WO2002030872A1 - Nouveaux composes aliphatiques, procede de preparation et utilisation associes - Google Patents

Description

明細書 新規脂肪族化合物、 その製造方法、 及びその利用方法 技術分野

本発明は新規脂肪族化合物、 その製造方法、 及び脂肪族化合物を有効成分とす る医薬に関する。

背景技術

止血過程で、 活性化血小板から放出される a類粒には、 セロトニン、 ADPな どとともに脂肪族誘導体 2—ァミノ— 3—ヒドロキシー 4一才クタデセン一 1一 リン酸、 2— am i no— .3— hyd r oxy— 4— o c t ad e c e n e— 1 -ph o s ph a t e (AHOP) が含まれるが、 セロトニンは血管収縮、 AD Pは血小板凝集を、 それぞれ示し、 どちらも止血を促進するが、 一方、 AHOP についてはその役割が未知であった。 近年、 AHOPを内因性リガンドとするォ 一ファン受容体である、 内皮分化遺伝子 e n d 0 t h e 1 i a 1 d i f f e r e n t i a t i on g en e (Ed g) が見い出され、 AHOPと Ed gの結 合が、 血行動態悪化や血管平滑筋増殖など、 動脈硬化促進性の方向に、 あるいは 呼吸器系疾患進行の方向に作用している可能性が示されつつある。

Ed gは 1990年にォーファン受容体として遺伝子がクローニングされた [Ed g— 1 (J BCノ 90， 265, p. 9308)] が、 その後、 Edg— 1のホモログとして、 Edg— 3 (BBRC，， 96, 227， p. 608)、 E dg— 5 (AGR 16/H218) (J CB,， 96， 135, p. ュ 071) が 得られたものの、 その生理的役割は不明だった。 ところが、' 98年、 AHOPが Ed g— 1の内因性リガンドとなっている可能性が示唆され （S c i e n c e ' 98, 279, p. 1552)、 その後、 Ed g— 3、 及び E d g _ 5も AHOP 特異的受容体である事が示された （BBRC， 99, 260, p. 263、 J B C' 99， 274, 27, p. 18997)。

血管内皮細胞上の Ed g— 1が AHOPの刺激によって、 低分子量 GTP結合 性タンパク質 Rh oの活性ィ匕経由にて力ドヘリンなど接着タンパク質をアップレ ギュレートし （S c i e n c e' 98， 279, p. 1552)、 Tリンパ球由来 株化細胞が、 AHOPの刺激によって、 i n V i t r o疑似血管モデルでの血 管層侵入を増長する （EMB〇 Jノ 98, vo l. 17, No. 14, p. 40 66)。 また、 岡島らは Edg— 1、或いは Edg— 3を強制発現させた CH〇細 胞を用い、 疑似血管遊走試験を行ったところ、 どちらの場合も、 AHOP濃度依 存的に遊走が促進された （' 99年日本生化学会大会要旨集 p. 883)。一方、 五十嵐らは、 がん細胞株 F 1 0が疑似血管モデルにて AHOP 10— ⁸〜10一⁶ Mにて濃度依存的に最大 80%ほど遊走抑制を受ける事を示したが、 F 10細胞 では Edg— 1、 或いは Ed g— 3は殆ど発現しておらず、 Ed g— 5が発現し ていた （' 99年日本生化学会)。 このことについて、 発現亜種が異なる事が原因 となって、 AHOPが遊走抑制を示した可能性が指摘されている （' 99年生化 学会大会要旨集 P. 675、 883)。

血管平滑筋細胞 （Eu r. J. B i o c h emノ 98， 257, p. 403)、 或いは気道平滑筋細胞 （B i o c h em. Jノ 99， 338， p. 643) で、 どちらも、 AH OP応答性に MAPキナーゼ活性化が観察されており、 AHOP が血管平滑筋細胞増殖の方向に作用する可能性が指摘されている。

杉山らは、ラットに AH〇 Pを尾静脈経路で投与し血行動態を観察したところ、 収縮期血圧、及び左心室圧時間微分の二指標の有意な低下を観察し、 AHOPが、 i n V i v oにおいて、 心機能低下の方向に作用している可能性を示した （' 00年薬理学会要旨集 P. 127)。

AHOPがムスカリン受容体内向き K+整流を活性化し不整脈を引き起こす可 能性が指摘されている （， 99 P f ug e r s Ar ch— Eu r J Ph i s i o 1 438, pp. 642— 648)事より、 Ed g受容体拮抗物質が不整脈 に奏効する可能性を考える事ができる。

血管内皮細胞に及ぼす AHOPの作用を、 血管新生動物モデルを用いて検討し た結果、 VEGF、 や FGF— 2などの増殖因子による血管新生を、 AHOPが Edg- 1, Edg— 3と結合する事によって相乗的に促進させ、 Edgがリウ マチ、 固形がんや糖尿病性網膜症の進行に作用している可能性が指摘されている (Ce l l ' 99， p. 301)。 AHOPと Ed g受容体の結合によって引き起こされる過剰な炎症や気道のリ モデリングの結果、 肺炎、 慢性閉塞性気道疾患 （C〇PD : c li I on i c o b s t r u c t i ve a i rway d i s e a s e〉、呼吸器系高血圧が進 ϊ する可能性が指摘されている （Pu lmona ry Ph a rmac o l ogy & Th e r ap eu t i c s ' 2000， 13, p. 99)。

原虫トリパノゾ一マの撲滅薬、 スラミンが E dg-3特異的な拮抗性を示し、 AHOPと Ed gの結合のシグナルを阻止する事が報じられている（J. B. Cノ 99, 274, 27， p. 18997)。 スラミンは動脈硬化病態モデルに治癒的 に奏効する事が示されている （C i r c u l a t i on,' 99、 Ca r d i ov a s c u 1 a r R e s .，， 94， 28， p. 1166) が、 この薬効の機作に E d g拮抗性が絡んでいる可能性が考えられる。

これらの知見を総合すると、 AHOPが Ed gと結合すると、 炎症性細胞活性 化や血管平滑筋細胞増殖、 血行動態悪化など動脈硬化促進的に作用し、 また、 血 管新生を促進し、 リウマチ、 固形がん、 糖尿病性網膜症の進行の方向に作用する 可能性が示されている事になる。 即ち、 Ed gに拮抗する物質が、 抗循環器系疾 患性 （例えば、 抗動脈硬化性、 抗心臓疾患性 （例えば、 抗不整脈性、 抗心筋梗塞 性)）、 抗リウマチ性、 抗がん性、 抗糖尿病性網膜症性ゃ抗呼吸器系疾患性を示す 可能性が考えられる。

本発明者らは、 上記の点に鑑み、 鋭意研究を行った結果、 下記式 （I) 〜 （V) で示される化合物を新たに発見し、 これらの化合物（以下、 「本発明化合物」 とい う） が Ed g受容体に拮抗する事を見い出した。 本発明はこの知見に基づくもの であり、 その目的は、 新規な脂肪族化合物、 その製造方法及び医薬を提供するこ とにある。

発明の開示

本発明は、 式 （I)

(式中、 nは 1〜1 1の整数であり、 1は 1〜1 6の整数である）

で表される脂肪族化合物であって、 8位が二重結合である場合には、 （2 R、 3 S、 2 ' S ) の光学異性体であり、 また 8位が単結合である場合には、 （2 S、 3 R、 2 ' R S ) の光学異性体である化合物に関する。

尚、上記式中、 波線は、 （R)、 （S )及びラセミ体のいずれの光学異性を含むこと を意味する。 また、 本願明細書において、 上の鎖を第 1鎖と呼び、 下の鎖を第 2 鎖と呼ぶ。

図面の簡単な説明

図 1は、 本発明の化合物が用量依存的に E d g拮抗性を示すグラフである （ス ラミン：対照）。

図中、 白三角は、 被験物質をいれない場合のデータである。

図 2は、本発明の化合物が用量依存的に A H〇 P競合作用を示すグラフである。 図中、 白丸は、 被験物質をいれない場合のデータである。

図 3は、 本発明の化合物が'用量依存的に血管平滑筋細胞増殖の抑制作用を示す グラフである （スラミン：対照）。

図中、 白四角は、 被験物質をいれない場合のデータであり、 また、 * ：陰性対照 に対し、危険率 p≤ 5 %にて有意に抑制、 * *：陰性対照に対し、危険率 p≤ 1 % にて有意に抑制を示す。

図 4は、 内皮細胞一好中球相互作用に及ぼす本発明の化合物の作用を示し、 ま た、 * * ：コントロールに対し、 危険率 p≤l %にて有意に抑制を示す。

発明を実施するための最良の形態

好ましい態様としては、 以下のものがあげられる。

本発明は、 前記式（I ) の化合物が下記の式 （I I ) である化合物を提供する。 式 （I I)

(式中、 n及び 1は式 （I) 化合物の記号の字義と同一である。）

本発明は、 前記式 （I) の化合物が式 （I I I) である化合物を提供する _t 式 （I I I) .

(式中 1及び nは式 （I) 化合物の記号の字義と同一である。）

本発明の式 （1)、 （I I) 及び （I I I) の化合物において、 好ましくは、 n は 1〜 10であり、 また 1は 1 15である、 さらに好ましくは、 nは 1〜8で あり、 また 1は 1〜13である。

また、 本発明は、 前記式 （I) の化合物が式 （I V) である化合物：（4E， 8 E， 2R， 3 S, 2， S) — N— 2， ーヒドロキシへキサデカノィル一 9ーメチ ルー 4， 8—ォクタデカジエンー 1， 3—ジオールを提供する。

式 （IV)

本発明は、 前記式 （I ) の化合物が式 （V) である化合物：（4 E， 2 S , 3 R, 2， R S ) 一 N— 2， ーヒドロキシへキサデカノィル— 9—メチルー 4一ォク夕 デセン— 1， 3—ジオールを提供する。

式 （V)

本発明の化合物はその薬理学的に許容される塩を形成することもでき、 その塩 としては、 特に制限されないが、 例えば、 フッ素酸塩、 塩酸塩、 臭化水素酸塩、 ヨウ化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩、 硝酸塩、 過塩素酸塩、 硫酸鉛、 リン 酸塩、 炭酸塩などの無機酸塩、 メタンスルホン酸塩、 トリフロォロメタンスルホ ン酸塩、 エタンスルホン酸塩などの低級アルキルスルホン酸塩、 ベンゼンスルホ ン酸塩、 ]?一トルエンスルホン酸塩などのァリールスルホン酸塩、 酢酸塩、 フマ ル酸塩、 コハク酸塩、 クェン酸塩、 酒石酸塩、 シユウ酸塩、 マレイン酸塩などの カルボン酸塩、 グリシン塩、 ァラニン塩、 グルタミン酸塩、 ァスパラギン酸塩な どのアミノ酸塩、 ナトリウム塩、 カリウム塩などのアルカリ金属塩などがあげら れる。

本発明化合物はいずれも内皮分化遺伝子 （E d g ) 受容体拮抗性を示し、 E d g受容体に対する AH O P、 スフィンゴシルフォスフオリルコリンなどの E d g 受容体作動物質の結合に拮抗し、 これらによる細胞内シグナル伝達系を阻止する ことができる。

従って、 本発明は、 式 （I ) 〜 （V) の化合物を有効成分として含有する、 内 皮分化遺伝子 (E d g ) 受容体に拮抗する医薬を提供する。

また、 本発明は、 炎症性細胞活性化や血管平滑筋増殖、 血行動態悪化、 さらに 血管新生によって生じる疾患、 例えば、 循環器系疾患 （例えば、 動脈硬化、 心臓 疾患 （例えば、 心筋梗塞、 不整脈)）、 リウマチ （例えば、 慢性関節リウマチ)、 が ん、 糖尿病性網膜症、 呼吸器系疾患 （例えば、 肺炎、 慢性閉塞性気道疾患、 呼吸 器系高血圧） を治療するための上記医薬を提供する。

ここで、 「治療」 とは予防も包含する。

ここで、 「循環器系疾患」 とは、 血液、 リンパなどの循環状態が障害され、 組織 や細胞に障害をおこしている疾患をいい、 例としては、動脈硬化性疾患（例えば、 ァテローム （粥状） 硬化症)、 心臓疾患 （例えば、 心筋梗塞、 不整脈） がある。 ここで、 「呼吸器系疾患」 とは、 気管、 気管支、肺などの呼吸器が障害されてい る疾患及びそれに関連した症候をいい、 例としては、 喘息 （即時型、 遅発型、 ァ レルギ一性喘息等)、 気管支喘息、 アレルギー性鼻炎、 好酸球浸潤、 気管支炎 （慢 性気管支炎等)、 気道炎症、 肺気腫、 肺炎、 慢性閉塞性肺疾患 （C O P D)、 急性 呼吸窮迫症候群、 呼吸器系高血圧、 呼吸困難、 疼痛、 咳、 痰、 嘔吐、 息切れがあ る。

本発明の化合物を医薬として用いるためには、 固体組成物、 液体組成物および その他の組成物のいずれの形態でもよく、必要に応じて最適のものが選択される。 医薬組成物は、 本発明の化合物を常用の賦形剤、 増量剤、 結合剤、 崩壊剤、 PH調 節剤、 溶解剤、 などを添加し、 常用の製剤技術によって、 錠剤、 丸剤、 カプセル 剤、 顆粒剤、 粉剤、 液剤、 乳剤、 懸濁剤、 注射剤などに調製することができる。 賦形剤、 増量剤としては、 例えば、 乳糖、 ステアリン酸マグネシウム、 デンプン、 タルク、 ゼラチン、 寒天、 ぺクチン、 アラビアゴム、 ォリーブ油、 ゴマ油、 力力 ォバター、 エチレングリコールなどやその他常用されるものをあげることができ る。

製剤の酸化を防止するためには、 酸化防止剤 （トコフエロール等） を添加した り、 シクロデキストリン等の包接剤で包接したり、 ゼラチン等の皮膜でカプセル 化することができる。

更に、 前記化合物を、 乳化剤として、 リン脂質あるいは非イオン界面活性剤を 用いて、 0/W型製剤として、 特開平 6— 298642に記載のように調製する ことができる。 乳化剤は、 単独あるいは 2種以上組み合わせて使用でき、 添加量 は、適宜でよいが、 0. 001〜10% (W/V)、好ましくは 0. 01〜5% (W /V) である。

リン脂質としては、 大豆由来リン脂質、 卵黄由来リン脂質、 リゾレシチン、 フ オスファチジルコリン (レシチン）、フォスファチジルセリンなどの単独あるいは 組み合わせが使用可能である。 非界面活性剤としては、 分子量 500〜1500 0のポリオキシエチレン一ポリオキシプロピレンブロック共重合体 （例えば、 プ ルロニック F— 68)、分子量 1000〜 10000のポリアルキレングリコ一ル、 分子量 1000〜 20000のポリオキシアルキレン共重合体、 硬化ヒマシ油ポ リオキシアルキレン誘導体、 ヒマシ油ポリオキシアルキレン誘導体、 グリセリン 脂肪酸エステル、 ポリグリセリン脂肪酸エステル、 ソルピタン脂肪酸エステル、 ポリォキシェチレンヒマシ油、 硬化ヒマシ油、 ポリオキシエチレンアルキルエー テル、 ショ糖脂肪酸エステルなどの単独あるいは組み合わせが好適に用いられる がこれに限定されない。

本発明化合物は、 約 0. 0001〜約 10 OmgZkg体重/日を 1日 1回又 は数回に分けて経口又は非経口で投与することができる。 この投与量は疾患の種 類、 患者の年齢、 体重、 症状により適宜増減することができる。

本発明の化合物は、 以下の製造法によって製造することができる。

(合成例 1 )

式 （I) の化合物の製造法について、 反応原料の調製例を含めて以下に説明す る。

(1) 反応原料の調製例

(A) ォキサゾリンアルデヒド誘導体の合成

下記式のォキサゾリンアルデヒド誘導体は従来法で合成することができる。

〔式中 R' はアルキル基またはァリール基である、 R' は好ましくはァリール基 (例えば、 フエニル基である）〕

例えば、 （L)ーセリンを出発原料にする場合には以下のように製造することが できる。

(L) —セリンをそのエステル（例えば、 Meエステル） へ変換する （Be r. D t s ch. C em. Ge s. 39， 2949 (1906))。 ここで、 セリン は、 目的化合物の第 1鎖の光学異性が、 2 R—異性体である場合には、 R—セリ ンを用い、 2 S—異性体である場合には、 S—セリンを用いる。

次に、 生じるセリンエステルをエリオット条件 （E 1 1 i o t t ' s c on d i t i on) (J. C em. S o c. 589 (1949)) 下で、 イミノエ一 テル （例えばべンズイミノエチルエーテル） を用いて反応させ、 ォキサゾリンェ ステル誘導体を得る。 ここで生成するォキサゾリンエステルは、 出発物質のセリ ンと同じ光学異性を保ち、 ラセミ化は観察されないため、 目的とする光学異性体 を得るために好都合である。

次に、 生成したォキサゾリンエステル誘導体から、 ォキサゾリンアルデヒド誘 導体を得る。

この還元反応は、 金属水素化物 （例えば、 D I BAL—H (水素化ジイソプチ ルアルミニウム）） 共存下、 不活性溶媒（例えば、 へキサン) 中で行い、 反応を停 止後、 次に溶媒抽出 （例えば、 酒石酸 NaK水溶液及び E t〇Ac) することに よって行うことができる。

生成するォキサゾリンアルデヒド誘導体は不安定であるため、 即座に次段階の 反応に処することが好ましい。

(B) (E) 体のアルケニルァランの合成 下記式のアルケニルァランは従来法で合成することができる。

H₃C— (CH₂)_n— C(CH₃)=C(H)— (CH₂)₂— CH=CH— AI(R)₂ (式中 nは式 （I) 化合物の字義と同一であり、 Rはアルキル基、 好ましくは i — Buである）

例えば、 Rが i一 Buのァルケニルァランは、 アルキンに D I BAL— Hを付 加することによって目的のアルケニルァランを得ることができる （J. Am. C hem. S o c. 95， 4098 (1973))。

この反応は、 不活性溶媒中 （例えば、 へキサン） で、 温度は、 20〜50°Cで 行うことができる。

アルケニルァランは、 不安定なので、 好ましくは得られた生成物のまま次のェ 程に用いる。 なお、 アルケニルァランは、 生成工程に用いる物質及びその後のェ 程の生成物により、 容易に確認できる。

上記アルケニルァラン合成の原料であるアルキンは、 種々な方法で合成できる が、 例えば以下の方法があげられる。

アルコール体をトシレートを経由してプロミド体に通常の方法によって変換す る。 プロミド体を二トリル体に変換し、 更に、 金属水素化物 （例えば、 D I BA L-H) 共存下で還元することによってアルデヒド体を得る。 次に、 コーリーら の方法（Te t r ahe d r on Le t t. 3769 (1972)) によって、 Ph₃Pと CB r ₄を用いて、 アルデヒドをジブ口モアルケンに変換し、 さらに、 強塩基 （例えば、 n— BuL i) 存在下でアルキンを合成する。

(2) 式 （I) の化合物の合成

式 （I) の化合物の合成スキームを以下に示す。 合成例 1

( 8位が二重結合で、 （2R,3¾2'S)光学異性の場合）

アルケニルァラン

- A1(R)₂

H₃C-(CH₂)„

l—i

ォ

第 1工程： 上記（ 1 ) (A)で得たォキサゾリンアルデヒド誘導体を、上記（ 1 ) (B) で得たアルケニルァランでアルケニル化することによって、 ジァステレオ マー混合物を得る。 ここで用いるォキサゾリンアルデヒド誘導体は、 目的化合物 の第 1鎖の 2位置と同じ光学異性を有するものを用い （目的化合物が 2 R—異性 体である場合には、 R—体を用い、 目的化合物が 2 S—異性体である場合には、 S—体を用いる）。

この反応は、 不活性溶媒中 （例えば、 エーテル） で、 温度は、 一 5〜10°Cで 行うことができる。

この反応によって生じたジァステレオマ一混合物は、 ォキサゾリンアルデヒド 誘導体とアルケニルァランとの反応によって生じた OH基の光学異性が、 Rと S の 2種の化合物を含む。 従って、 目的化合物に応じたジァステレオマ一を分離す ることが好ましい （目的化合物の第 1鎖の 3位の光学異性が 3 R—異性体である 場合には、 R—体を分離し、 目的化合物が 3 S—異性体である場合には、 S—体 を分離する）。

ここで、 ジァステレオマーの分離には、 通常のクロマトグラフィーを用いるこ とができる。

第 2工程： 上記生成物を、 ォキサゾリン環を開環して、 NH₂基及び—〇C (= 〇） R' 基を有する化合物を得る。 開環は、 酸 （例えば、 希釈 HC 1) の存在下 で行うことができる。

第 3工程： 開環後、 目的化合物の第 2鎖の 2' 位と同じ光学異性をもったァシ ル化剤によって選択的 N—ァシル化し、 次に、 _C (=〇） R' 基を脱離させる ことによって式 （I) 化合物を合成することができる。

ァシル化剤としては、 H₃C- (CH₂) ,-CH (OH) C (=0) —OH (式 中、 1は式 （I) 化合物の字義と同一である） のエステル体 （例えば、 p—二ト 口フエニルエステル体） を用いることができる。 ここで、 ァシル化剤の水酸基は、 保護 （例えば、 ァセチル （Ac) で） することが好ましい。

選択的 N—ァシル化は、 塩基性溶媒 （例えば、 ピリジン） 中で、 30〜45°C の温度で行うことができる。

— C (=〇） R' 基の脱離は、 塩基 （例えば、 NaOH) で行うことができ、 上記のように水酸基を A cで保護した場合には、 この脱離と同時に A c基も脱離 させることができる。

(合成例 2 )

式 （I I) の化合物の製造法について、 反応原料の調製例を含めて以下に説明 する。

(1) 反応原料の調製例

(A) (E) 体の HC≡C— (CH₉) -CH=C (CH。） 一 (CH,) .CH, の合成

ここでは、 n = 8の場合の （E) — 6—メチル一 5—ペン夕デセン一 1一イン を例にして説明するが、 他の n (nは、 （I I)化合物の字義と同一である） の場 合は、 2—ゥンデカノンの代わりに H₃CC (=0) (CH₂) _nCH₃を用いるこ とによって以下の反応と同様に合成することができる。

合成例 1で述べた方法を用いることもできるが、ここでは以下の方法を用いる。 2—ゥンデカノンをホーナーウィティッヒ （Ho r n e r— Wi t t i g) 反 応に処することによってメチル 3—メチル— 2—ドデセノエートの幾何異性体を 得る。

このエステルを金属水素化物 （例えば、 L i A l H₄) 下でアルコールにし、 アルコール体 (E) 一 3—メチルー 2—ドデセン— 1一オールを含む E/Z混合 物として得る。 この混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに処すること により、 （E) —異性体を分離する。

次に、 （E) —異性体の水酸基を臭素で置換することによって、 （E) — 1—ブ ロモ— 3—メチルー 2—ドデセンを得る。 この反応は、 水酸基を臭素で置換する 反応条件で行うことができる。 例えば、 臭素をホスフィン （例えば、 トリフエ二 ルホスフィン） 存在下、 不活性溶媒 （例えば、 ァセトニトリル） 中で作用させる ことによって行うことができる。

次に、 （E)— 1ーブロモー 3—メチル— 2―ドデセンをハロゲン化プロパルギ ル （例えば、 臭化プロパルギル） から調製したグリニャル試薬と反応させる事に よって （E) —6—メチル—5—ペンタデセン— 1—インを得る。 この反応は、 触媒 （例えば CuC 1) 存在下、 不活性溶媒 （例えば、 ジェチルエーテル） 中 0 〜 5 °Cの温度で行うことができる。

(B) N—保護した （R) —ホルミルォキサゾリジン誘導体の合成

下記式の N—保護した （R) —ホルミルォキサゾリジン誘導体は従来法で合成 することができ、 例えば、 （R) —セリンから森らの方法（Te t r ahe d r o n 1 985、 41、 2379— 2386) によって合成することができる。

(式中 Aは Nの保護基であり、 B及び Cはアルキル基 （例えば、 メチル基） であ る）

ここで、 Nの保護基 Aとしては、 例えば、 ベンジルォキシカルポニル （Z)、 t 一ブトキシカルポニル (Bo c)、 tーァミノォキシカルポニル (Ao c)、 イソ ポニルォキシ力ルポニル、 p—メトキシベンジルォキシカルポニル、 2—クロル 一ベンジルォキシカルポニル、 ァダマンチルォキシカルボニル、 トリフルォロア セチル、 フタロイル、 ホルミル、 o—ニトロフエニルスルフエ二ル、 ジフエ二ル ホスフイノチオイルなどの基が挙げられる。 好ましくは、 Bo cが用いられる。

(2) 式 （I I) の化合物の合成

式 （I I) の化合物の合成スキームを以下に示す。

合成例 2

,CH₃

第 1工程：上記 （1) (A) で得た （E) 体の HC≡C— (CH₂) ₂-CH=C (CH₃) 一 (CH₂) _nCH₃と、 上記 （1) (B) で得た N—保護した ） 一 ホルミルォキサゾリジン誘導体とを反応させる。

第 1工程の反応は、 塩基（例えば、 n—ブチルリチウム）下で、不活性溶媒（例 えば、 THF) 中— 10〜― 30°Cの温度で行うことができる。

第 2工程：第 1工程生成物の三重結合を （E) 型二重結合に還元し、 同時に、 ォ キサゾリジンを開環しながら脱保護して、 NH₂基及び OH基を有する化合物を 得る。

第 2工程の反応は、不活性溶媒（例えば、 THF)中アルカリ金属とァミン（例 えば、 ェチルァミン存在下リチウム） で、 一 70〜一 78 °Cの温度で行うことが できる。

第 3工程：

(1) 第 2工程生成物を水酸基の保護剤で処理する。

ここで、 水酸基の保護剤としては、 例えば、 2， 2—ジメトキシプロパンを用 いることができ、 この反応は、 酸触媒 （例えば、 ρ—トルエンスルホン酸ピリジ 二ゥム） 存在下、 不活性溶媒 （例えば、 トリクロロメタン） 中で行うことができ る。

(2) 次に、 この保護した化合物と、

下記式のカルボン酸化合物：

(式中、 R" は OHの保護基であり、 1は式 （I I) 化合物と同じ字義を表す） とを反応させる。

この反応は、 脱水縮合剤 （例えば、 ジシクロへキシルカルポジイミド及び 1一 ヒドロキシベンゾトリアゾール） 存在下、 不活性溶媒 （例えば乾燥ジクロロメタ ン） 中で行うことができる。 ここで用いたカルボン酸化合物は、 森らの方法 （L i e b i g s Ann. C hem. 1994、 41 -48) によって合成することができ、 R" は、 OH保 護基、 例えば、 t e r t一プチルジフエニルシリル （TBDPS) 基をあげるこ とができる。

第 4工程：水酸基の保護基を脱保護し、 R"基を脱離させる。

ここで、 水酸基の保護基の脱保護には、 酸触媒 （例えば、 p—トルエンスルホ ン酸ピリジニゥム） 存在下、 不活性溶媒 （例えば、 CH₂C 1₂及び Me〇H) 中 で行うことができる。 TBDPS基の脱離は、 フッ素陰イオン （例えば、 テトラ 一 n—プチルアンモニゥムフルオリド）、 不活性溶媒（例えば、 THF) 中で行う ことができる。

(合成例 3)

式 （I I I) の化合物の製造法について、 反応原料の調製例を含めて以下に説 明する。

(1) 反応原料の調製例

(A) HO-CH₉-CH=C (CH 一 (CHJ „CH₃の合成

H₃CC (=0) (CH₂) _nCH₃ (式中、 nは式 （I I I) 化合物の字義と同 一である） から合成例 2と同様に得ることができる。

(B) N—保護した （S) —ホルミルォキサゾリジン誘導体の合成

下記式の N—保護した （S) —ホルミルォキサゾリジン誘導体は従来法で合成 することができ、例えば、 （S)—セリンから合成例 2で述べたのと同様にして合 成する。

(式中 Aは Nの保護基であり、 B及び Cはアルキル基 （例えば、 メチル基） であ る）

ここで、 Nの保護基 Aとして 、 例えば、 ベンジルォキシカルポニル（Z；)、 t 一ブトキシカルボニル （Boc)、 t—アミノォキシカルポニル （Aoc；)、 イソ ポニルォキシ力ルポニル、 p—メトキシベンジルォキシカルポニル、 2—クロル 一べンジルォキシカルボニル、 ァダマンチルォキシカルポニル、 トリフルォロア セチル、 フタロイル、 ホルミル、 o—ニトロフエニルスルフエニル、 ジフエニル ホスフイノチオイルなどの基が挙げられる。 好ましくは、 Bo cが用いられる。

(2) 式 （I I I) の化合物の合成

式 （I I I) の化合物の合成スキームを以下に示す。

合成例 3

,CH₃ H₂

HO (CI „ '

HO z V \(C 。 -

z

[Ci CH₃

第 1工程：上記 （1) (A) で得た H〇— CH₂— CH=C (CH₃) ― (CH₂) _nCH₃の不飽和部分を接触還元によつて飽和する。

この反応は、 接触還元で通常用いられる種々な触媒下で行うことができる。 例 えば、 パラジウム触媒 （パラジウム一炭、 （1ー(3等） を用いることができる。 第 2工程：第 1工程生成物の水酸基を臭素で置換する。

臭素化は、 アルコールを臭素化できる方法で行うことができる。 例えば、 トシ ラートにした後、 臭素化することによって行うことができる。

この場合、 不活性溶媒 （例えば、 ピリジン） 中塩化パラトルエンスルホニルと反 応させることによってトシラートを得、 次にトシラートを不活性溶媒 （例えば、 ジメチルホルムアミド （DMF) 溶液） 中臭化物 （例えば、 臭化ナトリウム） 存 在下で反応させることができる。

第 3工程：第 2工程生成物の臭素を CH₃— C≡C一で置換する。

CH ₃— C三 C—置換に用いる反応原料は、 例えば、 CH₃— C三 C— L iを用 いることができ、 CH₃— C三 C— L iの場合は、 例えば、 以下のように第 3ェ 程の反応を行うことができる。

プロピンの不活性溶媒 （例えば、 THF溶液） に （好ましくは A r下）、 配位剤 (例えば、 テトラメチルエチレンジァミン (TMEDA)) を加える。 そこに、 ァ ルキルリチウム (例えば、 n-BuL i ) を加えて、 CH₃— C≡C_L iを得 る。 この際、 反応温度は、 — 78〜0°Cが好ましい。

次に、 ここに、 第 2工程生成物の溶液 (例えば、 へキサメチルホスホルアミド (HMPA) と THFとの混合液） を加えることによって行うことができる。 こ 際、 反応温度は、 ー78〜20°Cが好ましい。

第 4工程：第 3工程生成物の三重結合の位置を末端に移動させて、 末端三重結合 化合物を得る。

第 4工程の反応は、 例えば、 次のように行うことができる。

ァミン塩基 （例えば、 1， 3—ジァミノプロパン） に （好ましくは Ar下）、 ァ ルカリ金属 （例えばリチウム） を加える。 この反応は、 一 78〜一 70°Cで行う のが好ましい。

次に、 強塩基性アルコラート （例えば、 カリウム tーブトキシド） を加え、 こ. こに第 3工程生成物を加えることによって、 反応を行う。 この反応は、 15〜2 5 °Cで行うのが好ましい。

第 5工程：第 4工程生成物に上記 （1) (B) で得た N—保護した （S) —ホルミ ルォキサゾリジン誘導体とを反応させる。

第 5工程の反応は、塩基（例えば、 n—プチルリチウム）下で、不活性溶媒（例 えば、 THF) 中一 15〜― 28 °Cの温度で行うことができる。

以下の第 6工程以降は、 合成例 2の第 2工程以降と同様に行うことができる。 第 6工程：第 4工程生成物の三重結合を （E) 型二重結合に還元し、 同時に、 ォ キサゾリジンを開環しながら脱保護して、 NH₂基及び OH基を有する化合物を 得る。

第 7工程： この （E) 型二重結合化合物を水酸基の保護剤で処理し、 この保護し た化合物と、 下記式のカルボン酸化合物：

(式中、 R"は OHの保護基であり、 1は式 （I I I) 化合物と同じ字義を表す） とを反応させる。

ここで用いた、カルボン酸化合物は、合成例 2と同様に合成することができる。 第 8工程：水酸基の保護基を脱保護し、 R" 基を脱離させる。

実施例

以下、 実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、 これは本発明の技術範 囲を限定するものではない。

実施例 1 (4E, 8 E, 2 R, 3 S, 2， S) — N— 2， ーヒドロキシへキサデ カノィルー 9—メチルー 4， 8一才クタデカジエン— 1， 3—ジオールの合成 実施例 1の合成スキームは、 下記に示す。

-

(2) (4)

チル -2',6'-へキサ カシ'ェニル) キザ:'リン- 2-ェン

(14)

(15)

(1) 反応原料の調製

(A) アルケニルァラン （8) の合成

(E) —4ーメチルー 3—トリデセン— 1—オール（1) (33 g、 155 mm o 1) のピリジン （120ml) 攪拌冷却溶液に、 p— Ts C 1 (45 g、 23 6 mm o 1 ) を加えた。 この混合物を 8時間攪拌した。 次に、 この混合物を氷水 (500ml) に注ぎ、 エーテル （500ml) で抽出した。 このエーテル溶液 を、 2N— HC 1、飽和 N a HC0₃水溶液及び飽和食塩水で洗浄し、乾燥し （M gS〇₄)、 真空濃縮した。 残さの粗油状物 （E) —4—メチル—3—トリデセン — 1—トシレート （2) (58 g) を DMF (250ml) に溶解した。

これに、 L i B r (40 g、 46 Ommo 1 ) を加え、 この混合物を 18時間 室? で攪拌した。 次に、 これを氷水 （1 L) に注ぎ、 エーテル （300m 1 X 3) で抽出した。 このエーテル溶液を水で洗浄し、 乾燥し （MgS〇₄)、 真空濃縮し た。 残さを蒸留して、 38. 3 g (93. 4%) の （E) —1—プロモー 4ーメ チル— 3—トリデセン （3) を得た。

DMF (100ml) 及び水 (30ml) 中の （E) — 1—ブロモー 4ーメチ ル一 3—トリデセン （3) (38. 0 g、 138mmo 1 ) と KCN (11. 5 g、 176mmo 1 ) との混合物を 70 °Cにおいて 24時間攪拌した。 次に、 これを 氷水 (1 L) に注ぎ、 エーテル (500ml) で抽出した。 このエーテル溶液を、 水で洗浄し、 乾燥し （MgS〇₄)、 真空濃縮した。 残さをシリカゲルクロマトグ ラフィ一に処し、 n—へキサン—エーテル （100 : 1) で溶出して、 30. 0 g (98%) の （E) — 5—メチル—4ーテトラデセン二トリル （4) を油状物 として得た。

(E) 一 5—メチルー 4—テトラデセン二トリル（4) (30. 0 g、 136m mo 1 ) のエーテル （700ml) 中の攪拌冷却溶液に、 D I BAL— Hの n— へキサン溶液 （1. 7M, 123ml , 209mmo 1 ) をアルゴンガス下一 6 0°Cにおいて滴加した。 この混合物を、 一 60°Cにおいて 1時間、 室温において 3時間攪拌した。 過剰な試薬を HC0₂E t (5ml) の添加によってクェンチ した。 30分間攪拌後、 この混合物を飽和 NH₄C 1水溶液'（1. 5L) に注い だ。 生じた混合物を 20分間攪拌し、 20%H₂S〇₄水溶液 （1L) で酸性にし、 エーテルで抽出した。 このエーテル溶液を水で洗浄し、 乾燥し （MgS0₄)、 真 空濃縮した。 油状残さを F l o r i s i l (450 g) 上でクロマトグラフィー に処し、 n—へキサン—エーテル （50 ： 1) で溶出して、 29. 0 g (95. 4%) の （E) — 5—メチルー 4—テトラデセナール （5) を得た。

CB r₄ (85 g, 256mmo l) のジクロロメタン溶液 （100ml) を Ph₃P (138 g, 526 mm o 1 ) のジクロロメタン攪拌氷冷溶液 (300 ml) に滴加した。 ここに （E) — 5—メチル—4—テトラデセナ一ル （5) (2 9. 0 g, 129mmo 1 ) のジクロロメタン溶液 （100m 1 ) を 0°Cに冷却 し、 攪拌しながら加え、 0°Cにおいて 15分間攪拌した。 この混合物の反応を氷 冷した水 （100ml) で停止し、 20分間攪拌後に有機層を分離した。 この有 機溶液を乾燥 （硫酸マグネシウム） 後真空濃縮した。 残さをペンタン （1L) で 摩枠し、 不溶性 Ph₃P〇をろ過によって除去した。 ろ液を真空濃縮後、 油状残 さをシリカゲルカラムクロマトグラムに処し、 n—へキサンで溶出し、 38. 1 g (77. 6%) の油状 （E) — l, 1—ジブ口モー 6—メチル一1, 5—ペン タデカジエン （6) を得た。

(E) — 1， 1一ジブロモ— 6—メチル— 1， 5—ペンタデカジエン （6) (3 7. 0 g, 97. 6mmo 1 ) の THF (400m 1) の攪拌冷却溶液に n—B uL iの n—へキサン溶液 （1. 5M, 150ml, 225mmo l) を Arガ ス下ー 70。(：において滴加し、 この混合物を— 70 °Cにて 1時間、 室温にて 1 - 5時間攪拌した。 その後、 反応液を 1. 5 1の氷水に注ぎ、 n—へキサンで抽出 した。 このへキサン溶液を水で洗浄後、 硫酸ナトリウムによって乾燥し、 真空濃 縮した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラムに処し、 n—へキサンで溶出し、 (E) 一 6—メチルー 5—ペンタデセン— 1—イン（7) 18. 9 g (88. 0%) を油状物として得た。

(E) — 6—メチル— 5—ペン夕デセン一 1一イン （7) (1. 4 g, 6. 4m mo 1 ) の n—へキサン （5ml ) 攪拌溶液に、 n—へキサン中の D I BAL- H (1. 7M, 3. 8ml , 6. 4mmo 1 ) 溶液を A rガス存在下で滴加した。 この混合物を 50°Cにて 2時間攪拌し、 生成したアルケニルァラン （8) の溶液 を氷浴にて冷却した。 (B) (R) —4—ホルミル一 2—フエ二ルー 1， 3—才キサゾリン— 2—ェンの 合成

( ) —セリン（9) (25 g, 238mmo 1 ) の乾燥 Me〇H溶液に HC 1 ガスを勢いよくバブルさせ、溶液が非常に熱くなるまで行った（自発的還流)。 こ の溶液を室温において 16時間放置し、 次に Me OHを真空除去した。 残さをェ 一テル （50m,l) によって摩砕した。 （R) —セリン Meエステル （10) の 固体をろ紙上で回収し、 エーテル （50ml) で洗浄し、 真空乾燥した。 MeO H—エーテル （1 ： 3) から再結晶して、 35. 9 g (97. 0 %) の （R) — セリン Meエステル （10) を得た。

ジクロロメタン （100ml) 中 PhC (=NH) 〇E t (60 g， 0. 4m o 1 ) 溶液を （R) —セリン Meエステル HC 1 (33 g, 0. 21mo l) 水 溶液 （20m l) に加えた。 この混合物を室温にて 24時間激しく攪拌.した。 こ れをろ過し、 ろ液をジクロロメタン （100ml)、 及び水 （50ml) にて希釈 し、 有機溶液を分離し、 硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、 真空濃縮した。 残さ を蒸留して、 33. 3 gの （R) — 4—メトキシカルポニル— 2—フエ二ルー 1， 3—ォキサゾリン— 2—ェン （11)、 bpは 120〜； L 23°C/0. 09mm、 [a] _D ²¹ = - 118. 2° (c = l. 13， CHC 1₃) を得た。

n—へキサン中の D I BAL— H溶液 （1. 7M, 6. 0ml , 10. 2mm o l) を (R) —4ーメチルカルポニル— 2—フエニル— 1， 3一ォキサゾリン 一 2—ェン （11) (1. 4g, 6. 8mmo 1) のトルエン （30ml) 及び n 一へキサン （5ml) の攪拌冷却溶液に A rガス下一 70°Cにおいて滴加し、 一 70°Cにおいて 2時間攪拌した。 続いて、 MeOH (lml) を一 70 °Cにおい て滴加し、 30分間攪拌後、 E t OAc溶液 （10ml) と飽和酒石酸 N a K水 溶液 （20ml) とを加え反応を停止した。 冷浴を除くことによって温度を室温 まで昇温させた。 この混合物を E tOAc (50 OmL) と飽和酒石酸 NaK水 溶液 （1. 5L) との間で分配し、 有機溶液を硫酸マグネシウムで乾燥後、 真空 濃縮し、 1. 4g (定量的） の （R) 一 4—ホルミル一 2—フエニル— 1, 3— ォキサゾリン— 2—ェン （12) を粗黄色油として得た。

(2) 実施例 1の化合物の合成 工程 1 ： 上記（1) (A) で得たアルケニルァラン （8) の溶液に、 ェ一テル（5 m l) 中に溶解した上記 （1) (B) で得た （R) —4—ホルミルー2—フエニル 一 1， 3—ォキサゾリン一 2—ェン （12) (1. 2 g， 約 5. 8mmo 1) を加 え 0〜5°Cにて攪拌した。 温度を室温に戻し、 攪拌を 2時間継続した。 この混合 物を飽和酒石酸 NaK (400ml) 溶液に注ぎ、 E t OAc (400ml) で 抽出した。 E t OA c溶液を硫酸マグネシウムで乾燥後真空濃縮した。 残さの T LC分析 (n—へキサン：エーテル / 3 ： 7) によって、 2つの化合物の混合物 であることがわかり、 一つの R fは 0. 56、 もう一つは 0. 39だった。 これ らの 2つの化合物をシリカゲノレカラムクロマトグラフィーに処した。 n—へキサ ン：エーテル / 3 ： 1で溶出して、 最初に非極性結晶異性体、 404mg (化合 物 （7) から 21. 4%) の （1' R) 一異性体 （n—へキサンから再結晶） を 得、 同じ溶媒でさらに溶出して、 極性異性体、 294mg (化合物 （7) から 1 5. 6 %) のその （1， S) —異性体である、 （4R, 1， S) —4— (1， 一ヒ ドロキシ— 7， ーメチルー 2', 6， 一へキサデカジエニル) 一 2—フエニル一 1， 3—才キサゾリン— 2—ェン異性体 （13) を得た。 この結晶性異性体が、 エリ トロ体である事は、 後に最終生成物 （4E， 8 E) 体に変換することによって確

§忍し/

工程 2 ： (4R, 1 ' S) 一 4一 (1 ' ーヒドロキシー 7， 一メチルー 2：, 6， 一へキサデカジエニル) 一 2—フエニル— 1， 3—ォキサゾリン— 2—ェン （1 3) (16 Omg, 0. mmo 1) の THF溶液（4m l) に 2N— HC 1 (1 m l) を加えた。 この混合物を室温にて 20時間攪拌した。 これを氷水 （10m 1) で希釈し、 CHC 1₃— Me〇H (87 ： 13， 25m.1 X 3) で抽出した。 有機溶液を硫酸マグネシウムで乾燥し、 真空濃縮し、 約 20 Omg (定量的） の 化合物 （14) を得た。

工程 3 ： これをピリジン （1ml) に溶かし、 これに p—二トロフエニル （S) 一 2—ァセトキシへキサデカノエ一ト （40 Omg, 0. 92 mm o 1 ) のピリ ジン溶液 （1ml) を加え、 45°Cにて 20時間攪拌した。 溶媒を真空除去し、 残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに処した。 n—へキサン：エーテル / 2： 1で溶出し、 黄色油を得、 この少量の n—へキサン中の溶液は、 （4E， 8 E, 2R， 3 S, 2， S) — N— 2， ーァセトキシへキサデカノィル— 1一〇一 ベンゾィルー 9—メチル—4, 8—ォクタデカジエンー 1， 3—ジオールの結晶 を沈殿した。 これを n—へキサンから再結晶して、 184mgの純粋な生成物を 得た。 .

この生成物 （425mg， 0. 6mmo 1 ) を CHC 1₃ (30ml) に溶解 し、 Na〇Hの MeOH溶液. （0. 3N, 2 O.m 1 ) に加え、 混合物を室温にて 15分攪拌した。 これを氷冷した水 （100ml) に注ぎ、 CHC 1₃ (300 m 1 X 2) にて抽出した。 この CHC 1₃溶液を、 洗浄 （飽和食塩水）、 乾燥 （硫 酸マグネシウム） し、 真空濃縮してから、 残さをシリカゲルカラムクロマトダラ フィ一に処した。 CHC 1₃— E t OAc (3 : 2) で溶出して固体を得、 これ を n—へキサンから再結晶して、 248mg (73. 4%) の （4E, 8 E, 2 R, 3 S, 2， S) -N- 2 ' ーヒド口キシへキサデ力ノィルー 9ーメチルー 4， 8—ォク夕デカジエン— 1, 3—ジオール （15) を得た。

mp ： 62. 0 - 63. 0°C、 〔α〕 ²³ _D： - 7. 3 (c = 0. 61、 CHC 1₃) 実施例 2 (4E， 8 E, 2 R, 3 S， 2 ' S) — N— 2， ーヒドロキシへキサデ カノィル— 9—メチル—4， 8ーォクタデカジエンー 1， 3ージオールの合成 (1) 反応原料の調製

(A) N— Bo c保護した （R) 一ホルミルォキサゾリジン誘導体の合成

(R) ーセリンより以下のスキームによって、 N— Bo c保護した （R) -2, 2—ジメチルー 4一ホルミルォキサゾリジンを合成した。

(B) t e r t一プチルジフエニルシリル (TBDPS) 保護酸の合成

以下のスキームによって、 (2 S) - 2 - ( t e r t一プチルジフエニルシリル ォキシ） へキサデカン酸を合成した。 N- Boc保護した （R) —ホルミルォキサゾリジン誘導体の合成

—セリン

t

00

tert—ブチルジフエニルシリル （ BDPS) 保護酸の合成

^C14^H29^Br

CHsCONH^CO^t EtONa C₁₄H_{29 ∞} HCI . ^ N_HCOCH₂CI アミノアシラーゼ _NH

_一 2

CG₂Et ^C¾^C°^NH 、^∞2^Et . 。2^C で 議 H0_2CA_Cl4H29 Γ_Η H_ηQ₂C人 C_{W H}H₂9 幽 ₂ | ^H 議 OTBDPS

匪 ， ②

H₂S0₄H0₂C C₁₄H_{29 HC1}

_{EtOH H}0₂C^C₁₄H₂₉

(1

(A) 出発物質の合成

2一ゥンデカノン（メチルノニルケトン） （l，） （73. 9 g， 434mm 0 1 ) とメチル （ジェチルホスホノ） アセテート （99. 4g， 433 mm o 1 ) を乾 燥ベンゼン （300ml) 中に溶角爭した。 溶液を室温にて攪拌し、 メタノール中 の 28%ナトリウムメトキシド溶液 （83. 7 g) をゆっくり加えた。 攪拌を終 夜、 室温にて継続した。 反応混合物を氷水に注ぎ、 ジェチルェ一テルにて抽出し た。 有機層を洗浄 （水及び飽和食塩水） し、 乾燥 （硫酸ナトリウム） し、 溶媒を 真空除去し、 メチル 3—メチル— 2―ドデセノエ一ト （2 ') の幾何異性体混合 物を得た。

粗生成物、 メチル 3—メチルー 2—ドデセノエート (2，) (EZZ混合物、 98. 5 g， 0. 435 mo 1) の乾燥 THF溶液 （150ml) を、 L iA l H₄ (16. 5 g, 0. 435mo 1 ) の乾燥 THF (30 Om 1 ) 攪拌懸濁液 に室温で滴加した。反応混合物を還流しながら 2時間加熱した。室温に戻した後、 これに水と 10 %硫酸を続けてゆつくりと加え、 この混合物をジェチルエーテル にて抽出した。 有機層を水、 飽和食塩水で洗浄し、 硫酸マグネシウムで乾燥した 後真空濃縮し、 粗（E) — 3—メチルー 2—ドデセン— 1一オール （85. 5 g、 99%) を EZZ混合物として得た。 粗アルコール混合物の EZZ比は、 250 MHz iH— NMR解析によって 96 ： 4であることが解った。 この残さの一部 (50 g) をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (へキサン溶出) に処し、 純 粋な E異性体 （3') 41. 3 g (83%) を得た。

トリフエニルホスフィン （18. 6 g, 70. 9mmo 1) のァセトニトリル 溶液 （100ml) を 0°Cにて攪拌した。 この溶液に、 臭素 （1 1. 4 g, 3. 7ml , 71. 3mmo 1 ) をゆっくり混和した。 この混合物に、 （E) — 3—メ チル— 2—ドデセン— 1—オール (3，) のァセトニトリル (30ml) 溶液を滴 加し、 0°Cにて 2時間攪拌した。 溶媒を真空除去し、 残さをジクロロメタンに溶 解した。 この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム及び飽和食塩水で洗浄後、 硫酸ナト リウムで乾燥させ、 濃縮した。 ペンタンを残さに加え、 生じた固体をろ過除去し た。 ろ液を真空濃縮し、 17. 9 g (97%) の （E) — 1一プロモー 3—メチ ルー 2—ドデセン （4') を得た。 臭化プロパルギル（22. 4 g, 19 Ommo 1)のジェチルエーテル溶液（1 00m l) をマグネシウム （5. 20 g, 21 0 mm o 1 ) と HgC l ₂ (36 Omg, 1. 33 mm o 1 ) に滴加し、 臭化プロパルギルマグネシウム （グリニ ヤール試薬） を得た。 CuC l (20 Omg, 2. 02mmo 1 ) をこのグリニ ヤール試薬に加え、 この溶液を氷冷した。 （E) ― 1一プロモー 3—メチルー 2― ドデセ (4，） （1 8. 8 g， 72. Ommo 1 ) のジェチルエーテル （1 00 m l) 溶液を滴加した後、 0°Cにて 3時間攪拌した。 反応液を氷水に注ぎ、 希塩 酸で酸性にし、 ジェチルエーテルを用いて数回抽出した。 有機層を一緒にし、 水 及び飽和食塩水で洗浄した。 少量のアレン型不純物はシリカゲルカラムクロマト グラフィー （へキサンで溶出） によって除去し、 純粋な （E) —6—メチルー 5 —ペン夕デセン一 1一^ fン （5') (1 . 7 g、 80%) を得た。

(B) 実施例 2の化合物の合成 - 工程 1 ： n—プチルリチウムの n—へキサン溶液 （1. 68M, 1 0ml , 1 6. 8mmo 1) を、 上記 （1) (B) で合成した （E) — 6—メチルー 5—ペン タデセン一 1一イン （5，） （4. 0 g, 1 8. 2mmo 1) の乾燥 THF (50 ml) 溶液に— 23 °Cにて加え、 その後同温度にて 1時間アルゴンガス下で攪拌 した。 上記 （1) (A) で合成した N— Bo c保護した （R) -2, 2—ジメチル —4一ホルミルォキサゾリジン（3. 7 g, 16. lmmo 1)の乾燥 THF (3 Om l ) 溶液を、 この攪拌混合物に— 23 にて混和し、 その後、 同温度にて 3 時間攪拌した。 引き続き水水に注ぎ、 数回ジェチルェ一テルで抽出した。 一緒に した有機抽出物を洗浄 （水及び飽和食塩水） し、 乾燥 （硫酸マグネシウム） し、 これを真空濃縮して、 得られる淡黄色油状物をシリカゲル力ラムクロマトグラフ ィ一 （へキサン： AcOE t = 20： 1で溶出） によって精製し、 5. 17 g (1 1. 5mmo 1、 7 1%) の t e r t—ブチル （4R， 1 ' S) —4— (1 ' ーヒドロキシ— 7， —メチルー 6， —へキサデセン— 2， ーィニル） 一 2, 2 - ジメチルー 3—ォキサゾリジンカルポキシレ一ト (6') を精製した。

工程 2 ： t e r t—ブチル （4R， 1 ' S) — 4一 （ 1， —ヒドロキシ— 7， —メチルー 6， 一へキサデセン— 2 ' ーィニル） —2， 2—ジメチルー 3—ォキ サゾリジンカルポキシレート （6') (8. 4 g, 18. 7 mm o 1 ) の乾燥 TH F (100m l)溶液を、 リチウム（2 g、 288mmo 1) のェチルァミン （5 0 g) 青色溶液に 1時間かけて、 — 70 にて攪拌しながら滴加した。 4時間、 — 70°Cにて攪拌し、 この混合物を徐々に周囲温度に戻し、 飽和塩化アンモニゥ ム溶液で処理した。 ェチルァミンと溶媒を真空除去し、 残さに水を加えた。 この 混合物をジェチルエーテルにて数回抽出した。 一緒にした有機抽出物を飽和食塩 水で洗浄し、 硫酸ナトリウムにて乾燥させ、 真空濃縮して、 粗 （4E， 8E, 2 R, 3 S) — 9一メチル— 2—ァミノ— 4, 8—ォクタデカジエン— 1， 3—ジ オール （7') を 4. 5 g (14. 4mmo l， 77 %) の褐色油として得た。 工程 3 ： 粗 （4E， 8 E， 2 R, 3 S) — 9—メチル— 2—ァミノ— 4， 8—ォ クタデカジエンー 1， 3—ジオール （7，） (4. 3 g, 1 3. 8 mm o 1 ) と、 p—トルエンスルホン酸ピリジニゥム （PPTS) (3. 47 g, 13. 8mmo 1) と 2, 2—ジメトキシプロパン （20m l) とのトリクロロメタン （120 ml) 中混合物を 4時間還流しながら加熱した。 この混合物を室温に冷却し、 ト リクロロメタンで希釈した。 これを洗浄 （飽和炭酸水素ナトリウム溶液、 水、 及 び飽和食塩水） 後、 乾燥 （硫酸ナトリウム） し、 真空濃縮した。 残さをシリカゲ ルクロマトグラフィー （CH₂C 1₂： Me OH= 50 ： 1で溶出） によって精製 し、 4. 10 gの （4E， 8 E， 2R， 3 S) — 2—ァミノ一 1， 3— O—イソ プロピリデン— 9—メチルー 4， 8—才クタデカジエン （8') の淡褐色油 （6， 化合物に基づいて収率 88%) を得た。 n_D ²² : 1. 4751、 [ ] ²⁴ _D = - 8. 78 (c = 1. 85, CHC 1₃)

上記 （1) (B) で合成した (2 S) 一 2— (t e r t—プチルジフエ二ルシリ ルォキシ） へキサデカン酸 （2. 20 g, 4. 10 mm o 1 ) と、 ジシクロへキ シルカルポジイミド （DCC, 85 Omg, 4. 1 mm o 1 ) と、 1—ヒドロキ シベンゾトリアゾ一ル（H〇B t) (555mg, 4. l Ommo l) とを乾燥ジ クロロメタン （40ml) 中に溶解した。 この溶液を室温にて攪拌しながら、 （4 E, 8 E, 2 R, 3 S) — 2—アミノー 1， 3—〇一イソプロピリデンー 9ーメ チルー 4， 8—ォク夕デカジエン （8') (1. 4g， 4. lmmo l) の乾燥ジ クロロメタン溶液（20ml) を滴加した。反応混合物を室温にて 2時間攪拌後、 量が半分となるまで真空濃縮し、生成した尿素をセライトろ過によって除去した。 ろ液を洗浄 （飽和炭酸水素ナトリウム溶液、 水及び飽和食塩水） し、 乾燥 （硫酸 マグネシウム） し、 真空濃縮し、 残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに よって （へキサン： AcOE t/50 ： 1で溶出） 精製し、 1. 82 g (51 %) の （4E， 8 E, 2 , 3 S， 2， S) 一 2— 〔2， 一 （OTBDPS) へキサ デカノィルァミノ〕 ー1， 3—〇一 （イソプロピリデンジォキシ） —9—メチル 一 4, 8—才クタデカジエン （9') を得た。

工程 4 ： (4E, 8 E, 2R, 3 S, 2 ' S) —2— 〔2， 一 (OTBDPS) へキサデカノィルァミノ〕 — 1， 3— O— （イソプロピリデンジォキシ） 一 9一 メチル—4, 8—ォク夕デカジエン （9') (1. 1 g， 1. 26 mm o 1 ) を C H₂C l ₂ZMeOH (1 : 1， 20ml) に溶解した。 p—トルエンスルホン酸 ピリジニゥム （PPTS, 32 Omg) をこの溶液に加え、 室温にて 1時間攪拌 し、 溶媒を真空除去した。 残さを AcOE tに溶解の後、 この溶液を洗浄 （飽和 炭酸水素ナトリウム、 水及び飽和食塩水） し、 乾燥 （硫酸マグネシウム） し、 真 空濃縮した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、 （4E， 8 E, 2R, 3 S, 2 ' S) —2— [2 ' 一 (OTBDP S) へキサデカノィル ァミノ] 一 9ーメチルー 4， 8—ォクタデカジエン— 1, 3—ジオール （10，） (68 Omg, 65%) を得た。

TBDP Sエーテル、 (4E, 8 E, 2 R, 3 S, 2 ' S) —2— [2 ' 一 (O TBDPS) へキサデカノィルァミノ] 一 9ーメチルー 4， 8—才クタデカジエ ン一 1， 3—ジオール (10，） (64 Omg, 0. 7 lmmo 1 ) を THF (5 0ml ) に溶解し、 テトラ— n—プチルアンモニゥムフルオリド （1M THF 溶液、 1. 2m 1、 1. 2mmo 1 ) をこの溶液に加え、 1時間室温にて攪拌し た。 これを水に注ぎ、 ジクロロメタンにて抽出した。 有機層を水及び飽和食塩水 にて洗浄後、 硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、 真空濃縮した。 残さをシリカゲ ルカラムクロマトグラフィー (へキサン ZAcOE t, 1 ： 1で溶出) で精製し、 アセトンから再結晶して、 （4E， 8E, 2R, 3 S, 2， S) -N- 2 ' ーヒド 口キシへキサデカノィル— 9ーメチルー 4, 8—才ク夕デカジエン— 1, 3—ジ オール （11，） （424mg, 93%) を得た。

mp ： 82. 0°C、 〔α〕 ²⁴ _D： +8. 2 (c = 1. 0、 CHC 1₃) 実施例 3 (4 E, 2 S, 3 R, 2， RS) — N— 2， —ヒドロキシへキサデカノ ィル— 9—メチルー 4—ォクタデセン— 1， 3—ジオールの合成

(1) 反応原料の調製

(A) N— Boc保護した （S) —ホルミルォキサゾリジン誘導体の合成

(S) ーセリンより以下のスキームのように、 N— Bo c保護した （S) -2, 2—ジメチルー 4一ホルミルォキサゾリジンを合成した。

(B) t e r t—プチルジフエニルシリル （TBDPS) 保護酸の合成

以下のスキームのように、 (2RS) -2- (t e r t一プチルジフエ二ルシリ ルオギシ） へキサデカン酸を合成した。

N-Boc保護した （S) —ホルミルォキサゾリジン誘導体の合成

HO' γ DIBAL-H

_NH_

(S)-セリン

tert プチルジフエニルシリル （TBDPS) 保護酸の合成

OTBDPS ？ TBDPS ② 久

Me0₂C C_l4H,_{g E(0H} H<¾C C„H₂₉

カルポキシレート

(13")

工程 1 ： 2—ゥンデカノン（1")から実施例 2と同様にして得た、 3—メチル — 2—ドデセン一 1一オール （3") (30 g, 0. 15mo 1 ) の酢酸ェチル溶 液 （300ml) に Pd— C (1. 0 g) を加え、 水素雰囲気下 3日間攪拌した。 反応液をセライトろ過し、 得られたろ液を濃縮後、 減圧蒸留することによって 3 ーメチルドデカン一 1一オール （4") (20 g、 67%) を得た。 b. p.

122〜123°C/4トール。 ^XH-NMR (90MHz, CDC 1₃) 0. .8— 1. 0 (6H， m， Me), 1. 0— 1. 7 (2 OH, m， 2〜11一 H及び〇 H)、 3. 66 (2H, q, J = 7, 1— H)₀

工程 2 ： 3—メチルドデカン一 1—オール（4'') (12. 8 s, 63. 9mo 1) の塩化メチレン （50ml) 溶液にピリジン （20ml) を加え、 さらに塩 化パラトルエンスルホニル （12. 8 g， 67. 1 mm 01 ) を氷冷下加えた。 反応液を 4 °Cにて終夜攪拌した後、 希塩酸に注ぎ、 へキサン抽出した。 有機層を 洗浄 （水、 飽和重曹水、 飽和食塩水） し、 乾燥 （硫酸マグネシウム） した。 これ を減圧濃縮し、 21. 7 gのトシラートを得た。 得られたトシラートの DMF溶 液 （100ml) に、 臭化ナトリウム （9. 9 g, 96mo 1 ) を加え、 室温に て終夜攪拌した。 反応液を水に注ぎ、 へキサン抽出した。 有機層を洗浄 （水及び 飽和食塩水） し、 乾燥 （硫酸マグネシウム） し、 減圧濃縮し、 1一プロモー 3— メチルドデカン （5") (15. 1 g, 90%) を得た。 iH— NMR (90MH z， CDC 1₃) 0. 8-1. 0 (6H， m， Me), 1. 0— 2. 0 ( 19 H， m, 2〜； L 1 _H)、 3. 43 (2H, b r t、 J = 7, 1— H)。

工程 3 ： プロピン （約 4g， 0. lmo 1) の THF (80ml) 溶液にアル ゴン下、 テトラメチルェチレンジァミン (TMEDA) (15ml) を加えた。そ こに、 n— BuL i (1. 55M, 64. 5ml , 100 mm ο 1 ) を一 78。C にて滴加した。 徐々に Otまで昇温しながら 1. 5時間攪拌した後、 一 78°Cま で再び冷却した。 そこへ 1—プロモー 3—メチルドデカン (5") (13. 2 g, 5 Ommo 1 ) の HMPA— THF (2 Om 1 +2 Om 1 ) 溶液を滴加し、 徐々 に室温まで昇温しながら終夜攪拌を続けた。 反応液を飽和塩化アンモニゥム水溶 液に注ぎへキサン抽出し、得られた有機層を洗浄（水、 飽和重曹水、 飽和食塩水） し、 乾燥 （硫酸マグネシウム） し、 これを減圧濃縮して得られる残さをシリカゲ ルカラムクロマトグラフィーによって精製し、 6—メチルー 2—ペンタデシン (6 ") (1 2.. 1 g, 97 ) を得た。 ¹H— NMR (90MHz, CDC 1₃) 0. 84 (3H, d, 1 = 7, 6 -Me), 0. 88 (3H， t, J = 7, 1 5 - H), 1. 0— 1. 6 (19H, m, 5〜14— H)、 1. 77 (3H, t， J = 2. 5, 1— H), 2. 12 (2H, m， 4— H)。

工程 4 ： 蒸留した無水 1， 3—ジァミノプロパン （180ml) にアルゴン気 流下金属リチウム （2. 8 g， 0. 4mo 1) を加え、 70 にて 2時間攪拌し た。 放冷後、 カリウム t—ブトキシド （27 g, 0. 24mo 1 ) を加え、 さら に 15分間攪拌した。そこに 6—メチル—2—ペン夕デシン（6") (12. l g、 54. 5 mm o 1 ) を滴加し、 室温にて終夜攪拌した。 この反応を飽和塩化アン モニゥム水溶液にて注意深くクェンチした後、 混合物をエーテル抽出した。 得ら れた有機層を洗浄 （希塩酸、 飽和重曹水及び飽和食塩水） し、 乾燥 （硫酸マグネ シゥム） した。 これを減圧濃縮して得られる残さをシリカゲルカラムクロマトグ ラフィ一によって精製し、 6—メチル— 1—ペン夕デシン （7") (9. 90 g, 82%) を得た。 これは、 I R或いは¹ H— NMRによって分析した結果、 I R (f i lm) 3300 (m， C≡CH), 2130 cm—¹ (w, C≡C)₀ ^XH- NMR (90MHz, CDC ") 0. 84 (3H, d, J = 7, 6— Me), 0. 88 (3H, t , J = 7, 1 5— H)， 1. 0— 1. 6 (21 H, m, 4〜14— H)、 1. 93 (1 H, t, J = 2. 5, 1— H)， 2. 0-2. 3 (2H, m, 3— H) となった。

工程 5 : n—プチルリチウムの n—へキサン溶液 （1. 68M， 1 0m l , 1 6. 8mmo 1 ) を 6—メチルー 1一ペン夕デシン （7") (4. 0 g， 18. 2 mmo 1 ) の乾燥 THF溶液に一 23°Cにて加え、 その後同温度にて 1時間アル ゴンガス下で攪拌した。 上記 （1) (A) で得た N— Bo c保護した （S) —2， 2—ジメチルー 4一ホルミルォキサゾリジン （3. 7 g, 16. lmmo l) の 乾燥 THF (30ml)溶液を、 この攪拌混合物に— 23°Cにて混和し、 その後、 同温度にて 3時間攪拌した。 引き続き氷水に注ぎ、 数回ジェチルェ一テルで抽出 した。 得られた有機抽出物を洗浄 （水及び飽和食塩水） し、 乾燥 （硫酸マグネシ ゥム） した。 これを真空濃縮して得られる淡黄色油状物をシリカゲルカラムクロ マトグラフィー （へキサン： AcOE t = 20 ： 1で溶出） によって精製して、 5. 17 g (11. 5mmo 1、 71 %) の t e r t—ブチル （4S， 1 ' R) —4一 （1， ーヒドロキシ— 7， —メチルへキサデカン— 2 ' —ィニル） —2, 2—ジメチル— 3—ォキサゾリジンカルポキシレート （8") を精製した。

工程 6 ： t e r t—ブチル （4 S， 1 ' R) — 4— ( 1， ーヒドロキシ一 7， 一メチルへキサデカン一 2 ' —ィニル） 一 2， 2—ジメチル— 3—ォキサゾリジ ンカルポキシレート （8") (8. 4 g, 18. 7mmo 1 ) の乾燥 THF (10 0ml) 溶液を、 リチウム （2 g、 288mmo 1) のェチルァミン （50 g) 青色溶液に 1時間かけて、 -70°Cにて攪拌しながら滴加した。 4時間、 -70°C にて攪拌し、 この混合物を徐々に周囲温度に戻し、 飽和塩化アンモニゥム溶液で 処理した。 ェチルァミンと溶媒を真空除去し、 残さに水を加えた。 この混合物を ジェチルエーテルにて数回抽出した。 一緒にした有機抽出物を飽和食塩水で洗浄 し、 硫酸ナトリウムにて乾燥させ、 真空濃縮して、 粗 （4E, 2 S, 3R) 一 9 一メチル一 2—アミノー 4ーォクタデセン一 1, 3—ジオール （9'') を 4. 5 g (14. 4mmo 1 , 77%) の褐色油として得た。

工程 7 ： 粗 （4Ε， 2 S, 3R) —9—メチル—2—ァミノ— 4—ォクタデセ ンー 1， 3—ジオール （9") (4. 3 g, 13. 8 mm o 1 ) と、 p—トルエン スルホン酸ピリジニゥム （PPTS) (3. 47 g, 13. 8mmo l) と、 2, 2—ジメトキシプロパン （20ml) とのトリクロロメタン （120ml) 中混 合物を 4時間還流しながら加熱した。 この混合物を室温に冷却し、 トリクロロメ タンで希釈した。 これを洗浄 （飽和炭酸水素ナトリウム溶液、 水、 及び飽和食塩 水） 後、 乾燥 （硫酸ナトリウム） し、 真空濃縮した。 残さをシリカゲルクロマト グラフィ一 （CH₂C 1₂： Me〇H=50 : 1) によって精製し、 4. 10 gの (4E, 2 S, 3 R) 一 2—ァミノ一 1, 3—〇一イソプロピリデン一 9ーメチ ルー 4—ォクタデセン （10") の淡褐色油 （8"化合物に基づいて収率 88 %) を得た。

上記 （1) (B) で得た （2RS) — 2— ( t e r t一プチルジフエニルシリル ォキシ） へキサデカン酸 （2. 20 g, 4. 1 Ommo 1 ) と、 ジシクロへキシ ルカルポジイミド （DCC， 85 Omg, 4. lmmo l) と、 1ーヒドロキシ ベンゾトリアゾ一ル（HOB t) (555mg， 4. l Ommo l) とを乾燥ジク —ロロメタン（40ml) 中に溶解した。 この溶液を室温にて攪拌しながら、 （4E, 2 S, 3R) — 2—ァミノ一 1， 3—〇一イソプロピリデンー 9—メチル一4— ォクタデセン （10") (1. 4 g, 4. 1 mm 01 ) の乾燥ジクロロメタン溶液 (20ml) を滴加した。 反応混合物を室温にて 2時間攪拌後、 量が半分となる まで真空濃縮し、生成した尿素をセライトろ過によって除去した。ろ液を洗浄（飽 和炭酸水素ナトリウム溶液、 水、 及び飽和食塩水)、 乾燥（硫酸マグネシウム） し、 真空濃縮し、 残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって （へキサン： Ac OE t/50 ： 1で溶出） 精製し、 1. 82g (51%) の （4E， 2S， 3 R, 2 ' RS) 一 2— 〔2， 一 (OTBDP S) へキサデカノィルァミノ] 一 1, 3一 O—（イソプロピリデンジォキシ）一 9ーメチルー 4ーォクタデセン (1 1") を得た。

工程 8 ： (4E, 2 S, 3 R, 2 ' RS) —2— 〔2， - (OTBDP S) へ キサデカノィルァミノ] 一 1, 3—〇— (イソプロピリデンジォキシ) 一 9ーメ チル一 4一才クタデセン （1 1") (1. 1 g, 1. 26mmo 1 ) を CH₂C 1₂ /Me OH (1 ： 1, 20ml) に溶解した。 p—トルエンスルホン酸ピリジニ ゥム （PPTS, 32 Omg) をこの溶液に加え、 室温にて 1時間攪拌し、 溶媒 を真空除去した。 残さを Ac〇E tに溶解の後、 溶液を洗浄 （飽和炭酸水素ナト リウム、 水及び飽和食塩水） し、 乾燥 （硫酸マグネシウム） し、 真空濃縮した。 残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、 （4E， 2 S, 3R, 2, RS) —2— [2 ' - (OTBDP S) へキサデカノィルァミノ] —9ーメ チル一 4一才ク夕デセン一 1， 3ージオール （12") (68 Omg, 65 %) を 得た。

TBDPSエーテル、 （4E, 2 S, 3 R， 2， RS) ー2— [2 ' - (OTB DPS) へキサデカノィルァミノ] —9—メチルー 4一才ク夕デセン一 1, 3— ジオール （640mg， 0. 7 lmmo 1 ) を THF (50m 1 ) に溶解し、 テ トラー n—プチルアンモニゥムフルオリド （1M THF溶液、 1. 2ml、 1. 2mmo 1 ) をこの溶液に加え、 1時間室温にて攪拌した。 これを氷に注ぎ、 ジ クロロメタンにて抽出した。 有機層を洗浄 （水及び飽和食塩水） 後、 乾燥 （硫酸 マグネシウム） し、 真空濃縮した。 残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー

(へキサン ZAcOE t, 1 ： 1) で精製し、 アセトンから再結晶して、 （4E， 2 S， 3 R, 2 ' RS) — N— 2， —ヒドロキシへキサデカノィルー 9—メチル 一 4ーォクタデセン一 1, 3—ジオール（1 3") (400mg、 89%) を得た。 mp ： 52— 57°C、 [ ²⁰ _D： + 3. 7 (c = 0. 06， CHC 1₃) 実施例 4 Edg受容体応答性試験

HL 60細胞を細胞銀行より入手し、 BBRC' 98, 263, p. 253記 載の方法に従って、 10%ゥシ胎児血清を含有した RPMI— 1640培地 （G i b c o) を用いて半年間 50継代前後培養し、 Edg受容体を細胞表面に発現 している前骨髄芽腫細胞株 HL 60を調製した。 この E d g受容体を細胞表面に 発現している前骨髄芽腫細胞株 HL 60を用いて、 被験物質の細胞応答性を検討 した。 細胞応答の指標として、 細胞内 C a ²⁺濃度の上昇を測定した。 なお、 HL 60細胞表面上の Edg受容体は、 AHOPと結合すると、 Gタンパク質をリン 酸化し、 I P ₃キナーゼを活性化した後に細胞内 C a ²⁺濃度が上昇することが報 告されている （FEBS Le t t e r ' 96， 379, p. 260, BBRC' 98， 253, p. 253) ので、 細胞内 C a ²⁺濃度が E d g受容体応答性の指 標となる。

C a²⁺キレート試薬 Fu r a— 2AMを HL 60細胞に取り込ませた。

石英製セル内に細胞懸濁液 1. 2mlを充填し蛍光光度計 LS 5 OB (P e r k i n E 1 me r、 細胞測定用） に装着し、 0. 5秒毎に励起波長を 340 n m (C a ^{2 +}をキレートした F u r a— 2を励起） と 380 nm (未反応 F u r a ― 2を励起） に交互に切り替え 510 nmの蛍光光度を測定した。

被験物質をそれぞれ 30 M終濃度で、 マイクロシリンジを用いて加えた後蛍 光光度を追跡して C a ²⁺が増加するかどうか検討した。 また、 被験物質添加後に AHOP (1 M) を追加した際、 C a²⁺が増加するかどうか確認し、 各物質の AHOP拮抗性について検討した。

実施例 2の化合物、 或いは実施例 3の化合物を添加した後、 AHOP追加によ る細胞内 C a ²⁺濃度増加が阻止された事より、 これら二物質が E d g拮抗性であ る可能性が示唆された。 次に、 拮抗の可能性が示唆された二物質、 すなわち実施例 2の化合物及び実施 例 3の化合物による細胞内 C a ²⁺増加阻止作用の用量依存性を検討した。比較と して、 既に、 拮抗作用が確認されているスラミンを用いた。 実験手法は、 各濃度 の被験物質添加後 AHOP (1 M) を添加した以外は上記と同様に行った。 ま た、 Ca²⁺濃度増加は、 陰性対照群 （薬剤無添加） での C a ²⁺増加濃度に対する 相対値として、 C a²⁺増加濃度％で評価した。

その結果、 実施例 3の化合物が、 0. 3〜3 M濃度において、 実施例 2の化 合物が 0. 03〜0. 3 tM濃度において、 用量依存的に AHOPによる C a^{2 +} 濃度増加を抑制した。 その結果を図 1に示す。

また、 細胞内 C a ²⁺濃度増加の 50%阻止濃度 （ED_5Q) は、 実施例 3の化合 物で、 1. 2±0. 1 M、 実施例 2の化合物で、 0. 041±0. 1 Mであ. つた。 既に Ed g拮抗性が報告されているスラミンの ED₅₀値が 1. 8±0. 1 Μであるのと比較すると実施例 2の化合物の作用強度はおよそ 40倍強いこと になる。 これらの ED₅₀値を表 1に示す。'

1+

表 1 .. · o

Ca²+増加の 50%阻止点

物質 ED₅₀ .

陽性対照 スラミン 1.8 土 0.1

被験物質 実施例 2 0.041±0.1

実施例 3 実施例 5 ³H— AHOPを用いた競合実験

実施例 4と同じ E d g受容体を細胞表面に発現している前骨髄芽腫細胞株 H L 60を用いた。 細胞を遠心分離によって回収後 F— 12培地 （4°C保存、 10m 1 ) に懸濁し、 R I実験室に搬入した。 細胞懸濁液 200 1 (1 10⁶細胞 Zml F— 12) に、 終濃度 1 nMの³ H— AHOP ( 15 ^ C i / 1 nM) と 終濃度 10 nM, 30 n M又は 100 n Mの非標識化合物 （実施例 2または実施 例 3の化合物） を加え、 4°Cにて 30分間 （時々攪拌して） 結合試験を行った。 7分間 12， 000 r pm'にて遠心分離後、 上澄を素早く （細胞ペレットを傷付 けない様に） マイクロ.ピぺッターで捨て去り、 細胞ペレットをレディソルブ （ベ ックマン） 1. 5mlで懸濁後バイアルに移し液体シンチレーンヨンカウンタ一 L2100 (ベックマン） で放射活性を測定した。

その結果、 AHOPと同様、 実施例 2及び実施例 3の化合物が、 ³H— AHO Pに競合した事より、 .これら二物質が E d gと特異的に結合していると考えられ た。

なお、 実施例 2の化合物、 及び実施例 3の化合物の添加を 1 nM、 3nM、 及 び 1 OnMで行う以外は上記と同様な競合実験に供したところ、 用量依存的な³ H— AHOPの （HL60細胞への） 結合阻止を観察した。 その結果を図 2に示 す。

実施例 6 血管平滑筋に及ぼす作用

被験物質について血管平滑筋増殖への作用を検討した。 '

動脈硬化症の進行に伴って血管平滑筋細胞が収縮型から合成型に形質転換し、 炎症性サイトカインを分泌しながら血管平滑筋細胞が増殖し動脈硬化巣が進展す ると考えられている（ロスの仮説）。血管平滑筋細胞の表面には E d g受容体が発 現している事が報告されており （Th e Ame r i c an S o c i e t y f o r Ph a rma c o l ogy and Exp e r imen t a l T h e r apeu t i c s ' 00, Vo l. 58， 449頁、 AHOPと同様、 E d g受容体に作動するスフィンゴシルフォスフオリルコリンに応答して血管平滑 筋細胞が増殖する事が報じられている （The Ame r i c an Phy s i o 1 o g i c 1 S o c i e t y' 98， C1255頁））。

従って、 実施例 2及び実施例 3の化合物による血管平滑筋増殖への作用を以下 のように測定した。 陽性対照として、 Edg受容体拮抗性が確認されているスラ ミンを用いた。

ラット頸動脈内膜をパルーニングによって擦過し、 2週間後にェクスプラント 法（e xp l an t c u 1 t u r e)によって調製した血管平滑筋細胞を 10% ゥシ胎児血清を含んだ DMEM培地 （G i bc o) にて培養し、 数回継代し安定 させた後、 5X 10³細胞 Zcm²の細胞密度に蒔種し実験に用いた。 増殖因子スフインゴシルフォスフオリルコリン（1 O M) と併せて実施例 2、 実施例 3の化合物或いはスラミンを上記細胞に添加し、 24時間後、 B r dUァ ッセィ （S c i e nc e' 82, 218, p. 474, Cy t ome t r y' 8 5, 6， p. 584) によって細胞密度を測定した。

その結果、 実施例 2及び実施例 3の化合物はそれぞれ 0. 3〜3 M濃度及び 1〜10 M濃度において、用量依存的に血管平滑筋細胞増殖を抑制した。なお、 陽性対照として用いたスラミンについては 30、 100 zM濃度において血管平 滑筋細胞増殖を抑制した。 その結果を図 3に示す。

実施例 7 疑似血管モデルを用いた抗炎症試験

体内の損傷部位で、 露出を受けたコラーゲン （細胞外マトリックス） が損傷シ グナルとして標的になり、 血小板が凝集してくるが、 凝集して活性化した血小板 から放出される PDGFなどの炎症性サイトカインは、炎症を進行させ、また重度の 炎症は循環器の恒常性を破綻させ、 動脈硬化を進行させると考えられている。 AH0Pも、 PDGFと同様の作用を有すると考えられている。

そこで、 AH0Pを炎症惹起剤として用いて、 疑似血管 in vitroモデルを確立し て、 そのモデルを用いて、 本発明化合物が抗炎症作用を示し、 それによつて、 循 環器の恒常性を維持し、 病態を改善する方向に作用する可能性があるか否かを検 討した。

(1) 疑似血管モデルを用いた AH0Pの炎症惹起作用

多孔膜により上室と下室とに区切られたトランスゥエルを用い、 トランスゥェ ル上室底面の孔膜上に一層のゥシ内皮細胞を培養し、 トランスゥエル上室に蛍光 標識した好中球浮遊液を加え、 下室に AH0Pを終濃度 0.1〜10 microMとなるよう に懸濁した。 即ち、 トランスゥエルの上室と下室は内皮層を隔てて隔離され、 上 室が血管内部、下室が血管外の炎症部に対応する疑似血管 in vitro炎症モデルと なっている。 上室から内皮層を潜り抜けて下室へ透過した好中球数、 及び、 内皮 層に粘着した好中球数を測定したところ、 AH0P 10 microMにて、 有意に好中球の 内皮層透過、 及び、 粘着が促進を受けた。 つまり、 AH0Pが炎症惹起物質として作 用していると考えられた。

(2) 炎症細胞一血管内皮細胞相互作用に及ぼす本発明化合物 （Edg拮抗物質） の作用

AHOPを炎症惹起物質として用い、 Edg拮抗性を示す実施例 2、 3の化合物が疑 似血管 in vi t ro炎症モデルに及ぼす影響を検討した。

即ち、 卜ランスゥエル上室或いは下室に実施例 2または 3の化合物を 0. 01〜1 microMで添加し、 AH0P 10 microMを下室に入れて炎症を惹起した。 コントロール は、 薬剤無添加で上記と同様に炎症を惹起したものを用いた。

上室から内皮層を抜け下室へ透過した好中球数及び内皮層に粘着した好中球数 を測定し、 相対的好中球数％を以下の式により算出した。

相対的好中球数％ = [実験群での好中球（透過及び粘着）数] Z [コントロールでの 好中球 （透過及び粘着） 数] X 1 0 0

その結果を図 4に示す。 図に示されるように、 実施例 2及び 3の化合物の 0. 1、 1 microMにて、 好中球透過及び粘着が抑制を受けた。

従って、 疑似血管 in vi troモデルにおいて、 AH0Pを炎症惹起剤として用いた 場合、 実施例 2、 3の化合物は抗炎症的に作用する事より、 循環器の恒常性を維 持し、 病態を改善する方向に作用する可能性が考えられる。

実施例 8 結紮による心筋梗塞モデル

実施例 2の化合物を被験物質とし、 ゥサギ冠動脈結紮再灌流による心筋梗塞に 及ぼす影響を検討した。

ゥサギは、 N Z W系雄性 （体重 2 . 8 3 - 3 . 2 0 k g ) を北山ラベス社より 購入し、 室温 2 0 _ 2 6 °C、 湿度 4 0— 7 0 %、 照明時間 1 2時間/日 （7— 1 9時） の条件下で飼育し、 飼料及び水を自由に摂取させ、 2週間以上の検疫およ び馴化飼育した後、 健康状態の良好なものを用いた。

上記ゥサギを麻酔下、 実施例 2の化合物 10 mg/kg量を頸部静脈内投与し、 その 後実施例 2の化合物 6. 9 micro g/kg/分量を持続投与した。 コントロールとして 生理食塩水 （以下、 生食と略する） を実験群と同様に投与した。 次に、 冠動脈を 3 0分間結紮した後糸を解いて再灌流し、 頸動脈内血圧、 脈拍及び不整脈数を測 定した。 頸動脈内血圧及び脈拍は、 投与前、 持続静注中、 結紮期間 （1 5分後及 び 3 0分後)、或いは再灌流中に各々測定した。類動脈内血圧は、平均血圧として 算出した。 不整脈数は、 結紮期間 （3 0分間） 或いは再灌流の期間に出現した期 外収縮数を測定した。 それらの結果を下記の表 2及び 3に示す。

再灌流 3時間後に心臓を摘出し、 6切片に薄切し、 2, 3, 5-トリフエニルテトラ ゾリゥム塩酸塩 (2, 3, 5-triphenyl tetrazol ium hydrochloride (TTC)) で生きて いる組織を染色し、 結紮による梗塞領域の面積を測定し、 左心室の面積当たりの 梗塞領域率を算出した。 その結果を下記の表 4に示す。 表 2 血圧、 及び脈泊に及ぼす実施例 2の化合物の影響

表 3

不整脈数に及ぼす実施例 2の化合物の影響

動物数 結 紮 再 灌 流

生 食 4 22±1 0 1 9±1 2

実施例 2 4 1 2土 5 , 1 7士 6 表 4

梗塞領域率に及ぼす実施例 2の化合物の影響

薬 剤 動物数 梗塞領域/左心室（％) 生 食 4 1 7.9士 2,4

実施例 2 4 1 4.0±2.1

その結果、 実施例 2の化合物はゥサギ急性心筋梗塞モデルにおいて、 結紮によ る脈拍低下を抑え、 不整脈数を減少させる傾向を示した.。 また、 実施例 2の化合 物は梗塞領域率を減少する傾向を示した。

産業上の利用可能性

本発明の化合物は、 優れた E d g受容体拮抗作用を示し、 本発明の化合物を有 効成分とする医薬は循環器系疾患（例えば、 動脈硬化症、 心臓疾患)、 がん、 リウ マチ、 糖尿病性網膜症、 呼吸器系疾患に対して優れた治療効果を示す。

Claims

請求の範囲 式 （I)

(式中、 nは 1 11の整数であり、 1は 1 16の整数である）

で表される脂肪族化合物であって、 8位が二重結合である場合には、 （2R 3 S 2' S) の光学異性体であり、 また 8位が単結合である場合には、 （2 S 3R 2' RS) の光学異性体である化合物またはその薬理学的に許容される塩。

2. 式 （I) の化合物が式 (I I)

(式中 1及び nは請求の範囲第 1項の記号の字義と同一である） で表される化合 物である請求の範囲第 1項の化合物またはその薬理学的に許容される塩。

3. 式 （ I ) の化合物が式 （I I I)

(式中 1及び nは請求の範囲第 1項の記号の字義と同一である） で表される化合 物である請求の範囲第 1項の化合物またはその薬理学的に許容される塩。

4. 式 （I ) の化合物が式 （I V)

で表される化合物である、 請求の範囲第 1項の化合物またはその薬理学的に許容 される塩。

5 . 式 （ I ) の化合物が式 （V)

で表される化合物である請求の範囲第 1項の化合物またはその薬理学的に許容さ れる塩。

6.

(1) 下記式の （E) 体のアルケニルァラン： H₃C— (CH₂)_n— C(CH₃) C(H)— (CH₂)₂— CH=CH— AI(R)₂

(式中 nは請求の範囲第 1項の記号の字義と同一であり、 Rはアルキル基である） と

下記式のォキサゾリンアルデヒド誘導体であって、 目的化合物の 2位と同じ光学 異性を有するもの：

(式中 R' はアルキル基またはァリール基である）

とを反応させること、

(2) 第 （1) 工程生成物のォキサゾリンを開環して、 NH₂基及び

一〇C (=0) R' 基を有する化合物を得ること、

(3) 第 （2) 工程^成物を、 目的化合物の 2' 位と同じ光学異性を有するァシ ル化剤によって N—ァシル化し、 次に、 —C (=0) R' 基を脱離させることに よる、 請求の範囲第 1項の式 （I) 化合物の製造方法。 .

7.

(1) (E) 体の HC≡C— (CH₂) ₂-CH=C (CH₃) ― (CH₂) _nCH₃ (nは請求の範囲第 2項と同じ字義を表す） と

下記式の N—保護された （R) —ホルミルォキサゾリジン誘導体：

(式中 Aは Nの保護基であり、 B及び Cはアルキル基である）

とを反応させること、

(2) 第 （1) 工程生成物の三重結合を （E) 型二重結合にし、 同時に、 ォキサ ゾリジンを開環しながら脱保護して、 NH₂基及び OH基を有する化合物を得る こと、

(3) 第 （2) 工程生成物の水酸基を保護し、 この保護した化合物と、 下記式の化合物：

(式中、 R" は〇Hの保護基であり、 1は請求の範囲第 2項と同じ字義を表す） とを反応させること、

(4) 水酸基を脱保護し、 R"基を脱離させること、 を含む請求の範囲第 2項の 化合物の製造方法。

8. ·

(1) HO-CH₂-CH = C (CH₃) - (CH₂) _nCH₃ (nは請求の範囲第 3項と同じ字義を表す） の不飽和部分を接触還元によつて飽和すること、 (2) 第 （1) 工程生成物の水酸基を臭素で置換すること、

(3) 第 （2) 工程生成物の臭素を CH₃— C≡C—で置換すること、

(4) 第 （3) 工程生成物の三重結合の位置を末端に移動させて、 末端三重結合 化合物を得ること、 (5) 末端三重結合化合物に、 下記式の N—保護された （S) —ホルミルォキサ ゾリジン誘導体：

(式中 Aは Nの保護基であり、 B及び Cはアルキル基である）

を反応させること、

(6) 第 （5) 工程生成物の三重結合を （E) 型二重結合にし、 同時に、 ォキサ ゾリジンを開環しながら脱保護して、 NH₂基及び OH基を有する化合物を得る こと、

(7) 第 （6) 工程生成物の水酸基を保護し、 この保護した化合物と、 下記式の化合物：

(式中、 R" は OHの保護基であり、 1は請求の範囲第 3項と同じ字義を表す） とを反応させること、

(8) 水酸基の保護基を脱保護し、 R" 基を脱離させること、 を含む請求の範囲 第 3項の化合物の製造方法。

9. 請求の範囲第 1項〜請求の範囲第 5項のいずれか 1項に記載の化合物また はその薬理学的に許容される塩を有効成分とする、 内皮分化遺伝子 （Edg) 受 容体に拮抗する医薬。

10. 循環器系疾患を治療するための請求の範囲箄 9項の医薬。

1 . 循環器系疾患が動脈硬化症である請求の範囲第 1 0項の医薬。 2 . がんを治療するための請求の範囲第 9項の医薬。

3 . リウマチを治療するための請求の範囲第 9項の医薬。

4. 糖尿病性網膜症を治療するための請求の範囲第 9項の医薬。 5 . 呼吸器系疾患を治療するための請求の範囲第 9項の医薬。 6 . 循環器系疾患が心臓疾患である請求の範囲第 1 0項の医薬。