CN113648425B - Plk1抑制剂和csnk1d/e抑制剂对肿瘤细胞具有协同抑制作用 - Google Patents

Plk1抑制剂和csnk1d/e抑制剂对肿瘤细胞具有协同抑制作用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了PLK1抑制剂和CSNK1D/E抑制剂对肿瘤细胞具有协同抑制作用。本申请研究表明PLK1和CSNK1D/E激酶抑制剂组合能显著抑制肝癌细胞系的生长，一种二元复合抑制剂能协同抑制细胞生长。本申请为肝癌治疗提供了潜在的联合药物靶点。

Description

PLK1抑制剂和CSNK1D/E抑制剂对肿瘤细胞具有协同抑制作用
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及PLK1抑制剂和CSNK1D/E抑制剂对肿瘤细胞具有协同抑制作用。
背景技术
肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上最常见的癌症之一，是癌症死亡的第三大原因。乙型肝炎病毒(HBV)感染是肝细胞癌发展的一个危险因素，尤其是在东亚。在中国，自1990年以来，肝癌已被列为第二常见的致死性癌症，HBV感染是一个关键因素。目前，手术切除和肝移植被认为是早期HCC的最佳治疗选择，对约30％至40％的早期患者来说是治疗性治疗。大多数HCC患者仍被诊断为处于中晚期疾病阶段，治疗方法往往不可行。对于不适合局部治疗的晚期和中期患者，系统治疗是唯一的治疗选择。索拉非尼自2007年起一直是标准的治疗方案，而伦伐替尼最近才成为肝癌的新的一线治疗方案，因为伦伐替尼与索拉非尼相比无劣性。两者都与严重的副作用有关，影响生活质量。幸运的是，在过去的五年中，有几种新的全身治疗方法被批准用于晚期肝癌的治疗，其中一种与检查点抑制剂的联合治疗优于索拉非尼(阿替唑单抗加贝伐单抗)。为了推动该领域的发展，研究人员需要继续采用新的组合策略，并继续在HCC中寻找新的目标。因此，仍然迫切需要寻找用于肝癌治疗的关键致癌相关分子。
蛋白激酶构成了一个大的酶超家族，在真核细胞几乎所有的信号传递过程中都具有关键的调节功能。异常蛋白激酶表达和/或活性，通常由于基因扩增或突变，参与导致恶性转化和肿瘤发展的病理过程。因此，蛋白激酶已成为治疗干预的主要药物靶点。重要的是，索拉非尼和伦伐替尼是多激酶抑制剂，是唯一两种经批准的治疗不能切除的HCC的一线系统疗法。因此，对HCC进行比较激酶组研究对于提高我们对疾病相关激酶功能的理解并帮助发现新的治疗靶点至关重要。
发明内容
本申请研究表明PLK1和CSNK1D/E激酶抑制剂组合能显著抑制Hep3B和PLC/PRF/5细胞系的生长，一种二元复合抑制剂能协同抑制细胞生长。本申请为肝癌治疗提供了潜在的联合药物靶点。
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括PLK1抑制剂和CSNK1D/E抑制剂。
进一步，所述PLK1抑制剂的使用浓度是半致死浓度；CSNK1D/E抑制剂的使用浓度是半致死浓度。
进一步，所述PLK1抑制剂的半致死浓度是4.19nM；CSNK1D/E抑制剂的半致死浓度是22nM。
进一步，所述PLK1抑制剂的半致死浓度是5.27nM；CSNK1D/E抑制剂的半致死浓度是12nM。
本发明可以通过本领域任何已知的方式配制药物组合物来使用。这种组合物包含两种抑制剂作为活性成分，加上一种或多种药物可接受的载体、稀释剂、填充剂、结合剂及其它赋形剂，这依赖于给药方式及所设计的剂量形式。本领域枝术人员已知的治疗惰性的无机或有机的载体包括(但不限于)乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、植物油、蜡、脂肪、多羟基化合物例如聚乙二醇、水、蔗糖、乙醇、甘油，诸如此类，各种防腐剂、润滑剂、分散剂、矫味剂、保湿剂、抗氧化剂、甜味剂、着色剂、稳定剂、盐、缓冲液诸如此类也可加入其中，这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味，在这种组合物中可以使用的制剂可以是其原始化合物本身的形式，或任意选择使用其药物学可接受的盐的形式。
本发明的药物组合物可以单独给药，或以各种组合给药，以及与其它治疗药剂一起结合的形式给药。如此配制的组合物可根据需要选择本领域技术人员已知的任何适当的方式进行给药。使用药物组合物时，是将安全有效量的药物组合物施用于人，其中口服安全有效量通常至少约100微克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都在熟练医师技能范围之内。
本发明的药物组合物可根据需要制备成各种剂型。包括但不限于，经皮、粘膜、鼻、口颊、舌下或经口使用的片剂、溶液剂、颗粒剂、贴剂、膏剂、胶囊剂、气雾剂或栓剂。
本发明的药物组合物的施用途径不受限制，包括但不限于静脉内，腹膜内，眼内，动脉内，肺内，口服，小泡内，肌肉内，气管内，皮下的，通过皮肤，通过胸膜，局部的，吸入，通过粘膜，皮肤，肠胃，关节内，心室内，直肠，阴道，颅骨内，尿道内，肝内，瘤内。在某些情况下可以系统地给药。在某些情况下可以局部地给药。
本发明的药物组合物的剂量不受限制，只要获得期望的效果即可，可以依据症状、性别、年龄等来恰当的确定。
还可以将前面所述的药物组合物中的一种抑制剂和另一种抑制剂联合施用到需要治疗的对象中，其中两种抑制剂可以同时施用到需要治疗的个体中，也可以分别施用到需要治疗的个体中，还可以依次施用到需要治疗的个体中，例如先施用一种抑制剂，间隔一定时间再施用另一种抑制剂。
根据本发明的另一个方面，本发明提供了PLK1抑制剂和/或CSNK1D/E抑制剂在制备治疗肝癌的药物中的应用。
根据本发明的又一个方面，本发明提供了PLK1抑制剂在制备增强肝癌患者对CSNK1D/E抑制剂敏感性的药物中的应用。
根据本发明的又一个方面，本发明提供了CSNK1D/E抑制剂在制备增强肝癌患者对PLK1抑制剂敏感性的药物中的应用。
进一步，前面所述的药物的限定可以同前面所述的药物组合物。
PLK1抑制剂包括BI 2536、Volasertib(BI 6727)、Rigosertib(ON-01910)、GSK461364、MLN0905、Ro3280、SBE 13HCl、Wortmannin(KY 12420)、HMN-176、Onvansertib(NMS-P937)。
在本发明的具体实施方案中，所述PLK1抑制剂是BI 2536。
在本发明的具体实施方案中，CSNK1D/E抑制剂是PF670462。
根据本发明的又一个方面，本发明提供了一种预测肝癌患者预后的分子标志物，其特征在于，所述分子标志物是激酶。
进一步，所述激酶选自PLK1、CSNK1D/E、CHEK1、AURKA、AURKB、PRKDC、NEK2、MAPK3、CDK1中的任意一种或多种。
根据本发明的又一个方面，本发明提供了检测前面所述的分子标志物的试剂。
优选地，所述试剂包括定量所述分子标志物mRNA的试剂，和/或定量或半定量所述分子标志物蛋白的试剂。
本发明的定量样品中mRNA的试剂可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该产品可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。
进一步，定量所述分子标志物mRNA的试剂包括与所述分子标志物或所述分子标志物mRNA结合的核酸。
包含在上述试剂中的核酸可以通过化学合成来获得，或通过从生物材料制备含有期望核酸的基因，然后设计引物扩增期望的核酸来获得。
进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(Amplification RefractoryMutation System，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。
更进一步，所述核酸包括特异扩增所述分子标志物的引物。
引物可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。
如本文使用的，术语“引物”是指具有短的游离3′-末端羟基的核酸序列，其是短的核酸序列，可以与互补模板形成碱基对并用作模板链复制的起始点。在合适的缓冲液在合适的温度在存在用于聚合的试剂(例如，DNA聚合酶或反转录酶)和四种三磷酸核苷的情况下，引物可以起始DNA合成。PCR条件和有义和反义引物的长度可以根据本领域中已知技术适当选择。
上面所述的核酸还可包括探针，所述探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，然后设计引物扩增期望的核酸来获得。
如本文所使用的，“核酸”或者“核酸分子”指多核苷酸，如脱氧核糖核酸(DNA)或者核糖核酸(RNA)、寡核苷酸、由聚合酶链式反应(PCR)所产生的片段以及通过任意的连接、剪切、核酸内切酶和核酸外切酶活动产生的片段。核酸分子可以由天然产生的核苷酸的单体组成(例如DNA和RNA)，或者由天然产生的核苷酸的类似物组成(例如天然产生的核苷酸的α-对映体形式)，或者两者的组合组成。经修饰的核苷酸可以在糖部分和/或在嘧啶或者嘌呤碱基部分上有改变。糖的修饰包括，例如将一个或者多个羟基以卤素、烷基、胺和叠氮基团替代，或者可以将糖功能化成为醚或者酯。除此之外，整个的糖部分可以用空间上和电子上类似的结构替换，如阿扎糖以及碳环的糖类似物。在碱基部分上修饰的实例包括烷基化的嘌呤和嘧啶、酰化的嘌呤和嘧啶或者其他公知的杂环替代物。核酸单体可以通过磷酸二酯键或者该连接的类似物进行连接。磷酸二酯键的类似物包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)、二硒代磷酸酯(phosphorodiselenoate)、phosphoroanilothioate、phosphoranilidate、氨基磷酸酯等等。术语“核酸分子”还包括所谓的“肽核酸”，其包括连接到聚酰胺骨架上的天然产生的或者经修饰的核酸碱基。核酸可以是单链的或者双链的。
本发明的定量或半定量所述分子标志物蛋白通过抗原-抗体反应测量。更特别是，抗原-抗体反应可以根据本领域已知的定量或定性免疫测定方案进行。免疫测定形式可以包括，但不限于，酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射性免疫测定(RIA)、夹心测定、蛋白质印迹、免疫沉淀、免疫组织化学染色、流式细胞术、荧光辅助的细胞分选(FACS)、酶底物显色测定和抗原-抗体聚集。
作为实例，本发明的定量或半定量所述分子标志物蛋白的试剂包括特异性结合所述分子标志物蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本发明的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本发明的定量样品中分子标志物编码蛋白的试剂可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。
抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如，制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后，从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的分子标志物蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对分子标志物蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体：用与上文相同的抗原免疫动物，从经过免疫的动物收集血液样品，从血液中分离出血清，然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。
标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如，可以如下荧光标记蛋白质或肽：用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽，添加用DMSO、缓冲剂等准备的染料，然后混合溶液，再于室温放置10分钟。另外，标记可使用商品化的标记试剂盒，诸如生物素标记试剂盒，如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；碱性磷酸酶标记试剂盒诸如碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2、碱性磷酸酶标记试剂盒-SH(Dojindo Laboratories)；过氧化物酶标记试剂盒诸如过氧化物酶标记试剂盒-NH2、过氧化物酶标记试剂盒-NH2(Dojindo Laboratories)；藻胆蛋白标记试剂盒诸如藻胆蛋白标记试剂盒-NH2、藻胆蛋白标记试剂盒-SH、B-藻红蛋白标记试剂盒-NH2，B-藻红蛋白标记试剂盒-SH、R-藻红蛋白标记试剂盒-NH2、R-藻红蛋白标记试剂盒SH(DojindoLaboratories)；荧光标记试剂盒诸如荧光素标记试剂盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)555标记试剂盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)647标记试剂盒-NH2(Dojindo Laboratories)；及DyLight 547和DyLight647(Techno Chemical Corp.)、Zenon(TM)、Alexa Fluor(TM)抗体标记试剂盒、Qdot(TM)抗体标记试剂盒(Invitrogen Corporation)和EZ-标记物蛋白质标记试剂盒(Funakoshi Corporation)。为了正确标记，可以使用适宜的仪器来检测经过标记的抗体或其片段。
作为依照本发明的检测方法中使用的样品，可以使用例如自活检受试者获得的组织样品或流体。样品不受特别限制，只要它适于本发明的测定；例如，它可以包括组织、血液、血浆、血清、淋巴液、尿液、浆膜腔液、脊髓液、滑液、房水、泪液、唾液。
根据本发明的又一个方面，本发明提供了前面所述的试剂在制备预测肝癌预后的产品中的应用。
优选地，所述产品包括试剂盒、芯片、试纸、高通量测序平台。
附图说明
图1显示PLK1抑制剂的IC50测定曲线图，其中，A：Hep3B；B：PLC/PRF/5；
图2显示CHEK1抑制剂的IC50测定曲线图，其中，A：Hep3B；B：PLC/PRF/5；
图3显示AURKA抑制剂的IC50测定曲线图，其中，A：Hep3B；B：PLC/PRF/5；
图4显示AURKB抑制剂的IC50测定曲线图，其中，A：Hep3B；B：PLC/PRF/5；
图5显示PRKDC抑制剂的IC50测定曲线图，其中，A：Hep3B；B：PLC/PRF/5；
图6显示CSNK1D/E抑制剂的IC50测定曲线图，其中，A：Hep3B；B：PLC/PRF/5；图7显示PLK1抑制剂和CSNK11D/E抑制剂组合对细胞生长影响的结果图，其中，A：Hep3B；B：PLC/PRF/5；
图8显示AURKB抑制剂和PLK1抑制剂组合对细胞生长影响的结果图，其中，A：Hep3B；B：PLC/PRF/5；
图9显示AURKB抑制剂和CHEK1抑制剂组合对细胞生长影响的结果图，其中，A：Hep3B；B：PLC/PRF/5；
图10显示PRKDC抑制剂和CHEK1抑制剂组合对细胞生长影响的结果图，其中，A：Hep3B；B：PLC/PRF/5；
图11显示AURKB抑制剂和AURKA抑制剂组合对细胞生长影响的结果图，其中，A：Hep3B；B：PLC/PRF/5；
图12显示基因表达与肝癌患者预后相关性的生存曲线图，其中，A：AURKB和AURKA；B：PLK1和CSNK1D；C：AURKB和CHEK1；D：AURKA和PLK1；E：PRKDC和CHEK1。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1激酶抑制剂对肿瘤细胞生长的影响
使用Hep3B和PLC/PRF/5细胞测试6种激酶抑制剂抑制细胞生长的能力，6种激酶抑制剂的信息见表1。
表1 11种激酶抑制剂的信息
Figure BDA0003218236800000081
1、步骤
细胞培养与细胞生长测试：Hep3B和PLC/PRF/5细胞来自中国科学院细胞库(中国上海)。
Hep3B和PLC/PRF/5细胞系使用Dulbecco改良的Deagle培养基(DMEM，Gibco)在37℃下5％CO2增湿培养箱中培养，并添加10％胎牛血清(FBS)和1％青霉素-链霉素(Sigma-Aldrich)。对于单一抑制剂试验，小分子抑制剂溶解在100％二甲基亚砜(Sigma-Aldrich)中，并用二甲基亚砜稀释至所需浓度，最终二甲基亚砜浓度为0.1％。每种抑制剂的浓度不同。以0.1％(v/v)的二甲基亚砜作为对照。
将Hep3B和PLC/PRF/5细胞接种到96孔微量滴定板(每个细胞约3000个细胞)中，并在37℃下培养过夜。第二天，在添加抑制剂之前测量细胞活力。然后，在连续梯度稀释后，向孔中添加10种不同浓度的单一抑制剂。在用抑制剂处理细胞72小时后，测试吸光度的生长抑制效应，并绘制细胞生长曲线。使用GraphPad Prism8软件通过非线性回归分析计算IC50值，在该值下，与DMSO对照相比，细胞生长抑制率达到50％。对于联合抑制剂试验，细胞培养与单一抑制剂试验相同。细胞在IC50浓度下用0.1％二甲基亚砜、单一抑制剂处理72小时。连续4天测定细胞活力，绘制细胞生长曲线。使用MTS溶液测定细胞活力。将MTS溶液以20％的最终浓度添加到每个孔中，并培养1.5小时。在490nm处测量吸光度。误差线表示SEM，n＝9。
2、结果
1)单一激酶抑制剂的IC50检测结果
6种激酶抑制剂中，PLK1抑制剂BI2536显示出最好的抑制效果，在Hep3B和PLC/PRF/5细胞中的IC50分别为4.19nM和5.27nM(图1A和B)。表明PLK1抑制剂有效抑制了肿瘤生长。
CHEK1抑制剂Prexasertib有效抑制Hep3B和PLC/PRF/5细胞增殖，IC50分别为22nM和12nM(图2A和B)。表明CHEK1抑制剂有效抑制了肿瘤生长。
AURKA抑制剂Aurora A Inhibitor I有效抑制Hep3B和PLC/PRF/5细胞增殖，IC50分别为2.22μM和2.92μM(图3A和B)。表明AURKA抑制剂有效抑制了肿瘤生长。
AURKB抑制剂GSK1070916表现出良好的抑制效果，在Hep3B和PLC/PRF/5细胞中的IC50分别为1.84μM和5.14μM(图4A和B)。表明AURKB抑制剂有效抑制了肿瘤生长。
PRKDC抑制剂KU-57788对两种细胞系显示出较低的抑制作用，在Hep3B和PLC/PRF/5细胞中的IC50分别为14.72μM和15.78μM(图5A和B)。表明PRKDC抑制剂有效抑制了肿瘤生长。
CSNK1D/E抑制剂PF670462对两种细胞系显示出较低的抑制作用，在Hep3B和PLC/PRF/5细胞中的IC50分别为37.20μM和47.73μM(图6A和B)。表明CSNK1D/E抑制剂有效抑制了肿瘤生长。
2)激酶抑制剂联合抑制效果检测
结果表明，在Hep3B和PLC/PRF/5两种细胞系中，PLK1抑制剂和CSNK1D/E抑制剂的组合显示出比任何单独抑制剂更低的抑制效果(图7A和B)。经过数据分析可知，PLK1抑制剂和CSNK1D/E抑制剂在抑制上述两种细胞生长过程中发挥了协同增效的作用。
AURKA抑制剂和PLK1抑制剂组合、AURKB抑制剂和CHEK1抑制剂组合、PRKDC抑制剂和CHEK1抑制剂组合、AURKB抑制剂和AURKA抑制剂组和在两种细胞系中并没有发挥协同增效作用(图8-11)。注：图中ns P>0.05，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001(双尾成对t检验)。
实施例2激酶组合对肝癌患者总体生存期的影响
1、步骤
对肝癌单个或成对激酶的总体生存进行分析，以探索激酶mRNA表达与患者临床结果的相关性。免费访问Kaplan–Meier(KM)绘图仪在线工具(http://kmplot.com/analysis/)用于肝癌单个激酶的总体生存分析。在分析中，本申请纳入了TCGA数据集中的所有患者，不受病理(分期、分级、AJCC_T、血管侵袭)、患者(性别、种族和索拉非尼治疗)或风险因素(饮酒和肝炎病毒)的限制。应用了自动选择最佳截止值和60个月随访阈值。
为了分析成对激酶与患者临床结局的关系，进行了对数秩检验，并创建了Kaplan–Meier生存曲线，以使用R生存分析软件包(版本3.3.1)比较“高表达”与“低表达”患者的总生存率。简而言之，TCGA数据集是从TCGA网站下载。使用“LIHC”和RNA表达水平筛选出肝癌样本。对于每个成对的激酶，当两者的RNA表达都在最高四分位时，样品被标记为“高表达”，当两者都在最低四分位时，样品被标记为“低表达”。然后，使用R生存分析软件包进行对数秩检验和Kaplan–Meier生存曲线绘制。
2、结果
1)比较肝癌患者癌组织(HCC)和癌旁组织中(non-HCC)的激酶基因表达情况，基因表达比较情况见表2。
表2基因表达比较
激酶 log rank p_value Fold Change(HCC/non-HCC)
CHEK1 6.00E-05 7.42
AURKA 0.0004 15.12
AURKB 0.0002 8.77
PRKDC 0.0069 1.73
CSNK1E 0.0018 2.40
CSNK1D 0.0064 2.365
NEK2 4.30E-05 3.05
MAPK3 9.50E-05 1.76
CDK1 1.20E-05 1.655
2)进行Kaplan-Meier生存分析，分析成对激酶基因表达与肝癌患者总体生存率的相关性，结果如表3和图12所示。
表明表3中字体加粗的激酶组合的mRNA表达与HCC患者的总体生存率显著相关(P<0.05)。因此上述激酶组合可作为预测HCC预后的分子标志物。
表3基因表达与肝癌患者总体生存率的相关性
Figure BDA0003218236800000111
Figure BDA0003218236800000121
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括PLK1抑制剂和CSNK1D/E抑制剂；PLK1抑制剂是BI 2536；CSNK1D/E抑制剂是PF670462。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述PLK1抑制剂的使用浓度是IC50；CSNK1D/E抑制剂的使用浓度是IC50。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述PLK1抑制剂的IC50是4.19nM；CSNK1D/E抑制剂的IC50是37.20μM。
4.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述PLK1抑制剂的IC50是5.27nM；CSNK1D/E抑制剂的IC50是47.73μM。
5.PLK1抑制剂和CSNK1D/E抑制剂在制备治疗肝癌的药物中的应用；
PLK1抑制剂是BI 2536；CSNK1D/E抑制剂是PF670462。
6.PLK1抑制剂在制备增强肝癌患者对CSNK1D/E抑制剂敏感性的药物中的应用；PLK1抑制剂是BI 2536；CSNK1D/E抑制剂是PF670462。
7.CSNK1D/E抑制剂在制备增强肝癌患者对PLK1抑制剂敏感性的药物中的应用；PLK1抑制剂是BI 2536；CSNK1D/E抑制剂是PF670462。
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