WO1998022505A1

WO1998022505A1 - Polypeptides solubles

Info

Publication number: WO1998022505A1
Application number: PCT/JP1997/004195
Authority: WO
Inventors: Shogo Koshida
Original assignee: Sumitomo Electric Industries, Ltd.
Priority date: 1996-11-18
Filing date: 1997-11-18
Publication date: 1998-05-28
Also published as: KR20000053277A; KR100522509B1; AU4967397A; EP1008603A4; CA2272356A1; AU730367B2; JPH10147597A; DE69735533T2; CN100413888C; CA2272356C; CN1237982A; JP3903503B2; EP1008603A1; DE69735533D1; EP1008603B1; US6372890B1

Description

明細書

可溶性ポリペプチド ― 技術分野

本発明は、上皮細胞に対して形態形成促進作用や細胞増殖作用を有する新規な可溶性ポリべプチドに関するものである。背景技術

上皮組織の正常な形態形成は上皮組織の周りに存在する間充織細胞由来の因子による制御されていることが示唆されている。また、上皮組織の形態形成異常に起因する疾患の原因の多くが間充織細胞の異常によるものとされている。係る知見に基づき、間充織細胞による上皮組織の形態形成の制御メカニズムの解明に対して興味がもたれている。しかし、上皮組織の形態形成の制御に関与する物質群は複雑な系の中で時間的及び空間的な制御を受けて発現されており、それらの物質を単離して機能を解析することは極めて困難であること、また、上皮組織の形態形成を単純化したモデル実験系を構築することも難しいことなどの理由から、この分野の研究には今日まで大きな進展が見られていない。従って、上皮組織の形態形成に起因する疾患の発症機序の解明や、それらの疾患の治療方法の確立などのために、上皮組織における形態形成の制御メカニズムの解析が強く切望されている。

このような状況下にあって、上皮組織の形態形成の制御に関与するェピモルフイン（epimorphin) が分離 '精製された（特開平 6- 25295 号公報）。この物質は 277 ないし 289個のアミノ酸からなる蛋白質をコア ·蛋白質とする生理活性物質であり、主として間充織細胞により生合成されていることが明らかにされた。また、ェピモルフインは、上皮細胞に作用して上皮組織の形態形成を促進する作用を有していること、並びにェピモルフィンが機能を発揮しない条件では正常な組織形成が行われないことも明らかにされた。

また、ェピモルフインの構造的特徴については、ェピモルフイン分子が構造上大きく 4個のフラグメントに分けられることが見いだされている（欧州特許公開第 0698666 号）。すなわち、ェピモルフインの全長を構成するポリペプチドは、 N末端側より、コイルドコイル領域（1 ) 、機能ドメイン（2 ) 、コイルドコイル領域（3 ) 、及び C末端の疎水性領域に分けることができる。これらのフラグメントのうち、機能ドメィン（ヒト 'ェピモルフィンでは N末端より 104 番目から 187 番目のアミノ酸により特定される領域）については、この領域が細胞接着に関与しており、ェピモルフィンの生理活性の発現に密接にかかわつていることが示唆されている（上掲欧州特許公開第 0698666 号） o

ェピモルフィンが正常な形態形成を促進する作用を有することから、この物質は、形態形成の異常に起因する疾患などの予防や治療のための医薬や、又は育毛剤などの医薬の有効成分として有用であることが期待される。しかしながら、哺乳類動物から得られた天然型ェピモルフィンは生理食塩水などの水性媒体に難溶であり、医薬として実用に供することが困難であった。このため、天然型ェピモルフィンの形態形成促進作用を実質的に保持しつつ、溶解性に優れたェピモルフイン誘導体を創製する試みがなされている。例えば、 C末端部の疎水性領域を除去した改変体（フラグメント 123 )などが知られている（特開平 6-25295 号公報） _c ェピモルフインの部分構造であるコイルドコイル領域（1 ) については、従来、この領域がェピモルフィンを可溶化させる作用を有することが明らかにされている。しかしながら、ェピモルフインの N末端側からアミノ酸を除去してコイルドコイル領域（1 ) の一部を除去すると、得られた改変体の細胞接着活性が低下してしまうことも同時に明らかにされた（欧州特許公開第 0698666 号）。すなわち、この領域の作用については、可溶性の面ではフラグメント（23 )の高次構造を変化させる等の作用によりポジティブに働くが、細胞接着活性については機能ドメイン（2 ) をマスクする等の作用によりネガティブに働くと開示されており、医薬としての適用可能性について否定的な示唆がある。なお、ェピモルフインの上記各領域（コイルドコイル領域（1 ) 、機能ドメイン（2 ) 、又はコイルドコイル領域 (3) ) のそれぞれの生理作用については、細胞接着活性についての報告はあるものの、ェピモルフィンに類似の形態形成促進作用については従来知られていない

発明の開示

本発明の課題は、上皮細胞に対して形態形成促進作用を有する可溶性ポリぺプチドを提供することにある。より具体的には、上皮細胞に作用して上皮組織の形態形成を促進し、かつ生理食塩水などの水性媒体に溶解可能なポリぺプチドを提供することが本発明の課題である。

また本発明の別の課題は、上記の特徴を有するポリべプチドを有効成分として含み、形態形成因子、例えばェピモルフインの過少発現に起因する、又は組織又は器官の破壊を伴う疾患の予防及び/又は治療に有用な医薬を提供することにある。さらに本発明の別の課題は、上記の可溶性ポリペプチドを有効成分として含む毛成長促進剤を提供することにある。

本発明者は上記の課題を解決すべく鋭意努力した結果、ェピモルフインを構成するコイルドコィル領域（ 1 ) からなるポリべプチドが、水性媒体に溶解可能であり、かつ、上皮細胞に作用して上皮組織の形態形成を促進すること、並びに上皮細胞に対して顕著な細胞増殖促進作用を有することを見いだした。本発明は上記の知見を基にして完成されたものである。ここで、「細胞増殖促進作用」とは、無血清培地で細胞を数日間培養してその生細胞数を増やすことができることを意味するものとする。すなわち本発明は、形態形成促進作用を有するポリペプチドであって、下記のアミノ酸配列（I ) (配列表の配列番号 1 ) ：

Met Arg Asp Arg Leu Pro Asp Leu Thr Ala Cys Arg

Lys Asn Asp Asp Gly Asp Thr Val Val Val Val Glu

Lys Asp His Phe Met Asp Asp Phe Phe His Gin Val Glu Glu lie Arg Asn Ser lie Asp Lys lie Thr Gin

Tyr Val Glu Glu Val Lys Lys Asn His Ser lie lie

Leu Ser Ala Pro Asn Pro Glu Gly Lys lie Lys Glu

Glu Leu Glu Asp Leu Asn Lys Glu lie Lys Lys Thr

Ala Asn Lys He Arg Ala Lys Leu Lys Ala He Glu

Gin Ser Phe Asp Gin Asp Glu

により特定されるポリペプチド（本明細書においてこのポリペプチドを「ポリべプチド（I) 」という場合がある）を提供するものである。

また、本発明により、形態形成促進作用を有するポリペプチドであって、下記のアミノ酸配列（II) (配列表の配列番号 2) ：

Met Arg Asp Arg Leu Pro Asp Leu Thr Ala Cys Arg

Thr Asn Asp Asp Gly Asp Thr Ala Val Val lie Val

Glu Lys Asp His Phe Met Asp Gly Phe Phe His Gin

Val Glu Glu lie Arg Ser Ser He Ala Arg lie Ala

Gin His Val Glu Asp Val Lys Lys Asn His Ser lie

lie Leu Ser Ala Pro Asn Pro Glu Gly Lys lie Lys

Glu Glu Leu Glu Asp Leu Asn Lys Glu lie Lys Lys

Thr Ala Asn Arg lie Arg Gly Lys Leu Lys Ser lie

Glu Gin Ser Cys Asp Gin Asp Glu

により特定されるポリペプチド（本明細書においてこのポリペプチドを「ポリべプチド（11)」という場合がある）が提供される。

さらに、本発明によれば、上記アミノ酸配列（I) 若しくは（II)において 1又は 2以上のアミノ酸が置換、付加、及び/又は欠失されたことを特徴とするポリべプチド；天然型ェピモルフインの形態形成促進作用と実質的に同様の形態形成促進作用を有する上記の各ポリペプチド；並びに、さらに細胞増殖促進作用を有する上記の各ポリペプチドも提供される。ここで、「アミノ酸の置換、付加、欠失」は、例えば部位特異的変位誘発（site- directed mutagenesis )と呼ばれる方法により行うことができる。

本発明の別の態様によれば、上記のポリべプチドを有効成分として含む医薬が提供される。この医薬の好ましい態様として、形態形成因子の過少発現に起因する、又は組織若しくは器官の破壊を伴う疾患の治療及び/又は予防のために用いる医薬；並びに、毛成長促進剤として用いる医薬が提供される。これらに加えて、上記のポリペプチドをヒトを含む哺乳類に投与する工程を含む、形態形成因子の過少発現に起因する、又は組織若しくは器官の破壊を伴う疾患の治療及び/又は予防方法；上記のポリぺプチドをヒトを含む哺乳類に投与する工程を含む、ェピモルフィンの発現過少に起因する疾患の診断方法；並びに、上記のポリぺプチドをヒトを含む哺乳類に投与する工程を含む毛の成長促進方法が提供される。

本発明のさらに別の態様によれば、本発明の上記ポリべプチドを特異的に認識する抗体、好ましくはモノクローナル抗体が提供される。上記抗体の好ましい態様として、上記ポリペプチドに特異的に結合し、上皮細胞に対する上記ポリぺプチドの形態形成促進作用を阻害する抗体；並びに、コイルドコイル領域（1 ) を有するェピモルフイン類に特異的に結合し、上皮細胞に対する上記ェピモルフィン類の形態形成促進作用を阻害する抗体が提供される。また、上記抗体を有効成分として含む医薬、好ましくはェピモルフィンの発現過多に起因する疾患の予防及び/又は治療に有用な医薬、並びに、毛成長阻害剤として用いる医薬が提供される。これらに加えて、上記の抗体をヒトを含む哺乳類に投与する工程を含む、ェピモルフィンの発現過多に起因する疾患の治療及び/又は予防方法；上記の抗体をヒトを含む哺乳類に投与する工程を含む、ェピモルフィンの発現過多に起因する疾患の診断方法；並びに、上記の抗体をヒトを含む哺乳類に投与する工程を含む毛の成長阻害方法が提供される。図面の簡単な説明図 1は、例 2の試験のコントロールとして、 MDCKII細胞（腎臓由来細胞株）を DH- medium のみで培養した細胞の形態を顕微鏡下に撮影した写真である。

図 2は、本発明のポリペプチド（15 g/ml) の存在下で MDCKII細胞（腎臓由来細胞株）を培養した細胞及び該細胞由来の組織の形態を顕微鏡下に撮影した写真である。

図 3は、本発明のポリペプチド（15〃g/ml) の存在下で DCKII細胞（腎臓由来細胞株）を培養した細胞及び該細胞由来の組織の形態を、図 1及び図 2の場合よりもさらに高倍率で顕微鏡撮影した結果を示す写真である。

図 4は、例 4の試験のコントロールとして、 MDCKII細胞（腎臓由来細胞株）を DH - medium のみで培養した細胞の形態を顕微鏡下に撮影した写真である。

図 5は、例 4の試験のコントロール（陽性対照）として、ゲル中に本発明のポリペプチド（HI, 3 ig/ml) を添加して MDCKII細胞（腎臓由来細胞株）を培養した場合の細胞及び該細胞由来の組織の形態を示す写真である。

図 6は、ゲル中に本発明のポリペプチド（HI, 3〃g/ml) 及び抗111抗体（5.2 ^/1111) を添加して MDCKII細胞（腎臓由来細胞株）を培養した場合の細胞及び該細胞由来の組織の形態を示す写真である。

図 7は、ゲル中に本発明のポリペプチド（HI, 3〃g/ml) 及び抗 HI抗体（26 g/ml) を添加して MDCKII細胞（腎臓由来細胞株）を培養した場合の細胞及び該細胞由来の組織の形態を示す写真である。

図 8は、ゲル中に本発明のポリペプチド（Hl， 3/ g/ml) 及び抗 HI抗体（130 /g/ml) を添加して MDCKII細胞（腎臓由来細胞株）を培養した場合の細胞の形態を示す写真である。

図 9は、ゲル中に本発明のポリペプチド（Hl， 3 /g/ml) 及び抗 H3抗体 (5.2〃g/ml) を添加して MDCKII細胞（腎臓由来細胞株）を培養した場合の細胞及び該細胞由来の組織の形態を示す写真である。

図 1 0は、ゲル中に本発明のポリペプチド（HI, 3〃g/ml) 及び抗 H3抗体 (26 jug/ ml ) .を添加して MDCKI I細胞（腎臓由来細胞株）を培養した場合の細胞及び該細胞由来の組織の形態を示す写真である。

図 1 1は、ゲル中に本発明のポリペプチド（HI, 3 ig/ml ) 及び抗 H3抗体（130〃g/ ml ) を添加して DCKI I細胞（腎臓由来細胞株）を培養した場合の細胞及び該細胞由来の組織の形態を示す写真である。発明を実施するための最良の形態

本発明により提供される上記のポリペプチド（I ) は、ヒト 'ェピモルフインの N末端の 1番目から 103 番目のアミノ酸により特定されるコイルドコイル領域（1 )

(欧州特許公開第 0698666 号）に相当するものである。また、上記ポリべプチド（II )は、マウス ·ェピモルフィンの N末端の 1番目から 104 番目のアミノ酸により特定されるコイルドコイル領域（1 ) (上掲欧州特許公開 0698666 号）に相当している。これらのポリペプチドは、天然型ェピモルフインに比べて水溶性に優れており、蒸留水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの水性媒体に可溶であることを特徴としている。例えば、このポリペプチドを水性媒体に溶解して 100, 000 xg で 1〜2 時間遠心処理しても 0.2 mg/ml 以下の濃度であれば実質的に沈殿の生成が認められない。もっとも、本明細書において用いられる「可溶」という用語を上記の特定の溶解性に限定して解釈すべきではない。

また、上記ポリペプチド（I ) 又はポリペプチド（I I ) は、天然型ェピモルフィンの上皮細胞に対する形態形成促進作用と実質的に同様の作用を有することを特徴としている。天然型ェピモルフインとは、例えば哺乳類などの間充織細胞によつて生合成されるェピモルフィンのことを意味する。天然型ェピモルフィンとしては、例えば、ヒト、サル、ゥシ、ゥマ、ヒッジ、ィヌ、ネコ、ゥサギ、ラット、マウスなどに由来するェピモルフィン、好ましくはヒト由来のェピモルフィンなどを挙げることができる。

天然型のェピモルフィンには、遺伝子のスプライシングにより複数のアイソフオームが存在する場合がある。例えば、ヒト ·ェピモルフィンについては、特開平 6- 25295 号公報に示されているように 288個のアミノ酸からなるヒト 'ェピモルフィン、並びにそれぞれ 287 個及び 277個のアミノ酸からなるヒト ·ェピモルフィンのァイソフォ一ム A及び Bが存在しており、マウス 'ェピモルフィンについては、 289個のアミノ酸からなるマウス 'ェピモルフイン、並びにそれぞれ 2 88個及び 279個のアミノ酸からなるマウス ·ェピモルフィンのアイソフォーム A 及び Bが存在している。本明細書において天然型ェピモルフィンという場合には、これらのアイソフォーム類をすベて含む概念として用いる。

本発明のポリペプチドには、上記のポリペプチド（I ) 及びポリペプチド（I I )のほか、上記ポリペプチド（I ) 又はポリペプチド（II )の構成アミノ酸のうちの 1個または 2個以上のアミノ酸が他のアミノ酸によって置換されており、これらの構成アミノ酸のうちの 1個または 2個以上のァミノ酸が欠失しており、及び/又は上記ポリぺプチド鎖中に 1個若しくは 2個以上の任意のアミノ酸が付加された上記ポリペプチド（I ) 又はポリペプチド（I I )のアミノ酸変異体であって、実質的に上皮細胞に対して形態形成促進作用や細胞増殖作用を有するポリぺプチドが包含される。置換及び/又は付加される 1又は 2以上のアミノ酸の種類は特に限定されないが、 L-アミノ酸であることが好ましい。

本発明のポリペプチドには、上記のポリペプチド（I ) 若しくはポリペプチド（I 1 )、又はそのアミノ酸変異体をその部分配列として含み、実質的に形態形成促進作用や細胞増殖作用を有するポリペプチドが包含される。例えば、上記のポリべプチド（ I ) 又はポリペプチド（ 11 )の N末端及び/又は C末端には 1個又は 2個以上のアミノ酸が結合していてもよく、好ましくは、 2個以上の任意のアミノ酸から構成される任意のオリゴぺプチドが結合していてもよい。このようなアミノ酸の種類は特に限定されないが、 L-アミノ酸から選択されることが好ましい。例えば、上記ポリペプチド（I ) 又はポリペプチド（I I )の N末端に 1〜10個程度、好ましくは 5〜7個、特に好ましくは 6個の L-ヒスチジンをタグ配列として結合したものは、付加したタグ配列に特異的に結合する抗体やニッケル等の物質を用いて簡便に精製、検出できるので、生産効率などの観点から好ましいポリペプチドである。また、親水性や体内安定性を高めるなどの機能性の改善や、形態形成促進作用を高めるなどの目的で特定の夕グ配列をポリべプチドに付加することも可能である。その他、特定分子に結合可能なタグ配列を付加することにより、特定の組織又は器官に対するドラッグデリバリ一効率を改善した融合蛋白質などを製造することもできる。

上記のポリペプチドは遊離形態であってもよいが、塩酸塩、酢酸塩、若しくはパラトルエンスルホン酸などの酸付加塩、又はアンモニゥム塩若しくは有機アミン塩などの塩基付加塩として提供されてもよい。従って、本明細書においてポリぺプチドという場合には、上記のような塩の形態のポリべプチドを包含する意味に解釈されるべきである。また、上記の各ポリペプチドに任意の糖類（単糖、二糖、オリゴ糖、若しくは多糖）が結合したものや脂質類などが結合したもののほか、リン酸化されたものも本発明のポリべプチドの範囲に包含される。

本明細書の実施例には、上記可溶性ポリぺプチドの好ましい態様であるポリぺプチド（I ) について、腎臓由来 DCKI I 細胞に対する形態形成促進作用の試験方法が具体的に説明されている。従って、当業者はこれらの試験例を参照しつつ、あるいはこれらの方法に適宜の改変や修飾を加えることにより、上記に定義された各ポリべプチドが所望の形態形成促進作用を有していることを容易に確認することができる。なお、上皮組織に対するェピモルフインの形態形成の促進作用は、例えば、特開平 6-25295 号公報の実施例にも詳細に記載されているので、このような試験系を応用することによつても形態形成促進作用を確認することが可能でめる。'

いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、天然型ヒト ·ェピモルフィンは、中央フラグメント（機能ドメイン： N末端より 104 番目から 187番目のアミノ酸残基により特定されるフラグメント）に存在する細胞接着性領域が上皮細胞の細胞外表面に存在するェピモルフィン · レセプターに結合することによって上皮細胞表面に固定されるとともに、ポリペプチド（I ) を含む領域（天然型のヒト •ェピモルフィンのコイルドコイル領域：ェピモルフィンの N末端から 103 番目のアミノ酸残基までの部分）が形態形成に関与するレセプ夕一に結合ないし作用して形態形成作用を発現している可能性がある。

なお、本発明の上記ポリペプチドは、上皮組織に対して天然型ェピモルフインと実質的に同様の形態形成促進作用を有しているが、その作用の強弱は特に限定されない。例えば、天然型のヒト 'ェピモルフインと同程度又はそれ以下の濃度で形態形成促進作用を発揮できることが好ましい。なお、本明細書の実施例には形態形成促進作用の代表的試験方法（腎由来細胞に対する管構造形成作用の試験方法）を具体的に記載したが、上記ポリペプチドの形態形成促進作用はこの作用に限定されることはない。また、本発明のポリペプチドは上皮細胞に対して強力な細胞増殖促進作用を有している。従って、本発明のポリペプチドによる達成される形態形成は、細胞の増殖（細胞数の増加）を伴う形態形成であることを特徴としている。本明細書の実施例には本発明のポリべプチドによる細胞増殖促進活性の試験例が開示されているが、本発明のポリべプチドの細胞増殖促進作用はこの試験例により明らかにされた特定の作用に限定されることはない。

なお、天然型ェピモルフィンについて数種の形態形成促進作用が報告されているが、それらは天然型ェピモルフインの奏する多様な形態形成促進作用の一部である可能性があることを理解すべきである。従って、形態形成促進作用という用語は、従来報告又は確認されている形態形成促進作用に限定されず、最も広義に解釈する必要がある。また、例えば、形態形成誘導活性、器官 ·形態形成支持作用などの概念も形態形成促進作用に包含される概念である。さらに、実質的に同様という用語も限定的に解釈すべきではない。本発明のポリぺプチドが天然型ェピモルフインの形態形成促進作用に加えて、その作用とは異なる他の形態形成作用を有している場合も本発明の範囲に包含される。上記ポリべプチドは、ぺプチド合成に通常用いられる固相法および液相法などの化学的手法により合成することができる。ぺプチド合成におけるアミノ基等の保護基および縮合反応の縮合剤としては、例えば：鈴木紘ー編「タンパク質工学

—基礎と応用」（1992年，丸善株式会社）；ボンダンスキーら著「ぺプタイド · シンセシス」（1976 年， John Wiley & Sons, N. Y. )；及びスチュヮ一トら著「ソリッド · フェーズ ·ぺプタイド ·シンセシス」（1969 年， W.H. Freeman and Co. , San Francisco)等に記載されたものを用いることができる。固相法では市販の各種ペプチド合成装置を利用することができる。また、通常の遺伝子発現操作等の生物学的手法に従って、上記ポリペプチドをコードする DNA配列を含む組み換えベクターを製造した後、該ベクタ一により形質転換された微生物（形質転換体）を調製し、該形質転換体を培養した培養物から所望の上記可溶性ポリべプチドを分離 ·精製することができる。もっとも、上記可溶性ポリペプチドの製造方法はこれらの化学的方法及び生物学的方法に限定されることはない。

遺伝子発現による製造方法に利用可能な DNA としては、下記塩基配列：

ATG CGG GAC CGG CTG CCA GAC CTG ACG GCG TGT AGG AAG AAT GAT GAT GGA GAC ACA GTT GTT GTG GTT GAG AAA GAT CAT TTC ATG GAT GAT TTC TTC CAT CAG GTG GAG GAG ATT AGA AAC AGT ATT GAT AAA ATA ACT CM TAT GTT GAA GAA GTA AAG AAA AAC CAC AGC ATC ATT CTT TCT GCA CCA AAC CCG GAA GGA AAA ATA AAA GAA GAG CTT GAA GAT CTG AAC AAA GAA ATC AAG AAA ACT GCG AAT AAA ATT CGA GCC AAG TTA AAG GCT ATT GAA C AGT TTT GAT CAG GAT GAG

などを挙げることができる（相補的な塩基配列を省略してセンス鎖のみを示し、配列中、始点が 5'末端であり、終点が 3'末端である）。

この DNA は、天然型ヒト ·ェピモルフインの全長をコードする DNA (特開平 6- 2 5295 号公報に開示された式（6 )で表される核酸配列）のうち、第 1番目から第 309 番目のヌクレオチドまでに相当しており、上記ポリペプチド（I ) をコードする D NA である。上記ポリペプチド（I I )の製造には、例えば、天然型マウス ·ェピモルフィンの全長をコードする DNA (特開平 6- 25295 号公報に閧示された式（12)で表される核酸配列）のうち、第 1番目から第 312 番目のヌクレオチドにより特定される DNA を用いることができる。

また、上記のヒト由来の DNA 又はマウス由来の DNA を用いて常法によりアミノ酸変異体を容易に製造することが可能である。このような方法としては、例えば、「P C R実験マニュアル」（1991年， HJB 出版局）第 155 〜： 160 頁に記載されているリコンビナント PCR 法や「実験医学増刊 Vol.8， No.9」 ( 1990 年，羊土社）第 63〜67頁に記載された PCR を用いた変異遺伝子の作成法などを利用することができる。所望のポリぺプチドを製造するために利用可能な遺伝子発現方法としては、例えば、欧州特許公開第 0698666号明細書の実施例に詳細に記載された方法を利用することができるが、これらの方法に限定されることはない。

本発明の上記ポリペプチドは、上皮細胞に作用して、上皮性の組織又は器官等の形態形成を促進する作用を有している。従って、本発明のポリペプチドは、内因性の形態形成因子の過少発現などに起因する組織や器官の形態形成の異常を伴う疾患、又は組織又は器官の破壊を伴う疾患の治療及び/又は予防のための医薬あるいは上記疾患の診断のための医薬の有効成分として有用である。また、上記ポリべプチドは、毛成長促進剤として用いる医薬の有効成分としても有用である。本明細書における医薬という用語は、ヒトを含む哺乳類の病気の予防、治療、及び診断に用いるもののほか、通常は医薬部外品として分類される毛成長促進剤や毛成長阻害剤などを含めて最も広義に用いる。

形態形成因子としては天然型ェピモルフィンを含めて種々のものが知られている。本発明の医薬は、上記の形態形成因子、特にェピモルフインの過少発現に起因する組織や器官の形態形成異常を伴う疾患の予防及び/又は治療に有用である。また、炎症性疾患、癌、火傷、手術、又は創傷、並びにそれらの治癒過程など、上皮性の組織や器官の破壊を伴う疾患（傷害を含む概念として用いる）に対して、上皮組織や器官の再生を促進する目的で本発明の医薬を用いることが可能であるより具体的には、例えば、慢性腎炎などの腎疾患；肺炎、肺気腫、肺結核、慢性閉塞性肺疾患、塵肺、嚥下性肺炎などの慢性及び急性肺疾患；慢性気管支炎などの気管及び気管支疾患；急性肝炎、慢性肝炎、肝硬変、劇症肝炎などの肝疾患；癌；良性前立腺肥大；消化性潰瘍；創傷；皮膚潰瘍などの疾患は、形態形成促進作用を有する他の生理活性物質（例えば HGF や EGF など）によって治療が可能であることが示唆されているので、本発明の医薬はこれらの疾患に対して有効であることが期待される。

さらに、本発明の医薬をェピモルフィンの過少発現に起因する疾患の患者に投与した場合、一般的には該疾患の症状の軽減が認められるので、該疾患を確定診断することができる。本明細書の実施例に具体的に示したように、本発明のポリぺプチドは、特に腎細胞に対して強力な細胞増殖作用及び形態形成促進作用を有している。従って、治療に際して腎臓組織、例えば腎尿細管上皮細胞の再生や保護が必要な腎疾患に対して、本発明の医薬を特に好適に用いることができる。例えば、本発明の医薬を、急性糸球体腎炎、急速進行性腎炎、慢性糸球体腎炎などの慢性腎炎、ネフローゼ症候群、慢性腎不全、腎臓ガンなどの腎疾患に適用することが可能である。

本発明の医薬の適用対象は上記に例示した疾患に限定されることはなく、 1又は 2以上の形態形成因子の発現過少、特にェピモルフインの発現過少が関与していると考えられる疾患、及び組織や器官の実質的な破壊を伴う疾患に対して適用可能であることを理解すべきである。また、本発明のポリペプチドを有効成分として含む毛成長促進剤の用途は、育毛促進及び発毛促進などを含めて最も広義に解釈すべきである。

本発明の医薬としては、上記のポリべプチドから選ばれる 1又は 2種以上の物質をそのまま用いてもよいが、通常は、製剤学的に許容しうる 1又は 2種以上の製剤用添加物を用いて上記物質の 1又は 2種以上を有効成分として含む医薬組成物を製造し、上記の疾患の治療及び/又は予防のために用いることが好ましい。溶解度、吸収及び排泄などの体内動態、及び/又は製造方法などの観点から、上記のポリべプチドは生理学的に許容される塩の形態であってもよい。上記の医薬組成物の投与経路としては、例えば、静脈内投与、直腸内投与、経口投与などの全身投与の他、外用、点眼、点鼻、点耳、局所注射などの局所投与を挙げることができる。

例えば、静脈内投与用注射剤若しくは点滴剤などの全身投与剤、又は、軟膏、クリ一ム剤、貼付剤、若しくは局所注射剤などの局所投与剤は本発明の医薬組成物の好ましい形態である。有効成分をリボソームなどに封入した医薬組成物ゃ抗体などを結合した医薬組成物を用いることにより、標的器官に対する親和性や選択性を改善することができる場合がある。もっとも、投与経路は適用対象となる疾患の種類、治療又は予防の目的、患部の種類、患者の状態などに応じて適宜選択可能であり、それぞれの投与経路に好適な製剤形態も適宜選択できることはいうまでもない。診断薬として用いる場合の形態も特に限定されないが、診断方法には本発明の医薬を患者に投与する場合のほか、患者から分離，採取した生体試料を用いて行う場合も包含される。

また、上記のポリべプチドの 1種又は 2種以上を有効成分として含む毛成長促進剤は、クリーム剤、噴霧剤、塗布用の溶液剤、又は貼付剤など、毛成長促進剤としての使用目的に好適な形態の製剤として提供されることが好ましい。上記可溶性ポリぺプチドは生理学的に許容される塩の形態であってもよく、皮膚のケラチン層を通して有効成分である上記可溶性ポリペプチドを効率的に経皮吸収させるために、適宜の界面活性剤や脂溶性物質などをクリーム剤などに配合することも好適である。なお、本発明のポリペプチドの用途は上記の医薬に限定されることはなく、例えば、細胞培養用の培地に対する添加剤として用いることも可能である。

本発明の第二の態様によれば、本発明のポリペプチド、好ましくは上記ポリべプチド（I ) 又は（I I )を特異的に認識する抗体、好ましくはモノクローナル抗体が提供される。本発明の抗体は、本発明のポリペプチド（好ましくは上記ポリぺプチド（I ) 若しくは（I I ) ) 、又はコイルドコイル領域（1 ) を有するェピモルフイン類（好ましくはヒト又はマウス由来の天然型ェピモルフイン）に対して特異的に結合することができ、それらの物質の上皮細胞に対する形態形成促進作用を阻害する作用を有している。本明細書においてェピモルフイン類という用語は、天然型ェピモルフィン及び天然型ェピモルフインと実質的に同様な生理作用を有する天然型ェピモルフインの改変体（ェピモルフイン改変体）、並びに天然型ェピモルフィンと実質的に同様な生理作用を有するそれらのアミノ酸変異体を包含する概念で用いる。

本明細書において、ェピモルフイン改変体とは、天然型のェピモルフインと実質的に同様の生理作用（例えば、上皮細胞に対する細胞接着作用と上皮細胞に対する形態形成促進作用）を有するポリペプチドであって、上記の天然型ェピモルフィンのポリペプチド配列（通常は 277 ないし 289個のアミノ酸からなるポリべプチドである）に由来する部分ポリペプチド配列であるか、又は、天然型ェピモルフィンのポリべプチド配列に由来する上記部分ポリべプチド配列をその部分配列として含むポリペプチドのことを意味する。例えば、天然型ェピモルフインの C末端疎水性領域を除去したポリペプチド（特開平 6- 25295 号公報）はェピモルフィン改変体の代表的化合物である。また、本明細書において、天然型ェピモルフィン又はェピモルフィン改変体のアミノ酸変異体とは、天然型のェピモルフィンと実質的に同様の上記生理作用を有するポリぺプチドであって、上記天然型ェピモルフィン又はェピモルフィン改変体のポリべプチド鎖を構成するアミノ酸のうちの 1個または 2個以上のァミノ酸が他のアミノ酸によって置換されており、これらの構成アミノ酸のうちの 1個または 2個以上のアミノ酸が欠失しており、及び/又は上記ポリべプチド鎖中に 1個若しくは 2個以上の任意のアミノ酸が揷入されたものを意味している。

上記公報などに開示されたェピモルフィン改変体のほか、開示された方法に従つて、またはそれらに改変ないし修飾を加えた方法によって製造可能なェピモルフィン改変体は、いずれも上記の定義を満足する限り本明細書におけるェピモルフィン改変体に含まれることを理解すべきである。また、天然型ェピモルフイン又はェピモルフイン改変体のアミノ酸変異体の製造方法については、例えば、特顧平 7- 175539号明細書及び特顧平 8- 99684 号明細書に具体的に説明されているがこれらの方法に限定されることはなく、いかなる方法により製造されたアミノ酸変異体であってもよい。なお、これらのェピモルフイン改変体又はそのアミノ酸変異体の生理活性の検定方法については、特開平 6- 25295号公報又は国際公開 W09 7/40158において詳細に説明された天然型ェピモルフインの生理活性の検定方法に準じて行うことが可能である。例えば、特顧平 8- 102553号明細書の実施例に記載されたマウス胎児肺の気管支の形態形成促進作用や、マウス胎児上顎皮膚の形態形成促進作用などを確認すればよい。

ェピモルフイン類に結合してそれらの作用を阻害する抗体として、従来 MC- 1 が知られている（特開平 6- 25295 号公報； CELL, 69, pp.471-481 , 1992 ) 。本発明の抗体は、上記 MC-1 と同様に、ェピモルフイン類による上皮組織の正常な形態形成のメカニズムを明らかにするために有用であり、また、天然型ェピモルフインの発現異常（発現過多）に起因する疾患の発症機序の解明、並びにそれらの疾患の予防及び/又は治療に有用な医薬の有効成分として用いることができる。さらに、本発明の抗体を毛成長阻害剤として用いる医薬の有効成分としても有用である。

本発明の抗体の製造方法の一例として、上記ポリべプチド（I I )を用いたポリク口一ナル抗体の製造方法の詳細を実施例に記載した。従って、本発明のポリぺプチドが適宜の条件下においては哺乳類動物に対して抗原として作用することができ、通常の方法に従って哺乳類動物を免疫することができること、及び周知かつ慣用の方法に従って、本発明のポリべプチドに包含される任意のポリペプチドを特異的に認識するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体を容易に製造できることは当業者に容易に理解されよう。

形態形成因子の 1又は 2以上の因子の発現過多に起因する疾患としては、例えば、慢性間接リウマチ、腎細胞癌や皮膚癌などの癌、動脈硬化症、膠原病、造血器疾患、腎疾患、筋ジストロフィー、骨粗鬆症、神経線維腫症、 Sturge- Weber症候群、結節性硬化症、神経管閉塞障害、分節異常、迷走障害、脳梁形成、脳孔症、及び水頭症などを挙げることができるが、本発明の抗体を有効成分として含む医薬はこれらの疾患の治療及び/又は予防、並びに診断に有用であることが期待できる。

もっとも、本発明の医薬の適用対象はこれらの疾患に限定されることはなく、 1又は 2以上の形態形成因子の発現過多、特に天然型ェピモルフインの発現過多が関与していると考えられる疾患は全て適用対象となることを理解すべきであるまた、上記の抗体を有効成分として含む毛成長阻害剤の用途は、脱毛、育毛阻害、及び発毛阻害などを含めて最も広義に解釈すべきである。なお、本発明の抗体を有効成分として含む医薬は、通常は、製剤学的に許容しうる 1又は 2種以上の製剤用添加物を用いて医薬組成物として調製されるが、その形態、調製方法、及び医薬組成物の投与経路などは上記の説明したものを応用可能である。実施例

以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は以下の実施例に限定されることはない。

実施例 1 ：本発明のポリぺプチドの製造

マウス由来の天然型ェピモルフィンの N末端アミノ酸より 1〜104 番目のアミノ酸をコードする DNA配列（特閧平 6- 25295 号公報に開示された式（12 )で表される核酸配列のうち、第 1番目から第 312 番目のヌクレオチドにより特定される DN A )の 5，側にメチォニン及び 6個のヒスチジンとをコードする ATGCATCATCATCATC AT CAT が付加されており（合計 1U 個のアミノ酸をコード）、 3'末端にストップコドンが付加された cDNAを PCR により調製した。該 cDNAを 2つの EcoRV サイ卜の間の領域が欠失した PET3C ベクタ一の Nde l , Nhel l サイ卜に組み込み、発現用べク夕一を作製した。

得られた発現べクタ一を Hanahan 法（「ラボマニュアル遺伝子工学」、丸善株式会社発行）によりコンビテントセル化した大腸菌 BL21株に導入した。導入法としては、氷上でコンビテントセルを溶解し、その溶液 100 \ に発現べクタ一を適量（1 mg/ml の DNA 溶液を 1 〃1 )添加し、氷上で 10分放置して行った。その後、 42°Cのィンキュベー夕一中で 2分間放置し、最後に氷上で 30分放置することにより導入を完了した。

次に、上記の形質転換体を、アンピシリン（50〃g/ml ) を含む LBプレート（1% Bacto-tryptone , 0.5¾ Bacto-yeast extract , 1% NaCl , 1.5% Bacto-agar ) にまきこみ、生育してくるコロニーを選択して形質転換体を 1次スクリ一ニングした。さらに発現ベクターを有する形質転換体の最終確認として、 PCR により目的のポリペプチドをコードする DNA の有無を確認し（この時点で 10ケ中 9ケのクローンに DNA が保持されていた）、発現ベクターを有する形質転換体を得た。得られた形質転換体は、アンピシリン（50〃g/inl ) を含む液体 LB培地（1% Bacto-trypton e, 0. 5% Bacto-yeast extract, 1% NaCl ) を用いて、 37°Cでの振盪培養により大量に増殖させた後、発現を誘導するための物質 IPTGを培地中に終濃度 1 mM になるように添加した。その後、 37°Cで 2時間振盪培養を続け、目的のポリペプチドを大腸菌内で発現させた。発現したポリペプチドの精製は、 QIAGEN社の Ni ^{2 +}- NTA - Agarose (Cat . No. 30230 )を用いて添付のプロトコールに従って行った。精製したポリペプチドは SDS-PAGE ( CBB 染色）により 95% 以上の純度を有していることが確認された。また、精製後のポリペプチドのリン酸緩衝生理食塩水（PBS)に対する溶解度は 0. 15 mg/mlであった。実施例 2 ：本発明のポリペプチドの MDCKII細胞（腎臓由来細胞株）に対する形態形成促進作用

実施例 1で調製したポリぺプチドの器官 ·形態形成促進作用を以下のようにして評価した。

滅菌した卜レフチューブを氷中に立て、トレフチューブに 1/10容の 10 xDH-med ium (ダルベッコ変法 MEM培地とハム F12 培地の等量混合培地）、 1/10容量の再構成用緩衝液（260 mM NaHC03, 200 mM HEPES, 50 mM NaOH)を添加した。さらに、トレフチューブ内に新田ゼラチン製コラーゲン溶液 I- P を 8/10容量添加し、ピぺッティングにより混合した。実施例 1で製造したポリぺプチドを DH-medium に対して透析した後、終濃度が 15 ig/mlとなるようにトレフチューブに添加した。コントロールとしては、 DH- medium を同量添加した。その後、腎臓由来細胞株 DC KII 細胞（104cells/well)をトレフチューブに添加して、ピペッティングにより混合した。

48ゥエルのマルチウエルディヅシュに上記混合物を 200 〃l/wellずつ添加し、 37°Cのィンキュベ一夕一中で 1時間保温して混合物をゲル化させた。無血清の DH- medium を 800 1/wellずつ添加して 37°Cで 1時間平衡化させた後、ゲルを傷つけないように注意して培地を除いた。続いて、無血清の DH-medium を 500 z l/we 11ずつ添加し、 37°Cの 5% 炭酸ガスインキュベータ一中で 1〜2 週間培養して形態を観察した。

図 1ないし図 3は 2週間培養を行った後の細胞及びその細胞から発生した組織を顕微鏡下に撮影した結果を示した写真である。図 1はコントロール（ DH- mediu mのみ）の結果を示し、図 2はゲル中に本発明のポリペプチド（1 5〃g/ml ) を添加して培養した結果を示す。図 1及び図 2の写真は同倍率（40倍）で撮影した結果を示しており、図 3はゲル中に本発明のポリペプチド（15〃g/ml ) を添加して培養したものについて高倍率（100倍）で撮影を行った結果を示している。本発明のポリペプチドをコラーゲンゲル中に添加した場合には細胞 ( MD C K 11 )が三次元的に管構造を形成していた。この結果は、本発明のポリペプチドが形態形成促進作用（器官 ·形態形成支持作用）を有していることを示している。実施例 3 ：本発明のポリぺプチドの調製

マウス由来の天然型ェピモルフィンの N末端アミノ酸より 1〜104番目のアミノ酸をコードする DNA 配列に代えて、ヒト由来の天然型ェピモルフィンの N末端より 1〜103 番目のアミノ酸をコードする DNA 配列（特開平 6-25295 号公報に開示された式（6 ) で表される核酸配列のうち、第 1番目から第 309 番目のヌクレオチドにより特定される MA)を用いて、実施例 1と同様にして本発明のポリべプチドを製造した。このポリべプチドについて実施例 2と同様の試験を行ったところ、このポリペプチドが腎臓由来細胞株 MDCKI I 細胞に対して実施例 1のポリべプチドと同様の器官 ·形態形成支持作用を有することが確認された。実施例 4 ：本発明のポリべプチドに特異的に結合する抗体の作成及び該抗体による形態形成の阻害

実施例 1で得たポリペプチド（以下 HIとする）、及びコントロールとして形態形成促進作用を有しないマウス由来天然型ェピモルフィンの部分ポリべプチド（N 末端より 189 番目から 263 番目のアミノ酸配列により特定されるポリべプチド）の N末にメチォニンと 6個のヒスチジンを付加したポリべプチド（以下 H3とする）をそれぞれ用いて、通常の方法に従って（講談社サイェンティフイク、単クローン抗体実験マニュアル、 pp.184〜： 188)) ラヅトを免疫し、各々のポリペプチドに対する抗血清を得た。それぞれの血清から、フアルマシア製 HiTrap Protein G (code No.17- 0404-01 )を用いて IgG 画分を精製してポリクロ一ナル抗体を得た。精製操作は添付のプロトコールに従って行った。得られたポリクロ一ナル抗体をウエスタンブロッテイングに付し、各々特異性をチェックした後、夕イタ一を合わせて以下の実験に用いた。

本発明のポリペプチドにより腎臓由来細胞株 MDCKII 細胞に管構造が形成される実施例 2の実験条件を用いて、最終のィンキュベーシヨン直前にそれぞれのポリク口一ナル抗体を無血清の DH- medium (500 / l/well ) 中に添加し、本発明のポリベプチドの形態形成促進作用に及ぼす上記各抗体の影響を調べた。結果を表 1 及び図 4ないし図 11に示す。表中、（++ )は形態形成が進行したことを示し、（+ ) は形態形成が 80%阻害されたことを示し、（-）は形態形成が 100 %阻害されたことを示す。図 4ないし図 11は、培養 11日の細胞及びその細胞から発生した組織を顕微鏡下に撮影した結果を示す写真である。図 4はコントロール（DH- medium のみ）の結果を示し、図 5はゲル中に本発明のポリペプチド（HI, 3 g/ml ) を添加して培養した結果を示す。図 6、図 7、及び図 8は抗 HI抗体をそれぞれ 5.2〃g/ ml, 26 ig/ml, 及び 130〃g/mlの濃度で添加した場合の結果を示しており、図 9、図 10、及び図 11は抗 H3抗体をそれぞれ 5.2/ig/ml, 26〃g/ml，及び 130〃g/mlの濃度で添加した場合の結果を示している。写真はいずれも等倍率 (40倍）で撮影した。

表 1 抗体 5.2 g/ml 26 zg/ml 130 /g/ml 抗 HI抗体 ++ +

抗 H3抗体 ++ + ++

これらの結果から明らかなように、抗 HI抗体は本発明のポリぺプチド（HI )の D CKI I細胞に対する形態形成誘導活性を濃度依存的に阻害するが、抗 H3抗体は上記形態形成誘導活性に対する阻害作用を有しない。この事実から、実施例.2の実験において観察された形態形成促進作用は、例えば大腸菌の不純物等に由来するものではなく、本発明のポリべプチド（HI )自体の作用に基づくものであることが証明された。さらに、本発明の抗 HI抗体がポリペプチド HIのェピモルフイン様形態形成促進作用を効率的に阻害することから、この抗体がェピモルフィンの過剰発現に起因する疾患の治療及び/又は予防のための医薬として有用であることも証明された。実施例 5 ：細胞増殖に対する本発明のポリぺプチドの作用

実施例 1で製造した本発明のポリペプチドの細胞増殖に対する効果を以下のように評価した。培地として無血清の DH- medium 又は 0.003〜0. 15 mg/mlの本発明ポリペプチドを溶解させた無血清の DH- medium を用い、組織培養用の 24ゥヱルデイツシュに 12, 000 cells/ml となるように MDCKI I細胞をまきこんだ。 37°Cの 5% 炭酸ガスィンキュベ一夕一中で 5日間培養した後、培地を除いて PBS (- )で 2回洗浄した。トリプシン- EDTA で細胞をゥヱル底から剥がした後、トリパンブルーで染色して生細胞をカウントした。表 2に示したように、 MDCKI I細胞を無血清培地で単層培養した場合には、培養液に本発明のポリべプチドを添加しないと 5日後には約 1/10に生細胞は減少した（コントロール）。一方、培養液に本発明のポリぺプチドを添加した場合は、無血清培養にもかかわらず、添加した本発明ポリぺプチドの濃度に依存して MDCKI I細胞の増殖が誘導された。本発明のポリべプチド 0.075 mg/mlを培養液に添加した場合、 5日間培養後には培養開始時に比べて 10 倍以上の生細胞が存在することが確認されたが、この結果は 10%牛胎児血清添加の効果に匹敵するものであり、本発明のポリべプチドが極めて強い細胞増殖活性を有していることが明らかになった。表 2 ポリぺプチド濃度 (mg/ml) 培養後細胞数

0.15 140,000

0.075 140,000

0.05 90,000

0.0375 83,000

0.03 54,000

0.015 14,000

0.0075 9,800

0.003 5,300

0 (DH-medium) 1,800 培養開始時細胞数： 12,000

産業上の利用可能性

本発明のポリぺプチドは生理食塩水などの水性媒体に可溶であり、上皮組織に対する形態形成促進作用を有しているので、形態形成の異常に起因する疾患の予防及び/又は治療に用いる医薬の有効成分などに有用である。

配列表

配列番号： 1

配列の長さ： 103

配列の型：アミノ酸

トポロジー：直鎖状

配列の種類：ぺプチド

配列

Met Arg Asp Arg Leu Pro Asp Leu Thr Ala Cys Arg Lys Asn Asp

1 5 10 15

Asp Gly Asp Thr Val Val Val Val Glu Lys Asp His Phe Met Asp

16 20 25 30

Asp Phe Phe His Gin Val Glu Glu l ie Arg Asn Ser l ie Asp Lys

31 35 40 45 l ie Thr Gin Tyr Val Glu Glu Val Lys Lys Asn His Ser l ie He

46 50 55 60

Leu Ser Ala Pro Asn Pro Glu Gly Lys l ie Lys Glu Glu Leu Glu

61 65 70 75

Asp Leu Asn Lys Glu l ie Lys Lys Thr Ala Asn Lys l ie Arg Ala

76 80 85 90

Lys Leu Lys Ala He Glu Gin Ser Phe Asp Gin Asp Glu

91 95 100 配列番号： 2

配列の長さ： 104

配列の型：アミノ酸

トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

配列 -

Met Arg Asp Arg Leu Pro Asp Leu Thr Ala Cys Arg Thr Asn Asp

1 5 10 15

Asp Gly Asp Thr Ala Val Val lie Val Glu Lys Asp His Phe Met

16 20 25 30

Asp Gly Phe Phe His Gin Val Glu Glu He Arg Ser Ser lie Ala

31 35 40 45

Arg lie Ala Gin His Val Glu Asp Val Lys Lys Asn His Ser lie

46 50 55 60

lie Leu Ser Ala Pro Asn Pro Glu Gly Lys lie Lys Glu Glu Leu

61 65 70 75

Glu Asp Leu Asn Lys Glu lie Lys Lys Thr Ala Asn Arg lie Arg

76 80 85 90

Gly Lys Leu Lys Ser lie Glu Gin Ser Cys Asp Gin Asp Glu

91 95 100 配列番号： 3

配列の長さ： 309

配列の型：核酸

トポロジー：直鎖状

配列の種類： cDNA t o mRNA

配列

ATG CGG GAC CGG CTG CCA GAC CTG ACG GCG TGT AGG AAG AAT GAT 45

GAT GGA GAC ACA GTT GTT GTG GTT GAG AAA GAT CAT TTC ATG GAT 90

GAT TTC TTC CAT CAG GTG GAG GAG ATT AGA AAC AGT ATT GAT AAA 135

◦

◦ → -<

Claims

請求の範囲

1 配列表の配列番号 1に記載のァミノ酸配列を有するポリぺプチド。

2 請求項 1に記載のアミノ酸配列において 1個又は 2個以上のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたァミノ酸配列からなり、かつ上皮細胞に対する形態形成促進作用を有するポリぺプチド。

3 前記上皮細胞に対する形態形成促進作用が、天然型ェピモルフイン様作用である請求項 2に記載のポリべプチド。

4 請求項 2又は 3のいずれかに記載のポリペプチドであって、さらに、細胞増殖作用を有するポリべプチド。

5 請求項 1〜4のいづれか 1項に記載のポリペプチドであって、さらに、前記ァミノ酸配列のアミノ酸残基が、糖類、脂質類、リン酸基からなる群から選ばれる少なくとも 1つで修飾されているポリべプチド。

6 請求項 1 ~ 5のいずれか 1項に記載のポリぺプチドを有効成分とする医薬。

7 請求項 1〜5のいずれか 1項に記載のポリペプチドを有効成分とする、形態形成因子の過少発現に起因する疾患を治療及び/又は予防する医薬。

8 前記形態形成因子がェピモルフインである請求項 7に記載の医薬。

9 請求項 1〜5のいずれか 1項に記載のポリペプチドを有効成分とする、組織若しくは器官の破壊を伴う疾患を治療及び/又は予防する医薬。

1 0 前記疾患が腎疾患である請求項 9に記載の医薬。

1 1 請求項 1〜5のいずれか 1項に記載のポリペプチドを有効成分とする、毛成長促進剤。

1 2 配列表の配列番号 2に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド。

1 3 請求項 1 2に記載のアミノ酸配列において 1個又は 2個以上のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ上皮細胞に対する形態形成促進作用を有するポリべプチド。

1 4 前記上皮細胞に対する形態形成促進作用が、天然型ェピモルフイン様作用である請求項 1 3に記載のポリぺプチド。

1 5 さらに、細胞増殖作用を有する請求項 1 3又は 1 4のいずれかに記載のポリぺプチド。

1 6 請求項 1 2 ~ 1 5のいづれか 1項に記載のポリペプチドであって、さらに、前記アミノ酸配列のアミノ酸残基が、糖類、脂質類、リン酸基からなる群から選ばれる少なくとも 1つと結合するポリべプチド。

1 7 請求項 1 2〜 1 6のいずれか 1項に記載のポリペプチドを有効成分とする医薬。 1 8 請求項 1 2〜 1 6のいずれか 1項に記載のポリペプチドを有効成分とする、形態形成因子の過少発現に起因する疾患を治療及び/又は予防する医薬。

1 9 前記形態形成因子がェピモルフインである請求項 1 8に記載の医薬。

2 0 請求項 1 2〜 1 6のいずれか 1項に記載のポリペプチドを有効成分とする、組織若しくは器官の破壊を伴う疾患を治療及び/又は予防する医薬。

2 1 前記疾患が腎疾患である請求項 2 0に記載の医薬。

2 2 請求項 1 2〜 1 6のいずれか 1項に記載のポリペプチドを有効成分とする、毛成長促進剤。

2 3 請求項 4又は 1 5のいずれか 1項に記載のポリペプチドを含む細胞培養培地。

2 4 請求項 1〜5、又は 1 2〜 1 6のいずれか 1項に記載のポリペプチドに対する抗体。

2 5 請求項 2 4に記載の抗体であって、さらに前記ポリぺプチドの形態形成促進作用又は細胞増殖作用を阻害する抗体。

2 6 請求項 2 4に記載の抗体であって、さらに、コイルドコイル領域（1 )を有するェピモルフイン類に特異的に結合し、上皮細胞に対する前記ェピモルフィン類の形態形成促進作用又は細胞増殖作用を阻害する抗体。 2 7 請求項 2 4又は 2 6のいづれか 1項に記載の抗体を有効成分とする医薬。

2 8 ェピモルフイン発現過多に起因する疾患を治療又は予防する請求項 2 7に記載の医薬。

2 9 請求項 2 4又は 2 6のいづれか 1項に記載の抗体を有効成分とする毛成長促進剤。