UA124612C2 - Панель біомаркерів для виявлення раку - Google Patents

Панель біомаркерів для виявлення раку Download PDF

Info

Publication number
UA124612C2
UA124612C2 UAA201708275A UAA201708275A UA124612C2 UA 124612 C2 UA124612 C2 UA 124612C2 UA A201708275 A UAA201708275 A UA A201708275A UA A201708275 A UAA201708275 A UA A201708275A UA 124612 C2 UA124612 C2 UA 124612C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
still
tiv
shcha
methylation
zhe
Prior art date
Application number
UAA201708275A
Other languages
English (en)
Inventor
Барбара Бурвінкєль
Барбара Бурвинкель
Жунсі Ян
Жунси Ян
Андреас Шнєєвайсс
Андреас Шнеевайсс
Original Assignee
Рупрехт-Карлс-Універсітет Гейдельберг
Рупрэхт-Карлс-Университет Гейдельберг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Рупрехт-Карлс-Універсітет Гейдельберг, Рупрэхт-Карлс-Университет Гейдельберг filed Critical Рупрехт-Карлс-Універсітет Гейдельберг
Publication of UA124612C2 publication Critical patent/UA124612C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/154—Methylation markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

Винахід належить до способу діагностики раку молочної залози у суб’єкта, із застосуванням панелі маркерів метилування та мікроРНК, а також застосування зазначеної панелі для діагностики раку молочної залози, і засоби для виявлення зазначених маркерів, набори, що містять зазначені агенти, і пристрої для аналізу зазначеної панелі маркерів.

Description

(57) Реферат:
Винахід належить до способу діагностики раку молочної залози у суб'єкта, із застосуванням панелі маркерів метилування та мікроРНК, а також застосування зазначеної панелі для діагностики раку молочної залози, і засоби для виявлення зазначених маркерів, набори, що містять зазначені агенти, і пристрої для аналізу зазначеної панелі маркерів.
Даний винахід відноситься до панелей маркерів метилювання та мікроРНК, а також до застосування зазначених панелей у прогнозуванні, діагностиці та/або лікуванні раку, до засобів для виявлення зазначених маркерів, до наборів, що містять зазначені засоби, і пристроїв для аналізу зазначеної панелі маркерів.
Рівень техніки
Рак являє собою одну з найбільше суттєвих медичних проблем і патологій у світі. Рак є основною причиною смертності у всьому світі, і в 2008 році було зафіксовано 12,4 мільйонів нових випадків раку та 7,6 мільйонів смертей, викликаних раком. Було передвіщено, що кількість смертей від раку у всьому світі буде безперервно збільшуватися, і в 2030 році 12 мільйонів смертей будуть спричинені раком. Рак молочної залози являє собою найпоширеніший тип раку у жінок. Приблизно в однієї з дев'яти жінок протягом життя розвивається рак молочної залози (Рецег, Е.)., еї аї., Те ІМейте гізК ої демеІоріпуд Бгеавзі сапсег. у Маї! Сапсег Іпв5ії 85, 892- 897 (1993)). У всьому світі кожний рік приблизно у 1,3 мільйонів жінок розвивається рак молочної залози. З плином часу рівні смертності продовжують зменшуватися у зв'язку з множиною спроб й успіхів, досягнутих в області ранньої діагностики і лікування (етаї А, Вгау Е,
Сепівег ММ, Репау у, УМага Е, Роптап 0. Спобаї сапсег віаїййвіїс5. СА Сапсег У Сіїп 2011; 61:69-90).
Незважаючи на це, кожний рік тисячі жінок помирають від даного захворювання. У жінок у США загальна п'ятирічна виживаність складає 9895 при діагностиці на ранній стадії, тоді як у випадках, коли захворювання вже поширилося у віддалені органи, виживаність складає 23 95.
Таким чином, раннє виявлення раку молочної залози відноситься до одного з основних завдань у боротьбі проти даного захворювання. В даний час в якості стандарту діагностики застосовують мамографічний скринінг. Однак даний підхід має обмеження у зв'язку із застосуванням іонізуючого випромінювання та частинок хибнопозитивних висновків, що складають 8-10 95, яка також залежить від віку індивідуумів, скринінг яких проводять (Таріїп 5, Абгапат І, Вапом/ МЕ, Репіоп ХУ, Вегтп5 ЕА, Сагтеу РА, СиШег СВ, 5ісКіІез ЕА, Сап 0, ЕІтоге Уа.
Маттодгарпу Тасіїйу сПагасієгівіїїс5 авзвзосіаїей м/п о іпіегргеїйме оассигтасу ої взсгеєпіпа таттодгарну. Маї! Сапсег Іпвї 2008; 100: 876-87).
Більшість випадків раку молочної залози виникають спорадично, у той час як на спадкоємний рак молочної залози доводиться приблизно 10 95 від усіх випадків раку молочної залози (РасКепіпаї, У.О. 5. ОІораде, О.І. Вгеабві сапсег гізК аззосіаїедй м/п ВКСАТ апа вксАзг іп діметзе роршіайопв. Маї Нем Сапсег 7, 937-948 (2007)). На мутації в основних генах, пов'язаних з раком молочної залози, ВКСА!1 і ВКСА2, доводиться 25 9б, а на мутації в інших помірковано та низько пенетрантних генах - приблизно 5 95 від усіх спадкоємних випадків (мапа, Е. 4 Вигм/іпкеї,
В. (ед5.). Ратійа! гі5К іп Бгеабі сапсег, 251-256 (Зрііпдег, 2010)). Нещодавно проведені загальногеномні дослідження асоціацій (депоте-м/іде аззосіайоп 5іцаїе5, СЗУМА5) і підходи на основі одиничного гена-кандидата виявилися цілком успішними при виявленні генетичних варіантів з низьким ризиком розвитку раку молочної залози (Тпота», с., еї а. А тийіїаде депоте-м/іде азвосіайоп 5ішду іп Бргєабзі сапсег ідепійев йо пем/ гізК аеєзаї 1 р 11.2 апа 14д24.1 (ВАББІ1 11). Маї Сепеї 41, 579-584 (2009); Сох, А., еї а. А соттоп содіпу мапгапі іп
САБ5РВ із азвосіаїеєй м/ййп Ббгєаві сапсег гізК. Маї Сепеї 39, 352-358 (2007); 5іасеу, 5.М., єї аї. боттоп магіапів оп спготозоте 5рі2 сопієг зивсеріїбійу їо езігодеп гесеріог-розйпйме Бгєаві сапсег. Маї Сепеї 40, 703-706 (2008); Айтей, 5., єї а). Меулу аівсомегей Бгеавзі сапсег зизсеріїріїйу осі оп Зр2г4 апа 17д23.2. Маї Сепеї 41,585-590 (2009); Еавіоп, О.Р., вії аЇ. Сепоте- міде авззосіайоп 5ішду ідепійеб поме! ргеабзі сапсег 5ивзсеріїріїйу осі. Маїйге 447, 1087-1093 (2007); МіІпе, В.Г.., єї аї. Ві5К ої евігодеп гесеріог-розіїйме апа-педаїїме Бгеавзі сапсег апа віпаіе- писіеоїіде роїутогрнізт 2435-1513387042. у Маї! Сапсег Іпві 101, 1012-1018 (2009); Егапк, В., єї аї. Аззосіайоп ої а соттоп АКАРО маїпапі м/п Бгєаві сапсег гі5К: а соПарогаїме апаїувів. ) Маї!
Сапсег Іпвзі 100,437-442 (2008)). Однак велику кількість факторів ризику раку молочної залози все ще потрібно вивчити.
У порівнянні з РМЗ рак яєчників (РЯ) виникає відносно рідше, однак є основною причиною смертності у випадку гінекологічних типів раку у зв'язку з високою злоякісністю. В 2008 році у всьому світі рак яєчників було діагностовано у 225000 жінок, і 140000 з даних жінок померло від зазначеного захворювання. Як правило, у жінок з РЯ проявляються лише декілька ранніх симптомів, і, таким чином, приблизно три чверті випадків раку яєчників виявляють на прогресуючій стадії, коли захворювання поширилося далеко за межі яєчників. Рак підшлункової залози (РПЗ) є найбільше агресивним із усіх епітеліальних злоякісних утворень. При 279000 нових діагнозів РПЗ у всьому світі рівень 5-літньої загальної виживаності пацієнтів із РПЗ складає менше 5 95. Незважаючи на те, що в ході нещодавно проведених загальногеномних досліджень асоціацій (зЗУМА5) були успішно виявлені деякі генетичні варіанти, асоційовані з ризиком РМЗ, РЯ та РІЗ, не було виявлено жодного маркера, що піддається оцінці для раннього виявлення РМ3.
Метастатичний рак молочної залози (МРМ3) у всьому світі являє собою основну проблему в області охорони здоров'я. Застосовувані в даний час стратегії лікування МРМЗ спрямовані у першу чергу на паліативне лікування, при якому було вилікувано лише декілька випадків захворювання. Альтернативний підхід боротьби з МРМЗ являє собою розробку способів скринінгу та застосування біомаркерів для виявлення груп високого ризику та відповіді на терапію. Даний підхід може полегшити клініцистам прийняття рішення та допоможе коректувати підходящий для пацієнтів режим лікування.
Циркулюючі пухлинні клітини (ЦПК) були запропоновані в якості схваленого ЕБА (Росй апа
Огид Аатіпізігайоп, Управлінням США за контролем над якістю харчових продуктів і лікарських засобів) незалежного прогностичного маркера метастазування, особливо, виживаності без прогресування захворювання та загальної виживаності. Кількісний поріг, що складає більше 5
ЦПК на 7,5 мл крові, був визначений як ЦПК-позитивний (Стгібіоїтапій М, Виаа ст, ЕШП5 МУ, зіореск А, еї аї; Сіксцайпу Штог сеїЇІ5, аізеазе ргодгеввіоп, апа вигміма! іп теїавзіаїййс Бгєаві сапсег; М Епаї У Мед. 2004 Аца 19;351(8):781-91). Однак важливо відзначити, що значна частина пацієнтів із клінічно вираженими віддаленими метастазами є негативною у відношенні ЦПК.
Даному факту частково може сприяти феномен епітеліально-мезенхімального переходу в ЦПК, і у такому випадку дані пацієнти можуть бути виключені з розгляду при використанні методик підрахунку, в яких застосовують експресію епітеліальних маркерів, таких як ЕрРСАМ або цитокератин-8, -18 і -19.
Крім ЦПК, в якості прогностичних маркерів, а також для моніторингу успішності лікування та при моніторингу під час періоду після лікування при раку молочної залози також широко використовуються циркулюючі маркери пухлини на основі білків, такі як раковоембріональний антиген (сагсіпоетрбгуопіс апідеп, СЕА) і вуглеводний антиген 15-3 (сагопуагаїе апіїдеп 15-3,
СА 15-3) (Оепага М, Кіпознйа Т, Ноо Т, АКавпі-Тапака 5, Іматоїю Е, БикКшоті Т. І опд-їегт ргоапозіїс вішау ої сагсіпоетбгуопіс апіїдеп (СЕА) апа сагтопуагаїе апіїдеп 15-3 (СА 15-3) іп
Бгеаві сапсег. пі У Сіїп Опсої 2008;13:447-51; Наїтіз І, ЕгїзсНе Н, Меппеї! В, Мопоп Г., Вамаїнп Р,
Ташйбе 5, Зотепієій МЕ, Науєз ОБЕ, Ваві ВС, дуг. Атетгісап босівїу ої Сііпіса! Опсоіоду 2007 ирадаїє ог тесоттепааїйопв ог Ше изе ої їштог таїКе!з іп Бгеаві сапсег. У Сіїп Опсої 2007; 25:5287-312)).
Однак чутливість даних маркерів є низькою. Внаслідок цього необхідні нові чутливі та специфічні маркери з мінімальним ступенем інвазивності.
Епігенетичні зміни з визначення являють собою зміни експресії генів, які не є наслідком будь-яких змін послідовності геномної ДНК. Порушені епігенетичні сигнатури вважають відмітною ознакою раку людини (ЕзіеїПег, М. Сапсег ерідепотісв: ОМА теїйуютез апа пі(опе- тоаіїїісайоп тарз. Маї Вем Сепеї 8, 286-298 (2007).). Одна з найбільше важливих епігенетичних сигнатур, метилювання ДНК, відіграє найважливіші ролі при контролі активностей генів й архітектури ядра клітини (Умерег, М., еї а. Спготозоте-міде апа рготоїег-5ресіїс апаїузе5 ідепійу віїез ої аіїегепіїаї ОМА теїНуїайоп іп поптпаї! апа їгапвіоттейд питап сеїїв5. Маї Сепеї 37, 853-862 (2005)). Більше того, на відміну від генетичних маркерів або варіантів, метилювання
ДНК є принципово оборотним. Внаслідок цього профіль метилювання конкретних генів розглядають в якості терапевтичних мішеней (Маск, 5.5. Ерідепеїйійс сапсег (Шегару таКев5
Ппеадмжау. У Маї! Сапсег Іпві 98, 1443-1444 (2006)). При цьому у зв'язку з мінливим характером метилювання ДНК може виступати в якості зв'язку між факторами навколишнього середовища та геномом. Метилювання ДНК, яке модулюється факторами навколишнього середовища або старінням, може змінити експресію критично важливих генів клітин і, внаслідок цього, викликати злоякісну трансформацію клітин або навіть рак (М/азспу/епайег, М., еї аїЇ. Ерідепоїуріпд іп регірпега! Біоса сеї! ОМА апа Бгеавзі сапсег гізК: а ргоої ої ргіпсіріє зішау. Р Го5 Опе 3, вє2656 (2008)).
Будучи подією, що відбувається на ранніх стадіях розвитку раку, зміни метилювання ДНК є особливо перспективними в якості маркерів для раннього виявлення раку. У недавніх дослідженнях було продемонстровано, що аналіз метилювання ДНК клітин крові може виступати в якості надійного та стійкого маркера. В інтенсивних дослідженнях були виявлені змінені сигнатури метилювання ДНК при раку на соматичному рівні, при цьому тільки в декількох дослідженнях на основі підходу гена-кандидата були проаналізовані сигнатури метилювання в ДНК периферичної крові при раку.
У попередніх дослідженнях вивчалося гіперметилювання в областях промотору генів супресорів-пухлини і гіпометилювання в областях промотору онкогенів при раку молочної залози у порівнянні з нормальними прилягаючими тканинами (Го, У., еї аі. 5отаїйсайПу асацігеа 60 пуротеїНуїаїйоп ої ІС2Е2 іп Бгєавзі апа соіогесіаІ! сапсег. Нит Мої Сепеї 17, 2633-2643 (2008);
Роїарома, А., Ноїтап, А.М., Сюодм/п, А.К., АІ-ЗаІєет, Т. б Саігпв, Р. Рготоїег пурептеїНуїайоп ої
Ше РАГВ2 5изсеріїйбіїйу депе іп іппейіей апа з5рогадіс ргеаві апа омагіап сапсег. Сапсег ВНез 68, 998-1002 (2008); Надроитг, Н., еї аї. Меїпуїаїйоп ргоїйез ої 22 сапаїідагїе депез іп Бгеаві сапсег ивіпа підн-пгопдприї МАСОІ-ТОГ тазв атау. Опсодепе 28, 2969-2978 (2009); Мідб5спмепайїег, М. 4 допе5, Р.А. ОМА теїНуїайоп апа Бгєавзі сагсіподепезів. Опсодепе 21, 5462-5482 (2002)). Лише незначна частина досліджень була сфокусована на сигнатурах метилювання в ДНК периферичної крові та ризику виникнення раку молочної залози. У даних дослідженнях були вивчені лише специфічні гени, такі як ВКСА1 (Іматоїо, Т., Мататоїй, М., Тадиспі, Т., Татакі, У. а Модиспні, 5. ВВСАЇ рготоїег теїпуїайоп іп регірпега! ріоой сеї із аззосіаїейд м/йй іпстєавзеа тгівк ої ргєаві сапсег міт ВАСАТ рготоїег теїпуїайоп. Вгеазі Сапсег Нез Ттєаї 129, 69-77 (2011)),
АТМ (Ніападап, .М., еї а. Сепе-роду Нпуре!тпеїпуїайоп ої АТМ іп регірпега! Біоса ОМА ої Бііагегаї
Бгеавзі сапсег райепіз. Нит Мої Сепеї 18, 1332-1342 (2009)) і гени специфічних шляхів (Уміазспмепаїег еї а!. (2008), у процитованому місці).
Таким чином, в даній області техніки існує потреба у виявленні додаткових епігенетичних маркерів раку молочної залози й інших варіантів раку, переважно таких, що дозволяють проводити виявлення уражених суб'єктів за допомогою відбору зразка за допомогою засобів низької інвазивності, наприклад, за допомогою відбору зразка крові.
МікроРНК являє собою невеликі некодуючі РНК (18-25 нуклеотидів у довжину), які регулюють експресію генів на посттранскрипційному рівні за допомогою руйнування молекул
МРНК або блокування трансляції останніх (Вапе!: МісгокМАв5: депотісв5, Біодепевів5, теспапівт, апа тпсіоп. Сеї! 2004; 116: 281-97). Отже, дані молекули відіграють важливу роль у регуляції великої кількості біологічних процесів, включаючи рак (Саїїп СА, Оитйнгки СО, Зпіті?2и М, Віспі В, 7цро 5, Моспі Е, АїаІег Н, Райап 5, Кеаїїпо М, Раї К, Ваззепії І, Кіррз Т, вї а). Егедиепі аеєїіейбопе апа домп-тедашайоп ої тісто-НМА депе5 тій1!5 апа тій1б аї 13414 іп сПпгопіс Іутрпосуїс
ІєиКетіа. Ргос Майї Асай 5сі 0 5 А 2002; 99:15524-9). Згідно зі стандартною системою номенклатури підтвердженим експериментальним способом мікроРНК привласнюють назви. За приставкою "ті" йде дефіс і номер. Рядковий "тік-" означає рге-мікроРНК, тоді як "тік-" з прописною буквою означає зрілу форму. До мікроРНК з практично ідентичними послідовностями, що відрізняються на один або два нуклеотида, приписується додаткова мала
Зо літера. Вигляд, з якого була виділена мікроРНК, позначають трибуквеною приставкою, наприклад, п5а для Ното заріепо5 (людини). Дві зрілі мікроРНК, що йдуть з протилежних кінців однієї й тієї самої рге-мікроРНК, позначають суфіксом -Зр або -5р.
Циркулюючі мікроРНК за визначенням являють собою мікроРНК, присутні у безклітинному компоненті рідин організму, таких як плазма, сироватка та т.п. І амугіє зі співавт. (І амліє СН, сСаї
З, Випіор НМ, РизнНКагап В, І іддіп5 АР, Рийога К, Вапнат АН, Рег7еїа Е, Вошемооса у, Маїпвзсоаї
У5, Найоп С5, Наїтіз АГ. Оєїесійп ої віємаїей Ієме!5 ої Іштоиг-аззосіаїєд тістоВМАФв іп взегит ої райепів м/п айиве Іагде В-сеі! ІМтрпота. Вг ) Наєтаїйо! 2008; 141:672-5) одними з перших продемонстрували присутність мікроРНК у рідинах організму. З тих пір повідомлялося про порушену експресію циркулюючих мікроРНК у плазмі або сироватці крові при різних типах раку, наприклад, при карциномі передміхурової залози, товстої та прямої кишок або стравоходу (Вгазе УС, допаппез М, 5спіотт Т, Ран М, Наєзе А, 5іеибег Т, Веївззрайі Т, Кипег В, зийтапп
Н. Сігсшайпу тівВМАв аге соїтеїаїєй мій їШштог ргодгез5віоп іп рговіаїє сапсег. Іпі ) Сапсег 2011:128:608-16.; Ниапуд 7, Ниапду 0, Мі 5, Репд 7, Зпепа МУ, би Х. Ріазта тістВМАв аге роотівіпуд помє!ї та/Кеге їТог єапу аеїесійп ої соіогесіа! сапсег. Іпї У Сапсег 2010и127:118-26.; 2Ппапд С, Мапа С, Спеп Х, Мапа С, Гі К, У/апа «у, Оаї у, Ни 7, 7пои Х, Спеп І, 2папо ХУ, Її М, еї аї.
Ехргезвіоп ргойе ої тістоВМАФв іп зегит: а Тіпдегргіпі ог езорпадеа! здоатоизвз сеї! сагсіпота. Сіїп
Спет 2010; 56:1871-9-). Найбільше важливі переваги циркулюючих мікроРНК включають можливість кількаразового вимірювання даних молекул способом з мінімальною інвазивністю, а також значну стабільність зазначених молекул у плазмі/сироватці де дані молекули циркулюють, головним чином, за межами екзосом і є стабільними завдяки зв'язуванню з білками-аргонавтами (Агдопаціє ргоїеіп5) (Міїспеї! Р5, Раїкіп КК, Кгоп ЕМ, Егії: ВЕ, Ууутап 5К,
Родозома-Ададіапуап ЕЇ,, Реїегзоп А, Моїероот У, О'Вііапі КС, Айеп А, іп ОМУ, Ограп М, еї аї.
Сіксціайпу тісгоАМА5з аз 5іабіе рБіосд-разей таКегз їог сапсег деїесійоп. Ргос Маї! Асад Зсі ОА 2008;105:10513-8; Тигспіпомісй А, МУєї2 |, ІГапопеіп; А, ВипміпКе! В. СпНагасієгігайоп ої ехігасеїйІШіаг сігсцайпо тістоВМА. Мисівєїс Асід5 ВНез 2011;39:7223-33; Аітоуо 90, СпеміПеї УВ, Кгоп
ЕМ, Ви ІК, Рийснага СС, сібзоп ОР, МіїснеїЇ Р5, Веппей СЕ, Родозома-Ададіапуап ЕЇ., сігемаїй!
ОО, Тай ОБ, Тема М. Агтщдопаше2 сотріехе5 сату а роршіаїйоп ої сігсціайптпд тісгтоВМА5 іпаерепаепі ої мевісіІез іп питап ріазта. Ргос Маї! Асай 5сі О 5 А 2011; 108:5003-8).
Таким чином, в даній області техніки існує гостра потреба у поліпшених способах бо діагностики і прогнозування раку молочної залози, зокрема, первинного раку молочної залози і метастазуючого раку молочної залози. Дані способи, переважно, також будуть використовувати при превентивному скринінгу здорових із клінічної точки зору суб'єктів, причому низький ступінь інвазивності буде переважним.
КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Згідно з першим аспектом даний винахід відноситься до способу прогнозування та/або діагностування раку, зокрема, РМЗ, РЯ та/або РПЗ, у суб'єкта, причому зазначений спосіб включає (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАЇ2, МОЕМІ1, ЕРТОК,
ЗІ С22А18, РОТУ, ВАРБМ, 5100Р, ОМККА, ї (б) визначення присутності, зокрема, кількості, щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тів- 801, тів-37бс, тіВв-37ба, тів-127-Зр, тін-409-Зр, тів-148р, у суб'єкта, причому статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність щонайменше однієї мікроРНК служать показником для зазначеного прогнозу та/або діагнозу в зазначеного суб'єкта.
Згідно з другим аспектом даний винахід відноситься до способу визначення дози фармацевтичного препарату для впливу на рак або запобігання або лікування раку у суб'єкта, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку від суб'єкта та необов'язкове визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в еталоні для порівняння зі статусом метилювання та/або рівнем експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількістю щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, і (б) визначення дози фармацевтичного препарату залежно від статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, необов'язково залежно від порівняння статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, і в еталоні або еталонному зразку.
Згідно з третім аспектом даний винахід відноситься до способу підбирання дози
Зо фармацевтичного препарату для впливу на рак або запобігання або лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, (Б) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, (с) вивчення досліджуваного зразка для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (4) підбирання дози фармацевтичного препарату залежно від того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках.
Згідно з четвертим аспектом даний винахід відноситься до способу визначення сприятливого та/(або небажаного впливу речовини на рак або розвиток раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, (б) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (с) вивчення зразка, що представляє інтерес, для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, причому зразок, що представляє інтерес, піддавали відмінному впливу зазначеної речовини, ніж один або декілька еталонів або еталонних зразків.
Згідно з п'ятим аспектом даний винахід відноситься до способу ідентифікації пацієнта, такого, який відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше однієї мікроРНК у бо першому та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після першого зразка, причому збільшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та відсутність або зменшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК свідчить про відповідь на лікування.
Згідно з шостим аспектом даний винахід відноситься до способу ідентифікації пацієнта, такого, який не відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше однієї мікроРНК у першому та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після першого зразка, причому зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність або збільшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК свідчить про відсутність відповіді на лікування.
Згідно з сьомим аспектом даний винахід відноситься до способу лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (ї) визначення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше однієї мікроРНК у першому зразку від суб'єкта; (ії) початок лікування зазначеного пацієнта першим режимом лікування, який включає один або декілька протиракових засобів або варіантів терапії, (ії) визначення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше однієї мікроРНК в одному або декількох зразках, послідовно відібраних від зазначеного суб'єкта; (ім) необов'язкове повторення етапів (ії) і (її) один або декілька разів; (є) продовження лікування пацієнта першим режимом лікування у випадку, якщо спостерігається істотне збільшення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та зменшена кількість або відсутність щонайменше одного маркера мікроРНК, або (м) зміна лікування або припинення лікування пацієнта першим режимом лікування та замість цього лікування пацієнта другим режимом лікування, який включає один або декілька протиракових засобів або варіантів терапії, які не були включені у перший режим лікування, у
Зо випадку, якщо спостерігається зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та збільшена кількість або присутність щонайменше одного маркера мікроР НК.
Згідно з восьмим аспектом даний винахід відноситься до засобів для прогнозування та/або діагностування і. ризику розвитку раку, зокрема, РМЗ, РЯ та/або РПЗ, ії. наявності раку, зокрема, РМЗ, РЯ та/або РПЗ, і/або ії. прогресування раку, зокрема, РМЗ, РЯ та/або РПЗ, причому зазначені засоби включають а) один або декілька засобів для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, і Б) один або декілька засобів для виявлення кількості щонайменше одного маркера мікроРНК.
Згідно з дев'ятим аспектом даний винахід відноситься до набору, що містить засоби згідно з восьмим аспектом.
Згідно з десятим аспектом даний винахід відноситься до застосування засобів згідно з восьмим аспектом або набору згідно з дев'ятим аспектом для прогнозування та/або діагностування і. ризику розвитку раку, зокрема, РМЗ, РЯ та/або РПЗ, ії. наявності раку, зокрема, РМ3У, РЯ та/або РІЗ, і/або ії. прогресування раку, зокрема, РМ3У, РЯ та/або РПЗ.
Згідно з одинадцятим аспектом даний винахід відноситься до пристрою для виявлення раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, причому зазначений пристрій містить: (а) блок для аналізу, що містить () детектуючий агент для визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ2,
МОРМІ, КЕРТОК, 51С22А18, РОТУ, КАРЗМ, 5ІООР, ОМЕКА, і (її) детектуючий агент для визначення присутності щонайменше однієї мікроРНК, яка вибрана з групи, що складається з: тів-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127-3Зр, тів-409-Зр, тів-1486р, у зразку від суб'єкта; і (Б) блок для оцінки, що містить процесор для обробки даних, у який матеріально вбудований алгоритм для здійснення порівняння кількості, що визначено блоком для аналізу, з еталоном й який здатний генерувати файл вихідних даних, що містить діагноз, встановлений на підставі зазначеного порівняння.
Перелік фігур
Фіг. 1: Опис зразків панелі біомаркерів на основі крові для раннього виявлення раку молочної залози
Фіг. 2: Відмінності метилювання восьми генів у трьох раундах валідації.
Фіг. 3: Дискримінаційна здатність наборів маркерів метилювання ДНК розрізняти випадки
РМЗ і здорові контролі в зразках з інших центрів.
Фіг. 4: Дискримінаційна здатність наборів маркерів метилювання ДНК і наборів маркерів мікроРНК розрізняти випадки РМЗ і здорові контролі в зразках, отриманих групою авторів даного винаходу.
Фіг. 5: Рівень метилювання восьми генів у пацієнтів зі спорадичним РМЗ з різними клінічними характеристиками (випадки захворювання з другого раунду валідації)
Фіг. 6: Рівень метилювання восьми генів у пацієнтів зі спорадичним РМЗ з різними клінічними характеристиками (випадки захворювання в зразках, отриманих групою авторів даного винаходу)
Фіг. 7: Опис зразків панелі біомаркерів на основі крові для раннього виявлення раку підшлункової залози
Фіг. 8: Відмінності метилювання в генах при порівнянні випадків РПЗ і контролів
Фіг. 9: Відмінності метилювання в генах при порівнянні випадків РПЗ їі контролів, стратифікованих за статтю
Фіг. 10: Дискримінаційна здатність метилювання в генах розрізняти випадки РПЗ і здорові контролі
Фіг. 11: Метилювання генів у пацієнтів із РПЗ з різними клінічними характеристиками
Фіг. 12: Опис зразків панелі біомаркерів на основі крові для раннього виявлення раку яєчників
Фіг. 13: Відмінності метилювання в генах при порівнянні випадків РЯ та контролів
Фіг. 14: Дискримінаційна здатність метилювання в генах розрізняти випадки РЯ та здорові контролі
Фіг. 15: Визначення берега Сро-острівця, пов'язаного з раком молочної залози, в НУАЇ 2
Фіг. 16: Зворотня залежність між метилюванням й експресією 5100Р, 5І С22А18 і ОУРКА у лейкоцитах
Фіг. 17: Рівні метилювання Сро-сайтів НУАЇГ 2, визначені на приладі Шитіпа 450К
Фіг. 18: Рівні метилювання Сро-сайтів 5100Р, визначені на приладі ПШитіпа 450К
Фіг. 19: Рівні метилювання Сро-сайтів 5І С22А18, визначені на приладі Шитіпа 450К
Фіг. 20: Рівні метилювання Сро-сайтів ОУККА, визначені на приладі Шитіпа 450К
Фіг. 21: Рівні метилювання Сро-сайтів РОТ7, визначені на приладі Шитіпа 450К
Фіг. 22: Рівні метилювання Сро-сайтів КАРЗМ, визначені на приладі Шитіпа 450К
Фіг. 23: Рівні метилювання Сро-сайтів КРТОК, визначені на приладі Шитіпа 450К
Фіг. 24: Рівні метилювання Сро-сайтів МОКМІ, визначені на приладі Шитіпа 450К
Фіг. 25: Зворотня залежність між метилюванням й експресією НУАЇ2 у лейкоцитах. (а)
Блокові діаграми демонструють рівні метилювання с927091787 і прилеглих Сро-сайтів в ампліконі НУАГ2-А у лейкоцитах від 36 випадків спорадичного РМЗ ії 40 здорових контролів.
Блокова діаграма сд27091787 виділена рамкою для більшої наочності. (5) Блокова діаграма демонструє рівень експресії НУАГ2 у лейкоцитах від випадків спорадичного РМЗ і здорових контролів. Представлені р-значення розраховували із застосуванням О-критерію Манна-Уіїтні.
Кільцями відзначені випадаючі значення. (с) Зворотня залежність між рівнем метилювання с9д27091787 й експресією НУАЇГ2 у лейкоцитах.
Фіг. 26: Рівні метилювання чотирьох СрОо-сайтів в ампліконі НУАГ2-А у відсортованих фракціях лейкоцитів. Рівні метилювання вимірювали в трьох повторах у зразках (ДНК з суцільної крові та з відсортованих фракцій лейкоцитів) від семи випадків спорадичного РМЗ і 14 здорових контролів. Відмінність у метилюванні між випадками і контролями розраховували із застосуванням і-критерію. Рівні метилювання с927091787 представлені у вигляді діаграми вигляду "ящик з вусами". Кільцями відзначені випадаючі значення.
Перелік послідовностей
ЗЕО І МО: 1 нза-тів-652-Зр (МІМАТО003322): ааидасдссасиададичона
ЗЕО ІО МО: 2 пза-тів-652-5р (МІМАТО022709): саасссиаддачададидссациса
ЗЕБЕО 10 МО: З тів-801, розташована на хромосомі 1: 28847698 - 28847793: дашшдсисидсдидсддаайсдас
ЗЕО І МО: 4 пза-тів-376бс-Зр (МІМАТО000720): аасасададдааациссасди
ЗЕО І МО: 5 пза-тів-376бс-5р (МІМАТОО22861): аддидданайиссиисцайдии
ЗЕО І МО: 6 пза-тів-37ба-Зр (МІМАТО000729): аисацададдаааайссасди
ЗЕО І МО: 7 пза-тів-37ба-з5р (МІМАТО003386): днадацисиссиисиацдадна
ЗЕО І МО: 8 пза-тів-127-Зр (МІМАТО000446): исддаиссдисидадсицддси
ЗЕО І МО: 9 Нза-тів-127-5р (МІМАТО004604): сидааасисадададсисидац (510) ЗЕО І МО: 10 НнНза-тів-409-Зр (МІМАТО001639): даашдиидсисадидаасссси
ЗЕО ІО МО: 11 нНза-тів-409-5р (МІМАТО001638): аддинасссдадсаасицидсацй
ЗЕО І МО: 12 нза-тів-148р-Зр (МІМАТО000759): исадидсаисасадаасицшди
ЗЕО І МО: 13 НнНза-тів-148р-5р (МІМАТО004699): аадиисидицацасасисаддс
ЗЕО ІО МО: 14 НУАІ 2 (ММ 003773.4)
ЗЕО ІО МО: 15 НУАІ 2 (ММ 033158.4)
ЗЕО ІЮО МО: 16 НУМАІ2 (МР 0037643)
ЗЕО ІЮО МО: 17 НУАІ2 (МР 1493482)
ЗЕО І МО: 18 МЕВМІ (ММ 001142289.2)
ЗЕО ІЮ МО: 19 МАМІ (ММ 001142290.2)
ЗЕО І МО: 20 МаВМІ (ММ 001142291.2)
ЗЕО ІЮ МО: 21 МАМІ (ММ 015246.3)
ЗЕО ІЮ МО: 22 МЕаВМІ (МР 001135761.2)
ЗЕО ІЮ МО: 23 МаАВМІ (МР 001135762.1)
ЗЕО І МО: 24 МОВАМ (МР 001135763.2)
ЗЕО І МО: 25 МЕВМІ (МР 056061.1)
ЗЕО І МО: 26 ВРТОВ (ММ 001163034.1)
ЗЕО ІЮ МО: 27 ВРТОВ (ММ 0207612)
ЗЕО І МО: 28 АВРТОВ (МР 001156506.1)
ЗЕО ІЮ МО: 29 АВРТОВ (МР. 0658121)
ЗЕО ІО МО: 30 БІ С22А18 (ММ 002555.5)
ЗЕО ІО МО: 31 5І С22А18 (ММ 183233.2)
ЗЕО ІЮО МО: 32 5І С22А18 (МР. 002546.3)
ЗЕО ІО МО: 33 5І С22А18 (МР 899056.2)
ЗЕО ІЮ МО: 34 РОТ (ММ 004479.3)
ЗЕО ІЮО МО: 35 БОТ7 (МР 0044701)
ЗЕО ІЮ МО: 36 ВАРЗМ (ММ 005055.4)
ЗЕО ІЮ МО: 37 ВАРЗМ (ММ 032645.4)
ЗЕО ІЮО МО: 38 ВАРБМ (МР 0050462)
ЗЕО ІЮО МО: 39 ВАРБМ (МР 1160342)
Коо) ЗЕО ІЮО МО: 40 5100Р (ММ 005980.2)
ЗЕО ІО МО: 41 5100Р (МР. 0059711)
ЗЕО ІЮ МО: 42 ОУАКА (ММ 001282285.1)
ЗЕО І МО: 43 ОМАКА (ММ 001282286.1)
ЗЕО ІЮ МО: 44 ОУВКА (ММ 003845.2)
ЗЕО І МО: 45 ОУАКА (МР. 001269214.1)
ЗЕО І МО: 46 ОУАКА (МР 001269215.1)
ЗЕО ІЮ МО: 47 ОУВАКА (МР 003836.1)
ЗЕО ІЮ МО: 33 змістовна послідовність праймера НУАГ 2
ЗЕО ІЮО МО: 34 антизмістовна послідовність праймера НУАЇ 2
ЗЕО ІЮ МО: 33 змістовна послідовність праймера НУАЇ 2-і5-310
ЗЕО ІЮ МО: 34 антизмістовна послідовність праймера НУАЇ 2-і5-310
ЗЕО ІЮ МО: 33 змістовна послідовність праймера НУАЇ 2-і5-325
ЗЕО ІЮ МО: 34 антизмістовна послідовність праймера НУАЇ 2-і5-325
ЗЕО ІЮ МО: 35 змістовна послідовність праймера МОКМ!1
ЗЕО ІЮ МО: 36 антизмістовна послідовність праймера МОКМ1
ЗЕО ІЮ МО: 37 змістовна послідовність праймера КРТОК
ЗЕО ІЮ МО: 38 антизмістовна послідовність праймера КРТОК
ЗЕО ІЮ МО: 39 змістовна послідовність праймера 5І.С22А18
ЗЕО ІЮ МО: 40 антизмістовна послідовність праймера 5І С22А18
ЗЕО ІЮ МО: 41 змістовна послідовність праймера РОТ7
ЗЕО ІЮ МО: 42 антизмістовна послідовність праймера РГОТ7
ЗЕО ІЮ МО: 43 змістовна послідовність праймера КАРБМ
ЗЕО ІЮ МО: 44 антизмістовна послідовність праймера КАРБМ
ЗЕО ІЮ МО: 45 змістовна послідовність праймера 5100Р
ЗЕО ІЮ МО: 46 антизмістовна послідовність праймера 5100Р
ЗЕО ІЮ МО: 47 змістовна послідовність праймера ОУМККА
ЗЕО ІЮ МО: 48 антизмістовна послідовність праймера ОУМККА
Докладний опис винаходу
Визначення
Перед тим, як даний винахід буде докладно описаний нижче, слід зазначити, що даний винахід не обмежений конкретною методологією, протоколами і реактивами, описаними в даній заявці, оскільки всі зазначені параметри можуть варіювати. Також слід розуміти, що термінологія, яка використана в даній заявці, призначена винятково для цілей опису конкретних варіантів реалізації та не покликана обмежити обсяг даного винаходу, який обмежується винятково прикладеною формулою винаходу. Якщо не зазначено зворотнє, всі технічні та наукові терміни, що використовуються в даній заявці мають те саме значення, яке загальноприйнято розуміється середнім фахівцем в даній області техніки.
У тексті даної специфікації приводяться посилання на деякі документи. Кожний з документів, посилання на які приводяться в даній заявці (включаючи всі патенти, заявки на патент, наукові публікації, специфікації виробника, інструкції та т.п.), будь то вище або нижче за текстом, повністю включений у дану заявку за допомогою посилання. Ніщо в даній заявці не слід витлумачувати як визнання того, що даний винахід не дає права датувати такий винахід заднім числом на підставі попереднього винаходу. Деякі документи, посилання на які приводяться в даній заявці, характеризуються як "включені за допомогою посилання". У випадку протиріч між визначеннями або ідеями таких включених за допомогою посилання джерел і визначеннями або ідеями, наведеними в даній специфікації, перевагу має текст даної специфікації.
Далі за текстом будуть описані елементи даного винаходу. Дані елементи перераховані з конкретними варіантами реалізації, однак слід розуміти, що дані елементи можна поєднувати будь-яким способом й у будь-якій кількості, щоб одержати додаткові варіанти реалізації. Різним чином описані приклади і переважні варіанти реалізації не слід витлумачувати як обмежуючі даний винахід винятково варіантами реалізації, описаними в явному вигляді. Слід розуміти, що даний опис підтримує й охоплює варіанти реалізації, які поєднують в явному вигляді описані варіанти реалізації з будь-якою кількістю розкритих і/або переважних елементів. Більше того, будь-які перестановки і комбінації всіх описаних у даній заявці елементів слід вважати розкритими шляхом опису даної заявки, якщо контекст не диктує зворотнє.
За всією специфікацією та наступною за нею формулою винаходу, якщо контекст не диктує зворотнє, слова "включати" і "містити" та їх варіанти, такі як "включає", "містить" та "що включає", "що містить", слід розуміти як включення зазначеного цілого числа або етапу або групи цілих чисел або етапів, але не виключення будь-яких інших цілих чисел або етапів або групи цілих чисел або етапів.
У даній специфікації та прикладеній формулі винаходу форми однини включають форми множини, якщо контекст однозначно не диктує зворотнє.
Термін "приблизно" при використанні в комбінації з числовим значенням призначений для включення числових значень у межах діапазону, що має нижню межу, яка на 5 95 нижча, ніж зазначене числове значення, і має верхню межу, яка на 595 вища, ніж зазначене числове значення. "Молекули нуклеїнової кислоти" розуміються як полімерна або олігомерна макромолекула, складена з мономерів нуклеотидів. Мономери нуклеотидів складаються з нуклеотидної основи, п'ятивуглецевого цукру (такого як, але не обмежуючись зазначеними, рибоза або 2- дезоксирибоза), і від однієї до трьох фосфатних груп. Як правило, полінуклеотид утворений за допомогою фосфодіефірних зв'язків між окремими мономерами нуклеотидів. У контексті даного винаходу зазначені молекули нуклеїнової кислоти включають, але не обмежені зазначеними, рибонуклеїнову кислоту (РНК), дезоксирибонуклеїнову кислоту (ДНК) та суміші зазначених нуклеїнових кислот, такі як, наприклад, гібриди РНК-ДНК. Терміни "полінуклеотид", "нуклеїнова кислота" та "молекула нуклеїнової кислоти" використовуються в даній заявці взаємозамінно.
Нуклеїнові кислоти можна синтезувати, наприклад, хімічним способом, наприклад, згідно з фосфотриефірним методом (див., наприклад, публікацію ОПітапп, Е. 5 Реутап, А. (1990)
Спетіса! Веміємв, 90, 543-584). Аптамери являють собою нуклеїнові кислоти, які зв'язуються з високою афінністю з поліпептидом, у даній заявці - з тіг146б6-а. Аптамери можна виділити за допомогою способів селекції, таких як ЗЕ Етіг146-а (див., наприклад, публікації дауазепа (1999) Сіп. Спет., 45, 1628-50; Кішд апа Ратишок (1994) М. Мої. Вісі. Нер., 20, 97-107; 5 5,582,981), з великого пулу різних одноланцюгових молекул РНК. Аптамери можна також синтезувати і провести селекцію у формі їх дзеркального відображення, наприклад, у вигляді І - рибонуклеотида (МоМе еї аЇ. (1996) Маї. Віоїтесппої., 14, 1116-9; Кіпвзтапп єї аї. (1996) Маї.
Віоїеснпої., 14, 1112-5). Виділені таким способом форми мають таку перевагу, що існуючі у природі рибонуклеази не руйнують дані форми, і тому останні характеризуються більшою 60 стабільністю. Ендонуклеази або екзонуклеази, зокрема, ДНКази і РНКази, які можна виявити в клітині, можуть руйнувати нуклеїнові кислоти. Внаслідок цього нуклеїнові кислоти доцільно модифікувати для надання їм стійкості до руйнування, забезпечуючи тим самим підтримку високої концентрації нуклеїнових кислот в клітині протягом тривалого періоду часу (Веїдеїтап еї а!. (1995) Мисієїс Асіа5 Нев. 23:3989-94; УМО 95/11910; УМО 98/37240; УМО 97/29116). Як правило, такої стабілізації можна досягти за допомогою введення однієї або декількох міжнуклеотидних фосфатних груп або введення однієї або декількох нефосфатних міжнуклеотидних груп.
Підходящі модифіковані міжнуклеотидні групи зазначені у публікації Опітапп апі Реутап (1990), вище (див. також публікації Веїдеїтап еї аїЇ. (1995) Мисієїс Асід5 Ке5. 23:3989-94; МО 95/11910; УМО 98/37240; МО 97/29116). Модифіковані міжнуклеотидні фосфатні радикали і/або нефосфатні містки в нуклеїновій кислоті, які можна використовувати в одному із застосувань згідно з даним винаходом, включають, наприклад, метилфосфонат, фосфотіоат, фосфоамідат, фосфодитіоат і/або фосфатні ефіри, тоді як нефосфатні міжнуклеотидні аналоги включають, наприклад, силоксанові містки, карбонатні містки, карбоксиметилові складні ефіри, ацетамідатні містки і/або тіоефірні містки. Також мають на увазі, що дана модифікація повинна поліпшити стійкість фармацевтичної композиції, яку можна використовувати в одному із застосувань згідно з даним винаходом. Нуклеїнові кислоти можна вибрати з групи, що складається з пептидної нуклеїнової кислоти (ПНК), замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК), гліколь-нуклеїнової кислоти (ГНК), треозо-нуклеїнової кислоти (ТНК), мікроРНК і малої інтерферуючої РНК (міРНнК), полінуклеотидного зонда, праймера або праймерів (наприклад, пари праймерів), зокрема, праймера або праймерів для полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР), реакції зворотної транскрипції (ЗТ) або секвенування ДНК.
У контексті різних аспектів даного винаходу термін "нуклеїнова кислота" включає геномну
ДНК, кКДНК, рекомбінантну ДНК, кРНК, мРНК, мікроРНК і малу інтерферуючу РНК (міРНК).
Нуклеїнова кислота може складатися з цілого гена або частини гена. Нуклеїнова кислота може також являти собою штучну нуклеїнову кислоту. Штучні нуклеїнові кислоти включають поліамідну або пептидну нуклеїнову кислоту (ПНК), морфоліно та замкнену нуклеїнову кислоту (ЗНК), а також гліколь-нуклеїнову кислоту (ГНК) та треозо-нуклеїнову кислоту (ТНК). Кожна з перерахованих нуклеїнових кислот відрізняється від існуючих у природі ДНК або РНК внаслідок зміни кістяка молекули, як добре відомо фахівцю в даній області техніки.
Зо У даній заявці термін "мікроРНК" та його варіації, такі як "пікМА" ї "тів", є зрозумілим фахівцю в даній області техніки і відноситься до короткої молекули рибонуклеїнової кислоти (РНК), виявленої в еукаріотичних клітинах і рідинах організму багатоклітинних організмів.
МікроРНК включають мікроРНК людини, зрілі одноланцюгові мікроРНК, попередник мікроРНК (рге-мікроРНК) і варіанти зазначених молекул, які можуть існувати у природі. У деяких випадках термін "мікроРНК" також включає первинні транскрипти мікроРНК (ргі-мікроРНК) ії дуплексну мікроРНК. Якщо не зазначено зворотнє, у даній заявці назва конкретної мікроРНК означає зрілу мікроРНК. Попередник мікроРНК може складатися з від 25 до декількох тисяч нуклеотидів, як правило, від 40 до 130, від 50 до 120 або від 60 до 110 нуклеотидів. Як правило, зріла мікроРНК складається з від 5 до 100 нуклеотидів, часто від 10 до 50, від 12 до 40 або від 18 до 26 нуклеотидів. Термін "мікроРНК" також включає "напрямний" ланцюг, який в остаточному підсумку надходить в індукований РНК комплекс сайленсингу (КМА-іпдисей в5ійепсіпд сотріех,
КІС), а також "супровідний" ланцюг, комплементарний зазначеному ланцюгу.
Послідовність декількох мікроРНК відома в даній області техніки і легко доступна фахівцю в добре відомих базах даних послідовностей, таких як, наприклад, тікВахзе (пер/Лумлу. тігразе.ого/), (Спінйне-Уопез 5., МАВ 2004 З2(Раїаразе Івзйиє):0109-0111; Коготага
А, СИйнйне-допез 5., МАВ 2011 39(Оаїаразе Іввиє) 0152-0157). Слід розуміти, що зазначені нижче облікові номери баз даних окремих мікроРНК являють собою такі мікроРНК, отриманих від людини. Однак дані значення у базах даних також представляють облікові номери баз даних відповідних мікроРНК різного походження, таких як, наприклад, мікроРНК будь-якого походження від ссавця, плазуна або птаха, таких як, наприклад, мікроРНК, які вибрані з групи, що складається з мікроРНК лабораторних тварин (наприклад, миші або пацюки), свійських тварин (включаючи, наприклад, морську свинку, кролика, коня, віслюка, корову, вівцю, козу, свиню, курку, верблюда, кішку, собаку, морську черепаху, сухопутну черепаху, змію або ящірку) або приматів, включаючи шимпанзе, бонобо та горил. Також слід розуміти, що згадування конкретної мікроРНК за допомогою її номера (наприклад, ітік-652) рівною мірою означає послідовність -Зр і -5р (тій-652-Зр і тік-652-5р).
Послідовність тіт-652 депонована під обліковим номером тікКВахзе ІЮ МІО003667, який включає пза-тін-652-3р (МІМАТО0О003322) і пза-тів-652-5р (МІМАТО0О022709), що відповідають
ЗЕО ІЮ МО: 1 і 2, згідно з даним винаходом.
Послідовність ітік-801 була депонована під обліковим номером тіВВазе ІЮ МІООО5202: 5'- слоасобоссавосСасАдОСОАС-3, однак на даний час наведену послідовність вважають фрагментом сплайсосомної РНК ИЦТ11 та її, таким чином, вилучили з бази даних тікВазе. Рге- мікроРНК-801 розташована на хромосомі 1: 28847698 - 28847793. Послідовність даної молекули відповідає ЗЕО ІЮО МО: З даному винаходу. тівВ-376бс, також називана тік-368, депонована під обліковим номером тікКВазе ІЮ
МІО000776, який включає тік-376бс-Зр (МІМАТ0О000720) ії пза-тів-376бс-5р (МІМАТО022861), що відповідають 5ЕО ІЮ МО: 4 і 5, згідно з даним винаходом.
Послідовність тік-37ба депонована під обліковим номером тікВахзе ІЮ МІО000784, який включає пза-тів-37ба-Зр (МІМАТО000729) ії пза-тів-376ба-5р (МІМАТО003386), що відповідають
ЗЕОІЮ МО: 6 і 7, згідно з даним винаходом.
Послідовність тік-127 депонована під обліковим номером тікКВахзе ІЮ МІО000472, який включає п5за-тів-127-3р (МІМАТО000446) і пза-тів-127-5р (МІМАТО004604), що відповідають
ЗЕОІЮ МО: 8 і 9, згідно з даним винаходом.
Послідовність тій-409 депонована під обліковим номером тікВазе ІЮ МІО00О1735, який включає п5за-тін-409-3зр (МІМАТО001639) ії п5за-тів-409-5р (МІМАТО001638), що відповідають
ЗЕО ІЮО МО: 10 і 11, згідно з даним винаходом.
Послідовність тік-148р депонована під обліковим номером тікВахзе ІЮ МІО0О00811, який включає пза-тів-1486-3р (МІМАТО000759) ії пза-тів-148р-5р (МІМАТО0О004699), що відповідають
ЗЕО ІЮО МО: 12 і 13, згідно з даним винаходом.
Термін "комбінація мікроРНК" відноситься до комбінацій мікроРНК згідно з даним винаходом. Кількість мікроРНК у зразку від суб'єкта можна визначити за допомогою методик, добре відомих в даній області техніки. Залежно від природи зразка зазначену кількість можна визначити за допомогою методик на основі ПЛР для підрахунку кількості полінуклеотиду або за допомогою інших способів, таких як мас-спектрометрія або секвенування (наступного покоління) або за допомогою одного зі способів, описаних у прикладах (СівзеїїЇ КА, ЮОео 5К. Тгепаз іп тісто ВМА авеїесійоп. Апа! Віоапа! Спет. 2009;394(4):1109-1116 або де РіапеїІ-Задиег М, Водісіо
МО. Апаїуїіїса! авресів ої тістоАМА іп айіадповіїс5: а гемівєм). Апа! Спіт Асіа 2011 Ац4д 12:699(2):134-52). Термін "визначення кількостей щонайменше мікроРНК з комбінації мікроР НК"
Зо у даній заявці переважно відноситься до окремого визначення кількості кожної мікроРНК з комбінації для забезпечення можливості порівняння кількості кожної мікроРНК комбінації з еталоном, специфічним для зазначеної мікроРНК.
Термін "зонд" у даній заявці означає одноланцюговий олігонуклеотид, який, як правило, використовують для виявлення цільових послідовностей РНК і/або ДНК, комплементарних послідовності зонда. Зонд гібридизується з одноланцюговою нуклеїновою кислотою (ДНК або
РНК), нуклеотидна послідовність якої дозволяє здійснювати спарювання нуклеотидів внаслідок комплементарності між зондом і цільовою послідовністю. Довжина зонда залежить від ймовірного застосування, а також від необхідної специфічності зонда. Як правило, зонд складає 20-500 (тобто 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300, 400, 500) нуклеотидів у довжину, переважно, 20-100 нуклеотидів, більше переважно 20-50. Зонди для виявлення мікроРНК складають від 12 до 30 нуклеотидів у довжину. Зонди використовують у різних постановках експерименту, таких як, але не обмежуючись зазначеними, саузерн- і нозернблотинг, ПЛР у режимі реального часу та гібридизація іп 5йи (іп 5йи пубгіаігайоп, ІЗН), а також для експериментів на основі мікроматриць.
Зонд може бути неміченим, прямо міченим або опосередковано міченим, наприклад, за допомогою біотину, до якого потім може приєднатися комплекс стрептавідину. Зазначена мітка може являти собою молекулу, що виявляється спектроскопічним, фотохімічним, біохімічним, імунохімічним, хімічним або іншими фізичними способами. Наприклад мітки, що підходять, включають 32Р, флуоресцентні барвники, електронощільні реактиви, ферменти (наприклад, що зазвичай використовуються в аналізі БЕ І5БА - еплуте-ЇйпКей іттипозогбрепі авззау, твердофазний імуноферментний аналіз), біотин, дигоксигенін або гаптени та інші молекули, які є такими, що виявляються або які можна зробити такими, що виявляються. Мітка може бути вбудована в нуклеїнові кислоти у будь-якому положенні, наприклад, на 3'-кінці, на 5'-кінці або в середині ланцюга. Термін "зонд" також включає нуклеїнові кислоти, що відрізняються складом свого кістяка, такі як, але не обмежуючись зазначеними, пептидні нуклеїнові кислоти (ПНК), замкнені нуклеїнові кислоти (ЗНК), гліколь-нуклеїнові кислоти (ГНК) і треозо-нуклеїнові кислоти (ТНК).
Термін "праймер" у даній заявці означає одноланцюговий олігонуклеотид, який, як правило, виступає в якості стартової точки для ферментів, реплікуючих ДНК. Праймер зв'язується або бо гіоридизується з матрицею ДНК і, як правило, містить послідовність, яка є комплементарною послідовності ДНК, з якою праймер, приблизно, зв'язується. Праймер може також містити додаткові послідовності, наприклад, послідовності, що виступають в якості сайтів розщеплення нуклеазою (наприклад, Ват НІ, Ніпа ПШ ї т.д). Довжину праймера вибирають залежно від ймовірного застосування. Наприклад, довжина праймерів, що використовується для ампліфікації ДНК у полімеразній ланцюговій реакції (ПЛР), як правило, складає щонайменше 10 нуклеотидів, переважно, від 10 до 50 (тобто 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 45, 50) нуклеотидів, більше переважно, від 15 до 30 нуклеотидів. Більше короткі праймери довжиною щонайменше 5 нуклеотидів використовують для секвенування матриць ДНК. Також у даний термін "праймер" включені "вироджені праймери", які являють собою суміш подібних, але не ідентичних праймерів. Праймер може бути міченим "тагом"' (їад) або міченим маркерною молекулою, що виявляється спектроскопічним, фотохімічним, біохімічним, імунохімічним, хімічним або іншими фізичними способами.
Термін "рівень експресії" означає кількість продукту гена, що є присутнім в організмі або зразку в певній точці часу. Рівень експресії можна, наприклад, вимірювати/кількісно визначити/виявити за допомогою білка або мРНК, експресованої з гена. Рівень експресії можна, наприклад, кількісно визначити за допомогою нормування кількості продукту гена, що представляє інтерес, який є присутнім у зразку, до сумарної кількості продукту гена тієї самої категорії (сумарному білюку або мРНК) у тому самому зразку або в еталонному зразку (наприклад, у зразку, відібраному в той самий час від того самого індивідуума або в частині того самого зразка ідентичного розміру (маса, об'єм)) або за допомогою виявлення кількості продукту гена, що представляє інтерес, у перерахуванні на певний розмір зразка (маса, об'єм і т.п.). Рівень експресії можна вимірювати або виявити за допомогою будь-якого способу, відомого в даній області техніки, наприклад, способами прямого виявлення та кількісного визначення продукту гена, що представляє інтерес (такими як мас-спектрометрія), або способами опосередкованого виявлення та вимірювання продукту гена, що представляє інтерес, які зазвичай здійснюють за допомогою зв'язування продукту гена, що представляє інтерес, з однією або декількома різними молекулами або засобами виявлення (наприклад, праймером (праймерами), зондами, антитілами, білковими каркасами), специфічними до
Зо продукту гена, що представляє інтерес. Визначення рівня копій гена, включаючи також визначення відсутності або присутності одного або декількох фрагментів (наприклад, за допомогою зондів або праймерів нуклеїнової кислоти, наприклад, кількісної ПЛР, ПЛР на основі мультиплексної ампліфікації лігованих зондів (тийіріех Ідайоп-дерепаепі рообе атріїйісайоп,
МІ РА), також відноситься до знань фахівця в даній області техніки.
Терміни "білок" і "поліпептид" використовуються в даній заявці взаємозамінно й означають будь-який зв'язаний пептидним зв'язком ланцюг амінокислот, незалежно від довжини або посттрансляційної модифікації. Білки, придатні у даному винаході (включаючи похідні білка, варіанти білка, фрагменти білка, сегменти білка, епітопи білка та домени білка), можна додатково модифікувати за допомогою хімічної модифікації. Це означає, що такий, хімічним способом модифікований, поліпептид містить відмінні хімічні групи, ніж 20 існуючих у природі амінокислот. Приклади таких інших хімічних груп включають, без обмеження, глікозильовані амінокислоти і фосфорильовані амінокислоти. Хімічні модифікації поліпептиду можуть забезпечити переважні властивості у порівнянні з батьківським поліпептидом, наприклад, одну або декілька з наступних властивостей: збільшена стабільність, збільшений період біологічного напівжиття або збільшена розчинність у воді. Хімічні модифікації, застосовні до варіантів, придатних у даному винаході, включають, без обмеження: ПЕГілювання, глікозилювання неглікозильованих батьківських поліпептидів або модифікації паттерна глікозилювання у батьківському поліпептиді.
У контексті різних аспектів даного винаходу термін "пептид" означає короткий полімер амінокислот, з'єднаних пептидними зв'язками. Пептид містить такі самі хімічні (пептидні) зв'язки, що і білки, але зазвичай є більше коротким у довжину. Найкоротший пептид являє собою дипептид, що складається з двох амінокислот, з'єднаних одним пептидним зв'язком. Також можуть існувати трипептид, тетрапептид, пентапептид і т.д. Переважно, пептид складає у довжину більше 8, 10, 12, 15, 18 або 20 амінокислот. Пептид містить амінокінець та карбоксильний кінець, якщо не є циклічним пептидом.
У контексті різних аспектів даного винаходу термін "поліпептид" означає один лінійний ланцюг амінокислот, з'єднаних разом пептидними зв'язками і, переважно, містить щонайменше приблизно 21 амінокислоту. Поліпептид може являти собою один ланцюг білка, який складається з більше ніж одного ланцюга, або може являти собою білок сам по собі, якщо білок 60 складається з одного ланцюга.
У контексті різних аспектів даного винаходу термін "білок" означає молекулу, що містить один або декілька поліпептидів, які зберігають вторинну та третинну структуру, і додатково означає білок, який утворений декількома поліпептидами, тобто декількома суб'єдиницями, що утворюють четвертинні структури. Білок іноді містить приєднані непептидні групи, які можна назвати простетичними групами або кофакторами. Первинна структура білка або поліпептиду являє собою послідовність амінокислот у поліпептидному ланцюзі. Вторинна структура білка являє собою звичайну тривимірну форму локальних сегментів білка. Однак вторинна структура не описує конкретні положення атомів у тривимірному просторі, які вважаються третинною структурою. У білках вторинна структура визначена паттернами водневих зв'язків між амідними і карбоксильними групами кістяка. Третинна структура білка являє собою тривимірну структуру білка, визначену атомними координатами. Четвертинна структура являє собою розташування множини покладених або згорнутих молекул білка або поліпептиду в мультисуб'єсдиничному комплексі. Терміни "амінокислотний ланцюг" і "поліпептидний ланцюг" використовують у контексті даного винаходу в якості синонімів. Термін "посттрансляційний" у даній заявці означає події, які відбуваються після трансляції триплету нуклеотидів в амінокислоту й утворення пептидного зв'язку з наступною амінокислотою у послідовності. Такі посттрансляційні події можуть відбуватися після того, як був отриманий весь поліпептид, або вже протягом процесу трансляції на тих частинах поліпептиду, які вже були трансльовані. Посттрансляційні події, як правило, змінюють або модифікують хімічні або структурні властивості отриманого в результаті поліпептиду. Приклади посттрансляційних подій включають, але не обмежені зазначеними, події, такі як глікозилювання або фосфорилювання амінокислот, або відщеплення пептидного ланцюга, наприклад, ендопептидазою. Термін "котрансляційний" у даній заявці означає події, які відбуваються протягом процесу трансляції триплету нуклеотидів в амінокислотний ланцюг. Дані події, як правило, змінюють або модифікують хімічні або структурні властивості отриманого в результаті амінокислотного ланцюга. Приклади котрансляційних подій включають, але не обмежені зазначеними, події, які можуть зупинити процес трансляції повністю або порушити утворення пептидного зв'язку, що призведе до одержання двох окремих продуктів трансляції.
Термін "сегмент" означає будь-яку частину макромолекули (наприклад, поліпептиду, білка або поліпротеїну), на яку дана макромолекула може бути розділена. Макромолекула може
Зо складатися з одного або декількох сегментів. Така сегментація може існувати у зв'язку з функціональними властивостями (наприклад, сегменти, що мають імунореактивні властивості або функції приєднання до мембрани) або структурними властивостями (наприклад, послідовність нуклеотидів або амінокислотна послідовність, або вторинна, або третинна структура) макромолекули й/або окремого сегмента. У контексті даного винаходу переважно, що термін "сегмент" означає частину білка або поліпротеїну. Особливо переважно, що такий сегмент згортається та/або функціонує незалежно від іншого білка або поліпротеїну. "Епітоп", також відомий як антигенна детермінанта, являє собою сегмент макромолекули, який розпізнається імунною системою, зокрема, антитілами, В-клітинами або Т-клітинами. Такий епітоп являє собою ту частину або сегмент макромолекули, які здатні до зв'язування з антитілом або антигензв'язувальним фрагментом зазначеного антитіла. У даному контексті термін "зв'язування", переважно, відноситься до специфічного зв'язування. У контексті даного винаходу переважно, що термін "епітоп" означає сегмент білка або поліпротеїну, який розпізнається імунною системою. Епітопи зазвичай складаються з хімічно активних угруповань поверхні молекул, таких як амінокислоти або бічні ланцюги цукрів, і зазвичай мають специфічні тривимірні структурні характеристики, а також специфічні характеристики заряду.
Конформаційні та неконформаційні епітопи відрізняються тим, що зв'язування з першими, але не з другими, втрачається у присутності денатуруючих розчинників.
У даній заявці термін "домен" означає сегмент послідовності або структури білка або поліпротеїну (або відповідної послідовності нуклеотидів) який може еволюціонувати, функціонувати й/або існувати незалежно від іншого ланцюга білка. Як правило, білок складається з одного або декількох доменів, причому кожний з даних доменів являє собою тривимірну структуру, яка є стабільною та згорнутою незалежно від іншого ланцюга білка. Такий домен, як правило, утворює незалежну функціональну одиницю у білку (наприклад, трансмембранні домени, імуноглобуліноподібні домени або ДНК-зв'язувальні домени).
Амінокислотна послідовність деяких пептидів і білків, а також послідовності нуклеотидів, що кодують відповідні пептиди і білки, добре відомі в даній області техніки і легко доступні фахівцю у добре відомих базах даних послідовностей, таких як, наприклад Сепрапк (пер:/Лумли. побі.піт.пій-дом/депрапк/). Слід розуміти, що зазначені нижче облікові номери баз даних окремих послідовностей являють собою такі, що отримані від людини. Однак дані 60 значення у базах даних також представляють облікові номери баз даних відповідних послідовностей нуклеотидів різного походження, таких як, наприклад, амінокислотні послідовності або послідовності нуклеотидів будь-якого походження від ссавця, плазуна або птаха, такі як, наприклад, такі, які вибрані з групи, що складається з амінокислотних послідовностей або послідовностей нуклеотидів лабораторних тварин (наприклад, миші або пацюки), свійських тварин (включаючи, наприклад, морську свинку, кролика, коня, віслюка, корову, вівцю, козу, свиню, курку, верблюда, кішку, собаку, морську черепаху, сухопутну черепаху, змію або ящірку) або приматів, включаючи шимпанзе, бонобо та горил.
НУАГ2:
Обліковий Мо Сепрапк: ММ 003773.4 (01І:289802998) для варіанта транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:14 даного винаходу;
Обліковий Мо Сепрапк: ММ 033158.4 (0І:289802999) для варіанта транскрипта 2, який відповідає ЗЕО ІЮ МО:15 даної заявки;
Обліковий Мо Сепрапк: МР 003764.3 (51:15022801) для поліпептиду НЖУАЇ2, кодованого варіантом транскрипта 1, який відповідає 5ЕО ІЮ МО:16 даного винаходу, і
Обліковий Мо Сепрапк: МР 149348.2 (51:34304377) для поліпептиду НЖУАЇ2, кодованого варіантом транскрипта 2, який відповідає 5ЕО ІЮ МО:17 даного винаходу;
Мам:
Обліковий Мо (зепрапк: ММ 001142289.2 для варіанта транскрипта 2, який відповідає ЗЕО
ІО МО:18 даного винаходу, і
Обліковий Мо (зепрапк: ММ 001142290.2 для варіанта транскрипта 3, який відповідає ЗЕО
ІО МО:19 даного винаходу, і
Обліковий Мо (зепрапк: ММ 001142291.2 для варіанта транскрипта 4, який відповідає ЗЕО
ІО МО:20 даного винаходу, і
Обліковий Мо бСепрапк: ММ 015246.3 для варіанта транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІЮ
МО:21 даного винаходу, і
Обліковий Мо Сепрапк: МР 001135761.2 для поліпептиду МОКМІ1, кодованого варіантом транскрипта 2, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:22 даного винаходу;
Обліковий Мо Сбепрапк: МР 001135762.1 для поліпептиду МОКМІ1, кодованого варіантом транскрипта 3, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:23 даного винаходу;
Обліковий Мо Сбепрапк: МР 001135763.2 для поліпептиду МОКМІ1, кодованого варіантом транскрипта 4, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:24 даного винаходу;
Обліковий Мо (зепрапк: МР 056061.1 для поліпептиду МОКМІ1, кодованого варіантом транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:25 даного винаходу;
ВРТОВ
Обліковий Мо (зепрапк: ММ 001163034.1 для варіанта транскрипта 2, який відповідає ЗЕ
ІО МО:26 даного винаходу;
Обліковий Мо бСепрапк: ММ 020761.2 для варіанта транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІЮ
МО:27 даного винаходу;
Обліковий Мо Сепрапк: МР 001156506.1 для поліпептиду КРТОК, кодованого варіантом транскрипта 2, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:28 даного винаходу;
Обліковий Мо («зепрапк: МР 065812.1 для поліпептиду КРТОК, кодованого варіантом транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:29 даного винаходу;
І С22А18
Обліковий Мо СбСепрапк: ММ 002555.5 для варіанта транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІЮ
МО:30 даного винаходу;
Обліковий Мо бСепрапк: ММ 183233.2 для варіанта транскрипта 2, який відповідає ЗЕО ІЮ
МО:31 даного винаходу;
Обліковий Мо Сепрапк: МР 002546.3 для поліпептиду 5 С22А18, кодованого варіантом транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:32 даного винаходу;
Обліковий Мо Сепрапк: МР 899056.2 для поліпептиду 5ІС22А18, кодованого варіантом транскрипта 2, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:33 даного винаходу;
РИТ7
Обліковий Мо Сзепрапк: ММ 004479.3 для транскрипта, який відповідає ЗЕО ІЮ МО:34 даного винаходу;
Обліковий Мо (зепрапк: МР. 004470.1 для поліпептиду РОТ7, кодованого транскриптом, який відповідає ЗЕО ІЮ МО:З35 даного винаходу;
ВАРЗМ
Обліковий Мо Сбепрапк: ММ 005055.4 для варіанта транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІЮ
МО:36 даного винаходу;
Обліковий Мо бСепрапк: ММ 032645.4 для варіанта транскрипта 2, який відповідає 5ЕО ІЮ
МО:37 даного винаходу;
Обліковий Мо Сепрапк: МР 005046.2 для поліпептиду КАРБМ, кодованого варіантом транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:38 даного винаходу;
Обліковий Мо Сепрапк: МР 116034.2 для поліпептиду КАРБМ, кодованого варіантом транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІО МО:39 даного винаходу; 5100Р
Обліковий Мо Сепрапк: ММ 005980.2 для транскрипта, що відповідає ЗЕО ІЮО МО:40 даного винаходу;
Обліковий Мо бепрапк: МР. 005971.1 для поліпептиду 5100Р, кодованого транскриптом, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:41 даного винаходу; руУвкі
Обліковий Мо (зепрапк: ММ 001282285.1 для варіанта транскрипта 2, який відповідає ЗЕО
ІО МО:42 даного винаходу;
Обліковий Мо (зепрапк: ММ 001282286.1 для варіанта транскрипта 3, який відповідає 5ЕО
ІО МО:43 даного винаходу;
Обліковий Мо бСепрапк: ММ 003845.2 для варіанта транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІЮ
МО:44 даного винаходу;
Обліковий Мо Сепрапк: МР 001269214.1 для поліпептгиду ОМУКК4, кодованого варіантом транскрипта 2, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:45 даного винаходу;
Обліковий Мо Сепрапк: МР 001269215.1 для поліпептгиду ОМУКК4, кодованого варіантом транскрипта 3, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:46 даного винаходу;
Обліковий Мо (зепрапк: МР 003836.1 для поліпептиду ЮМКК4, кодованого варіантом транскрипта 1, який відповідає ЗЕО ІЮО МО:47 даного винаходу;
У даній заявці термін "варіант" слід розуміти як полінуклеотид або білок, який відрізняється у порівнянні з полінуклеотидом або білком, від якого був отриманий, на одну або декілька змін довжини або послідовності. Поліпептид або полінуклеотид, від якого був отриманий варіант білка або нуклеїнової кислоти, також відомий як батьківський поліпептид або полінуклеотид.
Термін "варіант" включає "фрагменти" або "похідні" батьківської молекули. Як правило,
Зо "фрагменти" є меншими за довжиною або за розміром, ніж батьківська молекула, у той час як "похідні" демонструють одну або більше відмінностей послідовності у порівнянні з батьківською молекулою. Також у даний термін включені модифіковані молекули, такі як, але не обмежуючись зазначеними, білки, модифіковані посттрансляційним способом (наприклад, глікозильовані, біотинільовані, фосфорильовані, убіквітиновані, пальмітоїльовані або розщеплені протеолітичним способом білки), і модифіковані нуклеїнові кислоти, такі як метильована ДНК. Також у термін "варіант" включені суміші різних молекул, такі як, але не обмежуючись зазначеними, гібриди РНК-ДНК. Як правило, варіант конструюють штучним способом, переважно, за допомогою генно-технологічних способів, у той час як батьківський поліпептид або полінуклеотид являє собою білок або полінуклеотид дикого типу. Однак існуючі у природі варіанти у даній заявці також розуміються включеними в термін "варіант". Також варіанти, придатні у даному винаході, можуть бути також отримані з гомологів, ортологів або паралогів батьківської молекули або зі штучно сконструйованого варіанта за умови, що варіант демонструє щонайменше одну біологічну активність батьківської молекули, тобто є функціонально активним.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу варіант, придатний у даному винаході, демонструє загальну кількість до 200 (до 1,2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 або 200) змін в амінокислотній послідовності або послідовності нуклеотидів (тобто замін, вставок, делецій, 5-, 3-, М-кінцевих і/або С-кінцевих усічень). Заміни амінокислот можуть бути консервативними і/або неконсервативними. Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу варіант, придатний у даному винаході, відрізняється від білка або полінуклеотиду, з якого був отриманий даний варіант, на 1, 2,3,4,5,6, 7,8, 9,10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 або 100 замін амінокислоти або нуклеїнової кислоти. В якості альтернативи або додатково, "варіант" у даній заявці можна охарактеризувати певним ступенем ідентичності послідовності батьківському поліпептиду або батьківському полінуклеотиду, з якого був отриманий даний варіант. Більше точно, варіант білка в контексті даного винаходу демонструє щонайменше 80 95 ідентичності послідовності своєму батьківському поліпептиду.
Варіант полінуклеотиду в контексті даного винаходу демонструє щонайменше 80 95 ідентичності послідовності своєму батьківському поліпептиду. Переважно, область ідентичності бо послідовностей варіантів білка перевищує безперервний фрагмент, що складається з 20, 30, 40,
45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 або більше амінокислот. Переважно, область ідентичності послідовностей варіантів полінуклеотиду перевищує безперервний фрагмент, що складається з 60, 90, 120, 135, 150, 180, 210, 240, 270, 300 або більше нуклеотидів.
Термін "їіщдентичність послідовності щонайменше 80 95" використовується за всією даною специфікацією щодо порівнянь послідовності поліпептидів і полінуклеотидів. Даний вираз, переважно, означає ідентичність послідовності щонайменше 8095, щонайменше 81 95, щонайменше 82 95, щонайменше 83 95, щонайменше 84 95, щонайменше 85 95, щонайменше 8695, щонайменше 8795, щонайменше 8895, щонайменше 89595, щонайменше 90 95, щонайменше 91 95, щонайменше 92 95, щонайменше 93 95, щонайменше 94 9565, щонайменше 9595, щонайменше 96 95, щонайменше 9795, щонайменше 9895 або щонайменше 99 95 відповідного до еталонного поліпептиду або відповідного еталонного полінуклеотиду.
Переважно, поліпептид, про який йде мова, і еталонний поліпептид демонструють зазначену ідентичність послідовності протягом безперервного фрагмента, що складається з 20, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 або більше амінокислот, або протягом всієї довжини еталонного поліпептиду. Переважно, полінуклеотид, про який йде мова, і еталонний полінуклеотид демонструють зазначену ідентичність послідовності в межах безперервного фрагмента, що складається з 60, 90, 120, 135, 150, 180, 210, 240, 270, 300 або більше нуклеотидів, або протягом всієї довжини еталонного поліпептиду.
Терміни "делеційний варіант" і "ррагмент" використовуються у даній заявці взаємозамінно.
Фрагмент може бути існуючим у природі (наприклад, сплайс-варіанти) або може бути сконструйованим штучним способом, переважно, генно-технологічними способами. Переважно, фрагмент (або делеційний варіант) містить делецію до 1, 2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 або 100 амінокислот або нуклеїнових кислот у порівнянні з батьківським поліпептидом. У випадку, коли порівнюють дві послідовності й еталонну послідовність, у порівнянні з якою потрібно розраховувати відсоток ідентичності послідовності, не зазначена, ідентичність послідовності необхідно розраховувати щодо більше довгої з двох порівнюваних послідовностей, якщо конкретно не зазначене зворотнє. Якщо еталонна послідовність зазначена, ідентичність послідовності визначають на підставі повної довжини еталонної послідовності, зазначеної за ЗЕО І, якщо конкретно не зазначено зворотнє.
Подібність послідовностей нуклеотидів й амінокислотних послідовностей, тобто відсоток ідентичності послідовності, можна визначити за допомогою вирівнювань послідовності. Такі вирівнювання можна проводити із застосуванням декількох відомих в даній області техніки алгоритмів, переважно, математичного алгоритму Карліна й Альтшуля (Каїіїйп 5 Ай5спи! (1993)
Ргос. Май. Асай. сі. ОБА 90: 5873-5877), алгоритму Пттаїдп (НММЕК раскаде, пЕр//пітітегмивіЇ.еди/) або СІ ОБТАЇ. (Тпотрзоп, у. О., Ніддіпв, ЮО. С. в Сірвоп, Т. у. (1994)
Мисівєїс Асіав5 Вез. 22, 4673-80), доступних, наприклад, за адресою: пер:/Лимли.ебрі.ас.ик/Гооїі5/сіивтам// або / пЕр:/Лимлу.ебі.ас.ик/Гооїі5/сіивіаМм/2/іпаех.піті, або пор//прза-рбіїІрер./сді-біп/прза ашотайрі?раде-/МРБЗА/прза сіивіам/.пті. Переважні використовувані параметри являють собою параметри за замовчуванням, як вони задані за адресою: ПЕр:/Лимлми.ері.ас.ик/Гооі5/сіивіам/ або пер:/Лимли.ері.ас.ик/Гооі5/сіитам/2/паех. пЕті.
Ступінь ідентичності послідовності (збіг послідовності) можна розрахувати із застосуванням, наприклад, програмного забезпечення ВАТ, ВАТ або Віазі7 (або ВіавзіХ). Аналогічний алгоритм вбудований у програми ВІ АЗТМ і ВІ А5ТР згідно з публікацією Ай5еапиЇ еї аї. (1990) У.
Мої. Віої. 215: 403-410. Пошуки полінуклеотидів у ВГА5Т здійснюють за допомогою програми
ВГАЗТМ, і встановлюють значення 5соге-100, мога Іепдій-12 для одержання гомологічних послідовностей полінуклеотидів. "Гібридизацію" також можна використовувати в якості міри ідентичності послідовності або гомології між двома послідовностями нуклеїнової кислоти. Послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує Е, М або М2-1, або частину кожної з даних послідовностей можна використовувати в якості зонда для гібридизації згідно зі стандартними методиками гібридизації. Гібридизація зонда Е, М або М2-1 з ДНК або РНК з досліджуваного джерела свідчить про присутність у досліджуваному джерелі ДНК або РНК РЕ, ДНК або РНК М або ДНК або РНК М2-1, відповідно.
Умови гібридизації відомі фахівцям в даній області техніки і можуть бути знайдені, наприклад, у керівництві Сиггепі Ргоїосої5 іп МоїІесшіаг Віоіоду, Чопп УмМієу 5 БОоп5, М. У., 6.3.1-6.3.6, 1991. "Помірні умови гібридизації" визначені як еквівалентні гібридизації в 2Х розчині хлориду натрію/цитрату натрію (5552) при температурі 30 "С з наступним промиванням в 1Х розчині 55С, 0,1 96 ДСН (додецилсульфаті натрію) при температурі 50 "С. "Високо жорсткі умови" визначені як еквівалентні гібридизації в 6Х розчині хлориду натрію/цитрату натрію (5552) при температурі 45 С з наступним промиванням в 0,2Х розчині 55С, 0,1 96 ДСН при температурі 65 70.
Напівконсервативні та, особливо, консервативні заміни амінокислот, при яких амінокислоту замінюють спорідненою з хімічної точки зору амінокислотою, є переважними. Типовими замінами є заміни між аліфатичними амінокислотами, між амінокислотами, що містять аліфатичний гідроксильний бічний ланцюг, між амінокислотами, що містять кислі залишки, між амідними похідними, між амінокислотами з основними залишками або амінокислотами, що містять ароматичні залишки. Типові напівконсервативні та консервативні заміни являють собою: 6777777777303ЩЕМО 37777730 АВІА 00171710 222 ММА 00717171 ЕМ 07171711 22202023 |бЕБІЛАЮКА. 00711111 82020203 ШШАММОМБІСЯ ( а 2727207З7------- 3 |ОБАВТИМКА / 20202070 МОВО БА 17171711
Заміна А, РЕ, Н, І, Г, М, Р, М, УМ або У на С являє собою напівконсервативну, якщо новий цистеїн залишається у формі вільного тіолу. Більше того, фахівцю очевидно, що гліцини в необхідних зі стеричної точки зору положеннях не повинні бути замінені, і що Р не повинен бути введений у частині білка, що характеризуються альфа-спіральною або бета-складчастою структурою.
Термін "тканина" у даній заявці означає сукупність клітин однакового походження, які узгоджено виконують конкретну функцію. Приклади тканини включають, але не обмежені зазначеними, сполучну тканину, м'язову тканину, нервову тканину й епітеліальну тканину.
Множини тканин разом утворюють "орган" для виконання конкретної функції. Приклади органів включають, але не обмежені зазначеними, залози, м'язи, кров, головний мозок, серце, печінку, нирки, шлунок, скелет, суглоб і шкіру.
Терміни "захворювання" та "порушення" використовуються у даній заявці взаємозамінно й означають аномальний стан, особливо, аномальний медичний стан, такий як хвороба або ушкодження, при якому тканина, орган або індивідуум більше не здатні ефективно виконувати свою функцію. Як правило, але не обов'язково, захворювання призведе до специфічних симптомів або ознак, що свідчать про наявність такого захворювання. Наявність таких симптомів або ознак може, таким чином, свідчити, що тканина, орган або індивідуум страждає від захворювання. Зміна даних симптомів або ознак може свідчити про прогресування такого захворювання. Прогресування захворювання, як правило, характеризується збільшенням або зменшенням таких симптомів або ознак, що може свідчити про "погіршення" або "поліпшення" захворювання. "Погіршення" захворювання характеризується зменшенням здатності тканини,
Зо органа або організму ефективно виконувати свою функцію, тоді як "поліпшення" захворювання, як правило, характеризується збільшенням здатності тканини, органа або індивідуума ефективно виконувати свою функцію. Тканина, орган або індивідуум, піддані "ризику розвитку" захворювання, перебувають у здоровому стані, але демонструють можливість виникнення захворювання. Як правило, ризик розвитку захворювання пов'язаний з ранніми або слабкими ознаками або симптомами такого захворювання. У даному випадку маніфестацію захворювання все ще можна запобігти за допомогою лікування. Приклади захворювань включають, але не обмежені зазначеними, травматичні захворювання, запальні захворювання, інфекційні захворювання, шкірні захворювання, ендокринні захворювання, кишкові захворювання,
неврологічні розлади, захворювання суглобів, спадкоємні захворювання, аутоімунні захворювання та різні типи раку. "Рак" означає проліферативне порушення, що включає аномальний ріст клітин, який може інвазувати або поширюватися в інші тканини або органи суб'єкта. Варіанти раку класифікують згідно з типом клітини, з яким мають подібність клітини пухлини й який, внаслідок цього, як припускають, є джерелом пухлини. Дані типи включають, але не обмежені зазначеними, карциному (варіанти раку, які походять з епітеліальних клітин), саркому (варіанти раку, що виникають зі сполучної тканини, такої як, наприклад, кістка, хрящ, жир, нерви), лімфому та лейкоз (варіанти раку, що виникають з гематопоетичних клітин, які залишають кістковий мозок і, як правило, дозрівають у лімфатичних вузлах і крові), герміногенну пухлину (варіанти раку, які походять з плюрипотентних клітин) і бластому (варіанти раку, які походять з незрілих клітин- "попередників" або ембріональної тканини). Зокрема, рак включає, але не обмежений зазначеними, гострий лімфобластний лейкоз (ГЛЛ), гострий мієлоїдний лейкоз, адренокортикальну карциному, СНІД-асоційовані варіанти раку, СНІД-асоційовану лімфому, рак анального каналу, рак апендикса, астроцитому, дитячий рак мозочка або церебральний рак, базальноклітинну карциному, рак жовчних проток, позапечінковий, рак сечового міхура, пухлина кістки, остеосаркому/злоякісну фіброзну гістіоцитому, гліому стовбура головного мозку, рак головного мозку, пухлину головного мозку (астроцитому мозочка, церебральну астроцитому/злоякісну гліому, епендимому, медулобластому, супратенторіальні примітивні нейроектодермальні пухлини, гліому зорового шляху та гіпоталамічну гліому), рак молочної залози, аденоми/карциноїди бронхів, лімфому Беркітта, карциноїдну пухлину, лімфому центральної нервової системи, астроцитому мозочка, рак шийки матки, хронічний бронхіт, хронічний лімфоцитарний лейкоз, хронічний мієлогенний лейкоз, хронічні мієлопроліферативні порушення, рак товстої кишки, шкірну Т-клітинну лімфому, десмопластичну дрібнокруглоклітинну пухлину, рак ендометрію, епендимому, рак стравоходу, саркому Юінга сімейства пухлин Юінга, позачерепну герміногенну пухлину, позагонадну герміногенну пухлину, позапечінковий рак жовчних проток, рак ока (інтраокулярну меланому, ретинобластому), рак жовчного міхура, гастричний рак (рак шлунка), шлунково-кишкову карциноїдну пухлину, шлунково-кишкову стромальну пухлину (давзігоїпіевіїпа! 5ігота! їштог, СІ5Т), герміногенну
Зо пухлину (позачерепну, позагонадну або яєчникову), гестаціонну трофобластичну пухлину, гліому стовбура головного мозку, гастричний карциноїд, волохатоклітинний лейкоз, рак голови та шиї, рак серця, гепатоклітинний рак (рак печінки), ходжкінську лімфому, гіпофарингіальний рак, гіпоталамічну гліому та гліому зорових шляхів, інтраокулярну меланому, карциному острівцевих клітин (ендокринної частини підшлункової залози), саркому Капоші, рак нирки (нирковоклітинний рак), рак гортані, лейкоз (гострий лімфобластний, гострий мієлоїдний, хронічний лімфоцитний, хронічний мієлогенний), рак губ і ротової порожнини, ліпосаркому, рак печінки, рак легенів (недрібноклітинний, дрібноклітинний), лімфоми (СНІД-асоційовані, Беркітта, шкірну Т-клітинну, ходжкінську, первинну центральної нервової системи), макроглобулінемію (Вальденстрема), рак молочної залози в чоловіків, злоякісну фіброзну гістіоцитому кістки/остеосаркому, медулобластому, меланому, рак клітин Меркеля, мезотеліому, метастатичний пласкоклітинний рак шиї з невідомою первинною локалізацією, рак роту, синдром множинної ендокринної неоплазії, множинну мієлому/плазмоклітинну пухлину, грибоподібний мікоз, мієлодиспластичний синдром, мієлодиспластичні/мієлопроліферативні захворювання, мієлогенний лейкоз, хронічний, мієлоїдний лейкоз, мієлому, мієлопроліферативні порушення, рак носової порожнини і навколоносової пазухи, носоглоткову карциному, нейробластому, олігодендрогліому, рак ротової порожнини, рак ротоглотки, остеосаркому/злоякісну фіброзну гістіоцитому кістки, рак яєчників, епітелі«альний рак яєчників, герміногенну пухлину яєчників, потенційну пухлину яєчників низького ступеня злоякісності, рак підшлункової залози, рак носової порожнини і навколоносової пазухи, рак паращитовидних залоз, рак статевого члена, фарингеальний рак, феохромоцитому, астроцитому шишкоподібної залози, герміному шишкоподібної залози, пінеобластому та супратенторіальні примітивні нейроектодермальні пухлини, аденому гіпофізу, плазмоклітинну пухлину/множинну мієлому, плевролегеневу бластому, лімфому первинної центральної нервової системи, рак передміхурової залози, рак прямої кишки, нирковоклітинну карциному, карциному ниркової лоханки і сечоводу, ретинобластому, рабдоміосаркому, рак слинних залоз, саркому (сімейство пухлин Юінга, Капоші, м'яких тканин, матки), синдром Сезарі, рак шкіри (карциному, меланому, немеланомний рак, рак клітин Меркеля), дрібноклітинний рак легенів, рак тонкої кишки, саркому м'яких тканин, пласкоклітинну карциному, супратенторіальну примітивну нейроектодермальну пухлину, рак яєчка, рак горла, тимому, тимому та карциному підгрудинної залози, рак бо щитовидної залози, перехідно-клітинний рак ниркової лоханки і сечоводу, трофобластичну пухлину, рак сечовипускального каналу, рак матки (ендометріальний, саркому), рак піхви, гліому зорових шляхів і гіпоталамуса, рак зовнішніх статевих органів, пухлину Вільмса (рак нирки).
У даній заявці термін "пухлина молочної залози" відноситься до аномальної гіперпроліферації клітин тканини молочної залози у суб'єкта, яка може бути доброякісною (нераковою) пухлиною або злоякісною (раковою) пухлиною. Доброякісні пухлини молочної залози, переважно, включають фіброаденоми, зернистоклітинні пухлини, інтрадуктальні папіломи і філоїдні пухлини. Злоякісна пухлина являє собою рак молочної залози (РМ3), як зазначено у даній заявці вище.
У даній заявці термін "метастатичний рак молочної залози" (МРМ3З) відноситься до раку молочної залози, при якому ракові клітини проростають у формі метастазу щонайменше в одну вторинну ділянку, тобто неприлеглий орган або частину тіла суб'єкта.
У даній заявці термін "пухлина яєчників" відноситься до аномальної гіперпроліферації клітин тканини яєчників у суб'єкта, яка може бути доброякісною (нераковою) пухлиною або злоякісною (раковою) пухлиною. Злоякісна пухлина являє собою рак яєчників (РЯ), як зазначено у даній заявці вище.
У даній заявці термін "пухлина підшлункової залози" відноситься до аномальної гіперпроліферації клітин тканини яєчників у суб'єкта, яка може бути доброякісною (нераковою) пухлиною або злоякісною (раковою) пухлиною. Злоякісна пухлина являє собою рак підшлункової залози (РІЗ), як зазначено у даній заявці вище.
Термін "циркулююча пухлинна клітина" або "ДПК" є зрозумілим фахівцю в даній області техніки і відноситься до пухлинної клітини, що від'єдналася від первинної або метастатичної пухлини і циркулюючої в кровоносному руслі. Слід розуміти, що кількість ЦПК являє собою прогностичний маркер захворювання та результат терапії раку молочної залози, наприклад, відносно загальної виживаності. Термін "статус ЦПК" відноситься до присутності або відсутності більше ніж еталонної кількості ЦПК у зразку. Переважно, еталонна кількість ЦПК складає 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7 або 7,5 ЦПК/7,5 мл крові, причому, 5 ЦПК/7,5 мл крові є більше переважним. У суб'єктів, зразок крові яких містить більше зазначеної еталонної кількості ЦПК, статус ЦПК є несприятливим, що свідчить про низькі ймовірності успішного лікування та низькі ймовірності виживаності без прогресування захворювання та загальної виживаності. І, навпаки,
Зо у суб'єктів, зразок крові яких містить менше зазначеної еталонної кількості ЦПК, статус ЦПК є сприятливим, свідчить про високу ймовірність успішного лікування та високі ймовірності виживаності без прогресування захворювання та загальної виживаності. Переважно, у даному винаході було виявлено, що кількості мікроРНК, що використовуються для визначення статусу
ЦПК суб'єкта, як визначено у даній заявці нижче, свідчать про статус ЦПК суб'єкта. Таким чином, визначення статусу ЦПК у суб'єкта у даній заявці відноситься до визначення кількості або кількостей зазначеної мікроРНК або зазначених мікроРНК і, таким чином, до одержання показника статусу ЦПК суб'єкта. Переважно, статус можна діагностувати як "сприятливий" або "несприятливий". "Симптоми" захворювання являють собою наслідки захворювання, помітні в тканині, органі або організмі, що страждають від зазначеного захворювання, і включають, але не обмежені зазначеними, біль, слабкість, хворобливість, напругу, ригідність та спазм тканини, органа або індивідуума. "Ознаки" або "сигнали" захворювання включають, але не обмежені зазначеними, зміну або модифікацію, таку як наявність, відсутність, збільшення або підвищення, зменшення або зниження рівня специфічних індикаторів, таких як біомаркери або молекулярні маркери, або розвиток, наявність або погіршення симптомів.
Термін "індикатор" і "маркер" використовуються у даній заявці взаємозамінно й означають ознаку або сигнал стану або використовуються для контролю над станом. Такий "стан" означає біологічний статус клітини, тканини або органа або статус здоров'я та/або захворювання індивідуума. Індикатор може являти собою присутність або відсутність молекули, включаючи, але не обмежуючись зазначеними, пептиду, білка та нуклеїнової кислоти, або може являти собою зміну рівня експресії або паттерна такої молекули в клітині або тканині, органі або індивідуумі. Індикатор може являти собою ознаку маніфестації, розвитку або наявності захворювання в індивідуума або наступного прогресування такого захворювання. Індикатор може являти собою також ознаку ризику розвитку захворювання в індивідуума.
У даній заявці термін "продукт гена", переважно, відноситься до макромолекулярного фізичного об'єкта, наявність якого в клітині залежить від експресії зазначеного гена в зазначеній клітині. Механізми експресії генів добре відомі фахівцю в даній області техніки і включають основні механізми транскрипції, тобто утворення РНК відповідно до зазначеного гена або частин зазначеного гена, і трансляції, тобто утворення молекул поліпептиду, що містять 60 амінокислотну послідовність, кодовану зазначеною РНК згідно з генетичним кодом; фахівцю в даній області техніки добре відомо, що в експресію генів також можуть бути залучені інші процеси в клітині, наприклад, процесинг РНК, редагування РНК, протеолітичний процесинг, редагування білка та т.п. Термін "продукт гена", таким чином, включає РНК, переважно, мРНК, а також поліпептиди, експресовані із зазначеного гена. З вищесказаного очевидно, що термін "продукт гена" також включає фрагменти зазначеної або зазначених РНК, переважно, довжиною щонайменше десять, щонайменше дванадцять, щонайменше 20, щонайменше 50 або щонайменше 100 нуклеотидів, і фрагменти (пептиди) зазначених поліпептидів, переважно, довжиною щонайменше вісім, щонайменше десять, щонайменше дванадцять, щонайменше 15, щонайменше 20 амінокислот. "Визначення" кількості продукту гена відноситься до вимірювання кількості зазначеного продукту гена, переважно, напівкількісного або кількісного. Вимірювання можна здійснювати прямо або опосередковано. Переважно, вимірювання проводять в обробленому зразку, причому зазначена обробка включає екстракцію зі зразка полінуклеотидів або поліпептидів.
Однак також даним винаходом передбачено, що продукт гена визначають іп 5йш, наприклад, методом імуногістохімії (ІГХ).
Кількості полінуклеотидів згідно з даним винаходом можна визначити декількома способами, добре відомими в даній області техніки. Кількісне визначення, переважно, є абсолютним, тобто відноситься до конкретної кількості полінуклеотидів, або, більше переважно, відносним, тобто вимірюється в умовних нормованих одиницях. Переважно, нормування проводять за допомогою підрахунку співвідношення кількості конкретних полінуклеотидів і сумарної кількості полінуклеотидів або еталонного продукту ампліфікації. Способи, що забезпечують абсолютне або відносне кількісне визначення, добре відомі в даній області техніки. Наприклад, способи кількісної ПЛР являють собою способи відносного кількісного визначення; якщо в такий аналіз включена калібрована крива, відносне кількісне визначення можна використовувати для одержання абсолютного кількісного визначення. Інші відомі способи являють собою, наприклад, ампліфікацію, засновану на послідовності нуклеїнових кислот (писієїс асії зедиепсе-разєй атрійісайоп, МА5ВА), або метод ампліфікації сигналу на основі розгалуженої ДНК (Вгапспеайа
ОМА 5ідпа! Атрійісайоп Абхзау) у комбінації з виявленням ампліфікованих полінуклеотидів методом дот-блотинга або за допомогою приладу Іштіпех. Переважно, кількості полінуклеотидів являють собою нормовані кількості полінуклеотидів, тобто отримані кількості полінуклеотидів, наведені в співвідношення з щонайменше одним еталонним продуктом ампліфікації, внаслідок цього, переважно, кількості полінуклеотидів приводять у співвідношення з кількістю клітин у зразку й/або ефективністю ампліфікації полінуклеотидів. Таким чином, переважно, еталонний продукт ампліфікації являє собою продукт, отриманий з полінуклеотиду, який, як відомо, характеризується постійним достатком у кожній клітині, тобто полінуклеотиду, який міститься у більшості, переважно, у всіх клітинах зразка у приблизно однаковій кількості. Більше переважно, еталонний продукт ампліфікації ампліфікований з хромосомного або мітохондріального гена або з мРНК гена домашнього господарства. Кількість полінуклеотидів можна визначити за допомогою секвенування методом дробовика, місткової ПЛР, секвенування методом Сенджера, піросеквенування, секвенування нового покоління, одномолекулярного секвенування в реальному часі, секвенування за допомогою технології оп Тогтепі, секвенування за допомогою синтезу, секвенування за допомогою лігування, масивно-паралельного розпізнавального секвенування, полони-секвенування, секвенування на основі ДНК-наношариків, одномолекулярного секвенування за допомогою технології Неїїзсоре, одномолекулярного секвенування в реальному часі (зіпдіє птоїесшіе геа! те, 5МКТ), нанопорового секвенування
ДНК, секвенування ДНК методом тунельних струмів, секвенування за допомогою гібридизації, секвенування з мас-спектрометрією, мікрорідинного секвенування Сенджера, секвенування ДНК із застосуванням трансмісійної електронної мікроскопії, секвенування на основі РНК- полімерази, високопродуктивного секвенування на основі вірусів іп міго, виділення хроматину за допомогою очищення РНК (СпПготаїйіп ІзоЇайоп Бу ЕМА Ритгійсайоп, СПІВ Р-Зед), глобального секвенування прочитування (Сіоба! Кип-оп бЗедиепсіпя, СНО-Зед), секвенування на основі профілювання рибосоми (Кірозоте Ргоїйййпуд бедиепсіпуд, Віро-зед)уАКтТзед), секвенування на основі імунопреципітації РНК (КМА Іттипоргесірйайоп зеднпепсіпа, КІР-5е8), високопродуктивного секвенування бібліотеки кДНК на основі СР (сго55-ПпКіпа апа іттипоргесіріайоп, перехресного зшивання й імунопреципітації) (Нідп- Титгопдиприї б5едиепсіпа ої
СР сОМА ргагу, НІТ5-СІІР), секвенування на основі перехресного зшивання й імунопреципітації перехресного зшивання й імунопреципітації з використанням фотоактивованого рибонуклеозиду (Рпоїоасіїмаєтаріє Кібописієозіде-Епнапсейд СтоззіїпКіпд апа
Іттипоргесірнайцйоп, РАВ-СГІР), СР з роздільною здатністю до одного нуклеотиду (Іпаїмідчаї бо Мисіеоїіде Кезоїшіоп СГІР, ІСГІР), секвенування нативного елонгуючого транскрипта (Майме
ЕІопааїіпа Тгапзстірі Зедиепсіпа, МЕТ-Зед), націленого очищення полісомальної мРНК (Тагдеїейд
Ригітісайоп ої Роїузгота! тАМА, ТААР-5е4), перехресного зшивання, лігування та секвенування гібридів (Сто55іїпКіпо, Гідайоп, апа Зедиепсіпуд ої Нубгіах, СІ А5Н-5ед), секвенування на основі паралельного аналізу кінців РНК (РагаїїеІ Апаїузіз ої КЕМА Епа5з Зедиепсіпд, РАКЕ-5е8), повногеномного картування некепованих транксриптів (бСепоте-М/іде Марріпу ої Опсарреа
Тгапзсгіріх, ОМОСТ), секвенування ізоформ транскриптів (Тгапзсгірі ІзоїТогпт Зедиепсіпд, ТІЕ- зеа), аналізу спарених кінців 55 (Раїгеайа-Епа Апаїузіє ої 1555, РЕАТ), селективного 2'- гідроксилацилювання, аналізованого методом секвенування з подовженням праймера (Зеїесіїме 2-Нудгоху! Асуїайоп Апаїулейд Бу Ріїтег Ехієпзіоп бедиепсіпа, ЗНАРЕ-Зед), паралельного аналізу структури РНК (РагайПе! Апаїузіз ої КМА бЗігисішге, РАК5-5ед), фрагментаційного секвенування (Егадтепіайоп Зедиепсіпд, ЕКАС-Бед), секвенування на основі афінного очищення СХХС (СХХС Айіпйу Ригійсацйоп бЗедцепсіпу, САР-Зед), секвенування Із застосуванням лужної фосфатази кишківника теляти - кислої пірофосфатази тютюну (АїКаїїпе
РіозрНаїазе Саї Іпіезііпе- Гобассо Асіа Ругорпозрпаїазе бЗедиепсіпа, СІР-ТАР), секвенування на основі хімічного руйнування з інозином (Іпозіпе Спетісаї! Егазіпд Зедиепсіпо, ІСЕ), секвенування на основі імунопреципітації тбА-специфічної метильованої РНК (тбА-5ресіїіїс Меїнуїаїга ВМА
Іттипоргесірйайоп Зедиєпсіпу, МевВІР-Зед), цифрового секвенування РНК, ампліфікації повного транскрипта для окремих клітин (Оцагі:-5ед), секвенування РНК на основі розроблених праймерів (Оезідпед Ргітег-Вазей ВМА бедиєпсіпду, ОР-Зед), на основі перемикаючого механізму на 5-кінці матриць РНК (Зм/йсп Меспапізт аг іШйе 5" Епа ої КМА Тептріагез, Зтагі- зеа), на основі перемикаючого механізму на 5'-кінці матриць РНК, версія 2 (Зтап-5ед2), на основі унікальних молекулярних ідентифікаторів (підие МоїІесшаг Ідепійіег5, ОМІ), методом експресії клітин за допомогою лінійного секвенування ампліфікації (СеїЇ Ехргеззіоп ру Гіпеаг
Атріїйісайоп бедиепсіпуд, СЕЇ -56д), секвенування мічених окремих клітин на основі зворотної транскрипції (5іпдіе-СеїЇ Таддєд Вемегзе Тгапзсгіріоп б5едиепсіпа, БЗТАТ-зед), методу на основі одномолекулярних інвертованих молекулярних зондів (5іпдіе-МоІесціе Мо/іесшціаг Іпмегвіоп
Ргорез5, 5тМіІР), ампліфікації з множинним витисненням ланцюга (Мийіріє Оізріасетепі
Атрійісайоп, МОА), циклів ампліфікації на основі множинного відпалювання й утворення петель (Мийіріеє Аппеайпуд апа Іооріпда-Вазеай Атрійісайоп Сусієх, МАГ-ВАС), олігонуклеотид-
Зо селективного секвенування (Оіїдописіеоііде-бЗеІєсіме бЗедиепсіпд, О5-5е4д), дуплексного секвенування (Юиріех Зедциепсіпо, Юиріех-бед), бісульфітного секвенування (Візийне
Зедиеєепсіпу, В5-5ед), постбісульфітного адаптерного мічення (Розі-ВізиНйе Адарієг Таоддіпа,
РВАТ), повногеномного бісульфітного секвенування на основі тагментації (Тадтепіайноп-Вазєй
МУпоЇїе Сепоте ВізиНйе бЗедиєепсіпа, Т-М/В5), окисного бісульфітного секвенування (Охідаїйме
Вівиййе Бедиепсіпа, охВ5-5Зед), ТЕТ-опосередкованого бісульфітного секвенування (Теї-
Аввівієйд Візийте бедиепсіпу, ТАВ-зед), секвенування на основі імунопреципітації метильованої
ДНК (Меїпуіаїєдй ОМА Іттипоргесірйанйоп 5Зедцепсіпу, МеріР-зед), секвенування на основі фіксації метилювання (Меїпуїайоп-Сарійте бЗедиепсіпу, МеїпуІСар), секвенування на основі фіксації метил-сполучного домена (МеїйпуІ-Віпаіпд-ботаіп-Сарійге Бедиеєпсіпу, МВОсСар), бісульфітного секвенування при зниженому представництві (бЗедиепсіпу, Кедисей-
Вергезепіайоп Візине бЗедиепсіпду, НАВ5-зед)), секвенування сайтів, гіперчутливих до ДНКази (ОМабзе ! Нурегвзепвзйіме 5йез Зедиепсіпу, ОМавзе-Зед), опосередкованого мікрококовою нуклеазою секвенування з виділенням нуклеосом (ММазе-Аввівієй Івоїайоп ої Мисіво5отев5
Зедиєпсіпу, МАЇМЕ-Зед), секвенування на основі імунопреципітації хроматину (Спготайіп
Іттипоргесірйайоп Зедиепсіпу, СНІР-Бед), опосередкованого формальдегідом виділення регуляторних елементів (РоптптаЇЧепуде-Аввівієд Ізоїайоп ої Неашаюгу ЕІетепі, ЕАІВЕ-569), аналізу для секвенування відкритого для транпозази хроматину (А5з5ау їог Тгапзрозазе-
Ассеззіріє Спготаїййп бедиєпсіпу, АТАС-Зед), аналізу взаємодії хроматину за допомогою секвенування спарених кінців (Спготаїйіп Іпіегасіоп Апаїузіз Бу Раїгеа-Епіа Тад 5бедиепсіпа, СПІА-РЕТ), фіксації конформації хроматину (Спготайіп Сопіоптаййоп Сарішйге, Ні-Сб/30-5е4), фіксації конформації циркулярного хроматину (Сігошаг Спготаїйіп Сопіоптаїйоп Саріиге 4-С або 4б-зед), вуглецевої копії фіксації конформації хроматину (Спготаййп Сопіогтайоп Сарішиге
Сатбоп Сору, 5-С), секвенування фіксацією ретротранспозонів (Кеїгоїгапхрозоп Сарішиге
Зедиеєпсіпу, АС-Зед), транспозонового секвенування (Тгапзрозоп Зедпцепсіпд, Тп-Зед) або інсерційного секвенування (Іпзепйіоп 5едиепсіпд, ІМзед), секвенування фіксацією транслокацій (Ттапзіосайоп-Саріцте бЗедиепсіпу, ТО-Зед), за допомогою способів на основі флуоресценції (таких як мікроматриці, ПЛР у реальному часі), способів на основі маси (мас-спектрометрія), способів на основі рестрикційних ферментів, способів на основі імунопреципітації з антитілами і цифрової ПЛР.
Кількість пептидів або поліпептидів згідно з даним винаходом можна визначити різними способами. Пряме вимірювання відноситься до вимірювання кількості пептиду або поліпептиду на основі сигналу, який одержують від пептиду або поліпептиду самого по собі й інтенсивність якого прямо корелює з кількістю молекул пептиду, присутніх у зразку. Такий сигнал - іноді називається сигналом інтенсивності - можна одержати, наприклад, за допомогою вимірювання величини інтенсивності конкретної фізичної або хімічної властивості пептиду або поліпептиду.
Опосередковане вимірювання включає вимірювання сигналу, отриманого від вторинного компонента (тобто компонента, який не є пептидом або поліпептидом самим по собі) або біологічної системи зчитування, наприклад, вимірюваних відповідей клітин, лігандів, міток або продуктів ферментативних реакцій.
Визначення кількості пептиду або поліпептиду можна проводити всіма відомими способами визначення кількості пептиду в зразку. Зазначені способи включають пристрої та способи імуноаналізу й/або імуногістохімії в яких можуть застосовуватися мічені молекули у різних форматах аналізу: "сендвіч"-форматі, конкурентному форматі або інших. У зазначених аналізах буде розвиватися сигнал, що свідчить про присутність або відсутність пептиду або поліпептиду.
Більше того, сила сигналу може, переважно, корелювати прямо або опосередковано (наприклад, обернено пропорційно) з кількістю поліпептиду, який є присутнім у зразку. Наступні підходящі способи включають вимірювання фізичної або хімічної властивості, специфічної для пептиду або поліпептиду, такої як точна молекулярна маса або ЯМР-спектр (спектр ядерного магнітного резонансу) пептиду або поліпептиду. Зазначені способи включають, переважно, біосенсори, оптичні пристрої, об'єднані з імуноаналізами, біочипи, аналітичні пристрої, такі як мас-спектрометри, ЯМР-аналізатори або пристрої для хроматографії. Також зазначені способи включають способи на основі мікропланшетного аналізу ЕГІ5А, повністю автоматизовані або роботизовані імуноаналізи, аналізи зв'язування кобальту й аналізи латекс-аглютинації.
Визначення кількості пептиду або поліпептиду включає етап вимірювання специфічного сигналу інтенсивності, одержуваного від пептиду або поліпептиду в зразку. Як описано вище, такий сигнал може являти собою сигнал інтенсивності, спостережуваний при змінній т/7 (маса/заряд), специфічній для пептиду або поліпептиду, спостережуваного в мас-спектрі або
ЯМР-спектрі, який специфічний пептиду або поліпептиду.
Визначення кількісті пептиду або поліпептиду може, переважно, включати наступні етапи: (а) здійснення контакту пептиду зі специфічним лігандом, (Б) (необов'язково) видалення ліганду, що не зв'язався (с) вимірювання кількості зв'язаного ліганду. Зв'язаний ліганд буде утворювати сигнал інтенсивності. Зв'язування згідно 3 даним винаходом включає як ковалентне, так і нековалентне зв'язування. Ліганд згідно з даним винаходом може являти собою будь-яку сполуку, наприклад, пептид, поліпептид, нуклеїнову кислоту або малу молекулу, що зв'язується з пептидом або поліпептидом, описаними у даній заявці. Переважні ліганди включають антитіла, нуклеїнові кислоти, пептиди або поліпептиди, такі як рецептори або партнери зв'язування для пептиду або поліпептиду або фрагменти зазначених молекул, що включають домени зв'язування для пептидів, і аптамери, наприклад, аптамери нуклеїнової кислоти або пептиду. Способи одержання таких лігандів добре відомі в даній області техніки. Наприклад, виявлення й одержання підходящих антитіл або аптамерів також запропоноване комерційними постачальниками. Фахівцю в даній області техніки відомі способи розробки похідних таких лігандів з більшою афінністю або специфічністю. Наприклад, у нуклеїнові кислоти, пептиди або поліпептиди можна ввести випадкові мутації. Термін "антитіло" у даній заявці означає секретовані імуноглобуліни, в яких відсутня трансмембранна область й які можуть, таким чином, вивільнятися в кровоток і порожнини організму. Антитіла, як правило, утворені чотирма поліпептидними ланцюгами, які містять два ідентичні важкі ланцюги і два ідентичні легкі ланцюги, які з'єднані за допомогою дисульфідних зв'язків і нагадують макромолекулу "У"- форми. У результаті розщеплення антитіл папаїном утворюються два ідентичні антигензв'язувальних фрагмента, що називаються "Бар-фрагментами" (також називаються "Рар-частиною" або "Рар-областю"), кожний з одним антигензв'язувальним сайтом, і "Ес- фрагмент" (також називаний "Рс-частиною" або "Ес-областю"), що залишився, назва якого відображає його здатність легко кристалізуватися. Кристалічна структура Ес-області (ДО людини була визначена (Оеєїзепрпоїег (1981) Віоспетівігу 20:2361-2370). В ізотипах Ідс, ІдА і дО Ес- область складається з двох ідентичних фрагментів білка, які походять з доменів СН2 і СНЗ двох важких ланцюгів антитіла; в ізотипах ІДМ і ІДЕ Ес-області містять три константні домена важких ланцюгів (СН2 - 4) у кожному поліпептидному ланцюгу. Крім того, більше маленькі молекули імуноглобулінів існують у природі або були сконструйовані штучним способом. Термін "Рар'- фрагмент" означає РГар-фрагмент, що додатково містить шарнірну область молекули Ід, тоді як 60 "Ка)2-фрагменти" містять два Раб'-фрагмента, об'єднані хімічним способом або з'єднані за допомогою дисульфідного зв'язку. У той час як "однодоменні антитіла (зіпдіе дотаїп апіібодієев, зад)" (Осзту!ег єї аї. (1996) Маї. Бігисійиге Віої!. 3:803-811) і "нанотіла" містять винятково один домен МН, "одноланцюгові Ем (з5іпдіє спаіїп Ем, 5сЕм)"-фрагменти містять варіабельний домен важкого ланцюга, приєднаний за допомогою короткого лінксерного пептиду до варіабельного домена легкого ланцюга (Нивіоп еї аІ. (1988) Ргос. Май. Асад. Зсі. ОБА 85, 5879-5883).
Двовалентні одноланцюгові варіабельні фрагменти (аїмаІепі 5іпдіе-снаїп магіабіе адтепів, аї- 5СЕм) можна сконструювати за допомогою сполучення двох 5сЕм (5СЕмА-5СЕмВ). Даний підхід можна здійснити за допомогою одержання одного пептидного ланцюга з двома областями МН і двома областями МІ, одержуючи "тандемні 5сЕм5" (МНА-МІ А-МНВ-МІ В). Інша можливість являє собою створення 5сЕм з лінкерами, які є занадто короткими, щоб утримувати разом дві варіабельні області, що викликає димеризацію 5сЕм. Для одержання даних димерів зазвичай використовують лінкери довжиною 5 залишків. Даний тип відомий як "діатіла". Ще більше короткі лінкери (з однієї або двох амінокислот) між доменами УН і МІ. призводять до утворення моноспецифічних тримерів, так званих "триатіл". Біспецифічні діатіла утворюються в результаті експресії двох ланцюгів з компонуванням МНА-МІ В і МНВ-МА або МІГА-МНВ ї МІ В-МНА, відповідно. Одноланцюгові діатіла (зіпдІе-спаіп діародієх, 5сОБ) містять фрагменти МНА-МІ В і
МНВ-УГА, які з'єднані лінкерним пептидом (Р), що складається з 12-20 амінокислот, переважно, 14 амінокислот (МНА-МІ В-Р-МНВ-МІ А). "Біспецифічні активатори Т-клітин (Ві-5ресіїїс Т-сеї епдадегх, ВІТЕ)" являють собою злиті білки, що складаються з двох різних антитіл 5сЕм, у яких один із 5сЕм з'єднується з Т-клітинами за допомогою рецептора СОЗ, а другий - з пухлинною клітиною за допомогою пухлино-специфічної молекули (Кшиїег еї аїЇ. (2004) Тгепаз Віоїесппої. 22:238-244). Молекули, що переорієнтуються, з подвійною афінністю (аца! айіпцу гегагдейпд тоїесціе5, "САКТ") являють собою діатіла, додатково стабілізовані за допомогою С-кінцевого дисульфідного містка. Даний винахід також включає одноланцюгові антитіла та гуманізовані гібридні антитіла, в яких амінокислотні послідовності донорного антитіла, відмінного від антитіла людини, що демонструє бажану антигенну специфічність, об'єднані з послідовностями акцепторного антитіла людини.
Донорні послідовності зазвичай містять щонайменше антигензв'язуючі амінокислотні залишки донора, але можуть також містити інші значимі зі структурної та/"або функціональної
Зо точки зору амінокислотні залишки донорного антитіла. Такі гібриди можна одержати за допомогою декількох способів, добре відомих в даній області техніки. Переважно, ліганд або засіб специфічний зв'язується з пептидом або поліпептидом. Специфічне зв'язування згідно з даним винаходом означає, що ліганд або засіб не повинні по суті зв'язуватися ("перехресно реагувати") з іншим пептидом, поліпептидом або речовиною, що присутня у зразку, аналіз якого проводять. Переважно пептид, що специфічно зв'язується, або поліпептид повинен зв'язуватися з афінністю, щонайменше в З рази більше, більше переважно, щонайменше в 10 разів більше, і ще більше переважно, щонайменше у 50 разів більше, ніж будь-який інший відповідний пептид або поліпептид. Неспецифічне зв'язування може бути припустимим, якщо його можна розмежувати й однозначно вимірювати, наприклад, на підставі розміру методом вестерн- блоттингу, або на підставі відносно більшого достатку в зразку. Зв'язування ліганду можна вимірювати будь-яким способом, відомим в даній області техніки. Переважно, зазначений спосіб являє собою напівкількісний або кількісний спосіб. Підходящі способи описані далі за текстом.
По-перше, зв'язування ліганду можна вимірювати прямо, наприклад, методом ЯМР або поверхневого плазмонного резонансу. По-друге, якщо ліганд також виступає в якості субстрату ферментативної активності пептиду або поліпептиду, що представляє інтерес, можна вимірювати продукт ферментативної реакції (наприклад, кількість протеази можна вимірювати за допомогою вимірювання кількості розщепленого субстрату, наприклад, методом вестерн- блоттингу). В якості альтернативи, ліганд може демонструвати ферментативні властивості сам
БО по собі, і комплекс "ліганд/пептид або поліпептид" або ліганд, який був зв'язаний пептидом або поліпептидом, відповідно, можуть контактувати з підходящим субстратом, що дозволить провести виявлення за допомогою утворення сигналу інтенсивності. Для вимірювання продуктів ферментативної реакції, переважно, кількість субстрату є насичуючою. Субстрат перед реакцією можна також позначити міткою, що виявляється. Переважно, контакт зразка із субстратом здійснюють протягом достатнього періоду часу. Достатній період часу означає час, необхідний для утворення кількості продукту, що виявляється, переважно, такого, що піддається вимірюванню. Замість вимірювання кількості продукту можна вимірювати час, необхідний для виникнення даної (наприклад, що виявляється) кількості продукту. По-третє, ліганд можна ковалентним або нековалентним способом приєднати до мітки, що дозволяє 60 здійснювати виявлення та вимірювання ліганду. Мічення можна здійснити за допомогою прямого або опосередкованого способів. Пряме мічення включає приєднання мітки до ліганду прямо (ковалентним або нековалентним способом). Опосередковане мічення включає зв'язування (ковалентним або нековалентним способом) вторинного ліганду з першим лігандом.
Вторинний ліганд повинен специфічно зв'язуватися з першим лігандом. Зазначений вторинний ліганд може бути з'єднаний з підходящою міткою та/або може являти собою мішень (рецептор) третинного ліганду, що зв'язується з вторинним лігандом. Застосування вторинного, третинного ліганду або лігандів більше високих порядків часто використовують для збільшення інтенсивності сигналу. Підходящі вторинні ліганди і ліганди більше високих порядків можуть включати антитіла, вторинні антитіла та добре відому систему стрептавідину-біотину (мМесіог
І арогаїогіе5, Іпс.). Ліганд або субстрат можуть також "бути міченими "тагами" (а9д5) з використанням одного або декількох "тагів", відомих в даній області техніки. Такі "таги" можуть являти собою мішені для лігандів більше високого порядку. Підходящі "таги" включають біотин, дигоксигенін, Ніз-Тад, глутатіон-5-трансферазу, БІГ АС, СЕР, тус-іад, геамгглютинін вірусу грипу
А (НА), мальтоза-зв'язувальний білок і т.п. У випадку пептиду або поліпептиду "таг", переважно, розташований на М-кінці та/або С-кінці. Підходящі мітки являють собою будь-які мітки, що виявляються підходящим способом виявлення. Типові мітки включають частки золота, латексні бусини, акридиновий складний ефір, люмінол, рутеній, ферментативно активні мітки, радіоактивні мітки, магнітні мітки (наприклад, "магнітні бусини", включаючи парамагнітні та суперпарамагнітні мітки), ії флуоресцентні мітки. Ферментативно активні мітки включають, наприклад, пероксидазу хрону, лужну фосфатазу, бета-галактозидазу, люциферазу та похідні зазначених міток. Підходящі субстрати для виявлення включають діамінобензидин (АВ), 3,3'- 5,5'-тетраметилбензидин, МВТ-ВСІР (хлорид 4-нітроблакитного тетразолію та 5-бром-4-хлор-3- індолілфосфат), СОР-Зіаг тм (Атегепат Віозсіепсе5), ЕСЕ м (Атегейпат Віозсіепсе5). Підходяща комбінація фермент-субстрат може призвести до утворення кольорового продукту реакції, флуоресценції або хемолюмінесценції, що можна вимірювати згідно зі способами, відомими в даній області техніки (наприклад, із застосуванням світлочутливої плівки або підходящої системи фотоапаратів). Що стосується вимірювання ферментативної реакції, можна аналогічно застосовувати критерії, наведені вище. Типові флуоресцентні мітки включають флуоресцентні білки (такі як СЕР і її похідні), СуЗ, Суб, техаський червоний, флуоресцеїн і барвники АїЇеха
Зо (наприклад, АІеха 568). Більше флуоресцентних міток доступні, наприклад, від компанії
Моїесшіаг Ргоре5 (Огедоп). Також передбачене застосування в якості флуоресцентних міток квантових точок. Типові радіоактивні мітки включають 355, 125І, 32Р, ЗЗР ї т.п. Радіоактивну мітку можна виявити будь-яким відомим і підходящим способом, наприклад, із застосуванням світлочутливої плівки або люмінесцентного пристрою для формування зображення. Підходящі способи вимірювання згідно з даним винаходом також включають преципітацію (особливо, імунопреципітацію), електрохемолюмінесценцію (електрогенеровану хемілюмінесценцію), РІА (радіоїмуноаналіз), ЕГІЗА (епгуте-іїпкейа іттипозогрепі аззау, твердофазний імуноферментний аналіз), ферментні імунні тести в "сендвіч"-форматі, електрохемілюмінесцентні імуноаналізи в "сендвіч"-форматі (еІесігоспетіїштіпезсепсе запаулспй іттипоаззау5, ЕСІІА), посилений дисоціацією лантанідний флюоресцентний імуноаналіз (діззосіайоп-епнапсей Іапіпапіде Пого іттипо аззау, ОЕЇГРІА), сцинтиляційний аналіз зближення (5сіпійацйоп ргохітйу аззау, РА), турбідиметрію, нефелометрію, посилену латексом турбідиметрію або нефелометрію або твердофазні імунні тести, наприклад, матриці білків з оберненою фазою або матриці антитіл.
Додаткові способи, відомі в даній області техніки (такі як гель-електрофорез, 20 гель- електрофорез, електрофорез у поліакриламідному гелі з ДСН (ДСН-ПААГ),, вестерн-блоттинг і мас-спектрометрія), можна використовувати окремо або в комбінації з міченням або іншими способами виявлення, описаними вище.
Кількість пептиду або поліпептиду можна також визначити в такий спосіб: (а) за допомогою здійснення контакту твердої підкладки, що містить ліганд пептиду або поліпептиду, як зазначено вище, зі зразком, що містить пептид або поліпептид, і (5) вимірювання кількості пептиду або поліпептиду, що приєднався до підкладки. Ліганд, який, переважно, вибраний з групи, що складається з: нуклеїнових кислот, пептидів, поліпептидів, антитіл й аптамерів, переважно, є присутнім на твердій підкладці в іммобілізованій формі. Матеріали для виробництва твердих підкладок добре відомі в даній області техніки і включають, серед іншого, комерційно доступні матеріали колонок, бусини полістиролу, латексні бусини, магнітні бусини, колоїдні частинки металів, скляні та/"або кремнієві чипи і поверхні, смужки, мембрани, шари нітроцелюлози, дурацити, лунки і стінки реакційних планшетів, пластикові пробірки і т.д. Ліганд або засіб можуть бути приєднані до множини різних носіїв. Приклади добре відомих носіїв включають скло, полістирол, полівінілхлорид, поліпропілен, поліетилен, полікарбонат, декстран, нейлон, амілозу, бо природні та модифіковані целюлози, поліакриламіди, агарози і магнетит. Для цілей,
передбачених даним винаходом, носії можуть бути або розчинними, або нерозчинними.
Підходящі способи фіксації/іммобілізації зазначеного ліганду добре відомі та включають, але не обмежені зазначеними, іонні, гідрофобні, ковалентні взаємодії та т.п. Також передбачене застосування "суспензійних матриць" в якості матриць згідно з даним винаходом (Моїап 2002,
Тгєпаз Віоїтесппої. 20(1):9-12). У таких суспензійних матрицях носій, наприклад, мікробусина або мікросфера, є присутніми у суспензії. Матриця складається з різних мікробусин або мікросфер, за можливістю мічених, що несуть різні ліганди. Способи одержання таких матриць, наприклад, на основі твердофазної хімії та фотолабільних захисних груп, як правило, відомі (патент США 5,744,305).
У даній заявці термін "Сро-сайт" відноситься до динуклеотидної послідовності 5'-С(23-3, що міститься у полінуклеотиді, переважно, що міститься в ДНК, більше переважно, що міститься в геномній ДНК суб'єкта. Сро-сайти, аналіз яких проводять згідно з даним винаходом, являють собою Сро-сайти, розташовані в області інтрону, екзону або промотору гена, що представляє інтерес. У випадку якщо СрО-сайти розташовані в області промотору, зазначена область розташована переважно на 3000 нуклеотидів, 2500 нуклеотидів, 2100 нуклеотидів або 1750 нуклеотидів вище від сайту початку трансляції відповідного гена, що представляє інтерес.
Більше переважно, Сро-сайти, аналіз яких проводять згідно з даним винаходом, являють собою Сро-сайти, розташовані в області на 1750-3000 нуклеотидів, 2100-3000 нуклеотидів або 2500-3000 нуклеотидів вище від сайту початку трансляції відповідного гена.
Таким чином, аналіз Сро-сайту на відповідність з Сро-сайтом згідно з даним винаходом також включений у даний винахід. Фахівцю відомо, як визначити Сро-сайти в зразку згідно з
Сра-сайтами, докладно описані у даній заявці вище, наприклад, за допомогою визначення сайту початку трансляції гена, що представляє інтерес, і/або за допомогою вирівнювання зазначених послідовностей зі зразка з послідовністю гена, що представляє інтерес. До того ж, у даному винаході також передбачено, що крім визначення статусу метилювання Сро-сайту згідно з даним винаходом визначають статус метилювання інших Сро-сайтів.
Термін "визначення статусу метилювання" відноситься до визначення того, чи є присутньою метильна група у 5-положенні піримідинового кільця цитозину у полінуклеотиді. Переважно, за залишком цитозину в 3'-напрямку йде залишок гуанозину, і дані два залишки утворюють Сро-
Зо сайт. Присутність зазначеної метильної групи можна визначити за допомогою різних способів, добре відомих фахівцю, включаючи, наприклад, ПЛР, специфічну до метилювання (Іпеїпуїайоп- зресіїс РСК, М5Р), повногеномне бісульфітне секвенування або інші способи на основі секвенування (бісульфітне секвенування (Візиййе Зедиепсіпдо, В5-Зед), постбісульфітне адаптерне мічення (Розі-Візиййе Адаріег Таддіпдо, РВАТ), повногеномне бісульфітне секвенування на основі тагментації (Тадтепіайоп-Вазед М/поЇїе Сепоте Візинйе бЗедиепсіпа, Т-
МУОВ5), окисне бісульфітне секвенування (Охідаїме Візиййе бедиепсіпд, охВ5-5ед), ТЕТ- опосередковане бісульфітне секвенування (Теї-Авб5ібіє!д ВізиНйе бедцепсіпа, ТАВ-5Е29), секвенування на основі імунопреципітації метильованої ДНК (МеїШуава ОМА
Іттипоргесірйайоп бедиепсіпу, МеріР-Зед), секвенування на основі фіксації метилювання (Меїпуїайоп-Саріиге Зедциепсіпу, МеїпуІСар), секвенування на основі фіксації метил- зв'язувального домена (МеїпуІ-Віпапд-Юботаіп-Саріиге бЗедиепсіпду, МВОсСар), бісульфітне секвенування при зниженому представництві (5едиепсіпд, Кедисей-Нергезепіайнйоп Вівинне
Зедиепсіпду, ААВ5-з5ед)), способи на основі ПЛР у реальному часі та бісульфітної обробки ДНК, наприклад, МеїПпуїїднії, рестрикцію чутливим до метилювання рестрикційним ферментом, наприклад, аналіз на основі збагачення мінімального фрагмента Нраї за допомогою опосередкованої лігуванням ПЛР (Нрагїї їіпу їтадтепі епгісптепі Бу Ідайноп-теаїаїва РСВ, НЕЇ Р), піросеквенування обробленої бісульфітом ДНК або тому подібні підходи, ампліфікацію взаємнометильованих сайтів; ВС-5ед, конверсію з бісульфітом з наступною фіксацією та секвенуванням; ВіМР, БрізиІрпйе теїПуїайоп ргоїйййпоу, бісульфітне профілювання метилювання;
В5, Бізшрийе зедцепсіпод, бісульфітне секвенування; В5РР, різиІрийе радіоск ргоревз, бісульфітні замикаючі кільце зонди; СНАКМ, сотргепепзіме пПідп-Тпгоцдприї атау5 тог геіайме теїНуїайоп, повні високопродуктивні матриці для відносного метилювання; СОВКА, сотрбіпей Бізшрийе гезігісйоп апаїузіх, об'єднаний аналіз бісульфітної рестрикції; ОМН, айегепійа!І теїВуїайоп пубгіаіїгайоп, диференціальну за метилюванням гібридизацію; НЕЇГР, Нраї! їіпу їйїадтепі епгісптепі Бу Ідаїйоп-тедіагей РСЕ, аналіз на основі збагачення мінімального фрагмента Нраї! за допомогою опосередкованої лігуванням ПЛР; МСА, теїПуїаїєй Сро ізіапа атрійсайоп, ампліфікацію метильованих Сро-острівців; МСАМ, МСА м/ййп тісгоаггау Пубгіаігацнйоп, МСА з мікроматричною гібридизацією; МеріР, тОіІР і тСІР, теїШуїай ОМА іттипоргесірнацйоп, імунопреципітацію метильованої ДНК; МІКА, теїйуїаїа Сро ізіапа гесомегу аззау, аналіз бо відновлення метильованих Сро-острівців; ММА55, тпісгоагау-рбазей теїПпуїайоп аззез5тепі ої зіпдіє затріе5, оцінку метилювання окремих зразків на основі мікроматриць; М5-АР-РСВ, теїпуїанйоп-зепзйіме агріїгагіу ргітей РСК, чутливу до метилювання ПЛР з довільними праймерами; МСС, теїПпуїайоп-зепейіме сиї соципіїпо, підрахунок чутливих до метилювання розрізів; МОР, теїПпуїіайоп-5ресійс РСЕ, ПЛР, специфічну до метилювання; М5-5МИиРЕ, теїпуїанйоп-зепзйїме зіпдіе писіеоїйіде ргітег ехіепзіоп, чутливе до метилювання нарощування однонуклеотидними праймерами; МО5, пехі-депегайоп 5едциепсіпд, секвенування наступного покоління; КІ 5, гевзігіснйоп Іапатагк депоте 5саппіпуд, рестрикційно-орієнтоване сканування генома; ККВ5, гедисей гергезепіайоп бБізцірпйе зедиепсіпуд, бісульфітне секвенування при зниженому представництві; -5ед, наступне секвенування; УМО5В5, м/поЇе-депоте 5поїщип рівшрийе зедшиепсіпуд, повногеномне бісульфітне секвенування методом дробовика. (Мапеї
ЕзіеїІег, Сапсег ерідепотісв: ОМА теїйуіотез апа Нпібіопе-тодіїїсайоп тарз, Майшге, 2007, 8:286- 298; Ретег МУ. І аїга, Ргіпсіріє5 апа спаПепде5 ої депоте-міде ОМА теїНуїаїйоп апаїувзів. Маїшйге
Вемієм Сепеїїсв5, 2010, 11: 191-203). Переважно, статус метилювання визначають способами, описаними у прикладах даної заявки нижче, наприклад, за допомогою аналізу метилювання на основі секвенування Іпіїпішт 27К або способом на основі мас-спектрометрії МАГ 0І-ТОЕ. У зв'язку з цим, статус метилювання конкретного залишку цитозину в конкретній молекулі полінуклеотиду може бути тільки "неметильованим" (що означає 095 метилювання) або "метильованим" (що означає 100 95 метилювання). У випадку Сро-сайта у дволанковій молекулі
ДНК, яка містить два залишки цитозину, статус метилювання може бути "неметильованим" (що означає 095 метилювання, тобто жоден із двох залишків цитозину не метильований), "напівметильованим" (що означає 50 956 метилювання, тобто один із двох залишків цитозину метильований) або "метильованим" або "повністю метильованим" (що означає 100 95 метилювання, тобто обидва залишки цитозину метильовані). Однак, як розуміє фахівець в даній області техніки, якщо одержують полінуклеотиди з множини клітин і визначають статус метилювання конкретного залишку цитозину в зазначеній множині полінуклеотидів, визначають середній статус метилювання, який може, наприклад, переважно, виражатися у вигляді відсотка (96 метилювання) й який може приймати будь-яке значення від 0 95 до 100 95. Також, як розуміє фахівець, статус метилювання можна виразити у вигляді відсотка у випадку, якщо визначають середнє метилювання різних популяцій клітин. Наприклад, клітини крові згідно з даним
Зо винаходом являють собою суміш різних типів клітин. Можливо, що певні типи клітин характеризуються більшими рівнями метилювання, тоді як інші типи клітин характеризуються меншими рівнями метилювання, і, нарешті, досягають середнього метилювання, що складає, наприклад, 50 95.
У даній заявці термін "детектуючий агент" відноситься до засобу, який специфічно взаємодіє з геном, що представляє інтерес, і за допомогою цього розпізнає рівень експресії гена, що представляє інтерес, статус метилювання гена, що представляє інтерес, або присутність або кількість мікроРНК згідно з даним винаходом. Переважно, зазначений детектуючий агент являє собою білок, поліпептид, пептид, полінуклеотид або олігонуклеотид. Переважно, детектуючий агент мічений способом, що дозволяє проводити виявлення зазначеного детектуючого агента відповідними способами. Мічення можна здійснити за допомогою різних методик, добре відомих в даній області техніки і залежних від використовуваної мітки. Переважні використовувані мітки являють собою флуоресцентні мітки, включаючи, серед іншого, флуорохроми, такі як флуоресцеїн, родамін або техаський червоний. Однак мітка може також являти собою фермент або антитіло. Передбачається, що фермент, використовуваний в якості мітки, буде утворювати сигнал, що виявляється за допомогою вступу в реакцію із субстратом. Підходящі ферменти, субстрати і методики добре відомі в даній області техніки. Детектуючий агент, що використовується в якості мітки, може специфічно розпізнавати молекулу-мішень, яку можна виявити прямо (наприклад, молекулу-мішень, яка є флуоресцентною сама по собі) або опосередковано (наприклад, молекулу-мішень, яка утворює виявляємий сигнал, таку як фермент). Мічені детектуючі агенти зразка будуть здійснювати контакт зі зразком, щоб забезпечити специфічну взаємодію. Може бути необхідним промивання, щоб вилучити неспецифічно зв'язаний детектуючий засіб, який в іншому випадку призведе до одержання неправильних значень. Після завершення даного етапу взаємодії дослідник помістить пристрій для виявлення у зчитувальний пристрій або сканер. Пристрій для виявлення флуоресцентних міток, переважно, складається з декількох лазерів, переважно, спеціального мікроскопа та фотокамери. Флуоресцентні мітки будуть збуджуватися лазером, і мікроскоп, і фотокамера будуть узгоджено працювати для створення цифрового зображення зразка. Потім ці дані можна зберігати на комп'ютері, і можна використовувати спеціальну програму, наприклад, для вирахування даних фона. Підсумкові дані, переважно, нормують та, при необхідності,
перетворюють у числовий формат або формат широко розповсюджених одиниць. Дані будуть аналізувати, щоб порівняти зразки з еталонами і виявити значні зміни. "Порівняння" у даній заявці включає порівняння присутності, відсутності або кількості індикатора, зазначеного у даній заявці, що міститься в зразку, аналіз якого проводять, з присутністю, відсутністю або кількістю зазначеного індикатора у підходящому еталонному зразку. Слід розуміти, що порівняння у даній заявці означає порівняння відповідних параметрів або значень, наприклад, абсолютної кількості індикатора, зазначеного у даній заявці, у порівнянні з абсолютною еталонною кількістю зазначеного індикатора; концентрації індикатора у порівнянні з еталонною концентрацією зазначеного індикатора; сигналу інтенсивності, отриманого від індикатора, зазначеного у даній заявці, у зразку в порівнянні із сигналом інтенсивності зазначеного індикатора того самого типу в еталонному зразку. Зазначене порівняння можна проводити вручну або комп'ютеризованим способом. Для порівняння комп'ютеризованим способом значення певної кількості можна порівняти зі значеннями відповідно до підходящих еталонів, які зберігаються у базі даних комп'ютерної програми. Потім комп'ютерна програма може оцінити результат порівняння за допомогою експертної системи.
Відповідно, результат виявлення, зазначеного у даній заявці, може бути автоматично наданий у підходящому вихідному форматі.
Терміни "зразок" або "зразок, що представляє інтерес", використовуються у даній заявці взаємозамінно й означають частину або фрагмент тканини, органа або індивідуума, які, як правило, є меншими, ніж така тканина, орган або індивідуум, і призначені для представлення цілої тканини, органа або індивідуума. Після проведення аналізу зразок забезпечує інформацію щодо статусу тканини або статусу здоров'я, або захворювання органа або індивідуума.
Приклади зразків включають, але не обмежені зазначеними, рідкі зразки, такі як кров, сироватка, плазма, синовіальна рідина, сеча, слина, лімфатична рідина, слізна рідина та рідина, отримана із залоз, таких як, наприклад, молочна залоза або передміхурова залоза, або зразки тканини, такі як, наприклад, екстракти тканини, отримані з тканини пухлини або тканини, прилеглої до пухлини. Наступні приклади зразків являють собою культури клітин або культури тканин, такі як, але не обмежуючись зазначеними, культури різних ракових клітин.
Зразки можна одержати за допомогою добре відомих методик; дані зразки включають,
Ко) переважно, зіскоби, мазки або біопсії травного тракту, печінки, підшлункової залози, заднепрохідного каналу, ротової порожнини, верхніх повітреносних шляхів й епідермісу. Такі зразки можна одержати за допомогою застосування щіточок, (бавовняних) тампонів, лопаточки, рідин після промивання/збризкування, пристрою для штанцевої біопсії, пункції порожнин голками або хірургічними інструментами. Зразки тканини або органа можна одержати з будь- якої тканини або органа за допомогою, наприклад, біопсії або інших хірургічних процедур.
Більше переважно, зразки являють собою зразки рідин організму, наприклад, переважно, крові, плазми, сироватки, сечі, слини, слізної рідини та рідин, отриманих з молочної залози, наприклад, молока. Найбільше переважно, зразок рідини організму містить клітини суб'єкта.
Виділені клітини можна одержати з рідин організму або тканин, або органів за допомогою методик виділення, таких як фільтрація, центрифугування або сортування клітин. Переважно, зразки одержують з тих рідин організму, які описані у даній заявці нижче. Більше переважно, клітини виділяють із зазначених рідин організму, як описано у даній заявці нижче.
Аналіз зразка можна проводити візуальним або хімічним способом. Візуальний аналіз включає, але не обмежений зазначеними, мікроскопічну візуалізацію або радіографічне сканування тканини, органа або індивідуума, що дозволяють проводити морфологічну оцінку зразка. Хімічний аналіз включає, але не обмежений зазначеними, виявлення наявності або відсутності специфічних індикаторів або змін кількості, або рівня специфічних індикаторів.
Термін "еталонний зразок" у даній заявці означає зразок, який аналізують по суті ідентичним способом, як і зразок, що представляє інтерес, й інформацію про який порівнюють з таким зразком, що представляє інтерес. Відповідно, еталонний зразок забезпечує стандарт, що дозволяє оцінювати інформацію, отриману зі зразка, що представляє інтерес. Еталонний зразок може бути отриманий зі здорової або нормальної тканини, органа або індивідуума, за допомогою цього забезпечуючи стандарт здорового статусу тканини, органа або індивідуума.
Відмінності між статусом нормального еталонного зразка та статусом зразка, що представляє інтерес, можуть свідчити про ризик розвитку захворювання або про присутність або подальше прогресування такого захворювання або порушення. Еталонний зразок може бути отриманий з аномальної або підданої хворобі тканини, органа або індивідуума, за допомогою цього забезпечуючи стандарт хворого статусу тканини, органа або індивідуума. Відмінності між статусом аномального еталонного зразка та статусом зразка, що представляє інтерес, можуть бо свідчити про менший ризик розвитку захворювання або про відсутність або поліпшення такого захворювання або порушення. Еталонний зразок може бути також отриманий з тієї самої тканини, органа або індивідуума, що й зразок, що представляє інтерес, але бути відібраним у більше ранню точку часу. Відмінності між статусом раніше відібраного еталонного зразка та статусом зразка, що представляє інтерес, можуть свідчити про прогресування захворювання, тобто про поліпшення або погіршення захворювання протягом часу. Еталонний зразок був відібраний у більше ранню або пізню точку часу у випадку, якщо між забором еталонного зразка та забором зразка, що представляє інтерес, пройшов деякий період часу. Такий період часу може являти собою роки (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 років), місяці (1,2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 місяців), тижні (наприклад, 1,2, 3,4,5,6,7, 8 тижнів), дні (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 днів), години (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 годин), хвилини (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60 хвилин) або секунди (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60 секунд).
Еталонний зразок можна "обробляти відмінним способом" або "піддавати відмінному впливу", ніж зразок, що представляє інтерес, у випадку якщо обидва зразка оброблюють по суті ідентичним способом, за винятком одного фактора. Такий один фактор включає, але не обмежений зазначеними, час впливу, концентрацію впливу або температуру впливу певної речовини. Відповідно, зразок, що представляє інтерес, можна піддати впливу відмінних доз певної речовини, ніж еталонний зразок, або можна піддати впливу протягом відмінного інтервалу часу, ніж еталонний зразок, або можна піддати впливу при відмінній температурі, ніж еталонний зразок. Відмінні дози, впливу яким можна піддати зразок, що представляє інтерес, включають, але не обмежені зазначеними, дози, збільшені або зменшені в 2 рази, у 5 разів, в 10 разів, в 20 разів, в ЗО разів, в 40 разів, у 50 разів, в 100 разів і/або в 1000 разів у порівнянні з дозами, впливу яких піддають еталонний зразок. Відмінні часи експозиції, впливу яких можна піддати зразок, що представляє інтерес, включають, але не обмежені зазначеними, в 2 рази, у 5 разів, в 10 разів, в 20 разів, в 30 разів, в 40 разів, у 50 разів, в 100 разів і/або в 1000 разів більше довгий або більше короткий період часу, ніж еталонний вплив. Відмінні температури впливу, впливу яких можна піддати зразок, що представляє інтерес, включають, але не обмежені зазначеними, температуру, збільшену або зменшену в 2 рази, у 5 разів, в 10 разів, в
Зо 20 разів, в 30 разів, в 40 разів, у 50 разів, в 100 разів і/або в 1000 разів, ніж еталонний вплив. У необмежуючому прикладі зразок, що представляє інтерес, можна піддати впливу в 10 разів збільшеної концентрації речовини, ніж еталонний зразок. Потім проводять аналіз обох зразків по суті ідентичним способом, що дозволяють проводити визначення впливу, тобто сприятливого або небажаного впливу, збільшених концентрацій такої речовини на зразок, що представляє інтерес. Фахівцю очевидно, що у даному прикладі вносять відповідні зміни в різні діапазони концентрацій, різні часи експозиції та/або різні температури впливу.
Терміни "знижений" або "зменшений" рівень індикатора означає рівень такого індикатору в зразку, який є меншим у порівнянні з еталоном або еталонним зразком. Терміни "підвищений" або "збільшений" рівень індикатора означає рівень такого індикатора в зразку, який є більшим у порівнянні з еталоном або еталонним зразком.
Еталонні кількості можна, у принципі, розрахувати для групи або когорти суб'єктів, як зазначено у даній заявці, на основі середніх або медіанних значень для даної мікроРНК за допомогою застосування стандартних способів статистики. Зокрема, точність тесту, такого як спосіб, метою якого є діагностика події або відсутності події, найкращим способом описується операційними характеристиками приймача (гесеїмег-орегайіпуд спагасіегібіїс5 КОС) даного тесту (див., зокрема, публікацію 2меїд 1993, Сіїп. Спет. 39:561-577). Графік КОС являє собою графік всіх пар чутливості у порівнянні зі специфічністю виникаючих внаслідок безперервно мінливого порога прийняття рішення у всьому спостережуваному діапазоні даних. Клінічні характеристики способу діагностики залежать від точності даного способу, тобто його здатності правильно визначати для суб'єктів певний прогноз або діагноз. Графік КОС демонструє перекриття між двома розподілами за допомогою відкладання на графіку чутливості залежно від 1- специфічності для повного діапазону порогів, що підходять для проведення розмежування. На вісі "у" відкладена чутливість або фракція істиннопозитивних результатів, яка визначена як співвідношення кількості істиннопозитивних результатів тесту до суми кількості істиннопозитивних і кількості хибнонегативних результатів тесту. Даний параметр також називають позитивним результатом щодо наявності захворювання або стану. Його розраховують винятково в ураженій підгрупі. На осі "х" відкладена хибнопозитивна фракція, або 1-специфічність, яка визначена як співвідношення кількості хибнопозитивних результатів до суми кількості істиннонегативних і кількості хибнопозитивних результатів. Даний параметр являє бо собою показник специфічності та розраховується винятково в неураженій підгрупі. Оскільки істинно- та хибнопозитивна фракції розраховуються повністю окремо, із застосуванням результатів тесту від двох різних підгруп, графік КОС є незалежним від поширеності події в групі. Кожна точка на графіку КОС являє собою пару чутливість/специфічність відповідно до конкретного порога прийняття рішення. Тест з чудовим розмежуванням (відсутність перекриття у двох розподілах результатів) характеризується графіком КОС, який проходить через верхній лівий кут, де фракція істиннопозитивних результатів складає 1,0, або 100 95 (переважаюча чутливість), і хибнопозитивна фракція складає 0 (переважаюча специфічність). Теоретичний графік для тесту без дискримінації (ідентичні розподіли результатів для двох груп) являє собою діагональну лінію, проведену під кутом 45" від нижнього лівого кута до верхнього правого кута.
Більшість графіків розташовуються між даними двома крайніми значеннями. Якщо графік КОС повністю розташовується нижче діагоналі під кутом 45, це легко виправити за допомогою обернення критерію "позитивності" з "більше ніж" на "менше ніж", або навпаки. Якісно, чим ближче графік розташований до верхнього лівого кута, тим вища загальна точність тесту.
Залежно від бажаного довірчого інтервалу з кривої КОС може бути отриманий поріг, що дозволяє ставити діагноз або прогноз даної події при належному співвідношенні чутливості та специфічності, відповідно. Відповідно, еталон, що використовується для способів згідно з даним винаходом, може бути отриманий, переважно, за допомогою встановлення КОС для зазначеної когорти, як описано вище, і виведення граничної кількості з КОС. Залежно від бажаної чутливості та специфічності способу діагностики графік КОС дозволяє одержувати підходящі пороги. Переважно, еталонні кількості лежать в межах діапазону значень, що представляють чутливість щонайменше 75 95 і специфічність щонайменше 45 95, або чутливість щонайменше 80 95 ії специфічність щонайменше 40 95, або чутливість щонайменше 85 95 і специфічність щонайменше 33 95, або чутливість щонайменше 90 95 і специфічність щонайменше 25 95.
Переважно, еталонну кількість у даній заявці одержують зі зразків суб'єктів, отриманих до лікування, але про яких невідомо, чи страждали донори даних зразків від РМЗ або МРМУ, чи ні.
Даний еталонний рівень кількості може являти собою дискретне число або може являти собою діапазон чисел. Очевидно, що еталонний рівень або кількість можуть варіювати між окремими видами мікроРНК. Внаслідок цього систему вимірювання, переважно, калібрують за допомогою зразка або серій зразків, що містять відомі кількості кожної конкретної мікроРНК. Фахівець
Зо розуміє, що у даному випадку кількості мікроРНК можна, переважно, виразити у вигляді умовних одиниць (У.О0.). Таким чином, переважно, кількості мікроРНК визначають за допомогою порівняння сигналу, отриманого зі зразка, і сигналів, що містяться в каліброваній кривій.
Еталонна кількість, застосовувана для індивідуального суб'єкта, може варіювати залежно від різних фізіологічних параметрів, таких як вік або субпопуляція. Таким чином, еталонну підходящу кількість, можна визначити за допомогою способів згідно з даним винаходом в результаті аналізу еталонного зразка, який проводять разом, тобто одночасно або послідовно, з досліджуваним зразком. Більше того, граничну кількість можна, переважно, використовувати в якості еталонної кількості. Еталонну кількість можна, переважно, одержати зі зразка суб'єкта або групи суб'єктів, що страждають від РМЗ або МРМ3У, які страждають від/про яких відомо, що вони страждають від РМЗ або МРМ3. Еталонну кількість можна, переважно, також одержати зі зразка суб'єкта або групи суб'єктів, які, як відомо, не страждають від РМЗ або МРМ3. Слід розуміти, що вищезгадані кількості можуть варіювати у зв'язку зі статистикою та помилками вимірювання. Відхилення, тобто зменшення або збільшення кількостей мікроРНК, зазначених у даній заявці, є, переважно, статистично значимим відхиленням, тобто статистично значимим зменшенням або статистично значимим збільшенням.
У даній заявці термін "лікувати" або "лікування" захворювання або порушення означає досягнення одного або декількох результатів з наступних: (а) зменшення ваги порушення; (Б) обмеження або запобігання розвитку симптомів, характерних для порушення (порушень), лікування яких проводять; (с) інгібування погіршення симптомів, характерних для порушення (порушень), лікування яких проводять; (4) обмеження або запобігання повторного прояву порушення (порушень) в індивідуума, який раніше страждав від порушення (порушень); і (е) обмеження або запобігання повторного прояву симптомів в індивідуумів, у яких раніше спостерігалися симптоми порушення (порушень).
У даній заявці термін "запобігати", "запобігання" або "профілактика" захворювання або порушення означає запобігання того, що таке захворювання або порушення виникне у пацієнта.
У даній заявці термін "терапія" означає всі заходи, що застосовуються відносно суб'єкта для полегшення захворювань або порушень, зазначених у даній заявці, або симптомів, якими супроводжуються зазначені захворювання або порушення, до значного ступеня. Зазначена терапія у даній заявці також включає заходи, що призводять до повного відновлення здоров'я бо відносно захворювань або порушень, зазначених у даній заявці. Слід розуміти, що терапія,
використовувана згідно з даним винаходом, може не бути ефективною у всіх суб'єктів, лікування яких проводять. Однак даний термін вимагає, щоб можна було успішно лікувати статистично значиму частину суб'єктів, що страждають від захворювання або порушення, зазначеного у даній заявці. Те, чи є частина статистично значимою, фахівець в даній області техніки може визначити без зайвої праці із застосуванням різних добре відомих інструментів статистичної оцінки, які обговорюються у даній заявці вище.
Термін "терапія раку молочної залози" у даній заявці відноситься до застосування відносно суб'єкта, що страждає від раку молочної залози, включаючи метастазуючий рак молочної залози, заходів щодо видалення ракових клітин у суб'єкта, з інгібування росту ракових клітин, зі знищення ракових клітин або зі стимулювання організму пацієнта до інгібування росту або знищення ракових клітин. Переважно, терапія раку молочної залози являє собою хіміотерапію, антигормональну терапію, таргетну терапію, імунотерапію або будь-які комбінації зазначених варіантів терапії. Однак також передбачено, що протиракова терапія являє собою променеву терапію або хірургію, саму по собі або в комбінації з іншими режимами терапії. Фахівець розуміє, що вибір терапії раку молочної залози залежить від декількох факторів, таких як вік суб'єкта, стадія пухлини і статус рецепторів клітин пухлини. Однак фахівець в даній області техніки також розуміє, що вибору терапії раку молочної залози можуть сприяти способи згідно з даним винаходом: якщо, наприклад, РМЗ діагностовано способом діагностики РМЗ, але МРМЗ3 не діагностовано способом діагностики МРМУЗ, хірургічного видалення пухлини може бути достатнім. Якщо, наприклад, РМЗ діагностовано способом діагностики РМЗ, і МРМЗ діагностовано способом діагностики МРМУ, крім хірургії, можуть бути необхідними терапевтичні заходи, наприклад, хіміотерапія та/або таргетна терапія. Аналогічно, якщо, наприклад, РМЗ діагностовано способом діагностики РМЗ, і небажаний статус ЦПК визначений способом визначення статусу ЦПК, може знадобитися, наприклад, додаткове додавання імунотерапії до режиму терапії.
У даній заявці термін "хіміотерапія" відноситься до лікування суб'єкта протипухлинним лікарським препаратом. Переважно, хіміотерапія являє собою лікування, що включає алкілуючі засоби (наприклад, циклофосфамід), платину (наприклад, карбоплатин), антрацикліни (наприклад, доксорубіцин, епірубіцин, ідарубіцин або даунорубіцин) й інгібітори топоізомерази ІЇ (наприклад, етопозид, іринотекан, топотекан, камптотецин або МРІ6), інгібітори кінази анапластичної лімфоми (апаріавійс ІмМтрпота Кіпазе, АГ.К) (наприклад, кризотиніб або АР26130), інгібітори аврора-кінази (наприклад, М-(4-(4-(4-метилпіперазин-1-іл)-6-(5-метил-1 Н-піразол-3- іл)яаміно|піримідин-2-ілісульфанілфеніл|Іциклопропанкарбоксамід (УХ-680)), антиангіогенні засоби (наприклад, бевацизумаб) або йод131-1-(3З3-йодбензил)гуанідин (терапевтичний метайодбензилгуанідин), інгібітори гістондеацетилази (НОАС), окремо або будь-яку підходящу комбінацію зазначених інгібіторів. Слід розуміти, що хіміотерапія, переважно, відноситься до повного циклу лікування, тобто серії з декількох (наприклад, чотирьох, шести або восьми) доз протипухлинного лікарського препарату або лікарських препаратів, що вводяться суб'єкту з інтервалом у декілька днів або тижнів, протягом яких не відбувається такого введення.
Термін "антигормональна терапія" відноситься до терапії раку молочної залози за допомогою блокування рецепторів гормонів, наприклад, рецептора естрогену або рецептора прогестерону, які експресуються на пухлинних клітинах, або за допомогою блокування біосинтезу естрогену. Блокування рецепторів гормонів можна, переважно, досягти за допомогою введення сполук, наприклад, тамоксифену, що зв'язуються специфічно та за допомогою цього блокуючих активність рецепторів зазначеного гормону. Блокування біосинтезу естрогенів, переважно, досягають за допомогою введення інгібіторів ароматази, таких як, наприклад, анастрозол або летрозол. Фахівцю в даній області техніки відомо, що антигормональна терапія є доцільною винятково у тих випадках, коли пухлинні клітини експресують рецептори гормонів.
Термін "таргетна терапія" у даній заявці відноситься до введення пацієнту хімічної речовини, яка, як відомо, блокує ріст ракових клітин за допомогою перешкоджання специфічним молекулам, які, як відомо, необхідні для пухлиноутворення або росту раку, або ракових клітин.
Приклади, відомі фахівцю в даній області техніки, являють собою малі молекули, такі як, наприклад, інгібітори РАКР - полі-АДФ-рибозополімерази (наприклад, ініпариб) або моноклональні антитіла, такі як, наприклад, трастузумаб.
Термін "імунотерапія" у даній заявці відноситься до лікування раку за допомогою модулювання імунної відповіді у суб'єкта Зазначене модулювання може викликати, підсилювати або пригнічувати зазначену імунну відповідь. Термін "клітинна імунотерапія" відноситься до терапії раку молочної залози, що включає введення суб'єкту імунних клітин, бо наприклад, Т-клітин, переважно, пухлино-специфічних клітин МК (природних кілерів).
Терміни "променева терапія" або "радіотерапія" відомі фахівцю в даній області техніки. Дані терміни відносяться до застосування іонізуючого випромінювання для лікування або контролю раку. Фахівцю також відомий термін "хірургія", який відноситься до оперативного втручання для лікування раку молочної залози, наприклад, вирізання тканини пухлини.
У даній заявці термін "моніторинг терапії" відноситься до одержання показника впливу протиракового лікування на статус раку суб'єкта, що страждає від зазначеного раку. Переважно, моніторинг терапії включає застосування способу згідно з даним винаходом на двох зразках від одного суб'єкта, причому перший зразок одержують у точці часу, що передує моменту одержання другого зразка. Переважно, точка часу одержання першого зразка відділена від точки часу одержання другого зразка приблизно на один тиждень, приблизно на два тижні, приблизно на три тижні, приблизно на чотири тижні, приблизно на п'ять тижнів, приблизно на шість тижнів, приблизно на сім тижнів, приблизно на два місяці, приблизно на три місяці, приблизно на п'ять місяців, приблизно на шість місяців або більше ніж приблизно на шість місяців. Однак даним винаходом також передбачено, що спосіб моніторингу терапії використовують для довгострокового моніторингу суб'єктів, наприклад, моніторингу часу безрецидивної виживаності або тощо. У цьому випадку, точка часу одержання першого зразка відділена від точки часу одержання другого зразка, переважно, щонайменше на шість місяців, щонайменше на один рік, щонайменше на два роки, щонайменше на три роки, щонайменше на чотири роки, щонайменше на п'ять років або щонайменше на шість років. Фахівцю в даній області техніки відомо, що перший зразок, переважно, одержують до початку протиракової терапії, у той час як другий зразок, переважно, одержують після початку терапії. Однак даним винаходом також передбачено, що обидва зразки одержують після початку терапії. Фахівець в даній області техніки також розуміє, що згідно зі способом моніторингу терапії згідно з даним винаходом можна одержати більше ніж два послідовні зразки, і що у цьому випадку зразок, отриманий у першій точці часу, можна використовувати в якості першого зразка відносно другого зразка, а також для третього зразка. Вносячи відповідні зміни, зразок, отриманий у другій точці часу, можна, проте, використовувати в якості першого зразка відносно третього зразка тощо.
Термін "успіх лікування" у даній заявці, переважно, відноситься до полегшення захворювань
Зо або порушень, зазначених у даній заявці, або симптомів, якими супроводжуються зазначені захворювання або порушення, у значній мірі. Більше переважно, даний термін відноситься до повного вилікування зазначеного суб'єкта, тобто запобіганню прогресування та/або рецидиву метастазуючого раку молочної залози протягом щонайменше п'яти років. Відповідно, "визначення успіху лікування" відноситься до оцінки ймовірності того, що суб'єкт буде успішно вилікуваний. Переважно, даний термін відноситься до прогнозування виживаності без прогресування захворювання та/або загальної виживаності суб'єкта, більше переважно, протягом конкретного періоду часу. Термін "прогнозування виживаності без прогресування захворювання" відноситься до визначення ймовірності того, що суб'єкт виживе без рецидиву та/або прогресування метастатичного раку молочної залози протягом конкретного періоду часу.
Відповідно, термін "прогнозування загальної виживаності" відноситься до визначення ймовірності того, що суб'єкт виживе протягом конкретного періоду часу. Переважно, зазначений період часу складає щонайменше 12 місяців, більше переважно, щонайменше 24 місяці.
Терміни "фармацевтичний препарат" "медичний препарат" і "лікарський препарат" використовуються у даній заявці взаємозамінно й означають речовину та/або комбінацію речовин, що використовуються для виявлення, запобігання або лікування статусу тканини або захворювання.
Термін "набір" у даній заявці означає сукупність вищезгаданих компонентів, переважно, наданих окремо або в одному контейнері. Контейнер, також переважно, містить інструкцію зі здійснення способу згідно з даним винаходом. Приклади таких компонентів набору, а також способи їх застосування, були наведені у даній специфікації. Набір, переважно, містить вищезгадані компоненти в готовій до використання формі. Переважно, набір може додатково містити інструкції, наприклад, керівництво для користувача з коректування компонентів, наприклад, концентрацій детектуючих агентів, і з інтерпретації результатів будь-якого визначення (визначень) відносно діагнозу, забезпечуваного способами згідно з даним винаходом. Зокрема, таке керівництво може містити інформацію для співвіднесення кількостей певного продукту гена з типом діагнозу. Подробиці можна знайти в іншому місці у даній специфікації. Додатково, у такому керівництві для користувача можуть бути надані інструкції щодо належного застосування компонентів набору для визначення кількості (кількостей) відповідного біомаркера. Керівництво для користувача може бути надане у паперовій або бо електронній формі, наприклад, може зберігатися на диску СО або СО-КОМ. Даний винахід
Зо також відноситься до застосування зазначеного набору в будь-якому зі способів згідно з даним винаходом.
Термін "пристрій" у даній заявці відноситься до системи засобів, що містить щонайменше вищезгадані засоби, функціонально зв'язані один з одним, для забезпечення постановки діагнозу. Переважні засоби для визначення статусу метилювання або кількості продукту гена та засобу для проведення порівняння розкриті вище в комбінації зі способами згідно з даним винаходом. Як з'єднати засоби функціональним способом, буде залежати від типу засобів, що містяться у пристрої. Наприклад, коли застосовуються засоби для автоматичного визначення статусу метилювання або кількості продукту гена, дані, отримані зазначеними працюючими в автоматичному режимі засобами, можна обробити, наприклад, за допомогою комп'ютерної програми, з метою поставити діагноз. Переважно, у такому випадку засоби містяться в єдиному пристрої. Зазначений пристрій може, відповідно, містити блок для аналізу, призначений для визначення статусу метилювання або кількості продукту гена в зразку, і блок для оцінки, призначений для обробки підсумкових даних з метою постановки діагнозу. Переважні засоби для виявлення розкриті вище в комбінації з варіантами реалізації, що відносяться до способів згідно з даним винаходом. У такому випадку засоби є функціонально зв'язаними таким чином, що користувач системи зводить разом результат визначення кількості та діагностичні значення зазначеного результату з урахуванням інструкції та пояснень, наведених у керівництві. У такому варіанті реалізації даного винаходу засоби можуть бути надані у вигляді окремих пристроїв і, переважно, упаковані разом у вигляді набору. Фахівець в даній області техніки зрозуміє, як об'єднати засоби без застосування додаткових винахідницьких навичок. Переважні пристрої являють собою такі, які можна застосовувати без конкретних знань спеціалізованого клініциста, наприклад, тест-смужки або електронні пристрої, на які просто необхідно нанести зразок.
Результати можуть бути надані у вигляді вихідного сигналу параметричних діагностичних первинних даних, переважно, у вигляді абсолютних або відносних кількостей. Слід розуміти, що ці дані вимагають інтерпретації клініцистом. Однак також передбачені пристрої з експертною системою, в яких вихідний сигнал містить оброблені діагностичні первинні дані, інтерпретація яких не вимагає участі спеціалізованого клініциста. Ще більше переважні пристрої містять аналітичні блоки/пристрої (наприклад, біосенсори, матриці, тверді підкладки, об'єднані з
Зо лігандами, які специфічно розпізнають поліпептиди, пристрої для поверхневого плазмонного резонансу, ЯМР-спектрометри, мас-спектрометри і т.д.) або блоки/пристрої для оцінки, зазначені вище, у комбінації зі способами згідно з даним винаходом.
Варіанти реалізації
Згідно з першим аспектом даний винахід відноситься до способу прогнозування та/або діагностування захворювання у суб'єкта, причому зазначений спосіб включає а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ/2, МОРМ1, ЕРТОК, 51 С22А18,
ЕИТ7, КАРЗМ, 5100Р, ОМРКА, і р) визначення присутності щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тів-801, тів-376бс, тій-37ба, тів-127, тіВв8-409, тів-148Бр, у суб'єкта.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу захворювання являє собою проліферативне захворювання клітин. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу захворювання являє собою рак. Зокрема, рак вибраний з групи, що складається з раку молочної залози, раку підшлункової залози і раку яєчників.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу термін "тік-652" означає послідовність ланцюга -Зр або -5р (зокрема, тік-652-Зр), термін "тік-801" означає послідовність ланцюга -Зр або -5р, термін "тік-376с" означає послідовність ланцюга -Зр або -5Бр (зокрема, тік-37бс-Зр), термін "птік-37ба" означає послідовність ланцюга -Зр або -5р (зокрема, тів-37ба-Зр), термін "тік-127" означає послідовність ланцюга -Зр або -5р (зокрема, тік-127-
Зр), термін "тік-409" означає послідовність ланцюга -Зр або -5р (зокрема, тік-409-3Зр), термін "тів-148Б" означає послідовність ланцюга -Зр або -5р (зокрема, тік-148-Зр).
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зміна статусу метилювання та/або рівня експресії НХАІ/2, МОМ, КЕРТОК, 5І/С22А18, РОТ7, КАРЗМ, 5100Р і/або ОМЕКА свідчить про зміну статусу тканини або захворювання, такого як погіршення або поліпшення статусу тканини або захворювання, зокрема, раку. Зокрема, зменшений статус метилювання
НУАІ2, МОКМІ, ЕРТОБЕ, 5І С22А18, БШТ7, КАРЗМ, 5100Р і/або ОУРКА свідчить про погіршення статусу тканини або захворювання. Збільшений статус метилювання НУАГ2, МОКМІ1, ЕРТОК,
ЗІ С22А18, РОТ7, КАРБЗМ, 5100Р і/або ЮОУККА свідчить про поліпшення статусу тканини або захворювання. Зміна статусу метилювання НУАГ2, МОКМІ1, КРТОК, 51.С22А18, БОТ7, КАРБМ, бо З100ОР і/або ОУКК4 також свідчить про ризик розвитку зміненого статусу тканини або захворювання, зокрема, раку. Більше конкретно, зменшення статусу метилювання НУАЇ12,
МОРМ1, ЕРТОК, 51 С22А18, БШТ7, КАРЗМ, 5100Р і/або ОМККА свідчить про ризик розвитку переродженого статусу тканини або захворювання, зокрема, раку. Зміна статусу метилювання
НУАІ2, МаВМІ, КРТОК, 51 С22А18, БШОТ7, КАРБМ, 5100Р і/або ОМЕКА4, зокрема, зменшений статус метилювання НУАІ2, МОКМІ, ЕРТОК, 5І С22А18, БШТ7, КАРЗМ, 5100Р і/або ОУККА, також свідчить про те, що індивідуум страждає від зміненого статусу тканини або захворювання, зокрема, раку. Більше того, зміна статусу метилювання НУАЇ2, МОКМІ1, КРТОК, 51 С22А18,
ЕИТ7, КАРБЗМ, 5ІООР і/або ЮУКК4, наприклад, підвищений або знижений рівень статусу метилювання НУАІ2, МОМ, КРТОБК, 5І С22А18, ГШТ7, КАРЗМ, З100Р і/або ОМЕКА, свідчить про прогресування або стадію статусу тканини або захворювання, зокрема, раку, у суб'єкта.
Зокрема, зменшений статус метилювання НУАІ2, МОКМІ1, КРТОК, 51 С22А18, БОТ7, КАРБМ,
З100Р і/або ОУРКА свідчить про погіршення статусу тканини або захворювання, зокрема, раку.
Зокрема, збільшений рівень експресії НУАГ2, МОКМІ, ЕРТОК, 5ІС22А18, БОТ7, КАРЗМ,
З100Р і/або ОУККА свідчить про погіршення статусу тканини або захворювання. Зменшений рівень експресії НЖАЇ2, МОКМІ, КРТОК, 5ІС22А18, РОТ, КАРЗМ, ЗІООР і/або ЮУККА свідчить про поліпшення статусу тканини або захворювання. Зміна рівня експресії НУА12,
МОРМІ, ЕРТОК, 5ІС22А18, РОТ7, КАРЗМ, 5ІООР і/або ЮУКК4 також свідчить про ризик розвитку зміненого статусу тканини або захворювання, зокрема, раку. Більше конкретно, збільшений рівень експресії НУАІ/2, МОКМІ, ЕРТОК, 5ІС22А18, РОТ7, КАРБМ, 5100Р і/або
ОУККЯ4 свідчить про ризик розвитку переродженого статусу тканини або захворювання, зокрема, раку. Змінений рівень експресії НУАГ2, МОКМ1, КРТОК, 5І./С22А18, БТ, КАРБМ,
З100Р і/або ОУККА, зокрема, збільшений рівень експресії НХАІГ2, МОРЕМ, КРТОК, 5І С22А18,
ЕИТ7, КАРБМ, 5100Р і/або ОУККА, також свідчить про те, що індивідуум страждає від зміненого статусу тканини або захворювання, зокрема, раку. Більше того, змінений рівень експресії
НУАІ 2, МаВМІ, АРТОК, 5І С22А18, ГОТ7, КАРЗМ, 5100Р і/або ОУККА, наприклад, підвищений або знижений рівень експресії НХАГ2, МОЕМІ1, ЕРТОК, 51 С22А18, БШТ7, КАРЗМ, 5100Р і/або рука, свідчить про прогресування або стадію статусу тканини або захворювання, зокрема, раку, у суб'єкта. Зокрема, збільшений рівень експресії НУАЇ2, МОКМ1, КРТОК, 51 С22А18,
ЕИТ7, КАРЗМ, 5100Р і/або ОУККА свідчить про погіршення статусу тканини або захворювання,
Зо зокрема, раку.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зміна рівня тік-652, тів-801, тівВ-376бс, тіВв-37ба, тів-127, тів-409 і/або тік-148р свідчить про зміну статусу тканини або захворювання, такого як погіршення або поліпшення статусу тканини або захворювання, зокрема, раку.
Зокрема, підвищений рівень тік-652, тіВв-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тіВв-409 і/або тів-1486 свідчить про погіршення статусу тканини або захворювання. Знижений рівень тпік- 652, тів-801, тів-37бс, тіВ-37ба, тів-127, тів-409 і/або тік-1486 свідчить про поліпшення статусу тканини або захворювання. Зміна рівня тік-652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тівВ-409 і/або тік-1485 також свідчить про ризик розвитку зміненого статусу тканини або захворювання, зокрема, раку. Більше конкретно, підвищений рівень тік-652, тів-801, тів-376бс, тів-376ба, тів-127, тів-409 і/або тів-1486 свідчить про ризик розвитку переродженого статусу тканини або захворювання, зокрема, раку. Змінений рівень тік-652, тін-801, тів-37бс, тів-
З7ба, тів-127, тів-409 і/або тік-14860, зокрема, підвищений рівень ітік-652, тів-801, тів-37бс, тівВ-37ба, тів-127, тів-409 і/або тік-148р, також свідчить про те, що індивідуум страждає від зміненого статусу тканини або захворювання, зокрема, раку. Більше того, змінений рівень тік- 652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409 і/або тік-14860, наприклад, підвищений або знижений рівень тік-652, тівВ-801, тівВ-37бс, тів-37ба, тів-127, тін-409 і/або тінк-1486б, свідчить про прогресування або стадію статусу тканини або захворювання, у суб'єкта. Зокрема, підвищений рівень тік-652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тіВв-409 і/або тік-148р свідчить про погіршення статусу тканини або захворювання, зокрема, раку.
Статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність, зокрема, кількість, щонайменше однієї мікроРНК служать показником для зазначеного прогнозу та/або діагнозу в зазначеного суб'єкта. Прогноз і/або діагноз раку включає і. ризик розвитку раку, і. наявність раку та/або іі. прогресування, зокрема, погіршення або поліпшення, раку.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу визначають присутність, зокрема, кількість, одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127р, тів-409 і тік-1486.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу визначають статус метилювання та/або рівень експресії одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАЇІ 2, МОКМІ1, ЕРТОБЕ, 5І С22А18, ГОТ7, КАРЗМ, ЗІООР і ОМЕКА.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу визначають статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше 2, 3, 4, 5, 6, 7 або 8 різних маркерів метилювання та/або визначають присутність, зокрема, кількість, щонайменше 2, 3, 4, 5, 6 або 7 різних маркерів мікроРНК. Зокрема, визначають всі 7 маркерів мікроРНК. У випадку, коли визначають всі сім маркерів мікроРНК, дану комбінацію позначають тік-7, тобто тік-7 включає всі сім маркерів мікроРНК іпік-652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127р, тіВ-409 і тік-1486.
Слід розуміти, що для прогнозування та/або діагностування раку можна використовувати різні специфічні комбінації маркера метилювання та мікроРНК.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу визначають статус метилювання та/або рівень експресії однієї або декількох з наступних комбінацій маркерів метилювання:
НУАІЇ2-ВАРБМ; 5І0О0ОРАВАРБЗМ; АРТОВАНМУАІ2; МмМавмМ-НМАЇ2; 0 51б22А1845100Р;
НУАЇІ 2-51 С22А18; ВАРТОВА 5100Р; тів-7-0УАКа; ВАРТОВАВАРБ5БМ; ЕОТ7-АВАРБМ;
Мам 5 С22А18; ВАРТОВАРИТ7; єОт7-мавм1; тів-7-мМа ВМ; Мам 5100; рУвКа4-АВАРБЗМ; ГОТ7-5100Р; ВРТОВАЮУАКУ; АРТОВ нтів-7; ОМАКА-МаВмМІ; БОТ7АНМА 2; тів-7-4ВАРБЗМ; МавМ1-ААРБЗМ; НМА 2-5100Р; 0/0 тів-7-5І С22А18; ВАРТОВАМОаВМІ; руУвВКа5І С22А18; 5І б22А18-48АРБЗМ; ЮОМАКаАНМАІ 2; ЮОМАКА5100Р; БОТ7-5І С22А18; тів- 7АНУАІ 2; ВРТОВ 5 С22А18; тів-7-5100Р; тів-7-6ОТ7; ОМА КАРИ; тів-7-0УАКаААРЕОТІ; тів-7-Ма ВМ -НУАЇ 2; АРТОВАМОИа ВМ! -ВАРБМ;
МавмМ1-5І б22А18-ВАРБМ; ВРТОВ нтів-7-5100Р; тів-7-МавМ1-5100Р;
АРТОВАМОИВМІ 51 С22А18; ВАРТОВАРТ7 НМА 2; ЕТ7-АНУАЇ 2-51 С22А18;
ЕОТ7АНМАЇ 2-4ВАРБМ; тів-7-51 Сб22А18-5100Р; тів-7-5100РАВАРБЗМ; ВРТОНАЮУ АКА 5100; руУвка5І С22А18-5100Р; руУувка4-мМайвМ! НМА 2; руУвка4-мМаВМІт І С22А18;
АРТОВАЮУАКА-Ма ВМ; тів-7-0УАКа45100Р; рУвкКа45100РАВАРБМ; рувк4-МавмМт а ВАРБЗМ; АВРТОВнтів-7-МавВМ1; оМАКА-РОТ7 Мам; тів-7-6ОТ7-АВАРБЗМ; тів-7-МавмМ1-ААРБЗМ; ВРТОВАНМАЇ 245100Р; НУАЇ 24-5100Р-ВАРБЗМ; ОМ АКЯААРОТ-ВАРБЗМ;
Зо МаИавмМ1 НМА 2-51 С22А18; єОТ7-МавМт 5100; ВАРТОВАОУАКААВАРБЗМ;
ЕОТ75100РАВАРБЗМ; АРТОВАРОТ7-5100Р; ОМАКААНУАІЇ2-ВАРБЗМ; РОТ -АНУАІ 25100;
ВАРТОВІ С22А18-ВАРБМ; ВАРТОВА нтів-7--НМАЇ 2; НУАГ 2-51 С22А18-ВАРБМ; рувк4-МавмМ15100Р; тів-7-НУАІ 2-4ВАРБМ; АВРТОВнтів-7-ВАРБМ; тів-7-60ОТ7-МаВМ1;
АРТОВАОМАКААНУАЇ 2; ЕОТ7-Ма ВМ -ВАРБМ; тів-7-0Увк4-мМавМ1;
ЕОТ7-Ма ВМ 51 С22А18; ВРТОВ нтів-7-0УВКАа; тів-7-0УАКа5І С22А18;
ВАРТОВА 5100Р-АВАРБЗМ; тів-7-0ОУАКА-ВАРБЗМ; ВАРТОВ-АНХУАЇ 2-51 С22А18;
ЗІ б22А18-5100Р-ВАРЗМ; ВАРТОВ-АНУАЇІ 2--ВАРБМ; ВАРТОВАРОТ7-Ма ВМ;
ВАРТОВІ С22А18-5100Р; МавмМ1-5І Сб22А18-5100Р; Маквм!т НМА 25100; тів- 7АНМУАГ 2145100Р; АВРТОВАМОИВМІ--5100Р; АРТОВАРОТ7 51 б22А18; МОВАМ 5100РАВАРБЗМ;
ВАРТОВАЮМАКААРОТ; ОМАКА-РОТ7 НМА 2; АРТОВАРОТ7-ВАРБЗМ; ОУАКААНМАЇІ 2-5100Р;
ЕОТ751 б22А18-ВАРБМ; ВРТОВ нтів-7-РШТ7; тів-7-60Т7-НУАЇ 2; тів- 7-мМавм15І С22А18; тів-7-ЕОТ7-51 б22А18; тів-7-0ОМАКААНУА 2; МОВАМ АНТА 2-ВАРБМ;
ЕОТ7-Ма ВМ! НМА 2; рувказРТ75І С22А18; НУАГ 2451 б22А1845100Р; рувкаРОТ 5100; ВАРТОВАЮСУВКАОЇІ С22А18; ОУАКаААНТАЇ 2-51 С22А18;
АРТОВАМОИВМ! -НУАЇ 2; рУвВКач5І б22А18-ВАРБМ; ЕОТ75І1 б22А18-5100Р; тів- 7451 б22А18-48АРЗМ; ВРТОВ нтів-7--51І С22А18; тів-7-ЕШТ7-5100Р; тів- 7АНУАІ 2451 С22А18;
АРТОВАМОИВМ! «НМА 2-5100Р; ВАРТОВАРОТ75І б22А1848АРЗМ; рУувка-РОТ7-5100РАВАРБМ; ВАРТОВАЮУАКЯААРИТ АНА 2; рувказ-РТ НМА 2-51 С22А18; ВАРТОВАЮУАКЯААРОТ7 5100; тів- 740УВКаАІ б22А18-ВАРБМ; ВАРТОВ-АНУАЇ 2--5100Р--ВАРЗМ; ВРТОВ нтів- 74-рУвВКаІ С22А18; тів-7-4ЕОТ7аНМА 251 С22А18; ВУАКаААРОТ7АНТАЇ 24В8АРЗМ;
МаИавмМ1 НМА 2-51 б22А18-5100Р; рУвкКаРОТ75І б22А185100Р;
МаИавмМ1 НМА 245100РАВАРБЗМ; ВАРТОВА нтів-7-0МАКА-ВАРБМ; тів- 74-0УвКА-Ма ВМ 51 С22А18;. тів-7-0МАКА-МавМ1-5100Р;. РОТ -МавмМ НМА 2-ВАРЗМ;
АРТОВАРОТ7-МавМ -вВАРЗМ; ОМАКЯААРОТУ-МавмМІт НМА 2; ВРТОВАРОТ7-МаймМ АНА 2; тів-7-4ЕШТ7-НМАЇ 2-5100Р; тів-7-4ЕОТ7-51 б22А1845100Р; РОТУ -МОа ВМ АНА 2-51 С22А18;
ВАРТОВАРОТ7-Ма ВМ С22А18; ВРТОВ нтів-7-51І С22А18-ВАРБМ;
ВАРТОВАНТМАЇІ 2-51 С22А18-ВАРБМ; тів-7-4601Т7-5100РАВАРБМ; 60 ЕОТ7-Ма ВМ 51 б22А18-ВАРБМ; тів-7-460Т7-МавМ1 НМА 2; ВРТОВнтів-7-ЕОТ7-5100Р;
АРТОА нтів-7-НМАЇ 2-5100Р; руУвкА-МавмМт НМА 2-5100Р;
ЕШТ7АНМАЇ 2-51 С22А184ВАРБМ; ЕОТ75І С22А18-5100РАВАРБЗМ;
АРТОААРОТ7-5100РАВАРБЗМ; АРТОВАРИТ7 НМА 251 С22А18; мМавмт-5І С22А18-5100РАВАРБМ; тів-7-НМАЇ 2-5100Р-ВАРБМ; АРТОНАЮУВАКА-Макнмі! 5 С22А18; рУвАКАНРОТ НМА 25100; тів- 7-0 АКААНМУАЇ 2-4ВАРБМ; тій-7-0ОМАК4-АРОТ7-МавМІ; оУв!КкаА-МаВМ 51 С22А18-ААРБМ;
АРТОА тів-7-0ОУАКА-АНУАЇ 2; тів-7-Ма АМ1 НМА 2-5100Р;
АРТОНАОСУВКАІ С22А18-ВАРБМ; тів-7-0ОУАКА-МаИавм!т «ААРБМ;
АРТОААМОИВмМ! НМА 2-4ААРБЗМ; АРТОНАОУВАКАУРОТ? -ВАРБМ;
АРТОН!АМИавмМ1-51 С22А185100Р; руУвка-гОТ-Мавм! -5І С22А18; тів- 7-ОУАКаБІ С22А1845100Р; тів-7-0ОУАКА-Манвмт НМА 2; тів- 7-Ма ВМ 51 С22А18-ВАРЗМ; АРТОАтів-7-МОа АМ1--51 С22А18;
АРТОВАНТУАІ 2-51 С22А185100Р; тів-7-4РОТ7-АНМАЇ 2-ВАРЗМ;
НУАЇ 2-51 С22А1845100РВАРБМ; АРТОН-АБЗІ С2г2А18--5100Р--ВАРЗМ; АРТОАтів- 7-0Уувк4-МОавМІ; АРТОВ тів-7-46ОТ7-ААРБМ; ЕеОТ7-МаАМІ 5 С22А18-5100Р;
АРТОААОУВАКА5ЗІ00РАВАРБМ; рувкагОТ-МанвмМт 5100Р;
ОУАКААНУАЇ 2-5100РАВАРБОМ; / АРТОВ нтів-7-6ОТ7АНМАГ 2; тів-7-6ОТ7-МавмМ 5100Р; тів-7-мМаАМІ НМА 251 С22А18; АРТОН!АЮМУАКАУНМАЇ 25100; АРТОАтів- 7-51 б22А18-5100Р; ОУВвКА-МавмМ1І5І С22А18-5100Р; АРТОВ!АЮМУАКА-АМОаАМІ 5100;
ЕШТ7АНМАЇ 2-5100РА-ВАРЗМ; АРТОНАРОТ7 НМА 2-5100Р; АРТОА нтів-745100Р-ААРБМ;
АРТОААОУВКААНТУАЇ 2--ААРБМ; тів-7-НМАЇ 2-51 С22А184ВАРБЗМ; тів- 7-0 АКАНМАЇ 2-5100Р; рувка-мМанвм! НМА 2-51 С22А18;
АРТОН!АМОИВвМт-51 С22А184ААРБЗМ; рУвАКАБІ С22А1845100РААРБМ;
АРТОААОУВКААНТАЇ 2-51 С22А18; гОТ7-мМанм! НМА 2-5100Р;
ОУАКААНТАЇ 2-51 С22А184ААРБЗМ; АРТОАтів-7-Ма АМ1--5100Р; рУвАКа-РОТ-МавмМт-ВАРЗМ; тів-7-0УАК4АРОТ7-АВАРБОМ; АРТОВ нтів-7-0ОУАКААРОТІ; тів-7-0ОМАКАРОТ І С22А18; тів-7-манм1--5І Сб22А18-5100Р; тів- 7-6ОТ7-МОАМІ І С22А18; 0 тів-7-МОаАМІ-5100РАВАРЗМ; о тів-7-0УАКА-РОТ НМА 2;
АРТОН!АЮУВКАЗгРОТ МОВАМ; тів-7-460Т7-МавмМ!т -ВАРБЗМ;
АРТОААРОТ7 І С22А18-5100Р; ЕШТ7ЯАНТАЇ 2451 С22А18-5100Р; АРТОАтів- 74НУАІ 251 С22А18; АРТОА тів-7-НМАЇ 2-ВАРБЗМ; руУвкА-Мавймт я 5100РАВАРБЗМ;
АРТОАтів-7-РОТ7-МОа ВАМ; тів-7-НМАЇ 2-51 С22А1845100Р;
АРТОНАМОИВМІ НМА 2-51 С22А18; АРТОНААМОИВМ! 45100Р--ВАРЗМ;
АРТОА!АОУВКАРИТЯ І С22А18; рУАКаРОТ7 5 С22А18-ВАРБМ; / мМанвм1-НТМАЇ 251 С22А18-ААРБМ; АРТОАнтів-7-0УАКАЗІООР;
АРТОААРОТУ-МавмМ15100в; тів-7-0ОУАКАш51О0РАВАРБЗМ; тів- 7-0 АКАНМАЇ 2-51 С22А18; тів-7-0ОМАКЯАРОТ5100Р; тів-7-РОТ7-51 С22А18-ВАРЗМ;
АРТОАтів-7-МаАМІ -ВАРБМ; тів-7-Мавйм! НМА 2-ААРБМ; АРТОАтів- 7-75 С22А18; ЕОТ7-Манм!т -5100Р-АВАРЗМ; АРТОА нтів-7-МаВмМ! НМА 2;
РУАКААНУАЇ 2-51 С22А1845100Р; АРТОВАОУАКААМОИАМІ «ВАРБМ;
АРТОААОСУВКАІ С22А18-5100Р; рУвкКА-Мавмт АНУАЇ 24ААРБЗМ; тів- 7-5І б22А18-5100Р--ВАРЗМ; ВРТОААРОТ7 -НУАЇІ 24ААРБЗМ; ВРТОВНА-ЮОУВНКА-МаИавм НА г; тів-7-0МАКААРОТ75100РАВАРБЗМ; АРТОВ нтів-7-0УА8КААРОТ7 НМА 2; АРТОВ тів- 74-6ОТ7-МОАМІ -5І С22А18; тів-7-0ОМАКА-РОТІ ЯМавм! НА 2; АРТОАтів- 7-мМавмМ1НУАІ 25100; АРТОВ «тів-7-460ОТ7-Мавм! -ААРБЗМ; руУвка-РОТ-Мавмт 5 С22А184ААРБЗМ; АРТОАтів-7-0ОМАКАРОТ 5100;
АРТОНАОСУВКАІ С22А18-5100РАААРБМ; АРТОН!АОЮУВАКАУРОТІ-МОАМІ 5І С22А18;
АРТОААОУВКААНУАЇІ 2-51 С22А18-ВАРЗМ; / АВРТОА нтів-7-6ОТ75І С22А18-ААРБМ; / тів- 7-0уАКА-РОТ7-Манмт 5100; АРТОНАЮМАКАРОТО -МавмМ!т -ВАРЗМ; тів- 7АРОТ7-АМОаВМІ 51 С22А18-ВАРБМ; ті8-7-АНМАЇ 2-51 С22А18-5100РАВАРБЗМ; АРТОВ нтів- 7-5І б22А18--5100Р--ВАРЗМ; АРТОВА тів-7-0ОМАКАЗНМАЇ 2-5100Р; АРТОАтів- 74НУАГ 251 С22А18-5100Р; АРТОААМИвм! НМА 2-51 С22А18-ААРБМ;
АРТОА!АОУВКА-МОИВМІ «НМА 2-51 С22А18; АРТОН!АОУВАКА-МИвмМт НМА 24ААРБЗМ;
АРТОААРОТ7-Мавм! НМА 25100Р; тів-7-0МАКА-РОТ7 51 С22А1845100Р;
ЕШТ7-Манвм!т НМА 2-5100РАВАРБЗМ; РОТ7-МОАМІ НМА 2-51 С22А18-5100Р; ВРТОВ нтів- 7 Ма МІ НМА 251 С22А18; АРТОВН нтів-7-АНМАЇ 2--5100Р--ВАРБМ; АРТОАтів- 7-6ОТ7-МаАМІ 100; АРТОА «тів-7-Майм! «НМА 2--ВАРБМ; АРТОАтів- 7-0 АКА-РОТ7-ВАРЗМ; АРТОАнтів-7-О0УАКА-МаИавм 45 С22А18; тів- 7-6ОТ7-АМОАМІ НМА 2-51 С22А18; АРТОААОУВКАНМАЇ 2-51 С22А18-5100Р; тів- 6000 740ОУАКА-МаВМ! НМА 245100Р; тів-7-0ОМАКА-Мавмт 51 С22А184ААРБЗМ; тів-
74-6ОТ7-МОАМІ І С22А18-5100Р; АРТОВН тів-7-60Т7-51100Р--ВАРЗМ; руУвкагОТ-Мавм! НМА 2-51 С22А18; АРТОВ нтів-7-0УАК4-РОТ7-МОа ВАМ; тів- 7-РОТ7АНУАЇ 2-51 С22А184ВАРЗМ; АРТОААОУАКААРИТО НМА 25100; тів- 7-0 АКАННУАЇ 2-5100Р--ВАРЗМ; РУВвАКАЗНУАЇ 2451 С22А18--5100РАВАРБМ;
ОуУАКа4АРОТ7-АМаАМІ БІ С22А185100Р; АРТОВ нтів-7-6ШТ7 НМА 2-51 С22А18;
АРТОН!АЮУВАКА-МОаВмМІ БІ С22А18-5100Р; АРТОААМИавм!т АНА 2--5100Р-ВАРБЗМ; рувка-мМанмт і С22А1Т845100РАВАРЗМ; АРТОААОЮУАКА РОТ 51 С22А18-ВАРЗМ; рУАКАРОТ7АНТАЇ 2451 С22А18-ААРБМ; ЕШТ7АНМАЇ 2451 С22А18-45100РАВАРБМ;
АРТОААРОТ7 51 С22А18--5100Р-ВАРБМ; АРТОВтів-7-НМАЇ 2-51 С22А184ВАРБМ; руУвка-Манм! -НМАЇ 2-51 С22А1845100Р; АРТОНАЮМУАКААРОТ7АНМАГ 2-51 С22А18; 0 тів- 7 -Ма МІ НМА 251 С22А18-5100Р;. АРТОВАРИОТ7 НМА 2-51 С22А18-5100Р;. АРТОВН тів- 7-мМаймМ1 51 С22А18-5100Р; АРТОВ нтів-7-60Т7-НМАЇІ 2-5100Р; тів- 7 -Ма МІ 51 С22А18--5100Р--ВАРБМ; АРТОААРОТ7-Мавм! НА 2ААРБМ; тів- 7-0 АКА-РОТ7 АНА 2-ВАРЗМ; тів-7-0ОУАКА-Мавм! «НМА 2-ВАРБЗМ; тів- 15. 7АРОТ7-МаАМІ НМА 2-5100Р; тів-7-0УАК4-Мавмт 4-5100РАВАРБЗМ; АРТОАтів- 7-Ма ВМ 51 С22А18-ВАРЗМ; АРТОАтів-7-0МАКА-Манвм! «НМА 2; АРТОАнтів- 7-0руУАКа-Манмт 5100; тів-7-0УАК4-АМО ВАМ НМА 2-51 С22А18;
ЕОТ7-Манвм! НМА 2-51 С22А18-ВАРЗМ; тів-7-4РИОТ7-НМАЇ 24-5100Р--ВАРБМ; руУвкагОТУ-Мавм! «НМА 2-5100Р; АРТОАнтів-7-0ОУАКАНУАЇ 2--ААРБМ; тів- 20. 7АРОТ7АНУАІ 2451 С22А18-5100Р; АРТОА.тів-7-0МАК45100Р-АВАРЗМ;
АРТОА!АОУВАКАЯРОТ І С22А18-5100Р; АРТОВАОУВКА-МаВМІ І С22А18-ВАРЗМ; тів- 7-рувКка-Манм1 і С22А18-5100Р; АРТОААОУВАКАУРОТЯ 5100РАВАРБМ; рУАКАЗРОТ7АНТАЇ 245100Р--ВАРЗМ; АРТОААРИТ7 АНУАЇ 2-51 С22А18-ВАРЗМ; рУАКАРОТ7 НМА 2451 С22А18-5100Р; ОУАКА-РОТ7--51 С22А1845100РАВАРЗМ;
АРТОА тів-7-0ОУАКААНУАЇ 2-51 С22А18; АРТОВААРИТ7-МОаВМІ 451 00РВАРБЗМ; гОт7-мМанвм!т і С22А1845100РАВАРБЗМ; тів-7-0У АКА Ма МІ С22А18;
АРТОАнтів-7-0МАКАІ С22А18-ВАРБЗМ; /тів-7-0МАКЯААНМАЇ 2-51 С22А18-ВАРЗМ; /тів- 7-0 АКА-РОТ7-МаймМ!т -ВАРБЗМ; АРТОВАНУАЇІ 2-51 С22А18--5100Р-ВАРБМ;
АРТОААРОТ7-МавмМ15ІС22А185100Р; 00 тів-7-0ОУАКАРОТ І С22А18-ВАРЗМ; о тів- 7-АРОТ7-АМаВмМІ -5100РАВАРБЗМ; АРТОА нтів-7-Манм!і -5100РАВАРЗМ; АРТОАтів- 7-6ОТ7-МОАМІ -НУАЇ 2; тів-7-Ма ВАМ НМА 2-51 С22А18-ВАРЗМ;
АРТОААОУВКААНТУАЇ 2--5100Р-ААРБЗМ; тів-7-0МАКа4УРШТ7 НМА 245100;
АРТОААОУВАКА»РОТ-МОаАМІ5100Р; тів-7-6ОТ7-АМавмт НМА 2-ВАРБОМ; ВАРТОВА нтів- 7-РОТ75І С22А18-5100Р; АРТОА!АОУВАКАРОТ МОВАМ АНА 2; рУувАКа-РОТІ-Мавмт -5100РАВАРЗМ; АРТОВнтів-7-РШТ7 НМА 2-ВАРБМ; руУвАка-Манм! НМА 2-51 С22А184ВАРБМ; рУвАКАРОТ?-Мавмт АНУАЇ 24А!АРБЗМ;
АРТОАтів-7-ОМАКА-АМаИанйм! -ВАРБЗМ; тів-7-46ОТ7-5І С22А18-45100Р-ВАРЗМ; тів- 7-0 АКАНМАЇ 2-51 С22А1845100Р; МОВАМ! АНМАЇ 2451 С22А18-4-5100РВАРБМ;
АРТОН!АЮУВАКАМаИанвмт 4-5100РААРБМ; рУвАКА-Мавм! НМА 2--5100Р--ВАРЗМ;
АРТОААОУВКАРИТ НУАЇ 2-ААРБМ; АРТОАнтів-7-0УАКЯА5І С22А185100Р;
АРТОНАМОИВМІ НМА 2-51 С22А185100Р; тів-7-0УАКАБІ С22А18--5100Р-ВАРБМ;
АРТОНАМОИвВвМт-51 С22А18-45100РАВАРБМ; АРТОВААРОТ7-АМОИАМІ НМА 251 С22А18;
АРТОААРОТ7-МавмМ151 С22А18-ВАРБМ; 0 АРТОН нтів-7-0УАКАРОТ І С22А18; 0 тів- 7 -Ма АМІ1 НМА 2--5100Р--ВАРБМ; тів-7-0УАКАРОТ НМА 2451 С22А18;
АРТОВАРИТ7 АНУАІ 245100Р-ААРЗМ; ВРТОН-АЮМАКА-МИанвм «НМА 2-5100Р;
АРТОА.тів-7-Ю0МАКАІ С2г2А18--5100Р--ВАРЗМ; руУвкагОТІ-Мавм! «НМА 2-51 С22А1845100Р;
АРТОААОУВКАРИТЯ НУАЇ 2-5100РАВАРБЗМ;
АРТОААРОТ7-Мавмт 51 С22А18--5100РАВАРЗМ;
АРТОААОУВКАРИТ? НМА 2-51 С22А18-5100Р;
АРТОААРОТ7-Мавм!т НМА 2-51 С22А18-ААРБМ; рУуАКаА-РОТ?-Мавмт «НМА 2-5100РАВАРБМ; / АРТОВ тів8-7-46017-НУАЇ 24-5100Р-ВАРЗМ; тів-7-60Т7-НМА 2-51 С22А18--5100Р--ВАРБМ; АРТОАтів- 7-рувКка-Манм1 і С22А18-5100Р; ВАРТОВА нтпід-7-0МАКАМаИанвмт -5100Р-АВАРБМ;
АРТОААОУВКАУРОТ -МОаАМІ НМА 25100; АРТОАтів- 74РОТ7АНУАГ 2-51 С22А18-5100Р; / АРТОА нтів-7-0О0УАКА-МИавмМт НМА 2-ААРЗМ; /-тів- 7-0 АКА-Манм! НМА 2-51 С22А184ВАРБМ; АРТОВ.нтів- 7-0уУАКаА-Манм! НМА 2-51І С2г2А18; АРТОВнтів-7-40УАКАЗРОТЯ 51 С22А18--ВАРБМ;
АРТОАнтів-7-МОаАМІ 4-51 С22А18-5100Р--ААРБМ; бо АРТОААМОИВмМ! НТАЇ 2-51 С22А18--5100Р--ВАРБМ;
АРТОААОУВКАРИТЯ НУАЇ 2-51 С22А18-ВАРБМ; АРТОАтів- 7-0 АКААНМУАЇ 2-5100РАВАРЗМ; 0 АРТОНАЮМАКАУРОТ7-5І С22А1845100РАВАРОЗМ; / тів- 7-0 АКаА-Манм! НМА 2-51 С22А1845100Р; ВАРТОВА нтів-7-РОТ7--51 С22А18--5100Р--ВАРБМ;
АРТОН!АЮУВКАРОТ-МавАМІ І С22А18-5100Р; тів- 7-АРОТ7-АМОаАМІ НМА 2-51 С22А18-5100Р; АРТОВ нтів-7460ОТ7-Мавмт і С22А18-5100Р; тів-7-0ОМАКА-АМаИаймМІ 51 С22А18--5100Р--ВАРЗМ;
АРТОААОУВКАНРОТ? -МаАМІ АНУАЇ 2--ААРБМ; тів- 7-0 АКА-РОТ7-Манймт і С2г2А184ВАРБМ; АРТОА тів-7-0УАКА-РОТ НМА 25100;
АРТОАтів-7-0ОМАКА-РОТ -Мавм 51 С22А18; АРТОАтів- 7ОУАКААНУАЇ 2-51 С22А18-ВАРБЗМ; ОУАК4ААРОТ НМА 2-51 С22А1845100РАВАРЗМ; тіВ- 7-0 АКА-РОТ7-Манмт НМА 2-51 С22А18; АРТОАтів-7-0ОУАКАНРОТЯ -5100РАВАРБМ; тів-7-0ОМАКА-РОТ7 НМА 2-5100РАВАРЗМ; / ВРТОААРОТУ-Мавмт НМА 2--5100РААРБЗМ;
АРТОА!АОУВАКА-МОИВмМ «НМА 2--5100РААРБМ; АРТОАтів- 74НУАГ 2-51 С22А1845100Р-ВАРЗМ; АРТОНАОЮУАКААМОаАМІ «НМА 2-51 С22А18-5100Р;
АРТОА тів-7-6ШТ7-Ма ВАМ «НМА 2--ААРБМ;
АРТОААОУВКААНТАЇ 2-51 С22А18--5100Р-ВАРБМ; АРТОАтів- 7-6ОТ7-АМОАМІ НМА 2-51 С22А18;. ЮОМАКА-Манймт НМА 2-51 С22А1845100РАВАРЗМ; тів- 7-6ОТ7-МОАМІ -5І С22А18-5100РАВАРБМ; тів-7-0ОМАКАРОТ -МавмМ1451 С22А18-5100Р;
АРТОАтів-7-ОМАКА-АМИанйм 51 С22А18-ВАРЗМ; тів- 20. 7-0УАКАРОТ Мам -5100РАВАРБМ; тів-7-0ОУАКАРОТ НМА 2451 С22А18-ВАРБМ;
АРТОАтів-7-ЮОМАКА-РОТ -Манвмт -5100Р; тів-7-0ОМАКА-РОТ -МавмМ НМА 2-5100Р;
АРТОА нтів-7-6ШТ7 НМА 2-51 С22А18-ВАРЗМ; тів- 7 -Ма АМІ -НУАІ 251 С22А18--5100Р--ВАРБМ; руУвка-гОТІ-Мавмт БІ С22А1845100РАВАРЗМ; АРТОАтів- 7-0УвАКАРОТ7 НМА 251 С22А18; АРТОА нтів-7-Манйм! «НМА 2-51 С22А185100Р;
АРТОАтів-7-0ОМАКА-РОТ7 НМА 24ААРЗМ; АРТОВ нтів-7-Мавмт НМА 2--5100РАВАРБЗМ; тів-7-0ОМАКААНУАЇ 2-51 С22А1845100Р--ВАРЗМ;
АРТОН!АЮУВАКАМаИанмт І С22А18-5100Р-ААРБМ;
АРТОА!АОУВАКА-МОИВмМІ НМА 2-51 С22А18-ВАРБМ; 0) АРТОВААРОТ7-Мавм! НМА 251 С22А185100Р; АРТОАтів- 7-0 АКАНМАЇ 2-51 С22А1845100Р; АРТОААОЮМУАКА-РОТІ -Манвм! НМА 2-5І С2г2А18;
ЕОТ7-Манвм!т НМА 2-51 С22А18-5100РВАРБМ;
АРТОААОУВКАНРОТІ Мам 5100РАВАРЗМ; АРТОАтів- 7-0уУвКа-Манм!т НМА 2-5100Р; АРТОНАРОТ7НУАЇ 2-51 С22А18--5100Р--ВАРБМ;
АРТОА тів-7-6ШОТ7-Ма МІ 51 С22А18-ВАРЗМ; тів- 7-0УуАКА-Манм! НМА 2-5100Р--ААРБМ; тів-7-460Т7-Мавмт АНА 2-5100Р--ВАРЗМ;
АРТОА нтів-7-6ШТ7-МОа ВАМ -НМАГ2-5100Р; / АРТОВА.тів-7-0МАК4РШТ Ма ВМ НМА 2; тів-7-60Т7-МайАМІ НМА 2-51 С22А18-ВАРБМ; АРТОВнтів- 7 -Ма ВМ НУАГ 2-51 С22А18-ВАРЗМ; / АРТОВ нтів-7-60ОТ7-МаИавмМ15100РАВАРОЗМ; /тів- 7-О0УАКАРОТ7 І С22А18-5100РАВАРБМ; АРТОА нтів-7-0ОУАКАЗРОТ Ма АМІ -ВАРБМ; рУувАка-РОТУ-Мавм! «НМА 2-51 С22А184ВАРБМ; тів- 7-0 АКА-РТ7 НМА 2-51 С22А1845100Р;
АРТОА!АОУВКАНРОТ -МаВМІ 5 С22А18-ААРБМ; АРТОАтів- 7-0 АКАРОТ75І С22А1845100Р; тів-7-0ОУАКАЗгОТ Мам ЯНУАЇ 2-ААРБМ; тів-7-0ОМАКА-РОТ-МОаАМІ «НМА 2-51 С22А18-5100Р; АРТОВнтів- 7-6О0Т7-МОаАМІ1 51 С22А18--5100Р--ВАРБМ; АРТОАтів- 7-0 АКА-РОТ7-Манм! -НМАЇ 2-5100Р; АРТОАтів- 7-6ОТ7-АМОАМІ НМА 2-51 С22А18-ВАРБМ; тів- 7-0 АКАРОТ7 НМА 2-51 С22А1845100Р--ВАРЗМ;
АРТОА!АОУВАКА-МОИВмМт НМА 2-51 С22А18--5100РВАРБМ; АРТОАтів- 7-0 АКА-РОТ7 НМА 2-51 С22А18-5100Р;
АРТОААОУВКАНРОТ -МОаВАМІ НМА 2-51 С22А18-ААРБМ; АРТОВ--тів- 7-0 АКАРОТ7 АНТАЇ 2-5100Р--ВАРЗМ; АРТОАтів- 7-0уАКА-РОТ7-Мманм1-5і С22А185100Р; АРТОАтів- 7АРОТ7-АМОаВМ!І НМА 2-5100Р-ААРБМ; тів- 7-0 АКА-РОТ7-Манймт і С2г2А1845100РАВАРЗМ; АРТОАтів- 7-0 АКАРОТ751 С22А1845100РАВАРЗМ; АРТОАтів- 7-0 АКА-РОТ7 АНА 2-51 С22А184А АРМ;
АРТОААОУВКАНРОТ? МОМ АНТМАЇ 2--5100Р-ААРБМ; АРТОАтів- 60000 7ОУВАКАНТАЇ 2451 С22А18--5100РААРЗМ; АРТОВ.нтів-
740 АКА-ЕОТ7 Мам 51 С22А18-ВАРБЗМ; ВРТОВ нтів- 740 вАКА-Ма ВМ -НУА 2-5100Р--ВАРБМ;
АРТОВАРОТ7-МайВМ НМА 2-51 С22А18--5100Р-ВАРБМ; ВРТОВ нтів- 7АРИТ7АНУАЇ 2-51 С22А1845100Р-ВАРБЗМ; ВРТОВ нтів- 740 вАКА-МавВМт НМА 2-51 Сб22А18-5100Р; тів- 740 вАКА-Ма ВМ -НУАЇ 2-51 б22А1845100Р--ВАРБМ; ВРТОВ нтів- 740 вКА-Ма ВМ 51 С22А18--5100Р--ВАРБМ; ВРТОВатів- 740 АКАЕОТ7 Ма ВМ -НУА 2--ВАРБМ;
ВАРТОВАОМАКАЯРОТО НМА 2-51 С22А18--5100Р-ВАРБМ; ВРТОВ нтів- 740 АКАЕОТ7 Ма ВМ -НУАЇ 2-51 С22А18; тів- 7АР6ОТ7-Мавмт НМА 2-51 б22А18--5100РАВАРЗМ; тів- 740 АКАЕОТ7 Ма ВМ НМА 2-51 С22А18-ВАРБЗМ; ВРТОВ нтів- 7АМа ВМ -НТА 2-51 С22А18-5100Р--ВАРЗМ; ВРТОВ нтів- 7АРОТ7-Мавм1 НМА 2-51 б22А18-5100Р;
АРТОВАОМАКАЯРОТ Ма ВМ НМА 2-51 С22А18-5100Р;
ВАРТОВАЮМАКАЯРОТІ Ма ВМ 51 С22А18-5100Р--ВАРБМ; ВРТОВ нтів- 740 в8КА-Ма ВМ -НУАЇ 2-51 С22А18-8ВАРЗМ; рувка-РОТ-Ма ВМ АНМАЇ 2451 б22А1845100РАВАРБЗМ; тів- 740 АКАЗЕОТ7 Ма ВМ -НУАЇ 2--5100Р--ВАРБЗМ; ВРТОВ нтів- 740 АКАРОТ Ма ВМ1 -5100Р--ВАРБМ;
ВРТОВантів-7-0ОУАКЯААРОТ-Ма ВМ -НМАЇ 2-51 С22А1848АРЗМ; ВРТОВ нтів- 740 АКАЕОТ7 Мам 51 С22А18-5100Р-ВАРБМ; ВРТОВ нтів- 740 АКАЕОТ7 НМА 251 б22А18-5100Р-ВАРЗМ; ВРТОВ нтів- 740 АКАЗЕОТ7 Ма ВМ -НУАЇ 2--5100Р--ВАРБЗМ; тів- 740 АКАЗЕОТ Ма ВМ -НУАЇ 2-51 С22А1845100РАВАРБМ; ВРТОВ нтів- 740 АКАЕОТ7 Ма ВМ -НУА 2-51 б22А18-5100Р; ВРТОВ нтів- 7АР6ОТ7-Мавмт НМА 2-51 б22А18--5100РАВАРЗМ;
АРТОВАОМАКАЯРОТ Ма ВМ НМА 2-51 С22А18-5100Р--ВАРБЗМ; ВРТОВ нтів- 74 ОМЕКА4-МОКМІ «НУАЇ 2-51 С22А185100РКАРБМ; і
Зо ВРТОВантів-7-0ОУАКЯААРОТ-Ма ВМ НМА 2-51 б22А18-45100Р-ВАРЗМ.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу визначають статус метилювання та/або рівень експресії маркера метилювання КРТОК, МОРБМІ і КАРБМ, і визначають присутність, зокрема, кількість, маркера мікроРНК тік-652, тів-801, тів-376с, тіВ-
З7ба, тів-127-Зр, тів-409-Зр і тік-148р. Необов'язково також визначають статус метилювання та/або рівень експресії НУАЇ 2.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу визначають статус метилювання та/або рівень експресії маркера метилювання ОУРЕКА, 5100Р, РШТ7 і 5І С22А18, і визначають присутність, зокрема, кількість, маркера мікроРНК тік-652, тів-801, тів-376с, тіВ-
З7ба, тів-127-Зр, тів-409-Зр і тік-148р. Необов'язково також визначають статус метилювання та/або рівень експресії НУАЇ 2.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу визначають статус метилювання та/або рівень експресії маркера метилювання МОКМІ, КРТОК, 5ІС22А18, РОТ7, КАРЗМ,
З100Р ї ОУККА, і визначають присутність маркера мікроРНК іпік-652, тів-801, тів-37бс, тів-
З7ба, тів-127-Зр, тів-409-Зр і тік-148р. Необов'язково також визначають статус метилювання та/або рівень експресії НУАЇ 2.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу визначення статусу метилювання включає визначення метилювання щонайменше одного Сро-сайта в гені НУА1І2,
МОРМІ1, КРТОК, 5І С22А18, БШТ7, КАРЗМ, 5100Р і/або ОУРКЯ4. Зокрема, визначають статус метилювання області промотору, інтрону й/або екзону зазначених генів.
Зокрема, ген НУАІТ2 являє собою ген НУАГ2 людини, розташований на хромосомі З людини (обліковий Мо Сепрапк: МС 000003.11 (І: 224589815). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше одного Сро-сайта, розташованого між положенням 50334760 і положенням 50335700 на хромосомі З людини. Більше конкретно, зокрема, щодо рийй 36.1/п918 гена людини, визначають статус метилювання щонайменше одного Сро-сайта, розташованого у положенні 50335694 (сд27091787), 50335584 (НМА! Сро 1), 50335646 (НХУАІ Сро 2) або 50335671 (НМА Сра 3), 50335166 (НУАЇ-і5-310 Ср 1), 50335180 (НУАЇ -ів6-310 Сра г), 50335192 (НУАЇ -ів-310 Сра 3), 50335195 (НУАЇ -і5-310 Сра 4), 50335227 (НУАЇ -із-310 Сра 5), 50335233 (НУАЇ -ів-310 Сра 6), 50335300 (НУАЇ -і5-310 Сра 7), 50335315 (НУАЇ -із-310 Сра 8), 50335375 (НУАЇ -ів6-310 Сра 9), 50335392 (НУАЇ-ів6-310 Сра 10), 50335401 (НУАЇ -і5-310 60 бра 11), 50334744 (НУАЇ 2-і5-325 бра 1), 50334761 (НМА 2-і6-325 бра 2), 50334804 (НУАЇ 2-
іє-325 бра 3), 50334844 (НУАЇ2-і5-325 бра 4), 50334853 (НУАЇ2-і56-325 бра 5), 50334862 (НУАГ2-і6-325 Сра 6), 50334880 (НУАЇ2-і5-325 бра 7), 50334906 (НУАЇ2-і5-325 Сра 8), 50334913 (НМА 2-і5-325 бра 9), 50334917 (НМА 2-і5-325 бра 10), 0334928 (НУАЇ2-і5- 325 бра 11), 50334944 (НУАЇІ2-і6-325 бра 12), 50334956 (НУАЇ2-і5-325 бра 13), 50334980 (НУАГ2-і6-325 бра 14), 50334982 (НУАЇ2-і5-325 бра 15), 50335010 (НМА 2-і6-325 Сра 16) 50335014 (НМА 2-і5-325 бра 17), 50331237 (сдОо8776109) і 50330420 (сд0б6721473).
Найбільше конкретно, щонайменше один Сро-сайт вибраний з переліку, що складається з с927091787 у положенні 50335694, НМА! Сро 1 у положенні 50335584, НУАЇ Сро 2 у положенні 50335646 і НУАЇ Сро 3 у положенні 50335671. Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше двох, щонайменше трьох, щонайменше чотирьох, щонайменше п'яти, щонайменше шести, щонайменше семи, щонайменше восьми, щонайменше дев'яти, щонайменше десяти, щонайменше одинадцяти, щонайменше дванадцяти або щонайменше п'ятнадцяти Сро-сайтів згідно з даним винаходом. Фахівець розуміє, що точна чисельність зазначених Сро-сайтів може залежати від конкретної геномної послідовності та від конкретної послідовності області промотору НЖАЇ2, що міститься в зразку, аналіз якого проводять.
Наприклад, ген НЖАЇ2 розташований на хромосомі 3: положення 50355221 - 50360337 у рийа37/п919, але на хромосомі 3: положення 50330244 - 50335146 у БбийаЗзб/по918.
Зокрема, ген МОМКМІ являє собою ген МОКМІ людини, розташований на хромосомі 16 людини (обліковий Мо Сепрапк: МС 000016.10, діапазон: 4624824 - 4690974, еталонна первинна колекція (ргітагу аззетбріу) СКСПЗ38; обліковий Мо Сепрапк: МС 018927.2, діапазон: 4674882 - 4741756, альтернативна колекція (аМегпаїе аззетріу) СНМ'І 1.1; обліковий Мо
Сепрапк: АС 000148.1, діапазон: 4641815 - 4707494, альтернативна колекція НиКеї). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше одного Сро-сайта, розташованого між положенням 4654000 і положенням 4681000 на хромосомі 16 людини. Зокрема, Сро-сайт (сайти) розташований (розташовані) в одній або декількох з наступних областей хромосоми 16: 4670069 - 4670542, 4654000 - 4655000, 4669000 - 4674000 і 4678000 - 4681000. Більше конкретно, зокрема, щодо бий 36.1/п1918 гена людини, визначають статус метилювання щонайменше одного СрО-сайта, розташованого у положенні: 4670487 (МОаВМІ Сра 1), 4670481 (МОВМІ Сра 2), 4670466 (МОВАМ! Сроа 3), 4670459 (МОВМІ Сра 4), 4670442
Зо (МОАМІ Сра 5), 4670440 (МОВАМ! Сроа 6), 4670435 (МОВАМ! Сра 7), 4670433 (МАМІ Сра 8), 4670422 (МОВАМ! Сра 9), 4670414 (МОаВАМІ Сра 10), 4670411 (МАМІ Сра 11), 4670402 (МОМ! Сра 12), 4670393 (МОВАМ! Сра 13), 4670357 (МОАМІ Сра 14), 4670352 (МОМ! Сра 15), 4670343 (МОВАМ! Сра 16), 4670341 (МАМІ Сра 17), 4670336 (МОМ! Ср 18), 4670313 (МОВАМ! Сра 19), 4670310 (МОАМІ Сра 20), 4670301 (МОМ! Сра 21), 4670292 (МОаВвМІ Сра 22), 4670287 (МОАМІ Сра 23), 4670281 (МОМ! Сра 24), 4670276 (МОаВвМІ Сра 25), 4670264 (МОАМІ Сра 26), 4670234 (МОМ! Сра 27), 4670211 (МОВАМ! Сра 28), 4670180 (МОАМІ Сра 29), 4670174 (МОМ! Сра 30), 4670157 (МОВАМ! Сра 31), 4670137 (МОАМІ Сра 32), 4670123 (МОВМІ Ср 33), 4670117 (Мам! Сра 34). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше двох, щонайменше трьох, щонайменше чотирьох, щонайменше п'яти, щонайменше шести, щонайменше семи, щонайменше восьми, щонайменше дев'яти, щонайменше десяти, щонайменше одинадцяти, щонайменше дванадцяти або щонайменше п'ятнадцяти Сро-сайтів згідно з даним винаходом. Фахівець розуміє, що точна чисельність зазначених Сро-сайтів може залежати від конкретної геномної послідовності та від конкретної послідовності області промотору МОКМІ, що міститься в зразку, аналіз якого проводять.
Зокрема, ген КРТОК являє собою ген КРТОК людини, розташований на хромосомі 17 людини (обліковий Мо (зепрапк: МС 000017.11, діапазон: 80544825 - 80966373, первинна колекція ОКСПЗ38; обліковий Мо Сепрапк: МО 0130341, діапазон: 5001 - 426549, Веїзедсепе; обліковий Мо Сепрапк: МС 018928.2, діапазон: 78604958-79026514, альтернативна колекція
СНМІ 1.1; обліковий Мо Сепрапк: МО 013034.1; обліковий Мо Сепрапк: АС 0001491, діапазон: 73954508 -74378467, альтернативна колекція НикКеї). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше одного Сро-сайта, розташованого між положенням 76297000 і положенням 76416000 на хромосомі 17 людини. Зокрема, СрОо-сайт (сайти) розташований (розташовані) в одній з наступних областей хромосоми 17: 76369937 - 76370536. 76297000 - 76310000, 76333000 - 76341000, 76360000 - 76380000 і 76411000 - 76416000. Більше конкретно, зокрема, щодо Бий 36.1/71918 гена людини, визначають статус метилювання щонайменше одного СрО-сайта, розташованого у положенні: 76370001 (КРТОК сСро 1), 76370037 (ВРТОВ Сра 2), 76370073 (ВАРТОВ Сра 3), 76370092 (ВРТОВ Сра 4), 76370172 60 (ВАРТОВА Сра 5), 76370199 (ВАРТОВ Ср 6) 76370220 (ВРТОВ Сра 7), 76370253
(ВАРТОВА Сра 8). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше двох, щонайменше трьох, щонайменше чотирьох, щонайменше п'яти, щонайменше шести, щонайменше семи, щонайменше восьми, щонайменше дев'яти, щонайменше десяти, щонайменше одинадцяти, щонайменше дванадцяти або щонайменше п'ятнадцяти Сро-сайтів згідно з даним винаходом.
Фахівець розуміє, що точна чисельність зазначених Сро-сайтів може залежати від конкретної геномної послідовності та від конкретної послідовності області промотору ЕРТОК, що міститься в зразку, аналіз якого проводять.
Зокрема, ген 5І С22А18 являє собою ген 5І С22А18 людини, розташований на хромосомі 11 людини (обліковий Мо Сзепрапк: МС 000011.10, діапазон: 2899721 - 2925246, еталонна первинна колекція СКСИЗ38; обліковий Мо епрапк: МО 011512.1, діапазон: 5001 - 30526, КеїбЗедбепе; обліковий Мо (зепрапк: МТ 1875851, діапазон: 131932 - 157362, еталон оКсСпЗ38 АТ КЕР ГОСІ 1; обліковий Мо Сепрапк: АС 0001431, діапазон: 2709509 - 2734907, альтернативна колекція НиКеї обліковий Мо Сепрапк: МС 018922.2, діапазон: 2919878 - 2945340, альтернативна колекція СНМ'І 1.1). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше одного СроО-сайта, розташованого між положенням 2876000 і положенням 2883000 на хромосомі 11 людини. Зокрема, СрОо-сайти розташовані у положенні 2877113 - 2877442. Більше конкретно, у положенні хромосоми 11: 2876000 - хромосоми 11: 2883000, в області диференціального метилювання, пов'язаної з раком, зокрема, пов'язаної з РМЗ, РЯ та/або РПЗ, розміром 7000 п.о. покривної області промотору, Сро-острівець та частина області тіла гена 5І С22А18 (варіанти транскриптів). Більше конкретно, зокрема, щодо рийй 36.1/п918 гена людини, визначають статус метилювання щонайменше одного Сро-сайта, розташованого у положенні: 2877395 (51С22А18 Сро 1), 2877375 (5ІС22А18 Сро 2), 2877365 (5ІС22А18 бра 3), 2877341 (51022А18 бра 4), 2877323 (510б22А18 бра 5), 2877311 (5ІСб22А18 бра 6), 2877193 (5ІСб22А18 бра 7), 2877140 (5ІСб22А18 бра 8). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше двох, щонайменше трьох, щонайменше чотирьох, щонайменше п'яти, щонайменше шести, щонайменше семи, щонайменше восьми, щонайменше дев'яти, щонайменше десяти, щонайменше одинадцяти, щонайменше дванадцяти або щонайменше п'ятнадцяти Сро-сайтів згідно з даним винаходом. Фахівець розуміє, що точна чисельність зазначених СрОо-сайтів може залежати від конкретної геномної
Зо послідовності та від конкретної послідовності області промотору 5ІС22А18, що міститься в зразку, аналіз якого проводять.
Зокрема, ген ГОТ7 являє собою ген РОТ7 людини, розташований на хромосомі людини 9 (обліковий Мо Сзепрапк: МС 000009.12, діапазон: 137030174 - 137032840, еталонна первинна колекція ЗКСПЗ38; обліковий Мо (зепрапк: МО 007527.1, діапазон: 5001 - 7667, Веїбедсепе; обліковий Мо (зепрапк: АС 000141.1, діапазон: 109383478 - 109386144, альтернативна колекція
Нимкег; обліковий Мо (епрапк: МС 018920.2, діапазон: 140073389 - 140076055, альтернативна колекція СНМІ 1.1). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше одного Сро-сайта, розташованого між положенням 139046000 і положенням 139048000 на хромосомі 9 людини.
Більше конкретно, область диференціального метилювання, пов'язана з раком, зокрема, пов'язана з РМЗ, РЯ та/або РПЗ, розміром 2000 п.о. розташована в області промотору ГОТ7.
Зокрема, Сра-сайти розташовані у положенні 139047218 - 139047610, 139046000 - 139048000 і 139045065 - 139045817. Більше конкретно, зокрема, щодо бий 36.1/п918 гена людини, визначають статус метилювання щонайменше одного Сро-сайта, розташованого у положенні: 139047253 (РОТ бра 1), 139047314 (РОТ Сра 2), 139047346 (РОТ Сра 3), 139047427 (РОТ Сра 4), 139047445 (РОТ Сра 5), 139047467 (РОТ Сра 6), 139047483 (РОТ Сра 7), 139047566 (РОТ бра 8). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше двох, щонайменше трьох, щонайменше чотирьох, щонайменше п'яти, щонайменше шести, щонайменше семи, щонайменше восьми, щонайменше дев'яти, щонайменше десяти, щонайменше одинадцяти, щонайменше дванадцяти або щонайменше п'ятнадцяти Сро-сайтів згідно з даним винаходом. Фахівець розуміє, що точна чисельність зазначених Сро-сайтів може залежати від конкретної геномної послідовності та від конкретної послідовності області промотору РОТ7, що міститься в зразку, аналіз якого проводять.
Зокрема, ген КАРЗМ являє собою ген КАРЗМ людини, розташований на хромосомі 11 людини (обліковий Мо Сепрапк: МС 000011.10, діапазон: 47437757 - 47449178, еталонна первинна колекція ЗКСПЗ38; обліковий Мо (зепрапк: МО 008312.1, діапазон: 5001 - 16423,
КеЗедсепе; обліковий Мо Сепрапк: МС 018922.2, діапазон: 47458570 - 47469991, альтернативна колекція СНМІ1 1.1; обліковий Мо (бепрапк: АС 0001431, діапазон: 47159075 - 47170494, альтернативна колекція НикКеї). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше одного СрОо-сайта, розташованого між положенням 47427500 і положенням бо 47428500 на хромосомі 11 людини. Переважно, Сро-сайти розташовані у положенні 47427500 -
47428300. Більше конкретно, область диференціального метилювання, пов'язана з раком, переважно, пов'язана з РМЗ, РЯ та/або РПЗ, розміром 1000 п.о. розташована в області промотору КАРБЗМ. Більше конкретно, зокрема, щодо рий 36.1/пд18 гена людини, визначають статус метилювання щонайменше одного Сро-сайта, розташованого у положенні: 47427787 (ВАРБМ Сра 1), 47427825 (ВАРБМ Сра 2), 47427883 (ВАРБМ Сра 3), 47427915 (ВАРБ5М Сра 4), 47427930 (ВАРБМ бра 5), 47427976 (ВАРБМ Сра 6), 47428029 (ВАРБМ Сра 7), 47428110 (ВАРБМ Ср 8). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше двох, щонайменше трьох, щонайменше чотирьох, щонайменше п'яти, щонайменше шести, щонайменше семи, щонайменше восьми, щонайменше дев'яти, щонайменше десяти, щонайменше одинадцяти, щонайменше дванадцяти або щонайменше п'ятнадцяти Сро-сайтів згідно з даним винаходом. Фахівець розуміє, що точна чисельність зазначених Сро-сайтів може залежати від конкретної геномної послідовності та від конкретної послідовності області промотору КАРБ5М, що міститься в зразку, аналіз якого проводять.
Зокрема, ген 5100Р являє собою ген 5100Р людини, розташований на хромосомі 4 людини (обліковий Мо бЗепрапк: МС 000004.12, діапазон: 6693839-6697170, еталонна первинна колекція
ССпЗ38; обліковий Мо Сзепрапк: АС 000136.1, діапазон: 6627254-6630595, альтернативна колекція НикКеї обліковий Мо бСепрапк: МС 018915.2, діапазон: 6693944-6697285, альтернативна колекція СНМІ 1.1). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше одного СрО-сайта, розташованого між положенням 6746000 і положенням 6747000 на хромосомі людини 4. Більше конкретно, область диференціального метилювання, пов'язана з раком (переважно, пов'язана з РМ3, РЯ та/або РПЗ), розміром 1000 п.о. розташована в межах від області промотору до першого екзону 5100Р. Зокрема, Сро-сайти розташовані у положенні 6746537 - 6746823. Більше конкретно, зокрема, щодо Бий 36.1/1918 гена людини, визначають статус метилювання щонайменше одного СрОо-сайта, розташованого у положенні: 6746565 (5І00Р Сра 1), 6746599 (5100Р Сра 2), 6746609 (5100Р Сра 3), 6746616 (5100Р Сра 4), 6746623 (5100Р Сра 5), 6746634 (5100Р Сра 6), 6746710 (5100Р Сра 7), 6746728 (5І00Р Сра 8), 6746753 (5100Р Сра 9), 6746779(5100Р Сра 10), 6746788 (5100Р Сра 11), 6746791 (5100Р Ср 12). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше двох, щонайменше трьох, щонайменше чотирьох, щонайменше п'яти, щонайменше шести, щонайменше семи, щонайменше восьми, щонайменше дев'яти, щонайменше десяти, щонайменше одинадцяти, щонайменше дванадцяти або щонайменше п'ятнадцяти Сро-сайтів згідно з даним винаходом. Фахівець розуміє, що точна чисельність зазначених Сро-сайтів може залежати від конкретної геномної послідовності та від конкретної послідовності області промотору 5100Р, що міститься в зразку, аналіз якого проводять.
Зокрема, ген ЮОМЕК4 являє собою ген ЮЖМЕК4 людини, розташований на хромосомі 12 людини (обліковий Мо Сепрапк: МС 000012.12, діапазон: 4590072 - 4613888, еталонна первинна колекція СЕСПЗ38; обліковий Мо Сзепрапк: АС 000144.1, діапазон: 4555932 - 4579747, альтернативна колекція НиКеї обліковий Мо Сепрапк: МС 018923.2, діапазон: 4698860 - 4722666, альтернативна колекція СНМ'І 1.1). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше одного СроО-сайта, розташованого між положенням 4569000 і положенням 4571000 на хромосомі людини 12. Більше конкретно, область диференціального метилювання, пов'язана з раком, переважно, пов'язана з РМЗ, РЯ та/або РПЗ, розміром 2000 п.о. розташована в області промотору ЮМАК4. Зокрема, СрО-сайти розташовані у положенні 4569448 - 4569945. Більше конкретно, зокрема, щодо рий 36.1/19418 гена людини, визначають статус метилювання щонайменше одного Сро-сайта, розташованого у положенні: 4569879 (рУВКА сСра 1), 4569809 (рУВКаА сСра г), 4569707 (рУВКАа сСра 3), 4569493 (УВКА Сра 4). Зокрема, визначають статус метилювання щонайменше двох, щонайменше трьох, щонайменше чотирьох, щонайменше п'яти, щонайменше шести, щонайменше семи, щонайменше восьми, щонайменше дев'яти, щонайменше десяти, щонайменше одинадцяти, щонайменше дванадцяти або щонайменше п'ятнадцяти Сро-сайтів згідно з даним винаходом.
Фахівець розуміє, що точна чисельність зазначених Сро-сайтів може залежати від конкретної геномної послідовності та від конкретної послідовності області промотору ОУККА, що міститься в зразку, аналіз якого проводять.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу спосіб прогнозування та/або діагностування раку також включає етап порівняння статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та присутності, зокрема, кількості, щонайменше одного маркера мікроРНК, у зазначеного суб'єкта, зі статусом метилювання щонайменше одного маркера метилювання та присутністю, зокрема, кількістю, щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах. Зокрема, еталон являє собою граничне значення, еталонне 60 значення або еталонний зразок.
Згідно з варіантами реалізації даного винаходу, в яких еталон являє собою граничне значення, статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАГ2, МОЕМІ, ЕРТОК, 5І С22А18, РОТУ, КАРЗМ, 5100Р і ОМЕКА, який є меншим, ніж граничне значення, свідчить про те, що суб'єкт страждає від раку, про збільшений ризик розвитку раку або погіршенні захворювання; тоді як статус метилювання, який еквівалентний граничному значенню або перевищує граничне значення, свідчить про те, що суб'єкт не страждає від раку, про зменшений ризик розвитку раку або про поліпшення захворювання. Слід розуміти, що вищезгаданий рівень може варіювати залежно від статистики і помилок вимірювання.
Згідно з варіантами реалізації даного винаходу, в яких еталон являє собою граничне значення, рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ/2, МОКМІ, КРТОЕК, 5ІС22А18, РОТУ, КАРЗМ, 5І0ООР ії ОМККА, який еквівалентний граничному значенню або перевищує граничне значення, свідчить про те, що суб'єкт страждає від раку, про збільшений ризик розвитку раку або погіршення захворювання; тоді як рівень експресії, який є меншим, ніж граничне значення, свідчить про те, що суб'єкт не страждає від раку, про зменшений ризик розвитку раку або про поліпшення захворювання. Слід розуміти, що вищезгаданий рівень може варіювати залежно від статистики і помилок вимірювання.
Згідно з варіантами реалізації даного винаходу, в яких еталон являє собою граничне значення, кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тінвй-801, тів-37бс, тіВв-З37ба, тівВ-127, тін-409 і тік-148р, яке еквівалентне граничному значенню або перевищує граничне значення, свідчить про те, що суб'єкт страждає від раку, про збільшений ризик розвитку раку або погіршенні захворювання; тоді як кількість, яка є менше, ніж граничне значення, свідчить про те, що суб'єкт не страждає від раку, про зменшений ризик розвитку раку або про поліпшення захворювання. Слід розуміти, що вищезгадані кількості можуть варіювати залежно від статистики і помилок вимірювання.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничне значення для суб'єкта, що страждає від раку, підданого збільшеному ризику розвитку раку або погіршенню захворювання, у випадку НУАЇ/2 являє собою статус метилювання менше 90 95 у порівнянні з
Зо контролями, і рівень експресії, більше ніж в 1,2 рази перевищуючий контролі. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничне значення у випадку МОКМІ1 являє собою статус метилювання менше 9095 у порівнянні з контролями. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничне значення у випадку КРТОК являє собою статус метилювання менше 9595 у порівнянні з контролями. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничне значення у випадку 5 С22А18 являє собою статус метилювання менше 95 95 у порівнянні з контролями, і рівень експресії, більше ніж в 1,1 рази перевищуючий контролі. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничне значення у випадку РШТ7 являє собою статус метилювання менше 9295 у порівнянні з контролями. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничне значення у випадку КАРБМ являє собою статус метилювання менше 9895 у порівнянні з контролями.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничне значення у випадку
З100Р являє собою статус метилювання менше 9095 у порівнянні з контролями, і рівень експресії, більше ніж в 2 рази перевищуючий контролі. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничне значення у випадку ЮОЖККА4 являє собою статус метилювання менше 85 95 у порівнянні з контролями.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничний рівень тік-652 являє собою кількість, щонайменше на 0,5 значення СІ менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,4 рази перевищуюча контролі). Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничний рівень тік-801 являє собою кількість, щонайменше на 0,6 значення Сі менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,5 рази перевищуюча контролі). Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничний рівень іпік-376с являє собою кількість, щонайменше на 0,5 значення Сі менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,4 рази перевищуюча контролі).
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничний рівень тік-37ба являє собою кількість, щонайменше на 0,6 значення СІ менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,5 рази перевищуюча контролі). Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничний рівень тівк-127 являє собою кількість, щонайменше на 0,5 значення Сі менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,4 рази перевищуюча контролі). Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничний рівень Іптік-409 являє собою кількість, щонайменше на 0,4 значення СІ менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,3 рази перевищуюча контролі). Згідно з бо конкретними варіантами реалізації даного винаходу граничний рівень тік-14865 являє собою кількість, щонайменше на 0,3 значення СІ менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,2 рази перевищуюча контролі).
Згідно з варіантами реалізації даного винаходу, в яких еталон являє собою еталонне значення, зазначене еталонне значення являє собою репрезентативне значення для відсутності раку, наявності раку, або збільшеного, або зменшеного ризику розвитку раку.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу еталонний зразок вибраний з групи, що складається з еталонного зразка, отриманого від здорового індивідуума, еталонного зразка, отриманого від хворого індивідуума, еталонного зразка, отриманого від того самого індивідуума, що й зразок, що представляє інтерес, відібраного у більше ранній або пізній точці часу, і еталонного зразка, репрезентативного для здорового індивідуума або репрезентативного для наявності або відсутності раку, або репрезентативного для збільшеного або зменшеного ризику розвитку раку.
Згідно з варіантами реалізації даного винаходу, в яких еталон являє собою здорового суб'єкта або суб'єкта, який характеризується зменшеним ризиком розвитку раку, або статусом метилювання маркера метилювання, або кількістю мікроРНК, репрезентативним для відсутності раку, зменшений рівень метилювання та/або збільшена експресія щонайменше одного маркера метилювання та присутність або збільшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у порівнянні з еталоном свідчить про і. ризик розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, і. наявність раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РІЗ, і/або іі. прогресування раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, у суб'єкта.
Згідно з варіантами реалізації даного винаходу, в яких еталон являє собою хворого суб'єкта або суб'єкта, який характеризується збільшеним ризиком розвитку раку або статусом метилювання маркера метилювання або кількістю мікроРНК, репрезентативним для наявності раку, еквівалентний статус метилювання або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та рівна кількість щонайменше одного маркера мікроРНК свідчить про і. ризик розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, і. наявність раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РІЗ, і/або
Зо ії. прогресування раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, у суб'єкта.
Згідно з варіантами реалізації даного винаходу, в яких еталонний зразок був отриманий від того самого суб'єкта, що й зразок, що представляє інтерес, і був відібраний у більше ранній точці часу, () зменшене метилювання та/або збільшена експресія щонайменше одного маркера метилювання та присутність або збільшення кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у порівнянні з еталоном свідчить про і. ризик розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, і. наявність раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РІЗ, і/або ії. прогресування раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, (і) збільшене метилювання та/або менша експресія щонайменше одного маркера метилювання та відсутність або зменшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у порівнянні з еталоном свідчить про і. зменшений ризик розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, і. відсутність раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РІЗ, і/або іі. спадне прогресування раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, й/або (ії) аналогічний рівень метилювання й/або експресії щонайменше одного маркера метилювання й аналогічна кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у порівнянні з еталоном свідчить про і. аналогічний ризик розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, і. зупинку прогресування раку, зокрема, РМ3У, РЯ та/або РІЗ, і/або іі. персистенцію раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, у суб'єкта.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу визначають кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тів- 801, тів-376бс, тів-376ба, тів-127, тів-409, тів-148р. Зокрема, кількість тік-652, щонайменше на 0,5 значення СІ менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,4 рази перевищуюча контролі), свідчить про рак. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу кількість тік-801, щонайменше на 0,6 значення Сі менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,5 рази бо перевищуюча контролі), свідчить про рак. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу кількість тік-37бс, щонайменше на 0,5 значення Сі менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,4 рази перевищуюча контролі), свідчить про рак. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу кількість тік-37ба, щонайменше на 0,6 значення Сі менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,5 рази перевищуюча контролі), свідчить про рак. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу кількість тік-127, щонайменше на 0,5 значення СІ менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,4 рази перевищуюча контролі), свідчить про рак. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу кількість тік-409, щонайменше на 0,4 значення Сі менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,3 рази перевищуюча контролі), свідчить про рак. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу кількість тік-14865, щонайменше на 0,3 значення Сі менше, ніж в контролях (або більше ніж в 1,2 рази перевищуюча контролі), свідчить про рак.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, і/або еталонний зразок являє собою зразок рідини організму або зразок тканини. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок рідини організму вибраний з групи, що складається з крові, сироватки, плазми, синовіальної рідини, сечі, слини, лімфатичної рідини, слізної рідини і рідини, отриманої із залоз, таких як, наприклад, молочна залоза або передміхурова залоза. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу рідина організму являє собою кров.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок тканини являє собою екстракти тканини, отримані з тканини пухлини або тканини, прилеглої до пухлини. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/або еталонний зразок являє собою культури клітин або культури тканин, такі як, але не обмежуючись зазначеними, культури різних ракових клітин. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою середовище, отримане із зазначених культур клітин або культур тканин.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу суб'єкт являє собою ссавця, плазуна або птаха. Зокрема, суб'єкт вибраний з групи, що складається з лабораторних тварин (наприклад, миші або пацюки), свійських тварин (включаючи, наприклад, морську свинку, кролика, коня, віслюка, корову, вівцю, козу, свиню, курку, верблюда, кішку, собаку, морську
Зо черепаху, сухопутну черепаху, змію або ящірку) або приматів, включаючи шимпанзе, бонобо, горил і людину. Люди є особливо переважними.
Згідно з другим аспектом даний винахід відноситься до способу визначення дози фармацевтичного препарату для впливу на рак або запобігання раку, або лікування раку у суб'єкта, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку від суб'єкта, і (Б) визначення дози фармацевтичного препарату залежно від статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУА/ 2, МОКМ'І, КЕРТОБК, 5І С22А18, ГОТ7, КАРБМ, 5100Р і ОМЕКА, як докладно зазначено вище, і кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тів-801, тів-376бс, ті8-37ба, тів-127, тіВв-409, тів-1486, як докладно зазначено вище, визначають в еталоні для порівняння зі статусом метилювання та/або рівнем експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількістю щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу дозу фармацевтичного препарату визначають залежно від порівняння статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, і в еталоні або еталонному зразку.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою зразок рідини організму або зразок тканини. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок рідини організму вибраний з групи, що складається з крові, сироватки, плазми, синовіальної рідини, сечі, слини, лімфатичної рідини, слізної рідини і рідини, отриманої із залоз, таких як, наприклад, молочна залоза або передміхурова залоза. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу рідина організму являє собою кров.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок тканини являє собою 60 екстракти тканини, отримані з тканини пухлини або тканини, прилеглої до пухлини. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/або еталонний зразок являє собою культури клітин або культури тканин, такі як, але не обмежуючись зазначеними, культури різних ракових клітин. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою середовище, отримане із зазначених культур клітин або культур тканин.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу суб'єкт являє собою ссавця, плазуна або птаха. Переважно, суб'єкт вибраний з групи, що складається з лабораторних тварин (наприклад, миші або пацюки), свійських тварин (включаючи, наприклад, морську свинку, кролика, коня, віслюка, корову, вівцю, козу, свиню, курку, верблюда, кішку, собаку, морську черепаху, сухопутну черепаху, змію або ящірку) або приматів, включаючи шимпанзе, бонобо, горил і людину. Люди є особливо переважними.
Згідно з третім аспектом даний винахід відноситься до способу підбирання дози фармацевтичного препарату для впливу на рак або запобігання, або лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАГ2, МОВМІ, АРТОВ, 51 С22А18,
РИТ7, КАРБМ, 5ІООР ї ОУККЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тів-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З37ва, тів-127, тів-409, тів-148р, як докладно зазначено вище, у зразку, (5) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, (с) вивчення досліджуваного зразка для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (4) підбирання дози фармацевтичного препарату залежно від того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному
Ко) або декількох еталонах або еталонних зразках.
Згідно з конкретним варіантом реалізації даного винаходу дозу фармацевтичного препарату збільшують, якщо а) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання, р) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання, с) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу, а) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є збільшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання, е) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або збільшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання,
Т рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або збільшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу, 9) кількість щонайменше однієї мікроРНК є збільшеною у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання,
Р) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є еквівалентною або збільшеною у бо порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання, ї) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є еквівалентною або збільшеною у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу.
Згідно з конкретним варіантом реалізації даного винаходу дозу фармацевтичного препарату зменшують, якщо а) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або збільшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання,
Б) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання, с) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу,
Я) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання, е) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання,
І) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу, 9) кількість щонайменше однієї мікроРНК є еквівалентною або зменшеною у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку
Зо захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання,
І) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є зменшеною у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання, ї) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є зменшеною у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою зразок рідини організму або зразок тканини. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок рідини організму вибраний з групи, що складається з крові, сироватки, плазми, синовіальної рідини, сечі, слини, лімфатичної рідини, слізної рідини і рідини, отриманої із залоз, таких як, наприклад, молочна залоза або передміхурова залоза. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок рідини організму являє собою зразок крові.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок тканини являє собою екстракти тканини, отримані з тканини пухлини або тканини, прилеглої до пухлини. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/або еталонний зразок являє собою культури клітин або культури тканин, такі як, але не обмежуючись зазначеними, культури різних ракових клітин. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою середовище, отримане із зазначених культур клітин або культур тканин.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу суб'єкт являє собою ссавця, плазуна або птаха. Зокрема, суб'єкт вибраний з групи, що складається з лабораторних тварин (наприклад, миші або пацюки), свійських тварин (включаючи, наприклад, морську свинку, кролика, коня, віслюка, корову, вівцю, козу, свиню, курку, верблюда, кішку, собаку, морську черепаху, сухопутну черепаху, змію або ящірку) або приматів, включаючи шимпанзе, бонобо, горил і людину. Люди є особливо переважними.
Згідно з четвертим аспектом даний винахід відноситься до способу визначення сприятливого та/або небажаного впливу речовини на рак або розвиток раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи:
(а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАГ2, МОВМІ, АРТОВ, 5І С22А18,
РИТ7, КАРБМ, 5ІООР ї ОУККЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тів-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З37ва, тів-127, тів-409, тів-148р, як докладно зазначено вище, у зразку, (Б) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (с) вивчення зразка, що представляє інтерес, для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, причому зразок, що представляє інтерес, піддавали відмінному впливу зазначеної речовини, ніж один, або декілька еталонів, або еталонних зразків.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, піддають відмінному впливу зазначеної речовини відносно часу та/або концентрації.
Таким чином, зразок, що представляє інтерес, можна піддавати впливу зазначеної речовини протягом більше тривалого або більше короткого інтервалу часу та/або при більше високій або більше низькій концентрації зазначеної речовини.
Згідно з варіантом реалізації, в якому зразок, що представляє інтерес, піддають впливу більшої концентрації та/або протягом більше тривалого інтервалу часу, небажаний вплив речовини визначають, якщо а) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання, р) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або
Зо репрезентативним для наявності захворювання, с) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу, а) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є збільшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання, е) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або збільшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання,
Т рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або збільшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу, 9) кількість щонайменше однієї мікроРНК є збільшеною у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання,
Р) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є еквівалентною або збільшеною у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання, ї) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є еквівалентною або збільшеною у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу.
Згідно з варіантом реалізації, в якому зразок, що представляє інтерес, піддають впливу більшої концентрації та/(або протягом більше тривалого інтервалу часу, сприятливий вплив речовини визначають, якщо а) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або збільшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання,
Б) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання, с) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу,
Я) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання, е) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання,
І) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу, 9) кількість щонайменше однієї мікроРНК є еквівалентною або зменшеною у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання,
І) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є зменшеною у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання, ї) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є зменшеною у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу.
Згідно з варіантом реалізації, в якому зразок, що представляє інтерес, піддають впливу
Зо меншої концентрації та/або протягом більше короткого інтервалу часу, відсутність впливу або небажаний вплив речовини визначають, якщо а) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання, р) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання, с) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу, а) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є збільшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання, е) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або збільшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання,
Т рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або збільшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу, 9) кількість щонайменше однієї мікроР!НК є збільшеною у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання,
Р) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є еквівалентною або збільшеною у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання, ї) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є еквівалентною або збільшеною у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу.
Згідно з варіантом реалізації, в якому зразок, що представляє інтерес, піддають впливу меншої концентрації та/"або протягом більше короткого інтервалу часу, сприятливий вплив речовини визначають, якщо а) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або збільшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання,
Б) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання, с) статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу,
Я) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є еквівалентним або зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання, е) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання,
І) рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання є зменшеним у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу, 9) кількість щонайменше однієї мікроРНК є еквівалентною або зменшеною у порівнянні з
Зо еталоном, характерним для відсутності захворювання або зменшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від здорового суб'єкта або репрезентативним для відсутності захворювання,
І) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є зменшеною у порівнянні з еталоном, характерним для наявності захворювання або збільшеного ризику розвитку захворювання, або з еталонним зразком від хворого суб'єкта або репрезентативним для наявності захворювання, ї) кількість щонайменше одного маркера мікроРНК є зменшеною у порівнянні з еталонним зразком, отриманим від зазначеного суб'єкта у більше ранній точці часу.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою зразок рідини організму або зразок тканини. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок рідини організму вибраний з групи, що складається з крові, сироватки, плазми, синовіальної рідини, сечі, слини, лімфатичної рідини, слізної рідини і рідини, отриманої із залоз, таких як, наприклад, молочна залоза або передміхурова залоза. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок рідини організму являє собою зразок крові.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок тканини являє собою екстракти тканини, отримані з тканини пухлини або тканини, прилеглої до пухлини. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/або еталонний зразок являє собою культури клітин або культури тканин, такі як, але не обмежуючись зазначеними, культури різних ракових клітин. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою середовище, отримане із зазначених культур клітин або культур тканин.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу суб'єкт являє собою ссавця, плазуна або птаха. Зокрема, суб'єкт вибраний з групи, що складається з лабораторних тварин (наприклад, миші або пацюки), свійських тварин (включаючи, наприклад, морську свинку, кролика, коня, віслюка, корову, вівцю, козу, свиню, курку, верблюда, кішку, собаку, морську черепаху, сухопутну черепаху, змію або ящірку) або приматів, включаючи шимпанзе, бонобо, горил і людину. Люди є особливо переважними.
Згідно з п'ятим аспектом даний винахід відноситься до способу ідентифікації пацієнта, такого, який відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення бо статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІГ2, МОМ, ЕРТОБЕ, 51 С22А18, БШТ7, КАРБМ, З100Р і
ОУКкКАЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тівВ-148Б, як докладно зазначено вище, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних від суб'єкта після першого зразка, причому збільшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/(або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та відсутність або зменшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК свідчить про відповідь на лікування.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/або еталонний зразок являє собою зразок рідини організму або зразок тканини. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок рідини організму вибраний з групи, що складається з крові, сироватки, плазми, синовіальної рідини, сечі, слини, лімфатичної рідини, слізної рідини і рідини, отриманої із залоз, таких як, наприклад, молочна залоза або передміхурова залоза. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок рідини організму являє собою зразок крові.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок тканини являє собою екстракти тканини, отримані з тканини пухлини або тканини, прилеглої до пухлини. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/або еталонний зразок являє собою культури клітин або культури тканин, такі як, але не обмежуючись зазначеними, культури різних ракових клітин. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою середовище, отримане із зазначених культур клітин або культур тканин.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу суб'єкт являє собою ссавця, плазуна або птаха. Зокрема, суб'єкт вибраний з групи, що складається з лабораторних тварин (наприклад, миші або пацюки), свійських тварин (включаючи, наприклад, морську свинку, кролика, коня, віслюка, корову, вівцю, козу, свиню, курку, верблюда, кішку, собаку, морську черепаху, сухопутну черепаху, змію або ящірку) або приматів, включаючи шимпанзе, бонобо, горил і людину. Люди є особливо переважними.
Згідно з шостим аспектом даний винахід відноситься до способу ідентифікації пацієнта,
Зо такого, який не відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАГ2, МОКМІ1, ЕРТОБЕ, 5І С22А18, РОТ7, КАРЗМ, 5100Р і
ОУКкКАЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-14860, як докладно зазначено вище, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після першого зразка, причому зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність або збільшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК свідчить про відсутність відповіді на лікування.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою зразок рідини організму або зразок тканини. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок рідини організму вибраний з групи, що складається з крові, сироватки, плазми, синовіальної рідини, сечі, слини, лімфатичної рідини, слізної рідини і рідини, отриманої із залоз, таких як, наприклад, молочна залоза або передміхурова залоза. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок тканини являє собою екстракти тканини, отримані з тканини пухлини або тканини, прилеглої до пухлини. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою культури клітин або культури тканин, такі як, але не обмежуючись зазначеними, культури різних ракових клітин. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою середовище, отримане із зазначених культур клітин або культур тканин.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу суб'єкт являє собою ссавця, плазуна або птаха. Зокрема, суб'єкт вибраний з групи, що складається з лабораторних тварин (наприклад, миші або пацюки), свійських тварин (включаючи, наприклад, морську свинку, кролика, коня, віслюка, корову, вівцю, козу, свиню, курку, верблюда, кішку, собаку, морську черепаху, сухопутну черепаху, змію або ящірку) або приматів, включаючи шимпанзе, бонобо, горил і людину. Люди є особливо переважними.
Згідно з сьомим аспектом даний винахід відноситься до способу лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи:
() визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАГ2, МОВМІ, АРТОВ, 51 С22А18,
РИТ7, КАРБМ, 5ІООР ї ОУККАЯ., як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тів-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З7ба, тів-127, тів-409, тів-148Б, як докладно зазначено вище, у першому зразку від суб'єкта; (ії) початок лікування зазначеного суб'єкта першим режимом лікування, який включає один або декілька протиракових засобів або варіантів терапії, (ії) визначення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше однієї мікроРНК в одному або декількох послідовно відібраних других зразків від зазначеного суб'єкта; (ім) необов'язкове повторення етапів (ії) і (ії) один або декілька разів; (м) продовження лікування суб'єкта першим режимом лікування у випадку, якщо спостерігається істотне збільшення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/(або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та зменшена кількість або відсутність щонайменше одного маркера мікроРНК, або (м) зміна лікування або припинення лікування суб'єкта першим режимом лікування та замість цього лікування суб'єкта другим режимом лікування, який включає один або декілька протиракових засобів або варіантів терапії, які не були включені у перший режим лікування, у випадку, якщо спостерігається зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та збільшена кількість або присутність щонайменше одного маркера мікроРНК.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою зразок рідини організму або зразок тканини. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зразок рідини організму вибраний з групи, що складається з крові, сироватки, плазми, синовіальної рідини, сечі, слини, лімфатичної рідини, слізної рідини і рідини, отриманої із залоз, таких як, наприклад, молочна залоза або передміхурова залоза. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу, зразок рідини організму являє собою зразок крові.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок тканини являє собою
Зо екстракти тканини, отримані з тканини пухлини або тканини, прилеглої до пухлини. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/або еталонний зразок являє собою культури клітин або культури тканин, такі як, але не обмежуючись зазначеними, культури різних ракових клітин. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зразок, що представляє інтерес, й/(або еталонний зразок являє собою середовище, отримане із зазначених культур клітин або культур тканин.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу суб'єкт являє собою ссавця, плазуна або птаха. Зокрема, суб'єкт вибраний з групи, що складається з лабораторних тварин (наприклад, миші або пацюки), свійських тварин (включаючи, наприклад, морську свинку, кролика, коня, віслюка, корову, вівцю, козу, свиню, курку, верблюда, кішку, собаку, морську черепаху, сухопутну черепаху, змію або ящірку) або приматів, включаючи шимпанзе, бонобо, горил і людину. Люди є особливо переважними.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу режим лікування вибраний з переліку, що складається з хіміотерапії, антигормональної терапії, імунотерапії та променевої терапії.
Згідно з восьмим аспектом даний винахід відноситься до засобів для прогнозування та/або діагностування і. ризику розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, і. наявності раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РІЗ, і/або іі. прогресування раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, причому зазначені засоби включають: с) один або декілька засобів для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, і
Я) один або декілька засобів для виявлення кількості щонайменше одного маркера мікроРНК.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зазначені засоби виявляють статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІГ2, МОКМІ, ЕРТОБК, 5І С22А18, РОТ7, КАРЗМ, З10О0Р, рука, як докладно зазначено вище.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу один або декілька засобів для 60 виявлення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання включають 5О0 щонайменше один полінуклеотид, специфічний до метилювання. Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу полінуклеотид, специфічний до метилювання, являє собою специфічний до метилювання праймер і/або специфічний до метилювання зонд.
Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу один або декілька засобів для виявлення рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання містить зв'язувальну групу. Зазначена зв'язувальна група являє собою, зокрема, полінуклеотид, пептид, білок або аптамер. Згідно з наступними варіантами реалізації даного винаходу зв'язувальна група вибрана з групи, що складається з моноклональних антитіл, поліклональних антитіл, Еар- фрагментів, Есо-фрагментів, Рар'-фрагментів, Е(ар")2-фрагментів, однодоменних антитіл (заАБ), нанотіл, одноланцюгових Ем (5сЕм), двовалентних одноланцюгових варіабельних фрагментів (аі-5сЕм), тандемних 5сЕм, діатіл, триатіл, біспецифічних діатіл, одноланцюгових діатіл (5606), біспецифічних активаторів Т-клітин (ВІТЕ) і молекул САКТ".
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зв'язувальна група зв'язується з частиною продукту гена маркера метилювання. Відповідно, згідно з варіантами реалізації, в яких зв'язувальна група являє собою полінуклеотид, зазначений полінуклеотид зв'язується з
МРНК, яка транскрибується з гена відповідного маркера метилювання, тобто гена НУАЇІ2,
МОМ, КРТОБЕ, 5І С22А18, ГШТ7, КАРЗМ, 5100Р або ОУККА.
Згідно з варіантами реалізації даного винаходу, в яких зв'язувальна група являє собою пептид, білок або аптамер, зазначений пептид, білок або аптамер зв'язується з частиною, зокрема, епітопом, білка, що транслюється з гена відповідного маркера метилювання, тобто гена НУАІ2, МОКМІ1, ЕРТОКЕК, 5І С22А18, ГОТ7, КАРБМ, 5100Р або СОУВКА.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зазначені засоби виявляють щонайменше один маркер мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів- 801, тів-376с, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486, як докладно зазначено вище.
Згідно з наступними варіантами реалізації один або декілька засобів для виявлення кількості щонайменше одного маркера мікроРНК містять щонайменше один полінуклеотид, специфічний до мікроРНК.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зазначений щонайменше один полінуклеотид, специфічний до мікроРНК, містить послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 1-13.
Зо Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зазначені засоби призначені для застосування в способі, що докладно описано вище. Зокрема, зазначені засоби призначені для застосування в способі, який вибраний з групи, що складається з: () способу прогнозування та/або діагностування раку, зокрема, РМЗ, РЯ та/або РПЗ, у суб'єкта, причому зазначений спосіб включає (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з
НУАІ2, МОКМІ, ЕРТОКЕК, 5І С22А18, ГОТ7, КАРБМ, 5100Р, ОУРКА, і (5) визначення присутності, зокрема, кількості, щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тіВв-127, тіВв-409, тів-14860, у суб'єкта, причому статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність щонайменше однієї мікроРНК служать показником для зазначеного прогнозу та/або діагнозу в зазначеного суб'єкта, (ії) способу визначення дози фармацевтичного препарату для впливу на рак або запобігання або лікування раку в суб'єкта, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ/2, МОРМ1, ЕРТОК, 51 С22А18,
ЕРИТ7, КАРБМ, 5І0ООР, ЮУККЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З7ба, тів-127, тів-409, тіВ-148юр, як докладно зазначено вище, у зразку від суб'єкта, і необов'язково визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в еталоні для порівняння зі статусом метилювання та/або рівнем експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількістю щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, і (5) визначення дози фармацевтичного препарату залежно від статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, необов'язково залежно від порівняння статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, і в еталоні або еталонному зразку, (ії) способу підбирання дози фармацевтичного препарату для впливу на рак або 60 запобігання, або лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а)
визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУА/2, МОВМІ, АВРТОВ, 5І С22А18,
ЕРИТ7, КАРБМ, 5І0ООР, ЮУККЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З37ба, тів-127, тіВв-409, тів-148р, як докладно зазначено вище, у зразку, (Б) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, (с) вивчення досліджуваного зразка для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (а) підбирання дози фармацевтичного препарату залежно від того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, (ім) способу визначення сприятливого та/"або небажаного впливу речовини на рак або розвиток раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ 2, МОКМІ1, ЕРТОБК, 5І С22А18, БОТ7, КАРБМ, 5100Р, ОМЕКА, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486, як докладно зазначено вище, у зразку, що представляє інтерес, (Б) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (с) вивчення зразка, що представляє інтерес, для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, причому зразок, що представляє інтерес, піддавали відмінному впливу зазначеної речовини, ніж
Ко) один або декілька еталонів або еталонних зразків, (м) способу ідентифікації пацієнта, такого, який відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАЇІ2,
МОРМІ, КЕРТОК, 5ІС22А18, РОТУ, КАРЗМ, 5100Р, ЮУРК4, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік - 652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486р, як докладно зазначено вище, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після першого зразка, причому збільшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та відсутність або зменшена кількість щонайменше одного маркера мікроРнК свідчить про відповідь на лікування, (м) способу ідентифікації пацієнта, такого, який не відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ2,
МОРМІ, ЕРТОК, 5ІС22А18, РОТУ, КАРЗМ, 5100ОР, ЮУРК4, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік- 652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486р, як докладно зазначено вище, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після першого зразка, причому зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність або збільшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК свідчить про відсутність відповіді на лікування, і (мі) способу лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (Її) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАГ2, МОКМІ1, ЕРТОК, 51 С22А18,
ЕРИТ7, КАРБМ, 5І0ООР, ЮУККЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З7ба, тів-127, тів-409, тіВв-148р0, як докладно зазначено вище, у першому зразку від суб'єкта; (ії) початок лікування зазначеного пацієнта першим режимом лікування, який включає один або бо декілька протиракових засобів або варіантів терапії, (ії) визначення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, і кількості щонайменше однієї мікроРНК в одному або декількох зразках, послідовно відібраних від зазначеного суб'єкта; (ім) необов'язкове повторення етапів (ії) і (іїї) один або декілька разів; (м) продовження лікування пацієнта першим режимом лікування у випадку, якщо спостерігається істотне збільшення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання, і зменшена кількість або відсутність щонайменше одного маркера мікроРНК, або (м) зміна лікування або припинення лікування пацієнта першим режимом лікування та замість цього лікування пацієнта другим режимом лікування, який включає один або декілька протиракових засобів або варіантів терапії, які не були включені у перший режим лікування, у випадку, якщо спостерігається зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання, і збільшена кількість або присутність щонайменше одного маркера мікроР НК.
Згідно з дев'ятим аспектом даний винахід відноситься до набору, що містить зазначені вище засоби для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ/2, МОКМ1, КРТОК,
ЗІ С22А18, БШОТ7, КАРБЗМ, 5100Р, ОУККАЯ, як докладно зазначено вище, і присутності, зокрема, кількості, щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік- 652, тів-801, тів-376с, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486, як докладно зазначено вище.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу набір також містить (а) контейнер й/або (в) інформаційний носій, причому інформаційний носій містить інформацію, таку як (ї) інструкції щодо способів виявлення ризику розвитку та/або виявлення присутності та/або моніторингу прогресування раку, (і) інструкції із застосування засобів для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, зокрема, у зразку, більше конкретно, у зразку від індивідуума та/або з набору, (ії) інформацію про якість, таку як інформація щодо номера серії/партії засобів для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера
Зо метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК і/або набору, місця виробництва або комплектації або дати закінчення строку придатності або дати строку реалізації, інформацію щодо належного зберігання або використання набору, (м) інформацію відносно складу буфера (буферів), розріджувача (розріджувачів), реактиву (реактивів) для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК і/або засобів для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, (м) інформацію щодо інтерпретації інформації, отриманої при здійсненні вищевказаних способів виявлення та/або моніторингу прогресування раку, (м) попередження щодо можливої помилкової інтерпретації або невірних результатів при застосуванні невідповідних способів і/або невідповідних засобів, і/або (мі) попередження щодо можливої помилкової інтерпретації або невірних результатів при застосуванні невідповідного реактиву (реактивів) та/або буфера (буферів).
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу набір призначений для застосування в способі що докладно описано вище. Зокрема, набір призначений для застосування в способі, який вибраний з групи, що складається з: () способу прогнозування та/або діагностування раку, зокрема, РМЗ, РЯ та/або РПЗ, у суб'єкта, причому зазначений спосіб включає (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з
НУАІ2, МОКМІ, ЕРТОКЕК, 5І С22А18, ГОТ7, КАРБМ, 5100Р, ОУРКА, і (5) визначення присутності, зокрема, кількості, щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тіВв-127, тіВв-409, тів-14860, у суб'єкта, причому статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність щонайменше однієї мікроРНК служать показником для зазначеного прогнозу та/або діагнозу в зазначеного суб'єкта, (і) способу визначення дози фармацевтичного препарату для впливу на рак або запобігання, або лікування раку в суб'єкта, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ/2, МОРМ1, ЕРТОК, 51 С22А18, 60 ЕРИТ7, КАРБМ, 5І0ООР, ЮУККЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З7ба, тів-127, тів-409, тіВ-148юр, як докладно зазначено вище, у зразку від суб'єкта, і необов'язкове визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в еталоні для порівняння зі статусом метилювання та/або рівнем експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількістю щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, і (5) визначення дози фармацевтичного препарату залежно від статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, необов'язково залежно від порівняння статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, і в еталоні або еталонному зразку, (ії) способу підбирання дози фармацевтичного препарату для впливу на рак або запобігання або лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІГ2, МОМ, ЕРТОК, 51 С22А18, БОТ7, КАРЗМ, 5100Р, ОМЕКА, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486, як докладно зазначено вище, у зразку, (б) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, (с) вивчення досліджуваного зразка для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (4) підбирання дози фармацевтичного препарату залежно від того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, (ім) способу визначення сприятливого та/"або небажаного впливу речовини на рак або
Зо розвиток раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ 2, МОКМІ1, ЕРТОБК, 5І С22А18, БОТ7, КАРБМ, 5100Р, ОМЕКА, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486, як докладно зазначено вище, у зразку, що представляє інтерес, (Б) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (с) вивчення зразка, що представляє інтерес, для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, причому зразок, що представляє інтерес, піддавали відмінному впливу зазначеної речовини, ніж один або декілька еталонів або еталонних зразків, (м) способу ідентифікації пацієнта, такого, який відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ2,
МОРМІ, КЕРТОК, 5ІС22А18, РОТУ, КАРЗМ, 5100Р, ЮУРК4, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тів- 652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486р, як докладно зазначено вище, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після першого зразка, причому збільшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/(або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та відсутність або зменшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНнК свідчить про відповідь на лікування, (м) способу ідентифікації пацієнта, такого, який не відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ2,
МОВАМІ, АРТОВ, 5ІС22А18, РОТ7, ВАРБМ, 5100Р, СУВКА4, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік- 60 652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486р, як докладно зазначено вище, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після першого зразка, причому зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність або збільшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК свідчить про відсутність відповіді на лікування, і (мі) способу лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (Її) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУА/2, МОРМ1, ЕРТОК, 51 С22А18,
ЕРИТ7, КАРБМ, 5І0ООР, ЮУККЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З7ба, тів-127, тів-409, тіВв-148р, як докладно зазначено вище, у першому зразку від суб'єкта; (ії) початок лікування зазначеного пацієнта першим режимом лікування, який включає один або декілька протиракових засобів або варіантів терапії, (ії) визначення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше однієї мікроРНК в одному або декількох зразках, послідовно відібраних від зазначеного суб'єкта; (ім) необов'язкове повторення етапів (ії) і (іїї) один або декілька разів; (м) продовження лікування пацієнта першим режимом лікування у випадку, якщо спостерігається істотне збільшення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та зменшена кількість або відсутність щонайменше одного маркера мікроРНК, або (м) зміна лікування або припинення лікування пацієнта першим режимом лікування та замість цього лікування пацієнта другим режимом лікування, який включає один або декілька протиракових засобів або варіантів терапії, які не були включені у перший режим лікування, у випадку, якщо спостерігається зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та збільшена кількість або присутність щонайменше одного маркера мікроР НК.
Згідно з десятим аспектом даний винахід відноситься до застосування засобів для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ/2, МОРМ1, ЕРТОК, 51 С22А18,
РИТ7, КАРБМ, 5ІООР, ОУККА, як докладно зазначено вище, і присутності, зокрема, кількості, щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тів- 801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127, тівй-409, тіВв-148р0, як докладно зазначено вище, або набору, що містить зазначені засоби, як докладно зазначено вище, для прогнозування та/або діагностування і. ризику розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, і. наявності раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, і/або іі. прогресування раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РІЗ.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу застосування зазначених засобів і/або зазначеного набору являє собою застосування в одному зі способів, докладно зазначених вище. Зокрема, застосування в способі, який вибраний з групи, що складається з: () способу прогнозування та/або діагностування раку, переважно, РМЗ, РЯ та/або РПЗ, у суб'єкта, причому зазначений спосіб включає (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з
НУАІ2, МОКМІ, ЕРТОКЕК, 5І С22А18, ГОТ7, КАРБМ, 5100Р, ОУРКА, і (5) визначення присутності, зокрема, кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тіВв-127, тіВв-409, тів-14860, у суб'єкта, причому статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність щонайменше однієї мікроРНК служать показником для зазначеного прогнозу та/або діагнозу в зазначеного суб'єкта, (і) способу визначення дози фармацевтичного препарату для впливу на рак або запобігання, або лікування раку в суб'єкта, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ/2, МОРМ1, ЕРТОК, 51 С22А18,
ЕРИТ7, КАРБМ, 5І0ООР, ЮУККЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З7ба, тів-127, тів-409, тіВ-148юр, як докладно зазначено вище, у зразку від суб'єкта, і необов'язкове визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в еталоні для порівняння зі статусом метилювання та/або рівнем експресії щонайменше одного маркера бо метилювання та кількістю щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, і (5) визначення дози фармацевтичного препарату залежно від статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, необов'язково залежно від порівняння статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, і в еталоні або еталонному зразку, (ії) способу підбирання дози фармацевтичного препарату для впливу на рак або запобігання, або лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАГ2, МОКМІ1, ЕРТОК, 51 С22А18,
ЕРИТ7, КАРБМ, 5І0ООР, ЮУККЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З37ба, тів-127, тіВв-409, тів-148р, як докладно зазначено вище, у зразку, (Б) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, (с) вивчення досліджуваного зразка для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (а) підбирання дози фармацевтичного препарату залежно від того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, (ім) способу визначення сприятливого та/"або небажаного впливу речовини на рак або розвиток раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ 2, МОКМІ1, ЕРТОБК, 5І С22А18, БОТ7, КАРБМ, 5100Р, ОМЕКА, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486, як
Зо докладно зазначено вище, у зразку, що представляє інтерес, (Б) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (с) вивчення зразка, що представляє інтерес, для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, причому зразок, що представляє інтерес, піддавали відмінному впливу зазначеної речовини, ніж один або декілька еталонів або еталонних зразків. (м) способу ідентифікації пацієнта, такого, який відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ2,
МОРМІ, КЕРТОК, 5ІС22А18, РОТУ, КАРЗМ, 5100Р, ЮУРК4, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тів- 652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486р, як докладно зазначено вище, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після першого зразка, причому збільшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/(або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та відсутність або зменшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНнК свідчить про відповідь на лікування, (м) способу ідентифікації пацієнта, такого, який не відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ2,
МОаВАМІ, АРТОВ, 5ІС22А18, РОТ7, ВАРБМ, 5100Р, ЮУККА, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік- 652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486р, як докладно зазначено вище, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після першого зразка, причому зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність або збільшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК свідчить про 60 відсутність відповіді на лікування, і
(мі) способу лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (Її) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ/2, МОРМ1, ЕРТОК, 51 С22А18,
ЕРИТ7, КАРБМ, 5І0ООР, ЮУККЯ, як докладно зазначено вище, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З7ба, тів-127, тів-409, тіВв-148р, як докладно зазначено вище, у першому зразку від суб'єкта; (ії) початок лікування зазначеного пацієнта першим режимом лікування, який включає один або декілька протиракових засобів або варіантів терапії, (ії) визначення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше однієї мікроРНК в одному або декількох зразках, послідовно відібраних від зазначеного суб'єкта; (ім) необов'язкове повторення етапів (ії) і (іїї) один або декілька разів; (м) продовження лікування пацієнта першим режимом лікування у випадку, якщо спостерігається істотне збільшення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та зменшена кількість або відсутність щонайменше одного маркера мікроРНК, або (м) зміна лікування або припинення лікування пацієнта першим режимом лікування та замість цього лікування пацієнта другим режимом лікування, який включає один або декілька протиракових засобів або варіантів терапії, які не були включені у перший режим лікування, у випадку, якщо спостерігається зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та збільшена кількість або присутність щонайменше одного маркера мікроР НК.
Згідно з одинадцятим аспектом даний винахід відноситься до пристрою для виявлення раку, зокрема, РМ3У, РЯ та/або РІЗ, який містить: (а) блок для аналізу, що містить () детектуючий агент для визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ2,
МОМ, КРТОБЕ, 5І С22А18, РШТ7, КАРЗМ, 5100Р, ОМРКА, і (ї) детектуючий агент для визначення присутності щонайменше однієї мікроРНК, яка вибрана з групи, що складається з: тік-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127-Зр, тів-409-
Ко) Зр, тів-1486б, у зразку від суб'єкта; і (Б) блок для оцінки, що містить процесор для обробки даних, у який матеріально вбудований алгоритм для здійснення порівняння кількості, визначеної блоком для аналізу, з еталоном й який здатний генерувати файл вихідних даних, що містить діагноз, установлений на підставі зазначеного порівняння.
Згідно з конкретними варіантами реалізації даного винаходу зазначений детектуючий агент являє собою засоби, як докладно зазначено вище.
Конкретні пристрої являють собою такі, які можна застосовувати без конкретних знань спеціалізованого клініциста, наприклад, тест-смужки або електронні пристрої, на які просто необхідно нанести зразок. Результати можуть бути надані у вигляді вихідного сигналу параметричних діагностичних первинних даних, переважно, у вигляді абсолютних або відносних кількостей. Слід розуміти, що ці дані вимагають інтерпретації клініцистом. Однак також передбачені пристрої з експертною системою, в яких вихідний сигнал містить оброблені діагностичні первинні дані, інтерпретація яких не вимагає участі спеціалізованого клініциста. Ще більше переважні пристрої містять аналітичні блоки/пристрої (наприклад, біосенсори, матриці, тверді підкладки, об'єднані з лігандами, які специфічно розпізнають поліпептиди, пристрої для поверхневого плазмонного резонансу, ЯМР-спектрометри, мас-спектрометри і т.д.) або блоки/пристрої для оцінки.
Додаткові аспекти даного винаходу є наступними: 1. Спосіб прогнозування та/або діагностування раку, зокрема, РМЗ, РЯ та/або РПЗ, у суб'єкта, причому зазначений спосіб включає:
Інші варіанти раку також включені в даний аспект? Просто прагну переконатися. а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ/2, МОРМ1, ЕРТОК, 51 С22А18,
ЕИТ7, КАРЗМ, 5100Р, ОМРКА, і р) визначення присутності, переважно, кількості, щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тік-652, тін-801, ті8в-37бс, тів-37ба, тів-127, тів- 409, тів-148Б, у суб'єкта, причому статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність щонайменше однієї мікроРНК служать показником для зазначеного 60 прогнозу та/або діагнозу в зазначеного суб'єкта.
2. Спосіб згідно з аспектом 1, який відрізняється тим, що прогноз і/або діагноз раку включає і. ризик розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, і. наявність раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РІЗ, і/або ії. прогресування, переважно, погіршення або поліпшення, раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або
РПЗ. 3. Спосіб згідно з будь-яким із аспектів 1 або 2, який відрізняється тим, що а) визначають статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше 2, 3, 4, 5, 6 або 7 різних маркерів метилювання, і/або р) визначають присутність щонайменше 2, 3, 4, 5, 6 або 7 різних маркерів мікроРНК. 4. Спосіб згідно з будь-яким із аспектів 1-3, який відрізняється тим, що а) визначають статус метилювання та/або рівень експресії маркера метилювання МОКМІ1,
ЕРТОР і ЕАРБМ, і необов'язково НУАЇ 2, і/або р) визначають присутність маркера мікроРНК тік-652, тін-801, тів-376бс, тів-37ба, тів- 127, тів-409 і тік-1486. 5. Спосіб згідно з будь-яким із аспектів 1-3, який відрізняється тим, що а) визначають статус метилювання та/або рівень експресії маркера метилювання 5І С22А18, РШТ7, 5100Р і ОУРКА, і необов'язково НУАЇ 2, і/або р) визначають присутність маркера мікроРНК тік-652, тін-801, тів-376бс, тів-37ба, тів- 127, тів-409 і тік-1486. 6. Спосіб згідно з будь-яким із аспектів 1-4, який відрізняється тим, що а) визначають статус метилювання та/або рівень експресії маркера метилювання МОКМІ1,
ЕРТОК, 5І.С22А18, ГШТ7, КАРЗМ, 5100Р і ОУККА, і необов'язково НУАЇ 2, і/або р) визначають присутність маркера мікроРНК тік-652, тін-801, тів-376бс, тів-37ба, тів- 127, тів-409 і тік-1486. 7. Спосіб згідно з будь-яким із аспектів 1-7, який відрізняється тим, що визначення статусу метилювання включає визначення метилювання щонайменше одного Сро-сайта в гені НУА1І2,
МОРМІ, КРТОК, 5ІС22А18, РОТУ, КАРЗМ, 5100Р, ЮУЕКЯ4, зокрема, в області промотору, інтрону або екзону зазначених генів. 8. Спосіб згідно з аспектом 7, який відрізняється тим, що щонайменше один Сро-сайт
Зо вибраний з групи, що складається з сд22266967 в 5100Р, с9д21019522 в 5І С22А18, сд09418321 в СУККА4 і сд0279745 в РОТ7, с906418238 в ЕРТОК, с900736299 в МОКМ'І, с901662869 в
МОРЕМ, сд27466532 в КАРЗМ, сд27091787 в НУА1 2. 9. Спосіб згідно з будь-яким із аспектів 1-8, що також включає етап с) порівняння статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та присутності щонайменше одного маркера мікроРНК у зазначеного суб'єкта зі статусом метилювання щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах. 10. Спосіб згідно з аспектом 9, який відрізняється тим, що еталон являє собою граничне значення, еталонне значення або еталонний зразок. 11. Спосіб згідно з аспектом 10, який відрізняється тим, що еталонний зразок вибраний з групи, що складається зі здорового індивідуума, хворого індивідуума або того самого індивідуума, що і досліджуваний індивідуум, у більше ранню або пізню точку часу, або репрезентативного значення для відсутності раку, для наявності раку або для збільшеного або зменшеного ризику розвитку раку. 12. Спосіб згідно з аспектом 10 або 11, який відрізняється тим, що еталонний зразок вибраний з групи, що складається з еталонного зразка, отриманого від здорового індивідуума, еталонного зразка, отриманого від хворого індивідуума, еталонного зразка, отриманого від того самого індивідуума, що і зразок, що представляє інтерес, відібраного у більше ранній або пізній точці часу, й еталонного зразка, репрезентативного для здорового індивідуума або репрезентативного для наявності або відсутності раку або репрезентативного для збільшеного або зменшеного ризику розвитку раку. 13. Спосіб згідно з будь-яким із аспектів 10-12, який відрізняється тим, що еталон являє собою здорового суб'єкта або суб'єкта, який характеризується зменшеним ризиком розвитку раку або статусом метилювання або кількістю мікроРНК, репрезентативним для відсутності раку, причому зменшене метилювання та/або надекспресія щонайменше одного маркера метилювання та присутність або збільшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у порівнянні з еталоном свідчить про їм. ризик розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, м. наявність раку, зокрема, РМ3У, РЯ та/або РПЗ, і/або бо мі. прогресування раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ,
у суб'єкта. 14. Спосіб згідно з будь-яким із аспектів 10-12, який відрізняється тим, що еталон являє собою хворого індивідуума або індивідуума, підданого збільшеному ризику розвитку раку, або значення, репрезентативне для наявності раку, причому аналогічний статус метилювання або експресії щонайменше одного маркера метилювання й аналогічна кількість щонайменше одного маркера мікроРНК свідчить про їм. ризик розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, м. наявність раку, зокрема, РМ3У, РЯ та/або РПЗ, і/або мі. прогресування раку, зокрема, РМ3У, РЯ та/або РПЗ, у суб'єкта. 15. Спосіб згідно з будь-яким із аспектів 10-12, який відрізняється тим, що еталонний зразок отриманий від того самого індивідуума, що і зразок, що представляє інтерес, і був відібраний у більше ранній точці часу, причому (ії) зменшене метилювання та/або надекспресія щонайменше одного маркера метилювання та присутність або збільшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у порівнянні з еталоном свідчить про їм. ризик розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, м. наявність раку, зокрема, РМ3У, РЯ та/або РПЗ, і/або мі. прогресування раку, зокрема, РМ3У, РЯ та/або РПЗ, (ії) збільшене метилювання та/або зменшена експресія щонайменше одного маркера метилювання та відсутність або зменшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у порівнянні з еталоном свідчить про їм. зменшений ризик розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, м. відсутність раку, зокрема, РМ3У, РЯ та/або РПЗ, і/або мі. спадне прогресування раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, й/або (її) аналогічний рівень метилювання й/або експресії щонайменше одного маркера метилювання й аналогічна кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у порівнянні з еталоном свідчить про їм. аналогічний ризик розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ,
Зо м. зупинку прогресування раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, і/або мі. персистенцію раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, у суб'єкта. 16. Спосіб визначення дози фармацевтичного препарату для впливу на рак або запобігання, або лікування раку в суб'єкта, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАГ2, МОВМІ, АРТОВ, 51 С22А18,
ЕРИТ7, ВАРБМ, 5100Р, ОУВКА, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тів-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486, у зразку від суб'єкта, і необов'язково визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в еталоні для порівняння зі статусом метилювання та/або рівнем експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, і (Б) визначення дози фармацевтичного препарату залежно від статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, необов'язково залежно від порівняння статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, і в еталоні або еталонному зразку. 17. Спосіб підбирання дози фармацевтичного препарату для впливу на рак або запобігання, або лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАГ2, МОВМІ, АРТОВ, 5І С22А18,
ЕРИТ7, ВАРБМ, 5100Р, ОУВКА, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тів-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486, у зразку, (Б) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках,
(с) вивчення досліджуваного зразка для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (4) підбирання дози фармацевтичного препарату залежно від того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК у зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках. 18. Спосіб визначення сприятливого та/або небажаного впливу речовини на рак або розвиток раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: (а) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАГ2, МОВМІ, АРТОВ, 51 С22А18,
ЕРИТ7, ВАРБМ, 5100Р, ОУВКА, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тів-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486, у зразку, що представляє інтерес, (Б) визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, і (с) вивчення зразка, що представляє інтерес, для визначення того, чи відрізняється статус метилювання та/або рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількість щонайменше одного маркера мікроРНК, який є присутнім у зазначеному зразку, що представляє інтерес, від рівня в одному або декількох еталонах або еталонних зразках, причому зразок, що представляє інтерес, піддавали відмінному впливу зазначеної речовини, ніж один або декілька еталонів або еталонних зразків. 19. Спосіб ідентифікації пацієнта, такого, який відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ2,
МОРМІ, ЕРТОК, 5І С22А18, БОТ7, КАРЗМ, 5ІООР, СУКА, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-
Зо З7ба, тів-127, тів-409, тів-1485, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після першого зразка, причому збільшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/(або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та відсутність або зменшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК свідчить про відповідь на лікування. 20. Спосіб ідентифікації пацієнта, такого, який не відповідає на лікування раку, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАЇ 2,
МОРМІ, ЕРТОК, 5І С22А18, БОТ7, КАРЗМ, 5ІООР, ОУРКА, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-
З7ба, тів-127, тів-409, тів-14865, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після першого зразка, причому зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та присутність або збільшена кількість щонайменше одного маркера мікроРНК свідчить про відсутність відповіді на лікування. 21. Спосіб лікування раку, причому зазначений спосіб включає наступні етапи: () визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАГ2, МОВМІ, АРТОВ, 51 С22А18,
ЕРИТ7, ВАРБМ, 5100Р, ОУВКА, і кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, який вибраний з групи, що складається з тів-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127, тів-409, тів-1486, у першому зразку від суб'єкта; (ії) початок лікування зазначеного пацієнта першим режимом лікування, який включає один або декілька протиракових засобів або варіантів терапії, (ії) визначення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше однієї мікроРНК в одному або декількох зразках, послідовно відібраних від зазначеного суб'єкта; (ім) необов'язкове повторення етапів (ії) і (ії) один або декілька разів; (м) продовження лікування пацієнта першим режимом лікування у випадку, якщо спостерігається істотне збільшення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/(або більше низький рівень експресії щонайменше одного маркера бо метилювання та зменшена кількість або відсутність щонайменше одного маркера мікроРНК, або бо
(м) зміна лікування або припинення лікування пацієнта першим режимом лікування та замість цього лікування пацієнта другим режимом лікування, який включає один або декілька протиракових засобів або варіантів терапії, які не були включені у перший режим лікування, у випадку, якщо спостерігається зменшений статус метилювання щонайменше одного маркера метилювання та/або збільшений рівень експресії щонайменше одного маркера метилювання та збільшена кількість або присутність щонайменше одного маркера мікроРНК. 22. Спосіб згідно з будь-яким із аспектів 1-21, який відрізняється тим, що зразок, що представляє інтерес, являє собою зразок тканини і/або зразок рідини організму. 23. Спосіб згідно з аспектом 22, який відрізняється тим, що зразок тканини являє собою зразок пухлини і/або зразок рідини організму та вибраний з групи, що складається з крові, плазми, сироватки, сечі, слини, слізної рідини і рідини, отриманої з молочної залози. 24. Засоби для прогнозування та/або діагностування їм. ризику розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, м. наявності раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РІЗ, і/або мі. прогресування раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, причому зазначені засоби включають: а) один або декілька засобів для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, й
Б) один або декілька засобів для виявлення кількості щонайменше одного маркера мікро? НК. 25. Засоби згідно з аспектом 24, які відрізняються тим, що а) один або декілька засобів для виявлення статусу метилювання щонайменше одного маркера метилювання містять щонайменше один полінуклеотид, специфічний до метилювання, й/або
Б) один або декілька засобів для виявлення рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання містять специфічний до мРНК полінуклеотид, зв'язувальну групу, зокрема, яка вибрана з групи, що складається з білка або пептиду, більше конкретно, моноклонального або поліклонального антитіла, й с) один або декілька засобів для виявлення кількості щонайменше одного маркера мікроРНнНК
Зо містять щонайменше один полінуклеотид, специфічний до мікроРНК. 26. Набір, що містить засоби згідно з аспектом 24 або 25. 27. Набір згідно з аспектом 26, який відрізняється тим, що зазначений набір також містить (а) контейнер й/або (5) інформаційний носій, причому інформаційний носій містить інформацію, таку як (ї) інструкції щодо способів виявлення ризику розвитку та/або виявлення присутності та/або моніторингу прогресування раку, (і) інструкції із застосування засобів для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, зокрема, у зразку, більше конкретно, у зразку від індивідуума та/або з набору, (ії) інформацію про якість, таку як інформація щодо номера серії/партії засобів для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК і/або набору, місця виробництва або комплектації, або дати закінчення строку придатності, або дати строку реалізації, інформацію щодо належного зберігання або використання набору, (м) інформацію відносно складу буфера (буферів), розріджувача (розріджувачів), реактиву (реактивів) для виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК і/або засобів виявлення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання та кількості щонайменше одного маркера мікроРНК, (м) інформацію щодо інтерпретації інформації, отриманої при здійсненні вищевказаних способів виявлення та/або моніторингу прогресування раку, (м) попередження щодо можливої помилкової інтерпретації або невірних результатів при застосуванні невідповідних способів і/або невідповідних засобів, і/або (мі) попередження щодо можливої помилкової інтерпретації або невірних результатів при застосуванні невідповідного реактиву (реактивів) та/або буфера (буферів). 28. Застосування засобів згідно з аспектами 24 або 25, або набору згідно з аспектами 26 або 277, для прогнозування та/або діагностування їм. ризику розвитку раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, м. наявності раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РІЗ, і/або бо мі. прогресування раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ.
29. Застосування засобів згідно з аспектами 24 або 25, або набору згідно з аспектами 26 або 27, у способі згідно з будь-яким із аспектів 1-23. 30. Пристрій для виявлення раку, зокрема, РМ3, РЯ та/або РПЗ, який містить: (а) блок для аналізу, що містить () детектуючий агент для визначення статусу метилювання та/або рівня експресії щонайменше одного маркера метилювання, який вибраний з групи, що складається з НУАІ2,
МОМ, КРТОБЕ, 5І С22А18, РШТ7, КАРЗМ, 5100Р, ОМРКА, і (ї) детектуючий агент для визначення присутності щонайменше однієї мікроРНК, яка вибрана з групи, що складається з: тік-652, тів-801, тів-376бс, тів-37ба, тів-127-Зр, тів-409-
Зр, тів-1486б, у зразку від суб'єкта; і (Б) блок для оцінки, що містить процесор для обробки даних, у який матеріально вбудований алгоритм для здійснення порівняння кількості, визначеної блоком для аналізу, з еталоном й який здатний генерувати файл вихідних даних, що містить діагноз, установлений на підставі зазначеного порівняння.
Наступні приклади призначені винятково для ілюстрації даного винаходу. Дані приклади ніяким чином не варто витлумачувати як обмежуючі обсяг даного винаходу.
ПРИКЛАДИ
Популяція дослідження
Дане дослідження було схвалено Етичним комітетом Гейдельбергського університету (Німеччина). Всі пацієнти, що страждають від раку, і здорові контролі відносилися до європеоїдної раси. Всі пацієнти-учасники дослідження та контрольні добровольці давали письмову інформовану згоду на участь у дослідженні. Геномну ДНК виділяли з периферичної суцільної крові із застосуванням набору для виділення ДНК від Оіадеп. Лейкоцити негайно після виділення заморожували в рідкому азоті та зберігали при температурі -80 "С до застосування.
ДНК ї РНК виділяли з лейкоцитів із застосуванням міні-набору АПРгер ОМА/КЕМА/Ргоїеїп від
Оіадеп. Докладна інформація про зразки представлена в таблиці 1. Див. клінічні дані пацієнтів зі спорадичним РМЗ у таблиці 5 і таблиці 6.
Випадки РМЗ й аналогічні контрольні групи
Зразки периферичної крові від 270 пацієнтів зі спадкоємним РМЗ з негативним індексом з
Зо мутацією ВКСА1/2 (перший раунд валідації) відбирали в центрах Німецького консорціуму за спадкоємним раком молочної залози й яєчників у Гейдельберзі та Кельні. Всіх пацієнтів з випадками спадкоємного РМЗ включали в дослідження згідно з критерієм сімейного анамнезу.
Зразки периферичної крові від 350 пацієнтів зі спорадичним РМЗ (189 у другому раунді валідації та 161 у третьому раунді валідації) відбирали у точці часу першого діагнозу РМЗ до початку будь-якого лікування та хірургії РМЗ у клініці Гейдельбергського університету. Клінічні характеристики пацієнтів зі спорадичним РМЗ визначали згідно з керівництвом за визначенням стадій раку Американського об'єднаного комітету з раку (Атегісап Щдоіїпї Соттее оп Сапсег,
АОСС). Зразки периферичної крові від 459 здорових контролів жіночої статі (251 у першому раунді валідації та 189 у другому раунді валідації) відбирали від донорів крові за допомогою
Німецької служби крові Червоного Хреста Бадена-Вюртемберга-Гессена. Зразки периферичної крові від 151 здорових контролів жіночої статі (третій раунд валідації) відбирали в клініці
Гейдельбергського університету. Всі випадки захворювання та контролі в третьому раунді валідації обробляли однаковим способом у паралелі. Лейкоцити виділяли з периферичної крові із застосуванням буфера для лізису червоних кров'яних клітин протягом чотирьох годин після забору крові в клініці Гейдельбергського університету. Всі лейкоцити від пацієнтів і контролів обробляли у паралелі.
Випадки РПЗ й аналогічні контрольні групи
Зразки периферичної крові від 147 пацієнтів зі спорадичним РПЗ (80 пацієнтів чоловічої статі та 67 пацієнтів жіночої статі) відбирали з множини центрів Німеччини. Спеціально вибирали більший відсоток випадків РПЗ на ранній стадії. Зразки периферичної крові від 191 здорових контролів (115 пацієнтів чоловічої статі та 76 пацієнтів жіночої статі) відбирали з крові донорів за допомогою Німецької служби крові Червоного Хреста Бадена-Вюртемберга-Гессена.
Випадки РЯ й аналогічні контрольні групи
Зразки периферичної крові від 84 пацієнтів зі спорадичним РЯ відбирали в клініці
Гейдельбергського університету. Спеціально вибирали більший відсоток випадків РЯ на ранній стадії. Зразки периферичної крові від 148 здорових контролів відбирали в клініці
Гейдельбергського університету.
Приклад 1: Аналіз маркера метилювання
Аналіз метилювання із застосуванням приладу Іпіпішт 27К й аналіз метилювання із бо застосуванням приладу Іпіїпічт 450К
У процесі раунду дослідження 500 нг геномної ДНК від кожного зразка обробляли із застосуванням набору Е2-96 ОМА МеїНуїайоп (7уто Везвєагсі) для бісульфітного перетворення та піддавали повногеномному скринінгу метилювання за допомогою наборів Нитап
МеїПпуїайоп27 ВеайсСпір (Шитіпа) й Іпбїпічт НитапМеїВуїайоп450 ВеаайсСпір (Шитіпа) згідно з рекомендаціями виробника (Зіеетег5 БУ, Спапдуд МУ, ее б, ВаїКкег ОЇ, 5пеп В, Сипаєгзоп КІ.
М/поЇе-депоте депоїуріпуд м/йп Ше взіпдіє-рбазе ехіепвзіоп аззау. Маї Меїйодв 2006;3:31-3. Воїк 5,
Ріївтег 5, МУ Н, єї ам. ОМА теїНуїайоп рацет сНпапдез ироп Іопа-їєпт сийшге апа адіпу ої пПитап тезепспутаї! віготаї сеїІ5. Адіпа Сеї! 2009:9:54-63). Всі зразки проходили контроль якості згідно з інструкціями виробника.
Аналіз метилювання за допомогою Маїді-ТОЕ мас-спектрометрії
Метод МАСОІ-ТОЕ мас-спектрометрії (Зедоепот), описаний Вгейіпо зі співавт. (Вгеййпо І Р,
Уапа А, Кот В, Вигміпкеї В, Втеппег Н. Тобассо-5токКіпа-геіаївй айегепіа! ОМА теїПуїайоп: 27К дівсомегу апа геріїсайоп. Ат У Нит Сепеї 2011;:88:450-7.), використовували в різних раундах верифікації. ДНК перетворювали бісульфітним способом за допомогою набору Е7-96 ОМА
Меїпуїайоп (7уто Кезеагсії) й ампліфікували із застосуванням бісульфіт-специфічних праймерів (фіг. 1). Продукти ПЛР обробляли згідно зі стандартними протоколами бедиепот ЕріТурег
Аз5ау та наносили на 384 5ресігоСНІР за допомогою нанодиспенсера. Чипи аналізували за допомогою системи бедиепот Маб5 Зресіготеїег. Дані збирали за допомогою програмного забезпечення ЗресігоАСОШІРЕ м3.3.1.3 і візуалізували за допомогою програмного забезпечення
МаззАтау ЕріТурег м1.0. 5 95 зразків випадковим чином вибирали для аналізу дуплікації.
Кількісна ПЛР у реальному часі для експресії РНК 100 нг сумарної РНК від кожного зразка транскрибували в кКДНК за допомогою реактивів
ТадмМмапе Кемегзе Тгапзосгіріїоп (Арріїеа Віозузіетв5). Кількісну ПЛР у реальному часі проводили із застосуванням приладу ГГ ідпіСусіег480 (Роспе) у комбінації з аналізами експресії генів ТадМап (Аррієй Віозузіет5) для гена НУАІГ2, МОКМІ, ЕРТОК, 5ІС22А18, РОТУ, КАРЗМ, 5100Р і рукка, і гена домашнього господарства НРКТІ в якості ендогенного контролю. Значення точки перетинання розраховували із застосуванням методу максимуму другої похідної з базового програмного забезпечення ГІ ідпіСусіег 480 (Коспе). Відносну експресію генів для кожного зразка розраховували згідно з методом ДАСІ за допомогою нормування до НРКТІ1. Всі пацієнти і
Зо контролі обробляли у паралелі.
Бісульфіт-специфічні праймери для різних ампліконів
Амплікони Праймери Послідовності 5100Р змістовний аддаадададасадсатасиа тт аААТТТАаИТтАТТ антизмістовний садіааіасдасісасіаїадддадаадасістАТОССТСОТТАССТСТАААССССТ ві С22А1В змістовний аддааадададіддсИаАА! ШСсейдіІн аа А антизмістовний садіааіасдасісасіаїадддачаадасіСсСАСТССАААССТАААСТСАССТСТА рУвка змістовний аддаадададаєі ШІ ААААІТаТТІ І аСАЇ антизмістовний садіааіасдасісасіаїадддадаадасіАДАССССАЇ 11 ІП ТАТТСССАТААТ гИТ7 змістовний аддаададададда ДаСАДаИаася І І Аа І 114АдО антизмістовний садіааіасдасісасіаїадддадаадастіАйСАААССТТААССТОССААААТАСТ
ВРТОВ змістовний адчаададада!ваасі І 1 ПИптАстАсІ ІЗАСА антизмістовний садіааіасдасісасіаїадддадчаадасі ГААТААСССААДААССАААСССТААС
Мем змістовний аддаадададчі ПП асасіАіААсаИаасаААсі І ТАС антизмістовний садіааіасдасісасіаїадддадчаадасіС С ТААССААСААДААДАССТААДАААА
ВАРеМ змістовний аддааадададаА ШІ Ас 11ссіаАдадастпаА антизмістовний садіааіасдасісасіаїадддадаадасті й ААДАССАСТАААТТАСССААССААДА
НУАІ 2 змістовний аддаададаоні ААА ПІ Ас АаасанададасцА антизмістовний садіааіасдасісасіаїадддачаадасіС ТСАТССАТАТТАТААААААССССС
НУА/2- змістовний аддаадададчі ПІ со І САС І ШАСІ 310 антизмістовний садіааіасдасісасіаїадддадаадасіСсСАССТААТССТАААСССАТААССТТ
НУА/2- змістовний адааададаанеї ПАСИ ТП адастшсяя 325 антизмістовний садіааіасдасісасіаїадддачаадасіА ТТАСАСТОССТОССТСОТОСТААС
Статистичний аналіз
Дані, отримані на приладі Шитіпа 27К, обробляли за допомогою програмного забезпечення
Шитіпа Веаазіцадіо з налаштуваннями за замовчуванням. Зонди з детекторним Р-значенням » 0,01 видаляли, і зразки нормували за квантилями. Зв'язок зондів зі статусом випадок захворювання/контроль оцінювали за допомогою моделей бета-регресії з логістичним ланцюгом й асоційованими критеріями Вальда із застосуванням пакета програм К бБеїагед м2.2-3 30.
Критерії відношення подібності використовували для порівняння моделі випадок захворювання/контроль з моделлю з угрупованням для відмінності чипів 3 метою виявити можливі помилкові збіги у зв'язку зі змішуванням в результаті ефектів чипа. Множину іспитових коректувань здійснювали із застосуванням методу Бенджаміні-Хохберга, контролюючого рівень хибнопозитивних результатів на рівні 0,05. Всі аналізи проводили за допомогою статистичного програмного забезпечення К м2.11.1.
Всі статистичні аналізи даних експресії генів проводили за допомогою програмного забезпечення 5РБЗБ5 Зіаїівііс5 17.0. Кореляції оцінювали із застосуванням коефіцієнтів кореляції рангів Спірмена. Регресійні логістичні моделі та непараметричні критерії використовували для порівняння між двома та декількома групами. Результати логістичної регресії коректували з врахуванням можливих ускладнюючих інтерпретацію впливу віку та відмінностей вимірювання партій за допомогою включення в регресійні логістичні моделі додаткових коваріат. Аналіз кривої операційних характеристик приймача (КОС) проводили для оцінки дискримінаційної здатності рівнів метилювання.
Приклад 2: Аналіз маркера мікроРНК
Обробка крові та виділення мікроРНК з плазми
Зразки крові з ЕОТА відбирали від індивідуумів з випадками захворювання та контролів й обробляли для одержання плазми протягом 2 годин після збору. Щоб уникнути контамінації епітеліальними клітинами від вихідної пункції шкіри першу пробірку з кров'ю, відібраною у процесі флеботомії, не обробляли для одержання плазми. Кров центрифугували при 13004 протягом 20 хвилин при температурі 10 "С. Супернатант (плазму) переносили у пробірки для мікроцентрифугування з наступним другим етапом високошвидкісного центрифугування при 15500 д протягом 10 хвилин при температурі 10 "С для видалення клітинного дебриса та фрагментів. Плазму розділяли на аліквоти, поміщали у кріовіали, швидко заморожували в рідкому азоті та зберігали при температурі -80 "С до застосування. Сумарну РНК (включаючи мікроРНК) екстрагували з 400 мкл плазми. Денатурацію та поділ фаз проводили із застосуванням реактиву Ттгі2оЇ! 5 (Іпмігодеп, Німеччина) згідно з протоколом виробника з незначними змінами: додавали 10 фемтомоль суміші тік-39/тівн-238 С. еІеєдап5. Водну фазу переносили в іншу пробірку, додавали 1,5 об'єму абсолютного етанолу та суміш наносили на
Зо колонки міні-набору тікМеазу (Оіадеп, Німеччина). Після промивання мікроРНК елюювали в 30 мкл води, що не містить РНКазу.
Валідація вибраних маркерів-кандидатів
Реакції зворотної транскрипції (37) проводили із застосуванням набору ТадМап тікМА
Кемегзе Тгапзсгірііоп (Арріїєа Віозуєтетв5, Німеччина) і специфічних до мікроРНК праймерів для
ЗТ для тів-652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409 ї тік-14856 (Арріїєйд Віозувзієтв,
Німеччина). Симплексні (первинний рак молочної залози) або мультиплексні (метастатичний рак молочної залози) реакції проводили в об'ємі 7,5 мкл або 15 мкл, відповідно. Кожна реакція містила 1х буфер для ЗТ, 1 мМ днНтФ, 0,3х праймери для ЗТ, специфічні до мікроРНК, 0,25 Од. інгібітора РНКази, 3,3 Од. зворотної транскриптази МийНізсгіре та фіксований об'єм матриці мікроРНК (2 або 1 мкл, відповідно). Для зразків тканини доброякісного та злоякісного раку молочної залози реакції проводили в 15 мкл, і реакції містили наступні компоненти: їх буфер для ЗТ, 1 мМ дНТФ, 0,бх праймера для ЗТ, специфічні до мікроРНК і КМИЄВ, 0,25 Од. інгібітора
РНКази, 3,3 Од. зворотної транскриптази МийНізсгіре та 5 нг РНК. Засліплення зразків і рандомізоване одночасне дослідження випадків захворювання та контролів на реакційних планшетах служило для мінімізації суб'єктивізму й особливостей партії у процесі валідації. ЗТ проводили на циклізаторі для ПЛР 5-5ТОВМ а52 (АІрпатеїйгіх, Німеччина) при наступних умовах: 16 "С протягом 30 хв., 42 "С протягом ЗО хв. і 85 "С протягом 5 хв. з наступним витримуванням при температурі 4 76.
Реакції ПЛР у реальному часі методом ТадМап проводили у трьох повторах у реакціях зменшеного масштабу, що містять 2,5 мкл 2х універсальної майстер-мікс для ПЛР ТадМап без амперази МО (Арріїеа Віозує(етв, Німеччина), 0,25 мкл 20х суміші праймера, специфічного до мікроРНК/зонда (Арріїеєй Віозузіет5, Німеччина) і 2,25 мкл продукту зворотної транскрипції (розведеного в співвідношенні 1:14). ПЛР у реальному часі проводили на термоциклері
ЦПопСусіег 480 (Коспе, Німеччина) при наступних умовах: 95 "С протягом 10 хв., потім 50 циклів при температурі 95 С протягом 15 с, 60 "С протягом 30 с і 72 7С протягом 30 с з наступним витримуванням при температурі 4 76.
Первинні дані валідаційних досліджень у плазмі крові нормували до доданої сеІ-тіВ-39, як описано у публікації Кгоп еї аї!. (Кгоп ЕМ, РагКкіп КК, Міїспеї! Р5, Теулагі М. Апаїувів ої сігоцацйіпд тісто ВМА ріотаїКег!з іп ріазта апа зегит ивіпуд доапійайме гемегзе ігапвсегіріоп-РСВА (д9АТ-РСВ). бо Меїтоаз 2010;50:298-301). Первинні значення СІ від зразків тканини молочної залози нормували до ЕМИЄВ, як описано у публікації Озег Виїейп Ж2: АВІ РЕІЗМ 7700 Зедшиепсе Оеїесіюп бЗувзіет (Арріїєй Віозувівтв).
Порівняння випадків раку та контролів
Для оцінки потенціалу виявлення раку молочної залози і раку передміхурової залози будували криві операційних характеристик приймача (КОС) та розраховували площі під кривою (агєаз ипдег (Ше сигме5, АОС). На основі кривих КОС з 9595 довірчими інтервалами обчислювали найменші специфічності при заздалегідь визначених чутливостях (від 75 95 до 90 95) для ітік-652, тів-801, тів-376бс, тів-37бвба, тів-127, тіВв-409 і тік-148р. На основі кривих
ВОС обчислювали найменші специфічності при заздалегідь визначених чутливостях (від 75 95 до 90 95)) для найбільше інформативних і найменше надлишкових моделей мікроРНК в якості нижньої границі 95 95 довірчих інтервалів (Тот ЕРам/сей (2006) "Ап іпігодисііоп о КОС апаїувів".
Райет НРесоодпійоп І еЦег5 27, 861-874. БОЇ: 10.1016/).раїгес.2005.10.010; ивіпа А раскаде РВОС м1.3.2).
Діагностичний потенціал ітік-652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409 і тік-1485 у плазмі
Аналіз кривих КОС проводили для оцінки діагностичного потенціалу тік-652, тів-801, тів-
З376с, тів-37ба, тіВв-127, тів-409 і тік-1485 для виявлення раку молочної залози і раку передміхурової залози у плазмі крові. Дискримінаційна здатність між зразками пухлини і контролем зображується площами під кривою (АОС).
За допомогою дослідження різних комбінацій тік-1480, тів-37бс, тін-409-Зр і тік-801 автори даного винаходу виявили, що об'єднана крива КОС з усіма сімома тік-652, тів-801, тівВ-376бс, тів-37ба, тів-127, тів-409 і тік-148р дозволила одержати найбільше інформативну та найменше надлишкову панель мікроРНК, АС якої становила 0,89.
Приклад 3: Комбінація метилювання та маркера мікроРНК
Підготовка зразків
Зразки периферичної крові від 161 пацієнтів зі спорадичним РМЗ (третій раунд валідації) відбирали у точці часу першого діагнозу РМЗ до початку будь-якого лікування та хірургії РМЗ у клініці Гейдельбергського університету. Клінічні характеристики пацієнтів зі спорадичним РМЗ визначали згідно з керівництвом за визначенням стадій раку Американського об'єднаного
Зо комітету з раку (АЧСС). Зразки периферичної крові від 151 здорових контролів жіночої статі (третій раунд валідації) відбирали в клініці Гейдельбергського університету. Всі випадки захворювання та контролі в третьому раунді валідації обробляли однаковим способом у паралелі. ДНК з суцільної крові та мікроРНК з плазми екстрагували з кожного зразка.
Визначення рівня метилювання ДНК і рівня мікроРНК. Рівні метилювання ДНК визначали методом МАСОІ-ТОЕ мас-спектрометрії (Зедоепот), як описано у прикладі 1. Рівні мікроРНК у плазмі визначали методом ПЛР у реальному часі, як описано у прикладі 2.
Статистичний аналіз
Всі статистичні аналізи даних експресії генів проводили за допомогою програмного забезпечення 5РБЗБ5 Зіацізііс5 17.0. Результати для наборів маркерів (комбінація метилювання
ДНК ії маркерів мікроРНК) одержували із застосуванням алгоритму логістичної регресії.
Регресійні логістичні моделі використовували для та непараметричні критерії використовували для порівняння між двома та декількома групами. Результати логістичної регресії коректували з урахуванням можливих ускладнюючих інтерпретацію впливу віку та відмінностей вимірювання партій за допомогою включення в регресійні логістичні моделі додаткових коваріат. Аналіз кривої операційних характеристик приймача (КОС) проводили для оцінки дискримінаційної здатності рівнів метилювання.
ВЕБ РОСЛО СОТ Е
«ій» ГВИДдельСериськиЙ УнузкоснУе менІ Кулракти та Каре «1205 ПАНЕЛЬ ВНУИЧАРКЕРМВ ДЛЯ БИЗВЛЕННЯ БАКУ «130 УВО РК «35» КИ ЗБК У «Ме КК ЗУ, «В» БУ «ВО Бебі верес З «вів і «вії «вій ДМК ав ВЕННЄ ЗареВХ «Не 3 зникне созсооцичов З КЗ «в а «Ка» ХВ «3» Бета зацих «вх «Ех й «ка РЕ ВОМ
ЗО дама комочсвоваи сов За «Ві» гхя «її» хі ч«їйе Мою ази «их є васвиаоВоО завис у її
«Ме 5 «іі 53
Кене і5рощ и. ДН «ше РМ ООН нрав сх. «Ех
ОЦЕ ВММ СЕС М ж сзухтк х
АК З
«їз 5 «ків ДЕК
Ж Ку руч Ж Я ее Ему ВЕДИ «я
ДусВиВеНх зако м ії и НН «ім 8 ск ВЕ ри ДМЕ ка Мо кави
ДЕН «ОЦЕ На а ке хро «і» ДНК «айв Немпи хайних я В кеикц гуни етики. Жекокикеєу жиє лавку ке ху пеЗцеесюю ссоаценно 2
ШК жк СТУ ноз КЗ ОО
СУК дю а рів ка Мегле вар
НЕ ех класі смути ких беру Кі тут куда сноВ засос коа вм ех «нів ЖЕ каш» НЕ
В ик бик ж є сту, «ЖЕ ВВ Не ах «НН. ЩО деко Софа ааююх єм я «ЯЩ3ї ка «вій ЩДИК «а МЕШВЕ ВІТЬ «М ТЕ впадин весс восвеєнц ви а «кіз їЕ «ій» МНК «й» веУуВе аа
МевсвеВ ВеВоааеСьМ Я й «кі» 15 «йіїз 4 «її МОНУ ЗВО снне 15
Вис Вас ж її «ші ВенНКО ЗБЕ «ніж 14
Киева чеки уко пи ку гоВувучи нак засво кий дчеч вмч вих пив в пес сВ сно с осасев сова зеавцвос жено ва денно Ви уривку оКучеукии куки ик учи учи окт Кок. УК ни КЕ знезсоваее везЗозИа ве засос ссвасооцев зе хко 150 саздвес мисовово посвосв осад аооосвесов сс ОБО ких мітки и худу кове хе ев Вуких фесту оче Кох оф тих ре
СОСКІВ кеВ СЕС МОСеВОЯІ ОО ВОК Ме ку УК Уха Ву захочу ее Куж смухачух ВЕУ ри сучки ЕЕ засос пезоресвеа зссхенеоє знє сао сис ЗО
ОКНсХН СТВ ЕВ СТ ЕюНоХ МКС ОО Є КЕН оком и, го их Ки коми ик чих уче вих Квт уки ке жу хг дике сзєвозоо мона везосмово мене аесмаНОю 0 ХО яву свв тут «КІ киив КЕ ех щи 2. ик Ц спини ов: своє совно Мова сецевеа севссвеа ЗО севсааосві свое ах совмсех кохав коса я троса Заг БОВеє Моє соєва сгоквунавняє ово евояя ВІК симончо воєвода со осо овововов маски Бай пише коса ери ав масу спц ен песо яйВ
ЕКОН СКК ОКО ККУ В винен ВВЕ ке
Мини касової свое десневе саке самє М
ТЕЦеСВеСНЄ ВІДОМОЮ ВОЮ КОНеСКуєнх ее ЗМ Ксеня я капс гово воакює етос МОКнжв у песо весен зве
МОУ сао Ко кос є МСЕ НОВ ее ОО
То юЄ паса ВОНО Ви Спок ен Мак 0 ЗОБО
Моевсссвс сассавоє ВиЗсВсесоє зола Мезсвезас ково ОБУ ссосазвоїє веде зраз сх вссеоєя Ве ЕН сетедесоєи сені ем нив аску Месвесеена севевеє ЗІБ сне ОБОВ Ком нон сон ов ОЗ стоаоесВоє савоеосв есе окон сан нев ОСБВЕ
СЕВЕССКЇ ЗОСеОКось КО ЦеНї сецовєснас ворот а ОСЗБННІ сон км восвина Бнозсооово сома сонна ЗБОЮ севосеок вона ско смена ин нрав ІБ
Де ОееКВЕ зо цк сеча сек винною сссвеско 152о
ТСН ВУ шСТСВКУ се Бас Носов сн ОКО
ВеБОсЕано Ве стволом; се пе кн 1 всем свосероєта мемаочОо зем сесмоу сеесиє 0 ЗВАО ссснієнов ЗоЗоВацово зоБсвосюо озсоаоува зов іаеене ІВ
КС КАН Ма ооо Мона сасвманнає 0 188 вес Квя сно ВО Кене «вів 15 «аі ІЗ «КІ» Нентну ване цх «ни їх земевнооза відоооне Євацеє вомм с сваснвюов оса ОО салувнесї вассоувов встовесююа доза зососасюе ссаєвннє ОБО мозосе подоаасеє позов сероєісю боФфоонає тю 0
ВОссюрмє ефаоєккя: сера вагою сення коссмнуЄ ОО песню зедооессов зас кас нн ес аа ве каси ОО косою окваснево; косевесє зностосюєве гескаевєтє авоосюєьяє БО я ча епохи сапавосоє своєю поцмємюн вч ж жихникнм зони пон сосен соні еююу ке ОКО
КОКО Во Козин сечо Вс ле схе ооо 0 БО звикає соч е СВО сеЕЕ оце МОБ своих КИ кавососесв зевоюеюса Мао со сома поко ОВО сеасасвоає куму есе песеовєене спос барва ОСНО ес аоє ване Ме нси заененесвмес ооо ОО
ВЕН сс ко ВИ ВО О СВО Зоя я
ТубсвВеєі буденно прокеніюв снсхнояенакоух он весен ЗОВ
ВсаеНох вооометю суден скооюаомає чес ссво ин ОЗОН «авсмоокоу песанннно зиску оп оесос св нмос сонна 0 1 кесеі ссбовеасє пезізсісва зсвооєвова мом сс ОЗ зжщосачне вострюю сестра пввовов осо сссс десвсс ОКО поосмекас смомеев: зсбастеєва соус зісооє досноаоєа 0 ЗО пастви ссе осо со еоє сеосавіас своє оон 0 ЕЗКО пресасо доскс себе села сем ксросеюа 0 КО
Кфсостетн: Несе Мссонса ооБопескМ собу наоснв ЕК
Михавсм осасниоа масам сао є весен пови 5 меоцосем ховає безе сага ню зеооцююєе ев ве вино: собом сексом сеспесювос зсопеаєсв ооо ЗБ
ВЕНОЦЕЯНЄ КЕКЕУОЄВОМХ ЗКеесня Вес знроуекса зосееноє 0350 каціесме сна ссассово піс соус ВО ОСНО ке сема пра еаке свамозчеє есе равос ема ТЗ
Ве Мосс вен змен се оса 0 пово кадет сою внкв ос ск сє саме товссв местосмне 0 ЗО мою сон ема кос сен кн нова 0 БОЮ
Енн ВОМС ВекКскВОО Осо еВ Ве ден ацо Іва оаск сон ссбомеює сосни чно СЯ
ТВЕН ВИК сю се, сн ван саван Моне 0 хай
ОБ КЗ
«Ве Ії «ЕЕ УЗ «Же. Натча ваузіанех «НМ В
ЕК АНІ МБ ОР по у Бгто ТВ з Ве Св Вів беня ЯН Бе АВ
З 2 т їх
Уві Бек їка Ав Ме В бе бух бю Тк Аа Без Бгто ре БУ Тех «о ЖХ КЕ
КНУ бачу М Бена ЩІ УМ Віз ТР; ба арго ТУ т Яке Сує МУ 0 ах
Кто вен іже і Бур бе дер ем вал А ве АБрозжі 5 А о ї ща ех Рі вва м Му РКО В Ази ші дао Не г Це БТ туге
НЕ У В У БНО Сі Ав У бек по Ав НЕ Ак мух мех
ЗО їі що ів св Ук Аа чі Мо Мі Тук Не блх ТВе сНе Сі бек лів СНУ і5 ХО 155
Бе лів У це Бо тр о Вер р Ага вро ее Тео Уві АГ АЖ
НЕ 135 Нео
ПТремп Ах ж вав Ме Туг АгО ДР ем бек й се Бе мо дід зе Аг НЕ МБ Аа То РО ре йо ви Пе У Бех СНИ АН ів
Тук Ве Сію Бе Абв дів єв ЄМ ме Ме іх со Твгіжи ав
Туг УМ у ІВ УВІ А КО Ага Ні і тр МУ ВВ Тег іо Бе
Без ам Сув тує Аа МБ дк Туг Уві Сі дал в СМ баг Туг Ту чашу х км Ви ко се їх фр фе шт фот КОЖ й щі: МЕЖ СТЕК
У ра У то ди жа о УВІ АБ А ол во МА Ба АТ ТК пе чини ек дж Й ху ех а 230 а а
Бе о а сн мес ок Аа ве ре но бе МЕ Тех Ба оц СМ «Ж ий. КІ КК
МЯй Ко «НЕ
ЕХ ІЗ С, С, т: сш й: «гола Мох а Кох фам. ко КК
Тк еви А бек Бег Ага Кн СБК Ар жав Вів Уві Ве Ре Акщ ма
БО ЕЕ й
ЩА ів АВ сен Ак М АН Ат Кг Не Ні ЗБ дам Не Аа сеу
РО Ві Буг ба! рве Ве Ак Рех Ме ТУР ща ака ака Б Те у і век и МО лю сем пе век ве Пе МУ и ек я дів цем ож аа На СНУ УВЕ пе Бе по і вав Ві В ТУ Тве ТВ
Твен тве бух и Тук Сам и бар Тук бе Те вгу Бем на ЗАВ ха 385 зо
Ба Ту» МЕН УН ланя Уа Кек Тв АБ Те Се тує Суб ек ве ЕВ
В ЗВ ЗВО
АК РЕ У ФО те и ха вед Бра ма У ОН Я ев ее Та АВ
Ко ЗІй я варів Аа Мі ем с Те Ні бе Аго бусів Су Тезе СУ гу й як ста сок сстпяжє УМ уче. г КЗ зок КВК Ох тд КЗ,»
То Бек ту (мм бі Суб Ка те Ар м Ав СНИ Аве вів ЄВУ У я ча діз Зег си дів Про СПУ Зак ніх бе Те баг во бен АБ Сем із в ен в не ТВ Нв я ЕВ ча 3 сам 17 «а» Бинт вон «Я» у
Меф Авкор Аза МУ бро Ру Тех Те Ма ТвР бею Абе ех УМ ке Ав 1 З 16 15 з БО ТВ АЮ Ме св оо Був КО ТИР Ав Бко Бе Пе РР ОТВе жо 5 З
ЩЖ в виз Бр Зі і Адорно Уві Кто Те ів аз Се Су 35 БІ 45
КО АгО БО Вуж УВІ ЕКО бе й ін ЗМ ДІВ МНЕ А УВІ У ДОВ
ОК Бго ван СНО іх Вве ув Аса са Ази Пе обме Пе Бе Те Ага
Б як худ хз Й що о ях що
Аа АС ЬВО У Би Те Кто Ага Ре йо б Ав СУ дпа ет Уві
Ес 5 5
ЕЕ сну Се А бує «5 бе Уа Бе ха Тер овів б Ага іде МК їха КИМ уз Ак му) 35; б тує в дер Те Сі а бег Ма СцУ іо Вів уві Пе Ар Те БЮ Ав ТР дих бго УТРО У Кео лмня 158 АЖ ЕЕ
Та Ка вяо бує яв а: Тук г Ка ем Бер вно ів Мем УВІ АВ ще їх ї55 їБ5 ек лу Ме Бе бе Тер ба Вр ації бу Б 3 Б СТЕ ЖЕВ 5НЗ сел ек Ехо КВ г Как що и дж МІЖ девізи іх іа З хі о їн овес Рене дів в ОБ я не Мебіо СВЕТР зво Аго ще 185 ЇЙ
Тур Уве кує Аа Ма ви ре ДК НІ Бо Тр ме Єна Тугівц вве і95 Б 05 с Де се Же де ше ще ог КО сту ун Фк Кв он КЕ
РО АСВ КУ ТУ Аа НІ бло Тук Уа НИ дал ПЕОМ ет ТУЄ ТЕ
З і щи
СНУ Ага Су ро о УВО МВ АВ КО без Джо шій це Дів Те хр хи вт Жх Б ча КН 235 а мео Тв А СМ Щек Тк Ві ео бівх Був бек ві Ту бе йо и
ТВт єм АН Бек Ат Мі ту дих дв бе МВВ ее ББе Аво ма с си дів ні вт Уві ді де тн Ме Ні: ді й Не Дів 1е ка КЕ а из Маі Тук май Віче Ту дру бтю ТК Тук ев: ех аку ем Те Ку
Мем еВ МеЕ Аа и Ме ее Те Па НУ СО; Баба ан іки
Кв 315 как З
Бе дів Ав У ма: Тебе Те Бе Кер вв є Тук Те твК Бех
ТВвЕМе Те був І Туга Бр Ааа Тука ТВЕ ККУ ве бе У фкеху ЗР МН ВИ дат БЕ ек ТО АН Те Бе Те кв бек вих АВ жо ЗБЕ
Тек БЕ дев ВВ кб: БЕ ТК ан бек БІВ кв ве ММ РО КУВЕ КВ;
Вів ве му дів ко сив ко ато МеВ ВІ Ж сх жо Бек ОА
Яц5 Се Бе дер еле Нів'іяи м ТКУ Ні рве аг ув КІ Су Тек ви МУ ча 85 Я
Тв оваю Бе ЦЕ С Су На РО аа ВН ВК сій МВ Абе НУ Ту а що з45 ж Бе бін АБ В із СУ Бек в ін ТК Ян ж м Ва 5 дій Ав у дід Яма Ток М ТВ я «їх ІВ «аз ЛЕВ чі» НЕ «Я МНеше харне «яні 38 акИсСЄ дав с є есост є сего сс КОС 150 совно осо нем о досві со смеосоа ев 0 йо спасає сесонас есе весстєсав ух оюнавс меня кВ осв сет в ововнансю всеєоєюєВ сосен ее ОС цеезаваєне венами пехкооюез пссКоок освоює ее ЗВО кідесековВ соку нн ке аква ВН Я
ВЗ ЕВ оВеНЯ ТК йо ВИС КИНЕ ОВС ОВС КТИ ре дон: своссєвва Мозесйсю зерно є кемновес аоев ОО ває ково о Меса со деВомОсвОк Вевосеєс веонаєкв 0 ВОЮ сокВеЯНає совно сесівовенує дес Мену сс ня БНО
ООН ее века каостоєве косвокен зернові) песен УВО асжоссв рен ик мо еко вос пимиа ОВЧО
ІНОЗ НеВх кону ен св Се оОмє «ос теКнІВ семою весно ЗО дсвесовюву вукНеноє сере пронос пен сосоеєює Зоо
ВЕКТОНК Є сбоівенвоє редесовев согідєєєВ ссоююєвоє васбаееева 0 ЗОВ
Мосс сонне вессмас се овос сом оз авоссвоюва ЗБ кесВнноє КОБЮ вив пефесовееи сон окон 10 севасточн своусоубеєв сенс зосссвее етос зесюаною БІО есновоце ис ссо зоснеоросі водсесссє Мена восвеєвнх 39 кн нстє овоч ес со мес сон песен ОО зоснакенесяна семан оса єсне вовосвацає сессопневос аесссаеое СК
ТОСеЦЕЄ сеосабссвє давен зовозаоєє свховдває ноднемоє 0 БНЮ ча оодеовеосв закис оса сем оеазацівев ІБ тзасхнрнеюуа соксакцюу оомк мов свевоаце сно КвоНа Тео воза МОсЄ воскова зо оосенє вемнсоссо зцоссеае поса БНО шесрсеви ведцкюєвє ев вов соссоссесва собою вссвескею ЗІ секс ен вн сонне Вежа сос осо вер 15 зазавесе сера зом семовесксє смокче: 1550 зиск неново Во о ев с ек со сяссвищНю ОО саван емо ва внев осмецава цесне миуєюЕ ОН несасво поз мевасто: земна ловсоаоювее бос Ж івцнсвово сесмжочеє везе спроснрне сома ааенє ОСНО ско нове свхосоє моно сеовен мое песен СО сезноваає сіре вона дає обов сенсовене асеоюює жее зазооееов: водсоеєа посзсоовся оз аосанея свое ссвсєсвоює жов хенсає кове МЕ цє ІОН косо чина ий «свое КОКО Ов нн ев НН СНІ ОСНО
КВ пессженюєв оекесвсвок своє осс сосні сосен: ОН саовачсаса зсосносв дон веен Зевс сс Мобовесва зобов Ва
Ве еО ен о віоесянве Вас сесЕ квоіово ос ОС БВ
Ходсицассо спосо зоосбммх посікееВх сне семою ОБО хе С НН плов мим се ОКУ ен уя Отеве вн свою обсвсмаа сспсокс ссовосве ЗК
МЕОВК НЕЮ СОСОК ее КЕН кеове и сонне ЯН
СОЦ НИВИ Мектвнов зооаемсв совно смс 0 ЖОВ
ННЯ вен ВОСНСіВ поховав соусі мене Вх ОСНО
Ву комее кесоухеєє Мокеом сему с ом ЗОМ сиродеваа есе вовна ска сок Не ОН
ЕЕ ТЯ дна піижнНнме Нео с іа: меми нев пани зазсссв ооссосвон квас во дено ссвннОВсє ЗІ
ВО сао позов схе ос певне 0 ЗАН сЕВННЯ семонюєвоє пос онко сода асскнаєє МКК ссЕсТааОО Сен ско ВиеВЕ дасОвсеоєє осмос ОосеенІ ОСІБ якриониа: вого сосвосєсє Меесвсссв осовоєове сосбєсюею СОЮ сабоовсвою сесосвовех сесісасвос свсасяесес свеауєнею ссеєоса МО сенхуєвевс сековеє св сеовецюсв сеслсрстов сесевосто: своем ЗВ сасвсревке Гасттоюи сабдбессв Мосебкню касова ссовосвє МНЮ ссовоневи с Вас вс кесваОснок Ме ює санок е тека 0 ЗЕВО сасновос с еосвс доме сус авососво ее СЯ песен соссвОосе ок безос с ново с СН сом сові; сезонно секс Мне мене ОЗ пек ВОкВа нм саосва ЗЕМ пенні засн сопе сен собослОосе сонне Бе акме кума ссево сецоМЕсоЄ Сех СоЗмееК МСС о
КОС є Земне О Зассвме тео ев сао за еа зо
КСЕНЯ песо сема вековецена косо СН ЖАНА
КОКНК МНЕ Камо седана асвессеєєв сссвоваоої гасу ЗО
ДЦ Ох ПО ЕЕ МКК ОС НК СВНКО ЕЕ ідо ев кова се а веоасасє зовоєеах завеве ав СКУ
ТОМ ОЧЕК ЦО: «Бан сек кни Во оев Сомова и БО весен ниє ав вес соєва сом оює вісвежН СЮ але нсеє есе Вехвавко асвоєсацє зкасавесся вааасоскЕ НІ соневацне Всю сао ее ацн земаомиає кофе ТО песасооєся СаО ВСУ НИОУ вимашеновсве деруни МІСТОК 4 вис вав с сасазвсм ном зва сс НО ОК зем савоавоває сецемвсосв осо ооа коса осоаоваса 005 пове Мишомас скнесваєє Васоцюнесее поеми сосесвює ОВО веіовосее своба я: вуовекнасв кенно ев ссоекеас ває ОВО кермо сс повно асо век ОСББ ее ее СО ес нОсекооВоє москва сема ее Новое ОС «МЕНЕ оон В засо Нео екв инмі ек інааа ТОБ доозазсава сожоасвоє дес осв кс мам скевІ енню 0 БОЖО кеВ ВК Кефм М Н СЕК ОККО КК НЕ певне 0 есе свое сю сказом гос осн ОС
ЗВЕВЕОЦНВ СВОЄ канаву сесцєвенн: сеаенсюс оасацевеех 0 М касою ЗБКоєт внхоаоннну висно оно зе ОС
ВОЦЕКОЄВОЄ весвкеВеє зов ср повені 1530
МЕКОВЕВКх ВОКа ОН вес кекси сет квоє сок ОН севмовое Знос: десант востевосею 1 О
ВЕНСЕВЕКЕ ССС ОКО ее ма евеню аск СВОЮ
КЕКС Ну ЗОНІ ВЗ Моне сенс БЕ меси сопіосеН еуваневов сенс поса соска Ї9БО пзавевко оман о мн созоосснв ос цена 0 ВО чек еще месекнеКО вом масове сна ВО
ООН ВН Ве ВОоКСО Зевеоєм Коса є зеБісзоо ден ОАЕ запфджово соєве; зеоводцаає сосною: сени особою ОЗ кивок пса СОБІМОСЮЮ ВОЗКНнон сей се же щен сода СВО сеН сени оно Нєяає Є шВОосе ВОНО НО сен СПОВНЕНІ Ко сок НЕ
Фк нос сови восогосо смесвовос сао сє сскОююв ОБО «КВК ВОВК век Є СВОЯ Ка ТОК КИСВКеН Ве ОВ еф: всем освоює асо ов аебовостве сосною 0 еН вебомавее побооенасв совосасвваа сага сосен аца осн ОС оре СВасеОснє ССЕСВВОСВО нОбеусес сна м асани ЯК посі везе ас ааосснв сно овов соя ХВ
МеВ Вико БОсвнонесВ еанаеав свв кіс 0 УВК «сен зво се со оно вомсавоос мене саме 0ОСЗНОЮ осісзавав нев ааеє зсвеВеВоси ВосснексВе Зесхне ка своею ОН
ЕЕНЗСЕВЕЕННЯ Я ЗНЗ КНВ ННЯ кН ково свв ооо 0 ЗАВ посво св дово своим зововооее Мине сом жеок ОСНЮ коевовіє спобєвоює дінинче пвецеюнвоє Меоно зоб 0 Зо
ВЕКССКНЕСННСВ БНО сови ово веіє ен она СЯ УБО
Мис ен земні ниви есе СА
ОМ сенс своею оон Вк паю 0 еВ песо сосен с ис ооо вові соска 0 ЗОЗ тоМеносе сесіоеоєс Зріз сесє кекс с мс с свою 0 ЗУ свеннєкмі зона семан сесвосОєеє ес помО сосесекає ОС УВЙ аастососа Мод поса сен сома кесенюєюня ОМЕ
Ескасту посасвооюї пиесввоє свое сосовореє фе ЗК поз есвессвма сен оєв ов аеКч ее ва КЕКВ за часов сао зсемацне вени оно сна ОНОЩО дансвава задо асова сон цас зеомноов вочєоа соня ОО ово кн Вами во насоси оо веса досНЕеваа ОСЗеВО мує сіна есВестє водасвнсє есе возсесєв ОО оКЕКнУно сВсесс сова са осо ссовісковО 0 Ма скечесево смів с ово оосса є осв аоксєсюе МЕ корок аа Кок сВ ЗО Ока Вес оае пеню сешина ОНИ шен ововнювон сно сс мого Вобовєаа зообовкех Б дасстює сен н состав сао ансна осовни ЯБО
Занодесвое восоеюм сепоаоев деасссоєн нхесни оннанєї чаВО оБосЗОс3 оесбним ососаєціє ооо ос оюс, асіоєіева 0 У
КЕНЗЕ ЦЕН СемУЄсевоВ прес внуОе шосе Оєв а Вовомастое ен ОВ варезскано певсаоаи похо осо сееошксвеоо жав СЯ
ВМ ИКих ума сов сон сво екон сосНЕ
ОО НЕЄ СОМ под совох песо сен ема ОО тевоВеов Комо поява сс севосівоза зн МН
СОВОК сукна зоееас ев совоєсвоеєв осві 0 З чес сазан вес соми она с 0 БІВ
Се ОК зно мосємооєня понос іно 0 БО си оо мс ев НН ну ОБОВ звивин мана похо вона: иа союасюв ча каже сво вата в сіє оса Весна 0 тин сбаоюецюВе дскоцєтва Кен: кеВ замах ОБО зсассві поєсвовс І віісвансв ссіваоів овес вом КИ вовноєов дез ововс омесеє дк ссцокє ссспосює Мк ОСББ носнни: снисісвас сою вода свое немае 0 Б повевео поваєоо сссозееео зо мцуае оон ково ОС
МОХ кон Ба сова судо ние саваа ВО кричала осв сссвоосоєоа дак рос ооо 0 ВО вом св скоса Ве ОО кс ососееНЕ ОВК см нин МеВ х вою вес нина сов ОМ дере соенувоссею сени нку Санні зсокоеОє есе 0 НКЮ ссаовессерс сне має вас винен Веаєвсве ОО БОБО зсвовавівє мецесове дозі ев Мессі веВс нє БІО ісасвевє иснсосає сонне зе певен БІВ оішсуевске свуаесомося Моссвооє восесзесс свосесовес весчюоє 0 БІ
КЕКВ ККСтскесВ слюаовени зако вес сс ки кщеКОсю 0 ВІ
ВОСЕНМНЦ ст сенс всво сеВесВееєх педеоссвєе зем еосов вес 0 ЗО
КОДЕК ХИМЕАКЯХ сис вен кеекамнаоє везхнОсаВк я ща «ій» ЗВ «і» мето ване «ММ» я
Зиивеє дос «зе пасовоєе кнОсм доменне 5
ЗЕМ Неоє мапу асккео кон еве СосТОММЕ СоЗиооО СЕС ЄЄ КО прюсеноє ЗсасВОосВВх Фев есНо Бовуосоєє сагоцсев кі од ІНО озон есе соми с кеєіссова пісне по Я
Кан со зода воза ес оно ее ЗОВ паж зов внє СХ В ЗО ссодОЄ соєю зако СН свое свою аа чав фас зам ЗО меж пово песо о всаресскас гово пасе ОВ пошана свт певен ез всоееасоє стосаоєс вона ОО венсвове зону неловеа ово вєвоосс вав 0 БОЮ сесввену м: сова састасаенив сен ев ОО ББХ ккмннаВх кодек ово емо денне смаааенн ОУЙ ее вве спосо оце еВ Зав Та песвешноєа ОМВО КМИН ване мем ЗЕСБСВОН, За
Восхккання снове у утвиє Вк нною пояс скине п ООН
СЕМ КЕКО НВ. Сас еНоВНе ВК есе єв вовВ восени ЗБ певен пМИОсЄ спосо века пен сек КО всем синок основ сосок овасамнноа ОТО оон осо ем еммсеоовс дума ваоснне 0О3-Ю текст сей воссссвиює уосссенуве семоососа оаневе Щ0Ю вена сао ОККО вВуСеКеНЯНе пскникоВа пес Іа ее Ор ем: ВОБСТСгею ЗсКаеК; соня абз аанав бе: ОЗ сасюрк ан: пове ескю осоеоєсв зем ос и сосен асо 0 1ЗО іпоасвца ссосовео сосок вазона ое сс вовас ес евнемаК 0 оС ЕЦЮ М МЕСЕНОрюВ Є Вас овен стос: вен. 0 БНВ
СК ЖЕКВХ ЦО ОСВОЮЄ МЕН ВОК еКх фер а СО
ЕК НЕ осн М о вк От НО МКК азазвіціссї ссвовосвус всоооваоє асвісєв од сссеєсі остова 0 Ню весвненує Сн паса сонне весна дехоюіес О1УчО пороки еве веде нні НК попі ВОК Ее ЗВ
СКК ВА ЦО КОКО КК МОКОКНІ ЦК А шен сесоо чо МОЄ весною бессввсге собонеєсв 0 ВМО песо веооцнис сарецєве сеомнвоє посессмсс сон 01898 мен озоном кіс свое поем смена 0 БО шовннЯє неїссаоє Ємохоноюе сеоуоансво поссвеююєв зосвосююю 0 БК савасвовоЄ се веє само егосевоко за ом ша ЯН часа оц ВОК сс діє совесвено бе саке ЯКА зве о десоснеос водна сонне ном моно о мив ни акссє екс ско вес ос вес Хна се кн кое а пи пен за пвицеми сема ес асв ес се е СОеН ОН си Бквоев свое оце бевореос сенс ву ОКО
ВЕК зон овен САН ВО ІНН ОВЕН Мен ОС
КЕССКОНВОВ КК ково сао сао ооо СК
ПІСЕННЕ СВО кремом ее Сова соє поза смаевІ: фена ск оо сне ЯВИ
ЕМВ вЕРУУ СВО есе ааанаемеся сеоєМсбсх зоеовавня ХВ вве ієвю пеню ен ає сного засво оса 0 ВВ чекав сзееооансє оон оа ворс кан овов нка КНЕУ
Віа аваха Вінс Вес вк са овоє сао вав НОЮ виваважаке касове сесесисвсе кесесвово осо сеанс 0
МоСВЕКНУВІ севосевенає пунк: сонне сесія Зо фено сов сінок певне епосом ссання ОВ зе киє зоооогосва ососеааоня Зессоює Сп єю стерео з29о десващеов асп нон осо оєвє кссвоовнес НО 0 ЖК
Вкесссвос двом пове повно Винкс Нова ЗО везе сова песосоос подсаени позасусює вена ЗО смознсво пбсваоєвє соовасвооа зап БоеомЕ свое вена ОС сво ав смог сова зимно меосн 0
ЗаБиНЕК се Не ВОНННУЄ сеейенну со во ОСНО сват ев савані дес вана сонце к сао 0 ЗБЕ спевннноє кадаесоюа собосасвос есе моє пса сс ОУН шаною сно засне Нененоє обо совно ВО кіаадкноо засн свекор шобоєннює бив 0 ЗВО пеню сікассювнє соканаеанює песня Зофоосюєс свою СОЮ пав чови ссвососаНо соснова ос сема ооо онов оса 0 ЯЗБО
ОЦ НВ сонне вало нон она соа нє ОВ
КЕН внсткокоВннаь тОшеОВоВНЕ ешкеасвеє емо зов 0
ВИН: ВЕСНОВОМ ОА ЕКС СВ: ККУ екон ую ска ВІВ сом СБосецеєв Бо оєче зе вою зовн сонне ОС
Се КОКОС СОКОМ ДесКе є Вес сопе ЯВИ
СК ВОКССК Є СЕС МОН всю совосююєює Я ЕО
СоАСвОнею се ве ев Винос еіоовосесх сооеа ВО песня есосоосвє ссоцессссю мобувосею оссосємуєє миомесеєє
Ку Еокняеє сосок исков оЦОюссовою Совенко всзааооєв се ОК
КосстЕсвея се ВССКЕ гетасец ВІКО ванни осе зонам ОСНО
КЕ ВОСНЕ ссейрестюну Косеюрнює соббооєюв омегою снустааююою же термо сере КН со ок БНО пероссвакє соааовасіс звозоєссстю свозаозова созандомрсвоеавоє 940 сабстевси ооо мевоєв оса восюо сОсбсєзюоє воза еооаеево ЗБ
Киснева сссвссє ве ке СОЦ МИС Я сен Іов ск с ом сон о сна ОО «ваза озосіоєвї соді смосвоє вовоє засос ОВО пес сором задово ек пксвоася досане вас ОО
Зевехвацсї спасає Мові ес чеенно везе ово 0 яю
Фе воввоє Не; своцевосве сезон сонце ев ОБО сон винне є ссмоємцт сор МНН Умовн ОО мине Мосс поса: соте вок немае 0 БУВ сецсока зоамеваці за сени нооє совеансма сова ОЗ
ЕН КН САНЯ вом скан: НВО 0 ВО меежонсечою кове васбсоівнну спкавюювс муоккевоюс доска 0 ЗБ скнем ас есціюовоє сессосоєвх опосссм з сміє НН 55 ке ВеНех се ово сон емо сон СН БО кино НМ зва ава сопе шо соевоеес земна ОБЛ єсннмсо демо зсув соснова сенс восвовни ОБО «тетасесов сецюеВСа ведете ссосвосвоо песни зо 050 кОИОСХНуЄВ своею сон ведозаеє сою се оео сесеек 0 БВВО тосвусснаове совосевуЗ есеооанн сспнвеє Веселе всовоєвеє 0 О
СИВСвНК МОСоВСТОВЕ дес сну бсасосовас зсесесасва 0 виасвоє сс: димова нє вівсвсвс водив 0 ОВ вка кевс ска вом ас вен аа В БІО
ВОНИ ЗОНОЮ асо осо веосвссе смс ОО БАВО дЕВСНОЄ совеесвкає воасоваюєьє сУсВОСює СКК еСюЄц кокс ксаеу ОВ носно с озссноя нсс сс сис ооусеюсо ВОК поосеорвся ооо ше МОбновоє понос савхнов БО
ІнНННа СОТ Е ВеВОкенеа: ВЕСНУ Ка Ох ках Хі «ах ЗЛЕ «КУ» 3
ЧК а оК сову нове Сов сю НО слОщеЄ що звоасеєсв поса кесіеневєє весло шоссе НЯ ОСНО
КОКС секс додане аозксєссв сосною СК зем поема Мекзооюв ссоаскоюх сова ВНС Ба кивок сце вена єве ода сао ває ОО
УФВ ЗМОНЦИЧННКХВНВЕЯ. креВКа НО НС «ее конк краса Яща
ВЕНУ КЕННЧСВВ своє сЕуво Пе нене кепевноє вчасне ща
ВЕТОЕКННЄ ВТСе ані МКС ск Е ВЕК НН ОБОВ
СОПСВВОВК КУВИВОЮ аа Вока зеунеоанк Зако се Та іно занневіє екв ннину еенсаваею вовна заново ВО
ВОКВКСС СОКЕССТ осо сс заазосесеї дозво Вес щай
СЕН окадевосне Меси доста себе кну нок ОЗ око се вес сивоаовссв весссісоюв соло зас загасання І чеватооЗ ие сеесоцнеє кни є мату сек ОО
ВССОМЄ СВК Госхвуев сода ссзеннес васрсєха НЕ
ТСН Вес ЕКО К за оо сени овао зна 0 сен цк аокоскцвоє вив есвое основе ден БНО ке нК і Вася Вацососвеє соц круки ані Ваша їх па аасваа «еомаае пежевеИ певен «маси БО трзасвЕєЕ ооо Месееоею овес в сосен 38 серивенну ЕВесвовцає ооєсеєє вооссвос песеоеу смневеєє БНО аежеюкоєя своею своя КИДОК СВОЮ СН КЕ неоцрссє іЄбссосх вееводеєн возом сне сезоном ОБО васасснс сс анонс мое свос нм БЕ опіках вовефаоцчке деуво в сенювємася девецоонос сувосвос 0 ЗОБО свинок сзасвнкассвес есе ас сві жасся вссовоаоеєда сссвсосіоєв дае сє сосок декессмюв ЗВО осессею есе ско еосв ков ск вес овосє ВО
ЧпаОсеО в сок ана СО ок пн ООН
Водних вооеске шасгснем свавовеснс Вас есе ОСНО о сузсевмеа са нос со ссва забез овес ХО «ЯМКИ НУЄ ОВК Є СКС аНЕ нка мн вна ВВ пек БОКИ КОНІ сс спав осн ОК пожшаеса кам зима винну хна с вес ОВ
ВИС СВО де соку мене веуоанноЕ весен ООН свое мисВоує: осо е кисло мом ін
ОО ВНУ КК пос вро обся Мен СКК
ЧНО вок оз осВоє сноеєв ее осв БІВ засо осв стос совно асо ос сова ІА сасасЕн КЕ сс те осМмнюов секс со евовіснодоцої ЗБЕ
Мн ноює емнжееевує сезон Су ОВЕН ВН ОеНЯ УП зовано сек ане ЕМО Не ноз не ВТБ неписво ос вима сен са весс сою Ю «ЕКОНОМ СОКОМ ВХ сно яву ООН мес ВаВО текс КеоККСНИЙ сен казав вищо чес ОО МН сЕВон ев: ВезомаВея СеВбссвес є сектооє кесвовоє позов 0 ЗЦЮ чено носа он оє ване за зас ОБ
Весни озосхонею мес сенс сюв освоєно осо ЗВО ше юевих зовано асо не монес НН зма ОВО
МОН заасоас соло евеє своє зазоовевх саме ОСИЗО
Мн есвово сне сен секс Не Ми кн 0ОЗНКХ сно вок ев са сно ев осо пен 0 БО здівеоеє спе сов сою ітнною се ооосомовеє ЗО каси не сис ове Сіпсве ою онко овессенє вва 0ОСЗНВНХ сен песо с сосен сасосвева сс СО кино сієвсоєвов ВОбсасвов пиво смак ном 0 ЛОВ хамвовевх сасекаася сосевевВО Мосс зими осе сісоовоєва 0 ЯББО
ЗВЕР СЦКК ЕСВВ сок оссю воеостюве суне сен ОКО каЗОЗВСВОоВ СВСВОЄ ПРОВКСОусОК осо осоєк соовосво ссссяеюєюю Я
Мною гою ВО смкоє чеоуее с одеса зерен 0 ЗАВ
ПОН К ЕВ ВО СОКЕК УКХ сема секс Є Мен ОЗ
Мина емо оон а щКЯ. «Де ие «Віз а «Вам Нопео зар
Ме слу Ех МЕ о ех Аг Ага Ве Ві Бу МН СУМ Яр те Аве і х 16 Ії
І СИН де дей бег А Туг деко ук ре ВАВ УА ЗК Ск и Тек
В 5 За
ВНЕ ді век Ні БЕ Бена ТЯ СНУ СВК М у Ра баг Тек вро КЕ
Хо кв шу Жук ж кої ЖКвесу й оз Не с нс. у. СУ ї ре іх С тує ем ББе СВ баз Ме Ак й МеВ Ре Па у
КЗЗ. 5 ВО
Бак ЯмтЕ иа мні сла Ве бе ук а За пре Ві бу БЖ СЕ бра
Р а ВО
Зав зи Ми ої ах Момек аж К окр ох мух Важ пух ЖК хи шожх Бе г ех чарку тк іво те у ке за Аза Не вт ти оо Бе Бен АКо
Фо ЩЕ кю ТХ У кжхх. ще Я Кк сю скік Кр Мою ХК, се МК, г
ЕМ У а ТУг іш вав АХ ВІВ Аа ек МУ Те З вер ВВ і ху Зх и у 1 озхої Жук й дучо КМУ ою Кг М се КЕ. Я к
Кук го Ага У и Тук бек цею С Біне ТНе РЕ дао АНІ аа Аа
Еш МВ і Ве ТЕ Не Труг Сук ЗБК ме ет СА І Бе бе Ве ох ку ска Й -
Ж фо й ка й Ж сво хо Кс нн Уч Ек но ся ож,
Кк ме Аа і тує бос ро бух ее бе бе Бе С Бест шу з Й що ж Ж до
То ЗЕ ї55 о чкці Ед бо Кк зеах Лохе йхіїху ТК ож Ж пери Ву М. т ох у
УМЯЕМЕ ЕР є ВМ УВІ век ЄЮ ве Бек мем бе бек РЕ
Фк ЖЕ ою, хх песо сек А, й Бе у. зо чу Я жк Тв А хо бін бег хе ТК Кук во дай Ом іо ван Бе дв Би ве Аме Єу МЕ ЕК ЕУ бу У МН ЗБ 55 Аза Уві щі йде а Ку дар має УВемм Маг те У БИ ТВ НЕ за еко без ів АЮ Вч сш Лу НІХ Ме хр се мак КР бек Ві є Бр бе Був с Ж
СМ ме Уа ев в Ві ще Тук Бе ка СВ В Ме теє Чу В
СН вал Ух ати ав Нв Те Бе вм ек вза вар С АН ЗЕ
КО КЕ ЗО
Твен ав Тук МА а Аа ден Ся РО З Су ау ве во рве що ЗІ ЗО ач ск сеї од А мед Ки ДИ МЖК ин Кошякг й ни ФУ Хкн окк
Ага ів дер ви Сі Пе АТО АВ ЯМ ве Бук же то СУ Вів ен
Ка в ВК чи ку жна Ж оди КВ Б ше.
ЕК ру В лек ре Дек НО УВІ ев Ка у Бебі СБ Ні АВ х са КЕ. о Ве Зх
КУ Ве мг йо бог йо ямок ей Буш бує СМ Туе В БО КВ ще
Хі боки ЕХ. ї ї - й тя Код аку т Є ке Жріих ; дк КЕ. и се ен З лів кам без Ну ее йо АВ Уві Бех Ру АВ ЛЬ чо
ЗМ 5 ЗО ах фі суки кода ух їх ж Ви ЖК Ж дж фах ик аю КК ок ще Ко
МВ АВ РК Бена бус СМ СВО МЕ ОТВе бур бнхе Су Зв ее вдв ЄТу іа Бе С АБУ БЕК СУ Бе ви Віа А те вер мів Не бер Аж іх ій їх кое Бр дич СВ БЖ СНУ Жра Вр сиг ек же ві Ре жо З Те яща За З рем Аз ще рю ек. Бак Ве 15 МЕ Сом БО з СЯ Оп Бук СО ері Ва У Ав чо Ра ВЕ ве у СУ ВВЕ ЕН 1 АіЕ я Ар (а Яма бик Яма рев С ек Б: Ве ПК ка КО М ВКВ в бек бек дае РКО КН ОМА СИ ТВ ви Ав іа бек Пе С ВВ
ЕК я ак
У ЕвМ НА и БЕт БеК Ви СНИ НІВ Се У АБУ бо гу а вв Не Тукізна Кекс Су базу бро Те без Ме сб Те Аа хе
Ківш аа Те Пюм яех бу Те Тр обу» бе бен СВК СПУ бу Щек тв. дожах ДК кое
Я Беж ВГ кр из ек лі А Ме о ТР без се щах 55 «Кф ЕТ «і оте ква
Ж и М мию Ж й о Ко зна КА з ЖК - ще с с
Меакну г Ме ре ек В АгО Не із су У а Вар Це ва
Ще МА Аве деп бак Аа Те Аг гук Бр» Беск бує бе У НВ
В я За вве ее Ре Бі ме Ку СУ о ув ВВЕ де З
За ЗМ ях х і . ск Ки т бух й йо Кох до Точх ек ск вах у ре я ре Се Ко ак Ме йо мо ва Кнме ее СТ, ; у е Ся жк і Куди те кра М 4 из Тк ві Те не вів бе БИжЖ С хе ет г бу ВЕ МО Біне Без ву У ТЕ Бе й з НЕ я. й ож Ж її ще
Ха КК ях х с Зах ме я хе о пе Кде с ен ЇМ ге ДА баків вт
У кУхМ ТВ іже гу ек де Уві які Це кару о заго Аг ще тро каре че Дів йо бак би Те спо бен се ВО ем Ма на ТНК ух лев Ва Аз ев Бек бо Тем Ар Ку ло я т. ж ме їо5 ТО : я х гр чут ето І Смик те р вах МІВ Ва Вів
МУ БУ Бр Ві ам тую БЕК Б СК Шк РОК ВК ВІ о МЕ
Й ЕІ и її Ка ї«з
ЗЕ Віа ле ТЕ ек ек а А у НІ КО Ве З умі Во дає мак аа т ЗМЕН тує Су А Аа нак Се СНО Не ее АВ х АВК ню В. 5. ми ви Шу бод і до КЗ а ВВ; ЖЕ
СУ то Вів УВІ Ту ех бто ув ек бро ак во а Бек нь ТВ шв м од Бе - шок КУ
І їх Ід вк су кемо за ве У С Кат Кі а Ве дек інх бео бок Мене ча В Тук ув Аа Ту У баг ім Сів ВВЕ егіви ро бек БЕув й др «з УК 1У5 М с у є шк, ех Ко о ща дк ямі бе ех й хх цех Пе Язв ме лехе СМо ТЕ ие ливі Кер мац я ВІіН ОВ Ку. су УщЕ Біне ве ма м І а віз ма Узі йо С Се
АБО АГ ЕНУ Уві Бе Без Уа у ве ща дів ма уз хр Са Км; 5 КЗ «о ш а хм у й кує Ко тк Зара Щі гема гак дід Ве
Бр м Емі Тв СМ МІВ ка ні ча ін ів АБ АВ РН
«з бух НІВ Моб Аве ЄМу бек Бе бвес УЗ р бек бе Ме си уж сі Ме УВІ Яее йге ва Бек бук бах М сть смке Те Бук се ве хана ас бух а пені М РЕ Кук рт Бег Дар АБ СВІ Де Бек
КУ, Ко жа дев ау екв м у ММ Ша ув і Як дарів вка Ар ве
З «ЖК у сх обу ож КЕ Її ж, ші Жук фр М кою туя ще ум
Кар пе во Кез Сук ано ж ем Ст же Су пе Я СУ А ЖІ пт жаи вто тує І вив Аа АНУ СУ БО ІБ ув Аа Му Бе КВ
З З 315 Зоо
Кг ів м зе с Ле Ак і МВ ат фу бух ко му Вів це
КЕ КВ За ха буку Ж кож М Ж дви Хр ви Кі пе ЖК Ж В умру КЕ Кжіще А его УВі бегрна Берг р маг ві си же фев нм МНЕ до яхт. фі шу ше ж ВУ, шк Жива У фак о ді КОДЧИЯ Й
СИ о РНх янжР Сук бео ве ув був Баг ув Био Не ех дів не Се) джек ух ус З УЗ АгИ СО ТМ дав Заг Дар Бек МЕ Бе БКа «ік та ВОК: нео Кік Кн г сего У м 4 ». дра : х.
М ТЕР У РОБ Бе БР Ви БЖ СИ АВ за а Ку БУ АК ВВ худу Кк лу ВН ще
Зх 30 ях ОВ й «их ни Ки. Зі и, Ж сої КЕ соку су р хо сдижьу ую КУ ЖК Ж
МАЕ го а Ме ба ек ів Мир жна Ту КИд МА Ва Те бек тиме У В днях а НЯ оч ик В о а о тив їх ле АНУ Це бек вхо іх во бек єм Ма яек ух Рго ко Вів ВЕ ще с пох ж с Й я дек о ЯНА яжтря х шк і, вк Ми ик ек ів А» Ох Пе бе ана Бер Бег ага и ух СУ б Ре а Бе яке 35 їж Вів то Ажр Бек ТК жу дар бег Бу жк ек Бе ле МНК м
Я У й
ОО вер о Був о бек бе Уві Ар в ре Бо Без Бе зам Кі и Вид г, ри їх ке Кк Що Шк жк СК мін юн Ух щіж ШЖ В Сі Би В НИ А СН бе Бак Бек бух С З ВЕ
Ех З т дк р 2 і. дош Мая Ж г. Ка ср Жфуш іую Ку Тк В, я
Не не мн с Уві вав'За Оек бек Бе ВкБ о С У Пе Аг
МО В З
М і Ким ХУ кує зі «5 КТ су Кб ак У Зах ке ве Вів ет Ме у де У вже А АВ Зег ер МО СН МН СжВ
Не ге Кг. лиж Как ДЕ ря о Же і зві ке 1 рі: Ж ш хх
Су Агреу Бра Ре дів аа Пе Тут ше Ро дів во СУ го ад
ЗІ За м
Фах Вухо КК Ви - ОНИ шк Су ем ВЕ се Не дев с щі Кв «іш» КЕ «НН Я
ЗУ тік Же КІ пах аж сх хе Фтш кею КЕ ж В, Я
МЕ шМУ БЕК ем Бек Ате без Пе ів КМУ чі ка дев Аа і 5 ІВ ІВ
МБ См Аа Ав БУ Аа ТУг Му Тек ре БО ее Бак СТУ вал тує
Ве Ав бек Мі Пі Ре ме ін спе Ме зух Ве вер ТНК без ВН 35 Бен Я
Бгто мо іуУ Тух зви Ве СБУ СМ дже Ме дер вм А Рі е СТУ
Бек тут ме ине го Ту уві Явг окО Абе МУ МБ Є КО а іує ТВ ем АРО аг іи ВІ Я Це го ув вер ек ве ага меми МВ) ве ТУЄ іуе дев АБО АТ вер век ви Те ок вав СУ Кер же Бу Ат Ж іш Ту ек Бе С Во Те ве Ащо АВ Аво Аа да щі Ві ПествЕ Дю тр» Су ВВ Вів бек ми СН а ев В
Су Яка А МЕ Те бах був ін баг Ка сн ів СО Заг Чи Тве
УМ НЕ ТеЕ Бук Ал Су Ма бе сип Ів Бе хек бо из ек НЕ
БУ Ле Аа ве Щек МО То Був Аа Ва ів Гео ха не вав ге 18 БЕ 15 хв Арго т У Мне ко У Маг св Ма УВЕ МЕ це СН СНУ аа УВО Уві Те СУ НІ: ів Ніж зві зец ів В ВІВ ВВЕ сю ее Ні Месяво Му Бек Ре бек У ух бто бе Бу Кіа 1ує
ЄМ Ме Ма мер вт Ма ее Тег Б дев СН СНО З ТУЄ Ве Вів ся ХО я щі за ух дал ан ЗК ЗВО ТА ре БУ Жак яр а ке бан ет
Б аж у сх. варі же Аа и Су а аг жа бео ог во ем то ва Тву ен ее из Су ГО Ніж ін Ск Бен ух Те нак Ся АЦя Лео
З я Б пед ік х и уж МЕ, с оф за ких ЄМ В их паху й ко ху КУ
ТВгіви Ат Тука Вів хв ам ув мк Це ех ла ва ВКО РНЕ «ка вів ів ен ств Не де іа У уз був зує Вр В В Це
Щек рі Б Ме ВК ет КО БЕ Зх А С МНК Ба СИН КОх ВХ хуй. со я су
Б ЯЗ я
КУНА Ве се Аеге нек бр ее МЕ Беж Кер іхіе ке СЕ РО Бе ек ще Бери дів сем жа СР Со ага в У Бек Бо Дів Пе Бк
КК зу 8
СЕ ВН БР вм Тек Бі СЯ Де ве Буг Бк БУ ІБ За Аа Су
Мезех кореня «кова де
У ве оу 5 БЕ. ім ва Ага ар Су пт ву ДІВ Ві Ле до КО Те во Вер
За ще Зх
ЗБК АГРО МВ БУВ НЯ Ви Бра Си бе бух ДВ БК зо Бе МК а Зав Я
Ком ї жах с Ж ом Ж шеею Ж Во жо м ся с ї каз йочу бе Без Бе бек без Ме Не СВ НО ев тв С БУ Бе ких єМм Ар ВІ Аза АВ Ре БуО то бе се Оу мае сн ем АВ ч ді ше Же тихе Шк Кт, ук; Вау ЖІ а. 18 ЖЕ з сх ЕІ Кк іже ба ім Бек бах бак Вт м беє Бре Ме те МО С М Аз й М док ВК ЖеЖХ
БЕ ав С ЗНО з. я - сх зе ше сову Кк ус с жа що Зх кн.
Сб Беє бег бег Без А ЄМ СМу ТЕ Аг Арх АБ ее За ст Ави звів бів 55 Бех Бек БО СЮ МІ Суз МУ Вт МУ Би Кто АЧЕ
Що шо чеки Й ши що Я я
ЩО 5 ій і В сркки. г. сам йтьсх Мр зЯ Кк: Ж
Ав Пе Ту ів Ре» із бр Су Без ав Бек ую Бек М СМу Де і БУХ За
Ав
Я
БО
«Вій» ЕТ «НЕ» 55 1 х 18 ї5
Тк о я . ме КУ п ска Кік б Ж В рих Кох КУБ Ву ек
Ме и Ліз деп Ок АН Туг ага Тут Рез Бгто уз ет НУ ВИ ТУ
Бра А сег НІХ вва Бе Ме смуУ СК Мн ік Не ве Те реа Бі
З ЗО 5
ВТО їУушму Тук де Біе СУ С Яви Ме ахр іно бен навів Му
ЕМ хм Ага БУ Уві СМ Квае Бу) Тук яЩі ТВ Бе Яів Ро Ні и Без
У а ККУ дО
М вуж Те ми Я БМ сво ча ве Ме Ага ув АЮ Зак о Ага ка Я сх їз Ма АгО ТУ Був аБО Вер а лев яВЕ ВУ Тве СН ВУ Бе Де цу Ва га Ущі ген тк Бе Бе Ома Ме Тв Ба яд а гц ча кяе 13 155
Ага а аа Це НИ а ТУ ув СН На Бех НМ ВО Ба З ВЕ
КО 155 І 155 5 їх це
МВ НН Тут ія дві Ну Уві Баг сн ЗБ Ми Заг ес ро бек не ів ЕК 175 ії Не зве С НО іу Вів АВ СН ве вав КЕ щі о
Бару ому ЕН МН БУХ ще МВ) КН СМ іже МЕ 3 ВМО НМ КН їз5 я 05 дао ЕІ Ущі Ек їщї бе Ко г Бек Ах Ве -Я щі горуку Кох зе дів ЕК
ВЕ Ж ж Б ЖИ ВИК у РО А іх ж ем бе ща АВ еНЕ «і віх за
МН БЕ РЕ МЕ Яр су Бог вне ще Ж уз Ре і Був БИК БУХ
ЯВ Ж ах З
Ух З ке о У ЯХахи Ту З зх їх ТЕО Кз Ж вму Ху вух В
Ми пе У Ажо Ато Уві жа Буг аву цес біт сн Пе Тує Се Це
ЯН АВ вуж Ар йжт с ЛЮ ТНК за Бу бак зорю Аве Км даю вк лерАжи ок Авт С Св ВЕ У Сує во бебаер ів Аг вв тв жк За ЗЕ Ї
У Ка; ККУ із а Бо Рез ку ага Мі і Су ем ув їж ех Се веде
Зк реє вл би ко вів ам вже Се ви На кох Вер еею КО РЕ
Ага ів зн ви а пе вс вів МВ Ага ку БУ Ве км х аа в
Кк ечя їщ ЕК бек ВМО Ущі ха Не ее то ем Бе В Се Ба мм На Бе ар
БОТЕ КБ КН
Си МІВ Зк ня Кг Ки ув ж ек дує Ви НІ БО Вів Бак БЕ
АВ кегбув іув без ух Ар МО Тек дв Заг дер Бог ві Вт Бех
Об бук КО ВО ще Бог іа ев Не Дів зе вет сія ів де дів
З а Б ща
Ма джек Бе вка 38 Ре ще ВК го и тег се «ЗНО Ме Те Тук
ТУ БУ ПЕ Бек вад СПУ Бек Бек в Аа дек мех Був ем Вів ів
Пе АЖО МІХ Пе во вер а яег Аг Сук НЕ апа бе СНИ Бех
Ку дошк КК Кп с Живи Ех. ЧЕ Ху ЩА фе Жуки чн Кокс
НИ А НЕ ЕНН Бу жна МР СХ ло МВ Ар ві че Ба вта їжи
МКУ НИ АВ СЛ Бо ВН ва Ач ін Ве Зеи Зег МеБ і: Бек РБе
Ящ5 ЯК за
КБ ЕЕ ВН СВІ а ви см Бе Яцек бек Бер ки У АР Я
Вів й бек ЦБ СТЮ ба УЗ Ка сне вхо Баг ек Ро Ми Ні ев бом ве в вто и і вер це Бек Се ге те ви вка ТВ ів ж ск Без ек Ре аа Бе Бер ня дів бі и ТВ РРО щи «Ві» еВ ке» Мате «вена «а» ЗВ само почну саме еВ пове генна ща
КАСКО кеВ ОО КК еВ йо сюВ ОМВК ї2
ЖЕ риси Уа фу УК си ри КВУ зх креми ек оду сек УК куки з их
МКС ПКС МКЕСЕЄ ОВО ККУ ах зе катки ви ою. см Микити вими усе. жи и вик век о паж хви ще пути учи трах «ща дессасове засво е соусом зов е висо БО ікру кв портр МеВ Евер ско щі ие зе Сг пасе ин висо сопе дае ССБНе В пенні сосна а есе шої анна а ее з кока песто ВО аа оденов зессенуву свое Б ку ваеесе дес шезкека со ех; ска МЛ аа
МОСКВИ КОН ВСНХ СВО вно Віки ен) 0 Б
МЕНКВНСВ СОС ТеМИ віє енео Март косе ВОНО саке побвевюцеу я нянво зецеценя спсовеєє осені 78 дао сою кастреца дссонвю сосен ю СЕС НЕ сна саван еОЗаКееє вовсеннас кемова СМ ес вав вавонимнс Мило Моз: сиониз ооо ово 00 мес днина сок вовоє асосмодев сов висееваНю ОО КО заминнсі свізаноасі воза сонна асо с мова севрасн ка Зоо вовну спосо сумного заоїенова 03500 кОм Ме КН пев аєцєєве озера шсовс асом ОВО сао соссодєска сезсвакзє созозсо пи свасв еанестаєве БА дово ссяє ОСББ веєть нео пев ево вкфоосвюєс совок ОБ сдЕсннзає Оусбсовеа сном соєве Мезаосво мое ОБО
КН а сек МОСК се севи се ака ОО БНО
Ер еН Миковаааа ассєвеєсв смаком сова 1560 пес со сЕ кечевнасеї вИсзсснс нова есе БО
МВТ СОКОМ мозкова зем сезеце и сяевкк 0 сІОМеЄКВК ВВ пемненнеє сек ою даочасвоє аЗовсосоює оон ОБ
ПЧАСОДКККК МОСК КОМСУНО Ве. СВО Вас СК ОС спон смсацає вооВсне дона обоз амннав 85 чем оВанц ВУАН соки сесеосеціє осо вісі ОО Т1ОЖО оскуссоною вісн весен мен не позовна СИ сек весююв Мосс суєта песо все асс сассеакя ОЗКВ
Зм асенс осн: тома сова нео сн ВІ побори ЧЕ ооо освоєно усві СИ сиеесвє домо оє осно во сне сОх ооо ооє сне ОО ЗаНО шісв о дес ооово іа квот осто пес бовуват ОЖН нузаева мирова єв знак Вас свентовоку зацаоован 0ОЖОЮ чаасцняуєє Бфосневх сувмняеє земне: еОсозаскс сени БО сеоесовівє весосвове Ес онов семан с нео сНеє ОС сесвоєсвою анеевоаеев за моєа сер перева закссом) Ка скосу йекосюо повеаесісви сессазевє вок осеаов своя СЯ свассхоаа вами маси сер вихов еко ОО он оваа зон вес аа есіі совок созноОоє 0 ВИ ке сіаасвоєв зоосвова сосок вассесеоюох соєве СХ мода Вес сосен касове сооеоввев зону ООН саше сфе осоесоює еєсвосє восвоєюссв зесмнаеєва ОК сцен На ко кВцвкВ сеЄБм кове кее сосововеве оон ОЗ снів вєє нема обоє сво осн посеваєє 33
ТОК вну ерссоКу Во усне дово вес восмеаюу 0ООЮ осно ом еасвосє зок свого свацвис зовноовеа ЗО ген аа несвея МанУвснка своею сне сно ЗО вихо еВ аЕ см Оовсє вовну свое о вее 0) сем ооо оо кеВ аск оюе веВоввеодеє ЗО
СеСваСеа НУ сука всооєовоюе сс косо ссвсацняа ЗБОВ сосну СВУ МеВ ен кн Ма ОЗ ВО соеоква педа мене: вва очно е оце 0 ЗО повевоновс серовов ов вососве се о сососаовеВ Б еде 0 зеозісе нИионе хе ВесОСвсВсЇ сао дессвхни сосок СМ сасшнихоооа візі оваос сс ока оваоодес двсоронасв сома СОМ дацеоєсвве зевананоє фоеестн ехововно сстоаоєкою саке ОБО ісевееєн зе сокосства своєю секс оеє С еОеВО ща кикченне даси св сна пока моваєнаовК ОМ свв оБсоцеєе боса сно Є Ве ВМС 0 НМ сспесвеєбво сосен сх оон ке має Мах чи ЗО дозеваса дено зас скх ооосссвосв зоссасомес сосен КН зав ненма са сопоцоО сину песо Вас оє се ОНИ с СОКИ сеанс пивна Мене песо УВО ессиврво свв свое ссср спосо ке ЯБХИ вдвоє см азанеа сс зов ою сома ню ОО спе ес весбнссює вісацвссва засн есоє деуососює ЯВНО сосок кеВ сома нови ска 0 ЗВБО фе еесторкюа а кеохнуинокі вхо зееневу с есте ОСИ сен ом ное сон не со сос ою ОО
МИМО СНО МОХ ВСВИ СеКІКЄТОю се В ВТО ОБ
ХО Вк ВИ ежОКВОВУ со кеОо скокове в понжакнус 0 мч еспеве вени вевосаомоє сс сіно свмнеєає ОБОВ кежеуо вену сення Том есе овес мем: донсвееє 0 пквоосоаоєо косе окрас ско ксо ісесаеева дсоеавоса ОО) сдссово сс сн сова св сенс сно шва МОЮ вина вело воза ое Уха свовоца м она ОМ сок во они ерзоні: КуаКВ Коомазовоа асо 55 Я вабанена ЗЕ за КОС ЕЄ сомассго семнонее ня Меса 55 пізнає сафу: сет содаценн свеоессвко осн. ОМ свкркицеоє девОссм вжосмКоЮ знос досту доссвезевє 5 аиееров вуз сегоестомї сеанажове саоаонеев ксбонеюсює ЗУБ зазвосша аск нн понос мона осно ло соц о с: осмос поса ояосєвє сова соооосе ЗВ
Вабсесск соецЕсНу кована ок еко ее МенунуоМях 0 сек певен ом Но Вво Мо нн саке 0 ВОБЕ
Шшавоцвесс кицю срсееке Би есех сс ен 0 ВІКО хна вином свемнНне мое еза ев ассовснхав В
СКОСКАКВНЯНХ НОСКА еОЄМсеНХ аксбаектває кухакєтавн сонне Є
НОСА УВК ВЕВХНО СИС уко ен красне Кеесанкнн 0 савасавсвх дсесацє сВ. аЗк3 «Ех ГЕНИ «ВуМОН «щи ХУ
ДЕКО ВОК ОВО В СВК кОЄсСЮТаВ кове ВО еНЯХ що сассаое: ссвовогсаде сеосаааоєє сссвідасє зано кссв ВМ 158
МоСБОоВеу ОМОСОЄЗЕС посух кове встоце носове доавнюе 0 1ЯО вада сосовоеєє вас еосоцем ее вссоццоя і забава звиеєчЕ СОеБУсеВО осв єто сс ак КУСоОвВ щі зсавазоса семою зодадаєєв ооо вессооє смовеово БВ зас свое ВО Ос На сеоосноав сном свв ЯКО вав со ов осока песо секнесне асо ОСНО сова сна є вОсеосте певасосася корон сок БО сви вон соб осн есе ес ОБО сперелвв ссоНе ес ее возом ас о Менше ОБО мене еОсаст весно ФЕНИ Сех НН ве каееННЄ денно я нка пера: сем ан асраа 0ОЯБО око шко соц веома аа сіє СЕС ОО ща со оао давню совет насе сема КЕ ОК есе засос ссе аа сне соєю 0 ЗХ
Косова о у ааасєв соомає весна мис вже ниє 0 ЗОБО еВ УОЯ свое о ваВосВЕ сесмасвая посох касова ЧО сус вода ово соми сб ау евовя Ї5О поси Мензе дека сао ск не ЗВО
ЕВ сосок оєв свои скан сан звееня СВО своє сстторюю пасе свое вмоосюе но З прасок віце вени кави ю иа вив З
МЕКВХНУ ВОбавОеве ан цсвоссв сстосвоєє посозоосєв ссоаосеє ЗО тен ее сенусееє Зевс сосок сек овкн ОЗБОЮ
МИХ иа КК еМеЄ ем асасну они тон 15 пас их Межовосся мзозцасно сеОоцецеве чВефінеє ссеокенкх БЖ е зесоуавнає право сокавнаєв сестро вусеоксюує Вккнєюює СОЮ «вВоцівеВ сероссанеє зоємнеева ооо сек оКК ЕМВ М попеоесо зів веде сссооесвс оком одосовоєя НБК осмнекосв Сехасох зоссовем поОсоієво вессоазеєс сао ОХ акгоееюв пмкною постав ссенмоювє сен сення. о меосзаон пів оонс о нсе поснеє сосни панове ЗВ снессеввє ово рен ово се вв ам оос свое ОСЛОВО мевею сесевовісє носа само ос сваосвавкє мно аовма 3 сеаснксвс вазах МИсоост нн дасєс івсаннсо сао МОЮ оессноов шоеповиє нессщає сумсваєвоє Мнсзсвоюо сософоенує СНО сек онсво повавса Мосс ссоовосво совакаєс косяк СВК шевососсва оце Все хВу спо седан вес вО Я соми іо ооо азс с осо ссценка ЗВО коди соску со кс цевоа мона всю ОС пачоессеє сан св нео ек: вена пово сао вососсю кеоцовее ско оком вн ОСЯ НАВ повен есе певен осв аа Зазане 0 ЗБ сосен оєє не нОсва сбєвсвООа ногу веессненю с нене ОК
ЗчИВОсеє ВОЗ сера сон вет Єсеосвосвє ОН
Кене вас гчововас замов ов озон сао 0 ОБО
ЧЕСНЕ она Овна панує вює вом оє оса ОО соесеиієну надано место ее зво ососє соєве ОЗ НЕ
КЕЕОВОСТОЄ соскою КОВІ Має зт веВ сво ЗО задав спосвосхо сповнює ківіссвово весосю Мане СЗЗ сне сце ВуЄ своє коє своекоєвес весвецом аснена 0 З «вана осо соєва соновсно є Неба сов 0 «свв соОоБнює паца лоєс позов ен смикає БО винкс во висо всоваєсв пікс онсоснов боббонене ЗХ
НЕО ВОВО пен тВекну ЗОСКОСВЕНя СОБОЮ ворвеенечав СВО ЗБЕ сном сив несу свое мере весен ОС ЯВ дазовея знає зе сво весе засос вас ЗВО ароссовс сеча гозасецюва сосссосоо сестонм сни Моне ОЗ сосен сстоєнсо Оснееєюе сао асвоє Весна сосесвня ЗО данаоовоно засос весно нова содмасенев нев НО сама скине вано ето вецоссвсо зе оє 0 НУ
КЕНЕ ВОКНУВ госененеаЕ МОЗ совеввоваєх ово ач ОО осв шеасє соска оменєою зване висксоою мооневе НБО волоса збуеваає воодзєвесс бкопасдсв на осо засво ОО
СКМ Состав свсісВеюох естО це є кнн і кВ ОВО совком вов Во Оне оссовеі ооо весно во 0 Я кн) вес осв гос касова рю
КВВНЕВУВ дося Вера юю сиве показа ех 0 ЯКО гами кна с ассввосс ровом св сс особову себе Бе комзенесво севосоосв сасанею своє сумо веесеаоюа ННЯ севецОоє НсВнУдеєЄ восоочієво сонюво с есе пока ОО
КЕфВОСВО ЕМО охо кевоо стакан о ен овен. 0 НОЮ
Фсомєвов гзосооеОго ессодосве веснесеє Пессносвє бубон ББО паацска ссвссвоюу сводооо соцсгоєтє ее ООН МО засно Час ввавежєво веодсоссву смевене пов ОБ зосіне зебра вешевзох азот ооо є ее БОЮ званні самМжеосою сао оссвкоцече сов че ОО БОЮ попе ово овВ азооооваас асо Вес ан ОБО їскиооєво вевавеює совсвовоєс спмносаза восени ХОМ соціо окюсвосвуї соосіювоя сееасвосов оовюеорее смс ЗВО юс є носію сову іцен сс оєсвово вес десвосв С сФвовооя вепеоове зсовннао вавазоваво воно ссовою СВО евро оте Секс се се ВУ Се ков ВМ 0 БВ синаса пвостнєво сеоаноссос пеню сесеоюво евовн БУ сок ціня сорок сен ссасюку зе ес каркомнаа оба ОСНО ковснаЧоне бусасасєся оссоассю сбсюсее есвооює бововеКню 50 аиквстняу свого персні емо ас вена ОВ сосок косо с носом нен певно в осв ОНКО песця ВОМ оюої зеноно ве ссоіссво сбмососею сення 0 ББВО
Мессі дсімсео є посеени боовувевее ото вевооєкеи ОО своя спини ав ев носваз свонасасве ссасваах К
ЕВ ас се ен Восаемо заз 0 БОБ
ЗВОНКОВ ЕВ скоєне ДКС сеСОВУеОВ все ВЕн СОКИ
ПОпООК СНО кое ОМ се сне БІО
ТКУ ВЕНУ енНос є МОотсвеВ Сорос овив сао сова Бл каско екомнню дос ооо еюа волос фен 0 БОЮ саефжив кри бух кути сивих лики о кож ами аку у Му ХК сіхосмнї ЯН оса вен ссвеєвозва засос своє є 0 ЗОВ всзквив сови занос зодіосюцев зоба сссєх 0ВеХО «ве всвоаВеме освоює вес спосо соеа 0 БНО с«еосовсне сацсосса есе севсве сфассеваю вес БУ «НОВО зозсеаа зосасемне зазесцсвею воуєтссва Зоо вве 0 а ан и и а и З п В ВЕ ЕЕ вх. сексі косо Веста ювеє совоскосВе зозсесссо Муовеає 0 БОБ о А а Кк с жк ом ху кг ик вени нн ебая вав вковеав овес БЮ замов сопе сабаееє Земне аовеосвав минає 0 ЗА х З се и т сечу сви Ух ма ши Ук. Уж ка А "хвалу уки щем кесасваав спосо света сов омо возобзасся зозціаеавса 0 асо свево Вс а «ей 5 «ії 1375 «ків РК «І» Бево вавівих
ТК Ся ек З; Ме ів см баг Без іє бо и жа СУ Се
Х 5 16 їв
Аз АВ АОС Ти Ажр Те Ашв іо узі іа бе Мекіхв
Ту Ага МБ Сум СІ Муз І. а ЯМУ Бегіна Заг іже Ав би щег
ЗВ «о Я "бух; ке ВУХ І що ох ту: Же і) и у чехІ Же ЗМІ Ех дик КІ Ж
ТЗ йгУ Ме ух Аею АЛЛО М ув ТК І ет У АВ Ме Ві їх
Си Аа і сМУ УВІ Ко го бро Ав щі ме ме Те ТУ БК му А ам ем см Су МО Че ах б зви бек Має іє Бе я
З ЗЕ
4. : теку вн і ни Я ші сек Ха г хх і Аа бе СХ ТНК Ме СИ А кам ев ми А Ту СМО Бе 103 М Р
ТЕЗ НУ Ре Аг АБУ и ТУК ж В ше Ах ке ДУБ АБИ ін чі Бузі БО КУ ВЕ баг ів не АТО АВ Дів зує СВ
КЕ Зх 155 жом «5 3 ш КАШ Кі азу и В с де и вує Ії из УВО Ба ее КО Б Ам Ж БЕХ У УВІ РРО вх ее СВ Ма їі 15 155 вес аа сі сив УВЕ То маі КНе вам се ва Трест ве У Туг Лв КО їв 120 і75 іа ІВ 35 зар тТук аа Су Бог Аж ів У Кам пе і був Баг ее еВ ки
Яое ва гер є ле с ба М В КО Ві Яна Аа пе де ек
ЖАХ «ії я де нів Ред Ме лев б) МЕ Ко зано Ме БУ бе НК ре де Кук:
Кк Ка Ах Ка
Пе я во я вну сві вів ве Не б бе; БО ех Пе бу
Кри Рез АВ Аве цем бів Те не ех Мем Те Те ба Це уз їж днів АвО кО Бе Су Мессі ух Сук За бек іо У Ре
М: кла Ж кох вки з ахіу Жфшк ух кока Ж буку АМКУ жодної бук онук
ОБУ Ма твК ее Аве во Пе і; ех Пе бо СУ дра їжи да вар їх З в 3 з: чаї тех Жокі Їх» Зах Ті» йіш Її Те бу ато тНе то ен СПх ЗО бе Ахо Тр Пе вбба вт дв Це Тв
Аз Те Пе Аз тр Акв Уві ев Бо аг бер цем бе ма ух Би в ЩО ж не га Сі Азов ге МЕ АЮ Ме ів ле ага Ал Ре ем Бе
З Зв ве дів в Аг Пе Ме й бег Туг Ав Суз вт орто Уа Я БкО ях хи ск й
З КІАо
Ані беч Бех Мо Те Тук Ме Ні Ав Ме ТВ СЯи Ав Ро Ар уко діа чат аю Ме бух бе за би ви бе вт Ме Ме ке СО Не
Тек із ява де Мі бек вк бо вве Дів и в Бе Тв АХ Ва я Б 15
Са МН КО За ТР Ме у У С ваз Аг де Бе ВО Є В о С 335 івм из Ме Уві бен сми Мей ко зо Бека МВ Аа ви АК 5 ще я дів йо їжу ее у го рве сви й ев Су Во Теа Вів чаї
МЕ. ж ох «Жак схо Ксу 1 аа хх цих Ж В С м У Ки НЕ НН
Зекієн Аа а ж Уа КК Ме РБе бо Зуг Ум бен ж се Бе
Кан дн ХЖнме Дів Аг Со ем АЮ б цем бе ма Рее Це Тр ве чах ча 5
Зх Ме ем Аа а дер баг м б Ма У Ай Бо ее Ні ее за міна Ту СН: ву ай Рне сук Те У айв сво єв Не ле и іа Зі іш ва ТУ АВМ Кен ВУ баг бо ДБ ТІ ТВ СВ Су їж Бек ім Те Бр ві ех ар ек ве я Тве Ви АК Бе ВН
Же Уві Бек Заг Туг СИ Ж лег З» ле АБ ее яма т Ме АБ АН ЕК ям вел бує БЕР ев ми Ави фев Бек ем Теми І ще СУ ЯМУ
ТНК Пе оре Мега Ра Ві ня мех Туг Бег бег во дей це ВЖЕ щі не
ПО М ЄМ Б Бе Вне да Бег Тек Тег В Не тв за ма 535 БО Ба кеч кер ін а іа Ав ре Ту Ре ОБ УВІ Бегомні МВ дів
Месгув ж іео елек бе Віз Туг іуа Абе Те УВЕ Ази Ав Ага ро Є5НЗ Ага мМ іже йо ЗК бек бек на ТТ єм Хек дів 5 КВ
Хр Бе Те вх уж МУ ВІ МИВ Пе Ніж с АБ СУ ЄХВу щек щахи 38 ІВ ТО
Вниз ав бе Бе ТМ бек бе» Бек бек хи ЇВХ Ал дя Ме АВ ув тях а ТЕ їі Бгто Маг ее Аг вхо іі беж Зк КУ да беж СУ ЗЕ Те СКУ
КЕ ях ТО
Вре Абе Су Ма Б ух ГНЕ бо На бег нів Сі бМе го Ага ТЕ іх Ме рРНе дао ев ту Рто і; 5 ТНК ів дав ев АВ АБО а: ТЯВ т аа аз АВ У Ніз бує Заг Бне це бе аб Те жа Ба Тв Су 785 70 БЕ ВО
РНе Суз йжр третє Аз Ага Тех Бе Ак бує Уві М ух Пе хх МН Є МБ Кер бен и; Бер СНИ Ве г Був Се Ат М Тр
Бе ен го дат мог Я У Ак вих КЕ Аа ех З жа пе
Са уж сх ІБ Те Ага бно бе Ав й Не бе во йо Аг йая
У МО
БЕ КНУ УЗ БР хек М) УЖ ух Кі МБ вна ме ТВ Бо Сух Де мож ВУЄ ВУ що щі УЖЕ лів Ар іуз Аер бек І уз БНе Тор йо з би був су
С ув іо бр Тут Ме МІВ Аж МОУ ап рез Вар тує ЗМР АРО М
Бе 5 З их п дупуда ка у Же хх ж ють флюси ти Км мам; В вжля ха ЖЕ
Тв щі ЕЕ НІ тує ем ви Су МОЗ ня Сук ек мем М Ме УРЕ і ТвВе дер ев Му й Не АгО УВІ Не уж ве КБ АН ло ще ща з50 А Зо іо м те Те аку Є Як КНУ МК щі у ме Тр Ем ЗВ ав зЗ55 ЗВ БЕ
ТнуамуУ ня Бен МЕ БР БЕ ОО а Уа Ям Пе АН АТ Не СТер» суки ще злим. В, ак ооЯх к ко й Мі шлю учи Сг Ех ху хек а ТЕ Ба АРК КІ Не ув Я СМ аа Пе бро и КМж в ва
За 805 тоб
Бег Су У ТЕ беріз бе Су азо ек Ні Ага Бе ко За
ЕН за МЕ 5; іх Ля 1 дах й ин Жавми іх ве хі ік ам нах м
ЧАН СМК а си Ар сїу МеБіАРО ВІ ТУК йзВ аку Аг
Ме Ям Кен бек ум сСув агоа У МЕ ТВ Тек аку СВ Це ТК пе: цех ВО
Аа то ЗВ жару Ан бек фе єв ех й ре бер сту Б
Ме ЖІ де УВК Уа аа КМУ бах УВІ Аме Не іме Кар ко 1555 ех 05
КР ЖЕ бо м ее АН Аж ів Б 55 У був СУ о бер ма дев ія не Бе Пе бук аби бек ве Ж б сао
Не йавї ваг ее беж Тк о ТУ дер і Біне МЕ Су Сме ле УВІ
СНУ а Ще ох Ст їв вів Бе Ні то Ні Бе сто Ні ев ді ме: Су ем Аня Ащо Туг Тук Пе бек МЕ тує бе Ме им 3150 11855 10 «ВМ» я «13» 1335 «335 Море арена
МАЕ СТО Бек і БЖ Бе МЛ ек БУ Бе б КЕХ БА бух Б УВА ї й 15 15
Ар вів Авр іена ТР хо їтр Ахи Бе РТ ее АВ вне Ме цув
Й а за
Ж АТЕИЗ СУх м ув Ше Є: Сйж Бегіжв мем вів ми Баг
Нр ЕК У а АГ МЕ У Вт УВІ ОГ МЕН АН бе и ви
Сувів аа Уві НУ Уві йве Без Бу дае ще) а іує тк тек бух
ЕЕ. г я ЩО їси йіщ й ут хх Ух Ек тує ЖК У ГУ о Є Каса Кр че Мову мух Ат и СМм Суз Тр Це Або Бк 3 бе МБ С ес» ій ітз Ай ем См Ті Ме СНУ дів Аж ем си ув СИ Тук СН йаа 150 це 10
З ща Бгто гу М Ага Туг ук СМ бен гемо ла Рго ТВ ОЖВІ Ар
Св Уві суч іувісв Су Пр бе ее Вед АНУ Яви АК КБ ЄМО ММ вже 135 148
Ага Узі іво Бе Ні Тут де Лу Мів СУ МН то ду бе ТР УВІ
Ап СНУ М УСЕ Тр У Бе Бо бу вані Тк Тео Тр Це ККЗ ви Ба Пе тує АБО ем МИ МК МО Ме ое Бек без Бе Ме РЕ
У Тук кю ух Бек дже Діз МУ ен Кв ма зу Бак не м
Биж АВ Бен: КУЄ АК М ОМА СМ Б КУНА МУ АН ЯНА Її Ав Ра 23 ІБ що
Ав Ніх Бгто бан Аза СНИ МОЄ без іа Мн бро ог Ме ал су
Пес іву дів АВ Су Бі Ві Те Об Бер іже бно Ме Це вт пах пе щей
ЧЕ ж «ВЗ завів мих Ме ріс вве Те жер БУВ ем ТК Те ро пе іх
Ме ді у; Ага ТО РНЕ СУЄ Мег НВ ув Сух МВ Баг ім УВІ рю
ЗУ Уві ТБ ем Вр іє Пе С був Не бе сих ве ви Ази ВхЮ
Ал) ана тет Бо КУ м а бар ко Ме Ббе Те а Це Ту
ОБ що З кВ дав Те Не Ак ттю а У Бево ре вге АЗЕ Бе бе сн Ку Бех
Вуне Агар ть ер Км сна ВО Аа ет бо Ре вих веб бів ем еВ
Кк жов ЗБ
Зв ем Вто Бе Тв Тут МЕЖ БЕ АК МеЄ ВМ АВ то Я щем
Ве УВІ Яна Це Єр без) бек сут гама бах ТВ С Пе СО ОН МУ
ЯпигАКЕРна й Ні ес Ба Ре бе ма с З Бео ТВ АВ ВВЕ «І «І а15
СТЬ УВЕ ТУ во Ве Ма Су УВІ НО дет го аа Бе рез В
Бе За 38 їжи Бра хв У Бе бів ак Бе це ян МН У НН ев бо АРИ
Діво Ако Б іж СК ве бе іо ер ем Ст» бро Тез АВ ві
Баг іно Аіз Бена ек а Не ЦЕ Ба Бур Тек У ази бив Гео Бе
С не Не АВ та Се Б; й Кто ем Кв же ке Ме Те АУя із Це ів Мі Я лев же Бег Сус З Аз Арі маг дев
АЕИ МУ МН ув Тут РБе ви ех У ем вів вер ето Тук КН Рез 15 ЗО БІ
ВІВ В МН» га Тв Ме ве вів бне Ме во АВ УВІ Пе УВА
Баг тує Мі ТВЕ ЗУ СО В АВ Сув Бе СН СУ Ям ем Бе А 55 З 555 вс
Пе Су жем са ій бям Ай вза Бен: БТ би бе Аа СН Те»
УВІ АТ ТУ Сув би У Ага За ТР) СО Ал тн: бар баг Ах Аг
Те Су СУ Ма Аг дер ек ів НЕБО ЗО бує Бена туго бе БМ Кене
Бек яна Без Пе го ни УВІ Аг Су лів АВ МВ ВНЕ АВ Бе СУ
Чі Бе ж Су бан бек АБУ Хм Ат Те Аве БВж бек бе Тве Пе
Авервне два ма) ів Ме Ме іси ів іп би МИ Бек Аве СИХ бе
БА 5
Бгто ме УВІ Ага гу Ки Б Уа УЗ Ае ее ем БИж Бема МВ) що Бай У я Тут зно Бек дев кіш Сук Ге В А бе БА бах Пе СМ «А; «МН Був Аж Туг Ма ін: Ро ее бе іа Те ТР ОЗ Су СПУ Заг іц Те Бгто Уві гу аа Бе б у Б Рехх й ка гер о Же
Бе бек бук ух йо Ме дез ів в ВК Ве Аз Яга ет Бе Аа тах В я і бак ев ОМ Я Мева Бе іє ТВ ОБ С бек СНУ СН Аа Я
ЕК г Бе у йжп сам Бек ГВт Баг Бек Бе Вів дог бе ТЕ ів ну Заг б и аа СО Сів Ні Пе бен ес ква мм Тег Бе ері Ме ло Ар А ще сег Тука Я ем хм Хе бо Це ча 9 та5 х су Уві бак Бе Аве бек і Пуг е А БЕ Те Ак УВІ сем Бо
Нв ЕВ Аз А Аже рт тує РР СМ УВІ баг ав УВІ АБ МЕ ув чагіец йан бек бе АН Тек Ку А ТР Уві дей Ав во Би сій
АЕН Ар не ее ет Бе Те СМ баг Аів Вес Ав Жах Без
ТВг ща ух СУ МІ НІХ ІБ БНО МИ Ма СНУ СУ Зег Бгто Ра дів сер ет Тк дек бек бек бебі ТВ без бар У вів Бу си Бу
УВІ Ле Ав А Кеш Бух Зег Се го Без єму те Те у о Ада су Ав с ТУР ТВ БУ НО Бек Ні З КТ Ве Ве НГ Аме ух
КЕ ое акр Куз у бро Ме М ТІ Ву Вів Бе ВО Ме бр аа АВ лів ну Нв у Мет ба бе За оа ТВ уві са те бу Я Сує
Ам о Бег вів Ар Тук ке іа ів Вго ще бух Пе БК СИ
За ЕВ) ЗВ
ТВ МІХ Аве цем озіМ Бек На НЕ Б Еф Б АНЯ СМ Та АВ ВНЕ їн АРО нх Бет Яту ек йткр и ЗНА На МИ 3 ща Зв В Ту
С Пе т Аг ем йо вав Са Не Бре о ен гу вал в
Ме ДК БО Бек ЯР Маріє Ре Бе Без Бе же бр Ка Те
Кр КЕ: ЕКС дів м діях ев у ер ог Пебув ве зр за ЗОВ же
СУМИ ік ве Ар оТУк Бе МНів Ажа Су бат МУ АБО ОТУЄ ТЕ
Аг Уві Те Ма МО ЄЛе тре бев вен бу З АВМ Сх Бек іо мер ба Те ТВЕ АВ АСВ СУ Мія Пе га ман Тра іх бе
Тв Ав АВ ее НЕгУв Аня Без Ме ві тек АЮ Тер сів
Сіківн Щек до Месіва бе Те ТЬ го снж Ав ну Ме УВІ
КУ щмО5
У Аве Неси ТВ сб фе іев есе пек Аве ма Аз Ме Уві ак Пе їв дер Тне во ве ВІ Ме ух У ка СЕ в лез Пе ие Тве РУ хх ву ек Сх МВ Кк ек бе Баг
МІЩУК ЕКЗ ТК
Зоуж Аве ек Мі ду ще а Ще БК В НУ Бе БУ Люцо ще ї3я5 їй Ін
Заг ще г ВЕ Туг Ав Ак Ага Ме АБ зи Бег бе Суб Вед кон ж не су їжі ск ж КВ 5. хіх ходижю Ж КК
УВЕВеЕ ТЕ Тук вед І НЕ Те Пе УВУ Бук Ві баг 19595 15 1-35 пи ів іа ар п ав У Ми о ві ВІ бек ув ден
ММ КК КУБ МОРОК СНУ НЕ це ма ек УВІ заг В АВ
Му во УВІ У Те БМ Аве Без вка чеЄ ВО о БЕК ММ дя зБієн ба Ме мі МУ фен Тег АБ Ва М ВЕЖ В
ІЗ50 1555 і
ЖЕ. іш о фу В шої Ж. 053 паж же Жифю Щх сек Ех Жах Же кі
Сб аа Абрісв Лю ав ух Сі его Ма ах не Бізе Ту Ав
ЕЕ 1 за
ЇШеТук дви Бек бек В Ки Тем Пе ой жа М бує ТК Тек дерну Реве же сМу З Аго Масу М Пе бек бух ем дів 1555 зай 15
Бпе Ні Без Б Пре Ре НІХ во дів Же у Ом Ам Авр ТуЕ
Тукг Дж БЕК УВІ Те Бек УВІ ШЕ ух Ага У АТО «Бе аа «віїх 1555 хйкйе Ментк» варієт «НН змен засос каст око осока се 5 сени свсс сс ОовенОоє саосесааомє соня со СОСОК з с«восвссссх вессоцеа Он усе сосен КОСОЮ і56
ЗЕ СВО сек сення кода во вон Кі: весвооонеє дзен аронеоене сессії зе вана ЗК сша поссоесавсв азам дека дезцееє ЗБ В
ВЖК ее оє сини а босом сосен ах немев С засн ксенон МК СС СК ОС З се ІМессх зав ОС Оєе ССО косе зешевсве шина поссвове нка кує сосомаае Бо
СЕ ККК Є ССО КЕН ВОЗ ЗЕ соЗацх сб УЖЕ
Ве пвсессннне Вес сових сосок сяє 00 УВО
ВОЧеННСЕ ЕОМ КОКС МОВО СКК е везе я хеТНаНМОва СессовОеї ссеєюво око песо Нео Б вешдеснеце сосні собомаююву акиовх засВео основ ЗО сома, сок СС Ві сеиевіс відо БО кевхнов хом ев вищо прове н зе сення 0 МО кввкоєвво коми ВЄ фс певосеВе т мою ово омеєє ОО подсевасоє пох весно зесбосои опосоюно осн 0 ЇХОЮ веннсос ен: сно чен сном вас оюєв БЮ сода сазан асіцнкев сесооасас вона свою БО
ДОСОСЕСМИ зевассвову ке Мун свас ес мное с цнаєт 0 АНО шен сан ехох он о сосен НО засво восавеве Мосс Соваа Мона давача аа ї555 «а і «Вії» 553 хаїйв Нерае даван шо сосна вк сані касбсеннв огесеіоує Ме щ соБнкає кино асаотдєт ооо зелессву сосну ТО змиви соки го аене бе В ЗОЇ іга екю ІОННССЄ СОС КСВ В пок СОС ОО ощцеенює Се овен зе страхву сом пон ОК паосаси соло сво а сс свое основа ЗВО кас ЕЗОвжаоВ ОВ Сема семокоа о кава З тех Чех емо поко цс СВО Осн змосесае своя 0
КОКОН ще ВОе мо ЕН ЕС КО ЕС зав
ОК ОЕННу ССС кеВ ВОсВеН сов КеЦесКВ БО ке саке песо НОВЕ Ек ВОВОСНКХ БО
ВОК Сою пусехви сценее мое кое: ЗЕ Та
СЕК сооцаєес дієві соч ее ве ОСЯХ сссоцк сне сс Кн ка осо єс осн 0 БЯЮ
УА: рН дея и ру а, сОшиве З дитя ви кача п и дм, ЯК ах ке УХЯ щіщуссавнє мЕВОЦессВО ВСЕССВОСЮЮ ке СНО ВЕД БІ
Ховеквоюва сроєюкя сосна Козісвн: сне ема ХО - піна ий уж чих ККД о Од я ос моих ж их несе ксво сммн восмаис сива см 0 МН фезкаВ Ум гізчатат вузу муки ида ми Бека маки сраки Тех, Я
Пианнев сн: змен Пекар єв еко се ОС мецчшесва сен свое оса сне нан ОС
Кун: куски пуфи В. ее Кф. кв веж ду кеВХЕ Ко стою Он кове са ОБО теВосО сн ВВС виз се кове кооне кекс Ве. 0 КО сек цих нео ос оцю Меса вес ОБО се См єнВах Се воно сезон есе 50 аа ї5а3 «Кі дя ках УЖ у -. дк. й 2 Уют, я пед Мо Ме сеї В доски Ву ву ще
КБ ИН СН АВ ЛІ А Бех Ага АБО І ОР» Ал ще РРО СК Ве
МК Бек вів цен СУ Вих ее аг УВЕ Пе ва ви Тв Ту М Бо дів аа Тен во ТВ Сув і ви бе ме с на бе М УЗ еко
Ко з 45
Уч і во жу. св за с ви. ЗК жх. К дк М КУ пляж чи Кук я
Тутіец ке Ар Сує ма КУ емо леци е Те Віа Ме се Туг Ям хо За ВИ з5а тв ТНК РІ СУ Же бив сю бе; мве Ру СЛУ Бко Уві рве Є; ах та та ВО
Ата вне АВ дя АР С» Ав Аг іх дів на Зк ее бета іо біз йів ви вів і; Тут во вен ме ВЕ Аа ча его щет Без м 125 115 дів ви бе єМу Уві Тук во во Різе дів бе Аг Зав бо Ву дів ів Моє не СТК зв бно Аів вів бі Ме Уві Ме пр дев бе Бек 13о їз НЕ дів Рез ін Сів без ро Вів Ар ія СУ Ага во СУ ем Су БЕ 1435 ї53 155 ій
Ж УВІ Му ме дів ів іх Бегівв вц Сіх МУ Те би Уді цех
Аа тук Сну Ле дій Су ко Ма Пе бен АТЕ АВ Зо Аз ТНК ід 188 ії 1980 іже У лів УВІ іш ЗК Бе Твг Су Це Бко Абе бе Те ув СУ зх и ЕЕ а уж Те Азов АН я ів бе ви Мез Му У Рез Ага Ада Бег
Ка 15 Кехв
Мане дорів уз АТ Пе Ав ет ви ем Ага ва буз АВ МЕ ке КЗ а ее
РгО Ага Не еле ем Уві бу В Аме г Аа уз Бу Твге сну Мем
Бе М щі Мекбпе хек Пе Це ее Ме Аж Бере БМВ ем сн віз аа АвеєНУ Буг НЕ МЕ дер Бі Бе Бк ме фен сни МЕЖ
Ма ТНЕУ МУ Бевза ма Це СИж Сави бек ек Не Бе Бек за я З
СН МВ ЦЕ ее го Віа Бе ЯВИ Бе м ВН ІВ мВ В ТИХ Бе аа ех АВ то Ме ба Баг Уа Ба ні ее був ев в Я БТ
За ВЕ ЗЕ
Сію ДВи У ВК бас бен Сх Те ре де ен Ме) Мне аа о аг Ме
КОМ За З мем Не бує Ан мВ баг ТВ бог Аз ТВ Се г Ме во му ев
Су Аза Мер ен С Вуз зец бо АН Те Кер су Без вк уві Ку
Ра З ЯКО
ПЕ Бе ія ТК Аа Баг бе Му Ме кг де Ве су ня Мамая
У АБ НЕ А ТВгожм У Еец ж ж ізо г а ух Би Ме
Бе им мг у вок ух МВ Ат я «Ні» «Від БЕ «Я Беито вра «Я» З
МОХ Бек СВ ММ бе Са ее МК ка Мем С во б См Се дав А авіви ТВг лев АН і ов ее Вів РН МЕ ТуУЄ ік Ак Мі Куб Ми БИК ТБ СО Су ек ую БЕК во А ОН Бех аа Б 5 пе і що вні Ме ех Ве УВК МВ А Бе У Це
ЗО НУ ща кух ів Ак УВУ ХНИ Ар го Ме ва УВІ Ма мух ТБг т реє
Я ТВ на
Суб ав Але бен СИН ке Про Ме бе оз бе хе Ме СВУ Бко т іїув КІЗ ер ін ТВК ІБ Оу айв вай ов а Су ОА ЗТУК м да 1 ще ма
Тв ВН ау дів АК Ту уз НВ ав ів Аве Бех Те Ма Аа
С У Гук іже ем Су Те Мега Мну вто ля АБ бух СО а
Яка м ме Ра мів Тук вза су Мі У Ма БО Ве бу ТВ В 145 Р їБ5 їі дам у Кім МеВ Пр ЩІ Бие ба був дер фут Крос Ту бе вка 155 КІ ії ем бек За Ту Кар ем сни Те тю Же Се беж Бех бек Пе СБ їщо ін ї9о
УЗ Тут а Куж ек ви АМС 5 У кує ем Ве Бук С
Ко же яке ок коки у Ж, хі. Й хх ві Хв Мюту їн же вів ізо В Агро СО А Зо Вони А УВІ це АВ Пе жна Ве сао ії КО ч и - чия писк нах ан фу Ж хв З дл ак а
Аа Б ро ем вів СН Ме бе ем то Бгто Баг Ме ух ваг ук
ЗЕ сит Ех Ек - що : са ау А СЕ и зх . зум БЖ Ті СКУ
ІА ви Але В СУ Б Ма ТРК; Бе; Ба ре МеВ ПЕ пт ке 5 з55 дпЕВБ ід о А ера Бе ТР ак Ст ве ТЕ твер пе щук
ЗБ КЕ за
Пе А ех Ак ЗО Бе Су ме нт і ж Уві ек Бе М Ва жу трах. Зх
ККУ ЗВО «В х сек кор ср. шорх Жфе жу су 1 Вр ЕТ ем око фа ку сну Ма Тве зве дав бе Ме іо Сех Не Бе Бе че Св Ав Аа
Ки а ЗО ху, Уудчи Кома І ОК ще гі УЗ ін і У Кк
Ага аа Те го Бена су а Бе вав іо Мебве ТВг АВ Це ТЕ
Аво ТВ Не в То АБИ МВ ее Ву Ат АВ ем тн НА Був а й Бо КІ у Еш
Бае дл ав іею беу Уві Ав бек іо не Ага Аа рве во ем
БЕ Зах З
Бо КЕ сКра: Бк хе ік ек ки Ж Екк Ши ЕЕ Кв в КЕ
Ав єм йго Ме Ме АМО ее ТуУг й С ТЕ Ро а бе ов БЕК яко З КЕ да вм вия Бе тк Бук мк Ні абе Ме бер озна а то дев ти
Ав ма Вер КН. су ж Знає КА Се би ТВ Те 15 СТО СВ СУ
Тв АВ Бі де НІВ Бек Без ба Бр В ЄМО (Ми Бена ТЕ Дів КН син Укі Бо а Тк Маму УВО деп Ага дев ех РКО ЄМО А і 553 Міху Че Аж ках Є М в іх хе Ух В З ВО їжу КЕ
Ба БЕЖ Не НИ МОЖЕ КН МН Я БУ НК АК КО РНК КМ БО дв іє авіа ів С Ага вве ви Акце ве КН Ваз бе АВ У аг ву й Ме Бек а МУ Ме ен Бе тує УК ев ів ви Бе й ЗВ а
Сів Как хе Ав АР Бе БЮ Ак Бере о аво В Ре Бе тер Ах цхв Ме жо Ай Ма вацх ЗОБе ух МА АВ Я ДО еВ ЬУВ МНХ
М 55 В деп му НЕСЕ ук ВН Сеи БЕ а сен Ка яв ве ТК Ме то
ІЗ В Ба
Ан еме мух З ЗМ Ме ТУ вів вве Не їж аю МВ пе за АВ що ЩІ ща
Ме Тут КБ Те сту СН Ко НИ Су жо СА КМУ бал а За Аква
Її Сув бе а ЄМ Си и бо УЗ мів Ро Бжнх ем є СИР ЗУ
У Ма пе Суб Св СТУ До З Трон айва ве жо Жег лів га ща 5 щов пЧервсже се Уві Аа вар оБег вів мі Ст ув ко тут Бак ях Се ща НЯ ВО ер Ме го с жа Аг Сух А вія УВЕ не АВМ Оу
Тебе УВУ яв Зв АБ ВІ АР Те АВ ВХ Бає ТОВ Пе хе Ні: йо Ук віз Ме Мега вів ст ес М Бег Ва СНУ ЗБЕ я БИ БО
Рг Ме уві Аго МУЗ СТЮ Ми Уви МН одіж мео Зег НЕ ее МІК УВЕ
Сів Тук СА Мет дя МНЕ Су Так У Ав ем є Бе Пе ЄВ
СВЕіув дво Тут Ав база Ре баг Бтю Аа Тве пчК дв у БЖ и 55 я із ого м Аго дев ек рт ся НК го вліво ага ет Уві
Мег Мек Тут (Му аз Ме Аго вів У Аіа Тву вів аку бек ско Я
Був дм Би Й Азн Бен Зег Бе ТВ Он Сі ее РУ МУ лів же я 7 іш Бе Бог рт СЛУ Аз ів бек ТНК бог бек бот Абе ек Бек Те
ГУ 760 В
Ба СНУ БОГ бро Сн Ав СИМ СО ВН Це ба Же Ббе КОТеЕ ТБ деовіж Ме Аг Амур АВ Бек ет Гук Хае Зак вм дев Я ву Це
ТВ 95 тах я щу УВІ бе кіна кий Баг ді тре Тве іа Та ТР) дах щі Бе ци
В від щі
Мн ма Абе Афв Ав Бую Ту? Бр СПО а! беж зе Уві) вів Ме ув
МЕ жо ее ек Це АВ тугі Ан ТК УВІ Аа АКА ТО СВ де У ен ар ТЕ Зах Зв мен ТР ОО: ек АВ БУВ АКа ек бе "ве вв Був се ще ме Ме ВН СУ Вів СУ Су бе БРо Без А но ВІВ ЗІ
Хим ех ТЕ дже Бег Баг ага ТР АХА Ав Уві А г СИ КУ ча бах Ага бер бе Бр ме МУ АМО В СМУ Ве ТВ КВУ Ву ще 5 КО
СИ Ав се Бук ТЕ бра Б Ба НЕ СН Бе рух Ага ТВ АРІ БВ масзне вер ув Сх мо а са ТВе КІВ Ада Ах АТ АКЮ АВМ
БВ Зх як
ІЗ хек Вік с ик шу УЖ ШУ до Ми вк птн В пи Ж й ру
На У БЦ гук же БЕ Ме Хна ка ТР Ма Се ТВ Ул Мумх Су дама ТРОЯН Аа Ак. РУК Ве А ОН Бр і Ме б Ме Бур КВ
БВ БНВ: Зх
НН ав во Си Бек і: Пе днкіше СБ Ага СІ По до ла їси Аг АБ ач Ага М Ан да ВЗ ві єНе СМ жі Ме ми ее
МК БЕК 19
С Не те Ра ов ВО й Сі ПО ее Бен Ав АР ЗВ В ци мн Зх
ОБ УВІ Бо ес ув Уа іме Бе Ні то вва ве ге Су Пе 10555 МОЗ 1035 дів УВІ Віз лаву зо ег Пе Суз Ре Пра Прі ке Не м сх и іт ев шо тує Се МН Ав МУ вол би» Ага ук Те зх Іо ця
Де Уві ТВ віз Ме Ту Ге ден СБ Св Ар Суб бек іже
ТО ЦЕ о ів ен ТВР АВ Те Азр обже Спу АВ Пе й: У те іт дей вне Ав ев ів ім ув авт реє с БЕ УВЕ Не Ав гро зн то за
Му ден: ЗегАБо МОЖ а то 1 Бе Аг Су Ах у Ме УЗ
Че вище Те НЕ Тв с Бе Бо ВЕ Бе Бех У ВВ
ІЗ О ТІ | 1-5
УВІ Ага ще Уві ке Пе б 55 ТЕ ер бра са МУК ух У кан иа фе оре ТВ МУ В во ее ух еВ ще Бо БЕ
Сус даю Бег іш АН БЕ іви Це У АВ КВ ви У бер ж 1325 во чІ85 ее ап Уві ук Ах Аг Ат МеЕ Віз ів ек Си Суб вий
МЕ БЕЄ ТК Бук кер бе НЕ Ве АБ бив Уночі щет іже і 1іуз Аг; Рг йзв СТУ Нів Не Уві его щі ще У дель іт Ам Уві Ат Це бе зро бо Аг Мем бу сим Бег уві ЕВ
УаЕЕже СО ЇВ ДЖ ув Б; фем Те Ав і дво Ме Ні вто
Кт Ав дор зе Пе АфМ Суз СУ Зм Уві Ал Зі Мне тв жа
Пе ук Авт бек З «Не ЗІ Бес бе вен жа Ме був Трк Тут
БО зах ТЕ дер Ве БЕЖ У ій Аг У ОНе АБ пе ек Су де да вве Ніх Бе) Ні Че Бех із бер дів І СБ Зм Аям Аза тує 1335 1515 Ії
Ту бег щі Тег ог УВІ Сбм Уж вн УВІ АТО «ам де «ій: ДЕК «1» Но» аа «На зажим ке ВИС осє весеицесюі нац сс 5 спосо засне ссавця засске сопе везе ве її звасщеза кассесоВо сор пессзави сеесиаах серссевеа ОО пасок сага се Ока ера сосну сови З і БУК КУ З з СК м М нс
ЗЕ ооо особа сома аосевесезо сс ом З евососвсх оссоєсвцєв дерссювоєг соуаобаоєе зодк Вуввимнеа ОО
МЕС сік ВУкОае КВН Кок ОВО НІ и осн зе сі осо НО ос 0 БОЮ псвоєсковО сво оо Кона Зоо оБо свого мо еенсенаее БИ сеозасає кв осочов сво своє веоскєксєї ос ес ОСТ ХИ еВОКНХИУ и жен: семою мн озон ек сннея ООУВО певен ее камня мусу кон ВВ ка весен сов оє оон сон оце нє НВ сЕКК Ж ще асо маше воВ соєю своя я сЕНТОВННОКЄ кер ЕК вен Кона ск НЕО даси сова кадсцеенє Мсвессоєсі весно ссдмюєає 0 Т1ОВО «принесе ас понесе панове ев ОЗ сщренеася зшевцінеся ссбєоєву ексовасоєс сосоеов ера 0 В ние мимщме інв своеовісме ен ви ЗУБ вассиКНиоє Ве всте деки дасвіа вно ссср овя 0 33 мес деко весною песвазвоса зопоеес смояие ОБ КО васяасноє орав ока сенс є засос: осо не ксНве 0 НО со еенев кавова нросвеагоце сосен семи КІ ма Не кож Нева см смена Ї5АО
ВсОаоаа стою сосасбогу совет асо осмоееє 0 ЯаеВ масвессе сло стосу мово покемона ЗББО «ККЕСаКНеЄ снаеаостоєє охо ово а мене твоєю 0 В
ЕМО овес вево: ЗегеоювО зе смсв сеоєстюоюсю повесоее Іво
Мис ко зссВса сосВоВосє: сок Оех вне повксова ТНЕВ
СНДМЕІЕКНК знзенесднує: БОсСтен: димок осокою; сенеососєю 20 ден свлаєсвося дос роє сон жове вен е сммевеюа 0 МО зсовсвВсв во вом оео зовні зосвова смнуНєну ОО БК шини соза мисом нена осо кс ква ососаааа ам сіро сестссєеи сода ва озон: зем ссе есвацавоя 002158 я сих сходах фени сухим и ЕК у ект В Уч я Ж ЖЕХ поазсозаваза сно зозоасоззо засво сс січноонеся О МАВЮ вас ее сем восеа ак осоє есе асо еВИ зас асоеса зимно сес воокннен сосен 00
Мивеевю; седсаааеов змо осо оса нена 00
ВЕН ВК ВИЗЕВВНВЯ ЯМ
«ів «міш КТ «1» Метью «арена
Ме лаз Аби бів сту Мб МУ БтО ТНЕ Аг АГ цем АТО СНУ Ме СУ
Х 5 їй 15
УМ ів Вів СНУ У Аа ів во АЦЕ АБ Бе ТР ее ем ТИВ Зк
ЕН ЗМУ Хнак АВ Бк Аг Су ТВ Рух» Аа фе Се бе т Ме СТЕ
ЗВ С 85
Пе вв УВЕ Те Ні ТР Рез Бе ТВ барв СЯ Бу вує єм Ба Ве щег Ажр Те Су ТМг йо; Тук Ж Це із Дек Сує Мі бе Як Дів ще т ТЯ ВО
ВЕ Ага ех ем Бе Аве век Ді вен Аа УВЕ ЖаЕ КВе іх НІ А с бе си Тет Ам кур мак Но бур Бек вно АЗВЕ КА Ве Ко Я сх Я. Збук; тугу Ге пе оере У Ж ямки фе жі ду а Зх се а КкО Тер Уа ЗУ Аа Бе ох УВА ек п Бе Не Тву Мі 155 ї25 сі ен аг Мі ам Ага Му Це ЖНеЕ ев Те Ме Б ОО Тк вт
Бра Не Р АЩО ДБ КНе кі Бех тує Ну Але ем КН Бех НІ 15
Зо МЕ
УВІ ее Аеи РЕ и СХ АР СУ КЕ ех із дез ба УК АХ СВ
З кош Хв. - кі дамі ех КК бек ЛЕ шт Ки они
Бе АВМ НІВ се Ага У Ако Уві вне СУ АР В Ля СУ Ко сяк мів Каже жо. ке ше сш и чо Уфа фо тях ТУ Же хи КЕ.
Безіви ух лів ек Суб ви Ма бе ТНЕУ вів с Туг дру Бне ке щі РН
КХ хечі Крузк ва ї35і ам Шах ЩЕ Р сек ножа Же из Бізи
Б ва мек бме СНО аа ех СА Ме Ага А ТТ Пе ТК СМЬ БУХ ка 3 3 М ї х х 2. їх ек кр Же км по В у Кк ее
Не Не Ас ап АМа в Ум Аіз Су Тв умі Бех ок Ме Кер;
Бер Бго АР АВ ТВ Те бів Аа Бе УВІ Сто А ве аа ре Уві
МЕ УВІ Ах» АБ Бе у Бек Ві АБ М ін і ІВ В ре Те
У кави судах. яиЖ ХВО ВХ
ШУ В дхп їн Ха Ат Туга де Ве Не Ві ТО дез йзр ве івв'яга МН аг еи Бе ТВ йод робо Ми ви Не кож в АБ
БІ З ЗІ Ки сКуз йша нх Гук Ру МНія Кеш Вих лез бек Є М Ту МО ва Бу
Ки у Пе ее Се АВ
КО
«ім ЗУ «ее МЕНме яащч ки
КеЗСВ МТК: КН ВК ОН: КОВО МНН Ве 5 мСоВсим севу еко мисом песни сем не се ВЕа їхО зимове с они за нис зав ссВа ОТО щік сумне зорово песо сен сова ОКО сонне дента кис савсевнвов дами сесвою а ОВ заеВенКн студе оце свжннеє МесцеВЕе ро ЗБЕ
КСВ КК. КОКОС сен ке со м ща асасо Веес во є ее мое сек аое ОсВОХ 0 ЯВО диво заго ениє ке евсинивеє НЯ пове асеко Бе
ССО ОсМОНеЯ песо се сснав осо дек ОО БО пасе есе осі сквер СК ооо СБК сосні схов зни свое с осве е ОСВ оса ЕОсссВОє пово цес МН сок ТВ
КЕН веСВенНес вес содою весело совно ща поз есВе вес тнеех асо мно засво мен ау КЕ тоже виє акне снн сосіоєссв сода ов о ссесссвов сосас ОО
Бон вобдесвоє весно моде дедесвастсооюае МОе ково ння Зно ааа соонвевс спимо своеї 0 ЗБ
Фа поса асо пово шасвеннес оавне НО сувою восє сво вов соовооао ос ооо свое асо 0 50
СОЕСТВЯО дев астеювиєвта зодентоєєя соку есс: сосок ОХ кави сао косо до: В ее ІЗ «вивме зазоааовосе посі вае ссвесє сов сс воовссна БВ
ДЕНОСВОКВИ кеВ віяя ек НВІ Пе МаЄ Сус ОМи коника ОС шення овес своє пес сноснее со 0 ВМНЮ повехнас оса цнє св нина сс есе 0 ЗБЕ
ПКС ВОМС СНО Осо соКвеиоє ев 353 кое остсм ана уазавакваа сне сус В її «МН У «гії РК «ій ДиК «ие еп зернах
НН Я
СССВНТ Є ЗНОС ее зкаоеки є уеассвосе Мобоесва зоенюєх о переоєвок свое ес еєє весовасоєї ее сиве св КК певен зоасаснов се ее ен везе ВВС ЕЕ аовесюге соідєювеве восцитекну песо: соровесеса ссввосвоса 29 пек вено Заоссвоє Сас саассвовсв Зозасоки сезонне 00300
ОВСВе ВНІ ств аненаєняе дебсвиенох семою Меосвеує ТЕН За ошбвеак сестро совосев св сова смесв ОО
ЕНОВКЕВВНЦЄХ еСске Вена КОХ севкенаюх всех осв 00 онов сепзи ня зом ннОє сеомовов нневовів ес авовах вой жнива тов восо іх ссаоааосоє сід зовоі бвуаааає СОЮ ке кохав Вин СВО осо ВС ТО финасах своз сива свое сенс соб ОБО чесвооє пвасвє у осааоою сброаоєв засос ою ссоздаююв 0
Вес ООН НН ОО КОН НН Б мне віза се жосвоє соодоесво сосен ео сненню 0
Яся скоса века оса Зак а во воєн БК пиво Оса Кернес свекра свое ес 0 БНВО мс пса нео дао ос есе БВ
ДСС ВЮВО драсекзренесха песроєтося зеессее сен Нє. ОБ свичкнсВІ свозасевєв ооо сенс сс е савхзена ЗОБО
Не со у а мовою со ке св ОСІ
СЕСТОЄВУЄТО ее вх кс ВВ Бон соки сабжєвес 0 МО зиксваци соц цеює кзкисавосос скоса осо Кос ОСНО
КЕНЕ МКМ зкаолевнх ва Масекасє сец іа тай РЕК «а Метео хара ни ЗВ
МОБ УвЕ Єме Мер єм Те ре Ки ск бе Со уч ЯМУ Ме спв ене
Туга Бег Ас СНИ ТР І ух АВ Мер Св Уві ТР Те ев я
Мем ста же Бе бек ле но Ме КМУ ве Бе ге Я вен Ну ух
Мена жа Тв Ав КЕ ек СИ МК У «ну Бут Був СО МК ів уз
Бе й ак ме 3 Не дев Твг ів вк и ве СН Ява АХ Яд вве и ж СНО Заг ТУ Бо вом цви ів ли ек кв с БУЄ ВЕ й КВ 5
Се ша вне Ніз бух Те Цебе: Тут сУхін Ту ух ев Сх КВ
Кт БВ ТЕ АНІ АН ОВУ АВ СИ ее Би СУ еВ Я Ме; ВК"
М МУ аю Ба ВВЕ Бо Сх Сво Бе ма Бе сти бує а бео що 135 ї35 ее
БеСВНеЕ і ух Ав Бе АкО ТУ Аз Мі лева й Дер Аве Ма меє ів Са Са Яку ВЕ Су ух бек ек СТ; бек Бне тук АБО УВІ їУ5 А жк Ми БУ Ві ід бі Ве ех Су ж іа АБ ЄМО 183
І5О їв3 НЕ,
За Ящи вщо Хуг ж МУ п зер іже ТК АНІ А МК Оех
СИ УК Ко Меб і УЗЕ АТ УК Ата бер бо Ку АГ бе Су аг
Ак ер св Су СУ СИМ ВІ ек МОЖ іде Ме Ав ме Є Мі Му -І5 23 Зк аа варта сто би ки А ев Су ке хе См Ве Ма вав Пе м
Ага Заг ге Се А аа СМ тет Аа вве Бу А Тук АХО ее АК
Мег ек і М Тег І Пе У яв в ям СЧу СА УНІ А А ко ВО Ва
Бен ін СПУ У Афв ів ух То У а ака Був А бе Ар Бу
Ав іє АЖе Ав Це сю го Вів Сів йо бен Аа ін СА У СНУ
З З І За
Авв Цух ех ек СНИ до ух Бе Ве Су вена хек ей бек Ме Тег зах Зо ЗІ га щегів Ку Б в гу і ін вто Ма НІЖ ЕК Ма го ВВЕ що З щи
Віз що сх мам ми ТК ан ре тує у СНУ Бе Су КРУ КОВІ а кто що
Ск Не сну ЄМ ух кг ек лу бе м Айва цей б'ю Суз ЗУ РНХ
Ме рте Не ев га тя ем ек ап йо Му Ге га г Су БАХ
За Зо 305 зай дда ух Ак Аги бБег Берг Месія РКО СТУ Бе УВІ
Зп5 Ів «їй» Бена хапієв «й За м у З вер ЩА ТЕ ке с СМ Це ЄМ Був СНУ ОБО сив це
Ту і ет вал жа тем був А Саме НИ ма Тер Р ук ув
КВ КУ БІ ха Сі: Був ех Кер ру ее а СУ воза ве два аг Кен се Сива
ЖЕ ВИ ЗЕ іви баг твгова Мі хе СИ Ме се Ви МУ ев На Че ЦО я
БЕ Вів Маг ен В Пе дер ТВ ж вед Ск іви 5» Вер ав вар
Внезжи ви ваг Бук сад ев ія Вів а Баг АБИ МЮ ух БЮ же Ми ББе Ні бує ТК бе бек Ук ух іа Те СУ Би ВУ ев в Щое що
ЇМенш БУ Кір Мег 5 п цх - КК спи: ЖЕ: М тн щі Жака Ж ії де
Ре у Те ко Вів Се дів СН зе Сну СНУ КУ УВІ беж си ще 115 еВ ще
МЕ хи Вів пе це СБУ ви баг ма! Бе З бух дів ни КО «Ек їх - Я З
З 135 Її мег Ре Но Ку Ав ім гу Ту в Ні Ав ее ва АБ АВ Ме іши Ки Муз го жа Су се ес іеа СМУ аг РЕ Бу а щМе У 155 17 1У5
СУБ А ук км р ме Мем ме ве Бр Сук их АВ АВС ем
УВІ АБА Аве Туб Нуе бух Се Бр ще ам; у Тег ве вів М жу
АЕН З Су Сує СВ СО Ба Мегіре бе Ав Це СНИ М Су
Аеровч рез жі ОМА ех ен су мем хну у Ре Ав вхо Ле НВ са оо ЧУ я я я та Бер бра сту Вр у СМ Бо нак «ХНУ Ба вв в Б Св КЕ
Хек КИ бек В ук Аг ет Бу Се во сів Ага Со ем ло яма
ВН ча ві РО КН НЯ КУМ Су Уа Ва СНО ЕЕ СН Ка ЗК Ух їшу ши Су МУ СМ ее НЕ СИХ б Уж ви М ах Бе ій Ач в 000 Кая зх їжа Бра Сує Бег ніх пет іх сем Ям) су ме с Вам йе Ж
Ягве су ЕТО Ак Сує ге Але Берг Бек Мак ув без сте ВВЕ
КВ За ЗБ «МА я ей Мото «кари
Я В
КЕНЕ ТАНИМ КОВИНО НВ Мене пек СВК века 5
СеСКСФОЦО ФЕНВОКН УЮ сб секс маком ОО соки ач Ки ВК. чив КВК таку и УК ох ММ В дух КО
ПВЕОНЕСВЕВ ВСЦ кекоа ее ооо ство сосок воаесеаяє ОВ
КОМОРИ Сесемеоеє Кого Юенння ом еосе ен всстоєс НН СО
Вода зесвоевв вемоссая зовсчоовс осо аа ним есвою ОСНО фнинсваї ззасвісо Новою оонамвов мно асан 00ОЗБО аЦНОеВ Ве песо зов кевея замесен вавцссм ай несв кесванаан кеценєв Я анессс сао сцена 09
ВеКЕКВОвН веб КаЕМЕВНе ЙО ів «А» я «іі» 55 хі» ВЕНтТ ЗарікЗ «а Я
МЕ ТВ ОВ; вес о Тег А Мессі Мене Не а У вве бег 1 х їв ї5
Во туге «Му ща МН СМЖ аг Те Аа ТВ Бе ТЕ БУВ СК СК 3) ї5 Зо
Ме Кує МЕ м МНК и Му С ви бує Їх РБе ява си Щек Му іув бар іт Ар Ді У Ащо ув мее бе ув Яр а вве Ав йзи 5 -
СУ вер мес Уа Ач МН Зеє сю Бе Пе и Бе Уві дія ав вх ЕВ Я 3 5 З за «МЕ Яд «Вій» ДНК «йВЯ БЕкпо каре зей» 45 пово денно ссосоваци ОС гогесююв «на йНсеюЕ 0 зсасжав сспучетває со юссо вацінсеє кю мисаца 1238 сеБЕасає спооввесів песбчевєв сесвову пеанаєююю бокову ї50 кеснкное заново: озосао оо соосовмас ооо ниеесє СЮ скавааві вассаасв вода вазах вом «ово ОС 5 шести яассеває воно іроасксє своею; Мессноюю 5 зно косах созовеснов сосбсавоєа по сов «вв цочва скасвокоє садова косе а оЄ МКК щи сова азасовсвво усе еоос дам осв сво мовов ОБО ісвссвевом екс КнМ асан а Окесев фа повна 00 ВО паайовоке поеми свосзєюсмІ соувововує овосгоке сесеюнаю 95 м о п о в БО о вм в о ПО ВО МОЮ ниж ем ласо Вин зов ана ОЗ «Ве асеов СЕ ЕМ СН КОМУ СОКУ ЕВа За
ЗЕ еВа ЗК «МН а «у» ДНК «ен» ЯЗ пруводекаа деокє севсуанон ісснес броецен кевсесеє БО вмажоааи сон Кен КВН Весно ие ово асо ї38
КЕВЕВеНННЕ дівцеююсв оосісясв спосоюи обясвеоцдює несе ЗО їссссооцое чаоасцо песо се охо со пеню С
СЕУ КВН Ва ев ОККО сао ВН сід зна Є зав
СЕЛА масово Ос меенна золеееє хана КОКО ЗК обнова ваоново вссооктнх Вин свозаою посівнюю ОВ зас мохноайасє сопонєсе сосрсвенєя МО себе Я сонаскієва зесасацою еконо сосна вессаасв ТеСЄЮ ОО сіовдесава севосвво весен оса свое засно 0500 севнасоацее Кастеои зе сеесвед соту саме Б вісвоєвоюв спрємсво свсоовосту всовойсе дсбросісва сбуоеаовєю 720 сессавова зісвовнна сс соовооие санвесюс ссвооеєвюа ТВО зеввазаки сесємомн; засесанне сан еєє се я ССКООса Ні
ОККОКЕНЕес ЕСВОСИНЕ СеСсееНЕ Софгантанно везоєвсе ебокасва івснжваеє МНИХ заахасва васцтаує ваза и кеВВу ско
Що зв5 «Кі» ак «лій» ДНЕ «Іл Минпо ващмеве «НЕ а зовоовео помесеомчх ваенестсвв осбвавевоє ваокове сек ве скозасвос заоосонаце зозаасосє еоссссв сасвоеоуся ваза 36 ев ся осетос зесвоюасва совет ве вибевомс оеювов ОС
Чемазецех знає смс азам асо о совки зав совок совевоааоє ваазооіє нео со своєю Б зо щозеваоєт стщисоюВ: Весна вас) вас ео нос зво
НО завроваце вас чом вас во 09 зов севхнуєтх анкжованве сосаоВ сесвітоссх восостнюмв 0 ЯКО заумеєюво есевгсоюоюа воосуек сфовсвезнроссвесвої икисвсве жа еСтЄНаєснену ктсвваснякх УЦеНІСЮС сенувяоннанну песен нся всяєстясве ОБО
НИ ен книЄ МтЄЄВ гедсвасо Метосав семівацеє 0756
КЕТННЕЕ ВЯСКОПЕВНО ВОМОвННО даенокяенає ЗЕСВВОЄХ ПеВКУЕСЕМЄ Тв казок ик ас ВЕК ЯІЄ базі савани сао най ване: сфе вессосенння сезон єоєа сесовававу сосен ОС галнанне ОС ВО сани МОВ Са зоас Вася ЗБ ставок є Месвосові ссосвоово: за осос сво вс ЗНОВ
Мис зом оса є они вс ою 0 ВО сова а обов есе св осо пек ТБ
КОКККНОВЕК КеВУ ВС Кк секс св мосвау ее 00 Б ваасиеккасє завекнсекк пускова ес низ есвокнно ТИВ осбованаоє свтувсвсся сснссюца см свов вою бозоваєє ЗХ О косе к ВБОВОоскеВо ВОМ свеуєви и бана заМвене ЗВО сів соопесасве сосен ве сс М песен пасваузи аазосоувся всастєчаос возааносво зовонсяє ОЗ 50 кова оК зеловнуваава свои овово сороенаво СВ воє мед ша 0 кадсвосас ние своє ворон свв спра пика ОЗ
ЕКС тину СВК оонаснувовеє везаестссє уарусє Т16БО
Де ВОСЕНИ: ее Бакаке ва сус вовк ОНОЮ
ВСБТЄВ ЯК СЕ зво аакє ех паза змова ЗВО х 2 Мото хв «хх а
МК пе Мег сем Су Су Це СТеЕ АВ хи жа Луг Те Му Тут Бе з з сок, жан Ж ее док жеізх ху З шкі Мою Км хх Бе Ж:
Сем Вт БУ Ку СНІ вам с Уа СНО СМ Бе; ма жа ЦЕ МК
Уві версію ен вка ве Аз сх Бр: ГТ НЕ ТР іш ка бо Де
Кс З 35
Фів Те Ба ВНе дер бек уз ру не Ро Ге ха Тв ТАК м дня
АНУ ук ку ато Ту бе ор ек і ва Ав БИ ТИ МЕ УК Бо ще 7 75 що іу5 ТЕ Тує бор ТЕ бвк БВ г ко Аоо Рна еа Ап Ян Сує ре Ві
Те чЕ
Чероомм Бгто аг ву ва Мак тн вх де Сіл АВ гені Кук НІ Ай щк 105 каз
Тержоде нів бів бек ага Вел ке Су КиБ НА Бео Ага Бра Сл ТВ
Со ва Бу аг вва ех Ве Бе бур бег Щі ТВе ДРУ ж пов був
МЕ СН у Сує НІЖ НІ бе бек йому ув А бер сю Бе Те ух
Її 156, 55 ці
КИМ ОТМЕ ТВ Ся Був ТВ Був йоду Мак Вев Тву фе Бе З ХМ М
БЕК СЮ Бов в СА Ав ув БО КА ЦЕ СИ ВІВ дао ти У А
ЦЕ РКО ОН Би У ее в без іч іє ее им віз Від У ЕЕ дів сим Уа бек МОХ Те бек вро у СІ бек був вка Кре Зег ща
Ух Да ТВА ди У Бе БО РУ Не «ік «іі ЖІ «ші» ВТ ек» Неену вах «КІ їж Я
Ме тк ее в Ве СУК Те Ве А 5 Бе тує тек Ху тує ко ї х їй ї5 іже Ре в СХ Со дай у Уві в С Бе ме Сея Пе М 5
Ко 5 ЩО
Уж вн СМК ен Бе буо ія СВУ Бе Пе ма Те Аа бек кн лк
КОН ТВ КН МЕНЕ ле ЕН Кок СТЕ МБ Бею ух Аергі Те ТУ дей кВ
АгрЄх уві а ус т ази бек ух Ав Те Ме МН ів
КУБ ву Тує во Те бек иНе во А РО се й во у Бе ща
Зеров тех баг Дек Ва Ме ТК бго вер Не Ав ге же НИХ Дів
Тер/ле Мів и баг АКО Кал ем бух ко Се БР Деу Би Сію Тек хе ху тк: ма 150 їх5 мем Ат Ку баг ел бе бе ке гот б Тк Аг Бех ба іде
МВ СМ НУ Сує КИ БНЕ бек ог ех то А се НЕ ТК іт и - їщОа 155 ВЕ
Тв МЕ о фу ВУ ух вер Зк бую ТВі Ні Ме На Бі жає
С5ре дме Не СИМ Вжо ух ее СИ Бе КМУ АВ Де ТУ НС БЕ рез і ем Ма Абе Вів Б у бує Ще с дів ва ма су Ма рЗХ ке всеж
Ом Уж же ВВЕ Тег моє виз СУ СНО Бегіув ве Бе бак ем Бу
Ав Твен У ав БО бко Пе Ук «і я «і БІ «кій» ВИТ «кій» Мом» ввоек
Ме РКО Вів ее сів Би Був Дів Ячак би Ме ко ба МВ є бег
Пе ув Му ій яр ре БУ АБО СИ Був ет Мне зу ув СА 2 а 3
МуБ МЕ ТВт ев БР Ада Аз СН дів іх бух ба Яна кух Ада Св іви Бех їх Тут Б) Ме бухе «5 Бір жо; СЗМбю фут До Є б ямі Ж
УК ек МУ Туг ща БІ ЗР а Ме БНО У Гук мух че Б КЕ
ЗВ ВЕ БО
Бра бен КЖ ви Со Вів і уз ен вом Ту дів Без і вух ВВЕ у уз ГВт ее че лев бо з МБ Се бе Тук цез бух У їв спря он че
М 195 то
СР ще БрНо КУБе СХ Уа ДІВ Бук уз ме Аз МО Був вам бал ме 120 125
Бе же А гео Бу Не Ле Ага дян був ув Ага Ве Ні сиг сут 13 12 ї5В
Її» ж її ії дир вет БНе Тек Джл ВЕ Ж БИК ЯК бе Аев Ре ЮК Тек ВВ Де 155 ЕВ Уж
Аа БЕ РЕ СУ Ме ТВ ЕНег вах то Сх Не бен и тує КУ ке з и до
КМ РМ Ку лем дек их Бра СМ Ме Єух бек емо б Не УВІ го ме Не Те ща ше У ем у Су Св МО Ме Сем ех МЕ БВ іо Ме Не КН ув А б зує Мт (ЗНУ бе ТБ МВА Зв Пре 50
Зи5 За 5 я
Ук у СИ Ді жа УЕ су: ча пе бе Бе у Беж бив су ТуУг в ке 55
СМР У КУЄ М Тр тве тує Не С на и Бе Тут вра ве
БО «ВО ВЕУ
Ме ЄМ я ЯМе Се СОУ Ні БО Тег ве Ма АБ Пе бе ме Та
У ща ва бабі СБ СуУх Це Те Аа Ос Бо Ту Пе У Ба б зе вне
Вч ЄнУ Со вен ку Уді ЄМО Сн зо Кі ух Не Мі СНО УВІ ме їму ви Биз Бр вів СМу РЕ пе Тв АБ аг вл део А ТЬу
Бе рве вк беріг НЕ Русь з ув Вам Ме Тнг Ве дже Вир НУ ; Е с - ч с се Я п и ИН
Кувіжеана Гук я) би Заг ух вер зе ТК Ме чек БУК ТР
ЗА 5 Зах
Тус айва т дек Ріє жо аю він Гея Яга Ага ух бе У о СИН
Бр Бер іжв а МЕ Тв Бе ях в Віз во зу Мі: АВ пе пе ла5 ЕВ ча ай ве НИ ЗЕ ди ка Се бує БР СН чо ак то Нв ТВі Аг
Ба Я ух іт ек аа Бех Вне Ре ве дек За ЗК аа Зм вам ув УВЕСТИ хо 35 Ям
КМУ Су НЕ ЕК ек хм б) ув АК ер й Не ТВ а М Ту
Те бук Те же у Ж Ка Те Бук Мі МВ ка Нр ке Су а5и ах ЗО
Авт СЕ Ав Су мецм Си яНе Ст ЯМее ба ТвК УВС Кев ВХ
ОМА ем Ущі Афо Дів йРО усю ух его Абе Ай; мае СЛУ Б СН за Бек В Твгоае Бо Ме СМ БР Ух Ав РН БЕК Б БУХ Аж
Же ко У ем Бере Без бе ві
ІВ ев «іо ЯВ «МЕ» Нічна после нєть «ел» «Я» зМмештевна пескдевність пиаянера НМ «Нр» 5
Восени Мер зок: ва жу «як ча «ії» 55 «аз ДМЕ «віх Цегучная послав ить «дах «ях витизнитювна пвслідоннєть паваеева МТА «ще 45
Сацканевоо всбсеєювєв псюкеовю БУВ: ЗНеєвая зксеех «5 «1 5 «Мі 5 «іме ДНК «кій ВІРУЧчНа ПЕД ВНІТЬ «ее «Ай ЗВИТОВНа ПОСДеВНСТЬ ване НУМО вона ЕК Евцчи са ВЕ ху во задане Мен ее Меце 35 «я» п «Фі» ДЕК хеЯж ЦИУчнНа пес ааНт» «ех жк ДЕ ТЕНТОЖЕНЕ ПОСЛІВ ПОЗА АК ЯМ
«аз сенавасо весен а доззоввове МВесКВеНо сеаасока Вас нео «ВІЗ» МІтучнНа ПЕСЛЕВОВЕСТЬ ж Ех хв «Ваїе змістовна послідвнить повунева НРУ аее ВЕ «НК ще веднеаеаомУ СО ЕВКЕ МЕ КІ їх «вій ДНК «13» КтТучна после «ВУХ оди жА «А» вити товВна пОослідовВить Прайнева МАУ «ЯК КЗ севменмасо всссасез позаозваюе миівсее кю СБ в «З1їх 5 «ЩЯ ЗІрЕУчМа послу УНСТЬ «ад «ЖЖ» Зміст песледенамст пуер МС УМІ
Не А винен Моска гав цОозани чав Я «НІВ 55 «іх 55 «ні» ДНК «Ме ЩРУхНа ГЕМОКДВН» «ж» витианістовиа послдеенктв правнерае МеВ. «Ох БК ак ке век «адшниеу сасена сечова мевассая сваванасєє аа 5
«ЗНМ їх «ійж МЕ
І НЕрУзна пестем т «ах ее зВЕстевна поси яне» пранмера КИТ «м 5 перо о с ВЕЖ Вр ВВ гуси за «КМ я «йІТїз 5 «Я» МІ УНЯ пев дХННіСт». «аа» знінзиитевнае воно. прамнеа Ве ши касо все зоацаоо пази вес сс е ще «иїїв 5 ст» ДМЕ «ВМ ЦШЕучНне ОСИ мВТЬ
Кос «ах зе тевназ ен вність правнева ВЕС зоцеаиневи гасне НОВ ке а чіїїв В «ії з ДЕ «аа МІРУуЧНа ПЕСМЦВНІТЬ «йаїх анти ВНна песо ть позанева МОЗ «Я» о
«ії ї5 «ій» ДК «ВІ15» ЦЕУчМа ПІСЛЯ «ие «ВАЗ» зестевна песлідовнть праннера КОТ «Ні БО знак паса зав га Б васчевевое завовова сота ав З «аММЕ ві «ші НУ ЧНЕ ПОКЛІН «вй звитизнитевна поси внить пранмера КОТ 2 ЗЕ У «Я вуса зсвекав песо ес маса зеехюосва ВаКасх ще «Я Ціручна песлім «й» ЗВ ТОВНЯ песлишННість права ВАТУ «ії» жа «кій» НЕ «їх ЦЕРУчна пегсвіанніть «ах «Я» антнантнна пасжаовніть прайнева КЕРУВ «Ві» 5 «ацБникс ЗебонесеВа осо Мане вена сює вес 5 «МО» в «ій НЕК теки ух
Кона ЧИ с кпку уві вує ут ка» МЦіТУчна пелернНість
«Ве Міста песен ст пк ЖЕК
«ЯК МЕ акне зем МОВ СХ 5
«а
«міх ЦІГУучНЕ ПЕСТЕДОВНЕЬ
«а
«ЖЕ антнзкіЄтювна песямименеть певимевя від
«Ов ВА свціванеко веваєв зддвавацеє Кемер насе вес за
«ВТО Ва
«ак Штучна песлервність
«а
«ВИ» змістовна песлідевність пренмеа СТВКЯ
«МНЕ» ВЕ как Ву
«Віа» МНЕ
«а Цеучнатосидванить
«ої» антнзниена послідовність печера МЖК каша амом зе укоуновеееє квас сее СИМ ВоВе хо

Claims (8)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Спосіб діагностування раку молочної залози (РМ3) у суб'єкта, який включає: а) визначення статусу метилування щонайменше одного маркера метилування, який вибраний з групи, що складається з НУАІ2, МОКМІ1, КРТОК, 5І.С22А18, РГОТ7, КАРБМ, 5100Р і ОУККА, і р) визначення кількості маркерів мікроРНК тік-652, тів-801, тів-376бс, тів-376вба, тів-127, тів- 409, тів-1486 у суб'єкта, причому зменшений статус метилування щонайменше одного зазначеного маркера метилування та присутність зазначених мікроРНК вказує на ризик наявності у зазначеного суб'єкта раку молочної залози.
2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що а) визначають статус метилування маркера метилування КРТОК, МОЕМІ і КАРЗМ, і необов'язково НУАЇ 2, і р) визначають присутність маркерів мікроРНК тік-652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409 і тік-1486.
3. Спосіб за будь-яким із пп. 1-2, який відрізняється тим, що а) визначають статус метилування маркера метилування ОУККА, 5100Р, РШТ7 і 5І С22А18, і необов'язково НУАЇІ2, і р) визначають присутність маркерів мікроРНК тік-652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409 і тік-1486.
4. Спосіб за будь-яким із пп. 1-2, який відрізняється тим, що а) визначають статус метилування маркера метилування МОКМ1, КРТОК, 5І/С22А18, РИОТ7, КАРБМ, 5ІООР, ОУКА і необов'язково НУАЇ 2, і р) визначають присутність маркерів мікроРНК тік-652, тів-801, тів-37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409 і тік-1486.
5. Спосіб ідентифікації пацієнта, такого, який відповідає на лікування раку молочної залози, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилування щонайменше одного маркера метилування, який вибраний з групи, що складається з НУАІ/2, МОКМІ, КРТОБК, ЗІ С22А18, БОТ7, КАРБЗМ, 5100Р і ОУККА, і кількості маркерів мікроРНК тік-652, тів-801, тів- 37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409 ії тік-148ю0, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після зазначеного першого зразка, причому збільшений статус метилування щонайменше одного зазначеного маркера метилування та відсутність або зменшена кількість зазначених маркерів мікроРНК свідчить про наявність відповіді на зазначене лікування.
6. Спосіб ідентифікації пацієнта, такого, який не відповідає на лікування раку молочної залози, причому зазначений спосіб включає визначення статусу метилування щонайменше одного маркера метилування, який вибраний з групи, що складається з НУАЇ2, МОКМІ, КРТОК, ЗІ С22А18, БОТ7, КАРБЗМ, 5100Р і ОУККА, і кількості маркерів мікроРНК тік-652, тів-801, тів- З37бс, тів-37ба, тів-127, тів-409 ії тік-148Ю0, у першому зразку та в одному або декількох наступних зразках, відібраних послідовно після зазначеного першого зразка, причому зменшений статус метилування щонайменше одного зазначеного маркера метилування та присутність або збільшена кількість зазначених маркерів мікроРНК свідчить про відсутність відповіді на зазначене лікування.
7. Застосування набору для діагностування раку молочної залози, який включає: а) один або більше засобів для детекції статусу метилування щонайменше одного маркера метилування, який вибраний з групи, що складається з НУА!2, МОКМІ1, КРТОК, 51 С22А18, ЕИТ7, КАРЗМ, 5100Р і ОМККА, і р) засіб для детекції кількості мікроРНК маркера тік-652, засіб для детекції кількості мікроРНК маркера тік-801, засіб для детекції кількості мікроРНК маркера тік-376бс, засіб для детекції кількості мікроРНК маркера тік-37ба, засіб для детекції кількості мікроРНК маркера тів-127, засіб для детекції кількості мікроРНК маркера тік-409 і засіб для детекції кількості мікроРНнНК маркера тік-1486р. Зо 8. Пристрій для виявлення раку молочної залози, який містить: (а) блок для аналізу, що містить: () детектуючий агент для визначення статусу метилування щонайменше одного маркера метилування, який вибраний з групи, що складається з НУА!2, МОКМІ, КРТОБК, 51 С22А18, ЕРИТ7, КАРБЗМ, 5100Р і ОУККА, і (ії) детектуючий агент для визначення присутності мікроРНК тпік-652, детектуючий агент для визначення присутності мікроРНК тік-801, детектуючий агент для визначення присутності мікроРНК тік-37б6с, детектуючий агент для визначення присутності мікроРНК тік-37ва, детектуючий агент для визначення присутності мікроРНК тік-127, детектуючий агент для визначення присутності мікроРНК тік-409, детектуючий агент для визначення присутності мікроРНК ітпік-148Б у зразку від суб'єкта; і (Б) блок для оцінки, що містить процесор для обробки даних, у який матеріально вбудований алгоритм для здійснення порівняння кількості, визначеної зазначеним блоком для аналізу, з еталоном і який здатний генерувати файл вихідних даних, що містить діагноз, установлений на підставі зазначеного порівняння.
Павнемк іскор: за венові Ера дня ваного квявлетнх вик мої Кок Тебонцв З Ми зраакя Разжнах Мері визна вва Дееуни вагна нам Яніна ви жена вив иа ДАК з невнвсрячни кро ДНК зерен кан ДНК х дерюререче криві ин не (Мена УОУХУККАЕ МВА нАХ Рруви боетозі Мимпазже МЕМ Ковтрєю Брхнее ЕМО КХонмхнй Внизаки МЕМ я Й Жов дужими Ж НехЕТрм ЛИУТНЯМЯХ з еовововії Моніка ШлННКЕ Зонека МЗуеюукемо Зукучаі т «5 є хо ку ук ук ка У й Х ц Я ст г ст о В ЗВО К ЗряИК НЕ вис ТЕКИ ХНАЮЧННОВОХ з певне НМ ГЕ еВледейвриєькозх ЕК КН левмуореькунтих МЕ ЕНоол ет і за Киньн хукІвецектех УНіВереНитх УНІВЕКЕМЕККУ Кількиль мипснив 3. т А 15 хх їз Зедіви віжу ке Ех яка « 5 Зк Діаназан вже За вела зЗиже БЖ тої зай Я дання тотстоноооосттетооостечтстьктоовонтно, . ооттотккВЕТННнноооснчн НТК етнос. есте то ввотооотетК нккоеетсссоє . ка Но ІВБе Хо дека мук ВО зва меваж мавп ува ква за зок мАаіщех ЗАВ не неху зкауиунина ЕОЗян малнХиКМ В ІЕІКА ЛК ХНИ ЗЖцлк ЗЕ заці ЕНН схе ЯкВХмОКу ЗВІХІ УВІ нерж вупавех зва еко Кіщоитеь КК ХВО ІНН ХВВІНМОВМ ЕНН КОК УМІННЮ Ма пуранкикних МАК ВЕД МНК ЕМВ Важ МАУ ІК УК ЦЯХ КАКК зма хено надам зе Не ТО аз плине ще ЕИЛНКОМЕННН, КІ ЯМІ че - - - так БУ педа ще як - я заава зазна «З не - ше - Іване зу ох вхоас же -- - - - зеащвоВ МОВУ я» - - - - зав НК тзкехі - - - - тав указакиі кокос а а я ї мВ Мак Фіг ЗБаблиця З.
Мідмунності мелннокадня восьми темів є трьох рзувдах валідації Негзний рака валіданя Другий раквд валідації срськавтя Кіедівих Медіяна СМ: на ЦО ве ВЗидхия Місія вноваюь СИ ва МЕ й- зе учнна ВНИХ МТВОННННЯ значення 0 Кока ЗМІНАМ ЧКОГО мехилнжакиа хначення? Й ТК ЕМ Бу ІЙ ІМЕВ ЕМИМЕРЬ ня сво влЕШІЗУОВЬ ЗІВіІ ОВУ: ЗО УМИ ВЗА злом зе іі БОЮ ну кра г зом сані ЗО аю швея 0 ож одн ЗБОЮ БА мтмх сре А зльншлесел загіовмі сіла щем пблфнояь па БАЗІВЖеМр БУ недея гра 3 об: ою иво іі ЗЯвІЯ аб Б5БОЩВ 05ЮЗБОЗ язіка»М аю 35 пОтТякЯ сеї озацьммо5) Ва ОЗ БІБ і ЖЕ після Обов; ЗІЗ Іл ЗАЗ оУВХЯ бра плЗвівОа по мояО 32513433) ХВ вліво ял ІЗіВІмОЯ ЗАЗ УМ яв ЗНО сво 33 ово ОБО; ЗТ.
ЗЕ 0 повер зов осла Та ЕНЮР Ср а азів зі 135383 ЗБОЇ падінь ЗІЗ; за яКіУЮ оп ЗК граб. зав Атотяр Злі яр зе АЗ Я ЗМО БАейНнОоВу; осязіиеовВА за фів в з ЯзЕАюЬ ЖК кро я плзецжнозв заз я ЗЕ МАВ КЕ авіа ям ЗІЗ ТЯ МТВ НО ср ЗБ Опов олова ахЮ АКА ох аЕ ОН ЯБОБ Здті3л хау ВКЖКАЗВ Кр З вліво півня зів Зейю 0 вледжеояь оЗВаБОеЯ зламав оба 522855 сре Я олешліза ох відвів ОвОЯ ВН боб льо олацьЬНеВО се5БМЛМІ МЛ ЯЕЯСА сво Є ПОЗІ ІОВА ВЕБ ЕВ ЧЕЮ погша»ма пою ажМ Зав ел МОХИ ІІ це 8 Зав пе вов ІВАНА ЯЗ М Аж шаеоВи Оле Оса ов и ЗАВ Фіг
Таблиця З. Візмівксті метнлювання шосьми генів у урмох вижноях вав продовження Тканики рана ввлідаї Друтив пауня валідації ся сам Маелівна Мівіна зниаикія СВ зе ке в. Марка Можна 7 го на в 0 рт свя окис зі вноЗ-ао, ЗсЯІІВЯ ЗІ 0 влощаохи ЗфюеЗвр вЖИВОВ Ж ОТ Кур повіз оле аз ньОодм За 337 ДЯК хі бла лові ВУХ ЖЕВУУ ТНТУ сві З озвію3 ві вію ласка за плесо ВЛ МЬОІЙ БозіьАЖИ ВавЕВ Рот кра я ох» 01333035 вЕЗІЗ 38 І Аве блема ои о блюОолЯя ЗБ ле5о5) З л5БВ тЕдавунЯх зна пев ЗВ зим соль вліво фі ююи ЗМО кт сват оЬНШОмООЯ) БоЗМО5-Хр ЗТ ов; 0 плоізнеаІя обзоовН ЗеБІБЬІЯХ ВВ вл я плодова 38323 32823 0 о5БІЗОео) 521 ЗАЗ жи отв; вБВЯрОЇ кто тре парео; вію) ЗМІНА по? 0 спеююева; Бо5ІЮЧІМ З ФВ вРТОИ СвБ Я сззецлеаз пло зір ще І3М-О5 Блешіьа опа зи НІ30) КЕ яРТОВ сво З З ющшоаяо оба 59 ЗЯТЬ НОЮ ЗовіВО5 М 05 неон ср З Зетюз о ов 0овр 2335735 лен 00 вом ЗОМ ОЗУ; ІДУ БЖ якТОВ ср 5 3855750 Же БЦ ОН 1554223 2О0р Е-ОЯ балони; 3065 5-І7 Ол ЯРТОК свв Ж шив з КО Пілот для ВІ ваше олова ково ще ДАВ ря певна; овеаа зов 0 00 2о? ом Завехосв о юВКІ 0 яАЕЕЕ ср а Ото пжІ жа БОБІВ 0 дя зано аву ояй зовіавізют азев ВАРУМ Се 4 пли Оові пазів ови) злив Ір МНЕ ода ювасяй ев мою Во АРМ сре 5 оекіотібвдя атшсзааюв іозюшакіжи Ух азішесям пай Зло Ва ВАРІМ ср б ета т ово ви яз) ЗО оБЮДЕНМ база жи мщювюОоЮВ паж ддезЗМм свої пз амннОКВ ЗХ ЬОМ 12пімалІ п оеівевіІом фюзіао ілеюаьі 323 варжм кри оз 33353 пи 132» ЯМ ох пог ана; оеіавчмІ пови б Фігх (продовження!) Табзмив я. Відмінності метилнмання восьми генів У тпьок паунлах визішний пух нюканняї МПехчима раунл чин лації Другий рауУмла валів Щі ховтнмна(ВМКК; МНЕМЗІМКР; жетилюванвх знахоцих? коктралів НК веимкю кхтввнахня ЗИКЕНМХ? МевмІ сеї 0000 па ОяМ ою; 13 Ли) ЗУ оз ОМоЛЬ опФУЮОЯОЮ ОЗОЖІБІМАЯ) ЛЯ МОВНІ КІ 7 ВЕ ОІІ пою 29803393 87) ЗМО бовшлеОВ опЯюОяе Зла: За0БОВ ЗАЕНМІ щу й воза ОУ а НМИьЯО; 235303 5-03 вав льОяВ ВЗ ЕщМММЯ З М15р зв ВАС КМІ Ср. Я ОЛОВО БО 3313 БО 1955 пдУВминотеЯ озима КЕ За РУ; Срна 557 ЗБ ИИ 053 ро НЛО Зак вано ФІБюЮВИаЯ З Я БаВЦя МЕММІ сере а35і62Іч и 022 Юа іі зло внмюоаєВ База ЗЛІ зав МЕИМІ гра 3Ї авіа оз? ме зір тує в юФояУ огщюдеаяй Зі ває еКві сра 3 ВІН бо ІА АТ а За аео ЯМ ЗОВ ЗІЗ знаю вані кре 34 пев меле ев МОВ ззіжшновиа зл Юамиві злі БВЛяМЬ ЗНУ ММ Кв 35 паза Олива ІП БЕ зе вОоВяр Во зоні і ВАВ МО Кри ЗБляЛЕ вав ови Бюл ІБ В ЩІМЕВУ пз мМОон о плошоі Зо со АЖЯНІ срб жав па шАовБИ За 3851 оБАЄВ ЗУ БІО М ВІЗІ ОВ 5МНі13 80 55584 вав св злого МИ 388 35 Зо бі жовоВи ВивБаявОвІ ОБО МЯІ ів вАЕНКХ ср 3Х23 Оле вАм ОЗОН ЗМОМ Ба сю ВльННЕНУЮМ БІВ ЛО ваанх св ле зи оз 5 УМ а5и см омО воБіюлІАМ ЗОМ ЗАВ ЗАМ р Я з5ішаоєю зи ам їі з паля ознцошьояВ БЛОКА миКЗІ хр гя 24535 оЗБіюгя а ІА ЛИ зи сов ах; лозою аЕ ОВ МиакзІ кре ща 55: бязі. з)оВж 0 053 п3шо5ая БІОЛ зе ОВУ кре ява бою 353 зе Ода о бівцьМмаяю аа еУю жах МОВ хра плац аа Ба БАЗ Злом ВІКО а Хі лм МОяМЗ хрИ. пав ам 04334653 їд8о7-а4) длОї змо ми озавнними За Ж знг.2 іпродовження!
Тасмевця З. Музменоть ее наван весь Кене є ВвОох Маунлах валеВНМ кпрадевена г Умова кіезівна Мдінна вюпаакю ГЕ зу ЗКУ й нтам сви З вай БІЗНІЮВ зоб ВеаВю тав я КВ Я пава вань НЕУюх 0 За а аа нев сві З планово бло ар еьеВ 33 НАВ он КОВІ ЯР ОБ 0 сея єв 000 бвовояю базееже Знав 000 Бе ВВ 00 ВОРОН базове 00ОМНЮ у заоор кр ла 000 вів обехфобехМ ЗВевнь 00 ЗаЕО Ваг хр лю ЗдеиНЯ мо ее пока ЗМ КЕ вла Вали 0 зн ВВ БЖ яоР сив В плями ваза На Ьеа ЗВУ НЕ твБ я ПОЯВИ Кана оо о ЗВЕ2ІАНЕ Же Я 000 ФІ ОЛЯДБІОММ БОМ 00ОММЕО МАВЖАІВ сво я оте а3тмаами3 55 ЗЛЯЕ-ВУ еВА гро оби б 0 ЗАЗНА хо МеззАІВ сив Я обме омю обои вію яловх РОТУ свя ВЖК Кі 0 ЗВЕХ УК АКЖХ НН; ср я плен одЯ Не 0 БНЮКЬ в ва сво я ОА Бо еБЯ 0 БІВ пак сЕВІБУ У: ПВ плн мам па мя св іга аа ЗЕРОВ в Я ВВ ПН УМАЯМ зем зе ьІеМ пл вет ех пЯЩКЖМаІЗВ ОІВ 0 БЕБІ З вен свеЯ олкшеми?яр ОБОВ 0 заБоеА БМЕЮ5 дечОн гра я ЗДО ОВ? ою ЕаоВю ЗБІЙ іо яртов сво Я ота ляяМЯ; вує За АВ хе сь: ПИ а НК кн НК ак ак НН
Фіг. (продовження!
Таблиця З. Відмінності метмаюзвання воєн генів у ярок ранах вачів іищюовкенняї й Терен рана вид ни У ДН КАРЕН КН бів Па ВЕИЬ їх ак кава сра ї пев тя певен зак за КАВЕН св баків ноз о плаюзееа пови ЗД кар свя МОУ АХ: БУВ КАБЕННЯЛ МКК ТОК еВ МЕ каву гра 5 ожвютьаяМ влешаенни: са поатя 4ащех яаРОМ Ср У алі оВО: ОзхеЗЯЬО 029 В вл МАМ я й 5 КЕКВ, ВУ КВВ-ВЯЯ пл ЧХ ВЕ Я ше ен ср асфііа)тиІ РІЖЕЗОННОТНІ БІ аьЬяЕ 0 МЩ зим Се Х певно ОБ: ЗЯБіІ АВ Заю МОМ св лою: па; ЗБК таро мені се Я дае плеааМм БА 1ММЬУХЬ ан ВХ Р ВВЕ БИ: ПОжІаЯ ОО БлІМьАВ ІБК ВОК СВО, Міна зва ват ЗВ заенах ср 3 Зав ОН ЖмО ХЕ НКВ Зав МОНУ Ж 38 піар ОРАНКА: ОСВІТУ! зле МК кра я шафах) МВ Нью ІЗ ЗЛюКАХ? вх сра її пліва; пз аяяг 0 1БЕМ ЗАКО Іа3- ВЕЖ КК ЗБК ага пк бив иці ЗА Мам себ ЗЛ заці озон зе ьНВ ЗЕЕ-Й ВК ЕК Вдевівяаях Зам ха АК З ЯКУ ПНІ КИ З ща ЗНУ БУВР ІАТІ ВОІВ МОЯ Кре Е пара овлінжеаз ОЗ ЯЬ мВ ЗЕ Ми ср 2 панна озаделеьеюю ІКАО зазе ов БМВ ср ІВ пев оз завів заНеа ВЕК Се 28 пунк зи; За яВ хек ВЕК НУ Св омезмаля БЦ вАМ заг заз ЕН сю я С аяк Боня ЗК З. ВВК-Я денні сво 00 бно ю ожюжо сени 0 Фіг (продовження) Твйлмця З Днекраміваі ва завтнеть кабовів маркерів метилювання ДНК визвонжев виеалюн РМЗ адеровь кону в зримках з винних центрів. КМіеумазия гауни валідації Дикгий раунл змида ії Нам каре ДМВНЯЖНМХ З ЖИ ІЯНИМ МУМТЦКККМ ТОМОБМЕАМА У ЖЕК АРІ ВА УХУТЄВУМА КОХУВОТХ Жінакльіямоаки Кіемеагіхіядцика Жіпкитнівкцацах зхотууаннх подих дих ак ДИ закжюкавня хни АШСОЗНЬ ДВ 0 жехорюзнят ват с: МБО БМВ нУдія ЗКУ протя БВ ВІЗУ чвалрстківа 0 БВ ВА Зм кее дя ВО БР, СІЛА, ЮУККЯ, РОТУ босих 0 ДеБІЗАВОЯЗ злих мо ПЛ КМУ ОВИ м лесі ОПОВ ОСУЗВ3І ОВК ЖЕТОЯ, ВАМ дат прут хуХ ПЗ МОВ Звагроківа ОБРАНО Чи квот 0 Пе ДЯК пл "ОР. НОСА ОНКО уох прот дах Оля ов їбащеиній 0 ЗВУКОВІ імлревсва пДООЯкОВИ тА, ВИНІ, ВеТОИ, КАБ заг хих 2 За З про ЗЩУ Ол НЯ ЗИ хни ЗО ЯМА чек Як щу нан ви, шпесети дея 0 СУ ВЕНЬ Знати 0 заецпях чив ПЛАЖНОЯ МАМ, БМКЖ, ВСЕМ ухкннме В ЮУМУК, цетрен 89325896 кнлринівю 0336
КМТ. ВВЖНМЯ. ЯРТОВ, КАРХУ й й І
Фіг.
ТЯзблнця 3. Дисхрнк нори алатність забор маркерів металювання ДНК розрізаяти виипздки БАЗ ізлорові ково в ЗДаАЗкВХ. З ЇННХ пензлів СпродевженвНяХ Зразки з вханх мемтнвії-вий она рзундв валідації це Мпа м их члени У Ук - їх пана домхічучнх зУухт в и ие 7 Ви Пік ее Набори маркери преріжианиї хапенміним ком о, І Бк я Кость іхноязки КАЧКЖТь ям АЗиХ Кіхекитніоюцацею "ааЕОрхУВия пртх вінтаж ДВ мажоукемнне у зосою ць бара проте дис ДЕ
(А-.КеНУХеМ проти мухцтюах Ши хИкУВІВАМ й недо Зав ВЕН Хвіст отв 0 ОВ аВвИЖКВ 28 проте 213 КЕ О
ВМР. ВКА ВТК БОТИ кімн пово Ва Таким МА 0 ФвДЯ ВО Хі ахни ЩЕ Оле дульвяя МАНМІ, ВЕТО, НАКУВ Зерова 0 УЯВІ Звйтхумс й ЛЬОХМ дохо х штамом НУТАКІ, БАООР, БЕСТІАІУ, СТИК, с. М е в й й й 7 яхвнахинкз ОБОВ 5бхинІви 0 БЮ нОВЕХ дозтуютихтх 00 без ОХ УВІ, ТАБЯМІ, ЕТО, ЗАВ апр ДІВО КИ деіщяма ха 0 БОКИ В Я доф:шИ КМ МІВ ЦЯ ХВО, МЕЖА, ЗУНКЯ, ВІТ, й . й й АК, З. отнке, ВИ, Зоуют ям о ФВ ДВЕОНУ жилим Вл еВ Ховжжтехіе Ва ПМ МИР МАХНО. ПРЕ, НАРЯМ й й НВ, 5, СІ 3818, ВЖК Я, ; й : й Й : пам они 6 ний се пмивя появ гмлкннох дал Жмтщрмни я 0 пода ЗЖ вот, ОВ, КРОВ, НАРУМ
Фіг. З іпродовження) тання 4, Дисквимінацівна заатнвість норів мирнери метноновання ДНК : ваборів маркерів міцоюбіЗЕ десерт випадки ВМ від здерзвих УСТЯ у яразках, сБриманих гругкунІ звторін дає Вау. Й й ЩЕНЯ вКкадем ках Сікдавізу крноюкн я В Ж св Шо й Вже ї шо. сок дос вний хм ишМІ ким СКМ МІХ хмеметуеМми КОМУ ФМ кх ках дк хана м Неон маркер фрі 00000000 КИМЗіжщак оо Жюміююмкяо Кілеіню заіюхоюоМке мує хмиюі: ВІСІМКУ ОВ, жмшхоуджвких МС ЗМУ рову СЧАЖОИЮЮВННЯ АМСУ М ї ! М . хук ких У крмихок цю Дт няття яти кл тля ллллях ЗМИМУЮ ФЕФЛІХМИУУ о пеллллаттятя х ПЛ УОХ укхнтятлллллллххючх плллллАлнятт няня. нт Ті люеи МВ У НКЕОЯМУВІ 57 щої ВІЗОК мом» ВІБІЗАСОЛКЯ ззхоми і ЗУВІВБЖ ВЗ ЗАВОД. ВК УХАТВ, ВУНКУ, ВОТУ 18 кр 8 ТЕТ ОВИХ лжсіхок ма ДВІ УМОВ) нене 8889-93) хворою: БІБ ВОЙ ВАЗА, ВЕТОВ, КАКЕМ Баян і ЩЕ ПМУМОКУ ззхоми ми ВЯЗІМНЯОЮОХУ слав ОЛОВО собою ВИ ЦО В НУАІЗ, БІНОР, МАКИ ЖАЗА, УВК, КТЕ свв ма ПОХІОТЯЯ 55 хром ОПОБЦЯОЧМЮІ акне ПОВИ Зворюк в ВНУ ПМК НУВІІ. ВОНА, ВЕТОВ, ВАКЯМ зва сихув ІТ ЗУМІВ ЯВУ фосолео ОО БУДООК и Ж ВООЗ зи ФЛ НЕВЯА УБОР. ВАК ХАЗВ. СЧНКЯ, КМТЕ, що нщк : - й й МеВ, дРтНя, АК " 182 прив 35 ЗИМИ ОЛЮВ сосок ме ОЛЯ ЛЦЬОВУ) сних ООКІВБЯФОЗВ Зверюнво ЗДВІКОВМІО НУАЛІІ, БОР, ЗБК ВІЯ, БУКВ. ВА Й й Й іх схеми ЗВ ЯОИ ломи ЗО. махом ЗОЗ БКЗОБІЖКУ Збцена а ВОЗІ ЩЬАВ ЗК ВЕТО ВВР 00 однини ен ' й же ння ТеіВНА ЗК3 ярити ЗАВ ПВХ ПЕРУ фара П8ОЦЬУИТ борної ЗОВ ЯБО М замхою ЗЛЯУНЬОВА
НУ. тасиМА вх хрут Я» ПЯБІВІО запеслиска БД ЯОЯЛ слот ПЛІД пе дещо ЗМР, ВСТАВ, БУКВА. ВТ. З ЕЯМА МЕ поле МІ ВЗ ЦКУ) тер ат БА БЮ О ЗІ Спосюте 3 БОБ ОДИ;р зісуєкоз БІО МЕВХ. ВЕТО, БАРІЮ, ЛіКаА звороти 3 ЗХ ЩО ВВЯКОЯ) по хау вя 95 ОІВ, зоххжуева ВЛ ВОНО песен ЗК КЕ ОВ МАК, ЗМР. ВЕІВІВ ТАКІ УНІ. й : : така мн " шт» п хро ЗА ПОБІІЗВМОІ Бісхотк о? 23 КМКВЯУХ собор (ЧУ ДМА озямихяе Оле ДОВКОВМ НІ, МОВА. ВЕТО КАВУН, й шк пода до хя тод пра й А м мине я й лапою мі: ОРІОН Зах ЙЗАВІОВ соблютко ДОВ МОБ ОВ, лес МФБ ЮМЬАКИ ЗАВОЮ, ВС ХІАЗК, ПУККО, КОТУ, ри й М зх хе а 0 ха посуху с МИ ск т Із лУХ млн й я см й МВяМЕ, КРОК, КАРОМ, УечАНА ласі мо ПАТО пбомлю мі ЗБОЇ ЛЮЮ см кмеет 1ХБІЗАЖНІАЮЙ зякихх ДЮКА МУВІ. МОМ, ЗІ ВІЯ ТАКІ, Я, й й й 7 мемуух Ка ПЛЯМИ О3 Зепреті ЗОМ сбоовси ох ЗОВ ВОЗИ да меках ЗЛаТЬОВІ КВ МЕКВІ, ЯКТОВЛАРІВ, БЯЯМА пи гоже вх МОУ МУ пече МНН М іга
Тасоивм З. Твон» метлювання дохжме гоніж у НЯДЖНИВЯ ЗЕ сон аєченх КВ дхоскнвнах кома ЗІБІКУК ТІВ РІВНИХ З ВИКТМЮЗУВЕ вах кУкаи х Пр МНХ еззіах ран А и НН НН НН НК НК зона й кеВ ввякв муза хивх ХАуКО Трон сла ПО НУДЯ МІ НУМО ОБЯНКЕ УВУ. камінь Кене "КЖ свв сл сво свбя сл сю Свв Ріг БУ КУ У л.хх 55 в че галі пон м; хх. хоче щи ОКУ НУЄЧНЯЯ дура «ж вх бю я вж БЮ ав пак 7 кладе ЗНЯВ: ЕК АХ Гак: БК В що ГЯеХУ по о сь Мена овмх км Муки кое (ЛВ ща? (Ж БЕХ вже БЕ ця ЩЕ га У лофт й? НБУ ща а пд Воміннеканню ОЗ за шо йлюо АЖ ОВ бл ба ТКУ тб пе тим о бж ва: вух вже ромажевнмя ікра рін Крускала Учсляаї ої вам? см) БЮ щу 25мо За Ураженне Жду: А везе жціг КК) АВ ща я лаз 5 ле Ох ліміти зних 1-3 уразмих ДИ «Божа 0 й3ж ЗА яв вла БУМНЕСЛМУ СН с. З хружежнх ДУ Ж я БІВ В блУ аль що? п.хї пу АЛАААААХ ДАЛА Дан ння тн но АКА АН А ААУ кн Нут кт кккААУАкчнн фезначених комтеи Крускаануналиаї сова бажаю 8 сок Ба ад повер оанно но н нн ннненн нн їзцінка стих ов» Макет КІ За 2 УМІВ лх ЕК п да заюуах нні Ктхнімь онко Вб 83» Ох ейо об я в - Я х ще пап КЛРуНль кловистиМті Зі ва: ва Бл «3 ва в Б зняВ енд КрНКо ВИХ КобусвинасУсляісов) ЛЖВ вл пхох пяхю бе 05» бю ЕВ-вентниний ПОВ кт вза блю ев Богу ЕКустаитує вв) В лмумвтканнй вх; -а? В 03 3 06 од фани омня іонів бен іні: Ба бліх пк За) па З ою Ву снетвунимий 8 зош аж ля ож ве 05 вх Ж красі с - - Е цх з. УЖ ЕТАКУФІВМ ФК тезвтюаеи пав; заз аж їм? МЕ ще ож 6 тезначиня Б кактернВ віяння І ЖУ жопа Важ дав бал сову вда Ківтд везе уннний Са ххх Ма ІМ М З ММ С Жісю ех ВКА Е Й мкм, Й й Й Й ТЖНЕНВУЄ НМ Држучлювтвьанян с чі Б в ом Ме ою оба уезмачемек Мекумуеній Жізмаиз кн) об б Ж вдо» Баю вам о аа штдхук ук зтвавка ОЗМОВНМУА вегатнвнивЯне ОУЖКУ бе ща ЩА Ем пе БЕ ке СВ ОЗ рех В кеішцто нами Вр фам ПМ ї ЖЕ екз. І? Ж БУ ах й х х х й сх но ах не сті рови нію тіту туту туту ту тт т пути туту тет мем же жен т поту тт тт т тт Ту Куй. Кр Ву Ву вул МК ВВ КСВ. Ву т тилу тити тут КЕНАчеТх ЕМ кратері МОНУ хе вежа блех же лях обж во е шк мимо КН зі щж ля МІХ ЕК Б ах СТВ : зменоменкнюю во М а ОВ ЯМ Ж ев твехнавення Сік ев Коза ІН те а 0баХУ вл ЗУ БІ од їх віха нову сте ВЗА Я їх ЗК ях ак ж я УЛІВНЕВИМВ МЕКЕЖ зу пірулвмах гдних сл га жд ЗНО РОВК ес НУМО еряь вм 8 в дя во в ВАЖКЕ дннжкюжкюжснет ж стжтнннсжнетннжттннн тенет екееет о откексететхкн ку кехкктєхстеюже ння звана ння курія Махна іні Бо Б вже Болі Зяй МУ Зо
НГ.
Тийеднія 5. Біде мг мя нУенх вІхоУМмУ: 43 у ЗЗЖВАМЧУХН Зі спорам КТЗ з умжним кленічними кодкХк теки ВНД вих аерквамоя з другу пхутах вевцлват іукхдвекнЕяі Клінічні Що Віхи: рівню мае кам г Ї ікси чл. еп ВКТАКНАККККККККЖЮЄЮЄЮ ТТН, МАКАКУАААКАЖХ ЖЖ Ж ЖАКА ЮК ЖЖ МНК ВН ДЕ оно о шов мо Филлв; ділу б соя херактедкетвк звідбнкиа ЖІН Ку ЖКОВВ се ВМ кеВ БМЮЄ баб НЮХ Кр квант п «З кн ИН ле Сзамн рем пжх в аа ре Зо Главу о руззіж ЦЯ; ще вяз ва зав КУ БТ НІ о 555 ех ща? п ща делначевхх пержесрвів Каускваь Уха ЗЖУ лав Оля ща ВЕЖ пе В Ди ака піків, ще па пл аа 255 Бозмір пдухляна ТР ва пев яз ях - т тзіта на ЖІ нах Зх вав БТ пока ин а КеЗЕЧЕНоЮя Екукатюрвія Кугушкоа У сама шяхХ че КОЛІ У Вл Уджеенях Ж ЛВ відсутні вже в Я я 5 лІМНатТНВМх 1-Х уражееннх ДВ пе п пях сяк пд ВЕБНЕЄЛНІЯВК о» З уреження ДЖ зве Зв аа? БК; «53 ІизначениХ КЕНЕ ВІК Китекалн сна) зх Вля те пл ВлІв кВлімка стук К/ЖЕНІЬ важки КМ ВК р ах шЯх НЯ Зх иносхї Ж туніве зовні ін Вк ще аз пад КОЛУ НЕК уж ех. Зилльучиї «мк . УВУ ож Нін» мижкнаньі ЗІ 0 вав 285 й рат 53 пе значевкя конт КиУккнО юне зх За ЕК 533 щлаб КК вегжтВВнии ВЕ БОКУ пло ал їх Каоосуоуюух та с . сететук их ЕКМткощетненни па за їмз їз пла вла шехночевня Кон Тов анна ик З шк ще Її лах БК перкункних ЗВ ДЕ БЕ ще с ЗІ КМсратх В а ш щи ща що й кстоує ПЕ ТОЖ незвтнани дя З НЯ дя аа фезначемна СК окіневі В Манна нн Бо Бак пада Ва в МНеко нега тнинив 58 ЖЕ БЖ ща 5 ТУ Коул: ЕД, в іх тк : Кк Меровтре Не 0 Негативний ПА оч ВУ зай 255 ве фзначеним ік кошти ні Міна міві: Ба Я дв пі рожа Суду звоюмюма Збій негативний ік БК аву а пав я ременем Би» ВХ В.В мя Б З СУХА АХ М ум у А А ХУ А АКА УЖ У ААХААААХА ААУ Аж кААюня ук чен Море тання нні 0 БЯК іх Ж ля я Єтууже пе-з киева КЕ ВЖЕ вла ля пах пла е ЕЕ Мезначеная ікла Манна уві ММ Я НУ йЖМЯ МІВ.
с. іх омейокю розуму МАЯ Я я ЖАХ ща 55 (ЗМО ЗК КНВЕХ жона льоху зоною ВИК га ах Св МВРУ рез спам ЗМК док п й пд ваз БАЗА ЖЕК ЗІ пп АА НКУ ККАКААКАКА КАНА УТ ТЕТЯНА КАСЕТ тет Тече резночемии ЗЕМНА Мне У ОВ Й важ НА ПА І їх Ч зле ж. Фіг 5 (продовження!
ТоНкУЖк З. КІМН кол ДИхОХИ ММ у МЕЦІОНМТЕ ЗЕ ККуКюаКм РМ З зедялю кот к хардисиЗоУмхамх кн охши их хнкомах З ДЕК БРАУН КОЛІНІ СВОИ Миша ін моемемекМюцо Канева . ОА АК ЕН ххркиюхтоки Гвутв РАМИ ЖЕКТЕ, БМК. ЖЖА. ВЕЖ ВНТ, укіпьУштТМ Й ВиолЯ 00000000 ШЕ бю з суб х се Б СО Х бою їхащда ВІТИЖЕ вий ша БЖ З МБ КМ Киздія пеки Яудні оц» їі: щи шу вх ма Аз й клею МУ дИФХ з о жщак о щЩЖх ш3лк ве шк знахахуехе порнашан М ахекаха ки пух ля ФМ Ка З КВ НН Бо ошаз БЕ пбХ о щ Боулікптаацим о Те З- щу БЖ ел мя ож У: ря ик - ме і. Я Фе Не їла БУЄ, Зо щи ще 036 За й3Ю фзнахохив ікра р Китпюкже кох Баш БЖ са Ба ЗАВ Бе др. і ВК кілисхчі са: ще 5343 й сх З ша Урихснка У дидежикяІ ВІВ відюж НЕ М х ОА жа ОН ОО дрхбкоуии ІА жркванкх ДМ щи віз ж Бо Б ва ХУМІЕВМІ НІНО с улудуююх ЛВ В ЗІ З й й м плх ВИМЙчаних хор Ж рупекмокстимикх Ма ОБ: БО БЕ Бл пиЖУ нн нн а м а ка нн а п а а о и у . . ек Я ФК хх 31 о, ячжркНх пика М ще іх А що А МОЖ КУгпшша пут оперна лухи У МІ дахкрки пуск сект вх Щі ФІЗ Ж БЕ 5 Б М Сзедокрожнозеклч а ща БЖ шо БЖ БЖ іо хх рУзкшжцк ікінкмн Кулон Устима; ЛІ ойаха Бе вл ЕК БІВ КЕ истутвуНнВ я що ЖЧЯ КІ пщ о ХЕ ККдлетух ПВХ ще сах че «і фа Я пах й я ЕК чоУуюююках ах ще аа лі сі бю где ко мено ДіЛК КК Кон иЕ кВжа ОО ОК ах Ух Бе БокстауВкикХ п ви ша аж вл ще Бк Фюосхиінсо г х ее 235 сла ня : ях Фрлухм уми СК Зх із шт Щм а 23 ТОЧОК ВЕ СХИНІКЙ Мам УТ бля; па сдуУ ; Фа ха йж пн а на а аа аа о а а ка ЕМ вис ииВ КИ Зах Бах в ЖЕ За ошла Мелостдтуєсвю ММ юденоюи З Ех Зв вл ми ва ва вк дек Ко кит дало житі ОБЛ БОМ поМА ПО пл НО хххккккккккя й и КИ Тл ЖАКА Ти щ Треччакав хана ніив М ВО ж ЗА Зх ках а сЕкона М Й | виш екс БЕ АВ АН Ки помах М тунмаха Бікнна Ума Ж мо ют оЖомх овове З ттддухе Я вах ж жо ОО звхоупоутиим 00 потюхкннква сте зи вн шм вам аю аж ПУМІУМІСНО І крук Мана Зк) А БО ЖЕ дл ва ла рон ізсімкцеме кто маш Зах З а З оо вок Кум ня тех из маки Мав КЕ ЩИХ Ве ПК КИ щі» Важ ва Влю Зав іезиохмюо крої ка міні ЖАНА ЩО о ЗЖаф же дОюмо й сяяли лииииииииююю юю А пт итюті ах « ; ня й Фіг 5 (продовження!
ЖМаих З Біжвь митмлювии жьми ГТК У КАШКУ В анлруцичмнх ММ х діхувхов клкізах ХМУКІЕИ НК НКИ МКМ ЗАКЕХОМІЕУКНО му ММнх ХаХІАХАК кумира мний нн и шціхічне еедНИх ВіВИУВ кутю зарекомикокмо плащ ВЕДЕ ЗЛО МААЇ РЕВА.
й . Й ІЕЕ щ НН сою щі їкількісткі ЕК кез щея свв спе слав віри ЇВ с мл п СТАМЕУМИМНХ о уудція ЦЯ 2 щіз за ах І іі ма ств М ща щі 2 а деку хх ТКряУВ 2 Кр ЕТО он УМ І ка Бах за щВх ТР 3 І ха ВХ ам БезацУ хухнюми ТІВ МІЖ щї Олі ровя ие свіж г - щ с: Не УЗ ЕТ йплж «3 що ах поему мКІхоМу В КЕКИКИХ ча ща дах ВЛА а г: ст до т ЛЕ хх Ії ща . «пек ММ здо га шЕ Ох ОХ М Урана й режвн: ЩЕ Ку ипіх Щ що Що Й дизЯатимихх ТЯ кудакхнх В БЕЗ 2 ЗХ 5 ЖеКНІІЛМВОММ т З урюисихх ЗМ МВ ШЕ Вл Бяко І пехихзуана конт МУ Ме к КО ох пня ще г ; фак с УК зх ККУ пі я че а СГ ДІКЦиКІКОгУх ЗХ ВЖЕ Ех чх ана свхихакткимих МТ ВК АЛУ ТАМ Кк мемвцениУ Ел МиУМе КІТ я Те У ЩЕ я СинимьіликкакеМ ап ле НУ зх ВЕ У У УК УК У ККУ У Ку я У ТСУЦКККНІ Как И Кужокие Межа 0 ХВ ЕК яка пЖщЕ Бинти 3: Я ЗА ах Хбоууєсмоют 0 З окрдухвай гне щік пе ах Яся петижуєюк І куУсиМВ ЗіЗКВ НІ КАЖУ вч мм ЗЕ ЕН нки ннХ с зв яка ж жу Кбостасуе - я З я ще ХХХ Ух ут ЗВ-позииким хх Мах дя м В ММК УМ 3000 сонних репичеяня ті еуеуевно МізнеаххіНк ККУ ах пе ЗЕ Зм оку МНН ГІВ БУ ро п в Тут єтятуєст Бек псанаюч о іх І п ж їм юни ким Моканастні 0 БО ВІ 3 Мах в кн в п На п а слуху ж крою Тени мЕ хом неМй ПК як ха ЕЕ ця ВЕК В удален нянні сонне фанамкнха і тмкриту Мами УтьхІ ВУЗУ ЗА ще роя о и о МА Ай пе щк пІХо Мих МИ а їж ах 85 ГНАТ лк хеміхомоМоУх хе ха хз зда пе мекаанняи СПИ ЛМШМШОММ 02020000 нн нитки етно зеанамемуя плани Мине ОК З: ха ОЇ вих Зипцаєцоме нових ВЖК ОО: п а -к ТАНКИ ЛУОДю сю Іл ВУ І ВІКО : ще ще нега Жиз ек Вис ВИ ВМІВ дів зі з Бах дкамихкануя секрети Микиті ЖЕ ра БА раху І г х З с и Фіг5 Гпродевження!
Уаймнами 5. Заєць ме плювамих ось і жмиех ВЗАКЖІВ ХК Оки БЖ з вет хоекиу кими ХЕракТНу Нама гаки ЗАХО ВВнХ З ДК ВИК Х заладааци г туколоКамнЕ Жінці що Ка елжана ДМЕ засувки УВНДЕТТНТНК певне вози ВВ еуйя КРТ ОВРТК ВН й Аж ЛКК моя шк ян нд - й Ікізвхість Мн і їв Я Каб Ж без х св 5 ма сСвжВ Ста ії «це -лх що па З ля рних кас рн п ме шо вжшо зяб ж о ох Май КОНЯ КА БМК шо Ста ВО хе зе Вл вм За 85 ож рознисрна и іжрит а Куикиаще самих (ее 3 Змю БО Зо тТвіЖРЕНіх МІУ сх ЩІХ ЕЕ БЕЖ ща: Коли пукавия ЗК ща аз и ле п п Тащех АНЯ - лож сок т аск о. що ТІ За Нв ща БЖ ку рек шле ше фенідченна кутів Курскае ати: й 038 БОМ б3я ОХ бах : Ж важну З аку Зх ж М п З ВМ С С М Я Мражанце в їв шо М ЕХ кражеквх Я х чо ЩО У Зах ЛЕ він тнчаих КЗ Крук их хг ще ХВ Се ЕХ ах ше хени ЛВ) ва З хковачкювх СВ заз хо дезнамтмихікр я Кууккщиеколакаю ее ЗЕ Бо 2 Ба блю ткамхнохтувенх КБУ анлнккеностк Я СК: ВВ ше У В ТЯ її моя жеНяМИ ІТІЖ НЕ ложки несу Ві дав хв й БО ЕЕ 5 ше хсіумімМ зоохкмашмк В ФІ З З Зк ВЛ ак режшихних ікри Крус толеки: ва ве ве бшже а пою ЕКВнеевииний ще да Бе 0ООЕ5 ще ШЕ о стик Що УЖНУ Кв хунтвжвий паз; паля БЛЯ вав Зо йо ох : ГІВХ, аг її що їла пе лу певнумкаМ іс вус ізн хіти ху 8в2У вп ба БЕ вхо Тех унВКиВ щ ЧЕ п роБокя БА ж Іква жия ШИ и В ЕЕ пе а вав 2 Бех кн КК Кн я УМ Ж УАД А АХАХАХА АХА АХА Я КНУ АХАХААЛАААНАААХ АХ КАХ Аля хя ях фена Кока Мкі івнна хітні) БІ бе ва 03 о 53 Мекка анневив пн ща Зяй па В пе п муха В ам спе км, . ПВНОЧЕНННУЄТВУ Поет вве сив Зав дж без о овя ях ож пехнжМяк ура іно хРніх ОБЖ ВЕ же 0833 Важ Ба щ Крові магаманий кві 0 Е я п Я ЗЕ СУС ИМЯ оз ек с ЛНВ Ме де УК пах БЖ ок пл ДОНЕСТИ ІНВ духсохкск июня нт нт кн нт тУзнакжиня ірннв кенУ вн: БО 835 й ОЗ Б ож ТУ Ер Вовк КВ М ля ВЕ ЗА ГежК а МЕ цею ки Ера ЕМВ и ОВ -м 5 БЖ; зе: зді 5 ЯЕКЖНУВВУВИИІЖ 00 ххххюююсксккккккк кекс укусі поем ННК і КУ Міна хичні БИ БЛЯЗ ве пдО ОК БА нн о о в і ВИШ й За кнакиднин лен Ма МИ ле КЗ аж Бл зт КОНЯМ ЗМУ ЕКХ Кол санації сок КК п гокх МТУ Ж спа зи ВАК ЯК пох ЕК пав дя РОК ух пи в ЕК о Я В С ЗМ У М ММ В С ММ ВК ВТК: Віго (продовження
Чибсекая 5. Кувань муках Води х НаМЧЯКів З моорадненне ККЗ з діви ми мг аваме УБИВ ЕНН УНН КОХ КК БИНК ХАН КНУЮНЯ 5 ДУУТКНа ШИУНА МеВ Ск Клничні У рхна а лнтннткннннннн ВН ВЕК МНН ях ХІТИ ККиУЯ іЖінекзітеї ЗАОВХ ВА: Ух МК ХВО МНН.
ВУХ, пкадмкіскі крб.і ра свя Б Я Ева «БЕ «аеро Ек ЗА МВ Зх хх Бе У дум сг лавах Кщ- гоже Й ще Й шк МТАДУН УЖ ЛНЕК За Ж БЕЗ їм ля Ля КЕ Ж МЕ «- гу й ча Пі Же ще 5-х ах ЯК ТЯ в пожаченихікрктері Кууско колами помада БЖ де У Ж твіттнине Зх З ЗХ ре ЩІ ке Фо ваехимни ТВ Б з Бл ОХ 3 ж ТНЕм; КВНЕЖеКУ щаг в Вю пла ж ваш пезвЗсання іме Кутеками копає аж ВО жю х ка а не нн а чн а а и в о лю, сен ЦИ ТІх НЕК 35 по» ФВ У Умзжкних Хімнимі Ме ісутві сю З ОВ Же Ж ях уражати окаих 1-3 ХИМКУМИХ.
8 НО шк ЕЕ ТЕ 5 пе які ПУНЖНЕВВ 2 ЗтУравеннх ДН 000 в ж ОМ й реаничини я зве Кррукака козлів 2: ВЕВ Вл ОКО дя п Шо м, М в и У 2 емо 43 Скйнкх ктуцекх ОЕМ, УЛОМЖИ МИ ХК КВ " і Б: й - й й хложміквст: Єеукімо кизахіхиті кг Я ВО МЛ вах ЕК Суліма кмності іх ЛІ кое Мал ЖЕ їх А сис НЕНя нумо Жреекиая юн БЖ; М аВЖЕ 00 О8ШК 0 Тв нки г за пак ха аж я о Жетйтиі В . й ЗБТЯТККИК р пектин ма ЕЕ ее шлю сл жк щля реве 13 три ви ізн З йо Ба Еко Б ще хюкажккккюя -. й о о М Вр нктвувонн зво вм Ох аю же аж Мелетвіжу 15 я г ке са ще се СНУ ре окт па аж 0 (МО 0 нн, року мия Зі мри ев Мідна ків але» пам о БМ 353 ал Мак ведені ІЗ БОБКІ Ве ВІ а ЗЕ М Кеочетеує ВХ; КеузлнІвкний 8 зд їх З Івоа ах пла злісне і крона Коза ВО ОО, Кут за трвлжх Нецивни зом Іна І ою щІх Кен пл ци вепумтераяня нях Бади ж ам ее ча ме ще позманеа кни манна іі а щем о зе МЕ ще Ім азу РФ МАМА ВВ В Се: Оу Би А ща звултхидулиоещ, 0 ЛОТКА КЯ ТК ЩІ Фа п «ха Ку пе Педан А КомУсуВ бом кін: МІМ п вв ОАЕ ЗЕ Ба тентом пекомісях Ху их ЗУ її 22 З п Жвева ос іхвіванною Море МЕККи З БЮ хьх мл ля ле во ще ваз КЕМЖ вну Мі З мо Бл вл: рони Есе ЩІ ах воаніатемижі з енизовн мине ги цяїв паща о ка ї-щ БЕ Фіг продовження! -Біпродовж Ї
Уа Х.
Бідні» мешканки дехумае тен у мій я спра нкчнихм ЖК х пузвцамя кеди корек ах у ВЕсиВ ДК кУКкрнсіМамнх х ВЕУКТОКЕ ДУХ ЗНАВ, у ароевкнявнхї ко в ьо гмїкіхмі карих тмкм хо СОН МУВНАХ ВІСК Бовіянх хлрактемнетнких коту шиї в о п СІСБННННОИНКХ іхізженле кін АЖ ЯКІ БО ВЕЖІ Кк ЗК С МЕНЯ ОВ ВЕН МХ гм мак ай жи ад хо жд. ких КК вн ЗХ лу се ж ЗАМ ВА В.А що КК Є тадіх пекли ствах ПЕНІ КУ пох тях ах Ж ща яко дих, І є. п а - АК хх в Єзжев ЕМ; Б ща зі ож важ аж їканаченмя нів Клукжали кові ОХ жа окея аа 5 важ Ан КУА п ААХАКААКАХ КАТА АМАМАХАХ КАК КАНА КУКА ння Ко ен няння КА тяж нистнтюния ВЕ ТЕгВ ВХ ВІ ща ах о В Мозміи пт диНи я ще Й ща й хх СОКИ УАНМ зак зав ВЕ зво жо ваш ще Зак шу ТІ Та вх ж пе ай 283 ще баз пезнахунна скан оо Кухня іона ВХ ЯКИХ ТЕ Вл ВЖК ООООТХ? вн а В аа в о отже Звжене Й вівоюжкі як ЗМ ВЖЕ я яЖояо же ланах 1-3 кршвовмах ЯК ще ря за пох вже ЗУМИВІЛНН 3 сруминиух ПВ ТЕВ зах вже Жак вах що Б п-змщен я (кв хві Коесуза ким: МО ЗА її З вах ЕК Нчщк їн диневКк). ни цпжі ТІ ЗІ в ЗЕ тля Шо ЩІ ово Що ізмінка ступеня КОКЕНТЬ МЖиНК я ВВ ВИ аж Я ля ЖЕ Як люки С зуМічь ме ник В) вда ле Ж І ЗВ ІЗ ВЕБ ТЛІ МУК НМТ ВЕ пд ГУ Я ЗЕ вах ми пехеанилия Перитеим Мекка кое СВ ще БЕ п зам 3 и а В оп Ва ва Кв атиннне БЖ За з зв. о о Пости ад КІ й , й де МКОЖУНКУЄКВУ: В хдатминий З Ж 3 АК І В ТТН Я ЕХ Яма Кік ТЕХ ех ще а КУ ФУ ВКонагж мав КВ В.
Зк в Зх Бл ХВ ШУ ЗЛВКУЕ В оо м КУСКІУРУХ ва ЖК отвзминамий гоже БУ ЕКЯКОСІ Б зх ПЗ ОХ везмжчкня каву Манна кві ЗАЕ ж пах зла ваш о БЖ Нагота ни щу мл ХЕ Зх ХУ ЗІ ачУ Нр НтусіВ; Нео кьантюанин го ЕІ ік п 228 ще 223 Ве лКмеИ С КІНА ТМ ад» У ЕУК ФВ: в Зах КЕ а Ба крат а така тини зим евки і ВЕ ща ад Оле зх «35 пеменуувни ще ЛЕ МЕ М Я З З ВЕ А ЗАЛИ Те ком Хв) КБЯМЯ ЗБЕ ГУ а ща М Туюзує ВЕК В МЕ МЗ ка ХХ щі? мира Дами МОЯ «3 Ес вс рон ЩА І й пис кн нн а а а и НК М в КН а Я теж кинмх Ома Жізвни іт си КУ їх ами -мака 8 МАЦІЯ . «х КфлімищиИМ: ом АЖ ля КУ В І кох а ських шим сЕдІМАММХ МСКОфЧеКЬ ТК ЖЛМ ВЖЯ І ГЖКЯ Хо І Зх РУБ па Без вияевнок ікторіх КАСЕТ дже 000 Фе з Бо яв ти ВК КОН МИ У І БК ООН нн на І я ст н х, сі пах ; Фіг продовження!
Тана Х. Рок» запа кцниння жесимаМ ММК Оу ЗЗЖНХКВИМУ М сізеухвовкм КЗ З вкшкнамя кін ми характеристикам самки зехукцеаннх їх дае отх дДЖуТк вені пре лювнахнияя Х Корж Гетов ПОН мок харакррнетнкх дак ашиві: Мекн ЗКНх ЗОБА ВЕБНМХ, іщезахнте НІ Ж суб 38 КИМ 5 ЩО Ж ВО Я уні сі У ва т ще як яз БАН МОВІ ПУХКИМ Ос о че - що трав дек ЧЕМ ТУ Єзазію й ох пох а.55 Ох Я ЕККУ ж й плеаня МІХ ат пах аж 3 ЕХ ромкчтч ік я Кускана сани В ої ба бо Бяю ТЕТ ее щі ій й 53 Коло пузнння ЖЕ БІ ца по ще ЕК я З се ще що ще сх сх ни НЕК АХ БЕжСКя пла а ї-- бах тниЕ китай КискачиоУсламиаї о СІ ЗАВ ска Зх І Уражені А зіяежее ахр ОЗ Ек С Ж ШО Ураження са п й В В Що 123 жражевня ЛІ Дж 53 ях зх ах оо тазних 7 ЩІ клі лінк З хе ЕВ вх ж сх ТІЇ ЗВ па я вже у ху нин а Д-ЗБАЧЕМНХ СКК Мука ка Мк пл пк дав ек а фтемоійне ода нвутня в мк цу пох ах да пла «нікеутумени З ТУНЯНЬ кожне юр СМ шк Шк Шо Щі звик ісвизиті срупівь аква иа Вл че з ІВ лу ЕХ ХоГушпінь мин ЗЕ 0 щов ва Зла Ге Б ТеНЕЧеННЯ ІКЦ Кто ЗМ ак ЗХ ВМ 5 Кемерон пе ще У п ах жо КК ОТИТУ ВК 0 КВ гема Ка) ре 3 У аа ще пі А с З ПО вн і і в ни р Унчисхнх Мр виЕ івннасуттви ВВ ЯКУ кВ ща Бл Феонсуачекнн і: Ме я а в ах
В. ЗИ НЕ КЯ чих зі ст. -Е БКоочатук іме КНоцвацтвемні вх пу сТЖХ Бу рок шлю дКамяИннх 14 хну ех зни ля але их ме Гея З вхо -негхнжней пік вх аЯя ще ве впж Крожочитжтюю ян ВЗ к чути св вл 5 пз п В. теанихчевиа оче зн ма МДУ за ЖК вже ВА Букфикний пагкажнеа тв ЗА ах 5 ЗИ ва СавтМеЕ ав шин перен захи ЗЕНІТІ Б. ХУ ГУ ЗЛЕ І ос п с Мокцмених БокувтМйИ кам Кг кщИ; пл як КУ ЗЕ СВ сину ух кни КИ ТЕ т азу ЛЕ Ж МНН й й ке нруиим; С ТКеВ я АН 38 БУ БУ ЩЕ ж ЗЛЕ ННЕ криті ння УНІ 0 ЗЛЕ У БЯКЯ Ол за сх сей вам кчиик Ток, лок ха Зах а пох ах Срмевака равіж З КАЕВНьКі охофрвнює ПТО в ак ж я ЗЕ ОН іме М ки КАК ВЕ За п. ЩІ ах ф-авичиних Гквеконй Мбинве жін: Об їх роКУЗу кох ЕЕ в А В в Па о аа я (ріг продовження!
Таких 5. Біенх межннваизщ: ось ГЕМНХ у наземне ХЕ свеАКчМММ РМЗ з рівне влив УАООКТУсВаС ТЕН ВНП КЗКИУ ЗаХАОДОМВУХ З ДУХ МУКУ ВЖК ЕН МЛ нн и пвх Жені Ева.
ВОК мазня еру хучко Ккомих Кн АНА АХА аданя АК Кн аня няння ун ння ХК ТЕИНосУКеХ х рун ВОНО ЖАЄБЦ МАРОМ ВИЩ АТОМ МЕ МАР РНК дннтннтнтюн тн птн Ной СВБ СВБ Сн св С Я СТЕ НІ вяк о йБУ я В ЖОМУ ОБ Уланка тухинни лиже Пот з вті в БЖ ще о вл Зх З готуанію А ем Й т СІВЖНЕ М ом аз ве Ва бля щех о вхеоп рови р сНій Курусюаля ані зе му ам аж ал Б вах о в ТвітЕИи Зак ще о» За ща Фа Ба? Холі лися пу ухоха ше о в см єкт, В сх. ще Й ва БУХЖНЧЯ ря З вк? вж ВЖК й ВО зе ші ГК За БІК Я 25 ЛУ ха ал їх шзнученив хро еюв Крускаа колом: вла: бе б Ва пе пев ОБ Здиесв: ЛВ дикі й Ба жо ща бще жи 55 пумжтнавих 1-Х уражених ЛВ я ЕОИ Я ВХ с як Ж музнів МУ; о З зражеких ЛВ аж ж 82 а Б 0 ах 7 У зу тв ЖЖЖЖЖЖЖЖЖЖЖАЖЖКВВВЮВЮ ВВ Я Ж АААЖАЖЖАЖАЖКЮВВААХ АКА АЖВ ВАЖКА ВА Ж ЖЖ ЖАЖЖЖЮВЮВЮВВВ В УЮ юю ую умандчсмичівеноріВ Кроки моні М БЕХ би блю Бо а ВЛ А Ов а а А ва яви Яким ек ниаті а Як ОБЖ же ше БА 3 пах Гімлмко муфжакх У й заевкнчнм Сзуцпічь ммовктскоюті ви а Є шов ЖК 3? що Ба НЕ флзувет запит Я аа ва ва БАХ о дяз 23 45 фнанЕнкса я КМ луски хни Вже Бі БИ пет вяхМХ об па Ему ати а За ев а БЕ щу Китатує ЗВ 0 Вконевннккв ех вл: бе Ве ва) бо ох тиакичемик ох нвіенв МЗанняо іні; Ой Фу» об що Ба пе МОЗ Вк негативний СЕ пав ме Бо зях аа мап про сік - н с я ТБУТЕТКЕ КЕ рр ахеумВ ск пк Зяж ж 0 б щз ах Зевруенис кину дан» щи НЕ Б3я) оба б оцту офащй ще Кіхулд-веентнемм ик Ко З БА? Зав дя Ху ав Зх ВКтучете В піде нв ума І ашщо Бе заб їй5 535 23 Зах п-лнжзкика ік а яння БУК Аа ФК Об вт би тій проток С т вн стих Спжере за твнома ООАННЕ нетаенВнУНкІКХ де ово баб ВЖК Ж ФО о ренеатерамн тк: ЛВНМТТВ Зак МЕ в б ав 0 Ба т нн а в я мезначоми (кВ еК нн ітці» БЖ УМ Ба боже БЖ ЗА ВІ «кул пре мод акрук Ва ВХ ГЗАЯ Ем ОБУ за ее зле ща мезклхаусювеИ; ОО ПОКТЕМКИУК ГІ о: ЗД В ШК В м шана лока тма Мідна ж тні Ж? ОФБХе фАжх со озвАжа пзяу вже спіши хуцосо ЛЕН Вю Кторн КГ аз лі ж о аж о ва зо веж Сімяна вам 0, схуд І І І ВА Кезшкмеватвтри МОН аз пд: б ад вх» Фо пвх пезнунух іс-уре бек еше бо) обл? блуз ве аж Фіг (продовження!
Я ебунакя 8. Ковкань мектзвхвнаканах велів: КеВЕВ Як рак ХЕ хехурхвчинк КМЕК різна змен ХРрЗКУСЦН РЕ ИМН ВОНА ЕХО В КОВХВЖХ, СЕ МІВМХ. КУМ: ВК ДІМ: ЗЕНЕВККЗ КЗ Жені Що Ха в ауВЕнЬ ДІВИ званою: ня й ж. ївсла вах хека пом оо о опо о о о КМЗ ТЕМНСТяКИ ЛЬОН щшке туя Ж НМ ОМНУЯМІ СВУ БУ. сфе кнх ікзльніють) У пн ва аа она аа ца а а в ЗЛУ пи бий Же СВБ Я РО Я Же КБ. Єва Віт г ам ЕЕ ЗХ 45 аж Із Став МУЖЕНЕ чуда И яма «а: в вай Б ба б еВ ни Стих «да ЗВ щЕ Го мя еЗ ГУ Я УХА КРТ ТУ Які чт кА Мезнажчнви критерія Куток ном БІж: бмМие Вл ах 2дБо пЕЯУ де додання Р АААЖАН АКА я ЗК ЧАКАК АЛ У АМКУ А АКККНАКНАХАКААААЮТ НА АЖЖКЖУАЧАКАК УК УКААХКАА ККУ кине, ТВЕТЕ Ом, ер М МЕ М З В ме Буєтиви зудхИ ее Сл З п В М ЗВ я МЕ СК ЯН ща ке й ЕН АБ пла ЕС ЯК З-- ХЕ лохх Й Депаоннннння пон НН НК М-зиаиенин ізн ері КрускщияктаамнІ шаяй За ле жо бля пл ща Уважевня Утааене Ме веутніне ОАЯ БЖ Б о Вю БЖ ж З Вівнватичних 1-5 жражинах ДМ ЮА ей ал а й па; пл віВ МУККЕЄМНМІЗЯН З уджжених ЛВ Не вийЕ зле бів до йзу ово 2 ПМК КМТ Кто кни щі вла ол БЕ Бе аж ще Єнинкдхстувенх тм мкм; мм ЗБ Вл Ж БУ ев пл хЕ деяке Стенмзь зоавінест аа БІТ що ВЛ Вже зав о 033 Бе а р учені. ому В их с с », - нок Мт; СУМУ МОНЕ СЖОК ЛЬ ЗМ І Б ІБ п Фах ах: ТК ВеНФфяаВНя кукотюме КрускалЕ кола фа оааї Би аж ав вен вл Іов ек С І ВЗ ЗЕ ее п. 535 МО КЖасзнуве сет, Крб-кнаивний т кт: йл3 б о ахз бля па КА АЛЛАХА АКА А А АХА АЛАНА А А АК АКА АААКАК КА КА ААААААХН МА ХАААААЛАХЯ УА АХА хан теаначеннм і фор а МінисеМін сля вах ма оф охо опеза ОВ Урок внинВ СК я важ 83 жов аз Бо п Зоо ік й й ТВО ВУУСИЯВ 0 ру ролвжння В ЗВ «ит аж зу 02 ва о бах З ВеЗКЖЕВНЯ КВ Мід р Ж БК ЗІ Фака Ба ща о й Мі вет ЗунаМаН «аж ЗЕ ТЕ пла й пох ж Ел З а ЗИ х ЕВ аз ВІ ях СХ ЖЖ ох Яку БУ БЕ ЦлжеЯ КУ пово свв ВИ дл п о від аа Кезказаснив іі ери івник тні ше аб: аж Ба Ба дом 03 о о ав А ан нь ав и А оо Ж ек кокон о ща їх, У оче мов ех їжа ксеетує з тевклав фБицевним охлтначнй стат Бе вл 8 Зо б ав печі іям: 0 НащЕет ЯБТя БЕ Ва ЛУ не З ОХ ШМК Кок Мамі Кі ЯМИ ЖАВ ОХ ЇМО оба ОМ Фа ХУЖАААКААХАХА КК МАААХАМА ААУ АКА АХА УААМ УЧ АНА МН ААМА УК АНУ КМУ АМА АН ТУ АКА АААХА ААУ А АКТ АНА гук пиекслихиах іт ака 55 ад БЕ Зав БЕ ої БУ: ій й машоюуюктя: 0 МОБ ЕМ ЕКС ВИНОС ВМС ВИС У МАС ТеЛЯЖЧУН В ЕКО КЗШВ КУМ сл ах їжи Зм ях Я ах
ЧНг.о
Трвйрнизя 8». Дуже мм ом а НОМОХИх УВА АКБИЄКИУИ ЗУ Пк ВХ з ахвашкм клина ХВКЛИКТКИУКИ ТІНИ: І ВНЕТВАЕВ МАХНО д КУКИ СЧДЕНИКИКЕ УК» НТЄЮЯ.
ПовАТнчо меха імівавоижанкях іо НК Жовчні Зав ревмую ветилюканях дно нн а нн на ХЕВаКУАІКТ ВА руни ЖУК БІ ЗОМ СХ ЗИМ КИ БЦ КМ Я Б ТКЕЕНКтЯЇ ТЕРАКТИ ККУ с - -В м па м в В Сов йі шт п ЗВ Зх 5 Зх ОН МУмх фуда М ща Р о рат вла ши «вам п ща КЯ й: РОЙ позна ниЖ КИ ВН Кука Утана таж ща ТВкХ пІж иа Тв вх вк в БА ЖЕ ма Гоа МКУ ТИКИ її ак АВ ся 5 й ТЕТ БУ що в яка ЕКО укзмаченнх іхиНМЕ Крус Маяк ке ща дя гр вах Уркаевна У важ: ЗЕ кідетні ДНК Бе рах дж шу ра іден нех БЕ раження ДІМ пит рес Вів Ж МУ ВУХЕВІННЕОЯЖЕ з» Х ураженнях ЛЯ Ех зже пд але ща ва кн а а веніпомине кино: мука уза ХА БА ще пл хм - : зда В пл «в яке пав тцінкастутимх СКНЕВе ик зевах ОХ за а о ще зх КлжНь книжн п ЕВЯ ОК ТЕ вав яХ Тк КЕ Сум ю МРЖКМНОКІ ЗХ оп мех В як ща пд чяннннт ну учня ту чну кАяннинУн АКА АКААМАМА Ат кА КАКМАккккк зання рис я Крускане кепки ЗАВ раз ТЕ Во жа КК окстятихнни ЕКЗ Кос Ва Я 28 Ек усі ЯМ Кр твухвуааен их в р БВ ях БЖ рама а ан пелнетеенив кри Мак Ж туВЕ БУ вс ЗУ тка яд о а по і В Ресхогативний В же пах з ож вжх Юста угу У са по й ще КБ КУВТЕК ВКМ 0 Бо сркуюсуваний г НИ) Ж Ід вла щь ЗХ ААУ А АКА АН АН ААУ АА КАКАО КУКАХААКАХАААААЖААААХУАА МКК деавичеммх хром В МіаннЯ їв: фл яка? що ТЕЖ ау Гени та янв ак пд За а вл З З . ТЖБСЖККУСНМ кс лсвениниВ СМ з с 8 хи з нина нн нн КК а ренЕкчаНВЕ умо Мне УТ ОО ЗУВХЕ да їм З ща о о ОД О Е ДЬ БВ во ще Кхройни вогник БЕХ Зк З- А аа Стдуут лю я де мевзкжніях КМ куна ті кфажав ін Я їхе?і ва ЕК 5383 осо в о р Уа АКА НЕ я 5 ВАК кк ях сект ще А спчачнняині 0 МЕНТИ МИВМУВК КВ ІК же -е в Фк Зх пер хх ск м п т и и и ОЗМІВМ ТХ овКЕКокНВ жде уУці ОК ЕС КУКИ ІМ ах ПРИИЧ . « Фіг (продовження!
Чипузния 5: БЕВещко Махно вон ВЕ Ж ПМД КІВ ЗЕ еворажи чним Ка дана клеми ХОМ КИМ МЕНА КУТКАХ Ж АК, СУКИ МЗНЮ ТКУ» КИМ Ж КХ НК інж кажуаваї І КОКини кова ПОН нм ЦИ ОК ск вйстві ЕМеХ Ку САНИ СЯ КК Я КК ВК ВАК уКІДВКНИ Я й ї КЗ а АХ -ї «КЕ пожанн н н с туда КО кс Кк щі ТЯ кла УЖ 5 пахв їея ке ще йо в КІ я ходи, докт КВ хі З ще її ТЕ Ге пл Кене кукними САН БМВ як я В їе ж мя МІЖ оз м мс ЗВННННН с НН ОН нь НИ НН Й
ММА. ік Куукоюих ЖЕ ЗЕ ак - МЕ АЖ о в ЕЕ о ки рю ви Ме вх з зла вк п пав Жозе иеник се ; : З в нн зе 8 зво ве ав ю У ТЕХ: ще шк «лу доки пох ке ККУ ОХ КуЯУ ях Я КАК 5 вн нн НН рн в КЕ В ОХ ДОМ КВК Буре кехНиВІ ЗМУ пЕх ОО КОЯ ОЗ ЕЖЕ Хіазенина. Журн В відкстніеО БК ще Ж па щ ж еККК НН ТЯ куме В У ПІ З щля Б сов пд ВКМ ЛНВ сю кое рах ПВ ку ; як що й ХЕ лк уреевн СМ ГКУ ГУ ща ща КЕ ОК пемозча ку кО Курка Кука МІХ ЕХЯУУ КХЖХ Оу же ДІ «АКУЛА ААКА АМААААКА НААН КТ ААУ ЧАН ЧА КУА ААУ КАМ АНАНА НА КАХ ААУ АААНА ААУ ул тАКня, Ілик озна КВК танк ОК БЕ Б МДЕ вл ШВЕЦЬ ве век Сюинвь илик сні и Х ще Божа щх Ба яд ке ОУН ЯК В а В НЯ Б пох дж ВІНКИ В КК рук я ДЕ ОБ Ук МАХ ек ЛЯ ВЕЖ БК кеВ ИМ ою пов З ЩІ ла КЕ п сс жи. Я КУ се евииемк ж В ОО а: БЖ Зк ом ов аз щ-- со т ПОД еп В я ИН вн Пенн ККХ ЕЛ КНМТОрЯ МІК МІУ БУ роя ЕВ з ще Ж пуженжу ножни тика КУН А КАХААА АХА АХА КА КАК АКА КА кА КК ЕКовоуятваниМ В ах ща чле КЗ злі ТЗ Коста рув УЯСКЕУКТНХ. З дно уюаний вне щ-- ща ще 8 Ще да ТВЧ ЕВ КЕДИ МНН. КК ХВ. БАБУ ОА А І ЗВУ ня я ля ле вл дя в Галян е В ріку коневі с ; ; че : пКЕКУЮ МТВ. КЕКВ ВВЕ КИ ЖЕ 38 ах щк У ОХ о КО БАЗ БУ я Вл оо в НН В М п і В В В в п и Жінка косу уче ке мік К КК. хУх да ж хек аву взнаки ЗК ВИН мега вм ве Кох шах що В же крав; НВК КЗ 8 раз. ЖЕ а з а ук арнкен М кре в І Вже УК дух Я МІХ Же МОВ Би вин В АН ОН НН и Бору зам Х ЖЖ ПА роя ре ЩІ ЖЕ ЖХ й г, ках симаксемееніви, ВОСЕНИ ха їЕ ща 2 Ж вах МЕМ п х т кох с МУ ІК. МК у ЖАЗЕМЕМЕВИУЙ, ссср ПК НК ККККХКААХАААААЛАТТ ХК ЖАЛАЛАЛ ЖУКА АТХ АЛЛА МАЛИ КАТАААААХКААМААААХАХАМКАККАЛ 000 зЗНахшння у еру піша мими Кі роя БО ри а пох вж « Фіг продовження!
ОВК, ВУвкоуц» мкм же ТЖЕКИ У ВЕЕЕМЕЗВ Зі страви КЗ З деки юне вна: хори онов ІБК ИМЕНИ В ЗМО СТІНА Ки ТУ ВК Дано ВикемоКЯ ПІКНІК ЕВ Кен Аа ВИВІЗ Ма КОМАХ Уч Грека в ння ХІІ КНКЯ сЕїхЕ м ЗК ВУ МЕКНУВ ІК ЗМОВ Си ВККС пово дних КМУ й й й й й В ЕЕУЖаниК : Ж Я ЖЕ «й Клена кі ще в КИ ве Бе «чад нуханни МАЕ Ме ща вл я ЕЕ ще каві а в в ях вс ДЕЖАВЮ ОУН З КІМ КВК Ки БЕ Зах ах ЗІ ТВБЕЖЕНЄ та пК о ЗЕ НХ ТЕТ. щі щі паж ак он и ВО он нн ПУЗНИУВН БІК КО Кука КН ОК вах па ЖЕ . одні ПХ ружеві кВ ла КАККЯ Де Ск Урванних Міна Пежо 0 зе Ж во деМВемеН Ге МИЗЖЕНХ. Вч 5 Ж Ж ЗА Яхве ОО; сс хрвавених ЗВ ХХ ТУЯ аж пов па сосотодюеюк юку кокетки секти БИЗВІЗОМИК КИНЕ КИУсКАМЬ ТЕКИ ЯЕ ОБУ ах КУ ЕК стороні зве а ВМ уз 2 КО генах УтиннцУ КК В и жХ Ми М Я МИ с ї : ще сх «зх Уж Тк: ЗоМкЕк нні Яхунівь екю м; ВІК ще пе ІЖ інн нм м ОовЯ ВЕ йо: вес ДеМЯНеН НК КАТ Коко км З ВХ ач У Кроче ям. ДК вок Ма ща паз я Я ДМЕ Ии НКИ СКК ква ех же Я ее 2-х ле и НЯ й Я А ще щ «у ТКС за нти кння ее зав Іх о ЕК не і м я УЗН ЕК КМ аж ків Ж В МЖЯХ ЕеЯУСН МКУ М ККУ ККУ ЖК КУ. УУКЕКНКЕ МТА СНІ ще щі МХ Ж БЕ оетТатук а Ме кни и УНІ Фх вав па пе пл НТ АХАКХ АХА ЮЮАЮК ЮК АААК КІ ЖК КК КК АКААКАКАААХАК АК ААКАХАХААХАХІ ЛК АЖ КАККААХААМ деЗВечевин Кен кеем ЕН І ЗК п а ВА уж ККУ УК ККУ к кю к КК к кю ки ик юю юки ки Кк жк Кк Кк КК КК КК ЖЖ жжжжья Кур жи на УВК ВФУВІКНОИТЮ ОХ по їж яв темні орзннівя ВИщЕМНН: я у а З й й ККАЛ АТАКА Кук ЖУКА КАК я АХ АК ЕК КАЛ я КАК КАМ ем дви ек Мне Кк мВнх ОХ З за ЕКе Я штук пре кпуюи ни я ЛЕ 5 ак ре й МД К ікси - КЯ од ще со: ВИНИК м АННА Я ший кевначенк Кевін 0 ЗО ВІК МКМ іа чне. ї овжень іг.б' продовження!
Язнащео. Мікске МЕТА Кая сь МеВЕХ ДЕ ІКОН В КВОТ ТОЖ Е з лення: КлУК ен -КАДКК ЕМВ ЗЕ КИМЕНЕ ВОЕУЕ ВМ ЖАН ВИК За ЗОВ; СВД КВ рути ев Евер нак зврозавкеннх «ДНИНИ ю ЕК УМ ИМТК Т К КТ Кт кт К КАТ ож жінк кю Канемі КеКДННХ КТК МЕТ Щі у м м я Жуисих Кук ою в МКК нн ХК АХ ХАНА АХА МАК УМ АХА КАТЯ ВЕК ТЕрЕОТИКи й ЯВНУ БУХ КИ ДРУК ее ВК кіна ЗК Пофа и ене до Тк я с т бевжкт 000 000 що За бю си Б о. рос ка з Кожен Ка Ву аж Б) бо ОВО» ЖЕ ЗІЕАНКВ МУЖНІ О0СЖЕХ ТК КККІ Й : т й п БЕЗ СОНЕТ КОКО вк. ЗА кла Б ще покамнна ім Крус Ва БУ на б ще ож чвітие ак ва Бо жк ХО Бенуа БВ З свя ВО вжк вж ще Я ЖЕО щВеч овхе ХХ КВ ЯЗ я ан НЕВ ки иКО Крук они ВЕ Зм паж ве ож вже о в в в и ; Фокін В век В МУ ЖЕ ще МОЖЕ гаку ї- Хравкннк УКВ М ВЕК ВК, я ,; кікВасечинх ек ркевев вх З М СІМ С М С В З ЗВ С ВУБЕВІМН ІВ. с рудах З) ще 3 мах ам Б 0 ШЕЗБАМУННХ ХІМ Мн кмаля коника Ж щі БЛяЄ ще ваю БЕЖ Й Пд ин ВУ й Біо ря хо ЕК в Нв В ИН НН НН НН Хек КНВ Михинк поки ам: Бу ша Бе вх Же о ж БВ УЗ НВ КУМ ве ва бе Зя Б о ЯеЗни нара Кит а хна; ве ен й: ваща алКо йОВ) пе ПО НК Вей БЖ еВ ай Блю ве З щу аж ЖК ЕК Кук ка цих пу ша щУк що (а 7 и ння ВУЖнмохе Мр смОе Мівна уз ще поема Зх вам о БЖ ще и а нн м В а а В ККенеганааня що ККУ ЕЕ п ЩЕ му пд преміум у соанкухкпва кою порк Й я щи УРоттУустНУ 0 ВВ теак ван ща що вої 83 ще ве в я кн нив викине ин МеВ рт вана и ВІ я Я Бах Б 5 она нн а нан оо ЗЕ ВЕЖ жа па БЖ Що в Увессвнуувняю Зіокачвкчнинв см що за: ще йо З ме МУК ер жмут кум т УК ун Кент ут жу нт кю дн тижню ук атюь є кутькьннннх КОЖНЕ ЧУННХ Мк нка уні Во ВХ МО о ЗЩОХ ЗО ее гли плас МНОТККВННК мовні: ОВОООСЖКЕУ МЖК ОК БЖ ПЛУВтТЖа же трИМІ: що - Що х АК оз У Кк ве К У г еВ явна, аа В що ак Ох т Тх лин и и и о шеЗнахнн і дна Кан: ЖИ Ба ще 5555 Ока па Кук ККУ ую ККУ ККУ КК КК кю ке ІМ МИНУВ БОКУ й ма ЕЗЯУ ШОжХ Ж ЯатКх ЩО МВ й й заноланнкища: 0 ПОЛКУ ак ок Же бле о» ВЖК моно, вся ен в м кодничсвии і криками ет а а НЕ БО бе Звай в: ; й й вже. 5
ФІ. (продовження)
ОРАНКА 5; КУЖКЕНІВ. ЗАКО НеВНВ ЗК МОВКЯа ІНУЖН ЯК ВИККНОМ В Я светра ВУЖ х ДКОМОвКя ЗЕМНЕ: УК УУІ НК И ВАВ ХА ПОДКККИМНХ Ж ОККО МУ ВМ КВК ККУ ВАК ВНЯ МНИХ МУКУ ІВЕЦККУ ККУ ки НК НК НК КК КК коня КУН Ве ВІБИХ УВК МОТО я й 4 ЛУК ККУ ККУ УКХ КК КК КК КК УК КК КУ Х УК ЛАК СКОІНЕКУ ТІНИ У НЯ хр я замі БОМ: БОКУ ЕН СУК ВНІ БЕ КІЛЬ КІ СЕК ше А сво Я Бу ВКА їз ЗХ Ос Я ее енер кЗаеажні НИ з же З КЕ ПІЖ. БВх зх іржу мк а КЗ ах З па п ик у я г 8 ЕХ їехї Ж ре І КИ КК най но» і й Й но й Й КЕ КД МЕЖ, ЯК ря ах Б Без МЕЖ ПАХУ КАХ МК ут ук КАК КАХ АХКА АКА ВАКАКАКА МК КАХКА КАНАВ ЛІЯ ЖЖ ККУ КАК КАЛАЖЮЮЮНИ НИХ КВК ННК КОВО ие к а МНН МІЗЕ ЕОМ ве ЗК ва ке ТЕБЕ ща ЕЕ па в ре БЖ пот ЕІ ща п Мк ХЕ. Зк Я ЕУКАчЕННВіКиМ КЕ Крук усу о ак ЕХ Порося ро МЕ нн нн НН как Уунені МЕ ВиокнЕ сах ЕУЯК ТЕХ я їх п щЕЗ. ЗННКВЯМЧМУЯХ ОКУ уіекжннк МУ СЕ йде ЯМЕ а ще БЕ БУ Ге ЗА її зи ЇВ мекв и а ВВ ож. ік г щ теки, УАЕІК ЕК З уванннх ОК а що вав ее о же в в в ав ІМОМичеКа НУО Кк ек НЯ БАК ОАЕ Б ше Тхорекн сумах СТУІМИВО КОНЕМ Ів СЕ В я ЗУ жк КК КЕВАМиКЇ а ОВ СІ М С В: ве в а Мал 5 ДДТ КУКА І о вл м ж СКУ М їх УНК КИ КК КК КК кю В сх «У Жм ххх, У пу фази кум Мк вка ЖЕ 89 ОХ щ ж ОХ КН КО М СО Я Вк кан МВ и о ОБ ЗЕ Ж ве ТЗ сх. Се жАННУУ Ще уж су й ах ї с. й г - ск Кжлтує В МКК ВІВ В ЕК зх 8 З БІ щжх ж нн аа о в дв МКК МЕНЕ У МІВ Ж аео па Ек кт ВАХ ВЖоветнунв а ке яз Я аж У РІ ще ЖК оетазуе вна У ваз В Кв г 3 р Я чех У БОМ ШЗМКУЧ ЕМВ МАЕ Хата БІ ВЕ КО зе щлю Й А Во п АК а а а Вісуо нак Я ЖЖ УЖЕ в з ше ЕБИ мар юмМ КК ВОНА КОЖ аж Фах реж 2 ка ЕК МЕЗНаниМ Кф ОНКО КР ЩЕ 5 КЕ ЗД ле фтвхри мінами ІКУММОВЯН Вена Ж ЖЕО З; ля в ще
УВК. ВВА УТ ї ха ші Вл ЗІ жу ЩЕ КеЯМИЧеКиК Ко МІВ ВМ аа жа ВЕ мок «8 аж В ВЕЕОУККМВ УВК ОКУ а Ж в ЛЕ вл щх ке НКАУ о НУ за ще МЖК КАК ВК я Пе НаМиМН Ніки ач КН А БЕЖ БЖ БЖ ка ВЕ і кн же шк де Фіг (продовження)
Тими В БіБенк меню вади Ук ММК ах синам М аз Ук кормом КОРОК Н ІНК ПЕК ЗКККОрН ана Ж ЗИУЗ ЖИ КОКОН ГІ КОМУК КУ Є МКМР ВМЕВЖЖКК ААКАКАХАК НААН акт ци кт ту КУКА нт т тк кутки УК ТД У Ж ААУ А АКА АТАК ААУ ЖУК ВОВНИ кова ДЕМОН КОЖНЕ МОУ КККНЯ г ТЕМ нн а а і Хр іжснани ЖБКНХ ЗМИОВКО Би ВБМЕ К ЗМБАЕХ М ЗЕ.
ЯКЕ.
ІЕМ Зб З ВОМУ Я ВА М ши В НК СА і А нн нннннн ин нвнанин Сх Я ЕС гхЯКУ Го КЕ КО ОВ коти нене ек М ках Бош ща пла жо Ж кое КНУ ще Фк КЕ ще кош ЗЛИВА ЗНКа КРИК МИНЕ ВН З ЗХ ес ща Ва ка м и м і п Зоя це кн с Я - м ск рух ТОВ ря дж Ж СК шо ках РИН» Щи уч шим у : хе изь Зах ах їх ж й Б ЕЕ ЕНН КВН ЕНН ЗНА же а Зб ве вжи Удивекня ун М вм УТНЕ В З жк ТЕ во в ЗЕНВОКа ЕНН Вл круки КЕ У БЖ ях КОКО па ях ВИШУ Я о з сонних В КЕ ; ще - ; ; КТ ж у ураноних ЯК Х пе ве ках -е охо БЖ нан нн нн Єівінка ктупрнх ОО тТМОНК КАК КСВ я ядЕ 2 НУ КЕ знав КЕНЕ МИ КО в ї-Е ща В Ж.О ОЖЖЕ ОА теме кед лк Кл щи щ щ-к ще ще ак о КЛЕКННЕ КВН ВЕ ЖЕ Ва так Зав Бо БЖ ПОЕМ КМ Кроки ема ВХ же вч щ-щ жк щи ЕКоскнугіян 0 Бвхвозкхвенн ЗВ вла вд жа З дах. а БЕВЗ В НК ІВАНЕ МЖК АВ- ИН ОХ жк Хо МА ШК ЬЩВХ и в и м кан ик и т Визв ни о З ЖЕ ж ща ни аж ни й с; щи с те с я Гак хх мк Бе а Хе ро унме г3ЖХ в ЯК БЕ ЗА кош 000 Зак КОХКун еВ НЕ Ж ВВ У ах Що жо й ЗУ Н За пл Ж п З п ВечлоложеяВЕ ВЕКЕОстекв НН 2 Зх яда те За вах межу Поки Кік ниа ти ВЖК а За Вжх ще в пня КН КА СУКА УА ААДХКХ А М КАХ ААУ АК ХХХ у У ААКАХКА АХА АК УКХ» о тів мук пк Кк.
Яке че У КУ Кук Ха ема ЗЕМНА зкж У а Ух ЖЕ я ке ея ке ря кро ва: пек ее Ук Уч Кк ня зкозщх. нини ВКМ т БА ЕК 23 у ВЕ - " і: х ТЛ путу у УТ ор вузу туту у ух тт ту ую зт и зу бу пух у пу ту т у т КК КК КК Б Кт и Зк и Зичу тю бук ТЕТ З у т т з з у туту у чу зр Вр оч у КК Кт кт чу чу ит: НІ ЗАНМх і ор МІ іні БВ Я ах ОВ З це ум у ую юю Ж кю ЖК КК К КК КК ККУ КК КК АКАЖ КК КК Ж АВ я ЖЖ Ж ЖК КК їз НІЕХМЕМ КВУ вк ШЕ Я а В В ств : їх ; ТЕКУ и ще ц я охлк Мен иК В плову яиЖю си Жах а в Б БУ вним кп нт и Манн п ЗЕ КЗ КЕ ІВ ВХ чи ч Й й я Фіг (продовження!
"Тел М Біже вих Ук ВК УВК МНК КК ДЕ ХК КК МЕ х реБЕКЯЕ БУК КНЕНКЦЕ Закевж ун КВ УВА ЕН ЗВИК Я ЗВУКО МНН рН, КУМ ХМННОХя ВИТКУ пунк пк іа ом си нн а КН Кос ке між оК МЕС УВИНИКО кова тн повен Кит МДЖ ЕК івінекно ВЕН з ВУХ БМК Є ЗЕ ТК ве БО ве вв Я она на а а в СА НТ 5 я ВІ У ЗЕ Ка лужвем УТ вк ВХ ВВ З -е ЗЕ тя КК ПЕН А пав 2 У й канава ан в вання ік Курка к а как а кни Во БХЖХ Мак пен в п в о и ТЕЖ п пл ЗЕ В Б РУКИВУЖИКНИ Зв ЕЕЕчЯ ве з ваз а яел дис І : ; й ТУКТиа Я ду Ба: їх ща о в п тМзнихе миня ЕВ Кудкхкне Ко КВУ аж пк жу я Жрвженвх Жан СНО він тнЕ пе В ве Б ЕЕ Бо ЕМВ: ЗО земних І ща а БУ КОЖ КЕ о оо НН стеджінтнк че - й ц Ще КУЄСЕМНЕОКВ хз ураджних ВЕ КЕ ж ех кв щи жу дахи КК Кука свя: ВК ЗОВ аж КН 8355 СчЯ АНЯ Я К- й пд: ж пежм, Із ек хуя ЗЛА тк МЕ сТУНОМя сСтевір кіс ОЖе ле шій а яз ЗАНЯККЗКУ Знущне моз носю м ОВО їж Боя 5ЯХ ЗК 7 МЛК ОВК КВ їх вл ж Я ак о о о о ІЗ, ою КО учи зак я -х Я ил; зи С 5 ВОВК НЕ КВН Кен М СБК ІВ М ж ах сна А КК НК НК КН НН НН НН НК о В УВІ А пе а Її Со УК у типи хек Е их В зд г х я Кбоштатуюєть Крововекюев хв а о ва п «ЕХ ТЕМНЕ КиМУ К У МАВ М УЗИН ВЖЕ ВХ 53 КК вм вн и и ВЕНИ НЕКАВ їх В рак - що БКоктатии ни ЕК Ж КУ ВО я. БЖ ЖЕ Боже Ня КИМ Кн КЕ Боже БУ ав НЯ ЛЯ ГЕО наст яВНЯ ВО 5 Б ща ЗЖх щЖУ ек ззсо ІННИ Н Шо ТО Ве кдевок ване см ща ВЛ 2 Я я о нн в а ок УЗН КЕ МІД КН НЕ ож важ КУ вл вен щи шу. І - сек Ук З пах села є Зк: КАЖКУЄ а ТКА Пенн нема В си ях ах ва ее и НИ Б КеВЯ щк НЕ ва З З ТК Бе ЖЕ я ах о ЗЕД ВЕК ЕОжхУ о вк З ак кує послом нимес с «МХК: УКХ ВХ ж я у: тки т завиМад Уч НВ М З МКК 5 їж. роя Бо «КІ В ПОТ Т м Ду у КК У Уже У У я кі а. А не КЗ. Дн ск ду. сира КК, з о соку пу неннЖ Мвнвтва Коан МЕНІ КК -К МЕМ. Ка АХ Соткжжжжжж кю жк ж жк юю юю Кі т тт тт т тт тт жив вл юр ж ж ж Ж т Ті т тт ТТ тт т в в ТТ т тут ТУТ т тт в кт кт:
Фіг.8 (продовж іг.б (продовження
ТВЕН КЕ Кен аку ВЕНУ К МН ХНИ У ЗНМ ЗІ хе ум ВВ кв Я х пек КУМ КО ХВНОКТОКОТНК а КМ ЗДКВК КВН ЗЕНИК СТВО. ГЗК: ЕТУВНВ КВК ВІККУВНХ кКал КАВА Жуенв САСОЗВБИХ КІКВУВ МАО КК КИ Дон ан нн и п ви МОДИ ЕКЕА НКИ КІЖеКМН ЖАВЕМ АБУ ЛАБЕМ ВАБОІ ВАС ВАК АВ о и и Су ау аа с а ву ща км Б Зах лухнянх 0 бадев НВ за ЖЖ вях бю вк ую ни КТяЖ НЕ 5 жк Ба: Б б Уж в ЕНЕР ННК КИМ КУ ІниМині ЖЯБ ВЛ а а ВХ йо На ЕЕ і ЕЕ ВА шо ві о аж щі З МІЖ мах Я Бази цв леми схе щи М . . й ма ТЕН вк вх ЗВ БМ кВ о вщ ОКХ КЕКВ ат що жа Ж БУ ве Мхнвшния ікони роли хна БЮ а вх ща дама іх В Козжени Жрекоє ЛИ ЖржжениМО важ ме 5 БЮ а вм Б пак колом ПІ гук п жо м о ; нс ще не ана Код Кк В «а ад п ЩІ З БК БК УМВС пес емиеммю ДМК. й ЗУБНИХ. 55 урвкених ПК Де а А Не ОВ ДВО В ВК КОМИ ВХ УКВ КЕКВ І БОЯВ ОБАЖе иа Ба сне 0-5 МИМО ТУНЕКЯ сурма БЕК ВАК. ОБ аж ВЖК бу Зк ока КН кутки рія має ам Кк хе мех ек це шко суКНІНИ Микиті БО В ЖЖ Зб В о век вашу Екон, МОДНИЦІ Е СОТЖЕиВ МКМ хе ку: г оху х сх ж пЛЕДЖНК МКОНЯНТЬЯ є Ва йаУ 5 Бо я а тезнжаснм крем Кекс жна ку нУ ЩО бо Ма щЕУ ооБе а Бу м яв як Кк кю в ять В, ж ЖЖ я АЖ ЖК ЛКК АЖ А КК Ж. дупу ЖК Ву БЕ МИ ту зу тк ду тк в А у ВК дить вк у ПК Ву Ж ут пу пучку у Вк ду туту у пк з тю ть ті пут и УТ т татютютют, КВ зкув ик я раз З ЗМ Ск ЗМ ВІ ЗВ С М С ЗМО Я ше кни со МНТУ МЕ КУ Же а Вл Б ца о ВлЕ БЕ МНЕ Них Коен УК иа ЛУ Зама. дима алве о обоа ФМС МИ вик е ник ж йде М З вв ох ва ОК духи ТА жиє уко : ща ТЕН 0 Бвхоовуувевн еВ; І бе Бак ВУ вашщо 55 в о и НН ШК ВВН МеКуНКВ Ощи Уіта і мах БІ ах» З ве аву о АРХ УМ ЖЖ ЖЖ ЖЕ АКА КАК АКАЛЛ АК АЛЕ АЛ юю дян кю тютюн ль нююь в жи ижажици юю. КЕКВ ВНАВ ВК Зах ОБ ее щоб о Око БК ЗХ и стік тих а ТЗ п ЗВЕР ВК сві ух м пером сах. К 5 їй ПУ ВЕК уко ВНКІ (МЕ й ваг ах І; 53 в дв и і кн В А ВОК о В В НН рити ких ще вхо м м п о Вена теки а в, с пок, зх зх с пе вич Еажркезвтрьях МНН веовенКНЯВ КК; еє Же ВОК фо в резонеовамясояв: МЖЖКТОМ, що що Вау важ вав ПП нон нн КОЖЕИОКК ККУ МАННУ ІРНіХ Ж п М же ажщяе оба В в НН В В Я се ЗІКу КК ин НН М Б ОС ООН МЕЖ й ит ДНЕМ ЕМ МІВ МІНІ ОО ЩЕ ВХНЕ БЖая оЗня Бме еЕ ом в оо о п а В а ща и и ск ежодхя, а
Ффт.в' (продовження!
аеенаха я: Модем; МКК еУККЯ ВУХ ТОНИ МКУ Зі суху к ме РУКУ х МуВВхВ кове м КОрОК РАНИ И СВНКАаК ТАКУ НО ВК В ЗНЗ ЕХ: КТ КЕ ВІВ ХМК; ВЕ ХЕККМКККЕНОВХ нн шк, ДчНННН Що ИН ння Кияни ТЕ ПН а ОН ке т Й ЗУМІВ КУ НИЖ пий кома я ЖІ б й ОКХ о дллхллдклклкккданкклАхАлкхА АХА КАХАХАХАК ААКІ ДИКА АААХАК І я ДК ля мент інж А АХАХ ДАМ КЛ АКнАТнинин т Єчхаа ВІВ жу З зар о 3 З 55 дах Кох пижащня ли за зах 3535 Мо Зх5х УМ дах КЕ сажа Еге ЗЕ Ж ВИШ КО ДМ СЯ ВМ Я ТЕ ЖИ виш ни ни Курси там аж Ще вам ща Іжа БІ ККУ КК КАК КК КАК ЖЖ КАК АКА КК ЖК ЖК АХ К КУА КК КК КУ УАК КК КК КК ккк жк ккк кю є кс юю кю кю тво За аж дво жо Зах ЩО Ж: рсезе некаМиМ о ЗХ ЩЕ Зх ща КЕ З ОБЖ яЖЕО А ТМ «хг сх с я Уч ша їз ква за ко ЗБаз Зк: аляЯ фУєх За СНЕКИ НВК МКК ЖЖ ОТ Бже Блю ша; БМ Бе нн нн нн в У ЖДЕ ПВ ВАЖИВ В. ЗХ Кеш 55 ЗЕ ЗЕ ШК ж ЗК Ко мохи Пк дан лих я ще ук че ху ню КО уран НКУ З Зла жк що ЗБ я ЗУ МЕНЕ НИХ У дяк зов лвкнже о ЗРИЖеККА ОХ ж ЗО ЗМК о о ЗХ ж ВО ІМуНаини КИ Мк КІ МВ ЗВ 0 ЖЕО ще УЮ бах З ОПН и ан оно но ан а ний ЗИ СІУНКМХ у кмоно маки З За За Ж Бе 33 З) ЗОМ За ЗОНИ укщинн ко под ва Яр де що щи дж 4-жа с зкде З рин бхінне мені я Зв: ЗБ ЗУ оо За ща УКУ - Я : й й СОРеННК МКК ЖК й Ж ЗЖжУ ЗО ОЗ Ж КВ векавнвннм км ЗЖеЖ ЗБЕ ЖБК ХК. ВО ОЗЖЖ ах Ох, ти ЯКУ с хг г. . В ККОСТНУВНЯМ. Кфотокканй ПВ за ща Зжа о Зя СЯ ЖЕ жа ах іменники ве икітні че. и в ЗУ. лох важ дже нн КК о в ВклвлЕнУнКННВ За БЖ МО ЗЖжЖ Зах ЖЖ БК ках ом ННЯ н ще шк Я й ск що - КБУЖЗЯТУСІВНМ волоки В зЗкУє а Зм За Зм а» хм ТУІМОЧИНВЕ Ір МІНИ КУМ ша и вжи БЛЕК ХХ Бе аувениМо ма ЗИ а ЖЖ ЗО ЗБ Ж ЗБ Яка ВА фа село онкнуию мк. й Я . . ТЕУЖОНИУНИЯЮ зокіоюневийаси З за жі мак ху м хе Мен оннк і зкВн и ина наі а - 5ще пив ще БУ В ще ТОК ки Ткані ЗЕ З ККУ КО З зе а Х фувеує хв зр ще Ре Ж МЕЗТКЕНККх ВЕ ще що каз ЩІ кв М: нене укима а. МИМІТЕ, зе ЗБОХ З. а ж З зо х З отих проте ПИ А КУМ АК УК УК НАУКАХ КУТА ТУ УК УКХ КУТУ ХУ У У КУ ук у ук утту Іза і хвни Не ННІ ва жа Бай ам З ЗБ Же зт ТУ ТУ ук тв у ру ТЕ У МТУ тт у ча клю ю Ки У ту у ТТ т у зу ух у пу К КТ КК тт ки КТ ЗУ ТУ пут у КТК КК КК КК я клю я я я кою ть юю
КН. о ек "ЗЕД ЗАЯЖХ ЖЕ Х ЗЖжЖк ЗБОЮ аж ЗХ вн и о ЗЕ ЗЕ ще ЗОж Зх Б За за ивне ЕзенК АМие Ма ВЛ В БЮ» Вт. вже и ва
Фіг. (продовж іс продовження!) Тайнвмия 7. Опие пики за РН Й зналогічних канкрних Чит КижЕкЗх Семи же Кіпджть придмимихманих ПМ» кмпркецих. М Качорт "яууків АижНаВ УруУпя Му зкУкиМе Му ж потен стопеюттстететютгосотессесся кін МНЖЖНЕМ о елуатуху МУ нт 5юВ щеАВ 0 На ВА Вид хомттоті а Бе; 5 ФЗжЕНКАО 303113 МиНевКЕ Іо 1 гНЯВУ ет кірка ми ПІТЕ - -к г зх ск чт сх г сх ох дя - : Ка ТК венами РНХ су вен щ- даті ТІ Н ІН ТНК 37 КВ Оу 33: о и с ромом ооо о о поп п о о попі о оп он пон оп он оон ооо о оон оп оон оон опо кемтрті щморнфе- АтажАТВХ не штат 315 УВІ «0 і1Мміншец; зжІНжш ЗібІНу ІНВ Б ПО МеМІИЄ пучка Нкназан КПІ Х й пам АТ ТАТ Ек вих -к г: є. г ; сет и 24 ; ггукюи ке Й пацієвтік кових ств ВВ БУМ КК 5 --ЩінУмІ БОМ: щем; Беси ВНОмМКУ Є І ек Й пиття ТТ ння нннюьькияя ють КЛ ВАТА ЖЖ Ж Ж пл. Ж АЛ Яся Я ЖЖ о Яся я я я п жен Вся яю я тенет ся ло лсжт л ж клон тяж п жюлжжя лють жжжжжя Кезкерими жіукнян тя Ж Васі 853 ІМ БЮ: сОмІоБО БІК тБІНЮЖ Ниайацею РІЗ х наши кв й сг ; с ; ще но ; кікках сі 5 еліті що шРінхве оРінеае о? ОшТІНХНе ОБР к ес
Фіг.?
збою Ж. Кі дниунеенех век мНоК В ВЕК Кум. ПЕХВКОККЕВ а ВЕК ВЕ ВТ СК, жено я КК Кене ПК. ВНИМ СЕ Все Й : не сво А ззанека паз Зими 0 БЕ НУ ср а ВІР ВЯ оз ее ве ВнЕя НЖВІІ ств З даевилянав вача ев 0 ВЕБ відо ух ЗУ бо ееос Зязімаеова МОозІВИМОЯ ЕІ; ЗМО НВ ср я ВВІВ ЕН БЯЗЬ ЯК Зак ср у ока Зк ІаьЯЬ ЯорМЯВ 0 Ба ЯМ кн Я Баг о зно ЗБ ЖО-35 вмсОв тре з зекемнаже Ве авіа ЗНО ЗНАВ Кр З Ба ЛЯ ЩНОУХ ОБЯРБІВ Ва 0 ЗО чеваїя ре я вза бю зон 00 ЗВ ема сно й БЮ ав Зав а 0 Зава Зо лов й залою ожияесшю Знімна Зам сняке ва: олошакеотю ОЛяФОВОЯР; зе ЕКОЮ ХАЕС ЯН сво олово бззцваеея; Зп ае Як вг?,сю:.: БЗНМаЕ: ЗЛО ЗІВА ОББМЕКО КОТУ сви З заз зе аа 0 Вля ВЗ св я стілі по ЗУ еВ я ІК ву кро я пл оев зем мія 0 ЗЗБ4а ТТ Св В УБІК: ланах: ЗВ ГЕ МОЕЖЕЯ ВИТ В па ооо ма З еВ 0 ЗоВБХ Кт, сви. ООН» олевос вобізжьояя Бе. ооо нин "м тйнке пегеОСіВ З кону жКеКУ НЕК ВЕК І КУНА Арі ем цюване
ЧМг.8 еввеця 8. Берн іенемУве ВЕН ВВ я ет ЕЕ КБЗКЕ нев: вена РК кер В перекв Ве вне кн в в и Я КИміихуї дев НОВ мети ювнниу : Свакотв Уівжнни Меимезвдювоехів ІМЯ в люеннх МИНУВ ТАКЕ ВЕК «МЕМ; виру и Км й нем оаейоюмю: фОЮЄОЬЖИ фееретви ЛЯБВ не сви г ІІІ вла овМ Бази хІВЕ 0 ВЕ не єв З зіва воно Заг іяеваь Зая ня сра я БІДЕ аа 0 БТ УанН Я БА нн ср аж Оз Ал бува: ЗСУВ ЖЕК ЗНИК Кв Я ТЯ ВМО ОВ ОМИНУВ БНО мае сві Я оБемяоЗ замша жила 0 вБОБлЗ ява се я паю ВМ ване ЗБЕ виюк св Батон базсюох: ам тя аХ Земан ово Я Фе бляеася: БеВЕщьВОВІ ля ЗМЕН АВИ СВ Я ОПІКУ ків ЗУБИ АяІ ВХ КУА свя й 0 БМК ОВ 0 БАЕГВОВВ зе щежках ня й 00 БЛОЦІ З я Чала 0 Бе ТВА Я Как ЗемАм СВО й пев Ба забою 0 сдОБОю Втнка ЕвО і плафшамов ЗРО: ЗО ві ЗАВ вит ве 000 веюзкаюі ом зво БЖ ККУ сх ОЕМ ОМ БЕК аа Ох кра,я алое воза жа 00 ЗОВ ВОтУ ке Я ВК Уам ХиеЯвК З ІОВА 00 ЗНОВ ват се ВЗН НОВ ОККО 0 ВНЕчВ ща св ВНОЧІ ВЧ НООЯ 0 ТЯ ЗБ Зо єве я 000 З шОВОЗ слова) Ве НЯЄ 7 ВЕЯ ЗУ НЕЖН ТКУ ЕКО х ЗИ) УНК вав УК З ДОН? НЕННЯ Ван ВЗН.
Чнг.а (продовження!
абліея Я. Мкеминутмсті меленим зх тоне пу заоріеним кмкнік КЕЕКІ Керн, С КрееиНВковаюх ж а; пн дразкн віх вжаежніх «оливи ких ШИ ср знодіннезонтнене МАН рот яео мннн по по НИМИ вен: 00 б35О ВІНММЬЗІ ЗАВ 00 ЗОБОВ межа ср, 2.332333; Бе ЗЯй; еВЯЖЯНЬХИ 0 ЗлЕщьЖХ НВ ср ї ЩЗ ЯМУ МВ МОЗ ввів ЗК МАХ сво А ОПЕК МАУ НИ ЯКІ В БУХ ЛЯ БІВ ра МЕ Бей осо КУЖІБМ; 1385Ю ЗНаше ср З ПОВЕ) БВ УМО БЕ ВІЛ НУ БОР Ко У ТНК АХА ККУЕУКе ЗЕ 3-3 ЗМК ср Пл па ЗАВ БЯМ ве кое све З паз юлиоси; венУєок бовІетья 0 жУщА ЗЕКАІ св: 000 пз біла За ЗЕ вежі соб З олациовезм л3авоїгь БІЙ БВ БІЛЛА Св Я шва пак ХХ ЗБІЙ ЗУБАХ вкозазя сви пло МІТОК Заг ЖтзАІВ св й 000 пам ев 00 БРА Е че у пу ИН УМ МЕНЕ У НЕ КИ пек 0 0МЮНаю; омюо) зле во МУ кн А аж оз) ЗВО ЯЮ 00 ВАВЕ коту КН ззадачУє; ІОН ке 0 з ЕШЗКУ Ки Я пла що? мод ЗБ нЯ в ЗЕ ОКУ со в ща ЛЖВ У ЗНА З ВЕУ КА кв в ваза вла 0 Зла пламьа зле ВІКУ р У БЕБІ БВ ВМ КО ЗІЗ ЗЯЕХ ВТ СВ НИ я МІЯ вл35 НМ ІКТ Я Б.ЯЖЕ « Дютікаючня рохроксія я епіранювки как МН МАН Винна 00000000 і
Фіг.
Хвбониа ік ВИ еВНно менту я тен же певна нен вела ВИ КОНКУ НВ. «ПЕ ДУ ВЕ БИКЕННХ З СВУ; СТрекє юка ВЕ Кк и ек ННЯ дв ну соя ЗЕ ЕМИ ЯК 0 ЗОБОВ еВ ВАВ нак кб.
З заая луьиея: весні ВВЕ Не свя сема бач заоюмаме воров кое ср Я зеюшееова сем 0 внуки пока ние свя Ве о вен зи аяй жа ви ов й Зло За звів зЗлявч ІК со З За аоюоІ ЯВКУ 0 ВЕБ Ве еВ ке и В НИ вехева см я алко блазень За ааях 0 жк ве свя я ФО ННЯ 0 а Ва ВЕК засн сві В зав сви БУ ВВЕ. села св В дешева оно 0 ж ХЕ втвка си. зле озна 0 зв о АЕН Жетвка свой 0000 ее оюзоз5 0 хек ре тотя ср пазів ізн З ЯНЕ ЗІБЕВУ МА євро а загін ленкаиш гамми 0 За КК ве З Вітя ами ЗХ ОВ ЗХ ВЕК ЕВН я ПОКУМЯЧАВЯ ОВУ НККВЧКЮ зага я ТУ Соя але пізня зн ЕеВВ ЖЖ. тут КН ПАХ МООИХХ ОК НЕОЄ 0КР ВР ЯВКУ ОБ ва М ВАВ а ЗО МЕ ПЬЮ «БУМ сект Т'тчоятрффаіяяфРььшьшшялшьяя Фо язя т шшошояоящ ММК вні 5: "ВИКБУеНЧНЕ регреснє зх непрвак: и ВІК в МВВ ВЕК ЧНиг. а продовження!
Яайзжня 10, Лезекриміне вх хакинь межмнванн м гене окон вел ВНЗ р заорурюві ковтроаюі ІміКщекВ МУ Можкедами БЕКХ та І сем сомів кам, СУММУ, І дерхомівюх здещи 00 мМвиМаМи ххх хек ЕТ) х пифненниве ВЕНА КЕКХ у зкухнком я нос І З2але083; ЗОЗ 0 юлова бьВиББаА НЕД КО ї ТО ОВ ТЗ МАВ плакат Вб ОЗЕЕ М се Я їв ЯНВ ВО НОЯ Вал ААУ НЕКЬВ Ок НАРЯ КрВ.
ЦБ ВОВК ПАК КВ ФУ ВХВЯ ОЛЯ ЯЗ ВЕОБО ФР сре лва 2зіневоє; пехдадмовє ОЗЗ0БЩеОо ФЗУЦЕМОВ ке гр З пеня 0 отв ПІІВЯНЯ ВЛлкіааВ . ЗЕ КУ Па ЗІ СВТ КЕКВ Я пава 0 п ВИНІ, М сво й пог 5Ул п 3 8338 0 п ВЗ ню» сво» ОВО юесом бзююноі паю оохУюжмю ясззАнЕ Кр Я бЖеОВеВЯНІ ВХ ЯЖРНМНОВІИ ОКО МЕ св Т.В ЖЕНЯ Я ВЧ ПЛР БОБ аКІ 5КЖЗВАХ Сро я ХВ (35353, са Ва ЯХ ПлЯІВЕНАН О МОЯ, ВКАЗАВ Кр в БЕБЕЗВІМКК 0 пе ВОМ ПЕВНА па ХВОЯ ЗЕЗАХ ЩрО Я ТУ ЩА ХХ ПОТ ХІІ ПОЗКИЕКНКАІІ МКУ ВА УВК шувхя све З тов бою БояТьЬШя ФВ меОМеВ оте бою 3 Рост етюзояюю феноли веязота влятлює: БЕБЮЖІЯЮ ОвежоОЖИ ФежівяЗея пиИЮУЕНЮ КНУ щрОо я МО ЗА ВВ Я ПОЧЗІВИЗ А КО О ЯК; НУ Ки.
З ПВ КТ ТКУ КМЗ ЯЩЕНКО ЕНТУ кб й МОЗ ХАКІ ПЗ СКМ ПОБУ а НЕУЗЕАВ КТУ кра аа 00 бла ПЗВ Ба ВИХ Ж ї яма швах КЕКВ) ФЕВ ав РУ свв В по по? ов тьаЯ пфтБННЬК ПЕ оввммлмлм'фгфТ г в ц Тв ц '«ккв тв пиши Фігло
Явбання 21. Містинезмнвях уенів у пецієвти: КІТ; З панами пани чнвими капактевнот нки што Щ Мхізна вівміх куки пахння ЛИН УКХ Хвупи зісніцка па нн а аа а а п В ни вв и аа а у я ІУдІМНА й И що щ . - с ск. з хвректуритсткки івілький щк недіХ НІАІІ НУДІІ НАДІЛ ОЖНКЯ ПУВКа 50 с яННЕ Бе О5ННЮ ОБНЮВ.
КО З й Й т їі Ко соя с ям к с З се Ко Є я к уч, с ч де ух МАлЬКЬІ тр і сво З сво З ско Я КО А Ср 3 рі 8353 Кв Я сра Я КРОВ сво З Тіздіюцуюлинци о стен ВІБІНІММ.
За 02 бле Вл пЯяї 0.53 ще п 5 Ге ля ІМ 2 16 БІ ЖК хх ц пою сеоде ПЕРУ ЖКЮ зи5 Ф25 034 в паж бля 0223 паз з с3е ва пк розначених ап а5 м? 0оа З Мщм пз б об 55 аз ва пе позі пуханям ет МБ ОБ ція же 5 ль 5.3 їі о вл ЛУ ї-а М - й В з й тку тка т8 ща Вл вм ва 03» 01:15 0 вх па їі плю о вБЖ фаз фоавачеВНя ОоБЗа пт оща? ба ах ЗУ виш бе воля пе 5 ОХ Ураження БЗУЯКС 53.57 ТЯ 845 ла ля пл п порі пі п 537 4 лЕКфи Уже зх зв дж «з ав дя пе г я щих г: « п й Ми вт яма» яла 0 п13 258 вах Ві о пЖж вла вяї ал) б3 042 ку АВ фени З? їмЗ од пз ам Зо БМ Злі ЗІБ ЗМ лю ща Стат ОЗНА а БК щі вл Вау У ще о ле ехЯ пд --ї МАТАКУЦТК ЖЕННЯ я Ки щ . ї ще л х - - -ує З ванни міни вг2яя 525 Вл Вк бак о біз аз 03 Фо 033 035 пж уМЗианжМях пу пахву б Ба ба 5 БА в а пе се пащ скцния стем їв вІ ява бле пав з28 ве блю вді ої зві пл пі вав злою уя тя «ІЗ е - : - вх з «ех 4: пок поки «хураеь ЗІ) їщ-аз во бле аз баз біз вв вже вві па пж о вд) АщО, уманачзення" ТЯ бої БАХ Об пу с 355 Оле пі Об бБяля пз Жеохполюаяпьуки: Кано міза сажу ВО; БМВ 5.5 і ля плат пла ж пло па пк лк ще пет 000 бекнйсеяньівх; БАХ 05 019 030 блю бж вхо об ма пе о а3ю о баз «авт Й пезначекмя" а п паза отв вщи пі плю пжЖх пат б пз» ОЗ троукачекию мдаховума тис зи кхувнинох пхемНхк ММНа УМ НІ Ге Фо ЧТвблніця ЇЇ.
Метнлювання генів у навів КИЗ х вінимм клізми ззрактернетнкама сврогинюквенмяї пухку ня піт у КАЖУ КК А тт тет КК ж т теттня тет НКТ ет тексти еттттт кт ост кт чкннтя кто тт ттттттяттттт тт тн ттчн нт АККМКККААКАКАККК тя Кінний жін МЕНЯ метилюцюмй ХАКІ МНАУ КИ. іа ікіхеКуВі ркозкащеончечрнааначааннаараанааааає-н!ц ьфоь; ід аж ааоооВ ШКТ С ПІЦА ОО ик Кум м ? ЗИМАІК МОМАЇВ ШСЛІАВІЙ МАЯ БСХХАМВ ВИТ ОВУ ОРНТУ ОВУ, ВЛ ОВУ ОВИТЕ, ВІКЧЬККЯМІ й шк : де мя у. са сих я ж м 2 Ши -ЖРБА св а ХВОЯ о србО 6 0 СвВ5 8 СВОЯ 3 СРО Х Ср Я ср а СВУ 5 сват своя Счзкдіж нехлннх сови вовВ ОІВ п РУ 2 ва: в ол Бо 83)» во ще ВК ОН ще оф с ху ак - - пові «лаві ЩіБіяю ві З 3 2 58 чі» Ва и Б 03 За п девначенн З пл аз бля 215: аз паз пою же біт б Бл Бозі нжкдиня ОО ЄТІМИ БК ща ТЕ Сл Масся ія шля баб ЗІ ЩОБ ІВ з жк х х гру ; є я : Я най ТУТ ТВ ле ОЗ ТК 07 о я Бл бал; 25 35 мо У ТУЗНаЗЕННЕ За пове В.І м а За з о с5Миа по ес важ о Упхесвкх заз п 213 5 в пже Ват 9» о зл: ла 0 ом дімефаунаних ін од я - х не я зве Ми міти о 232 ав в ва 823 од а5, 83» 5 ми вар зона ПЕВ ЩО Джианеннх зл ол 05 Здю оям о Бо бе що» бою об вм ОХ Стах ве ічи п48 па? з ба о В В: ЗК А МеТастТихуВкНня МВ пі лі пле 5 п зх по се а плі що п пизвачезна ЯКУ Пре паї Зв ОБАМИ З БАщЕ З У повну Оніюкиєтеценя о сувак ві; ОЗ ви З пла 55: йадв вм аа За 315 по ва мою крунйню З ЕМ ще вм о 0ю бю 05 ом б ва; я в/о 50 ВО а резина" защі пов; плнюе НЕ спла вляк балі бів ФР МИ? ЖЕ З Бозподуї випани ЗЧумкіча ствть ВИ ХУ ОК. пд щІ вже п оо? ще 036 пла Бо ох СУНОРИННКЯ У одній стать ВТК ПКУ Б ща пла пев ве о пяк бл вія па а шУуТТМВ 147 взнахенинх НУ МУ па ЛЕ ша бояв пав авжеж Ок ма пз пла пет какжжжК Я аж жЕ Ж Ат куту кни яж Ек кжж ит КУА жна кан І іні я ТТ ТЕ Няня -БКЕКНя БОМ ОУКОВУВини ІЗ Вау ун кркнеикх Мідна хтх Фіг 11 (продовження)
Табаков Р.
Оцнне яеаків занезі сиоааркерне ва со кукі щая равивоо виженення раку ВИЗНЕКИВ нан а а а а а В а В Чан | й Пиикля й Кипжіує кяреяже Що Зісзіаха Міхемістх пухка ехуа мух А иИХ МКМ и Мая.
М зражків Ажалія МО Труд соранцяй ННЯ НКУ зу нн а а а а а ' вежі МЕН дівеююнх і нта щівое щеаадя Ми? Кліцна. | Й Й | Й не Бебоєлюберттько; Корені; заЖ УЗ ЗВ з4УбКНЯКІ М? (95390 157 139.3 188 137.33 ММК УКІЖЕВКНІЕТИ повну Меажадня ТИ Тебе тнсько Звоваки Я Я БІВ Бі Я ОБОВ ЗІ ВЕ ЗНО ВО УВК хнівавожтту Фіг12 Тайн 15, Відмевнеють звтнкввнно з гекних нове перен век КЯ т кегерогна.
Ще: зуюежка ДМ сВНтю ВЕедіния.
Межана випаяків дУнттлів ЕМВ зм гущу Що ТЗН УАНМ срш З ваша аанащнози З я лев НА Св а Пе В ЗЯО я ВА НИЖ ЗУ НА ср З са паз зазнав апакчю НА Кв З Я КУН ах НІ аку МИ св ВЗ В.Б ОБ В ВЗ (ПВА ЮК сре Я В.Б НВО ВЕ) 253135 74853 зл еф ср З ваз аа ВЗ О ЗЕ кот сво Я ола юнь; 3803 зам НМР сво 5 ОВ ОЗ) ах 1057 За БЕ ЛВІЯ сво Я В.Н ОКО. пішло 8 ОК 13 БІЛА СВО Я О.25 ОЗ) 3510305 ЯК МЕЗІВАЯ СР Я О.Я Іа ОВ ОА за КІВІ я сво я об Ка ЩО АБО Зах КН? ср Я ОЗ МОЯ па ОВ ЗА е ВИ св я оо Іа ОВ ВВ ТЯ боб З ЛОЮ ДО ОЧНІ ВЗА Я се я бо че ЯКЕ ЕК СА НЯ ТЯ ср ж Я еВ Ваз З ДЯ ЗІЗ К- ЩО ВН свя а зач ПУ ПУ БВ МАЕ вк бра я ба яко а ТО МО З.БУБ-З УУУУУУ У У УЖ УУУУМУЮУ УКХ ОК КК КАМЮ Ко АКА Ж кі ко кн я я пут КС Ж КК кр тп КК КК КК КК КК А А КК кт учи с ке т ДОКТ НЯ Де З ЕВ ВВ МЯ ЕЕ ВАК Б ДМННВІ ТЕеУУЯІЇ веоміуснВа чих Фіг З
Жебоаннів 1Я.
Дкацквжана на звану)» метання в пенах фен гк випади МВ ЕН МАН КЕ вах кра МТ М шо плеч з ОО НОВ не се З ПУТ МЬО КЗ ее С ОЛЯ НКИ Ш-щшя ря а ИН С веж сво ай 00000000 Овмамнатв ЗМК ро Я ПОЗБАВ ІНК Св пОБЕ ОЛЯЧЬЯЇ . Ши своя ою КБ От) ше яса ЕВЕЯ 00000000 олнатьомо ЗАЗ ср а (КРУ ОО В Іа сра в ОР ОХ ТА НН з ИН на КО вже а. 761оже-о ВНТ Ср З Вл і РОТУ Ср, З УЗ ее ЯВНУ Ср 8 аа ча ВЕУ Кр, дог альна а нн НН аа КН Фіга
Гвзвохчетввя пеюта СВО УМУТІ ВВ; ЗКУ ВОВУЕННСХ в думи: Как жвоскнь В МАХ ин и п в як КУ Віда вів вел аення Коровай) я МКУ МУКА КК КК я Декан мн а КВН ББЕЯ ана хае дБ у З мч коовмнвя в й пек ин я Ки го МАМУ МК У ко о о В в В ВО ВАК Ку З БЕ ЦЕО У КЕНЕ БЕК ВВ ЧЕ «Я ее Ж ШИХ И ФОХХ І ЕВІЕ ЗУ ВБЕЯ ЮЯЖЖ вляї АК ну сво а Ба шВІНИ) ОВО зов За Ва кВ ша НІВ св Я ВЕ ОВБОБИ УВК За І аА ща ОК БАКИХ МУК Кв 5 аценники пав ЗО в З25х ВХ нумо кеВ ОБ ааеві ЗБ ЗІБ ЗХ а «аа нУдає с У даю ба ашоае ами В йо «ОВ вус я ЕЕ НУО ЗЕМ У За: сІмеКа нУудх Фр КЕ оф (ЮЧИ: міну ВІН влях щу така ЄВ ЯК 0 МОЖУ ХО БУНЕКУЮМ: ЗВ Я ее хо НеМмЕ бро ВІ Вова ВИЗ НІ БМВ п лЬЕНКХ МУК ев я пиво сина Зі мі Вл що ВО нене же ваз осіовеомО КОЮ зок ее Фа «па МУЩЕИВ СВК Її ОАБИМООЮИ ЖІ КММЬМВ: 1оТоІИВ ЗЕ? ВМО МЕ тва ех ЕІ: ОІВ БІ щЖЕ бБЕМ ЯК УВК Я СВУ Я БЖ НБА ші МНК «ХХ Бе Б ЯК КУ В БО НО ОВ НЕЬУУЕ БЕРЕЖЕ а ХК аМВ нУмеВ бра У 0 ож МОКОІ ООН ВОЯКИ МН «ФМЮХ ВУАН КВ В паж ше: ВМ ВХ ЗМ «Ва Не КУ алЕБЕеаяЯН ЗОБУ ЗЕМ З АНЕ. БАХ «КА нУЗЕМН сви З Злам ВАВ БІ аа ЗЕМ ЗЕ «ВІВ мем сво а ФЕНЕОМЮ еф о зоб «оо: Я «ооо вт сви плеизкояя пол фета З до оВОЖ МТВ ря МЖК МЕ КВ ПОБИЬКИ пев м «МАК КН ХАН нема КЗ У ЯН МІХ и В ЗБЕ Ж С «КІ ну Кв я ТЕКИ ОВУ ВКА М Ж З ще У ДЕКІВЕтВІ ВЕР ЕЄНВ З ВНЗ НруМН ВК Нм ВЕЖ ВОК БИНВЕ ЛО Н, ВЖК
Чиг.15
Тайоних ГБ.
Снмернене звасичиеть МК метнакиннням й еконееєна чек ТОНІ еркецекак КА п чн ан и С ІТ и Й Коалй в Кот кормах фоаавНя "ви хво. яка певоемова; БАНОК» ЖЕ 00 00 ЗЛОВЯЖ КК СЯ ПЕСНЯ ЖЕННЯ я пах ха ЕКЯК Я ЗВ СВ У пе жни вона ЖИ жк БІБ зник сво й ази шана ЗЕ «МК ВЕНЬ НИЖ КВ Я Паб Я НЬНКЯЯУВ 0 ЯК БЛЕНУ ши и УЖЕ ВаУіБЖеММ ВВ. злюе - ЗКМаів ню З Блек лено ВО «во НУ КІВІ р в пам Фі Ж ЯМ Я КМНІя ср в ване бмнелеазе ЕХ «що ХляЖ: ВІВ ри я пень и Фе ЬО МК «БА 3 СНО ев юуБАНО; ФУБІЕЕеІЮ ЗАМ за - оф ін В С НН пек КН Я МЕБЕЛИ ВОІВ ОК ЯКЕ ВА Здвк хви светри Й й : Фіг Заблиця 17. Бівхі метнаюванния Срозеванв НОЯ. вав зве прю Новое ЗБК Здевниаківік В ува пННІНН Зерха ЗК: веде Бепівщужання Еихчиух ЗВНИУЮУХ ОІЖЮВ чмиа Ж х жихнІ ВАЗ тТЕ ща «НІНІ КО Ма Ж 3 33 Та Ух на.
ФВКХУКУЮНи ОХ 0 ЯКУ в З ЗЕ ТІК ТУ ЖЕ «ЗЕМНІ Зааже яМЖи во 3 Бах Тех пк аж екюмзімжі алашк -баЖЮ ЗБ З БОЮ Ту ню на смена?» ажовк Вже жо їх охо теж ле вв. темне б Жм Зб 0 ЗБУвак ее, ТІКЕ НВ.
НИ БЕХ ее ВО З що СЕ КК МВ. «ЕН ТЯ ТЕЖ ЕК Ж З ау КА УЮ В, МВ. «ЕНІМКМ УВО» БЕЖ за Ж ЗОЗ Піна у НОХ «ННЯ бла Ка Ж З Бод Тео УТИ МВ «МЕЖІ КК «В Ж З аа ааОодх ТУКА МТК НЕ, ВІН Б МВ Зк З КК ОБЖ ЦА в заБінмо бла ЗМК ЩІ З ж ТОЖ ся ТЕЖ ТУ Же імя У й БОЖЕ ЕЕ НЕ «ВІВ М ЗКУ ОК ж 5 БВ ТУКА ЧИ ЗЕ КОЖ ЖУМВА ОФЯННЕ 00П.ООВ ї я БОКУ ЖЕ ТМ БЕ ока Оки ККУ «ВІ 35 З ККУ ЗМТА ХО пд. ча: пами же Зб 3 ма: 0 Блеощю нд.
Фіз сша 0 ЯК КК З Ви КУМ на ФОБКІВМ ЄОНКИ «щхе ж а БУ БЕН ИМ КК МВ. «ІН СХ МА «МВ КІЯ 3 ОБ МЕТ З СВІЖИХ ОБАЮЮЯ «ЗОМ ЗБ 3 ББУЖБИХМ СМТ нд яка ЮУУККК Мов, сах БАК Оу Зк 8 ОІВ РІЗ Ж зав оо КН ООН КН БАКІВ чо ЗЕ я ТЕБЕ М «ЖИУОВЕУВУ пляма по хе з жи тіж БЕ «МК ОО СО ОБОВ ЗОВ 000 НКЮ Фі
Забивих 15. Би метнааання Сосесанна ЗМ, визначен: ва палі Ніка ак | І дово АННИ со НН НО З З ШЕ ШК ТеМЕНа кВ.
АНЯ ОТО ОХ ЗБ З БАЗВщЦяЯ ТАМ КВ.
ММ Я МУ ЗБ я 0 НБК ТАКІ НО ще сек ма Би М З З Нау ТУЮ КЕ сві КМЗ яма 3 З В Т5УНЮ пе ОВУ СОМ 00 ОХ во З Ве ТММ ВЕ. яна (МКУ ха 35 я Ба ТММ ЩВ.
ОА БОЖЕ ЗК ЗЕ ж Вже іа екв МЕ.
КІВ.
СЕННЯ 0 БОЖОа «ЗОЗ З а БОБ ЕН ЖЕ КВ.
ФВ Таб ІЗ. бівні мечтеенованих сурсів РЕА ЗК, вкезнязен: ва нуля: Гете Зк «ВИЗ БІВ , АЖ Кк В ЗВББУ Тіз Ж «роя ВУ пав з З 0 ЗВББІ8е іде ня.
ХОВІІБНІ ОВ "ЖК КЕ КЗ ЗІ іже НВ. вами БИ ВАК їх її жВЕЕ Тіз ТЕ ЕНН УЗИ «ЕВ Ії ЇХ лЕТЕУЄВ То ТКжЕЗИО ТЕЦ чкмНиОЗ: паж пйлеа 38 3 ЗОБІ» Тіз Таж ЛННІЬ тех Фан: ЗУ «ВЕ їх ТО хВІБаІЯ. тіж ТОКІО ТВ сума уена пл» Ба З а дауаЗАя Ті ТЕБЕ щю ТаМЕ «КІВІ п Вщ ЗЕ їв Тео ЕІ МЮУ ТЕ «агОЗЕВі 05 бю о мо ЗВНеИ Біде РЕК ТК МЕН Б 0 Бк Зк її ем чів ЖК ТЕ І ЖІІ ще лю Б ій фЕРВІо пу ЕЖМіМВ ТащЕ твіножаО» пліжЖе «Ме ЗБ 3 3555 тав СВ ІКОЙ жаНЕ сама Бл «МЕ Би За ЗБУВТЯ Ті ТЕКІЩК ТЕ «ків МКМ «АК 35 1 ЗМО Трав Таж КЕ сховався пляя ММ ЗБ о 3 ЗяРБНЄ Зі ТАКЕ ЕЯ «ВІВ БОМ Ма їв 33 жене ТЖНО ЕЖщиВю ТАЧЕ : ЕІ УУУНКЕ ВЛЮИ «ОВУ їБ З ЖВКхНЗ Же КЕНЕ чТацЕ УМ БОМ ЯМ їЕ З ЕТО Жіва ТЕЖ НЮХ ТЕ ОКУНЯ БАХ «Х КІ А БТУЩОВ ТБ БЕК іщО нак Ба ТАХІ БаХАХ Я Б 11 ЗУ Чон ГУК В. ка ВЯЯ ОАЕ З ке Ж Ка НЕ ВЕК БАКА «ЛВ Ко 33 Уха ЕЕ ЖЕК КВ. теле ВО ни 3 33 УКРІЗЗ5 ТИЖ КВ.
ТІВ ля 0 КВ КЗ 33 УВеТ МТ Я КІЛО МУМІ 05 -АКЕ ЗЕ 33 Же я Отут їв «ЕОМ ІЖУЗ КА ЗЕ Х3 жНУВЕЯ БУВ ТНК АК Н.Н. каші Ж 00 ВВ Зк МО жБАННЯ БУВ МТ Ка ях НЕ «аІа КА ВІ ФАЕКІ ВВЕ 36 її о заяе БтвоРтТаА є «ВІНКІВ І ЗЕ З за житт А ТУ ВВ МЕ ВЛУВННИКІ ШАККЕ «ДАЕ а З сЕжЕМО ЖИТ ЦІВ УУ п.
ФІЛО КАІНЕ бо 00 КА Я хВ ОЗБУОБУ бо твА ти тан Бе сшееМННет ВЛ кАЖККу Ж ха ОщУВЦЯХ ЕВ БТ ЕКО КВ сени Ох ЛЕ З Р ах КЕКВ КН Я ЖЕ ВУХ ЗУ ММ ЗБ її СЯ бутетутвимяюю КВ ОТ УНЮ: БЕХ 0ОЛлЮюЮХ ЗБ ОЗ ЗяаВУ ожутевтя ою 00В Фіг 1о
Кбхенив КЗ, Ріка за вк кванн Сан КАСА Я, акме; за клея ТЕН ЗВ пемхокнкеня
Зовні Вовк нен их Жвае звеке Кохтовкнк как КиюНеКе м нн ох ИНА АЕН НН ЕКО ОХ жи За З УББ УНК В.
УЕООНІ ЕООО ЖКЮ ще ЗЕ зЗНа ФЕНА МИ ІВ ще УНН б ох ої Ж ЗБУННЯЮ 0 ОТ ЧИННІ кВ.
ОВ ЯІ БІВ НН жа 3 УВК ВЕ ВВ КТ КОМ ща «ВИК йЯдаа У В Ях ЗЕУ 0 век уеаоВ яж «иа ю ЗщЯ З Зк Я БЕ фИТА ТВ М ЕХ И І З ЖХ ООО0СБМХ ЗЕ Я НЕ ВАН ОТКИ В ОВ ІХЖсЯ о вк Не а З Є ВЕ зо ННЯ ЖЕК КК в, ЕОМ ВА ЕН ЗЕ Я ЗКУ МТВ ЕхЯя «ВУЗІВ ЗІ ЗАЖЯУ Зо 35 БОМ ЗМК Береза ТНІВОЖНІ МЕ ев веме а З 3 З УбІВо ів отв мук ЗМ вії пав.
Ж ЗЖ З ЗВО ЗК: бака ВКМ КК СВ ТИМ ПОХ? в жо ж ЗК МИТНІ ЕСЯЯ МІВ ІК БЖ 36 3: ЗВБВО БАНОК НВ як. «кЗІІ а хе в 3 звБхе ЖАНРОВА К не СМТ БЖ Ва Б 34 ЗБВНКУХ фероюхни МОМ ТВКотащи ТАЄ БВ БАНЯ са Зо ЗА ЖЩБООМ Ссвнаскю Мене ума ОВО РІВ МВ ЖЖ ве Зб 33 ЗАЯВА 0 боюріткню УММАКЕ ТЕ свята, ВАМ ММ Зб їх Зх Хкех Кекс ТІВ ТЕ сему: же ЯМЖЕМ о у ЗаВЖМА 0 лбко Бех БКЮЮ БОМ СЖОБОХМУМО ЕК ММ бо ЗО ЗяВаВМУ 05 БЯВОЖКЕНК ТВНЕ ДОМУ ОБЖ чМмке ЗБ о 3 заяв 0 СО же ЕН МЕ УДЕНЬ) яеажЖ баЖж: ЗО ХЕ ЯВКУ бю: Тех ПИНОЖЮ КЕ «НОВ ой мив о 35 зма ТвКО ТкВ ТУЖНЯВ, УЖЕ КЕТІ ХХ ОВ ЗНЗ ЗВЕ Туке Бек т я ТЕ ХЕОБІИТАя ВІКО МО Зж ЖК Жак Твух Кіш МОМ ЗЕ ХЕАМММБМХ бом МОВ ЗБ 35 ЖВЯЗІ Ковм Кі: ВЕК тк вне х шум айв ЗБ 5 фщаае ек Кох ЗЖХНВВ т еВ пе НН Бо 3 ЩЕ Явні Бі: ТК на ІОВАаяЖю ож ЯН Зо 3 ХО іже ПЕС КЕ хАІдТоЯНХ ХЖ Нм Зо ж ОБ УХ Же: Пав ГУК; ЕЕУЕг кам ВаІВІ ЗАТВ АК Зо: ХВОЯ Тв Пи ДКЗ Е КНУ М «ЕХ ВВАЛНУХ «ак па З 33 ХВ ПЕК б ТК Вк Фони я вам о зн Зо ЗБИВ Тевк Кен ТЕО я а но нн НН ЕНН ва НН
ФфФіг19 (продовження)
Теблннмя 19, Бідні меуноюваине сумі саве БЕЖ ХА ТЯ, звеезеенеме зов пра Те
ЗАМ кнролекнення)
ню иний Я ї ск Хром Що Й Щ І с
Те НВКННяХ ревнне зло Зх ях ВАД Бокнункох МКЖАОКАХ зе СЕ бю Й ше: пи 7 в КК А КК в м УВІ ОВ 00 дю ЗЕ ІІ ВВ Зі ївк ТІНІ КВ. емо щи ше 0 Зб О1ї ОЗВЯЩУХ бі бтюх МК КН нд.
ЗИ БЕБЯ БЕНУА її 2553БО5 пд: Тк ВІД. «ВОЛЕЮ ЗОТЯ ПАК зе КО ЗВУ ТивМ бух не СВІ ОННАВК оЯ 000 я: З КЕ ТМ ТБКІ ВЖЕ «УНН ЯКБОБО биЖ ЗБ її ЗЯЕАЖ Чі То» Кк.
Фа Я ЗА КВ БО 1 ОБУ Уже КБ М.
ТОВ ВИ МОУ ИЯ 00 Ж ЗЕ ЖЕ ВНИХ Три Тк па СВЕНЕОИЗАЗ ЛЗБІе ее К5 я ВИТ УЯХ Яра: То» ва скуааощоєе ми б ЗО з ЗВКБа: Чиж: бю твмЕ Фа ме иа Зб їі за Чек Гек пл «іо БВЗ ЗКУ «БІ щу 15 БУ ТЕЖ Бр КУ кВА овХ 00 КМ ЗЕ і ЗК Траж ЧК Я «БІ аВЯ б БЕ Зо з БаВева Пи ою ва візки ще -БЛЖ ЗЕ ЖЕ лу Зі, Тк 38. сві Вл З її ВОІВ Тв Вкво Мах КИ НВеВ ЗКУ ПЕВ ще мон За Тк ця. кое вк НЕ НЕ: НИ І НН
ФфігізЗз (продовження!
Таор КВН заховав Сан ММК З пекан ее пунк ЕКаЕЕеНЕ ке ну кран ВИМОВІ сою шо ЖКВЕМИ У колкои й вне ій до НОВИН Бк.
Тк дач Уккту ур ваня Еджни
ЕУКЕ ЕЕ еще хв плн тиск нет ктаккккххх от лекеє куки тек КК ККУ КК КК ККУ ТК КУМ НИХ мі ЗБ 35 35 БО т вв. сл ОХ БВ ке У ЕЕ ЖЕ тка ви ОІВ ВО 0 ВЕ ке КЗ те ть во о о ВИНА МИ во НН Табавиуя З.
Міні метнлювання Ср сані КС, вауназене ма пу Міникека кін
Іа кави моз ящик Жеймикат до 2 век ші сон ВОК чБкх нк ен Даретукоту жавних Кахажоее «МАЗІ НК мі 35 Я фжжееца ЗК; Болю ня. а ет ЗА З я Ки иЗ ЖК Мав В.
ЕНЕР НН ОМ ЗВ З ЖЖЖКНУХ ЖК тав На. «ЧУБ УВЕ ОХ 053 35 8 ЗЕНИК інвоххзе МТК НЕ чеки ШКЮХ 03 Зх З ВЖИ ЗЗГЕОІ яв кхв: МВ ОМВ. «нОуетаи: ОЗ 003 ЗБ 05 озажетеву 0 нях ТБІЖЮ В,
жк ок» Фіг
Тебанця ХХ, Кінні мегнавуванвя зле ов ВАМ, виємнаени не првлаю Мох.
ЗЕ сОМОБНІ 0ЛООІ сМЮ; Ж 33 ЯНОШ пах Не в живе паю ОМ Зб 13 МУМШУ те е кв.
Я МНюХа БАК СЕ Ко зм ки ТуЗК ТМ В. сома мі аа 00 чЧеЖе ЗБ 3 ах ТОНКОЮ мя са АК 0 МЖК 35 ЗВО Я УВУ Теж ВЕ м. сія? ЗХ 005 ЗБ З ЯажНи ТБ ЦЮ Ма ж ке МО С М т М: М ВЕК ММК ВЗН М.
ФЕН) ШЕ 0 че ЗБ З ЯРУ 0 ПЕЖКЕРККНКХ НЕ СЕІЗУТЬТа3 ПО Ж ЗБ жа 0 ТЕКНКеТИмОЮ я КІВІ ХО -шоаз З ЖА Я иНя Теж ВІОЮ в ЗЛІ БАЖЕЖЕ -Зо5 ІЗ КА Яка тека На
Фіг а
Табинив КЗ. Кві мехроовання Ср КРУК, воуманнознх зов паванаия Міхеев Мох й ни. наван зх МІбно ЗВАРЕНЕ Рентоння Клен нен т и я ЗК МАХ 00 Од ЗБ Ж? МИЛЬ ТОЛЯ На «ЕН е ча ЗВ Р тем ує темах а БЕ. АВМ ФВ З Б 2 ЗОВ 0 55 НЖЕ на яМіЗБІЧНУЯ ЧО ВАНН Зк М ЗІЗ щНУ Те УМО ця. Фен ОН БО З а ЗБОЮ ТОМУ ца. ЕНН ВІКНІ? «ОКУ а РУ ЗБЕ ТАНЕ ОО ве твіти ОА ЧОХ З ії 6 0 ТОК ТУю МЕ. ящоОЗ5ватІ АЛЬО 0 Зв о їУ 0 тБІЗаКа тежкх Бо В. «вод І5а2 о НК 35 ї7 535 Трхх ТЕКУ ва. Фа Во ЗО 0035 ХУ ау Тв брех я еВ ІЯ ВАШЕ жа ЗЕ Зх ОО Тв Те А ие ОО ООН З 35 неза Тек Тра М кат Зме 03 ЗБ зх БОНН Тв Тева В.В, ВИТОКИ НІ 6 37 То365355 ТвУх ТМ ТЕБЕ сон ааа ВОІВ «КИ ЗБ ХУ жала Хіде Тв ВВ. кине ня ЗО 00 яБ 0015 Була їн Пло . РІВ аа Зо 32 АН Тек Тнві ЕЗЯ свя ЕВ ТАЖ З Мк 0 ЯХ Ттлах ТІЛ, КВ. «Віл: о й 35 37 ЗБ Яке Бе НВ. ФЕМ нНУ Ва Я З їх Оті Тнхк ще В. скан ба МК ж 37 ще ВХ ТВ ТВвх, кВ. ОННБ ле 0 ЗЕ Зк 32 аа ЖЕ Тек Тех В. ВІЗІ За 335 005 Ух 0 сББНІа Ті; Ба вк теми еле п 35 НЕ Кіа Зо М. сон ЕВ ВХ Зо ВЕ 0 з3аТея Жевх Бе Я зам ІЯ бла ние З ж) зБХЮОЗ тихих ТЕе ка. ФЕЛІКСА АЖ Зк МЕ ЗБК тр Тіла ТВук цих Ва ЧК Ко Мк зва Те ТК ТЕ соч ха ОЕМ З 15 маію тк: Кеш ТОК СИЛ ЛВОК С -БАЩЕЬ КоЗЯ БЕ ООЗБолІВ5О Зкех іде ее бай ЗКУ ЕК Я У же Тех Про Н.В. СОН ОКХ ля їй Мт БІЛА ЖУ ТВЖК ТІНИ БЕК ІІ повне ЯК ЗБ ВХ ЗБ Тис їмо вв. ТЕН пої «НЕ БІ 17 ВЕЖУ Товж Берхе дя. сЯОБЕІІН? пІЗ яке що 00 зБ35Б5Х Тех трка ЗАУК ТВІР ННаВ ШИХ МЕ Зо жу жав Твкк гню КЕ ІКаБІНняУ февм опо» ЗБ а? сБраех хім 0
Фіг.
Каблвщя ЗХ.
Рівех зкуровюовання стресова КТК, весен вне пером Кока ЗЗОК спрволденккеннкї
Й ом и о М вовни вро оон й еш ді ММранН обох їнее ЗААВНЯЕЄМ Бихонщуюютх 0 рихвехе ев и Сон п нн о чим: ПоЗЖВ 00095 ЗБ 17 ЯКУ 0 Трех Сл ТОЖ мае йЗяІ -юО5 35 17 ЗМаМЯ 0 ткх яТВЦЕ «МП ФФ033 ЗОММе Зб 47 ОЗО4БНМО 00 Текктхю ТЕ Ух йо бо 35 047 НЯНЮ тх тех ня. «вну ОБ) ЖЖ Зб 39 ОЗБІ5АВ отв тв» п «аніж пе ОщЩЮ 35 31 ОБІБЕЩВУ СЛахїсю не. «заз хаа пяМЕ -ПЛЖЮУ ЗБ 39 ЗБІЙ 0 оку лих в «не БЕ ВО яко 19 БІО 0 ба; їм ня. «віку» ОКХ ВВ 85 0039 БМНЯВ пла ня, ОІВ ШО 036 0 ї2 ЗВІЯМОУ опа й ТвШЄ «сІЗВНА БЕ бЮЙ ЗА 39 СЗБІЯУ 00 Трек Бех НВ.
ХІІ Оля: Ме ЗБ р» СБОЖЯОЖЯ іа іяа в «наз ЗІ -ОЮ 35 17 ЗБ ах ж па «Іва Ол БО 055 Ж ЗОНУ Зона яв. ства МЕ МЖК З Ж ЗБІЯЮВЯ Пех ре ха, сії ЗЕ ба ЯБо 37 ЗБІЙ паж спа як.
ВІН ВЛ Вб Ой ЗБ ЯОЕХ спам не на. світе Ве ОО ЗБ 2 ЗНМ 00оржк та НВ.
ОН ОМ БІ Зб 417 ЗБОЗБЯ 0 тих тою ща зв ня ЗО я 32 0 ЗБОІВБОВ тре Тее ЕВ. теОВізІ3 ТЯ Бош зво 3 жо пк йде чк. сб ІЕО пл бло 35 їж ВОШОЩУ зви ях тацеЕ ІІ 15935 0 ОО 0036 035 ЗБІВНЯ 00Пеи ре твує «озБІЯта ее 000 ОЗЖ У ЗБУТ; Тіна тя зенМматаві пе ам З 37 Би Хр; Тра твЕ сЕІВІВИК ЛНУ чаї Ве ТЕ ЗзБуУ жо Ум Мід ке.
ОТ МЖОМІ (ІЖМЮ -0Я» ЗБ» ОВУ, ко вх. зехнОовях 585 а Я ї» б3ауаУ бів ївю ка соня Бе бо Зб ої о соБую5а ж бе тямЕ твізБІаЖЯ Бон аа Зб ої» о сБ3бодя сб ге та евІа МЕНІ КО ШО: Зої ТежЕюяВ зі ко яю УВМЕ сЕЗАЗІНЯУ ОМЖЕм ВО ЗБ 37 БЖ? 00 тов па.
Ба? обі ем Зб ої? збо Трик Тра на.
МУК Ме ДІЯ З РРО НОЇ 00оспах ща. свІаВахк ФІ мо Зб о зу 533 ЗЯіже Біде ТЕМЕ Кекс ІН ИН ИН В
Фіг продовження!
Чабовища ЗА.
Коен; меззевованих сук свв ВІНОК, вманечені ва приаааі НЕвезнчя ЯК свроваання шо п чн ннедн кра ваш ЗАДНІХ 0 бинауеання 0 Мих ен нн т нт нн нн м нн нн «аа Мая олив Я же Зі Та вх БОМ БЕ бліх За 3 ЗІ Тнке Та ЕБЯхя и Ж Я во сх В У ЗКУ Пра; йде Н.
ВН КУ іа з 37 Ов Ен Біде В.Б. «МНК я од ЗБ 03 0 БНУАХ Тіни Емях не ВМІВ шля ОБЖ З 37 УНК Зі ЗЕ вд. звештаВів М же ЗБ ої? Зх Тр бе А ««віЗмо вам 0803 35 їз» же Та Же тВЕ БЕ Я МОМ «МН З КОТА В Те: Тв ТЯМЕ тим ох НК я є: У ЗОНУ Зі; бю КЕ сог3за в ОН ЗБ ЗР ЗМ Трою те нд.
ТвОзаава п їж З ВР ЖІ Вів іа пя. сІМНОУ ОЕНЖХ КОХ Б КІ БУМ Жижи Ті ме ЗВО УПОІВ КЕЛЕЕВ "МАК.
З КУ РУКУ Как ле В.Б. тва ВіІВ БЖ 0 НКИ З Ж Ба 5 Же Тер; Ме.
СИЧ ОЗ «М З Вт 0 ТВЧ ТЕик бо ВЕ ВІВ СК НУ З 39 т7а3Кя Жук біла ТВ ема а СО Зк ою Тевк Кове ТЕ «а мм ВЖЕ І У БЕ Тек Те ТЕ ЕКО ВУ щовь ЗБ ТО МааЯОИ; Тек» р ТВ ЗОо5ІБаю ОО ОО? 3537 Б3МИЮ Теорію таж «міне Во ЗК 85 ОХ Ткмх бле ТЕ «ВІВ ОН «І» З У БОНН Та баз Вя. стаю ВЗ їж З ОКО БАХ Ті: Га ТЕЖ УВО ОБУ БК ЗБ Ж 0 УБУБОКІВ Тіло БІД ІБ сіла уУх ема ва ЗБ о 35 Бе Ткк Тю кв.
ІБВОРІ ОЖЖЮ ЧНЯ ЗО Р ЗЖУЮМ 0 пвк те п жен: ВА ЖИ ЗБ 7 ОБУ 0 Тех ве ва че АЗ ВАН пої ЗЕ її еще Тих тів: ЗВ. «інв БІБ йозм яв о ЮР БЮ тиви Те Тв. ша аі ВО З З 15 ЗБІАОВЕя Хі Тілю НА.
СВО АК «МУ 5 15 Уа И Юре ох Н.В. сІІЗВВАЖІ АЖ 0 Во ро РО Тік Хідюо ТЕ сл ана Ж МУ ЗБ о 35 яБяЯВНї Кави Куда ТЕ КЕ ЗОВ МА З її ЗЕаБНаНХ Хемк Тіло ТЕ еевіхі ФМ УХЮ БЕЖ Ям ЗЕ М жан Тове Беха ТЖЖЕ оче ню яо5а З ї9 ЗзБаБ5щА Зах Гаю ТЕ фіг З продовження!
Табянох 25. Вів: метилюваних сті сани в ВЕТОМ, низмачеві на вовняної Ні АК праденвженимі ан ни уч тної Зах» Жовч манна Козанужкаця Кано рн Ше ше Ши Ве и я сіном Юма Зої ВОЮ бівх тов в ща ою 005 00350 Баян бах тме вв. сви Оа ЖИ 0 ЯН а їз Тов ре ж сів а пл ор ЗБ 17 сяЗжнЕ Тов па вв. «віБі35585 ока Миші Зб їх тозУВ5І Тік Тізе ТВШЕ «са ем І 036 035 0 ЗЗОХ Зо; ія ЖЕ ев Зам З Я ВИМ КО У Зоя зх ЯЗужк Ме ТВЧЕ ОНИ ЛЯХ 00 ЖЕХВ З ої? Ба ти гла ТЕ оОБНІІ база в 35 05? 0 УКаВУРУВ Зики їрю ТВ. свузавзвв ба лю ЗБ ої» овеУМО ЗТ в зе ея Ка 365 0 РЕаЖУУЯ? Бізе; Тех Мь с МОБЕІІ МКМ 0005 35 Ж ЗОВ бех Б» в нан) 05 БІШЩУ ЗБ ої» пБЗВВОВЗ Зідее Зе ве жіно ба 0 пла ЗБ 37 ЕН Зк тре М.я. стат ЖЖ че З ої Не Три Та пд. «яна бе ве м 4» жожееа ев я на ТИХЕ.
ЯМКУ БІ ЗБ Я УББ ра: КІВ В. чав: паз вопю З їх Важно Зівоа; Мав ня.
ХОББІ ММ вл з 3 ОХ Яке блю Ва ЗИ БІ 0 ч Же как ов Тек Та на.
Інше бе яМмже ж 3 жив Трек Те я. жі ов: ав ЗБ 3к зщаця Тк; Те ня щажовве ши ЯМІ 5 її; ау ик Міда як «НМА ща 00 КВ З ОХ та Бі То ве свівВЕАтУ пе: Б 5 3 БОБІВ Зі Ме ва. «т НО ЖЕ ЗБ о 35 ная Зркк Тіде в «ша ож Мжх ЗБ Зк зн Тздю; Кдех ТЕ зви мя ЯН ЯКО 03935 Таж тва ТЕ ще аю мя 35 37 БЕ ЕН Я че еЕ ОБ 0 ОАЖЕ ЗБ Я 0 жвНеуТа Ве Тк ся сао лам ЯМЕЮ 35 45 555535 Зі: ла ях Фвівзяое оо бем З35 ї7 Мои Тех Так на ЗМК ЗЕ 0 ВК ЗО ЗБНЕН Та: Тіза ТЕ «ЕІОїБИЖ: ам 00 хі З5 ЗУ 0 УБоВОа Звер те реа «Іа аая (м МЕ ЗБ 47 ЯМОВЯХ : Жак Кіде ТЕ ФІН ОВУ ВЖЕ а 35 Ба Журшк Бі ТЯМЕ скол ЩЕ МИНЕ Ас з: АН НН
Фіг З продовження!
"Бабка 2, Кенії звозаетновіаннних Срна квіектв ВАМ ЕМ, звмаетечизвх вв. пцравалеанєх З Вмковнаках ЗМК справка
Здаре вк реа ві НІНІ Заже и: ведена рктукдамуюнняя 0 Мухлюхи ВО ОА 0 ОКХ З О3и ЯН Трек м Я зоиме Ох ОО ЗБ Ж) ОЖЯНО твою вк ЕАМЕУВУВ ЗБК. -ЗАЮХ За жу тБаКн55 Трах тва М она ОБ «ЗА БІЗ ТД У: ЗЕ Тіла; пла на «іме (53 (Ж ю За 35 тен Трек бла п. сага Аа -В З 7 ТО Тіхи Тік ня. «ВІКУ 03008 ОА ЗЕ 37 а НКеВ Теж Ток не Кана У яма Ва з 1 рік Чіа: Тіла Яся ФЕН НК 0 ЗвОООЖУ ОТО Зх ло вв.
НК б 8ЛЮ3 Зб Я? БНВО 0отволаз ня. ге З УРА ВЕН ЗМ ЕС ЗО ООЖУ 0 жЕраУЯ Ох ТЗ не ЕІ КИН ПОБІ ОКО в: У УК Ок Та МЕ, еоЗІеіБМ 05501 ЮК 036 029 99985 00отовк й вв.
ЗІ ОО -О33 в я 0 сБаератчА Жілюх Бк» ЗАЕ ІЕЕ ЬНІУ ТЬНеУ ЗМЖе же т 0 ЗМІЯ 55 Тнжо Жіда те азам ВО 0 ЗВО ОЖУ 0льНМЯОІЬ Жах.
ЖЕ ТЕ «віБІаа: 35 0ЯЖЕ ЗБ ОЗ ОБОВ орех Зо те литва БІВ АЖ Ж ї3 же шВ Їмих Біло ЗЕ а НяЯ бл Яма ЗБ ї5 ЗВУ рми таз ЗА КАЗБЯЯНЯХ НКУ ЕК.
Б З те ТМЖУ ЗДО ЗВОЕ оІНОМО сах Ва 0 БНВ ЗОЗ ЗБИВ меж ЗУдех ВЕ ІЗ УТ ЗМІ ЯМЖВ 5 15 сбБващеаЄ Тех» ЇМ ня. «ві аая помя бі Зб 395 0 вве Ваш бла ва. сОБІВВаЕ С 00 Ж кох БЮ Мав) аа ЕЗЯСЯ ФаЗЕОЯХ пов 0 юю За 35 Не тО вх Нац КВ. ев БІВ ВК Зб 003 сет Тек Та ва АИВІ55ОІ: ВОЗ ОО бо 3У ЗВУ паж ре вв. «еБЗІНИ ФБОХ ЕЕ 3 НН ІЕС ЗСУ ЯКУ Зізе: ле ВХ теМНмоУМа Ім яз 35 їх ЗБ З; Те не. «віщо Тяаа по «ЗУ Зк 1 0 еЗІВОВО Трек Тв ЯЗ ие НІ БІ Ж ЗБ її БЦ Чек їм Ех ТЕТ ш я ЗНО ж 45 зма Жрвх тив М «ФОНИ 0520 ОМ ЗО? НЯ 0опатрх на.
Фо беВ йошаЯ МНЯ Зб ЖЖ ЗБ Овя Тек Тр 0000 -ЖООЗНЕЯІО ІЗБОБ ОКе ЗО 3? МЕЖЕЮ 0 зро Тщо ТЕ «ваБібБІ) Ух ма Зб жу збі Зілос тую УВЦЕ ЕЕ ОМ М З Ек М КМ КОС Тіма: Тіла ня
Фіг а продовження!
Тайлвмя МК, Брвнї мезтевовання сі сайзів ЩІ НОМ, вимевчаен» з прі Мана ЗО провин Зокеаетовівакннй рУзВуз зак Зак Ждонех мав зеерута КН Кихамх НУК ІЛ Гео шо ШИ БНО За) СОЄК ЗБ 39 МНОЮ и їне 00 ТБІЗЕНЕТНЯ ВАХ ВО З ої Безе Три Ткях В «ениОоої 03 ню ЗБ о їжу ЗБОУюВ Тіз Зі НК «ВОЗлаНеЗІ бле ОМ ЗБ ої? 7593 вк піде ня. «вія щоо пам ЖЕ З 037 0 МАХ Тік гра ка «оКеБЯУВО ОВО ЯМюХ 36 Я? ЗНЯВ пає Ж.
ТЕЗУ шва 0 КЕ В Ва КК Тіла; Тіла ВВ.
ЕІ УМНЯ КББОЮ Же же БЕ Че саЗув Зіна; ле В сша ФКЯХ 0 че ЗБ От ЗУБ Же Те ТВ.
НМА ОБ 0 ЯМ Зо 17 0 МБ Тнке Тв м ккіяаЯкнн ВОЮ 0 Ю З Її аж Відех ЗВУ В. то аанх о Очки Зо УБОВнВ Звек Тих вв. ная СХ 00 Яма З 35 НІ Рів; Теле ня. «він И ВАВ «Ка що ОА АдЯУ Тек: Бк М.Я.
ВИННУ БОБ «ДЕК ще її Мая Зк ще ня.
КААЯЯК БОБОЮ 0 з ї5 аа Пре Тк» па «ВІБЄВОМУ ЯКУ 0 ЖК З ВК 653 Тумк Те ВЕ те ВЧЕИ ФІН МБ ЗБ О39 ЛЗ Таки б ве.
ВЖЕ ЗХ ОХ ха ТЯ ОНА Тр Білих МЕЖ ЄЕК МОВ ГЕ ЗЕ о КмМмаМме Чшжх То КН заіВрОвока ЕЕ 0033 ЗБ 0? ЗВОЗЕНУ 0прехтоє ня. сЕИЗНяМО (ОО Зо ж Аа ТБхх Тех МВ.
СЕК ЗБНЯ ТЯ Б їх ЗК ТБуже Бмж НЕ НИК СЮ УЮ 5 ТУ ану ККхе Трх: ЕЕ сМОБІШЕОІІ 33 0 Я Ж ЗБІЗЄЯМВВО пух й» кв. «аа ЗОзаів шОМЕ 0Ох ЗБ УМО Зівк Тра МВ.
НАНУ ХО ОК Я? ее Чілі» Вл ВІКИ ЖІ 00 КЕ ДК Зо: тю ЕСЖЯ іа лю У КІ її ЗБажеНю тн Те МВ БЛАНКУ.
ЕСЕ з їз вазі Тв їМме ВВ. овілівоя: ез5а яМЖе 35 їх ММК» Тек» Та» ня. хдіяляанІй єлВЕІ ЯМЮ5 Зо 32 Зак ЖУкх Ж НЯ ВІЗАВЕВІУ пОБяЕ Боді з5 37 зма Звк; Бізе вк сюідаяняв ся а ЯБ КУ ЯМУ 00 бі бе на.
ЕОМ УНА кеая чи Бк МЕ же ри Тіна В.
ОН ІБІ5В ФЕМ ЯМИ 36 Ж ОЗОЮХ 0 Зо: бю хЕя.
ОБАІ5 вЯЗ ЄЮ Зо Кк 0 Бах ТЕ Тов: не ЯЕІАКТІВВИ ПЛ МВ ОВ ВХ ССЗ НЮ осн с Фіг продовження!
Тайдеювя 23. Чі мал всннення С речевзів МРС. кизмахей но пенлає Казка ЗЛО про лОижеННя о наш щи нано Маха Хреш МААВЕВНХ 0 Бепзкуювнче Кнуаеюе а? ОЗ 0 ЗМ КЗЗ У НЕ З Я Зізах Та Н.В. «для шоб ХМ ЗО Я? ОЗБНЯЖ їх іїмю я. сВІЖКУЗЕІ ЯК ЗІЗ 36 0 ЩУ ОЗБЯУЕ 0оуідх їівя щВ.
Бра Ка УЇ ЯМ З Ж лах іде Зіни ТАКЕ ЕНН 0.33 НЕ щ ЗХ Тева у Зам Пдй ВК БЦ АН рен З 3 Жан Те: То Ж.
ЕТ У 0 МІ З їх Ба Зіва: іде Мх. сІЖНОНІВ ОЗ Зою 05 ах 0 ува Вовк В Ба в сова БІВ 0 ММЗ ЗЕ ОООЖЯ ЗженаІЯ Яр ТУ ВА.
СВОИ Ж ОБЕИО КИ З КУ ІК ЯЗзам Гіне Без «ШККОЄВІ6 БАММ о ЯММмО ЗО ЖЕ ОЗБЯЯЕЯНА ох вв. «ами шо? 0003 Що їх ЗБАЧНІЯ Чек Піза ТЕ «ВН сьо я ям жо 35 За Тняк Бик п. судоку ша Ва Ж 3 0 ВВІВ рн Же ТЯ сВО5ЗЯВУЕ ОО ОБ ЗБОКУ ЗВЯЗОК 00 рр; пою ня.
СИНА БАМИ Х БІК З їх БУМ Чікх Яіде ВІ.
МЕНЯ де КИ в ЗХ тУвБЯмуЯВ Жіжм Кідо на. «іа шЗМм 0 ЯМ З ої ТБ ті; Тр: хв. «КОНЯ п Обов ЗБ У ТЕЖ Занех ЖК ТВОЕ см ще ОО аб їж 0 КеУ Жнех Кок» Нь ФТІ Я БОМ 0 ЯМЖе ЗБ ЖЕ ТЕЖ Зрке філе БЕЖ сЕІТЗИВІІ ЗІ М ЗО їу ОЗБ3В 00 віх я ТЕЙ ле.
ТМ З 32 зБе55І Тих То В сюоББІІВ КеЕ Ж ЗБ з» ОМБНЮВ Бик тою ща.
ЕІ ЖУЧІВЮ ЗВ «ККУ З т Ба Чі Поле Но «ІБН ЗК ЖЖ З Я ее бик Гор в ВІН Та Ф03х чмНяв о її ем ТЕ» Те зи Я ЗЛІ ФВІа 0 ЗБ 37 59556 00 тре: тре ся Віа За сх ЗЕ КО ЗБаЧННЬ Жив; Ті Я.
УКІВБИВОА тя па Б ЖЖ ТЕЖ ЖБкМ Б ня.
ККЗ і я ЗЕ ТО БЕВОКНВ Чнкк Жах В. тЕЛНРНІЯЯ У щАМЕ Зб о жу ЗНУ 00 тнє т» вах.
ВІЛ ОІНБО ЖЕ «М З їх МО МеВ Тих» Бе ВВ. чл Ж 00-Х КЗ її яЯееі Тім Тю ЕКЗ УК ДБАВ «ЩО КІЗЯ ЩЕ ЗМУ Яви Бе КІ.
ЗМК бе БМ Зо жх РеЯБИЖеВ Тркє Тр НВ. еиІІЕ НН ТОБ Я ЖК Зк 35 за ННу Янак Же ЩЕ Вес КН се НЕ НК АК НН Фіг (продовження)
абияк ЖЖ Був захунваннвя досье КР. веною ва сема Нерон ЯК сПродВУМеН пе б втнюр, ВОННН леву маш ЯАРИМЕЮ 0 Безжкувкня Киютшахе «мн 30 0ОХЮО 36 047 ЗМО о Бакїюе 0 МК азу бЕНЯ ЯК б ту ж щюа Ян; їв Б ТБОЖБНЕІУ ФО ПЕК З їУ а Тов Бе Вл чия ау ММ 38 47 БУМ Як; Те В. схе 53 ЩЕ ЗБ З 0 мито Зоо Муха пк ТВО У Яма ЗБ їх а Хіже Біжх БЕ СЕМІВЕИ М КЕКС еКУ же 7 БУВ ЖЕК ЕМех ЖЕ. «вки а 0 МО з 37 Р ЖХрю: бю МВ.
ВИЗ ІКТ «АХ ЗБ о0О3 Бад Яра не. «ді ІНВ шви МЕ ложу 0Оредяя Тк їме В сріВОЯіВ яв НЕК ЗЕ Ж? туя М Трюртню В.В. хек в НК ЗБ Ж Ба тІЗ ТБикм Бк мя.
ІОВ УЮ АЖ ЗО У Зм ЖКН Тева Те вк сЕБІ БЕЗ Б Ж КО У ТБ Ті; Тіаа я. сееівізна ем МОЗ З 3» пе ма Теми Трах ва. «аа НО ОК Зо їУ ЗБаекя Трих Тіз» я сЕВООБОМУЮ БУ ЯЗ бо 35 0 левляоя Тіза: ТЕ ЕЕзЯ сеїзезаза ані 0 «МмМе В ЖЖ Вера Хеве іже ня сив па 0 ЧК З а 0Ое их Тек тю В.В. «ВИБУВ З 00 ЯН З ою ЗО НЕ Хіже їде Ви. си ТМ 00 Ж є ЗЗНВЕ ДИК С ЗБА УЗ Ззаки; Зак ж СЕЗ аЕВО 03 «ПЕК ЗЕ її» ати Тв а, ща сБмачЕЗаН 0353 МК Зв Ж? УЄУмЕК Тех Поле ВВ. сЕІБОЗНЕ пах че Зб 35 ОВеЗЦех Бен Тек ЗВ.
СЕОЗИЧАІЯЕ 953 0 Ва ЩО її База Чим бю мВ.
ФМ пл Же БУ ї? УВА Ям Тела.
М СОБІ ОБ яМщце ще Тая Зідєк БЕ ТВ. сЕМЖННЯЕ СІ ом ЗБ ж бБатеБВУ Же їн че «ТО я ща ОВ 35 ТО УБаРОВ ТЕеК ТЕ» ТЕ чле Оз 0 ЗБ 47 ета Так Мо Тв МКМ ЛЯ хмА БУ її? Ба т Тв Тен ТЕ Моз оз мМ З 37 Мадам Ту.
ТЗде че ФОН ті «Ме 35 17 УБ5ВХ5? Яфех де тн КЕ пи Гея ЖЕ і? ЗБащХщО Тім Зла КЕ СІЯТИ ЯІ Ма Ж яБ о 37 0 ЗБащОоВЗа дедек Тео КЕ «ява вІя ОХ ЖК З5 5 0 Моя Зими Ме вд, ЕНН Ю слюмУ яМКя ЗЕ МОЗМ Укщи Кох М.
Кз на с НИ На ІН а НН фіг 23 продовження)
Табливя 55, Бідні меонзвания ЄСредоввтів БРУК, визначен: ке рев Ввевіна ЗМЖ івродюовеннві Гео ріковаїнен ревидані тав Бика Храми звер ех Кома уиНиВ.
Мне п ка ни з ХОМИН КИМ ення ОМВО Ва ЖІ ЖАВИ Зб КУ МБО Поб'ївю в «а НЕЖНі Бе БО ЗБ 039 ОЯХУ 00 тре; ня. сіщчющи5 Важа жа ЗБ її ЗХ Чінек ТВв ня сну! ЕВ ЖЖ ЗБ о їУ 0 Же З Тек Тр вв. «вевІвяІ: ЛНУ ОО Зо 3, ЗвАВеНЖУ 0 Мах Кв Нв.
ТЕЗЕ ТНІВі Зоя На З їх БаБОвЯ За аю мя. сагазаи ТЗ ОО ЗБ 012 мае Зіза: Тіла ЕС «Іа За ЖИ ЗБ зх 052158 Зіва: Та вл.
ФВ УМм оз 06 35 12 Баку ЖМ Тр Те на. св8іО538315 Я» бАКМ З5 0 хУ 0 ЗБІДОЯт Тіло: Тіло ЗВ.
КЕ СИ Кс В МЕ З КЕ Утакх Тіла не ТЕОВАЄМН ЗВ БЛЕЮ ЗБ ЗУ 0 ВівяЗая За: Та ва свівкяа Іва ЯМКИ 35 ку Ме Тіще Міда З МАТОК КБУ ЯК ВоЯ 1ї ТЯМ сих Тк на ТЗЖ ЕВ Кале 00 БАЖВ жа Я 0 тещі Зі, Бо ма. скМчазоо ОО ЯМЕЮ 35 У ве Трвх Тех не. пеООЯТЯ5аЯ Та ЗБ 15 ЗНМ Бек ТО Б саоаБеЗ53а Я)УХ МЖЕ 6 ої» БНО тако: Міо нава. сИМІЗИЧЕ КУ 00 ОЛЖЮ ЗБ ОЗ заз Твкк пед Я ОБ аМ: плн ме ж їх ЗБК Тіжк Ба БЗЯ Іо БМ б 35 зу Беж Тіва: ле на «ВІЯНЬ еВ Ме ЗБ 35 БЕБІ Тінех Біле не Не НХЮ - ЗБ 37 ЗБМЯЗХУ 00 ах те ЕУЯ СВІЧІ ЖЕ Я Я 37 яМмеЗща Зізо: аз Ж «в иоваі ЗЕ ба 35 12 яма іде Тіхв на.
ТОБІ яте КІЯВО ЯН 35 0037 0 ЗБ Чех Тізв нВ.
ВПІ ММя МН АЮ Зб 35 тУбБНАХЬ Тевкх Тк а «МТВ НЮЗ Яке Об 0035 0037 МЮУ 00 Тек де МЕ. «ММК о МО ЗБ о 35 ЗБМЯМ ід Міо І схе ЗА -БЖІ ЗБ 3 ЗМО Жіже Ме ТВ. скоба У КИ 36 ХУ 0 УщачОХ пра Б ВА «ЕНН са У Зв ої» Бао53Я3 «Теми Міо ня.
ЕМ МНИ 033 ВЖЕ 36 35 ОО 00 тю яв, СЕМ ІЗВ ЗУ 0 З 37 ВИЗ тищхи Мо 1 сиве ітв ВУЖ Мию Зб ху ЗМОоБУм Ті Те кв. «ВІЗОВІ ля НЕ 36 35 Я МВО 00 хе НА ТД ЯАНО ІМ (МЖ ЗБ о 35 МАВ КЯЯ 00 ппжх ою нд.
В о о АНА Ина ВИК ПН фіг 25 (поодовження!
Такнням кл.
Брю метисниння свочайне ВЕТО, винен за вра Мф ва ЯН г румев ження іевевіфиваинх зеавагвні заеаві бщже Є вже болизехваниж 0 Євхвеме МБ З ІЕКЕ БІ їх Ва щУІя Зв що В. сязВоаЕ о бю Зб ОУЕН 0 Бо тую на, ФІН НЕУ МЕ БЕК ЗЕ Її РББОБЕДІ Яр Тр, не сао п У ЗБ їх ЕаОБНОЮ Хі Тех Нв.
ЗМК ВИ УТ Ве 0 ЯМю З ЗОБА Ліжх Тіжа В.В. «іа я КЕ ЗБ ОО ОО РБК Че: іде Ж ОІВ Я 0 ЯМЖе ЗБ Ж ЕКО Х Пізно Б.В. «НОІЗИКЕВ МЕ ЗМК Зк Її ТЕО Жевк КБ ль ВОВКІВ З ЗЕ ЇХ тещу Ук Тра ня ІЕМ КЕ М ЗА ЕК ЗНО Зрнх бою ЕВ, «Нею ОВ опо 36 49 ОБУБЩОХВ Место жа ФІЛІН ВАнаА ЖК З 17 ТЕО: Чек бою ве. зви жюаз пе 0 ЖА З ОВ 0 УКВ Трнм Бек па чани ве НИ 35 32 лев Жвмк Три; Ні.
ЗКУ а ТЕКУ Ж Р ОО ТАЩЕНЕЄ ТЖЕшме Беха жЯ Ко Е5 ом МЖК 35 ЖК ОЛББНКОУ Трек пу» я. «ія 0пезОо бом 38 її БІ 5 То МЕ ща спа 0 -ока Зв їх ЗЕМ Зако Міла ВЕЖ «вний па -О3 ЗУ ОБУ Ті; Біде КЗКоя аа ВА НК З З ЗВУК Звне брю ЗЕЖЕ ЗКУ МЬ Ба 0 ах 37 ЗБ Ті: Тіди Ж слава п аж Б ТЯ ЖБК Тіще ма ТВ. сою За 0 В БІ ЗУ ОІВ? Тіжк Гід ТВ. «ета п «Б ЗБ ТР ЖЕ етИЯ Яовк туее Я иа Уя ПБаХ ВКА 5 ЗУ ВІ АХУ уж бю Уся «БО? пе ОО 3035 Юа пах тье ва кЕОМіаВ ОБО ЦО ЗБ 35 ЗБ Тени Тебе НЕ сети НВ ЗККХ ЗЕ КУ ОО АВУ Ті: Гмя На ВМІВ НАВ ОЧІ з тема Зо; ло СЯ ФЕЯ СЕ «ЗО Зк 33 ОВО ООЯУ Жнхи ГМК Я ТВОФБОВІВ ФОАМЕ 0 175 Ве Твж ТБух на «ІЗІЖНІЯУ 882 МО ЗО 39 ОБОХ оз їі нов. «ВіВІНЮ БО ЯН ЗЕ ж ТБЗ5ОКО ТЕкх ЕКОх ТЕ «вОУББаЄ3І ОК ЖЖ 056 00 Ж ЗБЕ Тех їв ся ТЕЗЕ Не аю ЗБ 15 0 ЗБаЯБОКЗ Тв; Бра вл «ВІЗ пе Жах б ж ЗБ5НОК ках тую ща.
фФігУЗ (продовження!
Теайлниз 23. Біннх мезжнввання Субуайтв ВРЮ, енемачині ка призаді Нваліва А гордо ідежожвікакінкя вуадея плекав Збірка МОНО пава БОЖМЕУМОНХ фрунур ТЕЗА НУВ ЗМЮ БІ ЗБ 19 ОЗБЖУМЮ 00 тТркх тою Нв. «вага ОП юр 035 0 1У УбеБОК іже Гірка ва. «оо зтуУзе ля 365 ої» сБУлЮЮа Тих Те я ХБИАНЕКО ОЛЯ БЕ 36 З ЗБОЮ 0 бою те Нв. «Ва ЄДР б ЗО 3 БМ: 00 Зрек трвх в ВІЗ БЯОВ МК УНИЗУ СВ В КЖНиК ЕХдКх ТК УВІ о ВО - - 1 БОМ Ян ще ТЕЦЕ Фа БчІ Па Нм ЗБ ої ВУЖ Твхе Те ТЕЖ звів ОО а 36 17 ЗБ53Ма Хрхх Ше ТЕЦЕ «вів ВіВа по аж 35 ї7 ЗБ5ЗЮВ: Тек Ме тв УНН о б М 35 17 БО3НаЗ Тихе ТМ ва. ТВі Ох «АХ ЗБ ОЖЯ ха Же їм ЕБУЯ сеча КЕ 0 ЗБ ож ЗОН ЕЕ КЕДЕК на. ІТК п «ВА ЗНА У НК Жвмк Пров уЖеЯ «Бе Бо яМЖе 35 32 За Зіе: ТБ на хВіВМНІХХ ПЕ ВЕ КІЗ ТУ УВО 815 ЇЕкк Тех В «ЖК ОВУ ЯщЕ З5 хх ЗББЗУЗАЗ ТК Тіла МВ. КІР МВВ -ВО0 з У ТБ Чаежк Зх ка ЕЛ І «ВАК Ж ТЯ жов Зі; Біда ва ФЕНННОЇЗ сю АЮ 35 ої» зара Хтлюх Жуле» не звозОвІ 28553 63 0617 ЗБ Три; Те кв ом Ко ТЗ МУ 35 32 БУ Трек Тр кА Бе и СКМ Я В САУ З М: МИ УМО КК Зав Тр Есяся ЕІ В «БАК У ї5 Ме го? жк Тем; ва се БУ МАВ дь й ОООЗБАКХХ ЖНхх Бе на. ЗВУК О35БЕ -нНхМ Зв 195 ЗОВ Бі же Ва. ФЕМ ВІ М ЕТУ ЯМ З З ТЕБЕ ХЬЖЯ ЕЕВХ Бкцхх НВ хаІані ма сп КИ БК у в Чеки Би З. стю ОВТ ЖІ зб 17 жо Теж Те БЕЗ ІЗ ЛО чМхЕ Зо ї7 ТБ ВЕ Зі Жіла п ЕНН ОХ 00 Зк 37 ТВ Бр тю ЗЕ. змен ма ями 35 037 0 лУМюу Яаше; Кін в тІТаЕКОЗ Ба Ж З ої» заЗаЯо бро тва не чо ня Я Зо 32 0 сен ЖНЕК КК» МВ. соми пляе аа 36 37 МУ 00 їбЕх хе чав сроевозів оавех ХМ Зо 39 ЗОБІ бе: твю на сохм п бою 35 37 БУ ТЕ Брже на
". ; пи Фіг З продовження!
Таблнця ЗХ. Вів: мехнлючання Сесікайта КЕТОУВ. везеанені на пра; ТП орава
ЗК. Пл ма вх Би нн в ШІ ШИЯ С КК: УМА ЗБ 005 0 ТББОКе Тк їм яв. «ЛІНИВІ Е СЕ Зв ж аа АК Як тк: мя. сао Оле бБлюя ЗБ 5» тю Теко Біде НВ. ФОМНМІЗ бле що 035 т) тВбаЗаяе ЯЖілес Хюх МВ. ЗК БІННІ ШОМОЖ ОЖЖЕ ЗБ 39 0 ЗБЕ Яра: те ча. с НН ЯК КЕ 1 БЕК Зрао Твю Ва НИМИ ЛУЮИ СХ пе ЗЕ М ОнБОааа Тв ТУЮ М ен Ми; блю Бах Зб 33 ЗБ Вів; Та ня. това паз ми 35 35 Нм Зікх Трю пл. ся Зам аю Зб 3 зщаня піде Трю ва. сіни ІІ п. Же 35 395 УеЗУРВ ТЗрюуТню ва см о -О5 3 12 ЗЕаІя Тевх Пух па. ФОТО ЖК ХЕ ЗЖ о ї2 еез)е 0 ЗТ ТЕ ва. «и ОоМма 52 -Ж Зб 037 лоза 0 фут НтВ на. «ката: самта вл: ЗБ о 35 аз 0 ЗмтвдтВ етЯ «Оз 03 ба 35 37 жженАх 0 ЗтЕУЦТВ ча, ФМ ЛОК: баг МОХ 35 Зх Жах 0 ЗутвачиВ на. «ЕжоБою ОЗ - 35 зу БУМ 0 ЗЗНядьтВ НЕ «вів БегІв па жо ї» Бема 0 футфНтв Нв. БЕБІ ОН 00 КУ З з; Зм рити уте Нд. оо о В НЕ ЖЕ АН о ННЯ Б Б Фіг аа продовження!
Кабан ЗА.
Кох кеунлимання Се еаве ММК, визначені в пра Мівизая ЗК ка а зварна тпеяОНЕ ЗБцех Ясне АРІ БКсттдинцеазжах 0 Крхахнжку те он ІННА А ТВО МЕ М т ЕН М бере МЕ. «емо йовеа сни 55 36 ямЖще м жевюх я кома п п еех хе ЕФ а М брне В сени та ож 36 в 0 дБвКМЗ 5 бер мя. оо миа пн пох 35 35 0 ябаео кр мя. «вза ока бю 35 Бо Ви м Бер пд си ИН? дж жхЯ же зб 0 ЯБаМм Не я мя. сво: 05153 бом 6 35 0 яБаМма здетвннна не мана БІ -ВЛЮМ ЗБ зо ВрУМХ Сютрівець не. ка пе па в аБ 0 ЯБЕУ3А5 імя МВ.
Фея Олі блю: 35 зв БИ клрівень щВ. сова? а ки З ії 850 х джзив я ОККО Бе ОК ЗБ о БА ня. сення Ох ОО 35 3 о алу В «Юм: ой -0ДЕю ЗБ З БМК) вв Беж О ВОЗ? блюю 365 36 ми їв сао ВНУ ВО о ЗжЖ о ЗБщюща ТВ КОВІ: сяВІ МЕМ ЗБ о Зб БЮ ТВ «ОН ВЕ Ве 6 бо ЗВ М аж ЕК аа О3ЖЖМ ба 35 во З М Дорох шк ОЗ ЕІ ВК 0 юю зв 35 Я ща ужувжие НВ.
ВАМ: 053 ЯКУ ЗБ Зо ЗБ Я бро вл «КОТА ОЗ 00 ЗБ З 00 ЯК хВ Моферак В. сема Ва о 036 6 ЯБНУЮ Сюжровень на. зве Од ММЗ 35 35 0 «БК Сютрнеца вя «БИК БІВ «Ммюе 35 365 зкажжи Хр ня. сробаяжже б Ка Зб бо абме Х зва мВ. свя уваз ОЗ 0023 ЗК З 0 БІ кВ. киОкааао вже ЗІ 36 бо зам В. сита І Я 365 ЗБ Баня це «ІОННІ БаЖКХ 0 ОЗ Же ж 0 чБеБая НЕ ВОНО ЕОКЯ ОЗЯЖИ 00 ОЗ ЗБ В вм ня. свориоєа Зоя -озв 35 бо «буауЕ мВ.
Оз 0Я -йм ЗБ 36 «(БЕ нк. сема ол БК 35 35 Бу ва.
ТОНУ бля ОО си З С УА Ссся чнНг. ша
ЧТаблюми 34. Рівні метнлкчання крона МЕМ, вехначемі ма прань Ярова.
ЗМК іврожженняї
САМКИ ТЯ Е -ВОИ КО 35 ЯН не. «мама бі ММ Зб 35 БУ щ.в.
ОН Ол ЯМЮш: ЗБ 365 0 ЗБ М ване па свою? ОБи ЗМ ЗБ о ЗЖо ББВНХ М еамф В.В.
ТТН КМ 0 Е ее 35 Я щяЗХ М ще ТЕ ОБО МО БК ХМ З їз на Хкетаннь та стави ФКЮХ Я Ку 15 КЕ Тзострівев тане «они ФО Ом3 З 365 0 ЗєОБ5а М жерех ТОК «МОВО ЖК ОО ЖЬОЗО З її ЯБУмаа гоцяецк ЩЕ ОКУ що ха аю я ІБ ЯТІ ссхрівенх .Н. чина плеча Ою ЗБ 565 ЗБ Же Метр Б.В.
Уа ОО 0 ЯМмМщЦе З а5 БУМ АВЗ Квекавезь п зви: паще юЗ З5 ої ящУЗе гетіве кВ.
ЗАВ ДЕ 0 НУМ З моз АФЕКТ Зк сюнє пло еп Зо БО Є скавівенх кв «КІВІ ОБ 0 КЕ ЩУ ОЛЯ Бо Я СБК КН.
ОБ БЖ ОВО ї5 еВ сте Не. «ВОЗІВ ЛЖНЖ У ЗБ об 0 ЯБУЗІщЯ З йсржг я «МАО УІ ся ЯМКУ 35 55 0 ау Х Яерех як. «МОВИ ОНЕУ 00 ОХ З 45 яму Ж волю Яся ІТТ ВОїВ НО 0 чКю З Бо ав Х наЕщьф В.
ЯМББІВВЕ БОЖЕ ОН ЗБ 3 0 ЗЕ Х щіль НЯ БОТИ АВ БАК З ІВ ЕКО М мореф п. зНпеящкУе 5 М ЗБ о 15 ЗБЕ Х вякнамй ня «пики І ЕЕ 005 5 15 0 БУ нЕе ВЕ. совок: ев В? 85 35 за як кщОЗаЗІ ЯКІ 0 чОю ЗБ 45 0 ЯБУЯКХ ВЕ.
КВК МЖК «А КО ї15 ВОБОКВХ М шклке К.В. ес дк но Не НИ Шк А НИ и НН
Фіг (продевження!
1 вед ШЕ ' - ПЕ ЩЕ ШЕ ж Ж с Ко. р. х і че вевня Ко-е ЕН Б ! ово Ї ше мова 2 ще Х рних Н Колі дощ «0 Мосоєосокої сі с Ж і поеоннаннннн КОТИС вер і х А зх якухх : Й о у У і і Й ух Кон ї ОВО дн шо С ша в Се це КУ п деве Б Н : ЗМК : т ри 1. 4 ЕМ шодо НшНя шо й и ОО те Кк вини ч с Ж же ме єм ме зкоме ' СО ж нях 7 ше су Ї еяпують ва Два захво нвания нон пив х пи к пи т пн нина позов о вв НУДіе Ср і НЖАБЯА ср з НУВАННЯ сумі 3 00 евалвта? по нн і ж : в Косінвнвент Спімана ж В : Я | « Ве ВАВ: в ї р ї ї Я ве : воадяЯ щу Її Н а Н спаяти : КУ Н Шо Й ве : У | м а Ше сен.
Я Я : Н Ех ї ВЕСЬ юю я дж, ї м Н : Ж. їх а я склежах пжехлу ї жов ' х М вин 7 сеї Же В І ! ЕН НЕ НН ни Брой Я | В РУ ВО щу дону : є ША ! я. я Ши ВОМ рення - і ОЦ 5 Шо Ж гі : М: їх Н Ша г ї шЕ ше о ОН я ва ння : ОО і : СН: ши і те роя : жо Ме Ї Ва : 83 Я модатель б вниоек захворювання 0 сяяти. пон плану о певні зання не вовни пен: земна змив зай я контроль ВЕНЕЖ ща вт 98 Ж вм ве вк ВІ ЗВКВОрКнкуННя Відня стпресія НАЕК а пн нн вові ОК З «ма і Ш Ще і рем веж ї А ч- 1 : решенни і ї Н Н ; е : я г Н ща У : х Н ЕН ; Ж вх Не З Й Я ово ая Її - 10 Ж : ре : Н « КОР зе МК : КОХь 3 лини :ї ЗЕ Н Н ки ун ін фо НЕ вах МЕ я Я ш ВН он КО: З Кок ші : пек жа : М йЯх КО я ї Е ож ї ї ОК У « У з м у і : т- 2 Н ої 773 ї й У о У ЩІ 1 Е що 0000 ж й У сі х і зорі Бе Х. ск ; х - ї їн М ія з і оо зай с - що Зо ВХ Якої ОО ВЕК Бо рот : яннж ни х : ТЕ емагувнхм В зскуиунхиих і ; НЕ коки й і ді МеНЕрКтЬ КЕ) заховав Ж і аа траєь Я звужорювиних В х Що І на ї Суніяьнав о Бокоюнни бктвни Пейконеуе Стцівьна беклвчна Кецітнях з ейжоцнт,
крук: виснов: ВИТ» кумох ожиюнижені ККУ лЕфмкан лімфоми Є в жоахеуроь в ща ве Н я ї й Н ше - плахалляллАя ї «ї К : їх ший ок у ї х Е к І Я : Н е ї хх ах ї Н Кк ї Ко.
З АД Н КО - | і кАК ши - : шо З в І ке и ши ее Е з їж дя шу ТЕ рози ї сі Н Н 1 ж Н В ша в ОТ БО бомі вм с ХЕ Її ак 1 МЕМ ех Н 2 БОС т же ї Ка пи ан В ЕЕ ВМО Н « Гое У ї Е НЯ у ! ТЕЖ її Н х У отт - ї ж ше В о ЕК т | 5 БЕЗ НИ ЩЕ Б 4 и ШЕ Бо, мя ! т НУ ше, ї 1 і хг к дили Фе х У ІЗ що, НЕ МЕ | Й : щ ! ОК т ї СУД ЕМВ пиналув ку ті ко ЗЯ м ОК 1 т ВЕК ВК РОД вок їх Ж Ще ХВ Я я ї ї Ж тро Бириох «УА хухтиомувху КИ | м р пу Же Шк : 5-х ва овтроазься АВМ й Н ШО ВВ зкенхумьнь еУ за хвора ня Я Мннялн пиляти нлтляллллтлуюю нити тлтттттрут тт лттятттчютттруяттяттяжтяХ х Халинитлтнттрттю ин нтитинттттттююютюттттттттттт тютюн жтя тля жжтуют ти тижтттнг 7 Й Й К-Я пт . -е що 7 іещіавия Боян К-вдітннх Лейкомпен, шк «хціньна Воклітюми Коклітним Лейковх,
кров ВИКВКЕНЕ Хе хро виснажені ЛЕ»
іменниками кімоскитане Фіг ев Ех
UAA201708275A 2015-02-24 2016-02-24 Панель біомаркерів для виявлення раку UA124612C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15156389 2015-02-24
PCT/EP2016/053813 WO2016135168A1 (en) 2015-02-24 2016-02-24 Biomarker panel for the detection of cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA124612C2 true UA124612C2 (uk) 2021-10-20

Family

ID=52589264

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201708275A UA124612C2 (uk) 2015-02-24 2016-02-24 Панель біомаркерів для виявлення раку

Country Status (16)

Country Link
US (1) US10941451B2 (uk)
EP (1) EP3262190B1 (uk)
JP (2) JP6807873B2 (uk)
KR (1) KR20170120124A (uk)
CN (1) CN107406880A (uk)
AU (1) AU2016223532B2 (uk)
CA (1) CA2975952A1 (uk)
DK (1) DK3262190T3 (uk)
EA (1) EA037995B1 (uk)
ES (1) ES2893297T3 (uk)
HK (1) HK1246828A1 (uk)
IL (1) IL253756B (uk)
MX (1) MX2017010836A (uk)
PL (1) PL3262190T3 (uk)
UA (1) UA124612C2 (uk)
WO (1) WO2016135168A1 (uk)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018236065A1 (ko) * 2017-06-21 2018-12-27 사회복지법인 삼성생명공익재단 대장암 환자의 항암제 치료 반응성 예측용 마커
KR102100557B1 (ko) * 2017-06-21 2020-04-14 사회복지법인 삼성생명공익재단 대장암 환자의 항암제 치료 반응성 예측용 마커
JP6614630B2 (ja) * 2017-08-23 2019-12-04 国立研究開発法人国立がん研究センター 肝細胞癌のリスク評価方法
WO2019081507A1 (en) 2017-10-23 2019-05-02 Universität Heidelberg NEW MARKERS DERIVED FROM BLOOD FOR CANCER DETECTION
JP7326764B2 (ja) * 2018-03-09 2023-08-16 東ソー株式会社 腫瘍マーカーならびに腫瘍細胞を夾雑細胞と区別して回収および検出する方法
CA3127154A1 (en) * 2019-02-21 2020-08-27 Universitat Heidelberg Biomarker panel for diagnosis and prognosis of cancer
CN110136776B (zh) * 2019-05-15 2021-04-20 深圳大学 一种从低质量核糖体印迹数据预测基因编码框的方法和系统
CN110269869B (zh) * 2019-07-30 2023-03-31 宁夏医科大学 一种以蜥蜴为主的抗肿瘤药物及验证方法
CN112176419B (zh) * 2019-10-16 2022-03-22 中国医学科学院肿瘤医院 一种检测ctDNA中肿瘤特异基因的变异和甲基化的方法
CN113186279B (zh) * 2020-01-14 2024-07-02 腾辰生物科技(上海)有限公司 用于辅助诊断癌症的透明质酸酶甲基化标志物及试剂盒
CN113122630B (zh) * 2020-01-15 2024-04-30 腾辰生物科技(上海)有限公司 一种用于辅助诊断癌症的钙结合蛋白甲基化标志物
CN113136428B (zh) * 2020-01-19 2024-04-19 腾辰生物科技(上海)有限公司 一种甲基化标志物在辅助诊断癌症中的应用
CN113215251B (zh) * 2020-02-04 2024-04-26 腾辰生物科技(上海)有限公司 一种辅助诊断癌症的甲基化标志物
CN113215250B (zh) * 2020-02-04 2024-04-30 腾辰生物科技(上海)有限公司 一个基因的甲基化水平在辅助诊断癌症中的应用
CN113528635B (zh) * 2020-04-16 2024-06-11 腾辰生物科技(上海)有限公司 一种印记基因的甲基化作为心脑血管疾病早期诊断的标志物
US20230340607A1 (en) * 2020-07-13 2023-10-26 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Compositions and methods for detecting gene fusions of rad51ap1 and dyrk4 and for diagnosing and treating cancer
CN114480630A (zh) * 2020-10-26 2022-05-13 南京腾辰生物科技有限公司 用于辅助诊断癌症的一种甲基化标志物
US20240093306A1 (en) * 2021-02-04 2024-03-21 The Cleveland Clinic Foundation Micro rna liver cancer markers and uses thereof
JP7143480B1 (ja) * 2021-06-10 2022-09-28 株式会社大一商会 遊技機

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030211606A1 (en) * 2002-05-10 2003-11-13 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of DYRK4 expression
US20060263783A1 (en) 2003-07-03 2006-11-23 Podhajcer Osvaldo L Methods and systems for diagnosis of non-central nervous system (cns) diseases in cns samples
CA2558666C (en) 2004-02-20 2015-11-24 The Regents Of The University Of California Salivary mrna profiling, biomarkers, and related methods and kits of parts
EP2474628B1 (en) 2007-02-21 2015-10-28 Oslo Universitetssykehus HF New markers for cancer
WO2009067655A2 (en) * 2007-11-21 2009-05-28 University Of Florida Research Foundation, Inc. Methods of feature selection through local learning; breast and prostate cancer prognostic markers
CN101245386A (zh) 2008-03-26 2008-08-20 中南大学 用于多种肿瘤抑瘤基因检测的cDNA芯片
CN107254538A (zh) 2008-11-12 2017-10-17 卡里斯生命科学瑞士控股有限责任公司 使用外来体来确定表现型的方法和系统
JP2011097833A (ja) * 2009-11-04 2011-05-19 Takeshi Zama 特定の遺伝子のメチル化の頻度を、頭頸部腫瘍のバイオマーカーとして使用する方法
WO2011105570A1 (ja) * 2010-02-26 2011-09-01 シスメックス株式会社 生体試料中の癌細胞の存否を判定する方法、判定用分子マーカーおよびキット
WO2012174282A2 (en) 2011-06-16 2012-12-20 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. Biomarker compositions and methods
WO2012175562A2 (en) * 2011-06-21 2012-12-27 University Of Tartu Methylation and microrna markers of early-stage non-small cell lung cancer
JP2013027387A (ja) 2011-06-21 2013-02-07 Tohoku Univ 膵臓癌バイオマーカー
WO2013190091A1 (en) * 2012-06-21 2013-12-27 Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg CIRCULATING miRNAs AS MARKERS FOR BREAST CANCER
EP2682477A1 (en) * 2012-07-06 2014-01-08 National University of Ireland, Galway miR-181a and miR652 as oncologic biomarker of breast cancer
WO2014020048A1 (en) * 2012-07-31 2014-02-06 Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg Hyal2 methylation and expression as a cancer marker
JP2014036637A (ja) 2012-08-20 2014-02-27 Hitachi Chemical Co Ltd 癌の切除手術後の予後を判定するためのデータ分析方法

Also Published As

Publication number Publication date
CA2975952A1 (en) 2016-09-01
HK1246828A1 (zh) 2018-09-14
DK3262190T3 (da) 2021-10-11
IL253756B (en) 2021-04-29
CN107406880A (zh) 2017-11-28
AU2016223532B2 (en) 2021-07-01
AU2016223532A1 (en) 2017-08-17
JP2021052777A (ja) 2021-04-08
JP6807873B2 (ja) 2021-01-13
ES2893297T3 (es) 2022-02-08
EP3262190A1 (en) 2018-01-03
US10941451B2 (en) 2021-03-09
BR112017018008A2 (pt) 2018-04-10
EP3262190B1 (en) 2021-09-01
IL253756A0 (en) 2017-09-28
PL3262190T3 (pl) 2021-12-20
MX2017010836A (es) 2018-02-09
EA037995B1 (ru) 2021-06-21
US20180245159A1 (en) 2018-08-30
KR20170120124A (ko) 2017-10-30
JP2018509934A (ja) 2018-04-12
EA201791578A1 (ru) 2018-02-28
WO2016135168A1 (en) 2016-09-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA124612C2 (uk) Панель біомаркерів для виявлення раку
US10011881B2 (en) Alternative splicing variant of OATP1B3 mRNA
Rietbergen et al. Cancer stem cell enrichment marker CD98: a prognostic factor for survival in patients with human papillomavirus-positive oropharyngeal cancer
CN107532199B (zh) 与间质上皮转化因子抑制剂有关的感受性预测用新型生物标志物及其用途
JP2023503301A (ja) 直腸がんの術前化学放射線標準治療反応予測および治療後の予後予測のための組成物および標準治療後の予後が非常に悪い患者を予測する方法および組成物
Zhou et al. LRP4 promotes proliferation, migration, and invasion in papillary thyroid cancer
KR20170141951A (ko) Nckap1을 유효성분으로 포함하는 대장암 진단 또는 대장암 전이 예후 예측용 바이오마커 조성물
KR20180109811A (ko) 항암 치료 내성 판단 방법 및 상기 방법에 사용되는 조성물
EP3047273B1 (en) Cancer biomarker and diagnostic
CN102947446B (zh) 肺腺癌的预后预测方法、肺腺癌的检测试剂盒以及用于治疗肺腺癌的医药组合物
CN103003445A (zh) 确定肿瘤转移可能性的方法
Xu et al. Rh type C-glycoprotein functions as a novel tumor suppressor gene by inhibiting tumorigenicity and metastasis in head and neck squamous cell carcinoma
WO2021041299A1 (en) Method and kit for determining benefit of chemotherapy
KR101745297B1 (ko) 비만 진단용 조성물 및 이의 용도
CN113648425B (zh) Plk1抑制剂和csnk1d/e抑制剂对肿瘤细胞具有协同抑制作用
KR102253304B1 (ko) 위암 재발 예측용 바이오 마커
WO2019031637A1 (ko) p53-비돌연변이 암에 대한 암 마커 유전자 및 치료제 스크리닝 방법
EP3715475A2 (en) Biomarker composition for diagnosing radiation-resistant cancer or for predicting prognosis of radiation therapy containing pmvk as active ingredient
US20230288399A1 (en) Method for screening colorectal cancer metastasis inhibitor
KR102006999B1 (ko) 대장암 전이 진단 또는 예후 예측용 조성물 및 이의 용도
KR20190037071A (ko) 대장암의 항암제 내성 진단용 바이오마커 및 이의 용도
US20230019818A1 (en) Methods of detecting and treating hpv-positive head and neck squamous cell carcinoma
US20240102105A1 (en) Biomarker for predicting responsiveness to anticancer agent and use thereof
KR20230161186A (ko) 암 줄기세포의 신규한 바이오마커 및 이의 용도
KR101913180B1 (ko) Tmem39a 유전자를 포함하는 암 진단용 조성물