WO1999045784A1 - Bactericides - Google Patents

Description

明 糸

技術分野

本発明は、 天然物由来殺菌剤に関し、 とくにユーカリ属植物葉の極性有機溶 媒抽出物とキトサンを含む殺菌剤もしくはさらにグリセリン脂肪酸エステルを 添加してなる殺菌剤であって、 殺菌効果が大きく、 かつ殺菌力に持続性のある 安全性の高い殺菌剤に関する。

本発明にかかる殺菌剤は、 一般家庭や飲食店、 医療施設、 老人ホーム、 食肉 加工施設、 畜舎、 鶏舎などで使用することができる。 とくに、 二キビや水虫を 予防する殺菌剤などとして有用である。 背景技術

ュ一力リ属植物は約 600 種類存在し、 その精油やエタノール抽出物等が喘息 薬 ·防腐剤 ·芳番剤等の用途で医薬品 ·医薬部外品 ·食品添加物 ·香料として 用いられている （西村弘行著、 未来の生物資源ユー力リ、 1 9 8 7年） 。 ユー 力リ精油の主要成分であるシネオールに関しては防腐剤としての効果や、 抗菌 活性物質 （ビス一ビグアニド化合物） の作用増強が報告されている （特開昭 62 -289511 号） 。 又、 Bucalyptus perriniana の有機溶媒抽出物から単離された Grandinol (Agric. Biol. Chem. , 54, 1, 231, 1990 ) ^Eucalyptus macrocarp aから単離された Macrocarpal-A (Agric. Biol. Chem.， 54, 12, 3221) には St aphylococcus aureus ヽ Bacillus subtilis に対して抗囷活性があることが報 告されている。

—方、 キトサンは力二の甲羅等に含まれるキチンを脱ァセチル化したもので、 食品添加物としても用いられている。 キトサンについては、 フ一ザリウム属、 tisher ichia col i (太 囷) ヽ Staphylococcus aureus 黄色フドウ球菌) ヽ Bacillus subtilus (枯草菌） 等に対して抗菌活性があることが報告されてい る （Experimental Mycology 8, 276, 1984, フードケミカル 2， 22, 1988) 。

2種類以上の抗菌成分を混合した場合の相乗効果に関する報告例としては、 リファンピシンとキ トサン （特開昭 59- 46208) 、 スルホンアミ ド類とキ トサン (特開昭 59- 46223) 、 キ トサンとァスコルビン酸 （特開平 2- 35065 ) 、 ュ—力 リ有機溶媒抽出物 （種は不明） とアルキル硫酸ナト リウム （特開昭 58- 39615) があり、 ユーカリとキトサンの組み合わせでは報告はされていない。 切り花活 性剤 （特開 4- 3165G6) 、 植物有害生物防除剤 （特開平 7- 0336G2) でユー力リ抽 出物、 キトサンの組み合わせ例が報告されているが、 抗菌活性の相乗効果に関 しては記載されていない。

二キビは皮脂腺に存在するニキビ菌 （Propionibacterium acnes ) の増殖が 原面となり誘発される。 また、 水虫は白癬菌 (Trichophyton mentagrophytes) の感染により誘発される。 従って、 ニキビ菌ゃ白癬菌を効率的に殺菌すること ができれば、 二キビや水虫を予防することができる。

近年、 医療施設や老人ホームにおいて、 MRSA (メチシリン耐性ブドウ球菌） 、 VRE (バンコマイシン耐性腸球菌） 等の病原菌による院内感染が増加しており、 これらの病原菌を効率的に殺菌することが緊急の課題となっている。

また、 食肉加工場では、 病原性大腸菌 （Escherichia coli) 、 サルモネラ菌 (Salmonella enteritidis) 、 黄色ブドウ球囷 (Staphylococcus aureus ) 等 の食中毒菌による食肉加工機械 （肉ひき機、 サイレントカッター、 スライサー、 混和機、 充塡機、 食肉脱水機等） や加工施設の汚染が問題となっている。

従来の食肉加工場は、 食肉の殺菌工程において殺菌剤として次亜塩素酸ナト リウムが使用されている。 即ち、 枝肉等の食肉を次亜塩素酸ナト リウム溶液に 一定時間浸漬する方法である。 しかし、 この方法では次亜塩素酸ナト リウムが 食肉や食肉から溶出される肉汁の蛋白質と化学反応を起こし、 殺菌力が低下、 消滅するという問題がある。 しかも、 食肉に付着した次亜塩素酸反応物の人体 への安全性にも問題があつた。 このことから、 食肉の殺菌に際し、 殺菌力が低下せず、 人体に対して安全性 が高く、 しかも長時間殺菌力を維持する殺菌剤が求められている。 このような 殺菌剤であれば、 畜肉を長時間新鮮に保つことができ、 輸送中における商品の 劣化を軽減 ·防止することも可能となる。

また、 家畜自体への病原菌汚染を軽減することも食肉加工場での汚染防止に つながる。 その一手段として畜舎の殺菌がある。 特に間題となっている病原性 大腸菌 （Escher ichia col i) は牛、 羊、 豚等の家畜に生息しており、 特に牛の 汚染率が高い。 又、 サルモネラ菌 （Salmonel la enter it idis) も鶏や鶏卵を介 して伝染し、 間題となっている。 例えば、 畜舎が病原菌に汚染されていると、 畜舎内で家畜や家畜に接触した人の手等を介して汚染が拡大する可能性がある c 従って、 畜舎を殺菌することも病原菌を効率良く排除するために重要である。 牛、 豚、 鶏等の家畜飼育場では、 飼料が細菌に汚染されたり、 飼料中で細菌 が繁殖する等の間題が起こっている。 飼料が病原菌に汚染される.と、 動物に害 を及ぼすだけでなく、 動物の糞が汚染源となり、 さらに汚染を拡大する。 従来、 動物の生育を促進するために、 抗生物質を添加した飼料が考案されているが、 耐性菌の出現や抗生物質の残留等の問題があり、 現在、 抗生物質の使用が制限 されている。 また、 魚類においても、 病原菌感染予防 ·治療のために抗生物質 が使用されており、 題となっている。

近年、 鶏卵や卵加工品では、 特にサルモネラ菌による食中毒が年々増加傾向 にあり、 卵の殻を殺菌することは汚染を軽減 '防止することが可能である。 尿素分解菌はおむつかぶれに関与することが報告されていおり、 殺菌剤をお むつに配合することにより、 おむつかぶれの発生を軽減、 防止することができ ると考えられる。

上記の様々な病原菌に対する殺菌剤として、 アルコ ール、 合成殺菌剤、 次亜 塩素酸ナト リウム等の塩素系薬剤が使用されている。 しかし、 アルコ ールでは 殺菌力の持続性、 合成殺菌剤や塩素系薬剤では人体に対する安全性に問題があ る。 従って、 上記病原菌に対する殺菌剤は直接、 人体や動物の皮膚に触れたり、 経口接種される可能性もあるので、 安全性の高し、殺菌剤が求められている。 そこで本発明は、 安全性が高く、 低濃度で上記病原菌に対して殺菌力があり、 かつ、 その殺菌力の持続性が高く、 そして、 食肉の殺菌工程において殺菌中に 殺菌力に低下のない、 殺菌工程で繰り返し使用可能な殺菌剤を提供することを 目 β勺とする。 発明の開示

本発明者等は、 ユー力リ属極性有機溶媒抽出物とキトサンとを含む殺菌剤が、 ユー力 リ抽出物とヰトサンの相乗効果により、 低濃度で殺菌力を発揮し、 かつ 殺菌力に持続性があり、 また、 食肉 （ハム、 ソーセージ等の加工品も含む） の 殺菌剤として使用した場合、 殺菌力に低下が起こらないことを見いだした。 さ らに、 上記組成の殺菌剤にグリセリン脂肪酸エステルを添加した場合、 殺菌力 の持続性が向上し、 また、 ユーカ リ抽出物の作用により、 グリセリ ン脂肪酸ェ ステルの抗力ビ力が増強されることを見いだした。

即ち、 本発明は、 ユー力リ属植物葉の極性溶媒抽出物とキトサンとを含むこ とを基本とし、 必要に応じさらにグリセリ ン脂肪酸エステルを含む殺菌剤であ り、 その極性溶媒抽出物は低級了ルコールまたはグリコール類から選ばれたも のである。 とくに、 このユーカリ属植物葉の極性有機溶媒抽出物としては、 非 極性有機溶媒による脱脂または水蒸気蒸留により精油を除去したユー力 リ属植 物葉を極性有機溶媒で抽出した画分が挙げられる。 ここで用いる極性有機溶媒 としては、 ハロゲン化炭化水素、 エーテル、 低級脂肪酸エステル、 ケトン、 低 級アルコールから選ばれる溶媒またはこれらの任意の混合溶媒が、 前記非極性 有機溶媒としては了ルカンが挙げられる。 また、 前記ユー力リ属植物葉の極性溶媒抽出物としては、 下記式 （ I ) で表 されるジヒ ド _σ力ルコン化合物を主要な殺菌成分として含む抽出物が挙げられ な ο

本発明の殺菌剤は、 医療施設、 食肉加工施設、 畜舎、 鶏舎、 鳥類卵殻、 食肉 等の殺菌に使用することができ、 また、 飼料、 ウエッ トティ ッシュ、 おむつ等 に配合することにより殺菌力を付加する場合等に用いられる。

また、 本発明の殺菌剤は、 すでに安全性が知られている天然物を有効成分と するため、 人体に対して安全性が高い。

なお、 本発明において「殺菌」 とは、 細菌等の微生物を死滅させること、 お よび増殖を阻害することの両方を舍む概念である。 また、 「食肉加工施設」 と は、 食肉加工場に付設された設備または機械、 および食肉加工に用いる刃物等 の調理器具またはテーブル等を舍む。 発明を実施するための最良の形態

以下、 本発明を詳細に説明する。

(1) ユーカリ属植物の極性有機溶媒抽出物について

本発明の殺菌剤に用いるユーカリ属植物の極性有機溶媒抽出物 （以下、 「ュ 一力リ抽出物」 という） は、 ユー力リ属植物の葉を極性有機溶媒で抽出して得 られる抽出物である。

原料となる葉は、 ユー力リ属に属する植物の葉であれば使用可能で、 ユー力 リプタス ' グランデイス （Eucalyptus grandis) 、 ュ一カ リプタス ' ボッリオ イデス （Eucalyptus botryoides ) 、 ユーカ リプタス ' グロプルス （Bucalypt us gl obul us ) 、 ユーカ リプタス · 力マルジュレンシス （Eucalyptus camaldu lensis) 、 ュ一力 リプタス · クレブラ （Eucalyptus crebra ) 、 ュ一力 リプタ ス .マタラタ （B_ucalyptus maculata ) 、 ユーカ リプタス ' ビミナリス （Buca lyptus v im i nal i s) 等の植物の葉を用いることができる。 これらのユーカリ葉 は、 単独の植物由来の葉を用いてもよく、 2種 £1上の植物由来の葉を組み合わ せて用いることもできる。

このようなユー力リ属植物葉は、 極性有機溶媒で抽出する。 すなわち、 抽出 に先立って、 葉を適当な大きさに破砕したり、 粉末化するなど、 溶媒抽出し易 いように前処理する。 極性有機溶媒としては、 クロ口ホルム、 ジクロロメタン、 ジクロロェタン、 ト リクロロェタン等のハロゲン化炭化水素類、 メチルエーテ ル、 ェチルエーテル、 テトラヒ ドロフラン、 ジォキサン等のエーテル類、 酢酸 メチル、 酢酸ェチル、 酢酸ブチル等の低級脂肪酸エステル類、 又は了セ トン、 メチルェチルケ トン等のケ トン類、 メタノ一ル、 エタノール、 プロパノール等 の低級了ルコ一ル類、 プロピレングリコ一ル、 ブチレングリコ一ル等のグリコ ール類が挙げられる。 これらの溶媒は、 単独で用いてもよく、 任意の 2種又は 3種以上の混合溶媒として用いてもよい。 上記溶媒の中では、 得られる抽出物 の殺菌活性の点から酢酸ェチル、 アセ トン、 ェタノ一ル、 プロ ピレングリコ一 ル、 ブチレングリコ―ルが好ましく、 エタノール、 プロピレングリコ一ルがさ らに好ましい。

抽出方法としては、 一般に用いられる方法でよく、 例えば極性有機溶媒中に 原料ユー力リ葉を長時間浸 '液する方法、 極性有機溶媒の沸点以下の温度で加温、 撹拌しながら抽出を行い、 濾過して抽出物を得る方法などがある。 得られた抽 出物は、 減圧濃縮等によって濃縮することが好ましい。

また、 上記抽出 ·分離操作中、 殺菌活性の高いュ一力リ抽出物を得るには、 ユー力リ葉を直接極性有機溶媒で抽出するよりも、 ユー力 リ葉を乾燥後、 非極 性有機溶媒で脱脂し、 精油を除去してから極性有機溶媒で抽出する態様が好ま しい。 非極性溶媒で脱脂する過程では精油が除去される。 この操作は水蒸気蒸 留により精油を除去した後の残澄に極性溶媒を添加し抽出する方法でも行うこ とができる。 前記非極性溶媒としては、 へキサン、 ペンタン、 ヘプタン等のァ ルカンが挙げられる。 しかし、 脱脂操作は本発明にとくに必須ではなく、 直接、 ユーカリ属植物葉 を極性有機溶媒で抽出して得られる画分も、 本発明の殺菌剤に使用することが できる。 その場合の極性有機溶媒としては、 低級アルコール、 またはプ ϋピレ ングリ コール、 ブチレングリコ一ル等のグリコ一ル類が挙げられる。

ユー力 リ葉抽出物の殺菌活性と収率を合わせて総合評価すると、 殺菌活性が 強く、 抽出物の収率が高い方法は、 脱脂時に用いる非極性溶媒としてへキサン を、 抽出溶媒としてエタノールを組み合わせる態様が好ましい。

ユー力リプタス ·マクラタの葉抽出物には、 殺菌力を有する化合物として、 前記式 （ I ) で表される新規なジヒ ド ηカルコン化合物及び公知のフラボン化 合物 （ユーカ リプチン（eucalypt i n)及び 8—デスメチルーユーカ リプチン（8 - d esmethy l - euca l ypt in) (Aust. J. Chem. 17, 692, 1964 ; Aust. J. Chera. 17, 464 1964) ) が含まれている。 ユーカリ葉に含まれる殺菌作用を示す化合物 には、 これらの化合物以外の化合物も含まれていると考えられるが、 本発明に 用いるユー力 リ抽出物を調製する際に、 これらの化合物またはその類縁体を指 標とすることができると推定される。 また、 本発明に用いるユー力リ抽出物の 具体的態様として、 前記ジヒドロカルコン化合物もしくはフラボン化合物また はこれらの類縁体の少なくとも 1種または 2種 £1上を主要な殺菌成分として含 む抽出物、 あるいは精製したこれらの化合物またはその類縁体が挙げられる。 (2) キ トサンについて

ヰ トサン （ポリ /9一 1 , 4—ダルコサミ ン） は、 キチンの脱ァセチル化物で あり、 例えば力二、 ェビ等の甲殻類の殻、 あるいは昆虫の外骨格に含まれてい るキチンを、 高濃度熱了ルカリ溶液中で脱ァセチル化することにより得られる 。 また、 キトサン生産菌を培養することによつても得ることができる。 また、 市販品を用いることもできる。

本発明に用いるキトサンの分子量は特に制限されないが、 低粘度であること が好ましく、 5〜 5 0 c p程度 （0. 5%キトサン濃度） が好ましい。 また、 水溶 性を高めたキトサンオリゴ糖ゃキトサン乳酸塩、 キトサン塩酸塩等のキトサン 誘導体を用いることもできるが、 殺菌力の強い殺菌剤を調製するためには、 ヰ トサンを用いることが好ましい。

(3) 組成

上記ユー力 リ抽出物及びキトサンの含有量は、 その使用態様 '剤形により適 宜変更しうるが、 例えば、 これらを合計で 0. 0 0 0 1〜 1 (]重量％、 好まし くは Q. 0 0 1〜 1. (3重量％程度含有させることが例示される。 なお、 不揮 発性のプロピレングリコ一ル、 ブチレングリコ一ル等のグリコ一ル類をュ一力 リ属葉の抽出溶媒として用いる場合は、 ユーカリ抽出液として 0. 1〜 1 0容 量％程度含有させることが例示される。 この範囲の上限を越えると、 殺菌剤の 芳香に影響することがあり、 下限を下回ると効果が得にく くなることがあるの で、 上記範囲が好ましい。 ユー力リ抽出物とキトサンは、 上記濃度の範囲内に おいて任意の比率で混合することができる。 キトサンを溶解させるための酸 （ 乳酸、 酢酸等） は、 キトサンを溶解し得る範画で任意の濃度で配合することが できる。

(4) グリセリン脂肪酸エステル添加殺菌剤

本発明において、 ユー力リ抽出物とキトサンを舍む組成の上記殺菌剤に対し、 さらにグリセリン脂肪酸エステルを添加することができ。 この場合、 上記ユー 力リ抽出物及びキトサンを含む組成に 0. 0 0 0 1〜 2 0重量％、 好ましくは 、 0. 0 0 1 - 1. 0重量％のグリセリ ン脂肪酸エステル類を添加する。

上述した殺菌剤を食肉の殺菌剤として使用する場合は、 殺菌中に牛肉から溶 出される成分の影響で殺菌剤の p Hが上昇し、 pH 5. 5を超えると殺菌力が 低下するため、 殺菌剤の p Hを 5. 5以下、 好ましくは 5. 0以下に維持する ように乳酸、 酢酸等の酸、 あるいは PH調整剤を添加する。 添加の方法はあらか じめ殺菌剤中に高濃度の酸、 あるいは PH調製剤を添加しておいても良いし、 殺 菌中に連続的に酸を添加し、 pHを 5. 5以下に維持させてもよい =

なお、 本発明の殺菌剤としては、 本発明の効果を損なわない範画で、 食品、 医薬品、 医薬部外品、 化粧品等に一般的に用いられる各種成分、 酸度調節剤、 安定化剤、 界面活性剤、 抗酸化剤等に用いられている成分を配合することがで き、 2成分以上配合しても良い。 さらに、 殺菌効果をさらに増強する目的で他 の殺菌剤と併用してもよい。

食品、 医薬品、 医薬部外品、 化粧品等に一般的に用いられる各種成分として は、 例えば、 界面活性剤 （ァニオン性、 カチオン性、 両性又は非イオン性界面 活性剤） 、 抗酸化剤 （ステアリ ン酸エステル、 ノルジヒ ドログ了セレテン酸、 ジブチルヒ ドロキシトルエン、 ブチルヒ ドロキシァニソ一ル、 ノ ラヒ ドロキシ 了ニソ一ル、 没食子酸プロピル、 セサモール、 セサモリ ン、 ゴシポ一ル等） 、 保湿剤 （プロピレングリコール、 1 , 3 -プチレングリコール、 ポリェチレング リコール、 グリセ リ ン、 コ ンドロイチン硫酸及びその塩、 ヒアルロン酸及びそ の塩、 乳酸ナト リウム、 ローヤルゼリーエキス、 等） また、 その他、 コラーゲ ン、 低級アルコール、 多価了ルコール、 水溶性高分子、 P H調節剤、 香料、 清 涼剤、 安定化剤、 動植物抽出物、 動植物性蛋白質及びその分解物、 動植物性多 糖類及びその分解物、 動植物性糖蛋白質及びその分解物、 微生物培養代謝成分、 アミノ酸及びその塩、 消臭 ·脱臭剤、 乳化剤等と共に配合し、 併用して用いる ことができる。

酸度調節及び機能の安定化剤としては、 例えば、 アジピン酸、 クェン酸、 ク ェン酸三ナト リウム、 グリ シン、 グリセリ ン脂肪酸エステル、 グルコノデルタ ラク トン、 ダルコン酸、 コハク酸、 コハク酸ーナト リウム、 コハク酸ニナト リ ゥム、 酢酸、 酢酸ナト リウム、 DL—酒石酸、 L-酒石酸、 Dし一酒石酸ナト リウム 、 L-酒石酸ナト リウム、 炭酸塩類、 二酸化炭素、 乳酸、 乳酸ナト リウム、 フマ ル酸、 フマル酸一ナト リウム、 リゾチ一ム、 DL—リ ンゴ酸、 DL—リ ンゴ酸ナト リ ゥム、 リ ン酸、 リ ン酸塩類、 重合リ ン酸塩類、 イタコン酸、 フイチン酸等が 挙げられる。

界面活性剤としては例えば、 モノステアリ ン酸グリセロール、 ト リオレイ ン 酸ポリグリセロール等のグリセリ ン脂肪酸エステル、 有機酸モノグリセり ド、 プロピレングリコ一ル脂肪酸エステル、 ソルビタン脂肪酸エステル、 ショ糖脂 肪酸エステル、 レシチン、 リゾレシチン、 ポリエチレングリコール、 ポリオキ シアルキルエーテル、 ポリオキシエチレンポリ了ミ ン、 アルキルポリオキシェ チレン硫酸エステル塩、 アルキル硫酸エステル塩、 ァシルメチルタウリ ン塩、 N-ァシルグルタ ミ ン酸塩、 アルキルアミ ドべタイ ン等が挙げられる。

抗酸化剤としてはカテキン、 トコフヱロール、 プロポリス、 エラグ酸、 動植 物抽出物 （セージ、 セリ、 ローズマリー等） が挙げられる。

殺菌剤としては、 殺菌活性がある物質、 抽出物であれば特に制限はなく、 例 えば、 ヒノキチオール、 ト リクロサン、 塩化セチルピリジニゥ厶、 グルコン酸 クロルへキシジン、 動植物抽出物、 精油等が挙げられる。

上述したように、 ユー力リ属植物抽出物とキトサンを含有する殺菌剤は、 ュ —力 リ抽出物とキ トサンとの相乗効果により、 メチシリ ン耐性ブドウ球菌（MRS A)、 スタフイロコッカス ァゥ リ ウス（Staphylococcus aureus) 、 ェシエ リ ヒ ァ コ リ （Escherichia coli)、 サルモネラ ティビ厶リウ厶（Salmonella typh imur ium) サルモネラ ェンテリティディス (Salmonel la enteritidis)、 ェン テロコ ッカス ファェカ リス（Bnterococcus faecal is) 、 プソィ ドモナス プ テイダ（Pseudomonas putida)、 バチルス サブチリス（Baci 1 lus subtilis) f(Sa. r p;4r (Bacillus cereus) 、 ビブリオ 。ラへモリテイ クス（Vibrio par ahaemolyticus)、 了 Jレト α クタ一 ク、 ヒ、'ホ jレミス (Arthrobacter globif or mis), ブレビバクテリウム リネンス（Brevibacterium linens) 、 プ¹□テウス ブルガリス（Proteus vulgaris)、 プロピオンバクテリゥ厶 了クネス（Propi onobacteriura acnes) 、 ト リコフィ トン メタグリフィテス（Trichophyton m entagrp ytes) に対して強い殺菌力を発揮し、 また、 この殺菌力に持続性があ る。 又、 ユー力 リ抽出物及びキトサン共に安全性が高く、 他の成分として安全 性の高いものを選択することにより、 安全性の高い殺菌剤を調製することがで きる。

前記ユー力リ袖出物とキトサンを含む組成にグリセリン脂肪酸エステルを添 加した殺菌剤は、 ユー力 リ抽出物とグリセリ ン脂肪酸エステルとの相乗効果に より Aspergi l lus niger、 Penici l l ium citrinum等のカビに対しても効果を発 揮する。 また、 本殺菌剤をエタノールと水の混合液系として調製した場合も、 ェタノールの瞬間的な殺菌作用も加わるため、 上記力ビに対しても効果を発揮 する。

(5) 用途について

本発明の殺菌剤の剤型は特には制限されない。 例えば、 液犾、 ペースト状、 スプレー剤、 ムース剤等の使用態様に応じて決定され、 また、 噴霧、 浸漬、 塗 布、 拭き取り等の使用方式によって適宜に決定される。 なお、 この殺菌剤は、 スプレーの薬剤としても用いられ、 飲食店や一般家庭の厨房等で使用すること も可能である。 とくに、 液状で使用する場合、 ユーカリ抽出物とキトサンを適 当な溶媒に溶解させ、 殺菌液として用いる。 その溶媒としては、 エタノールと 水の混合液 （比率は任意） に、 例えば、 キトサンを溶解させるための乳酸、 酢 酸等の酸を添加した溶媒が用いられる。 ただし、 高濃度のエタノールはタンパ ク質を変 ¾ ^させるので、 食肉等の殺菌剤として使用する場合は、 エタノール濃 度を 0〜10%程度の範囲にするのが望ましい。 なお、 水溶性を高めたキトサン ォリゴ糖ゃ水溶性を高めたキトサン誘導体を用いる場合は、 前記の酸は添加し なお、 本発明にかかる殺菌剤を食肉の殺菌工程で使用する場合、 殺菌力に低 下が起こらないので、 殺菌工程において繰り返して使用することができる。 こ の殺菌剤は、 食肉を殺菌処理した場合、 食肉表面の細菌の増殖を長時間にわた り抑制する効果があるので、 食肉を長時間新鮮に保つことができる。

この殺菌剤を鳥類卵殻の殺菌剤として使用する場合、 本発明の殺菌剤を卵殻 表面に付着させた鳥類の卵は、 流通させることができる。

この殺菌剤をスプレーとして使用する場合、 内容物を収納する容器としては、 内容物を噴霧できる容器であれば良く、 例えば、 エアゾール方式、 トリガ—方 式等のスプレー容器が挙げげられる。 エアゾール方式では、 例えば、 炭酸ガス、 窒素ガス、 ジメチルエーテル等の噴霧剤を添加して用いる。 実施例

以下、 実施例、'試験例により本発明を具体的に説明するが、 これらの実施例 は例示的であり、 本発明の範囲は特許請求の範画により規定される。

〔製造例 1〕

ユー力 リ (Eucalyptus grandis, tiucalyptus botryoiaes, Eucalyptus glob ulus, Eucalyptus camaldulensis, Eucalyptus crebra, Eucalyptus maculata, Eucalyptus viminalis) の葉を乾燥し （それぞれ乾燥重量 3 0 g) 、 それぞ れァセ トン 5 0 0 mlで 3日間室温で抽 1 2出した。 抽出液は減圧下溶媒を留去し、 ァセトン抽出物を得た。

〔製造例 2〕

ユー力 U (Eucalyptus grandis, Eucalyptus botryoides, Eucalyptus glob ulus, Eucalyptus camaldulensis, Eucalyptus crebra, Eucalyptus maculata ， Eucalyptus viminalis) の葉を乾燥し （それぞれ乾燥重量 3 0 g) 、 それぞ れエタノール 5 0 0 mlで 3日間室温で抽出した。 抽出液は減圧下溶媒を留去し、 エタノール抽出物を得た。

〔製造例 3〕

ュ一力 ^fJ (Eucalyptus grandis, Eucalyptus botryoides, Eucalyptus glob ulus, Eucalyptus camaldulensis, Eucalyptus crebra, Eucalyptus maculata , Eucalyptus viminalis) の葉を乾燥し （それぞれ乾燥重量 3 0 g) 、 それぞ れ II一へキサン 5 0 0 mlで 2日間室温で脱脂後、 エタノール 5 0 0 mlで 3日間 室温で抽出した。 抽出液は減圧下溶媒を留去し、 エタノール抽出物を得た。 〔製造例 4〕

ユーカ リ （E. raacula )の葉を乾燥し （乾燥重量 5 0 0 g) 、 n—へキサン 6しで 2日間室温で脱脂後、 了セ ト ン 6 Lで 3日間室温で抽出した c 抽出液は 減圧下溶媒を留去し、 了セトン抽出物約 6 5 g (葉からの収率 13%) を得た。 〔製造例 5〕

ユー力リ (Eucalyptus grandis, Eucalyptus botryoides, Eucalyptus glob ulus, Eucalyptus camaldulensis, Eucalyptus crebra, Eucalyptus maculata , Eucalyptus viminalis) の葉を乾燥し （それぞれ乾燥重量 3 0 g) 、 それぞ れプロピレングリコール 5 0 0 mlで 3日間室温で抽出した。

〔製造例 6〕

ュ一力リ (Eucalyptus grandis, Eucalyptus botryoides, Eucalyptus glob ulus, Eucalyptus camaldulensis, Eucalyptus crebra, Eucalyptus maculata ， Eucalyptus viminalis) の葉を乾燥し （それぞれ乾燥重量 3 Q g) 、 それぞ

- 1

れ 1, 3—ブチレングリコール 5 0 Oralで 3日間室温で抽出した。

次に、 アセ トン抽出物を最初にへキサンと水で分配抽出し、 へキサン層を分 離後、 残った水層をジクロロメタンで分配抽出し、 さらに酢酸ェチル、 n—ブ タノールの順に分配抽出した。 活性の高い画分として酢酸ェチル画分を濃縮し、 酢酸ェチル抽出物を約 2 3 g得た （葉からの収率 4.6 %) 。

次に、 酢酸ェチル画分をシリカゲルカラムクロマ トグラフィーに付し、 へキ サン一酢酸ェチル混液で溶出した。 へキサン Z酢酸ェチル = 3/ 1混液で溶出 した画分を濃縮し 3. 9 2 gの活性画分を得た （葉からの収率 0.78%) 。 この 画分をさらに〇D S— HP LCに付し、 メタノ一ルー蒸留水 = 80Z20混液で分 取し、 化合物 （ I ) を 1. 3 3 g (葉中含有率 0.27%) 、 化合物 （II) を 1 5 6 mg (葉中含有率 0.031%) 、 化合物 （III)を 1 2 5 rag (葉中含有率 0.025%) 得 た。

化合物 （II) 及び （ΙΠ)は理化学データよりそれぞれ、 既知フラボン化合物 eucalyptin及ぴ 8-desmethyl-eucalyptin (Aust. J. Chem. 17, 692, 1964 ； Aust. J. Chem. 17, 464, 1964) であることが判明した。

化合物 （I ) は次の理化学的性質より新規ジヒドロカルコン化合物であるこ とが判明した。

分子量： EI-MS m/z 286 ( ⁺ ), 181， 154、 分子式： C ₁₇H ₁₈〇₄ UV _max MeOH) ： 286nm(e =21700)

I R ( _max KBr) ： 3296, 2944, 2924, 1650, 1595， 1516, 1429, 1274, 1247 , 1213, 1147, 1112, 1082, 886, 799, 742, 720, 699, 468cm一¹

'Η - NMR (3DMS0 - d_s ) ： 1.86 (3H, s), 2.89 (1H, t， J=7.6), 3.32 (1H, t， J=7.6), 3.77 (3H, s), 6.08 (1H, s), 7.15-7.30 (5H, m), 10.92 (1H, s), 13.6 4(1H, s) ppra

¹³C-NMR (3DMS0— d₅ ) ： 7.2, 30.1， 45.3, 55.4, 90.3, 102.3, 104.1, 125.8, 128.3, 141.6, 160.5, 162.0, 163.2, 204.7 pm

〔ユー力リ抽出物とキトサンの抗菌活性〕

- 1

(1) 製造例 3のユー力リ抽出物及び 4キトサンについて、 抗菌活性を調べた。 使用した菌株は以下のとおりである。

MRSA RIM 0310925. Staphylococcus aureus IF012732. Escherichia coli IF012734. Salmonella typhimuriura IFQ12529 、 Salmonella enteritidis I F03313. Enterococcus faecal is IFQ12970. Pseudomonas putida IFQ3738 、 Bacillus subtilis JCM1465、 Bacillus cereus IF0300U Vibrio parahaemo lyticus I卩 012了 11、 Arthrobacter globiformis IF012137 、 Brevibacterium 1 inens IF012142 ヽ Proteus vulgaris IF030456ヽ Propionibacterium acnes ATCC6919 Trichophyton mentagrophytes IF005466 。

表 1に示す培養条件で各菌株を前培養後、 生理食塩水で希釈し、 細菌につい ては、 菌数を約 5 X10⁸ 個/ ml に調製した。 また、 真菌 （Trichophyton menta grophytes ) については、 胞子数を 5 xlO⁶ 個/ ml に調製した。 なお、 Propio nibacterium acnes については嫌気性条件下で培養した。

表 1

1 製造例 3のュ一力リ抽出物を圆 SOに溶解し、 この溶液を抽出物の最終濃度が 63〜0.2 g/mlになるように 10〃1 を、 培地 190 j l を入れた 9 6ゥヱルプレ —トの各ゥヱルに添加した。 一方、 キトサン （和光純役：キトサン 10) につい ては滅菌蒸留水 （0. 005%乳酸添加 PH5. 3) に溶解し、 この溶液をキトサンの最 終濃度が 63〜0.2 〃g/ralになるように 10 1 を培地 190 ul を入れた 9 6ゥュ ルプレートの各ゥエルに添加した。 最後に各ゥエルに上記菌懸濁液を 10 il 加 え、 表 1に示す各菌の培養に適した条件で培養し、 細菌については、 2 4時間 後、 真菌 （Trichophyton mentagrophytes) については 7日後に発育の有無を 肉眼で観察し、 最小発育阻止濃度 （MIC ) を調べた。

表 2に、 各ユー力リ抽出物およびキトサンの MIC値の結果を示す。 ユーカリ 抽出物は、 MR A、 Staphylococcus auresu 、 Bnterococcus faecal is 、 Pseudo monas putida、 Bacillus subtilis 、 Bacillus cereus Arthrofaacter globi formisヽ Propionibacterium acnes ヽ Trichophyton mentagrophytes 5こ対する 抗菌活性が特に強く、 キトサンと比べて、 明らかに抗菌スぺク トルが異なるこ とが判明した。 表 2

ユーカリ 出 、キトサンの最小

E.gra: E. grandis. E.bot: E. botryoides. E.glo: E. globulus, E.cam: £. camaldutensis,

E.cre: E. crebra. E.mac: E. moculaia. E.vim: E. viminalis

また、 精油の抗菌活性を調べるために水蒸気蒸留により精油をユー力リ属植 物葉から回収し、 上記と同様の方法で各種細菌に対して最小発育阻止濃度を調 ベた。 尚、 精油を溶解させる溶媒としてエタノールを用いた。

ユー力リ属より得た精油の MI C値を表 3に示すが精油画分については強い抗 菌活性は認められなかつた。

表 3

ユー

E.gra: E. grandis. E.bot: E. botryoides. E.glo: E. globulus. Exam: E. camaldulensis.

E.cre: E. crebra. E.mac: E. macidaia. E.vim: E. viminalis (2) 製造例 5のュ一力リ抽出物について、 以下の方法で抗菌活性を調べた。 製造例 5のユーカリ抽出物を滅菌蒸留水で 1 0倍希釈し、 この希釈液 を、 表 1に示す培地 190 j l を入れた 9 6ゥヱルプレートの各ゥヱルに添加し た （抽出物は原液の 200 倍希釈） し、 上記と同様の方法で抗菌活性を調べた。 表 4に結果を示すが、 本抽出物 (200倍希釈液） には、 MRSA、 Staphylococc us auresu , Bnterococcus f aecai is ， Pseudomonas putida, Bacillus subti lis, Bacillus cereus， Arthrobacter globiformisヽ Propionibacterium ac nes 、 Trichophyton mentagrophytes に対して抗菌活性が認められた。

表 4

ユーカリ属プロピレングリコール抽出物の抗菌活性

菌株 抗菌活性

E.sra lE.bot l_E.£lo E.cam IE. ere lE.mac lE.vim_

MRSA

Siaphvlococcus aureus

Escherichia coli

Salmonella tvohimurhi

Salmonella enteritidis

Enterococcns faecalis

Pseudomonas putida

Bacillus siibtihis

Bacillus cereus

Vibrio parahaemolyticiis

Arthrobacter globiformis + 4- Brevibacte um linens

Proteus vulgaris

Propionibacterium acnes +

Trichophvton meni grophvtes

E.gra: E. grandis, E.bot: E. botiyoides, E.glo: t. globulus. E.cam: E. cam ldulensis, Ecre: E. crebr . E.mac: E. maculata. E.vim: E. viminalis

÷ ：活性あり、'一：活性なし

〈ュ一力リ抽出物、 キトサンを併用した場合の殺菌力試験〉

製造例 2のユーカ リ抽出物を DMS0に溶解して 2倍希釈系列を作成し、 また、 キトサンを滅菌蒸留水 （乳酸添加） に溶解したものを、 それぞれ 5θ αづっ滅 菌蒸留水 900 M l と混合した （ユーカリ抽出物の最終濃度： 0〜2500 g/ml、 キトサンの最終濃度： 0〜125

乳酸濃度：キトサン 1重量％に対して 乳酸 3/5 容量％添加） 。

次に、 表 1に示す条件で細菌 (Staphylococcus aureus IF012732 、 Bacill us subtilis JCM1465、 Bacillus subtilis JCM1465 、 Escherichia col i IFO 12734)を培養後、 10 il を上記混合液に添加し、 S. aureus、 B. subtilis に ついては 1時間、 B. coli については 4時間、 室温で放置した。 放置後、 1ml を 15ralニュートリエント寒天培地に添加し、 各菌の培養に適した条件で 24時間 培養し、 菌の発育の有無を観察した （菌が発育：十、 菌が発育せず：一） 。 表 5に S. aureus の結果を示すが、 ュ一力リ抽出物 1.0 g/nl、 キトサン 3 . lug/ral併用した場合、 最小殺菌濃度（MBD の値より FIC Index は 0.19となり、 相乗効果が認められた （FIC Indexが 0.5 以下で相乗効果あり） 。 また、 表 6 に、 B. subtilis の結果を示すが、 ユー力リ抽出物 0.5 g/ml、 キトサン 3.1 g/ml併用した場合、 FIC Index は 0.312 となり、 相乗効果が認められた。 さ らに、 表 7に、 E. coli の結果を示すが、 ユーカリ抽出物 78 g/ml、 キトサン 7.8 g/ml併用した場合、 FIC Index は 0.187 となり、 相乗効果が認められた (FIC Index =併用した場合の A成分の MBC /A成分の MBC +併用した場合の B成分の MBCZB成分の MB [： ：第 25回日本防菌防黴学会年次大会 P.35参照） 。 表 5 ユーカリ 出物と ン の

、 一 ： 発 _ 1

表 6

10 表 7

- ：菌が発育、 発育せ

〈殺菌剤の殺菌力の持続性試験〉

〔実施例 1 〜 3〕

20 製造例 3のユー力リ抽出物とキトサン、 及び他の成分を、 表 8に示す割合で 混合し、 実施例 1 ~ 3及び比較例 1 〜 4の殺菌剤を作成した。 ユーカ リ抽出物 とキトサンは重量％、 乳酸とエタノールは容量％で示す。

表 8

25

t.vini: t. viminalis. E.do: E. globulus, E.mac: E. maculata 〔試験例 1〕 紙面上での殺菌力の持続性試験

乾熱滅菌したぺーパ一ディスク （直径 8画） に表 8に示す各種殺菌剤を 25 1 しみ込ませ、 7日間放置した。 表 1に示す条件で前培養した菌懸濁液を生理 食塩水で希釈後、 このペーパーディスク上に 10 i l しみ込ませた。 1分間放置 後、 直ちに生理食塩水 （1 ml) の入った試験管に移し、 ボルテックスで 1分間 撹拌し、 ペーパーディスク中の菌を溶出させた。 この生理食塩水を希釈し、一 定量を寒天培地上に塗布することにより生菌数をカウントした。 なお、 対照と して永を、 又、 既存の殺菌剤のコント口一ルとして 70%エタノールを用いた。 各実施例の結果を表 9に、 比較例の結果を表 1 Qに示す。 殺菌剤塗布後、 7曰

2

間経過した時点でも、 ユー力リ抽出物 oとキトサンをともに含む各実施例の殺菌 剤には強い殺菌力が維持されており、 ユーカリ抽出物単独 （比較例 1 〜 3 ) あ るいはキトサン単独 （比較例 4 ) で含む殺菌剤と比較して殺菌力が強かった。 表 9 殺菌剤の殺菌力

生菌数 （ 7日間放置後）

(個 Zディスク）

実施例 1 実施例 2 実施例 3

MRSA く 10 < 10 く 10

Staphylococcus aureus く 10 〈10 < 10

Escherichia coli 10 10 30

Salmonella tvphimurium 1.1 X 10: 90 1.2 X 10²

Salmonella enteritidis 30 30 50

Pseudomonas putida <10 く 10 く 10

Bacillus subtilns く 10 く 10 く 10

Bacillus cereus く 10 く 10 く 10

Vibrio parahaemolyticus 〈10 く 10 <10

Arthrobacter globijormis く 10 〈10 <10

Brevibacterium linens く 10 く 10 〈10

Proteus vulgaris フ 0 50 50

Propionibacterium acnes く 10 く 10 く 10

表 1 0

殺菌剤の殺菌力

- il

〔試験例 2〕 抗白癬菌活性測定

乾熱滅菌したペーパーディスク （直径 8 mm) に、 表 8に示す殺菌剤を 25 1 しみ込ませ 24時間放置し、 ペーパーディスクを乾燥させた。 あらかじめ調製し た白癬菌 （Tr i chophyton mentagrophytes ) の胞子懸濁液を塗布した寒天培地 上にこのペーパーディスクを置き、 28。Cで 5日間培養し、 ペーパーディスクの 周りに阻止円ができるかどうかを観察した。 なお、 コントロールに既知の殺菌 剤として 70%エタノールを用いた。 表 1 1に示すように、 ユーカリ抽出物とキ トサンをともに含む各実施例の殺菌剤の方がユー力リ抽出物単独で含む殺菌剤 に比べ径の大きい阻止円が形成された。 一方、 キトサン単独で含む殺菌剤 （比 較例 4 ) では阻止円は形成されなかった。 すなわち、 ユーカリ抽出物に白癬菌 に対する抗菌力に持続性があり、 キトサンにより抗菌力が増強された。

表 1 1 阻止円の直径

例 2 例 3 比較例 1 比較例 2 比較例 3 比較例 4 70%エタノ-ル

21mm 23mm 20mm 12mm 13mm 13mm 形成せず 形成せず 〔試験例 3〕 ステンレス上での殺菌力の持続性試験

滅菌したステンレス板上に表 8に示す各殺菌剤を噴霧し （15 UA m² ) 、 無 菌室内で 7日間放置し乾燥させた。 前記と同様にして前培養した各細菌の懸濁 液を生理食塩水で希釈後、 このステンレス板上に のせた。 10分間放置後、 脱脂綿でステンレス板上の菌を拭き取り、 菌を生理食塩水中に溶出させ、 生菌 数を測定した。 各実施例の結果を表 1 2、 比較例の結果を表 1 3に示す。 なお 、 既存の殺菌剤として 70%エタノールについても比较検討した。 ユーカリ抽出 物とキトサンをともに含む各実施例の殺菌剤を塗布したステンレス板上には、 7日間経過した時点でも、 強い殺菌力力維持されていた。 又、 この殺菌力はュ 一カリ抽出物単独 （比較例 1〜3 ) あるいはキトサン単独 （比較例 4 ) で含む 殺菌剤の殺菌力と比較して強かつた。 1 ² 殺菌剤の殺菌力持铳性

乎 1 つ

殺菌剤の殺菌力持続性

〔試験例 4〕 卵殻上での殺菌力の持続性試験

滅菌した鶏卵殻表面に表 8に示す組成の殺菌剤を噴霧し （15 1ん!11² ) 、 無 菌室内で 7日間放置し乾燥させた。 前培養した菌懸溻液を生理食塩水で希釈後、 この希釈した菌懸濁液 10 1 をこの鶏卵殻表面にのせた。 10分間放置後、 脱脂 綿で鶏卵殻表面の菌を拭き取り、 菌を生理食塩水中に溶出させ、 生菌数を測定 した。 なお、 ブランクとして永を、 コントロールに既知の殺菌剤として 7 0 % エタノールを用いた。 実施例の結果を表 1 4、 比較例の結果を表 1 5に示す。 キトサン単独 （比較例 4 ) 、 ユーカリ抽出物単独 （比較例 1〜3 ) に比べ、 ュ 一カリ抽出物とキトサンをともに含む殺菌剤 （実施例 1〜3 ) では殺菌率が高 かった。 すなわち、 ？日経過した時点でも卵殻表面に殺菌力が維持されていた 表 1 4

殺菌剤の殺菌力持続性

2

。ヽ

表 1 5

殺菌剤の殺菌力持統性

〔実施例 4

製造例 2のユーカ リ抽出物、 キトサン、 グリセリ ン脂肪酸エステル、 及び他 の成分を、 表 1 6に示す割合で混合し、 実施例 4及び比較例 5の殺菌剤を作成 した。 ユー力リ抽出物とキトサンは重量％、 乳酸とエタノールは容量％で示す 表 1 6

実施例 4 比較例 5

ユ-力 Ufffl出物 c globulus

0.010%

キトサン 0.010% 0.010%

乳酸 0.010% 0.010%

エタノール 1% 1%

リセリン脂防酸ニス亍ル 0.05% 無添刀 η 〔試験例 5〕 ステンレス上での殺菌力の持続性試験 （グリセリ ン脂肪酸エステ ルの影響）

表 1 6に示す殺菌剤について、 試験例 3と同様の方法でステンレス上での殺 菌力の持続性を調べた （1ヶ月間放置） 。 結果を表 1 7に示すが、 殺菌剤噴霧 後 （15 l/cm² ) 、 1ヶ月経過した時点で比較した場合、 ユーカリ抽出物とキ トサンにグリセリ ン脂肪酸エステルを添加した組成 （実施例 4 ) では添加しな い組成 （比較例 5 ) に比べ強い殺菌力が維持されていた。

1 7

殺菌剤の殺菌力持統性

2

4

〔実施例 5〜 7〕

製造例 5のユー力リ抽出物とキトサン、 及び他の成分を、 表 1 8に示す割合 で混合し、 実施例 5〜7の殺菌剤を作成した。 キトサンは重量％、 ユーカリ抽 出物、 乳酸は容量％で示す。

表 1 8

〔試験例 6〕 紙面上での殺菌力の持続性試験

表 1 8に示す殺菌剤について、 試験例 1と同様の方法で殺菌力の持続性を調 ベた （？日間放置） 。 その結果を表 1 9に示す。 殺菌剤塗布後、 7日間経過し た時点でも、 ユー力リ抽出物とキトサンをともに含む各実施例の殺菌剤には強 い殺菌力が維持されていた

表 1 9

C乙

〔実施例 8、 9 )

製造例 3のユーカリ抽出物 （B. globulus, E. maculata) とキトサン、 及び 他の成分を表 1 2 0示す割合で混合し、 実施例 8、 9及び比較例 6〜 9の殺菌 剤を作製した。 なお、 ユーカリ、 キトサンは重量％、 乳酸は容量％である。

E.glo: i . globulus, jt.raac: E. macuiata

〔試験例 7〕 肉エキスと混合した場合の殺菌剤の殺菌力試験

表 2 0の殺菌剤について、 以下の方法で牛肉エキス （和光純薬） と混合した 場合、 殺菌力の低下が起こるかどうかを調べた。 又、 次亜塩素酸ナト リウムに ついても比較検討した。 使用した菌株は以下のとおりである。 Staphyl ococcus aureus I F012732. Salmonel la enter itidisI FQ03313o

表 2 0に示した各種殺菌剤 l mlと 5 %牛肉エキス （滅菌蒸留水に溶解） 1 ml を 1対 1の割合で混合し、 室温で放置した。 10分後、 これらの各種殺菌剤及び 混合液にあらかじめ調製しておいた菌液 10^1 を添加し、 攪拌後放置し、 混合 液中の細菌数の変化 （細菌を添加してから 1分後、 5分後、 10分後） を調べた 。 なお、 予備実験より 5%牛肉エキス 1 ml当たりの一般生菌数は 1 Q以下であ ることを確認した。 表 21、 表 22に示すように、 0.02%次亜塩素酸ナトリウ ムは牛肉エキスと混合することにより、 殺菌力が低下することが判明した。 一方、 ユーカリ抽出物とキトサンをともに含む殺菌剤 （実施例 8、 9) では 牛肉エキスと混合しても殺菌力の低下がみられなかった。 又、 ユーカリ抽出物 とキトサンをともに含む殺菌剤 （実施例 8、 9) では、 ユーカリ抽出物単独 （ 比較例 6、 7) 、 キトサン単独 （比較例 8) で含む殺菌剤と比較して殺菌力が 強化されていることが判明した。

表 2 1

菌添 ： 6.7 10 ' ml 表 22

〔実施例 1 0、 1 1〕

製造例 5のュ一カ リ抽出物 （B. gl obul us, E. maculata ) とキトサン、 及 ぴ乳酸を表 2 3に示す割合で混合し、 実施例 1 0、 1 1の殺菌剤を作製した。 なお、 ユー力リ抽出物と乳酸は容量％、 キトサンは重量％である。

表 2 3

〔試験例 8〕 肉エキスと混合した場合の殺菌剤の殺菌力試験

表 2 3に示す殺菌剤について、 試験例 7と同様の方法で殺菌力を調べた。 結 果を表 2 4に示す。 その結果、 各実施例の殺菌剤には、 強い殺菌力があった。 表 2 4

〔実施例 1 2、 1 3〕

製造例 5のユーカリ抽出物 （B. gl obul us)とキトサン、 および乳酸を表 2 5 に示す割合で混合し、 実施例 1 2、 1 3及び比較例 1 (K 1 1の殺菌剤を作製 した。 なお、 ユーカリ抽出物 （プロピレングリコール抽出物） と乳酸は容量％、 キトサンは重量％である。

表 2 5

mき剤の組成

実施例 12 実施例 D 比較例 10 比較例 1 1

ユーカリ h.alobulus c.alobulus 無添加 無添加

柚出物 1.0% 1.0%

キトサン 0.030% 0.030% 無添加 無添刀

乳酸 0.030% 0.30% 0.030% 0.30% 〔試験例 9〕 牛肉と混合した場合の殺菌剤の殺菌力試験

表 2 5に示した各種殺菌剤 100 mlを容器に入れ、 次に牛肉 （ブロック） 21 g をこの殺菌剤中に浸し、 室温で放置した。 2 4時間後、 牛肉を取り除き、 この 殺菌剤中に存在する一般細菌 （牛肉から溶出した細菌） を無菌フィルダーで取 り除いた。 この牛肉処理後の殺菌剤 2 mlに Staphylococcus aureus 、 又は Salm onel la enter i tidi sの菌液 30 1 を添加し、 添加してから 5分後の殺菌剤中の 細菌数を調べた。 また、 次亜塩素酸ナトリウムについても比較検討した。

表 2 6に示すように 0. 01%次亜塩素酸ナトリウムは牛肉と混合した場合、 St aphylococcus aureus、 salmonel la enter i t idisに対する殺 ¾力が低 r L† ₀

2

ユー力リ抽出物とキトサンをともに含o nむ殺菌剤のうち、 乳酸濃度が 0. 030 の殺 菌剤 （実施例 1 2 ) では、 Staphylococcus aureus に対する殺菌力は維持され ていたが、 Sa lmonel la enteri t id isに対する殺菌力の低下を引き起こした。 なお、 この時の殺菌剤の PHは 4. 2 (殺菌前） →5. 9 (殺菌後） に上昇した。 一方、 乳酸濃度が 0. 30%の殺菌剤 （実施例 1 3 ) では、 Staphylococcus aureu s、 Salmonel la enter itidisに対して強い殺菌力が維持されていた。 なお、 こ の時の殺菌剤の PHは 3. 1 (殺菌前） —4. 8 (殺菌後） に上昇した。

以上の結果から、 牛肉殺菌中に牛肉から溶出される成分の影響で殺菌剤の PH が上昇し、 殺菌力の低下を引き起こすが、 あらかじめ殺菌剤中の乳酸濃度を高 くして、 殺菌剤の PHを低い領域 （PH4. 8 付近まで） に維持させておけば、 殺菌 力の低下を防止できることが判明した。

表 2 6

牛肉処理後の殺菌剤の殺菌力

殺菌剤 牛肉 牛肉処理 牛肉処理 salmonella enteritidis Staphylococcus aureus

処理 前の殺菌 後の殺菌 生菌数 （個/ ml) 生菌数 （個/ ml) 剤の pH 剤の pH

0分 5分後 0分 5分後

0.01%次亜塩素酸ナトリウム あり 2.1 X ltf 15 x 10³ 5.0 10， 1.8 ltf

0.01%次亜塩素酸ナトリ ¾ なし 2.1 x ltf <1000 5.0 x ltf <1000 m 1 2 あり 42 5.9 2.1 x 10^s 1.0 x 10^s 5.0 10， 1000 mm i 2 なし 2.1 10⁵ <1(XX) 5.0 ltf <1000 難例 1 3 あり 3.1 4.7 2.1 x 10^s <10∞ 5.0 x 10³ <1000 麵例 1 3 なし 2.1 itf <1000 5.0 x ltf <1000 比較例 1 0 あり 42 5.9 2.1 Itf 4.6 x 10⁵ 5.0 ltf 5.0 ltf 比較例 1 1 あり 3.1 4.7 2.1 x ltf 4.0 x ltf 5.0 ltf 4.7 x 10^! 〔試験例 1 Q〕 殺菌剤で処理した牛肉表面の細菌数の測定

表 2 5に示した実施例 1 2および比較例 1 0の殺菌剤を用いて以下の実験を 行った。 容器内に各殺菌剤 50 ml を入れ、 次に牛肉 （ブロック） 15 gをこの殺 菌剤中に浸し、 室温で放置 （表面殺菌） した。 5分後、 殺菌剤を取り除き、 牛 肉のみを容器内で 4 t:で保存した。 一定時間後 （① 1日後、 ② 3曰後、 ③ 6曰 後） この牛肉の入った容器に 25mlの生理食塩水を添加し、 振盪した。 生理食 塩水中に溶出した牛肉表面の細菌数を測定した。 なお、 殺菌処理する前の牛肉 表面に存在する細菌数は牛肉 1 g当たり 1 Q個 £1下であることを予備実験より 確認した。 又、 滅菌水、 次亜塩素酸ナトリウムについても比較検討した。

表 2 7に殺菌剤処理後の牛肉表面に存在する細菌数 （牛肉 1 g当たり） を示 す。 ユーカリ抽出物とキトサンをともに含む殺菌剤 （実施例 9 ) で牛肉を処理 した場合、 滅菌水、 0. 01%次亜塩素酸ナトリウムで牛肉を処理した場合に比べ、 牛肉表面において細菌の増殖を抑制する効果が認められた。

⁷ 殺菌剤で処理した牛肉表面の細菌数

殺菌剤処理前の牛肉表面の一般細菌数： <10/g 〔実施例 1 4 j

表 2 8に示す組成の飼料を調製し、 乾熱滅菌した。 各成分は重量％である。 —方、 製造例 2のユー力リ抽出物 （B. gl obul us ) とキトサン、 及び他の成分 を表 2 9に示す割合で混合し、 実施例 1 4及び比較例 1 1 1 2に示す組成の 殺菌剤を作製した。 なお、 ユー力リ抽出物とキトサンは重量％、 乳酸、 ェタノ ール、 滅菌水は容量％である。 表 2 8

飼料の組成

表 2 9

〔試験例 1 1〕 殺菌剤配合飼料の殺菌力試験

表 2 9に示す実施例 1 4および比較例 1 1、 1 2の殺菌剤 1 0 m 1を表 2 8 に示す飼料 1 0 gと混合し、 乾燥させた。 この飼料 1 gに表 1に示す条件で前 培養した大腸菌： Escher ichia col i I F012734の菌液を生理食塩水で希釈後、 こ の希釈した菌液 をしみ込ませ室温で放置した。 一定時間後 （3日後、 6 日後、 1 5日後） 、 飼料に生理食塩水を添加、 攪拌し、 飼料中に存在する細菌 を遊離させた。 この生理食塩水に存在する生菌数を調べ、 飼料 l g当たりに存 在する生菌数を求めた。 表 3 Qに結果を示すが、 ユー力リ抽出物とキトサンを 配合した飼料 （実施例 1 4 ) ではコントロール （比較例 1 1， 1 2 ) に比べ細 菌の増殖が抑制された。 飼料の殺菌力

接種菌数 生菌数 （個/ g) Escherichia coli

(個/ g) 3日後 6日後 1 5日後

錢例 1 4 2.2 X 10⁴ く 200 く 200 1.2 X 10³

比較例 1 1 2.2 X 10⁴ 8.4 x lO⁴ 1.4 10⁶ 2.1 X 10⁸

比較例 1 2 2.2 X 10⁴ 8.6 lO⁴ 1.4 X 10⁶ 2.1 X 10⁸ 〔実施例 1 5〕

製造例 2のユー力リ抽出物とキトサン、 及び他の成分を表 3 1に示す割合で 混合し、 実施例 1 5及び比較例 1 3の殺菌剤を作製した。 なお、 ュ—力リ抽出 物とキトサンは重量％、 乳酸は容量％でフ

表 3 1

3

〔試験例 1 2〕 ウエッ トティ ッシュの殺菌力持続性試験

表 3 1に示す殺菌剤 100 m lをティッシュペーパー 2 0 gに舍浸させ、 ゥエツ トテイツシュを作成した。 無菌室内であらかじめ滅菌しておいたステンレス板 の一角 （1cm lcm ) をこのゥエツ トティ ッシュで拭き、 2 4時間放置した。 各菌株について菌懸濁液を 10 ^ 1 をステンレス板上にのせた。 10分間放置後、 滅菌した綿棒でステンレス板をふき取り、 この綿棒を生理食塩水中に移し、 撹 拌した。 この生理食塩水を一定量寒天培地に塗布し、 生菌数を測定じた。 表 3 2に結果を示すが、 実施例 1 .5を含浸させたゥエツ トティッシュでステ ンレス板を拭いた場合、 2 4時間経過した時点でもステンレス板上には強い殺 菌力が維持されていた。

表 3 2

ウエットティッシュで 4 at、たステンレス上の殺菌力持続性

接種菌数 生菌数 （個/ l OOcm

(個/ ml) 実施例 15 比較例 13

St pnvlococcus aureus 1.2 X 10。 < 100 1.1 X 10'

MRSA 2.5 10⁶ く 100 2.5 \ 0⁶

Escherichia coli 8.4 X 10⁵ < 100 8.5 X 10⁵

Bacillus sub ti lis 6.5 X 1 0⁵ く 100 6.5 X 10⁵ 〔実施例 1 6〕

製造例 2のュ—力リ抽出物とキトサン、 及び他の成分を表 3 3に示す割合で 混合し、 実施例 1 6及び比較例 1 4の殺菌剤を作製した。 なお、 ユー力リ抽出 物とキトサンは重量％、 乳酸は容量％で示す。

表 3 3

3

〔試験例 1 3〕 おむつの殺菌力試験

表 3 3に示す殺菌剤 100 mlをおむつ基紙 （30x 65 cm ) 15 gに含浸させ、 乾 燥させ、 紙おむつを作製した。 この紙おむつを正方形 （1 X lcm ) に切り取り、 ォ一トクレーブで滅菌した。 切り取った紙おむつ 0. 75 gを 300 ml容三角フラス コ （生理食塩水 7 O ml) に添加した。 次に、 各菌株の菌懸濁液 5 mlをこの三角 フラスコに添加し、 2 5 tで振盪した （回転数 320rpm) 。 1時間後に三角フラ スコの生理食塩水 l mlを取り出し、 希釈後、 寒天培地に塗布することにより、 生理食塩水中に存在する生菌数を求めた。 なお、 ブランクとして紙ォムッを添 加しない場合、 コント σ—ルとして殺菌剤を含浸させない場合の滅菌率も求め た。 滅菌率は 下の計算式より求めた。 表 3 4に結果を示すが、 ュ—力リ抽出 物とキトサンを含む殺菌剤 （実施例 1 6 ) を含浸させた紙おむつの各菌に対す る滅菌率は 99. 9%であり、 コントロールに比べ強い殺菌効果があることが判明 し c

表 3 4

- 1

〔実施例 1 Ί〕

製造例 2のユーカ リ抽出物、 キ トサン、 グリセリ ン脂肪酸エステル、 及び他 の成分を表 3 5に示す割合で混合し、 実施例 1 7及び比較例 1 5の殺菌剤を作 製した。 なお、 ユーカ リ抽出物とキトサンは重量％、 グリセリ ン脂肪酸エステ ル、 乳酸は容量％ - 表 3 5

3

3

10

〔試験例 1 4〕 殺力ビ試験

表 3 5に示す殺菌剤 1 m 1を入れた滅菌試験管に力ビ （Aspergillus niger IF09455, Penicillium citrinum IFD6352 ) の胞子懸濁液 50 1 を添加し、 攪 拌後、 室温で放置した。 1時間後、 一定量をポテトデキストロース培地に塗布 し、 力ビのコ口二一数 （生菌数） を調べた。 表 3 6に結果を示すが、 ュ—力リ 抽出物とグリセリ ン脂肪酸エステルを共に添加した殺菌剤 （実施例 1 7) は、 ユー力 リ抽出物単独 （比較例 1 5) 、 グリセリ ン脂肪酸エステル単独 （比較例 1 り ) に比べてカヒ (Aspergillus niger ， Penicillium citrinum) に対する

20 殺菌効果が強いことが判明した。

表 3 6

25 〔試験例 1 5〕 抗カビ試験

表 3 5に示す実施例 1 7の殺菌剤 100 mlをおむつ基紙 （30x 65 cm ) 15gに 舍浸させ、 乾燥させ、 紙おむつを作製した。 この紙おむつを正方形 （1 X lcm) に切り取り、 ォ一トクレーブで滅菌し後、 あらかじめ、 カビ （Aspergillus ni ger , Penicillium citrinum) の胞子懸濁液を塗布したポテトデキストロース 寒天培地上に置き、 2 8 tで 7日間静置培養した。 なお、 コン トロールとして 殺菌剤を含浸させない紙おむつを用いた。 表 3 7に結果を示すが、 実施例 1 7 の殺菌剤では阻止円 （ハロー） が形成され、 抗カビ力があることが判明した。 表 3 7

〔試験例 1 6〕 急性毒性試験

製造例 2のュ一カリ抽出物 （B. globulus及び B. maculata ) をエタノール オリ一ブオイル （1Z1) に溶解し、 4 5日齢のマウスに経口投与 （各試験 区 1 0匹使用） 、 及び皮下注射した （各試験区 1 0匹使用） 。 経口投与では 0. 5 〜145g/kgまでの 6水準、 又、 皮下注射では 0.3 〜6.5g/kg までの 6永準に ついて急性毒性試験を行い、 2週間マウスの状態を観察した。 いずれの試験区 においてもマウスは生存し、 皮膚の異常も見られなかった。 この毒性試験結果 は、 厚生省の普通薬としての急性毒性基準であるマウス皮下注射 LD₅D〉0.2g/k g よりも遥かに高い値であり、 非常に安全な医薬 ·医薬部外品であることを示 す。 産業上の利用可能性

以上説明したように本発明にかかる殺菌剤は、

① 一般家庭や飲食店等において、 亍—ブル、 食器類、 まな板、 調理台、 トイ レの便座等の家庭用品；畜舎、 鶏舎、 動物飼育用建物の器具類；食肉加工施設 の機械類；人や動物等の皮膚、 鶏卵やゥズラ等の卵殻；の殺菌剤として、

②、 病院や老人ホームにおいて、 ド了、 ドアの取っ手、 床、 べッ ドの手すり、 手術用器具等の医療機器、 医療設備；肉、 魚、 野菜等の生鮮食品；植物種子； の殺菌剤として、

③ ゥ ッ トティシュ、 おむつ、 シーツ類、 衣類、 衛生綿類、 おしり拭き、 不 織布、 油取り紙、 食品包装用の紙類 （シート） 、 食品の下に敷く紙類 （シート ) 、 下紙スリッパ、 おしぼり、 タオル、 カバーなどの生活用品；、 動物 ·魚類 等の飼料； ガム、 キヤ ンディ一、 かまぼこ、 ちくわ等の水産ねり製品、 ソーセ ージ、 ハム等の畜産製品、 洋菓子類、 和菓子類、 生めん、 ソバ等のめん類、 ソ ース、 醬油等の調味料、 漬物、 惣菜等、 卵加工品、 サンドイ ッチ、 マヨネーズ 、 シュ一クリーム等の食料品；に殺菌力を付加する殺菌剤として、

3

④ 石鹼、 洗浄剤、 クリームのような 5化粧品類；に配合したり、 経口薬剤等； に添加する殺菌剤として、

使用することができる。

Claims

請求の範面

1 . ユー力リ属植物葉の極性溶媒抽出物とキトサンとを含む殺菌剤。

2 . ユーカリ属植物葉の極性溶媒抽出物、 キトサンおよぴグリセリン脂肪酸ェ ステルを含むことを特徵とする殺菌剤。

3 . 前記極性溶媒抽出物が、 低級アルコールまたはグリコール類から選ばれた ものである請求の範囲 1または 2記載の殺菌剤。

4 . ユーカリ属植物葉の極性有機溶媒抽出物が、 非極性有機溶媒による脱脂ま たは水蒸気蒸留により精油を除去したユー力リ属植物葉を極性有機溶媒で抽 出した画分である請求の範囲 1または 2記載の殺菌剤。

5 . 前記極性有機溶媒が、 ハ Dゲン化炭化水素、 エーテル、 低級脂肪酸エステ ル、 ケトン、 低級アルコールから選ばれる溶媒またはこれらの任意の混合溶 媒である請求の範囲 4記載の殺菌剤。

6 . 前記非極性有機溶媒がアル力ンである請求の範囲 4記載の殺菌剤。

7 . ユー力リ属植物葉の極性溶媒抽出物およびキトサンを合計量で 0. 0001~10 重量％舍有し、 グリセリ ン脂肪酸エステルを 0. 0001〜20重量％含有する請求 の範囲 1または 2記載の殺菌剤。

8 . ユーカリ属植物葉の極性溶媒抽出物が、 下記式 （I ) で表わされるジヒ ド 口カルコン化合物を主要な殺菌成分として含むことを特徴とする請求の範囲 1または 2記載の殺菌剤。

9. ニキビ菌に対して用いられる請求の範画 1記載の殺菌剤。

1 0. 白癬菌に対して用いられる請求の範画 1記載の殺菌剤。

1 1. ァスペルギルス属（Aspergillus) 、 ペンシリウム属（Penci 11 ium)に対し て用いられる請求の範囲 1または 2記載の殺菌剤。

1 2. 鳥類卵殻に対して使用可能な請求の範囲 1または 2記載の殺菌剤。

1 3. 家庭用品、 医療機器、 医療施設または食肉加工施設に対して使用可能な 請求の範囲 1または 2記載の殺菌剤。

1 4. 食肉等の生鮮食品または植物種子に対して使用可能な請求の範囲 1また は 2記載の殺菌剤。

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1 5. 食料品や動物用飼料に対して使用可能な請求の範囲 1または 2記載の殺

1 6. ウエッ トティッシュやタオル、 おむつ等の生活用品に対して使用可能な 請求の範囲 1または 2記載の殺菌剤。