UA45967C2 - Похідні бензотіофену, бензофурану, індолтіазепінону, оксазепінону і діазепінону, фармацевтична композиція, що має інгібуючу клітинну адгезію або віл активність, спосіб гальмування адгезії лейкоцитів до ендотеліальних клітин при лікуванні хвороб, що визвані нею, спосіб лікування ссавців, що заражені віл - Google Patents

Abstract

Описано похідні бензотіофену, бензофурану, індолтіазепінону, оксазепінону і діазепінону. Зазначені гетероциклічні сполуки можуть гальмувати адгезію лейкоцитів до ендотелію судин і завдяки цьому можуть бути ефективними терапевтичними агентами для лікування запальних процесів. Крім того, ці сполуки можуть також інгібувати активацію вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ). (I)

Description

Опис винаходу

Изобретение относится к новьім гетероциклическим соединениям, обладающим биологической активностью, 2 более конкретно к производньім бензотиофена, бензофурана, индолтиазепинона, оксазепинона и диазепинона, фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей клеточную адгезию или ВИЧ активностью, способу торможения адгезий лейкоцитов к зндотелиальньмм клеткам при лечении вьізванньїх ею болезней и способу лечения млекопитающих, зараженньїх ВИЧем.

Адгезия лейкоцитов к сосудистому зндотелию является неотьемлемой частью патогенеза воспаления. 70 Процесс адгезий предшествуєт трансзндотелиальной миграции лейкоцитов в окружающую ткань и последующему повреждению ткани. От соединений, способньїх к торможению зтого начального адгезионного взаймодействия, ожидают зффективность при лечении воспалительньїх заболеваний, таких, как, например, ревматоидньій артрит, остеоартрит, астма, псориаз. Другие показания включают, например, респираторньй дистрессо-синдром у взросльїх, травму в связи с повторной перфузией, ишемию, язвенньій колит, васкулит, 72 атеросклероз, воспалительную кишечную болезнь и метастазь! опухолей.

Рецепторьі адгезий можно подразделять на три главнье семьи: селектинь), суперсемейство иммуноглобулинов и интегринь! (см. "Маїиге", 345:426 (1990)). Членьії всех трех классов содействуют адгезии лейкоцитов во время воспаления (отн. обзоров см. "ТППготрозіз апа Нетозвіавів", 65(3); 223 (1991); "Сііпісаї апа Ехрегітепіаї АйПегду", 20:619 (1990); "Тгаперіапіайоп", 48:727 (1989); "Віоспетіса! РНагт.", 40(8):1683 (1990)). Молекула-1 адгезий лейкоцитов к зндотелию (в дальнейшем: "Е-селектин") является членом семьи служащих в качестве селектина гликопротеийнов, способствующих межклеточной адгезии. В литературе есть сведения о максимальной зкспрессии Е-селектина на поверхности зндотелиальньїх клеток через 4 часа после стимуляции зндотелиальньх клеток цитокинами, такими, как, например, интерлейкин-1, фактор а некроза опухолей или другие медиаторьї воспаления как, например, липополисахаридь! (см. "Рго. Маї. Асай. Зсі-", с 34:9238 (1987)). о

Молекула-ї межклеточной адгезий (в дальнейщем: "ІСАМ-1") является членом суперсемейства иммуноглобулинов. Максимальная зкспрессия наблюдаєтся Через 12 - 24 часа после стимуляции. Есть сведения о том, что через 4 часа после стимуляции зндотелиальньїх клеток медиатором воспаления и

Е-селектин, и ІСАМ-1 находятся на клеточной поверхности (см. "9. Сіїп. Іпмеві", 82:1746 (1988); 79. Іттип.", - 131:1893 (1986); "Віоса", 78:2721 (1991)). Ге)

Бензотиофен, бензофуран и индолтиазепинонь), оксазепиноньй и диазепиноньі данного изобретения тормозят адгезию нейтрофилов к зндотелиальньм клеткам пупочной вень! человека, стимулированньім о фактором а некроза опухолей в рамках испьітания ин витро. ю

Настоящее изобретение также относится Кк новьім тиазепинонам, оксазепинонам и диазепинонам для 32 лечения зараженньїх вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) пациентов путем торможения активации ВИЧа, З являющегося латентньїм в зараженньх лицах.

Патогенез вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) является сложньм и пока полностью не вніявлен.

Жизненньїй цикл вируса теоретически разделяют на афферентнье и зфферентнье компоненть!. Связьввание, « слияние, обратная транскрипция и, в заключение, интеграция вируса являются собьітиями афферентного З компонента жизненного цикла. Именно афферентнье компонентьї жизненного цикла ВИЧа отвечают за с первичную инфекцию индивидуума ВИЧем, после чего обьічно наблюдается вспьішка виремии с клиническими з» симптомами или же без них.

Бьіло разработано множество терапевтических стратегий с целью вмешательства в афферентнье собьтия (см., например, Н. Міївцуа, 5. Вгодег, "Іппібйоп ої (Ше Іп Мійго Іптесімйу апа Суюораїіс ЕПесі оп Нитап

Т-ІутрПоїігоріс Мігив Туре Путрпадепораїну Мігив-азвосіаїей Мігив (НТ М-Ш/Л АМ) ру шк 2,3-Відеохуписіеовідев", Ргос. Маї!. Зсі. (ОБА), 83:1911 - 1915 (1986)). сл В то время, как разнье стадий афферентного компонента позволяют зффективное терапевтическое вмешательство, становилось все более очевидньім, что вмешательство лишь в зтот период недостаточно. іш После заражения ВИЧем и прогрессирования болезни по афферентньмм стадиям индивидуум переживает б 20 продолжительньй период клинической латентности, которьій может длиться несколько лет, и индивидуум является здоровь/м. В зтот момент достигается низкая или нулевая степень виремии и вирусной репликации в т периферических клетках крови. Позже, однако, болезнь в конечном счете прогрессирует до угрожающей жизни иммуносуппрессии (СПИД), способ лечения которой не известен. Зти более поздние собьтия представляют собой клинические проявления зфферентньїх стадий заражения ВИЧем. 29 Зфферентньій компонент жизненного цикла ВИЧа включает собьітия, необходимье провирусу ВИЧа для

ГФ) успешной транскрипции, трансляции, сборки и продукции вирионов. Начало собьтий, необходимьїх для прогрессирования ВИЧ-зараженньх клеток от бессимптомной, непроявляющей ВИЧ стадии к симптоматической, о проявляющей ВИЧ стадии назьівают активацией. В настоящее время зфферентньій компонент и клеточная основа активациий полностью не вьіявленьі. Несмотря на зто, разработка новьїх терапевтических средств и 60 стратегий и их применение во время клинически бессимптомного периода в целях борьбь! с прогрессированием к СПИДУу может вселять определенную надежду предполагаемому числу одного миллиона зараженньмх, но клинически латентньїх, индивидуумов.

С учетом вьішеизложенного первьім обьектом изобретения являются производнье бензотиофена, де бензофурана, индолтиазепинона, оксазелинона и диазепи-нона формульі (І)

В,

І-й В в " У 6 ах

СОТ тя ю в шля з х ія

В, где

Ку, Б», Ез и Ку независимо друг от друга означают водород, гидроксил, низший алкил, низший алкоксил,

Кв и Кв независимо друг от друга означают водород или низший алкил,

Х - группа Б(О)п или МН,

У - кислород, группа Б(О)п или МН, п - О, 1 или 2, при условии, что 1) если Х означает группу МН, У означаєт группу МН, Ку означает водород и Кз - водород, то Ко не означает метил, 2) если Х означаеєт группу МН, У означает группу МН, Кі Кз и Ку; означают водород, то Ко не означаєт метоксил или зтоксил, и с

З) если Х означает группу МН, У означает серу, то по меньшей мере один из радикалов Кі, Кз и К/ не означает водород, или их фармацевтически приемлемьсе кислотно-аддитивнье соли. і)

Вторьм обьектом изобретения является фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей клеточную адгезию или ВИЧ активностью, содержащая активное начало и фармацевтически приемлемьй носитель, которая содержит терапевтически зффективное количество соединения вьиішеприведенной формуль! ї- зо ЧІ) и фармацевтически приемлемьіїй носитель.

Третьим обьектом изобретения является способ торможения адгезии лейкоцитов к зндотелиальньм клеткам ікс, при лечении вьізванньх ею болезней, которьій заключается в том, что включает введение терапевтически б зффективного количества предлагаемой фармацевтической композиции в виде дозировочной единиць.

Предпочтительньй вариант данного способа заключается в том, что лечению подвергается воспалительная о болезнь. «г

Четвертьм обьектом изобретения является способ лечения млекопитающих, т.е. человека или животного, зараженньх ВИЧем, которьій заключается в том, что включаеєт введение терапевтически зффективного количества предлагаемой фармацевтической композиции в виде дозировочной единицьї.

Соединения вьішеприведенной формульі (І) относятся к категории малотоксичньїх веществ. «

Фармацевтически приємлемье кислотно-аддитивнье соли соединений формуль (І) включают соли -пт-ш) с неорганических кислот, таких, как, например, хлористоводородная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, серная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота, фтористоводородная ;» кислота, фосфористая кислота, а также соли нетоксических органических кислот, таких, как, например, алифатические моно- и дикарбоновье кислотьї, фенил-замещеннье алканкарбоновье кислоть, оксиалканкарбоновье кислотьі, алкандикарбоновье кислотьі, ароматические кислоть,, алифатические и ї5» ароматические сульфокислоть. В качестве примеров таких солей можно назвать сульфат, пиросульфат, бисульфат, сульфит, бисульфит, нитрат, фосфат, вторичньй фосфат, первичньй фосфат, метафосфат, о пирофосфат, хлорид, бромид, йодид, ацетат, трифторацетат, пропионат, каприлат, изобутират, оксалат, со малонат, сукцинат, суберат, себакат, фумарат, малеат, манделат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, фталат, бензолсульфонат, толуолсульфонат, фенилацетат, цитрат, лактат, малеат, тартрат,

Ме. метансульфонат. Кроме того, можно применять соли аминокислот, например аргинат и тому подобному, а также "М глюконат, галактуронат, М-метилглутамин (см., например, С. М. Берге и др., "Рпагтасеціїса! Заїв", доигпаї! ої

Рпагтасеціїса! Зсіепсе, 66: 1 - 19 (1977)).

Кислотно-аддитивнье соли приведенньїх основньїх соединений получают путем контактирования свободного основания с достаточньмм количеством желаемой кислоть! с получением соли стандартньїм образом. Свободное основание можно вьісвобождать путем контактирования соли с основанием и вьіделением свободного (Ф, основания стандартньім образом. Свободнье основания немного отличаются от их соответствующих солей по ка некоторьим физическим свойствам, например, по растворимости в полярньїх растворителях, но в остальном биологические свойства солей являются зквивалентньми соответствующему свободному основанию. 60 Некоторье из соединений данного изобретения могут иметься и в несольватированньїх формах, и в сольватированньїх формах, включая гидрированнье формь. В общем сольватированнье формь, включая гидрированнье формьі, являются зквивалентньми несольватированньм формам и все указаннье формь! охватьшваются настоящим изобретением.

Предпочтительньми соединениями формульї (І) являются те, у которьїх К., Кз и Ку означают водород. 65 Кроме того, предпочтительньми соегдинениями формуль! (І) являются еще те, у которьіх К 3, Кз и Ку означают водород, Ко означает водород или низший алкоксил, Х означает группу З(О)п или МН, У означает кислород или группу (Оп, а п означаєт 0, 1 или 2.

В частности предпочитаются соединения из группьї, включающей: 2,3-дигидро-9-метокси-|1|-бензотиеної|2,3-1-1,4-тиазепин-5(4Н)-он, 2,3-диги-дро-П|бензотиено|2,3-4-1,4-оксазепин-5(4Н)-он,. 2,3-дигидро-9-метокси-|11 бензотиеної|2,3-1-1,4-тиазепин-5(4Н)-он-1 -оксид,

З,4-дигидро-9-метокси-б6-метил-2Н-1,4-оксазепиної|б,7-Ь|-индол-5(6Н)-он, 2,3-дигидро-1

Н-бензотиено-|3,2-е|-1,4-диазепин-5-он, 2,3-дигидро-9-метокси-1Н-бензотиено-І(2,3-4-1,4-оксазе-пин-5-он, 2,3-дигидро-9-метокси-6-оксид-1Н-бензотиено-|2,3-Поксазепин-5-он, 70 2,3-дигидро-9-метокси-2-метил-1Н-бензотиено-|2,3-1-1,4-оказепин-5-он.

При определений показания к ингибитору клеточной адгезии или ингибитору активации ВИЧа лечащий врач будет учитьівать, конечно среди прочего, соответствующее состояние пациента, серьезность состояния, а также возраст, пол, веси т.п.

Для достижения терапевтического зффекта необходимое количество соединения формуль! (І) или его 7/5 Фармакологически приємлемой кислотно-аддитивной соли конечно варьируєется в зависимости от соответствующего соединения, пути введения средства, проходящего курс лечения пациента, определенного расстройства или соответствующей болезни. Предпочтительньій вариант изобретения охватьївает метод лечения лиц, страдающих от воспалительной болезни, такой, как, например артрит или припухлость, включающий дачу соединения в зффективном противовоспалительном количестве. Подходящей дозой 2о бсоединения формуль! (І) или его фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли для пациента, страдающего или предрасположенного к страданию от любого из вбиішеописанньх состояний, является 0,1мкг -

Б5ООмг соединения на килограмм веса тела. В случаеє системной дачи доза может составлять 0,5 - 500мг соединения на килограмм веса тела, предпочтительно 0,5 - 50мг/кг веса тела пациента два - три раза в день. В случаеє местного применения, например, на коже или на глазах, подходящая доза может составлять 0,нг - с 10Омкг соединения на килограмм, обьічно приблизительно 0,мкг/кг.

В случае оральной дачи соединения для лечения или профилактики артрита или воспаления, вьізванньх і) любой причиной, подходящая доза соединения формуль (І) или его физиологически приемлемой кислотно-аддитивной соли может бьть той же самой, что и в предьдущем абзаце, но предпочтительно применяют 1 - 1О0мг соеєдинения на килограмм, а более предпочтительно 1 - 5мкг/кг веса тела пациента, М зо Например, 1 - 2мкг/кг.

Само собой разумеется, что специалист в данной области (врач или ветеринар) будет определять и ікс, прописьхвать зффективное количество соединения для предотвращения или прекращения прогрессирования б соответствующего состояния. При зтом, врач или ветеринар может поступать так, что в начале курса лечения дает относительно низкие дозьї, после чего повьішает дозу до достижения максимальной реакции. о

Активное начало можно, правда, давать отдельно, но предпочтительно дают его в виде фармацевтической «г композиции, включающей соединение формульї (І) или его фармацевтически приемлемую кислотно-аддитивную соль и фармацевтически приемлемь!й носитель. Такие композиций являются дополнительньм обьектом настоящего изобретения.

Для применения в области ветеринарии, а также в области медициньї композиции данного изобретения « содержат активное начало вместе с фармацевтически приемлемьм носителем и, факультативно, другой /-З с (другие) терапевтический(ие) ингредиент(ь). Носитель(и) должен(ньї) бьіть "приемлемь!м(и)" в том смьісле, что он(и) должен(ньї) бьіть совместимь!м(и) с другими ингредиентами композиций и невредньі!м(и) для пациента. ;» Композиции включают препаратьї, пригоднье для орального, легочного, глазного, ректального, парентерального (включая подкожного, внутримьшечного и внутривенного), внутрисуставного, местного, НОсОового или трансбуккального введения. Такие композиции включают известнье препарать! длительного или ї5» продленного действия.

Композиции можно вьіпускать в виде препарата, включающего дозировочнье единицьі. Их можно получать о любьм известньім в области фармацевтики способом. Зти способь! могут охватьшвать стадию контактирования со активного начала с носителем, представляющим собой по меньшей мере одно вспомогательное вещество.

Обьічно композиции получают путем равномерного и гомогенного контактирования активного начала с жидким

Ме. носителем и/или тонкоизмельченньім твердьі!м носителем и, в случае необходимости, переведения продукта в

І желаемьй препарат.

Пригоднье для оральной аппликации препарать! согласно изобретению могут иметься в виде дискретньсх единиц, таких, как, например, капсуль,, крахмальнье капсуль, таблетки, лепешки, содержащие предопределенное количество активного начала; в виде порошка или гранул; в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости; или же в виде змульсий типа масла в воде или змульсийи типа водь в масле. (Ф, Активное начало может также иметься в виде болюса, злектуария или пасть. ка Пригодность соединений данного изобретения в качестве ингибиторов адгезии лейкоцитов к васкулярному зндотелию и, следовательно, пригодность для лечения связанньїх с воспалением болезней или состояний бо Можно оопределять на основе их зффективности в рамках различньх стандартньмх испьтаний. В нижеследующем приведень! описание хода анализов и результать! испьітаний.

МИспьтание зкспрессии молекуль-і межклеточной адгезиий и Е-селектина в зндотелиальньїх клетках пупочной веньї человека

Клеточная культура 65 Зндотелиальнье клетки пупочной веньі человека (поставляемье фирмой Клоне-тике) в склянках 1-25 культивируют в течение 1 - З дней при температуре 37"С в атмосфере, содержащей 595 двуокиси углерода.

Потом клетки расщепляют путем обработки 1Омл раствора, содержащего 0,02595 трипсина и 0,0190 зти-лендиаминотетрауксусной кислоть! (далее: "ЗДТУК"), в течение 5 - 10 секунд. После декантирования промьівочного раствора добавляют еще 1О0мл раствора трипсина и ЗДТУК и клетки перемешивают в течение 2 - 4 минут, слегка ударяя резинкой по стенке склянки. Затем содержимое склянки подают в пробирку для центрифугирования емкостью 5О0мл, содержащую 4Омл средь. Среда представляет собой зндотелиальную базальную среду (поставляемую фирмой Клонетике), содержащую 2мг/л гидрокортизона, 0,05мкг/л зпидермального фактора роста, 12мг/л зкстракта бьчьего мозга и бУо-ную термически инактивированную фетальную телячью сьіворотку (поставляемую фирмой Хайклон). Клетки центрифугируют при 157С в течение 10 7/0.7 15 минут, надосадочную жидкость удаляют и клетки ресуспендируют в свежей среде. Клетки вьішеописанньм образом еще раз обрабатьівают, после чего их вьісеивают в пластинку с 96 чашками.

Стимулирование цитокином

Через 5 дней после достижения слияния клетки стимулируют фактором а некроза опухолей (поставляемьм фирмой Гензайм) для получения окончательной концентрации средьі, равной 14бединиц/мл и инкубируют при 7/5. З7"С в течение 4 часов. Потом среду удаляют из инкубатора и хранят для анализа производства хемокина.

Клетки три раза промьивают фосфатсодержащим буфером солевого раствора, не содержащего кальция или магния. Затем монокультурь! фиксируют путем добавления к чашкам буферсодержащего 1095-ного формалина в течение 15 минут. Потом клетки три раза промьівают модифицированной по способу Дульбекко средой Игла (далее: "среда ДМЕМ") (поставляемой фирмой Гибко), содержащей 295 альбумина бьічьей сьіворотки, и хранят 2о В холодиИльникКе в течение ночи.

Твердофазньійй иммуноферментньй анализ

Мьішинье моноклональнье античеловеческие молекуль-! межклеточной адгезии (поставляемье фирмой К й ОО Зузіетв, кат. Мо ВВА-4) или мьішиньй моно-клональньйй античеловеческий Е-селектин (фирмь К 5 О Зузіетв, кат. Мо ВВА-2) растворяют в среде ДМЕМ, содержащей 295 альбумина бьічьей сч Сьіворотки. Указаннье молекуль-1! или Е-селектин в концентрации 0,5мкг/мл добавляют к каждой чашке и инкубируют при 377"С в течение 2 часов. Монокультурьі 4 раза промьвают средой ДМЕМ, содержащей 290 і) альбумина бьічьей сьіворотки. Добавляют разведенньїй в соотношений 1: 3000 коньюгированньій пероксидазой вьіделившийся из овца противомьішиньій иммуноглобулинг (поставляемьй фирмой Каппел) и инкубируют при 37"С в течение часа. Клетки четьіре раза промьівают средой ДМЕМ. Затем к зафиксированньм клеткам М зо добавляют окрашивающий реактив и инкубируют 15 минут при комнатной температуре. Реакцию прекращают добавлением 295-ного раствора щавелевой кислотьі. Абсорбция составляет 414нм на аппарате для чтения ісе) титрационньїх пластинок. б

Испьітание соединений

Соединения растворяют в диметилсульфоксиде при концентрациий ЗОммоль и разбавляют средой для о

Зз5 достижения конечной концентрации. К клеткам добавляют растворенное в среде соединение за 30 минут до «г стимуляции фактором а некроза опухолей. Абсорбцию нестимулированньїх клеток вьічитают из значений абсорбции стимулированньїх фактором а некроза опухолей клеток перед определением процента торможения.

Процент торможения определяют путем сравнения абсорбции обработанньїх только носителем соединений клеток (контрольньй опьїт) с клетками, обработанньми исследуемьм соединением. Значения КТ 5о определяют « б помощью линейно-регрессионного анализа. в с Метод определения торможения адгезий нейтрофилов человека к стимулированньм фактором а некроза опухолей зндотелиальнь!м клеткам пупочной вень! человека ;» Клеточная культура

Зндотелиальнье клетки пупочной веньі человека второго пассирования (поставляемье фирмой Клонетикс

Корпорейшн, Сан Дизго, Калифорния, СС-2617) вньісеивают в пластинки с 96 чашками (поставляемье фирмой «г» Корнинг гласе веркс, Корнинг, Нью-Йорк) плотностью приблизительно 5 х 103 клеток на чашку и виращивают до слияния в полной зндотелиальной базальной среде (ЕВМ, МСОВ, поставляемой фирмой Клонетикс), і-й содержащей 1Онг/мл зпидермального фактора роста, мкг/мл гидрокортизона, 0,495 зкстракта бьічьего мозга и (Се) боб-ную фетальную телячью сьіворотку. За один день до проведения испьітания, обьічно через З дня после ввісеивания клеток, к культурам добавляют еще 0,2мл полной зндотелиальной базальной средь на чашку. б изготовление испьітуемьїх соединений "І Испьітуемье соединения переводят в маточньій раствор обьемом 10мл, концентрация которого составляет 1,о0ммоль. Сначала соединения солюбилизируют в 0,їмл диметилсульфона, после чего добавляют 9,9мл полной зндотелиальной базальной средь. Затем испьітуемье соединения в одну стадию разбавляют до достижения концентрации 66б,бмкм. Операции солюбилизации и разбавления осуществляют в полистирольньх сосудах. о Стимулирование зндотелиальньїх клеток пупочной веньі человека Рекомбинантньійй человеческий фактор с, ко некроза опухолей (поставляемьій фирмой Гензайм, Бостон, Массачусетс, код ТМЕ-Н) получают в концентрации, равной 40бединиц/мл в полной зндотелиальной базальной среде. Маточньій раствор фактора а некроза 60 опухолей состоит из 2000б0единиц/мл фосфатсодер-жащего буфера солевого раствора (РВ5, поставляемого фирмой Гибко, Гранд Айлзонд, Нью-Йорк) и 0,195 альбумина бьічьей сьіворотки. Его хранят при температуре -107"С. Зндотелиальнье клетки пупочной вень человека один раз промьшвают 0,2мл теплой неполной зндотелиальной базальной средь, после чего их стимулируют фактором а некроза опухолей, взятьм в концентрации 20бединиц/мл, в присутствии 33,3мкм испьітуемого соединения при температуре 37"С в течение 4 65 часов. Зту операцию осуществляют путем добавления 0,їмл фактора а некроза опухолей, взятьім в концентрации 40бединиц/мл, и 0О,1мл (66,бмкм) испьітуемого соединения. Вещества добавляют медленно для предотвращения разрьіва монослоя зндотелиальньїх клеток. Каждое соединение испьітьявают в шести чашках.

Кроме того, в каждой пластинке проводят контрольньй опьт с нестимулированньми клетками и опьт с клетками, стимулированньми фактором а некроза опухолей без обработки испьітуемьм соединением.

Мечение нейтрофилов

За час до добавления нейтрофилов к зндотелиальньм клеткам нейтрофиль! в концентрации 5 х 10 б/мл подвергают мечению бмкм кальцеийна-АМ (поставляемого фирмой Молекулар Пробе, Юджин, Орегон) в сбалансированном солевом растворе Хознкса, содержащем 0,4595 альбумина бьічьей сьіворотки, при температуре 37"С в течение 30 минут. Маточньй кальцеийн получают в концентрации ммоль в безводном 70 диметилсульфоксиде, внісушивают и хранят при -207С. После инкубации клетки два раза промьівают холодньім сбалансированньм солевьм раствором Хзнкса и ресуспендируют до конечной концентрации, равной 1 х 10бклеток/мл в полной зндотелиальной базальной среде.

Добавление нейтрофилов к зндотелиальньм клеткам

После четьтрехчасового стимулирования и непосредственно до добавления нейтрофилов к монослою 75 зндотелиальньїх клеток пластинки обрабатьввают 0,2мл теплой неполной зндотелиальной базальной средь! для удаления фактора а некроза опухолей и испьітуемого соединения. К каждой обрабатьваемой чашке медленно добавляют нейтрофиль! (1 х 102? клеток) и инкубируют при 37"С в течейе 30 минут. Потом пластинки два раза промьівают 0,2мл теплой неполной зндотелиальной базальной средьі, после чего добавляют еще 0,1мл средь! для сканирования пластинки.

Определение относительной флюоресценции

Относительную флюоресценцию определяют с помощью системь! Міїроге Суїюйцог З00 (возбуждение - 480, змиссия - 530, чувствительность - 4).

Расчеть

Испьттание считаєтся действительньім, если стимулирование клеток фактором а некроза опухолей приводит --:СМ к З0096-ному повьішению адгезий нейтрофилов по сравнению с нестимулированньми клетками. Результать о приведеньї в процентах торможения стимулированной фактором а некроза опухолей адгезии. стимулированная нестимулированная адгезия (испитуемоє соединение) адгезия т 95 торможения - 100 - | --------ш-ти- тт со стимулированная 4 нестимулированная о адгезия (контроль) адгазия

ІС)

Некоторье соединения согласно изобретению подвергали испьтанию в концентрациях 33,З3мкмоль, « 10, Омкмоль, З,Змкмоль и 1,0мкмоль для определения средних значений КТ 50, которне определялись с помощью линейно-регрессионного анализа.

Результать! испьтитаний соединений согласно изобретению приведень! в таблице |.

Бьіло найдено, что соединения согласно изобретению, в частности соединения формульї (ІІ), тормозят « 70 активацию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), являющегося латентньім в зараженньїх людях и животньх, па) и, следовательно, являются пригодньіми для лечения СПИДа. с Попьїтки понять вируснье и клеточнье основьі клинического бессимптомного периода показьівают, что ВИЧ :з» представляет собой покоящийся или незкспри-мирующийся провирус в популяции хронически зараженньх клеток. Специфический вид вируса ВИЧ, ВИЧ-1, подвергали ряду различньїх испьітаний, в результате которьх стало ясно, что вирус является покоящимся или незкспримирующимся провирусом в популяции хронически їз зараженньїх Т-лимфоцитов. Однако, в рамках данньїх испьтаний не излагаются подробности ядерньїх и биохимических механизмов, которье являются основой латентного вирусного состояния. ОО подробной 1 информации см. статью Беднарика и др. "Меспапівтв ої НІМ-1 І агїепсу" в журнале Аїавз, Мо 6, стр. З - 16, 1992 г. со Вплоть до недавнего времени предполагалось, что во время клинического бессимптомного периода ВИЧ ср Является покоящимся или незкспримирующимся во всех популяциях хронически зараженньх клеток. (2) Вследствие наблюдений низких или отсуствующих степеней вирусемии и репликации вируса в периферических «м гемоцитах предполагалось, что ВИЧ не является активньм во время клинического бессимптомного периода.

Однако, бьло найдено, что настоящего скрьітого состояния во время заражения вирусом ВИЧ не существует (см. статью Фоки и др., "НІМ Іпїесіоп із Асіме апа Ргодгевзвзіме іп Гутрпоідй Тізвие ЮОигіпд (Пе Сіїіїпіса|у

І аїепі 5іаде ої аізеазе", в журнале Маїцге, Мо 362, стр. 355 - 358, 1993 г.).

Во время клинического скрьїтого состояния наблюдается дихотомия между степенями вирусного груза и (Ф. репликации вируса в периферических гемоцитах по отношению к лимфатическим органам. На основе данньх г наблюдений бьло установлено, что периферические гемоцитьії не точно отражают настоящую стадию заболевания вирусом ВИЧ, в частности в начале клинического хода ВИЧ-инфекции. На самом деле, во заболевание вирусом ВИЧ является активньм и развивается, даже в таком случає, если активность, измеряемая в периферических гемоцитах вирусньіми показателями, низкая и пациент находится в клиническом скрьїтом состоянии.

Неизбежно, стадия заболевания развивается начиная с клинически латентного бессимптомного периода до зкспрессионного и активного симптомного периода. Согласно Бутера и др. (см. АІО5, Мо 6, стр. 994, 1992 г.), бе бьіли разработаньі различнье клеточнье модели, которье при обработки цитокинами могут зкспримировать

ВИЧ-1. Значит, что на стадиий микробиологического скрьїтого состояния ВИЧ-1 начинает репликацию только после получения внеклеточного сигнала. Зтот сигнал может бьть вьзван не только взаймодействием растворимого цитокина с рецептором, но и межрецепторньм взаймодействием, происходящим во время межклеточной коммуникации или воздействия на клетки ультрафиолетовьм излучением или температурньім шоком. Кроме того, внеклеточньй сигнал может бьгть вьізван аутокринньім или паракринньім способом, так что активированная вирусом ВИЧ-1 клетка может продолжать зкспримироваться и одновременно активировать смежную латентную клетку.

Предполагается, что и дополнительнье факторьії участвуют в активации вируса ВИЧ. Бьло установлено, что применение 12-0-тетрадекансилфорбол-13-ацетата приводит к снижению количества рецепторов СО4 и к 70 вирусной зкспрессии в зараженньїх вирусом ВИЧ клетках (см. Хамамото и др. в журнале Віоспет. Віорпуз. Кев.

Соттип., Мо 164, стр. 339 - 344, 1989 г.). Интересно, что Хамамото исследовал также зффект вьісокоактивньх ингибиторов протеинкиназьі С, таких, как, например, стауроспорин, Н-7, ИОСМ-01, на вьізьіваемое 12-0-тетрадеканоилфорбо-13-ацетатом снижение количества рецепторов СО4 и повьішение зкспрессии. ВИЧ.

Найдено, что стауроспорин представляет собой зффективньй ингибитор как снижения количества рецептора 7/5 С04, таки зкспрессии вируса ВИЧ.

Клеточнье пути, передающие сигнал активации от плазматической мембрань к вирусу, что приводит к зкспрессиий ВИЧ-1, менее известнь. Недавно, на симпозиуме Майопа! Соорегайме Оівсомегу Огапі (МСООСУАЮ5, состоявшемся З - 7 ноября 1991 г., П. Феорино, С.Т. Бутера, Т.М. Фолкс и Р.Ф. Шинаци сообщили о разработке надежной и простой системь! определения соединений, способньїх предотвращать 2о активацию латентного вируса ВИЧ. МИспьтательная система включает клеточную линию ОМ-10.1, т.е. уникальньй хронически зараженньій промиелоциточньй клон, которьій сохраняет уровень рецептора СО4 т до активации ВИЧ-1 фактором а некроза опухолей. Зкспрессия рецептора СО4 ж на поверхности клеток, а также активность обратной транскриптазьії используют для определения зкспрессии вируса.

Альтернативно, для определения зкспрессии вируса ВИЧ можно применять и активность протеазьї. Клетки с дв ОМ-10.1 сохраняют уровень рецептора СО4 т до активации вируса и реагируют на индукцию фактора а некроза опухолей. Позтому зти культурьі используют для удобного и бьістрого исследования фармакологических і) свойств соединений в отношений их способности предотвращать снижение количества рецептора СО4 ж на поверхности клеток и зкспрессию вируса ВИЧ.

Исследовали ряд соединений, проявляющих антивирусную активность в отношений остро или хронически ї- зо Зараженньх клеток, проверяя их способность тормозить зкспрессию вируса ВИЧ в клетках ОМ-10.1. Кроме того, исследовали ряд соединений, которье взаиймодействуют с биохимическими путями, которье могут ікс, отрицательно влиять на реактивацию. Результать! исследования бьіли показань! на плакате, представленном на (зу симпозиуме МСРОС/АІЮ5, состоявшемся 3-7 ноября 1991 г. в Сан Диего в шт. Калифорния, США. Из числа приблизительно 48 исследованньїх соединений низкодействующими ингибиторами активациий ВИЧ-1 считают о

З'-фтор-3-деокситимидин, интерферон У и десферри-оксамин. «Е

Охватьваемое формулой (І) соединение, 2,3-дигидро-9-метокси-|(1|бензотиеної|2,3-1-1,4-тиазепин-5(4Н)-он, в концентрации 0,21мкм проявляет 5095-ное торможение в клетках ОМ-10.1 (см. таблицу 1).

Предлагаемьсе" соединения проявляют активность и в обьічньїх опьїтах іп мімо, в которьїх измеряют способность веществ предотвращать втекание нейтрофилов, и соответственно их полезность для лечения « воспалений. В одном опьте крьіс-самцов типа Вистар весом в 220 - 245г не кормят в течение 16 - 18 часов. Йм пв) с внутривенно дают буфер (смесь зтанола и солевого раствора в соотношений, равном 1:1) или предлагаемое

Й соединение в буфере. Крьіс слабо анестезируют дизтиловьім зфиром, им дают внутривенную иньекцию а раствора 2,5мг альбумина бьічьей сьшворотки в солевом растворе. Непосредственно после внутривенной иньекции делают маленький разрез между ребрами и с помощью подходящей игльї в плевральную полость

Мньецируют раствор 0,2мл вьіделенного из кроличего иммуноглобулина б антиальбумина бьічьей сьіворотки в їх фосфат-содержащем солевом растворе (концентрация: 1Омг/мл солевого раствора).

Затем разрез закрьівают зажимом из нержавеющей стали размером в Умм. Через 4 часа криіс умерщвляют с о помощью двуокиси углерода и плевральную полость промьівают 2мл 0,32595-ного раствора красного фенола в со фосфатсо-держащем солевом растворе. Вьїходящий из плевральной полости поток буфера подвергают 5р анализу. Лейкоцить (» 9095 нейтрофилов) подсчитают счетчиком фирмь! Каультер. Обьем вьіходящего потока

Ме, буфера измеряют способом разведения с применением красителя (см. статью Г.В. Картера и др. в журнале ".). "М Рпагт. РНнаптасої!.", Мо 34, стр. 66 - 67, 1982г.). Животньх, которьїм дали предлагаемое соединение, сравнивают с животньми, которьім дали только буфер. При зтом статистическую значимость активности испьтуемьх соединений определяют с помощью і-опьіта по Стьюденту. 5Б Результать! данного анализа, которому подвергают соединение примера 1, приведень в таблице 2.

В другом опьїте іп мімо мьішей-самок типа ВаІр/с помещают в клетках группами по семи. Во время (Ф, проведения опьіта мьіши имеют свободньй доступ к пище и воде. Им орально дают носитель (0,595-ньій раствор ка гидроксипропилметилцеллюлозь!, содержащий 0,296 Твина 80) или предлагаемое соединение, растворенное или суспендированное в указанном носителе. Через час после оральной подачи мьшей анестезируют путем бо Мнгаляции дизтилового зфира и им внутрибрюшинно иньецируют 1,0мл З9о-ного тиогликоллата в солевом растворе. Через 2 часа после иньекции тиогликоллата мьішей умерщвляют с помощью двуокиси углерода й им иньецируют бмл фосфатсодержащего солевого раствора, содержащего 1Оед./мл гепарина натрия и 0,190 альбумина бьічьей сьіворотки. Брюшинную полость массируют и разрезают и вьтекающую жидкость собирают в центрифужньїх пробирках емкостью в 15мл. От каждой мьіши берут аликвотную пробу и с помощью счетчика 65 фирмьї Каультер (модель 72Ві, поставляемая фирмой Каультер Инструменте, г. Ніаїеапй, шт. Флорида, США) подсчитают общее количество клеток в каждой аликвотной пробе. Берут другую аликвотную пробу с целью ее исследования под микроскопом с последующим окрашиванием модифицированньїм красителем фирмь! Райт. С помощью гематологического анализа определяют процентное количество нейтрофилов, вьтекших в брюшинную полость.

В данном опьіте соединение примера 1 проявляет следующее торможение втекания нейтрофилов: 26,190 при концентрации ТОмг/кг, 31,995 при концентрации ЗОмкг/кг, и, соответственно, 34,396 при концентрации 10Омкг/кг.

Предлагаемьсе соединения могут получаться следующими способами.

Согласно первому способу в качестве исходньх соединений оприменяют З-ги-дрокси-, З-тиола-, 70 З-аминобензо|р|Ігиофен-, бензофуран- или индол-2-карбокси-лат 1 (схема 1). Сложнье зфирь

З-гидрокси-бензо|БІтиофена-2 получают по способу, описанному Коннором и др. в журнале .). Мед. Спет., Мо 35, стр. 958, 1992 г. З-тиобензо|БІгиофен-2-карбоксилат получают взаймодействием соответствующего

З-хлор-производного (см. Коннор и др. в журнале у). Мей. Спет., Мо 35, стр. 958, 1992 г.) с тисацетамидом в присутствий основания, такого, как 1,8-диазабицикло|5.4.0|-ундек-7-ен, в среде растворителя, такого, как у/5 М.М-диметилформамид или тетрагидрофуран. З-аминобензо|рБ|гиофен-2-карбоксилат получают по общеизвестному методу, описанному Бекком в журнале .. Огу. Спет., Мо 37, стр. 3224, 1972 г.

З-гидроксииндол-2-карбоксилат получают известньми способами, описанньми, например, Унангстом и др. в журнале .). Нейегосусіїс Спет., Мо 24, стр.811, 1987г., и Мойером и др. в журнале У. Огуд. Спет., Мо 51, стр. 5106, 1986 г. З-тисиндол-2-карбоксилат получают по известньмм методам, описанньім, например, Унангстом и 2о др. в журнале 4). Неіегосусіс Спет., Мо 24, стр. 811, 1987 г., Аткинсоном и др. в журнале Зупіпевзів, стр. 480, 1988 г., Нагараяном и др. в журнале Іпаіап У. Спет., Мо 208, стр. 672, 1981 г. З-аминоиндол-2-карбоксилат получают известньіми способами, описан-ьми С.В. Симаковьм и др. в Химико-Фармацевтическом Журнале, Мо 17, стр. 1183, 1983 г.

Схема 1 поясняет превращение соединений 1 до предлагаемьх соединений. Сложнье зфирьї подвергают с ге взаймодействию с производньм замещенного а-галогеном ацетонитрила, таким, как бромацетонитрил, в присутствий основания, как трет.-бутилата калия, в тетрагидрофуране, ацетонитриле или диметил-сульфоксиде і) при температурах 0 - 80"С. Получают сложнье зфирь 2. Нитрил восстанавливают до соответственного первичного амина и получаемьй при зтом промежуточньій продукт З циклизуют с получением лактама 4.

Предпочтительной реакцией является гидрирование сложньїх зфиров 2 на кобальтовом катализаторе типа ї- зо Ренея в среде растворителя, такого, как тетрагидрофуран, в присутствии основания как тризтиламина, при повьішенньїх температурах и под давлением. В таких условиях сложнье зфирь 2 превращаются ікс, непосредственно до лактама 4. В случае предварительного вьіделения промежуточньй продукт З циклизуют до ду лактама 4 в основньїх условиях, предпочтительно в присутствиий метилата натрия в метаноле, или в кислотньїх условиях, предпочтительно в присутствий полифосфорной кислоть!, при повьішенньїх температурах. о

При синтезе некоторьїх предлагаемьх соединений необходимо или желательно переводить «г реакционноспособньюе группь), как гидроксил, амино или карбоксил, в производнье, защищающие их от нежелательньїх побочньїх реакций. Защитнье группьі снимают с гидроксила, амино-группьі или карбоксила стандартньми методами. Общепринятье химические группьі, способнье защищать реакционноспособнье группьі, как гидроксил, амино и карбоксил, а также методьі их введения в молекулу и последующего снятия « 70 описань Грином и Бутсом в источнике "Ргоїесіїме Сгошрз іп Огдапіс Зупіпевів", из-во Джон Уайлей 5 Сане, Мнк., пла) с Нью-Йорк, 1991 г. . Так, например, 3-амино-, З-гидрокси- или З-тисиндол, бензотиофен или бен-зофуран (соединение 1 в схеме а 1) можно подвергать взаймодействию с р-галогензтиленамином, причем амино-группа защищена пригодньім остатком, таким, как трет.-бутоксикарбонил или бензилоксикарбонил. При осуществлении реакции в

Вьішеуказанньїх условиях получают соєдинения 5. Снятием защитньх групп в соеєдинении 5 общеизвестньми ї» способами, такими, как применение трифторуксусной кКислотьі или водной кислотьі в случае трет.-бутоксикарбони-ла, или гидрогенолиз в случае бензилоксикарбонила, получают соединения 3, которье і-й циклизуют вьішеуказанньм способом. Другим способом получения соединений З является взайодействие

Те) соединений 1 с зтиленимином в среде спиртового растворителя (см. статью Нагараяна и др. в журнале Іпаїап 3. Спет., Мо 208, стр. 672, 1981 г.). б Вторьім общим способом получения соединений 4 (см. схему 2) является взаймодействие соответственньх "З З-галогенпроизводньїх б с зтилендиамином и окисью меди в среде растворителя, такого, как пиридин, в присутствий основания, такого, как карбонат калия, с получением соединений 3, где У означает группу МН (см.

С.М. Хайермат и др. в журнале Ргос. Маї. Асай. Зсі., Іпадіа, Мо 60, стр. 367, 1990 г.). Взаймодействием 5Б З-галогенпроизводньїх с 2-аминозтанолом в среде растворителя, такого, как диметилформамид, в присутствий основания, такого, как диазабициклоундекан, получают соединения 3, где У означает серу. Взаимодействием іФ) З-галогенпроизводньїх с нитрозтанолом в среде растворителя, такого, как тетрагидрофуран, в присутствий ко основания, такого, как трет.--бутилат калия или гидрид калия, получают соединения 7. Последующим восстановлением нитро-группьї до амина получают соединения З, где У - кислород. В некоторьїх случаях бо соединения З не вьіделяют, а непосредственно превращают до соединений 4.

В третьем общем способе получения соединения 4 тоже используют 3-галоген-производньсе 6 (см. схему 3), которье подвергают взаймодействию с первичньм оамином, содержащим в р-положении пригодную защищенную аминогруппу, гидроксильную или тиол-группу. Получают промежуточньй продукт 7. Снятием защитной группь! с последующей циклизацией получают соединения 4. В аналогичном способе осуществляется 65 взаймодействие З-гидроксил-, З-тиол-или З-амино-производного с амином, имеющим в р-положении пригодную удаляемую группу. Получаемьсе при зтом промежуточньсе продукть! 8 циклизуют с получением соединения 4.

Соединения 4, где Х означаєт серу, а УМ - кислород или группу МК, могут бьть превращень! до соответствующих сульфоксидов и/или сульфонов 9 с помощью агента окисления, такого, как хлорнадбензойная кислота, или оксазиридина, причем степень окисления зависит от условий реакции (схема 4). Аналогичньім окислением соединений 4, где У означает серу, получают либо сульфоксид, либо сульфон 10.

Условия реакций по схемам 1 - 4 широко известньі или могут определяться прость!м образом.

Нижеследующие примерь! поясняют получение соединений настоящего изобретения.

Пример 1 2,3-дигидро-9-метокси|1|бензотиено!|2,3-14-1,4-тиазепин-5(4Н)-он 70 К 5ООмМг (1,95ммоль) имеющего комнатную температуру раствора метил-3-хлор-5-метокси-бензо|БІтиофен-2-карбоксилата, полученного в результате взаймодействия известного

З-хлор-5-метокси-бензо|БІтиофен-2-карбонилхлорида с метанолом (см. у. Мед. Спет., 35:958 (1992)) в 20мл диметилформами-да добавляют сначала 885мг (7,79ммоль) 2-аминозтантиола в виде гидрохлорида, а потом 2,3З3мл (15,58ммоль) диазабициклоундекана. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в /5 течение 1,5 часов, после чего нагревают до 70"С. Смесь разбавляют зтилацетатом и промьівают водной соляной кислотой, водой и рассолом. Органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. Сьрой продукт перекристаллизуют из смеси гексана и зтилацетата с получением 2,3-дигидро-9-метокси|1|бензотиено|2,3-1-1,4-тиазепин-5(4Н)-она с вніходом 7495. Т.п. 209 - 209,576.

Пример 2 2,3-дигидро-|1|бензотиеної|2,3-Щ-1,4-оксазепин-5(4Н)-он

Смесь 405мг (1,64ммоль) сложного метилового зфира З3-(цианометокси)-бензо|БІтиофен-2-карбоновой кислоть! (см. У. Неїего. Спет., 12:1037 (1975)), О,бБмл тризтиламина и 0,50г кобальта Ренея в 5БО0мл тетрагидрофурана нагревают при 1007 в атмосфере 84,372 кг/см? водорода. Реакционную смесь сгущают в вакууме. В результате колоночной градиентной хроматографийи с применением в качестве злюента сначала су об смеси гексана и зтилацетата в соотношений 1: 1 и затем зтилацетата получают 2,3-дигидро-|1|бензотиеної|2,3-1-1,4-оксазепин-5(4Н)-она с вьіходом 55905. Т. п. 244 - 24576. і)

Пример З 2,3-дигидро-9-метокси-|1|бензотиеної|2,3-11-1,4-тиазепин-5(4Н)-он-1-оксид

Смесь 200мг (0,75ммоль) 2,3-дигидро-9-метокси-/1|бензотиено|2,3-Й-1,4-тиа-зепин-5(4Н)-она и 11бмг р («0,75ммоль) МаВО3-4Н20 в 18мл уксусной кислотьї перемешивают при комнатной температуре в течение ночи.

Реакционную смесь фильтруют, после чего к фильтрату добавляют бОмл водьі. В результате фильтрации о получают 2,3-дигидро-9-метокси-П|бензотиеної|2,3-2-1,4-тиазепин-5(4Н)-он-1-оксид с вьіходом 6995. Т. п. 215- («Ф 2167С (разл.).

Пример 4 о

З,4-дигидро-9-метокси-6-метил-2Н-1,4-оксазепиної|6б,7-5І-индол-5(6Н)-он «Її

А. Метил-3-(цианометокси)-5-метокси-1-метил-1Н-индол-2-карбоксилат

Суспензию 3,2г (29ммоль) трет.бутилата калия в ббмл диметилсульфоксида обрабатьшвают порциями 5,6бг (2і4ммоль) метил-З-гидрокси-5-метокси-1-метил-1Н-индол-2-карбоксилата (см. Унангст и др., у). Нейегосусіїс «

Спет., 24:811 (1987)). Смесь перемешивают в течение 15 минут, после чего прикальівают 4,8мл (5,7г, 7бммоль) Ххлорацетонитрила. Смесь нагревают при 807"С в течение 90 минут, охлаждают и подают в 800г льда и водь. й) с Осажденное твердое вещество фильтруют, промьвают 1090-ньм раствором метанола в воде и з» перекристаллизуют из водного ацетонитрила с получением 3З,9г (6095) продукта. Т.п. 136 - 13776. я Б.

Смесь 0,60г (2,2ммоль) метил-3-(цианометокси)-5-метокси-1-метил-1Н-индол-2-карбоксилата и 0,4Омл (0,29Гг, 2,Уммоль) тризтиламина в З5мл тетрагидрофурана в автоклаве обрабатьвают 0,40г кобальта Ренея в качестве ї катализатора. В автоклаве создают повьшенное давление с применением водорода (41,4829кг/см?) и сл нагревают при 80"С в течение 10 часов. Реакционную смесь охлаждают, фильтруют и фильтрат упаривают.

Масляньй остаток растворяют в 5О0мл метанола, после чего к раствору добавляют 0,80г (15ммоль) метилата се) натрия. Смесь нагревают с обратньм холодильником в течение З часов, охлаждают и упаривают. Остаток б» 50 распределяют между 75мл зтилацетата и 150мл рассола. Водньій слой зкстрагируют несколько раз свежим зтилацетатом. Обьединеннье органические слой промьвают рассолом, сушат над безводньм сульфатом що натрия и упаривают. Остаточньйй сьірой продукт очищают путем флеш-хроматографии на силикагеле. Злюацию осуществляют 5956-ньмм раствором метанола в дихлорметане с получением 0,18г (3395) продукта. Образец, перекристаллизованньй из смеси зтилацетата и гексана, имеет т.п. 184 -18670.

Пример 5 2,3-дигидро-1 Н-бензотиено-|3,2-е|-1,4-диазепин-5-он о Гидрохлорид сложного метилового зфира 3-(2-аминозтиламино)бензо|р|гтио-фен-2-карбоновой кислоть іме) Раствор 1,00г (5,62ммоль) 2-(4,5-дигидро-АН-имидазол-2-ил)бензолтиола (см. Н. Недеп, Н. Ріеїд, "Уивіи5

МПерідв Апп. Спет." Ц:1994 (1975)) и 6б10мг (5,62ммоль) хлорметилацетата в 15мл метанола нагревают с 60 обратньм холодильником в течение 90 минут. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температурь! и фильтруют. Фильтрат сгущают досуха и остаток растворяют в горячем хлороформе. По истечениий нескольких часов полученньій осадок собирают и сушат. Маточньїй раствор позволяет получать второй вьіход кристаллов в качестве гидрохлорида сложного метилового зфира 3-(2-аминозтиламино)бензо|рБ)|гиофен-2-карбоновой кислотьі. Общий вьіход: 61905. Т.п. 219 -22076. 65 2,3-дигидро-1Н-бензотиено-І|3,2-е|-1,4-диазепин-5-он

Раствор З3о9мМг (1,18ммоль) гидрохлорида сложного метилового зфира

3-(2-аминозтиламино)бензо|БІтиофен-2-карбоновой кислоть! и свежеизготовленного метилата натрия (из 134мМг (248ммоль) натрия) в бмл метанола нагревают с обратньм холодильником в течение 18 часов. Смесь охлаждают, нейтрализуют 25мл 1-н. соляной кислотьі и охлаждают до 0"С в течение часа. Получаемьй желтьй кристаллический продукт фильтруют и сушат в вакууме при 60"С в течение нескольких часов с получением 2,3-дигидро-1Н-бензотиено-|3,2-е|-1,4-диазепин-5-она. Вьїход: 6495. В результате колоночной градиентной хроматографии с применением в качестве злюента сначала 295-ного раствора метанола в зтилацетате и затем 5Уб-ного раствора метанола в зтилацетате получают аналитически чИСТЬІЙ 2,3-дигидро-1Н-бензотиено-І|3,2-е|-1,4-диазепин-5-он. Т.п. 210 - 21276. 70 Пример 6 2,3-дигидро-9-метокси-1Н-бензотиено-І3,2-т|-1,4-оксазепин-5-он

Сложньій метиловьій зфир З-цианометокси-5-метокси-бензо|рБ|тиофен-2-карбоновой кислоть!

К имеющему комнатную температуру раствору 1,00г (4,2ммоль) метил-3-окси-5-метоксибензо|р)|тиофен-2-карбоксилата (см. Коннор и др., У. Мед. Спет. 25:959 (1992)) в 20мл 7/5 диметилсульфоксида добавляют 494мг (4,441ммоль) трет.-бутилата калия, а потом 878 мкл (12,58ммоль) бромацетонитрила. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 часов, после чего ее подают в зтилацетат и 1-н. соляную кислоту. Органический слой сначала промьівают 1-н. соляной кислотой, потом несколькими порциями рассола, после чего сушат над сульфатом магния. В результате фильтрации, удаления растворителя в вакууме и перекристаллизации остатка из смеси зтилацетата и гексана получают 41Змг продукта. Дополнительньй вьїход в количестве 112мг можно получать из маточного раствора. Т.п. 159,5 - 16026. 2,3-дигидро-9-метокси-1Н-бензотиено-І2,3-4Щ-1,4-оксазепин-5нан Раствор 2,5Гг (9,Оммоль) сложного метилового зфира З-цианометокси-5-мет-окси-бензо|б|-тиофен-2-карбоновой кислоть! в 5ХО0мл тетрагидрофурана нагревают до интенсивного кипения. Бьістро добавляют 9,Омл (90,2ммоль) боран-диметилсульфида, сч продолжают нагревание в течение 25 минут и добавляют тетрагидрофуран в момент испарения. Добавляют еще 4,О0мл борандиметил-сульфида и нагревание продолжают в течение 10 минут. Реакционную смесь і) охлаждают до 0"С и осторожно добавляют Б5Омл б-н. соляной кислотьі. Водородньй газ вьіделяется и температура реакционной смеси повьішается. Полученньй осадок собирают путем фильтрации, промьівают водой и сушат в вакууме в течение ночи. ї- зо 2,3г (8,2ммоль) твердого вещества подают в свежеизготовленньій раствор метилата натрия (из 1,9г (82,0ммоль) натрия) в 40мл метанола. Реакционную смесь нагревают до 50"С в течение 2 часов, после чего ісе) нагревают с обратньім холодильником в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температурь осадок ду собирают и промьвают сначала холодньм метанолом, а потом холодньм дизтиловьм зфиром. Твердое вещество сушат в вакууме в течение ночи с вьіходом 1,18г (5295) продукта. Аналитический образец о 2,3-дигидро-9-метокси-1Н-бензотиено-І(2,3-14-1,4-оксазепин-5-она получают в результате перекристаллизации из «Е смеси зтилацетата и гексана. Т.п. 264 - 26576.

Пример 7 2,3-дигидро-9-метокси-6-оксид-1Н-бензотиено-|2,3-1-1,4-оксазепин-5-он

К суспензии 1,00г (4, Оммоль) 2,3-дигидро-9-метокси-1Н-бензотиено-|2,3-1,4-оксазепин-5-она в 100мл теплого « метанола добавляют сначала 8,0мл (8Оммоль) З0956-ной перекиси водорода, а потом 445мг (4,01ммоль) шщ с двуокиси селена. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение З часов, после чего нагревают при 30"С в течение 1,5 часов, а потом при 40"С в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают до ;» -40"С и полученньй осадок собирают путем фильтрации. Остаток подвергают колоночной градиентной хроматографии с применением в качестве злюента 590-ного метанола в зтилацетате при постепенном увеличениий концентрации метанола до получения его смеси с зтилацетатом в соотношений 1:1. Получают їх ЗЗ38мМг продукта. Аналитический образец 2,3-дигидро-9-метокси-6-оксид-1Н-бензотиено-|2,3-1-1,4-оксазепин-5-она получают путем перекристаллизации о из смеси метола и зтил-ацетата. Т.п. 273 - 27476.

Ге) Пример 8 2,3-дигидро-9-метокси-2-метил-1Н-бензотиено-|2,3-1-1,4-оксазепин-5-он

Ме, Сложньй метиловьїй зфир 3-(1-цианозтокси)-5-метокси-бензо|б|-тиофен-2-карбоновой кислоть "М К имеющему комнатную температуру раствору 1,00г (4 2ммоль) метил-3-окси-5-метоксибензо|р)|тиофен-2-карбоксилата (см. Коннор и др., У. Мед. Спет. 25:958 (1992)) в 20мл диметилсульфоксида добавляют сначала 494мг (4,41ммоль) трет.-бутилата натрия, а потом 1,1мл (12,бммоль) вв 2 хлорпропионитрила. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 часов, после чего нагревают до 82"С в течение З часов. Реакционную смесь подают в зтилацетат и 1-н. соляную кислоту. (Ф, Органический слой сначала промьтвают 1-н. соляной кислотой, потом несколькими порциями рассола, после ка чего сушат над сульфатом магния. В результате фильтрации, удаления растворителя в вакууме и перекристаллизации остатка из смеси зтилацетата и гексана получают 853мг продукта. Т.п. 127 - 12976. во 2,3-дигидро-9-метокси-2-метил-1Н-бензотиено-|2,3-1-1,4-оксазепин-5-он

Раствор 400мг (1,37ммоль) сложного метилового зфира 3-(1-цианозтокси)-5-метоксибензо|р|-тиофен-2-карбоновой кислотьі в 7Омл тетрагидрофурана нагревают до интенсивного кипения. Прикальівают 1,4мл (13,7ммоль) боранди-метилсульфида и нагревание продолжают в течение 20 минут с добавлением тетрагидрофурана в момент испарения. Реакционную смесь охлаждают до 65 комнатной температурь! и осторожно добавляют 7,5мл 6б-н. соляной кислотьі. Через 5 минут реакционную смесь охлаждают до 0"С и добавляют 68,5мл 1-н. гидроокиси натрия, а затем зтилацетат. Слоий разделяют и органическую фазу промьівают сначала смесью рассола и водьі в соотношений 1:1, потом дополнительньм рассолом. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. Остаток подвергают колоночной градиентной хроматографии с применением в качестве злюента смеси метанола, Гексана и хлороформа в соотношений 5:25:70, потом смеси метанола и хлороформа в соотношений 10:90, а затем смеси метанола и хлороформа в соотношении 30:70, в результате чего получают 135мг продукта.

Аналитический образец 2,3-дигидро-9-метокси-2-метил-1 Н-бензотиено-|2,3-1-1,4-оксазепин-5--она получают путем перекристаллизации из смеси зтилацетата и гексана. Т.п. 185 -18670.

Соединения согласно изобретения легко поддаются переработке со стандартньми разбавителями и 7/0 носителями для удобной оральной или парентеральной дачи людям и животньм для лечения болезней, таких, как, например, воспаление, в частности артрит и тому подобному. Нижеследующие примерь! поясняют получение типичньїх фармацевтических композиций.

Пример 9

Получение капсульі! емкостью 250 мг 250мг 2,3-дигидро-9-изопропокси-7-хлор-1Н-бензотиеної|2,3-1-1,4-оксазепина-б5--она осмешивают с о 150мг лактозьі и 150мг кукурузного крахмала до получения гомогенной смеси. Смесь подают в желатиновье капсуль, которье дают орально в количестве 1 - З в сутки для лечения артрита.

Пример 10

Композиция для оральной суспензии ! 2,3-дигидро-8-зтил- 10-трифторметил- 500 мг з |б-оксид-1Н-бензотиено(2,3-Й-1,4-око- о азелин-5-он «со (22)

Раствор сорбита подают в 40мл дистиллированной водьі и оксазепинон суспендируют. К смеси добавляют т с сахарин, бензоат натрия и аромат и растворяют. Обьем доводят до 100мл добавлением дистиллированной в водьі. Каждьйй миллилитр сиропа содержит 5мг оксазепинона. Данная композиция для оральной дачи идеально ни годится для лечения воспаления в области педиатрии.

Пример 11

Получение растворов для парентеральной дачи - В растворе 700мл пропиленгликоля и 200мл дистиллированной водьі для иньекции растворяют 20,0г с 2,3-дигидро-7-диметиламино-1Н-бензотиено-|3,2-е|-1,4-диазепин-5-она. Значение рн раствора хлористоводородной кислотой доводят до 5,5 и обьем доводят до 1000мл добавлением дистиллированной іс) водь. Композицию стерилизуют, разливают в ампульі емкостью 5,0мл, каждая из которьїх содержит 2,0мл б 50 композиции (что представляет собой 40мг активного диазепинона) и герметизируют в атмосфере азота.

Композицию внутривенно дают пациентам, страдающим от воспаления или СПИДа. "м Пример 12

Получение крема для местного применения 5б0Омг 2,3-дигидро-7-зтокси-бензофурано-І2,3-4-1,4-оксазепин-5--она смешивают с 15г цетилового спирта, 1г лаурилсульфата натрия, 40г жидкого силикона марки О.С. 200 (торговьій продукт фирмь! Дау Корнинг Ко.,

Ге! Мидленд, Мичиган), 43г стерильной водьі, 0,25г метилпарабена и 0,15г пропилпарабена. Смесь нагревают приблизительно до 757"С при постоянном перемешиванийи, после чего охлаждают до комнатной температурь, ко при которой смесь затвердеваєет. Препарат наносят на поверхность кожи пациента, страдающего от воспаления. 60 б5

Таблица 1

В. щ 70 х ЛЯ ще о то 2.3-дигидро-9-мехокси-Пбензотиено(2,3-4-1,4-тиазепин-5(4Н)-он

Пример В2 Х у ЕСА ІСАМУ/Е5БЕЇ. ОоМ-10 р. Мо (КТео) | (КТео или 95 ингиб. | (КТ«о мкм) (Ф 30 мкм) зтля с 5 | оме ме) 9 1 | ле 1 рю роя пре ром 51911 тов о 1 1 юю 1 в

ІС) поро в збе 1овя 1 « 1 Метод определения торможения адгезии нейтрофилов человека к стимулированньмм фактором а некроза опухолей зндотелиальнь!м клеткам пупочной вень! человека 2/3) Йспьтание зкспрессии молекуль-і межклеточной адгезий и Е-селектина в зндотелиальньх клетках «5 пупочной веньї человека ші с хз

Claims (15)

Формула винаходу

1. Производнье бензотиофена, бензофурана, индолтиазепинона, оксазепинона и диазепинона формульі (І) 2» В 1 В Кв (Се) 1 ч б 50 й. К х МН 55 Ф) хх о; іме) во Кк М) где Ку, Ко, Кз и Ку; независимо друг от друга означают водород, гидроксил, галоген, низший алкил, низший алкоксил, бо Кв и Кв независимо друг от друга означают водород или низший алкил, Х - группа (ОО) или МН,

У - кислород, группа (0), или МН, п - О, 1 или 2, при условии, что 1) если Х означаєт МН, У - МН, К. - водород и Кз - водород, то Ко не означаєт метил, 2) если Х означаєт МН, У - МН, Ку, Кз и К, - водород, то Ко не означаєт метокси или зтокси, и 3) если Х означаєт МН, У - серу, то по меньшей мере один из радикалов Ку, Кз, и Кі не означает водород, или их фармацевтически приегемлемье кислотно-аддитивньсе соли.

2. Производнье бензотиофена, бензофурана, индолтиазепинона, оксазепинона и диазепинона по п. 1, где Ку, Кз и Ку; означают водород. 70

3. Производнье бензотиофена, бензофурана, индолтиазепинона, оксазепинона и диазепинона по п. 2, где Ко означает водород или низший алкоксил, Х означает группу (ОО), или МН, МУ означает кислород или группу (0) и п означаєт 0, 1 или 2.

4. Производное индолтиазепинона по п. З, представляющее собой 2,3-дигидро-9-метокси-|1|бензотиеної|2,3-1-1,4-тиазепин-5(4Н)он.

5. Производное оксазепинона по п. З, представляющее собой 2,3-дигидро|Пбензотиено|2,3-24-1,4-оксазепин-5(4Н)он.

б. Производное индолтиазепинона по п. З, представляющее собой 2,3-дигидро-9-метокси|1|бензотиено|2,3-1-1,4-тиазепин-5(4Н)он-1-оксид.

7. Производное оксазепинона по п. З, представляющее собой З,4-дигидро-9-метокси-б6-метил-2Н-1,4-оксазепиної|б,7-Б|индол-5(6Н)он.

8. Производное диазепинона по п. З, представляющее собой 2,3-дигидро-1Н-бензотиено|3,2-е|-1,4-диазепин-5-он.

9. Производное оксазепинона по п. З, представляющее собой 2,3-дигидро-9-метокси-1Н-бензотиено-І2,3-14-1,4-оксазепин-5-он. сч

10. Производное оксазепинона по п. З, представляющее собой 2,3-дигидро-9-метокси-6-оксид-1Н-бензотиено-|2,3-1-1,4-оксазепин-5-он. (8)

11. Производное оксазепинона по п. З, представляющее собой 2,3-дигидро-9-метокси-2-метил-1Н-бензотиено-|2,3-1-1,4-оксазепин-5-он.

12. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей клеточную адгезию или ВИЧ активностью, М зо содержащая активное начало и фармацевтически приегмлемьй носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного начала она включает терапевтически зффективное количество соединения по п. 1. ісе)

13. Способ торможения адгезий лейкоцитов Кк зндотелиальньм клеткам при лечениий вьізванньїх ею б болезней, отличающийся тем, что включаєт введение терапевтически зффективного количества фармацевтической композиции по п. 12 в виде дозировочной единиць. що)

14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что лечению подвергают воспалительную болезнь. «Е

15. Способ лечения млекопитающих, зараженньїх ВИЧ, отличающийся тем, что включаєет введение терапевтически зффективного количества фармацевтической композиции по п. 12 в виде дозировочной единиць. « - с з т» 1 (се) б 50 і (Ф) ко бо б5