WO1994005679A1

WO1994005679A1 - Novel physiologically active substance nk175203, process for producing the same, and pharmaceutical use thereof

Info

Publication number: WO1994005679A1
Application number: PCT/JP1993/001276
Authority: WO
Inventors: Tomio Morino; Ayako Nakatani; Masayuki Kitagawa; Masaya Sato; Takashi Harada; Seiichi Saito
Original assignee: Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha
Priority date: 1992-09-09
Filing date: 1993-09-08
Publication date: 1994-03-17
Also published as: EP0659759A1; US5505944A; EP0659759B1; DE69327247T2; CA2142453A1; DE69327247D1; EP0659759A4

Description

明細書新規生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3

その製造法及びその薬学的用途技術分野

本発明は新規生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩に関する。更に詳細には、本発明は骨髄細胞の増殖促進作用等を有する新規生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 もしくはその塩、その製造法およびその薬学的用途に関する。

背景技術

従来、骨髄細胞増殖促進剤としては、エリスロボイエチン（Miyake, T. et al. , J. Β. C. , 252 , 5558, 1977) 及び G - C S F (Nicola, N. A.. Annu. Rev. Biochem. , 339 , 27-30, 1989) が知られている。しかし、これらは、蛋白製剤であるため、頻回投与ができず、同様の活性を有する低分子化合物の発見が待たれている。

発明の開示

本発明者らは、微生物の代謝産物について、種々検索した結果、放線菌に属するー菌株が、骨髄細胞の増殖促進作用等を有する生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 を産生する事を見い出した。

すなわち本発明の目的は下記の 1 ) 〜 1 0 ) の理化学的性質を示す新規生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩を提供することにある。

1 ) 外観；無色粉末

2 ) 分子量； F A B - M S ( M ) + m Z z 3 0 3 3 ) 元素分析値； C _{1 2}H _{1 7}N 〇 ₆ S - H 2 〇

理論値（％ ) 測定値

C ： 4 4 . 8 5 C ： 4 4 . 8 2

H ： 5 . 9 6 H ： 5 . 8 7

N ： 4 . 3 6 N ： 4 . 3 4

4 ) 水に可溶、へキサンク σ 口ホルムに難溶

5 ) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによる R f 値；ブ夕ノール；酢酸；水（ 4 ' 1 ： 2 ) の展開溶媒で 0 . 5 0 を示す

6 ) U V吸収スぺクトル（ H ₂ 〇）

Λ _m n m ： 2 0 0

7 ) I R吸収スぺクトノレ（ K B r ) cm—

3 4 0 0 ， 2 9 5 0 , 1 7 3 5 , 1 6 0 0 ，

1 4 0 0 ， 1 3 0 0 , 1 1 4 5 , 1 0 4 0 8 ) ¹ H - N M R ( 2 0 0 M H z ， D ₂ 〇） ά p p m ：

4 . 3 0 ( 1 H , d d , J = 4 . 5 ， 7 . 8 H z ) 2 . 9 7 ( 1 H , d d , J = 4 . 4 , 1 3 . 6

H z ) , 2 . 9 2 - 2 . 6 2 ( 5 H , m ) ， 2 . 5 0 — 2 . 1 0 ( 3 H , m ) ， 2 . 0 0 ( 3 H， s ) 1 . 8 1 ( 1 H , m )

9 ) ^{1 3} C - N M R ( 2 0 0 M H z , D ₂ 〇） δ p p m :

2 2 6 . 9 ( s ) , 1 8 5 . 2 ( s ) , 1 7 9 . 9 ( s ) ， 1 7 6 . 6 ( s ) , 5 7 . 5 ( d ) , 5 6 0 ( d ) , 5 2 . 6 ( d ) , 4 0 . 8 ( t ) , 3 7 9 ( t ) ， 3 3 . 6 ( t ) , 2 8 . 0 ( t ) , 2 4 8 ( q ) .

1 0 ) 呈色反応；リンモリブデン酸ー硫酸、トリジン一クロリンに陽性。

本発明の他の目的は、ストレプトミセス属に属し、上記の生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 を生産する能力を有する生産菌を、培地に培養し、培養物中に生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 を生成蓄積せしめ、これを採取する事を特徴とする生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 の製造法を提供することにある。

本発明の更に他の目的は、上記の生理活性物質 Ν Κ 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する骨髄細胞増殖促進のための医薬組成物を提供することにある。

本発明の更に他の目的は、上記の生理活性物質 Ν Κ 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することからなる骨髄細胞増殖促進方法を提供することにある。

本発明の更に他の目的は、上記の生理活性物質 Ν Κ 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩の医薬組成物の有効成分としての使用を提供することにある。

本発明の更に他の目的は、ストレプトミセス属に属する上記の生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 を生産する能力を有する生産菌を提供することにある。

図面の簡単な説明

第 1 図は生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 の U Vスぺクトル（ H ₂ 0 ) を示す。

第 2 図は生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 の I Rスぺクトル（ K B r ) を示す。

第 3 図は生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 の

1 H - N M R ( 2 0 0 M H z , D ₂ 0 ) を示す。

第 4 図は生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 の ¹³ C - N M R ( 2 0 0 M H z , D ₂ O ) を示す。

発明を実施するための最良の形態一

本発明化合物である生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 は薬学的に許容される塩であってもよく、かかる塩としては、ナトリウム、カリウムなどのアリカリ金属、カルシゥ厶などのァリカリ土類金属等との塩が挙げられる。

新規生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 はストレプトミセス属に属する N K 1 7 5 2 0 3生産菌を培養し、生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 を生成蓄積せしめ、この培養物より生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 を採取することにより得られる。生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 の生産菌の代表的な 1 例は次の菌学的および生理学的性質を有する。 1 . 形態的性質

2 7 でで 2 週間後に観察した結果、気菌糸は単純分岐し、その先端丄まらせん状あるいはフック状である。胞子のう及び輪生糸の形成は認められない。また、遊走子も認められない。胞子表面は平滑または粗面で、胞子はシリンダ一型で、大きさ 0 . 7 〜 0 . 9 X 0 . 9 〜 1 . 3 mである。また 2 0 個以上の連鎖をなして胞子が形成される。

2 . 各種培地における生育

各種培地上、 2 7 で、 2 週間後の生育状態を下記表 1 に示す。

培地生育気菌糸

シュクロース · 適度適度、茶白明るい硝酸塩寒天培地茶灰〜黒色

(吸湿性）

グルコース ' ァス適度豊富、茶白明るいパラギン寒天培地茶灰〜黒色

(吸湿性）

グリセリン · ァス適度豊富、茶白明るいパラギン寒天培地茶灰〜黒色

(吸湿性）

ス一ターチ ' 無機良好適度、茶白明るい塩寒天培地茶灰〜黒色

(吸湿性）

チロシン寒天培地良好適度、茶白明るい茶灰〜黒色

(吸湿性）

栄養寒天培地適度適度、白色

イースト麦芽寒良好豊富、茶白明るい天培地茶灰〜黒色

(吸湿性）

ォ一トミ —ル寒天 m度適度、茶白明るい培地茶灰〜黒色

(吸湿性）

ペプトン · ィ一ス適度適度、白色

ト鉄寒天培地シュクロース · 硝無色〜なし

酸塩寒天培地淡黄色

グルコース · ァス淡黄色わずかに茶色味パラギン寒天培地〜褐色

グリセリン · ァス無任〜茶色味

パラギン寒天培地淡黄色

ス一夕一チ · 無機淡黄色わずかに茶色味塩寒天培地

チロシン寒天培地淡黄色茶色味

〜淡褐色

栄養寒天培地淡黄色わずかに茶色味イースト ' 無色わずかに茶色味麦芽寒天培地

オートミール無色なし

寒天培地

ペプトン · ィ一スト淡黄色なし

鉄寒天培地

3 . 生理学的性質

1 ) 生育適度範囲： 2 4 〜 3 7 °C

2 ) 硝酸塩の還元：陰性

3 ) ゼラチンの液化（グルコース · ペプトン · ゼラチン培地上、 2 0 て）：擬陽性

4 ) スターチの加水分解（スターチ，無機塩寒天培地）：陽性

5 ) 脱脂牛乳の凝固：陰性

6 ) 脱脂牛乳のペプトン化：陽性

7 ) メラニン様色素の生成：陰性

4 . 炭素源の利用生（プリドハ厶 · ゴ卜リ一ブ寒天培地上）

L ーァラビノ一ス +

D— キシロース +

D— グルコ一ス +

D— フラク卜一ス +

シュクロース +

イノシトール

L 一ラムノース一

ラフイノール +

D - マ二トール +

5 . 細胞壁中のジァミノピメリン酸―

L Lージアミノビメリン酸である。

以上を要約すると、本菌株は細胞壁が L L ージァミノピメリン酸であり、インタ一ナショナノレ - ストレプトミセス属 ' プロジェクト（略称 I S P ) の方法によれば、胞子形成菌糸め形態は、セクションスハ'イラゾレズ

( Sp i rales) に厲し、胞子表面は平滑あるいは粗面で、成熟した菌糸の色は灰色系統（Gray color- series)で吸湿性である。また、メラニン様色素は生産しない。基生菌糸の色は淡黄色あるいは淡褐色を呈する。炭素源としては L ーァラビノース、 D— グルコース、 D— フラクトース、シュクロース、ラフィノース、 D— マ二トール、 D— キシロースを利用する。

以上の性質をもとにアール ' ィー ' ブッフアナン ' 了ンド · ェヌ . ィ一 . ギボンズ編、バージーズ · マ二ユアル ' ォブ ' デ夕ミネ一ティブ · くクテリオ π ジー

(Bergy' s Manual of Determinative Bacteriology) 第 8 版、 1 9 7 4 年に従って検索を行った結果、上記 N K 1 7 5 2 0 3 株はストレプトミセス属に属することが判明したので、本菌をストレプトミセス ' エスピー

( Streptomyces sp. ) N K 1 7 5 2 0 3 と命名した。該菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所（日本国茨城県）に、 1 9 9 2 年 7 月 1 0 日に微ェ研菌寄第 1 3 0 5 8 号（ F E R M P — 1 3 0 5 8 ) として寄託された。この寄託は更に 1 9 9 3 年 7 月 2 8 日にブダペスト条約による国際寄託に変更され受託番号 F E R M B P — 4 3 7 2 を得た。

本発明に用いるストレプトミセス属に属する菌株は他のストレプトミセス属の菌株と同様、その性状が変化しやすく、例えば紫外線、エックス線および薬品などを用いる人工的な変異手段で容易に変異しうるものであり、どの様な変異株であっても本発明の対象とする生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 の生産能を有するものはすべて本発明に使用することができる。

本発明により生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 を製造するには、まず前記菌株を放線菌が利用し得る栄養物を含有する培地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から放線菌の培養に利用されている公知のものが使用でき、例えば炭素源としてはグルコース、フラクト一ス、グリセリン、シュ一クロース、デキストリン、ガラクトース、有機酸などを単独かまたは組み合わせて用いることができる。

無機および有機窒素源としては塩化アンモニゥ厶、硫酸アンモニゥ厶、尿素、硝酸アンモニゥム、硝酸ナトリゥム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コ

— ン . スチープ . リカー、大豆粉、綿実油カス、カザミノ酸、バクトソィトン、ソリュブル ' ベジタブル ' プロティン、ォートミールなどを単独または組み合わせて用いることができる。

その他必要に応じて食塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシゥ厶、硫酸銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩化マンガン、燐酸塩などの無機塩類を加えることができるほか有機物、例えばアミノ酸類、ビタミン類、核酸類や無機物を適当に添加することができる。

培養法としては液体培養法、特に深部拡販培養法が最も適している。培養温度は 1 5 ° (：〜 3 5 °C、 p Hは中性ないし微酸性で培養を行うことが望ましい。

液体培養では通常 3 〜 5 日間培養を行うと N K 1 7 5 2 0 3 物質が培養液中に生成蓄積される。培養液中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、菌体と培養液をろ別し、目的物を精製単離する。

ろ液から本物質の精製単離には一般に微生物代謝生産物をその培養菌体から単離するために、用いられる分離精製の方法が利用される。

即ち、培養液は通常のろ過法でろ液と菌体部に分離する。

得られたろ液に、終濃度 3 % となる様に N a C ^ を加え、カーボン吸着カラムに吸着させる。次いで、 3 % N a C 溶液で、洗浄した後、蒸留水で溶出し、得られた活性画分を、減圧濃縮乾固する。次いで、ブタノ一ル；酢酸；水で展開するシリカゲルカラムクロマトグラフィ一、 L H — 2 0 カラムクロマトグラフィー、分取用高速液体クロマトグラフィーに順次かけ、活性画分を集める。最後に、上記の方法で、力一ボン吸着カラムにかける事により脱塩を行ない、無色の N K 1 7 5 2 0 3 物質を得る。

本発明の生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩は後記の如く、骨髄細胞増殖促進作用を有する医薬品として期待されるものである。

医薬品として使用する場合の製剤化及び投与方法は従来公知の種々の方法が適用できる。すわなち、投与方法としては注射、経口、直腸投与などが可能である。製剤形態としては注射剤、粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、坐剤などの形態がとり得る。

製剤化の際に生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩に悪影響を与えない限り、医薬用に用いられる種々の補助剤、すわなち、担体やその他の助剤、例えば安定剤、防腐剤、無痛化剤、乳化剤等が必要に応じて使用されうる。

製剤中において、生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩の含量は製剤形態等により広範囲に変えることが可能であり、一般には生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩を 0 . 0 1 〜 1 0 0 % (重量）、好ましくは 0 . 1 〜 7 0 % (重量）含有し、残りは通常医薬用に使用される担体その他の補助剤からなる。

生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩の投与量は症状等により異なるが、成人 1 人 1 日当り 0 . 0 1 〜 8 0 0 mg程度である。連投を必要とする場合には 1 日当り使用量をおさえることが好ましい次に試験例、実施例及び製剤例によって本発明を更に詳細に説明する。

試験例 1

骨髄細胞に対する作用

C ₅₇ B L Z 6 マウス（ 1 0 週令）より、大腿骨を取り出し、更にその骨髄細胞を、イーグル M E M培地に洗い出した。—これを 3 7 "C 5 % C 02 下で 2 時間放置後、静かに上清を取る事により浮遊細胞のみを回収した。これを、 1 2 0 0 r p m、 5 分間の遠心分離にかけて細胞を集め、更にひ — M E M培地で洗浄後、 2 0 % F B S含有ひ一 M E M培地に懸濁した。こうして得た骨髄細胞を、本発明の生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 あるいは G M— C S F (Lantrel 1. . A. et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. , 82， 6250-6254, 1985) と同時に、 9 6 穴プレートに 7 . 5 x 1 0 ⁵ c e 1 1 s Z 2 0 0 1 /穴となる様に播種し、 3 7 °C 5 % C 0 2 条件下で 1 1 2 時間培養した。最後に 3 7 K B q の ³ H — チミジンを加え、 8 時間培養後、細胞の ³H — チミジンのとりこみを、液体シンチレ一ションカウンタ一により測定した。

この結果を表 2 に示す。

表 2 生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 の骨髄細胞増殖作用

GM-CSF NK175203 〔 ³H〕 - - チミジンのとりこみ

( H g/m6 ) 平均土標準偏差 %

1 +

0 o 860.' 2土 416.4 100

0.01 1106. 7土 84O C.5

0.1 892. 2土 248.1 103.7

1 881. 2土 506.2 102.4 o o

10 600. 6土 2 2 6O9 C.8

O C

Oト C

100 397. 3土 84.9 46.2

100 0 33484. 100

0.01 43339. 8土 11996.2 129.4

0.1 63397.

1 43470. 0± 1065.3 129.8

100 531. 1土 18.5 1.6

の結果より、本発明の生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 は、低濃度において、骨髄細胞の増殖促進用を有し、又、 G M - C S F 1 0 0 U Z?^、存在下では、広い薬剤濃度において、相乗的に増殖を促進する事が判明した , 試験例 2

サイトカインの産生誘導に関する作用

ヒト白血病細胞株 T F — 1 細胞（Mckenzie A. N. J. , Proc. Natl. Acad. Sci. , 90, 3735 一 3739, 1993)を、 2 0 ^の本発明の生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 を含む 1 0 % F C S — R P M I 1 6 4 0 培地に、接種し、 3 7 °C、 5 % C 〇 ₂ 下で、培養した。経時的に、 1 ， 2 3 日と、培養上清を採取し、含まれるサイト力インの量 ( p g Z ) を、 E L I S A ( Amersham製）法

( Amersham. B i o t rackpro t oco 1 , RPN2143, 2145 and 21 51) により、測定した。この結果を表 3 に示す。

尚、コントロールとしてリン酸緩衡液のみを用いた場合についても比較として測定した。表 3 ΝΚ 1 75203添加により産生される

サイトカイン量（単位： p gZ )

Day GM— CSF I L- 6 I L- 3

'コント D-ル ΜΠ5203 コント D-ル K175203 コント D-ル K1T5203

1 6.8 10.5 0.4 4.2 13.2

2 7.5 20.3

3 7.1 19.7 これらの結果より、本発明化合物である生理活性物質

N K 1 7 5 2 0 3 は G M— C S F、 I L — 6 (Kishimoto, T. , Blood, 74, 1-10, 1989) . I L - 3 [ Ihle, J. N. , The Year in Immunology, 1988 (Crume J . M . e t al . , Eds) , New York, Karger, 59- 102, 1989]等のサイトカイン産生誘導をすることが判明した。

実施例 1

生理活性物質 N K 1 7 5 ?_0 3 の製造

( 1 ) 醱酵

下記の組成を有する種培養培地を 5 0 0 τ ^容の三角フラスコに 1 0 を分注し、 1 2 0 で、 2 0 分間オートクレープ滅菌した。これに N K 1 7 5 2 0 3 株（微ェ研菌寄 1 3 0 5 8 号）の一白金耳を接種し、 2 7 °C 2 0 0 回転 Z分の条件下で 2 日間培養しこれを種母とした。

種培養培地組成

グリセリン 2 %

グルコース 0 . 5 %

大豆粉（サンリッチ昭和産業） 1 . 5 %

ペプトン 0 . 5 %

酵母エキス 0 . 0 5 %

K 2 H P 0 0 . 0 5 %

p H = 7 . 0 に修正（ N a O Hで）本培養にあたり、まず、下記の組成を有する培地 1 0 を 5 0 0 容の三角フラスコに分注し、 1 2 0 °C 2 0 分間、オートクレープ滅菌した。この培地 1 0 0 本に先の種母培養液を 2 づっ接種し、 2 7 °Cで 2 0 0 回転 /分、 4 日目培養した。こうして得られた 1 0 リットルの培養液につき、フィルタープレスを用いてろ過を行いろ液を得た。本培養培地

グルコース 2 % 可溶性デンプン ' 1 % 酵母エキス 1 %

N Z ァミン 0 . 7 %

C a C 0 3 0 . 5 % p H = 7 . 0 修正（ N a O Hで）

( 2 ) 精製

得られたろ液 9 リットルに、終濃度 3 % となる様に、 N a C を加え、 2 リツトルのカーボン吸着力ラムに 4 °C下で吸着させた。次いで、 3 % N a C ^ 溶液 4 リットルで、洗浄した後、室温にもどし、蒸留水で活性成分を溶出した。これを減圧濃縮乾固して得られた 5 . 2 g を、ブ夕ノール；酢酸；水 = 1 0 ： 1 ： 2 で展開する 5 0 0 m のシリカゲルカラムクロマトグラフィ一に力、け、活性画分を得た。これを濃縮して得られた 0 . 7 5 g を 2 0 % M e O H水溶液で展開する 8 0 0 の L H — 2 0 ゲルろ過カラムクロマトグラフィーにかけ、活性画分（ 1 0 3 mg ) を得た。

次いで、これを下記の条件で分取用液体クロマトグラフィ一にかけ、 2 2 . 7 分の保持時間に出現する活性成分を、分取した。条件は移動相； 2 %ァセトニトリル一 1 % リン酸、流速； 3 Zm i n、温度； 4 0 て、検出波長； 2 2 0 n m、カラム、ヮコーシル I I 5 C 2 8 A R、カラムサイズ； 1 0 . 0 X 2 5 0 匪である。こうして得た分取液を 2 O ccのカーボン吸着カラムに先述の方法でかけて、脱塩を行なった。この溶出液を乾固すると、 7 O mgの生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 が得られた。この生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 の U Vスぺクトル

( H ₂ 0 ) 、 I Rスぺクトノレ（ K B r ) 、 ¹ H - N M R ( 2 0 0 M H z , D ₂ 0 ) 及び ¹³ C — N M R ( 2 0 0 M H z , D ₂ 〇）をそれぞれ第 1 図、第 2 図、第 3 図及び第 4 図に示した。

得られた生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 は下記の 1 ) 〜 1 0 ) の理化学的性質を示した。

1 ) 外観；無色粉末

2 ) 分子量； F A B - M S ( ) ⁺ m / z 3 0 3

3 ) 元素分析値； C ₁₂H _{i 7}N O s S · H ₂ 0

理論値（％ ) 測定値

C ： 4 4 . 8 5 C ： 4 4 . 8 2

H ： 5 . 9 6 H ： 5 . 8 7 N ： 4 . 3 6 N ： 4 . 3 4

4 ) 水に可溶、へキサン、クロ口ホルムに難溶

5 ) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによる R f 値；ブタノール；酢酸；水（ 4 ： 1 ： 2 ) の展開溶媒で 0 . 5 0 を示す

6 ) U V吸収スぺクトル（ H ₂ 0 ) ：

λ _{m e} x n m ： 2 0 0

7 ) I R吸収スペクトル（ K B r ) cm—

3400, 2950, 1735, 1600, 1400, 1300, 1145, 1040 8 ) ^! H - N M R ( 2 0 0 M H z , D ₂ 0 ) 5 p p m :

4 . 3 0 ( 1 H , d d , J = 4 . 5 ， 7 . 8 H z ) 2 . 9 7 ( 1 H , d d , J = 4 . 4 , 1 3 . 6 H z ) , 2 . 9 2 - 2 . 6 2 ( 5 H， m ) ,

2 . 5 0 - 2 . 1 0 ( 3 H， m ) , 2 . 0 0 ( 3 H s ) , 1 . 8 1 ( l H , m ) ;

9 ) ^{1 3} C - N M R ( 2 0 0 M H z , D ₂ 〇） <5 p p m ： 2 2 6 . 9 ( s ) , 1 8 5 . 2 ( s ) , 1 7 9 . 9

8 ( q ) .

1 0 ) 呈色反応；リンモリブデン酸一硫酸、トリジン — クロリンに陽性。

製剤例 1

顆粒剤の製造生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 のナトリウム塩 5 0 重量部、乳糖 6 0 0 部、結晶セルロース 3 3 0 部およびヒ ' ドロキシプロピルセルロース 2 0 部をよく混和し、口一ル型圧縮機（ローラーコンパクタ一 T M ) を用いて圧縮し、破砕して 1 9 メッシュと 1 6 メッシュの間に入るよう篩過し、顆粒とした。

製剤例 2

錠剤の製造

生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 のナトリウム塩 1 0 0 重量部、結晶乳糖 9 0 部、結晶セルロース 1 0 7 部およびステアリン酸マグネシウム 3 部を V型混合機で混和後、打錠し、 1 錠 3 0 0 mgの錠剤を得た。

製剤例 3

注射剤の製造

生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 のナトリウム塩 5 0 重量部、マンニトール 1 2 0 重量部に対し蒸留水を加え全量を 2 0 0 0 部としてこれを溶解後ミリポアフィルター G S タイプを用いて除菌ろ過する。このろ液 2 g を 1 0 のバイアルビンにとり凍結乾燥し、 1 ノくィアルに本化合物のナトリゥム塩 5 0 mgを含む凍結乾燥注射剤を得た。産業上の利用可能性

本発明で提供される新規生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 またはその塩は骨髄細胞の増殖促進作用等を有する。従って、例えば骨髄細胞増殖剤の有効成分として有用である。

Claims

請求の範囲

1 . 下記の理化学的性状を示す生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩：

1 ) 外観；無色粉末

5 2 ) 分子量； F A B - M S ( M ) ⁺ / z 3 0 3

3 ) 元素分析値； C , ₂Η , ₇N 0 6 S · H 2 〇

理論値（％ ) 測定値

C ： 4 4 . 8 5 C ： 4 4 . 8 2

H ： 5 . 9 6 H ： 5 . 8 7

0 N ： 4 . 3 6 N ： 4 . 3 4

4 ) 水に可溶、へキサン、クロ口ホルムに難溶

5 ) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによる R f 値；ブタノ一ノレ；酢酸；水（ 4 ： 1 ： 2 ) の展開溶媒で 0 . 5 0 を示す

5 6 ) U V吸収スぺクトル（ H ₂ 0 ) ：

Λ m a X n m ： 2 0 0

7 ) I R吸収スぺクトル（ K B r ) cm "¹ ：

3 4 0 0 , 2 9 5 0 , 1 7 3 5 , 1 6 0 0 , 1 4 0 0 , 1 3 0 0 ， 1 1 4 5 , 1 0 4 0

0 8 ) ¹ H - N M R ( 2 0 0 M H z ， D 2 〇） (5 p p m ：、 4 . 3 0 ( 1 H , d d， J = 4 . 5 ， 7 . 8 H z )

2 . 9 7 ( 1 H， d d， J = 4 . 4 , 1 3 . 6 H z ) , 2 . 9 2 - 2 . 6 2 ( 5 H , m ) , 2 . 5 0 - 2 . 1 0 ( 3 H , m ) ， 2 . 0 0 ( 3 H5 s ) , 1 . 8 1 ( 1 H , m ) 9 ) ¹³ C - N R ( 2 0 0 M H z , D 2 0 ) 5 p p m :

2 2 6 . 9 ( s ) , 1 8 5 . 2 ( s ) , 1 7 9 . 9 ( s ) , 1 7 6 . 6 ( s ) , 5 7 . 5 ( d ) , 5 6 0 ( d ) , 5 2 . 6 ( d ) ， 4 0 . 8 ( t ) ， 3 7 9 ( t ) , 3 3 . 6 ( t ) , 2 8 . 0 ( t ) , 2 4

8 ( q ) .

2 . ストレプトミセス属に属し、請求項 1 の生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 を生産する能力を有する生産菌を培地に培養し、培養物中に生理活性物質 Ν Κ 1 7 5 2 0 3 を生成蓄積せしめ、これを採取する事を特徴とする生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 の製造法。

3 . 請求項 1 の生理活性物質 Ν Κ 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩を有効成分とし、これに医薬用の添加物とからなる骨髄細胞増殖促進のための医薬組成物。

4 . 請求項 1 の生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することからなる骨髄細胞増殖促進方法。

5 . 請求項 1 の生理活性物質 Ν Κ 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩の医薬組成物の有効成分としての使用。

6 . 請求項 1 の生理活性物質 Ν Κ 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する骨髄細胞増殖促進のための医薬組成物を製造するための生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 またはその薬学的に許容される塩の使用。

7 . ストレプトミセス属に属する請求項 1 の生理活性物質 N K 1 7 5 2 0 3 を生産する能力を有する生産菌。

8 . ストレプトミセス s p . N K 1 7 5 2 0 3 株である請求項 7 の生産菌。