UA46005C2 - Спосіб одержання фактора ix із біологічних джерел та фактор, одержаний вказаним способом - Google Patents
Спосіб одержання фактора ix із біологічних джерел та фактор, одержаний вказаним способом Download PDFInfo
- Publication number
- UA46005C2 UA46005C2 UA97084352A UA97084352A UA46005C2 UA 46005 C2 UA46005 C2 UA 46005C2 UA 97084352 A UA97084352 A UA 97084352A UA 97084352 A UA97084352 A UA 97084352A UA 46005 C2 UA46005 C2 UA 46005C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- factor
- differs
- chromatography
- carried out
- plasma
- Prior art date
Links
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 claims abstract description 31
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 14
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 10
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 9
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 8
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical group OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 6
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 5
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 4
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 4
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 3
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 3
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 claims description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 13
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 4
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 4
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 2
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 description 2
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- 101001059734 Thermococcus litoralis (strain ATCC 51850 / DSM 5473 / JCM 8560 / NS-C) Trehalose/maltose-binding protein MalE Proteins 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000013060 ultrafiltration and diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
Спосіб приготування фактора IX із біологічних джерел методом хроматографії, який характеризується тим, що перед будь-якими хроматографічними сепараціями дане джерело піддають обробці протеїновим преципітувальним агентом.
Description
Опис винаходу
Даний винахід стосується способу приготування фактора ІХ із біологічних джерел методом хроматографії, а 2 також самого фактора ІХ, який може бути одержаний за способом, відповідним до даного винаходу.
Під час приготування фактора ІХ, наприклад із плазми крові, перш за все відділяють кріопреципітат.
Заморожену цитратну плазму розморожують і основну кількість фактора МІ ії фібріногену відділяють методом центрифугування. Отримана таким способом кріозбіднена плазма містить у собі вітамін К -залежні фактори скипання крові, величина активності яких становить 0,01 імунізуючої одиниці/мг (І/то) протеїну. 70 Згідно зі способом, який відомий із рівня техніки, вітамін К -залежні фактори скипання крові зв'язуються методом екстрагування з аніонообмінниками, наприклад з диетиламіноетилом (ОЕАЕ) Зерпадех, без поновлення ворожої дії альбуміну. Однак, внаслідок збіднених реологічних властивостей ОЕАЄЕ Зерпадех, дана операція повинна завжди виконуватися як операція екстрагування твердої фази у періодичному процесі. Фракції, отримані після елюювання ОЕАЕ Зерпадех, використовують як стартовий матеріал для очищення фактора ІХ. Однак у 72 даних фракціях здійснюється також збагачення протеаз, внаслідок чого спостерігають утрати у виході очікуваного матеріалу, тобто у виході фактора ІХ, із - за протеолітичного дигерирування, а також відмічають підвищення ризику тромбогенності препарату.
Задача, яку вирішує даний винахід, полягає у створенні і запровадженні способу, який знизив би вказані вище ризики без додавання інгібіторів протеази. Несподівано дійшлися висновку, що дану задачу можна вирішити за допомогою використання способу, основні ознаки якого визначені формулою даного винаходу.
Даний спосіб включає підцання обробці біологічного джерела, шо містить фактор ІХ, протеїновим преципітуючим агентом. Прикладом біологічного джерела, зокрема, є плазма крові або кріопреципітат, із якого еліміновані фактор МІ і фібріноген (кріозбіднена плазма).
Концентрація протеїнового преципітуючого агента, зокрема, становить від 1,5 до 2,Змол/л, перевагу має : с від 1,75 до 1,9мол/л. Значення відносяться до концентрацій протеїнового преципітуючого агента, які є у Ге) наявності у джерелах, що містять фактор ІХ (кінцева концентрація).
Зокрема, сульфат амонію визнають за протеїновий преципітатний агент.
Спосіб, відповідно до даного винаходу, знижує протеолітичну активність, при наймі, на один порядок величини. Крім того, інтерферентні компоненти, наприклад фактор МІ! і фактор ІІ, видаляють завдяки операції о осадження перед здійсненням операції хроматографічного очищення фактора ІХ. Також елімінують протеїни С і ав
З. У випадку з фактором МІЇ може бути досягнута майже повна елімінація. Фактор І також може бути елімінованим майже у повній мірі (від 70 до 9095), тоді як елімінація протеїнів С і 5 становить лише близько 50 90. о
У поверхневому шарі фракції, що піддається обробці протеїновим преципітуючим агентом, активність Ге) фактора ІХ, звичайно становить від 20 до 30 імунізуючих одиниць / мг (ІШ/та), що відповідає питомій активності від 1 до 5 імунізуючих одиниць / мг (ІШ/та). З
Згідно з даним винаходом, операцію осадження, переважно ту, яку здійснюють з використанням сульфату амонію, виконують з подальшою хроматографічною сепарацією Фракції, що збагачена фактором ІХ. Позитивним є те, що в умовах високих концентрацій солі протеїни можуть відчувати на собі результати різної міри « гідрофобних взаємодій. Відповідно до даного винаходу, фактор ІХ, переважно, вступає у зв'язок у присутності З відносно високих концентрацій солі, наявність яких спостерігають при опротеїновому осадженні, з с хроматографічним матеріалом, що здатний приймати участь у процесі гідрофобної хроматографії (НІС). У той же з» час, цим знижують високу концентрацію солі, що отримують внаслідок протеїнового осадження. Зокрема, мають можливість використовувати хроматографічний матеріал, що вже приєднав на матеріалі субстрату гідрофільну гнучку вітку (щупальце). До даних спейсерів ковалентним зв'язком приєднані відповідні ліганди, зокрема гідрофобні ліганди, наприклад пропіл, бутил, фенілові групи. шк Поверхневий шар фракції, яку піддавали обробці протеїновим преципітуючим агентом, наносять на
Ге») відповідний хроматографічний матеріал і можуть промивати. Елюювання фактора ІХ, приєднаного до колонки, який ще містить у собі фактор ІХ, може виконуватися буфером, що включає у невисокій концентрації протеїновий о преципітуючий агент, причому іонна сила розчину елюенту таким способом знижується по відношенню до ав! 20 розчину, який використовують для нанесення на хроматографічний матеріал. Фракція, що містить фактор ІХ, який отримують методом елюції із хроматографічної колонки, що включає матеріал гідрофобної хроматографії сл (НІС), збирають і піддають подальшій опріснювальній обробці з використанням відповідних засобів. Така обробка може здійснюватися, наприклад, методом ультрафільтрації і/або діафільтрації.
Наступне відділення фактора ІХ, наприклад від супроводжуючого фактора Х виконується у варіанті виноходу, 29 що становить перевагу, методом афінної хроматографії на гепарін - модифікованому субстраті. Коли іонна сила
ГФ) розчину, який включає дані фактори, є відносно низькою, останні будуть приєднуватися до хроматографічного матеріалу. Елюювання інтерферентного фактора Х, якщо такий є, здійснюють завдяки обробці розчином, що о містить хлорид натрію з концентрацією від 150 до ЗОО0ммол/л. За такими умовами, фактор ІХ буде залишатися зв'язаним з гепарин - афінним субстратом. При зростанні іонної сили розчину, приблизно, у два рази фактор ІХ 60 почне відділятися від поверхні афінного субстрату.
Знезараження вірусу може відбуватися завдяки здійсненню відповідних хімічних та/або фізичних процесів.
Фізичний метод знезараження вірусу полягає, головним чином, у тепловій обробці відповідної фракції при температурі від 60 до 657С протягом проміжку часу від 5 до 30 годин. Таку теплову обробку можуть здійснювати, зокрема, після супроводжуючої гепарин - афінної хроматографії. Хімічний метод знезараження вірусу полягає, бо наприклад, у обробці фракції, що містить фактор ІХ, неонними поверхневими компонентами та діалкільними або триалкільними фосфатами. Зокрема, можуть використовуватися комбінації подвійного (Гмееп) та три-п-бутилового фосфату (ТМВР). Способи знезараження вірусу розкриті у ЕР 0131740 або у роботі: Ногом/її еї аІ. Віосд, 79 (1992)826.
Способи знезараження вірусу можуть бути також комбінованими, наприклад такими, які розкриті у УМО 94/1734. Перевагу становить ситуація, коли хімічне знезараження вірусу виконують після ультрафільтрації / діафільтрації, яку здійснюють після гідрофобної хроматографії.
Беручи за основу плазму, дійшлися висновку, що при використанні способу згідно з даним винаходом, повний вихід фактора ІХ' з високою мірою чистоти може підвищуватися на величину від 20 до 30905. 70 На фіг. показаний графік - схема послідовності операцій способу, відповідно до винаходу, який включає послідовні етапи хроматографічного очищення. Стрілки вказують, які фракції відділяються, а які залишаються у відповідних елюатах та поверхневих шарах.
Наведений нижче приклад ілюструє винахід.
Створюють умови для відтавання замороженої цитратної плазми і активізують її при температурі від О до 7/5. З'С. Фактор МИ Ї фібріноген відділлють методом центрифугування. Одержана кріозбіднена плазмова фракція містить вітамін -К-залежні агенти скипання крові з питомою активністю близько 0,01 імунізуючих одиниць /мг (ІШ/тоа). Подальший етап отримання (відлову) продукту включає екстрагування твердої фази або хроматографію на іонообмінниках диетиламіноетилу (ОЕАЕ), відділення імуноглобуліну (Ід) та альбуміну. Вітамін К-залежні агенти скипання крові характеризуються активністю, що становить від 10 до 50 імунізуючих одиниць і відповідає фактору збагачення близько 3500, виходячи з фактора ІХ.
Після відлову продукту наступає етап самого очищення. До фракції, яку отримують, після завершення етапу відлову додають сульфат амонію, щоб одержати кінцеву концентрацію близько 1,О0мол/л. Протеїни С із видаляють до 5095, тоді як фактор І видаляють у кількості від 70 до 90, а фактор МІ майже повністю.
Поверхневий шар, що отримують при осадженні сульфату амонію, піддають гідрофобній хроматографії на сч ов Відповідно модифікованому гелі зі щупальцями. Концентрація сульфату амонію у розчині, що використовується, становить 1, 7бмол/л. Буфер, що використовується, також містить іони фосфату. Результатом гідрофобної і) хроматографії є залишковий фактор МІ і фактор ІХ, який знаходиться у стані приєднання. Фактор Х буде приєднаним до матеріалу на 70 - 8095. Елюцію суміші фактор ЇХ / фактор Х виконують на розчині сульфату амонію, що містить від 1.2 до 1,4мол/л. Елюент - вільний від фактора МІ і не має значної протеолітичної ю зо активності. Питома активність фактора ЇХ у суміші фактор ЇХ /фактор Х становить від 5 до 15 імунизуючих одиниць / мг протеїну. о
Сульфат амонію, що є присутнім у елюаті, видаляють за допомогою ультрафільтрації та діафільтрації. о
Знезараження вірусу детергентами здійснюють обробкою 195 Тмж'ееп 80/0,395 ТМВР.
Далі, після відділення детергенту, одержану фракцію піддають гепариновій афінній хроматографії. Фактори Х ісе)
Її ЇХ повинні зв'язуватися з гепариновим гелем при низькій осмолярності (низьких осмотичних властивостях). «Е
Фактор Х отримують промиванням з використанням буферу, що містить О0,25мол/л Масі. Фактор ІХ повинні піддавати елюції при зростанні концентрації хлориду натрію до 0,45мол/л. Внаслідок цього, одержують фактор
ЇХ, присутність якого в елюаті характеризується від 30 до 50 імунізуючими одиницями / мл (ІШ/ті) з питомою активністю » 100. «
Отриману даним способом фракцію, що містить фактор ІХ, опріснюють і ліофілізують (висушують в умовах тв) с вакууму).
Claims (1)
- ;» Формула винаходу , Шк , Щі ши, їз 1. Спосіб одержання фактора ІХ із біологічних джерел за допомогою хроматографії, який відрізняється тим, що перед розділенням за допомогою афінної хроматографії вказане джерело піддають обробці сульфатом б» амонію у концентрації від 1,5 до 2,3 мол/л.о 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що як біологічне джерело використовують плазму крові або плазму, 5р Яку виснажено по фактору МІ! ії фібріногену шляхом відокремлення кріопреципітату (кріозбідненої плазми). («в») З. Спосіб за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що після осадження білка здійснюють видалення сульфату с амонію і збагачення фактора ЇХ шляхом адсорбції фактора ІХ на хроматографічному матеріалі, що здатний використовуватися для хроматографії з гідрофобною взаємодією (НІС).4. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що хроматографічний матеріал, який містить адсорбований фактор ІЇХ, обробляють водним розчином з іонною силою, яка призводить до відділення фактора ІХ від вказаного матеріалу для НІС. (Ф; 5. Спосіб за п. З або 4, який відрізняється тим, що фракції, які одержані після відділення фактора ІХ від ГІ вказаного матеріалу, піддають етапу, у якому зменшують концентрацію солі у розчині, що містить фактор ІХ, наприклад за допомогою ультрафільтрації або діафільтрації. во 6. Спосіб за п. 5, який відрізняється тим, що далі здійснюють афінну хроматографію на матеріалі субстрату, який модифіковано гепарином.7. Спосіб за одним з пп. від 1 до б, який відрізняється тим, що інактивацію вірусу здійснюють хімічними і/або фізичними засобами.8. Спосіб за п. 7, який відрізняється тим, що фізична інактивація вірусу включає теплову обробку при 60-65" С 65 протягом 5-30 годин, зокрема після здійснення афінної хроматографії на гепарині, відповідно до п. 6.9. Спосіб за п. 7, який відрізняється тим, що хімічна інактивація вірусу включає теплову обробку зразка,який містить фактор ІХ, неіонними детергентами / діалкілованими або триалкілованими фосфатами.10. Фактор, що одержаний відповідно до способу за одним із пунктів 1-9. с о ІС) «в) «в) (Се) « -с . и? щ» (22) («в) о 50 сл Ф) іме) 60 б5
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19506633A DE19506633A1 (de) | 1995-02-25 | 1995-02-25 | Verfahren zur Herstellung von Faktor IX aus biologischen Quellen |
| PCT/EP1996/000636 WO1996027003A1 (en) | 1995-02-25 | 1996-02-14 | A process for the preparation of factor ix from biological sources |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA46005C2 true UA46005C2 (uk) | 2002-05-15 |
Family
ID=7755037
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA97084352A UA46005C2 (uk) | 1995-02-25 | 1996-02-14 | Спосіб одержання фактора ix із біологічних джерел та фактор, одержаний вказаним способом |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5919909A (uk) |
| EP (1) | EP0811058B1 (uk) |
| JP (1) | JPH11500910A (uk) |
| KR (1) | KR100436857B1 (uk) |
| CN (1) | CN1105779C (uk) |
| AT (1) | ATE194167T1 (uk) |
| AU (1) | AU697217B2 (uk) |
| CA (1) | CA2213577C (uk) |
| DE (2) | DE19506633A1 (uk) |
| DK (1) | DK0811058T3 (uk) |
| EA (1) | EA000222B1 (uk) |
| ES (1) | ES2147365T3 (uk) |
| FI (1) | FI119377B (uk) |
| GR (1) | GR3034035T3 (uk) |
| IL (1) | IL117157A (uk) |
| MY (1) | MY119366A (uk) |
| PT (1) | PT811058E (uk) |
| UA (1) | UA46005C2 (uk) |
| WO (1) | WO1996027003A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA961450B (uk) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19506633A1 (de) * | 1995-02-25 | 1996-08-29 | Octapharma Ag | Verfahren zur Herstellung von Faktor IX aus biologischen Quellen |
| AT405608B (de) * | 1997-04-08 | 1999-10-25 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von pathogenen, insbesondere von viren, in einem biologischen material |
| WO2005033140A1 (ja) * | 2003-09-30 | 2005-04-14 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | 高純度血液凝固ｉｘ因子調製物およびその精製方法 |
| KR100567448B1 (ko) * | 2003-11-05 | 2006-04-04 | 주식회사 인투젠 | 형질전환 동물의 유즙 전처리방법 및 이를 통한 인체단백질의 정제방법 |
| DE602005024955D1 (de) | 2004-03-19 | 2011-01-05 | Baxter Healthcare Sa | Faktor ixa zur behandlung von blutungsstörungen |
| US10434492B2 (en) * | 2007-01-26 | 2019-10-08 | Sigma-Aldrich Co. Llc | Compositions and methods for solid phase extraction of lipids |
| US10928366B2 (en) * | 2007-01-26 | 2021-02-23 | Sigma-Aldrich Co. Llc | Compositions and methods for combining protein precipitation and solid phase extraction |
| JP5876868B2 (ja) * | 2010-03-30 | 2016-03-02 | オクタファルマ・アーゲー | 第ｉｘ凝固因子などのビタミンｋ依存性タンパク質の精製方法 |
| CN104560925B (zh) * | 2014-12-30 | 2017-11-03 | 山东泰邦生物制品有限公司 | 一种从人凝血因子ⅸ层析废液中激活制备人凝血酶的方法 |
| CN107540743A (zh) * | 2017-10-11 | 2018-01-05 | 南岳生物制药有限公司 | 一种双层析法制备人纤维蛋白原的方法 |
| CN111378029B (zh) * | 2018-12-29 | 2023-05-05 | 四川远大蜀阳药业有限责任公司 | 一种人凝血因子ix的制备方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE36457T1 (de) * | 1983-05-02 | 1988-09-15 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen krankheitserregern. |
| US4540573A (en) * | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| DE3877529T2 (de) * | 1987-10-23 | 1996-11-07 | Centre Regional De Transfusion | Herstellung von hoch-gereingtem menschlichen Faktor IX sowie anderem Plasmaproteinkonzentrat und dessen therapeutische Verwendung. |
| AT402261B (de) * | 1991-01-25 | 1997-03-25 | Immuno Ag | Komplex enthaltend den gerinnungsfaktor ix |
| DK0573605T3 (da) * | 1991-03-01 | 2001-01-02 | Rhone Poulenc Rorer Int | Fremstilling af faktor IX |
| EP0683678B1 (de) | 1993-02-09 | 1998-07-15 | Octapharma Ag | Verfahren zur inaktivierung von viren, die nicht mit lipidhüllen versehen sind |
| DE19506633A1 (de) * | 1995-02-25 | 1996-08-29 | Octapharma Ag | Verfahren zur Herstellung von Faktor IX aus biologischen Quellen |
-
1995
- 1995-02-25 DE DE19506633A patent/DE19506633A1/de not_active Ceased
-
1996
- 1996-02-14 CN CN96193308A patent/CN1105779C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-02-14 US US08/894,654 patent/US5919909A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-14 JP JP8525986A patent/JPH11500910A/ja active Pending
- 1996-02-14 EP EP96904778A patent/EP0811058B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-14 DE DE69609054T patent/DE69609054T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-14 DK DK96904778T patent/DK0811058T3/da active
- 1996-02-14 WO PCT/EP1996/000636 patent/WO1996027003A1/en active IP Right Grant
- 1996-02-14 AT AT96904778T patent/ATE194167T1/de active
- 1996-02-14 AU AU48761/96A patent/AU697217B2/en not_active Ceased
- 1996-02-14 EA EA199700196A patent/EA000222B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-02-14 KR KR1019970705853A patent/KR100436857B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-02-14 CA CA002213577A patent/CA2213577C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-02-14 PT PT96904778T patent/PT811058E/pt unknown
- 1996-02-14 ES ES96904778T patent/ES2147365T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-14 UA UA97084352A patent/UA46005C2/uk unknown
- 1996-02-15 MY MYPI96000576A patent/MY119366A/en unknown
- 1996-02-16 IL IL11715796A patent/IL117157A/xx not_active IP Right Cessation
- 1996-02-23 ZA ZA961450A patent/ZA961450B/xx unknown
-
1997
- 1997-08-22 FI FI973469A patent/FI119377B/fi not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-07-27 GR GR20000401725T patent/GR3034035T3/el not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR100436857B1 (ko) | 2004-09-21 |
| FI973469A (fi) | 1997-08-22 |
| DE19506633A1 (de) | 1996-08-29 |
| EP0811058A1 (en) | 1997-12-10 |
| ES2147365T3 (es) | 2000-09-01 |
| CN1105779C (zh) | 2003-04-16 |
| PT811058E (pt) | 2000-10-31 |
| AU4876196A (en) | 1996-09-18 |
| JPH11500910A (ja) | 1999-01-26 |
| AU697217B2 (en) | 1998-10-01 |
| DE69609054T2 (de) | 2001-03-08 |
| CN1181782A (zh) | 1998-05-13 |
| FI973469A0 (fi) | 1997-08-22 |
| EP0811058B1 (en) | 2000-06-28 |
| IL117157A (en) | 1999-12-22 |
| IL117157A0 (en) | 1996-06-18 |
| DE69609054D1 (de) | 2000-08-03 |
| EA199700196A1 (ru) | 1998-02-26 |
| CA2213577A1 (en) | 1996-09-06 |
| FI119377B (fi) | 2008-10-31 |
| EA000222B1 (ru) | 1998-12-24 |
| KR19980702453A (ko) | 1998-07-15 |
| DK0811058T3 (da) | 2000-10-16 |
| WO1996027003A1 (en) | 1996-09-06 |
| GR3034035T3 (en) | 2000-11-30 |
| ZA961450B (en) | 1996-08-27 |
| ATE194167T1 (de) | 2000-07-15 |
| US5919909A (en) | 1999-07-06 |
| CA2213577C (en) | 2005-01-04 |
| MY119366A (en) | 2005-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3094167B2 (ja) | 免疫血清グロブリンの精製方法 | |
| JP4218980B2 (ja) | 治療用の免疫グロブリンｇ濃厚液および該濃厚液の製造方法 | |
| EP0378208B1 (en) | Production method for protein-containing composition | |
| RU2025129C1 (ru) | Способ получения концентрата фактора viii и фактора фон виллебранда | |
| KR20100058520A (ko) | 인자 Ⅷ 및 폰 빌리브란트 인자(ｖＷＦ)의 정제 방법 | |
| UA46005C2 (uk) | Спосіб одержання фактора ix із біологічних джерел та фактор, одержаний вказаним способом | |
| SI9420008B (sl) | Postopek za izdelavo koncentrata anti-D imunoglobulina G in farmacevtski pripravek ,ki ga vsebuje | |
| US5281661A (en) | Complex containing coagulation factor IX | |
| EP0512883A1 (fr) | Concentré de facteur XI de la coagulation sanguine à haute activité spécifique, approprié à un usage thérapeutique et son procédé de préparation | |
| CN103328000A (zh) | 用于从含有凝血因子的溶液中减少和/或除去FXI和FXIa的方法 | |
| KR100383063B1 (ko) | 사람활성화단백질c제제및이의제조방법 | |
| JP2573467B2 (ja) | 第ｉｘ因子タンパク質を含有する治療用途に適した薬剤的組成物 | |
| KR100320394B1 (ko) | 멤브레인크로마토그래피시켜비타민-k의존형단백질을정제시키는방법 | |
| US5445958A (en) | Process for purifying blood clotting factors | |
| WO1999020655A1 (fr) | Procede de purification de substrats de thrombine et/ou d'inhibiteurs de thrombine ou procede d'elimination de ceux-ci | |
| WO1995004077A1 (fr) | Procede de purification du plasminogene | |
| UA43855C2 (uk) | Спосіб одержання вірусоінактивованої фракції, що містить фактор yiii, та фракція, що містить фактор yiii | |
| RU2353386C1 (ru) | Способ получения концентрата ix фактора свертывания крови человека | |
| JPH04365481A (ja) | トロンビンの製造法 | |
| KR960005734B1 (ko) | 혈섬유소 분해능을 갖는 프로테아제의 분리 정제방법 | |
| JPH03176500A (ja) | リポコルチン類の精製方法 | |
| CS273467B1 (en) | Method of precallicreine's and hageman's factor's from blood plasma standard concentrates preparation |