CN110269869B - 一种以蜥蜴为主的抗肿瘤药物及验证方法 - Google Patents
一种以蜥蜴为主的抗肿瘤药物及验证方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110269869B CN110269869B CN201910692574.2A CN201910692574A CN110269869B CN 110269869 B CN110269869 B CN 110269869B CN 201910692574 A CN201910692574 A CN 201910692574A CN 110269869 B CN110269869 B CN 110269869B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gastric cancer
- lizards
- lizard
- tail
- wine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 title claims description 46
- 238000012795 verification Methods 0.000 title abstract description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 title description 4
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 title description 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 63
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims abstract description 63
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims abstract description 63
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 33
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 20
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims abstract description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 12
- 102000000344 Sirtuin 1 Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108010041191 Sirtuin 1 Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 claims description 7
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 claims description 7
- 210000000702 aorta abdominal Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 238000003304 gavage Methods 0.000 claims description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 2
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 206010006514 bruxism Diseases 0.000 claims 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 claims 1
- 241000722273 Saururus cernuus Species 0.000 abstract description 13
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 12
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 11
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 abstract 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 14
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 4
- 241000509992 Eremias Species 0.000 description 3
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 3
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 230000024121 nodulation Effects 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- SCULJPGYOQQXTK-OLRINKBESA-N Cinobufagin Chemical compound C=1([C@@H]2[C@@]3(C)CC[C@@H]4[C@@]5(C)CC[C@H](O)C[C@H]5CC[C@H]4[C@@]43O[C@@H]4[C@@H]2OC(=O)C)C=CC(=O)OC=1 SCULJPGYOQQXTK-OLRINKBESA-N 0.000 description 1
- SCULJPGYOQQXTK-UHFFFAOYSA-N Cinobufagin Natural products CC(=O)OC1C2OC22C3CCC4CC(O)CCC4(C)C3CCC2(C)C1C=1C=CC(=O)OC=1 SCULJPGYOQQXTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000034656 Contusions Diseases 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 206010018498 Goitre Diseases 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 241000758742 Saururaceae Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 208000034526 bruise Diseases 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 201000003872 goiter Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 201000011591 microinvasive gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 210000004876 tela submucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/56—Materials from animals other than mammals
- A61K35/58—Reptiles
- A61K35/583—Snakes; Lizards, e.g. chameleons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57446—Specifically defined cancers of stomach or intestine
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明属于肿瘤治疗技术领域，公开了一种对胃癌干预作用的药物有效部位及其验证方法，对胃癌干预作用的药物为蜥蜴尾部；验证方法为采用0.1‑0.5g/ml剂量连续给SD大鼠灌胃7天；制备含药血清，‑20℃冷藏备用；将对数生长期细胞用酶标仪在490nm波长下测吸光值；对数生长期的细胞进行流式细胞定量分析；检测相应胃癌细胞株干预后的P53和Sirt1表达水平。本发明的实验结果表明蜥蜴尾部干预后胃癌细胞株存活率较低；流式细胞定量分析结果为SGC‑7901胃癌细胞株的总凋亡率为蜥蜴尾部为最大22.9％，优于对照组及其他部位组。
Description
技术领域
本发明属于肿瘤治疗技术领域，尤其涉及一种对胃癌干预作用的药物有效部位及验证方法。
背景技术
目前，业内常用的现有技术是这样的：
胃癌是临床常见的恶性肿瘤之一，我国每年新增胃癌人数居世界之首，其死亡率居我国所有癌症死亡率的前三位。在中国，胃癌发病率居男性全身恶性肿瘤第二位，女性第四位。研究表明，病变位于黏膜层及黏膜下层早期胃癌的防治，可使患者5年生存率达到90％以上，而转移是影响胃癌患者疗效及预后的主要原因之一，严重威胁着患者的健康和生命。胃癌患者早期症状隐匿，目前尚缺乏有效的筛查和治疗方法，且胃癌前病变及早癌诊断也有很大的局限性，加之胃癌发病机制尚不完全清楚，因此，胃癌的诊断、防治和转移抑制即成为临床难点之一。李时珍在《本草纲目》中载蜥蜴可“滑窍破血，消水饮阴”。《中药大辞典》亦指出蜥蜴具有破结利水、消瘿散结之效。
综上所述，现有技术存在的问题是：
(1)现有技术对单味蜥蜴干预胃癌细胞株存活率研究较少。
(2)现有技术对蜥蜴身体不同部位干预胃癌细胞株存活率研究较少。
(3)现有技术缺乏对蜥蜴身体不同部位干预胃癌的物质基础的前期研究。
解决上述技术问题的难度：
(1)目前有关单味蜥蜴干预胃癌细胞的基础文献研究较少。
(2)蜥蜴身体不同部位干预胃癌的临床及实验研究较少。
(3)蜥蜴身体不同部位干预胃癌的物质基础的前期研究需要的周期较长，需要研究团队的稳定性。
解决上述技术问题的意义：
(1)解决单味蜥蜴干预胃癌细胞株存活率研究，可以明确蜥蜴抗肿瘤的作用及机制，为临床应用提供科学依据。
(2)解决蜥蜴身体不同部位干预胃癌细胞株存活率研究，可以进一步明确蜥蜴干预胃癌的有效部位，为促进其抗肿瘤物质基础研究奠定基础。
(3)解决蜥蜴身体不同部位干预胃癌的物质基础的前期研究，可以促进以蜥蜴为主的抗肿瘤药物的研发，造福患者。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种对胃癌干预作用的药物有效部位及验证方法。
本发明是这样实现的，一种对胃癌干预作用的药物，所述以蜥蜴为主的抗肿瘤药物采用密点麻蜥。
进一步，所述对胃癌干预作用的药物为蜥蜴尾部。
本发明的另一目的在于提供一种以蜥蜴为主的抗肿瘤药物的制备方法，所述制备方法为：
先将密点麻蜥采用52度白酒进行清洗三次以净化；将净化后蜥蜴置容器内，喷淋定量的黄酒搅拌均匀，每500克蜥蜴用黄酒50～100克，闷润2～4小时，使酒渗入药材组织内部，再于炒药锅内用文火加热、翻炒至表面显微黄火色，炒制一般掌握温度140～150℃，时间15～20分钟，取出，摊晾、晾凉制得，以增强药物入血分活血通络、解毒抗癌之效；酒制好后分解为密点麻蜥头部、四肢、躯干、全身及尾部等不同部分，阴凉储藏备用。
本发明的另一目的在于提供一种验证所述对胃癌干预作用的药物药效的方法，包括以下步骤：
步骤一：分别采用酒制后密点麻蜥头部、四肢、躯干、全身及尾部以0.1-0.5g/ml/100g(体重)剂量连续给SD大鼠灌胃7天；第7天各组末次给药后1h，腹腔麻醉，无菌条件下腹主动脉取血，离心，制备含药血清，-20℃冷藏备用；
步骤二：将对数生长期细胞分别以2×10 3个/ml浓度接种于96孔培养板中，加入含10-30％药物血清100ul，培养24h，经振荡仪振荡10min后，用酶标仪在490nm波长下测吸光值；
步骤三：对数生长期的细胞分别以6×105/ml接种于6孔板，培养24h后，加入含10-30％大鼠血清的培养液继续培养24h，清洗，离心，加入染色液，轻轻混匀后，进行流式细胞定量分析；
步骤四：检测相应胃癌细胞株干预后的P53和Sirt1表达水平。
进一步，所述步骤一中，制备含药血清方法为：
(1)分别采用酒制后密点麻蜥头部、四肢、躯干、全身及尾部以0.1-0.5g/ml/100g(体重)剂量连续给SD大鼠灌胃7天；
(2)第7天各组末次给药后1h，腹腔麻醉，无菌条件下腹主动脉取血，离心，制备含药血清，-20℃冷藏备用。
本发明的另一目的在于提供一种利用所述对胃癌干预作用的药物制备的制剂。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
本发明的实验结果表明蜥蜴尾部干预后胃癌细胞株存活率较低。流式细胞定量分析结果为SGC-7901胃癌细胞株的总凋亡率为蜥蜴尾部为最大22.9％，优于对照组及其他部位组。检测胃癌细胞株干预后的P53和Sirt1表达结果表明以蜥蜴尾部组效果较佳。
促进细胞凋亡、抑制恶性增殖是阻断肿瘤发生的关键环节。现代胃癌机制研究主要集中在能够引起细胞增殖、分化的基因和蛋白质表达上，而SIRT1调控的P53及P53正向细胞凋亡调控因子(P53up-regulatedmodulator of apoptosis protein，PUMA)，也称为bcl-2binding component 3protein(BBC3)，因作用独特、促凋亡活性强大而受到越来越多的关注，在胃癌阻断机制中起重要的调控作用。
实验表明，P53是SIRT1作用底物中很重要的一个，当细胞处于缺血缺氧致使DNA损伤等应激情况时，P53蛋白表达与多种恶性肿瘤的发生、发展、浸润、转移及预后有关。同时，P53过度表达又可导致肿瘤血管生成增加，是与血瘀证相关的重要因子。
前期通过复方蜥蜴散及单味宁夏密点麻蜥干预胃癌细胞实验也表明，该方及单味密点麻蜥可改善胃黏膜细胞缺血缺氧的微环境，促进细胞凋亡，阻断癌变，疗效优于5-FU及华蟾素片组。李时珍《本草纲目》中载蜥蜴可“滑窍破血，消水饮阴”，《中药大辞典》亦指出，蜥蜴具有破结利水、消瘿散结之效，表明其功效与毒瘀交阻的胃癌病机相符合。
此外，蜥蜴断尾再生也表明蜥蜴尾部含有较强的生物活性物质，宁夏密点麻蜥为生活在沙漠中，从临床及前期实验研究结果来看，其生物活性较草原蜥蜴更强。蜥蜴尾部再生分化对机体有较好的保护和功能恢复作用。基于此，我们进一步开展了宁夏密点麻蜥不同部位抗肿瘤细胞凋亡的研究。
本发明结果表明，宁夏密点麻蜥不同部位各组可明显抑制SGC-7901胃癌细胞增殖，诱导凋亡，以尾部组OD均值小于其他组，P<0.05。各含药大鼠血清干预组细胞总凋亡率大于生理盐水对照组，宁夏密点麻蜥尾部组细胞总凋亡率大于其他各组，宁夏密点麻蜥不同部位含药大鼠血清干预组Sirt1和P53蛋白表达各组比较，P<0.05，以尾部组下降最明显，P<0.05。
本发明解决了临床中蜥蜴抗胃癌的有效部位问题，为进一步研究蜥蜴尾部抗胃癌物质基础，促进药物研发具有较好的前瞻性，填补了蜥蜴抗肿瘤基础实验研究方面的国内外空白，为临床应用提供了较好的科学依据。
附图说明
图1是本发明实施例提供的对胃癌干预作用的药物药效的动物模型的构建方法流程图。
图2是本发明实施例提供的干预后胃癌细胞株存活率结果示意图。
图3是本发明实施例提供的流式细胞定量分析结果示意图。
图4是本发明实施例提供的胃癌细胞株干预后的P53和Sirt1表达结果示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
现有技术对蜥蜴尾部干预胃癌细胞株存活率研究较少。
为解决上述技术问题，下面结合具体方案对本发明的应用原理作详细说明。
本发明实施例提供的一种对胃癌干预作用的药物，所述对胃癌干预作用的药物为蜥蜴尾部。
如图1所示，本发明实施例提供的对胃癌干预作用的药物药效的验证方法具体包括以下步骤：
S101：分别采用酒制后密点麻蜥头部、四肢、躯干、全身及尾部以0.1-0.5g/ml/100g(体重)剂量连续给SD大鼠灌胃7天；第7天各组末次给药后1h，腹腔麻醉，无菌条件下腹主动脉取血，离心，制备含药血清，-20℃冷藏备用。
S102：将对数生长期细胞分别以2×103个/ml浓度接种于96孔培养板中，加入含10-30％药物血清100ul，培养24h，经振荡仪振荡10min后，用酶标仪在490nm波长下测吸光值。
S103：对数生长期的细胞分别以6×105/ml接种于6孔板，培养24h后，加入含10-30％大鼠血清的培养液继续培养24h，清洗，离心，加入染色液，轻轻混匀后，进行流式细胞定量分析。
S104：检测相应胃癌细胞株干预后的P53和Sirt1表达水平。
步骤S101中，本发明实施例提供的制备含药血清方法为：
(1)采用0.1-0.5g/ml剂量连续给SD大鼠灌胃7天；
(2)第7天各组末次给药后1h，腹腔麻醉，无菌条件下腹主动脉取血，离心，制备含药血清，-20℃冷藏备用。
下面结合具体实施例对本发明的应用原理进行进一步说明；
本发明前期在分析CAG及其癌前病变、胃癌时也发现，其病程较长，久则入络，而为癥瘕，采用密点麻蜥为主的复方蜥蜴散治疗CAG、胃癌前病变及胃癌，均取得了较好的临床疗效，表明该方可有效增加胃黏膜细胞的营养，改善胃黏膜细胞缺血缺氧的微环境，有效减轻患者症状，逆转胃黏膜病理，降低Stas3、Wnt信号通路及NF-κB通路中P65与IkB-a等蛋白表达，促进细胞凋亡，阻断癌变。
本发明在单味蜥蜴体外干预人胃癌细胞株的增殖、促进凋亡，有较好抗癌作用的基础上，进一步分析蜥蜴身体不同部位对胃癌的干预作用。
具体方法为：
(1)分别采用酒制后密点麻蜥头部、四肢、躯干、全身及尾部以0.1-0.5g/ml/100g(体重)剂量连续给SD大鼠灌胃7天。第7天各组末次给药后1h，腹腔麻醉，无菌条件下腹主动脉取血，离心，制备含药血清，-20℃冷藏备用。
(2)将对数生长期细胞分别以2×103个/ml浓度接种于96孔培养板中，加入含10-30％药物血清100ul，培养24h，经振荡仪振荡10min后，用酶标仪在490nm波长下测吸光值。
如图2所示，本发明实施例提供的干预后胃癌细胞株存活率结果示意图。
如图2所示，尾部干预后胃癌细胞株存活率较低，P<0.05。
(3)对数生长期的细胞分别以6×10 5/ml接种于6孔板，培养24h后，加入含10-30％大鼠血清的培养液继续培养24h，清洗，离心，加入染色液，轻轻混匀后，进行流式细胞定量分析。
如图3所示，本发明实施例提供的流式细胞定量分析结果示意图。
如图3所示，SGC-7901胃癌细胞株的总凋亡率为蜥蜴尾部为最大22.9％，优于对照组及其他部位组，P<0.05。
(4)检测相应胃癌细胞株干预后的P53和Sirt1表达水平。
如图4所示，本发明实施例提供的胃癌细胞株干预后的P53和Sirt1表达结果示意图。
如图4所示，以蜥蜴尾部组效果较佳，P<0.05。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种以蜥蜴为主的对胃癌干预作用的药物，其特征在于，所述以蜥蜴为主的对胃癌干预作用的药物采用密点麻蜥的尾部；
所述对胃癌干预作用的药物的制备方法为：
先将密点麻蜥采用52度白酒进行清洗三次以净化；
将净化后蜥蜴置容器内，喷淋定量的黄酒搅拌均匀，每500克蜥蜴用黄酒50～100克，闷润2～4小时，使酒渗入药材组织内部，再于炒药锅内用文火加热、翻炒至表面显微黄火色，炒制温度140～150℃，时间15～20分钟，取出，摊晾、晾凉制得；
酒制好后分解为密点麻蜥头部、四肢、躯干、全身及尾部不同部位，阴凉储藏备用。
2.一种验证权利要求1所述对胃癌干预作用的药物药效的验证方法，，所述验证方法包括以下步骤：
步骤一：分别采用酒制后密点麻蜥头部、四肢、躯干、全身及尾部以0.1-0.5g/ml/100g剂量连续给SD大鼠灌胃7天；第7天各组末次给药后1h，腹腔麻醉，无菌条件下腹主动脉取血，离心，制备含药血清，-20℃冷藏备用；
步骤二：将对数生长期细胞分别以2×10 3 个/ml浓度接种于96孔培养板中，加入含10-30％药物血清100ul，培养24h，经振荡仪振荡10min后，用酶标仪在490nm波长下测吸光值；
步骤三：对数生长期的细胞分别以6×10 5 /ml接种于6孔板，培养24h后，加入含10-30％大鼠血清的培养液继续培养24h，清洗，离心，加入染色液，轻轻混匀后，进行流式细胞定量分析；
步骤四：检测相应胃癌细胞株干预后的P53和Sirt1表达水平。
3.如权利要求2所述的验证方法，其特征在于，所述步骤一中，制备含药血清方法为：
(1)采用0.1-0.5g/ml剂量连续给SD大鼠灌胃7天；
(2)第7天各组末次给药后1h，腹腔麻醉，无菌条件下腹主动脉取血，离心，制备含药血清，-20℃冷藏备用。
4.一种利用权利要求1所述对胃癌干预作用的药物制备的制剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910692574.2A CN110269869B (zh) | 2019-07-30 | 2019-07-30 | 一种以蜥蜴为主的抗肿瘤药物及验证方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910692574.2A CN110269869B (zh) | 2019-07-30 | 2019-07-30 | 一种以蜥蜴为主的抗肿瘤药物及验证方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110269869A CN110269869A (zh) | 2019-09-24 |
| CN110269869B true CN110269869B (zh) | 2023-03-31 |
Family
ID=67966109
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910692574.2A Active CN110269869B (zh) | 2019-07-30 | 2019-07-30 | 一种以蜥蜴为主的抗肿瘤药物及验证方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110269869B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1782817A1 (de) * | 2005-11-08 | 2007-05-09 | TOXIMED GmbH | Pharmazeutischer Wirkstoff aus dem Mundsekret von Varanus, Timon, Lacerta und/oder Podarcis zur Behandlung von Tumorerkrankungen |
| CN103004689A (zh) * | 2012-10-31 | 2013-04-03 | 临泉县宗灿特种养殖有限公司 | 麻蜥的人工养殖技术及饲养管理方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1151835C (zh) * | 2001-10-11 | 2004-06-02 | 刘伟东 | 一种治疗肿瘤的药物 |
| WO2006039807A1 (en) * | 2004-10-15 | 2006-04-20 | Biopharmacopae Design International Inc. | Methods and therapeutic compositions comprising plant extracts for the treatment of cancer |
| CN100593417C (zh) * | 2007-05-25 | 2010-03-10 | 王化选 | 一种治疗胃癌及骨癌的中药 |
| CN101875661A (zh) * | 2010-05-25 | 2010-11-03 | 张仕状 | 从壁虎中提取的抗肿瘤化合物及其制备方法和应用 |
| CN101979044B (zh) * | 2010-10-23 | 2011-09-28 | 许文成 | 一种治疗脑梗塞的药物及其制备方法 |
| EP3262190B1 (en) * | 2015-02-24 | 2021-09-01 | Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg | Biomarker panel for the detection of cancer |
| CN114073736A (zh) * | 2018-05-18 | 2022-02-22 | 杜美丽 | 一种抗肿瘤中药组合物、药物及其制备方法和应用 |
| CN108938960A (zh) * | 2018-07-17 | 2018-12-07 | 宁夏医科大学 | 一种治疗胃癌的药物及其制备方法 |
| CN109512971A (zh) * | 2019-01-24 | 2019-03-26 | 宁夏医科大学 | 药物组合物及其用途和药物及其制备方法 |
| CN111329959A (zh) * | 2020-04-08 | 2020-06-26 | 宁夏医科大学 | 一种干预胃癌浸润转移的复方中药及其制备方法 |
| CN113559127A (zh) * | 2021-08-10 | 2021-10-29 | 宁夏医科大学 | 密点麻蜥水提物在制备治疗肝纤维化的药物中的应用 |
-
2019
- 2019-07-30 CN CN201910692574.2A patent/CN110269869B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1782817A1 (de) * | 2005-11-08 | 2007-05-09 | TOXIMED GmbH | Pharmazeutischer Wirkstoff aus dem Mundsekret von Varanus, Timon, Lacerta und/oder Podarcis zur Behandlung von Tumorerkrankungen |
| CN103004689A (zh) * | 2012-10-31 | 2013-04-03 | 临泉县宗灿特种养殖有限公司 | 麻蜥的人工养殖技术及饲养管理方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110269869A (zh) | 2019-09-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102526165B (zh) | 一种红景天有效部位、其制备方法、其药物组合物及用途 | |
| CN104922176B (zh) | 一种野菊花提取物的应用 | |
| CN102432620B (zh) | 一种白藜芦醇四聚体化合物及其制备方法和应用 | |
| CN108404019A (zh) | 复方菊苣根调节嘌呤代谢紊乱的固体制品及其制备方法 | |
| CN110269869B (zh) | 一种以蜥蜴为主的抗肿瘤药物及验证方法 | |
| CN111743924A (zh) | 治疗糖尿病的海洋植物提取物与组合物及用途 | |
| CN108813610A (zh) | 一种用于提高免疫力的雪莲组合物及其应用 | |
| CN104940241B (zh) | 一种防治妇女更年期综合征的硒虫草复方制剂 | |
| CN101485665B (zh) | 葫芦素的医药用途 | |
| CN108295085B (zh) | 原薯蓣皂苷在制备抗耐药性骨肉瘤药物中的应用 | |
| CN100558353C (zh) | 绿原酸在制备治疗小细胞肺癌的药物中的用途 | |
| CN102988422A (zh) | 美洲大蠊纳米提取物及其制备方法 | |
| CN100544736C (zh) | 一种增强免疫力的药物组合物及制备方法 | |
| CN112603920A (zh) | 一种中药川楝素在制备防治神经系统胶质瘤产品中的应用 | |
| CN105999245B (zh) | 含乌司他丁的药物组合物在制备治疗胆囊癌药物中的用途 | |
| CN104840747B (zh) | 具有抗甲状腺癌活性的中药组合物及其制备方法和应用 | |
| CN105168300A (zh) | 一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法 | |
| CN111228319A (zh) | 鸦胆子提取物及其制备方法和在防治乳腺癌方面的应用 | |
| CN116327857B (zh) | 一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物及其制备方法和应用 | |
| KR102669262B1 (ko) | 벼메뚜기 추출물 또는 쌍별귀뚜라미 추출물을 유효성분으로 함유하는 자폐 스펙트럼 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
| CN115607596B (zh) | 一种具有降尿酸作用的养生酒及其制备方法 | |
| CN110215469B (zh) | 一种治疗胆管癌的药物组合物 | |
| CN115400176B (zh) | 荔枝核提取物的制备方法和应用 | |
| CN107019771A (zh) | 一种抗肿瘤的中药组合物 | |
| WO2022222388A1 (zh) | L-山梨糖在制备治疗肿瘤的药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |