CA1157375A - Procede de preparation de concentres de complexe prothrombinique hautement purifies, et concentres obtenus - Google Patents
Procede de preparation de concentres de complexe prothrombinique hautement purifies, et concentres obtenusInfo
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- CA1157375A CA1157375A CA000351182A CA351182A CA1157375A CA 1157375 A CA1157375 A CA 1157375A CA 000351182 A CA000351182 A CA 000351182A CA 351182 A CA351182 A CA 351182A CA 1157375 A CA1157375 A CA 1157375A
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Abstract
Procédé de préparation d'un concentré de complexe prothrombinique. Ce procédé, dans lequel, partant d'une source de complexe prothrombinique, on effectue une adsorption suivie d'une élution, est caractérisé par le fait que l'on met en contact une source de complexe prothrombinique et une source d'anti-thrombine III (ou AT III) avec un agent adsorbant capable d'adsorber à la fois le complexe prothrombinique et l'anti-thrombine III, que l'on opère, au moins pendant le stade d'élution, en présence d'héparine, et que l'on effectue l'élution avec un agent d'élution capable d'éluer à la fois le complexe prothrombinique, l'AT III et l'héparine. Application du produit obtenu notamment au traitement des troubles de la coagulation sanguine.
Description
1 ~$17;~75 La présente i,nventicn a ~rait à un proceaé de préparation d'un concentré cle acteur rx ou plus généralement de complexe prothrombinique, hautemen~ purifié, ainsi qu'à des nouveaux concentrés hautement purifiés de complexe prothrombinique qui peuvent être ob-tenus grâce à ce procédé~
Di~férents essais de préparation de complexe prothrombi~
nique (complexe comprenant les facteurs de coagulation II, VII, IX et X~, ont déjà été proposés pour le trai~ement de divers troubles de la coagulation, d~s notamment à des défi-ciences en facteur IX (hémophilie B), ou encore à une insuffi-sance hépatique.
Ainsi, on a déjà cherché à puri~ier le complexe prothrom-binique en partant de plasma frais ou fraichement congelé par l'utilisation de phosphate de calcium ou d'échangeurs d'ions-DEAE.
D'autres procédés ont également été utilisés tels que l'adsorption sur sulfate de baryum ou gel d'alumine.
On a également déjà proposé de préparer un concentré de facteur IX a partir de la fraction III de COHN provenant du fractionnement de plasma fraichement congelé par l'éthanol à
froid.
Ces diférents produits se sont avérés insta~les parce que certains facteurs de la coagulation s'~ trouvent à l'état "activé" e-t il s'est avéré que il ~ environ des patients trai-tés avec ces concentrés ont développé des thromboses.
~ in de remédier a ces inconvénients, M. Wickerhauser a déjà prévu d'inactiver le facteur IX activé présent dans la fraction III de COHN par l'addition, au concentré obtenu après élution, d'héparine et de son co-facteur obtenu séparément à
partir de la ~raction IV de COHN.
Il en résulte qu'un Comité international a recommandé
1 ~L5'~37~
formellement que des préparatlons moins dangereuses soient développées par ~'adjonction c1~héparine au produit final pour éviter les e~fets néfastes de l'activité anti-coagulante.
Dans d'autres procédés on a également prévu, une fois le produit obtenu~ de Le stabiliser par addition d'héparine et de son co-facteur, en utilisant par exemple un sérum complet comme source de co-Eacteur d'héparine.
Cependant, les concentrés actuellement proposés présen-tent une proportion notable de facteur activé malyré l'adjonc-tion finale d'héparine, La présente invention se propose de fournir un procédé depréparation de concentré de complexe prothrombinique qui per-mette d'obtenir directement un concentré non "activé" c'est-à-dire stable et sans risque pour les patients. I
L'invention se propose également de fournir un procédé
simple et peu onéreux pour obtenir un tel concentré.
L'invention a pour objet un procédé de preparation de concentré
de complexe pro ~ ombinique pratiquement exemp-t de complexe prothrombinique active, dans lequel, partant d'une source de complexe prothrombinique, on effectue une adsorption suivie d'une elution, caracterise par le fait que l'on met en contact une source de complexe prothromb~lique et une source d'anti-thrombine III (ou AT III), avec un agent adsorbant capable d'absorber à la fois le complexe prothrombinique et l'anti-thrombine III~ que l'on opèrej au moins pendant le stade d'élu-tion, en présence d'héparine~ et que l'on effectue l'élution avec un agent d'élution capable d'éluer à la Eois le complexe prothrombinique/ l'A~ III et l'héparine.
L'héparine active l'anti-thrombine III. L'anti-thrombine III activé protège et stabilise le complexe prothrombinique~
Dans le cas où la source de complexe prothrombinique con-tient de l'AT III, en quan-tité suffisante, les deux sources de , t - 2 1 1~'73~5 départ sont évidemment ec>nondues en une seule Dans ~e cas où la s~urce de complexe prothrombinique ne contient pas cl'A~r III ou en contient une quantité insu~isante pour stablliser ledi~ complexe, il convient donc d'ajouter une quantité sufEisante d'A~ III avant l'élution. De préEérence, on ajoute l'AT III à la souree de complexe prothrombinique, avant adsorption.
L'addition d'heparine est eEfeetuée avant l'élution.
Autrement dit~ il est possible d'ajouter l'héparine à l'agent éluant, à la suite de quoi on efectue l'élution. Mais, de préférence, l'héparine est ajoutée à la source de complexe prothrombinique ou a la source d'AT I:CIr avant l'adsorption On peut aussi mettre l'héparine en contact avec l'agent adsor-; bant, puis mettre ceIui-ei en eontact avec la ou les sources de départ.
Lorsqu'il est nécessaire d'ajouter de l'AT III à la source de complexe prothrombinique, cette addition est effectuée, de préférenee, en même temps que l'addition d'héparine.
Ainsi, dans le mode d'éxécution préféré du procédé, le complexe prothrombinique se trouve protégé pendant toute la durée du procédé.
- Comme source de départ, on utilise de préférence la frac-tion obtenue à partir du plasma décongelé, après élimination du cryoprécipité, fraction dite "cryo poor plasma" ou CPP.
On peut cependant également utiliser un plasma frais con-gelé-ou non.`
On peut aus~i utiliser comme procluit de départ, la frac-tion III de COHN à la~uelle il conv1ent d'ajouter de l'anti-thrombine AT III~ par exemple sous forme de fraction IV de COH~.
On peut également utiliser comme produit de départ la fraction IV~ seule, car cette ~raction IV est aussi une source de com-1~5 737~
plexe prothrombinique~
De préEérence/ lorsque l'on part d'~n plasma on ajoutel'héparine le plus tôt possiblè, et même, si possible, avant la congélation, La quantité d'héparine à ajouter est fonction de la qua-lité de la source de complexe prothrombinique. Cette quantité
varie généralement de 0~1 à 1 U.I. environ par ml de source~
L'adsorption peut être effectuée sur le yel d'alumine qui s'est avéré particulièrement convenable pour l'adsorption puis l'élution du complexe prothrombinique protégé, conformément à l'invention.
On peut cependant utiliser d'autres agents adsorbants à
condition qu'ils soient susceptibles d'adsorber le concentré
et le co-facteur (AT III) activé par l'héparine.
On efEectue l'adsorption à la température qui est la plus favorable et qui dépend principalement de la nature de l'agent adsorbant. On opère généralement à température infér-ieure à la température alnbiante, par exemple de O à 15C.
Ainsi, pour le gel d'alumine, la température, est de préEé-rence de 2 à 8C environ, On eEfectue l'élution avec tout agent capable d'éluersimultanément le complexe prothromblnique et l'AT III. On utilise généralement un tampon de orce ionique convenable.
Selon un mode d'éxécution particulier, la source, par exemple une ~raction CPP ayant re~u une adjonction d'héparine est adsorbée sur gel d'alumine à la suite de quoi on effectue l'élution, entre 0C et la température ambiante.
La fraction éluée peut être purifiée, à pH 7 environ, grâce à une ou plusieurs additions ~e polyéthylènegl~col ~PEG) (5-10%) qui précipite des protéines indésirables. De préfé-rence on eectue les précipitations au PEG à température 1 15 ~375 ambiante, par exemple 0-8~ et not~mment à ~-4C environ.
Après avoir éLiminé par centriugation le précipité de protéines contaminantes~ on amène le pH du surnageant à une valeur de l'ordre de 4~8 à 5~2, on ajoute du PEG, jusqu'à une concentration de 12 à 20~ et isole le précipité qui contient le complexe prothrombinique. Cette précipitation est également effectue à basse température. Le complexe prothrombini~ue obtenu est ensuite redissous puis cette solution finale subit éventuellement des opérations de Eiltration, de répartition e~
de lyophilisation.
L'invention a également pour objet un concentré de com-plexe prothrombinique, caractérisé par le fait qu'il est pra-tiquement exempt de complexe prothrombinique activé. Un tel concentré peut etre obtenu par le procédé précité. Il se dis-tingue des produits obtenus jusqulà présent qui comportent en général des proportions importantes ou très importantes de complexe à l'état "activé".
Le concentré de compLexe prothrombinique selon l'invention est utilisable comme médlcament notamment pour le traitement de troubles de la coagulation, en particulier de déficiences en facteur IX, mais aussi de la maladie hemorragique du nouveau-né, des dépassements de dose des médicaments coumariniques/
et des maladies du foie à l'état avancé. Il est administré
selon les voies et posologies usuellesa Ce complexe possède lès propriétés pharmacologiques et l'innocuité habitueLles des autres concentrés ~e complexes prothrombiniques purifiés, mais s'en distingue notamment par l'absence ou la quasi-absence de complications thrombotiques ; indésirables~
L'invention va maintenant être décrite plus en détail à
l'aide d'un exemple de mise en oeuvre non limitatif.
1 15'7~
La source de dépàr~ est la raction dite CPP c'est-à-dire ce qui reske d~un plasma congelé puis décongelé et dont on , a alors éliminé Le cr~oprécipit~.
A cette ~raction on ajoute de l'héparine de façon à
avoir dans le melange environ a,5 unité par millilitre de plasma CPP .
On effectue ensuite à une températ~re basse, comprise entre 0 et 8C et de préférence entre 2 et 4QC 11 adsorption sur un gel d'alumine à raison de 10 à 2~ millilitres de yel d'alumine par litre de ce plasma héparlne.
On agite puis l'on centriuge et garde le gel.
On effectue ensuite l'élution du gel à l'aide d'un tampon éluant classique convenable, A titre d'exemple on peut uti-liser un tampon contenant 0~25 M de phosphate de potassium, 0,17 M de citrate trlsodique, 5 H2O - et 0,~03 M d'EDTA. Le pH
est ajusté aux alentours de 7,5 à 8,5 et l'on peut effectuer l'élution avec un uolume de tampon de l'ordre du trentième du volume du plasma CPP, L'élution s'effectue de façon usuelle en mettant le gel en suspension dans le tampon d'élution et en agitant. On effectue ens~ite uhe centrifugation et l'on garde l'éluat.
On ajuste ensuite le pH de l'éluat aux environs de 7r et la température à environ 2 à 4C, à la suite de quoi l'on ajoute de S à 10~ en poids/volume de PEG (pol~éthylènegl~col). On agite puis l~on centri~uge et l'on élimine le précipité pour garder le surnageant.
On abaisse alors le pH du surnageant à une valeur relative-ment faible~ de l'ordre de 4~8 à 5,2, on ajoute du PEG jusqu'à
une teneur de 12 à ~a % de PEG, en tenant compte du PEG ajouté
initialement, et de l'augmentation de volume, on agi-te et l'on ~ centrifuge pour conserver le précipité, Ce stade est égale-.
37~
ment e~ectue à basse ~empératured Le preci~ité est ensuite, de pr~erence à température ambiante, remis en dissolution, dans une sclution contenant par exemple du chlorure de sodiu~ ou du citrate trisodique, le volume de dissol~tion étant d'environ 1/2 ou 1/3 du volume de l'éluat. Après dissol~tion on a~uste le pH jusqu'à obtenir une solution claire, maniEestant une dissolution complète, ce yui se produit aux alentours d'un pEI de 7.
Il reste ensuite à eEfectuer ~ne Eiltration de préférence sur membrane, la filtration finale au moins etant eEfectuée de façon stérlle.
On répartit ensuite stérilement le produit obtenu en parties aliquotes désirées puis on lyophilise et ceci immédia-tement après congélation.
On obtient ainsi un concentré de facteur IX pratiquement dépourvu d'activité indésirable.
L'exemple qui vient d'être décrit n'est evidemment nul-lement limitatif.
L'administration du concentré lyophilisé s'effectue par voie parentérale. Le concentré n'est pas toxique aux doses actives habituelles.
L'invention a également pour objet un procédé de traite-ment des troubles de la coagulation, carackérisé par le Eait que l'on administre à une personne souffrant desdits troubles une quantité efficace d'un concentré de complexe prothrom-binique tel que defini dans la présente demande.
Di~férents essais de préparation de complexe prothrombi~
nique (complexe comprenant les facteurs de coagulation II, VII, IX et X~, ont déjà été proposés pour le trai~ement de divers troubles de la coagulation, d~s notamment à des défi-ciences en facteur IX (hémophilie B), ou encore à une insuffi-sance hépatique.
Ainsi, on a déjà cherché à puri~ier le complexe prothrom-binique en partant de plasma frais ou fraichement congelé par l'utilisation de phosphate de calcium ou d'échangeurs d'ions-DEAE.
D'autres procédés ont également été utilisés tels que l'adsorption sur sulfate de baryum ou gel d'alumine.
On a également déjà proposé de préparer un concentré de facteur IX a partir de la fraction III de COHN provenant du fractionnement de plasma fraichement congelé par l'éthanol à
froid.
Ces diférents produits se sont avérés insta~les parce que certains facteurs de la coagulation s'~ trouvent à l'état "activé" e-t il s'est avéré que il ~ environ des patients trai-tés avec ces concentrés ont développé des thromboses.
~ in de remédier a ces inconvénients, M. Wickerhauser a déjà prévu d'inactiver le facteur IX activé présent dans la fraction III de COHN par l'addition, au concentré obtenu après élution, d'héparine et de son co-facteur obtenu séparément à
partir de la ~raction IV de COHN.
Il en résulte qu'un Comité international a recommandé
1 ~L5'~37~
formellement que des préparatlons moins dangereuses soient développées par ~'adjonction c1~héparine au produit final pour éviter les e~fets néfastes de l'activité anti-coagulante.
Dans d'autres procédés on a également prévu, une fois le produit obtenu~ de Le stabiliser par addition d'héparine et de son co-facteur, en utilisant par exemple un sérum complet comme source de co-Eacteur d'héparine.
Cependant, les concentrés actuellement proposés présen-tent une proportion notable de facteur activé malyré l'adjonc-tion finale d'héparine, La présente invention se propose de fournir un procédé depréparation de concentré de complexe prothrombinique qui per-mette d'obtenir directement un concentré non "activé" c'est-à-dire stable et sans risque pour les patients. I
L'invention se propose également de fournir un procédé
simple et peu onéreux pour obtenir un tel concentré.
L'invention a pour objet un procédé de preparation de concentré
de complexe pro ~ ombinique pratiquement exemp-t de complexe prothrombinique active, dans lequel, partant d'une source de complexe prothrombinique, on effectue une adsorption suivie d'une elution, caracterise par le fait que l'on met en contact une source de complexe prothromb~lique et une source d'anti-thrombine III (ou AT III), avec un agent adsorbant capable d'absorber à la fois le complexe prothrombinique et l'anti-thrombine III~ que l'on opèrej au moins pendant le stade d'élu-tion, en présence d'héparine~ et que l'on effectue l'élution avec un agent d'élution capable d'éluer à la Eois le complexe prothrombinique/ l'A~ III et l'héparine.
L'héparine active l'anti-thrombine III. L'anti-thrombine III activé protège et stabilise le complexe prothrombinique~
Dans le cas où la source de complexe prothrombinique con-tient de l'AT III, en quan-tité suffisante, les deux sources de , t - 2 1 1~'73~5 départ sont évidemment ec>nondues en une seule Dans ~e cas où la s~urce de complexe prothrombinique ne contient pas cl'A~r III ou en contient une quantité insu~isante pour stablliser ledi~ complexe, il convient donc d'ajouter une quantité sufEisante d'A~ III avant l'élution. De préEérence, on ajoute l'AT III à la souree de complexe prothrombinique, avant adsorption.
L'addition d'heparine est eEfeetuée avant l'élution.
Autrement dit~ il est possible d'ajouter l'héparine à l'agent éluant, à la suite de quoi on efectue l'élution. Mais, de préférence, l'héparine est ajoutée à la source de complexe prothrombinique ou a la source d'AT I:CIr avant l'adsorption On peut aussi mettre l'héparine en contact avec l'agent adsor-; bant, puis mettre ceIui-ei en eontact avec la ou les sources de départ.
Lorsqu'il est nécessaire d'ajouter de l'AT III à la source de complexe prothrombinique, cette addition est effectuée, de préférenee, en même temps que l'addition d'héparine.
Ainsi, dans le mode d'éxécution préféré du procédé, le complexe prothrombinique se trouve protégé pendant toute la durée du procédé.
- Comme source de départ, on utilise de préférence la frac-tion obtenue à partir du plasma décongelé, après élimination du cryoprécipité, fraction dite "cryo poor plasma" ou CPP.
On peut cependant également utiliser un plasma frais con-gelé-ou non.`
On peut aus~i utiliser comme procluit de départ, la frac-tion III de COHN à la~uelle il conv1ent d'ajouter de l'anti-thrombine AT III~ par exemple sous forme de fraction IV de COH~.
On peut également utiliser comme produit de départ la fraction IV~ seule, car cette ~raction IV est aussi une source de com-1~5 737~
plexe prothrombinique~
De préEérence/ lorsque l'on part d'~n plasma on ajoutel'héparine le plus tôt possiblè, et même, si possible, avant la congélation, La quantité d'héparine à ajouter est fonction de la qua-lité de la source de complexe prothrombinique. Cette quantité
varie généralement de 0~1 à 1 U.I. environ par ml de source~
L'adsorption peut être effectuée sur le yel d'alumine qui s'est avéré particulièrement convenable pour l'adsorption puis l'élution du complexe prothrombinique protégé, conformément à l'invention.
On peut cependant utiliser d'autres agents adsorbants à
condition qu'ils soient susceptibles d'adsorber le concentré
et le co-facteur (AT III) activé par l'héparine.
On efEectue l'adsorption à la température qui est la plus favorable et qui dépend principalement de la nature de l'agent adsorbant. On opère généralement à température infér-ieure à la température alnbiante, par exemple de O à 15C.
Ainsi, pour le gel d'alumine, la température, est de préEé-rence de 2 à 8C environ, On eEfectue l'élution avec tout agent capable d'éluersimultanément le complexe prothromblnique et l'AT III. On utilise généralement un tampon de orce ionique convenable.
Selon un mode d'éxécution particulier, la source, par exemple une ~raction CPP ayant re~u une adjonction d'héparine est adsorbée sur gel d'alumine à la suite de quoi on effectue l'élution, entre 0C et la température ambiante.
La fraction éluée peut être purifiée, à pH 7 environ, grâce à une ou plusieurs additions ~e polyéthylènegl~col ~PEG) (5-10%) qui précipite des protéines indésirables. De préfé-rence on eectue les précipitations au PEG à température 1 15 ~375 ambiante, par exemple 0-8~ et not~mment à ~-4C environ.
Après avoir éLiminé par centriugation le précipité de protéines contaminantes~ on amène le pH du surnageant à une valeur de l'ordre de 4~8 à 5~2, on ajoute du PEG, jusqu'à une concentration de 12 à 20~ et isole le précipité qui contient le complexe prothrombinique. Cette précipitation est également effectue à basse température. Le complexe prothrombini~ue obtenu est ensuite redissous puis cette solution finale subit éventuellement des opérations de Eiltration, de répartition e~
de lyophilisation.
L'invention a également pour objet un concentré de com-plexe prothrombinique, caractérisé par le fait qu'il est pra-tiquement exempt de complexe prothrombinique activé. Un tel concentré peut etre obtenu par le procédé précité. Il se dis-tingue des produits obtenus jusqulà présent qui comportent en général des proportions importantes ou très importantes de complexe à l'état "activé".
Le concentré de compLexe prothrombinique selon l'invention est utilisable comme médlcament notamment pour le traitement de troubles de la coagulation, en particulier de déficiences en facteur IX, mais aussi de la maladie hemorragique du nouveau-né, des dépassements de dose des médicaments coumariniques/
et des maladies du foie à l'état avancé. Il est administré
selon les voies et posologies usuellesa Ce complexe possède lès propriétés pharmacologiques et l'innocuité habitueLles des autres concentrés ~e complexes prothrombiniques purifiés, mais s'en distingue notamment par l'absence ou la quasi-absence de complications thrombotiques ; indésirables~
L'invention va maintenant être décrite plus en détail à
l'aide d'un exemple de mise en oeuvre non limitatif.
1 15'7~
La source de dépàr~ est la raction dite CPP c'est-à-dire ce qui reske d~un plasma congelé puis décongelé et dont on , a alors éliminé Le cr~oprécipit~.
A cette ~raction on ajoute de l'héparine de façon à
avoir dans le melange environ a,5 unité par millilitre de plasma CPP .
On effectue ensuite à une températ~re basse, comprise entre 0 et 8C et de préférence entre 2 et 4QC 11 adsorption sur un gel d'alumine à raison de 10 à 2~ millilitres de yel d'alumine par litre de ce plasma héparlne.
On agite puis l'on centriuge et garde le gel.
On effectue ensuite l'élution du gel à l'aide d'un tampon éluant classique convenable, A titre d'exemple on peut uti-liser un tampon contenant 0~25 M de phosphate de potassium, 0,17 M de citrate trlsodique, 5 H2O - et 0,~03 M d'EDTA. Le pH
est ajusté aux alentours de 7,5 à 8,5 et l'on peut effectuer l'élution avec un uolume de tampon de l'ordre du trentième du volume du plasma CPP, L'élution s'effectue de façon usuelle en mettant le gel en suspension dans le tampon d'élution et en agitant. On effectue ens~ite uhe centrifugation et l'on garde l'éluat.
On ajuste ensuite le pH de l'éluat aux environs de 7r et la température à environ 2 à 4C, à la suite de quoi l'on ajoute de S à 10~ en poids/volume de PEG (pol~éthylènegl~col). On agite puis l~on centri~uge et l'on élimine le précipité pour garder le surnageant.
On abaisse alors le pH du surnageant à une valeur relative-ment faible~ de l'ordre de 4~8 à 5,2, on ajoute du PEG jusqu'à
une teneur de 12 à ~a % de PEG, en tenant compte du PEG ajouté
initialement, et de l'augmentation de volume, on agi-te et l'on ~ centrifuge pour conserver le précipité, Ce stade est égale-.
37~
ment e~ectue à basse ~empératured Le preci~ité est ensuite, de pr~erence à température ambiante, remis en dissolution, dans une sclution contenant par exemple du chlorure de sodiu~ ou du citrate trisodique, le volume de dissol~tion étant d'environ 1/2 ou 1/3 du volume de l'éluat. Après dissol~tion on a~uste le pH jusqu'à obtenir une solution claire, maniEestant une dissolution complète, ce yui se produit aux alentours d'un pEI de 7.
Il reste ensuite à eEfectuer ~ne Eiltration de préférence sur membrane, la filtration finale au moins etant eEfectuée de façon stérlle.
On répartit ensuite stérilement le produit obtenu en parties aliquotes désirées puis on lyophilise et ceci immédia-tement après congélation.
On obtient ainsi un concentré de facteur IX pratiquement dépourvu d'activité indésirable.
L'exemple qui vient d'être décrit n'est evidemment nul-lement limitatif.
L'administration du concentré lyophilisé s'effectue par voie parentérale. Le concentré n'est pas toxique aux doses actives habituelles.
L'invention a également pour objet un procédé de traite-ment des troubles de la coagulation, carackérisé par le Eait que l'on administre à une personne souffrant desdits troubles une quantité efficace d'un concentré de complexe prothrom-binique tel que defini dans la présente demande.
Claims (32)
1. Procédé de préparation de concentre de complexe prothrombinique pratiquement exempt de complexe prothrombini-que activé, dans lequel, partant d'une source de complexe prothrombinique, on effectue une adsorption suivie d'une é-lution, caractérisé par le fait que l'on met en contact une source de complexe prothrombinique et une source d'anti-thrombine III (ou AT III), avec un agent adsorbant capable d'adsorber à la fois le complexe prothrombinique et l'anti-thrombine III, que l'on opère, au moins pendant le stade d'élution, en présence d'héparine, et que l'on effectue l'é-lution avec un agent d'élution capable d'éluer à la fois le complexe prothrombinique, l'AT III et l'héparine.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
par le fait que l'on ajoute l'héparine à la source de complexe prothrombinique ou à la source d'AT III avant l'adsorption.
par le fait que l'on ajoute l'héparine à la source de complexe prothrombinique ou à la source d'AT III avant l'adsorption.
3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
par le fait que l'on met en contact l'agent adsorbant avec l'héparine avant de le mettre en contact avec la ou les sources de départ.
par le fait que l'on met en contact l'agent adsorbant avec l'héparine avant de le mettre en contact avec la ou les sources de départ.
4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
par le fait qu'avant l'élution, on mélange l'héparine et l'agent éluant.
par le fait qu'avant l'élution, on mélange l'héparine et l'agent éluant.
5. Procédé selon la revendication 1 caractérisé
par le fait que la teneur en héparine est comprise entre en-viron 0,1 et 1 U.I par ml de source.
par le fait que la teneur en héparine est comprise entre en-viron 0,1 et 1 U.I par ml de source.
6. Procédé selon la revendication 1 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique une fraction de plasma obtenue après élimina-tion du cryo-précipité.
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique une fraction de plasma obtenue après élimina-tion du cryo-précipité.
7. Procédé selon la revendication 5 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique une fraction de plasma obtenue après élimina-tion du cryo-précipité.
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique une fraction de plasma obtenue après élimina-tion du cryo-précipité.
8. Procédé selon la revendication 1 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme source de départ du plasma frais.
par le fait que l'on utilise comme source de départ du plasma frais.
9. Procédé selon la revendication 5 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme source de départ du plasma frais.
par le fait que l'on utilise comme source de départ du plasma frais.
10. Procédé selon la revendication 1 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique la fraction III de COHN.
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique la fraction III de COHN.
11. Procédé selon la revendication 5 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique la fraction III de COHN.
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique la fraction III de COHN.
12. Procédé selon la revendication 1 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique et/ou comme source d'AT III la fraction IV de COHN.
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique et/ou comme source d'AT III la fraction IV de COHN.
13. Procédé selon la revendication 5 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique et/ou comme source d'AT III la fraction IV de COHN.
par le fait que l'on utilise comme source de complexe pro-thrombinique et/ou comme source d'AT III la fraction IV de COHN.
14. Procédé selon la revendication 1 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme produit de départ une source contenant à la fois le complexe pro thrombinique et l'AT III.
par le fait que l'on utilise comme produit de départ une source contenant à la fois le complexe pro thrombinique et l'AT III.
15. Procédé selon la revendication 5 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme produit de départ une source contenant à la fois le complexe prothrombinique et l'AT III.
par le fait que l'on utilise comme produit de départ une source contenant à la fois le complexe prothrombinique et l'AT III.
16. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
par le fait que l'on effectue l'adsorption à température in-férieure à la température ambiante.
par le fait que l'on effectue l'adsorption à température in-férieure à la température ambiante.
17. Procédé selon la revendication 16 caractérisé
par le fait que l'on effectue l'adsorption à une température de 0 à 15°C.
par le fait que l'on effectue l'adsorption à une température de 0 à 15°C.
18. Procédé selon la revendication 16 caractérisé
par le fait que l'on effectue l'adsorption à une température comprise entre 2 et 8°C.
par le fait que l'on effectue l'adsorption à une température comprise entre 2 et 8°C.
19. Procédé selon la revendication 1 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme adsorbant un gel d'alumine.
par le fait que l'on utilise comme adsorbant un gel d'alumine.
20. Procédé selon la revendication 5 caractérisé
par le fait que l'on utilise comme adsorbant un gel d'alumine.
par le fait que l'on utilise comme adsorbant un gel d'alumine.
21. Procédé selon la revendication 1 caractérisé
par le fait que l'on effectue l'élution à température com-prise entre 0°C et la température ambiante.
par le fait que l'on effectue l'élution à température com-prise entre 0°C et la température ambiante.
22. Procédé selon la revendication 21 caractérisé
par le fait que l'on effectue l'élution à la température am-biante.
par le fait que l'on effectue l'élution à la température am-biante.
23. Procédé selon la revendication 1 caractérisé
par le fait qu'après élution, on purifie l'éluant par traite-ment avec le polyéthylèneglycol, à pH 7 environ, à tempé-rature inférieure à la température ambiante, pour précipiter les protéines indésirables.
par le fait qu'après élution, on purifie l'éluant par traite-ment avec le polyéthylèneglycol, à pH 7 environ, à tempé-rature inférieure à la température ambiante, pour précipiter les protéines indésirables.
24. Procédé selon la revendication 23, caracté-risé par le fait qu'après élimination du précipité de protéines, on amène le pH du surnageant à une valeur de l'ordre de 4,8 à 5,2, puis l'on ajoute du PEG pour précipiter le complexe prothrombinique.
25. Concentré de complexe prothrombinique caractérisé
par le fait qu'il est pratiquement exempt de complexe pro-thrombinique activé lorsque préparé par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, et 3 ou ses équivalents chimiques manifestes.
par le fait qu'il est pratiquement exempt de complexe pro-thrombinique activé lorsque préparé par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, et 3 ou ses équivalents chimiques manifestes.
26. Concentre de complexe prothrombinique carac-térisé par le fait qu'il est pratiquement exempt de complexe prothrombinique active, lorsque préparé par un procédé selon l'une quelconque des revendications 4, 5 et 6 ou ses équiva-lents chimiques manifestes.
27. Concentre de complexe prothrombinique carac-térisé par le fait qu'il est pratiquement exempt de complexe prothrombinique active, lorsque préparé par un procédé selon l'une quelconque des revendications 7, 8 et 9 ou ses équiva-lents chimiques manifestes.
28. Concentre de complexe prothrombinique carac-térisé par le fait qu'il est pratiquement exempt de complexe prothrombinique active, lorsque préparé par un procédé selon l'une quelconque des revendications 10, 11 et 12 ou ses équiva-lents chimiques manifestes.
29. Concentre de complexe prothrombinique carac-térisé par le fait qu'il est pratiquement exempt de complexe prothrombinique active, lorsque préparé par un procédé selon l'une quelconque des revendications 13, 14 et 15 ou ses équivalents chimiques manifestes.
30. Concentré de complexe prothrombinique carac-térisé par le fait qu'il est pratiquement, exempt de complexe prothrombinique active, lorsque préparé par un procédé selon l'une quelconque des revendications 16, 17 et 18 ou ses équivalents chimiques manifestes.
31. Concentré de complexe prothrombinique carac-térisé par le fait qu'il est pratiquement exempt de complexe prothrombinique activé, lorsque préparé par un procédé selon l'une quelconque des revendications 19, 20 et 21 ou ses équi-valents chimiques manifestes.
32. Concentré de complexe prothrombinique carac-térisé par le fait qu'il est pratiquement exempt de complexe prothrombinique activé, lorsque préparé par un procédé selon l'une quelconque des revendications 22, 23 et 24 ou ses équivalents chimiques manifestes.
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