UA57702C2 - Імуномодулятори - Google Patents

Abstract

Цей винахід відноситься до поліпептиду, що відрізняється від людського інтерлейкіна 10, що має щонайменше одну з нижченаведених властивостей: а) індукує інгібування спонтанної продукції IL-8 моноцитами людини, б) індукує інгібуванння IL-l -індукованої продукції IL-8 мононуклеарними клітками периферичної крові людини (РВМС), в) індукує продукцію білка-антагоніста рецептора інтерлейкіна-1 (IRAP) моноцитами людини, г) індукує in vitro хемотаксичну міграцію СD8+-Т-лімфоцитів людини, д) десенсібілізує СD8+-Т-клітки людини, приводячи до ареактивності стосовно rhIL-10, е) викликає супресію хемотаксичної відповіді СD4+-Т-лімфоцитів людини на IL-8, ж) викликає супресію хемотаксичної відповіді моноцитів людини на MCAF/MCP-1, з) індукує продукцію IL-4 культивованими СD4+-Т-клітками здорових людей, і) знижує продукцію TNF у реакції змішаних лейкоцитів людини. Зокрема, цей винахід відноситься до нонапептиду аlа-туr-меt-Thr-меt-Lуs-іlе-аrg-аsn і його аналогів і варіантів.

Description

Опис винаходу

Настоящее изобретение относится к фармацевтическому использованию вещества, которое представляет 2 собой агонист интерлейкина 10 (1-10), в частности, к использованию вещества для производства фармацевтического препарата для предупреждения и/или лечения заболеваний, патогенез которьїх связан со снижением образования и/или функции медиаторов иммуноподавления, главньмм образом цитокинов, и/или связано с увеличением образования и/или функции определенньїх иммуновоспалительньїх медиаторов, главньім образом цитокинов. В частности, изобретение относится к использованию вещества настоящего 70 изобретения для производства фармацевтического препарата для предупреждения и/или лечения аутоиммунньїх заболеваний (сахарньій диабет, тип 1; воспалительнье заболевания желудочно-кишечного тракта; ревматоидньіїй артрит, подагрический артрит (подагра), кожная аллергия? аллергические реакции на коже, в легких и дьїхательньїх путях (в том числе, бронхиальная астма); повреждение ткани в результате гипоксий/ишемий (инфаркт, реперфузия); атеросклероз; псориаз, гранулематознье заболевания; хронический 719 миелоидньй лейкоз; острьій миєелоидньй лейкоз; рак; реакция "трансплантант против хозяйна" и состояния, связаннье с отторжением трансплантанта; фиброз легких; фиброз печени; хроническое неинфекционное воспаление легких; гломерулонефрит; преждевременнье родь; периодонтит; воспалительнье реакции, связаннье с вирусньми инфекциями, остеопорозом, септическим шоком) и/или для производства противозачаточного средства.

Известньй уровень техники

Мсследования последних двух десятилетий показали, что стимуляция, регуляция и прекращение воспалительньїхх реакций, также как и регуляция роста и дифференцировки в рамках организма млекопитающих, находятся под строгим контролем особой группьі сигнальньїх полипептидов с общим названием цитокинь.

Цитокиньї представляют собой полипептидьі, которье могут бьїть продуцированьї большинством ядерньх с 22 клеток, и которне передают регуляторнье сигнальь между клетками, создавая, таким образом, Го) коммуникационную сеть между идентичньіми или различньми типами клеток организма. Цитокиньї являются очень сильньмми медиаторами и активньї при концентрациях, ниже 10772 М. Цитокиньі являются также ключевьми факторами для развития иммунньїх реакций, которье в свою очередь создают основу для клинических проявлений воспалительного процесса, связанного с инфекцией, аллергией, травмой, реакциями см 3о "трансплантант против хозяина" и аутоиммунньми заболеваниями. Аллергические и аутоиммуннье (ав) заболевания обьясняли аномалиями в иммунной системе, главньмм образом в иммунитете, опосредованном

Т-лимфоцитами, хотя обьічно зти заболевания имеют неизвестную зтиологию. В исследованиях ин витро, в - зкспериментах на животньїх и клинических зкспериментальньїх исследованиях бьіло показано, что цитокинь - играют важную патофизиологическую роль в отношений воспалительньхх реакций, связанньїх с аутоиммунньми заболеваниями, аллергией, ишемией, реперфузионном повреждений, травме, инфекциях, и важнь! для развития й опухоли, атеросклероза, развития беременности и плода, костного гомеостаза. Цитокинь! могут бьіть вовлечень в другие иммуновоспалительнье и пролиферативнье заболевания, также описаннье достаточно подробно ниже. « й Указаннье заболевания обьчно являются хроническими и лечение является паллиактивньм, т.е. -о большинство лекарств, прописанньїх в связи с указанньми заболеваниями, направлень на ослабление с симптомов и обьічно не обладают лечебньмм зффектом. Другие способьї лечения представляют собой так з назьшваемье восстановительнье терапии, которье предполагают долговременное поддержание пациента веществами, например гормонами, необходимьми вследствие сниженного/недостаточного внутреннего образования указанного вещества. Указаннье способьї лечения зачастую неудовлетворительнь, из-за с 75 нежелательньх и часто серьезньїх побочньїх зффектов, и скорее только замедляют, а не предотвращают развитие болезни. Позтому крайне необходимь! усовершенствованнье способьії лечения и улучшеннье - І фармацевтические препарать!. -1 Интерлейкин-10 (1-10) является недавно описанньм естественньімм зндогенньм иммуносупрессивньм цитокином, идентифицированньм в организме мьшей и человека. Мьішиньй интерлейкин 10 (мил-10) (ав) 50 первоначально описали как фактор, ингибирующий синтез цитокина, вьісвобождающийся из клонов

Кз ТНо-хелперньїх Т-клеток, но он также обладает пролиферативньми воздействиями на различнье субклассь лимфоцитов, в том числе усиливающим действием на зффективность клонирования СО-, СО8 "-Т-клеток селезенки мьіши (4). Недавно человеческий интерлейкин-10 (ЧИЛ-10) секвенировали и обнаружили его вьісокую дв Гомологию на уровне последовательности ДНК, также как и на аминокислотном уровне, с мИЛ-10. Кроме того, недавно секвенировали свиной интерлейкин-10 и ообнаружили его вьісокую сгомологию на уровне (Ф) последовательности ДНК, также как и на аминокислотном уровне, с человеческим ИЛ-10 (88), смотри также г Фигуру 2. чЧИЛ-10 обладаєт также вьсокой гомологией с открьтой рамкой считьвания генома вируса

Зпштейна-Барр, ВСВЕТ1, а вирусньій ИЛ-10 проявляет некоторую активность сходную с ЧИЛ-10, сравни Фиг.1 (5). во Человеческий ИЛ-10 вьірабатьівается активированньми Т-клетками и иммортализованньми В-клетками и помимо своего цитокина синтезируют ингибирующий фактор (С 5 ІЄ), подавляющий образование нескольких провоспалительньїх цитокинов и колониестимулирующих факторов, которьій также стимулирует образование мононуклеарньми клетками белок/пептидного (ХВАР) антагониста рецептора интерлейкина-1ї, косвенно ингибируя таким образом активность ИЛ-1. ИЛ-10 также снижаєт регуляцию своего собственного образования с ве помощью моноцитов и подавляет зкспрессию молекул класса П зкспрессируемого МНС (12) . Далее, ЧИЛ-10 понижаєт антиген-специфичную пролиферацию человеческих Т-клеток и клонов СО4"-Т-клеток при использований моноцитов ов качестве антиген-презентирующих клеток. Опьть ин виво на мьшах свидетельствуют, что исход заражения лейшманией зависит от профиля цитокина из соответствующих ср4"-Т-лимфоцитов (13). У мьшей С57ВІ/6б, резистентньх к инфекции лейшманией, СО4"Т-клетки из дренированньїх лимфоузлов нуждаются в регуляций цитокинами у-ИФН- и ИЛ-2, тогда как чувствительнье к зтой инфекции мьіши ВАЇ В/С в своих дренированньїх лимфоузлах содержат СО4"-Т-клетки, внісвобождающиє

ИЛ-4 и ИЛ-10, которне могяий бьії отражать корреляцию с прогрессирующим заболеванием (13). Таким образом,

ИЛ-10 может оказьівать сильньій регуляторньій зффект на иммунологические ответь! в условиях ин витро и ин виво. Кроме того, ИЛ-10 сильно влияєт на биологию хемокина, поскольку человеческий интерлейкин-10 70 представляєт собой специфический хемотаксический фактор для СО8 "-Т-клеток, так как ИЛ-10 супрессирует способность СО4"-Т-клеток, но не СО8"-Т-клеток, перемещаться в ответ на хемотаксический цитокин. ИЛ-8

Т-клеток (14). ИЛ-10 ингибирует также хемотаксическое действие других хемокинов -МСР-1/МСАБ и КАМТЕЗ (75). Так как ИЛ-10 является дезактиватором функций моноцита/-макрофаза и ингибитором ТП 1-активности, лекарства с полной или частичной ИЛ-10-подобной активностью могут обладать терапевтическим действием в 72 отношений заболеваний, характеризующихся дисбалансом в образований цитокина и/или уровня его активности.

Раньше предлагали готовить фармацевтические препарать, включающие чЧИЛ-1О0 или вил-10, и использовать ЧИЛ-10 или вИЛ-10 для производства фармацевтического препарата, предназначенного для лечения различньїх состояний, таких как септический или токсический шок, ревматоидньйй артрит, реакция "трансплантант против хозяйна", отторжение ткани, сахарньй диабет, аутоиммуннье нарушения, лейкоз и рак, раскрьтого, например, в МУО093/02693 и УУО94/04180. Кроме того, антагонистьї ИЛ-10, например антитела специфически связьвающиеся с ЙИЛ-10, раскрьтье, например, в ЕР 405980 и М/094/06473, относительно которьїх предположили, что такие антитела могли бь бьть применень для лечения пациентов, инфицированньх ВИЧ. с

Краткое изложение существа изобретения ге)

В соответствии с настоящим изобретением установлено, что вещество, отличное от Ччеловеческого интерлейкина-10, которое обладает одним или большим числом нижеследующих свойств: а) индуцирует подавление ИЛ-8, спонтанно образуемого человеческими моноцитами,

Б) индуцирует подавление ИЛ-10, индуцирующего образование ИЛ-8 мононуклеарньми клетками с периферической крови человека (РВМО), о с) индуцирует образование человеческими моноцитами белка, антагонистичного рецептору интерлейкина-1 (ІВАР). - 4) индуцируеєт ин витро хемотаксическую миграцию СО8" человеческих Т-лимфоцитов в условиях ин витро, ч- з е) десенситизируеєт человеческие СЮО8"-Т-клетки, влияя на их толерантность к рчИЛ-10, ою 7) супрессируєт хемотаксический ответ СО4" человеческих Т-лимфоцитов к ИЛ-8, 9) супрессирует хемотаксический ответ человеческих моноцитов к МСАР/МСР-1, п) не подавляет на человеческих моноцитах зкспрессию молекул МНС класса П, в противоположность человеческому ИЛ-10, « ї) индуцирует образование ИЛ-4 при культивирований СЮО4"-Т-клеток здоровьїх людей шщ с |) снижает образование 9-ТМЕ в реакции смешанной культурь! лейкоцитов человека, такой как полипептид, ц которьій включает в себя аминокислотную последовательность Ала-Тир-Мет- Гре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Асп. или "» аналог или вариант указанной последовательности (нонапентид с последовательностью, гомологичной чИЛ-10, названньй 179302), а его производньсе могут бьіть использовань! для предупреждения и/или лечения некоторьх форм воспалительньїх процессов, в частности форм, связанньїх с иммунной и/или гормональной системами. 1 Предположено (как зто подробно описали в нижеследующем описаний иммунологических механизмов), что действие механизма осуществляется в результате нарушения действия медиаторов иммунной системь, в - частности цитокинов, таких как монокиньї, лимфокинь, хемокинь и антагонистов рецепторов монокинов, т.е. что -І вещество настоящего изобретения нарушает/супрессирует образование и/или действие некоторьїх цитокинов и таким образом подавляет патологические процессь, приводящие к повреждению ткани, и что вещество о настоящего изобретения индуцируеєет образование естественньїх антагонистов рецепторов монокинов, з нарушая/супрессируя таким образом действие некоторьїх цитокинов, ингибируя тем самьм патологические процессь, которне приводят к повреждению ткани.

Важность осуществления настоящего изобретения связьвают, позтому с фармацевтическим препаратом,

ВвВКключающим в себя, в качестве активного ингредиента, вещество настоящего изобретения. Другие варианть! осуществления настоящего изобретения связьвают с веществом, которое обладаєет способностью і) нейтрализации одного или большего числа вьішеупомянутьхх действий а) - 9), например антителом и іме) фармацевтическим препаратом, включающим в себя такое вещество.

Другая цель настоящего изобретения связана с использованием вещества настоящего изобретения для бо промьішленного производства фармацевтического препарата, в значительной мере ингибирующего биологическое действие, вьїізванное цитокином, т.е. использование вещества настоящего изобретения в качестве белок-пептид-антагониста рецептора МИЛ-1, лимфокина, монокина, интерлейкина, интерферона, хемокина или колониестимулирующего фактора. Очередная цель связана с использованием вещества настоящего изобретения для промьішленного производства фармацевтического препарата для профилактики 65 или лечения состояния, связанного с расстройством цитокиновой системь,, т.е. белок/пептид-антагонистом рецептора МЛ-1ї, лимфокина, монокина, интерлейкина, интерферона, хемокина или системь колониестимулирующего фактора. Следующая цель настоящего изобретения связана также со способом лечения состояния у людей, вьізванного расстройством цитокиновой системь!, способом, которьій включаєт в себя введение индивидууму зффективного количества вещества настоящего изобретения.

Клеточная иммунная система частично ответственна за такие нарушения как инфекции, воспалительная реакция и неопластические заболевания. Иммунокомпетентньсе клетки и их продукть! могут играть важную роль в стимуляции, развитии и возможной хронической природе проявления воспалительньїх состояний. Зтиология зтих нарушений часто неизвестна и представлена обьічньми заболеваниями, такими как сахарньй диабет, воспалительнье заболевания желудочно-кишечного тракта и кожи. Кроме зтих примеров, 7/0 клеточно-опосредованньюи иммунитет или провоспалительнье медиаторь! способствуют возникновению других воспалительньїх и пролиферативньїх заболеваний (смотри Таблицу 2).

Таблица 2

Некоторье заболевания, в которьїх наблюдаются иммуннье реакции, опосредованнье макрофагами/Т-лимфоцитами, считающиеся патогенетически тяжельми

Кожнье заболевания

Псориаз

Атопический дерматит

Контактньій дерматит

Кожная Т-клеточная лимфома (СТСІ)

Пузьірчатка обьікновенная

Синдром Сезари

Пемфигоид буллезньй

Зритема узловатая

Склеродермия сч

Аутоиммуннньеєв (в том числе, ревматические) заболевания:

Увеит і)

Болезнь Бехчета

Саркоидоз Бека

Синдром Шегрена с зо Ревматоидньй артрит

Детский ревматоидньй артрит о

Синдром Рейтера ї-

Артрит подагрический (Остео)артроз ї-

Волчанка красная ю

Полимиозит

Миокардит

Первичньїй биллиарньй цирроз

Болезнь Крона «

Колит язвенньй в с Множественньй склероз и другие демиелинизирующие заболевания

Апластическая анемия ;» Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура

Множественная миелома и В-клеточная лимфома

Пангипопитуитаризм Симмондса с Болезнь Грейвса и офтальмопатия Грейвса

Подострьй тиреоидит и хронический лимфоматозньй тиреосидит (зоб Хасимото) - Болезнь Аддисона -І Инсулинзависимьій сахарньй диабет (тип 1)

Другие заболевания о Различнье клинические синдромь! с васкулитами (например, полиартериит нодозньій, Вегенера

Із гранулематоз, гигантоклеточньіїй артерийт)

Лихорадка, недомогание

Анорексия (например, при острьїх и хронических воспалительньїх и инфекционньїх заболеваниях)

Диссеминированная внутрисосудистая коагуляция (ІС)

Артериосклероз (атеросклероз)

Ф) Шок (например, при грам-отрицательном сепсисе) ка Кахексия (например, при раке, хронических инфекционньїх и хронических воспалительньїх заболеваниях)

Отторжение трансплантанта и реакция "трансплантант против хозяина". во Цитокинь!:

Т-лимфоцить! организовьівают индукцию и регуляцию клеточно-опосредованньх иммунньїх реакций, а цитокиновье продукть! (лимфокиньї) Т-клеток инициируют и контролируют иммунньй ответ (1,2). Медиаторь, активированнье лимфоцитами (лимфокиньї)), образованнье антиген-презентирующими клетками, относятся к группе полипептидов, назьіваемьх цитокинами. Цитокиньї являются посредниками общения между клетками в 65 физиологических и патофизиологических условиях, но могут таюке функционировать в качестве гормонов, обеспечивая сигнализацию между иммунной системой и другими тканями и органами. Цитокинь! могут бьїть полученьї через, поверхность клеток иммунной системь! и совершенно ясно, что все ядернье клетки обладают способностью продуцировать один или несколько цитокинов. Позтому, например кератиноцить! и фибробласть являются основньіми продуцентами цитокинов и в данной системе цитокинь! могут функционировать в качестве аутокринньхх и паракринньїх гормонов независимо от иммунной системь! (3).

Интерлейкин-10:

Мьішиньій интерлейкин-10 (мИЛ-10) первоначально описали как фактор, ингибирующий синтез цитокина (СЗІР), вьісвобождаемьй из клонов ТНо-хелперньїх Т-клеток, которьій обладал также пролиферативньм действием на различнье субклассьь лимфоцитов, в том числе усиливающим действием на зффективность 7/0 клонирования СО4-, 8 "-Т-клетки селезенки мьшей. (4). Описанньій недавно человеческий интерлейкин-10 (ЧИЛ-10) (5), обладаєт вьісокой гомологией с открьїтой рамкой считьшвания генома вируса Зпштейна-Барр,

ВСКЕ1, но вирусньій ИЛ-10 не проявляет какой-либо активности сходной с ЧИЛ-10. Ниже следует краткое изложение биохимической, биологической, физиологической и предполагаемой патофизиологической роли

ИЛл-10.

Структура ИЛ-10:

Первичнье структурь! мьішиного (МИЛ-10) и человеческого ИЛ-10 показьивают вьісокую степень гомологийи нуклеотидньїх последовательностей (28095) по всей их длине (4,5). Значительньім отличием является инсерция злемента человеческой АЇш- повторяющейся последовательности в 3'і-нетранслируемую область клона кДдНК

ЧИЛ-10. Очень сходнье открьтье рамки считьвания (ОРС) кКДНК милЛ-10 и кДНК чиИлЛ-10 кодируют последовательности из 178 аминокислот, в том числе гидрофобнье лидернье последовательности, соответствующие 7395 аминокислотной гомологии милЛ-10, которьй активен в мьішиньїх клетках, в человеческих клетках не обладают большой перекрестной реактивностью. ЧИЛ является/полипептидом с мол. массой 18кКД, в котором не обнаруживаются углеводьї, а МИЛ-10 гликозилирован по сайту, расположенному возле его Н-конца, которьій утрачен ЧИЛ-10. И милЛ-10 и рекомбинантньй чИЛ-10 (рчИЛ-10) зкспрессируются в виде нековалентньх су гомодимеров. Уровень биологической активности мономеров мИЛ-10 или чИЛ-10 еще не определили. Согласно данньім, опубликованньм Мооге еї аіЇ., которне первьіми секвенировали последовательность человеческого і)

ИЛ-10 (6), мИЛ-1О0 и чИЛ-10 с полипептидньми "метками", как минимум из 8 аминокислот на М-конце и 21 аминокислотьі на С-конце, не обнаруживают потери активности. Меченье С- и М-концов целого ИЛ-10 не обязательно вьізьшает функциональнье изменения, поскольку меченье является случайньм или с несущественньм. Большое число возможньх аминокислотньїх замен, о которьіх подробно изложено ниже, может также обьяснить, отчего меченьем не удаєтся показать потерю функций. Рекомбинантнье мил-10 и о

ЧИЛ-10 зкспрессировали в: клетках СО57, клетках миеломь! мьіши, овариальньїх клетках китайского хомячка, рч- бакуловирусной зкспрессионной системе, и Е.соїЇ. Биологическое действие зтих рИЛ-10-белков до сих пор не различают (б). -

Ген мил-10 содержит в себе пять зкзонов, протянувшихся, примерно, более чем на 5,1 т.п.н. ДНК. Сам ю геномньїй клон кодирует зкспрессируемьй мил-10 белок. Геньї мИЛ-10 и ЧИЛ-10 расположень, соответственно, на 1-й хромосоме мьіши и 1-й хромосоме человека (6,7).

МИЛ-10 и чиИл-10 проявляют вьісокую гомологию нуклеотидньїх последовательностей ДНК, и « аминокислотньїх последовательностей, с открьітой рамкой считьівания в геноме вируса Заштейна-Барр, ВСКЕ1, ограниченную гомологию последовательности, кодирующей зрельй белок, и не обнаруживают гомологиий в й) с сигнальной последовательности или 5- и 3-нетранслируемьх последовательностях (5). з трех ц последовтлеьностей, мИЛ-10 и ЧИЛ-10 являются найболее близкой парой по уровню последовательности ДНК «» (8195), тогда как последовательности ДНК, кодирующие зрелье белки ЧИЛ-10 и ОСКЕ1, имеют 7195 гомологии.

Гомология на аминокислотном уровне между ЧИЛ-10 и ВСКЕ1 составляет 8495. Предполагается, что гень! МИЛ-10 и чИЛ-10 зволюционировали от общего предка, тогда как ВСКЕ1 представляет сохраненньїйй клеточньй ос цитокиновьїй предковьїй ген в процессе становления, и зто ограничило сходство ВСКЕ1-белка с ЧИЛ-10. ВСКЕ1 зкспрессируется в течение литического цикла ЕВМ. ОРС ВСКЕ1 кодирует секретируемьй полипептид с

Ше мол.массой 17кД, которьйй, подобно ЧИЛ-10, содержит мало углеводов и не гликозилирован. ВСКЕ1 проявляет -І некоторье чертьі ИЛ-10 и бьл назван вирусньм ИЛ-10 (вИЛ-10), хотя как установлено, его активность составляет 1095 от ЧИЛ-10. о Действие ИЛ-10 на образование цитокинов:

Кз ЧИЛ-10 с помощью моноцитов/макрофагов и/или Т-лимфоцитов подавляет образование ряда цитокинов, в том числе у-интерферона (у-ИФН), фактора о некроза опухолей (ТМЕ-о), гранулоцитно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ), гранулоцитного КСФ (Г-КСФ), ИЛ-19, ИЛ-1Дф, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8 и хемотаксического полипептида-1 моноцитов (МСР-1/МСАР). ИЛ-10 подавляет также способность моноцитов к о миграции как ответ на хемокин МСОСР/МСАР (75). Далеє, ЧИЛ-10 индуцирует образование зндогенного антагониста (КАР) рецептора естественного интерлейкина-1 (6), которьій ингибирует ИЛ-Т0 и МИЛ-1Д в іме) результате конкурентного связьивания рецептора. Поскольку ИЛ-8 сильно индуцируется с помощью ЙИЛ-1 у и

ИЛ-1р, ИЛ-10 оказьівает определенное ингибирующее действие на образование ИЛ-8, стимулируя образование 60 |ВАР, антагониста рецептора ИЛ-1. Зтот последний механизм очень важен для настоящего изобретения и иллюстрируется нижеследующим примером. ІВАР обладаеєт противовоспалительньм действием (9), и бьло внісказано предположение о его терапевтическом действиий на ревматоидньй артрит (10). ІКАР также оказался зффективен при леченийи септического синдрома и проявил дозовую зависимость, а в исследований Різпег еї ої. (11) 28-дневньїй благоприятньій исход увязали с применением ІКАР (р-0,015). ІКАР проявляет определенное бо противовоспалительноеє действиєе в результате ингибирования образования хемокина, такого как ИЛ-8.

ИЛ-10 и зкспрессия антигена:

ИЛ-10 подавляет зкспрессию МНС класса П на человеческих моноцитах (8). Зкспрессия НІ А-ОК/ОР и ро, конститутивно индуцированная ИЛ-4 или у -ИНФ, бьла подавлена с помощью чЧИЛ-10 (12). Кроме того,

Моноцить), преинкубированньюе с ИЛ-10, приобретают резистентность к последующей индукции, с помощью

ИЛ-4 или уУ-ИФН, зкспрессиий МНС класса П. ИЛ-10 подавляєт зкспрессию МНС класса П с помощью челоческих моноцитов после их активации І РЗ (12,76). Мьіши ВАЇ В/с, получившие 1-10мг ИЛ-10 вместе с летальной дозой

І Р5 били защищень; от гибели (6).

ИЛ-10 подавляеєет образование промежуточньх соединений азота и супероксидньїх анионов. ИЛ-10 70 подавляет также реакционную способность промежуточного соединения азота (МО), подобно тому, как реакционная способность промежуточньїх соединений кислорода (Н»О»2) подавляется макрофагами после их активации уУ-ИНФ (13).

ИЛ-10 и активность Т-клеток:

ИЛ-10 обладаєт также модулирующим действием на функции/активность Т-клеток. Позтому, ЧчЧИЛ-10 75 является потенциальньм хемотаксическим фактором для СО8 -Т-лимфоцитов, и не обнаруживаєт хемотаксиса в отношений СО4"-Т-клеток (14). Кроме того, ИЛ-10 супрессируєет способность СО4"-Т-клеток отвечать на хемотаксические сигнальї р-хемокина КАМТЕЗ, как и о-хемокина ИЛ-8. чЧИЛ-10 также непосредственно ингибирует пролиферацию Т-клеток периферической крови человека и клоньії СЮО4"-Т-клеток (14).

ИЛ-10 и В-лимфоцить!:

ЧИЛ костимулирует пролиферацию В-лимфоцитов, индуцированную перекрестно связанньми поверхностньми Ід с иммобилизованньми анти-Ід М-антителами и зтот зффект усиливается, когда В-клетки стимулируют перекрестно связьвающими их СО4О-антигенами с анти- СО4О -антителами и мьІішиньми

Ї-клетками, зкспрессирующими ЕсукП/СО32 человека (15). Действие МЛ-10 на пролиферацию и дифференциацию активированньх человеческих В-клеток дает основание предполагать, что зтот цитокин сч намного улучшает способность Т-клеток зкспрессировать ЧИЛ-10, содействующего ответам В-клеток. о

ИЛ-10 как гомеостатический фактор иммунной системь!:

Физиологическими следствиями функционирования ИЛ-10, рассмотренного вьше, очевидно будет достижение иммунной системой некоторого гомеостаза. Так, ИЛ-10 определенно ингибирует функции зо хелперньїх Т-клеток и, по-видимому, стимулирует Т-клетки с супрессорньіми функциями. В зтой связи очевидно, с что ИЛ-10, подобно ИЛ-4, регулирует равновесие между цитокиновьіми профилями ТИ1 и Тп2 Т-клеток. В (ав) частности очевидно, что ИЛ-10 подавляет дифференциацию Тп1-клеток. Поскольку Тп1-клетки продуцируют цитокиньі (У-ИФН и ИЛ-2), которне благоприятствуют клеточно-опосредованньм иммунньм ответам, а -

Тп2-клетки вьірабатьсвают цитокиньї (ИЛ-4, ИЛ-5 и ИЛ-10), которое благоприятствуют гуморальному ответу и - зв бупрессируют клеточно-опосредованньи иммунньій ответ ИЛ-10 вероятно супрессирует, опосредованную ю

Т-клетками иммунную реакцию, такую как реакция гиперчувствительности замедленного типа, а она благоприятствует гуморальньм ответам.

Следствием характеристик ИЛ-10, рассмотренньїх вьіше, является описанная ранее активность ИЛ-10, ингибирующая синтез макрофагов и ТИ1-цитокина. В зтом связи проанализировали, действительно ли « едостаток образования и/или активности может играть роль в заболеваниях, в которьх усиление з клеточно-опосредованной иммунорективности определенно влияет на такие заболевания как аутоиммуннье и с воспаление. Мьіши, подвергавшиеся обработке анти-ИЛ-10-антителами, проявляют сильнейший :з» воспалительньій ответ на монокин, индуцирующий воспаление, и значительно больше подвержень! гибели, вьізванного І РеЗ-индуцированньм септическим шоком, воспалительной реакцией, опосредованной монокином (16). МЛ-10 вьїзьїваєт также у мьішей сильнейшую спонтанно развивающуюся кишечную воспалительную сл що реакцию, подобную той, которая имеет место при неспецифическом язвенном колите (17). Кроме того, исследовали возможную роль ИЛ-10 в различньїх паразитарньїх, микробактериальньїх или вирусньїх инфекциях -і и показали, что ИЛ-10 играет патофизиологическую роль при параличе иммунной системь), связанной с -1 инфекцией Зспізіозота топзопі (18). Такая же его роль предполагается при Мусо-расіегішт Іергае. Недавно 5р Установлено, что больнье СПИД'ом с неблагоприятньмм прогнозом имеют в плазме крови очень вьІсокий (ав) уровень ИЛ-10, которьйй, как предполагается, усиливаєт паралич иммунной системьї!, вьізванньій СПИД (19).

Кз Терапевтическая ценность:

Зти результатьуданньюе, полученнье ин виво, дают большое основание предполагать гомеостатическое значение ИЛ-10 в регуляции клеточно-опосредованного и усиленного монокином иммунного воспаления и вв Ууказьвают на возможность широкого терапевтического применения ИЛ-10 или лекарственного средства с

ИЛ-10-подобньім действием при лечении заболеваний, которне характеризуются уменьшенньім/недостачньм (Ф) образованием и/или активностью ИЛ-10. Поскольку вещество настоящего изобретения иллюстрируется 179302,

Ге осуществляющему действие, подобное ИЛ-10, в результате 1) индукции образования ІКАР человеческими моноцитами, во 2) подавления спонтанного образования ИЛ-8 человеческими моноцитами,

З) подавления стимулированного МИЛ-1 Др образования МЛ-8 с помощью мононуклеарньїх клеток периферической крови (РВМО), 4) стимуляция хемотаксической миграции СО8", но не СО4", человеческих Т-лимфоцитов, 5) десенситизациий человеческих СО8"-Т-клеток, предназначенньх для индуцированной /- ИЛ-10 б5 Ххемотаксической миграции. 6) подавления, опосредованного ИЛ-8, хемотаксиса СО4"-Т-клеток человека, и

7) подавления, опосредованного МСР-1/МСАРЕ, хемотаксиса человеческих моноцитов, 9) индукции образования ИЛ-4 путем культивирования СО4"-Т-клеток здоровьїх людей, 9) снижения образования ТВ/Е.о, в реакции смешанной культурь! лейкоцитов человека, зтот полипептид и его аналоги могут таким образом обладать теми же терапевтическими возможностями, что ЧИЛ-10. В Таблице З приведен перечень некоторьїх заболеваний, в отношений которьїх иммуномодулятор, подобньій ИЛ-10, или иммуномодулятор с активностью подобной ИЛ-10, имеет важное терапевтическое значение:

Таблица З

Некоторье заболевания, в отношений которьїх иммуномодулятор с действием, подобньім ИЛ-10, связанньім 70 с его индукцией образования ІКАР и/или подавлением образования цитокина и/или активностью может иметь терапевтическое значение (ссьІілки 20-74)

Преждевременнньєе родь, вьізваннье инфекцией или другими состояниями

Ревматоидньй артрит

Артрит Лима

Подагра

Септический синдром

Гипертермия

Неспецифический язвенньй колит или знтероколит

Остеопороз

Цитомегаловирус

Заболевания периодонтитом

Гломерулонефрит

Хроническое, неинфекционное воспаление легких (например саркоидоз и легкие курильщика)

Образование гранулемь с

Фиброз печени о

Фиброз легких

Отторжение трансплантанта

Заболевание "трансплантант против хозяина"

Хронический миелоидньй лейкоз Ге

Острьїй миелоидньй лейкоз

Другие неопластические заболевания о

Астма бронхиальная -

Диабет сахарньй, тип 1 (инсулинзависимьй)

Артериосклероз/атеросклероз -

Псориаз юю

Хронический В-лимфоцитарньй лейкоз

Общая иммунная недостаточность

Побочное действие других модификаторов биологического ответа «

Диссеминированная внутрисосудистая коагуляция (крови)

Системньй склероз - с Знцефаломиелит ц Воспаление легких ,» Синдром ІдЕ-гиперглобулинемийи

Знтероколить!

Метастазь рака и новообразования 1 Адоптивная иммунная терапия

Приобретенньій респираторньй дистресс-синдром ї Сепсис - І Реперфузионньїй синдром

Постхирургическое воспаление о Трансплантация органов

Що) Алопеция

Детальное описание изобретения

Создание нонапептидного ИЛ-10-гомолога с ИЛ-10-подобной активностью:

Отдельнье последовательности ЧИЛ-10 имеющие длину в 9 аминокислот, отобрали, насколько зто возможно, в соответствии с принципом, по которому последовательности вИЛ-10 и ЧИЛ-10 должнь! обладать о вьісокой гомологией между собой, а с мИЛ-10-низкой гомологией. Зта стратегия основана на том факте, что ко виИЛ-10 отчасти перекрестно реагирует с ЧИЛ-10, а мИЛ-10 не реагирует перекрестно с ЧИЛ-10 (смотри вьіше).

Позтому, последовательности ЧИЛ-10, ответственнье за некоторне действия в организме человека, могут бьіть 60 расположеньі в областях, где имеется вьісокая гомология между ЧИЛ-10 и вил-10, а низкая - в отношений

МИил-10.

Предполагается, что сигнальньій полипептид ЧИЛ-10 состоит, скорее всего, из 18 аминокислот. Зрельій белок начинается с аминокислоть! Мо 19 (Мо 1, которьій представлен серином, в функциональном белке) а весь белок содержит 160 аминокислот. Сопоставляя человеческие и вируснье СООН-концевье последовательности 65 и в особенности позиции 157 и 159, содержащие остатки лизина и аргинина, установлено, что зта область оказьівается отчасти ответственной за связьівание рецептора (Фигурь 1 и 2).

После скринирования нескольких кандидатов, полученньїх в химическом синтезе, на наличие

ИЛ-10-подобной активности, установили, что синтетический нонапептид, /Т9302, обладаєт несколькими иммуно-супрессивньми активностями, имитирующими чИЛ-10, которне подробно описаньі в нижеследующих примерах. ІТ9302 соответствует нонапептидной последовательности со стороньі М-конца ЧИЛ-10 со следующей аминокислотной последовательностью:

МН»-Ала-Тир-Мет-Тре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Асн-СООН(ЗЕО ІЮ МО 1)

ІТ9302 обладаеєт 10095-й гомологией с сегментом ЧИЛ-10, соответствующего аминокислотам с Мо 152 по Мо 160, находящимся на С-конце. Кроме того, зта полипептидная последовательность имеет 6 аминокислот, общих у 5 соответствующей областью вирусного вИЛ-10, смотри Фигурь! 1 и 2, которне означают, что 6 из 9 или 6690 указанньїх здесь аминокислот являются гомологами, а 4 аминокислоть! являются общими с милЛ-10, т.е. 4 из 9 или 44965. Зтот нонапептид представляет собой единственную последовательность, полученную или извлеченную из ЧИЛ-10, и исследованную к настоящему времени, которая обладаеєт специфическими свойствами, представленньми в примерах. До обсуждения зтих особенностей авторами настоящего /5 Мзобретения, нет смьісла рассматривать зту последовательность в качестве функционального домена.

Позтому, в соответствии с общей целью, настоящее изобретение относится к веществу, которое проявляет активность агониста ИЛ-10, т.е. веществу, которое отличаєется от человеческого интерлейкина-10 одним или несколькими нижеследующими свойствами: а) индуцирует подавление ИЛ-8, спонтанно образующегося моноцитами человека, 20 Б) индуцирует подавлениє, обусловленного ИЛ-1р, образования ИЛ-8 мононуклеарньми клетками периферической крови человека (РВМО), с) индуцирует образование человеческими моноцитами белка, антагонистичного рецептору интерлейкина-1 (ІБАР), а) индуцируєт хемотаксическую миграцию СОВ8" человеческих Т-лимфоцитов в условиях ин витро, Ге 25 е) десенситизируєт человеческие СЮО8"-Т-клетки, влияя на их толерантность к чИЛ-10, о 7 супрессирует хемотаксический ответ СЮО4" человеческих Т-лимфоцитов к ИЛ-8, 9) супрессирует хемотаксический ответ человеческих моноцитов к МСАР/МСР-1,

І) не ингибирует зкспрессию молекул МНС класса П, в противоположность человеческому ИЛ-10, ї) индуцирует образование ИЛ-4 при культивирований СЮО4"-Т-клеток здоровьїх людей, с 30 Ї) понижает образование ТМЕо, в реакции смешанной культурь! лейкоцитов человека. о

Изо всех зтих действий, 4) и 9) посчитали найболее уникальньми. Одним из важньїх вариантов осуществления настоящего изобретения является вещество, которое проявляет активность агониста ЧИЛ-10, т как указано вьше, и которое включает в себя аминокислотную последовательность рч-

Ала-Тир-Мет-Тре-Мет-Лиз-Мле-Арг-Асн или аналог или вариант указанной последовательности. Зта

Зо последовательность и все другие представленнье полипептиднье последовательности, даже когда они не юю точно определень, написань! в традиционной форме, от М-конца к С-концу.

Нонапептид ІТ9302 представляет собой очень зффективньй стимулятор различньїх функций, очень стабилен и предполагается, что он не может неверно присоединяться к рецепторам. Нонапептид бьл вьібран « потому, что 9 аминокислот полипептидной последовательности, в общем, являются уникальньми для белка. -

Однако, следует отметить, что б аминокислот, расположеннье на самом конце ЧИЛ-10, по-видимому, являются с найболее важньми. В рамках обьема настоящего изобретения вещество или полипептид представляет собой, з» таким образом, последовательность, включающую в себя аминокислотную последовательность

Ала-Тир-Мет-Тре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Асн (ЗЕО ІЮ МО:1).

Вполне вероятно, что определеннье аминокислотнье замень не оказьвают вредного воздействия на 75 активность указанного вьіше агониста ЧИЛ-10, до тех пор, пока имеются треонин, лизин и аргинин с одной

Мн промежуточной расположенной аминокислотой. -І Позтому, в соответствий с первой целью настоящее изобретение относится к полипептиду, имеющему формулу і Тре-Ху-Лиз-Х 5-Арг-Хв (ЗЕСО ІЮ МО:19) ав | 20 в которой

Ху и Хв представляют собой независимо вьібранньсе из группьі, состоящей из Мет, Иле, Лей и Вал; а їз Хв представляет собой вьібранную из группьі, состоящей из Асн Асп, Глн и Глу, при условийи, что полипептид не представляет собой последовательность Тре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Асн.

В соответствии со следующей целью, настоящее изобретение относится к полипептиду, имеющему формулу

Ха-Тре-Х/-Лиз-Х в-Арг-Хв (ЗЕО ІЮ МО:20),

ГФ) в которой юю Хз, Ху и Хо представляют собой независимо вьібранньсе из группьії, состоящей из Мет, Иле, Лей и Вал; а

Хе ввібрана из группьї, состоящей из Асн, Асп, Глн и Глу.

В соответствий с очередной целью, настоящее изобретение относится к полипептидам, имеющим формулу 60 Хо-Ха-Тре-Ху-Лиз-Хв-Арг-Хв (ЗЕО ІЮ МО:21), в которой

Хо представляет собой Тир или Фен,

Хз, Ху и Хо представляют собой независимо вьібранньсе из группьії, состоящей из Мет, Иле, Лей и Вал; а

Хв представляет собой вьібранную из группьї, состоящей из Асн, Асп, Глн и Глу. бо Предпочтительнье вариантьї осуществления настоящего изобретения представлень полипептидами,

имеющими формулу

Х1-Хо-Ха- Гре-Х.-Лиз-Х 5-Арг- Хв (ЗЕО ІЮ МО:22), в которой

Хі представляет собой Ала или Гли,

Хо представляет собой Тир или Фен,

Хз, Ху и Хб5 представляют собой вьібранньсе из группьі, состоящей из Мет, Иле, Лей и Вал; а Хо представляет собой вьібранную из группь, состоящей из Асн, Фсп, Глн и Глу.

Таким образом настоящее изобретение относится к веществу или полипептиду, включающему в себя 7/0 Вішеуказанную аминокислотную последовательность, при условии, что вещество или полипептид не представляет собой ИЛ-10 человека.

Примерьї специфических полипептидов, которне как предполагается, имеют вьішеуказанную активность агониста ЧИЛ-10, приведень! ниже:

І. МНуАла-Тир-Мет-Тре-Иле-Лиз-Мет-Арг-Асн-СООН (ЗЕОІЮ МО?) 2. МН-Ала-Фен-Мет-Тре-ЛДей-Лиз-Лей-Арг-Асн-СООН (5ЕО ІО МО:3) 3. МНо-Ала-Тир-Мет-Тре-Мет-Лиз-Вал-Арг-Глу«СООН /(5ЕО 10 МО:4) 4. МНо-Гли-Тир-Мет-Тре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Асп-СООН (5ЕО І МО:5) 5. МН:-Ала-Фен-Мет-Тре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Асп-СООН (5ЕО ІЮ МО:6) 6. МН.-Ала-Тир-Иле-Тре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Асп-СООН (5ЕО ІЮ МО:7) 7. МН;»-Ала-Тир-Лей-Тре-Мет-Лиз-Йле-Арг-Асп-СООН (5ЕО І МО:8) 8. МНо-Ала-Тир-Вал-Тре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Асп-СООН (5ЕО І МО:9) 9. МН.-Ала-Тир-Мет-Тре-Иле-Лиз-Иле-Арг-Асп-СООН (5ЕО І МО) сч

І0. МН.-Ала-Тир-Мет-Тре-Лей-Лиз-Иле-Арг-Асп-«СООН (5ЕО 10 МО) (о)

П.МНоІ-Ала-Тир-Мет-Тре-Вал-ЛДиз-Иле-Арг-Асп-«СООН (ЗЕО ТО МО:12) 12. МН.-Ала-Тир-Мет-Тре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Асп-СООН (5ЕО Ю МО:13) 13. МН»-Ала-Тир-Мет-Тре-Мет-Лиз-Мет-Арг-Асп-СООН (5ЕО 10 МО:14) с 14. МН»-А4 ла-Тир-Мет-Тре-Мет-Лиз-Вал-Арг-Асп-СООН (5БО 10 МО:15) | «в) 15. МН»-Ала-Тир-Мет-Тре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Глн-СООН (5ЕО ІО МО:16) -

Ів. МН.Ала-Тир-Мет- Тре-Мет-Диз-Иле-Арі-Глу-СООН (БО І МО:17) їм

Для сравнения синтезировали другой нонапептид, названньй 1Т9301, со 10095 гомологией с ю последовательностью ЧИЛ-10. Зтот полипептид, ІТ9301, соответствует последовательности нонапептида, начинающейся на М-конце полипептида чИЛ-10 (номера аминокислот от 19 до 27, т.е. первне 9 аминокислот зрелого белка) и имеет нижеследующую аминокислотную последовательность.

МН»о-Сер-Про-Гли-Глн-Гли-Тре-Глн-Сер-Глу-СООН (ЗЕО ІЮ МО:18) « дю Зтот полипептид не проявил активности подобной ИЛ-10 в использованной методике, описанной ниже, и -о бьл вьбран оединственно потому, что представлял другой конец полипептида чИЛ-10 и служил с преимущественно в качестве контроля для отрицательньїх результатов. Он не обладал признаками С-концевой :з» последовательности в отношений последовательности, гомологичной ЧИЛ-1О0, и не имел аминокислот, благоприятствующих связьвванию рецептора. ІТ9301 протестировали в индуцированной ИЛ-1р мононуклеарной 15 клеточной системе периферической крови человека, образующей МЛ-8, но он не вьізьівал какого-либо сл подавления образования ИЛ-8 зтими клетками.

В соответствии с настоящим изобретением, вьіражение "вещество настоящего изобретения, являющееся -і агонистом ЧИЛ-10", включаєт в себя любое фармацевтически активное и приемлемое соединение, которое суть -1 идентично или структурно сходно с ІТ9302 и проявляет необходимое биологическое действие, подобное действию 179302, в том числе производньмх 179302, в частности фармацевтически переносимьїх солей, зфиров и (ав) сольватов, также как и коньюгатов ІТ9302 или производньїх ІТ9302, в том числе - пептидомиметиков.

КЗ Ковалентное присоединение ІТ9302 на МНо- конце полипептида к соответствующим носителям, например к полизтиленгликолю или сахару, может удлинить время полужизни полипептида ин виво.

В данном тексте использовали следующие определения: "Цитокин" в общем смьсле является термином для белковьїх медиаторов, вьісвобождаемьх главньм образом, но не исключительно, популяцией клеток иммунной системь как ответ на специфическое (Ф) стимулирующее средство, например специфический антиген или аллоантиген; или неспецифический, г) поликлональньй активатор, например зндотоксин или другие компоненть! клеточной стенки грам-отрицательной бактерии. во "Лимфокин" в общем смьісле является термином для белковьїх медиаторов, вьісвобождаемьх с помощью сенсибилизированньїх лимфоцитов как ответ на стимулирующее средство, например специфический антиген или аллоантиген; или с помощью поликлонального активатора, вьізьвающего лейкоцитарную реакцию, например зндотоксина или с помощью иньїх компонентов клеточной стенки грамм-отрицательной бактерии. "Монокин" в общем смьсле является термином для белковьїх медиаторов, вьісвобождаемьїх главньм б образом, но не исключительно, с помощью мононуклеарньїх фагоцитов (например, моноцитами или макрофагами или клетками Купфера (печень) или клетками Лангерганса (кожа)) как ответ на любое стимулирующее средство. "Хемокин" в общем смьсле является термином для белковьїх хемотаксических и/или активирующих лейкоцить! медиаторов, вьісвобождаемьїх главньім образом, но не исключительно популяцией клеток иммунной бистемьі как ответ на специфическое стимулирующее средство, например специфический антиген или аллоантиген; или с помощью неспецифического, поликлонального активатора, например зндотоксина или с помощью иньїх компонентов клеточной стенки грамм-отрицательной бактерий и относящихся к отдельному семейству генов, либо к семейству генов о-хемокина, либо к семейству р-хемокина. "Интерферон" в общем смьісле является термином для белкового противовирусного и/или активируемого 7/0 Моноцитами активатора, вьісвобождаємого главньмм образом, но не исключительно, популяцией клеток иммунной системьі как ответ на вирусньій или интерфероновьй индуктор, такой как полинуклеотид; в частности, клетками иммунной системь!ї как ответ на специфическое стимулирующее средство, например специфический антиген или аллоантиген; или с помощью неспецифического, поликлонального активатора, например зндотоксина или с помощью иньїх компонентов клеточной стенки грамм-отрицательной бактерии. "Колониестимулирующий фактор" в общем смьісле является термином для белкового, гемопозтического колониестимулирующего медиатора, вьісвобождаемого главньм образом, но не исключительно, популяцией клеток иммунной системь как ответ на специфическое стимулирующее средство, например специфический антиген или аллоантиген; или с помощью неспецифического, поликлонального активатора, например зндотоксина или с помощью иньїх компонентов клеточной стенки грамм-отрицательной бактерии.

Термин "полипептид", как он используется здесь, означает и короткие пептидьї, длиной не менее двух аминокислотньїх оостатков и самое большее - 10 аминокислотньх остатков, олигопептидь! (11-100 аминокислотньїх остатков), и длинньіе пептидь! (оббічно интерпретируемье как "полипептидь!", т.е. в длину превьішающие 100 аминокислотньїх остатков), а также белки (функциональньй обьект, включающий как минимум один пептид, олигопептид, или полипептид, которье могут бьть химически модифицировань в су результате гликозилирования, в результате липидирования, или в результате включения простетических групп).

Определение полипептидов включает в себя также естественнье формь! пептидов/белков человека, а также о рекомбинантнье белки или пептидьі, зкспрессируемье любьм типом векторов, трансформирующие хозяина любого вида, а также химически синтезированнье пептидь!.

Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к полипептиду, в частности Га полипептиду ЗЕО ІЮ МО:1, включающему в себя субпоследовательность последовательности человеческого

И/1-10, и имеющему степень гомологии с вИЛ-10, равной 6695, и степень гомологий с мИЛ-10, равной 4495. о

Термином "гомология" обозначили идентичность в последовательностях аминокислот на участках из двух или че большего числа аминокислот, которье бьі гармонировали по найменованию и положению аминокислот данного полипептида. в

Гомология в качестве термина, использованного здесь, представляет собой, таким образом, меру подобия ю между двумя аминокислотньми (или нуклеотидньмми) последовательностями. Гомологию вьражают в виде долей или процентов соответствия аминокислот (или оснований) после совмещения двух последовательностей (возможно и неравной длиньі). Термин совмещение использовали в значений, определенном в (76). В первом приближении две последовательности совместили, максимизируя число совпадающих оснований (или « аминокислот) между двумя последовательностями, со вставкой из минимального числа "заглушенньїх" или 8 с "нулевьіх" оснований в любой из двух последовательностей, для обеспечения максимального перекрьівания. й Термин "гомологи", использованньй здесь в данном виде, среди прочего предназначается для иллюстрации "» степени, идентичности между аминокислотной последовательностью данного полипептида и аминокислотной последовательностью ІТ9302. Данную аминокислотную последовательность, которую сравнивают с аминокислотной последовательностью 119302, можно вьівести из нуклеотидной последовательности, такой как с последовательность ДНК или последовательность РНК, например, полученную в результате гибридизации, как показано ниже, или может бьть получена с помощью известньїх способов аминокислотного секвенирования. і Степень гомологиий предпочтительно оопределяли по аминокислотной последовательности зрелого -І полипептида, т.е. без учета какой-либо лидерной последовательности. Вообще, при сравнениий нуклеотидньх 5р последовательностей для определения гомологии между ними принимали во внимание только кодирующие о области. з Хотя предполагаєтся, что большая степень гомологим ЧИЛ-10 и виИЛ-10 полезна, вполне возможно, что субпоследовательности последовательности ЧИЛ-10, которая имеет сниженную степень гомологии с вил-10, скажем, например 5095, 55905 или 60905, могут также проявлять одну или больше полезньїх активностей агониста ЧИЛ-10. Кроме того, как обсуждалось вьіше, не обязательно, чтобь! степень гомологии с ЧИЛ-10 составляла 10095. В рамках обьема настоящего изобретения имеются полипептидь), также обладающие пониженной

Ф) степенью гомологии с ЧИЛ-10, такой как 75905, 8095, 8595, 9095 или 95905, хотя 10095-я гомология предпочтительна. ко Такие полипептидьі можно рассматривать как аналоги нонапептида. Позтому термин "аналог или его вариант" означает полипептид, не имеющий в точности последовательности бо Ала-Тир-Мет-Тре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Асн (ЗЕО ІЮО МО:1), но все же обладающий вьішеуказанной "активностью агониста ЧИЛ-10". В общем, такие полипептидь! представлень! полипептидами, которье в сравнений с ІГ9302, описанному в примерах, отличаются в какой-то мере аминокислотньм составом или посттрансляционньіми модификациями, например гликозилированием или фосфорилированием.

Таким образом, термин "аналог" или "вариант", использован в настоящем контексте для указания белка или б5 полипептида, с несколько отличающейся аминокислотной последовательностью, но все же близкой аминокислотной последовательности 119302, допускающей небольшие вариации, которье изменяют аминокислотную последовательность, например делеции, сайт-направленнье мутации, инсерции дополнительньїх аминокислот или комбинации зтих изменений при полученийи полипептидньїх аналогов 179302.

Сайт-направленньй мутагенез является одним из подходящих способов для осуществления консервативньх аминокислотньх замен и им подобньїх в естественной последовательности белка. По другому аналоги можно получить с помощью хорошо известньїх способов жидкофазного или твердофазного полипептидного синтеза, с использованием последовательного присоединения индивидуальньх аминокислот Кк полипептидной последовательности, или же полипептид можно синтезировать в результате присоединения индивидуальньх аминокислот, образующих фрагментьі полипептидной последовательности, которье затем соединяют так, 7/0 Утобь получить желаемьй полипептид.

Термин "консервативньй" в том виде как он используется здесь означаєет (і), что изменения, представленнье по возможности в виде конформационно нейтральньїх, означают получение минимальньхх изменений в третичной структуре мутантного полипептида, по сравнению с естественньм белком, и (ії) что изменения представленнье по возможности в виде антигенно нейтральньїх, означают получение минимальньїх изменений /5 в антигенньх детерминантах мутантньїх полипептидов, по сравнению с естественньм белком.

Конформационная нейтральность желательна для сохранения биологической активности, а антигенная нейтральность желательна для того, чтобьі избежать запуска у больньїх или животньїх, получивших вещества настоящего изобретения, иммуногенньїх ответов. Хотя трудно вьібрать с абсолютной уверенностью, какая альтернатива будет конформационно или антигенно нейтральной, существуют правила, позволяющие го специалистам в данной области произвести изменения, с вьісокой вероятностью конформационно или антигенно нейтральньсе, смотри например (77) и (78) . Некоторье из найболее важньїх правил включают 1) замещение гидрофобньїх остатков представляется маловероятньм для получения изменений в антигенности, потому что они, по-видимому, находятся внутри белка, например ВеггоїзКу (внішеприведенная ссьІлка) и Волі еї сі. (внішеприведенная ссьлка); сч 2) замещение физико-химически подобньми, т.е. синонимичньми, оостатками представляется маловероятньім для получения конформационньїх изменений, потому что замещающая аминокислота может і) иметь такое же значение для структурьї, что и замещенная аминокислота; и 3) изменение зволюционно консервативньхх последовательностей, представляется вероятньм для получения вредньїх конформационньїхх следствий, поскольку предполагается, что зволюционно консервативнье (і зо последовательности могут бьіть функционально важньми. В дополнение к зтим основньім правилам по отбору заглушенньїх последовательностей, необходимо провести анализ для подтверждения биологической о активности и конформации бисинженерньїх молекул. Биологические испьттания, вбіполненнье для веществ ї- настоящего изобретения, более полно описань! ниже, в примерах. Изменения в конформации протестировань, как минимум, двумя хорошо известньми способами, методом фиксации микрокомплемента, например (79) и - зв (80), широко используемьй в зволюционньїх исследованиях третичной структурь! белков; и анализом сродства к ю наборам конформационно-специфичньїх моноклональньїхх антител, например (81).

Позтому, важньй вариант осуществления настоящего исследования относится к полипептиду, в котором, как минимум, один аминокислотньй остаток бьіл замещен отличающимся аминокислотньм остатком и/или в котором, как минимум, один аминокислотньй остаток бьіл делетирован или добавлен, так чтобь! получить « полипептид включающий в себя аминокислотную последовательность, суть отличную от аминокислотной в с последовательности или субпоследовательности указанной аминокислотной последовательности, как указано

Й ниже, однако по существу имеющую вьішеуказанную активность агониста ЧИЛ-10. а МИнтересньій вариант осуществления настоящего изобретения относится к полипептиду, которьй представляет собой аналог, и/или включает в себя, по крайней мере, часть полипептида настоящего изобретения, в целом составляющий от 10 до 100 аминокислот, например, хотя бьї 12 аминокислот, хотя бь 15 с аминокислот, хотя бь 20 аминокислот или хотя бьї ЗО аминокислот.

В предпочтительном варианте настоящего изобретения вещество или полипептид использовали в ш- очищенном виде. Для зтого необходимо осуществить вьіделение очисткой полипептида. Примерами -І использования методик по вбіделению очисткой полипептидов являются: () иммунопреципитация или хроматография по сродству о с антителами,

Ге (ії) хроматография по сродству с подходящим лигандом, (її) другие хроматографические методики, такие как гель-фильтрация, ионообменная или жидкостная хроматография вьісокого разрешения или варианть! любой из врішеперечисленньїхх методик, 5Б (ім) злектрофоретические методики, такие как злектрофорез в полиакриламидном геле, денатурирующий злектрофорез в полиакриламидном геле, злектрофорез в агарозном геле и изозлектрическое фокусирование,

Ф) (у) любье инье методики специфической солюбилизации и/или вьіделений очисткой. ка В рамках обьема настоящего изобретения представлена также нуклеотидная последовательность, кодирующая вьшеуказанньй полипептид, в частности нуклеотидная последовательность, кодирующая бо полипептид, включающий в себя или суть аминокислотную последовательность 5ЕО ІЮ МО:1, например нуклеотидную последовательность, включающая в себя последовательность ОСС ТАС АТО- АСА АТО- ААО

АТА СОА ААС (ЗЕО ІЮО МО:23) или нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий субпоследовательность указанной аминокислотной последовательности. Кроме того, модифицированная нуклеотидная последовательность, которая отличается от виішеуказанной нуклеотидной последовательности, в 65 которой как минимум один нуклеотид делетирован, заменен или модифицирован или хотя бьі один нуклеотид дополнительно вставлен так, чтобьї получить нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид,

имеющий активность агониста ЧИЛ-10, представленного в рамках настоящего изобретения.

В данном описаний и формуле изобретения термин "субпоследовательность" означаєт последовательность, которая предпочтительно имеет размер не менее чем из 18 нуклеотидов, более предпочтительно - не менее чем из 21 нуклеотида, и найболее предпочтительно - не менее чем из 24 нуклеотидов. В числе вариантов осуществления настоящего изобретения субпоследовательность или аналог нуклеотидной последовательности настоящего изобретения будет включать в себя не менее 27 нуклеотидов, или не менее 30 нуклеотидов, или не менее 45 нуклеотидов. Такой полипептид, кодируемьй такой "субпоследовательностью" должен соответствовать, по крайней мере, одному из вьішеприведенньіїх критериев а) - 9), и/или нуклеотидная 70 "субпоследовательность" должна гибридизировать с нуклеотидной последовательностью, включающей в себя последовательность ЗЕО ІЮ МО:23 в строго соблюдаемьіх условиях.

Термин "очень строгий", примененньій применительно к условиям гибридизации, описанной в технике, которая осуществляется на 5 - 10"С ниже точки плавления Т у, сравни затрьгоок еї ої., 1989, страниць 11.45 - 11.49.

Термин "аналог" по отношению к фрагментам ДНК из настоящего изобретения включает нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, идентичньій или практически идентичньій полипептиду, кодируемому вьішеуказанной ДНК. Поскольку хорошо известно, что одни и те же аминокислоть! могут кодировать разнье кодоньі, использованньій кодон, будучи связанньій, среди прочего, с предпочтительньіми организмами, о которьїх идет речь, будет зкспрессировать данную нуклеотидную последовательность. Позтому,

Один или больше нуклеотидов или кодонов фрагмента ДНК настоящего изобретения могут бьіть заменень другими, которье при зкспрессий дают полипептид идентичньй или фактически идентичньій полипептиду, кодируемому вьішеуказанньм фрагментом ДНК.

Кроме того, подразумевается, что терминь! "аналог" и "субпоследовательность" допустимь! для применения, касающиеся изменений в последовательности, таких как замена, инсерция (включая интроньї), добавление и с перестройка одного или большего числа нуклеотидов, изменения которьїх не имеют какого-либо пагубного действия на оактивность агониста чИЛ-10, полипептида кодируемого фрагментом ДНК или его (8) субпоследовательностью. Позтому настоящее изобретение включаєт также нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий субпоследовательность аминокислотной последовательности ЗЕО ІЮ МО:1.

Полипептидьї настоящего изобретения могут бьіть полученьі при использований технологии рекомбинантной с зо ДНК. Важньй пример осуществления настоящего изобретения относится к системе зкспрессии, включающей в себя нуклеотидную последовательность данного изобретения. Позтому в рамках обьема настоящего о изобретения представлена таюке зкспрессионная система, включающая в себя нуклеотидную ї- последовательность данного изобретения, такую как реплицируемьй зкспрессионньій вектор, которьй переносит и способен опосредовать зкспрессию вьішеуказанной последовательности. -

Организм, которьій использовали для образования полипептида настоящего изобретения, может бьть ю вьісшим организмом, например животньім, или низшим организмом, например микроорганизмом, таким как

Езспегіепіа соїї, дрожжами, простейшим, или клеткой, вбіделенной из многоклеточного организма, таким как гриб, клетка насекомого, растительная клетка, клетка млекопитающего или клеточная линия, которая несет вьішеуказанную зкспрессионную систему. «

Независимо от типа использованного организма, фрагмент ДНК настоящего изобретения интродуцировали в пт») с организм либо непосредственно, либо посредством подходящего вектора. Альтернативно полипептидь! могут бьїть полученьї в линиях клеток млекопитающих в результате интродуцирования фрагмента ДНК или его з аналога, или субпоследовательности настоящего изобретения либо прямо, либо посредством зкспрессионного вектора. Полипептидьі настоящего изобретения можно также получить в результате химического синтеза, как описано вьіше. с Настоящее изобретение относится, кроме того, к плазмидному вектору, содержащему последовательность

ДНК, кодирующей полипептид настоящего изобретения или слитой полипептид, как определяется здесь. В - одном особенно важном варианте осуществления фрагмента ДНК или его аналог или субпоследовательность -І настоящего изобретения или фрагмент слитого белка настоящего изобретения, как определяется здесь, может бьїть перенесен с помощью реплицируемого зкспрессионного вектора, которьій обладаєт способностью о реплицироваться в организме хозяина или в клеточной линии.

Із Вектор может в частности бьіть плазмидой, фагом, космидой, минихромосомой или вирусом. В интересном варианте осуществления настоящего изобретения вектор может бьіть вектором, которьій, при введений в клетку хозяина, интегрируется в геном клетки хозяина. 5Б Полученньй, как описано вьіше полипептид может бьіть, подвергнут посттрансляционной или постсинтетической модификациям ов результате температурной обработки, химической обработки

Ф) (формальдегидом, глутаральдегидом и пр.) или ферментной обработки (пептидазами, протеиназами и ка ферментами, модифицирующими белок). Полученньій в организме полипептид может бьїть процессирован по-разному, хотя условия его образования одинаковьі. Например, при зкспрессии полипептида клеткой вьісшего бо организма, таким как дрожжи или предпочтительно млекопитающие, часто происходит гликозилирование.

Обьічно гликозилирование связано с аминокислотньіми остатками Асн, Сер, Тре или гидроксилизином.

Итак, один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к способу получения полипептида, как указано вьіше, включающему следующие стадии: а) включение нуклеотидной последовательности, как указано вьіше, в зкспрессионньй вектор, 65 в) трансформирование соответствующего организма хозяина вектором, образованньм на стадии (а), с) культивирование организма хозяина, полученного на стадии (Б) при соответствующих условиях, для зкспрессии полипептида. 4) получение полипептида, и е) необязательная посттрансляционная модификация полипептида.

Предполагается, что действие антагонистов на ЧИЛ-10 или вИЛ-10 можно осуществить, среди прочего, в результате использования антител, специфически связьвающихся с нонапептидом ІТ9302, и что их можно использовать в терапийи для нейтрализации вьісоких концентраций ИЛ-10.

В соответствий с другой целью настоящее изобретениє, позтому относится к антителу, которое специфически связано с полипептидом настоящего изобретения. 70 Термин "антитело" относится к веществу, которое продуцируется млекопитающим, или более точно, клеткой млекопитающего, принадлежащей иммунной системе, как проявление ответа на полипептидньій антиген настоящего изобретения. В настоящем описаний и формуле изобретения "антитело" определяется как, состоящее по существу из специфически связьівающей базовой единиць!, которая состоит из двух тяжельх цепей и двух легких цепей. Однако в самом широком плане понятие антитело будет также включать, например, /5 димерную или пентамерную структуру базовой единиць.

Вариантную область антитела составляют вариабельная и константная последовательности. Вариантную часть данной области назьівают идиотипом антитела. Зта часть антитела ответственна за взаймодействие с антигеном, связьивание антигена. В данном контексте термин антитело подразумевает целую молекулу антитела или его любье фрагменть». Антитело может бьть фрагментировано в течение и/или после его образования. Оно может бьіть также сделано вначале фрагментированньм и использовано в таком виде или использовано после соединения различньїх фрагментов. Особенно интересньіми фрагментами представляются связь вающие фрагменть! антител настоящего изобретения, например Рар- или Рар-фрагменть.

Идиотипическая (антиген-связьівающая) структура антитела является антигенной и может вьїізьівать образование специфических антител, направленньїх против идиотипической структурьі. Антитела, возникшие с ов против идиотипа, названьі антийидиотипическими антителами. Такие антитела могут имитировать структуру исходного антигена и, следовательно, могут действовать как исходньій антиген. Такие антитела способнь і) заменять частично или полностью функции исходного антигена, что присуще и свойственно исходному полипептиду настоящего изобретения.

Антитела настоящего изобретения включают в себя поликлональньсе антитела, также каки моноклональнье ("гі зо антитела.

Антитело или его фрагменть! могут бьїть моноспецифическимм (поликлональньми). Моноспецифическое о антитело можно получить в результате введения соответствующему животному очищенного препарата ї- полипептида настоящего изобретения. Зто можно осуществить путем однократной или неоднократной или неоднократньїх иньекций с соответствующими интервалами перед первьм кровопусканием. Животньм - з5 Открьівают кровь каждье 5 - 7 дней после очередной иммунизации. Антитела можно вьіделять из сьіворотки ю избирательно, используя стандартнье методики вьіделения очисткой.

Животное, которое использовали для получения антител, связьвающие полипептид настоящего изобретения, предпочтительно вьібирали из группьі состоящей из кролика, обезьяньії, барана, козь!, мьіши, крьісьї, свиньи, лошади и морской свинки. Продуцирующими антитела клетки могли бьїть лимфоцитарньіми « 70 клетками селезенки или периферической крови. в с Моноклональное антитело или его фрагментьі! могут образоваться против основного компонента полипептида, т.е. зпитопа. Моноклональнье антитела можно получить, применяя традиционнье методики ;» (Копіег апа Міїзіевіп, 1975), путем использования гибридомной клеточной линии или ее клонов или субклонов или с помощью клеток, несущих генетическую информацию о гибридомной клеточной линии, продуцирующей указаннье моноклональнье антитела. Моноклональнье антитела можно получить путем слияния клеток, с продуцирующих указаннье моноклональнье антитела с клетками соответствующей клеточной линии, и клонирования полученньїх гибридомньх клеток, продуцирующих указаннье моноклональнье антитела. ш- Альтернативно моноклональнье антитела можно получить в результате иммортализации линии неслитьх -І клеток, продуцирующих указаннье моноклональнье антитела. В конечном итоге моноклональнье антитела Ввделяли из средь, в которой росли клетки. МИспользуемье гибридомнье клетки, продуцирующие о моноклональнье антитела можно вьіращивать ин витро или в полости тела животного. Моноклональное тело

Ге или его фрагменть! можно также получить, применяя методьї рекомбинантной ДНК (Низе еї ої. 1989).

Моноклональнье антитела можно также получить путем иммунизации соответствующих животньх неочищенньм препаратом полипептида настоящего изобретения. Полученнье гибридомнье клонь, в Ссекретирующие моноклональньсе антитела, необходимо скринировать для вьіяснения их способности связьвать полипептидць) или его аналог. (Ф, Для целей, не требующих вьісокой специфичности, антитело может бьть поликлональньм антителом. ка Поликлональньюе антитела можно получить, например как описано у Нагрое апа Опдій, смотри вьіше. Для получения поликлональньїх антител с большей специфичностью, полипептид настоящего изобретения или бо представляющий его аналог, предпочтительно иньецировать животному после добавления подходящего адьюванта, такого как неполньій или полньій адьювант Фрейнда. Животному открьівают регулярно кровь, например с недельньмми интервалами, и полученную кровь разделяют на сьівороточную фракцию, содержащую антитело, и указанную произвольную фракцию, которую далее подвергают обьічньм процедурам по очистке антитела и/или применяют методики очистки полипептида или его аналога. 65 Антитело может бьть также анти-антиидиотипическим антителом, направленньм против антиидиотипического антитела, которое представляет собой антитело, направленное против участка антитела,

которое реагирует с зпитопом антигена. Антиидиотипическое антитело можно получить подобньм способом, которьїй вкратце изложен вьіше для моноклонального или поликлонального антитела.

В рамках обьема настоящее изобретение представляет антитело, которое связьівается с веществом или Вьішеуказанньм полипептидом, в частности антитело, которое специфически связьіваєтся с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность Ала-Тир-Мет- Тре-Мет-Лиз-Иле-Арг-Асн.

В широком плане настоящее изобретение относится, следовательно, к веществу, которое способно нейтрализовать одну или больше активностей ЧИЛ-10, от а) до |), те. имеющему активность антагониста

ЧИЛ-10, такому как наделенному зтими свойствами антителу. Известно моноклональное антитело 19Е1 (82), 7/0 Которое способно специфически связьіваться с ИЛ-10 и может блокировать зндогенньій ИЛ-10, образованньй моноцитами, стимулированньіми І Р5, смотри Таблицу 1 (82). Зто антитело распознает естественную укладку

ИЛ-10, но не обязательно всю функциональную область; однако, зто антитело специфически не связьвает

ІТ9302.

В рамках обьема настоящее изобретение представляет также фармацевтический препарат, включающий в /5 себя такое вещество, как и фармацевтический препарат, включающий в себя вещество или полипептид настоящего изобретения.

Очень важная цель настоящего изобретения относится к фармацевтическому препарату, включающему в себя вещество, имеющее активность агониста ЧИЛ-10 или активность антагониста ЧИЛ-10, как указано вьіше, и фармацевтически приемлемьй наполнитель. Препарат может содержать, например очищенньй 2о бинтезированньй белок или очищенньй рекомбинантньй полипептид, моноклональное или поликлональное антитело или любое иное вещество подпадающее под критерий а) - )) или, обладающее активностью антагониста ЧИЛ-10, способное нейтрализовать одну или больше активностей чИЛ-10 от а) до Ї).

Агонист или антагонист ИЛ-10, использованньй в данном изобретении, может бьіть приготовлен согласно технологий приготовления лекарственного средства, в фармацевтически приемлемой среде, например, в с ов физрастворе, фосфатном солевом растворе (РВЗ) растворе Рингера, декстрозно-солевом растворе, растворе

Хенка и в глюкозе. Препаратьї могут содержать фармацевтически приемлемье вспомогательнье вещества, і) необходимье для достижения физиологических условий, такие как буферньсе агенть, агентьі, регулирующие тонус, смачивающие агенть!, детергентьі и т.п. Добавки могут также включать дополнительнье активнье ингредиентьї, например бактерицидньсе агенть! или стабилизаторьі. Их введение пациенту будет определяться с зо общим обьемом вводимого препарата, целью, с которой вводится препарат, профилактической или терапевтической, состоянием реципиента, способом введения, и тому подобное. о

Фармацевтические препаратьї обьчно предназначеньь для трансдермального или парентерального ї- введения, например, внутривенно, подкожно или внутримьшечно. Перорально вводимье формь! также желательньї и могут бьіть созданьі путем модификации препарата, не поддающегося влиянию средь! желудка. - з5 Препарат можно применять для профилактического и/или терапевтического лечения. Предпочтительно, чтобь ю фармацевтические препаратьі вводили внутривенно. Таким образом, настоящим изобретением разработали препарат, коториій включает в себя вещество, антагонистичное или агонистичное ИЛ-10, растворенное или суспендированное в соответствующем носителе, предпочтительно в водном носителе. Зти препарать! можно стерилизовать с помощью традиционньїх методов стерилизации, или стерилизовать фильтрацией. «

Полученнье воднье растворь! фасуют готовьіми к употреблению или лиофилизируют, или лиофилизируют в па) с сочетании со стерильньім водньім носителем перед введением. Антагонист или агонист ИЛ-10 можно также ввести со вторьім биологически активньмм фактором, таким как стандартньй хемотерапевтический фактор. ;» Такие факторьі включают в себя, но не ограничиваются винкристином, даунорубицином, І -аспарагиназой, митоксантроном и амсакрином.

С терапевтической целью фармацевтические препарать! вводят пациенту в количестве, достаточном для с получения желаемого зффекта, определяемого как "терапевтически зффективная доза". Терапевтически зффективная доза антагониста или агониста ИЛ-10 будет изменяться в соответствии, например, с ш- особенностями осуществляемого лечения, способом введения, общим здоровьем и состоянием пациента, и на -І оснований предписаний врача. К примеру, доза для непрерьівного вливания будет обьічно колебаться от 500нг 5р до 80Омкг в день в расчете на пациента весом 7Окг, предпочтительно в интервале между 1Омкг и до Зб0Омкг. о Обьічная доза колеблется в интервале между 7ООнг/кг/день и 1бмкг/кг/день.

Із Концентрация агониста или антагониста ИЛ-10 в технологии приготовления лекарственного средства может варьировать широко, т.е., примерно, от 10мкг до 5мг/мл, предпочтительно в интервале между почти 100мкг и до почти 2мг/мл. Вначале желаемую концентрацию подбирали по обьемам жидкости, вязкости и т.д., в вв Соответствий с определенньм способом введения. Позтому, обьічньій фармацевтический препарат для внутривенного вливания необходимо доводить до обьема 250мл, содержащем декстрозно-солевой раствор и (Ф) 2,5мг агониста или антагониста ИЛ-10. ка Для твердьх препаратов можно использовать традиционно нетоксичнье твердье носители, которье включают в себя, например, фармацевтически чистье маннит, лактозу, крахмал, стеарат магния, сахарин бр натрия, тальк, целлюлозу, глюкозу, сахарозу, углекисльй магний и т.п. Для перорального введения фармацевтически приемлемьй нетоксический препарат получают путем включения обьічно используемьсмх наполнителей, таких как те же вьішеперечисленнье носители, и в общем, 10 - 9595 активного ингредиента, предпочтительно 25 - 7595, которьій представляет собой вещество агониста или антагониста ИЛ-10.

Для азрозольного применения агонист или антагонист ИЛ-10 предпочтительно готовят в тонко измельченном 65 виде вместе с поверхностно-активньімм веществом и газом-вьітеснителем. Обьічно процентная доля агониста или антагониста ИЛ-10 составляет 0,01-2090 по весу, предпочтительно 1 - 1095. Поверхностно-активное вещество, должно бьїть, разумеется, нетоксичньм и предпочтительно растворимьм в газе-вьітеснителе.

Представителями таких агентов являются зфирьі или неполньіе зфирь!ї жирньїх кислот, содержащие от 6 до 22 углеродньїх атомов, такие как капроновая, каприловая, лауриновая, пальмитиновая, стеариновая, линолевая, линоленовая, олестериновая и олеиновая кислотьі с алифатическим многоатомньм спиртом или его циклическим ангидридом, таким как зтиленгликоль, глицерин, зритритол, арбитол, маннит, сорбит, ангидридь! гекситола, полученнье из сорбита, и полиоксизтиленовье и полиоксипропиленовье производнье зтих зфиров.

Возможно использование смешанньїх зфиров, таких как смешаннье или природньсе глицеридь.

Поверхностно-активное вещество может составлять 0,1 - 2095 от веса препарата, предпочтительно 0,25 - 7/0 бю. Фактор, уУуравновешивающий препарат, представлен обьчно газом-вьітеснителем. Сжиженньєе газьі-вьітеснители в условиях окружающей средь! представляют собой обьічнье газьї, а под давлением они конденсируются. Среди подходящих сжиженньмх газов-виітеснителей имеются низшие алканьі, содержащие до 5 углеродньїх атомов, такие как бутан и пропан; и предпочтительно фторированнье или фторхлорированнье алкань. Можно также использовать вьішеуказаннье смеси. Для получения азрозоля, контейнер снабжают /5 специальньм клапаном через которьй вводят соответствующий газ-вьитеснитель, содержащий тонко диспергированнье полипептид(ь) и поверхностно-активное вещество. Ингредиентьі удерживаются, таким образом, под повьішенньїм давлением до вьісвобождения путем нажатия клапана.

Для увеличения времени полужизни сьіворотки крови, агонист или антагонист МИЛ-10 можно инкапсулировать, введением в полость липосом, приготовленньїх в виде коллоида, или другим традиционньм 2о способом, которьій обеспечивает продление времени жизни полипептидов. Позтому, в некоторьїх вариантах осуществления настоящего изобретения агонист или антагонист ИЛ-10 инкапсулировали в липосому. Для приготовления липосом применяют разнообразньсе способьї, которне описаньї например в (83), (84), (85) и (86).

Таким образом, один из важньїх вариантов осуществления настоящего изобретения, при производстве фармацевтического препарата, необходимого для лечения или профилактики рака яичника и/или СПИД а (87, сч ов 19), относится Кк использованию вещества, снижающего или нейтрализующего вьісокие концентрации ЧИЛ-10 и/или виИлЛ-10, такого как используемое вещество, обладающее свойствами антагонистичньіми ЧИЛ-10. В рамках і) обьема настоящего изобретения представлен также способ лечения и/или предупреждения рака яичника и/или

СспиИД'а, способ включающий введение пациенту, нуждающемуся в нем, терапевтически или профилактически зффективного количества вещества антагониста чИЛ-10, также как и применение соединения, котороеобладаєт су зо активностью антагониста чИЛ-10, )используемого при производстве фармацевтического препарата, необходимого для лечения или профилактики рака яичника и/или СПИД" а. о использование вещества в соответствии с настоящим изобретением ї-

Согласно настоящему изобретению, и как описано вьіше, установлено, что ІТ9302 и его аналоги и варианть! пригодньї для оказания защитного действия от цитокинов, которне, как известно, патогенетически вовлечень! в -

Зз5 Течение виішеописанньх патологических состояний. ю

В зтой связи рассмотреньі все потенциальнье возможности лечения с применением полипептида настоящего изобретения или его аналогов при производньїх и необходимо проанализировать все заболевания, где можно бьіло бьії ожидать терапевтическое действие ЧИЛ-10 и/или ІДАР (смотри вьіше, Таблица 3).

Очень важнье варианть! настоящего изобретения относятся к применению вещества или полипептида « настоящего изобретения к лечению или профилактике одного или большего числа заболеваний, приведенньх в 0/7) с Таблице 3, к применению вещества или полипептида, в соответствии с настоящим изобретением, для

Й промьшленного производства фармацевтического препарата, для лечения или профилактики одного или а большего числа заболеваний, приведенньїх в Таблице 3, также, как и к способу лечения и/или предупреждения одного или большего числа заболеваний, приведенньїх в Таблице 3, к способу, включающему в себя введение пациенту, нуждающемуся в нем, терапевтически или профилактически зффективного количества вещества или с полипептида в соответствии с настоящим изобретением.

Позтому, важной целью настоящего изобретения является использование ІГТ9302, или его функционального ш- производного, для промьішленного производства фармацевтического препарата, в значительной степени, -І подавляющего у человека биологический зффект, связанньій с цитокином, таким как лимфокин, интерлейкин, Монокин, хемокин, интерферон, колониестимулирующии фактор, простагландин и/или лейкотриен, для о профилактики или лечения состояния связанного с нарушением цитокиновой системьї, такой как система

Із лимфокина, интерлейкина, монокина, хемокина, интерферона или колониестимулирующего фактора и/или нарушения в системе простагландина и/или лейкотриена. Термин "фармацевтический препарат", как он используется здесь, включаєт в себя любой препарат, пригодньій для применения человеку, как подробно описано вьіше.

Настоящее изобретениєе, в частности, относится Кк использованию 119302 или его функциональньх (Ф, производньх ка для существенного подавления у человека биологического зффекта, связанного с цитокином, при профилактике или лечений состояния, связанного с нарушением системь! цитокина; и/или 60 для существенного подавления у человека биологического зффекта, связанного с лимфокином, при профилактике или лечений состояния, связанного с нарушением системь! лимфокина; и/или для существенного подавления у человека биологического зффекта, связанного с интерлейкином, при профилактике или лечений состояния, связанного с нарушением системьї интерлейкина; и/или для существовенного подавления у человека биологического зффекта, связанного с монокином, при 65 профилактике или лечений состояния, связанного с нарушением системь! монокина; и/или для существенного подавления у человека биологического зффекта, связанного с хемокином, при профилактике или лечений состояния, связанного с нарушением системь!ї хемокина; и/или для существенного подавления у человека биологического зффекта, связанного с лимфокином, при профилактике или лечений состояния, связанного с нарушением системь! лимфокина; и/или для существенного подавления у человека биологического зффекта, связанного с интерфероном, при профилактике или лечений состояния, связанного с нарушением системь! интерферона; и/или для существенного подавления у человека биологического зффекта, связанного с колониестимулирующим фактором, при профилактике или лечениий состояния, связанного с о нарушением системь колониестимулирующего фактора; и/или 70 для существенного подавления у человека биологического зффекта, связанного с простагландином при профилактике или лечений состояния, связанного с нарушением системь! простагландина; и/или для существенного подавления у человека биологического зффекта, связанного с лейкотриеном, при профилактике или лечений состояния, связанного с нарушением системь! лейкотриена.

Пояснения к рисункам

Фиг.1 иллюстрирует сравнение предсказанньїхх аминокислотньїх последовательностей мИиЛ-10, чИЛ-10 и

ВСЕ. Идентичнье аминокислотнье последовательности указань! вертикальньмми линиями.

Фиг.2 иллюстрирует СООН-концевье полипептиднье последовательности МЛ-10, включающие 9 аминокислот и сравниваемьсе белки свиньи, человека, ВСКЕ1 и мьіши.

Фиг.3 представляет собой диаграмму, показьівающую, что ІТ9302 подавляет спонтанное образование ИЛ-8

Культурой вьіделенньїх человеческих моноцитов.

Фиг.4 представляет собой диаграмму, показьівающую, что ІТ9302 ингибирует индуцированное ИЛ-1 (нг/мл) образование ИЛ-8 мононуклеарньіми клетками периферической крови человека.

Фиг.5 иллюстрирует образование ІКАР человеческими моноцитами, стимулированньх 179302.

Фиг. 6 иллюстрирует образование ІКАР человеческими моноцитами, стимулированньїх ИЛ-10. сч

Фиг.7 иллюстрируеєет хемотаксическое действиє ІТ9302 на СО8"-Т-клетки.

Фиг.8 иллюстрируєет десенситизацию СО8'-Т-клеток с помощью ІТ9302, влияющего на толерантность о

СІ 8"-Т-клеток по отношению к ИЛ-10 (1Онг/мл), вбізьівающего хемотаксис.

Фиг.9 иллюстрирует супрессию активности ИЛ-8 с помощью 179302.

Фиг.10 представляет собой диаграмму, показьівающую, что ІТ9302 подавляеєет хемотаксис моноцитов, сем индуцированньій МСАР/МСР-1. о

Фиг.11 показьваєт с помощью СІ -Вестерн-блоттинга образование МИЛ-4 в цитозольной фракции сСора47-Т-клеток. -

Фиг.12 с помощью ЕСІ-Вестерн-блоттинга показьвает образование о-ТМЕ в цитозольньхх фракциях їч- смешанной культурьі лейкоцитов человека. Вестерн-блоттинг с 7-ТМЕ бьл вьіполнен, как описано в разделе

Зо Материаль и Методь для ИЛ-4, но с использованием кроличьих антител к анти-30-ТМЕ человека (Рерго Теспі, що)

Іпс., Гопдоп, Англия) и вторичного антитела, меченого пероксидазой хрена (Саї. по, р. 211 ако, Дания).

Фиг.13 показьшаєт, что действие ІР5, вьізьівающего шок и лейкопению, модулируется 119302, что вьявляется при тотальном подсчете лейкоцитов. «

Примерь! 70 Материаль и методь 8 с Цитокинь и хемоаттрактанть! з» Рекомбинантньій чИЛ-1О получили из Рерго Тесп., Му, (Саї, по. 20010). Рекомбинантньй чиИЛ-10р и рекомбинантньй чИЛ-8 любезно предоставила ОЮаїпірроп РНагтасеціїсаї Сотрапу, ОзаКка, Япония.

Использовали культуральную среду КРМІ 1640 СІВСО, без добавления І РБ5, протестированную лизатом 15 амебоцитов І ітшиз (бЗідта Е-ТОХАТЕ КІії Саї. Мо210-АІ), р"МСАР/МСР-1 любезно предоставлен профессором і-й Коції Маїзизпіта, Капагама, Япония. -І Анализ лейкоцитарного хемотаксиса -І Хемотаксис Т-клеток

Субклассьь Т-лимфоцитов СО4" и сав', характеризующиеся зкспрессией СО4- или СОВ-антигенов, (ав) 50 вьіделяли из гепаринизированной крови здоровьїх доноров. Так, мононуклеарнье клетки периферической крови

Кз (РМ/ВС) вьіделяли из гепаринизированной крови путем разведения 100мл крови со сбалансированньїм солевьм раствором Хзнкса (НВ55), 1:11, а затем разделяли наслоением клеток на І утрпорастм (Мусотей РІагта, Озвіо,

Норвегия) с последующим градиентньм центрифугированием при 2000об/мин в течение 2Омин.

Мононуклеарнье клетки отмьівали З раза в НВ55, а осадок клеток разбавляли 4мл НВ5З5, содержащем 190 околоплодной сьіворотки теленка, и сортировали при 4"С, используя Динабусьї, покрьїтье моноклональньіми (Ф) антителами к СО4- или СО8-антигенам (ЮОупареадз М-450 СО4 Саї, Мо 111.16, Оупарбеадз М-450 СО8 Саї, Мо

ГІ 111.08, ОЕТАСНавЕАОЮ сСаї, Мо 125.04). Соотношение бусь!: клетки составляло 10:11, а время инкубации - 1 час.

Бусинки отделяли путем добавления поликлональньх анти-мьшиньх антител, согласно инструкциям бор Изготовителя.

Анализ хемотаксиса проводили в 48-луночной микрокамере для культивирования (Меигоргобе, КоскмШе, МО) как описано раньше (74; смотри ссьілку З и ссьілку 14). Хемоаттрактанть! разбавляли средой КРМІ 1640 (СІВСО

Са Мо 61870-010), содержащей 195 стерилизованной фильтрацией околоплодной сьворотки теленка, и помещали в нижнюю 25мкл ячейку. Для определения хемотаксиса Т-клеток, Т-клетки суспендировали в среде и бе 5Омкл суспензии помещали в верхнюю ячейку, отделенную от нижней ячейки поликарбонатньім, не содержащем поливинилпирролидона, фильтром с размером пор бмкм (Мисіеороге Согр, Ріеазопіоп, СА), покрьтого коллагеном, тип ІМ Зідта Саї, Мо С 0543). Клетки мигрировали в течение 2 часов при 37"С, при 595 СО». Затем фильтрь! аккуратно удаляли, фиксировали в 7090-м метаноле и окрашивали в Кумасси бриллиантовом голубом.

Клетки, отслоеннье с нижней поверхности фильтра, подсчитьівали, путем измерения их площади, применяя видеокамеру, размещенную на- микроскопе, соединенной с компьютерной системой для численного анализа и снабженной программой для обьективного определения хемотаксической миграции. Примерно 595 Т-клеток, что соответствует количеству между 12000 и 13000 клеток, могут мигрировать спонтанно; зта величина могла изменяться изо дня в день и почти не меняться в день зксперимента. Как описано ранее (ссьілка З и ссьілка 14), вьіборочнье результать! представленьії как отношение численности клеток в образце и в негативном контроле, 7/0 что отражает спонтанную миграцию. Зто отношение рассматривается в качестве хемотаксического индекса (СІ).

Все образцьї проанализировали триждьі на трех участках и получили среднюю оценку значения площади. В отдельньїх зкспериментах хемотаксическую мембрану не покрьівали коллагеном и по зтой причине в данном опьїте система мигрирующих клеток, стала иметь вид стекающих капель на дно нижней ячейки хемотаксической камерні.

В первом зксперименте хемотаксическое воздействиє ІТ9302 на СЮО8"-Т-клеток осуществили, испьтьївая ряд разведений ІТ9302, добавленного в нижнюю ячейку, и оценивали хемотаксис как описано вьіше.

Во втором зксперименте изучали способность ІТ9302 десенситизировать миграцию СО8'-Т-клеток как ответ на рчиИЛ-10 (1Онг/мл), добавляя ІТ9302 к мьішиньм клеткам за 30 минут перед осуществлением хемотаксиса. ІТ9302 добавляли в ряду концентраций и хемотаксический ответ рчиИл-10 оценивали, как описано

Ввіше.

В третьем зксперименте изучали способность ІТ9302 супрессировать хемотаксический ответ СІ)|)4--Т-клеток к рчилЛ-8 (1Онг/мл), добавляя 119302 к мишенньїм клеткам за 30 минут до осуществления хемотаксиса. 179302 добавляли в виде ряда концентраций и хемотаксический ответ рЧчИЛ-8 оценивали как описано вьіше.

Хемотаксис моноцитов с

Хемотаксис моноцитов измеряли, используя ту же камеру Бойдена, подготовленную, как описано вьіше, для о

Т-клеток. Хемоаттрактант разбавляли средой КРМІ 1640, содержащей 0,595 БСА и вносили в нижнюю камеру в концентрации 1ТОнг/мл. Моноцитьї, полученнье из нормальной РВМС человека, как описано вьіше, вьіделяли с помощью стандартной методики прилипания к пластику, суспендировали в среде ЯРМІ 1640, содержащей 0,590

БСА, и затем инкубировали в течение 30 минут в присутствиий ІТ9302, при различньїх концентрациях. В Ге последующем, клетки добавляли в верхние хемотаксические камерь! в концентрации 109 клеток/мл. Верхняя и о нижняя ячейки бьіли разделень! с помощью не содержащего поливинилпирролидона поликарбонатного фильтра с размером пор 8Змкм (Мисіеороге, Ріегазапіоп, СА). Камеру инкубировали при 37"С в течение 90 минут. ї-

Мембраньі, содержащие мигрирующие клетки, обрабатьмвали, как описано вьіше, и хемотаксический индекс їм вьічисляли в соответствии с вьішеописанной методикой.

Получение ИЛ-8 с помощью мононуклеарвьїх клеток периферической крови (РМВС) здоровьїх людей Іс)

РМВС вьіделяли из гепаринизированной крови здоровьх доноров человека. После градиентного центрифугирования с І утрпорастм (Мусотей Рпагта, Озіо, Норвегия), мононуклеарнье клетки разбавляли до концентрации 2 х 105 клеток/мл средой ЕРМІ 1640 без І Р5, содержащей 195 стерилизованной фильтрованием, « инактивированной нагреванием околоплодной сьіворотки теленка, а таюке пенициллин (10000 ІШ/мл), стрептомицин (1ТОмг/мл и гентамицин (2,5мг/мл). Клетки культивировали в 24-луночном микропланшете Мипс не) с (Мипс, Дания) в присутствий разньїх концентраций 179302 (0,1мкг, 1ООнг, 1Онг, Тнг, О,МТнг, О,О1нг/мл) в течение з» 24 часов. После 24 часов инкубации добавляли очередную дозу 1ІТ9302, а 1 часом позже к клеточной культуре добавляли р-чИЛ-1 р (Інг/мл). Супернанатньі! собирали после 48 часов непрерьівной инкубации и с помощью

ИЛ-8-ЕГІЗА, используя набор ИЛ-8-ЕПІЗА (Оаїіпірроп РНагтасеціїсаї Со., ЦЯ, ОзаКка, Япония) измеряли 35 концентрацию секретированного ИЛ-8. Вкратце, стандарть! и клеточнье супернатанть! инкубировали в течение о одного часа, а дубли инкубировали при 20"С на микропланшетной мешалке. Затем после отмьівки добавляли -І вторичное антитело и вьідерживали один час, после чего инкубировали в течение одного часа с меченьіми пероксидазой антителами козьї к анти-кроличьим ІдО. После отмьівки реакцию развивали О-фенилендиамином. і Тридцатью минутами позже реакцию останавливали 1,бн серной кислотой. Оптическую плотность (00) ав) 20 измеряли на считьвающем устройстве ЕГІЗА при 49Онм. Концентрацию МИЛ-8 вьічисляли с помощью калибровочной кривой абсорбции неизвестного образца против концентраций стандартов ИЛ-8. ї» Определение концентрации ІКАР

РВМС вьіделяли, как описано вьіше. РВМС культивировали в среде КРМІ 1640, содержащей 1095 стерильной, инактивированной нагреванием околоплодной сьіворотки теленка (включающей пенициллин, 10000 59 ІШ/мл, стрептомицин 1Омг/мл, гентамицин 2,5мг/мл), а концентрация клеток составляла 5 х 10 9 клеток/мл.

ГФ) Затем вьіделяли моноцить! по стандартной методике прилипания к пластику. Затем моноцить! культивировали в ко среде ЕРМІ 1640, содержащей 295 ЕСЗ (2,5 х 105 клеток/мл) и с разньми разведениями рчиИлЛ-10 или 1ІТ9302.

Клетки стимулировали в течение 24 часов, после чего собирали супернатантьь для определения ІКАР, во ІКАР-ЕГІЗА осуществляли с помощью закупленного у Я й ОО бувіетвз Епгоре Ца. (Саї, Мо. ОКА ОО, Абіпадіюп,

Охоп, Англия) набора для количественного иммуноанализа ИЛ-1га человека.

Определеннье зкспрессии антигена МНС класса П на моноцитах

РВМС вьіделяли, как описано вьіше, а моноцить! вбіІделяли с помощью методики прилипания к пластику.

Затем моноцить! культивировали в среде ЯРМІ 1640, содержащей 296 ЕС5, и включающей пенициллин 10000 бБ М/мл, стрептомицин ТОмг/мл, гентамицин 2,5мг/мл при концентрации клеток З х 106 клеток/мл. Клетки стимулировали в течение 40 часов в микролунках (Мипс, Дания) с рчИЛлЛ-10 ТООнг/мл или 119302 мкг/мл,

1б0Онг/мл, ТОнг/мл. По окончаниий стимуляции супернатантьь удаляли, я клетки снимали с пластика замораживанием при -20"С в течение 20 минут. Клетки собирали в їмл охлажденного НВЗ5, содержащего 190

ЕС и сортировали при 20"С, используя 5Омкл/мл Динабусинок М 450, покрьїтьїх моноклональньми антителами

Кк р-цепи НІА класса П (Саї, Мо 210.03). После 20 минут инкубации, клетки отмьівали З раза охлажденньм КВ55, содержащим 195 ЕС5, и собирали на магнитном сепараторе. Клетки разбавляли вьішеуказанньімм буфером и окрашивали метиленовьім синим, а розеткообразующие клетки (клетки, переносимье Динабусинками с мАт к

НІА класса П) подсчитьівали.

Определение образования ИЛ-4 с помощью СО4"-Т-лимфоцитов 70 Клеточнье культурь сОр47-Т-лимфоцить! вьіделяли из гепаринизированной крови здоровьх людей. После градиентного центрифугирования с І утрпорастм (Мусотеа Рпагта, Овіо, Норвегия), мононуклеарнье клетки сортировали при 4"С, испольузя Динабусинки (Оипа! А5, Норвегия), покрьїтье моноклональньмми анти-СО4"-антителами. Бусинки отделяли добавлением анти-мьішиного антитела (Оипаї АБ / Норвегия). Степень чистоть! позитивно 75 отселектированньїх клеток превьішала 9995, судя по результатам ЕАСЗ-анализа. Для проверки образования

ИЛ-4 де помо с помощью ИЛ-8-стимулированньх Т-клеток, Т-клетки культивировали при концентрации 5 х 105 клеток/мл в среде ЯРМІ 1640, без добавления /Р5, содержащей 195 стерилизованной фильтрованием, инактивированной нагреванием околоплодной сьіворотки теленка (БС5), пенициллин (10000 ІШ/мл), стрептомицин (1Омг/мл) и гентамицин (2,5мг/мл). Т-клетки стимулировали в течение З дней, используя рИЛ-8 (100Онг/мл), рИЛ-10 (10Онг/мл) , ІТ9302 (1Онг/мл) и УИФН (1Онг/мл). Рекомбинатньій ИЛ-8 человека (рчил-в) любезно предоставила Оаїпірроп РНагтасеціїсаїз Со. ЦЯ. (Озака, Япония), а у-ИФН закупили у Военйгіпдег

ІпдеІдейт Ат Кпеійт, Германия. Для специфического ингибирования стимуляции ИЛ-8, применяли нейтрализацию моноклональньм анти-ИЛ-8-антителом (М/5.4) (любезно предоставил д-р К. Маївивпіта,

Япония). Рекомбинантньй ИЛ-10 закупила у Рерго Тесп. Іпс. (Лондон, Англия). с

Приготовление клеточного материала и культурального супернанатна для гелевого злектрофореза Ге)

Культивированнье Т-клетки и культуральную среду разделяли центрифугированием при 2000об/мин в течение 5 минут. Полученнье супернатанть! виісушивали замораживанием и растворяли в 100мкл лизирующего буфера. Клетки ресуспендировали непосредственно в 100мкл гелевого лизирующего буфера (9). Материал хранили при -807С для последующего анализа. сч

ЕСІ -Вестерн-блоттинг белков, продуцированньїх СО4"-Т-клетками (ав)

Клетки или вьісушеннье замораживанием супернатанть! клеточньїх культур использовали для определения - - содержания ИЛ-4-белков. Белки из гелей одномерного 1590о-го ДСН-ПАГЗ переносили с помощью блоттинга на нитроцеллюлознье мембраньй Нуропа -ЕСІ (Атегепат КРМ 2020 О, Англия) и блокировали 590-м бьічьим - сьівороточньім альбумином в трис-солевом буфере рН 7,83, содержащем 0,195 твина 20. Затем блоть ою инкубировали с поликлональньїми антителами козьї к анти-ИЛ-4 человека (КО Зувіетв, Англия) и с меченьми пероксидазой хрена вторичньми антителами, после чего детектировали иммуноокрашеннье продукть, зкспонируя пленку (Кодоак Х-ОМАТ-5, США) в течение 90 секунд.

Специфичность аминокислотной последовательности І/Т9302 « 20 Информационньій поиск возможной гомологии последовательности ІТ9302 с другими известньіми белками, з производил в банке белков ЕМБО д-р Непгік І епПеге из Іпвійше їог Меадіса! Віоспетівігу, Опімегейу ої с Аагпиз, Дания. :з» Аминокислотная специфичность последовательности ІТ9302

Согласно информации, полученной из банка белков ЕМБО (Неїідеїрего) 10 июня 1994 года, ІТ9302 обладает 10095 гомологией с последовательностью ИЛ-10 человека и 7595-с последовательностью белка, полученного из сл но вируса Зпштейна-Барр, идентичного вИЛ-10. Другие вируснье белки, такие как белки фага Т7 и вирус скрученньїх желтьїх листьев томатов, обнаружили, соответственно, 7595 и 8595 идентичности. -і Результать -1 Замьісел настоящего изобретения сформировался в октябре-ноябре 1992 года, когда в соответствии со стратегией, представленной вьіше, бьіл создан нонапептид, обозначенньій ІТ9302, а решение о химическом («в) 50 синтезе первого прототипа (179302) назначили на 27 ноября 1992 года. Предполагалось, что данньій нонапептид

Кз должен бьіл бьї проявлять иммуномодуляторнье свойства, и некоторье из них должнь! бьіли бьі имитировать

ИЛ-10-подобную активность, после чего планировали сразу же поставить контрольнье зксперименть (примерьї). Химический синтез ІТ9302 осуществили с помощью автоматического полипептидного синтезатора, изготовленного Сагібіоїесп Ца. А/5, Дания и закупленного авторами. Впоследствиий белок очистили с помощью

ЖХВД и подтвердили с ее помощью, что степень чистотьї превьішала 9595. Тем самьм подтвердили, что

ГФ) синтезированньй продукт идентичен ІТ9302, названному так заявителями в октябре и ноябре 1992 года. з Пример 1

ІТ9302 индуцирует подавление спонтанного образования ИЛ-8 человеческими моноцитами во Опьїт проводили, как описано в разделе "Образование ИЛ-8 мононуклеарньми клетками периферической крови здоровьїх людей (РМВС)". Моноцить! вбіделяли с помощью методики прикрепления к пластику и при концентрации З х 105 клеток/мл стимулировали в течение 40 часов. Как показано на Фиг.3, ІТ9302 подавляет образование ИЛ-8 моноцитами, а при концентрации ІТ9302 равной 0,Тнг/мл супрессируется до 3595 спонтанно образуемого ин витро ИЛ-8. Жизнеспособность клеток в культуре всегда превьшала 80905 спустя 1 день, а в5 добавление ІТ9302 в данном или в последующим примерах не влияла на их жизнеспособность при любьх концентрациях ІТ9302 между 0,1 и 10ООнг/мл (мол.масса ІТ9302: 1127 дальтон, предсказанная мол. масса рчиИл-10: 18400 дальтон).

Пример 2

ЇІТ9302 индуцирует подавление ИЛ-1Д, индуцирующего образование ИЛ-8 мононуклеарньми клетками периферической крови человека (РМВС)

Опьїт проводили, как описано в разделе "Образование ИЛ-8 мононуклеарньми клетками периферической крови здоровьїх людей (РМВС)". Как показано на Фиг.4, ІТ9302 подавляет дозо-зависимьм образом ИЙИЛ-1 р, индуцирующий образование ИЛ-8 мононуклеарньими клетками периферической крови человека в условиях ин витро. Стабильная супрессия образования ИЛ-8 наблюдается при концентрациях ІТ9302 между 0,01 и 10Онг/мл.

Пример З

ІТ9302 индуцирует образование человеческими моноцитами белка-антагониста (ІКАР) рецептора интерлейкина-1

Опьїт проводили, как описано в разделе "Определение концентрации ІКАР". Как показано на Фиг.5 179302 дозо-зависимо индуцирует образование ІКАР человеческими моноцитами. Образование сильно увеличивается, 75 когда используемье концентрации І/Т9302 превьішают 1Онг/мл. Фиг.б иллюстрирует индукцию ІКАР с помощью рчИиИл-1О0, а поскольку концентрация ЧИЛ-10 примерно в 20 раз больше, чем 1Т9302, 1Онг/мл 179302 соответствует 200нг/мл. По зтой причине при низких концентрациях активности 1ІТ9302 и рчИЛ-10 сопоставимь и примерно равнь в отношений индукции ІКАР. При концентрациях ІТ9302, превьішающих 1Онг/мл, индукция ІКАР сильно увеличивается и достигает величин около 7ООнг/мл.

Пример 4

Хемотаксический зффект ІТ9302 на человеческие 50О87-Т-лимфоцить!

Зксперимент проводили, как описано в разделе "Исследование лейкоцитарного хемотаксиса". Как показано на Фиг. ІТ9302 индуцирует хемотаксическую миграцию СО8" человеческих Т-лимфоцитов ин витро и не действует на 4- -Т-клеток (даннье не показань). МИ вновь, активность ІТ9302, показанная в данном се зксперименте, сопоставима с активностью рчиИл-10, показанной прежде (ссьілка 14). о

Пример 5

І179302 десенситизирует человеческие СОВ8-- -Т-клетки, влияя на толерантность к рчИЛ-10.

Зксперимент проводили как описано в разделе "Исследование лейкоцитарного хемотаксиса". 179302 добавляли к суспензим СОВ'- -Т-клеток за 30 минут до того, как у зтих клеток испьітьвали их хемотаксический СМ ответ на рчИЛ-10. Как показано на Фиг.8, преинкубация клеток с ІТ9302 супрессирует толерантность СЮОвЖ о -Т-клеток к рчИЛ-10. Зто указьіваєет на то, что ІТ9302 может действовать, связьивая рчИЛ-10 с рецептором

ИЛл-10. -

Пример 6 чн

І79302 супрессирует хемотаксический ответ СЮ4- -Т-лимфоцитов к ИЛ-8 3 Зксперимент проводили, как описано в разделе "Исследование лейкоцитарного хемотаксиса". Какпоказано МО на Фиг.9, ІТ9302, добавленньй к суспензий человеческих СО4ж- -Т-лимфоцитов, в дозо-зависимой форме подавляет ответ СО4-- -Т-клеток к ИЛ-8.

Пример 7 «

ІТ9302 супрессирует хемотаксический ответ человеческих моноцитов к МСАР/МОСР-1

Зксперимент проводили, как описано в разделе "Хемотаксис моноцитов". Как показано на Фиг.9, 179302, - с добавленньй к суспензии человеческих моноцитов, в дозо-зависимой форме подавляет хемотаксический ответ "» моноцитов к МСАБ/МСОР-1. " Пример 8

ІТ9302 не подавляет зкспрессию молекул МНС класса П на человеческих моноцитах

Зксперимент проводили как описано в разделе "Материальй и Методь" и он показьваєт, что рчил-10 о подавляет зкспрессию МНС класса П, а ІТ9302, как показано ниже в Таблице 4, не подавляеєт ее. -І - о 50 о 12,0 1,0 х 104 1О0Онг/мл. рчил-1о0 Ава14х104

Е пенште|00озокт 1онг/мл ІТ9302 макадхоя 112 3,2 х 104 59 Обсуждение, связанное с зкспериментами

ГФ) Представленнье даннье демонстрируют дозо-зависимое ингибиторное действие синтетического з нонапептида І/Т9302 на процессьї, которне отражают предвоспалительную активность, в том числе образование

ИЛ-8 и миграцию моноцитов и/или Т-клеток. Таким образом, ІТ9302 проявляет способность супрессировать спонтанное образование МИЛ-8 с помощью ночной культурьі человеческих моноцитов. Зто можно бьло бь 60 обьяснить прямьім ингибиторньм воздействием на образование мРНК ИЛ-8 и/или образованием и/или вьісвобождением белковой субпоследовательности. Другой механизм мог бьі поясняться тем фактом, что моноцить!ї, культивированньюе ин витро, стали зкспрессировать и продуцировать ИЛ-1, которьій затем в свою очередь индуцировал образование ИЛ-8. Зто подтверждаєтся фактом, которьій демонстрирует, что 1ІТ9302 сильно индуцирует образование ІКАР из моноцитов. Вследствие зтого ІТ9302 может также подавлять 65 спонтанное образование ИЛ-8, расстрайвая активность ИЛ-1. Наблюдаємая индукция ІКАР с помощью 179302,

проявляется как индукция биологически активного ІКАР, поскольку ІТ9302, добавленньій в культурь нейтрализует образование ИЛ-8, индуцированное ИЛ-1, но только тогда, когда его добавляют не менее, чем за 16 часов до увеличения активности ИЛ-1 в культурах. Зто могло бьі означать, что 1Т9302 подавляет образование ИЛ-8, индуцированное ИЛ-1, в результате стимуляции образования ІКАР, которьїй в свою очередь блокирует активность ИЛ-1 через его рецептор. Если бьі 179302 прямо подавлял образование ИЛ-8, следовало бьі ожидать, что добавление ІТ9302 к культуре за 1 час до внесения ИЛ-1 должно бьло бьі подавлять образование ИЛ-8, чего не бьіло в данном случає (даннье не показань). Позтому наблюдаемое с помощью

ІТ9302 подавление образования ИЛ-8 вероятно связано, скорееє, с индукцией образования ІКАР, чем с прямь!м 7/0 подавлением образования ИЛ-8. Зти функции ІТ9302 обнаруживаются также и по отношению к чиИЛ-10, свидетельствуя тем самьїм, что ІТ9302 управляет ИЛ-10-подобньми активностями. ІТ9302 имитирует также активность ИЛ-10, супрессируя способность СЮ4-- -Т-клеток мигрировать, как ответ на действие ИЛ-8. Поскольку

ИЛ-8 связан со многими различньми воспалительньім состояниями и поскольку СОЮО4-ж- -Т-клетки появляются рано в инфильтрате аллергического воспаления, опосредованного Т-клетками, такого как аллергия кожи, может /5 оказаться, что данньій показатель имеет большое терапевтическое значение для контроля аллергического воспаления, опосредованного Т-клетками.

Проявление хемотаксической активности СО8- -Т-клетками под воздействием ІТ9302 аналогично также воздействию ЙИЛ-10, и ІТ9302 может таким образом активировать Т-клеточнье популяции с супрессорной активностью, содействующие прекращению аллергического воспаления, опосредованного Т-клетками. По зтой причине, и в соответствии с представленньми вьіше примерами, ІТ9302 обладает терапевтической ценностью для заболеваний, в отношений которьїх ИЛ-10 и/или ІКАР также имеют терапевтическое значение. Кроме того,

ІТ9302 может иметь терапевтическое значение для заболеваний, где ИЛ-8 и/или МСА и/или ИЛ-1, как полагают, играют патогенную роль.

Пример 9 сч

ІТ9302 и ИЛ-10 индуцируют образование ИЛ-4 в СО4-- -Т-лимфоцитах

Предпосьілка (8)

Подобно ИЛ-10, ИЛ-4 является продуктом СО4-- -Т-клеток Т у2-типа. Его наблюдали, когда рекомбинантньй

ИЛ-10 человека индуцировал образование ИЛ-4 культивируемьми СО4-- -Т-клетками. Зто означаєт, что ИЛ-10, помимо своих собственньх иммуносупрессивньх функций, индуцирует таюке образование другого су зо Ммуносупрессивного цитокина, ИЛ-4. В зтой связи вьіясняли, действительно ли Т9302 индуцирует также образование ИЛ-4 СО4-- -Т-клетками. о

В соответствии с зтим, СО4- -Т-клетки, вьіделеннье как описано в разделе "Способ осуществления М хемотаксиса Т-клеток', и культивированнье как описано в разделе "СОпределение образования ИЛ-4 Са -Т-лимфоцитами", стимулировали в течение З дней ІТ9302 (1Онг/мл) или ИЛ-10 (1ООнг/мл). Цитозольнье ї- фракции собирали и анализировали их на наличие ИЛ-4, применяя Вестерн-блоттинг (фиг.1) и поликлональнье ю антитела козьї к анти-ИЛ-4-человека.

Как показано на Фиг.11, ИЛ-10, также как и ІТ9302, индуцирует образование ИЛ-4 при культивирований СО4ч- -Т-клеток здоровьїх людей.

Пример 10 «

ІТ9302 подавляет образование о-ТНЕ во время реакции смешанньх лейкоцитов (МІ К) з с Бьіло показано, что реакция смешанньїх лейкоцитов частично зависит от образования о-ТМЕ во время ц реакции. Бьіло также показано, что ІТ9302 не снижает существенно МІК, но установлено, что во время МІ К "» происходит значительное снижение образования о-ТНЕ.

В соответствии с зтим, МК осуществляли путем вьіделения человеческих лейкоцитов и последующего Культивирования 1 миллиона клеток/мл, полученньїх от аллогенньїх доноров в течение 4 дней. Перед 1 постановкой культур, одну группу клеток облучали в течение 2 минут, используя бета-излучение. Вьіделяли -1 цитозольнье белковьіе фракции как описано в разделе "Определение образования ИЛ-4 сСраш -Т-лимфоцитами", а Вестерн-блоттинг осуществляли, используя кроличьи антитела к анти-о ТМЕ человека. Как -і показано на Фиг.12 во время реакции смешанньїх человеческих лейкоцитов наблюдали значительное снижение о 50 образования о-ТМЕ.

Пример 11

ІК) Использование ІТ9302 модулирует действие І Р5, вьіІЗЬНІвВаАЮЩщего шок и лейкопению у свиней.

Поскольку бьіло обнаружено, что ІТ9302 модулирует образование цитокинов, в том числе 9-ТМЕ и ИЛ-8, и подтверждено опубликованной последовательностью мьішиного ИЛ-10 (Віапсно еї оі., 1995) (смотри Фиг.2 по 29 гомологиий СООН-конценвого пептида), вьіясняли действительно ли ІТ9302 способен модулировать действиє

ГФ! І Р5, вьізьнівающего лейкопению у свиней (Фиг.3).

В предварительном зксперименте испьітьївали как внутривенная иньекция 179302, 0,1мг/кг, модулирует у о свиней (М-3) действие внутривенной иньекции 2мкг/кг І Р, 179302 иньецировали за 30 минут до введения І РБ, а время взятия образцов крови показано на Фиг.13. Определяли общее количество лейкоцитов и 60 лейкоцитарную формулу, и на оснований зтих результатов подсчитьвали общеє количество нейтрофильньх лейкоцитов.

Показано, что иньекция І РЗ вьізьівает скоротечную лейкопению. Однако, иньекция І Т9302 предотвращаєт лейкопению как"показано на фигуре.

Пример 12 65 Антитела против синтетического полипептида І/19302

Синтетический полипептид ІТ9302 приобретали у Кет-Еп-Тес А/5, Копенгаген, Дания, со степенью очистки более 9595. Зтот полипептид коньюгировали с помощью Кеупоїе ІГітреї Нетосуапіп (КІН), полученного от производителя. Растворимьїй ІТ9302/КІН является более иммуногенньм, чем лишь один полипептид, и его можно использовать также в качестве контрольного белка для ЕГІЗА или Вестерн-блоттинга.

Иммунизация кроликов 25Омкг ІТ9302, коньюгированного с КІН, и в виде змульсии с полньм адьювантом Фрейнда, использовали для внутрикожньїх и подкожньїх иньекций. Иньекции повторяли 4 раза с двухнедельньми интервалами и после зтого кроликам открьівали кровь на 8 и 12 дн. После последнего кровопускания 25О0мкг ІТ9З30О2/КІН с полньім адьювантом Фрейнда иньецировали подкожно с одномесячньми интервалами. Образование ІГ9302-антител 7/0 Контролировали с помощью дот-блот иммунотеста или Вестерн-блоттингом. 1. Вепаїлеп К. І утрпоКіпез іп іпїйаттаїйоп. Іпаттаїйоп Вавзіс Меспапізте» Тіззце Іпішгіпуд Ргіпсіріеєв апа

Сіїпіса! Моде!в (Р Меподе 8. А І іпдрот евдз) 1985; АІтоміві 5 УМікзеї! Іпіегпайопа!. 5іосКроЇт: 187-217. 2. Вепаїлеп К. ІпіепеийкКіп-1, ІпіегпеиКіп-б6, апа (Штог песговіз Тасіог іп о іпїесіоп, іпаттаїйоп апа іттипйу. Іттипої! Гек 1988; 19: 183-192.

З. Іаггеп 0.0. І еиКосуїе асіїмайпуд апа спептоїйасіїс суїоКіпез іп сеїІ-тедіаФеай іттипе геасіопе ої (пе

Ппитап вКіп. Асіа Оегтайюмепегої. 1991; Биррі. 160: 1-48 4. Ріогепіпо ОО. Е., М. МУ. Вопа, апа т. К. Мозтапп. 1989. То (урез ої тоцве ПеїІрег Т сеїЇ. ІМ. ТН2 сіопез зесгеїе а Тасіог (паї іппіріїв суюкКіпе ргодисіоп ру ТІ сіопев. У. Ехр. Меад., 170: 2081. 5. Міега Р., К. де УМаї-Маїегуб М.-М. ЮОапо, К. Е. допйпзоп, К. КавіеЇвеіп, ОО. Р. Ріогепіопо, 9. Е. ае

Мгіев, М.-б. Копсагоїю, Т. К. Мозтапп, апа К. МУ. Мооге. 1991. ІвоЇїайоп апа ехргезвіоп ої питап суйоКіпе зупіпевіз іппірйогу Тасіог (СБІБЛІ-10) сОМА сіопев: Потоіоду (о Ервзіеіп-Вагт умігив ореп геадіпд їате

ВСІ. Ргос. Маї). Асад. Зеї. (ОБА), 88: 1172. б. Мооге, К.МУ.,, Оббата А., де МУаа! Маїегуї К., Мівіга, Мозтапп Т.К. 1993. Іпіегпіеикіп-10, Аппи Кему.

Іттипої, 11: 165-90, сч 7. Кіт, 9.М., Вгаппап,- С.І. Сореїапа М.0., депКіпз, М.А., Кпап, Т.А., Мооге, К.М/. 1992. Бігисійге ої.

Ше тоизе іпіегіеиКіп-10 депе апа спготовотаї! Іосаїї2айоп ої (Ше тоцвзе апа питап депев. У. Іттипої! 148: і) 3618-23. 8. Сапег, О0.В., ОеїреІ, М.йК-Ог, ЮОйпп, С.). еї а). 1990. Ригійсацоп, сіопіпуд, ехргезвіоп апа бБіоіодіса! спагасіегігайоп ої ап іпіегіеиКіп-1 гесеріог апіадопіві ргоїеіп. МАТОКЕ 344: 633-638. с зо 9. Наппит, С.Н., УМісох, С.)., Агепа, МУ.Р. ей аїЇ. 1990. ІпіепеикКіп-1 гесеріог апіадопіві асімпйу ої а

Ппитап іпіегіеикКіп-1 іпріБбіог. Маїцге 343: 336-400. о 10. Рігевівіїй, (.5., Воуїе, О.Ї., Ми, С., еї а). 1994. бБупоміа! іпіегпеикіп-17 гесеріог апіадопіві апа М іпсег-Іеикіп-1 раіапсе іп гпештайоїіа агпійгійів. Агійгійв Кпешт 37: 644-652. 11. Бівпег, С.9).-Ог., Зіоїйтап, 0.)., раї, 5.М., РгіБббієе, УР. еї а). 1994. ||пйШа| емаїцайоп о ої в. гесотбіпапі іпіепеиКіп-1 гесеріог апіадопівї іп (Ше (геайтепі ої зерзів зупдготе: а гапдотігейд, ореп-Іабеї, ю ріасеро-сопігоПед тийКісепіег (гіаі. Те І -1КА Зерзів Зупаготе Зщшау ОСгоимр. Сті-Саге-Меа. 22:12-21. 12. де МУУагзі-Маїегуї, КК. Наапеп 3., Зріїв, Н., еї аїЇ. 1991. 11-10 апа міга! 1/-10 вігопдіу гедисе апіідеп-зресіїс Ппитап ТТ сеї/| ргоЇМегайоп бу аїтіпізйіпуд їйе апііїдеп-ргезепіїпуд сарасйу ої топосу(ев міа дом/п-гедшайоп ої сіазз ІІ МНС ехргеззіоп. 9. Ехр. Мед. 174:915-24. « 13. Садгліпеїй, К.Т., Овуаїд, І.Р., датев, 5.Ї., Зпег, А., 1992. 11-10 іппіріїз орагазпйе Кійпод апа шу с піїгіс охіде ргодисіоп Бу ІЕМ--асіїмагедй тасгорпадез. У). Іттипої. 148: 1792-96. . 14. діпадцап, Т., Гагзеп, С.О., Севззег, В., Маївизпіта, К., ТНевігир-Редегзеп, К. 1993. Нитап 1І/-10 із а и?» спето-айгасіапі ог СО8б- Т Іутрпосуїез апа ап іпрірйог ої 1/-8- іпдисеа СО4- т Іутрпосуїе Мідгайоп.

Уошигпаї ої Іттипоіоду, 151: 4545-4551. 15. Коийвззеї Е., Е. Сагсіа, Т. Оеєїгапсе, С. Регоппе, О.-Н. Нвги, К. КагвієїЇвіп, К. МУ. Мооге, апа .. с Вапспегеаи. 1992. 1/-10 із а роїепі дгомлй апа айегепіацйоп Тасіог Тог асіїмагєй питап В ІутрПосуїев.

Ргос. Маї). Асад. Зеї. ОА, 175: 671. - 16. Номжага, М., ОбЗаїта, А., Івпіда, Н., де МУааі! Маїєетуї К., де Мгіев, У. 1992. Віоіодіса! ргорегіев ої -І ІпіепеикКіп-10. 9. Сііп. Іттипої! 12:239-47. 17. Кийп, К., Гойіег, У9., Кеппіск, О., Каїі|емееКу, К., Мийег, МУ. 1993. ІпепеиКіп-10-деїісіепі тісе о демеіор спгопіс епіегосоїйів. Сеї! 75: 263-74.

Ге 18. 5Ппег, А., Ріогепііпо, О.Р., Сазраг, Р., Реагсе, Е., Мозтапп, Т. 1991. Ргодисіоп ої 1І/-10 ру СОр4-

Іутрпосу- (ез согтеїагез мййп дом/п-гедшіайоп ої ТИ! суюкКіпе зупіпевзів іп ПеїІтіпій іптесііоп. 9. Іттипої!. 147: 2713-16. 19. Сіегісі, М., Зпеагег, С.М. 1993 ІттипоіЇоду Тодау. 14: 107-111. 20. Вгу, К., Іарраїаіпеп, ОО. 1994. Іпепеикіп-4 апа (ігапвіогтіпд гом Тасіог-рега 1 тоаціайе (Ше ргодисіп ої іпіегіеиКіп-ї гесеріог апіадопівї апа ргозіадіапайпй Е2 ру даесідца| сеїЇв. Ат-)-орвіе(-Супесої (Ф, 170 (4): 1194-1198 ка 21. БРігевівіп, 0., 5., Воуїе, ОО. Ї., Ми, С., Раїпе, М. М., М/пізепапа, Т. О., 2уащшег, М. 9., Агепа, МУ.

Р. 1994. Бупоміа! іпіегіеикіп-ї гесеріог апіадопізвї апа іпіегіеиКіп-1 раїапсе іп о гпештаїйоій апйгіів. бо Апппйів-Кпешт, 37/5: 644-652 22. Корегде, С. 9., ЮОе-Меадісів, К., Оауег, 9. М., Коїіа-Ріез2сусгупеКі, М., Массапе, Р. Н., Рошбейе, Р.

Е. 1994. СтгувіаІ-іпдаисей пешігорпіЇ асіїмайоп: М. Ойегепіа! ргодисіоп о ої Біоіодісайу асіме 1-1 гесеріог апіадопіві. 3). Іттипої! 152/11: 5485-5494 23. МеСаїІ, Кк. 0., Навкіїї, 5., ттептапп, Е. М., па, Р. К., Тротрзоп, К. С., Загпог, К. В. 1994. 65 Тіввцуе іпіег-іеикіпй 1 апа іпіегкешКіп-1 огесеріог апіадопівї оехргезвіоп іп епіегсоїЇйів іп о гевівіапі апа зизсеріїбіе гаїв. (завігоепіегоЇоду (4): 960-72

25. КітбБіІе, К. В., Маппісе, У. |, Віоедомж, ОО. С., Тпотрзоп, К. С., Норіег, МУ., Кипод, М. Т., Вгомупіеїйа,

С., Расі-їсі, МК. 1994. Іпепеикіп-ї гесеріог апіадопізвї десгеа-- вев бБопе о55 апа опе гезогріп іп омагіесіотігеай гаїв. 9. Сіїп Іпмеві. 93/5: 1959-1967 26. Кіїпе, 9. М., Сеїві, І. 9., Мопіск, М. М., 2(іпекКі, М. Е., Ниппіпопаке, 0. МУ., 1994. 9. Іттипої. 152 (5): 2351-7 27. ТотрКіпв, К. с. 1994. Нутап гесотрБбіпапі іпіепеикКіп-1 гесеріог апіадопівїі іп (Ше (геаітепі ої зерзів зупдготе (еаїйогіа!; соттепіО). Стії-Саге-Меад. 22 (1): 3, 22 (1): 12-21 28. Емегаєегаї В., ВгоисКаетгі, Р., Біеге, МУ. 1994. КесотрБіпайоп 1/-1 гесеріог апіадопіві ргоїесів адаіїпві ТМЕ-іпдисеа Іеіпаїйу іп тісе. 9. Іттипої. 152/10: 5041-5049 70 29. Рівспег, С. 9. Ог., Зіоїтап, 0. 9., Ораї, 5. М., Рііббіе, У. Р., Вопе, К. С., Еттапиеї, 0., Ма, 0.,

Віоедом, 0. С. Сайаіапо, М. А. 1994. Іпйа! емаішайп ої Ппитап гесотріпайоп іпіепгеикКіп-1 гесеріог апіадопівї іп (Пе ігеайтепі ої зерзів взупіаготе: а тгапдотігей, ореп-Іабеї, ріасеро-сопігоПей тийісепіег іга). Тне І -1КА Зервзів 5Зупаготе Зішау Огоишр (зее соттепів). Стіі-Саге-Меада. 22(1): 12-21, 22(1): З 30. ботег-Кеїіпо-Сагпою, .). У. 1994. Мем Іегарієв іп гпеитайіа агійгіків. Меа-Сіїп 543-545. 32. Мівпіпага, Т., ОНзакі, М., Оеда, М., Байо, М. Мипау, с. К. 1994. Моизе іпіепеицКкіп-1 гесеріог апіадопівї іпдисей ру асііпорасіййз асііпотусесетсотійапе Іро-роіїузасспагіде ріоске (Ше еПесів ої іпєтепеикіп-1 от ропе гезогріїоп апа овіеосіаві-ІїКе сеї! гогтайоп. ІптесіІттип. 62(2): 390-7 33. Зітоп, С., Егапсез, А., Рідоеце, с. М., еІ-Юапазошгі, І., 2игамувкі, б., ОЮапо, МУ., Роїап, М. Ї. 1994.

Етрбгуопіс ітріапіайоп іп тісе із БіосКей ру іпіегпеиКіп-1 гесеріог апіадопівї (вее соттепів). Епдосгіпоіоду. 134(23: 521-8, 134(2): 519-20 34. Ваегдеп, К., ВепігесиКе, К., ШіІісп, Т. К., 1994. СуюкКі-пе ехргезвіоп іп (Пе ріасепіа. Те гоЇе ої іпіепеикіп 1 апа іпіегеикіп 1 гесеріог апіадопізвї ехргевзвіоп іп о сПпогіоатпіопійв апа /рапигйіоп.

Агеп-Раїпо!-І ар-Меа. 118(1): 52-5

З5. Тапо, МУМУ., Бепо, Ї., Маппісе, .). |., ММівоп, С. В. 1994. |ІпіегпіеиКкіп-1 гесеріог апіадопіві сч ов атеїогаєєз ехрегітепіа! апіїдіотегиіаг разетепі тетргапе апіроду-аззосіаєй ПЙотеціоперпгійв. У.

Сіїп-Іпмеві. 93(1): 279-9. і) 36. Саззайейа, М. А., Медіа, І.., Сазрегіпі, 5., СаіІ2еці, Е., Вопага, 5. 1994. 37. ІпіегіесцкКіп 10 (П-10) иргедшіа(ев ІС--1 гесеріог апіадопіві ргодисіоп їот

ІПророїузасспагіде-зітишацюа питап роїутогрпописієаг ІеиКосуїез ру адеіауїпд тМА аедгаданоп. У. Ехр-Мей. су зо 179/5: 1695-1699 38. Мапсіпі, К., Вепаейці, А., деледцеі, А. М. 1994. Ап |іпіегпеиКіп-1 гесеріог апіадопіві десгеазез о

Тірговіз іпдисей Бу дітеїпуІпігоггатіпе іп гаї Іїмег. Мігспому8-Агсп. 424/1: 25-31 М 39. | иКасв, М. МУ., КипкКеї, 5. Г., Вигаїск, М. О., Гіпсоїп, Р. М., Зігієїег, К. М. 1993. 40. ІпбегіеиКіп-1 гесеріог апіадопівї Біоск5 спетоКіпе ргодисіоп іп (Ше отіхей ІУутрпосуїе геасііоп. ї- з5 Віосй. 82(12): 3668-74 ю 41. Вапдага, б., МиейПег, с. М., Саїеа-іашгі, 9У., ТіпдаЇ, М. Н., Сеогдезси, Н. І., З,испапек, М. К., Нипо, (о. 1, Сіогіво, .). С., Коббріпег, Р. О., Емапг, С. Н. 1993. 42. Іпігаапісціаг ехргезвіоп ої бБіоіодісайу асіїме іпіег-ІіеиКіп 1-гесеріог-апіадопіві ргоївіп Бу ех мімо ІгапеТег. Ргос-Май-Асаа-5сі-0О-5-А. 90(22): 10764-8 « 43. Оіпагейо, С. А. 1994. Апі і-іпіегєиКіп-1 зві(гаїедіев іп (Ше ігеайтепі ої (Ше зеріїс 5посК в8упіготе. ств) с Сап-9-іп-тесі-Оів. 5 (виррі. А): 9ЗА-16А . 44. ОеєІтапп, Е., Торр, М. 5., Кейшії, В., Рарадітйнгіои, С., Коепіпдзтаійт, М., ОБегрегоа, О., Тпіеї, Е., и? Вегае!, МУ. Е. 1994. Іпі-О-Опсої. 4/3: 555-558 45. Евігом, 7. 1993. Іпіегиріоп ої ашосгіпе апа рагасгіпе дгоуй-війтоїайїйогу теспаізте: а пем їпегареціїс зіга(ету г спгопіс туеіодепошв Іеикетіа. Зетіп-Нетайо!. 30 (З зиррі 3): 35-6 с 46. МУсоіїеу, Р.Н., МУпаіеп, 9У.О0., Спартап, О.Ї., Вегдег, А.Е., Кіснага, К.А., Авраг, О.О., е(айе, М.О. 1993. Тпе епесі ої ап іпіепеиКіп-1 гесеріог апіадопівї ргоїеіп оп їуре | соПадеп-іпдисей акгйгійв апа

Ш- апіїдеп-іпдисейд апнйгів іп тісе. Агійгйів Кпешт. 36 (9): 1305-1314 -І 47. Реїегзоп, С.М., Наїез, Н.А., Наїйїазака, Н.Н., Міїснеїї, М.О., Кійбеппоизе, !., допе5, КР. 1993. во піепейкіп-1 брейа (1-1 реа) тоашаев рговіадіапай ргодисіоп апа (фе пайшга! 1-1 гесеріог апіадопіві о іппіріїв оушайоп іп (Те оріїтайПу зіітшіагеа гаї омагіап репивіоп тодеї. Епдосгіпоїоду 133 (5): 2301-2306

Ге 48. Евігом, 72., Кигагоск, К., Таіраг7, М. 1993. Коїе ої іпіепеикКіп-1ї іппірйогу тоіесціев іп (Шегару ої асціе апа спгопіс туеіодепоцз ІеоКетіа. І ешк. утрпота 10 (6): 407-418 49. Спепзце, 5.МУ., ВіепкомузКі, М., ЕеззаЇш, Т.Е., ММагтіпд-юп, К.5., НегеПпеу, 5.О0., ЇиКасв, М.МУ., Кипкеї, дво ЗІ. 1993. поиз ІЇ-1 гесеріог апіадопізі ргоїеіп (ІКАР) гедшіаїез зспівіовоте едо огапцота ТЮюгтайоп апа (фе гедіопа! ІМмМтрпоїа гезропзе. у). Іттипої. 151 (7): 3654-3662 (Ф) 50. Вомжуег, У.Р., Юаміев, Ю.Ї., Зсптией, Ї., Вгоепіпд, Н.МУ., Мемрогі, 5.Ю0., БІіКкКег, ММ Ог., Ноївоп, К.К. ка 1994. Рипйпег віцдіев ої (Ше гоїе ї пурегійегтіа іп теї(атрпеї(а-тіпе пеигоїохісйу. 9. РІпагтасої. Ехр. Тег. 268/3: 1571-1580 во 51. СоІе, О.Р., Зи!ПШмап, М.Н.Р., ЕїІдег, М.О. 1993. Тпе "іпіепеиКіп-1 гесеріог апіадопізбї із а рагііаї адопіві ої рговіадіапаїп зупіпезіз Бу питап адесідцаї! сеїІв. Рговіадіапаінз 46/6: 493-498 52. депКіпв, 9У.К., Агепа, МУР. 1993. ІпіепеиКіп 1 гесеріог апіадопіві ргодисіоп іп питап топосу(ев ів іпдисей бу І -ІаІрна, 1-3, апа І -4 апа М-С5Р. СуюкКіпе 5/5: 407-415 53. Сосеапі, ЕР., Іеев, .)., Кейога, .-., Вівпаї, !. 1992. ІпіепПеиКіп-1 гесеріог апіадопіві: еПесіїмепевз5 65 адаїпві іпіегіецикКіп-1 Темег. Сап. У. Рпагтасої. 70 (12): 1590-1596 54. Зспіго, К., ІГопдопі, О., Ковві, М., Мадіїа, 0., ЮОопі, А., Агвига, М., Саїтага, О., Мавзега, 0.,

Маппіег, В., Оіпагейо, С.А., Катрваїаї, А., Віопаі), А. 1994. Биурргевзвіоп ої |мепі спгопіс туеодепоийв

Іеикетіа соЇопу дгоулй Бу іпіепеикіп-1 гесеріог апіадопіві. Віоса 83/2: 460-465 55. МУаївоп, М.Ї., Зтійй, О., Воигпе, А.О., Тпотрзоп, К.С., МУевіміскК, 9У. 1993. СуфоКіпез сопігібшіе Юю аігплау адувзтипсіоп Пурегтеасіїміу, риітопагу еовзіпорпіЇ асситиацйоп апа іїштог песговів Тасіог депегайоп Бу рге-ігеайтепі м/йй ап іпіепеикіп-1 гесеріог апіадопіві. Ат. .). Кегзріг. СеїЇ Мої. Вісі. 8 (43: 365-369 56. Арпуапкаг, В., СШШапа, О.0., БРетага, 9У.|.М. 1993. ІпіегеиКіп-ї ів а сгйісаї еПесіог птоїесше дигіпуд о суїокіпе дузгедшіайоп іп дгай-мегзи8-пові дізеавзе йо о тіпог Півіосотрайрійу апіідепв.

Тгапзріапіайоп 56/6: 1518-1523 70 57. ІГап, Н.М., Мікоїїс Раїегвоп, Ю.)., 7агата, М., Маппісе, ..Ї., АїКіпз, К.С. 1993. Зирргезвіоп ої ехрегітепіа! сгезсепіїс діотегцІоперніїіз Бу (Пе іпіегіецкіп-І| гесеріог апіадопіві. Кідпеу Іпі. 43 (2): 479-485 58. Негме, Р. 1993. Ргемепіоп апа ігеайтепі ої асце СОмМНО - Мем/ тоааїйев. Мом. Кем. Ег. Нетаїйо). 35/3: 295-297 59. Сопії, Р., Рапага, М.К., Ваграсапе, К.С., Ріасідо, Е.С., Воподгагіо, М., Кеаіе, М., Оетрзеу, К.А,, 7/5 Ніоге, З. 1992. ВіосКіпу (Пе іпіепеийкіп-І гесеріог іпрірі5 Іеикомїіепе 84 апа рговіадіапай 2 депегайоп іп питап топосуїе си(игев. СеїЇ Іттипої. 145 (1): 199-209 бО. Кгізіепзеп, М., ЮОеїецгап, В., Ееду, О0.9., ЕРеідтапи, М., Вгеафйтпаси, 5.М., Вгеппап, Б.М. 1992.

Оівіібшіоп ої іпбіепеиКіп-ї гесеріог апіадопіві ргоїеіп (ІКАР), іпіепеикіп-7 гесеріог, апа іпепеикіп-1 аїрпа іп погта! апа рзогіайс в8Кіп, ЮОесгеазей ехргеззіоп ої ІКАР іп рзогіа-їїс Іевіопа! ерідегтів. Вг. 3. Вегтайо). 127 (4): 305-311 61. Котего, К., бЗершімеда, МУ., Магог, М., Вгапаї Р. Соцйоп, О.В., Оіпагейо, С.А., Міїспеїї, М.О. 1992.

Те паїйшга! іпіегіеиКкіп-1 гесеріог апіадопіві іп їепт апа рге-їегт рагіигйоп. Ат. .). ОбБвг(еїйї Супесої. 167 (4 РІ 1): 863-872 62. ОіпагеМйо, С.А. 1992. Кейисіоп ої іпатютайоп Бу десгеавіпд ргодисіоп ої іпіегпеиКіп-ї ого Бу сч ов зресійс гесеріог апіадопізт. Іпі. у. Тізвце. Кеасі. 14 (2): 65-75 63. Сопії, Р., Рапага, М.К., Ваграсапе, К.С., Вопдгаліо, М, ЮОетрзеу, К.А., Кеаіе, М. 1993. Нитап (8) гесотбріпапі 1.1 о гесеріог апіадопівї (1 -ІКа) іпрірі5 Іеокойіепе 84 депегайоп їйот питап топосуїе зиврепвіопз зіїтціагеа бу Ігророїузасснпагіде (І РБ). Сііп. Ехр. Іттипої. 91/3: 526-531 64. ЮОегБогде, І.Е., Тгасеу, О.Е., Кеппеу, .5., Кетіск, 0.0. 1992. ІпіепеиКіп-1 гесеріог апіадопіві с зо ргоїеїп іппіріїз іпіепейкКіп-8 ехргеввіоп іп ППророїузасспагіде-вітией Питап м/поїе бБіоод. Ат. .. Раїйої. 140 (5): 1045-1054 о 65. Рогаї, К., Роцівіака, О.О., Мійег, Ї.С., Огапом/й», Е.М., Оіпагейо, С.А. 1992. ІпепеиКіп-1 (1-1) М гесеріог ріосКаде гедисез епдоїохіп апа Вогтеаїйа Бигодог-Тегі-вітиціаєсй 1/-8 вупійевзів іп питап топосіеваг сеїІв. Разеб. .). 6 (7): 2482-2486 ї- 66. Воегптеевіег, М.А., мап Іеецмеп, Р.А.М., Зсппеїдег, А.)., НоцаїйкК, А.Р.)., Репмегда, С.С., МУездогр, ю

К.І.С. 1993. Іпбепеикіп-1 гесеріог апіадопізб А пем/ (пегареціїс адепі іп (Ше ігеаійтепі ої зеріїс зупаготе.

Меа. Тій-5Спг. Сепеезкв. 137/7: 337-342 67. Зтій, К.)., Спіп, 9У.Е., Зат, І.М., ЧУивієеп, УМ. 1991. Віоіодіс еПесів ої ап іпіегпецикіп-1 гесеріог апіадопівії оргоївіп оп о іпіегіеиКіп-1-вітиціайФвй сапіаде егозвіоп апа спопагосуїе гезропзімепезв. Агпзійів «

Пет. З4 (1): 78-83 в с 68. Сопії, Р. Ваграсапе, К.С., Рапага, М.К., Кеаїє, М., Ріасідо, Б.С., Егідаз, 5., Вопдгаліо, М., . Оетрзеу, К.А. 1992. Нитап гесотрбіпапі іпіегіеиКіп-1 гесеріог апіадопіві (ппі-Іга) еппапсез (Пе віітшайгу и?» ебПесі ої іпгіепеикіп-2 оп пайшгаї КіПег сеї! асіміу адаіпві МОЇ Т-4 (агодеї! сеїІв. Іпі. 9. Іттипорпагт. 14/6: 987-993 69. Зеїд, МУ., ТосКег, У. 1992. ЕПШесі ої іпіегіеикіп-ї гесеріог апіадопівї оп апііїдеп-іпдисей риїтопагу

Тезропвзез іп диїпеа рід. Ешг. /). Рпагтасої. 213/3: 331-336 с 70. МеСапву, Р.Г. ог. АрпуапКаг, 5., Мереп, 5., Мем/тап, с., Біей, С., Тпотрзоп, К.С., Вигакої, 5.).,

ГРетага, 9У.1.М. 1991. Іпрібйоп о ої іпіегпіеикКіп-ї ру ап о іпіеПецйкіп-ї гесеріог апіадопівї / ргемепів

Ш- дгай-мегвив-пові аізеазевз.Віоой 78/8: 1915-1918 -І 71. Евігом, 7, КигагосК, К., УУеслЛег, М., Капіагіап, Н., Віаке, М., Наїтів, О., СцуЧептап, 4.0., Таїра?,

М. 1991. Зирргевзвіоп ої спгопіс туеопдепоиз еиКетіа соопу голи ру іпіепецйкіп-1 (1-1) гесеріог о апіадопіві апа зоїЇцбріе 1-1 гесеріоге: А помеї арріїсайоп тог іппіріюогв ої ІІ -1 асіїмну. Віоса 78/6: 1476-1484

Ге 72. Тпотавз, Т.К.,, ММ, Р.С., бгімазіама, А., ММУйївоп, С.Ї., Нагбрізоп, М., ГіШе, ., Спезопіз, К.5.,

Рідпайейнйо, М., Зсптбіге, О., бутіпдіоп, 9., Кіїп, Р.Г., Тпотрзоп, К.С. 1991. Емаїцайоп ої ап іпепеикіп-1 гесеріог апіадопіві іп (пе гаї асеїйіс асіа-іпдисеа соїйів тодеї. Адепів Асіопе 34/1-2: 187-190 73. Сапег, О.В., Оеїре!ї, М.К. уг., ЮОйпп, С.9У., Тотісн, С.5.С., Іарогає, А.Ї., Бідніот, 9.Ї., Вегдег, А.Е.,

ВіепКомувзкі, М.9У., Зцп, ЕБ.Б., МсЕмжап, К.М., Наїтів, /' Р.К.МУ., Мет, АМУ/., М/азгак, О.А. Спозау, 9.0., Зіеи, (Ф) Г.С., Нагдее, М.М., 2йгспег Мееїу, Н.А., Кеагдоп, І.М., Неїіпгіквоп, К.Ї. еї а). 1990. Ригіїсакоп, сіопіпд ка ехргезвіоп апа бБіоіодіса! спагасіегігайоп ої ап іпіегпіеикіп-1 гесеріог апіадопіві ргоївіп. Майте 344/6267: 633-638 74. | агвеп С.О, Апдеггоп А.О, Ареїіа Е., Орреппеїт ..9., Маїзизйпіта К., 1989. Зсіепсе 243: 1464; во 75. Іагвгеп 0.0., діпдцап Т., ОеєеіІецгапі В., Тпезігир-Редегзеп К. 1993, 1І/-10 із а роїепі гедшіайг ої (пе спетоїасіїс гезропзе ої топописіеаг сеїЇв5, Биї пої ої дгапиціосу(ев. .). Іпмеві. Оегптайо!. Мої 100, Мо 6 76. Запкой апа КгивзКкаІ! іп спаріег 1 ої "Тіте МУУагрз, Зігіпд Едіїв, апа МасготоЇесціевз: Те ТНеогу апа

Ргасіісе ої Зедоепсе Сотрагізоп" (Адаізоп-УУезієу, Кеадіпод, Мазв. 1983) . 77. ВеггоївКу, Зсіепсе 229, (1985) 932-940 65 78. Воуле еї аі., Зсіепсе 247, (1990) 1306-1310 79. Маззегтап еї аї., У). Іптипої. 87, 1961, 290-295

80. І еміпе еї аіІ., Меййодз іп Епгутоїіоду 11, 1967, 928-936 81. І еміз еї аїі., Віоспетівігу 22, 1983, 948-954 82. Кепе де УМ/ааі Маїеці, дойп Аргапат», Вгисе Веппеї,

Сап с. БРіддог апа дап ЄЕ. де Мгіеєв (1991), Іпіепеикіп 10 (11-10) Іппірії СуюКіпе Зупіпезів Бу Нитап

Мопосуїег: Ап Аціогедціагу Коїе ої 1-10 Ргодисей Бу Мопосуїезв. у). Ехр. Мед. 174, 1209-1220 83. 520Ка еї аі|., Апп. Кеу. Віорпуз. Віоепад. 9, 1980, 467 84. 5 Раїепі Мо. 4,235,871 85. 05 4,501,728 86. 05 4,837,028. 70 87. МУамег Н. СойЦер, допйп 5. АбБгатв, доаппа М. МУУаївоп, ТПпіегу 9. Меїш, допаїйап 5. Вегек, Оопіе

Магіпе2-Мега (1992), Ргевзепсе ої іпіегіешКіп 10 (11-10) іп (Ше азсіев ої райМепів м/йй омагіап апа оїйпег іпіга-ардотіпа! сапсегв. СуюкКіпе 4, Мо. 5, 385-390 88. Віапспо 0., Р. Сіапейо, ЗИ. Септапа, М. Ваеївспег, ЮО.Н. Засиз апа Сг. Гебицегп (1995), МоїІесшаг ідепійісайоп о ої орогсіпе іпіепейкіпй 10: Кедшціайоп ої оехргезвіоп іп Кідпеу айодгаї тоде!ї. Ргос. Май. 7/5 Асад. Зеї. ОА 92, 2800-2804 Й

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

(1) ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ: () ЗАЯВИТЕЛЬ: (А) ИМЯ: Месотеа БАК А/З (В) УЛИЦА: Р.О. Вох 1911, І егогамегеме)| 59 (С) ГОРОД: Копенгаген 8 (0) СТРАНА: Дания (Р) ПОЧТОВЬЙ КОД (2ІР): 2300 (ї) НАЗВАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ: Иммуномодуляторь! сч (ії) ЧИСЛЕННОСТЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙИ: 23 (м) ФОРМА КОМПЬЮТЕРНОГО СЧИТЬІВАНИЯ: і) (А) ТИП СРЕДЬ!: Гибкий диск (В) КОМПЬЮТЕР: ІВМ РО-совместимьй (С) ОПЕРАЦИОННАЯ СИСТЕМА: РО-Б0О5/М5-БбО5 с зо (0) ПРОГРАММНОЕЄ ОБЕСПЕЧЕНИЕ: Патент, Редакция 21.0, Версия 21.30 (ЕРО) (2) ИНФОРМАЦИЯ О 5ЕО ІО МО: 1: о () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: М (А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота ї- (С) НИТЬ: ю (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид (хі) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 1: «

Ала Тир Що Тре Мет 7 Иле Арг Асн 2 с з (2) ИНФОРМАЦИЯ О 5ЕО ІО МО: 2: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 9 аминокислот 75 (В) ВИД: АМИНОКИСЛОТА й (С) НИТЬ: - | (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид їв. (хі) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 2: о 50

Ала Тир Мет Тре Иле Лиз Мет Арг Асн їз 1 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 3: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: о (А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота ю (С) НИТтьЬ: (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная 60 (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ: пептид (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІЮО МОЗ:

Ала Фен Мет Тре Лей Лиз Лей Арг Асн 1 5 б5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО 4:

() ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ: (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІЮ МО 4: 70 Ала Тир Мет Тре Мет Лиз Вал Арг Глу 1 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 5: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 9 аминокислот т (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ: (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид 2 (хі) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 5:

Гли Тир Мет Тре Мет Лиз Иле Арг Асп 1 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 6: с () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: о (А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ: (Ф) ТОПОЛОГИЯ: линейная с (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ: пептид о (хі) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 6: ча

Ала Фен Мет Тре Мет Лиз Иле Арг Асп їм 1 5

ІС в) (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 7: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота « (С) НИТЬ: - с (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная й (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид "» (хі) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 7:

Ала Тир Иле Тре Мет Лиз Иле Арг Асп с 1 5 -і (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 8: -1 () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ; (А) ДЛИНА: 9 аминокислот («в) 50 (В) ВИД: аминокислота

Кз (С) НИТЬ:

Р) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид (хі) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 8:

ГФ) Ала Тир Лей Тре Мет Лиз Иле Арг Асп юю 1 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 9: 60 () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ: (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная бо (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ: пептид

(хі) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 9:

Ала Тир Вал Тре Мет Лиз Иле Арг Асп 1 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 10: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота то (С) НИТЬ: (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 10:

Ала Тир Мет Тре Иле Лиз Иле Арг Асп 1 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 11: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ: (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ТИП МОЛЕКУЛЬ!: пептид с (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІЮО МО:11: о

Ала Тир Мет Тре Лей Лиз Иле Арг Асп 1 5 с (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 12: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: о (А) ДЛИНА: 9 аминокислот ча (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ: в (0) ТОПОЛОГИЯ: линейная ю (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 12:

Ала Тир Мет Тре Вал Лиз Иле Арг Асп « ! 5 о) с (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 13: :з» () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 9 аминокислот 15 (В) ВИД: аминокислота сл (С) НИТЬ: (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная -і (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид -1 (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 13: ав) 20 Ала Тир Мет Тре Мет Лиз Иле Арг Асп 1 5

Ко) (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 14: (ї) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 59 (А) ДЛИНА: 9 аминокислот

ГФ) (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ: де (0) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид 60 (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 14:

Ала Тир Мет Тре Мет Лиз Мет Арг Асп 1 5 65 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 15: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:

(А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ: (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 15:

Ала Тир Мет Тре Мет Лиз Вал Арг Асп 70 1 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 16: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота т (С) НИТЬ: (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 16:

Ала Тир Мет Тре Мет Лиз Иле Арг Глн 1 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО І МО: 17: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: с (А) ДЛИНА: 9 аминокислот о (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ: (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид с (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 17: о

Ала Тир Мет Тре Мет Лиз Иле Арг Глу у 1 5 м (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 18: ою () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ: « (Б) ТОПОЛОГИЯ: линейная - с (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид з» (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 18: п

Сер Про Гли Глн Гли Тре Глн Сер Глу ! 5 й (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 19: -і () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 6 аминокислот -І (В) ВИД: аминокислота

ФС (снить:

Кз (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 19; 29 Тре Хаа Лиз Хаа Арг Хаа

ГФ) 1 5 о (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 20: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 6о (А) ДЛИНА: 7 аминокислот (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ; (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид б5 (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 20:

Хаа Тре Хаа Лиз Хаа Арг Хаа 1 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 21: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 8 аминокислот (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ: /0 (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 21:

Хаа Хаа Тре Хаа Лиз Хаа Арг Хаа 1 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 22: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ДЛИНА: 9 аминокислот (В) ВИД: аминокислота (С) НИТЬ:

Р) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: пептид (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 22: с

Хаа Хаа Хаа Тре Хаа Лиз Хаа Арг Хаа о 1 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5ЕО ІО МО: 23: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: с (А) ДЛИНА: 27 пар оснований (В) ВИД: нуклеийновая кислота о (С) НИТЬ: одиночная ч- (6) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ї) ВИД МОЛЕКУЛЬ!: ДНК (геномная) - (хі) ОПИСАНИЄ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО МО: 23: юю

СССТАСАТОА СААТОААСАТ АСОСАААС

Claims (54)

1. Формула винаходу «
2. с 1. Полипептид длиной самое большее в 100 аминокислотньїх остатков, которьій включает в себя следующую ц последовательность: и? Тиг-Х і-Гув-Хв-Аго-Хв (ЗЕО 0 Мо : 19), 45 сл где Ху; и Хв независимо вьібраньй из группьі, состоящей из Меї, Пе, Гей и Маї, и Х 5 вьібирают из группь, - состоящей из Авзп, Авр, іп и СІМ, и которьій обладаєет по меньшей мере одним из нижеследующих свойств: -І а) индуцирует ингибирование спонтанной продукции 1-8 моноцитами человека, 50 б) индуцируєт ингибированиє /-Їд -индуцируемой продукции /-8 мононуклеарньми клетками о периферической крови человека (РВМО), що) в) индуцирует продукцию белка-антагониста рецептора интерлейкина-1 (ІКАР) моноцитами человека, г) индуцирует іп міго хемотаксическую миграцию СО8"-Т-лимфоцитов человека, д) десенсибилизирует СО8"-Т-клетки человека, приводя к ареактивности в отношений г -10, е) вьізьіваєт супрессию хемотаксического ответа СЮО4"-Т-лимфоцитов человека на І! -8, ГФ) ж) вьізьівает супрессию хемотаксического ответа моноцитов человека на МСАР/МОР-1, ГФ з) индуцирует продукцию ІІ -4 культивируемьми СО4"-Т-клетками здоровьїх людей, и) снижает продукцию ТМЕЄ: в реакции смешанньїх лейкоцитов человека. во 2. Полипептид по пункту 1, отличающийся тем, что включает в себя следующую последовательность: Ха-Тпі-Х д-Г ув-Хв-Аго-Хв (ЗЕО 10 Мо : 20), где Хз, Ху; и Х5 независимо вьібрань из группьї, состоящей из Меї, Пе, І ей и Маї, и бо Хе вьібран из группьі, состоящей из Азп, Авр, Сіп и СІМ.
3. 3. Полипептид по пункту 1, отличающийся тем, что содержит следующую последовательность: Хо-Ха-Тпг-Ха-І ув-Хв-Агд-Хв (ЗЕО 10 Мо: 21), где Хо представляет собой Туг или Ре, Хз, Ху; и Хо независимо вьібрань из группьї, состоящей из Меї, Іе, Гец и Маї, и Хе вьібран из группьі, состоящей из Азп, Авр, Сіп и СІМ. 70
4. 4. Полипептид по пункту 1, отличающийся тем, что включает в себя следующую последовательность: Х1-Хо-Ха-Тпг-Х д-І ув-Хв-Аго-Хв (ЗЕО 10 Мо 22), где Хі представляет собой Аа или Су, 19 Х»о представляет собой Туг или Ре, Хз, Ху; и Х5 независимо вьібрань из группьї, состоящей из Меї, Пе, І ей и Маї, и Хе вьібран из группьі, состоящей из Азп, Авр, Сіп и СІМ.
5. 5. Полипептид по любому из пунктов 1-4 отличающийся тем, что содержит по меньшей мере 12 аминокислот.
6. б. Полипептид по любому из пунктов 1-4 отличающийся тем, что содержит по меньшей мере 15 аминокислот.
7. 7. Полипептид по любому из пунктов 1-4 отличающийся тем, что содержит по меньшей мере 11 аминокислот.
8. 8. Полипептид по любому из пунктов 1-4 отличающийся тем, что содержит по меньшей мере 10 с 29 аминокислот. о
9. 9. Полипептид по пункту 1, отличающийся тем, что имеет аминокислотную последовательность, вбиібранную из группь, состоящей из: А1а-Тук-Мес-ТпК-тТ1е6-Буз-Меє-Ага-Ав5п (5ЕО ІЮ Шш:2), сч А1а-Рпе-Меє-Тіг-Бешп-Пуз-пец-АгоЯ-Авп (5ЕО ІО їШ :3), о А1іїа-Тук-Меє-Тпг-Мет-Гув-УМа1-Аку-С1й (5ЗЕО ІБ Ж :4), м бій-Тук-Мес-Тпх-Мес-Пуз-Іт11е-Аку-Авр (ЗО 10 Ж :5), Кк Аїа-Рюе-Мес-Трху-Мес-Пуз-І1е-Акуд-Авр (ЗЕО ІБ її :6), ІС в) Аїа-Тук-І1е-Трк-Мес-Гу5-11е-Агу-Азр (5ЕО ІВ ЖшЖб:7), А1а-Тук-Пеш-ТЬк-Мек-Буз-І1е-Ахк9-Азр (5ББЕО ІВ м :8), Аз1а-Тук-Уа1-ТПк-Меє-Пуз-І1е-Агу-Азр (5ББЕО 10 Б :9), « А1а-Тук-Меб-тТіг-І11е6-Буз-І11е-Агу-Азр І5ЕО 10 Ж :10), - с А1а-Туг-Мес-Тік-ГПец-Гу5-11е-Агу-Азр (ЗЕО Ір т :11), з А1а-Тук-Мес-ТЬг-Ма1-Гуз-І1е-Агуд-Азр (ЗБО ІРО в :12), А1т1а-Тук-Мес-ТпЕ-Мес-Гуз-І11е-Ак9-Азр (5БЕО ІВ м 13), сл 15 Аїа-Тук-Мес-ТпПпг-Мес-пуз-Месє-Агу-Азр (5БЕО І Ж :15), - Ата-Тук-Мет-ТПх-Мес-Буз-Уа1-Аку-Авр (ЗЕО ІО шо :15), А1а-Тук-Мес-Трхи-Мес-1у5-І1е-Агу-с1іп (5ЕО Ір ш :16), і А1та-Тук-Мес-ТрПхк-Месє-Пув-І1е6-Акд-сТц (БЕО Тр В о :17). У - («в)
10. 10. Полипептид по пункту 1, отличающийся тем, что он находится в чистой форме. Кз
11. 11. Полипептид, имеющий формулу Х1-Хо-Ха-Тпг-Х і- І ув-Хв-Аго-Хв (ЗЕО 10 Мо: 22), где Ф! Хі представляет собой Аїа или Су, юю Хо представляет собой Туг или Ре, Хз, Ху; и Х5 независимо вьібрань из группьї, состоящей из Меї, Пе, І ей и Маї, и Хе вьібран из группьі, состоящей из Азп, Авр, Сіп и СІМ. 60
12. 12. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Х/ представляет собой Аа.
13. 13. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Х/ представляет собой СОІУ.
14. 14. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Хо представляет собой Туг.
15. 15. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Хо представляет собой РнНе.
16. 16. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Хз представляет собой Меї. бо
17. 17. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Хз представляет собой Пе.
18. 18. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Хз представляет собой і еи.
19. 19. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Хз представляет собой Ма).
20. 20. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Ху. представляет собой Меї.
21. 21. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Ху; представляет собой Іе.
22. 22. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Ху. представляет собой І еи.
23. 23. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Ху; представляет собой Ма).
24. 24. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Хв представляет собой Меї.
25. 25. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Х5 представляет собой Іе. 70
26. 26. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Х5 представляет собой І еи.
27. 27. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Х5 представляет собой Ма).
28. 28. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Хе представляет собой Агр.
29. 29. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Хе представляет собой іп.
30. 30. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Хе представляет собой Си.
31. 31. Полипептид по пункту 11, отличающийся тем, что Хо; представляет собой Авп.
32. 32. Полипептид, имеющий формулу Хо-Ха-Тпг-Х-І ув-Хв-Аго-Хв (ЗЕО 0 Мо: 21), где Хо» представляеєт собой Туг или РНе, Хз, Ху; и Х5 независимо виьібрань из группьі, состоящей из Меї, Пе, Геи и Маї, и Хе вьібран из группьі, состоящей из Азп, Авр, Сіп и СІМ.
33. 33. Полипептид, имеющий формулу сч Ха-Тие-Х д-іув-Хв-Аго-Хв (ЗЕО 10 Мо : 20), о где Хз, Ху; и Х5 независимо вьібрань из группьї, состоящей из Меї, Пе, І ей и Маї, и Хе вьібран из группьі, состоящей из Азп, Авр, Сіп и СІМ. с
34. 34. Полипептид, имеющий формулу о Тиг-Х д-Гув-Хв-Ага-Хв (ЗЕО 0 Мо : 19), - ча где Ху и Хв независимо вьібрань из группьії, состоящей из Меї, ГІе, І ем и Маї, и Іо) Хе вьібран из группьі, состоящей из Азп, Авр, Сіп и СІМ.
35. 35. Полипептид, имеющий аминокислотную последовательность Аїа-ТтуіМе-тпг-Мейні уз-Пе-Ага-АБп. (ЗЕО ІО Мо : 1). « - с
36. 36. Вещество, которое представляет собой полипептид по пункту 1, соль, сложньій зфир или коньюгат указанного полипептида. з
37. 37. Вещество по пункту 36, отличающееся тем, что коньюгат представляет собой коньюгат сахарного остатка или коньюгат полизтиленгликоля указанного полипептида.
38. 38. Вещество по пункту 36, отличающееся тем, что обладает по меньшей мере одним из свойств (а)-(и), с указанньх в пункте 1.
39. 39. Полипептид, которьій включаєет в себя аминокислотную последовательность, представленную в любом - из пунктов 1-35, при условийи, что полипептид не является ІІ -10 человека. -І
40. 40. Молекула ДНК, кодирующая полипептид по пункту 1.
41. 41. Антитело, которое специфически связьівваєтся с полипептидом по пункту 1. о
42. 42. Антитело по пункту 41, отличающееся тем, что оно специфически связьмшваєтся с полипептидом, Із имеющим формулу Тиг-Х д-Гув-Хв-Ага-Хв (ЗЕО 0 Мо : 19), где ГФ) Ху и Хв независимо вьібрань из группьії, состоящей из Меї, ГІе, І ем и Маї, и ГФ Хе вьібран из группьі, состоящей из Азп, Авр, Сіп и СІМ.
43. 43. Антитело по пункту 42, отличающееся тем, что оно специфически связьмшваєтся с полипептидом, имеющим формулу бо Аїа-Туг-Ме-Тниг-Мей-і уз-Пе-Агда-Авп. (ЗЕО ІО Мо 71).
44. 44. Антитело по пункту 42, отличающееся тем, что оно специфически связьмшваєтся с полипептидом, вьібраньїм из группь!: б5

    А1а-Тук-Мес-Тіг-Іт11е-Бувз-Меб-Агд-Ав5п (5ЕО ІЮ ш :2), А1а-Рпе-Меє-Тіг-Бешп-Пуз-пец-АгоЯ-Авп (5ЕО ІО їШ :3), А1іїа-Тук-Меє-Тпг-Мет-Гув-УМа1-Аку-С1й (5ЗЕО ІБ Ж :4), бій-Тук-Мес-Тпх-Мес-Пуз-Іт11е-Аку-Авр (5БО 10 в :5), А1їа-Рюке-Меє-Тру-Меб-Гуз-Т11е-Аку-Авр (5БЕО ІВ Жб:6), Аїа-Тук-І1е-Трк-Мес-Гу5-11е-Агу-Азр (5ЕО ІВ ЖшЖб:7), 0 діа-тук-цеп-ТЬк-Мек-Буз-І1е-Агд-Азр (5ЕО ІЮ м :8), Аз1а-Тук-Уа1-ТПк-Меє-Пуз-І1е-Агу-Азр (5ББЕО 10 Б :9), А1а-Тук-Меє-Трг-І1е-Буз-І1е-Ак9у-Азр І5БО 10 т :10), 75 А1а-тУук-Мес-Тпг-Пецш-ГПу5-11е-Агу-Азр (ЗБО Тр т :11), А1а-Тук-Меб-ТЬг-Уа1-Буз-І1е-Аг9Ч-Азр (5ЗЕО ІВ Ж :12), А1т1а-Тук-Мес-ТпЕ-Мес-Гуз-І11е-Ак9-Азр (5БЕО ІВ м 13), Аїа-Тук-Мес-ТпПпг-Мес-пуз-Месє-Агу-Азр (5БЕО І Ж :15), Аіа-Тук-Мес-Трк-Мес-Буз-Уа1-Агу-Авр (ЗЕО І Ж :15), А1а-Тук-Мес-Трхи-Мес-1у5-І1е-Агу-с1іп (5ЕО ІЮ шШ :16), А1та-Тук-Мес-ТрПхк-Месє-Пув-І1е6-Акд-сТц (БЕО Тр В о :17).
45. 45. Антитело по любому из пунктов 41-44, отличающееся тем, что способно нейтрализовать по меньшей «СМ мере одну из активностей (а)-(и), указанньх в пункте 1. о
46. 46. Антитело по любому из пунктов 41-45, отличающееся тем, что представляет собой поликлональное антитело.
47. 47. Антитело по любому из пунктов 41-45, отличающееся тем, что представляет собой моноклональное антитело. с
48. 48. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пунктов 41-47. о
49. 49. Способ ослабления или нейтрализации вьісоких концентраций ПІЇ/-10 и/или міІ/-10, включающий применение антитела по любому из пунктов 41-47. -
50. 50. Способ лечения и/или предупреждения рака яичника и/или СПИДа, включающий введение пациенту м терапевтически или профилактически зффективного количества антитела по любому из пунктов 41-47.
51. 51. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по пункту 1. ІС)
52. 52. Полипептид по пункту 1, отличающийся тем, что его применяют для лечения или профилактики заболевания, вьібранного из группьі, состоящей из преждевременньмх родов, вьізванньіїх инфекцией или другими состояниями, ревматоидного артрита, артрита Лима, подагрь), септического синдрома, гипертермии, « неспецифического язвенного колита или ознтероколита, остеопороза, цитомегаловируса, заболевания периодонта, гломерулонефрита, хронического неинфекционного воспаления легких, образования гранулемь, - с фиброза печени, фиброза легких, отторжения трансплантата, заболевания "трансплантат против хозяина", а хронического миелоидного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, других неопластических заболеваний, ,» бронхиальной астмь), сахарного диабета типа 1 (инсулинзависимого), артериосклероза/атеросклероза, псориаза, хронического В-лимфоцитарного лейкоза, общей вариабельной иммунной недостаточности, побочньх действий других модификаторов биологического ответа, диссеминированной внутрисосудистой коагуляции, 1 системного склероза, знцефаломиелита, воспаления легких, синдрома гипер-ІдЕ-глобулинемии, знтероколитов, -1 ракового метастазирования и роста, адоптивной иммунной терапии, приобретенного респираторного дистрессо-синдрома, сепсиса, реперфузионного синдрома, постхирургического воспаления, трансплантации -і органов и алопеции. о 50
53. 53. Полипептид по пункту 1, отличающийся тем, что его применяют для производства фармацевтической композиции для лечения или предупреждения одного или более заболеваний, указанньмх в пункте 52. що)
54. 54. Способ лечения и/или предупреждения одного или более заболеваний, вьібранньїх из группь, состоящей из преждевременньїх родов, вьізванньх инфекцией или другими состояниями, ревматоидного артрита, артрита Лима, подагрьії, септического синдрома, гипертермии, неспецифического язвенного колита или знтероколита, остеопороза, цитомегаловируса, заболевания периодонта, гломерулонефрита, хронического о неинфекционного воспаления легких, образования гранулемь!, фиброза печени, фиброза легких, отторжения трансплантата, заболевания "трансплантат против хозяина", хронического миелоидного лейкоза, острого іме) миелоидного лейкоза, других неопластических заболеваний, бронхиальной астмьі, сахарного диабета типа 1 (инсулинзависимого), артериосклероза/атеросклероза, псориаза, хронического В-лимфоцитарного лейкоза, 60 общей вариабельной иммунной недостаточности, побочньїх действий других модификаторов биологического ответа, диссеминированной внутрисосудистой коагуляции, системного склероза, знцефаломиелита, воспаления легких, синдрома гипер-ІДЕ-глобулинемии, знтероколитов, ракового метастазирования и роста, адоптивной иммунной терапии, приобретенного респираторного дистресс-синдрома, сепсиса, реперфузионного синдрома, постхирургического воспаления, трансплантации органов и алопеции, включающий введение пациенту 65 терапевтически или профилактически зффективного количества полипептида по пункту 1.