より具体的には痴呆ラ ット、 肥満マウス、 動脈硬化ゥサギ、 担癌マウスなど） に対して、 薬剤 （例え ば、 抗痴呆薬、 血圧低下薬、 抗癌剤、 抗肥満薬など） あるいは物理的ス トレス (例えば、 浸水ス トレス、 電気ショック、 明暗、 低温など） などを与え、 一定 時間経過した後に、 血液、 あるいは特定の臓器 (例えば、 脳、 肝臓、 腎臓など ) 、 または臓器から単離した組織、 あるいは細胞を得る。 得られた臓器、 組織 または細胞等を、 例えば、 適当な緩衝液 （例えば、 トリス塩酸緩衝液、 リン酸 緩衝液、 へぺス緩衝液など） 等に懸濁し、 S蔵器、 組織あるいは細胞を破壌し、 界面活性剤（例えば、 トリ トン X I 0 0 TM、ツイーン 2 0 TMなど） などを用い、 さらに遠心分離や濾過、 カラム分画などの手法を用いて細胞膜画分を得る。
細胞膜画分としては、 細胞を破砕した後、 それ自体公知の方法で得られる細 胞膜が多く含まれる画分のことをいう。 細胞の破砕方法としては、 Potter— Elvehjera型ホモジナイザ一で細胞を押し潰す方法、 ヮーリングブレンダーゃポ リ トロン （Kinematica社製） のよる破碎、 超音波による破砕、 フレンチプレス などで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破碎などが挙 げられる。 細胞膜の分画には、 分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠 心力による分画法が主として用いられる。 例えば、 細胞破砕液を低速 ( 5 0 0 〜3 0 0 0 r p m) で短時間 （通常、 約 1〜 1 0分） 遠心し、 上清をさらに高 速 （1 5 0 0 0〜3 0 0 0 0 r p m) で通常 3 0分〜 2時間遠心し、 得られる 沈澱を膜画分とする。 該膜画分中には、 発現した 1 4 2 7 3と細胞由来のリン 脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
細胞膜画分に含まれる 1 4 2 7 3は、 例えば、 本発明の抗体を用いたサンド ィッチ免疫測定法、 ウェスタンプロット解析などにより定量することができる。 かかるサンドィツチ免疫測定法は上記の方法と同様にして行なうことができ、 ウェスタンプロットは自体公知の手段により行なうことができる。 (ii) 1 4 2 7 3を発現する形質転換体を上記の方法に従い作製し、 細胞膜 画分に含まれる 1 4 2 7 3を定量することができる。
細胞膜における 1 4 2 7 3の量を変化させる化合物またはその塩のスクリー ニングは、
( i ) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、 薬剤あるいは物理 的ストレスなどを与える一定時間前 （3 0分前〜 2 4時間前、 好ましくは 3 0 分前〜 1 2時間前、 より好ましくは 1時間前〜 6時間前） もしくは一定時間後 ( 3 0分後〜 3日後、 好ましくは 1時間後〜 2日後、 より好ましくは 1時間後 〜2 4時間後） 、 または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に被検化合物を投 与し、 投与後一定時間経過後 （ 3 0分後〜 3日後、 好ましくは 1時間後〜 2日 後、 より好ましくは 1時間後〜 2 4時間後） 、 細胞膜における 1 4 2 7 3の量 を定量することにより行なうことができ、
(ii)形質転換体を常法に従い培養する際に被検化合物を培地中に混合させ、 一定時間培養後 （1日後〜 7日後、 好ましくは 1日後〜 3日後、 より好ましく は 2日後〜 3日後） 、 細胞膜における 1 4 2 7 3の量を定量することにより行 なうことができる。
細胞膜画分に含まれる 1 4 2 7 3の確認は具体的には以下のようにして行な 5 o
(iii) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物 （例えば、 マウス、 ラット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど、 より具体的には痴呆ラ ット、 肥満マウス、 動脈硬化ゥサギ、 担癌マウスなど） に対して、 薬剤 （例え ば、 抗痴呆薬、 血圧低下薬、 抗癌剤、 抗肥満薬など) あるいは物理的ス トレス (例えば、 浸水ス トレス、 電気ショック、 明暗、 低温など） などを与え、 一定 時間経過した後に、 血液、 あるいは特定の臓器 （例えば、 脳、 肝臓、 腎臓など ) 、 または臓器から単離した組織、 あるいは細胞を得る。 得られた臓器、 組織 または細胞等を、 常法に従い組織切片とし、 本発明の抗体を用いて免疫染色を 行う。 細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、 細 胞膜上の該蛋白質を確認することにより、 定量的または定性的に、 細胞膜にお ける 1 4 2 7 3の量を確認することができる。 (iv) 1 4 2 7 3を発現する形質転換体等を用いて同様の手段をとることに より確認することもできる。
試験化合物としては、 例えば、 ペプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合 成化合物、 発酵生産物、 細胞抽出液、 植物抽出液、 動物組織抽出液、 血漿など が用いられ、 これら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公知の化合物で あってもよい。
試験化合物は塩を形成していてもよく、 試験化合物の塩としては、 生理学的 に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 （例、 有機酸など） などとの塩が用 いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩とし ては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸 硫酸など） との 塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイ ン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスル ホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩などが用いられる。
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、 細胞 膜における 1 4 2 7 3の量を変化させる作用を有する化合物またはその塩であ り、 具体的には、 （ィ） 細胞膜における 1 4 2 7 3の量を増加させることによ り、 1 4 2 7 3を介する細胞刺激活性を増強させる化合物またはその塩、 （口 ) 細胞膜における 1 4 2 7 3の量を減少させることにより、 該細胞刺激活性を 減弱させる化合物またはその塩である。
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物としては、 ぺプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合成化合物、 発酵生産物などが挙げられ、 これ ら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公知の化合物であってもよい。 本発明のスクリ一ユング方法を用いて得られる化合物は塩を形成していても よく、 該化合物の塩としては、 生理学的に許容される酸 （例、 無機酸など） や 塩基 （例、 有機酸など） などとの塩が用いられ、 とりわけ生理学的に許容され る酸付加塩が好ましい。 この様な塩としては、例えば、無機酸 （例えば、塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ 酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リ ンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との 塩などが用いられる。
細胞膜における 1 4 2 7 3の量を増加させる化合物またはその塩は、 1 4 2 7 3の機能不全に関連する疾患に対する安全で低毒性な予防 ·治療薬として有 用である。
細胞膜における 1 4 2 7 3の量を減少させる化合物またはその塩は、 1 4 2 7 3の発現過多に起因する疾患に対する安全で低毒性な予防 ·治療薬として有 用である。
具体的には、 1 4 2 7 3の量を増加させる化合物またはその塩は、 例えば、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成調節作用、 血中ダルセ口ール調節作用、 脂肪 分解調節作用、 インスリン抵抗調節作用、 ストレス調節作用、 副腎皮質刺激ホ ルモン （A C T H) 分泌調節作用 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセロール 生成抑制作用、 血中グルセロール低下作用、 脂肪分解抑制作用、 インスリン抵 抗抑制作用、 ストレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制 作用） などを有しているので、 脂肪細胞からのグリセロール生成調節剤、 血中 グルセロール調節剤、 脂肪分解調節剤、 インスリン抵抗調節剤、 ストレス調節 剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節剤 （好ましくは、 脂肪細胞か らのグリセロール生成抑制剤、 血中ダルセロール低下剤、 脂肪分解抑制剤、 ィ ンスリン抵抗抑制剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分 泌抑制剤） などとして有用である。
また、 1 4 2 7 3の量を増加させる化合物またはその塩は、例えば、糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿 病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満 症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩 症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合 分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、脂肪萎縮、癌性悪液質、高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂 食障害、 拒食症、 腸管ホルモン （例、 コレシストキニン （C C K) 、 ガストリ ックインヒビトリ一ペプチド （G I P ) 、 ガストリン、 グルカゴン様ペプチド 一 1 (G L P - 1 ) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、 バソアクティブインテスティナノレペプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニュ 一口テンシン、 ガラニン、 ニューロペプチド Y、 エンケフアリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、 循環器疾患などの疾患 （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥 満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞） に対する予防 ·治療剤またはストレス調節 剤として使用することができる。
また、 1 4 2 7 3の量を増加させる化合物またはその塩は、 例えば、 動脈硬 ィ匕、動脈硬化性疾患およびそれらの続発症〔例えば、ァテローム性動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的 冠動脈形成術 （P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出 血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変およびそれらの続発症 〔例え ば、 冠動脈疾患 （C HD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代 異常症およびその続発症 などの疾患の予防 ·治療剤として使用することができる。
さらに、 1 4 2 7 3の量を増加させる化合物またはその塩は、 例えば、 副腎 皮質刺激ホルモン （A C T H)分泌抑制剤として、例えば、 A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神 障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 （例、 中心性 肥満、 浮腫、 高血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨粗しょう症、 出血性素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血症、 高コレステロール血、 耐糖能異常、 白血球増多症） 、 副腎皮質の萎縮などの疾 患の予防 *治療剤として使用することができる。
1 4 2 7 3の量を減少させる化合物またはその塩は、 例えば、 脂肪細胞から のグリセロール生成調節作用、血中ダルセロール調節作用、脂肪分解調節作用、 インスリン抵抗調節作用、 ストレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節作用 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成促進作用、 血中グルセロール上昇作用、 脂肪分解促進作用、 インスリン抵抗促進作用、 ス トレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進作用） などを有 しているので、 脂肪細胞からのグリセロール生成調節剤、 血中ダルセロール調 節剤、 脂肪分解調節剤、 インスリン抵抗調節剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺 + 激ホルモン （A C T H) 分泌調節剤 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセロー ル生成促進剤、 血中ダルセロール上昇剤、 脂肪分解促進剤、 インスリン抵抗促 進剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤） など として有用である。
また、 1 4 2 7 3の量を減少させる化合物またはその塩は、例えば、糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿 病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満 症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩 症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合 分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、脂肪萎縮、癌性悪液質、高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂 食障害、 拒食症、 腸管ホルモン （例、 コレシストキニン （C C K) 、 ガストリ ックインヒビトリーぺプチド (G I P ) 、 ガストリン、 グルカゴン様ぺプチド 一 1 (G L P - 1 ) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出べプチド、 セクレチン、 バソアクティブインテスティナノレペプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニュ 一口テンシン、 ガラニン、 ニューロペプチド Y、 エンケフアリン類、 ぺプチド Υ Υなど） の分泌障害、 循環器疾患などの疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 とり わけ内臓脂肪蓄積型肥満症） に対する予防 ·治療剤またはストレス調節剤とし て使用することができる。
また、 1 4 2 7 3の量を減少させる化合物またはその塩は、 例えば、 動脈硬 ィ匕、動脈硬化性疾患およぴそれらの続発症〔例えば、ァテローム性動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的 冠動脈形成術 （P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出 血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変およびそれらの続発症 〔例え ば、 冠動脈疾患 （C HD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代謝異常症およびその続発症 などの疾患の予防 ·治療剤として使用することができる。
さらに、 1 4 2 7 3の量を減少させる化合物またはその塩は、 例えば、 副腎 皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤として、 例えば、 結合組織疾患 （例 えば、慢性関節リゥマチ、全身性ェリテマトーデス、多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症） 、 腎疾患 （例、 ネフローゼ） 、 呼吸器系疾患 （例、 気管支喘息、 肺結 核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎） 、 消化器系疾患 （例え ば、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変） 、 神経 ·筋疾患 （例えば、脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、重症筋無力症、 顔面神経麻痺） 、 血液疾患 （例えば、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再 生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫） 、 内分泌 ·代謝疾患 （例えば、 急性慢 性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症） 、 皮膚疾患 （例えば、 奪麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤ァレルギ一） 、 アナフィラキシーショックなどの予防 ·治療剤など の医薬として有用である。
また、 上記スクリーニングで得られた化合物またはその塩から誘導される化 合物またはその塩も同様に用いることができる。
本発明のスクリーニング方法を用!/、て得られる化合物またはその塩を医薬組 成物として使用する場合、 常套手段に従って製剤化することができる。
例えば、 該化合物またはその塩は、 必要に応じて糖衣を施した錠剤、 カプセ ル剤、 エリキシル剤、 マイクロカプセル剤などとして経口的に、 あるいは水も しくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌 '[4溶液、 または懸濁液剤など の注射剤の形で非経口的に使用できる。 例えば、 該化合物またはその塩を生理 学的に認められる公知の担体、 香味剤、 賦形剤、 べヒクル、 防腐剤、 安定剤、 結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混 和することによつて製造することができる。 これら製剤における有効成分量は 指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
錠剤、 カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、 例えば、 ゼ ラチン、 コーンスターチ、 トラガント、 アラビアゴムのような結合剤、 結晶性 セルロースのような賦形剤、 コーンスターチ、 ゼラチン、 アルギン酸などのよ うな膨化剤、 ステアリン酸マグネシゥムのような潤滑剤、 ショ糖、 乳糖または サッカリンのような甘味剤、 ペパーミント、 ァカモノ油またはチヱリーのよう な香味剤などが用いられる。 調剤単位形態がカプセルである場合には、 上記タ イブの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。 注射のた めの無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、 胡麻油、 椰子油な どのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施 に従って処方することができる。 注射用の水性液としては、 例えば、 生理食塩 水、 ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液 (例えば、 D—ソルビトール、 D 一マンニトール、 塩ィ匕ナトリウムなど） などが用いられ、 適当な溶解補助剤、 例えば、 アルコール (例、 エタノール） 、 ポリアルコール (例、 プロピレング リコール、 ポリエチレングリコール） 、 非イオン性界面活性剤 （例、 ポリソル ペート 8 0 TM、 H C O - 5 0 ) などと併用してもよい。 油性液としては、 例え ば、 ゴマ油、 大豆油などが用いられ、 溶解補助剤である安息香酸ベンジル、 ベ ンジルアルコールなどと併用してもよい。
また、 上記予防 ·治療薬は、 例えば、 緩衝剤 （例えば、 リン酸塩緩衝液、 酢 酸ナトリウム緩衝液） 、 無痛化剤 （例えば、 塩ィ匕ベンザルコニゥム、 塩酸プロ 力インなど） 、 安定剤 (例えば、 ヒト血淸アルブミン、 ポリエチレングリコー ルなど） 、 保存剤 （例えば、 ベンジルアルコール、 フエノールなど） 、 酸化防 止剤などと配合してもよい。 調製された注射液は通常、 適当なアンプルに充填 される。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトゃ哺 乳動物 （例えば、 ラット、 マウス、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対して投与することができる。
例えば、 細胞膜における 1 4 2 7 3の量を増加させる化合物またはその塩の 投与量は、 投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などにより差異はあるが、 経 口投与の場合、 一般的に例えば、 糖尿病患者 （体重 6 0 k gとして） において は、 一日にっき約 0 . ：！〜 1 0 0 m g、 好ましくは約 1 . 0〜5 0 m g、 より好 ましくは約 1 . 0〜2 0 m gである。 非経口的に投与する場合は、 その 1回投 与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、 注射剤の形では通常例えば、 糖尿病患者 （体重 6 O k gとして） においては、 一日につき約 0 . 0 1〜 3 0 m g程度、 好ましくは約 0 . 1〜 2 0 m g程度、 より好ましくは約 0 . 1〜 1 0 m g程度を静脈注射により投与するのが好都合 である。 他の動物の場合も、 体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与すること ができる。
( 9 ) 1 4 2 7 3に対する抗体を含有してなる医薬
1 4 2 7 3に対する抗体の中和活性とは、 1 4 2 7 3の関与するシグナル伝 達機能を不活性化する活性を意味する。 従って、 該抗体が中和活性を有する場 合は、 1 4 2 7 3の関与するシグナル伝達、 例えば、 1 4 2 7 3を介する細胞 刺激活性を不活性化することができる。
したがって、 1 4 2 7 3に対する抗体 （例、 中和抗体） は、 例えば、 脂肪細 胞からのグリセロール生成調節作用、 血中ダルセロール調節作用、 脂肪分解調 節作用、 インスリン抵抗調節作用、 ストレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン (A C T H) 分泌調節作用 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成促 進作用、 血中ダルセロール上昇作用、 脂肪分解促進作用、 インスリン抵抗促進 作用、 ストレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進作用） などを有しているので、 脂肪細胞からのグリセロール生成調節剤、 血中ダルセ ロール調節剤、 脂肪分解調節剤、 インスリン抵抗調節剤、 ストレス調節剤、 副 腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節剤 （好ましくは、 脂肪細胞からのグ リセロール生成促進剤、 血中グルセロール上昇剤、 脂肪分解促進剤、 インスリ ン抵抗促進剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進 剤） などとして有用である。
また、 1 4 2 7 3に対する抗体 (例、 中和抗体） は、 例えば、 糖尿病、 耐糖 能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網 膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合分泌 症候群） 、 癌 (例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 イン スリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高 血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食 障害、 拒食症、 腸管ホルモン （例、 コレシストキニン （C C K) 、 ガストリッ クインヒビトリーぺプチド （G I P ) 、 ガストリン、 グルカゴン様ぺプチドー 1 (G L P— 1 ) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、 バソアクティブィンテスティナルぺプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニュ 一口テンシン、 ガラニン、 ニューロペプチド Y、 エンケフアリン類、 ペプチド ΥΥなど） の分泌障害、 循環器疾患などの疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 とり わけ內臓脂肪蓄積型肥満症） の予防 ·治療剤またはストレス調節剤として用い ることができる。
また、 1 4 2 7 3に対する抗体 （例、 中和抗体） は、 例えば、 動脈硬化、 動 脈硬化性疾患おょぴそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬化症、 末梢 動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的冠動 脈形成術 （P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管 石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血な ど） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変およびそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （C HD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代謝異常症およびその続発症など の疾患の予防 ·治療剤として使用することができる。
さらに、 1 4 2 7 3に対する抗体 （例、 中和抗体） は、 例えば、 副腎皮質刺 激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤として、 例えば、 結合組織疾患 （例えば、 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮 症） 、 腎疾患 （例、 ネフローゼ） 、 呼吸器系疾患 （例、 気管支喘息、 肺結核性 胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎） 、 消化器系疾患 （例えば、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変） 、 神経 •筋疾患 （例えば、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔 面神経麻痺） 、 血液疾患 (例えば、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生 不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫） 、 内分泌 ·代謝疾患 （例えば、 急性慢性 副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C TH単独欠損症） 、 皮膚疾患 （例えば、 尊麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾 癬、 薬剤ァレルギ一） 、 アナフィラキシーショックなどの予防 ·治療剤などの 医薬として有用である。
(10) 本発明のアンチセンス DNAまたは s i RNAを含有してなる医薬 本発明のアンチセンス DNAまたは s i RNAは、 例えば、 脂 ¾ ^細胞からの グリセロール生成調節作用、 血中ダルセロール調節作用、 脂肪分解調節作用、 インスリン抵抗調節作用、 ストレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （ACT H) 分泌調節作用 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセロール生成促進作用、 血中ダルセロール上昇作用、 脂肪分解促進作用、 インスリン抵抗促進作用、 ス トレス調節作用、 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌促進作用） などを有 しているので、 脂肪細胞からのグリセロール生成調節剤、 血中ダルセロール調 節剤、 脂肪分解調節剤、 インスリン抵抗調節剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺 激ホルモン （ACTH) 分泌調節剤 （好ましくは、 脂肪細胞からのグリセロー ル生成促進剤、 血中ダルセロール上昇剤、 脂肪分解促進剤、 インスリン抵抗促 進剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌促進剤） など として有用である。
また、 本発明のアンチセンス DNAまたは s i RNAは、 例えば、 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿 病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満 症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩 症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合 分泌症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 腌臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、脂肪萎縮、癌性悪液質、高ィンスリン血症、 高血糖症、 高 FFA症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂 食障害、 拒食症、 腸管ホルモン (例、 コレシストキニン (CCK) 、 ガストリ ックインヒビトリーぺプチド (G I P) 、 ガストリン、 グルカゴン様ぺプチド 一 1 (GLP- 1) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、
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ド、 モチリン、 サブスタンス Ρ、 二 一口テンシン、 ガラニン、 ニューロペプチド Y、 エンケフアリン類、 ぺプチド YYなど） の分泌障害、 循環器疾患などの疾患 （特に、 拒食症、 肥満症、 とり わけ内 ϋ脂肪蓄積型肥満症） の予防 ·治療剤またはストレス調節剤として用い ることができる。
また、本発明のアンチセンス D NAまたは s i R N Aは、例えば、動脈硬化、 動脈硬化性疾患およびそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬化症、 末 梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症候群、 経皮的冠 動脈形成術 （P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血 管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血 など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕、ァテローム性動脈硬化血管病変おょぴそれらの続発症〔例えば、 冠動脈疾患 （C HD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代謝異常症およびその続発症など の疾患の予防 ·治療剤として使用することができる。
さらに、 本発明のアンチセンス D N Aまたは s i R NAは、 例えば、 副腎皮 質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤として、 例えば、 結合組織疾患 （例え ば、 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症） 、 腎疾患 （例、 ネフローゼ） 、 呼吸器系疾患 （例、 気管支喘息、 肺結 核性胸膜炎、 サルコィ ドーシス、 びまん性間質性肺炎） 、 消化器系疾患 （例え ば、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変） 、 神経 ·筋疾患 (例えば、脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺） 、 血液疾患 （例えば、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再 生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫） 、 内分泌 ·代謝疾患 （例えば、 急性慢 性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症） 、 皮膚疾患 （例えば、 尊麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤ァレルギ一） 、 アナブイラキシ一ショックなどの予防。治療剤など の医薬として有用である。
例えば、 該アンチセンス D N Aまたは s i R NAを用いる場合、 該アンチセ ンス D NAを単独あるいはレト口ウィルスベクター、 アデノウィルスベクター、 アデノウィルスァソシエーテツドウィルスベクターなどの適当なベクターに揷 入した後、 常套手段に従って実施することができる。 該アンチセンス D NAま たは s i RNAは、 そのままで、 あるいは摂取促進のために補助剤などの生理 学的に認められる担体とともに製剤化し、 遺伝子銃やハイドロゲルカテーテル のようなカテーテルによって投与できる。
さらに、 該アンチセンス DNAまたは s i RNAは、 組織や細胞における本 発明の DN Aの存在やその発現状況を調べるための診断用オリゴヌクレオチド プローブとして使用することもできる。
(1 1) 本発明の DN A導入動物の作製
本発明は、 外来性の本発明の DN A (以下、 本発明の外来性 DN Aと略記す る） またはその変異 DNA (本発明の外来性変異 DNAと略記する場合がある ) を有する非ヒト哺乳動物を提供する。
すなわち、 本発明は、
〔1〕 本発明の外来性 DNAまたはその変異 DNAを有する非ヒト哺乳動物、 〔2〕 非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第 〔1〕 記載の動物、
〔3〕 ゲッ歯動物がマウスまたはラットである第 〔2〕 記載の動物、 および 〔4〕 本発明の外来 1"生 DNAまたはその変異 DNAを含有し、 哺乳動物におい て発現しうる糸且換えベクターを提供するものである。
本発明の外来性 DN Aまたはその変異 DN Aを有する非ヒト哺乳動物 （以下、 本発明の DN A転移動物と略記する） は、 未受精卵、 受精卵、 精子およびその 始原細胞を含む胚芽細胞などに対して、 好ましくは、 非ヒト哺乳動物の発生に おける胚発生の段階 （さらに好ましくは、 単細胞または受精卵細胞の段階でか つ一般に 8細胞期以前） に、 リン酸カルシウム法、 電気パルス法、 リボフェク ション法、 凝集法、 マイクロインジェクション法、 パ ティクルガン法、 D E AE—デキストラン法などにより目的とする DNAを転移することによって作 出することができる。 また、 該 DN A転移方法により、 体細胞、 生体の臓器、 組織細胞などに目的とする本発明の外来性 DNAを転移し、 細胞培養、 組織培 養などに利用することもでき、 さらに、 これら細胞を上述の胚芽細胞と自体公 知の細胞融合法により融合させることにより本発明の DNA転移動物を作出す ることもできる。
非ヒト哺乳動物としては、 例えば、 ゥシ、 ブタ、 ヒッジ、 ャギ、 ゥサギ、 ィ ヌ、 ネコ、 モノレモット、 ハムスター、 マウス、 ラットなどが用いられる。 なか でも、 病体動物モデル系の作成の面から個体発生および生物サイクルが比較的 短く、 また、繁殖が容易なゲッ歯動物、 とりわけマウス （例えば、純系として、 C57BL/6系統， DBA 2系統など、 交雑系として、 お 6 C 3 F 系統， B DFi系統， B eD SFi系統， BALBZc系統， I CR系統など） またはラ ット （例えば、 Wi s t a r, SDなど） などが好ましい。
哺乳動物において発現しうる組換えベクターにおける「哺乳動物」 としては、 上記の非ヒト哺乳動物の他にヒトなどがあげられる。
本発明の外来性 DNAとは、 非ヒト哺乳動物が本来有している本発明の DN Aではなく、 いったん哺乳動物から単離 '抽.出された本発明の DNAをいう。 本発明の変異 DNAとしては、 元の本発明の DN Aの塩基配列に変異 （例え ば、 突然変異など） が生じたもの、 具体的には、 塩基の付加、 欠損、 他の塩基 への置換などが生じた DNAなどが用いられ、 また、 異常 DNAも含まれる。 該異常 DN Aとしては、 異常な 14273を発現させる DNAを意味し、 例 えば、 正常な 14273の機能を抑制する 14273を発現させる DN Aなど が用いられる。
本発明の外来性 D N Aは、 対象とする動物と同種あるいは異種のどちらの晡 乳動物由来のものであってもよい。 本発明の DNAを対象動物に転移させるに あたっては、 該 DNAを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結合し た DNAコンストラタトとして用いるのが一般に有利である。 例えば、 本発明 のヒト DNAを転移させる場合、 これと相同 1"生が高い本発明の DNAを有する 各種哺乳動物 （例えば、 ゥサギ、 ィヌ、 ネコ、 モルモット、 ハムスター、 ラッ ト、 マウスなど) 由来の D N Aを発現させうる各種プ口モータ一の下流に、 本 発明のヒ ト DNAを結合した DNAコンストラクト (例、 ベクターなど) を対 象哺乳動物の受精卵、 例えば、 マウス受精卵へマイクロインジェクションする ことによつて本発明の D N Aを高発現する D N A転移哺乳動物を作出すること ができる。 .
14273の発現ベクターとしては、 大腸菌由来のプラスミド、 枯草菌由来 のプラスミド、酵母由来のプラスミド、 えファージなどのパクテリオファージ、 モロニ一白血病ウィルスなどのレトロウイルス、 ワクシニアウィルスまたはパ キュロウィルスなどの動物ウィルスなどが用いられる。 なかでも、 大腸菌由来 のプラスミ ド、 枯草菌由来のプラスミ ドまたは酵母由来のプラスミ ドなどが好 ましく用いられる。
上記の DNA発現調節を行なうプロモーターとしては、 例えば、 （i ) ウイ ルス （例、 シミアンウィルス、 サイ トメガロウィルス、 モロニ一白血病ウィル ス、 J Cウィルス、 乳癌ウィルス、 ポリオウイルスなど） に由来する DNAの プロモーター、 （ii) 各種哺乳動物 （ヒ ト、 ゥサギ、 ィヌ、 ネコ、 モルモット、 ハムスター、 ラット、 マウスなど） 由来のプロモーター、 例えば、 アルブミン、 インスリン I I、 ゥロプラキン I I、 エラスターゼ、 エリスロポエチン、 ェン ドセリン、 筋クレアチンキナーゼ、 グリア線維性酸性蛋白質、 ダルタチオン S 一トランスフェラーゼ、 血小板由来成長因子 ]3、 ケラチン K l， Κ 1 0および Κ 1 4、 コラーゲン I型および I I型、 サイクリック AMP依存蛋白質キナー ゼ β Iサブュニット、 ジストロフィン、 酒石酸抵抗性アル力リフォスファタ一 ゼ、 心房ナトリゥム利尿性因子、 内皮レセプターチ口シンキナーゼ (一般に Τ i e 2と略される） 、 ナトリゥムカリゥムアデノシン 3リン酸化酵素 （N a， K— ATP a s e) 、 ニューロフイラメント軽鎖、 メタ口チォネイン Iおよび I I A、 メタ口プロティナーゼ 1組織インヒビター、 MHCクラス I抗原 (H - 2 L) 、 H— r a s、 レニン、 ドーパミン /3—水酸化酵素、 甲状腺ペルォキ シダーゼ (TPO) 、 ぺプチド鎖延長因子 1 a (E F- 1 α) 、 βァクチン、 a および ]3ミオシン重鎖、 ミオシン軽鎖 1および 2、 ミエリン基礎蛋白質、 チロ グロプリン、 T h y— 1、 免疫グロブリン、 H鎖可変部 (VNP) 、 血清アミ ロイド Pコンポーネント、 ミオグロビン、 トロポニン C、 平滑筋《ァクチン、 プレプロエンケファリン 、 バソプレシンなどのプロモーターなどが用いられ る。 なかでも、 全身で高発現することが可能なサイ トメガロウィルスプロモー ター、 ヒ トペプチド鎖延長因子 1 （EF— 1 ひ） のプロモーター、 ヒ トおよ びニヮトリ /3ァクチンプロモーターなどが好適である。
上記ベクターは、 DNA転移哺乳動物において目的とするメッセンジャー R NAの転写を終結する配列 （一般にターミネータ一と呼ばれる） を有している ことが好ましく、 例えば、 ウィルス由来おょぴ各種哺乳動物由来の各 D NAの 配列を用いることができ、 好ましくは、 シミアンウィルスの S V 4 0ターミネ 一ターなどが用いられる。
その他、 目的とする外来性 D NAをさらに高発現させる目的で各 D NAのス プライシングシグナル、 ェンハンサー領域、 真核 D N Aのイントロンの一部な どをプロモーター領域の 5， 上流、 プロモーター領域と翻訳領域間あるいは翻 訳領域の 3 ' 下流 に連結することも目的により可能である。
正常な 1 4 7 3の翻訳領域は、 ヒトまたは各種哺乳動物 (例えば、 ゥサギ、 ィヌ、 ネコ、 モルモット、 ハムスター、 ラット、 マウスなど） 由来の肝臓、 腎 臓、 甲状腺細胞、 線維芽細胞由来 D N Aおよび市販の各種ゲノム D N Aライブ ラリーよりゲノム D NAの全てあるいは一部として、 または肝臓、 腎臓、 甲状 腺細胞、 線維芽細胞由来 R NAより公知の方法により調製された相補 D N Aを 原料として取得することが出来る。 また、 外来性の異常 D NAは、 上記の細胞 または ,組織より得られた正常な 1 4 2 7 3の翻訳領域を点突然変異誘発法によ り変異した翻訳領域を作製することができる。
該翻訳領域は転移動物において発現しうる D N Aコンストラクトとして、 前 記のプロモーターの下流および所望により転写終結部位の上流に連結させる通 常の D N A工学的手法により作製することができる。
受精卵細胞段階における本発明の外来性 D N Aの転移は、 対象哺乳動物の胚 芽細胞および体細胞のすべてに存在するように確保される。 D N A転移後の作 出動物の胚芽細胞において、 本発明の外来性 D N Aが存在することは、 作出動 物の後代がすべて、 その胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性 D N Aを保持することを意味する。 本発明の外来性 D N Aを受け継いだこの種の動 物の子孫はその胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性 D N Aを有す る。
本発明の外来性正常 D N Aを転移させた非ヒト哺乳動物は、 交配により外来 性 D N Aを安定に保持することを確認して、 該 D N A保有動物として通常の飼 育環境で継代飼育することが出来る。
受精卵細胞段階における本発明の外来性 D N Aの転移は、 対象哺乳動物の胚 芽細胞および体細胞の全てに過剰に存在するように確保される。 D NA転移後 の作出動物の胚芽細胞において本発明の外来性 D N Aが過剰に存在することは、 作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性 D N Aを過剰に有することを意味する。 本発明の外来性 D N Aを受け継いだこの種 の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性 D N Aを過 剰に有する。
導入 D N Aを相同染色体の両方に持つホモザィゴート動物を取得し、 この雌 雄の動物を交配することによりすべての子孫が該 D N Aを過剰に有するように 繁殖継代することができる。
本発明の正常 D NAを有する非ヒト哺乳動物は、 本発明の正常 D NAが髙発 現させられており、 内在性の正常 D N Aの機能を促進することにより最終的に 1 4 2 7 3の機能亢進症を発症することがあり、 その病態モデル動物として利 用することができる。 例えば、 本発明の正常 D N A転移動物を用いて、 1 4 2 7 3の機能宂進症や、 1 4 2 7 3が関連する疾患の病態機序の解明およびこれ らの疾患の治療方法の検討を行なうことが可能である。
また、 本発明の外来性正常 D N Aを転移させた哺乳動物は、 遊離した 1 4 2 7 3の増加症状を有することから、 1 4 2 7 3に関連する疾患に対する治療薬 のスクリーニング試験にも利用可能である。
一方、 本発明の外来性異常 D NAを有する非ヒト哺乳動物は、 交配により外 来 1"生 D N Aを安定に保持することを確認して該 D N A保有動物として通常の飼 育環境で継代飼育することが出来る。 さらに、 目的とする外来 D N Aを前述の プラスミ ドに組み込んで原料として用いることができる。 プロモーターとの D N Aコンス トラク卜は、 通常の D N A工学的手法によつて作製することができ る。 受精卵細胞段階における本発明の異常 D N Aの転移は、 対象哺乳動物の胚 芽細胞おょぴ体細胞の全てに存在するように確保される。 D NA転移後の作出 動物の fl丕芽細胞において本発明の異常 D N Aが存在することは、 作出動物の子 孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常 D N Aを有すること を意味する。 本発明の外来性 D NAを受け継いだこの種の動物の子孫は、 その 胚芽細胞およぴ体細胞の全てに本発明の異常 D N Aを有する。 導入 D N Aを相 同染色体の両方に持つホモザィゴート動物を取得し、 この雌雄の動物を交配す ることによりすべての子孫が該 DN Aを有するように繁殖継代することができ る。
本発明の異常 DNAを有する非ヒト哺乳動物は、 本発明の異常 DNAが高発 現させられており、 内在性の正常 DNAの機能を阻害することにより最終的に
142 73の機能不活性型不応症となることがあり、 その病態モデル動物とし て利用することができる。 例えば、 本発明の異常 DNA転移動物を用いて、 1 427 3の機能不活性型不応症の病態機序の解明およびこの疾患を治療方法の 検討を行なうことが可能である。
また、 具体的な利用可能性としては、 本発明の異常 DNA高発現動物は、 1 427 3の機能不活性型不応症における本発明の異常 1 42 73による正常 1 427 3の機能阻害 （dominant negative作用） を解明するモデルとなる。 また、 本発明の外来異常 DNAを転移させた哺乳動物は、 遊離した 1 4 2 7 3の増加症状を有することから、 1 42 7 3の機能不活性型不応症に対する治 療薬スクリーニング試験にも利用可能である。
また、 上記 2種類の本発明の DN A転移動物のその他の利用可能性として、 例えば、
( i ) 組織培養のための細胞源としての使用、
(ii) 本発明の DNA転移動物の組織中の DNAもしくは RNAを直接分析す る力 または DNAにより発現された 1 42 73を分析することによる、 1 4
2 73により特異的に発現あるいは活性ィヒする 14273との関連性について の解析、
(iii) DNAを有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、 これらを 使用して、 一般に培養困難な組織からの細胞の機能の研究、
(iv) 上記 （iii) 記載の細胞を用いることによる細胞の機能を高めるような薬 剤のスクリーニング、 および
(V) 本発明の変異 1 42 73を単離精製およびその抗体作製などが考えられ る。
さらに、 本発明の DNA転移動物を用いて、 1 4273の機能不活性型不応 症などを含む、 1 4 2 7 3に関連する疾患の臨床症状を調べることができ、 ま た、 1 4 2 7 3に関連する疾患モデルの各臓器におけるより詳細な病理学的所 見が得られ、 新しい治療方法の開発、 さらには、 該疾患による二次的疾患の研 究ぉよぴ治療に貢献することができる。
また、 本発明の D NA転移動物から各臓器を取り出し、 細切後、 トリプシン などの蛋白質分解酵素により、 遊離した D N A転移細胞の取得、 その培養また はその培養細胞の系統^ f匕を行なうことが可能である。 さらに、 1 4 2 7 3産生 細胞の特定化、 アポトーシス、 分化あるいは増殖との関連性、 またはそれらに おけるシグナル伝達機構を調べ、 それらの異常を調べることなどができ、 1 4 2 7 3およびその作用解明のための有効な研究材料となる。
さらに、 本発明の D NA転移動物を用いて、 1 4 2 7 3の機能不活性型不応 症を含む、 1 4 2 7 3に関連する疾患の治療薬の開発を行なうために、 上述の 検査法および定量法などを用いて、 有効で迅速な該疾患治療薬のスクリ '一ニン グ法を提供することが可能となる。 また、 本発明の D NA転移動物または本発 明の外来性 D N A発現ベクターを用いて、 1 4 2 7 3が関連する疾患の D NA 治療法を検討、 開発することが可能である。
( 1 2 ) ノックァゥト動物
本発明は、 本発明の D N Αが不活'生化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞および 本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳動物を提供する。
すなわち、 本発明は、
〔1〕 本発明の D N Aが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞、
〔2〕 該 D N Aがレポーター遺伝子 (例、 大腸菌由来の ]3—ガラクトシダーゼ 遺伝子） を導入することにより不活性化された第 〔1〕 項記載の胚幹細胞、 〔3〕 ネオマイシン耐性である第 〔1〕 項記载の胚幹細胞、
〔4〕 非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第 〔1〕 項記載の胚幹細胞、 〔5〕 ゲッ歯動物がマウスである第 〔4〕 項記載の胚幹細胞、
〔6〕 本発明の D NAが不活性化された該 D N A発現不全非ヒト哺乳動物、 〔7〕 該 D NAがレポーター遺伝子 （例、 大腸菌由来の! 8—ガラクトシダーゼ 遺伝子） を導入することにより不活性化され、 該レポーター遺伝子が本発明の DNAに対するプロモーターの制御下で発現しうる第 〔6〕 項記載の非ヒト哺 乳動物、
〔8〕 非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第 〔6〕 項記載の非ヒト哺乳動物、 〔9〕 ゲッ歯動物がマウスである第 〔8〕 項記載の非ビト哺乳動物、 および 〔1 0〕 第 〔7〕 項記載の動物に、 試験化合物を投与し、 レポーター遺伝子の 発現を検出することを特徴とする本発明の DNAに対するプロモーター活性を 促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。 本発明の DNAが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞とは、 該非ヒト哺 乳動物が有する本発明の DNAに人為的に変異を加えることにより、 DNAの 発現能を抑制するか、 もしくは該 DNAがコードしている 1 42 7 3の活性を 実質的に喪失させることにより、 DNAが実質的に1 427 3の発現能を有さ ない （以下、 本発明のノックアウト DNAと称することがある） 非ヒト哺乳動 物の胚幹細胞 （以下、 E S細胞と略記する） をいう。
非ヒト哺乳動物としては、 前記と同様のものが用いられる。
本発明の DNAに人為的に変異を加える方法としては、 例えば、 遺伝子工学 的手法により該 DNA配列の一部又は全部の削除、 他 DNAを挿入または置換 させることによって行なうことができる。 これらの変異により、 例えば、 コド ンの読み取り枠をずらしたり、 プロモーターあるいはェキソンの機能を破壊す ることにより本発明のノックアウト D N Aを作製すればょレ、。
本発明の DNAが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞 （以下、 本発明の DNA不活性化 E S細胞または本発明のノックァゥト E S細胞と略記する） の 具体例としては、 例えば、 目的とする非ヒト哺乳動物が有する本発明の DNA を単離し、 そのェキソン部分にネオマイシン耐 '性遺伝子、 ハイグロマイシン耐 性遺伝子を代表とする薬剤耐性遺伝子、 あるいは 1 a c Z (β—ガラク トシダ ーゼ遺伝子） 、 c a t (クロラムフエニコ一ルァセチルトランスフェラ一ゼ遣 伝子） を代表とするレポータ一遺伝子等を挿入することによりェキソンの機能 を破壊するか、 あるいはェキソン間のイントロン部分に遺伝子の転写を終結さ せる DNA配列 (例えば、 poly A付加シグナルなど) を挿入し、 完全なメッセ ンジャー RN Aを合成できなくすることによって、 結果的に遺伝子を破壊する ように構築した DNA配列を有する DNA鎖 （以下、 ターゲッティングベクタ 一と略記する） を、 例えば相同糸且換え法により該動物の染色体に導入し、 得ら れた E S細胞について本発明の DN A上あるいはその近傍の DN A配列をプロ ーブとしたサザンハイブリダィゼーシヨン解析あるいはターゲッティングべク ター上の D N A配列とターゲッティングベクタ一作製に使用した本発明の D N A以外の近傍領域の DN A配列をプライマーとした PCR法により解析し、 本 発明のノックアウト E S細胞を選別することにより得ることができる。
また、 相同組換え法等により本発明の DNAを不活化させる元の E S細胞と しては、 例えば、 前述のような既に樹立されたものを用いてもよく、 また公知 Evansと Kaufmaの方法に準じて新しく樹立したものでもよい。 例えば、 マウスの ES細胞の場合、 現在、 一般的には 1 29系の E S細胞が使用されているが、 免疫学的背景がはっきりしていないので、 これに代わる純系で免疫学的に遺伝 的背景が明らかな E S細胞を取得するなどの目的で例えば、 C57BL/6マ ウスや C 57 B LZ 6の採卵数の少なさを DBA/ 2との交雑により改善した BDFiマウス （C 57BL/6と DBA/2との を用いて樹立したもの なども良好に用いうる。 BDFiマウスは、 採卵数が多く、 かつ、 卵が丈夫であ るという利点に加えて、 C 57 B LZ6マウスを背景に持つので、 これを用い て得られた E S細胞は病態モデルマゥスを作出したとき、 C 57 B L/6マウ スとバッククロスすることでその遺伝的背景を C 57 B L/6マウスに代える ことが可能である点で有利に用い得る。
また、 ES細胞を樹立する場合、 一般には受精後 3. 5日目の胚盤胞を使用す るが、 これ以外に 8細胞期胚を採卵し胚盤胞まで培養して用いることにより効 率よく多数の初期胚を取得することができる。
また、 雌雄いずれの E S細胞を用いてもよいが、 通常雄の ES細胞の方が生 殖系列キメラを作出するのに都合が良い。 また、 煩雑な培養の手間を削減する ためにもできるだけ早く雌雄の判別を行なうことが望ましい。
E S細胞の雌雄の判定方法としては、 例えば、 P C R法により Y染色体上の 性決定領域の遺伝子を増幅、 検出する方法が、 その 1例としてあげることがで きる。 この方法を使用すれば、 従来、 核型分析をするのに約 106個の細胞数を 要していたのに対して、 1コロニー程度の E S細胞数（約 50個） で済むので、 培養初期における E S細胞の第一次セレクションを雌雄の判別で行なうこと力 S 可能であり、 早期に雄細胞の選定を可能にしたことにより培養初期の手間は大 幅に削減できる。
また、 第二次セレクションとしては、 例えば、 G—バンデイング法による染 色体数の確認等により行うことができる。 得られる E S細胞の染色体数は正常 数の 1 00%が望ましいが、 樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、 E S細胞の遺伝子をノックアウトした後、 正常細胞 （例えば、 マウスでは染色 体数が 2 n = 40である細胞） に再ぴクローニングすることが望ましい。
このようにして得られた胚幹細胞株は、 通常その増殖性は大変良いが、 個体 発生できる能力を失いやすいので、 注意深く継代培養することが必要である。 例えば、 S T O繊維芽細胞のような適当なブイ一ダー細胞上で L I F ( 1〜 1 000 OU/ml) 存在下に炭酸ガス培養器内 （好ましくは、 5%炭酸ガス、 9 5 %空気または 5%酸素、 5%炭酸ガス、 90%空気） で約 3 7°Cで培養するな どの方法で培養し、 ¾代時には、 例えば、 トリプシン ZED T A溶液 （通常 00 1〜 0. 5%トリプシン Z 0. 1~5 mM E D T A、 好ましくは約 0. 1 % トリプシン/ ImM EDTA) 処理により単細胞化し、 新たに用意したフィー ダー細胞上に播種する方法などがとられる。 このような継代は、 通常 1〜 3日 毎に行なうが、 この際に細胞の観察を行い、 形態的に異常な細胞が見受けられ た場合はその培養細胞は放棄することが望まれる。
E S細胞は、 適当な条件により、 高密度に至るまで単層培養するか、 または 細胞集塊を形成するまで浮遊培養することにより、 頭頂筋、 内臓筋、 心筋など の種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり [M. J. Evans及ぴ M. H. Kaufman, ネイチヤー （Nature) 第 292卷、 154頁、 1981年； G. R. Martin プロ シーディングス ·ォブ ·ナショナル' ·アカデミー ·ォブ ·サイエンス ·ユーェ スエー （Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.) 第 78卷、 7634頁、 1981年； T. C. Doetschraan ら、 ジャーナノレ ·ォブ ·ェンブリオロジー ·アンド .ェクスペリメ ンタル.モルフォロジ一、 第 87卷、 27頁、 1985年〕 、 本発明の E S細胞を分化 させて得られる本発明の DNA発現不全細胞は、 インビト口における 1 427 3または 1 4 2 7 3の細胞生物学的検討において有用である。
本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳動物は、 該動物の mR N A量を公知方法 を用いて測定して間接的にその発現量を比較することにより、 正常動物と区別 することが可能である。
該非ヒト哺乳動物としては、 前記と同様のものが用いられる。
本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳動物は、 例えば、 前述のようにして作製 したターゲッティングベクターをマウス胚幹細胞またはマウス卵細胞に導入し、 導入によりターゲッティングベクタ一の本発明の D N Aが不活性化された D N A配列が遺伝子相同組換えにより、 マウス胚幹細胞またはマウス卵細胞の染色 体上の本発明の D N Aと入れ換わる相同組換えをさせることにより、 本発明の D N Aをノックァゥトさせることができる。
本発明の D N Aがノックァゥトされた細胞は、 本発明の D N A上またはその 近傍の D N A配列をプローブとしたサザンハイプリダイゼーシヨン解析または ターゲッティングベクター上の D NA配列と、 ターゲッティングベクターに使 用したマウス由来の本発明の D NA以外の近傍領域の D NA配列とをプライマ 一とした P C 法による解析で判定することができる。 非ヒト哺乳動物胚幹細 胞を用いた場合は、 遺伝子相同組換えにより、 本発明の D NAが不活性化され た細胞株をクローニングし、 その細胞を適当な時期、 例えば、 8細胞期の非ヒ ト哺乳動物胚または胚盤胞に注入し、 作製したキメラ胚を偽妊娠させた該非ヒ ト哺乳動物の子宮に移植する。 作出された動物は正常な本発明の D NA座をも つ細胞と人為的に変異した本発明の D N A座をもつ細胞との両者から構成され るキメラ動物である。
該キヌラ動物の生殖細胞の一部が変異した本発明の D N A座をもつ場合、 こ のようなキメラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体群より、 全 ての組織が人為的に変異を加えた本発明の D N A座をもつ細胞で構成された個 体を、 例えば、 コートカラーの判定等により選別することにより得られる。 こ のようにして得られた個体は、通常、 1 4 2 7 3のへテロ発現不全個体であり、 1 4 2 7 3のへテロ発現不全個体同志を交配し、 それらの産仔から 1 4 2 7 3 のホモ発現不全個体を得ることができる。 卵細胞を使用する場合は、 例えば、 卵細胞核内にマイクロインジェクション 法で D N A溶液を注入することによりタ一ゲッティングベクターを染色体内に 導入したトランスジェニック非ヒト哺乳動物を得ることができ、 これらのトラ ンスジヱニック非ヒト哺乳動物に比べて、 遺伝子相同糸且換えにより本発明の D NA座に変異のあるものを選択することにより得られる。
このようにして本発明の D N Aがノックァゥトされている個体は、 交配によ り得られた動物個体も該 D N Aがノックァゥトされていることを確認して通常 の飼育環境で飼育継代を行なうことができる。
さらに、生殖系列の取得および保持についても常法に従えばよい。すなわち、 該不活化 D N Aの保有する雌雄の動物を交配することにより、 該不活化 D NA を相同染色体の両方に持つホモザィゴート動物を取得しうる。 得られたホモザ ィゴート動物は、 母親動物に対して、 正常個体 1 , ホモザィゴート複数になる ような状態で飼育することにより効率的に得ることができる。 ヘテロザィゴー ト動物の雌雄を交配することにより、 該不活化 D N Aを有するホモザィゴート およびへテ口ザィゴート動物を繁殖継代する。
本発明の D NAが不活性ィヒされた非ヒト哺乳動物胚幹細胞は、 本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物を作出する上で、 非常に有用である。
また、 本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳動物は、 1 4 2 7 3により誘導さ れ得る種々の生物活性を欠失するため、 1 4 2 7 3の生物活性の不活性化を原 因とする疾病のモデルとなり得るので、 これらの疾病の原因究明及ぴ治療法の 検討に有用である。
( 1 2 a ) 本発明の D NAの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療 ·予 防効果を有する化合物のスクリーユング方法
本-発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物は、 本発明の D NAの欠損や損傷な どに起因する疾病に対して治療 ·予防効果を有する化合物のスクリ一二ングに 用いることができる。
すなわち、 本発明は、 本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物 を投与し、 該動物の変化を観察 '測定することを特徴とする、 本発明の D NA の欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療 ·予防効果を有する化合物また はその塩のスクリ一二ング方法を提供する。
該スクリーニング方法において用いられる本発明の D NA発現不全非ヒト哺 乳動物としては、 前記と同様のものがあげられる。
試験化合物としては、 例えば、 ペプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合 成化合物、 発酵生産物、 細胞抽出液、 植物抽出液、 動物組織抽出液、 血漿など があげられ、 これら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公知の化合物で あってもよい。 .
試験化合物は塩を形成していてもよく、 試験化合物の塩としては、 生理学的 に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 （例、 有機酸など） などとの塩が用 いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸'付加塩が好ましい。 この様な塩とし ては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との 塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイ ン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスル ホン酸、 ベンゼンスルホン酸など) との塩などが用いられる。
具体的には、 本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物を、 試験化合物で処理 し、 無処理の対照動物と比較し、 該動物の各器官、 組織、 疾病の症状などの変 化を指標として試験化合物の治療 ·予防効果を試験することができる。■ 試験動物を試験化合物で処理する方法としては、 例えば、 経口投与、 静脈注 射などが用いられ、 試験動物の症状、 試験化合物の性質などにあわせて適宜選 択することができる。 また、 試験化合物の投与量は、 投与方法、 試験化合物の 性質などにあわせて適宜選択することができる。
該スクリーニング方法において、 試験動物に試験化合物を投与した場合、 該 試験動物の血糖値、 血中グリセ口一ル値ゃ上記疾患症状が約 1 0 %以上、 好ま しくは約 3 0 %以上、 より好ましくは約 5 0 %以上低下した場合、 該試験化合 物を上記の疾患に対して治療 ·予防効果を有する化合物またはその塩として選 択することができる。
該スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、 上記した試 験化合物から選ばれた化合物またはその塩であり、 1 4 2 7 3の欠損や損傷な どによって引き起こされる疾患 （例えば、 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈 硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例え ば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大症、 クッシン グ病、 高プロラクチン血症、抗利尿ホルモン不適合分泌症候群） 、癌 （例えば、 大 S募癌） 、 記憶学習障害、 腌臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレルギー、 脂肪 毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高 中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 拒食症、 腸管ホル モン (例、 コレシストキュン ( C C K) 、 ガストリックインヒビトリーペプチ ド （G I P ) 、 ガス トリン、 グルカゴン様ペプチド一 1 (G L P—1 ) 、 ソマ トスタチン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、 バソアクティブインテス ティナルペプチド、 モチリン、 サブスタンス p、 ュユーロテンシン、 ガラニン、 ニューロペプチド Y、 エンケフアリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、 循 環器疾患など、 特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞 ) に対する安全で低毒性な治療 ·予防剤、 ストレス調節剤、 脂肪細胞からのグ リセロール生成調節剤、 血中ダルセロール調節剤、 脂肪分解調節剤、 インスリ ン抵抗調節剤、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節剤 （好ましくは、 ストレス調節剤、 脂肪細胞からのグリセ口一ル生成抑制剤、 血中グルセ口ール 低下剤、 脂肪分解抑制剤、 インスリン抵抗抑制剤、 副腎皮質刺激ホルモン （Α C T H) 分泌抑制剤） などの医薬として使用することができる。
また、 該スクリーニング方法を用いて得られる化合物またほその塩は、 例え ば、 動脈硬化、 動脈硬化性疾患おょぴそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性 動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の急性冠動脈症 候群、 経皮的冠動脈形成術 （P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚 血性心疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球体硬化症、 腎 症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変およびそれらの 続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （C HD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代謝異常症およ びその続発症などの疾患の予防 ·治療剤として使用することができる。
さらに、 該スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、 副 腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤として、 例えば、 〇丁11産生月重 瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 （例、 中 心性肥満、 浮腫、 高血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月 顔、 骨粗しょう症、 出血性素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血 症、 高コレステロール血、 耐糖能異常、 白血球増多症） 、 副腎皮質の萎縮など の疾患の予防 ·治療剤として使用することができる。
また、 上記スクリーニングで得られた化合物またはその塩から誘導される化 合物またはその塩も同様に用いることができる。
該スクリーニング方法で得られた化合物の塩としては、 生理学的に許容され る酸 （例、 無機酸、 有機酸など） や塩基 （例、 アルカリ金属など） などとの塩 が用いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩 としては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マ レイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタン スルホン酸、 ベンゼンスルホン酸など) との塩などが用いられる。
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、 前 記した 1 4 2 7 3とリガンドとの結合性を変化させる化合物を含有する医薬と 同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、 安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトま たは哺乳動物 (例えば、 ラット、 マウス、 モルモット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ゥマ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、 対象疾患、 投与対象、 投与ルートなどに より差異はあるが、 例えば、 該化合物またはその塩を経口投与する場合、 一般 的に例えば、 糖尿病患者 （体重 6 O k gとして） においては、 一日につき約 0 . 1〜 1 0 0 m g、 好ましくは約 1 . 0〜5 0 m g、 より好ましくは約 1 . 0〜 2 0 m gである。 非経口的に投与する場合は、 その 1回投与量は投与対象、 対 象臓器、 症状、 投与方法などによっても異なるが、 例えば、 注射剤の形では通 常例えば、 糖尿病患者 （体重 6 0 k gとして） においては、 一日につき約 0 . 0 1〜 3 0 m g程度、 好ましくは約 0 . 1〜 2 0 m g程度、 より好ましくは約
0 . 1〜1 O m g程度を静脈注射により投与するのが好都合である。 他の動物 の場合も、 体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。
( 1 2 b ) 本発明の D NAに対するプロモーターの活性を促進または阻害する 化合物またはその塩をスクリーニング方法
本発明は、本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物に、試験化合物を投与し、 レポータ一遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明の D NAに対する プロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニン グ方法を提供する。
上記スクリ一エング方法において、 本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物 としては、 前記した本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物の中でも、 本発明 の D N Aがレポーター遺伝子を導入することにより不活性化され、 該レポ一タ 一遺伝子が本発明の D N Aに対するプロモーターの制御下で発現しうるものが 用いられる。
試験化合物としては、 前記と同様のものがあげられる。
レポーター遺伝子としては、 前記と同様のものが用いられ、 j3—ガラクトシ ダーゼ遗伝子 ( 1 a c Z ) 、 可溶性アルカリフォスファターゼ遺伝子またはル シフェラーゼ遺伝子などが好適である。
本発明の D N Aをレポータ一遺伝子で置換された本発明の D N A発現不全非 ヒト哺乳動物では、 レポーター遺伝子が本発明の D N Aに対するプロモーター の支配下に存在するので、 レポーター遗伝子がコードする物質の発現をトレー スすることにより、 プロモーターの活性を検出することができる。
例えば、 1 4 2 7 3をコードする D N A領域の一部を大腸菌由来の —ガラ クトシダーゼ遺伝子 （1 a c Ζ ) で置換している場合、 本来、 1 4 2 7 3の発 現する組織で、 1 4 2 7 3の代わりに β—ガラクトシダーゼが発現する。 従つ て、 例えば、 5一プロモー 4一クロロー 3—ィンドリノレ一 β一ガラクトピラノ シド （X— g a 1 ) のような —ガラクトシダーゼの基質となる試薬を用いて 染色することにより、 簡便に 1 4 2 7 3の動物生体内における発現状態を観察 することができる。 具体的には、 1 4 2 7 3欠損マウスまたはその組織切片を ダルタルアルデヒドなどで固定し、 リン酸緩衝生理食塩液（P B S )で洗浄後、 X - g a 1を含む染色液で、 室温または 3 7 °C付近で、 約 3 0分ないし 1時間 反応させた後、 組織標本を I mM E D T A/ P B S溶液で洗浄することによつ て、 —ガラクトシダーゼ反応を停止させ、 呈色を観察すればよい。 また、 常 法に従い、 1 a c Ζをコードする mR NAを検出してもよい。
上記スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、 上記した 試験化合物から選ばれた化合物またはその塩であり、 本発明の D NAに対する プロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩である。
該スクリーニング方法で得られた化合物の塩としては、 生理学的に許容され る酸 （例、 無機酸など） や塩基 （例、 有機酸など） などとの塩が用いられ、 と りわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩としては、 例え ば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との塩、 あるい は有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハ ク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベ ンゼンスルホン酸など） との塩などが用いられる。
本発明の D N Aに対するプロモータ一活性を促進する化合物またはその塩は、 中枢または末梢神経機能調節剤として有用である。
本発明の D N Aに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物また はその塩は、 1 4 2 7 3の発現を調節し、 1 4 2 7 3の機能を調節することが できるので、 例えば、 脂肪細胞からのグリセロール生成調節剤、 血中ダルセ口 ール調節剤、 脂肪分角早調節剤、 インスリン抵抗調節剤、 ストレス調節剤、 副腎 皮質刺激ホルモン （ A C T H) 分泌調節剤などとして有用である。
本発明の D N Aに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、 1 4 2 7 3の発現を促進し、 1 4 2 7 3の機能を促進することができるので、 例えば、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成抑制剤、 血中ダルセロール低下剤、 脂肪分解抑制剤、 インスリン抵抗抑制剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホル モン （A C T H) 分泌抑制剤などとして有用である。
また、 本発明の D N Aに対するプロモータ一活性を促進する化合物またはそ の塩は、 例えば、 1 4 2 7 3の機能不全に関連する疾患、 例えば、 糖尿病、 耐 糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病 網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合分泌 症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 瞎臓疲弊、 低血糖症、 イン スリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高 血糖症、 高 FFA症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食 障害、 拒食症、 腸管ホルモン （例、 コレシストキニン （CCK) 、 ガストリッ クインヒビトリーぺプチド (G I P) 、 ガストリン、 グルカゴン様ぺプチドー 1 (GLP- 1) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、
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ド、 モチリン、 サブスタンス P 一口テンシン、 ガラニン、 ニューロペプチド Y、 エンケフアリン類、 ぺプチド ΥΥなど） の分泌障害、 循環器疾患、 ス トレス （特に、 糖尿病、 高脂血症、 肥 満、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞） などの予防 ·治療剤などの医薬として有用 である。
また、 本発明の D Ν Αに対するプロモータ一活性を促進する化合物またはそ の塩は、 例えば、 動脈硬化、 動脈硬化性疾患およびそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の 急性冠動脈症候群、 経皮的冠動脈形成術 (PTCA) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒 中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球 体硬化症、 腎症、 Ta n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変お よびそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （CHD) 、 脳虚血など〕 、 脂質代 謝異常症およびその続努症などの疾患の予防。治療剤として使用することがで さる。
さらに、 本発明の DNAに対するプロモーター活性を促進する化合物または その塩は、 副腎皮質刺激ホルモン （ACTH) 分泌抑制剤として、 例えば、 A CTH産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰 瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症 侯群 （例、 中心性肥満、 浮腫、 高血圧、 月経異常、 伸展性皮膚線条、 多毛症、 糖尿病、 満月顔、 骨粗しょう症、 出血性素因、 精神障害、 筋萎縮、 筋力低下、 低カリウム血症、 高コレステロール血、 耐糖能異常、 白血球増多症） 、 副腎皮 質の萎縮などの疾患の予防 ·治療剤として使用することができる。
本発明の D N Aに対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、 1 4 2 7 3の発現を阻害し、 1 4 2 7 3の機能を阻害することができるので、 例えば、 脂肪細胞からのグリセ口ール生成促進剤、 血中ダルセ口ール上昇剤、 脂肪分解促進剤、 インスリン抵抗促進剤、 ストレス調節剤、 副腎皮質刺激ホル モン （A C T H) 分泌促進剤などとして有用である。
また、 本発明の D N Aに対するプロモーター活性を阻害する化合物またはそ の塩は、 例えば、 1 4 2 7 3の発現過多に関連する疾患、 例えば、 糖尿病、 耐 糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病 網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満、 肥満症、 下垂体機能障害 （例えば、 下垂体前葉機能低下症、 下垂体性小人症、 尿崩症、 先端巨大症、 クッシング病、 高プロラクチン血症、 抗利尿ホルモン不適合分泌 症候群） 、 癌 （例えば、 大腸癌） 、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 イン スリンアレルギー、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高インスリン血症、 高 血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食 障害、 拒食症、 腸管ホルモン （例、 コレシストキエン （C C K) 、 ガストリッ クインヒビトリーぺプチド （G I P ) 、 ガス トリン、 ダル力ゴン様ぺプチドー 1 (G L P - 1 ) 、 ソマトスタチン、 ガストリン放出ペプチド、 セクレチン、 バソァタティプィンテスティナルぺプチド、 モチリン、 サブスタンス P、 ニュ 一口テンシン、 ガラニン、 ニューロペプチド γ、 エンケフアリン類、 ペプチド Υ Υなど） の分泌障害、 循環器疾患、 ス トレス （特に、 拒食症、 肥満症、 とり わけ内臓脂肪蓄積型肥満症)などの予防 ·治療剤などの医薬として有用である。 また、 本発明の D Ν Αに対するプロモータ一活性を阻害する化合物またはそ の塩は、 例えば、 動脈硬化、 動脈硬化性疾患おょぴそれらの続発症 〔例えば、 ァテローム性動脈硬化症、 末梢動脈閉塞症、 急性心筋梗塞、 不安定狭心症等の 急性冠動脈症候群、 経皮的冠動脈形成術 ( P T C A) 後の再狭搾、 心筋梗塞、 狭心症等の虚血性心疾患、 血管石灰化等を含む動脈硬化症、 間歇性跛行、 脳卒 中 （脳梗塞、 脳塞栓、 脳出血など） 、 ラタネ梗塞、 脳血管性痴呆、 壊疽、 糸球 体硬化症、 腎症、 T a n g i e r病など〕 、 ァテローム性動脈硬化血管病変お よびそれらの続発症 〔例えば、 冠動脈疾患 （C H D ) 、 脳虚血など〕 、 脂質代 謝異常症おょぴその続発症などの疾患の予防 ·治療剤として使用することがで さる。
さらに、 本発明の D N Aに対するプロモーター活性を阻害する化合物または その塩は、 例えば、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤として、 例 えば、 結合組織疾患 （例えば、 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症） 、 腎疾患 （例、 ネフローゼ） 、 呼吸器系疾 患 （例、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺 炎） 、 消化器系疾患 （例えば、 潰痕性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝 炎、 慢性肝炎、 肝硬変） 、 神経 ·筋疾患 （例えば、 .脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多 発性硬化症、 重症筋無力症、顔面神経麻癉） 、 血液疾患 （例えば、溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫） 、 内分泌 · 代謝疾患 (例えば、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患 による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症） 、 皮膚疾患 （例えば、 奪麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギー） 、 アナフィラキシーショッ クなどの予防 ·治療剤などの医薬として有用である。
さらに、 上記スクリーニングで得られた化合物またはその塩から誘導される 化合物またはその塩も同様に用いることができる。
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、 前 記した 1 4 2 7 3またはその塩とリガンドとの結合性を変化させる化合物また はその塩を含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、 安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトま たは哺乳動物 (例えば、 ラット、 マウス、 モルモット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ゥマ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、 対象疾患、 投与対象、 投与ルートなどに より差異はあるが、 例えば、 本発明の D N Aに対するプロモーター活性を促進 する化合物またはその塩を経口投与する場合、 一般的に例えば、 糖尿病患者 ( 体重 6 0 k gとして） においては、 一日につき約 0. 1〜1 0 Omg、 好ましく は約 1. 0〜5 0mg、 より好ましくは約 1. 0〜2 Omgである。 非経口的 に投与する場合は、 その 1回投与量は投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法な どによっても異なるが、 例えば、 注射剤の形では通常例えば、 糖尿病患者 （体 重 6 O k gとして） においては、 一日につき約 0. 0 1〜3 0mg程度、 好ま しくは約 0. 1〜2 Omg程度、 より好ましくは約 0. l〜1 0mg程度を静 脈注射により投与するのが好都合である。 他の動物の場合も、 体重 6 0 k g当 たりに換算した量を投与することができる。
このように、 本発明の DNA発現不全非ヒト哺乳動物は、 本発明の DNAに 対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩をスクリ 一ユングする上で極めて有用であり、 本発明の D N A発現不全に起因する各種 疾患の原因究明または予防 ·治療薬の開発に大きく貢献することができる。 また、 1 4 2 7 3のプロモーター領域を含有する DNAを使って、 その下流 に種々の蛋白質をコードする遺伝子を連結し、 これを動物の卵細胞に注入して いわゆるトランスジエニック動物 (遺伝子移入動物） を作成すれば、 特異的に その 1 4 2 7 3を合成させ、 その生体での作用を検討することも可能となる。 さらに上記プロモーター部分に適当なレポーター遺伝子を結合させ、 これが発 現するような細胞株を樹立すれば、 1 4 2 7 3そのものの体内での産生能力を 特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物の探索系として使用で さる。
本明細書おょぴ図面において、 塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、 I U P A C— I U B Commission on Biochemical Nomenclature による田各 ifめ るいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、 その例を下記する。 ま たァミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、 特に明示しなければ L体を示 すものとする。
DNA ：デォキシリボ核酸
c DNA ：相補的デォキシリポ核酸
A ：アデニン τ ：チミン
G ： グァニン
C ： シトシン
RNA ： リポ核酸
mRNA ： メッセンジャーリボ核酸 d ATP ：デォキシアデノシン三リン酸 dTTP ：デォキシチミジン三リン酸 dGTP ：デォキシグアノシン三リン酸 d CTP ：デォキシシチジン三リン酸
ATP ：アデノシン三リン酸
EDTA ：エチレンジァミン四酢酸
SD S ： ドデシル硫酸ナトリウム
G 1 y ： グリシン
A 1 a ：ァラニン
Va 1 ：バリン
L e u ： ロイシン
I 1 e ：イソロイシン
S e r ：セリン
Th r ： スレ才ニン
C y s ： システィン
Me t ：メチォニン
G 1 u ： グルタミン酸
As p ： ァスパラギン酸
L y s • 1)ジン
A r g ： アルギニン
H i s ： ヒスチジン
P h e ： フエ二ルァラニン
T y r ：チロシン
T r p ： トリプトファン P r o ：プロリン
A s n ' ：ァスパラギン
G 1 n ： グルタミン
p G 1 u ： ピログ/レタミン酸
氺 ：終止コドンに対応する
Me ：メチル基
E t ：ェチル基
B u ：ブチル基
P h ：フエニル基
TC ：チアゾリジン一 4 (R) 一カルボキサミ ド基
また、 本明細書中で繁用される置換基、 保護基および試薬を下記の記号で表D ^ "る。
To s ： p—トルエンスノレフォニノレ
CHO ： ホノレミノレ
B z 1 ： ベンシノレ
C12B z 1 ： 2, 6—ジクロロべンジル
B om
Z ベンジノレオキシカルボニノレ
C 1一 Z 2—クロロべンジノレォキシカノレボニノレ
B r— Z 2一ブロモベンジルォキシカルボニル
B o c t一ブトキシカノレボ二ノレ
DNP ジニトロフエノ一ノレ
T 1- t トリチル
Bum tープトキシメチル
F m o c N— 9—フノレオレニノレメ トキシカルボニル
HOB t 1ーヒ ドロキシベンズトリァゾーノレ
HOOB t 3， 4ージヒ ドロー 3—ヒ ドロキシ一 4ーォキソ一
1, 2, 3—ベンゾトリァジン
HONB 1 -ヒ ドロキシ- 5-ノルボルネン- 2, 3 -ジカルボキシイミ ド DCC ： N, N' ージシクロへキシノレカルボジイ ミ ド 本明細書の配列表の配列番号は、 以下の配列を示す。
配列番号： 1
ヒト由来 14273のアミノ酸配列を示す。
配列番号： 2
ヒト由来 14273をコードする c DN Aの塩基配列を示す。
配列番号： 3
マウス由来 14273のアミノ酸配列を示す。
配列番号： 4
マウス由来 14273をコードする c DN Aの塩基配列を示す。
配列番号： 5
実施例 2における P C R反応で使用したプライマーの塩基配列を示す。 配列番号： 6
実施例 2における P C R反応で使用したプライマーの塩基配列を示す。 配列番号： 7
実施例 2における P C R反応で使用したプローブの塩基配列を示す。 配列番号： 8
ラット由来 14273のァミノ酸配列を示す。
配列番号： 9
ラット由来 14273をコードする c DN Aの塩基配列を示す。
配列番号： 10
実施例 3における P C R反応で使用したプライマーの塩基配列を示す。 配列番号： 1 1
実施例 3における P C R反応で使用したプライマーの塩基配列を示す。 配列番号： 1 2
実施例 3における P C R反応で使用したプローブの塩基配列を示す。 配列番号： 13
実施例 4における P C R反応で使用したプライマー 1の塩基配列を示す。 配列番号： 14 実施例 4における P C R反応で使用したプライマー 2の塩基配列を示す。 配列番号： 15
実施例 7における P C R反応で使用したプライマーの塩基配列を示す。
配列番号： 16
実施例 7における P C R反応で使用したプライマーの塩基配列を示す。
配列番号： 1 7
実施例 7における P C R反応で使用したプローブの塩基配列を示す。
配列番号： 18
実施例 8における P CR反応で使用したプライマーの塩基配列を示す。
配列番号： 19
実施例 8における P C R反応で使用したプライマーの塩基配列を示す。
配列番号： 20
実施例 8における P C R反応で使用したプローブの塩基配列を示す。
配列番号： 21
s i RNA ml 4 i 561のセンス鎖の塩基配列を示す。
配列番号： 22
s i RNA ml 4 i 561のアンチセンス鎖の塩基配列を示す。
後述の実施例 4で得られた形質転換体 E s c h e r i c h i a c o l i JM109/p TAr a t l 4273は 2003年 4月 18日から茨城県つく ば巿東 1丁目 1番地 1 中央第 6 (郵便番号 305— 8566) の独立行政法人 産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託番号 F ERM BP-83 61として寄託されている。
実施例
以下に参考例および実施例を示して、 本発明をより詳細に説明するが、 これ らは本発明の範囲を限定するものではない。 なお、 大腸菌を用いての遺伝子操 作は、 モレキュラー ·クローニング (Molecular cloning) に記載されている方 法に従った。
参考例 1 ヒトおよびマウス 14273の発現ベクターの構築
ヒトおよびマウス 14273をコードする DN A断片はそれぞれ、 WO 20 0 2/ 6 7 8 6 8および WO 2 0 00/00 6 1 1に記載の配列に従つて P C Rを用いて MTCパネル （クロンテック） からクローンし、 得られた DNA断 片を p AKKO— l 1 1ベクターの S a 1 I、 S p e I部位に導入し、 それぞ れの発現プラスミドを構築した。 続いて自体公知の方法で CHO (d h f r一） 細胞にこれらの発現プラスミドをトランスフヱクシヨンし、 発現プラスミドが 導入された細胞をチミジンを含まない培地によつて選択し、 各受容体の安定発 現細胞を取得した。
実施例 1 ヒ トおよびマウス 1 4 2 7 3に対する脂肪酸の反応性の確認
CHO— K 1細胞株は、 特に記載が無い限り 1 0% 牛胎児血清 （I n v i t r o g e n) を含むハム F— 1 2培地 （I n v i t r o g e n) を用いて培 養した。 トランスフエクシヨンを行う前日に 1 0 c m2あたり 4. 5 x l 05個 の細胞を播き、 5 % C O 2濃度に調整された C O 2培養器にて 3 7。Cで 1 5時間 以上培養した。 トランスフエクションは L i p o f e c t a m i n e試薬 ( I n v i t r o g e n) を用い、 試薬添付の方法に準じて操作を行った。 培養器 に 6— w e 1 1プレートを使用する場合は、 以下のように行った。 まず、 1. 5m 1容チューブを 2本用意し、 それぞれに O p t i — MEM— I培地 （I n v i t r o g e n) を 1 0 0 μ 1分注した。 次に、 片方のチューブに発現べク ターを 1 g、 もう片方に L i p o f e c t a m i n e試薬を 6 μ 1添加後、 両者を混合し、 2 0分間室温に静置した。 この溶液に O p t i — MEM— I培 地を 8 0 0 μ I加えたトランスフエクション用混合液を、 あらかじめ O p t i -MEM- I培地を用いて洗浄した CHO _K 1細胞に添カ卩後、 C02培養器に て 6時間培養した。 培養後の細胞は、 P B S ( I n v i t r o g e n) を用い てリンスした後、 0. 0 5% トリプシン · E D T A溶液 （ I n V i t r o g e n) を用いて剥がし、 遠心操作にて回収した。 得られた細胞の数を測定し、 培地 1 0 0 1あたり 5 X 1 04個の細胞が含まれるように希釈し、 B 1 a c k w a 1 l e d 9 6— w e l l p l a t e (,C o s t a r ) ίこ 1ン、め 7こり 1 0 0 μ 1ずつ分注後、 C Ο 2培養器にて一晩培養した。 上記トランスフエクショ ン操作にて一過性に受容体を発現した CHO—K 1細胞に各種試験サンプルを 添カ卩し、 この際の細胞内カルシウム濃度の変動を F L I PR (Mo 1 e c u 1 a r D e v i c e) を用いて測定した。 F L I P Rにて細胞内カルシウム濃 度の変動を測定するために、 以下の前処置を施した。 まず、 細胞に蛍光色素 F 1 u o 3 -AM (DO J I N) を添加するため、 あるいは F L I P Rアツセィ を行う直前に細胞を洗浄するためのアツセィバッファーを作成した。 HB S S ( I n v i t r o g e n) 1 0 0 0m lに 1M HE P E S (p H 7. 4) ( DO J I N) 2 0m lを加えた溶液 (以下、 HB S S/HE P E S溶液) に、 プロべネシド （S i gma) 7 1 0mgを I N N a OH 5m lに溶解後さ らに HB S S/HE P E S溶液 5 m 1を加え混合した溶液 1 0m lを添カロし、 この溶液をアツセィバッファ一とした。 次に F 1 u o 3 -AM 5 0 μ gを 2 1 μ 1 DMS O (DO J I N) に溶解し、 さらに等量の 2 0 %プルロン酸 （ Mo l e c u l a r P r o b e s ) を加え混合後、 1 0 5 μ 1の牛胎児血清 を添加した 1 0. 6m 1のアツセィバッファーに加え、 蛍光色素溶液を調製し た。 トランスフエクシヨン処理を施した CHO— K 1細胞の培地を除き、 直ち に蛍光色素溶液を 1穴あたり 1 0 0 1ずつ分注後、 C O 2培養器にて 1時間培 養し、 細胞に蛍光色素を取り込ませた。 培養後の細胞は上記のアツセィバッフ ァーを用いて洗浄した後、 F L I PRにセットした。 また、 受容体発現 CHO 一 K 1細胞に添加する試験サンプルはァッセィバッファーを用いて調製し、 同 時に F L I PRにセットした。 以上の前処置を施した後、 F L I PRにて各種 試験サンプル添加後の細胞内カルシウム濃度の変動を測定した。 その結果、 パ ルミ トレイン酸 （P a l m i t o l e i c a c i d) (図 1) 、 リノール酸 (L i n o l e i c a c i d) (図 2) 、 τ /—リノレン酸 — L i η ο 1 e η i c a c i d; (図 3) 、 ァラキドン酸 (A r a c h i d o n i c a c i d) (図 4 ) 、 ドコサへキサェン酸 (D o c o s a h e x a e n o i c a c i d, DHA) (図 5) 等を加えたときに、 ヒ トおよびマウス 1 4 2 7 3 を発現する CHO— K 1細胞が特異的に応答 (細胞内力ルシゥム濃度の上昇) することが分かった。 コントロールの発現ベクターのみを導入した CHO— K 1細胞では、 このような応答は見られなかった。 すなわち、 ヒ トおよびマウス 1 4 2 7 3の内因性リガンドが脂肪酸であることが明らかになった。
実施例 2 ヒ ト 1 4 2 7 3 mRNAの発現分布 mRNAの発現量の定量には AB I PR I SM 7700 S e q u e n c e D e t e c t o r (アプライドバイオシステムズ社） を用いた。 発現量の定量に用 いるプライマー [5， -GCTGTGGCATGCTTTTAAAC-3 ' (配列番号： 5 )、 5'
-CGCTGTGGATGTCTATTTGC-3， （配列番号： 6 ) ]とプローブ [5，
- AGTTCATTTCCAGTACCCTCCATCAGTGGC- 3， （配列番号： 7)]は、 ヒト型 1 42 7 3 の塩基配列 （配列番号： 2) をもとに AB I PR I SM S e q u e n c e D e t e c t o r専用のソフトウエア P r i me r E x p r e s s (アプライド バイオシステムズ社) を利用してデザインした。 铸型となる c DNAは、 ヒ ト 各種組織由来の t o t a 1 RNA (クロンテック社） 1 μ gからランダムプ ライマーを用いて逆転写反応して合成したものを使用した。 逆転写反応は逆転 写酵素として S u p e r S c r i p t l l (G I BCO BRL社）を使用し、 添付のプロトコ一ノレにしたがって行った。 AB I PR I SM 7700 S e q u e n c e D e t e c t o rの反応液は T a qMa n Un i v e r s a l PGR Ma s t e r Mi x (アプライドバイオシステムズ社）を 1 2. 5 μ 1、 各プ ライマーを 0. 9 μΜ、 プローブを 0. 2 5 μΜ、 c DNA溶液を混ぜ合わせ、 蒸留水で 25 μ 1として調製した。 AB I PR I SM 7 700 S e q u e n c e D e t e c t o rでの反応は、 5 0°Cで 2分、 9 5°Cで 1 0分の後、 9 5 。C · 1 5秒、 6 0°C · 1分のサイクルを 40回,操り返して行った。 ヒト各種組 織での mRNAの発現分布を図 6に示す。 下垂体や脂肪組織や大腸で高い発現 が見出された。
実施例 3 ラット 1 42 7 3 mRNAの発現分布
mRNAの発現量の定量には AB I PR I SM 7700 S e q u e n c e D e t e c t o r (アプライドバイォシステムズ社) を用いた。 発現量の定量に用 いるプライマー [5 ' -GTGGTGGCCTTCACGTTTG-3 ' (配列番号： 1 0) 、 5， -CGCTCCTGAACAGCGACAT-3 ' (配列番号： 1 1 ) ]とプローブ [5'
-CAACTCCGCCCTAAACCCCATTCTGT-3 ' (配列番号： 1 2) ]は、 ラット型 1 42 7 3の塩基配列 （配列番号： 9) をもとに AB I PR I SM S e q u e n c e D e t e c t o r春用のンノ'トウエフ P r i me r Ex p r e s s (アブ ライドバイオシステムズ社）を利用してデザインした。錶型となる c DNAは、 正常および水浸拘束ストレスを負荷したラットより各種臓器を摘出し、 t o t a 1 RNAを I s o g e n (二ツボンジーン社） 、 p o l y (A) +RNAを mRNA p u r i f i c a t i o n k i t (Ph a rma c i a社) によ り、 それぞれのマニュアルにしたがって調製した。 得られた p o 1 y (A) +R N A を Dn a s e l (Amp l i f i c a t i o n Gr a d e, G I B CO BRL社） 処理後、 160 n g分を RNA PCR K i t (T a k a r a社） を用いて、 マニュアルに従い 42 °Cで c D N Aを合成した。 AB I PR I SM 7700 S e q u e n c eD e t e c t o rの反応液は T a qMa n Un i v e r s a l PCR Ma s t e r Mi x (アプライ ドバイォシステムズ社) を 12. 5 μ 1、 各プライマーを 0. 9 μΜゝ プロ一 プを 0. 25 μΜ、 c DN Α溶液を混ぜ合わせ、 蒸留水で 25 1として調製 した。 AB I PR I SM 7700 S e q u e n c eD e t e c t o rで の反応は、 50°Cで 2分、 95°Cで 10分の後、 95。。 · 1 5秒、 60 °C · 1 分のサイクルを 40回繰り返して行った。 各種組織での mRN Aの発現分布を 図 7に示す。 下垂体、 肺、 脂肪組織や腸管で高い発現が検出された。 また、 水 浸拘束ストレスを負荷したラットの下垂体では 14273 mRN Aの発現量の 上昇が検出され、 14273がストレスの調節に関与していることが明らかと なった （図 8) 。
実施例 4 ラット由来の 14273をコードする c DNAのクローユングとそ の塩基配列の決定
ラット脳 DNAを鍀型として、 プライマー 1 (配列番号： 13) 及ぴプライ マー 2 (配列番号： 14) を用いて PCRを行なった。 PCRには K l e n t a q DNA P o l yme r a s e (クロ一ンテック） を用レ、、 ( i ) 9 5°C · 2分、 (ii) 98。C · 10秒、 63°C · 20秒、 72°C · 1分を 35回 の後、 72 °C * 7分の伸長反応を行なった。 反応後、 増幅産物を TOP O T A C l o n i n g K i t (I nv i t r o g e n社） の処方にしたがって プラスミ ドベクター p CR 2. 1 TOPO (I nv i t r o g e n社） にク口 一二ングした。 これを大腸菌 JM109 (宝酒造） に導入して、 プラスミ ドを 持つクローンを a mp i c i 1 i nを含む L B寒天培地中で選択した。 個々の クローンの塩基配列を解析した結果、 新規 G蛋白質共役型レセプター蛋白質を コードする c DNA配列 （配列番号： 9) を得た。 この c DNAより導き出さ れるアミノ酸配列 （配列番号：' 8) を含有する新規レセプター蛋白質を r a t 1 4 2 7 3と命名した。 また、 形質転換体を大腸菌 (E s c h e r i c h i a c o l i ) JM1 0 9/p TA r a t l 4 2 7 3と命名した。
実施例 5 ヒト 1 4 2 7 3発現 C HO細胞の c AMP産生に対する脂肪酸の影 響
ヒト 1 4 2 7 3発現 CHO細胞を、 1 X 1 05/w e 1 1の濃度で 9 6— w e 1 1 P 1 a t eで 2 0時間培養した。 細胞は Ι Ο Ο μ Ιの A s s a y B u f f e r (0. I mM I BMX (和光純薬） および 0. 1 mM R o— 2 0 - 1 7 24 (B i o mo l ) を含む DMEM ( I n v i t r o g e n) ) で 2 回洗浄後、 2； uMのフオルスコリン (F o r s k o 1 i n、 和光純薬) を含む または含まない A s s a y B u f f e rに溶解した酪酸、 γ—リノレン酸、 リノール酸、 DHAおよぴォレイン酸 （ともに S I GMA) を加えて 3 7°Cで 1 0分間反応した。 反応後、 c AMP S c r e e n (AB I ) の処方に従つ て細胞を溶解し、 細胞内の c AMP量を測定した。 その結果、 フオルスコリン を含まない条件では、 各脂肪酸はヒト 1 4 2 7 3発現 CHO細胞に対して c A M P産生活性は示さなかつた。 一方、 フオルスコリン (2 μΜ) 存在下では、 ヒ ト 1 4 2 7 3発現 CHO細胞に対して γ—リノレン酸、 リノール酸、 DHA およぴォレイン酸は c AM Ρ産生抑制活性を示したのに対して酪酸では抑制活 性は見られなかった (図 9) 。 対照のヒ ト 1 4 2 7 3を発現していない CHO 細胞では、 このような c AMP産生抑制活性は見られなかった。
実施例 6 脂肪酸添加によるヒト 1 4 2 7 3発現 CHO細胞での MAPキナー ゼ活性化
参考例 1で作製したヒ ト 1 4 2 7 3発現ベクターを用いて自体公知の方法で 作製したヒト 1 4 2 7 3発現 CHO (CHO-h 1 4 2 7 3) または CHO— mo c k細胞を 3 X 1 05/w e 1 1の濃度で 6ゥエルプレートに撒いて、血清 低濃度培地 （核酸不含 MEM α培地に 0. 5 %の透析ゥシ胎児血清を添加した もの） にて一晩培養し、 さらに無血清培地 （核酸不含 MEM α培地） に交換し て一晩培養した。 新しい無血清培地に交換して 4時間培養後、 30 1\の各種 脂肪酸を添加した。 1 0分間インキュベーションしたのち、 サンプルバッファ 一 （TEFCO社） で細胞を溶解'抽出し SDS— PAGEによって分離を行 つた。 その後 P h o s p h o P l u s p 44/42 MAP k i n a s e (Th r 20 2/Ty r 204) An t i b o d y K i t (C e l l S i g n a l i n g T e c h n o l o g y, I n c ) を用いたウェスタンプロ ッティングを行った。 その結果、 図 1 0に示す通り、 ヒト 1 42 73発現 CH O細胞でのみ、 脂肪酸添加後に MAPキナーゼのリン酸化によって示される当 該蛋白質の活性化が起こることが分かった。
実施例 7 3T 3-L 1細胞の脂肪細胞分化誘導に伴う 1 427 3受容体の発 現変動
マウス繊維芽細胞様細胞株 * 3 T 3-L 1細胞の脂肪細胞への分化誘導に伴 う 1 42 73受容体の発現変動を以下の要領で解析した。
培地は 4. 5 g/ 1グノレコース、 1 · 5 g/ l N a 2HCO3を含む D u 1 b e c c o' s Mo d i f i e d E a g l e Me d i um (DMEM, インビトロゲン社） に 1 0 %ゥシ胎児血清 （Th e rmo T r a c e社） 、 1 0 OU/m 1ペニシリン、 1 00 μ g/m 1ス トレプトマイシンを添加したも のを用いた。 75 cm2フラスコでコンフルェントにまで培養した 3 T 3— L 1 細胞に、 2. 5 μΜ D e x ame t h a z o n e, 0. 5 mM 3— i s o b u t y 1— 1— m e t y 1 a n t h i n e , 1 0 g /m 1 ィンスリ ンを含む上記培地を用いて 2日間分化誘導刺激を与え、 以後 1 0 μ g/m 1 インスリンを含む上記培地で培養した。 各培養段階で、 細胞を PB S (—） で 2回洗浄し、 R N A抽出時まで一 80 °Cで保存した。
T o t a l RNAは I S OGEN (二ツボンジーン) にて抽出した。 c D NAは、 RNA 1 μ gからランダムプライマー、 逆転写酵素として S u p e r S c r i p t I I逆転写酵素 （G I B CO BRL社） を用い、 添付のマ-ュ アルに従って 42 °Cで反応を行い、 反応終了後にエタノール沈殿して 1 00 μ 1に溶角军した。 RT— PCRは S e q u e n c e D e t e c t i o n S y s t em P r i sm 7 700 (P E B i o s y s t ems社） を用い、 増幅と検出のためのプライマーとして 5 ' -TCCGAGTGTCCCAAC AAGACTAC— 3， （配列番号： 1 3) ， 5， -GACTCCACATG ATGAAGAAGGAAA— 3 ' (配列番号： 1 4 )および T a qM a n p r o b eとして 5' ― (F am) CCGCACGCTCTTCCTGCTCA TG— (T amr a) 一 3' (配列番号： 1 5) を使用した。 RT— PCR反 応液は T a qMa n Un i v e r s a l P CR Ma s t e r M i x ( P E B i o s y s t em社） 1 2. 5 μ 1に、 それぞれ 1 00 μΜのプライ マー溶液を 0. 0 5 μ 1、 5 μΜの T a qMa n p r o b eを 0· 5 μ 1、 および上記で調製した c DN Α溶液を 0。 5 /i 1カロえ、 蒸留水で総反応液量を 2 5 μ 1とした。 PCR反応は 50°C ' 2分、 9 5°C ' 1 0分の後、 95°C ' 1 5秒、 60°C · 1分のサイクルを 40回繰り返した。 得られた 3 T 3— L 1 細胞における 14273受容体の mRNA発現量は t o t a 1 RNA2 5 n gあたりのコピー数として算出した （図 1 1) 。
その結果、 142 7 3受容体は 3 T 3— L 1細胞に脂肪への分化誘導を行う 以前にはわずかな発現量しか見られなかったが、 分化誘導後に発現量の大幅な 増カロが認められ、 1 4日目には 1 3 6 027 c o p i e s/25 n g t o t a l RNAとなった。 このことから、 1 42 73受容体は脂肪細胞で重要な役 割を担っていると考えられた。
実施例 8 ラット初代培養前駆脂肪細胞の脂肪細胞分化誘導に伴 51 42 7 3 受容体の発現変動
S. D. ラット皮下脂肪由来白色前駆脂肪細胞、 肩甲骨褐色脂肪由来褐色前 駆脂肪細胞 （HOKUDO社） について、 それぞれ初代培養前駆脂肪細胞の脂 肪細胞への分化誘導に伴う 1 42 7 3受容体の発現変動を以下の要領で解析し 1
培地は 4. 5 g/ lグルコース、 1. 5 g/ l Na 2HC03を含む Du 1 b e c c o s Mo d i f i e d E a g l e Me d i um (D— MEM、 I n v i t r o g e n社） に 1 0%ゥシ胎児血清 （Hy c 1 o n e社） 、 1 0 OU/m 1ぺニシリン、 1 00 μ g/m 1ストレプトマイシンを添加したもの を用いた。 2 5 cm2フラスコでコンフルェントになるまで培養した各細胞に、 2. 5 μΜ D e x ame t h a z o n e^ 0. 5 mM 3— 1 s o b u t y
1一 1— m e t h y l x a n t h i n es 1 0 μ g/m 1 ィンスリンを含む 上記培地を用いて 2日間分化誘導刺激を与え、 以後 1 0 μ g/m Γ インスリ ンを含む上記培地で 8日間培養した。 分化誘導前細胞および分化誘導後 8日間 培養後の細胞から T o t a l RNAを I SOGEN (二ツボンジーン） を 用いて抽出した。 c DNAは、 T o t a l RNA 1 μ 8から、 ランダムプ ライマー、 逆転写酵素として S u p e r s c r i p t ΤΜΙ I逆転写酵素 （I n V i t r o g e n社) を用い、 添付のマニュアルに従って 42°Cで反応を行い 作製し、 反応終了後にエタノール沈殿して 40 ^ 1 T r i s— EDTA緩衝 液に溶角军した。 RT— PCRは S e q u e n c e D e t e c t i o n S y s t em P r i s m 7 700 Ap p l i e d B i o s y s t em s 社） を用い、 増幅と検出のためのプライマーとして 5 ' -GTGGTGGCC TTCACGTTTG- 3 (配列番号： 1 6) 、 5 ' -CGCTCCTGA ACAGCGACAT- 3 (配列番号： 1 7) および T a qMa nプローブ として 5 ' - (F a m) C
GT— (T amr a) 一 3 (配列番号： 1 8) を使用した。 RT— PCR反 応液は T a q M a n Un i v e r s a l PCR Ma s t e r M i x ( Ap p l i e d B i o s y s t e m社） 1 2. 5 μ 1に、 それぞれ 1 00 Μのプライマー溶液を 0. 22 5 μ 1、 5 μΜの T a qMa n プローブを 1. 25 μ 1、 および上記で調製した c DNA溶液を 1 μ 1加え、 蒸留水で総反応 液量を 25 μ 1とした。 PCR反応は 50°C · 2分、 9 5。C ' 1 0分の後、 9
5°C - 1 5秒、 60°C · 1分のサイクルを 40回繰り返した。 得られた初代培 養脂肪細胞における 1 42 7 3受容体の mRNA発現量は T o t a 1 RNA
25 n gあたりのコピー数として算出した （図 1 2) 。
その結果、 142 7 3受容体は初代培養白色前駆脂肪細胞、 初代培養褐色前 駆脂肪細胞共に脂肪細胞への分化誘導を行う以前にはわずかな発現量しか見ら れなかったが、分ィ匕誘導後に発現量の大幅な増加が認められた。このことから、
1427 3受容体は脂肪細胞で重要な役割を担っていると考えられた。
実施例 9 脂肪酸による A t T— 20細胞からの副腎皮質刺激ホルモン （A C TH) 分泌の抑制活性
マウス下垂体コルチコトロフ細胞株 A t T-20細胞に対する遊離脂肪酸の ACT H分泌に与える影響を以下の要,領で解析した。
まず p o l y—D— Ly s i n eコートフラスコを用いたコンタクトセレク ション法により、 A t T/ 20細胞株 （浮遊性） 力 ら付着性の亜株をクローン ィ匕した。 培地は 4. 5 g/ 1のグルコースを含む Du 1 b e c c o ' s Mo d i f i e d E a g l e Me d i um (DMEM、 インビトロゲン社） に 10 %ゥシ胎児血清 （Th e rmoT r a c e社） 、 100 UZm 1ぺニシリ ン、 100 g/m 1ストレプトマイシンを添加したものを用いた。 この付着 性 A t T/20細胞亜株を 4 X 104 c e 1 1 s /w e 1 1ノ 100 μ 1の濃 度で Ρ ο 1 y-D-L y s i n e コート 96ゥエルプレートにまいてニ晚培 養し、 アツセィに供した。 アツセィに用いる B u f f e rには、 25mM H EPES (p H 7. 1 ) 、 1 g/1のグルコースを含む D u 1 b e c c o ' s Mo d i f i e d E a g l e Me d i urn (DMEM、 インビトロゲン社 ) を用いた。 この Bu f f e rで 2回洗浄した後、 所定の濃度の脂肪酸を含有 する Bu f f e rを 10 Omlカ卩え、 C O 2インキュベーターで 37°C1時間プ レインキュベートした。 次に 10 nMの副腎皮質刺激ホルモン放出因子 （CR F) 共存下で脂肪酸を含有する b u f f e rへ培地交換を行い、 C02インキュ ベータ一で 37。C 90分インキュベートした。 90分後、 プレートを緩やかに 攪拌した後 1200 r pm、 5m i n、 室温で遠心し、 中層からサンプルを 5 Oml回収した。 以上の実験過程においては、 脂肪酸は常時ゥシ血清アルブミン (BSA、 S i g m a ) とモル比 B S A : F F A= 4： 1の条件で共存させた。 また B u f f e rのみの区と C R Fのみ添加した区にも、 脂肪酸を添加する区 に混入する B S Aを等量加えた。 回収したサンプルは、 ACTH測定キット （ 三菱メディカル ACTH I RMA 「ユカ」 ） を用いて AC TH濃度を測定し た。
その結果、 図 13に示すとおり、 γ—リノレン酸 (γ -LA), α—リノレン 酸 （ひ一 LA) により有意な CRFによって誘導された ACTH分泌の抑制が 認められた。 一方、 14273受容体にァゴニスト活性を示さない酪酸 （BA) は有意な C R F誘導性 A C T H分泌の抑制を示さなかつた。 .
実施例 1 0 3 T 3— L 1脂肪分ィヒ細胞における脂肪分解に対する脂肪酸の抑 制作用
脂肪細胞への分ィヒ能を有するマウス線維芽細胞株 3 T 3 -L 1細胞を用いて 脂肪分解作用への影響を検討した。 培地には 4. 5 gZlのグルコースを含む DMEM (D u l b e c c o ' s Mo d i f i e d E a g l e Me d i um、 I n v i t r o g e n) に 1 0%ゥシ胎児血清 （F B S、 I n v i t r
0 g e n) と l O O u n i t s /m 1ぺニシリンおよぴ 1 0 0 μ g/ 1スト レプトマイシンを添加したものを用いた。 3 T 3— L 1細胞をプレートに播種 しコンフルェントになるまで培養した後に、 1 0 μ g/m 1インスリン、 0. 5mM 3—イソブチルー 1ーメチルキサンチン （I BMX) 、 2. 5 μ Mデ キサメタゾンを含む上記培地で 4 8時間処理することにより脂肪への分化誘導 処理を行った。 その後 1 1日間培養継続することにより 3 Τ 3— L 1細胞を脂 肪分化させた後、 脂肪分解により生じるグリセ口ール生成量変化のァッセィを 行った。 細胞を、 改変した K r e b s— R i n g e r緩衝液にて洗浄後、 ィソ プロテレノールを 1 X 1 0_9Mで添加し、 同時に脂肪酸を加えて 2時間処理し 上清を回収した。 上清中のグリセロール含量は F r e e G l y c e r o l D e t e r m i n a t i o n K i t (S i gma) を用いて測定した。 その 結果、 1 4 2 7 3に対するァゴニスト活性を有する脂肪酸である γ—リノレン 酸（γ— LA)を添加することにより、 イソプロテレノール刺激で上昇したダリ セロール生成量の低下が認められた。 一方、 ァゴニスト活性を示さないリノ一 ル酸メチル （ML) ではこのような活性は認められなかった（図 1 4)。
実施例 1 1 マウス 1 4 2 7 3の配列に特異的な s i RNA導入によるマウス
1 4 2 7 3 -GF P融合タンパク質の発現抑制
自体公知の方法にて作製したマウス 1 4 2 7 3と GF Pの融合タンパク質発 現プラスミド （p AKKO— 1 4 2 7 3— GF P) (0. 2 μ g/w e 1 1 ) とマウス 1 4 2 7 3特異的な s i RNAである ml 4 i 5 6 1 (D h a r m a c o n社） （2 0 nM) を CHO細胞 （4 x 1 0 Vw e 1 1 : 9 6ゥェルプレ ート） に L i p o f e c t a m i n e 2 0 0 0試薬 （インビトロゲン社） を用 いて同時にトランスフエクシヨンし、 1 日培養した。 マウス 14273— GF Pの発現量の検出は以下に示す通りのェンザィムィムノアッセィにて行つた。 培養上清を捨てて H B S S (インビトロゲン社） にて洗浄後、 0. 01 %ダル タルアルデヒド （和光純薬社） で 5分間固定し、 2 % B S Aを含む P B S (宝 酒造社） にてブロッキングした。 500倍希釈した抗 GF Pモノクローナル抗 体 3 E 6 (二ツボンジーン社） を添加後室温で 2時間ィンキュベーションした 後、 洗浄し 500倍希釈した HRP標識化抗マウス I.gG抗体 （I CN) を添 カロし、 室温で 2時間インキュべ ^"シヨンした。 洗浄後、 TMBマイクロウェル ペルォキシダーゼ基質 （フナコシ社） を添加し、 30分間インキュベーション 後、 硫酸を添加して発色反応を停止させ、 450 nmで吸光度を測定した。 そ の結果、 ml 4 i 561の導入により p AKKO— 14273— GF Pの発現 量を 97%抑制した。 一方、 ネガティブコントロール s i RNAである S c r amb l e l l (Dh a rma c o n社） の導入では p AKKO— 14273 一 GF Pの顕著な発現抑制は見られず、 ml 4 i 561がマウス 14273を 特異的に抑制する s i RNAであることが確認された。
ml 4 i 561の配列 （上段がセンス鎖、 下段がアンチセンス鎖）
5， GGACCAGGAAAUUCCGAUUdTdT 3' (配列番号： 21)
3， dTdTCCUGGUCCUUUAAGGCUAA 5， （配列番号： 22) 産業上の利用可能性
14273の機能が脂肪酸またはその塩の受容体であることが明らかにな つたことで、 脂肪酸またはその塩と 14273、 その部分べプチドまたはそ の塩との結合性を変化させる化合物を効率良くスクリーニングすることがで き、 それによつて見出される化合物は、 糖尿病、 高脂血症、 肥満症、 下垂体 機能障害などの疾患に対する予防 ·治療薬、 ストレス調節薬として有用であ る。

Claims

請求の範囲
1 . ( 1 ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役 型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩おょぴ （2 ) 脂肪酸また はその塩を用いることを特徴とする該レセプター蛋白質またはその塩と脂肪酸 またはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方 法。
2 . ( 1 ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるァミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役 型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩おょぴ （2 ) 脂肪酸また はその塩を含有することを特徴とする該レセプター蛋白質またはその塩と脂肪 酸またはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング 用キット。
3 . ( 1 ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役 型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩おょぴ （2 ) 該レセプタ 一蛋白質またはその塩と脂肪酸またはその塩との結合性を変化させる化合物ま たはその塩を用いることを特徴とする該レセプター蛋白質またはその塩に対す るァゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニング方法。
4 . ( 1 ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるァミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役 型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩おょぴ （2 ) 該レセプタ 一蛋白質またはその塩と脂肪酸またはその塩との結合性を変化させる化合物ま たはその塩を含有することを特徴とする該レセプター蛋白質またはその塩に対 するァゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニング用キット。
5 . 脂肪酸またはその塩と配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で 表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有す る G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩との結合性を変化させる化合 物またはその塩を含有してなる医薬。
6 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその塩に対するァゴニストを含有してなる糖尿病、 高脂血 症、 動脈硬化、 狭心症または心筋梗塞の予防 ·治療剤。
7 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその塩に対するァゴニストを含有してなるス トレス調節剤。
8 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその塩に対するァゴニストを含有してなる副腎皮質刺激ホ ルモン (A C T H) 分泌抑制剤。
9 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその塩に対するァゴニストを含有してなる A C T H産生腫 瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群または副 腎皮質の萎縮の予防 ·治療剤。
1 0 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる肥満症の 予防。治療剤。
1 1 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴニストを含有してなるストレス 調節剤。
1 2 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる副腎皮質 刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤。
1 3 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる慢性関節 リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症、 腎疾 患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄 炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副 腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 奪麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまた はアナフィラキシーショックの予防 ·治療剤。
1 4 . 試験化合物を配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表され るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白 質共役型レセプター蛋白質を含有する細胞に接触させた場合における細胞内 C a 2 +濃度上昇活性、 細胞内 c AM P生成抑制活性、 MA Pキナーゼのリン酸ィ匕 もしくは活性化、 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制活性、 グリセ口 ール生成抑制活性、 または脂肪分解抑制活性を測定することを特徴とする該レ セプター蛋白質またはその塩に対するァゴニストのスクリーニング方法。
1 5 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質もしくはその部分ぺプチドまたはその塩を含有してなる糖尿病、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症または心筋梗塞の予防 '治療剤。
1 6。 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩を含有してなるストレス 調節剤。
1 7 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩を含有してなる副腎皮質 刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤。
1 8 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩を含有してなる A C T H 産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖 尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群ま たは副腎皮質の萎縮の予防 ·治療剤。
1 9 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドを含有してなる糖尿病、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症また は心筋梗塞の予防 ·治療剤。
2 0 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドを含有してなるストレス調節剤。
2 1 . 配列番号： 1、 配列番号： ' 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドを含有してなる副腎皮質刺激ホルモン (A C T H) 分泌抑 制剤。
2 2 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分ぺプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドを含有してなる A C T H産生月重瘍、クッシング病、感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、高血圧、 クッシング症候群または副腎皮質の萎縮の予防 ·治療剤。
2 3。 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分ぺプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドを含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァシド 一シス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、記憶学習障害、 瞎臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液 質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産 生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患の 診断剤。
2 4 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドを含有してなるストレスの診断剤。
2 5 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分ぺプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドを含有してなる A C T H産生腫瘍、クッシング病、感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、高血圧、 クッシング症候群、副腎皮質の萎縮、慢性関節リゥマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支 喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸 炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神 経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻瘅、 溶血性貧血、 顆粒球減少 症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能 不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損 症、 尊麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまたはアナフィ ラキシーショックの診断剤。
2 6 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体を含有して なる肥満症の予防 ·治療剤。
2 7 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体を含有して なるストレス調節剤。
2 8 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質もしくはその部分ぺプチドまたはその塩に対する抗体を含有して なる副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤。
2 9 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体を含有して なる慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症、'腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性 間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝 硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、顆粒球減少症、紫斑病、再生不良性貧血、 白血病、悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出 症、 A C T H単独欠損症、 蓴麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤ァレ ルギーまたはアナフィラキシーショックの予防 ·治療剤。
3 0 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるァミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体を含有して なる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿 病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、性機能障害、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 藤臓疲弊、 低血糖症、 インスリ ンァレルギ一、 脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液質、 高ィンスリン血症、 高血糖 症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 腸管ホルモンの分泌障害または循環器疾患の診断剤。
3 1 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体を含有して なるストレスの診断剤。
3 2 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プタ一蛋白質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体を含有して なる A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消 化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシ ング症候群、 副腎皮質の萎縮、 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サ ルコィドーシス、びまん性間質性肺炎、潰瘍性大腸炎、胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋 無力症、顔面神経麻痺、溶血性貧血、顆粒球減少症、紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺 疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 奪麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯 状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまたはアナフィラキシーショックの診断剤。 3 3 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドと相捕的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌ クレオチドを含有してなる肥満症の予防 ·治療剤。
3 4 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドと相捕的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌ クレオチドを含有してなるストレス調節剤。
3 5 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 歹 IJと同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌ クレオチドを含有してなる副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤。
3 6 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌ クレオチドを含有してなる慢性関節リゥマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発 性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコ ィドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇 症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無 力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 ij腎性器症候群、 甲状腺 疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 尊麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯 状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまたはアナフィラキシーショックの予防 ·治療 剤。
3 7 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分ぺプチドの発現量を増加させる化合物またはその 塩を含有してなる糖尿病、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症または心筋梗塞の予防 •治療剤。
3 8 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 歹 Uと同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドの発現量を増加させる化合物またはその 塩を含有してなるストレス調節剤。
3 9 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその 塩を含有してなる副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤。
4 0 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその 塩を含有してなる A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質 機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高 血圧、 クッシング症候群または副腎皮質の萎縮の予防 ·治療剤。
4 1 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドの発現量を減少させる化合物またはその 塩を含有してなる肥満症の予防 ·治療剤。
4 2 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその 塩を含有してなるストレス調節剤。
4 3 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその 塩を含有してなる副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤。
4 4 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるァミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセ プター蛋白質またはその部分べプチドの発現量を減少させる化合物またはその 塩を含有してなる慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシ ス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔 面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患によ る悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 蓴麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまたはアナフィラキシーショックの予防 ·治療剤。
4 5 . 脂肪酸またはその塩を含有してなる配列番号： 1、 配列番号： 3または 配列番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸 配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質のシグナル伝達作用増強剤。 4 6 . 糖尿病、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症または心筋梗塞の予防 ·治療剤で ある請求項 4 5記載の剤。
4 7 . ス トレス調節剤である請求項 4 5記載の剤。
4 8 . 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤である請求項 4 5記載の 剤。 '
4 9 . A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 タツ シング症候群または副腎皮質の萎縮の予防 ·治療剤である請求項 4 5記載の剤。
5 0 . 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤である請求項 4 5記載の 剤。
5 1 . 哺乳動物に対して、 （i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 （ ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプ ター蛋白質またはその部分ぺプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するァゴニストの有 効量を投与することを特徴とする糖尿病、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症または 心筋梗塞の予防 ·治療方法。
5 2 . 哺乳動物に対して、 （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 ( ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプ ター蛋白質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するァゴニストの有 効量を投与することを特徴とするストレス調節方法。
5 3 . 哺乳動物に対して、 （i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 （ ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプ ター蛋白質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するァゴニストの有 効量を投与することを特徴とする副腎皮質刺激ホルモン （A C TH) 分泌抑制 方法。
5 4 . 哺乳動物に対して、 （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 （ ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプ ター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有する ボリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するァゴニストの有 効量を投与することを特徴とする A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群または副腎皮質の萎縮の予防'治療方 法。
5 5 . 哺乳動物に対して、 （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に対 する抗体、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表される ァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質 共役型レセプター蛋白質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドと相捕的な塩基配列またはその一部を含有して なるポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列 番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴ- ストの有効量を投与することを特徴とする肥満症の予防 ·治療方法。
5 6 . 哺乳動物に対して、 （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に対 する抗体、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表される アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質 共役型レセプター蛋白質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有して なるポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列 番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列 を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴニ ストの有効量を投与することを特徴とするストレス調節方法。
5 7 . 哺乳動物に対して、 （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ぺプチドまたはその塩に対 する抗体、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表される アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質 共役型レセプター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有して なるポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列 番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列 を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴ- ストの有効量を投与することを特徴とする副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進方法。
5 8 . 哺乳動物に対して、 （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号 ： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含 有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に対 する抗体、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表される アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質 共役型レセプター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有して なるポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列 番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴニ ストの有効量を投与することを特徴とする慢性関節リゥマチ、 全身性エリテマ トーデス、 多発性筋炎、 リウマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性 胸膜炎、 サルコイドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞 型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬 化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再 生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器 症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 尊麻疹、 湿 疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーまたはアナフィラキシーショッ クの予防 ·治療方法。
5 9 . 糖尿病、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症または心筋梗塞の予防 '治療剤を 製造するための （i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表さ れるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋 白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 (ii) 配列番 号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もし くは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質 またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレ ォチド、 または （i i i) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表さ れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋 白質共役型レセプター蛋白質に対するァゴニストの使用。
6 0 . ストレス調節剤を製造するための （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3ま たは配列番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ぺプチドまた はその塩、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表される ァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質 共役型レセプター蛋白質またはその部分ぺプチドをコ一ドするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3ま たは配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質に対するァゴニストの使 用。
6 1 . 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制剤を製造するための （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同 一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター 蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3 または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分べプチ ドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 または (i i i) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同 —もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター 蛋白質に対するァゴニストの使用。
6 2 . A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 タツ シング症候群または副腎皮質の萎縮の予防 ·治療剤を製造するための （i ) 配 列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一 もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋 白質、 その部分ペプチドまたはその塩、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3ま たは配列番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分ペプチド をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 または （iii) 配 列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一 もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋 白質に対するァゴニストの使用。
6 3 . 肥満症の予防 ·治療剤を製造するための （ i ) 配列番号： 1、 配列番号 ： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分べプチ ドまたはその塩に対する抗体、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列 番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列 を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分べプチドをコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドと相補的な塩基配列または その一部を含有してなるポリヌ'クレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列 番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質に対するアン タゴニストの使用。
6 4 . ス トレス調節剤を製造するための （ i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3ま たは配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質、 その部分ぺプチドまた はその塩に対する抗体、 （i i) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分べプチドをコ一ドするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドと相捕的な塩基配列またはその一 部を含有してなるポリヌクレオチド、 または （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質に対するアンタゴニ ストの使用。
6 5 . 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進剤を製造するための （i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同 一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター 蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはそ の部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドと 相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌクレオチド、 または （ iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプ ター蛋白質に対するアンタゴニストの使用。
6 6 . 慢性関節リゥマチ、全身性エリテマトーデス、多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 びまん性 間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝 硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、顆粒球減少症、紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出 症、 A C T H単独欠損症、 蓴麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤ァレ ルギーまたはアナフィラキシーショックの予防 ·治療剤を製造するための ( i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプタ 一蛋白質、その部分べプチドまたはその塩に対する抗体、 （ii)配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはそ の部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドと 相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌクレオチド、 または （ iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レセプ ター蛋白質に対するアンタゴニストの使用。
6 7 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその塩を用いることを特徴とする、 （i ) 糖尿病、 耐糖 能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網 膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、 性機能障害、 肥満症、 下垂体 機能障害、 癌、 記憶学習障害、 膝臓疲弊、 低血糖症、 インスリンアレルギー、 脂肪毒性、脂肪萎縮、癌性悪液質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 腸管ホルモンの 分泌障害もしくは循環器疾患の予防 ·治療薬、 （ii) ストレス調節薬、 （iii) 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節薬、 （iv) A C T H産生腫瘍、 ク ッシング病、 感染症、 続発性副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障 害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群もしくは副腎皮 質の萎縮の予防 ·治療薬、 または （V ) 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマト 一デス、 多発性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸 膜炎、 サルコイ ドーシス、 びまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型 急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化 症、 重症筋無力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生 不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症 候群、 甲状腺疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、奪麻疹、湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤アレルギーもしくはアナフィラキシーショック の予防 ·治療薬が該レセプター蛋白質またはその塩に結合することを確認する 方法。
6 8 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその塩を用いることを特徴とする、 （i ) 糖尿病、 高脂 血症、 動脈硬化、 狭心症または心筋梗塞の予防'治療薬、 （ii) ストレス調節 薬、 （iii) 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌抑制薬、 または （iv) A C T H産生 Jffi瘍、 クッシング病、感染症、続発性副腎皮質機能不全、消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性疾患、 高血圧、 クッシング症候群 もしくは副腎皮質の萎縮の予防 ·治療薬が該レセプター蛋白質またはその塩に 対する了ゴニストであることを確認する方法。
6 9 . 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わされるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋白質共役型レ セプター蛋白質またはその塩を用いることを特徴とする、 （i ) 肥満症の予防 '治療薬、 （ii) ストレス調節薬、 （iii) 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌促進薬、 または （iv) 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発 性筋炎、 リゥマチ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコ ィドーシス、 ぴまん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇 症肝炎、 慢性肝炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無 力症、 顔面神経麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リンパ腫、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺 疾患による悪性眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 奪麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯 状疱疹、 乾癬、 薬剤ァレルギ一もしくはァナフイラキシーショックの予防 ·治 療薬が該レセプター蛋白質またはその塩に対するアンタゴニストであることを 確認する方法。
7 0 . 各薬を該レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩に接触させ た場合における、 各薬と該レセプター蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩 との結合量を測定することを特徴とする請求項 6 7〜6 9記載の確認方法。 7 1 . ( 1 ) ( i ) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わさ れるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する G蛋 白質共役型レセプター蛋白質に対するァゴニストまたはアンタゴニスト、 また は （および） （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3または配列番号： 8で表わさ れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する G蛋 白質共役型レセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を変化させる化 合物またはその塩、 と （2 ) ( i ) 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァシド 一シス、 糖尿病神経障害、 糖尿病腎症、 糖尿病網膜症、 高脂血症、 動脈硬化、 狭心症、 心筋梗塞、性機能障害、 肥満症、 下垂体機能障害、 癌、 記憶学習障害、 睦臓疲弊、 低血糖症、 インスリンァレルギ一、脂肪毒性、 脂肪萎縮、 癌性悪液 質、 高インスリン血症、 高血糖症、 高 F F A症、 高中性脂肪症、 脂肪肝、 熱産 生機能障害、 胆石症、 摂食障害、 腸管ホルモンの分泌障害もしくは循環器疾患 の予防 ·治療薬、 （i i) ストレス調節薬、 （iii) 副腎皮質刺激ホルモン （A C T H) 分泌調節薬、 （iv) A C T H産生腫瘍、 クッシング病、 感染症、 続発性 副腎皮質機能不全、 消化性潰瘍、 糖尿病、 精神障害、 白内障、 緑内障、 結核性 疾患、 高血圧、 クッシング症候群もしくは副腎皮質の萎縮の予防 ·治療薬、 ま たは （V ) 慢性関節リウマチ、 全身性エリテマトーデス、 多発性筋炎、 リウマ チ熱、 強皮症、 腎疾患、 気管支喘息、 肺結核性胸膜炎、 サルコィドーシス、 ぴ まん性間質性肺炎、 潰瘍性大腸炎、 胆汁うっ滞型急性肝炎、 劇症肝炎、 慢性肝 炎、 肝硬変、 脳脊髄炎、 末梢神経炎、 多発性硬化症、 重症筋無力症、 顔面神経 麻痺、 溶血性貧血、 顆粒球減少症、 紫斑病、 再生不良性貧血、 白血病、 悪性リ ンパ S重、 急性慢性副腎皮質機能不全、 副腎性器症候群、 甲状腺疾患による悪性 眼球突出症、 A C T H単独欠損症、 奪麻疹、 湿疹、 皮膚炎、 帯状疱疹、 乾癬、 薬剤ァレルギ一もしくはアナフィラキシーショックの予防 ·治療薬とを組み合 わせてなる医薬。
7 2 . 配列番号： 8で表されるアミノ酸配列からなる G蛋白質共役型レセプタ 一蛋白質、 その部分ペプチドまたはその塩。
7 3 . 請求項 7 2記載の G蛋白質共役型レセプター蛋白質をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド。
7 4 . 配列番号： 9で表される塩基配列からなる D N A。
7 5 . 請求項 7 3記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター。
7 6 . 請求項 Ί 5記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体。
7 7 . 請求項 7 6記載の形質転換体を培養し、 請求項 7 2記載の G蛋白質共役 型レセプター蛋白質またはその塩を生成せしめることを特徴とする請求項 7 2 記載の G蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩の製造法。
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