UA125041C2 - Анти-ox40 антитіла і їх застосування - Google Patents
Анти-ox40 антитіла і їх застосування Download PDFInfo
- Publication number
- UA125041C2 UA125041C2 UAA201907981A UAA201907981A UA125041C2 UA 125041 C2 UA125041 C2 UA 125041C2 UA A201907981 A UAA201907981 A UA A201907981A UA A201907981 A UAA201907981 A UA A201907981A UA 125041 C2 UA125041 C2 UA 125041C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- bek
- rgo
- tpg
- antibody
- avr
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 45
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 161
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 94
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 75
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 52
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 51
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 44
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 23
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 22
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 10
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 8
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 8
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 7
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 6
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 6
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 claims description 4
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 118
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 82
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 82
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 80
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 78
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 67
- 101000679851 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 62
- 102000050320 human TNFRSF4 Human genes 0.000 description 62
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 45
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 45
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 43
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 43
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 37
- 230000004044 response Effects 0.000 description 31
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 29
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 27
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 26
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 26
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 24
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 23
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 23
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 23
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 20
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 19
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 19
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 19
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 19
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 18
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 16
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 16
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 15
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 14
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 14
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 13
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 13
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 13
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 12
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 11
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 11
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 11
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 11
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 9
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 8
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 7
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 7
- -1 but not limited to Chemical compound 0.000 description 7
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 7
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 7
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 6
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 6
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 6
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 6
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 6
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 5
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 5
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 5
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 5
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 5
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 5
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 4
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 4
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 4
- 108700023707 TUG1 Proteins 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 4
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 208000002030 Merkel cell carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 101100153537 Mus musculus Tnfrsf4 gene Proteins 0.000 description 3
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 101100491259 Oryza sativa subsp. japonica AP2-2 gene Proteins 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 3
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 3
- 208000017763 cutaneous neuroendocrine carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 3
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 3
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 3
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 3
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 3
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 description 3
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 3
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100256965 Caenorhabditis elegans sip-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 206010029266 Neuroendocrine carcinoma of the skin Diseases 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 101100385396 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) cka1 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 2
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000003721 Triple Negative Breast Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000005889 cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 238000010573 double replacement reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 2
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 2
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 2
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 2
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000007781 signaling event Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000012409 standard PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 2
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 2
- 208000022679 triple-negative breast carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GEDVVYWLPUPJJZ-UHFFFAOYSA-N (7-amino-8-methylphenothiazin-3-ylidene)-dimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].N1=C2C=CC(=[N+](C)C)C=C2SC2=C1C=C(C)C(N)=C2 GEDVVYWLPUPJJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AQSYHEKLGWEVDF-UHFFFAOYSA-N 1-n,3-n-bis[4-(4,5-dihydro-1h-imidazol-2-yl)phenyl]benzene-1,3-dicarboxamide;hydrochloride Chemical compound Cl.C=1C=CC(C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)C=2NCCN=2)=CC=1C(=O)NC(C=C1)=CC=C1C1=NCCN1 AQSYHEKLGWEVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUMXHEUHHRTBQT-AATRIKPKSA-N 2,4-dimethoxy-1-[(e)-2-nitroethenyl]benzene Chemical compound COC1=CC=C(\C=C\[N+]([O-])=O)C(OC)=C1 NUMXHEUHHRTBQT-AATRIKPKSA-N 0.000 description 1
- 244000005894 Albizia lebbeck Species 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- 241000605445 Anemarrhena asphodeloides Species 0.000 description 1
- 101100042944 Arabidopsis thaliana SOB5 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- OWNRRUFOJXFKCU-UHFFFAOYSA-N Bromadiolone Chemical compound C=1C=C(C=2C=CC(Br)=CC=2)C=CC=1C(O)CC(C=1C(OC2=CC=CC=C2C=1O)=O)C1=CC=CC=C1 OWNRRUFOJXFKCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022533 Calcium-binding protein 39 Human genes 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000277301 Esociformes Species 0.000 description 1
- 241000975394 Evechinus chloroticus Species 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 101150083807 HSD17B10 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000001204 Hashimoto Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 101000899411 Homo sapiens Calcium-binding protein 39 Proteins 0.000 description 1
- 101001024566 Homo sapiens Ecto-ADP-ribosyltransferase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001030197 Homo sapiens Myelin transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000874160 Homo sapiens Succinate dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur subunit, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000764263 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 101100533890 Hypocrea jecorina (strain QM6a) sor3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100533874 Hypocrea jecorina (strain QM6a) sor5 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 241001026509 Kata Species 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- 241001446467 Mama Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 102100038893 Myelin transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 241000692885 Nymphalis antiopa Species 0.000 description 1
- 241000283965 Ochotona princeps Species 0.000 description 1
- 208000005141 Otitis Diseases 0.000 description 1
- 244000170916 Paeonia officinalis Species 0.000 description 1
- 235000006484 Paeonia officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 235000016787 Piper methysticum Nutrition 0.000 description 1
- 240000005546 Piper methysticum Species 0.000 description 1
- 208000013544 Platelet disease Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 208000031951 Primary immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 101710100266 Serine/threonine-protein phosphatase 6 catalytic subunit Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N Tunicamycin II Natural products O1C(CC(O)C2C(C(O)C(O2)N2C(NC(=O)C=C2)=O)O)C(O)C(O)C(NC(=O)C=CCCCCCCCCC(C)C)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1NC(C)=O YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- KBGAYAKRZNYFFG-BOHATCBPSA-N aceneuramic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)C[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO KBGAYAKRZNYFFG-BOHATCBPSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011374 additional therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001295 alanines Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000919 anti-host Effects 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229940126587 biotherapeutics Drugs 0.000 description 1
- 229930189065 blasticidin Natural products 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014759 blood platelet disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000009104 chemotherapy regimen Methods 0.000 description 1
- 108700010039 chimeric receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011254 conventional chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 208000019258 ear infection Diseases 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000022244 formylation Effects 0.000 description 1
- 238000006170 formylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000033581 fucosylation Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000054886 human ART4 Human genes 0.000 description 1
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 1
- 102000045360 human SDHB Human genes 0.000 description 1
- 102000051450 human TNFSF4 Human genes 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940124622 immune-modulator drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000014828 interferon-gamma production Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000000111 isothermal titration calorimetry Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 150000002704 mannoses Chemical class 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000033607 mismatch repair Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011518 platinum-based chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000979 retarding effect Effects 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 230000000276 sedentary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- AXOXZJJMUVSZQY-BVDKBYOBSA-N sip 20 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)C(C)O)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)O)C(C)O)C1=CC=CC=C1 AXOXZJJMUVSZQY-BVDKBYOBSA-N 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009121 systemic therapy Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- ZHSGGJXRNHWHRS-VIDYELAYSA-N tunicamycin Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@@H](O)[C@@H](CC(O)[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C=C2)=O)O)O1)O)NC(=O)/C=C/CC(C)C)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1NC(C)=O ZHSGGJXRNHWHRS-VIDYELAYSA-N 0.000 description 1
- MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N tunicamycin Natural products CC(C)CCCCCCCCCC=CC(=O)NC1C(O)C(O)C(CC(O)C2OC(C(O)C2O)N3C=CC(=O)NC3=O)OC1OC4OC(CO)C(O)C(O)C4NC(=O)C MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002618 waking effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3023—Lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/75—Agonist effect on antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Винахід стосується анти-OX40 антитіла, яке містить (і) ланцюг VH, що включає три CDR; і (іі) ланцюг VL, що включає три CDR, де: VHCDR#1 має амінокислотну послідовність GFTFSRYGMS (SEQ ID NO: 101); VHCDR#2 має амінокислотну послідовність TINSNGGRTYYPDSVKG (SEQ ID NO:102); VHCDR#3 має амінокислотну послідовність EGITTAYAMDY (SEQ ID NO: 103); VLCDR#1 має амінокислотну послідовність KASQSVDYDGDSYMH (SEQ ID NO: 104); VLCDR#2 має амінокислотну послідовність AASILES (SEQ ID NO: 105); та VLCDR#3 має амінокислотну послідовність QQSNEDPRT (SEQ ID NO: 106). Розкриті також композиція, що містить таке антитіло, нуклеїнова кислота, що кодує це антитіло, спосіб його одержання та застосування.
Description
1. ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
ЇО00О1| За даною заявкою запитується пріоритет відповідно до 119(е) розділу 35 Ц.5.С. попередньої патентної заявки США Мо 62/434761, поданої 15 грудня 2016 року, вміст якої включено в даний документ за допомогою посилання в повному об'ємі. 2. ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
ІЇ0002| Дана заявка включає "Список послідовностей", представлений в електронному вигляді у форматі АЗСІЇ і повністю включений у даний документ за допомогою посилання.
Зазначена копія АЗСІЇ, створена 30 жовтня 2017 року, називається 381493-368УМО 5І їх і має розмір 97999 байт. 3. ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД 0003) Дана заявка належить, серед іншого, до нових анти-ОХ40 антитіл, композицій, що містять ці антитіла, нуклеїнових кислот, що кодують ці антитіла, і до способів їх одержання і застосування. 4. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
ІЇ0004| Терапія злоякісних пухлин включає широкий спектр терапевтичних підходів, включаючи хірургію, променеву терапію і хіміотерапію. Незважаючи на те, що різні підходи дають лікареві-практику широкий вибір методів лікування злоякісних пухлин, терапевтичні засоби, які існують, мають ряд недоліків, таких як недостатня вибірковість націлювання на злоякісні клітини в порівнянні з нормальними, здоровими клітинами і розвиток стійкості злоякісної пухлини до лікування. 0005) Нещодавно розроблені підходи, основані на націленій терапії, яка впливає переважно на клітинні процеси злоякісних клітин у порівнянні з нормальними клітинами, призвели до створення хіміотерапевтичних схем з меншою кількістю побічних ефектів у порівнянні з не націленими варіантами терапії, такими як променева терапія. (0006) Імунотерапія злоякісних пухлин стала перспективним терапевтичним підходом, що доповнює існуючі стандарти лікування. Див., наприклад, МіПег еї аЇ. Сапсег СеїЇ, 27, 439-449 (2015). Такі підходи імунотерапії включають створення антитіл, використовуваних для модуляції імунної системи з метою знищення злоякісних клітин.
І0007| Протипухлинні імунні відповіді в пацієнтів із солідними пухлинами були посилені
Зо лікуванням біологічними препаратами. Наприклад, існує два дозволених і доступних на ринку моноклональних анти-РО-1 антитіла: ніволумаб (ОРОІМОФ) і пембролізумаб (КЕУТКОБАФ)), які схвалені в США і Європейському союзі для лікування таких захворювань, як неоперабельна або метастатична меланома і метастатичний недрібноклітинний рак легені. Лікування пацієнтів цими препаратами призводило до протипухлинних відповідей, оцінених за поліпшенням виживаності без прогресування і/або загальної виживаності. (0008) Відсутність сповільнюваного ефекту ОРОЇМОФ на розвиток прогресуючого раку легені в популяції пацієнтів, що не одержували лікування, у нещодавно проведеному клінічному дослідженні, у якому порівнювали ОРОІМОФ зі звичайною хіміотерапією, підкреслює необхідність в альтернативних підходах і додаткових методах лікування злоякісних пухлин на додаток до існуючих терапевтичних стандартів лікування. 5. РОЗКРИТТЯ СУТІ ВИНАХОДУ
ЇО009| Даний винахід належить до анти-ОХ40 антитіл, які специфічно зв'язуються і активують ОХ40. Приклади амінокислотних послідовностей визначальних комплементарність ділянок (СОК), варіабельного домену важкого ланцюга (Мн) і варіабельного домену легкого ланцюга (Мі) (тобто, ланцюгів Мн і Мі, відповідно) і важкого і легкого ланцюгів анти-ОХ40 антитіла наведені в докладному описі нижче. Анти-ОХ40 антитіла, представлені в даному описі, призводять до активації адаптивної імунної відповіді.
ІЇ0010| Анти-0ОХ40 антитіла можуть включати модифікації і/або мутації, які змінюють властивості антитіл, наприклад, збільшують період напівжиття, збільшують або зменшують антиген-залежну клітинну цитотоксичніть (АОСС), як відомо в даній галузі. 0011) В описі також наведені нуклеїнові кислоти, що містять нуклеотидні послідовності, що кодують анти-ОХ40-антитіла за винаходом, а також вектори, що містять нуклеїнові кислоти. Крім того, в описі також представлені прокаріотичні і еукаріотичні клітини-хазяї, трансформовані вектором, що містить нуклеотидну послідовність, що кодує описане анти-ОХ40 антитіло, а також еукаріотичні клітини-хазяї (такі як, клітини ссавців), сконструйовані для експресії нуклеотидних послідовностей. Також запропоновані способи одержання антитіл шляхом культивування клітин-хазяїв і виділення антитіл, які описані в докладному описі нижче. 0012) В іншому аспекті даний опис належить до композицій, що містять анти-оХ40-антитіла, описані в даному документі. Композиції, як правило, містять одне або декілька анти-ОХ40 антитіл, як описано в даному документі, і один або декілька допоміжних засобів, носіїв або розріджувачів. 0013) У даному описі розкриті способи лікування індивідів, наприклад, людей, з діагнозом солідна пухлина, за допомогою анти-ОХ40 антитіла. Спосіб зазвичай включає введення індивідові певної кількості анти-ОХ40-антитіла, описаного в даному документі, ефективного для забезпечення терапевтичного ефекту. В індивіда може бути діагностована будь-яка солідна пухлина, і вона може бути вперше діагностована, бути рецидивуючою або рефрактерно- рецидивуючою. Анти-ОХ40 антитіло можна вводити внутрішньовенно кожні два тижні. (0014) Анти-ОХ40 антитіла можна вводити як самостійні терапевтичні засоби (монотерапія) або на додаток до інших терапевтичних засобів або разом з ними, як правило, але не обов'язково, з такими засобами, які використовуються для лікування солідної пухлини.
Терапевтичні засоби зазвичай можна використовувати в їх прийнятій дозі, прийнятим шляхом введення та із затвердженою частотою введення.
І0015| Анти-0ОХ40 антитіла можна вводити різними шляхами або способами введення, включаючи, але не обмежуючись ними, внутрішньовенну інфузію і/або ін'єкцію, і внутрішньопухлинну ін'єкцію. Кількість, що вводиться, залежить від шляху введення, схеми дозування, типу злоякісної пухлини, відносно якої проводять лікування, стадії злоякісної пухлини, відносно якої проводять лікування, і інших параметрів, таких як вік і вага пацієнта, як добре відомо в даній галузі. 6. КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
І0016Ї На ФІГ.1А-1О зображена функціональна активація Т-клітин людини іп міго після обробки ілюстративним анти-ОХ40 антитілом Ни3738. На ФІГ.1А показана проліферація СО4-
Т-клітин периферичної крові людини після обробки анти-ОХ40-антитілом Ни3738 або антитілом 1104, або 1808, описаним у літературі. На ФІГ.1В показане збільшення продукції інтерферону- гамма (ІЕМ-у) СО4ж- Т-клітинами людини після обробки анти-ОХ40-антитілом Ни3738 або антитілом 1104, або 1808, описаним у літературі. На ФІГ.1С показана проліферація СО4- Т- клітин периферичної крові людини після обробки Ни3738 або антитілом ТА7, описаним у літературі. На ФІГ.1О показане збільшення продукції ІЕМ-у СО4- Т-клітинами людини після обробки Ни3738 або антитілом 1А7, описаним у літературі.
Зо Ї0017| На ФІГ.2А-28 показаний ефект ілюстративного анти-ОХ40-антитіла Ни3738 на супресію, опосередковану Т-регуляторними (Тгед) клітинами людини іп міїго. Аналіз супресії
Тгед проводили з використанням двох різних співвідношень СО4-4/С025- Т-клітин, що відповідають, (Тгез5р) і СО4-7С2025-/С0127ом Т-регуляторних клітин (Тгед). Намисто реагенту
Тгед Зи!ирргез5 Іпзресіог (Іп5р) додавали в лунки для культивування в пропорції 1:11 намисто до клітин для стимуляції. Не забарвлена смуга на фігурі відповідає проліферації клітин Тге5р у присутності Іп5р. Анти-ОХ40 ії контрольні ізотипові антитіла Ї(Д1 людини тестували в трьох повторах при кінцевій концентрації 10 мкг/мл під час відсутності або в присутності зшивального реагенту (Е(аб)2 кози проти (ДС людини, Ес-специфічний) у пропорції 1:4. Планшети інкубували при 372С в 595 СОг протягом чотирьох днів. Додавали 1 мкКі/лунка ЗН-тимідину і планшети додатково інкубували протягом 16 годин. На графіках показана проліферація в імпульсах на хвилину (імп/хв). На ФІГ.2А показані результати Тгезр до Тгед у пропорції 2:1; на ФІГ.2В показані результати Тгезр до Тгед у пропорції 4:1. 0018) На ФІГ.3 показане інгібування зв'язування ілюстративного анти-ОХ40 антитіла Ни3738 у присутності розчинного ліганду ОХ40 (0ОХ40І) людини. На графіку показана середня інтенсивність флуоресценції (МЕ) залежно від концентрації ОХ401. (мкг/мл). Клітини Уигкаї, що експресують ОХ40 людини, забарвлювали титром неміченого розчинного ОХ401І і 0,2 мкг/мл
Ни3738 або контрольним ізотиповим антитілом.
І0019) На ФІГ.4АА показане вирівнювання амінокислотної послідовності ОХ4А0 людини (5ЕО
ІО МО:1) ї ОХ40 миші (5ЕО ІО МО:3). На ФІГ.4В показана активність зв'язування ілюстративного анти-ОХ40-антитіла Ни3738 з молекулами ОХ40 людини, миші або химери людина-миша, що експресуються на поверхні клітин, де багаті на цистеїн домени (СКО) миші замінені на відповідні ділянки людини. ОХ40 людини позначений як "2935-пиОХ40", химерний ОХ40 людини з СКОЇ миші позначений як "2935-пПИОХ40-тиСкКОї!", химерний ОХ40 людини з СКОЇЇ миші позначений як "2935-пиОХ40-тисСтОІІ", химерний ОХ40 людини з СКОПЇ миші позначений як "2935-пиОХх40-тиСкКкОПІ", химерний ОХ40 людини з СКОЇМ миші позначений як "2935-пиИОХ40- тиском", химерний ОХ40 людини з СЕКОІЇ миші і СКОЇЇЇ миші позначений як "2935-пиИОХ40- тиСКкОе" ї ОХ40 миші позначений як "2935-тИиОХ40". (0020 На ФІГ.5 показана конкуренція за зв'язування з ОХ40 людини на клітинній поверхні ілюстративного анти-ОХ40 антитіла Ни3738 або антитіла (1104, 1808, 106-222, 119-122 або бо 1А7), описаного в літературі.
І0021)| На ФІГ.бА показана активація МЕ-кВ у лініях репортерних клітин УигКкаї людини, трансфікованих ОХ40, при обробці ілюстративним анти-ОХ40 антитілом Ми3738 або Ни3738, або антитілом 1104, 1808, 106-222 або 119-122, описаним у літературі, або контролем з ізотипом за відсутності додавання зшивального агента. На ФІГ.6В показана активація МЕ-кВ у лініях репортерних клітин дигкКаї людини, трансфікованих ОХ40, при обробці ілюстративним антитілом проти ОХ40 Ни3738, антитілом 1А7, описаним у літературі, або контролем з ізотипом у присутності або під час відсутності додавання зшивального агента.
І0022| На ФІГ.7 показана протипухлинна активність ілюстративного анти-ОХ40-антитіла
Ни3738 на моделі адоптивних пухлинних клітин РОЗ людини в мишей М5О. 002 ЗІ На ФІГ.8 показані рівні інтерлейкіну-8 (ПІ--8), гранулоцитарного колонієстимулювального фактора макрофагів (зЗМ-С5РЕ), фактора некрозу пухлини альфа (ТМЕ- а) ї гамма-інтерферону (ІЕМ-у) у моделі реакції трансплантант проти хазяїна (МНОЮ), опосередкованої мононуклеарними клітинами периферичної крові людини (РВМС), у мишей
М5О після обробки мишей 1 мг/кг Ни3738 або контролем з ізотипом дО: людини один раз кожні 7 днів у загальній складності в кількості 4 дози. 7. РОЗКРИТТЯ СУТІ ВИНАХОДУ 0024) Даний опис належить до антитіл і їх фрагментів, які специфічно зв'язуються з ОХ40, до композицій, що містять антитіла, полінуклеотидів, що кодують анти-ОХ40 антитіла, клітин- хазяїв, здатних продукувати антитіла, способів і композицій, що підходять для одержання антитіл, і до різних способів їх застосування. 0025) Фахівцям у даній галузі зрозуміло, що антитіла і їх фрагменти є "модульними" за своєю природою. Протягом всього опису розкриті різні конкретні варіанти здійснення різних "модулів", що становлять анти-ОХ40 антитіла або їх зв'язувальні фрагменти. Як конкретні необмежуючі приклади наведені різні конкретні варіанти здійснення визначальних комплементарність ділянок (СОК) варіабельного домену важкого ланцюга (Мн), ланцюга Мн,
СОРК варіабельного домену легкого ланцюга (Мі) і ланцюга Мі. Передбачається, що всі конкретні варіанти здійснення можуть бути об'єднані один з одним, як якби кожна конкретна комбінація була описана окремо. 7.1. Скорочення
Зо (0026) Антитіла, що зв'язують фрагменти і полінуклеотиди, описані в даному документі, у великій кількості варіантів здійснення описані за допомогою їх відповідних поліпептидних або полінуклеотидних послідовностей. Якщо не зазначене інше, то поліпептидні послідовності наведені в напрямку М--С; полінуклеотидні послідовності наведені в напрямку 5'--3. Для поліпептидних послідовностей можна використовувати звичайні три- або однобуквені скорочення для генетично кодованих амінокислот, як зазначено в Таблиці 1 нижче.
Таблиця 1
Скорочення кодованих амінокислот
ПЕТТІ ПН КОН с ПОН НО х НО
Аспарагновакислотаї | (Ар 17777777777101111ССсСсСсСС
Плутамно//////// Її
Пволейцин/////СЇ 77777111 оМетіїнино 11777171 Ме 17771111 МсСсСсСсСсшС
Пролін.//////СЇ11111171711111111Рю11111111111111111СРСС20О
Таблиця 1
Скорочення кодованих амінокислот
І0027| Деякі послідовності визначені структурними формулами, що описують амінокислотні залишки, що належать до певних класів (наприклад, аліфатичні, гідрофобні тощо). Різні класи, до яких належать генетично кодовані амінокислоти, як використовується в даному документі, зазначено в Таблиці 2 нижче. Деякі амінокислоти можуть належати більш ніж одному класу.
Цистеїн, який містить сульфгідрильну групу, і пролін, який конформаційно обмежений, не належать до жодного класу.
Таблиця 2
Класи кодованих амінокислот 71.2 Визначення
І0028| Якщо в даному документі не зазначене інше, то наукові і технічні терміни, використовувані у зв'язку з даним описом, мають значення, які зазвичай відомі середньому фахівцеві в даній галузі. 7.3 Анти-ОХ40 антитіла і зв'язувальні фрагменти
І(0029| ОХ40 є костимулювальною молекулою, яка відіграє критичну роль у посиленні виникаючих імунних відповідей і одночасно пригнічує регуляторну активність Т-клітин. ОХ40, також відома як СО134 або член суперродини рецепторів фактора некрозу пухлини 4 (ТМЕКЗЕ4), являє собою трансмембранний рецептор клітинної поверхні типу І суперродини рецепторів фактора некрозу пухлини (ТМЕ), тимчасово експресованих на Т-клітинах відразу після їх активації і конститутивно експресованих на активованих Т-регуляторних клітинах.
Позаклітинний ліганд-зв'язувальний домен ОХ40 складається із трьох доменів, багатих цистетном (СКО), і четвертого часткового СОК домену (СКОЇ, СКО, СКОШ ї СКМ, відповідно). Хоча ОХ40 в основному експресується активованими СО4-- Т-клітинами, після активації він може експресуватися на В-клітинах, СОв8- Т-клітинах і натуральних кілерах (МК) і натуральних Т-кілерах (МКТ). Також повідомлялося, що нейтрофіли експресують ОХ80, і сигнальний шлях через ОХ40 на нейтрофілах людини інгібує апоптотичну загибель клітин.
Ліганд ОХ40 (ОХ401І), також відомий як ліганд суперродини лігандів фактора некрозу пухлини 4 (ТМЕ5Е4), СО0252 або глікопротеїн 34 (др34), активується активованими антиген- презентувальними клітинами і В-клітинами. Зв'язування ліганду з ОХ40 на антиген-активованих
Зо Т-клітинах призводить до інгібування транслокації МЕ-кВ і до активації шляху АКТ. Транслокація
МЕ-КкВ веде до активації молекул виживання, таких як Всі-2, Всі-ХІ., і до клітинного виживання.
Активуючі антитіла, спрямовані на ОХ40, призначені щонайменше частково для посилення антиген-специфічних імунних відповідей шляхом подовження активації і диференціації Т- ефекторних клітин.
І0ООЗОІ| Крім впливу на активовані антигеном Т-ефекторні клітини, націлювання на ОХ40, які експресуються Т-регуляторними клітинами, також може сприяти цьому передбачуваному механізму дії. Т-регуляторні клітини експресують високі рівні ОХ40 у пухлинному мікрооточенні.
Було показано, що активація ОХ40 впливає на супресорну здатність Т-регуляторних клітин і призводить до швидкого виснаження ОХ40-позитивних Т-регуляторних клітин у мікрооточенні пухлини.
ІООЗ1| В одному аспекті винахід належить до антитіл, які специфічно зв'язуються з ОХ40.
І0032| Як використовується в даному документі, термін "антитіло" (АБ) належить до молекули імуноглобуліну, яка специфічно зв'язується з конкретним антигеном, у цьому випадку, з ОХ40. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40-антитіла за даним винаходом зв'язуються з
ОХ40 людини (ЗЕБО ІЮ МО:1) (посилальна послідовність МСВІ МРООЗ318) ії тим самим модулюють імунну систему. У результаті відповідь імунної системи стає цитотоксичною для пухлинних клітин. Анти-ОХ40 антитіла містять визначальні комплементарність ділянки (СОК), також відомі як гіперваріабельні ділянки, як у варіабельному домені легкого ланцюга, такі у варіабельному домені важкого ланцюга. Більш консервативні частини варіабельних доменів називаються каркасними ділянками (ЕК). Як відомо в даній галузі, амінокислотне положення/границя, що визначає гіперваріабельну ділянку антитіла, може змінюватися залежно від контексту і різних визначень, відомих у даній галузі. Деякі положення у варіабельній ділянці можуть розглядатися як гібридні гіперваріабельні положення в тому розумінні, що ці положення можуть вважатися такими, що перебувають усередині гіперваріабельної ділянки за одним набором критеріїв, у той час як за іншим набором критеріїв їх вважають такими, що перебувають поза гіперваріабельною ділянкою. Одне або декілька із цих положень також можна знайти в розширених гіперваріабельних ділянках. В описі представлені антитіла, що містять модифікації в цих гібридних гіперваріабельних положеннях. Варіабельні домени нативних легких і важких ланцюгів містять по чотири ділянки ЕК, що переважно приймають конфігурацію
В-листа, з'єднаних трьома СОК, які утворюють петлі, що з'єднують структури В-листа, а в деяких випадках, що є їх частиною. СОК кожного ланцюга утримуються разом у безпосередній близькості за допомогою ЕК, і разом з СОК іншого ланцюга сприяють утворенню антиген- зв'язувального сайту антитіл. Див. Кабаї еї аІ., Зедоепсез ої Ргоїеїіп5 ої Іттипоїодісаї! Іптегеві (Майопаї! Іпозійше ої Неапк, ВеїШезада, Ма. 1987). Як використовується в даному документі, нумерація амінокислотних залишків імуноглобуліну здійснюється за системою нумерації амінокислотних залишків імуноглобуліну КаБбаї еї аї., якщо не зазначене інше. 0033) Антитіла за винаходом можуть бути поліклональними, моноклональними, отриманим за допомогою генної інженерії і/або іншим способом модифікованими за своєю природою, включаючи, але не обмежуючись ними, химерні антитіла, гуманізовані антитіла і антитіла людини. У деяких варіантах здійснення константна ділянка являє собою ізотип, вибраний з: ІДА (наприклад, (ДАТ або ІдА2), дО, ЧЕ, дес (наприклад, ІдСи, Ідсі2, ДСз або Ідсл) і ЗМ. У конкретних варіантах здійснення анти-О0Х40 антитіло, описане в даному документі, містить
Ідс91. В інших варіантах здійснення анти-ОХ40-антитіла містять /д52 або /дса4.
Використовуваний у даному документі термін "константна ділянка" антитіла включає природну константну ділянку, алотипи або природні варіанти, такі як ОЗ56Е і І 358М, або А4310 в ІдС1 людини. Див., наприклад, ЧепПегіз апа І еїгапс, МАбБ», 1(4): 332-338 (ЧиІ-Ацд 2009).
І0034| Константна ділянка легкого ланцюга анти-ОХ40 антитіла може бути каппа (к) або лямбда (АХ). А легкий ланцюг може бути будь-яким з відомих підтипів, наприклад, А, Аг, Аз або Ах.
У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить каппа (к) легкий ланцюг.
Ї0035| Використовуваний у даному документі термін "моноклональне антитіло" не обмежується антитілами, отриманими за допомогою гібридомної технології. Моноклональне антитіло одержують із одного клону, включаючи будь-який еукаріотичний, прокаріотичний або фаговий клон, будь-якими способами, доступними або відомими в даній галузі. Моноклональні антитіла, які можуть бути використані в даному винаході, можуть бути отримані з використанням широкого спектра методів, відомих у даній галузі, включаючи використання гібридомної, рекомбінантної технології і методів фагового дисплея або їх комбінації. У багатьох варіантах застосування даного винаходу, у тому числі іп мімо застосування анти-ОХ40 антитіл у людей, можна використовувати химерні, гуманізовані або людські антитіла.
І0036| Використовуваний у даному документі термін "химерне" антитіло належить до антитіла, що має послідовності варіабельних ділянок, отримані з нелюдського імуноглобуліну, такого як антитіло щура або миши, і константні ділянки імуноглобуліну людини, зазвичай вибрані за шаблоном імуноглобуліну людини. Способи одержання химерних антитіл відомі в даній галузі. Див., наприклад, Моїтізоп, 1985, Зсіепсе 229(4719):1202-7; ОЇ єї а!., 1986, ВіоТесппідне5 4:214-221; СіШев єї аї., 1985, 9. Іттипої. Меїйоав5 125:191-202; патенти США МоМе 5807715; 4816567; і 4816397.
І0037| "Гуманізовані" форми нелюдських (наприклад, мишачих) антитіл являють собою химерні імуноглобуліни, які містять мінімальні послідовності, отримані з нелюдського імуноглобуліну. У цілому, гуманізоване антитіло може містити практично всі із щонайменше одного, а зазвичай із двох варіабельних доменів, у яких усі або по суті всі ділянки СОК відповідають ділянкам СОК імуноглобуліну нелюдського походження, а всі або по суті всі ЕВ 60 ділянки відповідають ЕК ділянкам послідовності імуноглобуліну людини. Гуманізоване антитіло може також містити щонайменше частину константної ділянки імуноглобуліну (ЕС), зазвичай консенсусної послідовності імуноглобуліну людини. Способи гуманізації антитіл відомі в даній галузі. Див., наприклад, Кіесптапп еї аї., 1988, Маїшге 332:323-7; патенти США МоМо 5530101; 5585089; 5693761; 5693762; і 6180370 Оцееп еї аІх; ЕР239400; публікація РСТ УУО 91/09967; патент США Мо 5225539; ЕРБ592106; ЕР519596; Райдіап, 1991, Мої. Іттипої., 28: 489-498; зіцапіскКа еї а!., 1994, Ргої. Епд. 7:805-814; Кодизхка еї а!., 1994, Ргос. Маїй!. Асад. сі. 91: 969-973; і патент США Мо 5565332.
І0038| "Антитіла людини" включають антитіла 3 амінокислотною послідовністю імуноглобуліну людини і включають антитіла, виділені з бібліотек імуноглобуліну людини або тварин, трансгенних одному або декільком імуноглобулінам людини, і які не експресують ендогенні імуноглобуліни. Антитіла людини можуть бути отримані різними способами, відомими в даній галузі техніки, включаючи методи фагового дисплея з використанням бібліотек антитіл, отриманих з послідовностей імуноглобулінів людини. Див. патенти США МоМо 4444887 і 4716111; ї публікації РСТ УМО 98/46645; УМО 98/50433; УУО 98/24893; УМО 98/16654;. УМО 96/34096; МО 96/33735; і МО 91/10741. Антитіла людини також можуть бути отримані з використанням трансгенних мишей, які нездатні експресувати функціональні ендогенні імуноглобуліни, але які можуть експресувати гени імуноглобулінів людини. Див., наприклад, публікації РСТ УМО 98/24893; УМО 92/01047; УМО 96/34096; УМО 96/33735; патенти США Мо 5413923; 5625126; 5633425; 5569825; 5661016; 5545806; 5814318; 5885793; 5916771; і 5939598.
Крім того, такі компанії, як ГакеРпапта, Іпс. (ВеІтопі, СА) або Сгеаїйме ВіоЇ арх (Зпіпеу, МУ) можна залучити для одержання антитіл людини проти вибраного антигену, використовуючи технології, подібні технологіям, описаним вище. Повністю людські антитіла, які розпізнають вибраний епітоп, можуть бути отримані з використанням методики, називаної "керований відбір"'. У цьому підході вибране нелюдське моноклональне антитіло, наприклад, мишаче антитіло, використовується для керованого відбору повністю людського антитіла, що розпізнає той же епітоп (див. Уезрегз еї аї., 1988, Віотесппоіоду 12: 899-903).
Ї0039| Також розглядаються зв'язувальні фрагменти анти-ОХ40 антитіла. Зв'язувальні фрагменти за даним винаходом включають фрагменти, які здатні специфічно зв'язуватися з
ОХ40. Приклади зв'язувальних фрагментів антитіл включають, наприклад, але ними не
Зо обмежуючись, Бар, Раб, (ав)», Ем-фрагменти, одноланцюгові Ем-фрагменти (5сЕм) і однодоменні фрагменти.
Ї0040| Раб-фрагмент містить константний домен легкого ланцюга і перший константний домен (СНІ) важкого ланцюга. Бар'- фрагменти відрізняються від Гар-фрагментів додаванням декількох залишків на карбокси-кінці домену СНІ важкого ланцюга, включаючи один або більше залишків цистеїну із шарнірної ділянки антитіла. Рар'-ррагменти одержують шляхом розщеплення дисульфідного зв'язку в цистеїнах шарнірної ділянки продукту розщеплення пепсином Е(аб)». Додаткові хімічні комбінації фрагментів антитіл відомі фахівцям у даній галузі.
Еар- ії Е(аб)»-фрагменти позбавлені ділянки кристалізованого фрагмента (Ес) інтактного антитіла, швидше виводяться із кровообігу тварин і можуть мати менше неспецифічне зв'язування із тканиною в порівнянні з інтактним антитілом (див., наприклад, Умапйі еї аї., 1983, у.
Мисі. Мед. 24:316).
І0041| Як добре відомо в даній галузі, "Ес"-ділянка являє собою фрагмент константної ділянки антитіла, що не містить антиген-специфічну зв'язувальну ділянку. В ізотипах антитіла
ІЧ, ІДЗА і дО, Ес-ділянка складається із двох однакових білкових фрагментів, отриманих із другого і третього константного доменів (СН2 ії СНЗ домени, відповідно) двох важких ланцюгів антитіла. Ес-ділянки ДМ і (ДЕ складаються із трьох константних доменів важкого ланцюга (домени СН2, СНЗ ї СН4) у кожному поліпептидному ланцюзі. (0042) Фрагмент "Ру" являє собою мінімальний фрагмент антитіла, який містить увесь сайт розпізнавання та зв'язування мішені. Ця ділянка складається з димеру одного варіабельного домену важкого і одного легкого ланцюга в тісній нековалентній асоціації (димер Мн-Му). Саме в цій конфігурації три СОК кожного варіабельного домену взаємодіють і утворюють сайт зв'язування мішені на поверхні димеру Мн-Мі. Найчастіше шість СОК надають антитілу специфічність зв'язування з мішенню. Однак у деяких випадках навіть один варіабельний домен (або половина Ем, що містить тільки три СОК, специфічних для мішені) може мати здатність розпізнавати і зв'язувати мішень, хоча і з більш низькою афінністю, ніж повнорозмірний сайт зв'язування. 0043) "Одноланцюговий Ем-фрагмент" або "зсЕм-фрагмент" зв'язування антитіла містять домени Мн і Мі антитіла, де ці домени присутні в загальному поліпептидному ланцюзі. Зазвичай поліпептид Ем додатково містить поліпептидний лінкер між доменами Мн і Мі, який дозволяє бо 50Ем утворювати структуру, сприятливу для зв'язування з мішенню.
Ї0044| "Однодоменні фрагменти" складаються з одиничних доменів Мн або Мі, які проявляють достатню афінність відносно ОХ40. У конкретному варіанті здійснення винаходу однодоменний фрагмент є верблюжим (див., наприклад, Кіесптапп, 1999, Чошигпа! ої
Іпптипоіодіса! Меї(одз» 231:25-38).
І0045| Анти-ОХ40-антитіла за винаходом включають похідні антитіл. Наприклад, похідні антитіл зазвичай модифікують глікозилюванням, ацетилуванням, пегілюванням, фосфорилюванням, амідування, приєднанням відомих захисних груп/блокувальних груп, протеолітичним розщепленням, зв'язуванням із клітинним лігандом або іншим білком. Будь-яка із численних хімічних модифікацій може бути здійснена відомими методами, включаючи, але не обмежуючись ними, специфічне хімічне розщеплення, ацетилування, формілування, метаболічний синтез тунікаміцину тощо. Крім того, похідне може містити одну або декілька неприродних амінокислот, наприклад, використовуючи технологію атбгх (див., наприклад,
УмоБоп, 2006, Спет. Віої. 13(10):1011-2). (0046) Анти-ОХ40 антитіла можуть бути антитілами, послідовності яких модифіковані так, щоб змінювалася щонайменше одна біологічна ефекторна функція, опосередкована константною ділянкою. Наприклад, у деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло може бути модифіковане так, щоб знижувалася щонайменше одна біологічна ефекторна функція, у порівнянні з немодифікованим антитілом, наприклад, зменшувалося зв'язування з одним або декількома рецепторами Ес (Есук), такими як ЕсукКіІ, ЕсукПА, ЕсуКІІВ, ЕсукПША і/або ЕсукІВ.
Зв'язування з ЕсукК може бути зменшене за рахунок мутації сегмента константної ділянки імуноглобуліну антитіла в певних ділянках, необхідних для взаємодії з Есук (див., наприклад,
Сапіеїй апа Моїгтізоп, 1991, У. Ехр. Мед. 173:1483-1491; ї Г ипа еї аї., 1991, У. Іттипої. 147:2657- 2662). Зниження здатності антитіла зв'язуватися з Есук також може знижувати інші ефекторні функції, які залежать від взаємодій з Есук, такі як опсонізація, фагоцитоз і антиген-залежна клітинна цитотоксичніть ("АОСС"). Як показано в ілюстративному прикладі, варіант домену СН2 із заміною М263Ї, М273С, М273Е, М273Е, М2731, М273М, М2735 або М273У у домені СН2 Ес- ділянки може мати знижену спорідненість відносно ЕсукІІВ у порівнянні з відповідною константою ділянкою дикого типу.
І0047| Анти-ОХ40-антитіло, описане в даному документі, включає антитіла, які були модифіковані на придбання або поліпшення щонайменше однієї опосередкованої константною ділянкою біологічної ефекторної функції в порівнянні з немодифікованим антитілом, наприклад, посилення взаємодії з ЕсукК (див., наприклад, патентну заявку США. Мо 2006/0134709).
Наприклад, анти-0ОХ40 антитіло за даним винаходом може мати константну ділянку, яка зв'язується з ЕСуКІЇ, ЕСУКІА, ЕсуйІІВ, ЕсуУвША і/або ЕсуАПІВ з більшою афінністю, ніж відповідна константна ділянка дикого типу. Як показано в ілюстративному прикладі, варіант домену СНАа із заміною М263ІЇ, М273С, М273Е, М273Е, М2731, М273М, М2735 або М273М у домені СН2 Ес- ділянки може мати більшу спорідненість відносно ЕсукПША в порівнянні з відповідною константою ділянкою дикого типу. (0048) Таким чином, анти-0ОХ40-антитіла за винаходом можуть бути змінені за біологічною активністю, що призводить до підвищеної або зниженої опсонізації, фагоцитозу або АОСС. Такі зміни відомі в даній галузі. Наприклад, модифікації антитіл, які знижують активність АОСС, описані в патенті США Ме5834597. Приклад варіанта зі зниженим АОСС відповідає "мутантові 3" (також відомий як "М3", показаний на ФІГ.4 патенту США Мо5834597), у якому залишки 234 і 237 (використовуючи нумерацію ЄС) заміщені аланінами. Варіант мутанта З (також відомий як "М3") можна використовувати в ряді ізотипів антитіл, наприклад, у МЗ дО» людини. 0049) Додаткові заміни, які можуть модифікувати зв'язування Есук і/або ефекторну функцію
АрСС анти-ОХ40 антитіла, включають заміну КЗ322А або подвійну заміну І 234А і І1235А в Ес- ділянці, наприклад, ДС! людини з подвійною заміною І234А/235А. Дивися, наприклад,
Нелаген, еї аї. 9. Мігої., 75 (24): 12161-12168 (2001). 0050 У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіла мають низькі рівні фукози або не мають фукозу. Антитіла, позбавлені фукози, корелювали з підвищеною активністю АОСС, особливо при низьких дозах антитіла. Див. Зпівїд5 еї аї!., 2002, 9. ВіоІї. Спет. 277:26733-26740;
ЗпіпКкажа еї аї., 2003, 9. ВіоІ. Спет. 278:3466-73. Способи одержання антитіл без фукози включають ріст клітин мієломи УВ2/0 щура (АТС СК. 1662). Клітини УВ2/0 експресують низькі рівні мРНК БИОТ8, яка кодує а-1,6-фукозилтрансферазу, фермент, необхідний для фукозилування поліпептидів. 0051) Анти-ОХ40 антитіла можуть містити модифіковані (або варіанти) домени СН2 або повнорозмірні Ес-домени, які включають амінокислотні заміни, які підвищують зв'язування з
ЕсуКІІВ і/або знижують зв'язування з ЕСуУРПША у порівнянні зі зв'язуванням відповідної ділянки бо СН?2 або Ес-ділянки дикого типу. Варіанти домену СН2 або варіанти Ес-ділянки описані в заявці на патент США Ме2014/0377253. Варіант домену СН2 або варіант Ес-домену зазвичай містить одну або декілька замін у положенні 263, положенні 266, положенні 273 і положенні 305, де нумерація залишків в Ес-домені відповідає нумерації ЄС за Караї У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40-антитіла містять одну або декілька замін, вибраних з М263І, М2661,
М273С, М273Е, М27З3Е, М273Ї, М273М, М2735, М273У, МЗО5К і МЗО5МУ, у порівнянні з доменом
СНО дикого типу. У конкретних варіантах здійснення одна або декілька замін домену СН2 вибрані з М263Ї, М273Е, М273Е, М273М, М2735 і М273М у порівнянні з доменом СН2 ІдС1 людини. Наприклад, одна або декілька замін домену СН2 ІдО1 можуть являти собою М273Е. В іншому конкретному варіанті здійснення анти-ОХ40-антитіло за винаходом містить варіант домену СН2 ІДС, що містить амінокислотну заміну М2631.
І0052| Інші приклади варіантів домену СН2 або Рос-ділянки, які можуть забезпечувати підвищене зв'язування з ЕсукіІВ і/або знижене зв'язування з ЕсукІША у порівнянні зі зв'язуванням відповідної ділянки СН2 або Ес-ділянки дикого типу, включають варіанти, описані
Мопаетеїде еї аї. Сіїп. Сапсег Кев5., 19(5), 1035-1043 (2013), наприклад 5267Е або 5267Е/ 328Е в ЇЯ401 людини.
ІЇ0053| У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40-антитіла включають модифікації, які збільшують або зменшують їх афінність зв'язування з фетальним Ес-рецептором, ЕсКап, наприклад, шляхом мутації константної ділянки імуноглобуліну в певних ділянках, пов'язаних із взаємодією з ЕсКп (див., наприклад, УМО2005/123780). У конкретних варіантах здійснення в анти-0ОХ40 антитілі класу Ідс введені мутації так, що щонайменше заміщено один з амінокислотних залишків 250, 314 і 428 константної ділянки важкого ланцюга заміщений, або будь-які їх комбінації, наприклад, положення 250 і 428 або положення 250 і 314, або положення 314 і 428, або положення 250, 314 і 428, положення 250 і 428 конкретної комбінації. Для положення 250 амінокислотний залишок, що заміщає, може бути будь-яким амінокислотним залишком, крім треоніну, включаючи, але не обмежуючись ними, аланін, цистеїн, аспарагінову кислоту, глутамінову кислоту, фенілаланін, гліцин, гістидин, ізолейцин, лізин, лейцин, метіонін, аспарагін, пролін, глутамін, аргінін, серин, валін, триптофан або тирозин. Для положення 314 амінокислотний залишок, що заміщає, може являти собою будь-який амінокислотний залишок, відмінний від лейцину, включаючи, але ними не обмежуючись, аланін, цистеїн, аспарагінову кислоту, глутамінову кислоту, фенілаланін, гліцин, гістидин, ізолейцин, лізин, метіонін, аспарагін, пролін, глутамін, аргінін, серин, треонін, валін, триптофан або тирозин. Для положення 428 амінокислотні залишки, що заміщають, можуть являти собою будь-який амінокислотний залишок, відмінний від метіоніну, включаючи, але не обмежуючись ними, аланін, цистеїн, аспарагінову кислоту, глутамінову кислоту, фенілаланін, гліцин, гістидин, ізолейцин, лізин, лейцин, аспарагін, пролін, глутамін, аргінін, серин, треонін, валін, триптофан або тирозин. Приклади заміни, відомої для модифікації ефекторної функції Ес, є заміна М4281. в
Ес, яка може виникати в комбінації із заміною Т2500) в Ес. Додаткові конкретні комбінації придатних амінокислотних замін зазначено в Таблиці 1 патенту США Ме7217797. Такі мутації збільшують зв'язування з ЕсКп, який захищає антитіло від деградації і підвищує його період напіврозпаду. (0054) Анти-ОХ40 антитіло може мати одну або декілька амінокислот, вбудованих в одну або декілька його СОК, наприклад, як описано в дипд апа Рійскіпип, 1997, Ргоївіп Епдіпеегіпд 10: 8, 959-966; Малакі еї аїІ., 2004, Ргоїєїп Епд. Оев 5еї. 17(5):481-9. Ериб 2004 Ам 17; і патентна заявка США Мео2007/0280931. 0055) Анти-ОХ40 антитіла з високої афінністю до ОХ40 людини (5ЕО ІЮ МО:1) можуть бути ефективні для терапевтичного і діагностичного застосування. Відповідно, у даному документі розкриті антитіла з високою афінністю зв'язування з ОХ40 людини. У конкретних варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіла зв'язують ОХ40 людини з афінністю, що дорівнює щонайменше приблизно 100 нМ, але можуть проявляти більш високу афінність, що дорівнює, наприклад, щонайменше приблизно 90 нМ, 80 нМ, 70 нМ, 60 нМ, 50 нМ, 4ОнМ, 30 нМ, 25 нМ, 20 нМ, 15 нм, 10 НМ, 7 нМ, 6 нм, 5 нМ, 4 нМ, З нМ, 2 нМ, 1 нМ, 0,1 нМ, 0,01 нм або навіть вище. У деяких варіантах здійснення антитіла зв'язують ОХ40 людини з афінністю зв'язування в діапазоні від приблизно 1 пМ до приблизно 100 нМ або з афінністю зв'язування з будь-яким з вищевказаних значень, таким як, але не обмежуючись ними, від приблизно 0,001 до 10 нМ, від 0,001 до 5 нМ, від 0,01 до 100 нМ, від 0,01 до 50 НМ, від 0,01 до 10 нМ, від 0,01 до 5 нМ або від 0,01 до 1 нМ.
І0056| Афінність анти-ОХ40-антитіла до ОХ40 людини може бути визначена методами, добре відомими в даній галузі або описаними в даному документі, такими як, наприклад, але не ними не обмежуючись, ЕГІ5А, ізотермічна титраційна калориметрія (ІТС), поверхневий плазмонний резонанс або флуоресцентний поляризаційний аналіз.
Ї0057| Анти-ОХ40 антитіла, як правило, містять важкий ланцюг, що містить варіабельну ділянку (Мн) із трьома визначальними комплементарність ділянками ("СОМ"), позначеними в даному описі (у напрямку М--С) як Мн СОНЯ, Мн СОЯ? і Мн СОКЯЗ, і легкий ланцюг, що містить варіабельну ділянку (Мі) із трьома визначальними комплементарність ділянками, позначеними в даному описі (у напрямку М--С) як М СОЯ, Мі СОКЖЯ і М СОКЯЗ. У даному документі наведені амінокислотні послідовності характерних СОК, а також амінокислотні послідовності ділянок Мн і Мі важкого і легкого ланцюгів характерного анти-ОХ40 антитіла.
Конкретні варіанти здійснення анти-ОХ40 антитіл включають ці характерні послідовності СОК і/або послідовності Мн і/ або Мі, а також антитіла, які конкурують за зв'язування з ОХ40 людини з такими антитілами. 0058) У деяких варіантах здійснення амінокислотні послідовності СОК анти-ОХ40 антитіла мають послідовності, вибрані з відповідних послідовностей СОК Мн і Мі у Таблиці З нижче:
Таблиця З
Приклади послідовностей СОК аСЕтТЕЗАУаМ5 (ЗЕО ІЮ МО 101) , СУБІАБИУУММ (ЗЕО І МО 111)
Мн СОВИ: СЕМІКОТУМН (5ЕО 10 МО-121) агЕБ/ТЗУСУН ЗЕО ІЮ МО:131 тІіМБмаавАтУМРОоБЗУКа (ЗЕО ІЮ МО 702) ми СОоВяо: мзУравзммумМРвБі са (ЗЕО ІЮ МО 7112)
І ВІОРАМЕМТКМОРКЕРОС (ЗЕО ІЮ МО 722) мімузааеТрумМмААРІЗ ЗЕО І МО:132
ЕСІТТАМАМОУ (ЗЕО ІЮ МО 103) , ТГРУМЕОСУ (ЗЕО ІЮ МО 113)
Мн СОНЯ: СОРАМ/РУУ (ЗО 10 МО 123)
ЕЕРрУ ЗЕО І МО:133
І ВАБОВІЗММІ М ЗЕО ІЮ МО:114
ААБІІ ЕБ (ЗЕО ІЮ МО 7105) мМ. сОовяг: УтзвІ нь (ЗЕО ІЮ МО 115)
УтЗвІнь5 ЗЕО І МО:125
ОООБМЕОРАТ (ЗЕО ІЮ МО 106) , ООСМТІ РІ Т (ЗЕО ІЮ МО 116)
М. СоВЯВ: ООСМТІ РУТ (ЗО 10 МО 126)
ОСТІ РРТ ЗЕО І МО:136 0059) Конкретні приклади варіантів здійснення анти-ОХ40 антитіл з вищевказаними СОК описані в даному описі. У деяких варіантах здійснення анти-0Х40 антитіло має СОК з послідовностями 5ЕО ІЮ МО:101, 102, 103, 104, 105 і 106. У деяких варіантах здійснення анти-
ОХ40 антитіло має СОК з послідовностями 5ЕО ІЮ МО:111, 112, 113, 114, 115 ї 116. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло має СОК з послідовностями ЗЕО ІЮ МО:121, 122, 123, 114, 125 і 126. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло має СОК у послідовностями
ЗЕО ІЮ МО:131, 132, 133, 114, 115 і 136. 0060) СОК, описані в даному описі, утворюють зв'язувальні елементи в ланцюгах Мн і Мі анти-ОХ40-антитіл за винаходом. У Таблицях 4 і 5 нижче описані Мн і Мі ланцюги, відповідні до прикладів анти-ОХ40 антитіл, що містять вищевказані СОМ. СОК підкреслені нижче в Таблицях 4 і 5. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить ланцюг Мн з амінокислотною послідовністю, як описано в Таблиці 4:
у хи ЕМ шк Ки КИ М І УКХ
НЕЯВКИ еф ях. Уе Укжжа кА юки п Кк тити вт КІМ ЕЕ А ЕІ ТУ ВОМ ЕКС
ГО ВО кове ТІМ пу
Ми3738 Ун сепмакнттттвомест окоту ет ткау ЗБОЮ МО
МКК І КИМ АХ ЕЖее ВА п ВОК А Ка ЗА НІВ ЗО Я око За алу у ур и ЕК
ЯК Ко жу МЕМ ж ти М ших м де ДИТ ВЕ ХЕ КІ
ЕЕ Ма Ва ї; Ко ХЕ Е Тк ок ом ІН М КІ КК м г ПИКА ЖАХ хх КК жо хи ки и МК р ЕК КТК кави ЕВ су МОМ МЖК
М КАК злак і ВКМ ЗМО ТУКА ТІ
Ни3738 Мн.1Ь своем ориммиї кі волотнко (ЗБОЮ МО:22) ен он їдшл Мк М КУМ дО хек КК КЕ ча З ми БК
МОНА ККУ и ув и в Кт ТНК ОКА
ВД ав В п и о у В ВО В ЖЕНЕ
З кі типу Кл я пив п КК ЕК КЕКС КТК
Ма ЕМ КО АН Ка ІН М КВК НА Я
Бак МІ Аня
Миз3726 Мн стен АТ ко Теж тиж Мх хІпрермут в их ЧЕ КИ ВХ (5 ЕО І р МІФ) 23)
Ва НЕ: НК НЕ КВ З КК Те ЗЕ ДИ КУ ДВ хижими ик ТЕХ
МУК шт М жи му т г ІиокМ тик тки ШУ три ри и хв ух цем сич Не а В КО Кано кол, ї ї ке ав Як їз
УС ОЕооУ Ки ов АУ Я клот у БУТ Е Ку ТАТИ ЖИ Х АК ВХ ГУК КИ КУТ ХК ит
КУ. ЩО БСК МЕ ОН Ко и а НО
Низ726 Мн.Ла рт тешемийтат мо юним уки пет (ЗЕО Іо МО: 24)
СТУК КЕ у ке М АЖ ІНАУ КУМ КК у Кл а КА
Кук ХУ ох. хКут лику Ух у и Кіма УВІ
КБ В ЕК Кв В й З У о В ЗИ М КУ ВО ВЕ МК пер ЕН Ти т па у КИ и ув у ду
КО я КМ нем ЗУ У ВІВ мес ЕК кое и КИ
Ми3739 Мн октвн кто пт ди и кот пк (ЗБОЮ МО25)
МЖК КТК МА лаки ках г пе М Ж АСВ М ЕК ін ит УЖ КАК ме М. ев о и В
Уж ходите МИТИ ех и КИ я ЖК Е КК х КК ож ев ОК МКЧХ жу ке
У У У КК У АВК ка ТАЗ, овес шле
МУКА КОКАМОВІКиМЕК СКАТ
Ни3739 Мн.1Ь тартатнтятмкі сві вста ттуслвсс ВАМ (ЗБОЮ МО)
ТЕ КИ КЕ КОМ ее шив че НИ Я ЗОН ЕК А рей: МТА М МАКИ Те ЕМ КК ХК У зи ж Ех
УЖЕ АК Ж Кам нку ки Щек их и тки ЩУКИ Ти ТІ и ке аа М МЕМ а КН й ма м му пт ж ж ув іх у рр у лим ліжку ря бланки щи оте лУмадт ве
МУКОВЕОКОСоВін но Іа Ко
З 7 (птінтікттн ж ння Канни ж ЖЖ Книжки 5 о (Ф) . )
ІНК Ж КОЛА ЕТИКИ МЖК КОМИ МІ ЕУХАЛІН У МЕ М УХ УДК
СЕ Уж
ШК Ме кала и не ча ик і па м и а и а и м в
Уа ю АТ ЕЕ, ва Сак КК СУ КІ У
Пе АК Узі У ілі ків Мир ад КМ
ХА АХАААААин шосе жін лососем адеІаВІ ТІВ ше аІиМ Х МААКІКОТІВ
ННиз741 Ун.25 КищеКто том Дек АвВІю Три (ЗЕО ТО МО:28)
ЯК Ке ва ЗК І З ик ад КО В В МУ
Ір т КИ тт а АЖ і ланцюг Мі з амінокислотною послідовністю, як описано в Таблиці 5:
Таблиця 5
Приклади послідовностей Мі
Послідовність Ідентифікатор
ПІ ТОВрАевВУВі шов ска орОтНОвХ
Миз7з8 У чнитТоскросеек тА І АВК ЕО ІЮ МОЗЗІ и І Пр и Он :
ТЕТУ ЕКО ВАТЕУ С ОМВО, | ) ве МмІйиЕ АЗОТ КМАТІМСКАВОВУОСОВЕ
Низ3738 Мі.1 нет пов у тет ик тек тт де ту тунх вет х что СОБОЮ МО:З2)
ТЕТ ТВОСОВЕМВУАУ ХУСТ ОМсМЕо еко
КНУ том тОогтаВаи МВТ Ах що ЗЕ МЕ
Миз3726 Мі Око КТК КРОК ОСІ (5ЕО ІЮ МО:33)
ОТУТ АТТВСОСМ ЕР КОАНОІКЕЕСК
Ни3726 Мр МИ РОКАРЕСОТК СТАНОМ СВК ТВ Т ОКО (ЗЕО О МО:34)
ТТ БСОРЕВКАТТКСОСОМТ ВТС ТК ТЕ рІшмтаттезовАВЬООоВеУТ СВОИ
Ми3739 Мі Кер ЕКеТЕеВ ОВЕН ЕЕ НЯ ТОЖ (БЕ І МО:35) ка ее пн в В В ВД ПП В НВ ше
Ни3739 МБ оокКрРОКВАВКОСТЄКЕВВКС, ВЕВЕБСОСБЕЖОКТ | (5ЕО ІЮ МО:36)
ПТОМТОТТиЕрида Спиши
МиЗ3741 Мі МКУ ТУ тЕВоновУВОВЕТОВсК МЕЖ (5ЕО ІО МО:37)
ТМ ук КОФЕ ЕРТЕЦЄ БИК ОоКІК
ПТО ТОВКИ САМ ЕН КНУ
Низ3741 Міс ООКРОКаАрКТО ВТО е УВО (5ЕО 1О МО:38) п ни в в в и ни ВО
ЇОО61| У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить ланцюг Мн з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:21 і ланцюг Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО
ІЮ МО:31. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить ланцюг Мн з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:23 і ланцюг Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО
ІЮ МО:33. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить ланцюг Мн з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:25 і ланцюг Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО
ІЮ МО:35. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить ланцюг Мн з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:27 і ланцюг Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО
ІО МО:37. 0062) У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло підходить для введення людям. У конкретному варіанті здійснення анти-0Х40 антитіло є гуманізованим. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить ланцюг Мн з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІЮ
МО:22 і ланцюг Мі з амінокислотною послідовністю ЗЕО І МО:32. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить ланцюг Мн з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІЮ
МО:24 і ланцюг Мі з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:34. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить ланцюг Мн з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІЮ
МО:26 і ланцюг Мі з амінокислотною послідовністю ЗЕО І МО:36. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить ланцюг Мн з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІЮ
МО:28 і ланцюг Мі з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО:38.
0063) Фахівцям у даній галузі зрозуміло, що певні мутації в послідовності Мн або Мі анти-
ОХ40-антитіла, описані в даній заявці, можуть дати анти-ОХ40-антитіла в рамках об'єму розкриття. Мутації можуть включати амінокислотні заміни, додавання або делеції в послідовності Мн або Мі, як описано в даному описі, при цьому зберігаючи значну активність проти ОХ40. Відповідно, у деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить послідовність Мн, яка щонайменше 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 93 95, щонайменше на 95 95, щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95 або щонайменше на 99 95 ідентична будь-якій послідовності Мн, як показано в Таблиці 4. Анти-0ОХ40 антитіло може містити послідовність Мн з мутаціями в кількості до 8, до 7, до б, до 5, до 4, до З або до 2 у порівнянні з будь-якою з послідовностей МН, показаних у Таблиці 4. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло може містити послідовність Мн з 5 або менше, з 4 або менше, з З або менше, з 2 або менше мутаціями в порівнянні з будь-якою з послідовностей Мн, як показано в Таблиці 4. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить послідовність М щонайменше 85 95, щонайменше на 90 95, щонайменше на 93 95, щонайменше на 95 95, щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95 або щонайменше на 99 95 ідентична будь-якій з послідовностей Мі, як показано в Таблиці 5. Анти-ОХ40 антитіло може містити послідовність Мі з мутаціями в кількості до 8, до 7, доб, до 55до 4, до Забо до2 у порівнянні з будь-якою з послідовностей Мі, як показано в Таблиці 5. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло може містити послідовність Мі з 5 або менше, з 4 або менше, з З або менше, з 2 або менше мутаціями в порівнянні з будь-якою з послідовностей Мі, як показано в Таблиці 5. (0064) Амінокислотні послідовності повнорозмірного важкого і легкого ланцюга зазвичай містять описаний вище ланцюг Мн або Мі, пов'язаний з відповідної константною ділянкою імуноглобуліну, наприклад, ЇДС1 людини або константою ділянкою легкого ланцюга каппа.
Можуть виникати посттрансляційні модифікації повнорозмірних послідовностей анти-ОХ40- антитіла, такі як відщіплення одного або декількох (наприклад, 1, 2, З або більше) амінокислотних залишків на С-кінці важкого ланцюга антитіла. Такі продукти з відщіпленням можуть включати деякі або всі анти-ОХ40 антитіла при експресії.
ЇОО65| Таким чином, у деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить
Зо амінокислотну послідовність важкого ланцюга, як описано в Таблиці 6:
Таблиця 6
Приклади послідовностей важкого ланцюга
Послідовність Ідентифікатор
Щ ; ЗЕО ІО МО:А1
Таблиця 6
Приклади послідовностей важкого ланцюга
Послідовність Ідентифікатор
ВУС Ух ювь кі Кма о ЮК А М А ЕС атіМеМмосзетекеозУКкеКегЕвВОМАККМ КОМ КАКОТАУ
ВЕСТ ТАчАМО МІСТ УТ РЕЛВИКВУ НА В со й мене ин и В и Мо М НЯ
ЗЕО ІЮ МО:42
Он но мі и и МАЯ В ОА ОН
КОМ ТА
Мехіко УА
ЕТО Е КОТ ОТУТ УКВ КОТА ЛО
БУКИУКеКВигИдиМа АСВ ВУХ мере жінку АК Оу , І ; і І й хх ЗЕО ІЮ МО:43 пиву у дани ес йно и ДО КО С КО пат кІСКУМНКи АКА КІНА ВК я ще це шо плоть ЗЕО ІО МО:44 ие ЕН в и А МИ СК В ОЕМ С ВВ
ІЕЕ ГКУ УБИВ ІЕКТІ еКААСОВВЕРО УТОМИ САШКО АВК
ЕХО Я Я ев в о и АС ВЕК ВН ОК В КН КК КО ЧК
ВІВАТ пек ОсВАТ ОТ АТОМ СТАВ БОКАХ
АЕС АВЕУ СОС РОУТУВВАВО КІ АВИ КО ТО В
ПАК в кн Е о НВ НОЯ А в М НИ и НИ Й
НЯ Що Що І ЩО ЗЕО ІЮО МО:А5 пен ан ни ней МОН в С ПД В В ЕЕ
ТтЕВЕКЕСиМИУКО и ККУ МАВКИ пеуреюнюУютУо ось истсетсковЕисем Если НиА
МАЕ ЕК КАК Мод М ВЕК Кт ЖЕ МИМИ МУ Ж ми май МКК
Мити жит ки иа и Іти и КЕ ТАК и ТО о КАН ТК В ТІК КАТА
ТЕТ А и КМ КА КІ А КК Я а ОВ иа о ОК А ЕН
КУ мк жЖ цих Я ЕТ БЕК Ж КК ХІМ КВК УКИЕХ ї ХА ККУ ДАХ КИ МЕКККИУТУ я петевракмн ет тини вари стю то уми тА и а КИ ин р МОН КИ в А и НО
ПЕМХМУ оди дии вка інших мури тут три рт мих то щиш Ту кт я ОК и с ко ММ МА РУ Нар но ЗБИВ о ОН о В ни КАЄ
ЗИ КЕ МО ВД СЯ ВЖК ми ор М а А Кв Я ВАВ мя турою вісі сво нирка мит ши НІК видри анна о имя тому и У тот сі их хи узи КІМ М ШК Ки КЕ
К ОК В и КК і В и НИ БУ ЯК ЕВ Во Ка Ку Ку щу бик ко АМОК ока оно З Ки ИН НН НЕ чия ДУМКУ мук, щ У шУМткІКт Мі Кроти тт ВЕ тин ЗЕ Іо МО:46
Ж ВІК МКК ко пови е а кит КЕ ТАТА ІМ а о вок и КВ а КК НО Кн ОК й; УТА АК Не ТЕХ КХ сиди о отити ие ВК шу ит а гаю
Кике нак ьк 5 їМ МЕМ ММ КК и Мои МІУ
Еш А ши и А АН а Нв и В
МУКА М ІВ А М КЕ КАВА я КИ МА КИ ЖК Я А МИХ МБТ АН ХХ пул кажи АК иММ МКлии ИИ М ДПУ ютя ЕЕЖККТЬ гне ІЗ и и В МИ пд М а у В и а а Ме Де Со З а п С м В о ом Ко А о ОК ся М а
ЕК ке М аа Ко ОК и и ОКО З ЗМК а ОКО ОК шу юлиюиююх ЦМК дхуитя
МК
КЕ ока КУКИ пи хо А т и мат Кт Кк Ки в их КН КИ Ж и КО
ПЕВ ее ве и В ЕЕ я хх ту ми пи МЕ т У вм ив зрсКіхтхусет их мини Кука ИМХ ОМ КУ Кт лю Ту КА ТАКІ я НА ЗД появ т З Я
Ким ЖК ІД ММК ІВ Тр КМ Ки МН МКУ КК КОХ сук ри мух о см ик п шви уми МОКУЕХ МХ Ди Ех у рима пвх ше Кж вн шк в КІ КК ЕЕ пи ОК
МАВКИ и Я МВ как КА М Ко НК с ку ян КАК ЖК ін о МТК хек Кую кину КК ви м ЗХ ЖІ ки ку ик Ко у хм их УТ КК ЕК у
С о о в и В АК А ИН А КИ ОН
ОКОМ Ж Од Ж КОТІВ ЕХ ДМК КО КУ ик вон Кк М М КК «сукад три КЕ Кт ши м Дт шк у Ком Код р МО КК Ко ду КОД УМ МУК пуфики тю їх Ку Ки КЕ ОТ МК ХХ каски КАВКАЗ КЕ где Ехо у Ву Он Ен у ПИ МЕ и тику ВН СЕК зЕО І МО:47
ЯВИ шт Я Аж Р У У МИ АВІА КЕ ВЖК МУК ММ ЕМ и ЕХ чек туру их тю М Ту Мекки витки юки ХК юр ме ую чи дю цх
У я а КЕ А ТК м КЕ ВУ ОХ Зеник Кк ТО ох дали МЕЖ КК Ж мк мн ОКХ п ке Нав и ККУ пи арт ж, я ЕК КІ ЖИТ ит тв т джу Кох ки их От МЕ ВУ ТЕКИ
ТІ Ему ШЕ и кит ЕВ КК ВН КА
См с МЖК ук Мод СКАН АА А ЖК М КАМЮ й У ТК ви ВОК во: ЕМ А ктдІлИ жу М у п кв штючти КИ КУК У жу пкт му и ик кутики м кути й. МИТІ ки І КІ М, їх пе) М нн и З
ЗИ юка м кан У КОЮ ОК М ХК КЕ ІІ Х сиди мм ду ур пи АК КН
Кук и пионовое руд
З ЖАХ ох І М КЕ Кан МКК ІА А МУ НКУ КОКС Мах
ТК М хом ди р мо р я же ж т др МКК теки т МК о р
БУТЮООСлТОУМААКІКВОТІОКИНОКВТУ ОМВК АКТКУ Є
З ХОЖМ УА Й МОЖ АТХЮДА ЯМА АУЮ ю ПАК ККД. х ПКД Ах КОКО пику терх ОНА А М Ко КН НК а о и НО ВВ й ІЗ НЯ Тл Пр КК в КК В ОК
ЕЕ туясоеІ УААН А ли «ж кж юю пектин ктт й «ЕК УЮІ тут или т сухих жу ЕТ мя У о мк МК р ху КК ККУ с у тех
ЗЕМ я и Ки ж р ку у в и ЮК п КИ КК ЕК КОТ ж ше М Же РИ У и КН М М Кк Анн Ки
ІБН вики и нин и в в я ід пкт ке КК ЕК ау КЕ ЕВ м и КК
ЕК у ИН В Мо ук а В т ні ВИ КК в ті пух в ва роду жах Й ух акт ТЕ чи Ат у ти кукі м че У й
Ов зм ЕТ ММ КК КМ. ек и у ов о ов а Я Ве ВОДИ А КК щи
ЕЕ м Ех КК М У ви Кі КЕ В ФК Мі еМКМУМЕ г. хх шипи ми ту шлю сук Кит ие и Ки ри куту жи во КАТЮ НК КИ КК УХ о кети ВО
ПОД Ко ки я вв и а и В Ва ЕК М в в НН М В ОЗ ее ОКА КВ ОК ЯКЕ СІК е У ВО МН в ек а СО ЕК Я ЗК шик ЖАКА
Ку мают кю хи ІМК У Исуде а вжив и де ж пт Ко ККУ МУК южуюх Ж Мову ре вих ім ек ок КЕ КК зн и У КН В У БО А
ЕМ Кан о ЕК КК кий КК й а В ДОТИКУ ЕК путі кам ух пуху ву уки ел ру и Кіри и аю Я КИ мули ли ук ух с у І и СІ й У
МЕЖ м и Ян Я Кк ТАХТАКУ МЕМ КУ М кий х й; ОІД ІН ав
КОМ ан я
Іі амІіНокислотнІ ПОСЛІДОВНОСТІ Ллегкого ланцюга, як описано в Таблиці 7.
Ах Но уро Му ТП У ЖЖ ї ЯМИ ЕК КЕ Аж І у КИТ ЦЯ ї ; І М БТ ГК АК Пн Ж і о ЕХ
ІАЕ зе БУКА ВОК АД КА ДМК ММ Ки ТОК а М А МЖК БІК Іо; ще КЕДИ КАМЮ
ЩА пли Ул сту ух ур ху и ру ЖрИ УК ЖЖ и у УК тиви ШК ни Я З КК ІМК ЕС МАЕ кві жваАйіІКау нКл какао МЕ Ж я
Кр тече меми Е джу м пот ж тку ше им р ТЕИят У ІКТ 9ЕО ІЮ ПФ) 51
ЗАКОН КО а Яном о КК В НУ ОК я КВ З В Ва В дич Со У ВД А ВВ ВВ
БЕ ХК ака МУ влити ДЖ ЕТАСКО Ми К я ік АК .
ОДА пе а тику кв КК у шир куки ик КО ду п ом уки я пу Мун А в он КК
У т. ж жу це КУТ ку Ж ОЕМ ОМ ЕХ вкажи МУКИ ХК пли и и КЕ Керр КАТ,
Ах шик М В ак В НИ М АК
Таблиця 7
Приклади послідовностей легкого ланцюга
Послідовність Ідентифікатор пеш е нен ен В о Ми
ТЕО ГКІ КЕТІ КИТА АТ У КЕКВ І ЗБОЮ МО с52 ке ни в о М НН о в о и
ТЕООБІКУКТКЕТеаАРУКТ Евра УСС МЕКРЕЕМ | ЗЕО ІЮ МО:5З
АОиК УМА Ева ве и у ОВ
АС ЕН ВК сини и В НИ ОДН М КО М ве о тиску иа ко СМУЖКА І ЗЕО ІЮ МОС54
СКУ ТК КАКУВ де підкреслені амінокислоти представляють СОК, а виділені курсивом амінокислоти представляють константні ділянки.
Ї0О6б| У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить амінокислотну послідовність важкого ланцюга 5ЗЕО ІЮ МО:41 або 42 і амінокислотну послідовність легкого ланцюга 5ЕБЕО ІО МО:51. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить амінокислотну послідовність важкого ланцюга ЗЕО ІЮ МО:43 або 44 і амінокислотну послідовність легсого ланцюга 5ЕБЕО ІЮ МО:52. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить амінокислотну послідовність важкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО:45 або 46 й амінокислотну послідовність легсого ланцюга ЗЕО ІЮО МО:53. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить амінокислотну послідовність важкого ланцюга ЗЕО ІЮ МО:47 або 48 і амінокислотну послідовність легкого ланцюга 5ЗЕО ІЮ МО:54.
І0067| У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить послідовність важкого ланцюга, яка щонайменше на 85 956, щонайменше на 90 95, щонайменше на 93 9565, щонайменше на 95 95, щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95 або щонайменше на 9995 ідентична будь-якій послідовності важкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО:41-48. Анти-0ОХ40 антитіло може містити послідовність важкого ланцюга з мутаціями в кількості до 8, до 7, до 6, до 5, до 4, до З або до 2 у порівнянні з будь-якою послідовністю важкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО:41-48.
У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло може містити послідовність важкого ланцюга з 5 або менше, 4 або менше, З або менше, 2 або менше мутаціями в порівнянні з будь-якою послідовністю важкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО:41-48.
І0068| У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло містить послідовність легкого ланцюга, яка щонайменше на 85 956, щонайменше на 90 95, щонайменше на 93 9565, щонайменше на 95 95, щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95 або щонайменше на 9995 ідентична будь-якій послідовності легксого ланцюга ЗЕО ІЮ МО:51-54. Анти-0ОХ40 антитіло може містити послідовність легкого ланцюга з мутаціями в кількості до 8, до 7, до 6, до 5, до 4, до З або до 2 у порівнянні з будь-якою послідовністю легкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО:51-54.
У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло може містити послідовність легкого ланцюга з 5 або менше, 4 або менше, З або менше, 2 або менше мутаціями в порівнянні з будь-якою послідовністю легкого ланцюга ЗЕО ІЮ МО:51-54.
ІЇ0069| Додаткові посттрансляційні модифікації анти-ОХ40-антитіла можуть включати глікозилювання. Звичайні біантенні комплекси можуть складатися з корової структури із двома
М-ацетилглюкозамінами (СІСМАс), трьома манозами і двома залишками СІСМАс, які є ДВ-1,2 зв'язаними з а-6 манозою і а-3-манозою з утворенням двох антен. До корової структури може бути приєднано один або декілька залишків фукози (Рис), галактози (Саї), глікани з високим вмістом манози Мап-5 або Мап-9, розділений навпіл СІСМАс і сіалова кислота, включаючи М-
ацетилнейрамінову кислоту (МАМА) або М-гліколіллейрамінову кислоту (МОМА). М-зв'язані глікоформи можуть включати (0 (білок з коровою біантенною глікозильованою структурою),
СОР (фукозильований (30), сіСМАс СОБЕ, 1 (білок з коровою глікозильованою структурою і одним залишком галактози), СТЕ (фукозильований С1), 52 (білок з коровою глікозильованою структурою і двома залишками галактози) і/або С2Е (фукозильований 2).
І0070) У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіла конкурують за зв'язування з ОХ40 людини (З5ЕО ІЮО МО:1) з еталонним антитілом в аналізах іп міїго. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіла конкурують за зв'язування з ОХ40 людини із клітинами, що експресують
ОХ40 людини. Еталонне антитіло може бути будь-яким анти-ОХ40-антитілом, описаним у даному документі. У деяких варіантах здійснення еталонне антитіло являє собою антитіло з Мн, зазначеним у Таблиці 4, і Мі, зазначеним у Таблиці 5. У конкретних варіантах здійснення еталонне антитіло являє собою антитіло миші, що містить Мн Ми3726 і Мі. Ми3726 ("Ми37267"), антитіло миші, що містить Мн Ми3738 і Мі Ми3838 ("Ми3738"), антитіло миші, що містить Мн
Ми3739 і Мі Ми3739 ("Ми3739") або антитіло миші, що містить Мн Ми3741 і М Миз3741 ("Ми37417). У деяких варіантах здійснення еталонне антитіло являє собою гуманізований варіант Ми3726, Ми3738, Ми3739 або Ми3741. У деяких варіантах здійснення еталонне антитіло являє собою гуманізоване антитіло, що містить важкий ланцюг 5ЕО ІЮ МО:41 або 42 і легкий ланцюг ЕС ІЮ МО:51 ("Ни3738"), гуманізоване антитіло, що містить важкий ланцюг 5ЕО ІЮ
МО:43 або 44 і легкий ланцюг 5ЕО ІЮ МО:52 ("Ни3726"), гуманізоване антитіло, що містить важкий ланцюг 5ЕО ІЮ МО:45 або 46 і легкий ланцюг 5ЕО ІЮ МО:53 ("Ни3739"), або гуманізоване антитіло, що містить важкий ланцюг ЗЕО ІЮ МО:47 або 48 і легкий ланцюг 5ЕО ІЮ
МО:54 ("Ни37417. 0071) Анти-ОХ40 антитіла, описані в даному документі, зазвичай специфічно зв'язуються з
ОохХ40 людини. Перехресна реактивність антитіл відносно зв'язування з ОХ40 інших видів, наприклад, мавпи, наприклад, яванського макака, може дати переваги, такі як здатність тестувати біологічну активність на моделях мавп. Таке тестування на тваринних моделях може бути використане для скринінгу анти-0Х40 антитіл для вибору властивостей, пов'язаних з ефективністю, наприклад, сприятливими фармакокінетичними властивостями, або властивостями, пов'язаними з безпекою, наприклад, зниженою гепатотоксичністю. У деяких
Зо варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло зв'язується з ОХ40 яванського макака (ЗЕО ІО МО:2) (посилальна послідовність МСВІ ХРО0О5545179), а також з ОХ40 людини. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло не зв'язується з ОХ40 миші (5ЕБЕО ІЮ МО:3) (посилальна послідовність МСВІ МРОЗ37181).
І0072| Аналізи конкуренції включають, але не обмежуються ними, радіоактивно-мічений імуноаналіз (КІА), імуноферментний аналіз (ЕГІ5А), сендвіч-ЕГІЗА, сортування клітин, активованих флуоресценцією (ЕАС5), і аналіз на основі поверхневого плазмонного резонансу.
Ї0073| Аналіз на основі поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК) дозволяє безпосередньо виміряти кінетику зв'язування двох білків, наприклад, рецептора і антитіла, таких як рецептор ОХ40 людини і анти-ОХ40 антитіло, без необхідності в репортерному сигналі або мітці. Як рівноважна константа дисоціації Ко, міра афінності зв'язування, так і два її компоненти - константи кінетичної швидкості зв'язування, Ка (М"-сек") (константа асоціації, Коп) і Ка (сек") (константа дисоціації, Ккомк) - можуть бути визначені за допомогою ЗРЕ. Константи зв'язані наступним рівнянням:
Ко-Ка/Ка.
І0074| У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіла мають Ко, що дорівнює щонайменше приблизно 100 нМ, але можуть проявляти більш високу афінність, що дорівнює, наприклад, щонайменше приблизно 90 нМ, 80 нМ, 70 нМ, 60 нМ, 50 нМ, 4ОнМ, 30 нМ, 25 нМ, 20
НМ, 15 нМ, 10 нМ, 7 нМ, 6 нм, 5 нМ, 4 нМ, З НМ, 2 НМ, 1 нМ, 0,1 нМ, 0,01 нМ або навіть вище. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіла людини мають Ко у діапазоні від приблизно 1
ПМ до приблизно 100 нМ або з афінністю зв'язування з будь-яким з вищевказаних значень, таким як, але не обмежуючись ними, від приблизно 0,001 до 10 нМ, від 0,001 до 5 нМ, від 0,01 до 100 нМ, від 0,01 до 50 нМ, від 0,01 до 10 нМ, від 0,01 до 5 нМ або від приблизно 0,01 до 1 нМ. 0075) У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло має константу дисоціації Ка, що дорівнює не більш приблизно 10 сек", наприклад, не більше приблизно 1, 0,5, 0,2, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005, 0,001 сек" або навіть менше. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло має Ка у діапазоні від приблизно 0,001 сек" до приблизно 10 сек" або Ко у діапазоні між будь- якими з вищевказаних значень, наприклад, але не обмежуючись ними, від приблизно 0,01 до 10 сек", від 0,001 до 0,5 сек", від0,001 до 0,2 с", від 0,001 до 0,1 с", від 0,01 до 1 с", від 0,001 до 0,05 с" або від 0,001 до 1 с".
0076) У деяких варіантах здійснення, анти-ОХ40 антитіло має константу асоціації Ка, що дорівнює не більше приблизно 107 М"-сек", наприклад, щонайменше приблизно 1х1027, 5х104, 1х105, 5х105, 1х106, 5х106, 1х107 М"-сек" або навіть більше. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло має Ка у діапазоні від приблизно 107 М"-сек" до приблизно 107 М"-сек", або
Ка у діапазоні будь-якого вищевказаного значення, наприклад, але ними не обмежуючись, від приблизно 5х107 до 1х107 М"-сек", 5х107 до 5х106 М"-сек" або від приблизно 1х107 до 5х106 М- 1-сек".
Ї0077| Анти-0Х40 антитіло за даним винаходом може мати Ко, Ка або Ка у діапазоні кінетичних констант зв'язування, вимірюваних для будь-якого ілюстративного анти-ОХ40 антитіла, описаного в даному документі. Наприклад, у деяких варіантах здійснення, анти-ОХ40 антитіло має константу дисоціації Ка у діапазоні від приблизно в 0,01 до приблизно в 100 раз вище, наприклад, від приблизно в 0,1 до приблизно в 10 раз вище або від приблизно в 0,5 до приблизно в 5 раз вище Ка будь-якого Ни3738, Ни3726, Ни3739 або Ни3741. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло має константу дисоціації Ка у діапазоні від приблизно в 0,01 до приблизно в 100 раз вище, наприклад, приблизно в 0,1 до приблизно в 10 раз вище, або від приблизно в 0,5 до приблизно в 5 раз вище Ка будь-якого Ни3738, Ни3726, Ни3739 або Ни3741.
І0078)| При проведенні аналізу на конкурентне зв'язування антитіл між еталонним антитілом і тестованим антитілом (незалежно від виду або ізотипу) спочатку можна позначити еталонне антитіло міткою, що виявляється, такою як флуорофор, біотин або ферментативна (або навіть радіоактивна) мітка, для наступної ідентифікації. У цьому випадку клітини, що експресують
ОХ40 людини, інкубують з неміченим тестованим антитілом, додають мічене еталонне антитіло і вимірюють інтенсивність мітки, що зв'язалася. Якщо тестоване антитіло конкурує за зв'язування з міченим еталонним антитілом, то зв'язуючись із епітопом, що перекривається, інтенсивність буде зменшуватися в порівнянні з контрольною реакцією, проведеною без тестованого антитіла.
Ї0079| У конкретному варіанті цього аналізу спочатку визначають концентрацію міченого еталонного антитіла, яка дає 80 95 максимального зв'язування ("концво») в умовах аналізу (наприклад, при певній густині клітин), і проводять конкурентний аналіз із 10х концво» неміченого тестованого антитіла і концво г; міченого контрольного антитіла.
Зо 00801 Інгібування може бути виражене як константа інгібування або Кі, яка розраховується за наступною формулою:
Кі-ІСво/(14(онцентрація еталонного АБУКа), де ІСво являє собою концентрацію тестованого антитіла, яка дає 5095 зменшення зв'язування еталонного антитіла, а Ка являє собою константу дисоціації еталонного антитіла, міру афінності до ОХ40 людини. Антитіла, які конкурують із анти-ОХ40-антитілами, описаними в даному документі, можуть мати К; від 10 пМ до 100 нМ в умовах аналізу, описаних у даному документі.
І0081| У різних варіантах здійснення тестоване антитіло вважається конкуруючим за зв'язування з еталонним антитілом, якщо воно зменшує зв'язування еталонного антитіла щонайменше приблизно на 20 95 або більше, наприклад, щонайменше приблизно на 20 95,
ЗО бо, 40 о, 50 95, 60 Зо, 70 о, 80 95, 90 о, 95 95 або навіть більше, або на процентне значення в діапазоні будь-якого з вищевказаних значень, при концентрації еталонного антитіла, що дорівнює 8095 від максимального зв'язування при конкретних умовах аналізу, і при концентрація тестованого антитіла, яка в 10 раз вище концентрації еталонного антитіла. 0082) Аналіз на специфічність зв'язування і умови аналізу, ефективні для оцінки того, чи конкурує антитіло за зв'язування з ОХ40 людини з еталонним антитілом, як описано в даному документі, наведено в розділі 8.1.4. 0083) У деяких варіантах здійснення анти-0ОХ40-антитіла за винаходом активують ОХ40 людини (5ЕО ІЮ МО:1). Активація рецептора ОХ40 може відбуватися за рахунок ряду механізмів, наприклад, за допомогою забезпечення лігандо-подібної активності відносно рецептора ОХ40. У таких випадках анти-ОХ40 антитіло конкурує за зв'язування з рецептором
ОХ40 з лігандом ОХ40 людини (0ОХ40І, СО252; ОпіРгоїКкВ/5м/і55-Ргої боде Р23510.1) (5ЕО І
МО:4). 00841 Анти-ОХ40-антитіло за винаходом, як правило, може активувати рецептор ОХ40 у присутності зшивального агента. Аналіз на специфічність і умови аналізу, ефективні для оцінки того, чи може анти-ОХ40 антитіло активувати рецептор ОХ40, наприклад, рецептор ОХ40 людини (ЗЕО ІЮО МО:1) у присутності зшивального агента, наведені в розділі 8.1.8. У деяких варіантах здійснення анти-0ОХ40 антитіло активує рецептор ОХ40 людини в присутності зшивального агента, з ЕС5о від приблизно 1 пМ до приблизно 500 нМ, наприклад, але не 60 обмежуючись ними, від приблизно 0,01 до приблизно 300 нМ, від приблизно 0,01 до приблизно
100 нМ, від приблизно 0,01 до приблизно 10 нМ, від приблизно 0,01 до приблизно 1 нМ, від приблизно 0,1 до приблизно 300 нМ, від приблизно 0,1 нМ до приблизно 100 нМ, від приблизно 1 НМ до приблизно 100 нМ або від приблизно 0,1 до приблизно 100 нМ. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло в концентрації 100 мкг/мл може активувати рецептор ОХ40 людини в присутності зшивального агента, з активністю щонайменше приблизно в З рази, наприклад, від приблизно З до приблизно 1000 раз, наприклад, приблизно в 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 200, 400, 500, 700, 800 або приблизно в 1000 раз вище в порівнянні з активністю рецептора ОХ40 людини під час відсутності анти-ОхХ40 антитіла.
І0085| Перехресне зв'язування може забезпечуватися рядом способів, включаючи додавання екзогенного агента зв'язування, наприклад, антитіл або фрагментів антитіл Е(аб)2, специфічних для важких, легких або варіабельних ділянок антитіл людини або гуманізованих антитіл; розчинного або іммобілізованого білка А; клітинних ліній, трансфікованих рецептором
Ес; клітинних ліній, що експресують ендогенний Ес-рецептор; шляхом безпосереднього нанесення тестованого антитіла на пластикові поверхні; пластикових поверхонь, покритих екзогенними антитілами або Ес-рецепторами зв'язування; або намист, кон'югованих з будь-яким з перерахованих вище агентів. В ілюстративному прикладі антитіла індивіда можуть бути кон'юговані з білком, таким як біотин, і як агент зв'язування використовується розчинний або іммобілізований авідин або стрептавідин. У ще одному прикладі в лімфатичних вузлах людини іп мімо мається на увазі активація ОХ40 після зв'язування з анти-ОХ40-антитілом після перехресного зв'язування з рецептором на ендогенних антиген-презентувальних клітинах
Есукж. 0086) У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло зв'язується і активує рецептор
ОХ40 людини під час відсутності зв'язувального агента. У деяких варіантах здійснення анти-
ОХ40 антитіло активує рецептор ОХ40, наприклад, рецептор ОХ40 людини (5ЕО ІЮ МО:1), під час відсутності ОХ40І, наприклад, ОХ40Ї. людини (5ЕО ІЮ МО:4). Конкретний аналіз і умови цього аналізу активації що використовуються для оцінки можливості, рецептора ОХ40 антитілом проти ОХ40 без зшивального агента, наведені в розділі 8.1.8. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло активує рецептор ОХ40 людини без зшивального агента з ЕСбо, що дорівнює від приблизно 1 пМ до приблизно 500 нМ, наприклад, але не обмежуючись ними,
Ко) від приблизно 0,01 до приблизно 300 нМ, від приблизно 0,01 до приблизно 100 нМ, від приблизно 0,1 до приблизно 300 нМ, від приблизно 0,1 нМ до приблизно 100 нМ, від приблизно 1 нМ до приблизно 100 нМ, від приблизно 0,1 нМ до приблизно 100 нМ, від приблизно 1 до приблизно 300 нМ, від приблизно 1 до приблизно 100 нМ, від приблизно 1 до приблизно 50 нм або від приблизно 10 до приблизно 100 НМ. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло при концентрації 100 мкг/мл може активувати рецептор ОХ40 людини без зшивального агента з активністю, яка щонайменше приблизно в 5 рази, наприклад, приблизно від 5 до приблизно 1000 раз, наприклад, приблизно в 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 200, 300, 400, 500, 700 або приблизно в 800 раз вище в порівнянні з активністю рецептора ОХ40, активованого однаковою кількістю ізотипового антитіла. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло в концентрації 10 мкг/мл може активувати рецептор ОХ40 людини без перехресного зв'язування з активністю, яка щонайменше приблизно в З рази, наприклад, приблизно від З до приблизно 300 раз, наприклад, приблизно в 3, 5, 6, 8, 10, 12, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 200 або приблизно в 300 раз вище в порівнянні з активністю рецептора ОХ40 людини, активованого еквівалентною кількістю ізотипового антитіла. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло в концентрації 1 мкг/мл може активувати рецептор ОХ40 людини без перехресного зв'язування з активністю, яка щонайменше приблизно в З рази, наприклад, приблизно від З до приблизно 150 раз, наприклад, приблизно в 3,4, 5,6, 7, 8, 10, 12, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 80, 100 або приблизно в 150 раз вище в порівнянні з активністю рецептора ОХ40 людини, дозованого еквівалентною кількістю ізотипового антитіла.
ІЇ0087| У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло активує рецептор ОХ40, наприклад, рецептор ОХ40 людини (ЗЕО ІЮ МО:1), на більш високому рівні в присутності зшивального агента, ніж за відсутності зшивального агента. Конкретний аналіз і умови цього аналізу, що використовуються для визначення рівня при якому анти-0Х40 антитіло може активувати рецептор ОХ40 без перехресного зв'язування, наведені розділі 8.1.8. Рівень активності може бути вимірюваний, наприклад, в одиницях ЕСв5о і/або спостережуваної максимальної активації. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло в концентрації 100 мкг/мл активує рецептор ОХ40, наприклад, рецептор ОХ40 людини (5ЕБО ІЮ МО:1), без перехресного зв'язування від приблизно 20 95 до приблизно 95 95 активності МЕ-кВ, наприклад, приблизно 25 95, ЗО 5, 40 95, 50 90, 60 Зо, 70 95, 80 95 або приблизно 90 95, у порівнянні з бо активністю МЕ-кВ без перехресного зв'язування в аналізі, наведеному в розділі 8.1.8.
0088) У деяких варіантах здійснення анти-0ОХ40 антитіло активує рецептор ОХ40 людини без перехресного зв'язування зі значенням ЕСво від приблизно 0,1 нМ до приблизно 500 нМ, наприклад, але не обмежуючись ними, від приблизно 1 нМ до приблизно 100 нМ, від приблизно 0,1 НМ до приблизно 100 нМ, від приблизно 1 до приблизно 300 нМ, від приблизно 1 до приблизно 100 нМ, від приблизно 1 до приблизно 50 нМ або від приблизно 10 до приблизно 100
НМ, в аналізі, наведеному в розділі 8.1.8. У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло в концентрації 10 мкг/мл може активувати рецептор ОХ40 людини без перехресного зв'язування з активністю, яка щонайменше приблизно в З рази, наприклад, приблизно від З до приблизно 300 раз, наприклад, приблизно в 3, 5,6, 8, 10, 12, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 200 або приблизно в 300 раз вище в порівнянні з активністю рецептора ОХ40 людини, активованої еквівалентною кількістю ізотипового антитіла. У деяких таких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло активує рецептор ОХ40 людини при поперечному зв'язуванні зі значенням ЕСво від приблизно 1 пМ до приблизно 300 нМ, наприклад, але не обмежуючись ними, від приблизно 0,01 до приблизно 300 нМ, від приблизно 0,01 до приблизно 100 нМ, від приблизно 0,01 до приблизно 10 нМ, від приблизно 0,01 до приблизно 1 нМ, від приблизно 0,1 до приблизно 300
НМ, від приблизно 0,1 нМ до приблизно 100 нМ, від приблизно 1 нМ до приблизно 100 нМ або від приблизно 0,1 до приблизно 100 нМ, в аналізі, наведеному в розділі 8.1.8. У деяких таких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло може активувати рецептор ОХ40 людини при перехресному зв'язуванні при більш низькому значенні ЕСзо, наприклад, від приблизно 1,5 до приблизно 100 раз, наприклад, від приблизно 1,5 до приблизно 10 раз, наприклад, приблизно в 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9 або приблизно в 10 раз нижче в порівнянні зі значенням ЕС5О антитіла 1А7, описаного в публікації США 2015/0307617, в аналізі, наведеному в розділі 8.1.8.
Ї0089| Анти-0ОХ40 антитіло за винаходом може активувати рецептор ОХ40 людини без перехресного зв'язування зі значенням ЕС5О від приблизно 1 нМ до приблизно 100 нМ в аналізі, наведеному в розділі 8.1.8, і може активувати рецептор ОХ40 людини при перехресному зв'язуванні з більш низьким значенням ЕС5О, що дорівнює, наприклад, приблизно від 1,5 до приблизно 10 раз нижче в порівнянні зі значенням ЕС50О антитіла 1А7, описаного в публікації
США 2015/0307617, в аналізі наведеному в розділі 8.1.8. Приклади анти-ОХ40-антитіл з вищевказаними властивостями, включають Ми3738 і Ни3738, як описано в прикладах 2-8 даного опису. 0090) Зазвичай активація ОХ40 при обробці анти-ОХ40 антитілом призводить до передачі сигналу, наприклад, до підвищення продукції цитокінів (наприклад, інтерферон-гамма (ІЕМ-у)) іМабо до посилення проліферації клітин, наприклад, проліферації СО4- Т-клітин. У деяких варіантах здійснення продукція ІЕМ-у після обробки 1 мкг/мл анти-ОХ40 антитілом збільшується приблизно в 1,5-50 раз, наприклад, приблизно в 1,5, 2, 3,4, 5,6, 8, В 10, 15, 20, 25, 30, 40 раз або приблизно в 50 раз у порівнянні з рівнем продукції ІЕМ-у після обробки еквівалентною кількістю антитіла того ж ізотипу. У деяких варіантах здійснення проліферація СО4- Т-клітин після обробки 1 мкг/мл анти-ОХ40-антитілом збільшується приблизно в 1,5-20 раз, наприклад, приблизно в 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 15 раз або приблизно в 20 раз у порівнянні з рівнем проліферації СО4- Т-клітин після обробки еквівалентною кількістю антитіла того ж ізотипу.
Аналізи для визначення рівнів проліферації клітин відомі в даній галузі. Конкретний аналіз і умови цього аналізу для визначення продукції ІЕМ-у і/або проліферації СО4-- Т-клітин наведені в даному описі в розділі 8.1.12. 7.4 Полінуклеотиди, що кодують анти-ОХ40 антитіла, системи експресії і способи їх одержання 0091) Даний опис включає молекули нуклеїнових кислот, що кодують гени легкого і важкого ланцюгів імуноглобуліну анти-0Х40 антитіл, вектори, що містять такі нуклеїнові кислоти, і клітини-хазяї, здатні продукувати анти-ОХ40 антитіла за даним винаходом. (0092| Анти-0ОХ40-антитіло за винаходом може бути отримане шляхом рекомбінантної експресії генів легкого і важкого ланцюгів імуноглобуліну в клітині-хазяїні. Для експресії антитіла рекомбінантнмм чином клітину-хазяїн трансфікують одним або декількома рекомбінантними векторами експресії, що несуть фрагменти ДНК, що кодують імуноглобулінові легкі і важкі ланцюги антитіла, так що легкі та важкі ланцюги експресуються в клітині-хазяїні і необов'язково секретуються в середовище, у якому культивуються клітини-хазяї, з якого можна вилучити антитіла. Стандартні методики рекомбінантної ДНК використовують для одержання генів важких і легких ланцюгів антитіл, включення цих генів у рекомбінантні вектори експресії і введення векторів у клітини-хазяї, наприклад, як описано в Моїесшаг Сіопіпу; А Гарогаїогу Мапиаї, Зесопа
Едіоп (Затрбгоок, Епізсй апа Мапіаїізз (едз5), Соїд 5ргіпд Нагбог, М. У., 1989), Ситепі Ргоїосоїв іп
Моїіесшіаг Віоіоду (А!йзибеї, Е.М. еї а)ї., єд5., Стеєпе Рибіїзніпоа Авзосіасевз, 1989) і в патенті США (510) 4816397.
І0093| Для одержання нуклеїнових кислот, що кодують такі анти-ОХ40 антитіла, спочатку одержують фрагменти ДНК, що кодують варіабельні ділянки легкого і важкого ланцюга. Ці ДНК можуть бути отримані шляхом ампліфікації і модифікації ДНК або кДНК зародкової лінії, що кодують варіабельні послідовності легкого і важкого ланцюга, наприклад, використовуючи полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР). Послідовності ДНК зародкової лінії генів варіабельної ділянки важкого і легкого ланцюга людини відомі в даній галузі (див., наприклад, базу даних послідовностей зародкової лінії людини "УВАЗЕ"; див. також Караї, Е. А. еї аї., 1991, Зедоепсе5 ої Ргоївїп5 ої Іттипоїодісаї Іпіегеві, БИ Еайіоп, 0.5. Оерайтепі ої Неайй апа Нитап 5егмісев,
МІН Рибіїсайоп Мо. 91-3242; Тотіїпзоп 6вї а!., 1992, 9. Мої. Віо!І. 221:116-198; і Сох еї аї., 1994, Еиг.
У. Іттипої. 24:827-836). (0094) Після одержання фрагментів ДНК, що кодують сегменти Мн і М. анти-ОХ40-антитіла, із цими фрагментами ДНК можна проводити додаткові маніпуляції стандартними методами рекомбінантної ДНК, наприклад, для перетворення генів варіабельної ділянки в гени повнорозмірних ланцюгів антитіла, у гени Гар-фрагментів або в ген 5сЕм. При цих маніпуляціях фрагмент ДНК, що кодує Мі або Мн, фунціонально пов'язаний з іншим фрагментом ДНК, що кодує інший білок, наприклад, константну ділянку антитіла або гнучкий лінкер. Термін "функціонально зв'язаний", використовуваний у даному контексті, призначений для позначення того, що два фрагменти ДНК об'єднані так, що амінокислотні послідовності, кодовані цими двома фрагментами ДНК, залишаються в рамці зчитування. 0095) Виділена ДНК, що кодує ділянку Мн, може бути перетворена в ген повнорозмірного важкого ланцюга шляхом фунціонального зв'язування ДНК, що кодує Мн, з іншою молекулою
ДНК, що кодує константні ділянки важкого ланцюга (СНІ, СН2, СНЗ і необов'язково СН).
Послідовності генів константної ділянки важкого ланцюга людини відомі в даній галузі (див., наприклад, Кабаї, Е.А., еї аї., 1991, 5едиепсез ої Ргоївіп5 ої Іттипо|одісаї! Іпіегеві, БІ Еайіоп,
И.5. Оерапйтепі ої Неайй апа Нитап 5бегмісевз, МІН Рибіїсайоп Мо. 91-3242) і фрагменти ДНК, що включають ці ділянки, можуть бути отримані стандартною ПЛР-ампліфікацією. Константна ділянка важкого ланцюга може бути константною ділянкою Ідсес1, Ідс2, дез, Ідс4, ІдА, ІДЧЕ, (ДМ або дО, але в деяких варіантах здійснення являє собою ІдсС1 або ІдсС4. Для гена важкого ланцюга ЕРаб-фрагмента, ДНК, що кодує Мн, може бути функціонально пов'язана з іншою
Зо молекулою ДНК, що кодує тільки константну ділянку СНІ важкого ланцюга.
І0096| Виділена ДНК, що кодує ділянку Мі, може бути перетворена в ген повнорозмірного легкого ланцюга (а також у ген легкого ланцюга Бар) шляхом функціонального зв'язування ДНК, що кодує Мі, з іншою молекулою ДНК, що кодує константну ділянку легкого ланцюга, Сі.
Послідовності генів константної ділянки легкого ланцюга людини відомі в даній галузі (див., наприклад, КарБбаї, єї а!., 1991, Зедцепсез ої Ргоїеїіп5 ої Іттипо!одісаї! Іпіегеві, БІЙКА Еайіоп, 0.5.
Рерапйтепі ої Неайй апа Нитап бегуісез5, МІН Рибіїсайоп Мо. 91-3242) і фрагменти ДНК, що включають ці ділянки, можуть бути отримані стандартною ПЛР-ампліфікацією. Константна ділянка легкого ланцюга може являти собою константну ділянку каппа або лямбда, але в деяких варіантах здійснення являє собою константну ділянку каппа. Для створення гена 5сЕм фрагменти ДНК, що кодують Мн і Мі, функціонально зв'язують із іншим фрагментом, що кодує гнучкий лінкер, наприклад, що кодує амінокислотну послідовність (СІу«"бег)з (ЗЕО ІЮ МО:60), наприклад так, щоб послідовності Мн і Мі могли експресуватися у вигляді безперервного одноланцюгового білка з ділянками Мі і Мн, зв'язаними гнучким лінкером (див., наприклад, Віга еї аіІ., 1988, 5сіепсе 242: 423-426; Нивіоп єї аї!., 1988, Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА 85:5879-5883;
МесСагепу еї аї., 1990, Маїшге 348:552-554).
І0097| Для експресії анти-0ОХ40-антитіл за даним винаходом, ДНК, що кодують частину або весь легкий і важкий ланцюги, отримані, як описано вище, вбудовують у вектори експресії, так щоб гени були функціонально пов'язані з послідовностями контролю транскрипції і трансляції. У цьому контексті під терміном "функціонально зв'язаний" слід розуміти, що ген антитіла лігований у вектор таким чином, що транскрипційні і трансляційні контрольні послідовності усередині вектора виконували призначену для них функцію регуляції транскрипції і трансляції гена антитіла. Вектор експресії і послідовності контролю експресії вибирають так, щоб вони були сумісні з використовуваною для експресії клітиною-хазяїном. Ген легкого ланцюга антитіла і ген важкого ланцюга антитіла можуть бути вбудовані в окремі вектори або, як правило, обидва гени вбудовують у той самий вектор експресії. 0098) Гени антитіла вбудовують у вектор експресії стандартними методами (наприклад, лігуванням комплементарних сайтів рестрикції на фрагменті гена антитіла або векторі, або лігуванням тупого кінця, якщо сайти рестрикції відсутні). До введення послідовностей легкого або важкого ланцюга анти-ОХ40 антитіла, вектор експресії може вже нести послідовності 60 константної ділянки антитіла. Наприклад, один з підходів до перетворення послідовностей Мн і
Мі моноклонального анти-0ОХ40 антитіла в гени повнорозмірних антитіл полягає в їх вбудовуванні у вектори експресії що вже кодують константні ділянки важкого ланцюга і константні ділянки легкого ланцюга відповідно так, щоб сегмент Мн був функціонально пов'язаний із сегментом(іами) СН у векторі, а сегмент Мі був функціонально пов'язаний із сегментом СІ у векторі. Додатково або альтернативно, рекомбінантний вектор експресії може кодувати сигнальний пептид, який полегшує секрецію ланцюга антитіла із клітини-хазяїна. Ген ланцюга антитіла може бути клонований у векторі таким чином, що сигнальний пептид був зв'язаний у рамці зчитування з аміно-кінцем гена ланцюга антитіла. Сигнальний пептид може бути сигнальним пептидом імуноглобуліну або гетерологічним сигнальним пептидом (тобто сигнальним пептидом білка, що не є імуноглобуліном). 0099) Крім генів ланцюга антитіл, рекомбінантні вектори експресії за даним винаходом несуть регуляторні послідовності, які контролюють експресію генів ланцюга антитіл у клітині- хазяїні. Під терміном "регуляторна послідовність" слід розуміти промотори, енхансери та інші елементи контролю експресії (наприклад, сигнали поліаденілювання), які контролюють транскрипцію або трансляцію генів ланцюга антитіла. Такі регуляторні послідовності описані, наприклад, в сСоедаеї, Сбепе Ехргеззіоп Тесппоїоду: Меїподз іп Епгуто!іоду 185, Асадетіс Ргев5,
Зап Оіедо, СА, 1990. Фахівцям у даній галузі буде зрозуміло, що конструкція вектора експресії, включаючи вибір регуляторних послідовностей, може залежати від таких факторів, як вибір клітини-хазяїна, що підлягає трансформації, бажаний рівень експресії білка і таке інше.
Придатні регуляторні послідовності експресії клітин-хазяїв ссавців включають вірусні елементи, які контролюють високі рівні експресії білка в клітинах ссавців, наприклад промотори і/або енхансери, отримані із цитомегаловірусу (СММ) (наприклад, промотор/енхансер СММУ), вірус мавпи 40 (5М40)) (наприклад, промотор/енхансер 5М40), аденовірус (наприклад, основний пізній промотор аденовірусу (Ам Р)) і поліоми. Додатковий опис регуляторних елементів вірусів і їх послідовностей наведений, наприклад, у патенті США Мо5168062, 5(п5Кі, патенті США
Мо4510245, ВеїЇ еї аї., і патенті США Мо4968615, 5спайпег еї аї.
ІО10О01 Крім генів ланцюгів антитіл і регуляторних послідовностей, рекомбінантні вектори експресії за даним винаходом можуть нести додаткові послідовності, такі як послідовності, які регулюють реплікацію вектора в клітинах-хазяїнах (наприклад, точку початку реплікації) і
Зо маркерні гени селекції. Маркерний ген селекції полегшує відбір клітин-хазяїв, у які був введений вектор (див., наприклад, патенти США 4399216, 4634665 і 5179017, Ахеї еї а1І.). Наприклад, зазвичай використовуваний маркерний ген селекції надає клітині-хазяїнові, у яку був введений вектор, стійкість до ліків, таких як 418, гігроміцин або метотрексат. Придатні маркерні гени селекції включають ген дигідрофолатредуктази (ОНЕК) (для використання в клітинах-хазяїнах
ОНЕК із селекцією/ампліфікацією метотрексатом) і ген пео (для селекції 5418). Для експресії легкого і важкого ланцюгів, вектор(и) експресії, що кодує важкий і легкий ланцюги, трансфікують у кклітину-хазяїна стандартними методами. Передбачається, що різні варіанти терміна "трансфекція" включають широкий спектр методів, зазвичай використовуваних для введення екзогенної ДНК у прокаріотичну або еукаріотичну клітину-хазяїна, наприклад електропорацію, ліпофекцію, осадження фосфатом кальцію, трансфекцію ОЕАЕ-декстраном і таке інше.
І0101| Анти-ОХ40-антитіла за даним винаходом можна експресувати або в прокаріотичних, або в еукаріотичних клітинах-хазяїнах. У деяких варіантах здійснення експресія антитіл здійснюється в еукаріотичних клітинах, наприклад клітинах- хазяїнах ссавців, з оптимальною секрецією правильно згорнутого і імунологічно активного антитіла. Приклади клітин-хазяїв ссавців, що підходять для експресії рекомбінантних антитіл за винаходом, включають клітини яєчника китайського хом'яка (клітини СНО) (включаючи клітини ОНЕК-СНО, описані в Огіацб апа
Спабзіп, 1980, Ргос. Маї!. Асад. сі. ОА 77:4216-4220, використовуючи маркером селекції ОНЕК, наприклад, як описано в Кашйптап апа Зпагр, 1982, Мої. ВіоїЇ. 159: 601-621), клітини мієломи
М5О, клітини СОБ5 і клітини 5Р2. Якщо рекомбінантні вектори експресії, що кодують гени антитіл, вводять у клітини-хазяї ссавців, то антитіла одержують шляхом культивування клітин- хазяїв у період, достатній для забезпечення можливості експресії антитіла в клітинах-хазяїнах або секреції антитіла в культуральне середовище, у якому вирощують клітини-хазяїв. Антитіла можуть бути виділені з культурального середовища стандартними методами очищення білка.
Клітини-хазяї також можна використовувати для одержання анти-ОХ40-зв'язувальних фрагментів антитіл, таких як Баб-фрагменти або молекули 5сЕм. Зрозуміло, що варіанти вищеописаної процедури входять у рамки даного розкриття. Наприклад, може бути бажаним трансфікувати клітину-хазяїна ДНК, що кодує або легкий ланцюг, або важкий ланцюг (але не обидва) анти-ОХ40 антитіла за даним винаходом. 0102) Технологія рекомбінантної ДНК також може бути використана для видалення частини 60 або всієї ДНК, що кодує один або обидва легкі і важкі ланцюги, які не потрібні для зв'язування з
ОХх40 людини. Молекули, що експресуються з таких усічених молекул ДНК, також належать до антитіл за винаходом.
ІО10О3| Для рекомбінантної експресії анти-ОХ40-антитіла за винаходом, клітина-хазяїн може бути піддана трансфекції одночасно двома векторами експресії за даним винаходом, причому перший вектор кодує поліпептид важкого ланцюга, а другий вектор кодує поліпептид легкого ланцюга. Два вектори можуть містити ідентичні маркери селекції або кожний з них може містити окремий маркер селекції. Альтернативно, можна використовувати один вектор, який кодує поліпептиди як важкого, так і легкого ланцюга.
І0104| Після одержання нуклеїнової кислоти, що кодує одну або декілька частин анти-ОХ40 антитіла, у послідовність, що кодує, можуть бути внесені додаткові зміни або мутації, наприклад, для одержання нуклеїнових кислот, що кодують антитіла з різними послідовностями
СОК, антитіла зі зниженою афінністю до Ес-рецептору або антитіла різних підкласів.
І0105| Анти-ОХ40-антитіла за винаходом також можуть бути отримані хімічним синтезом (наприклад, способами, описаними в 5оїїй Ріпазе Реріїде Зупіпеві5, 2па ей., 1984 Тпе Ріегсе
Спетіса! Со., КосКітога, ІП.). Варіанти антитіл також можуть бути отримані з використанням безклітинової платформи (див., наприклад, Спи еї аї., Віоспетіа Мо. 2, 2001 (Коспе МоїІесшаг
Віоіодіса!5) і Миттау еї аї., 2013, Сигепі Оріпіоп іп Спетісаї! Віоіоду, 1 7:420-426).
ЇО106| Якщо анти-ОХ40-антитіло за винаходом отримане рекомбінантною експресією, то його можна очистити будь-яким способом, відомим у даній галузі, для очищення молекули імуноглобуліну, наприклад, хроматографією (наприклад, іонний обмін, афінна колонка і колонка з поділом за розміром), центрифугуванням, диференціальною розчинністю або будь-яким іншим стандартним способом очищення білків. Крім того, анти-0Х40-антитіла за даним винаходом можуть бути злиті з гетерологічними поліпептидними послідовностями, описаними в даному документі, або з відомими в даній галузі для полегшення очищення.
ІО107| Після виділення анти-ОХ40 антитіло може, якщо необхідно, бути додатково очищене, наприклад, за допомогою високоефективної рідинної хроматографії (див., наприклад, Різпег,
Іарогаїогу Тесппідне5 Іп Віоспетівігу Апа МоїіІесшіаг Віоіоду, УУоїкК апа Вигаоп, едв., ЕІбемієвг, 1980), ог Бу деї Пгайоп спготаїоагарпу оп а Зуирегдех ТМ 75 соїштп (РНаптасіа Віоїєсн АВ,
Оррзаїа, бугедеп).
Зо 1.5 Фармацевтичні композиції
ІО108| Анти-ОХ40 антитіла, описані в даному документі, можуть перебувати у формі композицій, що містять антитіло і один або декілька носіїв, допоміжних агентів і/або розріджувачів (всі зазначені в даному документі як "носії"), тобто, буферні агенти, стабілізуючі агенти, консерванти, ізотонічні агенти, неіонні детергенти, антиоксиданти і інші різні добавки.
Див., Ветіпдіоп'є Рнаптасешіса! бсіепсев5, 161 єайіоп (Озої, єд. 1980). Композиції можуть бути складені для конкретного застосування, наприклад, для застосування у ветеринарії або для фармацевтичного застосування в людей. Форма композиції (наприклад, сухий порошок, рідка композиція тощо) і використовувані носії залежать від передбачуваного застосування антитіла і, у випадку терапевтичного застосування, від способу введення.
ІО109| Для терапевтичного застосування композиції можуть бути представлені як частина стерильної фармацевтичної композиції, яка містить фармацевтично прийнятний носій. Ця композиція може бути в будь-якій придатній формі (залежно від бажаного способу введення її пацієнтові). Фармацевтичну композицію можна вводити пацієнтові різними шляхами, такими як внутрішньовенний, внутрішньопухлинний або інтратекальний шлях. Найбільш придатний шлях введення в будь-якому конкретному випадку залежить від конкретного антитіла, індивіда, а також від природи і тяжкості захворювання і фізичного стану індивіда. Як правило, фармацевтичну композицію вводять внутрішньовенно.
ЇО110| Фармацевтичні композиції можуть бути для зручності представлені в одиничних лікарських формах, що містять заздалегідь визначену кількість анти-охХ40-антитіла, описаного в даному документі, на дозу. Кількість анти-ОХ40 антитіла, що входить до складу стандартної форми, залежить від захворювання, відносно якого проводять лікування, а також від інших факторів, відомих у даній галузі. Такі стандартні дози можуть перебувати у формі ліофілізованого сухого порошку, що містить кількість антитіла, що підходить для однократного введення, або у формі рідини. Одиничні лікарські форми у вигляді сухого порошку можуть бути впаковані в набір зі шприцом, придатною кількістю носія і/або інших компонентів, що підходять для введення. Одиничні форми в рідкій формі можуть бути для зручності представлені у формі шприца, попередньо заповненого кількістю анти-ОхХ40 антитіла, що підходять для однократного введення.
ЇО111| Фармацевтичні композиції також можуть перебувати в партії, що містить кількість 60 анти-ОХ40 антитіла, що підходить для багаторазового введення.
ІО112| Фармацевтичні композиції можуть бути отримані для зберігання у вигляді ліофілізованих складів або водних розчинів шляхом змішування антитіла з бажаним ступенем чистоти і необов'язковими фармацевтично прийнятними носіями, зазвичай використовуваними в даній галузі. Такі добавки повинні бути нетоксичними для реципієнтів у використовуваних дозуваннях і концентраціях.
ІЇО113| Наприклад, для внутрішньовенного введення композиція може бути у формі ліофілізованого порошку, який після розведення стерильною водою або іншим розчином, що підходять для ін'єкції або інфузії (наприклад, 0,9 95 фізіологічний розчин, розчин Рінгера, розчин
Рінгера з лактатом тощо) дає водну композицію. 7.6 Способи застосування 7.8.1 Терапевтичний ефект (0114) Представлені в даному документі дані демонструють, що описані анти-ОХ40 антитіла активують рецептор ОХ40 у присутності злоякісних клітин і проявляють сильну протипухлинну активність проти злоякісних новоутворень іп мімо. Відповідно, анти-ОХ40-антитіла і/або фармацевтичні композиції, що містять анти-ОХ40-антитіла, можуть бути використані в терапії злоякісних новоутворень.
ЇО115| У деяких варіантах здійснення, злоякісне новоутворення являє собою солідну пухлину. Солідні пухлини, які можна лікувати антитілом проти ОХ40, включають рак сечового міхура, рак молочної залози (наприклад, потрійний негативний рак молочної залози), рак голови і шиї, рак нирки (наприклад, нирково-клітинний рак), рак печінки (наприклад, гепатоцелюлярна карцинома, холангіокарцинома), рак легенів (наприклад, недрібноклітинний рак легені, мезотеліома, дрібноклітинний рак легені), меланому (наприклад, неоперабельна або метастатична меланома, прогресуюча злоякісна меланом), рак шкіри (наприклад, карцинома із клітин Меркеля), рак яєчників, рак шлунка і пухлини з ознаками дефекту репарації помилково спарених нуклеотидів у ДНК. Рак може складатися з пухлин, що містять ОХ40-експресуючі клітини; складаються з пухлин, деякі з яких містять ОХ40-експресуючі клітини, а деякі не містять; або складатися з пухлин, у яких відсутні ОХ40-експресуючі клітини. Рак може бути вперше діагностований і наївний для лікування, або може бути рецидивуючим, рефрактерним або рефрактерно-рецидивуючим, або метастатичною формою солідної пухлини. У деяких варіантах здійснення солідна пухлина наївна відносно засобу, націленого на РО-1 або РО-І 1. В інших варіантах здійснення солідна пухлина є рецидивуючю або рефрактерною після лікування засобом, націленим на РО-1 або РО-11. У деяких варіантах здійснення солідна пухлина вибрана з раку сечового міхура, раку молочної залози, раку голови і шиї, раку нирки, раку легені, меланоми і раку шлунка. У деяких варіантах здійснення солідна пухлина вибрана з меланоми (наприклад, неоперабельної або метастатичної меланоми), раку легені (наприклад, недрібноклітинного раку легені) і нирково-клітинного раку (наприклад, нирково-клітинного прогресуючого раку). У деяких варіантах здійснення солідна пухлина вибрана з потрійного негативного раку молочної залози, раку яєчника, гепатоцелюлярної карциноми, раку шлунка, дрібноклітинного раку легені, мезотеліоми, холангіокарциноми, карциноми Меркеля і пухлин з ознаками дефекту репарації помилково спарених нуклеотидів у ДНК. У деяких варіантах здійснення рак легені являє собою метастатичний недрібноклітинний рак легені із прогресуванням при проведенні або після проведення хіміотерапії на основі платини. У деяких варіантах здійснення рак легені являє собою місцево-розповсюджений або метастатичний недрібноклітинний рак легені, який не відповідає на терапію на основі платини і терапію засобом, націленим на РО-1 або РО-11. У деяких варіантах здійснення рак голови та шиї являє собою рецидивуючу плоскоклітинну карциному голови і шиї, яка не підходить для куративного лікування місцевою або системною терапією, або метастатичну (дисеміновану) плоскоклітинну карциному голови і шиї порожнини рота, ротоглотки, нижньої частини гортані і гортань, яка вважається невиліковною при місцевій терапії. (0116) Як обговорювалося вище, описані даному документі анти-ОХ40-антитіла модулюють імунологічну відповідь. Відповідно, пацієнти з порушеною імунною системою можуть бути виключені з лікування. У деяких варіантах здійснення пацієнт виключається у випадку відповідності одному або декільком наступним критеріям: (1) Активне або раніше зареєстроване аутоїмунне захворювання (включаючи, але не обмежуючись, запальне захворювання кишечнику, целіакія, синдром Вегенера) протягом останніх 2 років. (Пацієнти з атопією або астмою в дитинстві, вітиліго, алопецією, синдромом Хашімото, хворобою Грейвса або псоріазом, у яких не потрібне проведення системного лікування (протягом останніх 2 років), не виключаються); (2) З первинним імунодефіцитом, трансплантацією кісткового мозку, хронічним лімфоцитарним лейкозом, трансплантацією твердих органів в анамнезі або в яких раніше був бо клінічно діагностований туберкульоз; (3) З коагулопатією або тромбоцитарним порушенням в анамнезі; (4) З підтвердженим позитивним результатом тесту на вірус імунодефіциту людини (ВІЛ) або індивіди із хронічним або активним гепатитом В або С. (Сюди також можна віднести індивідів з гепатитом В або з в анамнезі, у яких було зареєстроване лікування після проведення антивірусної терапії); (5) З імунно-опосередкованою нейротоксичністю або пневмонією, що розвивається на фоні імунотерапії з попередньою оцінкою 23 (включаючи, але ними не обмежуючись, засоби, націлені на СТГ А-4, РО-Ї1 або РО-1). Крім того, будь-яка інша імуноопосередквана несприятлива подія при імунотерапії яка не пройшла або стала безсимптомною протягом З місяців, і що має попередню оцінку 2» 3; (б) Є реципієнтами живої атенуйованої вакцини протягом 28 днів перед першою дозою анти-ОХ40 антитіла.
ІЇ0117| Анти-ОХ40-антитіло за винаходом можна вводити самостійно (монотерапія) або на додаток до інших протипухлинних терапевтичних засобів і/або з мішеневими або немішеневими протипухлинними засобами або разом з ними. При монотерапії анти-0Х40 можна використовувати одне або декілька антитіл. Незалежно від того чи проводиться монотерапія або додаткова терапія до інших, разом з іншим методам лікування або засобами, кількість анти-
ОХ40 антитіла вводиться так, щоб загальна схема лікування давала терапевтичний ефект.
ІО118|) Під терапевтичним ефектом розуміють будь-який показаний клінічний ефект у пацієнта при використанні анти-ОХ40-антитіл у порівнянні з відсутністю терапії (якщо підходить) або в порівнянні з відомим стандартом лікування. Клінічний ефект може бути оцінений будь- яким способом, відомим фахівцеві в даній галузі. В одному з варіантів здійснення клінічний ефект оцінюють за відсотком пацієнтів з об'єктивною відповіддю (ОКК) (визначається за допомогою КЕСІ5Т, версія 1.1), тривалості відповіді (ОК), виживаності без прогресування (РЕ) і/або загальної виживаності (05). У деяких варіантах здійснення повна відповідь вказує на терапевтичний ефект. У деяких варіантах часткова відповідь вказує на терапевтичний ефект. У деяких варіантах стабільне захворювання вказує на терапевтичний ефект. У деяких варіантах здійснення збільшення загальної виживаності вказує на терапевтичний ефект. У деяких варіантах здійснення терапевтичний ефект являє собою збільшення тимчасового проміжку до прогресування захворювання і/або поліпшення симптомів або якості життя. В інших варіантах здійснення терапевтичний ефект не належить до збільшення періоду контролю над захворюванням, а скоріше помітно зменшує кількість симптомів, що призводить до поліпшення
Зо якості життя. Фахівцям у даній галузі буде очевидно, що терапевтичний ефект можна спостерігати при використанні тільки анти-ОХ40-антитіл (монотерапія) або при на додаток до інших протипухлинних методів або/"або мішеневими або немішеневими протипухлинним засобам.
І0119| Як правило, терапевтичний ефект оцінюють, використовуючи стандартні клінічні тести, розроблені для вимірювання відповіді на нове лікування злоякісного новоутворення. Для оцінки терапевтичного ефекту анти-ОХ40-антитіл, описаних у даному документі, можна використовувати один або комбінацію наступних тестів: (1) критерій оцінки відповіді при солідних пухлинах (КЕСІЗТ), версія 1.1, (2) імуно-зв'язаний КЕСІЗТ (ігкЕСІ5Т)), (3) загальний стан за критеріями Східної об'єднаної групи онкологів (ЕСОС), (4) критерій імунної відповіді (С), (5) оцінку захворювання за пухлинними антигенами, (б) за достовірною шкалою результатів відповіді в пацієнтів і/або (7) за оцінкою Каплана-Мейєра загальної виживаності і виживаності без прогресування захворювання.
ІО120| Оцінка зміни пухлинного навантаження є важливою ознакою клінічної оцінки протипухлинної терапії Як зменшення пухлини (об'єктивна відповідь), так і час до прогресування захворювання є важливими кінцевими точками в клінічних випробуваннях злоякісних новоутворень. Стандартизовані критерії відповіді, відомі як КЕСІЗТ (критерії оцінки відповіді солідних пухлин), були опубліковані в 2000 році. Відновлення (КЕСІБТ 1.1) було випущено в 2009 році. Критерії КЕСІ5Т зазвичай використовуються в клінічних випробуваннях, якщо об'єктивна відповідь є первинною кінцевою точкою дослідження, а також у випробуваннях, у яких проводиться оцінка стабільного захворювання, прогресування пухлини або аналізу часу до прогресування, оскільки ці показники основані на оцінці анатомічного пухлинного навантаження і на зміні в ході випробування. У Таблиці 8 наведені визначення критеріїв відповіді, використовувані для визначення об'єктивної відповіді пухлини на тестований лікарський засіб, такий як анти-ОХ40 антитіла, описані в даному документі.
Таблиця 8 (цільові або нецільові) повинні зменшуватися в діаметрі до «10 мм.
РА приймаючи за основу базові діаметри суми.
Збільшення щонайменше на 20 95 суми діаметрів цільових уражень, приймаючи за основу найменшу суму при дослідженні (включаючи
Прогресуюче базову суму, якщо вона найменша при дослідженні). Крім відносного захворювання (РО) збільшення на 20 95, сума також повинна мати абсолютне збільшення щонайменше на 5 мм. (Примітка: поява одного або декількох нових уражень також вважається прогресуванням).
Стабільне Відсутність значного зменшення, щоб вважатися РЕ, відсутність захворювання достатнього збільшення, щоб вважатися РО, приймаючи за основу 5О0 найменшу суму діаметрів під час дослідження.
ІО121| Вторинні показники, які можна використовувати для визначення терапевтичного ефекту анти-ОХ40-антитіл, описаних у даному документі, включають в себе відсоток пацієнтів з об'єктивною відповіддю (ОКК), виживаність без прогресування (РЕ5), загальне виживання (О5), тривалість загальної відповіді (ОК) і ступінь відповіді (ОрК). ОКК визначається як відсоток учасників, які дали повну відповідь (СК) або часткову відповідь (РЕК). РЕ5 визначається як час від дати першої дози анти-ОХ40 антитіла до прогресування захворювання або смерті, залежно від того, що настане раніше. О5 визначається як проміжок часу від дати постановки діагнозу до початку лікування захворювання, якщо діагностовані пацієнти живі. ОК визначається як час від початкового СК або РК до моменту прогресування захворювання. ЮркК визначається як відсоток зменшення пухлини, спостережуваний у точці максимальної відповіді в порівнянні з вихідним пухлинним навантаженням. Клінічні точки для ОКЕ і РЕ5 можуть бути визначені на основі критеріїв КЕСІ5Т 1.1, описаних вище. 0122) Додаткові критерії, які можна використовувати для клінічної оцінки, специфічної для онкологічних хворих, що проходять курс імунотерапії, включають стандартизовані імуно-зв'язані критерії КЕСІЗТ (ігкЕСІ5Т). Див., наприклад, Мізпіпо, М. еї аї. Єиг. 9. Кадіої., 84(7), раде5 1259- 1268 (2015 дшу). Ці керівні принципи змінили критерії КЕСІЗ5Т 1.1, зазначені вище, з обліком потенційних імуномодулюючих ефектів. У Таблиці 9 наведені визначення критеріїв відповіді, використовувані для визначення об'єктивної відповіді пухлини на імуномодулюючий лікарський засіб, такий як анти-ОХ40 антитіла, описані в даному документі.
Таблиця 9 повинні зменшуватися до «10 мм за найменшим діаметром.
Часткова відповідь Зниження загального вимірюваного пухлинного навантаження на » (гРВ) Зо уо у порівнянні з вихідними нецільовими ураженнями являє собою ігММ, і немає однозначного прогресування нових невимірних уражень
Збільшення щонайменше на 20 95 і абсолютне збільшення ТМТВ
Прогресуюче щонайменше наб мм у порівнянні з падіг або ігРО для нецільових або - нових невимірних уражень. Підтвердження прогресування захворювання (ігРО) вили 2. . рекомендується проводити принаймні через 4 тижні після першої оцінки ігРО.
Не-їїСе або не-ігРО На початку дослідження не було виявлено цільового захворювання і (мМ) при наступному спостереженні пацієнт не відповідав критеріям ісКк або ігРО.
Стабільне Відсутність значного зменшення, щоб вважатися ігРЕ, відсутність захворювання достатнього збільшення, щоб вважатися ігРО, приймаючи за основу
Пеів) найменшу суму діаметрів під час дослідження.
ІЇО123| Шкала загального стану ЕСОС, показана в Таблиці 10, використовується для опису загального функціонального стану пацієнта з погляду його здатності опікуватися про себе, здійснювати повсякденну активність і фізичні здатності. Шкала була розроблена Східною об'єднаною групою онкологів (ЕСОС), що на даний час входить до складу дослідницької групи
ЕСОЦ-АСКНЕІМ, і опублікована в 1982 році
Таблиця 10 ос рф жених З хвороби виконувати легку або сидячу роботу, наприклад, роботу з будинку, роботу в офісі виконувати яку-небудь роботу; і впритул або приблизно до 50 95 від часу неспання прикутий до ліжка або крісла сидячий
ІО124| Ще один набір критеріїв, які можна використовувати для повної характеристики і визначення відповіді на імунотерапевтичні засоби, такі як засоби при терапії антитілами злоякісних пухлин, являє собою критерії імунної відповіді (ігС), які були розроблені для вимірювання солідних пухлин в 2009 році, з відновленням в 2013 році (МиоІспокК, еї аї. Сііп.
Сапсег Вез., 2009; 15(23): 7412-7420 і Мібпіпо, еї аї. Сіїп. Сапсег Ке5. 2013; 19(14): 3936-3943).
Зазвичай для оцінки ефекту імунотерапевтичного засобу, такого як анти-ОХ40-антитіло, описане в даному документі, на пухлинне навантаження використовують оновлені критерії ігКкс, і відповідь визначають відповідно до Таблиці 11.
Таблиця 11 інтервалом не менше 4 тижнів щонайменше 30 95, приймаючи за основу базові діаметри суми.
Збільшення щонайменше на 20 95 суми діаметрів цільових уражень,
Прогресуюче приймаючи за основу найменшу суму при дослідженні (включаючи захворювання (РО) базову суму, якщо вона найменша при дослідженні). (Примітка: поява одного або декількох нових уражень не вважається прогресуванням.
Вимірювання нових уражень включається в суму вимірювань).
Стабільне Відсутність значного зменшення, щоб вважатися РЕ, відсутність захворювання достатнього збільшення, щоб вважатися РО, приймаючи за основу в 5О0 найменшу суму діаметрів під час дослідження. (0125) Одним із прикладів терапевтичного ефекту, що виникає в результаті використання анти-ОХ40 антитіл, описаних у даному документі, для лікування солідних пухлин, незалежно від того, чи застосовують їх як монотерапію або на додаток до інших варіантів терапії або засобів, є повна відповідь. Ще одним прикладом терапевтичного ефекту, що виникає в результаті застосування анти-0Х40 антитіл для лікування солідних пухлин, незалежно від того, чи застосовують їх як монотерапію або як доповнення до інших варіантів терапії або засобів, є часткова відповідь.
ІО126| Достовірна шкала результатів лікування, повідомлюваних пацієнтами, також може використовуватися для оцінки відповіді, що представляється кожним пацієнтом через певну систему звітності. Замість того, щоб фокусуватися на захворюванні, такі шкали результатів лікування стосуються збереження активності при лікуванні хронічного захворювання. Одним з необмежуючих прикладів достовірних шкал результатів лікування, повідомлюваних пацієнтами,
Зо є РАОМІБЗФ (Райепі Керопей Ошісоте5 Меазигетепі Іптогтайоп Зувіет) Національного інституту охорони здоров'я США. Наприклад, за РЕОМІЗФ РпПузіса! Рипсійоп Іпбігитепі для дорослих онкологічних хворих, може проводити самооцінку здатності і функції верхніх кінцівок (наприклад, спритності), нижніх кінцівок (наприклад, ходьба або рухомість) і центральних ділянок (наприклад, рухомість шиї і спини) і включає повсякденну активність, наприклад виконання доручень.
І0127| Криві Каплана-Мейєра (Каріап і Меїег, У. Ат. еїаї. Ав55об. 1958; 53 (282): 457-481) також можна використовувати для оцінки загальної виживаності і виживаності без прогресування захворювання в онкологічних хворих, що одержують терапію антитілами проти
ОХа40, у порівнянні зі стандартом лікування. 7.8.2 Додаткова терапія
І0128| Анти-0Х40 антитіла можуть бути використані на додаток до інших засобів або способів лікування, що володіють протираковими властивостями, або разом з ними, включаючи стандартні методи лікування, такі як терапія антитілами проти РО-1. При додатковому використанні анти-ОХ40-антитіло і інший засіб(и) можуть бути об'єднані разом в одному комбінованому фармацевтичному складі або можуть бути об'єднані і введені окремо, або в єдиному погодженому режимі дозування, або в різних режимах дозування. Засоби, що вводяться на додаток до анти-ОХ40-антитіл або разом з ними, зазвичай будуть мати взаємодоповнюючу активність для анти-ОХ40-антитіл, так що антитіла і інші агенти не будуть виявляти несприятливого впливу один на одного. 7.7 Дози і схеми введення
ІО129| Кількість анти-ОХ40-антитіл, що вводяться, залежить від множини факторів, включаючи, але не обмежуючись цим, конкретний тип онкологічного захворювання, стадію такого захворювання, спосіб введення, частоту введення, бажаний терапевтичний вплив, ефект і інші параметри, такі як вік, вага і інші параметри пацієнта тощо. Визначення доз, ефективних для терапевтичного ефекту при конкретних режимах і частоті введення, перебуває в межах компетенції фахівців у даній галузі. 01301 Дози, ефективні для досягнення терапевтичного ефекту, можуть бути спочатку оцінені на тваринних моделях іп мімо. Придатні тваринні моделі для широкого спектра захворювань відомі в даній галузі.
І0131| Анти-ОХ40-антитіла, розкриті в даному описі, можуть вводитися будь-яким шляхом, що підходить для стану, що підлягає лікуванню. У деяких варіантах здійснення анти-0ОХ40 антитіло являє собою будь-яке гуманізоване антитіло з важким ланцюгом з будь-якою амінокислотною послідовністю ЗЕ 0 МО:41-44, і легким ланцюгом з будь-якою амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО:51-54. У деяких варіантах здійснення анти-0ОХ40 антитіло містить важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:41 або 42 і легкий ланцюг з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:51. Анти-ОХ40 антитіло зазвичай вводять парентерально, тобто інфузією, внутрішньовенно (ІМ), інтратекально, болюсно, внутрішньопухлинно або епідурально (зЗпіге еї аї., 2004, .). Рпагт. 5сіепсе5 93(6):1390-1402). В одному з варіантів здійснення, анти-0Х40 антитіло перебуває у вигляді ліофілізованого порошку у флаконі. Перед введенням ліофілізований порошок відновлюють стерильною водою для ін'єкцій (ЗМУРІ) або іншим придатним середовищем для одержання розчину, що містить анти-ОХ40 антитіло. У деяких варіантах здійснення отриманий відновлений розчин також розбавляють фізіологічним розчином або іншим придатним середовищем для інфузії і вводять за допомогою внутрішньовенної інфузії один раз кожні два тижні, тобто кожні 13, 14 або 15 днів.
ЇО132| У деяких варіантах здійснення анти-ОХ40 антитіло вводять у вигляді внутрішньовенної інфузії один раз кожні два тижні в дозі 0,01 мг/кг, 0,1 мг/кг, 1,0 мг/кг або 3,0 мг/кг.
ІЇО133| При введенні на додаток або разом з іншими засобами, такими як інші хіміотерапевтичні засоби, анти-0Х40 антитіла можна вводити за тією ж схемою, за якою вводять інші засоби, або згідно з іншою схемою. При введенні за тією ж схемою анти-ОХ40- антитіло можна вводити перед, після або одночасно з іншим засобом.
ЇО134| Як зрозуміло Фахівцям у даній галузі, рекомендовані дози для різних засобів, описаних вище, можуть потребувати корегування для одержання оптимальної відповіді пацієнта і максимального терапевтичного ефекту.
ПРИКЛАДИ
ІО135)| Наступні приклади, які підкреслюють певні ознаки і властивості варіантів здійснення анти-ОХ40 антитіл, описаних у даному документі, надані для ілюстрації, а не обмеження.
Приклад 1. Матеріали і методи 8.1.1. Зв'язування анти-ОХ40 антитіла з ОХ40 людини в аналізі ЕГ ІЗА 0136) 96-лункові планшети Іттипоїоп 4хпБ (Тпепто зсіепійіс) покривали 1 мкг/мл ОХ40-Ес бо людини (КУО Зузіет5) при 49С протягом ночі. Планшети блокували фосфатно-сольовим буфером (РВ5), що містить 1 95 бичачого сироваткового альбуміну (В5А), протягом 30 хвилин при кімнатній температурі, а потім тричі промивали РВ5Т (РВЗ з 0,195 Тмеєп 20), використовуючи пристрій для промивання планшетів. Потім планшети, покриті ОХ40, інкубували із зазначеними концентраціями тестованого антитіла при кімнатній температурі протягом однієї години. Планшети чотири рази промивали РВЗТ і потім інкубували протягом 1 години при кімнатній температурі з 100 мкл цапиних анти-людських Раб-фрагментів, зв'язаних з біотином (Часкбооп ІттипокКезеагсі)), приготовленого до розведення 1:5000 в РВ5, що містить 1 95 ВБА.
Потім планшети промивали п'ять раз в РВ5Т і в кожну лунку додавали 100 мкл стрептавідин- пероксидазу хріну (НЕР) у розведенні 1:1000 (Тпепто Зсіепійіс) і інкубували протягом 30 хвилин при кімнатній температурі. Потім планшети промивали п'ять раз в РВ5Т і в кожну лунку додавали 100 мкл однокомпонентного ТМВ (Зигптоаісв) і інкубували при кімнатній температурі (КТ) до появи кольору (приблизно 5-10 хвилин). Оптичну густину (003) зчитували при 650 нм (МоїІесшаг Оемісе5 Зресіготах190). 8.1.2. Зв'язування анти-ОХ40 антитіла з ОХ40 яванського макака в аналізі ЕГІЗА (0137) 96-лункові планшети Іттипоїоп 4хпр (Тпепто з5сіепійіс) покривали 1 мкг/мл злитого білка ОХ40-ЕС яванського макака при 42С протягом ночі. Планшети блокували РВ5, що містить 195 бичачого сироваткового альбуміну (В5БА), протягом 30 хвилин при КТ, а потім тричі промивали РВЗТ (РВ5 з 0,195 Тмееп 20). Потім планшети, покриті ОХ40, інкубували із зазначеними концентраціями анти-ОХ40 антитіла при кімнатній температурі протягом однієї години. Планшети чотири рази промивали РВЗТ і потім інкубували протягом 1 години при кімнатній температурі з 100 мкл цапиними анти-людськими Рар-фрагментами, зв'язаними з біотином (даскзоп ІттипокКезеагсі), приготовленого до розведення 1:5000 в РВ5, що містить 195 ВБА. Потім планшети промивали п'ять раз в РВ5Т і в кожну лунку додавали 100 мкл стрептавідин-НЕР (Тпепто Зсіепійіс) у розведенні 1:1000 їі інкубували протягом 30 хвилин при кімнатній температурі. Потім планшети промивали п'ять раз в РВ5Т і в кожну лунку додавали 100 мкл однокомпонентного ТМВ (Зиптодісв) і інкубували при кімнатній температурі до появи кольору (приблизно 5-10 хвилин). Оптичну густину (00) зчитували при 650 нм (МоіІесшаг
Оемісе5 зресіготах190). 8.1.3. Зв'язування анти-ОХ40 антитіла з ОХ40 макака-резус в аналізі проточної цитометрії
Зо І0138| ОХ40 макака-резусу (Масаса тшаца) ідентична ОХ40 яванського макака (Масаса
Памісшіагіз) (ЗЕО ІО МО:2) на амінокислотному рівні. Репортерну клітинну лінію 293 МЕ-кВ, що експерсує ОХ40 макака-резус, культивували в середовищі Голка, модифікованому за методом
Дульбекко (0ОМЕМ), що містить 1095 ембріональної бичачої сироватки (ЕВ5) і пеніцилін/стрептоміцин. Для аналізу зв'язування клітини ресуспендували в кількості 5 мільйонів 35 клітин на мл. 50 мкл (250000 клітин)уулунка переносили в кожну лунку поліпропіленового 96- лункового планшета з об'ємом 500 мкл (Мипс). В окремому планшеті готували 2х маточний розчин тестованого анти-0ОХ40-антитіла або моноклонального контрольного ізотипового антитіла для розведення при 666, 333, 111, 37,03, 12,34, 4,11, 0,457, 0,152, 0,0508, 0,0169, 0,00564 НМ у культуральному середовищі. Моноклональні антитіла (50 мкл/лунка) переносили у 40 відповідні лунки планшета для аналізу. Клітини інкубували з первинними антитілами протягом хвилин при 42С і двічі промивали 250 мкл/лунка РВ5 центрифугуванням при 800 об/хв протягом З хвилин. Зв'язане антитіло детектували за допомогою ослиного Суб проти дО людини (Неї) (Часкбзоп ІттипоКезеагсі), розведеного до 2 мкг/мл (50 мкл/лунка) в РВ5 протягом 30 хвилин при 42С. Клітини промивали один раз 250 мкл/лунка РВ5, ресуспендували в
РВ5, що містить 1 96 формальдегід, і аналізували на подвійному лазері ЕАСзСаїїйриг (Весіоп ріскКкіпзоп). 8.1.4. Афінність зв'язування анти-ОХ40 антитіла з ОХ40 людини і макака-резусу в аналізі поверхневого плазмонного резонансу
ІЇО139| Кінетику зв'язування анти-ОХ40-антитіла з рекомбінантним розчинним ЕСО (позаклітинний домен) ОХ40 визначали вимірюваннями на основі поверхневого плазмонного резонансу, проведеними на приладі Віасоге Т200 (СЕ Неаййсаге) при 2520, використовуючи аналізу захоплення Ес. Здобували рекомбінантні позаклітинні домени (ЕС) ОХ40 людини (залишки 1-216) і макаки-резус ОХ40 (залишки 28-214) (Стгеаїме Віотаг) і додатково очищали гель-фільтрацією на Бирегдех200 (ЗЕ Неаййсагє) в 10 мМ «4-(2)-гідроксіетил)-1- піперазинетансульфонової кислоті (НЕРЕ5), рН 74, 150 мМ Масі 3 мМ етилендіамінтетраоцтової кислоті (ЕОТА). ОХ40 макака-резусу (Масаса тиїаца) ідентична ОХ40 яванського макака (Масаса Памісшіагіз) (ЗЕО ІЮ МО: 2) на амінокислотному рівні. Готуваали чіпи і проводили кінетичні вимірювання в буфері для аналізу НВ5-ЕР» (10 мМ НЕРЕЗ5, рН 7,4, 150
ММ масі, З мМ ЕОТА, 0,05 95 Твін 20). Для одержання чіпа для захоплення Ес, близько 2000 бо резонансних одиниць (КИ) поліклонального цапиного анти-людського с дос (Тпепто Різпег
Зсіепійіс Іпс.), розведеного до 25 мкг/мл в 10 мМ ацетаті натрію (рН 4,5) безпосередньо іммобілізували на біосенсорну мікросхему СМ5, використовуючи стандартний набір для зв'язування відповідно до інструкцій і методик виробника. Молекули, що не прореагували, на поверхні біосенсора, блокували етаноламіном. Для вимірювання кінетики зв'язування кожний цикл аналізу складався з наступних етапів: 1) захоплення тестованого анти-ОХ40 антитіла тільки на тестовій поверхні; 2) ін'єкція аналіту (0Х40 ЕСО або тільки буфер) на контрольну і тестову поверхню, 240 мкл при 80 мкл/хв, потім контроль дисоціацію протягом 900 секунд при 80 мкл/хв; 3) регенерація поверхні захоплення ін'єкціями 10 мМ гліцин-НСІ, рН 1,5 як на контрольній, так і на тестовій поверхні. Під час аналізу всі вимірювання зіставляли з вимірюваннями на поверхні захоплення (тобто без захоплення тестованого антитіла), і ін'єкції тільки буфера використовували для подвійного контролю. Ін'єкції ОХ40 змінювали від концентрації 900 нМ або 300 нМ до 11,11 нМ у рандомізованій 9- або З3-кратній серії розведень, відповідно. Дані обробляли і глобально адаптували до моделі зв'язування 1:1, використовуючи програмне забезпечення Віасоге Т200 ЕмаїЇчайоп для визначення констант кінетичної швидкості зв'язування, Ка (М" с) і Ка (с7), а також рівноважної константи дисоціації Ко (М). 8.1.5. Блокування ліганду ОХ40 анти-ОХ40 антитілом 0140) Клітини ШигКкаї, стабільно трансфікованні ОХ40 людини, культивували в 2х105 клітин/лунка, одночасно інкубували з 0,2 мкг/мл тестованого анти-ОХ40 антитіла і титрували розчинний ОХ40. людини (КО зузіетв5) в РВ5, що містить 1 95 В5ЗА в 96-лунковому планшеті із круглим дном протягом 30 хвилин при кімнатній температурі. Клітини двічі промивали і інкубували протягом ще 30 хвилин з 100 мкл цапиним анти-людським Ес РЕ (даск5оп
ІпітипоКезеагсі) на лунку в розведенні 1:500. Потім клітини двічі промивали і виявляли за допомогою ЕАСзЗсСапіо (ВО Віозсіепсев) і аналізували за допомогою ЕАСсСЗОЇма. 8.1.6. Зв'язування анти-ОХ40 антитіла з ОХ40 людини, що експресується на клітинній поверхні
ІЇО141| Репортерну клітинну лінію Уигкаї МЕ-кВ, що експерсує білок ОХ40 людини, культивували в ОМЕМ, що містить 10 95 ЕВ5 і пеніцилін/стрептоміцин (пін./стрепт.). Для аналізу зв'язування кожну клітинну лінію ресуспендували в кількості 5 мільйонів клітин на мл. 50 мкл (250000 клітину/улунка переносили в кожну лунку поліпропіленового 96-лункового планшета з
Зо об'ємом 500 мкл (Мипс). В окремому планшеті готували 2х маточний розчин тестованого анти-
ОХ40-антитіла або контрольного ізотипового тАб для розведення при 666, 333, 111, 37,03, 12,34, 4,11, 0,457, 0,152, 0,0508, 0,0169, 0,00564 нМ у культуральному середовищі. Кожне антитіло (50 мкл/лунка) переносили у відповідні лунки планшета для аналізу. Клітини інкубували з тестованим анти-ОХ40-антитілом або контрольними ізотиповими антитілами протягом 30 хвилин при 42С і двічі промивали 250 мкл/лунка РВ5, центрифугуючи при 800 об/хв протягом З хвилин. Зв'язане антитіло детектували за допомогою ослиного Су5 проти ДО людини (НЯ) (Часкзоп ІттипокКезеагсії), розведеного до 2 мкг/мл (50 мкл/лунка) в РВ5 протягом 30 хвилин при 42С. Клітини промивали один раз 250 мкл/лунка РВ5, ресуспендували в РВ5, що містить 1 95 формальдегід, і аналізували на двочастотному лазері ЕАСзЗСаїїриг (Весіоп ОісКіпзоп). 8.1.7. Зв'язування анти-ох40 антитіла з химерним рецептором ОХ40 0142) Одержували трансфектанти на основі 293 для експресії химерних варіантів молекули
ОХ40 людини за допомогою ОХ40-багатих цистеїном доменів (СКО) миші, у кожному випадку із заміною на відповідні СЕО людини. Після відбору 5418 клітини, що вижили, сортували за експресією на проточному цитометрі МоРіо (ВесКтап): 2935-пиШОХ40, 2935-пиОХх40-тиСВО, 2935 пШОХ40 тис, 2935-пиОХх40-тиСВ ОО, 2935-пиОХх40-тптисСкОІМ, 2935 пиСсСКОІМ, 2935 ПП ї 2935-тИиОХ40. У цілому 2х105 кожного химерного трансфектантна ОХ40 на основі 2935 на лунку додавали в поліпропіленові 96-лункові планшети об'ємом 500 мкл (Мипс). Після посіву клітин 50 мкл Ни3738 або ізотипового контрольного антитіла в концентрації 2 мкг/мл додавали у відповідні лунки у двох повторах для кожної клітинної лінії і залишали інкубуватися на льоді протягом 30 хвилин. Після інкубації в кожну лунку додавали 200 мкл фізіологічного розчину
Дульбекко з фосфатним буфером (ОРВ5) і планшети центрифугували при 1000 об/хв протягом трьох хвилин. Супернатанти з кожної лунки видаляли і додавали 50 мкл вторинного антитіла ослиного Суд проти дсС людини (Часкбоп ІттипоКевзеагсі) у розведенні 1:250, а потім інкубували протягом 30 хвилин на льоді в темряві. Після періоду інкубації додавали 200 мкл
ОРВ5Б, а потім центрифугували планшет при 1000 об/хв протягом трьох хвилин. Супернатанти видаляли і кожну лунку повторно суспендували разом з 100 мкл ОРВ5ш1 95 формальдегіду.
Зразки аналізували на двочастотному лазерному проточному цитометрі ЕАСзСаїїйриг (Весіоп ріскКкіпзоп). 8.1.8. Репортерна флуоресцентна активність МЕ-кВ відносно ОХ40 людини і макака-резус
І0143| Репортерні клітинні лінії УшЖКаї-МЕ-кВ-пчОхХ40 і 293-МЕ-кВ-ВпОХ40, МЕ-кВ, що експресують білки ОХ40 людини і макака-резусу, відповідно, підтримували в культуральному середовищі, що містить ОМЕМ, що містить 10 95 ЕВ5 і пеніцилін/стрептоміцин (100 Од/мл). Для репортерного аналізу МЕ-КкВ клітинну лінію ЩдигКаї-МЕ-кВ-пиОХ40 ресуспендували в середовищі для росту (ідентичному культуральному середовищу) при 1 млн/мл (у підсумку 50000 клітин/лунка) і клітинну лінію 293 МЕ-КВ КпОХ40 ресуспендували в живильному середовищі при 0,5 млн/мл (у підсумку 25000 клітин/лунка). 50 мкл/лунка переносили у внутрішні 60 лунок 96- лункового аналітичного планшета з білим/прозорим дном (Сов5іаг 3903). В окремому 96- лунковому планшеті для розведення з О-подібним дном (Весіоп ОісКіпб5оп) готували Зх маточний розчин наступних антитіл: анти-РО-1 антитіло, використовуване як негативний контроль, і анти-0Х40 антитіло. Серія розведень для тестування активності антитіл без екзогенного зв'язувального агента включала 2000, 500, 125, 31,25, 7,812, 1,953, 0,488, 0,122, 0,0305, 0,00762 нМ у культуральному середовищі. Серія розведень для перевірки ефекту сполучного агента на активність анти-0Х40 антитіла включала 200, 50, 12,5, 3,125, 0,7812, 0,1953, 0,0488, 0,0122, 0,00305, 0,000762 нМ антитіла. 50 мкл/лунка антитіло переносили у відповідні лунки планшета для аналізу із дворазовим повтором. У планшети тільки з антитілом додавали 50 мкл/лунка середовища у внутрішні 60 лунок. Для серії розведень із зв'язувальним агентом антитіло кози проти Ес ЇдДО людини (Чдаскзоп ІттипокКезеагсі) розводили до 800, 200, 50, 12,5, 3,125, 0,7812, 0,1953, 0,0488, 0,0122, 0,00305 нМ і 50 мкл/лунка і переносили у внутрішні 60 лунок для підтримки пропорції 4:11 анти-ОХ40-антитіла і зв'язувального агента.
Середовище для росту (150 мкл) додавали в зовнішні лунки для того, щоб запобігти випарюванню у внутрішніх 60 лунках. Планшети інкубували при 37"С протягом приблизно 18 годин. Активність люциферази визначали кількісно за допомогою Вгйеї! йе Ріи5 (РегКкіп ЕІптег).
Коротко, субстрат розчиняли в 10 мл наданого постачальником буфера і 75 мкл субстрату/лунка додавали у внутрішні 60 лунок кожного планшета. Планшети аналізували на Місіог5о (МоїІесшіаг
Оемісез) з використанням настройок люмінесценції. 8.1.9. АОСС-рептортерний аналіз
І0144| Ефекторні клітини АЮОСС, що експресують ЕсукіІї людини (Рготеда), відтавали і вирощували відповідно до рекомендацій протоколу. Клітини розділяли двічі перед
Зо використанням. Як клітини-мішені використовували клітини НЕК293, стабільно трансфіковані або ОХ40 людини, або ОХ40 макаки-резусу. Ці клітини розмножували в НуСіопе ТМ ОМЕМ з 10 95 ЕВ5, інактивованої нагріванням (Зідта) і 5 мкг/мл бластицидину (5ібсо І їе Тесппоїодіе5).
ЇО145| За день до аналізу клітини-мішені НЕК293, що експресують ОХ40, збирали за допомогою 0,2595 трипсину ((ібсо І їе Тесппоіодіе5). Клітини промивали, підраховували і висівали при 10000 клітин/лунка в 96-лункові планшети Созіаг (Согпіпд). Планшети інкубували при 37"С протягом ночі в ОМЕМ 10 95 ЕВ5. Для аналізу використовували ефекторні клітини біоаналізу АОСС, протокол розмноження (37102. Співвідношення ефекторних клітин і клітин- мішеней становило 7,5:1. Люмінесценцію вимірювали за допомогою Епзріге АІрга геадег (Регкіп
ЕІтег), використовуючи програмне забезпечення Еп5рігеМападег. Антитіла, які тестували в цьому аналізі, включали контрольне ізотипове антитіло і анти-ОХ40 антитіла. 8.1.10. Зв'язування анти-ОХ40 антитіла з активованими СО4-- Т-клітинами людини 0146 РВМС людини виділені з лейкоцитарних фракцій, придбаних у Стенфордському
Центрі Крові (Пало-Альто, Каліфорнія). Коротко, лейкоцитарні фракції розбавляли в пропорції 11 з РВ5 без додавання магнію і кальцію (ЗЕ Неакйсаге). Розведену кров (30 мл) нашаровували на 15 мл 90 95 РісоІ-Радце Ріих5 (СЕ Неаїїйсаге), отриманий в РВЗ без додавання магнію і кальцію (ЗЕ Неайпсаге), що міститься в пробірках ЗерМаїе (5іетсеї! Тесппо!іодієв).
Пробірки обертали при 1200 ду протягом 10 хвилин. Проміжну фазу збирали і двічі промивали в їх РВ5. СО4ж- Т-клітини виділяли, використовуючи набір для збагачення СО4 5біетсвї)
Тесппоодіе5 (сет СеїЇ Тесппоіодіе5). Клітини ресуспендували до 2х1059 клітин/мл в КРМІЛ О 95
ЕВ5. Гранули Бупа! СОЗ3/28 (І Ге Тесппоїодіє5) додавали в пропорції 1:1. Клітини інкубували на ротаторі вертикального типу протягом 20 хвилин при кімнатній температурі. Клітини культивували в б-лункових планшетах протягом 24 годин при 3720. 0147) Через 24 години намисто видаляло магнітом. Клітини підраховували і ресуспендували до 1,5х106/мл. Брали аліквоту клітинної суспензії (100 мкл) для кожного забарвлювання.
Тестоване антитіло титрували в серії 4-кратних розведень, починаючи з 1 мкг/мл. Клітини забарвлювали протягом 30 хвилин і двічі промивали. Розведення 1:250 (4 мкг/мл) цапині анти- людські Ес РЕ/лунка (Фаскхоп ІттипокКезеагсі) додавали до 100 мкл/лунка РВ5, що містить 195 В5А. Клітини забарвлювали ще 30 хвилин і двічі промивали, переносили в пробірки і збирали, використовуючи проточний цитометр ВО І 5Е. Рогіезза, і аналізували з використанням бо програмного забезпечення для аналізу ЕАСЗбіма версії 8.0.1.
Зо
8.1.11. Зв'язування анти-ОХ40 антитіла з активованими Т-клітинами яванського макака 0148) Цільну кров яванського макака здобували в Умогідж/іде Ргітаце5. Для виділення РВМС цільну кров розводили в пропорції 1:1 з РВ5 без додавання магнію і кальцію (СЕ Неаїсагеє).
Розведену кров (30 мл) нашаровували під 13 мл 9595 РісоїП-Радие Ріиз (СЕ НеайЙНсагеє), отриманого в РВ5 без додавання магнію і кальцію (ЗЕ Неайсаге) у конічних пробірках по 50 мл. Пробірки обертали при 1000 д протягом 25 хвилин. Проміжну фазу збирали і двічі промивали в їх РВ5. Клітини ресуспендували до 2х109 клітин/мл в ЕРМІ/10 95 ЕВ5. Клітини інкубували протягом 72 годин з 10 мг/мл фітогемагглютиніну (РНА) (Зідта) і 100 Од/мл рекомбінантного інтерлейкіну-2 людини (1-2) (РгоЇеиКіпФ, Рготеїпецив5) в б-лункових планшетах.
Через 24 години клітини промивали, рахували і ресуспендували до 2х10б/мл. 100 мкл клітин використовували для кожного забарвлювання. Тестоване анти-ОХ40 антитіло титрували в серії 4-кратних розведень, починаючи з 1 мкг/мл. Клітини забарвлювали протягом 30 хвилин і двічі промивали. У кожну лунку додавали антитіло кози проти ІдсС Ес людини-РЕ (Часк5оп
ІпптипоКезеагсі) у розведенні 1:250 (4 мкл/мл) в 100 мкл РВ5, що містить 1 95 В5БА. Клітини забарвлювали ще 30 хвилин і двічі промивали, переносили в пробірки і збирали, використовуючи проточний цитометр ВО І 54К Рогпеб5за, і аналізували з використанням програмного забезпечення для аналізу ГАСЗОЇма версії 8.0.1. 8.1.12. Активована проліферація Т-клітин людини і індукція ІЕМ-у
І0149| Лейкоцитарні фракції здобували в Стенфордському центрі крові (Пало-Альто,
Каліфорнія). Для виділення РВМС людини, лейкоцитарні плівки розводили в пропорції 1:1 з РВ5 без додавання магнію і кальцію (СЕ Неайсаге). Розведену кров (30 мл) нашаровували на 15 мл 90 95 Рісої-Радие Ріи5 (ЗЕ Неайсаге), отриманий в РВ5 без додавання магнію і кальцію (СЕ
Неайсаге), що міститься в пробірках ЗерМаїе (5іетсеї! ТесппоЇодіе5). Пробірки обертали при 1200 д протягом 10 хвилин. Проміжну фазу збирали і двічі промивали в їх РВ5. СО4-- Т-клітини виділяли із РВМС, використовуючи набір для збагачення Т-клітин Еазубер СО4-- (5ептсеї)Ї
Тесппоодіе5). СО4ж Т-клітини культивували при 2х105 клітин/мл в КРМІ Жї10 95 ЕС5 плюс 2 мкг/мл РНА (5ідта) і 20 ІШ/мл рекомбінантного І/-2 людини (РгоїеиКіпФ, Рготеїйеив5) в 6- лункових планшетах протягом 72 год. 0150 Планшети контролю активації Т-клітин Віосоаї 9б-лункові планшети (Согпіпд)
Зо покривали 2 мкг/мл цапиними анти-мишачими Ес дб (дЧаскбзоп ІттипокКезеагсі) і 2 мкг/мл цапиними анти-людськими ІдбС-Ес (Часкзоп ІттипоКезеагсі) в 100 мкл/лунка РВ5 протягом ночі при 40. Планшети блокували 200 мкл/лунка 1 95 ВЗА (КосКіапа) в РВ5 протягом 30 хвилин при кімнатній температурі. Планшети двічі промивали 200 мкл/лунка РВ5. 4 нг/мл анти-СОЗ людини ОКТЗ (еВіозсіепсе) додавали в 100 мкл/лунка РВЗ5 і інкубували протягом 90 хвилин при 3720. Планшети двічі промивали 200 мкл/лунка РВ5. У планшети з 100 мкл РВ5 додавали 3- кратні серії розведень анти-ОХ40-антитіла і ізотипового контрольного моноклонального антитіла, починаючи з 5 мкг/мл. Планшети інкубували протягом 90 хвилин при 3720. Планшети двічі промивали 200 мкл/лунка РВ5. У кожну лунку додавали СО4кТ-клітини (2х105), промиті
РНА і активовані 1-2.
ІО151| Через 48 годин культивування при 372С, 30 мкл супернатанту кожного повтору поєднували для аналізу ІЕМ-у за допомогою І итіпех (МійПіроге) і аналізували на Віоріех Мападег 6.0 (Віокад). У планшети вводили 0,25 мкКі ЗН-тимідину (РегкКкіп ЕІтег) протягом ночі і збирали на наступний ранок на Рікегптаїзх (Регкіп ЕІтег) з 5 мл сцинтиляційної рідини ОКіта соїа (Регкіп
ЕІтег). Фільтри рахували на лічильнику 1450 Місгобреїа Умаїїас Тпйих (РегкіпЕІтег). 8.1.13. Аналізи супресії регуляторних Т-клітин людини 01521) Свіжі мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) одержували від АЇйСеїІ5 або зіетсеї! ТесппоїІодіе5. Клітини центрифугували, осад клітин ресуспендували в їх РВ5 і знову центрифугували при 1200 об/хв протягом 10 хвилин при кімнатній температурі. Супернатанти видаляли і потім клітини ресуспендували в буфері КоробЗер (5іетсеї ТесПппоїіодієв5).
Життєздатність клітин і кількість клітин визначали, використовуючи лічильник клітин Мі-Сеїї ХА
ВесКтап Сошег. 100-150 мільйонів клітин було відкладено для збагачення СО4-- Т-клітин за допомогою набору для збагачення СО4-ж Т-клітин 5етсеїЇ Еазузер Нитап. Збагачені СО4- Т- клітини потім виснажували за СО25-, використовуючи набір для селекції СО25-51етсеїЇ
Еазубер Нитап. У результаті цього процесу були отримані очищені СО4-4/С025- Т-клітини, що відповідають, (Тгезр). Інші РВМС використовували для виділення регуляторних Т-клітин (Тгед) відповідно до інструкцій з набору ЗіетсеїЇ Еазубер Нитап СО4-/С0127юом/Сравза- набір для збагачення регуляторних Т-клітин. Після виділення СО4-4/С025-Ттезр і Тгед клітини ресуспендували з КРМІ 1640 з 1095 інактивованою нагріванням ЕВ5 і 0,01 мМ 2- меркаптоетанолом при 1х105 клітин/мл і 5х105 клітин/мл, відповідно.
(0153) Аналіз пригнічення Тгед проводили з використанням двох різних пропорцій Тгез5р до
Тгед, 2:1 і 4:1. Для пропорції 2:1, 5х102 клітин Тгезр і 2,5х102 клітин Тгед додавали в 96-лункові
М-донні планшети. Для пропорції 4:11 в 9б-лунковий планшет додавали 5х10" клітин Тгезр і 1,25х107 клітин Тгед. Реагент на основі намиста для контролю пригнічення Тгед (Мінкепуїі Віоїгес) також додавали в лунки в пропорції 1:1 гранул до клітин для стимуляції. Анти-ОХ40 антитіло і контрольне ізотипове ЇД1 людини тестували в трьох екземплярах при кінцевій концентрації 10 мкг/мл під час відсутності або в присутності цапиного Е(аб)2 проти (схНи) дб людини, Ес- специфічного (даскзоп ІттипокКезеагсії) у пропорції 1:4. Планшети інкубували при 372С в 5 95
СО» протягом чотирьох днів. Планшети обробляли 1 мкКі/лунка ЗН-тимідином і додатково інкубували протягом ще 16 годин при 372С в 595 СО». Після інкубації планшети збирали і вимірювали проліферацію з використанням сцинтиляційної рідини ОПйіта сої (Регкіп ЕІтег) і сцинтиляційного лічильника 1450 Місгобеїа Умаїїас Тийих (РегкіпЕїЇІтег). 8.1.14. Модель пухлини миші РСО-3 із трансплантованими імунними клітинами людини 0154) У день інокуляції Т-клітини людини, аутологічні тоОС людини (дендритні клітини, отримані з моноцитів) і клітини РО-3 підраховували за допомогою Ммі-Сеїї ХК (Весктап СошцКег) і поєднували для доставки за допомогою підшкірної ін'єкції 1х107. РО-3,1х105 Т-клітин і 5х105 торС на кожну мишу МБО (миша МОЮО.Сад-РікасзсіЦагдітУ52у) в 100 мкл фізіологічного розчину Дульбекко з фосфатним буфером (ОРВ5) (СЕ І езсіепсе5). Групи обробки (п-8 мишей/група) з 10 мг/кг контрольного ізотичного моноклонального антитіла і 10 мг/кг Ни3738 одержували в 200 мкл ОРВ5 для внутрішньоочеревинної ін'єкції. Одну дозу антитіла вводили під час інокуляції суміші клітин. Вимірювання росту пухлини оцінювали стандартним вимірюванням штангенциркулем і розраховували об'єм росту пухлини (довжинахширинахвисота/г). 8.1.15. Модель СУМНО з РВМС людини в мишей МО
І0155| Мононуклеарні клітини периферичної крові людини (РВМС) здобували в АЇІСеїЇ5 (ОакКіапа, СА). Імунодефіцитним мишам МБО (МОЮ.Са-РикасвеЦа діт) інокулювали 2х107
РВМС людини внутрішньочеревинно в 1-ий день. Анти-ОХ40 антитіло Ни3738 або контроль із ізотипом вводили внутрішньочеревинно один раз на тиждень, починаючи з першого дня. Після того, як у мишей виявилися поведінкові ознаки хвороби "трансплантат проти хазяїна" (ЗМНО)
Зо (наприклад, згорблена поза, скуйовджене хутро), брали зразки сироватки і визначали рівні цитокінів у сироватці в аналізі з намистом І итіпех (МіПіроге).
Приклад 2. Одержання і гуманізація мишачих антитіл проти ОХ40. 0156) Мишей імунізували відповідно до способів, відомих в даній галузі (Е. Напому, 0. І апе.
Апіїроду: А І арогаїогу Мапиаї, (Соїй бргіпа Нагбог Іарогаюгу Ргевз5, Соїд З5ргіпд Натбог, МУ, 1998). Ізотип кожного моноклонального антитіла визначали з використанням набору для ізотипування миші (Коспе). Клони гібридоми, які продукують антитіла, що представляють інтерес, очищали і додатково характеризували на афінність за допомогою поверхневого плазмонного резонансу і конкуренцію лігандів за допомогою ЕАС5.
ЇО157| Клонування і конструювання вектора експресії здійснювали способами, відомими в даній галузі, для експресії рекомбінантних моноклональних антитіл. (0158) Гуманізацію М-ділянки антитіла здійснювали, як описано Оцееп, С. еї аї. (Ргос. Маї!.
Асад. Зсі. ОБА, 1989; 86:10029-10033). Канонічні структури СОК визначали відповідно до Ниапа еї а). (Меїподз», 2005; 36:35-42). Були ідентифіковані варіабельні послідовності зародкової лінії людини з однаковими або найбільш подібними канонічними структурами СОК, і були вибрані придатні послідовності людського сегмента МН, Мі і 9, щоб забезпечити каркас для варіабельної ділянки анти-ОХ40. У положеннях каркасної ділянки, у яких комп'ютерна модель припускала значний контакт із СОК, амінокислоти з М-ділянок мишачого анти-ОХ40 були замінені вихідними людськими каркасними амінокислотами (зворотні мутації).
І0159| Анти-0ОХ40 антитіла миші, Ми3726, Ми3738, Ми3739 і Ми3741, гуманізували відповідно до способів, описаних вище. Гуманізований варіант Ми3726 МН відповідав Ни3726
МН.1а, де каркасні ділянки МН4-28 людини мали сім зворотних мутацій І48М, М671І, М69І, МЕ,
Е78М, АЗЗМ ії К94К. Ни3726 МН.1а поєднували з відповідним гуманізованим легким ланцюгом
Ни3726 МІ.1Б6, де каркасні ділянки МК1-39 людини мали дві зворотні мутації М48Е і Е71У.
Гуманізований варіант Ми3738 МН відповідав Ни3738 МН.1Б, де каркасні ділянки МН людини 3-7 мали одну зворотну мутацію УМ47Ї. Ни3738 МН.16 поєднували з відповідним гуманізованим легким ланцюгом Ни3738 МІ..1, де каркасна ділянка людини УК4А-1 не мала зворотних мутацій.
Гуманізований варіант Ми3739 МН відповідав Ни3739 МН.1Б, де каркасні ділянки МНІ1-69 людини мали чотири зворотні мутації М48І, М67А, Е7ЗТ і 576М. Ни3739 МН.1р поєднували з відповідним гуманізованим легким ланцюгом Ни3739 МІ.1Б, де каркасні ділянки МК1-39 людини мали дві бо зворотні мутації У58І. і Е71У. Гуманізований варіант Ми3741 МН відповідав Ни3741 МН.26, де каркасні ділянки МНЗ-66 людини мали сім зворотних мутацій А24М, М481, 5490, Е671, К/1К,
М765 і Г78М. Ни3741 МН.26 поєднували з відповідним гуманізованим легким ланцюгом Ни3741
МІ..1с, де каркасні ділянки МК1-39 людини мали дві зворотні мутації УЗ6Е і Е71У.
Приклад 3: Афінне зв'язування анти-ОХ40 антитіл
ІО160| На таблиці 3-1 нижче показані дані іп міго зв'язування ілюстративного анти-0ОХ40 антитіла Ни3738 або анти-ОХ40 антитіл 1104 або 1808, описаних у патенті США Ме7960515.
Кожне антитіло 1104 і 1808 належить до дО людини з каппа легким ланцюгом.
ЇО161| Як використовується в даному документі, 1104 має Мн з амінокислотною послідовністю:
ЕМОЇ МЕЗО МОРОИБІ ВІ БСААЗИаЕТЕЗ5УЗММУУВОАРаКаТі ЕМУЗМІЗ55ЗЗТОМАОБМ
КОКЕТІЗКОМАКМЗІ МІ ОММ5І КОЕОТАМУУСАКЕБСМУМІ ЕОММУСОСТІ МТУ (ЗЕО ІЮ МО 61), і
Мі з амінокислотною послідовністю:
РІОМТО5РБОБІ БАБМАО ВМТ СВАБЗОСІЗБЗУЛ АМ/МООКРЕКАРКБІ ІМААЗБОІ О5СУРЗАЕЗИ5 азатТоОРТТІЗБІ ОРЕОБРАТУУСООУМЗУРРТРСИаИткКМеїКк (5ЕО ІЮ МО:62). (0162) 1808 має Мн з амінокислотною послідовністю:
ЕМОЇ МЕЗО СОЇ МОРОВІ ВІ БСААЗаЕЄТЕООМАМНУУВОАРОКИГ ЕМ УЗаІЗУУМЗОБІИМАОВ
УКанвЕтІЗАЕМАКМ5І МІ ОММ5І ВАЕОТАЇ УУСАКРОЗТАОУУЕУМамМоУМсаОсТТУГУ5о (ЗЕ
ІО МО:63), і
Мі з амінокислотною послідовністю:
ЕІММТО5РАТІ 5І 5РИЕВАТІ БСВАБОБУЗОЗМУ АММООКРИООАРА ППМОАЗМАВАТОаІРАНЕЗОа5 азатТоеТТІЗЗІ ЕРЕОЕАУУМСООВЗММУУ РТЕИОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮ МО:64). (0163) Антитіло Ни3738 показало сильні зв'язувальні властивості відносно ОХ40 людини в аналізі поверхневого плазмонного резонансу або при трансфекції репортерних клітин Уигкаї МЕ -
КВ, що експресують ОХ40 людини, як виміряно в аналізі Прикладу 1, і високу зв'язувальну афінність в аналізі 5РЕ. у порівнянні з антитілами Ни3739 або Ни3741.
Таблиця 3-1
Зв'язувальні властивості ілюстративних антитіл проти ОХ40 людини . я ж Зв'язування на поверхні
Ко (М) Ка (1/сек) клітин Уигкаї, ЕСво (нг/мл 1104 1,6Е-09 2,7Е-04 1808 9,1Е-09 1.1Е-01
Низ3738 4,2Е-08 4,2Е-02
Ни3739 3,6Е-07 1,6Е-02
Низ3741 3,0Е-06 З,1Е-01 "як визначено поверхневим плазмонним резонансом згідно із Прикладом 1; показане експонентне представлення (наприклад, З3,0Е-09-3,0х103); Н.В.-не визначається. (0164) Ілюстративне анти-ОХ40 антитіло Ни3738 показало перехресну реактивність відносно
ОХабяванського макака або макака-резусу, але не показало значимого зв'язування з ОХ40
Зо щура або миші. Зв'язувальна активність Ни3738 відносно рекомбінантного ОХ40 людини або яванського макака (супо), або відносно ОХ40 людини або макака-резус, розташованих на поверхні, як визначено в аналізах, описаних у Прикладі 1, підсумовано в Таблиці 3-2.
Таблиця 3-2
Зв'язувальні властивості Ни3738 відносно ОХ40 людини, яванського макака і макака-резус
ЕСво (НМ) 0,044 гивА 0,039 клітини Зиткаї МЕ-КВ
Приклад 4: Біологічна активність іп міго анти-ОХ40 антитіла Ни3738
(0165) Для оцінки зв'язування Ни3738 з ендогенно експресованим ОХ40 людини, активовані
Сбра4. Т-клітини і нестимульовані мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) досліджували за допомогою проточної цитометрії. У Таблиці 4-1 підсумовані дані зв'язування
Ни3738 з ОХ40 на клітинній поверхні СО4ж- Т-клітинах людини, активованих гранулами сор3/с028, або на СО4-- Т-клітинах яванського макака, активованих фітогемагглютиніном (РНА) і інтерлейкіном-2 (ІІ--2), згідно з аналізами, описаними в Прикладі 1. Як показано в Таблиці 4-1, антитіло Ни3738 сильно зв'язується з ОХ40 на активованих СО4- Т-клітинах у культурах Т- клітин людини і яванського макака.
Таблиця 4-1
Зв'язування СО4-Т-клітин ілюстративним антитілом Ни3738
ІО166| Субнаномолярне зв'язування ОХ40 людини антитілом Ни3738 забезпечувало функціональну активацію, про що свідчить підвищена проліферація СО4- Т-клітин периферичної крові людини і підвищена продукція інтерферону-у СО4ж- Т-клітинами людини після обробки іп міго Ни3738 згідно з аналізами, описаними в розділі 8.1.12. (ФІГ.1А, 18). Як показано в ілюстративному експерименті, зображеному на ФІГ.1А, антитіло Ни3738 викликало підвищену проліферацію СО4- Т-клітин периферичної крові людини приблизно в 1,5-6 раз у порівнянні з контрольним ізотиповим пиЇдс1, який був порівнянний або більше, ніж підвищення проліферації, спостережуване при введенні Т-клітинам в еквівалентній дозі анти-ОХ40 антитіл 1104 або 1808, описаним у літературі. Ни3738 показав ЕС5о-0,11 нМ (16 нг/мл) у середньому в дослідах з вісьма донорами.
І0167| На ФІГ.1С показано, що проліферація СО4ж- Т-клітин периферичної крові людини після обробки іп міго Ни3738 була аналогічна проліферації анти-ОХ40-антитіла ТА7, описаного в літературі, у широкому діапазоні концентрацій антитіл від приблизно 0,001 до приблизно 1 мкг/мл, при тестуванні кожного відповідно до аналізу проліферації Т-клітин, описаному в розділі 8.1.12.
ІО168) Антитіло 1А7, описане в публікації США Ме2015/0307617, належить до ЇдДС1 людини з легкими ланцюгами каппа і має Мн з амінокислотною послідовністю:
ЕМО! 0ОО5аРЕЇ МКРЕОАЗУКІЗСКАБОаМТЕТОБУМБЗУУКОЗНОаИкКТтІ ЕМІСОМУРОМОО5ЗУМОК
ЕКЕКМТТУЮКЗ5ЗТТАММЕРКЗІ ТЗГЕОЗАМУУСМІ АРЕМ/МЕЗУМОТОТТУТМ55 (ЗЕО ІЮ МО:659), і
Мі з амінокислотною послідовністю:
РІОМТОТТ55І ЗАБІ аОгВМТІЗСВАБОВІЗММІ МУУООКРєРОС,ТУКІ ГПИУТЗАІ А5аМРЗАЕбИа5
ОБОКОМЕСТІЗМ'ЕОЕОМААХУЕСООСНТІРРТЕОСОСТКІ ЕК (ЗЕО ІО МО:70). 0169) Як показано в ілюстративному експерименті, зображеному на ФІГ.18В, продукція ІЄМ-у підвищувалася в СО4-- Т-клітинах людини в діапазоні від приблизно 2 до приблизно 10 раз при обробці Ни3738 в тестованому діапазоні концентрацій. Що стосується продукції ІЕМ-у, антитіло
Ни3738 показало ЕС5о-0,16 нм (24 нг/мл) у середньому значенні від дев'яти донорів. Анти-ОХ40 антитіла 1104 і 1808, описані в літературі, також продемонстрували аналогічний ефект на продукцію ІЕМ-у в умовах цього аналізу. 01701) На ФІГ.10О показано, що Ни3738 дає більш високу продукцію ІЕМ-у в СО4-- Т-клітинах людини в порівнянні з анти-0Х40 людини 1А7, описаним у літературі, якщо кожне було протестоване згідно аналізу продукції ІЕМ-у Т-клітинами, як описано в розділі 8.1.12. 01711 Крім інгібування сигнальної активності, що призводить до збільшення проліферації бра Т-клітин і підвищенню продукції ІЕМ-у, ілюстративне анти-ОХ40 антитіло Ни3738 також інгібує активність регуляторних Т-клітин людини іп міго, припускаючи, що регуляторні Т-клітини в солідній пухлині, які можуть інгібувати імунологічну відповідь організму на атаку пухлини, можуть бути подавлені при введенні антитіла Ни37 38. (0172) Ефект Ни3738 на регуляторну активність Т-клітин оцінювали іп міїго згідно з аналізом, описаним у розділі 8.1.13. Аутологічні, що відповідають СО4-4/С025- Т-клітини (Тгез5р) спільно культивували з регуляторними СО04-4/С2025-/С20127І0м/ Т-клітинами (Тгед) і активаторним намистом (Іп5р) у пропорції 2:1 або 4:1 Тгезр: Тгед (ФІГ.2А, 2В). Під час відсутності Тгед, клітини
Тгезр проліферували у відповідь на активаторне намисто. У присутності Тгед, проліферація інгібувалася. Введення 10 мкг/мл Ни3738 у культуральне середовище не виявляло впливу на опосередковану Тгед супресію. Контроль із ізотипом, використовуваний для цього аналізу супресії регуляторних Т-клітин, являв собою пиЇдсі з варіантами константних ділянок І234А і
Ї235А. Окремі експеримент, проведені з використанням ізотипового контролю ПпиЇдс:ї зі зшивальним агентом, показали відсутність ефекту. 0173) Напроти, у присутності екзогенного зшивального агента, антитіло Ни3738 повністю відновлювало проліферацію Тгезр (ФІГ.2А їі 28). Антитіло Ни3738 у присутності зшивального агента підсилювало проліферацію в цьому аналізі вище рівня відповіді Тгезр тільки на активаторні кульки. Цей результат припускає, що сигнали ОХ40 можуть долати супресію, опосередковану регуляторними Т-клітинами, і можуть підсилювати антиген-специфічні відповіді, що узгоджується з результатами, наведеними вище. (0174) Активність АОСС, опосередкована Ни3738, оцінювали з використанням комерційно доступного репортерного аналізу АОСС, як описано в розділі 8.1.9. У цьому аналізі як ефекторні клітини використовували сконструйовані клітини Уигкаї, що експресують ЕсукКПШа людини і ядерний фактор активованих Т-клітин (МЕАТ). Клітини НЕК 293, що експресують ОХ40 людини, використовувалися як клітин-мішені, і очікувалося, що анти-ОХ40 антитіло буде зв'язуватися з
ОХ40, що експресується на клітинах-мішенях. Крім того, передбачалося, що Ес-ділянка Ни3738 буде зв'язуватися з рецепторами ЕсукКІШа на поверхні репортерних клітин. Ці події зв'язування призвели б до багаторазового зшивання двох типів клітин і до активації репортерної активності
АОСС, ефект чого вимірювали за допомогою зчитування люмінесценції як результат активації шляху МЕАТ. У порівнянні з ізотиповим контролем, антитіло Ни3738 підвищувало активність репортерного АОСС з ЕСво-0,51 нм (77 нг/мл).
Приклад 5: Класифікація епітопів ілюстративних анти-ОХ40 антитіл 8.5.1. Зв'язування Ни3738 з химерним ОХ40 людина/миша 0175) Розчинний ОХ40ІЇ блокував зв'язування Ни3738 з ОХ40 з ІС5о-67 пМ (10 нг/мл) в аналізі із клітинами Чигкаї, що експресують ОХ40 людини, як описано в розділі 8.1.5 (ФІГ.3), що припускає зв'язування антитіла Ни3738 з ОХ40 людини в ліганд-зв'язувальній ділянці молекули.
ІО176| Для більш детального епітопного картування зв'язування антитіла Ни3738 була створена серія клітинних ліній, що експресують молекули ОХ40, багаті на цистеїн, людина/миша (СВО). Цей метод оснований на спостереженні, що Ни3738 не зв'язується з мишачим ОХ40 (ФІГ.48). Вирівнювання послідовності ОХ40 людини (5ЕО ІЮО МО:1) ії ОХ40 миші (5ЕО ІО МО:3)
Зо показане на ФІГ.4А. На базі аналізу послідовностей була отримана серія трансфектантів 2935, що експресують химерні варіанти рецептора ОХ40 людини із замінами послідовностей СКО миші і забарвлені Ни37 38.
І0177| Амінокислотні послідовності (включаючи сигнальні послідовності) химерного рецептора ОХ40 людини і миші, із замінами мишачих ділянок, зазначені підкресленням.
Химерний ОХ40 людини із замінами СОКІ людини на СКОЇ миші має амінокислотну послідовність:
МмсУусВАВВІсВОВОВВ тету тТо Секс ВЕСНИ
ОТІШЕРСсвОоКУВСУУВВКВОКВСТИСМо Есе АКо статор уєксвАЄТОВОВиТКВООЄ десСРоСМЕнгОоОпОоАсКри ТІСТА СЕКС АТОРОКМРО ВАК химерний ОХ40 людини із заміною СКОЇЇ людини на СКОЇЇ миші має амінокислотну послідовність:
АРСЕВРОНЕВеВОМОАСКВМСТ САШКВТТ ОВАЛУ ЦІН вАТОВОБТО Ле АН МТ ший тТеТИКиААнНигКІ БЕ ТБ Ошщнае, химерний ОХ40 людини із заміною СКОП людини на СКОЇЇЇ миші має амінокислотну послідовність:
Моска сортам ЕсАРСМОМ ВАС
Ми утикІрОосВЕТивУКУКОСКАМАЛ ТЕЛЬКИ
ОСС шЕАТЕ ВОВКА РОАКІ БЕ ЩО МО 7,
Химерний ОХ40 людини із заміною СКОЇМ людини на СКОЇМ миші має амінокислотну послідовність:
МО АКНОЗКОВСААТ ОЦТУ ТОБНСУЮО ТУ ВІ СССР СИ
МСА ЕСЕ КМШУ КАК ОКСАНУ ВОК ОЗЕР
ДЕСЕКОНЕЕРОКАСКРИТЕ СТО КОТ ЕВАНС НОВУСКОВОКВАТОРОКТОРАКРИТУО
ТЕКА ОС ВТВЕМЕУ ВВА ААТІТ М МНВК АК СВО і химерний ОХ40 людини із заміною СКОЇЇ Її СКОП людини на СКО і СКОП миші має амінокислотну послідовність:
МИ оВоРоВьС с ЕУОНСУОТ М О КОМ ОКУВКСВО
МОМЕСеРОНЕБРОКОВСКЕНТ МОТО ВОКНТ ОАЕ О ОВ ЕСКОКОВЕКТО ОКТАВИ
ВОСТІ ЕВ ТВ МОЯ. (0178) Визначення зв'язування Ни3738 із цією серією химерних варіантів проводили згідно з аналізом, описаним у розділі 8.1.7, для локалізації сайту зв'язування певних ділянок СКО.
Втрата зв'язування вказує на те, які СКО були критичними для розпізнавання ОХ40 конкретним антитілом. У цьому випадку відсутність зв'язування, що детектується, зі специфічною заміною
СКО ділянки в миші припускає ділянку рецептора ОХ40 людини, розпізнавану Ни3738. Було показано, що анти-ОХ40-антитіло Ни3738 втрачає здатність зв'язуватися, якщо СКОЇЇ людини замінений на відповідний СКОЇЇ миші, що узгоджується зі зв'язуванням Ни3738 з СКОП ОХ40 людини (ФІГ.4В). 8.5.2. Конкурентний аналіз із ілюстративним анти-0Х40 антитілом Ни3738 людини, що зв'язуються з ОХ40 людини
ІО179| Були взяті додаткові описані в літературі гуманізовані анти-ОХ40-антитіла для порівняння з ілюстративними анти-ОХ40-антитілами за винаходом. Антитіла 106-222 і 119-122, описані в публікації США Мо2013/0280275, належать до ЇДС1 людини з легкими ланцюгами каппа.
ІО180| Антитіло 106-222 має Мн з амінокислотною послідовністю:
ОМОЇ МОБОаЗЕЇ ККРОАЗУКУЗСКАБОаМ ТЕТОУЗМНУМВОАРИОСІЇ КУМСУММТЕТИЕРТУАЮ рЕКаВЕМЕБІ ОТЗУЗТАМІ 01551 КАЕОТАМУУУСАМРУУОМУБУМАМОУМУСОСТТМТУ5 (5ЕО І
МО:65), і
Мі з амінокислотною послідовністю:
РІОМТО5РБОБІ БАМИ ОВУ СКАБОВУЗТАМАМ МООКРИОКАРКИ ІМЗАБУЇ МТИМРОАЕБЗИа5 азатрЕТЕТІЗ5І ОРЕБПІАТУМСООНУЗТРАТЕСОСТКІ ЕК (ЗЕО ІЮ МО:66).
ІО181| Антитіло 119-122 має Мн з амінокислотною послідовністю:
Коо) ЕМОЇ МЕЗО МОРО,БІІ ВІ БСААЗБЕМЕЕРЗНОМЗУУУВНОАРИКИаї ЕІ МААІМЗОСОЗТУУРОТ
МЕАВРЕТІЗАОМАКМ5І МІ ОММ5І ВАЕОТАУУУСАВНУООУМАМ ГАМУ сСОСТМУТУ5О (5ЕБО Ір
МО:67), і
Мі з амінокислотною послідовністю:
ЕІММГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАЗКОУЗТЗИаУЗУМНУМООКРООАРВІ ПМ АЗМІЕЗБИМРАВН
ЕЗзаБаБатТОгЕТІ ТІ ЕРЕОБЕАУУМСОН5АЕЇ Р ТЕС ТКМЕЇІК (ЗЕО ІО МО:68).
І0182| Було показано, що зв'язування Ни3738 з ОХ40, що експресується на клітинній поверхні, конкурує з деякими, але не всіма описаними в літературі анти-ОХ40 антитілами, у дослідженнях із прямою конкуренцією. Як показано на ФІГ.5, клітини дигїкаї-МЕ-кВ-пиОХх40, оброблені титром дози антитіл, описаних у літературі, потім піддавали впливу 2 мкг/мл флуоресцентного АГЕХА РГООКФ 647-міченого Ни3738 для визначення конкуренції зв'язування. Аналіз проводили методом проточної цитометрії. Описані в літературі анти-ОХ40- антитіла 106-222 або 1А7 була конкурентоспроможними з Ни3738. Однак антитіла 1104, 1808 або 119-122 не конкурували з Ни3738 до 100 мкг/мл.
Приклад 6: Активація ОХ40 ілюстративним анти-ОХ40 антитілом Ни3738
ІО183) Дані для клітин ЧУигКаї МЕ-кВ підкреслюють активуючу здатність ілюстративного анти-
ОоХ40 антитіла Ни3738 навіть під час відсутності зшивального агента (ФІГ.бА, 6В). Як показано на ФІГ.бА, єдиними анти-ОХ40 антитілами, які продемонстрували значну сигнальну активність
МЕ-КкВ у діапазоні концентрацій від приблизно 0,001 до приблизно 100 мкг/мл, було антитіло
Ни3738 і відповідне антитіло Ми3738 миші. Описані в літературі анти-ОХ40-антитіла 1104, 1808, 106-222 і 119-122 не володіли значним сигнальним ефектом МЕ-КВ аж до приблизно 100 мкг/мл. (0184) Активність Ни3738 під час відсутності екзогенного зшивального агента контрастує з відсутністю активності інших описаних у літературі анти-ОХ40 антитіл у тих же умовах аналізу.
Зведення даних про передачу сигналів МЕ-кВ показано в Таблицях 6-1 і 6-2. Примітно, що хоча
Ни3738 конкурував за зв'язування з ОХ40 людини з описаними в літературі анти-ОХ40 антитілами 106-222 і 1А7, Ни3738 проявляв іншу функціональну активність у порівнянні з кожним з антитіл під час відсутності зшивального агента.
Таблиця 6-1
Передача сигналів МЕ-кВ в клітинах дигКаї-МЕ-кВв-пиОХх40
ЕСзо без зшивального агента (нМ) ЕСво зі зшивальним агентом (нМ)
Наз7зв 0,ов8 1104 1808 106-222 119-122 х Н.З.-не значима передача сигналу МЕ-кВ аж до 100 мг/мл антитіла; Н.В.-не визначався
ІО185) Крім здатності впливати на передачу сигналів МЕ-кВ під час відсутності екзогенного зшивального агента, у клітинах Уигкас-МЕ-кВвВ-пиОхХ40, антитіло Ни3738 також продемонструвало більш високу активність, вимірювану за допомогою ЕСво зі зшивальним агентом, у порівнянні з описаними в літературі анти-ОХ40 антитілами 1104, 1808, 106-222 і 119-122 (Таблиця 6-1).
ІО186) Підібране порівняння Ни3738 з 1А7 наведене на ФІГ.6В і підсумовано в таблиці 6-2 нижче. Крім відсутності передачі сигналів МЕ-кВ під час відсутності екзогенного зшивального агента у клітинах ЧЩигкас-МЕ-кВ-пиОХ40, кожне з описаних у літературі анти-ОХ40-антитіл, зазначених вище, також демонструвало більш низьке ЕСзхо у порівнянні з Ни3738.
Таблиця 6-2
Передача сигналу МЕ-кВ в клітинах дигка-МЕ-кВ-ниОХх40
ЕСзо без зшивального агента (нМ) ЕСво зі зшивальним агентом (нМ)
Низ3738 0.020 0.066 х Н.З.-не значима передача сигналу МЕ-кВ аж до 100 мг/мл антитіла; Н.В.-не визначався
Приклад 7: Протипухлинна активність Ни3738 на моделі миші з переносом клітин людини (0187) Антитіло Ни3738 продемонструвало протипухлинну активність на моделі з мишами
МБО іп мімо після однократної інокуляції клітинами РОЗ людини, Т-клітинами і дендритними
Зо клітинами з аутологічних моноцитів (тоОсС), згідно із протоколом, описану в розділі 8.1.14 (ФІГ.7). У день інокуляції Т-клітини людини клітини тоОС і РОЗ вводили підшкірною ін'єкцією кожній миші М5О. Моноклональне антитіло ізотипового контролю або Ни3738 (10 мг/кг) вводили внутрішньочеревинно кожній тварині в кожній групі лікування (п-8), причому дозу антитіла вводили під час інокуляції. Вимірювання росту пухлини оцінювали стандартним вимірюванням штангенциркулем і розраховували об'єм росту пухлини (довжинахширинахвисота/г2).
ІО188) Як показано на ФІГ.7, антитіло Ни3738 значно інгібувало ріст пухлини РОЗ у мишей
МО через 17 днів після інокуляції в порівнянні з еквівалентною дозою контрольного ізотипового антитіла.
Приклад 8: Імунна активація іп мімо на моделі ЗМНО з РВМС людини
ЇО189| Мишей М5О інокулювали РВМС людини внутрішньочеревинно. Потім мишей обробляли 1 мг/кг Ни3738 або контролем з ізотипом пиЇдс1 д7ах4 (тобто, один раз кожні 7 днів, усього 4 дози), причому першу дозу вводили в 1-ий день відразу після інокуляції клітинами людини. На 22-й день мишей умертвляли і визначали рівні цитокінів у сироватці крові з використанням аналізу на бусинках І штіпех (МіПіроге).
І0190| Результати на ФіГ.8 показали, що після введення дози анти-ОХ40-антитіла Ни3738 спостерігали збільшення рівня інтерлейкіну-8 (1-8), колонієстимулювального фактора гранулоцитарних макрофагів (ЗМ-С5Е), фактора некрозу пухлини альфа (ТМЕ-а) і інтерферону- гамма (ІЕМ-у) у порівнянні з ізотипом, що свідчить про посилення імунологічної відповіді в миші завдяки Ни3738. 01911 Усі публікації, патенти, патентні заявки і інші документи, цитовані в даному документі, включені як посилання в повному об'ємі для всіх цілей тією самою мірою, як якби було зазначено, що кожна окрема публікація, патент, заявка на патент або інший документ включена в даний документ і включена як посилання для всіх цілей.
ІО192| Незважаючи на те, що були проілюстровані і описані різні конкретні варіанти здійснення, слід розуміти, що можуть бути зроблені різні зміни без відхилення від суті та об'єму винаходу.
СПИСОК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 ЕББВІ БАЙОТЕРАП'ЮТІКС ІНК. «1205 АНТИ-ОХ40 АНТИТІЛА І ЇХ ЗАСТОСУВАННЯ «130» 381493-368М0
Зо «1405 «1415 «1505 62/434,761 «1515 2016-12-15 «1605 136 «1705 РабепсІпПп уегквзіоп 3.5 «21051 «2115 277 «212» Білок «213» Ношо зарієепь «4005 1
Меє Сув Уаі с1у Аїа Агуд Агуд Гей сіу Акуд біу Рго Суб5 Аї1а Аза Гей 1 в; 10 15
Тецп Гецп Геип сіу Гей с1іу Гей Бек ТПг Уа1і ТПг сіу Гец Нів Сув Уаї 20 25 30 с1у Авр ТПЕ Тук Рго бек Авп Авр Агуд Суб Сув Нів бій Сув Агд Рго 35 40 45 б1у Авп сіу Меє Уа1і Бек Агуд Сув Бек Агуд бек біп Авп ТПг Уа1ї! Сув 60 0) зо 6о
Акуд Рго Сув біу Рго бі1іу Робе Туг Авп Авр Уаії Уаі1ї Бек Бек Гпув Рго 65 70 75 80
Сув КГув Рго Сув ТПг Тер Сув Авп Гей Агуд бек сіу бек бі Агд Гу 85 90 95 сіп Гей Сув ТПг Аїа ТБПкг сбіп Авр ТБг Уаї Суб Агуд Сув Агуд Аїа 1У 100 105 110
ТПгЕ біп Ркго Гей Авр бек Тук Ппув Рго біу Уаі Авр Сув Аза Рго Сув 115 120 125
Ркго Рго біу Нів РПе бек Рго біу Авр АБп о біп Аїа Сув Пув Рго Тгр 130 135 140
ТПЕ Авп Сув ТПг Ггец Аза сіу Ппув Нів ТПг ІТецп біп Рго Аїа 5Бег Авп 145 150 155 160 зек бБект Авр Аїа І1е Сув біц Авр Агд АвБр Рго Рго Аїа ТПг сіп Рго 165 170 175
Зо сіп бій ТЕ біп б1у Рго Рго Аїа Агуд Рго І1е ТПг Уаї сбіп Рго Тбг 180 185 190 бі Аза Тер Рго Агуд ТПг о бек біп с1іу Рго Бек ТПг Агуд Рго Уаії бій
З5 195 200 205
Ууаї Рко с1у сі1у Акуд Аїа Уаі Аїа Аза І1їе Гей с1у Ге с1у Гей Уаї 210 215 220
Тец б1у Гей Гей с1іу Рго Гей Аза Іїе Гей Гей Аїа Гей Тукг Іец Іей 225 230 235 240
Ак Агуд Авр обіп Агд Тей Рго Рго Авр Аїа Нів Ппув Рго Рго сбі1у с1У 245 250 255 сіу бек Рпе Агуд ТПг Рго Іїе сбіп бій сбіц сбіп Аза Авр Аїа Нів 5ег 260 265 270
ТПг Ггеш Аїа ув І1е 275 «2105 2 «2115 277 60 «212» Білок «213» Масаса ТтТавсісціагів
«4005 2
Меє Сув Уаі с1у Аїа Агуд Агуд Гей сіу Акуд біу Рго Суб5 Аї1а Аза Гей 1 5 10 15
Тецп Гецп Геип сіу Гей сіу Гей бек ТПг ТБПг Аїа Гув ІТечп Нів Сув Уаї 20 25 30 б1у Авр ТПг Туг Рго Бек Авп Авр Агуд Сув Сув біп біц Сув Агд Рго 35 40 45 с1у Авп сбі1у Меє Уаії бек Агуд Сув Авп Акуд бек біп АБп о ТПг Уаї Сув 50 55 бо
Акуд Рго Сув біу Рго бі1іу Робе Туг Авп Авр Уаі! Уаі Бек Аїа Гпув Рго 65 70 75 80
Сув гув Аїа Сув ТПг Тер Сув Авп о Гец Агд бек біу бек бій Агд Гув 85 90 95 біп Ркго Сув ТПг Аза ТПг о біп Авр ТпПг Уа1і Сув Агд Сув Агд Аїа 01Уу 100 105 110
Зо
ТПгЕ біп Рко Гей Авр бек Тук Ппув Рго біу Уаі Авр Сув Аза Рго Сув 115 120 125
Рго Рго сіу Нів Рре бек Рго с1іу Авр АвБп о біп Аза Сув Пув Рго Тгр 130 135 140
ТПЕ Авп Сув ТПг Ггец Аїа сіу Ппув Нів ТПг Гец біп Рго А1їа бек Авп 145 150 155 160 зек Бек Авр Аїа І1е Сув біц Авр Агд АБр Рго Рго Рго ТПг сіп Рго 165 170 175 біп бій ТПпс обіп сб1у Рго Рго Аїа Агуд Рго ТПг ТБбг Уаї біп Рго ТЕПг 180 185 190 бі Аза Тер Рго Агуд ТПг о бек біп Агуд Рго бек ТПг Агуд Рго Уаії бій 195 200 205
Уа1ї Рго Агуд с1іу Рго Аїа Уаі Аїа Аза чІ1е Гей сСіу Іец с1у Гей Аїа 210 215 220
Тец б1у Гей Гей с1іу Рго Гей Аїа Меє Гей Гей Аїа Гей Гей Іецй Іей (516) 225 230 235 240
Аг Агуд Авр о біп Агд Тей Рго Рго АБр Аза Рго ув Аза Рго б1у Щ1У 245 250 255 біу бек Рпе Агуд ТПг Рго І1е сіп бій біш біп Аза Авр Аїа Нів 5ег 260 265 270
А1а Гечп Аїа Тув І1е 275 «2105 З «2115 272 «2125» Білок «2135 Мив штивси1и5 «4005 З
Меє Тук Маії Тер Уаі біп біп Рго ТПг Аїа Гей Іей Гей Гей с1Уу Геч 1 5 10 15
ТПг Ггеш сіу Уа1 ТБг Аза Агуд Агуд Гей Авп о Сув Уаї Гув Нів ТпПг Туг 20 25 30
Ркго Бек біу Ні пув Сув Сув Агд біц Сув біп Рго с1іу Нів с1у Меє
Зо
Уаї Бек Агуд Сув Авр Нів ТПг Агуд Авр о ТБг Ггец Суб Нів Рго Сув с1и бо
З5
ТП б1у Рпе Туг Авп бішц Аза Уаі1і Авп Туг Авр ТП Сув Ппув біп Сув 65 70 75 80 40 ТЕ біп Сув Авп Нів Агуд бек сбіу Бек бій Гей Ппув біп Авп Сув ТПг 85 90 95
Ркго ТПг біп Авр Тс о Уаї Сув Агд Суб Агуд Рго с1у ТПг біп Рго Агд 45 100 105 110 біп Авр бек сіу Тук Ппув Гей сіу Уаі Авр Сув Уа1і Рго Суб Рго Рго 115 120 125 50 бі1у Нів Рпе бек Рго б1іу Авп АвБп сбіп Аїа Сув Ппув Рго Тер ТПг Авп 130 135 140 55
Сув ТПЕ Гей бек с1у Ппув біп ТПг Агуд Нів Рго Аза бек Авр бекг Іей 145 150 155 160 (516) Авр Аї1а Уаі Сув біц Авр Агуд Бек Гей Гей Аїа ТПг Гей Гей Тер с1ци 165 170 175
А
ТПг біп Акуд Рго ТБг Робе Акуд Рго ТПг ТБг оУа1і! біп бек ТПг ТпПгс Уаї 180 185 190
ТЕр Рго Акуд ТБг бек бі Гей Рго бек Рго Рго ТПг Іец Уаї ТПг Рго 195 200 205 бі б1у Рго Аза Рпе Аїа Уаї Гей Гей сіу Гей сіу Гец сіу Іец Іей 210 215 220
А1Тїа Рго Гей ТПг Уаї Гей Гецш Аїа Гей Туг Тецй Гей Агуд Гув Аїа Тгр 225 230 235 240
Акуд Гей Рго АвБп оТБПг Рго пуб Рго Суб Тгр б1у Авп Бек Рпе Агд ТЕПг 245 250 255
Рго І1їе біп біц біц Нів ТБг Авр Аза Ні Рпе ТПг Гей Аїа Тув5 І1е 260 265 270 «2105 4 «2115 183 «2125» Білок
Зо «213» Ношто варієпвз «4005 4
Меє сій Агуд Уа1і сбіп Рго Гей біш бій Авп Уаі б1у АБп Аї1а Аї1а Агд 1 5 10 15
З5
Рго Акд Ропе біц Агд АБп оГпув ТІТец Іец ІТецй Уаі Аїа бек Уаі І1е сіп 20 25 30 40 с1у Гешп с1у Гей Гей Гей Сув Рпе ТПг Туг Іїе Сув Гей Нів РПе б5ег 45 А1їа Ггечп сіп Уа! бек Нів Агуд Тук Рго Акуд І1е сіп бек І1е Гуз Уаї бо біп Рпе ТПпг сій Тук Ппув Гув бій Ппув с1у Рпе Іїе Гей ТПг бек біп 50 65 70 75 80 пув 611 Авр сій І1їе Меє ув Уаі сбіп Авп Авп бек Уаї І1е І1е Авп 85 90 95 55
Сув Авр сі1у Рпе Тук Гей І1е бек Гей Ппув сіу Тук Робе бек біп бій 100 105 110 60
Уаї Авп І1їе Бек Ггецй Нів Тук біп пув Авр біц біц Рго Іецй Рпе сіп
115 120 125
Тецшц Ггув Гпув Уаі Агуд Бек Уаі Авп бек Гей Меє Уа1і Аїа бек Гей ТЕПг 130 135 140
Тук Ппув Авр Пув Уаї Тук гей Авп Уа1ї ТБПг ТБг Авр АБп о ТБПг бек Іецй 145 150 155 160
Авр Авр Ріпе Нів Уаі АБп сіу біу біцш Іецйп І1ї1е Гей Іїе Нів сбіп Авп 165 170 175
Рго сі1у біц Рбе Сув Уаї Іей 180 «2105 5 «2115 277 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид»
Зо «4005 5
Меє Сув Уаі с1у Аїа Агуд Агуд Гей сіу Акуд біу Рго Суб5 Аї1а Аза Гей 1 5 10 15
Пес Гей Гецш с1у Гпеп с1у Гей бек ТПг Уаі ТпПкК с1іу Тей Авп Сув Уаї 20 25 30
Тпув Нів ТПг Тук Рго Бек с1у Нів Ппув Сув Сув Акд біц Сув біп Рго 35 40 45 сбі1у Нів сіу Меє Уа1і Бек Агуд Сув Авр Нів ТПг Агуд Авр ТБПг Іец Сув 50 55 бо
Нів Рго Сув сіу Рго біу Рпе Туг Авп Авр Уа! Уаії бек бек пув Рго 65 70 75 80
Сув КГув Рго Сув ТПг Тер Сув Авп Гей Агуд бек сіу бек бі Агд Гу 85 90 95 сіп Гей Сув ТПг Аїа ТБПкг сбіп Авр ТБг Уаї Суб Агуд Сув Агуд Аїа 1У 100 105 110
ТПгЕ біп Рко Гей Авр бек Тук Ппув Рго біу Уаі Авр Сув Аза Рго Сув (516) 115 120 125
Ркго Рго біу Нів РПе бек Рго біу Авр АБп о біп Аїа Сув Пув Рго Тгр 130 135 140
ТПЕ Авп Сув ТПг Ггец Аїа сіу Ппув Нів ТПг Гец біп Рго А1їа бек Авп 145 150 155 160
Ззек Бек Авр Аїа І1е Сув біц Авр Агуд Авр Рго Рго Аїа ТПг біп Рго 165 170 175 біп бій ТПпс о біп с1у Рго Рго Аїа Агуд Рго Іїе ТПг Уаї біп Рго ТЕПг 180 185 190 бі Аза Тер Рго Агуд ТПг о бек біп с1іу Рго Бек ТПг Агуд Рго Уаії бій 195 200 205
Ууаї Рко с1у с1у Акуд Аїа Уаі Аїа Аза І1їе Гец с1у Іец с1у Ге Уаї 210 215 220
Тец б1у Гей Гей с1іу Рго Гей Аза Іїе Гей Гей Аїа Гей Тукг Іец Іей 225 230 235 240
Зо Агуд Агуд Авр обіп Агуд Гей Рго Рго Авр Аза Нів пуб Рго Рго с1у 1У 245 250 255 біу бек Рпе Агуд ТПг Рго І1е сіп бій біш біп Аза Авр Аїа Нів 5ег
З5 260 265 270
ТПг Ггеш Аїа ув І1е 275 «2105 6 «2115 277 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 6
Меє Сув Уаі с1у Аїа Агуд Агуд Гей сіу Акуд біу Рго Суб5 Аї1а Аза Гей 1 5 10 15
Тецп Гецп Геип сіу Гей с1іу Гей Бек ТПг Уа1і ТПг сіу Гец Нів Сув Уаї 20 25 30 60 б1у Авр ТПг о Туг Рго Бек Авп Авр Агуд Сув Сув Нів біц Сув Агд Рго
35 40 45 б1у Авп сіу Меє Уа1і Бек Агуд Сув Бек Агуд бек біп Авп ТПг Уа1ї! Сув 50 з9 бо
Акуд Рго Сув біц ТП б1у Робе Туг Авп б1іц Азї1а Уаії Авп Туг Авр ТЕГ 65 70 75 80
Сув гув біп Сув ТПг біп Сув Авп Нів Агуд бек сіу бек біц Іецй Гув 85 90 95 біп Авп оСув ТПг Рго ТПг о біп Авр ТпПс Уа1і Сув Агд Сув Агд Аїа 01У 100 105 110
ТП біп Рго Гей Авр бек Тук пуб Рго сіу Уа1і! Авр Сув Аїа Рго Сув 115 120 125
Ркго Рго біу Нів РПе бек Рго біу Авр АБп о біп Аїа Сув Пув Рго Тгр 130 135 140
ТПЕ Авп Сув ТПг Ггец Аїа сіу Ппув Нів ТПг Гец біп Рго А1їа бек Авп 145 150 155 160
Зо зек бБект Авр Аїа І1е Сув біц Авр Агд АБр Рго Рго Аза ТПг біп Рго 165 170 175
З5 біп бій ТПпс о біп с1у Рго Рго Аїа Агуд Рго Іїе ТПг Уаї біп Рго ТЕПг 180 185 190 сі Азїа Тгр Рго Агуд ТБк бек біп біу Рго Бек ТПг Агуд Рго Уаі1і с1іци 195 200 205
Уаї Ркго с1у б1у Акуд Аїа Уаі Аза Аїа Іїе Гей сіу Гец с1і1у Іец Уаї 210 215 220
Тец б1у Геп Гей с1іу Рго Іїеп Аза Іїе Гей їец Аїа Іецй Тук Іец Іецй 225 230 235 240
Аг Агуд Авр обіп Агд Тей Рго Рго АвБр Аза Нів Гув Рго Рго б1у ШУ 245 250 255 біу бек Рпе Агуд ТПг Рго І1е сіп сіц біц біп Азїа АБр Аз1а Нів 5ег 260 265 270 (516) ТВг гейш Аїа Іув І1е 275
«2105 7 «2115 279 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 7
Меє Сув Уаі с1у Аїа Агуд Агуд Гей сіу Акуд біу Рго Суб5 Аї1а Аза Гей 1 в) 10 15
Тецп Гецп Геип сіу Гей с1іу Гей Бек ТПг Уа1і ТПг сіу Гец Нів Сув Уаї 20 б1у Авр ТПг о Туг Рго Бек Авп Авр Агуд Сув Сув Нів біц Сув Агд Рго 25 б1у Авп сіу Меє Уа1і Бек Агуд Сув Бек Агуд бек біп Авп ТПг Уа1ї! Сув бо
Зо Агуд Рго Сув біу Рго сіу Рпе Тук Авп Авр Уаї Уаі1ї бек бек Тув Рго 65 70 75 80
Сув Кпув Рго Сув ТПг Тер Сув Авп Гей Агуд бек сіу бек біц Агд Гув
З5 85 90 95 біп Гей Сув ТПг Аїа ТПг біп Авр ТпПг Уа1і Сув Агкд Сув Агд Рго б1Уу 100 105 110 40
ТПгЕ біп Рго Агуд біп Авр о бек сіу Тук Мпув ІГец біу Маї Авр Сув Уаї 115 120 125 45
Ркго Сув Рго Рго біу Нів Рібе бек Рго б1у Авр АвБп біп Аїа Сув Гув 130 135 140 50 Рго Тер ТБг Авп оСув ТПг о Гецш Аза с1іу Пув Нів ТПг Тей сб1іп Рго Аїа 145 150 155 160 век Авп бекг бБег Авр Аї1а І1е Суб біцш Авр Агуд Авр Рго Рго Аза ТЕГ 55 165 170 175 біп Рго біп бій ТпПг біп б1у Рго Рго Аїа Агд Рго І1е ТПг Уа1ї сіп 180 185 190 60
Рго ТПг біц Аза Тгр Рго Агд ТБг бек біп б1у Рго Бек ТПг Агд Рго 195 200 205
Уаї біц Маї Рго с1у б1у Акуд Аїа Уаі Аза Аза І1е Гецп с1у Іеч 01Уу 210 215 220
Тецп Маї Гей сіу Гей Гей сб1у Рго Гей Аїа Іїе Гей Ггец Аїа Іец Туг 225 230 235 240
Тец гей Агуд Агуд Авр біп Агуд Гей Рго Рго АвБр Аза Нів Гув Рго Рго 245 250 255 сбі1у б1у сі1у Бек Рпе Агуд ТПг Рго Іїе сбіп бій сій біп Аза АБр А1а 260 265 270
Нів Бек ТПг Гей Аїа Гув5 І1е 275 «2105 8 «2115 277 «212» Білок «2135 Штучна послідовність
Зо «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 8
Меє Сув Уа1і с1у Аїа Агуд Агуд Гей сіу Акд сіу Рго Сув Аїа Аїа Гей 1 5 10 15
Пес Гей Гецш с1у Гпеп с1іу Гей бек ТПг Уаії ТпПкК с1іу ІТей Нів Сув Уаї 20 25 30 б1у Авр ТПг о Туг Рго Бек Авп Авр Агуд Сув Суб Нів бій Сув Агд Рго 35 40 45 б1у Авп сіу Меє Уа1і Бек Агуд Сув Бек Агуд бек біп Авп ТПг Уа1ї! Сув бо 50
Акуд Рго Сув біу Рго біу Робе Туг Авп Авр Уа1 Уа1 бек бек КГув Рго 65 70 75 80 55
Сув КГув Рго Сув ТПг Тер Сув Авп Гей Агуд бек сіу бек бі Агд Гу 85 90 95 (516) сіп Гей Сув ТПг Аїа ТБг біп Авр ТпПск о Уаі1ї Сув Агуд Сув Агд Аїа с1Уу 100 105 110
ТПгЕ біп Рко Гей Авр бек Тук Ппув Рго біу Уаі Авр Сув Аза Рго Сув 115 120 125
Ркго Рго біу Нів РПе бек Рго с1іу Авп Авп біп Аїа Сув пуб Рго Тгр 130 135 140
ТПЕ Ап Сув ТПг Гец бек с1і1у Ппув біп ТБг Агуд Ні Рго А1їа 5ег Авр 145 150 155 160 зек Гей Авр Аїа Уаії Сув бій Авр Агуд Авр Рго Рго Аїа ТПг біп Рго 165 170 175 біп бій ТПпс о біп с1у Рго Рго Аїа Агуд Рго Іїе ТПг Уаї біп Рго ТЕПг 180 185 190 бі Аза Тер Рго Агуд ТПг о бек біп с1іу Рго Бек ТПг Агуд Рго Уаії бій 195 200 205
Уаї Ркго с1у б1у Акуд Аїа Уаі Аза Аїа Іїе Гей сіу Гец с1і1у Іец Уаї 210 215 220
Зо
Тец б1у Гей Гей с1іу Рго Гей Аза Іїе Гей Гей Аїа Гей Тукг Іец Іей 225 230 235 240
Агуд Агуд Авр обіп Агуд Гей Рго Рго Ар Аза Нів пуб Рго Рго с1і1у с1Уу 245 250 255 біу бек Рпе Агуд ТПг Рго І1е сіп бій біш біп Аза Авр Аїа Нів 5ег 260 265 270
ТПг Ггеш Аїа ув І1е 275 «2105 9 «2115 279 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 9
Меє Сув Уаі с1у Аїа Агуд Агуд Гей сіу Акуд біу Рго Суб5 Аї1а Аза Гей 1 5 10 15 60
Тецп Гецп Геип сіу Гей с1іу Гей бек ТПг Уа! ТПг б1у ІГеп Нів Сув Уаї 20 25 30 с1у Авр ТПЕ Тук Рго бек Авп Авр Агуд Суб Сув Нів бій Сув Агд Рго 35 40 45 б1у Авп сбіу Меє Уа1і Бек Агуд Сув бек Агд бек біп Авп ТПг Уа1ї Сув 50 55 бо
Акуд Рго Сув біц ТП б1у Робе Туг Авп б1іц Азї1а Уаії Авп Туг Авр ТЕГ 65 70 75 80
Сув гув біп Сув ТПг біп Сув Авп о Нів Агуд бек сіу бек біц Іецй Гув 85 90 95 біп Авп оСув ТПг Рго ТПг о біп Авр ТпПс Уа1і Сув Агкд Сув Агд Рго б1Уу 100 105 110
ТП біп Рго Акуд біп Авр о бек сб1у Тук Ппув Гей біу Маії Авр Сув Уаї1ї 115 120 125
Ркго Сув Рго Рго біу Нів Рібе бек Рго б1у Авр АвБп біп Аїа Сув Гув
Зо 130 135 140
Рго Тер ТПг АвБп оСув ТПг Гец Аза б1у Гув Нів ТПг Гей сбіп Рго Аї1а 145 150 155 160
З5 век Авп бекг бБег Авр Аї1а І1е Суб біцш Авр Агуд Авр Рго Рго Аза ТЕГ 165 170 175 біп Рго біп сій ТпПг біп б1у Рго Рго Аїа Агуд Рго І1їе ТПг Уа1ї сіп 180 185 190
Рго ТПг біц Азїа Тер Рго Агуд ТПг бек біп б1у Рго бек ТПг Агд Рго 195 200 205
Ууаї біш Уаії Рго сіу с1у Агуд Аїа Уаі1 Аза Аїа І1е Іецш С1у еп ЩУ 210 215 220
Тецп Маї Гей сіу Гей Гей сб1у Рго Гей Аїа Іїе Гей Ггец Аїа Іец Туг 225 230 235 240
Тец Гей Агуд Агуд Авр біп Агуд Гей Рго Рго Авр Аїа Нів Пув Рго Рго 245 250 255 60 сбі1у б1у сі1у Бек Рпе Агуд ТПг Рго Іїе сбіп бій сій біп Аза АБр А1а
260 265 270
Нів Бек ТПг Ггец Аза туз Те 275 «2105 10 «4005 10
Годо) «2105 11 «4005 11
Годо) «2105 12 «4005 12
Годо) «2105 13 «4005 13
Годо)
Зо «2105» 14 «4005 14
З5 оо «2105 15 «4005 15
Годо) «2105» 16 «4005 16
Годо) «2105 17 «4005 17
Годо) «2105 18 «4005 18
Годо) 60
«2105» 19 «4005 19
Годо) «2105 20 «4005 20
Годо) «2105 21 «2115» 120 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 21 бі Маї біп Гей Уаі сій бек сіу сіу с1у Гей Уаі1 сіп Рго с1у 01У 1 в) 10 15 зек Гей пув ІТец бек Сув Аза Аза бек б1і1у Рпе ТПг Рпе бБег Агд Туг 20 25 30
Зо бі1у Меє бек Тер Уаі Агд біп ТПг Рго Авр Гуз Агд Гей сіц Іец Уаї
З5
Аза ТПг І1їе АвБп о бБег АБп обіу біу Агд ТП Тугк Тук Рго Авр бек Уаї бо 40 пув б1у Акуд Рпе ТПг І1їе бек Акуд Авр АБп Аза Пув Авп ТПг Гей Туг 65 70 75 80
Тецп біп Меє бек Бек Ггеп Ппув Бек бій Авр ТПг Аїа Меє Тук Тук Сув 45 85 90 95
Аза Акуд сбіц біу І1е ТПг ТБг Аза Туг Аза Меє Авр Тугє Тер СШ1у сіп 100 105 110 50 бі1у ТПг бек Уа1і ТПг Уаї бек 5ег 115 120 55 «2105 22 «2115» 120 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 60 «2205
«221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 22 бі Маї біп Гей Уаі сій бек сіу сіу с1у Гей Уаі1 сіп Рго с1у 01У 1 5 10 15 зек Геп Акуд Гей бек Сув А1ї1а Аза бек біу Робе ТПг Ррпе бег Агкд Туг 20 25 30 бі1у Меє бек Тер Уаі Агд сбіп Аза Рго сіу пув сіу Гец сіц Іец Уаї 35 40 45
Аза ТПг І1їе АвБп о бБег АБп обіу біу Агд ТП Тугк Тук Рго Авр бек Уаї 50 55 бо пув б1у Акуд Рпе ТПг Іїе бек Агуд Авр Авп Аїа ГПув Ап о бекг Іец Туг 65 70 75 80
Тец біп Меє Авп бек Гей Агуд Аза бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Зо Аза Агуд сій б1іу І1е ТПг ТБПг Аза Туг Аза Мес Авр Туг Тер с1у сіп 100 105 110 бі1у ТПпг ТпПг Уа1і ТПг Уаї бек 5ег
З5 115 120 «2105 23 «2115» 117 40 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело 45 «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 23
Авп оУа1! сбіп Гец біп бій бек біу Ркго б1у Геп Уаії Ппув Рго Бек сіп 50 1 в) 10 15 зек Гей бек ІТец ТПг Сув бек Уа! ТПг б1у Тугк Бек Іїе Аїа Бех щУ 20 25 30 55
Тук Тук Тер Авп Тгр І1е Агуд біп Робе Рго біу АвБп Гув Іечп сі Тгр 60
Меє сіу Тук Іїе Бек Тугк Авр сіу Бек Авп Авп Туг Авп о Рго бек Іецй
50 55 бо б1у АвБп Агуд І1їе Бек Іїе ТПг Агуд Авр ТПг бек пув Авп о біп Уаії РБПе 65 70 75 80
Тецшп Гув Гей Авп Бек Уа! ТПг ТПг бій Авр ТБг АТа ТБПг Тукє Тук Сув 85 90 95
Уаї Ппув ТПг Гей Рго Тук Тук Рпе Авр Туг Тер біу біп б1у ТПг ТПг 100 105 110
Тем ТПг Уаї бек 5ег 115 «2105 24 «2115» 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид»
Зо «4005 24 бі Маї біп Гей біп бій бек сіу Рго сіу Гей Уа1! Ппув Рго бБег Авр 1 5 10 15
ТП Гецп бек Гей ТПг Сув Аїа УМаії бек с1іу Туг Бек Іїе Аїа бек 01Уу 20 25 30
Тук Тук Тер Авп Тгр І1е Агуд біп Рго Рго біу Пув б1у Те сі Тгр 35 40 45
Меє сіу Тук Іїе Бек Тугк Авр сіу Бек Авп Авп Туг Авп о Рго бек Іецй 50 55 бо б1у АвБп Агуд чІ1е ТПг І1ї1е бек Агуд Авр ТПг бек Гпув Авп о біп Уаії 5ег 65 70 75 80
Тецшп Гпув Гей бек Бек Уа! ТПпг Аза Уаі Авр ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї Ппув ТП Гей Рго Тук Тук Рібе Авр Туг Тер сб1у біп о1у ТПкс Тбг 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 60 115
«2105 25 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 25 бі Маї біп Гей сбіп біп бек сіу Аїа біц Іїец Уаї Гув Рго с1у Аїа 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Тец бек Сув ТПг Аїа бек б1у Рпе АБп І1е Гпув Авр ТЕГ 20
Тук Меє Нів Тер Уаї Ппув біп Агуд Рго біц біп сб1у Іей б1й Тгр Ше 25 с1у Акуд І1е Авр Рго Аза Ап б1іу АвБп о ТПЕ Ппув Туг Авр Рго Ппув РІе бо біп б1у пув Аза ТПг Іїе ТПпг Аза Авр ТПг бек бек Ап ТПг Аїа Туг
Зо 65 70 75 80
Тецп біп Гей бек Бек Гей ТПг Бек бій Авр ТПг Авр Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
З5
Аза Акуд с1іу біу Рго Аїа Тер Рібе Уа! Туг Тер с1у сбіп с1у ТПг Ієец 100 105 110 40
Уаї ТПпг Уаі1ї бек Аї1а 115 45 «2105 26 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 50 «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» 55 «4005 26 бі Маї біп Гей Уаі сбіп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув Пув Рго біу вег 1 5 10 15 (516) зек Уаї Ппув Маї бек Сув Ппув Аза бек сб1у Рпе Ап І1е Гув Авр Тіг 20 25 30
Тук Меє Нів Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сбіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Акд І1е Авр Рго Аїа Ап сіу Авп ТПг пуб Туг Авр о Рго пув РІПе 50 55 бо біп б1у Акуд Аза ТПг І1ї1е ТПпг Аза Авр ТПг бек ТПг Ап ТБбг Аїа Туг 65 70 75 80
Меє бій Гей бек бек Те Агуд Бек бій Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Акуд с1іу біу Рго Аїа Тер Рібе Уа! Туг Тер с1у сбіп с1у ТПг Ієец 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 27 «2115 113 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний
З5 поліпептид» «4005 27 біп Маї біп Гей Ппув біп бек с1іу Рго сбіу Гей Уа1 сіп Рго бек сіп 1 5 10 15 40 зек Гей бек І1е ТПг Сув ТПг Уа1ї бек б1у Рпе бек Гей ТПг бек Туг 20 25 30 45 сбі1у Маї Нів Тер Уаі Агд біп бек Рго сіу Ппув сіу Іец бій Тгр Гей сіу Маї І1е Тер бек с1іу сіу бек ТПг Авр Туг АвБп Аїа Аїа Рпе Пе 50 55 бо зек Агд Пец бек І1е бек Пув Авр АвБп бек Гпув бек біп Уаії Рое РБПе 65 70 75 80
Тпув Меє Авп бек Гей біп Аза Авр Авр ТПг Аїа І1їе Тук Сув Субв А1а 85 90 95 60
Акуд бій бі Рбе Авр Туг Тер б1у сбіп с1у ТпПг ТБбг Гей ТПг Уаї 5ег 100 105 110 вег «2105 28 «2115 113 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 28 сій Маї біп Гецп Уаі сій бек сі1у сбіу сб1у Геп Уаі сбіп Рго б1у С01У 1 5 10 15 зек Гей Агд Іїец бек Сув Аза Уаі! бек б1і1у Рпе бек Гей ТПг бек Туг 20 25 30 сбі1у Маії Нів Тер Уаі Агд біп Аза Рго с1і1у Ппув сіу Гей біц Тгр Іей
Зо сі1у Маї І1ї1е Тер Бек сіу сбіу Бек ТПг Авр Туг Авп Аїа Аза РоПе І1е бо
З5 зек Агд Пец ТПг І1е бек Пув Авр АвБп бек Гув Бек ТПг Уа1 Тук Ієец 65 70 75 80 40 сСіп Мес АвБп бек Гей Агуд Аїа бій Авр ТПг Аза Уа1і Туг Тугк Сув А1а 85 90 95
Акуд бій бі Рбе Авр Туг Тер біу біп б1у ТПг ТПг Уа1і ТПг Уа1ї 5ег 45 100 105 110 зег 50 «2105» 29 «4005 29 55 Годо) «2105 30 бо «4005 30
Годо)
«2105 31 «2115 111 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 31
Авр І1ї1е Уаї Гец ТПг біп бек Рго Аїа бек Іїейп Аї1а Уаі бек їеш ШУ 1 в) 10 15 біп Акуд Аза ТПг о І1їе Бек Сув Ппув Аїа Бек біп бек Уаї Авр Туг Авр 20 б1у Авр бек Тук Меє Ні Тер Тук біп біп пув Рго с1іу біп Рго Рго 25 ув Теп Іїеп Іїе Туг Аїа Аїа бек Іїе гейш сій бек сіу І1е Рго А1а бо
Зо Агуд Рпе бек біу бек сіу бек б1у ТПг Авр Робе ТПг Гей АвБп І1е Нів 65 70 75 80
Рго Уаі біц біц б1іц АвБр Аїа Аза ТПг Тук Тук Сув біп біп Бек Авп
З5 85 90 95 бі Авр Рго Агуд ТпПг Рбе сіу сіу с1іу ТПкг Ппув Гец біц І11е Гув 100 105 110 40 «2105 32 «2115 111 «212» Білок 45 «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний 50 поліпептид» «4005 32
Авр І1ї1е Уаї Меєсє ТПг біп бек Рго Авр бек Те А1ї1а Уаі Бек Гец С1У 1 5 10 15 55 бі Агкуд Аза ТПг І1їе Ап о Сув пув Аза Бек біп бек Уаї Авр Туг Авр 20 25 30 60 б1у Авр бек Тук Меє Ні Тер Тук сбіп біп пув Рго б1у біп Рго Рго
35 40 45 ув Теп Гей Іїе Туг Аїа Аїа бек Іїе Гей бій бек сіу Уаї Рго Авр 50 з9 бо
Акуд Рпе бек біу бек біу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг І1е 5ег 65 70 75 80 зек Гец біп Аї1а біцш Авр Уаії Аїа Уаї Тук Тук Сув біп біп Бек Авп 85 90 95 бі Авр Рго Агуд ТПг Рпе сіу сіу біу ТЕ Гув УМаї сій І1е Гув 100 105 110 «2105 33 «2115 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид»
Зо «4005 33
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп ТБг ТБг обег бек ІГецйп бек Аза бек Геш 0Щ1У 1 5 10 15
Авр Агуд Уаі ТіПг І1е бек Сув Агуд Аїа бек біп Авр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп Гпув Рго Авр сб1іу ТПг Уа1ї пуб Гец Іецй І1е 35 40 45
Рпе Тукг ТіПг бек Агд ІТец Нів бек біу Маі Рго Бек Агуд Рпе Бех щЩ1У 50 55 бо сбі1у б1у бек с1у ТПг Авр Тук Бек Гей ТПг Іїе бек Авп Гец біц сіп 65 70 75 80 бі Авр чІ1е Аза ТПг Тук Рпе Сув біп біп с1іу Авп ТБПг Гей Рго Іей 85 90 95
ТПЕ Рпе с1у Аїа сіу ТПг Гпув Гецп бій Геч Гуз 100 105 «2105 34 60 «2115 107 «212» Білок
«2135 Штучна послідовність «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 34
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп ТБг Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Рпе Тукг ТіПг бек Агд ІТец Нів бек біу Маі Рго Бек Агуд Рпе Бех щЩ1У 50 55 бо зек б1іу бек біу ТПгЕ Авр Тук ТПг Гей ТіПг І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Сув біп біп с1іу Авп ТБПг Гей Рго Іей
Зо 85 90 935
ТПЕ Рпе сіу сбіп біу ТПг Ппув Гец біц І11е Гув 100 105
З5 «2105 35 «2115 107 «212» Білок 40 «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний 45 поліпептид» «4005 35
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп ТБг ТБг обег бек ІГецйп бек Аза бек Геш 0Щ1У 1 5 10 15 50
Авр Акуд Уаї ТБПг І1е бек Сув Агуд Аїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30 55
Тец АБп Тер Ту біп біп Гпув Рго Авр сб1іу ТПг Уа1ї пуб Гец Іецй І1е (516) Тук Тук ТПг бек Агуд Гей Агуд бек с1іу Гей Рго бБег Агд Рпе бек с1Уу бо зек сіу бек біу ТПг Авр Туг бек Іец ТПг І1е бек Авп Ге бій сіп 65 70 75 80 бі Авр чІ1е Аза ТПг Тук Рпе Сув біп біп с1іу Авп ТБПг Гей Рго Тгр 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіу біу ТПкЕ Ппув Гец біц І11е Гув 100 105 «2105 36 «2115 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 36
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Зо Авр Агуд Уаі ТПг І1е ТПг Суб Агуд Аїа бек біп АвБр І1е бБег АвБп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Іїей Агкуд бек біу ІТец Рго бек Агкуд Ріе бег б1Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Туг ТПг Іїецп ТПг І11е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Сув біп біп б1у Авп ТПг Іецй Рго Тгр 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу с1у біу ТПг Ппув УМаії сій І1їе Гув 100 105 «2105 37 «2115 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 (516) «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 37
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп ТБг ТБг обег бек ІГецйп бек Аза бек Геш 0Щ1У 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТБПг І1е бек Сув Агуд Аза Бек біп Авр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Рпе сбіп біп Гпув Рго Авр сіу ТПг Уа1ї пуб Гец Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг Бек Агд Іїей Нів бек сіу Уаі Рго Бек Агкд Ріе бег 01Уу 50 55 бо
Ззек с1іу бек біу ТПг Авр Тук бек Гей ТіПг І1е Бек Авп Гец бій сіп 65 70 75 80 бі Авр чІ1е Аза ТПг Тук Рпе Сув біп біп сіу Тук ТПг Іецй Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіу біу ТПкЕ Ппув Гец біц І11е Гув 100 105
Зо «2105 38 «2115 107 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 38
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Рпе сбіп біп Ппув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агуд Гей Нів бек сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Туг ТПг Іїецп ТПг І11е Бек Бек Гей сбіп Рго (516) 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аза ТПг Тук Тук Сув біп біп сіу Тук ТБПкг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіу біу ТПкг Ппув Уаї біц І11е Гув 100 105 «2105» 39 «4005 39
Годо) «2105» 40 «4005» 40
Годо) «2105» 41 «2115» 450 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо поліпептид» «4005» 41 бі Маї біп Гей Уаі сій бек сіу сіу с1у Гей Уаі1 сіп Рго с1у 01У 1 5 10 15
З5 зек Гей Агд Іїец бек Сув Аза Аза бек б1і1у Рпе ТПг Рпе бБег Агд Туг 20 25 30 40 біу Меє бек Тер Уаі Агд сбіп Аза Рго с1іу Ппув сіу Гец біц Іец Уаї 45 А1їа ТПг Іїе Авп обБег АБп осбіу с1у Ак9д ТБПг Тук Тук Рго Авр бек Уаї бо пув б1у Акуд Рпе ТПг Іїе бек Агуд Авр Авп Аїа Гпув Ап бек Іеци Туг 50 65 70 75 80
Тец біп Меє Авп бек Гей Агуд Аза бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95 55
Аза Акуд сбіц б1іу І1е ТПг ТБг Аза Туг Аза Меє Авр Туг Тгр с1у сіп 100 105 110 60 бі1іу ТПпг ТпПг оУа1ї ТПг Уаї бек Бек Аза Бек ТПг Ппув сіу Ркго бек Уаї
115 120 125
Рпе Рго Гец Аза Рго бек бБекг пуб бек ТПг бек сіу с1і1у ТБПг Аїа А1а 130 135 140
Тец б1у Сув Гей Уаії Ппув Авр Тук Рпе Рго бій Ркго Уаї ТіПг Уаї1ї 5ег 145 150 155 160
ТЕр Авп о бек сіу Аїа Гей ТПг бек біу Уаії Нів ТПг Рпе Рго Аїа Уаї 165 170 175
Тецп біп бек бек с1іу Гей Тук Бек Гей бек бек Уа1! Уаї ТіПг Уаї1ї Рго 180 185 190
Ззек бек бек Гей с1у ТПг сіп ТБг Туг І1е Сув Авп Уа! АБп Нів Гув 195 200 205
Ркго Бек Авп ТПг Гуз Маї Авр Гув пув УМаї бій Рго Ппув Бек Сув Авр 210 215 220
Тпув ТПЕ Нів ТП Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго бій Гей Геш с1у Щ1У 225 230 235 240
Зо
Ркго Бек Уаії РПе Іїецй Рпе Рго Ркго Гув Рго Гув Авр ТПг Ге Меє Те 245 250 255
З5 зек Агуд ТПг Рго біц Маї ТПпг Сув Уаії Уаї Уаї Авр Уа1і Бек Нів сіц 260 265 270
Авр Рго сій Уа1! Ппув Рре Авп о Тгр Тук Уаі Авр сі1у Уаії сій Уаї Нів 275 280 285
Авп Аза пуб ТПг Губв Рго Агд біц бі біп Туг Авп о бБег ТПг Туг Агд 290 295 300
Уаї Уаї Бек Уаії Гей ТПг Уаії гейш Нів сбіп Авр Тгр Гец Авп о б1у Гув 305 310 315 320 бі Тук Гпув Сув Ппув Уаії Бек Авп Гпув Аїа Гей Рго Аза Рго І1е с1іц 325 330 335
Тпув ТПг І1їе бек Ппув Аїа Гпув с1іу біп Рго Агуд бій Рго біп Уа1ї! Туг 340 345 350 (516) ТПЕ Гей Рго Рго бек Агуд бій біц Меє ТпПг пув Авп обіп Уаї бек Геч 355 3З6о 365
ТПЕ Сув Гей Уаї пув б1і1у Рпе Тукг Рго бБег Авр І1е А1ї1а Уаії сій Тгр 370 375 380 бі бек АвБп сіу біп Рго бій Авп Авп о Тук Ппув Тс ТБг Рго Рго Уаї 385 390 395 400
Тец Авр бек Авр сіу Бек Рпе Рпе Гей Тук бек Ппув Гей ТПг Уаіїі Авр 405 410 415 пув бек Агуд Тер біп біп с1у Авп Уаї Ріре бек Сув бек Уаї Меє Нів 420 425 430 бі Азїа Гей Нів Авп о Нів Туг ТПг о біп пув бек Гей бек Гец бег Рго 435 440 445 с1у Гув 450 «2105 42 «211» 449 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний
З5 поліпептид» «4005 42 бі Маї біп Ге Уаі сій бек сіу сбіу б1у Іїецпй Уаі сіп Рго б01у щу 1 5 10 15 40 зек Гей Агд Іїец бек Сув Аза Аза бек б1і1у Рпе ТПг Рпе бБег Агд Туг 20 25 30 45 біу Меє бек Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу пув б1у Те бій Геци Уаї
А1їа ТПг Іїе Авп обБег АБп осбіу с1у Ак9д ТБПг Тук Тук Рго Авр бек Уаї 50 55 бо пув б1у Акуд Рпе ТПг Іїе бек Агуд Авр Авп Аза Тув АБп бек Іеци Туг 65 70 75 80
Тец біп Меє Авп бек Гей Агуд Аза бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95 60
Аза Акуд сбіц сбіу І1е ТПг Тбпг Аза Туг Аза Меє Авр Тугє Тер СШ1у сіп 100 105 110 сіу ТПг ТрПкг Уаї ТПг Уаї бек бек Аза бек ТПкг Ппув біу Рго бек Уаї 115 120 125
Рпе Рго Гец Аза Рго бек бБекг пуб бек ТПг бек сі1у с1у ТПг Аза Аї1а 130 135 140
Тец б1у Сув Гей Уаії Ппув Авр Тук Рпе Рго бій Ркго Уаї ТіПг Уаї1ї 5ег 145 150 155 160
ТЕр Авп бек сіу Аїа Гей ТПг бек сіу Уаії Нів ТПг Рпе Рго Аїа Уаї 165 170 175
Тецп біп бек бек с1іу Гей Тук Бек Гей бек бек Уа1! Уаї ТіПг Уаї1ї Рго 180 185 190
Ззек бек бек Гей сб1у ТПг сбіп ТПк Туг Іїе Сув Авп Уаі Авп Нів Гуз 195 200 205
Ркго Бек Авп ТПг Гуз Маї Авр Гув пув УМаї бій Рго Ппув Бек Сув Авр
Зо 210 215 220
Тпув ТП Нів ТП о Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго бій Гей Гец сС1у с1Уу 225 230 235 240
З5
Ркго Бек Уаії РПе Іїецй Рпе Рго Ркго Гув Рго Гув Авр ТПг Ге Меє Те 245 250 255 зек Агуд ТПг Рго біц Маї ТПг Сув Уаії Уаї Уаї Авр Уа1і Бек Нів сіц 260 265 270
Авр Рго сій Уа1! Ппув Рре Авп о Тгр Тук Уаі Авр сі1у Уаії сій Уаї Нів 275 280 285
Авп Аза пуб ТПг Губв Рго Агд біц бі біп Туг Авп о бБег ТПг Туг Агд 290 295 300
Уаї Уаї Бек Уаії Гей ТПг Уаії гейш Нів сбіп Авр Тгр Гец Авп о б1у Гув 305 310 315 320 бі Тук Гпув Сув Ппув Уаії Бек Авп Гпув Аїа Гей Рго Аза Рго І1е с1іц 325 330 335 60
Тпув ТПг І1їе бек Ппув Аїа Гпув с1іу біп Рго Агуд бій Рго біп Уа1ї! Туг
340 345 350
ТПЕ Гей Рго Рго бБег Агкуд біц сій Меє ТПг Гпув Авп обіп Уаї бек Іецй 355 3З6о 365
ТПЕ Сув Гей Уаї пув б1і1у Рпе Тукг Рго бБег Авр І1е А1ї1а Уаії сій Тгр 370 375 380 бі бек АвБп сіу біп Рго бій Авп Авп о Тук Ппув Тс ТБг Рго Рго Уаї 385 390 395 400
Тец Авр бек Авр сіу Бек Рпе Рпе Гей Туг бек Ппув Гей ТПг Уаі1ї Авр 405 410 415 пув бек Агуд Тер біп біп с1у Авп Уаї Ріре бек Сув бек Уаї Меє Нів 420 425 430 бі Азїа Гей Нів Авп о Нів Тугк ТПг о біп пув бек Гей бек Гецй бек Рго 435 440 445 сову
Зо «2105» 43 «211» 447 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 43 бі Маї біп Гей біп бій бек сіу Рго сіу Гей Уа1! Ппув Рго бБег Авр 1 5 10 15
ТПЕ Гей бек Гей ТПг Сув Аїа Уаї бек біу Тук бек І1е Аїа Бех щУ 20 25 30
Тук Тук Тер Авп Тгр І1е Агуд біп Рго Рго біу Пув б1у Те сі Тгр 35 40 45
Меє с1у Тук Іїе бек Тук Авр біу Бек Авп Авп Туг Авп Рго бек Іеч 50 55 бо б1у АвБп Агуд чІ1е ТПг І1ї1е бек Агуд Авр ТПг бек Гпув Авп о біп Уаії 5ег (516) 65 70 75 80
Тецшп Гпув Гей бек Бек Уа! ТПпг Аза Уаі Авр ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї Ппув ТПг Гей Рго Тук Тук Рпе Авр Туг Тер біу біп б1у ТПг ТПг 100 105 110
Уа1ї1 ТПг Уаї бек бек Аза бек ТПг пуб с1іу Рго бек Уаії Роре Рго Іец 115 120 125
Аза Ркго бек бек пуб бек ТПг бек біу бі1у ТПг Аза Аїа Гей с1Уу Сув 130 135 140
Тецп Маї Гпув Авр Тук Рпе Рго сій Рго Уа1і ТПг Уа1 бек Тгр Авп б5ег 145 150 155 160 сб1у А1їа Гей ТПг бек сіу УМаії Нів ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Ггец сіп 5ег 165 170 175 зек с1і1у Пец Тукг бек ІГец бБекг бек Уаі! Уа1ї ТПг Уа1і Рго Бек бек бег 180 185 190
Зо Тем біу ТПкг біп ТПг Тук Іїе Сув Авп о Уаі Авп о Нів Пув Рго бек Авп 195 200 205
ТПЕ Ппув Уа1 Авр пуб пув Уа1 сій Рго Ппув бек Сув Авр Гув ТПгЕ Нів
З5 210 215 220
ТПЕ Сув Ркго Рго Сув Рго Аза Рго біц Гец Іец біу б1у Рго Бек Уаї 225 230 235 240
Рпе Гей Рібе Рго Рго Гув Рго Гув Авр ТПг ІТеийп Меє І1їе бБег Агд ТЕГ 245 250 255
Ркго сіц Уаї ТПг Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бек Нів бій Авр Рго сіц 260 265 270
Уаї Ппув Рпе Авп Тер Тук Уаі Авр сб1у УМаії сій Уаї Нів АБп Аїа Тув 275 280 285
ТПЕ Ппув Рго Акд біц бій біп Тукг Авп о бег ТПг Туг Агуд Уаї Уа1ї 5ег 290 295 300
Уаї Гей ТПг Уаії гей Нів сіп Авр Тер Гей Авп с1іу Ппув бій Тук Гув 305 310 315 320 60
Сув Кпув Уаї Бек Авп пув Азїа Гей Рго Аїа Рго Іїе сіц пуб ТПгЕ І1е 325 330 335 зек пув Аїа Ппув б1у біп Рго Агуд сій Рго біп Уаі Тук ТПг Гей Рго 340 345 350
Ркго Бех Агкд біц біц Меє ТПг Губв Авп обіп Уаї бек Гей ТПг Сув ГІец 355 3З6о 365
Уаї Ппув с1у Рпе Тук Рго Бек Авр І1е Аї1а Уаі сій Тгр бій Бек Авп 370 375 380 бі1у біп Рго бій Авп Авп о Тук Ппув ТПг Тк Рго Рго Уаї Гей Авр 5ег 385 390 395 400
Авр сіу бек РіПе РібПе Іїецй Тук бек Ппув Гей ТпПг Уа1і1 Авр пуб бБег Агд 405 410 415
Тер біп біп с1у Авп Уа1! Ріе бек Суб бек Уа1і Меєсє Ніз сіц Аїа Гей 420 425 430
Нів Авп Нів Тук ТПг біп Гув бек Гецп бек Гей бек Рго с1у ГПув
Зо 435 440 445 «2105» 44 «211» 446
З5 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «221» джерело 40 «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005» 44 бі Маї біп Гей біп бій бек сіу Рго сіу Гей Уа1! Ппув Рго бБег Авр 45 1 в) 10 15
ТПЕ Гей бек Гей ТПг Сув Аїа Уаї бек біу Тук бек І1е Аїа Бех щУ 20 25 30 50
Тук Тук Тер Авп Тгр І1е Агуд біп Рго Рго біу Пув б1у Те сі Тгр 55
Меє сіу Тук Іїе Бек Тугк Авр сіу Бек Авп Авп Туг Авп о Рго бек Іецй бо (516) с1у АвБп Агуд І1їе ТПг І1їе бек Акуд Авр ТПг бек Пув Авп біп Уаї 5ег 65 70 75 80
Тецшп Гпув Гей бек Бек Уа! ТПпг Аза Уаі Авр ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї Ппув ТПг Гей Рго Тук Тук Рпе Авр Туг Тер біу біп б1у ТПг ТПг 100 105 110
Уаї ТПпг Уаї Бек Бек Аїа Бек ТПг Ппув сіу Рго бек Уаі! РПпе Рго Іецй 115 120 125
А1Т1а Рго бек бек Пув бек ТПг бек сіу с1іу ТБг Аїа Аза Гей с1Уу Сув 130 135 140
Тецп Маї Гпув Авр Тук Рпе Рго сій Рго Уа1і ТПг Уа1 бек Тгр Авп б5ег 145 150 155 160 сб1у А1їа Гей ТПг бек сіу УМаії Нів ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Ггец сіп 5ег 165 170 175 зек с1і1у Пец Тукг бек ІГец бБекг бек Уаі! Уа1ї ТПг Уа1і Рго Бек бек бег 180 185 190
Зо
Тец б1у ТПпг сбіп ТпПг Тук І1е Сув Авп Уаі Авп о Нів пуб Рго бБег Авп 195 200 205
ТПЕ Ппув Маії Авр Пув Ппув Маї бі Рго Ппув бек Сув Авр Гув ТПг Нів 210 215 220
ТПЕ Сув Ркго Рго Сув Рго Аза Рго біц Гец Іец біу б1у Рго Бек Уаї 225 230 235 240
Рпе Гей Рібе Рго Рго Гув Рго Пув Авр ТПг Іеип Меє І1їе 5Бег Агд ТЕГ 245 250 255
Ркго сіц Уаї ТПг Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бек Нів бій Авр Рго сіц 260 265 270
Уаї Ппув Рпе Авп Тер Ту Уаі Авр сіу Уаі1 сій Уаї Нів АвБп Аїа Гув 275 280 285
ТПЕ Ппув Рго Акуд бій бій біп Туг Авп бек ТПг Туг Агуд Уаї Уа1ї 5ег 290 295 300
Уаї Гей ТПг Уаії гейш Нів сіп Авр Тер Ггец Авп о б1іу Ппув сій Тук Гув (516) 305 310 315 320
Сув Кпув Уаї Бек Авп пув Азїа Гей Рго Аїа Рго Іїе сіц пуб ТПгЕ І1е 325 330 335 зек Мпув Аїа пуб біу біп Рго Акуд бі Рго біп Уа1! Тук ТіПг Іецй Рго 340 345 350
Рго Бек Акуд бій біц Месє ТП Ппув Авп о біп Уаї бек Гей ТПг Сув Іецй 355 3З6о 365
Уаї пув с1у Рпе Тук Рго бек Авр І1е Аї1а Уаі сій Тгр бій Бек Авп 370 375 380 бі1у біп Рго бій Авп Авп о Тук Ппув ТПг Тк Рго Рго Уаї Гей Авр 5ег 385 390 395 400
Авр с1іу бек РіПе РібПе Іїецй Тук бек Ппув Гей ТпПг Уа1і1 Авр пуб бБег Агд 405 410 415
ТЕр біп біп с1іу Авп Уаі Рпе бек Сув бек Уа! Меє Нів сб1цп Аза Гей 420 425 430
Зо Нів Авп о Нів Туг ТПг біп пуб бек Гей бек Гей бек Рго о1Уу 435 440 445 «2105» 45
З5 «211» 447 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 40 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 45 45 сій Маї біп Гецп Уаії сіп бек б1у Аї1а сіцш Уаї Ппув Пув Рго сб1у 5ег 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Мпув Аза бек б1у Рпе АБп І1е Гпув Авр ТЕГ 50 20 25 30
Тук Меє Нів Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сбіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 55 б1у Акд І1ї1е Авр Рго Аїа АБп о сіу Авп о ТПг Ппув Тукг Авр Рго Тув РБПе бо 60 біп б1у Акуд Аза ТПг І1ї1е ТПпг Аза Авр ТПг бек ТПг Ап ТБбг Аїа Туг
65 70 75 80
Меє бій Гей бек бек Гей Агуд Бек бій Авр ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Акуд с1іу біу Рго Аїа Тер Рібе Уа! Туг Тер с1у сбіп с1у ТПг Ієец 100 105 110
Уаї ТПпг Уаї Бек Бек Аїа Бек ТПг Ппув сіу Рго бек Уаі! РПпе Рго Іецй 115 120 125
Аза Ркго бек бек пуб бек ТПг бек біу бі1у ТПг Аза Аїа Гей с1Уу Сув 130 135 140
Тем Маї Ппув Авр Тук Рібе Рго бій Рго Уа! ТПг Уаії бек Тгр Ап 5ег 145 150 155 160 сб1у А1їа Гей ТПг бек сіу УМаії Нів ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Ггец сіп 5ег 165 170 175 зек с1і1у Пец Тукг бек ІГец бБекг бек Уаі! Уа1ї ТПг Уа1і Рго Бек бек бег 180 185 190
Зо
Тец б1у ТПпг сбіп ТпПг Тук І1е Сув Авп Уаі Авп о Нів пуб Рго бБег Авп 195 200 205
З5
ТПЕ Ппув Уа1 Авр пуб пув Уа1 сій Рго Ппув бек Сув Авр Гув ТПг Нів 210 215 220
ТПЕ Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго біц Гей Гей сіу с1і1у Рго бек Уаї1! 225 230 235 240
Рпе Гей Рібе Рго Рго Гув Рго Пув Авр ТПг Іецп Меє І1їе бБег Агд ТЕГ 245 250 255
Ркго сіц Уаї ТПг Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бек Нів бій Авр Рго сіц 260 265 270
Уаї Ппув Рпе Авп Тер Ту Уаі Авр сіу Уаі1 сій УМаї Нів АвБп Аїа Гув 275 280 285
ТПЕ Ппув Рго Акд біц бій біп Тукг Авп о бег ТПг Туг Агуд Уаї Уа1ї 5ег 290 295 300 (516) Уаї Гецп ТрПг Уаї Гей Нів сіп Авр Тгр Гей Авп сб1іу Ппув сій Тук Тув 305 310 315 320
Сув Кпув Уаї Бек Авп пув Азїа Гей Рго Аїа Рго Іїе сіц пуб ТПгЕ І1е 325 330 335 зек Мпув Аїа пув біу біп Рго Агуд бій Рго біп Уа1! Тук ТіПг Іецй Рго 340 345 350
Ркго Бех Агкд біц біц Меє ТПг Губв Авп обіп Уаї бек Гей ТПг Сув ГІец 355 3З6о 365
Уаї Ппув б1у Рпе Туг Рго Бек Авр І1їе Аїа Уаї сбіш Тер сій бек Авп 370 375 380 бі1у біп Рго бій Авп Авп о Тук Ппув ТПг Тк Рго Рго Уаї Гей Авр 5ег 385 390 395 400
Авр с1іу бек РіПе РібПе Іїецй Тук бек Ппув Гей ТпПг Уа1і1 Авр пуб бБег Агд 405 410 415
ТЕр біп біп с1іу Авп Уаі Рпе бек Сув бек Уа! Меє Нів сб1цп Аза Гей 420 425 430
Зо
Нів Авп Нів Тук ТПг біп Гуз бек Гец бек Тец бек Рго с1У Гув 435 440 445 «2105 46 «211» 446 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005» 46 бі Маї біп Гей Уаі сбіп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув Пув Рго біу вег 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек біу Робе АБп чІ1е пув Авр ТПг 20 25 30
Тук Меє Нів Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сбіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Акд І1ї1е Авр Рго Аїа АБп о сіу Авп о ТПг Ппув Тукг Авр Рго Тув РБПе 50 55 бо 60 біп б1у Акуд Аза ТПг І1ї1е ТПпг Аза Авр ТПг бек ТПг Ап ТБбг Аїа Туг 65 70 75 80
Меє бій Гей бек бек Те Акуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1! Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Акуд с1іу біу Рго Аїа Тер Рібе Уа! Туг Тер с1у сбіп с1у ТПг Ієец 100 105 110
Уаї ТПпг Уаї Бек Бек Аїа Бек ТПг Ппув сіу Рго бек Уаі! РПпе Рго Іецй 115 120 125
Аза Ркго бек бек пуб бек ТПг бек біу бі1у ТПг Аза Аїа Гей с1Уу Сув 130 135 140
Тецп Маї Гпув Авр Тук Рпе Рго сій Рго Уа1і ТПг Уа1 бек Тгр Авп б5ег 145 150 155 160 сі1у Аїа Ге ТПг бек с1іу Уаії Нів ТПг Рре Рго Аїа Уаі1ї Іецй сіп 5ег 165 170 175 зек с1і1у Пец Тукг бек ТІГец бек бек Уаі! Уа1ї ТПг Уа1і Рго Бек бек бег
Зо 180 185 190
Тец б1у ТПпг сбіп ТпПг Тук І1е Сув Авп Уаі Авп о Нів пуб Рго бБег Авп 195 200 205
З5
ТПЕ Ппув Уа1 Авр пуб пув Уа1 сій Рго Ппув бек Сув Авр Гув ТПг Нів 210 215 220
ТПЕ Сув Ркго Рго Сув Рго Аза Рго біц Гец Іец біу б1у Рго Бек Уаї 225 230 235 240
Рпе Гей Рібе Рго Рго Ппув Рго Ппув Авр ТПг Гей Меє І1е бег Агд Тіг 245 250 255
Ркго сіц Уаї ТПг Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бек Нів бій Авр Рго сіц 260 265 270
Уаї Ппув Рпе Авп Тер Ту Уаі Авр сіу Уаі біц Маї Нів АвБп Аїа Гув 275 280 285
ТПЕ Ппув Рго Акд біц бій біп Тукг Авп о бег ТПг Туг Агуд Уаї Уа1ї 5ег 290 295 300 60
Уаї Гей ТПг Уаії гейш Нів сіп Авр Тгр Тец Авп о б1іу Ппув сій Тук Гув
305 310 315 320
Сув Кпув Уаї Бек Авп пув Азїа Гей Рго Аїа Рго Іїе сіц пуб ТПгЕ І1е 325 330 335 зек Мпув Аїа пув біу біп Рго Агуд бій Рго біп Уа1! Тук ТіПг Іецй Рго 340 345 350
Ркго Бех Агкд біц біц Меє ТПг Губв Авп обіп Уаї бек Гей ТПг Сув ГІец 355 3З6о 365
Уаї пув с1у Рпе Тук Рго бек Авр І1їе Аїа Уаії біц Тгр бій бек Авп 370 375 380 сі1у біп Рго біц Ап Авп о Тук Пув ТБг ТбЕ Рго Рго Уа1ї Іецй Ар 5ег 385 390 395 400
Авр с1іу бек РіПе РобПе Іїецй Тук бек пуб ТГецй ТПг Уаі Авр Гув бБег Аг4д 405 410 415
ТЕр біп біп с1іу Авп Уаі Рпе бек Сув бек Уа! Меє Нів сб1цп Аза Гей 420 425 430
Зо
Нів Авп Нів Тук ТПг біп пув бек Гец бег Іец бек Рго Щ1У 435 440 445
З5 «2105» 47 «211» 443 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 40 «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» 45 «4005 47 бі Маї біп Гей Уаі сій бек сіу сіу с1у Гей Уаі1 сіп Рго с1у 01У 1 5 10 15 50 зек Гей Агд Іїец бек Сув Аза Уаі! бек б1і1у Рпе бек Гей ТПг бек Туг 20 25 30 55 сіу Маії Ні Тер Уаі Акд сіп Аїа Рго сб1у Ппув с1у Гей бій Тгр Гей сі1у Маї І1ї1е Тер Бек сіу сбіу Бек ТПг Авр Туг Авп Аїа Аза РоПе І1е 60 50 з9 бо зек Агд Пец ТПг І1е бек Пув Авр АвБп бек Гув Бек ТПг Уа1 Тук Ієец 65 70 75 80 біп Меє Авп бек Гей Агуд Аї1а сій Авр ТПг Аїа Уа1! Тук Тук Субв А1а 85 90 95
Агд бій бій Рбе Авр Туг Тгр сіу біп с1і1у ТПг ТП Уаї ТПг Уа1ї! 5ег 100 105 110 зек Аїа бек ТПг пув біу Рго бек Уаі! Рпе Рго Гей Аза Рго Бек 5ег 115 120 125
Ппув бек ТПг бек сіу с1і1у ТПг Аза Аїа Гей сіу Сув Гец Уаї Гув Авр 130 135 140
Тук Рпе Рго біц Рго Уа1 ТПг Уаї бек Тгр АБп бек с1у Аїа Гей ТЕПг 145 150 155 160 зек сіу Уаї Нів ТПг Рре Рго Аїа Уаії Іецй біп бек Бек с1у Гей Туг 165 170 175
Зо зек Гей бек бек Уаі! Уаї ТПг Уаї Рго бек бек бек Гецп с1у ТПкгЕ сіп 180 185 190
ТПг Тук Іїе Сув Авп Уаі Авп о Нів пуб Рго бек Авп о ТПг Гув Уаі1і Авр
З5 195 200 205
Тпув Кпув Маї сій Рго Ппув бек Сув Авр ГПув ТПг Нів ТПг Сув Рго Рго 210 215 220
Сув Ркго Аїа Рго бій Гей Гей сіу с1іу Рго Бек Уа1 Рібе Гец Робе Рго 225 230 235 240
Ркго Ппув Рго Гу Авр ТПг Ггец Месє І1е бек Агуд ТПг Рго біц Уаї ТЕПг 245 250 255
Сув Ма1і Уаї Маї Авр Уаї бек Нів бій Авр Рго сій Уа1ї Ппув Роре Авп 260 265 270
ТЕр Тук Уа1 Авр сіу Уа1 сіц Уаї Нів Авп Аїа Ппув ТПг пуб Рго Агд 275 280 285 бі бій біп Туг Авп бек ТПг Туг Агуд Уа1 Уа1 бек Уаї Гец ТПг Уаї 290 295 300 60
Тец Нів біп Авр Тер гей Авп сіу Ппув біц Тук Гуз Сув КГув Уаї 5бег 305 310 315 320
Авп опув Аза Темп Рго Аза Рго І1е сій Ппув ТПг І1е бек Ппув Аїа Тув 325 330 335 бі1у біп Рго Агд бій Рго біп Уа1! Тук ТБг Гец Рго Рго бек Агд с1ци 340 345 350 біц Меє ТПпг о пув Авп о біп Уаї Бек Гей ТПг Сув Гей Уаї пув с1у РБПе 355 3З6о 365
Тук Рго Бек Авр Ії1е Аїа Уаі сій Тер біц бБег АвБп б1у бі1іп Рго с1ци 370 375 380
Авп о АвпоТук пуб ТПг Тк Рго Рго Уаі Іецй Авр бек Авр с1іу Бек Ріє 385 390 395 400
Рпе Гей Тук бек пуб Гей ТПг Уаії Авр Гуз бБег Агуд Тер сіп сбіп с1Уу 405 410 415
АвпоУа1 Ріе бек Суб бек Уаї Месє Ні бі1цп Аза Гей Нів Авп Нів Туг
Зо 420 425 430
ТПг біп пув бек Гец бек Гей бек Рго б1і1у Гув 435 440
З5 «2105» 48 «211» 442 «212» Білок 40 «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний 45 поліпептид» «4005» 48 бі Маї біп Гей Уаі сій бек сіу сіу с1у Гей Уаі1 сіп Рго с1у 01У 1 5 10 15 50 зек Гей Агд Іїец бек Сув Аза Уаі! бек б1і1у Рпе бек Гей ТПг бек Туг 20 25 30 55 сбі1у Маії Нів Тер Уаі Агд біп Аза Рго с1і1у Ппув сіу Гей біц Тгр Іей (516) сіу Маї І1е Тер бек с1іу сіу бек ТПг Авр Туг АвБп Аїа Аїа Рпе Пе бо зек Агд Пец ТПг І1е бек Пув Авр АвБп бек Гув Бек ТПг Уа1 Тук Ієец 65 70 75 80 біп Меє Авп бек Гей Агуд Аї1а сій Авр ТПг Аїа Уа1! Тук Тук Субв А1а 85 90 95
Акуд бій бі Рбе Авр Туг Тер біу біп б1у ТПг ТПг Уа1і ТПг Уа1ї 5ег 100 105 110 зек Аїа бек ТПг пуб с1іу Рго бек Уаі Рібе Рго Гей Аза Рго бек 5ег 115 120 125
Ппув бек ТПг бек сіу с1і1у ТПг Аза Аїа Гей сіу Сув Гец Уаї Гув Авр 130 135 140
Тук Рпе Ркго бій Рго Уаі ТПг Уа1 бек Тгр АвБп бек б1у Аї1а Те ТПг 145 150 155 160 зек сіу Уаї Нів ТПг Рре Рго Аїа Уаії Іецй біп бек Бек с1у Гей Туг 165 170 175
Зо зек Гей бек бек Уаії Уаї ТПг Уа1ї Ркго бек бек бек Ге с1у ТПкгЕ сіп 180 185 190
ТПЕ Тук Іїе Сув Авп о Уаі Авп о Нів пуб Рго бек Авп о ТПг пуб Уаі1ї Авр 195 200 205
Тпув Кпув Уаї сій Рго Ппув бек Сув Авр Пув ТПг Нів ТПг Суб Рго Рго 210 215 220
Сув Ркго Аїа Рго бій Гей Гей сіу с1іу Рго Бек Уа1 Рібе Гец Робе Рго 225 230 235 240
Ркго Ппув Рго Гу Авр ТПг Ггец Месє І1е бек Агуд ТПг Рго бій Уа1ї ТЕПг 245 250 255
Сув Маї Уаї Уаі Авр Уаї бек Нів бій Авр Рго бій Уаї Ппув Робе Авп 260 265 270
Тер Тук Уаі Авр сіу Маі! сбіц Маї Нів Авп Аїа Ппув ТПг Гув Рго Агд 275 280 285 бі бій біп Туг Авп бек ТПг Туг Агуд Уа1 Уа1 бек Уаї Гец ТПг Уаї 60 290 295 300
Тец Нів біп Авр Тер Ггец АвБп о с1іу Ппув бій Тук Гуз Сув КГув Уаї 5бег 305 310 315 320
Ап опув Аза Гец Рго Аза Рго Ії1е біц Гу ТПг І1е бек Ппув Аїа Гув 325 330 335 сі1у біп Рго Агд бій Рго сіп Уа1і Тук ТпПК Гей Рго Рго Бек Агд с1ци 340 345 350 біц Меє ТПпг о пув Авп о біп Уаї Бек Гей ТПг Сув Гей Уаї пув с1у РБПе 355 3З6о 365
Тук Рго Бек Авр І1е Аїа Уаі бій Тер бій Бек Авп с1іу біп Рго сій 370 375 380
Авп о АвпоТук пуб ТПг Тк Рго Рго Уаі Іецй Авр бек Авр с1іу Бек Ріє 385 390 395 400
Рпе Гей Тук бек пуб Тецй ТПг Уаі Авр Ггув бБег Агд Тер сбіп сбіп с01Уу 405 410 415
Зо Авп оУаії Рпе бек Сув бек Уа! Меє Нів сій Аїа Гец Нів Авп Нів Туг 420 425 430
ТпПг біп пув бек Гец бек Іец бек Рго б1Уу
З5 435 440 «2105» 49 «4005» 49
Годо) «2105 50 «4005 50
Годо) «2105 51 «2115» 218 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» бо «4005 51
Авр І1ї1е Уаї Меєсє ТПг біп бек Рго Авр бек Те Аї1а Уаі бек їеш ШУ
1 5 10 15 бі Агкуд Аза ТПг І1їе Ап о Сув пув Аза Бек біп бек Уаї Авр Туг Авр 20 25 30 б1у Авр бек Тук Меє Ні Тер Тук біп біп пув Рго с1іу біп Рго Рго 35 40 45 ув Теп Гей Іїе Туг Аїа Аїа бек Іїе Гей бій бек сіу Уаї Рго Авр 50 55 бо
Акуд Рпе бек біу бек біу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг І1їе 5ег 65 70 75 80 зек Гей біп Аї1а сб1іцш Авр Уаі Аїа Уа1ї Тук Тук Сув біп сбіп бек Авп 85 90 95 бі Авр Рго Агуд ТпПг Рпе сі1у сіу с1іу ТПг Ппув Уа1 сій І1е пув Агд 100 105 110
ТпПг Уаі Аза Аїа Рго бек Уаі Рпбе І1їе Рібе Рго Рго б5ег АБр бій сіп 115 120 125
Зо теп Гпув бек сіу ТПг Аїа бек Уаі Уаії Сув Гей Гей Авп Авп Рое Туг 130 135 140
З5
Рго Акд біц Аза Гуз УМаї біп Ткр Гуз УМаії Авр АБп Аїа Гей сіп бег 145 150 155 160 с1у Авп бек біп бій бек Уаі ТБг бій біп Авр бек Пув Авр бек ТіПг 165 170 175
Тук Бек Гей бек бек ТПг Гей ТПг Ггец бег їув Аза Авр Тук сій Гув 180 185 190
Нів Ппув Уа1 Туг Аїа Сув бій Уа1! ТБг Нів біп б1у ІТецй бек бек Рго 195 200 205
Уаї ТПпгЕ Ппув Бек Рбе Авп Агд сіу сіц Сув 210 215 «2105 52 «2115» 214 «2125» Білок «2135 Штучна послідовність 60 «220»
«221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 52
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп ТБг Рго бек бек ІТецй бек Аїа Бек Уаії с1У 1 5 10 15
Авр Агуд Уаі ТПг І1е ТПг Суб Агуд Аїа бек біп АвБр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп Гув Рго с1іу Ппув Аїа Ркго Гув Іечп Ге Ше 35 40 45
Рпе Тукг ТіПг бек Агд ІТец Нів бек біу Маі Рго Бек Агуд Рпе Бех щЩ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Туг ТПг Іецй ТПг Іїе бек бек Гец біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Сув біп біп с1іу Авп ТБПг Гей Рго Іей 85 90 95
Зо ТПЕ Рпе сіу сіп сбіу ТПг Пув Гей сій Іїе Гуз Агд ТПк Уаі Аїа А1а 100 105 110
Ркго Бек Уаії Рпе І1е Рпе Рго Рго бек Авр бій сбіп Гей пув Бех щу
З5 115 120 125
ТПг Аїа бек Уа1ї Уаї Сув їец Тец Авп Авп Рпе Туг Рго Агд сій Аї1а 130 135 140 пув Маї біп Тер пув Уаі Авр АвБп Аза Гей біп бек с1у Авп бек біп 145 150 155 160 бі бек Уаі ТпПг бі біп Авр бек Ппув Авр бек ТПг Тук бек Іец 5ег 165 170 175 зек ТпПг Ген ТПг Гей бБег пуб Аза Авр Тук бій Ппув Нів Ппув Уа1ї! Туг 180 185 190
А1їа Сув біц Уаї ТБгЕ Нів біп сіу Іецй бек бек Рго Уа1і ТПг Ппув бег 195 200 205
Рпе Авп Агд б1і1у б1ц Сув 210 60
«2105 53 «2115» 214 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 53
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТБПг І1е ТПг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е бек Авп Туг 20 Тем АвБп оТгр Тук біп біп пув Ркго біу Ппув Аза Рго ГУу5 Іецй Гей Те
Тук Тук ТПг Бек Агд Іїей Акуд бек сіу Гей Рго Бек Агкуд Ріе бег б1Уу 25 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Туг ТПг Іїецп ТПг І11е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80
Зо бі Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Сув біп біп б1у Авп ТПг Іецй Рго Тгр 85 90 95
З5
ТПЕ Рпе сіу сіу сіу ТБг Ппув Уа1 сіц І1е Ггубв5 Агд ТПпг Уаі Аза Аза 100 105 110 40 Рго Бек Уа1і Рібе І1е Ррбе Рго Рго бек АвБр біц біп Гей Ппув бБег 1У 115 120 125
ТПг Аїа бек Уаї Уаї Сув Гей Гей Авп Авп Рое Туг Рго Агд сій Аїа 45 130 135 140 пув Маї біп Тер пув Уаі Авр Авхп Аза Гей біп бек с1у Авп бек біп 145 150 155 160 бі бек Уаії ТП бі біп Авр бек Пув Авр бек ТПг Тукг бек Іец 5ег 165 170 175 зек ТПг Гец ТПг ІТец бек пув Аза Авр Тук біп Ппув Нів Ппув Уа1 Туг 180 185 190 (516) А1їа Сув сі Ма! ТПг Нів сіп сіу Гей бек бек Рго Уа1! ТПг ГТув бег 195 200 205
Рпе Авп Агд б1і1у б1ц Сув «2105 54 «2115» 214 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид» «4005 54
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго Бек Бек Гей бБег Аза бек Уаі с1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Рпе сіп біп пув Рго сіу Ппув Аза Ркго Гув Іечп Ге Ше
Зо Тук Тук ТПг бек Агуд Гей Нів бек сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу бо зек сіу бек біу ТПг Авр Туг ТПг Гей ТПг Іїе бек бек Гец біп Рго 35 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аза ТПг Тук Тук Сув біп біп сіу Тук ТБПкг Гей Рго Рго 85 90 95 40
ТПЕ Рпе сіу сіу сіу ТБг Гуз Уа1! сіц І1е гув5 Агд ТПпг Уаі Аза Аза 100 105 110 45
Ркго Бек Уаії Рпе І1е Рпе Рго Рго бек Авр бій сбіп Гей пув Бех щу 115 120 125 50 ТПг АТа бек Уа1ї Уа1ї Сув Гей Гец Авп Авп Рібе Туг Рго Агд сій Аїа 130 135 140 пув Маї біп Тер пув Уаі Авр АвБп Аза Гей біп бек с1у Авп бек біп 55 145 150 155 160 бі бек Уаії ТП бі біп Авр бек Пув Авр бек ТПг Тукг бек Іец 5ег 165 170 175 60 зек ТПг Гец ТПг ІТец бек пув Аза Авр Тук біп Ппув Нів Ппув Уа1 Туг 180 185 190
А1їа Сув сі Ма! ТПг Нів сіп сіу Гей бек бек Рго Уа1! ТПг ГТув бег 195 200 205
Рпе Авп Агд б1і1у б1ц Сув 210 «2105 55 «4005 55
Годо) «2105 56 «4005 56
Годо) «2105 57 «4005 57
Годо)
Зо «2105 58 «4005 58
Годо)
З5 «2105 59 «4005 59 оо «2105 60 «2115 15 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 60 сі1у б1у сі1у сіу Бек сбіу сб1у сіу сіу бек біу б1у б1у с1у 5бег 1 в) 10 15 «2105 61 «2115 118 (516) «212» Білок «213» Ношо зарієепь
«4005» 61 бі Маї біп Гей Уаі сій бек сіу сіу с1у Гей Уаі1 сіп Рго с1у 01У 1 5 10 15 зек Гей Агд Іїец бек Сув Аза Аза бек б1і1у Рпе ТПг Ропе бек бек Туг 20 25 30 зек Месє Авп о Тгр Уаі Агд біп Азїа Рго сб1у Ппув с1у Гей бій Тер Уаї 35 40 45 зек Тук І1їе бек бек бек бек бек ТПг І1їе Авр Туг Аїа Авр бек Уаї 50 55 бо пув б1у Акуд Рпе ТПг Іїе бек Агуд Авр Авп Аїа ГПув Ап о бекг Іец Туг 65 70 75 80
Тец біп Меє Авп бек Гей Агуд Авр бій Авр ТБг Атїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Акуд біц бек біу Тер Тук Гец Робе Авр Туг Тгр С1у біп с1у ТЕГ 100 105 110
Зо їеч Уа! ТПг Уаї бек 5екг 115 «2105 62 «2115 107 «2125» Білок «213» Ношо зарієепь «4005 62
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Агуд Уа1і ТПг І1е ТПг Суб Агуд Аїа бек біп сі1у І1їе бек бек Тгр 20 25 30
Тец Азїа Тер Ту біп біп пув Рго бій пув Аїа Рго пуб бек Іецй І1е 35 40 45
Туг Аїа Аїа бек бБекг ІТей біп бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех щЩ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Робе ТПг Іецй ТПг І11е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 60 бі Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Сув біп біп Туг Авп бек Туг Рго Рго
85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіу біу ТПкг Ппув Уаї біц І11е Гув 100 105 «2105» 63 «2115» 124 «2125» Білок «213» Ношо зарієепь «4005 63 бі Маї біп Гей Уаі сій бек сіу сіу с1у Гей Уа1 сіп Рго с1у Агд 1 в) 10 15
Тецп бек Агуд Гей бек Сув Аї1а Аза бек сбіу Робе ТПг Рпе Авр АБр Туг 20
А1їа Меє Нів Тер Уаі Агд біп Аза Рго б1у Ппув с1у Гей бій Тер Уаї 25 зек сіу І1е бек Тгр АБп бег біу Бек ІїІе сіу Туг Аза Авр бек Уаї бо
Зо пув б1у Акуд Рпе ТПг І1їе бек Акуд бій АБп Аза Ппув Авп бек Гей Туг 65 70 75 80
Тец біп Меє Авп бек Гей Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Іецп Тук Тук Сув
З5 85 90 95
Аза пув Авр о біп бек ТПг Аза Авр Туг Тук Рпе Туг Тук с1у Меє Авр 100 105 110 40
Ууаї ТЕр б1у біп сіу ТПг ТБг Уа1і! ТПг Уаї бек 5бег 115 120 45 «2105» 64 «2115» 106 «2125» Білок «213» Ношо зарієепь 50 «4005» 64 бі І1е Уаї Уаїі ТПг сбіп бек Рго Аза ТПг Гей бек Гей бег Рго 01Уу 1 5 10 15 55 бі Агкуд Аза ТПг о Гей бек Сув Агуд Аза Бек біп бек Уаї бек бек Туг 20 25 30 (516) Тем Аїа Тгр Тук сбіп біп Пув Рго біу біп Аза Рго Акд Іецй Гей Іе 35 40 45
Туг Авр Аза бБег АвБп Агуд Аїа ТПг сбіу І1е Рго А1ї1а Агуд Рпе Бех щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Робе ТПг Іецй ТПг І11е Бек Бек Гей сій Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа Уа1і Тук Тук Сув біп біп Агуд Бек Авп Тгр Рго ТЕГ 85 90 95
Рпе с1у біп бі1у ТП Ппув УМаії сі І1їе Туз 100 105 «2105» 65 «2115 122 «2125» Білок «213» Ношо зарієепь «4005 65 сіп Уаії сбіп Гецп Уаії сіп бек біу бек біш Геп пув Гув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Мпув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр Туг
Зо 20 25 30 зек Меє Нів Тгр Уаі Агд біп Азїа Рго б1у біп с1у Гей Ппув Тер Меє
З5 сб1у Тер І1ї1е АБп ТПг бій ТПпг с1у бі Рго ТПг Туг Аза Авр Авр РІе бо 40 пув б1у Акуд Рпе Уа1і РрПе бек Гей Авр ТПг бек Уа1 бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80 45 ем біп І1е бек бек Гей пув Аїа бій АвБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Авп о Рго Туг Туг Авр Тук Уаії бек Тук Туг Аїа Меє Авр Тукг Тгр 50 100 105 110 сбі1у бі1іп с1у ТПг ТпПг Уаї ТПг Уаі1і Бек 5ег 115 120 55 «2105» 66 «2115 107 «2125» Білок (516) «213» Ношто варієпвз
«4005» 66
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Гув Аза Бек біп Авр Уаї бек ТіПг А1а 20 25 30
Уаї Аїа Тер Тук біп біп Пув Рго сбіу Ппув АТїа Рго Пув Гецп Гечп І1е 35 40 45
Тук Бек Аїа бек Тук ІГец Тук ТПпг сіу Уаі Рго Бек Акд Ріе бег 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Робе ТПг Рре ТПг І1ї1е бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр чІ1е Аза ТПг Туг Тук Сув біп біп Нів Тук бек ТПг Рго Агд 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп біу ТПг Ппув Гец біц І11е Гув 100 105
Зо «2105 67 «2115» 120 «2125» Білок «213» Ношо зарієепь «4005 67 бі Маї біп Гей Уаі сій бек сіу сіу с1у Гей Уаі1 сіп Рго с1у 01У 1 5 10 15 зек Геп Акуд Гей бек Сув Аза Аїа бек бій Тук біц Рпе Рго бек Нів 20 25 30
Авр Меє бек Тер Уаі Агд біп Аїа Рго б1у Ппув с1у Гей бій Гей Уаї 35 40 45
Аза Аза І1е АвБп бБег АБр сіу біу бек ТПг Тук Тук Рго Авр ТПг Меє бо 50 бі Агуд Агуд Рпе ТПг І1їе бек Агуд Авр Авп Аїа ГПув Ап о бекг Іец Туг 65 70 75 80 55
Тец біп Меє Авп бек Гей Агуд Аза бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95 (516) А1а Агуд Нів Туг Авр Авр Туг Туг Аїа Ткгр Рпбе Аїа Туг Тер с1у сіп 100 105 110 бі1у ТПпг Меє Уа1і ТПг Уаї бек 5ег 115 120 «2105» 68 «2115 111 «2125» Білок «213» Ношто варієпвь «4005» 68 біц І1е Уаї Гей ТПг біп бек Рго Аза ТПг Гей бек Гей бег Рго 01Уу 1 5 10 15 бі Агкуд Аза ТПг о Гей бек Сув Агуд Аїа Бек Ппув бек Уаї бек ТПг 5ег 20 сбі1у Тук бек Тук Меє Ні Тер Ту біп біп пув Рго сі1у біп Аза Рго 25 Агд Гечп Гей Іїе Туг Гей Аїа Бек Авп Гей бій бек сіу Уаї Рго А1а бо
Акуд Рпе бек біу бек біу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг І1їе 5ег
Зо 65 70 75 80 зек Гец біц Рго біц АвБр Рібе Аза Уа1! Тук Тук Сув біп Нів бБег Агд 85 90 95
З5 біц Гей Рго Гей ТПг Рпе сіу сіу с1і1у ТПкг Ппув Уаї сбіц І11е Гув 100 105 110 40 «2105» 69 «2115» 117 «2125» Білок «213» Ношо зарієепь 45 «4005» 69 бі Маї біп Гей біп біп бек сіу Рго біш Гей Уа1! пуб Рго с1у А1а 1 5 10 15 50 зек Уаї Ппув І1е бек Сув МПув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30 55 Тук Меє бек Ткгр Ма! Ппув біп бек Нів с1іу Пув ТПг Те бій Тер І1е 35 40 45 б1у Авр Меє Тугк Рго Авр Авп о сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 60 50 з9 бо
Акуд бій пув Уаї Тс ІТецй ТБПг Уаї Авр Гув бек бек ТПг ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Меє бій Рпе Агуд Бек Гей ТПг бек бій Авр бек Аїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї теп Аза Рго Акуд Тгр Тук Рібе бек Уа! Тер б1у ТПг о1у ТПкс ТЕГ 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 70 «2115 107 «2125» Білок «213» Ношо зарієепь «4005 70
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп ТБг ТБг обег бек ІГецйп бек Аза бек Геш 0Щ1У 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТБПг І1е бек Сув Агуд Аїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Зо
Тец АБп Тер Ту біп біп Гпув Рго Авр сб1іу ТПг Уа1ї пуб Гец Іецй І1е
З5
Тук Тук ТПг бек Агд ІТей Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У бо 40 Ззек с1іу бек біу Ппув Авр Тук Рпе Гей ТіПг І1е Бек Авп Гец бій сіп 65 70 75 80 бі Авр Уаї Аза Аза Тук Рпе Сув сбіп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 45 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіу біу ТПкЕ Ппув Гец біц І11е Гув 100 105 50 «2105 71 «4005 71 55 Годо) «2105 72 60 «4005 72
Годо)
«2105 73 «4005 73 оо «2105 74
«4005 74 оо «2105 75 «4005 75 оо
«2105 76 «4005 76 оо
«2105 77 «4005 77 0) оо «2105 78 «4005 78 оо «2105 79
«4005 79 оо «2105 80 «4005 80 оо
«2105 81 «4005 81 оо
«2105 82 «4005 82 10) оо
«2105 83 «4005 83 оо «2105 84 «4005 84 оо «2105 85
«4005 85 оо «2105 86 «4005 86 оо
«2105 87 «4005 87 оо
«2105 88 «4005 88 оо «2105 89 «4005 89 оо «2105 90
«4005 90 оо «2105 91 «4005 91 оо
«2105 92 «4005 92 оо 60
«2105 93 «4005 93 оо
«2105 94 «4005 94 оо «2105 95 «4005 95 оо «2105 96
«4005 96 оо «2105 97 «4005 97 оо
«2105 98 «4005 98 оо
«2105 99 «4005 99 оо «2105 100 «4005 100 оо «2105 101 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 101 (516) сі1у Рпре ТПг Рре бек Агуд Тук біу Меє 5ег 1 5 10
«2105 102 «2115 17 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 102
ТПгЕ Іїе Авп бек Авп біу с1іу Агкуд ТБг Тук Тук Рго Авр бек Уа1ї! Гув 1 5 10 15 сову «2105 103 «211511 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 103 бі б1у І1їе ТПг ТПг Аїа Туг Аїа Меє Авр Туг 1 5 10 «2105 104 «2115 15 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 104
Туз Аза бек сбіп Бек Уаі Авр Туг Авр с1у Авр бек Тукг Меє Нів 1 5 10 15 «2105 105 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний 60 пептид»
«4005 105
Аза Аїа бек І1е Ге сіц 5ег 1 5 «2105 106 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 106 біп біп бек Авп бій Авр Рго Агд ТПг 1 5 «2105 107 «4005 107 оо «2105 108 «4005 108 оо «2105 109 «4005 109 оо «2105 110 «4005 110 оо «2105 111 «211511 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 111 сбі1у Тук бек Іїе Аїа Бек с1у Туг Тук Тегр Авп 1 5 10 60 «2105 112 «2115 15
«212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 112
Тук Іїе бек Туг Авр сіу бек АБп Авп Туг Авп Рго бек Геч с1У 1 5 10 15 «2105 113 «2115 8 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 113
ТПЕ Гей Рго Тугк Тук Робе Авр Туг 1 5 «2105 114
Зо «2115 11 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 114
Агуд Аза бек біп Авр І1е бек Авп Туг ТІеч Авп 1 5 10 «2105 115 «2115 7 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 115
Тук ТПпг бек Агуд Гей Нів 5ег 1 5 «2105 116 (516) «2115 9 «212» Білок
«2135 Штучна послідовність
«221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 116 біп бі1іп б1у Авп ТПг Гей Рго Те ТПг 1 5 «2105 117 «4005 117 оо «2105 118
«4005 118 оо «2105 119 «4005 119 оо
«2105 120 «4005 120 оо
«2105 121 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 121 б1у Рпе АвБп І1їе Гпув Авр ТПг Тугє Меє Нів 1 5 10
«2105 122 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний 60 пептид»
«4005 122
Акуд І1е Авр Рго Аза АБп осбіу АвБп оТБПг Гув Тук Авр Рго Ппув Рпе сіп 1 5 10 15 сову «2105 123 «2115 8 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 123 сбі1у б1у Рго Аїа Тгр РпПе Уаї1ї Туг 1 5 «2105 124 «4005 124 оо «2105 125 «2115 7 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 125
Тук ТПг бек Агд Гей Агд 5ег 1 5 «2105 126 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 126 біп бі1іп б1у Авп ТПг Гей Рго Тгр ТПг 1 5 60 «2105 127
«4005 127 оо «2105 128 «4005 128 оо «2105 129 «4005 129 оо «2105 130 «4005 130 оо «2105 131 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205
Зо «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 131 сі1у Роре бек Гей ТПг бек Тук с1у Уаї Нів 1 5 10 «2105 132 «2115 16 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 132
Уаї І1е Тер бек с1у біу Бек ТПг Авр Туг АБп Аза Аза Рпе І1е 5ег 1 5 10 15 «2105 133 «2115 5 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 (516) «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 133 бі бій Рпе Авр Туг 1 5 «2105 134 «4005 134 оо «2105 135
«4005 135 оо «2105 136 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /замітка-«Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид» «4005 136 біп бі1іп сб1у Тук ТПг Гей Рго Рго ТПг
Claims (20)
1. Анти-ОХ40 антитіло, яке містить: () ланцюг Мн, що включає три СОК; і (ії) ланцюг Мі, що включає три СОК, де: МиСОвЯ має амінокислотну послідовність ЕТЕЗАМСИМ5 (5ЕО ІО МО: 101); МнСОН2 має амінокислотну послідовність ТІМЕМаСАТУМРОБМУКа (ЗЕО ІЮ МО: 102); МнСОгЯЗ має амінокислотну послідовність ЕС ТАМАМОМ (5ЕО ІО МО: 103); МІСОВИЯ має амінокислотну послідовність КАБОБУВУрСОБММН (ЗЕО ІО МО: 104); МІСОВЯ2 має амінокислотну послідовність ААБІЇ Е5 (ЗЕО ІЮ МО: 105); та МІСОВЯЗ має амінокислотну послідовність ООБМЕОРАТ (ЗЕО ІО МО: 106).
2. Анти-ОХ40 антитіло за п. 1, яке включає ланцюг Мн, що має амінокислотну послідовність: ЕМОЇ МЕС МОРОСБІІ ВІ БСААБСЕТЕЗАВаМБУУВОАРОаКаїг ЕІ МАТІМОМОСС АТМ РОБУК САЕТІЗВОМАКМ5ЗІ М ОММ5І ВАЕОТАУУМСАВЕСІТТАМАМО УМ СОСТТУТУБ5 (ЗЕО І МО: 22); і ланцюг Мі, що має амінокислотну послідовність: РІММТО5РОБІ АУМ5І ЧаЧЕВАТІМСКАЗХОВУОМУОСО5УМНУМООКРИООРРКІ ПІМААБІ ЕБОУРОВЕ5 азваваторЕТІтТІЗ5І ОЧАЕОМАМУМСОО5МЕОРАТРСИИатТкКМеїКк (5ЕО І МО: 32).
3. Анти-ОХ40 антитіло за п. 1 або 2, яке є до.
4. Анти-ОХ40 антитіло за будь-яким з пп. 1-3, яке є Ідсі.
5. Антитіло за будь-яким з пп. 1-4, яке включає константну ділянку легкого ланцюга каппа.
6. Анти-ОХ40 антитіло за будь-яким з пп. 1-5, яке є моноклональним.
7. Анти-ОХ40 антитіло за будь-яким з пп. 1-6, яке є гуманізованим.
8. Анти-ОХ40 антитіло за п. 1, яке включає важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 41 або 42; і легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 51.
9. Анти-ОХ40 антитіло за п. 1, яке є (Да антитілом, що містить важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 41; та легкі ланцюги, кожний з яких містить 60 амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 51.
10. Анти-ОХ40 антитіло за п. 1, яке є (Да антитілом, що містить важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність «ЕС ІЮ МО: 42; та легкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 51.
11. Фармацевтична композиція, що включає анти-ОХ40 антитіло за будь-яким з пп. 1-10, і фармацевтично прийнятний носій.
12. Нуклеїнова кислота, що включає нуклеотидну послідовність, що кодує анти-ОХ40 антитіло за будь-яким з пп. 1-10.
13. Вектор, що включає нуклеїнову кислоту за п. 12.
14. Еукаріотична клітина-хазяїн, трансформована вектором за п. 13.
15. Єукаріотична клітина-хазяїн, створена для експресії нуклеїнової кислоти за п. 12.
16. Єукаріотична клітина-хазяїн за п. 14 або 15, яка являє собою клітину-хазяїна ссавця.
17. Спосіб одержання анти-ОХ40 антитіла, що включає: (а) культивування клітини-хазяїна за будь-яким з пп. 14-16 і (Б) відновлення анти-ОХ40 антитіла.
18. Антитіло за будь-яким з пп. 1-10 для застосування в лікуванні злоякісної пухлини у пацієнта, який потребує такого лікування.
19. Антитіло для застосування за п. 18, де злоякісна пухлина вибрана з раку сечового міхура, раку молочної залози, раку голови і шиї, раку шлунка, раку нирки, раку печінки, раку легенів, раку яєчників, раку шкіри і пухлини з ознаками дефекту репарації помилково спарених нуклеотидів у ДНК.
20. Антитіло для застосування за п. 19, де рак легені являє собою дрібноклітинний рак легені, недрібноклітинний рак легені або мезотеліому. Проліферація СОМ. Т-клітин периферичної крові людини 10 -- нив ; ше ав НН Фо В. | ШО . Ех шк Б ШИ я прясти 0 Ї1 т о ти ВОТИ ; Жов А ж в Беж вч я «З дну темат нт, г Є 44 о жи ШІ! ій ни ЕХ | Ух я «іх як зо сію Її. є : ще ії Й ши НН п | й їх й БУ й 5 СЗх ; п пре зав кАжАЖАнКу пи: зних зн! й 10 тая іо те то Концентрація антитіла (мкг/мл)
Фіг. 1А
Продукція ІЄМ-у СОВА Т-клітинами людини їй а Оє т а. 105 СІЗО ТИП А ій шо ма ж | шк З Я | й КЗ ВІ Я «и «і ве Е са 5 дк" шу нка) рр еВ б ж най ре і Як Х п ; чу зе 0,001 О.О 0 1 10 Концентрація антитіла (мкг/мл)
Фіг. 18 Проліферація СОМ Т-кпітин периферичної крові й людини 157 Що -ВАХ Ф | са-івоти З рорей- НозтаВ о 105 З | о ц ! ма Ж ; ! еще А нини й ях се Ти з н є В ОБ ядрняяррви я дн юр Й пре ррн пло ОО 0 01 1 18 Антитіло (мкг/мл)
Фіг. 1С
Продукція ІЇЕМ-у СОЯ. Т-клітинами людини т 2» са длйлжннВККККХ я й ГА низтзв х ре г 15 А ІЗОТИЙ, | Ї т т хх | і г пра нич шо 104 ЕР ї | в, і КО ! ще г | : В З З і. я щ-к «Як т 5 щи і я ! с | й; й І Дт ут ур ш-йй у, нан вних пив канви тт оосеобеюмх етан шснккн постоесетете Ані Ол ФО 0 1 10 Антитіло (МКГ/МЛ)
Фіг. 10 Пропіферація СОЯ НС Т-клітин АК й ПП кидоня не і В її - 3000 Як 5 - ; ще во ак -к и шин ш ше ШИ М и ши Без Ми3З73А зотипеаціиВ Низ істин обробки їзшивальн альний ий агент агент
Фіг. 2А
Проліферація СОМНАЄЮВТВ- Т-клітин зО0Ю- те теці 4 З і ійвр --к Б є : Тоня ск зе се Без до- Мизяза ЗОТИПЕЗШИВ нНеЗУ38 ізотип Й тзшивально альний давання ЗшИвально альний ий агент агент
Фіг. 28 інгібування зв'язування антитіла у присутності ОхабЇ. Бодя шк ВИННУ обов "ШИ СО вот 15004 х « х ЕН а щі з референти рості нні уні нн, 000001 ОО 0.01 1 100
ОХ. (МКГ/МЛ
Фіг. З
Сигнальна послідовність ТЕН) СВ ОВО МСВОВА : Трансмембрання частина ! людино МСУСАХНІОнОРСААМЬиСІСЬК-тТУТоЬ УСИК УВЕНРВЕСПРСККОМНЕНУВНеВИВ иша мнЕх-----ччч"ворРтАоьсьТОоаУтАВВ ЯСчЕнтТ хрРаАБНКСОС хЕСсСОраненУуя КЕ Свят пюодина ГМК УСНЕСБРОБУМНУУЄЕКиСКИСТВСНЕНьИЕВЕКИСТАТЮВТУСНСВНКВ КОВІ миша кртьстрсетокуВсАоМНУ тТСКОСТОСКОВаОсЕЬКОМсСтТрРТОЮТУЄВСЯВСТОВНОСВ людина їж К? ев СЕТВОНТВРОВНОАСКРИТИСТЬВОКИТБОРАВНОВОАІСКЮДОВРАТОРИО МИЩа сХКеСуУрсСУгсьРонеВРОКНОАСКРНТНСТЕВОКОТВНУАЕОВЬСАУСВОВВЕЬАТЮЬИ людина ЕТОСР?АХРІТУОРТНАНРЯТЗОСУВТИРУЄТРОСКАУААЙВОХИЬУЬОСЬОВКАЖЕЬАТИ МИШЕ БТОКРТЕНРТТУБІТУКРЕТЕВІРБРРТУСУТРЕСЕАКАТЬЕсЬСяТЕЧЬАКОЕЕКИВІ людина ГУБКЕВоОВЬРВРАНЕРРССОВРНтСВІОЕВОАРАВЕТКАКІ (ЗО ЮМОЇ) миша іяж я: ЗЕАБВЕОВНиТРЕВСМНОМОУЕТВТОКЕЕНТОВаАНЕТТАКІ (ЗБ МОВ
Фіг. 4А Н є й, з Зв'язування. НИЗИЗВ г935-поОхо ш п. 2935-поОХАО-тиСВ и и и или баЗ8- пи хаб тис реЗза-ниОХхай-тусто чес 2935-пиОХАО то СВО М 93 пидХхай тс я 2935-ЯОХАО о БІ. 1800 1500 2000 Середнє геометричне (Суб)
Фіг. 48
Конкуренція з Ни3738 ххжюф с» ІЗОТИЙ -Д-- Ноз738 Е: ЗО» Теннейя 104 а -й- 1808 Ф | а тт 105-222 х | аву о Як Фо 2000 з хз яті Збери... о Ф-- 115-122 пе ока ач ши - Шо чання ч; й дя а с 1000: І а! о 4 «І А ук а ре пла уессоосогесе оосвсводравснссн Й ей. ософесоповеповвтататснвося 1 102 109 102 105 Концентрація (мкг/мл)
Фіг. 5 дата: чекВ-НниОхай еннфукня МИЗ7ЗА М -- Низ738 не, МО в че Ї х. ов 108-209 де ше ев КНнЯ ме - ие Середо- я я | вищі Е тр ІЗОТИЙ | й. во шви я шани во шини М ин й "м ; ій шани 3 сій ші з що я БО 0. 0. і 16 100 Концентрація антитіля (мкг/мл)
Фіг. б
Передача сигналу ОХ40 МЕКВ 4000 --- Ізотип ж Лінкер. и |зотип ти 1А7 я зшивальний агент - обо причина я Ше. пф НиЗ736 Що п- сне. НИЗ7З8 я зшивальний агент. ІЗ / Ж 20004 Ф | Кан Ж зоов- и й с К ше
0.001 0.01 би ' 10 100 Концентрація антитіла (мкг/мл)
Фіг. 683
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662434761P | 2016-12-15 | 2016-12-15 | |
| PCT/US2017/066680 WO2018112346A1 (en) | 2016-12-15 | 2017-12-15 | Anti-ox40 antibodies and their uses |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA125041C2 true UA125041C2 (uk) | 2021-12-29 |
Family
ID=60937946
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201907981A UA125041C2 (uk) | 2016-12-15 | 2017-12-15 | Анти-ox40 антитіла і їх застосування |
Country Status (36)
| Country | Link |
|---|---|
| US (7) | US10556962B2 (uk) |
| EP (2) | EP3725809A1 (uk) |
| JP (2) | JP6772385B2 (uk) |
| KR (2) | KR102341926B1 (uk) |
| CN (1) | CN110573527A (uk) |
| AR (1) | AR110526A1 (uk) |
| AU (1) | AU2017377036B2 (uk) |
| BR (2) | BR112019012328A2 (uk) |
| CA (1) | CA3045940A1 (uk) |
| CL (1) | CL2019001646A1 (uk) |
| CO (1) | CO2019007288A2 (uk) |
| CR (1) | CR20190330A (uk) |
| CY (1) | CY1123274T1 (uk) |
| DK (1) | DK3504242T3 (uk) |
| DO (1) | DOP2019000165A (uk) |
| EC (1) | ECSP19050049A (uk) |
| ES (1) | ES2813057T3 (uk) |
| HR (1) | HRP20201259T1 (uk) |
| HU (1) | HUE050399T2 (uk) |
| IL (1) | IL267070A (uk) |
| LT (1) | LT3504242T (uk) |
| MA (1) | MA53184A (uk) |
| MX (1) | MX2019007121A (uk) |
| MY (1) | MY198059A (uk) |
| PE (1) | PE20191403A1 (uk) |
| PH (1) | PH12019501357A1 (uk) |
| PL (1) | PL3504242T3 (uk) |
| PT (1) | PT3504242T (uk) |
| RS (1) | RS60664B1 (uk) |
| RU (1) | RU2753493C2 (uk) |
| SG (1) | SG10201914126RA (uk) |
| SI (1) | SI3504242T1 (uk) |
| TW (1) | TWI734879B (uk) |
| UA (1) | UA125041C2 (uk) |
| UY (1) | UY37523A (uk) |
| WO (1) | WO2018112346A1 (uk) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3725809A1 (en) * | 2016-12-15 | 2020-10-21 | AbbVie Biotherapeutics Inc. | Anti-ox40 antibodies and their uses |
| CA3066007A1 (en) * | 2017-06-09 | 2018-12-13 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Combination therapy with icos agonist and ox40 agonist to treat cancer |
| WO2019028182A2 (en) * | 2017-08-01 | 2019-02-07 | Remd Biotherapeutics, Inc. | TREATMENT OF CANCER USING ANTIBODIES BINDING TO THE HUMAN CD134 RECEPTOR (OX40) |
| CN110790837A (zh) * | 2018-08-02 | 2020-02-14 | 上海君实生物医药科技股份有限公司 | 抗btla抗体 |
| WO2020119789A1 (en) * | 2018-12-14 | 2020-06-18 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. | Fully human antibodies against ox40, method for preparing the same, and use thereof |
| US20220017632A1 (en) * | 2018-12-25 | 2022-01-20 | Hanx Biopharmaceutics, Inc | Anti-ox40 monoclonal antibody and application thereof |
| CN110172090B (zh) * | 2019-06-03 | 2020-04-03 | 中山标佳生物科技有限公司 | Cd134单克隆抗体及其制备方法和癌症治疗中的应用 |
| WO2021098851A1 (en) * | 2019-11-20 | 2021-05-27 | Eucure (Beijing) Biopharma Co., Ltd | Anti-ctla4/ox40 bispecific antibodies and uses thereof |
| JP2023507115A (ja) | 2019-12-17 | 2023-02-21 | アムジエン・インコーポレーテツド | 治療における使用のためのデュアルインターロイキン－２／ｔｎｆ受容体アゴニスト |
| CN113045654A (zh) * | 2019-12-27 | 2021-06-29 | 南开大学 | 抗ox40抗体及其用途 |
| CN111303285B (zh) * | 2019-12-27 | 2023-06-02 | 百力司康生物医药(杭州)有限公司 | 靶向ox40的抗体及其制备方法和应用 |
| CN113429483A (zh) * | 2020-03-23 | 2021-09-24 | 百奥泰生物制药股份有限公司 | 一种免疫细胞激活剂的开发及应用 |
| US20230295324A1 (en) * | 2020-06-30 | 2023-09-21 | Harbour Biomed (Shanghai) Co., Ltd | Ox40-targeted antibody, and preparation method therefor and application thereof |
| CN111704671B (zh) * | 2020-08-19 | 2020-11-24 | 广东赛尔生物科技有限公司 | Ox40抗体及其在治疗癌症中的应用 |
| CN112442121A (zh) * | 2020-08-20 | 2021-03-05 | 山东兴瑞生物科技有限公司 | Ox40抗体、其编码基因、及抗体的制备方法和在增强人体免疫功能中的应用 |
| CN114106173A (zh) * | 2020-08-26 | 2022-03-01 | 上海泰槿生物技术有限公司 | 抗ox40抗体、其药物组合物及应用 |
| CN111763258B (zh) * | 2020-09-01 | 2020-12-29 | 北京百奥赛图基因生物技术有限公司 | 抗ox40抗体及其用途 |
| JP2024508207A (ja) | 2020-12-02 | 2024-02-26 | ブイアイビー ブイゼットダブリュ | がんに対する組み合わせ治療におけるｌｔｂｒアゴニスト |
| CN115260312A (zh) * | 2021-04-30 | 2022-11-01 | 保诺科技（北京）有限公司 | 结合ox40的抗体或抗原结合片段 |
Family Cites Families (59)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4444887A (en) | 1979-12-10 | 1984-04-24 | Sloan-Kettering Institute | Process for making human antibody producing B-lymphocytes |
| US4634665A (en) | 1980-02-25 | 1987-01-06 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
| US5179017A (en) | 1980-02-25 | 1993-01-12 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
| US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
| US4716111A (en) | 1982-08-11 | 1987-12-29 | Trustees Of Boston University | Process for producing human antibodies |
| US4510245A (en) | 1982-11-18 | 1985-04-09 | Chiron Corporation | Adenovirus promoter system |
| GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US5807715A (en) | 1984-08-27 | 1998-09-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin |
| US5168062A (en) | 1985-01-30 | 1992-12-01 | University Of Iowa Research Foundation | Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence |
| US4968615A (en) | 1985-12-18 | 1990-11-06 | Ciba-Geigy Corporation | Deoxyribonucleic acid segment from a virus |
| US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
| GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US5413923A (en) | 1989-07-25 | 1995-05-09 | Cell Genesys, Inc. | Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts |
| GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
| WO1991010741A1 (en) | 1990-01-12 | 1991-07-25 | Cell Genesys, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
| WO1996033735A1 (en) | 1995-04-27 | 1996-10-31 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
| US5814318A (en) | 1990-08-29 | 1998-09-29 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| EP0546073B1 (en) | 1990-08-29 | 1997-09-10 | GenPharm International, Inc. | production and use of transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
| US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| EP0519596B1 (en) | 1991-05-17 | 2005-02-23 | Merck & Co. Inc. | A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains |
| ES2136092T3 (es) | 1991-09-23 | 1999-11-16 | Medical Res Council | Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados. |
| DE69233782D1 (de) | 1991-12-02 | 2010-05-20 | Medical Res Council | Herstellung von Autoantikörpern auf Phagenoberflächen ausgehend von Antikörpersegmentbibliotheken |
| US5639641A (en) | 1992-09-09 | 1997-06-17 | Immunogen Inc. | Resurfacing of rodent antibodies |
| WO1996034096A1 (en) | 1995-04-28 | 1996-10-31 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| US5834597A (en) | 1996-05-20 | 1998-11-10 | Protein Design Labs, Inc. | Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same |
| US5916771A (en) | 1996-10-11 | 1999-06-29 | Abgenix, Inc. | Production of a multimeric protein by cell fusion method |
| JP4215172B2 (ja) | 1996-12-03 | 2009-01-28 | アムジェン フレモント インク． | 複数のＶ▲下Ｈ▼およびＶ▲下κ▼領域を含むヒトＩｇ遺伝子座を有するトランスジェニック哺乳動物、ならびにそれから産生される抗体 |
| AU742045B2 (en) | 1997-04-14 | 2001-12-13 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Novel method for the production of anti-human antigen receptors and uses thereof |
| US6235883B1 (en) | 1997-05-05 | 2001-05-22 | Abgenix, Inc. | Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor |
| EP1997893A1 (en) | 1998-02-24 | 2008-12-03 | Sisters of Providence in Oregon | Compositions containing an OX-40 receptor binding agent or a nucleic acid encoding the same and methods for enhancing antigen-specific immune response |
| US6312700B1 (en) | 1998-02-24 | 2001-11-06 | Andrew D. Weinberg | Method for enhancing an antigen specific immune response with OX-40L |
| WO2000029584A1 (en) | 1998-11-18 | 2000-05-25 | Genentech, Inc. | Antibody variants with higher binding affinity compared to parent antibodies |
| US7829084B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-11-09 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding constructs and methods for use thereof |
| EP1525223B1 (en) | 2002-06-13 | 2007-11-21 | Crucell Holland B.V. | Ox40 (=cd134) receptor agonists and therapeutic use |
| US7217797B2 (en) | 2002-10-15 | 2007-05-15 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
| WO2005123780A2 (en) | 2004-04-09 | 2005-12-29 | Protein Design Labs, Inc. | Alteration of fcrn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
| TWI309240B (en) | 2004-09-17 | 2009-05-01 | Hoffmann La Roche | Anti-ox40l antibodies |
| WO2007024249A2 (en) | 2004-11-10 | 2007-03-01 | Macrogenics, Inc. | Engineering fc antibody regions to confer effector function |
| TWI461436B (zh) * | 2005-11-25 | 2014-11-21 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | 人類ｃｄ１３４（ｏｘ４０）之人類單株抗體及其製造及使用方法 |
| US20080286286A1 (en) | 2006-01-13 | 2008-11-20 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods to Treat Disease States by Influencing the Signaling of Ox-40-Receptors and High Throughput Screening Methods for Identifying Substances Therefor |
| DK2851374T3 (en) | 2007-12-14 | 2017-06-19 | Bristol Myers Squibb Co | Binding molecules to the human OX40 receptor |
| MY171312A (en) * | 2010-08-23 | 2019-10-08 | Univ Texas | Anti-ox40 antibodies and methods of using the same |
| RU2562874C1 (ru) * | 2011-08-23 | 2015-09-10 | Борд Оф Риджентс, Дзе Юниверсити Оф Техас Систем | Антитела против ох40 и способы их применения |
| EP2970436B1 (en) | 2013-03-15 | 2018-09-05 | AbbVie Biotherapeutics Inc. | Fc variants |
| CN105229032A (zh) * | 2013-03-18 | 2016-01-06 | 比奥塞罗克斯产品公司 | 人源化抗cd134(ox40)抗体及其应用 |
| JP6588461B2 (ja) | 2014-03-31 | 2019-10-09 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 抗血管新生剤及びｏｘ４０結合アゴニストを含む併用療法 |
| TW201619200A (zh) | 2014-10-10 | 2016-06-01 | 麥迪紐有限責任公司 | 人類化抗－ｏｘ４０抗體及其用途 |
| JP2017536842A (ja) * | 2014-11-03 | 2017-12-14 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | Ｏｘ４０アゴニスト治療薬の有効性及び評価を予測するための方法及びバイオマーカー |
| CN115109158A (zh) * | 2015-05-07 | 2022-09-27 | 阿吉纳斯公司 | 抗ox40抗体及其使用方法 |
| EP3298045A1 (en) * | 2015-05-21 | 2018-03-28 | Alligator Bioscience AB | Novel polypeptides |
| US20160347848A1 (en) * | 2015-05-28 | 2016-12-01 | Medimmune Limited | Therapeutic combinations and methods for treating neoplasia |
| MA43389A (fr) | 2015-12-02 | 2021-05-12 | Agenus Inc | Anticorps anti-ox40 et leurs procédés d'utilisation |
| EP3725809A1 (en) * | 2016-12-15 | 2020-10-21 | AbbVie Biotherapeutics Inc. | Anti-ox40 antibodies and their uses |
-
2017
- 2017-12-15 EP EP20173858.0A patent/EP3725809A1/en not_active Withdrawn
- 2017-12-15 KR KR1020197020437A patent/KR102341926B1/ko active IP Right Grant
- 2017-12-15 MX MX2019007121A patent/MX2019007121A/es unknown
- 2017-12-15 SG SG10201914126RA patent/SG10201914126RA/en unknown
- 2017-12-15 JP JP2019531934A patent/JP6772385B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2017-12-15 HU HUE17826089A patent/HUE050399T2/hu unknown
- 2017-12-15 RS RS20200923A patent/RS60664B1/sr unknown
- 2017-12-15 PL PL17826089T patent/PL3504242T3/pl unknown
- 2017-12-15 CN CN201780086610.XA patent/CN110573527A/zh active Pending
- 2017-12-15 UA UAA201907981A patent/UA125041C2/uk unknown
- 2017-12-15 LT LTEP17826089.9T patent/LT3504242T/lt unknown
- 2017-12-15 PT PT178260899T patent/PT3504242T/pt unknown
- 2017-12-15 DK DK17826089.9T patent/DK3504242T3/da active
- 2017-12-15 RU RU2019121895A patent/RU2753493C2/ru active
- 2017-12-15 AR ARP170103527A patent/AR110526A1/es unknown
- 2017-12-15 MA MA053184A patent/MA53184A/fr unknown
- 2017-12-15 BR BR112019012328-8A patent/BR112019012328A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2017-12-15 ES ES17826089T patent/ES2813057T3/es active Active
- 2017-12-15 EP EP17826089.9A patent/EP3504242B1/en active Active
- 2017-12-15 MY MYPI2019003403A patent/MY198059A/en unknown
- 2017-12-15 KR KR1020217041290A patent/KR20210157471A/ko active Application Filing
- 2017-12-15 UY UY0001037523A patent/UY37523A/es not_active Application Discontinuation
- 2017-12-15 WO PCT/US2017/066680 patent/WO2018112346A1/en unknown
- 2017-12-15 US US15/843,281 patent/US10556962B2/en active Active
- 2017-12-15 BR BR122020025629-0A patent/BR122020025629B1/pt active IP Right Grant
- 2017-12-15 CA CA3045940A patent/CA3045940A1/en not_active Abandoned
- 2017-12-15 SI SI201730380T patent/SI3504242T1/sl unknown
- 2017-12-15 AU AU2017377036A patent/AU2017377036B2/en not_active Ceased
- 2017-12-15 TW TW106144235A patent/TWI734879B/zh not_active IP Right Cessation
- 2017-12-15 PE PE2019001249A patent/PE20191403A1/es unknown
- 2017-12-15 CR CR20190330A patent/CR20190330A/es unknown
-
2018
- 2018-02-28 US US15/908,221 patent/US10040864B2/en active Active
- 2018-08-06 US US16/056,042 patent/US20180346593A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-06-03 IL IL267070A patent/IL267070A/en unknown
- 2019-06-13 DO DO2019000165A patent/DOP2019000165A/es unknown
- 2019-06-14 PH PH12019501357A patent/PH12019501357A1/en unknown
- 2019-06-14 CL CL2019001646A patent/CL2019001646A1/es unknown
- 2019-07-08 CO CONC2019/0007288A patent/CO2019007288A2/es unknown
- 2019-07-12 EC ECSENADI201950049A patent/ECSP19050049A/es unknown
- 2019-10-24 US US16/663,131 patent/US10604584B2/en active Active
-
2020
- 2020-02-20 US US16/796,622 patent/US20200181282A1/en not_active Abandoned
- 2020-08-11 HR HRP20201259TT patent/HRP20201259T1/hr unknown
- 2020-08-21 CY CY20201100785T patent/CY1123274T1/el unknown
- 2020-09-29 JP JP2020162944A patent/JP2021019603A/ja active Pending
- 2020-10-02 US US17/062,474 patent/US20210017289A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-12-23 US US17/560,664 patent/US20220112304A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA125041C2 (uk) | Анти-ox40 антитіла і їх застосування | |
| US10150815B2 (en) | Method of treating cancer with humanized anti-OX40 antibodies | |
| US11661462B2 (en) | Optimized cross-species specific bispecific single chain antibody contructs | |
| KR101719118B1 (ko) | 항-ox40 항체 및 그의 용도 | |
| JP2019165730A (ja) | Ｃｄｈ１９およびｃｄ３に対する抗体構築物 | |
| CN106939050B (zh) | 抗pd1和cd19双特异性抗体及其应用 | |
| JP2019515661A (ja) | Ｂｃｍａ結合分子及びその使用方法 | |
| JP2019519223A (ja) | 免疫調節タンパク質及び腫瘍抗原に結合する二重特異性結合タンパク質 | |
| UA123111C2 (uk) | Антитіло до cd40 та його застосування | |
| CN109476735A (zh) | Flt3和cd3的抗体构建体 | |
| JP2020534830A (ja) | 新規抗ＣＤ３ε抗体 | |
| CN102190728A (zh) | 一种新型人源化抗cd20单克隆抗体 | |
| JP2022502076A (ja) | 抗ｔｎｆｒ２抗体およびその使用 | |
| CN111454358A (zh) | 一种嵌合抗原受体及其应用 | |
| WO2021121250A1 (zh) | Bcma结合抗体及其用途 | |
| JP2021521893A (ja) | Ｔｉｍ−３に対する抗体およびその使用 | |
| US20220281990A1 (en) | Anti-tnfr2 antibodies and uses thereof | |
| CN110291107A (zh) | 靶向cd43的独特唾液酸糖基化的癌症相关表位的单克隆抗体 | |
| CN114075283A (zh) | 结合人cd38的抗体、其制备方法和用途 | |
| CN114106174A (zh) | 低毒性抗ox40抗体、其药物组合物及应用 | |
| CN115947855B (zh) | 抗cd24抗体的制备及其用途 |