WO1982003175A1 - Water-soluble cholesterol derivatives - Google Patents

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WO1982003175A1
WO1982003175A1 PCT/JP1981/000056 JP8100056W WO8203175A1 WO 1982003175 A1 WO1982003175 A1 WO 1982003175A1 JP 8100056 W JP8100056 W JP 8100056W WO 8203175 A1 WO8203175 A1 WO 8203175A1
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ester
water
organic dibasic
complex
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Cross Corp Green
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Arakawa Yoshio
Takanabe Atsuyuki
Uemura Yahiro
Funakoshi Satoshi
Suyama Tadakazu
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives

Definitions

  • the present invention a water-soluble cholester? More specifically, the present invention relates to a water-soluble 7-hydroxyl cholesterol'-norre derivative.
  • 7-hydroxyl cholesterol which is an immunosuppressive active substance isolated from the corn serum IVi paste of the input serum. It is known that it is not only effective as a cellular immunosuppressive substance, but also effective as an anti-inflammatory therapeutic agent. (Japanese Unexamined Patent Publication No. 53-104755). Disclosure of the invention
  • 7-Hydroxyl cholesterol is a compound that is sparingly soluble in water, and is therefore highly valuable as a medical product in pharmaceutical technology.
  • a intensive study was conducted with the aim of developing a derivative of the compound.
  • R is a phenylene group or (CH 2 ) m, where ⁇ is an integer of 15 or 15, P is an albumin, and n is an albumin 1 7-Hydroxy core represented by, which indicates the number of steroids in the parentheses in parentheses, where n is 2200.
  • the goal was achieved by providing a complex of terol organic dibasic half ester and albumin.
  • Fig. 1 shows a compound obtained by reacting 1 part of albumin with 1 part of the half-ester
  • Fig. 2 shows a compound obtained by reacting 1 part of albumin. Gel analysis of the compound obtained by reacting 3 parts of rubumin.
  • the albumin concentration is the measured value at 0.D.280 nm.
  • Peak is complex
  • peak 3 is unreacted albumin
  • R has the same meaning as described above, and the 7-hydride ⁇ -xylesterole organic dibasic acid half ester represented by 7-ketoco Resterol is produced by reacting it with a reactive derivative of an organic dibasic acid in the presence of a tertiary amine to form an ester, and then reducing it with a complex metal hydride.
  • Suitable organic dibasic compounds include succinic acid and phthalic acid, and 7-hydroxyl cholesterol is a preferred raw material for koshi. 3-Conno, half-ester,
  • the compound of the present invention relates to the above-mentioned semi-ester and albumin by mixing water and dioxane, tetrahydrofuran, dimethylsulfoxide and the like. Produced more conveniently by uniformly reacting in a mixed solvent of water and a miscible organic solvent
  • OMPI WIPO It Water is the preferred solvent for albumin, and the organic solvent is a semi-ester.
  • the mixing ratio of the organic solvent and water is selected to be a mixing ratio sufficient to uniformly perform the reaction, and is 1: 1 to 10%.
  • the albumin used is not particularly limited as long as albumin of human or bovine serum is used and purified for medical use. Needless to say, albumin of human origin is preferred.
  • the purity is preferably one in which at least 80 is albumin as analyzed by electrophoresis.
  • the dosage used in production is 7-hide mouth
  • a complex selected between 10 parts by weight and having a desired binding ratio can be obtained.
  • Increasing the amount of the albumin component increases the water solubility of the half-ester, but decreases the half-ester component contained in the preparation, which is not preferable in terms of pharmacological effect. More preferably, the maximum amount of the half-ester is bound to one molecule of albumin.
  • the molar ratio is such that the half-ester is bound to 20 to 200 moles per 1 mole of albumin, more preferably 50 moles or more. And. In order to increase the bonding ratio of the semiconductor, the desired effect can be obtained by increasing the amount of addition to the solvent.
  • the reactivity is not particularly limited; ⁇ , usually 0 to 10. C. This reaction is
  • PH is set to 8 to 10.
  • a reaction time of 1 to 5 hours is sufficient, and there is no particular effect on extending the reaction time.
  • the resulting reaction solution removes the unreacted reaction components as desired.
  • the removal step is preferably a gel filtration step, which is better than choosing a known technique for the separation of argin and cholesterol. This will help you achieve your goals. Gel filtration is not particularly limited as long as it is a carrier suitable for separating proteins, and the molecular weight of serum albumin
  • albumin exerts a stabilizing effect on the preparation when it is present in an appropriate amount (0.01 to 10 weight).
  • the water-soluble cholesterol derivative of the present invention is formulated according to any required known pharmaceutical production method.
  • the reaction solution is then dialyzed against the buffer solution, desalted, and the internal solution is recovered. If necessary, sterilization and filtration are performed, and then a dry preparation is prepared by freeze-drying. You. Stool in dialysis process
  • the buffer to be used is preferably adjusted to pH 7.0 to 8.0.
  • a line buffer, a clean buffer, an acetate buffer, and the like can be used. Its ion intensity is 0.001 to 0.1M.
  • the preparations of the present invention may further contain known carriers, excipients, solubilizers, and stabilizers as required.
  • the preferred form for treatment as a 'medical plan' is an injection, and the dosage is 7-hydroxycholesterol dibasic half-ester. As a territory, the total amount is 10 ⁇ / ⁇ 10000 ⁇ .
  • the present formulation When used as an injection, it is preferable to use the present formulation as a 0.1 to 20% aqueous solution when necessary. Of course, it can be used as an external preparation or an oral preparation.
  • the complex of 7-hydroxyl cholesterol organic dibasic half-ester and albumin thus obtained is a novel compound which has not been published yet. It is a compound that exerts an immunosuppressive effect, especially a cell-mediated immunosuppressive effect, and an excellent effect on anti-inflammatory activity, and dissolves rapidly in water to form a clear and stable aqueous solution. In addition, the solution shows neutrality and is extremely useful as a pharmaceutical.
  • Aqueous ester-albumin complex aqueous solution (8, ⁇ days as steroid amount), albumin aqueous solution (8 ⁇ / no days), and As a control, physiological saline was intravenously administered intravenously for 20 days, and the effect of each group on skin transfer experiments was examined. The administration was performed 24 hours before the start of the transplantation experiment and then once a day for 20 days.
  • V iPO In the surface observation after 20 days, the engraftment rate of about 5 in the albumin-administered group and about 80 to 90 in the albumin-administered group was compared to 0 in the control. Indicated. This indicates the effectiveness of the present compound as an immunosuppressant in a stinging effect.
  • the acute toxicity test of the compound of the present invention was performed using 5 rats per group weighing about 200 ⁇ . Compounds were prepared as aqueous solutions, and the steroid amount was 250 ⁇ Z, 500 ⁇ ⁇ , 75 0 Z, and 10 ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ , each administered intraperitoneally for 5 days. Observations revealed no deaths.
  • the compound of the present invention has little toxicity and has no antigenicity, so that it can provide an excellent immunosuppressive or anti-inflammatory agent.
  • Fig. 1 shows the results of gel filtration using the Sephadex G-200.
  • the physicochemical properties of this substance are as follows.

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Description

明 <CB
mo
水溶性コ レ ス テ ロ ー ル誘導体 技術分野
本発明は、 水溶性コ レ ス テ ？ ー ル誘導体に関 し、 に詳し く は、 水溶性 7 - ハ イ ド ロ キ シ コ レ ス テ ロ ' ― ノレ 誘導体に関する。
Figure imgf000003_0001
入の血清の コ ー ン IViペ ー ス ト-から単離される免疫抑 制活性物質力；、 7 - ハ イ ド ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ルであ り 、 免疫抑制作用 と'く に細胞性免疫抑制物質と して有 効であ るばか り でな く 、 抗炎症治療剤と して も有効で あ る こ と が知られてい る。 （ 日本特開昭 53-104755 号 ） 。 発明の開示
7 - ハイ ド ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ルは、 水に難溶性の 化合物であ るため本癸明者らは、 医案品 と して製剤技 術的に きわめて価値があ る こ の化合物の溶解性改良の ため該化合物の誘導体を開発する こ と を 目的 と し、 鋭 意研究を行った。
その結果、 本癸明者らは新規化合物であ る
式
OMPI WIPO
Figure imgf000004_0001
式中 R はフ エ 二 レ ン基又は （ CH2 )m こ こ に πι はひ又 は 1 5 の整数を意味し、 P はア ル ブ ミ ンを意味し、 n は ア ルブ ミ ン 1 モ ル に対 して.結合する 〔 〕 内に示す ス テ ロ イ ドのモ ル数を示 し n は 2 0 2 0 0 である、 にて表わされる 7 - ハイ ド ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ル有機 二塩基漦半エ ス テ ル と ア ルブ ミ ンとの複合体を提供す る こ と に よ り その 目 的を達した。 図面の簡単な説明
7 ィ ド ロ キ シ コ レス テ ロ ー ル - 3 ハ ク該半 エ ス テ ル 1 部に対して第 1 図はア ルブ ミ ン 1 部を反応 して得られる化合物、 第 2 図はア ルブ ミ ン 3 部を反応 して得られる化合物のゲ ル^過分析結杲 ¾示 したもの
Cめ る 。
図中、 ア ルブ ミ ン濃度は 0 .D . 2 8 0 nm の測定値
( ^ ~ . - 7 キ シ コ レ ス テ ロ ー ル - 5 - コ ハ ク酸半エ ス テ ル 浸度^ ル フ シ ュ ッ ッ（Lufs cHェ i tz) 反応に よって発色させ、 0 .D . ό 4 0 ηιπ の測定値
C --。--。--。-- ) 、 ピー ク Α は複合体、 ピーク 3 は未 反応ア ル ブ ミ ン 、 Vo 〖 ポイ ド ボ リ ュー ム （ Vo id
OMPI Volume ) をそれぞれあ ら わ している 発明を実施するための最良の形態
本発明で出発原料と な る一般式
Figure imgf000005_0001
式中 、 Rは前記 と同 じ こ と を意味する、で示される 7 - ハ イ ド π キ シ コ レ ス テ ロ ー ル有機二塩基性酸半エ ス テ ル は 、 7 - ケ ト コ レ ステ ロ ー ルから まず第三級ァ ミ ン の存在下で有機二塩基酸の反応性誘導体と反応させェ ス テ ル化 し、 次いで錯金属水素化物で還元する こ と に よ り 製造する こ とができ る （ 日本特願昭 54 -70707)。 好適に使用でき る有機二塩基漦 と しては、 コ ハク酸、 フ タ ル 酸があげられ、 好適な 出癸原料と して、 7 - ハ ィ ド ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ル 3 - コ ノ、ク該半エ ス テ ル 、
7 - ハ イ ド ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ル 3 - フ タ ル酸半エ ス テ ル 、 つ β - ハ イ ド ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ル 3 - フ タ ル 酸半エ ス テ ル が例示される。
本発明の化合物は、 前記半エ ス テ ル と ア ル ブ ミ ン と を、 水及びジ才キサ ン 、 テ ト ラ ヒ ド ロ フ ラ ン 、 ジ メ チ ル ス ル ホ キ シ ドなどの水 と 混合可能の有機溶媒の混合 溶媒中で均一に反応させ る こ と に よ り 都合よ く 製造さ
OMPI WIPO れる。 水はア ルブ ミ ン に対 し有機溶媒は半エ ス テ ルの 好適な溶媒であ る 。 か してア ルブ ミ ン水溶液に前記 有機溶媒を加え 、 こ の混合物に捷捽しながら半エ ス テ ' ル の有機溶媒溶液を加え るか、 ま たはその逆が行なわ れる。 有機溶媒と水 との混合^は、 反応を均一に行な う に足る混合比が採用され、 それは 1 ： 1 〜 1 0 であ る。 使用される ア ルブ ミ ンは、 人又は牛の血清のア ル ブ ミ ンが用いられ、 医療用に精製された ものであ るか ぎ り 、 特に限定されない。 言う までもなく人由来のア ル ブ ミ ンが好ま しい。 その純度は、 電気泳動法で分析し て 8 0 以上がア ルブ ミ ンであ る ものが好ま しい。 製 造におけ る使-用量は、 7 - ハイ ド 口 キ シ コ レ ステ ロ一
ル有機二塩基性酸半エ ス テ ル 1 重量部に対して 0 .2〜
1 0 重量部の間で選ばれ、 所望の結合比を有する複合 体を得る こ とができ る。 ア ルブ ミ ン成分を増量するこ とは、 該半エ ス テ ルの水溶性を増大させるが製剤中に 含有する該半エ ス テ ル成分を減少させるので薬効上好 ま し く ない。 よ り 好適には、 1 分子のア ル ブ ミ ン に対 して最大量の該半エ ス テ ルを結合させる こ と であ る。
そのモ ル比は、 ア ル ブ ミ ン 1 モ ル に対 して該半エ ス テ ル を 2 0 〜 2 0 0 モ ル 、 よ り 好ま し く は 、 5 0 モ ル以 上結合させる こ と であ る。 該半 ヱ ス テ ルの結合比を上 昇させ ためには、 その溶媒中への添加を増量するこ と で所望の効果を う る。 反応 度は特に限定されない ；^、 通常 0 〜 1 0 。Cであ る。 こ の反応は、 ア ル ブ ミ ン
O PI の溶解性を考慮に入れア ル力 リ 性で行 う こ とが望ま し い。 それゆえにたと えば少量の NaOH を反応系に加え
PHを 8 〜 1 0 とする。 反応時間は 1 〜 5 時間で十分で あ り 、 反応時間を延長させる こ と に特に効杲はない。 得られた反応液は、 所望に よ .り 遊難の反応成分を除去 する。 除去の工程 と してはア ル グ ミ ンお よ びコ レ ステ 口 ー ル の分離の方法と して公知の技術を選択 し う るカ^ よ り 好ま し く はゲ ル^過工程をお こな う こ と で目的は 達成 し う る。 ゲ ル 過は、 蛋 白質の分離に適 した担体 であれば特に限定されず、 血清ア ル ブ ミ ン の分子量
( 約 ό 4,9 0 0 ) に適 したゲ ル 過担体が広 く 利用で き る 。 例えばセ フ アデ ッ ク ス （ ク ロ ス リ ン ク ドデ キ ス ト ラ ン ） の G - 2 0 0 、 G - 1 5 0 、 & - 1 0 0 、 セ フ ァ ロ ー ス （ ァ ガ ロ ー ス ） の 4 B 、 6 B ( ス エ ー デ ン フ ァーマ シャ社発売 ） な どが例示される。
なお遊離のア ル ブ ミ ンお よ び 7 - ハ イ ド ロ キ シ コ レ ス テ π — ル有機二塩基羧半エ ス テ ルは分錐する こ とな く その ま ま医薬品 と して製剤化 し て も よ い。 特にア ル ブ ミ ン は適量 （ 0.0 1 〜 1 0 重量 ） の存在に よって 製剤の安定化効果を.発撢する。
ついで本発明の水溶性コ レ ステ 口 ー ル誘導体は任意 所要の既知医薬品製造法に従って製剤化される。 例え ば、 反応液はついで、 瑗衝液に対 し て透析 し脱塩を行 い内液を回収 し、 要すれば除菌 ^過をお こなったのち、 凍結乾镍に よって乾燥製剤を う る。 透析工程で便^さ
ΟΜΡΙ ό れる緩衝液は pH 7.0 〜 8.0 で調整されている こ と が好 ま し く 、 例えば リ ン鷇緩衝液、 ク ェ ン漦瑷衝液、 酢漦 緩衝液等を使用でき る。 その イ オ ン籩度は 0.0 0 1 〜 0.1 M であ る。
本発明製剤は、 さ ら に所望に よ り 公知の ¾案用担体、 賦形剤、溶 助剤、 安定化剤を慣用に従って添加して も よ い。 その医案'と して治療に用いる時の好ま しい形態 は注射薬であ り 、 投与量 と しては、 7 - ハイ ド ロ キ シ コ レス テ ロ ー ル有檨ニ塩基 ¾半エ ス テ ルと して総量 1 0 ^ / 〜 1 0 0 0 1^でぁ る。 注射,,案と して使 用する場合には、 要時本発明製剤を 0.1 〜 2 0 %水溶 液 と して溶薛し箧用する-こ とが好ま しい。 なお'外用剤、 経口剤と して も もちろん使用でき る。
こ の よ う に して得られる 7 - ハ イ ド ロ キ シ コ レ ステ ロ ー ル有機二塩基性漦半エ ス テ ル と ア ル ブ ミ ン と の複 合体は、 文献未载の新規化合物であ り 、 免疫抑制作用 特に細胞性免疫抑制作用およ び抗炎症作周にす ぐれた 効果を発揮 し、 かつ水に対 し てすみやかに溶解-し、 澄 明な安定な水溶液とな り 、 その溶液は中性を示すの で、 医薬品 と してきわめて有用であ る 。
次に、 実 ¾例 1 において ¾造されたゲ ル P過前の本 発明の化合物の有用佺に関する実験データ を示す。
(1) 免疫抑剞作用 （ イ ン ビ ト ロ の実験 ）
ク ーノ ーノヾ ン ド、 · エ ス · ア ー ル ( Cooparband , S .R . ) ら に よ る ？ E A 法 〔 ザ ジ ャ ー ナ ル ォ ブ ―
"' ィ ン ム ノ ロ ジ ィ ( Tlie Journal o f Immunology )
1 0 9 巻、 （i) 1 5 4 ( 1 9 7 2 ) 〕 に よ って、 本 発明化合物の P H A 反応の 5 0 阻害濃度を調べた, 結杲を第 1 表に示す。 なお比較実験と して、 才 ク チ ノ （ 0 c cii iiio ) ら の方法 〔 ザ ジャー ナ ル ォブ イ ン ム ノ ロ ジ ィ 、 1 1 0 巻、 （3)、 6 8 5 C 1973 ) ] に よ って得た I R A C Imm noreg latory
a -globul in ) の效杲を示 した。
第 1
Figure imgf000009_0001
(2) 免疫抑制作用 （ イ ン ビポの実験 ）
マ ウ スを用い、 1 群 5匹において動物実験を行な つた。 7 イ ド ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ル _ 3 一
ク ϋ半エ ス テ ル - ア ルブ ミ ン 複合体水溶液 （ ス テ ロ イ ド量と し て、 8， Ζ日 ） 、 ア ル ブ ミ ン水溶液 ( 8 ^ / ノ日 ） お よ びコ ン ト ロ ー ル と し て、 生理 食塩水を 2 0 日 間違続静脈内投与 し、 各群の皮膚移 殖実験に対する効果を検討 した。 投与法は移殖実驗 開始 2 4 時間前にあ らか じめ投与 し、 その後 1 日 1 回、 2 0 日 間投与した。
O PI
V iPO 2 0 日後の表面観察では、 コ ン 卜 ロ ー ル の 0 に 対 して、 ア ル ブ ミ ン投与群で約 5 、 本発明化合物 投与群で約 8 0 〜 9 0 多 の生着率を示 した。 こ のこ と は、 本化合物の免疫抑制剤と しての蘂理効果の有 効性を示すものであ る。
） 抗炎症作用
ラ ッ ト を用い、 1 群 5匹において動物実験を行な つた。 7 - ハ イ ド ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ル - 3 - コ ノ、 ク酸半エ ス テ ル - ア ルブ ミ ン複合体水溶液 （ ステ ロ イ ド量と して 5 0 ^ノ ） を腹腔内に投与後、 1 時 間後に ラ ッ ト の後肢足皮下に、 起炎剤 と して 1 ^ 力 ラゲ ニ ン 0.0 5 ^を投与した。 力 ラゲ - ン投与後 4 時間 目 に足にできた浮腫の大き さをボ リ ユ ウ ム ジ フ ェ レ ン シ ャ ル メ ー タ ー ( Vo l ms Di f f srsn i l Me er ) で測定し対照のア ルブ ミ ン水溶液 （ 5 Q
ノ ） および生垤食塩水投与群と比較 した。 結杲を 第 2表に示す。
第 2 表
Figure imgf000010_0001
C FI (4) 急性毒性試験
本発明化合物の急性毒性試験を体重約 2 0 0 ^ の ラ ッ ト 1 群 5匹を用いて行なった。 化合物は、 水溶 液 と し、 ス テ ロ イ ド量 と して 2 5 0 ^ Z 、 5 0 0 ^ノ 、 7 5 0 Z 及び 1 0 Ο Ο ^ Ζ 、 それ ぞれ腹腔内投与 し 5 日間観察を行なったが、 死亡例 は認められなかった。
こ の よ う に本発明の化合物は、 毒性がほ と ん どな く 、 又抗原性もないのです ぐれた免疫抑制剤あ るい は抗炎症剤を提供する こ とができ る。
次に本発明化合物の製造法の参考例 施例を示す。 参考例 1 ( 原料の調製 ） *
(1) 7—ケ ト コ レステ ロ ー ル 5 ^ を リ ジ ン 5 0 ^に と 力 し これに無水コ ハク漦 1.8 ^ を加え 9 0 °Cで 8 時間 加温し、 さ ら に一夜室温で放置したのち、 反応液を、 5 0 0 ^の水水中に注ぎ、 塩 ϋ漦性と し、 析出する 結晶を 取 した。 こ の結晶をエ タ ノ ー ルに溶群し活 性炭を加え脱色 ^過後、 液に水を加え柝出 した結 晶を 取した。 こ の結晶を含水エ タ ノ ー ルか ら再結 晶する と融点 1 8 7.5 〜 1 8 9.5 °Cを示す 7 - ケ ト コ レス テ ロ ー ルコ ハク酸半エ ス テ ルの腾片拔晶 5.4 が得られた。 元素分析 ： C31H48O5
理論値 （ ） ： . 7 4.3 6 、 Η. 9.ό ό 。 実 値 （ ） ： c . 7 4.5 4 、 κ . 9.5 9 0
ΟΜΡΙ
ν/ιρο 赤外線吸収ス ペ ク ト ル （ ΚΒΓ 錠 ） ： 1 7 5 5
1 7 0 5 1 0 7 0 1 1 7 0 cm"1 0 (2) 7 - ケ ト コ レ ス テ ロ ー ル ク酸半エ ス テ ルの ナ ト リ ウ ム塩 3.7 5 ^ を メ タ ノ ー ル 1 0 0 ^に と力 し、 氷冷攙拌しながら水素化ホ ウ素ナ ト リ ゥ ム 8 2 Q Ψ を徐々 に加え氷冷下で 1 0 1 5 分間撓捽後、 さ ら に室温で 1 時間攬拌した。 反応液に、 詐 ¾ 2 ^を加 え過剰の水素化ホ ウ素ナ ト リ ゥ ムを分解後水 1 5 0 ？ ^で希釈し、 塩酸漦性と し、 析出する結矗を戸取し た。 得られた結晶を、 シク ロ へキサ ンから再結晶す る こ と に よ り 融点 1 5 0 1 5 4 を示す 7 - ハイ ド、 ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ル 3 ク漦半エ ス テ ノ の 針状晶 3.4 3 ^ を得た。 本品は、 Ί - ハ イ ド ロ キ シ体と 7 ? - ハイ ド ロ キ シ体との混合物であ り 、 そ の比は約 3 1 で 7 ^ - ハ イ ド ロ キ シ体が主であつ 元素分析 ： 31H5oOS
理論値 （ 多 ） ： c . 7 4.0 0 H 0.0 2 ο 実験値 （ ） ： c . 7 4.2 1 H 9.9 ό 。
赤外鎳吸収ス ぺ ク ト ル ( S3r ) 3 5 0 0 .
1 7 3 0 . 1 7 0 5 . 1 1 0 5 cm一1 0 実施例 1
7 ィ ドロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ル - 3 、ク 半 エ ス テ ル 9 0 0 をジォ キサ ン 2 1 ^に と カゝ し 、 こ の 溶液を 5 1 0 Cで攪拌しながら、 人血清ア ル ブ ミ ン 9 0 0 ) ^ を水 ό Q 、 1 Na OH 0.9 お よ びジ才 キ サ ン 5 に とカ した溶液を前記溶液に徐々 に加え 3 時間攪拌させた。 反応後、 反応液は、 0.0 5 リ ン 酸 塩緩衝液 （ ρΗ 7.4 ) で 2 4 時間、 5 1 0 ¾で透析し、 透析内液を凍結真空乾燥する と 、 白色の乾燥粉末 2.9 ^ が得られた。
本製品の理化学的性質は次の通 り であ る。
なお本物質中の 7 - ハ イ ド ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ル — 3 - コ ハ ク漦半エ ス テ ルは、 ア ル カ リ で加水分解 し、 7 ィ ド ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ル に誘導後、 周知の方 法でテ ト ラ メ チ ル シ リ ル イ匕 しガス ク ロ マ ト ク、、 ラ フ ィ に よって定量、 またア ル ブ ミ ンは ロ ー リ ー （ Lowry ) 法に よって定量 した。 (1) 組成 ：
7 -ハイドロキシコレステロール一 3 - コ ヽク酸半エステル 2 9. 4 ^ ア ルプ ミ ン 5 3.1 0 % リ ン漦塩 5 7.7 6 ^
(2) ステ αィ ド結合モル数 ： 1 1 7.5モル アルブミ ン 1モル
(3) 溶解度 ： 2 0 0 ^ / VL£ H2O
(4) ： 7.4 ( 2 %水溶液 ）
なお、 セ フ ア デ ッ ク ス G - 2 0 0 (て よ るゲ ル ^過の 結果を第 1 図に示す。
本製品は前記動物実験に よ り 優れた有用性を示した が、 更にゲ ル^過に よ り 純化 した裂品 2
Figure imgf000013_0001
ゲ ル^過条件は以下であ る。 ，
ゲ ル 過剤 ： セ フ ア デ ッ ク ス - 2 0 0 コ ラ ム ： κ 1 όΖ7 0 床容量 ： 120^( 1.0X0 Ocm)
溶離液 ： ェ Mリン酸塩缓衝液、 PH7.4
C 0.0 ^ NaN3 含む）
フローレー ト ： 6.0 0.5 m / iir
フラクション ： 5.0 m 1 チ ュ ー フ、' 実旌例 2
7 ィ ロ キ シ コ レ ス テ ロ ー ル 3 ヽ ク エ ス テ ル 9 0 0 をジ才 キ サ ン 2 1 m に と カゝ し、 5 1 0 °Cで撩持 し ながら、これに人血清アルズミ ン 2.7 ^を水 1 8 0 ^ NaOH 2.7 およびジォキサ ン 9 0 に とか した溶液を徐々 に加え、 3 時間攪拌 し実旌例 1 と同様に処理する と乾燥粉末 0.8 9- が得られた。
本物質の理化学的性質は次の通 り である。
(1) 組成
7 ヽィ κ "口キシコレステロール- 3 - 、ク^^: TL テノレ 1 2.Q 5 ^ 了 ル ミ ン 4 1.5 1 ^ リ ン漦塩 4 ό .ό ό ^
(2) ステロイ ド結合モル数 ： S 8.9モル ァルブミ ン 1モル
(3) 溶 度 ：. 2 5 0 ^ Z s2o
(4) PH ： 7.4 ( 2 % 水溶液 ）
実施例 1 と 同様にゲ ル 逼し、 その結杲は第 2 図に 示す。 これに よ り 純粋な製品 ό ^ が得られた。
O PI

Claims

請求の範囲
(1) 式
Figure imgf000015_0001
式中 Rは フ エ 二 レ ン基又は （ CHゥ）m こ こに は 0 又は 1 〜 5 の整数を意味し、 P はア ル ブ ミ ン を意床し、 n は 了 ルザ ミ ン 1 モ ル に対して結合する 〔 〕 内に示すス テ ロ イ ドのモ ル数を示し n は 2 0 〜 2 0 0 であ る o に て表わされる 7· - ハ イ ド ロ キ シ コ レ ステ ロ ー ル有機二 塩基酸半エ ス テ ル と ア ルブ ミ ン と の複合体。
(2) 式
Figure imgf000015_0002
COOH
式中 Rはフ エ - レ ン基又は （ CHク）m こ こ に m は 0 又は
1 〜 5 の蹵数を意味する。 にて表わ される 7 - ハ イ ド 口 キ シ コ レ ス テ 口 ー ルニ塩基酸エ ス テ ルをア ルゲ ミ ン と反応させ、 反応物 回驭する こ と を特竄とする、
式
OMPI_ V IPO"
Figure imgf000016_0001
式中、 Rは前と 同じ意昧を表わし、 P はア ル ブ ミ ン残 基を意味し、 n はア ル ミ ン 1 モ ル に対して結合する 〔 〕 内に示すス テ ロ イ ド の モ ル数を示し、 n は 2 0 〜
2 0 0 であ る o にて表わされる 7 - ハ イ ド π キ シ コ レ ス テ ロ ー ル有機二塩基酸半エ ス テ ル と ア ルデ ミ ン との 複合体の製造方法。
(3) 7 - ハイ ド α キ シ コ レ ステ π —ル有檨二塩基性 酸半エ ス テ ル 1 重量部に対してア ルデ ミ ン CL 2 〜 1 0 重量部使用する請求の範囲第（2)項に よ る方法。
(4) 反応が水と混合でき る有機溶媒と水と の混合媒 質中で行なわれる請求の範園第（2)項に よ る方法 ο
(5) 反応がア ル ブ ミ ン 1 モ ル に対し 7 - ハイ ド Q キ シ コ レ ス テ ロ ー ル有機二塩基漀半エ ス テ ル 2 0〜2 0 0 モ ル の使用において行なわれる請求の範囲苐（2)項によ る方法 ο
(6) 回収がゲ ル ^過方法によ り 違難のア ルブ ミ ン と 分離する こ と に よ り 行なわれる請求の範园^ (2)項に よ る方法 ο
(7) 請求の範囲苐（1)項の 7 - ハ イ ド ロ キ ンコ レ ステ π ー ル有機二塩基漦半エ ス テ ル と ア ル ミ ン と の水溶
O PI
i. v i?o 性複合体を含む臓器移殖のための組成物。
(8) 請求の範囲第（i)項の 7 - ハ イ π キ シ コ レ ス テ ロ ー ル有機二塩基酸半エ ス テ ル と ア ルブ ミ ン と の水溶 性複合体を含む炎症を治療するための組成物。
(9) 藏器移殖のための請求の範囲第（1)項の 7 - ハ イ ド ロ キ シ コ レ ス テ 口 ー ル有機二塩基逡半エ ス テ ル と 了 ルブ ミ ン と の水溶性複合体の使用。
αο) 炎症を治療するための請求の範囲第（1)項の 7 - ハ イ ドロ キ シ コ レ ス テ 口 ー ル有機二塩基鼓半エ ス テ ル と ア ル ミ ン と の水溶性複合体の使用。'
. \νι?ο
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