JP2021521893A

JP2021521893A - Ｔｉｍ−３に対する抗体およびその使用

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Publication number: JP2021521893A
Application number: JP2021508051A
Authority: JP
Inventors: 李強; 薛▲トウ▼▲トウ▼; 鄭雲程; 肖亮; 劉登念; 孫見宇; 胡江江; 馬心魯; 朱康勇; 李媛麗
Original assignee: Ampsource Biopharma Shanghai Inc
Current assignee: Ampsource Biopharma Shanghai Inc
Priority date: 2018-04-24
Filing date: 2019-04-22
Publication date: 2021-08-30
Anticipated expiration: 2039-04-22
Also published as: WO2019206095A1; CN111886023A; EP3785732A1; KR20210027254A; AU2019258468A1; EP3785732A4; AU2019258468B2; CA3098096A1; CN111886023B; JP7328324B2; US20210238282A1; US11884725B2

Abstract

本発明は、ヒトＴＩＭ−３に対する抗体もしくはその抗原結合断片を提供し、前記抗体をコードする核酸分子、前記抗体を発現するための発現ベクターおよび宿主細胞、並びに前記抗体の生産方法を更に提供する。また、本発明は、前記抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物、および薬剤の調製における使用を更に提供し、前記薬剤は、様々な疾患（腫瘍、感染性疾患および自己免疫疾患を含む）を予防および／または治療するために使用される。
【選択図】なし

Description

本発明は、治療性モノクローナル抗体分野に属し、より具体的に、本発明は、ヒトＴＩＭ−３に対する抗体もしくはその抗原結合断片に関し、更に、前記抗体の抗感染、抗腫瘍および抗自己免疫疾患等における使用に関する。

Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン−３（Ｔ−ｃｅｌｌｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎａｎｄｍｕｃｉｎｄｏｍａｉｎ３、ＴＩＭ−３）は、近年、発見された重要な免疫検査点分子である。ＴＩＭ−３分子は１回膜貫通分子であり、その構造はＩｇＶサブユニット、ムチンドメイン様ドメイン、１回膜貫通ドメインおよびＴｙｒを豊富に含む細胞内ドメインを含む（非特許文献１）。ＩｇＶサブユニットは細胞の外側に位置し、ムチンドメイン様ドメインと共にリガンドの識別に関与する。

ＴＩＭ−３は、ＩＦＮ−γを分泌するＣＤ４^＋Ｔヘルパー細胞１（Ｔｈ１）およびＣＤ８^＋細胞毒性Ｔ細胞（Ｔｃ１）の表面で高発現する（非特許文献２）。ガレクチン−９（Ｇａｌｅｃｔｉｎ−９、Ｇａｌ−９）はＴＩＭ−３の天然リガンドの１つであり、Ｇａｌ−９は内因性ガラクトシド結合アグルチニンタンパク質のファミリーメンバーに属し、組織における分布は十分に広く、細胞の凝集、接着、分化、アポトーシス、腫瘍の転移および炎症反応の調節等の面で重要な役割を果たす。Ｇａｌ−９は、Ｔ細胞の表面のＴＩＭ−３と結合することにより、細胞内信号経路をトリガし、Ｔ細胞の機能枯渇またはアポトーシスを誘導し、免疫反応を低減し、自己免疫疾患、アレルギー疾患および拒絶反応で重要な調節作用を果たす。従って、ＴＩＭ−３はネガ型免疫調節分子と考えられる。その後、ＴＩＭ−３も、調節性Ｔ細胞（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｃｅｌｌ、Ｔｒｅｇ）、単核球、マクロファージ、樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ、ＤＣｓ）、ナチュラルキラー細胞（ｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌ、ＮＫ）等を含む天然免疫細胞の表面で発現されることが見出された（非特許文献３）。現在、ＴＩＭ−３／Ｇａｌ−９が複数種の細胞の免疫応答を調節でき、炎症、自己免疫疾患および腫瘍の発生発展に広く関与することが研究により実証された（非特許文献４、５、６及び７）。

近年、研究により、病原体の感染過程において、ＴＩＭ−３のＴ細胞での高発現はＴ細胞の機能枯渇と密に関連することが見出され、また、マクロファージでの発現も上昇することが見出され（非特許文献８及び９）、ＴＩＭ−３が感染免疫の過程においても重要な役割を果たすことが示唆された。Ｗａｎｇらは、ヒト結核菌に感染した患者において、末梢血単核球は、マウス抗ヒトＴＩＭ−３抗体によりＴＩＭ−３経路を遮断した後、Ｔ細胞によるＩＦＮ−γの生成を著しく強化することができ、Ｔ細胞枯渇を改善し、生体の結核菌に対する抵抗を強化することを見出した（非特許文献１０）。Ｊａｙａｒａｍａｎらは、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスが呼吸器を介して結核菌に感染した後、ＴＩＭ３−Ｉｇ融合タンパク質を注射すると、体内結核菌の除去を増強できることを見出した（非特許文献１１）。Ｍａらは、正常なまたはＨＣＶに感染したヒトＤＣ細胞がＴＩＭ−３抗体で遮断された後、抗原の摂取を増強し、成熟を加速し、ＩＬ−１２の分泌を増加させることができることを見出した（非特許文献１２）。Ｎｅｂｂｉａらは、組換えＴＩＭ３−Ｆｃ融合タンパク質でＴＩＭ−３経路を遮断することによりＨＢＶ特異性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の機能枯渇を改善できることを見出した。体外でＴＩＭ−３経路を遮断することにより、一部の慢性ＨＢＶ患者の末梢血単核球ＨＢＶの特異性ＣＤ８^＋Ｔ細胞にＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの発現を回復させることができることを見出した（非特許文献１３）。上記一連の研究により、ＴＩＭ−３抗体（アンタゴニスト抗体）または融合タンパク質（ＴＩＭ−３の細胞外ドメインのみで構成される）でその信号経路を遮断することにより体内および体外で免疫細胞の機能を逆転させ、生体の抗感染能力を増強できることがいずれも実証されている。従って、ＴＩＭ−３は抗感染免疫治療に用いられる１つの潜在的な介入標的である。

ＴＩＭ−３は、重要な免疫調整制御標的として、複数種の免疫細胞での異常発現が複数種の腫瘍の発生、発展に密に関連する。現在、ＴＩＭ−３の泌尿器系腫瘍、腎細胞癌、結腸癌、乳癌、血液腫瘍等の複数種の悪性腫瘍を含むＣＤ８^＋Ｔ細胞の表面での発現が上昇することが見出された。ＴＩＭ−３は、Ｔ細胞の機能枯渇を調節してその免疫応答を抑制することができ、閉鎖性抗体または融合タンパク質でＴＩＭ−３下流の信号を抑制することにより、Ｔ細胞から分泌されるＩＦＮ−γを増加させることができる。腎透明細胞癌、肝癌の体外実験において、モノクローナル抗体を用いてＴＩＭ−３／Ｇａｌ−９経路を抑制した後、腫瘍は顕著に抑制される（非特許文献１４及び１５）。抗ＴＩＭ−３モノクローナル抗体を皮下注射することにより、マウス体内のＥＩＡリンパ腫の成長を抑制することができる（非特許文献１６）。

従って、臨床的には、高い特異性および親和性、より低い毒副作用およびより良好な臨床薬効を有するＴＩＭ−３遮断抗体が差し迫って必要となり、これも腫瘍、感染性または自己免疫疾患の患者により多くの投薬の選択肢を提供する。

Lee J 他, Genes Immun, 2011年, 12: p.595-604 Rodriguez-Manzanet R 他, Immunol Rev, 2009年, 229(1): p.259-270 Andemon AC 他, Science, 2007年, 318 (5853): p.1141-1143 Anderson DE, Expert Opin Ther Targets, 2007年, 11(8): p.1005-1009 Anderson AC, Curr Opin Immunol, 2006年, 18(6): p.665-669 Degauque N 他, Transplantation, 2007年, 84: S12-16 Zhu C他, Nat Immunol, 2005年, 6: p.1245-1252 Gorman JV 他, J Immunol, 2014年, 192(7): p.3133-3142 Jost S他, Retrovirology, 2013年, 10: 74 Wang X 他, J Infect, 2011年, 62(4): p.292-300 Jayaraman P 他, J Exp Med, 2010年, 207(11): p.2343-2354 Ma CJ 他, PLoS One, 2014年, 9(1): e87821 Nebbia G 他, PLoS One, 2012年, 7(10): e47648 Komohara Y 他, Cancer Immunol Res, 2015年, 3(9): p.999-1007 Yan W 他, Gut, 2015年, 64(10): p.1593-1604 Fourcade J 他, Exp Med, 2010年, 207(10): p.2175-2186

本発明において、高い親和性および特異性でＴＩＭ−３と結合する抗体もしくはその抗原結合断片を開示する。抗体分子をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞、および抗体分子を製造するための方法を更に提供する。抗体分子を含む二重特異性抗体、多特異性抗体、および医薬組成物を更に提供する。また、本発明に開示される抗ＴＩＭ−３抗体もしくはその抗原結合断片（単独で、あるいは他の活性剤もしくは治療方式と組み合わせる）の、癌、感染性疾患、クローン病、敗血症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）および糸球体腎炎等の疾患を治療、予防および／または診断する薬剤の調製における使用を更に提供する。

第１の態様では、本発明は、ＴＩＭ−３と特異的に結合可能な抗体もしくはその抗原結合断片であって、前記抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）３つの重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ１の配列、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ１の配列と比べて具有１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ２の配列、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ２の配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ３の配列、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ３の配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ、
および／または、
３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲであって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ１の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ１の配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ２の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ２の配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ３の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ３の配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ、
または、
（ｂ）３つの重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ１の配列、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ１の配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ２の配列、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ２の配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ３の配列、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ３の配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ、
および／または、
３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲであって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ１の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ１の配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ２の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ２の配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ３の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ３の配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ、
から選ばれる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＴＩＭ−３と特異的に結合可能な抗体もしくはその抗原結合断片を提供する。

いくつかの好ましい実施形態において、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに記載の置換は保存的置換である。

いくつかの好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３、および／または前記軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれるＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３はＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＩＭＧＴ番号付けシステムにより定義される。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１１のいずれか１つに示すＶＨ
から選ばれる重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ、
および／または
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１２のいずれか１つに示すＶＬ
から選ばれる軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲ、
を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲおよび／または前記軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲはＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＩＭＧＴ番号付けシステムにより定義される。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ、および／または、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲを含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲおよび前記軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲはＩＭＧＴ番号付けシステムにより確定される。

いくつかの好ましい実施形態において、前記抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１８、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１８と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１９と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２０、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２０と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ、
および／または
（ｂ）３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲであって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２７、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２７と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２５、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２５と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２３、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２３と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ、
を含み、
前記重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲおよび前記軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲはＩＭＧＴ番号付けシステムにより定義される。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片のＶＨは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８に示すＣＤＲ−Ｈ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９に示すＣＤＲ−Ｈ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２０に示すＣＤＲ−Ｈ３を含み、且つ、前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＬは、ＳＥＱＩＤＮＯ：２７に示すＣＤＲ−Ｌ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２５に示すＣＤＲ−Ｌ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２３に示すＣＤＲ−Ｌ３を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ、および／または、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲ、
を含み、
前記重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲおよび前記軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムにより定義される。

いくつかの好ましい実施形態において、前記抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１７と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ、
および／または
（ｂ）３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲであって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２４、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２４と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２５、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２５と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２６、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２６相比１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ、
を含み、
前記重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲおよび前記軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムにより定義される。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片のＶＨは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６に示すＣＤＲ−Ｈ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７に示すＣＤＲ−Ｈ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示すＣＤＲ−Ｈ３を含み、且つ、前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＬは、ＳＥＱＩＤＮＯ：２４に示すＣＤＲ−Ｌ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２５に示すＣＤＲ−Ｌ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２６に示すＣＤＲ−Ｌ３を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ、および／または、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲ、または、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示す重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ、および／または、ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示す軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲ、
を含み、
前記重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲおよび前記軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲはＫａｂａｔ番号付けシステムにより定義される。

いくつかの好ましい実施形態において、前記抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１３と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１４と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ、
および／または
（ｂ）３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲであって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２１と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２２と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２３、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２３と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ、
を含み、
前記重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲおよび前記軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲはＫａｂａｔ番号付けシステムにより定義される。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片のＶＨは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３に示すＣＤＲ−Ｈ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４に示すＣＤＲ−Ｈ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示すＣＤＲ−Ｈ３を含み、且つ、前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＬは、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１に示すＣＤＲ−Ｌ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２に示すＣＤＲ−Ｌ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２３に示すＣＤＲ−Ｌ３を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、前記抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１３と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）の配列からなるＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２８、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２８相比１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ、
および／または、
（ｂ）３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲであって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２９、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２９と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３０、またはＳＥＱＩＤＮＯ：３０と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２３、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２３と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ、
を含み、
前記重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲおよび前記軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲはＫａｂａｔ番号付けシステムにより定義される。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片のＶＨは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３に示すＣＤＲ−Ｈ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２８に示すＣＤＲ−Ｈ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示すＣＤＲ−Ｈ３を含み、且つ、前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＬは、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９に示すＣＤＲ−Ｌ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０に示すＣＤＲ−Ｌ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２３に示すＣＤＲ−Ｌ３を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）の免疫グロブリンに由来するフレームワーク領域（ＦＲ）を更に含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片のＶＨは、マウス免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）のフレームワーク領域（ＦＲ）を含み、および／または前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＬは、マウス免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片のＶＨは、ヒト免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）のフレームワーク領域（ＦＲ）、および／または前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＬは、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。このような実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片の重鎖可変領域ＦＲおよび／または軽鎖可変領域ＦＲは、１つまたは複数の非ヒト由来（例えば、マウス由来）アミノ酸残基を含んでもよく、例えば、前記重鎖のフレームワーク領域ＦＲおよび／または軽鎖のフレームワーク領域ＦＲは、１つまたは複数のアミノ酸復帰変異を含んでもよく、これらの復帰変異には対応するマウス由来のアミノ酸残基がある。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）ヒト免疫グロブリンの重鎖のフレームワーク領域、または由来する配列と比べて最大で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で１５個、最大で１０個、または最大で５つの保存的置換、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの保存的置換）を有するヒト免疫グロブリンの重鎖のフレームワーク領域の変異体、および／または
（ｂ）ヒト免疫グロブリンの軽鎖のフレームワーク領域、または由来する配列と比べて最大で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で１５個、最大で１０個、または最大で５つの保存的置換、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの保存的置換）を有するヒト免疫グロブリンの軽鎖のフレームワーク領域の変異体、
を含む。

従って、いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片はヒト化したものである。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片のヒト化程度は、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％である。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）であって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：１、３、５、７、９、１１のいずれか１つに示す配列、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：１、３、５、７、９、１１のいずれか１つに示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：１、３、５、７、９、１１のいずれか１つに示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、
および／または
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：２、４、６、８、１０、１２のいずれか１つに示す配列、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：２、４、６、８、１０、１２のいずれか１つに示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：２、４、６、８、１０、１２のいずれか１つに示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、
を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に記載の置換は保存的置換である。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）であって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す配列、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す配列、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断は、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）であって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３に示す配列、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４に示す配列、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）であって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５に示す配列、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：６に示す配列、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：６に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：６に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）であって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示す配列、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示す配列、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）であって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示す配列、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示す配列、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）であって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１に示す配列、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示す配列、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（１）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す配列を有するＶＬ、
（２）ＳＥＱＩＤＮＯ：３に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：４に示す配列を有するＶＬ、
（３）ＳＥＱＩＤＮＯ：５に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：６に示す配列を有するＶＬ、
（４）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：８に示す配列を有するＶＬ、
（５）ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示す配列を有するＶＬ、または
（６）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示す配列を有するＶＬ、
を含む。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）の免疫グロブリンに由来する定常領域の配列またはその変異体を更に含み、前記変異体は、由来する配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加を有する。いくつかの好ましい実施形態において、前記変異体は、由来する配列と比べて１つまたは複数の保存的置換を有する。いくつかの実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は重鎖定常領域（Ｆｃ）を有し、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥの重鎖定常領域から選ばれ、特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の重鎖定常領域から選ばれ、更に、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４（例えば、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４である）の重鎖定常領域から選ばれる。いくつかの実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は軽鎖定常領域を有し、例えば、κまたはλの軽鎖定常領域から選ばれ、好ましくは、κ軽鎖定常領域（例えば、ヒトκ軽鎖）から選ばれる。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片の重鎖は、ヒト免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）またはその変異体を含み、前記変異体は、由来する配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、または最大で５つの置換、欠落、または追加、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有し、および／または、
本発明の抗体もしくはその抗原結合断片の軽鎖は、ヒト免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）またはその変異体を有し、前記変異体は、由来する配列と比べて最大で２０個の保存的置換（例えば、最大で１５個、最大で１０個、または最大で５つの保存的置換、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの保存的置換）を有する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片の重鎖はマウス免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）またはその変異体を有し、前記変異体は、由来する配列と比べて最大で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で１５個、最大で１０個、または最大で５つの保存的置換、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの保存的置換）を有し、および／または、
本発明の抗体もしくはその抗原結合断片の軽鎖はマウス免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）またはその変異体を有し、前記変異体は、由来する配列と比べて具有最大で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で１５個、最大で１０個、または最大で５つの保存的置換、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの保存的置換）を有する。

いくつかの実施形態において、定常領域が変更され、例えば、突然変異されて抗ＴＩＭ−３抗体分子の性質（例えば、Ｆｃ受容体の結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つ以上の特性を変更する）を修飾する。抗体の定常領域における少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基に置き換えることにより機能変更を生じ、例えば、抗体のエフェクターリガンド（例えば、ＦｃＲ、または補体Ｃ１ｑ）に対する親和性を変更することによりエフェクター機能（例えば、増強、低減、または消去）を変更する。抗体のＦｃ領域におけるアミノ酸残基を置き換えてそのエフェクター機能を変更する方法は、本分野で知られているものである（例えば、ＥＰ３８８、１５１Ａ１、ＵＳ５６４、８２６０、ＵＳ５６２、４８２１を参照）。抗体のＦｃ領域は、ＡＤＣＣ、貪食作用、ＣＤＣ等のようないくつかの重要なエフェクター機能を媒介する。ある場合、これらのエフェクター機能は、治療性抗体に必要であるが、他の場合、所望の目的に依存してこれらのエフェクター機能は不要であるか、更に有害である可能性がある。従って、いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、低減され、更に消去されたエフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性）を有する。Ｓ２２８Ｐ（ＥＵ命名法によるものであり、Ｋａｂａｔ命名法ではＳ２４１Ｐである）のようなヒトＩｇＧ４で抗体構造を安定させるアミノ酸変異も考えられる。

このような実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域の変異体を含み、前記変異体は、由来する野生型配列と比べて、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ、Ｌｅｕ２３４Ａｌａ、Ｌｅｕ２３５Ａｌａ、Ｇｌｙ２３７Ａｌａ、Ａｓｐ２６５Ａｌａ、Ａｓｎ２９７Ａｌａ、Ｐｒｏ３２９Ａｌａ、Ａｓｐ３５６ＧｌｕおよびＬｅｕ３５８Ｍｅｔという置換のうちの少なくとも１つを含む（上記アミノ酸位置はＥＵ番号付けシステムによる位置であり、ＥｄｅｌｍａｎＧＭら、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＵＳＡ、６３、７８−８５（１９６９）．ＰＭＩＤ：５２５７９６９）。

ある例示的な実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、由来する野生型配列と比べてＬｅｕ２３４Ａｌａ、Ｌｅｕ２３５Ａｌａの置換を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域の変異体（ＥＵ番号付けシステムによる位置）を有する。このような実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、低減されたＡＤＣＣおよびＣＤＣ活性を有する。

ある例示的な実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、由来する野生型配列と比べてＡｓｎ２９７Ａｌａの置換を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域の変異体を含む（ＥＵ番号付けシステムによる位置）。このような実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、消去されたＡＤＣＣ活性を有する。

ある例示的な実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、由来する野生型配列と比べてＡｓｐ２６５Ａｌａ、Ｐｒｏ３２９Ａｌａの置換を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域の変異体を含む（ＥＵ番号付けシステムによる位置）。このような実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、消去されたＡＤＣＣ活性を有する。

ある例示的な実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、由来する野生型配列と比べてＳｅｒ２２８Ｐｒｏの置換を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域の変異体を有する（ＥＵ番号付けシステムによる位置）。このような実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は構造が安定し、Ｆａｂ−ａｒｍの交換を低減することができ、半抗体を形成しにくくなる。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片の重鎖はヒト免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）の変異体を含み、前記変異体は、由来する野生型配列と比べてほぼ変化しないエフェクター機能を有する。このような実施形態において、前記変異体は、由来する野生型配列と比べて最大で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で１５個、最大で１０個、または最大で５つの保存的置換、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの保存的置換）を有することができる。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）重鎖であって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示す配列、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）軽鎖であって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示す配列、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖と、
を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）重鎖であって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４２に示す配列、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４２に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４２に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）軽鎖であって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４４に示す配列、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４４に示す配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４４に示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、至少９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖と、
を含む。

ある例示的な実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、
（１）ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示す配列を有する重鎖およびＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示す配列を有する軽鎖、または
（２）ＳＥＱＩＤＮＯ：４２に示す配列を有する重鎖およびＳＥＱＩＤＮＯ：４４に示す配列を有する軽鎖、
を含む。

本発明に開示された抗ＴＩＭ−３抗体もしくはその抗原結合断片は、ＴＩＭ−３の１種以上の活性を抑制、低減または中和することができ、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞における免疫検査点を遮断したり低減したりし、または抗原提示細胞を調整することにより免疫応答を再活性化させる。

一実施形態において、抗体分子、もしくはその抗原結合断片は、
ａ）１００ｎＭまたはより低い、好ましくは、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦１００ｐＭ、または≦１ｐＭのＫ_ＤでＴＩＭ−３（特に、ヒトＴＩＭ−３）と結合するという性質と、
ｂ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）測定におけるＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋、またはＣＤ８^＋Ｔ細胞）の増殖を増進するという性質と、
ｃ）ＭＬＲ測定におけるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）の産生を増進するという性質、
ｄ）ＭＬＲ測定におけるインターロイキン−２（ＩＬ−２）の分泌を増進するという性質、
ｅ）ＴＩＭ−３を発現する細胞、例えば、ＴＩＭ−３を発現する急性骨髄性白血病細胞に対して細胞毒性（抗体依存性細胞介在性細胞毒性、ＡＤＣＣ）を有するという性質、
ｆ）ＮＫ細胞の細胞毒性活性を増強するという性質、
ｇ）調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）またはマクロファージのサプレッサー活性を低減するという性質、または
ｈ）マクロファージまたは樹状突起細胞の免疫応答を刺激する能力を増大させるという性質、
のうちの少なくとも１種を示すことができる。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、以下のモノクローナル抗体から誘導されるか、または以下のモノクローナル抗体である。

ハイブリドーマ細胞株＃２２が産生するモノクローナル抗体であって、ハイブリドーマ細胞株＃２２は、中国典型培養物寄託センター（ＣＣＴＣＣ）（アドレス：中国．武漢．武漢大学）に寄託され、且つ、受託番号ＣＣＴＣＣＮＯ．Ｃ２０１７１８１を有する。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、キメラ抗体またはヒト化抗体である。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、二重特異性抗体、多特異性抗体から選ばれる。

本発明の第２態様において、本発明に係る抗ＴＩＭ−３抗体分子をコードするヌクレオチド配列を開示する。いくつかの実施形態において、前記抗ＴＩＭ−３抗体分子をコードするヌクレオチド配列は、コドンが最適化されたものである。例えば、本発明の特徴は、抗ＴＩＭ−３の抗体分子の重鎖および軽鎖可変領域の第１および第２核酸をそれぞれコードすることであり、該抗体分子は、Ｍａｂ２２、ＡＢ１２Ｓ３、ＡＢ１２Ｓ４、ＡＢ１２Ｓ５、ＡＢ１２Ｓ６およびＡＢ１２Ｓ７から選ばれるいずれかであるか、またはそれとほぼ同じ配列である。例えば、核酸は、表４に示すＡＢ１２Ｓ３およびＡＢ１２Ｓ４ヌクレオチド配列、またはそれとほぼ同じ配列（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、またはそれ以上に類似する配列、または１つ以上のヌクレオチド置換（例えば、保存的置換）を有する配列）、または表４に示す配列と３、６、１５、３０、または４５個以下のヌクレオチドが異なる配列を含んでもよい。

本発明の第３態様において、本発明は、本発明の分離した核酸分子を含むベクター（例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター）を提供する。いくつかの好ましい実施形態において、本発明のベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ファージ等である。いくつかの好ましい実施形態において、前記ベクターは、被験者（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）の体内で本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を発現することができる。

本発明の第４態様において、本発明は、本発明の分離した核酸分子または本発明のベクターを含む宿主細胞を提供する。宿主細胞は、真核細胞（例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞）または原核細胞（例えば、大腸菌）であってもよい。適当な真核細胞は、ＮＳ０細胞、Ｖｅｒｏ細胞、Ｈｅｌａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、およびＭＤＣＫＩＩ細胞を含んでもよいが、これらに限定されない。適当な昆虫細胞は、Ｓｆ９細胞を含んでもよいが、これらに限定されない。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の宿主細胞は哺乳動物細胞であり、例えば、ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ−Ｋ１、ＣＨＯ−Ｓ、ＣＨＯＤＸＢ１１、ＣＨＯＤＧ４４）である。

本発明の第５態様において、前記抗体もしくはその抗原結合断片の発現が許容される条件で、本発明の宿主細胞を培養することと、培養した宿主細胞培養物から前記抗体もしくはその抗原結合断片を回収することとを含む本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を調製する方法を提供する。

本発明の第６態様において、医薬的に許容されるベクターおよび／または賦形剤および／または安定剤と、少なくとも１種の本発明に記載の抗ＴＩＭ−３抗体分子とを含む医薬組成物を開示する。

いくつかの好ましい実施形態において、前記医薬組成物は別の薬学的活性剤を含んでもよい。いくつかの好ましい実施形態において、前記別の薬学的活性剤は抗腫瘍活性を有する薬剤である。いくつかの好ましい実施形態において、前記別の薬学的活性剤は感染を治療するための薬剤である。いくつかの好ましい実施形態において、前記別の薬学的活性剤は自己免疫疾患を治療するための薬剤である。

いくつかの好ましい実施形態において、前記医薬組成物で、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片と前記別の薬学的活性剤とは、分離した成分または同一組成物の成分として提供される。従って、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片と前記別の薬学的活性剤とは、同時に、分離してまたは順次投与することができる。

いくつかの実施形態において、本発明の医薬組成物は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ−４、ＯＸ４０、ＢＴＬＡ、４−１ＢＢ、ＣＤ９６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦ−Ｒ、ＫＩＲ、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＣＤ３、ＣＤ３０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、Ｂ７−Ｈ３およびその任意の組み合わせから選ばれる受容体またはリガンドと特異的に結合する第２抗体、または前記第２抗体をコードする核酸を更に含む。

いくつかの特定の実施形態において、前記第２抗体はヒトＰＤ−１と結合する抗体もしくはその抗原結合断片である。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、ヒトＰＤ−１と結合する抗体もしくはその抗原結合断片を含む。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物に含まれるヒトＰＤ−１と結合する抗体もしくはその抗原結合断片は、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ（ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）またはＯｐｄｉｖｏ（登録商標）またはオプジーボ）もしくはその抗原結合断片、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ（ペンブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）またはＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）またはキイトルーダ）もしくはその抗原結合断片から選ばれる。

いくつかの特定の実施形態において、前記第２抗体はヒトＰＤ−Ｌ１と結合する抗体もしくはその抗原結合断片である。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、ヒトＰＤ−Ｌ１と結合する抗体もしくはその抗原結合断片を含む。

いくつかの実施形態において、前記抗体もしくはその抗原結合断片は薬剤を調製するために使用され、前記薬剤は、（１）体外または被験者（例えば、ヒト）の体内で免疫細胞活性を向上させることと、（２）被験者（例えば、ヒト）において免疫応答を増強することと、（３）被験者（例えば、ヒト）において癌を治療することと、（４）被験者（例えば、ヒト）において感染性疾患を治療することと、（５）被験者（例えば、ヒト）において自己免疫疾患を治療することと、（６）（１）〜（５）の任意の組み合わせとの少なくともいずれか１つに用いられる。

本発明の第７態様において、治療対象におけるＴＩＭ−３により媒介される病症または疾患（例えば、癌、感染性疾患、自己免疫疾患）に対する薬剤の調製における使用を提供する。前記腫瘍は、固形腫瘍、血液腫瘍（例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫のような骨髄腫）および転移性病巣から選ばれ、癌の非限定的な実例は、肺癌（例えば、肺腺癌または非小細胞肺癌）（ＮＳＣＬＣ）（例えば、鱗状および／または非鱗状病歴を有するＮＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣ腺癌）、メラノーマ（例えば、末期メラノーマ）、腎癌（例えば、腎細胞癌）、肝癌（例えば、肝細胞癌）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、前立腺癌、乳癌（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、またはＨｅｒ２／ｎｅｕのうちの１種、２種、または全てを発現しない乳癌、例えば、三重陰性の乳癌）、卵巣癌、結腸直腸癌、膵臓癌、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ））、肛門癌、胃−食道癌（例えば、食道扁平上皮癌）、中皮腫、上咽頭癌、甲状腺癌、子宮頸癌、リンパ増殖性疾患（例えば、移植後のリンパ増殖性疾患）、または血液学的癌（例えば、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ−細胞リンパ腫、Ｂ−細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫）、または白血病（例えば、骨髄性白血病、またはリンパ球性白血病）から選ばれる。

一実施形態において、癌は、末期もしくは転移性癌、メラノーマ、または非小細胞肺癌のような肺癌から選ばれる。

一実施形態において、癌は肺癌であり、例えば、肺腺癌、非小細胞肺癌、または小細胞肺癌である。

一実施形態において、癌はメラノーマであり、例えば、末期メラノーマである。一実施形態において、癌は、他の治療に応答しない末期または切除不可能なメラノーマである。他の実施形態において、癌はＢＲＡＦ突然変異（例えば、ＢＲＡＦＶ６００突然変異）を有するメラノーマである。

別の実施形態において、癌は肝癌であり、例えば、ウイルス感染を有してもよく有しなくてもよい末期肝癌であり、例えば、慢性ウイルス性肝炎である。

別の実施形態において、癌は前立腺癌であり、例えば、末期前立腺癌である。

更なる実施形態において、癌は骨髄腫であり、例えば、多発性骨髄腫である。

更なる実施形態において、癌は腎癌であり、例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ）（例えば、転移性ＲＣＣ、または透明な細胞腎細胞癌（ＣＣＲＣＣ）、または腎乳頭細胞癌）である。

一実施形態において、腫瘍の微小環境は、レベルが上昇したＰＤ−Ｌ１発現を有する。あるいは、腫瘍の微小環境は、増加したＩＦＮγおよび／またはＣＤ８発現を有することができる。

いくつかの実施形態において、対象は、高いＰＤ−Ｌ１レベルまたは発現を有する１種または複数種の腫瘍に罹患したと同定されたか、または腫瘍浸潤型リンパ球（ＴＩＬ）^＋と同定されたか、または前述した２種の状況である。

いくつかの実施形態において、前記感染性疾患は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染および寄生虫感染から選ばれ、例えば、感染性疾患の非限定的な実例は、ＨＩＶ、（Ａ型、Ｂ型、またはＣ型）肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、または敗血症等を含む。

いくつかの実施形態において、前記自己免疫疾患は、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、インスリン依存性糖尿病、バセドウ病、重症筋無力症、自己免疫肝炎および多発性硬化症から選ばれる。

本発明の第８態様において、対象における免疫応答を調整（例えば、刺激または抑制）する方法を提供する。方法は、単独で、あるいは１種以上の活性剤（例えば、他の免疫調節剤と組み合わせる）または手術と組み合わせて本発明に開示された抗ＴＩＭ−３抗体分子（例えば、治療有効量の抗ＴＩＭ−３抗体分子）を対象に投与することにより、対象における免疫応答を調整することを含む。いくつかの実施形態において、抗体分子は、対象における免疫応答を増強、刺激、または増加する。いくつかの実施形態において、抗体分子は、対象における免疫応答を抑制、低減、または中和する。対象は、サル、霊長類のような哺乳動物であってもよく、好ましくは高等霊長類であり、例えば、ヒト（例えば、本発明に係る病症に罹患したまたは罹患する恐れがある患者）である。

本発明の第９態様において、対象癌または腫瘍を治療する（例えば、抑制するおよび／または進行を遅延させる）方法を提供する。該方法は、本発明に係る抗ＴＩＭ−３抗体分子、例えば、治療有効量の抗ＴＩＭ−３抗体分子を、単独で、あるいは１種または複数種の活性剤またはプログラムと組み合わせて対象に投与することを含む。特定の実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、共刺激分子の調節剤（例えば、共刺激分子のアゴニスト）または抑制分子の調節剤（例えば、免疫検査点分子の抑制剤）と組み合わせて投与され、例えば、本発明に記載されるとおりである。

本発明の第１０態様において、対象における癌または腫瘍細胞の成長を減少または抑制する（例えば、癌を治療する）方法を更に提供し、単独で、あるいは第２活性剤と組み合わせて本発明に記載の抗ＴＩＭ−３抗体分子、例えば、治療有効量の抗ＴＩＭ−３抗体分子を対象に投与することを含む。

本発明の第１１態様において、本発明に記載の抗ＴＩＭ−３抗体分子および取扱説明書を含む診断性または治療性キットを提供する。

本発明で調製される抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体は、ＴＩＭ−３との結合親和性が高く、且つ極めて強い特異性を有する。体内の抗腫瘍研究データにより、本発明に係るヒト化抗体がマウス移植腫瘍の成長を著しく抑制することができ、更に、一部のマウスの腫瘍が完全に消えることが示される。また、本発明に係る抗体は、ＣＨＯ細胞発現を採用し、生産量が高く、活性が高く、精製プロセスが簡単で、且つ生産コストが低いという利点を有する。

マウス由来抗体とヒトＴｉｍ−３抗原との結合能力の測定。５つの抗ヒトＴＩＭ−３ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３、ＡＢ１２Ｓ４、ＡＢ１２Ｓ５、ＡＢ１２Ｓ６およびＡＢ１２Ｓ７と、マウス由来抗体Ｍａｂ２２との重鎖可変領域のアミノ酸配列の並列比較である。５つの抗ヒトＴＩＭ−３ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３、ＡＢ１２Ｓ４、ＡＢ１２Ｓ５、ＡＢ１２Ｓ６およびＡＢ１２Ｓ７と、マウス由来抗体Ｍａｂ２２との軽鎖可変領域のアミノ酸配列の並列比較である。ヒト化抗体とヒトＴＩＭ−３抗原との結合能力の測定である。ヒト化抗体のＴｍ値の測定である。ＥＬＩＳＡによる抗体ＡＢ１２Ｓ３と異なる属種由来のＴＩＭ−３抗原との親和性である。ＥＬＩＳＡによる抗体ＡＢ１２Ｓ３とＴＩＭ−３抗原との特異的結合の検出である。ＨＴＲＦによるＡＢ１２Ｓ１、ＡＢ１２Ｓ３がＴＩＭ−３／Ｇａｌｅｃｔｉｎ−９結合を遮断する能力の検出である。競合ＥＬＩＳＡによるＡＢ１２Ｓ１、ＡＢ１２Ｓ３がＴＩＭ−３／ＰＳ結合を遮断する能力の検出である。ＣＤ８^＋Ｔ細胞の表面のＣＤ６９の発現に対するＡＢ１２Ｓ１、ＡＢ１２Ｓ３、ＡＢ１２Ｓ４の影響である。抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３が体外でＴ細胞の腫瘍細胞を殺傷する能力を増強する図である。ＡＢ１２Ｓ３抗体および対照抗体ＡＢ１２Ｓ１の遺伝子組み換えマウスの体内における薬効検出である。抗ヒトＴＩＭ−３ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３、陽性対照抗体ＡＢ１２Ｓ１の、ＳＥＢにより刺激されたドナーＡに由来するＰＢＭＣのＩＦＮ−γ分泌に対する促進作用である。抗ヒトＴＩＭ−３ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３、陽性対照抗体ＡＢ１２Ｓ１の、ＳＥＢにより刺激されたドナーＢに由来するＰＢＭＣのＩＦＮ−γ分泌に対する促進作用である。抗ヒトＴＩＭ−３ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３、およびそれとＯＰＤＩＶＯ（登録商標）との併用の、ドナーＡに由来するＭＬＲにおけるＩＦＮ−γ分泌に対する刺激作用である。抗ヒトＴＩＭ−３ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３、およびそれとＯＰＤＩＶＯ（登録商標）との併用の、ドナーＢに由来するＭＬＲにおけるＩＦＮ−γ分泌に対する刺激作用である。

［略称および定義］
ＴＩＭ−３Ｔ細胞の免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３
ＣＤＲＫａｂａｔ番号付けシステムで定義された免疫グロブリンの可変領域における相補性決定領域
ＥＣ_５０５０％の効果または結合を生じる濃度
ＥＬＩＳＡ酵素結合免疫吸着測定
ＦＲ抗体のフレームワーク領域：ＣＤＲ領域を除外する免疫グロブリンの可変領域
ＨＲＰ西洋ワサビペルオキシダーゼ
ＩＬ−２インターロイキン２
ＩＦＮインターフェロン
ＩＣ_５０５０％の抑制を生じる濃度
ＩｇＧ免疫グロブリンＧ
ＫａｂａｔＥｌｖｉｎＡＫａｂａｔにより提唱された免疫グロブリンの比較および番号付けシステム
ｍＡｂモノクローナル抗体
ＰＣＲポリメラーゼ連鎖反応
Ｖ領域異なる抗体の間の配列が可変なＩｇＧ鎖ドメインであり、軽鎖の１０９位のＫａｂａｔ残基および重鎖の１１３位目の残基まで延伸する
ＶＨ免疫グロブリンの重鎖可変領域
ＶＬ免疫グロブリンの軽鎖可変領域
ＶＫ免疫グロブリンκの軽鎖可変領域
Ｋ_Ｄ平衡解離定数
ｋａ結合速度定数
ｋｄ解離速度定数

本発明に使用される「ＴＩＭ−３」という用語は、アイソタイプ、哺乳動物（例えば、ヒト）のＴＩＭ−３、ヒトＴＩＭ−３の種相同体、およびＴＩＭ−３との共通エピトープを少なくとも１つ含む類似物を含む。ＴＩＭ−３（例えば、ヒトＴＩＭ−３）のアミノ酸配列は、本分野で知られているものであり、例えば、Ｓａｂａｔｏｓら、ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ、２００３、４（１１）：１１０２である。いくつかの実施形態において、本発明に係る抗体分子は哺乳動物（例えば、ヒトまたはカニクイザル）のＴＩＭ−３におけるエピトープ（例えば、線形または配座エピトープ）と特異的に結合する。いくつかの実施形態において、結合エピトープは、ヒトまたはカニクイザルＴＩＭ−３のＩｇＶドメインの少なくとも一部である。ヒトＴＩＭ−３のヌクレオチドおよびタンパク質の配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＦ２５１７０７．１およびＵｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｑ８ＴＤＱ０を参照することができる。

「抗体」という用語は、全長抗体（２本の重鎖および２本の軽鎖を含む）、その様々な機能性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、またはｓｃＦｖ断片のような抗原結合部分のみを含んでもよい）および修飾された抗体（例えば、ヒト化、グリコシル化等）を含む。本発明は、グリコシル化修飾を有する抗ＴＩＭ−３抗体を更に含む。いくつかの適用において、修飾して所望でないグリコシル化部位を除去し、例えば、オリゴ糖鎖でフコース修飾を行って抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）の機能を増強する。別の適用において、ガラクトース化修飾を行って補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を変更することができる。本発明における抗ＴＩＭ３抗体分子は、ヒト化される、キメラされる、ラクダ（ｃａｍｅｌｉｄ）、サメまたは体外で生成される抗体分子であってもよい。抗体および抗体断片は、任意の抗体タイプに由来してもよく、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含んでもよいが、これらに限定されず、且つ、任意の抗体サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）に由来してもよい。抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、または体外で生成される抗体であってもよい。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選ばれる重鎖定常領域を有してもよい。抗体は、例えば、κまたはλから選ばれる軽鎖を更に有してもよい。

「モノクローナル抗体またはｍＡｂ」という用語は、単一のクローン細胞株から得られた抗体を指し、前記細胞株は、真核、原核、またはファージのクローン細胞株に限定されない。モノクローナル抗体または抗原結合断片は、ハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージディスプレイ法、合成技術（例えば、ＣＤＲ−ｇｒａｆｔｉｎｇ）、または他の従来技術で組換えを行って得ることができる。

「抗体断片」および「抗原結合断片」とは、抗体の抗原結合断片および抗体類似物を意味し、通常、一部の親抗体（ｐａｒｅｎｔａｌａｎｔｉｂｏｄｙ）の抗原結合領域または可変領域（例えば、１つまたは複数のＣＤＲ）を少なくとも含む。抗体断片は、親抗体の少なくともいくつかの結合特異性を保留する。通常、モルに基づいて活性を示す場合、抗体断片は少なくとも１０％の親結合活性を保留する。好ましくは、抗体断片は、少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％、またはそれ以上のターゲットに対する親抗体の結合親和性を保留する。抗体断片の実例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦｖ断片と、ダイアボディと、線形抗体（ｌｉｎｅａｒａｎｔｉｂｏｄｙ）と、ＳｃＦｖ、モノクローナル抗体、ナノ抗体、単一ドメイン抗体のような一本鎖抗体分子と、抗体断片で形成された多特異性抗体を含んでもよいが、これらに限定されない。工学的改造された抗体変異体は、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、２００５、ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、２３：１１２６〜１１３６にまとめられた。

「Ｆａｂ断片」は、１本の軽鎖、１本の重鎖のＣＨ１、および可変領域からなる。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。

「Ｆｃ」領域には、抗体を含むＣＨ１およびＣＨ２ドメインという２つの重鎖断片が含まれる。２つの重鎖断片は、２つ以上のジスルフィド結合により、ＣＨ３ドメインの疎水作用で一体に保持される。

「Ｆａｂ’断片」は、１本の軽鎖および１本の重鎖のＶＨドメインと、ＣＨ１ドメインと、ＣＨ１とＣＨ２ドメインとの間の定常領域部分とを含み、これにより、２つのＦａｂ’断片の２本の重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合を形成してＦ（ａｂ’）_２分子を形成する。

「Ｆ（ａｂ’）_２断片」は、２本の軽鎖および２本の重鎖のＶＨドメインと、ＣＨ１ドメインと、ＣＨ１とＣＨ２ドメインとの間の定常領域部分とを含み、これにより、２本の重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合を形成する。従って、Ｆ（ａｂ’）_２断片は、２本の重鎖の間のジスルフィド結合により一体に保持された２つのＦａｂ’断片からなる。

「ＦＶ領域」は、重鎖と軽鎖との両者に由来する可変領域を含むが、定常領域が欠ける。

「一本鎖Ｆｖ抗体」（または「ｓｃＦｖ抗体」）とは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体断片を意味し、ここで、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。ｓｃＦｖのまとめについては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）ＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（モノクローナル抗体薬理学）、第１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅにより編集され、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、ＮｅｗＹｏｒｋ、２６９〜３１５ページを参照することができる。国際特許出願公開番号ＷＯ８８／０１６４９、米国特許第４９４６７７８号および第５２６０２０３号も参照する。

「抗原結合断片」は、重鎖可変領域または軽鎖可変領域鎖のみを含む免疫学的機能を有する免疫グロブリン断片である。抗原結合断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片と、（ｉｉ）ジスルフィド結合によりヒンジ領域で連結した２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）_２断片と、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片と、（ｉｖ）抗体の単一の腕のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片と、（ｖ）ＶＨドメインからなる二重抗体（ｄＡｂ）断片と、（ｖｉ）ラクダ（またはラクダ化可変ドメイン）と、（ｖｉｉ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と、（ｖｉｉｉ）単一ドメイン抗体とを含む。当業者に知られている複数の従来技術を含む任意の適当な方法を使用することにより、これらの抗体断片を取得することができ、且つ、完全な抗体と同じ方法で前記断片の用途を選別することができる。

本発明に使用される「超可変領域」または「ＣＤＲ領域」、または「相補性決定領域」という用語は、抗原結合を担当する抗体アミノ酸残基を意味する。ＣＤＲ領域の配列は、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａおよびＡｂＭ法で定義できるまたは本分野でよく知られている任意のＣＤＲ領域の配列確定方法で同定できる可変領域内のアミノ酸残基である。抗体ＣＤＲは、最初にＫａｂａｔらにより定義された高頻度可変領域と同定されてもよく、例えば、軽鎖可変ドメインの２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）位残基と、重鎖可変ドメインの３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）位残基であり、Ｋａｂａｔら、１９９１、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ（免疫ターゲットのタンパク質配列）、第５版、ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ、ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．を参照する。ＣＤＲの位置も、最初にＣｈｏｔｈｉａらにより述べられた「超可変リング」（ＨＶＬ）構造で定義されたものと同定されてもよく、例えば、軽鎖可変ドメインの２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）位残基と、重鎖可変ドメインの２６〜３２（Ｈ１）、５２〜５６（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）位残基（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら、ＪＭｏｌＢｉｏｌ、１９９２、２２７：７９９−８１７、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、ＪＭｏｌＢｉｏｌ、１９９２、２２７：７７６〜７９８を参照）である。ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）も、ＣＤＲを含む免疫グロブリンの可変領域の番号付けシステムを提供し、ＩＭＧＴ番号に応じてＣＤＲ領域を定義し、例えば、軽鎖可変ドメインの２７〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）位残基と、重鎖可変ドメインの２６〜３５（Ｈ１）、５１〜５７（Ｈ２）および９３〜１０２（Ｈ３）位残基であり、Ｌｅｆｒａｎｃ、Ｍ．Ｐ．らのＤｅｖＣｏｍｐＩｍｍｕｎｏｌ、２００３、２７：５５〜７７を参照し、引用により本発明に援用する。ＣＤＲの同定に用いられる他の方法は、「ＡｂＭ定義」を含み、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの間の折衷であり、ＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓＡｂＭ抗体モデルソフトウェアを用いて得られる。または、ＣＤＲの「接触定義」を含み、観察された抗原接触に基づき、ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２〜７４５に述べられた。ＣＤＲの「構成定義」方法において、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピー寄与する残基と同定されてもよく、例えば、Ｍａｋａｂｅら、２００８、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８３：１１５６〜１１６６を参照する。本発明に使用される方法は、これらの方法におけるいずれかにより定義されたＣＤＲを用いるか、または基づくことができ、Ｋａｂａｔ定義、ＩＭＧＴ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、接触定義および／または構成定義のうちのいずれかを含んでもよいが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、少なくとも１つ、２つ、または３つの本発明に記載の抗体の重鎖可変領域に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、該抗体は、例えば、Ｍａｂ２２、ＡＢ１２Ｓ３、ＡＢ１２Ｓ４、ＡＢ１２Ｓ５、ＡＢ１２Ｓ６およびＡＢ１２Ｓ７から選ばれる任意の抗体であるか、または表１に記載されるものであるか、または表４におけるヌクレオチド配列でコードされるものであるか、または上記配列におけるいずれかとほぼ同じ（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上に類似し、または１つ以上のアミノ酸の置換（例えば、保存的置換）を有する）配列である。いくつかの実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、少なくとも１つ、２つ、または３つの本発明に記載の抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、該抗体は、例えば、Ｍａｂ２２、ＡＢ１２Ｓ３、ＡＢ１２Ｓ４、ＡＢ１２Ｓ５、ＡＢ１２Ｓ６およびＡＢ１２Ｓ７から選ばれる任意の抗体であるか、または表１に記載されるものであるか、または表４におけるヌクレオチド配列でコードされるものであるか、または上記配列におけるいずれかとほぼ同じ（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上に類似し、または１つ以上のアミノ酸の置換（例えば、保存的置換）を有する）配列である。いくつかの実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの重鎖および軽鎖可変領域に由来するＣＤＲを含み、該重鎖および軽鎖可変領域は、表１または表４に示すヌクレオチド配列でコードされるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、表１または表４に示すヌクレオチド配列でコードされるＣＤＲに対し、ＣＤＲにおける１つ以上（または全てのＣＤＲ）は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上の変更を有し、例えば、アミノ酸の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠落を有する。

「フレームワーク領域」「可変フレームワーク領域」、「ＦＲ領域」という用語は、本発明で定義された超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。いくつかの実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子の軽鎖可変フレームワーク領域、または重鎖可変フレームワーク領域は、（ａ）少なくとも７０、７５、８０、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９％、または好ましくは１００％のヒト軽鎖または重鎖可変フレームワーク領域に由来するアミノ酸残基（例えば、ヒト成熟抗体、ヒト種系配列、またはヒト共有配列の軽鎖または重鎖可変フレームワーク領域残基に由来する）を含む軽鎖または重鎖可変フレームワーク領域、（ｂ）非ヒトフレームワーク領域（例えば、げっ歯類動物フレームワーク）、または（ｃ）免疫除去されたまたは部分的にヒト化されたフレームワークのような修飾された（例えば、抗原決定クラスタまたは細胞毒性決定クラスタを除去するように修飾された）非ヒトフレームワーク領域から選択できる。いくつかの実施形態において、軽鎖または重鎖可変フレームワーク領域は、ヒト生殖細胞遺伝子のＶＬまたはＶＨドメインのフレームワーク領域と少なくとも７０、７５、８０、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同じまたは類似する軽鎖または重鎖可変フレームワーク領域の配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、例えば、完全な可変領域（例えば、表１に示す）におけるＦＲ領域のアミノ酸配列に由来する、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、１０個、１５個、２０個、またはそれ以上の変更（例えば、アミノ酸の置換、挿入、または欠落）を有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、例えば、完全な可変領域（例えば、表１に示す）におけるＦＲ領域のアミノ酸配列に由来する、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、１０個、１５個、２０個、またはそれ以上の変更（例えば、アミノ酸の置換、挿入、または欠落）を有する軽鎖可変領域を含む。

「キメラ抗体（Ｃｈｉｍｅｒｉｃａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、マウス由来抗体の可変領域とヒト抗体の定常領域とを融合した抗体であり、マウス由来抗体による免疫応答反応を軽減することができる。任意の適当な組換えＤＮＡ技術によりキメラ抗体を産生することができる。一部は本分野で知られているものである（ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９、ＥＰ１８４１８７、ＥＰ１７１４９６、ＥＰ１７３４９４、ＷＯ８６／０１５３３、ＵＳ４８１６５６７、ＥＰ１２５０２３、Ｂｅｔｔｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８８、２４０：１０４１〜１０４３、Ｌｉｕら、ＰＮＡＳ、１９８７、８４：３４３９〜３４４３、Ｌｉｕら、ＪＩｍｍｕｎｏｌ、１９８７、１３９：３５２１〜３５２６、Ｓｕｎら、ＰＮＡＳ、１９８７、８４：２１４〜２１８、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、ＣａｎｃＲｅｓ、１９８７、４７：９９９〜１００５、Ｗｏｏｄら、Ｎａｔｕｒｅ、１９８５、３１４：４４６〜４４９、およびＳｈａｗら、ＪＮａｔｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ、１９８８、８０：１５５３〜１５５９を参照）。本発明の１つの好ましい実施形態において、前記ＴＩＭ−３キメラ抗体の抗体軽鎖可変領域は、マウス由来κ、λ鎖、またはその変異体の軽鎖ＦＲ領域を更に含む。前記ＴＩＭ−３キメラ抗体の抗体重鎖可変領域は、マウス由来ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはその変異体の重鎖ＦＲ領域を更に含む。ヒト抗体の定常領域は、ヒト由来ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４、またはその変異体の重鎖定常領域から選択でき、好ましくは、ヒト由来ＩｇＧ１またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む。

「多特異性抗体」という用語は、第１抗体もしくはその抗原結合断片と、他の抗体もしくはその抗原結合断片または抗体類似物とをカップリングすることにより形成され、且つ、そのうちの各抗体もしくはその抗原結合断片または抗体類似物は元の結合特異性を保持し、例えば、多特異性抗体は三重特異性抗体または四重特異性抗体である。「二重特異性抗体」という用語は、本発明の抗ＴＩＭ−３抗体もしくはその抗原結合断片が少なくとも２種の異なる結合部位または標的分子と結合する二重特異性抗体を生成するために、誘導化を行うまたは別のペプチドまたはタンパク質（例えば、腫瘍関連抗原、サイトカインおよび細胞表面受容体）のような別の機能性分子に連結することができることを意味する。本発明の二重特異性抗体を作成するために、本発明の抗体を、他種の抗体、抗体断片、ペプチド、または結合模倣物のような１種または複数種の他の結合分子に機能的に（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合、または他の方式）連結することにより、二重特異性抗体を生成することができる。例えば、「二重特異性抗体」とは、２つの可変ドメインまたはＳｃＦｖ単位を含むことにより、得られた抗体に２種の異なる抗原を識別させるものを意味する。

本発明に使用される「免疫結合」および「免疫結合性質」という用語とは、非共有相互作用を意味し、免疫グロブリン分子と抗原（該抗原にとって免疫グロブリンが特異的である）との間で発生する。免疫結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で示すことができ、ここで、Ｋ_Ｄ値が小さければ小さいほど、親和性は高い。選択されたポリペプチドの免疫結合性質は、本分野で公知の方法で定量することができる。１つの方法は、抗原結合部位／抗原複合物の形成および解離の速度の測定に関する。「結合速度定数」（ｋａまたはｋｏｎ）と「解離速度定数」（ｋｄまたはｋｏｆｆ）との両者は、いずれも濃度、会合および解離の実際の速度により計算できる。（ＭａｌｍｑｖｉｓｔＭ、Ｎａｔｕｒｅ、１９９３、３６１：１８６〜１８７を参照）。ｋｄ／ｋａの比率は解離定数Ｋ_Ｄに等しい（通常、Ｄａｖｉｅｓら、ＡｎｎｕａｌＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ、１９９０、５９：４３９〜４７３を参照）。任意の有効な方法でＫ_Ｄ、ｋａおよびｋｄ値を測定することができる。好ましい実施形態において、生物発光干渉測定法（例えば、実施例５．２に係るＦｏｒｔｅＢｉｏＯｃｔｅｔ法）で解離定数を測定する。他の好ましい実施形態において、表面プラズモン共鳴技術（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）またはＫｉｎｅｘａで解離定数を測定することができる。平衡結合定数（Ｋ_Ｄ）が≦１０μＭで、好ましくは≦１００ｎＭで、より好ましくは≦１０ｎＭで、最も好ましくは≦１００ｐＭ〜約１ｐＭである場合、本発明の抗体は、ＴＩＭ−３のエピトープに特異的に結合すると考えられる。

相同抗体

更なる態様において、本発明の抗体に含まれる重鎖および軽鎖可変領域が含むアミノ酸配列は、本発明に係る好ましい抗体のアミノ酸配列と相同し、且つ、前記抗体は本発明の抗ＴＩＭ−３抗体の所望の機能特性を保留する。

例えば、本発明は、ヒト化された結合ＴＩＭ−３の抗体もしくはその抗原結合断片を提供し、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、（ａ）前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯｓ：１、３、５、７、９および１１から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％が同じであるアミノ酸配列を含み、より好ましくは、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯｓ：１、３、５、７、９および１１から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が同じであるアミノ酸配列を含み、（ｂ）前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯｓ：２、４、６、８、１０および１２から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％が同じであるアミノ酸配列を含み、より好ましくは、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯｓ：２、４、６、８、１０および１２から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が同じであるアミノ酸配列を含む。

保存的修飾を有する抗体

「保存的修飾」という用語とは、アミノ酸修飾が該アミノ酸配列を含む抗体の結合特徴に著しく影響したり変更したりすることがないことを意味する。このような保存的修飾はアミノ酸の置換、追加および欠落を含む。修飾は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介のような本分野で知られている標準技術の利点により本発明の抗体に導入することができる。保存的アミノ酸の置換とは、アミノ酸残基を類似する側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えることを意味する。本分野では、類似する側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーについて詳しく説明している。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷の極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β−分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。従って、本発明の抗体ＣＤＲ領域における１つまたは複数のアミノ酸残基を同一側鎖ファミリーに由来する他のアミノ酸残基に置き換えることができる。

抗ＴＩＭ−３抗体の用途

本発明に開示された抗ＴＩＭ−３抗体分子は、ＴＩＭ−３の１種以上の活性を抑制、低減、または中和することができ、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞における免疫検査点を遮断するか、または抗原提示細胞を調整することにより免疫応答を再活性化させる。一実施形態において、抗体分子は、Ｔ細胞におけるＩＦＮ−γおよび／またはＴＮＦαの分泌を増強させる活性、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋Ｔ細胞）の増殖を増強させる活性、ＮＫ細胞の細胞毒性作用を増強させる活性、または調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）またはマクロファージのサプレッサー活性を低減させる活性、またはマクロファージまたは樹状突起細胞の免疫応答を刺激する能力を増大させる活性の１種以上を有する。従って、このような抗体分子を用いて対象における免疫応答を増強したい病症、例えば、癌、感染性疾患および自己免疫疾患を治療または予防することができる。

癌

いくつかの実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子を用いてＴＩＭ−３を発現する癌を治療する。ＴＩＭ−３を発現する癌は、子宮頸癌（Ｃａｏら、ＰＬＯＳＯｎｅ、２０１３、８（１）：ｅ５３８３４）、肺癌（Ｚｈｕａｎｇら、ＡｍＪＣｌｉｎＰａｔｈｏｌ、２０１２、１３７（６）：９７８〜９８５）（例えば、非小細胞肺癌）、急性骨髄性白血病（Ｋｉｋｕｓｈｉｇｅら、ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ、２０１０、７（６）：７０８〜１７）、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、メラノーマ（Ｆｏｕｒｃａｄｅら、ＪＥＭ、２０１０、２０７（１０）：２１７５）、腎癌（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ）、例えば、腎透明細胞癌、腎乳頭細胞癌、または転移性腎細胞癌）、扁平上皮癌、食道扁平上皮癌、上咽頭癌、結腸直腸癌、乳癌（例えば、エストロゲン受容体タンパク質、プロゲステロン受容体、またはＨｅｒ２／ｎｅｕのうちの１種、２種、または全てを発現しない乳癌、例えば、三重陰性の乳癌）、中皮腫、肝細胞癌および卵巣癌を含む。ＴＩＭ−３を発現する癌は転移性癌であってもよい。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子を用い、ＬＩＬＲＢ４（マクロファージ抑制性受容体）、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ６８、ＭＳＲ１、ＳＩＧＬＥＣ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ１６３、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、またはＣＤ１１ｃのようなマクロファージの細胞マーカーを特徴とする癌の１種以上を治療する。このような癌の実例は、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、多形性膠芽腫、腎臓腎透明細胞癌、膵臓癌、肉腫、肝臓肝細胞癌、肺腺癌、腎臓乳頭細胞癌、皮膚の皮膚メラノーマ、脳低レベル神経膠腫、肺扁平上皮癌、卵巣性嚢胞性腺腫、頭部および頸部扁平上皮癌、乳房浸潤性癌、急性骨髄性白血病、子宮頸部扁平上皮癌、子宮頸部内腺癌、子宮癌、結腸直腸癌、子宮体子宮内膜癌、甲状腺癌、膀胱尿路上皮癌、副腎皮質癌、腎容態細胞および前立腺癌を含んでもよいが、これらに限定されない。

いくつかの態様において、本発明は、対象における免疫応答を調整（例えば、刺激または抑制）する方法を提供する。方法は、単独で、あるいは１種以上の活性剤または手術と組み合わせて（例えば、他の免疫調節剤と組み合わせ）本発明に開示された抗ＴＩＭ−３抗体分子（例えば、治療有効量の抗ＴＩＭ−３抗体分子）を対象に投与し、対象における免疫応答を調整することを含む。いくつかの実施形態において、抗体分子は対象における免疫応答を増強、刺激、または増加する。いくつかの実施形態において、抗体分子は対象における免疫応答を抑制、低減、または中和する。

対象は、サル、霊長類のような哺乳動物であってもよく、好ましくは、ヒト（例えば、本発明に記載の病症に罹患したまたは罹患する恐れがある患者）のような高等霊長類である。いくつかの実施形態において、対象は免疫応答を増強する必要があり、いくつかの実施形態において、対象は免疫応答を抑制する必要がある。一実施形態において、対象は、本発明に係る病症を有するか、または本発明に係る癌および感染性病症のような本発明に係る病症に罹患する恐れがある。特定の実施形態において、対象は免疫が損なわれたものであるか、または免疫が損なわれる恐れがあるものである。例えば、対象は、化学療法および／または放射線療法を経験しているまたは経験した。あるいは、対象は、感染により免疫が損なわれたか、または免疫が損なわれる恐れがある。

１つの態様において、対象癌または腫瘍を治療する（例えば、抑制するおよび／または進行を遅延させる）方法を提供する。該方法は、本発明に係る抗ＴＩＭ−３抗体分子、例えば、治療有効量の抗ＴＩＭ−３抗体分子を、単独で、あるいは１種または複数種の活性剤またはプログラムと組み合わせて対象に投与することを含む。特定の実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、共刺激分子の調節剤（例えば、共刺激分子のアゴニスト）または抑制分子の調節剤（例えば、免疫検査点分子の抑制剤）と組み合わせて投与され、例えば、本発明に記載されるとおりである。

本開示は、対象における癌または腫瘍細胞の成長を減少または抑制する（例えば、癌を治療する）方法を更に提供し、単独で、あるいは第２活性剤と組み合わせて本発明に記載の抗ＴＩＭ−３抗体分子、例えば、治療有効量の抗ＴＩＭ−３抗体分子を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子（単独で、あるいは１種以上の免疫調節剤と組み合わせる）で治療する癌は、固形腫瘍、血液学腫瘍（例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫のような骨髄腫）および転移性病巣を含んでもよいが、これらに限定されない。一実施形態において、癌は固形腫瘍である。固形腫瘍の実例は悪性腫瘍を含み、例えば、肉腫および癌、例えば、各器官系の腺癌、例えば、肺、乳房、卵巣、リンパ、胃腸（例えば、結腸）、肛門、生殖器および泌尿生殖道（例えば、腎、尿道、膀胱細胞、前立腺）、咽頭、ＣＮＳ（例えば、脳、神経、または膠細胞）、頭頸部、皮膚（例えば、メラノーマ）および膵臓に影響を与えるもの、および悪性腫瘍を含む腺癌、例えば、結腸癌、腎癌、腎細胞癌、肝癌、非小細胞肺癌、小腸の癌および食道の癌である。癌は早期、中期、末期、または転移性癌であってもよい。

一実施形態において、癌は、肺癌（例えば、肺腺癌または非小細胞肺癌）（ＮＳＣＬＣ）（例えば、鱗状および／または非鱗状病歴を有するＮＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣ腺癌）、メラノーマ（例えば、末期メラノーマ）、腎癌（例えば、腎細胞癌）、肝癌（例えば、肝細胞癌）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、前立腺癌、乳癌（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、またはＨｅｒ２／ｎｅｕのうちの１種、２種、または全てを発現しない乳癌、例えば、三重陰性の乳癌）、卵巣癌、結腸直腸癌、膵臓癌、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ））、肛門癌、胃−食道癌（例えば、食道扁平上皮癌）、中皮腫、上咽頭癌、甲状腺癌、子宮頸癌、リンパ増殖性疾患（例えば、移植後リンパ増殖性疾患）、または血液学癌（例えば、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ−細胞リンパ腫、Ｂ−細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫）、または白血病（例えば、骨髄性白血病、またはリンパ球性白血病）から選ばれる。

別の実施形態において、癌は、癌（例えば、末期または転移性癌）、メラノーマ、または非小細胞肺癌のような肺癌から選ばれる。

一実施形態において、癌の微小環境は、レベルが上昇したＰＤ−Ｌ１発現を有する。あるいは、癌の微小環境は、増加したＩＦＮγおよび／またはＣＤ８発現を有することができる。

いくつかの実施形態において、対象は、高発現のＰＤ−Ｌ１を有する腫瘍に罹患したと同定されたか、または腫瘍浸潤型リンパ球（ＴＩＬ）^＋（例えば、数が増加したＴＩＬを有する）と同定されたか、または前述した２種の状況である。いくつかの実施形態において、対象は、高発現のＰＤ−Ｌ１かつＴＩＬ^＋の腫瘍に罹患したか、または罹患したと同定される。いくつかの実施形態において、本発明に記載の方法は、高発現のＰＤ−Ｌ１腫瘍かつＴＩＬ^＋に罹患したか、または同定されることに基づくことを更に含む。いくつかの実施形態において、ＴＩＬ^＋の腫瘍はＣＤ８およびＩＦＮγ陽性である。いくつかの実施形態において、対象は、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８および／またはＩＦＮγのうちの１つ、２つまたはそれ以上に対して陽性である細胞を高い百分率で有するか、または有すると同定される。いくつかの実施形態において、対象は、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８およびＩＦＮγが全て陽性である細胞を高い百分率で有するか、または有すると同定される。いくつかの実施形態において、対象は、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８および／またはＩＦＮγのうちの１つ、２つまたはそれ以上を有するか、または有すると同定され、且つ、鱗状細胞肺癌または肺腺癌のような肺癌、頭頸部癌、鱗状細胞子宮頸癌、胃癌、食道癌、甲状腺癌、メラノーマおよび／または上咽頭癌（ＮＰＣ）のうちの１種または複数種の癌に罹患したか、または罹患したと同定される。いくつかの実施形態において、本発明に記載の方法は、対象が、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８および／またはＩＦＮγのうちの１つ、２つまたはそれ以上、例えば、鱗状細胞肺癌または肺腺癌、頭頸部癌、鱗状細胞子宮頸癌、胃癌、甲状腺癌、メラノーマおよび／または上咽頭癌のうちの１種または複数種に罹患したか、または罹患したと同定されることに基づくことについて更に述べた。

いくつかの実施形態において、対象が罹患したまたは罹患したと同定された腫瘍は、高発現のＰＤ−１、高発現のＴＩＭ−３および／または調節性Ｔ細胞の腫瘍における高レベルの浸潤のうちの１種、２種、またはそれ以上の特徴を有する。いくつかの実施形態において、対象に罹患したまたは罹患したと同定された腫瘍は、高いＰＤ−１およびＴＩＭ−３レベルを有し、且つ腫瘍における調節性Ｔ細胞のレベルが上昇した。いくつかの実施形態において、本発明に記載の方法は、対象が、高い百分率のＰＤ−１^＋細胞、高い百分率のＴＩＭ−３^＋細胞、および／または調節性Ｔ細胞の腫瘍における高レベルの浸潤（例えば、数または百分率が増加したＴｒｅｇが腫瘍に存在する）という特徴のうちの１種、２種、またはそれ以上を有するかまたはそれに基づくと同定されることを更に含む。いくつかの実施形態において、本発明に記載の方法は、対象が、高い百分率のＰＤ−１^＋細胞、高い百分率のＴＩＭ−３^＋細胞、および／または調節性Ｔ細胞の腫瘍における高レベルの浸潤という特徴のうちのの１種、２種、またはそれ以上に罹患したかまたはをそれを有すると同定され、且つ肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、肝細胞性癌（例えば、肝細胞癌）、または卵巣癌（例えば、卵巣癌）のうちの１種または複数種に罹患したことに基づくことを更に含む。

感染性疾患

関する感染性生物または物質の種類に基づき、感染を細菌性、ウイルス性、真菌性、または寄生虫に広く分類する。他の一般的ではないタイプの感染は、例えば、リケッチア、マイコプラズマおよび物質に関する感染性疾患を含み、前記物質は、痒み、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）およびプリオン病（例えば、クールー病およびクロイツフェルト−ヤコブ病）の感染を引き起こす。感染を引き起こす細菌、ウイルス、真菌および寄生虫の実例は、本分野でよく知られているものである。感染は、急性、亜急性、慢性、または潜伏のものであってもよく、且つ、局所的または全身的なものであってもよい。複数種の実施形態において、単独で、あるいはアジュバントの形式でワクチンと組み合わせて抗ＴＩＭ−３抗体分子を用い、例えば、病原体または毒素に対する免疫応答を刺激することができる。このような治療方法がそれに対して特に有用である可能性のある病原体の実例は、現在それに対して特に有効なワクチンがない病原体、または通常のワクチンがそれに対して完全に有効でない病原体を含む。ＨＩＶ、（Ａ型、Ｂ型およびＣ型）肝炎、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア（Ｇｉａｒｄｉａ）、マラリア、リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）を含んでもよいが、これらに限定されない。

ＴＩＭ−３抗体の治療可能な感染した病原性ウイルスのいくつかの例は、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ−１、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩ、ＣＭＶ、ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイスル、呼吸器合抱体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス、虫媒性脳炎ウイルスおよびエボラウイルス（例えば、ＢＤＢＶ、ＥＢＯＶ、ＲＥＳＴＶ、ＳＵＤＶおよびＴＡＦＶ）を含む。

本発明の方法により予防、治療、または管理可能な炎症性疾患の実例は、喘息（ａｓｔｈｍａ）、脳炎（ｅｎｃｅｐｈｉｌｉｔｉｓ）、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｂｏｗｅｌｄｉｓｅａｓｅ）、慢性閉塞性肺疾患（ｃｈｒｏｎｉｃｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｅａｓｅ（ＣＯＰＤ））、アレルギー性疾患（ａｌｌｅｒｇｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、敗血性ショック（ｓｅｐｔｉｃｓｈｏｃｋ）、肺線維症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓ）、未分化脊椎関節症（ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ）、未分化関節症（ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ）、関節炎（ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、炎症性骨溶解（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｏｓｔｅｏｌｙｓｉｓ）、および慢性ウイルスまたは細菌の感染による慢性炎症を含んでもよいが、これらに限定されない。

従って、本発明の抗体およびその抗原結合断片は、炎症性および自己免疫疾患の治療において実用性を有する。

自己免疫疾患

免疫系の低減は、炎症、自己免疫疾患および移植抗宿主疾患（ＧｖＨＤ）の治療において所望されたものである。本発明の抗体を投与することにより治療できる自己免疫疾患の実例は、脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉａｇｒｅａｔａ）、強直性脊椎炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ）、抗リン脂質症候群（ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓｙｎｄｒｏｍｅ）、自己免疫アジソン病（ａｕｔｏ−ｉｍｍｕｎｅＡｄｄｉｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、腎上腺自己免疫疾患、自己免疫溶血性貧血（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｈｅｍｏｌｙｔｉｃａｎｅｍｉａ）、自己免疫肝炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、自己免疫卵巣炎および睾丸炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｏｏｐｈｏｒｉｔｉｓａｎｄｏｒｃｈｉｔｉｓ）、自己免疫血小板減少症（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）、ベチェット病（Ｂｅｈｃｅｔ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、水疱性類天疱瘡（ｂｕｌｌｏｕｓｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、心筋症（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、セリアックスプルー−皮膚炎（ｃｅｌｉａｃｓｐｒｕｅ−ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、慢性疲労免疫機能障害症候群（ｃｈｒｏｎｉｃｆａｔｉｇｕｅｉｍｍｕｎｅｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＣＦＩＤＳ））、慢性炎症性脱髄性多発性神経障害（ｃｈｒｏｎｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、Ｃｈｕｒｇ−Ｓｔｒａｕｓｓ症候群、瘢痕性類天疱瘡（ｃｉｃａｔｒｉｃａｌｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素病（ｃｏｌｄａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｄｉｓｅａｓｅ）、クローン病（Ｃｒｏｈｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、ディスコルプス（ｄｉｓｃｏｉｄｌｕｐｕｓ）、特発性混合性クリオグロブリン血症（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｍｉｘｅｄｃｒｙｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、線維筋痛−線維筋炎（ｆｉｂｒｏｍｙａｌｇｉａ−ｆｉｂｒｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）、腎小球腎炎（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、Ｇｒａｖｅｓ’病、Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ、橋本甲状腺炎（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ’ｓｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓ）、特発性肺線維症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓ）、特発性血小板減少性紫斑病（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃｐｕｒｐｕｒａ（ＩＴＰ））、ＩｇＡ神経疾患、若年性関節炎（ｊｕｖｅｎｉｌｅａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、扁平苔癬（ｌｉｃｈｅｎｐｌａｎｕｓ）、エリテマトーデス（ｌｕｐｕｓｅｒｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、メニエール病（Ｍｅｎｉｅｒｅ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、混合結合組織疾患（ｍｉｘｅｄｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｄｉｓｅａｓｅ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、視神経脊髄炎（Ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓｏｐｔｉｃａ（ＮＭＯ））、１型または免疫により媒介された糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ）、重症筋無力症（ｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ）、尋常性天疱瘡（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓｖｕｌｇａｒｉｓ）、悪性貧血（ｐｅｒｎｉｃｉｏｕｓａｎｅｍｉａ）、結節性多発動脈炎（ｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｉｓｎｏｄｏｓａ）、多発軟骨炎（ｐｏｌｙｃｈｒｏｎｄｒｉｔｉｓ）、多腺体症候群（ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）、リウマチ性多発筋痛症（ｐｏｌｙｍｙａｌｇｉａｒｈｅｕｍａｔｉｃａ）、多発性筋炎（ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ）および皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）、原発性アガンマグロブリン血症（ｐｒｉｍａｒｙａｇａｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、原発性胆汁性肝硬変（ｐｒｉｍａｒｙｂｉｌｉａｒｙｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、乾癬（ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、乾癬関節炎（ｐｓｏｒｉａｔｉｃａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、レイノールド現象（Ｒａｙｎａｕｌｄ’ｓｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ）、ライター症候群（Ｒｅｉｔｅｒ’ｓｓｙｎｄｒｏｍｅ）、関節リウマチ（Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、サルコイドーシス（ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ）、強皮症（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ症候群、スティッフパーソン症候群（ｓｔｉｆｆ−ｍａｎｓｙｎｄｒｏｍｅ）、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、エリテマトーデス（ｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、高安動脈炎（ｔａｋａｙａｓｕａｒｔｅｒｉｔｉｓ）、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎（ｔｅｍｐｏｒａｌａｒｔｅｒｉｓｔｉｓ／ｇｉａｎｔｃｅｌｌａｒｔｅｒｉｔｉｓ）、横断性脊髄炎（ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅｍｙｅｌｉｔｉｓ）、潰瘍性結腸炎（ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅｃｏｌｉｔｉｓ）、ブドウ膜炎（ｕｖｅｉｔｉｓ）、脈管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ）（例えば、疱疹状皮膚炎および血管炎（ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓｈｅｒｐｅｔｉｆｏｒｍｉｓａｎｄｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ））、白斑（ｖｉｔｉｌｉｇｏ）およびウェゲナー肉芽腫症（Ｗｅｇｅｎｅｒ’ｓｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ）を含んでもよいが、これらに限定されない。

検出方法およびキット

いくつかの態様において、本発明は、ＴＩＭ−３のサンプル（例えば、生物サンプル、例えば、血液、血清、精液、または尿、または組織生検サンプル（例えば、過度増殖性または癌性病巣に由来する））における存在またはそのレベルを（例えば、体外または体内で）検出する方法を提供する。該方法は、評価（例えば、監視対象における本発明に係る疾患（例えば、免疫病症、癌、または感染性疾患）の治療または進展、その診断および／または分期）に使用できる。該方法は、（ｉ）相互作用の発生が許容された条件で、サンプルと本発明に係る抗ＴＩＭ−３抗体分子とを接触させ、または前記抗ＴＩＭ−３抗体分子を対象に投与することと、（ｉｉ）抗体分子とサンプルとの間の複合物の形成が存在するか否かを検出することとを含んでもよい。複合物の形成は、ＴＩＭ−３が存在することを表し、且つ、本発明に係る治療の適当性またはニーズを示すことができる。該方法は、例えば、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、抗体分子複合のビーズ、ＥＬＩＳＡ測定法、ＰＣＲ−技術（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ）に関してもよい。一般的には、体内および体外の診断方法に使用される抗ＴＩＭ−３抗体分子は、検出信号を出力するように検出可能物質で直接または間接的にマークされる。適当な検出可能物質は、様々な生物活性酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質を含む。

別の態様において、本発明は、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を含むキットを提供する。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、検出可能なマーカーを有する。１つの好ましい実施形態において、前記キットは、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を特異的に識別する第２抗体を更に含む。好ましくは、前記第２抗体は検出可能なマーカーを更に含む。

本発明において、前記検出可能なマーカーは、蛍光、スペクトル、光化学、生物化学、免疫学、電気的、光学、または化学手段により検出可能な任意の物質であってもよい。特に好ましくは、このようなマーカーは、免疫学的検出（例えば、酵素結合免疫測定法、放射免疫測定法、蛍光免疫測定法、化学発光免疫測定法等）に適用できる。このようなマーカーは本分野でよく知られているものであり、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、塩基性ホスファターゼ、β−ガラクトシド酵素、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼ等）、放射性核種（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐ）、蛍光染料（例えば、フルオロレッセンスイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フルオレセイン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、フィコエリスリン（ＰＥ）、テキサスレッド、ローダミン、量子ドット、またはシアニン色素誘導体（例えば、Ｃｙ７、Ａｌｅｘａ７５０））、アクリチニウムエステル系化合物、磁気ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標））、金コロイドまたはカラーガラスまたはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックス等）ビーズのような熱測定マーカー、および上記マーカーにより修飾されたアビジン（例えば、ストレプトアビジン）を結合するためのビオチンを含んでもよいが、これらに限定されない。該マーカーの使用を教示する特許は、米国特許３８１７８３７、３８５０７５２、３９３９３５０、３９９６３４５、４２７７４３７、４２７５１４９、および４３６６２４１（全てを引用により本発明に援用する）を含んでもよいが、これらに限定されない。本発明に含まれるマーカーは、本分野の従来方法により検出できる。例えば、放射性マーカーは、撮影フィルムまたはシンチレーションカウンターにより検出でき、蛍光マーカーは、光検出器により検出でき、発射する光を検出する。酵素マーカーは、一般的に酵素に基質を提供して酵素の基質に対する作用により生成した反応生成物を検出することにより検出され、熱測定マーカーは、着色マーカーを簡単に可視化することにより検出される。いくつかの実施形態において、異なる長さのリンカーにより上記検出可能なマーカーを本発明の組換えタンパク質に連結し、潜在的な立体障害を低減することができる。

別の態様において、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片のキットの調製における使用を提供し、前記キットは、ＴＩＭ−３のサンプルにおける存在またはそのレベルを検出するために用いられる。

医薬組成物および組み合わせ療法

本発明に係る抗体は、単独で使用でき、あるいは他の治療剤または治療方法と併用することができる。ＴＩＭ−３抗体は、標準的な癌治療と組み合わせることもできる。

いくつかの好ましい実施形態において、前記医薬組成物は、別の薬学的活性剤を更に含んでもよい。いくつかの好ましい実施形態において、前記別の薬学的活性剤は抗腫瘍活性を有する薬剤である。いくつかの好ましい実施形態において、前記別の薬学的活性剤は感染を治療するための薬剤である。いくつかの好ましい実施形態において、前記別の薬学的活性剤は自己免疫疾患を治療するための薬剤である。

いくつかの特定の実施形態において、前記第２抗体はヒトＰＤ−１と結合する抗体もしくはその抗原結合断片である。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、ヒトＰＤ−１と結合する抗体もしくはその抗原結合断片を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物に含まれるヒトＰＤ−１と結合する抗体もしくはその抗原結合断片は、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ（ニボルマブまたはＯｐｄｉｖｏ（登録商標）またはオプジーボ）もしくはその抗原結合断片、およびＰｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ（ペンブロリズマブまたはＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）またはキイトルーダ）もしくはその抗原結合断片から選ばれる。

いくつかの実施形態において、前記抗体もしくはその抗原結合断片は薬剤を調製するために用いられ、前記薬剤は、（１）体外または被験者（例えば、ヒト）の体内で免疫細胞活性を向上させることと、（２）被験者（例えば、ヒト）において免疫応答を増強することと、（３）被験者（例えば、ヒト）において癌を治療することと、（４）被験者（例えば、ヒト）において感染性疾患を治療することと、（５）被験者（例えば、ヒト）において自己免疫疾患を治療することと、（６）（１）〜（５）の任意の組み合わせとの少なくともいずれか１つに用いられる。

いくつかの好ましい実施形態において、前記癌は、固形腫瘍、血液腫瘍（例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫のような骨髄腫）および転移性病巣から選ばれ、例えば、肺癌、鱗状細胞肺癌、メラノーマ、腎癌、乳癌、ＩＭ−ＴＮ乳癌、結腸直腸癌、白血病、または癌の転移性病巣を含んでもよいが、これらに限定されない。

いくつかの好ましい実施形態において、前記感染性疾患は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染および寄生虫感染から選ばれ、ＨＩＶ、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、または敗血症を含んでもよいが、これらに限定されない。

いくつかの好ましい実施形態において、前記自己免疫疾患は、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、インスリン依存性糖尿病、バセドウ病、重症筋無力症、自己免疫肝炎および多発性硬化症から選ばれる。

誘導された抗体

本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、誘導化を行うことができ、例えば、別の分子（例えば、別のポリペプチド、またはタンパク質）に連結され得る。通常、抗体もしくはその抗原結合断片の誘導化（例えば、マーカー）は、ＴＩＭ−３（特に、ヒトＴＩＭ−３）に対する結合に悪影響を与えない。従って、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、このような誘導化の形式も含むことを意図する。例えば、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を、別の抗体（例えば、二重特異性抗体を形成する）、検出試薬、薬用試薬、および／または媒介可能抗体、または抗原結合断片が別の分子と結合するタンパク質またはポリペプチド（例えば、アビジン、またはポリヒスチジンタグ）のような１つまたは複数の他の分子基に機能的に（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有接続、または他の方式により）連結することができる。

１タイプの誘導化抗体（例えば、二重特異性抗体）は、２つまたは多くの抗体（同一タイプまたは異なるタイプに属する）をクロス連結することにより生成されたものである。二重特異性抗体の取得方法は本分野で公知のものであり、その実例は、化学架橋法、細胞工学法（ハイブリドーマ法）、または遺伝子工学法を含んでもよいが、これらに限定されない。

別のタイプの誘導化抗体は、治療性部分に連結された抗体である。本発明に係る治療性部分は、細菌毒素、細胞毒性薬剤、または放射性毒素であり、その実例は、タキソール（ｔａｘｏｌ）、サイトカラシンＢ（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎＢ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、または他の抗代謝物、アルキル化剤、抗生物質、または抗有糸分裂薬を含んでもよいが、これらに限定されない。

別のタイプの誘導化抗体は、マークされた抗体である。例えば、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を検出可能なマーカーに連結することができる。本発明に係る検出可能なマーカーは、蛍光、スペクトル、光化学、生物化学、免疫学、電気的、光学、または化学手段により検出可能な任意の物質であってもよい。このようなマーカーは本分野でよく知られているものであり、その実例は、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、塩基性ホスファターゼ、β−ガラクトシド酵素、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼ、等）、放射性核種（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐ）、蛍光染料（例えば、フルオロレッセンスイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フルオレセイン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、フィコエリスリン（ＰＥ）、テキサスレッド、ローダミン、量子ドット、またはシアニン色素誘導体（例えば、Ｃｙ７、Ａｌｅｘａ７５０））、アクリチニウムエステル系化合物、磁気ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標））、金コロイドまたはカラーガラスまたはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックス等）ビーズのような熱測定マーカー、および上記マーカーにより修飾されたアビジン（例えば、ストレプトアビジン）を結合するためのビオチンを含んでもよいが、これらに限定されない。該マーカーの使用を教示する特許は、米国特許３８１７８３７、３８５０７５２、３９３９３５０、３９９６３４５、４２７７４３７、４２７５１４９、および４３６６２４１（全てを引用により本発明に援用する）を含んでもよいが、これらに限定されない。上記検出可能なマーカーは、本分野の従来方法により検出できる。例えば、放射性マーカーは、撮影フィルムまたはシンチレーションカウンターにより検出でき、蛍光マーカーは、光検出器により検出でき、発射する光を検出する。酵素マーカーは、一般的に酵素に基質を提供して酵素の基質に対する作用により生成した反応生成物を検出することにより検出され、熱測定マーカーは、着色マーカーを簡単に可視化することにより検出される。いくつかの実施形態において、このようなマーカーは、免疫学的検出（例えば、酵素結合免疫測定法、放射免疫測定法、蛍光免疫測定法、化学発光免疫測定法等）に適用できる。いくつかの実施形態において、異なる長さのリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）により上記検出可能なマーカーを本発明の抗体もしくはその抗原結合断片に連結し、潜在的な立体障害を低減することができる。

また、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片は、更に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メチル基、またはエチル基、またはグリコシル基のような化学基で誘導することができる。これらの基は、血清半減期ｎを増加するような抗体の生物学的特性の改善に使用できる。

モノクローナル抗体の調製

本発明のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、様々な技術により調製でき、通常のモノクローナル抗体の方法学、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、１９７５、２５６：４９５に記載の標準体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む。体細胞ハイブリダイゼーション規程が好ましいが、原則として、Ｂリンパ球のウイルスまたは癌性転換のようなモノクローナル抗体を調製する他の方法を使用してもよい。

ハイブリドーマを調製するための好ましい動物システムはマウス科動物システムである。マウスでハイブリドーマを調製することは非常に完備した規程である。融合に用いられる免疫された脾細胞を分離する免疫形態および技術は、本分野で知られているものである。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）および融合規程も知られている。

抗体もしくはその抗体断片を発現するために、標準分子生物学技術（例えば、ＰＣＲ拡張、またはターゲット抗体を発現するハイブリドーマを用いるｃＤＮＡクローン）によりコードされた部分または全長軽鎖および重鎖のＤＮＡを取得することができ、且つ、ＤＮＡを発現ベクターに挿入し、標的遺伝子と転写および翻訳調整制御された配列とを操作可能に連結し、宿主細胞をトランスフェクションして発現させることができ、発現宿主は、真核発現ベクターが好ましく、ＣＨＯおよびその誘導細胞系のような哺乳動物細胞がより好ましい。

抗体は、公知の技術、例えば、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇを用いるアフィニティクロマトグラフィーにより精製することができる。あるいは、特異性抗原もしくはそのエピトープをカラムに固定して免疫アフィニティクロマトグラフィーにより免疫特異性抗体を精製することができる。免疫グロブリンの精製は、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎにより論議された（ＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｓｔ、ＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｓｔ、Ｉｎｃ．、ＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａＰＡ、Ｖｏｌ．１４、Ｎｏ．８（２０００年４月１７日）、２５〜２８ページに公開されている）。

本発明のキメラまたはヒト化抗体は、上記調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製できる。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、ターゲットマウスハイブリドーマから取得でき、且つ、非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含むように標準分子生物学技術を用いて工学的改造を行う。例えば、キメラ抗体を作成するために、本分野の従来方法を用いてマウス可変領域をヒト定常領域に連結することができる（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらの米国特許Ｎｏ．４，８１６，５６７を参照）。ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に操作可能に連結することにより、ＶＨ領域をコードする分離したＤＮＡを全長重鎖遺伝子に変換する。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は本分野で知られているものであり（例えば、Ｋａｂａｔ、Ｅ．Ａ．ら、１９９１、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ、Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１−３２４２を参照）、これらの領域を含むＤＮＡ断片は、標準ＰＣＲ拡張により取得できる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＤ定常領域であってもよいが、最も好ましくはＩｇＧ１、またはＩｇＧ４定常領域である。

ヒト化抗体を作成するために、本分野の従来方法を用いてマウスＣＤＲ領域をヒト由来フレーム配列に挿入することができる（Ｗｉｎｔｅｒの米国特許Ｎｏ．５，２２５，５３９およびＱｕｅｅｎらの米国特許Ｎｏｓ．５，５３０，１０１、５，５８５，０８９、５，６９３，７６２および６，１８０，３７０を参照）。更に、遺伝子組み換え動物を利用することもでき、例えば、ＨｕＭＡｂマウス（Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｉｎｃ．）が、転位のないヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子のマイクロ遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｉ）に加え、内因性μおよびκ鎖遺伝子座を失活させる標的突然変異（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ３６８（６４７４）：８５６〜８５９を参照）を含み、または、ヒト重鎖遺伝子組み換えおよびヒト軽鎖トランスフェクション色体を携帯する「ＫＭマウス^ＴＭ」（特許ＷＯ０２／４３４７８を参照）が抗体ヒト化改造を行う。他の抗体ヒト化改造の方法はファージディスプレイ法を含む。

以下の実施例により本発明について更に説明し、前記実施例は、更に限定するものと解釈すべきではない。ここで、明細書全体に引用される全ての図面および全ての参照文献、特許、および公開特許の出願内容を、参照として本発明に明確に援用する。

実施例１：抗ヒトＴＩＭ−３マウス由来モノクローナル抗体の調製

５０μｇのヒトＴＩＭ−３抗原（（安源医薬（上海）有限公司、通常方法で発現したＴＩＭ−３であり、細胞外ドメインにＨｉｓタグが付き、タンパク質配列：Ｕｎｉｐｏｒｔｅｎｔｒｙ号Ｑ８ＴＤＱ））を、完全フロイントアジュバントで十分に乳化した後、多点免疫方式で雄性Ｂａｌｂ／Ｃマウスを免疫し、免疫周期が３週間に１回であった。３回目の免疫後の１０日目に、尾静脈から採血し、ＥＬＩＳＡで血漿の抗ヒトＴＩＭ−３抗体の滴度をテストし、マウス免疫応答程度を監視し、その後、融合の３日前に、生成した抗ヒトＴＩＭ−３抗体の滴度が最も高いマウスに対して免疫を１回強化した。３日後に、マウスを殺して該マウスの脾臓を取り出してマウスの骨髄腫Ｓｐ２／０細胞株と融合した。２×１０^８個のＳｐ２／０細胞と２×１０^８個の脾細胞とを混合し、５０％のポリエチレングリコール（分子量１４５０）および５％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の溶液内で融合させた。Ｉｓｃｏｖｅ培地（１０％のウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、０．１ｍＭのヒポキサンチン、０．４μＭのアミノプテリン、および１６μｇのチミジンを含む）で脾臓細胞数を５×１０^５／ｍＬに調整し、０．３ｍＬで９６孔培養プレートの孔内に入れ、３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベータ内に置いた。１０日間培養した後、高スループットＥＬＩＳＡ法で上清における抗体とＴＩＭ３−Ｈｉｓとが高親和結合したクローンをそれぞれ検出した。更に、上記モノクローナル抗体の孔内融合細胞をサブクローン化した。更に、ＨＴＲＦの方法により、ヒトＧａｌｅｃｔｉｎ−９と競合してＴＩＭ−３と結合した陽性孔をスクリーニングし（方法は、実施例５．６の抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体のＴＩＭ−３／Ｇａｌｅｃｔｉｎ−９結合に対する遮断のテストを参照）、ハイブリドーマ細胞株＃２２を取得した。

１０％のＦＣＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培地で特異性抗体を生成したクローンを培養した。細胞密度が約５×１０^５個の細胞／ｍＬに達すると、該培地を無血清培地に置き換えた。２〜４日後に、培養した培地を遠心して培養物上清を収集した。タンパク質Ｇカラムで抗体を精製した。１５０ｍＭのＮａＣｌでモノクローナル抗体の溶出液を透析した。０．２μｍのフィルタで透析した溶液を濾過して除菌し、テスト待ちの精製したマウスモノクローナル抗体Ｍａｂ２２を取得した。

実施例２：ＥＬＩＳＡ法によるマウス由来抗体とヒトＴＩＭ−３抗原との結合能力の測定

ヒトＴＩＭ−３（（安源医薬（上海）有限公司が発現したＴＩＭ−３であり、細胞外ドメインにＨｉｓタグが付き、タンパク質配列：Ｕｎｉｐｏｒｔｅｎｔｒｙ号Ｑ８ＴＤＱ））で酵素標識プレートを被覆し、室温で一晩培養した。被覆溶液を捨て、リン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ）に溶解した脱脂乳で各孔を０．５時間閉鎖し、０．０５％のツイン−２０（Ｔｗｅｅｎ−２０）を含むＰＢＳで孔を洗浄した。その後、孔毎に５０μＬの精製した抗ヒトＴＩＭ−３マウス由来抗体Ｍａｂ２２を加え、室温で１時間インキュベートし、０．０５％のツイン（Ｔｗｅｅｎ）２０を含むＰＢＳで孔を洗浄し、その後、孔毎に５０μＬのＨＲＰでマークされた羊抗マウスＩｇＧポリクローナル抗体（ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙから購入）を検出抗体として加えた。

結果は、図１に示すように、マウス由来抗体Ｍａｂ２２およびヒトＴＩＭ−３は高い親和性を有し、ＥＣ_５０は６．３０ｎｇ／ｍＬであった。

実施例３：抗ＴＩＭ−３マウス由来モノクローナル抗体のサブタイプの同定および可変領域の拡張

抗体のサブタイプの同定：ハイブリドーマ細胞の培養上清を取り、ＩｓｏＳｔｒｉｐ^ＴＭマウスモノクローナル抗体のサブタイプ同定キット（ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、品番ｓｃ−２４９５８）で抗体のサブタイプを同定した。マウスモノクローナル抗体Ｍａｂ２２のサブタイプは、ＩｇＧ１（Ｋａｐｐａ）型であると同定された。

抗体の可変領域の拡張：候補ハイブリドーマ細胞＃２２を総数１０７個の細胞に培養し、１０００ｒｐｍで１０分間遠心して細胞を収集し、Ｔｒｉｚｏｌキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で総ＲＮＡを抽出し、逆転写キットＳＭＡＲＴｅｒＲＡＣＥで第１鎖ｃＤＮＡを合成し、第１鎖ｃＤＮＡを後続のテンプレートとしてハイブリドーマ細胞に対応する抗体可変領域のＤＮＡ配列を拡張した。サブタイプの同定結果に基づき、該抗体サブタイプの重鎖および軽鎖定常領域の配列を取得し、特異的なネスティッドＰＣＲプライマーを設計し、該拡張反応に使用されるプライマー配列は抗体可変領域の第１フレーム領域は定常領域と相補的であった。通常のＰＣＲ方法を用いて標的遺伝子を拡張し、拡張した生成物を配列決定した後、ハイブリドーマクローン＃２２分泌抗体Ｍａｂ２２の重鎖可変領域の配列ＳＥＱＩＤＮＯ：１および軽鎖可変領域の配列ＳＥＱＩＤＮＯ：２を取得した。ハイブリドーマ細胞株＃２２は、既に２０１７年１０月２５日に中国典型培養物寄託センターに寄託された（受託番号ＣＣＴＣＣＮＯ：Ｃ２０１７１８１）。

実施例４：抗ＴＩＭ−３マウスモノクローナル抗体のヒト化

上記で取得されたＭａｂ２２マウス由来抗体可変領域の配列に基づき、コンピュータ補助抗体の３次元モデリングおよび構造分析により抗体のヒト化改造を行った。ＣＤＲ移植（ＣＤＲ−Ｇｒａｆｔｉｎｇ）は、よく見られる抗体ヒト化方法であり、マウス由来抗体のＦＲをヒト由来抗体のＦＲに置き換えることにより、活性を保持して免疫原性を低減する目的を達成した。ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＳｔｕｄｉｏ分析ツールと合わせてＣＤＲ移植抗体のヒト化改造を行う方法は、主に以下のステップを含んだ。（１）抗体の３次元構造をモデリングした。（２）重要な残基を分析する。分子ドッキングを用いて可変領域およびその周辺のフレームアミノ酸配列を分析し、その空間立体結合方式を考察してＣＤＲ領域コンフォメーションの保持に極めて重要な残基を確定し、主に、１、２つのドメインの折り畳みに重要な作用を果たすＶＬとＶＨとの結合界面に位置する残基と、２、ＣＤＲ領域に近く、且つタンパク質内部に埋められた残基と、３、ＣＤＲ領域と直接な相互作用を有する残基との３種類を有し、相互作用は疎水相互作用／水素結合／塩橋を含んだ。（３）ヒト由来テンプレートを選択し、まず、各ハイブリドーマ細胞が分泌した抗体アミノ酸配列とヒト生殖系抗体アミノ酸配列とを比較し、相同性が高い配列を見つけ、次に、そのうちのＭＨＣＩＩ（ＨＬＡ−ＤＲ）との親和性が低いヒト生殖系（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）抗体フレーム配列を選択し、その免疫原性を低減するという２つの条件を同時に満足する必要があった。（４）重要な残基の分析の逆接ぎ木に基づき、ヒト化抗体の配列を取得した。

合計５つのヒト化抗体を取得し、それぞれＡＢ１２Ｓ３、ＡＢ１２Ｓ４、ＡＢ１２Ｓ５、ＡＢ１２Ｓ６およびＡＢ１２Ｓ７であった。５つのヒト化抗体およびその親マウス由来抗体の可変領域のアミノ酸配列は表１に示すとおりである。

図２は、５つのヒト化抗体とマウス由来抗体Ｍａｂ２２との重鎖可変領域のアミノ酸配列の並列比較を示す。図３は、５つのヒト化抗体とマウス由来抗体Ｍａｂ２２とのの軽鎖可変領域のアミノ酸配列の並列比較を示す。可変領域において、相補性決定領域（ＣＤＲｓ）およびフレームワーク領域（ＦＲｓ）は示すとおりであり、重鎖および軽鎖可変領域ＣＤＲはＩＭＧＴ法で定義される。

本発明で調製されたマウス由来モノクローナル抗体Ｍａｂ２２およびそれにより誘導された５つのヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３、ＡＢ１２Ｓ４、ＡＢ１２Ｓ５、ＡＢ１２Ｓ６、およびＡＢ１２Ｓ７の可変領域に含まれるＣＤＲ領域のアミノ酸配列は、表２に示すように、それぞれＫａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａおよびＩＭＧＴ方法で定義される。

２本の重鎖および２本の軽鎖からなる全長抗体配列を取得するために、表１に示すＶＨおよびＶＬ配列と抗体の重鎖定常領域（好ましくは、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４から選ばれる）および軽鎖定常領域（好ましくは、ヒトκ軽鎖から選ばれる）の配列とを通常の技術でステッチングするまたは組み立てる。例えば、一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は表３に示す野生型ヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域およびヒトκ軽鎖定常領域を含む。または、修飾されたヒトＩｇＧ４定常領域の配列を採用し、例えば、一実施形態において、表３に示すように、抗ＴＩＭ−３抗体分子はＥＵ番号に基づく２２８位目の突然変異（例えば、ＳがＰに変化する）のヒトＩｇＧ４に含まれる。別の実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は野生型ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域およびヒトκ軽鎖定常領域を含む。または、修飾されたヒトＩｇＧ１定常領域の配列を採用し、例えば、表３に示すように、ヒトＩｇＧ１はＥＵ番号に基づく２９７位目で置換（例えば、ＡｓｎをＡｌａに置換する）を含む。別の実施形態において、表３に示すように、ヒトＩｇＧ１はＥＵ番号に基づく２６５位目で置換を含むか、ＥＵ番号に基づく３２９位目で置換を含むか、またはこの２種の置換（例えば、２６５位目でＡｓｐをＡｌａに置換する、および／または３２９位目でＰｒｏをＡｌａに置換する）を含む。更なる実施形態において、表３に示すように、ヒトＩｇＧ１はＥＵ番号に基づく２３４位目で置換を含むか、ＥＵ番号に基づく２３５位目で置換を含むか、またはこの２種の置換（例えば、２３４位目でＬｅｕをＡｌａに置換する、および／または２３５位目でＬｅｕをＡｌａに置換する）を含む。

表４に示すように、ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３およびＡＢ１２Ｓ４は、ＥＵ番号に基づく２２８位目の突然変異（ＳがＰに変化した）のヒトＩｇＧ４およびヒトκ軽鎖定常領域に含まれる。抗Ｔｉｍ−３による抗体の機能発揮の遮断にはＡＤＣＣおよびＣＤＣ効果が必要としないため、ＡＢ１２Ｓ３およびＡＢ１２Ｓ４の定常領域はヒトＩｇＧ４を優先的に選択するが、ＩｇＧ４は半抗体を形成しやすく（Ｆａｂ−ａｒｍの交換が発生した）、従って、Ｓ２２８Ｐ改造を行うことにより、Ｆａｂ−ａｒｍの交換を低減することができる。

実施例５：抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体の定性

５．１抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体とヒトＴＩＭ−３との結合能力の測定

通常のＥＬＩＳＡ方法を採用してヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３およびＡＢ１２Ｓ４のヒトＴＩＭ−３（（安源医薬（上海）有限公司が発現したＴＩＭ−３であり、細胞外ドメインにＨｉｓタグが付き、タンパク質配列：Ｕｎｉｐｏｒｔｅｎｔｒｙ号Ｑ８ＴＤＱ））抗原と結合する能力を測定し、具体的な方法は実施例２と同じであった。結果は図４に示すように、ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３およびＡＢ１２Ｓ４は、対照抗体ＡＢ１２Ｓ１（ＡＢ１２Ｓ１可変領域の配列は、米国特許９６０５０７０における抗ＴＩＭ−３抗体ＡＢＴＩＭ３に由来し、本発明において、その重鎖のアミノ酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：４６で、軽鎖のアミノ酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：４７である）と同じであり、いずれもヒトＴＩＭ−３抗原と特異的に結合することができた。一方、別の陰性対照としてのヒト化ＩｇＧ非相関抗体は、ヒトＴＩＭ−３と結合できなかった。

５．２抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体の親和性分析試験

生物薄膜干渉技術（ＢＬＩ）を用いて精製したヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３、ＡＢ１２Ｓ４、ＡＢ１２Ｓ５、ＡＢ１２Ｓ６およびＡＢ１２Ｓ７と抗原との結合親和性定数を測定した（ＦｏｒｔｅＢｉｏＯｃｔｅｔＲＥＤ＆ＱＫシステム、ＰＡＬＬ社）。抗ヒトＩｇＧＦｃのポリクローナル抗体は、アミノカップリング法によりＣＭ５チップの表面に固定され、ヒト化抗体が流れてポリクローナル抗体と作用してチップの表面に捕獲され、抗原タンパク質を移動相とし、抗体の表面を流れてそれと相互作用した。得られたデータを処理し、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００の分析ソフトウェアを用いて１：１で結合したモデルで実験データをフィッティングし、フィッティングしたデータは実験データとほぼ重なり、結合および解離速度定数ｋａおよびｋｄを取得し、ｋｄでｋａを割って平衡解離定数Ｋ_Ｄを得た（表５を参照）。その結果、得られたヒト化抗体の親和性に明らかな損失がなく、候補抗体ＡＢ１２Ｓ３、ＡＢ１２Ｓ４、ＡＢ１２Ｓ５、ＡＢ１２Ｓ６およびＡＢ１２Ｓ７は、ヒトＴＩＭ−３との結合親和性がマウス抗Ｍａｂ２２との親和性にも相当し、Ｋ_Ｄ値はいずれもｐＭ級に達し、親マウスのモノクローナル抗体の親和性を良好に保留し、その免疫原性を大きく低減した。

５．３抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体のＴｍ値の測定

ＤＳＦ（示差走査蛍光測定）方法で抗ＴＩＭ−３抗体のＴｍ値を測定した。具体的な実験ステップは以下のとおりであった。ＡＢ１２Ｓ１、ＡＢ１２Ｓ３およびＡＢ１２Ｓ４をＰＢＳで１ｍｇ／ｍＬに希釈し、１２．５μＬを取って５μＬの４０×ＳＹＰＲＯＯｒａｎｇｅｄｙｅ（Ｌｉｆｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、品番４３０６７３７）および７．５μＬのｄｄＨ_２Ｏを加えた。その後、上記サンプルをＱ−ＰＣＲシステム（ＡＢＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＡＢＩ、７５００）に入れて反応させ、Ｑ−ＰＣＲパラメータ設定は、Ｔａｒｇｅｔ（ＲＯＸ）、プログラム（２５℃、３ｍｉｎ、１％の速度、９５℃、９５℃、２ｍｉｎ）であった。

結果は図５に示すように、候補抗体ＡＢ１２Ｓ３のＴｍ値（６７．８９℃）および候補抗体ＡＢ１２Ｓ４のＴｍ値（６６．６１℃）は、対照抗体ＡＢ１２Ｓ１（５８．５４℃）よりも少なくとも８℃高く、本発明で調製されたヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３およびＡＢ１２Ｓ４がより優れた熱安定性を有することが明らかになった。

５．４抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体の属種のクロス反応の測定

通常のＥＬＩＳＡ方法を採用して抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３と異なる属種のＴＩＭ−３抗原とのクロス反応性を測定した。

具体的な実験ステップは以下のとおりであった。１μｇ／ｍＬ１００μＬのヒトＴＩＭ−３（安源医薬（上海）有限公司が発現したＴＩＭ−３であり、細胞外ドメインにＨｉｓタグが付き、タンパク質配列：Ｕｎｉｐｏｒｔｅｎｔｒｙ号Ｑ８ＴＤＱ）、サルＴＩＭ−３（北京ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ有限公司、品番９０３１２−Ｃ０２Ｈ）、マウスＴＩＭ−３タンパク質（北京ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ有限公司、品番５１１５２−Ｍ０８Ｈ）で酵素標識プレートを被覆し、室温で一晩培養した。被覆溶液を捨て、リン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ）に溶解した脱脂乳で各孔を０．５時間閉鎖し、０．０５％のツイン−２０（Ｔｗｅｅｎ−２０）を含むＰＢＳで孔を洗浄した。その後、孔毎に５０μＬの精製したＨＲＰマーカーのＡＢ１２Ｓ３抗体を加え、室温で１時間インキュベートし、０．０５％のツイン２０（Ｔｗｅｅｎ−２０）を含むＰＢＳで５回洗浄し、１００μＬのＴＭＢを対応する孔に入れ、室温で５分間発色した。５０μＬの２ＮＨ_２ＳＯ_４を加えて終了させ、プレートリーダにより４５０ｎｍで数字を読み取った。結果をＧｒａｐｈＰｒｉｓｍに導入し、ＥＣ_５０値を計算した。

図６に示すように、結果により、ＡＢ１２Ｓ３がヒトＴＩＭ−３およびサルＴＩＭ−３抗原と結合でき、マウスＴＩＭ−３抗原と結合しないことが示された。

５．５抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体の特異性測定

ヒトのＴＩＭ−３相同ファミリーにはＴＩＭ−１およびＴＩＭ−４タンパク質が更にあり、ＥＬＩＳＡ方法で抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３がヒトＴＩＭ−３タンパク質と特異的に結合するか否かを検証した。

具体的な実験ステップは以下のとおりであった。ｐＨ９．６の炭酸緩衝液でヒトＴＩＭ−１（北京ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ有限公司、品番１１０５１−Ｈ０８Ｈ１）、ヒトＴＩＭ−３（北京ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ有限公司、品番１０３９０−Ｈ０８Ｈ）、ヒトＴＩＭ−４（北京ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ有限公司、１２１６１−Ｈ０８Ｈ）抗原を１μｇ／ｍＬに希釈し、１００μＬ／ｗｅｌｌで酵素標識プレートを被覆し、４℃で一晩培養し、３００μＬのＰＢＳＴ１回洗浄し、２％のＢＳＡを含む２００μＬのＰＢＳ溶液を加え、３７℃で２時間閉鎖した。２％のＢＳＡを含むＰＢＳＴ溶液でＡＢ１２Ｓ３を希釈し、１０μｇ／ｍＬを開始濃度とし、４倍に希釈し、合計１１個の濃度勾配で、孔毎に１００μＬを対応する孔に入れ、３７℃で２時間インキュベートした。３００μＬのＰＢＳＴで３回洗浄し、２％のＢＳＡを含むＰＢＳ溶液を用いて１：１００００でＨＲＰでマークされた羊抗ヒトＩｇＧ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を希釈し、孔毎に１００μＬを対応する孔に入れ、３７℃で１時間インキュベートした。３００μＬのＰＢＳＴで５回洗浄し、孔毎に１００μＬのＴＭＢ発色液を対応する孔に入れ、室温で５分間発色し、その後、５０μＬの１ＭＨ_２ＳＯ_４溶液を加えて発色を終了させ、プレートリーダにより４５０ｎｍで吸光度を測定し、結果をＧｒａｐｈＰｒｉｓｍに導入してＥＣ_５０値を計算した。

図７に示すように、その結果、ＡＢ１２Ｓ３がヒトＴＩＭ−３タンパク質と特異的に結合でき、ヒトＴＩＭ−１およびヒトＴＩＭ−４タンパク質と結合しないことが示された。

５．６抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体のＴＩＭ−３／Ｇａｌｅｃｔｉｎ−９結合に対する遮断の検出

ＨＴＲＦ方法は、均一時間解像蛍光技術の略称であった。該技術は、波長検出を用いて分子の結合作用を分析した。生物分子が相互作用する場合、２つの励起光６２０ｎｍおよび６６５ｎｍがあり、相互作用がない場合、６２０ｎｍの励起光のみがあった。

ＴＩＭ−３／Ｇａｌ９結合測定キット（Ｃｉｂｉｏ、品番：６３ＡＤＫ０００ＣＴＬＰＥＦ）を採用して抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体のＴＩＭ−３／Ｇａｌｅｃｔｉｎ−９結合に対する遮断作用を測定し、取扱説明書の方法に従って操作した。具体的な実験ステップは以下のとおりであった。ＡＢ１２Ｓ１およびＡＢ１２Ｓ３抗体をＰＢＳで１００００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬおよび１００ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬおよび１ｎｇ／ｍＬにそれぞれ希釈した。３８４孔蛍光プレートを取り、孔毎に４μＬの５ｎＭＴＩＭ３−Ｅｕｋ溶液を入れ、更に２μＬの希釈された抗体を入れ、続いて４０ｎＭのＴａｇ−Ｇａｌ９を入れ、孔毎に４μＬで、室温で５分間インキュベートした。最後に、Ａｎｔｉ−Ｔａｇ−ＸＬ６６５を加え、孔毎に４μＬで、プレート封止膜で３８４孔プレートを閉鎖し、室温で１時間インキュベートした。多機能プレートリーダを用いて６６５ｎｍ／６２０ｎｍでの蛍光値を読み取り、結果をＧｒａｐｈＰｒｉｓｍに導入してＩＣ_５０値を計算した。

図８に示すように、その結果、ＡＢ１２Ｓ３抗体（ＩＣ_５０＝２０２．４ｎｇ／ｍＬ）のＴＩＭ−３／Ｇａｌｅｃｔｉｎ−９結合に対する遮断能力がＡＢ１２Ｓ１抗体（ＩＣ_５０＝２５８．７ｎｇ／ｍＬ）よりも強いことが示された。

５．７抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体のＴＩＭ−３／ＰｔｄＳｅｒ結合に対する遮断のテスト

競合ＥＬＩＳＡの方法を採用し、ＴＩＭ−３ヒト化抗体のＴＩＭ−３／ＰｔｄＳｅｒ結合に対する遮断を検出した。

具体的な実験ステップは以下のとおりであった。ｐＨ９．６の炭酸緩衝液でＰｔｄＳｅｒ（Ｓｉｇｍａ社から購入され、品番：Ｐ６６４１）を１．３μＭに希釈し、１００μＬ／孔で酵素標識プレートに加え、４℃で一晩培養し、３００μＬのＰＢＳＴで１回洗浄し、２％のＢＳＡを含む１００μＬのＰＢＳ溶液を加え、３７℃で２時間閉鎖した。２％のＢＳＡを含むＰＢＳＴ溶液でＡＢ１２Ｓ１、ＡＢ１２Ｓ３（開始濃度が８００μｇ／ｍＬであり、３倍の勾配で希釈し、合計７つの濃度勾配となる）およびＴＩＭ−３（終濃度６μｇ／ｍＬ）をそれぞれ希釈し、１：１で混合した後、孔毎に１００μＬ加え、３７℃で２時間インキュベートした。３００μＬのＰＢＳＴで３回洗浄し、２％のＢＳＡを含むＰＢＳＴ溶液を用いて１：４０００でＨＲＰでマークされたａｎｔｉ−６×ＨｉｓｔａｇｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社から購入され、品番：６５２５０４）を希釈し、孔毎に１００μＬ加え、３７℃で１時間インキュベートした。３００μＬのＰＢＳＴで５回洗浄し、１００μＬのＴＭＢ溶液を対応する孔に入れ、室温で２０分間発色し、５０μＬの１ＭＨ_２ＳＯ_４溶液を加えて発色を終了させ、プレートリーダにより４５０ｎｍで吸光度を読み取り、結果をＧｒａｐｈＰｒｉｓｍソフトウェアに導入しｔＩＣ_５０値を計算した。

図９に示すように、その結果、ＡＢ１２Ｓ３（ＩＣ_５０＝１．３３μｇ／ｍＬ）のＴＩＭ−３／ＰｔｄＳｅｒ結合に対する遮断能力がＡＢ１２Ｓ１（ＩＣ_５０＝３．２０μｇ／ｍＬ）よりも強いことが示された。

５．８抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体のＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性化に対する増強

静止状態にあるＴ細胞が活性化された後、細胞膜の表面にＣＤ６９が発現し、ＦＡＣＳにより抗Ｔｉｍ−３抗体の存在下で超抗原ＳＥＢがＣＤ８^＋Ｔ細胞を刺激した後のＣＤ６９の発現を測定し、抗ＴＩＭ−３抗体のＴリンパ球機能に対する増強作用を評価した。密度勾配遠心法（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ^ＴＭ、ヒトのリンパ球分離液、ＳＴＥＭＣＥＬＬ社）を採用してヒト末梢血から新鮮な単核球（ヒトＰＢＭＣ細胞）を取得し、Ｔ細胞選別試薬（ＳＴＥＭＣＥＬＬ社、＃１９０５３）を用いて高純度のＣＤ８^＋Ｔ細胞を取得した。取得したＣＤ８^＋Ｔ細胞を、１ｎｇ／ｍＬのブドウ球菌腸毒素Ｂ（ＳＥＢ）を含む培液で再懸濁し、細胞密度を５．６×１０^５／ｍＬに調整し、孔毎に１８０μＬ（１０^５細胞／孔）で９６孔の細胞培養プレートに接種した。抗体ＡＢ１２Ｓ３およびＡＢ１２Ｓ４を１０倍の勾配で希釈した後、孔毎にそれぞれ２０μＬ加え、またＡＢ１２Ｓ１を陽性対照とし、各サンプルは合計１００μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬという３つ濃度を有した。各抗体の各濃度は３つの孔に対応した。４８時間後に、細胞を収集し、ＦＡＣＳでＣＤ８^＋Ｔ細胞の表面のＣＤ６９の発現を検出し、方法は以下のとおりであった。３００ｇの細胞を５ｍｉｎ遠心してから上清を捨て、２％のＢＳＡを含むＰＢＳを用いて２００μＬ／孔で洗浄し、遠心後に１００μＬ／孔で再懸濁し、ＣＤ６９抗体（ＢＤ社、＃５５５５３１）を２．５μＬ／孔で加え、４℃で１時間インキュベートした後に遠心し、２％のＢＳＡを含む１００μＬのＰＢＳで再懸濁した後、機器でＣＤ６９の発現を検出した。

結果は図１０に示すように、ＡＢ１２Ｓ１およびＡＢ１２Ｓ４に対し、ＡＢ１２Ｓ３で処理した場合のＣＤ８^＋Ｔ細胞の表面のＣＤ６９の発現は著しく向上した。

５．９抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体の体外でＴ細胞を刺激して腫瘍細胞を殺傷する能力

ヒト非小細胞肺癌細胞株ＨＣＣ８２７細胞（中国科学院細胞ライブラリ）およびヒト乳腺導管癌細胞株ＨＣＣ１９５４細胞（中国科学院細胞ライブラリ）をそれぞれ９６孔細胞培養プレートに接種し、濃度５μｇ／ｍＬのヒト化ＴＩＭ−３抗体ＡＢ１２Ｓ３を加え、分離された健康なボランティアの血清ＩｇＧを陰性対照とし、その後、４：１のＭＯＩ（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）で抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）およびインターロイキン−２（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ社、１１８４８−ＨＮＡＹ１）の活性化したＴ細胞を加え、２４時間培養し、細胞増殖試薬ＣＣＫ−８（東仁化学）を用いて細胞の生存状況を測定し、Ｔ細胞を追加しない培養孔（即ち、ターゲット細胞群）の生存率を１００％と記し、細胞の生存状況を測定し、且つ、以下の式で殺傷率（％）を計算した。
［式１］
殺傷率％＝（１−テスト群ＯＤ値／ターゲット細胞群ＯＤ値）×１００％
ＳＰＳＳを用いてＡＢ１２Ｓ３群およびヒトＩｇＧ群の３つの複数の孔の差異を統計し、ｐ値を計算した。

結果は図１１に示すように、ＡＢ１２Ｓ３群はＨｕＩｇＧ群と比べ、ターゲット細胞ＨＣＣ８２７の殺傷率が５９．２％から７５．８％に上昇し、殺傷率が２７．９％向上し、ｐ＜０．０１であった。ターゲット細胞ＨＣＣ１９５４に対する殺傷率が４２．４％から６０．８％に上昇し、殺傷率が４３．３％向上し、ｐ＜０．０１であった。実験により、抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体ＡＢ１２Ｓ３がＴ細胞の腫瘍細胞に対する殺傷能力を著しく増強することができることが示された。

５．１０抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体のｈＴＩＭ３遺伝子組み換えマウスの体内での薬効の検出

マウス皮下腫瘍モデルを用いてＡＢ１２Ｓ３抗体の薬効を検証し、遺伝子組み換えマウスモデルを用いて評価した。６〜７週齢のヒトＴｉｍ−３雄性遺伝子組み換えマウス（ＢｅｉｊｉｎｇＢｉｏｃｙｔｏｇｅｎ社）の１匹毎に０．１ｍＬ（５×１０^５個）のＭＣ３８細胞を皮下注射し、腫瘍体積が１００ｍｍ^３程度に達すると、ランダムに群を分け、各群に５匹で、陰性対照群（生理食塩水）、１０ｍｇ／ｋｇのＡＢ１２Ｓ１抗体群、１０ｍｇ／ｋｇのＡＢ１２Ｓ３抗体群という３群に分けた。投与方式は腹腔内投与であり、３日に１回、合計６回で、腫瘍体積を測定した。

結果は、図１２に示すように、陰性対照群と比較し、ＡＢ１２Ｓ３抗体は顕著な腫瘍成長を抑制する機能を有したが、対照抗体ＡＢ１２Ｓ１は顕著な腫瘍抑制効果がなかった。

５．１１抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体のＳＥＢがＰＢＭＣを刺激してＩＦＮ−γを分泌することに対する促進作用

ＴＩＭ−３は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、Ｔｈ１細胞等のような活性化したＴ細胞で発現でき、抗ＴＩＭ−３抗体は、ＴＩＭ−３と結合してＴＩＭ−３の活性を抑制することにより、最終的にＩＦＮ−γの分泌を促進した。本実施例はＳＥＢを用いてＰＢＭＣ（Ｔリンパ球等を含む）を刺激し、ＩＦＮ−γの分泌を検出指標として抗ＴＩＭ−３抗体の活性を検出した。ヒト（ドナーＡおよびドナーＢ）末梢血から新鮮な単核球（ＰＢＭＣ細胞）を取得した後、ＰＢＭＣを９６孔プレートに接種し、１ｎｇ／ｍｌのＳＥＢ溶液および異なる濃度のＡＢ１２Ｓ３を加え、対照抗体ＡＢ１２Ｓ１と３７℃、５％のＣＯ２のインキュベータで７２ｈインキュベートした。作用が終了した後、上清を吸い取り、ＩＦＮ−γ検出キットで上清内のＩＦＮ−γの含有量を検出した。図１３および１４に示すように、ＡＢ１２Ｓ３は、ＳＥＢがＰＢＭＣを刺激してＩＦＮ−γを分泌する活性を著しく促進し、且つ、対照抗体ＡＢ１２Ｓ１よりも強かった。

５．１２抗ＴＩＭ−３ヒト化抗体の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）におけるサイトカイン分泌に対する影響

ＣＤ１４磁気ビーズ選別キットでドナーＡおよびドナーＢのＰＢＭＣからＣＤ１４^＋単核球を選別した後、ＧＭ−ＣＳＦおよびｒｈＩＬ−４で７日間誘導し、成熟した樹状細胞（ＤＣ）に分化させた。ＣＤ４^＋Ｔ細胞磁気ビーズ選別キットでＰＢＭＣからＣＤ４^＋Ｔ細胞を選別し、その後、ＣＤ４^＋Ｔ細胞と成熟したＤＣ細胞とを混合し、異なる濃度のＡＢ１２Ｓ３を加え、単一薬剤またはＯＰＤＩＶＯ（登録商標）併用群（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）の濃度はいずれも０．０２μｇ／ｍｌである）を設け、３７℃のインキュベータに入れて５日間作用した。作用が終了した後、上清を吸い取り、ＩＦＮ−γ検出キットで上清内のＩＦＮ−γの含有量を検出した。ＡＢ１２Ｓ３、ＰＤ−１抗体ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）、ＡＢ１２Ｓ３とＰＤ−１抗体ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）との併用のＭＬＲにおけるＩＦＮ−γの分泌に対する作用を検出し、図１５および１６に示すように、ＡＢ１２Ｓ３とＯＰＤＩＶＯ（登録商標）との併用はＭＬＲにおけるＩＦＮ−γの分泌に対して協同促進作用を有した。

本発明で言及された全ての文献は、それぞれの文献が参照として単独で引用されるように、いずれも参照として本願に引用される。また、本発明の上記内容を読んだ後、当業者は本発明に対して様々な変更または修正を行うことができ、これらの等価形態も同様に本願の付属の特許請求の範囲により限定される範囲内に含まれることが理解すべきである。

Claims

（ａ）３つの重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ１の配列、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ１の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ２の配列を有し、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ２の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ３の配列、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ３の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ、および／または、
３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲであって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ１の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ１の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ２の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ２の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ３の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ３の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ、
または、
（ｂ）３つの重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ１の配列、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ１の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ２の配列、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ２の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示すＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ３の配列、または前記ＶＨに含まれるＣＤＲ−Ｈ３の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ、および／または、
３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲであって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ１の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ１の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ２の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ２の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示すＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ３の配列、または前記ＶＬに含まれるＣＤＲ−Ｌ３の配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ、
から選ばれる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、
好ましくは、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに記載の置換は保存的置換であり、
好ましくは、前記重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３、および／または前記軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれるＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３はＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＩＭＧＴ番号付けシステムにより定義される、ＴＩＭ−３と特異的に結合可能な抗体もしくはその抗原結合断片。
前記抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：９およびＳＥＱＩＤＮＯ：１１のいずれか１つに示すＶＨ、
から選ばれる重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ、
および／または、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０およびＳＥＱＩＤＮＯ：１２のいずれか１つに示すＶＬ、
から選ばれる軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲ、
を含み、
好ましくは、前記重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲおよび／または前記軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲはＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＩＭＧＴ番号付けシステムにより定義される、請求項１に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
前記抗体もしくはその抗原結合断片は、
（１）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ、および／または、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲ、
（ただし、前記重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲおよび前記軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲはＩＭＧＴ番号付けシステムにより定義される）
（２）（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ、および／または、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲ、または（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示す重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ、および／または、ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示す軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲ、
（ただし、前記重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ和前記軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲはＫａｂａｔ番号付けシステムにより定義される）
または
（３）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ、および／または、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲ、
（ただし、前記重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲおよび前記軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムにより定義される）
を含む、請求項２に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
前記抗体もしくはその抗原結合断片は、
（１）ＩＭＧＴ番号付けシステムにより定義されるＣＤＲであって、
（ａ）３つの重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１８、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１８と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１９と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２０、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２０と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ、
および／または
（ｂ）３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲであって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２７、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２７と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２５、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２５と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２３、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２３と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ、
または、
（２）Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムにより定義されるＣＤＲであって、
（ａ）３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１７相比１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ、
および／または、
（ｂ）３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲであって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２４、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２４と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２５、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２５と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２６、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２６相比１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ、
または、
（３）Ｋａｂａｔ番号付けシステムにより定義されるＣＤＲであって、
（ａ）３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１３と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１４相比１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ、
および／または、
（ｂ）３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２１と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２２と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２３、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２３と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ、
または、
（４）Ｋａｂａｔ番号付けシステムにより定義されるＣＤＲであって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１３と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２８、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２８相比１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ２、
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｈ３、
という３つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ、
および／または、
（ｂ）３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲであって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２９、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２９と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ１、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３０、またはＳＥＱＩＤＮＯ：３０と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ２、
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２３、またはＳＥＱＩＤＮＯ：２３と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、または３つの置換、欠落、または追加）を有する配列からなるＣＤＲ−Ｌ３、
という３つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ、
を含み、
好ましくは、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに記載の置換は保存的置換である、請求項１に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＨは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８に示すＣＤＲ−Ｈ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９に示すＣＤＲ−Ｈ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２０に示すＣＤＲ−Ｈ３を含み、且つ、前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＬは、ＳＥＱＩＤＮＯ：２７に示すＣＤＲ−Ｌ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２５に示すＣＤＲ−Ｌ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２３に示すＣＤＲ−Ｌ３を含み、
上記各ＣＤＲはＩＭＧＴ番号付けシステムにより定義される、請求項４に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＨは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６に示すＣＤＲ−Ｈ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７に示すＣＤＲ−Ｈ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示すＣＤＲ−Ｈ３を含み、且つ、前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＬは、ＳＥＱＩＤＮＯ：２４に示すＣＤＲ−Ｌ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２５に示すＣＤＲ−Ｌ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２６に示すＣＤＲ−Ｌ３を含み、
上記各ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムにより定義される、請求項４に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
（ａ）前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＨは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３に示すＣＤＲ−Ｈ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４に示すＣＤＲ−Ｈ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示すＣＤＲ−Ｈ３を含み、且つ、前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＬは、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１に示すＣＤＲ−Ｌ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２に示すＣＤＲ−Ｌ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２３に示すＣＤＲ−Ｌ３を含み、または
（ｂ）前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＨは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３に示すＣＤＲ−Ｈ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２８に示すＣＤＲ−Ｈ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示すＣＤＲ−Ｈ３を含み、且つ、前記抗体もしくはその抗原結合断片のＶＬは、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９に示すＣＤＲ−Ｌ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０に示すＣＤＲ−Ｌ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２３に示すＣＤＲ−Ｌ３を含み、
上記各ＣＤＲはＫａｂａｔ番号付けシステムにより定義される、請求項４に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
前記抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）であって、
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：１、３、５、７、９、１１のいずれか１つに示す配列、
（ｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：１、３、５、７、９、１１のいずれか１つに示す配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｉｉｉ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：１、３、５、７、９、１１のいずれか１つに示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、
および／または
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、
（ｉｖ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：２、４、６、８、１０、１２のいずれか１つに示す配列、
（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：２、４、６、８、１０、１２のいずれか１つに示す配列と比べて１つまたは複数の置換、欠落、または追加（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換、欠落、または追加）を有する配列、または
（ｖｉ）ＳＥＱＩＤＮＯｓ：２、４、６、８、１０、１２のいずれか１つに示す配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列、
から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、
を含み、
好ましくは、（ｉｉ）または（ｖ）に記載の置換は保存的置換である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
前記抗体もしくはその抗原結合断片は、
（１）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す配列を有するＶＬ、
（２）ＳＥＱＩＤＮＯ：３に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：４に示す配列を有するＶＬ、
（３）ＳＥＱＩＤＮＯ：５に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：６に示す配列を有するＶＬ、
（４）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：８に示す配列を有するＶＬ、
（５）ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示す配列を有するＶＬ、または
（６）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１に示す配列を有するＶＨおよびＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示す配列を有するＶＬ、
を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
前記抗体もしくはその抗原結合断片は、
（ａ）ヒト免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）、または由来する配列と比べて最大で２０個の保存的置換（例えば、最大で１５個、最大で１０個、または最大で５つの保存的置換、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの保存的置換）を有するヒト免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）の変異体と、
（ｂ）ヒト免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）、または由来する配列と比べて最大で２０個の保存的置換（例えば、最大で１５個、最大で１０個、または最大で５つの保存的置換、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの保存的置換）を有するヒト免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）の変異体と、
を更に含み、
好ましくは、前記重鎖定常領域はＩｇＧ重鎖定常領域であり、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖定常領域であり、
（１）ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、
（２）ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域、
（３）由来する野生型配列と比べてＬｅｕ２３４Ａｌａ、Ｌｅｕ２３５Ａｌａの置換を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域の変異体、
（４）由来する野生型配列と比べてＡｓｎ２９７Ａｌａの置換を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域の変異体、
（５）由来する野生型配列と比べてＡｓｐ２６５Ａｌａ、Ｐｒｏ３２９Ａｌａの置換を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域の変異体、
（６）由来する野生型配列と比べてＳｅｒ２２８Ｐｒｏの置換を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域の変異体、
から選ばれる重鎖定常領域を含み、
上記アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けシステムによる位置であり、
好ましくは、前記抗体もしくはその抗原結合断片はＳＥＱＩＤＮＯｓ：３２〜３７のいずれか１つに示す重鎖定常領域（ＣＨ）を含み、
好ましくは、前記軽鎖定常領域はκ軽鎖定常領域であり、
好ましくは、前記抗体もしくはその抗原結合断片はＳＥＱＩＤＮＯ：３１に示す軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
前記抗体もしくはその抗原結合断片はキメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
前記抗体もしくはその抗原結合断片はｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、二重特異性抗体および多特異性抗体から選ばれる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
前記抗体もしくはその抗原結合断片は、約１００×１０^−１２Ｍまたはより低いＫ_ＤでＴＩＭ−３（例えば、ヒトＴＩＭ−３）と結合し、
好ましくは、前記抗体もしくはその抗原結合断片は、約１×１０^−１２Ｍまたはより低いＫ_ＤでＴＩＭ−３（例えば、ヒトＴＩＭ−３）と結合する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片。
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、またはその重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードする、分離した核酸分子。
請求項１４に記載の核酸分子を含み、好ましくは、前記ベクターはクローニングベクターまたは発現ベクターである、ベクター。
請求項１４に記載の核酸分子または請求項１５に記載のベクターを含む、宿主細胞。
前記抗体もしくはその抗原結合断片の発現が許容される条件で、請求項１６に記載の宿主細胞を培養することと、
培養した宿主細胞培養物から前記抗体もしくはその抗原結合断片を回収することと、
を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片を調製する方法。
ハイブリドーマ細胞株＃２２であり、中国典型培養物寄託センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託され、受託番号ＣＣＴＣＣＮＯ．Ｃ２０１７１８１を有する、ハイブリドーマ細胞株。
請求項１８に記載のハイブリドーマ細胞株から産生される、モノクローナル抗体。
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片と、医薬的に許容されるベクターおよび／または賦形剤および／または安定剤とを含み、
好ましくは、前記医薬組成物は別の薬学的活性剤を更に含み、
好ましくは、前記別の薬学的活性剤は抗腫瘍活性を有する薬剤であり、
好ましくは、前記別の薬学的活性剤は感染を治療するための薬剤であり、
好ましくは、前記別の薬学的活性剤は自己免疫疾患を治療するための薬剤であり、
好ましくは、前記抗体もしくはその抗原結合断片と前記別の薬学的活性剤とは、分離した成分または同一組成物の成分として提供される、医薬組成物。
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ−４、ＯＸ４０、ＢＴＬＡ、４−１ＢＢ、ＣＤ９６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦ−Ｒ、ＫＩＲ、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＣＤ３、ＣＤ３０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、Ｂ７−Ｈ３およびその任意の組み合わせから選ばれる受容体またはリガンドと特異的に結合する第２抗体、または前記第２抗体をコードする核酸を更に含み、
好ましくは、前記第２抗体はヒトＰＤ−１と結合する抗体もしくはその抗原結合断片であり、より好ましくは、前記ヒトＰＤ−１と結合する抗体もしくはその抗原結合断片は、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂもしくはその抗原結合断片、またはＰｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂもしくはその抗原結合断片から選ばれる、
好ましくは、前記第２抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１と結合する抗体もしくはその抗原結合断片である、請求項２０に記載の医薬組成物。
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片の薬剤の調製における使用であって、前記薬剤は、少なくとも、
（１）体外または被験者（例えば、ヒト）の体内で免疫細胞活性を向上させることと、
（２）被験者（例えば、ヒト）において免疫応答を増強することと、
（３）被験者（例えば、ヒト）において癌を治療することと、
（４）被験者（例えば、ヒト）において感染性疾患を治療することと、
（５）被験者（例えば、ヒト）において自己免疫疾患を治療することと、
（６）（１）〜（５）の任意の組み合わせと、
のうちのいずれか１つに用いられ、
好ましくは、前記癌は、固形腫瘍、血液腫瘍（例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫のような骨髄腫）および転移性病巣から選ばれ、例えば、肺癌、鱗状細胞肺癌、メラノーマ、腎癌、乳癌、ＩＭ−ＴＮ乳癌、結腸直腸癌、白血病、または癌の転移性病巣を含んでもよいが、これらに限定されず、
好ましくは、前記感染性疾患は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染および寄生虫感染から選ばれ、ＨＩＶ、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、または敗血症を含んでもよいが、これらに限定されず、
好ましくは、前記自己免疫疾患は、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、インスリン依存性糖尿病、バセドウ病、重症筋無力症、自己免疫肝炎および多発性硬化症から選ばれる、使用。
免疫応答を効果的に刺激する量で、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項２０もしくは２１に記載の医薬組成物を必要な対象に投与することを含む、対象における免疫応答を刺激する方法。
有効投与量で請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項２０もしくは２１に記載の医薬組成物を必要な対象に投与することを含む、癌を治療する方法。
前記癌は、肺癌、鱗状細胞肺癌、メラノーマ、腎癌、乳癌、ＩＭ−ＴＮ乳癌、結腸直腸癌、白血病、または癌の転移性病巣から選ばれる、請求項２４に記載の方法。
有効量の請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項２０もしくは２１に記載の医薬組成物を必要な被験者に投与することを含む、被験者（例えば、ヒト）に使用して自己免疫疾患を予防および／または治療する方法。
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片および取扱説明書を含む、診断性または治療性キット。