WO2001044437A1 - Incubateur de micro-organismes et milieu de culture de micro-organismes comprenant ledit incubateur - Google Patents

Incubateur de micro-organismes et milieu de culture de micro-organismes comprenant ledit incubateur Download PDF

Info

Publication number
WO2001044437A1
WO2001044437A1 PCT/JP2000/008923 JP0008923W WO0144437A1 WO 2001044437 A1 WO2001044437 A1 WO 2001044437A1 JP 0008923 W JP0008923 W JP 0008923W WO 0144437 A1 WO0144437 A1 WO 0144437A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
layer
water
soluble polymer
microorganism
polymer compound
Prior art date
Application number
PCT/JP2000/008923
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Masashi Ushiyama
Shigeyuki Aoyama
Original Assignee
Chisso Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chisso Corporation filed Critical Chisso Corporation
Priority to JP2001545515A priority Critical patent/JP4396078B2/ja
Publication of WO2001044437A1 publication Critical patent/WO2001044437A1/ja
Priority to US10/938,296 priority patent/US7312072B2/en
Priority to US11/940,683 priority patent/US8357498B2/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/04—Flat or tray type, drawers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/16—Apparatus for enzymology or microbiology containing, or adapted to contain, solid media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/20—Material Coatings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/22—Transparent or translucent parts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/24—Gas permeable parts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/14—Scaffolds; Matrices

Definitions

  • the present invention relates to a microorganism incubator for culturing and detecting microorganisms in food or the environment, a sheet-like microorganism incubator, a microorganism medium using the same, and a sheet-like microorganism medium.
  • Conventional microbial culture tests for example, when measuring the general viable cell count in food tests, dissolve and sterilize the powdered agar medium, and then use 45 ° C to prevent the agar medium from solidifying. C, and aliquots of the agar medium are dispensed into a sterile Petri dish or the like that has been filled with a fixed amount of test sample solution (food suspension, etc.) in advance. After solidifying and culturing at a constant temperature, a method has been used in which the number of colonies of the resulting microorganisms is counted. Such conventional microbial cultivation methods were extremely time-consuming and time consuming, as it was necessary to prepare and sterilize the medium in advance, as well as to maintain the agar medium at a temperature that did not solidify.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. H11-11729 / 99 discloses a method in which agar medium is dispensed in a state in which the agar medium is raised in a plastic container, and the surface of the agar medium is directly contacted with the object to be inspected. ing.
  • This method is simple and easy to use and easy to test for microbial contamination in the environment.However, due to the small area of the culture medium, the quantitative quality is poor, and the inspection target has curved or uneven surfaces. Inspection was difficult and had the disadvantage that it could not be used for normal food inspection.
  • test paper type a method is known in which a filter paper is impregnated with nutrient components of microorganisms, a sample solution is added or absorbed, and then placed in a plastic bag and cultured.
  • This type of test paper has poor qualitative drawbacks, such as the ease with which colonies grown by microorganisms spread and the difficulty of observing the microorganisms grown inside the filter paper.
  • Japanese Patent Publication No. 2-49705 Japanese Patent Application Laid-Open No. 3-153 No. 79 discloses a method in which a nutrient component of microorganisms and a gelling agent reconstituted by cold water are adhered to the inside of two films, and a sample solution is added between the two films to culture the film. ing.
  • This film type is quantitative and easy to use in food inspections, but it is difficult to directly contact the inspection target like a stamp type when conducting environmental inspections. Disadvantages are that nutrients and gelling agent that are not adhered are scattered, and when microorganisms that decompose the gelling agent grow, the gel is decomposed into a solution and liquid leakage occurs.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 6-171841 discloses a microorganism culturing apparatus in which a cold water-soluble gelling agent and a fibrous water-absorbing sheet are laminated. This is a microbial culture device that combines a gelling agent and a fibrous water-absorbing sheet. In this combination, the added sample solution is also absorbed by the gelling agent, so that the sample solution is uniformly applied to the culture medium surface.
  • a sheet or film-form microbial culture medium comprising a porous matrix layer and a water-soluble polymer compound layer in International Patent Publication No. WO 91/24432.
  • This is a microbial culture medium that can be used for various purposes such as wiping, in addition to ordinary food testing, and is easy to dispose of.
  • this microbial medium when a sample liquid is added to the porous matrix layer, the sample liquid is once held in the porous matrix layer.
  • the water in the sample liquid retained in the porous matrix layer dissolves, and at the same time, the growth and nutrient components of the microorganisms contained in the water-soluble polymer compound layer also dissolve, and the growth and division of the microorganisms are started.
  • Microorganisms present in the sample solution are dispersed throughout the porous matrix layer by adding the sample solution to the culture medium, but the surface of the water-soluble polymer compound layer gradually dissolves to form a high-viscosity solution. Microorganisms do not enter inside the water-soluble polymer compound layer, and the dissolved water-soluble polymer compound layer and the porous matrix layer are integrated.
  • microorganisms are pushed up to the surface of the porous matrix layer, and colonies are formed on the surface of the porous matrix layer. As described above, since colonies are formed on the surface of the porous matrix layer, microorganisms can be counted relatively well despite the use of the porous matrix layer.
  • the optimal porous matrix layer used for microbial culture is Due to the lack of proper physical properties, the dispersibility of microorganisms was poor depending on the sample solution, and the number of microorganisms whose growth could be confirmed was lower than in standard methods.
  • the object of the present invention can be used for microbiological tests in ordinary foods and the environment. Furthermore, by directly stamping or wiping the test object, it can be used not only for flat surfaces but also for curved surfaces and non-surfaces.
  • a microbial incubator that can easily perform a microbial examination on a smooth surface and a microbial medium using the same. It is to provide a microorganism medium.
  • the present inventors have intensively studied to solve the above problems. As a result, it was found that the intended purpose was achieved by adopting the following configuration, and the present invention was completed based on this finding.
  • the present invention has the following configurations.
  • a microorganism incubator in which a porous matrix layer having a basis weight of 40 to 100 gZm 2 and an air permeability of 7 to 24 cm / sec and at least one water-soluble polymer compound layer are laminated.
  • the water-soluble polymer compound layer is formed by laminating two layers, A layer and B layer.
  • the layer A is a layer containing a water-soluble polymer compound
  • the layer B is a layer containing a water-soluble polymer compound or a layer made of a water-soluble polymer compound. Item or the microorganism incubator according to Item (2).
  • the water-soluble polymer compound layer is composed of three layers, A layer, B layer, and C layer.
  • the water-soluble polymer compound in the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer has a basis weight of 1 to 20 gZm 2 , wherein the water-soluble polymer compound has a basis weight of 1 to 20 gZm 2 .
  • porous matrix layer is made of one or more hydrophilic fibers selected from the group consisting of nylon, rayon, cotton, and cellulose.
  • the microorganism incubator according to any one of (I) to (6).
  • the microbial incubator according to any one of (1) to (9) is adhered to a central portion of an adhesive sheet larger than the microbial incubator so that a porous matrix layer is located above, A transparent film larger than the microbial incubator is placed thereon so as to be in contact with the porous matrix layer and to align the center with the microbial incubator, and the portion of the transparent film that protrudes from the microbial incubator is an adhesive sheet.
  • a pressure-sensitive adhesive sheet one side of which is coated with an acrylic or rubber-based adhesive, a polyester film of 0.07 to 0.5 mm thickness, white polyester film, polyolefin-based synthetic paper, and polyolefin
  • microorganism incubator according to any one of the above (1) to (9), wherein at least one selected from the group consisting of a growth and nutrition component of a microorganism, a coloring agent, and a selection agent is contained.
  • Microbial medium at least one selected from the group consisting of a growth and nutrition component of a microorganism, a coloring agent, and a selection agent is contained.
  • a microorganism culture medium comprising one kind.
  • a microbial medium characterized in that the water-soluble substance according to the above (9) contains a growth and nutrient component of a microorganism, salts, or a mixture thereof.
  • the sheet-shaped microorganism incubator according to any one of the above (10) to (15) contains at least one selected from the group consisting of a growth and nutrition component of a microorganism, a coloring agent, and a selection agent.
  • a sheet-like microorganism medium characterized by the following.
  • FIG. 1 is a graph showing a comparison between the culture medium for general viable bacteria of Example 1 and a standard agar medium.
  • FIG. 2 is a graph showing a comparison between the general viable cell culture medium of Comparative Example 1 and a standard agar medium.
  • FIG. 3 is a schematic diagram showing an example of the sheet-like microorganism incubator of the present invention.
  • FIG. 4 is a schematic diagram showing an example of the sheet-shaped microorganism incubator of the present invention. Explanation of reference numerals
  • the microbial incubator of the present invention comprises a porous matrix layer having a basis weight of 40 to 100 g Zm 2 and an air permeability of 7 to 24 cm / sec, and at least one water-soluble polymer compound layer.
  • This is a laminated microbial incubator, in a form in which a porous matrix layer is laminated on a water-soluble polymer compound layer.
  • the microbial incubator of the present invention is rarely stored or cultured in a state where the microbial incubator is exposed, and is usually enclosed in a container in order to prevent contamination of bacteria other than the inspection target. .
  • the microbial incubator is adhered to the center of the adhesive sheet larger than the microbial incubator with an adhesive or the like so that the porous matrix layer faces upward, and the transparent incubator is larger than the microbial incubator.
  • a film is put on the porous matrix layer so as to be in contact with the microbial incubator, and a portion of the transparent film protruding from the microbial incubator is adhered to the microbial incubator of the adhesive sheet. It can be used as a sheet-shaped microbial incubator because it is adhered to parts that are not covered. Thus, by enclosing in a sheet-like container, a light-weight, low-bulk, and easy-to-handle sheet-type microorganism incubator can be obtained.
  • a state in which a culture component of a microorganism is contained in a microorganism incubator is referred to as a microorganism culture medium.
  • a state in which the growth and nutrition components of microorganisms are contained in a sheet-shaped microorganism incubator is referred to as a sheet-shaped microorganism culture medium.
  • the microbial incubator and sheet-like microbial incubator of the present invention can be used as a culture medium by containing at least one kind of growth and nutritional components of microorganisms.
  • a method of including a nutrient for growth for example, a water-soluble polymer compound layer is produced.
  • a sample liquid water or water containing nutrients for growth, etc.
  • the retained water dissolves the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer, and the resulting water-soluble polymer compound aqueous solution and an environment in which microorganisms can grow due to the growth and nutrient components provide an environment where microorganisms can grow. Presumably that the growth and division of the plant will begin.
  • Microorganisms present in the sample solution are uniformly dispersed throughout the porous matrix layer together with the sample solution when the sample solution is added.
  • the water-soluble polymer layer gradually dissolves to form a highly viscous solution.
  • This high-viscosity solution integrates the water-soluble polymer compound layer and the porous matrix layer. For this reason, the microorganisms do not penetrate into the inside of the water-soluble polymer compound layer and are further pushed up to the surface of the porous matrix layer, and colonies are formed on or near the surface of the porous matrix layer. This mechanism works similarly when these are put in a sheet-like container.
  • weight per unit area is the 4 0 ⁇ 1 0 0 g Zm 2
  • the microbial culture medium air permeability using a porous Matoritsu box layer is a 7 to 2 4 c / sec
  • the number of microorganisms even when very large
  • the growth of microorganisms can be easily confirmed because the microorganisms divide and proliferate on or near the surface of the porous matrix layer. Therefore, in the present invention, the count of microorganisms does not become inaccurate even though the porous matrix layer is used.
  • the configurations of the microorganism incubator and the sheet-shaped microorganism incubator of the present invention will be described with reference to FIG. 3 and FIG.
  • the sheet-shaped microorganism incubator (1) of the present invention is adhered to the center of a pressure-sensitive adhesive sheet (4) larger than the microorganism incubator (5) so that the porous matrix layer (2) faces up.
  • a transparent film (3) larger than the microbial incubator (5) is put on the porous matrix layer (2) so as to be in contact with the center of the microbial incubator (5) and the transparent film (3).
  • the portion of the microorganism incubator protruding from the microorganism incubator (5) is an adhesive sheet (4). (5) has a structure in which it is bonded to a non-bonded part.
  • the sheet can be used the porous sheet such as a film, also, the basis weight of the porous matrix layer is more preferable properly is 50 to 90 g m 2, more preferably is 55 ⁇ 80 gZm 2. If the basis weight is significantly less than 40 g / m 2 can not hold the added water and the sample solution, a high viscosity solution of the sample liquid that overflows from the porous matrix layer and the dissolved water-soluble polymer compound layer The fixation may be insufficient, and it may be difficult to form a well-shaped colony for observation.
  • the basis weight of the porous matrix layer is more preferable properly is 50 to 90 g m 2, more preferably is 55 ⁇ 80 gZm 2. If the basis weight is significantly less than 40 g / m 2 can not hold the added water and the sample solution, a high viscosity solution of the sample liquid that overflows from the porous matrix layer and the dissolved water-soluble polymer compound layer The fixation may be insufficient, and it may be difficult to form a well-shaped
  • the basis weight is significantly higher than 100 g / m 2 , the dissolved high-viscosity solution of the water-soluble polymer compound layer is retained inside the porous matrix layer, and the high-viscosity solution of the water-soluble polymer compound is And the integration with the porous matrix layer becomes insufficient.
  • microorganisms may grow not only on the surface of the porous matrix layer but also inside the porous matrix layer, and when the microorganisms grown inside the porous matrix layer cannot be easily confirmed, Microorganisms existing in the vicinity of the surface of the porous matrix layer may not be supplied with sufficient nutrients for growth, and may cause problems such as slow growth of the microorganisms.
  • the air permeability of the porous matrix layer is 7 to 24 cm / sec (70 to 240
  • Fibers can be used as a material for forming the porous matrix layer.
  • Nylon fibers polyacrylonitrile fibers, polybutyl alcohol (PVA) fibers, ethylene-vinyl acetate copolymer fibers, polyester fibers (hydrophilized polystyrene fibers) Ester fibers are more preferred), polyolefin fibers (hydrophilized polyolefin fibers are more preferred), synthetic fibers such as polyurethane fibers, semi-synthetic fibers such as rayon fibers, wool (animal hair), silk, cotton fibers, Examples thereof include natural fibers such as cellulose fibers and pulp fibers, and inorganic fibers such as glass fibers.
  • one or more fibers selected from the group consisting of nylon fibers, cotton fibers, cellulose fibers, and rayon fibers as the material of the porous matrix layer.
  • a porous sheet made of a fabric such as a knitted fabric or a non-woven fabric made of these fibers, or a porous matrix made of a porous film, a sponge, or a porous ceramic made of the above-mentioned fiber constituent material is used.
  • a porous sheet made of a fabric such as a knitted fabric or a nonwoven fabric, which can be used as a layer, and whose weight permeation and air permeability can be easily adjusted, is preferably used, and is manufactured by a melt blow method that can obtain fine fibers relatively easily.
  • Nonwoven fabrics such as nylon meltblown nonwoven fabrics and ultrafine fiber nonwoven fabrics produced from split fibers are particularly preferably used.
  • the porous matrix layer used in the present invention may be water-repellent, but by using a hydrophilic or hydrophilized porous matrix layer, the water absorption rate is higher than that of a water-repellent porous matrix layer. It is preferable because the efficiency of the test work can be increased. Further, it is preferable to apply a water-soluble substance to the surface of the porous matrix layer because the dispersion of microorganisms can be further improved. As the water-soluble substance, growth and nutrition components of the microorganism and Z or salts are preferably added because they are suitable for culturing the microorganism.
  • Any nutrient that is water-soluble and does not inhibit the growth of microorganisms can be used without any problem.
  • various peptones, yeast extracts, meat extracts, casamino acids, amino acids, amino acid mixtures, glucose, maltose, etc. Saccharides, organic acids, organic acid salts and the like are preferably used.
  • the salts can be used without any problem as long as they are used for pH adjustment or osmotic pressure adjustment.
  • salts such as sodium chloride, phosphates such as diphosphate phosphate, and carbonates
  • a carbonate such as sodium hydrogen is preferably used. These may be applied alone or in combination to the porous matrix layer. In addition, powder is added to the porous matrix layer.
  • Growth nutrients and salts may be sprayed, but preferably applied as a solution or suspension.
  • the solvent used as a solution or suspension may be any liquid that dissolves or partially dissolves a water-soluble substance and volatilizes or evaporates.Water, ethanol, methanol, or a mixed solvent thereof can be used. preferable.
  • the water-soluble polymer of compounds to form the water-soluble polymer layer used in the present invention when applying the sample solution, is dissolved with water 1 X 1 0- 2 P a ⁇ s ( (Viscosity measured at 40 ° C) Those exhibiting the above viscosity and not inhibiting the growth of microorganisms are preferably used.
  • polybutyl alcohol a cellulose derivative, a polyacrylic acid derivative, a starch derivative, a protein, a protein derivative, a polysaccharide and the like
  • polyvinyl alcohol is more preferable
  • polybiol alcohol having an experimental degree of 75 to 95% and a molecular weight of 2500 to 2500 is particularly preferable.
  • the microorganism incubator used in the present invention has at least one water-soluble polymer compound layer.
  • the water-soluble polymer compound layer may be a single layer, or may be a multilayer of two or more layers.
  • the water-soluble polymer compound layer has a multilayer structure, it can be prepared by applying a water-soluble polymer compound solution repeatedly. Further, a multi-layer structure can be obtained by laminating a water-soluble polymer compound layer formed in several layers. For example, when a water-soluble polymer compound layer is given a letter in alphabetical order in the order of proximity to the porous matrix layer, the water-soluble polymer compound layer is formed by laminating two layers, A layer and B layer.
  • the layer A is preferably a layer containing a water-soluble polymer compound
  • the layer B is preferably a layer containing a water-soluble polymer compound or a layer made of a water-soluble polymer compound.
  • the layer A contains at least one selected from the group consisting of growth and nutrition components of microorganisms, a coloring agent, and a selection agent
  • the layer B contains growth and nutrition components of microorganisms, a coloring agent
  • the compound may be a water-soluble polymer compound containing at least one selected from the selection agents, or may be composed of only the water-soluble polymer compound.
  • the water-soluble polymer compound layer is assigned a symbol in alphabetical order from the closest to the porous matrix layer
  • the water-soluble polymer compound layer is , A layer, B layer, and C layer are laminated, and the A layer and B layer are layers containing a water-soluble polymer compound, and the C layer is made of a water-soluble polymer compound.
  • a microbial incubator that is a layer is good.
  • the layer A and / or the layer B contain at least one selected from the group consisting of growth and nutritional components of microorganisms, a coloring agent, and a selection agent.
  • it is composed of only molecular compounds.
  • the layer C which is the water-soluble polymer compound layer farthest from the porous matrix layer, only from the water-soluble polymer compound, the growth and nutritional components of microorganisms added to the water-soluble polymer compound layer can be reduced. This is preferable because the utilization efficiency of the nutrients can be increased. Depending on the combination of the coloring agent and the selection agent, a reaction may be caused by mixing. In order to prevent this, it is preferable that the B layer is formed as a multilayer of two or more layers, and a component which easily reacts is added to separate layers. When the water-soluble polymer compound layer has a multilayer structure, it is preferable that each layer is in close contact with each other.
  • the water-soluble polymer compound layer may be supplemented with the growth and nutritional components of the microbe in advance during the manufacture of the microbial medium, or during the culture of the microbe.
  • the medium becomes a medium in which the microorganism can grow.
  • the microorganism culture Yoki of the present invention the addition of water containing surface area lm 2 per microbial incubator, growth nutrients 3 5 0 m L ⁇ 6 5 microorganisms of 0 m L, good Culture conditions.
  • microbiological media of the present invention the surface area lm 2 per microbiological media, 3 5 0 m L ⁇ 6 5 0 m L by adding water or water containing a growth nutrients such microorganisms, good culture Condition.
  • the growth and nutritional components of the microorganism used in the present invention can be used without any particular limitation as long as they are suitable for the microorganism.For example, a general-purpose liquid medium or a medium component obtained by removing agar from an agar medium is used.
  • a selective agent that suppresses the growth of microorganisms other than for the purpose of detection, an indicator that improves the visibility of the resulting colonies, and a dye may be added to the microorganism incubator. May be added with a chromogenic or fluorescent enzyme substrate.
  • antibiotics such as antibiotics and synthetic antibacterial agents, pigments, surfactants, inorganic salts and the like are used.
  • antibiotics include methicillin, ceftamethozo / re, cefixime, ceftazidime, cefsulodin, bacitracin, polymyxin B, rifampicin, novopiocin, colistin, lincomacin, chloramphenicol, tetracycline, streptomycin, and the like.
  • synthetic antibacterial agents include sulfa drugs, nalidixic acid, and olaquindox.
  • Examples of the pigment include crystal violet, brilliant green, malachite green, and methylene butyl which have a bacteriostatic or bactericidal action.
  • Examples of the surfactant include Tergitol 7, dodecyl sulfate, lauryl sulfate and the like.
  • Examples of the inorganic salts include selenite, tellurite, sulfite, sodium nitride, lithium chloride, oxalate, and high-concentration sodium chloride. Besides these, taurocholate, glycine, bile powder, bile salts, deoxycholate and the like can be used.
  • Examples of the growth and nutritional components of microorganisms include, for general viable bacteria, yeast yeast / peptone 'glucose mixture, meat extract / peptone mixture, peptone / soybean peptone / glucose mixture, and phosphoric acid. Mixtures with dicalcium and / or sodium chloride can be used for Escherichia coli and coliform testing for sodium desoxycholate, peptone, iron ammonium citrate, sodium chloride, diphosphate phosphate, lactose, and neutral mixture.
  • a tetrazolim salt such as 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride or a pH indicator
  • the growth of microorganisms can be improved.
  • the growth or growth of the microorganisms becomes easier to see due to color development or discoloration.
  • the addition of a substrate for the color development of an enzyme possessed by the specific microorganism or a fluorescent enzyme substrate has the advantage that the specific microorganism can be detected.
  • these color formers and the like are susceptible to thermal denaturation, care must be taken when producing microbial incubators and microbial media.
  • tellurite which is a component of Vogel-Johnson medium and Baird-Parker medium for detecting Staphylococcus aureus, must be added after sterilization and cooling of other components during the production of microbial medium due to thermal decomposition. No. In general, antibiotics are also easily decomposed by heat, so they should be added after cooling. When a solution of a water-soluble polymer compound is formed into a film or sheet-like water-soluble polymer compound layer, a large amount of water must be evaporated, and heating and drying with hot air require several minutes.
  • tetrazolium salt Was added to the solution of the water-soluble polymer compound, this drying may cause the color development of tetrazolium salt, decrease in the effect due to thermal decomposition, and the generation and influence of the growth of the tetrazolium salt hydrolyzate to microorganisms. is there.
  • the water-soluble polymer compound solution is 2 to 20%, and the weight of the water-soluble polymer compound in the water-soluble polymer compound layer (content of the water-soluble polymer compound itself) is 1 to 2
  • the drying temperature and time can be reduced to such an extent that the effects of thermal denaturation or thermal decomposition do not appear, and a water-soluble polymer layer containing components that are not easily susceptible to thermal denaturation or thermal decomposition
  • an aqueous solution of a water-soluble polymer compound containing a component susceptible to thermal denaturation and thermal decomposition is applied thereon, and a porous matrix layer is further laminated thereon and dried.
  • a microbial incubator or a microbial medium containing components that are susceptible to thermal denaturation and pyrolysis can be prepared.
  • the contact with the porous matrix layer The weight of the water-soluble polymer compound in the water-soluble polymer compound layer (the content of the water-soluble polymer compound itself) is 1 to 20 g / water when the water-soluble polymer compound layer is a single layer.
  • m 2 more preferably from 3 to 1 2 g Zm 2, also when a water-soluble polymer compound layer is composed of at least two layers are l ⁇ 2 0 g Zm 2, the preferred properly 1 110 g Zm 2 .
  • the water-soluble polymer compound constituting the water-soluble polymer compound layer dissolves by adding an aqueous solution such as water and has a high viscosity. Since it is a solution, the diffusion rate of the growth nutrients of the microorganisms is slow, and the supply of the growth nutrients to the microorganisms tends to be insufficient.
  • the water-soluble polymer compound layer which tends to decrease the utilization efficiency of the nutrients, has a multilayer structure of at least two layers, and the water-soluble polymer compound layer furthest from the porous matrix layer has:
  • the content of the water-soluble polymer compound layer containing no growth nutrient component of the microorganism is preferably 20% or more, more preferably 40% or more, based on the total water-soluble polymer compound layer.
  • the upper limit of this value is not particularly limited in terms of function, but is preferably not more than 80% in consideration of economic viewpoint and workability.
  • a resin film may be laminated further below the water-soluble polymer compound layer constituting the microorganism incubator or the microorganism medium.
  • This resin film is a film used as a backing film when the water-soluble polymer compound layer is produced, and may be removed from the water-soluble high-molecular compound layer if necessary.
  • As a raw material of the resin film at least one resin selected from polyester, polyolefin, and nylon is used. It is preferable to use a resin film made of these resins, since the adhesiveness to the adhesive sheet is improved.
  • a microbial incubator or microbial culture The ground may be cut and used in any shape.
  • any pressure-sensitive adhesive that does not inhibit the growth of microorganisms can be used, but in consideration of workability, the pressure-sensitive adhesive sheet and the transparent film are re-adhered.
  • Adhesives having weak adhesive strength to the extent possible are preferred.
  • a rubber-based pressure-sensitive adhesive or an acrylic-based pressure-sensitive adhesive is preferable, and particularly, a re-peelable-type or slightly-adhesive-type acrylic pressure-sensitive adhesive is preferably used.
  • a sheet made of a general-purpose thermoplastic resin is used as the base sheet used for the adhesive sheet.However, a certain degree of rigidity is required to peel off the adhered transparent film, and further wipe the curved surface etc. In order to be flexible, it's preferable.
  • a polyester film having a thickness of 0.07 to 0.5 mm, a white polyester film, a polyolefin-based synthetic paper, or a polyolefin-laminated paper is preferably used.
  • the adhesive sheet may be of any shape, but it should be placed around the microbial incubator or the microbial culture medium so that the adhesive between the adhesive sheet and the transparent film can be adhered to without any gap. It is necessary to have parts that are not bonded.
  • the transparent film used in the present invention can be used without any problem as long as it does not inhibit the growth of microorganisms.
  • a microorganism incubator or a microorganism medium is inserted between the sticky sheet and the transparent film. Therefore, a flexible film is preferably used.
  • a polyolefin film, a polyester film, a nylon film, a poly (chlorinated) vinyl film, or the like can be preferably used, and an easily peelable film treated with a release agent is also preferable in order to improve the peelability of the film.
  • a polyester film is preferable, and a polyolefin film or an easily peelable polyolefin film is particularly preferable.
  • the thickness of the transparent film is preferably in the range of 20 to 100 / m because it is flexible.
  • the transparent film may be of any shape, but it must be larger than the microbial incubator or microbial medium so that it can adhere to the adhesive sheet without gaps to prevent invasion of various bacteria. There is a need to.
  • the transparent film is completely peeled off from the adhesive sheet when opening the transparent film of the sheet-shaped microbial incubator or the sheet-shaped microbial culture medium. Since it is necessary to cover the culture medium and re-adhere to the adhesive sheet, it is preferable that a part of the adhesion between the two remains without being peeled off. However, when performing a direct stamping or wiping test, if removal of the transparent film from the microbial incubator or microbial culture medium facilitates the work, it may be completely removed. In addition, the adhesion between the adhesive film and the transparent film in the part where the microorganism culture device is not adhered can be peeled off so that the adhesion between the two parts is stronger than that in the remaining part.
  • the transparent film can be opened while the film is being adhered, and it is easy to adhere again with the transparent film after the addition of the sample solution or the like. Further, if the transparent film and the adhesive sheet are not completely adhered to each other and only partially increase the adhesive strength, the transparent film can be completely removed as necessary. In addition, it is very preferable to use a transparent film having a size larger than the pressure-sensitive adhesive sheet because the transparent film can be easily opened.
  • the adhesive sheet and the transparent film are separated from each other by using another adhesive tape having a strong adhesive strength between the adhesive sheet Z and the transparent film.
  • a method of adhering another pressure-sensitive adhesive sheet to the surface in contact with is preferably used. Another method is to fold another adhesive tape without shifting the overlap between the adhesive sheet and the transparent film, and to adhere the back surface of the adhesive sheet to the surface of the transparent film that is not in contact with the laminate. Good.
  • the back surface of the adhesive sheet and the transparent film when another adhesive tape is bent and adhered to the back side of the adhesive sheet and the surface of the transparent film that is not in contact with the microbial incubator or microbial medium, when the transparent film is opened, the back surface of the adhesive sheet and the transparent film This is convenient because it can be completely opened with the adhesive bonded.
  • the part having a strong adhesive strength may have a stronger adhesive strength than the remaining part, but the adhesive strength is preferably at least twice.
  • a film of polyester or the like is used as a mount, and an aqueous solution of a water-soluble polymer compound (which may or may not contain growth and nutritional components of microorganisms. Also includes a color former, a selector, etc.) May be applied to form a water-soluble polymer compound layer in a dry or semi-dry state. Further, if necessary, an aqueous solution of a water-soluble polymer compound (which may or may not contain growth and nutritional components of microorganisms) is formed on the water-soluble polymer compound layer. , Which may contain a selective agent or the like, may be applied to form a multilayer structure of two or more layers. Further, a porous matrix layer is laminated on the water-soluble polymer compound layer and dried.
  • the weight of the uppermost water-soluble polymer compound in contact with the porous matrix layer is preferably 1 to 20 g Zm 2 .
  • the aqueous solution of the water-soluble polymer compound is in a semi-dried state and the porous matrix is dried. Laminate layers or, if dry, add a porous matrix layer moistened with water or water containing microbial growth and nutritional components.
  • an aqueous solution of the water-soluble polymer compound is further applied, and the porous matrix layer is laminated as it is or in a semi-dry state, or after drying, water Or water containing microbial growth and nutrients In addition, a moistened porous matrix layer is laminated.
  • a step of applying a water-soluble substance on the porous matrix layer and drying may be added if necessary.
  • the mount may be peeled off from the obtained microorganism incubator, if necessary. Next, take measures such as cutting the obtained microbial incubator to an appropriate size if necessary, bonding it to a sheet or film coated with an adhesive, covering it with a transparent film, and putting it in a bag and a dish.
  • a sheet-shaped microorganism incubator By including a growth nutrient component of a microorganism in this microorganism incubator, it can be used as a microorganism culture medium and can be produced in the same manner as a microorganism incubator.
  • a sheet-shaped microorganism medium can be similarly prepared. It is preferable that the water-soluble polymer compound layer and the porous matrix layer are at least partially adhered to each other regardless of the method used for preparing the microorganism culture medium or the microorganism culture medium.
  • the microorganism culture medium of the present invention is composed of three water-soluble polymer compound layers.
  • the state in which the growth and nutrient components of microorganisms are added to the layer A and the layer of layer B or B is referred to as a microorganism culture medium, and the state in which the growth and nutrition components of microbes are not added is referred to as a microorganism incubator.
  • An aqueous solution of a water-soluble polymer compound is applied and dried on a resin film such as polyester to form a water-soluble polymer compound layer (C layer).
  • An aqueous solution of a water-soluble polymer compound containing a growth and nutrient component of a microorganism, a coloring agent, a selection agent, or a mixture thereof is applied and dried on this layer to form a water-soluble polymer compound layer (B layer).
  • an aqueous solution of a water-soluble polymer compound containing a growth and nutrient component of a microorganism, a color former, or a mixture thereof is applied on this layer to form a water-soluble polymer compound layer (A layer).
  • a laminate of a water-soluble polymer compound layer consisting of a layer, a layer B and a layer A.
  • the weight of the water-soluble polymer compound in the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer is preferably 1 to 20 g / m 2 .
  • growth and nutritional components of microorganisms such as peptone, yeast extract, meat extract, amino acid mixture sugars, and sodium chloride
  • An aqueous solution of salts such as gum, phosphate, carbonate or a mixed aqueous solution of nutrients and salts may be applied to the surface of the porous matrix layer and dried. If necessary, the resin film used as the backing film may be removed after drying.
  • the microbial culture medium is cut into an appropriate size, and this is adhered to a larger adhesive sheet.
  • an adhesive sheet is adhered to the resin film side of the microbial medium when the resin film is used with the adhesive film attached, and an adhesive sheet is attached to the water-soluble polymer compound layer side when the resin film is removed. Glue.
  • a transparent film is put on the transparent medium, and the transparent film is adhered to the adhesive sheet around the microorganism medium where the microorganism medium is not adhered.
  • the microbial incubator or the microbial medium of the present invention is composed of two water-soluble polymer compound layers.
  • the state in which the growth and nutrition components of microorganisms are added to the layer A and / or the layer B is referred to as a microorganism culture medium, and the state in which the growth and nutrition components of microorganisms are not added thereto is referred to as a microorganism incubator.
  • An aqueous solution of a water-soluble polymer compound containing a growth and nutrition component of microorganisms, a color former, a selection agent, or a mixture thereof, or an aqueous solution consisting of only a water-soluble polymer compound is applied to a resin film such as polyester.
  • a resin film such as polyester.
  • heat-denaturing or pyrolysis may be performed on this layer, or a water-soluble high-molecular-weight component containing microbial growth and nutrients, a coloring agent, or a mixture thereof may be used.
  • a water-soluble polymer compound layer (A layer) is prepared, and a laminate of a water-soluble polymer compound layer composed of a B layer and an A layer is formed. And On this laminate, a porous matrix layer or a porous matrix layer containing a growth and nutrient component of microorganisms and the like is laminated and dried to obtain a microorganism incubator or a microorganism culture medium. It is highly preferable that the weight of the water-soluble polymer compound in the water-soluble polymer compound layer (layer A) in contact with the porous matrix layer is 1 to 20 g / m 2 .
  • the resin film used as the backing may be removed, if necessary.
  • the microbial incubator or the microbial medium is cut to a suitable size and adhered to a larger adhesive sheet.
  • an adhesive sheet is adhered to the microbial incubator or microbial medium on the resin film side when the resin film is used with the resin film attached, and a water-soluble polymer compound layer is used when the resin film is removed.
  • B layer Adhere the adhesive sheet to the side. Further, a transparent film is put on the transparent film from above, and the transparent film is adhered to the adhesive sheet portion where the microorganism culture medium around the microorganism incubator or the microorganism culture medium is not adhered.
  • one end of the transparent film and the adhesive sheet are shifted, and an adhesive tape having a stronger adhesive force than the adhesive force between the adhesive sheet and the transparent film is adhered, or Attach one end of the transparent film and the adhesive sheet with double-sided tape with a stronger adhesive strength than the adhesive strength between the adhesive sheet and the transparent film, or attach one end of the transparent film or the adhesive sheet or both ends to the other end.
  • Apply an adhesive with stronger adhesive strength, etc. so that one end of the adhesive sheet and the transparent film is stronger than the adhesive force between the remaining adhesive sheet and the transparent film, and ethylene oxide gas sterilization is performed. Or the like, to obtain a sheet-shaped microorganism culture device or a sheet-shaped microorganism culture medium of the present invention.
  • the water-soluble polymer compound layer and the resin film adhere to each other.
  • the water-soluble polymer compound layer and the porous matrix layer are adhered.
  • a major feature is that microorganisms can be tested by contacting, contacting with the test object, or wiping the test object. When inspecting by direct contact or direct wiping, it can be inspected even if the inspection target has a curved surface or some unevenness.
  • sterile physiological saline or sterile water containing growth and nutritional components of microorganisms instead of sterile physiological saline or sterile water.
  • the value (unit: cm / sec) of the porous matrix layer measured according to the JIS F 1912 medical nonwoven fabric test method Frazier method.
  • CMX 10 to dry the water-soluble polymer compound layer was cut to a size of cm, after measuring the weight of its was converted to weight per lm 2 value (unit: g / m 2).
  • the value obtained by dividing the nutrient components by proportional calculation was determined.
  • the measurement was carried out according to the polybutyl alcohol test method of JIS K 6726-1994.
  • the thickness of the sheet and the film was measured by a technes meter B 1 of Toyo Seiki Seisaku-sho, Ltd.
  • the adhesive strength was measured in accordance with the JIS K 6854 adhesive peel strength test method, and this was taken as the adhesive strength.
  • Escherichia coli IF013500 strain, Bacillus subtilis IF03134 strain, Stap hylococcus aureus IF013276 strain, tnterobacter cloacae JCM1232 shredding passes, Providen cia alcalifaciens IF012931 strain, after culturing Klebsiella oxytoca JCM1665 strain ordinary Buiyo down medium, 1 0 4 in sterile physiological saline After diluting to ⁇ 10 8 1111 ⁇ , 1 mL of the diluted solution was added to the prepared medium for general viable bacteria and cultured at 35 ° C for 48 hours. Any strain even 1 0 4 red spot Bok is uniformly dispersed in ZML, it became red uniform nonwoven surface is 1 0 5 concentration of not less than ZML.
  • the basis weight of the water-soluble polymer compound in the polyvinyl alcohol film (water-soluble polymer compound layer) in contact with the nylon meltblown nonwoven fabric was 9.8 gZm 2 . This was cut into a circular shape with a diameter of 5 Omm, and the polyester film (backing paper) side was adhered to the center of a polyester adhesive film with a thickness of 100 m and a size of 70 mm x 80 mm. A polypropylene film (transparent film) with a size of 06 mm and a size of 70 mm x 85 mm was covered and sterilized with ethylene oxide gas to prepare a sheet-shaped microbial medium, which was used as a medium for general viable bacteria.
  • Example 2 In the same manner as in Example 1, 10 g of various foods such as meat, cut vegetables, and prepared dishes are put into a sterilized bag, and 10 OmL of sterile physiological saline is added thereto, and the mixture is homogenized with a stomacher. A 0-fold dilution series was prepared to prepare a sample solution. After opening the polypropylene film of the medium for general viable bacteria, adding 1 mL of the sample solution, the sample was covered again with a polypropylene film, and cultured at 35 ° C for 48 hours.
  • Escherichia coli IF013500 Bacillus subtilis IF03134 strain, Staphy lococcus aureus IF01327 Ri ⁇ , Enterobacter cloacae JCM1232 strain, Providenci a alcalifaciens IF012931 strain, after cultivation in the nutrient broth medium Klebsiella oxytoca JCM1665 strain, 1 0 4 in sterile physiological saline and diluted to ⁇ 1 0 8 ZmL, in addition to the viable bacteria medium produced the 1 mL, and cultured 3 5 ° C, 48 hours.
  • Example 2 Es chenchia coli, Enterobacter cloacae Bacillus subtilis , Klebsiella oxytoca , although coloring was observed when: 1 0 6 / m L, the 1 0 7 / mL or more color development could not be confirmed.
  • Staphylococcus aureus is a 1 0 6 / mL or more, Providencia alcalifaciens could not confirm color development at all concentrations. This is because the dissolved water-soluble polymer layer does not completely reach the surface of the nonwoven fabric, so that the supply of nutrients for growth near the growth of microorganisms is slow, and the growth of microorganisms is slow. It is considered that the cause is that the nonwoven fabric is blocking.
  • Example 2 Example 2
  • the basis weight of the water-soluble polymer compound in the polyvinyl alcohol film (layer A of the water-soluble polymer compound layer) in contact with the nylon meltblown nonwoven fabric was 7.8 gZm 2 .
  • This is cut into a circle with a diameter of 5 Omm, and the polyester film (backing) side is adhered to the center of a polyester adhesive film with a thickness of 100 ⁇ and a size of 7 OmmX 8 Omm, then a thickness of 0.06 mm, a size Cover a 70 mm x 85 mm polypropylene film (transparent film) and sterilize with ethylene oxide gas to produce a medium for coliform bacteria did.
  • Escherichia coli IF013500 strain Klebsiella oxytoca JCM1665 strain, Klebsiell a pneumoniae JCM1662 strain, Citrobacter freundii IF012681, Serratia rubi daea IF012973 strain, and food isolates 1 and 2 are cultured in normal broth medium and sterilized physiological saline to 10-500. It was diluted to cf uZmL. The diluted bacterial solution (lmL) was added to the prepared medium for coliform bacteria, and cultured at 36 ° C. All strains formed well visible blue spots after approximately 16 hours of culture.
  • polyvinyl alcohol In 0.75 L of water, 45 g of polyvinyl alcohol (89% experimental degree, 1700 polymerization degree, molecular weight of about 83000), 45 g of peptone, 1.2 g of dipotassium phosphate, 1.2 g of lactose Add 25 g and 0.3 g of sodium deoxycholate, heat and dissolve, then apply all on a polyester film (resin film used as backing paper) with a thickness of 20 ⁇ and a size of 0.5 mx 1 m. C, and dried for 20 minutes to prepare a polyvinyl alcohol film (water-soluble polymer compound layer).
  • the basis weight of the water-soluble polymer compound in the polyvinyl alcohol film (water-soluble polymer compound layer) in contact with the nylon meltblown nonwoven fabric was 7.8 gZm 2 . This is cut into a circle with a diameter of 50 mm, and the polyester film (backing) side is adhered to the center of a polyester adhesive film with a thickness of 100 ⁇ and 70 mm x 80 mm, then a thickness of 0.06 mm and 70 mm An X85 mm polypropylene film (transparent film) was covered and sterilized with ethylene oxide gas to prepare a medium for coliform bacteria.
  • Escherichia coli IFO13500 strain Klebsiella oxytoca JTCM1665 strain, Klebsiell apneumoniae strain JCM1662, Citrobacter freundii IF012681 strain, Serratia rubi daea IF012973 strain, and food isolates 1 and 2 were cultured in normal broth medium and diluted with sterile physiological saline to a concentration of 10 to 500 cfuZmL. 1 mL of the diluted bacterial solution was added to the prepared medium for coliform bacteria, and cultured at 36 ° C. E. coli IF013500 strain, food isolate 1 about 16 hours, K. oxytoca JCM1665 strain, S. rubidaea IF012973 strain about 20 hours, K. pneumoni ae It took about 25 hours for JCM1662 and C. freundii IF012681, and about 30 hours for Food Isolate 2.
  • this layer B 5 g of polyvinyl alcohol (89% of degree of polymerization, degree of polymerization of 1700, molecular weight of 83000), 5 g of peptone, 0.25 g of dipotassium phosphate, 0.25 g of lactose.
  • 5 g as a color former, 5-bromo 1-black 3-indolyl 1-galactopyranoside 25 mg of a solution obtained by dissolving 25 mg of water in 10 mL of water was applied all over, A nylon melt-blown nonwoven fabric (porous matrix layer) of 65 g / m air permeability of 12 csec was laminated and dried at 100 ° C for 30 seconds to obtain a microorganism culture medium.
  • the polyvinyl alcohol film in contact with the nylon meltblown nonwoven fabric corresponds to the layer A of the water-soluble polymer compound layer. This was cut into a circle having a diameter of 50 mm.
  • Acrylic micro-adhesive type adhesive (manufactured by Lintec Co., Ltd.) is applied to white polyester with a size of 8 O mm X 9 O mm and a thickness of 100 ⁇ m, and this is used as an adhesive sheet.
  • a polypropylene film (clear film) with a thickness of 0.06 mm and a size of 8 Omm X 9 Omm is displaced 5 mm toward the 9 Omm direction side, and the adhesive sheet Then, a 9 mm wide back sealing tape (manufactured by Kyowa Co., Ltd.) as an adhesive tape was adhered so as to cover the shifted part, and ethylene oxide gas sterilization was performed to prepare a sheet-shaped microorganism culture medium for coliform bacteria. The obtained microbial sheet medium was very compact.
  • the opening of the polypropylene film stops once at the 5 mm portion adhered with the back sealing tape. Operations such as collecting microorganisms could be performed with the polypropylene film and adhesive sheet partially adhered.
  • the polypropylene film could be re-adhered without any gap in the adhesive part with the adhesive sheet.
  • the coliform group was not found.
  • a blue spot appeared, indicating that it can be used favorably as a microorganism medium.
  • the microbial incubator and microbial medium of the present invention comprise at least one layer of a water-soluble polymer compound layer and a porous matrix layer, and a porous matrix layer is laminated on the water-soluble polymer compound layer.
  • the porous matrix layer has a basis weight of 40 to: L 0 g Zm 2 and an air permeability of 7 to 24 cm / sec. Microorganisms in food and the environment can be easily tested. In addition to normal food and environmental inspections, curved or slightly uneven surfaces can be directly inspected by stamping or wiping them.
  • the microorganisms in the sample solution are uniformly dispersed on the surface of the microorganism medium, and the growth of microorganisms can be confirmed even when the number of microorganisms is extremely large.
  • the microbial culture medium is thin, it does not take up space for storage and cultivation, and the volume of waste can be significantly reduced compared to ordinary microbial culture media.
  • the water-soluble polymer compound layer is composed of two or more layers, and the weight of the water-soluble polymer compound in the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer is 1 to 20 g Zm 2 . By doing so, it became possible to add a component easily degraded by heat to the water-soluble polymer compound layer.
  • the growth-nutrient component of the microorganism is not added to the water-soluble polymer layer farthest from the porous matrix layer, so that it is used by microorganisms. It is possible to reduce the amount of growth nutrients and the like added to the microorganisms that were not present, to increase the utilization efficiency of the nutrients, and to increase the efficiency of the production process.
  • the sheet-shaped microorganism incubator and the sheet-shaped microorganism culture medium of the present invention can easily perform microbiological inspection of foods and the environment, and can also perform inspection by stamping or wiping directly on an object to be inspected even on a curved surface or a surface with some unevenness. be able to. Since the cover film can be used with a part of the cover film attached or completely peeled off, it is possible to select an easy-to-use method according to the application, and it is possible to easily and easily test microorganisms for various test objects and applications. Also Since the sheet-shaped microorganism incubator and the sheet-shaped microorganism culture medium of the present invention are thin sheets, they do not require much space for cultivation, and waste can be greatly reduced as compared with ordinary microorganism tests.

Description

明 細 書 微生物培養器、 及びこれを用いた微生物培地 技術分野
本発明は、 食品や環境中の微生物を培養検出するための微生物培養器、 シー ト状微生物培養器及びこれを用いた微生物培地、 シート状微生物培地に関する
背景技術
従来から行われてきた微生物培養検査は、 例えば、 食品検査で一般生菌数の 測定を行う場合には、 粉末寒天培地を溶解、 滅菌した後、 寒天培地が固化しな いように 4 5 °C程度に保っておき、 その寒天培地の一定量を、 あらかじめ一定 量の検査試料液 （食品の懸濁液等） を入れておいた滅菌ペトリ皿等に分注し、 混釈後、 寒天を固化し、 一定温度で培養後、 生じた微生物のコロニー数を計数 する方法が行われてきた。 このような従来の微生物培養方法では、 前もって、 培地を調製、 滅菌しておくだけでなく、 固化しない温度で寒天培地を保ってお く必要があるなど、 非常に時間と手間がかかっていた。
より簡便、 迅速に微生物培養検査を行うためには、 このような、 手間と時間 のかかる培地の調製が省けることが好ましい。 また、 滅菌ペトリ皿として、 ガ ラス製やプラスチック製のぺトリ皿が使用されているが、 食品検査の場合には 、 多数の微生物培養検査を行う必要があり、 ガラス製ペトリ皿を培養に使用し た場合には、 再使用のためにペトリ皿の洗浄、 滅菌等を行わなければならない 。 これは非常に手間がかかるため、 近年は、 廃棄ができる滅菌済プラスチック 製ペトリ皿が利用されるようになってきた。 しかし、 この場合には、 多量のプ ラスチック廃棄物となることから処分等で問題となっていた。 また、 環境微生 物検査で一般生菌数の測定を行う場合には、 通常、 検査対象の一定面積をガー ゼまたは綿棒で拭き取り、 このガーゼまたは綿棒を滅菌水または滅菌生理食塩 水中で洗い、 綿棒に付着した菌体を滅菌水または滅菌生理食塩水中に懸濁させ 、 この懸濁液をあらかじめ作製しておいた固形寒天培地に塗布するか、 または 前記の方法と同様に寒天培地に混釈して培養した後、 生じたコロニーを計数す る方法が行われてきた。 この場合も、 微生物培養検査と同様に非常に手間と時 間がかかっていた。
このようなことから、 培地調整の手間を省いた簡易培地が検討され、 生産 - 市販されてきた。 これら簡易培地を便宜的に分類すればスタンプタイプ、 フィ ルタータイプ、 フィルムタイプ、 試験紙タイプ等に分類できる。
スタンプタイプとしては、 特開平 4一 1 1 7 2 9 9号に、 プラスチック容器 に寒天培地を盛り上げた状態で分注し、 寒天培地面を直接、 検査対象に接触し て検査する方法が開示されている。 この方法は、 簡便であり、 環境中の微生物 汚染を検査するためには使レ、やすレ、ものであるが、 培地面積が小さいために定 量性に乏しく、 さらに曲面や凹凸がある検査対象の検査は難しく、 通常の食品 検査には利用できない欠点があった。 またプラスチック容器を使用しているた めに培養後、 従来法と同様に多量のブラスチック廃棄物が生じる問題があった フィルタ一タイプとしては、 A N S I ZA S TM F 4 8 8— 7 9記載の 方法のように、 メンブランフィルタ一等で覆われた内部に栄養成分の加えられ た吸水性材料があり、 試料液中に培地を入れ、 試料液を吸収させ、 フィルター 表面に微生物を捕集して培養する等の方法がある。 なお、 フィルタータイプは 、 液体試料の検査には適しているものの、 固形物を含む試料の検査は難しい。 試験紙タイプとしては、 濾紙に微生物の栄養成分等を含浸し、 試料液を加え るか吸収させた後、 プラスチック袋に入れて培養する方法が知られている。 こ の試験紙タイプは、 微生物の生育したコロニーが拡散しやすいことや、 濾紙内 部で生育した微生物が観察し難いことなど定 性に乏しい欠点がある。
フィルムタイプとしては、 特公平 2— 4 9 7 0 5号公報、 特開平 3— 1 5 3 7 9号公報に、 2枚のフィルムの内側に微生物の栄養成分と冷水により再構成 されるゲル化剤が接着され、 2枚のフィルムの間に試料液を加えて、 培養する 方法が開示されている。 このフィルムタイプは、 食品の検査では定量性もあり 使いやすいが、 環境中の検査をするときなどには、 スタンプタイプのように検 査対象に直接接触して検査することが困難で、 完全に接着されていない栄養成 分やゲル化剤が飛散することや、 ゲル化剤を分解する微生物が生育したときに は、 ゲルが分解溶液化し、 液漏れがおきること等の欠点がある。
このように、 それぞれの目的にあわせ使いやすいようにいくつかのタイプの 簡易培地が開発 ·生産されてきたが、 1種類の簡易培地で食品検査、 検査対象 の直接検查など、 多くの用途に使用できる微生物検查培地ではなかった。 特開平 6 - 1 8 1 7 4 1号公報には、 冷水可溶性ゲル化剤と繊維質吸水性シ —トを積層した微生物培養装置が提案されている。 これは、 ゲル化剤と繊維質 吸水性シートを組み合わせた微生物培養装置であり、 この組み合わせでは、 添 加した試料液がゲル化剤にも吸収されるため、 試料液の培地面への均一な分散 が困難であり、 更に、 微生物が繊維質吸水性シートの上面でコロニーを形成す るとは限らず、 繊維質吸水性シートの下面または内部に微生物が生育した場合 には、 微生物の確認がし難いため、 定量性が損なわれる欠点があった。 それ故 、 このタイプの微生物培養培地装置は、 生育した微生物の観察を容易にするた めに、 実用上、 繊維質吸水性シートを透明乃至半透明となるように薄く してお く必要があった。 また、 繊維質吸水性シートと冷水可溶性ゲル化剤の層は接着 されていないため、 スタンプまたは直接拭き取りによる検查は難しい。
我々は、 国際公開特許 WO 9 1 / 2 4 4 3 2号公報で、 多孔質マトリックス 層と水溶性高分子化合物層からなるシートまたはフィルム状の微生物培地を開 示した。 これは、 通常の食品検査に加え、 拭き取りによる検査など様々な用途 に使え、 廃棄も容易で、 定量性のある微生物培地である。 この微生物培地では 、 試料液を多孔質マトリックス層に添加すると、 試料液は一旦、 多孔質マトリ ックス層に保持される。 多孔質マトリックス層に保持された試料液中の水によ り多孔質マトリックス層に接している水溶性高分子化合物層が溶解し、 同時に 水溶性高分子化合物層中に含有する微生物の生育栄養成分も溶け出し、 微生物 の生育分裂が開始される。 試料液中に存在する微生物は、 試料液を培地に添加 することで、 多孔質マトリックス層全体に分散するが、 水溶性高分子化合物層 表面は徐々に溶解し、 高粘度溶液を形成するために水溶性高分子化合物層内部 まで微生物が入らず、 溶解した水溶性高分子化合物層と多孔質マトリックス層 とが一体化する。 この過程で微生物は多孔質マトリックス層の表面まで押し上 げられ、 多孔質マトリ ックス層の表面にコロニーが形成される。 このように、 多孔質マトリックス層表面にコロニーが形成されるため、 多孔質マトリックス 層を用いているにもかかわらず微生物の計数が比較的良好に行える。
しカゝし、 このように優れた多孔質マトリックス層と水溶性高分子化合物層か らなるシートまたはフィルム状の培養容器または培地ではあるが、 微生物培養 に対して使用する多孔質マトリックス層の最適な物性条件が得られていなかつ たために、 試料液によっては、 微生物の分散性が悪くなる場合や、 標準的な方 法に比べて生育の確認できる微生物数が少ない場合があった。 また、 微生物数 が非常に多い場合には微生物の生育を確認できない場合もあり、 それ故、 この タイプのシートまたはフィルムの状培養容器または培地を用いる場合には、 添 加試料液の保持性、 分散性、 あるいは、 試料液により溶解した水溶性高分子化 合物の該マトリックス層への浸透性などについて考慮し、 微生物の培養を行わ なければならなかった。 また、 多量に微生物検査を行う場合には、 培地内への 雑菌の侵入を防止するために、 試料添加済みの微生物培地を袋詰めにする工程 等が必要であることから、 作業が繁雑であり、 更に袋詰めされた微生物培地は 嵩張ってしまうなど種々の問題があった。 発明の開示
本発明の目的は、 通常の食品や環境中の微生物検査に利用でき、 更に、 検査 対象に直接にスタンプまたは拭き取りを行うことで、 平面だけでなく曲面や非 平滑面の微生物検査が簡便に行える微生物培養器及びこれを用いた微生物培地 を提供し、 更に、 省スペースで扱い易く、 雑菌の侵入を防止できるシート状微 生物培養器及びこれを用いたシート状微生物培地を提供することにある。 本発明者らは、 上記課題を解決するべく鋭意研究を重ねた。 その結果、 以下 の構成をとることにより所期の目的が達成されることを知り得て、 この知見に 基づいて本発明を完成するに至った。
すなわち、 本発明は以下の構成を有する。
(1) 目付が 40〜100 gZm2、 通気度が 7〜24 c m/ s e cである多 孔質マトリックス層と、 少なくとも 1層の水溶性高分子化合物層とが、 積層さ れた微生物培養器。
(2) 水溶性高分子化合物層が、 少なくとも 2層からなることを特徴とする前 記 （1) 項記載の微生物培養器。
(3) 水溶性高分子化合物層を多孔質マトリ ックス層に近い順にアルファべッ ト順の記号を付けるとき、 水溶性高分子化合物層が、 A層、 及び B層の 2層を 積層して構成されており、 A層は水溶性高分子化合物を含む層であり、 B層は 水溶性高分子化合物を含む層または水溶性高分子化合物からなる層であること を特徴とする前記 （1) 項または前記 （2) 項記載の微生物培養器。
(4) 水溶性高分子化合物層を多孔質マトリ ックス層に近い順にアルファべッ ト順の記号を付けるとき、 水溶性高分子化合物層が、 A層、 B層、 及び C層の 3層を積層して構成されており、 A層、 及び B層は水溶性高分子化合物を含む 層であり、 C層は水溶性高分子化合物からなる層であることを特徴とする前記 (1) 項または前記 （2) 項記載の微生物培養器。
(5) 多孔質マトリックス層に接する水溶性高分子化合物層中の水溶性高分子 化合物が、 1〜20 gZm2の目付であることを特徴とする前記 （1) 〜 （4 ) 項のいずれか 1項記載の微生物培養器。
( 6 ) 水溶性高分子化合物が、 鹼化度 75〜 95 %、 分子量 25000〜 25 0000のポリビニルアルコールである前記 （1) 〜 （5) 項のいずれか 1項 記載の微生物培養器。
(7) 多孔質マトリ ックス層が、 ナイロン、 レーヨン、 コットン、 及びセル口 ースからなる群から選ばれた 1種以上の親水性繊維からなる不織布である前記
(I) 〜 （6) 項のいずれか 1項記載の微生物培養器。
(8) 多孔質マトリ ックス層が、 ナイロンメルトブロー不織布である前記 （7 ) 項記載の微生物培養器。
(9) 多孔質マトリックス層が、 その表面に水溶性物質が塗布されていること を特徴とする前記 （1) 〜 （8) 項のいずれか 1項記載の微生物培養器。
(10) 前記 （1) 〜 （9) 項のいずれか 1項記載の微生物培養器が、 その微 生物培養器より大きな粘着シートの中心部に多孔質マトリックス層が上になる ように接着され、 その上に前記微生物培養器より大きな透明フィルムが多孔質 マトリックス層に接し、 かつ前記微生物培養器と中心部を合わせるように被せ られ、 この透明フィルムの前記微生物培養器からはみ出している部分が粘着シ ートの前記微生物培養器が接着されていない部分と接着されていることを特徴 とするシート状微生物培養器。
(I I) 粘着シートが、 透明フィルムと接着する粘着シートの粘着力が部分的 に高いことを特徴とする前記 （10) 項記載のシート状微生物培養器。
(12) 粘着シートが、 粘着シートより強い粘着力を有する別の粘着テープに より、 部分的に透明フィルムと接着されていることを特徴とする前記 （10) 項記載のシート状微生物培養器。
(13) 粘着シートが、 その片面にアクリル系粘着剤またはゴム系粘着剤が塗 布された、 厚さ 0. 07〜0. 5mmのポリエステルフィルム、 白色ポリエス テルフィルム、 ポリオレフイン系合成紙、 及びポリオレフインラミネート紙か ら選ばれた 1種であることを特徴とする前記 （10) 〜 （12) 項のいずれか 1項記載のシート状微生物培養器。
(14) 透明フィルムが、 ポリオレフインフ ルムまたは易剥離性ポリオレフ インフィルムである前記 （10) 〜 (1 3) のいずれか 1項記載のシート状 微生物培養器。
(15) 透明フィルムが、 厚さ 20〜100 /zmであることを特徴とする前記 (10) 〜 （14) 項のいずれか 1項記載のシート状微生物培養器。
(16) 前記 （1) 〜 （9) 項のいずれか 1項記載の微生物培養器に、 微生物 の生育栄養成分、 発色剤、 及び選択剤から選ばれた少なくとも 1種が含まれる ことを特徴とする微生物培地。
(1 7) 前記 （3) 項または前記 （4) 項記載の微生物培養器を構成する A層 、 及び Zまたは B層に、 微生物の生育栄養成分、 発色剤、 及び選択剤から選ば れた少なくとも 1種が含まれることを特徴とする微生物培地。
(18) 前記 （9) 項記載の水溶性物質に、 微生物の生育栄養成分、 塩類、 ま たはこれらの混合物が含有させていることを特徴とする微生物培地。
(19) 前記 （1) 〜 （9) 項のいずれか 1項記載の微生物培養器を構成する 水溶性高分子化合物層、 及び Zまたは多孔質マトリックス層に、 少なくとも 1 種の微生物の生育栄養成分が含まれることを特徴とする微生物培地。
(20) 前記 （10) 〜 （15) 項のいずれか 1項記載のシート状微生物培養 器に、 微生物の生育栄養成分、 発色剤、 及び選択剤から選ばれた少なくとも 1 種が含まれることを特徴とするシ一ト状微生物培地。
(21) 前記 （10) 〜 （1 5) 項のいずれか 1項記載のシート状微生物培養 器を構成する水溶性高分子化合物層、 及び Zまたは多孔質マトリックス層に、 少なくとも 1種の微生物の生育栄養成分が含まれることを特徴とするシート状 微生物培地。 図面の簡単な説明
第 1図は、 実施例 1の一般生菌用培地と標準寒天培地との比較を表したダラ フである。
第 2図は、 比較例 1の一般生菌用培地と標準寒天培地との比較を表したダラ フである。 第 3図は、 本発明のシー卜状微生物培養器の一例を表した概略図である。 第 4図は、 本発明のシート状微生物培養器の一例を表した概略図である。 符号の説明
1 ： シート状微生物培養器、 2 ：多孔質マトリックス層、 3 ：透明フィルム 、 4 ：粘着シート、 5 ：水溶性高分子化合物層。 発明を実施するための最良の形態
以下、 本発明について詳細に説明する。
本発明の微生物培養器は、 目付が 4 0〜1 0 0 g Zm2、 通気度が 7〜 2 4 c m/ s e cである多孔質マトリックス層と、 少なくとも 1層の水溶性高分子 化合物層とが積層された微生物培養器であり、 水溶性高分子化合物層上に、 多 孔質マトリ ックス層が積層された形態をとる。 更に、 本発明の微生物培養器は 、 微生物培養器が露出した状態で保存や培養が行われることが稀であり、 通常 、 検査対象外の雑菌の混入を防ぐために、 容器中に封入されている。 本発明で は、 微生物培養器が、 その微生物培養器より大きな粘着シートの中心部に多孔 質マトリックス層が上になるように粘着剤等により接着され、 その上に前記微 生物培養器より大きな透明フィルムが多孔質マトリックス層に接し、 かつ前記 微生物培養器と中心部を合わせるように被せられ、 この透明フィルムの前記微 生物培養器からはみ出している部分が粘着シートの前記微生物培養器が接着さ れていない部分と接着されていることで、 シート状微生物培養器として利用で きる。 このように、 シート状の容器に封入することで、 軽量で嵩が低く、 更に 取り扱いが容易なシート状微生物培養器となる。 なお、 本発明では、 微生物培 養器に微生物の培養成分を含ませた状態を微生物培地という。 同様に、 シート 状微生物培養器に微生物の生育栄養成分を含ませた状態をシート状微生物培地 という。 本発明の微生物培養器及びシ一ト状微生物培養器に、 少なくとも 1種 の微生物の生育栄養成分を含有させることにより培地として利用できる。 生育 栄養成分を含有させる方法としては、 例えば、 水溶性高分子化合物層を製造す る工程で、 多孔質マトリックス層と接する水溶性高分子化合物層に生育栄養成 分を予め添加しておく方法や、 微生物検査時に、 生育栄養成分を含む試料液を 多孔質マトリックス層上から微生物培養器に添加する方法等が挙げられる。 多 孔質マトリ ックス層上に試料液 （水または生育栄養成分を含んだ水等） を添加 すると、 試料液が一且、 多孔質マトリ ックス層に保持される。 この保持された 水により、 多孔質マトリックス層に接した水溶性高分子化合物層が溶解し、 生 じた水溶性高分子化合物水溶液と、 生育栄養成分によつて微生物の生育しうる 環境となり、 微生物の生育分裂が開始されると推定している。 なお、 試料液中 に存在する微生物は、 試料液が添加されることで、 試料液と共に多孔質マトリ ックス層全体に均一に分散する。 水溶性高分子化合物層は徐々に溶解し、 高粘 度溶液を形成する。 この高粘度溶液により水溶性高分子化合物層と多孔質マト リックス層とが一体化する。 このため、 微生物は水溶性高分子化合物層内部ま では侵入せず、 更に多孔質マトリックス層の表面まで押し上げられ、 多孔質マ トリックス層の表面または表面近傍にコロニーが形成される。 この機構は、 こ れらをシート状の容器に入れた場合にも同様に機能する。 また、 目付が 4 0〜 1 0 0 g Zm2であり、 通気度が 7〜2 4 c / s e cである多孔質マトリツ クス層を用いた微生物培地では、 微生物数が非常に多い場合であっても、 微生 物が多孔質マトリックス層の表面または表面近傍で分裂増殖するため、 微生物 の生育を容易に確認できる。 よって本発明では、 多孔質マトリ ックス層を用い ているにもかかわらず微生物の計数が不正確となることはない。
第 3図、 第 4図を用いて本発明の微生物培養器、 及びシート状微生物培養器 の構成を説明する。 本発明のシート状微生物培養器 （1 ) は、 微生物培養器 （ 5 ) より大きな粘着シート （4 ) の中心部に多孔質マトリックス層 （2 ) が上 になるように接着され、 その上に前記微生物培養器 （5 ) より大きな透明フィ ルム （3 ) が多孔質マトリ ックス層 （2 ) に接し、 かつ前記微生物培養器 （5 ) と中心部を合わせるように被せられ、 この透明フィルム （3 ) の前記微生物 培養器 （5 ) からはみ出している部分が粘着シート （4 ) の前記微生物培養器 (5) が接着されていない部分と接着された構造を有する。
本発明に用いられる多孔質マトリックス層は、 シート、 フィルム等の多孔質 シートを用いることができ、 また、 多孔質マトリックス層の目付は、 より好ま しくは 50〜 90 g m2であり、 更に好ましくは 55〜80 gZm2である。 目付が 40 g/m2を大幅に下回る場合には、 添加した水や試料液を保持でき ず、 試料液が多孔質マトリックス層から溢れることや、 溶解した水溶性高分子 化合物層の高粘度溶液の固定性が不充分となり、 観察しゃすい良好な形状のコ ロニ一を形成しにくい恐れがある。 逆に目付が 1 00 g/m2を大幅に上回る 場合には、 溶解した水溶性高分子化合物層の高粘度溶液が多孔質マトリックス 層の内部に保持され、 水溶性高分子化合物の高粘度溶液と多孔質マトリックス 層との一体化が不充分となる。 このことにより、 多孔質マトリ ックス層の表面 上だけでなく、 多孔質マトリックス層の内部でも微生物が生育する可能性があ り、 多孔質マトリックス層内部で生育した微生物を容易に確認できない場合や 、 多孔質マトリックス層の表面近傍に存在する微生物に、 充分な生育栄養成分 等が供給されず、 微生物の生育が遅れる等の不具合が生じる恐れがある。 また 、 多孔質マトリックス層の通気度は 7〜 24 c m/ s e c { 70〜240し
(m2 - s e c) } の範囲が好ましく、 より好ましくは 8〜20 c m/ s e c 、 更に好ましくは、 1 0〜： L 8 c m/ s e cである。 通気度が 7 c / s e c を大幅に下回る場合には、 水分の通過性に劣り水溶性高分子化合物層に均一に 試料液等の水分が行き渡らず、 均一に微生物を培養できない等の不具合を生じ る恐れがある。 逆に通気度が 24 cmZs e cを大幅に上回る場合には、 溶解 した水溶性高分子化合物層の高粘度溶液の固定性が不充分となり、 観察しゃす い良好な形状のコロニーを形成しにくく、 微生物の計数が不正確となり易い傾 向力 Sある。
多孔質マトリックス層を形成するための材料としては繊維が利用でき、 ナイ ロン繊維， ポリアクリロニトリル繊維， ポリ ビュルアルコール （PVA) 繊維 ， エチレン酢酸ビニル共重合体繊維， ポリエステル繊維 （親水化処理したポリ エステル繊維がより好ましい） ， ポリオレフイン繊維 （親水化処理したポリオ レフイン繊維がより好ましい） ， ポリウレタン繊維等の合成繊維、 レーヨン繊 維等の半合成繊維、 羊毛（獣毛）， 絹， コッ トン繊維， セルロース繊維， パルプ 繊維等の天然繊維、 ガラス繊維等の無機繊維等が例示できる。 なかでも、 ナイ ロン繊維、 コッ トン繊維、 セルロース繊維、 及びレーヨン繊維からなる群から 選ばれた 1種以上の繊維を多孔質マトリックス層の材料として用いることが好 ましい。 また、 これらの繊維を用いて作られた編織物、 不織布等の布帛からな る多孔質シートや、 上記繊維の構成素材で作られた多孔質フィルム， スポンジ , 多孔質セラミックス等が多孔質マトリ ックス層として使用でき、 特に、 目付 、 通気度の調整が容易な編織物、 不織布等の布帛からなる多孔質シートが好ま しく用いられ、 更に比較的容易に細繊維が得られるメルトブロー製法で作製し たナイロンメルトブロー不織布等の不織布や、 分割繊維から製造した極細繊維 不織布が特に好ましく用いられる。
本発明に用いられる多孔質マトリックス層は、 撥水性であってもよいが、 親 水性または親水化処理した多孔質マトリックス層を用いることで、 撥水性の多 孔質マトリックス層よりも吸水速度が速くできるため、 試験作業の能率が高く なり好ましい。 さらにこれら多孔質マトリックス層の表面に水溶性物質を塗布 しておくことで、 微生物の分散をさらに向上できるため好ましい。 水溶性物質 としては、 微生物の生育栄養成分及び Zまたは塩類が微生物の培養に適してい るため好ましく添加される。 水溶性で、 微生物の生育を阻害しない微生物の生 育栄養成分であれば問題なく利用でき、 例えば、 各種ペプトン類、 酵母エキス 、 肉エキス類、 カザミノ酸、 アミノ酸、 アミノ酸混合物、 グルコース、 麦芽糖 等の糖類、 有機酸、 有機酸塩等が好ましく用いられる。 また、 塩類は、 P H調 整用または浸透圧調節用等に用いられているものであれば問題なく利用でき、 例えば、 塩化ナトリゥム等の塩酸塩、 リン酸ニ力リゥム等のリン酸塩、 炭酸水 素ナトリウム等の炭酸塩等が好ましく用いられる。 これらは、 単独または混合 して多孔質マトリ ックス層に塗布される。 なお、 多孔質マトリックス層に粉末 状の生育栄養成分や塩類を散布してもよいが、 溶液または懸濁液として塗布す ることが好ましい。 溶液または懸濁液として用いられる溶媒は水溶性物質を溶 解または部分溶解し、 揮発または蒸発する液体であればどのようなものでもよ いが、 水、 エタノール、 メタノール、 またはこれらの混合溶媒が好ましい。 本発明で用いられる水溶性高分子化合物層を形成するための水溶性高分子化 合物としては、 試料液を加えたときに、 水により溶解して 1 X 1 0— 2 P a · s ( 4 0 °Cで測定した粘度） 以上の粘度を示し、 微生物の生育を阻害しないもの が好ましく用いられる。 例えば、 ポリビュルアルコール、 セルロース誘導体、 ポリアクリル酸誘導体、 でんぷん誘導体、 蛋白質、 蛋白質誘導体、 多糖類等が 使用できる。 この中でもポリビニルアルコールがより好ましく、 験化度が 7 5 〜 9 5 %、 分子量が 2 5 0 0 0〜 2 5 0 0 0 0のポリビエルアルコールが特に 好ましい。
本発明で用いられる微生物培養器には、 少なくとも 1層の水溶性高分子化合 物層を有する。 このとき、 水溶性高分子化合物層は 1層であってもよいが、 2 層以上の多層であってもよい。 水溶性高分子化合物層を多層とする場合には、 水溶性高分子化合物溶液を塗り重ねて作製することができる。 また、 数層に分 けて作製した水溶性高分子化合物層を貼り合わせることで、 多層とすることも できる。 例えば、 水溶性高分子化合物層を多孔質マトリ ックス層に近い順にァ ルファベット順の記号を付けるとき、 水溶性高分子化合物層が、 A層、 及び B 層の 2層を積層して構成されており、 A層は水溶性高分子化合物を含む層であ り、 B層は水溶性高分子化合物を含む層または水溶性高分子化合物からなる層 である微生物培養器がよい。 このとき、 A層には、 微生物の生育栄養成分、 発 色剤、 及び選択剤から選ばれた少なくとも 1種が含まれることが好ましいが、 B層は、 微生物の生育栄養成分、 発色剤、 及び選択剤から選ばれた少なくとも 1種を含む水溶性高分子化合物であってもよいが、 水溶性高分子化合物のみか ら構成されていてもよい。 また、 水溶性高分子化合物層を多孔質マトリックス 層に近い順にアルファべット順の記号を付けるとき、 水溶性高分子化合物層が 、 A層、 B層、 及び C層の 3層を積層して構成されており、 A層、 及び B層は 水溶性高分子化合物を含む層であり、 C層は水溶性高分子化合物からなる層で ある微生物培養器がよい。 このとき、 A層、 及び/または B層に、 微生物の生 育栄養成分、 発色剤、 及び選択剤から選ばれた少なくとも 1種が含まれること が好ましく、 逆に、 C層は、 水溶性高分子化合物のみから構成されることが好 ましい。 多孔質マトリックス層から最も離れた水溶性高分子化合物層である C 層を、 水溶性高分子化合物のみから構成することで、 水溶性高分子化合物層に 添加する微生物の生育栄養成分を減量でき、 生育栄養成分の利用効率が高くで きるため好ましい。 なお、 発色剤や選択剤の組み合わせによっては、 混合する ことで反応を起こす場合がある。 これを防ぐため、 B層を 2層以上の多層とし 、 反応しやすい成分を別々の層に添加することがよい。 また、 水溶性高分子化 合物層を多層構造にする場合には、 各層が密着していることが好ましい。 また 、 あまりに多くの層を形成しても製造工程の増加に伴うコストアップに見合う 効果が得られないので、 5層を越えた多層とすることにはあまり意味はない。 また、 本発明の微生物培養器を微生物培地として利用する場合には、 水溶性 高分子化合物層に、 微生物培地の製造時に前もって微生物の生育栄養成分を添 加しておく力、 あるいは微生物の培養時に、 微生物の生育栄養成分を含む水を 加えることで、 微生物の生育しうる培地となる。 このとき、 本発明の微生物培 養器は、 微生物培養器の表面積 l m2当たり、 3 5 0 m L〜6 5 0 m Lの微生 物の生育栄養成分を含む水を加えることで、 良好な培養条件となる。 同様に、 本発明の微生物培地は、 微生物培地の表面積 l m2当たり、 3 5 0 m L〜6 5 0 m Lの水または微生物の生育栄養成分等を含む水を加えることで、 良好な培 養条件となる。 本発明に用いられる微生物の生育栄養成分としては、 微生物に 適したものであれば、 特に制限なく用いることができ、 例えば、 汎用の液体培 地や寒天培地から寒天を除いた培地成分等が利用できる。 さらに検出目的以外 の微生物の生育を抑える選択剤や、 生じたコロニーを見やすくするための指示 薬、 染料等を微生物培養器に加えてもよく、 また特定の微生物を検出するため に発色または蛍光酵素基質を加えてもよい。
本発明で用いられる選択剤としては、 抗生物質， 合成抗菌剤等の抗生剤、 色 素、 界面活性剤、 無機塩等が用いられる。 抗生物質としては、 メチシリン， セ フタメタゾ一/レ， セフィキシム， セフタジジム， セフスロジン， バシトラシン ， ポリ ミキシン B , リファンピシン， ノボピオシン， コリスチン， リンコマィ シン， クロラムフエ二コール， テトラサイクリン， ス トレプトマイシン等が例 示でき、 合成抗菌剤としては、 サルファ剤， ナリジクス酸， オラキンドックス 等が例示できる。 また、 色素としては、 静菌または殺菌作用のあるクリスタル バイオレッ ト， ブリ リアントグリーン， マラカイ トグリーン， メチレンブ — 等が例示できる。 また、 界面活性剤としては、 Tergitol7， ドデシル硫酸塩， ラウリル硫酸塩等が例示できる。 また、 無機塩類としては、 亜セレン酸塩， 亜 テルル酸塩， 亜硫酸塩， 窒化ナトリウム， 塩化リチウム， シユウ酸塩， 高濃度 の塩化ナトリウム等が例示できる。 これら以外にもタウロコール酸塩， グリシ ン， 胆汁末， 胆汁酸塩， デォキシコール酸塩等を用いることができる。
微生物の生育栄養成分としては、 例えば、 一般生菌検查用としては、 酵母ェ キス ·ペプトン 'ブドウ糖混合物、 肉エキス ·ぺプトン混合物、 ペプトン ·大 豆ペプトン ·ブドウ糖混合物等や、 これらにリン酸二カリゥム及び/または塩 化ナトリウムを加えた混合物が、 大腸菌 ·大腸菌群検査用としては、 デソキシ コール酸ナトリウム .ペプトン ·クェン酸鉄アンモニゥム ·塩化ナトリウム ' リン酸ニ力リゥム ·乳糖 · ニュートラルレツ ド混合物、 ペプトン '乳糖' リン 酸二力リウム 'ェォジン Y ·メチレンブルー混合物等が、 ブドウ球菌用として は、 肉エキス ·ペプトン ·塩化ナトリウム 'マンニット ·フエノールレツド · 卵黄混合物、 ペプトン ·肉エキス ·酵母エキス · ピルビン酸ナトリウム ' グリ シン ·塩化リチウム ·亜テルル酸卵黄液混合物等が、 ビブリオ用としては酵母 エキス 'ペプトン '蔗糖 ·チォ硫酸ナトリウム 'クェン酸ナトリウム ' コール 酸ナトリウム 'クェン酸第 2鉄 ·塩化ナトリウム '牛胆汁 ·ブロムチモールブ ルー .チモールブルー混合物等が、 腸球菌用としては、 牛脳エキス .ハートェ キス ·ペプトン 'ブドウ糖 · リン酸ニカリゥム ·窒化ナトリウム 'ブロムチモ —ルブルー '塩化 2， 3， 5—トリフヱニルテトラゾリゥム混合物等が、 真菌 用としては、 ペプトン♦ブドウ糖混合物、 酵母エキス ·ブドウ糖混合物、 ポテ トエキス ·ブドウ糖混合物等が用いられる。
生じたコロニーを見やすくするために、 水溶性高分子化合物層に 2， 3 , 5 —トリフエニルテトラゾリゥムクロライ ドなどのテトラゾリム塩または p H指 示薬を加えておくことで、 微生物の生育に伴い、 発色または変色して微生物の 生育が見やすくなり、 また、 特定の微生物が有する酵素の発色または蛍光酵素 基質を加えておくことで、 特定の微生物が検出できる利点がある。 しかし、 こ れらの発色剤等は熱変成しやすいため微生物培養器や微生物培地の製造時に注 意が必要である。 また、 黄色ブドウ球菌検出用の Vogel- Johnson培地や Baird- P arker培地の成分である亜テルル酸塩等は、 熱分解しゃすいため微生物培地の 製造時に他成分の滅菌、 冷却後に添加しなければならない。 また、 一般に抗生 剤も熱分解しやすいため、 冷却後に加えることがよい。 水溶性高分子化合物の 溶液をフィルム状またはシート状の水溶性高分子化合物層とするとき、 大量の 水を蒸発させる必要があり、 加熱乾燥、 熱風乾燥に数分を要するため、 例えば 、 テトラゾリゥム塩が水溶性高分子化合物溶液中に添加されていた場合には、 この乾燥により、 テトラゾリゥム塩の発色や、 熱分解による効果の低下、 テト ラゾリゥム塩分解物の微生物に対する生育阻害等の発生や影響がある。 成分に もよるが、 水溶性高分子化合物溶液を 2〜 2 0 %として、 水溶性高分子化合物 層中の水溶性高分子化合物の目付 （水溶性高分子化合物自体の含有量） が 1〜 2 0 g /m2であれば、 熱変成や熱分解による影響が現れない程度に乾燥温度 や時間を抑えて乾燥でき、 あらかじめ熱変成や熱分解を受けにくい成分を加え た水溶性高分子化合物層を作製した後、 熱変成や熱分解を受けやすい成分を含 む水溶性高分子化合物水溶液をその上に塗布して、 さらにその上に多孔質マト リ ックス層を積層し、 乾燥することで、 熱変成や熱分解が受けやすい成分を含 む微生物培養器や微生物培地が作製できる。 なお、 多孔質マトリ ックス層に接 する水溶性高分子化合物層中の水溶性高分子化合物の目付 （水溶性高分子化合 物自体の含有量） は、 水溶性高分子化合物層が単層の場合には、 l〜2 0 g / m2が好ましく、 より好ましくは 3〜1 2 g Zm2であり、 また、 水溶性高分子 化合物層が少なくとも 2層からなる場合には、 l〜2 0 g Zm2であり、 好ま しくは 1〜 1 0 g Zm2である。 水溶性高分子化合物層に生育栄養成分等を加 え微生物培地としたとき、 水溶性高分子化合物層を構成する水溶性高分子化合 物は、 水等の水溶液を添加することで溶解し高粘度溶液となるため、 微生物の 生育栄養成分等の拡散速度が遅く、 微生物への生育栄養成分等の供給が不充分 となりやすい。 これにより、 生育栄養成分等の利用効率が悪くなる傾向にある 力 水溶性高分子化合物層を少なくとも 2層の多層構造とし、 多孔質マトリツ クス層から最も離れた水溶性高分子化合物層には、 微生物の生育栄養成分を含 有しない水溶性高分子化合物層を用い、 多孔質マトリックス層に接する水溶性 高分子化合物層に微生物の生育栄養成分を加えることで、 生育する微生物の近 傍に微生物の生育栄養成分を集中でき、 これにより栄養成分等の利用効率を高 くできるため好ましい。 なお、 微生物の生育栄養成分を含有しない水溶性高分 子化合物層は全水溶性高分子化合物層に対して 2 0 %以上であることが好まし く、 より好ましくは 4 0 %以上である。 この値の上限については、 機能の点か らは特に制限はないが、 経済的観点及び作業性を考慮すると、 8 0 %を越えな い範囲が好ましい。
本発明に用いられる微生物培養器または微生物培地には、 微生物培養器また は微生物培地を構成する水溶性高分子化合物層のさらに下層に樹脂フィルムが 積層されていてもよい。 この樹脂フィルムは、 水溶性高分子化合物層を製造す る際に、 台紙フィルムとして用いたフィルムであり、 必要に応じて、 水溶性高 分子化合物層から取り除いてもよい。 この樹脂フィルムの原料としては、 ポリ エステル、 ポリオレフイン、 及びナイロンから選ばれた少なくとも 1種の樹脂 が用いられる。 これらの樹脂からなる樹脂フィルムを用いることで、 粘着シー 卜との接着性が良好となるため好ましい。 また、 微生物培養器または微生物培 地は、 どのような形に切断して利用してもよい。
本発明に用いられる粘着シートに使用する粘着剤としては、 微生物の生育を 阻害しないものであればどのようなものでも用いることができるが、 作業性を 考えると粘着シートと透明フィルムとが再接着できる程度に、 弱い粘着力を有 する粘着剤が好ましい。 例えば、 ゴム系粘着剤やアクリル系粘着剤が好ましく 、 特に再剥離タイプ及び微粘着タイプのアク リル系粘着剤が好ましく用いられ る。 粘着シートに用いられる下地のシートとしては、 汎用の熱可塑性樹脂から なるシートが用いられるが、 粘着した透明フィルムを剥がしゃすくするために は、 ある程度の剛性が必要であり、 更に曲面等を拭き取るためには柔軟である ことが好ましレ、。 例えば、 厚さ 0 . 0 7〜0 . 5 mmのポリエステノレフィルム 、 白色ポリエステルフィルム、 ポリオレフイン系合成紙、 ポリオレフインラミ ネート紙が好ましく用いられる。 また、 粘着シートは、 どのような形状でもよ レ、が、 粘着シートと透明フィルムとの接着部分に隙間がなく接着できるように 、 微生物培養器または微生物培地の周囲に、 微生物培養器または微生物培地が 接着されていない部分を有することが必要である。
本発明に用いられる透明フィルムとしては、 微生物の生育を阻害しないもの であれば問題なく用いることができるが、 微生物培養器または微生物培地が粘 着シ一トと透明フィルムとの間に挿入されるため、 柔軟なフィルムが好ましく 用いられる。 例えば、 ポリオレフインフィルム、 ポリエステルフィルム、 ナイ ロンフィルム、 ポリ （塩化） ビニルフィルム等が好ましく使用でき、 更にフィ ルムの剥離性を向上させるために、 剥離剤処理を施した易剥離性フィルムも好 ましく用いることができる。 なお、 透明フィルムの開け閉め等の作業性を考慮 すると、 ポリエステルフィルムが好ましく、 ポリオレフインフィルムまたは易 剥離性ポリオレフインフィルムが特に好ましい。 また、 透明フィルムの厚さは 、 2 0〜 1 0 0 / mの範囲が柔軟で好ましい。 透明フィルムは、 どのような形 状であってもよいが、 雑菌の進入を防ぐために、 粘着シートと隙間が生じない ように接着できるように微生物培養器または微生物培地よりも大きいサイズと する必要がある。
シート状微生物培養器またはシ一ト状微生物培地の透明フィルムを開けると き、 透明フィルムを粘着シートから完全に剥離しても問題はなレ、が、 再度、 透 明フィルムで微生物培養器または微生物培地を覆い、 粘着シートと再接着を行 う必要があることから、 両者の接着の一部が剥離されずに残っていることが好 ましい。 ただし、 直接スタンプまたは拭き取り試験を行うときに、 シート状微 生物培養器またはシート状微生物培地から透明フィルムを取り除くことで作業 がしやすくなる場合には、 完全に取り除いて使用してもよい。 また、 微生物培 養器が接着されていない部分の粘着フィルムと透明フィルムとの接着を剥離で きる程度に、 両者の接着部分の粘着力を残りの部分よりも強くすることで、 一 部が接着したまま、 透明フィルムを開けることができ、 試料液等の添加作業後 に、 再度、 透明フィルムで接着することが容易であるため好ましい。 さらに、 透明フィルムと粘着シ一トとが完全に接着されておらず、 部分的に粘着力を強 くしているだけであれば、 必要に応じて透明フィルムを完全に取り除くことも 可能である。 なお、 粘着シートより大きなサイズの透明フィルムを用いると、 透明フィルムを開きやすくできるため、 非常に好ましい。
本発明で用いられる粘着シー卜に、 粘着力の強い部分を作る方法としては、 粘着シー卜 Z透明フィルム間より、 強い粘着力を有する別の粘着テープ等によ り粘着シートと透明フィルムとを接着する方法や、 粘着シートと透明フィルム の一端を両面テープにより接着する方法、 粘着シートに粘着力の異なる粘着剤 を塗布する方法、 透明フィルムに粘着シートノ透明フィルム間より、 更に強い 粘着力を有する粘着剤を塗布する方法、 粘着シートと透明フィルムの一端の重 なり合う部分に残りの部分の粘着シ一ト Z透明フィルム間より、 更に強い粘着 力を有する粘着剤を塗布する方法等が例示できる。 別の粘着テープで接着する ときには、 粘着シートと透明フィルムの重なりをずらし、 粘着シートの粘着剤 塗布面と透明フィルム上の微生物培養器また 微生物培地に接していない面、 または、 粘着シー卜の裏面と透明フィルム上の微生物培養器または微生物培地 に接した面に、 別の粘着シートを接着する方法が好ましく用いられる。 また、 粘着シ一トと透明フィルムとの重なりをずらさずに別の粘着テープを折り曲げ て、 粘着シ一卜の裏面と透明フィルム上の積層物に接していない面に接着する 方法を用いてもよい。 また、 別の粘着テープを折り曲げて、 粘着シートの裏面 と透明フィルム上の微生物培養器または微生物培地に接していない面に接着し たときには、 透明フィルムを開けたとき、 粘着シートの裏面と透明フィルムを 接着したまま完全に開くことができ便利である。 強い粘着力の部分は残りの部 分より、 粘着力が強ければよいが、 粘着力は 2倍以上であることが好ましい。 以下に、 本発明の微生物培養器、 シート状微生物培養器を例にして、 その作 製方法について説明する。
ポリエステル等のフィルムを台紙として、 その上に、 水溶性高分子化合物の 水溶液 （微生物の生育栄養成分を含有していてもよいし、 含まなくてもよい。 また、 発色剤、 選択剤等を含んでいてもよい） を塗布し、 乾燥または半乾燥状 態の水溶性高分子化合物層とする。 さらに、 必要に応じてこの水溶性高分子化 合物層上に、 水溶性高分子化合物の水溶液 （微生物の生育栄養成分を含有して いてもよいし、 含まなくてもよい。 また、 発色剤、 選択剤等を含んでいてもよ レ、） を塗布して 2層以上の多層構造としてもよい。 さらに該水溶性高分子化合 物層上に、 多孔質マトリックス層を積層して乾燥する。 なお、 水溶性高分子化 合物層を多層構造とするときは多孔質マトリックス層と接する最上層の水溶性 高分子化合物の目付は、 1〜2 0 g Zm2とすることが好ましい。 多孔質マト リックス層と水溶性高分子化合物層とを積層して乾燥する工程において、 水溶 性高分子化合物層が 1層の場合、 水溶性高分子化合物の水溶液が半乾燥状態で 、 多孔質マトリックス層を積層するか、 または、 乾燥状態であれば水または微 生物の生育栄養成分を含んだ水を加えて湿らせた多孔質マトリ ックス層を積層 する。 水溶性高分子化合物層が 2層以上とする場合、 更に水溶性高分子化合物 の水溶液を塗布して、 そのまま、 または半乾燥状態で多孔質マトリ ックス層を 積層するか、 または、 乾燥後、 水または微生物の生育栄養成分等を含んだ水を 加えて湿らせた多孔質マトリ ックス層を積層する。 また、 乾燥後、 さらに必要 に応じて多孔質マトリックス層上に水溶性物質を塗布し乾燥する工程を加えて もよレ、。 なお、 得られた微生物培養器から、 必要に応じて台紙を剥がしてもよ レ、。 次に、 得られた微生物培養器を必要に応じて適当な大きさに切断し、 粘着 剤を塗布したシートまたはフィルムに接着し、 透明フィルムを被せ、 袋ゃシャ ーレに入れる等の措置を施し、 エチレンォキサイ ドガス等により滅菌を施し、 シート状微生物培養器とする。 なお、 この微生物培養器に微生物の生育栄養成 分を含ませることで、 微生物培地とでき、 微生物培養器と同様に作製できる。 また、 シート状微生物培地も同様に作製できる。 また、 どの方法で作製した微 生物培養器や微生物培地であつても、 水溶性高分子化合物層と多孔質マトリッ クス層は少なくとも部分的には接着していることが好ましい。
具体的に、 本発明の微生物培地が、 3層の水溶性高分子化合物層から構成さ れる場合の作製方法について以下に説明する。 なお、 A層、 及びノまたは B層 に微生物の生育栄養成分が添加された状態を微生物培地といい、 これらに微生 物の生育栄養成分が添加されていない状態を微生物培養器という。 ポリエステ ル等の樹脂フィルム上に、 水溶性高分子化合物の水溶液を塗布，乾燥し、 水溶 性高分子化合物層 （C層） を作製する。 この層上に微生物の生育栄養成分、 発 色剤、 選択剤またはこれらの混合物等を含んだ水溶性高分子化合物の水溶液を 塗布 ·乾燥し、 水溶性高分子化合物層 （B層） を作製する。 更にこの層上に微 生物の生育栄養成分、 発色剤またはこれらの混合物等を含んだ水溶性高分子化 合物の水溶液を塗布し、 水溶性高分子化合物層 （A層） を作製し、 C層、 B層 、 A層からなる水溶性高分子化合物層の積層体とする。 この積層体上に多孔質 マトリックス層または培地成分を含ませた多孔質マトリックス層を積層して乾 燥する。 以上の工程により、 微生物培地が得られる。 このとき、 多孔質マトリ ックス層に接する水溶性高分子化合物層中の水溶性高分子化合物の目付は 1〜 2 0 g /m2であることが好ましい。 また、 乾燥後に、 ペプトン、 酵母エキス 、 肉エキス、 アミノ酸混合物糖類等の微生物の生育栄養成分または塩化ナトリ ゥム、 リン酸塩、 炭酸塩等の塩類の水溶液または栄養成分と塩類の混合水溶液 を多孔質マトリックス層表面に塗布し乾燥してもよい。 なお、 必要に応じて、 台紙フィルムとして用いた樹脂フィルムを乾燥後に取り除いてもよい。 次に、 微生物培地を適当な大きさに切断し、 これをより大きな粘着シートに接着する 。 このとき、 樹脂フィルムを付着したままで使用する場合には、 微生物培地の 樹脂フィルム側に粘着シートを接着し、 また樹脂フィルムを取り除いた場合に は、 水溶性高分子化合物層側に粘着シートを接着する。 更に、 この上から透明 フィルムを被せ、 微生物培地の周りの微生物培地が接着されていない粘着シー ト部分に透明フィルムを接着する。 このとき、 またはこの後、 透明フィルムと 粘着シートの一端をずらし、 粘着シートと透明フィルムとの間の粘着力より、 更に強い粘着力を有する粘着テープで接着するか、 または、 透明フィルムと粘 着シ一トの一端を粘着シートと透明フィルムとの間の粘着力より、 さらに強い 粘着力を有する両面テープで接着するか、 または、 透明フィルムまたは粘着シ ―トまたは両者の一端に残りの部分より、 さらに強い接着力を有する粘着剤を 塗布するなどの方法によって、 粘着シートと透明フィルムの一端を残りの部分 の粘着シー卜と透明フィルムとの間の粘着力より、 さらに強く してエチレンォ キサイ ドガス滅菌等の滅菌を施し、 シート状微生物培地を作製することができ る。
具体的に、 本発明の微生物培養器、 または微生物培地が、 2層の水溶性高分 子化合物層から構成される場合の作製方法について以下に説明する。 なお、 A 層、 及び または B層に微生物の生育栄養成分が添加された状態を微生物培地 といい、 これらに微生物の生育栄養成分が添加されていない状態を微生物培養 器という。 ポリエステル等の樹脂フィルム上に、 微生物の生育栄養成分、 発色 剤、 選択剤またはこれらの混合物等を含む水溶性高分子化合物の水溶液または 水溶性高分子化合物のみからなる水溶液を塗布し ·乾燥し、 水溶性高分子化合 物層 （B層） を作製する。 更に、 この層上に必要に応じて熱変成または熱分解 しゃすレ、微生物の生育栄養成分、 発色剤またはこれらの混合物を含む水溶性高 分子化合物の水溶液または水溶性高分子化合物のみからなる水溶液を塗布する ことで、 水溶性高分子化合物層 （A層） を作製し、 B層、 A層からなる水溶性 高分子化合物層の積層体とする。 この積層体上に多孔質マトリックス層または 微生物の生育栄養成分等を含ませた多孔質マトリックス層を積層して乾燥し、 微生物培養器または微生物培地とする。 なお、 多孔質マトリックス層に接する 水溶性高分子化合物層 （A層） 中の水溶性高分子化合物の目付が l〜2 0 g / m2となるようにすることが非常に好ましレ、。 微生物培養器または微生物培地 の乾燥後、 必要に応じて、 台紙として用いた樹脂フィルムを取り除いてもよい 。 次に、 微生物培養器または微生物培地を適当な大きさに切断し、 これをより 大きな粘着シートに接着する。 このとき、 樹脂フィルムを付着したままで使用 する場合には、 微生物培養器または微生物培地の樹脂フィルム側に粘着シート を接着し、 樹脂フィルムを取り除いて使用する場合には、 水溶性高分子化合物 層 （B層） 側に粘着シートを接着する。 更に、 この上から透明フィルムを被せ 、 微生物培養器または微生物培地の周りの微生物培地が接着されていない粘着 シート部分に透明フィルムを接着する。 このとき、 またはこの後、 透明フィル ムと粘着シ一トの一端をずらし、 粘着シー卜と透明フィルムとの間の粘着力よ り、 更に強い粘着力を有する粘着テープを接着するか、 または、 透明フィルム と粘着シートの一端を粘着シートと透明フィルムとの間の粘着力より、 さらに 強い粘着力の両面テープで接着するか、 または、 透明フィルムまたは粘着シー トまたは両者の一端に残りの部分より、 さらに強い接着力の粘着剤を塗布する などの方法によって、 粘着シートと透明フィルムの一端を残りの部分の粘着シ 一卜と透明フィルム間の粘着力より、 さらに強くしてエチレンォキサイ ドガス 滅菌等の滅菌を施し、 本発明のシート状微生物培養器または、 シート状微生物 培地とする。
いかなる方法で作製したシート状微生物培養器またはシート状微生物培地で あっても、 水溶性高分子化合物層間及び樹脂フイルムを取り除かない場合には 、 水溶性高分子化合物層と樹脂フィルムとの は密着していることが好ましく 、 水溶性高分子化合物層と多孔質マトリックス層は少なくとも一部が接着して いることが好ましい。 また、 透明フィルムと粘着シートとの接着された部分に は隙間のないことが好ましい。
本発明のシート状微生物培地の使用例を以下に示す。
①食品等の微生物検査を行う場合は、 滅菌済袋等に食品と滅菌生理食塩水また は滅菌水等を加えストマッカ一等でホモジナイズし、 得られた懸濁液を適宜希 釈して試料液として用いる。 また、 食品製造環境等の環境微生物検査を行う場 合には、 製造現場等を滅菌ガーゼや滅菌綿棒等により拭き取り、 拭き取ったガ 一ゼ等を滅菌生理食塩水または滅菌水等に懸濁し懸濁液を作製し、 さらに適宜 希釈して試料液として用いる。 本発明のシート状微生物培養器またはシート状 微生物培地の透明フィルムを開け （このとき、 粘着力を強く した部分は剥離さ せずに残しておくことが好ましい） 、 多孔質マトリックス層上から、 試料液を 加え、 透明フィルムを被せて密封し、 微生物培地を適切な温度で一定時間、 保 温して培養を行い、 微生物生育の有無及びコ口ニー数等の測定を行う。
②滅菌生理食塩水または滅菌水等を本発明のシート状微生物培地に加え、 該シ 一ト状微生物培地により検査対象面を直接スタンプするか、 検査対象面を直接 拭き取り、 そのまま、 または再度、 滅菌生理食塩水または滅菌水等を加えた後 、 透明フィルム （プラスチック製等のフィルム） を被せ、 水分の蒸発を防ぐ処 置を施して培養し、 微生物生育の有無及びコ口ニー数等の測定を行う。
③湿った面を検査する場合には、 シート状微生物培地をあらかじめ湿らせる必 要はなく、 そのまま拭き取る力、、 直接、 検査対象にスタンプし、 透明フィルム を被せて培養するか、 または、 滅菌生理食塩水または滅菌水等を加えた後、 透 明フィルムを被せ培養し、 微生物生育の有無及びコ口ニー数等の測定を行う。 ④シート状微生物培地に、 滅菌生理食塩水または滅菌水等を加えた後、 そのま ま放置し落下菌を捕集し、 そのまま、 または再度、 滅菌生理食塩水または滅菌 水等を加えた後、 透明フィルムを被せ、 培養し、 微生物生育の有無及びコロニ 一数等の測定を行う。 このように通常の食品や環境中の微生物検査に加え、 直 接、 検査対象に接触する力 または、 検査対象を拭き取る方法により微生物検 査ができることが大きな特徴である。 直接接触または直接拭き取って検査する ときは検查対象が曲面や多少の凹凸があるものでも検査できる。 なお、 シート 状微生物培養器を用いるときは滅菌生理食塩水または滅菌水の代わりに微生物 の生育栄養成分等を含んだ滅菌生理食塩水または滅菌水を使用する。 実施例
次に実施例をあげて本発明を詳細に説明するが、 本発明はこれら実施例に限 定されるものではない。 なお、 各例において用いた測定方法を以下に示す。 (生育菌数）
微生物培地上に生成したコロニー数を目視によりカウントし数値を求めた。 (通気度）
多孔質マトリックス層を J I S L 19 12の医療用不織布試験方法フラ ジール形法に準じて測定した値 （単位： c m/s e c) 。
(目付）
20 cmX 20 cmのサイズに切断した多孔質マトリックス層の重量を測定 後、 lm2当たりの重量に変換した値 （単位： g/m2) 。
(水溶性高分子化合物層中の水溶性高分子化合物の目付）
10 cmX 10 cmのサイズに切断した水溶性高分子化合物層を乾燥し、 そ の重量を測定後、 l m2当たりの重量に変換した値 （単位： g/m2) 。 微生物 の生育栄養成分等を含む水溶性高分子化合物層では比例計算により栄養成分等 を除した値。 多層構造としたときは、 各層を塗布乾燥後、 重量を測定し、 各ェ 程毎の差を求めた。
(ポリビュルアルコールの験化度、 重合度）
J I S K 6726- 1994のポリ ビュルアルコール試験方法に準じて 測定を行った。
(厚み） シート及びフィルムの厚みは、 （株） 東洋精機製作所テクネスメーター B 1 により測定を行った。
(粘着力）
テンシロン型引張試験器を用いて、 J I S K 6854の接着剤のはく離 接着強さ試験方法に準拠して、 接着強さを測定し、 これを粘着力とした。
実施例 1
水 0. 75 Lにポリビニルアルコール （験化度 89%、 重合度 1 700、 分 子量約 83000) 45 g、 肉エキス 1. 3 g、 ペプトン 4 g、 リン酸二カリ ゥム 1. 3 gを加え加熱 '溶解後、 厚さ 20 μπι、 サイズ 0. 5mX lmのポ リエステルフィルム （台紙として用いた樹脂フィルム） 上に、 すべて塗布し、 1 10°Cで 1 5分間乾燥し、 ポリビュルアルコールフィルム （水溶性高分子化 合物層の B層） を作製した。 さらに、 この B層上に、 ポリビュルアルコール （ 験化度 89%、 重合度 1 700、 分子量約 83000) 58、 肉ェキス0. 1 25 g、 ペプトン 0. 4 g、 リン酸二カリウム 0. 125 g、 塩ィ匕 2， 3， 5 —トリフエニルテトラゾリゥム 5mgを水 10 OmLに溶解した溶液をすベて 塗布し、 この上に、 目付 65 gZm2、 通気度 12 cmZs e cのナイロンメ ルトブ口一不織布 （多孔質マトリ ックス層） を積層し、 100°Cで 30秒間乾 燥した。 なお、 ナイロンメルトブロー不織布に接するポリビュルアルコールフ イルム （水溶性高分子化合物層の A層） 中の水溶性高分子化合物の目付は、 9 . 8 g/m2であった。 さらにこれを直径 5 Ommの円形に切断し、 ポリエス テルフィルム （台紙） 側を、 厚さ 100 μπι、 サイズ 7 OmmX 8 Ommのポ リエステル粘着フィルムのほぼ中央に接着した後、 さらにその上に、 厚さ 0. 06 mm, サイズ 7 OmmX 85mmのポリプロピレンフィルム （透明フィル ム） を被せて、 エチレンオキサイ ドガス滅菌を行い、 シ一ト状微生物培地を作 製し、 これを一般生菌用培地として用いた。
食肉、 カツト野菜、 総菜などの各種食品 10 gを滅菌済袋に入れ、 100m Lの滅菌生理食塩水を加えてストマッカ一でホモジナイズし、 滅菌生理食塩水 で 1 0倍希釈列を作製し、 試料液を作製した。 一般生菌用培地のポリプロピレ ンフィルムを開いて、 試料液 l mLを加えた後、 再度ポリプロピレンフィルム で被せて、 3 5でで 48時間培養した。 同時に試料液 1 m Lを滅菌済みべトリ 皿に加え、 滅菌後 45 °Cに保っておいた標準寒天培地を加え混釈し、 35°Cで 48時間培養して、 両者の生育菌数を測定比較した。 第 1図に示すように相関 係数 0. 9 9 9の良好な相関性を示した。 なお、 ナイロンメルトブロー不織布 の代わりに、 レーヨン、 コッ トン、 セルロースからなる目付 6 5 gZm2 通 気度 1 0 c m/s e cの不織布を積層して、 微生物培地を作製し、 同様に微生 物検查を行っても、 良好に微生物の培養ができる。
また、 Escherichia coli IF013500株、 Bacillus subtilis IF03134株、 Stap hylococcus aureus IF013276株、 tnterobacter cloacae JCM1232抹、 Providen cia alcalifaciens IF012931株、 Klebsiella oxytoca JCM1665株を普通ブイョ ン培地で培養後、 滅菌生理食塩水で 1 04〜1 08 1111^となるように希釈して 、 作製した一般生菌用培地にその 1 mLを加え、 35°C、 48時間培養した。 どの菌株も 1 04ZmLでは赤色スポッ卜が一様に分散し、 1 05ZmL以上の 濃度では不織布表面が一様に赤色となった。
比較例 1
水 0. 75 Lにポリビュルアルコール （験化度 8 9%、 重合度 1 700、 分 子量約 8 3000) 45 g、 肉エキス 1. 3 g、 ぺプトン 4 g、 リン酸ニ力リ ゥム 1. 3 gを加え加熱 ·溶解後、 厚さ 20 m、 サイズが 0. 5mX lmの ポリエステルフィルム （台紙として用いた樹脂フィルム） 上に、 得られた溶液 をすベて塗布し、 1 1 0°Cで 1 5分間乾燥し、 ポリビュルアルコールフィルム (水溶性高分子化合物層） を作製した。 さらに、 このフィルム上に、 ポリビニ ルアルコール （験化度 8 9 %、 重合度 1 700、 分子量約 8 3000) 5 g、 肉エキス 0. 1 2 5 g、 ペプトン 0. 4 g、 リン酸二カリウム 0. 1 2 5 g、 塩化 2， 3， 5—トリフエニルテトラゾリゥム 5mgを水 1 0 OmLに溶解し て得た溶液をすベて塗布し、 この上に、 目付 1 05 g/m 通気度 6 cm/ s e cのナイロンメルトブロー不織布 （多孔質マトリ ックス層） を積層し、 1 00。じで 30秒間乾燥した。 なお、 ナイロンメルトブロー不織布に接するポリ ビニルアルコールフィルム （水溶性高分子化合物層） 中の水溶性高分子化合物 の目付は、 9. 8 gZm2であった。 これを直径 5 Ommの円形に切断し、 ポ リエステルフィルム （台紙） 側を、 厚さ 1 00 m、 サイズ 70mmX 80m mのポリエステル粘着フィルムのほぼ中央に接着した後、 さらにその上に、 厚 さ 0. 06mm、 サイズ 70 mm X 8 5 mmのポリプロピレンフィルム （透明 フィルム） を被せ、 エチレンオキサイ ドガス滅菌を行い、 シート状微生物培地 を作製し、 これを一般生菌用培地として用いた。
実施例 1と同様に、 食肉、 カツト野菜、 総菜などの各種食品 1 0 gを滅菌済 袋に入れ、 1 0 OmLの滅菌生理食塩水を加えてストマッカ一でホモジナイズ し、 滅菌生理食塩水で 1 0倍希釈列を作製し、 試料液を作製した。 一般生菌用 培地のポリプロピレンフィルムを開いて、 試料液 l mLを加えた後、 再度ポリ プロピレンフィルムで被せて、 3 5°Cで 4 8時間培養した。 同時に 1 mLを滅 菌済みべトリ皿に加え、 滅菌後 4 5 °Cに保っておいた標準寒天培地を加え混釈 し、 35 °Cで 48時間培養して、 両者の生育菌数を測定比較した。 第 2図に示 すように相関係数 0. 94 9の比較的良好な相関性を示したが、 標準寒天に比 ベ生育菌数が 1桁程度低い試料が認められた。
また、 Escherichia coli IF013500、 Bacillus subtilis IF03134株、 Staphy lococcus aureus IF01327り^^、 Enterobacter cloacae JCM1232株、 Providenci a alcalifaciens IF012931株、 Klebsiella oxytoca JCM1665株を普通ブイヨン 培地で培養後、 滅菌生理食塩水で 1 04〜 1 08ZmLとなるように希釈して、 その 1 mLを作製した一般生菌用培地に加え、 3 5°C、 48時間培養した。 Es chenchia coli、 Enterobacter cloacae Bacillus subtilis、 Klebsiella oxytocaは、 1 06 /m L以下のときに発色は認められたが、 1 07/mL以上 では発色が確認できなかった。 Staphylococcus aureusは 1 06/mL以上で、 Providencia alcalifaciensはすべての濃度で発色を確認できなかった。 これ は、 溶解した水溶性高分子化合物層が完全に不織布の表面まで達しないために 、 微生物が生育する付近への生育栄養成分の供給が遅く、 微生物の生育が遅い こと、 及びコロニーの観察を不織布が阻害していることが原因と考えられる。 実施例 2
水 0. 5 Lにポリビュルアルコール （験化度 89%、 重合度 1 700、 分子 量約 83000) 30 gを加え加熱 '溶解後、 厚さ 20 X m、 サイズ 0. 5 m X 1 mのポリエステルフィルム （台紙として用いた樹脂フィルム） 上に、 得ら れた溶液をすベて塗布し、 120°Cで 5分間乾燥し、 ポリビニルアルコールフ イルム （水溶性高分子化合物層の C層） を作製した。 さらに、 この C層上に、 ポリビュルアルコール （験化度 89%、 重合度 1700、 分子量約 83000 ) 1 5 g、 ペプトン 3. 75 g、 リン酸ニ力リウム 1 g、 乳糖 0. 2 g、 デォ キシコール酸ナトリウム 0. 25 gを水 25 OmLに溶解して得た溶液をすベ て塗布し、 1 10°C、 7分間乾燥し、 ポリビニルアルコールフィルム （水溶性 高分子化合物層の B層） とした。 さらに、 この B層上に、 ポリビニルアルコー ノレ （験化度 89%、 重合度 1 700、 分子量約 83000) 4 g、 ぺプトン 1 . 25 g、 リン酸二カリウム 0. 25 g、 乳糖 0. 05 g、 5—ブロモー 4— クロロー 3—インドリル一 ]3— D—ガラク トピラノシド 251118を水100m Lに溶解して得た溶液をすベて塗布し、 この上に、 目付 65 gZm2、 通気度 10 cmZs e cのナイロンメノレトブロー不織布 （多孔質マトリックス層） を 積層し、 100でで 30秒間乾燥した。 なお、 ナイロンメルトブロー不織布に 接するポリビニルアルコールフィルム （水溶性高分子化合物層の A層） 中の水 溶性高分子化合物の目付は 7. 8 gZm2であった。 これを直径 5 Ommの円 形に切断し、 ポリエステルフィルム （台紙） 側を、 厚さ 100 μπι、 サイズ 7 OmmX 8 Ommのポリエステル粘着フィルムのほぼ中央に接着した後、 厚さ 0. 06 mm, サイズ 70 mm X 85 mmのポリプロピレンフィルム （透明フ イルム） を被せ、 エチレンオキサイ ドガス滅菌を行い、 大腸菌群用培地を作製 した。
Escherichia coli IF013500株、 Klebsiella oxytoca JCM1665株、 Klebsiell a pneumoniae JCM1662株、 Citrobacter freundii IF012681抹、 Serratia rubi daea IF012973株、 食品分離株 1、 2を普通ブイヨン培地で培養し、 滅菌生理 食塩水で 1 0〜500 c f uZmLとなるように希釈した。 希釈した菌液 lm Lを作製した大腸菌群用培地に加え、 36°Cで培養した。 すべての菌株が約 1 6時間の培養で充分に確認できる青色スポットを形成した。
比較例 2
水 0. 7 5 Lにポリビニルアルコール （験化度 8 9 %、 重合度 1 700、 分 子量約 8 3000) 45 g、 ペプトン 1 0 g、 リン酸二カリウム 1. 2 g、 乳 糖 0. 25 g、 デォキシコール酸ナトリウム 0. 3 gを加え加熱 '溶解後、 厚 さ 20 μπι、 サイズ 0. 5mX 1 mのポリエステルフィルム （台紙として用い た樹脂フィルム） 上に、 すべて塗布し、 1 1 0°Cで、 20分間乾燥し、 ポリ ビ ニルアルコールフィルム （水溶性高分子化合物層） を作製した。 さらに、 この フィルム上に、 ポリビニルアルコール （験化度 8 9%、 重合度 1 700、 分子 量約 8 3000) 4 g、 ペプトン 0. 5 g、 リン酸二カリウム 0. l g、 乳糖 0. 0 25 g、 5—ブロモ一 4—クロ口一 3—イン ドリノレ一 3—D—ガラク ト ビラノシド 2 5m gを水 1 0 OmLに溶解して得た溶液をすベて塗布し、 この 上に、 目付 6 5 g/m2、 通気度 1 0 c / s e cのナイ口ンメノレトブロー不 織布を積層し、 1 00°Cで 30秒間乾燥した。 なお、 ナイロンメルトブロー不 織布に接するポリビニルアルコールフィルム （水溶性高分子化合物層） 中の水 溶性高分子化合物の目付は 7. 8 gZm2であった。 これを直径 50mmの円 形に切断し、 ポリエステルフィルム （台紙） 側を、 厚さ 1 00 μπι、 70mm X 80mmのポリエステル粘着フィルムのほぼ中央に接着した後、 厚さ 0. 0 6 mm, 70 mm X 8 5 mmのポリプロピレンフィルム （透明フィルム） を被 せ、 エチレンオキサイ ドガス滅菌を行い、 大腸菌群用培地を作製した。
Escherichia coli IFO13500株、 Klebsiella oxytoca JTCM1665株、 Klebsiell a pneumoniae JCM1662株、 Citrobacter freundii IF012681株、 Serratia rubi daea IF012973株、 食品分離株 1、 2を普通ブイョン培地で培養し、 滅菌生理 食塩水で 1 0〜 500 c f uZmLとなるように希釈した。 希釈した菌液 1 m Lを作製した大腸菌群用培地に加え、 36 °Cで培養した。 充分に確認できる青 色スポットを形成するまでに、 E.coli IF013500株、 食品分離株 1で約 1 6時 間、 K. oxytoca JCM1665株、 S. rubidaea IF012973株で約 20時間、 K. pneumoni ae JCM1662株、 C. freundii IF012681株で約 2 5時間、 食品分離株 2では約 3 0時間を要した。
実施例 3
水 0. 5 Lにポリビュルアルコール （験化度 8 9%、 重合度 1 700、 分子 量 83000) 30 gを加え加熱 ·溶解後、 厚さ 20 μ m、 サイズ 0. 5mX lmのポリエステルフィルム （台紙として用いた樹脂フィルム） 上に、 得られ た溶液をすベて塗布し、 1 20°Cで、 5分間乾燥し、 ポリビュルアルコールフ イルム （水溶性高分子化合物層の C層） を作製した。 さらにこの C層上に、 水 0. 25 Lにポリビュルアルコール （験化度 8 9%、 重合度 1 700、 分子量 8 3000) 1 5 g、 ペプトン 3. 75 g、 リン酸二カリウム 1 g、 乳糖 0. 2 g、 デォキシコール酸ナトリウム 0. 2 5 gを溶解して得た溶液をすベて塗 布し、 1 1 0°Cで、 7分間乾燥し、 ポリビュルアルコールフィルム （水溶性高 分子化合物層の B層） を作製した。 さらにこの B層上に、 ポリビニルアルコー ル （験化度 8 9%、 重合度 1 700、 分子量 8 3000) 5 g、 ぺプトン 1. 25 g、 リン酸ニ力リウム 0. 25 g、 乳糖 0. 05 gを、 発色剤として、 5 —ブロモ一 4—クロ口一 3—インドリル一 —ガラク トピラノシド 25m gを水 1 0 OmLに溶解して得た溶液をすベて塗布し、 この上に、 目付 65 g /m 通気度 1 2 c s e cナイロンメルトブロー不織布 （多孔質マトリ ックス層） を積層し、 1 00°Cで、 30秒間乾燥し、 微生物培地を得た。 なお 、 ナイロンメルトブロー不織布に接するポリビニルアルコールフィルムが水溶 性高分子化合物層の A層に相当する。 これを ϋ:径 50 mmの円形に切断した。 サイズ 8 O mm X 9 O mm、 厚さ 1 0 0 μ mの白色ポリエステルに、 アクリル 系微粘着タイプ粘着剤 （リンテック （株） 製） を塗布し、 これを粘着シートと して用い、 ほぼ中央に、 得られた円形の微生物培地を接着した後、 厚さ 0 . 0 6 mm, サイズ 8 O mm X 9 O mmのポリプロピレンフィルム （透明フィルム ) を 9 O mm方向側に 5 mmずらして粘着シートに被せ、 粘着テープとして 9 mm巾バックシーリングテープ （ （株） 共和製） をずらした部分を覆うように 接着し、 エチレンオキサイ ドガス滅菌を行い、 大腸菌群用シート状微生物培地 を作製した。 得られたシート状微生物培地は、 非常にコンパク トであった。 シート状微生物培地のバックシーリングテープで接着した一端の反対側から ポリプロピレンフィルム （透明フィルム） を開けたとき、 ポリプロピレンフィ ルムの開きは、 バックシーリングテープで接着した 5 mmの部分で一旦、 止ま り、 ポリプロピレンフィルムと粘着シートは、 部分的に接着を残した状態で微 生物の採取等の操作が行えた。
また、 シート状微生物培地のバックシ一リングテープで接着した一端の反対 側からポリプロピレンフィルム （透明フィルム） を開け、 廃棄されていた食品 を滅菌生理食塩水で懸濁し、 更にこの懸濁液を適宜希釈して得た試料液を 1 m L加え、 ポリプロピレンフィルムを被せたところと、 ポリプロピレンフィルム は容易に粘着シー卜と再接着できた。
シート状微生物培地のバックシーリングテープで接着した一端の反対側から ポリプロピレンフィルム （透明フィルム） を開け、 一旦、 剥離が止まる位置よ り、 更に強くポリプロピレンフィルムを開くと、 ポリプロピレンフィルムにバ ックシーリングテープが接着した状態で、 粘着シー卜から取り除くことができ た。 多孔質マトリ ックス層上から滅菌生理食塩水を 0 . 4 m L加えた後、 まな 板を拭き取り、 滅菌生理食塩水を 0 . 6 m L追加して、 ポリプロピレンフィル ムを再接着したが、 バックシーリングテープは変形し、 再接着ができなかった 。 しカゝし、 ポリプロピレンフィルムは粘着シートとの接着部分に隙間を生じな い状態で再接着ができた。 なお、 3 6 °Cで培養を行ったところ、 大腸菌群が存 在したために、 青色のスポットが現れ、 微生物培地として良好に使用できるこ とがわカゝつた。 産業上の利用可能性
本発明の微生物培養器、 及び微生物培地は、 少なくとも 1層の水溶性高分子 化合物層と、 多孔質マトリ ックス層とからなり、 水溶性高分子化合物層上に、 多孔質マトリ ックス層が積層された形態をとり、 多孔質マトリックス層は、 目 付 4 0〜： L 0 0 g Zm2、 通気度 7〜2 4 c m/ s e cとなる構成であること から、 培養前の培地の準備が要らず、 食品や環境中の微生物検査が簡便に行え る。 また、 通常の食品や環境検査に加え、 曲面や多少の凹凸のある面でも直接 検査対象にスタンプまたは拭き取って検査することもできる。 さらに、 試料液 中の微生物は、 微生物培地表面に一様に分散し、 微生物数が非常に多いときで も微生物の生育が確認できる。 また、 微生物培地が薄いため、 保存や培養に場 所をとらず、 廃棄物の体積も通常の微生物培地に比べ大幅に減少できる。 また 、 水溶性高分子化合物層が、 2層以上からなり、 多孔質マトリ ックス層に接す る水溶性高分子化合物層中の水溶性高分子化合物の目付を、 1〜2 0 g Zm2 とすることで、 熱により劣化しやすい成分を水溶性高分子化合物層に添加する ことが可能となった。 また、 水溶性高分子化合物層が、 2層以上からなる場合 に、 多孔質マトリックス層から最も離れた水溶性高分子化合物層に微生物の生 育栄養成分を添加させないことで、 微生物に利用されていなかった微生物の生 育栄養成分等の添加量を減少でき、 さらに、 生育栄養成分の利用効率が高くで き、 作製工程も効率化できる。
本発明のシ一ト状微生物培養器及びシート状微生物培地は、 食品や環境の微 生物検査が簡便に行え、 更に、 曲面や多少の凹凸のある面でも直接検査対象に スタンプまたは拭き取って検査することができる。 カバ一フィルムの一部を接 着したままでも、 完全に剥がしても使えるため、 用途に合わせて使いやすい方 法を選択でき、 様々な検査対象 ·用途の微生物検査が簡単容易に行える。 また 、 本発明のシート状微生物培養器及びシート状微生物培地は、 薄いシート状で あることから、 培養に場所をとらず、 また、 廃棄物も通常の微生物検査に比べ 大幅に減少できる。

Claims

請 求 の 範 囲
1 . 目付が 4 0〜1 0 0 g Zm2、 通気度が 7〜2 4 c m/ s e cである多孔 質マトリ ックス層と、 少なくとも 1層の水溶性高分子化合物層とが、 積層され た微生物培養器。
2 . 水溶性高分子化合物層が、 少なくとも 2層からなることを特徴とする請求 項 1項記載の微生物培養器。
3 . 水溶性高分子化合物層を多孔質マトリックス層に近い順にアルファべット 順の記号を付けるとき、 水溶性高分子化合物層が、 A層、 及び B層の 2層を積 層して構成されており、 A層は水溶性高分子化合物を含む層であり、 B層は水 溶性高分子化合物を含む層または水溶性高分子化合物からなる層であることを 特徴とする請求項 1または請求項 2記載の微生物培養器。
4 . 水溶性高分子化合物層を多孔質マトリックス層に近い順にアルファべット 順の記号を付けるとき、 水溶性高分子化合物層が、 A層、 B層、 及び C層の 3 層を積層して構成されており、 A層、 及び B層は水溶性高分子化合物を含む層 であり、 C層は水溶性高分子化合物からなる層であることを特徴とする請求項 1または請求項 2記載の微生物培養器。
5 . 多孔質マトリックス層に接する水溶性高分子化合物層中の水溶性高分子化 合物が、 1〜2 0 g Zm2の目付であることを特徴とする請求項 1〜4のいず れか 1項記載の微生物培養器。
6 . 水溶性高分子化合物が、 験化度 7 5〜 9 5 %、 分子量 2 5 0 0 0〜 2 5 0 0 0 0のポリビュルアルコールである請求項 1〜5のいずれか 1項記載の微生 物培養器。
7 . 多孔質マトリックス層が、 ナイロン、 レーヨン、 コッ トン、 及びセルロー スからなる群から選ばれた 1種以上の親水性繊維からなる不織布である請求項
1〜 6のいずれか 1項記載の微生物培養器。
8 . 多孔質マトリ ックス層が、 ナイロンメルトブロー不織布である請求項 7記 載の微生物培養器。
9 . 多孔質マトリックス層が、 その表面に水溶性物質が塗布されていることを 特徴とする請求項 1〜 8のいずれか 1項記載の微生物培養器。
1 0 . 請求項 1〜9のいずれか 1項記載の微生物培養器が、 その微生物培養器 より大きな粘着シー卜の中心部に多孔質マトリックス層が上になるように接着 され、 その上に前記微生物培養器より大きな透明フィルムが多孔質マトリック ス層に接し、 かつ前記微生物培養器と中心部を合わせるように被せられ、 この 透明フィルムの前記微生物培養器からはみ出している部分が粘着シ一トの前記 微生物培養器が接着されていない部分と接着されていることを特徴とするシー ト状微生物培養器。
1 1 . 粘着シートが、 透明フィルムと接着する粘着シートの粘着力が部分的に 高いことを特徴とする請求項 1 0記載のシート状微生物培養器。
1 2 . 粘着シートが、 粘着シートより強い粘着力を有する別の粘着テープによ り、 部分的に透明フィルムと接着されていることを特徴とする請求項 1 0記載 のシート状微生物培養器。
1 3 . 粘着シートが、 その片面にアクリル系粘着剤またはゴム系粘着剤が塗布 された、 厚さ 0 . 0 7〜0 . 5 mmのポリエステルフィルム、 白色ポリエステ ルフィルム、 ポリオレフイン系合成紙、 及びポリオレフインラミネート紙から 選ばれた 1種であることを特徴とする請求項 1 0〜1 2のいずれか 1項記載の シート状微生物培養器。
1 4 . 透明フィルムが、 ポリオレフインフィルムまたは易剥離性ポリオレフィ ンフィルムである請求項 1 0〜1 3のいずれか 1項記載のシート状微生物培養 器。
1 5 . 透明フィルムが、 厚さ 2 0〜1 0 0 μ πιであることを特徴とする請求項 1 0〜 1 4のいずれか 1項記載のシート状微生物培養器。
1 6 . 請求項 1〜 9のいずれか 1項記載の微生物培養器に、 微生物の生育栄養 成分、 発色剤、 及び選択剤から選ばれた少なくとも 1種が含まれることを特徴 とする微生物培地。
1 7 . 請求項 3または請求項 4記載の微生物培養器を構成する A層、 及び/ま たは B層に、 微生物の生育栄養成分、 発色剤、 及び選択剤から選ばれた少なく とも 1種が含まれることを特徴とする微生物培地。
1 8 . 請求項 9記載の水溶性物質に、 微生物の生育栄養成分、 塩類、 またはこ れらの混合物が含有させていることを特徴とする微生物培地。
1 9 . 請求項 1〜 9のいずれか 1項記載の微生物培養器を構成する水溶性高分 子化合物層、 及びノまたは多孔質マトリックス層に、 少なくとも 1種の微生物 の生育栄養成分が含まれることを特徴とする微生物培地。
2 0 . 請求項 1 0〜 1 5のいずれか 1項記載のシート状微生物培養器に、 微生 物の生育栄養成分、 発色剤、 及び選択剤から選ばれた少なくとも 1種が含まれ ることを特徴とするシート状微生物培地。
2 1 . 請求項 1 0〜1 5のいずれか 1項記載のシート状微生物培養器を構成す る水溶性高分子化合物層、 及び または多孔質マトリックス層に、 少なくとも 1種の微生物の生育栄養成分が含まれることを特徴とするシート状微生物培地
PCT/JP2000/008923 1999-12-17 2000-12-15 Incubateur de micro-organismes et milieu de culture de micro-organismes comprenant ledit incubateur WO2001044437A1 (fr)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2001545515A JP4396078B2 (ja) 1999-12-17 2000-12-15 微生物培養器、及びこれを用いた微生物培地
US10/938,296 US7312072B2 (en) 1999-12-17 2004-09-10 Microorganism culture device and microorganism culture medium comprising the same
US11/940,683 US8357498B2 (en) 1999-12-17 2007-11-15 Microorganism culture device and microorganism culture medium comprising the same

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP35948499 1999-12-17
JP11/359485 1999-12-17
JP11/359484 1999-12-17
JP35948599 1999-12-17

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US10168250 A-371-Of-International 2000-12-15
US10/938,296 Continuation US7312072B2 (en) 1999-12-17 2004-09-10 Microorganism culture device and microorganism culture medium comprising the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2001044437A1 true WO2001044437A1 (fr) 2001-06-21

Family

ID=26580977

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2000/008923 WO2001044437A1 (fr) 1999-12-17 2000-12-15 Incubateur de micro-organismes et milieu de culture de micro-organismes comprenant ledit incubateur

Country Status (3)

Country Link
US (3) US20020192742A1 (ja)
JP (1) JP4396078B2 (ja)
WO (1) WO2001044437A1 (ja)

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005287452A (ja) * 2004-04-02 2005-10-20 Chisso Corp 微生物の培養・検出法および微生物検出用発色試薬。
WO2011132480A1 (ja) 2010-04-19 2011-10-27 Jnc株式会社 微生物検出用テトラゾリウム化合物、微生物検出用試薬および微生物の検出方法
JP2012200152A (ja) * 2011-03-23 2012-10-22 Futamura Chemical Co Ltd 液体培地用足場部材
WO2014054494A1 (ja) 2012-10-04 2014-04-10 Jnc株式会社 微生物培養器、微生物検査キット、透析液の検査方法、微生物の培養方法、微生物の検査方法、及び微生物培養器の製造方法
JP2014221007A (ja) * 2013-05-13 2014-11-27 大日本印刷株式会社 微生物培養シート
JP2016082951A (ja) * 2014-10-29 2016-05-19 Jnc株式会社 微生物培養器材及び微生物検出法
US9695456B2 (en) 2014-11-14 2017-07-04 Jnc Corporation Microorganism testing apparatus, method and program
JP2017127197A (ja) * 2016-01-18 2017-07-27 Jnc株式会社 腸球菌検出用培地及び腸球菌検出法
US10563167B2 (en) 2010-01-29 2020-02-18 Dai Nippon Printing Co., Ltd. Microorganism culture sheet
JP2020517292A (ja) * 2017-04-26 2020-06-18 ビオメリューＢｉｏｍｅｒｉｅｕｘ 脱水多糖ヒドロゲルのシートを備える微生物培養デバイス
US11124757B2 (en) 2009-07-14 2021-09-21 Kikkoman Corporation Microorganism culture sheet and manufacturing method therefor

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7122338B2 (en) * 1995-11-14 2006-10-17 Biocontrol Systems, Inc. Method for quantification of biological material in a sample
AUPQ265899A0 (en) * 1999-09-03 1999-09-30 Genetic Solutions Pty Ltd Sampling system
IL139593A (en) * 2000-11-09 2010-12-30 Biogem Optical Ltd Method for the detection of viable microorganisms
US20050042741A1 (en) * 2002-02-05 2005-02-24 Guritza Dennis A. Stenoprophiluric generation and isolation of chemical products
DE102004043446B4 (de) * 2004-09-06 2006-06-08 Frantschach Industrial Packaging Deutschland Gmbh Ventilsack
EP1831375B1 (en) * 2004-12-23 2014-07-16 Novozymes Biopharma DK A/S Gene expression technique
FR2885912B1 (fr) * 2005-05-18 2007-07-13 Biomerieux Sa Milieu reactionnel pour les bacteries vibrio
EP1932892B1 (en) * 2006-12-13 2009-10-28 Scapa France Wire harnessing tape
AU2008275188B2 (en) 2007-07-09 2012-01-19 3M Innovative Properties Company Modular system and method for detecting microorganisms
EP2045303A1 (en) * 2007-10-05 2009-04-08 Scapa France Abrasion-resistant adhesive tape
ES2376559B1 (es) 2011-04-11 2013-01-24 Universidad Pública de Navarra Dispositivo de monitorización de condiciones de tiempo y temperatura.
CZ304336B6 (cs) * 2012-04-17 2014-03-12 Biologické Centrum Av Čr, V.V.I. Ústav Půdní Biologie Způsob monitorování infekčního tlaku moru včelího plodu, zařízení k provádění tohoto způsobu, použití testovací karty pro monitorování infekčního tlaku moru včelího plodu
EP2895595B1 (en) * 2012-09-14 2018-11-28 Charm Sciences, Inc. Culture medium method and device
FR3016636B1 (fr) * 2014-01-20 2016-01-01 Biomerieux Sa Dispositif pour la culture de microorganismes et procede associe
CN114990099A (zh) 2015-05-11 2022-09-02 迈彼欧提克斯制药有限公司 用于使益生菌在使细菌于肠道中定植用途的固体颗粒上生长成益生菌生物膜的系统和方法
AU2016283997A1 (en) * 2015-06-22 2018-01-25 Ray EAST Biomolecular zonal compositions and methods for in-situ biological exfoliation of contaminated surfaces
EP3463403A4 (en) 2016-05-25 2020-04-15 Mybiotics Pharma Ltd COMPOSITION AND METHODS FOR TREATMENT WITH A MICROBIOTE
WO2018125805A1 (en) 2016-12-28 2018-07-05 3M Innovative Properties Company Microbial detection devices including adhesive masked nutrients and methods of using the same
US11052346B2 (en) * 2018-05-23 2021-07-06 Molecule Works Inc. Device and method for separation of water from mixtures

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08280377A (ja) * 1995-04-14 1996-10-29 Dainippon Printing Co Ltd 培養装置
WO1997024432A1 (fr) * 1995-12-27 1997-07-10 Chisso Corporation Dispositif d'incubation et milieu de culture de micro-organismes

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4565783A (en) * 1981-01-27 1986-01-21 Minnesota Mining And Manufacturing Company Dry culture media
US4758239A (en) * 1986-10-31 1988-07-19 Kimberly-Clark Corporation Breathable barrier
US5089413A (en) * 1989-05-19 1992-02-18 Minnesota Mining And Manufacturing Company Method and apparatus for culturing with microbiological dry culture medium
JPH0310674A (ja) * 1989-06-09 1991-01-18 Terumo Corp 細胞培養用多孔質膜およびそれを用いた細胞培養器
JPH03164169A (ja) * 1989-08-04 1991-07-16 Mitsubishi Rayon Co Ltd 細胞培養方法
GB9300188D0 (en) * 1993-01-06 1993-03-03 Dexter Speciality Materials Fibrous bonded sheet material
JPH0937765A (ja) * 1995-08-02 1997-02-10 Dainippon Printing Co Ltd 培養装置
JPH09206062A (ja) * 1996-02-06 1997-08-12 Dainippon Printing Co Ltd 培養装置

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08280377A (ja) * 1995-04-14 1996-10-29 Dainippon Printing Co Ltd 培養装置
WO1997024432A1 (fr) * 1995-12-27 1997-07-10 Chisso Corporation Dispositif d'incubation et milieu de culture de micro-organismes

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005287452A (ja) * 2004-04-02 2005-10-20 Chisso Corp 微生物の培養・検出法および微生物検出用発色試薬。
US11124757B2 (en) 2009-07-14 2021-09-21 Kikkoman Corporation Microorganism culture sheet and manufacturing method therefor
US10563167B2 (en) 2010-01-29 2020-02-18 Dai Nippon Printing Co., Ltd. Microorganism culture sheet
WO2011132480A1 (ja) 2010-04-19 2011-10-27 Jnc株式会社 微生物検出用テトラゾリウム化合物、微生物検出用試薬および微生物の検出方法
US11022556B2 (en) 2010-04-19 2021-06-01 Jnc Corporation Tetrazolium compound for detecting microorganisms, reagent for detecting microorganisms and method for detecting microorganisms
JP2012200152A (ja) * 2011-03-23 2012-10-22 Futamura Chemical Co Ltd 液体培地用足場部材
JPWO2014054494A1 (ja) * 2012-10-04 2016-08-25 Jnc株式会社 微生物培養器、微生物検査キット、透析液の検査方法、微生物の培養方法、微生物の検査方法、及び微生物培養器の製造方法
US10030218B2 (en) 2012-10-04 2018-07-24 Jnc Corporation Microorganism culture vessel, microorganism test kit, method for testing dialysate, method for culturing microorganism, method for testing microorganism and method for producing microorganism culture vessel
WO2014054494A1 (ja) 2012-10-04 2014-04-10 Jnc株式会社 微生物培養器、微生物検査キット、透析液の検査方法、微生物の培養方法、微生物の検査方法、及び微生物培養器の製造方法
JP2014221007A (ja) * 2013-05-13 2014-11-27 大日本印刷株式会社 微生物培養シート
JP2016082951A (ja) * 2014-10-29 2016-05-19 Jnc株式会社 微生物培養器材及び微生物検出法
US9695456B2 (en) 2014-11-14 2017-07-04 Jnc Corporation Microorganism testing apparatus, method and program
JP2017127197A (ja) * 2016-01-18 2017-07-27 Jnc株式会社 腸球菌検出用培地及び腸球菌検出法
JP2020517292A (ja) * 2017-04-26 2020-06-18 ビオメリューＢｉｏｍｅｒｉｅｕｘ 脱水多糖ヒドロゲルのシートを備える微生物培養デバイス
JP7181894B2 (ja) 2017-04-26 2022-12-01 ビオメリュー 脱水多糖ヒドロゲルのシートを備える微生物培養デバイス

Also Published As

Publication number Publication date
US20020192742A1 (en) 2002-12-19
JP4396078B2 (ja) 2010-01-13
US7312072B2 (en) 2007-12-25
US20050084948A1 (en) 2005-04-21
US20080138881A1 (en) 2008-06-12
US8357498B2 (en) 2013-01-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2001044437A1 (fr) Incubateur de micro-organismes et milieu de culture de micro-organismes comprenant ledit incubateur
JP5803677B2 (ja) 微生物培養シート
JP6206412B2 (ja) 微生物培養器、微生物検査キット、透析液の検査方法、微生物の培養方法、微生物の検査方法、及び微生物培養器の製造方法
JP6938151B2 (ja) 内蔵型嫌気性環境生成培養デバイス及び使用方法
WO1997024432A1 (fr) Dispositif d'incubation et milieu de culture de micro-organismes
JP3115002B2 (ja) 微生物培地
JP2007124985A (ja) 微生物の培養方法及び微生物培養器
JP2020503042A (ja) 接着剤マスクされた栄養素を含む微生物検出デバイス、及びその使用方法
WO2014043616A1 (en) Culture medium method and device
JP2011072279A (ja) 微生物培養シート
JP2008017712A (ja) 微生物培地
JP2001321196A (ja) サルモネラ菌検出用培地積層物およびシート状培地
JP2009153500A (ja) 微生物培養シート
JP2001245693A (ja) 一般生菌検出用シート状培地
JPH08286A (ja) フィルム状培地及びこれを用いた微生物の検出方法
JP2001275651A (ja) シート状微生物培養器及びこれを用いた培地
JP2001275657A (ja) 黄色ブドウ球菌検出用培地
JP2001169772A (ja) シート状培養器及びこれを用いたシート状培地
JP2001333796A (ja) 微生物の拭き取り検査方法
JP2001333795A (ja) 大腸菌群検出用培地積層物およびシート状培地
JP2002171964A (ja) 黄色ブドウ球菌検出用培地積層物およびシート状培地
JP2001299324A (ja) 微生物検査用具
JP2007020434A (ja) フィルム状培地
JP2003189896A (ja) 抗菌剤検出用シート状培地および抗菌剤検出用キット
JP2001231541A (ja) 真菌用培地積層物およびシート状培地

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): JP US

DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
ENP Entry into the national phase

Ref country code: JP

Ref document number: 2001 545515

Kind code of ref document: A

Format of ref document f/p: F

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 10168250

Country of ref document: US