WO1980002426A1 - Concentres de complexe prothrombinique, preparation et application - Google Patents

Concentres de complexe prothrombinique, preparation et application Download PDF

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WO1980002426A1
WO1980002426A1 PCT/FR1980/000069 FR8000069W WO8002426A1 WO 1980002426 A1 WO1980002426 A1 WO 1980002426A1 FR 8000069 W FR8000069 W FR 8000069W WO 8002426 A1 WO8002426 A1 WO 8002426A1
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complex
iii
elution
heparin
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PCT/FR1980/000069
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J Liautaud
E Shanbrom
M Chanas
J Pla
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Merieux Inst
J Liautaud
E Shanbrom
M Chanas
J Pla
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
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    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
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    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6429—Thrombin (3.4.21.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21005—Thrombin (3.4.21.5)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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    • Y10S530/829—Blood
    • Y10S530/83—Plasma; serum
    • Y10S530/831—Cohn fractions

Definitions

  • the present invention relates to a process for the preparation of a highly purified factor IX concentrate or more generally of a prothrombin complex, as well as to new highly purified concentrates of prothrombin complex which can be obtained by this process.
  • prothrombin complex complex comprising coagulation factors II, VII, IX and X
  • complex comprising coagulation factors II, VII, IX and X
  • the present invention proposes to provide a process for the preparation of prothrombin complex concentrate which makes it possible to directly obtain a concentrate which is not "activated", that is to say stable and without risk for patients.
  • the invention also proposes to provide a simple and inexpensive method for obtaining such a concentrate.
  • the subject of the invention is a process for the preparation of prothrombinic complex concentrate in which, starting from a source of prothrombinic complex, an adsorption is carried out followed by an elution, characterized in that a source is brought into contact of prothrombinic complex and a source of anti-thrombin III (or AT III), with an adsorbing agent capable of adsorbing both the prothrombinic complex and the anti-thrombin III, which one operates, at least during the elution stage, in the presence of heparin, and that the elution is carried out with an eluting agent capable of eluting at the same time the prothrombin complex, AT III and heparin.
  • Heparin activates anti-thrombin III.
  • Activated anti-thrombin III protects and stabilizes the prothrombin complex.
  • the source of prothrombin complex does not contain AT III or contains an amount insufficient to stabilize said complex, it is therefore advisable to add a sufficient amount of AT III before elution.
  • AT III is added to the source of prothrombin complex, before adsorption.
  • heparin is carried out before elution.
  • heparin is added to the eluting agent, after which the elution is carried out.
  • heparin is added to the source of prothrombin complex or to the source of AT III before adsorption. It is also possible to put the heparin in contact with the adsorbent agent, then to put the latter in contact with the starting source or sources.
  • this addition is preferably carried out at the same time as the addition of heparin.
  • the prothrombin complex is protected for the entire duration of the process.
  • the fraction obtained from the thawed plasma is preferably used, after elimination of the cryoprecipitate, a fraction known as "cryo poor plasma" or CPP.
  • fraction III of COHN it is also possible to use fresh plasma, frozen or not. It is also possible to use, as starting material, fraction III of COHN to which it is advisable to add antithrombin AT III, for example in the form of fraction IV of COHN. One can also use as starting material fraction IV, alone, because this fraction IV is also a source of prothrombin complex.
  • heparin when starting from a plasma, heparin is added as soon as possible, and even, if possible, before freezing.
  • the amount of heparin to be added depends on the quality of the source of the prothrombin complex. This amount generally ranges from about 0.1 to 1 IU per ml of source.
  • the adsorption can be carried out on the alumina gel which has proved to be particularly suitable for the adsorption then the elution of the protected prothrombin complex, in accordance with the invention.
  • adsorbent agents can be used provided that they are capable of adsorbing the concentrate and the co-factor (AT III) activated by heparin.
  • the adsorption is carried out at the temperature which is the most favorable and which depends mainly on the nature of the adsorbing agent. It is generally carried out at a temperature below ambient temperature, for example from 0 to 15 ° C. Thus, for the alumina gel, the temperature is preferably from 2 to 8 ° C. approximately.
  • the elution is carried out with any agent capable of simultaneously eluting the prothrombinic complex and the AT III.
  • any agent capable of simultaneously eluting the prothrombinic complex and the AT III Generally a suitable ionic strength buffer is used.
  • the source for example a CPP fraction having received an addition of heparin is adsorbed on alumina gel after which the elution is carried out, between 0 ° C. and room temperature.
  • the eluted fraction can be purified, at approximately pH 7, using one or more additions of polyethylene glycol (PEG) (510%) which precipitates unwanted proteins.
  • PEG polyethylene glycol
  • precipitation is carried out at PEG at a temperature below ambient temperature, for example 0-8 ° C. and in particular at approximately 2-4 ° C.
  • the pH of the supernatant is brought to a value of the order of 4.8 to 5.2, PEG is added, up to a concentration of 12 to 20% and is isolated the precipitate which contains the prothrombin complex. This precipitation is also carried out at low temperature.
  • the prothrombin complex obtained is then redissolved and this final solution is then possibly subjected to filtration, distribution and lyophilization operations.
  • the invention also relates to a prothrombinic complex concentrate, characterized in that it is practically free of activated prothrombinic complex.
  • a concentrate can be obtained by the above process. It differs from the products obtained so far which generally have large or very large proportions of complex in the "activated" state.
  • the prothrombinic complex concentrate according to the invention can be used as a medicament, in particular for the treatment of coagulation disorders, in particular deficiencies in factor IX, but also of hemorrhagic disease of the newborn, overdoses of coumarinic drugs, and advanced liver disease. It is administered according to the usual routes and dosages.
  • This complex has the usual pharmacological and safety properties of other concentrates of purified prothrombin complexes, but is distinguished in particular by the absence or near absence of undesirable thrombotic complications.
  • the starting source is the fraction known as CPP, that is to say what remains of a frozen and then thawed plasma from which the cryoprecipitate has then been eliminated.
  • heparin To this fraction is added heparin so as to have in the mixture approximately 0.5 units per milliliter of CPP plasma.
  • the mixture is then stirred and centrifuged and the gel is kept.
  • the gel is then eluted using a suitable conventional eluent buffer.
  • a buffer containing 0.25 M of potassium phosphate, 0.17 M of trisodium citrate, 5 H 2 O - and 0.003 M of EDTA can be used.
  • the pH is adjusted to around 7.5 to 8.5 and the elution can be carried out with a volume of buffer of the order of one thirtieth of the volume of the CPP plasma. Elution is carried out in the usual manner by suspending the gel in the elution buffer and stirring. A centrifugation is then carried out and the eluate is kept.
  • the pH of the eluate is then adjusted to around 7, and the temperature to around 2 to 4 ° C, after which add 5 to 10% w / v of PEG (polyethylene glycol), stir, then centrifuge and remove the precipitate to keep the supernatant.
  • PEG polyethylene glycol
  • the pH of the supernatant is then lowered to a relatively low value, of the order of 4.8 to 5.2, PEG is added to a content of 12 to 20% of PEG, taking into account the PEG added initially. , and of the increase in volume, the mixture is stirred and centrifuged to keep the precipitate. This stage is also carried out at low temperature.
  • the precipitate is then, preferably at room temperature, dissolved again, in a solution containing for example sodium chloride or trisodium citrate, the volume of dissolution being approximately 1/2 or 1/3 of the volume of the eluate.
  • a solution containing for example sodium chloride or trisodium citrate the volume of dissolution being approximately 1/2 or 1/3 of the volume of the eluate.
  • the pH is adjusted until a clear solution is obtained, manifesting complete dissolution, which occurs around a pH of 7.
  • the product obtained is then sterile distributed into the desired aliquots and then lyophilized and this immediately after freezing.
  • the administration of the lyophilized concentrate is carried out parenterally.
  • the concentrate is not toxic at the usual active doses.
  • the subject of the invention is also a method of treating coagulation disorders, characterized in that a person suffering from said disorders is administered an effective amount of a prothrombinic complex concentrate as defined in the present application.

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Abstract

Procede de preparation d'un concentre de complexe prothrombinique. Ce procede, dans lequel, partant d'une source de complexe prothrombinique, on effectue une adsorption suivie d'une elution, est caracterise par le fait que l'on met en contact une source de complexe prothrombinique et une source d'anti-thrombine III (ou AT III) avec un agent adsorbant capable d'adsorber a la fois le complexe prothrombinique et l'anti-thrombine III, que l'on opere, au moins pendant le stade d'elution, en presence d'heparine, et que l'on effectue l'elution avec un agent d'elution capable d'eluer a la fois le complexe prothrombinique, l'AT III et l'heparine. Application du produit obtenu notamment au traitement des troubles de la coagulation sanguine.

Description

CONCENTRES DE COMPLEXE PROTHROMBINIQUE PREPARATION ET APPLICATION
La présente invention a trait à un procédé de préparation d'un concentré de facteur IX ou plus généralement de complexe prothrombinique, hautement purifié, ainsi qu'à des nouveaux concentrés hautement purifiés de complexe prothrombinique qui peuvent être obtenus grâce à ce procédé.
Différents essais de préparation de complexe prothrombinique (complexe comprenant les facteurs de coagulation II,VII, IX et X), ont déjà été proposés pour le traitement de divers troubles de la coagulation, dus notamment a des déficiences en facteur IX (hémophilie B), ou encore à une insuffisance hépatique.
Ainsi , on a déjà cherché à purifier le complexe prothrombinique en partant de plasma frais ou fraichement congelé par l'utilisation de phosphate de calcium ou d'échangeurs d' ions-DEAE.
D'autres procédés ont également été utilisés tels que l' adsorption sur sulfate de baryum ou gel d'alumine.
On a également déjà proposé de préparer un concentré de facteur IX à partir de la fraction III de COHN provenant du fractionnement de plasma fraichement congelé par l'éthanol à froid.
Ces différents produits se sont avérés instables parce que certains facteurs de la coagulation s'y trouvent à l'état "activé" et il s'est avéré que 11 % environ des patients traités avec. ces concentrés ont développé des thromboses.
Afin de remédier à ces inconvénients, M.Wickerhauser a déjà prévu d' inactiver le facteur IX activé présent dans la fraction III de COHN par l'addition, au concentré obtenu après élution, d'héparine et de son co-facteur obtenu séparément à partir de la fraction IV de COHN.
Il en résulte qu'un Comité international a recommandé formellement que des préparations moins dangereuses soient développées par l'adjonction d'héparine au produit final pour éviter les effets néfastes de l'activité anti-coagulante.
Dans d'autres procédés on a également prévu, une fois le produit obtenu, de le stabiliser par addition d'héparine et de son co-facteur, en utilisant par exemple un sérum complet comme source de co-facteur d'héparine.
Cependant, les concentrés actuellement proposés présentent une proportion notable de facteur activé malgré l'adjonction finale d'héparine.
La présente invention se propose de fournir un procédé de préparation de concentré de complexe prothrombinique qui permette d'obtenir directement un concentré non "activé" c'est-à-dire stable et sans risque pour les patients.
L'invention se propose également de fournir un procédé simple et peu onéreux pour obtenir un tel concentré.
L'invention a pour objet un procédé de préparation de concentré de complexe prothrombinique dans lequel, partant d'une source de complexe prothrombinique, on effectue une adsorption suivie d'une élution, caractérisé par le fait que l'on met en contact une source de complexe prothrombinique et une source d'anti-thrombine III (ou AT III), avec un agent adsorbant capable d'adsorber à la fois le complexe prothrombinique et l'anti-thrombine III, que l'on opère, au moins pendant le stade d' élution, en présence d'héparine, et que l'on effectue l'élution avec un agent d'élution capable d'éluer à la fois le complexe prothrombinique, l'AT III et l'héparine. L' héparine active l'anti-thrombine III. L' anti-thrombine III activé protège et stabilise le complexe prothrombinique.
Dans le cas où la source de complexe prothrombinique contient de l'AT III, en quantité suffisante, les deux sources de départ sont évidemment confondues en une seule.
Dans le cas où la source de complexe prothrombinique ne contient pas d'AT III ou en contient une quantité insuffisante pour stabiliser ledit complexe, il convient donc d'ajouter une quantité suffisante d'AT III avant l' élution. De préférence, on ajoute l'AT III à la source de complexe prothrombinique, avant adsorption.
L'addition d'héparine est effectuée avant l' élution. Autrement dit, il est possible d'ajouter l'héparine à l'agent éluant, à la suite de quoi on effectue l' élution. Mais, de préférence, l'héparine est ajoutée à la source de complexe prothrombinique ou à la source d'AT III, avant l'adsorption. On peut aussi mettre l'héparine en contact avec l'agent adsorbant, puis mettre celui-ci en contact avec la ou les sources de départ.
Lorsqu'il est nécessaire d'ajouter de l'AT III à la source de complexe prothrombinique, cette addition est effectuée, de préférence, en même temps que l'addition d'héparine.
Ainsi, dans le mode d'éxécution préféré du procédé, le complexe prothrombinique se trouve protégé pendant toute la durée du procédé.
Comme source de départ, on utilise àe préférence la fraction obtenue à partir du plasma décongelé, après élimination du cryoprécipité, fraction dite "cryo poor plasma" ou CPP.
On peut cependant également utiliser un plasma frais congelé ou non. On peut aussi utiliser comme produit de départ, la fraction III de COHN à laquelle il convient d'ajouter de l' antithrombine AT III, par exemple sous forme de fraction IV de COHN. On peut également utiliser comme produit de départ la fraction IV, seule, car cette fraction IV est aussi une source de complexe prothrombinique.
De préférence, lorsque l'on part d'un plasma on ajoute l'héparine le plus tôt possible, et même, si possible, avant la congélation.
La quantité d'héparine à ajouter est fonction de la qualité de la source de complexe prothrombinique. Cette quantité varie généralement de 0,1 à 1 U.I. environ par ml de source.
L' adsorption peut être effectuée sur le gel d' alumine qui s'est avéré particulièrement convenable pour l' adsorption puis l' élution du complexe prothrombinique protégé, conformément à l'invention.
On peut cependant utiliser d'autres agents adsorbants à condition qu'ils soient susceptibles d'adsorber le concentré et le co-facteur (AT III) activé par l'héparine.
On effectue l' adsorption à la température qui est la plus favorable et qui dépend principalement de la nature de l'agent adsorbant. On opère généralement à température inférieure à la température ambiante, par exemple de 0 à 15°C. Ainsi, pour le gel d'alumine, la température, est de préférence de 2 à 8°C environ.
On- effectue l' élution avec tout agent capable d'éluer simultanément le complexe prothrombinique et l'AT III. On utilise généralement un tampon de force ionique convenable.
Selon un mode d'éxécution particulier, la source, par exemple une fraction CPP ayant reçu une adjonction d'héparine est adsorbée sur gel d' alumine à la suite de quoi on effectue l' élution, entre 0°C et la température ambiante.
La fraction éluée peut être purifiée, à pH 7 environ, grâce à une ou plusieurs additions de polyéthylèneglycol (PEG) (510%) qui précipite des protéines indésirables. De préférence on effectue les précipitations au PEG à température inférieure à la température ambiante, par exemple 0-8°C et notamment à 2-4°C environ.
Après avoir éliminé par centrifugation le précipité de protéines contaminantes, on amène le pH du surnageant à une valeur de l'ordre de 4,8 à 5,2, on ajoute du PEG, jusqu'à une concentration de 12 à 20% et isole le précipité qui contient le complexe prothrombinique. Cette précipitation est également effectuée à basse température. Le complexe prothrombinique obtenu est ensuite redissous puis cette solution finale subit éventuellement des opérations de filtration, de répartition et de lyophilisation.
L'invention a également pour objet un concentré de complexe prothrombinique, caractérisé par le fait qu'il est pratiquement exempt de complexe prothrombinique activé. Un tel concentré peut être obtenu par le procédé précité. Il se distingue des produits obtenus jusqu'à présent qui comportent en général des proportions importantes ou très importantes de complexe à l'état "activé".
Le concentré de complexe prothrombinique selon l'invention est utilisable comme médicament notamment pour le traitement de troubles de la coagulation, en particulier de déficiences en facteur IX, mais aussi de la maladie hémorragique du nouveau-né, des dépassements de dose des médicaments coumariniques, et des maladies du foie à l'état avancé. Il est administré selon les voies et posologies usuelles. Ce complexe possède les propriétés pharmacologiques et l'innocuité habituelles des autres concentrés de complexes prothrombiniques purifiés, mais s'en distingue notamment parl'absence ou la quasi-absence de complications thrombotiques indésirables.
L'invention va maintenant être décrite plus en détail à l'aide d'un exemple de mise en oeuvre non limitatif.
La source de départ est la fraction dite CPP c'est-à-dire ce qui reste d'un plasma congelé puis décongelé et dont on a alors éliminé le cryoprécipité.
A cette fraction on ajoute de l'héparine de façon à avoir dans le mélange environ 0,5 unité par millilitre de plasma CPP.
On effectue ensuite à une température basse, comprise entre 0 et 8ºC et de préférence entre 2 et 4°C l' adsorption sur un gel d'alumine à raison de 10 à 20 millilitres de gel d'alumine par litre de ce plasma héparine.
On agite puis l'on centrifuge et garde le gel.
On effectue ensuite l' élution du gel à l'aide d'un tampon éluant classique convenable. A titre d'exemple on peut utiliser un tampon contenant 0,25 M de phosphate de potassium, 0,17 M de citrate trisodique, 5 H2O - et 0,003 M d'EDTA. Le pH est ajusté aux alentours de 7,5 à 8,5 et l'on peut effectuer l' élution avec un volume de tampon de l'ordre du.trentième du volume du plasma CPP. L' élution s'effectue de façon usuelle en mettant le gel en suspension dans le tampon d' élution et en agitant. On effectue ensuite une centrifugation et l'on garde l'éluat.
On ajuste ensuite le pH de l'éluat aux environs de 7, et la température à environ 2 à 4°C, à la suite de quoi l'on ajoute de 5 à 10 % en poids/volume de PEG (polyéthylèneglycol), On agite puis l'on centrifuge et l'on élimine le précipité pour garder le surnageant.
On abaisse alors le pH du surnageant à une valeur relativement faible, de l'ordre de 4,8 à 5,2 , on ajoute du PEG jusqu'à une teneur de 12 à 20 % de PEG, en tenant compte du PEG ajouté initialement, et de l'augmentation de volume, on agite et l'on centrifuge pour conserver le précipité. Ce stade est également effectué à basse température.
Le précipité est ensuite, de préférence à température ambiante, remis en dissolution, dans une solution contenant par exemple du chlorure de sodium ou du citrate trisodique, le volume de dissolution étant d'environ 1/2 ou 1/3 du volume de l'éluat. Après dissolution on ajuste le pH jusqu'à obtenir une solution claire, manifestant une dissolution complète, ce qui se produit aux alentours d'un pH de 7.
Il reste ensuite à effectuer une filtration de préférence sur membrane, la filtration finale au moins étant effectuée de façon stérile.
On répartit ensuite stérilement le produit obtenu en parties aliquotes désirées puis on lyophilise et ceci immédiatement après congélation.
On obtient ainsi un concentré de facteur IX pratiquement dépourvu d'activité indésirable,
L'exemple qui vient d'être décrit n'est évidemment nullement limitatif.
L'administration du concentré lyophilisé s'effectue par voie parentérale. Le concentré n'est pas toxique aux doses actives habituelles. L' invention a également pour objet un procédé de traitement des troubles de la coagulation, caractérisé par le fait que l'on administre à une personne souffrant desdits troubles une quantité efficace d'un concentré de complexe prothrombinique tel que défini dans la présente demande.

Claims

Revendications de brevet
1. Procédé de préparation de concentré de complexe prothrombinique dans lequel, partant d'une source de complexe prothrombinique, on effectue une adsorption suivie d'une élution, caractérisé par le fait que l'on met en contact une source de complexe prothrombinique et une source d' anti-thrombine III ( ou AT III), avec un agent adsorbant capable d'adsorber à la fois le complexe prothrombinique et l'anti-thrombine III, que l'on opère, au moins pendant le stade d' élution, en présence d'héparine, et que l'on effectue l' élution avec un agent d' élution capable d'éluer à la fois le complexe prothrombinique, l'AT III et l'héparine.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que l'on ajoute l'héparine à la source de complexe prothrombinique ou à la source d'AT III avant l' adsorption.
3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que l'on met en contact l'agent adsorbant avec l'héparine avant de le mettre en contact avec la ou les sources de départ.
4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'avant l' élution, on mélange l'héparine et l'agent éluant.
5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait que la teneur en héparine est comprise entre environ 0,1 et 1 U.I par ml de source.
6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé par le fait que l'on utilise comme source de complexe prothrombinique une fraction de plasma obtenue après élimination du cryo-précipité.
7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé par le fait que l'on utilise comme source de départ du plasma frais.
8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé par le fait que l'on utilise comme source de complexe prothrombinique la fraction III de COHN.
9. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'on utilise comme source de complexe prothrombinique et/ou comme source d'AT III la fraction IV de COHN.
10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé par le fait que l'on utilise comme produit de départ une source contenant à la fois le complexe prothrombinique et l'AT III.
11. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'on effectue l'adsorption à température inférieure à la température ambiante.
12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé par le fait que l'on effectue l' adsorption à une température de 0 à 15°C.
13. Procédé selon la revendication 11, caractérisé par le fait que l'on effectue l' adsorption à température comprise entre 2 et 8°C environ.
14. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'on utilise comme adsorbant un gel d'alumine.
15. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'on effectue l' élution à température comprise entre ºC et la température ambiante.
16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé par le fait que l'on effectue l' élution à la température ambiante.
17. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait qu'après élution, on purifie l'éluat par traitement avec le polyéthylèneglycol, à pH 7 environ, à température inférieure à la température ambiante, pour précipiter les protéines indésirables.
18. Procédé selon la revendication 17, caractérisé par le fait qu'après élimination du précipité de protéines, on amène le pH du surnageant à une valeur de l'ordre de 4,8 à 5,2, puis l'on ajoute du PEG pour précipiter le complexe prothrombinique.
19. Concentré de complexe prothrombinique, caractérisé par le fait qu'il est pratiquement exempt de complexe prothrombinique activé.
20. Concentré de complexe prothrombinique selon la revendication 19, caractérisé par le fait qu'il est obtenu selon le procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 18.
21. Procédé de traitement des troubles de la coagulation, caractérisé par le fait que l'on administre à une personne souffrant desdits troubles une quantité efficace d'un concentré de complexe prothrombinique tel que défini dans l'une quelconque des revendications 19 et 20.
PCT/FR1980/000069 1979-05-04 1980-05-05 Concentres de complexe prothrombinique, preparation et application WO1980002426A1 (fr)

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