UA125377C2 - L-валінат карбоксамідного похідного гідроксипропілтіазолідину та його сольова форма, кристалічна поліморфна форма - Google Patents

L-валінат карбоксамідного похідного гідроксипропілтіазолідину та його сольова форма, кристалічна поліморфна форма Download PDF

Info

Publication number
UA125377C2
UA125377C2 UAA201806074A UAA201806074A UA125377C2 UA 125377 C2 UA125377 C2 UA 125377C2 UA A201806074 A UAA201806074 A UA A201806074A UA A201806074 A UAA201806074 A UA A201806074A UA 125377 C2 UA125377 C2 UA 125377C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
compound
shi
sho
shk
nya
Prior art date
Application number
UAA201806074A
Other languages
English (en)
Inventor
Пейдж Патрік Наксос
Пэйдж Патрик Наксос
Маттіас Шварц
Маттиас Шварц
Катрін Жоран-Лебрен
Катрин Жоран-Лебрен
Анна Куаттропані
Анна Куаттропани
Вінсент Помел
Винсент Помел
Original Assignee
Мерк Сероно С.А.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US14/987,586 external-priority patent/US9447055B1/en
Application filed by Мерк Сероно С.А. filed Critical Мерк Сероно С.А.
Publication of UA125377C2 publication Critical patent/UA125377C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/426—1,3-Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4422—1,4-Dihydropyridines, e.g. nifedipine, nicardipine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A61K38/095—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/06—Antiabortive agents; Labour repressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/04—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/06—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)

Abstract

У винаході пропонується L-валінатний естер карбоксамідного похідного гідроксипропілтіазолідину (І), (2S)-3-([1,1’-біфеніл]-4-ілсульфоніл)-N-[(1S)-3-гідрокси-1-фенілпропіл]-1,3-тіазолідин-2-карбоксаміду, а також його солі і кристалічні поліморфи. Сполука інгібує рецептор простагландину F (РGF2альфа) і є придатною для лікування розладів, таких як передчасні передпологові перейми на ранній стадії гестації або дисменорея.

Description

ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ
Винахід відноситься до хімічних композицій, таких як сполуки, солі та кристалічні поліморфні форми, які здатні зв'язувати та інгібувати активність рецептора простагландину Е2а (РОЕ2а), а також способів запобігання передчасним пологам на ранній стадії гестації шляхом введення вказаних композицій пацієнту, який потребує лікування.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Передчасні передпологові перейми є поширеною причиною перинатальної смертності у розвинених країнах і зустрічаються у близько 7-10 95 усіх пологів (Вегком/ї еї а!., Ерідетіо! Кему. 15: 414-443 (1993). Тяжка захворюваність, особливо респіраторний дистрес-синдром, внутрішньошлуночковий крововилив, бронхолегенева дисплазія та некротичний ентероколіт, набагато частіше зустрічається у недоношених, ніж у доношених новонароджених. Хронічні порушення, такі як церебральний параліч, порушення зору та втрата слуху, також частіше зустрічаються у недоношених дітей. На цей час передчасні передпологові перейми залишаються провідною причиною дитячої смертності та захворюваності в Сполучених Штатах, де, незважаючи на значні покращення акушерської медицини, дитяча смертність є вищою, ніж у багатьох інших промислово розвинених країнах, що спричиняє витрати понад 5 мільярдів доларів на рік на неонатальну інтенсивну терапію дітей, народжених з низькою масою тіла.
Фактичні витрати, пов'язані з таким лікуванням, є ще вищими, якщо враховувати медичний догляд при захворюваннях, пов'язаних з недоношеністю дитини, таких як респіраторний дистрес синдром, серцеві захворювання, церебральний параліч, епілепсія і серйозні проблеми з навчанням.
Протягом останніх 40 років клінічних досліджень і незважаючи на застосування численних терапевтичних засобів, зустрічальність передчасних передпологових перейм суттєво не зменшилася. Профілактика передчасних передпологових перейм є складною і, хоча токолітична терапія залишається наріжним каменем управління передчасними пологовими переймами, не існує загальної згоди щодо її значення при цьому стані. Наявні токолітичні агенти самі по собі не подовжують пологи більш ніж на 48 годин, а більшість цих агентів не володіють селективністю по відношенню до матки, тому вони можуть спричиняти потенційно серйозні побічні ефекти як для матері, так і для плоду.
Зо По суті, вчасні і передчасні передпологові перейми є подібними процесами в тому, що вони мають спільну фізіологічну кінцеву точку, яка характеризується скороченнями матки, розширенням шийки матки та активацією фетальних оболонок. Відмінності полягають в термінах гестації, при яких відбуваються ці процеси, і механізмах, за допомогою яких вони активуються. Вважається, що вчасні передпологові перейми є результатом фізіологічної активації термінального шляху, тоді як передчасні передпологові перейми є патологічним станом, що характеризується множинною етіологією, при якій один або більша кількість компонентів цього шляху аберантно активуються.
Скоротність матки стимулюється або пригнічується різними рецепторами в клітинах міометрію. Висунута гіпотеза про те, що активація міометрію виникає внаслідок скоординованої експресії пов'язаних із скороченням білків, ПСБ (САР), включаючи актин, міозин, конексин-43, рецептори окситоцину та простагландинів. Загалом, рецептори, які провокують вхід кальцію або вивільнення кальцію з внутрішньоклітинних запасів, стимулюють скоротність. Однак рецептори, пов'язані з продукуванням циклічних нуклеотидів, таких як циклічний аденозинмонофосфат (ЦАМФ), розслабляють матку. Наприклад, рецептори окситоцину та простагландину Е (ЕР) є стимулюючими, тоді як В2-адренорецептори та рецептори простагландину Е2, пов'язані з утворенням ЦАМФ, є інгібіторними.
Було показано, що в тканинах матки простагландини Е2 (РОЕ2) та Е2а (РОБЕ29а) індукують зміни шийки матки та спричиняють скоротність матки, дві основні події у фізіології передпологових перейм і розродження. Активація рецептора ЕР в міометрії людини за допомогою РОБГ2а приводить до підвищення рівня внутрішньоклітинного кальцію, що, в свою чергу, веде до скорочення гладкої мускулатури матки (Абгатоміїх еї аї., 9. Віої. Спет., 269: 2632- 2636 (1994) і 5Зепіог еї аї., Вг. У. Рпагтасої. 108: 501-506 (1993)). Рецептори ЕР активуються в тканинах матки ближче до терміну пологів (АІ-Майибрві єї аї!., Віо!., Вергод., 65: 1029-1037 (2001)).
Інгібітори синтезу простагландинів (такі як індометацин та німесулід) продемонстрували деякий токолітичний ефект, але не позбавлені побічних ефектів, а їх неліцензійне застосування в клініці викликало занепокоєння щодо безпеки плоду (Могіоп еї аІ., Мемж/ Епаді. У. Мей. 329: 1602-1067 (1993) і Реги7і еї аіІ. Мем/ Епої. У. Мей., 354: 1615 (1999)). Залишається потреба у розробці терапевтичних засобів із селективністю по відношенню до міометрію, які дозволяли б тривале гальмування скорочень матки, що призводять до передпологових перейм, і подовжували б вагітність до стадії, коли збільшення ступеню дозрівання плоду підвищує шанси на його виживання.
КОРОТКИЙ ОПИС СУТІ ВИНАХОДУ
Винахід включає а-аміноестери карбоксамідного похідного гідроксипропілтіазолідину, а також їх солі, здатні виявляти антагонізм по відношенню до взаємодії між простагландином Е2а (РОБГ20) і рецептором простагландину РЕ. Ці сполуки можна вводити суб'єкту, наприклад, вагітній жінці-суб'єкту, для лікування або попередження передчасних передпологових перейм. У винаході додатково пропонуються способи синтезу цих сполук, а також способи одержання їх кристалічних форм.
В першому аспекті винаходу пропонується сполука, представлена формулою (І),
Е
« 5 НМ
Суть Й во пу хх
Ще () (35)-3-0(25)-3-(біфеніл-4-ілсульфоніл)-1,3-тіазолідин-2-ілікарбоніл)іаміно)-3-(4- флуорфеніл)пропіл-І -валінат або його фармацевтично прийнятна сіль. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука представлена формулою (ІІ), (35)-3-4((25)-3-(біфеніл-4- ілсульфоніл)-1,3-тіазолідин-2-ілікарбоніл)-аміно)-3-(4-флуорфеніл)пропіл-І -валінат гідрохлорид.
Е
" в НМ
Суть й ж - о пу сі
ХХ су й
Фі (І)
В деяких варіантах реалізації винаходу сполука зв'язує рецептор Е2а простагландину з афінністю близько 1 нМ. Сполуки за винаходом демонструють здатність селективно зв'язувати рецептори простагландину КЕ, такі як простагландин Е2са, порівняно з іншими підтипами простагландинового рецептора. Наприклад, сполуки за винаходом виявляють афінність до рецептора Е2а простагландину, у близько 10 разів вищу, ніж спостерігається для рецептора простагландину Е2. Крім того, сполуки за винаходом виявляють афінність до рецептора простагландину Ег2а, у близько 100 або більшу кількість разів вищу (наприклад, від близько 100 до 1000 разів, наприклад, у близько 100 разів, у 110 разів, у 120 разів, 130 разів, 140 разів, 150 разів, 160 разів, 170 разів, 180 разів, 190 разів, 200 разів, 210 разів, 220 разів, 230 разів, 240 разів, 250 разів, 260 разів, 270 разів, 280 разів, 290 разів, 300 разів, 310 разів, 320 разів, 330 разів, 340 разів, 350 разів, 360 разів, 370 разів, 380 разів, 390 разів, 400 разів, 410 разів, 420 разів, 430 разів, 440 разів, 450 разів, 460 разів, 470 разів, 480 разів, 490 разів, 500 разів, 510 разів, 520 разів, 530 разів, 540 разів, 550 разів, 560 разів, 570 разів, 580 разів, 590 разів, 600 разів, 610 разів, 620 разів, 630 разів, 640 разів, 650 разів, 660 разів, 670 разів, 680 разів, 690 разів, 700 разів, 710 разів, 720 разів, 730 разів, 740 разів, 750 разів, 760 разів, 770 разів, 780 разів, 790 разів, 800 разів, 810 разів, 820 разів, 830 разів, 840 разів, 850 разів, 860 разів, 870 разів, 880 разів, 890 разів, 900 разів, 910 разів, 920 разів, 930 разів, 940 разів, 950 разів, 960 разів, 970 разів, 980 разів, 990 разів, 1000 або більшу кількість разів) вищу, ніж по відношенню до інших підтипів простагландинового рецептора, таких, як підтипи рецепторів простагландину
ЕТ, ЕЗ, Е4, 01, 02, 11 та І2. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука є розчинною у водному розчині в концентрації від близько 300 мкг/мл до близько 500 мкг/мл, наприклад, в концентрації близько 380 мкг/мл.
В деяких варіантах сполука інгібує синтез інозитолтрифосфату в клітині, такій як ссавцева клітина. В деяких варіантах ссавцева клітина являє собою клітину людини, таку як клітина міометрію. В деяких варіантах клітина міометрію є міоцитом матки. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука спричиняє зменшення амплітуди скорочень матки у суб'єкта після введення сполуки суб'єкту. Наприклад, сполука може індукувати зменшення від близько 40 95 до близько 50 95 відносно виміряного показника амплітуди скорочень матки у суб'єкта, зареєстрованого до введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука демонструє період напіввиведення у суб'єкта від близько 1 до близько 4 годин після введення сполуки суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука досягає максимальної концентрації в плазмі суб'єкта в межах від близько 0,25 до близько 2 годин після введення сполуки суб'єкту.
В деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт є ссавцем. В деяких варіантах реалізації винаходу ссавець є людиною. В деяких варіантах реалізації винаходу ссавець не є людиною, наприклад, собака або щур. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту перорально. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту внутрішньовенно.
В іншому аспекті винахід включає сполуку, представлену формулою (ПІ),
Е
" в НМ
Суть в су і:
Фі (І) причому сполука знаходиться в кристалічному стані.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполука демонструє характерні піки на дифрактограмі рентгеноструктурного аналізу порошку при близько 7,0728, близько 8,1726, близько 10,07269, близько 20,1728, близько 21,0728 і близько 23,5729. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука додатково демонструє піки на дифрактограмі рентгеноструктурного аналізу порошку при близько 12,07269, близько 13,1729, близько 14,1728, близько 16,4726, близько 18,4729 і близько 29,5729. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука характеризується дифрактограмою рентгеноструктурного аналізу порошку, по суті такою, як зображена на будь-якій з фіг. 19, 22, 29, 45-49 та 54. Наприклад, у деяких варіантах реалізації
Зо винаходу сполука характеризується дифрактограмою рентгеноструктурного аналізу порошку, по суті такою, як зображена на Фіг. 49.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполука демонструє піки "Н ядерного магнітного резонансу (ЯМР) з центром близько 1,1 м.ч., близько 3,3 м.ч., близько 4,9 м.ч., близько 5,4 м.ч., близько 7,1 м.ч., близько 7,7 м.ч., близько 7,9 м.ч. і близько 8,0 м.ч. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука характеризується спектром "Н ЯМР, по суті таким, як зображено на
Фіг. 21.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполука демонструє ендотерму в діапазоні від близько 145 "С до близько 147 "С, за даними диференційної скануючої калориметрії. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука демонструє додаткову ендотерму при температурі близько 214 "С, за даними диференційної скануючої калориметрії. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука характеризується кривою диференційної скануючої калориметрії, по суті такою, як зображено на Фіг. 20. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука демонструє додаткову ендотерму при температурі близько 228 "С, за даними диференційної скануючої калориметрії. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука характеризується кривою диференційної скануючої калориметрії, по суті такою, як зображено на Фіг. 23.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполука зазнає втрати маси від близько 0,2 95 до близько 0,6 95 при нагріванні від 25 "С до 100 "С, за даними термогравіметричного аналізу. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука зазнає втрати маси від близько 2,5 95 до близько 3,5 95 при нагріванні від 100 "С до 160 "С, за даними термогравіметричного аналізу. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука демонструє криву термогравіметричного аналізу, по суті таку, як зображено на Фіг. 24.
У додатковому аспекті винаходу пропонується фармацевтична композиція, що містить сполуку за будь-яким з описаних вище аспектів. Фармацевтична композиція може необов'язково містити одну або більше допоміжних речовин. В деяких варіантах реалізації винаходу чистота сполуки становить щонайменше 90 905, 91 95, 92 95, 93 905, 94 905, 95 905, 96 95, 97 90, 98 95, 99 95 або 99,9 95, наприклад, за даними рідинної хроматографії високого тиску, ВЕРХ (НРІ С) або ЯМР спектроскопії. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука та/або фармацевтична композиція складена для перорального введення суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція являє собою таблетку, капсулу, гелевий ковпачок, порошок, рідкий розчин або рідку суспензію. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука та/або фармацевтична композиція складена для внутрішньовенного введення суб'єкту.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить два або більшу кількість терапевтичних агентів, таких як сполука за винаходом (наприклад, сполука, представлена формулою (І) або її фармацевтично прийнятна сіль, така як сполука, представлена формулою (ІІЇ)) і додатковий терапевтичний агент. Наприклад, фармацевтична композиція може містити два або більшу кількість терапевтичних агентів, змішаних один з одним для спільного введення пацієнту, наприклад, для лікування або профілактики передчасних передпологових перейм. Фармацевтичну композицію за винаходом можна вводити суб'єкту з метою затримки початку передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1,2,3,4,5,6, 7,8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 днів або близько 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів). В деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт зазнає передчасних передпологових перейм. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичну композицію вводять суб'єкту (наприклад, суб'єкту-людині) перед початком передчасних передпологових перейм. Фармацевтичну композицію за винаходом можна вводити суб'єкту (наприклад, суб'єкту-/людині) 3 метою запобігання
Зо передпологовим переймам до кесаревого розтину. Фармацевтичну композицію за винаходом можна вводити суб'єкту (наприклад, людині) для лікування або профілактики дисменореї.
Фармацевтичну композицію за винаходом можна вводити суб'єкту, такому як вагітний суб'єкт- людина жіночої статі, для полегшення одного або більшої кількості симптомів, пов'язаних з пологами, таких як вагінальна кровотеча та розрив маткових оболонок.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний агент є додатковим токолітичним агентом.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль і додатковий токолітичний агент. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ЇЇ), і додатковий токолітичний агент.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент являє собою антагоніст рецептора окситоцину, такий як атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан і нуласибан, або один або більшу кількість їх варіантів, композицій, кристалічних форм або похідних.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль і атосибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), і атосибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль і варіант атосибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 4504469 або 4402942, розкриття кожного з яких включено в цей документ шляхом посилання. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ІІ), і варіант атосибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 4504469 або 4402942.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль і ретосибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), і ретосибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль і варіант ретосибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 7141437; 8367673; 8541579; 8071594; 60 8357685; 8937179; або 05 2016/0074413, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ІІ), і варіант ретосибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 7141437; 8367673; 8541579; 8071594; 8357685; 8937179; або 05 2016/0074413.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль і барусибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), і барусибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль і варіант барусибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 6143727; 7091314; 7816489; або 5 2016/0175283, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), і варіант барусибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 6143272; 7091314; 7816489; або 05 2016/0175283.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль, та епелсибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), і епелсибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль і варіант епелсибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 7141437; 8367673; 8541579; 7550462; 1919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; або 8815856, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ІІ), і варіант епелсибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 7141437; 8367673; 8541579; 7550462; 7919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; або 8815856.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль і нуласибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), і нуласибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція
Зо містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль і варіант, композицію або кристалічну форму нуласибану, такі як варіант, композиція або кристалічна форма, описані в патенті США Мо 7115754 або патентній заявці США Мо 2015/0073032; 2015/0164859; або 2016/0002160, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), і варіант, композицію або кристалічну форму нуласибану, такі як варіант, композиція або кристалічна форма, описані в патенті США Мо 7115754 або
Публікації заявки на патент США Мо 2015/0073032; 2015/0164859; або 2016/0002160.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент являє собою бетаміметик, такий як тербуталін, ритодрин, гексопреналін, альбутерол, фенотерол, нілідрин або орципреналін.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент являє собою інгібітор кальцієвих каналів, такий як дигідропіридин. В деяких варіантах інгібітор кальцієвих каналів є ніфедипіном. В деяких варіантах інгібітор кальцієвих каналів є нікардипіном.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент являє собою сіль магнію, таку як магній сульфат.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент являє собою донор нітрогену оксиду, такий як нітрогліцерол.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент являє собою антагоніст рецептора окситоцину, такий як атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан, нуласибан або їх варіант, композиція, кристалічна форма або похідне, наприклад, як описано в цьому документі.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена для перорального введення, і додатковий токолітичний агент складений для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена для внутрішньовенного введення, і додатковий токолітичний агент складений для внутрішньовенного введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена для перорального введення, а додатковий токолітичний агент складений для внутрішньовенного введення. В деяких варіантах бо реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена для внутрішньовенного введення, а додатковий токолітичний агент складений для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена для перорального введення, а додатковий токолітичний агент складений для внутрішньом'язового введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена для внутрішньовенного введення, а додатковий токолітичний агент складений для внутрішньом'язового введення.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (ІІ), складена для перорального введення, і додатковий токолітичний агент складений для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (ПП), складена для внутрішньовенного введення, і додатковий токолітичний агент складений для внутрішньовенного введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), складена для перорального введення, а додатковий токолітичний агент складений для внутрішньовенного введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (ІІ), складена для внутрішньовенного введення, а додатковий токолітичний агент складений для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (ІІ), складена для перорального введення, а додатковий токолітичний агент складений для внутрішньом'язового введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), складена для внутрішньовенного введення, а додатковий токолітичний агент складений для внутрішньом'язового введення.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний агент є прогестероном або його варіантом або похідним, наприклад 17-а-гідроксипрогестерон капроатом.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), або її фармацевтично прийнятну сіль і прогестерон або 17-а- гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена для перорального введення, а прогестерон або 17-а-гідроксипрогестерон капроат складений для інтравагінального введення.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її
Зо фармацевтично прийнятна сіль складена для внутрішньовенного введення, а прогестерон або 17-а-гідроксипрогестерон капроат складений для інтравагінального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу як сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль, так і прогестерон або 17-а-гідроксипрогестерон капроат складені для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена для внутрішньовенного введення, а прогестерон або 17-а-гідроксипрогестерон капроат складений для перорального введення.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ІІ), і прогестерон або 17-а-гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), складена для перорального введення, а прогестерон або 17-ос-гідроксипрогестерон капроат складений для інтравагінального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (ІІ), складена для внутрішньовенного введення, а прогестерон або 17-а- гідроксипрогестерон капроат складений для інтравагінального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу як сполука, представлена формулою (ІІ), так і прогестерон або 17-а- гідроксипрогестерон капроат складені для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (ІІІ), складена для внутрішньовенного введення, а прогестерон або 17-а-гідроксипрогестерон капроат складений для перорального введення.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний агент являє собою кортикостероїд. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є бетаметазоном. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є дексаметазоном. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є гідрокортизоном. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена для перорального введення, а кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для внутрішньом'язового введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена для внутрішньовенного введення, а кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для внутрішньом'язового введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена 60 для перорального введення, і кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), або її фармацевтично прийнятна сіль складена для внутрішньовенного введення, а кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для перорального введення.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (ІІ), складена для перорального введення, а кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для внутрішньом'язового введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (Ії), складена для внутрішньовенного введення, а кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для внутрішньом'язового введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (ІП), складена для перорального введення, і кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (ІІ), складена для внутрішньовенного введення, а кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для перорального введення.
В іншому аспекті винаходу пропонується спосіб синтезу сполуки, представленої формулою ()
Е й
З пдв В;
М щ-о 9 Мн» хх (в) . й ПА ЛИ . або її фармацевтично прийнятної солі шляхом введення в реакцію прекурсору, представленого формулою (ІМ)
Е
) Н ( Ми, і
СУ Й-во й о
Н о (М) з прекурсором, представленим формулою (М) в) «МН х (М) з утворенням аміноестеру, де Х являє собою захисну групу. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає видалення захисної групи з аміноестеру. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука представлена формулою (ІІ).
Е
« в НМ ді В, я - ре о МН СІ су і:
Фф (І)
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає введення аміноестеру в реакцію з реагентом, здатним видаляти захисну групу з аміноестеру. В деяких варіантах реалізації винаходу захисна група вибрана з групи, що складається із трет-бутоксикарбонілу, тритілу, 4- монометокситритілу, 4-метилтритілу, 3,5-диметоксифенілізопропоксикарбонілу, 2-(4- біфеніл)ізопропоксикарбонілу, 2-нітрофенілсульфенілу, 9-флуоренілметоксикарбоніл /2-(4- нітрофонеїлсульфоніл)етоксикарбонілу, (1,1-діоксобензо|Б|гіофен-2-іл)метоксикарбонілу, 1-(4,4- диметил-2,6-діоксоциклогекс-1-иліден)-З-метилбутилу, 2,7-ди-трет-бутил-9- флуоренілметоксикарбонілу, 2-флуор-9-флуоренілметоксикарбонілу, 2-моноізооктил-9- флуоренілметоксикарбонілу, 2,7-діїізооктил-З-флуоренілметоксикарбонілу, тетрахлорфталоїлу, 2-Іфеніл(іметил)сульфоніо|етилоксикарбоніл тетрафлуорборату, етансульфонілетоксикарбонілу, 2-(4-сульфофенілсульфоніл)етоксикарбонілу, бензилоксикарбонілу, алілоксикарбонілу, о-нітробензенсульфонілу, 2,4- динітробензенсульфонілу, бензотіазол-2-сульфонілу, 2,2,2-трихлоретоксикарбонілу, дитіасукциноїлу, п-нітробензилоксикарбонілу, а-азидокислоти, пропаргілоксикарбонілу, 9-(4- бромфеніл)-9-флуоренілу, азидометоксикарбонілу, гексафлуорацетону, 2- хлорбензилоксикарбонілу, трифлуорацетилу, 2-(метилсульфоніл)етоксикарбонілу, фенілдисульфанілетилоксикарбонілу і 2-піридилдисульфанілетилоксикарбонілу.
В деяких варіантах реалізації винаходу реагент вибраний з групи, що складається із метансульфонової кислоти, хлоргідрогенової кислоти, трифлуороцтової кислоти, оцтової кислоти, піперидину, 1,8-діазабіцикло/5.4.О)ундец-7-ену, морфоліну, гексаметиленіміну, аміаку, діетиламіну, піперазину, трис(2-аміноетил)аміну, гідразину, 1-метилпіролідину, натрій гідрокарбонату, натрій гідроксиду, барій гідроксиду, натрій карбонату, молекулярного гідрогену, бромгідрогенової кислоти, бор триброміду, тетракісс(трифенілфосфін)паладію, тіофенолу, ВД- меркаптоетанолу, 2-меркаптооцтової кислоти, амальгами алюмінію, цинку, гіпофосфористої кислоти, натрій боргідриду, М-меркаптоацетаміду, олово (І) хлориду, триметилфосфіну, трибутилфосфіну, трифенілфосфіну, бензилтриетиламоній тетратіомолібдату, паладій (ІІ) ацетату, флуоргідрогенової кислоти, триметилсилілхлориду, триметилсилілтрифлуорметансульфонату і трирфлуорметансульфонової кислоти.
Зо В деяких варіантах реалізації винаходу захисна група є трет-бутоксикарбонілом, а реагент вибраний з групи, що складається із метансульфокислоти, хлоргідрогенової кислоти і трифлуороцтової кислоти, наприклад, метансульфонової кислоти.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає обробку аміноестеру електромагнітним випромінюванням. В деяких варіантах реалізації винаходу захисна група вибрана з групи, що складається із о-нітробензилоксикарбонілу, 4-нітровератрилоксикарбонілу, 2-(2-нітрофеніл)пропілоксикарбонілу і 2-(3,4-метилендіокси-б-нітрофеніл)/пропілоксикарбонілу. В деяких варіантах реалізації винаходу електромагнітне випромінювання характеризується довжиною хвилі від близько 300 до близько 400 нм.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає введення прекурсору, представленого формулою (ІМ), в реакцію з прекурсором, представленим формулою (М), та діїімідом. В деяких варіантах реалізації винаходу діїмід вибраний з групи, що складається із 1- етил-3-(З-диметиламінопропіл)карбодіїміду, М,М'-діїізопропілкарбодіїміду та М,М'- дициклогексилкарбодіїміду. В деяких варіантах реалізації винаходу діїмід є 1-етил-3-(3- диметиламінопропіл)карбодіїімідом. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає введення прекурсору, представленого формулою (ІМ), в реакцію з прекурсором, представленим формулою (М), і похідним бензотриазолу, таким як похідне бензотриазолу, вибране з групи, що складається із 1-гідроксибензотриазолу, б-хлор-1-гідроксибензотриазолу і 1-гідрокси-7-
азабензотриазолу. В деяких варіантах реалізації винаходу похідне бензотриазолу є 1- гідроксибензотриазолом.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає введення прекурсору, представленого формулою (ІМ), в реакцію з прекурсором, представленим формулою (М), і основою, такою як М,М-диметиламінопіридин.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає синтез прекурсору, представленого формулою (ІМ), шляхом введення прекурсору, представленого формулою (МІ)
Е
5 Н
С М,
М но о (Фін (МІ) в реакцію з прекурсором, представленим формулою (МІ).
СІ
СИ о мі)
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає введення прекурсору, представленого формулою (МІ), в реакцію з прекурсором, представленим формулою (МІЇ),, і однією або більшою кількістю основ. В деяких варіантах реалізації винаходу одна або більша кількість основ вибрані з групи, що складається із дізопропілетиламіну, триетиламіну і М,М- диметиламінопіридину.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає введення прекурсору, представленого формулою (МІ), в реакцію з прекурсором, представленим формулою (МІ), діізопропілетиламіном і М,М-диметиламінопіридином.
В додатковому аспекті винаходу пропонується спосіб одержання сполуки, представленої формулою (І),
Е й 5
Суть й
М ці г що о МНа СІ хх су о
Фі (І) причому спосіб включає змішування сполуки, представленої формулою (І)
Е й
З
Суть Й
М що 9 МН» хх су ? (І) з хлоргідрогеновою кислотою.
В деяких варіантах реалізації винаходу хлоргідрогенова кислота являє собою водну хлоргідрогенову кислоту. Водна хлоргідрогенова кислота може бути приготована, наприклад,
шляхом розведення хлоргідрогенової кислоти у воді, такій як дистильована або демінералізована вода. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає одержання сполуки, представленої формулою (І), у кристалічному стані.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає розчинення сполуки, представленої формулою (І), в етанолі. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає змішування хлоргідрогенової кислоти з етанолом. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає змішування хлоргідрогенової кислоти з етилацетатом. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає додавання сполуки, представленої формулою (І), до хлоргідрогенової кислоти протягом періоду від близько 20 до близько 30 хвилин, з утворенням суміші. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає підтримання температури суміші під час додавання від близько 15С до близько 25"С. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає зниження температури суміші до близько 5 "С після додавання. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає перемішування суміші протягом періоду від близько 50 хвилин до близько 70 хвилин при температурі від близько 0 "С до близько 5 "С після зниження.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає змішування сполуки, представленої формулою (І), і хлоргідрогенової кислоти в еквімолярних кількостях.
В іншому аспекті винахід включає сполуку, одержану за будь-яким з описаних вище способів.
В додатковому аспекті винаходу пропонується спосіб лікування передчасних передпологових перейм у суб'єкта шляхом введення суб'єкту терапевтично ефективної кількості сполуки або фармацевтичної композиції у відповідності до будь-якого з описаних вище аспектів винаходу.
В додатковому аспекті винаходу пропонується спосіб запобігання передчасним передпологовим переймам у суб'єкта шляхом введення суб'єкту терапевтично ефективної кількості сполуки або фармацевтичної композиції у відповідності до будь-якого з описаних вище аспектів винаходу.
В іншому аспекті винаходу пропонується спосіб запобігання передпологовим переймам до кесаревого розладу у суб'єкта шляхом введення суб'єкту терапевтично ефективної кількості сполуки або фармацевтичної композиції у відповідності до будь-якого з описаних вище аспектів винаходу.
В іншому аспекті винаходу пропонується спосіб лікування або запобігання дисменореї у суб'єкта шляхом введення суб'єкту терапевтично ефективної кількості сполуки або фармацевтичної композиції у відповідності до будь-якого з описаних вище аспектів винаходу.
В іншому аспекті винаходу пропонується спосіб лікування або профілактики ендометріозу у суб'єкта шляхом введення суб'єкту терапевтично ефективної кількості сполуки або фармацевтичної композиції у відповідності до будь-якого з описаних вище аспектів винаходу.
В деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт характеризується гестаційним віком від близько 24 до близько 34 тижнів. В деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт демонструє зменшення амплітуди скорочень матки після введення, наприклад, зниження від близько 40 905 до близько 50 95 (наприклад, близько 40 95, 41 90, 42 905, 43 905, 44 95, 45 95, 46 90, 47 90, 48 90, 49
Фо або 50 95) відносно виміряного значення амплітуди скорочень матки у суб'єкта, зареєстрованого до введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука демонструє період напіввиведення у суб'єкта від близько 1 до близько 4 годин (наприклад, близько 1 години, 1,1 години, 1,2 години, 1,3 години, 1,4 години, 1,5 години, 1,6 години, 1,7 години, 1,8 години, 1,9 години, 2,0 години, 2,1 години, 2,2 години, 2,3 години, 2,4 години, 2,5 години, 2,6 години, 2,7 години, 2,8 години, 2,9 години, 3,0 годин, 3,1 години, 3,2 години, 3,3 години, 3,4 години, 3,5 години, 3,6 години, 3,7 години, 3,8 години, 3,9 години або 4,0 години). В деяких варіантах реалізації винаходу сполука досягає максимальної концентрації в плазмі суб'єкта в межах від близько 0,25 до близько 2 годин після введення (наприклад, близько 0,25 години, 0,3 години, 0,4 години, 0,5 години, 0,6 години, 0,7 години, 0,8 години, 0,9 години, 1,0 години, 1,1 години, 1,2 години, 1,3 години, 1,4 години, 1,5 години, 1,6 години, 1,7 години, 1,8 години, 1,9 години або 2,0 години). В деяких варіантах реалізації винаходу, суб'єкт є ссавцем, таким як людина.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення сполуки або фармацевтичної композиції суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення сполуки або фармацевтичної композиції суб'єкту.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту в комбінації з додатковим терапевтичним агентом. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту в комбінації з додатковим токолітичним агентом.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту в поєднанні з антагоністом рецептора окситоцину. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає введення суб'єкту перорального антагоніста рецептора окситоцину. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення суб'єкту антагоніста рецептора окситоцину.
Сполуку можна вводити суб'єкту одночасно із введенням антагоніста рецептора окситоцину. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту до введення суб'єкту антагоніста рецептора окситоцину. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту після введення суб'єкту антагоніста рецептора окситоцину. В деяких варіантах сполуку змішують з антагоністом рецептора окситоцину, і ці агенти вводять суб'єкту одночасно. В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину є атосибаном, ретосибаном, барусибаном, епелсибаном або нуласибаном або їх варіантом, препаратом, кристалічною формою або похідним.
В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину є атосибаном або варіантом атосибану, таким як варіант, описаний в патенті США Мо 4504469 або 4402942, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину є ретосибаном або варіантом ретосибану, таким як варіант, описаний в патенті США Мо 7514437; 8367673; 8541579; 8071594; 8357685; 8937179; або 05 2016/0074413, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину є барусибаном або варіантом барусибану, таким як варіант, описаний в патенті США Мо 6143722; 7091314; 7816489; або 05 2016/0175283, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину є епелсибаном або варіантом епелсибану, таким як варіант, описаний в патенті США Мо 7514437; 8367673; 8541579; 7550462; 7919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; або 8815856, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину є нуласибаном або варіантом, препаратом або кристалічною формою нуласибану, такими як варіант, композиція
Зо або кристалічна форма, описані в патенті США Мо 7115754 або Публікації патентної заявки США
Мо 2015/0073032; 2015/0164859; або 2016/0002160, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту в комбінації з бетаміметиком, таким як тербуталін, ритодрин, гексопреналін, альбутерол, фенотерол, нілідрин або орципреналін. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення суб'єкту бетаміметика. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення суб'єкту бетаміметика. Сполуку можна вводити суб'єкту одночасно з введенням бетаміметика. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту до введення суб'єкту бетаміметика. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту після введення суб'єкту бетаміметика. В деяких варіантах сполуку змішують з бетаміметиком, і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту в комбінації з інгібітором кальцієвих каналів, таким як дигідропіридин. В деяких варіантах інгібітор кальцієвих каналів є ніфедипіном. В деяких варіантах інгібітор кальцієвих каналів є нікардипіном. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення інгібітору кальцієвих каналів суб'єкту.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення |інгібітору кальцієвих каналів суб'єкту. Сполуку можна вводити суб'єкту одночасно з інгібітором кальцієвих каналів. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту до введення інгібітору суб'єкту кальцієвих каналів. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту після введення суб'єкту інгібітору кальцієвих каналів. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку змішують з інгібітором кальцієвих каналів, і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту в комбінації з сіллю магнію, такою як магній сульфат. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення суб'єкту солі магнію. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньом'язове введення суб'єкту солі магнію. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення суб'єкту солі магнію. Сполуку можна вводити суб'єкту одночасно із введенням солі магнію. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту до введення суб'єкту солі магнію. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту після введення суб'єкту солі магнію. В деяких варіантах реалізації бо винаходу сполуку змішують із сіллю магнію, і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту в поєднанні з донором нітрогену оксиду, таким як нітрогліцерол. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення суб'єкту донора нітрогену оксиду. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення суб'єкту донора нітрогену оксиду. Сполуку можна вводити суб'єкту одночасно з введенням донора нітрогену оксиду. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту перед введенням суб'єкту донора нітрогену оксиду. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту після введення суб'єкту донора нітрогену оксиду. В деяких варіантах сполуку змішують з донором нітрогену оксиду, і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту в комбінації з прогестероном або його варіантом або похідним, таким як 17-а-гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення суб'єкту прогестерону або його варіанта або похідного, такого як 17-а-гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення суб'єкту прогестерону або його варіанта або похідного, такого як 17-а-гідроксипрогестерон капроат.
Сполуку можна вводити суб'єкту одночасно із введенням прогестерону або його варіанту або похідного, такого як 17-а-гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту до введення суб'єкту прогестерону або його варіанту або похідного, такого як 17-с-гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту після введення суб'єкту прогестерону або його варіанту або похідного, такого як 17-а-гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку змішують із прогестероном або його варіантом або похідним, таким як 17-а-гідроксипрогестерон капроат (наприклад, у препараті для перорального введення, серед іншого), і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту в комбінації з кортикостероїдом. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є бетаметазоном. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є дексаметазоном. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення суб'єкту кортикостероїда. В деяких варіантах реалізації винаходу цей спосіб включає внутрішньом'язове введення суб'єкту
Зо кортикостероїда. Сполуку можна вводити суб'єкту одночасно з введенням кортикостероїду. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту до введення суб'єкту кортикостероїда. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку вводять суб'єкту після введення суб'єкту кортикостероїда. В деяких варіантах сполуку змішують з кортикостероїдом (наприклад, у препараті для перорального введення, серед іншого), і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації пропонується набір, що включає сполуку або фармацевтичну композицію у відповідності до будь-якого з описаних вище аспектів винаходу, а також листок- вкладиш в упаковку. В деяких варіантах реалізації винаходу листок-вкладиш в упаковку інструктує користувача набору щодо введення сполуки або фармацевтичної композиції суб'єкту з передчасними передпологовими переймами або що піддається ризику передчасних передпологових перейм, такому як суб'єкт, у якого присутні один або більша кількість симптомів передчасних передпологових перейм, описаних в цьому документі. В деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт характеризується гестаційним віком від близько 24 до близько 34 тижнів. В деяких варіантах реалізації винаходу листок-вкладиш в упаковку інструктує користувача набору щодо змішування сполуки або фармацевтичної композиції з водним розчином. В деяких варіантах реалізації винаходу листок-вкладиш в упаковку інструктує користувача набору щодо перорального введення сполуки суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу листок-вкладиш в упаковку інструктує користувача набору щодо внутрішньовенного введення сполуки суб'єкту.
У додатковому аспекті винаходу пропонується фармацевтична композиція, що містить сполуку, представлену формулою (Ії),
Е
« в НМ
С Он
М, ие
Щі (І) 3-(П1,1"-біфеніл|-4-ілеоульфоніл)-М-(П1-(4-флуорфеніл)-3-гідроксипропіл|-1,3-тіазолідин-2- карбоксамід. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ІІ), і додатковий терапевтичний агент. В деяких варіантах 5 реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ЇЇ), і додатковий токолітичний агент. Фармацевтична композиція необов'язково може містити одну або більшу кількість допоміжних речовин. В деяких варіантах реалізації винаходу чистота сполуки, представленої формулою (Ії), становить щонайменше, 90 905, 91 95, 92 95, 93 905, 94 905, 95 95, 96 965, 97 95, 98 95, 99 95 або 99,9 95, наприклад, за даними рідинної хроматографії високого тиску (ВЕРХ) або ЯМР спектроскопії. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука та/або фармацевтична композиція складені для перорального введення суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука та/"або фармацевтична композиція є таблеткою, капсулою, гелевим ковпачком, порошком, рідким розчином або рідкою суспензією. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука та/або фармацевтична композиція складена для внутрішньовенного введення суб'єкту.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить два або більшу кількість терапевтичних агентів, таких як сполука, представлена формулою (І), і додатковий терапевтичний агент. Наприклад, фармацевтична композиція може містити два або більшу кількість терапевтичних агентів, змішаних один з одним для спільного введення пацієнту, наприклад, для лікування або профілактики передчасних передпологових перейм.
Фармацевтичну композицію можна вводити суб'єкту з метою затримки початку передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30 днів або близько 1,2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів). В деяких варіантах реалізації винаходу у суб'єкта присутні передчасні передпологові перейми. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичну композицію вводять суб'єкту (наприклад, суб'єктгу-/людини) до початку передчасних передпологових перейм. Фармацевтичну композицію можна вводити суб'єкту (наприклад, суб'єккгуу/людини) для запобігання передпологовим переймам до розродження шляхом
Зо кесаревого розтину. Фармацевтичну композицію можна вводити суб'єкту (наприклад, суб'єкту- людини) для лікування або профілактики дисменореї. Фармацевтичну композицію можна вводити суб'єкту, наприклад, вагітному суб'єкту-людині жіночої статі, 3 метою полегшення одного або більшої кількості симптомів, пов'язаних з передпологовими переймами, таких як вагінальна кровотеча і розрив маткових оболонок.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний агент є додатковим токолітичним агентом. В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент являє собою антагоніст рецептора окситоцину, такий як атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан і нуласибан, або один або більшу кількість їх варіантів, композицій, кристалічних форм або похідних.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ІЇ), і атосибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), і варіант атосибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 4504469 або 4402942, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), і ретосибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (Ії), і варіант ретосибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 7 514 437; 8367673; 8541579; 8071594; 8357685;
8937179; або 5 2016/0074413, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ІЇ), і барусибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (Ії), і варіант барусибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 6143722; 7091314; 7816489; або 05 2016/0175283, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ІЇ), і епелсибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (Ії), і варіант епелсибану, такий як варіант, описаний у патенті США Мо 7141437; 8367673; 8541579; 7550462; 7919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; або 8815856, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (І), і нуласибан. В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ІІ), і варіант, композицію або кристалічну форму нуласибану, такі як варіант, композиція або кристалічна форма, описані в патенті США Мо 7115754 або Публікації патентної заявки США Мо 2015/0073032; 2015/0164859; або 2016/0002160, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент являє собою бетаміметик, такий як тербуталін, ритодрин, гексопреналін, альбутерол, фенотерол, нілідрин або орципреналін.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент являє собою інгібітор кальцієвих каналів, такий як дигідропіридин. В деяких варіантах інгібітор кальцієвих каналів є ніфедипіном. В деяких варіантах інгібітор кальцієвих каналів є нікардипіном.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент являє собою сіль магнію, таку як магній сульфат.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент являє собою донор нітрогену оксиду, такий як нітрогліцерол. В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий
Зо токолітичний агент являє собою антагоніст рецептора окситоцину, такий як атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан, нуласибан або їх варіант, композиція, кристалічна форма або похідне, наприклад, як описано в цьому документі.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (Ії), складена для перорального введення, а додатковий токолітичний агент складений для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), складена для внутрішньовенного введення, і додатковий токолітичний агент складений для внутрішньовенного введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), складена для перорального введення, а додатковий токолітичний агент складений для внутрішньовенного введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (ІІ), складена для внутрішньовенного введення, а додатковий токолітичний агент складений для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (Ії), складена для перорального введення, а додатковий токолітичний агент складений для внутрішньом'язового введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (Ії), складена для внутрішньовенного введення, а додатковий токолітичний агент складений для внутрішньом'язового введення.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний агент являє собою прогестерон або його варіант або похідне, наприклад, 17-а-гідроксипрогестерон капроат.
В деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція містить сполуку, представлену формулою (ІІ), і прогестерон або 17-а-гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (Ії), складена для перорального введення, а прогестерон або 17-с-гідроксипрогестерон капроат складений для інтравагінального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (Ії), складена для внутрішньовенного введення, а прогестерон або 17-а- гідроксипрогестерон капроат складений для інтравагінального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу як сполука, представлена формулою (І), так і прогестерон або 17-а- гідроксипрогестерон капроат складені для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (Ії), складена для внутрішньовенного введення, а прогестерон або 17-а-гідроксипрогестерон капроат складений для перорального
Гс10) введення.
В деяких варіантах реалізації винаходу, додатковий терапевтичний агент являє собою кортикостероїд. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є бетаметазоном. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є дексаметазоном. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є гідрокортизоном. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (ІІ), складена для перорального введення, а кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для внутрішньом'язового введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), складена для внутрішньовенного введення, а кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для внутрішньом'язового введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (Ії), складена для перорального введення, і кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для перорального введення. В деяких варіантах реалізації винаходу сполука, представлена формулою (І), складена для внутрішньовенного введення, а кортикостероїд (наприклад, бетаметазон, дексаметазон або гідрокортизон) складений для перорального введення.
В додатковому аспекті винаходу пропонується спосіб лікування передчасних передпологових перейм у суб'єкта шляхом надання (наприклад, введення) суб'єкту терапевтично ефективної кількості сполуки, представленої формулою (І),
Е
« в НМ
СУ он де
ХУ ся о
Ще (І) 3-(П1,1"-біфеніл|-4-ілеоульфоніл)-М-(П1-(4-флуорфеніл)-3-гідроксипропіл|-1,3-тіазолідин-2- карбоксамід, або фармацевтичної композиції, що містить сполуку, представлену формулою (Ії), у відповідності до будь-якого з вищезазначених аспектів винаходу.
У додатковому аспекті винаходу пропонується спосіб запобігання передчасним передпологовим переймам у суб'єкта шляхом надання (наприклад, введення) суб'єкту терапевтично ефективної кількості сполуки, представленої формулою (Ії), або фармацевтичної композиції, що містить сполуку, представлену формулою (ІІ), у відповідності до будь-якого з описаних вище аспектів винаходу.
В іншому аспекті винаходу пропонується спосіб профілактики передпологових перейм до розродження шляхом кесаревого розтину у суб'єкта шляхом надання (наприклад, введення)
Зо суб'єкту терапевтично ефективної кількості сполуки, представленої формулою (І), або фармацевтичної композиції, що містить сполуку, представлену формулою (ІЇ), у відповідності до будь-якого з описаних вище аспектів винаходу.
В іншому аспекті винаходу пропонується спосіб лікування або запобігання дисменореї у суб'єкта шляхом надання (наприклад, введення) суб'єкту терапевтично ефективної кількості сполуки, представленої формулою (ІІ), або фармацевтичної композиції, що містить сполуку, представлену формулою (ІЇ), у відповідності до будь-якого з описаних вище аспектів винаходу.
В іншому аспекті винаходу пропонується спосіб лікування або профілактики ендометріозу у суб'єкта шляхом надання (наприклад, введення) суб'єкту терапевтично ефективної кількості сполуки, представленої формулою (Ії), або фармацевтичної композиції, що містить сполуку, представлену формулою (Ії), у відповідності до будь-якого з описаних вище аспектів винаходу.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (І), надають суб'єкту в комбінації з додатковим терапевтичним агентом. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку надають суб'єкту в комбінації з додатковим токолітичним агентом. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку надають суб'єкту шляхом введення сполуки суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку надають суб'єкту шляхом введення суб'єкту пролікарської речовини, яка метаболізується іп мімо з утворенням сполуки, представленої формулою (І).
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (І), надають суб'єкту в комбінації з антагоністом рецептора окситоцину. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення антагоніста рецептора окситоцину суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення антагоніста рецептора окситоцину суб'єкту. Сполуку, представлену формулою (І), можна надавати суб'єкту одночасно з введенням антагоніста рецептора окситоцину. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), надають суб'єкту перед введенням суб'єкту антагоніста рецептора окситоцину. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), надають суб'єкту після введення суб'єкту антагоніста рецептора окситоцину. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (Ії) або її проліки змішують з антагоністом рецептора окситоцину, і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину являє собою атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан або нуласибан або їх варіант, композицію, кристалічну форму або похідне.
В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину є атосибаном або варіантом атосибану, таким, як варіант, описаний в патенті США Мо 4504469 або 4402942, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину є ретосибаном або варіантом ретосибану, таким як варіант, описаний в патенті США Мо 7514437; 8367673; 8541579; 8071594; 8357685; 8937179; або 05 2016/0074413, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину є барусибаном або варіантом барусибану, таким як варіант, описаний в патенті США Мо 6143722; 7091314; 7816489; або США 2016/0175283, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину є епелсибаном або варіантом епелсибану, таким як варіант, описаний в патенті США Мо 7514437; 8367673; 8541579; 7550462; 7919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; або 8815856, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
Зо В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст рецептора окситоцину є нуласибаном або варіантом, препаратом або кристалічною формою нуласибану, таким як варіант, препарат або кристалічна форма, описана в патенті США Мо 7115754 або Публікації патентної заявки США Мо 2015/0073032; 2015/0164859; або 2016/0002160, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), надають суб'єкту в поєднанні з бетаміметиком, таким як тербуталін, ритодрин, гексопреналін, альбутерол, фенотерол, нілідрин або орципреналін. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення бетаміметика суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення бетаміметика суб'єкту. Сполуку, представлену формулою (Ії), можна надавати суб'єкту одночасно з введенням бетаміметика. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), надають суб'єкту до введення суб'єкту бетаміметика. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), надають суб'єкту після введення суб'єкту бетаміметика. В деяких варіантах реалізації винаходу, сполуку, представлену формулою (Ії), або її проліки змішують з бетаміметиком, і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), надають суб'єкту в комбінації з інгібітором кальцієвих каналів, таким як дигідропіридин. В деяких варіантах інгібітор кальцієвих каналів є ніфедипіном. В деяких варіантах інгібітор кальцієвих каналів є нікардипіном. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення інгібітору кальцієвих каналів суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення інгібітору кальцієвих каналів суб'єкту. Сполуку, представлену формулою (Ії), можна надавати суб'єкту одночасно з інгібітором кальцієвих каналів. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (Ії), надають суб'єкту до введення суб'єкту інгібітора кальцієвих каналів. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (І), надають суб'єкту після введення суб'єкту інгібітору кальцієвих каналів. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), або її проліки, змішують з інгібітором кальцієвих каналів, і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (І), надають бо суб'єкту в комбінації з сіллю магнію, такою як магній сульфат. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення суб'єкту солі магнію. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньом'язове введення суб'єкту солі магнію. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення суб'єкту солі магнію.
Сполуку, представлену формулою (ІІ), можна надавати суб'єкту одночасно із введенням солі магнію. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (Ії), надають суб'єкту до введення суб'єкту солі магнію. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (Ії), надають суб'єкту після введення суб'єкту солі магнію. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (Ії) або її проліки, змішують із сіллю магнію, і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), надають суб'єкту в поєднанні з донором нітрогену оксиду, таким як нітрогліцерол. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення суб'єкту донора нітрогену оксиду. В деяких варіантах реалізації винаходу цей спосіб включає внутрішньовенне введення суб'єкту донора нітрогену оксиду. Сполуку, представлену формулою (Ії), можна надавати суб'єкту одночасно із введенням донора нітрогену оксиду. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), надають суб'єкту до введення суб'єкту донора нітрогену оксиду. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (І), надають суб'єкту після введення суб'єкту донора нітрогену оксиду. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ) або її проліки, змішують з донором нітрогену оксиду, і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), надають суб'єкту в комбінації з прогестероном або його варіантом або похідним, таким як 17-а- гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення суб'єкту прогестерону або його варіанта або похідного, такого як 17-а- гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення суб'єкту прогестерону або його варіанта або похідного, такого як 17- а-гідроксипрогестерон капроат. Сполуку, представлену формулою (ІІ), можна надавати суб'єкту одночасно із введенням прогестерону або його варіанту або похідного, такого як 17-а- гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену
Зо формулою (ІІ), надають суб'єкту перед введенням суб'єкту прогестерону або його варіанту або похідного, такого як 17-а-гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), надають суб'єкту після введення суб'єкту прогестерону або його варіанту або похідного, такого як 17-а-гідроксипрогестерон капроат. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (І), або її проліки, змішують з прогестероном або його варіантом або похідним, таким як 17-а-гідроксипрогестерон капроат (наприклад, у пероральному препараті, серед іншого), і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (І), надають суб'єкту в комбінації з кортикостероїдом. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є бетаметазоном. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є дексаметазоном. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення кортикостероїда суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньом'язове введення кортикостероїда суб'єкту. Сполуку, представлену формулою (Ії), можна надавати суб'єкту одночасно із введенням кортикостероїду. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (І), надають суб'єкту перед введенням суб'єкту кортикостероїда. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (ІІ), надають суб'єкту після введення суб'єкту кортикостероїда. В деяких варіантах реалізації винаходу сполуку, представлену формулою (І), або її проліки змішують з кортикостероїдом (наприклад, у пероральному препараті, серед іншого), і ці агенти вводять суб'єкту одночасно.
В деяких варіантах реалізації винаходу, суб'єкт характеризується гестаційним віком від близько 24 до близько 34 тижнів. В деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт виявляє зменшення амплітуди скорочень матки після введення, наприклад, зниження від близько 40 905 до близько 50 95 (наприклад, близько 40 905, 41 95, 42 95, 43 95, 44 905, 45 905, 46 905, 47 905, 48 95, 49
Фо або 50 95) відносно виміряного показника амплітуди скорочень матки у суб'єкта, зареєстрованого до введення. В деяких варіантах реалізації винаходу, суб'єкт є ссавцем, таким як людина.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає пероральне введення сполуки або фармацевтичної композиції суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає внутрішньовенне введення сполуки або фармацевтичної композиції суб'єкту.
В деяких варіантах реалізації винаходу пропонується набор, що містить сполуку або бо фармацевтичну композицію у відповідності до будь-якого з описаних вище аспектів винаходу, а також листок-вкладиш в упаковку. В деяких варіантах реалізації винаходу листок-вкладиш в упаковку інструктує користувача набору щодо введення сполуки або фармацевтичної композиції суб'єкту, у якого присутні передчасні передпологові перейми або ризик передчасних передпологових перейм, наприклад, у суб'єкта присутні один або більша кількість симптомів передчасних передпологових перейм, описаних в цьому документі. В деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт характеризується гестаційним віком від близько 24 до близько 34 тижнів. В деяких варіантах реалізації винаходу листок-вкладиш в упаковку інструктує користувача набору щодо змішування сполуки або фармацевтичної композиції з водним розчином. В деяких варіантах реалізації винаходу листок-вкладиш в упаковку інструктує користувача набору щодо перорального введення сполуки суб'єкту. В деяких варіантах реалізації винаходу листок-вкладиш в упаковку інструктує користувача набору щодо внутрішньовенного введення сполуки суб'єкту.
Визначення
В цьому описі термін "близько" відноситься до значення, що є в межах 10 95 вищим або нижчим за описане значення.
Як використовується в цьому документі, термін "афінність" стосується міцності зв'язувальної взаємодії між двома молекулами, такими як ліганд та рецептор. Термін "К!", як використовується в цьому документі, призначений для позначення константи інгібування антагоніста для конкретної молекули, що представляє інтерес, і виражається як молярна концентрація (М).
Значення К; для взаємодії антагоніста-мішені можуть бути визначені, наприклад, за допомогою методів, визнаних у даній галузі техніки. Методи, які можуть бути застосовані для визначення Кі антагоніста для молекулярної мішені, включають експерименти з конкурентним зв'язуванням, такі як аналізи конкурентного зв'язування з радіолігандом, наприклад, як описано в 05 8415480.
Термін "Ка", як використовується в цьому документі, призначений для позначення константи дисоціації, яка може бути одержана, наприклад, із співвідношення константи швидкості для дисоціації двох молекул (Ка) і константи швидкості для асоціації двох молекул (Ка) і виражається як молярна концентрація (М). Значення Ка для взаємодії рецептора-ліганда можна визначати, наприклад, за допомогою методів, визнаних у даній галузі техніки. Методи, які можуть бути застосовані для визначення Ка взаємодії рецептора-ліганду, включають поверхневий плазмовий резонанс, наприклад, за допомогою системи біосенсора, наприклад, систему ВІАСОКЕФ)
Як використовується в цьому документі, термін "кортикостероїд" означає будь-який із стероїдних гормонів, що продукуються корою наднирників, або їх синтетичних еквівалентів.
Типовими кортикостероїдами є бетаметазон, дексаметазон і гідрокортизон, серед інших, а також їх варіанти. Кортикостероїди, призначені для застосування разом із композиціями і способами, описаними в цьому документі, включають, наприклад, такі, які здатні спричиняти дозрівання легенів плоду, наприклад, таким чином, щоб запобігти розвитку респіраторного дистрес-синдрому у недоношених немовлят. Типові кортикостероїди для застосування разом із композиціями і способами, описаними в цьому документі, включають описані у ЧЩобе еї аї. Ат. .).
Обзївї. Супесої. 190: 878-881 (2004) і Мігасіє еї аї. .). Регіпаї. Меа. 36: 191-196 (2008), розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
Як використовується в цьому документі, термін "кристалічний" або "кристалічна форма" означає наявність фізичного стану, який є регулярним тривимірним масивом атомів, іонів, молекул або молекулярних агрегатів. Кристалічні форми містять решітчасті масиви будівельних блоків під назвою асиметричних блоків, розташовані відповідно до добре визначеної симетрії в одиничних комірках, які повторюються в трьох вимірах. На відміну від цього, термін "аморфний" або "аморфна форма" означає неорганізовану (без упорядкованості) структуру. Фізичний стан терапевтичної сполуки може бути визначений типовими методами, такими як рентгеноструктурний аналіз, мікроскопія поляризованого світла та/або диференційна скануюча калориметрія.
Як використовується в цьому документі, термін "ендогенний" описує молекулу (наприклад, поліпептид, нуклеїнову кислоту або кофактор), яка природним чином виявляється в певному організмі (наприклад, людини) або в певному місці організму (наприклад, орган, тканина або клітина, наприклад, клітина людини).
Як використовується в цьому документі, термін "екзогенний" описує молекулу (наприклад, поліпептид, нуклеїнову кислоту або кофактор), яка не виявляється природним чином в певному організмі (наприклад, людини) або в певному місці організму (наприклад, орган, тканина або клітина, така як клітина людини). Екзогенні матеріали включають ті, які надходять із зовнішнього джерела до організму або до культивованих речовин, що виділяють з нього.
Як використовується в цьому документі, термін "гестаційний вік" описує, наскільки далеко бо прогресувала конкретна вагітність, і вимірюється з першого дня останнього менструального циклу вагітного суб'єкта жіночої статі до поточної дати. Як використовується в цьому документі, термін "передпологові перейми" (який також може мати назву розродження) відноситься до вигнання плоду та плаценти з матки вагітного суб'єкта жіночої статі. У випадку нормальної вагітності, передпологові перейми можуть виникати в гестаційному віці близько 40 тижнів. "Передчасні передпологові перейми", як використовується в цьому документі, стосуються стану, при якому передпологові перейми починаються більш ніж на три тижні раніше повного періоду гестації, що зазвичай становить близько 40 тижнів. Тобто передчасні передпологові перейми виникають на будь-якій стадії до, наприклад, 38 тижнів вагітності. За відсутності лікування, передчасні передпологові перейми зазвичай призводять до розродження або фізіологічних змін, пов'язаних з розродженням, у вагітного суб'єкта жіночої статі. Передчасні передпологові перейми можуть супроводжуватися або не супроводжуватися вагінальною кровотечею або розривом маткових оболонок. Передчасні передпологові перейми додатково можуть мати назву передчасних пологів. Уникнення передчасних передпологових перейм у суб'єкта подовжує термін вагітності і, таким чином, можна уникнути передчасних пологів, зменшуючи в такий спосіб ризик неонатальної смертності та захворюваності.
Як використовується в цьому документі, термін "ІСво" означає концентрацію речовини (антагоніста), яка знижує ефективність референтного агоніста або конститутивну активність біологічної мішені на 50 95, наприклад, за даними аналізу конкурентного зв'язування ліганду.
Типові аналізи конкурентного зв'язування ліганду включають аналізи конкурентного зв'язування радіоліганду, конкурентні імуноферментні аналізи, ІФА (ЕЇІ5А) та аналізи на базі флуоресцентної анізотропії, серед інших, відомих у даній галузі техніки.
Як використовується в цьому документі в контексті надання або введення суб'єкту двох або більшої кількості терапевтичних агентів, фраза "в комбінації з" означає доставку двох або більшої кількості терапевтичних агентів суб'єкту (наприклад, суб'єкту-ссавцю, такому як суб'єкт- людина), наприклад, одночасно або в різний час. Наприклад, один терапевтичний агент може бути введений суб'єкту в комбінації з іншим шляхом введення обох агентів суб'єкту одночасно, наприклад, в одній фармацевтичній композиції або в окремих композиціях, які вводяться суб'єкту одночасно (наприклад, різними способами введення). В іншому прикладі один терапевтичний агент може бути введений суб'єкту в комбінації з іншим, із введенням спочатку
Зо суб'єкту одного терапевтичного агента, з наступним введенням іншого терапевтичного агента, з використанням того самого або іншого способу введення.
Як використовується в цьому документі, термін "нуласибан" означає (37,55)-5- (гідроксиметил)-1-(2'-метил-1,1"-біфеніл-4-ілукарбоніл|піролідин-3-он О-метилоксим, представлений наступною структурною формулою: пору ИН
М й 9 в,
Нуласибан
Варіанти, препарати і кристалічна форма нуласибану описані, наприклад, у патенті США Мо 7115754 і Патентній заявці США Мо 2015/0073032; 2015/0164859; і 2016/0002160, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
Як використовується в цьому документі, термін "біодоступність при пероральному введенні" стосується частки сполуки, введеної суб'єкту, такому як ссавець (наприклад, людина), яка досягає системного кровообігу у суб'єкта, причому вона не є ізольованою в нецільових органах або виведеною без абсорбції через шлунково-кишковий тракт. Цей термін означає концентрацію в плазмі крові, яка інтегрована в часі, і, як правило, виражається у відсотках від перорально введеної дози.
Як використовується в цьому документі, термін "антагоніст рецептора окситоцину" або "антагоніст окситоцину" відноситься до сполуки, здатної інгібувати взаємодію між окситоцином і рецептором окситоцину, наприклад, таким чином, що інгібується активність однієї або більшої кількості сигнальних молекул нижче в сигнальному шляху в каскаді трансдукції сигналу окситоцину. Антагоністи окситоцину для застосування з композиціями і способами, описаними в цьому документі, включають сполуки, які зв'язуються та інгібують рецептор окситоцину, такі як атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан і нуласибан, а також їх варіанти, препарати, кристалічні форми і похідні, в тому числі описані в цьому документі, серед іншого.
Як використовується в цьому документі, термін "фармацевтично прийнятний" стосується тих сполук, матеріалів, композицій та/або лікарських форм, що є придатними для приведення в контакт із тканинами суб'єкта, наприклад, ссавця (наприклад, людина) без надмірної токсичності, подразнення, алергічної реакції та інших проблемних ускладнень, співставно із розумним співвідношенням користі та ризику.
Як використовується в цьому документі, термін "фармацевтична композиція" означає суміш, яка містить терапевтичну сполуку, призначену для введення суб'єкту, такому як ссавець, наприклад, людини, з метою запобігання, лікування або контролю певного захворювання або стану, що впливає на ссавця, такого як передчасні передпологові перейми або дисменорея, серед іншого, наприклад, як описано в цьому документі.
Як використовується в цьому документі, термін "захисна група" відноситься до хімічного фрагменту, який, при зв'язуванні з функціональною групою, робить функціональну групу інертною по відношенню до однієї або більшої кількості хімічних реакцій. Такі реакції можуть модифікувати один або більшу кількість замісників у сполуці та, за відсутності захисних груп, можуть призводити до небажаної хімічної модифікації (наприклад, електрофільне приєднання, сольволіз, окиснення, відновлення або взаємоперетворення функціональних груп) фрагмента, що представляє інтерес (наприклад, аміно, гідроксильний, карбоксильний або карбоксамідний фрагмент). Захисні групи можуть, у відповідний час, бути введені в хімічну реакцію, з метою відновлення початкової функціональної групи. Природа захисної групи може бути вибрана таким чином, щоб вона була сумісною рештою молекули, наприклад, таким чином, що захисна група не видаляється під час інших етапів синтезу або модифікації молекули, а також, необов'язково, таким чином, що реакційні умови, які застосовуються для видалення захисної групи, не призводять до видалення інших захисних груп, розташованих на інших замісниках молекули. Приклади захисних груп включають такі, що можуть бути ковалентно зв'язані, наприклад, з амінним замісником, такими як аміногрупа с-аміноестеру. Подальше видалення захисної групи, згадане в цьому документі як "знаття захисту" з хімічного фрагмента, може бути досягнуте за допомогою реагентів та умов, відомих у даній галузі техніки. Типові захисні групи
Ко) включають, але не обмежуючись цим, бензил, ацетил, оксиацетил, карбоксибензил, 9- флуоренілоксикарбоніл, 2-хлор-1-інданілметоксикарбоніл, бенз|Цінден-З-метоксикарбоніл, 2- (трет-бутилсульфоніл)-2-пропенілоксикарбоніл, бензотіофен сульфон-2-метилкарбоніл, трет- бутоксикарбоніл, трет-амілоксикарбоніл, В-триметилсилілетилоксикарбоніл, адамантилоксикарбоніл, 1-метилциклобутилоксикарбоніл, 2-(п-біфеніліл)пропіл-2-оксикарбоніл, 2-(п-фенілазофеніл)пропіл-2-оксикарбоніл, 2-2-диметил-3,5- диметилоксибензилоксикарбоніл, 2-фенілпропіл-2-оксикарбоніл, бензилоксикарбоніл, п-толуенсульфоніламінокарбоніл, - 0о- нітрофенілсульфеніл, дитіасукциноїл, фталоїл, піперидиноксикарбоніл, форміл, трифлуорацетил, 2,4,6-триметоксибензил, 2,3,6-триметил-4-метоксибензолсульфоніл, трет- бутоксиметил, пентаметилхромансульфоніл, адамантил, В-триметилсилілетил, В- триметилілілетилоксикарбоніл, трет-бутил, трет-бутилбензил, циклопентил, трифенілметил, бензилоксикарбоніл, форміл і трифлуорацетил, серед іншого. Захисні групи можуть бути придатними для конкретного хімічного замісника. Наприклад, приклади гідроксильних захисних груп включають, без обмеження, бензил, п-метоксибензил, п-нітробензил, аліл, тритіл, діалкілсилілові етери, такі як диметилсиліловий етер, і триалкілсилілові етери, такі як триметилсиліловий етер, триєтилсіліловий етер і трет-бутилдиметилсиліловий етер; такі естери, як бензоїл, ацетил, фенілацетил, форміл, моно-, ди- і тригалогенацетил, такі як хлорацетил, дихлорацетил, трихлорацетил, трифлуорацетил; і карбонати, такі як метил, етил, 2,2,2-трихлоретил, аліл, бензил і п-нітрофеніл. Додаткові приклади захисних груп можна найти, наприклад, у Сгеепе апа Ууцї5, Ргоїтесіїме СгоцМирз іп Огдапіс Зупіпебзів, 24 Еа., 1991, Хдопп Уміеу Є зоп5, а також у МсОтіеє, Ргоїесіїме СгоиМирз іп Огдапіс Спетівігу, 1975, Ріепит Ргез5, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання. Інші приклади захисних груп описані, наприклад, у патентах США МоМо 3835175; 4508657; 3839396; 4581167; 4460501; і 4108846, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
Як використовується в цьому документі в контексті терапевтичного лікування, терміни "надавати" та "надання" стосуються доставки терапевтичного агента суб'єкту (наприклад, суб'єкту-ссавцю, такому як людина), який потребує лікування, такому як суб'єкт, у якого присутні або існує ризик передчасних передпологових перейм. Терапевтичний агент може бути наданий суб'єкту, який потребує цього, наприклад, шляхом прямого введення терапевтичного агента суб'єкту або шляхом введення проліків, які іп мімо перетворюються на терапевтичний агент бо після введення проліків суб'єкту. Типові проліки включають, але не обмежуючись цим, естери,
фосфати та інші хімічні функціональні групи, чутливі до гідролізу при введенні суб'єкту.
Препарати включають відомі в цій галузі техніки, такі, як описані, наприклад, у Мід еї аї., Адм.
Огд Оєїїм. Нем. 65: 1370-1385 (2013), і Нийипеп еї аї., Рпаптасої. Кем. 63: 750-771 (2011), розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
Як використовується в цьому документі, термін "зразок" відноситься до зразка (наприклад, крові, компоненту крові (наприклад, сироватка або плазма), сечі, слини, амніотичної рідини, спинномозкової рідини, тканини (наприклад, плацентарної або шкірної), панкреатичної рідини, зразка ворсин хоріону та клітин), виділеного з організму суб'єкта.
Як використовується в цьому документі, фрази "специфічно зв'язується" і "зв'язується" означають реакцію зв'язування, що є визначальною для наявності певного білка в гетерогенної популяції білків та інших біологічних молекул, який розпізнається, наприклад, специфічним лігандом. Ліганд (наприклад, білок, протеоглікан або глікозаміноглікан), що специфічно зв'язується з білком, буде зв'язуватися з білком, наприклад, з Ко менш ніж 100 нМ. Наприклад, ліганд, що специфічно зв'язується з білком, може зв'язуватися з білком із Ко до 100 НМ (наприклад, від 1 пМ до 100 нМ). Значення Ко для ліганду, що не виявляє специфічного зв'язування з білком або його доменом, буде становити більш ніж 100 нМ (наприклад, більш ніж 200 НМ, 300 нм, 400 нМ, 500 нм, 600 нм, 700 нм, 800 нМ, 900 нМ, 1 мкМ, 100 мкМ, 500 мкМ або 1
ММ) для цього конкретного білка або його домену. Різноманітні формати аналізу можуть бути застосовані для визначення афінності ліганду по відношенню до конкретного білка. Наприклад, твердофазні аналізи ІФА (ЕГІБА) звичайно застосовуються для ідентифікації лігандів, що специфічно зв'язують цільовий білок. Див., наприклад, Нагіоу" 8 І апе, Апііродієв, А І арогайгу
Мапиаї, Соїа бргіпа Нагрог Ргез5, Мем/ Хогк (1988) і Напому 8 І апе, О5іпуд Апііродієв, А І арогаюгу
Мапиаї!, Со 5ргіпд Нагрог Ргез5, Мем/ МогКк (1999) щодо опису форматів і умов аналізу, які можуть бути застосовані для визначення специфічного зв'язування білка.
Як використовується в цьому документі, терміни "суб'єкт" і "пацієнт" є взаємозамінними і відносяться до організму, який одержує лікування певного захворювання або стану, як описано в цьому документі (такого як передчасні передпологові перейми або дисменорея) або якому встановлено діагноз захворювання або стану відповідно до описаних в цьому документі способів. Приклади суб'єктів і пацієнтів включають ссавців, таких як людина, які одержують
Зо лікування захворювань або станів, наприклад, передчасних передпологових перейм в ранньому гестаційному віці (наприклад, 24-34 тижні).
Сполука, сольова форма, кристалічна поліморфна форма, терапевтичний агент або інша композиція, описані в цьому документі, можуть згадуватися як такі, що характеризуються графічними даними "по суті такими, як зображено на" фігурі. Серед іншого, такі дані можуть включати, але не обмежуючись цим, дифрактограми рентгеноструктурного аналізу порошку, спектри ЯМР, криві диференційної скануючої калориметрії та криві термогравіметричного аналізу. Як відомо в цій галузі техніки, такі графічні дані можуть містити додаткову технічну інформацію для подальшого визначення сполуки, сольової форми, кристалічної поліморфної форми, терапевтичного агента або іншої композиції. Як буде зрозуміло фахівцю в цій галузі, таке графічне представлення даних може бути об'єктом невеликих варіацій, наприклад, відносної інтенсивності піку та положення піку, зумовлених такими факторами, як варіації відповіді приладу та зміни концентрації і чистоти зразка. Тим не менше, фахівець в цій галузі легко зможе порівняти графічні дані на фігурах в цьому документі із графічними даними, одержаними для сполуки, сольової форми, кристалічної поліморфної форми, терапевтичного агента або іншої композиції, і підтвердити, чи характеризують два набори графічних даних один і той самий матеріал чи два різні матеріали. Наприклад, кристалічну форму (35)-3-(((25)-3- (біфеніл-4-ілсульфоніл)-1,3-тіазолідин-2-ілІікарбоніл)аміно)-3-(4-флуорфеніл)пропіл-і -валінат гідрохлориду, що згадується в цьому документі, як така, що характеризується графічними даними "по суті такими, як зображено на" фігурі, таким чином, слід сприймати як таку, що включає будь-яку кристалічну форму (35)-3-4((25)-3-(біфеніл-4-ілсульфоніл)-1,3-тіазолідин-2- іл)карбоніліаміно)-3-(4-флуорфеніл)пропіл-Ї -валінат гідрохлориду, яка характеризується графічними даними, що необов'язково містять одну або більшу кількість невеликих варіацій, наприклад, одну або більшу кількість варіацій, описаних вище або відомих фахівцю в цій галузі техніки.
Як використовується в цьому документі, терміни "лікувати" або "лікування" означають терапевтичне лікування, метою якого є запобігання або сповільнення (зменшення) небажаної фізіологічної зміни або розладу, такого як прогресування передчасних передпологових перейм в ранньому гестаційному віці (наприклад, 24-34 тижні). Сприятливі або бажані клінічні результати включають, але не обмежуючись цим, полегшення симптомів, таких як вагінальна 60 кровотеча або розрив оболонки, а також затримку або сповільнення передпологових перейм. Ті,
хто потребує лікування, включають, наприклад, вагітних суб'єктів жіночої статі, у яких вже присутні передчасні передпологові перейми, а також схильних до розвитку цього стану.
Як використовується в цьому документі, термін "токолітичний агент" відноситься до речовини, здатної затримувати початок передпологових перейм у суб'єкта (наприклад, суб'єкта- ссавця, такого як суб'єкт-людина). Функція токолітичних агентів може полягати у пригніченні скоротності матки, наприклад, шляхом збільшення цитоплазматичних рівнів ЦАМФ та пригнічення мобілізації внутрішньоклітинного Са". Типові токолітичні агенти, описані, наприклад, у Нааз еї аї. Іпї. У. Муотеп5 Неакй. 6: 343-349 (2014), розкриття якої включено до цього документу шляхом посилання. Токолітичні агенти для застосування у поєднанні з композиціями та способами, описаними в цьому документі, включають, але не обмежуючись цим, речовини, наведені в Табл. 1 нижче.
Таблиця 1
Типові токолітичні агенти
Сопае-Адцаеїйо єї а. Ат. У.
Тербуталін, ритодрин, оо; Скупесої. 204: е1-6є20
Бетаміметики гексопреналін, альбутерол, Стгеазу ета. Стеаб5і апа Кезпік'5 фенотерол, нілідрин, Маїегтпа! Реза! Медісіпе: орципреналін атег мн
Ріїпсірієз апа Ргасіїсе. Еа. 6.
РпіПааде!рніа, РА (2009 ніфедипін, нікардипін 281: 57-66 (2011 . . о Мегсег єї а. Орзівї. Супесо).
Антагоністи рецептора Атосибан, ретосибан, Рараїзопів еї аї. Соспгапе окситоцину барусибан, епелсибан, Раїабазе 5уві. Неу. 3: нуласибан сбро4452 (2005 . . . рискій єї аі. Соснтапе Оаїаразе
КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
Фіг. 1 являє собою графік, що демонструє вплив сполуки ІЇ і сполуки І на спонтанну скоротність матки у щурів на пізніх термінах вагітності після внутрішньовенного введення.
Фіг. 2 являє собою графік, на якому зображено дозозалежний та оборотний вплив сполуки на спонтанну скоротність матки у щурів на пізніх термінах вагітності.
Фіг. З являє собою графік, що демонструє ефект сполуки ІЇ і сполуки ІП на спонтанну скоротність матки у щурів на пізніх термінах вагітності після перорального введення.
Фіг. 4 являє собою таблицю, що узагальнює різні способи, що застосовуються для одержання вільної основи сполуки І. а також спостереження щодо фізичних характеристик і
ЯМР спектри сполуки І, одержаної за допомогою кожного способу.
Фі. 5 являє собою таблицю, що узагальнює різні способи, що застосовуються для одержання солей сполуки І а також спостереження щодо фізичних характеристик і ЯМР спектри солей сполуки І, одержаних за допомогою кожного способу.
Фіг. б являє собою таблицю, що узагальнює фізичні характеристики, а також спектри рентгеноструктурного аналізу порошку, РСАП (ХКРО) різних солей сполуки І.
Фіг. 7 являє собою таблицю, що узагальнює способи, які застосовуються для одержання
Зо кристалічних форм різних солей сполуки !/, а також спостереження щодо фізичних характеристик і РСАП спектри кожної кристалічної форми.
Фіг. 8 являє собою таблицю, що узагальнює розчинність різних солей сполук І у водному розчині.
Фіг. 9 являє собою таблицю, що узагальнює стабільність кристалічних форм різних солей сполуки І при вказаній відносній вологості, ВВ (КН).
Фіг. 10 являє собою таблицю, що узагальнює різні характеристики сполуки І, визначені за допомогою рентгеноструктурного аналізу порошку (РСАП), диференційної скануючої калориметрії, ДСК (055), термогравіметричного аналізу, ТГ (ТО), сорбції/десорбції вологи, СВ (МВ), а також "Н ядерного магнітного резонансу (ЯМР).
Фіг. 11 являє собою таблицю, що узагальнює різні характеристики гідросульфатної солі сполуки Іі, визначені за допомогою рентгеноструктурного аналізу порошку (РСАП), диференційної скануючої калориметрії (ДСК), термогравіметричного аналізу (ТГ), сорбції/десорбції вологи (СВ), а також "Н ядерного магнітного резонансу (ЯМР).
На Фіг. 12 зображений РСАП спектр мезилатної солі сполуки Ї.
На Фіг. 13 зображений спектр "Н ЯМР спектр мезилатної солі сполуки І.
На Фіг. 14 зображений РСАП спектр вільної основи сполуки Ї.
На Фіг. 15 зображений "Н ЯМР спектр вільної основи сполуки І.
На Фіг. 16 зображений раманівський спектр в інфрачервоній області вільної основи сполуки
І.
На Фіг. 17 зображений "Н ЯМР спектр мезилатної солі сполуки І. Мезилатна сіль одержана шляхом додавання метансульфонової кислоти до розчину вільної основи сполуки Ї у діеєтиловому етері.
На Фіг. 18 зображено серію "Н ЯМР спектрів вільної основи сполуки І, зареєстрованих під час експериментів з гомоядерним розривом зв'язків.
На Фіг. 19 зображено серію РСАП спектрів хлоридної солі сполуки І, одержаної із суспензії в ацетоні (верхній), в результаті випарювання метиленхлориду:етилового етеру (другий зверху) і в результаті повільного випарювання суміші ацетону:толуену 1:1 (другий знизу і нижній).
На Фіг. 20 зображено накладення кривої диференційної скануючої калориметрії (в діапазоні від близько -0,5 до близько 1,3 Вт/г) і кривої термогравіметричного аналізу (в діапазоні від близько 0 95 до близько 100 95 по масі), зареєстрованих для хлоридної солі сполуки І, одержаної із суспензії в ацетоні.
На Фіг. 21 зображено "Н ЯМР спектр хлоридної солі сполуки І, одержаної із суміші ацетону- толуену 1:1.
На Фіг. 22 зображено серію РСАП спектрів хлоридної солі сполуки І, одержаної із суспензії в ацетоні (верхній) та після її висушування під вакуумом при температурі близько 50 "С протягом 1 дня (нижній).
На Фіг. 23 наведено накладення кривої диференційної скануючої калориметрії (в діапазоні від близько -1,0 до близько 0,2 Вт/г) і кривої термогравіметричного аналізу (в діапазоні від
Зо близько 30 95 до близько 100 95 по масі), зареєстрованих для хлоридної солі сполуки І після її висушування під вакуумом при температурі близько 50 "С протягом 1 дня.
На Фіг. 24 зображено накладення кривих термогравіметричного аналізу хлоридної солі сполуки І, одержаної із суспензії в ацетоні (верхній) та після її висушування під вакуумом при температурі близько 50 "С протягом 1 дня (нижній).
На Фіг. 25 зображено накладення кривих диференційної скануючої калориметрії, зареєстрованих для хлоридної солі сполуки І, одержаної із суспензії в ацетоні (верхній), та після її висушування під вакуумом при температурі близько 50 "С протягом 1 дня (нижній).
На Фіг. 26 зображено криву сорбції/десорбції вологи, зареєстровану для хлоридної солі сполуки І. Значення на осі у показують відсоткову зміну маси хлоридної солі як функцію відносної вологості (ВВ) в атмосфері, що оточує сіль.
Фіг. 27 являє собою таблицю, в якій наведено дані, одержані в експериментах із сорбцією/десорбцією вологи, проведених для хлоридної солі сполуки Ї.
На Фіг. 28 зображено криву сорбції/десорбіції вологи, зареєстровану для хлоридної солі сполуки І. Значення на осі у показують відсоткову зміну маси хлоридної солі як функцію часу, протягом якого відносна вологість в атмосфері, що оточує сіль, змінювалась.
На Фіг. 29 зображено РСАП спектри хлоридної солі сполуки І після (верхній) і перед (нижній) проведенням експериментів із сорбцією/десорбцією вологи.
На Фіг. 30 зображено накладення РСАП спектра фумаратної солі сполуки І, одержаної при повільному випарюванні суміші метанолу:толуену 1:1 (верхній) і РСАП фумарової кислоти (нижній).
На Фіг. 31 зображено накладення РСАП спектра дигідрофосфатної солі сполуки І (верхній) і
РСАП гідросульфатної солі сполуки І (нижній).
На Фіг. 32 зображено накладення кривої диференційної скануючої калориметрії (в діапазоні від близько 1,9 до близько 0 Вт/г) і кривої термогравіметричного аналізу (в діапазоні від близько 25 95 до близько 95 95 за масою), зареєстрованих для гідросульфатної солі сполуки Ї.
На Фіг. 33 зображений "Н ЯМР спектр гідросульфатної солі сполуки І.
На Фіг. 34 зображений "Н ЯМР спектр сульфатної солі сполуки Ї.
На Фіг. 35 зображений РСАП спектр мезилатної солі сполуки І.
На Фіг. 36 зображений РСАП спектр цитратної солі сполуки І. бо На Фіг. 37 зображений РСАП спектр едизилатної солі сполуки І.
На Фіг. 38 зображений РСАП спектр гідросульфатної солі сполуки І.
На Фіг. 39 зображений РСАП спектр цитратної солі сполуки І, одержаної при повільному випарюванні суміші метанолу:толуену 1:2.
На Фіг. 40 зображений РСАП спектр гідросульфатної солі сполуки І, одержаної при повільному випарюванні суміші етилацетату:гептану 6:1.
На Фіг. 41 зображений РСАП спектр гідросульфатної солі сполуки І, одержаної при повільному випарюванні суміші в етилацетаті.
На Фіг. 42 зображений РСАП спектр дигідрофосфатної солі сполуки І. одержаної при повільному випарюванні суміші метанолу:ацетонітрилу 1:2.
На Фіг. 43 зображений РСАП спектр дигідрофосфатної солі сполуки І, одержаної при повільному випарюванні суміші метилетилкетону:н-бутилацетату 1:1.
На Фіг. 44 зображений РСАП спектр, зареєстрований в ході проведеного у двох екземплярах експерименту РСАП для дигідрофосфатної солі сполуки І, одержаної при повільному випарюванні суміші метилетилкетону:н-бутилацетату 1:1.
На Фіг. 45 зображений РСАП спектр хлоридної солі сполуки І, одержаної при повільному випарюванні суміші ацетону-толуену 1:1.
На Фіг. 46 зображений РСАП спектр, зареєстрований в ході проведеного у двох екземплярах експерименту РСАП для хлоридної солі сполуки І. одержаної при повільному випарюванні суміші ацетону-толуену 1:1.
На Фіг. 47 зображений РСАП спектр хлоридної солі сполуки І, одержаної при повільному випарюванні суміші діетилового етеру:метиленхлориду.
На Фіг. 48 зображений РСАП спектр хлоридної солі сполуки І, одержаної із суспензії в ацетоні.
На Фіг. 49 зображений РСАП спектр хлоридної солі сполуки І після висушування під вакуумом.
На Фіг. 50 зображений РСАП спектр фумаратної солі сполуки І, одержаної при повільному випарюванні суміші метанолу:толуену 1:1.
На Фіг. 51 зображений РСАП спектр фумаратної солі сполуки Ї, одержаної при повільному випарюванні суміші метанолу:етилацетату 11.
Зо На Фіг. 52 зображений РСАП спектр фумаратної солі сполуки І, одержаної висушуванням під вакуумом суміші метанолу:толуену 1:1.
На Фіг. 53 зображений РСАП спектр едизилатної солі сполуки І, одержаної при повільному випарюванні суміші метанолу: метилетилкетону:толуену 1:1:1.
На Фіг. 54 зображено накладення РСАП спектрів хлоридної солі сполуки | до (нижній) та після (верхній) зберігання при 40 "С та відносній вологості 75 95.
Фіг. 55 являє собою таблицю, що узагальнює стабільність мезилатної солі сполуки | |і сполуки ІЇ в буферному розчині, який використовується в експериментах з проникненням крізь
Сасо-2: збалансований буферний сольовий розчин Хенкса, ЗСРХ (НВ5З5), кінцева концентрація
ДМСО 2 95.
Фіг. 5ба являє собою таблицю, в якій наведені дані, одержані в результаті аналізу здатності мезилатної солі сполуки І проникати з апікального до базолатерального відділення трансвелу, вкритого моношаром Сасо-2. Культивовані клітини Сасо-2 інкубують із вказаною концентрацією мезилатної солі сполуки І в апікальному відділенні трансвелу, а аліквоти з базолатерального відділення відбирають у вказані для відбору зразків моменти часу для визначення присутності сполуки І або сполуки Ії. Дані зареєстровані як концентрація сполуки ІЇ в базолатеральному відділенні у відсотках від вказаної початкової концентрації мезилатної солі сполуки І. Фіг. 56р являє собою таблицю з даними, одержаними в результаті аналізу здатності мезилатної солі сполуки І проникати з базолатерального до апікального відділення трансвелу, вкритого моношаром Сасо-2. Культивовані клітини Сасо-2 інкубують із вказаною концентрацією мезилатної солі сполуки І в базолатеральному відділенні трансвелу, а аліквоти з апікального відділення відбирають у вказані для відбору зразків моменти часу для визначення присутності сполуки І або сполуки ІІ. Дані зареєстровані як концентрація сполуки ІЇ в базолатеральному відділенні у відсотках від вказаної початкової концентрації мезилатної солі сполуки І. Фіг. 56с являє собою графік, на якому зображено відносну концентрацію сполуки ІІ в базолатеральному відділенні у відсотках від початкової концентрації мезилатної солі сполуки | в апікальному відділенні. Фіг. 564 являє собою графік, на якому зображено відносну концентрацію сполуки ЇЇ в апікальному відділенні у відсотках від початкової концентрації мезилатної солі сполуки І| в базолатеральному відділення. Сполуку І не було виявлено в базолатеральному відділенні через 60 або 120 хвилин інкубації в апікальному відділенні. Крім того, сполуку І не було бо виявлено в апікальному відділенні після 60 або 120 хвилин інкубації в базолатеральному відділення. Скоріше, у кожному випадку було виявлено сполуку ІІ. Фіг. 5бе являє собою таблицю, яка демонструє виділення сполуки | з апікального відділення після 120 хвилин інкубації. Початкову сполуку виділяли у формі деестерифікованого варіанта сполуки ІІ.
Фіг. 57а являє собою таблицю, в якій наведено дані, одержані в результаті аналізу здатності сполуки ІЇ проникати з апікального до базолатерального відділення трансвелу, вкритого моношаром Сасо-2. Культивовані клітини Сасо-2 інкубують із вказаною концентрацією сполуки
ІЇ в апікальному відділенні трансвелу, а аліквоти з базолатерального відділення відбирають у вказані для відбору зразків моменти часу для визначення присутності сполуки ІІ. Дані зареєстровані як концентрація сполуки ІІ в базолатеральному відділенні у відсотках від вказаної початкової концентрації сполуки ЇЇ. Фіг. 570 являє собою таблицю, в якій наведені дані, одержані в результаті аналізу здатності сполуки ІЇ проникати з базолатерального до апікального відділення трансвелу, вкритого моношаром Сасо-2. Культивовані клітини Сасо-2 інкубують із вказаною концентрацією сполуки ІЇ в базолатеральному відділенні трансвелу, а аліквоти з апікального відділення відбирають у вказані для відбору зразків моменти часу для визначення присутності сполуки ІЇ. Дані зареєстровані як концентрація сполуки ІЇ в базолатеральному відділенні у відсотках від вказаної початкової концентрації сполуки Ії. Фіг. 57с являє собою таблицю, яка демонструє виділення сполуки ІІ в апікальному відділенні після 60 та 120 хвилин інкубації в базолатеральному відділенні, а також швидкість проникнення сполуки І! крізь моношар клітин Сасо-2. фіг. 574 являє собою графік, на якому зображено відносну концентрацію сполуки ІЇ в базолатеральному відділенні у відсотках від початкової концентрації сполуки ІЇ в апікальному відділенні. Фіг. 57е являє собою графік, на якому зображено відносну концентрацію сполуки ІІ в апікальному відділенні у відсотках від початкової концентрації сполуки
ІЇ в базолатеральному відділенні.
Фіг. 5ва являє собою таблицю, в якій наведено дані, одержані в результаті аналізу здатності мезилатної солі сполуки І проникати з апікального до базолатерального відділення трансвелу, вкритого моношаром Сасо-2. Культивовані клітини Сасо-2 інкубують із вказаною концентрацією мезилатної солі сполуки І в апікальному відділенні трансвелу, а аліквоти з базолатерального відділення відбирають у вказані для відбору зразків моменти часу для визначення присутності сполуки І або сполуки ІІ. Дані зареєстровані як концентрація сполуки ІЇ в базолатеральному
Зо відділенні у відсотках від вказаної початкової концентрації мезилатної солі сполуки І. Сполуку І не було виявлено в базолатеральному відділенні після 60 або 120 хвилин інкубації в апікальному відділенні. Фіг. 5865 являє собою графік, на якому зображено відносну концентрацію сполуки ІЇ в базолатеральному відділенні у відсотках від початкової концентрації мезилатної солі сполуки І у апікальному відділенні. Фіг. 58с являє собою таблицю, що демонструє виділення сполуки | з апікального відділення після 120 хвилин інкубації. Початкову сполуку виділяли у формі деестерифікованого варіанта сполуки ІІ.
Фі. 59 являє собою таблицю, що узагальнює параметри хроматографії та мас- спектрометрії, які застосовуються для аналізу концентрацій сполуки !/ ії сполуки ЇЇ в експериментах з проникненням крізь клітини Сасо-2, описаних в цьому документі.
Фіг ба являє собою графік, на якому зображено фракційну життєздатність потомства мишей СО-1, оброблених КО486 або ліпополісахаридом, ЛПС (І Р) в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус стандартну похибку середнього. Зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05. Статистичні аналізи проводили із застосуванням тесту Манна-Уїтні проти відповідної групи. Фіг. 606 являє собою графік, на якому зображено кількість життєздатного та нежиттєздатного потомства мишей СО-1, оброблених КИОШ486 або ЛІС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм.
Фіг. 61а являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до народження першої щеня для мишей СО-1, оброблених КШ486 або ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус стандартну похибку середнього. фіг. 616 та 61с являють собою графіки, що ілюструють період часу від індукції до завершення пологів у мишей СО-1, оброблених КО486 або ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції пологів. Значення вздовж осі у позначають частку мишей СО-1, у яких передпологові перейми завершилися. На кожній фігурі зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05. Статистичні аналізи проводили за допомогою тесту Манна-Уїтні або логарифмічного рангового критерію проти відповідної групи.
Фіг. б2а являє собою графік, що демонструє вплив атосибану (300 мг/кг, введений підшкірно) та ніфедипіну (5 мг/кг, введений перорально) на фракційну життєздатність потомства мишей СО-1, оброблених КО486 або ліпополісахаридом (ЛПС) в гестаційному віці 17 днів з бо метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус стандартну похибку середнього. Зірочка позначає значення р на рівні р ох 0,05; "нз" ("пв5") позначає значення р на рівні р » 0,05. Статистичні аналізи проводили за допомогою тесту
Манна-Уїтні або логарифмічного рангового критерію проти відповідної групи. розчинника. фіг. 625 являє собою графік, що демонструє вплив атосибану (300 мг/кг, введений підшкірно) та ніфедипіну (5 мг/кг, введений перорально) на кількість життєздатного та нежиттєздатного потомства мишей СО-1, оброблених КО486 або ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм.
Фіг. бЗа являє собою графік, що демонструє вплив сполуки ПІ (10 мг/кг, 30 мг/кг та 100 мг/кг, введена перорально) на фракційну життєздатність потомства мишей СО-1, оброблених КО486 або ЛІС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус стандартну похибку середнього. Зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05; "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05. Статистичні аналізи проводили за допомогою тесту Манна-Уїтні або логарифмічного рангового критерію проти відповідної групи розчинника. Фіг. 636 являє собою графік, що демонструє вплив сполуки ПІ (10 мг/кг, 30 мг/кг та 100 мг/кг, введена перорально) на кількість життєздатного та нежиттєздатного потомства мишей СО-1, оброблених КО486 або ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм.
Фіг. б4а являє собою графік, що демонструє вплив ніфедипіну (5 мг/кг, введений перорально), сполуки ПІ (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на фракційну життєздатність потомства мишей СО-1, оброблених КИ486 в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус стандартну похибку середнього. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи; "НЗ" ("М5") позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи розчинника.
Статистичні аналізи проводили за допомогою тесту Мана-Уїтні або логарифмічного рангового критерію проти відповідної цільової групи. Фіг. 645 являє собою графік, що демонструє вплив ніфедипіну (5 мг/кг, введений перорально), сполуки ПІ (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на кількість життєздатного та нежиттєздатного потомства мишей СО-1, оброблених
КИ486 в гестаційному віку 17 днів з метою індукції передпологових перейм.
Фіг. бба являє собою графік, що демонструє вплив ніфедипіну (5 мг/кг, введений
Зо перорально), сполуки І (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на періоду часу від індукції до народження першого щеня у мишей СО-1, оброблених КИ486 в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус стандартну похибку середнього. Три зірочки позначають значення р на рівні р « 0,001 проти відповідної групи; дві зірочки позначають значення р на рівні р « 0,01 проти відповідної групи. Групи ніфедипіну, сполуки ПІ і комбінації демонстрували значення р на рівні р - 0,0576, р - 0,0601 і р « 0,001 (позначені символом "555"), відповідно, відносно групи, яка одержувала тільки розчинник. Статистичні аналізи проводили із застосуванням тесту Манна-
Уїтні або двохвибіркового І-критерію для незалежних вибірок проти відповідної цільової групи.
Фіг. 6565 являє собою графік, що демонструє вплив ніфедипіну (5 мг/кг, введений перорально), сполуки ШІ (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на період часу від індукції до завершення пологів у мишей СО-1, оброблених КО486 в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення вздовж осі у позначають частку мишей СО-1, у яких закінчилися передпологові перейми. фіг. б5с являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства у групах розчинника та комбінації, зображених на Фіг. 655. Три зірочки позначають значення р на рівні р « 0,001 проти відповідної групи. Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної цільової групи. Фіг. б65а являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства для груп сполуки ПІ і комбінації, зображених на Фіг. 656. Три зірочки позначають значення р на рівні р « 0,001 проти відповідної групи.
Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної цільової групи. Фіг. ббе являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства для груп ніфедипіну та комбінації, зображених на
Фіг. 65р. Дві зірочки позначають значення р на рівні р « 0,01 проти відповідної групи.
Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної цільової групи.
Фіг. бба являє собою графік, що демонструє вплив атосибану (300 мг/кг, введений підшкірно), сполуки ПШ (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на фракційну життєздатність потомства мишей СО-1, оброблених КИ486 в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус бо стандартну похибку середнього. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи; "НЗ" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи розчинника.
Статистичні аналізи проводили із застосуванням тесту Манна-Уїтні проти відповідної цільової групи. Фіг. 660 являє собою графік, що демонструє вплив атосибану (300 мг/кг, введений підшкірно), сполуки Ш (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на кількість життєздатного та нежиттєздатного потомства мишей СО-1 оброблених ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм.
Фіг. б7а являє собою графік, що демонструє вплив атосибану (300 мг/кг, введений підшкірно), сполуки ПІІ (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на період часу від індукції до народження першого щеня у мишей СО-1, оброблених КИ486 в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус стандартну похибку середнього. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи; "НЗ" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи розчинника. Групи атосибану, сполуки ПІІ і комбінації продемонстрували значення р на рівні р » 0,05, р - 0,0601 тар » 0,05, відповідно, відносно групи розчинника. Статистичні аналізи проводили із застосуванням двохвибіркового Ї-критерію для незалежних вибірок проти відповідної цільової групи. Фіг. 675 являє собою графік, що демонструє вплив атосибану (300 мг/кг, введений підшкірно), сполуки ПІ (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на період часу від індукції до завершення пологів у мишей СО-1, оброблених КИО486 в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення вздовж осі у позначають частку мишей СО-1, у яких закінчилися передпологові перейми. Фіг. 67с являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах носія і комбінації, зображених на Фіг. 67Б. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи. Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної цільової групи. Фіг. 674 являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах сполуки І та комбінації, зображених на Фіг. 6765.
Група комбінації продемонструвала значення р на рівні р - 0,0832 відносно групи сполуки ПІ.
Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної цільової групи. Фіг. б7е являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах атосибану та комбінації, зображених на
Зо Фіг. 67р. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи. Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної цільової групи.
Фіг. бва являє собою графік, що демонструє вплив ніфедипіну (5 мг/кг, введений перорально), сполуки ІІ (10 мг/кг, 30 мг/кг та 100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на фракційну життєздатність потомства мишей СО-1, оброблених ЛПС, в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус стандартну похибку середнього. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи; "НЗ" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи розчинника.
Група ніфедипіну продемонструвала значення р на рівні р - 0,0859 відносно групи, яка одержувала тільки розчинник. Статистичні аналізи проводили із застосуванням тесту Манна-
Уїтні або двохвибіркового І-критерію для незалежних вибірок проти відповідної цільової групи.
Фіг. 685 являє собою графік, що демонструє вплив ніфедипіну (5 мг/кг, введений перорально), сполуки ПІ (10 мг/кг, 30 мг/кг та 100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на кількість життєздатного та нежиттєздатного потомства мишей СО-1, оброблених ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції пологів.
Фіг. бЗа являє собою графік, що демонструє вплив ніфедипіну (5 мг/кг, введений перорально), сполуки ПІ (10 мг/кг, 30 мг/кг та 100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на період часу від індукції до народження першого щеня для мишей СО-1, оброблених ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус стандартну похибку середнього. Дві зірочки позначають значення р на рівні р « 0,01 проти відповідної групи, оцінене за допомогою тесту Манна-Уїтні проти відповідної групи; "нз" означає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи, оцінене за допомогою тесту Манна-Уїтні проти відповідної групи; "НЗ" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи розчинника, оцінене за допомогою двохвибіркового І-критерію для незалежних вибірок проти відповідної групи; "без тесту" означає, що для вказаної пари статистичний тест не проводився. Фіг. 69Б являє собою графік, що демонструє вплив ніфедипіну (5 мг/кг, введений перорально), сполуки ПІ (10 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на період часу від індукції до завершення пологів у мишей СО-1, оброблених ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Фіг. б9с являє собою графік, бо що демонструє вплив ніфедипіну (5 мг/кг, введений перорально), сполуки ПІ (30 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації не період часу від індукції до завершення пологів у мишей СО-1, оброблених ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Фіг. 694 являє собою графік, що демонструє вплив ніфедипіну (5 мг/кг, введений перорально), сполуки
ІШ («100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на період часу від індукції до завершення пологів у мишей СО-1, оброблених ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Фіг. б9е являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах розчинника та комбінації, зображених на
Фіг. 69р. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи. Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної групи. Фіг. 691 являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах сполуки ПІ та комбінації, зображених на Фіг. 690. Дві зірочки позначають значення р на рівні р « 0,01 проти відповідної групи. Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної цільової групи. Фіг. 699 являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах ніфедипіну та комбінації, зображених на Фіг. 69р. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи. Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної групи. Фіг. 69п являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах розчинника та комбінації, зображених на фіг. 69с. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи. Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної групи. Фіг. 69і являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах сполуки ІІІ та комбінації, зображених на Фіг. 69б. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи.
Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної групи. Фіг. 69) являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах ніфедипіну та комбінації, зображених на Фіг. 69бс. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи. Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної групи. Фіг. бО9К являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення
Зо народження потомства в групах розчинника та комбінації, зображених на Фіг. 694. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи. Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної групи. Фіг. 69І являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах сполуки І та комбінації, зображених на Фіг. 694. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи. Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної групи. Фіг. б9т являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах ніфедипіну та комбінації, зображених на фіг. 694. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи.
Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної групи.
Фіг. 7б0а представляє собою графік, що демонструє вплив атосибану (300 мг/кг, введений підшкірно), сполуки ПП (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на фракційну життєздатність потомства мишей СО-1, оброблених ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус стандартну похибку середнього. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи; "НЗ" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи розчинника.
Статистичні аналізи проводили із застосуванням тесту Манна-Уїтні або двохвибіркового 1- критерію для незалежних вибірок проти відповідної цільової групи. Фіг. 706 являє собою графік, що демонструє вплив атосибану (300 мг/кг, введений підшкірно), сполуки ПІ (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на кількість життєздатного і нежиттєздатного потомства мишей СО- 1, оброблених ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм.
Фіг. 71а являє собою графік, що демонструє вплив атосибану (300 мг/кг, введений підшкірно), сполуки ПІІ (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на період часу від індукції до народження першого щеня у мишей СО-1, оброблених ЛПС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Значення представляють середнє значення плюс/мінус стандартну похибку середнього. "нз" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи; "НЗ" позначає значення р на рівні р » 0,05 проти відповідної групи розчинника; "Ф" позначає значення р на рівні р « 0,05 проти відповідної групи розчинника. Група комбінації продемонструвала значення р на рівні р - 0,0909 відносно групи, що одержувала тільки бо атосибан. Статистичні аналізи проводили із застосуванням тесту Манна-Уїтні або двохвибіркового І-критерію для незалежних вибірок проти відповідної цільової групи. Фіг. 715 являє собою графік, що демонструє вплив атосибану (300 мг/кг, введений підшкірно), сполуки ЇЇ (100 мг/кг, введена перорально) та їх комбінації на період часу від індукції до завершення пологів у мишей СО-1, оброблених ЛІС в гестаційному віці 17 днів з метою індукції передпологових перейм. Фіг. 71с являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства для груп розчинника та комбінації, зображених на Фіг. 710. Дві зірочки позначають значення р на рівні р « 0,01 проти відповідної групи.
Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної цільової групи. Фіг. 714 являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах сполуки ПІ та комбінації, зображених на
Фіг. 716. Група комбінації продемонструвала значення р на рівні р - 0,0964 відносно групи сполуки ПІІ. Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної цільової групи. Фіг. 716 являє собою графік, на якому зображено період часу від індукції до завершення народження потомства в групах атосибану та комбінації рук, зображених на Фіг. 71р. Зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05 проти відповідної групи.
Статистичні аналізи проводили із застосуванням логарифмічного рангового критерію проти відповідної цільової групи.
Фіг. 72а являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки Ії (б нМ, 60
НМ, 600 нМ і 6000 нМ) на частоту індукованих РОЕ2а скорочень гладких м'язів в М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ЮОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМ5ТКОМЕМТЗП) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роуегіар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники частоти спонтанних скорочень. Виміряний показник частоти спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль диметилсульфоксиду (ДМСО) або сполуку ІЇ у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або сполуки І на частоту скорочень протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Сполука ІІ". Далі вплив сполуки ЇЇ на частоту
Зо скорочень в присутності РОБ2а вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕ2а (1 нМ, 10 нМ і 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як ""ОЕ2а 1 нМ", "РОЕ2а 10 нм" і "Рога 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють частоту скорочень як відсоток від частоти початкових спонтанних скорочень. Символ "Ж" позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем ДМСО. фіг. 725 являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки ІЇ (б нМ, 60 нМ, 600 нм і 6000 нМ) на виконану роботу на скорочення (площа під кривою або "ХОС") для індукованих РОЕ2а скорочень гладких м'язів у М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМ5ТВОМЕМТ5І)) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роуегіар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники спонтанної виконаної роботи на скорочення. Виміряний показник спонтанної виконаної роботи на скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або сполуку ІЇ у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або сполуки ІЇ на виконану роботу на скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Сполука ІІ". Далі вплив сполуки ІЇ на виконану роботу на скорочення в присутності РОБ2а вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕга (1 нМ, 10 нМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як ""сЕ2а 1 нМ", "РОгг2а 10 нм" і "РОгг2а 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють виконану роботу на скорочення як відсоток від виконаної роботи на скорочення для спонтанних початкових скорочень. Символ "Ж" позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем ДМСО.
Фіг. 72с являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки ЇЇ (б нМ, 60 нМ, 600 нм і 6000 нМ) на пікову амплітуду індукованих РОБ2а скорочень гладких м'язів у М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ЮОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМ5ТКОМЕМТЗП) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роуегіар. Після встановлення бо регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники пікової амплітуди спонтанного скорочення. Виміряний показник пікової амплітуди спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або сполуку ІЇ у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або сполуки ІЇ на пікову амплітуду скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин.
Ця точка часу представлена на осі х як "Сполука ІІ". Далі вплив сполуки ІІ на пікову амплітуду скорочення в присутності РОБ2а вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕ2а (1 нМ, 10 нМ і 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як ""ОЕ2а 1 нМ", "РОЕ2а 10 нм" і "Рога 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють пікову амплітуду скорочення як відсоток від пікової амплітуди спонтанних початкових скорочень. Символ "Ж" позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем ДМСО. Фіг. 724 являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки Ії (6 нМ, 60 нМ, 600 нМ і 6000 нМ) на тривалість індукованих
РОБг2а скорочень гладких м'язів у М - б зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарп 800 М5 (АРІМ5ТАОМЕМТ5І) ов оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АСбІ Рожегіаб. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше хвилин, реєструють початкові показники тривалості спонтанного скорочення. Виміряний показник тривалості спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до 20 кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або сполуку ІІ у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або сполуки І на тривалість скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Сполука ІІ". Далі вплив сполуки ІЇ на тривалість скорочень в присутності РОЕ2а вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОБ2а (1 НМ, 10 НМ ії 100 нм) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "РОГ2а 1 НМ", "РОБг2а 10 нМ" і "РОєг2а 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють тривалість скорочення як відсоток від тривалості початкових спонтанних скорочень. Фіг. 72е являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки ІІ (б нМ, 60 нМ, 600 нМ і 6000 нм) на загальну роботу, виконану при всіх скороченнях (сумарна площа під кривою для всіх скорочень)
Зо для індукованих РОЕ2а скорочень гладких м'язів у М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ
Муодгари 800 М5 (АБІМЗ5ТАОМЕМТОЛ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роугегіарю. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень. Показник виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або сполуку ЇЇ у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або сполуки ІЇ на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Сполука ІІ". Далі вплив сполуки ІЇ на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, в присутності РОБ2а вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕ2а (1 нМ, 10 нМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "РОЕг2а 1 НМ", "РОБг2а 10 нм" і "РОЄг2а 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють сумарну виконану роботу для всіх наступних скорочень як відсоток від сумарної виконаної роботи для всіх початкових спонтанних скорочень. Символ "Ж" позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем ДМСО.
Фіг. 7За являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки Ії (б нМ, 60
НМ, 600 нМ і 6000 нМ) на частоту індукованих окситоцином (ОТ) скорочень гладких м'язів в М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ЮОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМ5ТКОМЕМТЗІ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роуегіар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники частоти спонтанних скорочень. Виміряний показник частоти спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль
ДМСО або сполуку ІІ у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або сполуки ЇЇ на частоту скорочень протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Сполука ІІ". Далі вплив сполуки ІЇ на частоту скорочень в присутності бо ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1
Зо
НМ, 10 нМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 НМ", "ОТ 10 нм" ї "ОТ 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють частоту скорочень як відсоток від частоти початкових спонтанних скорочень.
Зірочка значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем ДМСО. фіг. 730 являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки І! (6 нМ, 60 нМ, 600 нм і 6000 нМ) на виконану роботу на скорочення (площа під кривою або "АОС") для індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарп 800 мМ5 (АРІМ5ТАОМЕМТОГ) ов оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АСбІ Рожегіаб. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники спонтанної виконаної роботи на скорочення.
Виміряний показник спонтанної виконаної роботи на скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або сполуку ЇЇ у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або сполуки І на виконану роботу на скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Сполука ІІ". Далі вплив сполуки ЇЇ на виконану роботу на скорочення в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 НМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 НМ", "ОТ 10 нм" ї "ОТ 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють виконану роботу на скорочення як відсоток від виконаної роботи на скорочення для спонтанних початкових скорочень. Символ "Ж" позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем ДМСО. Фіг. 73с являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки Ії (б нм, 60 нМ, 600 нМ і 6000 нМ) на пікову амплітуду індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарп 800 М5 (АРІМ5ТАОМЕМТ5І) ов оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АСбІ Рожегіаб. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше
Зо 20 хвилин, реєструють початкові показники пікової амплітуди спонтанного скорочення.
Виміряний показник пікової амплітуди спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або сполуку ЇЇ у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або сполуки ІЇ на пікову амплітуду скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Сполука ІІ". Далі вплив сполуки ЇЇ на пікову амплітуду скорочення в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 НМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 НМ", "ОТ 10 нм" ї "ОТ 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють пікову амплітуду скорочення як відсоток від пікової амплітуди спонтанних початкових скорочень. Зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем
ДМСО. Фіг. 73а являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки ІІ (б НМ, 60 нм, 600 нМ і 6000 нм) на тривалість індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарпн 800 М5 (АБІМ5ТВОМЕМТ5Г) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роуегіар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники тривалості спонтанного скорочення. Виміряний показник тривалості спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль
ДМСО або сполуку ІЇ у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або сполуки ІІ на тривалість скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Сполука І". Далі вплив сполуки ІЇ на тривалість скорочень в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 нМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нм", "ОТ 10 нм" ї "ОТ 100 нм", відповідно.
Значення на осі у представляють тривалість скорочення як відсоток від тривалості початкових спонтанних скорочень. Фіг. 7Зе являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки ЇЇ (б нМ, 60 нМ, 600 нМ і 6000 нМ) на загальну роботу, виконану при всіх скороченнях (сумарна площа під кривою для всіх скорочень) для індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у бо М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм,
одержаних від суб'єктів- людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину.
Експерименти проводили з використанням ЮМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМЗТКОМЕМТ5Г) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АРІ Роуегіар.
Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень. Показник виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або сполуку ІІ у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або сполуки ІЇ на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Сполука ІІ". Далі вплив сполуки ІІ на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 нМ і 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нм", "ОТ 10 нм" ї "ОТ 100 нм", відповідно.
Значення на осі у представляють сумарну виконану роботу для всіх наступних скорочень як відсоток від сумарної виконаної роботи для всіх початкових спонтанних скорочень. Зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем ДМСО.
Фіг. 74а являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій атосибану (6 нМ, 60
НМ їі 600 нМ) на частоту індукованих РОБ2а скорочень гладких м'язів в М - б зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів- людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМЗТКОМЕМТЗГ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення А! Роуегіар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники частоти спонтанних скорочень. Виміряний показник частоти спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або атосибан "Аг" у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або атосибану на частоту скорочень протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Аїо". Далі вплив атосибану на частоту скорочень в присутності РОБ2а вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕ2а (1 нМ, ТО НМ і 100
Зо НМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "РОБЕ2а 1 НМ", "РОБгга 10 нм" і "РОЄ2а 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють частоту скорочень як відсоток від частоти початкових спонтанних скорочень. Зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем ДМСО. Фіг. 746 являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій атосибану (6 нМ, 60 нМ їі 600) на виконану роботу на скорочення (площа під кривою або "АОС") для індукованих РОЕ2а скорочень гладких м'язів у М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів- людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину.
Експерименти проводили з використанням ЮОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМЗТКОМЕМТЗІ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АРІ Роуегіар.
Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники спонтанної виконаної роботи на скорочення. Виміряний показник спонтанної виконаної роботи на скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або атосибану на виконану роботу на скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Аю". Далі вплив атосибану на виконану роботу на скорочення в присутності РОЕ2а вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕ2а (1 нМ, ТО НМ і 100
НМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "РОБЕ2а 1 НМ", "РОБгга 10 нм" і "РОЄ2а 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють виконану роботу на скорочення як відсоток від виконаної роботи на скорочення для спонтанних початкових скорочень. Фіг. 74с являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій атосибану (6 нМ, 60 нМ і 600 нМ) на пікову амплітуду індукованих РОЕБ2а скорочень гладких м'язів у М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину.
Експерименти проводили з використанням ЮОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМЗ5ТКОМЕМТЗИ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АРІ Роуегіар.
Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники пікової амплітуди спонтанного скорочення. Виміряний показник пікової амплітуди спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного бо зразка міометрію додають контроль ДМСО або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або атосибану на пікову амплітуду скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "А". Далі вплив атосибану на пікову амплітуду скорочення в присутності РОЕ2а вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОБ2а (1 нМ, 10 нМ і 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як ""сЕ2а 1 нМ", "Рога 10 нм" і "Рога 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють пікову амплітуду скорочення як відсоток від пікової амплітуди спонтанних початкових скорочень. Фіг. 744 являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій атосибану (6 нМ, 60 нМ і 600 нМ) на тривалість індукованих РОБ2а скорочень гладких м'язів у М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням
ОМТ Муодгарі 800 М5 (АБІМ5ТАОМЕМТ5 ГГ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роугегіарю. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники тривалості спонтанного скорочення.
Виміряний показник тривалості спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або атосибану на тривалість скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Аго". Далі вплив атосибану на тривалість скорочень в присутності РОБЄ2а вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕ2а (1 нМ, 10 нМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "РОЕ2а 1 НМ", "РОЄг2а 10 нМ" і "РОєг2а 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють тривалість скорочення як відсоток від тривалості початкових спонтанних скорочень. Фіг. 74е являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій атосибану (6 нМ, 60 нМ і 600 нМ) на загальну роботу, виконану при всіх скороченнях (сумарна площа під кривою для всіх скорочень) для індукованих РОБ2а скорочень гладких м'язів у М - б зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ
Муодгарн 800 М5 (АБІМЗ5ТАОМЕМТ5! І) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням
Зо програмного забезпечення А0І Роугегіаб. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень. Показник виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або атосибану на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Або". Далі вплив атосибану на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, в присутності РОЕ2а вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОБ2а (1 НМ, 10 НМ ії 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "РОЕ2а 1 НМ", "РОБг2а 10 нм" і "РОЄг2а 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють сумарну виконану роботу для всіх наступних скорочень як відсоток від сумарної виконаної роботи для всіх початкових спонтанних скорочень. Зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем ДМСО.
Фіг. 75а являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій атосибану (6 нм, 60
НМ ії 600 нМ) на частоту індукованих РОЕ2 скорочень гладких м'язів в М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів- людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМЗТКОМЕМТЗГ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення А! Роуегіар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники частоти спонтанних скорочень. Виміряний показник частоти спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або атосибан (Аїо") у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або атосибану на частоту скорочень протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Або". Далі вплив атосибану на частоту скорочень в присутності РОЕ2 вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕЗ2 (1 нМ, ТО НМ і 100
НМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як ""СЕ2 1 НМ", "РОЕ2 10 нМ" їі ""єСЕ2 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють частоту скорочень як відсоток від частоти початкових спонтанних скорочень. Три зірочки бо позначають значення р на рівні р « 0,001 в порівнянні з контролем ДМСО. Фіг. 756 являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій атосибану (б нМ, 60 нМ і 600) на виконану роботу на скорочення (площа під кривою або "ХДОС") для індукованих РОЕ2 скорочень гладких м'язів у М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів- людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину.
Експерименти проводили з використанням ЮМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМ5ТКОМЕМТ5І І) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АРІ Роуегіар.
Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники спонтанної виконаної роботи на скорочення. Виміряний показник спонтанної виконаної роботи на скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або атосибану на виконану роботу на скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Ай". Далі вплив атосибану на виконану роботу на скорочення в присутності РОЕ2 вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕ2 (1 нМ, 10 НМ і 100
НМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як ""СЕ2 1 НМ", "РОЕ2 10 нМ" і ""РСЕ2 100 нм", відповідно. Значення на осі у представляють виконану роботу на скорочення як відсоток від виконаної роботи на скорочення для спонтанних початкових скорочень. Фіг. 75с являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій атосибану (б нМ, 60 нМ і 600 нМ) на пікову амплітуду індукованих РОЕ2 скорочень гладких м'язів у М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину.
Експерименти проводили з використанням ЮОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМЗТКОМЕМТЗП) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АРІ Роуегіар.
Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники пікової амплітуди спонтанного скорочення. Виміряний показник пікової амплітуди спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або атосибану на пікову амплітуду скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "А". Далі вплив атосибану на
Зо пікову амплітуду скорочення в присутності РОЕ2 вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕ2 (1 НМ, 10 нМ їі 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "РОЕ2 1 нМ", "РОЕ2 10 НМ" її "РОЕ2 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють пікову амплітуду скорочення як відсоток від пікової амплітуди спонтанних початкових скорочень. Зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем ДМСО. фіг. 750 являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій атосибану (б нМ, 60 нМ ії 600 нМ) на тривалість індукованих РОЕ2 скорочень гладких м'язів у М - б зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням
ОМТ Муодгарі 800 М5 (АБІМ5ТАОМЕМТ5. ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роугегіарю. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники тривалості спонтанного скорочення.
Виміряний показник тривалості спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або атосибану на тривалість скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Ай". Далі вплив атосибану на тривалість скорочень в присутності РОЕ2 вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕ2 (1 НМ, 10 нМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "РОЕ2 1 НМ", "РОЕ2 10 нм" ії "РОЕ2 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють тривалість скорочення як відсоток від тривалості початкових спонтанних скорочень. Фіг. 75е являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій атосибану (6 нМ, 60 нМ і 600 нМ) на загальну роботу, виконану при всіх скороченнях (сумарна площа під кривою для всіх скорочень) для індукованих РОЕ2 скорочень гладких м'язів у М - б зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ
Муодгари 800 М5 (АБІМЗ5ТАОМЕМТОЛ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роугегіарю. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники виконаної роботи для всіх спонтанних бо скорочень. Показник виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень представлений на осі х як
"Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або атосибану на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Або". Далі вплив атосибану на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, в присутності РОЕ2 вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями РОЕ2 (1 НМ, 10 нМ їі 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "РОЕ2 1 нМ", "РОЕ2 нМ" ії "РОЕ2 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють сумарну виконану роботу для всіх наступних скорочень як відсоток від сумарної виконаної роботи для всіх початкових 10 спонтанних скорочень. Зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем
ДМСО. Три зірочки позначають значення р на рівні р « 0,001 в порівнянні з контролем ДМСО.
Фіг. 7ба являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки І! (60 нМ і 600 НМ), атосибану (б нМ) і комбінацій сполуки ІЇ і атосибану на частоту індукованих ОТ скорочень гладких м'язів в М - З зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарн 800 М5 (АРІМ5ТАОМЕМТ5І) ов оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АСбІ Рожегіаб. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше хвилин, реєструють початкові показники частоти спонтанних скорочень. Виміряний показник 20 частоти спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО, сполуку Ії та/"або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю, сполуки І та/або атосибану на частоту скорочень протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "АМТ". Далі вплив сполуки ІЇ та/або атосибану на частоту скорочень в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 НМ і 100 нм) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нм", "ОТ 10 нм" ї "ОТ 100 нм", відповідно. Значення на осі у представляють частоту скорочень як відсоток від частоти початкових спонтанних скорочень. Фіг. 7605 являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки ІІ (60 нМ і 600 нМ), атосибану (6 нМ) і
Зо комбінацій сполуки ІЇ і атосибану на виконану роботу на скорочення (площа під кривою або "АС") для індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - З зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ
Муодгари 800 М5 (АБІМ5ТАОМЕМТ5) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення А0І Роугегіаб. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники спонтанної виконаної роботи на скорочення. Виміряний показник спонтанної виконаної роботи на скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО, сполуку ЇЇ та/або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю, сполуки І та/або атосибану на виконану роботу на скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "АМТ". Далі вплив сполуки ЇЇ та/або атосибану на виконану роботу на скорочення в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 нМ ії 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нМ", "ОТ 10 нм" "ОТ 100 нм", відповідно. Значення на осі у представляють виконану роботу на скорочення як відсоток від виконаної роботи на скорочення для спонтанних початкових скорочень. Фіг. 76бс являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки ІІ (60 нМ їі 600 нМ), атосибану (б нМ) і комбінацій сполуки І ії атосибану на пікову амплітуду індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - З зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарп 800 М5 (АРІМ5ТАОМЕМТ5І) ов оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АСбІ Рожегіаб. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники пікової амплітуди спонтанного скорочення.
Виміряний показник пікової амплітуди спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО, сполуку ІІ та/або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю, сполуки ІІ та/або атосибану на пікову амплітуду скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "АМТ". Далі вплив сполуки ЇЇ та/або атосибану на пікову амплітуду бо скорочення в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 НМ, 10 нМ і 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нМ", "ОТ 10 нм" і "ОТ 100
НМ", відповідно. Значення на осі у представляють пікову амплітуду скорочення як відсоток від пікової амплітуди спонтанних початкових скорочень. Фіг. 7ба являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки ЇЇ (60 нМ і 600 нМ), атосибану (6 нМ) і комбінацій сполуки ІЇ ії атосибану на тривалість індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - З зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ЮОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМ5ТКОМЕМТЗП) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення А0І Ромжегіаб. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники тривалості спонтанного скорочення. Виміряний показник тривалості спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль
ДМСО, сполуку ІЇ та/або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю, сполуки ЇЇ та/або атосибану на тривалість скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "АМТ". Далі вплив сполуки ІЇ та/або атосибану на тривалість скорочень в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 нМ ії 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нМ", "ОТ 10 нм" "ОТ 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють тривалість скорочення як відсоток від тривалості початкових спонтанних скорочень. Фіг. 7бе являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки ЇЇ (60 нМ і 600 нМ), атосибану (6 нМ) і комбінацій сполуки І! і атосибану на загальну роботу, виконану при всіх скороченнях (сумарна площа під кривою для всіх скорочень) для індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - З зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням
ОМТ Муодгарі 800 М5 (АБІМ5ТАОМЕМТ5. ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роугегіар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники виконаної роботи для всіх спонтанних
Зо скорочень. Показник виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО, сполуку ІЇ та/або атосибан у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю, сполуки ЇЇ та/або атосибану на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "АМТ". Далі вплив сполуки ЇЇ та/або атосибану на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 НМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 НМ", "ОТ 10 нм" ї "ОТ 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють загальну виконану роботу для всіх наступних скорочень як відсоток від загальної виконаної роботи для всіх початкових спонтанних скорочень. Три зірочки позначають значення р на рівні р « 0,001 в порівнянні з контролем ДМСО. Два символи "Ж" позначають значення р на рівні р « 0,01 в порівнянні з обробкою атосибаном в концентрації 6 нМ.
Фіг. 77а являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій ніфедипіну (1 нМ, 6
НМ, 60 нМ, 600 нМ і 10 мкм) на частоту індукованих ОТ скорочень гладких м'язів в М - 2 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ЮОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМ5ТКОМЕМТЗП) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роуегіар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники частоти спонтанних скорочень. Виміряний показник частоти спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль
ДМСО або ніфедипін у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або ніфедипіну на частоту скорочень протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Ніф". Далі вплив ніфедипіну на частоту скорочень в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 НМ, 10 НМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нм", "ОТ 10 нМ" і "ОТ 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють частоту скорочень як відсоток від частоти початкових спонтанних скорочень. Фіг. 77р являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій ніфедипіну (1 нМ, 6 нМ, 60 бо НМ, 600 нМ і 10 мкМ) на виконану роботу на скорочення (площа під кривою або "АОС") для індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - 2 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ
Муодгари 800 М5 (АБІМ5ТАОМЕМТ5! І) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення А0І Роугегіаб. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники спонтанної виконаної роботи на скорочення. Виміряний показник спонтанної виконаної роботи на скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або ніфедипін у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або ніфедипіну на виконану роботу на скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Ніф". Далі вплив ніфедипіну на виконану роботу на скорочення в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 нМ і 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нм", "ОТ 10 нм" ї "ОТ 100 нм", відповідно.
Значення на осі у представляють виконану роботу на скорочення як відсоток від виконаної роботи на скорочення для спонтанних початкових скорочень. Фіг. 77с являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій ніфедипіну (1 нМ, 6 нм, 60 нМ, 600 нМ і 10 мкМ) на пікову амплітуду індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - 2 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ
Муодгари 800 М5 (АБІМ5ТАОМЕМТ5Л) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роугегіарю. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники пікової амплітуди спонтанного скорочення. Виміряний показник пікової амплітуди спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або ніфедипін у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або ніфедипіну на пікову амплітуду скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Ніф". Далі вплив ніфедипіну на пікову амплітуду скорочення в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими
Зо концентраціями ОТ (1 нМ, 10 нМ і 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нм", "ОТ 10 нм" ї "ОТ 100 нм", відповідно.
Значення на осі у представляють пікову амплітуду скорочення як відсоток від пікової амплітуди спонтанних початкових скорочень. Фіг. 774 являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій ніфедипіну (1 нМ, 6 нМ, 60 нМ, 600 нМ і 10 мкм) на тривалість індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - 2 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарп 800 М5 (АРІМ5ТАОМЕМТ5І) ов оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АСбІ Рожегіаб. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники тривалості спонтанного скорочення. Виміряний показник тривалості спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або ніфедипін у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або ніфедипіну на тривалість скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Ніф". Далі вплив ніфедипіну на тривалість скорочень в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 нМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нМ", "ОТ 10
НМ" її "ОТ 100 нм", відповідно. Значення на осі у представляють тривалість скорочення як відсоток від тривалості початкових спонтанних скорочень. Фіг. 77е являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій ніфедипіну (1 НМ, б нМ, 60 нМ, 600 нм їі 10 мкМ) на загальну роботу, виконану при всіх скороченнях (сумарна площа під кривою для всіх скорочень) для індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - 2 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ
Муодгари 800 М5 (АБІМЗ5ТАОМЕМТОЛ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення А0І Роугепар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень. Показник виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО або ніфедипін у бо вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю або ніфедипіну на загальну роботу,
виконану для всіх наступних скорочень, протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "Ніф". Далі вплив ніфедипіну на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 нМ ії 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нм", "ОТ 10 нм" і "ОТ 100 нм", відповідно. Значення на осі у представляють сумарну виконану роботу для всіх наступних скорочень як відсоток від сумарної виконаної роботи для всіх початкових спонтанних скорочень.
Фіг. 7ва являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки І! (60 нМ і 600 НМ), ніфедипіну (б нМ) і комбінацій сполуки ЇЇ ії ніфедипіну на частоту індукованих ОТ скорочень гладких м'язів в М - 5 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарп 800 М5 (АРІМ5ТАОМЕМТОГ) ов оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Рожегіар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше хвилин, реєструють початкові показники частоти спонтанних скорочень. Виміряний показник частоти спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО, сполуку ІЇ та/або ніфедипін у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю, сполуки ІЇ та/або ніфедипіну на частоту скорочень протягом 20 наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "АМТ". Далі вплив сполуки ІЇ та/(або ніфедипіну на частоту скорочень в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, ТО НМ і 100 нм) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нм", "ОТ 10 нм" ї "ОТ 100 нм", відповідно. Значення на осі у представляють частоту скорочень як відсоток від частоти початкових спонтанних скорочень. Фіг. 780 являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки ЇЇ (60 нМ і 600 нм), ніфедипіну (6 нМ) і комбінацій сполуки ІІ і ніфедипіну на виконану роботу на скорочення (площа під кривою або "АС") для індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - 5 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з
Зо розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ
Муодгари 800 М5 (АБІМЗ5ТАОМЕМТ5! І) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Роугегіарю. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники спонтанної виконаної роботи на скорочення. Виміряний показник спонтанної виконаної роботи на скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО, сполуку ІЇ та/або ніфедипін у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю, сполуки І! та/або ніфедипіну на виконану роботу на скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "АМТ". Далі вплив сполуки ІІ та/або ніфедипіну на виконану роботу на скорочення в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 нМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нм", "ОТ 10
НМ" ї "ОТ 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють виконану роботу на скорочення як відсоток від виконаної роботи на скорочення для спонтанних початкових скорочень. Фіг. 78с являє собою графік, що демонструє вплив різних концентрацій сполуки ІІ (60 нМ їі 600 нМ), ніфедипіну (б нМ) і комбінацій сполуки Ії ї ніфедипіну на пікову амплітуду індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - 5 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарн 800 М5 (АРІМ5ТАОМЕМТ5І) ов оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення АОІ Рожегіар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники пікової амплітуди спонтанного скорочення.
Виміряний показник пікової амплітуди спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО, сполуку ІІ та/або ніфедипін у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю, сполуки ІІ та/або ніфедипіну на пікову амплітуду скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "АМТ". Далі вплив сполуки Ії та/або ніфедипіну на пікову амплітуду скорочення в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 НМ, 10 нМ і 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нМ", "ОТ 10 нм" і "ОТ 100 60 НМ", відповідно. Значення на осі у представляють пікову амплітуду скорочення як відсоток від пікової амплітуди спонтанних початкових скорочень. Фіг. 784 являє собою графік, що демонструє вплив сполуки ІЇ (60 нМ ї 600 нМ), ніфедипіну (б нМ) і комбінацій сполуки І і ніфедипіну на тривалість індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - 5 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів- людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням ОМТ Муодгарп 800 М5 (АБІМ5ТАОМЕМТ5І ) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення А! Роуегіар. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники тривалості спонтанного скорочення. Виміряний показник тривалості спонтанного скорочення представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль
ДМСО, сполуку ІЇ та/або ніфедипін у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю, сполуки ІЇ та/або ніфедипіну на тривалість скорочення протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "АМТ". Далі вплив сполуки ЇЇ та/або ніфедипіну на тривалість скорочень в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 нМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 нм", "ОТ 10
НМ" її "ОТ 100 нм", відповідно. Значення на осі у представляють тривалість скорочення як відсоток від тривалості початкових спонтанних скорочень. Фіг. 7в8е являє собою графік, що демонструє вплив сполуки ІЇ (60 нМ ї 600 нМ), ніфедипіну (б нМ) і комбінацій сполуки І і ніфедипіну на загальну роботу, виконану при всіх скороченнях (сумарна площа під кривою для всіх скорочень) для індукованих ОТ скорочень гладких м'язів у М - 5 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Експерименти проводили з використанням
ОМТ Муодгарі 800 М5 (АБІМ5ТАОМЕМТ5Г) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення А0І Роугегіаб. Після встановлення регулярних скорочень протягом щонайменше 20 хвилин, реєструють початкові показники виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень. Показник виконаної роботи для всіх спонтанних скорочень представлений на осі х як "Спон". Після цього до кожного зразка міометрію додають контроль ДМСО, сполуку ІІ та/або ніфедипін у вказаних концентраціях і вимірюють вплив контролю, сполуки ІЇ та/або ніфедипіну
Зо на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин. Ця точка часу представлена на осі х як "АМТ". Далі вплив сполуки ЇЇ та/або ніфедипіну на загальну роботу, виконану для всіх наступних скорочень, в присутності ОТ вимірюють при навантаженні зразків тканини міометрію зростаючими концентраціями ОТ (1 нМ, 10 НМ ї 100 нМ) в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин. Ці точки часу представлені на осі х як "ОТ 1 НМ", "ОТ 10 нм" ї "ОТ 100 нМ", відповідно. Значення на осі у представляють сумарну виконану роботу для всіх наступних скорочень як відсоток від сумарної виконаної роботи для всіх початкових спонтанних скорочень. Зірочка значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з контролем ДМСО. Дві зірочки позначають значення р на рівні р « 0,01 в порівнянні з контролем ДМСО. Три зірочки позначають значення р на рівні р « 0,001 в порівнянні з контролем ДМСО. Два символи "жк" позначають значення р на рівні р « 0,001 в порівнянні з обробкою сполукою ІІ в концентрації 60 нМ.
Фіг. 79а являє собою Вестерн-блот, який демонструє вплив окситоцину, нуласибану та їх комбінації на експресію фосфорильованого рб5 (р-рб5), фосфорильованого рів (р-рзв) і фосфорильованої кінази, регульованої позаклітинними сигналами (р-ЕКК) в М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Зразки були нестимульованими ("НС"), стимульованими окситоцином ("ОТ"), обробленими нуласибаном в концентрації 1 мкМ або обробленими як окситоцином, так і нуласибаном в концентрації 1 мкм протягом вказаних періодів часу. Блот проти В-актину одержаний як контроль. Фіг. 796 являє собою Вестерн-блот, який демонструє вплив окситоцину та/або різних концентрацій сполуки ЇЇ, необов'язково в комбінації з нуласибаном, на експресію р-рб5, р-р38 та р-ЕКК в М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Зразки були нестимульованими ("НС"), стимульованими окситоцином ("ОТ"), обробленими сполукою ЇЇ в концентрації З мкМ або обробленими як окситоцином, так і сполукою | з різними концентраціями сполуки ЇЇ, як в присутності, так і за відсутності нуласибану в концентрації 1 мкМ у вказані періоди часу. Блот проти В-актину одержаний як контроль. Фіг. 79с являє собою
Вестерн-блот, який демонструє вплив окситоцину, нуласибану та їх комбінації на експресію прозапальних генів циклооксигенази 2, ЦОГ-2 (СОХ-2) і фосфорильованої кальцій-залежної бо фосфоліпази А2 (р-сРІ А2) в М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Зразки були нестимульованими ("НС"), стимульованими окситоцином ("ОТ"), обробленими нуласибаном в концентрації 1 мкМ або обробленими як окситоцином, так і нуласибаном в концентрації 1 мкМ протягом вказаних періодів часу. Блот проти В-актину одержаний як контроль. Фіг. 794 являє собою Вестерн-блот, який демонструє вплив окситоцину та/або різних концентрацій сполуки ІІ, необов'язково в комбінації з нуласибаном, на експресію прозапальних генів ЦОГ-2 і р-сРІ А2 в М - 6 зразках біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Зразки були нестимульованими ("НС"), стимульованими окситоцином ("ОТ"), обробленими сполукою ІІ в концентрації З мкМ або обробленими як окситоцином, так і сполукою ЇЇ з різними концентраціями сполуки ІЇ, як в присутності, так ії за відсутності нуласибану в концентрації 1 мкМ у вказані періоди часу. Блот проти В-актину одержаний як контроль. Фіг. 79е являє собою графік, на якому кількісно представлена експресія р-рб5, зображеного на Фіг. 7За і 795. Фіг. 797 являє собою графік, на якому кількісно представлена експресія р-р38, зображеного на Фіг. 79а і 79р. Фіг. 799 являє собою графік, на якому кількісно представлена експресія р-ЕКК, зображеного на Фіг. 79а і 79р. Фіг. 79п являє собою графік, на якому кількісно представлена експресія ЦОГ-2, зображеної на Фіг. 79с та 794.
Зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05 у порівнянні з нестимульованийм ("НС") зразками.
Два зірочки позначають значення р на рівні р « 0,01 у порівнянні з нестимульованими зразками.
Три зірочки позначають значення р на рівні р «0,001 у порівнянні з нестимульованими зразками.
Три символи "Ж" позначають значення р на рівні р р «0,001 в порівнянні із зразками, обробленими окситоцином (ОТ). Фіг. 79і являє собою графік, на якому кількісно представлена експресія р-сРІ А2, зображеної на Фіг. 79с та 794. Зірочка позначає значення р на рівні р « 0,05 в порівнянні з нестимульованими ("НС") зразками. Три зірочки позначають значення р на рівні р « 0,001 в порівнянні з нестимульованими зразками.
Фіг. вба являє собою Вестерн-блот, який демонструє вплив окситоцину, нуласибану та їх комбінації на експресію р-рб5, р-р38 та р-ЕКК в М - З зразках біопсії амніону доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Зразки були нестимульованими ("НС"),
Зо стимульованими окситоцином ("ОТ"), обробленими нуласибаном в концентрації 1 мкМ або обробленими як окситоцином, так і нуласибаном в концентрації 1 мкМ протягом вказаних періодів часу. Блот проти В-актину одержаний як контроль. Фіг. 805 являє собою Вестерн-блот, який демонструє вплив окситоцину та/або різних концентрацій сполуки ІІ, необов'язково в комбінації з нуласибаном, на експресію р-рб5, р-р38 та р-ЕКК в М - З зразках біопсії амніону доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Зразки були нестимульованими ("НС"), стимульованими окситоцином ("ОТ"), обробленими сполукою ІІ в концентрації З мкМ або обробленими як окситоцином, так і сполукою Ії з різними концентраціями сполуки ЇЇ, як в присутності, так і за відсутності нуласибану в концентрації 1 мкМ у вказані періоди часу. Блот проти ВД-актину одержаний як контроль. Фіг. 80с являє собою Вестерн-блот, який демонструє вплив окситоцину, нуласибану та їх комбінації на експресію прозапальних генів СОХ-2 і р-сРІ А2 в М - 3 зразках біопсії амніону доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів- людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину.
Зразки були нестимульованими ("НС"), стимульованими окситоцином ("ОТ"), обробленими нуласибаном в концентрації 1 мкМ або обробленими як окситоцином, так і нуласибаном в концентрації 1 мкМ протягом вказаних періодів часу. Блот проти В-актину одержаний як контроль. Фіг. 804 являє собою Вестерн-блот, який демонструє вплив окситоцину та/або різних концентрацій сполуки ІЇ, необов'язково в комбінації з нуласибаном, на експресію прозапальних генів ЦОГ-2 і р-сРІА?2 в М - 3 зразках біопсії амніону доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Зразки були нестимульованими ("НС"), стимульованими окситоцином ("ОТ"), обробленими сполукою ЇЇ в концентрації З мкМ або обробленими як окситоцином, так і сполукою ІІ з різними концентраціями сполуки ЇЇ, як в присутності, так і за відсутності нуласибану в концентрації 1 мкМ у вказані періоди часу. Блот проти В-актину одержаний як контроль.
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
У винаході пропонуються а-аміноестери тиазолідинкарбоксаміду, такі як (35)-3-3(25)-3- (біфеніл-4-ілсульфоніл)-1,3-тіазолідин-2-ілІікарбоніл)аміно)-3-(4-флуорфеніл)пропіл-і -валінат, а також їх сольові форми і кристалічні поліморфні форми. Ці сполуки здатні інгібувати активність білків сімейства рецепторів простагландину Е (ЕР-К), таких як рецептор простагландину Е2а бо (РОБ2а). Сполуки, солі та кристалічні поліморфні форми, описані в цьому документі, можуть бути застосовані для інгібування активності рецептора простагландину Е іп міго та іп мімо і представляють ефективні терапевтичні композиції для лікування передчасних передпологових перейм. Сполуки, солі та кристалічні поліморфні форми, описані в цьому документі, можна вводити суб'єкту (наприклад, суб'єкту-ссавцю, такому як людина), який зазнає або піддається ризику передчасних передпологових перейм в ранній період гестації, наприклад, до 38 тижнів (наприклад, від близько 20 до 37 тижнів, наприклад, гестаційний вік близько 20 тижнів, 21 тижня, 22 тижнів, 23 тижнів, 24 тижнів, 25 тижнів, 26 тижнів, 27 тижнів, 28 тижнів, 29 тижнів, 30 тижнів, 31 тижня, 32 тижнів, 33 тижнів, 34 тижнів, 35 тижнів, 36 тижнів або 37 тижнів, переважно від близько 24 до близько 34 тижнів, наприклад, гестаційний вік близько 24 тижнів, 25 тижнів, 26 тижнів, 27 тижнів, 28 тижнів, 29 тижнів, 30 тижнів, 31 тижня, 32 тижнів, 33 тижнів або 34 тижнів).
У винаході додатково пропонуються способи синтезу (35)-3-3((25)-3-(біфеніл-4-ілсульфоніл)- 1,3-тіазолідин-2-ілікарбоніл)аміно)-3-(4-флуорфеніл)пропіл-| -валінату, а також способи одержання його сольових форм та кристалічних поліморфних форм. Крім того, у винаході пропонуються способи лікування передчасних передпологових перейм у суб'єкта шляхом введення альфа-аміноестерів за винаходом суб'єкту, який потребує лікування, такому як суб'єкт, який зазнає передчасних передпологових перейм, або суб'єкт, який піддається ризику розвитку передчасних передпологових перейм, необов'язково в комбінації з одним або більшою кількістю додаткових терапевтичних агентів, як описано в цьому документі.
На додаток до вищевикладеного, винахід включає композиції та способи, що стосуються 3- (П1,1"-біфеніл|-4-ілсульфоніл)-М-(1-(4-флуорфеніл)-3-гідроксипропіл|-1,3 тіазолідин-2- карбоксаміду. Як описано в цьому документі, цю сполуку можна надавати суб'єкту (наприклад, суб'єкту-ссавцю, такому як людина), який зазнає або піддається ризику передчасних пологових перейм у ранньому гестаційному віці, наприклад, до 38 тижнів (наприклад, від близько від 20 до 37 тижнів, наприклад, гестаційний вік близько 20 тижнів, 21 тижня, 22 тижнів, 23 тижнів, 24 тижнів, 25 тижнів, 26 тижнів, 27 тижнів, 28 тижнів, 29 тижнів, 30 тижнів, 31 тижня, 32 тижнів, 33 тижнів, 34 тижнів, 35 тижнів, 36 тижнів або 37 тижнів, переважно від близько 24 до близько 34 тижнів, такий як гестаційний вік близько 24 тижнів, 25 тижнів, 26 тижнів, 27 тижнів, 28 тижнів, 29 тижнів, 30 тижнів, 31 тижня, 32 тижнів, 33 тижнів або 34 тижнів), необов'язково в комбінації з одним або більшою кількістю додаткових терапевтичних агентів, описаних в цьому документі.
Зо (35)-3-0(25)-3-(біфеніл-4-ілсульфоніл)-1,3-тіазолідин-2-ілікарбоніл)іаміно)-3-(4- флуорфеніл)пропіл-! -валінат (Сполука І)
Винахід базується на відкритті того факту, що сполука !/ (35)-3-4(25)-3-(біфеніл-4- ілсульфоніл)-1,3-тіазолідин-2-ілікарбоніл)аміно)-3-(4-флуорфеніл)пропіл-і| -валінат, представлений формулою І нижче) та її солі іп мімо перетворюються на 3-(1,1"-біфеніл)-4- ілсульфоніл)-М-(11-(4-флуорфеніл)-3-гідроксипропіл|-1,3-тіазолідин-2-карбоксамід (представлений формулою ЇЇ нижче). Сполука ІІ, раніше описана в 05 8415480, є антагоністом рецептора простагландину РЕ, оскільки ця сполука демонструє константу інгібування (Кі) 6 нм для ЕР-К людини, визначену за допомогою аналізів конкурентного зв'язування з радіолігандом (деталі експериментів щодо аналізів конкурентного зв'язування з радіолігандом, придатних для визначення значень Кі, описані, наприклад, в 05 8415480, Приклад 51). Після введення суб'єкту, сполука І іп мімо деестерифікується в результаті дії ендогенних естераз, таких як присутні в шлунково-кишковому тракті, таким чином, що утворюється сполука ІІ.
Е Е й Ендогенні естерази й го) пт З
Су о їй -- он
Мо о -м А з- МН» що)
З сій З,
Се й (0 (п
Виявлено, що сполука І є інгібітором рецептора простагландину РЕ, оскільки сполука І інгібує
ЕР-К людини з Кі, що становить 1 нМ. Сполука | демонструє покращення декількох фізико- хімічних характеристик відносно сполуки Ії, включаючи розчинність у воді, а також у середовищах, що імітують вміст тонкого кишечнику в стані після прийому їжі (БезвіРб) і натщесерце (Базвівє). Ці дані узагальнені в Табл. 2 нижче.
Таблиця 2
Порівняння фізико-хімічних властивостей сполуки І і сполуки ЇЇ
Розчинністьв гез5ІЕ(мк/млірН5О | 77/90 777777 Ї177777171711171о01
КЕР-Влюдини(йМ)ЇГ///77777711111111Ї111111111111111Ї111111116сС1
Крім виявлення збільшеної розчинності у воді, сполука І та її солі виявляють несподіваний та сприятливий механізм абсорбції Як описано нижче у Прикладах, сполука деестерифікується естеразами середовища у тонкому кишечнику і пасивно проникає в епітелій тонкого кишечнику. Несподівано було виявлено, що сполука І та її солі не є субстратами білка- носія Рерії, що являє собою протон-пов'язаний коносій, який опосередковує абсорбцію пептидних поживних речовин. Це відкриття представляє несподівану та сприятливу з фармакологічної точки зору властивість. Відомо, що Рерії опосередковує абсорбцію різних валінатних естерів, як описано, наприклад, у Мід еї аїІ., Адм. Огид Оеїїм. Кем. 65: 1370-1385 (2013), розкриття якої включено до цього документу шляхом посилання. Рериї виявляє широку специфічність по відношенню до субстратів, про що свідчить структурна різноманітність сполук, які транспортуються крізь кишковий епітелій цим білком. Незважаючи на присутність функціональної групи валінатного естеру, абсорбція сполуки І та її солей крізь епітелій тонкого кишечнику не залежить від цього носія. Це є переважною властивістю, оскільки сполука І та її солі (наприклад, сполука ІІ), таким чином, не конкурують з природними субстратами Рери, такими як пептидні поживні речовини, за зв'язування і транспортування цим білком. Скоріше, сполука І та її солі іп мімо перетворюються на форму, яка легко абсорбується способом, що не залежить від енергії та місцевого градієнта протонів. Ця несподівана властивість, у поєднанні з високою розчинністю сполуки !/ та її солей у воді, разом забезпечують сприятливий фармакокінетичний профіль, таким чином, що сполуки за винаходом з легкістю розчиняються у водному середови щі і, і свою чергу, перетворюються на форму, здатну до незалежної від носія абсорбції. (35)-3-0(25)-3-(біфеніл-4-ілсульфоніл)-1,3-тіазолідин-2-ілікарбоніл)іаміно)-3-(4- флуорфеніл)пропіл-! -валінат гідрохлорид (сполука ЇЇ)
Виявлено, що хлоридна сіль сполуки і! ((35)-3-4(25)-3-(біфеніл-4-ілсульфоніл)-1,3- тіазолідин-2-ілікарбоніл)-аміно)-3-(4-флуорфеніл)пропіл-І| -валінат гідрохлорид, позначений як
Зо формула Ш нижче) з легкістю кристалізується із застосуванням декількох різних експериментальних методик, як описано у Прикладах нижче. Сполука ІЇ передбачає одинарну, відтворювану кристалічну форму при кристалізації з різних середовищ і в різних умовах навколишнього середовища. Більше того, ця кристалічна форма сполуки І виявляє підвищену стабільність і умовах навколишнього середовища і в присутності підвищеної відносної вологості.
Як докладно описано у наведених нижче Прикладах, сполука ПІ виявляє низьку гігроскопічність і, таким чином, не виявляє схильності до поглинання вологи з локальної атмосфери. Таким чином, сполука Ії виявляє стійкість до хімічних змін, таких як гідроліз, а також стійкість до включення домішок. Наприклад, домішки, пов'язані з атмосферною водою, не інтегруються з легкістю в кристалічну форму сполуки І. Сполуку ІП можна вводити суб'єкту, такому як вагітний суб'єкт-людина жіночої статі для затримки початку передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22,23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 днів або близько 1,2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів). Крім того, сполуку І вводять суб'єкту, наприклад, вагітному суб'єкту-людині жіночої статі з метою полегшення одного або більшої кількості симптомів, пов'язаних з передпологовими переймами, таких як вагінальна кровотеча та розрив маткових оболонок.
Е
« в НМ ді В, я - ре о МН СІ су і:
Фф (І)
Сполуку І або її фармацевтично прийнятну сіль, таку як сполука Ії, можна вводити окремо або в комбінації з одним або більшою кількістю додаткових агентів, таких як додатковий терапевтичний агент. Приклади додаткових терапевтичних агентів включають додаткові токолітичні агенти, такі як описаний в цьому документі антагоніст рецептора окситоцину, в тому числі, наприклад, атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан і нуласибан, що являє собою (32,55)-5-(гідроксиметил)-1-((2'-метил-1,1-біфеніл-4-ілукарбоніл|піролідин-3-он О-метилоксим, або їх варіант, композиція, кристалічна форма або похідне. Шляхом пригнічення трансдукції сигналу окситоцину, антагоністи рецептора окситоцину можуть здійснювати синергічний вплив з описаними в цьому документі антагоністами рецептора простагландину Е2а в напрямку сповільнення або зупинки скорочень матки, наприклад, у пацієнта, який зазнає або піддається ризику передчасних (наприклад, у якого присутній один або більша кількість симптомів) передпологових перейм. Типові додаткові токолітичні агенти включають бетаміметики, такі як тербуталін, ритодрин, гексопреналін, альбутерол, фенотерол, нілідрин та орципреналін, що можуть функціонувати як неактивна кіназа легкого ланцюгу міозину та/або виснажувати резерви
Са міометрію шляхом активізації цАМФ, тим самим пригнічуючи скоротність матки. Інгібітори кальцієвих каналів, такі як дигідропіридини (наприклад, ніфедипін та нікардипін), можна вводити додатково або як альтернативу, разом із сполукою за винаходом, наприклад, для модулювання
ІСа? міометрію та пригнічення опосередкованої Са?" активації міозинових ниток, що призводить до скорочень міометрію. Солі магнію, такі як магній сульфат, можна вводити додатково або як альтернатива, разом із сполукою за винаходом, наприклад, з метою гіперполяризації плазматичної мембрани та/або конкуренції з Саг: за зв'язування з легким ланцюгом міозину. Додатково або як альтернатива, донори нітрогену оксиду, такі як нітрогліцерол, можна вводити разом із сполукою, описаною в цьому документі, наприклад, з метою збільшення рівнів циклічного гуанозинмонофосфату в міометрії, з інактивацією в такий спосіб ниток легкого ланцюга міозину.
Сполуку за винаходом, таку як сполука І або її фармацевтично прийнятна сіль, така як сполука ІЇЇ, можна вводити, додатково або як альтернатива, разом з прогестероном або його варіантом або похідним, таким як 17-а-гідроксипрогестерон, для пригнічення скоротності матки
Зо у суб'єкта, який зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм.
Додатково або як альтернатива, сполуку за винаходом можна вводити разом з кортикостероїдом, описаним в цьому документі, або відомим у даній галузі техніки, наприклад, для сприяння дозріванню легеневої тканини плоду, таким чином, щоб запобігти розвитку дихального дистрес-синдрому, серед інших розладів.
Додатково, сполука може бути складена у вигляді фармацевтичної композиції, такої як фармацевтична композиція, складена, як описано нижче.
Способи лікування
Сполука І, а також її солі представляють надійні інгібітори рецептора простагландину Е і можуть бути застосовані з метою антагонізму взаємодії між членами сімейства простагландину
Е, такими як простагландин Ег2а, і відповідним рецептором простагландину Е іп мімо з метою ослаблення скорочень матки. Сполуку І та її солі можна вводити суб'єкту, наприклад, вагітному суб'єкту-людині жіночої статі, для лікування або попередження передчасних передпологових перейм. Ендогенний простагландин Ег2а синтезується та виділяється епітеліальними клітинами матки у відповідь на каскади сигнальної трансдукції, ініційовані окситоцином. Після зв'язування
РОБ2а з РОБ20-К на позаклітинній поверхні міоциту матки фосфоліпаза С розщеплює фосфатидилінозитол-4,5-бісфосфат (РІРг2) з утворенням діацилгліцеролу, ДАГ (БАС), та інозитол-1,4,5-трисфосфату (ІРз). ІРз, у свою чергу, потенціює вивільнення саркоплазматичними ретикулумами внутрішньоклітинного кальцію (Са). Раптове збільшення запасів кальцію в кінцевому підсумку призводить до скорочення м'язів матки та некрозу ендотеліальних клітин жовтого тіла, секретуючої прогестерон структури, яка підтримує розвиток плоду. Аберантна ініціація скорочень матки і деградація жовтого тіла, спричинені порушенням регуляції секреції
РОБ2а, може призвести до передчасних передпологових перейм. Сполука І та її солі, такі як сполука ІШ, можуть ослаблювати опосередковане фосфоліпазою С утворення ІРз і подальшу мобілізацію внутрішньоклітинних запасів кальцію шляхом інгібування асоціації РОБ2а з
РОГ2ОК. Таким чином, сполуку І або її солі, наприклад, сполуку ІЇЇ, можна вводити суб'єктам, таким як вагітні суб'єкти-люди жіночої статі, з метою затримки початку передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 до 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 днів або близько 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів). Наприклад, сполуку І або її сіль, таку як сполука ІЇЇ, можна вводити суб'єкту з метою запобігання передпологових перейм до розродження шляхом кесаревого розтину. Крім того, сполуку І або її сіль, наприклад, сполуку І, можна вводити суб'єкту з метою профілактики та/або лікування дисменореї. Додатково, сполуку І або її сіль, таку як сполука ІЇЇ, можна вводити суб'єкту, такому як вагітний суб'єкт-людина жіночої статі з метою полегшення одного або більшої кількості симптомів, пов'язаних з передпологовими переймами, таких як вагінальна кровотеча та розрив маткових оболонок.
Додатково, сполуки за винаходом можна застосовувати для лікування ендометріозу у пацієнта (наприклад, пацієнта-людини). Підвищена експресія рецептора простагландину Е2а корелювала з аберантним ростом ендометрію. Як антагоністи активності рецепторів простагландину Е2а, сполуки за винаходом (наприклад, сполука (І) або її сіль, така як сполука (І) можна вводити пацієнту, який страждає на ендометріоз, для лікування цього показання.
Крім того, сполуки за винаходом можна вводити пацієнту для пом'якшення одного або більшої кількості симптомів ендометріозу, таких як болісні симптоми, в тому числі дисменорея, диспареунія, хронічний тазовий біль, дизурія та дисхезія під час менструації та/або без неї.
Успішне лікування ендометріозу шляхом введення сполуки за винаходом пацієнту може відображатися, наприклад, зменшенням росту тканин ендометрію та/або зменшенням болісних симптомів під час менструації та/або без неї.
Поряд з вищевикладеним, в цьому винаході пропонуються способи терапевтичного лікування шляхом надання сполуки ІІ суб'єкту, який потребує лікування, станів, описаних в цьому документі. Наприклад, сполуку ЇЇ можна надавати суб'єкту, такому як вагітний суб'єкт жіночої статі, з метою лікування або попередження передчасних передпологових перейм.
Сполука ІЇ є конкурентним антагоністом рецептора РОЕга і, таким чином, може інгібувати асоціацію цього рецептора з РОЕ2а. Таким чином, сполуку ІЇ можна надавати суб'єктам, таким як вагітні суб'єкти-люди жіночої статі, з метою затримки початку передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25 26, 27, 28, 29, 30 днів або близько 1,2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів). Наприклад, сполуку І можна надавати суб'єкту з метою запобігання передпологових перейм до розродження шляхом кесаревого розтину. Крім того, сполуку ЇЇ можна надавати суб'єкту з метою профілактики та/або лікування дисменореї. Додатково, сполуку ІЇ можна надавати суб'єкту, такому як вагітний суб'єкт-людина жіночої статі, з метою полегшення одного або більшої кількості симптомів, пов'язаних з передпологовими переймами, таких як вагінальна кровотеча та розрив маткових оболонок.
Додатково, сполуку ЇЇ можна надавати суб'єкту для лікування ендометріозу у пацієнта (наприклад, пацієнта-людини). Як антагоніст рецептора РОБЕ2а, сполуку ЇЇ можна надавати пацієнту, який страждає на ендометріоз, з метою лікування цього показання. Сполуку ІЇ можна надавати пацієнту з метою полегшення одного або більшої кількості симптомів ендометріозу, таких як болісні симптоми, в тому числі дисменорея, диспареунія, хронічний тазовий біль, дизурія та дисхезія під час менструації та/або без неї. На успішне лікування ендометріозу шляхом надання сполуки ІЇ суб'єкту може вказувати, наприклад, зменшення росту тканини ендометрію та/або зменшення болісних симптомів під час менструації та/або без неї.
Комбінована терапія
Хоча процеси, що беруть участь у початку передпологових перейм, ще не визначені повністю, з'являється все більше доказів, що підтверджують значущість запалення як у вчасному, так і в передчасному розродженні. Під час початку передпологових перейм бо спостерігається системне збільшення кількості прозапальних факторів, в тому числі простагландинів, цитокінів і марганець супероксиддисмутази. Крім того, запалення було великою мірою пов'язане з передчасними пологами, спричиненими інфекцією.
Вважається, що окситоцин ініціює передпологові перейми, виявляючи два різних ефекти: безпосереднє індукування скорочення міометрію матки та підсилення синтезу і вивільнення скоротливих простагландинів з ендометрію/децидуальної оболонки матки. Інгібуючи трансдукцію сигналу окситоцину, можна досягти прямого (скоротливого) і непрямого (підсилення синтезу простагландинів) впливу окситоцину на матку. Додатково, обробка децидуальної оболонки людини окситоцином приводить до стимуляції продукування простагландину Е2а. Це наводить на думку про існування додаткової ролі сигнальної системи окситоцину в тканинах матки, завдяки якій окситоцин може взаємодіяти не тільки безпосередньо з міометрієм, стимулюючи скорочення матки, але також опосередковано, шляхом утворення простагландинів у інших тканинах.
Існують останні дані, що підтверджують активність скоротливого рецептора простагландину
Е з початком і при прогресуванні передпологових перейм. Крім того, останні повідомлення на те, що окситоцин спричиняє продукування простагландинів у клітинах міометрію людини шляхом потенціювання циклооксигенази 2 (ЦОГ-2). Такий механізм може пояснити стійке вивільнення простагландинів у тканині матки, що сприяє поширенню передпологових перейм.
Комбінована терапія, що включає антагоніст рецептора простагландину Ег2а, такий як сполука І або її соль (наприклад, сполука ІІ), і антагоніст рецептора окситоцину, таким чином, може бути придатною для лікування та/або профілактики передчасних передпологових перейм. Крім того, комбінація антагоніста рецептора окситоцину та антагоніста рецептора простагландину Е2а може бути ефективнішою з точки зору лікування передчасних передпологових перейм, ніж існуючі схеми. Синергічні ефекти можуть спостерігатися і описані в цьому документі, для запобігання як скоротливим, так і запальним процесам, що лежать в основі передчасних передпологових перейм, оскільки доза(и) антагоніста рецептора окситоцину, введенакї) пацієнту, може(уть) бути меншою(ими) при введенні в комбінації з рецептора Е простагландину в порівнянні з дозами, які можна вводити пацієнту, який одержує тільки антагоніст рецептора окситоцину.
Сполуку І або її сіль, таку як сполука І, можна вводити з одним або більшою кількістю
З0 додаткових агентів, таких як антагоніст рецептора окситоцину, 3 метою зменшення частоти скорочень матки та затримки початку передпологових перейм. Наприклад, сполуку І або її сіль, таку як сполука Ії, можна вводити одночасно з, змішувати з або вводити окремо від антагоніста рецептора окситоцину. Типові антагоністи рецептора окситоцину для застосування разом із композиціями та способами за винаходом включають атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан і нуласибан або їх варіант, композицію, кристалічну форму або похідне. Наприклад, сполуку І або її сіль, таку як сполука І, можна вводити до, після або одночасно з нуласибаном або його варіантом, композицією, кристалічною формою або похідним, з метою затримки початку передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 днів або близько 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів).
Додатково або як альтернатива, сполуку за винаходом (наприклад, сполуку | або її фармацевтично прийнятну сіль, таку як сполука ІІ) можна вводити пацієнту, який зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, в поєднанні з бетаміметиком. Дія бетаміметиків, таких як тербуталін, ритодрин, гексопреналін, альбутерол, фенотерол, нілідрин та орципреналін, може бути спрямована на зниження рівня внутрішньоклітинного Са? (наприклад, рівня внутрішньоклітинного Са: в міометрії) шляхом потенціювання В-2 адренергічних рецепторів, тим самим активуючи цАМФ і виснажуючи резерви внутрішньоклітинного Са», які інакше були б доступними для стимуляції скоротності матки. Типові бетаміметики для застосування разом із описаними в цьому документі композиціями та способами, а також типові способи введення бетаміметиків разом з композиціями та способами, описаними в цьому документі, описані, наприклад, у Суєїмаї еї аі. Орегеї. сзупесої. 94: 869-877 (1999), розкриття якої включено до цього документу шляхом посилання.
Додатково або як альтернатива, сполуку за винаходом (наприклад, сполуку | або її фармацевтично прийнятну сіль, таку як сполука Ії) можна вводити пацієнту, який піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, разом з інгібітором кальцієвих каналів, таким як інгібітор кальцієвих каналів І-типу.
Інгібітори кальцієвих каналів, включаючи дигідропіридини, такі як ніфедипін та нікардипін, бо можуть діяти шляхом пригнічення вивільнення Са? із саркоплазматичних ретикулумів, тим самим запобігаючи мобілізації Са, яка стимулює скорочення м'язів матки. Типові інгібітори кальцієвих каналів для застосування разом з описаними в цьому документі композиціями та способами, а також типові способи введення інгібіторів кальцієвих каналів разом з композиціями та способами, описаними в цьому документі, описані, наприклад, у Умоісіеє7ек еї а. Соспгапе Юаарабзе Бузі. Кем. 6: С0О002255 (2014), розкриття якої включено до цього документу шляхом посилання.
Додатково або як альтернатива, сполуку за винаходом (наприклад, сполуку | або її фармацевтично прийнятну сіль, таку як сполука Ії) можна вводити пацієнту, який зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, разом із сіллю магнію, такою як магній сульфат. Солі магнію, такі як магній сульфат, можуть модулювати скоротність матки за декількома механізмами, такими як індукування гіперполяризації плазматичної мембрани та/або конкуренція з Са" за зв'язування з легким ланцюгом міозину, таким чином пригнічуючи скорочення ниток міозину в міоцитах матки.
Додатково або як альтернатива, сполуку за винаходом (наприклад, сполуку | або її фармацевтично прийнятна сіль, таку як сполука Ії) можна вводити пацієнту, який зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, разом з донором нітрогену оксиду. Нітрогену оксид, вазодилататор, необхідний для підтримки нормального м'язового тонусу, продукується в різних клітинах.
Нітрогену оксид синтезується під час окиснення Іі -аргініну до Іі-цитруліну. Ця реакція каталізується синтазою нітрогену оксиду, що існує в кількох ізоформах. Обидві, індуцибельна (тип 2) ії мозкова (тип 1) синтази нітрогену оксиду експресуються в клітинах міометрію та ендотеліальних клітинах кровоносних судин, тоді як ендотеліальні (тип 3) синтази нітрогену оксиду експресуються виключно в ендотеліальних клітинах кровоносних судин. Взаємодія між нітрогену оксидом і розчинною гуанілатциклазою, що присутня у найближчих ефекторних клітинах, представляє широко розповсюджений механізм трансдукції сигналу, що сполучає різні позаклітинні стимули утворення нітрогену оксиду із синтезом циклічного гуанозинмонофосфату (ЦГМФ) в клітинах-мішенях. Збільшення вмісту ЦГМФ у гладком'язових клітинах, таких як міоцити матки, інактивує кінази легких ланцюгів міозину, що приводить до розслаблення гладкої мускулатури. Токолітичні ефекти донорів нітрогену оксиду, таких як нітрогліцерол, описані,
Зо наприклад, у 5ітпап еї аі. Мем Епої. У. Мей. 357: 477-487 (2007), розкриття якої включено до цього документу шляхом посилання.
Додатково або як альтернатива, сполуку за винаходом (наприклад, сполуку | або її фармацевтично прийнятну сіль, таку як сполука Ії) можна вводити пацієнту, який зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, разом з прогестероном або його варіантом, таким як 17-а- гідроксипрогестерон капроат. Прогестерон є стероїдним гормоном, що секретується жовтим тілом і плацентою після близько 8 тижнів вагітності. Прогестерон і його варіанти, такі, як 17-а- гидроксипрогестерона капроат, може регулювати стан спокою матки шляхом прямого модулювання |Саг-| міометрію і синтезу простагландинів, як описано, наприклад, у Мидіїйа еї а).
Мем Епаді. У. Меа. 362: 529-535 (2010); бБітнап еї аї. Мем Епаі. У. Мед. 357: 477-487 (2007); тії еї ах. Єшиг. У. ОБзівєї. Супесої. Вергод. Віої. 142: 3-11 (2009); Вегпаї. ет. Сеї!Ї Оєм. Віої. 18: 340- 347 (2007); і Нибіпопі еї аї. 9. Ргедпапсу. 941057 (2011), розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
Додатково або як альтернатива, сполуку за винаходом (наприклад, сполуку | або її фармацевтично прийнятну сіль, таку як сполука ІЇЇ) можна вводити пацієнту, що зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, разом з кортикостероїдами. Допологові кортикостероїди, такі як бетаметазон, дексаметазон і гідрокортизон, являють собою клас терапевтичних агентів, які можна вводити суб'єкту, наприклад, вагітному суб'єкту жіночої статі в ході передчасних передпологових перейм або суб'єкту з ризиком передчасних передпологових перейм (наприклад, суб'єкту, у якого присутні один або більша кількість симптомів передчасних передпологових перейм, такі як вагінальна кровотеча та розрив маткових оболонок) для прискорення дозрівання легенів плоду. Лікування допологовими кортикостероїдами пов'язане із загальним зменшенням смертності новонароджених, частоти респіраторного дистрес-синдрому, внутрішньошлуночкових крововиливів, некротизуючого ентероколіту, допоміжної штучної вентиляції легенів, госпіталізації до відділення інтенсивної терапії, а також системних інфекцій протягом перших 48 годин життя. Крім того, терапія допологовими кортикостероїдами є ефективною у жінок з передчасним розривом оболонок, ПРО (РЕОМ) та пов'язаними з вагітністю гіпертензивними синдромами. Існують докази, що наводять на думку про переваги в 60 широкому діапазоні гестаційних вікових груп, наприклад, від 26 до 34 тижнів, серед іншого
(Мігасіє сеї аї. 9. Регіпаї. Меа. 36: 191-196 (2008), розкриття якої включено до цього документу шляхом посилання).
Крім вищевикладеного, у відповідності до способів, описаних в цьому документі, сполуку ЇЇ можна надавати (наприклад, шляхом безпосереднього введення або введення її проліків) суб'єкту, який потребує лікування (наприклад, суб'єкту-людині, який зазнає або піддається ризику передчасних передпологових перейм, або суб'єкту-/людині, який страждає на дисменорею або ендометріозу), з одним або більшою кількістю додаткових агентів, таких як антагоніст рецептора окситоцину, наприклад, з метою зменшення частоти скорочень матки і затримати початку передпологових перейм. Наприклад, сполуку І можна одержувати одночасно з, змішувати з або вводити окремо від антагоніста рецептора окситоцину. Типові антагоністи рецептора окситоцину для застосування разом із композиціями та способами за винаходом включають атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан і нуласибан або їх варіант, композицію, кристалічну форму або похідне. Наприклад, сполуку ІЇ можна надавати до, після або одночасно з нуласибаном або його варіантом, композицією, кристалічною формою або похідним, з метою затримки початку передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1,2,3,4,5,6, 7,8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 днів або близько 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів).
Додатково або як альтернатива, сполуку ЇЇ можна надавати пацієнту, який зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, разом із бетаміметиком. Як описано вище, функція бетаміметиків, таких як тербуталін, ритодрин, гексопреналін, альбутерол, фенотерол, нілідрин і орципреналін, може полягати у зниженні внутрішньоклітинних рівнів Са-" (наприклад, внутрішньоклітинних рівнів Сає в міометрії)ї шляхом потенціювання В-2 адренергічних рецепторів, тим самим активуючи цАМФ і виснажуючи внутрішньоклітинні резерви Са", які інакше могли б бути доступними для стимуляції скоротності матки. Типові бетаміметики для застосування разом із описаними в цьому документі композиціями та способами, а також типові способи введення бетаміметиків у поєднанні з композиціями та способами, описаними в цьому документі, описані, наприклад, у Суєїмаї еї аі. Орегеї. сзупесої. 94: 869-877 (1999), розкриття якої включено до цього документу шляхом посилання.
Додатково або як альтернатива, сполуку ЇЇ можна надавати пацієнту, який зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, разом з інгібітором кальцієвих каналів, таким як інгібітор кальцієвих каналів І -типу. Як описано вище, інгібітори кальцієвих каналів, включаючи дигідропіридини, такі як ніфедипін та нікардипін, можуть функціонувати шляхом пригнічення вивільнення Са?» із саркоплазматичних ретикулумів, тим самим запобігаючи мобілізації Са, яка стимулює скорочення м'язів матки. Типові інгібітори кальцієвих каналів для застосування разом з описаними в цьому документі композиціями та способами, а також типові способи введення інгібіторів кальцієвих каналів разом з композиціями та способами, описаними в цьому документі, описані, наприклад, у ММо|сіеєє2еК еї ам. Соспгапе Оааразе Бузі. Кем. 6:00002255 (2014), розкриття якої включено до цього документу шляхом посилання.
Додатково або як альтернатива, сполуку ЇЇ можна надавати пацієнту, який зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, разом із сіллю магнію, такою як магній сульфат. Як описано вище, солі магнію, такі як магній сульфат, можуть модулювати скоротливу здатність матки за допомогою декількох механізмів, таких як індукування гіперполяризації плазматичної мембрани та/або конкуренція з Са? за зв'язування з легким ланцюгом міозину, тим самим пригнічуючи скорочення ниток міозину в міоцитах матки.
Додатково або як альтернатива, сполуку ЇЇ можна надавати пацієнту, який зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, разом із донором нітрогену оксиду. Як описано вище, нітрогену оксид, вазодилататор, необхідний для підтримання нормального м'язового тонусу, продукується у різних клітинах, а індуковане нітрогену оксидом збільшення вмісту ЦГМР у клітинах гладкої мускулатури, таких як міоцити матки, приводить до розслабленню м'язів. Токолітичні ефекти донорів нітрогену оксиду, таких як нітрогліцерол, описані, наприклад, у Зітпап еї аІ. Мем/ Епаї. У.
Меа. 357: 477-487 (2007), розкриття якої включено до цього документу шляхом посилання.
Додатково або як альтернатива, сполуку ЇЇ можна надавати пацієнту, який зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, разом з прогестероном або його варіантом, таким як 17-а- бо гідроксипрогестерон капроат. Як описано вище, прогестерон і його варіанти, такі як 17-а-
гідроксипрогестерон капроат, можуть регулювати стан спокою матки шляхом прямого модулювання (Са--| міометрію та синтезу простагландинів, як описано, наприклад, у Мидіїйа еї аї.
Мем Епаї. У. Меа. 362:529-535 (2010); бітнап еї аі. Мем Епаї. У. Мед. 357:477-487 (2007); тії еї а). Єшг. У. ОБзівї. Ссупесої. Нергод. Віої. 142:3-11 (2009); Ветаї!. Зет. Сеї! Оєм. Віої. 18:340-347 (2007); і Нибіпопі еї аї. 9. Ргедпапсу. 941057 (2011), розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
Додатково або як альтернатива, сполуку ЇЇ можна надавати пацієнту, який зазнає або піддається ризику (наприклад, присутні один або більша кількість симптомів) передчасних передпологових перейм, разом з кортикостероїдом. Як описано вище, допологові кортикостероїди, такі як бетаметазон, дексаметазон та гідрокортизон, являють собою клас терапевтичних агентів, які можна вводити суб'єкту, наприклад, вагітному суб'єкту жіночої статі, в ході передчасних передпологових перейм або суб'єкту з ризиком передчасних передпологових перейм (наприклад, суб'єкт, у якого присутні один або більша кількість симптомів передчасних передпологових перейм, таких як вагінальна кровотеча та розрив маткових оболонок) з метою прискорення дозрівання легенів плоду, причому лікування допологовими кортикостероїдами пов'язане із загальним зменшенням смертності новонароджених, частоти респіраторного дистрес-синдрому, внутрішньошлуночкових крововиливів, некротизуючого ентероколіту, допоміжної штучної вентиляції легенів, вміщення до відділення інтенсивної терапії, а також системних інфекцій протягом перших 48 годин життя.
Фармацевтичні композиції
Сполука І або її сіль, така як сполука І, може бути складена у вигляді фармацевтичної композиції для введення суб'єкту, такому як вагітний суб'єкт-людина жіночої статі, у біологічно сумісній формі, придатній для введення іп мімо. Відповідно, в одному аспекті даного винаходу пропонується фармацевтична композиція, що містить сполуку І або її сіль, таку як сполука ЇЇ, в суміші з придатним розбавлювачем, носієм або допоміжною речовиною. Сполуку І або її сіль, таку як сполука І, можна вводити, наприклад, перорально або шляхом внутрішньовенної ін'єкції.
В цьому винаході додатково пропонуються фармацевтичні композиції, що містять сполуку ІІ.
Такі композиції можуть містити сполуку ІІ, змішану з придатним розбавлювачем, носієм або допоміжною речовиною.
За звичайних умов зберігання та використання фармацевтична композиція може містити консервант, наприклад, для запобігання росту мікроорганізмів. Звичайні методики та інгредієнти для вибору та приготування придатних препаратів описані, наприклад, у Кетіпдіоп: Те б5сієепсе апа Ргасіїсе ої Рпапгтасу (2012, 2279 ей.) і в Те Опйей 5іа(е5 Рпаптасореїа: Тпе Маїіопаї!
Еоптиїагу (2015, ОБР 38 МЕ 33).
Фармацевтичні композиції можуть включати стерильні водні розчини, дисперсії або порошки, наприклад, для екстемпорального приготування стерильних розчинів або дисперсій. У всіх випадках форма може бути стерилізована із застосуванням способів, відомих в цій галузі техніки, і може бути псевдозріджена до такого ступеня, що її можна з легкістю вводити суб'єкту, який потребує лікування.
Фармацевтичну композицію можна вводити суб'єкту, наприклад, людині, окремо або разом з фармацевтично прийнятними носіями, як вказано в цьому документі, частка яких може визначатися розчинністю та/або хімічною природою сполуки, вибраним способом введення і стандартною фармацевтичною практикою.
Композиції для комбінованої терапії
Сполуку І або її сіль, таку як сполука І, можна застосовувати окремо або в комбінації з одним або більшою кількістю додаткових агентів, придатних для інгібування скорочень матки та/або лютеолізу, таких як атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан і нуласибан або їх варіант, композиція, кристалічна форма або похідне, серед інших терапевтичних агентів (наприклад, токолітичних агентів), описаних в цьому документі. Сполуку І або її сіль, таку як сполука І, можна змішувати з додатковим активним агентом, таким як антагоніст рецептора окситоцину, бетаміметик, інгібітор кальцієвих каналів, сіль магнію, донор нітрогену оксиду, прогестерон або його варіант або кортикостероїд, описаний в цьому документі, і вводити пацієнту в складі однієї композиції, або сполуку І або її соль, таку як сполука ЇЇ, можна вводити пацієнту окремо від додаткового активного агента. Наприклад, сполуку І або її сіль, таку як сполука І, ї додатковий активний агент можна вводити пацієнту послідовно.
Крім вищевикладеного, сполуку ІЇ можна надавати суб'єкту окремо або в комбінації з одним або більшою кількістю додаткових агентів, придатних для інгібування скорочень матки та/або лютеолізу, таких як атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан і нуласибан або їх варіант, бо композиція, кристалічна форма або похідне, серед інших терапевтичних агентів (наприклад,
токолітичних агентів), описаних в цьому документі. Сполуку ІЇ можна змішувати з додатковим активним агентом, таким як антагоніст рецептора окситоцину, бетаміметик, інгібітор кальцієвих каналів, сіль магнію, донор нітрогену оксиду, прогестерон або його варіант або кортикостероїд, описаний в цьому документі, і вводити пацієнту в складі єдиної композиції, або сполуку ІЇ можна надавати пацієнту окремо від додаткового активного агента. Наприклад, сполуку ІЇ і додатковий активний агент можна надавати пацієнту послідовно, наприклад, шляхом надання пацієнту сполуки ІЇ, з наступним введенням пацієнту додаткового активного агента.
Композицію для комбінованої терапії, описану в цьому документі, таку як фармацевтична композиція, описана в цьому документі, можна вводити суб'єкту з метою затримки початок передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 до близько 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 днів або близько 1,2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів). У деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт зазнає передчасних передпологових перейм. У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичну композицію вводять суб'єкту (наприклад, суб'єктуу/людині) до початку передчасних передпологових перейм. Фармацевтичну композицію за винаходом можна вводити суб'єкту (наприклад, суб'єкту-/людині) з метою запобігання передпологових перейм до розродження шляхом кесаревого розтину. Фармацевтичну композицію за винаходом можна вводити суб'єкту (наприклад, суб'єкту-/людині) для лікування або профілактики дисменореї. Фармацевтичну композицію за винаходом можна вводити суб'єкту, такому як вагітний суб'єкт-людина жіночої статі з метою полегшення одного або більшої кількості симптомів, пов'язаних з передпологовими переймами, таких як вагінальна кровотеча та розрив маткових оболонок.
Додатковий терапевтичний агент, присутній у композиції для комбінованої терапії, може бути, наприклад, іншим токолітичним агентом. Додатковий токолітичний агент може бути, наприклад, антагоністом рецептора окситоцину, таким як атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан і нуласибан, а також одним або більшою кількістю їх варіантів, препаратів, кристалічних форм або похідних. Наприклад, атосибан і його варіанти описані, наприклад, у патенті США Мо 4504469 і 4402942, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання. Ретосибан і його варіанти описані, наприклад, у патенті США Мо 7141437;
Ко) 8367673; 8541579; 8071594; 8357685; 8937179; і 005 2016/0074413, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання. Барусибан і його варіанти описані, наприклад, у патенті США Мо 6143722; 7091314; 7816489; і 005 2016/0175283, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання. Епелсибан і його варіанти описані, наприклад, у патенті США Мо 7141437; 8367673; 8541579; 7550462; 7919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; і 81815856, розкриття кожного з яких включено в дану заявку шляхом посилання. Нуласибан і його варіанти, композиції та кристалічні форми описані, наприклад, у патенті США Мо 7115754 і Публікації патентної заявки США Мо 2015/0073032; 2015/0164859; і 2016/0002160, розкриття кожного з яких включено до цього документу шляхом посилання.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент є бетаміметиком, таким як тербуталін, ритодрин, гексопреналін, альбутерол, фенотерол, нілідрин або орципреналін. В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент є інгібітором кальцієвих каналів, таким як дигідропіридин, такий як ніфедипін або нікардипін. В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент є сіллю магнію, такою як магній сульфат. В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий токолітичний агент є донором нітрогену оксиду, таким як нітрогліцерол.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний агент є прогестероном або його варіантом або похідним, таким як 17-а-гідроксипрогестерон капроат.
В деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний агент є кортикостероїдом. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є бетаметазоном. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є дексаметазоном. В деяких варіантах реалізації винаходу кортикостероїд є гідрокортизоном.
При комбінованому лікуванні дози однієї або більшої кількості терапевтичних сполук можуть бути зменшені відносно стандартних для монотерапії доз. Наприклад, дози можуть бути визначені емпірично, виходячи з комбінацій і перестановок лікарських засобів або можуть бути виведені лікарем, компетентним в цій галузі техніки.
ПРИКЛАДИ
Наступні приклади наведені таким чином, щоб надати звичайному фахівцю в цій галузі техніки опис того, яким чином можна застосовувати, виготовляти та оцінювати композиції і способи, описані в цьому документі, і призначені бути тільки прикладами реалізації винаходу, та 60 не призначені для обмеження того, що винахідники вважають своїм винаходом.
Приклад 1. Одержання сполук | і ПІ
Сполука І та її хлоридна сіль (сполука Ії) одержані у відповідності до Схеми 1, наведеної нижче. В цьому Прикладі буде описана кожна із стадій, які проводять для синтезу сполуки І, позначених Стадії 1-6.
Схема 1. Одержання сполуки І та її хлоридної солі дб
Зоита І див МО СН о гЙ та мемо и ТИВ Я во ОКО аДІПБА,дМАЛТФ збу кодек с: ПИ Ни саун пнкннтятнннннннт нки бай М
Ех Но про я є Н зле па Укаи
Ре: юшнонониких Кох вод СЕ 1. ота й по ве м р Я ре нес і 2 зав їх 5. щ Ес; х т ям де К Е ще я що й сооюа Її я пить Уа Ммаеи Й Пн Мм
АКА і СойЕ ну Мова
М.м. 235.8 ся Мая, за Стадія 2
Стадія 1 пак ШИ я мя м ту
ЕДКІ, НОВІ, ДМА Сни Мовою, Дюксано шк а и руду чи н- АН Стадія 4 СИ нон
ДМФА, СтСь р! 5 3 ді То 2 й н зт т вн пи ї й
НО рес є Що 2 ща АК гоіне Її Й ся сив, ги Я - А . Ми я м ЕщВ. см
Стадія З М.м.сог я М р гл ши ШИ 1. маносу БО, СНУ Ж ь ни тнатнвомо 0000 Ту оно схнунервьна
ВОНО ЕН, ЕЛАХ ре а о а Мам. 2352
Стадії 5,6 ще о бр
Стадія 1: Одержання 2-1-(4-флуорфеніл)-3-гідроксипропілкарбамоїлі|гіазолідин-3- карбонової кислоти трет-бутилового естеру 1. о 3 ії тгФ в дент
АК он ЦІ я н р іі ле шк с --о сн есНСНСОст о за 312 2 о-7о о 2. вон Е З хе Ї ра он
НМ, аж я
СН. МО,З
М.аа.: 233.28 Сівйак М.О, ов М.м.: 384.45
До колби відповідного розміру (ємність А) вміщують 3-(бутоксикарбоніл)-1,3-тіазолідин-(25)- карбонову кислоту (1 мас.), з наступним додаванням тетрагідрофурану, і далі вміст колби охолоджують до температури від -357С до близько -45"С Потім в колбу додають М- метилморфолін (1,18 об.), підтримуючи температури від -307 С до -40 потім додають в колбу, підтримуючи температуру від -30 "С до -40 "С. Далі ізобутилхлорформіат (0,58 об.) вміщують в колбу, підтримуючи температуру від -30 "С до -40 "С.
До окремої ємності (ємність В) вміщують (35)-аміно-3-(4-флуорфеніл)пропан-1-ол (0,76 мас.) і тетрагідрофуран (ТГФ), і ємність ретельно перемішують до тих пір, поки сипкі тверді речовини не розчиняться.
Потім до реакційної ємності А додають розчин (35)-амино-3-(4-флуорфеніл)пропан-1-олу з емності В, підтримуючи температуру від -30"С до -40 "С. Далі вмісту колби дозволяють нагрітись до температури від 15"7С до 25"С протягом періоду від 1 години до 24 годин.
Реакційну суміш перемішують при температурі від 15"С до 25"С до тих пір, поки буде зафіксовано завершення реакції. Реакційну суміш концентрують до сухого стану, потім до 5О0 залишку додають етилацетат, і далі насичений водний розчин амоній хлориду. Органічну фракцію відокремлюють і промивають насиченим водним розчином амоній хлориду. Далі органічну фракцію відокремлюють і промивають насиченим водним розчином натрій гідрокарбонату. Після цього органічну фракцію сушать над натрій сульфатом, фільтрують, і фільтрат концентрують при 35-40 "С до тих пір, поки вміст етилацетату буде становити х 10 95 мас. (мас/мас) з одержанням 2-(1-(4-флуорфеніл)-3-гідроксипропілкарбамоїл|гіазолідин-3- карбонової кислоти трет-бутилового естеру.
Стадія 2: Одержання 3-(бенфіл-4-сульфоніл) тіазолідин-2-карбонової кислоти |1-(4- флуорфеніл)-3-гідроксипропіл|-аміду й: 1. не, СН І- ц бр ід "а 2. ДІПЕА, ДМА, ТГФ С му. у ре с тнннтитннтнттттттоттоож М Її С жа ос С о ого й с: це он р он Ми Ї 7 йо й ше Со де и М.м252.73 Сов ЕМО, сСенокМ, М.ми 500.60
М.м.:384.46
До колби придатного розміру (ємність А) вміщують /(2-(4-флуорфеніл)-3- гідроксипропілкарбамоїлігіазолідин-З3-карбонову кислоту (1 мас.), з наступним додаванням дихлорметану. Далі вміст колби охолоджують до температури від -15 С до -20 "С. Потім у колбу додають хлоргідрогенову кислоту (3,3 об.), підтримуючи температуру від -15 "С до -20 С, до тих пір, поки буде зафіксовано завершення реакції. Після цього реакційну суміш охолоджують до температури від -357С до -40 "С, і до суміші додають тетрагідрофуран, підтримуючи температуру від -30 "С до -40 "С. Далі до суміші додають М,М-діїзопропілетиламін (8,16 об.), підтримуючи температуру від -15 С до -45 С. Після цього в ємність додають 4- диметиламінопіридин (0,032 мас), підтримуючи температуру від -15 "С та -45 76.
До окремої ємності (ємність В) вміщують 4-біфенілсульфонілхлорид (0,85 ваг), з наступним додаванням ТГФф.
Розчин 4-біфренілсульфолхлориду з ємності В додають до реакційної ємності А, підтримуючи температуру від -157С до -45 "С. Після цього реакційній суміші дозволяють нагрітися до температури від 15 "С до 25 "С протягом періоду від 1 години до 24 годин. Далі в колбу додають етилацетат, а потім насичений водний розчин амоній хлориду. Органічну фракцію відокремлюють і промивають насиченим водним розчином амоній хлориду, і потім насиченим водним розчином гідроген карбонату. Далі органічну фракцію сушать над натрій сульфатом і фільтрують. Фільтрат концентрують при температурі від 35 "С до 40 "С до утворення твердого залишку. Після цього дихлорметан додають до залишку і перемішують при температурі від 30 С до 35 "С. Після випарювання до залишку додають етилацетат, і суспензію переносять до придатної ємності. Далі перемішувану суспензію нагрівають до кипіння із зворотним холодильником, а потім охолоджують до температурі від 0"С до 5"С. Осаджену тверду речовину відокремлюють фільтрацією. Залишок на фільтрі промивають етилацетатом, потім трет-бутилметиловим естером, і залишок на фільтрі сушать протягом періоду від 1 год до 24 годин в атмосфері нітрогену з одержанням 3-(біфеніл-4-сульфоніл)тіазолідин-2г-карбонової кислоти (1-(4-флуорфеніл)-3-гідроксипропілі|аміду.
Стадія ЗА: Одержання 2-трет-бутоксикарбоніламіно-3-метилмасляної кислоти 3-(3-(біфеніл- 4-сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|аміно)-3-(4-флуорфеніл)-З-пропілового естеру
Я вн те Я в у ук си ЕДКІ, НОВІ, ДМАП учи
С Ге й М ДдМФА, Ст | ри шь гай я - н о ща о Н
А ною у Є днини т Ж зл й Х ї г
Сех, Со
Моманюво М.М Во
До колб придатного розміру (ємність А) вміщують Вос-їЇ -валін (0,48 мас.), дихлорметан і
М,М-диметилформамід, і далі суміш перемішують в атмосфері нітрогену при температурі від 157С до 25"С. Потім в ємність додають 1-гідроксибензотриазол (НОВІ, 0,3 мас.) і 1-(3- диметиламінопропіл)-З-етилкарбодіїмід гідрохлорид, ЕДКІ (ЕОСІ, 0,42 мас.), підтримуючи температуру при 15 "С до 25 "С. Після цього суміш перемішують при температурі від 15 "С до 25"С до розчинення сипких твердих речовин з одержанням розчину А.
До окремої ємності (ємність В) вміщують 3-(біфеніл-4-сульфоніл)тіазолідин-2-карбонової кислоти /(1-(4-флуорфеніл)-З-гідроксипропілф|амід (1,0 мас.;), дихлорметан і М. М- диметилформамід, і далі суміш перемішують при температурі від 15 "С до 25 "С в атмосфері нітрогену. Потім в ємність додають 4-диметиламінопіридин (0,27 ваг), підтримуючи температуру від 15 "С до 25 "С. Суміш перемішують при цій температурі до розчинення твердих частинок (зазвичай від 5 до 15 хвилин) з одержання розчину В.
Далі розчин А додають до розчину В, підтримуючи температуру від 15 "С до 30 "С. Суміш перемішують при цій температурі до тих пір, поки не буде зафіксовано завершення реакції.
Реакційну суміш концентрують для видалення летких розчинників. Після цього в колбу додають етилацетат, і потім 10 95 мас/мас водний розчин лимонної кислоти. Водну фракцію відокремлюють та екстрагують етилацетатом. Об'єднані органічні фракції промивають сумішшю 10 95 мас/мас водного розчину лимонної кислоти, та додають насичений водний розчин натрій хлориду, з наступним додаванням насиченого водного розчину амоній хлориду, насиченого водного розчину натрій гідрокарбонату і насиченого водного розчину натрій хлориду. Далі органічну фракцію сушать над магній сульфатом, фільтрують, і залишок на фільтрі промивають етилацетатом. Фільтрати концентрують з утворенням твердого залишку, з одержанням неочищеного 2-трет-бутоксикарбоніламіно-3-метилмасляної кислоти 3-Ц3-(біфеніл-4- сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|аміно)-3-(4-флуорфеніл)-)-З-пропілового естеру.
Стадія ЗВ: Очищення 2-трет-бутоксикарбоніламіно-3-метилмасляної кислоти 3-(3-(біфеніл- 4-сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|аміно)-3-(4-флуорфеніл)-З-пропілового естеру -5 ей В 5 ноя ж вч) чо)
МВ Хроматографія р реч ери понннкнннннтннннннкетннтентннннс нен Яр зи ВО с
І о і гг о А
Ай Ід з МА о ще бр СГ й й чех ра ЧОЛ І б!
Сей оєМУО,В» Се Му
М.м.: 598.85 Мам: 699,85
Для очищення 2-трет-бутоксикарбоніламіно-3-метилмасляної кислоти 3-13-(біфеніл-4- сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|аміно)-3-(4-флуорфеніл)-З-пропілового естеру, неочищений
Зо продукт (1 мас.) і дихлорметан змішують в ємності до розчинення сипких твердих речовин.
Потім розчин переносять на силіцію діоксид, з наступним додаванням дихлорметану. Продукт елююють етилацетатом:гептанами. Фракції, що містять продукт, об'єднують і концентрують до сухого стану під вакуумом при температурі водяної бані від 35 "С до 40 "С, з одержанням очищеного 2-трет-бутоксикарбоніламіно-3-метилмасляної кислоти 3-Ц3-(біфеніл-4- сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|аміно)-3-(4-флуорфеніл)-З-пропілового естеру.
Стадія 4: Одержання 2-аміно-3-метилмасляної кислоти 3-13-(біфеніл-4- сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|аміно)-3-(4-флуорфеніл)пропіловий естер метансульфонату р Е аа и г ї С мевОо Я г ц й й т их | й а Ш як тів, пе ро о ; Діоксан С йо о з сно ся Її ч о, й я Ї Мн
Її ши в р : м А о м
Сокме
М. 59085 СанаєМм,О,5, СНО,
М.м. 695.83
До колби відповідного розміру вміщують 2-трет-бутоксикарбоніламіно-3-метилмасляної кислоти 3-(3-(біфеніл-4-сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|Іаміно)-3-(4-флуорфеніл)-З-пропіловий естер (1 мас.), з наступнім додаванням 1,4-діоксану, і суміш перемішують в атмосфері нітрогену. Потім додають метансульфонову кислоту (0,18 мас.), і вміст колби нагрівають до температурі від 68 "С до 73 "С. Реакційну суміш перемішують при цій температурі до тих пір, поки дані аналізу методом "Н ЯМР не покажуть завершення реакції. Після цього реакційну суміш охолоджують до 35-40 "С і концентрують до сухого стану при цій температурі. Далі залишок розчиняють у ТГФ і концентрують до сухого стану при 35-40 "С. Цей цикл азеосушки продовжують до тих пір, поки вміст 1,4-діоксану не буде становити менш ніж 1,0 95 мас/мас, з одержанням 2-аміно-3-метилмасляної кислоти 3-Ї3-(біфеніл-4-сульфоніл)тіазолідин-2- карбоніл|аміно)-3-(4-флуорфеніл)пропілового естеру метансульфонату.
Стадія 5: Одержання 2-аміно-3-метилмасляної кислоти 3-13-(біфеніл-4- сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|аміно)-3-(4-флуорфеніл)пропілового естеру (Сполука Ї) 8 вини 8 са
Сич, г С я і Її в мансо, ни, СНСь у пак м МН Кох кв, ПОП г и ве о от о щу ве мн, С ри
Ж Х
Сон Мав СНО Сава МОЯ
М.М во5.83 М. Ба
До колби відповідного розміру вміщують 2-аміно-3-метилмасляної кислоти 3-(ІЗ-(біфеніл-4- сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|аміно)-3-(4-флуорфеніл)пропіловий естер метансульфонат (1 мас.), з наступним додаванням дихлорметану. Далі вміст колби охолоджують до температурі від 5Б"Сб до 15"С. До суміші додають водний розчин натрій гідрокарбонату, підтримуючи температуру від 5"С до 25"С. Потім фракції розділяють, і органічну фракцію повторно вміщують до ємності, з наступним додаванням водного розчину натрій гідрокарбонату, підтримуючи температуру від 5 "С до 25 "С. Після цього водну та органічну фракції розділяють, органічну фракцію сушать над магній сульфатом, фільтрують, і залишок на фільтрі промивають дихлорметаном. Далі комбіновані органічні фракції концентрують до сухого стану при температурі від 40 до 45 "С, до вмісту дихлорметану х 2 95 мас/мас, з одержанням 2-аміно-3- метилмасляної кислоти 3-Ї3-(біфеніл-4-сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|аміно)-3-(4- флуорфеніл)пропілового естеру (сполука І).
Стадія 6: Одержання З-метилмасляної кислоти 3-1(3-(біфеніл-4-сульфоніл)тіазолідин-2- карбоніл|аміно)-3-(4-флуорфеніл)пропіловий естер гідрохлориду (сполука ПП) дитя ї почи
СА СХ в А т фо о щи пу М НС ЕН, ОА люиВОЮ 5 1 нина о ВЕ слу К дк зе ж
Ї Т ек. МН, ГУ ен, й й І й о Ї неї ря ра
Сам, Снів. НОЇ
Мом вата М.м.: 538.20
До колби відповідного розміру вміщують воду (1,66 об.), потім додають хлоргідрогенову кислоту (0,18 об.), і встановлюють температуру суміші від 15С до 250. Далі розчин фільтрують, і фільтрований розчин вміщують до колби відповідного розміру (ємність А), з
Зо наступним додаванням етанолу та етилацетату. Одержану суміш перемішують в атмосфері нітрогену при температурі від 15 "С до 25 "С протягом щонайменше 5 хвилин.
До ємності відповідного розміру (ємність В) вміщують 2-аміно-3-метилмасляної кислоти 3- (З-(біфеніл-4-сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|аміно)-3-(4-флуорфеніл)упропіловий естер (1 мас.), і потім етанол. Після цього вміст колби перемішують до розчинення сипких твердих речовин і прояснення розчину.
Далі розчин з ємності В додають в ємність А, підтримуючи температуру від 15 "С до 2576.
Перемішувану суміш охолоджують до температурі від 0 С до 5"С і перемішують при цій температурі протягом 50-70 хвилин. Тверду речовину відокремлюють фільтрацією, і залишок на фільтрі сушать в атмосфері нітрогену протягом щонайменше 12 годин, з одержанням неочищеного 3-13-(біфеніл-4-сульфоніл)тіазолідин-2-карбоніл|аміно)-3-(4- флуорфеніл)пропіловий естер гідрохлориду.
Приклад 2. Фармакодинамічні властивості сполуки І та її солей
Неклінічна фармакологія
Сполука І та її солі швидко перетворюються на сполуку ІІ після введення через шлунково- кишковий тракт. Сполука І є конкурентним та оборотним антагоністом рецептора Ег2а простагландину (К; - 6 нМ для рецептора ЕР2а людини), який знаходиться в стадії розробки для лікування передчасних передпологових перейм шляхом інгібування передчасних скорочень матки. Ефективна фармакологія (токолітичний ефект) була продемонстрована на моделі спонтанної активності матки у вагітних щурів на пізніх термінах вагітності.
Фармакологія іп міго
Потужність інгібування рецептора Е2а простагландину сполукою І і сполукою ІЇ оцінювали шляхом аналізу афінності цих сполук до рекомбінантного рецептора ЕР, експресованого у клітинах НЕК293-ЕВМА. Результати демонструють високу афінність зв'язування сполуки | і сполуки ІЇ з рецептором людини (див. Табл. 2).
Селективність сполуки ІІ була протестована проти всіх восьми підтипів рецептора простагландину. Селективність була приблизно в 10 разів вищою в порівнянні з рецептором простагландину Е (ЕР) і більш ніж у 100 разів в порівнянні з іншими рецепторами. Тестування впливу 1 мкМ сполуки І проти панелі з 50 рецепторів, каналів та сайтів зв'язування з ферментами показало високу селективність по відношенню до ЕР.
Функціональну характеристику сполуки ЇЇ на ЕР людини проводили на трансфікованих клітинах НЕК293-ЕВМА. Сполука ІІ була здатною до дозозалежного інгібування синтезу ІРЗ із значенням ІСсо 60 НМ. При окремому додаванні до клітин ЕР/НЕК293-ЕВМА, сполука І, протестована в концентрації до 10 мкМ, не спричиняла синтезу ІРЗ, що свідчить про відсутність агоністичної активності у цієї сполуки.
Фармакологія іп мімо
Токолітичний вплив сполуки І і сполуки ІЇ досліджували на моделі спонтанної активності матки у вагітних щурів з пізніми термінами (19-21 дні гестації) під анестезією (Каугагарауаєзпі еї аІ. Ат. У). Орзівї. Супесої. 175:1348-1355 (1996) і ЗпіпкКаї еї аї. 9. Рпагт. Рпагтасої. 52:1417-1423 (2000)). Якщо коротко, самок щурів з пізніми термінами вагітності піддають анестезії уретаном.
Один ріг вагітної матки оголюють, і поліетиленовий катетер із встановленим на кінці латексним
Зо балоном, заповненим фізіологічним розчином, вставляють у просвіт. Катетер підключають до системи підсилення/реєстрації через перетворювач тиску. Зростаючі дози сполуки | (у формі мезилатної солі) або сполуки ЇЇ вводять перорально або вводять шляхом 10-хвилинної в/в інфузії У випадку в/в введення скоротливу активність матки кількісно визначають шляхом обчислення АС протягом 10-хвилинного періоду ін'єкції.
Відсоткову варіацію значень АОС відносно спонтанної відповіді матки, яка спостерігається після кожного введення, обчислюють в порівнянні із значенням, зареєстрованим до введення першої дози (початкове значення). Ефект сполуки І або сполуки ІЇ оцінюють шляхом порівняння значень тиску в просвіті матки до та після обробки. У випадку перорального введення застосовують таку ж методику обчислення в різних точках часу після обробки. Статистичні відмінності між групами обробки в кожній точці часу визначають за допомогою одностороннього дисперсійного аналізу (АМОМА) з подальшим тестом Тьюкі. Обидві сполуки, введені внутрішньовенно або перорально, були здатними суттєво зменшувати спонтанні скорочення матки на близько 40-50 95 (максимальний ефект був досягнутий при в/в введенні 30 мг/кг і пероральному введенні 60 мг/кг). Активність при внутрішньовенному введенні була порівнянною або дещо вищою, ніж активність токолітичного лікарського засобу атосибану, ліцензованого в
Європейському Союзі.
Інгібуючий ефект після перорального введення починався швидко (5-15 хвилин після введення) і залишався на стабільному рівні до кінця періоду спостереження З години (Фіг. 3).
При пероральному введенні одиничної дози значне інгібування скорочень матки досягається при 30 мг/кг.
Таким чином, дослідження фармакології іп міго показали високу афінність сполуки | і сполуки ІЇ до рецептора ЕР людини. При введенні внутрішньовенним або пероральним шляхом ці сполуки були здатними помітно зменшувати спонтанні скорочення матки на близько 40-50 95 при дослідженні на моделі спонтанної активності матки у вагітних щурів на пізніх термінах (19- 21 дні вагітності) під анестезією.
Приклад 3. Скринінг кристалів солей сполуки
В цьому прикладі описані експерименти, проведені з метою одержання та характеристики кристалічних сольових форм сполуки Ї.
Резюме
Мезилатна сіль сполуки | була визначена як аморфна за допомогою РСАП. Спроби кристалізації матеріалу не були успішними. Вільну основу синтезували з мезилатної солі і використовували для одержання різних солей. Кристалічну гідросульфатну сіль одержували безпосередньо в ході синтезу солі. Три солі кристалізували, використовуючи різні суміші розчинників і способи кристалізації: гідрохлорид, фумарат і дигідрофосфат. Схоже, що гідрохлоридна сіль володіє низькою гігроскопічністю, підвищеною стійкістю при підвищеній відносній вологості (ВВ) ії дозволяє одержати монокристалічну форму при кристалізації в різних експериментальних умовах.
Кристалічна сіль НСІ була одержана в двох експериментах з випарюванням та експерименті із суспензією. В кожному випадку спостерігався однаковий характер РСАП. На базі термічних даних, у матеріалі містилася певна кількість залишкового розчиннику; ймовірна температура плавлення становить близько 146-147 "С. Ймовірно, під час плавлення відбувається часткове розкладання. На базі даних про баланс вологості, гідрохлоридна сіль є негігроскопічною.
Кристалічна гідросульфатна сіль, ймовірно, сольватується і розкладається при температурі вище за близько 100 "С. Матеріал був стабільним при відносній вологості до близько 65 95.
Кристалічні дигідрофосфатна та фумаратна солі були гігроскопічні при близько 65 95 ВВ.
Спроби збільшити кількість солей не були успішними через високу лабораторну вологість.
Таким чином, для цих солей була доступна тільки часткова характеристика.
Солі гідрохлорид, гідросульфат та фумарат продемонстрували порівнянну розчинність у воді (нижче за 1 мг/мл, див. Фіг. 8).
Експериментальна частина
Дифракційний рентгеноструктурний аналіз порошку, описаний в цьому документі, проводили на порошковому рентгенівському дифрактометрі Зпітад7и ХКО-6000 з використанням випромінювання Си Ка. Прилад обладнаний довгою рентгенівською трубкою 3 тонким фокусуванням. Напругу і силу току трубки встановлюють на рівні 40 кВ ії 40 мА, відповідно.
Щілини розходження і розсіювання встановлюють на рівні 17, а щілину приймання встановлюють на рівні 0,15 мм. Дифраговане випромінювання виявляється сцинтиляційним детектором Маї. Застосовують тета-два тета безперервне сканування при 3"/хв (0,4 с/крок 0,027) від 2,5 до 40" 28. Щодня аналізують силіцієвий стандарт для перевірки вирівнювання приладу.
Зо Зразки аналізують за допомогою тримача зразка силіцію.
Дифракційний рентгеноструктурний аналіз порошку, описаний в цьому документі, додатково проводили на дифрактометрі Іпеї ХКО-3000, обладнаному викривленим позиційно-чутливим детектором з діапазоном 29 1207. Дані в реальному часі одержують, використовуючи випромінювання Си Ка, починаючи з близько 4" 28 при роздільній здатності 0.03? 286. Напругу і силу току трубки встановлюють на рівні 40 кВ та 30 мА, відповідно. Щілину монохроматора встановлюють на 5 мм на 160 мкм. Діаграми відображають від 2,5 до 40" 26. Зразки готують до аналізу, вкладаючи їх у тонкостінні скляні капіляри. Кожен капіляр встановлюють на гоніометричній голівці яка є моторизованою, щоб дозволити обертання капіляра під час реєстрації даних. Зразки аналізують протягом 5-10 хв. Калібрування приладу здійснюють щодня, використовуючи еталонний стандарт силіцію.
Описані в цьому документі аналізи ДСК були проведені на диференційному скануючому калориметрі 2920 ТА Іпвігитепіб5. Прилад калібрують, використовуючи індій як еталонний матеріал. Зразки вміщують до стандартної алюмінієвої чашки ДСК, чашку обжимають, і точну масу реєструють. Зразки врівноважують при 25 "С і нагрівають до 350 7С при продуванні нітрогеном із швидкістю 10 "С/хв. Як стандарт калібрування використовують металічний індій.
ТГ аналіз, описаний в цьому документі, був проведений на термогравіметричному аналізаторі ТА Іпзігитепів 2950. Стандартами калібрування були нікель та АГОМЕЇ м. Зразки вміщують до алюмінієвої чашки для зразків та вміщують до ТГ печі. Спочатку зразки врівноважують при 25"С, і потім нагрівають до 350 "С в потоці нітрогену із швидкістю нагрівання 10 "С/хв.
Спектри "Н-ядерного магнітного резонансу (ЯМР) в розчині, описані в цьому документі, були зареєстровані при температурі навколишнього середовища на спектрометрі Магіап
ИМІТМІМОМА-400 з частотою "Н Лармора 399,8 МГц. Зразки розчиняють в метанолі-а4, метиленхлориді-а2 або хлороформі-аЗ3. Спектри реєструють із шириною імпульсу "Н 7,8 або 8,6 мкс, час реєстрації 2,50 секунди, затримка між сканами 5 секунд, ширина спектру 4095 або 6400
Гц з 20474 або 32000 точками даних та 16 або 40 додатковими сканами. Вільний індукційний розпад, ВІР (БІБ) обробляють за допомогою програмного забезпечення Магіап МММЕ 6.1С з 65536 точками і коефіцієнтом розширення експонентної лінії 0,2 Гц для покращення співвідношення сигнал/шум. Внутрішнім стандартом спектрів був тетраметилсилан, ТМС (ТМ5) бо при 0,0 м.ч. або пік залишкового розчинника.
Фур'є-раманівські спектри, описані в цьому документі, зареєстровані на спектрометрі ЕТ-
Катап 960 або 860 (Тпегто Місоїе). В цьому спектрометрі використовується довжина хвилі збудження 1064 нм. Для опромінення зразків використовують потужність лазера Ма:УМО4 близько 0,5-0,7 Вт. Раманівські спектри комбінації зареєстровані за допомогою індій галій арсенідного (ІпсаАв5) детектора. Зразки готують для аналізу, вміщуючи матеріал до скляного капіляра, а потім у вкритий золотом тримач для капілярів у допоміжному блоці. Загалом було одержано 256 сканів зразків від 3600 до 100 см-1 при спектральній роздільній здатності 4 см-1, з використанням аподизації Хаппа-Гензеля. Калібрування довжини хвилі здійснювали за допомогою сульфуру та циклогексану.
Дані сорбції-десорбції вологи (СВ) одержані на аналізаторі сорбції парів МТ! 5СА-100. Дані сорбції та десорбції одержані в діапазоні від 5 95 до 95 95 відносної вологості (ВВ) з проміжками 10 95 ВВ при продуванні нітрогеном. Перед аналізом зразки не сушили. Критерієм рівноваги для аналізу була зміна маси менш ніж 0,0100 95 за 5 хвилин, причому максимальний час врівноваження становив З години, якщо критерій маси не витримувався. Дані не були виправлені з урахуванням початкового вмісту вологи у зразках. Як калібрувальні стандарти використовували Масі та полівінілпіролідон, ПВП (РМР).
Одержання сполуки І
Були здійснені множинні спроби одержання вільної основи сполуки | з мезилатної солі, результати яких описані на Фіг. 4. Спочатку застосовували один еквівалент натрій гідроксиду на еквівалент солі. Протонний ЯМР вказує на присутність піків метансульфонової кислоти.
Завершення реакції було досягнуте при змішуванні мезилатної солі в метиленхлориді та розчину Маон у воді із співвідношенням солі:основи 1:2. Органічний шар відокремлювали після декількох промивань та випаровували. Одержаний пастоподібний або в'язкий маслянистий матеріал сушили під вакуумом з одержанням аморфної твердої речовини. Вільну основу аналізувалиь методом "Н ЯМР та раманівською спектроскопією (Фіг. 15 та фіг. 16, відповідно). В подальших скринінгових дослідженнях солі вільну основу використовували як початковий матеріал (узагальнені на Фіг. 5-7).
Скринінг солі сполуки І
Одержані дванадцять солей сполуки І. Кристалічну гідросульфатну сіль осаджували шляхом
Зо додавання близько 25 молярного надлишку сульфурної кислоти до розчину вільної основи в ацетоні. Інші солі із стадії синтезу, схоже, не є двозаломлюючими, за даними мікроскопії, або є аморфними, за даними РСАП (фіг. 5-7). Солі бензенсульфонат, цитрат, етансульфонат, гідрохлорид, гідросульфат та сульфат аналізували методом протонного ЯМР.
Експерименти з кристалізації солей сполуки І узагальнені на Фіг. 5-7. Були кристалізовані наступні солі: гідрохлорид, фумарат та дигідрофосфат.
Хлоридну сіль кристалізували із суміші ацетону"толуену 171, суміші метиленхлориду:етилового етеру та суспензії ацетону. У всіх експериментах спостерігався однаковий патерн РСАП, що позначений як форма А (Фіг. 7). Кристалічна фумаратна сіль одержана в результаті повільного випарювання розчину в метанолі:толуені 1:11. Характер рентгенологічної діаграми був позначений як патерн В. Гідросульфатна та дигідрофосфатна солі демонстрували дуже подібний характер РСАП (позначений як патерн Х). Протиїони НЗО та НеРОХх мають подібні розміри і є невеликими у порівнянні з молекулою вільної основи, тому подібні кристалічні структури, ймовірно, характерні для гідросульфатної та дигідрофосфатної солей. Спроби кристалізації мезилатної солі давали в'язкі або склоподібні тверді матеріали.
Характеристика вільної основи та мезилатної солі сполуки І
Протонний ЯМР спектр вільної основи продемонстрував два дублети при близько 1 м.ч., що відповідає метильним групам валінового фрагмента. Метильні групи знаходяться при хіральному карбоновому центрі а, отже, не є еквівалентними для протонного ЯМР. Два дублети для метильних груп спостерігалися для наступних солей сполуки І: безилат, цитрат, езилат, гідросульфат (більшою мірою перекриваються) і сульфат (більшою мірою перекриваються). На спектрах "Н ЯМР мезилатної солі та хлоридної солі дублет при -- 1 м.ч., що відповідає шести атомам гідрогену, був результатом повного накладання двох дублетів метильних груп (Фіг. 13 і
Фіг. 21).
Експеримент "Н ЯМР з гомоядерним розривом зв'язків у вільній основі підтвердив мультиплет метинового гідрогену (СН) при близько 2 м.ч. (Фіг. 18). Спектр "Н ЯМР вільної основи, зареєстрований без попереднього опромінення будь-якої метильної групи, зображений на нижній частині Фіг. 18. Опромінення кожної метильної групи (зверху, посередині) приводило до спрощеного метинового мультиплету з такою ж кількістю ліній (5). Якщо два дублети відповідали б різним діастереоізомерам, спостерігалося б два типи мультиплетів, оригінальний бо та спрощений.
Характеристика хлоридної солі сполуки І (сполука ПП)
Кристалічну хлоридну сіль аналізували методами термічної обробки, "Н ЯМР та автоматизованого аналізу сорбції/десорбції вологи. Ендотерма ДСК при близько 147 "С виявилася ширшою, ніж та, що зазвичай спостерігається для ендотерми плавлення. Втрата маси близько 4 95 спостерігалася в діапазоні від 25 до 160 "С (аналіз зразків, одержаних із суспензії в ацетоні, Фіг. 20). "Н ЯМР хлоридної солі узгоджується із структурою (Фіг. 21). Однак дані не можуть бути співвіднесені із втратою маси при термічному аналізі, оскільки був проведений аналіз іншого зразка (повільне випарювання із суміші ацетону-толуену 1:1).
Хлоридну сіль із суспензії ацетону сушать під вакуумом при температурі близько 50 "С протягом 1 дня. За даними РСАП, одержаний зразок був подібний до оригінальної солі (Фіг. 22). Термічні дані представлені на Фіг. 23. На базі порівняння термічних даних сухий матеріал демонстрував меншу втрату маси в діапазоні від 25 до 100 "С (0,2 95 проти 0,6 95 для оригінальної хлоридної солі) і від 100 до 160 "С (2,5 95 проти 3,5 95) (Фіг. 24). Це вказує на те, що деяка кількість розчинника видаляється при вакуумній сушці. Однак ендотерма ДСК при температурі близько 146-147 "С була все ще широкою (Фіг. 25). Ймовірно, під час плавлення відбувається часткове розкладання (слід відзначити зниження початкового значення та відповідну втрату маси при ТГ).
Хлоридна сіль сполуки І не переходила до рідкого стану через 2 дні при близько 95 95 ВВ.
Дані щодо сорбції/десорбції вологи узагальнені на Фіг. 27 та відображені на Фіг. 26 і 28.
Мінімальна втрата маси спостерігалась у випадку врівноваження при 5 95 ВВ. При сорбції від 5 до 95 9о відносної вологості спостерігалося збільшення маси близько 0,9 95. При десорбції зразок продемонстрував втрату маси близько 0,7 905. Аналіз РСАП зразка після МВ продемонстрував рентгенограму, подібну до вихідного матеріалу (Фіг. 29).
Характеристика гідросульфатної та сульфатної солей сполуки І
Одержана як гідросульфатна, так і сульфатна сіль сполуки І. Гідросульфатну сіль осаджують із ацетонового розчину вільної основи шляхом додавання близько 25 молярного надлишку сульфурної кислоти. За даними РСАП, осад виявився кристалічним (Фіг. 38). Термічні дані для гідросульфатної солі наведені на Фіг. 32. Широка ендотерма при близько 68 "С відповідає втраті маси близько 1 95, ймовірно, внаслідок десольватації (дегідратації). Розпад відбувається при підвищених температурах. Вона не переходила до рідкого стану через З дні
Зо при близько 65 95 ВВ (Фіг. 32). Сульфатна сіль одержана з використанням двох еквівалентів вільної основи на один еквівалент кислоти. Спроби кристалізації сульфатної солі сполуки І не були успішними (Фіг. 5-7). Гідросульфатну та сульфатну солі аналізували за допомогою протонного ЯМР (Фіг. 33 та Фіг. 34). Були виявлені відмінності у ЯМР спектрах. Наприклад, метильні групи фрагменту валіну, схоже, мають різний характер сполучення.
Характеристика дигідрофосфатної солі сполуки І
Дигідрофосфатна сіль кристалізована із суміші метилетилкетону:н-бутилацетату 1:1 (Фіг. 5- 7). Вона продемонструвала рентгенограму, подібну до гідросульфатної солі (Фіг. 43).
Характеристика дигідрофосфатної солі обмежувалася РСАП через втрату зразка під час аналізу. Спроби одержання додаткових кількостей кристалічної солі не були успішними. Під час першої спроби було одержано низько кристалічний матеріал (Фіг. 5-7). Перекристалізація низько кристалічної солі дала в'язку тверду речовину. Матеріал залишався в'язким після сушіння під вакуумом. Вологість в лабораторії становила близько 62 95 ВВ під час росту кристалів і, ймовірно, вплинула на матеріал через його гігроскопічність. Подальших спроб кристалізації дигідрофосфатної солі не проводили.
Характеристика фумаратної солі сполуки І
Невелику кількість фумаратної солі кристалізували з суміші метанолу:толуену 1:1 (Фіг. 5-7).
Спроби збільшення кристалічної солі проводили при лабораторній вологості близько 62 95 ВВ, і вони не були успішними. Одержано переважно маслянисті матеріали, хоча мікроскопія виявила певну кількість кристалічної твердої речовини. Сушіння в'язкої твердої речовини під вакуумом давало в основному аморфний матеріал. Початково одержану кристалічну сіль використовували для експериментів із затравкою. Однак жодних кристалічних матеріалів не було одержано. Гігроскопічний характер фумаратної солі було підтверджено при дослідженнях відносної вологості.
Фумаратна сіль, схоже, є чутливою до вологи. Кристалічна сіль була стабільною при близько 43 та 53 95 відносній вологості і почала переходити до рідкого стану протягом першого дня при близько 65 95 ВВ. Через З дні при 65 95 ВВ утворилося жовте масло (набрало близько 4
Фо вологи).
Висновки
Мезилатна сіль сполуки І була виязначена як аморфна, за даними РСАП. Спроби бо кристалізації матеріалу не були успішними.
Вільна основа сполуки І була синтезована з мезилатної солі і використана при приготуванні 12 солей. Кристалічна гідросульфатна сіль була одержана безпосередньо в ході синтезу солі.
Три солі кристалізували, застосовуючи різні суміші розчинників та способи кристалізації: гідрохлорид, фумарат і дигідрофосфат. Хлоридна сіль, схоже, є найкращим кандидатом для подальшої розробки. Кристалічна гідросульфатна сіль, ймовірно, була сольватованою і розклалася вище за близько 100 "С. Матеріал був стабільним при відносній вологості до близько 65 95. Кристалічна сіль НСІ була одержана в двох експериментах з випарюванням та експерименті із суспензією. Спостерігався однаковий патерн РСАП. Термічні дані вказують на наявність в матеріалі деякої кількості залишкового розчинника; ймовірна температура плавлення становила близько 146-147 "С. Часткове розкладання, ймовірно, відбулося під час плавлення. За даними балансу вологи, хлоридна сіль є негігроскопічною. Кристалічні дигідрофосфатна та фумаратна солі були гігроскопічними при близько 65 95 ВВ. Спроби збільшити кількість солей не були успішними через високу лабораторну вологість. Таким чином, для цих солей була доступна тільки часткова характеристика.
Приклад 4. Моніторинг проникності мезилатної солі сполуки І крізь клітини Сасо-2
Біодоступність перорально введених лікарських засобів значною мірою залежить від здатності до транспорту крізь кишкові бар'єри. Клітини Сасо-2, одержані з аденокарциноми ободочної кишки людини, розведені Дж. Фогхом за здатність досягати більш високого ступеня диференціації ентероцитів, можуть бути використані як модель іп міго для дослідження транспорту лікарських засобів крізь кишковий епітелій. При культивуванні на полікарбонатній мембрані з колагеном ці клітини утворюють моношар поляризованих епітеліальних клітин.
Моношар диференційованих клітин є придатною моделлю епітелію тонкого кишечнику. Процес диференціації, що починається із злиття клітин, приводить до утворення щіточкової облямівки з добре розвиненими мікроворсинками, вузькими апікальними з'єднаннями та поляризованим розподілом мембранних компонентів, включаючи ферменти, рецептори, транспортні системи, іонні канали та молекули ліпідів.
Метою дослідження було на першій стадії оцінити неспецифічне зв'язування сполуки | в тестовій системі клітин Сасо-2 (без клітин), а на другій стадії оцінити перетворення сполуки І на сполуку І ї визначити, чи буде транспортування сполуки | крізь моношар клітин Сасо-2
Зо опосередковуватися білком-носієм Рерт1.
Матеріали
Клітинна лінія Сасо-2 (клітини аденокарциноми ободочної кишки людини) була одержана з контрольованих банків клітин (Віозеагспй 5рА, Джеренцано, Італія). Модифіковане Дульбекко середовище Ігла, МДСІ (ОМЕМ), сироватка телячого ембріону, розчин замінних амінокислот, І - глутамін 200 мМ, розчин пеніциліну/стрептоміцину, розчин трипсину-етилендіамінтетраацетату,
ЕДТА (ЕОТА) без кальцію та магнію були придбані у Сеїбіо (Мілан, Італія). 4- (2-Гідроксіетил)-1- піперазин етансульфонова кислота, ГЕПЕС (НЕРЕ5), збалансований сольовий розчин Хенкса (ЗСРХ), фосфатно-сольовий буфер ФСБ (РВ5) Дульбекко, диметилсульфоксид, ДМСО (ОМ509), гліцин-саркозин (Сіу-Заг) були придбані у Зідта (Мілан, Італія).
Експериментальна частина
Клітини Сасо-2 культивують в МДСІ з додаванням 10 95 сироватки телячого ембріону, 2 95 І - глютаміну 200 мМ та 1 95 розчину замінних амінокислот.
Клітини зберігають у заморожених кріопробірках в рідкому нітрогені як аліквоти клітинної суспензії в сироватці телячого ембріону, що містить 10 95 ДМСО, по 1 мл. Клітини, що використовуються для експериментів, будуть утримуватися в культурі не більше одного місяця.
При необхідності, заморожені флакони клітин Сасо-2 швидко розморожують при 37 "С на водяній бані, застосовуючи обережне вихрове перемішування, до напівповного відтавання.
Потім клітинну суспензію додають по краплях до 10 мл поживного середовища. Далі суспензію клітин центрифугують протягом 7 хвилин при 9000-1000 об/хв, супернатант видаляють, клітинну гранулу розбавляють середовищем і розподіляють в колби місткістю 75 см", що містять середовище. Колби інкубують при 37 "С в атмосфері 5 95 СО». Клітини серійно субкультивують до утворення майже злитих моношарів. Середовище з кожної колби видаляють, а моношар промивають 10-15 мл фосфатно-сольового буферу (ФСБ) Дульбекко.
Розчин трипсину-ЕДТА додають до моношару клітин, інкубують при 37 "С, ї рідину обережно, з проміжками витягають, щоб відокремити клітини. Повне відокремлення і дезагрегацію шару клітин підтверджують мікроскопічними дослідженнями. Далі клітини ресуспендують у 10 мл повного середовища і центрифугують протягом 7 хвилин при 900-1000 об/хв. Супернатант відкидають; клітини ресуспендують у поживному середовищі і вкривають ними із щільністю 2,5 х 105 клітин/мл флакони місткістю 175 см.
Клітини з колб із майже злитими культурами від'єднують та дизагрегують обробкою трипсином, як описано вище. Клітини ресуспендують у поживному середовищі та здійснюють підрахунок. Клітинну суспензію розбавляють середовищем, щоб одержати близько 1 х 105 клітин/мл, і 300 мкл клітинної суспензії наносять на апікальне відділення кожного трансвелу (діаметром 6,5 мм, розмір отворів 0,4 мкм). 600 мкл поживного середовища вміщують до базолатерального відділення. Планшети інкубують при 37 "С у зволоженій атмосфері, 5 96 СО» у повітрі, протягом 15-21 дня, замінюючи середовище кожні 48-72 години.
Цілісність кожного моношару клітин Сасо-2 оцінюють методом трансепітеліального електричного опору, ТЕЕО (ТЕЕБК), як до експерименту, так і наприкінці періоду інкубації.
ТЕЕБО, виражений як Ом х см7, вимірюють у трансвелах за допомогою МіїйїсеП-ЕВН5 (Мійїроге). Моношар вважається добре диференційованим, якщо значення ТЕЕО є вищим за 800 Ом х см.
Цілісність кожного моношару клітини Сасо-2 оцінюють наприкінці періоду інкубації за допомогою Люциферу жовтого. Після експерименту трансвели двічі промивають транспортним буфером. 200 мкл Люциферу жовтого в концентрації 100 мкМ у ЗСРХ розподіляють в апікальному відділенні, а в базолатеральне відділення додають 400 мкл ЗСРХ. Трансвели інкубують при 37"С протягом 1 години. Визначають кількість Люциферу жовтого в базолатеральному відділенні при довжині хвилі 535 нм за допомогою стандартної кривої
Люциферу жовтого у тому ж фізіологічному розчині, використовуючи спектрофлуориметр для мікропланшетів (Еб 5 б УМАЇГАС). Моношар вважається неушкодженим, якщо у базолатеральному відділенні виявлено « 1 95 Люциферу жовтого.
Оцінка неспецифічного зв'язування з трансвелами без клітин
Неспецифічне зв'язування та виділення оцінюють у трансвелах без клітин. Сполуку І тестували в концентрації 1,5, З і б мкМ у трансвелах без клітин в двох екземплярах.
Випробування проводять з градієнтом рН між апікальним і базолатеральним відділеннями. В апікальному відділенні (донорне) присутній буферний рН 6,5, тоді як в базолатеральному відділенні (приймач) присутній буферний рн 7,4. Зразки відбирали в наступних точках часу: 60 і 120 хвилин для базолатерального відділення (приймач) та 120 хвилин для апікального відділення (донорне). Одержані зразки аналізують рідинною хроматографією-мас-
Зо спектроскопією, РХ-МС (І С-М5), здійснюють моніторинг обидвох сполук І і ІІ для оцінки відсотку виділення.
Оцінка стійкості сполуки І ї сполуки ЇЇ
Стабільність сполуки І і сполуки ІЇ оцінювали в ході тесту. Ці сполуки розчиняють в буфері
ЗСРХ (кінцева концентрація ДМСО 1 95) в концентрації 1,5, З і 6 мкМ. Аліквоту кожного розчину відбирають в нульовій точці часу (Її - 0), щоб оцінити початкові концентрації сполук. Розчини інкубують при 37 "С протягом періоду транспортного експерименту. Аліквоту кожного розчину відбирають наприкінці експерименту (Її - 120), щоб оцінити кінцеву концентрацію сполуки | і сполуки ІІ. Зразки аналізують РХ-МС.
Оцінка двонаправленої проникності сполуки І
Сполуку І розчиняють в буфері ЗСРХ (кінцева концентрація ДМСО 1 95) в концентрації 1,5, З і б мкМ. Кожну концентрацію/точку часу аналізують в лунках у двох екземплярах. Тест проводять із градієнтом рН: рН в апікальному відділенні (мукозальне) становить 6,5, рН в базолатеральному відділенні (серозне) становить 7,4.
Транспорт з апікального до базолатерального відділення (А -» В, мукозально-серозний): 200 мкл кожної концентрації сполуки І вміщують до апікального відділення, і 400 мкл ЗСРХ вміщують до базолатерального відділення. Планшети інкубують при 37 "С. Аліквоти вмісту базолатерального відділенні відбирають через 60 та 120 хв (1-60 і ї - 120). Аліквоти вмісту апікального відділенні відбирають в початковій точці часу (ї - 0) і через 120 хв. (Ії - 120).
Транспорт з базолатерального до апікального відділення (В -» А, серозно-мукозальний): 400 мкл кожної концентрації сполуки | вміщують до базолатерального відділення, і 200 мкл ЗСРХ вміщують до апікального відділення. Планшети інкубують при 37 "С. Аліквоти вмісту апікального відділення відбирають через 60 та 120 хв (1 - 60 її - 120). Аліквоти вмісту базолатерального відділенні відбирають в початковій точці часу (( - 0) і через 120 хв. (Її - 120). Всі зразки аналізують методом РХ/МС для контролю як сполуки І, так і появи сполуки ЇЇ.
Оцінка двонаправленої проникності сполуки ЇЇ
Сполуку ІЇ розчиняють в буфері ЗСРХ (кінцева концентрація ДМСО 1 95) в концентрації 1,5, З і б мкМ. Кожну концентрацію/точку часу аналізують в лунках у двох екземплярах. Тест проводять із градієнтом рН: рН в апікальному відділенні (мукозальне) становить 6,5, рН в базолатеральному відділенні (серозне) становить 7,4.
Транспорт з апікального до базолатерального відділення (А -» В, мукозально-серозний): 200 мкл кожної концентрації сполуки І вміщують до апікального відділення, і 400 мкл ЗСРХ вміщують до базолатерального відділення. Планшети інкубують при 37 "С. Аліквоти вмісту базолатерального відділенні відбирають через 60 та 120 хв (1-60 і ї - 120). Аліквоти вмісту апікального відділенні відбирають в початковій точці часу (ї - 0) і через 120 хв. (І - 120).
Транспорт з базолатерального до апікального відділення (В -» А, серозно-мукозальний): 400 мкл кожної концентрації сполуки ІЇ вміщують до базолатерального відділення, і 200 мкл ЗСРХ вміщують до апікального відділення. Планшети інкубують при 37 "С. Аліквоти вмісту апікального відділення відбирають через 60 та 120 хв (1 - 60 її - 120). Аліквоти вмісту базолатерального відділенні відбирають в початковій точці часу (( - 0) і через 120 хв. (Ї - 120). Всі зразки аналізують методом РХ/МС для контролю сполуки ЇЇ.
Інгібування мукозально-серозного транспорту сполуки І субстратом Рерт (сіу-заї)
Диференційовані клітини попередньо обробляють протягом 30 хв 10 мМ сіу-Заг, щоб заблокувати активний носій Рерт1.
Сполуку І розчиняють в буфері ЗСРХ (остаточна концентрація ДМСО 1 95) в концентрації 1,5, З ї 6 мкМ. Кожну концентрацію/точку часу аналізують в лунках у двох екземплярах. Тест проводять із градієнтом рН: рН в апікальному відділенні (мукозальне) становить 6,5, рН в базолатеральному відділенні (серозне) становить 7,4.
Транспорт з апікального до базолатерального відділення (А -» В, мукозально-серозний): 200 мкл кожної концентрації сполуки І вміщують до апікального відділення, і 400 мкл ЗСРХ вміщують до базолатерального відділення. Планшети інкубують при 37 "С. Аліквоти вмісту базолатерального відділенні відбирають через 60 та 120 хв (1-60 і ї - 120). Аліквоти вмісту апікального відділенні відбирають в початковій точці часу (Її - 0) і через 120 хв. (Ії - 120). Всі зразки аналізують методом РХ/МС для контролю як сполуки І, так і появи сполуки ІІ.
Аналітичні визначення
Концентрації сполуки ЇЇ та сполуки І в зразках після інкубації визначають високоефективною рідинною хроматографією/мас-спектрометрією (РХ/МС), спосіб описаний у Додатку (розділ 7.1), без будь-якого подальшого розведення.
Результати
Зо Використовувані значення ТЕЕО до експерименту для моношарів клітин Сасо-2 знаходяться в діапазоні від 850 до 1160 0 х см", що вказує на злитий моношар з щільними з'єднаннями. В кінці експериментів значення ТЕЕО знизилися в середньому на 170 0 х см: (з 680 до 9900 х см) без впливу на цілісність моношару клітин. Тест з Люцифером жовтим підтвердив цілісність усіх моношарів після експериментів, фактично, кількість Люциферу жовтого, виявлена в базолатеральних відділеннях після експериментів, завжди становила « 1 95, у всіх лунках. На
Фіг. 55 представлені дані, одержані в дослідженні неспецифічного зв'язування сполуки І. В умовах тесту сполуку І було виявлено в апікальному відділенні при всіх протестованих дозах.
Сполуку І не було виявлено в базолатеральному відділенні при жодній з протестованих доз.
Неспецифічне зв'язування сполуки І було виключено. Сполуку ІЇ не було виявлено в жодному відділенні. На Фіг. 55 представлені дані, одержані в тесті на стабільність сполуки І ії сполуки ЇЇ.
Обидві сполуки виявилися стабільними в умовах тесту: буфер ЗСРХ (кінцева концентрація
ДМСО 2 95) при 37 "С протягом 60 та 120 хвилин. На Фіг. 5ба-56е представлені дані, одержані в тесті двонаправленої проникності сполуки І. Ця сполука не проникала крізь моношар клітин. В апікально-базолатеральному тесті сполуку І не було виявлено в приймальному відділенні через 60 і 120 хвилин, і в той же час в кінці експерименту в базолатеральному відділенні було виявлено збільшення концентрації сполуки ІІ. Відсоток проходження сполуки ІЇ наведено в таблиці. В кінці апікально-базолатерального експерименту в апікальному відділенні спостерігалося низьке виділення сполуки Іі, і в той же час було виявлено підвищені концентрації сполуки ЇЇ (високе виділення). Збільшену концентрацію сполуки ІЇ через 120 хв у апікальному відділення можна пояснити наявністю поза- та внутрішньоклітинних естераз у клітині Сасо-2, здатній деестерифікувати сполуки (Кегп еї аї. У. Адгіс. Боой Спет. 51: 7884-7891 (2003)). У базолатерально-апікальному тесті сполуку І не було виявлено у приймальному відділенні, і в той же час було виявлено низькі концентрації сполуки ЇЇ. Таким чином, сполука І, ймовірно, переноситься і транспортується крізь моношар Сасо-2 як сполука ІІ. На Фіг. 57а-57е наведені дані, одержані у тесті двонаправленої проникності для сполуки І. Ця сполука показала сприятливий відсоток апікально-базолатерального проникнення і низький рівень проникності з базолатерального до апікального відділення. Було обчислено Рарр, оскільки була відома концентрація в донорних відділеннях. Сполуці І властиве сприятливе пасивне проникнення крізь моношар Сасо-2. Витоку не було виявлено. На Фіг. 5ва-58с представлені дані, одержані в бо тесті інгібування, в якому клітини моношару Сасо-2 попередньо обробляли 10 мМ сіу-Заг (для бо насичення носія Рерт1). Сполуку І не було виявлено в приймальному відділенні, і в той же час спостерігалося проникнення сполуки ІІ. В цьому тесті відсоток проходження не був лінійним.
Обговорення
В цьому дослідженні оцінювали та виключали неспецифічне зв'язування сполуки І у тестовій системі клітин Сасо-2 (без клітин). В умовах тесту сполука | була стабільною. Перетворення сполуки І на сполуку ІЇ оцінювали та підтверджували у тесті двонаправленої проникності. В протестованих умовах сполука І не проникала крізь моношар клітини. Таким чином, сполука Ї, ймовірно, переноситься і транспортується крізь моношар як деестерифікована сполука ІІ Сасо- 2.
В тесті двонаправленої проникності випробовувана сполука !| продемонструвала сприятливе пасивне проникнення крізь моношар Сасо-2. Не було виявлено доказів того, що сполука ІЇ може бути субстратом для носія витоку.
Тест з попередньою обробкою Сіу-Заг (для насичення носія Рерт1) показав відсутність проникнення сполуки І і швидкість проникнення сполуки Ії. Транспортування сполуки І! крізь моношари клітин Сасо-2, ймовірно, не опосередковується Рерт1.
Ці експерименти вказують на те, що кишкова абсорбція сполуки !/ та її солей не опосередкується білком-носієм Рері1. Натомість, вищевикладені результати демонструють, що сполука І деестерифікується естеразами навколишнього середовища в тонкому кишечнику і пасивно проникає в епітелій тонкого кишечнику. Вказана сполука І та її солі не є субстратами для Рерії, що представляє дивовижну і сприятливу з фармакологічної точки зору властивість.
Рери являє собою рН-залежний котранспортер, що, як відомо, опосередковує абсорбцію різних валінатних естерів, як описано, наприклад, у Мід еї аї., Адм. Огид Оевїїм. Кем. 65:1370-1385 (2013), розкриття якої включено до цього документу шляхом посилання. Рериї виявляє широку специфічність по відношенню до субстратів, про що свідчить структурна різноманітність сполук, які транспортуються крізь кишковий епітелій цим білком. Несподівано, незважаючи на присутність функціональної групи валінатного естеру, абсорбція сполуки І та її солей крізь епітелій тонкого кишечнику не залежить від цього носія. Це є переважною властивістю, оскільки
Сполука І та її солі, таким чином, не конкурують з природними субстратами Рерії, такими як пептидні поживні речовини, за зв'язування і транспортування цим білком. Скоріше, сполука І та її солі іп мімо перетворюються на форму, яка легко абсорбується способом, що не залежить від енергії та місцевого градієнта протонів. Ця несподівана властивість, у поєднанні з високою розчинністю сполуки І та її солей у воді, разом забезпечують сприятливий фармакокінетичний профіль, таким чином, що сполуки за винаходом з легкістю розчиняються у водному середовищі і, в свою чергу, перетворюються на форму, здатну до незалежної від носія абсорбції.
Приклад 5. Комбінована терапія, що включає додатковий токолітичний агент
Сполуку І або її сіль, таку як сполука І, можна вводити суб'єкту, такому як суб'єкт-людина, в комбінації з одним або більшою кількістю додаткових агентів, таких як антагоніст рецептора окситоцину, бетаміметик, інгібітор кальцієвих каналів, сіль магнію або донор нітрогену оксиду, наприклад, для зменшення частоти скорочень матки та затримки початку передпологових перейм.
Лікар, який є фахівцем в цій галузі техніко, може вводити сполуку І або її сіль, таку як сполука І, одночасно з, в суміші з або окремо від антагоніста рецептора окситоцину. Типові антагоністи рецептора окситоцину для застосування разом із композиціями та способами за винаходом включають атосибан, ретосибан, барусибан, епелсибан і нуласибан або їх варіант, композицію, кристалічну форму або похідне. Наприклад, сполуку І або її соль, така як сполука
І, можна вводити до, після або одночасно з нуласибаном або його варіантом, композицією, кристалічною формою або похідним, з тим щоб затримати початок передпологових перейм, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22,23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 днів або близько 1,2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів).
Додатково або як альтернатива, лікар, що є фахівцем в цій галузі техніки, може вводити сполуку І або її сіль, таку як сполука ЇЇ, одночасно з, в суміші з або окремо від бетаміметика, такого як бетаміметик, описаний в цьому документі. Наприклад, сполуку І або її соль, таку як сполука І, можна вводити до, після або одночасно з бетаміметиком, описаним в цьому документі або відомим в цій галузі техніки, з метою затримки початку передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30 днів або близько 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 60 15 або 16 тижнів).
Додатково або як альтернатива, лікар, що є фахівцем в цій галузі техніки, може вводити сполуку І або її сіль, таку як сполука ІП, одночасно з, в суміші з або окремо від інгібітору кальцієвих каналів, такого як інгібітор кальцієвих каналів, описаний в цьому документі.
Наприклад, сполуку І або її соль, таку як сполука ІІ, можна вводити до, після або одночасно з інгібітором кальцієвих каналів, описаним в цьому документі або відомим у даній галузі техніки, з метою затримки початку передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3, 4,5,6, 7,8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30 днів або близько 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів).
Додатково або як альтернатива, лікар, що є фахівцем в цій галузі техніки, може вводити сполуку І або її сіль, таку як сполука ЇЇ, одночасно з, в суміші з або окремо від солі магнію, наприклад, магній сульфату. Наприклад, сполуку І або її сіль, таку як сполуку ІЇЇ, можна вводити до, після або одночасно з магній сульфатом, з метою затримки початку передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18,19 20,21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30 днів або близько 1,2,3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів).
Додатково або як альтернатива, лікар, що є фахівцем в цій галузі техніки, може вводити сполуку І або її сіль, таку як сполука ІІІ, одночасно з, в суміші з або окремо від донор нітрогену оксиду, такого як нітрогліцерол. Наприклад, сполуку І або її сіль, таку як сполука І, можна вводити до, після або одночасно з нітрогліцеролом, з метою затримки початку передпологових перейм у суб'єкта, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30 днів або близько 1,2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів).
Додатково або як альтернатива, лікар, що є фахівцем в цій галузі техніки, може вводити сполуку І або її сіль, таку як сполука Ії, одночасно з, в суміші з або окремо від прогестерону або його похідного або варіанта, такого як похідне або варіант, описаний в цьому документі або відомий в цій галузі техніки. Наприклад, сполуку І або її сіль, таку як сполука ІЇЇ, можна вводити
Ко) до, після або одночасно з прогестероном або його варіантом або похідним, описаним в цьому документі або відомим в цій галузі техніки, з метою затримки початку передпологових перейм, наприклад, на один або більшу кількість днів або тижнів, наприклад, від близько 1 дня до близько 16 тижнів (наприклад, 1, 2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22,23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 днів або близько 1,2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 тижнів).
Приклад 6. Токолітичний ефект сполуки І та її фармацевтично прийнятних солей у поєднанні з ніфедипіном та атосибаном на мишачих моделях передчасних передпологових перейм
Для дослідження терапевтичних ефектів сполуки | в комбінації з блокатором кальцієвих каналів або антагоністом рецепторів окситоцину на тваринних моделях передчасного розродження, вагітним мишам СО-1 з першою вагітністю вводять відомі індуктори передпологових перейм в ранньому гестаційному віці 17 днів, після чого вводять різні дози хлоридної солі сполуки І (сполука І; 10 мг/кг, 30 мг/кг або 100 мг/кг, в кожному випадку вводять перорально), окремо або в комбінації з ніфедипіном (5 мг/кг, вводять перорально) або атосибаном (300 мг/кг, вводять підшкірно). Токолітичні ефекти оцінюють шляхом вимірювання часу від індукції до народження першого щеня для кожної миші в когортах лікування та контролю, часу від індукції до завершення розродження у всіх мишей з кожної когорти та життєздатності потомства мишей з кожної когорта. Індукторами передчасних передпологових перейм в цьому дослідженні є КИО486 (також має назву міфепристон), стероїдний антипрогестин, що сприяє дилатації шийки матки і провокує підсилену скоротність матки та чутливість до простагландинів і ліпополісахариду (ЛПС), медіатора запалення.
Для індукції передпологових перейм в ранньому гестаційному віці кожній миші вводять одну дозу КИО486 2,5 мг/кг підшкірно (Її - 0). Мишам, які одержують ЛПС, здійснюють внутрішньочеревинну ін'єкцію ЛПС в дозі 2 мг/кг (Її - 0). Атосибан вводять мишам СО-1 шляхом підшкірної ін'єкції в дозі 300 мг/кг в дві різні ділянки. Ці ін'єкції здійснюють через 5 годин (Її - 5) і 29 годин (ї - 29) після обробки індукуючим агентом КШ486 або ЛПС. Ніфедипін вводять мишам
СО-1 перорально в дозі 5 мг/кг через 5 годин (Ї - 5), 19 годин (Її - 19), 29 годин (Її - 29) і 43 години (Її - 43) після обробки індукуючим агентом КШ486 або ЛПС. Сполуку ПІ вводять мишам
СО-1 перорально в дозі 10 мг/кг, 30 мг/кг або 100 мг/кг через 5 годин (ї - 5), 19 годин (Її - 19), 29 годин (Її - 29) і 43 години (Її - 43) після обробки індукуючим агентом КО486 або ЛПС. Після 60 індукції КО48б6 або ЛПС та наступного введення атосибану, ніфедипіну та/або сполуки ПІ,
когорти мишей підлягали постійному візуальному моніторингу для оцінки періоду часу, що минув між індукцією та народженням першого щеня для кожної миші, а також долі мишей у кожній когорті, у яких відбулося розродження, в залежності від часу. Життєздатність щенят, народжених у кожній когорті, оцінюють за допомогою галенової гідростатичної легеневої
Б життєвої проби.
Здатність КО486 та ЛПС індукувати передчасні передпологові перейми було підтверджено, оскільки обробка мишей СО-1 Ки486 в гестаційному віці 17 днів призводила до середнього часу розродження близько 21 годин після індукції (ї - 21, обчислене середнє значення - 21 5 1,00 год), тоді як миші СО-1, які одержували ЛПС в гестаційному віці 17 днів, продемонстрували середній час розродження близько 26 годин після індукції (ї - 26; обчислене середнє значення - 26 ж 2,34 год). На відміну від цього, вчасне розродження у мишей СО-1 відбувається в гестаційному віці від близько 19 днів до 21 дня, більш ніж через 50 годин після 17 дня вагітності.
Серед щенят, народжених обробленими КО486 мишами, 96 95 були народжені живими, тоді як 48 95 щенят, народжених обробленими ЛІС мишами, були народжені живими (Фіг. 60 і 61). З 95 мишей, оброблених КО486, були виключені з цього дослідження внаслідок смерті або умертвіння в ході дослідження; 34 95 мишей, які одержували ЛПС, були виключені з цього дослідження внаслідок смерті або умертвіння в ході дослідження.
Під час дослідження спостерігалося, що лікування тільки ніфедипіном спричиняло значне збільшення середнього часу до розродження в порівнянні з розчинником (23,53 х 0,99 год проти 21,19 ж 1,00 годин, Фіг. 65) у мишей, оброблених КИ486. Додатково, лікування тільки ніфедипіном сприяло збільшенню часу до розродження і значно підвищувало фракційну життєздатність потомства мишей, оброблених ЛПС, у порівнянні з розчинником (90,39 95 ж 5,34
Фо проти 48,20 95 ж 16,45 905; фіг. 68 і 69). Застосування атосибану подібним чином приводило до збільшення часу до розродження у мишей, оброблених ЛПС (Фіг. 70).
Встановлено, що сполука ПШ сприяє збільшенню часу до розродження і порівнянні з розчинником у мишей, оброблених КиИ486 (Фіг. 65 і 67). Зокрема, оброблені КО486 миші, яким вводили сполуку І перорально в дозах 30 мг/кг і 100 мг/кг, продемонстрували збільшення часу до розродження в порівнянні з розчинником (р - 0,0871 і р - 0,0601, відповідно). Крім того, введення сполуки Ш оброблених ЛПС мишам приводило до дозозалежного збільшення
Зо фракційної життєздатності потомства (життєздатність 69,41 95 ж 15,76 905 спостерігалася у відповідь на 100 мг/кг сполуки ІІ в порівнянні з 48,20 95 ж 16,45 95 у відповідь на розчинник, Фіг. 68).
Комбінація ніфедипіну і сполуки ІЇЇ приводила до особливо вираженого токолітичного ефекту (Фіг. 65 і 69). Пероральне введення ніфедипіну (5 мг/кг) і сполуки Ш (100 мг/кг) оброблених
КО486 мишам приводило до чіткого синергічного ефекту, оскільки ця комбінація спричиняла значне збільшення часу до розродження в порівнянні з розчинником (27,91 хх 0,35 години проти 21,19 ж 1,00 година), окремо такою ж дозою ніфедипіну (27,91 ж 0,35 години проти 23,53 ж 0,99 години) і окремо такою ж дозою сполуки І (27,91 5 0,35 години проти 23,70 ж 0,60 години). Крім того, пероральне введення ніфедипіну (5 мг/кг) і сполуки ПІ (10 мг/кг) обробленим ЛІС мишам приводило до значного збільшення часу до розродження в порівнянні з когортою, що одержувала тільки 10 мг/кг сполуки ПІ (31,01 хз 1,89 години проти 23,98 хз 0,66 години). Крім того, пероральне введення 10 мг/кг сполуки ПІ в комбінації з 5 мг/кг ніфедипіну сприяло підвищенню життєздатності щенят, народжених обробленими ЛІС мишами, в порівнянні з мишами, яким окремо вводили таку ж дозу сполуки І (94,23 95 ж- 3,68 95 проти 57,90 95 ж 14,89 95) та в порівнянні з мишами, яким вводили окремо розчинник (94,23 95 ж 3,68 95 проти 48,20 95 ж 16,45
Фо; Фіг. 68).
Комбінація атосибану та сполуки ІЇЇ додатково потенціювала токолітичний ефект кожної окремо застосовуваної сполуки. Підшкірне введення атосибану (300 мг/кг) та пероральне введення сполуки ІІ (100 мг/кг) обробленим ЛПС мишам індукували значне збільшення часу до розродження в порівнянні з мишами, яким вводили тільки носій (33,23 ж 2,95 годин проти 26,17 - 1,98 годин) та в порівнянні з мишами, яким окремо вводили таку ж дозу атосибану (33,23 ж 2,95 годин проти 28,41 хз 2,99 годин; Фіг. 71). Ця комбінація також продемонструвала тенденцію до збільшення фракційної життєздатності потомства у порівнянні з мишами, яких лікували тільки розчинником, окремо такою ж дозою атосибану або окремо такою ж дозою сполуки ЇЇ (Фіг. 70).
Це дослідження додатково ілюструє токолітичний ефект солі антагоніста ЕР сполуки І на двох різних тваринних моделях передчасних пологів та підтримує застосування сполуки | та її солей для лікування та запобігання передчасним передпологовим переймам, незалежно від базової біохімічної етіології. Це дослідження додатково підтримує застосування антагоністів ЕР, бо таких як сполука | і її солі (наприклад, сполука ІІІ) в комбінації з кожним із антагоніста кальцієвих каналів та антагоніста рецептора окситоцину для запобігання передчасним передпологовим переймам. Вплив застосування сполуки ПІ в комбінації з кожним із ніфедипіну та атосибану значно перевищував терапевтичні ефекти окремих компонентів і демонструє, що сполука І і її солі, такі як сполука Ії, можуть виявляти синергізм з додатковими токолітичними агентами.
Приклад 7. Токолітичні ефекти сполуки І в комбінації з ніфедипіном, атосибаном і нуласибаном на зразках тканини людини
Для дослідження терапевтичних ефектів сполуки ІЇ активний метаболіт сполуки І та її солей (таких як сполука ІІ) в комбінації з антагоністами рецептора окситоцину та блокаторами кальцієвих каналів були одержані зразки біопсії міометрію доношеної вагітності до початку передпологових перейм, від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Серед завдань цього дослідження було охарактеризувати вплив сполуки ІЇ окремо та в комбінації з додатковими токолітичними агентами на частоту, пікову амплітуду і тривалість скорочень міометрію, а також на виконану роботу на скорочення та загальну виконану роботу для всіх скорочень. З цією метою проводили експерименти з використанням ОМТ Муодгаріп 800
М5 (АБІМ5ТАОМЕМТ5) в оксигенованому розчині Кребса із застосуванням програмного забезпечення А0І Рожепар, що полегшувало одночасне проведення паралельних вимірювань для декількох м'язових препаратів.
Експерименти на зразках біопсії міометрію розпочинали, дозволяючи встановитися скороченням гладкої мускулатури на початковому рівні протягом щонайменше 20 хвилин. Після цього періоду часу реєстрували початкові значення частоти спонтанних скорочень, пікової амплітуди, тривалості, виконаної роботи на скорочення та загальної виконаної роботи для всіх скорочень. Далі зразки біопсії міометрію обробляли контролем ДМСО, сполукою ЇЇ, атосибаном, ніфедипіном, комбінацією сполуки ІЇ і атосибану або комбінацією сполуки Ії ї ніфедипіну. В подальшому вплив цих агентів на частоту, амплітуду і тривалість, а також на виконану роботу при скороченнях міометрію вимірювали протягом наступного періоду тривалістю 10 хвилин.
Далі зразки міометрію навантажували додаванням зростаючих концентрацій стимулюючого скорочення агента, такого як окситоцин, РОЕ2а або РОБЕ2, в ході послідовних проміжків часу тривалістю 10 хвилин, і вимірювали частоту скорочень, пікову амплітуду, тривалість, виконану роботу на скорочення і загальну виконану роботу для всіх скорочень, відповідно. Кожен з
Зо окситоцину, РОБЕ2а і РОЕ представляє різні типи модуляторів скоротності матки та передчасних пологів. Окситоцин безпосередньо індукує скорочення міометрію матки підсилює синтез та вивільнення скоротливих простагландинів з ендометрію матки та децидуальної оболонки. Крім того, окситоцин був залучений до сприяння продукуванню простагландинів в клітинах міометрію людини шляхом потенціювання циклооксигенази 2 (ЦОГ-2). Показано, що простагландини
РОБГ2а ї РОЕ2 індукують зміни шийки матки та спричиняють скоротність матки, дві ключових події у фізіології передпологових перейм і пологів. Активація РОЕ2а рецептора ЕР в міометрії людини приводить до підвищення внутрішньоклітинної концентрації кальцію, що, в свою чергу, приводить до скорочення клітин гладкої мускулатури матки. Таким чином, ще одним завданням цього дослідження було оцінити здатність сполуки ІЇ зменшувати скоротливу активність матки, індуковану трьома різними біохімічними способами.
Результати цих експериментів демонструють, що сполука ІЇ окремо здатна дозозалежним чином пригнічувати як індуковану РОЕ2а, так і індуковану ОТ скоротність міометрію (Фіг. 72 і 73).
Більше того, на даний час було встановлено, що сполука ІЇ виявляє несподіваний синергічний вплив у напрямку зменшення скоротності міометрію при застосуванні в комбінації з антагоністом рецептора окситоцину атосибаном (Фіг. 76) та блокатором кальцієвих каналів ніфедипіном (Фіг. 78). Несподівано, дози сполуки ІЇ що демонструють знижений потенціал зменшення скоротності міометрію, застосовані за відсутності додаткового токолітичного агента (наприклад, 60 нМ, Фіг. 72 і 73), демонструють яскраве збільшення інгібіторної активності в комбінації з атосибаном (Фіг. 76) та ніфедипіном (Фіг. 78). Подібним чином, дози атосибану (6
НМ, Фіг. 74 ії 75) і ніфедипіну (б нМ, Фіг. 77), які за відсутності сполуки ІЇ виявилися субопгимальними для зменшення скоротності міометрію, продемонстрували несподіване збільшення протискоротливої активності в комбінації із сполукою І (Фіг. 7б і 78). Ці дані демонструють, що сполука І здатна виявляти синергізм із додатковими токолітичними агентами, такими як антагоністи рецептора окситоцину та блокатори кальцієвих каналів, для пригнічення скоротливої активності матки, що може призводити до передчасних пологів.
На додаток до пригнічення скоротності міометрію, токолітичні ефекти сполуки ЇЇ також виявляються у здатності цього агента зменшувати експресію прозапальних генів нижче в біохімічному шляху у зразках біопсії міометрію та амніону людини (Фіг. 79 і 80). Вестерн-блоти були одержані з метою характеристики здатності сполуки Ії, окремо і в комбінації з додатковими бо токолітичними агентами, модулювати експресію різних білків у зразках міометрію і амніону доношеної вагітності до початку передпологових перейм, одержаних від суб'єктів-людей жіночої статі з розродженням шляхом кесаревого розтину. Результати цих досліджень демонструють, що сполука ІЇ здатна зменшувати експресію різних прозапальних білків і виявляє несподіваний синергізм в напрямку зменшення експресії ЦОГ-2 при застосуванні в комбінації з нуласибаном.
В сукупності, дані, одержані в цих експериментах, демонструють, що сполука Ії здатна пригнічувати активність гладкої мускулатури, спричинену різними модуляторами скоротності матки, яка може призвести до передчасних пологів. Більш того, сполука ІЇ виявляє несподіваний синергічний вплив у напрямку зменшення скорочень матки при застосуванні в комбінації з антагоністами рецептора окситоцину та блокаторами кальцієвих каналів. Ця взаємодія виявляється як на рівні активності гладких м'язів, так і в зменшенні експресії прозапальних генів у зразках біопсії міометрію і амніону, та демонструє різні сприятливі ефекти надання сполуки ЇЇ в комбінації з одним або більшою кількістю додаткових токолітичних агентів суб'єкту, який потребує лікування, наприклад, суб'єкту, який зазнає або піддається ризику передчасних передпологових перейм.
Інші варіанти реалізації винаходу
Всі публікації, патенти і патентні заявки, згадані в цьому описі, включені в цей документ шляхом посилання такою ж мірою, ніби кожна незалежна публікація або патентна заявка була конкретно і індивідуально вказана як така, що включена шляхом посилання.
Хоча винахід був описаний в зв'язку з конкретними варіантами реалізації винаходу, необхідно розуміти, що він може бути об'єктом подальших модифікацій, і ця заявка охоплює будь-які варіанти, застосування або адаптації винаходу, що загалом слідують принципам винаходу, і включає такі відхилення від винаходу, що знаходяться в межах звичайної практики в галузі техніки, до якої належить винахід, і можуть бути застосовані до основних ознак, наведених вище в цьому документі та викладених у формулі винаходу.
Інші варіанти реалізації винаходу знаходяться в межах формули винаходу.

Claims (6)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Сполука, представлена формулою (І) Коо) Мей ух Й У в НН ш в ке Су Кв: конт я ро що туз МН, й | ї ре ше К кл ви , () або її фармацевтично прийнятна сіль.
2. Сполука за п. 1, де вказана сполука представлена формулою (І) ж і км, ї -ч ну Ме щи Ж . Мо ОО емнь о БЦ Н їй ке і ше М ' К, -- те (11).
3. Сполука за п. 2, де вказана сполука знаходиться у кристалічному стані.
4. Сполука за п. 3, де вказана сполука демонструє характерні піки на дифрактограмі рентгеноструктурного аналізу порошку при 7,07 20, 8,17 20, 10,07 26, 12,07 26, 13,17 26, 14,17 26, 16,47 26, 18,47 26, 20,17 26, 21,07 26, 23,57 28 та 29,57 26, де дифракційний рентгеноструктурний аналіз порошку виконаний шляхом піддавання сполуки випромінюванню СиКа при напрузі трубки 40 кВ.
5. Сполука за п. 3, де вказана сполука демонструє піки "Н-ядерного магнітного резонансу (ЯМР) з центром в точці 1,1 м.ч., 3,3 м.ч., 4,9 м.ч., 5,4 м.ч., 7,1 м.ч., 7,7 м.ч., 7,9. м.ч. і 8,0 м.ч., де "Н ЯМР виконаний з використанням частоти спектрометра 399,8 МГц.
6. Сполука за п. 3, де вказана сполука демонструє ендотерму в діапазоні від 145 до 147 гС, за даними диференційної скануючої калориметрії, де ДСК виконана шляхом нагрівання сполуки зі швидкістю 10 "С на хвилину до 350 "С.
7. Сполука за п. 3, де вказана сполука зазнає втрати маси від 0,2 до 0,6 95 при нагріванні від 25 до 100 "С за даними термогравіметричного аналізу, де ТГА виконаний шляхом нагрівання сполуки зі швидкістю 10 "С на хвилину до 350 "С.
8. Фармацевтична композиція, що містить сполуку за п. 1 або п. 2 та одну чи більше допоміжних речовин.
9. Фармацевтична композиція за п. 8, у якій сполука введена до складу композиції для перорального введення пацієнту, який є людиною.
10. Фармацевтична композиція за п. 9, у якій сполука введена до складу композиції, яка є таблеткою, капсулою, гелевою капсулою, порошком, рідким розчином або рідкою суспензією.
11. Спосіб синтезу сполуки, представленої формулою (І) Кк й ту г рах Гб; а Не й Й тео м ен; я у А Ї р ж шк й Ї Ши ша й ди ; (І) або її фармацевтично прийнятної солі, причому вказаний спосіб включає введення прекурсору, представленого формулою (ІМ) у ев Є 5 М ши п; Ма 7 и В ду ЯКЕ, М м м У у лвхо В у Хо Я ї Й он 7 (М) в реакцію з прекурсором, представленим формулою (М) о сов й і он «МН з утворенням аміноестеру, де Х являє собою захисну групу, і при цьому вказаний спосіб додатково включає реакцію аміноестеру з реагентом, здатним видалити захисну групу з вказаного аміноестеру.
12. Спосіб за п. 11, у якому вказана сполука представлена формулою (І!) Е Гл Мод - НМ во) й ен с ак М Н І ве й і Би х. К ко Я (1).
13. Спосіб за п. 11, у якому захисна група являє собою трет-бутоксикарбоніл, а реагент являє собою метансульфонову кислоту.
14. Спосіб за п. 11, де спосіб включає введення вказаного прекурсору, представленого формулою (ІМ), в реакцію з вказаним прекурсором, представленим формулою (М), 1-етил-3-(3- диметиламінопропіл)карбодіїмідом, 1-гідроксибензотриазолом та М,М-диметиламінопіридином.
15. Спосіб за п. 11, де спосіб включає синтез вказаного прекурсору, представленого формулою (ІМ), шляхом введення прекурсору, представленого формулою (МІ) пит ЕЕ ик С х ше Ши Ї у ЯМИ Меч рай « ж ка н З ту ; (МІ) в реакцію з прекурсором, представленим формулою (МІЇ) ята ; Бак й , чини «Колки 3 (МІ).
16. Спосіб за п. 15, де спосіб включає введення прекурсору, представленого формулою (МІ), в реакцію з прекурсором, представленим формулою (МІЇ), діїзопропілетидаміном та М,М- диметиламінопіридином.
17. Спосіб одержання сполуки, представленої формулою (І), у кристалічному стані
Е і ве дь М ші неї ши ЩО; и: ШКО: ШК ку рей Ме МНУ с ша ї З М Що у К їЗ сн ши х ни Й ЩІ вом К я т ; (ПІ) де спосіб включає змішування сполуки, представленої формулою (І) Е ше й х її 7 Мн х ї Щі в ро мо м Ой р й МН з ос Шк Я і 7 Й о пен ї ЗК, ях тк ; (І) з водною соляною кислотою.
18. Спосіб за п. 17, де спосіб включає: а) розчинення сполуки, представленої формулою (І), в етанолі; б) змішування водної соляної кислоти з етанолом і етилацетатом; в) додавання сполуки, представленої формулою (І), до водної соляної кислоти протягом періоду від приблизно 20 до приблизно 30 хвилин, з утворенням суміші та підтримання температури суміші від приблизно 15 "С до приблизно 25 "С під час додавання; г) зниження температури суміші до приблизно 5 "С після додавання; та д) перемішування суміші протягом від приблизно 50 до приблизно 70 хвилин при температурі від приблизно 0 "С до приблизно 5 "С після зниження температури.
19. Спосіб за п. 18, у якому сполуку, представлену формулою (І), та водну соляну кислоту змішують в еквімолярних кількостях.
20. Спосіб лікування або профілактики передчасних переймів у пацієнта-людини, який включає введення вказаному пацієнту терапевтично ефективної кількості сполуки, представленої формулою (І)
Е нм і ох я Моя, до ОТ еМн; но це й а і Й яти С я м шк -е (й або її фармацевтично прийнятної солі.
21. Спосіб запобігання передчасним переймам перед пологами шляхом кесаревого розтину у пацієнта-людини, який включає введення вказаному пацієнту терапевтично ефективної кількості сполуки, представленої формулою (І) М шк ї СУ о й М г що ї ве й т й я Ві Н МДЕ М Н Й ши Ж х КО : КЕ ше й 0) або її фармацевтично прийнятної солі.
22. Спосіб за п. 20 або п. 21, де сполука представлена формулою (І) Й бура не. «і м а о Хлжх ї і Ка що, БУ - Мо о м Мне не Ше 7 ж і киш т ва Ж ше М п т (1).
23. Спосіб за п. 22, де вказана сполука знаходиться у кристалічному стані.
24. Спосіб за п. 23, де вказана сполука демонструє характерні піки на дифрактограмі рентгеноструктурного аналізу порошку при 7,07 20, 8,17 20, 10,07 26, 12,07 26, 13,17 26, 14,17 26, 16,47 26, 18,47 26, 20,17 26, 21,07 26, 23,57 28 та 29,57 26, де дифракційний рентгеноструктурний аналіз порошку виконаний шляхом піддавання сполуки випромінюванню СиКа при напрузі трубки 40 кВ.
25. Спосіб за п. 23, де вказана сполука демонструє піки "Н ядерного магнітного резонансу (ЯМР) із центром в точці 1,1 м.ч., 3,3 м.ч., 4,9 м.ч., 5,4 м.ч., 7,1 м.ч., 7,7 м.ч., 7,9 м.ч. і 8,0 м.ч., де "Н- ЯМР виконаний з використанням частоти спектрометра 399,8 МГц.
26. Спосіб за п. 23, де вказана сполука демонструє ендотерму в діапазоні від 145 "С до 147 "С, за даними диференційної скануючої калориметрії (ДСК), де ДСК виконана шляхом нагрівання сполуки зі швидкістю 10 "С на хвилину до 350 "С.
27. Спосіб за п. 23, де вказана сполука зазнає втрати маси від 0,2 до 0,6 95 при нагріванні від 25 до 100 "С, за даними термогравіметричного аналізу (ТГА), де ТГА виконаний шляхом нагрівання сполуки зі швидкістю 10 "С на хвилину до 350 "С.
28. Спосіб за п. 20 або п. 21, у якому вказаний пацієнт характеризується гестаційним віком від 24 тижнів до 34 тижнів.
29. Спосіб за п. 24 або п. 25, у якому суб'єкт демонструє зменшення амплітуди скорочень матки після вказаного введення.
30. Спосіб за п. 20 або п. 21, у якому сполуку пацієнту вводять перорально.
Фі Н ! Н ї Ї і ! ! Н ' ! 1 Я Я Н Я нин : І хх і і І ЗШ У Я ! Н : щи ; Н Н і и фен фран Оу і і х ї ях й Ї і Н Е Ко Ї і З ох й І і І: ий і В кв і і ї Х Ї ї 1 ! КОНКУ Я Я і її Же я Н п! і НИ Як й ! і Н її ше і ті Н хї Хе Є Я -я--о ї 15 хх, Ї Н ті Н НІ їх Ї ит Н і Н хо ее о нене НЯ Ро ді ! Н її с К Ж і щі Н І: Ж ж а ! -- ї Ії Боні М т ї пі М її Х Кя т Н щі з Ех ЕХ Н щі у Я Е і ВІ Е Ї ха «Ж і ті ї Я "ж - і Н зії Е : «й 1х рі що Н | хо ях 1 (і ді і ЗП В і і Н СУ м до Я -- і Кок Ж 1 Й і і і НЯ су р ро - щі ШИ К НИЙ р щі ! рення іх шия : ї ї її: і Комі Н ЕЕ Х ЗЕ і о! 1 її Х я Н Н ЕН Н г У ї-- Н Н і ! г су Неми їі щі І їх: ГЕ я. ! СВК ІДЕ І ! Н М БЖ ЗР ! Н мох ЕД ота і Я Н ї Її рт щ ! і І ЗБ шт Н Н її ЕЕ В у і ЕКЗ ТЕБЕ іш І У ї ГЕ іщшшпУ ПИ У - 1 ЗК ішов їош ' в Н 2 ідея рот і жд Н 2 іш і ов ! ш і Її тут, о Я Ж Н З Ті ро Н ре Н : нас У ! - ї НУ Н їй Н т І р хх 1 Н а У р ї Н Їх - нн В В ЗІ МИНЕ ! 008 Н 1 5 і ди Н НИ ! її 1 - ' т ! ! ов 1 нин: нини ннжжаааааннн аа ї - І Н щ- Н ЩЕ що - що ! Ен 1 ГУ й а ж і я Н У ' то м ' рез їх сх . Н во виноартания сс жннианвене ія од ік га Н ух і р і езававаанвавннввааннииввнннавнвввнввнваннввавававнввваваннввимї Я Ж селян з КО о плятня ККУ ві нини М Я В спятя х В Ше: ШЕ: Н - кодеЇ ; В і Я вАлозанес на : Ми " і Еш ТЕ й . Н шов дик -ї ше: пОЕ Ботеян і ОВ, Ж з Н ж шк. ОВ Н шен ж і й ш ве Бу і ок ші ШЕ 8 о д і пе же 8 Зі їі 1 У і шля о: Ж ад шк: і ж Оле до г се ше ня : ше й я ЕЕ пон.
ро. ; . нах я доки НК са
КО. Си - я т пак їз Я . ж не ЕЕ сх ше : Й паж "ГЕ й ТІВ де г - : : я СЕ шин бок НЯ с : -к З СЕ -: де й бю: " ПА я Ши ЕМ т й зх - Н ; Се ра з 5 оз се ; « ж й Н - ие З . я : ей ! те Й Шк дж: ше ше : дев р: ХО й І Ж - - дж. ЕС Ще шк рости с : де : Ян Ед і ї код а . сх чо й яні « т пе ї - аа - г ЖОВОВ ОХ. - - рони яр Бак їх ЕЕ : й я о? і соя . ЩЕ У і п ЕК си я и! КО ЕЕ. Кш «ч і Ії о ІЗ
; с зіва пи в ; 7 ОТ : Ї ро І | ; м я ЇЇ ': х Її г І! рі і Я» в х і 1 оо : В рі в ! Н а К В хі я яз рення - ж і ГГ; яв у Б зве шій пи х й ЩОш Ру - й я В ВЕ щ хх ке шини ши Ї І 3 Ї т ря г ря їх і - ; в Ж я 5 я й КЕ я й З 5 -е | - М коп винавончя ок овБиновоНе є Я пд В є х 5 Б, 9 г жож
Фіг. 4 ' І : Результ Н і св І пиДщ Ії Результати Ї Спосіб Н Спостереження й ЯМ і о и п опо о опе порив п ОО І п п а а о о ОО о и оС ИОВИ і Додавання розчину МО Вниарюють до сухого стану: присутній їнкоО ії ОФщо ло роззнну слі ої нароторному винаринику, і метансужьютча і (СТЬСІО і сушитьу вакуумній печі 1 овогкнолоти Додавання розчину Мас срортнотаста суцпінвьх 0 брисутній щік Е пло розчину ек і. вакуумній печі 00 МегапсУЛЬфОМО Н і пе І шк 1 вої Жнологи ДЕД НН тт і До СНАСЬ реззину Н : ет ут тич з - - ї Н додакоть воду, ЗбовтуУюЮтТЬ І сад твердої речовним у і і уручну. Видаляють шар водному знарі Н : ! і водного СП, Н й : Н внизрючоть Н і нн в о в в Яе ни оон МК. Д'язкий осад, еуужать у і ї оМасміст водії Лолаютть РОТ У Н ч У в й Н ї УМ нії | ї І СПоСІ». збовтують уручну закууман цен :
у. ж ше Р аста сушать У вакуум ой й , Видиляаютьшар СИС, Паста, су хать у вакуумний Е пеоеольннної І і випарюють Б одн пот А « ХВО г 020000 ласк осакення СІЛЯЙ. ШИ: і Молавання розчину МЕС ро вмілизоть до хололильника. 8 присутній шко! рОСЕюЮН до розчиму селі | |" Випарюють вароторному ; метансильфоно і СЕ | випарнвку. сушать у ВАБУУМНИЙІ овоїкислеги І ІЗ Н ридав пу п. Зіаста, сушить у вактуУМНІЙ! 5, ; ОК дорозчнну сов вч 7 вільна основа БОШюЮНУЄ Вимарюють | Н і і Аолаваєця розчину МОНО ще пи і ОККО до розчину солі | Сушатьу вакуумній Нечі : вільна остова І БОНН БВипарюєть : Н заомв по оннноан пемнннв іонна їз Н НА І і йодавання розчинах Мас о Єниляь сутнать у вакУУМНИЙЇ п І р Мюда Е у в ше Ь 7 ії вільна основа ОС ЯБОНІлеороззивуУ солі | цпеці рольва освова КОНЯ. Випарюють Н і і ! ; пити шини пен повне, пи, і Мдодинвини водного і Кастя. суціить с вакуумній . і резчину МАН до розчних! ше це ОР вільна основа і салі в СН. Ввпарнюють! : тету тете тт тт т тт пусте пустир тот ут тет Кт нт т т пуринів тет пут т пн тт у тут тт т ТК Туре т т піпетку оте тут т тет туту тт,
Фіг. 5 б пппптекттнттннннння і Єзосіб пен і До проф і у. дет АтАлтя Грозчину флктройанох ; "росуе дгннтлннн Н роззни сюови люд з В хрсяен, дплатлАнлял: Ї зн кнолоті сеннутя. урохуюй роя я фезсзьтан а Н ке Я) ТТ рег брозиря трон поовиоя ЗІ пе сл На пюдічо ВІЛЛИ ро гивних г» Еехккщкн ер ЯМ га рол в АКНИ ПОЗИ ї «хх МАК дою тн з, а Дня ВНКМІ п лоеусте: ти Орох пеню піекет з акорнх, Бе Н Про: ОХ, зей І оси ри терло Кен іт ененсух 12 ОЗ ОНаЄ ро вх ропчия вн і: нат сУлдьфО І полают їх Мовне мцУкак де мопочи ж яса. ен те рода пилоляреятоннноя волю М плен сь нн ее; до розчину Р. ша Й ! Ки я кет НЕ і забцрило ЯУТниМ ВО Ко чи ВІН ці Н до «ДеНИй Ук ди й рололають й нн ном ний у жовтні к ще ши де----- КИЖЕ до оон зи мінерші реа й Тк Кільсі слів. дедилятлтлт Н сткввавт ЕН ЧА Н вот і келькіст ще Н ічин пітьх КМУ св шк лк ово дюи Й роае дленовю сі--. - ВЕ ДКВ пеховних кі й г року в схсценя, Тр вий оно в кнглидає сш ШЩШеараг ння ше їм пен НИоУ Вийцркн с ' ллляя Ася У мий чех арезнуух і інн і пови п - Ї Я - днкеннннння «р при 50 кочтальций ДИНИ іх Рози ві вок МЕС. Пр винй розеНоВи пі вАЛЕНКЇ РК лети олені стояк прий 1 сусї но лоданаться Н про мені Бий п още - Н уЄ лик сьо ії Трезорі 5 цеб, пе «ее нення і ІЗ КМСЛюТ КЕ Вмн рий мух персмішу. пн нини -- ! (ВЮАс ті боворне ризи смішуктн, ші дддляценявсдня, шо Н Кілий ло какуєм ГА Настя Трон ро морфол ссод не умиОї ще То Бачив пятяяннятняя Н -ю ролю мись овідамої ке Н ' кві ппляняжнт Н сут Та с МК ї ще Н подяк вільної ос ппннев ння слодня чим проза Інуратия й Е і кас. сопе чевн ї ше Не "ра ща СІЛ ШЕ і ! щи Т доро Мнуги. ро ди і бозчя ро пе Розчин ве ОМ І ! іон кислоти Є ех тане, з Кх. про дененжажажнняї Ї реч сангдад: мутинй! ПЛУЧаКТТНЯ випр одорий 1 сн рехянну пі додане тю в заварки яке Кия. - пвнннннннннння селі барноєний у зе тери пи ої коло), Шо пет На С З птн ди в бик тові ідо Іво ло; ня глкате нія ї хпсаноне чне НІ розчину не здані ТЬ : т тЯнх зицій мкуумом чн їй. ше ТЕГУ НЕ гі ПічЯй с і ММА В ще А ГК снопи ві перемі яй деало си са к і і фомруки рен оцю - Не премовні кліку м щи СТВ. Н ха підем хуумам зк. лора та дод СПб пон ло розчину ДОНЮ нер п нення Н сть. денови в То поро Білнй посад локивук ій «ель пн СБ еО і фе еМишуюий еіхспеняї нин й р дитарук ують прі топ інн їжу руки ЛІЯ Й Фі пон Н орла ечиешим вакух ки «їх іс. 5 (прод 220 сутеянню тай інлкоте; В'яжа! В преденя ПЕЖЕЛУЖТХ хг ЗистоВ, се; Ї авКя лік претаю, он сфеіж ВеНУЙ роїном 2 дівю . ігілж, й бдль пн по ня лосі? поеннркнннннн речетчиччичя , чату ці роеччен ! колл і Дозні дея ! Є сн ЕЕ рофіль ши чис длчкнччн Езила ризчі лютровяног фени терте днини І зе дан п ! шт Женя зУВуКо Н й г ль ких Вій І сон поли ттетнннтх І Безу ятудеии се пк, ня тя мипюркіх ПН: зу Нав дети Не ж усе винне ня пе ка. сю ям газ у пюююююююю Ме резчину перен І пе ння ше Генна і «ВМ і Їк мими зи ку жо Я поволі сек, пом. хфунк їх ; ден сфумарат свюваиний т дойшюти епркттет бик ши і Клзнеу. і АХА М Ки кп еЕ дуже ето кмин ль і знсулюфенат, ще веди ос скит пе ок кон ання зп пас я хллавк іі А АК НКЙ вдесхе кол Яни "кі киьке: сн Е ль пане секта Ів в: спа ух ден І Глу сов кислот Грнтюро еВ пох: я ! чутамат ледвичн, до ре плита нн реміярмжннм, Чо ние тні нені і у кн ло реухе КО а (Б Й Й ; і сві ОО І декрету М помниенн валарячечт ПН: пяня деукех ванн т) МОН мопаяннетої Ко для і -4 них що кави яри ТИ пи кун х рохонтуяти іо мирі ши - Чесно ек киці єне ди Мен раї КА: МлосУни рення і пек сеповні ВН - схіматяиЙ масі ВОК ! почни М лоДо» очнаКи, озення І Я рт ТЕКА темпу хр х Н Ммишлаене ре и; ЛО Кей ШЕ ме ОКХ. ніх серовидл зхри ; що НН ЖМИХ ТУБКНМЙ рух й учи т ЖИ ! Н її ЯКИМИ, ее І ПОП О Я мель Що уми жинини і Мк рани ПЕК Прозчрий ОККАКМКЕ мндудим, | пчнннчнчннннннї мин дидант ву ми зерня жрий рози. 0 ож Но: слі шин ан Мнслот тане нт щи. бхолоця сли скннтснкя " і х чн з: М помооннинемин куки | деенннччнннння Мезво пу Р ен теє, ОС Й ої звлит | Де ПИ НаИИМИ їх перемі кох соколи певен і г т розчину о реееничи іх МАХ», хіт у А пиши і
-. З дог Бк оСкН Н им теуу: У. син сви. хі 22.24 Тит удакугь Кк я 14 жаркий Уч дикукио і пишних , как ле І дихав пек ФВ Укл . ! Ух лету Гркнини епоутиь ст Зоо ! ДААААААААНАЯ у рркецелих, т, віх нею прКе Зо шен плчбкччн Н Ар рез длдллятняя ПМ Мпенімн мину НН ше ро беє мули ях ок Іл «КОМ: хітин се пе са Мезил Н совет ледая я нив» о г ка тОБКеКУМНИВ Кз М ко сен зла і ств каслютх і тя Зо КН,. і що зала лях ра й; ще р печення Ба їБ : По ую лААлАМЯ дарроим теми са Ми -- Ух лі їтнк для рення ера они. | вом зофкст пен оо ! кддллллллня Н ман дода. Нови Кк для пемюмоМ тома стнтьее д і длднкд ЦИТ тех димесі ТКА Мижуємо тлі Ци мя ЗР і І
Ся. Ле пнанцит У ТТИВИМТКЕХ нон ! ! Сужифат Це розчин оон ' дек кон беріком ак - Н раї гот тн ск я ко ух ско і ще Н СКМ НК Оу фах УЗИ Ко, хх І і ин мех сн БО С ві поки побу, З не і вх ни а СН Р Бере жк кімеоюй Вени Гн А тв окисийре І рох Щех пе МОЯ ом вої удлллхлнлялні ть КНСЯвХ (НЯ ро кома ЕК ТЕКИ ї мо МАМА М ех с пУКеМ теж, г пи - Н вини о еНО пику Кококюй фея Н й ШИ Хот вн нн нн ен І Сульф пенні ОЙ р ефална і
ДИН. «ід мулллллля 7 ! ПН нн зані нн ин прин дпа тн нят чА тя нят качання ! ї : ї ! З 1 : і І ре, Й і : - ! РТ : ! З ї : зу : Н ди й нс : Н ща ї Б ; , ОБ бр ЕВ ' ре рак: НІШ : Н пк й БО ПЕ Шо: ! щі і у : Н чт кв няні жінк і її яв о я ЕЕЕВ: 15 бе іс» вд У : ше щ брошож що Ач "ки ах ; нн то вів и. БИ, вс Ше ШИЯ 3 пи во я в Не в НЕ шиті МЕ і Нав ви ВЕ ВВА и ВЕ з ОБ Я Б шо ли шов В БЕ ЕП В у ОІД НОВ Б Об от шо жо ре шо «шов СО ог, 3 ВЕБ не ши ж ЕБбоненях ів НЕ Ши у во ВЕ везе Кл лоше ЕМ у З БЕ Еш юні ВЕ поем я ревА й 58 х і ж АЗК ВЕІВсІ ДАНО 1555 ВЕ ЕВ У щш вка вки ВН Е РЕЖ Шк Б50БІ ЕВ і Е ЕЕ ниви ішВЕХ |БЯЗІ ЖО 1 щі БВ щи м Я щих ша і швея явдеВЕовВ во ака е і коса я нм а пн і ВІСІ З ИН ШИ ДЕ ківш ох ш а а НИ І В Елен сиве ав В ! вовки вЕкшиЕсьЬВ ЕЕ ВІ вен ще Зою од І БО шов В тд бай с І КЕ Уа гот МЕ щу ж з а: шо пшяшеУ й Бе шо р ж се ШЕУ Я ! ж ен ІН івакшЕ КІВІ ВЕ 1 Же мо. С о й пові Бе ь лаві МЕ дід ЕТИХ вЕВОНЕЯ дв ст ех СУ БАсСЕВОСНА КЕР Х 5 КЕ ее 1 НЯ ях НБУ А що Ол Й да. с ЗО - і ІВ В.В огні йод я кави гав мап я, : пе в'д ШО што дж щ М м ох жов ее есе з жЕшиЕВЕВІ ЕВБ'ЯКе Ява іч ие з що 5 ОО ОВО фол жо Ох я ший рах Ше НУ ! ЕБЕВЕКВ ЕВ мя СЕУ ! пав ше М хо БЖД Я В.В. Еш 5 ша т і шви шк шо р ве ВЕ ї : дО В о шва іш» т Ж ! : яка -- Ма З З пові ї : - п Їй З аеежеесея Й Н шен о - з : ех ня і шА Е є Я щ : Мей щі то; С ! Га : Н УЖ 1 ау щу, 1 з щш З : Ж і дов щен ЕК ЩЕ Я : Й я ш В ЗЕ КК ше с ди шт ЕІ ! : дій ОМ і к- СЕ Б " у : ст і А у Коди пи їн Я З : 7 ш- К 5-х -к теор : шов : ше ше вв ' : ЕК ЕЕ аж ік розшо: шо шов її БЕЗ БА их ВоОЖ: 5 пе КЕ до У тир В Кос: Ю Ж ОБЖ ій РЕ: Ж пов Бі, шо ЗБЕ в ОК ро: - щ і що йо роко шко вх А В ГО я гар І що В де ре ТЕ ре і : ЕІ ЩЕ р авЕВ БЕ ! : Б д от КОТ Зо жвм реч Н : т - ЩО оо оч ш з : й Фо рух зи - ! : ЕВ ї "ше ев се М як у : -О і ши Н р 5-1 - т І : п-Е дО - й Е ! : шо т- Н я та З : щі Е І : З х Й 0 ДЕ в у Н щи р е : ВЕ, - ЕН ШЕ ВБЕ я, 5 Кк і : ООН олу Щ ї Її ке в Ен РЕ: т-ва хи КУ її з б! ОМОщОтМя, г Ж Зо я б М - ще Оу, МІ -- м у : прис п й . Я ЩЕ: в ШЕ ла птнтттеттстон птн
Фіг.
6 . Ї Результат : Сіль Єпостереження ОО ВСАн Н і нення МВ ПО КОТ ЕД Безилат речовини, склододісня. не | - двоханиаМетиОВа. Н : склоподібйна, не дивопаломліюча аморфна І пня нання Е склепеодіона, пе двозалочлівача - тат да АД ет асист досто есе і Цитрат прозора склополіна ка І невідомої морфолеть сяє і - Її дкозадомногюча : і склоподівна, пе зволаломлюючаї аморфна Ро рент няння тенет о БЕдивилат рожева скіюцодійна тверда і резовина. не двозаломонмк т : Тзипат біла склонодіна тверда Н ро облили речовина, не двозаломлізютча 1 й Фумаринх помарадчела скловолієви зверни! Й й резонвна, не двозаломлихеача 1 : 1 лузамат гсклоподібва, пе прозацевлкнеча й Дали дтореннтя Н ря Я КЕ мапеці їла склецодина тверда Н і й й речовиця. не двозаломчая 1 х Н па ЗНАВ НН я / пи їмна паерда резавний невідохняЯ З «рови а Н і Ї софат морфалегяї, а ДЕ алОоМмІНнарочА Н ї Нуар ОНИ Н ставати
ЕЕ. І нн ВИК он їхр неталічна Х й ілросульфат свитло-жовте масло Н - й - о ї св логжоОонте маюло Н я ера біла паерла речавица невідомої Н Сульфат морфології, не двозаломлюорюча | 7 Н : фодюнююкнюююютттмююютюних і т еклоподіюна; не лвозаломанча « Тозипаж т ї скнопоційна, не двозаломлювюча А АлААААААААААААААААНААААААА І А АНА А А тА АТ А Ат ня няття лит х що . (Я ї ще біналаерда речажхвда невідомої і і УМХ морфології. ве дясзаломахрюча З 7 ра нан и:
Фіг. Кл ї й пентернтеенттоетк осн рення тт пон прин денне й вань ання ніна нинининй золи пп пні | с | І: в й й ; і Спостереження Н гезульти Е ни пон понесе ето теттттн ТО РСАНОЇ ше Шк деній во 100 ток, ее ; Ко Цитрат Га ОНИ і еле й я ТЯ овен її ви ни ни І М овнв ї вивих дя В од ВШ, т Ї Гоше сно пух Енн и мин ! й ї ГЕН Мов вв пен плн ! р анекчєсіМницеуйківи злі т ШИ пек : - : ! фан азів пе Ши НИ - ПИ Мних конання вин они мин сосни тет дення Її Гідрохунефягі «інцвцетат киян | Н інн тков ЗАКОКЕЖ сну т : Шан | ме ! асукова еклоподих, рн : стийноте нин ння п фо яморфня ї ; т оон НИ : Н І вктодетивкоН С МЕК їй птсреюи СЕЛ ї То устидепукоок СМ ПУ они нина Е і ТО омрсусутияяцетоя Кк. Тонке луженаке масло ши : -- Ї пря З Беовння. еклоподніки, не Ї шк ї Ге фуннннннннням котом еН о ї у ллля ззлИмктча, й Н Й Е ТО сулніюх ом Сотня т тонттаннннняй і оон : ї КО зеюзінистеткотом Кк, щі То ДоплоемиК пи Н ї детиливтоК СЯ БК . КовинвневИх і я ї (отит рен по роб рвеки рів НК МИ УТИАНеТЯ Я речемням. тю о Н фун і Ма ен і дер коовокх Е і і ши Еш шо Ї я ПД й ДОБ ХМиКня, ни нн Може ніки тететежетинітиния кі пе. Га Н сх нео : з ; Її ЇЇ же ЗОЗ МИНЕ Ста К Лют ! : / зетнотонетовітрих 12 Гв Тк сот ПВА ДЯК ї ї ! но шк Мишни п Не Н хокльному силалолема. ї нан девлекуть | ПТО і Р ухаоко вчать З ! ї й ; ПА ЗДА око плода ломота ЮНАК і Чех | мегаволіолуєн і пк ЕДКДТ КК -е- вного | Фі ропетшомої зорфолімаї. пе | шин! ВН ПАН ПН сн Н і І ' їй і Ки ами щ- і ронедамех мобтололц Ук му Ї ї Ї МЛИНА Ас осо фериствлячна Хі Що В .УККОЗАО МУ ї п: меттвнтиніетенст учет ЕТ рво і в вони Ше . ї Н р ті ! псхаера тя потасУвИМ, 1ааукКрН Н і й нн нн А Ї жчюх і ВИК ТОКОЛИ речовина ї М ше | | сякууаши | коспвном ! : ! ши звуумнх в рстунну у склоцомівна Її ше : ши поту ему песню пеню, Н ен пеня ши роєнмоюо десзаукакю ЩЕ Клх там і ПІШОВ ЦЕКаК КБ КІ фен ша : : і К- пво | свисноня ' ї ут ттт юю жують й і А елоКОя х і інн нини МКУ КИ, ни ман ся АКА ' й пече сонне жене : МВ ев я не і / ЗАУУАНИ : ре в на МНН вних ЗМЕН 000 Долннннннся і ТЕТ | шен М прснннннннн ПВ і оклопелієна не Е ї ГАК ООН я - пня и мк Е 7 : ват осстн ВИНИ с: шини ! он нання тв ; пе ун в СТТИТУТУ Н КУТИ пот нн пе і ер мими знанине нин і і : ЯТІ НАЦентвн ни а ї т і. 00 ОуУБЛВНОТЕК ТОМ і во і Ше пашеок ' : ші НИ ши МИ ' тетегт аа ПОВ Ск ай 3 Й 3 І Н мотичетвлюстовчеятян Оу ЕЙ ї Щ сте : : чі пво і склопеадія . то і в і склеподійна- ке Н нн КОН Оу пря ене А двихкохминю ми ї - ї щ- : о НЕ їх ! ооо дет ши ШИ пови зо око вро В Ї 1 скидає р с і Н ин ; еко усятин З. ст ї матом Ен й ! і і пк и Н прозою - МИ нн пита ї я Н Що М су оо з ШЕ КИМ і Н і спегонсолуєв | 1 ро нсвдом видифодогм, інн А к ши М уриетанінив ді й ГТБЕТА НВ вові ня : ії пе поч Л. що я ритя їчн 1 і ЖК УКАЗ, ер ВНОКОВЕНКК. ураотаячня 8. Я ж ово) кпрамерим позок, ше ПИ ї ї тля тт МІМУ ща і І 1 ї з х. діозлОМмєючи Тктастичічна ДІ дув: пса лаз ги тет їх полка М і в. втеч фросусентх, Не не тви вини Е й .еннтнть ек Е хи 1 рочовилке, ток; їхх ле, 4 ДІ ши псНЕК Кох шт нн нан їх ікриеталічня 1 ; ! З з т нена КК Кк вк кіжтжтютютютютья й Щі Й оповільне випарювання: ШО А ие її ; СЕН, і) обптальне пхододження о» зпвидке Випареваннх ЦО тю ПЕ те жі рН еколог «Орнгінальций зразок ши
ФНг. 7 (продовження) Пенн нн нн я 1 біль! | і 1 Безультат і зразка Н Ротивнних Спесйк | Єпосьтереженимо с рСді 1 3 ї г і зетиноліюрплацетат я п. ПЕК : й Н нн нн ин нн НН Я МК: вн-бутилацетит 1 ПНО фв'юєвльєдеюреовнию : Й і СУМ вок тнладетаз 1 ТИВ 15 яжнлеврахуєчовнико с й Н кн м кн ПОВ ОВ НН і Се УА: ВО НВО о демекаюююмя « і па: прозорих розамно с: -
Н . . МИ ТКПУКТНОНЯ ве их М ! ізопрепілацетат: метанол я Двозівомиоюч й У і КІН Сб ої прозорай розчин й НИ НМ і ин нн ння Н ПО .: ВК Кол ЕН, Н - і мете А М ОО м п п і Мелилат | гептанІМЕКОстаная 6:12. осетра чання : их і ПРОЗИ роми Я - Н ще ПЕ шк ХДОМаИ СЛИНИ Н с щ ІЗ і хаврде Геаслиня Н - ! ЗНеТОЦ АКТИ Ку ТИВИ ВО ОКОМ й Н голі 1 ї ДІМ КУМ КН. : я і ацеююнпелуєн ГУ В ; денти : й і вик нн нин мин Н ацетон тчолуєноя З і ДЕСАНТ : х і ізопраданов ізопронілеви) ру 0 прозоро сюкюдине Н йстр Бі їі тасімт уечианцм : М Н пп КА А ян А п НААН АНА АН ТАЖ АНА ААУ АЛАНА ЛАНКА : сс. прозорий ря: - Н СНИСМ:водал1:1 ПИ НОНЛОКИЇ й ! ТОЇ морфології, ве! - Н 1 двалалоаМмлюючи і п ння рр ння ака екннкння і іхтараліленції стер; СКУ 1оопроюрми ри. ї : сни М МЕНІ її скали, т Н й й Її ДьезалеМньх. Н : зиетовиебйутилацетат і МВ З: Ов : х ! СНУ стечнренанолої:ї ПВ: кепспежен не : Й і -- Її частювосюртвюана. кписуалічни : метзиолітестуєв МІ НЕ і и мо жристалізма. : й : ПРОЗА ОЗИОчИ : в і 0ОрЯНеТЕвО МОСЛЯНН і мехтапелетиманечзах 11 ЇМ 10 дрохимуююи 0 аморфна Н 1 Й лю ЖКих) Н Ї фумарят ренннннянннтяннннттетттнннтнтннннння нн п на Н Й І МмОасІКОно МУЛ ИСТО. с. і 2 і час моцо Н А і По: паозалокювуха Н ! дулетметтттютютттттттттттнї Н і се мим Н ! метаноллолугз 11 у пннтннннтент остттктнттннн Я Ї слівксжоата терня 1. М : вакуумна! шен хевМоМт аморфна. ни : сепія морфоненії, : пк Н сушка | дюхотомннк ча Н і Пов ог МИ виді ни ми ув ще й і метаноллолуєв ЩА її 000 фщукде» а а ПВ т повинне внпарюватння: ЦІВ з швидке виварювання: ТО с: повільне охоладження сю: обвазвне охолодження
В. Оригінальний зразок
Фік. 7 (продовження) пен нн і Єіль/ Ле | Н : 1 безульчаї Н зразка 3 Ракхтинях Кобицоски с кностереженця Н АТ пе ин ПИ ННЯ Е Н зЯ З хек в-ва за . й сло пОоДеа, Ке Н ожила он ОВО донннннднннннн і ол КИ сяк З і і анетонсотольст і їв ТАТОПОНК Ке ї Н Н Її х Я пиендлиМлнОчО ї М Н нн по вн оно нан мин нн нн о нн нн нн і 1 о стиданезахнснтн 1 000ОНВ ВОВНИ у х і і і кн ії Бедихт Н здеелктв ОВ Не ОЯ , У і і пан нн нн нн нн нн нн і ТО сСНосСіхінаронавал МЕ 100 В | ДЕК КК» | я Н і сани і вва ВВ ! і МЕКк ц-бутилаетятії Н по ЕЕМУКОВИеа і . Е ен п оно чн: нини ни м зн Н і ацетон:в-бутилацетат ії | ПВ | ка і я Н Н Едизхалає онов но о з вно кі: ооо носооооорнввв И Н і В , 1 -- А г ! с Ав тиВ : Е ії оадсткаво склопелдіина 1 Н зоомеонмеютеяуто ро зеМЖЖМОММКУЄ о аморфна Н М | ї Н п пет 5 дкдкакаччючачча чан С Малжає | МУЗИ Жбутнлаєтатій 0089 і шин пи и п Н і ї зпернізанромйлиол я ОО ТІВ Ї ІК ВЕ і й ї нн и КК ЗДО ВЛ т повільце випарювання; ШО з півидке випарювацевие ЦО т повинне охолодження; ОС опйвальне вхолодження
В. Орнгнеломий зразок - Та шо д колу асв по в дещо щ - шо В во дощ оч шо : що В шОоде Ш ОК й Бод рення ш пе: хі ож ЩІ Іі пт ото Не В ЯН у ве І З га щ М "ех ї т «сто ВЕУ У в.ощо НН їх лето сок ШЕ ш БВ т Пи НН МИ З шощос їі і г що іБіскінкі в ро я Я ІЕРУфУ ре я ЕЛ 555 хі х й Б ПЕЧЕ Есе КУН ШИХ Щі У с ЕОЖ 5 р а В ши ЕМВ Дижжккдккижкікююююфкюююкфрююююй он БІ ШЕ ШЕ 15555 ЗЕ отож до Ж ГЕ їв рев ОК фін Б. Ох І о аа яра ж и НС ние ин ие ііі ві сен хх ЕІ ЕРДЯЕ св А Е Во а В ЕН Я 3 Е зшриі М д що ІЗ Орда Ко от- і ЕНН А РБЕБЕ я 1555 ПН ПИ ПИКА З З Я х в А до ВОМ ш В я Ж ШОЕ З що мо В В й шов В х в ха о бохо око г ші Й і щ ї х ї | і І!
йо. «ї :
Б. в м : Її « ил їх щ их ДЯ 5 Ж Ше с га я Ж ! СЛУ 5 т 3 т- ї х і що | ! ія ї ї ї ї х х і ша и ВОЛІ п І ії з - 15ІБІБІВІВЬ пОБОрр шо Р ш ББІБІРШРБІБІ іх 5. ЕЕ Б ІЕЕ підркіІкрк і оо Е - шШ ійрдіа інв СЕ Я й ЕЕ оЕя яв с ж ши І ли Я ние ЗБЕ з: Її ие ШАНЕ КечВ ЯК И е Н Са кі ї - 1вІБІВІ БІВ ВЕ ди сш ше ее не Не ШК в БР віщі А ВІВ ВВ 2 ві вВ'вІвідівівіаБ ах І шини ян В НН Ше Не хі в іншім ІВ жна ше ШЕ д ІшРЕ Мр ти ї З Ся дош М ї ї жо В люки фллилат ї ІЗ і х й . п а ж Я ПЕ КК а А хх ; фенфреннфеннренннннттннння й і : ЕМ ЕР от , о, 1515 РЕ ії « - БР нічні - п Я веу а В яекі хх ст іже сфе й ЩЕ ШК ор ууз тру -а : 123255 ї ч ї ї : кож г ж х ся і ї і ї ! ! ї -в ї ї щої ї ї 2: ї ї ЕЕ Ж ! і КЕ -- бю Кф шия чо и ші Ве цех я ери щ- : в хх Мене Ха фра щі : БИ КУ три жо фер: Ба з МУ ї |! :
5. | ! : І х ї ПАК внх ЗДИДАНННН АНАННщн ЗЩАНЕ ЩА ія ї - , р щ І - 1 С вро 1 : Е Во К- ї о щ- ее Я ва В Н - ! ї- ' то 1 ! З і де е ! Ф а тох є 5 і ; д те В Ж - о ні 5 Е В е до : ї- вт ! | КІ т ш щ г я в щ Ж
Ж т
2 се)
- і
-- Е уежзювхдєтюююєих 5 М уже яююююиьюьююяюююю Ж х пер д о)
; слетечутнттттттсю х
- ПО й щ в дя ; д Ск
-- т ж о Х щі жд
- Ні чи х 5 щі.
з КУ шо р а т
ВР 15 їх 2 ї- " ш й 17У т щ ше га г вра ЩЕ На в шо СЕ
РЕ Жоща ру т ех щ
Форм «Ж я ііі ер Я
ЕВ РК кара окре б оя Ех ря
ВР РЕ сн В овов рд і р чУ РО В:
вІБРсч я щі ві - КВ с візі че ев р В й
Івін Еш Б ШІ БРІВ Е й
Де Яни У Віші УКХ щи і ша чх а що Кір; я -
- 2 -к я ВІ д і 5 Сай г мч з Ж а щш -
: шини шеншь їз ще Ж щі року 2
Ме ря - х- а ско т о ка шо ої Ж з мали п «щЩ и ї В Й іс іі - ХВ с 5 р ри п йх мок ос -- Ф з 75 В « 2 п по ря ж 2 515 х в В вІШЕЯ - Щ щі щі 7 ш я Я рез до МО БЕ 56 ме Ж ря т М ж Вох щі я щ Ж зи я У що жо жо спнннн, З т й т не тато ХХ нннннфрнннннй НІ с ЖЕО МЕ щ їй в що А щ зу т в х о ї пол Мо д о - ви А - 5 ї З «В в'шо в'в
- я ї З З В ше Бош : ря ї ща р а Би ш З ду я ВОЮ ОТО ЕВ - РУ - 3 що т те за Гсеі З т. жд Зк я- я -х ех м а . їУу Х що - в шо х ! ї шк ее В я нка ОВО ж В 3 е Ж я ор ! щов б хпппппчтч кпк кяктянтт я шо тк ПЕ УК що шо 5 «нпллкннлкнляккнякю В 2 сен в о В шо
-Е шЕ с С В я їй х Ка « Кк Ще по ду щЬ
В. є Ф шо СВ -1 З З т ве 515 5 вр-іє щі - ях ія ху І й зе вро р зі В С ца Віші ті - віт мі ші х ря ішіас зі ні я т візі мів Май -щ- тт Блид кущі В оо мі зчекомілюх і; НЕ З ів И Ї-у -- нн щ щі ем кні і ВООЖО 2? БЕ же ШЕ ВИ КЕ ШУ - щіЗзрщш чері Б Ж рі дІаАБЕВ 3 ве ї -в в ше шів Ек тв и: Вт гу Н оо-, що ли Фо ос е ще шо я 888 т що т кі щі; - щ-і Е ро іш ів іСІРч щ Р В ші т ні ж т шіще ще 7 ово що ом ошО В ш вче що дк - до, шо що е І: хо шов ВУ В ш ЩО ЩО 2 в ще ш В що З чо У шо Моє не еВ А й ВЕ ЕЕ - що то З що вок щошщном нин пошко до
КО : Й 5. і : : : пд Н Н : НОЯ Н : : : й ЕЕ Н ї У ее НОЯ Н : : : : Ж Б Н : : ЕМ її Н : : : : Б ік. Н Н : 21 і шт БАЧ Н : : ПЕТ 220 ОА Н ву ї «М МЕХАНІКИ ІА РОС, х где ЗЕ ННЯ Вр ИН А ЛИШ. е шя па НН МЕМ ПМД ПВ Н ОКУ От ЖНИ Й З Н БК п «Ту Н РИМ Не Н о 1: : й Вчи Н -й й пи Н З Е : а Н ре їй же Н З Я : : ПМ. і х Е : пхщі Н В ! Й й Б Н т : п. 1 ЩщОУ и ТА Н Е : : НЯ і т і пог Н В Н : Б Н «В Я ИЙ ! і й ОК. ! п і : : УМцо:! ї : ОпЕвКі ши ше Ї ж ше нин нин нн с п С п М ар
Фе. із і Н і ! и і Н ї Н : ! НЯ ! Н і І Н ї Н 1: Н : і ій :і 1 і
1. ві и :
І. НН Н .
о. НІ : Я ! Я ! ті і й й : Рі у І р 5 НИ 1 ТК 3 НН - Я Е Н НЯ : ї ІЙ ; НЯ Е і ; а ТЕ Е Тр; хх і чн. нн 14 ча 1 З 5 4 в Од.
Фіг, та : ІН ї : 11 : Н : : -ї Н : Н 1 : Н : Н «Ж Н : Я . КЕН : : : ММК ТЕМІ м х : Н ШКО МД: Н : ! КЗ ПУ. Н : Н Я що Н : Н іі НК Я : : Н ОХ Нечя : МЕ Н Н Н БаЯ ши Женя і де ом: : щх ПИЖХ,. Н ма ни ее Я ' Н : ННІ щи : ВН : : НШУНУ ли ОВ. М : НЕ у ПЕ ї 17 ЖЖ. : ії ТЕ Н 1: І ! ЩЕ Е м Не Не Н т НЯ . . Б Н п к Я Н в б : - Баш І Е бе Е т : : : я Н -ш Н Й Й Ме і ї Н : хек Н т : А І в : Пк. : щ : : : . НЕБУ Н -Е Я НБЕСНН Н щ : : : КУН Н і пожв к Н : : ЕК Н є и Н - Н :
Н . : : : Н : : : Н : : Н : : : : : Н Н : : Н Н Н Н : : Н : Н - . : Н : Н Н : Н : : Н : Н . . . Н : : Н : Н Н Н : : ї Н Н Я : : : Н : 5 та 15 то 25 Зо ЕІ за дет в.аттрад) НН : 210 Х :
пі. Н 1:10 : НЕК : нм нн и НЕ Н У : У рої ї т 155 1 НН : 14 їі? Но В й а 2 Я Мм.д.
Й «Му її : І : і Е я : - : -н : КОЗУ : УА Її : -й : : - Е БУ : Ху Ї : хі : й : ДЕ пкнкжкжЖКА КК, У Я : зу І Н в : в НУ Н Я пек ї : ТИХ, ї : МЕ З : шої : дей : МУКИ ї : "ві : У : : ІЗ : ІЗ : ї : І : «ет : Зі : «ки ї : К : ли? ї : НН во На Ко озон о р и В їОшгі ех Її ПН Тр: Ж щої т Мк щі. ї й ОБ Гн тої І Комі х п: ЕН Мо: МР: МО Іі ЖОВ: род: Бост: хх рН Х ті Ко: Кон їх Н х : : : : ї : КІ : гу : КЕ : Хм : М : М : Ж Е ее : ех ї : 2 ї : - дних ІЗ : ня т : б, 5 В : ві У» : вилити її : во ОО : кої в і : її : ШЕ КО: й : КІ : М : КУ : ЕЕ: ї : ча ї : . каре вве кн ов мокро ов в зо во вк ов дов о оо з ов коро ух оон онко оо ко ва ворон в осв ве : ги і «хе і «3 ху ро « « Я «3 ех : а чі хо Я ч « «а с та -- ж хо : НІ :
ія х : ТЕ : : Я : : : о» 12 НІ : : й ТЕ ИН Я І пет я Кн а іх ве п В НКУ : ШК ї в : ів ни : т я : Я І ня : ї - 112 ЕХ є ке -К т « мех ще й ІВ ке Не і і Брат пок хз Яр Бр щу НЕ нн нн ОН ВВ Ні їх 7 З 15 шия 5 ОЕМ тк І ТЕ ї НЯ ї- ії х я пи 1: . ППП 3 й пиши МС ЯНЕЗ а г» Н
«Фіг. 18 : і і ; І: г : НК й ; й І: не и ЧИН вн і нн НААН у І ІК її п і ВОНА мин НЕНЬ НА НН КК НАННЯ ни на п в в и ех хз 2.8 1.8 х.5 ря 1-2 3.9 ЕС мод
«ріг. 19 : : І й : : і : Н : : : Н ї ї : : Н Н ми . . : чи ун. монотонно : : нн Ем х . . : Н ї ї ГИ : : | ХЕ Б. : : : | Я : : : Н і КУ по: З : Н п НН . : : : п НЕ ш . : : ї Я : Ку о : й : : ! і | спини: ИН Ще : : ї т. : - її : ї по Ці ї . : : ї Е її їх ЕНН ., СУ : . Н ї Е и ЕНН НЯ Ше иймі со ду : І Б вої. 008.4 МОЯ ее р ня СА Ід. ду КК пл ів - НІМ ох у Дік ДУЙ о Кх М: я Со ПОВ: вишаРьи ла Ох іі Да М 5 СЖши пол Їй ом КЕ МІК ПЕТ ж ЕТ ТОЖ НЯ БУ : ка УНН пд ЖК ПІК, ЕМВ Ще Ту о х х ОП шк КК ОІВ в ВЕ В М в ї; М З КВН У они МЕНА хм Ж Х ї ЕЕ НЕ: ШИН НН Кк : : ш -ї й ї БО вт сх 3 Н й й
- г. пох ДЕН: АК 18: Хо ді : Я фу. НЯ НИ, І АЛЛО І.О ді КОН їх : Но коп дл АЛІ ДЯ ІВ КА пе В о Я д НОЯ ож ВК МК В, І, кА ках СУ У ОДИН ННЯ: КА ЖЕК о А, я Жан п ОК Я М ЛЕМ ТК ІМК Я Уч ЗО МК х б Й ї 7 Ох Х. Ко Ж.О. Ме КсЯ . й й ВЗ де дно р КН УЗ п: ху ни 2 З 05 НЕ ві ВВ. І, З З ІЕШИИК їх: пу Я п. ваші ІБ пеії В.І ОО Ма я т БУЯ ОХ х ЯК Ве НК І КИ під лвК М І ся ай СНИ НС жа ВЕ пи ПЕ МИ Я Гу ВК : б поту да ЛІЦ РМ Й (т йо ! ше Мб БУКА ОТ ЦИ І! : наше Р ІЕЕ Її: СНИ . : ; Е.А у, ОДНЕ ШЕ ДН рі: Н і: і ДЕД ШНЕННН НН Е.В о: їх : 1 і Па, ТАК ВЕЖ Аа В: ші чи й лу ма БК, Н м: К й й Мету КУ Мох і ЗК : КОТЯХ а ще ОКХ Не тк ях У : нн С ЕМВ ОМ Н пава ан ааваареаааанннннитинвти т Те за 35 чо і к 1 її за 2 їй пня в.вігрид)
іо) нову НУ КЗ ся к х М х 2 т в Й я , у Мк, є в Ка З я - я Ко н -х К рі КК че їх У ку, "й шо з ж ск. БІ й задня МТ ЕТ ІТІ Ме еотточьння хх. Ше Ак ій й н кит ее вай сі о Мк у я Й не КУ як ; р Мч: точ їй ша є ще є Я М шко Х Х ше го І Б що о. НУ осн . я АК х ра КУ и току т щ Обае Хе щ д. ЩЕ: Су Не Й Ух М та Я сало и ш р ро Ж нанниттдухх З Ух -- су дея щі дет З Ка МН: кт я Ка МАК -х ще м а їх хх ху є « еКеК7 ї Я Ї 5 У і Я і : У Н Н ЗУ і ння сит ра г Дану в ук ук рей Ф і сія м х ЕК ш ЕН з жд Ши - З ЩІ п БУ БУ т ЩІ г - їй а (А жо ПИчЧОКНО, ді фік. 21 ЩЕ | : 4 і2 1 гЯ й А ї ОМ д.
ЕЕ. тот Еш рр НН НН рі НН І КЕ а Рі Рі ГРІ сек зано мова г 5 ід Рі НЕ УНН рі Рі р Ті НК НК НН Не їїік р 2 гі НУ рі НУ їі Кз НЕ тв! НИ шен, БК ин ТУКА УУ А КУА Н М З вра В ЕЕ: рі рі Брі ті рі кі НЕ рр г, р" нн НЕ НИ НУ і НН -В Н Н їх ря НН Не ше Ба НЕ - і Н Е Її « Ж 15 Ж ЗЕ 5 Ф сш Ж кі й НЕ ге НЕ.
Не г; р" а НУ БР а : НЕЕШНИЙ їх ВН Рі як й 9 НУ
ГЕ. і Е їз У т х о я їх ря я КТежасі НЕ ре БЕ ШОК МКК и ю соснова в М і, зей Кі ша ше р І Я РЕ) і й Її Бе : ТЕ 4 Н ї НЯ Н - ве ТИ ЧЕН р де і НЕ тов, Кз. З НЕ ГЕві РЕ В
Н .
в. кі режі СН як х їх ; Би м ИН регі ЕЕ НЯ НЕ НЯ їх га на З і БЕ: НЕ ЯВаННКЗ Ох їх - й ЕІ ном и х Н з рЕві і ща 1 Н Кох Геї Ж хх і т. ш Ех х тні я р с кКді ж БЕ ш їх і о НЕ і- З жів я БЕ тут т тежююнюжуєттнки кві ней ЗЕ ч- НЕ Н - З ' і с ЕВ ДИ ш | ІЗ жк НЕ а р т ря ТЕ і ТА її РЕ Ех і Ті НЕ Н і гі З Ежкі фати ЗЕ Н зна. ЕЕ м ро -е Н судоми нининвинининикисивининсиним. «пюмоєююююю Н Н ц УК А КК оо их іх ФА Мем КМ ЕІ оо КК, Км Н щЯ каре у ЕР ще У Ні : печу Н НУ : -к М ті «оті «Кі ПЕ Я вт ії 4 А, і мі З рі АХ Ек ви КК в мам ПОН о ИН ще --Х М шини пиннниннниципиниипинии КО Е НВ ОН В о МАМА Тех ВУЖ ен НИМИДНН вим а ва а в т ї-і фУгх. фони ВЕ КК х РІКИ Кук Ж, як ї Н тен, шен ІН М в о оо нн жі Зах вве с Осо ооо ЦИ Ко ож зе ее куМ М ох мк німі нн а; в ие ї НУ чиє й рр хара й з же й БК хи ріг. зак НЯ і Сак Гі оБутаннА ше вій п Мово ово ко У - т Он в в о А НИ НК мн М : ; й АК Н сен її : Еш 4 1 її» Без ЕІ їі Н укр Тег ек й ШИ ВИНИ ни ни ИН оп соспспсосхвИ ї їх т Кк осо о мі і веди ЕЕ х вк ро. Яга Кі шт М В ОН : Геї КК КК КК Алл пнллтттттти ї Фік о Ду, Ден т Канни мії що б ух 5 жу їх їх ЕЕ - їх Н - шНе - 1 і с і: . ЕЕ 5 її її о Ті фути Й : І : ї ї : : ї ї . : : Пт І ї 1 у н й 3 ї : нн, : й ї мм : й й ії : хо. Й : й і і : г : : і ; : ! ; Ко : Й ше ЕЕ ! ! х ЗУ 5 т Н Е і І т В Що : Й ня Е : В По: помоомооття : ; І ВЕУ Ну пононінон : : З : й ВО Осн : Ї 3 Н : ш02-К. ру і: і Е нон я ВЕН г : і ше ння і: 1 Ех о. і: її і ЕМ п що. КАШН : ; й Й З 5. НЕ В ві Ід - і ї 1: Морі РА, ІЙ Й. Н ї : 1, ВИ ПК. ПЕ Ку Ж в ї т, ЕНН: Пе ЕД ль Нау ду З СУЩЕ ЯН ПЕКИ Ви ща ЕІ ці ЗУ У я х й ПВ ПАК Дема ПЕЧУТЬ ШИН д ша, БА у і и А виз В й ання щ : М І ОК АННИ: ДТ : пот х 5 НКИ ут НК ЕН пох : то х пе уКХ і с х. Й 7 ї ря нон й Ї ш Н ! ОКО НАЩО : : ка ї - най нн ки 15: Й : Е оно. й ЗШ Не че : й ода сх ЕН НЕЯШНИ . : Я 2 : га Пи 18. пі Й 7 Її : М їх . Мп. її : : ; і . : Ї ОМ НЕНШШНН ТК у Ч ч ше : ; їх ропи при УЛ ої ох КО -е ; ї Й і х ми :2:5 її І хх В є І : Н й. 1 ов: НЕ их пі ВК. Я їх А ДН пох МК до ху: НЕО ш : З ЩЕ Я ЕНН Іі А Я мя БУ
Н 5. ОКО ло КЕН НН їх й Н НН НАД: НИАНННЕЕ Ли тУ т І ї З Ох ПЕЖІВІІТЮТх ши : х ни ее я : Н Н що пою Тих пннінннння Зі зо З : помаанннння пе й Є пня ще дет ЗЕ НИ Н Мен т 15 о-- 3 г селення зВггеді і ння а: звсграді З ння сад вопу ка з х їз З х - КУ х - В - ох У БУ ся їх - хх п МК НК ДК А А А А ПД А А ПА Н й хх : Й і у : - ся Я Н о Е Н й й : з я Н зм ра ЕЕ ї; де т КІ Ф У є х ра ; і: в х ж ся ех х т ж Я М т У х ра І х Ка Ну чай і Я У ра м яхту, х ПН КВ - Ук З ка К ш у ій пе Фк но ско «и
Ж. ї - У) ХИТ Її Гоше ше і я ро че і У 5
Ж. і 5 я. і в Н фотку х А Н А шина мот Н ц зддженяннь у Й Н ї ще х 1; Н слнже р ЛКеК : ще я Н Н як Н с ! й Кк у м КЕ гЗ У х І Ух - зх Кая су ко Н Ж хх : Ба і . ми : сих і Ї КУ Ї ОО ІЗ МАХ : ши і гук : Б | : "я ро ще я даю дну р. с ФУ ху її з ЕсЯ с Е - хх -ї с їх - г са ї В - гй же за Тх їх Ж в СЛАБО ат ниНОИа | Е ЯН
Спд вар, СІ фун панда АААН А АННА АЛАНА А АННА АННА АННА АННА НААН А тА Антени 3 К "У Н ї і Я і й І Кк і й і с і Я ой Н Ко й х СК Е й і є Е й ра Н ве ї і! най ж і Ки : р ; ой їх хе 53 : -7 я Б і и КЗ ей К і ж на Й і х т й і В Ка А Е как й й Ї ме й «аг і вм Ї» що З ой і жо: жк са Е ЖК: ІБ С-я : чем гово й і Ті КОочу Я щ і ! Роде ге і Н НЕК й і Ж о их ш У ті І: БЕТА х Я і БЕН Ор й ї 53 ПН Ж Н от Н жи М і Утщі щі Н я Як ро жж; ді НЕ Ж і ОЗ ЧЕ КЗ 25. і ФМ ТК ю і з Б і ХУ і і Н Н Н Н і і Н 1 Я Н і і Н - і і Н Н і і і 2 м Н і Н і р : з 2 сн ася кит внанни мни зна пали мн кв нання ник сна нн м панна КО щ а Ко її гу ГУ га «з у й х З І З КУ к й Кх 2 М Х г; х В е биді яшон инНосив |,
: «ення рення поте денне ант птн чпртн чорт ї : 15
Н у : х Є з, ГУ ї те ї ї
Н б м, Н
ІЗ Зх ч. к
Н х і
Ї З х ; Н
: з у, « :
і 5, є М НК і Ж х. хх НЕ
Н КЕ - щі І:
і 2 Би ШИ:
Н ї ух ТТ удкдккю :
Н К їх Н і х ке !
і х ій Я
Н 5 І ї р й Н
Ї ї х Ї м
Н Н х Х Не і к І 5 Е
Н дуаннАААК ї 5 Н ї і М.Х Її
Е т о ї ї Б Н м Я ;
ї т, 7 м ї
Н я і ІЧ іх і х : і к ія КІ ее ьо
Ї і: що ї зі ї х х ї -о
Н 3 З Н п
Н х і ї ї і ! М її а
; КЕ ме - Н Ей
: ї 5 в ш
І хх Н ем ву ох їш Ж
Н и Ода ТИ хх ї У а мА сек у м жи
Ї дян стек Бо дутяня шин Н ї К Ж І ; ; і ї с й ї ї ї Н
Н ї В ї і і : Бех
Н і : У ї : : ж
Н і У :
і Н : !
Н Н : ї
Н ї З Е і Н у і ї Н ї ї
Н Н ? ІЗ
: :
І ЕЇ Н Це ї З Н М і ; і З
Н і я Н ї х х Н ї й х Н і го Ко ?
ї Н ї Н
:
ї У Фо аю нн нин нн шо нн и СУ І Бу КН їй У «х чо м ж Ук зо 5 ХУ в КУ з Ши я З - : 5 - «А а | я
(дя) зов МиЖОоКИО ТТ, щі ск вини и У ке ї пз З ; РИ ШІ ЩІ хх вх і ВОЕ; гаку ---к ЕЕ, - : раді т ЕД ОЗ с а щі ; й х З : І щі я 5 ше й ШІ: і І | хі ї : і і- ф щ ц А і ши и ше НО. к ш з й: ї і М : й м т ї і Е і і Й | х Н і пстфннж ян жж жерти Й і і шк м зни ин нх з і Н Ї ТЕГ : Ф К і їх ши шк фонннннннні і що. нини. ш я 1 і жо ЩІ Е 1 і ч З е Шк: Х, ї : і рова щі х В : : ! з ; БУ ! 2 А Н І З ї Н У х | | і Е Н їх З | | Й ше Ши Ше шо - : - У ння п'я'ятя; х і " переннняннннй ШІ і що ї ;
р. ж. що шк че Н Н : ій Н Н ! МА хх Ї ; І ї і р З Н І : ж ше ше ре Ше че . : З хі і і шк : чи ї зх ши ше ЩІ Н : й рення є 1 х 1 : : Н ї ро я ШІ ше Ф у Е Н уж і х дефжжжю я : і з ї З В в - У - «Ф ї : ї я су М х їх КЗ їй Я Ж Н ї Я : ї їх є І ш - а - «3 я я єю Б З . и те оо 2 с «5 (ин ох я НІХ ою) В | шк
Фіг? ; Міаса ха Темпх зразка ВІ зразка Чно хе Маса ме в й й й щі й зміджя ци то Вл з ОХ ОХ чат зв ав ЗЛІТ ка а ЗО за «М кажи 58 55 аа лай 5 Я тв аа «ВЛ Ми за в237 852 «оо зда 4485 тов 57 по Та ОА іще я з НЕ РАВ ад ВЕС а ЕК 23 У4В7 аа 5335 Ул пад ТНБ аеЗ по жа вада
ФО. СОН Бе го 87 аа ЗА пдв ЯК та з БУКНУ З 853 щи Іва 53 пн аа Зк юа ав «ВО БД ЗаяЗ ма 887 ЯКБИ Ка Од ЗИ Бе «За жа дз 15 458 Ян МУЖА ЗА у 4 : ІЗ Ух Тл х ї ї Н З і НН х І ї ї Гн ож х ї , : 1: Н ро ї ї ї : тіж : Е 1 Н ї ї М сі. Н ї І і ЕЕ щі Н і Н ї ІЗ ві щ і Н 1 Н ї І Ві аші і Н х Її і і рішаі і : Н : Н Н Трах ї їжа Н : ї І 5195 т «ех : І ІЗ З гос о ї АЙ ї У У чиї ї ії Н зі Ко А ї : Н Тік ро іа Н Н НЕ : їі ї - : ї Н Н НЯ : Кк. Н ши ши ШЕ. Я я: ШИ Н і і Н «7 Н ши ши ЕЕ ШЕ ШЕ З ШИ ї ї і 7 ї 1 ка ї І Н і ТОМ Н РОК : Н : Н і Н і 5 : В ши званих ин знан я Н ЕЕ я ї ї ї і З ї «1 ї ї ї і з рам Н Н ії І з Н ї ї і Н ! х Н ї Н Н і ! » і : і ї Є х с 1 й. Ух і ї 1 з Н ї ії ї І І - Н ї І ії і 1 - Н і з Її і і й Н її ощ 1 Н Н Її ї 7 ії ех ї У ї ї Том Н Я ї У і х х х лллялфрллллляяяя риття а Ма ВИНИ ЗИ СИХ контр шк ї З 3 НЯ і І ї і Н ї ж ШЕ и ще ГЕ: Н У і М З Н : і І і кі і ! і ї і і і і Н Н як і | і ї Н Б | і Н і « Н : тд в ії і і Її ех 1 Н У І ІЗ ІЗ Не ї с гавасе ав х т х т ї ТО х 7 й Н ї 1 « ї Н х Є ( Ме Ж » ї Н і і НУ Н Н ї Н у і : 1 Н й і : З Н Н І І ої Н і : ї Н я і Н 1 Пе і і Е І тей 3 і З : КО з ! : У ї Ма з Кох 1 ї ї К З і рос ї І ї іч і : - ї І Н НВ НИК і Н і х І ї : а ОБ ї Н і Н ї Її А І Н і гу і Н Н ї ї 3 де і Н Її і : 3 те ї ї А Н Е мі і і і ї і кі ко ї І Її 3 З Н Зх пеню а ння нн мон нення зання чини ее д їх Я Н Н Ї ПЕ і Н Н 1 ТК Н і і 3 Н ч ї і ї ІЗ ї Н з ї ї ї Н ї і ке Я Ї ії Н З Н У ї І Н Н 3 Н я: Н ї : і : і і Н Н : З хі ї Н : Н і і З х і : Н «ТУ х х 1 х НЕ хі Н Н і Н НУ і : ї ї ї ї Н ії вБіІі ї і х і і їі Н ШЕ і і ЕЕ Н Н і Н МЕЧ ї їх Кк і х У ї і і Н 3 у А і : Го і Н і і ще. Н ї ІЗ 1 і До: І Н Н Н ік Н шви о пи в оежккносня пен рохжккююкфюхжюкчккфоюкюккнк Є де сих де де у їх г - ВЕ В в ж ше ше ше ши ше нн ВН СУ її з . " ); З З х З т го ре М ї г Я й : З Я шк що в ще К с ті : се з єс - Гу ка «Ок хх У КІ Кк ту ку « І п но " Пн; по) рову щ- Н й
Фіг. 29 З : : : Н Н Й Й й : й : й Я ї Н . : : ен ! і : :
1. : ї Н Її І і т і : | : Н ії х : Н - Н К, І : і ! : : й Я : : о: ї Н БЕ ! : і Н ІМК : : Ії Н Ж: Ії і : НУ В : : й : В ЕН : З и : : Н Не Но ї сх и по ВМО ЕЕ. Я НУ й : : ВН УНН Бо ВО і і ШЕ | я ще. КУ БОЛЖК : ї Й АВ й І х ОБ ! по! ЕЕ : З ! ЩЕ є НИ: МО ХХ Н : : - : ЕЕ 5 : 1: ОХ ши ї й ши шин ши ше ; Ь : : ТЕО НЕ; НН НЕ ЧЕ А й : : а : СОЯ ПЕ ЩЕ ЗЕ Б ща Ї «Ж д і . Не 1 т «й МБУуд й жі: НЕ: :К. ; : ї Ш : Н цу І й ЯКІ ПВ з 15 З х оОТя : У нк пом М 1 СЯ І Не м Ме ЩІ ОЗу а ІМИІ: ГІВ ІК Ох МН А, в : : НЕ КІ. ЖЕ: г ІОВ г Б з ЩЕ; с : ! МЕД Я В ВОІВ, ва В р : : : ЗУ НК ЯК СКХ ЗОН ЗИ ї Я ЗК ННН З СУ АВМ М і Ех а НАЙ й ке с : й : 1; З ТНК НМ ВН НВ В В В Я В У ЗВ 3 : Н І: ВІТ ПІ Її 7 : З : Н : . ї 1 :: 3 хом й ї : : 1 їх: р. НН и . ї Й : ї : ц : Си ИН УНН ї їх по. НЯ г. Н т Й щі 1 шк фев ІІ п кові : ІН : Но . тої п АФ КІ: НЕННЯ КА г: Н 1 пі: ПВІФ ПОЗИ ЩІ, 515 0 25 ЖИ 0 НЯ і ж. х МО хи АЩІ:Ї З ІОН вот Хо ОЕ Н Н Ж ї : 3: цс: ші добро. НІ Ма ЕТ. і РОГИ і. БЕ ВІКІ ЕІ ші То Е ОТ ОХ ЖК с А Н МВ НИ п В М В У і ; ! їв Н мк х нн нн о Н Ук нн чинне ччн нн кжтютюттхтннння - - - ї ї НУ хг 25 Зоо о В Хоняяянннєєююиня жжкнюєннюих пжжжюння чкккки -жж «пкання Зеунутий б. хв тТад)
фл - -к - нн ВА - 2 Що. Н Е : : ! : і : . . : : ї ї : : : ' : Н Що Н Н : : : . І ї й Й й ї Х : ІЗ їх : : :ї І ї : І Н Н ! й : і : Н : і : ї : : Ще : ; : : Що : ї : : НЕ: : Н : : і ї ех У І І І : і ї й :
і. ї ї й г : : ! Н Н ї й її. . і х Н ї : ЕМ : і ї ї Ї ІЗ г: х : НЯ х І І пе Н ї ї й й х ! З : : : ї : Но Ж Н Х . ї хі ї г : ї : НУ г : х ї : М : КЕ . ї . і ЕІ Н Е Е й І м ї Кк 3 . ї : і до! ї КО ЕЙ : і щоав Я : : Н : йо : ї НЕ СК НИМ Н й : Н Н т г и Я : й Н і й "дд Н Б Її й В : Н З Її НН х НУ ї : : кЕ- Н НІ : У : ЦІ: : І :ї Н й й ЕН Й ПІ Й 1:14 : ї щН Кк па й п : : Ї гі НІ й НЯ ті і і Ян ц : І : хі. : Н Я ; НЯ ; КН : кі БО й : Н нин ШИ ОО : А НЕ а КЕ Я. Мио ІЗ : її к г МО:ІТУ Ілх41 ЖІ « У :ї ї ї Ії х НЯ : ПЛОВ БЕТА ЇХ: і ЗЕШИ : : ГАЙ її кА ТЕХ ЖЕНА АЯ І Я ді ії РО Вед УТ июня Хо КТ КО ОК Кк Хей ек ї ДОБ ТТ МУ злих щи т тий ку зд зу злуку ния МОМОТ В УТ ТК т ' і Н : М спжннінююннтуттенннн інею : : : : і метбненння Є зе - па а на ї С . т5 р з хв і Н З 10 ГЕ ХО я Зо їх зі а-вирад)
: і Е : : : ї Я : : НЯ : ! ї : . ї ї й й : : ї : : : ї : . : 1 : : нк І НК І Й : Н : : : Й Б Е: ї : : : ше пиши ше Ше Н : : 3 І Щщ І й : х Ех о ї Я є . Н : : «З КНУ Е : : : х у Я ЧЕ : : Й Н 41 . 5 і: ЕЕ : и ен ; У її : : : І : пса ее Соч А ие: : : : ї Н : : ї ОМА Сх м и : ї : ї Х хі ПЕ ї ї у м ни : Е Н х АТБ : хх : : й й ї : : 1 ї ТВ. 1 і: : жу Н : ї ї І їх 1 її Я : і З З ТЕЖ: ІК КЗ Н : : с: ШИ и Еш І ШЕ. : й : 35 ІК і ЖЕ КЕ хо н : : : КУ і й ї НК НЕ Ж ІК ТУ: ЗК: з І я ін х КЗ Ж Я ка т і: . ВШ ШІ. нн Ей ий ШАНИ ! Н Ка КК ЖЕ: ЧУ хх хх хі ї Е - х : К М Н Ь; УКВ ТЛІ. х в У ше : ї : : ПІ. МІ ща Хі уд : З х А я БЕ 0 МОВ ПОЗ В Ко т а з ВИ ІВ БІ КГ КК ИН З - ах :ізе ІОННІ КВ т ТЕР 1 ВО рОжЖІ КВ ВАК ТК ЗУ 05 що: НІЖОК ї БІ ря ТК З ху їй ях ОІВ ВОВКИ І ЖЕЕ ЖІ у. К.І МОІБфОКБЖІВКЗ КУ - ОКХ ЗТ ГГ ех ОТРЕВКК ЕМ у М МАСАХ м ВО : хх 5 ІТК т: І Ек й й КЗ -- НН Е 1 її 2:35 В А ОМ -к Б Е Ух ж ще ХЕ ах п ОК. 2 - мк ЕКО г КУ 5.5 (ОЕМ ООКЕ ЛЕВ 1 : « В ЧИН ЦЕ МО: І13КХ МЕ ПІК. Я і : ї РА ЖІ: - ЕЕ ЗІ х р; Си о КИиЖУЕ их: : т : Н СОКІВ: СІЖ ВІ ВЕ УВК З КЕН : : ІОН. ОО, Бе ШЕ ЕВ КО Ми ОБ о: ши на ее ши Б ЕК Н ЩА ІДЕ, я Ж Х ї т х АК КОКО КВ Н : Рв Я я Е Х ТЕХ Б. т КК а. Ї Н : Я З 5 ЕК НИ х Ка ТЕ МН ще Ту ї ї Ії ГК Х Е ща. я БЕЗ ЗК ї : З Ух їх Я У/КХ ЇЖІ ї : ГО ЯК : Ж А Н : : Я : : й : : ї . гі Н ї є 4 ш с У пеннннннннннннння ів 15 Ь 5 а ще й т зн ши В шо Ж Й ЗО «5 зараза нини плянтня в. гатградо соді шок З - с І З с 7 ще КЗ ж зо і 00 дк б ііі дігіі1ніії:хі11. Кіті: пі1111х111114, реле і ї НК ! ї і Н 3 й : і : ра і ' х - ; ! х Кай Н : 3 ща у і ; й а Н Її ет Не : х дк Н Н с ся : А ; ! сет в Я ! дент й у і ра Ще Я Н Шк яки у Н и мой Кох Н ж есе ї і кої Е і ЖХ а і і ях Ма Н ях Я з ЕОМ. ! 7 КЗ вх т Я Ї Н БУ Я Н М Н їх Н Н - Н х і Н Б Я - Н ; -- Е па Н : я ! й ще одне В Н Н «М . х 1 ря Н ї ХХШУМТУМИХ ху на мо Н і й СУ КУ : і хай З і Гн : Н ХМК кнкюннях Ж ї ! Н ХЕДОКККю ну, Мі : Н миша ВИ ія Н Н ен : НЕ дення Н Н Н хх Н : - 143 і ч. ве ВОК ео Хеутмлкк : : ЗУ де : І НЕ т В Н Н ТО Май : і Тож а - М Н ж ге Н т ! ; і ь Я «и о 7 зерня ЖИ в ху хо х а м хо а ї І «ех щу - " х Ка а сІДЖЮ ЖК НУЖНЯЛІВ І х пе
Фіг, 33 В г: у Н и. у і ННЯ З і
М. у ; і 125 Її х і пої у пої х Н Зі ї НН ї її ї у Бі : ! і у Е Ні ї Н що : І І ; | ї і ; у ; В Не і ї ; ї : : у у й 3 хх : Я Я, пі НКУ Й : і і : ї ЕВ НЯ ЕНН і І; НК : ЕК М НЕ ШІ що. НКУ Н ІМК НА ЩІ Ой НАЩЕН і нн нн пн нн р з - М. за 13 зо й І СЯ рі Ом,
фіг. За і Н ї Н : Її : Н : і у : і : і Н : ї І ї 1 : 1 ї ї ІЗ і : : ї ї 1 Н 1 ї їх ї І : 1 : Н : і : І ї 1 Н 1 ї Е х 1 ї І ї 1 ї й ї 1 ї й ї ї ї Ге х хх и : и Н У т Н и : Не 1ї : Н Н Ну НЕ ! І. :
1. її Н ї Н М: її : КУ : НЯ НЕ : ї : НН В : ї : НЯ ії : ї : НА НЕ Н ї : НЕ ї : ї : НН 1 : ї : Но, її : ї : ГЕ НЕ НН : В Н НН НН : х : пої Ії : й : пої и : ї : п: її Н п Н ГУ її Н К Н НЕеШ п : В : Еш НН : З : Еш 1 : З : НЕ Не : з : НАШ: НЕ ї Е : НН БЕ Я ІН Н М : Е : НН І : В : НН 1 : з : НЕ ЕЕ : Е : р 1 : : : ї М : К Н і НН : В : У її Н К : НЕ 1 : К : НН : З : НІ т : Е : У НУ і : К : ЗІ Не Н : : ЧУ 11 і : : ЩІ г Н Н Н
Я. ЕВ Н ИН Я ї ї ОБР Я ЕІ х БОР Я І У т: З НІ 3 і : шк Я Не 1: НИ КІ : і де рі МЕ ї ПК ЧА Я ЕЕ здій ши ВАНЯ ЗАКО р , с З в ї М її 12 т В 5 п х З мА й 5 шо я я -й ! -вки Ж і Ка !
Б. с: а ЕЕ х і ре от» вой го щік Е в . СЯ - ее же Ей «М и В Розв
Ж. - -Жк Зк ОК дент й І «їх і ю Си КЗ о Сак
Ж і Сама як. ЩЕ , що З ро х я і Ей й УЖ дттннннннн сх й в - ш Б (зяплї в: нс Й вх. хх ее сект Й яке" В ще ко в й ї й Ме Б т. с | У й пис | яку и ее І аа ОДН ри он по вв о пе он ний по хів по пвн пи ря пон пе пон шо піни пон пи пінні же в годні ї щ Н Ще 2 У Н я ! Бо повій к т КУх ій Н раки хе Н С чт ТУ ! дике Ше З і с. ! В амцій Шк соя я : о ГУ ее Н аку з ! В здався У і покттотттктіножіжсжя осо ох чех У Шренсн ПИШИ т - Н 2 "з аканжжживя ях тя КЕ Н ото лтили кою я птн ВК ііі срех Н росооввввв вв АНА чи Н НК рожеву, ща і с ПИоосссссхеся попав нині ВИ В ОН сп й Н стткститх й с ! не і с сво Н Повій. : ПОП іно вв нн ню я Н пилом м ДТ Н - Щі і леж кдд Н ве с і ях пс ооо овацНЙ й
Н ш.- ПОЛ ОДИЛДадай аа вала зе -ї од Бо і пов і с і Н лллля і пт ттжжи ок. ; вс СВЙ т ення ! А ссессссовнвові т т щ КЗ " В «Фо В З з де В (днк)
Ей ий І шк | їх ї: - й Я з - в а я ! с -- се Зо й я я що Й й я й й З шен с
Б (опо
Ї й сднннннннн КЗ Н к Пк і -5 Н -Пї х Ї Н ЗА Н їй З: Н по дан Її ! т СЗМИН
Н т. Н ке сш ' Ж ! шен КГ Н ПЛХХ х і Н о тої Н з: ї М я КК Е і асо ! Н дней - і се Н Н о осіння Н ск Н Н ем УЗ Кн Н з і Н и ! Н сс ; Н ІВ . Н к ! т ни Ї Н я ВВ і Н паля Я
Н з. Н Н ай ! Н пили СИ ІЗ Н і ие г Н питних ! х сх зх і ш-Х З Н М схов і : сн Й і Н : сх не Н Н ОДА сов Н 7 Н дек кекси о Н ре осо Мен. х Гаї ' по ух ХК : го Н к і «М КО Н й пу | «З Н шо 7 іш ЖЕ і ; 5 Н МО сх Тв Фк Н нин ЖК ї і о Н Н с я і Н Мас не ї Н сосни нах ! Н з о : Н но і Н і ! зо песесни їх Н - сснЕЯ мех Н не Ох ! Н соль Й ї Н по Мн Ї Н с і і стос Е Н я сх Н Н Ом Н До тлня Н Н й . Н мет сов ! Шк ВВ і Н ра |! Н гу пи - їз Н ПВХ АИИКІ: тн НЕ Н пол кое са ! хе Н Ес ай Н і о ВІ ! Н тетжклки зі сни ї Н ад ! Н « Н шо. сома Н Н чл КЕ і Н серии дна ! ' я Ех Н БЕК 5 ! Н сх й ї ! ен Ба ! посеюето ТВ Зх і і се кове : Н сігссододвосй Н Н НИ - сессссей ! Н некесесх сс Н 5: Кк Я їх ГУ Гог ГУ хз - а бадкп
Н сою дя Н уих і Я, З ! - Н Шон і ДАсак Н ОЗ й ро їа - ' в З і За Н в ! щі ! о В Н МАЯ І ! рення і Кн У о і ща Н Куй ! над 3 і -хвще ! КОМУ Н К і 5 і од д ТК че д ша В і З що Р зов «І І о «о о 5 Гола зх і ще і А і Сх че, і со ТЕ ! і Те я ве ! ок Й і дос жує Я ння ! реа - і ЕХ Н С Н в Н пд Я і Не 5 і Кутя жк, у ' пер Ше и ви сл ! Що ступ асан омана дано я А я ож т т м че чу Ге КЗ а СЛ рун кн чкнжк куки жкнАКн КАК ж нки кн Аж кн кн Аж ц кни кажи ижн АК кн Ак ОВО ники иккикткнкнАнякикадн яки кнАкккакнЖнкннря ' я ; Я жк Н і м Ме кій ! ! о ШО 7 ! шия ї : я Н ' чадо ; : с - ; шо я 7 ней ме м це в У ; р: ! пив | що : Н нн З й ша ! з а и пн нн и пана пі піни пи пн п п пи в в вн м 6 СУупвої о се й осо м дамо ро о іх сер НИХ м . ев ааавв в сохоу ден - сенс ков щи Пе сни сх.
ОО озззнн ний ІЙ до гозаво ш ши чех сддчлчятя «їх патини Мосс стжнанй щі п одпеюсе пс тоотесттесовпетя ВК Корвет поєєттоя УЛ еєнччюс о коввнввв й х ння ЕК вия є чан й ШІ етно І о мах н пе Ш сх ях нин Й - 9 содехі
,миижи жи и ж а жяжяж аж ящФящФящФящФщящядщящдщящдщдДд,длдлджнли жили ашжиюяшчюшФюшчФшяюшюЧ юяю,3ШНицЙМ ие ЗИ -Х хх й й ак гу Й з Е с-м ща -й лм М - й ще с г опоотетосжкньнкося кдд ще мч М охо ех пава КИ й те пс -кі зав и ЦІ с.
Й хх се т, я пісні я 7 ра -5 зі Й рах ах дос ення нини нин нн мини З В М в е ; 5 Но Х Не о | . СаО пон дн КІ роз ко, ЗЕ: Е Ї Же В М неня Ц Ше -л повно ОО І реа я к.з ї я вх но ЙО Р де днниЇ сном Й Ж Ї Ше Шк и вн Й : ї ж шк: сек І шик у нень Е ве: Й, сет ! й ж СЯ т з 8 СДН пен ИН і се вай ї м Е ри Й : ана І ім Н : і і бр. і ян, Н км гі свій ' м СЮ і З ! я є І ис Н сс ве і с ї клала і Ше: і і й і і Н У, . і піна Н Й З : ас ї Носов ії сезенеся (в І РОДЕ. ння і а, і ЖК: і І сладаттаюх ї ек, і а Н - Н лани с ЗА ї са : й оодх Щі м і весен Н ПИ : сододх і -ї Н ся г Н ТЕ й ї п - детей Шу і пенннетттнтеттннн нан нн а погоні п да : ван пом Й ія « і Поет « Н Н шт хек і знееете ее АКТ, : Й : осей Н мох : х і ання їх Бена ііі ііі інь і пт мнтентетюнтя Н и рпнннннмннавксосттн ї дя о і: дон ни і о. щі Н гоп ККККЕТС і тннавео дови і є : скит Н нах і Ії сне ї екс : Е-- ї - Її м ї АВКСртУ Н моя МІ і і зак ї ВОЯ Е Ж ї ее 1 ж ! Ше НІ аа а вні Я Н аж ! - і і: і ще - І: ів. І: Ж і я І се Н у сх : рює і У в м ж 5 якої п М с Ві Е І ств КК ххх ще. й - с І Ве нм іон МИ м понині НН и іа аа аа ОО м -В З кн ло ой - І спр З п секкон ЕК з де ех, су Й Пон НН Ч Б сЗДІКї
-
нин а А ОО НУ і ПК ее: : Гах і ре «і Ще, ; ве: ! п НН ! с НИ В Піна АЙ Мед Т ані дн Т на не: ВИ : : о Ше пси їх і по Її ! іс Ши ! п : ей ся Пес А : нм ОД ї о ний Я : нн НОВИЙ Ї Ї нн ви і я Гощі сп В нн о НИ ії ї нн М 1 пет ОО МДУ юн с : ВАУАККЕТХ онхлжжжжжлжжжжнтн г хурфи 5 ї з м ї ев, ще Т ї чн жк ти : дин 1 ї п оса і : У ак : реа ввів ї г - ож п ; песто пд 1 вн У у Ж ожжжжежжесюкня у ї в З ! ен ОВ Я і ка : о о И КЗ шо се ї сосни ; Т я ! о мА ї ї З ях ї -К й - з Ї : У : Що зе і ї З п ; се У З
Фе Ж У М й гом т гу пкт г, сздика солоні до сс і Денна ! пп У, ї руна ь КК нс і ПП ни пек Я нти ни нн ота овода оо вив й 1 с овен НААН Ко зе ВК з зі пас о ! ож і КТ ки косою! ни не Псков ! п ство Н осені КЕ й . нн ИЙ Е пе зими нин д" ще а Би Ж гу М 8 сало о Б . З і ення МВ . вин Ї З Ж пкт в нт ТЯ оос- сш З Б ж» Н У Н ух ІЗ
І.
У
І. яку ту , п Н КК КІ Соя Н й пух г її - те р садка) а і 5 Хеюхк ня і нжию е і ря ев Н Пед не ї й ХХ ск : Ах а Н ЩО 1 - В Н очки : ех ще г : хх п: і я оС ек і Ех Н зе ПІВ Н "ТКУ МУХ о і і дл ой : рен: Н кв зо Я Н Сл :: шо ня ма : т са Н осо й Н че Н оо по осссссовевве З і их ло : Се СО 1 я ен о нн і сн З дей а А Я і пос их і зо і слой се г НІ ПО ЕС сшдля Н Енн х шиття - : Ко 7 ; НБК оо ЗИ : Ко оо З ООДИЙ Н ко в я Ди і ПІМОМ п ВО АДАДАЙ щі сера х КН ле Н ооо ЗА су І АК соепоевеней М юнтжнюнтннях - Н ме сем д І дао зве ухух мя ЇГ Ь; Ес є нео - ії нн Ас п «г і се не - тОЇХ Н КЛ Мох ; А: Н нНХ о тк Н и лу і с: Ї сонне я Н ДДДДУТ тент Ї "Сука Енн і ех ММ Ї ня дн і кплжтнттттттти ооо шесжетитнтяя 1 ка У УУУУУУ УМ, о Ан і У МАМА соссюсння Щ І сек У дя У і т пак діди» - і ; со - Н тала юс Н Оллі.
Н МОХ Н я Ух че і У рю і іден і о ЕК се ще і бою дореєєння і пеня АКА і ренеоксукс ев З і и Е ї восох ка їй ти ! ПО осв і воеоя УА Н ХО і вх АК в мо ія і й мое і рат і зе ВИ 1 екв Н Мих і - дини ух Н ПО, седосд, і У і МК схсхсрненнй ! сосок СЯ КЗ) і: Я х Пе: Б У, г в зді) ї
З Н сх, Н нен Н Не і ие Н оса т : ІЙ ї сек певен і А Я у : ло й Н ; Н Під інн сок ї «Поолня нет ж Н шо Н А Н й Н Н Мо ВН і побесссосс : о ї пло Н но Н Холл Н Н ТЗ се Н рем й і Пл х ії жиє що ех тт я Н со с т м Е
: . А Н -х х вах Н іно Н Б с Й Н вне ю і сн сх. і не еВ Н досві В А подуеос х -к ! Кс В Н і : доня Н «ЕЕ й Н : і ро Уляни п- і се а т і Аа ей Газ еко за ПИ а ропи с Ех он вк і о селення У і діжка сно Тл з і ре Н і нео у . Н -т Сен М Же Н Есе хх. Н Те же : М: НН і ме сх - Н КК дреди 3 і : пам : ЕІ Я Н опклнпссосі і сей і Н ен Н Й : се Н ся Н сне з Н сс ї ех. о ще : Музи З Н й Н и оса Н пох А знан Й Н ресссовооа і З і
Н с. Н ва Н Н се А юю -к Н : нові Н одИес: 1 й і З Н ке сх Н що Е тн ст М дентин ессороги сс ВИ ня ч К се х В Ге й що шШ6- е Ссадіо
І те ее г Н дл дет Ц Н жене Ю Н для; Ї Н і секти : і тему ща Кк Н жи т У Н - се , Н ресевевотиоссх З, , Н мае: нпнжннли і І Н - ! Н еп Н - маса Е і х 4 щ ж Н ех Бу і м ї т Й зжектечя , Н х , Н дення с не КЕ Н шия Я Н с ї Н гла СУХІ.
І Н ііі - , Н пллнннн І Жах Я ї перли олжтни ї Н На с еикесов , ! Й окдя ттввВЙ Я Н рова: І І ев з Н за 3за сепевавая ї Н ПІНКИ се ь ! : жо ні : я КК ' Н Не й 1 ІЗ ке у Н сек ТЕСТ ІЗ 1 т ІЗ і петрросі Я склав ї 1 сос ' Н с» сла аій х Н Кк Н сх ї Н зеету У , Н дач де ! Н ке єв КЕ Н о І Н іа - ! слона ке г Н діги і Н ін ! Її с шия Кк І --- ММ а , Н Енн ТО. ! і Вес яню а І Н І , Н дили х Н Б МЖК ек Н ша ши о Н для ттште ї - Н пннннтлттюн нти т й ! т І су Ц -х5Зх І Н «ПК о ре і я шо Н -гаасо ШИ -- З рН Н се Н і роя - у Н СН Є 7 Е Н ши І Н ЗЕ ! Н з оолозацив ь Н я Н Її з А ІЗ Н с у.
Н - т дода х Н діння - І Н плдлння квввва І : ла Дюєєектт ї 1 Мосс у Н р вза ста ЗУ : ення КЕ ї й соці , Н я рол ї І й у У Н о і ї ре ї Н т і 1 х Н з Н ІП є Н 1 й х Кк Н т Н Н с ст ї Н «Алли ще ОХ Ю 1 Бейсоосю ї ях яння понвшанях І Н шк. сон МН : МАК соссвовій І ! оо: я ї Н З І . БЕК: к. , Н не ке у ! їх Н Н но т... ї Н и ї 4 ; Н я М І ї 1 ост зни --кх 1 птн тент ВН й СС ВИЙ ст , Н несе сх і Н аа ВВ Н сн-лудина "рнжлижя і Уж 13 - вся Ж Фо т х - Сжкрі
У й х Х Н Не х КЗ ї вне ай ча г Х хі бе Хе і а ау У нн ї я Ж і я Ах. ЗУ Бе ОК у «і ї У н- ше г ке до и т Дн У я ни т о сі й як шо Е Ка
УЖ. МЕЖ - я еч спннетето вести В ПД й песто НВ КК Енея і й пи КАНАВ пи нн щ пекти Шк: і т пн Кт Ту су ї п оо ї вання і НК у ПЕ НЕ, і пн Ост - ен о Па пи но ши: ще пн іх Ме МИ ГМК : ше; ї ії Я Я іт - - ре «х Тек - - м в 5 В 5 а -Е ш 2 -
фіг. 55 : сСлвлука Сподука (О Н Е Те НАКаКУ Кавцпевтрація мим Кенуцевтрація зх і ха Бозі 5 оон ж ме: ИН НИМ ІНН З ЕН їТ очїеакво 100 1А3С Її зва оз мор мкм Ко вВрхідї 10 І. ж Не щої обо Ро ово.
Фіг. З56А 1 Авіжхально-базолахеральний: винвлено СцполукуУ і ПИ ТТН НИЄ ХНН ХЕ і За жк з мкЕМ і б мМ 1 проходження | бо проходження Я то проходженвня Час підборх | Середнє Середнє Н Середнє зразка. ої значення СВ значення СТО: зназенвя СВ Щіхв о 1 Ба ож па Зо? о ОД Я4 ою пов
Фіг. 568 о Базолатерально-апікальний: виявлено Єполуку (Пі і ід мкм. 3 МЕМ в мМ рен в плете еячетеячн г гани ви сени і ба лроходження о бо проходження і То проходження. Чає підбору! СЕреДНЄ | середнє і Середнє ( зразїзха ої значення СВО 0000 значення СВ І зназення СВ ЩО хи 1 БЕ ж по Мо ж 034 БЯу ох ВІВ ПО Но оо НИКИ А і нак КАН ванн і хвої 55 ко Б БВ ж ОХ ПАЮ ох ФТІ
Фіг. Зс і Атпікально-базолатеральний: збе : проходження і Виявлена як сполука (1) с» і і і х в кп: ї МО і п винна з: Б ій хв
Ще . ші хи РОД ар френч МАЛО ВАКВІ РО» ОКХ В: нич | шк НО ная С нин ик нн МКК знан і ВВ ше ОВ. і з пло ВО ОВС:
! ї.5 3 і ! Конпентримя мкм Вьсад в апікальному відділення в хна перізду обробка (с120х вала?
Фіг. 5680 гХпікальноспазолатералюний то проходження Овивлені як сводука У виш нн а а як т і я і і ША нн м Н ж «5 Коди ОВ іо хв Ух іі
Ж . шо БЖ З 2 Конпентрація мкм Вихід в апжалькому виліденкй в жі херізду обробка 120 хв)
Фіг. ЗБЕ із Мо ЗмеМ о ЯМ нин п а, Сполука їж пе З п он нн нн Схелука Мі) Зате | рі795 | 2095
Фіг. 27А Е гикально-даюлатеризьнвій зам | З жЕМ і в мкм ї За проколження Та проходження і ббхрохолження Час вибору Єерелнє з Серед св обере. Св ї зриака Значення 79 БВначевня? с Значення" Що гм о мм: зоооо в иоооп о поо ооо в ово вих подр р ооо в овмючн мреим роде Н М ха т па. жо Вп ОР 83 я ЗИ 420 хвої пд х В. | СХЕМ М НАМ ВЕК МИ
Фіг. 578 Н Бавзолазеравуносгмікальний Й їм. З мкм Я мкм І проходження бо проходження ї Зо проходження пек мем нн в нн нн Час відпорутСереднє св Б СОреНЄ сбр о сере ов і зразка ізначення 70 значення 7 едачежня" о 7 Ох Ева ОВ РОЯЛ ТВ ово Ов їх Її опа ов РО МОРОК я ВЕ нн п и М Фіг, 570 повно рон і : Б хв 128 хв : вера торсли пост м р ВН з овен нини они со - (о еєредйс начення 5. С) 0001895 з ЛО ЗДО я ЗВ і ГРаррох 10 вм/с і зква ДНІ і
Фіг. 570 : ДАаивкально-базолатеральний: 95 проходження Н Сцовука (У і х 55 і нин ке кн с п уеннентжюююютютжютююютюттю тт сїщі г Не МИНА т іш ша ха рт маса ее - Її які КЕ ТО ОО хв : їе 15 р виш шк ШСЗ нн ин шк Н Н КЕ КН Н і й ї няття АЛ шк КОЗУ ще Н Конпентранія мкм о у Фіг, 87Е Геволпатерально-пуй кальний: а проходження ! Спожека і ЩЕ дні ш : ; Ї ТЕС нин Мох : ї Я ря ; нини он в де 3 іа хв й Ж, ЛЕК Я днннннладданнннннпддннннннннанАн нання ААдАннннннааАн ян нн нап дання нннннАн нянні Ве пи мини пи тя к : У Н пе ними мимо і Концентрація мкм :
Фіг. ВА Ахпкально-палолзатеральний: ниявлено Сполуку СУ мем З мкм ! 8 МЕМ Фо проходження 95 проходження іас тідеору Серелнє зх СВ Герелнє жо сво фберелнє у ср Н зразка «вачекцяя зпачетнІя каченя ФО хв 251 ж 283) 3372 ж 534) 325 з 050 120 хв Я447 ох Б | 36 ож 955 0 БЯ6 ово и
Фіг. 585 Ахакашьно-базожнтеральний: бо проходження Вичвлена вк сполука (1 і Е КОКО : і У ві КК Н 1 ше й т шабхн Ж, КО БООООВ і ен ВВ З ХВ З КШН ВОЯ КЕ ї 1 х Дн ВІКИ ВОМ В КВК тин ВВ нн з ОО ЕВ ЕВ со і й 1 КЕ ВВ Я КЕ ВВ ї і Конпентріація мк Мі і Вихід в апіхальному відділенні в кита періплу сороки 120 хв «ріг. 586 ібмкмі З мкм б мМ Сполука 0. взо Рв ген Сполука (У и 7 и соми ше ЗО Ч5 О 39155 | 15635 кла ЖВЛАКАЛЛКААВВЖВЖЖЖН Я фіг. 58 і Ана чне абладиан і : ацуресусих Би Раш Е : шо Н (ВЕРХ СС, раї
Н . ах - й Н лувжемидер Масеспектромето По Бела ах : і Детекюр ОБСА ХР І НИ й - п Н пСвотема даних Ехсанівди Хопйкате Е ЇМО інтерфейс поем і Н КР ГВадокану ЕМ і озарність й озитниназОої Я мезсвихіаний он Я щ Ковтродльсваний іо баолука (КИ а й щи о леСИ ТИМ КОТИ І й врош ст», Ж. 40 м І Коптрольований ов Счимгука ази ям м/з) Е і ЗО21 моз вихідний кмя 349,5 м) ! і У нн ин НН НИ В НИ В В В КО В Хрематосраєфрічй і масо чекрочні умова Е : й Н Н Н і Аналітаних зазна Хв лак М сі) М х 30 мм, УМ іевя і і Темпоратурі велики Зділжороротояв кислота (52 (5 У Е І Рухома фачаєх ватним Н НЕ : Н І Рухома фаза В З мки:хв І нка і Мівидкієть зику і Об'єм інфекції Нмкя Е : Н і . . Рухома Фаза о Гекохаа фага і Грахісту час (хи ло Ж зо В Е Н я Н : Н й ЩЕ Що ! Н й Н і за х ох Н за 5 95 і ХА Ка КХ і п.
КАМ В пуху Н Н Н Н да що Я Ж я Н Кк Н сення в Н і я ї ї - мо ДЯ Н й В Н Ж і Ж -кі о жмя Е Н Н Н Її Е Н Н Ії і Що: ву«ав ДИС Фіє, вОБ хе Дерока ж денне оз Мері щенита : ві Е г нан щ Н 3 їй Н їх хх да й НИШЕ НН У а хи Н 3 1 щ Жде ї ї ї Н Я ШЕ ШЕ ВЕ НИШЕ ЕЕ НИ 1 ї 1 Е Ві Р ж роз її 1 ї ї ІЗ ше її 1 ї ї 1 я її ї ї ї ї НИМ ЕНН Ж щі: 1: їх ро у ї ї ї Го НН ї 3 Н у НІШЕ НЕ ШЕ ЇЇ НУ Н ї 1 в СЕН 5 і тяж я : Н Н З НИЗ ЕМ її 1 ї Н їз Ток ї Н КНУ Н ї 1 Б ободі ж рек кцае ле
Фіг МА
ШО я ж в зві '
У м ї о:
и КаО ЛПС Фіг, 81 - Мая Й Еф Е і й м х Н У К ко у І пиши в й ж-й в чн 2 що я / 2 Н х й т ! м / як- КІМмив К м Н хх -- ен Її а Б оОдая а А й ШИ К ! М кі «ж ВНС с Го ж-жж ш Н ра Ку її ТЕ 83 хи и У М НС кож НС Я
Чве після ів'єкці КОЛО або ЛИС стодння
Фіг. 81С 1 ві є - Н -й «й щ : т же? Жооекії ї Е х я вк І : - ї га Н і-й і до і дня по Н ення с: | ні І пера я - : ї я ВЕНЬ, КА рн м п іх що ' ! - ДИС (4 - Ії ние 2 Енн її 15 А ІН НС 3 5 КУ Час пісня ін'єкції КОКО або ЛИС (стодини)
Фіг. 62А , ВЗ пз х ЕНН мех ле реа сих 5 Е ПШШИНИ з ПІШШИНИ, Я ї МІШИИИИИ ї КЕ | Н х роком З ї В и в БЕЕ З і Е - - ВУ - ШИНИ Я Ї ї
В . ОТ 2 5 і В ро з ПИШИИНИХ І ї В ш- і Ж БО ОХ ПЕК : ш ше БОШ за КО роли БО в БО НЕЇ КО Бе БО Ж ЗО ОО М шо ШІ ОБО; СМ й Й пк ПИИИПИЦІ, Ух і. м. пи ИИИ 4 ди лис М Розчинники КАВУ т м а ще 4 н Атосибан ЗИ міихх (й ВИЯВ, пе МР) С Ніфедипім 5 мук (Ае ТО КВ, ах БР)
Фіг. 828 З Бомко еруУНИЯ сти жи Мер піснях т - Б т ї в ; В т й рії | ; | шик ) ї | З В | Б іс І 1 т шини 5 : І . Е З , шщ М шк шк як І хе ще « ня я в Я СЯ я кН НН «в - кцмве як
Фіг. б3А п й НЕ» с п А вх п ши ж Шк Шо: ве 7
- . в щ- | В ро ї І : : БИШИХ З ко Я й . З ше 1 .
шо . хх ЩО .
ЩЕ . й з ЩЕ . . .
і. і.
є і. ЩЕ | . п . ники: вина ле ши ши и А и М см У хе АЖ Ж ки а м М А З ен чи КЕ ки «КЕ Ко ши «й У но і шо коза С ИСЯ За - дей сш З Кк; СА ся ся се соя
«фіг. 538 Ж Гецизго зна Мертві щевяте а Моя ї ї - У С У х ; - ї- хі У Ка ж щ Ж у Ум ї ї ш ЕІ і Її т х ка я ї УА Я НиШ ЖЕ ЗН зи ЗЕ ЖЕ НН ЖЕ НЕ я БР т ЖЕ ЗИ ЖЕ МИ ЖЕ НИ НЕ НН Ку ЕР рі Н ті 1 11 ті 11 5 РО ши я ши и Шище НИ ИНЕ ПЕ «Ті НИ і ті ті 11 ті Ті д кі НЕ і її ЕЕ 11 ті ті а хі НЕ : її БРРКОРІО і ще На НЕ ОР ОБР ОРІ Ті І т РІ Н : ТІ ІТ РР Ті В РІ І Н її ій 11 І Ті т о ж 11 ї 11 3 їх: І 1 ОО ши ЖИ ЖИ К трі і Н 11 ЕЕ 11 РРО, х ЕРЕО1І жи: З ЗНАННІ Ко РРО ни мя ЖЕНЕ З Ії ЗІ Р НІ ті т 1 1 115 М Ері 1: ї 11 1 У 1 11 тк: 1: ї 1: 1 11 У 1 хр 3: ї 1. 1: 1: 11 1 ЕІ: 3: ї 112 1 1 1 1 ду нки ЗШ З ЖЖ ЗЕ с хх Ж дх ще х КА - й ха з Кох Й а хі зу Ки ке же ДК осееюююєєтеютєкюхєкююттюккннх КЗ сектеиикитт тю ка їж 2 «м за я сук ет оуканйау шо чека ТЕ; «ет х Сполука Прумауки) У СпналуУка М мкг сесееоготтсвеесеесесесстсссососсстсе КУНА МКК внадЕ лис
Фіг. 63А нях ром АККАНАНААККККК УК ААААКАККККАКУ УК АКАМ, їз З ухккккюжккююкююкююююк юю «пк З З ІМЖ т сххюуюхх УВК ! о щен роз : і ЦБ нен Н : : о. ОК Я 1 : ОХ З ОКОМ ТК : В о КО ! Ї : ! ВИ и ї 1 : ХО СОКУ Е і З І ОО о НЕО Е і Е 0 ШОВ З Н Н Н . 5 Мі я і Е | о. Кетжання З Кк. : що ВЯ Е ші 00 ШО 5 | : б 00 ШО ЕЗ Е Е КУ би ї : : ОКХ ОО х | : ші 0 ще Ж : шщ- шо їх Б ї : ЗХ ХХ ОО 2 : їі а ї : і З Ей шо Е ї ІЗ ХК СОН ї Н : ХК КУ Му ї ї і . У бан КІ : і Н ОКУ ОКИС Н ї і МОХ ху КОКО ! шщ- ше Н Н Н ОК ис п Е | Коня ораснь атаку у у ту туту их пут ву ун пу пу туту чу чн КК муку м еф мк я чн ЯМИ рескрхивхкіпеку КУ Бибелунин о муки пе о, : ї ант й УМ мг мой ЩЕ Сполука ЦО БК МУКг вит) Б Компанія бів)
Фіг. 6483 КМУ Вежвого сх Ж Мертві щенята ТУ «хе Ку я . Се ШУ Кк ї Її о З ум щ- ї ІЗ ї х Бі І і в ЗаЯ і ., і ШЕ т сини ШЕ: рі ті не - КЕ ГУ ЕН І: хх Ії: її ха її: т ЕН: і її І ; УДК ї т її . ї ЕЕ з. ЕН ШЕ: що ї ІЗ ІЗ ї х ї ІЗ ї г КЕН їі ЕН їі т ван Бі ті Кі й ЕН. їі її І д : 1 м ЕЕ І ЕН І: ОО ЗЯ ЩЕ Гі і ЕЕ Кі ЕН ШЕ ГЗМЕЗННЕ НА їі ТОК ж ої т х Ех ї ї х ї ш ї ї ни Я х х. ї щ З ї ї ї сни и и НКИ хіх, у ща щ ви х ме - м А й ну ЩА - са ще Ку ней У ж Ще сі У . п зе хе як У и - А хх ке СЖх АЖ 7 ре ва
Фіг. БА хик що пан Е шо» 55 - Й сх в вам зом ее М пек век ПО Е се ОБР ВВВОБВО ея З й Н Н ОККО ОО Бе «зх Ї : ОКХ Му х Н КОХ ОО Е | 00 ше 2 Е ШЕ и і | . ЩО рюн - : ; СМ. фен ІІ КОЖ Ж щ й І : КО ї КК я і : о Кая ш 1 Н Їх х о Б І ; . ЩО и до І Н КОХ ООН дО мг езчивникі ЛЕВІ СХ Вафедивнн 5 мікрон я Сполука І ОО мітк; ЩІ Зк Комашаціній я
Фіг. 658 ща Р ай ай мій мой зі ой п мн м ой мій щЕ ї кош ще : У : Ж : ро Н й Н Мол ШУ : Ж Ша Ї Н в і лет 4 дО Н г; ; «о Розчивник х, Н и г Н - : пе нен ПАН: її в Н -- Бфедивц Сх мук
50.4 2 А - 2 Е, в ХУ ; я Н ї яре (Чруту ва ПІ Об мткту ш Н в : Е ще Спелека ШІС1Об мок) ре Н ІЗ ; щ 3 й 4 я с . я сет Еоолді й Ї : еко Піфедніув я Спонукз - В У ї Я й. БОЖЕ утно і - А ; НЯ г 5 йод ул ; ис менше с шо нн вн кон ни як ово 83 55 39 285 28 Ро зу 4 Зо кояг Час після іш'єкни КО або ЛПС години)
Фіг, 852 в ж ге в і ВО і во же Ж ик і ЩО же їх х : і Сх ! ее з І ЗЕ рого фот Розчивник дже : : ж 3 Н «жує Ніфодиптів З Сполука ТО й. пиши І Я Пи п с З ВИК: ЗИ З ВИ я ВИ В МК Час після інн екції КОЯО або ЛИС годитио фіг. 650 1 к щ ї х щ ї і х ї : 2 «о -- ре м ! Ж І Е ї і же 2, пок ! Ї Як Сполука ПЕСОЮ мкг; во | | ВИШ жа» 3 фроланялляляянй і: зх Ніфеднпін к Сполука ЩІ З а і 3 Час після прежхції КІЛО айо ЛИС години)
Фіг. 65Е не З Ж : Н : Н Н : В ще » ї : я Н Н в й Н Н 2 У : - ї 2 У у Ніфенніци - Бе же В й соеооодовнтовввадввютх ї яке Міфеднтви в Сиолука ПЕ ООЙ як ї Щ Е їУ ча хе жа 55 55 05а 35 035 0 5 Час хнеля ін'єкції КОЯЯО або ЛИС соди) о
Фіг. 66А на род ААМАКАННАКНАККААКАНКАААКАККАХ на ран що нз ЦЯ нн ЦЗ 1МУ- аж кеексовен хахумх ШІ 0 0 шк ! Би ОК ВН ! ВО . АК ОО щ о Е ! кр о пере я і о -- я | ПОН ОАЕ ТО х | ОО: о. Ко - ун : МНИХ ОХ З ОЗ ОО | о. ше я | п о не й Я ДИНИ НИХ хх х ОО вх я о. є й -к З о НН: о ОО 254 | ші 3 с о і! БИМОЕЕННЕВ с о ОХ ї ХНИ хх хх КК : КЕНЕ ХУ . МО МИ розчутизикій Ві КИ Алосновноіп т В Сполука ПІ ООЮ міуке сет ОО Компінапія цугй)
Фіг. 6685 ЕЗАДАДАМА Всвога й за Мертві щенята 18» ше Шк; І чи и що
В. ще ! 7 12 : усу -й КЕ її - х їх ве і но ЕЕ в | і в 5 і Ге рі З ЕЕ М Рі З і Кк її част ЕВ - ок ня щи Кк ов ще іч я ах -З свя Її их У Ояй т х ще м Ям 7 ко Б щи 3) - сх кое
Фіг. ТА в . рення ок Анну - Ба НІ й : флеш ш і З мок З бетно : З сер ФО Рооедя пе КО З зеококех Воші нан МУ МЖЕХ ОО а ШО о ш Н ПИВНІ КХ ХК ОО ЩО Н ДЯ КК ОО шо Н ЕНН в МЕЖА ДБ дя Ох ОО Бі ПН с Я а оо пи КІ ОВ ож Н ЕНН о. Ме щоОщш Н ППНИНННИНИИ Ех З ОХ Б і Б о а ц Н ПЕН ХО ОО З Я ПЕШЕВ ПК ПО Мухи ак КЗ ллосицанійтіЗі Сполука ПР ОЮ мілкріметі Же КОомснцаніимееті
Фіг. 87 що Я нір айва и ки о ж нік нон нік вон п ї - ш : СЯ ше їз т І КЕ Кок ЖІ хх Ти БЕ ве ї У Ї р Н мая о. в и І Ж: Ї Но щ Н ит Іі «а Розчважнвх ш Н 5 КН в ! й А і о Алтесвбанія 300 мок жо вн КН як Сполкка ШО СТО0Й міУкку їх Н еф ще й / с фа «фе Лосини сь Сполука ЦІ - рох ї га Уч ї ці хм Пак ме оон вин нн п НК ВО ЕЕ КО Ук З ЗВИК Є МИ З КО ЗИ СИС Часзасня ек БІ або ЗЄС розв
Фіг. 676 їх що ? щ Н ре ох. : їзй Яні х жі с т дови. І рей і і: ее рречнимих ж уруннніннннй ВОННЯ нз ш : | -йу дютовн о ГУКУуТКА ЦЕ о еі и сп я ее ке ЗИ о п я М ВК З ВИ СП З СЯ Час після б'є КОАВО або ЛИС (тодини
Фіг. 87 щ 4 Б В і НЕ Е : Ен 2 мії 1 роз Н Н : - Н ре ФО НЕ ря Н НЯ ж і іі ш Н НИ ей сцподека НІ 300 хнукії шк жо 3 | і вакм 5 У А Ї і сон юю СА ПН о гне пи - 2 ї Н й є - ги сх МИ В Я ВИ Я З В З КЗ ВК Час після ін'єкції МОНО або З ПІС (гонини) «ріг. 67Е зп гу шо 54 і Бі Кк я ет ш і мч З ї Н т- Н І Н щ Н Фі Н 4 і 3 4 ТЖке Атротбаю 5 З фе КТ ва В А Н ве Диван Стподеке ЦІ - я і сум же щЩ ! ! УНП ПОМ КН ї7 І: ЗШ ПИ з ПИ ДО З У З ЗК КУ В Час полю ц'єкіі КОЯ86 ябо ЛИС (голи іг. ВВА г -- 835 як З їн пох Е ве ЯЗ. КЕ та то її че це ЕЯ і н Говій уважн Ве Ж во т : сш те гестун щоощЯ. і - рих я Кн днсення за: "в ши п но т гували де : 4 их г Божу їЗ пе ЕХ : хи р Е же Мк Б і З Н Я р Н вн ; яй їй І п ЯК У Ух йо - Н а Кия Коня ОМ і еВ ск Мих МО; рід : в вх. Мк . дя з. : ЩО НЕ й кое . ле й Н Я вих ких КК з жк ї ПЕ Кк НО ХХ З дж Шк АК І ли нок В ще " :; а а їх Но с. ; Є и І АЖ СН УК о я, я х хх ще кА с . Я й ня рез ке як І я «Же З їх с й хе и о в де ск 5-х ее х В. - й й й - й х Кх яко й «й «жо. «В й ШИХ а. Й А ще с, й о д-З за не ся « ще Фі ай ; а г. 58 щоя у в ки й вх В ях т сьо е зх де ци ; ! щ Н Мертві я її | ру їх 354 ще - з еНя: ка га а і е «Й І їй в НИ | Н На М Н Н т БУ КУ НУ хі т: а і ті НН « н Н іі ті а Н щ її Іі 1 В гі реч НУ 1 11 У УМ КН т 5 І ті НІ ЕІ ІН і-З вій їі т Ті Рі ся І; ЕЕ ТЕ. 1: Р! т ; 3 і ТІЇ ї ! 8 2 НЕ | в й ! 1 ЩЕ ІЗ Рів 1 ЕЕ У Е т у Н ті НЕ | ЕЕ Рі Рі 1: г ; ї 1 1 3: НН : Н 11 ті КН ті І: 1: Ті ті Ії Ті шле і її і: НЕ Рі її Ії 11 І 11 РН Н ї КУ її АХ 1 т: 11 т Н 3 Н 11 т я Ла 1: ІН ЕН 1 т ше ж 1: ті їі 13 ті С к и но ЕЕ Рі ті їі її ; МИ КЗ ій І ЩЕ НЕ г Кс и ЗИ: ЩЕ і В. Ії і и ше Ж тій рі с : Ко " й ЗА ті її і в в і и с-44 НІ щ КО КЗ а нн І: . В - сш щУ а я с 7 и ком й Ух декниМ га де Ка кх м й -е ще (я с НК -е - хі З й я - и - й. . Кк У Ко іх З де й ще КУ ев Я Ще об й о
Фіг. 69А ВЗ пекан пе п жІх У не о оо «ЖИ 0000ВЖ00 теступаду гз і З ма сам Її : ТІ ще їх шусх по НІ НИ и ШИ НН КН: Код ще
В. іо Я Кия Ох мод ОБО Бу З їся о ри шо оз Н ПИШНА Кия и зи ве ЕЕ НН Я я КЗ Н 3 Н Шрі ВИ сх Нео щі РОБ ря їх В Бе З Ме шщ р гос ей НІ ше - х | І НН Ш див З і РОБ бл сеу ВЕ КУ м ФА 420 ОККЯ. В оБИХ.. : і г хх Ж ДУ: Ух ХК в З уся щи ния ом и А п и ШИЯ Ж де У чес У Ох и ся кУжИх ШК Ах « хх ки и В НЕ ши с нн и НН ННЯ Ум ви; нин С НН хх СЯ ож Ах ре М Й - М Ой ве КЗАКЯ р ж я
Фі. в «ве ГОУЧННННК «ом ПШфедииля 5 мкг) зп Фе слаол ка НЕО МЕУКК) дель ак я а Е Ще я й Ко ов Р Піфедити т Сполука НГ Ж ри м здо де й. тн то, ЖНЯ пані гу фей Я
ШЕ . о жі ВШ ї с ії 5 ї гг ! Н жо 7 / ОО і суки А су кі Ко оей КМЕККиУ Я НЕ ке Я ше: В КИ ; шх, їх Б і ж ра ; мо як х К 7 х і ствесвис Я 7 Н КЕ я 7 У З КА КО С У рути зе оозй 2 о о2й хе їб5 ха ЗОЗ» За зв Зо) Чис спеля пек НИЄ гстодини
Фіг. 9С «вх ГОоЗВиВНнИик й км Ніфедіщн (5 мно В Пра же Сволука ШІ 3 мийко) ай в в кі В. й Ко ях У ї : й 24 р спек щ : «ви Ціфеднимі є Сполуха ЦІ КИ ї--О 54 ов х : а Ї шої дже ; о 85 х й ху у шана В Е Гени КАХ Ме Е і хо В : оо ки : В Е СЯ : хх 3 й й а В Вася нм : й і б. Й ї : їх п і й «Бонн» «НЕ ДЦ рефе фе вк фуе нев век «фе нн 7 хз: НК НИ а ІА ЗНА ЗВ п В ЗХ ЗСУ Час тасєля х'єкп ЛГС Стадянву
Фіг. 90) «же Розчвиник «е Ніфецниш 5 мн ку) ВОВК о стека ПІ (30 мік дакаккии т Н й СИКя щ ГА Нфеднців к Сполука ПІ ОСИ її ; й й Од ШІ обвн н дж В А, Н й ї ; і ща Б м Г-ЗНН що Н ПЧ дента ш ЗЕ. ЙО вві : най Е ї я : є ШЕ в В ВЕК і п НИК М : он и ана ЗНЗ В НИ: ВИ УНН С М Х З М С А З НТ Яде пієдя пе св ЛИС ссодинв)
фіг. БОЕ тва зе РожцтіниВк ї па : Я ї а ї щш «фея Бфелиі в Сполука ОО с ї хи і : ох ї І ре : зни й і і НО женні :
Ж. Ох . в- з ий м ї м ще ї що З Е завалавлланввввввавававняяй й ЗІ ЗИ с ПИ В З З ВИК ІЗ У ВК З Час шоля ін'єкщі ЛИС (години)
Фіг. Б9Е ВЕ З ; 7 І су : З шої ; мини фр й І Н Н я ЩА фен Ной Н : - к ї й Н І г І пе воЖчя і фе М Сцолука ШО муку: (7 й Ї і І р Ї се | «ефе дициєсь Сполека ЩО Ї Її 2) пкт рало поч уч подат А тА от т тот дед СУ ЗХ ИН ЗИ ИМЯ МИМО З ІК А З ВВ НИЗ Час пасля бек ДИС поживи
Фіг. 9 ЯКУ 0 ее Ніфеднмів Що ее : ї ові У Ї ї ство . зач ТТ Н фдннефннкннннк в ой Нвфеднинок Сполука ОЇ Гі г ти пе І Ж І ОТ дн Шон щ 1 ж Н ще В А ї Н Е - З дж п ЕЕ: У З З ЗОЗ М З В В ЗИ В Час пасля п'є ЛИС сроливи
Фе. 9 НК нен Розчвиник т я Кк їз ! і З г, кі що гої Ж я Нофрелинм Сполука ЦІ Я Гн і дОТАМ і ж ді ІЗ Ес ї : х Ї і Ж кя ження шо ща. Н в. ! їй же сили ; - Н ! і - Би --- і : ЗШ СИ ПИ А НИ З І: ВИ Я ВИ ЗИ М ЗЕВС Час засля зр ек ЛИС (години
Фіг. 691 Кз ее Сполука ШЗО мік з І | М х Коха Піфелицін я Сполука З знання М кі ВО - М Н Ї го, :
в. т, во ж і дк О т Енн інн
ЕЗ. | і у т тк ся МИ с М З ЗНО З я ЗНЗ Я жа шЖк о ЗА Час ласляап'єкці ЛИС броди
Фіг. 6954 ЧК я Ніфединій З : КУ : ня . З В та русин ЗТ оояже РНфедиців Сполука НІ т Ж : й й і х 4 д і е : ОБ - Н елек нення х : : сові ГГ З в : ! ; зе а ПИ Из М З ВК з ВИЯ З МК У Є Часзаеля з'єкой ЛІС чТОоливи)
Фіг. БУК ККУ же Розчинник 7 ж : яз ; ж Роже Гелі в Сполука ШІ т шок ті їх в х дААААААААНАНАХ ї р : 5 Е : У: Н Н Б Ії ами : ш ІЗ Н : я : : : : ва : Час тасля зв'єкві ЛИС спаде
Фіг. Б9. ЖК яю сСпозука ШО мія ЕЗ в Ї рова : Н ї : , в и У ї Е х Коеве Пделиніксь сродукюа ЩІ Е нини М : сф ко - т- х ї ї щи е- те х і х до ВУ у Н хи Я ЩЕ ї Б З - : Е : г З сек чек : й яв ши : Р ї : З 1 ран Е з ї І нка а КИ Я яз 7 хЗ 55 59 55 ЗР 33 5 Зї це Час оля 'єкВі ЛИС сода
Фіг. б93М КИ о-ее Піфедицін Ш Ф ш Н З я ї щ їх Й Н що ин щ Вона Наіфедині сь Сліблжка НІ т ОХ ми фррнннннной що уп і: м 1 ШЕ В Во
5. о 5 : ЩЕ : «ок : ш Бак фей : : : : : : : : : т ПИ погооготсіутевіег осот ве оісчуте. І КУ Пи І х : МИ З З, У ВИ В МК З Час після п 'єктні ЛИС сродини)
Фіг. 70А ні п ПО З Б й й з : пз Шут ї пиття : - Н ї Ч о ок тех ї си - Н ХК ше й Н Н З ОО - ї І ХХ МЕ ге ї КООНЕННОЯ ЗО КУ ш і Мона о щи в Мона ВБО5У сок Жоож й. 1 МИНА х х МОВ Н КОПЛИНЕНИИНИ о ШО і НО ОКХ КИ : МИША ж КЕН ка МК ШЕЙ Алоснбаніекі ЯЗ Столука ШІ 100 мік ие) ББЖ Комічнацннівзеті
Фіг. 708 оз Веового 18 трі я СУ і: як Мертві щенята ЕЕ зе Е 18.
ко . х Н очи» т й т рі Е їх. ра ря і З рі ї рі " їі Н Я рі Б їі І і р ія 5.3 1 | В Н Кз я рт я і рі вк ШЕ Ж | Рі і Гі ж ШЕ УШ: Гі Н рі 84 миши і х і і щ
Ж. гі І і рі - 1 і щ р 28341 щ рі р їі Н р. НН і | Н рі ЩЕ Ро 1 р ВАК новні клала раллі ВИЩ ул (ч ся сих У. й й Ко я- Ка їх се ща сх - се хг «0 І се сю й щу х ще ще ки ще з ке ке Ко я
Фін. А пло ро нн и м Е дя В «й - т а : Е : ян ет ї сте К Н 2 ; Н БО о шо р : ОКО . Сх ОО Е : КОНЯ КОХ НО є хе Її МЕН о. ОКО 20 Я НЕОН о. ОО 3 І ВІДНИХ ХХХ ЗКУ ОО Кк : МЕНЯ г ХК ОО т і ма о. Ожее - : ПОВ ХХ КК я ве Б. о. щ-х СУ ті КОВО КОЕеН ох НК ГУ Ї ОО. п. З ОО ноя ї ВИПОШИННННХ КОЖ З У г ї ПИШНИЙ ХК МОЯ дк ; ВЕС В . я В оов шт шт й шц Кк ш зи гозченинкійтті КОХ Атоснознійе ту ЩЕ Сполука ПІ 190 дику о І Комбінацінійе 7
Фіг. 718 В ОО ефе Розчинник Ге ж ж шо жі у; В; 7 ку глаб Й й й Е я Алесиви 300 мілко Ж во й-А ш- тб» ак Сполека ПСО мкг) 7 сно Н р ; - й но жі ж У ї - УЖ Атом Сполука НП щі і і ки з Елкнам й 5 5 шо: А ш м р й г о я ки же в га ? Го СЯ 2 у; ? Я - о-енянао ; ше Ж ПЕ Яка шо Ї ве (Я М Й г І ши чн м. Б 5 І см т, м, А б-ки. С Е фресок евееріу вожовсвсвсьсься З Я Дні їх путі ннтнуднтннннренноуннтнеренннртннрентннн ЕЕ Ше ЕК С: ЗИ с ВИЗ СО ЗК ВИ В З ВТ Час після інб'єюції ЛИС Ссролині
Фіг. 71с Яни . у шо тперозчинник Н З З ш «ат пфеднтя Стеяука Я ех фея зви Н ї З і і З Ко НАШ 211 й і . й шоую м 35 ОБ зв в: З) З Б з Час після інсекції ЛИС (години Фі о яке кцналука ДЕСЦ00 маку 7 о Ж 2 щ і фе Ніфедянн я Сполука НІ дення - Н . А Ї о ТВ. : Н ря і Н З
В. Е і ОН а- же т. 3 ! д Е фе фути Еш Н ї Н 5 і і ож фреон "т-о хйт х Яд Е х і г мене с у на їк код В У ВС І З ЗІ С З В З ЗК Час після мб ЯКІС (ходини
Фіг. зе 1994 еМАТОСЯЙВІ ї Ф в «а федті жслюлука у дня фу Гфеднунвою Слолука ШІ З Об др ї ж ї З т Дукнчнннннннннннннннняй ее ВО б, і к У р- ож ї 5 СЕ ї В 5 с: ї ї : їх пн а а КИ ИН А НК КИ КК КК КН г кН І У У а У В Ся ВИС ВИ З З ЗВ Час хйсзяа ів'єкв ЛИС стодавно
Фіг. 72А Сппрвідношення скорочень г В же ВЕ - т - ДСО вх 20 щ у : се Сполука Ле вм ВЕ | рин «ве Сполука ПД БО М Е -Ї 4 че т : ДЯ «ее СНОолука І Є нм й Ки НИ тиру 1 ОО ки шок що ША ші і вк а я Стелека Ц 000 М рому ОН ан Кя Де: - В мое ши м Е з ї ва ще Бо Во ви Мої шСЖ Ше а БЕ ; пон сини нн чо Ме ОО к- шо ще ж ух ку я дк ее У св Кі ки в « су ч Час
Фнг. 72 вс 5 З д Е І 0 дМСО во Н 7 Єпзлука ПОб ВМ т ЕЕ вв і -е Сполука ПО ям ще : «як Сполука ПОБО0 М шо Тони ха Млюлука ЛОООБЮ М пн як «Ко нет 4 пт й пи НН і шен ше нн НН М що ЧО ба їде Я т - В ве їй кВ шу Ку хх се ій ин зни Е е Ї Ка х і ех їх х Ше и а ШИЯ «сх М з кВ і У ще - яе Фо и ВИ че У ( ОО : Час Ту
Фіг тс х Пк в хв - жу о си я В ее ДМС Б же Й се Сродука ЦП о вм. Я й: «ке Сжюрука ПО по вм Ж ож дих я Слюлука П БОЮ ПМ ос и НН Й З зе СТЮМУКа ПП ОПОЮ ВМ ЕЕ А Тон Х З Еш ен д в Бо Х ї ве ЕЗШНЯ ї Ма Й г ве п ши шини чинни нн чн КІНА я шо их я зх ще се Кк ож КУ ху їх сту їхе М - Ех «хх У Кая й -х Є Ко, Час фіг, 720 Що Тривалість ш що В щ Ж М АМС в.о г з Срлолека ОП б ям я фено ї ї тах Сполука БОМ мот рон на так Суюлука П 600 ВМ. що ення и як СюлеКН ЦОБМКЮ ВМ дощ кю о и і що | шин й ОМ й ХЕ 4 їй їх х я ше Ще Кі ж В" : роя хх ЗВИК я ек С « «У «о (9) «Код К Ку ки ШЕ Я «У Ся я « Чає Фіг: ТЕ що. Загальна виконана робота -Е що ЕЕ | - ДМСО ГУ З я пи й зе Єрюлука П б цМ що і Е -ке Сполука ПСО ямі ре В за Ко дев зви СЮТУ Ка Ц 600 М. КЗ Щ-х і т ди з Мюлука п еОЮ ВМ г їди шу ще Н Шо нан и НК Я ше щ ШЕ С се А Де Я шо ж Н і нання БУК ни За ами а ши й як по Я - У - Ка по НО - іш Й Ко рез А КАК; К-й я о ШЕ ШИ х Час
Фіг. 73А в Співвідношення скорочень - Б БЮ щщ В то ДдМсо оо Яд т ії о сСуолука По нім ЕЕ фея -- Сполука ЦО ОБО НМ що ЗО мдраннт я Спюдука ЦП О0ю ЯМ КЕ гд они дяк Смолука П 000 НМ СЕ меш БІ В сс й 7 щшОСя. СЮ ве: мн вт х х х в я що Кк КУ а « С КМ Б Б а «М а ж я М о Ж ще І о С Час
Фіг. 738 Ш дис з зо арх Іа дмСОо Енощі - Н я Єполеука П б вм. ЗЕ, і Н де ее Сполука ПО вм р: Як ке . Сполука І 600 М що Е ме і нн мч г В шо са блюдука Й 6000 М т аа ши ех ШИ ОО озяд САН сн кран 5 ою ми сн НН - -щ В; ; т Я У Ех ж це - щу «У У ке ду Ки ше я г «З - ги а ке СУ є Час вола?
Фіг. 736 - цк я о дМсо хх ще речи - що ДМес шк В же ї т ї Сполука Ц б ям що і Н : ско (нале ва ог ще 2 Жодний ж сСлюлукаЛ оп иМ ОЗ реа ех с -ж о Суюпежа Й 000 в пої рай дент : -- Сполука БІО ція ни шення 00 Сполука БЮ М БУК с нн З АВМ НЯ шин З о БИ 5 я -о м ше 5 М хе м М -3 и и а НИ -е о хе Ка НЕ й «Х Час
Фіг. 730 Тривалість М В : 5 ОО дДМСО - В ! в ЧНУ 7 фролуха По ям то М ї их, жів ч як кх чне у ЗЕ че он Я щк ! о буюзука бо ВМ З В : Пн, ен Сполука ЦЮ нм Бр і 7 Ї ше; кн «ко Сродука ЦП 000 вій ков : по дм В 5 он ки пи ЧІ «они чи Кк -3 - Кия ре «к Ж Я Ко Ко щ що : ха Ух « - к поя чве
Фіг. 73Е ж - Загальна виконана робота я ве д Щ нй чфн ще ко Е Н АМС 5 5 вв : т пе Сполука По б М що я ї п ---е сполука ПоОбО ямі Фон Бах Сх вия кру вени ож Б ях лосо зак Сполука ПО БО0 М оте Жди Ж Счтолека ЗО ОЗ 406 пр нн в Спелука П 000 М щоВ ПО ев дош б» Шо ла ин : во Мо дин ї Фо ї я У хх 2 Ух Ух вжи и ЗНУ кує с ж «У : НН: м Час
Фіг. 74А сліввіднопення скорочень В й «ке ДМСО як ш -- Алое М 2 Б а0о - сен ЙКТО й б ям о т Н сах ЙО ПО БО НМ шов і : Й ру -- 5 300 Е Ж сю СО ДЦ 0 М щ дл ВОЮ» ра Ши и: ЗО дання : г г ки ІНК с Й хх Я Ех КЗ я щх р дій «і і «о Час
Фіг. 748 - дис г: 250 пар г Й - ДдМСО ще : л-ее до ПН б нм д в : «ке Алто ТО ВМ а ва й - Ши са Ле ПО ОО0 ЯМ А ові зт а я зо З У ПІ АХ кв Бе т я сх х х їх м КО ше я я Я М С це хх ХУ вся ; ях хз Фе ч «о «а Час
Фіг. 74С Тк «в йЮ щі в ча ДМСО т се Ал б НМ Я зо т к ск Віто ЦІ БО М ж ря оон сер хто М 00 НМ п й и Мо ще пос К най Мк вейе чаки Ж : в ЗО. Ше: вия кн х щ що що : ї В що | їй що Б й ш онов рою роноохкюююфюемнювовююроюттн с же хх х о ее є ех Я і; я С ся " хх я дер ке и ШИ З я Час
Фіг. 7433 Тривалість ія ої з дя й т і те ДСО Б щ Е ; ЩО -ее Аби б ОО й й ке Ат НП БО НМ Но а п ен -кО ї светрі 5 З ну и ха ТО ЛЕ БО НМ - Е ЕЕ «ек ВЕ во ш З Е г ї Ос їх - т - х Б зу хо щи де пі се «Ки в я «о Час
Фіг. 73Е т Загальна виконав. робо й БЕ АЮ є є - яке ДМСО ОБ : схе Ато П б нм що жо о і ме Ато НП бо ЯМ ж Б т не ай ї зн ЛО БО НМ о В а А - ш Б ик да ШЕ Ве си ИН ; КЗ ВХ ннуетннютсосюсорооосвютоосореоососсовооосозоссогсссосссг етос К х Ж Е ! ! їх к сх ооо є ее Час
Фіг. 75А Частота скорочень - че ДМОЮ НЕ Зк т хе ДлОЦ ВМ Б ж «ак то ЦО 60 ВМ Е ЕІ 2883 що Х зар ДЛ 000 ВМ оо з Ф в у Шу п тд й ми: ке Аня Я 2 ее ж М « Я р ше ОЗ де КУ с с К Е Час
Фіг. 758 щ Ас В --е ДМСО Бош чо ее АлО По М в ї ї х «же дло По М в г ин ча ще шк: за Алло ПО ЯМ В ОБО ЗНМро знесцоот оофя Б ДФ р. 5 т З і Фе Ж о -х х ке У ви чі хе до Інн АК М ш дя ща се Я ще ву « к- Час
Фіг. 755 Шк - з щ З чт а І! ке дМСО Ж І: ша ; Я 5 -е 4 й ОАла ТевМм ще і щ Ї ех дло Пе ЕН | нн ЧИЯ й яке доро ЦП б00 М щ'я Й і зо аа пенні р еВ те ї а ї ря вод і їй ке НН їх 4. ї г. я І : «г -У ІЗ ї ж 1 м ДІД донююмумннннннннннннтрчннимккк мк роооотфчкххннннннкккцукннмо Кк Ж їж ж и М ІНШ НИ що я й со сх и Час
Фіг. 7553 Тривалієть я -- пМСО З | зе Алло Не нМ я ОВО т хан Ато ПО М М В - т де ЛО І БО МІ чо хх Ме че : СОВОК Фет бе 2 яв ХХКУЄ нон вн в В З т ри шк «М ж Ку Е - є В В -5 ! щі ку и Є ск їм МУ с а ч - їж Час ріг. 78Е Засвльца виконана робота вою Мох Е в Ї -е- ДМОСО - В і і нах б 6 ві Во 35 й; з Ато П об'ям Е Е | рай 1 са кто ПО о00 вм 5 ЗЮ ший « ом ее пом ох ші сонне ш з С м их У кн ж: ИН «Фе од Я « С є ща КУ я Б Час
ФНг. 7ВА Частота екорочень и 5 ж те ДМС в в ою | й - Атом в В «Ох -к Сполука Ц 60 М в'Б ТУХИ яе д БЮ ей А Зк сполука В БО М
5. З жю г; ше ке ке Сполука І Об нім з Атео НП блаМ Во - В. й шин зе сполука ПІ О00О ВМ з Алло по М в В НЕК он ни зн 5 З их же ні з к що У сб -Ж їх т КО я КУ ка я м « ке дя ча
Фіг. 768 Е Аще Ех Е й 00 за ДМС 5 щ І т яв Ало б М шо В ї : «ко Єполука Н БО М в Я ан тя Слючука ЦОВОЮ нм 2 Уа онннких МНН Я -- Созолука Н БО мМ я Ахо П б ам ж ЗО не що Я Е 7 Сполука НОбОЮЮ ВМ з Ало НО бом оо опе ши їй їх - Кн мин пн миня чин м ке їж - ж ФУ ся ке С - ; г -х Ко вих Час
Фіг. 76С пох ш водою 0 др ДМСО я в х І т є Б Е І т і схе лоб М
КЕ . т 5 їх й Де ВЕ ше ШИ -жх Сполука М бО нм БеШЯ де й : з Е К о а 5 ке Слолька ЛВОд НМ З х ень ЗМ НЯ не що - т що м: Б Ж ; ее Сполука Пе нм я Алло П б ям дош те і ду я тих Й - в Н о дет ІЗ ех Сполука ЦП 6000 М о Ахо П б М В проніс лст ун : х » ше де М г щк м Р що с с. хх З с ГХч Ко ре. Час
Фіг. 760 Тривалість «в? ся- ДМСО в В . -е Ато НП в ям З тво Ж. Н Й ке Смлолука ПО бом в Е 6 еко ї у я Соолика Н 600 М т- й ТО ен ее Сполука ЦП БО нм -- Ато 6 М ОО зни М м ПРЯМІ ; шов ! ни ан о Сполука П ОООО ЯМ з Ато По ВМ У Е 5 рення ! ВЕ А х ВВ шок їй і; у д - о х їх х Ж се су у - с рей в-я я У Є « А ої о 8 Час
Фіг. 76Е гя в Захальна виконана робота с В дБ Ою- ж ДМСО 5 А - Ат БиМ що те х Сполука НОб'яМ шо рану . й и Щодо жю - ке я рлолука По бой нМ - В ий 7 7 столука ПОМ А ПВА що Кх В неньку их сток а шо ЖК ран т те Сполука Н БОЮ ВМ я Ато По нм ож Пси ра ЗХ дян «і "В. Ко савкнвана У ди 4 ОВО ; ення - й у сх -х я І А ШИК, Є Кк КЗ КЗ з с я Фф Час фіг 7тТА Частота скорозені» ш й 500 шк шо -- ДМСО Е В я. т - ях ЕЕ НМ -Е : : --е МЕВНМ бю ! ! х я МЕН Бод фе тн зе МЕ ВООИМ -- ще КЕ Ше щи вк Пн ние ее МІЯ КМ тот зд Н ія й «Щ. пен нн Я ; 5 ; м пн: пон с «ее с ке т рей с Ух « КО КО Ф у ие о Час
Фіг. 77 цс Не В -е- ДМСО ї т се МЕ ЗНМ Ж що. е ; зе МЕ ВНМ а Е вн «аю МЕ ВОНМ 5 З ОС вх Н Б ци й й яуяеуит ї ух АК кенях а що А й В женні тина нин ин ї кн чи НИ ши Кі У У Ж СХ ге КУ «г оо Час
Фіг. 77 їнк 258 с Е | Н - ДМСО ЩЕ а» 7 т Ге мим т х фон -е МЕ бНМ до ідрктитттнсте т В 8 Бо при -е МЕДОВМ Е З ля ше Ше; с МЕН РЕ: Ше шо Еш - МИ МЕМ ш ш Е нн й ш- й Бк І овен каш Ше ШИ НИК Я г Бач «Б СУ Ф Ф «я іж Час
Фіг. 77 Тривалість я що З тк яд й ее ДМСО В - | сл МИ ЗМ щ: ДН ША Й тя МЕМ щ о но НЯ х са пов че ее сов НН е «в Й : сн шк Бо Ох В : ЩЕ: | й х ХЕ ХХ за | ; 7 ї : : : жи І НИ МИ -Х кх У Кз Я до г) Час
Фіг. тТЕ Загальна виконана робота
Ме і за ДМСО дк ї схо ВИ ЗНМ 2 щ БІК т х ЕЩІ х Ко В ї : у й вчу 7 К . сх ре Ж «зе Ві дБ в Б КІ Кот й м ВИ НМ шо ї р ї ої ФВ З ан Од г УМ Но т в Ж я ШО й ї Бе п ЕоОВ і Мол : В ско щ -Е ї йо ве їх 4. ра мот 2 со З З с ж нн НН ша З ке а що що ще те Ех дв Час
Фіг. 78А Частота охорозень щ і в Е . ха ДМС Е З зх Й ї ск Сполука ПО БО ЯМ в Н Жов «еесполека ПП 00 ВМ иЬ Ц б нм - п ї 3, дод Й й Й ши Й шов бо Ба жать ежесполека П БО Мо» НІф б вм Є "в й Ки шт КЗ еВ СпОопУ сх ям я ща Я х Фо ри, х дя з Пе вімою Пів о я х се Б х сам ЩЕ В, ЗУ вн ЕК пра ие и ис Кк х й С ж НО С ти ду Кк Кк Зе,
Фіг. 78 - Ем х З0в4 дмсо га і мон соляожих о: Ї Сполука ЦП БО нм -кОж і тако й Зо ! В зга Сполука ЦОбБО0 нМНІФ б М во Її ії я й слот; я Е ! й ке «же Сполука ЦП бо нм я ПЕН дов во Шен: о М -8 1 ї ння ее спюлука ЛОБООВ ЯМ - НІфИ Є
За. НН о о НК. М З | ши и НН, нм Мо і: звання знов зорово змінні змімнвнннн пн ше к Кк ХУ п - с С д ж Ф 7 ч є кї БІ Час
Фіг. 78С А Тк - й ЗюА дМоо во сСполужа Пк НМ оЕ НЕ - шо зако Сполука ПО 600 ВМТ в'яМ х 5 ! й свт тні свя Сполука ПО бом НІф Не ід оНю ше: М шрн «а. ВМ. ВЕ «карт т поки спри Е ЕЕ я і зве Сполука НП ОБО0О ВМ о фе сеощо ям Фе ш пра а чи и су на сх С ие ді КИ с ГУ Час
Фіг. 780 - ТІривзвліють їй я од І І . ! маю ДМСО Е 5 -о ; т Н : зе Спюлека П ОБО ям 5 Е ї їх т дк яке Слюлука ЛООбО МФ 6 вм. ви ї А и Ж шо й гать с що ї дк Й ше тех Сполука Пед М Нв о В і о; - Соні но З ям ЕЕ хм Сполука П ОО нм я Но ох 7 й ся ; ВМ. й пн ин пи «ин «нн в и ШИ НЯ ГО Б і К- «7 КЗ й є Час
Фіг. 7У8Е - ще Загалюні викоманн роєвуєа ш В зе М сок яеДдМсО до -ю шаф ее Сполука П 60 хм шк Кд І че сполука ЦП ОО НМ ЕЕ ви ж НІфе нм х Мн тик 4 ее сила ПО вм о НАФТІ Б М Ще ех зе Сполука 1 ОпО піс М в В жо к Я же сСполука ПП О00ОО Мо Нф І б нм шо кусок ИН с ми я ! в до 5. пункту виникав жрьиникя В и ж Щ ко гій К Я С Бе Бк) ге є Ко Чис
Фіг. 79А Нулдасцояв Пунасибан і мкм Рг і мкм ж б Ме кож му ж ВК и У У щук и А А фіг. 798 гх тин зджка Слювука - рр й Стету кар ТА Сполука Сполука Сполука МОЇ пк Пі мкМ На мМ па)мкМо мкм мкм ЗІ ЖЕ Саня ко КУ поооннвдодононно МводддоННОВО оддовнВОоНМ ОО фодедодоннномо ОО вддддоонновоооню модонододнннноо.
МУ Б зу щу У МУ У У Ж ЗУ Ж ЕХ щу У КО У юЖ ТУ щу РОХУОМ МИМО ПО ОО їнрВ5 ОО КК КК о ж а м ік и КЕКВ ВТ ОО ПВ ПЕ п КЕ я ОО КОН У ВІСНОВН сєссксссссссснснсємннєсмснсннсноно к-п38 КО КК А ЕК о на ВН Я шк» о о о Я ЕМ ОО В В В В ВІЇ - пІІІОДО ОО І ОО І М М М М М І МІ М М Б В ВІ о КК КК КК В КК ВИ Уч М КК В КК КН мон КК о о нн МПулисийан ОК ОК ЗО ХОХКЕ О К 4 ЛП УХУХКи КК МУХИ Ок актин М ПОМ М ОО НК ОК ОХ М М я ВО КО ОО Я т ОМ М лиш ЕООО о О В Оо ооо
Фіг. 796 Пуласий - авімкмМ Нуласно й єуг зн і мим - УЖ 0299009 09900099с Фе мемеовмювовооо м два ошь ль ль о Б ОВ ав дь п В В Шин нн Щ-акти ч пи Й ооо ОО Я ВИМКИНИ Зо з Ко
Фіг. 790 Слионука Сполека у люту ка цозїороз Сполука дчолу те - З їх не Н вщА я З мКЄ МНуласибо мкм мем МімЕМ обо мех ТУК зи З мим. «у о сн ЗІЗ и АВ З ЗВ ав ОБ дв дв дн оЯВ БИ Зв яв ов осв» ав ов Оозв ав ов в в нн Му ласиовн УРА с ЛОКК ОК КК 0 ПО ОО - ОО Я пу ласиоаті В ПМ М М М М Б-акт о. о Я МИШКИ р, - ОО ж м НУ ласиан
ОБО о МИ ЕХ А сопла др неОмовКАТІ В ЗЕМ ПО нМАКОМНСЮЯ УЖ І ПВОМНОВК АН СО СИМ пн АСОВО -- Ук | неабовАН інн ВЕ суч Пре АНОУ - ДІЯ | НЕОМНОВКАЦ ня КІ ТАГОМКІ ТІ СЯАБОШОУ - ДАІ І НРОЖОРКАТІ н-ВЕБВ з ОК ТІ ВЖАКОНОЗ ІН фр Емо АЖ я и КИ ОО ВАНОЇ О рух ї ВООНОВКАН КЕ ЧІТ 1 ва я ДАИХ Її ВеОНОТ АН що Ц ВЗАКОМОЗ А ОХ р вжовоВихАНІ ве перу Ом я МОХ ї пеОмОВе АТ ін З ЦИТ ВЖАСОМУ я ОХ Її НОМ ОНСАЦІ ПО 5 ук а о ояАКОМОУ -- Я ОЇ мРОНОВКАНІ Ва Я: Ах Кк пражанопо юри ринок Б си є ПремаАКОМТЬ я РІ | НВОЙОВКАТІ БО З АСОМ Є ТрЕМАБОМОУ - ОХ оНОДиЗеК АТ ден нний КЕ ДО ИН І ЖК КІ Кн В ДИ іон М іс ВИН ОБ ОО У ДАНИМ ЛІ В АНОМОУ и Зм рН Є ІЕМ АНОНО МОН Б м КОН Є ЦД НЯ АШОНО І ою зо их Тр иЖАКОМОУ зх : НО сь о ИН ТІ ВЯАКОПО ж дн В Я 3 ЯКО ПО ВЯАКОМУ їх ож Но о І Я лін о УНК Ка р пчАКОВОУ й калу ко трон в у ВК КЕН ТО І ВЯАКОПУ КоноиМ Е КОГО ПрИМАЄОНОЇ и В ДО ЗВ ГО ПрЕМаноПоу МОВ ОБ Я Є ПІ ЕМАКОО о З Є І В ККУ ячна З мс | вчАКОНОІ з зеодеснееевн К нний СЯ ЮОО ми мн ЯМ , НЕ ОК вон уЩЯК І НиаИсегАЦТІ Я рез КОХ (Опов сАї а з зе ОИХ І МВОИЛЕБАТІ В Б уУЧях її понлоА ОБ Уч | неон паж КО А ІП ОВК А Ї моаоожююнЯ М ЗА со з: ПИМНННН И ге нн СИ КЗ С В У іт же як --О зу я вЯ сво. М ПИ ЕРа Я НК)
з-федевнює се ірис 1 ечмапонос, я уд ; водпове АН о: КИ Мрихе дсананонпосьь рум пооновсАН ОМ Є НЯ АКОПО зу | неон АН на се ПОЕМА я МУ | ТОН ОабВКАН о до ІАЕ При АКОПОІ в УЖ | ЯВОИСВКАН ь МО Я І вмАКОВО А ТИХ З ВОНО АН нн ок уро | ВМАЖОМОІ Я. ТОК р неОНоеКАН вн МЕ. р ДОП І Я АНОПО) я ДОН | НЕОИВАТІЬ БО я ОО І РмАКОпОУ З. ЯМ Ї неонових КТ ФврІМІ І еяХнОомоУ я. рани І НеОМОоВКА М Ці КК ТО ема я ДІХ ранок Ау НК Я Др еманопту я- роз ої наоисвеАх
ЗМ. ско НИХ Є ЯКОЮ ДЖ р неонових пе. п НО Є ПреЯАНсН Ар р ИХДИОВНАН ен З ХУ ДемАТОНОЗ - БМ Її НЕОМОТАЦНІ за ПИ Я Ко лляланнянюннннК ОМ нн МИ МИ сг о ЯКО Є ПО БМАКОНО НЕМОВ с зе ЯКО Є І ОВАКОМОЇ ПІИТКИНИИМИ МНИХ ШК ОА МОН Ех Ч вяАНОНГу КОКО ов о сю ЯКО | Доза жк о ОО ШО ЧИЛІ мАКОЦ ГхЯ ОК с о КОТ ПВА - ок Я КО ЦП пмАКОВОУ ; яиоджу я ДІ КО ПО НЯАКОВОЇ
КВ. у цу У УМХ БО. МНН аж що ІНК ГО ПО ИЯАКОМУ «ро як ГО ехо нн не І НО УКЯНКОГО ПО НМАНУ зн. су рр: Є ПТ ЯМАКОПОЗ МЕ З ИН Є ПО яМАСОНУ знімає. 5 НУ Є ПОВЖАНОНО Ко лмемчччтюннй М ЗАЙ зх ИМЯ ЖЕЯ вом КЗ КО в дю ДВх | НеЙМОВНАЦ ре З 2 ИН | НОМОВЕХТ СТЬ в о НИХ | НОМОАН -- ЕМ КИ | нано І а ВИ МН В рваионКАщ Кк В ЧК 1 веоВ зкАН (05 4ю в нки ВІЙ п ни СИ ж жи и чи Ф ДЕ Б С 7а алмаза вза глаисьу
СН ов я вяАКОВОЯ зум р нон хн ВЕ З Є ЕиЯАКОВОЮ А ЖК р пово --- Не реяАКОМО в КН І НВОЙОАТЬ нення. З ТИХІ ПІ ВЖАКОМОУ 3- ДАН І НЕОНОВІ ВО р пПоямАНОПОЮ УМ | ВОЯКА Н кишеня 5 ТЯ Премланоцо - тям | неаКОВКАН яжряео вяаноеюту я |дрох рнвОомоВАТІ ж з ЯМ ЦІ ВжАНОЮТ з ДОР | НЕОЙОВКАЦ я Я ЯКО р ВАВ яю рих ріномон Ах се ДЕ Я чі ЦиЗАКОПОЗ- р фоном овгАНн Е дон ее, «щи О ПОвмАКХВХОЗ я рак Її неон овКАІ КО пу го ПО вало ДЯК І НЕОНОВЕАЦ М КИТИ Є ЦремАНОПО я рр ран зинАЦ ни ру Є І ВЯАКОМОІ я МАС пропо аН, ВО ЗНМ Є ПІ ВЯАКОМО) я рН Її НООШОВНАТ осовесюсвеєюютені 5. ЗИ пишна 543 Косі Н МЕМ сс з Я Є ДОН АТО Й осв а р У я АК сг ! ЕЕ т соссо ВІЩИЙ з ЕХ ЯАК ОП о А ПреЗаАНОЮУ ж НО ОО ЯКОЮ Це АІМКУ Бе Я я мо Я І ПрЕЯАТОП І
В. ПЕ М З КЕ Є ТО РЕ ВЯАКОМОУ Ки на М МОН КО МАКОМ СОСЕН, «Я де ДМ ОКО П ВАКОВ У я УМ ДЕ реп роя АНОМЗ ме а по УМО, ЦО СТОНУ не аю уча ГО ТІ вжи сх ВАНІ УНІ вяХрОвІх нія. сі ЯНА ПОВЯЛІЯКУ мах у ДВ Є 1 ОЯАЖОВОУ ин Ка НК длмлжляннннн ЗК АК лю Мк й ПОН Б ді Мих р нБонавХН Вр аю утяи р неоповиХу В БО ДОВ рнидисвсАу і В сх кі прамовкАН КО п рих | пеайовкАН "ПО З ИН І НИОМОВ. кН СК Яю ї- ЇЇ ланажляляжялляляняжнй ЗК КУ с псчюмеяентннннтя А МК т є - кох «ж З г23 ше ШЕ НЕ НЕ ЕІ алеля важити па су
ХУ чо УчиКе Треялесо) я рих ї миоповг АТ ЗК Зк ре домом о Др ї НеОБОВСАТІ Же це ре р емАпОойтЬ я АрРЮХ НедИоВА А чом: ПОвЯАНОПО ру рононови КН ЧІ ПрИЖАНОМОУ кю ІДОВХ РНРОЯОНКАЦ ЗЕ чиАВИХІ Призлеопс) с Ох Її НеОМОМАЮІ ЗА ча ОНКО Пр ОМАБОВІЗ е УуЯЕ | БО КАН ЖЕ зу о ТрижАНОМОУ я ОХ Її нвОМОоК Ар кі чо ЦрежАНОМОУ ДОВ ї НРОМОНКАТІ ЖЕ АААккея ЗЕРНО ПО НнАНКОВО ДИ р ВедпооБАН ЗО чрРУТАНО П вхАШОНМО 6 ЯМ ї ВеОНОВВАЦ ве уява АОНО я БІК р пРОЙОВВАН до науч Є ЦО взАКОПО я ррех раховотАН За ЧЕНИХ Є Пром АНОМО я ДОМ Її пеовОВКА й Я зе и є рим аАнОоНоу я рев ропюоновКАр ЗМ Я М Шкве, ЗкаЄю МЕ х снення. зва ОН Є ТІ яЯАКОНОЗ з МВ че іст ДМОХ Є ЦП ОМАКОПІУ ВВ ЧИ це МУЯР Є ПОНЛАКОПО о зе с МОЇ ПМАКОПОУ КО чес НОЇ ПОВЯАБКОПІЗ ж не чи і УМЯМОЇ ТЕМОЮ її ІН ЕК Не я ЯМ КО ПЯЯАНОПОУ ке Ме М «ТАРИМ КО Пр ВМАБОНО ша, кад ЕМЯК КО ВМАКОВО Я дм В ку роз ДОВЖ ОТ ИЖАНОМУ овен Че ак МІК ГО ПРЕМАКОМО КК Чи ше ДЯ ГО ЦЕ иМАНОНОІ ЗИ че ущяи є ПОеЯАТОП Х й церк Є речАКОМОУ ХЕ ЧЕ УЧ Є НИ охАКОМОУ Вс Я і КЕ, че ще ще МКК я мих є ДАМ І НЕОНОВКАН я Ме до МНК р неоновКА з жене Ен МЕ КО ДЯ НИРКА МВ зо уч | весно ХЕ зх | воша Ін чх рих рониомовКАН ВС синяк МІ Ж і вих НИМИННННИН ЗКУ г не р : Зб ЕН 6 ж ШЕ КНОЗЖЕОЮХ ВЕ ЕКОМ МО
С оз их По ежапоно я рих р еромонсАТ ОЗ чи уч І ВХ АКОВОІ е Арх | веойтА БЕ чер т вяАгОН с Кр вихаиаВКАЦ Б зви ПоехамовОо ук р веаВоВгАН, МН ЧК ЦО еМАКОМОЗ -- Ох | неоВОоВАН. НЕО ЧЕ ур рримагоноу юю рр | неаанонг АН НО чар р ехАКОМОУ Я. ІДНА | пеоМиопКАД, СО чере о ежАногУ я ДЮ її проновК Ар и МКК І вх аопо ь ую водна р ЗоОввВ задо веАКОПІЗ ІК | ВеОНЗОКАД. поши ЯК ИМЯ Й пжАКОПО) я рІЯК р НВО НІ МО чЕучяні о і ЗАКО я АОБХ Її месиовКАЇ не по Р Ж Ор ЕЖАМОМОУ яю ДІЯ рома в ЧТ вил спо ра ГониамОове АхЦ ВО чер І ПОМ хоп 3 рак | неон кА І Ї днпнлтлнічататтнтнинї ЗЕ ЯК анннеяеннсеттеснний ЗЕ ОЗ ло ПИММНННОМВ ЕЕ ВІ і лання ЗМ КЕ ча зр вжАгОопЗ НЕ че о Кри є вм АКОПОУ ОО чи зх УМ Є ЕН 4 НЕ рало с ЕХ Я ЦОВЯАКОНО ру С че оо У ВЗ АКОМОУ Ж КК и о КН Ор ЕчАКОНОУ й Еш ча дк ДЯК КО ПримАКОНОХ ЕК Че Я КО романи ОК Ми ЗО ИН СТО р ВЛАКОГОУ М ча о ОО ремонту Ми Зк МО БО речо в ЗЕ НИХ ГО ТІ ВЯАКОНО у е. па РИМ КОП
"НЕ. ду ЧИХ КО ЕЖАКОМУ зер ЗО вяХгОвО НМУ за о к вен ЦИ ЩО Кн М НМ ЗВ за ДОНУ Її МеОпОоНеХТІ ха кас рія р нодятАу Е ЗЕ о як | неовта АН ема. ча рих рижонову АН МО ЦЕ учнях ранима ВО ЗЕ АрИХ р анонош АН Є нан мі ММ КО тд же пПИМОННОООО рій МУ їК- Я З ж о пенею ЕН ве чланоюі вЕНПУЕЗНОЮКХ
Фіг. 8В0А й Й Бузасий Пуласий анімкМ пт ВН 1 мкм ої ВУ пак Кк ме МУ Ко мо ПО В
Фіг. 80835 І Стюдузна слюррка Сполука Сполука МНуласнб мкм мкм МЛімЕМОц мМ пе зн З мим КчуЯ с «Пт Е5 ме хо змизас т ВЕ ЩО У ЗУ СУ МУ З Б ОЗж НУ 5 БУ ЖЕ ОК в с с . с К і ще С ЗУ ММУХ с й
- . Пузвоисня с их е-- с ух Пузасношх х-йклІм КО о В М 7
Фіг. 8О0С о Шуласий Шулзсно ані мкм сеї ав, с і оволававовававо Повававввалввово НИ новввввлавовавосі щік ав я ль ав ов ХВ ЯКО дж дови ОМ В ВО
Фіг. 800 СпОодуКкВ СЛЮМКИ у чолка ! я йо оз Сболука юлвка МНуласяй осв бкж 1 мкм о н'оМко ан мимо 0 МЕМ мкм зу анал хг ту «су «цу ри в в МО ЗВ в оЖв осв яв оЯв осв ль ож Лв оЯВОВВ ОВ о своЖа ов т Жв ВИНЕН НВ німа М М М ВАННИ ОО й о
UAA201806074A 2016-01-04 2017-01-04 L-валінат карбоксамідного похідного гідроксипропілтіазолідину та його сольова форма, кристалічна поліморфна форма UA125377C2 (uk)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662274674P 2016-01-04 2016-01-04
US14/987,586 US9447055B1 (en) 2016-01-04 2016-01-04 α-amino esters of hydroxypropylthiazolidine carboxamide derivative and salt form, crystal polymorph thereof
US201662395664P 2016-09-16 2016-09-16
US201662407918P 2016-10-13 2016-10-13
PCT/EP2017/050101 WO2017118641A1 (en) 2016-01-04 2017-01-04 L-valinate of hydroxypropylthiazolidine carboxamide derivative and salt form, crystal polymorph thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA125377C2 true UA125377C2 (uk) 2022-03-02

Family

ID=57799697

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201806074A UA125377C2 (uk) 2016-01-04 2017-01-04 L-валінат карбоксамідного похідного гідроксипропілтіазолідину та його сольова форма, кристалічна поліморфна форма
UAA201806830A UA125118C2 (uk) 2016-01-04 2017-01-04 Альфа-аміноестери карбоксамідного похідного гідроксипропілтіазолідину та їх сольова форма, кристалічна поліморфна форма

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201806830A UA125118C2 (uk) 2016-01-04 2017-01-04 Альфа-аміноестери карбоксамідного похідного гідроксипропілтіазолідину та їх сольова форма, кристалічна поліморфна форма

Country Status (23)

Country Link
EP (4) EP4144351A1 (uk)
JP (5) JP6933322B2 (uk)
KR (2) KR20180099708A (uk)
CN (1) CN108779087A (uk)
AU (4) AU2017205670B2 (uk)
CA (2) CA3009573A1 (uk)
DK (2) DK3400217T3 (uk)
EA (1) EA036990B1 (uk)
ES (2) ES2916835T3 (uk)
HR (2) HRP20220674T1 (uk)
HU (2) HUE058871T2 (uk)
IL (4) IL284912B (uk)
LT (2) LT3397622T (uk)
MA (2) MA43580A (uk)
MX (3) MX2018008304A (uk)
PL (2) PL3400217T3 (uk)
PT (2) PT3397622T (uk)
RS (2) RS63286B1 (uk)
SG (4) SG11201804789QA (uk)
SI (2) SI3400217T1 (uk)
UA (2) UA125377C2 (uk)
WO (2) WO2017118641A1 (uk)
ZA (1) ZA201903769B (uk)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL284912B (en) * 2016-01-04 2022-07-01 Merck Serono Sa L-Valinate derivative of hydroxypropylthiazolidine carboxamide and salt form, crystalline polymorph thereof
RU2711615C1 (ru) * 2019-09-12 2020-01-17 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта" Способ лечения эндометриоза на основании экспериментальной модели у крыс
EP4034129A4 (en) * 2019-09-23 2023-11-01 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University TREATMENT PROCEDURES FOR GESTATIONAL EXTENSION AND FOR MENSTRUAL OR GESTATIONAL COMPLICATIONS

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3835175A (en) 1971-03-15 1974-09-10 Research Corp 9-fluorenylmethanol haloformates, carbonates and thiocarbonates
US3839396A (en) 1971-07-15 1974-10-01 Shionogi & Co 9-lower alkyl-9-fluorenyl carbonates
US4108846A (en) 1977-02-01 1978-08-22 Hoffmann-La Roche Inc. Solid phase synthesis with base N alpha-protecting group cleavage
SE430885B (sv) 1980-03-24 1983-12-19 Ferring Ab Oxytocin-derivat
US4508657A (en) 1982-01-19 1985-04-02 Research Corporation Peptide synthesis and amino acid blocking agents
US4581167A (en) 1982-01-19 1986-04-08 Research Corporation Peptide synthesis and amino acid blocking agents
EP0112809B1 (en) 1982-12-21 1986-05-28 Ferring AB Vasotocin derivatives
US4460501A (en) 1983-08-30 1984-07-17 Research Corporation Process for the synthesis of peptides utilizing thioxanthylmethyloxycarbonyl dioxides
US5370135A (en) * 1993-10-13 1994-12-06 Biex, Inc. Use of estriol measurement to monitor tocolytic therapy
DE4434488A1 (de) * 1994-09-14 1996-03-21 Schering Ag Steroidester und -amide, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre pharmazeutische Verwendung
SE9604341D0 (sv) 1996-11-26 1996-11-26 Ferring Bv Hepta-peptide oxytocin analogue
IN188411B (uk) * 1997-03-27 2002-09-21 Yuhan Corp
AU2001261161A1 (en) * 2000-05-30 2001-12-11 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Dihydropyridine compounds for inhibition of calcium-influx
GB0130677D0 (en) 2001-12-21 2002-02-06 Glaxo Group Ltd Medicaments and novel compounds
ES2277640T3 (es) 2002-02-27 2007-07-16 Ferring Bv Productos intermedios y metodos para preparar analogos de heptapeptido de oxitocina.
UA78021C2 (en) * 2002-03-28 2007-02-15 Applied Research Systems Thiazolidine carboxamide derivatives as modulators of prostaglandine f receptors
GB0208785D0 (en) 2002-04-17 2002-05-29 Medical Res Council Treatment methtods
US7521530B2 (en) 2002-06-11 2009-04-21 Universite De Montreal Peptides and peptidomimetics useful for inhibiting the activity of prostaglandin F2α receptor
UA78058C2 (en) 2002-07-05 2007-02-15 Applied Research Systems Pyrrolidine derivative as oxitocin antagonists
AU2003300901A1 (en) * 2002-12-12 2004-06-30 Idenix (Cayman) Limited Process for the production of 2'-branched nucleosides
GB0314738D0 (en) 2003-06-24 2003-07-30 Glaxo Group Ltd Novel compounds
GB0414093D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Glaxo Group Ltd Novel compounds
WO2011051814A1 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Glaxo Group Limited Novel crystalline forms of (3r,6r) -3- (2, 3 -dihydro- 1h- inden- 2 -yl) - 1 - [ (1r) - 1 - (2, 6 - dimethyl - 3 - pyridinyl) - 2 - (4 -morpholinyl) -2-oxoethyl] -6- [(1s) - 1 -methylpropyl] -2,5- piperazinedione
EP2845850A1 (en) 2013-09-10 2015-03-11 ObsEva S.A. Pyrrolidine derivatives as oxytocin/vasopressin V1a receptors antagonists
EP2886107A1 (en) 2013-12-17 2015-06-24 ObsEva S.A. Oral formulations of pyrrolydine derivatives
WO2015192878A1 (en) 2014-06-16 2015-12-23 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Retosiban for the treatment of pre-term labour
CN106795110A (zh) 2014-07-02 2017-05-31 奥布赛瓦股份公司 治疗ot‑r活性相关的病症的方法中可用的晶体(3z，5s)‑5‑(羟甲基)‑1‑[(2’‑甲基‑1，1’‑联苯‑4‑基)羰基]吡咯烷‑3‑酮o‑甲基肟
EP3037101B1 (en) 2014-12-22 2019-03-06 Ferring B.V. Oxytocin receptor antagonist therapy in the luteal phase for implantation and pregnancy in women undergoing assisted reproductive technologies
IL284912B (en) 2016-01-04 2022-07-01 Merck Serono Sa L-Valinate derivative of hydroxypropylthiazolidine carboxamide and salt form, crystalline polymorph thereof
US9447055B1 (en) * 2016-01-04 2016-09-20 Merck Serono S.A. α-amino esters of hydroxypropylthiazolidine carboxamide derivative and salt form, crystal polymorph thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP3400217B1 (en) 2022-03-09
DK3400217T3 (da) 2022-06-07
PL3400217T3 (pl) 2022-07-04
HUE058872T2 (hu) 2022-09-28
AU2021218003A1 (en) 2021-09-02
IL260286B (en) 2022-02-01
ES2915948T3 (es) 2022-06-27
MX2018008157A (es) 2018-09-03
KR20180099708A (ko) 2018-09-05
JP2019501897A (ja) 2019-01-24
IL289256A (en) 2022-02-01
UA125118C2 (uk) 2022-01-12
JP2023002668A (ja) 2023-01-10
LT3397622T (lt) 2022-06-27
ZA201903769B (en) 2023-03-29
AU2021218009A1 (en) 2021-09-09
JP7432284B2 (ja) 2024-02-16
EA036990B1 (ru) 2021-01-25
CN108779087A (zh) 2018-11-09
WO2017118639A1 (en) 2017-07-13
WO2017118641A1 (en) 2017-07-13
AU2017205670A1 (en) 2018-08-16
JP2019500351A (ja) 2019-01-10
SG11201804594YA (en) 2018-06-28
JP2024012376A (ja) 2024-01-30
AU2023233151A1 (en) 2023-10-12
SG10202009723PA (en) 2020-11-27
KR20180100120A (ko) 2018-09-07
LT3400217T (lt) 2022-06-27
MA43549A (fr) 2021-05-26
JP6933322B2 (ja) 2021-09-08
MX2022000154A (es) 2022-02-21
MX2018008304A (es) 2019-01-24
EP4140988A1 (en) 2023-03-01
AU2017205670B2 (en) 2021-05-20
SG11201804789QA (en) 2018-07-30
PL3397622T3 (pl) 2022-07-04
AU2017205254A1 (en) 2018-08-16
JP7377588B2 (ja) 2023-11-10
HRP20220673T1 (hr) 2022-07-08
IL259742B (en) 2021-08-31
PT3397622T (pt) 2022-06-15
IL284912B (en) 2022-07-01
AU2017205254B2 (en) 2021-05-20
HUE058871T2 (hu) 2022-09-28
CA3009576A1 (en) 2017-07-13
SI3397622T1 (sl) 2022-07-29
EP3397622B1 (en) 2022-03-09
EA201891095A1 (ru) 2019-01-31
SI3400217T1 (sl) 2022-07-29
JP7169573B2 (ja) 2022-11-11
IL259742A (en) 2018-07-31
PT3400217T (pt) 2022-06-15
DK3397622T3 (en) 2022-06-07
EP3400217A1 (en) 2018-11-14
AU2021218009B2 (en) 2023-06-22
JP2021178858A (ja) 2021-11-18
RS63285B1 (sr) 2022-06-30
ES2916835T3 (es) 2022-07-06
EP3397622A1 (en) 2018-11-07
CA3009573A1 (en) 2017-07-13
IL284912A (en) 2021-08-31
IL260286A (en) 2018-07-31
HRP20220674T1 (hr) 2022-07-22
SG10202009769WA (en) 2020-11-27
EP4144351A1 (en) 2023-03-08
MA43580A (fr) 2021-05-26
RS63286B1 (sr) 2022-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI776886B (zh) Sestrin-gator2交互作用之調節劑及其用途
US11524003B2 (en) Alpha-amino esters of hydroxypropylthiazolidine carboxamide derivative and salt form, crystal polymorph thereof
JP7432284B2 (ja) ヒドロキシプロピルチアゾリジンカルボキサミド誘導体のｌ－バリネート及びその塩形態、結晶多形
US20210323935A1 (en) Alpha-amino esters of hydroxypropylthiazolidine carboxamide derivative and salt form, crystal polymorph thereof
EA039545B1 (ru) Способы предотвращения преждевременных родов с помощью комбинации ингибитора pgf2 и токолитического агента