JP4167868B2 - 新規分泌蛋白質およびそのｄｎａ - Google Patents

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亮 藤井
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【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規な分泌蛋白質、そのＤＮＡおよびそれらの用途、および新規なＡＱ２７受容体、そのＤＮＡおよびそれらの用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、ヒトゲノムＤＮＡあるいは各種ヒト組織由来のｃＤＮＡのランダムな配列決定による配列情報の蓄積および遺伝子解析技術の急速な進歩によってヒトの遺伝子が加速度的に解明されてきている。それにともない、機能未知の蛋白をコードすると予想される多くの遺伝子の存在が明らかになっている。
ＷＯ０１／１６３１３号には、オーファンＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質であるＡＱ２７およびそのＤＮＡが記載されている。
ＷＯ００／２９４４１号には、オーファンＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質であるＯＴ７Ｔ０２２およびそのＤＮＡが記載されており、ＯＴ７Ｔ０２２に結合するリガンドとしてＲＦＲＰ（ＲＦ related peptide）が記載されている。
ＷＯ０１／６６１３４号公報には、上記ＲＦＲＰがプロラクチン分泌調節作用を有することが記載されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、新規な分泌蛋白質、、そのＤＮＡおよびそれらの用途、および新規なＡＱ２７受容体、そのＤＮＡおよびそれらの用途などを提供する。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ヒト全脳等から分泌シグナルを含む新規なペプチドをコードする９種類のＤＮＡを取得することに成功し、このＤＮＡに分泌ペプチドがコードされていることを見い出した。さらに、本発明者らは、マウスおよびラット由来のＡＱ２７受容体をコードする９種類のＤＮＡを取得することに成功した。本発明者らは、これらの知見に基づいて、さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち、本発明は、
（１）配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２）配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなる分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３）上記（１）記載の分泌蛋白質の部分ペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（４）上記（１）記載の分泌蛋白質の前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（５）配列番号：２で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする上記（４）記載の前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（６）配列番号：２で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（７）上記（１）記載の分泌蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（８）配列番号：７で表わされる塩基配列からなる上記（７）記載のポリヌクレオチド、
（９）上記（３）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１０）上記（４）記載の前駆体蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１１）配列番号：８で表わされる塩基配列からなる上記（１０）記載のポリヌクレオチド、
（１２）上記（７）〜（１１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（１３）上記（１２）記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、
（１４）上記（１３）記載の形質転換体を培養し、上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質を生成せしめることを特徴とする上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の製造法、
（１５）上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（１６）上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を不活性化する中和抗体である上記（１５）記載の抗体、
（１７）上記（１５）記載の抗体を含有してなる医薬、
（１８）上記（１５）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（１９）上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる医薬、
（２０）上記（７）〜（１１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（２１）上記（７）〜（１１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（２２）上記（７）〜（１１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチド、
（２３）上記（２２）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（２４）上記（２２）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（２５）上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を用いることを特徴とする上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２６）上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有することを特徴とする上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（２７）上記（２５）記載のスクリーニング方法または上記（２６）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、
（２８）上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２９）上記（７）〜（１１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３０）上記（７）〜（１１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（３１）上記（２９）記載のスクリーニング方法または上記（３０）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（３２）上記（１）記載の分泌蛋白質、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（３３）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜１１２番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３４）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜１１２番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３５）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜３７番目のアミノ酸配列または第４０番目〜５５番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３６）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜３７番目のアミノ酸配列または第４０番目〜５５番目のアミノ酸配列からなるペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３７）上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチドの部分ペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３８）上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチドの前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３９）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする上記（３８）記載の前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（４０）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（４１）上記（３３）記載の分泌蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（４２）配列番号：９で表わされる塩基配列の第６４番目〜３３６番目の塩基配列からなる上記（４１）記載のポリヌクレオチド、
（４３）上記（３５）記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（４４）配列番号：９で表わされる塩基配列の第６４番目〜１１１番目の塩基配列または第１１８番目〜１６５番目の塩基配列からなる上記（４３）記載のポリヌクレオチド、
（４５）上記（３７）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（４６）上記（３８）記載の前駆体蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（４７）配列番号：９で表わされる塩基配列からなる上記（４６）記載のポリヌクレオチド、
（４８）上記（４１）〜（４７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（４９）上記（４８）記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、
（５０）上記（４９）記載の形質転換体を培養し、上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質を生成せしめることを特徴とする上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の製造法、
（５１）上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（５２）上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を不活性化する中和抗体である上記（５１）記載の抗体、
（５３）上記（５１）記載の抗体を含有してなる医薬、
（５４）上記（５１）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（５５）上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる医薬、
（５６）上記（４１）〜（４７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（５７）上記（４１）〜（４７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（５８）上記（４１）〜（４７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチド、
（５９）上記（５８）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（６０）上記（５８）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（６１）上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を用いることを特徴とする上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（６２）上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有することを特徴とする上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（６３）上記（６１）記載のスクリーニング方法または上記（６２）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、
（６４）上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（６５）上記（４１）〜（４７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（６６）上記（４１）〜（４７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（６７）上記（６５）記載のスクリーニング方法または上記（６６）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（６８）上記（３３）記載の分泌蛋白質または上記（３５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（６９）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜２３４番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（７０）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜２３４番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（７１）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜２１番目のアミノ酸配列、第２６番目〜５８番目のアミノ酸配列、第６０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第９０番目〜１０７番目のアミノ酸配列、第１１０番目〜１８７番目のアミノ酸配列または第１９０番目〜２３４番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（７２）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜２１番目のアミノ酸配列、第２６番目〜５８番目のアミノ酸配列、第６０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第９０番目〜１０７番目のアミノ酸配列、第１１０番目〜１８７番目のアミノ酸配列または第１９０番目〜２３４番目のアミノ酸配列からなるペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（７３）上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチドの部分ペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（７４）上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチドの前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（７５）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする上記（７４）記載の前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（７６）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（７７）上記（６９）記載の分泌蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（７８）配列番号：１０で表わされる塩基配列の第４３番目〜７０２番目の塩基配列からなる上記（７７）記載のポリヌクレオチド、
（７９）上記（７１）記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（８０）配列番号：１０で表わされる塩基配列の第４３番目〜６３番目の塩基配列、第７６番目〜１７４番目の塩基配列、第１７８番目〜２６４番目の塩基配列、第２６８番目〜３２１番目の塩基配列、第３２８番目〜５６１番目の塩基配列または第５６８番目〜７０２番目の塩基配列からなる上記（７９）記載のポリヌクレオチド、
（８１）上記（７３）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（８２）上記（７４）記載の前駆体蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（８３）配列番号：１０で表わされる塩基配列からなる上記（８２）記載のポリヌクレオチド、
（８４）上記（７７）〜（８３）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（８５）上記（８４）記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、
（８６）上記（８５）記載の形質転換体を培養し、上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質を生成せしめることを特徴とする上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の製造法、
（８７）上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（８８）上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を不活性化する中和抗体である上記（８７）記載の抗体、
（８９）上記（８７）記載の抗体を含有してなる医薬、
（９０）上記（８７）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（９１）上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる医薬、
（９２）上記（７７）〜（８３）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（９３）上記（７７）〜（８３）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（９４）上記（７７）〜（８３）のいずれかに記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチド、
（９５）上記（９４）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（９６）上記（９４）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（９７）上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を用いることを特徴とする上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（９８）上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有することを特徴とする上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（９９）上記（９７）記載のスクリーニング方法または上記（９８）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、
（１００）上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（１０１）上記（７７）〜（８３）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（１０２）上記（７７）〜（８３）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（１０３）上記（１０１）記載のスクリーニング方法または上記（１０２）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（１０４）上記（６９）記載の分泌蛋白質または上記（７１）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（１０５）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜１６６番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１０６）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜１６６番目のアミノ酸配列をからなる分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１０７）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜８５番目のアミノ酸配列、第８６番目〜１１４番目のアミノ酸配列または第１１５番目〜１６６番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１０８）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜８５番目のアミノ酸配列、第８６番目〜１１４番目のアミノ酸配列または第１１５番目〜１６６番目のアミノ酸配列からなるペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１０９）上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチドの部分ペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１１０）上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチドの前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１１１）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする上記（１１０）記載の前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１１２）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１１３）上記（１０５）記載の分泌蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１１４）配列番号：１１で表わされる塩基配列の第７３番目〜４９８番目の塩基配列からなる上記（１１３）記載のポリヌクレオチド、
（１１５）上記（１０７）記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１１６）配列番号：１１で表わされる塩基配列の第７３番目〜２５５番目の塩基配列、第２５６番目〜３４２番目または第３４３番目〜４９８番目の塩基配列からなる上記（１１５）記載のポリヌクレオチド、
（１１７）上記（１０９）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１１８）上記（１１０）記載の前駆体蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１１９）配列番号：１１で表わされる塩基配列からなる上記（１１８）記載のポリヌクレオチド、
（１２０）上記（１１３）〜（１１９）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（１２１）上記（１２０）記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、
（１２２）上記（１２１）記載の形質転換体を培養し、上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質を生成せしめることを特徴とする上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の製造法、
（１２３）上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（１２４）上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を不活性化する中和抗体である上記（１２３）記載の抗体、
（１２５）上記（１２３）記載の抗体を含有してなる医薬、
（１２６）上記（１２３）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（１２７）上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる医薬、
（１２８）上記（１１３）〜（１１９）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（１２９）上記（１１３）〜（１１９）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（１３０）上記（１１３）〜（１１９）のいずれかに記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチド、
（１３１）上記（１３０）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（１３２）上記（１３０）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（１３３）上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を用いることを特徴とする上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（１３４）上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその塩を含有することを特徴とする上記（９７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（１３５）上記（１３３）記載のスクリーニング方法または上記（１３４）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、
（１３６）上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（１３７）上記（１１３）〜（１１９）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（１３８）上記（１１３）〜（１１９）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（１３９）上記（１３７）記載のスクリーニング方法または上記（１３８）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（１４０）上記（１０５）記載の分泌蛋白質または上記（１０７）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（１４１）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜２４１番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１４２）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜２４１番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１４３）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜５８番目のアミノ酸配列、第６３番目〜２０２番目のアミノ酸配列または第２０５番目〜２４１番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１４４）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜５８番目のアミノ酸配列、第６３番目〜２０２番目のアミノ酸配列または第２０５番目〜２４１番目のアミノ酸配列からなるペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１４５）上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチドの部分ペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１４６）上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチドの前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１４７）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする上記（１４６）記載の前駆体蛋白質またはその塩、
（１４８）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１４９）上記（１４１）記載の分泌蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１５０）配列番号：１２で表わされる塩基配列の第５５番目〜７２３番目の塩基配列からなる上記（１４９）記載のポリヌクレオチド、
（１５１）上記（１４３）記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１５２）配列番号：１２で表わされる塩基配列の第５５番目〜１７４番目の塩基配列、第１８７番目〜６０６番目または第６１３番目〜７２３番目の塩基配列からなる上記（１５１）記載のポリヌクレオチド、
（１５３）上記（１４５）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１５４）上記（１４６）記載の前駆体蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１５５）配列番号：１２で表わされる塩基配列からなる上記（１５４）記載のポリヌクレオチド、
（１５６）上記（１４９）〜（１５５）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（１５７）上記（１５６）記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、
（１５８）上記（１５７）記載の形質転換体を培養し、上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質を生成せしめることを特徴とする上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の製造法、
（１５９）上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（１６０）上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を不活性化する中和抗体である上記（１５９）記載の抗体、
（１６１）上記（１５９）記載の抗体を含有してなる医薬、
（１６２）上記（１５９）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（１６３）上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる医薬、
（１６４）上記（１４９）〜（１５５）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（１６５）上記（１４９）〜（１５５）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（１６６）上記（１４９）〜（１５５）のいずれかに記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチド、
（１６７）上記（１６６）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（１６８）上記（１６６）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（１６９）上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を用いることを特徴とする上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（１７０）上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有することを特徴とする上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（１７１）上記（１６９）記載のスクリーニング方法または上記（１７０）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、
（１７２）上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（１７３）上記（１４９）〜（１５５）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（１７４）上記（１４９）〜（１５５）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（１７５）上記（１７３）記載のスクリーニング方法または上記（１７４）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（１７６）上記（１４１）記載の分泌蛋白質または上記（１４３）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（１７７）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜１３６番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列、配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列または配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１３４番目のアミノ酸配列）を含有することを特徴とする分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１７８）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜１３６番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１７９）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第２６番目〜８８番目のアミノ酸配列、第８０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第９１番目〜１３３番目のアミノ酸配列または第１２７番目〜１３３番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１８０）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第２６番目〜８８番目のアミノ酸配列、第８０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第９０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２６番目〜１３３番目または第１２７番目〜１３３番目のアミノ酸配列からなるペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１８１）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチドの部分ペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１８２）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチドの前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１８３）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列、配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列または配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列）を含有することを特徴とする上記（１８２）記載の前駆体蛋白質またはその塩、
（１８４）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（１８５）上記（１７７）記載の分泌蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１８６）配列番号：２４で表わされる塩基配列の第５５番目〜４０８番目の塩基配列からなる上記（１８５）記載のポリヌクレオチド、
（１８７）上記（１７９）記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１８８）配列番号：２４で表わされる塩基配列の第７６番目〜２６４番目の塩基配列、第２３８番目〜２６４番目、第２７１番目〜３９９番目または第３７９番目〜３９９番目の塩基配列からなる上記（１８７）記載のポリヌクレオチド、
（１８９）上記（１８１）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１９０）上記（１８３）記載の前駆体蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（１９１）配列番号：２４で表わされる塩基配列からなる上記（１９０）記載のポリヌクレオチド、
（１９２）上記（１８５）〜（１９１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（１９３）上記（１９２）記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、
（１９４）上記（１９３）記載の形質転換体を培養し、上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質を生成せしめることを特徴とする上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の製造法、
（１９５）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（１９６）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を不活性化する中和抗体である上記（１９５）記載の抗体、
（１９７）上記（１９５）記載の抗体を含有してなる医薬、
（１９８）上記（１９５）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（１９９）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる医薬、
（２００）上記（１８５）〜（１９１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（２０１）上記（１８５）〜（１９１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（２０２）上記（１８５）〜（１９１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチド、
（２０３）上記（２０２）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（２０４）上記（２０２）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（２０５）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を用いることを特徴とする上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２０６）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有することを特徴とする上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（２０７）上記（２０５）記載のスクリーニング方法または上記（２０６）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、
（２０８）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２０９）上記（１８５）〜（１９１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２１０）上記（１８５）〜（１９１）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（２１１）上記（２０９）記載のスクリーニング方法または上記（２１０）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（２１２）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２１３）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２１４）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２１５）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列または第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２１６）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列または第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列からなるペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２１７）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチドの部分ペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２１８）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチドの前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２１９）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする上記（２１８）記載の前駆体蛋白質またはその塩、
（２２０）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列からなる上記（２１９）記載の前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２２１）上記（２１３）記載の分泌蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（２２２）配列番号：２８で表わされる塩基配列の第５２番目〜３７２番目の塩基配列からなる上記（２２１）記載のポリヌクレオチド、
（２２３）上記（２１５）記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（２２４）配列番号：２８で表わされる塩基配列の第３４３番目〜３６６番目の塩基配列または第３４６番目〜３６６番目の塩基配列からなる上記（２２３）記載のポリヌクレオチド、
（２２５）上記（２１７）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（２２６）上記（２１９）記載の前駆体蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（２２７）配列番号：２８で表わされる塩基配列からなる上記（２２６）記載のポリヌクレオチド、
（２２８）上記（２２１）〜（２２７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（２２９）上記（２２８）記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、
（２３０）上記（２２９）記載の形質転換体を培養し、上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質を生成せしめることを特徴とする上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の製造法、
（２３１）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（２３２）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を不活性化する中和抗体である上記（２３１）記載の抗体、
（２３３）上記（２３１）記載の抗体を含有してなる医薬、
（２３４）上記（２３１）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（２３５）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる医薬、
（２３６）上記（２２１）〜（２２７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（２３７）上記（２２１）〜（２２７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（２３８）上記（２２１）〜（２２７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチド、
（２３９）上記（２３８）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（２４０）上記（２３８）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（２４１）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を用いることを特徴とする上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２４２）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有することを特徴とする上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（２４３）上記（２４１）記載のスクリーニング方法または上記（２４２）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、
（２４４）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２４５）上記（２２１）〜（２２７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２４６）上記（２２１）〜（２２７）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（２４７）上記（２４５）記載のスクリーニング方法または上記（２４６）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（２４８）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２４９）（ｉ）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩とを用いることを特徴とする、（ｉ）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２５０）上記（２４９）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる、（ｉ）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、
（２５１）上記（２４９）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる（ｉ）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２５２）（ｉ）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩とを用いることを特徴とする、（ｉ）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２５３）上記（２５２）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる、（ｉ）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、
（２５４）上記（２５２）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる（ｉ）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２５５）（ｉ）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩とを用いることを特徴とする、（ｉ）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２５６）上記（２５５）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる、（ｉ）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、
（２５７）上記（２５５）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる（ｉ）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２５８）（ｉ）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩とを用いることを特徴とする、（ｉ）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２５９）上記（２５８）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる、（ｉ）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、
（２６０）上記（２５８）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる（ｉ）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２６１）該Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を含有する細胞を用い、該細胞内Ｃａ２＋遊離または細胞内ｃＡＭＰ生成を指標とする上記（２４９）、（２５２）、（２５５）または（２５８）記載のスクリーニング方法、
（２６２）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２６３）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２６４）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列または第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２６５）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列または第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列からなるペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２６６）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチドの部分ペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２６７）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチドの前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２６８）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする上記（２６７）記載の前駆体蛋白質またはその塩、
（２６９）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２７０）上記（２６２）記載の分泌蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（２７１）配列番号：３９で表わされる塩基配列の第５２番目〜３７２番目の塩基配列からなる上記（２７０）記載のポリヌクレオチド、
（２７２）上記（２６４）記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（２７３）配列番号：３９で表わされる塩基配列の第３４３番目〜３６６番目の塩基配列または第３４６番目〜３６６番目の塩基配列からなる上記（２７２）記載のポリヌクレオチド、
（２７４）上記（２６５）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（２７５）上記（２６７）記載の前駆体蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（２７６）配列番号：３９で表わされる塩基配列からなる上記（２７５）記載のポリヌクレオチド、
（２７７）上記（２７０）〜（２７６）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（２７８）上記（２７７）記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、
（２７９）上記（２７８）記載の形質転換体を培養し、上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質を生成せしめることを特徴とする上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の製造法、
（２８０）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（２８１）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を不活性化する中和抗体である上記（２８０）記載の抗体、
（２８２）上記（２８０）記載の抗体を含有してなる医薬、
（２８３）上記（２８０）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（２８４）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる医薬、
（２８５）上記（２７０）〜（２７６）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（２８６）上記（２７０）〜（２７６）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（２８７）上記（２７０）〜（２７６）のいずれかに記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチド、
（２８８）上記（２８７）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（２８９）上記（２８７）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（２９０）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を用いることを特徴とする上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２９１）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有することを特徴とする上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（２９２）上記（２９０）記載のスクリーニング方法または上記（２９１）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、
（２９３）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２９４）上記（２７０）〜（２７６）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２９５）上記（２７０）〜（２７６）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（２９６）上記（２９４）記載のスクリーニング方法または上記（２９５）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（２９７）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２９８）配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１３４番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（２９９）配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１３１番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３００）配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１２５番目〜１３１番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３０１）配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１２５番目〜１３１番目のアミノ酸配列または第１２４番目〜１３１番目のアミノ酸配列からなるペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３０２）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチドの部分ペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３０３）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチドの前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３０４）配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする上記（３０３）記載の前駆体蛋白質またはその塩、
（３０５）配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（３０６）上記（２９８）記載の分泌蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（３０７）配列番号：４３で表わされる塩基配列の第５２番目〜４０２番目の塩基配列からなる上記（３０６）記載のポリヌクレオチド、
（３０８）上記（３００）記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（３０９）配列番号：４３で表わされる塩基配列の第３７３番目〜３９３番目の塩基配列または第３７０番目〜３９３番目の塩基配列からなる上記（３０８）記載のポリヌクレオチド、
（３１０）上記（３０１）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（３１１）上記（３０３）記載の前駆体蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（３１２）配列番号：４３で表わされる塩基配列からなる上記（３１１）記載のポリヌクレオチド、
（３１３）上記（３０６）〜（３１２）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（３１４）上記（３１３）記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、
（３１５）上記（３１４）記載の形質転換体を培養し、上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質を生成せしめることを特徴とする上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の製造法、
（３１６）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（３１７）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を不活性化する中和抗体である上記（３１６）記載の抗体、
（３１８）上記（３１６）記載の抗体を含有してなる医薬、
（３１９）上記（３１６）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（３２０）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる医薬、
（３２１）上記（３０６）〜（３１２）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（３２２）上記（３０６）〜（３１２）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（３２３）上記（３０６）〜（３１２）のいずれかに記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチド、
（３２４）上記（３２３）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（３２５）上記（３２３）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（３２６）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を用いることを特徴とする上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３２７）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有することを特徴とする上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（３２８）上記（３２６）記載のスクリーニング方法または上記（３２７）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、
（３２９）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（３３０）上記（３０６）〜（３１２）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３３１）上記（３０６）〜（３１２）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（３３２）上記（３３０）記載のスクリーニング方法または上記（３３１）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（３３３）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（３３４）（ｉ）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩とを用いることを特徴とする、（ｉ）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３３５）上記（３３４）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる、（ｉ）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、
（３３６）上記（３３４）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる（ｉ）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（３３７）（ｉ）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６２）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩とを用いることを特徴とする、（ｉ）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３３８）上記（３３７）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる、（ｉ）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、
（３３９）上記（３３７）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる（ｉ）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（３４０）（ｉ）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩とを用いることを特徴とする、（ｉ）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３４１）上記（３４０）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる、（ｉ）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、
（３４２）上記（３４０）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる（ｉ）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（３４３）（ｉ）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩とを用いることを特徴とする、（ｉ）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３４４）上記（３４３）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる、（ｉ）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、
（３４５）上記（３４３）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる（ｉ）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と（ii）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（３４６）該Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を含有する細胞を用い、該細胞内Ｃａ２＋遊離または細胞内ｃＡＭＰ生成を指標とする上記（３３４）、（３３７）、（３４０）または（３４３）記載のスクリーニング方法、
（３４７）配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩、
（３４８）配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列からなるＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩、
（３４９）上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（３５０）配列番号：４５または配列番号：４７で表わされる塩基配列からなる上記（３４９）記載のポリヌクレオチド、
（３５１）上記（３４９）記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（３５２）上記（３５１）記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、
（３５３）上記（３５２）記載の形質転換体を培養し、上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質を生成せしめることを特徴とする上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩の製造法、
（３５４）上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（３５５）上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩の活性を不活性化する中和抗体である上記（３５４）記載の抗体、
（３５６）上記（３５４）記載の抗体を含有してなる医薬、
（３５７）上記（３５４）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（３５８）上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる医薬、
（３５９）上記（３４９）記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（３６０）上記（３４９）記載のポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（３６１）上記（３４９）記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチド、
（３６２）上記（３６１）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（３６３）上記（３６１）記載のアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる診断剤、
（３６４）上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３６５）上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を含有することを特徴とする上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（３６６）上記（３６４）記載のスクリーニング方法または上記（３６５）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、
（３６７）上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（３６８）上記（３４９）記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３６９）上記（３４９）記載のポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（３７０）上記（３６８）記載のスクリーニング方法または上記（３６９）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（３７１）上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（３７２）ホルモン分泌調節剤、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤または情動行動調節剤である上記（１９７）、（１９９）、（２００）、（２０３，２０８）、（２１２）、（２３３）、（２３５）、（２３６）、（２３９）、（２４４）、（２４８）、（２５１）、（２５４）、（２５７）、（２８２）、（２８４）、（２８８）、（２９３）、（２９７）、（３１７）、（３２０）、（３２２）、（３２４）、（３２９）、（３３３）、（３３６）、（３４２）、（３５６）、（３５９）、（３６２）、（３６７）または（３７１）記載の医薬、
（３７３）プロラクチン分泌調節剤である上記（１９７）、（１９９）、（２００）、（２０３）、（２０８）、（２１２）、（２３３）、（２３５）、（２３６）、（２３９）、（２４４）、（２４８）、（２５１）、（２５７）、（２８２）、（２８４）、（２８５）、（２８８）、（２９３）、（２９７）、（３１８）、（３２０）、（３２１）、（３２４）、（３２９）、（３３３）、（３３９）または（３４５）記載の医薬、
（３７４）哺乳動物に対して、
（i）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（ii）上記（１８５）〜（１９１）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（iii）上記（１９５）記載の抗体、（iv）上記（２０２）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（v）上記（２０７）記載の化合物またはその塩、（vi）上記（２１１）記載の化合物またはその塩、（vii）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（viii）上記（２２１）〜（２２７）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（ix）上記（２３１）記載の抗体、（x）上記（２３８）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xi）上記（２４３）記載の化合物またはその塩、（xii）上記（２４７）記載の化合物またはその塩、（xiii）上記（２５０）記載の化合物またはその塩、（xiv）上記（２５６）記載の化合物またはその塩、（xv）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（xvi）上記（２７０）〜（２７６）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（xvii）上記（２８０）記載の抗体、（xviii）上記（２８７）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xix）上記（２９２）記載の化合物またはその塩、（xx）上記（２９６）記載の化合物またはその塩、（xxi）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（xxii）上記（３０６）〜（３１２）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（xxiii）上記（３１６）記載の抗体、（xxiv）上記（３２３）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xxv）上記（３２８）記載の化合物またはその塩、（xxvi）上記（３３２）記載の化合物またはその塩、（xxvii）上記（３３５）記載の化合物またはその塩、（xxviii）上記（３４１）記載の化合物またはその塩、（xxix）上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩、（xxxx）上記（３４９）記載のポリヌクレオチド、（xxxi）上記（３５４）記載の抗体、（xxxii）上記（３６１）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xxxiii）上記（３６６）記載の化合物、または（xxxiv）上記（３７０）記載の化合物の有効量を投与することを特徴とするホルモン分泌調節、摂食、睡眠、覚醒、痛覚、ストレス応答、自発行動または情動行動の調節方法、
（３７５）哺乳動物に対して
（i）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（ii）上記（１８５）〜（１９１）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（iii）上記（１９５）記載の抗体、（iv）上記（２０２）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（v）上記（２０７）記載の化合物またはその塩、（vi）上記（２１１）記載の化合物またはその塩、（vii）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（viii）上記（２２１）〜（２２７）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（ix）上記（２３１）記載の抗体、（x）上記（２３８）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xi）上記（２４３）記載の化合物またはその塩、（xii）上記（２４７）記載の化合物またはその塩、（xiii）上記（２５３）記載の化合物またはその塩、（xiv）上記（２５９）記載の化合物またはその塩、（xv）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（xvi）上記（２７０）〜（２７６）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（xvii）上記（２８０）記載の抗体、（xviii）上記（２８７）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xix）上記（２９２）記載の化合物またはその塩、（xx）上記（２９６）記載の化合物またはその塩、（xxi）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（xxii）上記（３０６）〜（３１２）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（xxiii）上記（３１６）記載の抗体、（xxiv）上記（３２３）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xxv）上記（３２８）記載の化合物またはその塩、（xxvi）上記（３３２）記載の化合物またはその塩、（xxvii）上記（３３８）記載の化合物またはその塩、または（xxviii）上記（３４４）記載の化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とするプロラクチン分泌調節方法、
（３７６）ホルモン分泌調節剤、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤または情動行動調節剤を製造するための
（i）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（ii）上記（１８５）〜（１９１）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（iii）上記（１９５）記載の抗体、（iv）上記（２０２）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（v）上記（２０７）記載の化合物またはその塩、（vi）上記（２１１）記載の化合物またはその塩、（vii）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（viii）上記（２２１）〜（２２７）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（ix）上記（２３１）記載の抗体、（x）上記（２３８）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xi）上記（２４３）記載の化合物またはその塩、（xii）上記（２４７）記載の化合物またはその塩、（xiii）上記（２５０）記載の化合物またはその塩、（xiv）上記（２５６）記載の化合物またはその塩、（xv）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（xvi）上記（２７０）〜（２７６）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（xvii）上記（２８０）記載の抗体、（xviii）上記（２８７）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xix）上記（２９２）記載の化合物またはその塩、（xx）上記（２９６）記載の化合物またはその塩、（xxi）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（xxii）上記（３０６）〜（３１２）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（xxiii）上記（３１６）記載の抗体、（xxiv）上記（３２３）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xxv）上記（３２８）記載の化合物またはその塩、（xxvi）上記（３３２）記載の化合物またはその塩、（xxvii）上記（３３５）記載の化合物またはその塩、（xxviii）上記（３４１）記載の化合物またはその塩、（xxix）上記（３４７）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩、（xxxx）上記（３４９）記載のポリヌクレオチド、（xxxi）上記（３５４）記載の抗体、（xxxii）上記（３６１）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xxxiii）上記（３６６）記載の化合物、または（xxxiv）上記（３７０）記載の化合物の使用、
（３７７）プロラクチン分泌調節剤を製造するための
（i）上記（１７７）記載の分泌蛋白質または上記（１７９）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（ii）上記（１８５）〜（１９１）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（iii）上記（１９５）記載の抗体、（iv）上記（２０２）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（v）上記（２０７）記載の化合物またはその塩、（vi）上記（２１１）記載の化合物またはその塩、（vii）上記（２１３）記載の分泌蛋白質または上記（２１５）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（viii）上記（２２１）〜（２２７）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（ix）上記（２３１）記載の抗体、（x）上記（２３８）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xi）上記（２４３）記載の化合物またはその塩、（xii）上記（２４７）記載の化合物またはその塩、（xiii）上記（２５３）記載の化合物またはその塩、（xiv）上記（２５９）記載の化合物またはその塩、（xv）上記（２６２）記載の分泌蛋白質または上記（２６４）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（xvi）上記（２７０）〜（２７６）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（xvii）上記（２８０）記載の抗体、（xviii）上記（２８７）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xix）上記（２９２）記載の化合物またはその塩、（xx）上記（２９６）記載の化合物またはその塩、（xxi）上記（２９８）記載の分泌蛋白質または上記（３００）記載のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（xxii）上記（３０６）〜（３１２）のいずれかに記載のポリヌクレオチド、（xxiii）上記（３１６）記載の抗体、（xxiv）上記（３２３）記載のアンチセンスポリヌクレオチド、（xxv）上記（３２８）記載の化合物またはその塩、（xxvi）上記（３３２）記載の化合物またはその塩、（xxvii）上記（３３８）記載の化合物またはその塩、または（xxviii）上記（３４４）記載の化合物またはその塩の使用、
（３７８）配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤または情動行動調節剤、
（３７９）配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドを含有してなる摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤または情動行動調節剤、
（３８０）配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤または情動行動調節剤、
（３８１）配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤または情動行動調節剤、
（３８２）配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤または情動行動調節剤、および
（３８３）配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現を促進または阻害する化合物またはその塩を含有してなる摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤または情動行動調節剤を提供する。
【０００６】
【発明の実施の形態】
（１）本発明の配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する分泌蛋白質（以下、本発明の分泌蛋白質Ａと略記する場合がある）、
（２）本発明の配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜１１２番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する分泌蛋白質（以下、本発明の分泌蛋白質Ｂと略記する場合がある）、
（３）本発明の配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜２３４番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する分泌蛋白質（以下、本発明の分泌蛋白質Ｃと略記する場合がある）、
（４）本発明の配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜１６６番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する分泌蛋白質（以下、本発明の分泌蛋白質Ｄと略記する場合がある）、
（５）本発明の配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜２４１番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する分泌蛋白質（以下、本発明の分泌蛋白質Ｅと略記する場合がある）、
（６）本発明の配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜１３６番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する分泌蛋白質（以下、本発明の分泌蛋白質Ｆと略記する場合がある）、
（７）本発明の配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する分泌蛋白質（以下、本発明の分泌蛋白質Ｇと略記する場合がある）、
（８）本発明の配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する分泌蛋白質（以下、本発明の分泌蛋白質Ｈと略記する場合がある）または、
（９）本発明の配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１３４番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する分泌蛋白質（以下、本発明の分泌蛋白質Ｉと略記する場合がある）は、ヒトや温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなど）の細胞（例えば、網膜細胞、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくは癌細胞など）もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、網膜、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など、または血球系の細胞もしくはその培養細胞（例えば、ＭＥＬ，Ｍ１，ＣＴＬＬ−２，ＨＴ−２，ＷＥＨＩ−３，ＨＬ−６０，ＪＯＳＫ−１，Ｋ５６２，ＭＬ−１，ＭＯＬＴ−３，ＭＯＬＴ−４，ＭＯＬＴ−１０，ＣＣＲＦ−ＣＥＭ，ＴＡＬＬ−１，Ｊｕｒｋａｔ，ＣＣＲＴ−ＨＳＢ−２，ＫＥ−３７，ＳＫＷ−３，ＨＵＴ−７８，ＨＵＴ−１０２，Ｈ９，Ｕ９３７，ＴＨＰ−１，ＨＥＬ，ＪＫ−１，ＣＭＫ，ＫＯ−８１２，ＭＥＧ−０１など）に由来するペプチドであってもよく、合成ペプチドであってもよい。
【０００７】
本願明細書において、アミノ酸配列Ｘとは、以下の９種類のアミノ酸配列から選ばれる１つのアミノ酸配列を示す。
（Ａ）配列番号：１で表わされるアミノ酸配列、
（Ｂ）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜１１２番目のアミノ酸配列、
（Ｃ）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜２３４番目のアミノ酸配列、
（Ｄ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜１６６番目のアミノ酸配列、
（Ｅ）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜２４１番目のアミノ酸配列、
（Ｆ）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜１３６番目のアミノ酸配列、
（Ｇ）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列、
（Ｈ）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列、
（Ｉ）配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１３４番目のアミノ酸配列。
アミノ酸配列Ｘと実質的に同一のアミノ酸配列としては、アミノ酸配列Ｘと約５０％以上、好ましくは約６０％以上、さらに好ましくは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などがあげられる。具体的には、配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜１３６番目のアミノ酸配列と６０％以上の相同性を有するアミノ酸配列としては、配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列、配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列または配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１３４番目のアミノ酸配列が挙げられる。
アミノ酸配列Ｘと実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチドとしては、例えば、前記のアミノ酸配列Ｘと実質的に同一のアミノ酸配列を有し、アミノ酸配列Ｘを有するペプチドと実質的に同質の活性を有するペプチドなどが好ましい。
実質的に同質の活性としては、例えば、本発明のペプチドが有する活性（例えば、受容体との結合活性、受容体発現細胞に対する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ2+遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下、ＧＴＰγＳ結合活性などを促進する活性等）、酵素活性、転写活性、結合タンパク質との結合活性等）などが挙げられる。
実質的に同質とは、それらの活性が性質的に（例、生理化学的に、または薬理学的に）同質であることを示す。
【０００８】
アミノ酸配列Ｘと同一または実質的に同一のアミノ酸配列の具体例としては、（ｉ）アミノ酸配列Ｘ、
（ii）アミノ酸配列Ｘ中の１〜３０個（例えば１〜１０個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜３個、より好ましくは１個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、
（iii）アミノ酸配列Ｘに１〜３０個（例えば１〜１０個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜３個、より好ましくは１個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、
（iv）アミノ酸配列Ｘに１〜３０個（例えば１〜１０個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜３個、より好ましくは１個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、
（v）アミノ酸配列Ｘ中の１〜３０個（例えば１〜１０個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜３個、より好ましくは１個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、
（vi）上記（ii）〜（v）を組み合わせたアミノ酸配列などがあげられる。
本発明のペプチドの具体例としては、例えば、
（１）配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなる分泌蛋白質Ａ、
（２）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜１１２番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質Ｂ、
（３）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜２３４番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質Ｃ、
（４）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜１６６番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質Ｄ、
（５）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜２４１番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質Ｅ、
（６）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜１３６番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質Ｆ、
（７）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質Ｇ、
（８）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２４番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質Ｈ、
（９）配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１３４番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質Ｉなどが挙げられる。
本願明細書において、上記の分泌蛋白質Ａ、分泌蛋白質Ｂ、分泌蛋白質Ｃ、分泌蛋白質Ｄ、分泌蛋白質Ｅ、分泌蛋白質Ｆ、分泌蛋白質Ｇ、分泌蛋白質Ｈおよび分泌蛋白質Ｉを本発明のペプチドと総称する場合がある。
【０００９】
（１）本発明の配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜３７番目のアミノ酸配列または第４０番目〜５５番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチド（以下、本発明のペプチドＢと略記する場合がある）、
（２）本発明の配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜２１番目のアミノ酸配列、第２６番目〜５８番目のアミノ酸配列、第６０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第９０番目〜１０７番目のアミノ酸配列、第１１０番目〜１８７番目のアミノ酸配列または第１９０番目〜２３４番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチド（以下、本発明のペプチドＣと略記する場合がある）、
（３）本発明の配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜８５番目のアミノ酸配列、第８６番目〜１１４番目のアミノ酸配列または第１１５番目〜１６６番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチド（以下、本発明のペプチドＤと略記する場合がある）、または
（４）本発明の配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜５８番目のアミノ酸配列、第６３番目〜２０２番目のアミノ酸配列または第２０５番目〜２４１番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチド（以下、本発明のペプチドＥと略記する場合がある）、
（５）本発明の配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第２６番目〜８８番目のアミノ酸配列、第８０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第９１番目〜１３３番目のアミノ酸配列または第１２７番目〜１３３番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチド（以下、本発明のペプチドＦと略記する場合がある）、
（６）本発明の配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列または第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチド（以下、本発明のペプチドＧと略記する場合がある）、
（７）本発明の配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列または第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチド（以下、本発明のペプチドＨと略記する場合がある）、
（８）本発明の配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１２４番目〜１３１番目のアミノ酸配列または第１２５番目〜１３１番目のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチド（以下、本発明のペプチドＩと略記する場合がある）は、ヒトや温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなど）の細胞（例えば、網膜細胞、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくは癌細胞など）もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、網膜、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など、または血球系の細胞もしくはその培養細胞（例えば、ＭＥＬ，Ｍ１，ＣＴＬＬ−２，ＨＴ−２，ＷＥＨＩ−３，ＨＬ−６０，ＪＯＳＫ−１，Ｋ５６２，ＭＬ−１，ＭＯＬＴ−３，ＭＯＬＴ−４，ＭＯＬＴ−１０，ＣＣＲＦ−ＣＥＭ，ＴＡＬＬ−１，Ｊｕｒｋａｔ，ＣＣＲＴ−ＨＳＢ−２，ＫＥ−３７，ＳＫＷ−３，ＨＵＴ−７８，ＨＵＴ−１０２，Ｈ９，Ｕ９３７，ＴＨＰ−１，ＨＥＬ，ＪＫ−１，ＣＭＫ，ＫＯ−８１２，ＭＥＧ−０１など）に由来するペプチドであってもよく、合成ペプチドであってもよい。
【００１０】
本願明細書において、アミノ酸配列Ｙとは、以下の２５種類のアミノ酸配列から選ばれる１つのアミノ酸配列を示す。
（１）▲１▼配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜３７番目のアミノ酸配列、
▲２▼配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第４０番目〜５５番目のアミノ酸配列、
（２）▲１▼配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜２１番目のアミノ酸配列、
▲２▼配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第２６番目〜５８番目のアミノ酸配列、
▲３▼配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第６０番目〜８８番目のアミノ酸配列、
▲４▼配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第９０番目〜１０７番目のアミノ酸配列、
▲５▼配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１１０番目〜１８７番目のアミノ酸配列、
▲６▼配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１９０番目〜２３４番目のアミノ酸配列、
（３）▲１▼配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜８５番目のアミノ酸配列、
▲２▼配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第８６番目〜１１４番目のアミノ酸配列、
▲３▼配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜１６６番目のアミノ酸配列、
（４）▲１▼配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜５８番目のアミノ酸配列、
▲２▼配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第６３番目〜２０２番目のアミノ酸配列、
▲３▼配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第２０５番目〜２４１番目のアミノ酸配列、
（５）▲１▼配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第２６番目〜８８番目のアミノ酸配列、
▲２▼配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第８０番目〜８８番目のアミノ酸配列、
▲３▼配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第９１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、
▲４▼配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１２７番目〜１３３番目のアミノ酸配列、
（６）▲１▼配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、
▲２▼配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、
（７）▲１▼配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、
▲２▼配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、
（８）▲１▼配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１２４番目〜１３４番目のアミノ酸配列、
▲２▼配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１２４番目〜１３４番目のアミノ酸配列。
アミノ酸配列Ｙと実質的に同一のアミノ酸配列としては、アミノ酸配列Ｙと約７０％以上、好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などがあげられる。
アミノ酸配列Ｙと実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチドとしては、例えば、前記のアミノ酸配列Ｙと実質的に同一のアミノ酸配列を有し、アミノ酸配列Ｙを有するペプチドと実質的に同質の活性を有するペプチドなどが好ましい。
実質的に同質の活性としては、例えば、本発明のペプチドが有する活性（例えば、受容体との結合活性、受容体発現細胞に対する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ2+遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下、ＧＴＰγＳ結合活性などを促進する活性等）、酵素活性、転写活性、結合タンパク質との結合活性等）などが挙げられる。
実質的に同質とは、それらの活性が性質的に（例、生理化学的に、または薬理学的に）同質であることを示す。
【００１１】
アミノ酸配列Ｙと同一または実質的に同一のアミノ酸配列の具体例としては、
（ｉ）アミノ酸配列Ｙ、
（ii）アミノ酸配列Ｙ中の１〜５個（好ましくは１〜３個、さらに好ましくは１〜２個、より好ましくは、１個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、
（iii）アミノ酸配列Ｙに１〜５個（好ましくは１〜３個、さらに好ましくは１〜２個、より好ましくは、１個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、
（iv）アミノ酸配列Ｙに１〜５個（好ましくは１〜３個、さらに好ましくは１〜２個、より好ましくは、１個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、
（v）アミノ酸配列Ｙ中の１〜１０個（好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜３個、より好ましくは、１個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、
（vi）上記（ii）〜（v）を組み合わせたアミノ酸配列などがあげられる。
本発明のペプチドの具体例としては、例えば、
（１）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜３７番目のアミノ酸配列または第４０番目〜５５番目のアミノ酸配列からなるペプチドＢ、
（２）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜２１番目のアミノ酸配列、第２６番目〜５８番目のアミノ酸配列、第６０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第９０番目〜１０７番目のアミノ酸配列、第１１０番目〜１８７番目のアミノ酸配列または第１９０番目〜２３４番目のアミノ酸配列からなるペプチドＣ、
（３）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜８５番目のアミノ酸配列、第８６番目〜１１４番目のアミノ酸配列または第１１５番目〜１６６番目のアミノ酸配列からなるペプチドＤ、
（４）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜５８番目のアミノ酸配列、第６３番目〜２０２番目のアミノ酸配列または第２０５番目〜２４１番目のアミノ酸配列からなるペプチドＥ、
（５）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜８８番目のアミノ酸配列、第２０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第２１番目〜８８番目のアミノ酸配列、第２２番目〜８８番目のアミノ酸配列、第２３番目〜８８番目のアミノ酸配列、第２４番目〜８８番目のアミノ酸配列、第２５番目〜８８番目のアミノ酸配列、第２６番目〜８８番目のアミノ酸配列、第２７番目〜８８番目のアミノ酸配列、第２８番目〜８８番目のアミノ酸配列、第２９番目〜８８番目のアミノ酸配列、第３０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第３１番目〜８８番目のアミノ酸配列、第３２番目〜８８番目のアミノ酸配列、第３３番目〜８８番目のアミノ酸配列、第３４番目〜８８番目のアミノ酸配列、第３５番目〜８８番目のアミノ酸配列、第３６番目〜８８番目のアミノ酸配列、第３７番目〜８８番目のアミノ酸配列、第３８番目〜８８番目のアミノ酸配列、第３９番目〜８８番目のアミノ酸配列、第４０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第４１番目〜８８番目のアミノ酸配列、第４２番目〜８８番目のアミノ酸配列、第４３番目〜８８番目のアミノ酸配列、第４４番目〜８８番目のアミノ酸配列、第４５番目〜８８番目のアミノ酸配列、第４６番目〜８８番目のアミノ酸配列、第４７番目〜８８番目のアミノ酸配列、第４８番目〜８８番目のアミノ酸配列、第４９番目〜８８番目のアミノ酸配列、第５０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第５１番目〜８８番目のアミノ酸配列、第５２番目〜８８番目のアミノ酸配列、第５３番目〜８８番目のアミノ酸配列、第５４番目〜８８番目のアミノ酸配列、第５５番目〜８８番目のアミノ酸配列、第５６番目〜８８番目のアミノ酸配列、第５７番目〜８８番目のアミノ酸配列、第５８番目〜８８番目のアミノ酸配列、第５９番目〜８８番目のアミノ酸配列、第６０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第６１番目〜８８番目のアミノ酸配列、第６２番目〜８８番目のアミノ酸配列、第６３番目〜８８番目のアミノ酸配列、第６４番目〜８８番目のアミノ酸配列、第６５番目〜８８番目のアミノ酸配列、第６６番目〜８８番目のアミノ酸配列、第６７番目〜８８番目のアミノ酸配列、第６８番目〜８８番目のアミノ酸配列、第６９番目〜８８番目のアミノ酸配列、第７０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第７１番目〜８８番目のアミノ酸配列、第７２番目〜８８番目のアミノ酸配列、第７３番目〜８８番目のアミノ酸配列、第７４番目〜８８番目のアミノ酸配列、第７５番目〜８８番目のアミノ酸配列、第７６番目〜８８番目のアミノ酸配列、第７７番目〜８８番目のアミノ酸配列、第７８番目〜８８番目のアミノ酸配列、第７９番目〜８８番目のアミノ酸配列または第８０番目〜８８番目のアミノ酸配列からなるペプチドＦ、または配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第２０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第２１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第２２番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第２３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第２４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第２５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第２６番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第２７番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第２８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第２９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第３０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第３１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第３２番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第３３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第３４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第３５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第３６番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第３７番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第３８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第３９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第４０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第４１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第４２番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第４３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第４４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第４５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第４６番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第４７番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第４８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第４９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第５０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第５１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第５２番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第５３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第５４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第５５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第５６番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第５７番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第５８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第５９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第６０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第６１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第６２番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第６３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第６４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第６５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第６６番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第６７番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第６８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第６９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第７０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第７１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第７２番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第７３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第７４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第７５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第７６番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第７７番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第７８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第７９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第８０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第８１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第８２番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第８３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第８４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第８５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第８６番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第８７番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第８８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第８９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９２番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９６番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９７番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１００番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０２番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０６番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０７番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１２番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１６番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１７番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２２番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２６番目〜１３３番目のアミノ酸配列または第１２７番目〜１３３番目のアミノ酸配列からなるペプチドＦ（なかでも配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第２６番目〜８８番目のアミノ酸配列、第８０番目〜８８番目のアミノ酸配列、第９０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２６番目〜１３３番目、第１２７番目〜１３３番目のアミノ酸配列からなるペプチドＦなどが好ましく、特に第９０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２６番目〜１３３番目、第１２７番目〜１３３番目のアミノ酸配列からなるペプチドＦなどが好ましく、第９１番目〜１３３番目のアミノ酸配列からなるペプチドＦはＮ末端のグルタミン残基がピログルタミン化されていてもよく、第９０番目〜１３３番目のアミノ酸配列からなるペプチドＦはＮ末端のグルタミン残基がＴｙｒに置換されていてもよい（図５７および図５８参照））、
（６）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１００番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列または第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列からなるペプチドＧ（なかでも配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列からなるペプチドＧなどが好ましい）、
（７）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第２９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第３９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第４９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第５９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第６９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第７９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第８９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第９９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１００番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０６番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０７番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０８番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１０９番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１０番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１１番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１２番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１３番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１４番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列または第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列からなるペプチドＨ（なかでも配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜１２２番目のアミノ酸配列、第１１６番目〜１２２番目のアミノ酸配列からなるペプチドＨなどが好ましい）、
（８）配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１９番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第２０番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第２１番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第２２番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第２３番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第２４番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第２５番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第２６番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第２７番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第２８番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第２９番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第３０番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第３１番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第３２番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第３３番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第３４番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第３５番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第３６番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第３７番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第３８番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第３９番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第４０番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第４１番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第４２番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第４３番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第４４番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第４５番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第４６番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第４７番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第４８番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第４９番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第５０番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第５１番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第５２番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第５３番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第５４番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第５５番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第５６番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第５７番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第５８番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第５９番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第６０番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第６１番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第６２番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第６３番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第６４番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第６５番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第６６番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第６７番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第６８番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第６９番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第７０番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第７１番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第７２番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第７３番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第７４番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第７５番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第７６番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第７７番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第７８番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第７９番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第８０番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第８１番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第８２番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第８３番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第８４番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第８５番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第８６番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第８７番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第８８番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第８９番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第９０番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第９１番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第９２番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第９３番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第９４番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第９５番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第９６番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第９７番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第９８番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第９９番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１００番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１０１番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１０２番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１０３番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１０４番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１０５番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１０６番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１０７番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１０８番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１０９番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１１０番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１１１番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１１２番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１１３番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１１４番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１１５番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１１６番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１１７番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１１８番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１１９番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１２０番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１２１番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１２２番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１２３番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１２４番目〜１３１番目のアミノ酸配列または第１２５番目〜１３１番目のアミノ酸配列からなるペプチドＩ（なかでも配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１２４番目〜１３１番目のアミノ酸配列、第１２５番目〜１３１番目のアミノ酸配列からなるペプチドＩなどが好ましい）などが挙げられる。
これらのペプチドとしては、Ｃ末端のアミド体が好ましく用いられる。
本願明細書において、上記のペプチドＢ、ペプチドＣ、ペプチドＤ、ペプチドＥ、ペプチドＦ、ペプチドＧ、ペプチドＨおよびペプチドＩを本発明のペプチドと総称する場合がある。
【００１２】
本発明の部分ペプチドとしては、前記した本発明のペプチドの部分ペプチドであれば何れのものであってもよいが、通常、アミノ酸が５個以上、好ましくは１０個以上からなるペプチドが好ましく、さらには、本発明のペプチドと同様の活性を有するものが好ましい。
【００１３】
本発明の分泌蛋白質または本発明のペプチドの前駆体蛋白質としては、前記した本発明の分泌蛋白質または本発明のペプチドを含む蛋白質であり、適当なペプチダーゼ等で切断することによって、本発明の分泌蛋白質または本発明のペプチドを製造し得るものである。
具体的には、
（１）分泌蛋白質Ａの前駆体蛋白質としては、配列番号：２で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する前駆体蛋白質Ａなどが、
（２）分泌蛋白質ＢまたはペプチドＢの前駆体蛋白質としては、配列番号：３で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｂなどが、
（３）分泌蛋白質ＣまたはペプチドＣの前駆体蛋白質としては、配列番号：４で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｃなどが、
（４）分泌蛋白質ＤまたはペプチドＤの前駆体蛋白質としては、配列番号：５で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｄなどが、
（５）分泌蛋白質ＥまたはペプチドＥの前駆体蛋白質としては、配列番号：６で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｅなどが、
（６）分泌蛋白質ＦまたはペプチドＦの前駆体蛋白質としては、配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｆなどが、
（７）分泌蛋白質ＧまたはペプチドＧの前駆体蛋白質としては、配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｇなどが、
（８）分泌蛋白質ＨまたはペプチドＨの前駆体蛋白質としては、配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｈなどが、
（９）分泌蛋白質ＩまたはペプチドＩの前駆体蛋白質としては、配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｉなどが用いられる。
本願明細書において、アミノ酸配列Ｚとは、配列番号：２〜配列番号：６、配列番号：２３、配列番号：２７、配列番号：３８および配列番号：４２から選ばれる１つの配列番号で表されるアミノ酸配列を示す。
アミノ酸配列Ｚと同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する蛋白質は、ヒトや温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなど）の細胞（例えば、網膜細胞、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくは癌細胞など）もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、網膜、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など、または血球系の細胞もしくはその培養細胞（例えば、ＭＥＬ，Ｍ１，ＣＴＬＬ−２，ＨＴ−２，ＷＥＨＩ−３，ＨＬ−６０，ＪＯＳＫ−１，Ｋ５６２，ＭＬ−１，ＭＯＬＴ−３，ＭＯＬＴ−４，ＭＯＬＴ−１０，ＣＣＲＦ−ＣＥＭ，ＴＡＬＬ−１，Ｊｕｒｋａｔ，ＣＣＲＴ−ＨＳＢ−２，ＫＥ−３７，ＳＫＷ−３，ＨＵＴ−７８，ＨＵＴ−１０２，Ｈ９，Ｕ９３７，ＴＨＰ−１，ＨＥＬ，ＪＫ−１，ＣＭＫ，ＫＯ−８１２，ＭＥＧ−０１など）に由来する蛋白質であってもよく、合成蛋白質であってもよい。
【００１４】
アミノ酸配列Ｚと実質的に同一のアミノ酸配列としては、アミノ酸配列Ｚと約５０％以上、好ましくは約６０％以上、さらに好ましくは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などがあげられる。具体的には、配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列と６０％以上の相同性を有するアミノ酸配列としては、配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列、配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列または配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列が挙げられる。
特に、アミノ酸配列Ｚと実質的に同一のアミノ酸配列としては、
（i）アミノ酸配列Ｚ、
（ii）アミノ酸配列Ｚ中の１〜３０個（例えば１〜１５個、好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個、特に好ましくは１個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、
（iii）アミノ酸配列Ｚに１〜３０個（例えば１〜１５個、好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個、特に好ましくは１個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、
（iv）アミノ酸配列Ｚに１〜３０個（例えば１〜１５個、好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個、特に好ましくは１個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、
（v）アミノ酸配列Ｚ中の１〜３０個（例えば１〜１５個、好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個、特に好ましくは１個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、
（vi）上記（ii）〜（v）を組み合わせたアミノ酸配列などがあげられる。
本発明の前駆体蛋白質の具体例としては、例えば、
（１）配列番号：２で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ａ、
（２）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｂ、
（３）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｃ、
（４）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｄ、
（５）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｅ、
（６）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｆ、
（７）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｇ、
（８）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｈ、
（９）配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ｉなどが挙げられる。
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなる分泌蛋白質Ａは、配列番号：２で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質Ａから分泌シグナル配列を除いたものである。
配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１番目〜２１番目のアミノ酸配列は分泌シグナル配列を示す
配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１番目〜１４番目のアミノ酸配列は分泌シグナル配列を示す。
配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１番目〜２４番目のアミノ酸配列は分泌シグナル配列を示す。
配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１番目〜１８番目のアミノ酸配列は分泌シグナル配列を示す。
配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１番目〜１８番目のアミノ酸配列は分泌シグナル配列を示す。
配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１番目〜１７番目のアミノ酸配列は分泌シグナル配列を示す。
配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１番目〜１７番目のアミノ酸配列は分泌シグナル配列を示す。
配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１番目〜１７番目のアミノ酸配列は分泌シグナル配列を示す。
本発明の前駆体蛋白質は、本発明の分泌蛋白質または本発明のペプチドと同様の活性を有していてもよい。
【００１５】
本発明の分泌蛋白質または本発明のペプチド、その部分ペプチドまたはその前駆体蛋白質（以下、本発明のペプチドと略記する場合がある）は、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなるペプチドをはじめとする、本発明のペプチドは、Ｃ末端が通常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレート(−ＣＯＯ-)であるが、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ2）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。
ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ1-6アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ3-8シクロアルキル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ6-12アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ1-2アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ1-2アルキル基などのＣ7-14アラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチル基などが用いられる。
本発明のペプチドがＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明のペプチドに含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
さらに、本発明のペプチドには、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイルなどのＣ1-6アシル基など）で保護されているもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグルタミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイル基などのＣ1-6アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖タンパク質などの複合タンパク質なども含まれる。
【００１６】
本発明のペプチドの塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属塩）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。このような塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。以下、塩も含めて、本発明のペプチドと称する。
本発明のペプチドは、前述したヒトや温血動物の細胞または組織から自体公知のペプチドの精製方法によって製造することもできるし、後述するペプチドをコードするＤＮＡで形質転換された形質転換体を培養することによっても製造することができる。また、後述のペプチド合成法に準じて製造することもできる。
ヒトや哺乳動物の組織または細胞から製造する場合、ヒトや哺乳動物の組織または細胞をホモジナイズした後、酸などで抽出を行ない、該抽出液を逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを組み合わせることにより精製単離することができる。
【００１７】
本発明のペプチドまたはそれらのアミド体の合成には、通常市販のペプチド合成用樹脂を用いることができる。そのような樹脂としては、例えば、クロロメチル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、アミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、ＰＡＭ樹脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニルアセトアミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−ヒドロキシメチル）フェノキシ樹脂、４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃアミノエチル）フェノキシ樹脂などをあげることができる。このような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、目的とするペプチドの配列通りに、自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合させる。反応の最後に樹脂からペプチドを切り出すと同時に各種保護基を除去し、さらに高希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実施し、目的の本発明のペプチドまたはそれらのアミド体を取得する。
上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、ペプチド合成に使用できる各種活性化試薬を用いることができるが、特に、カルボジイミド類がよい。カルボジイミド類としては、ＤＣＣ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロリル）カルボジイミドなどが用いられる。これらによる活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、ＨＯＢｔ，ＨＯＯＢｔ）とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまたは、対称酸無水物またはＨＯＢｔエステルあるいはＨＯＯＢｔエステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に添加することができる。
保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる溶媒としては、ペプチド縮合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド，Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド類、塩化メチレン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジン，ジオキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル類、アセトニトリル，プロピオニトリルなどのニトリル類、酢酸メチル，酢酸エチルなどのエステル類あるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度はペプチド結合形成反応に使用され得ることが知られている範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行なうことなく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセチルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化することによって、後の反応に影響を与えないようにすることができる。
【００１８】
原料のアミノ基の保護基としては、例えば、Ｚ、Ｂｏｃ、ｔ−ペンチルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、Ｃｌ−Ｚ、Ｂｒ−Ｚ、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノチオイル、Fmocなどが用いられる。
カルボキシル基は、例えば、アルキルエステル化（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、２−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もしくは環状アルキルエステル化）、アラルキルエステル化（例えば、ベンジルエステル、４−ニトロベンジルエステル、４−メトキシベンジルエステル、４−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシルエステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド化、ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒドラジド化などによって保護することができる。
セリンの水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化によって保護することができる。このエステル化に適する基としては、例えば、アセチル基などの低級（Ｃ1-6）アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭酸から誘導される基などが用いられる。また、エーテル化に適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである。
チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、例えば、Ｂｚｌ、Ｃｌ2−Ｂｚｌ、２−ニトロベンジル、Ｂｒ−Ｚ、ｔ−ブチルなどが用いられる。
ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えば、Ｔｏｓ、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、ＤＮＰ、ベンジルオキシメチル、Ｂｕｍ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｆｍｏｃなどが用いられる。
【００１９】
原料のカルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノール、２，４，５−トリクロロフェノール、２，４−ジニトロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノール、ＨＯＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、ＨＯＢｔ）とのエステル〕などが用いられる。原料のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられる。
保護基の除去（脱離）方法としては、例えば、Ｐｄ−黒あるいはＰｄ−炭素などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによる還元なども用いられる。上記酸処理による脱離反応は、一般に約−２０℃〜４０℃の温度で行なわれるが、酸処理においては、例えば、アニソール、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、パラクレゾール、ジメチルスルフィド、１，４−ブタンジチオール、１，２−エタンジチオールなどのようなカチオン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンのイミダゾール保護基として用いられる２，４−ジニトロフェニル基はチオフェノール処理により除去され、トリプトファンのインドール保護基として用いられるホルミル基は上記の１，２−エタンジチオール、１，４−ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニアなどによるアルカリ処理によっても除去される。
原料の反応に関与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段から適宜選択しうる。
【００２０】
本発明のペプチドのアミド体を得る別の方法としては、例えば、まず、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基をアミド化して保護した後、アミノ基側にペプチド（ペプチド）鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプチド鎖のＮ末端のα−アミノ基の保護基のみを除いたペプチドとＣ末端のカルボキシル基の保護基のみを除去したペプチドとを製造し、この両ペプチドを上記したような混合溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細については上記と同様である。縮合により得られた保護ペプチドを精製した後、上記方法によりすべての保護基を除去し、所望の粗ペプチドを得ることができる。この粗ペプチドは既知の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥することで所望の本発明のペプチドのアミド体を得ることができる。
本発明のペプチドのエステル体を得るには、例えば、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸エステルとした後、本発明のペプチドのアミド体と同様にして、所望の本発明のペプチドのエステル体を得ることができる。
【００２１】
本発明のペプチドの部分ペプチドは、自体公知のペプチドの合成法に従って、あるいは本発明のペプチドを適当なペプチダーゼで切断することによって製造することができる。ペプチドの合成法としては、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによっても良い。すなわち、本発明のペプチドの部分ペプチドを構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的のペプチドを製造することができる。公知の縮合方法や保護基の脱離としては、例えば、以下の▲１▼〜▲５▼に記載された方法があげられる。
▲１▼M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シンセシス (Peptide Synthesis), Interscience Publishers, New York (1966年)
▲２▼SchroederおよびLuebke、ザ・ペプチド(The Peptide), Academic Press, New York (1965年)
▲３▼泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株) （1975年）
▲４▼矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タンパク質の化学IV、 205、(1977年)
▲５▼矢島治明監修、続医薬品の開発、第14巻、ペプチド合成、広川書店
また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー・再結晶などを組み合わせて本発明のペプチドまたはその部分ペプチドを精製単離することができる。上記方法で得られる本発明のペプチドの部分ペプチドが遊離体である場合は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって遊離体または他の塩に変換することができる。
【００２２】
本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドとしては、上記した本発明のペプチドをコードする塩基配列（ＤＮＡまたはＲＮＡ、好ましくはＤＮＡ）を含有するものであればいかなるものであってもよい。該ポリヌクレオチドとしては、本発明のペプチドをコードするＤＮＡ、ｍＲＮＡ等のＲＮＡであり、二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。二本鎖の場合は、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドでもよい。一本鎖の場合は、センス鎖（すなわち、コード鎖）であっても、アンチセンス鎖（すなわち、非コード鎖）であってもよい。
本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドを用いて、例えば、公知の実験医学増刊「新ＰＣＲとその応用」１５（７）、１９９７記載の方法またはそれに準じた方法により、本発明のペプチドのｍＲＮＡを定量することができる。
【００２３】
本発明のペプチドをコードするＤＮＡとしては、前述した本発明のペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。
ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前記した細胞・組織よりtotalＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ-ＰＣＲ法と略称する）によって増幅することもできる。
【００２４】
本願明細書において、塩基配列Ｐとは、以下の９種類の塩基配列から選ばれる１つの塩基配列を示す。
（１）配列番号：７で表される塩基配列、
（２）配列番号：９で表わされる塩基配列の第６４番目〜３３６番目の塩基配列、
（３）配列番号：１０で表わされる塩基配列の第４３番目〜７０２番目の塩基配列、
（４）配列番号：１１で表わされる塩基配列の第７３番目〜４９８番目の塩基配列、
（５）配列番号：１２で表わされる塩基配列の第５５番目〜７２４番目の塩基配列、
（６）配列番号：２４で表わされる塩基配列の第５５番目〜４０８番目の塩基配列、
（７）配列番号：２８で表わされる塩基配列の第５２番目〜３７２番目の塩基配列、
（８）配列番号：３９で表わされる塩基配列の第５２番目〜３７２番目の塩基配列、
（９）配列番号：４３で表わされる塩基配列の第５２番目〜４０２番目の塩基配列。
本発明の分泌蛋白質をコードするＤＮＡとしては、例えば塩基配列Ｐとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を含有し、本発明のペプチドと実質的に同質の活性を有するペプチドをコードするＤＮＡなどであれば何れのものでもよい。
塩基配列Ｐとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできる塩基配列としては、例えば、塩基配列Ｐと約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。
ハイブリダイゼーションは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。
ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。
より具体的には、
（１）配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなる分泌蛋白質ＡをコードするＤＮＡとしては、配列番号：７で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（２）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜第１１２番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質ＢをコードするＤＮＡとしては、配列番号：９で表わされる塩基配列の第６４番目〜第３３６番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（３）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜第２３４番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質ＣをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０で表わされる塩基配列の第４３番目〜第７０２番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（４）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜第１６６番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質ＤをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１１で表わされる塩基配列の第７３番目〜第４９８番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（５）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜第２４１番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質ＥをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１２で表わされる塩基配列の第５５番目〜第７２３番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（６）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜第１３６番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質ＦをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２４で表わされる塩基配列の第５５番目〜第４０８番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（７）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜第１２４番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質ＧをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２８で表わされる塩基配列の第５２番目〜第３７２番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（８）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜第１２４番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質ＨをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３９で表わされる塩基配列の第５２番目〜第３７２番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（９）配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列の第１８番目〜第１３４番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質ＨをコードするＤＮＡとしては、配列番号：４３で表わされる塩基配列の第５２番目〜第４０２番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
【００２５】
本願明細書において、塩基配列Ｑとは、以下の２４種類の塩基配列から選ばれる１つの塩基配列を示す。
（１）▲１▼配列番号：９で表わされる塩基配列の第６４番目〜１１１番目の塩基配列、
▲２▼配列番号：９で表わされる塩基配列の第１１８番目〜１６５番目の塩基配列、
（２）▲１▼配列番号：１０で表わされる塩基配列の第４３番目〜６３番目の塩基配列、
▲２▼配列番号：１０で表わされる塩基配列の第７６番目〜１７４番目の塩基配列、
▲３▼配列番号：１０で表わされる塩基配列の第１７８番目〜２６４番目の塩基配列、
▲４▼配列番号：１０で表わされる塩基配列の第２６８番目〜３２１番目の塩基配列、
▲５▼配列番号：１０で表わされる塩基配列の第３２８番目〜５６１番目の塩基配列、
▲６▼配列番号：１０で表わされる塩基配列の第５６８番目〜７０２番目の塩基配列、
（３）▲１▼配列番号：１１で表わされる塩基配列の第７３番目〜２５５番目の塩基配列、
▲２▼配列番号：１１で表わされる塩基配列の第２５６番目〜３４２番目の塩基配列、
▲３▼配列番号：１１で表わされる塩基配列の第３４３番目〜４９８番目の塩基配列、
（４）▲１▼配列番号：１２で表わされる塩基配列の第５５番目〜１７４番目の塩基配列、
▲２▼配列番号：１２で表わされる塩基配列の第１８７番目〜６０６番目の塩基配列、
▲３▼配列番号：１２で表わされる塩基配列の第６１３番目〜７２３番目の塩基配列、
（５）▲１▼配列番号：２４で表わされる塩基配列の第７６番目〜２６４番目の塩基配列、
▲２▼配列番号：２４で表わされる塩基配列の第２３８番目〜２６４番目の塩基配列、
▲３▼配列番号：２４で表わされる塩基配列の第２７１番目〜３９９番目の塩基配列、
▲４▼配列番号：２４で表わされる塩基配列の第３７９番目〜３９９番目の塩基配列、
（６）▲１▼配列番号：２８で表わされる塩基配列の第３４３番目〜３６６番目の塩基配列、
▲２▼配列番号：２８で表わされる塩基配列の第３４６番目〜３６６番目の塩基配列、
（７）▲１▼配列番号：３９で表わされる塩基配列の第３４３番目〜３６６番目の塩基配列、
▲２▼配列番号：３９で表わされる塩基配列の第３４６番目〜３６６番目の塩基配列、
（８）▲１▼配列番号：４３で表わされる塩基配列の第３７０番目〜３９３番目の塩基配列、
▲２▼配列番号：４３で表わされる塩基配列の第３７３番目〜３９３番目の塩基配列。
本発明のペプチドをコードするＤＮＡとしては、例えば塩基配列Ｑとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を含有し、本発明のペプチドと実質的に同質の活性を有するペプチドをコードするＤＮＡなどであれば何れのものでもよい。
塩基配列Ｑとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできる塩基配列としては、例えば、塩基配列Ｑと約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。
ハイブリダイゼーションの方法およびハイストリンジェントな条件は前記と同様のものが用いられる。
【００２６】
より具体的には、
（１）（i）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第２２番目〜第３７番目のアミノ酸配列からなるペプチドＢをコードするＤＮＡとしては、配列番号：９で表わされる塩基配列の第６４番目〜第１１１番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（ii）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第４０番目〜第５５番目のアミノ酸配列からなるペプチドＢをコードするＤＮＡとしては、配列番号：９で表わされる塩基配列の第１１８番目〜第１６５番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（２）（i）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１５番目〜第２１番目のアミノ酸配列からなるペプチドＣをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０で表わされる塩基配列の第４３番目〜第６３番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（ii）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第２６番目〜第５８番目のアミノ酸配列からなるペプチドＣをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０で表わされる塩基配列の第７６番目〜第１７４番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（iii）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第６０番目〜第８８番目のアミノ酸配列からなるペプチドＣをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０で表わされる塩基配列の第１７８番目〜第２６４番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（iv）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第９０番目〜第１０７番目のアミノ酸配列からなるペプチドＣをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０で表わされる塩基配列の第２６８番目〜第３２１番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（v）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１１０番目〜第１８７番目のアミノ酸配列からなるペプチドＣをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０で表わされる塩基配列の第３２８番目〜第５６１番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（vi）配列番号：４で表わされるアミノ酸配列の第１９０番目〜第２３４番目のアミノ酸配列からなるペプチドＣをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０で表わされる塩基配列の第５６８番目〜第７０２番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（３）（i）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第２５番目〜第８５番目のアミノ酸配列からなるペプチドＤをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１１で表わされる塩基配列の第７３番目〜第２５５番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（ii）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第８６番目〜第１１４番目のアミノ酸配列からなるペプチドＤをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１１で表わされる塩基配列の第２５６番目〜第３４２番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（iii）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜第１６６番目のアミノ酸配列からなるペプチドＤをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１１で表わされる塩基配列の第３４３番目〜第４９８番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（４）（i）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜第５８番目のアミノ酸配列からなるペプチドＥをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１２で表わされる塩基配列の第５５番目〜第１７４番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（ii）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第６３番目〜第２０２番目のアミノ酸配列からなるペプチドＥをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１２で表わされる塩基配列の第１８７番目〜第６０６番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（iii）配列番号：６で表わされるアミノ酸配列の第２０５番目〜第２４１番目のアミノ酸配列からなるペプチドＥをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１２で表わされる塩基配列の第６１３番目〜第７２３番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（５）（i）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第２６番目〜第８８番目のアミノ酸配列からなるペプチドＦをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２４で表わされる塩基配列の第７６番目〜第２６４番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（ii）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第８０番目〜第８８番目のアミノ酸配列からなるペプチドＦをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２４で表わされる塩基配列の第２３８番目〜第２６４番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（iii）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第９１番目〜第１３３番目のアミノ酸配列からなるペプチドＦをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２４で表わされる塩基配列の第２７１番目〜第３９９番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（iv）配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１２７番目〜第１３３番目のアミノ酸配列からなるペプチドＦをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２４で表わされる塩基配列の第３７９番目〜第３９９番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（６）（i）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜第１２２番目のアミノ酸配列からなるペプチドＧをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２８で表わされる塩基配列の第３４３番目〜第３６６番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（ii）配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列の第１１６番目〜第１２２番目のアミノ酸配列からなるペプチドＧをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２８で表わされる塩基配列の第３４６番目〜第３６６番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（７）（i）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１１５番目〜第１２２番目のアミノ酸配列からなるペプチドＨをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３９で表わされる塩基配列の第３４３番目〜第３６６番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（ii）配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列の第１１６番目〜第１２２番目のアミノ酸配列からなるペプチドＨをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３９で表わされる塩基配列の第３４６番目〜第３６６番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
（８）（i）配列番号：４３で表わされるアミノ酸配列の第１２４番目〜第１３１番目のアミノ酸配列からなるペプチドＩをコードするＤＮＡとしては、配列番号：４３で表わされる塩基配列の第３７０番目〜第３９３番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが、
（ii）配列番号：４３で表わされるアミノ酸配列の第１２５番目〜第１３１番目のアミノ酸配列からなるペプチドＩをコードするＤＮＡとしては、配列番号：４３で表わされる塩基配列の第３７３番目〜第３９３番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
【００２７】
本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、前述した本発明の部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。
本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例えば、塩基配列ＰまたはＱを有するＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または塩基配列ＰまたはＱとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明のペプチドと実質的に同質の活性を有するペプチドをコードするＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられる。
塩基配列ＰまたはＱとハイブリダイズできる塩基配列は、前記と同意義を示す。
ハイブリダイゼーションの方法およびハイストリンジェントな条件は前記と同様のものが用いられる。
本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、前述した本発明の部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。
【００２８】
本願明細書において、塩基配列Ｒとは、配列番号：８〜配列番号：１２、配列番号：２４、配列番号：２８、配列番号：３９および配列番号：４３から選ばれる１つの配列番号で表される塩基配列を示す。
本発明の前駆体蛋白質をコードするＤＮＡとしては、例えば、塩基配列Ｒを含有するＤＮＡの塩基配列を有するＤＮＡ、または塩基配列Ｒとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を含有し、本発明の前駆体蛋白質と実質的に同質の活性を有する前駆体蛋白質をコードするＤＮＡの塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
塩基配列Ｒとハイブリダイズできる塩基配列は、前記と同意義を示す。
ハイブリダイゼーションの方法およびハイストリンジェントな条件は前記と同様のものが用いられる。
より具体的には、
(１)配列番号：２で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質ＡをコードするＤＮＡとしては、配列番号：８で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
(２)配列番号：３で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質ＢをコードするＤＮＡとしては、配列番号：９で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
(３)配列番号：４で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質ＣをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
(４)配列番号：５で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質ＤをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１１で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
(５)配列番号：６で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質ＥをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１２で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
(６)配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質ＦをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２４で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
(７)配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質ＧをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２８で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
(８)配列番号：３８で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質ＨをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３９で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
(９)配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質ＩをコードするＤＮＡとしては、配列番号：４３で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
【００２９】
本発明のペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列の一部、または該ＤＮＡと相補的な塩基配列の一部を含有してなるポリヌクレオチドとは、本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡを包含するだけではなく、ＲＮＡをも包含する意味で用いられる。
本発明に従えば、本発明のペプチド遺伝子の複製または発現を阻害することのできるアンチセンス・ポリヌクレオチド（核酸）を、クローン化した、あるいは決定された本発明のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列情報に基づき設計し、合成しうる。そうしたポリヌクレオチド（核酸）は、本発明のペプチド遺伝子のＲＮＡとハイブリダイズすることができ、該ＲＮＡの合成または機能を阻害することができるか、あるいは本発明のペプチド関連ＲＮＡとの相互作用を介して本発明のペプチド遺伝子の発現を調節・制御することができる。本発明のペプチド関連ＲＮＡの選択された配列に相補的なポリヌクレオチド、および本発明のペプチド関連ＲＮＡと特異的にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドは、生体内および生体外で本発明のペプチド遺伝子の発現を調節・制御するのに有用であり、また病気などの治療または診断に有用である。用語「対応する」とは、遺伝子を含めたヌクレオチド、塩基配列または核酸の特定の配列に相同性を有するあるいは相補的であることを意味する。ヌクレオチド、塩基配列または核酸とペプチド（蛋白質）との間で「対応する」とは、ヌクレオチド（核酸）の配列またはその相補体から誘導される指令にあるペプチド（蛋白質）のアミノ酸を通常指している。本発明のペプチド遺伝子の５’端ヘアピンループ、５’端６−ベースペア・リピート、５’端非翻訳領域、ペプチド翻訳開始コドン、蛋白質コード領域、ＯＲＦ翻訳終止コドン、３’端非翻訳領域、３’端パリンドローム領域、および３’端ヘアピンループは好ましい対象領域として選択しうるが、本発明のペプチド遺伝子内の如何なる領域も対象として選択しうる。
【００３０】
目的核酸と、対象領域の少なくとも一部に相補的なポリヌクレオチドとの関係は、対象物とハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドとの関係は、「アンチセンス」であるということができる。アンチセンス・ポリヌクレオチドは、２−デオキシ−Ｄ−リボースを含有しているポリヌクレオチド、Ｄ−リボースを含有しているポリヌクレオチド、プリンまたはピリミジン塩基のＮ−グリコシドであるその他のタイプのポリヌクレオチド、あるいは非ヌクレオチド骨格を有するその他のポリマー（例えば、市販の蛋白質核酸および合成配列特異的な核酸ポリマー）または特殊な結合を含有するその他のポリマー（但し、該ポリマーはＤＮＡやＲＮＡ中に見出されるような塩基のペアリングや塩基の付着を許容する配置をもつヌクレオチドを含有する）などが挙げられる。それらは、２本鎖ＤＮＡ、１本鎖ＤＮＡ、２本鎖ＲＮＡ、１本鎖ＲＮＡ、さらにＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッドであることができ、さらに非修飾ポリヌクレオチド（または非修飾オリゴヌクレオチド）、さらには公知の修飾の付加されたもの、例えば当該分野で知られた標識のあるもの、キャップの付いたもの、メチル化されたもの、１個以上の天然のヌクレオチドを類縁物で置換したもの、分子内ヌクレオチド修飾のされたもの、例えば非荷電結合（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、カルバメートなど）を持つもの、電荷を有する結合または硫黄含有結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）を持つもの、例えば蛋白質（ヌクレアーゼ、ヌクレアーゼ・インヒビター、トキシン、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リジンなど）や糖（例えば、モノサッカライドなど）などの側鎖基を有しているもの、インターカレント化合物（例えば、アクリジン、プソラレンなど）を持つもの、キレート化合物（例えば、金属、放射活性をもつ金属、ホウ素、酸化性の金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾された結合を持つもの（例えば、αアノマー型の核酸など）であってもよい。ここで「ヌクレオシド」、「ヌクレオチド」および「核酸」とは、プリンおよびピリミジン塩基を含有するのみでなく、修飾されたその他の複素環型塩基をもつようなものを含んでいて良い。こうした修飾物は、メチル化されたプリンおよびピリミジン、アシル化されたプリンおよびピリミジン、あるいはその他の複素環を含むものであってよい。修飾されたヌクレオチドおよび修飾されたヌクレオチドはまた糖部分が修飾されていてよく、例えば、１個以上の水酸基がハロゲンとか、脂肪族基などで置換されていたり、あるいはエーテル、アミンなどの官能基に変換されていてよい。
【００３１】
本発明のアンチセンス・ポリヌクレオチド（核酸）は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、あるいは修飾された核酸（ＲＮＡ、ＤＮＡ）である。修飾された核酸の具体例としては核酸の硫黄誘導体やチオホスフェート誘導体、そしてポリヌクレオシドアミドやオリゴヌクレオシドアミドの分解に抵抗性のものが挙げられるが、それに限定されるものではない。本発明のアンチセンス核酸は次のような方針で好ましく設計されうる。すなわち、細胞内でのアンチセンス核酸をより安定なものにする、アンチセンス核酸の細胞透過性をより高める、目標とするセンス鎖に対する親和性をより大きなものにする、そしてもし毒性があるならアンチセンス核酸の毒性をより小さなものにする。
こうして修飾は当該分野で数多く知られており、例えば J. Kawakami et al., Pharm Tech Japan, Vol. 8, pp.247, 1992; Vol. 8, pp.395, 1992; S. T. Crooke et al. ed., Antisense Research and Applications, CRC Press, 1993 などに開示がある。
本発明のアンチセンス核酸は、変化せしめられたり、修飾された糖、塩基、結合を含有していて良く、リポゾーム、ミクロスフェアのような特殊な形態で供与されたり、遺伝子治療により適用されたり、付加された形態で与えられることができうる。こうして付加形態で用いられるものとしては、リン酸基骨格の電荷を中和するように働くポリリジンのようなポリカチオン体、細胞膜との相互作用を高めたり、核酸の取込みを増大せしめるような脂質（例えば、ホスホリピド、コレステロールなど）といった粗水性のものが挙げられる。付加するに好ましい脂質としては、コレステロールやその誘導体（例えば、コレステリルクロロホルメート、コール酸など）が挙げられる。こうしたものは、核酸の３’端あるいは５’端に付着させることができ、塩基、糖、分子内ヌクレオシド結合を介して付着させることができうる。その他の基としては、核酸の３’端あるいは５’端に特異的に配置されたキャップ用の基で、エキソヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅなどのヌクレアーゼによる分解を阻止するためのものが挙げられる。こうしたキャップ用の基としては、ポリエチレングリコール、テトラエチレングリコールなどのグリコールをはじめとした当該分野で知られた水酸基の保護基が挙げられるが、それに限定されるものではない。
アンチセンス核酸の阻害活性は、本発明の形質転換体、本発明の生体内や生体外の遺伝子発現系、あるいは本発明のペプチドの生体内や生体外の翻訳系を用いて調べることができる。該核酸それ自体公知の各種の方法で細胞に適用できる。
【００３２】
本発明のペプチドをコードするＤＮＡは、自体公知の方法で標識化されていてもよく、具体的にはアイソトープラベル化されたもの、蛍光標識されたもの（例えば、フルオレセインなどによる蛍光標識）、ビオチン化されたものまたは酵素標識されたものなどがあげられる。
本発明のペプチドを完全にコードするＤＮＡのクローニングの手段としては、本発明のペプチドの部分塩基配列を有する合成ＤＮＡプライマーを用いて自体公知のＰＣＲ法によって増幅するか、または適当なベクターに組み込んだＤＮＡを本発明のペプチドの一部あるいは全領域をコードするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて標識したものとのハイブリダイゼーションによって選別することができる。ハイブリダイゼーションの方法は、例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。
【００３３】
ＤＮＡの塩基配列の変換は、公知のキット、例えば、MutanTM-super Express Km（宝酒造（株））、MutanTM-K（宝酒造（株））等を用いて、ODA-LA PCR法、Gapped duplex法、Kunkel法等の自体公知の方法あるいはそれらに準じる方法に従って行なうことができる。
クローン化されたペプチドをコードするＤＮＡは目的によりそのまま、または所望により制限酵素で消化したり、リンカーを付加したりして使用することができる。該ＤＮＡはその５’末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、また３’末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付加することもできる。
本発明のペプチドの発現ベクターは、例えば、（イ）本発明のペプチドをコードするＤＮＡから目的とするＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結することにより製造することができる。
ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバクテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイルス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐＡ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。
本発明で用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用いる宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなるものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＨＩＶ・ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ-ＴＫプロモーターなどがあげられる。
【００３４】
これらのうち、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プロモーター、ＳＲαプロモーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰLプロモーター、ｌｐｐプロモーター、Ｔ７プロモーターなどが、宿主がバチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモーター、ＳＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーターなどが好ましい。宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーターなどが好ましい。発現ベクターには、以上の他に、所望によりエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有しているものを用いることができる。選択マーカーとしては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒと略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（ＭＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐｒと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子（以下、Ｎｅｏｒと略称する場合がある、Ｇ４１８耐性）等があげられる。特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞を用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マーカーとして使用する場合、目的遺伝子をチミジンを含まない培地によっても選択できる。
また、必要に応じて、宿主に合ったシグナル配列を、本発明のペプチドのＮ端末側に付加する。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、PhoＡ・シグナル配列、OmpＡ・シグナル配列などが、宿主がバチルス属菌である場合は、α−アミラーゼ・シグナル配列、サブチリシン・シグナル配列などが、宿主が酵母である場合は、ＭＦα・シグナル配列、ＳＵＣ２・シグナル配列など、宿主が動物細胞である場合には、インシュリン・シグナル配列、α−インターフェロン・シグナル配列、抗体分子・シグナル配列などがそれぞれ利用できる。
このようにして構築された本発明のペプチドをコードするＤＮＡを含有するベクターを用いて、形質転換体を製造することができる。
宿主としては、例えば、エシェリヒア属菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞などが用いられる。
【００３５】
エシェリヒア属菌の具体例としては、例えば、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２・ＤＨ１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），６０巻，１６０(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクイレック・アシッズ・リサーチ（Nucleic Acids Research），９巻，３０９(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal of Molecular Biology），１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ１０１〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，４１巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネティックス（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕などが用いられる。
バチルス属菌としては、例えば、バチルス・サブチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４〔ジーン，２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１〔ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Journal of Biochemistry），９５巻，８７(１９８４)〕などが用いられる。
酵母としては、例えば、サッカロマイセス セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２Ｒ-，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１２、シゾサッカロマイセス ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）ＮＣＹＣ１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、ピキア パストリス（Pichia pastoris）ＫＭ７１などが用いられる。
【００３６】
昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Spodoptera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia niの中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来のHigh FiveTM細胞、Mamestra brassicae由来の細胞またはEstigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイルスがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（Bombyx mori N 細胞；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、Ｓｆ２１細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴィボ（In Vivo）,13, 213-217,(1977)）などが用いられる。
昆虫としては、例えば、カイコの幼虫などが用いられる〔前田ら、ネイチャー（Nature），３１５巻，５９２(１９８５)〕。
動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ−７（ＣＯＳ７），Ｖｅｒｏ，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ細胞と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ-）細胞と略記），マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２０，マウスミエローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細胞などが用いられる。
エシェリヒア属菌を形質転換するには、例えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンジイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），６９巻，２１１０(１９７２)やジーン（Gene），１７巻，１０７(１９８２)などに記載の方法に従って行なうことができる。
バチルス属菌を形質転換するには、例えば、モレキュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティックス（Molecular ＆ General Genetics），１６８巻，１１１(１９７９)などに記載の方法に従って行なうことができる。
酵母を形質転換するには、例えば、メソッズ・イン・エンザイモロジー（Methods in Enzymology），１９４巻，１８２−１８７（１９９１）、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），７５巻，１９２９(１９７８)などに記載の方法に従って行なうことができる。
【００３７】
昆虫細胞または昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノロジー（Bio/Technology）, 6, 47-55(1988)などに記載の方法に従って行なうことができる。
動物細胞を形質転換するには、例えば、細胞工学別冊８ 新細胞工学実験プロトコール．２６３−２６７（１９９５）（秀潤社発行）、ヴィロロジー（Virology），５２巻，４５６(１９７３)に記載の方法に従って行なうことができる。このようにして、ペプチドをコードするＤＮＡを含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体を得ることができる。
宿主がエシェリヒア属菌、バチルス属菌である形質転換体を培養する際、培養に使用される培地としては液体培地が適当であり、その中には該形質転換体の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有せしめられる。炭素源としては、例えば、グルコース、デキストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物質、無機物としては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウムなどがあげられる。また、酵母エキス、ビタミン類、生長促進因子などを添加してもよい。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。
エシェリヒア属菌を培養する際の培地としては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地〔ミラー（Miller），ジャーナル・オブ・エクスペリメンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journal of Experiments in Molecular Genetics），４３１−４３３，Cold Spring Harbor LaboHumanory, New York １９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを効率よく働かせるために、例えば、３β−インドリルアクリル酸のような薬剤を加えることができる。
【００３８】
宿主がエシェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加えることもできる。
宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通気や撹拌を加えることもできる。
宿主が酵母である形質転換体を培養する際、培地としては、例えば、バークホールダー（Burkholder）最小培地〔Bostian, K. L. ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），７７巻，４５０５(１９８０)〕や０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培地〔Bitter, G. A. ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），８１巻，５３３０（１９８４）〕があげられる。培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は通常約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。
宿主が昆虫細胞または昆虫である形質転換体を培養する際、培地としては、Grace's Insect Medium（Grace, T.C.C.,ネイチャー（Nature）,195,788(1962)）に非動化した１０％ウシ血清等の添加物を適宜加えたものなどが用いられる。培地のｐＨは約６．２〜６．４に調整するのが好ましい。培養は通常約２７℃で約３〜５日間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。
宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、培地としては、例えば、約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地〔サイエンス（Science），１２２巻，５０１(１９５２)〕，ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジー（Virology），８巻，３９６(１９５９)〕，ＲＰＭＩ １６４０培地〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・メディカル・アソシエーション（The Journal of the American Medical Association）１９９巻，５１９(１９６７)〕，１９９培地〔プロシージング・オブ・ザ・ソサイエティ・フォー・ザ・バイオロジカル・メディスン（Proceeding of the Society for the Biological Medicine），７３巻，１(１９５０)〕などが用いられる。ｐＨは約６〜８であるのが好ましい。培養は通常約３０℃〜４０℃で約１５〜６０時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。
以上のようにして、形質転換体の細胞内、細胞膜または細胞外などに本発明のペプチドを生成せしめることができる。
上記培養物から本発明のペプチドを分離精製するには、例えば、下記の方法により行なうことができる。
【００３９】
本発明のペプチドを培養菌体あるいは細胞から抽出するに際しては、培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび／または凍結融解などによって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠心分離やろ過により本発明のペプチドの粗抽出液を得る方法などが適宜用いられる。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンなどの蛋白質変性剤や、トリトンＸ−１００TMなどの界面活性剤が含まれていてもよい。培養液中にペプチドが分泌される場合には、培養終了後、それ自体公知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを分離し、上清を集める。
このようにして得られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれる本発明のペプチドの精製は、自体公知の分離・精製法を適宜組み合わせて行なうことができる。これらの公知の分離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する方法などが用いられる。
かくして得られる本発明のペプチドが遊離体で得られた場合には、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法によって塩に変換することができ、逆に塩で得られた場合には自体公知の方法あるいはそれに準じる方法により、遊離体または他の塩に変換することができる。
なお、組換え体が産生する本発明のペプチドを、精製前または精製後に適当な蛋白修飾酵素を作用させることにより、任意に修飾を加えたり、ペプチドを部分的に除去することもできる。蛋白修飾酵素としては、例えば、トリプシン、キモトリプシン、アルギニルエンドペプチダーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダーゼなどが用いられる。
【００４０】
本発明のペプチドに対する抗体（以下、単に本発明の抗体と称する場合がある）は、本発明のペプチドに対する抗体を認識し得る抗体であれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよい。
本発明のペプチドに対する抗体は、本発明のペプチドを抗原として用い、自体公知の抗体または抗血清の製造法に従って製造することができる。
【００４１】
〔モノクローナル抗体の作製〕
（ａ）モノクローナル抗体産生細胞の作製
本発明のペプチドは、温血動物に対して投与により抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は通常２〜６週毎に１回ずつ、計２〜１０回程度行われる。用いられる温血動物としては、例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモット、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ニワトリがあげられるが、マウスおよびラットが好ましく用いられる。
モノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、抗原で免疫された温血動物、例えばマウスから抗体価の認められた個体を選択し最終免疫の２〜５日後に脾臓またはリンパ節を採取し、それらに含まれる抗体産生細胞を同種または異種動物の骨髄腫細胞と融合させることにより、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマを調製することができる。抗血清中の抗体価の測定は、例えば、後記の標識化ペプチドと抗血清とを反応させたのち、抗体に結合した標識剤の活性を測定することにより行なうことができる。融合操作は既知の方法、例えば、ケーラーとミルスタインの方法〔ネイチャー（Nature)、256、495 (1975)〕に従い実施することができる。融合促進剤としては、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）やセンダイウィルスなどがあげられるが、好ましくはＰＥＧが用いられる。
骨髄腫細胞としては、例えば、ＮＳ−１、Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０、ＡＰ−１などの温血動物の骨髄腫細胞があげられるが、Ｐ３Ｕ１が好ましく用いられる。用いられる抗体産生細胞（脾臓細胞）数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は１：１〜２０：１程度であり、ＰＥＧ（好ましくはＰＥＧ１０００〜ＰＥＧ６０００）が１０〜８０％程度の濃度で添加され、２０〜４０℃、好ましくは３０〜３７℃で１〜１０分間インキュベートすることにより効率よく細胞融合を実施できる。モノクローナル抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには種々の方法が使用できるが、例えば、ペプチド（蛋白質）抗原を直接あるいは担体とともに吸着させた固相（例、マイクロプレート）にハイブリドーマ培養上清を添加し、次に放射性物質や酵素などで標識した抗免疫グロブリン抗体（細胞融合に用いられる細胞がマウスの場合、抗マウス免疫グロブリン抗体が用いられる）またはプロテインＡを加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する方法、抗免疫グロブリン抗体またはプロテインＡを吸着させた固相にハイブリドーマ培養上清を添加し、放射性物質や酵素などで標識したペプチドを加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する方法などがあげられる。
モノクローナル抗体の選別は、自体公知あるいはそれに準じる方法に従って行なうことができる。通常ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加した動物細胞用培地で行なうことができる。選別および育種用培地としては、ハイブリドーマが生育できるものならばどのような培地を用いても良い。例えば、１〜２０％、好ましくは１０〜２０％の牛胎児血清を含むＲＰＭＩ １６４０培地、１〜１０％の牛胎児血清を含むＧＩＴ培地（和光純薬工業（株））あるいはハイブリドーマ培養用無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬（株））などを用いることができる。培養温度は、通常２０〜４０℃、好ましくは約３７℃である。培養時間は、通常５日〜３週間、好ましくは１週間〜２週間である。培養は、通常５％炭酸ガス下で行なうことができる。ハイブリドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測定できる。
【００４２】
（ｂ）モノクローナル抗体の精製
モノクローナル抗体の分離精製は、自体公知の方法、例えば、免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アルコール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換体（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ過法、抗原結合固相あるいはプロテインＡあるいはプロテインＧなどの活性吸着剤により抗体のみを採取し、結合を解離させて抗体を得る特異的精製法〕に従って行なうことができる。
【００４３】
〔ポリクローナル抗体の作製〕
本発明のポリクローナル抗体は、それ自体公知あるいはそれに準じる方法に従って製造することができる。例えば、免疫抗原（ペプチド抗原）自体、あるいはそれとキャリアー蛋白質との複合体をつくり、上記のモノクローナル抗体の製造法と同様に温血動物に免疫を行ない、該免疫動物から本発明のペプチドに対する抗体含有物を採取して、抗体の分離精製を行なうことにより製造することができる。
温血動物を免疫するために用いられる免疫抗原とキャリアー蛋白質との複合体に関し、キャリアー蛋白質の種類およびキャリアーとハプテンとの混合比は、キャリアーに架橋させて免疫したハプテンに対して抗体が効率良くできれば、どの様なものをどの様な比率で架橋させてもよいが、例えば、ウシ血清アルブミンやウシサイログロブリン、ヘモシアニン等を重量比でハプテン１に対し、約０．１〜２０、好ましくは約１〜５の割合でカプルさせる方法が用いられる。
また、ハプテンとキャリアーのカプリングには、種々の縮合剤を用いることができるが、グルタルアルデヒドやカルボジイミド、マレイミド活性エステル、チオール基、ジチオビリジル基を含有する活性エステル試薬等が用いられる。
縮合生成物は、温血動物に対して、抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は、通常約２〜６週毎に１回ずつ、計約３〜１０回程度行なわれる。
ポリクローナル抗体は、上記の方法で免疫された温血動物の血液、腹水など、好ましくは血液から採取することができる。
抗血清中のポリクローナル抗体価の測定は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測定できる。ポリクローナル抗体の分離精製は、上記のモノクローナル抗体の分離精製と同様の免疫グロブリンの分離精製法に従って行なうことができる。
【００４４】
本発明のペプチドをコードするＤＮＡ（以下、これらのＤＮＡを本発明のＤＮＡと略記する場合がある）に相補的な、または実質的に相補的な塩基配列を有するアンチセンスＤＮＡ（以下、これらのＤＮＡをアンチセンスＤＮＡと略記する場合がある）としては、本発明のＤＮＡに相補的な、または実質的に相補的な塩基配列を有し、該ＤＮＡの発現を抑制し得る作用を有するものであれば、いずれのアンチセンスＤＮＡであってもよい。
本発明のＤＮＡに実質的に相補的な塩基配列とは、例えば、本発明のＤＮＡに相補的な塩基配列（すなわち、本発明のＤＮＡの相補鎖）の全塩基配列あるいは部分塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列などがあげられる。特に、本発明のＤＮＡの相補鎖の全塩基配列うち、本発明のペプチドのＮ末端部位をコードする部分の塩基配列（例えば、開始コドン付近の塩基配列など）の相補鎖と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアンチセンスＤＮＡが好適である。これらのアンチセンスＤＮＡは、公知のＤＮＡ合成装置などを用いて製造することができる。
以下に、▲１▼本発明のペプチド、▲２▼本発明のＤＮＡ、▲３▼本発明の抗体、および▲４▼アンチセンスＤＮＡの用途を説明する。
【００４５】
（１）本発明のペプチドが関与する各種疾病の治療・予防剤
本発明のペプチドまたは本発明のＤＮＡは、本発明のペプチドまたは本発明のＤＮＡに異常があったり、欠損している場合、例えば、本発明のペプチドの機能不全に関連する疾患の予防・治療剤などの医薬として使用することができる。
例えば、本発明の分泌蛋白質Ｆ、本発明のペプチドＦもしくはその部分ペプチド、本発明の前駆体蛋白質Ｆ、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩（以下、本発明のペプチドＦと略記する場合がある）、▲２▼本発明の分泌蛋白質Ｇ、本発明のペプチドＧもしくはその部分ペプチド、本発明の前駆体蛋白質Ｇ、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩（以下、本発明のペプチドＧと略記する場合がある）、▲３▼本発明の分泌蛋白質Ｈ、本発明のペプチドＨもしくはその部分ペプチド、本発明の前駆体蛋白質Ｈ、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩（以下、本発明のペプチドＨと略記する場合がある）、▲４▼本発明の分泌蛋白質Ｉ、本発明のペプチドＩもしくはその部分ペプチド、本発明の前駆体蛋白質Ｉ、またはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩（以下、本発明のペプチドＩと略記する場合がある）はＡＱ２７受容体と結合することができるので、本発明のＦ、Ｇ、ＨまたはＩおよびそれらをコードするＤＮＡは、安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌促進剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤などとして有用である。
また、本発明のＦ、Ｇ、ＨまたはＩおよびそれらをコードするＤＮＡは、例えば、中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)の予防・治療剤などとして有用である。
【００４６】
本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩはＯＴ７Ｔ０２２受容体と結合することができるので、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩおよびそれらをコードするＤＮＡは、安全で低毒性な医薬、例えば、プロラクチン分泌調節剤として有用である。すなわち、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩがプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩおよびそれらをコードするＤＮＡはプロラクチン分泌促進剤として、プロラクチン分泌不全に関係する各種疾患、例えば、卵巣機能低下症、精嚢発育不全、骨粗鬆症、更年期障害、乳汁分泌不全、甲状腺機能低下、腎不全などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩがプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩおよびそれらをコードするＤＮＡはプロラクチン分泌促進作用に基づく性欲促進作用（フェロモン的作用）を有するため、性欲促進剤としても有用である。
本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩがプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩおよびそれらをコードするＤＮＡはプロラクチン分泌抑制剤として、プロラクチン過剰分泌に関係する各種疾患、例えば、高プロラクチン血症、下垂体腺腫瘍、間脳腫瘍、月経異常、ストレス、自己免疫疾患、プロラクチノーマ、不妊症、インポテンス、無月経症、乳汁漏症、末端肥大症、キアリ・フロンメル（Chiari-Frommel）症候群、アルゴンツ-デル・カスティロ（Argonz-del Castilo）症候群、フォーベス・アルブライト（Forbes-Albright）症候群、乳癌リンパ腫またはシーハン症候群または精子形成異常などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩがプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩおよびそれらをコードするＤＮＡはプロラクチン分泌抑制作用に基づいて、避妊薬としても有用である。
その他、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩはプロラクチン分泌機能を調べるための検査薬としても、また、ウシ、ヤギ、ブタなどの哺乳動物の乳汁の分泌促進剤などの動物薬としても有用であり、さらには該哺乳動物体内で有用物質を生産させ、これをその乳汁中への分泌することによる有用物質生産などへの応用できる。
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩは、胎盤機能調節作用を有するため、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩおよびそれらをコードするＤＮＡは絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防または治療薬としても有用である。
プロラクチン分泌調節活性については、Neuroendocrinology, 62巻 1995年 198-206頁、または、Neuroscience Letters 203巻 1996年 164-170頁などに記載の方法またはそれに準じた方法により測定することができる。
【００４７】
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩおよびそれらをコードするＤＮＡは、例えば、高血圧、自己免疫疾患、心不全、白内障、緑内障、急性バクテリア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アルツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテリア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食症，火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸がん），クローン病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性腎症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコバクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨軟化症，骨減少症，骨粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺がん，逆流性食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分裂症，敗血症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマトーサス，一過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴呆，創傷治癒，不眠症，関節炎、下垂体ホルモン分泌不全、瀕尿、尿毒症、または神経変成疾患等の疾病の治療・予防剤などとして有用できる。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩおよびそれらをコードするＤＮＡは、MACULAR EDEMA CYSTOID（嚢胞状黄斑浮腫）の疾病の治療・予防剤などの医薬として使用することができる。
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩおよびそれらをコードするＤＮＡは、例えば、（１）先端巨大症、ＴＳＨ産生腫瘍、非分泌性（非機能性）下垂体腫瘍、異所性ＡＣＴＨ（アドレノコルチコトロピン）産生腫瘍、髄様甲状腺癌、ＶＩＰ産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、インスリノーマ、カルチノイドなどの腫瘍の治療薬、（２）インスリン依存性または非依存性糖尿病、あるいはこれら糖尿病に関連した種々の疾患、すなわち糖尿病合併症（例、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、ドーン症候群、起立性低血圧症など）の治療薬、（３）高インスリン血症の改善または食欲の抑制などによる肥満、過食症などの治療薬、（４）急性膵炎、慢性膵炎、膵臓・腸フィステル、出血性潰瘍、消化性潰瘍、胃炎、胃酸過多症、逆流性食道炎などの治療薬、（５）ヘリコバクター・ピロリ菌感染に伴う様々な症状の改善剤（例、ガストリン分泌昂進の抑制剤など）、（６）内視鏡胆道膵管造影に伴うアミラーゼの分泌抑制剤、さらには膵臓外科手術の予後治療薬、（７）小腸の吸収能低下、分泌昂進または消化管の運動能異常に起因する下痢（例、Ｓｈｏｒｔ ｂｏｗｅｌ症候群など）、癌化学療法などの薬物に起因する下痢、先天性小腸萎縮に起因する下痢、ＶＩＰ産生腫瘍などの神経内分泌腫瘍に起因する下痢、ＡＩＤＳに起因する下痢、骨髄移植などに伴う対宿主移植片反応に起因する下痢、糖尿病に起因する下痢、腹腔神経叢遮断に起因する下痢、全身性硬化症に起因する下痢、好酸球増加症に起因する下痢などの治療薬、（８）ダンピング症候群、過敏性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患などの治療薬、（９）腫瘍または癌（例、甲状腺癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、胆管癌、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌、メラノーマ、骨肉腫、軟骨肉腫、悪性褐色細胞腫、神経芽細胞腫、脳腫瘍、胸腺腫、腎臓癌など）、白血病（例、好塩基性白血球の白血病・慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン性リンパ腫など）などの治療薬；該治療薬は、単独または他の制癌剤（例、タモキシフエン、ＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、インターフェロン−α、βおよびγ、インターロイキン−２など）と併用して用いることができる、（１０）肥大性心筋症、動脈硬化症、心弁膜症、心筋梗塞（特に、経皮経管冠動脈形成術後の心解梗塞）、再血管形成の予防・治療薬、（１１）食道静脈癌出血、肝硬変、末梢血管疾患の治療薬、（１２）免疫系に作用する生理活性物質（例、サブスタンスＰ、タヒキニン、サイトカインなど）の分泌の調節作用に基づき、例えば、全身性または局所性の炎症に伴う疾患（例、多発性動脈炎、リュウマチ性関節炎、乾せん、日焼け、湿疹、アレルギー（例、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎など）など）の治療薬、（１３）神経調節因子の産生・分泌に影響を及ぼすことから、例えば、痴呆症（例、アルツハイマー病、アルツハイマー型老年期痴呆、血管性・多発性痴呆など）、精神分裂症、てんかん、うつ病、一般不安障害、睡眠障害、多発性硬化症などの治療薬、（１４）眼疾患（例、緑内障など）などの治療薬、（１５）急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、重症全身性真菌感染症、結核、脊髄損傷、骨折、肝不全、肺炎、アルコール性肝炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＡＩＤＳ感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、インフルエンザ感染症、癌転移、多発性骨髄腫、骨軟化症、骨粗しょう症、骨ベーチェット症、腎炎、腎不全、敗血症、敗血症ショック、高カルシウム血症、高コレステロール血症、高グリセリド血症、高脂血症、全身性エリテマトーサス、一過性脳虚血発作、アルコール性肝炎などの予防・治療薬として有用であり、（１６）臓器移植、火傷、創傷、脱毛症などの治癒などにも用いられ、（１７）慢性あるいは急性疼痛（例、術後疼痛、炎症性疼痛、歯痛、骨疾患（例、関節炎、リウマチ、骨粗鬆症など）にともなう疼痛）の抑制・緩和など、鎮痛剤としても有用である。
【００４８】
本発明のペプチドおよび本発明のＤＮＡは、例えば、生体内において本発明のペプチドが減少あるいは欠損している患者がいる場合に、（イ）本発明のＤＮＡを該患者に投与し、生体内で本発明のペプチドを発現させることによって、（ロ）細胞に本発明のＤＮＡを挿入し、本発明のペプチドを発現させた後に、該細胞を患者に移植することによって、または（ハ）本発明のペプチドを該患者に投与することなどによって、該患者における本発明のペプチドの役割を十分に、あるいは正常に発揮させることができる。
本発明のＤＮＡを上記の治療・予防剤として使用する場合は、該ＤＮＡを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って、ヒトまたは温血動物に投与することができる。本発明のＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のための補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。
本発明のペプチドを上記の治療・予防剤として使用する場合は、少なくとも９０％、好ましくは９５％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上に精製されたものを使用するのが好ましい。
本発明のペプチドは、例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、本発明のペプチドを生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにするものである。
【００４９】
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。
注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などがあげられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例えば、エタノールなど）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０TM、ＨＣＯ−５０など）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などがあげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液など）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプルに充填される。
本発明のＤＮＡが挿入されたベクターも上記と同様に製剤化され、通常、非経口的に使用される。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、など）に対して投与することができる。
【００５０】
本発明のペプチドの投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、本発明のペプチドを経口投与する場合、一般的に成人（６０ｋｇとして）においては、一日につき該ペプチドを約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該ペプチドの１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のペプチドを注射剤の形で成人（体重６０ｋｇとして）に投与する場合、一日につき該ペプチドを約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を患部に注射することにより投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００５１】
（２）疾病に対する医薬候補化合物のスクリーニング
本発明のペプチドは、本発明のペプチドの機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法に使用することができる。
また、本発明のＤＮＡは、本発明のペプチドの発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法に使用することができる。
以下に、本発明のペプチドまたは本発明のＤＮＡを用いるスクリーニング方法を具体的に説明する。
【００５２】
（２−１）本発明のペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニング方法
該スクリーニングは、本発明のペプチドを用いるか、または組換え型本発明のペプチドの発現系を構築し、該発現系を用いたレセプター結合アッセイ系を用いることによって、本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物）（例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物など）またはその塩をスクリーニングすることができる。このような化合物には、本発明のペプチドの受容体を介した細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ2+遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下、ＧＴＰγＳ結合活性などを促進する活性など）を有する化合物（即ち受容体アゴニスト）と該細胞刺激活性を有しない化合物（即ち受容体アンタゴニスト）などが含まれる。「リガンドとの結合性を変化させる」とは、リガンドとの結合を阻害する場合とリガンドとの結合を促進する場合の両方を包含するものである。
【００５３】
すなわち、本発明は、
本発明のペプチドを用いることを特徴とする本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、具体的には、
（ｉ）受容体またはその部分ペプチド（以下、これらを単に受容体と略称する）に、本発明のペプチドを接触させた場合と（ii）受容体に、本発明のペプチドおよび試験化合物を接触させた場合との比較を行なうことを特徴とする本発明のペプチドと受容体の結合性を変化させる化合物（本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
本発明のスクリーニング方法においては、（i）受容体に、本発明のペプチドを接触させた場合と（ii）受容体に、本発明のペプチドおよび試験化合物を接触させた場合における、例えば受容体に対するリガンドの結合量、細胞刺激活性などを測定して、比較する。
【００５４】
本発明のスクリーニング方法は具体的には、
▲１▼標識した本発明のペプチドを、受容体に接触させた場合と、標識した本発明のペプチドおよび試験化合物を受容体に接触させた場合における、標識した本発明のペプチドの受容体に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法、
▲２▼標識した本発明のペプチドを、受容体を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合と、標識した本発明のペプチドおよび試験化合物を受容体を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、標識した本発明のペプチドの該細胞または該膜画分に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法、
▲３▼標識した本発明のペプチドを、受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した受容体に接触させた場合と、標識した本発明のペプチドおよび試験化合物を受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した受容体に接触させた場合における、標識した本発明のペプチドの受容体に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法、
【００５５】
▲４▼受容体を活性化する化合物（例えば、本発明のペプチド）を受容体を含有する細胞に接触させた場合と、受容体を活性化する化合物および試験化合物を受容体を含有する細胞に接触させた場合における、受容体を介した細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ2+遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下、ＧＴＰγＳ結合活性などを促進する活性または抑制する活性など）を測定し、比較することを特徴とする本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法、および
▲５▼受容体を活性化する化合物（例えば、本発明のペプチドなど）を受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した受容体に接触させた場合と、受容体を活性化する化合物および試験化合物を、受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した受容体に接触させた場合における、受容体を介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ2+遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下、ＧＴＰγＳ結合活性などを促進する活性または抑制する活性など）を測定し、比較することを特徴とする本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法などである。
【００５６】
本発明のスクリーニング方法の具体的な説明を以下にする。
まず、本発明のスクリーニング方法に用いる受容体としては、本発明のペプチドをリガンドとして認識するものであれば何れのものであってもよいが、ヒトや温血動物の臓器の膜画分などが好適である。しかし、特にヒト由来の臓器は入手が極めて困難なことから、スクリーニングに用いられるものとしては、組換え体を用いて大量発現させた受容体などが適している。受容体は、公知の方法に従って製造することができる。
本発明のスクリーニング方法において、受容体を含有する細胞あるいは該細胞膜画分などを用いる場合、後述の調製法に従えばよい。
受容体を含有する細胞を用いる場合、該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固定化してもよい。固定化方法はそれ自体公知の方法に従って行うことができる。
受容体を含有する細胞としては、受容体を発現した宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、前述の大腸菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが挙げられる。また、受容体を発現した宿主細胞は、前述の本発明のペプチドを含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体の製造方法と同様の方法などがあげられる。
膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Potter−Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダーやポリトロン（Kinematica社製）による破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などがあげられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（５００ｒｐｍ〜３０００ｒｐｍ）で短時間（通常、約１分〜１０分）遠心し、上清をさらに高速（１５０００ｒｐｍ〜３００００ｒｐｍ）で通常３０分〜２時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現した受容体と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
該受容体を含有する細胞や膜画分中の受容体の量は、１細胞当たり１０3〜１０8分子であるのが好ましく、１０5〜１０7分子であるのが好適である。なお、発現量が多いほど膜画分当たりのリガンド結合活性（比活性）が高くなり、高感度なスクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、同一ロットで大量の試料を測定できるようになる。
【００５７】
本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物）をスクリーニングする前記の▲１▼〜▲３▼を実施するためには、適当な受容体画分と、標識した本発明のペプチドなどが用いられる。受容体画分としては、天然型の受容体画分か、またはそれと同等の活性を有する組換え型受容体画分などが望ましい。ここで、同等の活性とは、同等のリガンド結合活性などを示す。標識したリガンドとしては、標識したリガンド、標識したリガンドアナログ化合物などが用いられる。例えば〔3Ｈ〕、〔125Ｉ〕、〔14Ｃ〕、〔35Ｓ〕などで標識されたリガンドなどを利用することができる。このうち好ましくは、〔125Ｉ〕で標識されたリガンドである。
具体的には、本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物のスクリーニングを行うには、まず受容体を含有する細胞または細胞の膜画分を、スクリーニングに適したバッファーに懸濁することによりレセプター標品を調製する。バッファーには、ｐＨ４〜１０（望ましくはｐＨ６〜８）のリン酸バッファー、トリス−塩酸バッファーなどのリガンドとレセプターとの結合を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。また、非特異的結合を低減させる目的で、ＣＨＡＰＳ、Ｔｗｅｅｎ−８０TM（花王−アトラス社）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面活性剤をバッファーに加えることもできる。さらに、プロテアーゼによる受容体や本発明のペプチドの分解を抑える目的でＰＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−６４（ペプチド研究所製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加することもできる。０．０１ｍｌ〜１０ｍｌの該レセプター溶液に、一定量（５０００ｃｐｍ〜５０００００ｃｐｍ）の標識した本発明のペプチドを添加し、同時に１０-10〜１０-7Ｍの試験化合物を共存させる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るために大過剰の未標識の本発明のペプチドを加えた反応チューブも用意する。反応は０℃から５０℃、望ましくは４℃から３７℃で２０分から２４時間、望ましくは３０分から３時間行う。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレーションカウンターまたはγ−カウンターで計測する。拮抗する物質がない場合のカウント(Ｂ0）から非特異的結合量（ＮＳＢ）を引いたカウント（Ｂ0−ＮＳＢ）を１００％とした時、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が例えば５０％以下になる試験化合物を拮抗阻害能力のある候補物質として選択することができる。
【００５８】
本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物）をスクリーニングする前記の▲４▼〜▲５▼の方法を実施するためには、受容体を介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ2+遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下、ＧＴＰγＳ結合活性などを促進する活性または抑制する活性など）を公知の方法または市販の測定用キットを用いて測定することができる。具体的には、まず、受容体を含有する細胞をマルチウェルプレート等に培養する。スクリーニングを行うにあたっては前もって新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当なバッファーに交換し、試験化合物などを添加して一定時間インキュベートした後、細胞を抽出あるいは上清液を回収して、生成した産物をそれぞれの方法に従って定量する。細胞刺激活性の指標とする物質（例えば、アラキドン酸など）の生成が、細胞が含有する分解酵素によって検定困難な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を添加してアッセイを行なってもよい。また、ｃＡＭＰ産生抑制などの活性については、フォルスコリンなどで細胞の基礎的産生量を増大させておいた細胞に対する産生抑制作用として検出することができる。
細胞刺激活性を測定してスクリーニングを行なうには、適当な受容体を発現した細胞が必要である。受容体を発現した細胞としては、前述の受容体発現細胞株などが望ましい。
試験化合物としては、例えばペプチド、タンパク質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などがあげられる。
また、試験化合物としては、受容体の活性部位の原子座標およびリガンド結合ポケットの位置に基づいて、リガンド結合ポケットに結合するように設計された化合物が好ましく用いられる。受容体の活性部位の原子座標およびリガンド結合ポケットの位置の測定は、公知の方法あるいはそれに準じる方法を用いて行うことができる。
さらに、本発明のペプチドに代えて、本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物またはその塩を用いることもできる。本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物またはその塩は、例えば、リガンドとして本発明のペプチドを用いて、後述する本発明のスクーニング方法を実施することによって得ることができる。
【００５９】
本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング用キットは、受容体またはその塩、受容体の部分ペプチドまたはその塩、受容体を含有する細胞、あるいは受容体を含有する細胞の膜画分、および本発明のペプチドを含有するものである。
本発明のスクリーニング用キットの例としては、次のものが挙げられる。
１．スクリーニング用試薬
▲１▼測定用緩衝液および洗浄用緩衝液
Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、０.０５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたもの。
孔径０.４５μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃で保存するか、あるいは用時調製しても良い。
▲２▼受容体標品
受容体を発現させたＣＨＯ細胞を、１２穴プレートに５×１０5個／穴で継代し、３７℃、５％ＣＯ2、９５％ａｉｒで２日間培養したもの。
▲３▼標識リガンド
〔3Ｈ〕、〔125Ｉ〕、〔14Ｃ〕、〔35Ｓ〕などで標識した本発明のペプチドを適当な溶媒または緩衝液に溶解したものを４℃あるいは−２０℃にて保存し、用時に測定用緩衝液にて１μＭに希釈する。
▲４▼リガンド標準液
本発明のペプチドを０.１％ウシ血清アルブミン（シグマ社製）を含むＰＢＳで１ｍＭとなるように溶解し、−２０℃で保存する。
【００６０】
２．測定法
▲１▼１２穴組織培養用プレートにて培養した受容体を発現させた細胞を、測定用緩衝液１ｍｌで２回洗浄した後、４９０μｌの測定用緩衝液を各穴に加える。
▲２▼１０-3〜１０-10Ｍの試験化合物溶液を５μｌ加えた後、標識した本発明のペプチドを５μｌ加え、室温にて１時間反応させる。非特異的結合量を知るためには試験化合物の代わりに１０-3Ｍの本発明のペプチドを５μｌ加えておく。
▲３▼反応液を除去し、１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄する。細胞に結合した標識された本発明のペプチドを０.２Ｎ ＮａＯＨ−１％ＳＤＳで溶解し、４ｍｌの液体シンチレーターＡ（和光純薬製）と混合する。
▲４▼液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）を用いて放射活性を測定し、Percent Maximum Binding（ＰＭＢ）を次の式〔数１〕で求める。
〔数１〕
ＰＭＢ＝［（Ｂ−ＮＳＢ）／（Ｂ0−ＮＳＢ）］×１００
ＰＭＢ：Percent Maximum Binding
Ｂ ：検体を加えた時の値
ＮＳＢ：Non-specific Binding（非特異的結合量）
Ｂ0 ：最大結合量
【００６１】
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、本発明のペプチドと受容体との結合を変化させる（結合を阻害あるいは促進する）化合物（本発明のペプチドの活性を促進または阻害する化合物）であり、具体的には受容体を介して細胞刺激活性を有する化合物またはその塩（いわゆる受容体アゴニスト）、あるいは該刺激活性を有しない化合物（いわゆる受容体アンタゴニスト）である。該化合物としては、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
上記受容体アゴニストであるかアンタゴニストであるかの具体的な評価方法は以下の（ｉ）または（ii）に従えばよい。
（ｉ）前記▲１▼〜▲３▼のスクリーニング方法で示されるバインディング・アッセイを行い、本発明のペプチドと受容体との結合性を変化させる（特に、結合を阻害する）化合物を得た後、該化合物が上記した受容体を介する細胞刺激活性を有しているか否かを測定する。細胞刺激活性を有する化合物またはその塩は受容体アゴニストであり、該活性を有しない化合物またはその塩は受容体アンタゴニストである。
（ii）(a)試験化合物を受容体を含有する細胞に接触させ、上記受容体を介した細胞刺激活性を測定する。細胞刺激活性を有する化合物またはその塩は受容体アゴニストである。
(b) 受容体を活性化する化合物（例えば、本発明のペプチドアゴニストなど）を受容体を含有する細胞に接触させた場合と、受容体を活性化する化合物および試験化合物を受容体を含有する細胞に接触させた場合における、受容体を介した細胞刺激活性を測定し、比較する。受容体を活性化する化合物による細胞刺激活性を減少させ得る化合物またはその塩は受容体アンタゴニストである。
【００６２】
該受容体アゴニストは、受容体に対する本発明のペプチドが有する生理活性と同様の作用を有しているので、本発明のペプチドと同様に安全で低毒性な医薬として有用である。
逆に、受容体アンタゴニストは、受容体に対する本発明のペプチドが有する生理活性を抑制することができるので、本発明のペプチドの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから選ばれた化合物であり、本発明のペプチドの機能を促進または阻害する化合物である。
該化合物の塩としては、前記した本発明のペプチドの塩と同様のものが用いられる。
【００６３】
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物を上述の治療・予防剤として使用する場合、常套手段に従って実施することができる。例えば、前記した本発明のペプチドを含有する医薬と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすることができる。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、受容体アンタゴニストを経口投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇ当たり）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、受容体アンタゴニストを注射剤の形で通常成人（６０ｋｇ当たり）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００６４】
より具体的には、本発明のペプチドが、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩである場合、受容体としては、
（１）配列番号：３１、配列番号：４４または配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩（以下、ＡＱ２７受容体と略記する場合がある）、
（２）配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩（以下、ＯＴ７Ｔ０２２受容体と略記する場合がある）などが用いられる。
【００６５】
配列番号：３１、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号：３１、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
本発明の配列番号：３１、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質としては、例えば、配列番号：３１、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、配列番号：３１、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列からなる蛋白質と実質的に同質の活性を有する蛋白質などが好ましい。
実質的に同質の活性としては、例えば、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用などが挙げられる。実質的に同質とは、それらの活性が性質的に同質であることを示す。したがって、リガンド結合活性やシグナル情報伝達作用などの活性が同等（例、約０．５〜２倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度や蛋白質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。
リガンド結合活性やシグナル情報伝達作用などの活性の測定は、前記と同様にして測定することができる。
【００６６】
また、ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体としては、▲１▼配列番号：３１、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、▲２▼配列番号：３１、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、▲３▼配列番号：３１、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または▲４▼それら欠失・付加・置換を組み合わせたアミノ酸配列を含有する蛋白質なども用いられる。
ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体は、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：３１、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：３３または配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列からなる蛋白質をはじめとするＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体は、Ｃ末端が通常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート(−ＣＯＯ−)、アミド（−ＣＯＮＨ２）またはエステル（−ＣＯＯＲ）の何れであってもよい。
ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ１−６アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ３−８シクロアルキル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ６−１２アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ１−２アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ１−２アルキル基などのＣ７−１４アラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチル基などが用いられる。
ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明の蛋白質に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
さらに、ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体には、上記した蛋白質において、Ｎ末端のメチオニン残基のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ２−６アルカノイル基などのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば、−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ２−６アルカノイル基などのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白質なども含まれる。
ＡＱ２７受容体の具体例としては、例えば、配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列からなるヒト由来ＡＱ２７受容体、配列番号：４４で表わされるアミノ酸配列からなるラット由来ＡＱ２７受容体、配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列からなるマウス由来ＡＱ２７受容体などがあげられる。
ＯＴ７Ｔ０２２受容体の具体例としては、例えば、配列番号：３３で表わされるアミノ酸配列からなるラット由来ＯＴ７Ｔ０２２受容体、配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列からなるヒト由来ＯＴ７Ｔ０２２受容体などがあげられる。
【００６７】
ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体の部分ペプチドとしては、前記したＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体の部分ペプチドであれば何れのものであってもよいが、例えば、ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体の蛋白質分子のうち、細胞膜の外に露出している部位であって、レセプター結合活性を有するものなどが用いられる。
ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体の部分ペプチドとしては、疎水性プロット解析において細胞外領域（親水性（Hydrophilic）部位）であると分析された部分を含むペプチドである。また、疎水性（Hydrophobic）部位を一部に含むペプチドも同様に用いることができる。個々のドメインを個別に含むペプチドも用い得るが、複数のドメインを同時に含む部分のペプチドでも良い。
ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体の部分ペプチドのアミノ酸の数は、前記したＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体の構成アミノ酸配列のうち少なくとも２０個以上、好ましくは５０個以上、より好ましくは１００個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが好ましい。
実質的に同一のアミノ酸配列とは、これらアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列を示す。
ここで、「実質的に同質の活性」とは、前記と同意義を示す。「実質的に同質の活性」の測定は前記と同様に行なうことができる。
また、ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体の部分ペプチドは、上記アミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜２０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好ましくは１〜５個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。
また、ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体の部分ペプチドはＣ末端が通常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−ＣＯＯ−）、アミド（−ＣＯＮＨ２）またはエステル（−ＣＯＯＲ）の何れであってもよい。
さらに、ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体の部分ペプチドには、前記したＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体と同様に、Ｎ末端のメチオニン残基のアミノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したGlnがピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。
ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体またはその部分ペプチドの塩としては、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。
【００６８】
ＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体をコードするＤＮＡとしては、前述したＡＱ２７受容体またはＯＴ７Ｔ０２２受容体をコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前記した細胞・組織よりtotalＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ-ＰＣＲ法と略称する）によって増幅することもできる。
具体的には、ＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：３２、配列番号：４５、配列番号：４７で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：３２、配列番号：４５、配列番号：４７で表わされる塩基配列を有するＤＮＡとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡを有し、配列番号：３１、配列番号：４４、配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列からなるＡＱ２７受容体と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用など）を有する受容体をコードするＤＮＡであれば何れのものでもよい。
配列番号：３２、配列番号：４５、配列番号：４７で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：３２、配列番号：４５、配列番号：４７で表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
より具体的には、配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡとしては、配列番号：３２で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
より具体的には、配列番号：４４で表わされるアミノ酸配列からなるラットＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡとしては、配列番号：４５で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
より具体的には、配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列からなるマウスＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡとしては、配列番号：４７で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
【００６９】
ＯＴ７Ｔ０２２受容体をコードするＤＮＡとしては、例えば、
（１）配列番号：３４で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：３４で表わされる塩基配列を有するＤＮＡとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡを有し、配列番号：３３で表わされるアミノ酸配列からなるＯＴ７Ｔ０２２受容体と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用など）を有する受容体をコードするＤＮＡ、または
（２）配列番号：３６または配列番号：３７で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：３６または配列番号：３７で表わされる塩基配列を有するＤＮＡとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡを有し、配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列からなるＯＴ７Ｔ０２２受容体と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用など）を有する受容体をコードするＤＮＡであれば何れのものでもよい。
配列番号：３４、配列番号：３６または配列番号：３７で表わされる塩基配列を有するＤＮＡとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：３４、配列番号：３６または配列番号：３７で表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
ハイブリダイゼーションは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。
ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。
より具体的には、配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列を含有するＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡとしては、配列番号：３２で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡが用いられる。
配列番号：３３で表わされるアミノ酸配列からなるラットＯＴ７Ｔ０２２受容体をコードするＤＮＡとしては、配列番号：３４で表わされる塩基配列からなるＤＮＡが用いられる。
配列番号：３５で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＯＴ７Ｔ０２２受容体をコードするＤＮＡとしては、配列番号：３６または配列番号：３７で表わされる塩基配列からなるＤＮＡが用いられる。
ヒトＡＱ２７受容体、その部分ペプチドまたはその塩は、ＷＯ０１／１６３１６号公報に記載の方法に準じて製造することができる。
ＯＴ７Ｔ０２２受容体、その部分ペプチドまたはその塩は、ＷＯ００／２９４４１号公報に記載の方法に準じて製造することができる。
ラットまたはマウスＡＱ２７受容体、その部分ペプチドまたはその塩は、新規な蛋白質であり、ＷＯ０１／１６３１６号公報に記載の方法に準じて製造することができる。
【００７０】
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩとＡＱ２７受容体との結合性を変化させる化合物またはその塩は、安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌調節剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤などとして有用である。
また、本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られるＡＱ２７受容体アゴニストは、安全で低毒性な医薬、例えば、中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)の予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌促進剤などとして有用である。
一方、本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られるＡＱ２７受容体アンタゴニストは、安全で低毒性な医薬、例えば、本発明のペプチドＦの過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患の予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌阻害剤などとして有用である。
【００７１】
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られるＯＴ７Ｔ０２２受容体アゴニストまたはＯＴ７Ｔ０２２受容体アンタゴニストはプロラクチン分泌の調節作用剤として有用である。すなわち、ＯＴ７Ｔ０２２受容体アゴニストまたはＯＴ７Ｔ０２２受容体アンタゴニストがプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進剤として、プロラクチン分泌不全に関係する各種疾患、例えば、卵巣機能低下症、精嚢発育不全、骨粗鬆症、更年期障害、乳汁分泌不全、甲状腺機能低下、腎不全などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、ＯＴ７Ｔ０２２受容体アゴニストまたはＯＴ７Ｔ０２２受容体アンタゴニストがプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進作用に基づく性欲促進作用（フェロモン的作用）を有するため、性欲促進剤としても有用である。
ＯＴ７Ｔ０２２受容体アゴニストまたはＯＴ７Ｔ０２２受容体アンタゴニストがプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制剤として、プロラクチン過剰分泌に関係する各種疾患、例えば、高プロラクチン血症、下垂体腺腫瘍、間脳腫瘍、月経異常、ストレス、自己免疫疾患、プロラクチノーマ、不妊症、インポテンス、無月経症、乳汁漏症、末端肥大症、キアリ・フロンメル（Chiari-Frommel）症候群、アルゴンツ-デル・カスティロ（Argonz-del Castilo）症候群、フォーベス・アルブライト（Forbes-Albright）症候群、乳癌リンパ腫またはシーハン症候群または精子形成異常などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、ＯＴ７Ｔ０２２受容体アゴニストまたはＯＴ７Ｔ０２２受容体アンタゴニストがプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制作用に基づいて、避妊薬としても有用である。
その他、ＯＴ７Ｔ０２２受容体アゴニストまたはＯＴ７Ｔ０２２受容体アンタゴニストは、プロラクチン分泌機能を調べるための検査薬としても、また、ウシ、ヤギ、ブタなどの畜産哺乳動物の乳汁の分泌促進剤などの動物薬としても有用であり、さらには該畜産哺乳動物体内で有用物質を生産させ、これをその乳汁中への分泌することによる有用物質生産などへの応用できる。
さらに、ＯＴ７Ｔ０２２受容体アゴニストまたはＯＴ７Ｔ０２２受容体アンタゴニストは、胎盤機能調節作用を有するため、絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防または治療薬としても有用である。
プロラクチン分泌調節活性については、Neuroendocrinology, 62巻 1995年 198-206頁、または、Neuroscience Letters 203巻 1996年 164-170頁などに記載の方法またはそれに準じた方法により行うことができる。
さらに、本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られるＯＴ７Ｔ０２２受容体アゴニストまたはＯＴ７Ｔ０２２受容体アンタゴニストは、安全で低毒性な医薬、例えば、高血圧、自己免疫疾患、心不全、白内障、緑内障、急性バクテリア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アルツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテリア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食症，火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸がん），クローン病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性腎症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコバクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨軟化症，骨減少症，骨粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺がん，逆流性食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分裂症，敗血症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマトーサス，一過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴呆，創傷治癒，不眠症，関節炎、下垂体ホルモン分泌不全、瀕尿、尿毒症、または神経変成疾患等の疾病の治療・予防剤などの医薬として有用できる。
また、ＯＴ７Ｔ０２２受容体アゴニストまたはＯＴ７Ｔ０２２受容体アンタゴニストは、MACULAR EDEMA CYSTOID（嚢胞状黄斑浮腫）の疾病の治療・予防剤などの医薬として使用することができる。
さらに、ＯＴ７Ｔ０２２受容体アゴニストまたはＯＴ７Ｔ０２２受容体アンタゴニストは、例えば、（１）先端巨大症、ＴＳＨ産生腫瘍、非分泌性（非機能性）下垂体腫瘍、異所性ＡＣＴＨ（アドレノコルチコトロピン）産生腫瘍、髄様甲状腺癌、ＶＩＰ産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、インスリノーマ、カルチノイドなどの腫瘍の治療薬、（２）インスリン依存性または非依存性糖尿病、あるいはこれら糖尿病に関連した種々の疾患、すなわち糖尿病合併症（例、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、ドーン症候群、起立性低血圧症など）の治療薬、（３）高インスリン血症の改善または食欲の抑制などによる肥満、過食症などの治療薬、（４）急性膵炎、慢性膵炎、膵臓・腸フィステル、出血性潰瘍、消化性潰瘍、胃炎、胃酸過多症、逆流性食道炎などの治療薬、（５）ヘリコバクター・ピロリ菌感染に伴う様々な症状の改善剤（例、ガストリン分泌昂進の抑制剤など）、（６）内視鏡胆道膵管造影に伴うアミラーゼの分泌抑制剤、さらには膵臓外科手術の予後治療薬、（７）小腸の吸収能低下、分泌昂進または消化管の運動能異常に起因する下痢（例、Ｓｈｏｒｔ ｂｏｗｅｌ症候群など）、癌化学療法などの薬物に起因する下痢、先天性小腸萎縮に起因する下痢、ＶＩＰ産生腫瘍などの神経内分泌腫瘍に起因する下痢、ＡＩＤＳに起因する下痢、骨髄移植などに伴う対宿主移植片反応に起因する下痢、糖尿病に起因する下痢、腹腔神経叢遮断に起因する下痢、全身性硬化症に起因する下痢、好酸球増加症に起因する下痢などの治療薬、（８）ダンピング症候群、過敏性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患などの治療薬、（９）腫瘍または癌（例、甲状腺癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、胆管癌、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌、メラノーマ、骨肉腫、軟骨肉腫、悪性褐色細胞腫、神経芽細胞腫、脳腫瘍、胸腺腫、腎臓癌など）、白血病（例、好塩基性白血球の白血病・慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン性リンパ腫など）などの治療薬；該治療薬は、単独または他の制癌剤（例、タモキシフエン、ＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、インターフェロン−α、βおよびγ、インターロイキン−２など）と併用して用いることができる、（１０）肥大性心筋症、動脈硬化症、心弁膜症、心筋梗塞（特に、経皮経管冠動脈形成術後の心解梗塞）、再血管形成の予防・治療薬、（１１）食道静脈癌出血、肝硬変、末梢血管疾患の治療薬、（１２）免疫系に作用する生理活性物質（例、サブスタンスＰ、タヒキニン、サイトカインなど）の分泌の調節作用に基づき、例えば、全身性または局所性の炎症に伴う疾患（例、多発性動脈炎、リュウマチ性関節炎、乾せん、日焼け、湿疹、アレルギー（例、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎など）など）の治療薬、（１３）神経調節因子の産生・分泌に影響を及ぼすことから、例えば、痴呆症（例、アルツハイマー病、アルツハイマー型老年期痴呆、血管性・多発性痴呆など）、精神分裂症、てんかん、うつ病、一般不安障害、睡眠障害、多発性硬化症などの治療薬、（１４）眼疾患（例、緑内障など）などの治療薬、（１５）急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、重症全身性真菌感染症、結核、脊髄損傷、骨折、肝不全、肺炎、アルコール性肝炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＡＩＤＳ感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、インフルエンザ感染症、癌転移、多発性骨髄腫、骨軟化症、骨粗しょう症、骨ベーチェット症、腎炎、腎不全、敗血症、敗血症ショック、高カルシウム血症、高コレステロール血症、高グリセリド血症、高脂血症、全身性エリテマトーサス、一過性脳虚血発作、アルコール性肝炎などの予防・治療薬として有用であり、（１６）臓器移植、火傷、創傷、脱毛症などの治癒などにも用いられ、（１７）慢性あるいは急性疼痛（例、術後疼痛、炎症性疼痛、歯痛、骨疾患（例、関節炎、リウマチ、骨粗鬆症など）にともなう疼痛）の抑制・緩和など、鎮痛剤としても有用である。
これらの医薬は前記と同様に製剤化して、使用することができる。
【００７２】
（２−２）本発明のタンパク質の発現を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法
本発明のタンパク質、本発明のオリゴヌクレオチド、本発明の形質変換体または本発明の抗体は、本発明のタンパク質の発現を促進または阻害する化合物のスクリーニング法に使用することができる。
すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明のタンパク質を発現し得る細胞または組織を、試験化合物の存在下および非存在下で培養した場合における、それぞれの本発明のタンパク質の発現量または本発明のタンパク質をコードするｍＲＮＡ量を測定し、比較することを特徴とする本発明のタンパク質の発現を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法を提供する。
本発明のタンパク質を発現し得る細胞または組織としては、ヒトや温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サル等）の細胞（例えば、神経細胞、内分泌細胞、神経内分泌細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、肝細胞、脾細胞、メサンギウム細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球、樹状細胞）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞等、もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、唾液腺、末梢血、前立腺、睾丸（精巣）、卵巣、胎盤、子宮、骨、軟骨、関節、骨格筋等を用いても良い。その際、株化細胞、初代培養系を用いてもよい。また、前記した本発明の形質転換された形質変換体を使用してもよい。
本発明のペプチドを発現し得る細胞の培養方法は、前記した本発明の形質変換体の培養法と同様である。
試験化合物としては、前記の試験化合物の他、ＤＮＡライブラリーなどを用いることができる。
【００７３】
本発明のペプチドの発現量は抗体などを用いて免疫化学的方法などの公知の方法により測定することもできるし、本発明のペプチドをコードするｍＲＮＡをノザンハイブリダイゼーション法、ＲＴ−ＰＣＲやＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法を用いて、公知の方法により測定することもできる。
ｍＲＮＡの発現量の比較をハイブリダイゼーション法によって行うには、公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法等に従って行なうことができる。
具体的には、本発明のペプチドをコードするｍＲＮＡの量の測定は、公知の方法に従って細胞から抽出したＲＮＡと、本発明のポリヌクレオチドもしくはその一部または本発明のアンチセンスポリヌクレオチドとを接触させ、本発明のポリヌクレオチドもしくはその一部または本発明のアンチセンスポリヌクレオチド結合したｍＲＮＡの量を測定することによって行われる。本発明のポリヌクレオチドもしくはその一部または本発明のアンチセンスポリヌクレオチドを、例えば放射性同位元素、色素などで標識することによって、本発明のポリヌクレオチドもしくはその一部または本発明のアンチセンスポリヌクレオチドに結合したｍＲＮＡの量が容易に測定できる。放射性同位元素としては、例えば32Ｐ、3Ｈなどが用いられ、色素としては、例えばfluorescein、ＦＡＭ（PE Biosystems社製）、ＪＯＥ（PE Biosystems社製）、ＴＡＭＲＡ（PE Biosystems社製）、ＲＯＸ（PE Biosystems社製）、Ｃｙ５（Amersham社製）、Ｃｙ３（Amersham社製）などの蛍光色素が用いられる。
また、ｍＲＮＡの量は、細胞から抽出したＲＮＡを逆転写酵素によってｃＤＮＡに変換した後、本発明のポリヌクレオチドもしくはその一部または本発明のアンチセンスポリヌクレオチドをプライマーとして用いるＰＣＲによって、増幅されるｃＤＮＡの量を測定することによって行うことができる。
このように、本発明のペプチドをコードするｍＲＮＡの量を増加させる試験化合物を、本発明のペプチドの発現を促進する活性を有する化合物として選択することができ、また本発明のペプチドをコードするｍＲＮＡの量を減少させる試験化合物を、本発明のペプチドの発現を阻害する活性を有する化合物として選択することができる。
【００７４】
さらに、本発明は、
（ii）本発明のペプチドをコードする遺伝子のプロモーター領域またはエンハンサー領域の下流にレポーター遺伝子を連結した組換えＤＮＡで形質転換した形質転換体を試験化合物の存在下および非存在下で培養した場合における、それぞれのレポーター活性を測定し、比較することを特徴とする当該プロモーター活性を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法を提供する。
レポーター遺伝子としては、例えば、ｌａｃＺ（β−ガラクトシダーゼ遺伝子）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（CAT）、ルシフェラーゼ、成長因子、β-グルクロニダーゼ、アルカリホスファターゼ、Green fluorescent protein (GFP)、β-ラクタマーゼなどが用いられる。
レポーター遺伝子産物（例、ｍＲＮＡ、タンパク質）の量を公知の方法を用いて測定することによって、レポーター遺伝子産物の量を増加させる試験化合物を本発明のペプチドのプロモーターもしくはエンハンサーの活性を制御（特に促進）する作用を有する化合物、すなわち本発明のペプチドの発現を促進する活性を有する化合物として選択できる。逆に、レポーター遺伝子産物の量を減少させる試験化合物を本発明のペプチドのプロモーターもしくはエンハンサーの活性を制御（特に阻害）する作用を有する化合物、すなわち本発明のペプチドの発現を阻害する活性を有する化合物として選択することができる。
試験化合物としては、前記と同様のものが使用される。
形質転換体の培養は、前記の本発明の形質転換体と同様にして行うことができる。
レポーター遺伝子のベクター構築やアッセイ法は公知の技術に従うことができる（例えば、Molecular Biotechnology 13, 29-43, 1999）。
【００７５】
本発明のペプチドの発現を促進する活性を有する化合物は、本発明のペプチドの作用を増強することができるので、本発明のペプチドと同様に安全で低毒性な医薬として有用である。
逆に、本発明のペプチドの発現を阻害する活性を有する化合物は、本発明のペプチドが有する生理活性を抑制することができるので、本発明のペプチドの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから選ばれた化合物である。該化合物の塩としては、前記した本発明のペプチドの塩と同様のものが用いられる。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物を上述の治療・予防剤として使用する場合、常套手段に従って実施することができる。例えば、前記した本発明のペプチドを含有する医薬と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすることができる。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、本発明のペプチドの発現を促進する化合物を経口投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇ当たり）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のペプチドの発現を促進する化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇ当たり）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００７６】
より具体的には、本発明のペプチドが、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩである場合、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を促進または阻害する化合物またはその塩は、安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌調節剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤などとして有用である。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を促進する化合物またはその塩は、安全で低毒性な医薬、例えば、中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)の予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌促進剤などとして有用である。
一方、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を阻害する化合物またはその塩は、安全で低毒性な医薬、例えば、本発明のペプチドＦの過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患の予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌阻害剤などとして有用である。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を促進または阻害する化合物またはその塩は、プロラクチン分泌の調節作用剤として有用である。すなわち、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を促進または阻害する化合物またはその塩がプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進剤として、プロラクチン分泌不全に関係する各種疾患、例えば、卵巣機能低下症、精嚢発育不全、骨粗鬆症、更年期障害、乳汁分泌不全、甲状腺機能低下、腎不全などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、本発明のペプチドＦの発現を促進または阻害する化合物またはその塩がプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進作用に基づく性欲促進作用（フェロモン的作用）を有するため、性欲促進剤としても有用である。
本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を促進または阻害する化合物またはその塩がプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制剤として、プロラクチン過剰分泌に関係する各種疾患、例えば、高プロラクチン血症、下垂体腺腫瘍、間脳腫瘍、月経異常、ストレス、自己免疫疾患、プロラクチノーマ、不妊症、インポテンス、無月経症、乳汁漏症、末端肥大症、キアリ・フロンメル（Chiari-Frommel）症候群、アルゴンツ-デル・カスティロ（Argonz-del Castilo）症候群、フォーベス・アルブライト（Forbes-Albright）症候群、乳癌リンパ腫またはシーハン症候群または精子形成異常などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を促進または阻害する化合物またはその塩がプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制作用に基づいて、避妊薬としても有用である。
その他、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を促進または阻害する化合物またはその塩は、プロラクチン分泌機能を調べるための検査薬としても、また、ウシ、ヤギ、ブタなどの畜産哺乳動物の乳汁の分泌促進剤などの動物薬としても有用であり、さらには該畜産哺乳動物体内で有用物質を生産させ、これをその乳汁中への分泌することによる有用物質生産などへの応用できる。
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を促進または阻害する化合物またはその塩は、胎盤機能調節作用を有するため、絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防または治療薬としても有用である。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を促進または阻害する化合物またはその塩は、安全で低毒性な医薬、例えば、高血圧、自己免疫疾患、心不全、白内障、緑内障、急性バクテリア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アルツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテリア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食症，火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸がん），クローン病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性腎症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコバクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨軟化症，骨減少症，骨粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺がん，逆流性食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分裂症，敗血症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマトーサス，一過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴呆，創傷治癒，不眠症，関節炎、下垂体ホルモン分泌不全、瀕尿、尿毒症、または神経変成疾患等の疾病の治療・予防剤などの医薬として有用できる。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を促進または阻害する化合物またはその塩は、MACULAR EDEMA CYSTOID（嚢胞状黄斑浮腫）の疾病の治療・予防剤などの医薬として使用することができる。
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現を促進または阻害する化合物またはその塩は、例えば、（１）先端巨大症、ＴＳＨ産生腫瘍、非分泌性（非機能性）下垂体腫瘍、異所性ＡＣＴＨ（アドレノコルチコトロピン）産生腫瘍、髄様甲状腺癌、ＶＩＰ産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、インスリノーマ、カルチノイドなどの腫瘍の治療薬、（２）インスリン依存性または非依存性糖尿病、あるいはこれら糖尿病に関連した種々の疾患、すなわち糖尿病合併症（例、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、ドーン症候群、起立性低血圧症など）の治療薬、（３）高インスリン血症の改善または食欲の抑制などによる肥満、過食症などの治療薬、（４）急性膵炎、慢性膵炎、膵臓・腸フィステル、出血性潰瘍、消化性潰瘍、胃炎、胃酸過多症、逆流性食道炎などの治療薬、（５）ヘリコバクター・ピロリ菌感染に伴う様々な症状の改善剤（例、ガストリン分泌昂進の抑制剤など）、（６）内視鏡胆道膵管造影に伴うアミラーゼの分泌抑制剤、さらには膵臓外科手術の予後治療薬、（７）小腸の吸収能低下、分泌昂進または消化管の運動能異常に起因する下痢（例、Ｓｈｏｒｔ ｂｏｗｅｌ症候群など）、癌化学療法などの薬物に起因する下痢、先天性小腸萎縮に起因する下痢、ＶＩＰ産生腫瘍などの神経内分泌腫瘍に起因する下痢、ＡＩＤＳに起因する下痢、骨髄移植などに伴う対宿主移植片反応に起因する下痢、糖尿病に起因する下痢、腹腔神経叢遮断に起因する下痢、全身性硬化症に起因する下痢、好酸球増加症に起因する下痢などの治療薬、（８）ダンピング症候群、過敏性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患などの治療薬、（９）腫瘍または癌（例、甲状腺癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、胆管癌、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌、メラノーマ、骨肉腫、軟骨肉腫、悪性褐色細胞腫、神経芽細胞腫、脳腫瘍、胸腺腫、腎臓癌など）、白血病（例、好塩基性白血球の白血病・慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン性リンパ腫など）などの治療薬；該治療薬は、単独または他の制癌剤（例、タモキシフエン、ＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、インターフェロン−α、βおよびγ、インターロイキン−２など）と併用して用いることができる、（１０）肥大性心筋症、動脈硬化症、心弁膜症、心筋梗塞（特に、経皮経管冠動脈形成術後の心解梗塞）、再血管形成の予防・治療薬、（１１）食道静脈癌出血、肝硬変、末梢血管疾患の治療薬、（１２）免疫系に作用する生理活性物質（例、サブスタンスＰ、タヒキニン、サイトカインなど）の分泌の調節作用に基づき、例えば、全身性または局所性の炎症に伴う疾患（例、多発性動脈炎、リュウマチ性関節炎、乾せん、日焼け、湿疹、アレルギー（例、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎など）など）の治療薬、（１３）神経調節因子の産生・分泌に影響を及ぼすことから、例えば、痴呆症（例、アルツハイマー病、アルツハイマー型老年期痴呆、血管性・多発性痴呆など）、精神分裂症、てんかん、うつ病、一般不安障害、睡眠障害、多発性硬化症などの治療薬、（１４）眼疾患（例、緑内障など）などの治療薬、（１５）急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、重症全身性真菌感染症、結核、脊髄損傷、骨折、肝不全、肺炎、アルコール性肝炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＡＩＤＳ感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、インフルエンザ感染症、癌転移、多発性骨髄腫、骨軟化症、骨粗しょう症、骨ベーチェット症、腎炎、腎不全、敗血症、敗血症ショック、高カルシウム血症、高コレステロール血症、高グリセリド血症、高脂血症、全身性エリテマトーサス、一過性脳虚血発作、アルコール性肝炎などの予防・治療薬として有用であり、（１６）臓器移植、火傷、創傷、脱毛症などの治癒などにも用いられ、（１７）慢性あるいは急性疼痛（例、術後疼痛、炎症性疼痛、歯痛、骨疾患（例、関節炎、リウマチ、骨粗鬆症など）にともなう疼痛）の抑制・緩和など、鎮痛剤としても有用である。
これらの医薬は前記と同様に製剤化して、使用することができる。
【００７７】
（２−３）本発明のペプチドの酵素活性を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法
本発明のペプチドまたは本発明のポリヌクレオチドは、本発明のペプチドの酵素活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法に使用することができる。
すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明のペプチドに、試験化合物の存在下および非存在下で基質を添加した場合における、それぞれの生成物の生産量または生成物の活性を測定し、比較することを特徴とする本発明のペプチドの酵素活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
（ii）▲１▼本発明のペプチドを発現し得る細胞にＲＩ標識化された基質を接触させて培養した場合と▲２▼本発明のペプチドを発現し得る細胞にＲＩ標識化された基質および試験化合物を接触させて培養した場合とにおける、生成物の生成量または生成物の活性を測定し、比較することを特徴とする本発明のペプチドの酵素活性を促進または阻害する活性を有する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
本発明のペプチドを発現し得る細胞の培養方法は、前記した本発明の形質変換体の培養法と同様である。
試験化合物としては、前記と同様のものを用いることができる。
酵素活性は公知の方法を用いて測定することができる。
【００７８】
例えば、上記（ii）の場合における酵素活性が上記（i）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上上昇させる試験化合物を本発明のペプチドの酵素活性を促進する化合物として、上記（ii）の場合における酵素活性が上記（i）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上減少させる試験化合物を本発明のペプチドの酵素活性を阻害する化合物として選択することができる。
本発明のペプチドの酵素活性を促進する活性を有する化合物は、本発明のペプチドの作用を増強することができるので、本発明のペプチドと同様に安全で低毒性な医薬として有用である。
逆に、本発明のペプチドの酵素活性を阻害する活性を有する化合物は、本発明のペプチドの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから選ばれた化合物である。該化合物の塩としては、前記した本発明のペプチドの塩と同様のものが用いられる。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物を上述の治療・予防剤として使用する場合、常套手段に従って実施することができる。例えば、前記した本発明のペプチドを含有する医薬と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすることができる。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、本発明のペプチドの酵素活性を促進する化合物を経口投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇ当たり）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のペプチドの酵素活性を促進する化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇ当たり）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００７９】
（２−４）本発明のペプチドの転写因子活性を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法
本発明のペプチドまたは本発明のオリゴヌクレオチドは、本発明のペプチドの転写因子活性を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法に使用することができる。
すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明のペプチドが結合するＤＮＡ配列（例、プロモーター領域、エンハンサー領域）の下流に選択マーカー遺伝子を結合させたＤＮＡを含むベクターで形質転換された形質転換体を、本発明のペプチドの存在下で培養した場合と本発明のペプチドおよび試験化合物の存在下で培養した場合における、それぞれの選択マーカー活性を測定し、比較することを特徴とする本発明のペプチドの転写因子活性を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法を提供する。
選択マーカー遺伝子としては、前記のレポーター遺伝子や薬剤耐性遺伝子が用いられる（新生化学実験講座２、核酸III、3.6動物細胞発現ベクター、p84-103）。
薬剤耐性遺伝子と薬剤の組み合わせとしては、
（１）ピューロマイシン-N-アセチルトランスフェラーゼ遺伝子とピューロマイシンとの組み合わせ、
（２）アミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ遺伝子（APH）とG418との組み合わせ、
（３）ハイグロマイシンBホスホトランスフェラーゼ遺伝子（HPH）とハイグロマイシンBとの組み合わせ、
（４）キサンチン-グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（XGPRT）とマイコフェノール酸との組み合わせ、などを用いることができる。
また、親株の細胞株がヒポキサンチン-グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（HGPRT）またはチミジンキナーゼ（TK）欠損株である場合、これらの遺伝子とHAT（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）との組み合わせを用いることができる。
さらに、選択マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸還元酵素やアンピシリン耐性遺伝子などを用いることもできる。
これらの第一および第二の組換え遺伝子構築物を含有するベクターには、以上の他に、所望によりエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加シグナル、その他の選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを付加させても良い。
試験化合物としては、前記と同様のものを用いることができる。
レポーター活性は公知の方法を用いて測定することができる。
例えば、上記（ii）の場合におけるレポーター活性が上記（i）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上上昇させる試験化合物を本発明のペプチドの転写因子活性を促進する化合物として、上記（ii）の場合におけるレポーター活性が上記（i）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上減少させる試験化合物を本発明のペプチドの転写因子活性を阻害する化合物として選択することができる。
【００８０】
本発明のペプチドの転写因子活性を促進する活性を有する化合物は、本発明のペプチドの作用を増強することができるので、本発明のペプチドと同様に安全で低毒性な医薬として有用である。
逆に、本発明のペプチドの転写因子活性を阻害する活性を有する化合物は、本発明のペプチドの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから選ばれた化合物である。該化合物の塩としては、前記した本発明のペプチドの塩と同様のものが用いられる。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物を上述の治療・予防剤として使用する場合、常套手段に従って実施することができる。例えば、前記した本発明のペプチドを含有する医薬と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすることができる。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、本発明のペプチドの転写因子活性を促進する化合物を経口投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇ当たり）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のペプチドの転写因子活性を促進する化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇ当たり）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００８１】
（２−５）本発明のペプチドのタンパク質結合活性を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法
本発明のペプチド、本発明のオリゴヌクレオチドまたは本発明の形質転換体は、本発明のペプチドのタンパク質結合活性を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法に使用することができる。
すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明のペプチドまたはそれを含有する細胞と、本発明のペプチドが結合するタンパク質またはそれを含有する細胞とを、試験化合物の存在下および非存在下で接触させた場合における、それぞれの▲１▼両者の結合活性を測定するか、または▲２▼両細胞の形態変化を観察、比較することを特徴とする本発明のペプチドのタンパク質結合活性を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法を提供する。
本発明のペプチドを含有する細胞は、前記した本発明の形質転換体を用いることができる。
本発明のペプチドが結合するタンパク質またはそれを含有する細胞も同様にして製造することができる。
試験化合物としては、前記と同様のものを用いることができる。
両者の結合活性は公知の方法を用いて測定することができる。
両細胞の形態変化は公知の方法を用いて観察すことができる。
例えば、上記のスクリーニング方法において、タンパク質結合活性を約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上上昇させる試験化合物を本発明のペプチドのタンパク質結合活性を促進する化合物として、逆にタンパク質結合活性を約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上減少させる試験化合物を本発明のペプチドのタンパク質結合活性を阻害する化合物として選択することができる。
【００８２】
本発明のペプチドのタンパク質結合活性を促進する活性を有する化合物は、本発明のペプチドの作用を増強することができるので、本発明のペプチドと同様に安全で低毒性な医薬として有用である。
逆に、本発明のペプチドのタンパク質結合活性を阻害する活性を有する化合物は、本発明のペプチドの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから選ばれた化合物である。該化合物の塩としては、前記した本発明のペプチドの塩と同様のものが用いられる。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物を上述の治療・予防剤として使用する場合、常套手段に従って実施することができる。例えば、前記した本発明のペプチドを含有する医薬と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすることができる。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、本発明のペプチドのタンパク質結合活性を促進する化合物を経口投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇ当たり）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のペプチドのタンパク質結合活性を促進する化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇ当たり）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００８３】
（３）本発明のペプチドの定量
本発明の抗体は、本発明のペプチドを特異的に認識することができるので、被検液中の本発明のペプチドの定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定量などに使用することができる。
すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標識化された本発明のペプチドとを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化された本発明のペプチドの割合を測定することを特徴とする被検液中の本発明のペプチドの定量法、および
（ii）被検液と担体上に不溶化した本発明の抗体および標識化された本発明の別の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中の本発明のペプチドの定量法を提供する。
【００８４】
上記（ii）の定量法においては、一方の抗体が本発明のペプチドのＮ端部を認識する抗体で、他方の抗体が本発明のペプチドのＣ端部に反応する抗体であることが望ましい。
また、本発明のペプチドに対するモノクローナル抗体を用いて本発明のペプチドの定量を行うことができるほか、組織染色等による検出を行なうこともできる。これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子のＦ(ａｂ')2、Ｆａｂ'、あるいはＦａｂ画分を用いてもよい。
本発明の抗体を用いる本発明のペプチドの定量法は、 特に制限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量（例えば、ペプチド量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好ましい。
【００８５】
標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、例えば、〔125Ｉ〕、〔131Ｉ〕、〔3Ｈ〕、〔14Ｃ〕などが用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大きなものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍光物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレッセンイソチオシアネートなどが用いられる。発光物質としては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが用いられる。さらに、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−アビジン系を用いることもできる。
抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物理吸着を用いてもよく、また通常ペプチドあるいは酵素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用いる方法でもよい。担体としては、アガロース、デキストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、あるいはガラス等があげられる。
サンドイッチ法においては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノクローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中の本発明のペプチド量を定量することができる。１次反応と２次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行なってもよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができる。また、サンドイッチ法による免疫測定法において、固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。
【００８６】
本発明のサンドイッチ法による本発明のペプチドの測定法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発明のモノクローナル抗体は、本発明のペプチドの結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例えば、２次反応で用いられる抗体が、本発明のペプチドのＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗体が用いられる。
本発明のモノクローナル抗体をサンドイッチ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメトリック法あるいはネフロメトリーなどに用いることができる。
競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原(Ｆ）と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコール、前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、および、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるいは、第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相化抗体を用いる固相化法とが用いられる。
イムノメトリック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離するか、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。
また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるいは溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の量を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。
これら個々の免疫学的測定法を本発明の定量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発明のペプチドの測定系を構築すればよい。これらの一般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参照することができる。
例えば、入江 寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和４９年発行）、入江 寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」 Vol. 70(Immunochemical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunochemical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunochemical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochemical Techniques(Part D : Selected Immunoassays))、 同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E : Monoclonal Antibodies and General Immunoassay Methods))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part I : Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照することができる。
以上のようにして、本発明の抗体を用いることによって、本発明のペプチドを感度良く定量することができる。
【００８７】
さらには、本発明の抗体を用いて本発明のペプチドの濃度を定量することによって、本発明のペプチドの濃度の減少が検出された場合、例えば、本発明のペプチドの機能不全に関連する疾患である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
また、本発明のペプチドの濃度の増加が検出された場合には、例えば、本発明のペプチドの過剰発現に起因する疾患である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの機能不全に関連する疾患または過剰発現に起因する疾患としては、例えば、
（ｉ）中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)、
（ii）プロラクチン分泌不全に関係する各種疾患、例えば、卵巣機能低下症、精嚢発育不全、骨粗鬆症、更年期障害、乳汁分泌不全、甲状腺機能低下、腎不全、
（iii）プロラクチン過剰分泌に関係する各種疾患、例えば、高プロラクチン血症、下垂体腺腫瘍、間脳腫瘍、月経異常、ストレス、自己免疫疾患、プロラクチノーマ、不妊症、インポテンス、無月経症、乳汁漏症、末端肥大症、キアリ・フロンメル（Chiari-Frommel）症候群、アルゴンツ-デル・カスティロ（Argonz-del Castilo）症候群、フォーベス・アルブライト（Forbes-Albright）症候群、乳癌リンパ腫またはシーハン症候群または精子形成異常、
（iv）絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発、
（ｖ）高血圧、自己免疫疾患、心不全、白内障、緑内障、急性バクテリア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アルツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテリア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食症，火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸がん），クローン病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性腎症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコバクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨軟化症，骨減少症，骨粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺がん，逆流性食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分裂症，敗血症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマトーサス，一過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴呆，創傷治癒，不眠症，関節炎、下垂体ホルモン分泌不全、瀕尿、尿毒症、または神経変成疾患、
（vi）MACULAR EDEMA CYSTOID（嚢胞状黄斑浮腫）、
（vii）先端巨大症、ＴＳＨ産生腫瘍、非分泌性（非機能性）下垂体腫瘍、異所性ＡＣＴＨ（アドレノコルチコトロピン）産生腫瘍、髄様甲状腺癌、ＶＩＰ産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、インスリノーマ、カルチノイド、
（viii）インスリン依存性または非依存性糖尿病、あるいはこれら糖尿病に関連した種々の疾患、すなわち糖尿病合併症（例、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、ドーン症候群、起立性低血圧症など）、
（ix）高インスリン血症の改善または食欲の抑制などによる肥満、過食症、
（x）急性膵炎、慢性膵炎、膵臓・腸フィステル、出血性潰瘍、消化性潰瘍、胃炎、胃酸過多症、逆流性食道炎、
（xi）ヘリコバクター・ピロリ菌感染に伴う様々な症状（例、ガストリン分泌昂進など）、
（xii）内視鏡胆道膵管造影に伴うアミラーゼの分泌抑制、
（xiii）小腸の吸収能低下、分泌昂進または消化管の運動能異常に起因する下痢（例、Ｓｈｏｒｔ ｂｏｗｅｌ症候群など）、癌化学療法などの薬物に起因する下痢、先天性小腸萎縮に起因する下痢、ＶＩＰ産生腫瘍などの神経内分泌腫瘍に起因する下痢、ＡＩＤＳに起因する下痢、骨髄移植などに伴う対宿主移植片反応に起因する下痢、糖尿病に起因する下痢、腹腔神経叢遮断に起因する下痢、全身性硬化症に起因する下痢、好酸球増加症に起因する下痢、
（xiv）ダンピング症候群、過敏性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、
（xv）腫瘍または癌（例、甲状腺癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、胆管癌、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌、メラノーマ、骨肉腫、軟骨肉腫、悪性褐色細胞腫、神経芽細胞腫、脳腫瘍、胸腺腫、腎臓癌など）、白血病（例、好塩基性白血球の白血病・慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン性リンパ腫など）、
（xvi）肥大性心筋症、動脈硬化症、心弁膜症、心筋梗塞（特に、経皮経管冠動脈形成術後の心解梗塞）、再血管形成、
（xvii）食道静脈癌出血、肝硬変、末梢血管疾患、
（xviii）全身性または局所性の炎症に伴う疾患（例、多発性動脈炎、リュウマチ性関節炎、乾せん、日焼け、湿疹、アレルギー（例、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎など）など）、
（xix）痴呆症（例、アルツハイマー病、アルツハイマー型老年期痴呆、血管性・多発性痴呆など）、精神分裂症、てんかん、うつ病、一般不安障害、睡眠障害、多発性硬化症、
（xx）眼疾患（例、緑内障など）、
（xxi）急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、重症全身性真菌感染症、結核、脊髄損傷、骨折、肝不全、肺炎、アルコール性肝炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＡＩＤＳ感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、インフルエンザ感染症、癌転移、多発性骨髄腫、骨軟化症、骨粗しょう症、骨ベーチェット症、腎炎、腎不全、敗血症、敗血症ショック、高カルシウム血症、高コレステロール血症、高グリセリド血症、高脂血症、全身性エリテマトーサス、一過性脳虚血発作、アルコール性肝炎、
（xxii）臓器移植、火傷、創傷、脱毛症、
（xxiii）慢性あるいは急性疼痛（例、術後疼痛、炎症性疼痛、歯痛、骨疾患（例、関節炎、リウマチ、骨粗鬆症など）にともなう疼痛）、
（xxiv）痛み、などが挙げられる。
また、本発明の抗体は、体液や組織などの被検体中に存在する本発明のペプチドを検出するために使用することができる。また、本発明のペプチドを精製するために使用する抗体カラムの作製、精製時の各分画中の本発明のペプチドの検出、被検細胞内における本発明のペプチドの挙動の分析などのために使用することができる。
【００８８】
（４）遺伝子診断剤
本発明のポリヌクレオチドまたは本発明のアンチセンスポリヌクレオチドは、例えば、プローブとして使用することにより、ヒトまたは温血動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、など）における本発明のペプチドをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤として有用である。
本発明のポリヌクレオチドまたは本発明のアンチセンスポリヌクレオチドを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、自体公知のノーザンハイブリダイゼーションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Genomics），第５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ユーエスエー（Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America），第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１９８９年））などにより実施することができる。
例えば、ノーザンハイブリダイゼーションにより発現低下が検出された場合は、 例えば、本発明のペプチドの機能不全に関連する疾患である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
また、ノーザンハイブリダイゼーションにより発現過多が検出された場合は、例えば、本発明のペプチドの過剰発現に起因する疾患である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの発現低下または過剰発現に起因する疾患としては、例えば、
（ｉ）中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)、
（ii）プロラクチン分泌不全に関係する各種疾患、例えば、卵巣機能低下症、精嚢発育不全、骨粗鬆症、更年期障害、乳汁分泌不全、甲状腺機能低下、腎不全、
（iii）プロラクチン過剰分泌に関係する各種疾患、例えば、高プロラクチン血症、下垂体腺腫瘍、間脳腫瘍、月経異常、ストレス、自己免疫疾患、プロラクチノーマ、不妊症、インポテンス、無月経症、乳汁漏症、末端肥大症、キアリ・フロンメル（Chiari-Frommel）症候群、アルゴンツ-デル・カスティロ（Argonz-del Castilo）症候群、フォーベス・アルブライト（Forbes-Albright）症候群、乳癌リンパ腫またはシーハン症候群または精子形成異常、
（iv）絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発、
（ｖ）高血圧、自己免疫疾患、心不全、白内障、緑内障、急性バクテリア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アルツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテリア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食症，火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸がん），クローン病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性腎症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコバクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨軟化症，骨減少症，骨粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺がん，逆流性食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分裂症，敗血症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマトーサス，一過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴呆，創傷治癒，不眠症，関節炎、下垂体ホルモン分泌不全、瀕尿、尿毒症、または神経変成疾患、
（vi）MACULAR EDEMA CYSTOID（嚢胞状黄斑浮腫）、
（vii）先端巨大症、ＴＳＨ産生腫瘍、非分泌性（非機能性）下垂体腫瘍、異所性ＡＣＴＨ（アドレノコルチコトロピン）産生腫瘍、髄様甲状腺癌、ＶＩＰ産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、インスリノーマ、カルチノイド、
（viii）インスリン依存性または非依存性糖尿病、あるいはこれら糖尿病に関連した種々の疾患、すなわち糖尿病合併症（例、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、ドーン症候群、起立性低血圧症など）、
（ix）高インスリン血症の改善または食欲の抑制などによる肥満、過食症、
（x）急性膵炎、慢性膵炎、膵臓・腸フィステル、出血性潰瘍、消化性潰瘍、胃炎、胃酸過多症、逆流性食道炎、
（xi）ヘリコバクター・ピロリ菌感染に伴う様々な症状（例、ガストリン分泌昂進など）、
（xii）内視鏡胆道膵管造影に伴うアミラーゼの分泌抑制、
（xiii）小腸の吸収能低下、分泌昂進または消化管の運動能異常に起因する下痢（例、Ｓｈｏｒｔ ｂｏｗｅｌ症候群など）、癌化学療法などの薬物に起因する下痢、先天性小腸萎縮に起因する下痢、ＶＩＰ産生腫瘍などの神経内分泌腫瘍に起因する下痢、ＡＩＤＳに起因する下痢、骨髄移植などに伴う対宿主移植片反応に起因する下痢、糖尿病に起因する下痢、腹腔神経叢遮断に起因する下痢、全身性硬化症に起因する下痢、好酸球増加症に起因する下痢、
（xiv）ダンピング症候群、過敏性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、
（xv）腫瘍または癌（例、甲状腺癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、胆管癌、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌、メラノーマ、骨肉腫、軟骨肉腫、悪性褐色細胞腫、神経芽細胞腫、脳腫瘍、胸腺腫、腎臓癌など）、白血病（例、好塩基性白血球の白血病・慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン性リンパ腫など）、
（xvi）肥大性心筋症、動脈硬化症、心弁膜症、心筋梗塞（特に、経皮経管冠動脈形成術後の心解梗塞）、再血管形成、
（xvii）食道静脈癌出血、肝硬変、末梢血管疾患、
（xviii）全身性または局所性の炎症に伴う疾患（例、多発性動脈炎、リュウマチ性関節炎、乾せん、日焼け、湿疹、アレルギー（例、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎など）など）、
（xix）痴呆症（例、アルツハイマー病、アルツハイマー型老年期痴呆、血管性・多発性痴呆など）、精神分裂症、てんかん、うつ病、一般不安障害、睡眠障害、多発性硬化症、
（xx）眼疾患（例、緑内障など）、
（xxi）急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、重症全身性真菌感染症、結核、脊髄損傷、骨折、肝不全、肺炎、アルコール性肝炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＡＩＤＳ感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、インフルエンザ感染症、癌転移、多発性骨髄腫、骨軟化症、骨粗しょう症、骨ベーチェット症、腎炎、腎不全、敗血症、敗血症ショック、高カルシウム血症、高コレステロール血症、高グリセリド血症、高脂血症、全身性エリテマトーサス、一過性脳虚血発作、アルコール性肝炎、
（xxii）臓器移植、火傷、創傷、脱毛症、
（xxiii）慢性あるいは急性疼痛（例、術後疼痛、炎症性疼痛、歯痛、骨疾患（例、関節炎、リウマチ、骨粗鬆症など）にともなう疼痛）、
（xxiv）痛み、などが挙げられる。
【００８９】
（５）アンチセンスポリヌクレオチドを含有する医薬
本発明のポリヌクレオチド（例、ＤＮＡ）に相補的に結合し、該ポリヌクレオチド（例、ＤＮＡ）の発現を抑制することができる本発明のアンチセンスポリヌクレオチドは低毒性であり、生体内における本発明のレセプター蛋白質または本発明のポリヌクレオチド（例、ＤＮＡ）の機能を抑制することができるので、例えば、本発明のペプチドの過剰発現に起因する疾患の予防・治療剤として用いることができる。
具体的には、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチドは、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの機能を阻害することができるので、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの活性を抑制する安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌阻害剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患の予防・治療剤などとして有用である。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチドはプロラクチン分泌の調節剤として有用である。すなわち、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチドがプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進剤として、プロラクチン分泌不全に関係する各種疾患、例えば、卵巣機能低下症、精嚢発育不全、骨粗鬆症、更年期障害、乳汁分泌不全、甲状腺機能低下、腎不全などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチドがプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進作用に基づく性欲促進作用（フェロモン的作用）を有するため、性欲促進剤としても有用である。
本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチドがプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制剤として、プロラクチン過剰分泌に関係する各種疾患、例えば、高プロラクチン血症、下垂体腺腫瘍、間脳腫瘍、月経異常、ストレス、自己免疫疾患、プロラクチノーマ、不妊症、インポテンス、無月経症、乳汁漏症、末端肥大症、キアリ・フロンメル（Chiari-Frommel）症候群、アルゴンツ-デル・カスティロ（Argonz-del Castilo）症候群、フォーベス・アルブライト（Forbes-Albright）症候群、乳癌リンパ腫またはシーハン症候群または精子形成異常などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチドがプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制作用に基づいて、避妊薬としても有用である。
その他、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチは、プロラクチン分泌機能を調べるための検査薬としても、また、ウシ、ヤギ、ブタなどの哺乳動物の乳汁の分泌促進剤などの動物薬としても有用であり、さらには該哺乳動物体内で有用物質を生産させ、これをその乳汁中への分泌することによる有用物質生産などへの応用できる。
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチは、絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防または治療薬としても有用である。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチは、例えば、高血圧、自己免疫疾患、心不全、白内障、緑内障、急性バクテリア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アルツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテリア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食症，火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸がん），クローン病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性腎症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコバクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨軟化症，骨減少症，骨粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺がん，逆流性食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分裂症，敗血症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマトーサス，一過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴呆，創傷治癒，不眠症，関節炎、下垂体ホルモン分泌不全、瀕尿、尿毒症、または神経変成疾患等の疾病の治療・予防剤などの医薬として有用できる。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチは、MACULAR EDEMA CYSTOID（嚢胞状黄斑浮腫）の疾病の治療・予防剤などの医薬として使用することができる。
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するアンチセンスポリヌクレオチは、例えば、（１）先端巨大症、ＴＳＨ産生腫瘍、非分泌性（非機能性）下垂体腫瘍、異所性ＡＣＴＨ（アドレノコルチコトロピン）産生腫瘍、髄様甲状腺癌、ＶＩＰ産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、インスリノーマ、カルチノイドなどの腫瘍の治療薬、（２）インスリン依存性または非依存性糖尿病、あるいはこれら糖尿病に関連した種々の疾患、すなわち糖尿病合併症（例、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、ドーン症候群、起立性低血圧症など）の治療薬、（３）高インスリン血症の改善または食欲の抑制などによる肥満、過食症などの治療薬、（４）急性膵炎、慢性膵炎、膵臓・腸フィステル、出血性潰瘍、消化性潰瘍、胃炎、胃酸過多症、逆流性食道炎などの治療薬、（５）ヘリコバクター・ピロリ菌感染に伴う様々な症状の改善剤（例、ガストリン分泌昂進の抑制剤など）、（６）内視鏡胆道膵管造影に伴うアミラーゼの分泌抑制剤、さらには膵臓外科手術の予後治療薬、（７）小腸の吸収能低下、分泌昂進または消化管の運動能異常に起因する下痢（例、Ｓｈｏｒｔ ｂｏｗｅｌ症候群など）、癌化学療法などの薬物に起因する下痢、先天性小腸萎縮に起因する下痢、ＶＩＰ産生腫瘍などの神経内分泌腫瘍に起因する下痢、ＡＩＤＳに起因する下痢、骨髄移植などに伴う対宿主移植片反応に起因する下痢、糖尿病に起因する下痢、腹腔神経叢遮断に起因する下痢、全身性硬化症に起因する下痢、好酸球増加症に起因する下痢などの治療薬、（８）ダンピング症候群、過敏性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患などの治療薬、（９）腫瘍または癌（例、甲状腺癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、胆管癌、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌、メラノーマ、骨肉腫、軟骨肉腫、悪性褐色細胞腫、神経芽細胞腫、脳腫瘍、胸腺腫、腎臓癌など）、白血病（例、好塩基性白血球の白血病・慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン性リンパ腫など）などの治療薬；該治療薬は、単独または他の制癌剤（例、タモキシフエン、ＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、インターフェロン−α、βおよびγ、インターロイキン−２など）と併用して用いることができる、（１０）肥大性心筋症、動脈硬化症、心弁膜症、心筋梗塞（特に、経皮経管冠動脈形成術後の心解梗塞）、再血管形成の予防・治療薬、（１１）食道静脈癌出血、肝硬変、末梢血管疾患の治療薬、（１２）免疫系に作用する生理活性物質（例、サブスタンスＰ、タヒキニン、サイトカインなど）の分泌の調節作用に基づき、例えば、全身性または局所性の炎症に伴う疾患（例、多発性動脈炎、リュウマチ性関節炎、乾せん、日焼け、湿疹、アレルギー（例、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎など）など）の治療薬、（１３）神経調節因子の産生・分泌に影響を及ぼすことから、例えば、痴呆症（例、アルツハイマー病、アルツハイマー型老年期痴呆、血管性・多発性痴呆など）、精神分裂症、てんかん、うつ病、一般不安障害、睡眠障害、多発性硬化症などの治療薬、（１４）眼疾患（例、緑内障など）などの治療薬、（１５）急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、重症全身性真菌感染症、結核、脊髄損傷、骨折、肝不全、肺炎、アルコール性肝炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＡＩＤＳ感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、インフルエンザ感染症、癌転移、多発性骨髄腫、骨軟化症、骨粗しょう症、骨ベーチェット症、腎炎、腎不全、敗血症、敗血症ショック、高カルシウム血症、高コレステロール血症、高グリセリド血症、高脂血症、全身性エリテマトーサス、一過性脳虚血発作、アルコール性肝炎などの予防・治療薬として有用であり、（１６）臓器移植、火傷、創傷、脱毛症などの治癒などにも用いられ、（１７）慢性あるいは急性疼痛（例、術後疼痛、炎症性疼痛、歯痛、骨疾患（例、関節炎、リウマチ、骨粗鬆症など）にともなう疼痛）の抑制・緩和など、鎮痛剤としても有用である。
【００９０】
上記アンチセンスポリヌクレオチドを上記の治療・予防剤として使用する場合は、該アンチセンスポリヌクレオチドを、上記した本発明のポリヌクレオチドの場合と同様にして製剤化することができる。
このようにして得られる製剤は低毒性であり、ヒトまたは哺乳動物（例、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して経口的または非経口的に投与することができる。
なお、該アンチセンスポリヌクレオチドは、そのままで、あるいは摂取促進用の補助剤などの生理学的に認められる担体とともに、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与することもできる。
該アンチセンスポリヌクレオチドの投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより異なるが、例えば、癌の治療の目的で本発明のアンチセンスヌクレオチドを臓器（例、肝臓、肺、心臓、腎臓など）に局所投与する場合、成人（体重60 ｋｇ）に対して、一日あたり約0.1〜100 ｍｇである。
さらに、該アンチセンスポリヌクレオチドは、組織や細胞における本発明のＤＮＡの存在やその発現状況を調べるための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用することもできる。
【００９１】
本発明は、さらに
▲１▼本発明のペプチドをコードするＲＮＡの一部とそれに相補的なＲＮＡとを含有する二重鎖ＲＮＡ、
▲２▼前記二重鎖ＲＮＡを含有してなる医薬、
▲３▼本発明のペプチドをコードするＲＮＡの一部を含有するリボザイム、
▲４▼前記リボザイムを含有してなる医薬を提供する。
これらの二重鎖ＲＮＡ（RNAi；RNA interference法）、リボザイムなどは、上記アンチセンスポリヌクレオチドと同様に、本発明のポリヌクレオチド（例、ＤＮＡ）の発現を抑制することができ、生体内における本発明のペプチド、Ｇ、ＨまたはＩまたはそれをコードする本発明のポリヌクレオチド（例、ＤＮＡ）の機能を抑制することができるので、例えば、本発明のペプチド、Ｇ、ＨまたはＩの過剰発現に起因する疾患（例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌阻害剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患）の予防・治療剤として用いることができる。
さらには、該二重鎖ＲＮＡ（RNAi；RNA interference法）またはリボザイムはプロラクチン分泌の調節作用剤として有用である。すなわち、該二重鎖ＲＮＡ（RNAi；RNA interference法）またはリボザイムがプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進剤として、プロラクチン分泌不全に関係する各種疾患、例えば、卵巣機能低下症、精嚢発育不全、骨粗鬆症、更年期障害、乳汁分泌不全、甲状腺機能低下、腎不全などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、該二重鎖ＲＮＡ（RNAi；RNA interference法）またはリボザイムがプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進作用に基づく性欲促進作用（フェロモン的作用）を有するため、性欲促進剤としても有用である。
該二重鎖ＲＮＡ（RNAi；RNA interference法）またはリボザイムがプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制剤として、プロラクチン過剰分泌に関係する各種疾患、例えば、高プロラクチン血症、下垂体腺腫瘍、間脳腫瘍、月経異常、ストレス、自己免疫疾患、プロラクチノーマ、不妊症、インポテンス、無月経症、乳汁漏症、末端肥大症、キアリ・フロンメル（Chiari-Frommel）症候群、アルゴンツ-デル・カスティロ（Argonz-del Castilo）症候群、フォーベス・アルブライト（Forbes-Albright）症候群、乳癌リンパ腫またはシーハン症候群または精子形成異常などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、該二重鎖ＲＮＡ（RNAi；RNA interference法）またはリボザイムがプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制作用に基づいて、避妊薬としても有用である。
その他、該二重鎖ＲＮＡ（RNAi；RNA interference法）またはリボザイムは、プロラクチン分泌機能を調べるための検査薬としても、また、ウシ、ヤギ、ブタなどの畜産哺乳動物の乳汁の分泌促進剤などの動物薬としても有用であり、さらには該畜産哺乳動物体内で有用物質を生産させ、これをその乳汁中への分泌することによる有用物質生産などへの応用できる。
さらに、該二重鎖ＲＮＡ（RNAi；RNA interference法）またはリボザイムは、絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防または治療薬としても有用である。
また、該二重鎖ＲＮＡ（RNAi；RNA interference法）またはリボザイムは、例えば、高血圧、自己免疫疾患、心不全、白内障、緑内障、急性バクテリア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アルツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテリア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食症，火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸がん），クローン病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性腎症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコバクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨軟化症，骨減少症，骨粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺がん，逆流性食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分裂症，敗血症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマトーサス，一過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴呆，創傷治癒，不眠症，関節炎、下垂体ホルモン分泌不全、瀕尿、尿毒症、または神経変成疾患等の疾病の治療・予防剤などの医薬として有用できる。
また、該二重鎖ＲＮＡ（RNAi；RNA interference法）またはリボザイムは、MACULAR EDEMA CYSTOID（嚢胞状黄斑浮腫）の疾病の治療・予防剤などの医薬として使用することができる。
さらに、該二重鎖ＲＮＡ（RNAi；RNA interference法）またはリボザイムは、例えば、（１）先端巨大症、ＴＳＨ産生腫瘍、非分泌性（非機能性）下垂体腫瘍、異所性ＡＣＴＨ（アドレノコルチコトロピン）産生腫瘍、髄様甲状腺癌、ＶＩＰ産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、インスリノーマ、カルチノイドなどの腫瘍の治療薬、（２）インスリン依存性または非依存性糖尿病、あるいはこれら糖尿病に関連した種々の疾患、すなわち糖尿病合併症（例、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、ドーン症候群、起立性低血圧症など）の治療薬、（３）高インスリン血症の改善または食欲の抑制などによる肥満、過食症などの治療薬、（４）急性膵炎、慢性膵炎、膵臓・腸フィステル、出血性潰瘍、消化性潰瘍、胃炎、胃酸過多症、逆流性食道炎などの治療薬、（５）ヘリコバクター・ピロリ菌感染に伴う様々な症状の改善剤（例、ガストリン分泌昂進の抑制剤など）、（６）内視鏡胆道膵管造影に伴うアミラーゼの分泌抑制剤、さらには膵臓外科手術の予後治療薬、（７）小腸の吸収能低下、分泌昂進または消化管の運動能異常に起因する下痢（例、Ｓｈｏｒｔ ｂｏｗｅｌ症候群など）、癌化学療法などの薬物に起因する下痢、先天性小腸萎縮に起因する下痢、ＶＩＰ産生腫瘍などの神経内分泌腫瘍に起因する下痢、ＡＩＤＳに起因する下痢、骨髄移植などに伴う対宿主移植片反応に起因する下痢、糖尿病に起因する下痢、腹腔神経叢遮断に起因する下痢、全身性硬化症に起因する下痢、好酸球増加症に起因する下痢などの治療薬、（８）ダンピング症候群、過敏性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患などの治療薬、（９）腫瘍または癌（例、甲状腺癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、胆管癌、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌、メラノーマ、骨肉腫、軟骨肉腫、悪性褐色細胞腫、神経芽細胞腫、脳腫瘍、胸腺腫、腎臓癌など）、白血病（例、好塩基性白血球の白血病・慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン性リンパ腫など）などの治療薬；該治療薬は、単独または他の制癌剤（例、タモキシフエン、ＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、インターフェロン−α、βおよびγ、インターロイキン−２など）と併用して用いることができる、（１０）肥大性心筋症、動脈硬化症、心弁膜症、心筋梗塞（特に、経皮経管冠動脈形成術後の心解梗塞）、再血管形成の予防・治療薬、（１１）食道静脈癌出血、肝硬変、末梢血管疾患の治療薬、（１２）免疫系に作用する生理活性物質（例、サブスタンスＰ、タヒキニン、サイトカインなど）の分泌の調節作用に基づき、例えば、全身性または局所性の炎症に伴う疾患（例、多発性動脈炎、リュウマチ性関節炎、乾せん、日焼け、湿疹、アレルギー（例、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎など）など）の治療薬、（１３）神経調節因子の産生・分泌に影響を及ぼすことから、例えば、痴呆症（例、アルツハイマー病、アルツハイマー型老年期痴呆、血管性・多発性痴呆など）、精神分裂症、てんかん、うつ病、一般不安障害、睡眠障害、多発性硬化症などの治療薬、（１４）眼疾患（例、緑内障など）などの治療薬、（１５）急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、重症全身性真菌感染症、結核、脊髄損傷、骨折、肝不全、肺炎、アルコール性肝炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＡＩＤＳ感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、インフルエンザ感染症、癌転移、多発性骨髄腫、骨軟化症、骨粗しょう症、骨ベーチェット症、腎炎、腎不全、敗血症、敗血症ショック、高カルシウム血症、高コレステロール血症、高グリセリド血症、高脂血症、全身性エリテマトーサス、一過性脳虚血発作、アルコール性肝炎などの予防・治療薬として有用であり、（１６）臓器移植、火傷、創傷、脱毛症などの治癒などにも用いられ、（１７）慢性あるいは急性疼痛（例、術後疼痛、炎症性疼痛、歯痛、骨疾患（例、関節炎、リウマチ、骨粗鬆症など）にともなう疼痛）の抑制・緩和など、鎮痛剤としても有用である。
二重鎖ＲＮＡは、公知の方法（例、Nature, 411巻, 494頁, 2001年）に準じて、本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。
リボザイムは、公知の方法（例、TRENDS in Molecular Medicine, 7巻, 221頁, 2001年）に準じて、本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。例えば、本発明のペプチドをコードするＲＮＡの一部に公知のリボザイムを連結することによって製造することができる。本発明のペプチドをコードするＲＮＡの一部としては、公知のリボザイムによって切断され得る本発明のＲＮＡ上の切断部位に近接した部分（ＲＮＡ断片）が挙げられる。
上記の二重鎖ＲＮＡまたはリボザイムを上記予防・治療剤として使用する場合、アンチセンスポリヌクレオチドと同様にして製剤化し、投与することができる。
【００９２】
（６）本発明の抗体を含有する医薬
本発明のペプチドの活性を中和する作用を有する本発明の抗体は、例えば、本発明のペプチドの過剰発現に起因する疾患などの予防・治療薬などの医薬として使用することができる。
具体的には、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩに対する抗体は、本発明のペプチドＦの機能を阻害することができるので、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの活性を抑制する安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌阻害剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩの過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患の予防・治療剤などとして有用である。
また、本発明のペプチドＦに対する抗体は、プロラクチン分泌の調節作用剤として有用である。すなわち、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩに対する抗体がプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進剤として、プロラクチン分泌不全に関係する各種疾患、例えば、卵巣機能低下症、精嚢発育不全、骨粗鬆症、更年期障害、乳汁分泌不全、甲状腺機能低下、腎不全などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩに対する抗体がプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進作用に基づく性欲促進作用（フェロモン的作用）を有するため、性欲促進剤としても有用である。
本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩに対する抗体がプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制剤として、プロラクチン過剰分泌に関係する各種疾患、例えば、高プロラクチン血症、下垂体腺腫瘍、間脳腫瘍、月経異常、ストレス、自己免疫疾患、プロラクチノーマ、不妊症、インポテンス、無月経症、乳汁漏症、末端肥大症、キアリ・フロンメル（Chiari-Frommel）症候群、アルゴンツ-デル・カスティロ（Argonz-del Castilo）症候群、フォーベス・アルブライト（Forbes-Albright）症候群、乳癌リンパ腫またはシーハン症候群または精子形成異常などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩに対する抗体がプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制作用に基づいて、避妊薬としても有用である。
その他、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩに対する抗体は、プロラクチン分泌機能を調べるための検査薬としても、また、ウシ、ヤギ、ブタなどの哺乳動物の乳汁の分泌促進剤などの動物薬としても有用であり、さらには該哺乳動物体内で有用物質を生産させ、これをその乳汁中への分泌することによる有用物質生産などへの応用できる。
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩに対する抗体は、胎盤機能調節作用を有するため、絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防または治療薬としても有用である。また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩに対する抗体は、例えば、高血圧、自己免疫疾患、心不全、白内障、緑内障、急性バクテリア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アルツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテリア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食症，火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸がん），クローン病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性腎症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコバクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨軟化症，骨減少症，骨粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺がん，逆流性食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分裂症，敗血症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマトーサス，一過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴呆，創傷治癒，不眠症，関節炎、下垂体ホルモン分泌不全、瀕尿、尿毒症、または神経変成疾患等の疾病の治療・予防剤などの医薬として有用できる。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩに対する抗体は、MACULAR EDEMA CYSTOID（嚢胞状黄斑浮腫）の疾病の治療・予防剤などの医薬として使用することができる。
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩに対する抗体は、例えば、（１）先端巨大症、ＴＳＨ産生腫瘍、非分泌性（非機能性）下垂体腫瘍、異所性ＡＣＴＨ（アドレノコルチコトロピン）産生腫瘍、髄様甲状腺癌、ＶＩＰ産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、インスリノーマ、カルチノイドなどの腫瘍の治療薬、（２）インスリン依存性または非依存性糖尿病、あるいはこれら糖尿病に関連した種々の疾患、すなわち糖尿病合併症（例、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、ドーン症候群、起立性低血圧症など）の治療薬、（３）高インスリン血症の改善または食欲の抑制などによる肥満、過食症などの治療薬、（４）急性膵炎、慢性膵炎、膵臓・腸フィステル、出血性潰瘍、消化性潰瘍、胃炎、胃酸過多症、逆流性食道炎などの治療薬、（５）ヘリコバクター・ピロリ菌感染に伴う様々な症状の改善剤（例、ガストリン分泌昂進の抑制剤など）、（６）内視鏡胆道膵管造影に伴うアミラーゼの分泌抑制剤、さらには膵臓外科手術の予後治療薬、（７）小腸の吸収能低下、分泌昂進または消化管の運動能異常に起因する下痢（例、Ｓｈｏｒｔ ｂｏｗｅｌ症候群など）、癌化学療法などの薬物に起因する下痢、先天性小腸萎縮に起因する下痢、ＶＩＰ産生腫瘍などの神経内分泌腫瘍に起因する下痢、ＡＩＤＳに起因する下痢、骨髄移植などに伴う対宿主移植片反応に起因する下痢、糖尿病に起因する下痢、腹腔神経叢遮断に起因する下痢、全身性硬化症に起因する下痢、好酸球増加症に起因する下痢などの治療薬、（８）ダンピング症候群、過敏性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患などの治療薬、（９）腫瘍または癌（例、甲状腺癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、胆管癌、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌、メラノーマ、骨肉腫、軟骨肉腫、悪性褐色細胞腫、神経芽細胞腫、脳腫瘍、胸腺腫、腎臓癌など）、白血病（例、好塩基性白血球の白血病・慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン性リンパ腫など）などの治療薬；該治療薬は、単独または他の制癌剤（例、タモキシフエン、ＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、インターフェロン−α、βおよびγ、インターロイキン−２など）と併用して用いることができる、（１０）肥大性心筋症、動脈硬化症、心弁膜症、心筋梗塞（特に、経皮経管冠動脈形成術後の心解梗塞）、再血管形成の予防・治療薬、（１１）食道静脈癌出血、肝硬変、末梢血管疾患の治療薬、（１２）免疫系に作用する生理活性物質（例、サブスタンスＰ、タヒキニン、サイトカインなど）の分泌の調節作用に基づき、例えば、全身性または局所性の炎症に伴う疾患（例、多発性動脈炎、リュウマチ性関節炎、乾せん、日焼け、湿疹、アレルギー（例、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎など）など）の治療薬、（１３）神経調節因子の産生・分泌に影響を及ぼすことから、例えば、痴呆症（例、アルツハイマー病、アルツハイマー型老年期痴呆、血管性・多発性痴呆など）、精神分裂症、てんかん、うつ病、一般不安障害、睡眠障害、多発性硬化症などの治療薬、（１４）眼疾患（例、緑内障など）などの治療薬、（１５）急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、重症全身性真菌感染症、結核、脊髄損傷、骨折、肝不全、肺炎、アルコール性肝炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＡＩＤＳ感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、インフルエンザ感染症、癌転移、多発性骨髄腫、骨軟化症、骨粗しょう症、骨ベーチェット症、腎炎、腎不全、敗血症、敗血症ショック、高カルシウム血症、高コレステロール血症、高グリセリド血症、高脂血症、全身性エリテマトーサス、一過性脳虚血発作、アルコール性肝炎などの予防・治療薬として有用であり、（１６）臓器移植、火傷、創傷、脱毛症などの治癒などにも用いられ、（１７）慢性あるいは急性疼痛（例、術後疼痛、炎症性疼痛、歯痛、骨疾患（例、関節炎、リウマチ、骨粗鬆症など）にともなう疼痛）の抑制・緩和など、鎮痛剤としても有用である。
【００９３】
本発明の抗体を含有する上記疾患の治療・予防剤は、そのまま液剤として、または適当な剤型の医薬組成物として、ヒトまたは哺乳動物（例、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して経口的または非経口的に投与することができる。投与量は、投与対象、対象疾患、症状、投与ルートなどによっても異なるが、例えば、成人に使用する場合には、本発明の抗体を１回量として、通常０.０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重程度、好ましくは０.１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重程度、さらに好ましくは０.１〜５ｍｇ／ｋｇ体重程度を、１日１〜５回程度、好ましくは１日１〜３回程度、静脈注射により投与するのが好都合である。他の非経口投与および経口投与の場合もこれに準ずる量を投与することができる。症状が特に重い場合には、その症状に応じて増量してもよい。
本発明の抗体は、それ自体または適当な医薬組成物として投与することができる。上記投与に用いられる医薬組成物は、上記またはその塩と薬理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含むものである。かかる組成物は、経口または非経口投与に適する剤形として提供される。
すなわち、例えば、経口投与のための組成物としては、固体または液体の剤形、具体的には錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげられる。かかる組成物は自体公知の方法によって製造され、製剤分野において通常用いられる担体、希釈剤もしくは賦形剤を含有するものである。例えば、錠剤用の担体、賦形剤としては、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムなどが用いられる。
【００９４】
非経口投与のための組成物としては、例えば、注射剤、坐剤などが用いられ、注射剤は静脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤などの剤形を包含する。かかる注射剤は、自体公知の方法に従って、例えば、上記抗体またはその塩を通常注射剤に用いられる無菌の水性もしくは油性液に溶解、懸濁または乳化することによって調製する。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン界面活性剤〔例、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（polyoxyethylene（５０mol）adduct of hydrogenated castor oil）〕などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどを併用してもよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプルに充填される。直腸投与に用いられる坐剤は、上記抗体またはその塩を通常の坐薬用基剤に混合することによって調製される。
上記の経口用または非経口用医薬組成物は、活性成分の投与量に適合するような投薬単位の剤形に調製されることが好都合である。かかる投薬単位の剤形としては、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが例示され、それぞれの投薬単位剤形当たり通常５〜５００ｍｇ、とりわけ注射剤では５〜１００ｍｇ、その他の剤形では１０〜２５０ｍｇの上記抗体が含有されていることが好ましい。
なお前記した各組成物は、上記抗体との配合により好ましくない相互作用を生じない限り他の活性成分を含有してもよい。
【００９５】
（７）ＤＮＡ転移動物
本発明は、外来性の本発明のペプチドをコードするＤＮＡ（以下、本発明の外来性ＤＮＡと略記する）またはその変異ＤＮＡ（本発明の外来性変異ＤＮＡと略記する場合がある）を有する非ヒト哺乳動物を提供する。
すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物、
（ii）非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（ｉ）記載の動物、
（iii）ゲッ歯動物がマウスまたはラットである第（ii）記載の動物、および
（iv）本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを含有し、哺乳動物において発現しうる組換えベクターを提供するものである。
本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物（以下、本発明のＤＮＡ転移動物と略記する）は、未受精卵、受精卵、精子およびその始原細胞を含む胚芽細胞などに対して、好ましくは、非ヒト哺乳動物の発生における胚発生の段階（さらに好ましくは、単細胞または受精卵細胞の段階でかつ一般に８細胞期以前）に、リン酸カルシウム法、電気パルス法、リポフェクション法、凝集法、マイクロインジェクション法、パーティクルガン法、ＤＥＡＥ−デキストラン法などにより目的とするＤＮＡを転移することによって作出することができる。また、該ＤＮＡ転移方法により、体細胞、生体の臓器、組織細胞などに目的とする本発明の外来性ＤＮＡを転移し、細胞培養、組織培養などに利用することもでき、さらに、これら細胞を上述の胚芽細胞と自体公知の細胞融合法により融合させることにより本発明のＤＮＡ転移動物を作出することもできる。
非ヒト哺乳動物としては、例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、マウス、ラットなどが用いられる。なかでも、病体動物モデル系の作成の面から個体発生および生物サイクルが比較的短く、また、繁殖が容易なゲッ歯動物、とりわけマウス（例えば、純系として、Ｃ５７ＢＬ／６系統，ＤＢＡ２系統など、交雑系として、Ｂ６Ｃ３Ｆ1系統，ＢＤＦ1系統，Ｂ６Ｄ２Ｆ1系統，ＢＡＬＢ／ｃ系統，ＩＣＲ系統など）またはラット（例えば、Ｗｉｓｔａｒ，ＳＤなど）などが好ましい。
哺乳動物において発現しうる組換えベクターにおける「哺乳動物」としては、上記の非ヒト哺乳動物の他にヒトなどがあげられる。
【００９６】
本発明の外来性ＤＮＡとは、非ヒト哺乳動物が本来有している本発明のＤＮＡではなく、いったん哺乳動物から単離・抽出された本発明のＤＮＡをいう。
本発明の変異ＤＮＡとしては、元の本発明のＤＮＡの塩基配列に変異（例えば、突然変異など）が生じたもの、具体的には、塩基の付加、欠損、他の塩基への置換などが生じたＤＮＡなどが用いられ、また、異常ＤＮＡも含まれる。
該異常ＤＮＡとしては、異常な本発明のペプチドを発現させるＤＮＡを意味し、例えば、正常な本発明のペプチドの機能を抑制するペプチドを発現させるＤＮＡなどが用いられる。
本発明の外来性ＤＮＡは、対象とする動物と同種あるいは異種のどちらの哺乳動物由来のものであってもよい。本発明のＤＮＡを対象動物に転移させるにあたっては、該ＤＮＡを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結合したＤＮＡコンストラクトとして用いるのが一般に有利である。例えば、本発明のヒトＤＮＡを転移させる場合、これと相同性が高い本発明のＤＮＡを有する各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来のＤＮＡを発現させうる各種プロモーターの下流に、本発明のヒトＤＮＡを結合したＤＮＡコンストラクト（例、ベクターなど）を対象哺乳動物の受精卵、例えば、マウス受精卵へマイクロインジェクションすることによって本発明のＤＮＡを高発現するＤＮＡ転移哺乳動物を作出することができる。
【００９７】
本発明のペプチドの発現ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミド、酵母由来のプラスミド、λファージなどのバクテリオファージ、モロニー白血病ウィルスなどのレトロウィルス、ワクシニアウィルスまたはバキュロウィルスなどの動物ウイルスなどが用いられる。なかでも、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミドまたは酵母由来のプラスミドなどが好ましく用いられる。
上記のＤＮＡ発現調節を行なうプロモーターとしては、例えば、▲１▼ウイルス（例、シミアンウイルス、サイトメガロウイルス、モロニー白血病ウイルス、ＪＣウイルス、乳癌ウイルス、ポリオウイルスなど）に由来するＤＮＡのプロモーター、▲２▼各種哺乳動物（ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来のプロモーター、例えば、アルブミン、インスリンＩＩ、ウロプラキンＩＩ、エラスターゼ、エリスロポエチン、エンドセリン、筋クレアチンキナーゼ、グリア線維性酸性タンパク質、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、血小板由来成長因子β、ケラチンＫ１，Ｋ１０およびＫ１４、コラーゲンＩ型およびＩＩ型、サイクリックＡＭＰ依存タンパク質キナーゼβＩサブユニット、ジストロフィン、酒石酸抵抗性アルカリフォスファターゼ、心房ナトリウム利尿性因子、内皮レセプターチロシンキナーゼ（一般にＴｉｅ２と略される）、ナトリウムカリウムアデノシン３リン酸化酵素（Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰａｓｅ）、ニューロフィラメント軽鎖、メタロチオネインＩおよびＩＩＡ、メタロプロティナーゼ１組織インヒビター、ＭＨＣクラスＩ抗原（Ｈ−２Ｌ）、Ｈ−ｒａｓ、レニン、ドーパミンβ−水酸化酵素、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、ペプチド鎖延長因子1α（ＥＦ−１α）、βアクチン、αおよびβミオシン重鎖、ミオシン軽鎖１および２、ミエリン基礎タンパク質、チログロブリン、Ｔｈｙ−１、免疫グロブリン、Ｈ鎖可変部（ＶＮＰ）、血清アミロイドＰコンポーネント、ミオグロビン、トロポニンＣ、平滑筋αアクチン、プレプロエンケファリンＡ、バソプレシンなどのプロモーターなどが用いられる。なかでも、全身で高発現することが可能なサイトメガロウイルスプロモーター、ヒトペプチド鎖延長因子１α（ＥＦ−１α）のプロモーター、ヒトおよびニワトリβアクチンプロモーターなどが好適である。
上記ベクターは、ＤＮＡ転移哺乳動物において目的とするメッセンジャーＲＮＡの転写を終結する配列（一般にターミネターと呼ばれる）を有していることが好ましく、例えば、ウイルス由来および各種哺乳動物由来の各ＤＮＡの配列を用いることができ、好ましくは、シミアンウイルスのＳＶ４０ターミネターなどが用いられる。
【００９８】
その他、目的とする外来性ＤＮＡをさらに高発現させる目的で各ＤＮＡのスプライシングシグナル、エンハンサー領域、真核ＤＮＡのイントロンの一部などをプロモーター領域の５’上流、プロモーター領域と翻訳領域間あるいは翻訳領域の３’下流 に連結することも目的により可能である。
正常な本発明のペプチドの翻訳領域は、ヒトまたは各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来の肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＤＮＡおよび市販の各種ゲノムＤＮＡライブラリーよりゲノムＤＮＡの全てあるいは一部として、または肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＲＮＡより公知の方法により調製された相補ＤＮＡを原料として取得することが出来る。また、外来性の異常ＤＮＡは、上記の細胞または組織より得られた正常なペプチドの翻訳領域を点突然変異誘発法により変異した翻訳領域を作製することができる。
該翻訳領域は転移動物において発現しうるＤＮＡコンストラクトとして、前記のプロモーターの下流および所望により転写終結部位の上流に連結させる通常のＤＮＡ工学的手法により作製することができる。
受精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞のすべてに存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において、本発明の外来性ＤＮＡが存在することは、作出動物の後代がすべて、その胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性ＤＮＡを保持することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性ＤＮＡを有する。
本発明の外来性正常ＤＮＡを転移させた非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持することを確認して、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。
受精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに過剰に存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明の外来性ＤＮＡが過剰に存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡを過剰に有することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡを過剰に有する。
導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該ＤＮＡを過剰に有するように繁殖継代することができる。
【００９９】
本発明の正常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、本発明の正常ＤＮＡが高発現させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を促進することにより最終的に本発明のペプチドの機能亢進症を発症することがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の正常ＤＮＡ転移動物を用いて、本発明のペプチドの機能亢進症や、本発明のペプチドが関連する疾患の病態機序の解明およびこれらの疾患の治療方法の検討を行なうことが可能である。
また、本発明の外来性正常ＤＮＡを転移させた哺乳動物は、遊離した本発明のペプチドの増加症状を有することから、本発明のペプチドに関連する疾患に対する治療薬のスクリーニング試験にも利用可能である。
一方、本発明の外来性異常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持することを確認して該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。さらに、目的とする外来ＤＮＡを前述のプラスミドに組み込んで原科として用いることができる。プロモーターとのＤＮＡコンストラク卜は、通常のＤＮＡ工学的手法によって作製することができる。受精卵細胞段階における本発明の異常ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明の異常ＤＮＡが存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫は、その胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有する。導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該ＤＮＡを有するように繁殖継代することができる。
【０１００】
本発明の異常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、本発明の異常ＤＮＡが高発現させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を阻害することにより最終的に本発明のペプチドの機能不活性型不応症となることがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の異常ＤＮＡ転移動物を用いて、本発明のペプチドの機能不活性型不応症の病態機序の解明およびこの疾患を治療方法の検討を行なうことが可能である。
また、具体的な利用可能性としては、本発明の異常ＤＮＡ高発現動物は、本発明のペプチドの機能不活性型不応症における本発明の異常ペプチドによる正常ペプチドの機能阻害（dominant negative作用）を解明するモデルとなる。
また、本発明の外来異常ＤＮＡを転移させた哺乳動物は、遊離した本発明のペプチドの増加症状を有することから、本発明のペプチドまたはの機能不活性型不応症に対する治療薬スクリーニング試験にも利用可能である。
また、上記２種類の本発明のＤＮＡ転移動物のその他の利用可能性として、例えば、
▲１▼組織培養のための細胞源としての使用、
▲２▼本発明のＤＮＡ転移動物の組織中のＤＮＡもしくはＲＮＡを直接分析するか、またはＤＮＡにより発現されたペプチド組織を分析することによる、本発明のペプチドにより特異的に発現あるいは活性化するペプチドとの関連性についての解析、
▲３▼ＤＮＡを有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、これらを使用して、一般に培養困難な組織からの細胞の機能の研究、
▲４▼上記▲３▼記載の細胞を用いることによる細胞の機能を高めるような薬剤のスクリーニング、および
▲５▼本発明の変異ペプチドを単離精製およびその抗体作製などが考えられる。
さらに、本発明のＤＮＡ転移動物を用いて、本発明のペプチドの機能不活性型不応症などを含む、本発明のペプチドに関連する疾患の臨床症状を調べることができ、また、本発明のペプチドに関連する疾患モデルの各臓器におけるより詳細な病理学的所見が得られ、新しい治療方法の開発、さらには、該疾患による二次的疾患の研究および治療に貢献することができる。
また、本発明のＤＮＡ転移動物から各臓器を取り出し、細切後、トリプシンなどのタンパク質分解酵素により、遊離したＤＮＡ転移細胞の取得、その培養またはその培養細胞の系統化を行なうことが可能である。さらに、本発明のペプチド産生細胞の特定化、アポトーシス、分化あるいは増殖との関連性、またはそれらにおけるシグナル伝達機構を調べ、それらの異常を調べることなどができ、本発明のペプチドおよびその作用解明のための有効な研究材料となる。
さらに、本発明のＤＮＡ転移動物を用いて、本発明のペプチドの機能不活性型不応症を含む、本発明のペプチドに関連する疾患の治療薬の開発を行なうために、上述の検査法および定量法などを用いて、有効で迅速な該疾患治療薬のスクリーニング法を提供することが可能となる。また、本発明のＤＮＡ転移動物または本発明の外来性ＤＮＡ発現ベクターを用いて、本発明のペプチドが関連する疾患のＤＮＡ治療法を検討、開発することが可能である。
【０１０１】
（８）ノックアウト動物
本発明は、本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞および本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を提供する。
すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞、
（ii）該ＤＮＡがレポーター遺伝子（例、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不活性化された第（ｉ）項記載の胚幹細胞、
（iii）ネオマイシン耐性である第（ｉ）項記載の胚幹細胞、
（iv）非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（ｉ）項記載の胚幹細胞、
（v）ゲッ歯動物がマウスである第（iv）項記載の胚幹細胞、
（vi）本発明のＤＮＡが不活性化された該ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物、
（vii）該ＤＮＡがレポーター遺伝子（例、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうる第（vi）項記載の非ヒト哺乳動物、
（viii）非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（vi）項記載の非ヒト哺乳動物、（ix）ゲッ歯動物がマウスである第（viii）項記載の非ヒト哺乳動物、および
（x）第（vii）項記載の動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞とは、該非ヒト哺乳動物が有する本発明のＤＮＡに人為的に変異を加えることにより、ＤＮＡの発現能を抑制するか、もしくは該ＤＮＡがコードしている本発明のペプチドの活性を実質的に喪失させることにより、ＤＮＡが実質的に本発明のペプチドの発現能を有さない（以下、本発明のノックアウトＤＮＡと称することがある）非ヒト哺乳動物の胚幹細胞（以下、ＥＳ細胞と略記する）をいう。
非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。
本発明のＤＮＡに人為的に変異を加える方法としては、例えば、遺伝子工学的手法により該ＤＮＡ配列の一部又は全部の削除、他ＤＮＡを挿入または置換させることによって行なうことができる。これらの変異により、例えば、コドンの読み取り枠をずらしたり、プロモーターあるいはエキソンの機能を破壊することにより本発明のノックアウトＤＮＡを作製すればよい。
【０１０２】
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞（以下、本発明のＤＮＡ不活性化ＥＳ細胞または本発明のノックアウトＥＳ細胞と略記する）の具体例としては、例えば、目的とする非ヒト哺乳動物が有する本発明のＤＮＡを単離し、そのエキソン部分にネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子を代表とする薬剤耐性遺伝子、あるいはｌａｃＺ（β−ガラクトシダーゼ遺伝子）、ｃａｔ（クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子）を代表とするレポーター遺伝子等を挿入することによりエキソンの機能を破壊するか、あるいはエキソン間のイントロン部分に遺伝子の転写を終結させるＤＮＡ配列（例えば、polyＡ付加シグナルなど）を挿入し、完全なメッセンジャーＲＮＡを合成できなくすることによって、結果的に遺伝子を破壊するように構築したＤＮＡ配列を有するＤＮＡ鎖（以下、ターゲッティングベクターと略記する）を、例えば相同組換え法により該動物の染色体に導入し、得られたＥＳ細胞について本発明のＤＮＡ上あるいはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析あるいはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列とターゲッティングベクター作製に使用した本発明のＤＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列をプライマーとしたＰＣＲ法により解析し、本発明のノックアウトＥＳ細胞を選別することにより得ることができる。
また、相同組換え法等により本発明のＤＮＡを不活化させる元のＥＳ細胞としては、例えば、前述のような既に樹立されたものを用いてもよく、また公知 EvansとKaufmaの方法に準じて新しく樹立したものでもよい。例えば、マウスのＥＳ細胞の場合、現在、一般的には１２９系のＥＳ細胞が使用されているが、免疫学的背景がはっきりしていないので、これに代わる純系で免疫学的に遺伝的背景が明らかなＥＳ細胞を取得するなどの目的で例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウスやＣ５７ＢＬ／６の採卵数の少なさをＤＢＡ／２との交雑により改善したＢＤＦ1マウス（Ｃ５７ＢＬ／６とＤＢＡ／２とのＦ1）を用いて樹立したものなども良好に用いうる。ＢＤＦ1マウスは、採卵数が多く、かつ、卵が丈夫であるという利点に加えて、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを背景に持つので、これを用いて得られたＥＳ細胞は病態モデルマウスを作出したとき、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとバッククロスすることでその遺伝的背景をＣ５７ＢＬ／６マウスに代えることが可能である点で有利に用い得る。
また、ＥＳ細胞を樹立する場合、一般には受精後３.５日目の胚盤胞を使用するが、これ以外に８細胞期胚を採卵し胚盤胞まで培養して用いることにより効率よく多数の初期胚を取得することができる。
また、雌雄いずれのＥＳ細胞を用いてもよいが、通常雄のＥＳ細胞の方が生殖系列キメラを作出するのに都合が良い。また、煩雑な培養の手間を削減するためにもできるだけ早く雌雄の判別を行なうことが望ましい。
【０１０３】
ＥＳ細胞の雌雄の判定方法としては、例えば、ＰＣＲ法によりＹ染色体上の性決定領域の遺伝子を増幅、検出する方法が、その１例としてあげることができる。この方法を使用すれば、従来、核型分析をするのに約１０6個の細胞数を要していたのに対して、１コロニー程度のＥＳ細胞数（約５０個）で済むので、培養初期におけるＥＳ細胞の第一次セレクションを雌雄の判別で行なうことが可能であり、早期に雄細胞の選定を可能にしたことにより培養初期の手間は大幅に削減できる。
また、第二次セレクションとしては、例えば、Ｇ−バンディング法による染色体数の確認等により行うことができる。得られるＥＳ細胞の染色体数は正常数の１００％が望ましいが、樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、ＥＳ細胞の遺伝子をノックアウトした後、正常細胞（例えば、マウスでは染色体数が２ｎ＝４０である細胞）に再びクローニングすることが望ましい。
このようにして得られた胚幹細胞株は、通常その増殖性は大変良いが、個体発生できる能力を失いやすいので、注意深く継代培養することが必要である。例えば、ＳＴＯ繊維芽細胞のような適当なフィーダー細胞上でＬＩＦ（１〜１００００U/ml）存在下に炭酸ガス培養器内（好ましくは、５％炭酸ガス、９５％空気または５％酸素、５％炭酸ガス、９０％空気）で約３７℃で培養するなどの方法で培養し、継代時には、例えば、トリプシン／ＥＤＴＡ溶液（通常０.００１〜０.５％トリプシン／０.１〜５ｍＭ ＥＤＴＡ、好ましくは約０.１％トリプシン／１ｍＭ ＥＤＴＡ）処理により単細胞化し、新たに用意したフィーダー細胞上に播種する方法などがとられる。このような継代は、通常１〜３日毎に行なうが、この際に細胞の観察を行い、形態的に異常な細胞が見受けられた場合はその培養細胞は放棄することが望まれる。
ＥＳ細胞は、適当な条件により、高密度に至るまで単層培養するか、または細胞集塊を形成するまで浮遊培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋などの種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり〔M. J. Evans及びM. H. Kaufman, ネイチャー（Nature）第292巻、154頁、1981年；G. R. Martin プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.）第78巻、7634頁、1981年；T. C. Doetschman ら、ジャーナル・オブ・エンブリオロジー・アンド・エクスペリメンタル・モルフォロジー、第87巻、27頁、1985年〕、本発明のＥＳ細胞を分化させて得られる本発明のＤＮＡ発現不全細胞は、インビトロにおける本発明のペプチドまたは本発明のレセプター蛋白質の細胞生物学的検討において有用である。
【０１０４】
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、該動物のｍＲＮＡ量を公知方法を用いて測定して間接的にその発現量を比較することにより、正常動物と区別することが可能である。
該非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、例えば、前述のようにして作製したターゲッティングベクターをマウス胚幹細胞またはマウス卵細胞に導入し、導入によりターゲッティングベクターの本発明のＤＮＡが不活性化されたＤＮＡ配列が遺伝子相同組換えにより、マウス胚幹細胞またはマウス卵細胞の染色体上の本発明のＤＮＡと入れ換わる相同組換えをさせることにより、本発明のＤＮＡをノックアウトさせることができる。
本発明のＤＮＡがノックアウトされた細胞は、本発明のＤＮＡ上またはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析またはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列と、ターゲッティングベクターに使用したマウス由来の本発明のＤＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列とをプライマーとしたＰＣＲ法による解析で判定することができる。非ヒト哺乳動物胚幹細胞を用いた場合は、遺伝子相同組換えにより、本発明のＤＮＡが不活性化された細胞株をクローニングし、その細胞を適当な時期、例えば、８細胞期の非ヒト哺乳動物胚または胚盤胞に注入し、作製したキメラ胚を偽妊娠させた該非ヒト哺乳動物の子宮に移植する。作出された動物は正常な本発明のＤＮＡ座をもつ細胞と人為的に変異した本発明のＤＮＡ座をもつ細胞との両者から構成されるキメラ動物である。
該キメラ動物の生殖細胞の一部が変異した本発明のＤＮＡ座をもつ場合、このようなキメラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体群より、全ての組織が人為的に変異を加えた本発明のＤＮＡ座をもつ細胞で構成された個体を、例えば、コートカラーの判定等により選別することにより得られる。このようにして得られた個体は、通常、本発明のペプチドのヘテロ発現不全個体であり、本発明のペプチドのヘテロ発現不全個体同志を交配し、それらの産仔から本発明のペプチドのホモ発現不全個体を得ることができる。
【０１０５】
卵細胞を使用する場合は、例えば、卵細胞核内にマイクロインジェクション法でＤＮＡ溶液を注入することによりターゲッティングベクターを染色体内に導入したトランスジェニック非ヒト哺乳動物を得ることができ、これらのトランスジェニック非ヒト哺乳動物に比べて、遺伝子相同組換えにより本発明のＤＮＡ座に変異のあるものを選択することにより得られる。
このようにして本発明のＤＮＡがノックアウトされている個体は、交配により得られた動物個体も該ＤＮＡがノックアウトされていることを確認して通常の飼育環境で飼育継代を行なうことができる。
さらに、生殖系列の取得および保持についても常法に従えばよい。すなわち、該不活化ＤＮＡの保有する雌雄の動物を交配することにより、該不活化ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得しうる。得られたホモザイゴート動物は、母親動物に対して、正常個体１，ホモザイゴート複数になるような状態で飼育することにより効率的に得ることができる。ヘテロザイゴート動物の雌雄を交配することにより、該不活化ＤＮＡを有するホモザイゴートおよびヘテロザイゴート動物を繁殖継代する。
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を作出する上で、非常に有用である。
また、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のペプチドにより誘導され得る種々の生物活性を欠失するため、本発明のペプチドの生物活性の不活性化を原因とする疾病のモデルとなり得るので、これらの疾病の原因究明及び治療法の検討に有用である。
【０１０６】
（８ａ）本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物のスクリーニング方法
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物のスクリーニングに用いることができる。
すなわち、本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を投与し、該動物の変化を観察・測定することを特徴とする、本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
該スクリーニング方法において用いられる本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものがあげられる。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などがあげられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
具体的には、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を、試験化合物で処理し、無処理の対照動物と比較し、該動物の各器官、組織、疾病の症状などの変化を指標として試験化合物の治療・予防効果を試験することができる。
試験動物を試験化合物で処理する方法としては、例えば、経口投与、静脈注射などが用いられ、試験動物の症状、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。また、試験化合物の投与量は、投与方法、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。
【０１０７】
該スクリーニング方法において、試験動物に試験化合物を投与した場合、該試験動物の機能が約１０％以上、好ましくは約３０％以上、より好ましくは約５０％以上低下した場合、該試験化合物を上記の疾患に対して治療・予防効果を有する化合物として選択することができる。
具体的には、本発明のペプチドが、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩである場合、該化合物を例えば、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤、または中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)の予防・治療剤などとして使用することができる。
また、該化合物はプロラクチン分泌の調節作用剤として有用である。すなわち、該化合物がプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進剤として、プロラクチン分泌不全に関係する各種疾患、例えば、卵巣機能低下症、精嚢発育不全、骨粗鬆症、更年期障害、乳汁分泌不全、甲状腺機能低下、腎不全などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、該化合物がプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進作用に基づく性欲促進作用（フェロモン的作用）を有するため、性欲促進剤としても有用である。
該化合物がプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制剤として、プロラクチン過剰分泌に関係する各種疾患、例えば、高プロラクチン血症、下垂体腺腫瘍、間脳腫瘍、月経異常、ストレス、自己免疫疾患、プロラクチノーマ、不妊症、インポテンス、無月経症、乳汁漏症、末端肥大症、キアリ・フロンメル（Chiari-Frommel）症候群、アルゴンツ-デル・カスティロ（Argonz-del Castilo）症候群、フォーベス・アルブライト（Forbes-Albright）症候群、乳癌リンパ腫またはシーハン症候群または精子形成異常などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、該化合物がプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制作用に基づいて、避妊薬としても有用である。
その他、該化合物は、プロラクチン分泌機能を調べるための検査薬としても、また、ウシ、ヤギ、ブタなどの畜産哺乳動物の乳汁の分泌促進剤などの動物薬としても有用であり、さらには該畜産哺乳動物体内で有用物質を生産させ、これをその乳汁中への分泌することによる有用物質生産などへの応用できる。
さらに、該化合物は、絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防または治療薬としても有用である。
また、該化合物は、例えば、高血圧、自己免疫疾患、心不全、白内障、緑内障、急性バクテリア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アルツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテリア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食症，火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸がん），クローン病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性腎症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコバクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨軟化症，骨減少症，骨粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺がん，逆流性食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分裂症，敗血症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマトーサス，一過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴呆，創傷治癒，不眠症，関節炎、下垂体ホルモン分泌不全、瀕尿、尿毒症、または神経変成疾患等の疾病の治療・予防剤などの医薬として有用できる。
また、該化合物は、MACULAR EDEMA CYSTOID（嚢胞状黄斑浮腫）の疾病の治療・予防剤などの医薬として使用することができる。
さらに、該化合物は、例えば、（１）先端巨大症、ＴＳＨ産生腫瘍、非分泌性（非機能性）下垂体腫瘍、異所性ＡＣＴＨ（アドレノコルチコトロピン）産生腫瘍、髄様甲状腺癌、ＶＩＰ産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、インスリノーマ、カルチノイドなどの腫瘍の治療薬、（２）インスリン依存性または非依存性糖尿病、あるいはこれら糖尿病に関連した種々の疾患、すなわち糖尿病合併症（例、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、ドーン症候群、起立性低血圧症など）の治療薬、（３）高インスリン血症の改善または食欲の抑制などによる肥満、過食症などの治療薬、（４）急性膵炎、慢性膵炎、膵臓・腸フィステル、出血性潰瘍、消化性潰瘍、胃炎、胃酸過多症、逆流性食道炎などの治療薬、（５）ヘリコバクター・ピロリ菌感染に伴う様々な症状の改善剤（例、ガストリン分泌昂進の抑制剤など）、（６）内視鏡胆道膵管造影に伴うアミラーゼの分泌抑制剤、さらには膵臓外科手術の予後治療薬、（７）小腸の吸収能低下、分泌昂進または消化管の運動能異常に起因する下痢（例、Ｓｈｏｒｔｂｏｗｅｌ症候群など）、癌化学療法などの薬物に起因する下痢、先天性小腸萎縮に起因する下痢、ＶＩＰ産生腫瘍などの神経内分泌腫瘍に起因する下痢、ＡＩＤＳに起因する下痢、骨髄移植などに伴う対宿主移植片反応に起因する下痢、糖尿病に起因する下痢、腹腔神経叢遮断に起因する下痢、全身性硬化症に起因する下痢、好酸球増加症に起因する下痢などの治療薬、（８）ダンピング症候群、過敏性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患などの治療薬、（９）腫瘍または癌（例、甲状腺癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、胆管癌、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌、メラノーマ、骨肉腫、軟骨肉腫、悪性褐色細胞腫、神経芽細胞腫、脳腫瘍、胸腺腫、腎臓癌など）、白血病（例、好塩基性白血球の白血病・慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン性リンパ腫など）などの治療薬；該治療薬は、単独または他の制癌剤（例、タモキシフエン、ＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、インターフェロン−α、βおよびγ、インターロイキン−２など）と併用して用いることができる、（１０）肥大性心筋症、動脈硬化症、心弁膜症、心筋梗塞（特に、経皮経管冠動脈形成術後の心解梗塞）、再血管形成の予防・治療薬、（１１）食道静脈癌出血、肝硬変、末梢血管疾患の治療薬、（１２）免疫系に作用する生理活性物質（例、サブスタンスＰ、タヒキニン、サイトカインなど）の分泌の調節作用に基づき、例えば、全身性または局所性の炎症に伴う疾患（例、多発性動脈炎、リュウマチ性関節炎、乾せん、日焼け、湿疹、アレルギー（例、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎など）など）の治療薬、（１３）神経調節因子の産生・分泌に影響を及ぼすことから、例えば、痴呆症（例、アルツハイマー病、アルツハイマー型老年期痴呆、血管性・多発性痴呆など）、精神分裂症、てんかん、うつ病、一般不安障害、睡眠障害、多発性硬化症などの治療薬、（１４）眼疾患（例、緑内障など）などの治療薬、（１５）急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、重症全身性真菌感染症、結核、脊髄損傷、骨折、肝不全、肺炎、アルコール性肝炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＡＩＤＳ感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、インフルエンザ感染症、癌転移、多発性骨髄腫、骨軟化症、骨粗しょう症、骨ベーチェット症、腎炎、腎不全、敗血症、敗血症ショック、高カルシウム血症、高コレステロール血症、高グリセリド血症、高脂血症、全身性エリテマトーサス、一過性脳虚血発作、アルコール性肝炎などの予防・治療薬として有用であり、（１６）臓器移植、火傷、創傷、脱毛症などの治癒などにも用いられ、（１７）慢性あるいは急性疼痛（例、術後疼痛、炎症性疼痛、歯痛、骨疾患（例、関節炎、リウマチ、骨粗鬆症など）にともなう疼痛）の抑制・緩和など、鎮痛剤としても有用である。
【０１０８】
該スクリーニング方法を用いて得られる化合物は、上記した試験化合物から選ばれた化合物であり、本発明のペプチドの欠損や損傷などによって引き起こされる疾患に対して治療・予防効果を有するので、該疾患に対する安全で低毒性な治療・予防剤などの医薬として使用することができる。さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
該スクリーニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸など）や塩基（例、アルカリ金属など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、前記した本発明のペプチドを含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、該化合物を経口投与する場合、一般的に成人患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、該化合物を注射剤の形で通常成人患者（６０ｋｇとして）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【０１０９】
（８ｂ）本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物をスクリーニング方法
本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
上記スクリーニング方法において、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記した本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物の中でも、本発明のＤＮＡがレポーター遺伝子を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうるものが用いられる。
試験化合物としては、前記と同様のものがあげられる。
レポーター遺伝子としては、前記と同様のものが用いられ、β−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）、可溶性アルカリフォスファターゼ遺伝子またはルシフェラーゼ遺伝子などが好適である。
本発明のＤＮＡをレポーター遺伝子で置換された本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物では、レポーター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの支配下に存在するので、レポーター遺伝子がコードする物質の発現をトレースすることにより、プロモーターの活性を検出することができる。
例えば、本発明のペプチドをコードするＤＮＡ領域の一部を大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）で置換している場合、本来、本発明のペプチドの発現する組織で、本発明のペプチドの代わりにβ−ガラクトシダーゼが発現する。従って、例えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−ｇａｌ）のようなβ−ガラクトシダーゼの基質となる試薬を用いて染色することにより、簡便に本発明のペプチドの動物生体内における発現状態を観察することができる。具体的には、本発明のペプチド欠損マウスまたはその組織切片をグルタルアルデヒドなどで固定し、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）で洗浄後、Ｘ−ｇａｌを含む染色液で、室温または３７℃付近で、約３０分ないし１時間反応させた後、組織標本を１ｍＭ ＥＤＴＡ／ＰＢＳ溶液で洗浄することによって、β−ガラクトシダーゼ反応を停止させ、呈色を観察すればよい。また、常法に従い、ｌａｃＺをコードするｍＲＮＡを検出してもよい。
上記スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれた化合物であり、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物である。
該スクリーニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸など）や塩基（例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
【０１１０】
本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、本発明のペプチドの発現を促進し、該ペプチドの機能を促進することができるので、例えば、本発明のペプチドの機能不全に関連する疾患などの予防・治療剤などの医薬として有用である。
より具体的には、本発明のペプチドが、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩである場合、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩は、安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌調節剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤などとして有用である。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、本発明のペプチドＦの活性を促進する安全で低毒性な医薬、例えば、中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)の予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌促進剤などとして有用である。
一方、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、本発明のペプチドＦの活性を抑制する安全で低毒性な医薬、例えば、本発明のペプチドＦの過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患の予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌阻害剤などとして有用である。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩は、プロラクチン分泌の調節作用剤として有用である。すなわち、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩がプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進剤として、プロラクチン分泌不全に関係する各種疾患、例えば、卵巣機能低下症、精嚢発育不全、骨粗鬆症、更年期障害、乳汁分泌不全、甲状腺機能低下、腎不全などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩がプロラクチン分泌促進作用を有する場合は、プロラクチン分泌促進作用に基づく性欲促進作用（フェロモン的作用）を有するため、性欲促進剤としても有用である。
本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩がプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制剤として、プロラクチン過剰分泌に関係する各種疾患、例えば、高プロラクチン血症、下垂体腺腫瘍、間脳腫瘍、月経異常、ストレス、自己免疫疾患、プロラクチノーマ、不妊症、インポテンス、無月経症、乳汁漏症、末端肥大症、キアリ・フロンメル（Chiari-Frommel）症候群、アルゴンツ-デル・カスティロ（Argonz-del Castilo）症候群、フォーベス・アルブライト（Forbes-Albright）症候群、乳癌リンパ腫またはシーハン症候群または精子形成異常などのプロラクチン分泌に関係する各種疾患の予防および治療薬として有用である。さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩がプロラクチン分泌抑制作用を有する場合は、プロラクチン分泌抑制作用に基づいて、避妊薬としても有用である。
その他、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩は、プロラクチン分泌機能を調べるための検査薬としても、また、ウシ、ヤギ、ブタなどの畜産哺乳動物の乳汁の分泌促進剤などの動物薬としても有用であり、さらには該畜産哺乳動物体内で有用物質を生産させ、これをその乳汁中への分泌することによる有用物質生産などへの応用できる。
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩は、絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防または治療薬としても有用である。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩は、例えば、高血圧、自己免疫疾患、心不全、白内障、緑内障、急性バクテリア髄膜炎，急性心筋梗塞，急性膵炎，急性ウイルス脳炎，成人呼吸促迫症候群，アルコール性肝炎，アルツハイマー病，喘息，動脈硬化，アトピー性皮膚炎，バクテリア肺炎，膀胱がん，骨折，乳がん，過食症，多食症，火傷治癒，子宮頸部がん，慢性リンパ性白血病，慢性骨髄性白血病，慢性膵炎，肝硬変，大腸がん（結腸／直腸がん），クローン病，痴呆，糖尿病性合併症，糖尿病性腎症，糖尿病性神経障害，糖尿病性網膜症，胃炎，ヘリコバクター・ピロリ感染症，肝不全，Ａ型肝炎，Ｂ型肝炎，Ｃ型肝炎，肝炎，単純ヘルペスウイルス感染症，水痘帯状疱疹ウイルス感染症，ホジキン病，エイズ感染症，ヒトパピローマウイルス感染症，高カルシウム血症，高コレステロール血症，高グリセリド血症，高脂血症，感染症，インフルエンザ感染症，インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型），侵襲性ブドウ状球菌感染症，悪性黒色腫，がん転移，多発性骨髄腫，アレルギー性鼻炎，腎炎，非ホジキン性リンパ腫，インシュリン非依存性糖尿病（II型），非小細胞肺がん，臓器移植，骨関節炎，骨軟化症，骨減少症，骨粗鬆症，卵巣がん，骨ペーチェット病，消化性潰瘍，末梢血管疾患，前立腺がん，逆流性食道炎，腎不全，リウマチ関節炎，精神分裂症，敗血症，敗血症ショック，重症全身性真菌感染症，小細胞肺がん，脊髄損傷，胃がん，全身性エリテマトーサス，一過性脳虚血発作，結核，心弁膜症，血管性／多発梗塞痴呆，創傷治癒，不眠症，関節炎、下垂体ホルモン分泌不全、瀕尿、尿毒症、または神経変成疾患等の疾病の治療・予防剤などの医薬として有用できる。
また、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩は、MACULAR EDEMA CYSTOID（嚢胞状黄斑浮腫）の疾病の治療・予防剤などの医薬として使用することができる。
さらに、本発明のペプチドＦ、Ｇ、ＨまたはＩをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩は、例えば、（１）先端巨大症、ＴＳＨ産生腫瘍、非分泌性（非機能性）下垂体腫瘍、異所性ＡＣＴＨ（アドレノコルチコトロピン）産生腫瘍、髄様甲状腺癌、ＶＩＰ産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、インスリノーマ、カルチノイドなどの腫瘍の治療薬、（２）インスリン依存性または非依存性糖尿病、あるいはこれら糖尿病に関連した種々の疾患、すなわち糖尿病合併症（例、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、ドーン症候群、起立性低血圧症など）の治療薬、（３）高インスリン血症の改善または食欲の抑制などによる肥満、過食症などの治療薬、（４）急性膵炎、慢性膵炎、膵臓・腸フィステル、出血性潰瘍、消化性潰瘍、胃炎、胃酸過多症、逆流性食道炎などの治療薬、（５）ヘリコバクター・ピロリ菌感染に伴う様々な症状の改善剤（例、ガストリン分泌昂進の抑制剤など）、（６）内視鏡胆道膵管造影に伴うアミラーゼの分泌抑制剤、さらには膵臓外科手術の予後治療薬、（７）小腸の吸収能低下、分泌昂進または消化管の運動能異常に起因する下痢（例、Ｓｈｏｒｔ ｂｏｗｅｌ症候群など）、癌化学療法などの薬物に起因する下痢、先天性小腸萎縮に起因する下痢、ＶＩＰ産生腫瘍などの神経内分泌腫瘍に起因する下痢、ＡＩＤＳに起因する下痢、骨髄移植などに伴う対宿主移植片反応に起因する下痢、糖尿病に起因する下痢、腹腔神経叢遮断に起因する下痢、全身性硬化症に起因する下痢、好酸球増加症に起因する下痢などの治療薬、（８）ダンピング症候群、過敏性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患などの治療薬、（９）腫瘍または癌（例、甲状腺癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、胆管癌、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌、メラノーマ、骨肉腫、軟骨肉腫、悪性褐色細胞腫、神経芽細胞腫、脳腫瘍、胸腺腫、腎臓癌など）、白血病（例、好塩基性白血球の白血病・慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン性リンパ腫など）などの治療薬；該治療薬は、単独または他の制癌剤（例、タモキシフエン、ＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、インターフェロン−α、βおよびγ、インターロイキン−２など）と併用して用いることができる、（１０）肥大性心筋症、動脈硬化症、心弁膜症、心筋梗塞（特に、経皮経管冠動脈形成術後の心解梗塞）、再血管形成の予防・治療薬、（１１）食道静脈癌出血、肝硬変、末梢血管疾患の治療薬、（１２）免疫系に作用する生理活性物質（例、サブスタンスＰ、タヒキニン、サイトカインなど）の分泌の調節作用に基づき、例えば、全身性または局所性の炎症に伴う疾患（例、多発性動脈炎、リュウマチ性関節炎、乾せん、日焼け、湿疹、アレルギー（例、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎など）など）の治療薬、（１３）神経調節因子の産生・分泌に影響を及ぼすことから、例えば、痴呆症（例、アルツハイマー病、アルツハイマー型老年期痴呆、血管性・多発性痴呆など）、精神分裂症、てんかん、うつ病、一般不安障害、睡眠障害、多発性硬化症などの治療薬、（１４）眼疾患（例、緑内障など）などの治療薬、（１５）急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、重症全身性真菌感染症、結核、脊髄損傷、骨折、肝不全、肺炎、アルコール性肝炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＡＩＤＳ感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、インフルエンザ感染症、癌転移、多発性骨髄腫、骨軟化症、骨粗しょう症、骨ベーチェット症、腎炎、腎不全、敗血症、敗血症ショック、高カルシウム血症、高コレステロール血症、高グリセリド血症、高脂血症、全身性エリテマトーサス、一過性脳虚血発作、アルコール性肝炎などの予防・治療薬として有用であり、（１６）臓器移植、火傷、創傷、脱毛症などの治癒などにも用いられ、（１７）慢性あるいは急性疼痛（例、術後疼痛、炎症性疼痛、歯痛、骨疾患（例、関節炎、リウマチ、骨粗鬆症など）にともなう疼痛）の抑制・緩和など、鎮痛剤としても有用である。
【０１１１】
さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、前記した本発明のペプチドまたはその塩を含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物を経口投与する場合、一般的に成人患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物を注射剤の形で通常成人患者（６０ｋｇとして）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
一方、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物を経口投与する場合、一般的に成人患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物を注射剤の形で通常成人患者（６０ｋｇとして）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
このように、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩をスクリーニングする上で極めて有用であり、本発明のＤＮＡ発現不全に起因する各種疾患の原因究明または予防・治療薬の開発に大きく貢献することができる。
また、本発明のペプチドのプロモーター領域を含有するＤＮＡを使って、その下流に種々のタンパクをコードする遺伝子を連結し、これを動物の卵細胞に注入していわゆるトランスジェニック動物（遺伝子移入動物）を作成すれば、特異的にそのペプチドを合成させ、その生体での作用を検討することも可能となる。さらに上記プロモーター部分に適当なレポータ遺伝子を結合させ、これが発現するような細胞株を樹立すれば、本発明のペプチドそのものの体内での産生能力を特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物の探索系として使用できる。
【０１１２】
ＡＱ２７受容体に対する抗体、ＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡと相補的な塩基配列またはその一部を含有してなるアンチセンスポリヌクレオチド（アンチセンスＤＮＡ）は、ＷＯ０１／１６３１３号に記載の方法に準じて製造することができる。
ＡＱ２７受容体、ＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡ（以下、ＡＱ２７受容体ＤＮＡと略記する場合がある）、ＡＱ２７受容体に対する抗体（以下、本発明の抗体と略記する場合がある）、ＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡ（以下、本発明のアンチセンスＤＮＡと略記する場合がある）は、以下の用途を有している。
【０１１３】
（１）ＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患の予防および／または治療剤
a）ＡＱ２７受容体またはb）ＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡを、ＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患の予防および／または治療剤などの医薬として使用することができる。
例えば、生体内においてＡＱ２７受容体が減少しているために、リガンドである脂肪酸の生理作用が期待できない（ＡＱ２７受容体の欠乏症）患者がいる場合に、a）ＡＱ２７受容体を該患者に投与し該ＡＱ２７受容体の量を補充したり、b）（イ）ＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡを該患者に投与し発現させることによって、あるいは（ロ）対象となる細胞にＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡを挿入し発現させた後に、該細胞を該患者に移植することなどによって、患者の体内におけるＡＱ２７受容体の量を増加させ、リガンドの作用を充分に発揮させることができる。すなわち、ＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡは、安全で低毒性なＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患の予防および／または治療剤などとして有用である。
具体的には、ＡＱ２７受容体またはＡＱ２７受容体ＤＮＡは、安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌促進剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤などとして有用である。
また、ＡＱ２７受容体またはＡＱ２７受容体ＤＮＡは、中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)の予防・治療剤などとして有用である。
ＡＱ２７受容体を上記予防・治療剤として使用する場合は、常套手段に従って製剤化することができる。
一方、ＡＱ２７受容体ＤＮＡを上記予防・治療剤として使用する場合は、ＡＱ２７受容体ＤＮＡを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って実施することができる。ＡＱ２７受容体ＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のための補助剤とともに、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。
例えば、a）ＡＱ２７受容体またはb）ＡＱ２７受容体ＤＮＡは、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、a）ＡＱ２７受容体またはb）ＡＱ２７受容体ＤＮＡを生理学的に認められる公知の担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
【０１１４】
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。
【０１１５】
また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填される。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
ＡＱ２７受容体の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、糖尿病患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、糖尿病患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
ＡＱ２７受容体ＤＮＡの投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、糖尿病患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、糖尿病患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【０１１６】
（２）遺伝子診断剤
ＡＱ２７受容体ＤＮＡおよびアンチセンスＤＮＡは、プローブとして使用することにより、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）におけるＡＱ２７受容体またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤として有用である。
ＡＱ２７受容体ＤＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、自体公知のノーザンハイブリダイゼーションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Genomics），第５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ユーエスエー（Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America），第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１９８９年））などにより実施することができる。
例えば、ノーザンハイブリダイゼーションによりＡＱ２７受容体の発現低下が検出された場合は、例えば、ＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
また、ノーザンハイブリダイゼーションによりＡＱ２７受容体の発現過多が検出された場合は、例えば、ＡＱ２７受容体の過剰発現に起因する疾患である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
ＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患としては、中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)などが挙げられる。
ＡＱ２７受容体の過剰発現に起因する疾患としては、例えば、ＡＱ２７受容体の過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患などが挙げられる。
【０１１７】
（３）ＡＱ２７受容体の発現量を変化させる化合物を含有する医薬
ＡＱ２７受容体ＤＮＡは、プローブとして用いることにより、ＡＱ２７受容体の発現量を変化させる化合物のスクリーニングに用いることができる。
すなわち、本発明は、例えば、（ｉ）非ヒト哺乳動物のa）血液、b）特定の臓器、c）臓器から単離した組織もしくは細胞、または（ii）形質転換体等に含まれるＡＱ２７受容体のｍＲＮＡ量を測定することによる、ＡＱ２７受容体の発現量を変化させる化合物のスクリーニング方法を提供する。
ＡＱ２７受容体のｍＲＮＡ量の測定は具体的には以下のようにして行なう。
（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど、より具体的には痴呆ラット、肥満マウス、動脈硬化ウサギ、担癌マウスなど）に対して、薬剤（例えば、抗痴呆薬、血圧低下薬、抗癌剤、抗肥満薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。
得られた細胞に含まれるＡＱ２７受容体のｍＲＮＡは、例えば、通常の方法により細胞等からｍＲＮＡを抽出し、例えば、ＴａｑＭａｎＰＣＲなどの手法を用いることにより定量することができ、自体公知の手段によりノザンブロットを行うことにより解析することもできる。
（ii）ＡＱ２７受容体を発現する形質転換体を上記の方法に従い作製し、該形質転換体に含まれるＡＱ２７受容体のｍＲＮＡを同様にして定量、解析することができる。
【０１１８】
ＡＱ２７受容体の発現量を変化させる化合物のスクリーニングは、
（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一定時間前（３０分前〜２４時間前、好ましくは３０分前〜１２時間前、より好ましくは１時間前〜６時間前）もしくは一定時間後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に被検化合物を投与し、投与後一定時間経過後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、細胞に含まれるＡＱ２７受容体のｍＲＮＡ量を定量、解析することにより行なうことができ、
（ii）形質転換体を常法に従い培養する際に被検化合物を培地中に混合させ、一定時間培養後（１日後〜７日後、好ましくは１日後〜３日後、より好ましくは２日後〜３日後）、該形質転換体に含まれるＡＱ２７受容体のｍＲＮＡ量を定量、解析することにより行なうことができる。
【０１１９】
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、ＡＱ２７受容体の発現量を変化させる作用を有する化合物であり、具体的には、（イ）ＡＱ２７受容体の発現量を増加させることにより、ＡＱ２７受容体を介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性など）を増強させる化合物、（ロ）ＡＱ２７受容体の発現量を減少させることにより、該細胞刺激活性を減弱させる化合物である。
該化合物としては、ペプチド、蛋白、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
上記スクリーニング方法で得られるＡＱ２７受容体の発現量を変化させる化合物は、安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌調節剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤などとして有用である。
また、ＡＱ２７受容体の発現量を増加させ、細胞刺激活性を増強させる化合物は、ＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患、例えば、中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)に対する安全で低毒性な予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌促進剤などとして有用である。
ＡＱ２７受容体の発現量を減少させ、細胞刺激活性を減弱させる化合物は、ＡＱ２７受容体の発現過多に起因する疾患、例えば、ＡＱ２７受容体の過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患に対する安全で低毒性な予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌阻害剤などとして有用である。
【０１２０】
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。
例えば、該化合物は、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、該化合物を生理学的に認められる公知の担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。
【０１２１】
また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填される。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、糖尿病患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、糖尿病患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【０１２２】
（４）ＡＱ２７受容体の定量法および診断方法
本発明の抗体は、ＡＱ２７受容体を特異的に認識することができるので、被検液中のＡＱ２７受容体の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定量などに使用することができる。
すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標識化されたＡＱ２７受容体とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化されたＡＱ２７受容体の割合を測定することを特徴とする被検液中のＡＱ２７受容体の定量法、および
（ii）被検液と担体上に不溶化した本発明の抗体および標識化された本発明の別の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中のＡＱ２７受容体の定量法を提供する。
【０１２３】
上記（ii）の定量法においては、一方の抗体がＡＱ２７受容体のＮ端部を認識する抗体で、他方の抗体がＡＱ２７受容体のＣ端部に反応する抗体であることが望ましい。
また、ＡＱ２７受容体に対するモノクローナル抗体を用いてＡＱ２７受容体の定量を行うことができるほか、組織染色等による検出を行なうこともできる。これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子のＦ(ａｂ')２、Ｆａｂ'、あるいはＦａｂ画分を用いてもよい。
本発明の抗体を用いるＡＱ２７受容体の定量法は、 特に制限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量（例えば、ＡＱ２７受容体量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好ましい。
【０１２４】
標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、例えば、〔１２５Ｉ〕、〔１３１Ｉ〕、〔３Ｈ〕、〔１４Ｃ〕などが用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大きなものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍光物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレッセンイソチオシアネートなどが用いられる。発光物質としては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが用いられる。さらに、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−アビジン系を用いることもできる。
抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物理吸着を用いてもよく、また通常ＡＱ２７受容体あるいは酵素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用いる方法でもよい。担体としては、アガロース、デキストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、あるいはガラス等があげられる。
サンドイッチ法においては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノクローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中のＡＱ２７受容体量を定量することができる。１次反応と２次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行なってもよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができる。また、サンドイッチ法による免疫測定法において、固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。
【０１２５】
本発明のサンドイッチ法によるＡＱ２７受容体の測定法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発明のモノクローナル抗体は、ＡＱ２７受容体の結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例えば、２次反応で用いられる抗体が、ＡＱ２７受容体のＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗体が用いられる。
本発明のモノクローナル抗体をサンドイッチ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメトリック法あるいはネフロメトリーなどに用いることができる。
競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原(Ｆ）と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコール、前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、および、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるいは、第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相化抗体を用いる固相化法とが用いられる。
イムノメトリック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離するか、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。
また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるいは溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の量を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。
これら個々の免疫学的測定法を本発明の定量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えてＡＱ２７受容体の測定系を構築すればよい。これらの一般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参照することができる。
例えば、入江 寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和４９年発行）、入江 寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」 Vol. 70(Immunochemical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunochemical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunochemical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochemical Techniques(Part D : Selected Immunoassays))、 同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E : Monoclonal Antibodies and General Immunoassay Methods))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part I : Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照することができる。
以上のようにして、本発明の抗体を用いることによって、ＡＱ２７受容体を感度良く定量することができる。
【０１２６】
さらには、本発明の抗体を用いてＡＱ２７受容体の濃度を定量することによって、ＡＱ２７受容体の濃度の減少が検出された場合、例えば、ＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
また、ＡＱ２７受容体の濃度の増加が検出された場合には、例えば、ＡＱ２７受容体の過剰発現に起因する疾患である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
ＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患としては、中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)などが挙げられる。
ＡＱ２７受容体の過剰発現に起因する疾患としては、例えば、ＡＱ２７受容体の過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患などが挙げられる。
【０１２７】
（５）細胞膜におけるＡＱ２７受容体またはその部分ペプチドの量を変化させる化合物を含有する医薬
本発明の抗体は、ＡＱ２７受容体を特異的に認識することができるので、細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を変化させる化合物のスクリーニングに用いることができる。
すなわち本発明は、例えば、
（ｉ）非ヒト哺乳動物のa）血液、b）特定の臓器、c）臓器から単離した組織もしくは細胞等を破壊した後、細胞膜画分を単離し、細胞膜画分に含まれるＡＱ２７受容体を定量することによる、細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を変化させる化合物のスクリーニング方法、
（ii）ＡＱ２７受容体を発現する形質転換体等を破壊した後、細胞膜画分を単離し、細胞膜画分に含まれるＡＱ２７受容体を定量することによる、細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を変化させる化合物のスクリーニング方法、
（iii）非ヒト哺乳動物のa）血液、b）特定の臓器、c）臓器から単離した組織もしくは細胞等を切片とした後、免疫染色法を用いることにより、細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することによる、細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を変化させる化合物のスクリーニング方法を提供する。
（iv）ＡＱ２７受容体を発現する形質転換体等を切片とした後、免疫染色法を用いることにより、細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することによる、細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を変化させる化合物のスクリーニング方法を提供する。
【０１２８】
細胞膜画分に含まれるＡＱ２７受容体の定量は具体的には以下のようにして行なう。
（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど、より具体的には痴呆ラット、肥満マウス、動脈硬化ウサギ、担癌マウスなど）に対して、薬剤（例えば、抗痴呆薬、血圧低下薬、抗癌剤、抗肥満薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。得られた臓器、組織または細胞等を、例えば、適当な緩衝液（例えば、トリス塩酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヘペス緩衝液など）等に懸濁し、臓器、組織あるいは細胞を破壊し、界面活性剤（例えば、トリトンＸ１００ＴＭ、ツイーン２０ＴＭなど）などを用い、さらに遠心分離や濾過、カラム分画などの手法を用いて細胞膜画分を得る。
細胞膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Potter−Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダーやポリトロン（Kinematica社製）のよる破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（５００ｒｐｍ〜３０００ｒｐｍ）で短時間（通常、約１分〜１０分）遠心し、上清をさらに高速（１５０００ｒｐｍ〜３００００ｒｐｍ）で通常３０分〜２時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現したＡＱ２７受容体と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
細胞膜画分に含まれるＡＱ２７受容体は、例えば、本発明の抗体を用いたサンドイッチ免疫測定法、ウエスタンブロット解析などにより定量することができる。
かかるサンドイッチ免疫測定法は上記の方法と同様にして行なうことができ、ウエスタンブロットは自体公知の手段により行なうことができる。
（ii）ＡＱ２７受容体を発現する形質転換体を上記の方法に従い作製し、細胞膜画分に含まれるＡＱ２７受容体を定量することができる。
【０１２９】
細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を変化させる化合物のスクリーニングは、（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一定時間前（３０分前〜２４時間前、好ましくは３０分前〜１２時間前、より好ましくは１時間前〜６時間前）もしくは一定時間後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に被検化合物を投与し、投与後一定時間経過後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を定量することにより行なうことができ、
（ii）形質転換体を常法に従い培養する際に被検化合物を培地中に混合させ、一定時間培養後（１日後〜７日後、好ましくは１日後〜３日後、より好ましくは２日後〜３日後）、細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を定量することにより行なうことができる。
細胞膜画分に含まれるＡＱ２７受容体の確認は具体的には以下のようにして行なう。
（iii）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど、より具体的には痴呆ラット、肥満マウス、動脈硬化ウサギ、担癌マウスなど）に対して、薬剤（例えば、抗痴呆薬、血圧低下薬、抗癌剤、抗肥満薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。得られた臓器、組織または細胞等を、常法に従い組織切片とし、本発明の抗体を用いて免疫染色を行う。細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することにより、定量的または定性的に、細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を確認することができる。
（iv）ＡＱ２７受容体を発現する形質転換体等を用いて同様の手段をとることにより確認することもできる。
【０１３０】
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を変化させる作用を有する化合物であり、具体的には、（イ）細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を増加させることにより、Ｇ蛋白質共役型レセプターを介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性など）を増強させる化合物、（ロ）細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を減少させることにより、該細胞刺激活性を減弱させる化合物である。
該化合物としては、ペプチド、蛋白、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
該化合物は、安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌調節剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤などとして有用である。
また、細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を増加させることにより、細胞刺激活性を増強させる化合物は、ＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患に対する安全で低毒性な予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌促進剤などとして有用である。
細胞膜におけるＡＱ２７受容体の量を減少させることにより、細胞刺激活性を減弱させる化合物は、ＡＱ２７受容体の発現過多に起因する疾患に対する安全で低毒性な予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌阻害剤として有用である。
ＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患としては、中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)などが挙げられる。
ＡＱ２７受容体の過剰発現に起因する疾患としては、例えば、ＡＱ２７受容体の過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患などが挙げられる。
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。
例えば、該化合物は、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、該化合物を生理学的に認められる公知の担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
【０１３１】
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。
また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填される。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、糖尿病患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、糖尿病患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【０１３２】
（６）ＡＱ２７受容体に対する抗体を含有してなる医薬
ＡＱ２７受容体に対する抗体の中和活性とは、該ＡＱ２７受容体の関与するシグナル伝達機能を不活性化する活性を意味する。従って、該抗体が中和活性を有する場合は、該ＡＱ２７受容体の関与するシグナル伝達、例えば、該ＡＱ２７受容体を介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性など）を不活性化することができる。
したがって、ＡＱ２７受容体に対する中和抗体は、安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌阻害剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調、またはＡＱ２７受容体の過剰発現などに起因する疾患、例えば、本発明のペプチドＦの過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患の予防・治療剤などとして有用である。
【０１３３】
（７）本発明のアンチセンスＤＮＡを含有してなる医薬
本発明のアンチセンスＤＮＡは、安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌阻害剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調、またはＡＱ２７受容体の過剰発現などに起因する疾患、例えば、本発明のペプチドＦの過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患の予防・治療剤などとして用いることができる。
例えば、該アンチセンスＤＮＡを用いる場合、該アンチセンスＤＮＡを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って実施することができる。該アンチセンスＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。
さらに、該アンチセンスＤＮＡは、組織や細胞におけるＡＱ２７受容体ＤＮＡの存在やその発現状況を調べるための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用することもできる。
【０１３４】
（８）ＡＱ２７受容体ＤＮＡ導入動物の作製
本発明は、外来性のＡＱ２７受容体ＤＮＡ（以下、本発明の外来性ＤＮＡと略記する）またはその変異ＤＮＡ（本発明の外来性変異ＤＮＡと略記する場合がある）を有する非ヒト哺乳動物を提供する。
すなわち、本発明は、
〔１〕本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物、
〔２〕非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第〔１〕記載の動物、
〔３〕ゲッ歯動物がマウスまたはラットである第〔２〕記載の動物、および
〔４〕本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを含有し、哺乳動物において発現しうる組換えベクターを提供するものである。
本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物（以下、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ転移動物と略記する）は、未受精卵、受精卵、精子およびその始原細胞を含む胚芽細胞などに対して、好ましくは、非ヒト哺乳動物の発生における胚発生の段階（さらに好ましくは、単細胞または受精卵細胞の段階でかつ一般に８細胞期以前）に、リン酸カルシウム法、電気パルス法、リポフェクション法、凝集法、マイクロインジェクション法、パーティクルガン法、ＤＥＡＥ−デキストラン法などにより目的とするＤＮＡを転移することによって作出することができる。また、該ＤＮＡ転移方法により、体細胞、生体の臓器、組織細胞などに目的とする本発明の外来性ＤＮＡを転移し、細胞培養、組織培養などに利用することもでき、さらに、これら細胞を上述の胚芽細胞と自体公知の細胞融合法により融合させることによりＡＱ２７受容体ＤＮＡ転移動物を作出することもできる。
非ヒト哺乳動物としては、例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、マウス、ラットなどが用いられる。なかでも、病体動物モデル系の作成の面から個体発生および生物サイクルが比較的短く、また、繁殖が容易なゲッ歯動物、とりわけマウス（例えば、純系として、Ｃ５７ＢＬ／６系統，ＤＢＡ２系統など、交雑系として、Ｂ６Ｃ３Ｆ１系統，ＢＤＦ１系統，Ｂ６Ｄ２Ｆ１系統，ＢＡＬＢ／ｃ系統，ＩＣＲ系統など）またはラット（例えば、Ｗｉｓｔａｒ，ＳＤなど）などが好ましい。
哺乳動物において発現しうる組換えベクターにおける「哺乳動物」としては、上記の非ヒト哺乳動物の他にヒトなどがあげられる。
【０１３５】
本発明の外来性ＤＮＡとは、非ヒト哺乳動物が本来有しているＡＱ２７受容体ＤＮＡではなく、いったん哺乳動物から単離・抽出されたＡＱ２７受容体ＤＮＡをいう。
本発明の変異ＤＮＡとしては、元のＡＱ２７受容体ＤＮＡの塩基配列に変異（例えば、突然変異など）が生じたもの、具体的には、塩基の付加、欠損、他の塩基への置換などが生じたＤＮＡなどが用いられ、また、異常ＤＮＡも含まれる。
該異常ＤＮＡとしては、異常なＡＱ２７受容体を発現させるＤＮＡを意味し、例えば、正常なＡＱ２７受容体の機能を抑制するＡＱ２７受容体を発現させるＤＮＡなどが用いられる。
本発明の外来性ＤＮＡは、対象とする動物と同種あるいは異種のどちらの哺乳動物由来のものであってもよい。ＡＱ２７受容体ＤＮＡを対象動物に転移させるにあたっては、該ＤＮＡを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結合したＤＮＡコンストラクトとして用いるのが一般に有利である。例えば、本発明のヒトＤＮＡを転移させる場合、これと相同性が高いＡＱ２７受容体ＤＮＡを有する各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来のＤＮＡを発現させうる各種プロモーターの下流に、本発明のヒトＤＮＡを結合したＤＮＡコンストラクト（例、ベクターなど）を対象哺乳動物の受精卵、例えば、マウス受精卵へマイクロインジェクションすることによってＡＱ２７受容体ＤＮＡを高発現するＤＮＡ転移哺乳動物を作出することができる。
【０１３６】
ＡＱ２７受容体の発現ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミド、酵母由来のプラスミド、λファージなどのバクテリオファージ、モロニー白血病ウィルスなどのレトロウィルス、ワクシニアウィルスまたはバキュロウィルスなどの動物ウイルスなどが用いられる。なかでも、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミドまたは酵母由来のプラスミドなどが好ましく用いられる。
上記のＤＮＡ発現調節を行なうプロモーターとしては、例えば、▲１▼ウイルス（例、シミアンウイルス、サイトメガロウイルス、モロニー白血病ウイルス、ＪＣウイルス、乳癌ウイルス、ポリオウイルスなど）に由来するＤＮＡのプロモーター、▲２▼各種哺乳動物（ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来のプロモーター、例えば、アルブミン、インスリンＩＩ、ウロプラキンＩＩ、エラスターゼ、エリスロポエチン、エンドセリン、筋クレアチンキナーゼ、グリア線維性酸性タンパク質、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、血小板由来成長因子β、ケラチンＫ１，Ｋ１０およびＫ１４、コラーゲンＩ型およびＩＩ型、サイクリックＡＭＰ依存タンパク質キナーゼβＩサブユニット、ジストロフィン、酒石酸抵抗性アルカリフォスファターゼ、心房ナトリウム利尿性因子、内皮レセプターチロシンキナーゼ（一般にＴｉｅ２と略される）、ナトリウムカリウムアデノシン３リン酸化酵素（Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰａｓｅ）、ニューロフィラメント軽鎖、メタロチオネインＩおよびＩＩＡ、メタロプロティナーゼ１組織インヒビター、ＭＨＣクラスＩ抗原（Ｈ−２Ｌ）、Ｈ−ｒａｓ、レニン、ドーパミンβ−水酸化酵素、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、ペプチド鎖延長因子1α（ＥＦ−１α）、βアクチン、αおよびβミオシン重鎖、ミオシン軽鎖１および２、ミエリン基礎タンパク質、チログロブリン、Ｔｈｙ−１、免疫グロブリン、Ｈ鎖可変部（ＶＮＰ）、血清アミロイドＰコンポーネント、ミオグロビン、トロポニンＣ、平滑筋αアクチン、プレプロエンケファリンＡ、バソプレシンなどのプロモーターなどが用いられる。なかでも、全身で高発現することが可能なサイトメガロウイルスプロモーター、ヒトペプチド鎖延長因子１α（ＥＦ−１α）のプロモーター、ヒトおよびニワトリβアクチンプロモーターなどが好適である。
上記ベクターは、ＤＮＡ転移哺乳動物において目的とするメッセンジャーＲＮＡの転写を終結する配列（一般にターミネターと呼ばれる）を有していることが好ましく、例えば、ウイルス由来および各種哺乳動物由来の各ＤＮＡの配列を用いることができ、好ましくは、シミアンウイルスのＳＶ４０ターミネターなどが用いられる。
【０１３７】
その他、目的とする外来性ＤＮＡをさらに高発現させる目的で各ＤＮＡのスプライシングシグナル、エンハンサー領域、真核ＤＮＡのイントロンの一部などをプロモーター領域の５’上流、プロモーター領域と翻訳領域間あるいは翻訳領域の３’下流 に連結することも目的により可能である。
正常なＡＱ２７受容体の翻訳領域は、ヒトまたは各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来の肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＤＮＡおよび市販の各種ゲノムＤＮＡライブラリーよりゲノムＤＮＡの全てあるいは一部として、または肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＲＮＡより公知の方法により調製された相補ＤＮＡを原料として取得することが出来る。また、外来性の異常ＤＮＡは、上記の細胞または組織より得られた正常なＡＱ２７受容体の翻訳領域を点突然変異誘発法により変異した翻訳領域を作製することができる。
該翻訳領域は転移動物において発現しうるＤＮＡコンストラクトとして、前記のプロモーターの下流および所望により転写終結部位の上流に連結させる通常のＤＮＡ工学的手法により作製することができる。
受精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞のすべてに存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において、本発明の外来性ＤＮＡが存在することは、作出動物の後代がすべて、その胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性ＤＮＡを保持することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性ＤＮＡを有する。
本発明の外来性正常ＤＮＡを転移させた非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持することを確認して、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。
受精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに過剰に存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明の外来性ＤＮＡが過剰に存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡを過剰に有することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡを過剰に有する。
導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該ＤＮＡを過剰に有するように繁殖継代することができる。
【０１３８】
本発明の正常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、本発明の正常ＤＮＡが高発現させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を促進することにより最終的にＡＱ２７受容体の機能亢進症を発症することがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の正常ＤＮＡ転移動物を用いて、ＡＱ２７受容体の機能亢進症や、ＡＱ２７受容体が関連する疾患の病態機序の解明およびこれらの疾患の治療方法の検討を行なうことが可能である。
また、本発明の外来性正常ＤＮＡを転移させた哺乳動物は、遊離したＡＱ２７受容体の増加症状を有することから、ＡＱ２７受容体に関連する疾患に対する治療薬のスクリーニング試験にも利用可能である。
一方、本発明の外来性異常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持することを確認して該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。さらに、目的とする外来ＤＮＡを前述のプラスミドに組み込んで原科として用いることができる。プロモーターとのＤＮＡコンストラク卜は、通常のＤＮＡ工学的手法によって作製することができる。受精卵細胞段階における本発明の異常ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明の異常ＤＮＡが存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫は、その胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有する。導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該ＤＮＡを有するように繁殖継代することができる。
【０１３９】
本発明の異常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、本発明の異常ＤＮＡが高発現させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を阻害することにより最終的にＡＱ２７受容体の機能不活性型不応症となることがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の異常ＤＮＡ転移動物を用いて、ＡＱ２７受容体の機能不活性型不応症の病態機序の解明およびこの疾患を治療方法の検討を行なうことが可能である。
また、具体的な利用可能性としては、本発明の異常ＤＮＡ高発現動物は、ＡＱ２７受容体の機能不活性型不応症における本発明の異常ＡＱ２７受容体による正常ＡＱ２７受容体の機能阻害（dominant negative作用）を解明するモデルとなる。
また、本発明の外来異常ＤＮＡを転移させた哺乳動物は、遊離したＡＱ２７受容体の増加症状を有することから、ＡＱ２７受容体またはの機能不活性型不応症に対する治療薬スクリーニング試験にも利用可能である。
また、上記２種類のＡＱ２７受容体ＤＮＡ転移動物のその他の利用可能性として、例えば、
▲１▼組織培養のための細胞源としての使用、
▲２▼ＡＱ２７受容体ＤＮＡ転移動物の組織中のＤＮＡもしくはＲＮＡを直接分析するか、またはＤＮＡにより発現されたＡＱ２７受容体組織を分析することによる、ＡＱ２７受容体により特異的に発現あるいは活性化するＡＱ２７受容体との関連性についての解析、
▲３▼ＤＮＡを有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、これらを使用して、一般に培養困難な組織からの細胞の機能の研究、
▲４▼上記▲３▼記載の細胞を用いることによる細胞の機能を高めるような薬剤のスクリーニング、および
▲５▼本発明の変異ＡＱ２７受容体を単離精製およびその抗体作製などが考えられる。
さらに、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ転移動物を用いて、ＡＱ２７受容体の機能不活性型不応症などを含む、ＡＱ２７受容体に関連する疾患の臨床症状を調べることができ、また、ＡＱ２７受容体に関連する疾患モデルの各臓器におけるより詳細な病理学的所見が得られ、新しい治療方法の開発、さらには、該疾患による二次的疾患の研究および治療に貢献することができる。
また、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ転移動物から各臓器を取り出し、細切後、トリプシンなどのタンパク質分解酵素により、遊離したＤＮＡ転移細胞の取得、その培養またはその培養細胞の系統化を行なうことが可能である。さらに、ＡＱ２７受容体産生細胞の特定化、アポトーシス、分化あるいは増殖との関連性、またはそれらにおけるシグナル伝達機構を調べ、それらの異常を調べることなどができ、ＡＱ２７受容体およびその作用解明のための有効な研究材料となる。
さらに、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ転移動物を用いて、ＡＱ２７受容体の機能不活性型不応症を含む、ＡＱ２７受容体に関連する疾患の治療薬の開発を行なうために、上述の検査法および定量法などを用いて、有効で迅速な該疾患治療薬のスクリーニング法を提供することが可能となる。また、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ転移動物または本発明の外来性ＤＮＡ発現ベクターを用いて、ＡＱ２７受容体が関連する疾患のＤＮＡ治療法を検討、開発することが可能である。
【０１４０】
（９）ノックアウト動物
本発明は、ＡＱ２７受容体ＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞およびＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を提供する。
すなわち、本発明は、
〔１〕ＡＱ２７受容体ＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞、
〔２〕該ＤＮＡがレポーター遺伝子（例、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不活性化された第〔１〕項記載の胚幹細胞、
〔３〕ネオマイシン耐性である第〔１〕項記載の胚幹細胞、
〔４〕非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第〔１〕項記載の胚幹細胞、
〔５〕ゲッ歯動物がマウスである第〔４〕項記載の胚幹細胞、
〔６〕ＡＱ２７受容体ＤＮＡが不活性化された該ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物、
〔７〕該ＤＮＡがレポーター遺伝子（例、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子がＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうる第〔６〕項記載の非ヒト哺乳動物、
〔８〕非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第〔６〕項記載の非ヒト哺乳動物、
〔９〕ゲッ歯動物がマウスである第〔８〕項記載の非ヒト哺乳動物、および
〔１０〕第〔７〕項記載の動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とするＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
ＡＱ２７受容体ＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞とは、該非ヒト哺乳動物が有するＡＱ２７受容体ＤＮＡに人為的に変異を加えることにより、ＤＮＡの発現能を抑制するか、もしくは該ＤＮＡがコードしているＡＱ２７受容体の活性を実質的に喪失させることにより、ＤＮＡが実質的にＡＱ２７受容体の発現能を有さない（以下、本発明のノックアウトＤＮＡと称することがある）非ヒト哺乳動物の胚幹細胞（以下、ＥＳ細胞と略記する）をいう。
非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。
ＡＱ２７受容体ＤＮＡに人為的に変異を加える方法としては、例えば、遺伝子工学的手法により該ＤＮＡ配列の一部又は全部の削除、他ＤＮＡを挿入または置換させることによって行なうことができる。これらの変異により、例えば、コドンの読み取り枠をずらしたり、プロモーターあるいはエキソンの機能を破壊することにより本発明のノックアウトＤＮＡを作製すればよい。
【０１４１】
ＡＱ２７受容体ＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞（以下、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ不活性化ＥＳ細胞または本発明のノックアウトＥＳ細胞と略記する）の具体例としては、例えば、目的とする非ヒト哺乳動物が有するＡＱ２７受容体ＤＮＡを単離し、そのエキソン部分にネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子を代表とする薬剤耐性遺伝子、あるいはｌａｃＺ（β−ガラクトシダーゼ遺伝子）、ｃａｔ（クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子）を代表とするレポーター遺伝子等を挿入することによりエキソンの機能を破壊するか、あるいはエキソン間のイントロン部分に遺伝子の転写を終結させるＤＮＡ配列（例えば、polyＡ付加シグナルなど）を挿入し、完全なメッセンジャーＲＮＡを合成できなくすることによって、結果的に遺伝子を破壊するように構築したＤＮＡ配列を有するＤＮＡ鎖（以下、ターゲッティングベクターと略記する）を、例えば相同組換え法により該動物の染色体に導入し、得られたＥＳ細胞についてＡＱ２７受容体ＤＮＡ上あるいはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析あるいはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列とターゲッティングベクター作製に使用したＡＱ２７受容体ＤＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列をプライマーとしたＰＣＲ法により解析し、本発明のノックアウトＥＳ細胞を選別することにより得ることができる。
また、相同組換え法等によりＡＱ２７受容体ＤＮＡを不活化させる元のＥＳ細胞としては、例えば、前述のような既に樹立されたものを用いてもよく、また公知 EvansとKaufmaの方法に準じて新しく樹立したものでもよい。例えば、マウスのＥＳ細胞の場合、現在、一般的には１２９系のＥＳ細胞が使用されているが、免疫学的背景がはっきりしていないので、これに代わる純系で免疫学的に遺伝的背景が明らかなＥＳ細胞を取得するなどの目的で例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウスやＣ５７ＢＬ／６の採卵数の少なさをＤＢＡ／２との交雑により改善したＢＤＦ１マウス（Ｃ５７ＢＬ／６とＤＢＡ／２とのＦ１）を用いて樹立したものなども良好に用いうる。ＢＤＦ１マウスは、採卵数が多く、かつ、卵が丈夫であるという利点に加えて、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを背景に持つので、これを用いて得られたＥＳ細胞は病態モデルマウスを作出したとき、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとバッククロスすることでその遺伝的背景をＣ５７ＢＬ／６マウスに代えることが可能である点で有利に用い得る。
また、ＥＳ細胞を樹立する場合、一般には受精後３.５日目の胚盤胞を使用するが、これ以外に８細胞期胚を採卵し胚盤胞まで培養して用いることにより効率よく多数の初期胚を取得することができる。
また、雌雄いずれのＥＳ細胞を用いてもよいが、通常雄のＥＳ細胞の方が生殖系列キメラを作出するのに都合が良い。また、煩雑な培養の手間を削減するためにもできるだけ早く雌雄の判別を行なうことが望ましい。
【０１４２】
ＥＳ細胞の雌雄の判定方法としては、例えば、ＰＣＲ法によりＹ染色体上の性決定領域の遺伝子を増幅、検出する方法が、その１例としてあげることができる。この方法を使用すれば、従来、核型分析をするのに約１０６個の細胞数を要していたのに対して、１コロニー程度のＥＳ細胞数（約５０個）で済むので、培養初期におけるＥＳ細胞の第一次セレクションを雌雄の判別で行なうことが可能であり、早期に雄細胞の選定を可能にしたことにより培養初期の手間は大幅に削減できる。
また、第二次セレクションとしては、例えば、Ｇ−バンディング法による染色体数の確認等により行うことができる。得られるＥＳ細胞の染色体数は正常数の１００％が望ましいが、樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、ＥＳ細胞の遺伝子をノックアウトした後、正常細胞（例えば、マウスでは染色体数が２ｎ＝４０である細胞）に再びクローニングすることが望ましい。
このようにして得られた胚幹細胞株は、通常その増殖性は大変良いが、個体発生できる能力を失いやすいので、注意深く継代培養することが必要である。例えば、ＳＴＯ繊維芽細胞のような適当なフィーダー細胞上でＬＩＦ（１〜１００００U/ml）存在下に炭酸ガス培養器内（好ましくは、５％炭酸ガス、９５％空気または５％酸素、５％炭酸ガス、９０％空気）で約３７℃で培養するなどの方法で培養し、継代時には、例えば、トリプシン／ＥＤＴＡ溶液（通常０.００１〜０.５％トリプシン／０.１〜５ｍＭ ＥＤＴＡ、好ましくは約０.１％トリプシン／１ｍＭ ＥＤＴＡ）処理により単細胞化し、新たに用意したフィーダー細胞上に播種する方法などがとられる。このような継代は、通常１〜３日毎に行なうが、この際に細胞の観察を行い、形態的に異常な細胞が見受けられた場合はその培養細胞は放棄することが望まれる。
ＥＳ細胞は、適当な条件により、高密度に至るまで単層培養するか、または細胞集塊を形成するまで浮遊培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋などの種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり〔M. J. Evans及びM. H. Kaufman, ネイチャー（Nature）第292巻、154頁、1981年；G. R. Martin プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.）第78巻、7634頁、1981年；T. C. Doetschman ら、ジャーナル・オブ・エンブリオロジー・アンド・エクスペリメンタル・モルフォロジー、第87巻、27頁、1985年〕、本発明のＥＳ細胞を分化させて得られるＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全細胞は、インビトロにおけるＡＱ２７受容体またはＡＱ２７受容体の細胞生物学的検討において有用である。
【０１４３】
ＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、該動物のｍＲＮＡ量を公知方法を用いて測定して間接的にその発現量を比較することにより、正常動物と区別することが可能である。
該非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。
ＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、例えば、前述のようにして作製したターゲッティングベクターをマウス胚幹細胞またはマウス卵細胞に導入し、導入によりターゲッティングベクターのＡＱ２７受容体ＤＮＡが不活性化されたＤＮＡ配列が遺伝子相同組換えにより、マウス胚幹細胞またはマウス卵細胞の染色体上のＡＱ２７受容体ＤＮＡと入れ換わる相同組換えをさせることにより、ＡＱ２７受容体ＤＮＡをノックアウトさせることができる。
ＡＱ２７受容体ＤＮＡがノックアウトされた細胞は、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ上またはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析またはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列と、ターゲッティングベクターに使用したマウス由来のＡＱ２７受容体ＤＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列とをプライマーとしたＰＣＲ法による解析で判定することができる。非ヒト哺乳動物胚幹細胞を用いた場合は、遺伝子相同組換えにより、ＡＱ２７受容体ＤＮＡが不活性化された細胞株をクローニングし、その細胞を適当な時期、例えば、８細胞期の非ヒト哺乳動物胚または胚盤胞に注入し、作製したキメラ胚を偽妊娠させた該非ヒト哺乳動物の子宮に移植する。作出された動物は正常なＡＱ２７受容体ＤＮＡ座をもつ細胞と人為的に変異したＡＱ２７受容体ＤＮＡ座をもつ細胞との両者から構成されるキメラ動物である。
該キメラ動物の生殖細胞の一部が変異したＡＱ２７受容体ＤＮＡ座をもつ場合、このようなキメラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体群より、全ての組織が人為的に変異を加えたＡＱ２７受容体ＤＮＡ座をもつ細胞で構成された個体を、例えば、コートカラーの判定等により選別することにより得られる。このようにして得られた個体は、通常、ＡＱ２７受容体のヘテロ発現不全個体であり、ＡＱ２７受容体のヘテロ発現不全個体同志を交配し、それらの産仔からＡＱ２７受容体のホモ発現不全個体を得ることができる。
【０１４４】
卵細胞を使用する場合は、例えば、卵細胞核内にマイクロインジェクション法でＤＮＡ溶液を注入することによりターゲッティングベクターを染色体内に導入したトランスジェニック非ヒト哺乳動物を得ることができ、これらのトランスジェニック非ヒト哺乳動物に比べて、遺伝子相同組換えによりＡＱ２７受容体ＤＮＡ座に変異のあるものを選択することにより得られる。
このようにしてＡＱ２７受容体ＤＮＡがノックアウトされている個体は、交配により得られた動物個体も該ＤＮＡがノックアウトされていることを確認して通常の飼育環境で飼育継代を行なうことができる。
さらに、生殖系列の取得および保持についても常法に従えばよい。すなわち、該不活化ＤＮＡの保有する雌雄の動物を交配することにより、該不活化ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得しうる。得られたホモザイゴート動物は、母親動物に対して、正常個体１，ホモザイゴート複数になるような状態で飼育することにより効率的に得ることができる。ヘテロザイゴート動物の雌雄を交配することにより、該不活化ＤＮＡを有するホモザイゴートおよびヘテロザイゴート動物を繁殖継代する。
ＡＱ２７受容体ＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞は、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を作出する上で、非常に有用である。
また、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、ＡＱ２７受容体により誘導され得る種々の生物活性を欠失するため、ＡＱ２７受容体の生物活性の不活性化を原因とする疾病のモデルとなり得るので、これらの疾病の原因究明及び治療法の検討に有用である。
【０１４５】
（９ａ）ＡＱ２７受容体ＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物のスクリーニング方法
ＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、ＡＱ２７受容体ＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物のスクリーニングに用いることができる。
すなわち、本発明は、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を投与し、該動物の変化を観察・測定することを特徴とする、ＡＱ２７受容体ＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
該スクリーニング方法において用いられるＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものがあげられる。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などがあげられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
具体的には、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を、試験化合物で処理し、無処理の対照動物と比較し、該動物の各器官、組織、疾病の症状などの変化を指標として試験化合物の治療・予防効果を試験することができる。
試験動物を試験化合物で処理する方法としては、例えば、経口投与、静脈注射などが用いられ、試験動物の症状、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。また、試験化合物の投与量は、投与方法、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。
【０１４６】
該スクリーニング方法において、試験動物に試験化合物を投与した場合、該試験動物の血糖値が約１０％以上、好ましくは約３０％以上、より好ましくは約５０％以上低下した場合、該試験化合物を上記の疾患に対して治療・予防効果を有する化合物として選択することができる。
該スクリーニング方法を用いて得られる化合物は、上記した試験化合物から選ばれた化合物であり、ＡＱ２７受容体の欠損や損傷などによって引き起こされる疾患（例えば、中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)）に対する安全で低毒性な治療・予防剤、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌促進剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤などとして有用である。さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
該スクリーニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸など）や塩基（例、アルカリ金属など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、前記したＡＱ２７受容体とリガンドとの結合性を変化させる化合物を含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、該化合物を経口投与する場合、一般的に糖尿病患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、該化合物を注射剤の形で通常、糖尿病患者（体重６０ｋｇとして）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【０１４７】
（９ｂ）ＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物をスクリーニング方法
本発明は、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とするＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
上記スクリーニング方法において、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記したＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物の中でも、ＡＱ２７受容体ＤＮＡがレポーター遺伝子を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子がＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうるものが用いられる。
試験化合物としては、前記と同様のものがあげられる。
レポーター遺伝子としては、前記と同様のものが用いられ、β−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）、可溶性アルカリフォスファターゼ遺伝子またはルシフェラーゼ遺伝子などが好適である。
ＡＱ２７受容体ＤＮＡをレポーター遺伝子で置換されたＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物では、レポーター遺伝子がＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーターの支配下に存在するので、レポーター遺伝子がコードする物質の発現をトレースすることにより、プロモーターの活性を検出することができる。
例えば、ＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡ領域の一部を大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）で置換している場合、本来、ＡＱ２７受容体の発現する組織で、ＡＱ２７受容体の代わりにβ−ガラクトシダーゼが発現する。従って、例えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−ｇａｌ）のようなβ−ガラクトシダーゼの基質となる試薬を用いて染色することにより、簡便にＡＱ２７受容体の動物生体内における発現状態を観察することができる。具体的には、ＡＱ２７受容体欠損マウスまたはその組織切片をグルタルアルデヒドなどで固定し、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）で洗浄後、Ｘ−ｇａｌを含む染色液で、室温または３７℃付近で、約３０分ないし１時間反応させた後、組織標本を１ｍＭ ＥＤＴＡ／ＰＢＳ溶液で洗浄することによって、β−ガラクトシダーゼ反応を停止させ、呈色を観察すればよい。また、常法に従い、ｌａｃＺをコードするｍＲＮＡを検出してもよい。
上記スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれた化合物であり、ＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物である。
該スクリーニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸など）や塩基（例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
【０１４８】
ＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩は、安全で低毒性な医薬、例えば、ホルモン分泌調節剤（例えば、コルチコステロンなどの副腎皮質ホルモン分泌調節剤）、摂食調節剤、睡眠調節剤、覚醒調節剤、痛覚調節剤、ストレス応答調節剤、自発行動調節剤、情動行動調節剤などとして有用である。
ＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、ＡＱ２７受容体の発現を促進し、ＡＱ２７受容体の機能を促進することができるので、例えば、ＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患などの予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌促進剤などの医薬として有用である。
ＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、ＡＱ２７受容体の発現を阻害し、ＡＱ２７受容体の機能を阻害することができるので、例えば、ＡＱ２７受容体の発現過多に関連する疾患などの予防・治療剤、副腎皮質ホルモン分泌阻害剤などの医薬として有用である。
ＡＱ２７受容体の機能不全に関連する疾患としては、中枢疾患(例えばアルツハイマー病・痴呆・摂食障害（拒食症）・てんかんなど)、ホルモン系の疾患（例えば、微弱陣痛、弛緩出血、胎盤娩出前後、子宮復古不全、帝王切開術、人工妊娠中絶、乳汁うっ滞など）、肝/胆/膵/内分泌疾患(例えば糖尿病・摂食障害など)、炎症性疾患(アレルギー・喘息・リュウマチなど)、循環器疾患(例えば高血圧症・心肥大・狭心症・動脈硬化等)などが含まれる。
ＡＱ２７受容体の過剰発現に起因する疾患としては、例えば、本発明のペプチドＦの過剰な産生によって惹起される中枢疾患、ホルモン系の疾患、肝／胆／膵／内分泌疾患（例えば抗肥満薬・摂食過剰など）、炎症性疾患、循環器疾患などが挙げられる。
さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
【０１４９】
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、前記したＡＱ２７受容体またはその塩とリガンドとの結合性を変化させる化合物を含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、ＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物を経口投与する場合、一般的に糖尿病患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、ＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物を注射剤の形で通常、糖尿病患者（体重６０ｋｇとして）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
このように、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、ＡＱ２７受容体ＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩をスクリーニングする上で極めて有用であり、ＡＱ２７受容体ＤＮＡ発現不全に起因する各種疾患の原因究明または予防・治療薬の開発に大きく貢献することができる。
また、ＡＱ２７受容体のプロモーター領域を含有するＤＮＡを使って、その下流に種々のタンパクをコードする遺伝子を連結し、これを動物の卵細胞に注入していわゆるトランスジェニック動物（遺伝子移入動物）を作成すれば、特異的にそのＡＱ２７受容体を合成させ、その生体での作用を検討することも可能となる。さらに上記プロモーター部分に適当なレポータ遺伝子を結合させ、これが発現するような細胞株を樹立すれば、ＡＱ２７受容体そのものの体内での産生能力を特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物の探索系として使用できる。
【０１５０】
本明細書および図面において、塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Commission on Biochemical Nomenclatureによる略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸
ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸
Ａ ：アデニン
Ｔ ：チミン
Ｇ ：グアニン
Ｃ ：シトシン
Ｉ ：イノシン
Ｒ ：アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）
Ｙ ：チミン（Ｔ）またはシトシン（Ｃ）
Ｍ ：アデニン（Ａ）またはシトシン（Ｃ）
Ｋ ：グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｓ ：グアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）
Ｗ ：アデニン（Ａ）またはチミン（Ｔ）
Ｂ ：グアニン（Ｇ）、グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｄ ：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｖ ：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）
Ｎ ：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）もしく
はチミン（Ｔ）または不明もしくは他の塩基
ＲＮＡ ：リボ核酸
ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸
ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸
ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸
ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸
ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸
ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸
ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸
ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム
ＢＨＡ ：ベンズヒドリルアミン
ｐＭＢＨＡ ：ｐ−メチルベンズヒドリルアミン
Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル
Ｂｚｌ ：ベンジル
Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル
Ｂｏｃ ：ｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ ：ジクロロメタン
ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール
ＤＣＣ ：Ｎ,Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＴＦＡ ：トリフルオロ酢酸
ＤＩＥＡ ：ジイソプロピルエチルアミン
【０１５１】
Ｇｌｙ又はＧ ：グリシン
Ａｌａ又はＡ ：アラニン
Ｖａｌ又はＶ ：バリン
Ｌｅｕ又はＬ ：ロイシン
Ｉｌｅ又はＩ ：イソロイシン
Ｓｅｒ又はＳ ：セリン
Ｔｈｒ又はＴ ：スレオニン
Ｃｙｓ又はＣ ：システイン
Ｍｅｔ又はＭ ：メチオニン
Ｇｌｕ又はＥ ：グルタミン酸
Ａｓｐ又はＤ ：アスパラギン酸
Ｌｙｓ又はＫ ：リジン
Ａｒｇ又はＲ ：アルギニン
Ｈｉｓ又はＨ ：ヒスチジン
Ｐｈｅ又はＦ ：フェニルアラニン
Ｔｙｒ又はＹ ：チロシン
Ｔｒｐ又はＷ ：トリプトファン
Ｐｒｏ又はＰ ：プロリン
Ａｓｎ又はＮ ：アスパラギン
Ｇｌｎ又はＱ ：グルタミン
ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸
Ｔｙｒ（Ｉ） ：３−ヨードチロシン
ＤＭＦ ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル
Ｔｒｔ ：トリチル
Ｐｂｆ ：2,2,4,6,7-ペンタメチルジヒドロベンゾフラン-5-
スルホニル
Ｃｌｔ ：２−クロロトリチル
Ｂｕt ：ｔ−ブチル
Ｍｅｔ（Ｏ） ：メチオニンスルフォキシド
【０１５２】
本願明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。
〔配列番号：１〕
分泌ペプチドＡのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２〕
前駆体蛋白質Ａのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３〕
前駆体蛋白質Ｂのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４〕
前駆体蛋白質Ｃのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５〕
前駆体蛋白質Ｄのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：６〕
前駆体蛋白質Ｅのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：７〕
分泌ペプチドＡをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：８〕
前駆体蛋白質ＡをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：９〕
前駆体蛋白質ＢをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１０〕
前駆体蛋白質ＣをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１１〕
前駆体蛋白質ＤをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１２〕
前駆体蛋白質ＥをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１３〕
実施例１で前駆体蛋白質ＡをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：１４〕
実施例１で前駆体蛋白質ＡをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：１５〕
実施例２で前駆体蛋白質ＢをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：１６〕
実施例２で前駆体蛋白質ＢをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：１７〕
実施例３で前駆体蛋白質ＣをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：１８〕
実施例３で前駆体蛋白質ＣをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：１９〕
実施例４で前駆体蛋白質ＤをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：２０〕
実施例４で前駆体蛋白質ＤをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：２１〕
実施例５で前駆体蛋白質ＥをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：２２〕
実施例５で前駆体蛋白質ＥをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：２３〕
前駆体蛋白質Ｆのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２４〕
前駆体蛋白質ＦをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：２５〕
実施例６で前駆体蛋白質ＦをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：２６〕
実施例６で前駆体蛋白質ＦをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：２７〕
前駆体蛋白質Ｇのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２８〕
前駆体蛋白質ＧをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：２９〕
実施例７で前駆体蛋白質ＧをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：３０〕
実施例７で前駆体蛋白質ＧをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：３１〕
ヒトＡＱ２７受容体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３２〕
ヒトＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３３〕
ラットＯＴ７Ｔ０２２受容体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３４〕
ラットＯＴ７Ｔ０２２受容体をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３５〕
ヒトＯＴ７Ｔ０２２受容体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３６〕
ヒトＯＴ７Ｔ０２２受容体をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３７〕
ヒトＯＴ７Ｔ０２２受容体をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３８〕
前駆体蛋白質Ｈのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３９〕
前駆体蛋白質ＨをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４０〕
実施例１０で前駆体蛋白質ＨをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：４１〕
実施例１０で前駆体蛋白質ＨをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：４２〕
前駆体蛋白質Ｉのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４３〕
前駆体蛋白質ＩをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４４〕
ラットＡＱ２７受容体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４５〕
ラットＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４６〕
マウスＡＱ２７受容体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４７〕
マウスＡＱ２７受容体をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４８〕
実施例２１で前駆体蛋白質ＩをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：４９〕
実施例２１で前駆体蛋白質ＩをコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：５０〕
実施例２２でラットＡＱ２７をコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：５１〕
実施例２２でラットＡＱ２７をコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：５２〕
実施例２２でマウスＡＱ２７をコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：５３〕
実施例２２でマウスＡＱ２７をコードするｃＤＮＡのスクリーニングに使用した合成ＤＮＡを示す。
〔配列番号：５４〕
実施例２４で使用したプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：５５〕
実施例２４で使用したプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：５６〕
実施例２４で使用したプローブの塩基配列を示す。
〔配列番号：５７〕
実施例２５で使用したプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：５８〕
実施例２５で使用したプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：５９〕
実施例２５で使用したプローブの塩基配列を示す。
〔配列番号：６０〕
実施例２６で使用したプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：６１〕
実施例２６で使用したプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：６２〕
実施例２６で使用したプローブの塩基配列を示す。
〔配列番号：６３〕
実施例２６で使用したプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：６４〕
実施例２６で使用したプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：６５〕
実施例２６で使用したプローブの塩基配列を示す。
【０１５３】
後述の実施例１で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＴＡ−Ｓ６５は、２００１年９月１９日から茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７７４２として、２００１年９月６日から大阪府大阪市淀川区十三本町２−１７−８５（郵便番号５３２−８６８６）の財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １６６９７として寄託されている。
後述の実施例２で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＴＡ−Ｓ６６は、２００１年９月１９日から茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７７４３として、２００１年９月６日から大阪府大阪市淀川区十三本町２−１７−８５（郵便番号５３２−８６８６）の財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １６６９８として寄託されている。
後述の実施例３で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＴＡ−Ｓ６７は、２００１年９月１９日から茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７７４４として、２００１年９月１１日から大阪府大阪市淀川区十三本町２−１７−８５（郵便番号５３２−８６８６）の財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １６６９９として寄託されている。
後述の実施例４で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＴＡ−Ｓ６８は、２００１年９月１９日から茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７７４５として、２００１年９月１１日から大阪府大阪市淀川区十三本町２−１７−８５（郵便番号５３２−８６８６）の財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １６７００として寄託されている。
後述の実施例５で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＴＡ−Ｓ６９は、２００１年９月１９日から茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７７４６として、２００１年９月１１日から大阪府大阪市淀川区十三本町２−１７−８５（郵便番号５３２−８６８６）の財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １６７０１として寄託されている。
後述の実施例６で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＴＡｈＦＲＦ−１は、２００２年２月１８日から茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７９０３として、２００２年２月６日から大阪府大阪市淀川区十三本町２−１７−８５（郵便番号５３２−８６８６）の財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １６７５２として寄託されている。
後述の実施例７で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＴＡｒＦＲＦ−１は、２００２年２月１８日から茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７９０５として、２００２年２月６日から大阪府大阪市淀川区十三本町２−１７−８５（郵便番号５３２−８６８６）の財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １６７５４として寄託されている。
後述の実施例１０で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＴＡｍＦＲＦ−１は、２００２年２月１８日から茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７９０４として、２００２年２月６日から大阪府大阪市淀川区十三本町２−１７−８５（郵便番号５３２−８６８６）の財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １６７５３として寄託されている。
後述の実施例２１で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＴＡｂＦＲＦ−１は、２００２年８月２１日から茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−８１６２として寄託されている。
後述の実施例２２で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＣＲ２．１−ｒａｔＡＱ２７は、２００２年８月２１日から茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−８１６３として寄託されている。
後述の実施例２３で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＣＲ２．１−ｍｏｕｓｅＡＱ２７は、２００２年８月２１日から茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−８１６４として寄託されている。
【０１５４】
【実施例】
以下に実施例を示して、本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
実施例１ ヒト全脳cDNAからのPCR法による新規分泌蛋白質の遺伝子の取得
クローンテック社より購入したヒト全脳cDNAを鋳型として、以下の２種類の合成DNAを用いて、PCR による増幅を行った。
Figure 0004167868
PCRの反応液はcDNA溶液1 microl、0.5 microl C216F（10 microM）、0. 5 microl C216R（10 microM）、2.5 microl添付の10 x 反応液、2.5 microl dNTP（10 mM）、0.5 microl KlenTaq（クローンテック）、17.5 microl大塚蒸留水を加えて合計25 microlにした。反応液を、ThermalCycler9600を用いてPCR反応にかけた。PCRの条件は95 ℃2 分の変性の後、98 ℃10 秒、63 ℃20 秒、72 ℃60秒のサイクルを40回繰り返した。PCR産物の一部を用いて電気泳動で約300 bpのPCR産物の増幅を確認した後、PCR産物をQuiagen PCR purification Kitを用いて精製し、直接配列決定を行ったところ図１で示す配列がえられた。図１のDNA配列から予測されるアミノ酸配列は図２に示すものであった。また図２のアミノ酸配列の１から１７番目のアミノ酸配列は分泌シグナルと予想された。さらに生成するペプチドとしてPro Pro Pro Glu Ala Ser Gln Tyr Cys Gly Arg Leu Glu Tyr Trp Asn Pro Asp Asn Lys Cys Cys Ser Ser Cys Leu Gln Arg Phe Gly Pro Pro Pro Cys Pro Glu Leu Ser Ser Leu Ala Ser Gln Pro Leu Ser Arg Leu Leu Asp Glu Leu Glu Val Leu Glu Glu Leu Ile Val Leu Leu Asp Pro Glu Pro Gly Pro Gly Gly Gly Met Ala His Gly Thr Thr Arg His Leu Ala Ala Arg（配列番号：１）が予想された。次に、ゲルから回収したPCR産物をTAクローニングキット（Invitrogen社）を用いて大腸菌JM109にサブクローニングし、大腸菌JM109/pTA-S65を取得した。サブクローニングで得られた大腸菌からプラスミドpTA-S65をプラスミド抽出機（クラボウ社）を用いて抽出し、挿入断片の塩基配列を決定し、その配列が図１と同じヒト型分泌蛋白質遺伝子cDNAであることを確認した。
【０１５５】
実施例２ ヒト胎盤cDNAからのPCR法による新規分泌蛋白質の遺伝子の取得
クローンテック社より購入したヒト胎盤cDNAを鋳型として、以下の２種類の合成DNAを用いて、PCR による増幅を行った。
Figure 0004167868
PCRの反応液はcDNA溶液1 microl、0.5 microl C2008F（10 microM）、0. 5 microl C2008R（10 microM）、2.5 microl添付の10 x 反応液、2.5 microl dNTP（10 mM）、0.5 microl KlenTaq（クローンテック）、17.5 microl大塚蒸留水を加えて合計25 microlにした。反応液を、ThermalCycler9600を用いてPCR反応にかけた。PCRの条件は95 ℃2 分の変性の後、98 ℃10 秒、63 ℃20 秒、72 ℃60秒のサイクルを40回繰り返した。PCR産物の一部を用いて電気泳動で約 600 bpのPCR産物の増幅を確認した後、PCR産物をQuiagen PCR purification Kitを用いて精製し、直接配列決定を行ったところ図３で示す配列がえられた。図３のDNA配列から予測されるアミノ酸配列は図４に示すものであった。また図４のアミノ酸配列の第１番目から２１番目のアミノ酸配列は分泌シグナルと予想された。また生成するペプチドとして、図４のアミノ酸配列の第２２番目から３７番目のアミノ酸配列を有するペプチドのアミド、図４の第４０番目から５５番目のアミノ酸配列を有するペプチドのアミドなどが予想された。次に、ゲルから回収したPCR産物をTAクローニングキット（Invitrogen社）を用いて大腸菌JM109にサブクローニングし、大腸菌JM109/pTA-S66を取得した。サブクローニングで得られた大腸菌からプラスミドpTA-S66をプラスミド抽出機（クラボウ社）を用いて抽出し、挿入断片の塩基配列を決定し、その配列が図３と同じヒト型分泌蛋白質遺伝子cDNAであることを確認した。
【０１５６】
実施例３ ヒト全脳cDNAからのPCR法による新規分泌蛋白質の遺伝子の取得
クローンテック社より購入したヒト全脳cDNAを鋳型として、以下の２種類の合成DNAを用いて、PCR による増幅を行った。
Figure 0004167868
PCRの反応液はcDNA溶液1 microl、0.5 microl C196F（10 microM）、0. 5 microl C196R（10 microM）、2.5 microl添付の10 x 反応液、2.5 microl dNTP（10 mM）、0.5 microl KlenTaq（クローンテック）、17.5 microl大塚蒸留水を加えて合計25 microlにした。反応液を、ThermalCycler9600を用いてPCR反応にかけた。PCRの条件は95 ℃2 分の変性の後、98 ℃10 秒、63 ℃20 秒、72 ℃60秒のサイクルを40回繰り返した。PCR産物の一部を用いて電気泳動で約 700bpのPCR産物の増幅を確認した後、PCR産物をQuiagen PCR purification Kitを用いて精製し、直接配列決定を行ったところ図５で示す配列がえられた。図５のDNA配列から予測されるアミノ酸配列は図６に示すものであった。また図６のアミノ酸配列の１から１４番目のアミノ酸配列は分泌シグナルと予想された。さらに生成するペプチドとして、図６のアミノ酸配列の第１５番目〜２１番目のアミノ酸配列を有するペプチド、図６のアミノ酸配列の第２６番目〜５８番目のアミノ酸配列を有するペプチド、図６のアミノ酸配列の第６０番目〜８８番目のアミノ酸配列を有するペプチド、図６のアミノ酸配列の第９０番目〜１０７番目または図６のアミノ酸配列の第１１０番目〜１８７番目のアミノ酸配列のアミノ酸配列を有するペプチド等が予想された。次に、ゲルから回収したPCR産物をTAクローニングキット（Invitrogen社）を用いて大腸菌JM109にサブクローニングし、大腸菌JM109/pTA-S67を取得した。サブクローニングで得られた大腸菌からプラスミドpTA-S67をプラスミド抽出機（クラボウ社）を用いて抽出し、挿入断片の塩基配列を決定し、その配列が図５と同じヒト型分泌蛋白質遺伝子cDNAであることを確認した。
【０１５７】
実施例４ ヒト全脳cDNAからのPCR法による新規分泌蛋白質の遺伝子の取得
クローンテック社より購入したヒト全脳cDNAを鋳型として、以下の２種類の合成DNAを用いて、PCR による増幅を行った。
Figure 0004167868
PCRの反応液はcDNA溶液1 microl、0.5 microl C296F（10 microM）、0. 5 microl C296R（10 microM）、2.5 microl添付の10 x 反応液、2.5 microl dNTP（10 mM）、0.5 microl KlenTaq（クローンテック）、17.5 microl大塚蒸留水を加えて合計25 microlにした。反応液を、ThermalCycler9600を用いてPCR反応にかけた。PCRの条件は95 ℃2 分の変性の後、98 ℃10 秒、63 ℃20 秒、72 ℃60秒のサイクルを40回繰り返した。PCR産物の一部を用いて電気泳動で約 500 bpのPCR産物の増幅を確認した後、PCR産物をQuiagen PCR purification Kitを用いて精製し、直接配列決定を行ったところ図７で示す配列がえられた。図７のDNA配列から予測されるアミノ酸配列は図８に示すものであった。また図８のアミノ酸配列の１から２４番目のアミノ酸配列は分泌シグナルと予想された。さら生成するペプチドとして、図８のアミノ酸配列の第２５番目〜８５番目のアミノ酸配列を有するペプチド、図８のアミノ酸配列の第８６番目〜１１４番目のアミノ酸配列を有するペプチドまたは図８のアミノ酸配列の第１１５番目〜１６６番目のアミノ酸配列を有するペプチドが予想された。次に、ゲルから回収したPCR産物をTAクローニングキット（Invitrogen社）を用いて大腸菌JM109にサブクローニングし、大腸菌JM109/pTA-S68を取得した。サブクローニングで得られた大腸菌からプラスミドpTA-S68をプラスミド抽出機（クラボウ社）を用いて抽出し、挿入断片の塩基配列を決定し、その配列が図７と同じヒト型分泌蛋白質遺伝子cDNAであることを確認した。
【０１５８】
実施例５ ヒト全脳cDNAからのPCR法による新規分泌蛋白質の遺伝子の取得
クローンテック社より購入したヒト全脳cDNAを鋳型として、以下の２種類の合成DNAを用いて、PCR による増幅を行った。
Figure 0004167868
PCRの反応液はcDNA溶液1 microl、0.5 microl C216F（10 microM）、0. 5 microl C216R（10 microM）、2.5 microl添付の10 x 反応液、2.5 microl dNTP（10 mM）、0.5 microl KlenTaq（クローンテック）、17.5 microl大塚蒸留水を加えて合計25 microlにした。反応液を、ThermalCycler9600を用いてPCR反応にかけた。PCRの条件は95 ℃2 分の変性の後、98 ℃10 秒、63 ℃20 秒、72 ℃60秒のサイクルを40回繰り返した。PCR産物の一部を用いて電気泳動で約300 bpのPCR産物の増幅を確認した後、PCR産物をQuiagen PCR purification Kitを用いて精製し、直接配列決定を行ったところ図９で示す配列がえられた。図９のDNA配列から予測されるアミノ酸配列は図１０に示すものであった。また図１０のアミノ酸配列の１から１８番目のアミノ酸配列は分泌シグナルと予想された。さらに生成するペプチドとして、図１０のアミノ酸配列の第１９番目〜５８番目のアミノ酸配列を有するペプチド、図１０のアミノ酸配列の第６３番目〜２０２番目のアミノ酸配列を有するペプチドまたは図１０のアミノ酸配列の第２０５番目〜２４１番目のアミノ酸配列を有するペプチドが予想された。次に、ゲルから回収したPCR産物をTAクローニングキット（Invitrogen社）を用いて大腸菌JM109にサブクローニングし、大腸菌JM109/pTA-S69を取得した。サブクローニングで得られた大腸菌からプラスミドpTA-S69をプラスミド抽出機（クラボウ社）を用いて抽出し、挿入断片の塩基配列を決定し、その配列が図９と同じヒト型分泌蛋白質遺伝子cDNAであることを確認した。
【０１５９】
実施例６ ヒトcDNAからのPCR法による新規分泌蛋白質遺伝子の取得
クローンテック社より購入したHuman Universal cDNAを鋳型として、以下の２種類の合成DNAを用いて、PCR による増幅を行った。
Figure 0004167868
PCRの反応液はcDNA溶液1 microl、0.5 microl RFF2（10 microM）、0. 5 microl RFR1（10 microM）、2.5 microl添付の10 x 反応液、2.5 microl dNTP（10 mM）、0.25 microl ExTaq（タカラ）、17.75 microl大塚蒸留水を加えて合計25 microlにした。反応液を、ThermalCycler9600を用いてPCR反応にかけた。PCRの条件は95 ℃2 分の変性の後、98 ℃10 秒、60 ℃20 秒、72 ℃30秒のサイクルを40回繰り返した。PCR産物の一部を用いて電気泳動で約400 bpのPCR産物の増幅を確認した後、PCR産物をQuiagen PCR purification Kitを用いて精製し、直接配列決定を行ったところ図１１で示す配列がえられた。図１１のDNA配列から予測されるアミノ酸配列は図１２に示すものであった。また、図１２のアミノ酸配列の１から１8番目のアミノ酸配列は分泌シグナルと予想された。
さらに、生成するペプチドとして、
（１）Ｃ末端がアミド化された、図１２（配列番号：２３）に示されたアミノ酸配列の第２６番目〜第８８番目のアミノ酸配列を含有するペプチド、
（２）Ｃ末端がアミド化された、図１２（配列番号：２３）に示されたアミノ酸配列の第８０番目〜第８８番目のアミノ酸配列を含有するペプチド、
（３）Ｃ末端がアミド化された、図１２（配列番号：２３）に示されたアミノ酸配列の第９１番目〜第１３３番目のアミノ酸配列を含有するペプチド、
（４）Ｃ末端がアミド化された、図１２（配列番号：２３）に示されたアミノ酸配列の第１２７番目〜第１３３番目のアミノ酸配列を含有するペプチドなどが考えられる。
次に、ゲルから回収したPCR産物をTAクローニングキット（Invitrogen社）を用いて大腸菌JM109にサブクローニングし、大腸菌JM109/pTAhFRF-1を取得した。サブクローニングで得られた大腸菌からプラスミドpTAhFRF-1をプラスミド抽出機（クラボウ社）を用いて抽出し、挿入断片の塩基配列を決定し、その配列が図１１と同じヒト型分泌蛋白質遺伝子cDNAであることを確認した。
【０１６０】
実施例７ ラットゲノムDNAからのPCR法によるリガンド候補遺伝子の取得
クローンテック社より購入したRat Genomic DNAを鋳型として、以下の２種類の合成DNAを用いて、PCR による増幅を行った。
Figure 0004167868
PCRの反応液はDNA溶液1 microl、0.5 microl F1（10 microM）、0. 5 microl R1（10 microM）、2.5 microl添付の10 x 反応液、2.5 microl dNTP（10 mM）、0.25 microl ExTaq（タカラ）、17.75 microl大塚蒸留水を加えて合計25 microlにした。反応液を、Thermal Cycler9600を用いてPCR反応にかけた。PCRの条件は95 ℃2 分の変性の後、98 ℃10 秒、60 ℃20 秒、72 ℃30秒のサイクルを30回繰り返した。PCR産物の一部を用いて電気泳動で約400 bpのPCR産物の増幅を確認した後、PCR産物をQuiagen PCR purification Kitを用いて精製し、直接配列決定を行ったところ図１３で示す配列がえられた。図１３のDNA配列から予測されるアミノ酸配列は図１４に示すものであった。また図１４のアミノ酸配列の１から１７番目のアミノ酸配列は分泌シグナルと予想された。
またヒト型とラット型のアミノ酸配列を比較したところ図１５のようになり、特にC末端のRFアミドモチーフの配列（Arg Phe Gly Arg）が保存されていた。さらに、生成するペプチドとしてC末端がアミド化されたGly Gly Phe Ser Phe Arg Phe-NH２（配列番号：２７の第１１６番目〜第１２２番目）、Lys Gly Gly Phe Ser Phe Arg Phe-NH２（配列番号：２７の第１１５番目〜第１２２番目）等が予想された。
次に、ゲルから回収したPCR産物をTAクローニングキット（Invitrogen社）を用いて大腸菌JM109にサブクローニングし、大腸菌JM109/pTArFRF-1を取得した。サブクローニングで得られた大腸菌からプラスミドpTArFRF-1をプラスミド抽出機（クラボウ社）を用いて抽出し、挿入断片の塩基配列を決定し、その配列が図１３と同じラット型分泌蛋白質遺伝子cDNAであることを確認した。
【０１６１】
実施例８
（１） Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目）および Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第８０番目〜第８８番目）の合成
Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目）および Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第８０番目〜第８８番目）を自体公知のペプチド合成法を用いて製造した。
（２） Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目）の合成
Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目）を自体公知のペプチド合成法を用いて製造した。
【０１６２】
実施例９ 新規ポリペプチドＦ：Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目）および Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第８０番目〜第８８番目）のＡＱ２７受容体およびＯＴ７Ｔ０２２受容体を一過性に発現させたＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性
実施例８で合成した新規ポリペプチドＦによるＡＱ２７受容体（配列番号：３１）およびヒトＯＴ７Ｔ０２２受容体（配列番号：３５）に特異的な刺激活性の検出は、ｃＡＭＰレスポンスエレメント（ＣＲＥ）プロモーターの発現誘導によって産生されるレポーター遺伝子産物（ルシフェラーゼ）の発現量を指標に行った。
ＨＥＫ２９３細胞を増殖培地（ＤＭＥＭ（Dulbecco’s Modified Eagle Medium）（GibcoBRL）に１０％ウシ胎児血清（GibcoBRL）を添加したもの）に懸濁し、１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度にてコラーゲンでコートされたＢｌａｃｋ ｗｅｌｌ ９６ウェルプレート（ベクトンディッキンソン社）にまいた。３７℃、５％ＣＯ２条件下で一晩培養した後、レポーター遺伝子を含むプラスミドであるｐＣＲＥ−Ｌｕｃ（Clontech）と同時に、公知の方法により動物細胞での発現用ベクターｐＡＫＫＯ−１１１Ｈ（Biochem. Biophys. Acta, Hinuma, S. et al., 1219, 251-259, 1994記載のｐＡＫＫＯ−１．１１Ｈと同一のプラスミドベクター）にＡＱ２７遺伝子（配列番号：３２）およびヒトＯＴ７Ｔ０２２遺伝子（配列番号：３６）を挿入して作製した発現ベクタープラスミド、または、ＡＱ２７遺伝子を含まないもとのｐＡＫＫＯ−１１１Ｈを用いて細胞のトランスフェクションを以下のとおりに行った。
ＯＰＴＩ−ＭＥＭ−Ｉ（GibcoBRL）とＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ２０００ Ｒｅａｇｅｎｔ（GibcoBRL）を２４：１にて混合することにより、リポフェクトアミン希釈液を調製した。また、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ−Ｉ、ＡＱ２７発現ベクタープラスミドまたはもとのベクタープラスミド（２４０ｎｇ／μｌ）およびｐＣＲＥ−Ｌｕｃ（２４０ｎｇ／μｌ）を２４：０．９：０．１にて混合することによりＤＮＡ希釈液を調製した。リポフェクトアミン希釈液とＤＮＡ希釈液を等量混合し、２０分間室温で静置することによりＤＮＡとリポフェクトアミンの複合体を形成させた後、上記のＨＥＫ２９３細胞を培養したプレートに２５μｌ添加し、さらに３７℃、５％ＣＯ２条件下で一晩培養した。
トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞をアッセイ用培地（ＤＭＥＭに０．１％ウシ血清アルブミンを添加したもの）にて洗浄した後、アッセイ用培地にて希釈した実勢例８で合成した新規ポリペプチドＦを１０、１、０．１μＭとなるよう添加し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で４時間培養した。培養上清を捨てて、ルシフェラーゼ活性測定用の基質であるピッカジーンＬＴ２．０（東洋インキ製造株式会社）を５０μｌ添加し、プレートリーダー（ＡＲＶＯ ｓｘマルチラベルカウンター、Wallac社）を用いてルシフェラーゼの発光量を測定した。
その結果、２種類の新規ポリペプチドＦはいずれもＡＱ２７受容体に対しフォルスコリン（ＦＳＫ）添加で刺激したルシフェラーゼ活性を濃度依存的に増強する反応として検出された。一方、ヒトＯＴ７Ｔ０２２受容体に対してはＦＳＫ添加で刺激したルシフェラーゼ活性を抑制する反応として検出された。これらの反応は受容体を導入していない空のベクターｐＡＫＫＯ-111Ｈを発現させた細胞では検出されなかった。したがって、２種類の新規ポリペプチドＦはＡＱ２７受容体特異的にルシフェラーゼ活性の増強を、またヒトＯＴ７Ｔ０２２受容体特異的にルシフェラーゼ活性の抑制を引き起こしたことが確認された（図１６、図１７、図１８）。
【０１６３】
実施例１０ マウスゲノムＤＮＡからのＰＣＲ法によるリガンド候補遺伝子の取得
クローンテック社より購入したＭｏｕｓｅ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡを鋳型として、以下の２種類の合成ＤＮＡを用いて、ＰＣＲ による増幅を行った。
Figure 0004167868
ＰＣＲの反応液はＤＮＡ溶液１ ｍｉｃｒｏｌ、０．５ ｍｉｃｒｏｌ Ｆ２（１０ ｍｉｃｒｏＭ）、０．５ ｍｉｃｒｏｌ Ｒ２（１０ ｍｉｃｒｏＭ）、２．５ ｍｉｃｒｏｌ添付の１０ ｘ 反応液、２．５ ｍｉｃｒｏｌ ｄＮＴＰ（１０ ｍＭ）、０．２５ ｍｉｃｒｏｌ ＥｘＴａｑ（タカラ）、１７．７５ ｍｉｃｒｏｌ大塚蒸留水を加えて合計２５ ｍｉｃｒｏｌにした。反応液を、Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ９６００を用いてＰＣＲ反応にかけた。ＰＣＲの条件は９５℃・２分の変性の後、９８℃・１０秒、６０℃・２０秒、７２℃・３０秒のサイクルを３０回繰り返した。ＰＣＲ産物の一部を用いて電気泳動で約４００ ｂｐのＰＣＲ産物の増幅を確認した後、ＰＣＲ産物をＱｕｉａｇｅｎＰＣＲ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて精製し、直接配列決定を行ったところ図１９で示す配列がえられた。図１９のDNA配列から予測されるアミノ酸配列は図２０に示すものであった。また、図２０のアミノ酸配列の１から１７番目のアミノ酸配列は分泌シグナルと予想された。さらに生成するペプチドとしてＣ末端がアミド化されたGly Gly Phe Ser Phe Arg Phe-NH２（配列番号：４０の第１１６番目〜第１２２番目）、Lys Gly Gly Phe Ser Phe Arg Phe-NH２（配列番号：４０の第１１５番目〜第１２２番目）等が予想された。
次に、ゲルから回収したPCR産物をTAクローニングキット（Invitrogen社）を用いて大腸菌JM109にサブクローニングし、大腸菌JM109/pTAmFRF-1を取得した。サブクローニングで得られた大腸菌からプラスミドpTAmFRF-1をプラスミド抽出機（クラボウ社）を用いて抽出し、挿入断片の塩基配列を決定し、その配列が図１９と同じマウス型分泌蛋白質遺伝子cDNAであることを確認した。
【０１６４】
実施例１１ 新規ポリペプチドＦ：Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目）のＡＱ２７受容体およびＯＴ７Ｔ０２２受容体を一過性に発現させたＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性
実施例９と同様の方法で新規ポリペプチドＦ：Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目）の（１）ＡＱ２７受容体およびＯＴ７Ｔ０２２受容体を一過性に発現させていないＨＥＫ２９３細胞（図２１）、（２）ＡＱ２７受容体を一過性に発現させたＨＥＫ２９３細胞（図２２）および（３）ＯＴ７Ｔ０２２受容体を一過性に発現させたＨＥＫ２９３細胞（図２３）に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性を測定した。その結果、新規ポリペプチドはＡＱ２７に対してはルシフェラーゼ活性の上昇作用を（図２２）、またｈＯＴ７Ｔ０２２に対してはルシフェラーゼ活性の抑制作用を引き起こした（図２３）。
【０１６５】
実施例１２ ヒトＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞におけるｃＡＭＰ産生抑制活性の検出自体公知の方法で樹立したＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞（図２４）およびコントロールとなるｍｏｃｋ ＣＨＯ細胞（図２５）を、４ｘ１０４／ｗｅｌｌの濃度にて９６ウェルプレート（ベクトンデッキンソン）に撒いて、一晩培養した。アッセイ用バッファーにはＨａｎｋｓ’ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎに０．１％ウシ血清アルブミンおよび０．２ ｍＭ ３−Ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅを添加したものを用いた。アッセイ用バッファーで細胞を２回洗浄し、３７℃で３０分間プレインキュベーションした。再度細胞を２回洗浄したのちにアッセイ用バッファーで調製したサンプルを添加し、３７℃で３０分間インキュベーションした。ｃＡＭＰ産生抑制活性を評価するため、ｃＡＭＰ産生上昇を促進するホルスコリン（ＦＳＫ、和光純薬）２ μＭのみのサンプルと同濃度のＦＳＫと１０−７〜１０−５Ｍの新規ポリペプチドＦ：Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目）を含むサンプルで比較した。細胞の上清を捨てて、ｃＡＭＰＳｃｒｅｅｎ Ｓｙｓｔｅｍ（アプライド バイオシステムズ）によって細胞内のｃＡＭＰ産生量を測定した。その結果、図２４に示す通り、ＡＱ２７発現ＣＨＯにおいてのみ、ＦＳＫで誘導されたｃＡＭＰ産生がペプチドの添加によって抑制された。
【０１６６】
実施例１３ ＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞における細胞内カルシウムイオン遊離促進活性の検出
自体公知の方法で樹立したＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞を９６−ｗｅｌｌの黒色培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ社）に４×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞数で播種し、一晩培養した。Ｈａｎｋ’ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＨＢＳＳ）に２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４， 同仁化学研究所）、２．５ｍＭ ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ（Ｓｉｇｍａ社）を添加したものをアッセイバッファーとして用意した。細胞の培地を除去し、アッセイバッファーに４μＭのＦｌｕｏ ３−ＡＭ（Ｄｏｊｉｎｄｏ社）および０．０４％ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ（Ｍｏｒｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ社）を添加したものを加え、３７℃で１時間インキュベーションした。細胞をアッセイバッファーで洗浄して過剰なＦｌｕｏ ３を除去し、ＦＬＩＰＲ（モレキュラーデバイス社）にセットした。アッセイバッファーに溶解した検体も同じくＦＬＩＰＲにセットした後、内蔵のマニュピレーターによってサンプルを細胞に添加し、励起光の照射によって発生する細胞内カルシウムイオン濃度に依存した蛍光量の変化を測定した。その結果、サンプル無添加（○）に対し、新規ポリペプチドＦ：Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目；ＲＫＫＧＧＦＳＦＲＦ−ＮＨ２）および新規ポリペプチドＦ：Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目；ＧＧＦＳＦＲＦ−ＮＨ２）について、１０μＭ（▲）、１μＭ（□）ではそれぞれ図２６および図２７に示すような反応が検出され、それぞれのペプチドによってＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞の細胞内カルシウムイオン遊離促進活性が検出された。
【０１６７】
実施例１４
（１）Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg -Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第１０８番目〜第１３３番目；Ｔ１−Ｆ２６−ＮＨ２）の合成
Ｔ１−Ｆ２６−ＮＨ２を自体公知のペプチド合成法を用いて製造した。
（２）Pyr-Asp-Glu-Gly-Ser-Glu-Ala-Thr-Gly-Phe-Leu-Pro-Ala-Ala-Gly-Glu-Lys-Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg -Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第９１番目〜第１３３番目；Ｐｙｒ１−Ｆ４３−ＮＨ２）の合成
Ｐｙｒ１−Ｆ４３−ＮＨ２を自体公知のペプチド合成法を用いて製造した。
（３）Ala-Ser-Gln-Pro-Gln-Ala-Leu-Leu-Val-Ile-Ala-Arg-Gly -Leu-Gln-Thr-Ser-Gly-Arg-Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第６１番目〜第８６番目；Ａ１−Ｆ２８−ＮＨ２）の合成
Ａ１−Ｆ２８−ＮＨ２を自体公知のペプチド合成法を用いて製造した。
【０１６８】
実施例１５
新規ポリペプチドＦ：Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg -Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第１０８番目〜第１３３番目；Ｔ１−Ｆ２６−ＮＨ２）およびPyr-Asp-Glu-Gly-Ser-Glu-Ala-Thr-Gly-Phe-Leu-Pro-Ala-Ala-Gly-Glu-Lys-Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg -Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第９１番目〜第１３３番目；Ｐｙｒ１−Ｆ４３−ＮＨ２）のヒトＡＱ２７受容体を一過性に発現させたＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性
実施例９と同様の方法を用いて、実施例１４で合成した新規ポリペプチドＴ１−Ｆ２６−ＮＨ２およびＰｙｒ１−Ｆ４３−ＮＨ２の（１）ＡＱ２７受容体を一過性に発現させていないＨＥＫ２９３細胞（図２８）、（２）ＡＱ２７受容体を一過性に発現させたＨＥＫ２９３細胞（図２９）に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性を測定した。その結果、それぞれのポリペプチドによってＡＱ２７受容体を発現させたＨＥＫ２９３細胞においてルシフェラーゼ活性の上昇が検出された。
【０１６９】
実施例１６
新規ポリペプチドPyr１−Ｆ４３−ＮＨ２によるＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞特異的な細胞内カルシウムイオン動員活性の検出
実施例１３と同様の方法により、新規ポリペプチドPyr１−Ｆ４３−ＮＨ２によるＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞特異的な細胞内カルシウムイオン動員活性の検討を行った。その結果、図３０に示す通り１０−８Ｍ以上の新規ポリペプチドPyr１−Ｆ４３−ＮＨ２の添加によって、ＣＨＯ−ＡＱ２７特異的な細胞内カルシウムイオン動員活性が認められた。一方、図３１に示す通り、コントロールとなるｍｏｃｋ ＣＨＯ細胞においては活性が認められず、同ペプチドがＡＱ２７のリガンドとして特異的なアゴニスト活性を示すことが確認された。
【０１７０】
実施例１７
新規ポリペプチドPyr１−Ｆ４３−ＮＨ２によるＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞特異的なｃＡＭＰ産生抑制活性
実施例１２の方法と同様の方法により、新規ポリペプチドPyr１−Ｆ４３−ＮＨ２によるＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞特異的なｃＡＭＰ産生抑制活性を検出した。その結果、図３２に示す通り、ＡＱ２７発現ＣＨＯ特異的に、ＦＳＫで誘導されたｃＡＭＰ産生が新規ポリペプチドPyr１−Ｆ４３−ＮＨ２の添加によって抑制された。一方、図３３に示す通り、コントロールとなるｍｏｃｋ ＣＨＯ細胞においては活性が認められず、同ペプチドがＡＱ２７のリガンドとして特異的なアゴニスト活性を示すことが確認された。
【０１７１】
実施例１８
新規ポリペプチドＦ：Ala-Ser-Gln-Pro-Gln-Ala-Leu-Leu-Val-Ile-Ala-Arg-Gly -Leu-Gln-Thr-Ser-Gly-Arg-Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第６１番目〜第８６番目；Ａ１−Ｆ２８−ＮＨ２）のヒトＡＱ２７受容体を一過性に発現させたＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性実施例９と同様の方法を用いて、実施例１４で合成した新規ポリペプチドＦ：Ａ１−Ｆ２８−ＮＨ２の（１）ＡＱ２７受容体を一過性に発現させていないＨＥＫ２９３細胞（図３４）、（２）ＡＱ２７受容体を一過性に発現させたＨＥＫ２９３細胞（図３５）に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性を測定した。その結果、Ａ１−Ｆ２８−ＮＨ２によってＡＱ２７受容体を発現させたＨＥＫ２９３細胞においてルシフェラーゼ活性の上昇が検出された。
【０１７２】
実施例１９
新規ポリペプチドＡ１−Ｆ２８−ＮＨ２によるＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞特異的な細胞内カルシウムイオン動員活性の検出
実施例１３と同様の方法により、新規ポリペプチドＡ１−Ｆ２８−ＮＨ２によるＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞特異的な細胞内カルシウムイオン動員活性の検討を行った。その結果、図３６に示す通り１０−６Ｍ以上の新規ポリペプチドＡ１−Ｆ２８−ＮＨ２の添加によって、ＣＨＯ−ＡＱ２７特異的な細胞内カルシウムイオン動員活性が認められた。一方、図３７に示す通り、コントロールとなるｍｏｃｋ ＣＨＯ細胞においては活性が認められず、同ペプチドがＡＱ２７のリガンドとして特異的なアゴニスト活性を示すことが確認された。
【０１７３】
実施例２０
新規ポリペプチドＡ１−Ｆ２８−ＮＨ２によるＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞特異的なｃＡＭＰ産生抑制活性
実施例１２の方法と同様の方法により、新規ポリペプチドＡ１−Ｆ２８−ＮＨ２によるＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞特異的なｃＡＭＰ産生抑制活性を検出した。その結果、図３８に示す通り、ＡＱ２７発現ＣＨＯ特異的に、ＦＳＫで誘導されたｃＡＭＰ産生が１０−６Ｍ以上の新規ポリペプチドＡ１−Ｆ２８−ＮＨ２の添加によって抑制された。一方、図３９に示す通り、コントロールとなるｍｏｃｋ ＣＨＯ細胞においては活性が認められず、同ペプチドがＡＱ２７のリガンドとして特異的なアゴニスト活性を示すことが確認された。
【０１７４】
実施例２１ ウシゲノムＤＮＡからのＰＣＲ法による新規分泌蛋白質Ｉ遺伝子の取得
クローンテック社より購入したＢｏｖｉｎｅ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡを鋳型として、以下の２種類の合成ＤＮＡを用いて、ＰＣＲによる増幅を行った。
Figure 0004167868
ＰＣＲの反応液はＤＮＡ溶液１ ｍｉｃｒｏｌ、０．５ ｍｉｃｒｏｌ ｂＦ（１０ｍｉｃｒｏＭ）、０．５ｍｉｃｒｏｌ ｂＲ（１０ｍｉｃｒｏＭ）、２．５ｍｉｃｒｏｌ添付の１０ｘ反応液、２．５ｍｉｃｒｏｌ ｄＮＴＰ（１０ｍＭ）、０．２５ｍｉｃｒｏｌ ＥｘＴａｑ（タカラ）、１７．７５ｍｉｃｒｏｌ大塚蒸留水を加えて合計２５ｍｉｃｒｏｌにした。反応液を、Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ９６００を用いてＰＣＲ反応にかけた。ＰＣＲの条件は９５℃・２分の変性の後、９８℃・１０秒、６０℃・２０秒、７２℃・３０秒のサイクルを３０回繰り返した。ＰＣＲ産物の一部を用いて電気泳動で約４００ｂｐのＰＣＲ産物の増幅を確認した後、ＰＣＲ産物をＱｕｉａｇｅｎ ＰＣＲ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて精製し、直接配列決定を行ったところ図４０で示す配列がえられた。図４０のＤＮＡ配列から予測されるアミノ酸配列は図４１に示すものであった。また図４１のアミノ酸配列の１から１７番目のアミノ酸配列は分泌シグナルと予想された。さらに生成するペプチドとして、Ｃ末端がアミド化された図４１のアミノ酸配列の第１２４番目〜１３１番目のアミノ酸配列を有するペプチドまたはＣ末端がアミド化された図４１のアミノ酸配列の第１２５番目〜１３１番目のアミノ酸配列を有するペプチド等が予想される。
次に、ゲルから回収したＰＣＲ産物をＴＡクローニングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いて大腸菌ＪＭ１０９にサブクローニングし、大腸菌ＪＭ１０９／ｐＴＡｂＦＲＦ−１。サブクローニングで得られた大腸菌からプラスミドｐＴＡｂＦＲＦ−１をプラスミド抽出機（クラボウ社）を用いて抽出し、挿入断片の塩基配列を決定し、その配列が図４０と同じヒト型分泌蛋白質遺伝子ｃＤＮＡであることを確認した。
【０１７５】
実施例２２ ラット副腎ｃＤＮＡからのＰＣＲ法によるＡＱ２７受容体遺伝子の取得
ラット副腎のｐｏｌｙＡ＋ＲＮＡ１μｇからランダムプライマー、逆転写酵素としてＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩ逆転写酵素（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社）を用い、添付のマニュアルに従って４２℃で反応を行い、ｃＤＮＡを得た。以下の２種類の合成ＤＮＡを用いて、ＰＣＲ による増幅を行った。
Figure 0004167868
ＰＣＲの反応液はｃＤＮＡ溶液１ｍｉｃｒｏｌ、０．５ｍｉｃｒｏｌ Ｆ１（１０ｍｉｃｒｏＭ）、０．５ｍｉｃｒｏｌ Ｒ１（１０ｍｉｃｒｏＭ）、５ｍｉｃｒｏｌ添付の５ｘ反応液、２．５ｍｉｃｒｏｌ Ｇｃｍｅｌｔ、２．５ｍｉｃｒｏｌ ｄＮＴＰ（１０ｍＭ）、０．５ｍｉｃｒｏｌ Ａｄｖａｎｔａｇｅ Ｇｃｍｅｌｔ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｍｉｘ（クローンテック）、１２．５ｍｉｃｒｏｌ大塚蒸留水を加えて合計２５ｍｉｃｒｏｌにした。反応液を、ＴｈｅｒｍａｌＣｙｃｌｅｒ９６００を用いてＰＣＲ反応にかけた。ＰＣＲの条件は９５℃・２分の変性の後、９８℃・１０秒、６１℃・２０秒、７２℃・１２０秒のサイクルを３５回繰り返した。ＰＣＲ産物の一部を用いて電気泳動で約１３００ｂｐのＰＣＲ産物の増幅を確認した後、ＰＣＲ産物をＱｕｉａｇｅｎ ＰＣＲ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて精製し、ＴＡクローニングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いて大腸菌ＪＭ１０９にサブクローニングし、大腸菌ＪＭ１０９／ｐＣＲ２．１−ｒａｔＡＱ２７を取得した。サブクローニングで得られた大腸菌からプラスミドｐＣＲ２．１−ｒａｔＡＱ２７をＱｕｉａｇｅｎＱＩＡｗｅｌｌ ８ Ｕｌｔｒａ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｋｉｔを用いて抽出し、挿入断片の塩基配列を決定し、図４２で示す配列がえられた。図４２のＤＮＡ配列から予測されるアミノ酸配列は図４３に示すものであった。また、ヒト型およびマウス型ＡＱ２７との相同性は図４４に示すとおりであり、ラット型ＡＱ２７受容体であることが確認された。
【０１７６】
実施例２３ マウス脳ｃＤＮＡからのＰＣＲ法によるＡＱ２７受容体遺伝子の取得
クローンテック マウスＭＴＣ Ｐａｎｅｌの脳ｃＤＮＡを鋳型として、以下の２種類の合成ＤＮＡを用いて、ＰＣＲによる増幅を行った。
Figure 0004167868
ＰＣＲの反応液はｃＤＮＡ溶液１ｍｉｃｒｏｌ、０．５ｍｉｃｒｏｌ Ｆ１（１０ｍｉｃｒｏＭ）、０．５ｍｉｃｒｏｌ Ｒ１（１０ｍｉｃｒｏＭ）、５ｍｉｃｒｏｌ添付の５ｘ反応液、２．５ｍｉｃｒｏｌ Ｇｃｍｅｌｔ、２．５ ｍｉｃｒｏｌ ｄＮＴＰ（１０ｍＭ）、０．５ｍｉｃｒｏｌ Ａｄｖａｎｔａｇｅ Ｇｃｍｅｌｔ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｍｉｘ（クローンテック）、１２．５ｍｉｃｒｏｌ大塚蒸留水を加えて合計２５ｍｉｃｒｏｌにした。反応液を、ＴｈｅｒｍａｌＣｙｃｌｅｒ９６００を用いてＰＣＲ反応にかけた。ＰＣＲの条件は９５℃・２分の変性の後、９８℃・１０秒、５９℃・２０秒、７２℃・１２０秒のサイクルを３５回繰り返した。ＰＣＲ産物の一部を用いて電気泳動で約１３００ｂｐのＰＣＲ産物の増幅を確認した後、ＰＣＲ産物をＱｕｉａｇｅｎ ＰＣＲ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて精製し、ＴＡクローニングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いて大腸菌ＪＭ１０９にサブクローニングし、大腸菌ＪＭ１０９／ｐＣＲ２．１−ｍｏｕｓｅＡＱ２７を取得した。サブクローニングで得られた大腸菌からプラスミドｐＣＲ２．１−ｍｏｕｓｅＡＱ２７をＱｕｉａｇｅｎ ＱＩＡｗｅｌｌ ８ Ｕｌｔｒａ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｋｉｔを用いて抽出し、挿入断片の塩基配列を決定し、図４５で示す配列がえられた。図４５のＤＮＡ配列から予測されるアミノ酸配列は図４６に示すものであった。またヒト型およびラット型ＡＱ２７との相同性は図４７のようであり、マウス型ＡＱ２７受容体であることが確認された。
【０１７７】
実施例２４ ＲＴ−ＰＣＲによるＡＱ２７受容体ｍＲＮＡのヒトにおける組織分布の検討
鋳型となるｃＤＮＡには、ヒト各種組織由来のｐｏｌｙＡ＋ＲＮＡ（クロンテック社）から以下の方法で合成したものを使用した。ＲＮＡ１μｇからランダムプライマー、逆転写酵素としてＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩ逆転写酵素（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社）を用い、添付のマニュアルに従って４２℃で反応を行い、反応終了後にエタノール沈殿して１００μｌに溶解した。ＲＴ−ＰＣＲはＳｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｐｒｉｓｍ ７７００（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用い、増幅と検出のためのプライマーとして５’−ＣＣＡＧＡＡＣＡＴＴＴＣＣＧＡＣＡＡＣＴＧ−３’（配列番号：５４）， ５’−ＡＣＡＧＣＧＧＴＡＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＡ−３’（配列番号：５５） およびＴａｑＭａｎ ｐｒｏｂｅとして５’−（Ｆａｍ）−ＴＧＣＴＴＴＣＡＴＴＴＧＣＡＡＧＡＴＧＧＴＧＣＣ−（Ｔａｍｒａ）−３’（配列番号：５６）を使用した。ＲＴ−ＰＣＲ反応液はＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）１２．５μｌに、それぞれ１００μＭのプライマー溶液を０．０５μｌ、５μＭのＴａｑＭａｎ ｐｒｏｂｅを０．５μｌ、および上記で調製したｃＤＮＡ溶液を０．５μｌ加え、蒸留水で総反応液量を２５μｌとした。ＰＣＲ反応は５０℃・２分、９５℃・１０分の後、９５℃・１５秒、６０℃・１分のサイクルを４０回繰り返した。得られたヒト各種組織におけるＡＱ２７受容体のｍＲＮＡ発現量はｔｏｔａｌ ＲＮＡ ２５ｎｇあたりのコピー数として算出した（図４８）。
【０１７８】
実施例２５ ＲＴ−ＰＣＲによるＡＱ２７受容体ｍＲＮＡのラットにおける組織分布の検討
鋳型となるｃＤＮＡには、ラット各種組織由来のｐｏｌｙＡ＋ＲＮＡから以下の方法で合成したものを使用した。ＲＮＡ１μｇからランダムプライマー、逆転写酵素としてＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩ逆転写酵素（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社）を用い、添付のマニュアルに従って４２℃で反応を行い、反応終了後にエタノール沈殿して１００μｌに溶解した。ＲＴ−ＰＣＲはＳｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｐｒｉｓｍ ７７００（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用い、増幅と検出のためのプライマーとして５’−ＣＧＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＡＡＴＴＣＴＧ−３’（配列番号：５７），５’−ＡＴＧＴＧＴＣＴＣＣＴＴＴＧＧＴＴＴＣＴＴＣＣＡ−３’（配列番号：５８） よびＴａｑＭａｎ ｐｒｏｂｅとして５’−（Ｆａｍ）−ＡＧＣＡＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＧＡＣＣＡＣＡＧＣＧＴＣＣＡ−（Ｔａｍｒａ）−３’（配列番号：５９）を使用した。ＲＴ−ＰＣＲ反応液はＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）１２．５μｌに、それぞれ１００μＭのプライマー溶液を０．０５μｌ、５μＭのＴａｑＭａｎ ｐｒｏｂｅを０．５μｌ、および上記で調製したｃＤＮＡ溶液を０．５μｌ加え、蒸留水で総反応液量を２５μｌとした。ＰＣＲ反応は５０℃・２分、９５℃・１０分の後、９５℃・１５秒、６０℃・１分のサイクルを４０回繰り返した。得られたラット各種組織におけるＡＱ２７受容体のｍＲＮＡ発現量はｔｏｔａｌ ＲＮＡ ２５ｎｇあたりのコピー数として算出した（図４８）。
【０１７９】
実施例２６ ＲＴ−ＰＣＲによる新規分泌蛋白質ＧのｍＲＮＡのラットにおける組織分布の検討
Ｗｉｓｔａｒラットより各種臓器を摘出し、ｔｏｔａｌ ＲＮＡをＩｓｏｇｅｎ（ニッポンジーン社）、ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡをｍＲＮＡ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）により、それぞれのマニュアルにしたがって調製した。得られたｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ １μｇをＤｎａｓｅＩ（Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｇｒａｄｅ， ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社）処理後、１６０ｎｇ分をＲＮＡ ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ社）を用いて、マニュアルに従い４２℃でｃＤＮＡを合成した。合成されたｃＤＮＡはｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ換算で４ｎｇ／μｌの溶液とし、以後のＲＴ−ＰＣＲの鋳型として用いた。ＲＴ−ＰＣＲはＳｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｐｒｉｓｍ ７７００（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用い、増幅と検出のためのプライマーとして５’−ＡＧＣＡＣＡＣＴＧＧＣＴＴＣＣＧＴＣＴＡＧ−３’（配列番号：６０），５’−ＣＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＴＣＴＧＡＧＴＣＡ−３’（配列番号：６１）およびＴａｑＭａｎ ｐｒｏｂｅとして５’−（Ｆａｍ）ＡＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＡＡＧＣＣ−（Ｔａｍｒａ）−３’（配列番号：６２）を使用した。ＲＴ−ＰＣＲ反応液はＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）１２．５μｌに、それぞれ１００μＭのプライマー溶液を０．２２５μｌ、５μＭのＴａｑＭａｎ ｐｒｏｂｅを１．２５μｌ、および上記で調製したｃＤＮＡ溶液を０．５μｌ加え、蒸留水で総反応液量を２５μｌとした。ＰＣＲ反応は５０℃・２分、９５℃・１０分の後、９５℃・１５秒、６０℃・１分のサイクルを４０回繰り返した。得られたラット各種組織における新規分泌蛋白質ＧのｍＲＮＡ発現量はｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ １ｎｇあたりのコピー数として算出した（図４９）。
【０１８０】
実施例２７ ＲＴ−ＰＣＲによる新規分泌蛋白質ＦのｍＲＮＡのヒトにおける組織分布の検討
ｍＲＮＡの発現量検出のためのＲＴ−ＰＣＲの鋳型となるｃＤＮＡには、ヒト各種組織由来のｐｏｌｙＡ＋ＲＮＡ（クロンテック社）から以下の方法で合成したものを使用した。ＲＮＡ１μｇからランダムプライマー、逆転写酵素としてＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩ逆転写酵素（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社）を用い、添付のマニュアルに従って４２℃で反応を行い、反応終了後にエタノール沈殿して１００μｌに溶解した。発現量の定量はＳｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｐｒｉｓｍ ７７００を用いて行った。増幅と検出のためのプライマーとして5’-ＴＧＡＧＡＧＣＴＴＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡ-3’（配列番号：６３），5’-ＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＧＣＣＴＴＴＣＴＴ-3’（配列番号：６４）およびＴａｑＭａｎ ｐｒｏｂｅとして5’-(Ｆａｍ)ＡＡＣＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＡＧＣＴＣＡＡＴＧＧＣＴＡ-(Ｔａｍｒａ)-3’（配列番号：６５）を使用した。ＲＴ−ＰＣＲ反応は実施例２４と同様の方法で行った。
得られたヒト各種組織における新規分泌蛋白質ＦのｍＲＮＡ発現量はｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ １ｎｇあたりのコピー数として算出した（図５０）。
【０１８１】
実施例２８ ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション法による新規分泌蛋白質mRNAのラット脳における発現分布の検討
Ｗｉｓｔａｒラットをネンブタール麻酔下で開腹し、左心室から０．９％食塩水を５分間潅流し、続いて４％パラホルムアルデヒド溶液を５分間潅流した。取り出した脳を同溶液中に２４時間４℃で浸漬したのち、３０％スクロース溶液に置換し，４℃で３日間浸漬し、解析に供する脳のサンプルを得た。
新規分泌蛋白質アンチセンス、センスプローブは以下の方法で調製した。
まず、プラスミドベクターｐＣＲＩＩ ＴＯＰＯ（インビトロジェン社）に自体公知の方法でラット型ＡＱ２７リガンドｃＤＮＡを挿入した。このｃＤＮＡを、Ｍ１３プライマー（インビトロジェン社）・Ａｄｖａｎｔａｇｅ ＧＣ２ポリメラーゼ（クロンテック社）を用いたＰＣＲにて増幅・直鎖化し、エタノール沈殿法により精製した。このｃＤＮＡから、ＤＩＧ ＲＮＡ ＬａｂｅｌｌｉｎｇＫＩＴ （ＳＰ６／Ｔ７）（ロッシュ社）にてＳＰ６もしくはＴ７によるｉｎｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎを行い（４０μｌスケール）、生成されたＤＩＧラベルリボプローブをエタノール沈殿により精製した。精製したプローブは大塚精製水１００μｌに溶解した。ｃＤＮＡの挿入方向から、ＳＰ６により生成されたＤＩＧラベルリボプローブがアンチセンスプローブ、Ｔ７により生成されたＤＩＧラベルリボプローブがセンスプローブであった。
Ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにはフリーフローティング法を使用した。まずクライオスタットＣＭ３０５０（ライカ社）を用いて４０μｍの厚さの前頭断凍結切片を作製した。つぎに切片をＰＢＳで洗浄した後、１μｇ／ｍｌ Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｋを含む１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ／ １ｍＭ ＥＤＴＡ （ｐＨ８．０）処理（３７℃・１５分）にてプロテアーゼ処理を行った。さらに、０．２５％無水酢酸を含む０．１Ｍトリエタノールアミン （ｐＨ８．０）による処理（室温・１０分）にてアセチル化を行った後、ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ （５０％ホルムアミド，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．５，１×Ｄｅｎｈａｒｄｔ’ｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ， ２００μｇ／ｍｌ ｔＲＮＡ，１０％デキストラン硫酸，６００ｍＭ ＮａＣｌ，０．２５％ ＳＤＳ，１ｍＭ ＥＤＴＡ）による処理（６０℃・２０分）にてｐｒｅ−ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ反応を行った。Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ反応には、ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒでアンチセンスプローブもしくはセンスプローブを１０００倍に希釈し、８５℃で３分変性した後、切片に加え６０℃で１２時間以上反応させた。引き続き、非特異的にｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎしたプローブを洗浄するため以下の操作を行った。１）２×ＳＳＣ （ＳＳＣ；１×ＳＳＣ＝１５０ｍＭ ＮａＣｌ，１５ｍＭクエン酸ナトリウム，ｐＨ７．０）／５０％ホルムアミド処理（６０℃・１５分・２回）、２）ＴＮＥ（０．５Ｍ ＮａＣｌ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．６），１ｍＭ ＥＤＴＡ）処理（３７℃・１０分）、３）２０ｍｇ／ｍｌ ＲＮａｓｅ Ａ ｉｎ ＴＮＥ処理（３７℃・３０分）、４）ＴＮＥ処理（３７℃・１０分）、５）２×ＳＳＣ処理 （６０℃・１５分・２回）、６）０．５×ＳＳＣ処理（６０℃・１５分・２回）。以上の操作を行った後、ＤＩＧラベルプローブを検出するための免疫組織化学を行った。まず、ＤＩＧ−１（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．５，１５０ｍＭ ＮａＣｌ，０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０）で洗浄した後、１．５％ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｒｅａｇｅｎｔ （ロッシュ社）を含むＤＩＧ−１による処理（３７℃・１時間）にて非特異反応のブロッキングを行い、ａｎｔｉ−ＤＩＧ ｆａｂ−ｆｒａｇｍｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ロッシュ社）を含むＤＩＧ−１（１：１０００）を室温で１時間反応させた。ＤＩＧ−１で十分洗浄した後、ＤＩＧ−３（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ９．５，１００ｍＭ ＮａＣｌ，５０ｍＭ ＭｇＣｌ２）でリンスし、０．１８ｍｇ／ｍｌ ５−ｂｒｏｍｏ−４−ｃｈｌｏｒｏ−３−ｉｎｄｏｌｙｌ−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ （ＢＣＩＰ）を含むジメチルホルムアミド、および０．３４ｍｇ／ｍｌ ４−ｎｉｔｒｏｂｌｕｅ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ （ＮＢＴ）を含む７０％ジメチルホルムアミドを、ＤＩＧ−３ １ｍｌにつきそれぞれ３．５ｍｌおよび４．５ｍｌ加えた溶液によって、室温にて発色反応を行った。適時に発色をＰＢＳ洗浄により止めた後、切片をスライドガラスに載せ、９０％グリセロールを含むＰＢＳで封入し、光学顕微鏡で観察した。
アンチセンスプローブにて特異的に発色していたのは、視床下部のｒｅｔｒｏｃｈｉａｓｍａｔｉｃ ａｒｅａを中心に、ａｒｃｕａｔｅ ｎｕｃｌｅｕｓの吻側、特に背側部・外側部にかけてであった。これらの領域においてセンスプローブによる発色は検出されなかった。
上記部位では、ｃｏｃａｉｎｅ− ａｎｄ ａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ（ＣＡＲＴ）、ＰＯＭＣが発現し（ともに摂食抑制）、またレプチン受容体が高濃度に存在することが知られている。このことから、ＡＱ２７リガンドは摂食を制御すると考えられる。ａｒｃｕａｔｅ ｎｕｃｌｅｕｓはＧＨＲＨの存在する部位で、正中隆起外層に投射する神経があることが知られている。このことから、新規分泌蛋白質は神経内分泌に関与すると考えられる。さらに、実施例２９に記すＡＱ２７ｍＲＮＡの分布と併せ考えると、新規分泌蛋白質が睡眠・覚醒、痛覚、交感神経系、自発行動・情動行動等を制御・修飾すると考えられる。
【０１８２】
実施例２９ ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション法によるＡＱ２７ｍＲＮＡのラット脳における発現分布の検討
Ｗｉｓｔａｒラットをネンブタール麻酔下で開腹し、左心室から０．９％食塩水を５分間潅流し、続いて４％パラホルムアルデヒド溶液を５分間潅流した。取り出した脳を同溶液中に２４時間４℃で浸漬したのち、３０％スクロース溶液に置換し，４℃で３日間浸漬し、解析に供する脳のサンプルを得た。
ＡＱ２７アンチセンス、センスプローブは以下の方法で調製した。
まず、プラスミドベクターｐＣＲＩＩ ＴＯＰＯ（インビトロジェン社）に自体公知の方法でラット型ＡＱ２７ｃＤＮＡを挿入した。このｃＤＮＡを、Ｍ１３プライマー（インビトロジェン社）・Ａｄｖａｎｔａｇｅ ＧＣ２ポリメラーゼ（クロンテック社）を用いたＰＣＲにて増幅・直鎖化し、エタノール沈殿法により精製した。このｃＤＮＡから、ＤＩＧ ＲＮＡ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ＫＩＴ（ＳＰ６／Ｔ７）（ロッシュ社）にてＳＰ６もしくはＴ７によるｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎを行い（４０μｌスケール）、生成されたＤＩＧラベルリボプローブをさらに４０ｍＭ ＮａＨＣＯ３，６０ｍＭＮａ２ＣＯ３ｐＨ１０．２により４００ｂｐにアルカリ加水分解した後エタノール沈殿により精製した。精製したプローブは大塚精製水１００μｌに溶解した。ｃＤＮＡの挿入方向から、ＳＰ６により生成されたＤＩＧラベルリボプローブがアンチセンスプローブ、Ｔ７により生成されたＤＩＧラベルリボプローブがセンスプローブであった。
Ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにはフリーフローティング法を使用した。まずクライオスタットＣＭ３０５０（ライカ社）を用いて４０μｍの厚さの前頭断凍結切片を作製した。つぎに切片をＰＢＳで洗浄した後、１μｇ／ｍｌ Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｋを含む１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ／１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）処理（３７℃・１５分）にてプロテアーゼ処理を行った。さらに、０．２５％無水酢酸を含む０．１Ｍトリエタノールアミン（ｐＨ８．０）による処理（室温・１０分）にてアセチル化を行った後、ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ（５０％ホルムアミド，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．５，１×Ｄｅｎｈａｒｄｔ’ｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ， ２００μｇ／ｍｌ ｔＲＮＡ，１０％デキストラン硫酸，６００ｍＭ ＮａＣｌ，０．２５％ ＳＤＳ，１ｍＭ ＥＤＴＡ）による処理（６０℃・２０分）にてｐｒｅ−ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ反応を行った。Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ反応には、ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒでアンチセンスプローブもしくはセンスプローブを１０００倍に希釈し、８５℃で３分変性した後、切片に加え６０℃で１２時間以上反応させた。引き続き、非特異的にｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎしたプローブを洗浄するため以下の操作を行った。１） ２×ＳＳＣ（ＳＳＣ；１×ＳＳＣ＝１５０ｍＭ ＮａＣｌ，１５ｍＭクエン酸ナトリウム，ｐＨ７．０）／５０％ホルムアミド処理（６０℃・１５分・２回）、２）ＴＮＥ（０．５Ｍ ＮａＣｌ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．６），１ｍＭ ＥＤＴＡ）処理（３７℃・１０分）、３）２０ｍｇ／ｍｌ ＲＮａｓｅ Ａ ｉｎ ＴＮＥ処理（３７℃・３０分）、４）ＴＮＥ処理（３７℃・１０分）、５）２×ＳＳＣ処理（６０℃・１５分・２回）、６）０．５×ＳＳＣ処理（６０℃・１５分・２回）。以上の操作を行った後、ＤＩＧラベルプローブを検出するための免疫組織化学を行った。まず、ＤＩＧ−１（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．５，１５０ｍＭ ＮａＣｌ，０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０）で洗浄した後、１．５％ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｒｅａｇｅｎｔ （ロッシュ社）を含む ＤＩＧ−１による処理（３７℃、１時間）にて非特異反応のブロッキングを行い、ａｎｔｉ−ＤＩＧｆａｂ−ｆｒａｇｍｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ロッシュ社）を含むＤＩＧ−１（１：１０００）を室温で１時間反応させた。ＤＩＧ−１で十分洗浄した後、ＤＩＧ−３（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ９．５，１００ｍＭ ＮａＣｌ，５０ｍＭ ＭｇＣｌ２）でリンスし、０．１８ｍｇ／ｍｌ ５−ｂｒｏｍｏ−４−ｃｈｌｏｒｏ−３−ｉｎｄｏｌｙｌ−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ （ＢＣＩＰ）を含むジメチルホルムアミド、および０．３４ｍｇ／ｍｌ ４−ｎｉｔｒｏｂｌｕｅ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ （ＮＢＴ）を含む７０％ジメチルホルムアミドを、ＤＩＧ−３ １ｍｌにつきそれぞれ３．５ｍｌおよび４．５ｍｌ加えた溶液によって、４℃にて一晩発色反応を行った。適時に発色をＰＢＳ洗浄により止めた後、切片をスライドガラスに載せ、９０％グリセロールを含むＰＢＳで封入し、光学顕微鏡で観察した。
アンチセンスプローブにて特異的に発色していたのは、ｐｉｒｉｆｏｒｍ ｃｏｒｔｅｘ（梨状皮質）、ｃｏｒｔｅｘ−ａｍｙｇｄａｒａ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｚｏｎｅ（皮質扁桃移行帯）、ｖｅｎｔｒａｌ ｐａｌｌｉｄｕｍ（淡蒼球）、ｌａｔｅｒａｌ ｐｒｅｏｐｔｉｃ ａｒｅａ（視索前野）、ｖｅｎｔｒｏｍｅｄｉａｌ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ ｎｕｃｌｅｕｓ（腹内側核）、ｚｏｎａ ｉｎｃｅｒｔａ（不確帯）、ｐｏｓｔｅｒｏｒ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ ａｒｅａ（視床下部後核）、ｍａｒｇｉｎａｌ ｚｏｎｅ ｍｅｄｉａｎｇｅｎｉｃｕｌａｔｅ（内側膝状周辺帯）、ｄｏｒｓａｌ ｒａｐｈｅ ｎｕｃｌｅｕｓ（背側縫線核）、ｎｕｃｌｅｕｓ ｏｆ ｂｒａｃｈｉｕｍ ｉｎｆｅｒｉｏｒ ｃｏｌｌｉｃｕｌｕｓ（下丘腕核）、ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｕｌａｔｅ ｌｅａｆ（膝状体間小葉）、ｌｏｃｕｓ ｃｏｅｒｕｌｅｕｓ（青斑核）、ｃｅｎｔｒａｌ ｇｒａｙ，ａｌｐｈａ・ｂｅｔａ ｐａｒｔ（中心灰白質）等であった（図５１）。特にｄｏｒｓａｌ ｒａｐｈｅ ｎｕｃｌｅｕｓ（背側縫線核）、ｌｏｃｕｓ ｃｏｅｒｕｌｅｕｓ（青斑核）では強い発色が認められた。これらの領域ではセンスプローブによる発色は検出されなかった。
以上の結果から、新規分泌蛋白質／ＡＱ２７は視床下部で統合された情報を大脳−脳幹に伝達する役割を担うと考えられた。具体的には、１）摂食、２）睡眠・覚醒、３）痛覚、４）ストレス応答、５）自発行動・情動行動等の制御・修飾作用が示唆された。
【０１８３】
実施例３０ ヒト型新規分泌蛋白質Ｆ遺伝子を導入したＣＨＯ細胞上清中のＡＱ２７特異的活性成分の精製
まず定法により、ヒト型新規分泌蛋白質Ｆ遺伝子全長（配列番号：２４）を発現ベクターｐＡＫＫＯ−Ｈ１１１に導入した。このベクターをリポフェクトアミン２０００（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を用いてトランスフェクションし、一過性にＣＨＯ細胞においてヒト型新規分泌蛋白質Ｆを発現させ、培養上清を取得した。この培養上清中に、ベクターのみを導入したＣＨＯ細胞（ｍｏｃｋ ＣＨＯ細胞）の培養上清と比較して、ＨＥＫ細胞に一過性に発現させたオーファンレセプターＡＱ２７に対して特異的な刺激活性を見出した（図５２）。ＡＱ２７特異的な刺激活性の検出は、ｃＡＭＰレスポンスエレメント（ＣＲＥ）プロモーターの発現誘導によって産生されるレポーター遺伝子産物（ルシフェラーゼ）の発現量を指標に行った。
次に、この発現ベクターを、ジーントランスファー（和光純薬）を用いてＣＨＯｄｈｆｒ−細胞にトランスフェクションし、ヒト型ＡＱ２７リガンド遺伝子を恒常的に発現するＣＨＯ細胞を取得した。このヒト型新規分泌蛋白質Ｆ遺伝子発現ＣＨＯ細胞を培養し、培養上清を得た。
培養上清からの精製にあたって、既知ＲＦアミドペプチドを認識する抗体が分泌蛋白質Ｆを認識し得るか、液相の競合法で検討したところ、抗ＲＦＲＰ−１抗体の１Ｆ３−１が分泌蛋白質ＦのＣ末端構造を認識することが判明した（図５３）。
培養上清を２．４Ｌ取得し、１Ｆ３−１抗体を用いたアフィニティー精製を行った。まず、上清を煮沸し、遠心にて析出物を取り除き、１Ｆ３−１抗体を結合させたＮＨＳ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム（アマシャムバイオサイエンス）にアプライした。カラムを１．０Ｍ ＮａＣｌを加えたＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ）にて洗浄後、０．５ＭｎａＣｌを含む０．２Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ−ＨＣｌ ｐＨ２．２で１Ｆ３−１抗体を結合させたＮＨＳ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムに結合した成分を溶出した。この溶出画分を，Ｖｙｄａｃ Ｃ１８ ２１８ＴＰ５４１５カラムにアプライし、２０−３５％アセトニトリルの濃度勾配で溶出したところ、２つのピークのＡＱ２７特異的な刺激活性が検出された（図５４）。それぞれの活性ピークをμＲＰＣ Ｃ２／Ｃ１８ ＳＣ２．１／１０カラムで分離したことろ、それぞれ活性ピークは２つに分かれ合計４つの活性ピーク１〜４が得られた（図５５および図５６）。
４つの活性画分に含まれるペプチドの分子量をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳで測定した。図５５および図５６に示されるそれぞれの活性ピークに含まれるペプチドの測定分子量とそれらに対応するヒト型ＡＱ２７リガンド遺伝子から推測される分子量の理論値およびアミノ酸配列を図５７に示す。
【０１８４】
実施例３１ 長さの異なるペプチドＦのＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞株に対するｃＡＭＰ産生抑制試験
ＡＱ２７を発現させたＣＨＯ細胞を、９６穴プレート（ファルコン）に４×１０４個／ｗｅｌｌでまき、３７℃、５％ＣＯ２・９５％ａｉｒで一晩培養した。アッセイ用バッファーとして、Ｈａｎｋｓ’Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ギブコ）に、終濃度０．１％ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、シグマ）、２００μＭ ３−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ（シグマ）、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４） （ギブコ）を加えたものを調製した。試料希釈用バッファーとしてアッセイ用バッファーに終濃度２μＭフォルスコリンを添加したものを作成、これを用い図５８に示した試料ペプチドを、２×１０−６Ｍ、２×１０−７Ｍ、２×１０−８Ｍ、２×１０−９Ｍ、２×１０−１０Ｍ、２×１０−１１Ｍに希釈した。一晩培養した細胞は、アッセイ用バッファー１５０μｌで二回洗浄後交換して３０分、３７℃、１００％ ａｉｒで培養し、同様に２回洗浄して、アッセイ用バッファー５０μｌ、試料溶液５０μｌを添加し、攪拌した後３０分、３７℃、１００％ ａｉｒで培養した。細胞内ｃＡＭＰ量を、ｃＡＭＰ−ＳｃｒｅｅｎＴＭ Ｓｙｓｔｅｍ（ＡＢＩ）を用い、本キットのプロトコールに従い測定した。Ｍａｘｉｍａｍ ｌｅｖｅｌのｃＡＭＰ量と各サンプルを添加した時のｃＡＭＰ量の差を算出して、フォルスコリンによるｃＡＭＰ産生促進量に対する百分率を算出し、これをｃＡＭＰの産生の抑制率とした（図５９）。図５８に各試料のＥＣ５０値を示す。
【０１８５】
実施例３２ ヒト型新規分泌蛋白質Ｆのラットコルチコステロンの分泌刺激活性ＡＱ２７受容体がラット副腎で高い発現をしていることから、副腎ホルモンの分泌に作用する可能性があるため、図５８に記載のＡＱ２７Ｌ−４３をラットに投与して副腎皮質ホルモンに対する影響を調べた。８週齢のオスＷｉｓｔａｒラットを軽く固定し尾静脈からＡＱ２７Ｌ−４３を生理食塩水に溶解し０．５ｍｇ／ラットの濃度で投与し３０分後に断頭により採血を行った。またコントロールとして生理食塩水を投与したラットから採血した。これらの血清成分をラットコルチコステロン測定キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ社）を用いて測定したところＡＱ２７投与ラットで血中コルチコステロンの上昇が観察できた。
【０１８６】
【発明の効果】
本発明の新規分泌蛋白質およびそのＤＮＡは、例えば、本発明の新規分泌蛋白質の機能不全に関連する疾患などに対する予防・治療薬などとして有用である。さらに、本発明の新規分泌蛋白質は、本発明の新規分泌蛋白質の機能を促進または阻害する化合物のスクリーニング等にも有用である。
本発明のＤＮＡは、本発明の新規分泌蛋白質の発現を促進または阻害する化合物のスクリーニング等にも有用である。
【０１８７】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】分泌蛋白質ＡのＤＮＡ配列を示す。
【図２】分泌蛋白質Ａのアミノ酸配列を示す。
【図３】分泌蛋白質ＢのＤＮＡ配列を示す。
【図４】分泌蛋白質Ｂのアミノ酸配列を示す。
【図５】分泌蛋白質ＣのＤＮＡ配列を示す。
【図６】分泌蛋白質Ｃのアミノ酸配列を示す。
【図７】分泌蛋白質ＤのＤＮＡ配列を示す。
【図８】分泌蛋白質Ｄのアミノ酸配列を示す。
【図９】分泌蛋白質ＥのＤＮＡ配列を示す。
【図１０】分泌蛋白質Ｅのアミノ酸配列を示す。
【図１１】分泌蛋白質ＦのＤＮＡ配列を示す。
【図１２】分泌蛋白質Ｆのアミノ酸配列を示す。
【図１３】分泌蛋白質ＧのＤＮＡ配列を示す。
【図１４】分泌蛋白質Ｇのアミノ酸配列を示す。
【図１５】分泌蛋白質Ｆと分泌蛋白質Ｇのアミノ酸配列の比較図を示す。
【図１６】新規ポリペプチドＦ：Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目）および新規ポリペプチドＦ：Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第８０番目〜第８８番目）のヒトＡＱ２７受容体およびヒトＯＴ７Ｔ０２２受容体を発現させていないＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性（ルシフェラーゼ活性）を示す。縦軸はルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）を示す。横軸はポリペプチドの濃度（μＭ）を示す。ＦＳＫはフォルスコリンを示す。ＥＨＡＧＣＲＦＲＦ-NH２はポリペプチドGlu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第８０番目〜第８８番目）を、ＧＧＦＳＦＲＦはポリペプチドGly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目）を示す。ｂａｓｅはポリペプチド無添加の場合を示す。
【図１７】新規ポリペプチドＦ：Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目）および新規ポリペプチドＦ：Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第８０番目〜第８８番目）のヒトＡＱ２７受容体を一過性に発現させたＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性（ルシフェラーゼ活性）を示す。縦軸はルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）を示す。横軸はポリペプチドの濃度（μＭ）を示す。ＦＳＫはフォルスコリンを示す。ＥＨＡＧＣＲＦＲＦ-NH２はポリペプチドGlu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第８０番目〜第８８番目）を、ＧＧＦＳＦＲＦはポリペプチドGly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目）を示す。ｂａｓｅはポリペプチド無添加の場合を示す。
【図１８】新規ポリペプチドＦ：Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目）および新規ポリペプチドＦ：Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第８０番目〜第８８番目）のヒトＯＴ７Ｔ０２２受容体を一過性に発現させたＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性（ルシフェラーゼ活性）を示す。縦軸はルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）を示す。横軸はポリペプチドの濃度（μＭ）を示す。ＦＳＫはフォルスコリンを示す。ＥＨＡＧＣＲＦＲＦ-NH２はポリペプチドGlu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第８０番目〜第８８番目）を、ＧＧＦＳＦＲＦはポリペプチドGly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目）を示す。ｂａｓｅはポリペプチド無添加の場合を示す。
【図１９】分泌蛋白質ＨのＤＮＡ配列を示す。
【図２０】分泌蛋白質Ｈのアミノ酸配列を示す。
【図２１】新規ポリペプチドＦ：Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２4番目〜第１３３番目）のヒトＡＱ２７受容体およびヒトＯＴ７Ｔ０２２受容体を発現させていないＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性（ルシフェラーゼ活性）を示す。縦軸はルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）を示す。横軸はポリペプチドの濃度（μＭ）を示す。ＦＳＫはフォルスコリンを示す。ＲＫＫＧＧＦＳＦＲＦ-NH２はポリペプチドArg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目）を示す。ｂａｓｅはポリペプチド無添加の場合を示す。
【図２２】新規ポリペプチドＦ：Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２4番目〜第１３３番目）のヒトＡＱ２７受容体を発現させたＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性（ルシフェラーゼ活性）を示す。縦軸はルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）を示す。横軸はポリペプチドの濃度（μＭ）を示す。ＦＳＫはフォルスコリンを示す。ＲＫＫＧＧＦＳＦＲＦ-NH２はポリペプチドArg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目）を示す。ｂａｓｅはポリペプチド無添加の場合を示す。
【図２３】新規ポリペプチドＦ：Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２4番目〜第１３３番目）のヒトＯＴ７Ｔ０２２受容体を発現させたＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性（ルシフェラーゼ活性）を示す。縦軸はルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）を示す。横軸はポリペプチドの濃度（μＭ）を示す。ＦＳＫはフォルスコリンを示す。ＲＫＫＧＧＦＳＦＲＦ-NH２はポリペプチドArg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目）を示す。ｂａｓｅはポリペプチド無添加の場合を示す。
【図２４】ＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞におけるｃＡＭＰ産生抑制活性を示す。ｎ＝２の平均値である。縦軸はｃＡＭＰ濃度(pmol)を示す。横軸はポリペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものである。ＦＳＫ−はフォルスコリン無添加の場合を、ＦＳＫ＋はフォルスコリン添加の場合を示す。ＲＫＫＧＧＦＳＦＲＦ-NH２はポリペプチドＦ：Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目）を示す。
【図２５】ｍｏｃｋ ＣＨＯ細胞におけるｃＡＭＰ産生抑制活性を示す。ｎ＝２の平均値を示す。縦軸はｃＡＭＰ濃度(pmol)を示す。横軸はポリペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものである。ＦＳＫ−はフォルスコリン無添加の場合を、ＦＳＫ＋はフォルスコリン添加の場合を示す。ＲＫＫＧＧＦＳＦＲＦ-NH２はポリペプチドＦ：Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目）を示す。
【図２６】ＧＧＦＳＦＲＦ-NH２のＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞における細胞内カルシウムイオン遊離促進活性を示す。縦軸のＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅは蛍光強度(cps)を示す。横軸は時間（秒）を示す。ＧＧＦＳＦＲＦ-NH２はポリペプチドＦ：Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目）を示す。○、□および▲はそれぞれ添加したＧＧＦＳＦＲＦ-NH２の濃度が０μＭ、１μＭおよび１０μＭであることを示す。
【図２７】ＲＫＫＧＧＦＳＦＲＦ-NH２のＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞における細胞内カルシウムイオン遊離促進活性を示す。縦軸のＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅは蛍光強度(cps)を示す。横軸は時間（秒）を示す。ＲＫＫＧＧＦＳＦＲＦ-NH２はポリペプチドＦ：Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２４番目〜第１３３番目）を示す。○、□および▲はそれぞれ添加したＧＧＦＳＦＲＦ-NH２の濃度が０μＭ、１μＭおよび１０μＭであることを示す。
【図２８】新規ポリペプチドＦ：Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg -Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH2、Pyr-Asp-Glu-Gly-Ser-Glu-Ala-Thr-Gly-Phe-Leu-Pro-Ala-Ala-Gly-Glu-Lys-Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg -Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第１０８番目〜第１３３番目および第９１番目〜第１３３番目）のヒトＡＱ２７受容体を発現させていないＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性（ルシフェラーゼ活性）を示す。縦軸はルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）を示す。横軸はポリペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものである。ＦＳＫ−はフォルスコリン無添加の場合を、ＦＳＫ＋はフォルスコリン添加の場合を示す。Ｔ１−Ｆ２６−ＮＨ２は新規ポリペプチドＦ： Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg-Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第１０８番目〜第１３３番目）、Ｐｙｒ１−Ｆ４３−ＮＨ２は新規ポリペプチドＦ：Pyr -Asp-Glu-Gly-Ser-Glu-Ala-Thr-Gly-Phe-Leu-Pro-Ala-Ala-Gly-Glu-Lys-Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg -Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第９１番目〜第１３３番目）を示す。Pyrは環状ピログルタミル化されたグルタミンを示す。
【図２９】新規ポリペプチドＦ：
Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg -Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH2、Pyr-Asp-Glu-Gly-Ser-Glu-Ala-Thr-Gly-Phe-Leu-Pro-Ala-Ala-Gly-Glu-Lys-Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg -Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第１０８番目〜第１３３番目および第９１番目〜第１３３番目）のヒトＡＱ２７受容体を発現させたＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性（ルシフェラーゼ活性）を示す。縦軸はルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）を示す。横軸はポリペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものである。ＦＳＫ−はフォルスコリン無添加の場合を、ＦＳＫ＋はフォルスコリン添加の場合を示す。Ｔ１−Ｆ２６−ＮＨ２は新規ポリペプチドＦ：
Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg -Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第１０８番目〜第１３３番目、Ｐｙｒ１−Ｆ４３−ＮＨ２は新規ポリペプチドＦ：Pyr-Asp-Glu-Gly-Ser-Glu-Ala-Thr-Gly-Phe-Leu-Pro-Ala-Ala-Gly-Glu-Lys-Thr-Ser-Gly-Pro-Leu-Gly-Asn-Leu-Ala-Glu-Glu-Leu-Asn-Gly-Tyr-Ser-Arg -Lys-Lys-Gly-Gly-Phe-Ser-Phe Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第９１番目〜第１３３番目）を示す。Pyrは環状ピログルタミル化されたグルタミンを示す。
【図３０】新規ポリペプチドPyr１−Ｆ４３−ＮＨ２によるAQ27発現CHO細胞での細胞内カルシウムイオン動員活性を示す。縦軸のＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅは蛍光強度(cps)を示す。横軸は時間（秒）を示す。□はペプチド無添加の場合を、■、△、▲、○、●および◇は添加したペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものであり、それぞれ５、６、７、８、９および１０を示す。
【図３１】ｍｏｃｋ ＣＨＯ細胞での細胞内カルシウムイオン濃度変化に対する新規ポリペプチドPyr１−Ｆ４３−ＮＨ２の影響を調べた結果を示す。縦軸のＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅは蛍光強度（ｃｐｓ）を示す。横軸は時間（秒）を示す。□はペプチド無添加の場合を、■、△、▲、○、●および◇は添加したペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものであり、それぞれ５、６、７、８、９および１０を示す。
【図３２】新規ポリペプチドPyr１−Ｆ４３−ＮＨ２によるＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞でのｃＡＭＰ産生抑制活性を示す。ｎ＝３の平均値。縦軸のｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎはｃＡＭＰ産生抑制率（％）を示す。横軸のＣｏｎｃ．は添加したペプチドの濃度をｌｏｇＭで表した。
【図３３】ｍｏｃｋ ＣＨＯのｃＡＭＰ産生抑制活性に対する新規ポリペプチドPyr１−Ｆ４３−ＮＨ２の影響を調べた結果を示す。ｎ＝３の平均値。縦軸のｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎはｃＡＭＰ産生抑制率（％）を示す。横軸のＣｏｎｃ．は添加したペプチドの濃度をｌｏｇＭで表した。
【図３４】新規ポリペプチドＦ：Ala-Ser-Gln-Pro-Gln-Ala-Leu-Leu-Val-Ile-Ala-Arg-Gly-Leu-Gln-Thr-Ser-Gly-Arg-Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第６１番目〜第８６番目）のヒトＡＱ２７受容体を発現させていないＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性（ルシフェラーゼ活性）を示す。縦軸はルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）、横軸はポリペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものである。ＦＳＫ−はフォルスコリン無添加の場合を、ＦＳＫ＋はフォルスコリン添加の場合を示す。Ａ１−Ｆ２８−ＮＨ２は新規ポリペプチドＦ：Ala-Ser-Gln-Pro-Gln-Ala-Leu-Leu-Val-Ile-Ala-Arg-Gly-Leu-Gln-Thr-Ser-Gly-Arg-Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第６１番目〜第８６番目）を示す。
【図３５】新規ポリペプチドＦ：
Ala-Ser-Gln-Pro-Gln-Ala-Leu-Leu-Val-Ile-Ala-Arg-Gly-Leu-Gln-Thr-Ser-Gly-Arg-Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第６１番目〜第８６番目）のヒトＡＱ２７受容体を発現させたＨＥＫ２９３細胞に対するレポーター遺伝子発現量の上昇活性（ルシフェラーゼ活性）を示す。縦軸のＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅはルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）、横軸はポリペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものである。ＦＳＫ−はフォルスコリン無添加の場合を、ＦＳＫ＋はフォルスコリン添加の場合を示す。Ａ１−Ｆ２８−ＮＨ２は新規ポリペプチドＦ：Ala-Ser-Gln-Pro-Gln-Ala-Leu-Leu-Val-Ile-Ala-Arg-Gly-Leu-Gln-Thr-Ser-Gly-Arg-Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-NH2（配列番号：２３の第６１番目〜第８６番目）を示す。
【図３６】新規ポリペプチドＡ１−Ｆ２８−ＮＨ２によるＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞での細胞内カルシウムイオン動員活性を示す。縦軸のＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅは蛍光強度（ｃｐｓ）を示す。横軸は時間（秒）を示す。＊はペプチド無添加の場合を、■、●、○、▲、◇および◆はペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものであり、それぞれ５、６、７、８、９および１０を示す。
【図３７】ｍｏｃｋ ＣＨＯ細胞での細胞内カルシウムイオン濃度変化に対する新規ポリペプチドＡ１−Ｆ２８−ＮＨ２の影響を調べた結果を示す。縦軸のＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅは蛍光強度（ｃｐｓ）を示す。横軸は時間（秒）を示す。＊はペプチド無添加の場合を、■、●、○、▲、◇および◆はペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものであり、それぞれ５、６、７、８、９および１０を示す。
【図３８】新規ポリペプチドＡ１−Ｆ２８−ＮＨ２によるＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞でのｃＡＭＰ産生抑制活性を示す。ｎ＝２の平均値。縦軸のｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎはｃＡＭＰ産生抑制率（％）を示す。横軸のＣｏｎｃ．は添加したペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものである。
【図３９】ｍｏｃｋ ＣＨＯ細胞のｃＡＭＰ産生抑制活性に対する新規ポリペプチドＡ１−Ｆ２８−ＮＨ２の影響を調べた結果を示す。ｎ＝２の平均値。縦軸のｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎはｃＡＭＰ産生抑制率（％）を示す。横軸のＣｏｎｃ．は添加したペプチドの濃度をｌｏｇＭで表したものである。
【図４０】分泌蛋白質ＩのＤＮＡ配列を示す。
【図４１】分泌蛋白質Ｉのアミノ酸配列を示す。
【図４２】ラットＡＱ２７受容体の塩基配列を示す。
【図４３】ラットＡＱ２７受容体のアミノ酸配列を示す。
【図４４】マウスＡＱ２７受容体の塩基配列を示す。
【図４５】マウスＡＱ２７受容体のアミノ酸配列を示す。
【図４６】ヒトＡＱ２７受容体（Ａ）、ラットＡＱ２７受容体（Ｂ）およびマウスＡＱ２７受容体（Ｃ）のアミノ酸配列の相同性を示す。
【図４７】ＡＱ２７受容体ｍＲＮＡのヒトにおける組織分布を示す。
【図４８】ＡＱ２７受容体ｍＲＮＡのラットにおける組織分布を示す。図中のｉはｉｎｆａｎｔ（胎児）を示す。
【図４９】分泌蛋白質ＧのｍＲＮＡのラットにおける組織分布を示す。
【図５０】分泌蛋白質ＦのｍＲＮＡのヒトにおける組織分布を示す。
【図５１】ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション法によるＡＱ２７ｍＲＮＡのラット脳における発現分布を示す。シグナルの相対強度の＋＋＋は最も強い（ｈｉｇｈｅｓｔ）、＋＋は中程度（ｍｏｄｅｒａｔｅ ｄｅｎｓｉｔｙ）、＋は弱い（ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ）を示す。
【図５２】分泌蛋白質Ｆ遺伝子を導入したＣＨＯ細胞または分泌蛋白質Ｆ遺伝子を導入していないＣＨＯ細胞の細胞上清をＡＱ２７受容体発現細胞（ＡＱ２７／ＨＥＫ）またはＡＱ２７受容体を発現していない細胞（ｐＡＫＫＯ／ＨＥＫ）に接触させた時の特異的刺激活性を検出した結果を示す。縦軸はルシフェラーゼの発現量（ｃｐｓ）を示す。横軸はＡＱ２７受容体に反応させた物質の濃度または希釈度を示す。Ｂａｓａｌは無添加の場合を示す。ＦＳＫはフォルスコリンを添加した場合を示す。ペプチド（１）はペプチドＦ：Glu-His-Ala-Gly-Cys-Arg-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第８０番目〜第８８番目）を、ペプチド（２）はポリペプチドＦ：Gly-Gly-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-NH２（配列番号：２３の第１２７番目〜第１３３番目）を添加した場合を示す。ｍｏｃｋ ＳＵＰ．は分泌蛋白質Ｆ遺伝子を導入していないＣＨＯ細胞の細胞上清を添加した場合を示す。ペプチドＦ ＳＵＰ．は分泌蛋白質Ｆ遺伝子を導入したＣＨＯ細胞の細胞上清を添加した場合を示す。
【図５３】既知の抗ＲＦＲＰ−１抗体 １Ｆ３−１と分泌蛋白質Ｆとの反応曲線を示す。縦軸のＢ／Ｂ０（％）はサンプル添加時の結合量とサンプル非添加時の結合量の比を、横軸のＰｅｐｔｉｄｅ ｃｏｎｃ．は分泌蛋白質Ｆの濃度をｌｏｇＭで表したものである。
【図５４】既知の抗ＲＦＲＰ−１抗体 １Ｆ３−１を用いたアフィニティクロマトグラフィー結合画分のＡＱ２７受容体発現細胞（ＡＱ２７）またはＡＱ２７受容体を発現していない細胞（ｐＡＫＫＯ）に対する特異的刺激活性を示す。横軸のＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙはルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）を示す。横軸はアフィニティクロマトグラフィー結合画分の番号を示す。
【図５５】図５４のフラクション２０（ｆｒ．２０）を分離した時の各フラクションのＡＱ２７受容体発現細胞に対する特異的刺激活性を示す。横軸のＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙはルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）を示す。横軸はフラクションの番号を示す。３と４は活性ピークを示す。
【図５６】図５４のフラクション２０−１３（ｆｒ．２０−２３）を分離した時の各フラクションのＡＱ２７受容体発現細胞に対する特異的刺激活性を示す。横軸のＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙはルシフェラーゼ活性（ｃｐｓ）を示す。横軸はフラクションの番号を示す。１と２は活性ピークを示す。
【図５７】図５５および図５６の活性ピーク１〜４に含まれるペプチドＦの測定分子量と理論値およびアミノ酸配列を示す。
【図５８】長さの異なるペプチドＦのアミノ酸配列と各種ペプチドＦのＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞株に対するｃＡＭＰ産生抑制活性（ＥＣ５０値）を示す。
【図５９】図５８に示したペプチドＦのＡＱ２７発現ＣＨＯ細胞株に対するｃＡＭＰ産生抑制率を示す。縦軸のｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（％）はｃＡＭＰ産生抑制率（％）を示す。横軸のＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｌｏｇＭ）は添加したペプチドＦの濃度をｌｏｇＭで表したものである。

Claims (13)

  1. 配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第１９番目〜１３６番目のアミノ酸配列からなる分泌蛋白質、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩。
  2. 配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列の第９０番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第９３番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０８番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１０９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１１番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１５番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１１９番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２４番目〜１３３番目のアミノ酸配列、第１２６番目〜１３３番目または第１２７番目〜１３３番目のアミノ酸配列からなるペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩。
  3. 配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列からなる前駆体蛋白質またはその塩。
  4. 請求項１記載の分泌蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド。
  5. 配列番号：２４で表わされる塩基配列の第５５番目〜４０８番目の塩基配列からなる請求項４記載のポリヌクレオチド。
  6. 請求項２記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドからなるポリヌクレオチド。
  7. 配列番号：２４で表わされる塩基配列の第２６８番目〜３９９番目、第２７１番目〜３９９番目、第２７７番目〜３９９番目、第３１０番目〜３９９番目、第３２２番目〜３９９番目、第３２５番目〜３９９番目、第３３１番目〜３９９番目、第３４３番目〜３９９番目、第３５５番目〜３９９番目、第３７０番目〜３９９番目、第３７６番目〜３９９番目または第３７９番目〜３９９番目の塩基配列からなる請求項６記載のポリヌクレオチド。
  8. 請求項３記載の前駆体蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド。
  9. 配列番号：２４で表わされる塩基配列からなる請求項８記載のポリヌクレオチド。
  10. 請求項１記載の分泌蛋白質または請求項２記載のペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体。
  11. 請求項２記載のペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の細胞内Ｃａ2+遊離活性または細胞内ｃＡＭＰ生成抑制活性を不活性化する中和抗体である請求項１０記載の抗体。
  12. 請求項６または７に記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする請求項２記載のペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法。
  13. 請求項２記載のペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を用いることを特徴とする請求項１記載の分泌蛋白質または請求項２記載のペプチド、そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の、細胞内Ｃａ2+遊離活性または細胞内ｃＡＭＰ生成抑制活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法。
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