UA121656C2 - Олігомерна сполука та спосіб лікування захворювання, пов'язаного з порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу - Google Patents

Олігомерна сполука та спосіб лікування захворювання, пов'язаного з порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу Download PDF

Info

Publication number
UA121656C2
UA121656C2 UAA201612124A UAA201612124A UA121656C2 UA 121656 C2 UA121656 C2 UA 121656C2 UA A201612124 A UAA201612124 A UA A201612124A UA A201612124 A UAA201612124 A UA A201612124A UA 121656 C2 UA121656 C2 UA 121656C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
oligomeric compound
disease
antisense
nucleic acid
compound
Prior art date
Application number
UAA201612124A
Other languages
English (en)
Inventor
Тхазха П. Пракаш
Пуніт П. Сетх
Пунит П. Сетх
Ерік Е. Свайзе
Эрик Э. Свайзе
Тамар Р. Ґроссман
Тамар Р. Гроссман
Майкл Л. МакКелеб
Майкл Л. МакКэлеб
Ендрю Т. Уотт
Эндрю Т. Уотт
Сьюзан М. Фреєр
Сьюзан М. Фрэер
Original Assignee
Айоніс Фармасьютикалз, Інк.
Айонис Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Айоніс Фармасьютикалз, Інк., Айонис Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Айоніс Фармасьютикалз, Інк.
Publication of UA121656C2 publication Critical patent/UA121656C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/555—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound pre-targeting systems involving an organic compound, other than a peptide, protein or antibody, for targeting specific cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21047—Alternative-complement-pathway C3/C5 convertase (3.4.21.47), i.e. properdin factor B
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Винахід стосується олігомерної сполуки, композиції для інгібування експресії фактора комплементу В (CFB), яка містить дану сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль, способу лікування захворювання, пов'язаного з порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу у суб'єкта, та застосування олігомерної сполуки або композиції для виготовлення лікарського засобу для лікування вказаного захворювання.

Description

(54) ОЛІГОМЕРНА СПОЛУКА ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ ЗАХВОРЮВАННЯ, ПОВ'ЯЗАНОГО з
ПОРУШЕННЯМ РЕГУЛЯЦІЇ АЛЬТЕРНАТИВНОГО ШЛЯХУ КОМПЛЕМЕНТУ
(57) Реферат:
Винахід стосується олігомерної сполуки, композиції для інгібування експресії фактора комплементу В (СЕВ), яка містить дану сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль, способу лікування захворювання, пов'язаного з порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу у суб'єкта, та застосування олігомерної сполуки або композиції для виготовлення лікарського засобу для лікування вказаного захворювання.
Перелік послідовностей
Цей винахід зареєстровано разом з переліком послідовностей в електронному форматі.
Перелік послідовностей представлений у вигляді файлу під назвою ВІОЇ 0251УМО5БО 57Т25.4Х, створеного 28 квітня 2015 року, розміром 204 Кб. Інформація про перелік послідовностей в електронному форматі в повному обсязі включена в цей документ шляхом посилання.
Галузь техніки
У варіантах реалізації цього винаходу запропоновані способи, сполуки та композиції для лікування, попередження або полегшення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, за допомогою введення суб'єкту специфічного інгібітору фактора комплементу В (СЕВ).
Рівень техніки
Система комплементу являє собою частину вродженої імунної системи хазяїна, що бере участь у лізингу чужорідних клітин, посиленні фагоцитозу антигенів, агрегації агентів, що несуть антигени і притягненні макрофагів і нейтрофілів. Систему комплементу підрозділяють на три шляхи ініціації - класичний, лектиновий та альтернативний шляхи - які сходяться у компоненту
СЗ з утворенням ферментного комплексу, відомого як СЗ-конвертаза, яка розщеплює СЗ на СЗа і С3р. СЗ3р через СЕВ зв'язується з СЗ-конвертазою і призводить до утворення С5-конвертази, що розщеплює С5 на Сба і С5р, що ініціює мембраноатакуючий каскад, що приводить до формування мембраноатакуючого комплексу (МАС), який містить компоненти С5Б, Сб, С7, Св і
С9. Мембраноатакуючий комплекс (МАС) утворює трансмембранні канали і руйнує фосфоліпідний подвійний шар клітин-мішеней, що призводить до лізису клітин.
У гомеостатичному стані альтернативний шлях безперервно активується на нижньому "холостому" рівні в результаті альтернативного шляху активації спонтанним гідролізом СЗ і виробленням СЗБ, який утворює С5-конвертазу.
Суть винаходу
Система комплементу опосередковує вроджений імунітет і відіграє важливу роль у нормальній запальній реакції на травму, але її дизрегуляція може викликати важке пошкодження. Активація альтернативного шляху комплементу вище конститутивного "холостого" рівня може призводити до необмеженої гіперактивності і прояву у формі
Зо захворювань дизрегуляції комплементу.
Деякі варіанти реалізації винаходу відносяться до способів лікування, попередження або полегшення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, у суб'єкта шляхом введення специфічного інгібітору фактора комплементу В (СЕВ). Деякі варіанти реалізації, запропоновані в цьому документі, відносяться до способу інгібування експресії СЕВ у суб'єкта, який страждає або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, за допомогою введення суб'єкту специфічного інгібітору СЕВ. У деяких варіантах реалізації винаходу спосіб зниження або інгібування накопичення відкладень СЗ в оці суб'єкта, який страждає або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту специфічного інгібітору СЕВ. У деяких варіантах реалізації винаходу спосіб зниження або інгібування накопичення відкладення СЗ3 в нирках суб'єкта, страждає або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту специфічного інгібітору СЕВ.
Детальний опис винаходу
Слід розуміти, що наведений вище загальний опис і наступний докладний опис є лише зразковими і пояснювальними, і не обмежують заявлений винахід. У цьому документі використання однини включає множину, якщо спеціально не зазначено інше. При використанні в цьому документі, термін "або" означає "та/або" якщо не зазначено інше. Крім того, використання терміна "включаючи", а також інших форм, таких як "включає" і "включений", не є обмежуючим. Також, такі терміни як "елемент" або "компонент" охоплюють як елементи і компоненти, що містять одну одиницю, так і елементи і компоненти, які містять більше однієї субодиниці, якщо спеціально не зазначено інше.
Назви розділів, що використовуються в цьому документі, призначені лише для організаційних цілей, і їх не слід тлумачити як обмеження описаного об'єкта винаходу. Всі документи або частини документів, наведених у цій заявці, включаючи, без обмеження, патенти, патентні заявки, статті, книги і трактати, в явній формі включені в цей документ шляхом посилання у відношенні частин документів, обговорюваних у цьому описі, а також у повному обсязі.
При відсутності конкретних визначень, номенклатура, використовувана у зв'язку з ними, а бо також у зв'язку з прийомами і методиками аналітичної хімії, синтетичної органічної хімії, а також медичної та фармацевтичної хімії описана в цьому документі, є загальновідомою та загальноприйнятою в цій галузі техніки. Для хімічного синтезу та хімічного аналізу можуть бути використані стандартні методики. Деякі такі методики і прийоми представлені, наприклад, у публікаціях "СагроПпуадгаїе Модійсайопе іп Апіїзепхе Кезеагсй" під редакцією Запдмі і Соок,
Атегісап Спетіса! 5осієїу, федеральний округ Вашинітон, 1994; "Кетіпдіоп'є Рпагтасешісаї зЗсіепсе5, » Маск Рибіїзпіпд Со., Істон, штат Пенсільванія, 212 видання, 2005; "Апіїзхепзе ЮОгид
Тесппооду, Ргіпсіріе5, Зігагедіеєз, апа Арріїсайопе" під редакцією 5іапіеу Т. СтооКе, СКС Ргев5,
Боки-Ратон, штат Флорида; а також у книзі затюогоок еї аї., "Моїесшаг СіІопіпуд, А Іабогафгу
Мапиаї, » 22 видання, Сода Зргіпд Нагрог І абогагу Ргез5, 1989, які включені в цей документ шляхом посилання для усіх цілей. Якщо це допустимо, всі патенти, заявки, опубліковані заявки та інші публікації, а також інші дані, що згадуються в тексті цього опису, включені в цей документ шляхом посилання в повному обсязі.
Якщо не вказано інше, такі терміни мають такі значення: "2-Е нуклеозид" відноситься до нуклеозиду, який містить цукор, що містить фтор у 2- положенні. Якщо не вказано інше, то фтор у 2'-Е нуклеозиді знаходиться в рибо-положенні (замінюючи ОН природної рибози). "2-О-метоксіетил" (також 2-МОЕ і 2-О(СНг)»-ОСН»а) відноситься до О-метоксіетил модифікації у 2 положенні фуранозного кільця. 2'-О-метоксіетил-модифікований цукор являє собою модифікований цукор. "2-МОЕ нуклеозид" (також 2'-О-метоксіетил-нуклеозид) означає нуклеозид, що містить 2'-
МОЕ модифікований цукровий фрагмент. "2-заміщений нуклеозид" означає нуклеозид, що містить замісник у 2'-положенні фуранозного кільця, відмінний від Н або ОН. У деяких варіантах реалізації 2'-заміщені нуклеозиди включають нуклеозиди з біциклічними цукровими модифікаціями. "3 Сайт-мішень" позначає нуклеотид нуклеїнової кислоти-мішені, комплементарний 3'- крайньому нуклеотиду конкретної антисмислової сполуки. "Б Сайт-мішень" позначає нуклеотид нуклеїнової кислоти-мішені, комплементарний 5'- крайньому нуклеотиду конкретної антисмислової сполуки. "Б-метилцитозин" означає цитозин модифікований метильною групою в 5 положенні. 5-
Зо метилцитозин являє собою модифіковану азотисту основу. "Близько" означає в межах ж10 95 від значення. Наприклад, якщо вказано, що "сполуки викликають щонайменше близько 70 95 інгібування СЕВ", мається на увазі, що рівні СЕВ інгібуються в межах 60-80 95. "Вводити" або "введення" відноситься до способів введення суб'єкту антисмислової сполуки, запропонованої в цьому документі, для виконання його призначеної функції. Приклад способу введення, який може бути використаний, включає, без обмеження, парентеральне введення, таке як підшкірна, внутрішньовенна або внутрішньом'язова ін'єкція або інфузія. "Алкіл" у цьому контексті означає насичений нерозгалужений або розгалужений вуглеводневий радикал, що містить до двадцяти чотирьох атомів вуглецю. Приклади алкільних груп включають, без обмежень, метил, етил, пропіл, бутил, ізопропіл, н-гексил, октил, децил, додецил і т. п. Алкільні групи зазвичай містять від 1 до близько 24 атомів вуглецю, більш часто від 1 до близько 12 атомів вуглецю (С1-С12 алкіл), більш переважно від 1 до близько 6 атомів вуглецю.
У цьому контексті "алкеніл" означає нерозгалужений або розгалужений вуглеводневий радикал, що містить до двадцяти чотирьох атомів вуглецю і має щонайменше один подвійний вуглець-вуглецевий зв'язок. Приклади алкенільних груп включают, без обмеження, етеніл, пропеніл, бутеніл, 1-метил-2-бутен-1-іл, дієни, такі як 1,3-бутадієн і т. п. Алкенільні групи зазвичай містять від 2 до близько 24 атомів вуглецю, більш часто від 2 до близько 12 атомів вуглецю, більш переважно від 2 до 6 атомів вуглецю. Алкенільні групи, що використовуються в цьому документі, можуть додатково містити одну або більше додаткових груп замісників.
У цьому контексті "алкініл" означає нерозгалужений або розгалужений вуглеводневий радикал, що містить до двадцяти чотирьох атомів вуглецю і має щонайменше один потрійний вуглець-вуглецевий зв'язок. Приклади алкінільних груп включают, без обмеження, етиніл, 1- пропініл, 1-бутиніл і т. п. Алкінільні групи зазвичай містять від 2 до близько 24 атомів вуглецю, більш часто від 2 до близько 12 атомів вуглецю, більш переважно від 2 до 6 атомів вуглецю.
Алкінільні групи, що використовуються в цьому документі, можуть додатково містити одну або більше додаткових груп замісників.
У цьому контексті "ацил" означає радикал, утворений за рахунок видалення гідроксильної групи від органічної кислоти, і має загальну формулу -С(О0)-Х, де Х зазвичай є аліфатичним, бо аліциклічним або ароматичним. Приклади включають аліфатичні карбоніли, ароматичні карбоніли, аліфатичні сульфоніли, ароматичні сульфініли, аліфатичні сульфініли, ароматичні фосфати, аліфатичні фосфати і т. п. Ацильні групи, що використовуються в цьому документі, можуть додатково містити додаткові групи замісників.
У цьому контексті "аліциклічна" означає циклічну кільцеву систему, в якій кільце є аліфатичним. Кільцева система може містити одне або більше кілець, при цьому щонайменше одне кільце є аліфатичним. Переважні аліциклічні системи включають кільця, що мають від близько 5 до близько 9 атомів вуглецю в кільці. Ацліциклічні групи, що використовуються в цьому документі, можуть додатково містити додаткові групи замісників.
У цьому контексті "аліфатичний" означає нерозгалужений або розгалужений вуглеводневий радикал, що містить до двадцяти чотирьох атомів вуглецю, в якому насиченість між будь-якими двома атомами вуглецю являє собою одинарний, подвійний або потрійний зв'язок. Аліфатична група переважно містить від 1 до близько 24 атомів вуглецю, більш часто від 1 до близько 12 атомів вуглецю, більш переважно від Її до близько б атомів вуглецю. Нерозгалужений або розгалужений ланцюг аліфатичної групи може бути перерваним одним або більше гетероатомами, що включають азот, кисень, сірку і фосфор. Такі аліфатичні групи, перервані гетероатомами, що включають, без обмежень, поліалкокси, такі як поліалкіленгліколі, поліаміни і поліїміни. Аліфатичні групи, що використовуються в цьому документі, можуть додатково містити додаткові групи замісників.
У цьому контексті "алкокси" означає радикал, утворений між алкільною групою та атомом кисню, при цьому атом кисню використовується для приєднання алкокси-групи до початкової молекули. Приклади алкокси-груп включають, без обмежень, метокси, етокси, пропокси, ізопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентокси, неопентокси, н-гексокси і т. п.
Алкокси-групи, що використовуються в цьому документі, можуть додатково містити додаткові групи замісників.
У цьому контексті "аміноалкіл" означає амінозаміщений С1-С12 алкільний радикал. Алкільна частина зазначеного радикала утворює ковалентний зв'язок із початковою молекулою.
Аміногрупа може бути розташована в будь-якому положенні, і аміноалкільна група може бути заміщена додатковою групою замісника алкільної та/або аміно-частини.
У цьому контексті "аралкіл" і "арилалкіл" означає ароматичну групу, яка ковалентно зв'язана
Зо з С1-С12 алкільним радикалом. Частина алкільного радикала утвореної аралкільної (або арилалкільної) групи утворює ковалентний зв'язок із початковою молекулою. Приклади включають, без обмежень, бензил, фенетил і т. п. Аралкільні групи, що використовуються в цьому документі, можуть додатково містити додаткові групи замісників, приєднані до алкільної, арильної або до обох груп, які утворюють зазначену радикальну групу.
У цьому контексті "арил" і "ароматичний" означають радикали моно - або поліциклічної карбоциклічної кільцевої системи, які мають одно або більше ароматичних кілець. Приклади арильних груп включают, без обмеження, феніл, нафтіл, тетрагідронафтіл, інданіл, інденіл і т. п.
Переважні арильні кільцеві системи мають від близько 5 до близько 20 атомів вуглецю в одному або більше кільцях. Арильні групи, що використовуються в цьому документі, можуть додатково містити додаткові групи замісників. "Послаблення" відноситься до зменшення щонайменше одного показника, ознаки або симптому пов'язаного захворювання, розладу або патологічного стану. У деяких варіантах реалізації ослаблення включає відстрочку або уповільнення розвитку одного або більше показників патологічного стану або захворювання. Ступінь тяжкості показників може бути визначена суб'єктивними або об'єктивними показниками, які відомі фахівцям у цій області техніки. "Тварина" відноситься до людині або тварині, яка не є людиною, що включає, без обмеження, мишей, пацюків, кроликів, собак, котів, свиней і приматів, включаючи, без обмеження, мавп і шимпанзе. "Антисмислова активність" означає будь-яку активність, що детектується або піддається вимірюванню, зумовлену гібридизацією антисмислової сполуки з її нуклеїновою кислотою- мішенню. У деяких варіантах реалізації антисмислова активність являє собою зменшення кількості або експресії нуклеїнової кислоти-мішені або білка, який кодований такою нуклеїновою кислотою-мішенню. "Антисмислова сполука" означає олігомерну сполуку, яка здатна до гібридизації з нуклеїновою кислотою-мішенню за допомогою водневого зв'язку. Приклади антисмислових сполук включають одноланцюгові і дволанцюгові сполуки, такі як антисмислові олігонуклеотиди, міРНК, мшРНК, олРНК і сполуки на їх основі. "Антисмислове інгібування" означає зниження рівнів нуклеїнової кислоти-мішені в бо присутності антисмислової сполуки, комплементарної нуклеїновій кислоті-мішені, порівняно з рівнями нуклеїнової кислоти-мішені у відсутності антисмислової сполуки. "Антисмислові механізми" являють собою всі механізми, які беруть участь у гібридизації сполуки з нуклеїновою кислотою-мішенню, причому результат або ефект гібридизації являє собою розкладання мішені або окупацію мішені зі супутньою зупинкою клітинного апарату, включаючи, наприклад, транскрипцію або сплайсинг. "Антисмисловий олігонуклеотид" означає одноланцюговий олігонуклеотид, який має послідовність азотистих основ, що забезпечує можливість гібридизації з відповідною ділякою або сегментом нуклеїнової кислоти-мішені. "Комплементарність основи" відноситься до здатності спарювання конкретної пари азотистих основ антисмислового олігонуклеотида з відповідними азотистими основами у нуклеїновій кислоті-мішені (тобто гібридизації), опосередкованої уотсон-криковським, хугстиновским або зворотним хугстиновским водневим зв'язуванням між відповідними азотистими основами. "Біциклічний цукровий фрагмент" означає модифікований цукровий фрагмент, що містить 4- 7--ленне кільце (включаючи, без обмеження, фуранозил), що містить місток, що зв'язує два атоми 4-7-членного кільця з утворенням другого кільця, що приводить до отримання біциклічної структури. У деяких варіантах реалізації 4-7--ленне кільце являє собою цукрове кільце. У деяких варіантах реалізації 4-7-ч-ленне кільце являє собою фуранозил. У деяких таких варіантах реалізації місток з'єднує 2'-вуглець і 4'-вуглець фуранозилу. "Біциклічна нуклеїнова кислота" або "БНК" або "БНК нуклеозид" означає, що мономери нуклеїнової кислоти мають місток, що з'єднує два атоми вуглецю між 4" і 2' положеннями нуклеозидної цукрової одиниці, тим самим утворюючи біциклічний цукор. Приклади такого біциклічного цукру включають, без обмеження, А) а-І -метиленокси (4-СН2-0-2) ЗНК, (В) В-0- метиленокси (4-СНг-0-23 ЗНК, (С) етиленокси (4-(СНг)2-0-23 ЗНК, (0) аміноокси (4-СНе»-О-
М(Н)-2 ЗНК і (Е) оксиаміно (4-СНо-М(НА)-О-2) ЗНК, як показано нижче. :
ВХ Вх о Вх ої Вх ; о і О. ,Вх ! о : г: о М. о Тем ВЕ мл то -а я, х чу пл, лі Кк (А) (В) (с (5) (Б)
У цьому контексті сполуки ЗНК включають, без обмеження, сполуки, які мають щонайменше один місток між 4" і 2 положеннями цукру, причому кожен з містків незалежно містить 1 або від 2 до 4 зв'язаних груп, незалежно вибраних з -ІС(В:)(Р2г)н-, -С(В1)-С(А2)-, -С(В1і)-М-, -С(-МВА)-, -
Зо Ф(-0)-, -б(-5) -, О-, -5І(В1)2-, -5(-0)х - -М(В1)-; де: х дорівнює 0, 1 або 2; п дорівнює 1, 2, З або 4; кожен К: Во незалежно являє собою Н, захисну групу, гідроксил, С1-С:2 алкіл, заміщений С1-С12 алкіл, С2-С:і2 алкеніл, заміщений С2-С:12 алкеніл, С2-С:і2 алкініл, заміщений С2-С:2 алкініл, С5-Сго арил, заміщений С5-Сго арил, гетероциклічний радикал, заміщений гетероциклічний радикал, гетероарил, заміщений гетероарил, С5-С7 аліциклічний радикал, заміщений С5-С7 аліциклічний радикал, галоген, 0)ї, МУї9Уг, 591, Мз, СО, ацил (С(2О)-Н), заміщений ацил, СМ, сульфоніл (5(-0)2)ї) або сульфоксил (5(-0)-)1); і кожен 1 дУг незалежно являє собою Н, С1-Сі2 алкіл, заміщений С1-Сі2 алкіл, С2-С12 алкеніл, заміщений С2-С:12 алкеніл, С2-С12 алкініл, заміщений Со-
Сі2 алкініл, Св-Сго арил, заміщений С5-Сго арил, ацил (С(-О0)-Н), заміщений ацил, гетероциклічний радикал, заміщений гетероциклічний радикал, С1-С12 аміноалкіл, заміщений С1-
Сі2 аміноалкіл або захисну групу.
Приклади 4-2 місткових груп, що входять у визначення ЗНК, включають, без обмеження, одну з формул: -ІС(В:)(Аг)Ін-, -(С(АХ(Аг)н-О-, -С(А1А2)-М(А1)-О-ог -С(А1А2)-О-М(А1)-. Крім того, інші місткові групи, що входять у визначення ЗНК, являють собою містки 4-СНе-2", 4-(СНг)»-2", 4-(СНг)з-2, -СНо-О-2,. 4-(СНг)»-О-2,. 4-СНо-О-М(Ві)-2 її 42-СНо-М(НІ)-О-2-, де кожен Кі Рг незалежно являє собою Н, захисну групу або С.1-С-» алкіл.
Також у визначення ЗНК згідно з цим винаходом включені ЗНК, в яких 2'"-гідроксильна група рибозильного цукрового кільця з'єднана з 4" атомом вуглецю цукрового кільця, з утворенням таким чином містка метиленокси (4-СН2-0-2), формуючи біциклічний цукровий фрагмент.
Місток також може бути метиленовою групою (-СНег-), що з'єднує атом кисню 2" і атом вуглецю 4", до якої використовується термін метиленокси (4"-СН2-0-2) ЗНК. Крім того, у разі біциклічного цукрового фрагменту, що містить етиленову місткову групу в цьому положенні, застосовується термін етиленокси (4-СНаСНг-0-2) ЗНК. а -І -метиленокси (4-СНг-0-2), ізомер метиленокси (4"-
СНег-О-2) ЗНК, також потрапляє під визначення ЗНК у цьому контексті. "Кеп-структура" або "кеп-термінальний фрагмент" означає хімічні модифікації, які були зроблені з будь-якого кінця антисмислової сполуки. "Вуглевод" означає природний вуглевод, модифікований вуглевод або похідне вуглеводу. "Вуглеводний кластер" означає сполуку, що має один або більше вуглеводних залишків, приєднаних до скелету або лінкерної групи. (див., наприклад, Маїег еї аї., "Зупіпевів ої Апііхепзе
Оїїдописіеоїіде5 Сопішдатва 0 а Мийімаїепі Сагропуайгаєтє Сіие(ег їТог СейЙшШаг Тагудейпд, »
Віосопіндаїє СПетівму, 2003, (14): 18-29, повний зміст якої включено у цей документ за допомогою посилання, або Кепзеп еї а!., "Оезідп апа Зупіпевіз5 ої Моме! М-АсеїуІдаіасіозатіпе-
Тептіпаїєйа сСіусоїїріах Тог Тагдейіпд ої Гіроргоїеїіп5 То Ше Нераїйс Азіадіусоргоївіп Кесеріог, » 5.
Меа. Спет. 2004, (47): 5798-5808, де представлені приклади вуглеводних зв'язаних кластерів). "Похідне вуглеводу" означає будь-яку сполуку, яка може бути синтезована з використанням вуглеводу в якості вихідного матеріалу або проміжної сполуки. "СЕР або "стерично утруднений етил" означає біциклічний цукровий фрагмент, який містить місток, що з'єднує 4"-вуглець і 2'-вуглець, причому місток має формулу: 4-СН(СНз)-О-27. "Хімічна модифікація" означає хімічну відмінність у сполуці, порівняно з природним аналогом. Хімічні модифікації олігонуклеотидів включають нуклеозидні модифікації (включаючи модифікації цукрового фрагмента і модифікації азотистої основи) і модифікації міжнуклеозидних лінкерів. У відношенні олігонуклеотиду хімічна модифікація включає не тільки відмінності в послідовності азотистих основ. "Зв'язок що розщеплюється" означає будь-який хімічний зв'язок, який може бути розщеплений. У деяких варіантах реалізації зв'язок, що розщеплюється обран з: аміду, поліаміду, естеру, ефіру, одного або обох естерів фосфодіефіру, фосфатного естеру, карбамату, дисульфіду або пептиду. "Фрагмент що розщеплюється" означає зв'язок або групу, яка може бути розщеплена при фізіологічних умовах. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється, розщеплюється всередині клітини або у внутрішньоклітинних відділах, таких як лізосома. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється, розщеплюється ендогенними ферментами, такими як нуклеази. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється містить групу атомів, яка має один, два, три, чотири або більше чотирьох зв'язків, що розщеплюються.
Зо "Кон'югат" або "група кон'югату" означає атом або групу атомів, зв'язану з олігонуклеотидом або олігомерною сполукою. Як правило, групи кон'югату модифікують одне або більше властивостей сполуки, до якої вони приєднані, включаючи, без обмеження, властивості фармакодинаміки, фармакокінетики, зв'язування, поглинання, клітинного розподілу, клітинного захоплення, заряду та/або виведення. "Лінкер кон'югату" або "лінкер" у контексті групи кон'югату означає частину групи кон'югату, що містить будь-який атом або групу атомів і яка ковалентно зв'язує (1) олігонуклеотид з іншою частиною групи кон'югату або (2) дві або більше частин групи кон'югату.
Групи кон'югату представлені в цьому документі як радикали, що забезпечують зв'язок для утворення ковалентного приєднання до оолігомерної сполуки, такої як антисмисловий олігонуклеотид. У деяких варіантах реалізації точка приєднання в олігомерній сполуці являє собою 3'-атом кисню 3'-гідроксильної групи 3'-кінцевого нуклеозиду олігомерної сполуки. У деяких варіантах реалізації точка приєднання в олігомерній сполуці являє собою 5'-атом кисню
Б'-гідроксильної групи 5'-кінцевого нуклеозиду олігомерної сполуки. У деяких варіантах реалізації зв'язок для утворення приєднання до олігомерної сполуки являє собою зв'язок, що розщеплюється. У деяких таких варіантах реалізації такий зв'язок, що розщеплюється, охоплює весь або частину фрагмента, що розщеплюється.
У деяких варіантах реалізації групи кон'югату містять фрагмент, що розщеплюється (наприклад, зв'язок, що розщеплюється або нуклеозид, що розщеплюється) і частину вуглеводного кластеру, таку як частина кластеру СаЇМАс. Така частина вуглеводного кластеру містить: фрагмент, що націлює і необов'язково лінкер кон'югату. У деяких варіантах реалізації частину вуглеводного кластеру визначають за кількістю і суттю ліганду. Наприклад, у деяких варіантах реалізації частина вуглеводного кластеру містить З групи саМАс і позначена "заіМмАс3З". У деяких варіантах реалізації частина вуглеводного кластеру містить 4 групи саіМмАс і позначена "саіМАса4". Конкретні частини вуглеводних кластерів (мають конкретну зв'язку, групи розгалуження і лінкера кон'югату) описані в цьому документі і позначені римською цифрою з подальшим нижнім індексом "а". Відповідно, "заіМас3-Та" відноситься до конкретної частини вуглеводного кластеру групи кон'югату, що має З групи СаїМас і конкретно визначену зв'язку, групи розгалуження і лінкера. Такий фрагмент вуглеводного кластеру приєднаний до олігомерної сполуки через фрагмент, що розщеплюється, такий як зв'язок, що розщеплюється 60 або нуклеозид, що розщеплюється.
"Сполучена сполука" означає будь-які атоми, групи атомів або групу зв'язаних атомів, що підходить для застосування в якості групи кон'югату. У деяких варіантах реалізації парні сполуки можуть володіти або впливати на одне або більше властивостей, включаючи, без обмеження, властивості фармакодинаміки, фармакокінетики, зв'язування, абсорбції, клітинного розподілу, клітинного захоплення, заряду та/або виведення. "Нуклеозид зі стерично утрудненим етилом" (також сЕїЇ нуклеозид) означає нуклеозид, що містить біциклічний цукровий фрагмент, який містить 4-СН(СНз)-О-2" місток. "Фактор комплементу В (СЕВ)» означає будь-яку нуклеїнову кислоту або білок СЕВ. "Нуклеїнова кислота СЕВ" означає будь-яку нуклеїнову кислоту, що кодує СЕВ. Наприклад, у деяких варіантах реалізації нуклеїнова кислота СЕВ включає послідовність ДНК, що кодує СЕВ, послідовність РНК, транскрибовану з ДНК, що кодує СЕВ (включаючи геномну ДНК, що містить інтрони та екзони), включаючи некодуючу білок (тобто некодуючу) послідовність РНК, і послідовність МРНК, що кодує СЕВ. "ИРНК СЕВ" означає мРНК, що кодує білок СЕВ. "Специфічний інгібітор СЕВ" відноситься до будь-якого агента, здатного специфічно інгібувати експресію РНК СЕВ та/або білка СЕВ або активність на молекулярному рівні.
Наприклад, СЕВ-специфічні інгібітори включають нуклеїнові кислоти (включаючи антисмислові сполуки), пептиди, антитіла, низькомолекулярні сполуки та інші агенти, здатні пригнічувати експресію РНК СЕВ та/або білка СЕВ. "Хімічно помітна ділянка" відноситься до ділянки антисмислової сполуки, яка в деякому роді хімічно відрізняється від іншої ділянки тієї ж антисмислової сполуки. Наприклад, ділянка, що містить 2'--О-метоксіетилові нуклеозиди, є хімічно відмінною від ділянки, що містить нуклеозиди без 2'-О-метоксіетилових модифікацій. "Химерна антисмислова сполука" означає антисмислову сполуку, яка має щонайменше 2 хімічно різних ділянки, кожна позиція має безліч субодиниць. "Комплементарність" означає здатність спарювання азотистих основ першої та другої нуклеїнових кислот. "Включати", "включає" і "той, що включає" слід розуміти як позначення включення зазначеної стадії або елемента або групи елементів або етапів, але не виключення будь-якого іншого елемента або стадії, або групи стадій або елементів.
Зо "Безперервні азотисті основи" означають азотисті основи, які безпосередньо примикають один до одного. "Дезоксинуклеозид" означає нуклеозид, що містить 2'-Н фуранозильний цукровий фрагмент, що знаходиться в природних дезоксирибонуклеозидах (ДНК). У деяких варіантах реалізації 2'- дезоксинуклеозид може містити модифіковану азотисту основу або може містити азотисту основу РНК (наприклад, урацил). "Дезоксирибонуклеотид" означає нуклеотид, що має водень у 2" положенні цукрової частини нуклеотиду. Дезоксирибонуклеотиди можуть бути модифіковані за допомогою будь-якого з безлічі замісників. "Конструювання" або "розробка" відноситься до процесу конструювання олігомерної сполуки, яка специфічно гібридизується з обраною молекулою нуклеїнової кислоти. "По-різному модифіковані" означає хімічні модифікації або хімічні замісники, які відрізняються один від одного, включаючи відсутність модифікацій. Так, наприклад, МОЕ нуклеозид і модифікований нуклеозид ДНК є "по-різному модифікованими", навіть незважаючи на те, що нуклеозид ДНК не є модифікованим. Точно так, ДНК і РНК є "по-різному модифікованими", навіть незважаючи на те, що обидва являють собою природні немодифіковані нуклеозиди. Нуклеозиди, які є однаковими, але містять різні азотисті основи, не є по-різному модифікованими. Наприклад, нуклеозид, що містить 2'-ОМе модифікований цукор і немодифіковану азотисту основу аденін, і нуклеозид, що містить 2'-ОМе модифікований цукор і немодифіковану азотисту основу тимін, не є по-різному модифікованими. "Дволанцюгові" відноситься до двох окремих олігомерних сполук, які гібридизовані одна з одною. Такі дволанцюгові сполуки можуть мати один або більше негібридизованих нуклеозидів з одного або обох кінців одного або обох ланцюгів (виступи) та/або один або більше внутрішніх негібридизованих нуклеозидів (невідповідностей), за умови, що існує достатня комплементарність для збереження гібридизації при фізіологічно релевантних умовах. "Ефективна кількість" означає кількість активного фармацевтичного агенту, достатню для досягнення бажаного фізіологічного результату у індивідуума, що має потребу в такому агенті.
Ефективна кількість може варіювати серед індивідуумів в залежності від здоров'я і фізичного стану індивіда, що підлягає лікуванню, таксономічної групи індивідуумів, що підлягають лікуванню, рецептури композиції, оцінки індивідуального стану здоров'я та інших релевантних бо факторів.
"Ефективність" означає здатність виробляти бажаний ефект. "Експресія" включає всі функції завдяки яким інформація, закодована в гені, перетворюється в структури, які присутні і функціонують у клітині. Такі структури включають, без обмеження, продукти транскрипції і трансляції. "Повністю комплементарний" або "100 95 комплементарний" означає, що кожна азотиста основа першої нуклеїнової кислоти має комплементарну азотисту основу у другій нуклеїновій кислоті. У деяких варіантах реалізації перша нуклеїнова кислота являє собою антисмислову сполуку, а нуклеїнова кислота-мішень являє собою другу нуклеїнову кислоту. "Фуранозил" означає структуру, що містить 5-ч-ленне кільце, що містить чотири атоми вуглецю та один атом кисню. "Гепмер" означає химерну антисмислову сполуку, в якій внутрішня ділянка, має безліч нуклеозидів, які підтримують розщеплення РНКазою Н, який розташовується між зовнішніми ділянками, що мають один або кілька нуклеозидів, причому нуклеозиди, які складають внутрішні ділянки, хімічно відрізняються від нуклеозиду або нуклеозидів, що складають зовнішні ділянки.
Внутрішня ділянка може бути описана як "геп", а зовнішні ділянки можуть бути описані як "крила". "Гало" і "галоген" означають атом, вибраний з фтору, хлору, брому та йоду. "Гетероарил" і "етероароматичний" означають радикал, що містить моно - або поліциклічне ароматичне кільце, кільцеву систему або конденсовану кільцеву систему, у якій щонайменше одне з кілець є ароматичним і містить один або більше гетероатомів. Гетероарил включає також конденсовані кільцеві системи, включаючи системи, в яких одно або більше з конденсованих кілець не містять гетероатомів. Гетероарильні групи, як правило, містять один кільцевий атом, вибраний з сірки, азоту або кисню. Приклади гетероарильних груп включают, без обмеження, піридиніл, піразиніл, піримідиніл, пірроліл, піразоліл, імідазоліл, тіазоліл, оксазоліл, ізоксазоліл, тіадіазоліл, оксадіазоліл, тіофеніл, фураніл, хінолініл, ізохінолініл, бензимідазоліл, бензоксазоліл, хіноксалініл і т. п. Гетероарильні радикали можуть бути приєднані до початкової молекули безпосередньо або через лінкерний фрагмент, такий як аліфатична група або гетероатом. Гетероарильні групи, що використовуються у цьому документі, можуть додатково містити додаткові групи замісників.
Зо "Гібридизація" означає сполучення комплементарних молекул нуклеїнових кислот. У деяких варіантах реалізації комплементарні молекули нуклеїнових кислот включають, без обмеження, антисмислові сполуки і нуклеїнову кислоту-мішень. У деяких варіантах реалізації комплементарні молекули нуклеїнових кислот включають, без обмеження, антисмисловий олігонуклеотид і нуклеїнову кислоту-мішень. "Ідентифікація тварини", що страждає або має ризик виникнення захворювання, розладу та/або патологічного стану" означає ідентифікацію тварини, якій поставлено діагноз захворювання, розладу та/або патологічного стану, або ідентифікацію тварини, схильної до розвитку захворювання, розладу та/або патологічного стану. Така ідентифікація може бути виконана будь-яким способом, включаючи оцінку історії хвороби індивідуума і стандартні клінічні випробування або оцінки. "Безпосередньо примикає" означає, що немає ніяких проміжних елементів між безпосередньо зв'язаними елементами. "Індивід" означає людину або тварину, що не є людиною, який вибран для лікування або терапії. "Інгібування експресії або активності" означає зниження, блокаду експресії або активності і не обов'язково говорить про повне припинення експресії або активності. "Міжнуклеозидний зв'язок" відноситься до хімічного зв'язку між нуклеозидами. "Міжнуклеозидна нейтральна лінкерна група" означає нейтральну лінкерну групу, яка безпосередньо зв'язує два нуклеозиди. "Міжнуклеозидна фосфорна лінкерна група" означає фосфорну лінкерну групу, яка безпосередньо зв'язує два нуклеозиди. "Подовжені" антисмислові олігонуклеотиди являють собою олігонуклеотиди, які мають один або більше додаткових нуклеозидів, порівняно з антисмисловим олігонуклеотидом, який описан у цьому документі. "Лінкерний мотив" означає характерну ділянку лінкерних модифікацій в олігонуклеотиді або його ділянці. Нуклеозиди такого олігонуклеотида можуть бути модифікованими або немодифікованими. Якщо не вказано інше, мотиви, які описують у цьому документі тільки лінкери, являють собою лінкерні мотиви. Отже, у таких випадках нуклеозиди не обмежені. "Зв'язаний дезоксинуклеозид" означає основу нуклеїнової кислоти (А, 0, С, Т, І), заміщену бо дезоксирибозою, зв'язану фосфатним ефіром, з утворенням нуклеотиду.
"Зв'язані нуклеозиди" означають сусідні нуклеозиди, зв'язані між собою міжнуклеозидним зв'язком. "Нуклеозид закритої нуклеїнової кислоти" або "ЗНК" означає нуклеозид, що містить біциклічний цукровий фрагмент, який містить місток 4-СН2-О-2". "Невідповідність" або "некомплементарна азотиста основа" відноситься до випадку, коли азотиста основа першої нуклеїнової кислоти не здатна зв'язуватися з відповідною азотистою основою другої або нуклеїнової кислоти-мішені. "Модифікований міжнуклеозидний зв'язок" означає заміну або будь-яку зміну природного міжнуклеозидного зв'язку (тобто фосфодіестерний міжнуклеозидний зв'язок). "Модифікована азотиста основа" означає будь яку азотисту основу, відмінну від аденіну, цитозину, гуаніну, тимідину або урацилу. "Немодифікована азотиста основа" означає пуринові основи: аденін (А) і гуанін (5), та піримідинові основи: тимін (Т), цитозин (С) і урацил (М). "Модифікований нуклеозид" позначає нуклеозид, що містить незалежно модифікований цукровий фрагмент і/або модифіковану азотисту основу. "Модифікований нуклеотид" означає нуклеотид, який містить незалежно модифікований цукровий фрагмент, модифікований міжнуклеозидний зв'язок або модифіковану азотисту основу. "Модифікований олігонуклеотид" позначає олігонуклеотид, що містить щонайменше оидн модифікований міжнуклеозидний зв'язок, модифікований цукор, та/або модифіковану азотисту основу. "Модифікований цукор" означає заміщення та/або заміну будь-якого з природних цукрових фрагментів. "Модуляція" відноситься до зміни або регулювання характеристики в клітині, тканині, органі або організмі. Наприклад, модуляція МРНК СЕВ може означати збільшення або зниження рівня
МРНК СЕВ та/або білка СЕВ у клітині, тканині, органі або організмі. "Модулятор" викликає зміни в клітині, тканині, органі або організмі. Наприклад, антисмислова сполука СЕВ може являти собою модулятор, який знижує кількість МРНК СЕВ та/або білка СЕВ у клітині, тканині, органі або організмі. "Мономер" означає одну ланку олігомеру. Мономери включають, без обмеження, нуклеозиди та нуклеотиди, природні або модифіковані. "Моно - або поліциклічна кільцева система" включає всі кільцеві системи, вибрані з поодиночних або поліциклічних радикальних кільцевих систем, в яких зазначені кільця конденсовані або зв'язані, і включає поодинокі або змішані кільцеві системи, індивідуально вибрані з аліфатичних, аліциклічних, арильних, гетероарильних, аралкільних, арилалкільних, гетероциклічних, гетероарильних, гетероароматичних і гетероарилалкільних. Такі моно - і поліциклічні структури можуть містити кільця, кожне з яких має однакову ступінь насиченості, або кожне незалежно має змінні ступені насиченості, включаючи повністю насичені, частково насичені або повністю ненасичені. Кожне кільце може містити кільцеві атоми, вибраніз С, М, О і
З з утворенням гетероциклічних кілець, а також кілець, що містять тільки кільцеві атоми С, які можуть бути представлені в змішаному мотиві, як, наприклад, у бензімідазолі, в якому одне кільце має тільки кільцеві атоми вуглецю, а конденсоване кільце має два атоми азоту. Моно - або поліциклічна кільцева система може бути додатково заміщена групами замісників, як, наприклад, фталімід, який має дві групи -О, приєднані до одного з кілець. Моно - або поліциклічні кільцеві системи можуть бути приєднані до початкових молекул за допомогою різних способів, таких як безпосередньо через кільцевий атом, шляхом конденсації через кілька кільцевих атомів, через групу замісника або через біфункціональний лінкерний фрагмент. "Мотив" означає конфігурацію з немодифікованих та модифікованих нуклеозидів у антисмисловій сполуці. "Природний цукровий фрагмент" означає фрагмент цукру, що знаходиться в ДНК (2'-Н) або
РНК (2-ОН). "Природний міжнуклеозидний зв'язок" означає 3'5' фосфодіестерний зв'язок. "Нейтральна лінкерна група" означає лінкерну групу, яка не має заряду. Нейтральні линкерні групи включають, без обмежень, фосфотриефіри, метилфосфонати, ММІ (-СН2-М(СНЗ)-О-), амід-3 /(-СН2-С(-0)-М(Н)-), амід-4 (-СН2-М(Н)-С(-0)-), формацеталь (-0О-СН2-0О-) і тіоформацеталь (-5-СН2-0-). Додаткові нейтральні групи включають неїонні лінкери, які містять силоксан (діалкілсилоксан), карбоксилатний ефір, карбоксамід, сульфід, сульфонатний ефір і аміди (див., наприклад: Сагропуагаїе Моайісайоп5 іп Апіїзепзе Кезеагсі; У. 5. запупмі апа Р.О. боок Ед5. АС5 Зутрозішт Зегіе5 580; глави З та 4, (сс. 40-65)). Додаткові нейтральні лінкерні групи включають неїонні лінкери, які містять змішані складові частини М, 0, 5 і СН». бо "Некомплементарна азотиста основа" відноситься до пари азотистих основ нуклеїнових кислот, які не утворюють водневих зв'язків один з одним, або іншим чином не підтримують гібридизацію. "Неміжнуклеозидна нейтральна лінкерна група" означає нейтральну лінкерну групу, яка не зв'язує безпосередньо два нуклеозиди. У деяких варіантах реалізації неміжнуклеозидна нейтральна лінкерна група зв'язує нуклеозид з групою, відмінною від нуклеозиду. У деяких варіантах реалізації неміжнуклеозидна нейтральна лінкерна група зв'язує дві групи, жодна з яких не є нуклеозидом. "Неміжнуклеозидна фосфорна лінкерна група" означає фосфорну лінкерну групу, яка не зв'язує безпосередньо два нуклеозиди. У деяких варіантах реалізації неміжнуклеозидна фосфорна лінкерна група зв'язує нуклеозид з групою, відмінною від нуклеозиду. У деяких варіантах реалізації неміжнуклеозидна фосфорна лінкерна група зв'язує дві групи, жодна з яких не є нуклеозидом. "Нуклеїнова кислота" означає молекули, що складаються з мономерних нуклеотидів.
Нуклеїнова кислота включає, без обмеження, рибонуклеїнові кислоти (РНК), дезоксирибонуклеїнові кислоти (ДНК), одноланцюгові нуклеїнові кислоти їх дволанцюгові нуклеїнові кислоти. "Азотиста основа" означає гетероциклічний фрагмент, здатний паруватися з основою іншої нуклеїнової кислоти. "Комплементарність азотистої основи" відноситься до азотистої основи, здатної до спаровування з іншою основою. Наприклад, у ДНК аденін (А) є комплементарним тиміну (Т).
Наприклад, у ДНК аденін (А) є комплементарним урацилу (0). У деяких варіантах реалізації комплементарна азотиста основа відноситься до азотистої основи антисмислової сполуки, здатної паруватися з азотистою основою своєї нуклеїнової кислоти-мішені. Наприклад, якщо азотиста основа в певному положенні антисмислової сполуки здатна до водневого зв'язування з азотистою основою в певному положенні нуклеїнової кислоти-мішені, то це положення водневого зв'язування між олігонуклеотидом і нуклеїновою кислотою-мішенню вважається комплементарним по цій парі азотистих основ. "Мотив модифікації азотистої основи" означає характерну ділянку модифікації азотистих основ вздовж олігонуклеотида. Якщо не вказано інше, то мотив модифікації азотистої основи не залежить від послідовності азотистої основи. "Послідовність азотистих основ" означає порядок послідовних азотистих основ, незалежний від будь-якого цукру, зв'язку та/або модифікації азотистої основи. "Нуклеозид" означає азотисту основу зв'язану з цукром. "Міметик нуклеозиду" включає структури, що використовуються для заміни цукру або цукру і основи і необов'язково зв'язку в одному або декількох положеннях олігомерної сполуки, наприклад, такі як міметики нуклеозидів, що містять морфоліно, циклогексеніл, циклогексіл, тетрагідропіраніл, біцикло або трицикло цукри-миметики, , наприклад, нефуранозні цукрові ланки. Нуклеотид-міметик включає структури, які використовуються для заміни нуклеозиду і зв'язку в одному або більше положеннях олігомерної сполуки, такі як, наприклад, пептидні нуклеїнові кислоти або морфоліно-сполуки (морфоліно-сполуки, зв'язані -М(Н)-С(-0)-О - або іншими нефосфодіестерним зв'язком). Замінник цукру перетинається більш широким терміном нуклеозид-міметик, але призначений для позначення заміни тільки цукрових одиниці (фуранозного кільця). Тетрагідропіранілові кільця, представлені у цьому документі, ілюструють приклад замінника цукру, в якому цукрова фуранозна група замінена тетрагідропіранільною кільцевою системою. "Міметик" відноситься до груп, які замінюють цукор, азотисту основу і/або міжнуклеозидний зв'язок. Як правило, міметик використовують замість цукру або комбінації цукру з міжнуклеозидним зв'язком, а азотиста основа зберігається для гібридизації з обраною мішенню. "Нуклеозидний мотив" означає характерну ділянку нуклеозидних модифікацій в олігонуклеотиді або його області. Зв'язки такого олігонуклеотиду можуть бути модифікованими або немодифікованими. Якщо не вказано інше, мотиви, які описують у цьому документі тільки нуклеозиди, являють собою нуклеозидні мотиви. Отже, в таких випадках не обмежені. "Нуклеотид" означає нуклеозид, що має фосфатну групу, ковалентно зв'язану з цукровою частиною нуклеозиду. "Олігомерна сполука" означає полімер із зв'язаних мономерних субодиниць, які здатні до гібридизації зі щонайменше областю молекули нуклеїнової кислоти. "Олігонуклеозид" означає олігонуклеотид, в якому жоден з міжнуклеозидних зв'язків не містить атома фосфору. "Олігонуклеотид" означає полімер зв'язаних нуклеозидів, кожен з яких може бути 60 модифікованим або немодифікованим, незалежно один від одного.
"Парентеральне введення" означає введення шляхом ін'єкцій або інфузій. Парентеральне введення включає підшкірне введення, внутрішньовенне введення, внутрішньом'язове введення, внутрішньоартеріальне введення, внутрішньоочеревинне введення або внутрішньочерепне введення, наприклад, інтратекальне або інтрацеребровентрикулярне введення. "Фармацевтична композиція" означає суміш речовин, придатних для введення індивідууму.
Наприклад, фармацевтична композиція може містити один або більше активних фармацевтичних агентів і стерильний водний розчин. "Фармацевтично прийнятні солі" позначає фізіологічно і фармацевтично прийнятні солі антисмислових сполук, тобто солі, які зберігають бажану біологічну активність вихідного олігонуклеотиду і не викликають небажаних токсикологічних ефектів. "Тофосфатний зв'язок" означає зв'язок між нуклеозидами, де фосфодіестерні зв'язки модифіковані шляхом заміни одного з немісткових атомів кисню на атом сірки. Тофосфатний зв'язок являє собою модифікований міжнуклеозидний зв'язок. "Фосфорна лінкерна група" означає лінкерну групу, що містить атом фосфору. Фосфорні лінкерні групи включають, без обмежень, групи, які мають формулу: чл
Кк.
Ву В, йх де:
Ва і Ка, кожен незалежно являє собою 0, 5, СНег, МН або М, де уУї являє собою Сі1-Св алкіл або заміщений С.-Св алкіл;
Вь являє собою О або 5;
Вс являє собою ОН, 5Н, С1-Св алкіл, заміщений С1-Сє алкіл, Сі-Сє алкокси, заміщений С1-Св алкокси, аміно або заміщений аміно;
У: являє собою Рь являє собою О або 5.
Фосфорні лінкерні групи включають, без обмежень, фосфодіестер, тіофосфат, дитіофосфат, фосфонат, фосфорамідат, фосфортіоамідат, тіоноалкілфосфонат, фосфотриефіри, тіоноалкіл- фосфотриефір і боранофосфат. "Частина" означає певну кількість суміжних (тобто зв'язаних) азотистих основ нуклеїнової кислоти. У деяких варіантах реалізації частина являє собою певне число суміжних азотистих
Зо основ нуклеїнової кислоти-мішені. У деяких варіантах реалізації частина являє собою певне число суміжних азотистих основ антисмислової сполуки. "Попереджати" відноситься до затримки або запобігання появи, розвитку або прогресування захворювання, розладу або патологічного стану протягом періоду часу від декількох хвилин до невизначеного терміну. Попередження означає також зниження ризику розвитку захворювання, розладу або патологічного стану. "Проліки" означає неактивну або менш активну форму сполуки, яка при введенні суб'єкту метаболізується з утворенням активної або більш активної сполуки (наприклад, ліки). "Профілактично ефективна кількість" означає таку кількість фармацевтичного агента, яка забезпечує профілактичний або превентивний ефект для тварини. "Захисна група" означає будь-яку сполуку або захисну групу, відому фахівцям у цій галузі техніки. Необмежуючі приклади захисних груп представлені у книзі "Ргоїесіїме сгоимрз іп Огдапіс
Спетівігу", Т. МУ. Сгеепе, Р. С. М. М/шїв, ІЗВМ 0-471-62301-6, допп Умієу 5 бопв, Іпс, Нью-Йорк, повний зміст якої включено в цей документ шляхом посилання. "Ділянка" визначається як фрагмент нуклеїнової кислоти-мішені, який має щонайменше одну ідентифіковану структуру, функцію або характеристику. "Рибонуклеотид" означає нуклеотид, що має гідрокси-групу у 2" положенні цукрового фрагменту нуклеотиду. Рибонуклеотиди можуть бути модифіковані за допомогою будь-якого з безлічі замісників. "Антисмислова сполука на основі КІЗС" означає антисмислову сполуку, в якій щонайменше частина антисмислової активності антисмислової сполуки обумовлена РнНкК-індукованим комплексом сайленсінгу (КІЗС). "Антисмислова сполука на основі РНКази Н" означає антисмислову сполуку в якій щонайменше частина антисмислової активності антисмислової сполуки обумовлена гібридизацією антисмислової сполуки з нуклесновою кислотою-мішенню і подальшим розщепленням нуклеїнової кислоти-мішені під дією РНКази Н.
"Сегменти" визначають як менші або субфрагменти ділянок у складі нуклеїнової кислоти- мішені. "Окремі ділянки" означають частини олігонуклеотиду, в яких хімічні модифікації або мотив хімічних модифікацій будь-якої із сусідніх частин містить щонайменше одну відмінність для забезпечення можливості розрізняти ділянки одну від одної. "Мотив послідовності" означає характерну ділянку азотистих основ, розташованих уздовж олігонуклеотиду або його частини. Якщо не вказано інше, то мотив послідовності не залежить від хімічних модифікацій і, отже, може мати будь-яку комбінацію хімічних модифікацій, включаючи відсутність хімічних модифікацій. "Побічні ефекти" означають фізіологічне захворювання і/або стан, зумовлені лікуванням, які відмінні від бажаного ефекту. У деяких варіантах реалізації побічні ефекти включають реакції в місці ін'єкції аномалії функціональних проб печінки, відхилення у функції нирок, гепатотоксичність, нефротоксичність, аномалії центральної нервової системи, міопатії і нездужання. Наприклад, підвищення рівнів амінотрансфераз у сироватці може вказувати на гепатотоксичність або порушення функції печінки. Наприклад, підвищений білірубін може вказувати на гепатотоксичність або порушення функції печінки. "Сайти" в цьому контексті визначають як унікальні положення азотистих основ у нуклеїнової кислоти-мішені. "Уповільнює прогресування" означає ослаблення розвитку зазначеного захворювання. "Специфічно гібридизується" позначає антисмислову сполуку, що має достатню міру комплементарності між антисмисловим олігонуклеотидом і нуклеїнової кислотою-мішенню, щоб викликати бажаний ефект, мінімально або ніяк не впливаючи на нецільові нуклеїнові кислоти в умовах, в яких специфічне зв'язування є бажаним, тобто, у фізіологічних умовах у випадку аналізів іп мімо та терапевтичного лікування. "Суворі умови гібридизації" або "жорсткі умови" означають умови, при яких олігомерна сполука гібридизується зі своєю цільовою послідовністю, але з мінімальною кількістю інших послідовностей. "Суб'єкт" означає людину або тварину, що не є людиною, обраного для лікування чи терапії. "Замісник" та "група замісника" означає атом або групу, яка витісняє атом або групу зазначеної вихідної сполуки. Наприклад, замісник модифікованого нуклеозиду являє собою
Зо будь-який атом або групу, яка відмінна від атома або групи, що знаходиться в природному нуклеозиді (наприклад, модифікований 2'-замісник являє собою будь-який атом або групу 2- положенні нуклеозиду, відмінну від Н або ОН). Групи замісників можуть бути захищеними або незахищеними. У деяких варіантах реалізації сполуки відповідно до цього опису мають замісники в одному або більш ніж в одному положенні вихідної сполуки. Замісники також можуть бути додатково заміщені іншими групами замісників і можуть бути приєднані безпосередньо або через лінкерну групу, таку як алкільна або вуглеводнева група, до сполуки.
Так само, у цьому контексті "замісник" стосовно хімічної функціональної групи означає атом або групу атомів, яка відмінна від атома або групи атомів, який зазвичай містяться у вказаній функціональній групі У деяких варіантах реалізації замісник витісняє атом водню функціональної групи (наприклад, у деяких варіантах реалізації замісник замісної метильної групи являє собою атом або групу, відмінну від водню, яка витісняє один або більше атомів водню незаміщеної метильної групи). Якщо не вказано інше, групи, які можуть бути використані в якості замісників, включають, без обмежень, галоген, гідроксил, алкіл, алкеніл, алкініл, ацил (-
С(О)Каа), карбоксил (-С(0)О-Каа), аліфатичні групи, аліциклічні групи, алкокси, заміщений окси (-О-Каа), арил, аралкіл, гетероциклічний радикал, гетероарил, гетероарилалкіл, аміно (М(КррХКсс)), іміно (-МКЬБ), амідо (С(О)М(КБЬХКсс) або МЩ(КЬВ)С(О)Каа), азідо (-М3), нітрит (МО2), ціано (-СМ), карбамідо (ОС(ОМ(КЬВХАсс) або М(КБЮС(О)ОКаа), уреїдо (Щер,С(ОМ(КЬЬ)Ксс)), тіоуреїдо (ЩО) С(5М(РЬВКсс)), гуанідиніл (ЩерЮС(-МКВОМ(КЬВ)Рсс)), амідиніл (С(-МКБВ)М(ЬВХКсс) або МБ) С(-МерЬ)(Каа)), тіол (-5КЬБ), сульфиніл (З(О)КБЬ), сульфоніл (-5Х0)2ЕЬБ) і сульфонаміділ (-5Х0)2М(КЬБЬ)(Ксс) або
М(КЬр)5(0)2КББ). Де кожен Каа, КрЬ і Ксс незалежно являє собою Н, необов'язково зв'язану хімічну функціональну групу або додаткову групу замісника, при цьому переважний перелік включає, без обмеження, алкіл, алкеніл, алкиніл, аліфатичні, алкокси, ацил, арил, аралкіл, гетероарил, аліциклічні, гетероциклічні та гетероарилалкіл. Обрані замісники в сполуках, описаних у цьому документі, перебувають у рекурсивному ступені. "Заміщений вуглеводний фрагмент" означає фуранозил, який не є природним цукровим фрагментом. Заміщені цукрові фрагменти включають, без обмеження, фуранозили, які містять замісники у 2'-положенні, 3'-положенні, 5'-положенні та/або 4"-положенні. Деякі заміщені цукрові фрагменти являють собою біциклічні цукрові фрагменти. бо "Цукровий фрагмент" означає природний цукровий фрагмент або модифікований цукровий фрагмент нуклеозиду. "Цукровий мотив" означає характерну ділянку цукрових модифікацій в олігонуклеотиді або його області. "Замінник цукру" означає структуру, яка не містить фуранозилу і здатна замінювати природний цукровий фрагмент нуклеозиду, так що нуклеозидні субодиниці які утворюються можуть зв'язуватися разом і/або зв'язуватися з іншими нуклеозидами з утворенням олігомерної сполуки, яка може гібридизуватися з комплементарною олігомерною сполукою. Такі структури включають кільця, які містять іншу кількість атомів, ніж фуранозил (наприклад, (наприклад, 4, 6 або 7-членні кільця); заміну кисню фуранозилу атомом, який не є киснем (наприклад, вуглецем, сіркою або азотом); або одночасну зміну кількості атомів і заміну кисню. Такі структури також можуть містити заміщення, відповідні заміщення, описаним для заміщених цукрових фрагментів (наприклад, б-членні карбоциклічні біциклічні замінники цукру, необов'язково містять додаткові замісники). Замінники цукру включають також більш складні цукрові заміни (наприклад, некільцеві системи пептидної нуклеїнової кислоти). Замінники цукру включають, без обмежень, морфоліно, циклогексеніли і циклогексити. "Мішень" позначає білок, модуляція якого є бажаною. "Ген-мішень" означає ген, що кодує білок-мішень. "Таргетінг" означає процес конструювання і вибору антисмислової сполуки, яка буде специфічно гібридизуватися з нуклеїновою кислотою-мішенню і викликати бажаний ефект. "Нуклеїнова кислота-мішень", "РНК-мішень", транскрипт РНК-мішені" і "цільова нуклеїнова кислота" означають нуклеїнову кислоту, здатну піддаватися цільовому впливу антисмислових сполук. "Цільова ділянка" означає фрагмент цільової нуклеїнової кислоти, на який націлене одна або більше антисмислових сполук. "Цільовий сегмент" означає послідовність нуклеотидів нуклеїнової кислоти-мішені, на яку націлене антисмислова сполука. "5 цільовий сайт" відноситься до 5'-крайнього нуклеотиду цільового сегмента. "3 цільовий сайт" відноситься до 3'-крайнього нуклеотиду цільового сегмента. "Кінцева група" означає один або більше атомів, приєднаних до будь-якого чи до обох 3'-
Зо або 5'-кінцях олігонуклеотиду. У деяких варіантах реалізації кінцева група являє собою групу кон'югату. У деяких варіантах реалізації кінцева група містить один або більше нуклеозидів кінцевої групи. "Кінцевий міжнуклеозидний зв'язок" означає зв'язок між останніми двома нуклеозидами олігонуклеотиду або його певної області. "Терапевтично ефективна кількість" означає кількість фармацевтичного агента, яка забезпечує терапевтичний ефект для індивідуума. "Лікування" означає введення композиції тварині для зміни або полегшення захворювання, розладу або патологічного стану тварини. У деяких варіантах реалізації тварині може бути введена одна або більше фармацевтичних композицій. "Немодифіковані" азотисті основи означають пуринові основи: аденін (А) і гуанін (С), і піримідинові основи: тимін (Т), цитозин (С) і урацил (М). "Немодифікований нуклеотид" означає нуклеотид, який складається з природних азотистих основ, цукрових фрагментів і міжнуклеозидних зв'язків. У деяких варіантах реалізації винаходу модифікований нуклеотид являє собою РНК нуклеотид (тобто В-ЮО-рибонуклеозиди) або ДНК нуклеотид (тобто В-Ю-дезоксирибонуклеозид).
Деякі варіанти реалізації винаходу
У деяких варіантах реалізації винаходу запропоновані способи, сполуки та композиції для інгібування експресії фактора комплементу В (СЕВ).
У деяких варіантах реалізації запропоновані антисмислові сполуки, спрямовані на нуклеїнову кислоту СЕВ. У деяких варіантах реалізації нуклеїнова кислота СЕВ має послідовність з номером доступу ЗЕМВАМК ММ 001710.5 (включену в цей документ як ЗЕО ІЮ
МО: 1), з номером доступу СЕМВАМК МТ 007592.15, усічену з нуклеотиду 31852000 по 31861000 (включену в цей документ як 5ЕБО ІО МО: 2), з номером доступу СЕМВАМК
МУУ 001116486.1, усічену з нуклеотиду 536000 по 545000 (включену в цей документ як ЗЕО ІЮ
МО: 3), з номером доступу ЗОЗЕМВАМК ХМ 001113553.2 (включену в цей документ як ЗЕО ІЮ МО: 4) або за номером доступу СЕМВАМК ММ 008198.2 (включену в цей документ як ЗЕО ІО МО: 5).
У деяких варіантах реалізації запропонована сполука, що містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить щонайменше 8 суміжних 60 азотистих основ будь-якої з послідовностей азотистих основ 5ЕО ІЮ МО: 6-808.
У деяких варіантах реалізації запропонована сполука, що містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить щонайменше 9 суміжних азотистих основ будь-якої з послідовностей азотистих основ 5ЕО ІЮ МО: 6-808.
У деяких варіантах реалізації запропонована сполука, що містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить щонайменше 10 суміжних азотистих основ будь-якої з послідовностей азотистих основ 5ЕО ІЮ МО: 6-808.
У деяких варіантах реалізації запропонована сполука, що містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить щонайменше 11 суміжних азотистих основ будь-якої з послідовностей азотистих основ 5ЕО ІЮ МО: 6-808.
У деяких варіантах реалізації запропонована сполука, що містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить щонайменше 12 суміжних азотистих основ будь-якої з послідовностей азотистих основ 5ЕО ІЮ МО: 6-808.
У деяких варіантах реалізації запропонована сполука, що містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить послідовність азотистих основ будь якої з 5ЕО ІЮ МО: 6-808.
У деяких варіантах реалізації запропонована сполука, що містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з послідовності азотистих основ 5ЕО ІЮ МО: 6-808.
У деяких варіантах реалізації запропонована сполука, що містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, комплементарних азотистим основам 30-49, 48-63, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-177, 480-499, 600-619, 638- 657, 644-663, 738-757, 1089-1108, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1150-1169, 1153-1172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1171-1186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-1190,
Зо 1175-1194, 1177-1196, 1183-1202, 1208-1227, 1235-1254, 1298-1317, 1304-1323, 1310-1329, 1316-1335, 1319-1338, 1322-1341, 1328-1347, 1349-1368, 1355-1374, 1393-1412, 1396-1415, 1399-1418, 1405-1424, 1421-1440, 1621-1640, 1646-1665, 1646-1665, 1647-1666, 1689-1708, 1749-1768, 1763-1782, 1912-1931, 2073-2092, 2085-2104, 2166-2185, 2172-2191, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195-2210, 2195-2214, 2196-2215, 2197-2212, 2197-2216, 2202-2221, 2223-2238, 2223-2242, 2225-2240, 2226-2245, 2227-2242, 2227-2246, 2238-2257, 2241-2260, 2267-2286, 2361-2380, 2388-2407, 2397-2416, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459-2474, 2459-2478, 2461-2476, 2461-2480, 2532-2551, 2550-2569, 2551-2566, 2551-2570, 2552-2568, 2552-2570, 2552-2571, 2553-2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-2570, 2555-2572, 2555-2574, 2556-2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2573, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559-2577, 2559-2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2576, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562-2581, 2563-2578, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567-2586, 2568-2583, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2585, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2586, 2571-2588, 2571-2590, 2572-2589, 2572-2590, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2590, 2574-2591, 2574-2593, 2575-2590, 2575-2591, 2575-2592, 2575-2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2595, 2577-2596, 2578-2594, 2578-2596, 2578-2597, 2579-2598, 2580-2596, 2580-2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2598, 2581-2599, 2581-2600, 2582-2598, 2582-2599, 2582-2600, 2582-2601, 2583-2599, 2583-2600, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2601, 2584-2602, 2584-2603, 2585-2601, 2585-2603, 2585-2604, 2586-2601, 2586-2602, 2586-2604, 2586-2605, 2587-2602, 2587-2603, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2603, 2588-2604, 2588-2605, 2588-2606, 2588-2607, 2589-2604, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589-2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2608, 2590-2609, 2590-2609, 2591-2607, 2591-2608, 2591-2609, 2591-2610, 2592-2607, 2592-2608, 2592-2609, 2592-2610, 2592-2611, 2593-2608, 2593-2609, 2593-2610, 2593-2612, 2594-2609, 2594-2610, 2594-2611, 2594-2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595-2611, 2595-2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2612, 2596-2613, 2596-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2615, 2599-2616, 2599-2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 60 2601-2616, 2601-2617, 2601-2618, 2601-2619, 2601-2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619,
2602-2620, 2602-2621, 2603-2618, 2603-2619, 2603-2620, 2603-2621, 2603-2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606-2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631 або 2616-2631 5ЕО ІО МО: 1, і при цьому зазначений модифікований олігонуклеотид щонайменше на 85 95, щонайменше на 90 95, щонайменше на 95 95 або на 100 95 комплементарний 5ЕО ІЮ МО: 1.
У деяких варіантах реалізації запропоновано сполуку, що містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, які мають послідовність азотистих основ, що містить частину з щонайменше 8 суміжних азотистих основ, комплементарних рівній по довжині частини азотистих основ 30-49, 48-63, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-177, 480-499, 600-619, 638-657, 644-663, 738-757, 1089-1108, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1150-1169, 1153-1172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1171-1186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-1190, 1175-1194, 1177-1196, 1183-1202, 1208-1227, 1235-1254, 1298-1317, 1304-1323, 1310-1329, 1316-1335, 1319-1338, 1322-1341, 1328-1347, 1349-1368, 1355-1374, 1393-1412, 1396-1415, 1399-1418, 1405-1424, 1421-1440, 1621-1640, 1646-1665, 1646-1665, 1647-1666, 1689-1708, 1749-1768, 1763-1782, 1912-1931, 2073-2092, 2085-2104, 2166-2185, 2172-2191, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195-2210, 2195-2214, 2196-2215, 2197-2212, 2197-2216, 2202-2221, 2223-2238, 2223-2242, 2225-2240, 2226-2245, 2221-2242, 2227-2246, 2238-2257, 2241-2260, 2267-2286, 2361-2380, 2388-2407, 2397-2416, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459-2474, 2459-2478, 2461-2476, 2461-2480, 2532-2551, 2550-2569, 2551-2566, 2551-2570, 2552-2568, 2552-2570, 2552-2571, 2553-2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-2570, 2555-2572, 2555-2574, 2556-2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2573, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559-2577, 2559-2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2576, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562-2581, 2563-2578, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567-2586, 2568-2583, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2585, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2586, 2571-2588, 2571-2590, 2572-2589, 2572-2590, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2590, 2574-2591, 2574-2593, 2575-2590, 2575-2591, 2575-2592, 2575-2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2595, 2577-2596, 2578-2594, 2578-2596, 2578-2597, 2579-2598, 2580-2596, 2580-2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2598, 2581-2599, 2581-2600, 2582-2598, 2582-2599, 2582-2600, 2582-2601, 2583-2599, 2583-2600, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2601, 2584-2602, 2584-2603, 2585-2601, 2585-2603, 2585-2604, 2586-2601, 2586-2602, 2586-2604, 2586-2605, 2587-2602, 2587-2603, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2603, 2588-2604, 2588-2605, 2588-2606, 2588-2607, 2589-2604, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589-2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2608, 2590-2609, 2590-2609, 2591-2607, 2591-2608, 2591-2609, 2591-2610, 2592-2607, 2592-2608, 2592-2609, 2592-2610, 2592-2611, 2593-2608, 2593-2609, 2593-2610, 2593-2612, 2594-2609, 2594-2610, 2594-2611, 2594-2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595-2611, 2595-2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2612, 2596-2613, 2596-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2615, 2599-2616, 2599-2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2618, 2601-2619, 2601-2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2618, 2603-2619, 5БОо 2603-2620, 2603-2621, 2603-2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606-2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631 або 2616-2631 5БО ІЮ МО: 1, і при цьому послідовність азотистих основ модифікованого олігонуклеотиду щонайменше на 85 95, щонайменше на 90 95, щонайменше на 95 95 або на 100 95 є комплементарною ЗЕО ІЮ МО: 1. бо У деяких варіантах реалізації запропоновано сполуку, що містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, комплементарних азотистим основам 1608-1627, 1685-1704, 1686-1705, 1751-1770, 1769-1784, 1871-1890, 1872-1891, 1873-1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1878-1897, 1879-1894, 1879-1898, 2288-2307, 2808-2827, 2846-2865, 2852-2871, 2946-2965, 3773-3792, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 3834-3853, 3837-3856, 3843-3862, 4151-4166, 4151-4170, 4153-4172, 4159-4178, 4184-4203, 4211-4230, 4609-4628, 4612-4631, 4615-4634, 4621-4640, 4642-4661, 4648-4667, 4686-4705, 4689-4708, 4692-4711, 4698-4717, 4714-4733, 5270-5289, 5295-5314, 5296-5315, 5830-5849, 5890-5909, 5904-5923, 6406-6425, 6662-6681, 6674-6693, 6954-6973, 6960-6979, 6977-6996, 6979-6998, 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 6984-7003, 6985-7000, 6985-7004, 6990-7009, 7122-7141, 7125-7144, 7151-7170, 7353-7372, 7362-7381, 7683-7702, 7688-7707, 7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7694-7713, 7696-7711, 7696-7715, 7767-7786, 7785-7804, 7786-7801, 7787-7803, 7787-7805, 7787-7806, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7805, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7808, 7792-7809, 7792-7810, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7811, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7820, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7821, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7825, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7825, 7810-7826, 7810-7827, 7810-7829, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7830, 7812-7831, 7813-7829, 7813-7831, 7813-7832, 7814-7833, 7815-7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7833, 7816-7834, 7816-7835, 7817-7833, 7817-7834, 7817-7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7836, 7819-7837, 7819-7838, 7820-7836, 7820-7838, 7820-7839, 7821-7836, 7821-7837, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7837, 7822-7838, 7822-7840, 7822-7841, 7823-7838, 7823-7839, 7823-7839, 7823-7840, 7823-7841, 7823-7842, 7824-7839, 7824-7840, 7824-7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824-7843, 7825-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7843, 7825-7844, 7826-7842, 7826-7843, 7826-7844, 7826-7845, 7827-7842, 7827-7843, 7827-7844, 7827-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7844,
Зо 7828-7845, 7828-7847, 7829-7844, 7829-7845, 7829-7846, 7829-7847, 7829-7848, 7830-7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7847, 7831-7848, 7831-7849, 7831-7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7853, 7838-7854, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861 або 7846-7862 5ЗЕО ІЮО МО: 2, і, при цьому вказаний модифікований олігонуклеотид щонайменше на 85 96, щонайменше на 90 95, щонайменше на 95 95 або на 100 95 є комплементарним 5ЕО ІЮ МО: 2.
У деяких варіантах реалізації запропоновано сполуку, що містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, які мають послідовність азотистих основ, що містить частину з щонайменше 8 суміжних азотистих основ, комплементарних рівній по довжині частини азотистих основ 1608-1627, 1685-1704, 1686-1705, 1751-1770, 1769-1784, 1871-1890, 1872-1891, 1873-1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1878-1897, 1879-1894, 1879-1898, 2288-2307, 2808-2827, 2846-2865, 2852-2871, 2946-2965, 3773-3792, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 3834-3853, 3837-3856, 3843-3862, 4151-4166, 4151-4170, 4153-4172, 4159-4178, 4184-4203, 4211-4230, 4609-4628, 4612-4631, 4615-4634, 4621-4640, 4642-4661, 4648-4667, 4686-4705, 4689-4708, 4692-4711, 4698-4717, 4714-4733, 5270-5289, 5295-5314, 5296-5315, 5830-5849, 5890-5909, 5904-5923, 6406-6425, 6662-6681, 6674-6693, 6954-6973, 6960-6979, 6977-6996, 6979-6998, 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 6984-7003, 6985-7000, 6985-7004, 6990-7009, 7122-7141, 7125-7144, 7151-7170, 7353-7372, 7362-7381, 7683-7702, 7688-7707, 7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7694-7713, 7696-7711, 7696-7715, 7767-7786, 7785-7804, 7786-7801, 7787-7803, 7787-7805, 7787-7806, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7805, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7808, 7792-7809, 7792-7810, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 60 7793-7812, 7794-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7811,
7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7820, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7821, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7825, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7825, 7810-7826, 7810-7827, 7810-7829, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7830, 7812-7831, 7813-7829, 7813-7831, 7813-7832, 7814-7833, 7815-7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7833, 7816-7834, 7816-7835, 7817-7833, 7817-7834, 7817-7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7836, 7819-7837, 7819-7838, 7820-7836, 7820-7838, 7820-7839, 7821-7836, 7821-7837, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7837, 7822-7838, 7822-7840, 7822-7841, 7823-7838, 7823-7839, 7823-7839, 7823-7840, 7823-7841, 7823-7842, 7824-7839, 7824-7840, 7824-7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824-7843, 7825-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7843, 7825-7844, 7826-7842, 7826-7843, 7826-7844, 7826-7845, 7827-7842, 7827-7843, 7827-7844, 7827-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7844, 7828-7845, 7828-7847, 7829-7844, 7829-7845, 7829-7846, 7829-7847, 7829-7848, 7830-7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7847, 7831-7848, 7831-7849, 7831-7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7853, 7838-7854, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861 і 7846-7862 5ЕО ІО МО: 2, і при цьому послідовність азотистих основ модифікованого олігонуклеотиду щонайменше на 85 95, щонайменше на 90 95, щонайменше на 95 95 або на 100 95 є комплементарною 5ЕО ІО МО: 2.
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані до області нуклеїнової кислоти СЕВ. У деяких варіантах реалізації такі сполуки або
Зо олігонуклеотиди, спрямовані до області нуклеїнової кислоти СЕВ, мають частину суміжних азотистих основ, яка комплементарна рівній по довжині частини азотистих основ зазначеної області. Наприклад, область може являти собою частину з щонайменше 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 суміжних азотистих основ, комплементарну однаковій за довжиною частині області, вказанної в цьому документі. У деяких варіантах реалізації сполука містить або складається з кон'югату і модифікованого олігонуклеотиду, спрямованого до будь-яких з наступних нуклеотидних областей 5ЕО ІЮ МО: 1: 30-49, 48-63, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-177, 480-499, 600-619, 638-657, 644-663, 738-757, 1089- 1108, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1150-1169, 1153-1172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1171-1186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-1190, 1175-1194, 1177-1196, 1183-1202, 1208-1227, 1235-1254, 1298-1317, 1304-1323, 1310-1329, 1316-1335, 1319-1338, 1322-1341, 1328-1347, 1349-1368, 1355-1374, 1393-1412, 1396-1415, 1399-1418, 1405-1424, 1421-1440, 1621-1640, 1646-1665, 1646-1665, 1647-1666, 1689-1708, 1749-1768, 1763-1782, 1912-1931, 2073-2092, 2085-2104, 2166-2185, 2172-2191, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195-2210, 2195-2214, 2196-2215, 2197-2212, 2197-2216, 2202-2221, 2223-2238, 2223-2242, 2225-2240, 2226-2245, 2227-2242, 2221-2246, 2238-2257, 2241-2260, 2267-2286, 2361-2380, 2388-2407, 2397-2416, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459-2474, 2459-2478, 2461-2476, 2461-2480, 2532-2551, 2550-2569, 2551-2566, 2551-2570, 2552-2568, 2552-2570, 2552-2571, 2553-2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-2570, 2555-2572, 2555-2574, 2556-2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2573, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559-2577, 2559-2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2576, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562-2581, 2563-2578, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567-2586, 2568-2583, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2585, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2586, 2571-2588, 2571-2590, 2572-2589, 2572-2590, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2590, 2574-2591, 2574-2593, 2575-2590, 2575-2591, 2575-2592, 2575-2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2595, 2577-2596, 2578-2594, 2578-2596, 2578-2597, 2579-2598, 2580-2596, 2580-2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2598, 2581-2599, 2581-2600, 2582-2598, 2582-2599, 2582-2600, 2582-2601, 2583-2599, 2583-2600, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2601, 2584-2602, 60 2584-2603, 2585-2601, 2585-2603, 2585-2604, 2586-2601, 2586-2602, 2586-2604, 2586-2605,
2587-2602, 2587-2603, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2603, 2588-2604, 2588-2605, 2588-2606, 2588-2607, 2589-2604, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589-2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2608, 2590-2609, 2590-2609, 2591-2607, 2591-2608, 2591-2609, 2591-2610, 2592-2607, 2592-2608, 2592-2609, 2592-2610, 2592-2611, 2593-2608, 2593-2609, 2593-2610, 2593-2612, 2594-2609, 2594-2610, 2594-2611, 2594-2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595-2611, 2595-2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2612, 2596-2613, 2596-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2615, 2599-2616, 2599-2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2618, 2601-2619, 2601-2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2618, 2603-2619, 2603-2620, 2603-2621, 2603-2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606-2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631 і 2616-2631.
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані до області нуклеїнової кислоти СЕВ. У деяких варіантах реалізації такі сполуки або олігонуклеотиди, спрямовані до області нуклеїнової кислоти СЕВ, мають частину суміжних азотистих основ, яка є комплементарною рівній по довжині частині азотистих основ вказаної області. Наприклад, область може являти собою частину з щонайменше 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 суміжних азотистих основ, комплементарну рівній по довжині частин області, вказаної в цьому документі. У деяких варіантах реалізації сполука містить або складається з кон'югату і модифікованого олігонуклеотиду, спрямованого до наступних нуклеотидних областей ЗЕО ІЮ
МО: 2: 1608-1627, 1685-1704, 1686-1705, 1751-1770, 1769-1784, 1871-1890, 1872-1891, 1873- 1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1878-1897, 1879-1894, 1879-1898, 2288-2307, 2808-2827, 2846-2865, 2852-2871, 2946-2965, 3773-3792, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 3834-3853, 3837-3856, 3843-3862, 4151-4166, 4151-4170, 4153-4172, 4159-4178, 4184-4203, 4211-4230, 4609-4628, 4612-4631, 4615-4634, 4621-4640, 4642-4661, 4648-4667, 4686-4705, 4689-4708, 4692-4711, 4698-4717, 4714-4733, 5270-5289, 5295-5314, 5296-5315, 5830-5849, 5890-5909, 5904-5923, 6406-6425, 6662-6681, 6674-6693, 6954-6973, 6960-6979, 6977-6996, 6979-6998, 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 6984-7003, 6985-7000, 6985-7004, 6990-7009, 7122-7141, 7125-7144, 7151-7170, 7353-7372, 7362-7381, 7683-7702, 7688-7707, 7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7694-7713, 7696-7711, 7696-7715, 7767-7786, 7785-7804, 7786-7801, 7787-7803, 7787-7805, 7787-7806, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7805, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7808, 7792-7809, 7792-7810, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7811, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7820, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7821, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7825, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7825, 7810-7826, 7810-7827, 7810-7829, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7830, 7812-7831, 7813-7829, 7813-7831, 7813-7832, 7814-7833, 7815-7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7833, 7816-7834, 7816-7835, 7817-7833, 7817-7834, 7817-7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7836, 7819-7837, 7819-7838, 7820-7836, 7820-7838, 7820-7839, 7821-7836, 7821-7837, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7837, 7822-7838, 7822-7840, 7822-7841, 7823-7838, 7823-7839, 7823-7839, 7823-7840, 7823-7841, 7823-7842, 7824-7839, 7824-7840, 7824-7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824-7843, 7825-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7843, 7825-7844, 7826-7842, 7826-7843, 7826-7844, 7826-7845, 7827-7842, 7827-7843, 7827-7844, 7827-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7844, 7828-7845, 7828-7847, 7829-7844, 7829-7845, 7829-7846, 7829-7847, 7829-7848, 7830-7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7847, 7831-7848, 7831-7849, 7831-7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 60 7837-7855, 7837-7856, 7838-7853, 7838-7854, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854,
7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861 і 7846-7862.
У деяких варіантах реалізації сполука містить або складається з кон'югату і модифікованого олігонуклеотиду, спрямованого на 3" НТО нуклеїнової кислоти СЕВ. у деяких аспектах модифікований олігонуклеотид спрямован на діапазон нуклеотидів 2574-2626 нуклеїнової кислоти СЕВ, що має послідовність азотистих основ 5ЕБЕО І МО: 1. У деякиьх аспектах модифікований олігонуклеотид має частину з щонайменше 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 суміжних азотистих основ, комплементарну рівній по довжині частині у діапазоні нуклеотидів 2576-2626 нуклеїнової кислоти СЕВ, яка має послідовність азотистих основ ЗЕО ІЮО МО: 1.
У деяких варіантах реалізації сполука містить або складається з кон'югату і модифікованого олігонуклеотиду, спрямованого на область нуклеїнової кислоти СЕВ, яка має послідовність азотистих основ 5ЕО ІЮО МО: 1 у діапазоні азотистих основ 2457-2631, 2457-2472, 2457-2474, 2457-2476, 2457-2566, 2457-2570, 2457-2571, 2457-2572, 2457-2573, 2457-2574, 2457-2575, 2457-2576, 2457-2577, 2457-2578, 2457-2579, 2457-2580, 2457-2581, 2457-2582, 2457-2583, 2457-2584, 2457-2585, 2457-2586, 2457-2587, 2457-2588, 2457-2589, 2457-2590, 2457-2591, 2457-2592, 2457-2593, 2457-2594, 2457-2595, 2457-2596, 2457-2597, 2457-2598, 2457-2599, 2457-2600, 2457-2601, 2457-2602, 2457-2603, 2457-2604, 2457-2605, 2457-2606, 2457-2607, 2457-2608, 2457-2609, 2457-2610, 2457-2611, 2457-2612, 2457-2613, 2457-2614, 2457-2615, 2457-2616, 2457-2617, 2457-2618, 2457-2619, 2457-2620, 2457-2621, 2457-2622, 2457-2623, 2457-2624, 2457-2625, 2457-2626, 2457-2627, 2457-2628, 2457-2629, 2457-2630, 2457-2631, 2459-2474, 2459-2476, 2459-2566, 2459-2570, 2459-2571, 2459-2572, 2459-2573, 2459-2574, 2459-2575, 2459-2576, 2459-2577, 2459-2578, 2459-2579, 2459-2580, 2459-2581, 2459-2582, 2459-2583, 2459-2584, 2459-2585, 2459-2586, 2459-2587, 2459-2588, 2459-2589, 2459-2590, 2459-2591, 2459-2592, 2459-2593, 2459-2594, 2459-2595, 2459-2596, 2459-2597, 2459-2598, 2459-2599, 2459-2600, 2459-2601, 2459-2602, 2459-2603, 2459-2604, 2459-2605, 2459-2606, 2459-2607, 2459-2608, 2459-2609, 2459-2610, 2459-2611, 2459-2612, 2459-2613, 2459-2614,
Зо 2459-2615, 2459-2616, 2459-2617, 2459-2618, 2459-2619, 2459-2620, 2459-2621, 2459-2622, 2459-2623, 2459-2624, 2459-2625, 2459-2626, 2459-2627, 2459-2628, 2459-2629, 2459-2630, 2459-2631, 2461-2476, 2461-2566, 2461-2570, 2461-2571, 2461-2572, 2461-2573, 2461-2574, 2461-2575, 2461-2576, 2461-2577, 2461-2578, 2461-2579, 2461-2580, 2461-2581, 2461-2582, 2461-2583, 2461-2584, 2461-2585, 2461-2586, 2461-2587, 2461-2588, 2461-2589, 2461-2590, 2461-2591, 2461-2592, 2461-2593, 2461-2594, 2461-2595, 2461-2596, 2461-2597, 2461-2598, 2461-2599, 2461-2600, 2461-2601, 2461-2602, 2461-2603, 2461-2604, 2461-2605, 2461-2606, 2461-2607, 2461-2608, 2461-2609, 2461-2610, 2461-2611, 2461-2612, 2461-2613, 2461-2614, 2461-2615, 2461-2616, 2461-2617, 2461-2618, 2461-2619, 2461-2620, 2461-2621, 2461-2622, 2461-2623, 2461-2624, 2461-2625, 2461-2626, 2461-2627, 2461-2628, 2461-2629, 2461-2630, 2461-2631, 2551-2566, 2551-2570, 2551-2571, 2551-2572, 2551-2573, 2551-2574, 2551-2575, 2551-2576, 2551-2577, 2551-2578, 2551-2579, 2551-2580, 2551-2581, 2551-2582, 2551-2583, 2551-2584, 2551-2585, 2551-2586, 2551-2587, 2551-2588, 2551-2589, 2551-2590, 2551-2591, 2551-2592, 2551-2593, 2551-2594, 2551-2595, 2551-2596, 2551-2597, 2551-2598, 2551-2599, 2551-2600, 2551-2601, 2551-2602, 2551-2603, 2551-2604, 2551-2605, 2551-2606, 2551-2607, 2551-2608, 2551-2609, 2551-2610, 2551-2611, 2551-2612, 2551-2613, 2551-2614, 2551-2615, 2551-2616, 2551-2617, 2551-2618, 2551-2619, 2551-2620, 2551-2621, 2551-2622, 2551-2623, 2551-2624, 2551-2625, 2551-2626, 2551-2627, 2551-2628, 2551-2629, 2551-2630, 2551-2631, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2553-2573, 2553-2574, 2553-2575, 2553-2576, 2553-2577, 2553-2578, 2553-2579, 2553-2580, 2553-2581, 2553-2582, 2553-2583, 2553-2584, 2553-2585, 2553-2586, 2553-2587, 2553-2588, 2553-2589, 2553-2590, 2553-2591, 2553-2592, 2553-2593, 2553-2594, 2553-2595, 2553-2596, 2553-2597, 2553-2598, 2553-2599, 2553-2600, 2553-2601, 2553-2602, 2553-2603, 2553-2604, 2553-2605, 2553-2606, 2553-2607, 2553-2608, 2553-2609, 2553-2610, 2553-2611, 2553-2612, 2553-2613, 2553-2614, 2553-2615, 2553-2616, 2553-2617, 2553-2618, 2553-2619, 2553-2620, 2553-2621, 2553-2622, 2553-2623, 2553-2624, 2553-2625, 2553-2626, 2553-2627, 2553-2628, 2553-2629, 2553-2630, 2553-2631, 2554-2573, 2554-2574, 2554-2575, 2554-2576, 2554-2577, 2554-2578, 2554-2579, 2554-2580, 2554-2581, 2554-2582, 2554-2583, 2554-2584, 2554-2585, 2554-2586, 2554-2587, 2554-2588, 2554-2589, 2554-2590, 2554-2591, 2554-2592, 2554-2593, 2554-2594, 2554-2595, 2554-2596, 2554-2597, 2554-2598, 2554-2599, 2554-2600, 2554-2601, 2554-2602, 2554-2603, 2554-2604, 2554-2605, 2554-2606, 60 2554-2607, 2554-2608, 2554-2609, 2554-2610, 2554-2611, 2554-2612, 2554-2613, 2554-2614,
2554-2615, 2554-2616, 2554-2617, 2554-2618, 2554-2619, 2554-2620, 2554-2621, 2554-2622, 2554-2623, 2554-2624, 2554-2625, 2554-2626, 2554-2627, 2554-2628, 2554-2629, 2554-2630, 2554-2631, 2555-2572, 2555-2573, 2555-2574, 2555-2575, 2555-2576, 2555-2577, 2555-2578, 2555-2579, 2555-2580, 2555-2581, 2555-2582, 2555-2583, 2555-2584, 2555-2585, 2555-2586, 2555-2587, 2555-2588, 2555-2589, 2555-2590, 2555-2591, 2555-2592, 2555-2593, 2555-2594, 2555-2595, 2555-2596, 2555-2597, 2555-2598, 2555-2599, 2555-2600, 2555-2601, 2555-2602, 2555-2603, 2555-2604, 2555-2605, 2555-2606, 2555-2607, 2555-2608, 2555-2609, 2555-2610, 2555-2611, 2555-2612, 2555-2613, 2555-2614, 2555-2615, 2555-2616, 2555-2617, 2555-2618, 2555-2619, 2555-2620, 2555-2621, 2555-2622, 2555-2623, 2555-2624, 2555-2625, 2555-2626, 2555-2627, 2555-2628, 2555-2629, 2555-2630, 2555-2631, 2556-2573, 2556-2574, 2556-2575, 2556-2576, 2556-2577, 2556-2578, 2556-2579, 2556-2580, 2556-2581, 2556-2582, 2556-2583, 2556-2584, 2556-2585, 2556-2586, 2556-2587, 2556-2588, 2556-2589, 2556-2590, 2556-2591, 2556-2592, 2556-2593, 2556-2594, 2556-2595, 2556-2596, 2556-2597, 2556-2598, 2556-2599, 2556-2600, 2556-2601, 2556-2602, 2556-2603, 2556-2604, 2556-2605, 2556-2606, 2556-2607, 2556-2608, 2556-2609, 2556-2610, 2556-2611, 2556-2612, 2556-2613, 2556-2614, 2556-2615, 2556-2616, 2556-2617, 2556-2618, 2556-2619, 2556-2620, 2556-2621, 2556-2622, 2556-2623, 2556-2624, 2556-2625, 2556-2626, 2556-2627, 2556-2628, 2556-2629, 2556-2630, 2556-2631, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2576, 2557-2577, 2557-2578, 2557-2579, 2557-2580, 2557-2581, 2557-2582, 2557-2583, 2557-2584, 2557-2585, 2557-2586, 2557-2587, 2557-2588, 2557-2589, 2557-2590, 2557-2591, 2557-2592, 2557-2593, 2557-2594, 2557-2595, 2557-2596, 2557-2597, 2557-2598, 2557-2599, 2557-2600, 2557-2601, 2557-2602, 2557-2603, 2557-2604, 2557-2605, 2557-2606, 2557-2607, 2557-2608, 2557-2609, 2557-2610, 2557-2611, 2557-2612, 2557-2613, 2557-2614, 2557-2615, 2557-2616, 2557-2617, 2557-2618, 2557-2619, 2557-2620, 2557-2621, 2557-2622, 2557-2623, 2557-2624, 2557-2625, 2557-2626, 2557-2627, 2557-2628, 2557-2629, 2557-2630, 2557-2631, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2558-2578, 2558-2579, 2558-2580, 2558-2581, 2558-2582, 2558-2583, 2558-2584, 2558-2585, 2558-2586, 2558-2587, 2558-2588, 2558-2589, 2558-2590, 2558-2591, 2558-2592, 2558-2593, 2558-2594, 2558-2595, 2558-2596, 2558-2597, 2558-2598, 2558-2599, 2558-2600, 2558-2601, 2558-2602, 2558-2603, 2558-2604, 2558-2605, 2558-2606, 2558-2607, 2558-2608, 2558-2609, 2558-2610, 2558-2611, 2558-2612, 2558-2613, 2558-2614, 2558-2615, 2558-2616, 2558-2617, 2558-2618, 2558-2619, 2558-2620, 2558-2621, 2558-2622, 2558-2623, 2558-2624, 2558-2625, 2558-2626, 2558-2627, 2558-2628, 2558-2629, 2558-2630, 2558-2631, 2559-2576, 2559-2577, 2559-2578, 2559-2579, 2559-2580, 2559-2581, 2559-2582, 2559-2583, 2559-2584, 2559-2585, 2559-2586, 2559-2587, 2559-2588, 2559-2589, 2559-2590, 2559-2591, 2559-2592, 2559-2593, 2559-2594, 2559-2595, 2559-2596, 2559-2597, 2559-2598, 2559-2599, 2559-2600, 2559-2601, 2559-2602, 2559-2603, 2559-2604, 2559-2605, 2559-2606, 2559-2607, 2559-2608, 2559-2609, 2559-2610, 2559-2611, 2559-2612, 2559-2613, 2559-2614, 2559-2615, 2559-2616, 2559-2617, 2559-2618, 2559-2619, 2559-2620, 2559-2621, 2559-2622, 2559-2623, 2559-2624, 2559-2625, 2559-2626, 2559-2627, 2559-2628, 2559-2629, 2559-2630, 2559-2631, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2560-2580, 2560-2581, 2560-2582, 2560-2583, 2560-2584, 2560-2585, 2560-2586, 2560-2587, 2560-2588, 2560-2589, 2560-2590, 2560-2591, 2560-2592, 2560-2593, 2560-2594, 2560-2595, 2560-2596, 2560-2597, 2560-2598, 2560-2599, 2560-2600, 2560-2601, 2560-2602, 2560-2603, 2560-2604, 2560-2605, 2560-2606, 2560-2607, 2560-2608, 2560-2609, 2560-2610, 2560-2611, 2560-2612, 2560-2613, 2560-2614, 2560-2615, 2560-2616, 2560-2617, 2560-2618, 2560-2619, 2560-2620, 2560-2621, 2560-2622, 2560-2623, 2560-2624, 2560-2625, 2560-2626, 2560-2627, 2560-2628, 2560-2629, 2560-2630, 2560-2631, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2561-2581, 2561-2582, 2561-2583, 2561-2584, 2561-2585, 2561-2586, 2561-2587, 2561-2588, 2561-2589, 2561-2590, 2561-2591, 2561-2592, 2561-2593, 2561-2594, 2561-2595, 2561-2596, 2561-2597, 2561-2598, 2561-2599, 2561-2600, 2561-2601, 2561-2602, 2561-2603, 2561-2604, 2561-2605, 2561-2606, 2561-2607, 2561-2608, 2561-2609, 2561-2610, 2561-2611, 2561-2612, 2561-2613, 2561-2614, 2561-2615, 2561-2616, 2561-2617, 2561-2618, 2561-2619, 2561-2620, 2561-2621, 2561-2622, 2561-2623, 2561-2624, 2561-2625, 2561-2626, 2561-2627, 2561-2628, 2561-2629, 2561-2630, 2561-2631, 2562-2577, 2562-2578, 2562-2579, 2562-2580, 2562-2581, 2562-2582, 2562-2583, 2562-2584, 2562-2585, 2562-2586, 2562-2587, 2562-2588, 2562-2589, 2562-2590, 2562-2591, 2562-2592, 2562-2593, 2562-2594, 2562-2595, 2562-2596, 2562-2597, 2562-2598, 2562-2599, 2562-2600, 2562-2601, 2562-2602, 2562-2603, 2562-2604, 2562-2605, 2562-2606, 2562-2607, 2562-2608, 2562-2609, 2562-2610, 2562-2611, 2562-2612, 2562-2613, 2562-2614, 2562-2615, 2562-2616, 2562-2617, 2562-2618, 2562-2619, 2562-2620, 2562-2621, 2562-2622, 2562-2623, 2562-2624, 2562-2625, 2562-2626, 2562-2627, 2562-2628, 2562-2629, 2562-2630, 2562-2631, 2563-2580, 60 00 2563-2581, 2563-2582, 2563-2583, 2563-2584, 2563-2585, 2563-2586, 2563-2587, 2563-2588,
2563-2589, 2563-2590, 2563-2591, 2563-2592, 2563-2593, 2563-2594, 2563-2595, 2563-2596, 2563-2597, 2563-2598, 2563-2599, 2563-2600, 2563-2601, 2563-2602, 2563-2603, 2563-2604, 2563-2605, 2563-2606, 2563-2607, 2563-2608, 2563-2609, 2563-2610, 2563-2611, 2563-2612, 2563-2613, 2563-2614, 2563-2615, 2563-2616, 2563-2617, 2563-2618, 2563-2619, 2563-2620, 2563-2621, 2563-2622, 2563-2623, 2563-2624, 2563-2625, 2563-2626, 2563-2627, 2563-2628, 2563-2629, 2563-2630, 2563-2631, 2564-2581, 2564-2582, 2564-2583, 2564-2584, 2564-2585, 2564-2586, 2564-2587, 2564-2588, 2564-2589, 2564-2590, 2564-2591, 2564-2592, 2564-2593, 2564-2594, 2564-2595, 2564-2596, 2564-2597, 2564-2598, 2564-2599, 2564-2600, 2564-2601, 2564-2602, 2564-2603, 2564-2604, 2564-2605, 2564-2606, 2564-2607, 2564-2608, 2564-2609, 2564-2610, 2564-2611, 2564-2612, 2564-2613, 2564-2614, 2564-2615, 2564-2616, 2564-2617, 2564-2618, 2564-2619, 2564-2620, 2564-2621, 2564-2622, 2564-2623, 2564-2624, 2564-2625, 2564-2626, 2564-2627, 2564-2628, 2564-2629, 2564-2630, 2564-2631, 2565-2584, 2565-2585, 2565-2586, 2565-2587, 2565-2588, 2565-2589, 2565-2590, 2565-2591, 2565-2592, 2565-2593, 2565-2594, 2565-2595, 2565-2596, 2565-2597, 2565-2598, 2565-2599, 2565-2600, 2565-2601, 2565-2602, 2565-2603, 2565-2604, 2565-2605, 2565-2606, 2565-2607, 2565-2608, 2565-2609, 2565-2610, 2565-2611, 2565-2612, 2565-2613, 2565-2614, 2565-2615, 2565-2616, 2565-2617, 2565-2618, 2565-2619, 2565-2620, 2565-2621, 2565-2622, 2565-2623, 2565-2624, 2565-2625, 2565-2626, 2565-2627, 2565-2628, 2565-2629, 2565-2630, 2565-2631, 2566-2583, 2566-2584, 2566-2585, 2566-2586, 2566-2587, 2566-2588, 2566-2589, 2566-2590, 2566-2591, 2566-2592, 2566-2593, 2566-2594, 2566-2595, 2566-2596, 2566-2597, 2566-2598, 2566-2599, 2566-2600, 2566-2601, 2566-2602, 2566-2603, 2566-2604, 2566-2605, 2566-2606, 2566-2607, 2566-2608, 2566-2609, 2566-2610, 2566-2611, 2566-2612, 2566-2613, 2566-2614, 2566-2615, 2566-2616, 2566-2617, 2566-2618, 2566-2619, 2566-2620, 2566-2621, 2566-2622, 2566-2623, 2566-2624, 2566-2625, 2566-2626, 2566-2627, 2566-2628, 2566-2629, 2566-2630, 2566-2631, 2567-2584, 25: 2567-2585, 2567-2586, 2567-2587, 2567-2588, 2567-2589, 2567-2590, 2567-2591, 2567-2592, 2567-2593, 2567-2594, 2567-2595, 2567-2596, 2567-2597, 2567-2598, 2567-2599, 2567-2600, 2567-2601, 2567-2602, 2567-2603, 2567-2604, 2567-2605, 2567-2606, 2567-2607, 2567-2608, 2567-2609, 2567-2610, 2567-2611, 2567-2612, 2567-2613, 2567-2614, 2567-2615, 2567-2616, 2567-2617, 2567-2618, 2567-2619, 2567-2620, 2567-2621, 2567-2622, 2567-2623, 2567-2624, 002567-2625, 2567-2626, 2567-2627, 2567-2628, 2567-2629, 2567-2630, 2567-2631, 2568-2585, 2568-2586, 2568-2587, 2568-2588, 2568-2589, 2568-2590, 2568-2591, 2568-2592, 2568-2593, 2568-2594, 2568-2595, 2568-2596, 2568-2597, 2568-2598, 2568-2599, 2568-2600, 2568-2601, 2568-2602, 2568-2603, 2568-2604, 2568-2605, 2568-2606, 2568-2607, 2568-2608, 2568-2609, 2568-2610, 2568-2611, 2568-2612, 2568-2613, 2568-2614, 2568-2615, 2568-2616, 2568-2617, 2568-2618, 2568-2619, 2568-2620, 2568-2621, 2568-2622, 2568-2623, 2568-2624, 2568-2625, 2568-2626, 2568-2627, 2568-2628, 2568-2629, 2568-2630, 2568-2631, 2569-2586, 2569-2587, 2569-2588, 2569-2589, 2569-2590, 2569-2591, 2569-2592, 2569-2593, 2569-2594, 2569-2595, 2569-2596, 2569-2597, 2569-2598, 2569-2599, 2569-2600, 2569-2601, 2569-2602, 2569-2603, 2569-2604, 2569-2605, 2569-2606, 2569-2607, 2569-2608, 2569-2609, 2569-2610, 2569-2611, 2569-2612, 2569-2613, 2569-2614, 2569-2615, 2569-2616, 2569-2617, 2569-2618, 2569-2619, 2569-2620, 2569-2621, 2569-2622, 2569-2623, 2569-2624, 2569-2625, 2569-2626, 2569-2627, 2569-2628, 2569-2629, 2569-2630, 2569-2631, 2569-2586, 2569-2587, 2569-2588, 2569-2589, 2569-2590, 2569-2591, 2569-2592, 2569-2593, 2569-2594, 2569-2595, 2569-2596, 2569-2597, 2569-2598, 2569-2599, 2569-2600, 2569-2601, 2569-2602, 2569-2603, 2569-2604, 2569-2605, 2569-2606, 2569-2607, 2569-2608, 2569-2609, 2569-2610, 2569-2611, 2569-2612, 2569-2613, 2569-2614, 2569-2615, 2569-2616, 2569-2617, 2569-2618, 2569-2619, 2569-2620, 2569-2621, 2569-2622, 2569-2623, 2569-2624, 2569-2625, 2569-2626, 2569-2627, 2569-2628, 2569-2629, 2569-2630, 2569-2631, 2571-2588, 2571-2589, 2571-2590, 2571-2591, 2571-2592, 2571-2593, 2571-2594, 2571-2595, 2571-2596, 2571-2597, 2571-2598, 2571-2599, 2571-2600, 2571-2601, 2571-2602, 2571-2603, 2571-2604, 2571-2605, 2571-2606, 2571-2607, 2571-2608, 2571-2609, 2571-2610, 2571-2611, 2571-2612, 2571-2613, 2571-2614, 2571-2615, 2571-2616, 2571-2617, 2571-2618, 2571-2619, 2571-2620, 2571-2621, 2571-2622, 2571-2623, 2571-2624, 2571-2625, 2571-2626, 2571-2627, 2571-2628, 2571-2629, 2571-2630, 2571-2631, 2572-2589, 2572-2590, 2572-2591, 2572-2592, 2572-2593, 2572-2594, 2572-2595, 2572-2596, 2572-2597, 2572-2598, 2572-2599, 2572-2600, 2572-2601, 2572-2602, 2572-2603, 2572-2604, 2572-2605, 2572-2606, 2572-2607, 2572-2608, 2572-2609, 2572-2610, 2572-2611, 2572-2612, 2572-2613, 2572-2614, 2572-2615, 2572-2616, 2572-2617, 2572-2618, 2572-2619, 2572-2620, 2572-2621, 2572-2622, 2572-2623, 2572-2624, 2572-2625, 2572-2626, 2572-2627, 2572-2628, 2572-2629, 2572-2630, 2572-2631, 2573-2590, 2573-2591, 2573-2592, 2573-2593, 2573-2594, 2573-2595, 2573-2596, 60 0 2579-2597, 2573-2598, 2573-2599, 2573-2600, 2573-2601, 2573-2602, 2573-2603, 2573-2604,
2573-2605, 2573-2606, 2573-2607, 2573-2608, 2573-2609, 2573-2610, 2573-2611, 2573-2612, 2573-2613, 2573-2614, 2573-2615, 2573-2616, 2573-2617, 2573-2618, 2573-2619, 2573-2620, 2573-2621, 2573-2622, 2573-2623, 2573-2624, 2573-2625, 2573-2626, 2573-2627, 2573-2628, 2573-2629, 2573-2630, 2573-2631, 2574-2591, 2574-2592, 2574-2593, 2574-2594, 2574-2595, 2574-2596, 2574-2597, 2574-2598, 2574-2599, 2574-2600, 2574-2601, 2574-2602, 2574-2603, 2574-2604, 2574-2605, 2574-2606, 2574-2607, 2574-2608, 2574-2609, 2574-2610, 2574-2611, 2574-2612, 2574-2613, 2574-2614, 2574-2615, 2574-2616, 2574-2617, 2574-2618, 2574-2619, 2574-2620, 2574-2621, 2574-2622, 2574-2623, 2574-2624, 2574-2625, 2574-2626, 2574-2627, 2574-2628, 2574-2629, 2574-2630, 2574-2631, 2575-2592, 2575-2593, 2575-2594, 2575-2595, 2575-2596, 2575-2597, 2575-2598, 2575-2599, 2575-2600, 2575-2601, 2575-2602, 2575-2603, 2575-2604, 2575-2605, 2575-2606, 2575-2607, 2575-2608, 2575-2609, 2575-2610, 2575-2611, 2575-2612, 2575-2613, 2575-2614, 2575-2615, 2575-2616, 2575-2617, 2575-2618, 2575-2619, 2575-2620, 2575-2621, 2575-2622, 2575-2623, 2575-2624, 2575-2625, 2575-2626, 2575-2627, 2575-2628, 2575-2629, 2575-2630, 2575-2631, 2576-2593, 2576-2594, 2576-2595, 2576-2596, 2576-2597, 2576-2598, 2576-2599, 2576-2600, 2576-2601, 2576-2602, 2576-2603, 2576-2604, 2576-2605, 2576-2606, 2576-2607, 2576-2608, 2576-2609, 2576-2610, 2576-2611, 2576-2612, 2576-2613, 2576-2614, 2576-2615, 2576-2616, 2576-2617, 2576-2618, 2576-2619, 2576-2620, 2576-2621, 2576-2622, 2576-2623, 2576-2624, 2576-2625, 2576-2626, 2576-2627, 2576-2628, 2576-2629, 2576-2630, 2576-2631, 2577-2594, 2577-2595, 2577-2596, 2577-2597, 2577-2598, 2577-2599, 2577-2600, 2577-2601, 2577-2602, 2577-2603, 2577-2604, 2577-2605, 2577-2606, 2577-2607, 2577-2608, 2577-2609, 2577-2610, 2577-2611, 2577-2612, 2577-2613, 2577-2614, 2577-2615, 2577-2616, 2577-2617, 2577-2618, 2577-2619, 2577-2620, 2577-2621, 2577-2622, 2577-2623, 2577-2624, 2577-2625, 2577-2626, 2577-2627, 2577-2628, 2577-2629, 2577-2630, 2577-2631, 2578-2597, 2578-2598, 2578-2599, 2578-2600, 2578-2601, 2578-2602, 2578-2603, 25: 2578-2604, 2578-2605, 2578-2606, 2578-2607, 2578-2608, 2578-2609, 2578-2610, 2578-2611, 2578-2612, 2578-2613, 2578-2614, 2578-2615, 2578-2616, 2578-2617, 2578-2618, 2578-2619, 2578-2620, 2578-2621, 2578-2622, 2578-2623, 2578-2624, 2578-2625, 2578-2626, 2578-2627, 2578-2628, 2578-2629, 2578-2630, 2578-2631, 2579-2598, 2579-2599, 2579-2600, 2579-2601, 2579-2602, 2579-2603, 2579-2604, 2579-2605, 2579-2606, 2579-2607, 2579-2608, 2579-2609, 002579-2610, 2579-2611, 2579-2612, 2579-2613, 2579-2614, 2579-2615, 2579-2616, 2579-2617, 2579-2618, 2579-2619, 2579-2620, 2579-2621, 2579-2622, 2579-2623, 2579-2624, 2579-2625, 2579-2626, 2579-2627, 2579-2628, 2579-2629, 2579-2630, 2579-2631, 2580-2598, 2580-2599, 2580-2600, 2580-2601, 2580-2602, 2580-2603, 2580-2604, 2580-2605, 2580-2606, 2580-2607, 2580-2608, 2580-2609, 2580-2610, 2580-2611, 2580-2612, 2580-2613, 2580-2614, 2580-2615, 2580-2616, 2580-2617, 2580-2618, 2580-2619, 2580-2620, 2580-2621, 2580-2622, 2580-2623, 2580-2624, 2580-2625, 2580-2626, 2580-2627, 2580-2628, 2580-2629, 2580-2630, 2580-2631, 2581-2597, 2581-2598, 2581-2599, 2581-2600, 2581-2601, 2581-2602, 2581-2603, 2581-2604, 2581-2605, 2581-2606, 2581-2607, 2581-2608, 2581-2609, 2581-2610, 2581-2611, 2581-2612, 2581-2613, 2581-2614, 2581-2615, 2581-2616, 2581-2617, 2581-2618, 2581-2619, 2581-2620, 2581-2621, 2581-2622, 2581-2623, 2581-2624, 2581-2625, 2581-2626, 2581-2627, 2581-2628, 2581-2629, 2581-2630, 2581-2631, 2582-2600, 2582-2601, 2582-2602, 2582-2603, 2582-2604, 2582-2605, 2582-2606, 2582-2607, 2582-2608, 2582-2609, 2582-2610, 2582-2611, 2582-2612, 2582-2613, 2582-2614, 2582-2615, 2582-2616, 2582-2617, 2582-2618, 2582-2619, 2582-2620, 2582-2621, 2582-2622, 2582-2623, 2582-2624, 2582-2625, 2582-2626, 2582-2627, 2582-2628, 2582-2629, 2582-2630, 2582-2631, 2583-2601, 2583-2602, 2583-2603, 2583-2604, 2583-2605, 2583-2606, 2583-2607, 2583-2608, 2583-2609, 2583-2610, 2583-2611, 2583-2612, 2583-2613, 2583-2614, 2583-2615, 2583-2616, 2583-2617, 2583-2618, 2583-2619, 2583-2620, 2583-2621, 2583-2622, 2583-2623, 2583-2624, 2583-2625, 2583-2626, 2583-2627, 2583-2628, 2583-2629, 2583-2630, 2583-2631, 2585-2603, 2585-2604, 2585-2605, 2585-2606, 2585-2607, 2585-2608, 2585-2609, 2585-2610, 2585-2611, 2585-2612, 2585-2613, 2585-2614, 2585-2615, 2585-2616, 2585-2617, 2585-2618, 2585-2619, 2585-2620, 2585-2621, 2585-2622, 2585-2623, 2585-2624, 2585-2625, 2585-2626, 2585-2627, 2585-2628, 2585-2629, 2585-2630, 2585-2631, 2586-2604, 2586-2605, 2586-2606, 2586-2607, 2586-2608, 2586-2609, 2586-2610, 2586-2611, 2586-2612, 2586-2613, 2586-2614, 2586-2615, 2586-2616, 2586-2617, 2586-2618, 2586-2619, 2586-2620, 2586-2621, 2586-2622, 2586-2623, 2586-2624, 2586-2625, 2586-2626, 2586-2627, 2586-2628, 2586-2629, 2586-2630, 2586-2631, 2587-2605, 2587-2606, 2587-2607, 2587-2608, 2587-2609, 2587-2610, 2587-2611, 2587-2612, 2587-2613, 2587-2614, 2587-2615, 2587-2616, 2587-2617, 2587-2618, 2587-2619, 2587-2620, 2587-2621, 2587-2622, 2587-2623, 2587-2624, 2587-2625, 2587-2626, 2587-2627, 2587-2628, 2587-2629, 2587-2630, 2587-2631, 2588-2606, 2588-2607, 60 0 2588-2608, 2588-2609, 2588-2610, 2588-2611, 2588-2612, 2588-2613, 2588-2614, 2588-2615,
2588-2616, 2588-2617, 2588-2618, 2588-2619, 2588-2620, 2588-2621, 2588-2622, 2588-2623, 2588-2624, 2588-2625, 2588-2626, 2588-2627, 2588-2628, 2588-2629, 2588-2630, 2588-2631, 2589-2607, 2589-2608, 2589-2609, 2589-2610, 2589-2611, 2589-2612, 2589-2613, 2589-2614, 2589-2615, 2589-2616, 2589-2617, 2589-2618, 2589-2619, 2589-2620, 2589-2621, 2589-2622, 2589-2623, 2589-2624, 2589-2625, 2589-2626, 2589-2627, 2589-2628, 2589-2629, 2589-2630, 2589-2631, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2608, 2590-2609, 2590-2610, 2590-2611, 2590-2612, 2590-2613, 2590-2614, 2590-2615, 2590-2616, 2590-2617, 2590-2618, 2590-2619, 2590-2620, 2590-2621, 2590-2622, 2590-2623, 2590-2624, 2590-2625, 2590-2626, 2590-2627, 2590-2628, 2590-2629, 2590-2630, 2590-2631, 2591-2610, 2591-2611, 2591-2612, 2591-2613, 2591-2614, 10. 2591-2615, 2591-2616, 2591-2617, 2591-2618, 2591-2619, 2591-2620, 2591-2621, 2591-2622, 2591-2623, 2591-2624, 2591-2625, 2591-2626, 2591-2627, 2591-2628, 2591-2629, 2591-2630, 2591-2631, 2592-2611, 2592-2612, 2592-2613, 2592-2614, 2592-2615, 2592-2616, 2592-2617, 2592-2618, 2592-2619, 2592-2620, 2592-2621, 2592-2622, 2592-2623, 2592-2624, 2592-2625, 2592-2626, 2592-2627, 2592-2628, 2592-2629, 2592-2630, 2592-2631, 2593-2608, 2593-2612, 2593-2613, 2593-2614, 2593-2615, 2593-2616, 2593-2617, 2593-2618, 2593-2619, 2593-2620, 2593-2621, 2593-2622, 2593-2623, 2593-2624, 2593-2625, 2593-2626, 2593-2627, 2593-2628, 2593-2629, 2593-2630, 2593-2631, 2594-2612, 2594-2613, 2594-2614, 2594-2615, 2594-2616, 2594-2617, 2594-2618, 2594-2619, 2594-2620, 2594-2621, 2594-2622, 2594-2623, 2594-2624, 2594-2625, 2594-2626, 2594-2627, 2594-2628, 2594-2629, 2594-2630, 2594-2631, 2595-2611, 2595-2612, 2595-2613, 2595-2614, 2595-2615, 2595-2616, 2595-2617, 2595-2618, 2595-2619, 2595-2620, 2595-2621, 2595-2622, 2595-2623, 2595-2624, 2595-2625, 2595-2626, 2595-2627, 2595-2628, 2595-2629, 2595-2630, 2595-2631, 2596-2614, 2596-2615, 2596-2616, 2596-2617, 2596-2618, 2596-2619, 2596-2620, 2596-2621, 2596-2622, 2596-2623, 2596-2624, 2596-2625, 2596-2626, 2596-2627, 2596-2628, 2596-2629, 2596-2630, 2596-2631, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2597-2617, 2597-2618, 2597-2619, 2597-2620, 2597-2621, 2597-2622, 2597-2623, 2597-2624, 2597-2625, 2597-2626, 2597-2627, 2597-2628, 2597-2629, 2597-2630, 2597-2631, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2598-2618, 2598-2619, 2598-2620, 2598-2621, 2598-2622, 2598-2623, 2598-2624, 2598-2625, 2598-2626, 2598-2627, 2598-2628, 2598-2629, 2598-2630, 2598-2631, 2599-2614, 2599-2615, 2599-2616, 2599-2617, 2599-2618, 2599-2619, 2599-2620, 2599-2621, 2599-2622, 2599-2623, 2599-2624, 2599-2625, 2599-2626, 2599-2627, 2599-2628, 2599-2629, 2599-2630, 2599-2631, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2600-2620, 2600-2621, 2600-2622, 2600-2623, 2600-2624, 2600-2625, 2600-2626, 2600-2627, 2600-2628, 2600-2629, 2600-2630, 2600-2631, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2618, 2601-2619, 2601-2620, 2601-2621, 2601-2622, 2601-2623, 2601-2624, 2601-2625, 2601-2626, 2601-2627, 2601-2628, 2601-2629, 2601-2630, 2601-2631, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2602-2622, 2602-2623, 2602-2624, 2602-2625, 2602-2626, 2602-2627, 2602-2628, 2602-2629, 2602-2630, 2602-2631, 2603-2620, 2603-2621, 2603-2622, 2603-2623, 2603-2624, 2603-2625, 2603-2626, 2603-2627, 2603-2628, 2603-2629, 2603-2630, 2603-2631, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2604-2624, 2604-2625, 2604-2626, 2604-2627, 2604-2628, 2604-2629, 2604-2630, 2604-2631, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2605-2625, 2605-2626, 2605-2627, 2605-2628, 2605-2629, 2605-2630, 2605-2631, 2606-2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2606-2626, 2606-2627, 2606-2628, 2606-2629, 2606-2630, 2606-2631, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2607-2627, 2607-2628, 2607-2629, 2607-2630, 2607-2631, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2608-2628, 2608-2629, 2608-2630, 2608-2631, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2609-2629, 2609-2630, 2609-2631, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610-2628, 2610-2629, 2610-2630, 2610-2631, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630, 2611-2631, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631 або 2616-2631. У деяких аспектах антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані на щонайменше 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 суміжних азотистих основ у межах вищезазначених областей азотистих основ.
У деяких варіантах реалізації наступні нуклеотидні області ЗЕО ІЮ МО: 1, при направленому впливі антисмислових сполук або олігонуклеотидів, демонструють щонайменше 50 95 інгібування: 30-49, 48-63, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157- 176, 158-173, 158-177, 480-499, 600-619, 638-657, 644-663, 738-757, 1089-1108, 1135-1154, 1141- 1160, 1147-1166, 1150-1169, 1153-1172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1171-1186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-1190, 1175-1194, 1177-1196, 1183-1202, 1208-1227, 1235-1254, 1298-1317, 1304-1323, 1310-1329, 1316-1335, 1319-1338, 1322-1341, 1328-1347, 1349-1368, 60 1355-1374, 1393-1412, 1396-1415, 1399-1418, 1405-1424, 1421-1440, 1621-1640, 1646-1665,
1646-1665, 1647-1666, 1689-1708, 1749-1768, 1763-1782, 1912-1931, 2073-2092, 2085-2104, 2166-2185, 2172-2191, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195-2210, 2195-2214, 2196-2215, 2197-2212, 2197-2216, 2202-2221, 2223-2238, 2223-2242, 2225-2240, 2226-2245, 2227-2242, 2227-2246, 2238-2257, 2241-2260, 2267-2286, 2361-2380, 2388-2407, 2397-2416, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459-2474, 2459-2478, 2461-2476, 2461-2480, 2532-2551, 2550-2569, 2551-2566, 2551-2570, 2552-2568, 2552-2570, 2552-2571, 2553-2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-2570, 2555-2572, 2555-2574, 2556-2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2573, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2516, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559-2577, 2559-2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2576, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562-2581, 2563-2578, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567-2586, 2568-2583, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2585, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2586, 2571-2588, 2571-2590, 2572-2589, 2572-2590, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2590, 2574-2591, 2574-2593, 2575-2590, 2575-2591, 2575-2592, 2575-2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2595, 2577-2596, 2578-2594, 2578-2596, 2578-2597, 2579-2598, 2580-2596, 2580-2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2598, 2581-2599, 2581-2600, 2582-2598, 2582-2599, 2582-2600, 2582-2601, 2583-2599, 2583-2600, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2601, 2584-2602, 2584-2603, 2585-2601, 2585-2603, 2585-2604, 2586-2601, 2586-2602, 2586-2604, 2586-2605, 2587-2602, 2587-2603, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2603, 2588-2604, 2588-2605, 2588-2606, 2588-2607, 2589-2604, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589-2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2608, 2590-2609, 2590-2609, 2591-2607, 2591-2608, 2591-2609, 2591-2610, 2592-2607, 2592-2608, 2592-2609, 2592-2610, 2592-2611, 2593-2608, 2593-2609, 2593-2610, 2593-2612, 2594-2609, 2594-2610, 2594-2611, 2594-2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595-2611, 2595-2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2612, 2596-2613, 2596-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2615, 2599-2616, 2599-2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2618, 2601-2619, 2601-2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2618, 2603-2619, 2603-2620, 2603-2621, 2603-2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606-2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631 та 2616-2631.
У деяких варіантах реалізації наступні нуклеотидні області БЕО ІО МО: 2, при направленому впливі антисмислових сполук або олігонуклеотидів, демонструють щонайменше 50 95 інгібування: 1608-1627, 1685-1704, 1686-1705, 1751-1770, 1769-1784, 1871-1890, 1872-1891, 1873-1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1878-1897, 1879-1894, 1879-1898, 2288-2307, 2808-2827, 2846-2865, 2852-2871, 2946-2965, 3773-3792, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 3834-3853, 3837-3856, 3843-3862, 4151-4166, 4151-4170, 4153-4172, 4159-4178, 4184-4203, 4211-4230, 4609-4628, 4612-4631, 4615-4634, 4621-4640, 4642-4661, 4648-4667, 4686-4705, 4689-4708, 4692-4711, 4698-4717, 4714-4733, 5270-5289, 5295-5314, 5296-5315, 5830-5849, 5890-5909, 5904-5923, 6406-6425, 6662-6681, 6674-6693, 6954-6973, 6960-6979, 6977-6996, 6979-6998, 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 6984-7003, 6985-7000, 6985-7004, 6990-7009, 7122-7141, 7125-7144, 7151-7170, 7353-7372, 7362-7381, 7683-7702, 7688-7707, 7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7694-7713, 7696-7711, 7696-7715, 7767-7786, 7785-7804, 7786-7801, 7787-7803, 7787-7805, 7787-7806, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7805, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7808, 7792-7809, 7792-7810, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7811, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7820, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7821, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7825, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7825, 7810-7826, 7810-7827, 7810-7829, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7830, 7812-7831, 7813-7829, 7813-7831, 7813-7832, 60 7814-7833, 7815-7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7833, 7816-7834,
7816-7835, 7817-7833, 7817-7834, 7817-7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7836, 7819-7837, 7819-7838, 7820-7836, 7820-7838, 7820-7839, 7821-7836, 7821-7837, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7837, 7822-7838, 7822-7840, 7822-7841, 7823-7838, 7823-7839, 7823-7839, 7823-7840, 7823-7841, 7823-7842, 7824-7839, 7824-7840, 7824-7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824-7843, 7825-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7843, 7825-7844, 7826-7842, 7826-7843, 7826-7844, 7826-7845, 7827-7842, 7827-7843, 7827-7844, 7827-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7844, 7828-7845, 7828-7847, 7829-7844, 7829-7845, 7829-7846, 7829-7847, 7829-7848, 7830-7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7847, 7831-7848, 7831-7849, 7831-7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7853, 7838-7854, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861 та 7846-7862.
У деяких варіантах реалізації наступні нуклеотидні області БЕО ІЮ МО: 1, при направленому впливі антисмислових сполук або олігонуклеотидів, демонструють щонайменше 60 95 інгібування: 48-63, 150-169, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 158-173, 158-177, 600- 619, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1153-1172, 1171-1186, 1173-1188, 1175-1190, 1749-1768, 1763-1782, 1763-1782, 1912-1931, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195-2210, 2195-2214, 2197-2212, 2197-2216, 2223-2238, 2225-2240, 2227-2242, 2238-2257, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459-2474, 2459-2478, 2461-2476, 2461-2480, 2550-2569, 2551-2566, 2552-2571, 2553-2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-2572, 2555-2574, 2556-2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559-2577, 2559-2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562-2581, 2563-2578, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567-2586, 2568-2583, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2588, 2572-2590, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2591, 2574-2593, 2575-2590, 2575-2592, 2575-2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2595, 2577-2596, 2578-2594, 2578-2597, 2579-2598, 2580-2596, 2580-2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2598, 2581-2599, 2581-2600, 2582-2598, 2582-2599, 2582-2600, 2582-2601, 2583-2599, 2583-2600, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2602, 2584-2603, 2585-2601, 2585-2603, 2585-2604, 2586-2602, 2586-2604, 2586-2605, 2587-2603, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2603, 2588-2604, 2588-2606, 2588-2607, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589-2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2608, 2590-2609, 2591-2607, 2591-2609, 2591-2610, 2592-2608, 2592-2609, 2592-2611, 2593-2608, 2593-2609, 2593-2612, 2594-2609, 2594-2610, 2594-2611, 2594-2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595-2611, 2595-2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2612, 2596-2613, 2596-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2615, 2599-2616, 2599-2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2618, 2601-2619, 2601-2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2618, 2603-2619, 2603-2620, 2603-2621, 2603-2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606-2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2630, 2615-2631, 2615-2631 та 2616-2631.
У деяких варіантах реалізації наступні нуклеотидні області БЕО ІО МО: 2, при направленому впливі антисмислових сполук або олігонуклеотидів, демонструють щонайменше 60 95 інгібування: 1685-1704, 1686-1705, 1769-1784, 1871-1890, 1873-1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1879-1894, 1879-1898, 2808-2827, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 3837-3856, 4151-4166, 5890-5909, 5904-5923, 5904-5923, 6406-6425, 6977-6996, 6979-6998, 60 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 6985-7000, 6985-7004, 7122-7141, 7683-7702, 7688-7707,
7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7696-7711, 7696-7715, 7786-7801, 7787-7806, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7809, 7792-7810, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7825, 7810-7827, 7810-7829, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7830, 7812-7831, 7813-7829, 7813-7832, 7814-7833, 7815-7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7833, 7816-7834, 7816-7835, 7817-7833, 7817-7834, 7817-7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7837, 7819-7838, 7820-7836, 7820-7838, 7820-7839, 7821-7837, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7838, 7822-7840, 7822-7841, 7823-7838, 7823-7839, 7823-7841, 7823-7842, 7824-7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824-7843, 7825-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7843, 7825-7844, 7826-7842, 7826-7844, 7826-7845, 7827-7843, 7827-7844, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7844, 7828-7847, 7829-7844, 7829-7845, 7829-7846, 7829-7847, 7829-7848, 7830-7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7847, 7831-7848, 7831-7849, 7831-7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7853, 7838-7854, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861, 7846-7862 та 7847-7862.
У деяких варіантах реалізації наступні нуклеотидні області БЕО ІО МО: 1, при направленому впливі антисмислових сполук або олігонуклеотидів, демонструють щонайменше 70 95 інгібування: 48-63, 150-169, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 158-173, 158-177, 1135- 1154, 1141-1160, 1147-1166, 1171-1186, 1173-1188, 1175-1190, 1749-1768, 1763-1782, 1912-1931, 2193-2212, 2195-2210, 2195-2214, 2197-2212, 2197-2216, 2223-2238, 2225-2240, 2227-2242, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459-2474, 2461-2476, 2461-2480, 2550-2569, 2551-2566, 2552-2571, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, зЗ5 0 2554-2573, 2555-2572, 2555-2574, 2555-2574, 2556-2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2574, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559-2577, 2559-2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562-2581, 2563-2578, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567-2586, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2588, 2571-2590, 2572-2589, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2591, 2574-2593, 2575-2592, 2575-2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2596, 2578-2597, 2579-2598, 2580-2596, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2600, 2582-2598, 2582-2600, 2582-2601, 2583-2599, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2602, 2584-2603, 2585-2601, 2585-2603, 2585-2604, 2586-2605, 2587-2606, 2588-2604, 2588-2606, 2588-2607, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589-2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2609, 2591-2607, 2591-2610, 2592-2611, 2593-2608, 2593-2612, 2594-2609, 2594-2610, 2594-2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595-2611, 2595-2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2615, 2599-2616, 2599-2617, 2599-2618, 2600-2615, 5 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2618, 2601-2619, 2601-2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2619, 2603-2620, 2603-2621, 2603-2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606-2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2630, 2615-2631 та 2616-2631. 60 У деяких варіантах реалізації наступні нуклеотидні області ФЕО ІЮ МО: 2, при направленому впливі антисмислових сполук або олігонуклеотидів, демонструють щонайменше 70 95 інгібування: 1685-1704, 1686-1705, 1769-1784, 1871-1890, 1873-1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1879-1894, 1879-1898, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 4151-4166, 5890-5909, 5904-5923, 5904-5923, 6406-6425, 6983-6998, 6983-7002, 6985-7000, 6985-7004, 7688-7707, 7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7696-7711, 7696-7715, 7786-7801, 7787-7806, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7809, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7827, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7831, 7813-7832, 7814-7833, 7815-7831, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7835, 7817-7833, 7817-7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7837, 7819-7838, 7820-7836, 7820-7838, 7820-7839, 7821-7840, 7822-7841, 7823-7839, 7823-7841, 7823-7842, 7824-7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824-7843, 7825-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7844, 7826-7842, 7826-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7847, 7829-7844, 7829-7845, 7829-7847, 7829-7848, 7830-7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7849, 7831-7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7854, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861, 7846-7862 та 7847-7862.
У деяких варіантах реалізації наступні нуклеотидні області БЕО ІО МО: 1, при направленому
Зо впливі антисмислових сполук або олігонуклеотидів, демонструють щонайменше 80 95 інгібування: 152-171, 154-169, 156-171, 158-173, 1135-1154, 1171-1186, 1173-1188, 1175-1190, 1763-1782, 1912-1931, 2197-2212, 2223-2238, 2225-2240, 2227-2242, 2457-2472, 2459-2474, 2461-2476, 2551-2566, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2573, 2555-2572, 2555-2574, 2556-2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2574, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2559-2577, 2559-2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562-2581, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2567-2584, 2567-2586, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2587, 2571-2588, 2571-2590, 2572-2589, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2591, 2574-2593, 2575-2592, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2596, 2578-2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2600, 2582-2601, 2583-2602, 2584-2603, 2585-2604, 2586-2605, 2587-2606, 2588-2607, 2589-2608, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2609, 2591-2610, 2592-2611, 2593-2608, 2593-2612, 2594-2613, 2595-2611, 2595-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2619, 2601-2620, 2602-2618, 2602-2621, 2603-2620, 2603-2621, 2603-2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606-2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 00 2611-2627, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630 та 2616-2631.
У деяких варіантах реалізації наступні нуклеотидні області БЕО ІО МО: 2, при направленому впливі антисмислових сполук або олігонуклеотидів, демонструють щонайменше 80 95 інгібування: 1685-1704, 1686-1705, 1873-1892, 1875-1890, 1877-1892, 1879-1894, 3819-3838, 4151-4166, 5904-5923, 6406-6425, 6985-7000, 7692-7707, 7694-7709, 7696-7711, 7786-7801, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7808, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7809, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7802-7819, 7802-7821, 60 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7822, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824,
7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7827, 7811-7828, 7812-7829, 7812-7831, 7813-7832, 7814-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7835, 7817-7836, 7818-7837, 7819-7838, 7820-7839, 7821-7840, 7822-7841, 7823-7842, 7824-7843, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7844, 7826-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7847, 7829-7848, 7830-7846, 7830-7849, 7831-7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7853, 7837-7856, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7846-7862 та 7847-7862.
У деяких варіантах реалізації наступні нуклеотидні області БЕО ІО МО: 1, при направленому впливі антисмислових сполук або олігонуклеотидів, демонструють щонайменше 90 95 інгібування: 154-169, 156-171, 158-173, 1135-1154, 1171-1186, 1173-1188, 1763-1782, 1912-1931, 2223-2238, 2227-2242, 2459-2474, 2461-2476, 2554-2573, 2555-2574, 2560-2577, 2561-2578, 2561-2579, 2562-2581, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2566-2583, 2567-2584, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2570-2587, 2576-2593, 2577-2594, 2577-2596, 2578-2597, 2580-2599, 2581-2600, 2582-2601, 2583-2602, 2584-2603, 2586-2605, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2607, 2589-2608, 2590-2607, 2590-2609, 2592-2611, 2595-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2613, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2619, 2601-2617, 2601-2620, 2602-2621, 2603-2622, 2604-2623, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2624, 2606-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608-2625, 2609-2628, 2611-2627, 2611-2630, 2612-2628, 2612-2631, 2613-2629, 2614-2629, 2615-2630 та 2616-2631.
У деяких варіантах реалізації наступні нуклеотидні області БЕО ІО МО: 2, при направленому впливі антисмислових сполук або олігонуклеотидів, демонструють щонайменше 90 95 інгібування: 1685-1704, 1686-1705, 1875-1890, 1877-1892, 1879-1894, 3819-3838, 5904-5923, 6406-6425, 7694-7709, 7696-7711, 7789-7808, 7790-7809, 7795-7812, 7795-7813, 7796-7813, 7796-7814, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7801-7818, 7802-7819, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7805-7822, 7811-7828, 7812-7829, 7812-7831, 7813-7832, 7815-7834, 7818-7837, 7819-7838, 7821-7840, 7822-7840, 7822-7841, 7825-7842, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7850, 7833-7848, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7853, 7835-7850, 7836-7852, 7836-7855, 7837-7856, 7838-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7859, 7843-7858, 7843-7860 та 7846-7862.
У деяких варіантах реалізації наступні антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані на область нуклеїнової кислоти СЕВ і викликають щонайменше 50 95 інгібування
МРНК СЕВ, ІЗІЗ МО: 516350, 532614, 532632, 532635, 532638, 532639, 532686, 532687, 532688, 532689, 532690, 532691, 532692, 532692, 532693, 532694, 532695, 532696, 532697, 532698, 532699, 532700, 532701, 532702, 532703, 532704, 532705, 532706, 532707, 532770, 532775, 532778, 532780, 532791, 532800, 532809, 532810, 532811, 532917, 532952, 588509, 588510, 588511, 588512, 588513, 588514, 588515, 588516, 588517, 588518, 588519, 588520, 588522, 588523, 588524, 588525, 588527, 588528, 588529, 588530, 588531, 588532, 588533, 588534, 588535, 588536, 588537, 588538, 588539, 588540, 588541, 588542, 588543, 588544, 588545, 588546, 588547, 588548, 588549, 588550, 588551, 588552, 588553, 588554, 588555, 588556, 588557, 588558, 588559, 588560, 588561, 588562, 588563, 588564, 588565, 588566, 588567, 588568, 588569, 588570, 588571, 588572, 588573, 588574, 588575, 588576, 588577, 588580, 588581, 588585, 588586, 588589, 588590, 588599, 588603, 588606, 588608, 588610, 588614, 588616, 588628, 588631, 588632, 588634, 588636, 588638, 588640, 588645, 588646, 588654, 588656, 588658, 588660, 588662, 588664, 588670, 588672, 588676, 588682, 588688, 588696, 588698, 588807, 588808, 588809, 588813, 588814, 588815, 588819, 588820, 588822, 588823, 588838, 588839, 588840, 588841, 588842, 588846, 588847, 588848, 588849, 588850, 588851, 588852, 588853, 588854, 588855, 588856, 588857, 588858, 588859, 588860, 588861, 588862, 588863, 588864, 588865, 588866, 588867, 588868, 588870, 588871, 588872, 588873, 588874, 588875, 588876, 588877, 588878, 588879, 588880, 588881, 588882, 588883, 588884, 598999, 599000, 599001, 599002, 599003, 599004, 599005, 599006, 599007, 599008, 599009, 599010, 599011, 599012, 599013, 599014, 599015, 599018, 599019, 599023, 599024, 599025, 599026, 599027, 599028, 599029, 599030, 599031, 599032, 599033, 599034, 599035, 599058, 599062, 599063, 599064, 599065, 599070, 599071, 599072, 599073, 599074, 599076, 599077, 599078, 599079, 599080, 599081, 599082, 599083, 599084, 599085, 599086, 599087, 599088, 599089, 60 599090, 599091, 599092, 599093, 599094, 599095, 599096, 599097, 599098, 599102, 599119,
599123, 599124, 599125, 599126, 599127, 599128, 599132, 599133, 599134, 599135, 599136, 599137, 599138, 599139, 599140, 599141, 599142, 599143, 599144, 599145, 599147, 599148, 599149, 599150, 599151, 599152, 599153, 599154, 599155, 599156, 599157, 599158, 599159, 599178, 599179, 599180, 599181, 599182, 599186, 599187, 599188, 599189, 599190, 599191, 599192, 599193, 599194, 599195, 599196, 599197, 599198, 599199, 599200, 599201, 599202, 599203, 599204, 599205, 599206, 599207, 599208, 599209, 599210, 599211, 599212, 599213, 599214, 599215, 599216, 599217, 599218, 599219, 599220, 599221, 599221, 599222, 599223, 599224, 599225, 599226, 599227, 599228, 599229, 599230, 599231, 599232, 599233, 599234, 599235, 599236, 599241, 599247, 599248, 599249, 599255, 599256, 599257, 599258, 599260, 599261, 599262, 599263, 599264, 599265, 599266, 599267, 599268, 599269, 599270, 599271, 599272, 599273, 599274, 599275, 599276, 599277, 599278, 599279, 599280, 599297, 599299, 599306, 599307, 599308, 599309, 599311, 599312, 599313, 599314, 599315, 599316, 599317, 599318, 599319, 599320, 599321, 599322, 599323, 599324, 599325, 599326, 599327, 599328, 599329, 599330, 599338, 599349, 599353, 599354, 599355, 599356, 599357, 599358, 599359, 599360, 599361, 599362, 599363, 599364, 599369, 599371, 599372, 599373, 599376, 599378, 599379, 599382, 599383, 599384, 599385, 599386, 599387, 599388, 599389, 599390, 599391, 599392, 599393, 599394, 599395, 599396, 599397, 599398, 599399, 599400, 599401, 599402, 599403, 599404, 599405, 599406, 599407, 599408, 599409, 599410, 599412, 599413, 599414, 599415, 599416, 599417, 599418, 599419, 599420, 599421, 599422, 599423, 599424, 599425, 599426, 599433, 599434, 599435, 599436, 599437, 599438, 599439, 599440, 599441, 599442, 599443, 599444, 599445, 599446, 599447, 599448, 599450, 599454, 599455, 599456, 599467, 599468, 599469, 599471, 599472, 599473, 599474, 599475, 599476, 599477, 599478, 599479, 599480, 599481, 599482, 599483, 599484, 599485, 599486, 599487, 599488, 599489, 599490, 599491, 599492, 599493, 599494, 599495, 599496, 599497, 599498, 599499, 599500, 599501, 599502, 599503, 599504, 599505, 599506, 599507, 599508, 599509, 599512, 599515, 599518, 599531, 599541, 599541, 599546, 599547, 599548, 599549, 599550, 599552, 599553, 599554, 599555, 599557, 599558, 599561, 599562, 599563, 599564, 599565, 599566, 599567, 599568, 599569, 599570, 599577, 599578, 599579, 599580, 599581, 599581, 599582, 599584, 599585, 599586, 599587, 599588, 599589, 599590, 599591, 599592, 599593, 599594, 599595, 601321, 601322, 601323, 601325, 601327, 601328, 601329, 601330, 601332, 601333, 601334, 601335, 601336, 601337, 601338, 601339, 601341, 601342, 601343, 601344, 601345, 601346, 601347, 601348, 601349, 601362, 601367, 601368, 601369, 601371, 601372, 601373, 601374, 601375, 601377, 601378, 601380, 601381, 601382, 601383, 601384, 601385, 601386, 601387 та 601388.
У деяких варіантах реалізації наступні антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані на область нуклеїнової кислоти СЕВ і викликають щонайменше 50 95 інгібування
МРНК СЕВ, 5ЕО ІО МО: 12, 30, 33, 36, 37, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 198, 203, 206, 208, 219, 228, 237, 238, 239, 317, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, А13, 414, 415, 416, 417, А18, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 468, 472, А73, 475, 478, 479, 488, 492, 494, 495, 498, 499, 500, 502, 503, 509, 510, 511, 512, 513, 514, 515, 517, 518, 522, 523, 524, 525, 529, 530, 531, 534, 535, 537, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 563, 564, 565, 569, 570, 572, 573, 577, 588, 589, 590, 591, 592, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 623, 640, 641, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 700, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 718, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 735, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 758, 759, 760, 761, 762, 766, 767, 768, 769, 770, 771, 772, 773, 774, 775, 716, 777, 718, 779, 780, 781, 782, 783, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 813, 833, 834, 841, 846, 849, 850, 867 та 873.
У деяких варіантах реалізації наступні антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані на область нуклеїнової кислоти СЕВ і викликають щонайменше 60 95 інгібування
МРНК СЕВ, ІЗІЗ МО: 516350, 532614, 532635, 532686, 532687, 532688, 532689, 532770, 532800, 532809, 532810, 532811, 532917, 532952, 588512, 588513, 588514, 588515, 588516, 588517, 588518, 588519, 588522, 588523, 588524, 588525, 588527, 588528, 588529, 588530, 588531, 588532, 588533, 588534, 588535, 588536, 588537, 588538, 588539, 588540, 588541, 588542, 60 588543, 588544, 588545, 588546, 588547, 588548, 588549, 588550, 588551, 588552, 588553,
588554, 588555, 588556, 588557, 588558, 588559, 588560, 588561, 588562, 588563, 588564, 588565, 588566, 588567, 588568, 588569, 588570, 588571, 588572, 588573, 588574, 588575, 588576, 588577, 588636, 588638, 588640, 588664, 588676, 588696, 588698, 588807, 588808, 588814, 588815, 588819, 588820, 588840, 588842, 588846, 588847, 588848, 588849, 588850, 588851, 588852, 588853, 588854, 588855, 588856, 588857, 588858, 588859, 588860, 588861, 588862, 588863, 588864, 588866, 588867, 588868, 588870, 588871, 588872, 588873, 588874, 588875, 588876, 588877, 588878, 588879, 588880, 588881, 588882, 588883, 588884, 598999, 599000, 599001, 599002, 599003, 599004, 599005, 599006, 599007, 599008, 599009, 599010, 599011, 599012, 599013, 599014, 599015, 599019, 599024, 599025, 599026, 599027, 599028, 599029, 599030, 599031, 599032, 599033, 599034, 599035, 599064, 599065, 599071, 599072, 599077, 599078, 599079, 599080, 599083, 599084, 599085, 599086, 599087, 599088, 599089, 599090, 599091, 599092, 599093, 599094, 599095, 599096, 599097, 599125, 599126, 599127, 599133, 599134, 599135, 599136, 599138, 599139, 599140, 599141, 599142, 599148, 599149, 599150, 599151, 599152, 599154, 599155, 599156, 599157, 599158, 599159, 599178, 599179, 599180, 599181, 599187, 599188, 599190, 599192, 599193, 599194, 599195, 599196, 599197, 599198, 599199, 599200, 599201, 599202, 599203, 599204, 599205, 599206, 599207, 599208, 599209, 599210, 599211, 599212, 599213, 599214, 599215, 599216, 599217, 599218, 599219, 599220, 599221, 599222, 599223, 599224, 599225, 599226, 599227, 599228, 599229, 599230, 599231, 599232, 599233, 599234, 599235, 599236, 599247, 599255, 599256, 599257, 599263, 599264, 599265, 599266, 599270, 599271, 599272, 599273, 599274, 599275, 599276, 599277, 599278, 599279, 599280, 599306, 599307, 599308, 599311, 599312, 599313, 599314, 599315, 599316, 599317, 599318, 599319, 599320, 599321, 599322, 599323, 599324, 599325, 599327, 599328, 599329, 599330, 599349, 599353, 599355, 599356, 599357, 599358, 599359, 599360, 599361, 599362, 599363, 599364, 599369, 599371, 599372, 599373, 599376, 599378, 599379, 599382, 599384, 599386, 599387, 599388, 599389, 599390, 599391, 599392, 599393, 599394, 599395, 599396, 599397, 599398, 599399, 599400, 599401, 599402, 599403, 599404, 599405, 599406, 599407, 599408, 599409, 599410, 599412, 599413, 599414, 599415, 599416, 599417, 599418, 599419, 599420, 599421, 599422, 599423, 599424, 599425, 599433, 599434, 599435, 599436, 599437, 599438, 599439, 599440, 599441, 599442, 599443, 599444, 599445, 599446, 599447, 599448, 599456, 599467, 599468, 599471, 599472, 599473, 599474, 599475, 599476, 599477, 599478, 599479, 599480, 599481, 599482, 599483, 599484, 599485, 599486, 599487, 599488, 599489, 599490, 599491, 599492, 599493, 599494, 599495, 599496, 599497, 599498, 599499, 599500, 599501, 599502, 599503, 599504, 599505, 599506, 599507, 599508, 599512, 599531, 599547, 599548, 599549, 599552, 599553, 599554, 599555, 599557, 599558, 599562, 599563, 599564, 599565, 599566, 599567, 599568, 599569, 599570, 599577, 599578, 599579, 599580, 599581, 599582, 599584, 599585, 599586, 599587, 599588, 599589, 599590, 599591, 599592, 599593, 599594, 599595, 601323, 601327, 601329, 601332, 601333, 601333, 601334, 601335, 601336, 601338, 601339, 601341, 601342, 601343, 601344, 601345, 601346, 601347, 601348, 601349, 601368, 601369, 601371, 601372, 601374, 601375, 601377, 601378, 601380, 601381, 601382, 601383, 601384, 601385, 601386, 601387 та 601388.
У деяких варіантах реалізації наступні антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані на область нуклеїнової кислоти СЕВ і викликають щонайменше 60 95 інгібування
МРНК СЕВ, 5ЕО ІЮО МО: 12, 33, 84, 85, 86, 87, 198, 228, 237, 238, 239, 317, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 410, 411, 412, 413, 414, 415, А16, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, Ада, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 472, 473, 513, 514, 515, 531, 537, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 564, 565, 569, 570, 577, 590, 592, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 700, 704, 706, 707, 708, 709, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 758, 759, 760, 761, 767, 768, 770, 772, 773, 774, 775, 775, 776, 776, 777, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 783, 784, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 813, 833, 834, 841, 846, 849 та 850.
У деяких варіантах реалізації наступні антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані на область нуклеїнової кислоти СЕВ і викликають щонайменше 70 95 інгібування 60 МРНК СЕВ, І5БІЗ МО: 516350, 532614, 532686, 532687, 532688, 532770, 532800, 532809, 532810,
532811, 532917, 532952, 588512, 588513, 588514, 588515, 588516, 588517, 588518, 588524, 588529, 588530, 588531, 588532, 588533, 588534, 588535, 588536, 588537, 588538, 588539, 588540, 588541, 588542, 588543, 588544, 588545, 588546, 588547, 588548, 588549, 588550, 588551, 588552, 588553, 588554, 588555, 588556, 588557, 588558, 588559, 588560, 588561, 588562, 588563, 588564, 588565, 588568, 588569, 588570, 588571, 588572, 588573, 588574, 588575, 588577, 588636, 588638, 588640, 588696, 588698, 588807, 588814, 588815, 588819, 588842, 588847, 588848, 588849, 588850, 588851, 588852, 588853, 588856, 588857, 588858, 588859, 588860, 588861, 588862, 588863, 588866, 588867, 588870, 588871, 588872, 588873, 588874, 588875, 588876, 588877, 588878, 588879, 588880, 588881, 588882, 588883, 588884, 599000, 599001, 599003, 599004, 599005, 599008, 599009, 599010, 599011, 599014, 599015, 599024, 599025, 599027, 599028, 599029, 599030, 599031, 599032, 599033, 599034, 599072, 599077, 599080, 599085, 599086, 599087, 599088, 599089, 599090, 599091, 599093, 599094, 599095, 599096, 599097, 599125, 599126, 599134, 599138, 599139, 599148, 599149, 599150, 599151, 599152, 599154, 599155, 599156, 599157, 599158, 599187, 599188, 599193, 599195, 599196, 599197, 599198, 599199, 599200, 599201, 599202, 599203, 599204, 599205, 599206, 599207, 599208, 599210, 599211, 599212, 599213, 599214, 599215, 599216, 599217, 599218, 599219, 599220, 599221, 599222, 599223, 599224, 599225, 599226, 599227, 599228, 599229, 599230, 599231, 599232, 599233, 599234, 599235, 599236, 599266, 599272, 599272, 599273, 599274, 599275, 599277, 599278, 599279, 599280, 599280, 599306, 599311, 599312, 599313, 599314, 599315, 599316, 599317, 599318, 599319, 599320, 599321, 599322, 599323, 599325, 599327, 599328, 599329, 599330, 599355, 599357, 599358, 599359, 599360, 599361, 599362, 599363, 599364, 599369, 599371, 599372, 599373, 599378, 599379, 599382, 599384, 599386, 599387, 599388, 599389, 599390, 599391, 599392, 599393, 599394, 599395, 599396, 599397, 599398, 599399, 599400, 599401, 599402, 599403, 599404, 599405, 599406, 599407, 599408, 599409, 599410, 599413, 599414, 599415, 599416, 599417, 599418, 599419, 599420, 599421, 599422, 599423, 599424, 599433, 599434, 599435, 599436, 599437, 599438, 599439, 599440, 599441, 599442, 599443, 599445, 599446, 599447, 599448, 599472, 599473, 599474, 599475, 599476, 599477, 599478, 599479, 599480, 599481, 599482, 599483, 599484, 599485, 599486, 599487, 599488, 599489, 599490, 599491, 599492, 599493, 599494, 599495, 599496, 599497, 599498, 599499, 599500, 599501, 599502, 599503, 599504, 599505, 599506, 599507, 599508, 599512, 599547, 599548, 599552, 599553, 599554, 599555, 599558, 599562, 599563, 599564, 599566, 599567, 599568, 599569, 599570, 599577, 599578, 599579, 599580, 599581, 599582, 599585, 599586, 599587, 599588, 599589, 599590, 599591, 599592, 599593, 599594, 599595, 601332, 601335, 601341, 601343, 601344, 601345, 601346, 601347, 601348, 601349, 601371,
З5 601372, 601380, 601382, 601383, 601384, 601385, 601386 та 601387.
У деяких варіантах реалізації наступні антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані на область нуклеїнової кислоти СЕВ і викликають щонайменше 70 95 інгібування
МРНК СЕВ, 5ЕО ІО МО: 12, 84, 85, 86, 198, 228, 237, 238, 239, 317, 395, 396, 397, 398, 399, 402, 403, 404, 405, 407, 408, 410, 411, 412, А12, 413, 414, 415, А16, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, А25, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 464, 465, 472, 473, 513, 514, 515, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 564, 565, 569, 592, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 653, 654, 655, 656, 659, 660, 662, 663, 664, 665, 666, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 677, 678, 679, 680, 682, 683, 684, 686, 687, 688, 689, 706, 708, 709, 711, 712, 713, 714, 715, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 767, 768, 773, 775, 776, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 793, 794, 795, 797, 798, 799, 813, 833, 834, 841, 846, 849, 867 та 873.
У деяких варіантах реалізації наступні антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані на область нуклеїнової кислоти СЕВ і викликають щонайменше 80 95 інгібування
МРНК СЕВ, І5ІЗ МО: 532686, 532809, 532810, 532811, 532917, 532952, 588512, 588517, 588518, 588533, 588534, 588535, 588536, 588537, 588538, 588539, 588540, 588542, 588543, 588544, 588545, 588546, 588547, 588548, 588549, 588550, 588551, 588552, 588553, 588554, 588555, 588556, 588557, 588558, 588559, 588560, 588561, 588562, 588563, 588564, 588565, 588571, 588638, 588640, 588696, 588698, 588807, 588814, 588849, 588850, 588851, 588853, 588857, 588858, 588859, 588860, 588861, 588862, 588863, 588866, 588867, 588871, 588872, 588873, 588874, 588875, 588876, 588877, 588878, 588879, 588880, 588881, 588882, 588883, 599001, 60 599024, 599025, 599033, 599086, 599087, 599088, 599089, 599093, 599094, 599095, 599096,
Зо
599134, 599139, 599148, 599149, 599151, 599154, 599155, 599156, 599158, 599188, 599195, 599196, 599198, 599201, 599202, 599203, 599204, 599205, 599206, 599207, 599212, 599213, 599215, 599216, 599217, 599218, 599219, 599220, 599221, 599222, 599223, 599224, 599225, 599226, 599227, 599228, 599229, 599230, 599231, 599232, 599233, 599234, 599235, 599236, 599272, 599273, 599275, 599277, 599278, 599279, 599280, 599311, 599313, 599314, 599316, 599317, 599318, 599320, 599321, 599322, 599323, 599327, 599328, 599329, 599330, 599355, 599357, 599358, 599359, 599360, 599361, 599362, 599363, 599364, 599371, 599372, 599373, 599378, 599379, 599382, 599384, 599386, 599387, 599388, 599389, 599390, 599391, 599392, 599393, 599397, 599398, 599399, 599400, 599401, 599403, 599404, 599405, 599407, 599408, 599409, 599410, 599413, 599414, 599415, 599416, 599417, 599418, 599419, 599420, 599421, 599422, 599423, 599424, 599433, 599434, 599435, 599436, 599437, 599438, 599439, 599440, 599441, 599445, 599446, 599447, 599448, 599474, 599476, 599477, 599479, 599481, 599482, 599483, 599485, 599486, 599487, 599488, 599489, 599490, 599491, 599492, 599494, 599495, 599496, 599497, 599498, 599499, 599500, 599502, 599503, 599504, 599505, 599506, 599507, 599508, 599547, 599552, 599553, 599554, 599558, 599563, 599567, 599568, 599569, 599570, 599577, 599578, 599581, 599582, 599585, 599587, 599588, 599590, 599591, 599592, 599593, 599594, 601332, 601344, 601345, 601382, 601383 та 601385.
У деяких варіантах реалізації наступні антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані на область нуклеїнової кислоти СЕВ і викликають щонайменше 80 95 інгібування
МРНК СЕВ, 5ЕО ІО МО: 84, 237, 238, 239, 317, 395, 397, 411, 412, 413, 414, 415, 417, 418, 419, 420, 421, 422, А23, 425, 426, 427, 429, АЗ0, 431, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 472, 473, 514, 515, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 564, 595, 599, 600, 601, 602, 603, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 646, 655, 660, 662, 663, 666, 669, 670, 671, 672, 673, 675, 676, 677, 678, 679, 682, 684, 686, 687, 688, 689, 706, 708, 709, 711, 712, 713, 714, 715, 720, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 729, 730, 731, 732, 733, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 768, 775, 776, 778, 781, 782, 783, 784, 785, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 799, 813, 833, 834, 841, 849, 867 та 873.
Зо У деяких варіантах реалізації наступні антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані на область нуклеїнової кислоти СЕВ і викликають щонайменше 90 95 інгібування
МРНК СЕВ, ІЗІЗ МО: 532686, 532811, 532917, 588536, 588537, 588538, 588539, 588544, 588545, 588546, 588548, 588551, 588552, 588553, 588554, 588555, 588556, 588557, 588558, 588559, 588560, 588561, 588562, 588564, 588638, 588640, 588696, 588698, 588849, 588850, 588851, 588860, 588866, 588867, 588872, 588873, 588874, 588876, 588877, 588878, 588879, 588881, 588883, 599149, 599188, 599203, 599206, 599220, 599221, 599222, 599223, 599224, 599225, 599226, 599227, 599228, 599229, 599235, 599236, 599279, 599280, 599314, 599321, 599362, 599378, 599390, 599391, 599398, 599399, 599404, 599413, 599414, 599416, 599419, 599420, 599422, 599435, 599437, 599438, 599441, 599483, 599494, 599508, 599552, 599553, 599554, 599568, 599570, 599577, 599581, 599591, 599592 та 599593.
У деяких варіантах реалізації наступні антисмислові сполуки або олігонуклеотиди спрямовані на область нуклеїнової кислоти СЕВ і викликають щонайменше 90 95 інгібування
МРНК СЕВ, ЗЕО ІО МО: 84, 238, 239, 317, 412, 413, 420, 421, 426, 434, 436, 437, 438, 439, 440, 442, 443, 444, 445, 446, 448, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 464, 465, 472, 473, 514, 515, 542, 543, 544, 545, 546, 551, 553, 555, 556, 599, 600, 601, 602, 610, 616, 617, 618, 662, 666, 670, 676, 677, 678, 688, 689, 713, 723, 729, 730, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 755, 756, 768, 783, 793, 833 та 867.
У деяких варіантах реалізації сполука може містити або складатися з будь-якого олігонуклеотиду, спрямованого на СЕВ, описаний у цьому документі, та групи кон'югату.
У деяких варіантах реалізації сполука містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, комплементарних у діапазоні нуклеотидів 2193-2212, 2195-2210, 2457-2476, 2571-2590, 2584- 2603, 2588-2607, 2592-2611, 2594-2613, 2597-2616, 2600-2619 або 2596-2611 5ЕО ІЮ МО: 1.
У деяких варіантах реалізації сполука містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, що мають послідовність азотистих основ, яка містить будь-яку з ЗЕО ІЮО МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 і 598.
У деяких варіантах реалізації сполука містить модифікований олігонуклеотид і групу кон'югату, де модифікований олігонуклеотид має послідовність азотистих основ, що 60 складається з будь-якої з ЗЕО ІЮ МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 і 598.
У деяких варіантах реалізації будь-яка з попередніх сполук або олігонуклеотидів може містити щонайменше один модифікований міжнуклеозидний зв'язок, щонайменше один модифікований цукор і/або щонайменше одну модифіковану азотисту основу.
У деяких аспектах будь-яка з попередніх сполук або олігонуклеотидів може містити щонайменше один модифікований цукор. У деяких аспектах щонайменше один модифікований цукор містить 2'-О-метоксіетильну групу. У деяких аспектах щонайменше один модифікований цукор являє собою біциклічний цукор, такий як група 4-СН(СНз)-О-2", група 4-СНг-0О-2" або група 4-(СНг)»-О-2".
У деяких аспектах модифікований олігонуклеотид містить щонайменше одну модифікований міжнуклеозидний зв'язок, такий як тіофосфатний міжнуклеозидний зв'язок.
У деяких варіантах реалізації модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7 фосфодіестерних міжнуклеозидних зв'язків.
У деяких варіантах реалізації кожний міжнуклеозидний зв'язок модифікованого олігонуклеотиду обран з фосфодіестерного міжнуклеозидного зв'язку та тіофосфатного міжнуклеозидного зв'язку.
У деяких варіантах реалізації кожен міжнуклеозидний зв'язок модифікованого олігонуклеотиду являє собою тіофосфатний зв'язок.
У деяких варіантах реалізації будь-які попередні сполуки або олігонуклеотиди містять щонайменше одну модифіковану азотисту основу, таку як 5-метилцитозин.
У деяких варіантах реалізації сполука містить групу кон'югату та модифікований олігонуклеотид, що містить: сегмент геп, який складається зі зв'язаних дезоксинуклеозидів; сегмент 5'-крила, який складається зі зв'язаних нуклеозидів; та сегмент 3'-крила, який складається зі зв'язаних нуклеозидів; причому сегмент геп розташований між сегментом 5'-крила і сегментом 3'-крила і, при цьому кожен нуклеозид кожного сегмента крила містить модифікований цукор. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, які мають послідовність азотистих основ, що містить послідовність, зазначену в ЗЕО ІЮО МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 або 598.
Зо У деяких варіантах реалізації модифікований олігонуклеотид має послідовність азотистих основ, яка містить або складається з послідовності, зазначеній у 5ЕО ІЮ МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453 або 455, причому модифікований олігонуклеотид містить: сегмент геп, який складається з десяти зв'язаних дезоксинуклеозидів; сегмент 5'-крила, який складається з п'яти зв'язаних нуклеозидів; та сегмент 3'-крила, який складається з п'яти зв'язаних нуклеозидів; де кожен сегмент геп розташований між сегментом 5'-крила і сегментом 3'-крила, причому кожен нуклеозид кожного сегмента крила містить 2'-О-метоксіетильний цукор; де кожен міжнуклеозидний зв'язок являє собою тіофосфатний зв'язок, і де кожен цитозин являє собою 5- метилцитозин.
У деяких варіантах реалізації сполука містить або складається з одноланцюгового модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з 20 зв'язаних нуклеозидів, що мають послідовність азотистих основ, яка складається з послідовності, зазначеної в 5ХЕО ІЮО МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453 або 455, причому олігонуклеотид містить: сегмент геп, який складається з десяти зв'язаних дезоксинуклеозидів; сегмент 5'-крила, який складається з п'яти зв'язаних нуклеозидів; та сегмент 3'-крила, який складається з п'яти зв'язаних нуклеозидів; де сегмент геп розташований між сегментом 5'-крила і сегментом 3'-крила, причому кожен нуклеозид кожного сегмента крила містить 2'-О-метоксіетильний цукор; при цьому кожний міжнуклеозидний зв'язок являє собою тіофосфатний зв'язок, і де кожен цитозин являє собою 5- метилцитозин.
У деяких варіантах реалізації сполука містить або складається з І5БІ5 588540 і групи кон'югату. У деяких варіантах реалізації ІБІ5 588540 має наступну хімічну структуру:
Мне
М М о ет з но ММ М Гопн о г | чн А - Ж м осо о ММ мн, о
З--0 МН» мно б | М 25 зе о зе з--о0 М о х
М 1 -в- ле о о. | мо в'рто мо й о о о о о о. Мне р Мне о7
О 8-р-о о о 1 М о 5 Б о Мне 9 в зо ев - б А, 8-р-0 ь о М о М о й Ї М 07 пре мо о о мно о о Мне о. Ї пев оо не 13 о. І А о. А, о МН2
Мм'со м'о Ов-р-о о о ! Ж-зм о7 мн о с що 2 М о 0.4 мн е. 9. С о
Ов-р-О 8-р-0 М А і Гм 5 в о (Ф) м сТОо о мо ою 55 о. о о7 5 о в-р-о р о ев оо м не о в-р-о з о м мен, й ї М о А. о о. « | 8 мо й
М М о о о о о м о о МН» о Мне бе в ; пе 8-в-о0 м о в-во Ь вп'ло що щей о І ї Гм о М мн, А о А. о /1 о
Мм7осо о 07 о о 9 он о. о о 8-Р-О 5-Р-О
Й о о
У деяких варіантах реалізації модифікований олігонуклеотид має послідовність азотистих основ, що містить або складається з послідовності, зазначеної в 5БО ІЮ МО: 549, де 5 модифікований олігонуклеотид містить сегмент геп, який складається з десяти зв'язаних дезоксинуклеозидів; сегмент 5'-крила, який складається з трьох зв'язаних нуклеозидів; та сегмент 3'-крила, який складається з трьох зв'язаних нуклеозидів; де сегмент геп розташований між сегментом 5'-крила і сегментом 3'-крила; причому кожен нуклеозид кожного сегмента крила містить СЕЇ цукор; при цьому кожен міжнуклеозидний зв'язок являє собою тіофосфатний зв'язок; і де кожен цитозин являє собою 5-метилцитозин.
У деяких аспектах модифікований олігонуклеотид має послідовність азотистих основ, що містить або складається з послідовності, зазначеної в 5ЕО ІЮ МО: 598, де модифікований олігонуклеотид містить сегмент геп, який складається з десяти зв'язаних дезоксинуклеозидів; сегмент 5'-крила, який складається з трьох зв'язаних нуклеозидів; та сегмент 3'-крила, який складається з трьох зв'язаних нуклеозидів; де сегмент геп розташований між сегментом 5'-крила і сегментом 3-крила; де сегмент 5'- крила містить 2'-О-метоксіетильний цукор, 2'-О-метоксіетильний цукор і СЕЇ цукор у напрямку від 5 до 3"; де сегмент 3'-крила містить СЕЇ цукор, СЕ цукор і 2'-О-метоксіетильний цукор у напрямку від 5' до 3"; де кожний міжнуклеозидний зв'язок являє собою тіофосфатний зв'язок; і де кожен цитозин являє собою 5-метилцитозин.
У деяких попередніх варіантах реалізації сполука або олігонуклеотид може бути щонайменше на 85 95, щонайменше на 90 956, щонайменше на 95 95, щонайменше на 98 965, щонайменше на 99 95 або на 100 95 комплементарним нуклеїновій кислоти, яка кодує СЕВ.
У будь-яких попередніх варіантах реалізації сполука або олігонуклеотид може бути одноланцюговим.
У деяких варіантах реалізації група кон'югату зв'язана з модифікований олігонуклеотидом на
5-кінці модифікованого олігонуклеотиду. У деяких варіантах реалізації група кон'югату зв'язана з модифікованим олігонуклеотидом на 3'-кінці модифікованого олігонуклеотиду. У деяких варіантах реалізації група кон'югату містить щонайменше один М- ацетилгалактозамін (сСаїІМАс) щонайменше два М- ацетилгалактозаміну (самАс) або щонайменше три /-М- ацетилгалактозаміну (саІМАс).
У деяких варіантах реалізації сполука, яка має наступну хімічну структуру, містить або складається з І5І5 588540 з 5-Х, де Х являє собою групу кон'югату, що містить саІМАс, як описано в цьому документі:
Мне
М Сх о хто З пе о ММ М Гн о ; МН А « | Ж М р - о о МОм мн, о о о о. о о 8-80 Мне МН» хх зів со в: зЗ-в-о0 КМ а х Ї о о ща в-р-о мо й о) о о о о 9,4 мн Мне 97
О 8-то о о 1 М О 8-6-о М о Мне о І А, п | А О5- в-о о мо о Мо І Ї тм о о о7 пр мо о 9. Мне о о Мне о. р
О в-р-о 8-Р-0 с о зм | о о ГК о А, о Мне
Мо о. 1
М оо 8-Р-0 Ми о о. 1 ; М о7 ще о і І 2 М ? о. Мне о Ф о
Ов8-в-о вро ря й
ОС А ;
МмосТо ру щу 55 ра ов- М о б о 8-в-0 У МН о МН ве. о 2 о в в-о Мн о М мен 5 в-о М М б Ї А о 2 о. г | А Мо м
М М о о о о о о М о 9 МН
МН й о в-во й Ов-р-о є ле 7 о 7 Ко 1 Гм о ММ мн, А, о А о. Ло
М7то о 97 о 8 о он о... о. 9 в-рео в-во о о
У деяких варіантах реалізації сполука містить або складається з 5ЕО ІЮ МО: 440, 5'-саІМАс і хімічних модифікацій, як показано наступною хімічною структурою:
о МН» мно ноон о о-в-о о шо о нм О ММ
НК о Ме о о. Йо нон у о ? го 55 в о о в 2 о о МН 8-го в ОВ. о пас ати ви І о Се вро І А, зр о о Мото сто / н он г ве о в Ї о МН Є в-р-о в нот о ВВ о й-Ро без о іо зум у р о о на оо тр в 8-рР-0 Ж з-й-о во Те о МОМ вна
КО пе о. ЙО ві о
К », е о тк в 8-рео ІФ о в Мне о! мо 25р-о ре о буру «| в дв (в о - ко ві МН» Чв-в-о І 7-рР-О ММ о я о У ру о те МН» о в Мне 27--0 На
Чв-б-о бе о мо о мо о
Кк з о о Мне
Явно в гїмо оз о м нь ру м о. о
Мн Ко 1 о ре ТО о Ох то о б ен, о
Мне е о б «в 8-РО | о в нг 6- о кто У в-во бо
У З о мо в-рео Кон в о де будь-який КЕ" являє собою ОСН»СН2гОСНзІ (МОЕ), і 2 являє собою Н; К' В? разом утворюють місток, де ВЕ! являє собою -О, В? являє собою -СНе-, -СН(СНз)- або -«СНаСНе-, і г 5 безпосередньо зв'язані так, що отриманий місток обирають з: -О-СНе-, -0-СН(СНз)- і -0-
Сснсне-;
Ї для кожної пари КЗ В: в одному кільці, незалежно для кожного кільця: кожен КЗ обраний з Н і -ОСН.СНогОСснН» В" являє собою Н; або КЗ В" разом утворюють місток, де КЗ являє собою -0,
В? являє собою -СНго-, -СН(СНз)- або -СН»СНег - і КЗ В" безпосередньо з'єднані так, що отриманий місток обирають з: -0-СНе-, -О-СН(СНз)- та -0О-СН.СНе-;
І 2? обраний з Н і -СНз;
І 7 обраний з 5'О..
У деяких варіантах реалізації сполука містить І5І5 696844. У деяких варіантах реалізації сполука складається з І5І5 696844. У деяких варіантах реалізації ІБІ5 696844 має наступну хімічну структуру:
о? Ма МН» не ей МО т и о не о ММ А, ною о «Хе о шо зр с о о о. носно о о е 9 о оо це о А о Мн 8-го 8-р-о зе но ло Ото в
Мн Мото о. те о о о о7 о ноон е о
О о М Фе Те з--о | Х но ТО о т зе о Мо
МН о А, о то о мо о о о7 о о в ї Й І о ми в-Рно «А Ж "в-в-о о о ММ мн, о. о. у Ї о о а т Мн 97 8-Р-О зе 5-9 0. мн 5 мо вро за о.
К- у о7 ее) за е9 ми це в-рно ло 8-р-о г о-- о о М ща о7 о б о. мн о Мне Ов-р-о М е є ! | А зро ГО о мо о мо -о.. / бе о7 о т о м Ов-р-о кое 8-0 / МН І ет 1 є І Ж о 4 о ММ мн, мм о. о - о т- Мне т в-в-о зе о 9 5 М ї
А вро «1 Х
Ве тру о. о
Мне о7 о хх
Єв-вго з 59 о. мн, о м оо -0-0 М -0. / о Ї А о мо оо о7 5-го он 0. о
У деяких варіантах реалізації сполука містить І5І5 696845. У деяких варіантах реалізації сполука складається з І5І5 696845. У деяких варіантах реалізації ІІ 696845 має наступну хімічну структуру:
о? Мна МН» не 8 ей МО т вч о нм 0 ММ А, ною о «Хе о што зр с о о о. носно о о е 9 о оо Те о ХА о мно 0/8-во в-р-о зе но ло Ото о
Мн Мото о. те о о о о7 о ноон о о
О о М Фо ї2 з--о | Х но ТО о що зе о Мо
МН о А, о то о мо о о 07 оо М МН оф « е о о Мн 8-Р-0 м о-б-о о є Мотнн, о. о. у Ї о о а т Мн 97 8-Р-О зе -9 0. мн 5 мо олио за о.
К- х о7 о о за ев ми рн в-рно ло о-Р-О Мем о о «СД о и
М М о о б о. мн о Мне ОФо-р-о М о є ! | А 8-в-0 зм о М і Ї о о А, о у о о7 о От е о м Уо-в-о а
В'юко В о «1 о. М ме мн» мм о. о - о т- Мне т в-в-о зе о 9 5 М ї
А во Ж
Ве тру о. о
Мне о7 о хх в-во з 59 о. мн, о Мо 8-Р-0 М -0. / о Ї А о мо оо о7 5-го он 0. о
У деяких варіантах реалізації сполука містить І5І5 698969. У деяких варіантах реалізації сполука складається з І5І5 698969. У деяких варіантах реалізації ІБІ5 698969 має наступну хімічну структуру:
о? Мна МН» не 8 ей МО т вч о нм 0 ММ А, ною о «Хе о што зр с о о о. носно о о е 9 о оо Те о ХА о мно 0/8-во в-р-о зе но ло Ото о
Мн Мото о. те о о о о7 о ноон о о
О о М Фо ї2 з--о | Х но ТО о що зе о Мо
МН о А, о то о мо о о 07 оо М МН оф « е о о Мн 8-Р-0 м о-б-о о є юн, о. о. у Ї о о а т Мн 97 8-Р-О зе -9 0. мн 5 мо олио за о.
К- ї о7 о о за ев ми рн в-рно ло 8-р-0 Мем о о «СД о и
М М о о б о. мн о Мне ОФо-р-о М е 5 ! | А 8-в-0 зм о М і Ї о о А, о у о о7 о От е о м Уо-в-о а
В'юко В о «1 о. М ме мн» мм о. о - о т- Мне т в-в-о зе о 9 5 М ї
А во Ж
Ве тру о. о
Мне о7 о хх в-во з 59 о. мн, о мо 8-р-о за у о м о о оо 7 5-го он 0. о
У деяких варіантах реалізації сполука містить І5І5 698970. У деяких варіантах реалізації сполука складається з І5І5 698970. У деяких варіантах реалізації ІІ 698970 має наступну хімічну структуру:
о Мне мно ноон о о во о ся о ня о мм що ною о «Хе о што зу ді о7 о. о. носно о о е 9 о оо у о ХА о мно 0/8-во в-р-о зе но ло Ото о
Мн Мото о. те о о о о7 о нон оо
О о М Фе ї2 з--о | Х но ТО о що зе о Мо
МН о А, о то о мо о о о оо М МН оф « е о о Мн 8-Р-0 м о-р-о но о МОН» о, Ї о ух Ф А а т Мн 97 8-Р-О зе -9 о, мн 5 мо олио за о.
К- х о7 е о за е9 ми у зло мо о-Р-О Мем о о «СД о и
М М о о б о. мн
Мне Оо-р-о м о є ! | А вікно ГО о мо о А, о у о о7 о От е о м Фо-Р-о р 8-рР-О АВ МН б ет А о. М ме мн» М М то / о - о
Мн. о о но -е 9 о м о че бо
Ве тру о. о , Мне о7 в-во з 59 о. мн, о Мо 8-Р-0 М -0. / о Ї А о мо оо 7 5-го он 0. о
У деяких варіантах реалізації винаходу запропоновані композиції, які містять будь-яку сполуку, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду, спрямованого на СЕВ, 5 або його сіль, і групу кон'югату, і щонайменше один фармацевтично прийнятний носій або розріджувач.
У деяких варіантах реалізації сполуки або композиції, описані в цьому документі, ефективні в тому відношенні, що вони мають щонайменше одну іп міїго Со менше 250 нм, менше 200 нМ, менше 150 нМ, менше 100 нМ, менше 90 нМ, менше 80 нМ, менше 70 нМ, менше 65 нМ, менше 60 НМ, менше 55 нМ, менше 50 нМ, менше 45 нМ, менше 40 нМ, менше 35 нМ, менше 30 нМ, менше 25 нМ або менше 20 нМ.
У деяких варіантах реалізації сполуки або композиції, описані в цьому документі, добре переносяться, що демонструється наявністю щонайменше одного з показників: підвищення значення АТ або А5Т не більш ніж у 4 рази, З рази або 2 рази порівняно з тваринами, обробленими сольовим розчином, або збільшення маси печінки, селезінки або нирок не більше ніж на 30 95, 20 95, 15 95, 12 905, 10 95, 5 90 або 2 95. Удеяких варіантах реалізації сполуки або композиції, описані в цьому документі, добре переносяться, що демонструється відсутністю збільшення АЇТ або А5Т порівняно з тваринами, обробленими сольовим розчином. У деяких варіантах реалізації сполуки або композиції, описані в цьому документі, добре переносяться, що демонструється відсутністю збільшення маси печінки, селезінки або нирок порівняно з тваринами, обробленими сольовим розчином.
У деяких варіантах реалізації запропонована композиція, що містить сполуку по кожному з попередніх варіантів реалізації або його сіль і щонайменше один з фармацевтично прийнятного носія або розчинника. У деяких аспектах композиція має в'язкість менш ніж близько 40 сантипуаз (СП), менш ніж близько 30 сантипуаз (СП), менш ніж близько 20 сантипуаз (СП), менш ніж близько 15 сантипуаз (СП) або менш ніж близько 10 сантипуаз (СП). У деяких аспектах композиція, що має будь-яку вищевказану в'язкість, містить сполуку, запропоновану в цьому документі, у концентрації близько 100 мг/мл, близько 125 мг/мл, близько 150 мг/мл, близько 175 мг/мл, близько 200 мг/мл, близько 225 мг/мл, 250 мг/мл, близько 275 мг/мл або близько 300 мг/мл У деяких аспектах композиція, що має будь-яку вищевказану в'язкість і/або концентрацію сполуки, має температуру що дорівнює кімнатній температурі або близько 20 "С, близько 21 "С, близько 22 С, близько23 "С, близько 24 С, близько 25 С, близько 26 "С, близько 27 "С, близько 28 "С, близько 29 "С або близько 30 "С.
У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або ослаблення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу у суб'єкта, включає введення суб'єкту сполуки або композиції, описаної в цьому документі, тим самим забезпечуючи лікування, попередження та полегшення захворювання. У деяких аспектах альтернативний шлях комплементу активований вище нормального рівня. У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або полегшення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу у суб'єкта, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, причьому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить послідовність азотистих основ будь-якої з ЗЕО ІЮ
МО: 6-808. У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або полегшення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу у суб'єкта, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, що мають послідовність азотистих основ, що містить будь-яку з БЕО ІЮ
МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 і 598. У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або полегшення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією
Зо альтернативного шляху комплементу у суб'єкта, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з ІЗІ5 696844, ІБІ5 696845, ІБІ5 698969 або ІБІЗ 698970.
У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або полегшення дегенерації жовтої плями, такої як вікова дегенерація жовтої плями (ВДМ), у суб'єкта включає введення суб'єкту сполуки або композиції, описаної в цьому документі, тим самим забезпечуючи лікування, попередження та полегшення ВДМ. У деяких аспектах альтернативний шлях комплементу активований вище нормального рівня. У деяких аспектах ВДМ являє собою вологу
ВДМ. У деяких варіантах реалізації ВДМ являє собою суху ВДМ або географічну атрофію. У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або полегшення дегенерації жовтої плями у суб'єкта, такої як вікова дегенерація жовтої плями (ВДМ), волога ВДМ, суха ВДМ або географічна атрофія, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить послідовність азотистих основ будь-якої з 5ЕО ІЮ МО: 6-808. У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або полегшення дегенерації жовтої плями, такої як вікова дегенерація жовтої плями (ВДМ), волога ВДМ, суха ВДМ або географічна атрофія у суб'єкта, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, які мають послідовність азотистих основ, що містить будь-яку з 5ЕО ІЮ
МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 і 598. У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або полегшення дегенерації жовтої плями, такої як вікова дегенерація жовтої плями (ВДМ), волога ВДМ, суха ВДМ або географічна атрофія у суб'єкта, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з І5І5 696844, ІБІ5 696845, ІБІ5 698969 або І5І5 698970. В деяких аспектах сполуку або композицію вводять суб'єкту парентерально.
У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або полегшення захворювання нирок, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу у суб'єкта, включає введення суб'єкту сполуки або композиції, описаної в цьому документі, забезпечуючи тим самим лікування, попередження та полегшення захворювання нирок. У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або полегшення захворювання нирок, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу у суб'єкта, включає бо введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить послідовність азотистих основ будь-якої з БЕО ІЮ МО: 6-808. У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або полегшення захворювання нирок, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу у суб'єкта, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, що мають послідовність азотистих основ, що містить будь-яку з ЗЕО ІЮ МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 і 598. У деяких варіантах реалізації спосіб лікування, попередження або полегшення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу у суб'єкта, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з І5БІ5 696844, І5БІ5 696845, ІБІ5 698969 або І5І5 698970. У деяких аспектах альтернативний шлях комплементу активований вище нормального рівня. У деяких аспектах захворювання нирок являє собою вовчаковий нефрит, системний червоний вовчак (ЗЕ), хвороба щільного осаду (000), СЗ гломерулонефрит (СЗОМ), СЕНК5 нефропатію або атиповий гемолітико-уремічний синдром (аниб5), або будь-яку їх комбинацію. У деяких аспектах захворювання нирок пов'язано з відкладенням ССЗ, наприклад, відкладенням ССЗ у гломерулі. У деяких аспектах захворювання нирок пов'язано з більш низькими, порівняно з нормальними, рівнями циркулюючого С3, наприклад, рівнями ССЗ у сироватці або плазмі. У деяких аспектах введення сполуки або композиції знижує або інгібує накопичення вмісту СЗ в очах, наприклад, вмісту білка С3. У деяких аспектах введення сполуки або композиції знижує рівень відкладень СЗ3 в очах або інгібує накопичення вмісту ССЗ в очах. У деяких аспектах сполуку або композицію вводять суб'єкту парентерально. У деяких аспектах введення сполуки або композиції знижує або інгібує накопичення вмісту СЗ в нирках, наприклад, вмісту білка С3. У деяких аспектах введення сполуки або композиції знижує рівні відкладень СЗ в нирках або інгібує накопичення відкладень СЗ3 в нирках, наприклад, рівнів СЗ3 в гломерулі. У деяких аспектах суб'єкта ідентифікують як такого, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, наприклад, шляхом визначення рівнів комплементу або рівнів мембраноатакуючего комплексу у крові суб'єкта та/або шляхом генетичного тесту на генетичні мутації факторів комплементу, які
Зо пов'язані із захворюванням.
У деяких варіантах реалізації спосіб інгібування експресії фактора комплементу В (СЕВ) у суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки або композиції, описаної в цьому документі, забезпечуючи тим самим інгібування експресії СЕВ у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації спосіб інгібування експресії фактора комплементу В (СЕВ) у суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить послідовність азотистих основ будь-якої з БЕ ІЮ МО: 6-808. У деяких варіантах реалізації спосіб інгібування експресії фактора комплементу В (СЕВ) у суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається 3 10-30 зв'язаних нуклеозидів, що мають послідовність азотистих основ, що містить будь-яку з БЗЕО ІЮ МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 і 598. У деяких варіантах реалізації спосіб інгібування експресії фактора комплементу В (СЕВ) у суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з ІБІ5 696844, І5БІ5 696845, І5І5 698969 або І5БІ5 698970. У деяких аспектах введення сполуки або композиції інгібує експресію СЕВ в очах. У деяких аспектах суб'єкт страждає від від або має ризик виникнення вікової дегенерації жовтої плями (ВДМ), такий як волога ВДМ або суха ВДМ. У деяких аспектах суха ВДМ може являти собою географічну атрофію. Географічну атрофію вважають прогресуючою формою сухої ВДМ, що зачіпає дегенерацію сітківки. У деяких аспектах введення сполуки або композиції інгібує експресію СЕВ у нирках, наприклад, у гломерулі. У деяких аспектах суб'єкт страждає від або має ризик виникнення вовчакового нефриту, системного червоної вовчака (СЧВ), хвороби щільного осаду (000), С3 гломерулонефриту СЗОМ), СЕНК5 нефропатії або атипічного гемолітико-уремічного синдрому (аниз), або будь-якої їх комбінації. бо У деяких варіантах реалізації спосіб зниження або інгібування накопичення відкладення СЗ в оці суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки або композиції, описаної в цьому документі, тим самим знижуючи або інгібуючи накопичення відкладень СЗ в оці суб'єкта. У деяких варіантах реалізації спосіб зниження або інгібування накопичення відкладень ССЗ в оці суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить послідовність азотистих основ будь-якої з ЗЕО ІЮ МО: 6-808. У деяких варіантах реалізації спосіб зниження або інгібування накопичення відкладень СЗ в оці суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, які мають послідовність азотистих основ, що містить будь-яку з БЕО ІЮ МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 і 598. У деяких варіантах реалізації спосіб зниження або інгібування накопичення відкладень СЗ3 в оці суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з ІБІ5 696844, ІБІ5 696845, ІБІ5 698969 або І5ЗІ5 698970. У деяких аспектах суб'єкт страждає від від або має ризик виникнення вікової дегенерації жовтої плями (ВДМ), такий як волога ВДМ або суха ВДМ. У деяких аспектах суха ВДМ може являти собою географічну атрофію. У деяких аспектах сполуку або композицію вводять суб'єкту парентерально.
У деяких варіантах реалізації спосіб зниження або інгібування накопичення відкладень С3З в нирках суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки або композиції, описаної в цьому документі, тим самим знижуючи або інгібуючи накопичення відкладень СЗ в нирках суб'єкта. У деяких варіантах реалізації спосіб зниження або інгібування накопичення відкладень СЗ3 в нирках суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення
Зо захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить послідовність азотистих основ будь
ЗЕО І МО: 6-808. У деяких варіантах реалізації спосіб зниження або інгібування накопичення відкладень СЗ в нирках суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, причому модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, що мають послідовність азотистих основ будь ЗЕО ІЮ МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 5491 598. У деяких варіантах реалізації спосіб зниження або інгібування накопичення відкладень СЗ в нирках суб'єкта, який страждає від або має ризик виникнення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, включає введення суб'єкту сполуки, що містить або складається з І5І5 696844, І5ЗІЗ 696845, ІБІ5 698969 або І5ЗІЗ 698970. У деяких аспектах суб'єкт страждає від або має ризик виникнення вовчакового нефриту, системного червоної вовчака (СЧВ), хвороби щільного осаду (000), СЗ гломерулонефриту СЗОМ), СЕНКЬ нефропатії або атипічного гемолітико-уремічного синдрому (анивз), або будь-якої їх комбінації.
У деяких аспектах сполуку або композицію вводять суб'єкту парентерально.
Деякі варіанти реалізації винаходу відносяться до застосування сполуки або композиції, описаної в цьому документі, для лікування захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу. Деякі варіанти реалізації відносяться до застосування сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів і має послідовність азотистих основ, що містить послідовність азотистих основ будь-якої з БЗЕО ІЮ МО: 6-808, для лікування захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу.
Деякі варіанти реалізації винаходу відносяться до застосування сполуки, що містить або складається з модифікованого олігонуклеотиду і групи кон'югату, де модифікований олігонуклеотид складається з 10-30 зв'язаних нуклеозидів, які мають послідовність азотистих основ, що містить будь-яку з БЕО ІЮО МО: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 і 598, для лікування захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу. бо Деякі варіанти реалізації відносяться до застосування сполуки, що містить або складається з
ІБІ5 696844, І5ІЗ 696845, І5БІЗ 698969 або І5ЗІЗ 698970, для лікування захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу. У деяких аспектах альтернативний шлях комплементу активований вище нормального рівня. У деяких аспектах захворювання являє собою дегенерацію жовтої плями, таку як вікова дегенерація жовтої плями (ВДМ), яка може бути вологою ВДМ або сухої ВДМ. У деяких аспектах суха ВДМ може являти собою географічну атрофію. У деяких аспектах захворювання являє собою хворобу нирок, таку як вовчаковий нефрит, системний червоний вовчак (СЧВ), хвороба щільного осаду (000), СЗ3 гломерулонефрит (СЗОМ), СЕНК5 нефропатія або атиповий гемолітико-уремічний синдром (анив), або будь-яку їх комбінація. У деяких аспектах сполуку або композицію вводять суб'єкту парентерально.
У деяких варіантах реалізації сполуку або композицію, описану у цьому документі, вводять парентерально. Наприклад, у деяких варіантах реалізації сполука або композиція може бути введена шляхом ін'єкції або інфузії. Парентеральне введення включає підшкірне введення, внутрішньовенне введення, внутрішньом'язове введення, внутрішньоартеріальне введення, внутрішньоочеревинне введення або внутрішньочерепний введення, наприклад, интратекальное або интрацеребровентрикулярное введення.
Антисмислові сполуки
Олігомерні сполуки включають, але не обмежуються ними, олігонуклеотиди, олігонуклеозиди, аналоги олігонуклеотидів, міметики олігонуклеотидів, антисмислові сполуки, антисмислові олігонуклеотиди та міРНК. Олігомерна сполука може бути "антисмисловою" до нуклеїнової кислоти-мішені, що означає, що вона здатна зазнавати гібридизації з нуклеїновою кислотою-мішенню за допомогою водневого зв'язування.
У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука містить послідовність азотистих основ, яка при написанні у 5-3 напрямку містить зворотний комплемент цільового сегмента нуклеїнової кислоти-мішені, до якої вона спрямована.
У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 10-30 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 12-30 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 12-22 субодиниці у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 14-30 субодиниць у довжину. У деяких варіантах
Зо реалізації антисмислова сполука має 14-20 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 15-30 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 15-20 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 16-30 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 16-20 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 17-30 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 17-20 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 18-30 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 18-21 субодиниці у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 18-20 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 20-30 субодиниць у довжину. Іншими словами, такі антисмислові сполуки мають від 12 до 30 зв'язаних субодиниць, від 14 до 30 зв'язаних субодиниць, від 14 до 20 субодиниць, від 15 до 30 субодиниць, від 15 до 20 субодиниць, від 16 до 30 субодиниць, від 16 до 20 зв'язаних субодиниць, від 17 до 30 субодиниць, від 17 до 20 субодиниць, від 18 до 30 субодиниць, від 18 до 20 субодиниць, від 18 до 21 субодиниці, від 20 до 30 субодиниць або від 12 до 22 зв'язаних субодиниць, відповідно. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 14 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 16 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 17 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 18 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 19 субодиниць у довжину. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука має 20 субодиниць у довжину. В інших варіантах реалізації антисмислова сполука має 8-80, 12-50, 13-30, 13-50, 14-30, 14-50, 15-30, 15-50, 16-30, 16-50, 17-30, 17-50, 18-22, 18-24, 18-30, 18-50, 19-22, 19-30, 19-50 або 20-30 зв'язаних субодиниць. У деяких таких варіантах реалізації антисмислові сполуки містять 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, Зб, 37, 38, 39, 40, АТ, 42, 43, 44, 45, Аб, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67,68,69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 або 80 зв'язаних субодиниць у довжину або діапазон, обумовлений будь-якими двома з вказаних вище значень. У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука являє собою антисмисловий олігонуклеотид, а зв'язані субодиниці являють собою нуклеотиди. бо У деяких варіантах реалізації антисмислові олігонуклеотиди можуть бути короткими або усіченими. Наприклад, одна субодиниця може бути видалена з 5' кінця (5' усічення), або ж зі 3" кінця (3' усічення). Вкорочена або обрізана антисмислова сполука, спрямована до нуклеїнової кислоти СЕВ, може мати дві субодиниці видалені з 5' кінця, або ж може мати дві субодиниці видалені з 3' кінця антисмислової сполуки. В альтернативному варіанті, видалені нуклеозиди можуть бути розсіяні по всій антисмисловій сполуці, наприклад, в антисмисловій сполуці з одним нуклеозидом, вилученим з 5' кінця, і одним нуклеозидом, вилученим зі З' кінця.
Якщо одна додаткова субодиниця присутня в подовженому антисмисловій сполуці, додаткова субодиниця може бути розташована на 5' або 3' кінці антисмислової сполуки. Якщо присутні дві або більше додаткових субодиниць, приєднані субодиниці можуть бути суміжними одна з одною, наприклад, в антисмисловій сполуці, що має дві субодиниці приєднані до 5' кінця (5 приєднання), або ж до 3' кінця (3' приєднання) антисмислової сполуки. В альтернативному варіанті приєднані субодиниці можуть бути розсіяні по всій антисмисловій сполуці, наприклад, в антисмисловій сполуці, що має одну субодиницю, приєднану до 5' кінця, і одну субодиницю, приєднану до 3З' кінця.
Можливо збільшення або зменшення довжини антисмислової сполуки, такої як антисмисловий олігонуклеотид, талабо введення некомплементарної азотистої основи без усунення активності. Наприклад, Умооїї еї аїЇ. (Ргос. Май. Асай. сі. ОБА 89:7305-7309, 1992), описують ряд антисмислових олігонуклеотидів довжиною 13-25 азотистих основ, які були випробувані на їх здатність індукувати розщеплення РНК-мішені в моделі ін'єкції в ооцит.
Антисмислові олігонуклеотиди довжиною 25 азотистих основ з 8 або 11 некомплементарними основами поблизу кінців антисмислових олігонуклеотидів були в змозі управляти прямим специфічним розщепленням мРЕК-мішені, хоча і в меншій мірі, ніж антисмислові олігонуклеотиди, які не містили жодних невідповідностей. Аналогічним чином, цільове специфічне розщеплення було отримано із застосуванням антисмислових олігонуклеотидів з 13 азотистих основ, включаючи такі, що мали 1 або З невідповідності.
Сацівсні еї аї. (У. Май. Сапсег Іпві. 93:463-471, Магсп, 2001) продемонстрували здатність олігонуклеотиду, який має 100 95 комплементарністі до мРНК бсі-2 і містить З неузгоджених осови по відношенню до мРНК бБсі-х!., зменшувати експресію як рсі-2 так і Бсі-хі. іп міго та іп мімо.
Крім того, цей олігонуклеотид продемонстрував високу протипухлинну активність іп мімо.
Зо Мапекг апа Ооїпіск (Мис. Асій. ВНВевз. 16:3341-3358,1988) випробування серії тандемів антисмислових олігонуклеотидів з 14 азотистих основ і антисмислових олігонуклеотидів з 28 і 42 азотистих основ, що складається з послідовності двох або трьох тандемів антисмислових олігонуклеотидів, відповідно, на їх здатність до блокування трансляції ДГФР людини в аналізі на ретикулоцитах кролика. Кожен з трьох антисмислових олігонуклеотидів з 14 азотистих основ поодинці був здатний інгібувати трансляцію, хоча і на більш низькому рівні, ніж антисмислові олігонуклеотиди з 28 або 42 азотистих основ.
Деякі мотиви і механізми антисмислових сполук
У деяких варіантах реалізації винаходу антисмислові сполуки містять хімічно модифіковані субодиниці, організовані в патерни або мотиви, для додання антисмисловим сполукам таких властивостей, як посилена інгібуюча активність, підвищена афінність зв'язування з нуклеїновою кислотою-мішенню або опір до розкладання нуклеазами іп мімо
Химерні антисмислові сполуки зазвичай містять щонайменше одну ділянка, змінену таким чином, щоб надати підвищену стійкість до деградації під дією нуклеаз, посилення клітинного поглинання, підвищену афінність зв'язування з нуклеїновою кислотою-мішенню і/або підвищену ингибуючу активність. Друга ділянка химерної антисмислової сполуки може забезпечувати іншу необхідну властивість, наприклад, служити в якості субстрату для клітинної ендонуклеази
РНКази Н, яка розщеплює спіраль РНК у дуплексі РНК:ДНК.
Антисмислова активність може бути результатом будь-якого механізму, який зачіпає гібридизацію антисмислової сполуки (наприклад, олігонуклеотиду) з нуклеїновою кислотою- мішенню, при цьому гібридизація в кінцевому підсумку призводить до біологічного ефекту. У деяких варіантах реалізації модулюють кількість і/або активність нуклеїнової кислоти-мішені. У деяких варіантах реалізації знижується кількість і/або активність нуклеїнової кислоти-мішені. У деяких варіантах реалізації гібридизація антисмислової сполуки з нуклегтовою кислотою- мішенню в кінцевому підсумку призводить до руйнування нуклеїнової кислоти-мішені. У деяких варіантах реалізації гібридизація антисмислової сполуки з нуклеїновою кислотою-мішенню не призводить до руйнування нуклеїнової кислоти-мішені. У деяких варіантах реалізації наявність антисмислової сполуки, гібридизованого з нуклесновою кислотою-мішенню (зайнятість), призводить до модулювання антисмислової активності. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, які мають певний хімічний мотив або патерн хімічних модифікацій, 60 особливо підходять для функціонування одного або більше механізмів. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки функціонують більше ніж по одному механізму і/або механізмам, які не були з'ясовані. Відповідно, антисмислові сполуки, описані в цьому документі, не обмежені конкретним механізмом.
Антисмислові механізми включають, без обмежень, антисенс, опосередкований РНКазой НН;
РНКІ-механізми, в яких використовується шлях КІЗС і які включають, без обмеження, механізми міРНК, олРНК та мікроРНК; і механізми на основі зайнятості. Деякі антисмислові сполуки можуть діяти більше ніж за одним таким механізмом та/або за додатковими механізмами.
Антисенс, опосередкований РНКазой Н
У деяких варіантах реалізації антисмислова активність щонайменше частково обумовлена руйнуванням РНК-мішені РНКазой Н. РНКаза Н являє собою клітинну ендонуклеазу, яка розщеплює спіраль РНК дуплексу РНК:ДНК. У цій області техніки відомо, що одноланцюгові антисмислові сполуки, які є "ДНК-подібними", викликають активність РНКази Н у клітинах ссавців. Відповідно, антисмислові сполуки, які містять щонайменше частину ДНК або ДНК- подібних нуклеозидів, можуть активувати РНКазу Н, приводячи до розщеплення нуклеїнової кислоти-мішені. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, які використовують РНКазу
Н, містять один або більше модифікованих нуклеозидів. У деяких варіантах реалізації такі антисмислові сполуки містять щонайменше один блок з 1-8 модифікованих нуклеозидів. У деяких варіантах реалізації модифіковані нуклеозиди не підтримують активність РНКази Н. У деяких варіантах реалізації такі антисмислові сполуки являють собою гепмери, як описано в цьому документі. У деяких таких варіантах реалізації геп гепмеру містить ДНК нуклеозиди. У деяких таких варіантах реалізації геп гепмеру містить ДНК-подібні нуклеозиди. У деяких таких варіантах реалізації геп гепмеру містить ДНК нуклеозиди і ДНК-подібні нуклеозиди.
Деякі антисмислові сполуки, які мають гепмерний мотив, вважаються химерними антисмисловими сполуками. У гепмері внутрішня ділянка має безліч нуклеотидів, які підтримують розщеплення РНКазой Н, розташованих між зовнішніми областями, які мають безліч нуклеозидів, хімічно відмінних від нуклеозидів внутрішньої області. У разі, коли антисмисловий олігонуклеотид має гепмерний мотив, сегмент геп, як правило, служить в якості субстрату для розщеплення ендонуклеазою, у той час, як сегменти крил містять модифіковані нуклеозиди. У деяких варіантах реалізації ділянки гепмеру розрізняються за типами цукрових
Зо фрагментів у складі кожної окремої ділянки. Типи цукрових фрагментів, які використовуються для диференціації ділянок гепмеру, у деяких варіантах реалізації можуть включати В-О- рибонуклеозиди, В-Ю-дезоксирибонуклеозиди, 2'-модифіковані нуклеозиди (2'-модифіковані нуклеозиди можуть включати, серед інших, 2-МОЕ і 2'-0О-СНз) і модифіковані нуклеозиди з біциклічним цукром (такі модифіковані нуклеозиди з біциклічним цукром можуть включати ті, які містять стерично утруднений етил). У деяких варіантах реалізації нуклеозиди в крилах можуть містити кілька модифікованих цукрових фрагментів, включаючи, наприклад, 2'-МОЕ і біциклічні цукрові фрагменти, такі як стерично утруднений етил або ЗНК. У деяких варіантах реалізації крила можуть містити кілька модифікованих і немодифікованих цукрових фрагментів. У деяких варіантах реалізації крила можуть містити різні комбінації 2'-МОЕ нуклеозидів, біциклічних цукрових фрагментів, таких як нуклеозиди зі стерично утрудненим етилом або ЗНК нуклеозиди, і 2і-дезоксинуклеозиди.
Кожна окрема ділянка може містити однакові цукрові фрагменти, або цукрові фрагменти які відрізняються або чергуються. Мотив крило-геп-крило часто описують як "Х-У-2", де "Х" позначає довжину 5' крила, "у" позначає довжину гепа, а "2" позначає довжину З' крила. "Х" і "и" можуть містити однакові цукрові фрагменти, або цукрові фрагменти які відрізняються або чергуються. У деяких варіантах реалізації "Х" та "у" можуть містити один або більше 2'- дезоксинуклеозидів. "у" може містити 2'-дезоксинуклеозиди. У цтому контексті гепмер, описаний як "Х-У-2", має конфігурацію, в якій геп розташований безпосередньо прилягаючи до 5' крила і
З крила. Таким чином, між 5' крилом і гепом або гепом і 3 крилом не існує проміжних нуклеотидів. Будь-які антисмислові сполуки, описані в цьому документі, можуть мати гепмерний мотив. У деяких варіантах реалізації "Х" ії "7" є однаковими; в інших варіантах реалізації вони різні. У деяких варіантах реалізації "У" містить від 8 до 15 нуклеозидів. Х, М або 7 можуть містити 1,2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30 або більше нуклеозидів.
У деяких варіантах реалізації антисмислова сполука, спрямоване на нуклеїнову кислоту
СЕВ, має гепмерний мотив, у якому геп складається з 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 зв'язаних нуклеозидів.
У деяких варіантах реалізації антисмисловий олігонуклеотид має цукровий мотив, описаний
Формулою А, представленою нижче: (5/) т-(В)п-(У)р-(В)А (Ах (О)а-(А)х-(В)ж-(У)х-(В)у-(9)2 бо де:
кожен А незалежно являє собою 2'-заміщений нуклеозид; кожен В незалежно являє собою біциклічний нуклеозид; кожен .) незалежно являє собою або 2'-заміщений нуклеозид, або 2'-дезоксинуклеозид; кожен О являє собою 2'-дезоксинуклеозид; т дорівнює 0-4; п дорівнює 0-2; р дорівнює 0-2; г дорівнює 0-2; ї дорівнює 0-2; м дорівнює 0- 2; м дорівнює 0-4; х дорівнює 0-2; у дорівнює 0-2; 7 дорівнює 0-4; д дорівнює 6-14; за умови, що: шонайменше один з т, п і г є відмінним від 0; шонайменше один з му і у є відмінним від 0; сумат, п, р, гії дорівнює від 2 до 5; і сумам, му, х, у і 7 дорівнює від 2 до 5.
РНКІ сполуки
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки являють собою сполуки інтерферуючої
РНК (РНКІ,), які включають дволанцюгові сполуки РНК (також відомі як малі інтерферуючі РНК або міРНК) і одноланцюгові сполуки РНКи (або олРНК). Такі сполуки щонайменше частково діють по шляху КІЗС для руйнування та/або ізолювання нуклеїнової кислоти-мішені (отже, включають сполуки мікроРНК/мікроРНК-міметики). У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки містять модифікації, які роблять їх особливо придатними для таких механізмів. і. Сполуки олРНК
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, включаючи сполуки, які особливо підходять для застосування в якості одноланцюгових РНКі сполук (ОолЛРНК), містять модифікований 5'--ермінальний кінець. У деяких таких варіантах реалізації 5'--еримнальний кінець містить модифікований фосфатний фрагмент. У деяких варіантах реалізації такий модифікований фосфат є стабілізованим (наприклад, стійким до розкладання/розщеплення порівняно з немодифікованим 5'-фосфатом). У деяких варіантах реалізації такі 5'-кінцеві нуклеозиди стабілізують 5'--фосфорний фрагмент. Деякі модифіковані 5'-кінцеві нуклеозиди описані у відомому рівні техніки, наприклад, у МО/2011/139702.
У деяких варіантах реалізації 5'--ч-уклеозид сполуки ОЛРНК має формулу Іс:
ТА Му ВХ,
Ії 5 о о т; с
Зо де:
Ті являє собою необов'язково захищений фосфорний фрагмент;
Т2 являє собою міжнуклеозидну лінкерну групу, яка зв'язує сполуку Формули Пс з олігомерною сполукою;
А має одну з формул: по. 00 І ба А Од мо, о. бо Жов Ох о ас 7
С: та О2, кожен незалежно, являють собою Н, галоген, С1-Сє алкіл, заміщений С:-Св алкіл,
Сі-Св алкокси, заміщений Сі-Сє алкокси, С2о-Св алкеніл, заміщений С2-Свє алкеніл, С2о-Св алкиніл, заміщений С2-Свє алкиніл або М(Ез) (Ва);
Оз являє собою О, 5, М(К5) або С(Ке)(В»7); кожен Ез, Ва В5, Нє В7 незалежно являє собою Н, С.1-Св алкіл, заміщений С.1-Св алкіл або С1-
Св алкокси;
Мз являє собою 0, 5, МЕКча, С(Ні5) (Вів), С(Ві5)(Вів)С(А17) (Вів), С(А15)-С(Ви7), "С(Кі5) (Вів) або
ОС(А:5)(ВХ»);
Віа являє собою Н, С:-Сє алкіл, заміщений Сі-Свє алкіл, Сі--Св алкокси, заміщений С1-Св алкокси, Сг-Св алкеніл, заміщений С2-Сє алкеніл, Со-Сє алкиніл або заміщений С2-Сє алкиніл;
Ве», Вів, Ви? та К:в, кожен незалежно, являють собою Н, галоген, С1-Свє алкіл, заміщений С1-
Св алкіл, Сі-Свє алкокси, заміщений С:1-Свє алкокси, Сг-Свє алкеніл, заміщений С2-Свє алкеніл, С2-Св алкиніл або заміщений С2-Свє алкиніл;
Вх: являє собою фрагмент гетероциклічної основи; або якщо присутній Вхг2, Вхг являє собою фрагмент гетероциклічної основи, а Вхі являє собою Н, галоген, Сі-Свє алкіл, заміщений С:і-Свє алкіл, Сі-Свє алюокси, заміщений Сі-Сє алкокси,
С2-Св алкеніл, заміщений С2-Сє алкеніл, Со-Свє алкиніл або заміщений С2-Св алкиніл;
Уа, 95, дв та у, кожен незалежно, являють собою Н, галоген, Сі-Сє алкіл, заміщений С1-Св алкіл, Сі-Св алкокси, заміщений С1-Сє алкокси, С2-Сє алкеніл, заміщений С2-Свє алкеніл, С2-Св алкиніл або заміщений С2-Свє алкиніл; або 94 утворює місток з одним з .)5 //7, де зазначений місток складається з 1-3 зв'язаних бірадикальних груп, вибраних з 0, 5, МК», С(Вго) (Рг), С(Нго)-С(Агі), СІ-С(Аго(Аг)| і С(0-О),а інші два з в, ув //7, кожен незалежно, являють собою Н, галоген, С1-Свє алкіл, заміщений С1-Св алкіл, Сі-Св алкокси, заміщений С1-Сє алкокси, С2-Сє алкеніл, заміщений С2-Свє алкеніл, С2-Св алкиніл або заміщений С2-Свє алкиніл; кожен ВЕ», Вго та Б2і незалежно являє собою Н, С1-Свє алкіл, заміщений С1-Свє алкіл, С1-Св алкокси, заміщений Сі-Свє алкокси, Сго-Свє алкеніл, заміщений С2-Свє алкеніл, Со-Св алкиніл або заміщений С2-Св алкиніл;
С являє собою Н, ОН, галоген або О-|С(АВв)(Ное)н-КО-О) т-Х11-27; кожен Кзе Но незалежно являє собою Н, галоген, С1-Свє алкіл або заміщений С.1-Св алкіл;
Хі являє собою 0, 5 або М(Еї); 7 являє собою Н, галоген, С1-Сє алкіл, заміщений С1-Сє алкіл, Се-Свє алкеніл, заміщений С2-
Се алкеніл, Сг-Сє алкиніл, заміщений С2-Сє алкиніл або М(Ег)(Ез);
Ех: Ег Ез, кожен незалежно, являють собою Н, С1-Св алкіл або заміщений С:1-Св алкіл; п дорівнює від 1 до близько 6; т дорівнює 0 або 1; | дорівнює 0 або 1; кожна заміщена група містить одну або більше необов'язково захищених груп замісників, незалежно вибраних з галогену, 091, М(У1)(92), -Мої, З, Мз, СМ, "С(еХг)уї, "С(еХ2г)М(у1)(ог2) і
С(-Х2 М) (ог);
Хг являє собою 0, 5 або М.з; кожен .)1, уд» дз незалежно являє собою Н або С.і-Св алкіл; якщо | дорівнює 1, то 2 відрізняється від галогену або М(Ег)(Ез); де зазначена олігомерна сполука містить від 8 до 40 мономерних субодиниць і може піддаватися гібридизації щонайменше частиною нуклеїнової кислоти-мішені.
У деяких варіантах реалізації Мз являє собою О, СНАСН, ОСН» або ОС(Н)(Вхг). У деяких
Зо варіантах реалізації Мз являє собою 0.
У деяких варіантах реалізації 4, 5, д6 та У; являють собою Н. У деяких варіантах реалізації
Уа утворює місток з одним з У5або 7.
У деяких варіантах реалізації А має одну з формул: о, о». Ко
Ге В: й й - и чо азюо де:
СО: ФО», кожен незалежно, являють собою Н, галоген, С1-Сє алкіл, заміщений С:і-Св алкіл, С1-
Св алкокси або заміщений С:-Сє алкокси. У деяких варіантах реалізації 01 та 02 являють собою
Н. У деяких варіантах реалізації 0 та ОО, кожен незалежно, являють собою Н або галоген. У деяких варіантах реалізації 0: та ОО являє собою Н, а інший з 0): та ОО являє собою Е, СНз або
Осн».
У деяких варіантах реалізації Ті має формулу:
В.
І вет
Е де:
Ва Кс, кожен незалежно, являють собою захищений гідроксил, захищений тіол, С1-Свє алкіл, заміщений С:1-Св алкіл, Сі-Свє алкокси, заміщений Сі-Сєвє алкокси, захищений аміно або заміщений аміно;
Вь іявляє собою О або 5. У деяких варіантах реалізації Кь являє собою 0, а Ка Вс, кожен незалежно, являють собою ОСНз, ОСН»СНз або СН(СНЗ)».
У деяких варіантах реалізації б являє собою галоген, ОСНз, ОСНоЕ, ОСНЕ»:, ОСЕ:»,
БО ОСН.СН:і, О(СНг2»Б, ОСН.СНЕ», ОСНоСЕз, ОСН»АСН-СН:, О(СНг)»-ОСНзі, О(СНг)2-5СОН з,
О(СНга-ОСЕ:», О(СНг)з-М(Віо) (Ви), О(СНгаІ-ОМ(Атоу (В), О(СНгаа-О(СНгІа-М(Атоу (Ві),
ОоСНС(-О)-М(Аоу(Ві), ОоСНегС(-О0)-М(Н12)-(СНг)2-М(Віо) (Ач) або О(СНаг)2-М(Ви2)-
С(-МА зу МА) (Ач), де Ко, Ви, Ві2 Віз, кожен незалежно, являє собою Н або Сі1-Свє алкіл. У деяких варіантах реалізації С являє собою галоген, ОСНз, ОСЕз, ОСНаСНз, ОСНоСЕз, ОСН»-
Сн-сСНно, О(СНг-ОсН», О(СН2)-О(СНг)2-М(СНз)г, ОСНагО(-0)-МЩ(Н)СНзі, ОСН2гС(-О0)-М(Н)-(СНег)2-
М(СНз)г5 або ОСН»-М(Н)-С(-МН)МН». У деяких варіантах реалізації С являє собою Е, ОСНз або
Оо(СНг)2-ОСН:». У деяких варіантах реалізації С являє собою О(СНг)2-ОСН».
У деяких варіантах реалізації 5'-кінцевий нуклеозид має Формулу Пе: о, он їх но оу" о о 12 Ме
У деяких варіантах реалізації винаходу антисмислові сполуки, включаючи сполуки, які особливо підходять для ОолЛРНК, містять один або більше типів модифікованих цукрових фрагментів і/або природних цукрових фрагментів, розташованих уздовж олігонуклеотиду або його області у певному патерні або мотиві цукрової модифікації. Такі мотиви можуть містити будь-які цукрові модифікації, описані в цьому документі, та/або інші відомі модифікації цукру.
У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди містять або складаються з області, що має однакові цукрові модифікації. У деяких варіантах реалізації кожен нуклеозид області містить однакову РНК-подібну цукрову модифікацію. У деяких варіантах реалізації кожен нуклеозид області являє собою 2'-Е нуклеозид. У деяких варіантах реалізації кожен нуклеозид області являє собою 2'-ОМе нуклеозид. У деяких варіантах реалізації кожен нуклеозид області являє собою 2'--МОЕ нуклеозид. У деяких варіантах реалізації кожен нуклеозид області являє собою
СЕК нуклеозид. У деяких варіантах реалізації кожен нуклеозид області являє собою ЗНК нуклеозид. У деяких варіантах реалізації однорідна область утворює весь або по суті весь олігонуклеотид. У деяких варіантах реалізації область утворює весь нуклеотид, за винятком 1-4 кінцевих нуклеозидів.
У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди містять одну або більше областей цукрових модифікацій, що чергуються, де нуклеозиди чергуються між нуклеотидами, які мають цукрову модифікацію першого типу, і нуклеотидами, які мають цукрову модифікацію другого типу. У деяких варіантах реалізації нуклеозиди обох типів являють собою РНК-подібні нуклеозиди. У деяких варіантах реалізації нуклеозиди, що чергуються вибрані з: 2'-ОМе, 2-Е, 2'-МОЕ, ЗНК і
СЕЇ. У деяких варіантах реалізації модифікації що чергуються являють собою 2'-Е і 2'-ОМе. Такі області можуть бути суміжними або можуть бути перервані по-іншому модифікованими нуклеозидами або кон'югованими нуклеозидами.
У деяких варіантах реалізації кожна область що чергується модифікацій які чергуються
Зо складається з одного нуклеозиду (тобто патерн являє собою (АВ)хАу, де А являє собою нуклеозид, який має цукрову модифікацію першого типу, і В являє собою нуклеозид, який має цукрову модифікацію другого типу; х дорівнює 1-20, а у дорівнює 0 або 1). У деяких варіантах реалізації одна або більше областей що чергуються у мотиві який чергується містить більше одного нуклеозиду деякого типу. Наприклад, олігонуклеотиди можуть містити одну або більше областей будь-якого з наступних нуклеозидних мотивів:
ААВВАА;
АВВАВВ;
ААВААВ;
АВВАВААВВ;
АВАВАА;
ААВАВАВ;
АВАВАА;
АВВААВВАВАВАА;
ВАВВААВВАВАВАА; або
АВАВВААВВАВАВАА; де А являє собою нуклеозид першого типу, і В являє собою нуклеозид другого типу. У деяких варіантах реалізації кожний А і В обраний з 2'-Е, 2'-ОМе, БНК та МОЕ.
У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди, які мають такий мотив, що чергується, містять також модифікований 5'-кінцевий нуклеозид, такий як нуклеозид формули Іс або Пе.
У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди містять область, що має мотив 2-2-3. Такі області містять наступний мотив:
ЧА)2-(В)с(А)2-(О)У-(А)з- де: А являє собою перший тип модифікованого нуклеозиду;
В ї С являють собою нуклеозиди, модифіковані інакше, ніж А, однак В і С можуть мати однакові або різні модифікації відносно один одного; х та у дорівнюють від 1 до 15.
У деяких варіантах реалізації А являє собою 2-ОМе модифікований нуклеозид. У деяких варіантах реалізації В і С являють собою 2'-Е модифіковані нуклеозиди. У деяких варіантах реалізації А являє собою 2'-ОМе модифікований нуклеозид, а В ії С являють собою 2-Е модифіковані нуклеозиди.
У деяких варіантах реалізації олігонуклеозиди мають наступний цукровий мотив: 5- (0)- (АВ)ХАу-(0); де:
О являє собою нуклеозид, що містить стабілізований фосфатний фрагмент. У деяких варіантах реалізації С) являє собою нуклеозид, який має Формули Іс або Пе;
А являє собою перший тип модифікованого нуклеозиду;
В являє собою другий тип модифіцированого нуклеозиду; р являє собою модифікований нуклеозид, що містить модифікацію, відмінну від нуклеозиду, суміжного з ним. Так, якщо у дорівнює 0, то Ю повинен бути модифікований інакше, ніж В, а якщо у дорівнює 71, то Ю повинен бути модифікований інакше, ніж А. У деяких варіантах реалізації О відмінний як від А, так і від В.
Х дорівнює 5-15;
У дорівнює 0 або 1; 2 дорівнює 0-4.
У деяких варіантах реалізації олігонуклеозиди мають наступний цукровий мотив: 5-(0)- (А)х-(0); де:
О являє собою нуклеозид, що містить стабілізований фосфатний фрагмент. У деяких варіантах реалізації С) являє собою нуклеозид, що має Формули ІІс або Пе;
А являє собою перший тип модифікованого нуклеозиду; р являє собою модифікований нуклеозид, що містить модифікацію, відмінну від А.
Х дорівнює 11-30; 2 дорівнює 0-4.
У деяких варіантах реалізації А, В, С і О у представлених вище мотивах обрані з: 2'-ОМе, 2'-
Е, 2'-МОЕ, ЗНК і сЕї. У деяких варіантах реалізації О являє собою кінцеві нуклеозиди. У деяких варіантах реалізації такі кінцеві нуклеозиди не призначені для гібридизації з нуклеїновою кислотою-мішенню (хоча може відбуватися випадкова гібридизація одного або більше з них). У деяких варіантах реалізації азотиста основа кожного нуклеозиду ЮО являє собою аденін, незалежно від ідентичності азотистої основи у відповідному положенні нуклеїнової кислоти- мішені. У деяких варіантах реалізації азотиста основа кожного нуклеозиду О являє собою тимін.
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, включаючи сполуки, які особливо підходять для застосування в якості ОЛРНК, містять модифіковані міжнуклеозидні зв'язки, розташовані вздовж олігонуклеотиду або його області в певному порядку або в мотиві модифікованого міжнуклеозидного зв'язку. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди містять область, що має мотив міжнуклеозидних зв'язків які чергуються. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди містять область однаково модифікованих міжнуклеозидних зв'язків.
У деяких таких варіантах реалізації олігонуклеотид містить область, що рівномірно зв'язана тіофосфатнимими міжнуклеозидними зв'язками. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид рівномірно зв'язаний тіофосфатнимими міжнуклеозидними зв'язками. У деяких варіантах реалізації кожен міжнуклеозидний зв'язок олігонуклеотиду вибран із фосфодіестеру і тіофосфату. У деяких варіантах реалізації кожен міжнуклеозидний зв'язок олігонуклеотиду вибран з фосфодіестеру і тіофосфату, і щонайменше однин міжнуклеозидний зв'язок являє собою тіофосфат.
У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше б тіофосфатних міжнуклеозидних зв'язків. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше 8 тіофосфатних міжнуклеозидних зв'язків. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше 10 тіофосфатних міжнуклеозидних зв'язків. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше один блок з щонайменше б послідовними тіофосфатнимими міжнуклеозиднми зв'язками. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше один блок з щонайменше 8 послідовними тіофосфатнимими міжнуклеозиднми зв'язками. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше один блок з щонайменше 10 послідовними тіофосфатнимими міжнуклеозиднми зв'язками. У бо деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше один блок з щонайменше 12 послідовними тіофосфатнимими міжнуклеозиднми зв'язками. У деяких таких варіантах реалізації щонайменше один такий блок розташований на 3' кінці олігонуклеотиду. У деяких таких варіантах реалізації щонайменше один такий блок розташований в межах З нуклеозидів від З'кінця олігонуклеотиду.
Олігонуклеотиди, які мають будь-які з різних цукрових мотивів, описаних у цьому документі, можуть мати будь-який мотив який зв'язує. Наприклад, олігонуклеотиди, включаючи, без обмеження, ті, які описані вище, можуть мати мотив, що зв'язує, вибраний з необмежуючої таблиці, поданої нижче: і. Сполуки міРНК
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки являють собою дволанцюгові РНКІ сполуки (міРНК). У таких варіантах реалізації однин або обидвп ланцюга можуть містити будь- який мотив модифікації описаний вище для олЛРНК. У деяких варіантах реалізації олРНК сполуки можуть являти собою немодифіковані РНК. У деяких варіантах реалізації сполуки міРНК можуть містити немодифіковані нуклеозиди РНК, але модифіковані міжнуклеозидні зв'язки.
Деякі варіанти реалізації відносяться до дволанцюгових композицій, в яких кожен ланцюг містить мотив, визначений положенням одного або більше модифікованих або немодифікованих нуклеозидів. У деяких варіантах реалізації запропоновані композиції, що містять першу і другу олігомерну сполуку, які повністю або щонайменше частково гібридизовані з утворенням дуплексної області, та додатково містять область, яка комплементарна нуклеїнової кислоти-мішені і гібридизується з нею. Зручно, що така композиція містить першу олігомерну сполуку, яка являє собою антисмисловий ланцюг, що має повну або часткову комплементарність до нуклеїнової кислоти-мішені, і другу олігомерну сполуку, яка являє собою смисловий ланцюг, що має одну або більше областей, які комплементарні та утворюють щонайменше одну дуплексну область з першою олігомерною сполукою.
Композиції згідно з деякими варіантами реалізації модулюють генну експресію шляхом гібридизації з нуклетїновою кислотою-мішенню, що призводить до втрати її нормальної функції.
Зо У деяких варіантах реалізації нуклеїнова кислота-мішень являє собою СЕВ. У деяких варіантах реалізації руйнування СЕВ-мішені полегшується активованим комплексом КіЗС, який утворюється з композиціями за цим винаходом.
Деякі варіанти реалізації відносяться до дволанцюгових композицій, в яких один із ланцюгів підходить, наприклад, для впливу на переважне включення протилежного ланцюга в КІЗС (або розщеплює) комплекс. Зазначені композиції підходять для спрямованого впливу на вибрані молекули нуклеїнових кислот і для модулювання експресії одного або більше генів. У деяких варіантах реалізації композиції згідно з цим винаходу гібридизуються з частиною РНК-мішені, що призводить до втрати нормальної функції РНК-мішені.
Деякі варіанти реалізації відносяться до двохланцюгових композицій, в яких обидва ланцюги містять гемімерний мотив, повністю модифікований мотив, позиційно модифікований мотив або мотив, який чергується. Кожен ланцюг композицій згідно з цим винаходом може бути модифікована для виконання певної ролі, наприклад, у каскаді міРНК. Використовуючи різні мотиви в кожному ланцюзі або однаковий мотив з різними хімічними модифікаціями в кожному ланцюзі, може бути забезпечено спрямований вплив на онтисенсний ланцюг комплексу КІЗС при інгібуванні впровадження смислового ланцюга. В рамках такої моделі кожен ланцюг може бути модифікован незалежно, так щоб він краще виконував свою конкретну роль.
Антисмисловий ланцюг може бути модифікован на 5'-кінці для посилення його ролі в одній області КІЗС, тоді як 3'-кінець може бути модифікований інакше для посилення його ролі в іншій області КІЗС.
Молекули дволанцюгових олігонуклеотидів можуть являти собою молекулу дволанцюгового полінуклеотиду, який містить автокомплементарні смислові і антисмислові області, де антисмислова область містить нуклеотидну послідовність, яка комплементарна нуклеотидній послідовності в молекулі нуклеїнової кислоти-мішені або її частини, а смислова область має нуклеотидну послідовність, що відповідає послідовності нуклеїнової кислоти-мішені або її частини. Молекули дволанцюгових олігонуклеотидів можуть бути зібрані з двох окремих олігонуклеотидів, де один ланцюг являє собою смисловий ланцюг, а інший являє собою 5О0 антисмисловий ланцюг, при цьому антисмисловий і смисловий ланцюгі є автокомплементарними (тобто кожен ланцюг містить нуклеотидну послідовність, яка комплементарна нуклеотидній послідовності іншого ланцюга; наприклад, якщо антисмисловий ланцюг і смисловий ланцюг утворюють дуплекс або дволанцюгову структуру, наприклад, якщо дволанцюгова область має від близько 15 до близько 30, наприклад, близько 15, 16, 17, 18, 19, 20,21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30 пар основ); антисмисловий ланцюг містить нуклеотидну послідовність, яка комплементарна нуклеотидній послідовності в молекулі нуклеїнової кислоти-мішені або її частини, а смисловий ланцюг містить нуклеотидну послідовність, що відповідає послідовності нуклеїнової кислоти-мішені або її частини (наприклад, від близько 15 до близько 25 або більше нуклеотидів молекули дволанцюгового олігонуклеотиду комплементарні нуклеїновій кислоті-мішені або її частини). В альтернативному варіанті, дволанцюговий олігонуклеотид збирається 3 одного олігонуклеотиду, де автокомплементарні смислові і антисмислові області міРНК зв'язані за допомогою лінкерус-ів) на основі нуклеїнової кислоти або не на основі нуклеїнової кислоти.
Дволанцюговий олігонуклеотид може являти собою полінуклеотид з дуплексом, асиметричним дуплексом, шпильковою або асиметричною шпильковою вторинною структурою, що має автокомплементарні смислові і антисмислові області, при цьому антисмислова область містить нуклеотидну послідовність, яка комплементарна нуклеотидній послідовності в окремій молекулі нуклеїнової кислоти-мішені або її частини, а смислова область має нуклеотидну послідовність, що відповідає послідовності нуклеїнової кислоти-мішені або її частини.
Дволанцюговий олігонуклеотид може являти собою кільцевий одноланцюговий полінуклеотид, що має дві або більше петльових структур і стовбур, що містить автокомплементарні смислові і антисмислові області, при цьому антисмислова область містить нуклеотидну послідовність, яка комплементарна нуклеотидній послідовності в молекулі нуклеїнової кислоти-мішені або її частини, а смислова область має нуклеотидну послідовність, що відповідає послідовності нуклеїнової кислоти-мішені або її частини, і при цьому кільцевий полінуклеотид може бути процесованим іп мімо або іп оміго з отриманням активної молекули міРнНК, здатної опосередкувати РНКІ.
У деяких варіантах реалізації дволанцюговий олігонуклеотид містить окремі смислові і
Зо антисмислові послідовності або області при цьому смислова і антисмислова області ковалентно зв'язані нуклеотидними або ненуклеотидними лінксерними молекулами, відомими в цій галузі техніки, або в альтернативному варіанті реалізації зв'язані нековалентно за допомогою іонних взаємодій, водневого зв'язування, ван-дер-ваальсовських взаємодій, гідрофобних взаємодій та/або стекінг-взаємодій. У деяких варіантах реалізації дволанцюговий олігонуклеотид містить нуклеотидну послідовність, яка комплементарна нуклеотидній послідовності гена-мішені В іншому варіанті реалізації дволанцюговий олігонуклеотид взаємодіє з нуклеотидною послідовністю гена-мішені таким чином, щоб викликати інгібування експресії гена-мішені.
У даному контексті дволанцюгові олігонуклеотиди не обмежені молекулами, що містять тільки РНК, а додатково охоплюють хімічно модифіковані нуклеотиди і ненуклеотиди. У деяких варіантах реалізації молекули малої інтерферуючої нуклеїнової кислоти не мають нуклеотидів, що містять 2-гідрокси (2- ОН). У деяких варіантах реалізації малі інтерферуючі нуклеїнові кислоти необов'язково не містять рибонуклеотидів (наприклад, нуклеотидів, які мають групу 2'-
ОН). Такі дволанцюгові олігонуклеотиди, які не вимагають наявності рибонуклеотидів у молекулі для підтримання РНКІі, можуть тим не менш мати приєднаний лінкер або лінкери або інші приєднані або зв'язані групи, фрагменти або ланцюги, що містять один або більше нуклеотидів з групами 2'-ОН. Необов'язково, дволанцюгові олігонуклеотиди можуть містити рибонуклеотиди у близько 5, 10, 20, 30, 40 або 50 95 положеннях нуклеотидів. У контексті цього документа термін міРНК вважають еквівалентним іншим термінам, що використовуються для опису молекул нуклеїнових кислот, які можуть опосередкувати послідовність-специфічну РНКІ, наприклад, малої інтерферуючої РНК (міРНК), дволанцюгової РНК (длРНК), мікро-РНК (мікроРНК), короткої шпилькової РНК (кшШРНК), малого интерферуючого олігонуклеотиду, малої інтерферуючої нуклеїнової кислоти, малого интерферуючого модифікованого олігонуклеотиду, хімічно модифікованої міРНК, РНК посттранскрипційного сайленсингу гена (рі9Ф5РНК) та інших. Крім того, у цьому контексті термін РНКі вважають еквівалентним іншим термінам, що використовуються для опису послідовність-специфічної інтерференції РНК, такий як посттранскрипційний сайленсинг гена, трансляційне інгібування або епігенетика. Наприклад, дволанцюгові олігонуклеотиди можуть бути використані для епігенетичного сайленсингу генів на посттранскрипційному рівні і на дотранскрипційному рівні У необмежуючому прикладі бо епігенетичне регулювання генної експресії молекулами міРНК відповідно до цього винаходу може бути результатом міРНК-опосередкованої модифікації структури хроматину або патерну метилювання для зміни генної експресії (див., наприклад, Мегаеї еї аї., 2004, Зсієпсе, 303, 672- 676; Ра!-Внаадга єї аї., 2004, бсіепсе, 303, 669-672; АїІбНіге, 2002, Зсієпсе, 297, 1818-1819; Море вї а!., 2002, 5сіепсе, 297, 1833-1837; Уепимеїп, 2002, бсіепсеє, 297, 2215-2218; і Наї! єї аї., 2002,
Зсієпсе, 297, 2232-2237).
Мається на увазі, що сполуки і композиції згідно з деякими варіантами реалізації, запропонованими у цьому документі, можуть цілеспрямовано впливати на СЕВ за допомогою длРНК-опосередкованого сайленсингу гена або механізму РНКІі, включаючи, наприклад, ефекторні молекули "шпилькової" або дволанцюгової РНК з стовбура-петлі, в яких один ланцюг
РНК з автокомплементарними послідовностями може приймати дволанцюгову конформацію, або ефекторні молекули дуплексної длРНК, що містять два окремі ланцюга РНК. В різних варіантах реалізації длРНК повністю складається з рибонуклеотидів або складається з суміші рибонуклеотидів і дезоксинуклеотидів, таких як гібриди РНК/ДНК, описані, наприклад, в УМО 00/63364, поданої 19 квітня 2000 року, або в патенті США з серійним номером 60/130377, поданому 21 квітня 1999 року. длРНК або ефекторна молекула длРНК може являти собою одну молекулу з областю автокомплементарності, так що нуклеотиди в одному сегменті молекули беруть участь у паруванні основ з нуклеотидами в іншому сегменті молекули. У різних варіантах реалізації длРНК, яка складається з однієї молекули, повністю складається з рибонуклеотидів або містить область рибонуклеотидів, яка комплементарна області дезоксирибонуклеотидів. В альтернативному варіанті реалізації длРНК може містити два різні ланцюги, які мають область комплементарності один з одним.
У різних варіантах реалізації обидва ланцюги повністю складаються з рибонуклеотидів, один ланцюг повністю складається з рибонуклеотидів, і один ланцюг повністю складається з дезоксирибонуклеотидів, або один або обидва ланцюги містять суміш рибонуклеотидів і дезоксирибонуклеотидів. У деяких варіантах реалізації області комплементарності щонайменше є на 70, 80, 90, 95, 98 або 100 95 комплементарними одна одній і послідовності нуклеїнової кислоти-мішені. У деяких варіантах реалізації область длРНК, яка знаходиться в дволанцюговій конформації, містить щонайменше 19, 20, 21, 22, 23, 24,25, 26, 27, 28, 29, 30, 50, 75,100, 200, 500, 1000, 2000 або 5000 нуклеотидів або містить всі нуклеотиди в кКДНК або іншій послідовності нуклеїнової кислоти-мішені, що знаходиться в длРНК. У деяких варіантах реалізації длРНК не містить одноланцюгових областей, таких як одноланцюгові кінці, або длРНК являє собою шпильку. В інших варіантах реалізації длРНК має одну або більше одноланцюгових областей або виступів. У деяких варіантах реалізації гібриди РНК/ДНК містять ланцюг або область ДНК, яка являє собою антисмисловий ланцюг або область (наприклад, має щонайменше 70, 80, 90, 95, 98 або 100 95 комплементарністі з нуклеїнової кислотою-мішенню), і ланцюг або область
РНК, яка являє собою смисловий ланцюг або область (наприклад, має щонайменше 70, 80, 90, 95, 98 або 100 95 ідентичністі з нуклеїновою кислотою-мішенню) і навпаки.
У різних варіантах реалізації гібрид РНК/ДНК отримують іп мйго за допомогою методів ферментного або хімічного синтезу, таких як описано в цьому документі або в УМО 00/63364, поданої 19 квітня 2000 року, або в патенті США з серійним номером 60/130377, поданому 21 квітня 1999 року. В інших варіантах реалізації ланцюг ДНК, який синтезован іп міїго, зв'язан у комплекс із ланцюгом РНК, отриманим іп мімо або іп мійго до, після або одночасно з трансформацією ланцюга ДНК у клітину. В інших варіантах реалізації длРНК представляє собою одну кільцеву нуклеїнову кислоту, яка містить смислову і антисмислову область, або
ДЛРНК містить кільцеву нуклеїнову кислоту і другу кільцеву нуклеїнову кислоту або лінійну нуклеїнову кислоту (див., наприклад, МО 00/63364, подану 19 квітня 2000 року, або в патенті
США з серійним номером 60/130377, поданому 21 квітня 1999 року). Ілюстративні кільцеві нуклеїнові кислоти включають ларіатні структури, у яких вільна 5 фосфорильна група нуклеотиду стає зв'язаної з 2 гідроксильної групою іншого нуклеотиду шляхом закільцювання.
В інших варіантах реалізації длРНК містить один або більше модифікованих нуклеотидів, в яких 2" положення цукру містить галоген (такий як група фтору) або містить алкокси-групу (таку як метокси-група), що збільшує період напіввиведення длРНК іп міго або іп мімо порівняно з відповідною длРНК, у якій відповідне 2 положення містить водень або гідроксильну групу. В інших варіантах реалізації длРНК містить одну або більше зв'язків між сусідніми нуклеотидами, відмінних від природного фосфодіестерного зв'язку. Приклади таких зв'язків включають фосфорамідні, тіофосфатні і дитіофосфатні зв'язки. длРНК також можуть являти собою хімічно модифіковані молекули нуклеїнових кислот, як описано в патенті США Мо 6673661. В інших варіантах реалізації длРНК містить один або два кепірованих ланцюгів, як описано, наприклад, в УМО 00/63364, поданої 19 квітня 2000 року, або в патенті США з серійним номером 60/130377, бо поданому 21 квітня 1999 року.
В інших варіантах реалізації длРНК може являти собою будь-яку з щонайменше частково
ДлЛРНК молекул, описаних в МО 00/63364, а також будь-яку з длРНК молекул, описаних у попередній заявці США 60/399998; і у попередній заявці США 60/419532, їі в
РСТ/О52003/033466, зміст яких включено в цей документ за допомогою посилання. Будь-яка з
ДлЛРНК може бути експресована іп міго або іп мімо за допомогою методів, описаних у цьому документі, або стандартних способів, таких як описані у УМО 00/63364.
Зайнятість
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки імовірно не призводять до розщеплення нуклеїнової кислоти-мішені за допомогою РНКази Н або не призводять до розщеплення або секвестрації по шляху КІ5С. У деяких таких варіантах реалізації антисмислова активність може бути результатом зайнятості, при цьому наявність гібридизованої антисмислової сполуки порушує активність нуклеїнової кислоти-мішені. У деяких таких варіантах реалізації антисмислова сполука може бути рівномірно модифікована або може містити суміш модифікацій і/або модифікованих і немодифікованих нуклеозидів.
Нуклеїнові кислоти-мішені, області-мішені та нуклеотидні послідовності
Нуклеотидні послідовності, що кодують фактор комплементу В (СЕВ), включають, без обмежень, наступні: з номером доступу ЗЕМВАМК ММ 001710.5 (включену в цей документ як
ЗЕО ІЮ МО: 1), з номером доступу СЕМВАМК МТ 007592.15, усічену з нуклеотиду 31852000 до 31861000 (включену в цей документ як 5ЕБО ІО МО: 2), з номером доступу СЕМВАМК
ММУУ 001116486.1, усічену з нуклеотиду 536000 до 545000 (включену в справжній документ як
ЗБО ІЮО МО: 3), з номером доступу СОЕМВАМК ХМ 001113553.2 (включену в цей документ як
ЗЕО ІЮ МО: 4) або за номером доступу ЗЕМВАМК ММ 008198.2 (включену в цей документ як
ЗЕО ІО МО: 5).
Гібридизація
У деяких варіантах реалізації відбувається гібридизація між антисмисловою сполукою, описаною у цьому документі, і нуклеїнової кислотою СЕВ. Найбільш поширений механізм гібридизації включає водневе зв'язування (наприклад, уотсон-криковськє, хугстиновськє або зворотнє хугстиновськє водневе зв'язування) між комплементарними азотистими основами молекул нуклеїнових кислот.
Зо Гібридизація може відбуватися в різних умовах. Жорсткі умови є послідовність-залежними і визначаються природою та складом молекул нуклеїнових кислот які гібридизуються.
Спосіб визначення, чи є послідовність специфічно гибридизуємою з цільовою нуклеїновою кислотою, добре відомі в цій галузі техніки. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, представлені в цьому документі, є специфічно гібридизуємим з нуклеїнової кислотою СЕВ.
Комплементарність
Антисмислові сполуки і нуклеїнова кислота-мішень є комплементарними один до одного, якщо достатня кількість азотистих основ антисмислової сполуки можуть утворювати водневі зв'язки з відповідними азотистими основами нуклеїнової кислоти-мішені, таким чином, щоб виникав бажаний ефект (наприклад, антисмислове інгібування нуклеїнової кислоти-мішені, такої як нуклеїнова кислота СЕВ).
Некомплементарні азотисті основи між антисмисловими сполуками і нуклеїнової кислотою
СЕВ можуть бути прийнятними за умови, що антисмислова сполука як і раніше здатна специфічно гібридизуватися з нуклеїнової кислотою-мішенню. Крім того, антисмислова сполука може гібридизуватися більш ніж з одним або більше сегментами нуклеїнової кислоти СЕВ так, щоб проміжні або сусідні сегменти не брали участі в гібридизації (наприклад, петльова структура, некомплементарна основа або шпилька).
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, представлені в цьому винаході, або певні їх частини, є або щонайменше на 70 95, 80 Фо, 85 95, 86 о, 87 95, 88 95, 89 Фо, 90 95, 91 Ор, 92 96, 93 У, 94 90, 95 95, 96 9, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 комплементарними до нуклеїнової кислоти СЕВ, області-мішені, сегменту-мішені або певної її частини. Відсоток комплементарності антисмислової сполуки з цільовою нуклеїнової кислотою може бути визначений з використанням стандартних методів.
Наприклад, антисмислова сполука, в якій 18 з 20 азотистих основ антисмислової сполуки є комплементарними до області-мішені, і тому будуть специфічно гібридизуватися, має 90 відсотків комплементарності У даному прикладі некомплементарні азотисті основи, які залишилися можуть бути розташовані кластерно або упереміш з комплементарними азотистими основами і не повинні бути суміжними один з одним або комплементарними азотистими основам. Таким чином, антисмислова сполука, довжина якої становить 18 азотистих основ, містить чотири некомплементарні азотисті основи, фланковані двома ділянками повної 60 комплементарності з нуклеїновою кислотою-мішенню, має загальну комплементарності з нуклеїнової кислотою-мішенню 77,8 95, і таким чином, входить в межі обсягу цього винаходу.
Відсоток комплементарності антисмислової сполуки з областю нуклеїнової кислоти-мішені може бути визначений за допомогою програм ВІАБТ (основний засіб пошуку локального вирівнювання) і програм РоумегВІ А5Т, відомих у цій області техніки (Айбспиц! еї аї., У. Мо).
Товарбіої., 1990, 215, 403 410; 7папуд і Маддеп, Сепоте Кев5., 1997, 7, 649 656). Відсоток гомології, ідентичність або комплементарність послідовностей, можуть бути визначені, наприклад, програмою Сар (вісконсінський пакет аналізу послідовностей, версія 8 для Опіх,
Сепеїсв Сотршиег Сгоир, Вісконсинський Університет, Медісон, штат Вісконсін), з використанням налаштувань за замовчуванням, які використовує алгоритм Сміта і Ватермана (Аду. Аррі. Маїй., 1981, 2, 482 489).
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, запропоновані в цьому документі, або їх окремі частини повністю комплементарні (тобто на 100 95 комплементарні) нуклеїновій кислоті-мішені або її певній частині. Наприклад, антисмисловасполука може бути повністю комплементарною нуклеїновій кислоті СЕВ або її області-мішені, або її сегменту-мішені, або її послідовності-мішені. У цьому контексті "повністю комплементарний" означає, що кожна азотиста основа антисмислової сполуки здатне точно злучатися з відповідними азотистими основами нуклеїнової кислоти-мішені. Наприклад, антисмислова сполука з 20 азотистих основ повністю комплементарна цільовій послідовності, що має 400 азотистих основ, якщо існує відповідний фрагмент з 20 азотистих основ нуклеїнової кислоти-мішені, повністю комплементарний антисмисловомій сполуці. Повністю комплементарний може також використовуватися в посиланні на певний фрагмент першої та/або другої нуклеїнової кислоти.
Наприклад, фрагмент з 20 азотистих основ антісенсної сполуки, що складається з 30 азотистих основ, може бути "повністю комплементарним" послідовності-мішені, яка має 400 азотистих основ у довжину. Фрагмент з 20 азотистих основ олігонуклеотиду, що складається з 30 азотистих основ, повністю комплементарен цільовій послідовності, якщо цільова послідовність має відповідний фрагмент з 20 азотистих основ, при цьому кожну його азотисту основу комплементарного фрагменту з 20 азотистих основ антисмислової сполуки. У той же час, уся антисмислова сполука з 30 азотистих основ може бути або не бути повністю комплементарною цільовій послідовності залежно від того, чи будуть інші 10 азотистих основ антисмислової
Зо сполуки також комплементарні цільовій послідовності.
Некомплементарна азотиста основа може розташовуватися на 5 кінці або 3' кінці антисмислової сполуки. В альтернативному варіанті некомплементарна азотиста основу або азотисті основи можуть бути всередині антисмислової сполуки. Якщо присутні два або більше некомплементарні азотисті основи, вони можуть бути суміжними (тобто зв'язаними) або не суміжними. В одному варіанті реалізації некомплементарна азотиса основа розташована у сегменті крила гепмеру антисмислового олігонуклеотиду.
В деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, які містять точно або до 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 азотистих основ у довжину, містять не більше 4, не більше 3, не більше 2 не більше 1 некомплементарних азотистих основ щодо нуклеїнової кислоти-мішені, такий як нуклеїнова кислота СЕВ, або її певної частини.
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, які містять точно або до 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30 азотистих основ у довжину, містять не більше 6, 5, 4, 3, не більше 2 не більше 1 некомплементарних азтистих основ щодо нуклеїнової кислоти-мішені, такий як нуклеїнова кислота СЕВ, або її певної частини.
Запропоновані антисмислові сполуки включають також сполуки, які є комплементарними частини нуклеїнової кислоти-мішені. У цьому контексті "частина" відноситься до певної кількості суміжних (тобто зв'язаних) азотистих основ у межах області або сегмента нуклеїнової кислоти- мішені. "Частина" також може відноситися до певної кількості суміжних азотистих основ антисмислової сполуки. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки комплементарні частині цільового сегменту з щонайменше 8 азотистих основ. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки комплементарні частині цільового сегменту з щонайменше 9 азотистих основ. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки комплементарні частині цільового сегменту з щонайменше 10 азотистих основ. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки комплементарні частині цільового сегменту з щонайменше 11 азотистих основ. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки комплементарні частині цільового сегменту з щонайменше 12 азотистих основ. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки комплементарні частині цільового сегменту з щонайменше 13 азотистих основ. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки комплементарні частині цільового сегменту з щонайменше 14 азотистих основ. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки бо комплементарні частині цільового сегменту з щонайменше 15 азотистих основ. Також розглядаються антисмислові сполуки, які є комплементарними щонайменше 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 або більше азотистим основам частини цільового сегменту, або діапазону, обумовленому будь-якими двома з зазначених значень.
Ідентичність
Антисмислові сполуки, представлені в цьому документі, також можуть мати певний відсоток ідентичності конкретної нуклеотидної послідовності, 5ЕО ІЮ МО, або сполуці, представленій конкретним номером /і5і5, або її частині. У цьому контексті антисмислові сполуки ідентично послідовності, описаній в цьому документі, якщо воно має таку ж здатність до спарювання азотистих основ. Наприклад, РНК, яка містить урацил замість тимідину в описаній послідовності
ДНК, вважають ідентичною послідовності ДНК, оскільки і урацил, і тимідин спаровуються з аденіном. Розглядаються також укорочений і подовжений варіанти антисмислових сполук, описаних у цьому документі, а також сполук, що мають неідентичні основи по відношенню до антисмислових сполук, запропонованих у цьому документі. Неідентичних основи можуть бути суміжними один з одним або розсіяними по всій антисмисловій сполуці. Відсоток ідентичності антисмислової сполуки розраховують за кількістю основ, які мають ідентичне спарювання основ, щодо послідовності, з якою йде порівняння.
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки або їх частини щонайменше на 70 95, 75 ув, 80 96, 85 96, 90 90, 95 95, 96 95, 97 9о, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичні одного або більше антисмисловим сполукаи з ЗЕО ІЮ МО, або їх частині, як описано в цьому документі.
У деяких варіантах реалізації фрагмент антисмислової сполуки порівнюють із рівною по довжині частиною нуклеїнової кислоти-мішені. У деяких варіантах реалізації порівнюють частини з 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 або 25 азотистих основ із рівною по довжині частиною нуклеїнової кислоти-мішені.
У деяких варіантах реалізації частину антисмислового олігонуклеотиду порівнюють із рівною по довжині частиною нуклеїнової кислоти-мішені. У деяких варіантах реалізації порівнюють частини з 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 або 25 азотистих основ із рівною по довжині частиною нуклеїнової кислоти-мішені.
Модифікації
Нуклеозид являє собою комбінацію азотиста основа-цукор. Азотиста основа (також відома
Зо як основа) - частина нуклеозиду, зазвичай являє собою фрагмент гетероциклічної основи.
Нуклеотиди являють собою нуклеозиди, які додатково містять фосфатну групу, ковалентно зв'язану з цукровою частиною нуклеозиду. Для тих нуклеозидів, які містять пентофуранозильний цукор, фосфатна група може бути зв'язана з 2", 3", 5' гідроксильним фрагментом цукру. Олігонуклеотиди утворюються за допомогою ковалентного зв'язування сусідніх нуклеозидів один з одним з утворенням лінійного полімерного олігонуклеотиду. В олігонуклеотиднійструктурі фосфатні групи зазвичай називають як ті, що утворюють міжнуклеозидні зв "язкиолігонуклеотиду.
Модифікації антисмислових сполук охоплюють заміщення або зміни міжнуклеозидних зв'язків, цукрових фрагментів або азотистих основ. Модифіковані антисмислові сполуки часто переважні в порівнянні з нативними формами за рахунок бажаних властивостей, таких як, наприклад, покращене клітинне поглинання, підвищена афінність зв'язування з нуклеїнової кислотою-мішенню, підвищена стабільність у присутності нуклеаз або підвищена інгібуюча активність.
Хімічно модифіковані нуклеозиди також можуть бути використані для підвищення афінності зв'язування укороченого або усіченого антисенсого олігонуклеотиду з його нуклеїновою кислотою-мішенню. Отже, зіставні результати часто можуть бути отримані за допомогою більш коротких антисмислових сполук, які мають такі хімічно модифіковані нуклеозиди.
Модифіковані міжнуклеозидні зв'язки
Природний міжнуклеозидний зв'язок РНК і ДНК являє собою 3-5" фосфодіестерний зв'язок.
Антисмислові сполуки, що мають одну або більше модифікованих, тобто неприродних міжнуклеозидних зв'язків, часто кращі порівняно з антисмисловими сполуками, що мають природні міжнуклеозидні зв'язки, завдяки бажаним властивостям, таким як, наприклад, покращене клітинне поглинання, посилена афінності зв'язування з нуклеїновими кислотами- мішенями і підвищена стабільність у присутності нуклеаз.
Олігонуклеотиди, які мають модифіковані міжнуклеозидні зв'язки, включають міжнуклеозидні зв'язки, які мають атом фосфору, а також міжнуклеозидні зв'язки, які не мають атома фосфору.
Ілюстративні фосфоровмісні міжнуклеозидні зв'язки включають, але не обмежуються ними, фосфодіестери, фосфотриефіри, метилфосфонати, фосфорамідати і тіофосфати. Способи отримання фосфоровмісних і нефосфоровмісних зв'язків добре відомі. бо У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, які спрямовані на нуклеїнову кислоту
СЕВ, містять один або більше модифікованих міжнуклеозидних зв'язків. У деяких варіантах реалізації модифіковані міжнуклеозидні зв'язки являють собою тіофосфатні зв'язки. У деяких варіантах реалізації кожен міжнуклеозидний зв'язок антисмислової сполуки являє собою тіофосфатний міжнуклеозидний зв'язок.
У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди містять модифіковані міжнуклеозидні зв'язки, розташовані вздовж олігонуклеотиду або його області певним чином у вигляді мотиву модифікованого міжнуклеозидного зв'язку. У деяких варіантах реалізації міжнуклеозидні зв'язки розташовані в розірваному мотиві. У таких варіантах реалізації міжнуклеозидні зв'язки в кожній з двох областей крил відмінні від міжнуклеозидних зв'язків в області гепу. У деяких варіантах реалізації міжнуклеозидні зв'язки в крилах є фосфодіестерними, а міжнуклеозидні зв'язки в гепі є тіофосфатними. Нуклеозидний мотив обраний незалежно, так що олігонуклеотиди, мають розірваний мотив міжнуклеозидних зв'язків може мати або не мати розірваний нуклеозидний мотив, і якщо він має розірваний нуклеозидний мотив, то довжина крил і гепу може бути або не бути однаковою.
У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди містять область, що має мотив міжнуклеозидних зв'язків які чергуються. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди згідно з цим винаходу містять область однаково модифікованих міжнуклеозидних зв'язків. У деяких таких варіантах реалізації олігонуклеотид містить область, що рівномірно зв'язана тіофосфатними міжнуклеозидними зв'язками. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид рівномірно зв'язаний тіофосфатними міжнуклеозидними зв'язками. У деяких варіантах реалізації кожен міжнуклеозидний зв'язок олігонуклеотиду вибран із фосфодіестеру і тіофосфату. У деяких варіантах реалізації кожен міжнуклеозидний зв'язок олігонуклеотиду вибран з фосфодіестеру і тіофосфату, і щонайменше однин міжнуклеозидний зв'язок являє собою тіофосфат.
У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше б тіофосфатних міжнуклеозидних зв'язків. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше 8 тіофосфатних міжнуклеозидних зв'язків. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше 10 тіофосфатних міжнуклеозидних зв'язків. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше один блок з щонайменше б послідовними
Зо тіофосфатнимими міжнуклеозиднми зв'язками. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше один блок з щонайменше 8 послідовними тіофосфатнимими міжнуклеозиднми зв'язками. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше один блок з щонайменше 10 послідовними тіофосфатнимими міжнуклеозиднми зв'язками. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить щонайменше один блок з щонайменше 12 послідовними тіофосфатнимими міжнуклеозиднми зв'язками. У деяких таких варіантах реалізації щонайменше один такий блок розташований на 3' кінці олігонуклеотиду. У деяких таких варіантах реалізації щонайменше один такий блок розташований в межах З нуклеозидів від З'кінця олігонуклеотиду.
У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди містять одну або більше метилфосфонатних зв'язків. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди, які мають гепмерний нуклеозидний мотив, містять мотив зв'язку, що містить всі тіофосфатні міжнуклеозидні зв'язки, за винятком одного чи двох метилфосфонатних зв'язків. У деяких варіантах реалізації один метилфосфонатний зв'язок знаходиться в центральному гепі олігонуклеотиду, який має гепмерний нуклеозидний мотив.
У деяких варіантах реалізації бажано розподіляти кількість тіофосфатних міжнуклеозидних зв'язків і фосфодіестерних міжнуклеозидних зв'язків для збереження стійкості до дії нуклеаз. У деяких варіантах реалізації бажано розподіляти кількість і положення тіофосфатних міжнуклеозидних зв'язків і положення фосфодіестерних міжнуклеозидних зв'язків для збереження стійкості до дії нуклеаз. У деяких варіантах реалізації кількість тіофосфатних міжнуклеозидних зв'язків може бути зменшено, а кількість фосфодіестерних міжнуклеозидних зв'язків може бути збільшено. У деяких варіантах реалізації кількість тіофосфатних міжнуклеозидних зв'язків може бути зменшено, а кількість фосфодіестерних міжнуклеозидних зв'язків може бути збільшено при збереженні стійкості до дії нуклеаз. У деяких варіантах реалізації бажано зменшити кількість тіофосфатних міжнуклеозидних зв'язків при збереженні стійкості до дії нуклеаз. У деяких варіантах реалізації бажано збільшити кількість фосфодіестерних міжнуклеозидних зв'язків при збереженні стійкості до дії нуклеаз.
Модифіковані цукрові фрагменти
Антисмислові сполуки можуть обов'язково містити один або більше нуклеозидів, в яких модифікована цукрова група. Зазначені нуклеозиди з модифікованим цукром можуть бо забезпечувати підвищену стійкість до дії нуклеаз, підвищену афінність зв'язування або деякі інші корисні біологічні властивості антисмислових сполук. У деяких варіантах реалізації нуклеозиди містять хімічно модифіковані фрагменти рибофуранозного кільця. Приклади хімічно модифікованих рибофуранозних кілець включають, без обмежень, додавання груп замісників (включаючи 5' і 2" групи замісників, сполуки місткових негемінальних кільцевих атомів з утворенням біциклічних нуклеїнових кислот (БНК), заміну рибозильного кільцевого атома кисню на 5, М(К) або С(Е:)(А»г) (В, В; Р», кожен незалежно, являють собою Н, С1-С12 алкіл або захисну групу) та їх комбінації. Приклади хімічно модифікованих цукрів включають 2'-БЕ-5- метилзаміщений нуклеозид (див. міжнародну заявку РСТ УМО 2008/101157, опубліковану 8/21/08, де описані інші 5',2'-біс-заміщені нуклеозиди) або заміну рибозильного кільцевого атома кисню на 5 з додатковим заміщенням у 2'-положенні (див. опубліковану заявку на патент США
О52005-0130923, опубліковану 16 червня 2005 року), або в альтернативному варіанті 5'- заміщення БНК (див. міжнародну заявку РСТ УМО 2007/134181, опубліковану 11/22/07, де ЗНК заміщена, наприклад, 5'-метильної або 5'-вінільной групою).
Приклади нуклеозидів, що мають модифіковані цукрові фрагменти, що включають, без обмежень, нуклеозиди, які містять 5'-вінильні, 5'-єметильні (ФК або), 4-5, 2-Е, 2-ОСН», 2-
ОоСнНсН», 2-ОСННЬЕ і 2-О(СНг25ОСН: групи замісників. Замісник у 2" положенні також може бути вибраний з аліла, аміно, азидо, тіо, О-аліла, О-С1-С1о алкила, ОСЕз, ОСНоЕ, О(СНг)25СН 5,
О(СНгг-О-М(Ат) (Ва), О-СН2г-С(-0)-М(Ат) (А) ії О-СНо-С(-0)-М(ВІ)-(СНг)2-М(Ат) (Ви), де кожен К.,
Вт Вп незалежно являє собою Н або заміщений або незаміщений С1-С:о алкіл.
У цьому контексті "біциклічні нуклеозиди" відносяться до модифікованих нуклеозидів, які містять біциклічний цукровий фрагмент. Приклади біциклічних нуклеозидів включають без обмеження нуклеозиди, що містять місток між 4" і 2 атомами рибозильного кільця. У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, запропоновані в цьому документі, містять один або більше біциклічних нуклеозидів, що містять 4"-2' місток. Приклади таких біциклічних нуклеозидів 253 4-2 мотиками включають, але не обмежуються однією з формул: 4-(СНг)-О-2' (ЗНК); 4-(СНг)- 5-2 4-(СНг)2-0-2" (ЕНК); 4-СН(СН»з)-О-2! (також звана стерично затрудненим етилом або се) і 4-СН(СНгОСН»)-0-2" (і їх аналоги, див. патент США 7399845, виданий 15 липня 2008 року); 4"-
СіСНз)уСНз)-О-2 (і їх аналоги, див. опубліковану міжнародну заявку УМО 2009/006478, опублікований 8 січня 2009 року); 4-СН»-М(ОСНЗз)-2" (і їх аналоги, див. опубліковану міжнародну заявку УМО/2008/150729, опубліковану 11 грудня 2008 року); «4-СНа-О-М(СНз)-2' (див. опубліковану заявку на патент США 0Ш52004-0171570, опубліковану 2 вересня 2004 року); 4-
СНно-М(В)-О-2", де ЕК являє собою Н, С1-С12 алкіл або захисну групу (див. патент США 7427672, виданий 23 вересня 2008 року); 4-СНо-С(НуСН»Зз)-2 (див. 7Ппои еї аї., У. Огд. Спет., 2009, 74, 118-134); її 4-СНо-С(-СН2г)-2 (і їх аналоги, див. опубліковану міжнародну заявку УМО 2008/154401, опубліковану 8 грудня 2008 року).
Подальші повідомлення, пов'язані з біциклічними нуклеозидами можуть також бути знайдені в опублікованій літературі (див., наприклад: біпудйп еї аЇ., Спет. Соттип., 1998, 4, 455-456;
Кознкіп єї аї., Теігапедгоп, 1998, 54, 3607-3630; УМаніезієдії єї а!., Ргос. Маї!. Асайд. осі. 0. 5. А., 2000, 97, 5633-5638; Китаг" евї а!., Віоогд. Мед. Спет. І ей., 1998, 8, 2219-2222; Зіпоп еї аї!., 9. Ога.
СПпет., 1998, 63, 10035-10039; 5ймавзіама еї аЇ., ). Ат. Спет. 5ос., 2007, 129(26) 8362-8379;
ЕІауаді єї аї., Си. Оріпіоп Іпмеві. Огидв, 2001, 2, 558-561; Вгаазсйі єї аІ., Сет. Віо!., 2001, 8, 1-7; и Огит еї аї., Сшт. Оріпіоп Мої. ТНег., 2001, 3, 239-243; патенти США Мо 6268490; 6525191; 6670461; 6770748; 6794499; 7034133; 7053207; 7399845; 7547684; 8530640; і 7696345; публікації патентів США Мо Ш52008-0039618; О052009-0012281; патенти
США з серійними номерами 61/026995 і 61/097787; опубліковані міжнародні заявки РСТ; УМО 2009/067647; МО 2011/017521; МО 2010/036698 М/О 1999/014226; МО 2004/106356; МО 2005/021570; УМО 2007/134181; УМО 2008/150729; УМО 2008/154401; УМО 2009/006478. Кожен із зазначених біциклічних нуклеозидів можна отримати, маючи одну або більше стереохимічну цукрову конфігурацію, що включають, наприклад, а-І -рибофуранозу і В-ЮО-рибофуранозу (див. міжнародну заявку РСТ РСТ/ОКУ8/00393, опубліковану 25 березня 1999 як МО 99/14226).
У деяких варіантах реалізації біциклічні цукрові фрагменти нуклеозидів БНК включають, але не обмежуються ними, сполуки, які, мають щонайменше один місток між 4 і 2" положенням пентофуранозильного цукрового фрагмента, де такі містки незалежно містять 1 або від 2 до 4 зв'язаних груп, незалежно вибраних з -ІС(На)Нь)н-., «С(На)-С(Рь)-, -«С(Ва)-М-, -«С(-0)-, -С(-МВа)-, -б(-5) -, О-, -5І(Ва)2-, -2(-0О)х - -М(На)-; де: х дорівнює 0, 1 або 2; п дорівнює 1, 2, З або 4; кожен Ка Вь незалежно являє собою Н, захисну групу, гідроксил, С1-С.2 алкіл, заміщений С1- 60 Сг алкіл, С2-С12 алкеніл, заміщений С2-С:12 алкеніл, С2-Сі2 алкиніл, заміщений С2-С:2 алкиніл,
С5-Сго арил, заміщений С5-Сго арил, гетероциклічний радикал, заміщений гетероциклічний радикал, гетероарил, заміщений гетероарил, С5-С7 аліциклічний радикал, заміщений С5-С7 аліциклічний радикал, галоген, 0.)ї, МуУ1о9г2, у, Мз, СОУ, ацил (С(2О)-Н), заміщений ацил, СМ, сульфоніл (5(-0)21) або сульфоксил (5(-0)-).); кожен 1 Уг незалежно являє собою Н, С1-Сі2 алкіл, заміщений С1-С:2 алкіл, С2-С:12 алкеніл, заміщений С2-С:2 алкеніл, С2-С12 алкиніл, заміщений С2-С:12 алкиніл, С5-Сго арил, заміщений С5-
Сго оарил, ацил (С(-О)-Н), заміщений ацил, гетероциклічний радикал, заміщений гетероциклічний радикал, С1-С12 аміноалкіл, заміщений С1-Сі2 аміноалкіл або захисну групу.
У деяких варіантах реалізації місток біциклічних цукрового фрагмента являє собою 10. -ІС(ВахАьЦа-, -(С(ВахАьЦа-О-, -С(ВаВь)-М(2)-О - або -С(ВаНь)-О-М(Н)-. У деяких варіантах реалізації місток являє собою 4-СНе-2, 2-(СНг)»-2, 4-(СНг)з2, -СНо-О-2, 4-(СНег)»-О-2, 4-
Сно-О-М(Н)-2 ї 4-СНо-М(В)-О-2-, де кожен К незалежно являє собою Н, захисну групу або С1-
Сіг25 алкіл.
У деяких варіантах реалізації біциклічні нуклеозиди додатково визначають за ізомерною конфігурацією. Наприклад, нуклеозид, що містить місток 4"-2'-метиленокси, може бути в а-Ї. конфігурації або в В-О конфігурації. Раніше а-І -метиленокси (4-СН2-0-2) БНК були впроваджені в антисмислові олігонуклеотиди, які демонстрували антисмислову активність (Ргієдеп еї аї.,
Мисівїс Асіа5 Незеагси, 2003, 21, 6365-6372).
У деяких варіантах реалізації біциклічні нуклеозиди включають, але не обмежуються ними, (А) а-І -метиленокси (4-СН2-0-2) БНК, (В) В-О-метиленокси (4-СНг2-0О-2) БНК (С) етиленокси (4"- (СНг)2-0О-2) БНК (0) аміноокси (4-СН2-О-М(Н)-23 БНК (Е) оксіаміно (4-СН2-М(Н)-О-2) БНК і (Р) метил(метиленокси) (4-СН(СНз)-0О-2) БНК (б) метилентіо (4-СНг-5-23 БНК, (Н) метиленаміно (4-СНоАМ(ВН)-2) БНК (І) метилкарбоциклічні (4-2Нг-СН(СНз)-23 БНК (у) пропіленкарбоциклічні (2-(СНег)з-2) БНК і (К) вініл БНК, як показано нижче: о о! Вх З о Вх З о ВХ З о ВХ то ч- о й ок в с) (В) (С) (0) - й-о С ио ее мМ
Кк
Е (в (Б) (б) (Н) ре Я | У
Кок - Я
СН ов Фо 0) (ю сно де Вх являє собою фрагмент основи, а К незалежно являє собою Н, захисну групу, С1-Сч12 алкіл або С1-С:і2 алкокси.
У деяких варіантах реалізації представлені біциклічні нуклеозиди, що мають формулу І: 1.70 Вх й о
Ох чо» о Ь
Ть І
Зо де:
Вх являє собою фрагмент гетероциклічної основи; -ФОаОьОс- являє собою -СН2-М(НАе)-СНе-, -С(-0)-М(Ас)-СНе-, -«СН2-О-М(Все)-, -«СН2-М(Все)-О - або -
М(Ас)-О-СН»;
Вес являє собою С1-Сі12 алкіл або амінозахисну групу;
Та іть, кожен незалежно, являють собою Н, гідроксил-захисну групу, групу кон'югату, реакційноздатну фосфорну групу, фосфорний фрагмент або ковалентне приєднання до середовища підкладки.
У деяких варіантах реалізації представлені біциклічні нуклеозиди, що мають формулу ІІ:
ОК
7а бо
І
Ть П де:
Вх являє собою фрагмент гетероциклічної основи;
Та Ть, кожен незалежно, являють собою Н, гідрокси-захисну групу, групу кон'югату, реакційноздатну фосфорну групу, фосфорний фрагмент або ковалентноеє приєднання до середовища підкладки; 7а являє собою С1-Св алкіл, Со-Св алкеніл, Со-Сє алкиніл, заміщений С1-Сє алкіл, заміщений
С2-Свє алкеніл, заміщений С2-Сє алкиніл, ацил, заміщений ацил, заміщений амід, тіол або заміщений тіо.
В одному з варіантів реалізації кожна з заміщених груп незалежно є моно або полізаміщеною групами замісників, вибраних з галогену, оксо, гідроксилу, Ос, Моусуа, ес,
Ма, "С(-Х)с Моеб(-Х)МОсоуа, де кожен «с, да де незалежно являє собою Н, С:і-Сє алкіл аба заміщений Сі-Св алкіл, і Х являє собою О або Мус.
У деяких варіантах реалізації представлені біциклічні нуклеозиди, що мають формулу ПІ:
Та о вх о ек;
І Шш
Ть де:
Вх являє собою фрагмент гетероциклічної основи;
Та Ть, кожен незалежно, являють собою Н, гідрокси-захисну групу, групу кон'югату, реакційноздатну фосфорну групу, фосфорний фрагмент або ковалентное приєднання до середовища підкладки; 75 являє собою С1-Св алкіл, Се-Св алкеніл, Со-Сє алкиніл, заміщений С1-Сє алкіл, заміщений
С2-Св алкеніл, заміщений С2-Сє алкиніл або заміщений ацил (С(-:0)-).
У деяких варіантах реалізації представлені біциклічні нуклеозиди, що мають формулу ІМ:
Чадь о т.-о Вх о ас
Ча М ІМ
ОК.
Зо де:
Вх являє собою фрагмент гетероциклічної основи;
Та Ть, кожен незалежно, являють собою Н, гідрокси-захисну групу, групу кон'югату, реакційноздатну фосфорну групу, фосфорний фрагмент або ковалентное приєднання до середовища підкладки;
Ва представляє собою Сі-Свє алкіл, заміщений Сі-Свє алкіл, Сое-Сє алкеніл, заміщений С2-Свє алкеніл, Со-Св алкиніл або заміщений С2-Свє алкиніл;
КОЖЕН Да дь дДс да незалежно являє собою Н, галоген, С1-Сє алкіл, заміщений Сі-Св алкіл, С2-
Св алкеніл, заміщений С2-Сє алкеніл, Со-Свє алкиніл або заміщений С2-Сє алкиніл, С1-Св алкоксил, заміщений С1-Сє алкоксил, ацил, заміщений ацил, С1-Сє аміноалкил або заміщений
С-Свє аминоалкил;
У деяких варіантах реалізації представлені біциклічні нуклеозиди, що мають формулу У:
Чад о т.-О Вх о-т,
Че
Че
Оу де:
Вх являє собою фрагмент гетероциклічної основи;
Та Ть, кожен незалежно, являють собою Н, гідрокси-захисну групу, групу кон'югату, реакційноздатну фосфорну групу, фосфорний фрагмент або ковалентное приєднання до середовища підкладки;
Да дь, де дії, кожен незалежно, являють собою водень, галоген, Сі-Сігалкіл, заміщений С1-Сч12 алкіл, С2о-С12 алкеніл, заміщений С2-С:2 алкеніл, С2о-Сі2 алкиніл, заміщений С2-С:2 алкиніл, С1-С12 алкокси, заміщений С1-С1і2 алкокси, Оу, 5), ЗО, ЗОг2, МУдюк, Мз, СМ, С(-0)0, С(-О)МУюк,
Ф(-0)9), О-С(-О)МЮЮ, ЖЩ(Н)С(-МН)ІМОМК, ЩН)ІС(-О)МУЮ або М(Н)С(-5)МО Мк; або де де разом являють собою -С(до) (Дн); до ди, кожен незалежно, являє собою Н, галоген, С1-С12 алкіл або заміщений С1-С.2 алкіл.
Описано синтез та отримання метиленокси (4-СНг-0О-2) мономерів БНК: аденіну, цитозину, гуаніну, 5-метилцитозину, тиміну і урацилу, а також їх олігомеризація і властивості розпізнавання нуклеїнових кислот (Козпкіп еї аї., Теігапейгоп, 1998, 54, 3607-3630). БНК та їх отримання також описані в УМО 98/39352 і ММО 99/14226.
Були також отримані аналоги метиленокси (4-СН2-0-2 БНК і 2"-тіо-БНК (Киптаг еї а!., Віоога.
Мей. Сет. Іей., 1998, 8, 2219-2222). Описано також отримання аналогів замкнених нуклеозидів, що містять олігодезоксирибонуклеотидні дуплекси в якості субстратів полімераз нуклеїнових кислот (Ууепдеї! еї аІ., УМО 99/14226). Крім того, у цій області техніки описаний синтез 2'-аміно-БНК, нового конформаційно обмеженого високоафінного аналогу олігонуклеотиду (Зіпуйп еї аї., У). Огд. Спет., 1998, 63, 10035-10039). Крім того, раніше були отримані 2'-аміно- і 2'-метиленамино БНК, і була описана термостабільність їх дуплексів з комплементарними ланцюгами РНК і ДНК.
У деяких варіантах реалізації представлені біциклічні нуклеозиди, що мають формулу МІ:
Т.О щ Вх о-т,
Чі
Ф МІ дк
Зо де:
Вх являє собою фрагмент гетероциклічної основи;
Та Ть, кожен незалежно, являють собою Н, гідрокси-захисну групу, групу кон'югату, реакційноздатну фосфорну групу, фосфорний фрагмент або ковалентное приєднання до середовища підкладки; кожен ді ді дк ді незалежно являє собою Н, галоген, С1-Сі12 алкіл, заміщений С1-Сі2 алкіл, Сг-
С:і2 алкеніл, заміщений С2-С1і2 алкеніл, С2-Сі2 алкиніл, заміщений С2-С1і2 алкиніл, С1-С12 алкоксил, заміщений С1-С12 алкоксил, 0)), 59), ЗО, ЗОг)), МУюк, Мз, СМ, С(-0)03)), С(-О)Мк,
Ф(-09), О-С(-О)М9к, Щ(Н)ІС(Т-МНІМОМК, МНІС(-О)МУк або М(Н)С(-5)М Мк; і ді д; або ді дк разом являють собою -«С(до)(Дди), де до ди, кожен незалежно, являють собою Н, галоген, С1-С:12 алкіл або заміщений С.1-С-» алкіл.
Описаний один карбоциклічний біциклічний нуклеозид, який має місток 4-(СН?г)з-2", і місток з аналога алкенілу 4-СН-СН-СНе-2" (Егеїег єї аї., Мисівіс Асідаз Везвєагсі, 1997, 25(22), 4429-4443 і
Араєк єї аї., У. Ог9. Спет., 2006, 71, 7731-7740). Описаний також синтез та отримання карбоциклічних біциклічних нуклеозидів разом з їх оолігомеризацією і біохімічними дослідженнями (5гімавзіама еї аї., У. Ат. Спет. 50с., 2007, 129(26), 8362-8379).
У цьому контексті "4-2 біциклічний нуклеозид" або "4 до 2' біциклічний нуклеозид" бо відноситься до біциклічного нуклеозиду, який містить фуранозне кільце, що містить місток, який з'єднує два атоми вуглецю фуранозного кільця, що з'єднує 2" атом вуглецю і 4" атом вуглецю цукрового кільця.
У цьому контексті "моноциклічні нуклеозиди" відносяться до нуклеозидів, що містять модифіковані цукрові фрагменти, які не є біциклічними цукровими фрагментами. У деяких варіантах реалізації цукровий фрагмент або аналог цукрового фрагмента нуклеозиду може бути модифікований або заміщений в будь-якому положенні.
У цьому контексті "2'-модифікований цукор" означає фуранозильний цукор, модифікований в 2" положенні. У деяких варіантах реалізації такі модифікації включають замісники, обрані з: галогенідів, включаючи, не обмежуючись ними, заміщений і незаміщений алкокси, заміщений і незаміщений тіоалкіл, заміщений і незаміщений аміноалкіл, заміщений і незаміщений алкіл, заміщений і незаміщений аліл і заміщений і незаміщений алкініл. У деяких варіантах реалізації 2" модифікації обрані із замісників, що включають, не обмежуючись ними: О|(СНг)пО|тСНз,
О(СНазМНег, О(СНа)оСНз, О(СНг)Е, О(СНа МН, ОСНО(-ОМ(НІСНзі иф(СсНООМ((СНа)з С Нзіг, де п та т дорівнюють від 1 до близько 10. Інші 2" групи замісників також можуть бути обрані з:
С1-С12 алкілу, заміщеного алкілу, алкенілу, алкінілу, алкарилу, аралкілу, О-алкарилу або О- аралкілу, ЗН, ЗСНз, ОСМ, СІ, Ві, СМ, Е, СЕз, ОСЕз, БОСН:з, 502СНз, ОМО», МО», Мз, МН», гетероциклоалкілу, гетероциклоалкарілу, аміноалкіламіно, поліалкіламіно, заміщеного силілу, групи, що розщеплює РНК, репортерної групи, интеркалятора, групи для поліпшення фармакокінетичних властивостей або групи для поліпшення фармакодинамічних властивостей антисмислової сполуки, і інших замісників з подібними властивостями. У деяких варіантах реалізації модифіковані нуклеозиди містять 2'-МОЕ бічний ланцюг (ВакКег еї аї.,.). Товарбіо!.
Спет., 1997, 272, 11944-12000). Такі 2-МОЄЕ заміщення описані як поліпшують афінність зв'язування порівняно з немодифікованими нуклеозидами і з іншими модифікованими нуклеозидами, такими як 2- О-метил, О-пропіл та О-амінопропіл. Було показано, що олігонуклеотиди, мають 2'--МОЕ замісник, які є антисмисловими інгібіторами експресії генів з перспективними можливостями для застосування іп мімо (Магіп, Нем. Спіт. Асіа, 1995, 78, 486- 504; Айтаптп еї аї., Спітіа, 1996, 50, 168-176; Аптапп сеї а!., Віоспет. бос. Тгапв5., 1996, 24, 630- 637; та Актапп еї аї., МисіІеозідез МисіІеоїідев, 1997, 16, 917-926).
Зо У цьому контексті "модифікований тетрагідропірановий нуклеозид" або "модифікований ТП нуклеозид" означає нуклеозид, що має шестичленний тетрагідропірановий "цукор", що замінив пентофуранозильний залишок у звичайних нуклеозидах (замінник цукру). ТГП-модифіковані нуклеозиди включають, але не обмежуються ними, ті, які в даній області техніки називають гекситоловой нуклеїнової кислотою (ГНК), анитоловой нуклеїнової кислотою (АНК), манитоловой нуклеїнової кислотою (МНК) (див. Геитапп, Віоогд. Мед. Спет., 2002, 10, 841-854) або фтор-ГНК (Р-ГНК), що мають тетрагідропіранову кільцеву систему, представлену нижче: тру щу но о
НО Сто Вх но то ВХ вок
Е ОСН»
У деяких варіантах реалізації обрані замінники цукру, мають формулу МІ:
ЧІ Фі тТ.-о0 о аз 97 да
Че Вх /л Ві Во 55
Ть М де незалежно для кожного з зазначеного щонайменше одного тетрагідропіранового нуклеозидного аналога формули МІ:
Вх являє собою фрагмент гетероциклічної основи;
Та Ть, кожен незалежно, являють собою міжнуклеозидну лінкерну групу, яка зв'язує тетрагідропірановий нуклеозидний аналог з антисмисловим сполукам, або один з Та Ть являє собою міжнуклеозидну лінкерну групу, яка зв'язує тетрагідропірановий нуклеозидний аналог з антисмисловою сполукою, а інший з Та Ть являє собою Н, гідроксил-захисну групу, зв'язану групу кон'югату або 5' 3'-кінцеву групу; а: де дз да д5 де ду, Кожен незалежно, являють собою Н, С.1-Св алкіл, заміщений С:1-Свє алкіл,
С2-Св алкеніл, заміщений С2-Сє алкеніл, Со-Свє алкиніл або заміщений С2-Сє алкиніл; і кожен з КЕ.
БО Вг2 вибраний з водню, гідроксилу, галогену, заміщеного або незаміщеного алкокси, МУ», уч,
Ма, "С(-Х)Уї, "С(-Х)Мї2, Мозб(-Х)МО19щ2 СМ, де Х являє собою 0, 5 або Му:, і кожен 1, 92 из незалежно являє собою Н або С.1-Св алкіл.
У деяких варіантах реалізації запропоновано модифіковані ТГП нуклеозиди формули МІЇ, де ат дг дз дя д5 де д7 являють собою Н. У деяких варіантах реалізації щонайменше один з ді д2 дз д4 ад5 двд7 є відмінним від Н. У деяких варіантах реалізації щонайменше один з ді д2 дз да д5 дв 47 являє собою метил. У деяких варіантах реалізації запропоновані ТГП нуклеозиди формули МІ, де один з Кі Рг являє собою фтор. У деяких варіантах реалізації Кі: являє собою фтор, а Ко являє собою Н; ЕК: являє собою метокси, а Р2 являє собою Н, Кі являє собою метоксиетокси, а
Вг являє собою Н. у деяких варіантах реалізації замінники цукру містять кільця, що мають більше 5 атомів і більше одного гетероатому. Наприклад, описані нуклеозиди, що містять морфоліносахарні фрагменти, та їх застосування в олігомерних сполуках (див., наприклад: Вгаазсп еї аї.,
Віоспетівігу, 2002, 41, 4503-4510; і патенти США 5698685; 5166315; 5185444; і 5034506). У цьому контексті термін "морфоліно" означає замінник цукру, який має наступну формулу: шко
М
М .
У деяких варіантах реалізації морфоліно можуть бути модифікованими, наприклад, шляхом додавання або зміною різних груп замісників щодо представленої вище структури морфоліно.
Такі замінники цукру в цьому контексті називають "модифікованими морфоліно".
Запропоновані також комбінації модифікацій, без обмеження, такі як 2'-Е-5'-метил-заміщені нуклеозиди (див. міжнародну заявку РСТ УМО 2008/101157, опубліковану 8/21/08, де описані інші 5, 2'-біс-заміщені нуклеозиди) і заміну рибозильного кільцевого атома кисню на 5 із додатковим заміщенням у 2'-положенні (див. опубліковану заявку на патент США И52005-0130923, опубліковану 16 червня 2005 року) або в альтернативному варіанті 5'-заміщенням біциклічної нуклеїнової кислоти (див. міжнародну заявку РСТ МО 2007 /134181, опубліковану 11/22/07, де 4"-
Сно-О-2" біциклічний нуклеозид додатково заміщений в 5' положенні 5'-метильною або 5'- вінільною групою). Описаний також синтез та отримання карбоциклічних біциклічних нуклеозидів разом з їх олігомеризацією і біохімічними дослідженнями (див, наприклад, зЗгімавіама еї а!., у). Ат. Спет. 5ос. 2007, 129(26), 8362-8379).
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки містять один або більше модифікованих циклогексенільних нуклеозидів, які являють собою нуклеозиди, що мають шестичленний циклогексеніл замість пентофуранозильного залишку в природних нуклеозидах. Модифіковані циклогексенильні нуклеозиди включають, але не обмежуються ними, нуклеозиди, описані в цій області техніки (див., наприклад, паралельну опубліковану заявку РСТ УМО 2010/036696, опубліковану 10 квітня, 2010, Кобреупз еї аї., У. Ат. Спет. 5ос., 2008, 130(6), 1979-1984; Ногуат еї аі., Темйанедюоп І ейегв, 2007, 48, 3621-3623; МаймеїЇаєгів єї аЇ., )У. Ат. Спет. 5ос., 2007, 129(30), 9340-9348; Си еї аї.,, Мисієозіде5, Мисіеоїіде5 4 Мисієїс Асідв, 2005, 24(5-7), 993-998;
Машймеїаєнв еї аї., Мисівїс Асід5 Незеагси, 2005, 33(8), 2452-2463; Нореуп5 сеї аї., Асіа
СтузіаПодгтарніса, Зесіп Е: Бігисіига! Віогоду апа Сгувіаїїїй2айоп Соттипісайопе5, 2005, Еб611(6), 585-586; Си еї а!., Теманеєедгоп, 2004, 60(9), 2111-2123; Си єї аї., Оіїдописіеоїіде5, 2003, 13(6), 479-489; Мапа еї аї!., У. Ога. Снет., 2003, 68, 4499-4505; Мегбеиге еї аї., Мисівєїс Асіаз Везеагси, 2001, 29(24), 4941-4947; Мапо еї аї., у. Огу. Спет., 2001, 66, 8478-82; Мапа еї аї., МисіІеовідев,
Мисієоїідез5 4 Мисієїс Асіав, 2001, 20(4-7), 785-788; Мапа еї аї., 9). Ат. Спет., 2000, 122, 8595- 8602; опубліковану заявку РСТ УМО 06/047842; і опубліковану заявку РСТ УМО 01/049687; повний зміст кожної з яких включено в справжній документ за допомогою посилання). Деякі модифіковані циклогексенильні нуклеозиди мають формулу Х. 91 до т.-о 93 3
Ча
Чо
О ду це? т,
Х де незалежно для кожного зазначеного щонайменше одного циклогексенильного нуклеозидного аналога формули Х:
Вх являє собою фрагмент гетероциклічної основи;
Тз Та, кожен незалежно, являють собою міжнуклеозидн лінкерну групу, яка зв'язує циклогексенильний нуклеозидний аналог з антисмисловою сполукою, або один з Тз Т4 являє собою міжнуклеозидну лінкерну групу, яка зв'язує тетрагідропірановий нуклеозидний аналог з антисмисловими сполуками, а інший з Тз Т4 являє собою Н, гідроксил-захисну групу, зв'язану групу кон'югату або 5"-і 3'-кінцеву групу; а: дг дз дя д5 де Дд7 дв до, кожен незалежно, являють собою Н, С1-Сє алкіл, заміщений С1-Сє алкіл, Со-Св алкеніл, заміщений С2-Св алкеніл, Со-Свє алкиніл, заміщений С2-Сє алкиніл або інші групи-заміснику цукру.
У цьому контексті "2'і-модифікований" або "2'--заміщений" відноситься до нуклеозиду, який містить цукор, що містить замісник у 2' положенні, відмінний від Н або ОН. 2'-модифіковані нуклеозиди включають, але не обмежуються ними, біциклічні нуклеозиди, в яких місток, що з'єднує два атоми вуглецю цукрового кільця, з'єднує 2" атом вуглецю та інший атом вуглецю цукрового кільця; та нуклеозиди з немістковими 2" замісниками, такими як аліл, аміно, азидо, тіо,
О-аліл, О-С1-Сто алкіл, -ОСЕз, О-(СНег)2-О-СНз, 2-О(СНг)2 ЗОН», О-(СНг)2-О-М(А т) (Ве), або О-СН»е-
С(-0)-МЖ(Ат)(Аио), де кожен Кт Наи незалежно являє собою Н або заміщений або незаміщений С1-
Со алкіл. 2'-модифіковані нуклеозиди можуть також містити інші модифікації, наприклад, в інших положеннях цукру і/або азотистої основи.
У цьому контексті "2-Е" відноситься до нуклеозиду, який містить цукор, що містить групу фтору у 2 положенні цукрового кільця.
У цьому контексті "2-«ОМе" або "2-ОСН:", або "2'-О-метил" відноситься до нуклеозиду, який містить цукор, що містить групу -ОСНз у 2 положенні цукрового кільця.
У цьому контексті "ШМОЕ" або "2-МОЕ", або "2-ОСН.СНгОСсСнН»", або "2-О-метоксіетил" відноситься до нуклеозиду, який містить цукор, що містить групу -ОСН».СНгОСснН: у 2 положенні цукрового кільця.
У цьому контексті "олігонуклеотид" відноситься до сполуки, що містить безліч зв'язаних нуклеозидів. У деяких варіантах реалізації один або більше з безлічі нуклеозидів є модифікованими. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотид містить один або більше
Зо рибонуклеозидів (РНК) та/або дезоксирибонуклеозидів (ДНК).
У цій області техніки відомі також багато інших біциклічних і трициклічних кільцевмх систем замінників цукру, які можуть бути використані для модифікації нуклеозидів для впровадження в антисмислові сполуки (див., наприклад, оглядову статтю: І ештапп, Віоога. Мед. Спет., 2002, 10, 841-854). Такі кільцеві системи можуть піддаватися різним додатковим заміщенням для підвищення активності.
Способи одержання модифікованих цукрів добре відомі фахівцям в цій області техніки.
Деякі ілюстративні патенти США, які описують отримання таких модифікованих цукрів, включають, без обмежень, патенти США: 4981957; 5118800; 5319080; 5359044: 5393878; 5446137; 5466786; 5514785; 5519134; 5567811; 5576427; 5591722; 5597909; 5610300; 5627053; 5639873; 5646265; 5670633; 5700920; 5792847 і 6600032, а також міжнародну заявку
РСТ/О52005/019219, подану 2 червня 2005 року та опублікованої як УМО 2005/121371 22 грудня 2005 року, повний зміст кожного з які включено в справжній документ за допомогою посилання.
У нуклеотидах, які мають модифіковані цукрові фрагменти, фрагменти азотистих основ (природні, модифіковані або їх комбінації) зберігаються для гібридизації з відповідною нуклеїнової кислотою-мішенню.
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки містять один або більше нуклеозидів, що мають модифіковані цукрові фрагменти. У деяких варіантах реалізації модифікований цукровий фрагмент являє собою 2'-МОБЕ. У деяких варіантах реалізації 2-МОЕ модифіковані нуклеозиди розташовані в гепмерному мотиві. У деяких варіантах реалізації модифікований цукровий фрагмент являє собою біциклічний нуклеозид, який має місткову групу (4-СН(СНз)-О- 2). У деяких варіантах реалізації (4-СН(СНз)-О-2) модифіковані нуклеозиди розташовані в крилах гепмерного мотиву.
Модифіковані азотисті основи
Модифікації або заміщення азотистої основи (або основи) структурно відрізняються і функціонально взаємозамінні з природними або синтетичними немодифікованими азотистими основами. Природні модифіковані азотисті основи можуть брати участь у водневому зв'язуванні. Такі модифікації азотистих основ можуть впливати на стабільність до дії нуклеаз, афінність зв'язування або деякі інші корисні біологічні властивості антисмислових сполук.
Модифіковані азотисті основи включають синтетичні і природні азотисті основи, такі як, бо наприклад, 5-метилцитозин (5-те-С). Деякі заміщення азотистих основ, включаючи 5-
метилцитозинові заміщення, особливо підходять для підвищення афінності зв'язування антисмислової сполуки з нуклетїновою кислотою-мішенню. Наприклад, було показано, що 5- метилцитозинові заміщення підвищують стабільність дуплексу нуклеїнової кислоти на 0,6-1,2 260 (Запопмі, У. 5., СтоокКе, 5. Т. і І ерієи, В., ред., Апіїзепзе Кезеагсії апа Арріїсайоп5, СКС Ргев5,
Воса Каїоп, 1993, сс. 276-278).
Додаткові модифіковані азотисті основи включають б5-гідроксиметилцитозин, ксантин, гіпоксантин, 2-аминоаденін, б-метил та інші алкільні похідні аденіну і гуаніну, 2-пропіл і інші алкільні похідні аденіну і гуаніну, 2-тіоурацил, 2-тіотимін і 2-тіоцитозин, 5-галогенурацил і цитозин, 5-пропініл (-С-0-СНЗ) урацил і цитозин і інші алкінільні похідні піримідинових основ, 6- азоурацил, цитозин і тимін, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тіоурацил, 8-галоген, 8-аміно, 8-тіол, 8- тіоалкил, 8-гідроксил і інші 8-заміщені аденіни і гуаніни, 5-галоген, зокрема, 5-бром, 5- трифторметил і інші 5-заміщені урацили і цитозини, 7-метилгуанін і 7-метиладенін, 2-Е-аденін, 2-аміноаденін, 8-азагуанін і 8-азааденін, 7-дезазагуанін і 7-дезазааденін, і З-дезазагуанін і 3- дезазааденін.
Фрагменти гетероциклічних основ також можуть включати ті, в яких пуринова або піримідинова основа замінена іншими гетероциклами, наприклад, 7-дезазааденин, 7- дезазагуанозин, 2-амінопиридин і 2-піридон. Азотисті основи, які особливо підходять для підвищення афінності зв'язування антисмислової сполуки, включають 5-заміщені піримідини, 6- азаппіримідини і М-2 М-6 і 0-6 заміщені пурини, включаючи 2-амінопропіладенин, 5- пропінилурацил і 5-пропінилцитозин.
У деяких варіантах реалізації антисмислові сполуки, спрямовані на нуклеїнову кислоту СЕВ, містять одну або більше модифікованих азотистих основ. У деяких варіантах реалізації укорочені або геп-розширені антисмислові олігонуклеотиди, спрямовані на нуклеїнову кислоту
СЕВ, містять одне або більше модифікованих азотистих основ. У деяких варіантах реалізації модифікована азотиста основа являє собою 5-метилцитозин. У деяких варіантах реалізації кожен цитозин являє собою 5-метилцитозин.
Спряжені антисмислові сполуки
У деяких варіантах реалізації цього опису запропоновані спряжені антисмислові сполуки. У деяких варіантах реалізації цього опису запропоновані спряжені антисмислові сполуки, які
Зо містять антисмисловий олігонуклеотид, комплементарний транскрипту нуклеїнової кислоти. У деяких варіантах реалізації цього опису запропоновані способи, що включають приведення в контакт клітини з парним антисмисловою сполукою, що містить антисмисловий олігонуклеотид, комплементарний транскрипту нуклеїнової кислоти. У деяких варіантах реалізації цього опису запропоновані способи, що включають приведення в контакт клітини з парною антисмисловою сполукою, що містить антисмисловий олігонуклеотид, і зменшення кількості або активності транскрипту нуклеїнової кислоти в клітині.
Раніше був описаний асіалоглікопротеїновий рецептор (АБОР-К). Див. наприклад, Рагк еї аі!.,, РМА5, тому. 102, Мо 47, сс. 17125-17129 (2005). Такі рецептори експресуються на клітинах печінки, зокрема, гепатоцитах. Крім того, було показано, що сполуки, що містять кластери трьох
М-ацетилгалактозамінових (ЗаїМАс) лігандів, здатні зв'язуватися з АБОР-К, приводячи до захоплення зазначеної сполуки в клітку. Див., наприклад, Кпогем еї а!., Віоогдапіс апа Меаісіпаї
Спетізігу, 16, 9, сб. 5216-5231 (Мау, 2008). Відповідно, кон'югати, що містять такі кластери саїІМАс, використовували для полегшення захоплення деяких сполук у клітини печінки, зокрема, гепатоцитах. Наприклад, було показано, що деякі кон'югати які містять саіМАс збільшують активність дуплексних міРНК сполук у клітинах печінки іп мімо. У таких випадках кон'югат який містить сзаіІМАс, як правило, прикріплюється до смислової спіралі дуплексу міРНК. Оскільки смислова спіраль відкидається перед остаточною гібридизацією антисмислової спіралі з нуклеїнової кислотою-мішенню, то малоймовірно, що такий кон'югат буде впливати на активність. Як правило, кон'югат приєднується до 3-кінця смислової спіралі міРНК. Див. наприклад, патент США 8106022. Деякі групи кон'югату, описані в цьому документі, більш активні та/або синтезуються легше, ніж групи кон'югату, описані раніше.
У деяких варіантах реалізації цього винаходу кон'югати приєднуються до одноланцюгових антисмислових сполук, включаючи, але не обмежуючись ними, антисмислові сполуки на основі
РНКази Н та антисмислові сполуки, які змінюють сплайсинг цільової нуклеїнової кислоти пре-
МРНК. У таких варіантах реалізації кон'югат повинен залишатися приєднаним до антисмислової сполуки досить довго для забезпечення переваги (покращеного захоплення в клітини), але потім він повинен або розщеплюватися, або іншим чином не перешкоджати подальшим стадіями, необхідним для активності, таким як гібридизація з цільовою нуклеїновою кислотою і взаємодія з РНКазою Н або ферментами, пов'язаними зі сплайсингом або моделюванням бо сплайсингу. Такий баланс властивостей більш важливий при осадженні одноланцюгових антисмисенсних сполук, ніж сполук міРНК, де кон'югат може бути просто приєднаний до смислового ланцюга. У цьому документі описані одноланцюгові антисмислові сполуки, які мають покращену активніст в клітинах печінки іп мімо, порівняно з такою-саме антисмисловою сполукою, яка не мають кон'югату. Враховуючи необхідний баланс властивостей цих сполук, така покращена активність є несподіваною.
У деяких варіантах реалізації групи кон'югату за цим документом містять фрагмент що розщеплюється. Як було відзначено, не обмежуючись якимось механізмом, логічно, що кон'югат повинен зберігатися у сполуки досить довго для забезпечення посилення захоплення, але після цього бажано, щоб певна його частина або, в ідеалі, весь кон'югат розщеплювався, виділяючи вихідну сполуку (наприклад, антисмислову сполуку) в її найбільш активній формі. У деяких варіантах реалізації рФррагмент що розщеплюється являє собою нуклеозид що розщеплюється.
Такі варіанти реалізації мають перевагу ендогенних нуклеаз у клітці за рахунок приєднання частини кон'югату (кластера) до антисеного олігонуклеотиду через нуклеозид за допомогою одного або більше зв'язків що розщеплюється, таких як фосфодіестерний зв'язок. У деяких варіантах реалізації кластер зв'язаний з нуклеозидом що розщеплюється через фосфодіестерний зв'язок. У деяких варіантах реалізації нуклеозид що розщеплюється приєднаний до антисмислового олігонуклеотиду (антисмисловій сполуці) фосфодіестерним зв'язком. У деяких варіантах реалізації група кон'югату може містити два або три нуклеозиду що розщеплюються. У таких варіантах реалізації зазначені нуклеозиди що розщеплюються зв'язані один 3 одним, з антисмисловою сполукою та/або з кластером за допомогою зв'язків що розщеплюються (таких як фосфодіестерний зв'язок). Деякі кон'юЮгати за цим документом не містять нуклеозид що розщеплюється, а замість цього містять зв'язок що розщеплюється.
Показано, що достатнє розщеплення кон'югату з олігонуклеотиду забезпечується щонайменше за рахунок одного зв'язку, який легко піддається розщепленню в клітині (зв'язок що розщеплюється).
У деяких варіантах реалізації зв'язані антисмислові сполуки являють собою проліки. Такі проліки вводять тварині, і вони в кінцевому підсумку метаболізуються до більш активної форми.
Наприклад, спряжені антисмислові сполуки розщеплюються з видаленням всього або частини кон'югату, приводячи до активної (або більш активної) формі антисмислової сполуки, що не
Зо містить всього або частини кон'югату.
У деяких варіантах реалізації кон'югати приєднані у 5'-кінця олігонуклеотиду. Деякі такі 5'- кон'югати розщеплюються більш ефективно, ніж аналоги, які мають таку ж групу кон'югату, приєднану у 3'-кінця. У деяких варіантах реалізації покращена активність може корелювати з поліпшеним розщепленням. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди, містять кон'югат у
Б'-кінця, мають вищу ефективність, ніж олігонуклеотиди, містять кон'югат у 3'-кінця (див., наприклад, Приклади 56, 81, 83 і 84). Крім того, 5'-приєднання забезпечує більш простий синтез олігонуклеотиду. Як правило, олігонуклеотиди синтезують на твердій підкладці в напрямку від З" до 5. Для отримання 3'-сполученого олігонуклеотиду, як правило приєднують попередньо сполучений 3'-нуклеозид до твердої підкладки, а потім звичайним шляхом створюють олігонуклеотид. Однак приєднання такого сполученого нуклеозиду до твердої підкладки ускладнює синтез. Крім того, використовуючи такий підхід, кон'югат потім присутній в ході всього синтезу олігонуклеотиду і може руйнуватися під час наступних стадій або може обмежувати типи реакцій та реагентів, які можна використовувати. Використовуючи структури та методики, описані в цьому документі для 5-сполучених олігонуклеотидів, можна синтезувати олігонуклеотид за допомогою стандартних автоматизованих методик і впроваджувати в кон'югат останній (5'-крайній) нуклеозид або після відділення олігонуклеотиду від твердої підкладки.
З урахуванням відомого рівня техніки і цього опису, фахівці в даній області техніки можуть легко отримати будь-які з кон'югатів та сполучених олігонуклеотидів, описаних у цьому документі. Крім того, синтез деяких таких кон'югатів та сполучених олігонуклеотидів, описаних у цьому документі, простіше і/або вимагає менше стадій і, отже, менш дорогий, ніж синтез раніше описаних кон'югатів, що дає перевагу при виробництві. Наприклад, синтез деяких груп кон'югату складається з меншої кількості синтетичних стадій, що приводить до збільшення виходу, порівняно з раніше описаними групами кон'югату. Групи кон'югатів, такі як заМАс3-10 у
Прикладі 46 і саіМАс3-7 у Прикладі 48 набагато простіше, ніж раніше описані кон'югати, такі як описано в публікаціях О.5. 8106022 або Ш.5. 7262177, для яких необхідне складання більшої кількості хімічних проміжних сполук. Відповідно, ці та інші кон'югати, описані в цьому документі, мають переваги у порівнянні з раніше описаними сполуками для застосування з будь-яким олігонуклеотидом, включаючи одноланцюгові олігонуклеотиди і будь-яку спіраль дволанцюгові бо олігонуклеотидів (наприклад, міРНК).
Також, в цьому документі описані групи кон'югатів, які мають тільки один або два ліганди саїІМАс. Як показано, такі парні групи посилюють активність антисмислових сполук. Такі сполуки набагато простіше отримати, ніж кон'югати, що містять три ліганди саїМАс. Групи кон'югатів, які містять один або два ліганди сзаіМмАс, можуть бути приєднані до будь яких антисмислових сполук, включаючи одноланцюгомі олігонуклеотиди і будь-який ланцюгдволанцюгових олігонуклеотидів (наприклад, міРНК).
У деяких варіантах реалізації кон'югати, описані в цьому документі, суттєво не змінюють деякі показники переносимості. Наприклад, у цьому документі показано, що зв'язані антисмислові сполуки є імуногенними, ніж несполучені вихідні сполуки. Оскільки активність поліпшується, то варіанти реалізації в яких переносимість залишається такою ж (або в дійсності якщо навіть погіршується переносимість лише незначно, в порівнянні з приростом активності), мають поліпшені характеристики для терапії.
У деяких варіантах реалізації сполучання дозволяє змінювати антисмислові сполуки так, щоб вони мали менш виражені наслідки у відсутність сполучення. Наприклад, у деяких варіантах реалізації заміна одного чи більше тіофосфатних зв'язків повністю тіофосфатної антисмислової сполуки на фосфодіестерні зв'язки приводить до покращення деяких показників переносимості. Наприклад, у деяких випадках такі антисмислові сполуки, що мають один або більше фосфодіестерів, є менш імуногенними, ніж такі ж сполуки, в яких кожен зв'язок являє собою тіофосфат. Проте у деяких випадках, як показано в Прикладі 26, таке ж заміщення одного чи більше тіофсофатних зв'язків на фосфодіестерні зв'язки призводить також до зниження клітинного захоплення та/або до зниження активності. У деяких варіантах реалізації зв'язані антисмислові сполуки, описані в цьому документі, допускають таку зміну зв'язків з невеликим зниженням або без зниження захоплення і активності, порівняно з парним повністю тіофосфатним аналогом. Насправді, у деяких варіантах реалізації, наприклад, у Прикладах 44, 57, 59 і 86, олігонуклеотиди, містять кон'югат і щонайменше одну фосфодіестерний міжнуклеозидний зв'язок, фактично демонструють підвищену активність іп мімо навіть у порівнянні з повністю тіофосфатним аналогом, який також містить такий саме кон'югат. Більше того, оскільки сполучення призводить до значного збільшення захоплення /активності, то невелике зниження такого істотного приросту може бути прийнятним для досягнення
Зо покращеної переносимості. Відповідно, у деяких варіантах реалізації зв'язані антисмислові сполуки містять щонайменше один фосфодіестерний зв'язок.
У деяких варіантах реалізації сполучення антисмислових сполук за цим документом призводить до покращеної доставки, захоплення і активності в гепатоцитах. Отже, у тканину печінки доставляється більша кількість сполуки. Однак у деяких варіантах реалізації така поліпшена доставка сама по собі не пояснює загального збільшення активності. У деяких таких варіантах реалізації в гепатоцити надходить більша кількість сполуки. У деяких варіантах реалізації навіть таке покращене захоплення гепатоцитів сам по собі не пояснює загального збільшення активності. У таких варіантах реалізації збільшується продуктивне захоплення сполученої сполука. Наприклад, як показано в Прикладі 102, деякі варіанти реалізації кон'югатів що містять саїІМАс збільшують збагачення антисених олігонуклеотидів у гепатоцитах, порівняно з не паренхимальними клітинами. Таке збагачення переважно для олігонуклеотидів, які спрямовані на гени, які експресуються в гепатоцитах.
У деяких варіантах реалізації спряжені антисмислові сполуки за цим документом призводять до зменшення впливу на нирки. Наприклад, як показано в Прикладі 20, концентрації антисмислових олігонуклеотидів, що містять деякі варіанти реалізації кон'югатів що містять саіМАс, в нирках нижче, ніж концентрації антисмислових олігонуклеотидів, кон'югату що не містять саМАс. Це має кілька нагальних терапевтичних застосувань. Для терапевтичних показань, в яких не вимагається прояв активності в нирках, вплив на нирки піддає їх ризику токсичності без відповідної користі. Більш того, висока концентрація в нирках зазвичай приводить до виведення сполуки з сечею, забезпечуючи більш швидке виведення. Відповідно, для позаниркових мішеней накопичення в нирках є небажаним.
У деяких варіантах реалізації цього опису запропоновані спряжені антисмислові сполуки, представлені формулою: к-в-- о оС Е--Я
Ч де
А являє собою антисмисловий олігонуклеотид;
В являє собою фрагмент, що розщеплюється
С являє собою лінкер кон'югату р являє собою групу розгалуження кожен Е являє собою зв'язку; кожен Е являє собою ліганд; д являє собою ціле число від 1 до 5.
На представленій вище схемі та в аналогічних схемах у цьому документі група розгалуження "О" розгалужується таку кількість разів, що необхідно для відповідності кількості груп (Е-Е), вказаної кількості "д". Отже, якщо д-1, то формула являє собою:
А- ж ж 5х--З2Ж "З - - - 0О - -- -- якщо 4-2, то формула являє собою: и
А--зсХЗБЗ- -Фс0 - -йЯоя8
М в якщо 4-3, то формула являє собою: /
А-«ОА ю («С- - 0 А - - - 5 -А - - - Е-А-А- і Е----А'їЕ якщо 4-4, то формула являє собою:
Е-А-Р т ші
А- 5 - 0 - - - -
Е--БЕ якщо 4-5, то формула являє собою:
Е--АА:. р ЩІ
А-- - 82 - 0-0 -- 87 сх .
Е-А-А5
У деяких варіантах реалізації запропоновані спряжені антисмислові сполуки, які мають структуру:
Направляючий Фрагмент / пово. опо г У 7 и я» фрак гої з метр ми 7 виш З. ек ! ен :
Ко - й во Ко Б Ш не деки ї її ! під юн вт а те Ше і / ї ши ;
Хек КЕ Е То дж 7 ї :
Ліганд Зв'язка ре Дінкер ре в й Су мит ск ТК ще МПозшеплюєтья поет ї Група возгалуження
У деяких варіантах реалізації запропоновані спряжені антисмислові сполуки, які мають структуру:
Направляючий на клітину Фрагмент ран вин
Її чо у і о но Ко тю ДМ Фрагмент,
АСНМ о он «що розщеплюєтья -
НО о В. о КИТ нн о їх ІН Е Й дл» Кі ; : Зони шен ди ні Один Ен З дл ; нн а. і дн ш- ке т тан та к тя Е я Тит е . х їй БУ ; - денМ Я оовязуд я о о і 7 7 во ;
Ліганд я , я о Го -4 но, яд АЧО ен, Дооонитн ТО с ; но-ит Он
МНАЄ Група розгалуження 5 .
У деяких варіантах реалізації запропоновані спряжені антисмислові сполуки, які мають структуру:
Фрагмент,
АБО що розщеплюєтья ще в м МН, мае В ее Я. ї т
НО ; : е я г: ЯКА Кк
СИ с
НО
Направляючий на клітину фрагмент І стер Я 6 : й ння Ка . М З т Я Кк х, що і нон У, їх ії З їх днк ий - г Х но-клх АХ пи, о Ей
ГТ ют ит В ги щи щі осо», г он
СН з х - і о з - Ід. ноон о | З о. о Лінкез
Но- КОЮ. дит урни т» дно кан'югату . АсНМ Еш Є чо ОН, ши. зЗнаЯзка перен
Ліганд р: ;. о ої наОон АОМЦЯ ку, А ви ти 7 Од о на І
МНАс Гоупа розгалуження
У деяких варіантах реалізації запропоновані спряжені антисмислові сполуки, які мають структуру:
АБО з
Ліганд фрагмент, а. т | - свя пряна І Е щі Зв'язка ЩО БОЗЩеПНКЄТЬЯ рову неон г - НО ен ( они НЕ : їі : Ї . і: Хо ши -й ТЕ -Х г 3 ЩЕ о ;
І я : «| ї ї ; 00 АСНМ й маш ще | я нооН а што нн га ні в. но Ж я М чи и М- че денМ о од ноон Лу Лікер с -О й н, я с кон'югату
НО Хо М. ЯТЬ ; т і денім о щ -4 ч Група розгалуження і ' Я т й ї
Напранляючий на клітину Фрагмент
У цьому описі запропоновані наступні необмежуючі нумеровані варіанти реалізації:
Варіант реалізації 1. Кон'югована антисмислова сполука за будь-яким з варіантів реалізації 1179-1182, в якій зв'язка має структуру, обрану з: о о
М М т або с ; де кожен п незалежно дорівнює 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7.
Варіант реалізації 2. Кон'югована антисмислова сполука за будь-яким з варіантів реалізації 1179-1182, в якій зв'язка має структуру: о
М еВ х,
Варіант реалізації 3. Кон'югована антисмислова сполука за будь-яким з варіантів реалізації 1179-1182 або 1688-1689, в якій лінкер має структуру, обрану з: о о а же і т В є Же М оку в я Ж мета З и ин т я 1 я М У С С А т Е " хе . о та -
Варіант реалізації 4. Кон'югована антисмислова сполука за будь-яким з варіантів реалізації 1179-1182 або 1688-1689, в якій лінкер має структуру, обрану з: як Я тд -- а-ї бери зт
Ї ши нт та ; де кожен п незалежно дорівнює 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7.
Варіант реалізації 5. Кон'югована антисмислова сполука за будь-яким з варіантів реалізації 1179-1182 або 1688-1689, в якій лінкер має структуру:
о о
ЖАХ ч Ммо-
У варіантах реалізації, які мають більше однієї конкретної змінної (наприклад, більше одного "т" або "п"), якщо не вказано інше, кожна така конкретна змінна обрана незалежно. Отже, для структури, яка має більше одного п, кожен п обраний незалежно, так що вони можуть бути або не бути однаковими між собою. і. Деякі фрагменти, що розщеплюються
У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою зв'язок, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється містить зв'язок, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації група кон'югату містить фрагмент, що розщеплюється. У деяких таких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється приєднується до антисмислового олігонуклеотиду. У деяких таких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється приєднується безпосередньо до фрагмента, який спрямовує на клітку. У деяких таких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється приєднується до лінкеру кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється містить фосфат або фосфодіестер. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою нуклеозид, що розщеплюється або нуклеозидний аналог. У деяких варіантах реалізації нуклеозид або нуклеозидний аналог містить додатково захищену гетероциклічну основу, вибрану з пурину, заміщеного пурину, піримідину або заміщеного піримідину. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою нуклеозид, який містить додатково захищену гетероциклічну основу, вибрану з урацилу, тиміну, цитозину, 4-М-бензоїлцитозину, 5- метилцитозину, 4-М-бензоїл-5--метилцитозину, аденіну, 6-М-бензоиладеніну, гуаніну і 2-М- ізобутирілгуаніну. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою 2'- дезоксинуклеозид, який приєднаний до 3'-положення антисмислового олігонуклеотиду за допомогою фосфодіестерного зв'язку і приєднаний до лінкеру фосфодіестерним або тіофосфатним зв'язком. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою 2'-дезоксиаденозин, який приєднаний до 3'-положення антисмислового олігонуклеотиду за допомогою фосфодіестерного зв'язку і приєднаний до лінкеру фосфодіестерним або тіофосфатним зв'язком. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою 2'-дезоксиаденозин, який приєднаний до 3'-положення антисмислового олігонуклеотиду
Зо за допомогою фосфодіестерного зв'язку і приєднаний до лінкеру фосфодіестерним зв'язком.
У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється приєднаний до 3'-положення антисмислового олігонуклеотиду. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється приєднаний до 5'-положення антисмислового олігонуклеотиду. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється приєднаний до 2'-положення антисмислового олігонуклеотиду. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється приєднаний до антисмисловому олігонуклеотиду фосфодіестерним зв'язком. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється приєднаний до зазначеного лінкеру або фосфодіестерним, або тіофосфатним зв'язком. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється приєднаний до зазначеного лінкеру фосфодіестерним зв'язком. У деяких варіантах реалізації група кон'югату не містить фрагмент, що розщеплюється.
У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється розщеплюється після введення зазначеного комплексу в організм тварини тільки після його поглинання цільовою кліткою.
Всередині клітини фрагмент, що розщеплюється розщеплюється, вивільняючи таким чином активний антисмисловий олігонуклеотид. Не обмежуючись теорією, припускають, що фрагмент, що розщеплюється розщеплюється під дією однієї або більше нуклеаз всередині клітини. У деяких варіантах реалізації одна або білоше нуклеаз розщеплюють фосфодіестерний зв'язок між фрагментом, що розщеплюється і лінкером. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється має структуру, обрану з наступних:
т певен о
КМ дк
Я ще у ї
ІЯУ щу ен с а -їЩ
З о і Ж, шх: і Ко хо с зу хз - зе пкха акнжнн , і У о данной унії гир Я Я а їзереюи сере си Її ї о о
М. цу а Же М и. дк ще с кеш М а и з ох ї і у я ж і : їй : та й сем цею сере де кожен з Вх, Вхі, Вхг Вхз незалежно являє собою фрагмент гетероциклічної основи. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється має структуру, обрану з наступних: т о-р-оН Мне
М
САМО у о-еоон іі. Деякі лінкери
У деяких варіантах реалізації групи кон'югату містять лінкер. У деяких таких варіантах реалізації лінкер ковалентно зв'язаний з фрагментом, що розщеплюється. У деяких таких варіантах реалізації лінкер ковалентно зв'язаний з антисмисловим олігонуклеотидом. У деяких варіантах реалізації лінкер ковалентно зв'язаний з фрагментом, спрямованим на клітку. У деяких варіантах реалізації лінксер, додатково містить ковалентне приєднання до твердої підкладки. У деяких варіантах реалізації лінкер додатково містить ковалентне приєднання до білкового зв'язучого фрагменту. У деяких варіантах реалізації лінкер додатково містить ковалентне приєднання до твердої підкладки і додатково містить ковалентне приєднання до білкового зв'язуючого фрагменту. У деяких варіантах реалізації лінкер містить кілька положень для приєднання зв'язаних лігандів. У деяких варіантах реалізації лінкер містить кілька положень для приєднання зв'язаних лігандів і не є приєднаним до групи розгалуження. У деяких варіантах реалізації лінкер додатково містить один або більше зв'язків, що розщеплюються. У деяких варіантах реалізації група кон'югату не містить лінкер.
У деяких варіантах реалізації лінкер містить щонайменше одну лінійну групу, яка містить групи, вибрані з алкільних, амідних, дисульфідних, поліетиленгліколевих, тіоефірних (-5-) і гідроксиламіно (-0О-М(Н)-) груп. У деяких варіантах реалізації лінійна група містить групи, вибрані з алкільних, амідних і простих ефірних груп. У деяких варіантах реалізації лінійна група містить групи, вибрані з алкільних і простих ефірних груп. У деяких варіантах реалізації лінійна група містить щонайменше одну фосфорну лінкерну групу. У деяких варіантах реалізації лінійна група містить щонайменше одну фосфодіестерну групу. У деяких варіантах реалізації лінійна група містить щонайменше одну нейтральну лінкерну групу. У деяких варіантах реалізації лінійна група ковалентно приєднана до фрагмента, який спрямовує на клітку, і до фрагменту, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації лінійна група ковалентно приєднана до фрагмента, який спрямовує на клітку, і до антисмислового олігонуклеотиду. У деяких варіантах
Зо реалізації лінійна група ковалентно приєднана до фрагмента, який спрямовує на клітку, до фрагмента, що розщеплюється і до твердої підкладки. У деяких варіантах реалізації лінійна група ковалентно приєднана до фрагмента, який спрямовує на клітку, до фрагмента, що розщеплюється, до твердої підкладки і до білкового зв'язуючого фрагменту. У деяких варіантах реалізації лінійна група містить однин або більше розщеплюваних зв'язків.
У деяких варіантах реалізації лінкер містить лінійну групу, ковалентно приєднану до групи скелета. У деяких варіантах реалізації скелет містить розгалужену аліфатичну групу, яка містить групи, вибрані з алкільних, амідних, дисульфідних, поліетиленгліколевих, простих ефірних, тіоефірних і гідроксиламіно-груп. У деяких варіантах реалізації скелет містить розгалужену аліфатичну групу, яка містить групи, вибрані з алкільних, амідних і простих ефірних груп. У деяких варіантах реалізації скелет містить щонайменше одну моно - або поліциклічну кільцеву систему. У деяких варіантах реалізації скелет містить щонайменше дві моно - або поліциклічні кільцеві системи. У деяких варіантах реалізації лінійна група ковалентно приєднана до групи скелета, а група скелета ковалентно приєднана до фрагмент, що розщеплюється і линкеру. У деяких варіантах реалізації лінійна група ковалентно приєднана до групи скелета, а група скелета ковалентно приєднана до фрагменту, що розщеплюється, линкеру і твердої підкладки.
У деяких варіантах реалізації лінійна група ковалентно приєднана до групи скелета, а група скелета ковалентно приєднана до фрагменту, що розщеплюється, линкеру і білкового зв'язуючого фрагменту. У деяких варіантах реалізації лінійна група ковалентно приєднана до групи скелета, а група скелета ковалентно приєднана до фрагмента, що розщеплюється, линкеру, білкового зв'язуючого фрагменту і твердої підкладки. У деяких варіантах реалізації група скелета містить один або більше зв'язків, що розщеплюються.
У деяких варіантах реалізації лінкер містить зв'язуючий білок фрагмент. У деяких варіантах реалізації зв'язуючий білок фрагмент являє собою ліпід, такий як, наприклад, включаючий, без обмежень, холестерин, холева кислота, адамантан-оцтова кислота, 1-пірен-масляна кислота, дигідротестостерон, 1,3-біс-О(гексадецил)гліцерин, геранилоксигексилова група, гексадецилглицерин, борнеол, ментол, 1,3-пропандіол, гептадецилова група, пальмітинова кислота, міристинова кислота, О3-(олеоил)літохолева кислота, О3-(олеоїл)ухоленова кислота, диметокситритил або феноксазин, вітамін (наприклад, фолат, вітамін А, вітамін Е, біотин, піридоксаль), пептид, вуглевод (наприклад, моносахарид, дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, олігосахарид, полісахарид), ендосомолітичний компонент, стероїд (наприклад, уваол, гецигенин, діосгенін), терпен (наприклад, тритерпен, наприклад, сарсасапогенин, фриделин, літохолева кислота, дериватизована епіфриделанолом) або катіонний ліпід. У деяких варіантах реалізації зв'язуючий білок фрагмент являє собою насичену або ненасичену жирну кислоту з довжиною ланцюга від С1б6 до С22, холестерин, холеву кислоту, вітамін Е, адамантан або 1-пентафторпропил.
У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з:
з и і ЕЕ з беж, у дя : її їх г о с ї У ща Га а пт то щи х пн, с | і
З Її А м - н ІЗ і мех З
Бе и я : Мой : т я Мао Са з и х лю. і ї іа
Об що х 0, и та -в-ОНоОох 7 ши х х Зник З 7 ЗІ С х і Є с о ВА С К. г й і о ! дн т» х ОО щ т а М м ї я ШЕ НН М ща і п. х з / що ч ; у : че Я зо я х Як х ін ХО
Кв «кл т а чічткх 0
Щ--я ит СН ння, т ак с Ше : р "в маш г т З г
К. я й т бе й у - А дю г М рин, 5 ч А
М "й з пев М Зоо Матч н Жов СА В, й, млн дик М. ев ! Є зад ж хе і авт ьо вою У й о ех я
З п - яд й йди и дит я Н 5 шк во в т їй Й їЕ х ї т » яр Я пд тю - хх в Як Ка «
КК рчнннй з сей ха Ст о о-ї зі ре Ко. км . . а | : Ка зе р о у а и є -жх . в ли ЗА ї З я й ; ох гост й дя ; ї - ї р-н, яв ОВ ї ; ши их рн у дев й пи зе по тд" - т Я З З тя . та й ох М н ї - я | ях Є ет о я зе зу «М фе я т т я
У тт | о де кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20; р дорівнює від 1 до 6.
У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з:
м" о тв ху з АК я ех - ; ях і у У х ої ка) і о Хх М х нн І Шо фею Й дв дити ли «яд яте ; «сю Ето.
Ей й з те це ух и З Кк в У о т
Ко А х стеми : п т
Ко ре з У т А я х я яти и ва тд кої в п 7 Ко і З т Є хх г н кл яв МОЯ м:
Кй и, Ж- в ЯМ Х ін ов : но ан п я і ї у ТЕ си? т а, а "х Б іх м "а ї . ну - и ним Де ли и Ж ; 7 у ї зе х Га 3 чих й г жу рай й К р ЕЕ Я 7 й 9 є вх х и у х й :
Же уні я є М. ою й л тм: а 7 У бро,
Я сл М в З 7 щи С з,
Ко ві
Ї о м у
У т Її Є , стики Ї Кс во мМ я с
КЗ ї я й КК з й 5 : і Ї 5 у
СА ланно г є щ М он ; м ку Я ер м, І о М :
Я М зо ЖХ. цих и В 3 ій со я. п - Зричю с М у ря ос о : та с шк й
З - дих ар н . ї ї М 1 ! і на -Х
Ям яд вити дня ге
ТІ я
Е. їх де кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20.
У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з:
х - їз я
Ов о а м нн о і; в ї ї ; « М. ОМ. А я Як : АХ . М ра щи их. дек, 3
А Кт . ви ват ТОК, о т ї « ж КУ в : зл а ; п вм в вна іт . З ! ' а ОО па : яке
ГО Он о діа оз оно нт САМ. ск М пед цятья я
І Я З КВТ вв ть й в М я : М ІЗ хв ; ї - т Ух г
ГУ ї і В Є з х - ї іх а
Я ту ; в й, є Я т, 7 я с Ії , ся й Є ща - з хе У Й х їв КЕ ; пря я Ж су м шт : в ше ви зи о " пн п, а й н ку М дну ; - й щі 7 8 Му мМ а н ин дин Мф др ОТ н кої
От, ТЕ ват во Вуж х ов ит У, ни й х т Т Во и Ай дет и ти лі х о о тр - Таж іш ОО в
В о шт 2 М х х щ окуня; та дк ке, й ць жк х х Ка я я Я ш-ї ху. Дю я я ей ї 1 о х Є її Є я і т їн З їх ін КІ ОО зв а Її о н - М
Х 13 Ж с ко те к
А их дю М йод Я Я -а
І ЩІ Че В ій ТО Ст 0 єв де п дорівнює від 1 до 20.
У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з:
І 14 ї м; Н ї нн Ї : ї І чу В ї ї ї
ЯМ явним и ЖК г озятни В ож ДМ шив щи ча», г т ЗК зе У Й Я я Щ в тах ЗК Ка ГЕ з Її 4 У « ат хі КЕ я х а! ї. ; Ко зп ,
В в подув о и дети ОН А АК
Наш й о пооокажа і й В нн у ке її - не о яд Я ОМ. лим род тя і - г 7 в а чн у т ш- т Ст "ві їч я Я у по ої її - ми Ко "7 о ви км М
Ах як Я и ; пе х й 1 и и з й п 1
М з хро з н « ОЗ рам чия М си ме І т х - і
Я КА т у В. т К 5 й Н
МО С М му тн кт одусн би кон у . хв о а тя н Ї М от В у КО т я о по З " г ишн ! : ; , м і а в є н й М ; Н ач Ж я А
Х ин Ма хе х Й ж пив дитя ий до Ко круте 7 ЕЙ пк Ше ямей т ев го Я Є Те г за ою тв ТЕ о о о Мі пи, ї
ОО г: -іни М
Н Не! : Мп - ММ
В у і М ооо і Ми хи КИЙ
З дія Ма Др і еди ен Ко ях тр Артур У і ї т Мн С Су Об У Її 2
Коб ве 5 507 о о
ИН вон з в те : кг тах 3,
Бу м уні, у фрі у 5-3 р п ост гот лк во я ї по п х з Її п о о
Я нт я Ко А А чу о ї ши У та бю ТТ
З ї ї н п - а а де кожен Ї незалежно являє собою фосфорну лінкерну групу або нейтральну лінкерну групу; кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20. 5 У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з:
я щі о о, / з
Со о Н ж о М , Аллу их -8 ; «о ' х Ї 5 о т і-вн о о ШІ ди
Н о Н їз т «лети вгу ут ; і мн Що У ї Осо 1 я Ки «у олрон о 3-МН !
Н М . т
АВА жо ; 9 оо
О плн 0 те он и т о НО
Мгу», о во о,
ДИВ он ки 9 че, н А Н чу 8 Зо ; тата Ого ; Що о І т о, нн нн Н . о еивитур яру оби ів о н " 8778 о ; й ч ко 1 - у
Со о, ла и піде й он п ху и - 87 о з з ; й «о пунргрутне»
й ОВ в й - сла Май я ту
ДЯ а вод ей х ; и чу Є -ї 7 З як бив У ші «КА й
Й 9 во чи Ето о,
Х. й дит к КА М ма би ик В . ; х
М Ст - о е в 0.
Но ре ї х 7 о І Шо - у чад и . зи ох ви Еш Б : а зе 7 ит дек в У з Шия ! І де т чий 5
С Ск рн-й ех цк т М й х
Щ-в й Оу 2 ЖК й бюро їх о
У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з: ст з На НК о 4 єв з м і; ка Д кі яече поч, Д мк З Її М с ка Кк з я ЖК. нат т А 3 ще пд з бот ит М т В й Що и сни ж и зщ . їх що Її ня о, о а п Н о косіння ОН м: з т
А, Ї ХВ ї о ни7бо
М: яд ЇЇ 5. з Ї ЕЖ й . х ї Ко яри р ; бере и що? 0 ж Ії
Її " о
ГЕ
« М І о фути зт щі т г з А 7 бета ут у денний ори
Н І ї БІК З й -ї "и ; г те її; з : «т Н
Н я М. г п
М Х - х але вир жи Шк хи су Я : : н є4 А Й ,
Кв : АК оди ит Ж їз о її В її й Гея. т во и : І н гу М СЯ Й я - т М. а ТЯ дич х х пеню вм й оо яку я кан во 2 Шо пут -Е : е я т я я, ті я и за п гу х У
В т КЕ у є с о м См н я ЦЕ а М.
Ходи Мои Й, гз тк т в Зоя Ах й -и х о а
У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану 3:
ї З в о Ов о пе зи й а Ех з хо З ди тд з : Кз не ї я -- й , " ! зе ше ї Н о , о що. а сити з о м маш С ; ;
Ї Ї її н з - не
Ас ці А ШЕ о й йея Гн Яр пк ЧУ й Я, х В " й . є : ; : 7 і ї І вм в я т б ан ях тре Ж. У її ее шо її
Мт т о
ВО жі риму ЯК я и. В 5 є чо
ТММ МТМО рн дет рр лише М не мк пише ши о М Х д о о н й т дня є г й - М хх У м биті арт и дити ТТ ; я 4 х т й а КЕ кре ду "в жк й шли З - р я Аз .
З З т Ми я в Г Чи за чі п е х дз о
С
- н й м . і о.
Фо Мк З ку дичні ІМ пен ре ин в
Олю ту ств тот о й о
Е 2 г ка лет ; рт ру -Е . « За дит ух пи ей І й и тю з в. у М. е х г: Й тк і. і ту І
Х т а а і ї жд дю с ток тя 1 шу ше ва Мо фижай птн А ж. ДО бефтббюростет т у у ту
З З й «А З о Є о о
В ; Ї - ї ; Е з: В х го те шу тя кидют чн здав он : я Ме Пе Зм нт зи та оно 5 он но
З о бер же -в - - : Ко х ха ня Н а К ост
У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з: ух не т о, У, й дини 2 -8- я т Я
КУ о д-ь Аа . ша з т о р В х ;
Я у | і М
Я 4, Фииця фе зе а, Ма та й ин В Зо де п дорівнює від 1 до 20. 5 У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з: й ат яна е ; жо т, щу тм, тю й и У я б дк яю як ту: ша тя іта беубтттауєтиттатт,
У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з:
ян сн
ГО У нано тд БО УК ник я оз ОК ан ен та У
У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з: о о | | . х хх ї М, ї 5 ше й КВ ЯК да-к-о-їі г 7 Пи Ше к в З У а Єв в Ох о
Ї З - б СН та а в 5 -
У деяких варіантах реалізації лінкер кон'югату має структуру: п о, я
СХ о о М
АК А . 6 . " пав .
У деяких варіантах реалізації лінкер кон'югату має структуру:
АХ
« Мтно--
У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з:
АВ ут о-в-о- пеки кт
І У й : за он й ЕД Но й
В г ї ! та і й
У деяких варіантах реалізації лінкер має структуру, обрану з: 5 ; ї я їх х М ПЯ М. ші -к г» . ен шим тло-Бв-о- « я я ех т ле й во Я он й з а й й та а де кожен п незалежно дорівнює 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7. ії. Деякі фрагменти, спрямовані на клітину
У деяких варіантах реалізації групи кон'югату містять фрагменти, спрямовані на клітину.
Деякі такі фрагменти, - спрямовані на клітину, збільшують клітинний захоплення антисмислової сполуки. У деяких варіантах реалізації фрагменти, спрямовані на клітину, містять групу розгалуження, одну чи більше зв'язок і один або більше лігандів. У деяких варіантах реалізації фрагменти, спрямовані на клітину, містять групу розгалуження, одну або більше зв'язок, один або більше лігандів і один або більше зв'язків, що розщеплюються. 1. Деякі групи розгалуження
У деяких варіантах реалізації групи кон'югату містять націлюючий фрагмент, що містить групу розгалуження і щонайменше два зв'язаних ліганди. У деяких варіантах реалізації група розгалуження приєднує лінкер кон'югату. У деяких варіантах реалізації група розгалуження приєднує фрагмент, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації група розгалуження приєднує антисмисловий олігонуклеотид. У деяких варіантах реалізації група розгалуження ковалентно приєднана до лінкеру і до кожного зі зв'язаних лігандів. У деяких варіантах реалізації група розгалуження містить розгалужену аліфатичну групу, яка містить групи, вибрані з алкільних, амідних, дисульфідних, поліетиленгліколевих, простих ефірних, тіоефірних і гідроксиламіно-груп. У деяких варіантах реалізації група розгалуження містить групи, вибрані з
Зо алкільних, амідних і простих ефірних груп. У деяких варіантах реалізації група розгалуження містить групи, вибрані з алкільних і простих ефірних груп. У деяких варіантах реалізації група розгалуження містить моно - або поліциклічну кільцеву систему. У деяких варіантах реалізації група розгалуження містить один або більше зв'язків, що розщеплюються. У деяких варіантах реалізації група кон'югату не містить групу розгалуження.
У деяких варіантах реалізації група розгалуження має структуру, вибрану з:
ох» т о о я МН о о о о я но о-рР-о0 З и , моб ото п он ; Ма сні М/о оч пу ох и н о (п н о і и і ч М м Ю р
Н Н - М М
Ще Мо (а ТМ, як гМя ( п ли інінінй т
З й о я | п сн Єна ' сн п
Кот МН М ( о п о о І
Що о ( о ) п . і ; п о І лм у хо ш-МНО о та о о :
Що пози путч мн «МН ил тн шо і й о й й Ах я ій о г у ; є й р ливі їн ї і : Яни М ОМ . і і ' М з ! м Ї ОН : ї А Н г Об з а і о о й ян о оч емно Я
ЗЕ Кн хе ей я
Чу Ка Мои ек че М ся хв і З
З й й б огвноо о в . ЕЙ; мржтк ритн Я тю, М. Ж як ки АК ШК МОЖ КО туту сен то Зм я я МЕ я м я їн о М а і НН . бо Се е че со о АЙ . і | в у - з
У ЕЯ де кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20; )| дорівнює від 1 до З; та т дорівнює від 2 до 6. та
У деяких варіантах реалізації група розгалуження має структуру, вибрану з:
че якию де йо жем . С р бе 7 ї х . У
Її 7 Ї - ік о о я ео з Кри Ко В я, гр ї я Мих . гаю ї а СМ: щи " "в ох Но, У 7 хвоя з тн КА у Є КЕ Е їх Са Ха с
Я и сх У я т Я Дей Ї керує
Вб їн м ши при чо ну тих ої Ку ІА А Бр ще й ! іч і ше на віконне ня " ТІ: б бе Ов м ЕН ШЕ Н ще тях о он і ї ТЕ о о,
А ве я бр сі
ОО, ,, г іа Чв св МВ, і Ку во: й . То яечй МО яв «КК ба оди ШИ » Є М р хм дв емо Го»
К Ж г
З я ї
КАК. хо Б ее їх Ї 7 тах й Фо ке. й дих Я
М ' ін де кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20; та т дорівнює від 2 до 6.
У деяких варіантах реалізації група розгалуження має структуру, вибрану з: о па ої их о 9 о « х -
Н ' о о ; о чн о МН ли лм о
МН
МН с о о 0 о 3 М Жуки А ) о " . з о; о АКА, ш-АМНО 7 чл чл н о
; с т т у т г х М.
Но Її вити ко -кн а З ди п М С - х Ї з - 7 З ! кт г я. і Є І! - - | й | ід Ї
Отит тя, Б нн в 5 | х с ку, м я - їх ні Й ; С
З ної а
М о ( з ее 1 К
НМ. , в ди : Н
У Й Е
. о ; рому кт з ртнитн- н Ж маш МН ї т й 4 о 7 о
СО т а | і н і
З Її ї- З тоди диму жи дн я їх мод ит М ш-- Х А . Бе ва чи з з. дя че - те ше М фе Хпди че « х Та я М З ; є
В НН | х г х
В. й
ІК й г і се
З ї і
Як у, ше А - я Ми ши її
І со
У деяких варіантах реалізації група розгалуження має структуру, вибрану з: «ух нг ї х
А м ше ; км г Ех У
А «-Да оойц- ши іч
Ат х лу ко та чем де кожен Аї незалежно являє собою 0, 5, С-О або МН; та кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20.
У деяких варіантах реалізації група розгалуження має структуру, вибрану з: я т ух х | і у і : ді-ї і ї їв, у і бля, тя ї г г ж : х зт - с" -х 5 НН ; Зо хх «ок, я 5 д ї -Ах Я д я Е-А і; , М
См А що та" и, де кожен Аї незалежно являє собою 0, 5, С-О або МН; та кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20.
У деяких варіантах реалізації група розгалуження має структуру, вибрану з: та
ЩЕ я «У ях з з
УА Олива д-Г щі й ге - Я о їв та з п Тв
Ж Ка ще х и хе
Кай ї де Аї являє собою 0, 5, С-О або МН; та кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20.
У деяких варіантах реалізації група розгалуження має структуру, вибрану з: у
Ом о. А Мн жд ли о й, .
У деяких варіантах реалізації група розгалуження має структуру, вибрану з: у
Ом, од ли о м, .
У деяких варіантах реалізації група розгалуження має структуру, вибрану з:
Кі ль
Ко я 2. Деякі зв'язки
У деяких варіантах реалізації групи кон'югату містять одну або більше зв'язок, ковалентно приєднаних до групи розгалуження. У деяких варіантах реалізації групи кон'югату містять одну або більше зв'язок, ковалентно приєднаних долінкерної групи. У деяких варіантах реалізації кожен зв'язок являє собою лінійну аліфатичну групу, яка містить одну або більше груп, вибраних з алкільних, простих ефірних, тіоефірних, дисульфідних, амідних і поліетиленгліколевих груп у будь-якій комбінації. У деяких варіантах реалізації кожен зв'язок являє собою лінійну аліфатичну групу, яка містить одну або більше груп, вибраних з алкільних, заміщених алкільних, простих ефірних, тіоефірних, дисульфідних, амідних, фосфодіестерних і поліетиленгліколевих груп у будь-якій комбінації. У деяких варіантах реалізації кожен зв'язок являє собою лінійну аліфатичну групу, яка містить одну або більше груп, вибраних з алкільних, простих ефірних і амідних груп у будь-якій комбінації. У деяких варіантах реалізації кожен зв'язок являє собою лінійну аліфатичну групу, яка містить одну або більше груп, вибраних з алкільних, заміщених алкільних, фосфодіестерних, простих ефірних і амідних груп у будь-якій комбінації. У деяких варіантах реалізації кожен зв'язок являє собою лінійну аліфатичну групу, яка містить одну або більше груп, вибраних з алкила і фосфодіестера в будь-якій комбінації. У деяких варіантах реалізації кожен зв'язок містить щонайменше одну фосфорну лінкерну групу або нейтральну лінкерну групу.
У деяких варіантах реалізації зв'язка містить один або більше зв'язків, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації зв'язка приєднана до групи розгалуження або через амідну, або через просту ефірну групу. У деяких варіантах реалізації зв'язка приєднана до групи
Зо розгалуження через фосфордіефірну групу. У деяких варіантах реалізації зв'язка приєднана до групи розгалуження через фосфорну лінкерну групу або через нейтральну лінкерну групу. У деяких варіантах реалізації зв'язка приєднана до групи розгалуження через просту ефірну групу. У деяких варіантах реалізації зв'язка приєднана до ліганда або через амідну, або через просту ефірну групу. У деяких варіантах реалізації зв'язка приєднана до ліганда через просту ефірну групу. У деяких варіантах реалізації зв'язка приєднана до ліганда або через амідну, або через просту ефірну групу. У деяких варіантах реалізації зв'язка приєднана до ліганда через просту ефірну групу.
У деяких варіантах реалізації кожен зв'язок має довжину від близько 8 до близько 20 атомів у ланцюгу між лігандом і групою розгалуження. У деяких варіантах реалізації кожен зв'язок має довжину від близько 10 до близько 18 атомів в ланцюгу між лігандом і групою розгалуження. У деяких варіантах реалізації кожен зв'язок має довжину близько 13 атомів у ланцюгу.
У деяких варіантах реалізації зв'язка має структуру, вибрану з: та о Н « оре де з 5 є ие с, ха й х ж
Кк ж ху 5 ЖИ я Е и и ей точ ун ек вн т ит
Хр КУЄ "з АС пи яко КЗ роя їх Ак . ре СК Ах і ха в є б їв : й ; и в - бро во т : хв : 0: п :
МК ні "ха их ; я Ян : ї чі ь синий я. «ее м І. Я дитя і в пе М КД шо а
УК ОБ Її ї к з зе М я п те КЗ з - К-т є зд в хв » н їв Ї хв « : клю В хв хв : о о о і Ї А н І Н ї,. В з - - я- 5
А пий ни хи : Ап а її А зе: брадедку р, рів В ту ув й я йо ї ; "Е ; й Є й УНІ о о ; я Ак
Ж іч Тр ; Щ х 5 5 їх 5 хх В ЕН тоди кий 5, М...
Ми, ОВТ. ги - п хв є т та КО ! н п й де кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20; та кожен р дорівнює від 1 до близько 6.
У деяких варіантах реалізації зв'язка має структуру, вибрану з: : з АК тот Яся - Ах х пихи ше сб перуть з : зи - М з ди У ЕЕ ; КУ зт х :
СК н я води ди дя ши в є ох Кия яйці є я т як Я
Б й ей ХХ чо у вт сут й ий ва ей ше ту у та х би те а .
У деяких варіантах реалізації зв'язка має структуру, вибрану з: нн ри п п п о о де кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20.
У деяких варіантах реалізації зв'язка має структуру, вибрану з: х х з х Ї ї ч ден о В МКотю ЇЇ из ять Дер кс ин Му е
ЧИ. КЕ та ть й ля. 10 . я я . де Ї являє собою або фосфорну лінкерну групу, або нейтральну лінкерну групу; 71 являє собою С(-О)О-В»2; 72 являє собою Н, С:1-Св алкіл або заміщений С.і-Св алкіл;
Вг являє собою Н, С.1-Св алкіл або заміщений С.-Свє алкіл; та кожен т: незалежно дорівнює від 0 до 20, при цьому щонайменше один т: є більшим за 0 для кожного зв'язку.
У деяких варіантах реалізації зв'язка має структуру, вибрану з: н н () о ,
У деяких варіантах реалізації зв'язка має структуру, вибрану з: та
С : Ос ОМ, зей ві ве о-в-04 а «Х тт р, та - Я ти тн, о он ! тн 16 де 72 являє собою Н або СН»; та кожен т: незалежно дорівнює від 0 до 20, при цьому щонайменше один т": є більшим за 0 для кожного зв'язку.
У деяких варіантах реалізації зв'язка має структуру, вибрану з: о о є еВ 4 Н п Н т або т ; де кожен п незалежно дорівнює 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7.
У деяких варіантах реалізації зв'язка містить фосфорну лінкерну групу. У деяких варіантах реалізації зв'язка не містить жодного амідного зв'язку. У деяких варіантах реалізації зв'язка містить фосфорну лінкерну групу і не містить жодного амідного зв'язку. 3. Деякі ліганди
У деяких варіантах реалізації цього опису представлені ліганди, при цьому кожен ліганд ковалентно приєднаний до зв'язки. У деяких варіантах реалізації кожний ліганд вибрано так, щоб він мав афінність щонайменше до одного типу рецептору на клітини-мішені. У деяких варіантах реалізації кожний лігандвибрано так, щоб він мав афінність щонайменше до одного типу рецептору на поверхні клітини печінки ссавця. У деяких варіантах реалізації кожний лігандвибрано так, щоб він мав афінність до печінкового асіалоглікопротеїнового рецептору (АБОР-К). У деяких варіантах реалізації кожний ліганд являє собою вуглевод. У деяких варіантах реалізації кожний ліганд незалежно обраний з галактози, М-ацетилгалактозаміна, манози, глюкози, глюкозаміна і фукози. У деяких варіантах реалізації кожний ліганд являє собою М-ацетилгалактозамін (заіМмАс). У деяких варіантах реалізації націлюючий фрагмент містить 2-6 лігандів. У деяких варіантах реалізації націлюючий фрагмент містить З ліганди. У деяких варіантах реалізації націлюючий фрагмент містить З М-ацетилгалактозамінових ліганда.
У деяких варіантах реалізації ліганд являє собою вуглевод, вуглеводне похідне, модифікований вуглевод, полівалентний вуглеводний кластер, полісахарид, модифікований полісахарид або полісахаридне похідне. У деяких варіантах реалізації ліганд являє собою аміноцукор або тіоцукор. Наприклад, аміноцукри можуть бути вибрані з будь-якої кількості сполук, відомих у цій області техніки, наприклад, глюкозаміну, сіалової кислоти, а-О- галактозаміна, М-ацетилгалактозаміна, 2-ацетамідо-2-дезокси-О-галактопіранози (заїІМАс), 2-
Зо аміно-3-0-(В8)-1-карбоксиетил|-2-дезокси-В-Ю-глюкопіранози (В-мурамової кислоти), 2-дезокси- 2-метиламіно-Ї -глюкопіранози, 4,б6-дидезокси-4-формамідо-2,3-ди-О-метил-О-маннопіранози, 2- дезокси-2-сульфоаміно-Ю-глюкопіранози та М-сульфо-ЮО-глюкозаміну, та М-гликолоїл-а- нейрамінової кислоти. Наприклад, тіоцукри можуть бути вибрані з групи, що складається з 5-тіо-
В-О-глюкопіранози, метил-2,3,4-три-О-ацетил-1-тіо-6-О-тритил-а4-ЮО-глюкопіранозида, 4-тіо-8-О- галактопіранози та етил-3,4,6,7-тетра-О-ацетил-2-дезокси-1,5-дитіо-4-О-глюко-гептопіранозида.
У деяких варіантах реалізації "заІМас" або "ЗаІ-МАс" відноситься до 2-(ацетиламіно)-2- дезокси-ЮО-галактопіранози, зазвичай згадується в літературі як М-ацетилгалактозамін. У деяких варіантах реалізації "М-ацетилгалактозамін" відноситься до 2-(ацетиламіно)-2-дезокси-О- галактопіранози. У деяких варіантах реалізації "сзаіїМас" або "СаІ-МАс" відноситься до 2- (ацетиламіно)-2-дезокси-О-галактопіранози. У деяких варіантах реалізації "ЗаіМас" або "Са!-
МАс" відноситься до 2-(ацетиламіно)-2-дезокси-О-галактопіранози, яка включає і В-форму: 2- (ацетиламіно)-2-дезокси-В-Ю-галактопіранозу, і а-форму: 2-(ацетиламіно)-2-дезокси-О- галактопіранозу. У деяких варіантах реалізації обидві форми, В-форма: 2-(ацетиламіно)-2- дезокси-В-ЮО-галактопіраноза, і а-форма: 2-(ацетиламіно)-2-дезокси-О-галактопіраноза, можуть бути використані як взаємозамінні. Відповідно, у структурах, в яких зображена одна форма, мається на увазі, що ці структури включають також і іншу форму. Наприклад, якщо показана структура а-форми: 2-(ацетиламіно)-2-дезокси-О-галактопіранози, то мається на увазі, що ця структура включає також і іншу форму. У деяких бажаних варіантах реалізації В-форма 2- (ацетиламіно)-2-дезокси-О-галактопіранози є кращим варіантом реалізації. 2-(Ацетиламіно)-2-дезокси-О-галактопіраноза шт т жи на7 - те о ра я ш- як р но зи т
І й ом 8-(Анетипамино2г дезоксн-І)-гапактапираноза он он о но 0-3
МНАс 2-(Ацетиламіно)-2-дезокси-В-Ю-галактопіраноза он он о но
МНАс й 2-(Ацетиламіно)-2-дезокси-4-О-галактопіраноза
У деяких варіантах один або більше лігандів мають структуру, вибрану з: та
М он і нон я. нате о, да-» пуд тн 0 Ніні З с
М: рт и Ве п в 7 бен : кни
ВК де кожен ЕК: вибраний ОН з МНСООН. та
У деяких варіантах один або більше лігандів мають структуру, вибрану «з:
ОН а В НО а ІЕЕ
ЯМ ее. я п а ан с - - носки і Отит НОЮ. МОУ. кі я ї : кв я . ча - є
Над Сн 2 З
Св хи дк вх Кай сн Кк ря р дих на-клх в Ми о. он уч носн но он ноя дн ев Моно В,
ЗО ною ую; Но мн А. но Я щу хи он Он «ко ся на, ж:
АХ но УКо ма-ну не, 00, он хо не-еа, нате тт
Мо З :
Її 0. с у
У деяких варіантах один або більше лігандів мають структуру, вибрану з: ноОоНн
Н
О м но Ме У
МНАс .
У деяких варіантах один або більше лігандів мають структуру, вибрану з: ноон о, о о Ме ув
МНАс - і. Деякі кон'югати
У деяких варіантах реалізації групи кон'югату містять структурні особливості, представлені вище. У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: но он о н о о ай но миле 7
МНАс о п но он 5 І о Н Н пн о М М о М- п п
МНАс о о о в ге он но НМ
Н о о о М но т п
МНАс о й де кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20.
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру:
но он о Н о
М о ит но
МНАс о но он о о Н Н Нн о М дики о кА но ит
МНАс в о о он но ме
Н о о о М но май
МНАс о .
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: но он -- о М Н о о-і- он о М М он п І о.
МНАс у в вх но он б ) о -Ао Ки - й й о. М о. М 1 і! п о-Р-Х
МНАс И о ) о он о п ) но он о Н Нм
Ах. ЧЕ но. в п
МНАс " ї де кожен п незалежно дорівнює від 1 до 20; 7 являє собою Н або зв'язану тверду підкладку;
О являє собою антисмислову сполуку;
Х являє собою О або 5; та
Вх являє собою фрагмент гетероциклічної основи.
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: но ОН -- о о К н о он о-і- он но то м Е о : о. о МНАс о вх н но о о о Нн Н М Ж о
М М о М й Са аа Я 0--в-х он
МНАс у о о о но он ( о Н НМ
А. ща о т зр
МНАс 10 . о . пав
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру:
но он - кА. М Мк он о-р-он І?
МНАс гр т де А о у ЩІ но он о о о М 1 О-в-о т МНАс я їх рт о Ге он но он (
ХА рр о. но. 3
МНАс р
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: нОооНн -а о о її по тої о
АСНМ он В) нон в о о с) о п «Р нота Уго о-Єо
АсНнМ он
ОТ о ь й ) о Я оо п но Дроїх
МНАс
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: нОоОоНн о о ГО
АсНнНМ он 1 нон о о о о и но ТТ ото
АсНМ он о но он г /
О 0. чи Того но он
МНАс ,
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру:
нОоОоН о о нок о щі
У оо
АснМ он ) ян нОооНн п р 2 о о о о Її" М о її Й О.М но кт У хобхо-2 о-в-о и Ме
АСНМ он о о ОН нон о з (Ї) но-р-о оо о но --
МНАс
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: нОоОНн о ною х о ГО
АСсНМ ОН
М МН, он 2 7 о о о о о о с кА ДИ, - ни но ооо оо Ме
АСНМ он о о) о Г но-р-о
І жк о Сон но
МНАс
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру:
т МН
НОо-Р-О Ж ? 0-л ді М
Ким о ного о нооН (п о но Зо о
У тотьо Он
АсНнМ ОН ) о но он пф ко ун в но АР. -
Мої о- ву мло-ьчо
АСНМ он о он щей оо Її ) 0 ке; п ю с їх
МНАс .
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: т МН вою у о о.,М- М
Ким у ного і (з нОоон о - но Ох дик ї ОН олто
АснМ ОН у ? 3 ноТН о о т о и --
Оо-Р-О0 нов. ит» ої то і, Н
АСНМ он о о но он І Г о Очний о но он
МНАс .
У деяких варіантах реалізації кон'югати не містять піролідин.
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру:
М МН» хо о т М ую нООН Кк
О о М М. оо т но тр ве І о-Р-о о нооно0/0/ лен о о
АТМ о ОХ но т зр А ів М
АснМ о о о - с он ноон но 00 йо ха - (6)
АснМ .
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: нОоОНн о) п В
АСНМ о ж на о о о о о О. ,Вх кити дерУ -р- но о ото а су
АснМ о о б но он В. лам но
МНАс ,
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: но он ної о Н
АСНМ Ше: о пз ое о он
МА 95 ХА сну і. он мл о-А-кй поп -о-р- но То осях Кк Н Й о о о но с
МНАс нм о я і о бо о но, У но
МНАс ,
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру:
ноон о о ска ві
АснНМ о о (о) но ст отит ч нтНрто-(см)--
АснНнмМ Ге ноон г о но кт отит о
АснМ .
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: ноон о о воло НК
АснМ о о о ПО нота от и м МТ то-р-
АСНМ о о ноон г о нота отцю
АснМ .
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: нооН Н о о М. о нок А
АсСНМ ноон о о о о но Мне то-(ем)--
АснНМ нон М оо о но кт он
АсСНМ .
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: ноОоН Н о о М. 0 нок У
АснМ нон о о о о о М т но кто НВ М внто-В
АСНМ о нооН М оо о нок Й
АснмМ .
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру:
онОн о МН
АснМ онОн о о Н но о А Мор (ем)
М Мт в
АснМ НО Н о о но он ди оо но
МНАс .
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: онОн о МН
АснМ онОн но о но Но
М м
АСНМ Но Н о о о но он ди оо но
МНАс ,
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру: он ноон ота нгу о о
АснМ о-есон о ноон х о о
АсНнМ отрооН
Ка. ноон Х о М о нот з К.
АснНнМ ,
У деяких таких варіантах реалізації групи кон'югату мають наступну структуру:
он нон У о М нота о гу К,
АснМ оте-оН о ноон у о М но-ктао Ну К,
АснМ осетоН о ноон Х о М ютер в,
АснНМ о
У деяких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: ноон о но то.
АСНМ М ноен о о -3уИТуЧЮ ра нок х зу
АсСНМ о он х но о 07 но
АсНнМ де Х являє собою заміщену або незаміщену зв'язку з шести до одинадцяти послідовно зв'язаних атомів.
У деяких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: ноон о но сте ом. у
АСНМ Бе ноон о о -иА ШТ - нок х зу
АснМ о он х но о 07 но
АснМ де Х являє собою заміщену або незаміщену зв'язку з десяти послідовно зв'язаних атомів.
У деяких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру:
нОооНн о но то
АСНМ М ноен о о пжЖжА нок х зу
АснНМ о он х но о 07 но
АснМ де Х являє собою заміщену або незаміщену в'язку з чотирьох-одинадцяти послідовно зв'язаних атомів, і при цьому зазначена зв'язка містить тільки один амідний зв'язок.
У деяких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: нОооНн о ною, Д
АСНМ 77 ,-о ноон он о нок та
АСНМ НН ж нон "ак о о б о но
АснНМ де У і 7 незалежно вибрані з С1-С12 заміщеної або незаміщеної алкільної, алкенільної або алкинільної групи або групи, що містить ефір, кетон, амід, естер, карбамат, амін, піперидин, фосфат, фосфодіестер, тіофосфат, триазол, піролідин, дисульфід або тіоефір.
У деяких таких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: ноон о ною, Д
АСНМ 77 ,-о ноон он о нот о- жит
АСНМ НН ж нон "ак о о б о но
АсНнМ де У і 7 незалежно вибрані з С1-С12 заміщеної або незаміщеної алкільної групи або групи, що містить тільки один ефір або тільки два ефіри, амід, амін, піперидин, фосфат, фосфодіестер або тіофосфат.
У деяких таких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру:
ноон о
АсНМ й; 7-0 нооН о о о А
АсНМ Н 2
М г- нОоон ф й о о б о но
АснНМ де У і 7 незалежно вибрані з Сі-С12 заміщеної або незаміщеної алкільної групи.
У деяких таких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: нОооНн в) но М
АСНМ о п . ноОНн Хр 8 но Н
АСНМ ОН Мило
Со Се о о нок
АснМ де т і п незалежно вибрані 31,2,3,4,5,6, 7,8, 9, 10,11 ї 12.
У деяких таких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: нОооНн о о Ху. нок у
АСНМ о п ноОоНн Хре М
Де я о о т Н п Н
АСНМ Мо
Н оон Хе У о но
АснМ де т дорівнює 4, 5, 6, 7 або 8, та п дорівнює 1, 2, З або 4.
У деяких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: нОоОоН
Хо нооно НО тХх о АснМ но ох
АснНМ Н оНон х вода ю77
АснМ де Х являє собою заміщену або незаміщену в'язку з чотирьох-тринадцяти послідовно зв'язаних атомів, і при цьому Х не містить ефірну групу.
У деяких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: нНоОоН
Хо ноон НО тХ о АснНМ но о х Ми
АснМ Н оНон х но- дво
АснНМ де Х являє собою заміщену або незаміщену зв'язку з восьми послідовно зв'язаних атомів, і при цьому Х не містить ефірну групу.
У деяких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру:
НООН
Хо нооно/ НО ЗХ о АснМ но о53532327х ми
АснНМ Н оНон х вода ю77
АснМ де Х являє собою заміщену або незаміщену зв'язку з чотирьох-тринадцяти послідовно зв'язаних атомів, і при цьому зазначена зв'язка містить тільки один амідний зв'язок, а Х не містить ефірну групу.
У деяких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: нНоОоН
Хо ноон НО тХ о АснНМ но о х Ми
АснМ Н оНон х но- дво
АснНМ де Х являє собою заміщену або незаміщену зв'язку з чотирьох-тринадцяти послідовно зв'язаних атомів, і при цьому зазначена зв'язка складається з амідного зв'язку та заміщеної або незаміщеної С2-С11 алкільної групи.
У деяких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: нОооНн Н о 0о--- М о но
АснМ ноон о о ом А но Н М
АснМ ноон но
АснМ де У вибраний з С1-С1і2 заміщеної або незаміщеної алкільної, алкенільної або алкинільної групи або групи, що містить ефір, кетон, амід, естер, карбамат, амін, піперидин, фосфат, фосфодіестер, тіофосфат, триазол, піролідин, дисульфід або тіоефір.
У деяких таких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: ноОон Н о 0о-У-М 0 но
АснНМ ноон о -ї- оо М А но Н М
АснМ нОоОоНн о 0о-у-н 9 но
АснМ де У вибраний з С1-С12 заміщеної або незаміщеної алкільної групи або групи, що містить ефір, амін, піперидин, фосфат, фосфодіестер або тіофосфат.
У деяких таких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: нОооНн Н о 0о--- М о но
АснМ ноон о ду, о о М А но Н М
АснМ нОооНн но
АснМ де У вибрано з С1-С12 заміщеної або незаміщеної алкільної групи.
У деяких таких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру: ноон Н
О ом, но кт У,
АсНнМ о ноон о о07М А нок Сх М
АснНМ ноон о ом о но Н
АснНМ де п дорівнює 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 або 12.
У деяких таких варіантах реалізації фрагмент групи кон'югату, націлюючий на клітину, має наступну структуру:
нооНн Н
ОО ОМ, но п
АснМ нОоОоНн о о оС) мА но Н Н
АснМ нон ДІ о ол/пмМ о нота Н
АснНМ де п дорівнює 4, 5, 6, 7 або 8.
У деяких варіантах реалізації кон'югати не містять піролідин.
Деякі спряжені антисмислові сполуки
У деяких варіантах реалізації кон'югати зв'язані з нуклеозидом антисмислового олігонуклеотиду в 2", 3' або 5' положенні нуклеозиду. У деяких варіантах реалізації кон'югована антисмислова сполука має наступну структуру:
К-- - 2 6 в -) 9 де
А являє собою антисмисловий олігонуклеотид;
В являє собою фрагмент, що розщеплюється
С являє собою лінкер кон'югату р являє собою групу розгалуження кожен Е являє собою зв'язку; кожен Е являє собою ліганд; та д являє собою ціле число від 1 до 5.
У деяких варіантах реалізації кон'югована антисмислова сполука має наступну структуру: к-е- 6 в) 9 де
А являє собою антисмисловий олігонуклеотид;
С являє собою лінкер кон'югату р являє собою групу розгалуження кожен Е являє собою зв'язку; кожен Е являє собою ліганд; та д являє собою ціле число від 1 до 5.
У деяких таких варіантах реалізації лінкер кон'югату містить щонайменше один зв'язок, що
Зо розщеплюється.
У деяких таких варіантах реалізації група розгалуження містить щонайменше один зв'язок, що розщеплюється.
У деяких варіантах реалізації кожен зв'язок містить щонайменше один зв'язок, що розщеплюється.
У деяких варіантах реалізації кон'югати зв'язані з нуклеозидом антисмислового олігонуклеотиду в 2", 3' або 5' положенні нуклеозиду.
У деяких варіантах реалізації кон'югована антисмислова сполука має наступну структуру: к-в- о в--я) 9 де
А являє собою антисмисловий олігонуклеотид;
В являє собою фрагмент, що розщеплюється
С являє собою лінкер кон'югату кожен Е являє собою зв'язку; кожен Е являє собою ліганд; та д являє собою ціле число від 1 до 5.
У деяких варіантах реалізації кон'югати зв'язані з нуклеозидом антисмислового олігонуклеотиду в 2", 3' або 5' положенні нуклеозиду. У деяких варіантах реалізації Кон'югована антисмислова сполука має наступну структуру: к-т е--я) 4 де
А являє собою антисмисловий олігонуклеотид;
С являє собою лінкер кон'югату кожен Е являє собою зв'язку; кожен Е являє собою ліганд; та д являє собою ціле число від 1 до 5.
У деяких варіантах реалізації Кон'югована антисмислова сполука має наступну структуру: к- в о в) го ч де
А являє собою антисмисловий олігонуклеотид;
В являє собою фрагмент, що розщеплюється р являє собою групу розгалуження кожен Е являє собою зв'язку; кожен Е являє собою ліганд; та д являє собою ціле число від 1 до 5.
У деяких варіантах реалізації Кон'югована антисмислова сполука має наступну структуру: к-т) зо 4 де
А являє собою антисмисловий олігонуклеотид; р являє собою групу розгалуження кожен Е являє собою зв'язку; кожен Е являє собою ліганд; та д являє собою ціле число від 1 до 5.
У деяких таких варіантах реалізації лінкер кон'югату містить щонайменше один зв'язок, що розщеплюється.
У деяких варіантах реалізації кожен зв'язок містить щонайменше один зв'язок, що розщеплюється.
У деяких варіантах реалізації Кон'югована антисмислова сполука має структуру, обрану з наступних:
Направляючий Фрагмент у те - йо ххх х Ко - щем ак . Я ду, М щи КИ т деку пахне р тить я ій я Се ч МУ : ля ї я я і | з - Мотя м є : де І В п 1 ще 7 - х п З х і І Я дхфкя хо лЛінкер «Я 4
Ліганд Зн'язка Ох н її ко т Фрагмент, ку о 7 що розщеплюється молю ї Група розгалуження
Млкх й " 7
У деяких варіантах реалізації Кон'югована антисмислова сполука має структуру, обрану з наступних:
Направляючий на клітину фрагмент
А вн б диддддддддАААААААААААААннннннннннннкккк р ж і на;он у о . нистй т а но ш- й Фрагмент, - и а г дент опр, - Ще розщеплюється ни он. т . - М МН; ноон г т и че о ОЗ 19 зо М одн а с ше В ; : дина чай і
НО. о ! ди ит "З я, ж що ! жу Те У " й щ7 і - ден 4 ЗН КО Ї о !
Зв'язка пу ча-в
Літганд з й ; Х Її 3 с -4 з ОН Я й но9 с кт ко
Но Он і
МнАс Група розгалуження
У деяких варіантах реалізації Кон'югована антисмислова сполука має структуру, обрану з наступних:
Фрагмент,
А що розщеплюється (насе ян
Направляючий на клину фрагмент ї. реннюрутя Щ но-к в 9 , і Й зх у я он ден 7 їк це о є і. о
Ії цс ї. - перен Ю З Лінкер зЗвяка ее я
Ліганд й та Б но он оо пеуча . рас У шен дин Сх кла Е зн ТЯ ІЗ ! но-ит» !
НАС Група розгалуження
Ллюстративні патенти Сполучених штатів Америки, публікації патентних заявок Сполучених штатів Америки і публікації міжнародних патентних заявок, в яких описано отримання деяких із зазначених вище кон'югатів, сполучених антисмислових сполук, зв'язок, лінкерів, груп розгалуження, лігандів, фрагментів, що розщеплюються, а також інших модифікацій, включають, без обмежень, 5 5994517, 05 6300319, 005 6660720, 005 6906182, 05 7262177, 05 7491805, 005 8106022, 005 7723509, 005 2006/0148740, 005 2011/0123520, УМО 2013/033230 і УМО 2012/037254, кожна з яких включена в цей документ за допомогою посилання в повному обсязі.
Ілюстративні публікації, в яких описано отримання деяких із зазначених вище кон'югатів, сполучених антисмислових сполук, зв'язок, лінкері, груп розгалуження, лігандів, фрагментів, що розщеплюються, а також інших модифікацій, включають, без обмежень, ВІЕЄЗ5ЕМ еї аї., "Те
Споїезієго! ОЮегімайме ої а ТПпіапіеппагу Саїасіозіде мййп о Нідй Айіпйу бог Ше Нераїс
Авзіаіодіусоргоїєїп ВНесеріоюог: а Роїепі Споїевієго! І омегіпод Адепі" ). Мед. Спет. (1995) 38:1846- 1852, ВІЕЗБЕМ еї аї., "Зупійезів ої Сіивієг Саїасіовідез м/йй Нідпн Айіпйу їТог Ше Нераїіс
Авіаіодіусоргоївіп Весеріог У. Мед. Спет. (1995) 38:1538-1546, 1 ЕЕ еї аїЇ., "Мемж/ апі тоге ейісіепі тиймаїєпі діусо-Ідапав ог абвіаюдіусоргоїєїп гесеріої ої таттаїйап Пераїосуїев"
Віоогдапіс 5 Медісіпа! Спетівігу (2011) 19:2494-2500, ВЕМ5ЗЕМ еї аї!., "Осіегтіпайоп ої Те Оррег
Зі2ге Гітії ог ОріаКе апа Ргосеззіпд ої Гідапаз Бу Ше Авіаіоадіусоргоївєїп Весеріог оп Нераїосуїев іп Міо апа іп Мімо" 9). Віої. Спет. (2001) 276(40):37577-37584, ВЕМ5ЕМ еї аї., "Оевзідп апа
Зупіпезіз ої Моме! М-АсеїуІдаіїасіозатіпе- Тептіпаїєд Спіусоїїріав ог Тагоеїйпо ої І іроргоївїпв Ю їйе
Нераїйс Авіаіодіусоргоїєїп Весеріог" У. Мей. Снет. (2004) 47:5798-5808, БІПЕОВЕСТ еї аї., "Оезідп апа БЗупіпевзіє ої Моме! АтрпПірнпійс Оепагййс Саїасіозідев ог Зеїесіїме Тагдеїйп9 ої
Прозотез о Ше Нераїйс Авзіаіодіусоргоївіп Весеріог" У. Мед. Спет. (1999) 42:609-618, і МаІепціп еї аї., "Зоїйа4-рназе зупіпевзів ої Іузіпе-сінивієї Бразей даїасіозідез айіпйу й іднотг їШе
Авіаіодіусоргоївїіп Несеріог" Теігапеадгоп, 1997, 53(2), 759-770, кожен які включені у цей документ за допомогою посилання у повному обсязі.
У деяких варіантах реалізації спряжені антисмислові сполуки містять олігонуклеотид на основі РНКази Н (такий як гепмер) або сплайс-модулюючий олігонуклеотид (такий як повністю модифікований олігонуклеотид) і будь-яку групу кон'югату, яка містить щонайменше одну, дві
Зо або три групи СаїЇМАс. У деяких варіантах реалізації Кон'югована антисмислова сполука містить будь-яку групу кон'югату, описану в будь-якому з наступних посилань: І ее, Сагропуаг Кев, 1978, 67, 509-514; СоппопПу еї аї., У Товарріої Спет, 1982, 257, 939-945; Раміа вї аї., Іпі У Рер Ргоївіп
Вез, 1983, 22, 539-548; І ее вї аї!., Віоспет, 1984, 23, 4255-4261; І ее вї аї., Сіусосопішдаїйе У, 1987, 4, 317-328; ТоуоКипі еї аїІ., Темапеадгоп І ей, 1990, 31, 2673-2676; Вієззеп еї аї., У Мей
Спет, 1995, 38, 1538-1546; МаІепіЦип еї а)., Теманедгоп, 1997, 53, 759-770; Кіт єї аї!., Тезгапедгоп
І ейї, 1997, 38, 3487-3490; І еє вї а!., Віосопіца Спет, 1997, 8, 762-765; Каїо вї аї., Сіусобіої, 2001, 11, 821-829; Кепзеп еї аїЇ., У Товарріої Спет, 2001, 276, 37577-37584; І ее єї аї., МеїШйовдз
Епгутої, 2003, 362, 38-43; ММевієпіпа еї аї., Сіусосопі У, 2004, 21, 227-241; І ве єї аї!., Віоогд Мей
Спет Гей, 2006, 16(19), 5132-5135; Маїетоїег еї а)І., Вісогд Мей Спет, 2007, 15, 7661-7676;
Кногем вї аї., Вісогд Мед Спет, 2008, 16, 5216-5231; І еє єї а!., Віосогу Мей Спет, 2011, 19, 2494- 2500; Котійома еї а!., Апаїуї Віоснет, 2012, 425, 43-46; Ро! еї аІ., Апдемж/ Спетіе Іпї Ей Епоі, 2012, 51, 7445-7448; Вієзз5еп сеї аі., ) Мей Спет, 1995, 38, 1846-1852; 5іієдгевії еї аї!., У Мей
Спет, 1999, 42, 609-618; Непбзеп єї аІ,, ) Мей Спет, 2004, 47, 5798-5808; Вепзеп еї аї.,
Апепозсіег Тпготр Мазс Товарбіої, 2006, 26, 169-175; мап Коззепьега єї а!., Сепе Тег, 2004, 11, 457-464; аю еї аІ.,, У Ат Спет 5ос, 2004, 126, 14013-14022; І ее вї аї., У Ога Спет, 2012, 77, 7564-7571; Віеззеп єї аіІ., ЕАБЕВ У, 2000, 14, 1784-1792; Ва)шг еї аї!., Віосопішд Спет, 1997, 8, 935-940; Бий єї аІ., Мештоде» Епгутої, 2000, 313, 297-321; Маїег єї а)ї., Віосопіца Спет, 2003, 14, 18-29; дауаргакавни єї аї!., Огу Гей, 2010, 12, 5410-5413; Мапонагап, Апіїзепзе Мисієїс Асі Огпа ем, 2002, 12, 103-128; Мегміп еї а!., Віосопіцд Спет, 1994, 5, 612-620; Тотіуа єї а!., Віосогд Мей
Спет, 2013, 21, 5275-5281; міжнародних заявках УМО1998/013381; УМО2011/038356;
МО1997/046098; УМуО2008/098788; М/О2004/101619; М/О2012/037254; М О2011/120053;
МО2011/100131; УМУО2011/163121; М/О2012/177947; МО2013/033230; МО2013/075035;
МО2012/083185; МО 2012/083046; М/О2009/082607; М/О2009/134487; МО2010/144740;
МО2010/148013; МУО1997/020563; М/О2010/088537; М/О2002/043771; М Ог2010/129709;
МО2012/068187; МО2009/126933; М/О2004/024757; М/О2010/054406; М О2012/089352;
УМО2012/089602; ММО2013/166121; ММО2013/165816; патентах США 4751219; 8552163; 6908903; 7262177; 5994517; 6300319; 8106022; 7491805; 7491805; 7582744; 8137695; 6383812; 6525031; 6660720; 7723509; 8541548; 8344125; 8313772; 8349308; 8450467; 8501930; 8158601; 7262177; 6906182; 6620916; 8435491; 8404862; 7851615; опублікованих заявках на патент США
Зо О52О11/0097264; О52011/0097265; О52013/0004427; И052005/0164235; 052006/0148740;
ОБ2гО08/0281044; О5Б2гОТ0/0240730; О5Б2О0О03/0119724; И52006/0183886; О52гО08/0206869;
О5Б2О11/0269814; О5Б2009/0286973; О52011/0207799; И052012/0136042; 052012/0165393;
ОБгО08/0281041; О52009/0203135; О52012/0035115; О052012/0095075; О52012/0101148;
О52О12/0128760; О5Б2012/0157509; О52012/0230938; О052013/0109817; 052013/0121954;
О52013/0178512; 052013/0236968; 052011/0123520; 052003/0077829; И52008/0108801; і 052009/0203132; повний зміст яких включено в цей документ за допомогою посилання.
Тестування антисмислових олігонуклеотидів іп міго
Описані в цьому документі способи лікування клітин за допомогою антисмислових олігонуклеотидів можуть бути змінені відповідним чином для лікування іншими антисмисловими сполуками.
Клітини можуть бути оброблені антисмисловими олігонуклеотидами при 60-80 95 рівні конфлюентності в культурі.
Реагент, який використовується для введення антисмислових олігонуклеотидів у культивовані клітини, включає катіонний ліпідний трансфекційний реагент Ліпофектин (Іпийгодеп, Карлсобад, Каліфорнія). Антисмислові олігонуклеотиди можуть бути змішані з
Ліпофектином воОРТІ-МЕМ 1 (Іпуийгодеп, Карлсобад, Каліфорнія) для досягнення бажаної кінцевої концентрації антисмислових олігонуклеотидів і концентрації Ліпофектину в межах від 2 до 12 мкг/мл при 100 нМ антисмислового олігонуклеотиду.
Інший реагент, який використовується для введення антисмислових олігонуклеотидіву культивовані клітини, включає Ліпофектамін (Іпмиїгодеп, Карлобад, Каліфорнія). Антисмисловий олігонуклеотид змішують з Ліпофектаміном в середовищі ОРТІ-МЕМ 1 зі зниженим вмістом сироватки (Іпмйгодеп, Карлобад, Каліфорнія) для досягнення бажаної концентрації антисмислових олігонуклеотидів і концентрації Ліпофектаміна в межах від 2 до 12 мкг/мл при 100 нм антисмислового олігонуклеотиду.
Ще одна методика, що використовувалась для введення антисмислових олігонуклеотидіву культивовані клітини, включає електропорацію.
Інша методика, що використовувалась для введенн антисмислових олігонуклеотидів у культивовані клітини, включає вільне захоплення олігонуклеотидів клітинами.
Клітини обробляють антисмисловими оолгіонуклеотидами за допомогою стандартних 60 способів. Клітини можуть бути відібрані через 16-24 годин після обробки антисмисловим олігонуклеотидом, після чого рівні РНК або білків нуклеїнових кислот-мішеней вимірюють методами, відомими у цій галузі техніки і описаними в цьому документі. Як правило, якщо обробку проводять в декількох повтореннях, дані представляються як середнє значення для багаторазових обробок.
Концентрація використаного антисмислового олігонуклеотиду варіюєт в залежності від лінії клітин. Способи визначення оптимальної концентрації антисмислового олігонуклеотиду для конкретної лінії клітин добре відомі в цій галузі техніки. Антисмислові олігонуклеотиди зазвичай використовують у концентраціях від 1 НМ до 300 нМ при трансфеціюванні з використанням
Ліпофектаміну. Антисмислові олігонуклеотиди використовують в більш високих концентраціях в діапазоні від 625 до 20000 нМ при трансфеціюваннійи з використанням електропорації.
Ізоляція РНК
Аналіз РНК може бути проведено на загальній клітинної РНК або полі(А)- мРНК. Способи ізоляції РНК добре відомі в цій галузі техніки. РНК отримують з використанням способів, добре відомих в цій області техніки, наприклад, з використанням реагенту Тризол (Іпмігодеп,
Карлсбад, Каліфорнія) за рекомендованими протоколами виробника.
Деякі показання
Деякі варіанти реалізації, запропоновані в цьому документі, відносяться до способів лікування, попередження або полегшення захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, у суб'єкта за допомогою введення специфічного інгібітора
СЕВ, такого як антисмислові сполуки, спрямоване на СЕВ.
Приклади ниркових захворювань, пов'язаних з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, які можна лікувати, попереджати і/або полегшувати способами, запропонованими у цьому документі, включають СЗ3 гломерулопатію, атиповий геполітико-уремічний синдром (аниз), хвороба щільного осаду (000; також відому як МРОМ типу ІЇ або СЗМері) і СЕНН5 нефропатію.
Додаткові ниркові захворювання, пов'язані з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, які можна лікувати, попереджати і/або полегшувати способами, запропонованими у цьому документі, включають ІдА нефропатію; мезангіокапілярний (мембранопроліферативний) гломерулонефрит (МРОМ); аутоїмунні розлади, включаючи вовчаковий нефрит і системний
Зо червоний вовчак (СЧВ); інфекційний гломерулонефрит (також відомий як постінфекційний гломерулонефрит) ішемічно-реперфузійне пошкодження нирок, наприклад, ішемічно- реперфузійне пошкодження нирок після пересадки органу.
Приклади позаниркових розладів, пов'язаних з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, які можна лікувати і/або попереджати способами, запропонованими у цьому документі, включають очні захворювання, такі як дегенерація жовтої плями, наприклад, вікова дегенерація жовтої плями (ВДМ), включаючи вологу ВДМ і суху ВДМ, таку як географічна атрофія; нейроміеліт зорового нерва; хвороба рогівки, така як запалення рогівки; аутоімунні увеїти; і діабетичну ретинопатію. Описано, що система комплементу бере участь в очних захворюваннях. ОУПпа Р, еї аї,, Мої Іттипої (2007) 44(16): 3901-3908. Додаткові приклади позаниркових розладів, пов'язаних з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, які можна лікувати і/або попереджати способами, запропонованими у цьому документі, включають
АМСА-пов'язані васкуліти, антифосфоліпідний синдром (також відомий як синдром антифосфоліпідних антитіл (АРБ)), астму, ревматоїдний артрит, міастенію гравіс і розсіяний склероз.
Деякі варіанти реалізації, запропоновані в цьому документі, відносяться до способів лікування, попередження або полегшення ниркового захворювання, пов'язаного з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, у суб'єкта за допомогою введення специфічного інгібітора СЕВ, такого як антисмислова сполука, спрямована на СЕВ. У деяких аспектах ниркове захворювання являє собою вовчаковий нефрит, системний червоний вовчак (СЧВ), хвороба щільного осаду (000), СЗ гломерулонефрит (СЗОМ), СЕНК5 нефропатию або атиповий гемолітико-уремічний синдром), або будь-яку їх комбінацію.
Деякі варіанти реалізації, запропоновані в цьому документі, відносяться до способів лікування, попередження або полегшення дегенерації жовтої плями, такої як вікова дегенерація жовтої плями (ВДМ), у суб'єкта за допомогою введення специфічного інгібітора СЕВ, такого як антисмислова сполука, спрямована на СЕВ. У деяких аспектах ВДМ являє собою вологу ВДМ або суху ВДМ. У деяких аспектах суха ВДМ може являти собою географічну атрофію. У дослідженнях показано зв'язок дизрегуляції альтернативного шляху комплементу з ВДМ.
Компоненти комплементу являють собою звичайні складові очної друзи, позаклітинного матеріалу, який накопичується в жовтій плямі пацієнтів з ВДМ. Крім того, було описано, що СЕН бо і СЕВ варіанти становлять близько 75 95 випадків ВДМ у Північній Європі і Північній Америці.
«5К| також виявлено, що специфічний поліморфізм СЕВ забезпечує захист від ВДМ. Раїеї, М. еї а!., Єує (2008) 22(6):768-76. Крім того, гомозиготні по нульовому СЕВ миші мають більш низьку активністю шляху комплементу, демонструють більш слабкі очні пошкодження і хоріоідальну неоваскулярізацію (СММ) після лазерної фотокоагуляції. Копгег, В. еї аї., Іпме5ї Орпїваїтої Мі зЗсі. (2009) 50(7):3056-64. Крім того, лікування із застосуванням міРНК СЕВ захищає мишей від
СММ, індукованої лазером. Вога, М еї аї., 9) Іттипої. (2006) 177(3):1872-8. У дослідженнях показано також, що нирки та очі мають спільні шляхи розвитку та структурні особливості, включаючи склад промотору колагену базальної мембрани ІМ і васкулярність. Заміде еї аї., У Ат ос Мерпгої. (2011) 22(8):1403-15. Існують дані, що шлях комплементу бере участь у ниркових і очних захворюваннях. Наприклад, спадковий дефіцит регуляторного білка системи комплементу викликає схильність до атипічного гемолітико-уремическому синдрому і АМО.
Віснагаз А евї аї., Адм Іттипо!. (2007) 96:141-77. Крім того, хронічна хвороба нирок пов'язана з
ВДМ. Мії5сп, 0. еї аї., Орінпаїтіс Ерідетіо!ї. (2009) 16(3):181-6; Спої, 9. еї аї, Орпіна!Ітіс
Ерідетіо!. (2011) 18(6):259-63. Хвороба щільного осаду (000), захворювання нирок, пов'язане з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, що характеризується гострим нефритічним синдромом і очними друзами. Сти7 апа тій, бЗепеКеміем5 (2007) ди! 20. Крім того, миші, які несуть генетичну делецию компоненту альтернативного шляху комплементу, одночасно демонструють фенотипом ниркової та очної хвороби. Описано, що у гомозиготних за нульовим СЕН мишей розвивається ОО і присутні патології сітківки, а також зорова дисфункція. РіскКегіпд еї аї!., Маї Сепеї. (2002) 31(4):424-8. Мишачі моделі ниркових захворювань, пов'язаних з дизрегуляцією альтернативного шляху комплементу, також є загальноприйнятими моделями ВДМ. Реппезі МЕ еї аї., Мо! Азресі5 Мей (2012) 33:487-509. Нульові за СЕН миші, наприклад, являють собою загальноприйняту модель ниркових захворювань, таких як ОО і
ВДМ. Крім того, описано, що ВДМ пов'язана з системним джерелом факторів комплементу, які локально накопичуються в очах, приводячи в дію альтернативний шлях активації комплементу.
Ї оувї єї а!., Іпмезі Орпійаїтої Мів сі. (2012) 53(10):6628-37.
Приклади
Наступні приклади ілюструють деякі варіанти реалізації цього опису і не є обмежуючими.
Більш того, якщо подані конкретні варіанти реалізації, автори винаходу мають на увазі загальне
Зо застосування зазначених конкретних варіантів реалізації. Наприклад, опис олігонуклеотиду, якиймістить конкретний мотив, дає обгрунтовану підставу для додаткових олігонуклеотидів, що містять такий самий або схожий мотив. І, наприклад, якщо конкретна високоафінна модифікація виникає в певному положенні то в цьому ж положенні вважаються придатними інші високоафінні модифікації, якщо не зазначено інше.
Приклад 1: Загальний спосіб одержання фосфорамідитів, Сполук 1, Таі2
Вх являє собою гетероциклічну основу; орви сл АХ оДх тік дн ж ВХ вм Вх вм й омо
Я о ол ЩІ ї Ко
Ме от МеВ» Мито хм ть Мету «мор к
І ів й
Вх представпявт собон гетероцикличасков основанне:
Сполуки 1, 1а ії 2 були отримані способами, загальновідомиму у цій області техніки, як описано в цьому документі (див. Зейй еї аї., Вісогд. Мед. Спет., 2011, 21(4), 1122-1125, 9. Ог9.
Спет., 2010, 75(5), 1569-1581, Мисієїс Асідз Зутровзішт 5егієв, 2008, 52(1), 553-554); и см. також опубліковані Міжнародні заявки РСТ (МО 2011/115818, УМО 2010/077578, М/О2010/036698,
УМО2009/143369, УМО 2009/006478 ії ММО 2007/090071) і патент США 7569686).
Приклад 2: Отримання Сполуки 7
АсОдАе
АсрОде Й ен Код У їй іі тмаот, БОЮ АОС ще, нал чу т я
СН ет) ОСНЕ одкк ден сіспеенкя І ТМ5ОТ, ДКЕ
З (Вч 4 | ГБ е АМНаАЄ вс А і р. ко ночі КН Ок
ОО сеть и Й т мен д не Її дич год, СНУ Боу
ОН «б га) 7
Сполука З (2-ацетамідо-1,3,4,6-тетра-О-ацетил-2-дезокси-В-ЮО-галактопіраноза або галактозаіїина пентаацетат) є у продажу. Сполуку 5 отримали за опублікованими методиками (Уебег еї аї., ). Мед. Снет., 1991, 34, 2692).
Приклад 3: Отримання Сполуки11
Кк т пе щу А п ї т ши де В о- МСЕ ти дян МН,
НО МНЕ осо ут ну тав й і
З сл, ії - ї й ї 7 к М х г Й а КОН водн. во кп. ЗЕ звор. ще і
В Т,а-діоксан ми. холоду кімновраїд в (30 і56 3
Сполуки 8 і 9 є в продажу.
Приклад 4: Отримання Сполуки18
ВО нн Ви
Ж хензилхлоерюєворміат а а. Що що І -о М о аюжевно Мао: ОО. о з А м МОМ, НУ пет ЯН НО т дя Й ре яв пттнтнннтнннттнннтя бо (во; ою Є и - діхсвн
А ї ї 55 мя кіл дви Не я ТЯ жа т З н м в
НО як з 3 З тт
Її т т -Х З КЕ М З З ї- а А З я зи пул етун. за дах В, М я ва А. . ною. їн КО чо оту ет -х зу попа нання ан цаннннанннноонно Ян 5 5 пе у Кн
Яна 00 мепо вх, ДМФА в З не 9 важ; яви ки за роя Ме ч Галю и ме дя й М о
Асдюде ноя Й ви ен мити кі водню пкт дн з З - м н бах ї зони а седочие НМ Мо 7 щем Й
МАЛА оц ноу оту нВтН,ЮВА, НОВІ
ЗБ З п -е
Я г ДМФА вк ї 7 сагех рр миле, Бах пом йо де Ка о Жид житя ж В си жд М й денМ а С
АоСЮде 4 з нн, Н я на т доз ЯМУ Х пд «7 Що нини ша 3 пли й ї й стж - ден 5 й о Її ші т веде В Ат
НА рритт ри дез-кдний т ї леНя 1
Сполуки 11 отримали способами, описаними у Прикладі 3. Сполука 14 є у продажу. Сполуку 17 отримали таким-саме способом, як описаний у публікації Кепзеп еї аї., 9). Мед. Спет., 2004, 47, 5798-5808.
Приклад 5: Отримання Сполуки 23
ОЗ о 3. БК ню рон ду р СТОК н НТ, ме ї й ДНА вида, че дме М, ДМФА, КІМН. т-ба
М кімн.о-оаіз5 т М ї Ї пн нати У тенет нн тттннт от тннтентетнт В і нн я плн. у 7 ї. КО М» МЕМ, й зв м о ТЕАЗНЕ, ТВА ТТ Ф о пМтО со во. З а 1. СКАЕСЯ, руук, вМтО у й.
Е ; и шіщави ву РО МИ АК - сом хи ко "ссму кмно тра їз М / М ї ХЕ - ці 3 2.АЗН, діжеан ке А ве. Ки я - дн 2 сн
Сполуки 19 і 21 є в продажу.
Приклад 6: Отримання Сполуки 24
МКюАс ї Я Н І я й во тях ЖК М оди В - ка З і 1. Но, РВК, Мао Ж
АЮ Ке они т Кі ту пили тн ою м М С се т. ВТ ОжА. ДМА (б т чі М Ко діях - хук ул део-ко зт т тн В отр о о ОМ ден о а жи м на - т тк за г Коня, доОСАє мо 0 вн ан ЯМИ
Си рфрндитнт дер-кь й йе Х
Її м 15 ден оцю -а Н Я де итит итний чи
НИ о У щ суку десбде СН | У ц о ром
Аня митр пат дети Ся ї ї т КО 7 плов
АеНМ о 5 о ша
А 7
АКСЮАЄ я. ньо
Гея) іо дя т додктия ша м ем
І .
Сполуки 18 і 23 отримали так, як описано в способах у Прикладах 4 і 5.
Приклад 7: Отримання Сполуки 25
АСОЮДО м 15 г я і. міо кдуо би зи политі а 7 Ї З дсобдю ММ о у о 5 ВОМ
М к м н Ок Вч - - . дес о д т Ша : ДМА, наго вімовув. ВВІВ г лекруле М по
Ман рр лили додати я р вон 7 но
ВСОСАЄ вом о отут юю
ЕЛ лонн 6 йо Сом СУ
Хо Я н 5 95 а дет тт тт ке КІ: д-ма вон 5 З а да т о вою в ол
За я ож як и ик ло-КСИМ ї
Ап я
Сполуку 24 отримали способамм, представленими в Прикладі 6.
Приклад 8: Отримання Сполуки 26
Асцюде
Я я ж н і і і : щу дом о -- сю деОАо й з о дом!
І н 0. о
Пен її я т м. Н з Я хх Х с . депн-м т ши титр зт дин РК чом, дна т "і З фосфітипювання
АснМ 0 2 ії з н -
АсОЮо що НН -зо ан роди вк тя м 5 : Х т ден т
Аодюде сини ех Н не кео ДОЮ дини і й : ден о в суеука
МСА Ю " й ! а й ОВ м її - нн нн г. я Сх ви ци ЧИ Зоо ваг Стрия т М мі ка ї: ця ? Ї донМ й а о Ше 2 й
Ї АНТ ач Кто
А Нм нщ че за ре Я дк
АСОЮОАс н сей а
АД» Ї и 5 х 2
Сполуку 24 отримали способамм, представленими в Прикладі 6.
Приклад 9: Загальне отримання сполучених АБО, що містять сзаїіМАсз-1 у 3-кінця, Сполуки 293 оС АЄ
І М н сові М х с
Аг З - Коня ж М. си ої? - - АсНМ о я с г ве м 4 о в до М а не у н шк ДВ й . я ДК я Її мен КК М у
Аодетя юттр тиЙ три ом З з--Мн
АсНМ о о ж й
Її -
З
1 БОоБирсСя, дхк ся ме. ем ще й ши те г засьнмьАСЮ ще де денти І Фесфорянидитний 000 зт скатеатор вт а ок Козу би НК ня вемМ 2 1 8 Капіктання пооду
ОБОВ руду и : ЯК, «і море ' ди ге нн М о их си ях Кк од Ії А С вка ха КК, а зи мит -о о-в. «у ях денім й -. їх «
АОС й па я
Ге їх к М н о г К ї - ЕХ
Кия х кис : ле ші Кі ча ї со М п х Ат іже щ 5 км ї Кк ? м У даної доня о й о ит
Я твосюдхмо ТУ я : с я БЕХ ММ АС
Ар де н КА ба Ї фковбктмилаютький вВЕТ. МИНТеЗЕТОр і
Її дж . я Х Буд. блюхла днюРНКк ! де ко яння ер р хохалжявння УААН оте Ї га ЗУ ї я ев ден ж ро Мем. ; :
Ме (хх
Мт я я ху («Е з Уа ма дроти рі Вк
Я я х. (у кю яті ї Б я я Не Де ик м Мч ї доо-кою З зей звуки бе гуВ-гу і Я і Ї доні го в я допово ПН З о а 5 а хх м : й. о: Зх ни М Н ше До г . У ян у с 5 «АКА І Й воо-кодемо тк тр ше пи ринки М га з Ам --ї ї х ї н Її дн
У о о - ту, х і о
Як? іш РОБІЮА, дя пд нат. дожіхає ке лося но СОУ зх нмрАск
Жено шо дич РО фагелравідненхй дет синтехотод щи др т Ко будовимх | Пд венм - ! соди
Р З яйнкд жшмтямх ж ВАН
РО вич ВОМ;
Роб МН. водно МИМО ллеМЯ ом
Гопсо ї о оскомуи сення ит ОМ їх ло МЕТЕІК КМ ЧНИЯ ШОДКНАЯ г г шд-
Хе бе В 51
У с с шк ух нон Я ш--о нн нн, 9 но Хдоо би пкрттиЙ ой пок -а З і -К шва в З з ноон ден о з в. Рв інно о й н о. ї ї ц сп тм и Мн є дн Я ною . т а т хо 7 -ї М / он Го; о о зн ноон но те сл ще ця дея М но-китт
М 29
КРУ т
Де захищений СаїІМАсз-1 має структуру:
Мне у є ноон х о о Нн Н о но тро о-о о ноон 0/0 ЛеНМ о Р жа о М М о Я, ит м но тр зро В МВ
АснНМ о о о с он нОоон Н нм о оч но о
АСНМ
Кластерна частина СаІМАсз групи кон'югату СаіІМАсз-1 (СаІМАсз-14) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. Де СаІМАсз-їа має формулу: нООн о Н Н склессуто т о ноон 0/0 ЛеНМ о В оо М М о Ї -
АснМ о о с ОН ноОн Н нм
Кос пов
АснМ
Захищений саїЇМАсз-1, зв'язаний з твердою підкладкою, Сполуку 25, отримали способами,
наведеними в Прикладі 7. Олігомерна сполука 29, що містить саїІМАсз-1 у 3'-кінця, отримали за стандартними способами в автоматичному синтезаторі ДНК/РНК (див. Юиропу еї аї., Апдему.
Сет. Іпі Еа., 2006, 45, 3623-3627). Фосфорамідитні будівельні блоки, Сполуки 1 та а, отримали так, як описано в способах у прикладі 1. Зображені фосфорамідити є ілюстративними і не призначені для обмеження, оскільки можуть бути використані інші фосфорамідитні будівельні блоки для отримання олігомерних сполук, що мають задану послідовність і склад.
Порядок і кількість фосфорамідитів, що додаються до твердої підкладки, може бути підібрана для отримання розірваних олігомерних сполук, описаних у цьому документі. Такі розірвані олігомерні сполуки можуть мати заданий склад і послідовність основ, продиктовану будь-якою даною мішенню.
Приклад 10: Загальне отримання сполучених АБО, що містять (заіМАсз-1 у 5'-кінця, Сполуки 34 ом 1. Кепіювання АЮ ЯМ в
КОСА, дом СНИ З. РАПЕ ке ЗВВООН
МТУ 8 МС ММ АЄМ с пив ово щі ' за сврвозамілитні - Ї се З ВСУ УМЬ АСМ
ЗІ фоесепзамідитні ПО МВ ей фер дну ин фасвихьо ват. синтвевторо | кі рат пинтеєвтов Ії дНювНК : Зі | дишРнК : с ЕК хх ков ожжа вм чув
ЇХ кКепіювання АХА ВК, БУКВ я
З. У щ ЕЙ
З ВСАА, дм Ме зебр нн а
З, С М АС і на ! дат. пкнтЕєВВатТОор ї З
МХ хо етвухиклаккя І і со порти ск ОХ й и п посррие ее в , ге Ж пюре Мн дим М чай ден й . ЕТ ко ВК " й ОМ
Ак ї- у а ба с
ЕК чина сова св й З ж ІК Ук дей сем М че 7 в Є з,
Шк ї ї ши ох
Ас о а с в
Т М тр окон
К Кеди ди ру ее соні сеча кі мк, Хбсждя та й Шк і
АСООВе М ші У - шлн бут ши ; ше о динь М і но ч с ї Бо а денм т ; шк
Її. Кепіювання ї леї А, г З
ОЗ еВню я і па
ОХОВБМ СНОМ облі С омноєяуя а. ОСА, дхм х : 5, Ми. ходять п ОВ Ко кода Ен з3 ї нОоОН о о Н Н
М
АснМ о он нОоон о / оо М Н о 4
АснНМ о о о т
О-р. О. ,Вх
Нм бо ноОоон Н Те) з но о -Р-0
АСНМ за о омсоО . . . он . пуїїпКег! "М 30 є у продажу. Олігомерна сполука 34, що містить кластер СаІМАсз-1 у 5'-кінця, отримали за стандартними способами в автоматичному синтезаторі ДНК/РНК (див. ЮБирону єї аІ,, Апдем/. Спет. Іпі. Ейа., 2006, 45, 3623-3627). Фосфорамідитні будівельні блоки, Сполуки 1 і
Та, отримали так, як описано в способах у прикладі 1. Зображені фосфорамідити є ілюстративними і не призначені для обмеження, оскільки можуть бути використані інші фосфорамідитні будівельні блоки для отримання олігомерних сполук, що мають задану послідовність і склад. Порядок і кількість фосфорамідитів, що додаються до твердої підкладки, може бути підібрана для отримання розірваних олігомерних сполук, описаних у цьому документі. Такі розірвані олігомерні сполуки можуть мати заданий склад і послідовність основ, продиктовану будь-якою даною мішенню.
Приклад 11: Отримання Сполуки 39 о
ОСА пив, дини дитя їі Бо а ОМ ж Мале ши ек 7 н Кей і ї т по, а тМмВотЬ ДЖЕ Й дей Ада охотдеон; і о пн ї пе й В ха З. Брі Рі, МВС АсНМ ЗБ 4 і во сво г ік с На вил. ма
МЕМ. да, БЕ сн те, - н 1. Не Ра. МОВ шеннннтнттнттттттттттннтттттттнтнттств -нк ВМ
Сполука 13 ване щі ІЙ З 2. НВТИ, ЯКА, ДМА дО, са Н о а н Сполука 23
М рт тя,
Аео- хх га її і "до - дАС м - С йог У " З й- і и пд КИ ни т дІ- ! є ох що й дос па хх їх х М ях др Кн сом
Вк а Ме кі н га що ф аг фі сет ! яд Кк щі : тосрітнлювання дене У зятя Оя п тя де Кв нм. оленя, А кдд ж личко ММ з дод тм о її шо
НА бо
Кк я у
Со п З донори й 7 Ї хв
АОННМ
А ОА і сно сОмт кою, у г дон М ин би ко, Ї о н а МАЙ ну
Юри дин В дн МН З
МНАс о У Я Мито вет - МАО М - во, й-
Слон ; за що м; я детрит ря Кн «М
Авц ек ди
АсНВ
Сполуки 4, 13 та 23 отримали так, як описано в способах у Прикладах 2, 4 і 5. Сполуку 35 отримали за таким-саме способом, як описаний у публікації Коиспаца еї аї., Ешиг. У. Огд. Спет., 2011, 12, 2346-2353.
Приклад 12: Отримання Сполуки 40 лох ОАс й ер хну х - м. ї дЕнНМ г сан дитя 0 ню
Її 3 Я яв з
САС з і Кк о сх цк !
АсО, г : . ї ІА ше -КВ стад одини У пі, м КН Ден М
І Мои ЖИ ди и
МНАс о о є Її. Будштиновий акгіщння БМАР, ДЖЕ
ЗА М А леої 7 а Мт пт нн МЕ 2. дме, НЕТ, БІК ЕТЬ, ВАВ ден мс третя Ж. дмеа НВО, МАКЕТ. РОУЗ
Й Ї ЩЕ: За
АсНМ
АрО ОАЄ кі у. КО сом во ща о. | ц В М
І м додай У т що ден ЮА я А з в н во туш нн й рим кві ю - з ії вд нд н ся ун ж ти т чи т
Асо те я й - З
МНАє б оо - Одес я
АвОї Дня ча хх ян ри еКч оо тт пи т --и
Ас
Сполуку 38 отримали за способами, наведеними в Прикладі 11.
Приклад 13: Отримання Сполуки 44
АрОосАе МЕТО, дмта КЕР»
Й ї Зник, я ре ту щн. У вв додай ох В и й а шу ден К МН ши диня ке ж я
Но я о
Ак ПА і воо-кс я ц і лечу з. деНМ ри зи шу о в 1. на. Ра, МеОН
ДИ 8. НВТИ, РІС, дека о З є Ктналука 23 з ОАс М ах ! тя, Я жжкуй вин Ь У ден 4?
Ас, пде а ШІ дсо-КеО о, 7 Н АСОМ о . щі дн и ї Фосфітилювання
МИШКУ» З на сан ко. бе Пп г В; з ом 7 ш 0-- ре і , хо бю он
Ін
От
З м й
ОАе кі я
АЮ а ф-н-н нн хх . КЕ дей Ждео --Е ти МН
Й В
АеНМ
АС ОАЄ
КІ дали дн асо о, ка ОМ / і шн Й т
АсНнМ ВО ит о х ї з МК А 9
КО А ек ру
Нв з З як аж С М іт» ду г і дез Гой М «й
Мона ск с. УМА
Ав с р
Ас і
Сполуки 23 і 36 отримали так, як описано в способах у Прикладах 5 і 11. Сполуку 41 отримали таким-саме способом, як описаний у публікації М/ЛО 2009082607.
Приклад 14: Отримання Сполуки 45
А ОАЄ
КЕ
АК ро но
Те Н т щі У дит ЗУ В дені З У це ще С ж і і о м 1 й. о - Ж-й, ке, вм ОН гу здс «Ук 43
Ас те мч он а 1 1. Берштиновий ангідсни. СМАР, ДХЕ денм г 2. дме, МЕТО. МОРІ», 25-83
Ас АЮ 1 - Ко лсо-Х се у ц МОМ і: КА М ї деНМ ие зу по
Її ас у он з оо. у Ж и не ун о о 8
Сх х я ча ї КЕ , шй
Сн п х че до Адкооо що В сим !
АСНМ
Сполуку 43 отримали за способами, наведеними в Прикладі 13.
Приклад 15: Отримання Сполуки 47 о но -7 рмто у о
У 1. ОМТСЇ, руг МН -------7-4-0 - 46 2. ра/сС, Но, меон Н Є 47 но
Сполука 46 є у продажу.
Приклад 16: Отримання Сполуки 53
ЗТ ЕН М дата Не
Но чик Ов и 1 В
Кк у те ми Ше ет кох ц Щк Її. ї іх х «Вас по ОО М т. вх «8 НМ й ї -
І Ат И-МН і ве й ШИХ » З ка й ОВЕ З млява -ММ
СЕТ
«КЕ
Не ог оту 3 св
ВОЮ й В і чи , я тек ше ї ін т М 1. В, МеОН 2. НЕТ КВК ТЬ два т є 2. НЕТ, ЕОР, ДИФА уКВх . Щ сполука 47
НК З полукю де им НК вх
КИ Хдллнкя ун.
А 45 ОБЕ
ВЕ пмто Не: щк , я і Я . В ще РЕ
Ся пд вності» - що ї КО0юву 002. НВО БВДРЕ, дмех но, Ме ня те в -МН -й3 не Сполека 17 ої й, 7 н х - ї шт і 52 з
НМ св їла ї га
А, дет гу ми КН
Мас і те
З
Оде пе г
Саші з вно, о ие юн а п кре ин до Кан жк шк Д НУ зи и Ки . Е
АЕС летимо ву би и т, о і й ! ки
МНАє УА о Й
УК Оде чі ер : І аг а ом! ин и МН ва
АБ тн
МАЄ полуки і прод . Сполуки т тримали так, як описано в сп х
Спо 48 і 49 є ода Спо 17 та 47 о а а описано в способа
Прикладах 4 і 15.
Приклад 17: Отримання Сполуки 54 піде
Од? Є - у -
АБО тю ну ит ти Мн нас
Є
Ї
Од я о
Одрі . Її Он ОН : о ! Н ; оте -к Ї ню рт
А КО ее тей с кдд у дн т; ї 7 х ке АХ
МНАє ММ З ї т /
ТЕЗАНХ Іі як М
Ас і о я
Е І К х он оон И-МН 53
А тю
МА і Фосфітилювання сяк АК де х г ьо Ї
Док - М
Або дит и ТВ ї ОМ А й о ве, як КАС з я ї ваш
Сас і г і М гі М й нії СВ реа о о В ни» М
АОС я шт сито нн т її 7 чн
МНАє шо и
Одес -щи ее дис а 2ом' з к ї з а скит МН За 4 З соду лциих що
МНас 5 .
Сполуки 53 отримали способами, наведеними в Прикладі 16.
Приклад 18: Отримання Сполуки 55
Кан З
НАХ і. о ! «ОАЕ я о
Од; Із ! н ОК чно
ДЕ нету дн м дим Ї ї : мл
МНАЄ. пи Кн о 7 ма Ша ША М Зрмт
Ас а і ЕМ й г ї 5 во, дуття В Б
МНАХ
4 Бурштиновниа анпдрих, ПАР, ДЕ ' с АВ м д з
Мнає М ко 2 і мк бух й с удо се т с , З ши
САС З Ї М з У ет й ьо . у не ве ми М : 7
АБО оту и вм чн Ї ї 7 р спдои е рмт че ОО Ж за де диня в Моди Ж ЩА
МчАс
Сполуки 53 отримали способами, наведеними в Прикладі 16.
Приклад 19: Загальний спосіб отримання сполучених АБО, що містять саіМАсз-1 в 3- положенні, за допомогою твердофазних методик (отримання І5І5 647535, 647536 і 651900)
Якщо не вказано інше, всі реагенти і розчини, використані для синтезу олігомерних сполук, придбані у комерційних постачальників. Стандартні фосфорамідитні будівельні блоки і тверду підкладку використовували для впровадження нуклеозидних залишків, які включають, наприклад, залишки Т, А, с і "С. 0,1 М розчин фосфорамідиту у безводному ацетонітрилі використовували для В-ЮО-2'"-дезоксирибонуклеозиду і 2'-МОЕ.
Синтез антисмислових олігонуклеотидів (А5О) виконували на синтезаторі АВІ 394 (в масштабі 1-2 мкмоль) або на синтезаторі АКТА Оіїдоріїої виробництва СЕ Неаййсаге Віозсіепсе (в масштабі 40-200 мкмоль) способом фосфорамідитного зв'язування на твердій підкладці
МІМАЮ, наповненої саІМАсз-1 (110 мкмоль/р, Сиаєм еї аї., 2003), упакованої в колонку. Для стадії зв'язування фосфорамідити вводили в 4-кратному надлишку порівняно з завантаженням на твердій підкладці, а конденсацію фосфорамідиту виконували протягом 10 хвилин. Всі інші стадії виконували за стандартними протоколами, наданими виробником. Для видалення диметокситритильної (ОМТ) групи з 5'-гідроксильної групи нуклеотиду використовували 6 95 розчин дихлороцтової кислоти в толуолі. На стадії зв'язування в якості активатора використовували 4,5-дицианоіїмідазол (0,7 М) в безводному СНзСМ. Тіофосфатні зв'язки впроваджували сульфіруванням за допомогою 0,1 М розчину гідриду ксантану в 1:1 суміші піридину/СНзСМ протягом З хвилин часу контакту. В якості окислюючого агента для отримання фосфодіестерних міжнуклеозидних зв'язків використовували 2095 розчин /-трет- бутилгідропероксиду СНІСМ, що містить 6 95 води, протягом 12 хвилин часу контакту.
Після збирання необхідної послідовності цианоетил-фосфатні захисні групи знімали за допомогою 1:1 (об./06.) суміші триетиламіну і ацетонітрилу протягом 45 хвилин часу контакту.
Зв'язані з твердою підкладкою АБО суспендували у водному розчині аміаку (28-30 мас. 9б) і нагрівали при 55 "С протягом 6 годин.
Потім відфільтровували незв'язані АБО і випаровували аміак кип'ятінням. Залишок очищали
Зо рідинної хроматографією високого тиску на сильній аніонообмінній колонці (ЗЕ Неайсаге
Віозсіепсе, Зоцгсе 300), 30 мкм, 2,54 х 8 см, А-100 мМ ацетату амонію в 30 95 водному СНЗСМ,
В-1,5 М МавВг А, 0-4095 В за 60 хв., швидкість потоку 14 мл.мін-1ї, А - 260 нм). Залишок обезсолювали за допомогою ВЕРХ на зворотньо-фазовій колонці з отриманням заданих АБО з виділеним виходом 15-30 95 щодо початкового завантаження на тверду підкладку. АБО характеризували за допомогою іон-парної ВЕРХ, поєднаної з МС-аналізом на системі Адіїепі 1100 М50.
Антисмислові олігонуклеотиди, які не містять кон'югат, синтезували за стандартним способом синтезу олігонуклеотидів, загальновідомим в цій галузі техніки.
Застосовуючи ці способи отримали три окремих антисмислових сплуки, спрямовані на АросС
І. Як показано нижче в Таблиці 17, кожна з трьох антисмислових сполук, спрямованих на АросС
ІП, має одну і ту ж послідовність азотистих основ. ІБІ5 304801 являє собою 5-10-5 МОЕ гепмер, який містить тільки тіофосфатні зв'язки; ІЗІ5 647535 є таким-саме, як І5І5 304801, за винятком того, що він містить саіМАсз-1, сполучений у його 3'-кінця; і ІБІ5 647536 є таким-саме, як ІБІ5 647535, за винятком того, що деякі міжнуклеозидні зв'язки цієї сполуки являють собою фосфодіестерніє зв'язки. Як додатково показано в Таблиці 17, були синтезовані дві окремі антисмислові сполуки, спрямовані на ЗКВ-1. ІЗІ5 440762 являє собою 2-10-2 сСЕї гепмер, містить тільки тіофосфатні міжнуклеозидні зв'язки; І5ІЗ 651900 є таким-самим, як ІБІЗ 440762, за винятком того, що він містить саіІМАсз-1 у його 3'-кінця.
Таблиця 17
Модифіковані АБО, спрямовані на Арос ПІ ї БКВ-1
АБО Послідовність (від 5' до 3") Мішень ва жувана |! маса МО маса
ВІВ АообоєтиСосТеє Те" Со ТавТавСаєТав"Сов"СовАсе є" С 30480 ез'яевз ез І ев І е5 аз І ав І авхлав І ав ав аз/хав'лав а5 АроСс ШІ 71654 71644 821 1 Тез Тез ТГезАев Ге
ЇБІВ | АсеСес"СесТеє Те" Со ТавТавСаТав""Сов"СовАве Ов "СаеТеєТеєТ 64753 А т доб ев аз І ав І авхлав І ав ав аз/хав'лав 45 І ев І е5 АроСс ШІ 9239 5 92378 22 5 еєАез І еоДао -С1аІМАсз-Та
Ба АеСіво"Сео Гео Гео" Сав Газ ГазСав Гав'""Сав"СавАваеСіав"Сав Гео Гео Арос Ш 9142 9 91408 до? 6 ТевАев ТеоАдо- С1аІМАсз-їа ро " "
ІБІВ
44076 | Тке"СквАввСав Гав'"СавАвв» ГазСіавАвв" Сов Гав Гкв"Ск ЗАВ-1 )4647,0| 46464 1|823 2
ВІВ | Те"СювдсеСвєТав"СсвАсе ТавСЗвеАсо" Сов Таке" Скодос"- 65190 5 кв/лавАлав І ав ав/лав І азлав/лав аз ав І ке ко/лао овВ-1 67211 67194 да 0 СаіМмАсз-їа
Нижні індекси: "е" означає 2-МОЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-0-2- дезоксирибонуклеозид; "К" означає 6'-(5)-СНз біциклічний нуклеозид (наприклад, СЕЮ; "5" означає тіофосфатні міжнуклеозидні зв'язки (Р5); "о" означає фосфодіестерні міжнуклеозидні зв'язки (РО); і "о" означає -О-Р(-О)ХОН)-. Верхній індекс "т" означає 5-метилцитозини. "СаіМАсз-1" означає групу кон'югату, що має структуру, показану раніше у Прикладі 9. Слід зазначити, що саіМАсз-1 містить аденозин, який розщеплюється, який зв'язує АБО з рештою кон'югату, позначеною "СаїЇМАсз-14.» Номенклатура, використована в представленій вище таблиці, показує повну послідовність азотистих основ, включаючи аденозин, який є частиною кон'югату. Отже, у представленій вище таблиці послідовності також можуть бути наведені з
Зо закінчення "ЗаіМАсз-1", без "Авдо. Таке умовне застосування нижнього індексу "а" для позначення частини групи кон'югату, яка не містить нуклеозиду, що розщеплюється або фрагмента, що розщеплюється, використовується у всіх поданих Прикладах. Ця частина групи кон'югату, не містить фрагмента, що розщеплюється, згадується в цьому документі як "кластер" або "кластер кон'югату" або "кластер СаІМАсз. У деяких випадках група кон'югату для зручності описана шляхом окремого подання її кластера та її фрагмента, що розщеплюється.
Приклад 20: Дозозалежне антисмислове інгібування людського АроС І у пиАрос Ш у трансгенних мишей
ІБІ5 304801 і ІБІ5 647535, кожен з яких спрямований на людський Арос І ії описаний вище, окремо відчували і оцінювали в дозозалежному дослідженні на їх здатність інгібувати людський
Арос Ії у трансгенних мишей з людським Арос ПП.
Лікування
Трансгенних мишей з людським АроСії витримували при 12-годинному циклі освітлення/гемряви і забезпечували ай ІПрішт доступ до їжі ТекКіай Іар. До початку експерименту тварин акліматизували щонайменше протягом 7 днів у дослідницькій лабораторії. Отримали
АБО в РВ5 і стерилізували фільтруванням через фільтр 0,2 мікрона. АБО розчинили в 0,9 95
РВ5 для ін'єкцій.
Трансгенним мишам з людським АроС ПШ один раз на тиждень протягом двох тижнів внутрішньочеревно вводили ін'єкції І5І5 304801 або 647535 при 0,08, 0,25, 0,75, 2,25 або 6,75 мкмоль/кг або РВ5З в якості контролю. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин.
Через сорок вісім годин після введення останньої дози кожну мишу знекровили і приспали, та зібрали тканини.
Аналіз МРНК Арос ПЇ
Рівні мРНК АросС-ІП в печінці мишей визначили за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЄЕМФО (МоїІесшаг Ргобез, Іпс. Юджин, штат
Орегон) за стандартними протоколами. Рівні мРНК Арос ІІ визначали відносно загальної РНК (за допомогою Кіродгееп), потім нормалізували до контрольного зразка, обробленого РВ5.
Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів мРНК Арос І для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразка, обробленого РВЕ, і позначені як «96 РВ5". Полумаксимальна ефективна доза (ЕДво) кожного АБО представлена також нижче у Таблиці 18.
Показано, що обидві антисмислові сполуки знижують РНК Арос ІП, порівняно з контрольним зразком, обробленим РВ5. Крім того, антисмислова сполука, поєднана з саіМАсз-1 (І5І5 647535), була значно більш ефективною, ніж антисмислова сполука, яка не містить кон'югат
СаіМАсз-ї (ІБІ5 304801).
Таблиця 18
Вплив АБО лікування на рівні мРНК Арос ІІІ у трансгенних мишей з людським Арос ЇЇ
Доза о ЕдДво ' ' Міжнуклеозидний | 5ЕО І
РОЗ ЇЇ 0 | 100 Її - ЇЇ - ЇЇ - Її
І 675 | 8
Зо Аналіз білка Арос ПІІ (турбідиметричний аналіз)
Аналіз білка АросС ІІ в плазмі виконували способами, описаними в роботі сгапбат еї аї,
Сігсціайоп Кезеагсі, до друку опублікованій онлайн 29 березня 2013 року.
Приблизно 100 мкл плазми, виділеної з мишей, аналізували без розведення, використовуючи клінічний аналізатор Оіутри5х і наявний у продажу турбідиметричний аналітичний набір Арос ПІ (Каптіуа, кат. Мо КАІ-006, Каптіуа Віотеаіса!, Сіетл, штат Вашингтон).
Протокол аналізу виконували за описом постачальника.
Як показано нижче в Таблиці 19, обидві антисмислові сполуки знижують білок Арос ІІ, порівняно з РВ5 контрольним зразком. Крім того, антисмислова сполука, сполучена з СаІМАсз-1 (ІБІЗ 647535), була значно більш ефективною, ніж антисмислова сполука, яка не містить кон'югат СаїІМАсз-1 (І5І5 304801).
Таблиця 19
Вплив АБО лікування на рівні білка Арос | в плазмі у трансгенних мишей з людським Арос ЇЇ
Доза о ЕДгвхо бут Міжнуклеозидний ЗЕО І
АЗО (мкмоль/кг) 5 Рв (мкмоль/кг) З-кон'югат зв'язок/довжина МО
РВ5 | 0 | 00 | - ЇЇ - ЇЇ - її 008 1 86
Тригліцериди і холестерин плазми виділили способом Віїднп і Оуег (Відп, Е. б. и Буег, УМ.У.
Сап. 9. Віоспет. Рпузіої. 37: 911-917, 1959)(Віїдн Е апа Буег, М, Сап У Віоспет РнНувіої, 37, 911- 917, 1959У(ВІД4й, Е апа Оуєг, МУ, Сап У Віосйет РнНузіої, 37, 911-917, 1959) і виміряли за допомогою клінічного аналізатора ВесКктапп СошгГег і наявних у продажу реагентів.
Рівні тригліцеридів виміряли щодо мишей, ін'єкованих РВ5, і виражали як «95 РВ5".
Результати представлені у Таблиці 20. Показано, що обидві антисмислові сполуки знижують рівні тригліцеридів. Крім того, антисмислова сполука, поєднана з саіІМАсз-1 (І5І5 647535), була значно більш ефективною, ніж антисмислова сполука, яка не містить кон'югат саіМмАсз-1 (БІБ 304801).
Таблиця 20
Вплив АБО лікування на рівні тригліцеридів у трансгенних мишей
Доза о ЕдДво бут Міжнуклеозидний ЗЕО І
АЗО (мкмоль/кг) 5 Рв (мкмоль/кг) З-кон'югат зв'язок/довжина МО
РВ5 | 0 | 100 Її - ЇЇ - Ї - ЇЇ 075 | 9 675 | 9
Зразки плазми аналізували за допомогою ВЕРХ для визначення кількості загального холестерину і різних фракцій холестерину (НОЇ і 0). Результати представлені в таблицях 21 і 22. Показано, що обидві антисмислові сполуки знижують загальні рівні холестерину; обидва знижують І І; і обидві підвищують НОЇ. Крім того, антисмислова сполука, поєднана з СаІМАсз- 1 (БІ 647535), була значно більш ефективною, ніж антисмислова сполука, яка не містить кон'югат саіМАсз-1 (І5І5 304801). Збільшення рівнів НОЇ і зниження рівнів ОЇ являє собою переважний серцево-судинний ефект антисмислового інгібування Арос ІІІ.
Таблиця 21
Вплив АБО лікування на рівні загального холестерину у трансгенних мишей
Доза Загальний бути Міжнуклеозидний | 5ЕО ІЮ
АБО (мкмоль/кг) холестерин (мг/дл) З-кон'югат зв'язок/довжина МО
РВ5 107711 Ї777717111257 | 1111111
Ів ВОтВО немає 78/20 Ви вів вата сама | вето во 65 | 99
Таблиця 22
Вплив АБО лікування на рівні НОЇ і І 0. холестерину у трансгенних мишей
Доза НО. ГО. бути Міжнуклеозидний | 5ЕО І
АБО (мкмоль/кг) (мг/дл) (мг/дл) З-кон'югат зв'язок/довжина МО
РВ5 | 0 | 17 | 28 | - | - її
ІБ ВОтВО немає 78/20 Ви
Фармакокінетичний аналіз (ФК)
Досліджували також ФК АБО. Зразки печінки і нирок подрібнювали і екстрагували за стандартними протоколами. Зразки аналізували на М501, використовуючи ІП-ВЕРХ-МС.
Визначили зміст (мкг/г) у тканини І5І5 304801 і 647535 повної довжини, і результати представлені в Таблиці 23. Показано, що концентрації в печінці антисмислових сполук повної довжини були однаковими для двох антисмислових сполук. Отже, навіть не зважаючи на те, що
СаіМАсз-1-Кон'югована антисмислова сполука є більш активною в печінці (як показано за даними РНК їі білка, представлениим вище), її вміст у печінці не набагато вище. Дійсно, розраховане значення ЕСво (представлене в Таблиці 23) підтверджує, що спостережуване збільшення ефективності парної сполуки не може бути приписано виключно підвищеному накопиченню. Такий результат дозволяє припустити, що кон'югат покращує ефективність за іншим механізмом, ніж просте накопичення в печінці можливо за рахунок збільшення продуктивного захоплення антисмислової сполуки в клітини.
Ці результати показують, що концентрація саіМАсз-1-сполученої антисмислової сполуки в нирках нижче, ніж концентрація антисмислової сполуки, що не містить кон'югату саІМАс. Це має кілька нагальних терапевтичних застосувань. Для терапевтичних показань, в яких не вимагається прояв активності в нирках, вплив на нирки піддає їх ризику токсичності без відповідної користі. Більш того, висока концентрація в нирках зазвичай приводить до виведення сполуки з сечею, забезпечуючи більш швидке виведення. Відповідно, для позаниркових мішеней накопичення в нирках є небажаним. Ці дані дозволяють припустити, що сполучення з
СаіМАсз-1 знижує накопичення в нирках.
Таблиця 23
ФК аналіз АБО лікування у трансгенних мишей . ЕСво у Міжнуклеозидний
АБО Доза Печінка | Нирки печінці | З'-кон'югат | зв'язок/довжина ЗЕО (мкмоль/кг)| (мкг/г) (мкг/г) Ір Мо (мкг/г) 08 1 626 | 1196 68 | 2023 | 3377 08 | 727 | 343 68 | 2372 | 1793
Також ідентифікували метаболіти І5І5 647535 і підтвердили їх маси за допомогою мас- спектрометричного аналізу високого дозволу. Сайти розщеплення і структури спостережуваних метаболітів представлені нижче. Відносний 96 від загальної довжини АБО розрахували за стандартними технологіями, а результати представлені в Таблиці 23а. Основний метаболіт ІЗІ5 647535 являє собою АБО повної довжини без кон'югату (тобто ІБІ5 304801), який утворюється в результаті розщеплення по сайту розщеплення А, поданому нижче. Крім того, спостерігали також додаткові метаболіти, що утворюються з інших сайтів розщеплення. Ці результати дозволяють припустити, що може бути придатним також впровадження інших зв'язків, що розщеплюються таких як складні ефіри, пептиди, дисульфіди, фосфорамідати або ацил- гидразони, між цукром саіМАсз-1 ії АБО, які можуть розщеплюватися під дією ферментів всередині клітини або які можуть розщеплюватися у відновному середовищі цитозолю, або які лабільні в кислотному рН всередині ендосом і лізосом.
Таблиця 23а
Спостережені метаболіти повної довжини І5БІ5 647535
Метаболіт АБО Сайт Відносний 90 розщеплення
ІЗІЗ5 304801
ІЗІ5 304801 кад в | 105
ІЗІЗ 647535 мінус ІЗ саїМАсі
А ІБІ5 647535 мінус 17 6
ІЗ сСащмАс1 зв'язка 5-гідроксипентанової кислоти) " 5 ІБІ5 647535 мінус (2 саіМмАста зв'язки 5-гідроксипентанової кислоти
ІБІ5 647535 мінус
ІЗ сСагїмАсяЗ зв'язки 5-гідроксипентанової кислоти
Свійти розщеплення г 7-7 о, Свт розщеплення С Сайтрозщепнення А с тн ку Ян Єайт розщеплення Й 5 о А к - 5 жд а тт дит ї ку я 1 сб а поши: ї ; Дебет п й Ше сайт розщеплення В на Сини ит Ти и че ди Тож т де і і рохцепзвння с
Жде щ мит ? т мес сив ож розщеплення фозхепнення о совок о
Ще во ЗВ од, Бе Хек
Метаболіт З | метамнт я ї дм є з З с чакр сн хі фея кої вк 4 ик р . й Хей во А ИЙ ен БАКИ о и и В НИК ! в ї - У --й
Х г У їі З ж ї М се рені ана
В я х и, ин ий х у а сит не Ши тот х ї ун
Ї Ї п Х це
Метайолв З і
Є н кі окт г жах бот ши стей : у ства ле й х з
КЕ щі -- ї и т те т пк хи и г Кия й шу у но, 5 і ; й з - й я 0000 Вянй т
В м КЕ к - 4 ши нан йо х їх
Но дит и и р кт они ЕН мая
Метаїннит 4 г о рн кв зав в. ре мн І й оч х
З ск 0 Кк
А ве ан : ке у в т уч і 4 ! а 7 т
За, уч -А-мо т 4 з шк щ я дин нор й Шо І
ММ ку и ож пи Ї Дума Кія
Уа ЗЕ ях х Н КК.
Х 1 й ск
Метаболіт й 7 й з ім дам
Ну жить ри нн ї ї стіною так -к г но док ники Ко -- А. хі т «7 Хлав . а у ? Я - Ше В до ху моє дя к ! х че ке одини Дани ет т ит
Ох і у Зв
Метиєпліт ВО ! тб вк, пану ра з ї
Приклад 21: Антисмислове інгібування людського Арос ІІ у трансгенних мишей з Арос ПІ в дослідженні одного введення
ІБІ5 304801, 647535 і 647536, кожен з яких спрямований на людський Арос І і описаний у
Таблиці 17, додатково оцінювали в дослідженні однокраного введення на їх здатність інгібувати людський Арос ЇЇ у трансгенних мишей з людським Арос ПІ.
Лікування
Трансгенних мишей з людським АроСій витримували при 12-годинному циклі освітлення/темряви і забезпечували ай Ійрйшит доступ до їжі ТекКіай Іар. До початку експерименту тварин акліматизували щонайменше протягом 7 днів в дослідницькій лабораторії. Отримали
АБО в РВ5 і стерилізували фільтруванням через фільтр 0,2 мікрона. АБО розчинили в 0,9 95
РВ5 для ін'єкцій.
Трансгенним мишам з людським Арос Ії внутрішньочеревно ввели одноразову ін'єкцію дози, представленої нижче, сполуки ІБІ5 304801, 647535 або 647536 (описаних вище), або РВ5 в якості контрольного зразка. Експериментальна група складалася з З тварин, а контрольна група складалася з 4 тварин. Перед лікуванням, а також після останньої дози у кожній миші брали кров і аналізували зразки плазми. Мишей приспали через 72 години після останнього введення.
Зразки зібрали і аналізували для визначення рівнів мРНК АроС ПП і білка в печінці; тригліцеридів у плазмі; і холестерину, включаючи фракції НОЇ і ГО, які аналізували так, як описано вище (Приклад 20). Дані цих аналізів представлені нижче в Таблицях 24-28. Рівні трансамінази печінки, аланін-амінотрансферази (АТ) та аспартат-амінотрансферази (А5Т) у сироватці вимірювали щодо мишей, ін'єкованих сольовим розчином, використовуючи стандартні протоколи. Рівні АТ та А5Т показали, що антисмислові сполуки добре переносяться при всіх введених дозах.
Ці результати демонструють посилення ефективності антисмислових сполук, що містять кон'югат сзаїіМАсз-1 у 3'-кінця (ІБІ5 647535 і 647536), порівняно з антисмисловою сполукою, що не містить кон'югат саїіМАсз-1 (І5ІЗ 304801). Крім того, ІБІ5 647536, який містить кон'югат
СаМАсз-1 і кілька фосфодіестерних зв'язків, був таким же ефективним, як І5І5 647535, який містить той же кон'югат, і всі міжнуклеозидні зв'язки в цьому АБО є тіофосфатними.
Таблиця 24
Вплив АБО лікування на рівні мРНК Арос ІІІ у трансгенних мишей з людським Арос ЇЇ
АБО |Доза(мгк)| 96РВ5 | БД о) з3кон'югат | Міжнуклеозидний | се (р Мо (мг/кг) зв'язок/довжина
РВ5 011 99 | - ЇЇ - ЇЇ - Ї 03 | 98
ІБІ5 647536 1,7 сСаіМАсз-1 РБ/РО/20 822
Таблиця 25
Вплив АБО лікування на рівні білка Арос ІІ в плазмі у трансгенних мишей з людським Арос ЇЇ
АБО о |Доза(мгк)| 9РВО | БД о) зокон'югат | Міжнуклеозидний | еед (р МО (мг/кг) зв'язок/довжина
Р | 0 ЇЇ 99 | - | - ! - Її 03 | 98
Таблиця 25
Вплив АБО лікування на рівні білка Арос ІІ в плазмі у трансгенних мишей з людським Арос ЇЇ
АБО о |Доза(мгк)| 9РВО | БД о) зокон'югат | Міжнуклеозидний | еед (р МО (мг/кг) зв'язок/довжина
ІБІ5 647536 1,8 СаіМАсз-1 РБ/РО/20 822
Таблиця 26
Вплив АБО лікування на рівні тригліцеридів у трансгенних мишей о ЕДгвхо бути Міжнуклеозидний |5ЕО І
Доза (мг/кг) о РВ5 (мг/кг) З3'-кон'югат зв'язок/довжина МО
РВ5 ї/70777717711798 1-1 1-1 1- її 1180 71 1 66
Таблиця 27
Вплив АБО лікування на рівні загального холестерину у трансгенних мишей о бути Міжнуклеозидний | 5ЕО 10
Доза (мг/кг) то РВ5 З3'-кон'югат зв'язок/довжина МО
Р ЇЇ 77077 Ї1117196 ЇЇ - Її щЩщ- ЇЇ 778 (96 2 «( вівзоявої ГГ 5071 вв70 немає 78/20 Ви вів битв самий | оввео0 во вів битв самий | ретого | во
Таблиця 28
Вплив АБО лікування на рівні НОЇ і І 0. холестерину у трансгенних мишей
НО. ГО , ' Міжнуклеозидний
РВ5 | 0 | 7191 | 980 1 ЮЩДщф- |! - її 03 | 98 | 86 вів вата сама | вто во 03 | 143 | 89
ІБІ5 647536 сСаіМАсз-1 РБ/РО/20 822
Ці результати підтверджують, що кон'югат саіМАсз-1 покращує ефективність антисмислової сполуки. Ці результати показують також рівну ефективність сбаїіМАсз-1-сполучених антисмислових сполук, в яких антисмислові олігонуклеотиди мають змішані зв'язки (І5І5 647536, який має шість фосфодіестерних зв'язків), і повністю тіофосфатної версії тіє ж антисмислової сполуки (ІБІ5 647535).
Тіофосфатні зв'язки забезпечують кілька властивостей антисмислових сполук. Наприклад, вони стійкі до нуклеазного розщеплення і зв'язуються з білками, що призводить до накопичення сполуки в печінці, а не в нирках/сечі. Ці властивості є бажаними, особливо при лікуванні показань у печінці. Однак тіофосфатні зв'язки пов'язані також зі запальною реакцією.
Відповідно, зменшення кількості тіофосфатних зв'язків у сполуці імовірно знижує ризик запалення, але також знижує концентрацію сполуки в печінці, підвищує концентрацію в нирках і сечі, знижує стабільність у присутності нуклеаз і зменшує загальну ефективність. Представлені результати демонструють, що сбаїЇМАсз-1-кон'югована антисмислова сполука, у якій деякі тіофосфатні зв'язки замінені фосфодіестерними зв'язками, настільки ж ефективні проти мішені в печінці, як ії аналог, що містить тільки тиофосфатні зв'язки. Такі сполуки імовірно є менш прозапальними (див. Приклад 24, в якому описаний експеримент, який демонструє, що зменшення тіофосфатів (Р5) призводить до зниження запальної дії).
Приклад 22: Вплив модифікованого саіМАсз-1-сполученого АБО, спрямованого на 5КВА-1, іп мімо
ІБІ5 440762 та 651900, кожен з яких спрямований на 5КВ-1 і описаний в Таблиці 17, оцінили в дозозалежне дослідженні на їх здатність інгібувати 5КВ-1 у ВаІр/с мишей.
Лікування
Шоститижневим самцям мишей ВаїБ/с (Часкзоп І арогаогу, Бар-Харбор, штат Мен) ввели одноразову підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, сполуки ІБІ5 440762, 651900 або РВ5 в якості контрольного зразка. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Мишей приспали через 48 годин після останнього введення для визначення рівнів МРНК 5КВ-1 в печінці за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення. РНК
Зо КІВОСКЕЕМО (Моїесшаг Ргорев, Іпсо. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами. Рівні
МРНК ЗКВ-1 визначали відносно загальної РНК (за допомогою Кіродгееп), потім нормалізували до контрольного зразка, обробленого РВ5. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК 5КВ-1 для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразка, обробленого РВ5, і позначені як «до РВ5".
Як показано в Таблиці 29, обидві антисмислові сполуки знижують рівні мРНК ЗКВ-1. Крім того, антисмислова сполука, що містить кон'югат саіМАсз-1 (І5ІЗ 651900), була значно більш ефективною, ніж антисмислова сполука, що не містить кон'югат саіМАсз-1 (І5І5 440762). Ці результати демонструють, що перевага ефективності кон'югатів саіМАсз-1 спостерігається при використанні антисмислових олігонуклеотидів, комплементарних різних мішеням які мають різні хімічно модифіковані нуклеозиди, в цьому випадку модифіковані нуклеозиди містять стерично утруднені етил-цукрові фрагменти (біциклічний цукровий фрагмент).
Таблиця 29
Вплив АБО лікування на рівні мРНК 5КВ-1 у мишейВаїр/с
Печінка ЕдДзво ' ' Міжнуклеозидний 5ЕО 10 ово дозе(нко рве мі | Зчонюет | Гоузокдовжина| МО
РВЕ | 0 7001 (177-171 1 дово 22 немає РА 823 007 | 98 вів 651900 0,3 СамАсз-1 РБ/14 824 2 16
Приклад 23: Протокол аналізу людських мононуклеарних клітин периферичної крові (пПРВМС)
Аналіз ПРВМС виконували за допомогою пробіркового способу ВО Машаїіпег СРТ. Отримали зразок цільної крові, отриманої від донорів-добровольців, дали інформовану згоду у Медичній клініці США (Рагадау 4. ЕІ Сатіпо Кеаї, Карлеобад), і зібрали його в 4-15 пробірок ВО Масшіаїіпег
СРТ по 8 мл (МУК, кат. Мо ВО362753). Приблизний початковий загальний обсяг цільної крові в пробірці СРТ для кожного донора записали у формулярі аналізу РВМО.
Безпосередньо перед центрифугуванням зразок крові повторно перемішали, обережно перевертаючи пробірки 8-10 разів. Пробірки СРТ центрифугували при кімнатній температурі (18-257С) в горизонтальному (з надлишковою обертаємостю) роторі протягом 30 хвилин з фактором поділу (ЕСЕ) 1500-1800 з загальмуванням (2700 об./мін. ВесКктап АїЇедга 6К). Клітини зняли з лейкоцитарною поверхні розділу між шарами фіколла і полімерного гелю); перенесли в стерильну 50 мл конічну пробірку і згрупували по 5 СРТ пробірок/50 мл конічна пробірка/донор.
Потім клітини двічі промили РВ5 (без Са-, Му-; СІВСО). Пробірки поповнили до 50 мл і перемішали, перевертаючи кілька разів. Потім зразок центрифугували при 330 х д протягом 15 хвилин при кімнатній температурі (1215 об./мін. у Весктап АйПШедга 6К) і зливали максимальну кількість надосадової рідини, не порушуючи осад. Клітинний осад зняли, обережно повертаючи пробірку, і повторно суспендували клітини в ЕРМІ-10 95 ФБС-пеніцилін/стрептоміцин (41 мл / 10 мл початкового об'єму цільної крові). Піпеткою взяли 60 мкл зразка і помістили у флакон з пробою (ВесКтап Сошег), що містить 600 мкл реагенту МегзаіІ усе (Весктап СошиПег, кат. Мо
А09777), і обережно перемішували на вортексе протягом 10-15 секунд. Зразок залишили інкубуватися протягом 10 хвилин при кімнатній температурі, й знову перемішали перед підрахунком. Суспензію клітин зчитували на аналізаторі життєздатності клітин МісеїЇ ХК (ВесКтап Сошпег), використовуючи клітини типу РВМС (зберегли фактор розбавлення 1:11 з іншими параметрами). Записали кількість живих клітин/мл і життєздатність. Клітинну суспензію розбавили до 1 х 107 живих РВМС/мл у КРМІН1ТО 95 ФБС-нпеніцилін/стрептоміцин.
Клітини помістили на планшет при 5 х 105 в 50 мкл/лунки 96-лункового тканинного
Зо культурального планшета (РаїЇсоп Місгоїе5). 50 мкл/лунку 2х концентрації олігомерів/контролю, розбавлених в КРМІ-1095 ФБСпеніцилін/стрептоміцин, додали у відповідності з експериментальної матрицею (в цілому 100 мкл/лунку). Планшети встановили на шейкер і залишили перемішуватися протягом приблизно 1 хв. Після інкубації протягом 24 годин при 377С; 595 СО», планшети центрифугували при 400 х д протягом 10 хвилин, потім видалили надосадову рідину для аналізу цитокінів МБО (тобто людських ІЛ-б, ІЛ-10, ІЛ-8 та МСР-1).
Приклад 24: Оцінка прозапальних ефектів в аналізі ПРВМС для СаІМАсз-1-сполучених АБО
Антисмислові олігонуклеотиди (АБО), перелічені у Таблиці 30, оцінили на прозапальну дію в аналізі ПРВМС, використовуючи протокол, описаний у Прикладі 23. ІЗІ5 353512 являє собою внутрішній стандарт, який, як відомо, має високу відповідь на вивільнення ІЛ-6 у цьому аналізі.
ПРВМС виділили зі свіжих зразків, отриманих від донорів-добровольців, і обробили АБО в концентраціях 0, 0,0128, 0,064, 0,32, 1,6, 8, 40 ії 200 мкМ. Через 24 години обробки виміряли рівні цитокінів.
Рівні ІЛ-6 використовували в якості первинного значення. ЕКво Етах розраховували за стандартним способом. Результати виразили як середнє відношення Етах/ЕКхо для двох донорів та позначили як "Етах/ЕК5о. Більш низьке співвідношення означає відносне зниження прозапальної відповід, а більш високе співвідношення означає відносне збільшення прозапальної відповіді.
Щодо досліджуваних сполук, найменш прозапальною сполукою була АБО, сполучена за допомогою РБ/РО (І5ЗІЗ 616468). СаіМАсз-1-сполучене АБО, ІЗІЗ 647535, було трохи менше прозапальним, ніж його несполучений аналог, І5БІ5 304801. Ці результати показують, що впровадження декількох РО зв'язків знижує прозапальну реакцію, а додавання кон'югату
СаіМмАсз-1 не робить сполуку більш прозапальною, і може знижувати прозапальну реакцію.
Відповідно, можна очікувати, що антисмислова сполука, що містить змішані РБ/РО зв'язки і кон'югат (заїМАсз-ї, може викликати більш слабкі прозапальні реакції, порівняно з антисмисловою сполукою, зв'язаною тільки за допомогою Р5, з кон'югатом саіІМАсз-1 або без нього. Ці результати показують, що саїіМАсз-1-спряжені антисмислові сполуки, зокрема, сполуки, що мають менший вміст Р5, є менш прозапальними.
В цілому, ці результати дозволяють припустити, що саіІМАсз-1-сполучена сполука, зокрема, сполука зі зниженим вмістом Р5, може бути введена у більш високій дозі, ніж аналогічна повністю РЗ5 антисмислова сполука без кон'югату саїІМАсз-1. Оскільки не очікується, що період напіввиведення для цих сполук буде істотно відрізнятися, то таке введення у більш високій дозі зумовить менш часте введення доз. Насправді, таке введення може бути ще більш рідкісним, оскільки СаІМАсз-1-сполучені сполуки є більш ефективними (див. Приклади 20-22), а повторне введення дози необхідно тільки при зниженні концентрації сполуки нижче заданого рівня, при цьому заданий рівень зумовлений ефективністю.
Таблиця 30
Модифіковані АБО
Послідовність (від 5' до 3) 5ЕО Ю МО
Сев"Сев Гев(ЛезАев Газ ГазАвавСлав Аве Став
ІЗІЗ5 104838 АваеСіавАвдеСіавСтев Ге "С ев" ев"
Тев"Сев"Сев"СавАве Гав Газ Га'"СавАвеСав
ІЗІЗ 353512 СіавАввСіавАвав"Сав" Сов Т ев(Зев(Зе
АезСев"Сев Тез Гев'"Сав Газ Гав(Зав Т дв
ІЗІ5 З04801 тіав"СавАввСав" Св Тез Гез ГезАез Ге рос ТІ
АезСев"Сев Тез Гев'"Сав Газ Гав(Зав Т дв
ІЗІ5 647535 тіав"СавАвв(Сав" Св Тез Те ГезАез ГеоЛао-С(1азі!МАсз-їа Арос т
АезСво"Сео Гео Гео"Сав Газ Газа Г дв
ЗІЗ 616468 тіав"СавАвз(Сав" Св Тео Гео ГезАев Ге рос ТІ
Нижні індекси: "е" означають 2-МОЄЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-0-2- дезоксирибонуклеозид; "К" означає 6'-(5)-СНз біциклічний нуклеозид (наприклад, СЕЮ; "5" означає тіофосфатні міжнуклеозидні зв'язки (Р5); "о" означає фосфодіестерні міжнуклеозидні зв'язки (РО); і "о" означає -О-Р(-О)(ОН)-. Верхній індекс "т" означає 5-метилцитозини. "Адо-
СаіМАсз-14" означає кон'югат, що має структуру СаІМАсз-1, показану у Прикладі 9, приєднану до 3'-кінця антисмислового олігонуклеотиду, як показано.
Зо
Таблиця 31
Прозапальна дія АБО, спрямованих на Арос ПП, в аналізі НПРВМС
ЕК:о Етах ' ' Міжнуклеозидний
ІБІ5 353512 (підвищена 0,01 265,9 26590 немає рБ/г20 826 реакція)
І5І5 304801 106,55 1522 РБ/2О
ІБІ5 647535 1150 СаімАсз-1 РБ/2О
ІЗІЗ 616468 71,52 РБЗ/РО/20
Приклад 25: Вплив модифікованого заІМАсз-1-сполученого АБО, спрямованого на людський
Ароб ЇЇ, іп міто
ІБІБ 304801 і 647535, описані вище, випробували іп міго. Первинні гепатоцитарні клітини трансгенних мишей при щільності 25000 клітин на лунку обробили концентраціями 0,03, 0,08, 0,24, 0,74, 2,22, 6,67 і 20 мкМ модифікованих олігонуклеотидів. Після обробки протягом приблизно 16 годин, з клітин виділили РНК і виміряли рівні мРНК за допомогою кількісного ПЛР у реальному часі, а рівні мРНК пАрос ПІ скорегували у відповідності із загальним вмістом РНК, виміряних за допомогою КІВОСКЕЕМ.
ІКоо розрахували за стандартними способами, а результати представлені в Таблиці 32.
Показано, що спостерігали порівнянну ефективність у клітинах, оброблених І5І5 647535, порівняно з контрольним зразком, І5І5 304801.
Таблиця 32
Модифіковані АБО, спрямовані на людські Арос І, у первинних гепатоцитах бут Міжнуклеозидний
ІЗІ5 304801 р/го
ІЗІЗ 647535 СаіМАсз-ї рБ/го
У цьому експерименті іп мійго не спостерігали такої великої переваги ефективності сполучення з сзаіМАсз-1, як спостерігали іп мімо. Наступні експерименти вільного захоплення у первинних гепатоцитах іп міго не показали підвищеної ефективності олігонуклеотидів, що містять різні кон'югати саїІМАс, порівняно з олігонуклеотидами, що не містять кон'югати саіМмАс (див. Приклади 60, 82 та 92).
Приклад 26: Вплив лінкерів РО/РБ на активність АБО щодо Арос ПІ
Трансгенним мишам з людським Арос І внутрибрюшинно вводили ін'єкцією 25 мг/кг І5ІЗ 304801 або І5БІ5 616468 (обидва описані вище) або РВ5 в якості контрольного зразка, один раз на тиждень протягом двох тижнів. Експериментальна група складалася з З тварин, а контрольна група складалася з 4 тварин. Перед лікуванням, а також після останньої дози у кожній миші брали кров і аналізували зразки плазми. Мишей приспали через 72 години після останнього введення.
Зразки зібрали і аналізували для визначення рівнів білка Арос ІІІ в печінці, як описано вище (Приклад 20). Дані цих аналізів представлені нижче в Таблиці 33.
Ці результати демонструють зниження ефективності антисмислових сполук з РО/РБЗ (ІБ5ІЗ 616468) в крилах, порівняно зі сполуками, що містять тільки РБ5 (ІЗІЗ 304801).
Таблиця 33
Вплив АБО лікування на рівні білка Арос ІІ у трансгенних мишей з людським Арос ЇЇ о бути Міжнуклеозидний
Доза (мг/кг) у РВО З-кон'югат зв'язок/довжина ЗЕО ІЮ МО
РВ5 | 0. 99 | - / - / 25 мг/кг/ллиждень
ІБІБ 304801 протягом 2 24 немає Повністю Р5 821 тижнів 25 мг/кг/ллиждень
ІБІ5 616468 протягом 2 40 немає 14 РБ/б РО 821 тижнів
Зо Приклад 27: Сполука 56
РМТО. чно про» вмтоу тло от том рмто7 бо 56
Сполука 56 є у продажу у компанії Сієп Кевзеагсй або може бути отримана за опублікованими методиками, описаними авторами Зпсоперіпом еї аї., Мисієїс Асід5 Кезеагсй, 1997, 25(22), 4447-4454.
Приклад 28: Отримання Сполуки 60
А ? тя дає дн сурінех итмо ни ЛВ є її г тори щ Ду ит и ту Сн МОРІ лених, ОТ ж кме- МДЕ дитя пенсію 1 кА а ХЕ х ях те М ще м ві Я ЖК щи Залюкі й 1 Ук х і ким ск, лах | Мирне см дід ит СН х май вити Т леня - пе как жі
Сполуку 4 отримали способом, представленим у Прикладі 2. Сполука 57 є у продажу.
Сполуку 60 підтвердили структурним аналізом.
Сполука 57 є ілюстративною, і її не слід вважати обмежуючим, оскільки можуть бути використані інші монозахищені заміщені або незаміщені алкілдіоли, включаючи, але не обмежуючись ними, ті, які представлені в цьому описі, для отримання фосфорамідитів, що мають заданий склад.
Приклад 29: Отримання Сполуки 63
С ЗОМ а КЕ пес ре І.М, прут з МК
НІ я- з КОН дисо ; х ВС, Но А. у Ї шиє
НО фс, ОН ую вю, дит о Сн ори Ор Мт хай 7 ю нс меоу тА уфосфітилювання о нищи як я. МанСО, Що Мова т т Кяу їз
Сполуки 61 та 62 отримали таким-саме способом, як описано в публікації Тобег еї аї., Єшиг. 5.
Ог9. Спет., 2013, 3, 566-577; та Лапо еї аї., Теїхгапедгоп, 2007, 63(19), 3982-3988.
Альтернативно, Сполуку 63 отримали за такими-саме способами, як описані в науковій і патентній літературі авторами Кіт еї аї., Зупієй, 2003, 12, 1838-1840; Кіт еї а!., в опублікованій міжнародної заявки РСТ МО 2004063208.
Приклад 30: Отримання Сполуки 63Б
Її ЩО СЯ ї : їх ше я С
Ка с яку ГУМИ ее і шу сен З ЖЕК, рег І жк "ЯзМт
УЗ кт ше шу. а ху т " й и Ех и. й Нама,
ТЕ ОБО че З ТВА з Веде прути ще З.Фосфітилювання МОВ В хо х за ОН єї» ОМ
Сполуку б3а отримали такими-саме способами, як описані авторами Напезвзіап еї аї.,
Сападіап доштаї ої Спетівігу, 1996, 74(9), 1731-1737.
Приклад 31: Отримання Сполуки 63а іх ПЯ о м дк -- Кк Фр ь Що ї3. нт з. ІОБМТСЬРХ ові г З ви ою
НО тою ов 00 ту рути ви З.Фосфітилювання й
І яж В-Я а до п-нй ТК ння
Сполуку 63с отримали такими саме способами, як описані авторами Спеп еї аї., Спіпезе
СНетісаї І енегз, 1998, 9(5), 451-453.
Приклад 32: Отримання Сполуки 67 шеюзя СОМ саме н ХК вчу с с г З Те Асі наАх нічо у х ни ВОМ Ах Зо соль хе інн и дн дити ря " ! па шани в ОЇ 7 дторах
Ап ій я тий хх шо ОН Е. Ж доб те У ке мети т ще то МК ВІ леНМ Ба нате ел АНЯ во не
Ве Но авоєн, мазка З сти
І. ТЕАЗНЕ, ТЕФ ле що З о ря з фосфітилювання ме-кдта и ит о тт о лем щ й Е М у
ГУ
Сполуку 64 отримали способами, наведеними в Прикладі 2. Сполуки 65 отримали такими- саме способами, як описані авторами Окг еї аї., в опублікованій міжнародної заявки РСТ УМО 2009003009. Захисні групи, використані для Сполуки 65, є ілюстративним, і їх не слід вважати обмеженням, оскільки можуть бути використані інші захисні групи, включаючи, але не обмежуючись ними, ті, які представлені в даному описі.
Приклад 33: Отримання Сполуки 70 сти ВВ мОйдх К нк ек ле. но ї СН. пе І в лих и - т? , «КК и ян вч: КК банк ї гу
АОС хе Ї тре би тя тя тон сн НА деу-дия пн пр хеНЕ : дива і ме Я ленк а 7 АсНК ва СН;
АеЕОАе 4
ГовауМ БЕ, що аа ко, по я Кк 2 фосфітилювання Вб Г ей и т я - те с Чи ле зом вин . СН. Море) за ! з
Сполуку 64 отримали способами, наведеними в Прикладі 2. Сполука 68 є у продажу.
Захисна група, використана для Сполуки 68, є ілюстративною, і її не слід вважати обмеженням, оскільки можуть бути використані інші захисні групи, включаючи, але не обмежуючись ними, ті, які представлені в цьому описі.
Приклад 34: Отримання Сполуки 75а їх. СВ
І. ТВОМЕСІ, ру М миве
У ко З. СР Ме й й Ї плавки ММ
КД 00 пнннннннннннтннннннннненнннннннннннннтнннннннтеяв Бут А КИТИ
Мити Я. ТЕАЗНК, Тле бок пт трун й - 5.Восфітипювання 3 Ві У ке ший Й Та
Ще ОС,
Сполуку 75 отримали за опублікованими способами, описаними авторами Зпсаперіпом еї аї.,
Мисівїс Асіа5 Незеагси, 1997, 25(22), 4447-4454.
Приклад 35: Отримання Сполуки 79
ЯКО услід НО кв сіло я плечу че що 1 і. Вис, Май Чо м т 1. С.М АЄСМ
СО вити Ж 0 днями нт на ТМ 0 Фехесорзміднт 53 яву ву шиття ях. ВСАА, и ни мує тат ж ВСАКНКЬ нал Те во ово іш - сно р ка
АС - р З У ше о ве ная пкт, Ї : ли,
АСНМ т с ї. ОНУРО, мес
МС ве ми дво ОА Ко в. п тсттттяю і Її о а а 7 2 Фосфітипювання ве Пі Арт ке но дит до т у шк Р. ч зу сб м з ші я КН дих дон Щ ен о ех де -о й арок щ ра Би
Ав
НА Що де КАЄ МС хі ї ко Мов оС Я ик . ї і Май жи а, В ден о У че що дор че ще я у -о о дед---й Ї з тити дути ря тт дени ме-- - Моро» щі аг дер уАс я В ії
Що З і З а пити бу Рут ой ї
Те
Сполуку 76 отримали за опублікованими способами, описаними авторами 5пеПеріпом еї аї.,
Мисівїс Асіа5 Незеагси, 1997, 25(22), 4447-4454.
Приклад 36: Отримання Сполуки 79а
НО ан КЕ. Бика рух КН тонн й з не
НО нів и Ас З Ра, що Би дит сито -ї тру і у - Й 3 дику тую з.Ффосфітипювання ния нео о ? Еш ОО 7 ток
Сполуку 77 отримали способами, наведеними в Прикладі 35.
Приклад 37: Загальний спосіб отримання асоційованої олігомерної сполуки 82, яка містить фосфодіестер-зв'язаний кон'югат сзаїІМАсз-2 у 5'-кінця, міа твердої підкладки (Спосіб І),
ооМмт г я и
ЗВ ї дптр ТОМИ пики и ни ах шк Й от жлеиивіи, я
ІК т у х т чу ва д- а ото
М о МС чий ду ж ВХ
Мо оту вею Т.Є. дам - лу т х з пен ок і з ос мМмі АСМ че о питан з Фххфораніднт ЗБ де вай ! НИ рентна чено 7 А - т 7 і авт. скнтязвтор : М х ї тд : ре що І | ї ек жк тиж кт ж жд ж ніж жи ж жити і Ти
ЩО і
Ж зв о
КК М» й ї са црмм АПНОт дуть що
Хе в'або (у Ж
ЇХ» гетертдеічна основа |. Кепіювання (Ас, ММ, вт о
Я. Ва рі
М СА, дк й
З На Я Б ММ АС й
КК с їі дкоовораміт БО ях
АОС Ха ет ее Її Ж
Ї с и ве Ка
Ас Мая що сл оде Моя їх І
Ат З іш я а. а й ї. т, сх З. С гей а ко фк КО А ру ВЕ де " ки дк ; ух ше ее рейх є щи добу о вх зу ех ж з р-н г М і й ; щей й ше
АеНМ ме о ще о
Ім 3 х еще у ще з. У а Учу, сл зерх рей
Що Бе Її а о ОАо . як в м й ї коду мВ Ос.
Ан бр чнНАЄ й г у дя В - - УМА Веде
Х дк м Що: щх
Ї. Келіювання ТА МИ, ВУЄ | кі х, ! з мен сдкнях
М ОМИОНеМН толувлі обі
М МН З, ! з ноон о, п у ьо
АСНМ о у по он о Те) п о-в-о о Вх но АТ ооо о Ще,
АСНМ о б о Оо-Р-О но он р о , о
ОО ли То осо но
МНАс 82 де саІМАсз-2 має структуру: нОоон о) п В
АСНМ о У на о о о о о О. ,Вх кити ди, -Р-0
АснМ о о б но он В. лам
О 0 ли То ВО но
МНАс
Кластерна частина СаІМАсз групи кон'югату СаІМАсз-2 (СаІМАсз-24) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. Де СаІМАсз-2а має формулу: ноОНн о но о. 5
АСНМ о шк он но о о о о но пли ооо оч
АснМ о о ноон В. / о ОО 5О но
МНАс
МІМАЮ-зв'язану олігомерну сполуку 7960 отримали стандартними способами в автоматичному синтезаторі ДНК/РНК (див. Юироиу еї аї., Апдем/. Спет. Іпі. Ед., 2006, 45, 3623- 3627). Фосфорамідитні Сполуки 56 і 60 отримали так, як описано в способах у Прикладах 27 і 28 відповідно. Зображені фософорамідити є ілюстративними, і їх не слід вважати обмеженням, оскільки можуть бути використані інші фософорамідитні будівельні блоки, включаючи, але не обмежуючись ними, ті, які представлені в цьому описі, для отримання олігомерної сполуки, що містить фосфодіестер зв'язану групу кон'югату у 5'-кінця. Порядок і кількість фосфорамідитів,
що додаються до твердої підкладки, може бути підібран для отримання олігомерних сполук, описаних у цьому документі, які мають будь-яку задану послідовність і склад.
Приклад 38: Альтернативний спосіб отримання олігомерної сполуки 82, яка містить фосфодіестер-зв'язаний кон'югат саїІМАсз-2 у 5'-кінця (Спосіб Ії) стави и я ВХ
ВМмТО т ти . о І. ОСА, дом
МО това птн 7 пін ре 2. ОС, ММ, АС
С син хе ев ї зУюкіазвлецямт их
Й х 7 ДТ
Сн | | евт. интехатою і опа к кни дра ККнннкккнньк Е Дню о з й її Хо В де СК (Су АмАреосроруисМ й в - чо х т ВХ ЗК вичеркицютьнию осниеа о
Аео ОАс Мо. ; ї
ЧК! Гн ек. о й А
АсО кв а чи ст І ден оо а
Од Ту з !
СО ! т то то М о о, ,Вх
Кеди . : . наш ке ов Ух т ; хи з т и М ици Й нут дини т --О ї Ї
АСНЮ втвх о ОХ
М. т й КС пит В «З -о Ї З
АОС суб і
КД ни КО помоши
Кв Я " аю де г и Сл
МнНАс о і. жи СО СУ ММАЮ-О-родитн им 2. БІОС ' Що 3. ББМСНУЄМ (совок, я я Мне С ' 7
Зв сюмерне споликя Же 5 .
МІМАЮ-зв'язану оолігомерну сполуку 790 отримали за стандартними способами в автоматичному синтезаторі ДНК/РНК (див. Юироиу еї аї., Апдем/. Спет. Іпі. Ед., 2006, 45, 3623- 3627). СаіМАсз-2-кластерний фосфорамідит, Сполуку 79 отримали способами, наведеними в
Прикладі 35. Альтернативний спосіб забезпечує можливість одностадійної установки фосфодіестер-связанногоса|МАсз-2 кон'югату на олігомерну сполуку на останній стадії синтезу.
Зображені фософорамідити є ілюстративними, і їх не слід вважати обмеженням, оскільки можуть бути використані інші фосфорамідитні будівельні блоки, включаючи, але не обмежуючись ними, ті, які представлені в цьому описі, для отримання олігомерних сполук, що містять фосфодіестерний кон'югат у 5'-кінця. Порядок і кількість фосфорамідитів, що додаються до твердої підкладки, може бути підібрана для отримання олігомерних сполук, описаних у цьому документі, які мають будь-яку задану послідовність і склад.
Приклад 39: Загальний спосіб отримання олігомерної сполуки 83П, що містить кон'югат
СаіМАсз-3 у 5'-кінця (ЗаіМАсз-1, модифікований для 5'-кінцевого приєднання), міа твердої підкладки.
дм о рАє - до пня док тре, в су яти ит їм я ! ; - Мо, МеЄМУ ах
Медове Як Н В М. ІА мак дм х х СМ р - кор пед І я кот з ВИ ян ях яке ще - В ч й шен пу тд. т мини дози їх а ай ї З Ж ОО ода ї й ЗУ За ванає і вся с 2 дм ож мадяття г пп: вих в ни тя о0вато,шжА. ДКРА, ТО се А- у КО З. Ківш ме о
Ї руни 7 вату дя
Ак х 18 ве; Ас хо, У мив мак, пред,
Е лонх потюрні ч - от М
Щ воно, в че кл - й
ВЗ Ї ООСЕ» Ж ХЕ р 4 ї а ренням, ЯКЕ вадою сити З 5 бю ЇЇ Кк й ос одн те о т
Її дод в й тр сн г і. щ сей жо з с . петтттяяятттяттттттннння МиАх у тіридино ДМФА ср еитя т ни ще т в в взе - й М дою уже тає й х т тк г Ї ка й-- т ВХ Ак див з
З обення хх Ао-й У кожи у б денх ит - м Мак от, с 7 дм. г пт шк КІ ще є в г м а ООВ Сава | Зде дою АЙ - ях ї ом її З 7 рану Мем и-й ще Ї дк Се пн Я тяж зи ко З би А нК, МВ КК ому о и т : ки б | ке дося Я й І" Й р-н Й пеня ок ї 3 г ін нь де
ЧНАС і ща дея 7 : З - Болти ду. пд
Мале т КЕ Е щі я Зуфарь дк ие ме пк кІмноглх я н т 7
ОдАг -е для дет вза ло б ї око де?
Дис х
МНАХ бика се
Я дес ну тт доня т сту я ї м й 2 ся
В ТЗ р а дір Же Кк н оо М х .
А в ни кит ний о» Ан ЖК Ом вн панни т Х я терня «й ди тних ши | | т щі ди -3 її й ії й ПоМаюрчс яв обришд
Що з ї ТВО кнах й ! Аня от г о Е в "м-н, ва ех ме но цеє й с ей, я ит са лет х ж
Мкле но он ' во-СщО н се СН ше М птн й Що п Н
НО Й З п. шини с о г о Ям я у но да
УНАС
Сполуку 18 отримали за способами, наведеними в Прикладі 4. Сполуки 83За і 8356 є у продажу. Олігомерну Сполуку 83е, що містить зв'язаний через фосфодіестер гексиламін, отримали стандартним способом синтезу олігонуклеотидів. В результаті обробки захищеної олігомерної сполуки водним розчином аміаку отримали 5'-СаІМАсз-3 сполучену олігомерну сполуку (83).
Де СаІМАсз-3 має структуру: но он но о Н
АСНМ тА в о пз о 9 он он Мт о-А-кй Чеп2в-о-рР- о о о Ге) но с
МНАс нм тю о
Ша і о о о но У но
МНАс .
Кластерна частина СаІМАсз групи кон'югату СаіМАсз-3 (СаІМАсз-За) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. Де СаІМАсз-За має формулу: но он нок со Н
М
АСНМ сту Н о пл о о он У о.А-мй пеп2в-о- но бо ох Кок й о о о но (с
МНАс нм о я і о о о но, У» но
МНАс .
Приклад 40: Загальний спосіб отримання олігомерної сполуки 89, яка містить зв'язаний фосфодіестерним лінкером СаІМАсз-4 кон'югат у 3'-кінця міа твердої підкладки до Мт рен 1 СА -
Сулла-орми па З у Океан щ МОЛ ММ АСМ | па зва: ОЗ ІМЕ рт
КО ик я чо т: 5- 5 с т шині М 7 ЩЕ
ОМ. ле Кут уттис до квоюеютх: Щі смт Ам кесЕтюс 4. мВеОЮН тя | ший то і пи яру ОКтос
Т.О пперудин -х ії Е п я- шо дак дич Кинути
Ме ВИ и дкех ато
З ОС ММ АСУ СД плато до
Захфоргміми г що ГЗ Й ному кнккнкннНККАККК КЕ. Капікядннхк ;
Н вет. Шут ощтТОх : з, счажя ї дчаювнк і 3 «нан
Плити У. ТУ т пивридин
Ас Оде ІННО, ОЄо дмов доро. М Я. рот, хм, АСМ т ее докорами
ЯК ав Товт шнннеятоє
АСВ м ! дчетНЕ нях, МО, М --- - - 5 хх ї ХМ. Каепрювхния
У ї дод оАє су г о-к
АБО МО я й
З Ос СМ
А ач | я, і
АденМм тд В у: ет
ТМ, ї тут М нг 7» ра моно 2 в о х ет опти, о -о і нн ее І док, пра ше т
АК Вб ВМО тд 0 а щих І ! ме им
Анди | ще Шфсомьсанногоя
Мчнас ОК й 13. ОСА т 3. Хинаіюасвузнук ес севх. пхнжхан юр ДНК З і Я. Кенія г і Х бхмслення і 5 БВМИНУМІ ЇЇ, валі т
АсОо одс
Асо о
АсНМ о
АСО Одес ди о о-в
АсОо о і о о Око
АснНМ - м г 0-5. о 88 о - о о 0-0 о в о о
Р--
АсОо ОАс р б х о
Ж о о, Ото о
СМ
Асо рмт-4-- опо В зх Ї ис
МНАс 300000 уллі-о-ь-о о
НО он МН, 55 С но о
АСНМ о но он дк о о-Е но о Фо. о
АСНМ М о о
О-. о-Ї-о.о 89
Фо-/7 о ці о о --о0 до
Бех й он но о 79
МА Сопво) -(см)"
У 3
Де СаІМАсз-4 має структуру:
НО он но о
АснНМ о но он да о
О-в но о со
АСНМ о о:
Р. о о. /
Ок - о о дО ;Р-- о, /0 о он но о-7-7о
МА і-(сму;
Де СМ являє собою фрагмент, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою: п
О-Р-ОН М (2 о рути 9 очгоН
Кластерна частина СаІМАсз групи кон'югату СаІМАсз-4 (Сіа!МАсз-44) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. Де сСаЇІМАсз-4а4 має формулу:
НО он но о
АсНМ о но ОН да о //
Оо-Р нов бо о --о
АСНМ о о-
Р. о О., /
Ок - о ;Р-- но о оси о р й х о-то он но т
МНАс
Захищена Сполука 30 на функціоналізованій твердій підкладці ОпуїйпКег є у продажу.
Сполуку 84 отримали такими-саме способами, як описані в літературі (Зпсперіпом еї аї., Мисівїс
Асіаз Везєагсі, 1997, 25(22), 4447-4454; ЗнеПеріпом еї аї., Мисієїс Асідх Везвєагсі, 1999, 27, 3035-3041; і Ноппеї єї а!., Мисієїс Асід5 Кезеагсі, 1997, 25, 4842-4849).
Фосфорамідитні будівельні блоки, Сполук 60 і 79а, отримали так, як описано в способах у прикладах 28 і 36. Зображені фосфорамідити є ілюстративними і не призначені для обмеження, оскільки можуть бути використані інші фосфорамідитні будівельні блоки для отримання олігомерної сполуки, що має фосфодіестер-зв'язаний кон'югат у 3'-кінця і задану послідовність і склад. Порядок і кількість фосфорамідитів, що додаються до твердої підкладки, може бути підібрана для отримання олігомерних сполук, описаних у цьому документі, які мають будь-яку задану послідовність і склад.
Приклад 41: Загальний спосіб отримання АБО, що містять фосфодіестер-зв'язаний кон'югат
СаіМмАсз-2 (див. Приклад 37, Вх являє собою аденін) в 5'-положенні міа твердофазному способу (отримання І5І5 661134)
Якщо не вказано інше, всі реагенти і розчини, використані для синтезу олігомерних сполук, придбані у комерційних постачальників. Стандартні фосфорамідитні будівельні блоки і тверду підкладку використовували для впровадження нуклеозидних залишків, які включають, наприклад, залишки Т, А, б і "С. Фосфорамідитні сполуки 56 і 60 використовували для синтезу фосфодіестер-зв'язаного кон'югату саіМАсз-2 у 5-кінця. 0,1 М розчин фосфорамідиту в безводному ацетонітрилі використовували для В-О-2'-дезоксирибонуклеозиду і 2'-МОЕ.
Синтез антисмислових олігонуклеотидів (АБО) виконали на синтезаторі АВІ 394 (в масштабі 1-2 мкмоль) або на синтезаторі АКТА Оіідоріюї виробництва СЕ Неаййсаге Віобсіепсе (в масштабі 40-200 мкмоль) способом фосфорамідитного зв'язування на твердій підкладці МІМАЮ (110 мкмоль/г, сСи?аєм еї аї!., 2003), упакованої в колонку. Для стадії зв'язування фосфораїдити вводили в 4-кратному надлишку порівняно з вихідною завантаженням на твердій підкладці, а конденсацію фосфораідиту виконували протягом 10 хвилин. Всі інші стадії виконували за стандартними протоколами, наданими виробником. Для видалення диметокситритильних (ОМТ)
Зо груп з 5'-гідроксильних груп нуклеотиду використовували б 95 розчин дихлороцтової кислоти в толуолі. На стадії зв'язування в якості активатора використовували 4,5-дицианоїмідазол (0,7 М) в безводному СНІСМ. Тіофосфатні зв'язки впроваджували сульфируванням за допомогою 0,1 М розчину гідриду ксантану в 1:1 суміші піридину/СНзСМ протягом З хвилин часу контакту. В якості окислюючого агента для отримання фосфодіестерних міжнуклеозидних зв'язків використовували 2095 розчин трет-бутилгідропероксиду в СНзСМ, що містить 695 води, протягом 12 хвилин часу контакту.
Після складання необхідної послідовності цианоетил-фосфатні захисні групи знімали за допомогою 20 95 діетиламіну в толуолі (06./06.) протягом 45 хвилин часу контакту. Зв'язані з твердою підкладкою АБО суспендували у водному розчині аміаку (28-30 мас. 95) і нагрівали при 55"С протягом б годин. Потім відфільтровували не зв'язані АБО і випарювали аміак кип'ятінням. Залишок очищали рідинною хроматографією високого тиску на сильній аніонообмінний колонці (ЗЕ Неайпсаге Віозсіепсе, Зоцйгсе 300), 30 мкм, 2,54 х 8 см, А-100 мМ ацетату амонію в 30 96 водному СНЗСМ, В-1,5 М МавВг в А, 0-40 95 В за 60 хв., швидкість потоку 14 мл хв-1, А - 260 нм). Залишок обезсолювали за допомогою ВЕРХ на зворотньо-фазовій колонці з отриманням заданих АБО з виділеним виходом 15-3095 щодо початкового завантаження на тверду підкладку. АБО характеризували за допомогою іон-парної ВЕРХ, поєднаної з МС-аналізом на системі Адіїепі 1100 М50.
Таблиця 34
АБО, які містять фосфодіестер-зв'язаний кон'югат сСаІМАсз-2 в 5'-положенні, спрямовані на ЗКВ- 1 . . ши , Розрахункова ІСпостережувана| 5ЕО ІЮ
СаіМАсз-да-ойАдво Гке"СквАвавОСав Гав'"СавАвв Т ав
Нижні індекси: "е" означають 2-МОЄЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-0-2- дезоксирибонуклеозид; "К" означає 6'-(5)-СНз біциклічний нуклеозид (наприклад, СЕЮ; "5" означає тіофосфатні міжнуклеозидні зв'язки (Р5); "о" означає фосфодіестерні міжнуклеозидні зв'язки (РО); і "о" означає -О-Р(-Ш0ОХОН)-. Верхній індекс "т" означає 5-метилцитозини.
Структура СаІМАсз-2а показана у Прикладі 37.
Приклад 42: Загальний спосіб отримання АБО, що містять кон'югат саіМАсз-3 в 5'- положенні, міа твердофазним методиками (отримання І5ІЗ 661166)
Синтез І5ЗІ5 661166 виконали такими-саме способами, як представлені в Прикладах 39 та 41.
ІБІЗ 661166 являє собою 5-10-5 МОЄ гепмер, в якому 5'-положення містить кон'югат
СаіМАсз-3. Це АБО характеризували за допомогою іон-парної ВЕРХ, поєднаної з МС-аналізом на системі Адіїепі 1100 М50.
Таблиця 34а
АБО, що містить кон'югат СаІМАсз-3 в 5'-положенні через гексиламіно- фосфодіестерний лінкер, спрямоване на Маїаї-1 . . ов , Кон'югат | Розрахун-| Спостере- овівне| Послідоеністьвдєлог) | КО овамаса жувана маса РЕО о МО 5'-СаіМАсз-Зао"СевСевСЗев ГезСев 661166 |"СавАвдвАвз(СЗавСтав" Сов Гав ГавАвдвСав 5'-саіМАсз-3І 8992,16 8990,51 828
СіезАезАез Те Те
Нижні індекси: "е" означає 2-МОЄЕ модифікований нуклеозид; "а" означає рВ-0-2- дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатні міжнуклеозидні лінкери (РБ5); "о" означає фосфодіестерні міжнуклеозидні лінкери (РО); і "о" означає ОР(-ФОХОН)-. Верхній індекс "т" означає 5-метилцитозини. Структура "5'-СаІМАсз-За" показана в Прикладі 39.
Зо Приклад 43: Дозозалежне дослідження фосфодіестер-зв'язаного саіІМАсз-2 (див. Приклади 37 і 41, Вх являє собою аденін) у 5'-кінця, спрямованого на 5КВ-1, іп мімо
ІБІЗ 661134 (див. Приклад 41), що містить фосфодіестер-зв'язаний кон'югат саІМАсз-2 у 5'- кінця, відчували в дозозалежне дослідженні на антисмислове інгібування 5КВ-1 у мишей.
Неспарені ІБІ5 440762 і 651900 (кон'югат (аіМАсз-1 у 3-кінця, див. Приклад 9) включені в дослідження для порівняння та описані раніше в Таблиці 17.
Лікування
Шоститижневим самцям мишей Ваїр/с (Часкхоп І арогаїогу, Бар-Харбор, штат Мен) ввели одноразову підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, сполуки ІБІ5 440762, 651900, 661134 або РВ5 в якості контрольного зразка. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин.
Мишей приспали через 72 години після останнього введення для визначення рівнів мРНК ЗКВ- 1 в печінці за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК
КІВОСКЕЕМО (Моїесшаг Ргобев, Іпсо. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами. Рівні
МРНК ЗКВ-1 визначали відносно загальної РНК (за допомогою Кіродгееп), потім нормалізували до контрольного зразка, обробленого РВ5. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК 5КВ-1 для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразка, обробленого РВБ, і позначені як «96 РВ5". ЕДоовимірювали такими-саме способами, як описано раніше, і ці значення представлені нижче.
Як показано в Таблиці 35, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні мРНК
ЗАВ-1 дозозалежним чином. Дійсно, антисмислові олігонуклеотиди, містять фосфодіестер- зв'язаний кон'югат СаіІМАсз-2 у 5'-кінця (І5І5 661134) або кон'югат саїІМАсз-1, зв'язаний у 3'-кінця (ІБІЗ 651900), демонструють значне поліпшення ефективності, порівняно з неспареним антисмисловим олігонуклеотидом (І5ІЗ 440762). Крім того, ІЗІ5 661134, який містить фосфодіестер-зв'язаний кон'югат СаіМАсз-2 у 5-кінця, був настільки ж ефективним, як І5ІЗ 651900, який містить кон'югат саІМАсз-1 у 3'-кінця.
Таблиця 35
АБО, які містять саіМАсз-1 або саіМАсз-2, спрямовані на 5КВ-1
РВ5 17707771777717111700 ЇЇ -1Ї11111-1111 44076212169 2,58 Без кон'югату 823 651900 0,26 3" СаМАсз-1 824 7 | 8 02 | 86 Ф 661134 0,25 Б" баімАсз-2 827 7 ЇЇ 6
Структури 3' саІМАсз-1 і 5 СаіМАсз-2 описані раніше у Прикладах 9 і 37.
Фармакокінетичний аналіз (ФК)
ФК для АБО з групи високої дози (7 мг/кг) досліджували та оцінили таким-саме чином, як описано в Прикладі 20. Зразки печінки подрібнили та екстрагували за стандартними протоколами. Ідентифікували метаболіти повної довжини 661134 (5' сзаІМАсз-2) і ІЗІ5 651900 (3'
СаіМмАсз-ї1) і підтвердили їх маси за допомогою мас-спектрометричного аналізу високої роздільної здатності. Результати показали, що основний метаболіт, виявлений для АБО, що містить фосфодіестер-зв'язаний кон'югат саіМАсз-2 у 5'-кінця (І5БІЗ 661134), являв собою І5І5 440762 (дані не показані). Не спостерігали ніяких додаткових метаболітів у виявляємій кількості.
На відміну від нього, для АБО, що містить кон'югат СаіМАсз-1 у 3'-кінця (І5ІЗ5 651900), спостерігали додаткові метаболіти, аналогічні тим, які описані раніше в Таблиці 23а. Ці результати дозволяють припустити, що наявність фосфодіестер-зв'язаного кон'югату саІМАсз-1 або СаІМАсз-2 може покращувати ФК профіль АЗО без погіршення їх ефективності.
Приклад 44: Вплив РО/РБЗ лінкерів на антисмислове інгібування АБО, що містять кон'югат
Зо СаіМАсз-1 (див. Приклад 9) у 3"-кінця, спрямованих на ЗКВ-1
ІБІЗ 655861 і 655862, містять кон'югат сзаіМАсз-1 у 3-кінця, кожний з яких спрямований на
ЗАВ-1, випробували в дослідженні одноразового введення на їх здатність інгібувати 5КВ-1 у мишей. Початкову неспаровану сполуку, ІЗІ5 353382, включили в дослідження для порівняння.
Ці АБО являють собою 5-10-5 МОЄ гепмери, в яких геп-область містить десять 2'- дезоксирибонуклеозидів, і кожна область крил містить п'ять 2'-МОЕ модифікованих нуклеозидів.
Ці АБО отримали такими-саме способами, як показано раніше в Прикладі 19, і вони описані нижче в Таблиці 36.
Таблиця 36
Модифіковані АБО, містять кон'югат СаІМАсз-1 у 3"-кінця, спрямовані на 5КВ-1 353382 Сев"Сев Тез Гев'"СевАвдеСав Гав'"СавАвв ГавСтазАвв - ' вв тає Тає ТеєтОСеєтСеєТесТе Повністю РБ, без кон'югату 829 тав Га Гев'"Сев"С ев Т ев І еоАао-СЯ аіМмАсз-1 а СаІМАсз-1 655862 Сев"Сео Гео Гео"СеоАазОав Гав'"СавАвв ГазСіавзАав Суміш РБ/РО З кон'югатом тав Га Гео"Сево"Сев Тез І еоАао-СЯ аіМмАсз-1 а СаІМАсз-1
Нижні індекси: "е" означає 2-МОЄЕ модифікований нуклеозид; "а" означає рВ-0-2- дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатні міжнуклеозидні лінкери (РБ5); "о" означає фосфодіестерні міжнуклеозидні лінкери (РО); і "о" означає ОР(-ФОХОН)-. Верхній індекс "т" означає 5-метилцитозини. Структура "СаІМАсз-1" показано в Прикладі 9.
Лікування
Шоститижневим самцям мишей Ваїр/с (даскзоп І арогагогу, Бар-Харбор, штат Мен) ввели одноразову підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, сполуки «515 353382, 655861, 655862 або РВ5 в якості контрольного зразка. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин.
Перед лікуванням, а також після останньої дози у кожній миші брали кров і аналізували зразки плазми. Мишей приспали через 72 години після останнього введення для визначення рівнів
МРНК ЗКВ-1 в печінці за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення
РНК КІВОСКЕЕМФ (Моїесшіаг Ргоревз, Іпс. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами.
Рівні мРНК 5КВ-1 визначали відносно загальної РНК (за допомогою Кіродгееп), потім нормалізували до контрольного зразка, обробленого РВ5. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК 5КВ-1 для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразка, обробленого РВ5, і позначені як «95 РВБ".
ЕДвовимірювали такими-саме способами, як описано раніше, і ці значення представлені нижче.
Як показано в Таблиці 37, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні МРНК
ЗАВ-1 дозозалежним чином, у порівнянні з контрольним зразком, обробленим РВ5. Дійсно, антисмислові олігонуклеотиди, містять кон'югат сзаіМАсз-1 у 3-кінця (І5І5 655861 і 655862), демонструють значне посилення ефективності, порівняно з несполученим антисменсним олиіїонуклеотидом (І5І5 353382). Крім того, І5БІ5 655862 зі змішаними РБ/РО лінкерами демонструє посилення ефективності, порівняно зі сполукою, що містить тільки Р (ІБІ5 655861).
Таблиця 37
Вплив РО/РЗ лінкерів на антисмислове інгібування АБО, які містять кон'югат саІМАсз-1 у 3'- кінця, спрямованих на 5КВ-1
Доза Рівні мРНК ЕдДрво с.
ІБІЗ Мо (мг/кг) | 88В-1 (925 РВ5 (мг/кг) Хімізм ЗЕО І МО
РВЗ | 0 | 700 ЇЇ - ЇЇ Щщ- БЮ Щ щщЩ її 76,65 (вихідна) Бо, 40 10,4. | Повністю Р, без кон'югату 829 24,95 с Повністю РЗ з кон'югатом 14,80 69,57 45,78 Суміш РЗ/РО з кон'югатом 655862 19,70 19. |дамАсз- 830 12,90
Рівні трансамінази печінки, аланін-амінотрансферази (АЇТ) та аспартат-амінотрансферази (А5Т) у сироватці вимірювали щодо мишей, ін'єкованих сольовим розчином, використовуючи стандартні протоколи. Оцінили також масу органів. Результати показують, що не спостерігали будь-якого збільшення рівнів трансамінази (Таблиця 38) або маси органів (дані не показані) у мишей, оброблених АБО, порівняно з РВ5 контролем. Крім того, АБО зі змішаними РБЗ/РО лінкерами (ІЗІ5 655862) демонструє схожі рівні трансамінази, порівняно зі сполукою, що містить тільки РЗ (І5ІЗ 655861).
Таблиця 38
Вплив РО/РБ5 лінкеров на рівні трансамінази АЗО, які містять кон'югат заїІМАсз-1 у 3--кінця, спрямованих на 5КВ-1
ІБІЗ Мо | Доза (мг/кг) | АГ-Т (од./л). | АЄТ (од./л) 5ЕО Ю МО
РВ5 ЇЇ 01 2855 | 65 | Д- |! 5025 | 89 (вихідна) Повністю Р, без кон'югату | 829 бооеви Повністю 75 Зайлог 539
Приклад 45: Отримання РЕР ефіру, Сполуки 11ба ії кт Аня сс год вас, Не
Ос де вад: пе ри Кх ЕЮАє, МАСНІ
Її иа За; пе он ен о «Ме дев тов: не? водять ДИТ і. 1 ПН Нет пон Ява: пе -О ЗодЕкое 7 і
Я Ос
Ї хм виб ую Оде око
Ж Ас Я я г ря ям Ка
ОА ном, де ОА рт
Шев я С яку ВД. ВЕР Са й зи
Аобн а сн пи а палала Аа Ал інь ДЕ няня нн, дить и : сн о ен Ок МА дич МО дсеМми па, , їх зух ен «Ай те дян | х
ТоБа: пе Спопука 90 деку Во
Мк па ее тора - нм денс тт о
Ас
Нюх не
НЕНК ве и
ОА ї; . вок Аа тю
Оле «Од я Кі се Ин ' х. нати геа дит ма-мчі, Но Кен ; та НАТО ІНК А, плете тттетстт р ді «тут тиф щи . І ка кехекхєкскскеккккскскесксккскоксксєсссос фік» мес, Одес АсСНМ хв й -т я о я . о й сей в ї нова Ж Ї наж чав я дит - а М те 7 м ку .
ДЕ ся В ей б (6.
АсНМ до
ЗОВ; пае
Зп
Ав с ЦИ а ке си Во ни тк «сх
Со нова Ст 7 7щ--я оцінні е м н хну їм обуви Її. Дитя щно. ; ден х п І зро
Од од по то дало ви ден ЩА
ТОВ пе в
ТОВ пе З
Би рас
М и До чо деНМО--о о ово НС ФС дей 1088; пе Ом. МеОНн рот хуй х 1авроашу 0 со га. жк не пи ВЕ коти ит юн Й ден хіп тя МН а о
Одес «Одес щк Її К и . Р і-ї деотуоХ и о ( денМ
ТО пе в З
ТО9Б; пе
САс
Її
Ас - Ас мое
АН шк, сяк 3
ОАЄ Од отит
КС мо н ку
АБО ня ж а ЧА |.
Ен т и
РЕРТЕА, ОМЕ, ско бо и друг САС ут ОА і х пт --йо па р ШИ ЧЕ м НН; това ДЕоят ит о; денМ йо та о Е ші я
Е КЕ
Сполуку 4 (9,5 г, 28,8 ммоль) обробили окремо сполукою 10За або 1035 (38 ммоль) і ТМ5ОТІ
(0,5 екв.), і молекулярними ситами в дихлорметані (200 мл), і перемішували протягом 16 годин при кімнатній температурі. Потім органічний шар відфільтрували через целит, потім промили бікарбонатом натрію, водою і насиченим сольовим розчином. Потім відокремили органічний шар і висушили над сульфатом натрію, відфільтрували та упарили при зниженому тиску.
Отриману маслянисту речовину очистили хроматографією на силікагелі (2 95-10 95 метанол/дихлорметан) з отриманням сполук 104а і 104р з виходом 280 95. Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуки 104а і 1046 обробили в тих-саме умовах, що і сполуки 100а-4 (Приклад 47), з отриманням сполук 105а і 105р з виходом 290 95. Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуки 105а і 1056 окремо обробили сполукою 90 при тих-саме умовах, що і сполики 901а- а, з отриманням сполуки 10ба (8095) і 1060 (20965). Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуки 10ба і 106605 обробили в тих-саме умовах, що і сполуки 9ба-й (Приклад 47), з отриманням сполуки 107а (60 90) і 1076 (20 95). Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуки 107а і 10765 обробили в тих-саме умовах, що і сполуки 97а-й (Приклад 47), з отриманням сполук 108а та 1086 з виходом 40-60 9о. Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуки 108а (6095) і 1085 (4095) обробили в тих-саме умовах, що і сполуки 100а-а (Приклад 47), з отриманням сполук 109а і 109р з виходом 280 95. Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуки 109а обробили в тих-саме умовах, що і сполуки 101а-4й (Приклад 47), з отриманням сполуки 110а з виходом 30-60 95. Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. Альтернативно, Сполука 11065 може бути отримана таким-саме чином, виходячи зі
Сполуки 1096.
Приклад 46: Загальний спосіб сполучення з РЕР ефірами (олігонуклеотид 111); отримання
ІБІ5 666881 (СіааІМАсз-10)
Синтезували та очистили 5'-гексиламино-модифікований олігонуклеотид за стандартними
Зо способами твердофазного отримання олігонуклеотидів. 5'-Гексиламіно-модифікований олігонуклеотид розчинили в 0,1 М розчині тетраборату натрію, рН 8,5 (200 мкл) і додали З еквіваленти обраного РЕР-естерифікованого кластеру СсСаІМАсз, розчиненого у ДМСО (50 мкл).
Якщо при додаванні розчину АБО ефір РЕР випадав в осад, то додавали ДМСО до переходу всього ефіру РЕР у розчин. Реакція була завершена приблизно через 16 годин перемішування при кімнатній температурі Отриманий розчин розбавили водою до 12 мл, а потім центрифугували при 3000 об./мін. у віддентровому фільтрі з відсіканням по масі 3000 Да. Цей прийом повторили два рази для видалення низькомолекулярних домішок. Потім розчин ліофілізували насухо і повторно розчинили в концентрованому водному розчині аміаку, і перемішували при кімнатній температурі протягом 2,5 годин, потім концентрували іп масио для видалення більшої частини аміаку. Сполучений олігонуклеотид очистили і обессолили за допомогою ОФ-ВЕРУХ, і ліофілізували з отриманням саїіМАсз сполученого олігонуклеотиду.
СН
І а 8Зе недо
У. ЇЇ вонм о Мо, кож КЗ
Сойбо о- Св ЧНх он сон ти тк
Зростають ди ту -- р 1, Е Борзтнив Буфер, ДМСУ денне Що пт ще
І ИН 5 юшвамовря о й о 5. МН, інддно кім ера я ій я Ї - нор дати с ко
АснМ ук
АБ лад ше: ее
Олігонуклеотид 111 зв'язаний з сСаіМАсз-10. Кластерна частина СаІМАсз групи кон'югату
СаіМмАсз-10 (СаІМАсз-104) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою-Р(-ОХОН)-Аа-Р(-ОХОН)-, як показано нижче в олігонуклеотиді (І5ІЗ 666881), синтезованому з СаіМАсз-10. Структура СаІМАсз-10 (СсаІМАсз-104-СМ-) представлена нижче: ноОоНн Н о о М. ,0 нок У
АснНМ ноон о о о о нок НВ мм рто-(см)--
АСНМ ноОНн М оо о нок Он
АсНМ
Вказаним загальним способом отримали І5І5 666881. Синтезували і очистили 5'- гексиламіно-модифікований олігонуклеотид, І5І5 660254, за стандартними способами твердофазного отримання олігонуклеотидів. ІБІЗ 660254 (40 мг, 5,2 мкмоль) розчинили в 0,1 М розчині тетраборату натрію, рН 8,5 (200 мкл) і додали З еквівалента РЕР ефіру (Сполука 110а), розчиненого в ДМСО (50 мкл). Ефір РЕР випав в осад при додаванні розчину АБО, тому треба додавання додаткової кількості ДМСО (600 мкл) для повного розчинення РЕР ефіру. Реакція була завершена через 16 годин перемішування при кімнатній температурі. Розчин розбавили водою до загального об'єму 12 мл, а потім центрифугували при 3000 об./мін. у віддентровому фільтрі з відсіканням по масі 3000 Да. Цей прийом повторили два рази для видалення низькомолекулярних домішок. Потім розчин ліофілізували насухо і повторно розчинили в концентрованому водному розчині аміаку, і перемішували при кімнатній температурі протягом 2,5 годин, потім концентрували іп масио для видалення більшої частини аміаку. Спряжений олігонуклеотид очистили та обессолили за допомогою ОФ-ВЕРХ, і ліофілізували з отриманням
ІБІ5 666881 з виходом 90 95 по масі (42 мг, 4,7 мкмоль).
СаіМАсз-10-сполучений олігонуклеотид
ІБІБ 660254 тіСвеАсе ТаеСаеАвотСа Та ТеєтСетОеєТеєТе Гексиламін 831
СваіМмАсз-1Оз-оАвдосСтев"Сев Геє Гев'"СевАвз дв Г ав
ІЗІ5 666881 тіавАв» ГазСіавАвв "Св Гав Гев'"Сев"Сев Тез Те ба!МмАсз 10
Заголовні букви вказують азотисту основу для кожного нуклеозиду, а "С означає 5- метилцитозин. Нижні індекси: "е" означає 2'-МОЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-О-2'- дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатний міжнуклеозидний лінкер (Р); "о" означає фосфодіестерний міжнуклеозидний лінкер (РО); ії "о" означає ОР(І:ОХОН)-. Групи кон'югату виділені жирним.
Приклад 47: Отримання олігонуклеотиду 102, який містить саіМмАсз-8
Ка ср ЯК ; ха - кан ки ин ет ри
Кк. ном Ся Мн ВаснМ т --ї - БА
НО я Її. ло Зтагнеї доокіЙ детаи |. так. дим дит о, ВІВ. лей Восчм (ТММ о 04 Мох й
НУ 3 ї "Ж я ит тх пттттттттттттттттт т фе ї РЕР-ТеЖ, РЕА. ДМА о Ї
З досі А ве
Вовнм ДАМ аа хв а те - БУВ пе - ий ото шї ні ве с-АЯ 7 ітць т М
ШК -к Те біде : - ит ї ик - не сржлх яв МА, тити : ко ТМЖОТЕ дк
І К: АОС ин ве птетеннттттннннннн Ж о т АНЯ З : х їі чар мем. у Але ей
ВЗ пе
Ва пи? вав: пік
З ахи 0 з їз САпо ЗА
Оле дя й ди Ж вп і. ит : й вс р ск Го кох і з їх с т. вия КА м АК Ти зи мі пон дом той з тМаотЕ Уоте З ! РІД, Ма 84, тах 4
Се
А а шк нн -
АсНМ ОА С Кум аз рда 938 Аню 0000 г а ще пчпннчкндннчннкннннюнннннсвю 000000 Кн у ди ло і и М нати, ЕЕ, ДМА води КУ МО т стае ' денк М Ї я
ОАсосодо о г 3 Її Нї сей т МОМ
ДК студ ит оо
АсНМ ет ї хв пи ія
ПЗ: пе ре
ЗМ пе, пн
Я лк, гаї
ЗБ пу, ть со
Аа и ас Її нях йон
АНЕо с юумв хіт Н Бсв-я МВТ, А, ДМА
САС пд а ши НИ ЧИ ші
С дей ди в ?
В пасинки - т "М Е Ти я р МНЕ
АСММ Що В Ї й а пОоМт
САС Од . я Є Ноя ї і се вд А я, нм Ка у.
Ак ть Дер Я ТО гою Ат денМ Дів сиве
У 5 оон
Зтоолеі, пї що
ВА пе, пт ще
ЧАиню, яри
ЯКО пед,
Се
КЕ п пото я и дії рі тру ух що)
БНО ех ї тт М а сек
ОАЕ коло р Ех зом.
Її мив ЕЙ яку, З чо доМмте
Аа іс щи "М 7 Гая МА ий ее с
АСНМ | н І, А кю у
Пе ее маг Що мі шоу Й, п мн обои ит ша о М ООН вові и ле
З ре, пе
ЗВО пн ей
За ня, її
ЗАЯ век. ех сс (й мом о
Мак) ; 4 З канони м о . НЕТ. СФЕ. дЯФА Й ик Море в-Я а
Чия ев пі Ай оон о п щ Я. їз дФукіяті тез оптика нчанннннкннн фо и и В руч т Я й са: нтй пи а вв З ех Ве чн не и
ВЯйянй, пе : її ще щен. І н Я 2 я "Ви ножі нт Сяє еОде Я ши ж кн КО АХ я Й. пі нм ев пит ся й -ї Б о
М й " 7 10 леї пе
ЗК я, ех
Та теж, ту
СА Кк ахе я дей чат Не а о А ЧИ ШЩ м ен нм ше ані Одес а В а а
Я. ЕК, А ща ЩО З Ж ой ЕЕБ-ТЯЖК, Дика,
МЕНЕ. ож ден ннитц нн. рт и з щ В
АКНМО . що н Ї но в І ма вет о г ав, ЖК. А и М їх вмч Зв леі, те бан ЗВ; ле. тео 3 101 твої, ке
Звір Е тей
Кк коду, й Ї ямка я Ву В Е й о З ра в-й в як Ак
Ол нн а шишки ї гу стр
Кн диня з Ко и я 1 и ЩІ АХ Н КУ дз ж її й ВН тя -- ця див
М. ! Її ж Р
Сех о епд о К ее їх п, : ев ск яки зт зоря ча ід лі, та
Арк ши й в дю, ки й зоба: пд, кт
ЗЕ лей, тех
Трьохкислотну сполуку 90 (4 г, 14,43 ммоль) розчинили в ДМФА (120 мл) і М, М- діізопропілетіламіні (12,35 мл, 72 ммоль). По краплях додали пентафторфеніл трифторацетат (8,Р9 мл, 52 ммоль) в атмосфері аргону і залишили реакційну суміш перемішуватися при кімнатній температурі протягом 30 хвилин. Додали Вос-діамін 9Та або 9160 (68,87 ммоль) разом з М, М-діізопропілетіламіном (12,35 мл, 72 ммоль) і залишили реакційну суміш перемішуватися при кімнатній температурі протягом 16 годин. Потім упарили ДМФА на »75 95 при зниженому тиску, а потім розчинили суміш в дихлорметані. Органічний шар промили бікарбонатом натрію, водою і насиченим сольовим розчином. Потім відокремили органічний шар і висушили над сульфатом натрію, відфільтрували та упарили при зниженому тиску до маслянистого залишку.
Отриману маслянисту речовину очистили хроматографією на силікагелі (2 95-10 95 метанол/дихлорметан) з отриманням сполук 92а і 925 з приблизними виходом 80 95. Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуки 92а або 925 (6,7 ммоль) обробляли 20 мл дихлорметану і 20 мл трифтороцтової кислоти при кімнатній температурі протягом 16 годин. Отриманий розчин випарували, а потім розчинили в метанолі та обробляли смолою ЮОМУЕХ-ОН протягом 30 хвилин. Отриманий розчин відфільтрували і упарили до маслянистої речовини при зниженому тиску з отриманням 85-90 95 виходу сполук 93За і 93р.
Сполуки 7 або 64 (9,6 ммоль) обробляли НВТИ (3,7 м, 9,6 ммоль) і М, М- діізопропілетиламіном (5 мл) у ДМФА (20 мл) протягом 15 хвилин. До суміші додали або сполуку 9За, або 935 (3 ммоль) і залишили перемішуватися при кімнатній температурі на 16 годин. Потім упарили ДМФА на »75 95 при зниженому тиску, а потім розчинили суміш у дихлорметані.
Органічний шар промили бікарбонатом натрію, водою і насиченим сольовим розчином. Потім відокремили органічний шар і висушили над сульфатом натрію, відфільтрували та упарили при зниженому тиску до маслянистого залишку. Отриману маслянисту речовину очистили хроматографією на силікагелі (5 90-20 95 метанол/дихлорметан) з отриманням сполук 9ба-а з виходом 20-40 95. Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуки 9ба-а (0,75 ммоль) окремо гідрирували на нікель Ренея протягом З годин в етанолі (75 мл). Потім каталізатор видалили фільтруванням через целит, а етанол видалили при зниженому тиску з отриманням сполук 97а-й з виходом 80-90 95. Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуки 23 (0,32 г, 0,53 ммоль) обробляли НВТИО (0,2 г, 0,53 ммоль) і М, М- діізопропілетиламіном (0,19 мл, 1,14 ммоль) у ДМФА (30 мл) протягом 15 хвилин. До суміші окремо додали сполуки 97а-4 (0,38 ммоль) і залишили перемішуватися при кімнатній температурі на 16 годин. Потім упарили ДМФА на »75 95 при зниженому тиску, а потім розчинили суміш в дихлорметані. Органічний шар промили бікарбонатом натрію, водою і
Зо насиченим сольовим розчином. Потім відокремили органічний шар і висушили над сульфатом натрію, відфільтрували та упарили при зниженому тиску до маслянистого залишку. Отриману маслянисту речовину очистили хроматографією на силікагелі (2 95-20 95 метанол/дихлорметан) з отриманням сполук 9в8а-а з виходом 30-40 9о. Дані РХМС та протонного
ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуку 99 (0,17 г, 0,76 ммоль) обробляли НВТИО (0,29 г, 0,76 ммоль) і М, М- діізопропилетиламіном (0,35 мл, 2,0 ммоль) у ДМФА (50 мл) протягом 15 хвилин. До суміші окремо додали сполуки 97а-4ї (0,51 ммоль) і залишили перемішуватися при кімнатній температурі на 16 годин. Потім упарили ДМФА на 275595 при зниженому тиску, а потім розчинили суміш в дихлорметані. Органічний шар промили бікарбонатом натрію, водою і насиченим сольовим розчином. Потім відокремили органічний шар і висушили над сульфатом натрію, відфільтрували та упарили при зниженому тиску до маслянистого залишку. Отриману маслянисту речовину очистили хроматографією на силікагелі (5 95-20 95 метанол/дихлорметан) з отриманням сполук 100а-4 з виходом 40-60 905. Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуки 100а-а (0,16 ммоль) окремо гідрирували на 10 95 РаА(ОН)г/С протягом З годин у метанолі/етилацетаті (1:1, 50 мл). Потім каталізатор видалили фільтруванням через целит, а органічні розчинники видалили при зниженому тиску з отриманням сполук 101а-а з виходом 80- 90 95. Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Сполуки 101а-4 (0,15 ммоль) окремо розчинили в ДМФА (15 мл) і піридині (0,016 мл, 0,2 ммоль). По краплях додали пентафторфеніл трифторацетат (0,034 мл, 0,2 ммоль) в атмосфері аргону і залишили реакційну суміш перемішуватися при кімнатній температурі протягом 30 хвилин. Потім упарили ДМФА на »75 95 при зниженому тиску, а потім розчинили суміш в дихлорметані. Органічний шар промили бікарбонатом натрію, водою і насиченим сольовим розчином. Потім відокремили органічний шар і висушили над сульфатом натрію, відфільтрували та упарили при зниженому тиску до маслянистого залишку. Отриману маслянисту речовину очистили хроматографією на силікагелі (2 95--5 95 метанол/дихлорметан) з отриманням сполук 102а-4 з приблизними виходом 8095. Дані РХМС та протонного ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
ов в сл
Ге МОНЕ ОО ЧОМ ВМ фузпатних Ку ДАХ ВН ВАК хімно еЗпл
Ж: хмік вдномно Зпх нон о З ва т м З си за 5 А. в . Ї синя ї й в ху М Ко я дев а ГА вок Кі а м де г. плнннннн 0 оввччнанчнн ний пери ж КК ВЕ а Ом ен но -Кдюх ЩО аа ин ї 1 р І: Я
ОМ їх х хі с В х
Сн де др фев
Олігомерну сполуку 102, яка містить групу кон'югату заіМмАсз-8, отримали стандартними способами синтезу олігонуклеотидів проілюстровані у Прикладі 46. Кластерна частина СаіІМАсз групи кон'югату саїІМАсз-8 ((заіМАсз-84) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У кращому варіанті реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою-Р(-О)Х(ОН)-Аа-Р(-О)ХОН)-.
Структура СаЇІМАсз-8 (Са!МАсз-8а-СМ-) представлена нижче: нооНн о о о отем нота а ММ
АснМ о о он о но мимо -Ї(см|)- оо МТМ Н Н но 4 Н 2 но
АснМ ноОн о олотНи М о нота а М
АсНМ .
Приклад 48: Отримання олігонуклеотиду 119, який містить саіМАсз-7 лоцов до бде ! І еВ й соня . : я 5 коки СТВО ДЖ шою Ал ННовя 0 вЩоНею у
З - 0 ВМНоВеЕ М І Не, Мас, ЕКО йссі ще ми йо чне АДМ я і Зо не
МО дк. г шк МЕТ, ВКА во ОА Яся пк к--а ср по А-кмнову дме док, ДУ ж водити гі пек пи : А - аснк З а 5 че де що ма
Ав Ас
Са в Я в
АСНМ З К мой З 1 5 ря нн М я дод Клея зи шия онов
НВ КЕ --
Е з ера й
ВгссМю Урни
ГКУ а і 2 миЖ на уки жатт в я, НН а доб ин дню " -
Ас АС і
Ра, Не. іш а док а 114 ню, део-М те шо: а
Аонм й 7
Ме Ове ши нео кю Ви вен й чі
Ас Ове їв н
Ї 4 і
НЕТ, БІБЕА, дме де од доня З 9 Й з пн де Хот, ра т лова
Вена кий з Ї м ті Г поли з За рих дод Оле ча й о оз Є
В дея тини Н оза донМ й в
Сполуку 112 синтезували способом, описаним в літературі (). Мед. Спет. 2004, 47, 5798- 5808).
Сполуку 112 (5 г, 8,6 ммоль) розчинили в 1:1 суміші метанол/етилацетат (22 мл/22 мл).
Додали гідроксид паладію на вуглеці (0,5 г). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі в атмосфері водню протягом 12 годин. Реакційну суміш відфільтрували через шар целиту і промили цей шар 1:11 сумішшю метанол/етилацетат. Фільтрат і промивні розчини об'єднали і концентрували насухо з отриманням Сполуки 105а (кількісно). Структуру підтвердили за допомогою РХМС.
Сполуку 113 (1,25 м, 2,7 ммоль), НВТИ (3,2 м, 8,4 ммоль) і СІЕА (2,8 мл, 16,2 ммоль) розчинили в безводному ДМФА (17 мл) і реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 5 хвилин. До цієї суміші додали розчин Сполуки 105а (3,77 м, 8,4 ммоль) у безводному ДМФА (20 мл). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом б годин. Розчинник видалили при зниженому тиску з отриманням маслянистої речовини.
Залишок розчинили в СНесСі» (100 мл) і промили насиченим водним розчином Мансоз (100 мл) і насиченим сольовим розчином (100 мл). Органічну фазу відокремили, висушили (Маг5Ох), відфільтрували і випарили. Залишок очистили сілікагелевою колонковою хроматографії та елюїровали від 10 до 20 96 МеОН у дихлорметані з отриманням Сполуки 114 (1,45 м, 30 Об).
Структуру підтвердили аналізом РХМС та "Н ЯМР.
Сполуку 114 (1,43 г, 0,8 ммоль) розчинили в 1:1 суміші метанол/етилацетат (4 мл/4 мл).
Додали паладій на вуглеці (вологий, 0,14 г). Реакційну суміш продували воднем і перемішували при кімнатній температурі в атмосфері водню протягом 12 годин. Реакційну суміш фільтрували через шар целіту. Шар целіту промили метанолом/етилацетатом (1:1). Фільтрат і промивні розчини об'єднали і випарували при зниженому тиску з отриманням Сполуки 115 (кількісно).
Структуру підтвердили за допомогою аналіза РХМС і 'Н ЯМР.
Сполуку 8За (0,17 г, 0,75 ммоль), НВТИ (0,31 г, 0,83 ммоль) і СІЕА (0,26 мл, 1,5 ммоль) розчинили в безводному ДМФА (5 мл) та реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 5 хвилин. До цієї суміші додали розчин Сполуки 115 (1,22 м, 0,75 ммоль) у безводному ДМФА і реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 6 годин.
Зо Розчинник видалили при зниженому тиску, а залишок розчинили в СНеСі». Органічний шар промили насиченим водним розчином МанНсоз і насиченим сольовим розчином, і висушили на безводному Маг50О», та відфільтрували. Органічний шар концентрували насухо, а отриманий залишок очистили сілікагелевою колонковою хроматографією та елюїровали від З до 15 95
Меон у дихлорметані з отриманням Сполуки 116 (0,84 г, 61 95). Структуру підтвердили аналізом РХМС та "Н ЯМР.
АгО ве її М се , ' - псом вий
З 4 ї вон, де рд т о о ків ЕЮАє, МОН їх а ро о Ж Шк
Що п доска но ий и М, шемА ШК М і З зе ти денм м я.
І а т до) ОА и жено мод й
От тки т 4417 денм
Асо Ах їх 2 н с Е ко КД ня : ком з і во, я
РЕБ-ТОР, ДМА, Рут дозво В З а ї Ї ! ково тю ДН вен 5 а" ? з 1 шко Оле фони
У пом 118
ДИС. Зх ек рен н я Му с Я" денм
Сполуку 116 (0,74 г, 0,4 ммоль) розчинили в 1:1 суміші метанол/етилацетат (5 мл/5 мл).
Додали паладій на вуглеці (вологий, 0,074 р). Реакційну суміш продували воднем і перемішували при кімнатній температурі в атмосфері водню протягом 12 годин. Реакційну суміш фільтрували через шар целіту. Шар целіту промили метанолом/етилацетатом (1:1).
Фільтрат і промивні розчини об'єднали і випарували при зниженому тиску з отриманням сполуки 117 (0,73 м, 98 95). Структуру підтвердили за допомогою аналіза РХМС і"Н ЯМР.
Сполуку 117 (0,63 м, 0,36 ммоль) розчинили в безводному ДМФА (3 мл). До цього розчину додали М, М-діізопропілетиламін (70 мкл, 0,4 ммоль) пентафторфенілу трифторацетат (72 мкл, 0,42 ммоль). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 12 годин і вилили в насичений водний розчин МансСоОз. Суміш екстрагували дихлорметаном, промили насиченим сольовим розчином і висушили на безводному Маг25О4. Дихлорметановий розчин концентрували насухо та очистили сілікагелевою колоночною хроматографією, та елюїровали від 5 до 1095 МеоН у дихлорметані з отриманням сполуки 118 (0,51 г, 79 95). Структуру підтвердили аналізом РХМС і'"Н'Н "Е ЯМР. о ЯЗа
С овею Б О-в оно МН ом ї. Боржжній Фуфіро ДИ. НН Вл. кино ви
Щ. банк важшнокняано тро но он г х -ш--в пред Ж ія ї їх 4 нон льно ій й
Ї но он о З ео о дики ук ий дю Я Ж, Де стру пкттову нос -? т "щщ ЩЕ М и в лен ай ! -4 но Т г
Ї но-слю ЦЯ Й з 11
ДОВБНЯ
Олігомерну сполуку 119, яка містить групу кон'югату саіМАсз-7, отримали за загальним способом, представленим у Прикладі 46. Кластерна частина СаЇМАсз групи кон'югату СсСаіІМАсз-7 (СаІМАсз-7а) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(І-ФОХОН)-Ао-РІ-О)(ОН)-.
Структура СаЇІМАсз-7 (СаІМАсз-7а-СМ-) представлена нижче: ноон о о оо
АсНМ о о о нот отит М ме то-Тем)-
АсНнМ о ноон г о нот отит о
АснМ ,
Приклад 49: Отримання олігонуклеотиду 132, який містить саіМмАсз-5 ну бою Воє . не ню є не Вос З - М що я Ко о ї й кб - в а їн З щі Нами ку я ЯМ я ще 4 М й
І ї Мт Її оо че «ан
Восу шину МН не, В д
Кам | г
Що; НИ, Тед 7 Он, НО й діжа, ве НК дат Мем, те Вк. 120 чо йос тв є 123
Сполуку 120 (14,01 г, 40 ммоль) і НВТИ (14,06 г, 37 ммоль) розчинили в безводному ДМФА (80 мл). Додали триєтиламін (11,2 мл, 80,35 ммоль) і перемішували протягом 5 хвилин.
Реакційну суміш охолодили на крижаній бані і додали розчин сполуки 121 (10 г, ммоль) у безводному ДМФА (20 мл). Додали додаткову кількість триетиламіну (4,5 мл, 32,28 ммоль) і реакційну суміш перемішували протягом 18 годин в атмосфері аргону. Реакцію контролювали за
ТШХ (етилацетат:гексан; 1:11; К-0,47). Розчинник видалили при зниженому тиску. Залишок розчинили в ЕІОАс (300 мл) і промили 1 М розчином Манзох (3 х 150 мл), насиченим водним розчином Мансо»з (З х 150 мл) і насиченим сольовим розчином (2 х 100 мл). Органічний шар висушили над Ма»5О4. Висушуючий агент видалили фільтруванням, а органічний шар концентрували на ротаційному випарнику. Неочищену суміш очистили сілікагелевою колонковою хроматографією і елюїровали за допомогою 35-50 96 ЕЮАс у гексані з отриманням сполуки 122 (15,50 м, 78,13 95). Структуру підтвердили аналізом РХМС та "Н ЯМР. Маса Іп/2 589,3 |М--НІУ.
До охолодженого розчину сполуки 122 (7,75 г, 13,16 ммоль), розчиненої в метанолі (15 мл), додали розчин ГІОН (92,15 ммоль) у воді (20 мл) і ТГФ (10 мл). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 45 хвилин і контролювали за ТШХ (ЕАс: гексан; 1:1).
Реакційну суміш концентрували до половини об'єму при зниженому тиску. Залишився розчин охолодили на крижаній бані і нейтралізували додаванням концентрованої НСІ. Реакційну суміш розбавили, екстрагували ЕІЮАсС (120 мл) і промили насиченим сольовим розчином (100 мл). При
Зо стоянні протягом ночі утворилася і висвітлилася емульсія. Органічний шар відокремили, висушили (Маг25О, відфільтрували і випарували з отриманням Сполуки 123 (8,42 р).
Надлишкову масу ймовірно обумовлює залишкова сіль... РХМС узгоджувався зі структурою.
Продукт використовували без додаткового очищення. Мол. маса, розрахункова: 574,36; мол. маса, знайдена: 575,3 МАНІ".
сек Б о
А в ся і
З - Я БУОМ ВК ООН дитяти рук у
Ї р ок 5 и - о й ом ди тк, Я я НО те у іш КО " В РЕ ! З жи ож ка КЕ ї ІА а с ЖЖ і лий сн Кк ех ПОРО оте ссте остео ІВ осо ОЙ х ем й С Кн дих
Топи кмлпям. ві дес Хкд, о є ' о
Та їз5 ел з
ШЩМЛлЛК
Сполуку 126 синтезували способом, описаним у літературі (У. Ат. Спет. ос. 2011, 133, 958-963). нш
М с - н о З ; ; А МО Кс то Мо СЕООН а пн Анрі В з ке сту тить СКЛ гора ! НО і во зо
ННІ, НЕ А, б з З ем
Бур, бор. дене Її
НМ. 1-7
Воє есрооге що
Са ММ к де ОАЄ і Ії
Ко З с ко ЖК я М : В ї ї З Ак хлор 7 А бо и з
Кк «Кові МК Х Ї ная те В че кр ее з" дон и ден У 5 ! НАТО, НОВЕ НЕК, дмех
Кто я я Ї
СЕС саме чай доб де їі
Ох о те у пи Ян я мою от и ша Ті: дечМ 1
МА ща - о яю
ОК в НЕ мо ОА 4 їй соті г Й
АК вили перттчдєти иттяй фен - й Ї оз ї
Дехто т х шо ся лок Бо
АгО ЮАЄ
То уні а М дез-нх тт
АсНМ в 12в ле Оле
ХК х до, о дж ян ід
Що Те
АеНМ у
МН яв ОСТ щи М ної ші й нк шен «7 т в шик лоо- Крит с т ? ІЗ лснМ о я део Ой хо. і ко Жди н дво Сас аснм А тк асо Хо. Ци
Її Є деНМ х
Ме
ВЕР-теК, ДКРА, Рут пит т с КЕ коз Оде Ж Я. Ж. питннф ут ин А я
Кк рр ут доски ит о Я й о КО дню дон и ши! шк р і т ден 5 їм
Сполуку 123 (7,419 р, 12,91 ммоль), НОВІ (3,49 г, 25,82 ммоль) і сполуку 126 (6,33 м, 16,14 ммоль) розчинили в ДМФА (40 мл), а отриману реакційну суміш охолодили на крижаній бані. До суміші додали М, М-діїзопропилетиламін (4,42 мл, 25,82 ммоль), РуВор (8,7 м, 16,7 ммоль, потім
Вор-зв'язувальний агент (1,17 г, 2,66 ммоль) в атмосфері аргону Крижану баню прибрали і залишили розчин нагріватися до кімнатної температури. Реакція була завершена через 1 годину, за результатами ТШХ (ДХМ:МеОН:АА; 89:10:11). Реакційну суміш концентрували при зниженому тиску. Залишок розчинили в ЕІЮАс (200 мл) і промили 1 М Манзох (3 х 100 мл), насиченим водним розчином Мансо» (3 х 100 мл) і насиченим сольовим розчином (2 х 100 мл).
Відокремлену органічну фазу висушили (Маг5О54), відфільтрували і концентрували. Залишок очистили хроматографією на сілікагелевій колонці з градієнтом від 50 95 гексанів/ЕОАс до 100 956 ЕТОАс з отриманням Сполуки 127 (9,4 м) у вигляді білої пінистої речовини. Дані РХМС і
ІН ЯМР узгоджувалися зі структурою. Маса т/ 778,4 (МАНІ 7.
Трифтороцтову кислоту (12 мл) додали до розчину сполуки 127 (1,57 г, 2,02 ммоль) у дихлорметані (12 мл) і перемішували при кімнатній температурі протягом 1 години. Реакційну суміш випарували спільно з толуолом (30 мл) при зниженому тиску насухо. Отриманий залишок два рази спільно випарували ацетонітрилом (30 мл) і толуолом (40 мл) з отриманням Сполуки 129 (1,67 г) у вигляді трифторацетатної солі і використовували для наступної стадії без додаткової очистки. Дані РХМС і 'Н ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. Маса т/27 478,2 М.ННІ 7.
Сполуку 7 (0,43 м, 0,963 ммоль), НАТИ (0,35 г, 0,91 ммоль) НОАЇ (0,035 г, 0,26 ммоль) об'єднали і висушували протягом 4 годин Р2О5 при зниженому тиску в круглодонній колбі, а потім розчинили в безводному ДМФА (1 мл) і перемішували протягом 5 хвилин. До отриманої суміші додали розчин сполуки 128 (0,20 г, 0,26 ммоль) у безводному ДМФА (0,2 мл) і М, М- діізопропилетиламіні (0,2 мл). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі в атмосфері аргону. Реакція була завершена через 30 хвилин, за даними РХМС і ТШХ (7 95
Меон/дхм). Реакційну суміш концентрували при зниженому тиску. Залишок розчинили в ДХМ (30 мл) і промили 1 М Манзох (3 х 20 мл), насиченим водним розчином МанНсоз (3 х 20 мл) і насиченим сольовим розчином (3 х 20 мл). Органічну фазу відокремили, висушили над Маг50Оа,
Зо відфільтрували і концентрували. Залишок очистили колонковою хроматографією на силікагелі,
використовуючи 5-15 96 Мен у дихлорметані, з отриманням Сполуки 129 (96,6 мг). Дані РХМС і
ІН ЯМР узгоджувалися зі структурою. Маса т/: 883,4 Маг НІ".
Сполуку 129 (0,09 г, 0,051 ммоль) розчинили в метанолі (5 мл) у сцинтиляційній пробірці обсягом 20 мл. До суміші додали невелику кількість 10 95 Ра/С (0,015 мг) і продували реакційний посудину газоподібним Но. Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі ватмосфері Не протягом 18 годин. Реакційну суміш відфільтрували через шар целіту і промили шар целіту метанолом. Фільтрат і промивні розчини злили разом і концентрували при зниженому тиску з отриманням Сполуки 130 (0,08 м). Дані РХМС і 'Н ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. Продукт використовували без додаткового очищення. Маса Іп/2 838,3
ІМ--2НЕ.
У конічну круглодонну колбу об'ємом 10 мл додали сполуку 130 (75,8 мг, 0,046 ммоль), 0,37
М піридин/ДМФА (200 мкл) і мішалку. До цього розчину по краплях додали 0, М пентафторфенилтрифторацетат/ДМФА (100 мкл) при перемішуванні. За даними РХМС реакція була завершена через 1 годину. Розчинник видалили при зниженому тиску і розчинили залишок у СНеіз (- 10 мл). Органічний шар розділили між МанзоО»з- (1 М, 10 мл), насиченим водним розчином Мансоз (10 іл) ії насиченим сольовим розчином (10 мл), з кожним розчином по три рази. Органічну фазу відокремили і висушили над Маг505, відфільтрували і концентрували з отриманням Сполуки 131 (77,7 мг). РХМС узгоджувався зі структурою. Використовували без додаткового очищення. Маса іп/72 921,3 (МА2НІ".
ЩО он
Ії енд я : НО ення им В нотеен й чаю МОНЕ і
ГоМмоЮ нОо-еео-Єноють цк і і он у їх Бопитний буфер, ДУ НЕ АХ ківмномпа З
ТЯ пеннннннннннннннннннннтнтттттттттттттттттттттттттттттттня Вк , й н о
Ж дек меси кох тло НОСОВ ше М Я
Я. Вик ноднохівн. мив І - Нв: з у "нн нати З и х доНК Вис но он ! у 7 КЕ. о
АСНМ 0 ' 29 Кедя,
Олігомерну Сполука 132, яка містить групу кон'югату саїЇМАсз-5,отримали загальним способом, представленим у Прикладі 46. Кластерна частина саїІМАсз групи кон'югату СаіМАсз-5 (СаІМАсз-5а) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-Аа-Р(-ОХОН)-.
Структура СаІМАсз-5 (Са!МАсз-5а-СМ-) представлена нижче: но он о ово о
АСНМ т
МН о но он М о ни МН
АСНМ о но он о о МН юс -щ 5 б ро СМ З
АсНМ о ,
Приклад 50: Отримання олігонуклеотиду 144, який містить заіМАса-11 смт Епюв ота кА прмта Епос
М. М ВОМ. сжопа МАЮ Ми ЗВ дУквА, -й ю со ШОВК Копроваиня Мн то ТЕЖИКУ в 7 зн еВ ек ан Майже папининий О- щи.
Уляни хкюй інте я їв їм нюртов - гу й М ке я » А шк у то К бли ту і 7 ки - є с . 1 З 4 з м Сеть ча хи 0- - МЕТІ ІМЕА, дека У ший с Кк. й я а йо
Х
137
ПеЕнкю
ОМ - т. Вірш: дкевА . т н Г | З ІД Біідразуннлмва
Квлевух похктукних Ак, ОК. ши М ек я Каиавріпсяктиниих я. Ме ув нює 1ЯВІ - ОО дай Ки Я. Бики девтвосьсЯ (140)
МАТИ, ЯКА, ДМЬ й и: МАТИ, ПЕК люФА
Кавцевр: мнехлювний - Кант: зоготжений о а щен тає іх ям
Ще о Ї Езиює
Яр ек 2 М
Мт щ- о шт а,
Її я її
Кві них Ко я ННІ г тя СН МИ вто ей Х Кк ї
У о ех й ! д-у у її а 443 ! вч М ен яке, тло
Асо рАє н т ден дин о о Фошншя і о
Ася Ї в ші в о Ос 1. рір-овОдьна днк Мн прин о 484 Кайеро мраквчМй о А м Бе 2. ТАТО, ОКА, део ОАЄ КЕ о і дме, І | ! Ом
Жейвеум зскаіювний до 2-Х полян яти М М що ож
Ам її і З дод Од г в я т соколи ІН
АсНК 4 142
Синтез Сполуки 134. У колбу Меррифілда додали амінометилову смолу МІМАО (2,5 г, 450 мкмоль/р), яку промили ацетонітрилом, диметилформамідом, дихлорметаном і ацетонітрилом.
Смолу залишили набухати в ацетонітрилі (4 мл). Сполуку 133 попередньо активували в 100 мл круглодонній колбі шляхом додавання 20 (1,0 ммоль, 0,747 р), ТВТИ (1,0 ммоль, 0,321 р), ацетонітрилу (5 мл) і ОІЕА (3,0 ммоль, 0,5 мл). Цей розчин залишили перемішуватися на 5 хвилин, а потім додали в колбу Меррифілда при струшуванні. Суспензію залишили струшуватися на З години. Реакційну суміш злили, а смолу промили ацетонітрилом, ДМФА і
ДХМ. Заповнення нової смоли кількісно визначили для вимірювання абсорбції ОМТ катіона при 500 нм (коефіцієнт екстинкції - 76000) в ДХМ, яка склала 238 мкмоль/р. Смолу кепували триразовим суспендуванням в розчині оцтового ангідриду протягом десяти хвилин.
Сполуку 141, зв'язану з твердою підкладкою, синтезували багаторазовим повторенням способів твердофазного синтезу пептидів за допомогою Еітос. Взяли невелику кількість твердої підкладки і суспендували у водному розчині аміаку (28-30 мас.9У5) протягом 6 годин.
Розщеплену сполуку аналізували за РХ-МС і спостерігали, що маса узгоджується зі структурою.
Маса тп/: 1063,8 (МА2 НІ".
Сполуку 142, зв'язану з твердою підкладкою, синтезували способами твердофазного синтезу пептидів.
оо Од
І зн я
І: дея се вон вн ( З
Бе к а о сАе ; гео Й і і р
Що і ли: шко Мої ша де ВОВК чт, шо Кв синтвгатов ДНК о ! 7 Ям - 192. донні вне 3-й й доб) Оле -щ о Ї їж ю І о ню, я ім З доп юн я ще й в пт. шт в ОА г
НЕ ет
КВ і ех и як ! яз ло -дннь ит КІН яз дек НД ден 4 на он 3 х як ян т на Хо тет ит, ! Щі ву ден и но ан з ке і і ин з Й й - но-китня еднни ух но
МН. дон. Ся і ЩІ Ген т ; я і С а і от на- кидки, В МН | я цк Коен (см А АвоЇ
АсНМ ай т но он НІ
ЕК - теорі ї . г но-коднй вс м Я доня й г 44
Сполуку 143, зв'язану з твердою підкладкою, синтезували за допомогою стандартного твердофазного синтезу на ДНК синтезаторі.
Сполуку 143, зв'язану з твердою підкладкою, суспендували у водному аміаку (28-30 мас. 9б) і нагрівали при 55 "С протягом 16 годин. Розчин охолодили, а тверду підкладку відфільтрували.
Фільтрат концентрували, а залишок розчинили у воді та очистили за допомогою ВЕРХ на сильній аніонообмінній колонці. Фракції, що містять сполуку 144 повної довжини, злили разом і обессолили. Отриману СаїЇМАс4-11-сполучену олігомерну сполуку аналізували за допомогою
РХ-МС і спостерігали, що маса узгоджується зі структурою.
Кластерна частина аіМАс. групи кон'югату СаїЇМАса-11 (СаіМАс4-114) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(І-ОХОН)-Азч-
РІ-ФОХОН)-.
Структура саіМАса-11 (СаІМАса-114-СМ) представлена нижче:
но он ща о но у
МН
АснМ о но он о о юл ту н о
АСНМ Фу он о М (
Н
З М но он і) о о о н МН но ту а
АсНМ о о но он о о юлв вн
АснМ о
Приклад 51: Отримання олігонуклеотиду 155, містить СаіМАсз-б он о ак н о о те чно ветон 55; м. оон 2м маон о о тон 145 146
Сполуку 146 синтезували так, як описано в літературі (Апаїуїса! Віоспетівзігу 1995, 229, 54- 60).
Вт Я дих нт вес ув ; М Ї ! я вк о
З я С Мч М ; а У фе Дн би нитки з і - ЗЕ них
ТАКТ Я А : здодекулярніскаю о» МСЕ, хіт. ов демю чо М -й яв о я У у КУ. ге їх ско ке тю он
Ве. ВО. Я ен Зою
Не РИН ков ОД яти . а
ЕКасМмеОН АсНх «па НВО, ОКА, дьева, хівнат тре еко
Ас Оке 1 о н я в. ВНС ВИ, ВОМ
Ж м нд я ЛП КП,
ДИ сейнант вн и ТК Три п Я нт тк в ех Н К
КМ зв й
І. З і ой Х я :
Ше пиояколе «МН мо Ко и од и а А Мих вон М
Сполуку 4 (15 р, 45,55 ммоль) і сполуку 356 (14,3 грам, 57 ммоль) розчинили в СНеосСі» (200 мл). Додали активовані молекулярні сита (4 А, 2 м, порошкоподібні) і залишили реакційну суміш перемішуватися протягом 30 хвилин в атмосфері азоту. Додали ТМ5-ОТІ (41 мл, 22,77 ммоль) і залишили реакційну суміш перемішуватися при кімнатній температурі протягом ночі. Після завершення реакції суміш погасили, виливши в насичений водний розчин МанНсСоОз (500 мл) з подрібненим льодом (- 150 г). Органічний шар відокремили, промили насиченим сольовим розчином, висушили над Ма5О5, відфільтрували і концентрували до помаранчевої маслянистої речовини при зниженому тиску. Неочищений матеріал очистили сілікагелевою колонковою хроматографією і елюїровали 2-10 95 МеОнН СНесі» з отриманням Сполуки 112 (16,53 м, 63 обо).
РХМС і"Н ЯМР узгоджувалися з очікуваною сполукою.
Сполуку 112 (4,27 м, 7,35 ммоль) розчинили в 1:11 Меон/ЕюАс (40 мл). Реакційну суміш очистили пропусканням потоку аргону через розчин протягом 15 хвилин. Додали каталізатор
Перлмана (гідроксид паладію на вуглеці, 400 мг) і пропускали через розчин газоподібний водень протягом 30 хвилин. Після завершення (ТШХ, 1095 МеоОН СНесСі», і РХМС), каталізатор видалили фільтруванням через шар целіту. Фільтрат концентрували на ротаційному випарнику і швидко висушили під значним вакуумом з отриманням Сполуки 105а (3,28 м). Дані РХМС і 1Нн
ЯМР узгоджувалися з заданим продуктом.
Сполуку 147 (2,31 г, 11 ммоль) розчинили в безводному ДМФА (100 мл). Додали М, М- діззопропилетиламін (ОІЕА, 3,9 мл, 22 ммоль), потім НВТИ (4 г, 10,5 ммоль). Реакційну суміш залишили перемішуватися протягом «15 хвилин в атмосфері азоту. До цієї суміші додали розчин сполуки 105а (3,3 г, 7,4 ммоль) у сухому ДМФА і перемішували протягом 2 годин в атмосфері азоту. Реакційну суміш розбавили ЕАс і промили насиченим водним розчином
МансСоз і насиченим сольовим розчином. Органічну фазу відокремили, висушили (Мо95Ох4), відфільтрували і концентрували до помаранчевої сиропоподібної речовини. Неочищений матеріал очистили колонковою хроматографією і елюїровали 2-5 95 МеОН СНесСі» з отриманням сполуки 148 (3,44 г, 73 965). РХМС і"Н ЯМР узгоджувалися з очікуваним продуктом.
Сполуку 148 (3,3 г, 5,2 ммоль) розчинили в 1:11 Меон/ЕОАс (75 мл). Реакційну суміш очистили пропусканням потоку аргону через розчин протягом 15 хвилин. Додали каталізатор
Перлмана (гідроксид паладію на вуглеці) (350 мг). Через розчин продували газоподібний водень протягом 30 хвилин. Після завершення (ТШХ, 1095 МеоН у ДХМ, і РХМС), каталізатор видалили фільтруванням через шар целіту. Фільтрат концентрували на ротаційному випарнику і швидко висушили під значним вакуумом з отриманням Сполуки 149 (2,66 м). Дані РХМС
Зо узгоджувалися з заданим продуктом. Залишок розчинили в сухому ДМФА (10 мл) і відразу використали на наступній стадії. дво Се
Ге , - дес КК др дн, 4. АХ дво ОАЄ доня Ото ї і | о ; о і шо дачну о ЖЕ ко Ду в зт і доня зн о но 145 т
ЗЕ петлі дво ове о вв
МВТ. ОСОБА ДМА Хдлтитю ! сей зв
МНАх 150 дае пе - а пок в ї Я чо га Ї ть но еаОонЄ, Не АоО г доню ої й ех
Пк фри. є че диня кі ни ВК
МеОН, ЕюЮде дев Коен т пе доня зн 9 Ї шо яко й о о ї км
Має 7
Сполуку 146 (0,68 г, 1,73 ммоль) розчинили в сухому ДМФА (20 мл). До нього додали СІЕА (450 мкл, 2,6 ммоль, 1,5 екв) та НВТИ (1,96 г, 0,52 ммоль). Реакційну суміш залишили перемішуватися протягом 15 хвилин при кімнатній температурі в атмосфері азоту. Додали розчин сполуки 149 (2,6 м) у безводному ДМФА (10 мл). рН реакційної суміші довели до рН - 9-
10 додаванням ОІЕА (при необхідності). Реакційну суміш залишили перемішуватися протягом 2 годин при кімнатній температурі в атмосфері азоту. Після завершення реакції суміш розбавили
ЕОАс (100 мл) і промили насиченим водним раствором Мансоз, потім насиченим сольовим розчином. Органічну фазу відокремили, висушили над Мо5О5, відфільтрували і концентрували.
Залишок очистили сілікагелевою колонковою хроматографією і елюїровали 2-10 95 МеОНн
СНеСіІ» з отриманням Сполуки 150 (0,62 г, 20 95). РХМС і "Н ЯМР узгоджувалися з заданим продуктом.
Сполуку 150 (0,62 г) розчинили в 1:11 Меон/ЕЮАс (5 л). Реакційну суміш очистили пропусканням потоку аргону через розчин протягом 15 хвилин. Додали каталізатор Перлмана (гідроксид паладію на вуглеці) (60 мг). Через розчин продували газоподібний водень протягом 30 хвилин. Після завершення (ТШХ, 1095 Меон у ДХМ, і ЖХМС), каталізатор видалили фільтруванням (тефлоновий фільтр з перехідною канюлею шприца, 0,45 мкм). Фільтрат концентрували на ротаційному випарнику і швидко висушили під високим вакуумом з отриманням Сполуки 151 (0,57 г). Дані РХМС узгоджувалися з заданим продуктом. Продукт розчинили в 4 мл сухого ДМФА і відразу використали на наступній стадії. дю рАс
НЯ нн, а : веди дині ЖК ота Ї Б дини в
З в во р АенМ АЗ / о ї ї щи: я ОВ учити им, в "ча он доня ай тут Її ОО й ове
ЖЕО со АНТ з М 5 --о
ЕКР-ТаК, ПІКА, ДМА во ОА 9 ; у : кош. и мех, де Я ко Кам Кай т
МНАс
І
Аво ОАк х сно, г я ї - ; юр м т дитя Я
А ! С дин ре асню 53 й ре ї а ящОоМьЮ, й М ; МО ин ожтий пегесесесеететтссесесс гост м-н ран Шк та т, х йо ен
Мен, ЕАС ден КУ о ше й ОА й і її ї з б ЕМ ди моддньї - и, К
Чеде іа п Ове ще й З ; доо- КА дих, й й К дк СА вом а ї те еко го: їм орех їх РАМ - - 7 ї г поети гне кеш З М дит ню А ши Що її
РЕК А ро КЕО оч прю, дит ден з У но во в г е я і. он оди й т
МНАх й ї8-5
Сполуку 8За (0,11 г, 0,33 ммоль) розчинили в безводному ДМФА (5 мл) і додали М, М- діззопропилетиламін (75 мкл, 1 ммоль) і РЕР-ТФК (90 мкл, 0,76 ммоль). При зіткненні реакційна суміш стала пурпуровою і поступово змінила колір на помаранчевий протягом наступних 30 хвилин. Хід реакції контролювали за ТШХ і РХМСО. Після завершення утворення ефіру РЕР) додали розчин сполуки 151 (0,57 г, 0,33 ммоль) у ДМФА. рН реакційної суміші довели до рН - 9- 10 додаванням М, М-діїізопропилетиламіну (при необхідності). Реакційну суміш перемішували в атмосфері азоту протягом «- 30 хвилин. Після завершення реакції більшу частину розчинника видалили при зниженому тиску. Залишок розбавили СНеаСі» і промили насиченим водним розчином МансСоО»з, потім насиченим сольовим розчином. Органічну фазу відокремили, висушили над МБО», відфільтрували і концентрували до помаранчевоїо сиропоподібної речовини. Залишок очистили колонковою хроматографією на силікагелі (2-10 95 МеОН СНесСІг) з отриманням Сполуки 152 (0,35 г, 55 95). РХМС і "Н ЯМР узгоджувалися з заданим продуктом.
Сполуку 152 (0,35 г, 0,182 ммоль) розчинили в 1:11 МеОон/ЕюАс (10 мл). Реакційну суміш очистили пропусканням потоку аргону через розчин протягом 15 хвилин. Додали каталізатор
Перлмана (гідроксид паладію на вуглеці) (35 мг). Через розчин продували газоподібний водень протягом 30 хвилин. Після завершення (ТШХ, 1095 МеоН у ДХМ, і РХМС), каталізатор видалили фільтруванням (тефлоновий фільтр із перехідною канюлею шприца, 0,45 мкм).
Фільтрат концентрували на ротаційному випарнику і швидко висушили під значним вакуумом з отриманням Сполуки 153 (0,33 г, кількісно). Дані РХМС узгоджувалися з заданим продуктом.
Сполуку 153 (0,33 г, 0,18 ммоль) розчинили в безводному ДМФА (5 мл) при перемішуванні в атмосфері азоту. До нього додали М, М-діїізопропилетиламін (65 мкл, 0,37 ммоль) і РЕР-ТФК (35 мкл, 0,28 ммоль). Реакційну суміш перемішували в атмосфері азоту протягом «- 30 хвилин. При зіткненні реакційна суміш стала пурпуровою і поступово змінила колір на помаранчевий. рн реакційної суміші підтримували при рН - 9-10 додаванням додаткової кількості М, - діізопропілетиламіну. Хід реакції контролювали за ТШХ і РХМС. Після завершення реакції більшу частину розчинника видалили при зниженому тиску. Залишок розбавили СНесСі» (50 мл) і промили насиченим водним розчином МанНсСоОз, потім насиченим сольовим розчином.
Органічний шар висушили над МоБзО»5, відфільтрували і концентрували до помаранчевої сиропоподібної речовини. Залишок очистили колонковою хроматографією і елюїровали 2-10 95
Меон сСнНегсСіІ» з отриманням Сполуки 154 (0,29 г, 7995). РХМС і '"Н ЯМР узгоджувалися з заданим продуктом. я ще я нон о шо пап олетев щі нак пе тез
Й о дення ММ я тка 1 бмреснй рер. ДМСО, ном - ї в Кай М н 4. дейек надо канат ера дом Н о І та т В б-ки ї гом м я Й пе ект мо-мдкь-о ТЕ Мо і5к
Олігомерну Сполуку 155, яка містить групу кон'югату саіМАсз-6, отримали за загальним способам, представленим у Прикладі 46. Кластерна частина СаЇМАсз групи кон'югату сСаіМАсз-6 (СаІМАсз-6б4) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщепюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-Аа-Р(-ОХОН)-.
Структура СаІМАсз-6 (СаІМАсз-ба-СМ-) представлена нижче: нон о нота ог ВГ ноон АсНМ он о я нок о Кутя Кт ро-(ем)-З
АСНМ у о о
Н ноОНн с в)
АснНМ ,
Приклад 52: Отримання олігонуклеотиду 160, якиймістить саіМАсз-9 у АвОЮАє 2 робо а Х
М ; ік ото туу ек; таеоте, Бо Ас нн ноу
Ас нев АЮ 0000 нн у пн сне і і і ра ТТ І нхз БДдО
АсНМ СЮНІСНОСЇ, кввнатлтра ВО но) ТМООТЬ дк,
З 4 і деко СА Асо ОАс і ха Месн, вах яд
ОН а масло денм Ше
Та 15 део Оле п
НЕТ, дмем, БЮ о в. й Фосфітилювання оМтО. ї ха ать х АСММ о чаоМмт тн
М 358 на 4ї МО. з 0 сей д-к вс Од -7 0000 МЩеть
Її Ї ? ет, і ло Ко я я Ї ви
Ас в Юм 350
Сполуку 156 синтезували способом, описаним в літературі (9. Мед. Спет. 2004, 47, 5798- 5808).
Сполуку 156 (18,60 р, 29,28 ммоль) розчинили в метанолі (200 мл). Додали паладій на вуглеці (6,15 м, завантаження 10 мас.9о (перерахунку на суху речовину), матриця з порошкоподібного вуглецю, вологий). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі в атмосфері водню протягом 18 годин. Реакційну суміш відфільтрували через шар целіту і ретельно промили шар целіту метанолом. Об'єднаний фільтрат промили і концентрували насухо. Залишок очистили сілікагелевою колонковою хроматографією і елюїровали 5-10 95 метанолу в дихлорметані з отриманням Сполуки 157 (14,26 р, 89 90). Маса п/з: 5441 |М-НІ.
Сполуку 157 (5 г, 9,17 ммоль) розчинили в безводному ДМФА (30 мл). Додали НВТИ (3,65 м, 9,61 ммоль) М, М-діїзопропилетиламін (13,73 мл, 78,81 ммоль) і реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 5 хвилин. До нього додали розчин сполуки 47 (2,96 г, 7,04 ммоль). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 8 годин. Реакційну суміш вилити в насичений водний розчин МансСоО»з. Суміш екстрагували етилацетатом, а органічний шар промили насиченим сольовим розчином і висушили (Маг50О»5), відфільтрували і випарували. Отриманий залишок очистили сілікагелевою колонковою хроматографією і елюїровали 50 95 етилацетатом у гексані з отриманням Сполуки 158 (8,25 м, 73,3 95). Структуру підтвердили аналізом МС і"Н ЯМР.
Сполуку 158 (7,2 г, 7,61 ммоль) висушили над Р2О5 при зниженому тиску. Висушену сполуку розчинили в безводному ДМФА (50 мл). До нього додали 1Н-тетразол (0,43 м, 6,09 ммоль) М- метилімідазол (0,3 мл, 3,81 ммоль), і 2-цианоетил-М, М,М',М'-тетраізопропіл-фосфородіамідит (3,65 мл, 11,50 ммоль). Реакційну суміш перемішували в атмосфері аргону протягом 4 годин.
Реакційну суміш розбавили етилацетатом (200 мл). Реакційну суміш промили насиченим розчином МанНсСоОз і насиченим сольовим розчином. Органічну фазу відокремили, висушили (Маг25О04), відфільтрували і випарували. Залишок очистили сілікагелевою колонковою хроматографією і елюїровали 50-90 95 етилацетатом у гексані з отриманням Сполуки 159 (7,82 м, 80,5 95). Структуру підтвердили аналізом РХМС і з'Р ЯМР.
Сн ноон ту
Зк сить» М мо-мтмо 5 ї й
ДОНУ і
Ох їі, Синтезатооб ДНК нам 7
ЯВЩ сю Мн А
З. МНеОН водк. намет 7 у хо денк і
Оев-он нон тк . дин ди де Кен Що ю Д Х овр-єда дон панк 18о
Олігомерну сполуку 160, яка містить групу кон'югату заіМмАсз-9, отримали стандартними 5 способами синтезу олігонуклеотидів. Три одиниці сполуки 159 зв'язали з твердою підкладкою, потім з фосфорамідитами нуклеотидів. В результаті обробки захищеної олігомерної сполуки водним розчином аміаку отримали сполуку 160. Кластерна частина саїІМАсз групи кон'югату
СаіМмАсз-9 (СаІМАсз-94) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-А--РІ-ОХОН)-. Структура СаіМАсз-9 (СаІМАсз-9а-СМ) представлена нижче: он нооН Х о М нок ща
АснМ о-е-оН о ноон А о М
АснНМ осРоон о ноон Х о М о 9 ною д К. емр-
АснНМ .
Приклад 53: Альтернативний спосіб отримання Сполуки 18(саїІМАсз-1а і СаІМАсз-За)
ї д щ ВЕ ни ж З Е АКТ шк иа а и: ВАНН і ж дах її пря лей ж тор КЕ жо що КС ї м ее Бе МН ще СЕ З де пк 181 ста 7 Ве Н.О Ва с, сько ЕМ у в бр, 1воЬ поси
Ех Ка й у не
РЕНО од З пає й оо дей ють з моти МВА реворн Мет
МНАє а З шо
Ки х
Т8ВБЗНЗНЗ ЩІ із хау А 7 ван жнив вЕВОТ
Хоче А х М. 63 яр
ІК
Одес
Оле се З -к о -е г
АСОМ м дн,
МНАС ОТ дню
Одес ї А
Ар а о 2-. кн-шо БЕ В н 2. --МНОВ ос Ко шк с н М и а -Гг ВЕ
Тай Т вт ем й -ф вої М
ВІ с рот тра о м - 18
Виконали реакцію лактона 161 з діамінопропаном (3-5 екв.) або моно-Вос-захищеним діамінопропаном (1 екв.) з отриманням спирту 162а або 1620. При використанні для описаної вище реакції незахищеного пропандіаміну, надлишок діаміну видалили випарюванням під значним вакуумом, а вільну аміногрупу в 162а захистили за допомогою СБ2СІ з отриманням 1625 у вигляді білої твердої речовини після очищення колонковою хроматографією. Спирт 1620 потім взаємодіяв зі сполукою 4 у присутності ТМе5ОТІ з отриманням 163За, яку перетворили в 1636 шляхом зняття Сб7 групи за допомогою каталітичного гідрування. Пентафторфеніловий (РЕР) ефір 164 отримали взаємодією трьохкислотної сполуки 113 (див. Приклад 48) з РЕР-ТФК (3,5 екв.) та піридином (3,5 екв.) в ДМФА (від 0,1 до 0,5 М). Триефір 164 безпосередньо взаємодіяв з аміном 16365 (3-4 екв.) і ОІРЕА (3-4 екв.) з отриманням Сполуки 18. Представлений вище спосіб значно полегшує очищення проміжних сполук і мінімізує утворення побічних продуктів, які утворюються при використанні способу, описаного в Прикладі 4.
Приклад 54: Альтернативний спосіб отримання Сполуки 18(саїІМАсз-1а і СаІМАсз-За)
но З РЕР-ТЯЖ РРО ту а дме. БУТ про
Є А МНС ян ; і сх нг че ди НОВ РЕВО птн щи СВЕ
НО Ко ше ВЕВООУ 33 | Н тва
ВБОСНМ. с
ОЗ
Носн мито ЯН Н о о. Я. НС ве тек питне ВЕСНИ. и ДМ ти и НОВЕ потя
ОЕЕА ши А Ж оде ооо Ода пі і о пр и чну, я й сич ї-ка о І
Васену й АС СО ВЕЕ ік МмМАє як МАЄ но
Оле | а кн ї ї. Едекозидіця со КТ : Н пт пентвндіох ваша НМ я, М, отня !
НАС м тя ТМБС ж пшпсюжка Я ос у ше 2. ТЕМРО о а: у ГЕ н Кк миеву «ОР ЕЕ-ТЕК, рух
А Я ди М ду у я и ОКУ, с пт г т ос те Те ,
МАС З оо де і
СА у вудки А и ко НМ - Й пра ; ї
Аг сни же
МнНас їв
Три-РЕР ефір 164 отримали з кислоти 113 способом, представленим вище в Прикладі 53, виконали реакцію цього ефіру з моно-Вос-захищеним діаміном з отриманням 165 практично з кількісним виходом. Вос групи зняли хлористоводневою кислотою або трифтороцтовою кислотою з отриманням триамину, що взаємодіяв з активованою кислотою РЕР 166 в присутності відповідної основи, такої як ОСІРЕА, з отриманням Сполуки 18.
РЕР-захищену кислоту СаІ-МАс 166 отримали з відповідної кислоти обробкою РЕР-ТФК (1- 1,2 екв.) та піридином (1-1,2 екв.) у ДМФА. Кислоту-попередник, у свою чергу, отримали з відповідного спирту окисленням із використанням ТЕМРО (0,2 екв.) і ВАІВ вацетонітрилі і воді.
Спирт-попередник отримали з цукрової проміжної сполуки 4 взаємодією з 1,6-гександіолом (або 1,5-гександіолом або іншим діолом для інших значень п) (2-4 екв.) і ТМ5ОТІ, використовуючи умови, описані вище в Прикладі 47.
Приклад 55: Дозозалежне дослідження олігонуклеотидів, які містять або 3", або 5'-групу кон'югату (порівняння сСаІМАсз-1, 3, 8 і 9), спрямованих на 5КВ-1, іп мімо
Олігонуклеотиди, перелічені нижче, випробували у дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування 5КВ-1 у мишей. Неспарений І5БІЗ5 353382 включили в якості стандарту. Кожна з різних груп кон'югату СаіМАсз була приєднана до 3, або до 5'-кінця відповідного олігонуклеотиду за допомогою фосфодіестер-зв'язаного 2'--дезоксиаденозинового нуклеозиду (фрагмент, що розщеплюється).
Таблиця 39
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1
ІБІВ 353382 Сев"Сев Тез Гев'"СевАвдеСав Гав'"СавАвв ГавСтазАвв
Сев"Сев Тез Гев'"СевАвдеСав Гав'"СавАвв ГавСтазАвв
Сев"Сев Тез Гев'"СевАвдеСав Гав'"СавАвв ГавСтазАвв
СаімМАсз-За-оАво
ІБІ5 661161 Сев"Сев Гев Гев'"СевАвавОав Гав'"СавАва» ГазСіавАсв Бл0/5 СаіМАсз-3 831 тав Гав Гев'"Сев"Сев Тез Те
СаіМмАсз-ва-оАво
ІБІ5 665001 Сев"Сев Тез Гев'"СевАвдеСав Гав'"СавАвв ГавСтавАвв 5Б/10/5 СаіМАсз-8 831 тав Гав Гев'"Сев"Сев Тез Те
Заголовні букви вказують азотисту основу для кожного нуклеозиду, а "С означає 5- метилцитозин. Нижні індекси: "е" означає 2'-МОЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-О-2'- дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатний міжнуклеозидний лінкер (Р); "о" означає фосфодіестерний міжнуклеозидний лінкер (РО); і "о" означає ОР(-ОХОН)-. Групи кон'югату виділені жирним.
Структура СаІМАсз-1 показана раніше у Прикладі 9. Структура сСаІМАсз-9 показана раніше в
Прикладі 52. Структура саіМАсз-3 показана раніше в Прикладі 39. Структура СаіМАсз-8 показана раніше в Прикладі 47.
Лікування
Шоститижневим самцям мишей Ваїр/с (даскзоп І арогагогу, Бар-Харбор, штат Мен) ввели одноразову підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, сполуки І5БІ5 353382, 655861, 664078, 661161, 665001 або сольового розчину. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин.
Мишей приспали через 72 години після останнього введення для визначення рівнів МРНК 5КВ- 1 у печінці за допомогою ПЛР у реальному часі та реагенту для кількісного визначення РНК
КІВОСКЕЕМО (МоїІесшаг Ргобе5, Іпс. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами.
Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК З5КВ-1 для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразка, обробленого сольовим розчином.
Як показано в Таблиці 40, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні мРНК
ЗАВ-1 дозозалежним чином. Дійсно, антисмислові олігонуклеотиди, містять фосфодіестер- зв'язані кон'югати саіМАсз-1 і СаІМАсз-9 у 3'"-кінця (І5БІ5 655861 і І5І5 664078), а також кон'югати
СаіМАсз-3 і СаіМАсз-8, зв'язані у 5-кінця (ЗІЗ 661161 і ІЗІ5 665001) демонструють істотне поліпшення ефективності, порівняно з несполученим антисмисловим олігонуклеотидом (І5І5 353382). Крім того, ІБІЗ 664078, що містить кон'югат саІМАсз-9 у 3'-кінця, був, по суті, настільки ж ефективним, як І5ІЗ5 655861, який містить кон'югат сСаіМАсз-1 у 3'-кінця. 5'-спряжені антисмислові олігонуклеотиди, І5ІЗ 661161 і І5І5 665001, які містять саіМАсз-3 або саїіМАсз-9, відповідно, володіють підвищеною ефективністю, порівняно з 3''єсполученими антисмисловими
Зо сполуками (І5І5 655861 і І5І5 664078).
Таблиця 40
АБО, містять СсСаїЇМАсз-1, 3, 8 або 9, спрямовані на 5КВ-1 сольового розчину) о Сольовийрозчин | - нд. | 100 ЇЇ 77777771 353382 12710777 177111117168 немає і 655861 | ..юю05 2 ЮюЮщ | (Б 98 (| СаМасе1(83)
Таблиця 40
АБО, містять СсСаїЇМАсз-1, 3, 8 або 9, спрямовані на 5КВ-1 -1 (95 ві сольового розчину) ' болотв Замасе8 (8) ' 661161 ИШЗШ- 5 55333---і8----- Саї!Масз-З (5) ' безос Замасе-в (5)
Рівні трансамінази в печінці, аланін-амінотрансферази (АГЇТ) і аспартат-амінотрансферази (А5Т) в сировитці вимірювали щодо мишей, іньекованих сольовим розчином, використовуючи стандартні протоколи. Оцінили також загальний білірубін і азот сечовини крові (АМК).
Перевірили зміну маси тіла, що істотно не відрізнялася від групи з сольовим розчином.
Значення АЇ Т, А5Т, загального білірубіну та АМК представлені нижче в таблиці.
Таблиця 41
ІБІЗ Ме Дозамг/кг! АІТ дет Загальний) дк Кон'югат білірубін
Сольовий 73 | 21 | 66 | 02 | 3465 353382 немає 33,72 30,65 30,97 боовв! 3292 | 0 баМасе (3) 31,62 32,75 ' ши зоба |та 0) 3417 33,37 пе тв 1 723.11.89.11. 011 зав Сама) 31,32 32,32 ' ша зав |оОааєв 0)
Приклад 56: Дозозалежне дослідження олігонуклеотидів, якімістять або 3, або 5'-групу кон'югату (порівняння ЗаїМАсз-1, 2, 3, 5, 6, 7 і 10), спрямованих на ЗКВ-1, іп мімо
Олігонуклеотиди, перелічені нижче, випробували у дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування 5КВ-1 у мишей. Неспарений І5БІЗ5 353382 включили в якості стандарту. Кожна з різних груп коньюгату СаіМАсз була приєднана до 5'-кінця відповідного олігонуклеотиду фосфодіестер-зв'язаним 2'-дезоксиаденозиновим нуклеозидом (фрагмент, що розщеплюється), за винятком І5І5 655861, в якому група кон'югату саіМАсз приєднана до 3'- кінця.
Таблиця 42
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1
ІБІ5 353382 Сев"Сев Тез Гев'"СевАвдеСав Гав'"СавАвв ГавСтавАвв ' Щ-
Сев"Сев Тез Гев'"СевАвдеСав Гав'"СавАвв ГавСтавАвв
ІЗІ5 655861 тав Газ Гев'""Сев"Сев Тез ГеоЛао -(1аі«МАсз-їа ЗЛ10/5 баїмАсз
СаіМАсз-га-ойАвдоСтев"Сев ев Гез'"СевАвавСівв Т ав
ІЗІЗ 664507 тоавАвв ГазСзавАвав "Свв Гав Гев'"Сев"Сев Ге Ге ЗЛ10/5 СбаїМмАсз-2
СаімМАсз-За-оАво
ІБІ5 661161 | Сев"Сев Гез Гев'"СевАвавСівв Гав'"СавАввз ГавСіавАвв Бл0/5 СаіМАсз-3 831 тав Гав Гев'"Сев"Сев Тез Те
СаіМАсз-Ба-оАвдостев"Севє Ге Гев'""СевАвеСав Г ав
ІБІ5 666224 тіСаеАве Та«СаеАвет Са Та Твет Сет СеєТесТе Бло/5 СаіМАсз-5
СаіМАсз-ба-оАвдостев"Севє Ге Гев'""СевАвеСав Г ав
ІБІ5 666961 тіСаеАве Та«СаеАвет Са Та Твет Сет СеєТесТе Бло/5 СаімМАсз-6
СаіМАсз-7а-оАвдостев"Севє Геє Гев'""СевАвеСав Г ав
ІБІ5 666981 тіСаеАве Та«СаеАвдет Са Та ТветСевтСеєТесТе Бло/5 СаіМАсз-7
СаіМмАсз-1Оа-оАвдоСтев"Сев Ге Гев'""СеєАвав(Зав І дв
ІБІ5 666881 тіСаеАве Та«СаеАвет Са Та Те" Сет СеєТеєТе Бло/5 СаіМмАсз-10
Заголовні букви вказують азотисту основу для кожного нуклеозиду, а "С означає 5- метилцитозин. Нижні індекси: "е" означає 2'-МОЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-О-2'- дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатний міжнуклеозидний лінкер (Р); "о" означає фосфодіестерний міжнуклеозидний лінкер (РО); і "о" означає ОР(-ОХОН)-. Групи кон'югату виділені жирним.
Структура СаІМАсз-1 показана раніше у Прикладі 9. Структура сСаІМАсз-24 показана раніше в Прикладі 37. Структура СаІМАсз-3За показана раніше в Прикладі 39. Структура СаЇІМАсз-5а показана раніше в Прикладі 49. Структура СаІМАсз-ба показана раніше в Прикладі 51. Структура
СаіМмАсз-7а показана раніше в Прикладі 48. Структура саіМАсз-104 показана раніше в Прикладі 46.
Лікування
Шоститижневим самцям мишей Ваїр/с (даскзоп І арогагогу, Бар-Харбор, штат Мен) ввели одноразову підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, сполуки І5ЗІЗ 353382, 655861, 664507, 661161, 666224, 666961, 666981, 666881 або сольового розчину. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Мишей приспали через 72 години після останнього введення для визначення рівнів МРНК 5КВ-1 у печінці за допомогою ПЛР в реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМФОФ (Моїесшіаг Ргобре5, Іпс. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК 5КВ-1 для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразка, обробленого сольовим розчином.
Як показано в Таблиці 43, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні мРНК
ЗАВ-1 дозозалежним чином. Дійсно, спряжені антисмислові олігонуклеотиди демонструють значне посилення ефективності, порівняно з несполученим антисмисловим олігонуклеотидом (БІБ 353382). 5'-спряжені антисмислові олігонуклеотиди демонструють невелике посилення
Зо ефективності, порівняно з 3'-сполученим антисмисловим олігонуклеотидом.
Таблиця 43 - о, ї сольового розчину)
Сбольовийрозчин 1/3 нд 331 100,0 ИШВЗ--0-О-2 2 «2 '-«щ(З 22525233. 960 353382 немає 655861 Заїмасз-1 (3) 102,0 бба507 ЗаїМасз-2 (5) ббТ1в1 ЗаїМмасз-З (5) бббгая ЗаїМмасз-5 (5) бббов1 ЗаїмАсз-6 (5) бббоВ1 ЗаїмАсз 7 (5) 100,0 ббБбВВ1 ЗаїмАсз-10 (5)
Рівні трансамінази в печінці, аланін-амінотрансферази (АГЇТ) і аспартат-амінотрансферази (А5Т) в сировитці вимірювали щодо мишей, іньекованих сольовим розчином, використовуючи стандартні протоколи. Оцінили також загальний білірубін і азот сечовини крові (АМК).
Перевірили зміну маси тіла, що істотно не відрізнялася від групи з сольовим розчином.
Значення АЇ Т, А5Т, загального білірубіну та АМК представлені нижче в Таблиці 44.
Таблиця 44
ІБІ5 Мо Доза мг/кг АТ АТ Загальний АМК Кон'югат білірубін
Сольовий обро 0001650 353382 немає 5 17772833313860102126 655861 ЗаїМасз-1 (3)
Таблиця 44
ІБІВ Мо Доза мг/кг діт АТ Загальний! ДМК Кон'югат білірубін ' бва5о Заімасв-? (5) ' бв1ТвІ Заімасв- 8 (5) ' бввагя Заімасв-5 (5) 15 | 23 | 68 | 02 | 26 | ' бвв96 Гов 71777л25301 661...0201 26 |СаМмАс6 5) ' бббоВ! Заімлсв 7 (5) ' бвоБВ! ЗаімАсви10 (5)
Приклад 57: Дослідження тривалості дії олігонуклеотидів, якімістять 3'-групу кон'югату, спрямованих на Арос ПІ іп мімо
Мишам одноразово ввели ін'єкцію дози, вказаної нижче, і протягом 42 днів спостерігали рівні
Ароб-П і тригліцеридів у плазмі (ТО в плазмі). Дослідження виконали, використовуючи в кожній групі З трансгенних мишей, які експресують людський АРОС-І І.
Таблиця 45
Модифіковані АБО, спрямовані на Арос ЇЇ
Послідовність (від 5' до 3) 5ЕО Ю МО
ІБІЄ АезСіев"Сев Тез Гев'" Сов ав ГавСівв Т ав 304801 тав" СавАвавСіав'" Св Тез Гез ГезАез Те
ІБІЄ АезСіев"Сев Тез Гев'""Сав Гав ГавСіав Гав'"Сав'"Сав 647535 АвавСіав'" Св Тез Тез ГезАев ГеоЛАдо -С1аІМАсз-1 а
ІБІЗ АезСіво"Сео Гео Гео" Сов Т ав ГавСав Гав'"Сав"Сав 647536 АвазСіав" Сов Тео Т во І езАев І еоКао -С1а! МАсз-1а РО/РЬ
Заголовні букви вказують азотисту основу для кожного нуклеозиду, а "С означає 5- метилцитозин. Нижні індекси: "е" означає 2'-МОЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-О-2'- дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатний міжнуклеозидний лінкер (Р); "о" означає фосфодіестерний міжнуклеозидний лінкер (РО); і "о" означає ОР(-ОХОН)-. Групи кон'югату виділені жирним.
Структура СаІМАсз-14а показана раніше у Прикладі 9.
Таблиця 46
МРНК Арос ПІ (95 від сольового розчину на 1 день) і рівні ТО в плазмі (95 від сольового розчину на 1 день) (Сольовий розчин | Омг/кг |Арос-Ш | 98 / 100 | 700 | 95 | 16 /
І8ІЗ 304801 | ЗОмг/кг |ТСуплазмі| 34 / 37 | 50 | 69 | 698
Як можна бачити в представленій вище таблиці, тривалість дії збільшується при додаванні 3-групи кон'югату, порівняно неспареним олігонуклеотидом. Додаткове збільшення тривалості дії спостерігали для змішаного сполученого РО/Р5 олігонуклеотиду 647536, порівняно зі спареним олігонуклеотидом 647535, що містить тільки Р.
Приклад 58: Дозозалежне дослідження олігонуклеотидів, якімістять 3'-групу кон'югату (порівняння СаїІМАсз-1 і сзаїМмАса-11), спрямованих на 5КВ-1, іп мімо
Олігонуклеотиди, перелічені нижче, випробували у дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування ЗКВ-1 у мишей. Несполучений І5БІЗ 440762 включили в якості несполученого стандарту. Кожна з груп кон'югату була приєднана до 3'-кінця відповідного олігонуклеотиду за допомогою фрагмента, що розщеплюється фосфодіестер-зв'язаного 2'- дезоксиаденозинового нуклеозиду.
Структура СаІМАсз-1а показана раніше у Прикладі 9. Структура СаІМАсз-114 показана раніше в Прикладі 50.
Лікування
Шоститижневим самцям мишей Ваїр/с (даскзоп І арогагогу, Бар-Харбор, штат Мен) ввели одноразову підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, сполуки ІБІ5 440762, 651900, 663748 або сольового розчину. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Мишей приспали через 72 години після останнього введення для визначення рівнів МРНК 5КВ-1 у печінці за допомогою ПЛР у реальному часі та реагенту для кількісного визначення РНК
КІВОСКЕЕМО (МоїІесшаг Ргобе5, Іпс. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами.
Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК З5КВ-1 для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразка, обробленого сольовим розчином.
Як показано в Таблиці 47 лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні мРНК
ЗАВ-1 дозозалежним чином. Антисмислові олігонуклеотиди, містять фосфодіестер-зв'язані кон'югати саіМАсз-1 ії саіМмАса-11 у 3-кінця (І5І5 651900 і ІБІ5 663748), демонструють значне посилення ефективності, порівняно з несполученим антисмисловим олігонуклеотидом (І5І5
Зо 440762). Ці два сполучених олігонуклеотиди, сатМАсз-1 і «(«заіїМАс4-11, були однаково ефективними.
Таблиця 47
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1 . . в ' Фо від контролю з ЗЕО ІЮ
Сольовий бю 0000011 о плели ти снАтисьАх 30617345
ІВІВ 440762 тт 823 тав Гав Гкв"Ск 776 1 2350
Ткв"СквАвазСав Тав"СавАвв ГавСідвАвв " вони Іо нот отакднорнн тов р вк
Таблиця 47
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1 . . в ' Фо від контролю з ЗЕО ІЮ 116111711111111562...ЙД 63,99
ТкотлСкеАдеСоєТає"СавАаєТаєОаєАа | 0000006 33,53
ІБ ВБИВ пОаеТавТе"Скодсо-СаїМАсь-1 1 щи 76 | 552 Ж /
Заголовні букви вказують азотисту основу для кожного нуклеозиду, а "С означає 5- метилцитозин. Нижні індекси: "е" означає 2'-МОЕ модифікований нуклеозид; "К" означає 6'-(5)-
СНз біциклічний нуклеозид; "а" означає В-О-2'-дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатний міжнуклеозидний зв'язок (РБ); "о" означає фосфодіестерний міжнуклеозидний зв'язок (РО); "о" означає -0О-Р(-О)(ОН)-. Групи кон'югату виділені жирним.
Рівні трансамінази в печінці, аланін-амінотрансферази (АГТ) аспартат-амінотрансферази (А5Т) в сировитці вимірювали щодо мишей, іньекованих сольовим розчином, використовуючи стандартні протоколи. Оцінили також загальний білірубін і азот сечовини крові (АМК).
Перевірили зміну маси тіла, що істотно не відрізнялася від групи з сольовим розчином.
Значення АЇ Т, А5Т, загального білірубіну та АМК представлені нижче в Таблиці 48.
Таблиця 48 білірубін
Сольовий бно 0001916 | 02 | юю 060 | 32 | 70 | 01 1 з 440762 немає 76 1 91 1 48 | 0 1 щюз39 06 | 93 | 6 | 01 1 з | ' боттсо Замасет (8) 76 | 94 | 52 | щ 0 1 зб 06 | 34 | 60 | 01 1 з | ' бботлв Замасют (8) 6 | 98 | 7 | 0 1 93
Приклад 59: Дія саіМАсз-1-сполучених АБО, спрямованих на ЕХІ, іп мімо
Олігонуклеотиди, наведені нижче, випробували в дослідженні дії багаторазових наростаючих доз на антисмисловиє інгібування ЕХІ у мишей. ІЗІ5 404071 включили в якості несполученого стандарту. Кожна з груп кон'югату була приєднана до 3'-кінця відповідного олігонуклеотиду за допомогою фрагменту, що розщеплюється фосфодіестер-зв'язаного 2'- дезоксиаденозинового нуклеозиду.
Таблиця 49
Модифіковані АБО, спрямовані на ЕХІ
Послідовність (від 5' до 3) | Зв'язки. |(ЗЕО ІО МО
ТевІЗев(Зеє ГеєАезАвв Гав'"Сав"СавАвав"Сав
ІЗІ5 404071 Таз Газ Гав"СавАезСіввАезСтев(Зе
ТевІЗев(Зеє ГеєАезАвв Гав'"Сав"СавАвав"Сав
ІЗІ5 656172 Таз Газ Гав"СавАезСіевАезСев(ЗеоАдо -С1а!МАсз-їа
Тев(ЗеоСлво ГеоЛеоЛав Гав'"Сав"СавАвав"Сав
ІЗІЗ 656173 Таз Газ Гав"СавАеоСТеоАезСтевСЗеоАао -С1аІМАсз-Та РО/РЗ
Заголовні букви вказують азотисту основу для кожного нуклеозиду, а "С означає 5- метилцитозин. Нижні індекси: "е" означає 2'-МОЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-О-2'- дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатний міжнуклеозидний лінкер (Р); "о" означає фосфодіестерний міжнуклеозидний лінкер (РО); ії "о" означає ОР(І:ОХОН)-. Групи кон'югату виділені жирним.
Структура СаІМАсз-14а показана раніше у Прикладі 9.
Лікування
Шоститижневим самцям мишей Ваїр/с (даскзоп І абогаїгу, Бар-Харбор, штат Мен) двічі на тиждень протягом З тижнів вводили підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, сполуки ІБІ5 404071, 656172, 656173 або РВ5 в якості контрольного зразка. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Мишей приспали через 72 години після останнього введення для визначення рівнів МРНК ЕХІ в печінці за допомогою ПЛР у реальному часі та реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМФОФ (Моїесшіаг Ргобре5, Іпс. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами. Виміряли також рівні білка ЕХІ в плазмі за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу. Рівні МРНК ЕХІ визначали відносно загальної РНК (за допомогою КІВОСКЕЕМФ)), потім нормалізували до контрольного зразка, обробленого РВ5.
Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК ЕХІ для кожної експериментальної групи. Дані нормалізували до контрольного зразка, обробленого РВУ, і позначили як «95 РВЗ". ЕДво вимірювали такими-саме способами, як описано раніше, і ці значення представлені нижче.
Таблиця 50
МРНК фактора ХІ (95 від сольового розчину) ж рон 100 немає розчин
ІЗІЗ 404071 немає РЗ
ІЗІ5 656172 сСаїмАсз-1 РЗ 76 ЇЇ Щщ.
ІБІ5 656173 СаМАсз-1 РО/Р5 76 ЇЇ 11
Як показано в Таблиці 50, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні мРНК
ЕХІ дозозалежним чином. Олігонуклеотиди, що містять групу кон'югату 3'-СаІМАсз-1, демонструють значне посилення ефективності, порівняно з несполученим антисмисловим олігонуклеотидом (І5ІЗ 404071). Між ціми двома сполученими олігонуклеотидами додаткове посилення ефективності було забезпечено за рахунок заміни деяких Р5 линкеров РО (І5І5 656173).
Зо Як показано в Таблиці 50а, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні білка
ЕХІ дозозалежним чином. Олігонуклеотиди, що містять групу кон'югату 3'-СаІМАсз-1, демонструють значне посилення ефективності, порівняно з несполученим антисмисловим олігонуклеотидом (І5ІЗ 404071). Між ціми двома сполученими олігонуклеотидами додаткове посилення ефективності було забезпечено за рахунок заміни деяких Р5 линкеров РО (І5І5 656173).
Таблиця 50а
Білок фактора ХІ (95 від сольового розчину) ї о зразка) же 02201 розчин
ІЗІЗ 404071 немає Р5
ІЗІЗ 656172 СаїМАсз-1 Р5 6111
ІЗІЗ 656173, 2 |. 6 ССС СаїМАсз-1 РО/Р5 76 1 щЩщЩД.оЦоФш г
Рівні трансамінази в печінці, аланін-амінотрансферази (АГЇТ) і аспартат-амінотрансферази (А5Т) в сировитці вимірювали щодо мишей, іньекованих сольовим розчином, використовуючи стандартні протоколи. Оцінили також загальний білірубін, загальний альбумін, СКЕ та азот сечовини крові (АМК). Перевірили зміну маси тіла, що істотно не відрізнялася від групи з сольовим розчином. Значення АЇТ, А5Т, загального білірубіну та АМК представлені нижче в таблиці.
Таблиця 51
Івіз ме | доза | діт | дет | Загальний) Загальний) де | дМК | Кон'югат мг/кг альбумін | білірубін усіляко | м |с|н| 430 розчин 152,81 176,0 404071 121,5 немає 111,5 656172 СаїМасз-1 (3) 6 | 650 | 715 | 32 | 02 | 02 | 239 656173 СаїМасз-1 (3) 6 | 1140 | 101,8
Приклад 60: Дія сполучених АБО, спрямованих на 5КВ-1, іп міо.
Олігонуклеотиди, наведені нижче, випробували в дослідженні дії багаторазових наростаючих доз антисмислове інгібування 5А8В-1 у первинних гепатоцитах мишей. ІЗІЗ 353382 включили як несполученого стандарту. Кожна з груп кон'югату була приєднана до 3", 5'-кінця відповідного олігонуклеотиду за допомогою фрагмента, що розщеплюється фосфодіестер- зв'язаного 2'--дезоксиаденозинового нуклеозиду.
Таблиця 52
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1
Сев"Сев Тез Гев'"СевАвдеСав Гав'"СавАвв ГавСтазАвв
Сев"Сев Тез Гев'"СевАвдеСав Гав'"СавАвв ГавСтавАвв
ІЗІЗ 655861 тав Гав Гев'"Сев"Сев Те ГеодДас-Сс1аі!МАсз- 1 а ЗЛ10/5 баїмАсз-1
Таблиця 52
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1
Сев"Сео Гео Гео" СеоДавСіав Гав"СавАвв ГавСіазАсв
ІБІ5 655862 тає Та ТвотСво"Сеє Те ГеоАдо-СВІМАсз-Та Б/10/5 СаіМмАсз-1
СаіМмАсз-За-ойАваоСіев "Сев Ге Гев'""СевАвдв (ав
ІВІВ 661161 Тав"СавАвв ГавСіавАвав "Сів Газ Гев'""Сев'""Сев Гев Ге з/10/5 ОаімАсз З
СаіМАсз-ва-сойАвоСівв"Сев ТІ ев Гев'"СевАвавСіав
ЗІЗ 665001 Тав"СавАвв ГазСіавАвав "Св Т ав Гев'""Сев"Сев Ге Ге з/10/5 ОаімАсз- В
Сев"Сев Тез Гев'"СевАввСіав Гав'"СавАвв ГавСіазАсв
ІІ 664078 тав Гав Гев'"Сев"Сев Ге Г еоКао-Сс3аугМАсз-ЗУа ЗЛ10/5 СаїМмАсз-9
СаіМмАсз-ба-оАвдоСівв"Севє Гев Гев'""СевАвавСіав
ІЗІЗ5 666961 Тавп"СавАв» ГавСтавАвв "Св Таз Гев'"Сев""Сев Ге Ге ЗЛ10/5 баїМмАсз б
СаімМАсз-2а-оАвдоСівв"Севє Гев Геє""СевАвавСвв І ав
ІБІ5 664507 тіСаеАве Та«СаеАвдетСає Та ТветСевтСеєТесТе Б/10/5 СаімАсз-2
СаіМмАсз-10Оа-оАдоСівв"Сев Тез Гев""СевАвавСвв І ав
ІБІ5 666881 тіСаеАве Та«СаеАвдетав Та ТаетСаєтСеєТеєТе Б/10/5 СаімМАсз-10
СаіМмАсз-Ба-оАвдоСівв"Севє Гев Геє""СевАвавСвв І ав
ІБІ5 666224 тіСаеАве Та«СаеАвдет Свв Та ТветСевтСеєТесТе Б/10/5 СаімАсз-5
СаіМмАсз-7а-оАвдоСівв"Севє Гев Геє""СевАвавСвв І ав
ІБІ5 666981 тіСаеАве Та«СаеАвдет Са Та ТветСевтСеєТесТе Б/10/5 СаімАсз-7
Заголовні букви вказують азотисту основу для кожного нуклеозиду, а "С означає 5- метилцитозин. Нижні індекси: "е" означає 2'-МОЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-О-2'- дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатний міжнуклеозидний лінкер (Р); "о" означає фосфодіестерний міжнуклеозидний лінкер (РО); ії "о" означає ОР(І:ОХОН)-. Групи кон'югату виділені жирним.
Структура сСаІМАсз-14 показана раніше у Прикладі 9. Структура саІМАсз-За показана раніше в Прикладі 39. Структура СаІМАсз-ва показана раніше в Прикладі 47. Структура СаІМАсз-За показана раніше в Прикладі 52. Структура СаіМАсз-ба показана раніше в Прикладі 51.
Структура СаІМАсз-2а показана раніше в Прикладі 37. Структура саіМАсз-10а показана раніше в
Прикладі 46. Структура СаіМАсз-5а показана раніше в Прикладі 49. Структура саіМАсз-7а показана раніше в Прикладі 48.
Лікування
Олігонуклеотиди, наведені вище, відчували іп мійго у первинних гепатоцитах мишей, поміщених на планшет при щільності 25000 клітин на лунку та обробляли 0,03, 0,08, 0,24, 0,74, 2,22, 6,67 або 20 нМ модифікованого олігонуклеотиду. Після обробки протягом приблизно 16 годин, з клітин виділили РНК і виміряли рівні мРНК за допомогою кількісної ПЛР в реальному часі, а рівні мРНК 5КВ-1 ІІЇ скорегували у відповідності із загальним вмістом РНК, виміряних за допомогою КІВОСКЕЕМФ).
ІКоо розрахували за стандартними способами, а результати представлені в Таблиці 53.
Результати показують, що за умов вільного поглинання, в яких не використані ніякі реагенти або електроїмпульсні прийоми для штучного прискорення входу олігонуклеотидів в клітини, олігонуклеотиди, містять кон'югат сСаїЇМАс, були істотно більш ефективними в гепатоцитах, ніж вихідний олігонуклеотид (І5І5 353382), який не містить кон'югат зЗаїІМАс.
Таблиця 53
Міжнуклеозидні '
ІЗІ5 353382
ІЗІ5 655861 баїМАсз-1
ІЗІ5 655862 РО/Р5 баїМАсз-1
ІЗІ5 661161 СаїМАсз-З
ІЗІ5 665001 СаїМАсз-8
ІЗІ5 664078 СаїМАсз-9
ІБІ5 666961 СаїМАсз-6
Таблиця 53
Міжнуклеозидні
АБО ІСво (НМ) ук д Кон'югат ЗЕОЮ МО зв'язки
ІЗІ5 664507 СаїМАсз-2
ІЗІ5 666881 СаіМАсз-10
ІЗІ5 666224 СаМАсз-5
ІБІ5 666981 Са!МАсз-7 аСереднє для кількох повторів.
Приклад 61: Отримання олігомерної сполуки 175, яка містить саІМАсз-12 2 по р под о хо вро бити т Од Ов А С, дае
НМ зон Ор и ери дитя дим, у Дн бод Я Н ет де 16 187 НК де нос н й м яМолт ля ЯМ о А Одес шваТ ТЯ т длоон тек риття яко в В ча Он ни ЕІ Мо М воли тет ОА ппттттттттттттттттттттттттттттттттттттттттттттттттт дим НМ МВТ жа ВдитА 158
ВЕК Сх в т рі оде
Ж доти нятт оно УМ НК де ; ши і М Ї 8 вд й Її ВМ о т сде ка а К тет зе г пк - к ХМ жк . - З. Ї Ще о ай, М те У М и ське
Онаю ОН Н вм.
КК де о щі
Най Веб он не У ОАЄ поді оно 370 НМ. о ша Аг о она ї Со й
ВОМ, Не дно ОН Нове мМеснееме Шин я пет ї дек
Ноти З от Од яті ит ско по БА -к ВОМ У Оде с й вн я й х. тА: пе? мо у во
Аля, У бас пив в трчеоде їв Нд о з Рот, - ре дить М зма, Х а К фути соти
Є шу Е кл
Бензипі перфторфеніп)глтутарат диФА по Те а с Її хе - КІН А не ния тако хни ни
З и --Й де
ММ питну, и Що я І Що г і ; Н 1 а ; АН ва у Дт ножни В ї З ба
Її ї З я км, у жим, яти, Кз Се я о З се ОО ЩО еєтодо
ВА і І м НМ. г Я
Зх о о не во беж т Ас о і бен, Ка ресів
НК. їм 172
А ОА;
ПН а Я т о. Ос т ов
Ко кт тт а НК нео і п НМ опотад
РОН Є, Мо АВ
ТИХ птн тк т
Ї ех в ї т М д
МЕОМІВЮАЄ НО дит и дит В З о, Одес ї ї Ши а а о о сети В їх ПОВЕ ше ММ.
У де п у їх о нМ-- йо б У Сдо сти ту ча «та НМ еко її ІМ.
Ас о пає кв. так !
ОБ ж р 3-44 рЕАДМФ й по Я фетеня ОВе ит
Об;н з; НК де х Е ВАШ
Кк й -
Их В і аг де во : ко г М, пд й пкт пит В ГІ ЩЕ ОАЄ нн | і узи ж и и айву
ШЕ: ї о ах. Отит ерокодю
ОК ! НЯ. хо де з а ї - «
НМА. й вс ї, ой я вет щі А | ОРЕ не ОЗ оі нед «Я
Ціле еоде тА НМ ле с Ве ок «га 3.Боратний буфер, ДІМСО, рН 5,2, кімн. т-ра
ККУ УУУУУУ ТІВ
2. Аміак водн, кімн. т-ра
С КК ноя уж ; 7 ша ї вон 7 "вн дном - н х - не Ї а а ще 7 не . о п , . ок т би й ше Ж Шк Шк Я Щі й "ві ок к тк ' зн М. рад І пл ее я З-ж ій ва --кн ли шт тт з е (з дк 7
МО сш Ку
НА
Сполука 169 Є у продажу. Сполуку 172 отримали додаванням бензил(перфторфеніл)глутарату до сполуки 171. Бензил(перфторфеніл)глутарат отримали додаванням РЕР-ТФК ї СІЕА до 5-(бензилокси)-5-оксопентанової кислоті в ДМФА. Олігомерну сполука 175, яка містить групу кон'югату сСаіМАсз-12, отримали зі сполуки 174, використовуючи загальні способи, описані в Прикладі 46. Кластерна частина саїІМАсз групи кон'югату СаіМАсз-12 (СаіМАсз-1234) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою-Р(-ОХОН)-Аа-Р(-ФОХОН)-. Структура СаіМАсз-12 (СаІМАсз-12а-СМ-) представлена нижче: онОон но о о дснМО 0
МН отнН вн о о
АСНМО 077 Д дим М Но ; ку й М вро)
Н М 6
Я й о ря но
МНАс
Приклад 62: Отримання олігомерної сполуки 180, яка містить саІМАсз-13
МН
С
САс о -Одо х ! ї ї ЕІ : ш-- Ії з й ще я ве з го Не дод би и дит А. іч я і н КЕ , і | НАТО, НОАМ
АсНя С к У дея мтс ву жит у ша петтесссофію вм т тити їв з Її Ї і КЕ ОА, дитА пр В г ! 128 т
Мн,
Сас Ов -йв и Б
АОС ето ит, жену 7 чн ї
З бас бде і 7 зе оч во Сну РНЮ
Ен БЕ В А ей --
ВО ка ит дитин си ММ, дяк, ДК меню »
АЕН В Ї Ї х | Ї в о 4
Од ОА ! их ня
МИ Й кдд Я яти ден пото
САдо Со де ; т де --о їУ. Її
Р педня м ик дж
АСМА тн
С т
Ас Од ; / ЗТ но і до -о, є Ї К.Л ою ТК і са Вт м тн Ж з м й тал пев
Й | М В дюФА по о
САє бде Г 17
Со не ко люди, жд сх денм па
ОАс Одес о о
Асо о. и
АСНМ МН
ОАс Одес о о 7 М Ї дсо о. и М о Е о М мит
Н Н о о
Е Е
Е
ОАс Одес 179 о НМ
Асо о. ли
АснМ о
У т щ й
Гоцео о о (мен ом 1.Боратний буфер, ДМСО, рН 5,5, кімн. т-ра тля яння яння няття тяяятяяяяяяяяяятяяятяяяя я Вк» 2. йиміак водн, кімн. т-ра оно он
Га а но сет пн тт Ж вен Що 7 "м м
С
1
ОН оон ї
З Я по (з сн т М в етері дя Ї ; я вич о оно он г 180
Носьсяню ск тм, соди «нт р
Сполуку 176 отримали загальним способом, наведеним у Прикладі 2. Олігомерну сполуку 180, яка містить групу кон'югату сСаІМАсз-13, отримали зі сполуки 177, використовуючи загальні способи, описані в Прикладі 49. Кластерна частина самМАсз групи кон'югату саїІМАсз-13 (СаіМАсз-134) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-Аа-РІ-ОХОН)-. Структура СаІМАсз-13 (СаІМАсз-13а-СМ-) представлена нижче: онОНн о МН
АСсНМ онон ноу о о но Но ко АЛ М Ме ом)
М Мт в
АснНМ Но Н Ге! о но он ди оо но
МНАс
Приклад 63: Отримання олігомерної сполуки 188, яка містить саіМАсз-14
Її х и де се
Ся і дей Кит А ї оце ще дай ьян МАЗКИ їв. ї З ще
М. КЗ їв в З с со КЕ
НИ: щ- й К к я Ку пдкчух. Ви х 4 вк те З і
Еб. о ТО НЕ гу м одпннннттт тт сстідв а 1 є чу й хх й дегА : Модний же МС не Ку й БУ т Іва мі ц ма У м
Мне 3 Жшннх АЙКЮММ ше по тної а з дод й КЕ ї
Од ЗНАЄ. З ам А (Ме МНЕ 0000
Я і 3 Й І па м, Ак і ої К - Ж сн зе ЕТ, дек де НОВЕ ТО оче дн и дм ТВОЇ й М ВУ 5 7 чна У М МНає а й до М я
Зае «НЕ х а у ше й ко р-р сах ТВ чн ДОВ пан
Аве Маг на: ВЗ «84 се йо я бите Зешн йю УК. пет ч (Й З вен ще КЕ З п Я НО, М пуття «А Оде ЯНА у З 0 я у тою Щі 3 З й і й я бай Й ие ву; й 55 г кн ій тя щ С дме чати. М. жі те
ТЗЕК, ле 4 яти ЯК дме. ин се ТМ - а
Ану Й же тв в САКЕ а Її 6 Е ення, ст ах, Шк М. тн, ї доб тв ОО - я дей
Тк о кндк г З. У г їй люд і ТЕ те . я . о й в и о ние ше ФЕТА ит УЖЕ виь яв ї 1 м ї ямас З є з кА МАЕ В
ОО; ро
А х я
Мнак о 53 но ан і ї
У тя. Й но Я
СОМИ Основ МН; в Мнас но 5 гі З ї ил МАХ т Ж г В З х пд АЛ АМО що Др чит му и ЕТ он не С чуя со ме чоМ Чом зву Т.Боратний буфер, ДМСО, ше я йо я Бо
Н 8,2, кімн. т-ра ие не г, Аміак води, кімн. т-ра АК т ноу У вм 188
МАЮ
Сполуки 181 і 185 є у продажу. Олігомерну сполуку 188, яка містить групу кон'югату сзаіМАсз- 5 14, отримали зі сполуки 187, використовуючи загальні способи, описані в Прикладі 46.
Кластерна частина сСаЇМАсз групи кон'югату СаіМАсз-14 (СаІМАсз-144) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-Аа-Р(-ОХОН)-.
Структура СаЇІМАсз-14 (СіаІМАсз-14а-СМ-) представлена нижче:
нОоОНн о) о о М нот ее
АснМ о нооНн о о (є, о о м ---о ма -(см|)-- нок ом ї М7;о !
АснМ о ноон г оо М нок ом о
АснМ
Приклад 64: Отримання олігомерної сполуки 188, яка містить саІМАсз-15 бСАЄ т ство -О оцих х. дсо Оле А дед- - 5 Ї ) тво І Ми донМ з их у дих с . Н Арон ге о і НТ, Ед АснМм оМЕ 190 7 мМ чнмеОН и дтва ннннчннкллочнлелнлннод . От ВгаО, ОМАР нон й А 2 -О дя нн Ж шах юка о
АсСНМ 191 он отв . и я Вго ов й вхо ОВЕ й ЕМЧЕ я - -
Ме ЯН -
Жаит--- зо М нени вхОо- ! о дент
НК 153
АсНМ хво щи
Ми дини ТВі С
Рво босфінаававих ВгО ОоВх і А ра птеенететтететнетететессессв ' що У се х ен в дині вю-МАМ Ж У десни їза
ВМО, У ни дин ах
М А вм оо 0000, ж це мотаню с о поееооеоототтттттеоссеосдрю гвах дб і
ЗБ, Хюктезаторв ДНЕ Р
ОМ шу КОТ а . а 4.84 Юиитезехов ДНК с т тк - пенжжнннннняннннятятянтююютюєюстєссс Вр их - нац 4 мм; водн. 35 С, ІЙ К, Є шо тн ща ов що ей. д бю, я пн а На ОК рт вв
Нчьий митити зн дети
Мак 5 рі дет я х Я М і ще -н е ри ЗУ щу Ми
Сполука 189 є у продажу. Сполуку 195 отримали загальним способом, наведеним у
Прикладі 31. Олігомерну сполуку 197, яка містить групу кон'югату СсСаіМАсз-15, отримали зі сполук 194 і 195 стандартним способом синтезу олігонуклеотидів. Кластерна частина саІМАсз групи кон'югату СсСаіМАсз-15 (СсаІМАсз-154) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-Аа-Р(-ОХОН)-. Структура СаІМАсз-15 (Са!МАсз-15а-СМ- ) представлена нижче: о ноон В бот о но оо у
АснМ о о о «Р дити о 5 ноон оф то 1 (вм)- о о С о но мае
АСНМ о з о ОН нон М о ОК но о
МНАс
Приклад 65: Дозозалежне дослідження олігонуклеотидів, які містять 5'-групу кон'югату (порівняння СаіІМАсз-3, 12, 13, 14 і 15), спрямованих на 5КВ-1, іп мімо
Олігонуклеотиди, перелічені нижче, випробували у дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування 5КВ-1 у мишей. Неспарений І5БІЗ 353382 включили в якості стандарту. Кожна з груп кон'югату (сатМАсз була приєднана до 5'-кінця відповідного олігонуклеотиду за допомогою фрагмента, що розщеплюється фосфодіестер-зв'язаного 2'- дезоксиаденозинового нуклеозиду.
Таблиця 54
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1 ез е5 езієвне
СаіМАсз-12а- 671144 | сАцоСтев"Сев Гез Гев'"СевАвв(ав Гав'"СаєАваз» ГазСіавАвав "Свв Т дв СаіМАсз-12 831
Тев"Сев"Сев Ге Ге
СаіМАсз-13а- 670061 | оАвоСіев"Сев Ге Гев'"СевАвв(ав Гав'"СавАваз» ГазСіавАвав"Сав Т дв СаіМАсз-13 831
Тев"Сев"Сев Ге Ге
СаіМАсз-14а4- 671261 | сАцоСіев"Сев Ге Гев'"СевАвв(ав Гав'"СавАваз» ГазСіавАвав "Свв Т дв СаіМАсз-14 831
Тев"Сев"Сев Ге Ге
СаіМАсз-15а- 671262 | оАцдоСев"Сев Ге Гев'"СевАвв(ав Гав'"СавАвав» ГазСіавАвав "Свв Т дв СаіМАсз-15 831
Тев"Сев"Сев Ге Ге
Заголовні букви вказують азотисту основу для кожного нуклеозиду, а "С означає 5- метилцитозин. Нижні індекси: "е" означає 2'-МОЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-О-2'- дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатний міжнуклеозидний лінкер (Р); "о" означає фосфодіестерний міжнуклеозидний лінкер (РО); і "о" означає ОР(-ОХОН)-. Групи кон'югату виділені жирним.
Структура СаіМАсз-За показана раніше в Прикладі 39. Структура СаІМАсз-12а показана раніше в Прикладі 61. Структура сСаіМАсз-1І3а показана раніше в Прикладі 62. Структура
СамМмАсз-14а показана раніше в Прикладі 63. Структура СаіМАсз-15а показана раніше в
Прикладі 64.
Лікування
Шости-восьмитижневим мишам С57ріІб (даскзоп І арогаїогу, Бар-Харбор, штат Мен) один або два рази ввели підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, сполуки І5І5 353382, 661161, 671144, 670061, 671261, 671262 або сольового розчину. Миши, яким вводили дозу два рази, другу дозу вводили через три дні після першої дози. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Мишей приспали через 72 години після останнього введення для визначення рівнів
МРНК ЗКВ-1 в печінці за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення
РНК КІВОСКЕЕМФ (Моїесшіаг Ргоревз, Іпсо. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами.
Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК ЗКВ-1 для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразка, обробленого сольовим розчином.
Як показано в Таблиці 55, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні МРНК
ЗАВ-1 дозозалежним чином. Значної різниці нокдауну мішені між тваринами, які отримували одну дозу, і тваринами, які отримували дві дози не спостерігалося (див. І5І5 353382 у дозах З0 і 2 х 15 мг/кг; і І5І5 661161 у дозах 5 і 2 х 2,5 мг/кг). Антисмислові олігонуклеотиди, містять фосфодіестер-зв'язані кон'югати (заіМАсз-3, 12, 13, 14 ї 15, демонструють істотне посилення ефективності, порівняно з несполученим антисмисловим олігонуклеотидом (ІЗІ5 335382).
Таблиця 55
МРНК ЗЕКВ-1 (95 від сольового розчину)
МРНК 5КВ-1 (95 від , вюле / дозасмтко Ед (нт)
Сольовийрозчин| нд. - | 100,0 нд | нд зо3аве би немає 661161 22 СаімАсз-З 101,2 би за Замостя бтсов! 2 Замлоя 110,7 бло т Замлстя 109,4 бив Замлотя
Рівні трансамінази в печінці, аланін-амінотрансферази (АГЇТ) і аспартат-амінотрансферази (А5БТ) у сироватцізаміряли до мишей, ін'єкованих сольовим розчином, використовуючи стандартні протоколи. Оцінили також загальний білірубін і азот сечовини крові (АМК).
Перевірили зміну маси тіла, що істотно не відрізнялася від групи з сольовим розчином (дані не показані). Значення АЇ Т, А5Т, загального білірубіну та АМК представлені нижче в Таблиці 56.
Таблиця 56
Загальний
ІБІВ Мо Доза (мг/кг) | АГ Т (од./л) | А5Т (од./л) білірубін |АМК (мг/дл) Кон'югат (мг/дл)
Сольовий би | мя | | | м | | а 2958882 немає ввтії6ї |.1175 71717714117771771711780 | 02 | 32 | СамМАсзЗ 715 | 32 | 69 | 02 | з6
Таблиця 56
Загальний
ІБІВ Мо Доза (мг/кг) | АГ Т (од./л) | А5Т (од./л) білірубін |АМК (мг/дл) Кон'югат (мг/дл) бля Замлсетя бтоови Замлсет3 05 | 69 | 99 | 01 | з бля! Заїхлситя бив Замлсет5
Приклад 66: Вплив різних фрагментів, що розщеплюються на антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на 5КВ-1, які містять кластер 5'-СаІМАсз
Олігонуклеотиди, перелічені нижче, випробували в дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування 5КВ-1 у мишей. Кожна з груп кон'югату СсСаіМАсз була приєднана до
Б'-кінця відповідного олігонуклеотиду за допомогою фосфодіестер-зв'язаного нуклеозиду (фрагмент, що розщеплюється (СМ)).
Таблиця 57
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1 . . ши , Кластер ЗЕБЕО І
ІБІЗ Мо |Послідовність (від 5' до 3") СсаМАс»
СаіМАсз-За-оАдоСтев"Сев Ге Гев'""СевАвавСіав Гав'""СавАвв Т ав 661161 СіавАвче "Свв Гав Гев'"Сев"Сев Тез Ге ба!МмАсз За
СаіМАсз-За-о ТаоСівв'""Сео Гео Гео"СеоАав ав Гав'"СсавАвсв Гав 670699 СіавАвче "Свв Гав Гео"Сео"Сев Тез Ге Са!МмАсз-За
СаіМАсз-За-оАеоСівв"Сео Гео Гео" СеоАазСав Гав'"СавАвв Г ав 670700 СіавАвче "Свв Гав Гео"Сео"Сев Тез Ге Са!МмАсз-За
СаіМАсз-За-о ТП еоСівв'""Сео Гео Гео"СеоАав ав Гав'"СсавАвсв Гав 670701 СіавАвв"Сав І ав Гео"Сео"Сев Гев Ге ОівімАсз-За
СаіМАсз-1 За-оАвдоСіев"Сео Гео Гео"СеоАавСіав Гав'"СавАдвв» Т ав 671165 СіавАвче "Свв Гав Гео"Сео"Сев Тез Ге ба!МмАсз 1За
Заголовні букви вказують азотисту основу для кожного нуклеозиду, а "С означає 5- метилцитозин. Нижні індекси: "е" означає 2'-МОЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-О-2'- дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатний міжнуклеозидний лінкер (Р); "о" означає фосфодіестерний міжнуклеозидний лінкер (РО); і "о" означає ОР(-ОХОН)-. Групи кон'югату виділені жирним.
Структура СаіМАсз-За показана раніше в Прикладі 39. Структура СаІМАсз-13а показана раніше в Прикладі 62.
Лікування
Шости-восьмитижневимм мишам С57БІб (Часкзоп І арогаїгу, Бар-Харбор, штат Мен) ввели одноразову підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, сполуки ІБІЗ 661161, 670699, 670700, 670701, 671165 або сольового розчину. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин.
Мишей приспали через 72 години після останнього введення для визначення рівнів МРНК ЗКВ-
1 в печінці за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК
КІВОСКЕЕМО (МоїІесшаг Ргобе5, Іпс. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами.
Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК ЗКВ-1 для кожної експериментальної групи, нормалізовані до контрольного зразка, обробленого сольовим розчином.
Як показано в Таблиці 58, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні мР НК
ЗАВ-1 дозозалежним чином. Всі антисмислові олігонуклеотиди, що містять різні фрагменти, що розщеплюються, демонструють однакову ефективність.
Таблиця 58
МРНК ЗКВ-1(95 від сольового розчину)
МРНК ЗЕВ-1 (95 см
ІБІЗ Мо Доза (мг/кг) від сольового Кластер СаІМАсз розчину)
Сольовийрозчин нд. | 100,0 нд | нд бот! Замлсв за те бтов29 Замлсв за 7 бтотто Замлсв за т бтото Замлсв за т б71165 22253128 СаіМАсз-1За Аа
Рівні трансамінази печінки, аланін-амінотрансферази (АЇТ) та аспартат-амінотрансферази (А5Т) у сироватці вимірювали щодо мишей, ін'єкованих сольовим розчином, використовуючи стандартні протоколи. Оцінили також загальний білірубін і азот сечовини крові (АМК).
Перевірили зміну маси тіла, що істотно не відрізнялася від групи з сольовим розчином (дані не показані). Значення АЇ Т, А5Т, загального білірубіну та АМК представлені нижче в Таблиці 56.
Таблиця 59
Загальний
Доза АТ А5Т ду Кластер
ІБІЗ Мо (мг/кг) (од./л) (од./л) білірубін |АМК (мг/дл) самАсз СМ (мг/дл)
Сольовий бони на | мо 6020 на бот! Заімлсх За те бтов29 Заімлсх За 7
Таблиця 59
Загальний
Доза АТ А5Т ду Кластер
ІБІЗ Мо (мг/кг) (од./л) (од./л) білірубін |АМК (мг/дл) самАсз СМ
І І (мг/дл) 670700 З " СаіМАсз-За А " 7 670701 З " СаіМАсз-За т " 7 671165 З " СаіМмАсз-1За А " "
Приклад 67: Отримання олігомерної сполуки 199, яка містить саІМАсз-16
А св Котов З
БО екв т, «Й
АЕН Мои тя м тку, в в Я
САС о еСАє о нин зи зом і и й 1 І тео ва ТЯ
НАВ ди зр ОМ є я янті до но ше -- й СТМА. дич ян ї у Бурштиновий ангідрид,
АСНМ ' н Її ча ін ОМАР, ДХЕ о - я я х -к т Я пенні ння
Ос ново н Є Ї Ом ц Б НАНА НВО ВА іншій АК т дме ре Хот: БВ-Ва под Дер тк Я то ні ок денім тд м вдо
Ас Оле - : кеш Н,, й лей «кн чит МЕ ; щі ле З их і і Щ де сде СМ ія сит
ТЕ н х б ах
Зв и М й н Ко Кк, ; 5 Я. Синтезатев ДНК мо-Ко вия Май ж пт тур я Ко води і хів ше: ! і і З ден п й й -,
Ї о-, піве Не ;
ДЕК Ї Є з в НМ нас і се що М. В Щ нос сл Ву дня фан во пити рт її 2 ох 78 Ї ШЕ СВ нн наон лен і я М з вто ока їв а в в х ї ох не шо М є Ї шк? І я ; денім о вон ше ча он : нс а Ма т «Унинті юн Шк -- 1 1. но Ат х їв Й ї шо
Олігомерну сполуку 199, яка містить групу кон'югату саіМАсз-16, отримали за допомогою загальних способів, наведених у Прикладах 7 і 9. Кластерна частина саїІМАсз групи кон'югату
СаіМмАсз-16 (СаІМАсз-164) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-Аа-РІ-ОХОН)-. Структура СаІМАсз-16 (СаІМАсз-164-СМ-) представлена нижче: ноон о Ге) о те о М М нот о МНИр Сем
АсНнМ
Н о о 8-0 нон о М 2
З отит и ю но 4н о 2 о
АснМ он ноон о о те о нот о м
АсСНМ
Приклад 68: Отримання олігомерної сполуки 200, яка містить саїІМАсз-17
Ах де» дроту З т я дом ит м он В т 00 СВЦЕОМОчочсннн, до К нн Й й т т Ех яко Е ке
Ас есве со у е бе Он ; во, дуття тт о В КК, З. Боратний буфер, ДМСО, рН 5,5, кімн. т-ра
АН, д м Х М т Е т с сиде в і. І т. Аміак водн, кімн. т-ра
АФК дини чити ве Ой 1озе нозн г й шк ета тю но-коью 7 у Ме, о вом ! а о ноя г о її янв А де ур М Се ном у Й пкто- Мч) деня і м носно ї х
АсНИ ши оо
Олігомерну Сполуку 200, яка містить групу кон'югату саіМАсз-17, отримали загальними способами, представленими у Прикладі 46. Кластерна частина саіМАсз групи кон'югату
СаіМмАсз-17 (СаІМАсз-17а4) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-Аа-РІ-ОХОН)-. Структура СаІМАсз-17 (СаІМАсз-17а-СМ-) представлена нижче: нон о о о М М нота з Н Н он АснНМ о Н 2.5 но М но з Н с)
АснНМ нон о о М мо нота з Н Н
АСсНМ
Приклад 69: Отримання олігомерної сполуки 201, містить саіМмАсз-18
ОАЄ ето г й
Код, -- т Ве
Ас а му мон Е и ЩІ
Одс соло ой ни З о ср га Ссво зр очено МН. і Йон МО ие й не я 5 т Кк ДУ ох сю т ММ у др ан 5 адек я їз м Ї -ї5 а Ї Е 3. Боратний буфер, ДМС, рН 5,2, кімн. т-ра ко Со ст ди с ВЕ З. А так водн, кімн. т-ра ден сад ов нон о а -.. АСНМ ! г ї ноон о оди ері ря рт
Янв А0О ДИ ис ПМК но-кю Ж Утун й о бато-емчовоо)
АсНМ Щ Ка нан о у
Мн дич дует иютчнку еру ря у ж ве ся зм 53 но кт п Й » вон здя
Олігомерну Сполуку 201, яка містить групу кон'югату саїіМАсз-18, отримали загальним способом, представленим у Прикладі 46. Кластерна частина саїІМАсз групи кон'югату сСаіМАсз- 18 (СаіМАсз-184) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-Аа-РІ-ОХОН)-. Структура СаІМАсз-18 (СаІМАсз-184-СМ-) представлена нижче: нон о о о те кутю о М М нота я Н М он ЗенМ о Н о (в но М о р мм то (см) З но о М н н 4 н о
АСНМ нон о о ще ра а о М мо нота я Н М
АснНМ
Приклад 70: Отримання олігомерної сполуки 204, що містить саіМАсз-19 во ає АкООве іш З мату. де, пев - з З ї дей Ед тин нання сн се Боб ет ит ти еюм доні тод деНВ й- я і й М рмто тя
Як ре З
Факфітизювацня «Й з ї сннннннннннено рн код тт А рило че Я. Ємнтехатою ДНК ден ЙО ай 00До0 ннннтнтнтннтнноннист з Ей ни? о и ДАЕ РТ он но он ТУ
Зшити гу - ще но-кдАя БК о-я ща
Вена Ї 8 но он тА
Ж дети найом 5 ї ха стервом нан т
З У З х Її м Зиоа доми «ем |-існоо 584
Олігомерну сполуку 204, що містить групу кон'югату саїІМАсз-19, отримали зі сполуки 64, використовуючи загальні способи, описані в Прикладі 52. Кластерна частина СаЇМАсз групи кон'югату саїЇМАсз-19 (СаіМАсз-193) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-Аа-Р(-ОХОН)-. Структура СаІМАсз-19 (Са!МАсз-19а-СМ- ) представлена нижче: он нОооНн Х о М но-ктао Ну К,
АснМ
ОохРТОН о ноОН х о М оон у,
АснМ осрооН о ноон ї о оте
З нот ї
АснМ
Приклад 71: Отримання олігомерної сполуки 210, яка містить саіМАсз-20
Є к кВ а в дня 00 ВІР, СНяЮМ ж? м ве КД
Кок М ї к Її пеня Зп и, юн
Е бр Мити ул тек вмто х. ч Моя о Е М-мн - й 13 є 8 рмто 205 шк о де ее: зи пити оре
СЯ з ; Ї ку т
КОС сжетанкоп пом им, ох лоНК й га т см в: т дес ек їі ХК й чщШх бок ит Фосфітилювання шив БЕЗ М о бзнеюрр ОСЛЛЮЛСЕЕЄНЯ мо-итти «тт тувттчцнй їн р ше ден сах Я ай ОМ що д де Ає у і ії, вкнтезвтор ДНК ен «Я 1 з Моне мо доо-тнья пики ци ов ча Ин "а в | до ж водн. : би
НМ ! ! що рмт ІТК
ОН па плн в ши ше ша чека; ши ди -- зи М аб
Наен хі З
НС» щЗ а 5 ї с х
Що о то ау і а-в-ОоН
ОМ В о а ях ні я АК у арт и но-ттья ще ї її с та денНМ вхв-ОН , ї
Он а Ж на / Код ко ик 2-х ее дл тнжксюв У дики
Що й ит т є ; -- рення
І: Її поні см ЕК ан 7 ж -о- є 1-Ярово)
Сполуку 205 отримали додаванням РЕР-ТФК і ОІБА до 6-(2,2,2-трифторацетамідо) рексанової кислоти в ацетонітрилі, яку отримали додаванням трифтороцтового ангідриду до 6- 5 аміногексанової кислоті. Реакційну суміш нагрівали до 80 "С, потім охолодили до кімнатної температури. Олігомерну сполуку 210, яка містить групу кон'югату саїіМАсз-20, отримали зі сполуки 208, використовуючи загальні способи, представлені в Прикладі 52. Кластерна частина
СаіМмАсз групи кон'югату СсаїіМАсз-20 (СаіМАсз-204) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-А-Р(-ОХОН)-. Структура
СаіМмАсз-20 (СаІМАсз-204-СМ-) представлена нижче:
он он но Н о о о М. И-к но шу З о
АСНМ о опетон он о З й М. ди о о М но З З
АСНМ о ? отитон он о «о й ва о о М но З З см
АСНМ о о-Їсм |--3
Приклад 72: Отримання олігомерної сполуки 215, яка містить саІМАсз-2 1 с М , М 3 - Ф сх : Щі т що ля кає й, ев Все КО в т а м ! ОН ї КО - хусреву з шен ГИ он ВО. ШИН. 1л-вкжяжеви вен й . ти з сн
КЕ я г т Пе хрмиких тат ВЯВЯВ Мен ві Зо тних
ВН дод ейннни ти ні шк птн ккд мін. тр ден і. І за що
Я х яким х їх я Мат» зеесогосоеотсооооотоостеюннн інф он, ух ї х Ж щи щу
Ди ! ; У ут якою ов й Я. МК вх дем ї. на оС М тім но-н И і ше шко зем ї з ШШЙ в че; ТЕ ит «В, вдає ГЕО кан у
ОВ т смарен ней ! бен о деті деки М,
НН ТОК ост тт воне їх текікв рою
Сполука 211 є у продажу. Олігомерну сполуку 215, яка містить групу кон'югату СаІМАсз-21, отримали зі сполуки 213, використовуючи загальні способи, представлені в Прикладі 52.
Кластерна частина сСаЇМАсз групи кон'югату СаіМАсз-21 (СаІМАсз-214) може бути комбінована з 5 будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-Аа-Р(-ОХОН)-.
Структура СаІМАсз-21 (СсаІМАсз-21а4-СМ-) представлена нижче: он он но Р о М но с
АснМ т? огитен о он но о М но ет ї
АСНМ ї отетон о он но о М но о й 9 о-(5)-
АснМ
Приклад 73: Отримання олігомерної сполуки 221, яка містить саІМАсз-22 тек Й ї Мур М 7 7 Ями Мт т ий "а т й бо. де М дити "м пи
В | ох В :
ІД Р ей ти? що з І 3 б ще он І гак КО пуху зів Я в Ед АСЮ ц 2 со піридик й ї мес: че ща ще З седан где Е
М нн и а в М ї ке ан й -х ії хх зів | : Минає Ше вні зе 7 чн 7 Б І : і
Е
Осо ІН
Де м ї
ОК ї - кю ку, кк Ж. ям дк ще 5 - юк, МЕНЯ ТЕ т м ре оди сит ця соди "ву дих ж . ши ОО м Фосфітипювання
МНАд з (5 са ще и ре ко М р ря КЗ їй г сте до То де и цю ун шия З м - о ЯН де і З щ
ЧАЄ а ;
КОМ сім Я сукхи
Зо ху ще, он ї ху ут пет Моди джтои ве й меш й ї
Соадю, Щ з : , З т. Сльтезатор ДНК яка З за нн Зм В ї . . в 5 Й обом 2. МН водк я ї Я дин зи з У зе тю в З нах й ї мах З й зн м о ме
См п а и і ШК НО
Тіз рення соди
МнНАє т
Сполуку 220 отримали зі сполуки 219, використовуючи тетразолід дізопропіламмонію.
Олігомерну сполуку 221, яка містить групу кон'югату ЗаіІМАсз-21, отримали зі сполуки 220, використовуючи загальний спосіб, описаний у Прикладі 52. Кластерна частина сСаіІМАсз групи кон'югату сЗаїіМАсз-22 (СааїМАсз-22:) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації фрагмент, що розщеплюється являє собою -Р(-ОХОН)-Аа-Р(-ОХОН)-. Структура СаІМАсз-22 (СаІМАсз-22а-СМ-
) представлена нижче: о он Н о
Н М. чи Ж он ою їй но о
МНАс о он Н о його он син т ее тр м7-9 он но о
МНАс т о он М Ї о СО
Н пр 7 Н светр м но о
МНАс о
Ссм)-ї
Приклад 74: Вплив різних фрагментів, що розщеплюються на антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на 5КВ-1, що містять кон'югат 5'-СбаіМАсз
Олігонуклеотиди, перелічені нижче, випробували в дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування 5КВ-1 у мишей. Кожна з груп кон'югату СсСаіМАсз була приєднана до
Б-кінця відповідного олігонуклеотиду.
Таблиця 60
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1 . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") СаМАсз 353382 Стев"Сев Гев Гев"СевАсвСтав Гав'"СавАвв ТавСіавАвав"Сдв Газ Гев нд ндо| вра пев" Сев Те Ге
СаіМАсз-За-оАдоСтев"Сев Ге Гев'""СевАвавСіав Гав'"СавАвв» Г ав 661161 СіавАвче "Свв Гав Гев"Сев"Сев Тез Ге Са!МмАсз-За
СаіМАсз-За-оСев"Сев Ге Гев'"СевАвдв ав Гав'"СсавАвв Т ав 566904 СіавАвче "Свв Гав Гев"Сев"Сев Тез Ге ба!МмАсз За Ро 82
СаіМАсз-1 7а-оАвдоСіев'"Сев Тез Гев'"СевАвавСіав Гав'"СавАвв» Г ав ба СіавАвче "Свв Гав Гев"Сев"Сев Тез Ге ба!МмАсз 17а
СаіМАсз-1 8а-оАвдоСіев"Сев Тез Гев'"СевАвавСіав Гав'"СавАвв» Г ав 675442 СіавАвче "Свв Гав Гев"Сев"Сев Тез Ге ба!МмАсз 1Ва
У всіх таблицях заголовні букви вказують азотисту основу для кожного нуклеозиду, а "С означає 5-метилцитозин. Нижні індекси: "е" означає 2-«МОЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-О-2'-дезоксирибонуклеозид; "5" означає тіофосфатний міжнуклеозидний лінкер (РБ); "о" означає фосфодіестерний міжнуклеозидний лінкер (РО); їі "о" означає ОР(-ОХОН)-. Групи кон'югату виділені жирним.
Структура СаіМАсз-За показана раніше в Прикладі 39. Структура СаІМАсз-17а показана раніше в Прикладі 68, а структура сСаіМАсз-1ва показана раніше в Прикладі 69.
Лікування
Шости-восьмитижневим мишам С57БІ6 (даскзоп І арогаїогу, Бар-Харбор, штат Мен) ввели одноразову підшкірну ін'єкцію дози, представленого нижче, олігонуклеотиду, наведеного в
Таблиці 60, або сольового розчину. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин.
Мишей приспали через 72 години після останнього введення для визначення рівнів МРНК 5КВ- 1 за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМФ (МоІесшаг Ргобрез5, Іпс. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів мРНК 5КВ-1ї для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразка, обробленого сольовим розчином.
Як показано в Таблиці 61, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні МРНК
ЗАВ-1 дозозалежним чином. Антисмислові олігонуклеотиди, які містять кон'югат саїМмАс, демонструють рівні ефективності і є значно більш ефективними, ніж вихідний олігонуклеотид, який не має кон'югату сСаІМАс.
Таблиця 61
МРНК ЗЕКВ-1 (95 від сольового розчину)
МРНК ЗЕВ-1 (95 см
ІБІЗ Мо Доза (мг/кг) від сольового Кластер СаІМАсз розчину)
Сольовийрозчин | нд. | 100,0 нд | нд 79,38 353382 68,67 40,70 79,18 75,96 661161 30,53 СаіМАсз-За Аа 12,52 91,30 57ВВ ши 21.22 бамлсзза 16,49 76,71 63,63 675441 29,57 СаіМАсз-17а Аа 13,49 95,03 60,06 675442 СЕ 04 СаіМАсз-1в8а Аа 19,40
Рівні трансамінази печінки, аланін-амінотрансферази (АЇТ) та аспартат-амінотрансферази (А5Т) у сироватці вимірювали щодо мишей, ін'єкованих сольовим розчином, використовуючи стандартні протоколи. Оцінили також загальний білірубін і азот сечовини крові (АМК).
Перевірили зміну маси тіла, що істотно не відрізнялася від групи з сольовим розчином (дані не показані). Значення АЇ Т, А5Т, загального білірубіну та АМК представлені нижче в Таблиці 62.
Таблиця 62
Загальний
Доза АТ А5Т ду Кластер
ІБІЗ Мо (мг/кг) (од./л) (од./л) білірубін |АМК (мг/дл) самАсз СМ (мг/дл)
Сольовий боми | мя | 6 | в | 06001 353382 бот! Замлсиза . бовгох Заімлсх За
Таблиця 62
Загальний
Доза АТ А5Т ду Кластер
ІБІЗ Мо (мг/кг) (од./л) (од./л) білірубін |АМК (мг/дл) самАсз СМ (мг/дл) 851 601951 061534 бува ЗаїмАсе17а Ав бу Гов 17277168. 025.1. 37. | СаіМАства | Ав
Приклад 75: Фармакокінетичний аналіз олігонуклеотидів, які містять 5'-групу кон'югату
ФК АБО, представлених вище в таблицях 54, 57 та 60, оцінили з використанням зразків печінки, які отримали після виконання способів лікування, описаних у Прикладах 65, 66, 74.
Зразки печінки подрібнили і екстрагували за стандартними протоколами, та аналізували за допомогою ІП-ВЕРХ-МС разом з внутрішнім стандартом. Сумарний рівень (мкг/г) усіх метаболітів у тканині виміряли інтегруванням відповідних УФ піків, а рівні у тканини АБО повної довжини, що не містять кон'югату ("початкове", в цьому випадку І5із Мо 353382), виміряли з використанням відповідних іон-екстракційних хроматограмм (Ес).
Таблиця 63
ФК аналіз у печінці
Загальний рівень в Рівень вихідного АБО в
ІЗІ5 Ме | Доза (мг/кг) печінці з УФ (мкг/г) | печінці за ЕІС (мкг/г) Кластер бамдся СМ 555а32251703001880000100000086 353382 бБТТви Заїмлсз' За й
Ши СаїмАсетза | й
БТООБи СаїмАсеїЗа | й бтави СаїмАсзтза | А б71262 СаїмАсет5а | А 670699 Заїмлсз' За в 570700 Заїмлсз' За ле
БТОТО Заїмлсз' За те 671165 СаїмАсеїЗа | й
Бббзол Заїмлсз' За во бТБи СаїмАсзтїта | й бт5лч2 СаїмАсзіва | А
Результати, представлені вище в Таблиці 63, демонструють, що спостерігали більш високі рівні в печінці олігонуклеотидів, що містять групу кон'югату саіМАсз, ніж вихідного олігонуклеотиду, який не містить групу СсаІМАсз (ІЗІЗ 353382) через 72 години після введення олігонуклеотиду, особливо з урахуванням введення різних доз для олігонуклеотидів з групою кон'югату СаїІМАсз і без неї. Крім того, через 72 години 40-98 95 кожного олігонуклеотиду, що містить групу кон'югату СаЇМАсз, було метаболізовано до вихідної сполуки, що вказує на те, що групи кон'югату СаіїМмАсз розщеплюються в зазначених олігонуклеотидах.
Приклад 76: Отримання олігомерної сполуки 230, яка містить саіМмАсз-23 ко й сл М вав. рей К., пд й С х нат ти три пегееоооосоосог с нале тат туу би з
БУ см г 4 ТМЕОтІ бдобє яти кдд В І МК у ;
ОТТО дня дини дитя
Оле пкт "й у 224 Мне
РОН дик дом по отстстсстоВВВх дити дядя Но петнттнттнттнттнттнттнттнттнттнттнттнттнттнттнтт нн фюх
МАБЕОАсЄ МОМ 0 пдде Кл М ов ЕК х -2О ГОЕ-х Я 1 но ча 2 Ї ї Е ех : х ме
Х -у з ово - х - шт цуют ж ме с 00 ол То Ї
САМУ нету к
Ас ; с. З :
Одес МНас . що МО» 1ХВідновлення у.о ру сн рт я ша т 2) Зв'язування дикиспоти
Оденкни З | З ЗРО і - ий йх вЕвотву ї й г де й Кот в-ТфЕ
МАЄ де це .
ЖК шо рія риття М мно Він ши а г
Ас стих . ОАб н
СА | мк КУ я, ню М че «о шана то
САє нут у Кк
Где Е, т що З пд З НА Га Ген чт М я и х тк пт пн. М. т тю, й т й У у ще дитини а ! її
Сон й 0 О детодлю і, Одес ' о ГГ
МНАс де | - ї Е
У що Коди ру ке п дини у и
КУМ пет і
МНАЄ ав
З.Боратний буфер, ДМСО, рН 5,2, кімн. т-ра
МУКУ КУКА КУКА ій.
Ж. Аміак води, кімн. т-ра
С дод ру р оноамльня М с 5 Т.оац М
М М а диву у т в В. ще ще ій см в око
ОН вн й | о С
КнНАсЄ си То щ й . з ; «ех дк син о ди оно 7 з
Мняє ме
Сполука 222 є у продажу. 44,48 мл (0,33 моль) сполуки 222 обробляли тозилхлоридом (25,39 р, 0,13 моль) в піридині (500 мл) протягом 16 годин. Потім реакційну суміш випарували до маслянистої речовини, розчинили в ЕТОАс і промили водою, насиченим розчином Мансо»з, насиченим сольовим розчином і висушили над Маг25О.4. Етилацетат концентрували насухо і очистили колоночною хроматографією, елюїровали ЕІОАсС у гексанах (1:1), потім 10 95 метанолу в СНоСі» з отриманням сполуки 223 у вигляді безбарвної маслянистої речовини. Дані РХМС і
ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. 10 г (32,86 ммоль) 1-тозилтриетиленгліколю (сполука 223) обробляли азидом натрію (10,68 р, 164,28 ммоль) у ДМСО (100 мл) при кімнатній температурі протягом 17 годин. Потім реакційну суміш вилили у воду і екстрагували ЕЮАСс.
Органічний шар три рази промили водою і висушили над Маг25О4. Органічний шар концентрували насухо з отриманням 5,3 г сполуки 224 (92 95). Дані РХМС і ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. 1-Азидотриетиленгліколь (сполука 224, 5,53 м, 23,69 ммоль) та сполука 4 (6 г, 18,22 ммоль) обробили 4А молекулярними ситами (5 г) і ТМ5ОТІ (1,65 мл, 9,11 ммоль) у дихлорметані (100 мл) під інертною атмосферою. Через 14 годин реакційну суміш відфільтрували для видалення сит, а органічний шар промили насиченим розчином Мансо»з, водою, насиченим сольовим розчином і висушили над Маг5О»х. Органічний шар концентрували насухо і очистили колоночною хроматографією, елюїровали градієнтом від 2 до 4 95 метанолу в дихлорметані з отриманням сполуки 225. Дані РХМС і ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. Сполуку 225 (11,9 м, 23,59 ммоль) гідрирували в Е(Ас/метанолі (4:11, 250 мл) на каталізаторі Перлмана. Через 8 годин каталізатор видалили фільтруванням, а розчинники видалили насухо з отриманням сполуки 226. Дані РХМС і ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Для отримання сполуки 227 розчин нитрометантриспропіонової кислоти (4,17 г, 15,04 ммоль) та основу Хюніга (10,3 мл, 60,17 ммоль) у ДМФА (100 мл) по краплях обробили пентафтортрифторацетатом (9,05 мл, 52,65 ммоль). Через 30 хвилин реакційну суміш вилити в крижану воду і екстрагували ЕАс. Органічний шар промили водою, насиченим сольовим розчином і висушили над Ма»5Ої. Органічний шар концентрували насухо, а потім перекристалізували з гептану з отриманням сполуки 227 у вигляді білої твердого речовини. Дані
Зо РХМС і ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. Сполуку 227 (1,5 г, 1,93 ммоль) і сполуку 226 (3,7 м, 7,74 ммоль) перемішували при кімнатній температурі в ацетонітрилі (15 мл) протягом 2 годин. Потім реакційну суміш випарували насухо і очистили колоночною хроматографією, елюїруючи градієнтом від 2 до 10 95 метанолу в дихлорметані, з отриманням сполуки 228. Дані
РХМС ії ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. Сполуку 228 (1,7 г, 1,02 ммоль) обробили нікелем Ренея (близько 2 г, вологий) в етанолі (100 мл) в атмосфері водню. Через 12 годин каталізатор видалили фільтруванням, а органічний шар випарували до твердої речовини, яку використовували безпосередньо на наступній стадії. Дані РХМС і ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. Цю тверду речовини (0,87 г, 0,53 ммоль) обробили бензилглутаровою кислотою (0,18 г, 0,8 ммоль), НВТИи (0,3 м, 0,8 ммоль) і ОІЕА (273,7 мкл, 1,6 ммоль) у ДМФА (5 мл). Через 16 годин ДМФА видалили при зниженому тиску при 65" до маслянистої речовини, і цю маслянисту речовина розчинили в дихлорметані. Органічний шар промили насиченим розчином Мансо»з, насиченим сольовим розчином і висушили над Маг25О4. Після випарювання органічного шару сполуку очистили колонковою хроматографією і елюїровали градієнтом від 2 до 2095 метанолу в дихлорметані зв'язаного з отриманням продукту. Дані РХМС і ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. З бензилового ефіру зняли захист на каталізаторі
Перлмана в атмосфері водню протягом 1 години. Потім каталізатор видалили фільтруванням, а розчинники видалили насухо з отриманням кислоти. Дані РХМС і ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. Цю кислоту (486 мг, 0,27 ммоль) розчинили в сухому ДМФА (3 мл).
Додали піридин (53,61 мкл, 0,66 ммоль) і продули реакційну суміш аргоном. До реакційної суміші повільно додали пентафторфенілтрифторацетат (46,39 мкл, 0,4 ммоль). Колір реакційної суміші змінився з блідо-жовтого на винний, та з'явився легкий димок, який випарувався з потоком аргону. Реакційну суміш залишили перемішуватися при кімнатній температурі на одну годину (завершення реакції підтвердили РХМС). Розчинник видалили при зниженому тиску (ротаційний випарник) при 70 "С. Залишок розбавили ДХМ і промили 1 н. Манзох, насиченим сольовим розчином, насиченим розчином бікарбонату натрію і знову насиченим сольовим розчином. Органічний шар висушили над Маг5О», відфільтрували і концентрували насухо з отриманням 225 мг сполуки 229 у вигляді тендітної жовтої піни. Дані РХМС і ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою.
Олігомерну сполуку 230, що містить групу кон'югату саіМАсз-23, отримали зі сполуки 229, використовуючи загальний спосіб, описаний у Прикладі 46. Кластерна частина саіІМАсз групи кон'югату саїіМАсз-23 (СаіМАсз-23а) може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату. Структура СаіМАсз-23 (СсаіМмАсз-23а-СМ) представлена нижче: он Н он Хе; он он Н он МНАс н МН М. А мо о ооо те Сем он о о о б) о
МНАс он тн он
МНАс
Приклад 77: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на
ЗАВ-1, що містять кон'югат саіМмАсз
Олігонуклеотиди, перелічені нижче, випробували в дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування 5КВ-1 у мишей.
Таблиця 64
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1 . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") СсамаАсз
СаіМмАсз-За-оАвдоСтіев"Сев Гев Гев'"СевАввСав Гав'"СавАвв ГТ ав 661161 СіавАвче "Свв Гав Гев'"Сев"Сев Тез Ге ба!МмАсз За
СаіМмАсз-За-о(Зев"Сев Геє Гев'"СевАвазСав Гав'""СавАвдв Т ав 566904 СіавАвче "Свв Гав Гев'"Сев"Сев Тез Ге ба!МмАсз За Ро ва
СваіМмАсз-1 Оз-оАвдосСтев"Сео Гео Гео"СеоАавСіав Гав'"СавАдв Т ав 673502 СіавАвче "Свв Гав Гео"Сео"Сев Тез Ге ба!МмАсз 1ба
СаіМмАсз-ЗУ9а-оАвдоСтіев"Сев Тез Гев'"СевАвдвСав Гав'"СавАвв Гав 677844 СіавАвче "Свв Гав Гев'"Сев"Сев Тез Ге ба!МмАсз За
СаімМмАсз-2За-оАвдосСтев"Сев Геє Гев'"СевАвазСав Гав'""СавАвв Т дв 677843 СіавАвче "Свв Гав Гев'"Сев"Сев Тез Ге ба!МмАсз 2За
Сев"Сев Тез Гев'"СевАвав(Став Гав'"СавАвв ГавСзавАвав" Са» Газ Гев'"С ев 655861 пев ев ГеоАао-С1аІМАсз- а баімАсзта
Таблиця 64
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1 . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") СсамаАсз
Сев"Сев Гев Гев"СевАвв Став Гав'"СавАвв» ГавСЗавАсв'"" Свв Гав Гев'"Сев 677841 пев ев ГеоАао -С1ІаЇМАсз-19а баімАсз19а
Стев"Сев Гев Гев"СевАсв Став Гав'""СавАвв» Г ав 677842 СіавАвав"Сав Газ Гев"Сев "Сев Ге ГеоАао -С1а!І.ІМАсз-2Оа Са!МмАсз-2ба
Структура сСаіМАсз-14 показана раніше у Прикладі 9, саіМАсз-3За показана в Прикладі 39,
СаіМмАсз-9а показана в Прикладі 52, саіМАсз-10а показана в Прикладі 46, сзаіМАсз-1943 показана в Прикладі 70, саіМАсз-20а показана в Прикладі 71 і сзаїМмАсз-23а показана в Прикладі 76.
Лікування
Шости-восьмитижневим мишам С57БІ6 (даскзоп І арогаїогу, Бар-Харбор, штат Мен) ввели одноразову підшкірну ін'єкцію дози, представленого нижче, олігонуклеотиду, наведеного в
Таблиці 64, або сольового розчину. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин.
Мишей приспали через 72 години після останнього введення для визначення рівнів МРНК ЗАВ- 1 за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМФ (МоІесшаг Ргобрез5, Іпс. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів мРНК 5КВ-1ї для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразка, обробленого сольовим розчином.
Як показано в Таблиці 65, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні мРНК
ЗАВ-1 дозозалежним чином.
Таблиця 65
МРНК ЗЕКВ-1 (95 від сольового розчину)
МРНК 5КВ-1 (95
ІБІЗ Мо Доза (мг/кг) від сольового Кластер СаІМАсз СМ розчину)
Сольовийрозчин | нд | 100,0 нд. | нд 2 89,18 77,02 661161 нини Кс СаіМАсз-За Аз 12,64 98,11 55,85 ши 21.29 бамлсзза 13,43 77,15 41,05 673502 1 927 СаіМАсз-1 ба Аз та 87,65 93,04 677844 40,77 СаіМмАсз-За Аз 16.95 т02,28 70,51 677843 30,68 СаіМАсз-2За Аз 13,26
Таблиця 65
МРНК ЗЕКВ-1 (95 від сольового розчину)
МРНК 5ЕВ-1 (95
ІБІЗ Мо Доза (мг/кг) від сольового Кластер СаІМАсз СМ розчину) 79,72 55,48 655861 26,99 СаІМАсз-1 а Аз 17,58 67,43 45,13 677841 27,02 СаМАсз-19а Аз 12,41 64,13 53,56 677842 20,47 СаіМмАсз-2ба Аа 10,23
Виміряли також рівні трансамінази в печінці, аланін-амінотрансферази (АГ Т) та аспартат- амінотрансферази (А5Т) у сироватці, використовуючи стандартні протоколи. Оцінили також загальний білірубін і азот сечовини крові (АМК). Перевірили зміну маси тіла, що істотно не відрізнялася від групи з сольовим розчином (дані не показані). Значення АЇТ, А5Т, загального білірубіну та АМК представлені нижче в Таблиці 66.
Таблиця 66
Загальний
Доза АТ АБТ киш Кластер
ІБІЗ Мо білірубін |АМК (мг/дл) СМ (мг/кг) (од./л) (од./л) (мг/дл) СаімМАсз
Сольовий роми | ма 5 | 0301 на бвттв! бамлсиЗа сл | 26 | 68 | 015 | 35 бввзох Заімлсв За 15 |ДЙЮДБК24 | 60 | оз | 35 бт3502 Заімасотоа | Аз бттвах бамлсиза сл біз готов 2111, во | ол5 | 00034 | баМАстза | й
Таблиця 66
Загальний
Доза А! Т А5Т ду Кластер
ІБІЗ Мо (мг/кг) (од./л) (од./л) білірубін |АМК (мг/дл) самАсз СМ (мг/дл) ба! Гово 1 220 60 | 031 36 3 бамаста |) бе Замлстза лю бттеля Замлсвоа тю
Приклад 78: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на ангіотензиноген, що містять кон'югат заіМмАсз
Олігонуклеотиди, перелічені нижче, випробували в дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування ангіотензиногену (АСТ) у нормотензивних щурів Спрег-Доулі.
Таблиця 67
Модифіковані АБО, спрямовані на АСТ . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІВ Мо Послідовність (від 5' до 3") СсамаАсз 5Б2668 со влеибеТебидетеТеТеТеТеба Се бе Сенд, 000 до 835
СіезАез Те тОевАев""Сев ГезСееАвз І ав І ав ав Г ав ГавСлав"Сав'"Сав"СавАев(Тез 669509 СіезАез ГеоДдо -СЗ2аЇМАсз- а бамАсз а
Структура СаІМАсз-14а показана раніше у Прикладі 9.
Лікування
Шоститижневим самцям щурів Спрег-Доулі один раз на тиждень вводили підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, у цілому три дози олігонуклеотиду, представленого у Таблиці 67, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Щурів приспали через 72 години після останньої дози. Рівні МРНК АСТ у печінці виміряли за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМФ (Моїесшаг Ргобевз, Іпс., Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами. Рівні білка АСТ у плазмі виміряли за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу для визначення загального ангіотензиногену (кат. Мо
УР27412, ІВ ІпгегпайопаіІ, Торонто, штат Онтаріо) з розведенням сироватки 1:20000.
Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток від рівнів МРНК АСТ у печінці або від рівнів білка АСТ у плазмі для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразку з РВ5.
Як показано в Таблиці 68, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні МРНК
АСТ у печінці та рівні білка в плазмі дозозалежним чином, та олігонуклеотид, що містить кон'югат саіМАс, був значно ефективнішим, ніж вихідний олігонуклеотид, який не містить кон'югату СсаіІМАс.
Таблиця 68
Рівні мРНК АСТ у печінці та білка в плазмі
МРНК АСТ у Білок АСТ у СМ
ІБІВ Мо Доза (мг/кг) печінці (96 РВУ) | плазмі (95 РВЗ) Кластер саІМАсз М
РВ5 | нд. | 10017777 100 | нд | нд. 52668 80111118 669509 Звімлсвта ле 107 Ї1777111719 ЇЇ 23 2 /
Виміряли також рівні трансамінази в печінці, аланін-амінотрансферази (АГ Т) та аспартат- амінотрансферази (А5Т) у плазмі, а також масу тіла у момент вбивства, використовуючи стандартні протоколи. Результати представлені нижче в Таблиці 69.
Таблиця 69
Рівні трансамінази печінки і маси тіла щурів
Маса тіла (95 Класте
ІБІВ Мо Доза (мг/кг) | АТ (од./л) | АБ5Т (од./л) |від вихідного й СМ
СаІМмАсз значення)
РВЗ 77 нд. | 51 | 81 2 | 7186 | нд. | нд. оБибвв 73001777 59 | 991 182 80 | 58 | 78 | 7170 03 1 щюж5З | 90 | 7190 669509 Замлсюта ла
Приклад 79: Тривалість дії іп мімо олігонуклеотидів, спрямованих на АРОС-ЇЇ, що містять кон'югат сСаіМАсз
Олігонуклеотиди, наведені нижче в Таблиці 70, випробували у дослідженні одноразової дози на тривалість дії у мишей.
Таблиця 70
Модифіковані АБО, спрямовані на АРОС-ПІ . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") СаМАсз 304801 пес беТете Сететабете Се СелебилонТтете до Тндо) 821
ТезАезТе
АезСіев""Сев Тез Гев'"Сав Гав ГавСіав Гав'"Сав'"СавАвавСіав""Сав Тез Тез 647535 ТезАев ТеоАао -СЛ1ОІМАсз-1а Са!мАсз-та
СаіМмАсз-За-оАвдоАевзСівв"Сев Ге Гев'" Сов Газ Газа Гав'"Сав 663083 тоавАввСтав" Св Т ев Ї ев ТезАезТе СаїМмАсз-За
СаіМмАсз-7а-ойАвдоАевзСівв"Сев Ге Гев'" Сов Газ Газа Гав'"Сав 674449 тоавАввСтав" Св Т ев Ї ев ТезАезТе СаїМмАсз-7а
СаіМмАсз-1 Оа-о АвдоАезСівв'"Сев Ге Гев'" Сов Газ Газа Гав'"Сав 674450 тоавАввСтав" Св Т ев Ї ев ТезАезТе ба!МмАсз 1ба
Таблиця 70
Модифіковані АБО, спрямовані на АРОС-ПІ . . ши , Кластер ЗЕО І
СаімМАсз-1 За-оАдоАезСтев"Сев Ге Гев'"Сав Г ав ГавСлав Гав'"Сав
Структура СаІМАсз-13 показана раніше у Прикладі 9, СаіМАсз-3За показана у Прикладі 39,
СаіМАсз-7а показана у Прикладі 48, сСаіМАсз-10а показана у Прикладі 46 і СаіМАсз-13а показана у
Прикладі 62.
Лікування
Шости-восьмитижневим трансгенним мишая, які експресують людський АРОС-Ц, ввели одноразову підшкірну ін'єкцію олігонуклеотиду, наведеного в Таблиці 70, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 3 тварин. Зразки крові брали до введення дози для визначення вихідного значення, а також через 72 години, 1 тиждень, 2 тижні, З тижні 4 тижні, 5 тижнів і 6 тижнів після введення дози. Рівні тригліцеридів і білка АРОС-Ц в плазмі вимірювали так, як описано в Прикладі 20. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток від рівнів тригліцеридів та АРОС-ПЇ в плазмі для кожної експериментальної групи, нормалізованих до вихідних значень, і вони демонструють, що олігонуклеотиди, які містять групу кон'югату саЇІМАс, мають більш тривалу дію, ніж вихідний олігонуклеотид, який не містить групу кон'югату (І5БІЗ 304801) навіть незважаючи на те, що доза вихідної сполуки була в три рази вище, ніж доза олігонуклеотидів, які містять групу кон'югату СаІМАс.
Таблиця 71
Рівні тригліцеридів і білка АРОС-І| в плазмі трансгенних мишей
Часові точки Тригліцериди Білок АРОС-ІЇ!
ІБІЗ Мо | Доза (мг/кг) (дні після (95 від вихідного С ВІД Кластер СМ введення вихідного СаІМмАсз значення) дози) значення) 77 | ло | 98 2 щ з«« 714 | 108 | 98 кц«/
РВ5 | 88 6 Щ | 9 304801 30 35 | 68 | 7 647535 10 СаїМАсз-та Аа 35 | 69 | 695
Таблиця 71
Рівні тригліцеридів і білка АРОС-І| в плазмі трансгенних мишей
Часові точки Тригліцериди Білок АРОС-П с. бу:
ІБІЗ Мо | Доза (мг/кг) (дні після (95 від вихідного С ВІД Кластер СМ введення вихідного СаіМАсз значення) дози) значення) 663083 10 СаїМАсз-За Аа 42 | 60 | 78 674449 10 СаїМАсз-7а Аа 35 | 69 | 77 742 | 78 | 99 674450 10 СаіМАсз-1ба Аа 35 | 68 | 7 674451 10 СаіМАсз-1За Аа
Приклад 80: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на альфа-1 антитрипсин (АТАТ), що містять кон'югат заіМАсз
Олігонуклеотиди, перелічені нижче в Таблиці 72, випробували в дослідженні дозозалежного інгібування АТАТ у мишей.
Таблиця 72
Модифіковані АБО, спрямовані на АТАТ . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") СсамаАсз 476366 Аев"Сев"Сев"СевАевзАав Газ Гав'"СавАвавСавАвавзАвавСіавС145АевАев оно |ндо вв
Сіе5Се5Ае
Аев"Сев'"Сев"СевАезАввз Гав Гав'"СавАвавСіавАвавАвавз(ЗавСіаєАевАев 656326 СіевСієвАвоАао-С1аІМАсз- 14 СаїМмАсзта
СаіМмАсз-За-оАвдоАев"Сев'"Сев""СевАевАвв Газ Гав'"СавАвавСіавАвав 678381 АвавСіавСіазАезАев СіевСієвАе СаїМмАсз-За
СаіМмАсз-7а-ойАвдоАев"Сев'"Сев""СевАевАвв Газ Гав'"СавАвавСіавАвав 678382 АавСіавСіазАезАев СіезСіевАе СаїМАсз-7а
СаімМАсз-1Оа-оАдоДАев"Сев"Сев"СевАееАвв Таз Гав'""СавАваз Свв 678383 АдеАвзСідеСіазАевАев СезСевзАе Са!МмАсз-тба
Таблиця 72
Модифіковані АБО, спрямовані на АТАТ . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІВ Мо Послідовність (від 5' до 3") СсамаАсз
СаімАсз-1 За-оАвдоАев"Сев"Сев'""СевАевАвв Газ Гав'"СавАвае Став 678384 АдеАвзСідеСіазАевАев СіееСтевАе ОіаічАсз 1За
Структура СаІМАсз-13 показана раніше у Прикладі 9, СаіМАсз-3За показана у Прикладі 39,
СаіМАсз-7а показана у Прикладі 48, сСаіМАсз-10а показана у Прикладі 46 і СаіМАсз-13а показана у
Прикладі 62.
Лікування
Шоститижневим самцям мишей С57ВІ /6 (Часкзоп І арогаїогу, Бар-Харбор, штат Мен) один раз на тиждень вводили підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, в цілому три дози олігонуклеотиду, переліченого в Таблиці 72, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Мишей приспали через 72 години після останнього введення. Рівні
МРНК АТАТ у печінці визначили за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМФ (Моїесшіаг Ргобев, Іпс., Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами. Рівні білка АТАТ у плазмі визначили за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу для визначення мишачого альфа 1-антитрипсину (кат. Мо 41-АТАМ5-
ЕО1, АІрсо, Салем, штат Нью-Гемпшир). Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК АТАТ у печінці і білка в плазмі для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразку з РВ5.
Як показано в Таблиці 73, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні мРНК
АТАТ у печінці і рівні білка АТАТ у плазмі дозозалежним чином. Олігонуклеотиди, які містять кон'югат саїІМАс, були значно ефективнішими, ніж вихідна сполука (І5ЗІ5 476366).
Таблиця 73
Рівні мРНК АТАТ у печінці та білка в плазмі
МРНКААТАТ у Білок АТАТ у
ІБІЗ Мо Доза (мг/кг) печінці (95 РВЗ) | плазмі (95 РВЗ) Кластер Фамдсі СМО
РВ5 нд. | 7700 | 700 | нд. | нд. 75 ЮЩ| Юющ866 5 щЩ | 78 "76366 7706 ЮюЮ.Ї Юлю | 9 ба 6 010011777150001011.30000 | баса в 718. Її 6 ! 0 06 | 705 | 9 772 | 51414 БЖю | 6 був! 61011716 200 | бамасва в 06 | щ90 | 7 вза 60117721 27.000| бамаста в 218 71181 06 | 94 | 84 був п6111177117131011 2400 | бамастоа в 718. | 6 ! 0 06 | 706 | 9 вза. 60101171260001010111113100| бамасва в
Під час умертвіння виміряли рівні трансамінази печінки та АМК у плазмі за стандартними протоколами. Виміряли також маси тіла і маси органів. Результати представлені нижче в
Таблиці 74. Маса тіла представлена яко відносно вихідного значення. Маси органів представлені як 95 від маси тіла відносно контрольної групи з РВ5.
Таблиця 74
Маса тіла (У5ІМаса печінки) Маса нирок Маса
ІБІВ Мо Доза АТ | АБ АМК від вихідного! (95 від. маси | (9о від. маси селезінки С (мг/кг). | (од./л) | (од./л)|. (мг/дл) й й від. маси значення) тіла) тіла) тіла)
РВ5 | нд. | 25 | 51 | 37 | 119 | 100 | 100 | 0 5 | 34 68 | 35 | 116 | 9 | 98 | 06 / 476366 45 | 3047 | з | 118 | 99 | 108 | 23 06 | 29 57 | 40 | 123 | 100 | 103 | їш9 2 | 936 75 | 39 | 114 | 98 | 11 | 06 без гв6 1732 1767 391 125.0 | 9901 871. 122 06 | 2657 | 32 | 117 | 93 | 109 | по вувзвя/ 2 | 26 | 521 33 | 7121 | 96 | 706 | 7125 6 | 40 78 | 32 | 124 | 92 | 106 | 126 06 | 26 42 | 35 | 114 | 100 | 103 | лоз / бтзвигов6 17301779, 291.17. 89 | 1021. 107. 18 | 65 112| з | 120 | 89 | 104 | мз 06 | 30 67 | 38 | 121 | 91 | 100 | 23 / вувзва! 2 | 33 | 53 33 | 78 | 98 | 102 | 7121 6 | З2 | 63 | 32 | 117 | 97 | 105 | 05 / 18 | 936 68 | з | 118 | 99 | 103 | 08 / 06 | 36 63 | 31 | 118 | 98 | 103 | 98 / 678384 6 | 3469 | 34 | 122 | 100 | 100 | 96 18 | 28 | 55 | 30 | 117 | 98 | 101 | 04
Приклад 81: Тривалість дії іп мімо олігонуклеотидів, спрямованих на АТАТ, що містять кластер СаІМАсз
Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 72, випробували у дослідженні одноразової дози на тривалість дії у мишей.
Лікування
Шоститижневим самцям мишей С57ВІ/6 ввели одноразову підшкірну ін'єкцію олігонуклеотиду, згаданого у Таблиці 72, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Зразки крові брали за день до введення дози для визначення вихідного значення, а також на 5, 12, 19 ії 25 день після введення дози. Рівні білюяа АТАТ у плазмі виміряли за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу (див. Приклад 80). Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів білька АТАТ у плазмі для кожної експериментальної групи, нормалізованих до вихідних рівнів. Результати демонструють, що олігонуклеотиди, які містять кон'югат сзаїіМАс, були більш ефективними і мали більш тривалу дію, ніж вихідна сполука без кон'югату СаіМАс (І5І5 476366). Крім того, олігонуклеотиди, що містять 5'-саМАс кон'югат (І5І5 678381, 678382, 678383 і 678384), були, в цілому, ще більш ефективними зі ще більш тривалою дією, ніж олігонуклеотид, який містить 3'-саїЇМАс кон'югат (ІБІЗ 656326).
Таблиця 75
Рівні білка АТАТ у плазмі мишей
Здштсля | МАТ Освй см
ІБІЗ Мо Доза (мг/кг) вихідного Кластер СаІМАсз введення значення) дози 785 7779190 7 "76366 19 656326 В Замлста 7 тов! в Замлсв за 7 брова в Замлсвта 7 низин ши бтвова в Заімлсзтоа 7 бтвзв в Заімлсз тва 7
Приклад 82: Антисмислове інгібування іп міго під дією олігонуклеотидів, спрямованих на
ЗАВ-1, що містять кон'югат СаіМАсз
Первинні гепатоцити печінки мишей висівали у 96-лункові планшети при 15000 клітин на лунку за 2 години до обробки. Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 76, додали в концентрації 2, 10, 50 або 250 нМ в середовищі Вільяма Е, і клітини інкубували протягом ночі при 37 "С 5 95
СО». Клітини лізирували через 16 годин після додавання олігонуклеотиду, а загальну РНК очистили за допомогою КМеазе 3000 ВіоКоброї (Сіадеп). Рівні мРНК 5КВ-1 визначили за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМО (МоїІесшаг Ргобе5, Іпс., Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами. Значення ІСво визначили за допомогою програми Ргізт 4 (СгарпРад). Результати демонструють, що олігонуклеотиди, які містять безліч різних груп кон'югату СаїІМАс і безліч різних фрагментів, що розщеплюються, є значно більш ефективними в іп міго експерименті вільного поглинання, ніж вихідні олігонуклеотиди, які не містять групу кон'югату СаІМАс (І5І5 353382 і 666841).
Таблиця 76
Інгібування експресії 5ЕВ-1 іп міго . . ов й ' Кластер ІСвю І5ЕО ІЮ
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") самАс
Стев"Сев Тез Ге'"СевАвавСтав Гав'"СавАвв Гав(СзавАвв
Стев"Сев Тез Ге'"СевАвавСтав Гав'"СавАвв Гав(СзавАвв СаіМАсз- 655861 "Сава Гев"Сев"Сев Гев Геойао -(заїмАсз-їа
СаіМАсз-За-оАдоСівв "Сев Ге ТГев'""СевАвавзСвав І ав СаіМАсз-
СаіМАсз-За-оАвдоСіев"Сео Гео Гео" СеоАазСвав ГІ ав СаіМАсз- 661162 тіавАв» ГазСіавАвв "Св Т дв Тео"Сео"Сев Тез Ге РО/Р5 баси де) в | ват
Стев"Сев Тез Ге'""СевАвавСтав Гав'"СавАвв Гав(СзавАвв СаіМАсз-
СаіМАсз-ва-оАдоСтвв "Сев Ге Гев'""СевАвавзСвав І ав СаіМАсз-
СаіМАсз-Ба-оАдоСтвв "Сев Ге Гев'""СевАвавзСвав І ав СаіМАсз-
Стев"Сео Гео Гео"СевАвзСав Гав'"СавАва» ГаєСіавАсів
Саї!МАсз-1 Оа- 666881 оАдоСлев""Сев Ге Гев'""СевАвав(ав Г дв Заллех тіавАв» ГазСіавАвв "Св Гав Гев'"Сев"Сев Тез Те а
СаіМмАсз-За- 666904 оСев"Сев Тез Ге'""СевАвавСтав Гав'"Сав Заглсх горе вю
Аве ГавСтавАвв "Св Т ав Тев"Сев"Сев Тез Ге а
СаіМАсз-За-о І аоСівв""Сев Ге Гев'"СевАвв ав Т ав СаіМАсз- 566924 пСавАвв ГавСзавАвав"Сав Гав Тев'"Сев'"Сев Гев Ге
СаіМАсз-ба-оАдоСтвв "Се Ге Тев'""СевАвавзСвав І ав СаіМАсз-
СаіМАсз-7а-оАдоСівв"Сев Ге Гев'""СевАвавзСвав І ав СаіМАсз-
Саї!МАсз-1 За- 670061 оАдоСлев""Сев Ге Гев'""СевАвав(ав Г дв Заллех тіавАв» ГазСіавАвв "Св Т дв Тев"Сев"Сев Тез Ге а
СаіМмАсз-За-о ТаоСівв"Сео Гео Гео" СвойАазСівв І ав СаіМАсз- 670699 тоавАвв» Га» СіавАвче "Свв Та Гео"Сео"Сев Тез Ге РО/Р5
СаіМАсз-За-оАеоСіев"Сео Гео Гео" СеоАазСвав І ав СаіМАсз- 670700 тоавАвв» Га» СіавАвче "Свв Таз Гео"Сево"Сев Тез Г РО/Р5
СаіМмАсз-За-о ТеоСівв"Сео Гео Гео" СевойАазСівв І ав СаіМАсз- 670701 тоавАвв» Га» СіавАвче "Свв Таз Гео"Сео"Сев Тез Ге РО/Р5
Саї!МАсз-1 2а- б71144 оАдоСлев""Сев Ге Гев'""СевАвав(ав Г дв Затлов тіавАв» ГазСіавАвв "Св Т дв Тев"Сев"Сев Тез Ге а
СхаімАсз-1 За- самаАсз- 671 1 65 о АдоСіев'""Сео Гео Гео"СевоАазОСав» Газ тавАаз» Газ РО/Р5 1 З З Аа 831
СіавАвче "Свв Гав Гео"Сево"Сев Те Т а
Саї!МАсз-14а- 671261 оАдоСлев""Сев Ге Гев'""СевАвав(ав Г дв Замдсх тіавАв» ГазСіавАвв "Св Т дв Тев"Сев"Сев Тез Ге а
СхаімАсз-1 5а- самаАсз- 671 262 о АдоСтев"Сев Ге Гев'"СевАазСав І ав РБ 1 5 З Аз »250 831 тіавАв» ГазСіавАвв "Св Т дв Тев"Сев"Сев Тез Ге а
СаіМАсз-7а-оАдоСіев"Сео Гео Гео" СеоАазСвав І ав СаіМАсз- 673501 тіавАв» ГазСіадвАвв "Св Гав Гео" Сево"Сев Тез Ге РО/Р5 673502 |СаМАсз-10а- РО/Р5 |СаМмАсз--| Аз | 8 | 831
Таблиця 76
Інгібування експресії 5ЕВ-1 іп міго . . ов й ' Кластер ІСвю І5ЕО ІЮ
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") самАс тоавАвв ГавСіавАвсв "Сов Г ав Тео"Сео"Сев Гев Ге
СаіМАсз-17а- 675441 о АдоСіев""Севє Тез Гев'"СевАвавСвв І ав Замов тоавАвв ГавСіавАвв "Свв Т ав Тев"Сев"Сев І ев Те а
СаіМАсз-18а- 675442 о АдоСіев'""Севє Тез Гев'""СевАвавСвв І ав Задлех тавАвв ГавСіавАвсв"" Сов Г ав Тев"Сев"Сев Гев Ге а
Сев"Сев Гев Гев"СевАвв Став Гав"СавАвв ГавСіавАсів СаіМАсз-
Сев"Сев Гев Гев"СевАвв Став Гав"СавАвв ГавСіавАсів СаіМАсз-
СаіМмАсз-2За- самаАсз- 677843 о АдоСіев'""Севє Тез Гев'""СевАвавСвв І ав РБ5 23 З Аз 40 831 тавАвв ГавСіавАвсв"" Сов Г ав Тев"Сев"Сев Гев Ге а
Структура СаІМАсз-13 показана раніше у Прикладі 9, СаіМАсз-3За показана у Прикладі 39,
СаіМАсз-5а показана у Прикладі 49, СаіМАсз-ба показана у Прикладі 51, СаІМАсз-7а показана у
Прикладі 48, саіМАсз-8а показана у Прикладі 47, СсаіМАсз-9а показана у Прикладі 52, СаІМАсз- показана у Прикладі 46, саіМАсз-12а показана у Прикладі 61, СаІМАсз-13а показана у
Прикладі 62, СсСаіМАсз-14а показана у Прикладі 63, сзаіїМмАсз-15а4 показана у Прикладі 64, саіМАсз- 174 показана у Прикладі 68, СаіМАсз-184 показана у Прикладі 69, СаІМАсз-19 показана у
Прикладі 70, СаІМАсз-20а показана у Прикладі 71 і сзаїМмАсз-23а показана у Прикладі 76.
Приклад 83: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на 10 фактор ХІ, що містять кластер СаІМАсз
Олігонуклеотиди, наведені нижче в Таблиці 77, випробували в дослідженні дозозалежного інгібування фактора ХІ у мишей.
Таблиця 77
Модифіковані олігонуклеотиди, спрямовані на фактор ХІ . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") самАс 404071 ТезСіевСівв ГезАевАвв Гав'"Сав'""СавАвав'" Сов Г ав ав Гав"СавАевСвв оондо о ндо| вва
АезСіевСе
ТезСіеоСієо Ї еоАеодав Гав'"Сав"СавАвав'" Сов Г ав Пав Гав"СавАвоСтео 656173 АезСіевСівоАао -С1а!МАсз-їа СвімАсз- а
СаіМАсз-За-оАво ГезСеоСіво ГеоДеойоав Гав'"Сав'""СавАвав'"Сав Т ав 663086 Таз Гав"СавАеоСТеоАезСез(Зе баїМАсз-За
СаіМАсз-7а-оАдво ГезСЗеоСіво ГеоДеойоав Гав'"Сав'""СавАвав'"Сав Т ав 678347 Таз Гав"СавАеоСТеоАезСез(Зе баїМАсз-7а
СаіМАсз-1Оа-оАво ГезСівоСіво ГеоДеоДав Гав"Сав'"СавАвав"Сав 678348 Тав Гав Гав"СавАеоСівоАевзСЗев Се ОіаічАсз-ї Оз
СаіМАсз-1 За-оАво ГезСівоСіво ГеоДеоДав Гав"Сав'"СавАвав"Сав 678343 Таз Газ Гав"СавАеоСТеоАезСТез Се баїМмАсз-1За
Структура СаІМАсз-13 показана раніше у Прикладі 9, СаіМАсз-3За показана у Прикладі 39,
СаіМАсз-7а показана у Прикладі 48, сСаіМАсз-10а показана у Прикладі 46 і СаіМАсз-13а показана у
Прикладі 62.
Лікування
Шости-восьмитижневим мишам один раз на тиждень вводили підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, в цілому три дози олігонуклеотиду, наведеного нижче, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Мишей приспали через 72 години після останньої дози. Рівні мРНК фактора ХІ в печінці виміряли за допомогою ПЛР у реальному часі і нормалізували до циклофілину за стандартними протоколами. Виміряли також рівні трансамінази печінки, АМК і білірубіну. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток для кожної експериментальної групи, нормалізований до контролю з РВ5.
Як показано в Таблиці 78, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні мРНК фактора ХІ в печінці дозозалежним чином. Результати демонструють, що олігонуклеотиди, які містять кон'югат саїіМАс, були більш ефективними, ніж вихідна сполука без кон'югату сзаіМмАс (ІБІЗ 404071). Крім того, олігонуклеотиди, що містять 5'-саіМАс кон'югат (ІЗІЗ 663086, 678347, 678348 і 678349), були ще більш ефективними, ніж олігонуклеотид, який містить 3'-СаІМАс кон'югат (І5І5 656173).
Таблиця 78
Рівні мРНК фактора ХІ в печінці, трансамінази печінки, АМК та білірубіну 1 (мг/кг) | ХІ (95 від РВ5) | (од./л) | (од./л) | (мг/дл) | (мг/дл) СаМАсз МО
РВЗ | нд. | 100. | 63 | 70 | 21 | 08 | нд. | над. 404071 832 07 | щющ43 | 90 | 89 | 21 | об 656173| 2 | щЮК»е | 36 | 58 | 26 | 017 | СаіМАсзла | 833 6 | ющз | 50 | 63| 25 | 05 663086 СамАсз-За | 841 6 | щ1 134 | 40 | 23 | ол4 678347 СамАсз-7а | 841 6 | щ1 144 | 76| 19 | 05 678348 СаМАсз-1б0а| 841 6 | ющг2 | 25 | 38 | 20 | 04 678349| 22 | 8 | 43 63 | 21 | 04 |СамМАсзіЗа| 841 6 | щгг | 28 | | 20 | ола
Приклад 84: Тривалість дії іп мімо олігонуклеотидів, спрямованих на фактор ХІ, що містять кон'югат СаІМАсз
Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 77, випробували у дослідженні одноразової дози на тривалість дії у мишей.
Лікування
Шости-восьмитижневим мишам ввели одноразову підшкірну ін'єкцію олігонуклеотиду, наведеного у Таблиці 77, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин.
Зразки крові брали з хвостової вени за день до введення дози для визначення вихідного значення, а також на 3, 10 і 17 день після введення дози. Рівні білка фактора Хі в плазмі визначали твердофазним імуноферментним аналізом, використовуючи іммобілізовані і біотиніліровані детекторні антитіла для фактора ХІ виробництва КК 5 ОО бузіетв5, Міннеаполіс, штат Міннесота (кат. Мо АЕ2460 і Мо ВАЕР2460, відповідно), а також реагент ОрІЕЇА, набір В (кат.
Мо 550534, ВО Віозсіепсе5, Сан-Хосе, штат Каліфорнія). Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів білка фактора Хі в плазмі для кожної експериментальної групи, нормалізовані до вихідних рівнів. Результати демонструють, що олігонуклеотиди, які містять кон'югат сзаіМАс, були більш ефективними і мали більш тривалу дію, ніж вихідна сполука без кон'югату саіМАс (І5ІЗ 404071). Крім того, олігонуклеотиди, що
Зо містять 5'--СбаІМАс кон'югат (ІБІ5 663086, 678347, 678348 і 678349), були ще більш ефективними з ще більш тривалою дією, ніж олігонуклеотид, містить 3'-саїІМАс кон'югат (І5І5 656173).
Таблиця 79
Рівні білка фактора ХІ в плазмі мишей
Часові точки (дні | Фактор ХІ (95 від см ФЕОІЮ
ІБІЗ Мо | Доза (мг/кг)| після введення вихідного Кластер СаІМАсз МО дози) значення)
РВ5 404071 30 832 656173 баіМАсз-1а Аа 833 663086 Са!МАсз-За Аа ва 71717118. 678347 Са!МАсз-7а Аа ват 17111 в 678348 СаіМАсз-1ба Ав 841 17117116. 678349 СаМАсз-1За Ав 841
Приклад 85: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на
ЗАВ-1, що містять кон'югат саіМмАсз
Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 76, випробували в дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування 5КВ-1 у мишей.
Лікування
Шости-восьмитижневим мишей С57ВІ/6 один раз на тиждень вводили підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, в цілому три дози олігонуклеотиду, наведеного в Таблиці 76, або сольового розчину. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Мишей приспали через 48 годин після останнього введення для визначення рівнів МРНК 5КВ-1 за допомогою
ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМФ (МоїІесшаг
Ргобез, Іпс. Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК 5КВ-1 у печінці для кожної експериментальної групи, нормалізованих до контрольного зразка, обробленого сольовим розчином.
Як показано в Табляцях 80 і 81, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні
МРНК 5КВ-1 дозозалежним чином.
Таблиця 80
Таблиця мРНК 5ЕВ-1 у печінці сольового розчину)
Сольовийрозчин | нд. | 100 | нд | нд. ( вББВЄ! саімАсз-та де
Таблиця 80
Таблиця мРНК 5ЕВ-1 у печінці - о, Ї
ІІ Ме Доза (мг/кг) МРНКЗНВЛ Оввід | кластер саїМАсз сольового розчину) 66698 саїмАсз-7а ту 670061 20323608 89 1 саімдоіза ту 7703 щЩщ(їЙЮЙ.Й.ЙКЙКД96 г ж щ-(Б бттеля Заімлсз са те
Таблиця 81
МРНК ЗКВ-1 у печінці - о, Ї
ІІ Ме Доза (мг/кг) МРНКЗНВЛ Оввід | кластер саїМАсз сольового розчину) 661161 саїмАсз-за ту
Виміряли також рівні трансамінази печінки, загального білірубіну, АМК і маси тіла за стандартними протоколами. Середні значення для кожної експериментальної групи представлені нижче в Таблиці 82.
Таблиця 82 соді Маса тіла (90
ІБІБ Ме (мою (од) вп) т (мг/дг) від вихідного |Кластер СаіМАсз| СМ ! ! значення) с вів в 1 розчин боово! Замлста
Таблиця 82 соді Маса тіла (90 ! ! значення) бив тт |за | 601 ов | 221116. баМАсЗа бовев! Замлстоа | 7 бобев! Замлсоюта брови Замлсютза | 7 бле Замлсяоа | 7
Приклад 86: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на
ТТЕ, що містять кластер СаІМАсз
Олігонуклеотиди, наведені нижче в Таблиці 83, випробували у дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування людського транстиретину (ТТК) у трансгенних мишей, що експресують людський ген ТТЕ.
Лікування
Восьмитижневим ТТК трансгеннмх мишам один раз на тиждень протягом трьох тижнів, в цілому три дози, вводили підшкірну ін'єкцію олігонуклеотиду та дози, наведених у поданих нижче таблицях, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Мишей приспали через 72 години після останнього введення. Протягом експерименту в різних часових точках брали зразки крові з хвостової вени і вимірювали рівні білка ТТЕ у плазмі, АЇ Т та А5Т, які представлені в Таблицях 85-87. Після усипляння тварин виміряли рівні АТ, А5Т та людського ТТК у плазмі, а також маси тіла, маси органів і рівні МРНК людського ТТЕК у печінці.
Рівні білка ТТК виміряли за допомогою клінічного аналізатора (АШ480, ВесКтап СошиКег, штат
Каліфорнія). ПЛР у реальному часі і реагент для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМФ (МоїІесшаг Ргобе5, Іпс. Юджин, штат Орегон) використовували за стандартними протоколами для визначення рівнів мРНК людського ТТЕ у печінці. Результати, показані в Таблицях 84-87, являють собою середні значення для кожної експериментальної групи. Рівні мРНК являють собою середні значення щодо середнього значення для РВЗ5 групи. Рівні білка в плазмі являють собою середні значення щодо середнього значення для РВ5 групи у вихідному стані. Маси тіла являють собою середню процентну зміну маси від початкового значення до умертвіння для кожної окремої експериментальної групи. Представлені маси органів нормалізовані до маси тіла тварини, а потім представлена середня нормалізована маса органів для кожної експериментальної групи щодо середньої нормалізованої маси органів РВ5 групи.
У Таблицях 84-87 "ВІ" означає початкове значення вимірювань, виконаних безпосередньо перед введенням першої дози. Як показано в Таблицях 84 і 85,лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні експресії ТТК дозозалежним чином. Олігонуклеотиди, які
Зо містять кон'югат СаіІМАс, були більш ефективними, ніж вихідна сполука без кон'югату саіМмАс (БІВ 420915). Крім того, олігонуклеотиди, які містять кон'югат сЗаМАс і змішані РБ/РО міжнуклеозидні линкери, були ще більш ефективними, ніж олігонуклеотид, що містить кон'югат саїІМАс і тільки Р лінкери.
Таблиця 83
Олігонуклеотиди, спрямовані на людський ТТК
ЗЕ
Івіє Мо Послідовність від 5' до З" Зв'язки ато СМІ ІЮ
МО
420915 Тев"Сев Тез ГезСЗез дв І ав ГавАвав"СавАввз ГазСідвАвз Ав» Аев ТГев"Сев"Сев"Се РУ | нд. Інд.і842 660261 с дват ев боєТеТавйо вва ТовСовйсойке ЛетелСе"Сел Сей ре (Вінс два
СаімМАсз-За-оТГев'""Сео Гео Ї еоСіеоСівв Т ав ГазАвсв'"СавАвв с(за!МАсз- 682883 Тав(СавАввАвеАео Гео"Сев"Сев"Се РБ/РО Сад ро ва
СаімМАсз-7а-оТев'""Сео Гео Ї еоСіеоСівв Газ ГазАвсв'""СавАвв с(за!МАсз- 682884 Тав(СавАввАвеАео Гео"Сев"Сев"Се РБ/РО Семеро ва
СаіМАсз-1 Ог-о ТГев"Сео Ї ео І еоСтеосЗав І ав І аєАвав "Свв с(заіМАсз- 682885 Аве ГаєСіавАвдеАвазАео Гео"Сев"Сев"Се РБ/РО ба е ро ваг
СаіМАсз-1 За-о ТГеє"Сео Гео Ї еоСЗео(Сав Т ав І авАдав "Св с(заіМАсз- 682886 Аве ГаєСіавАвдеАвазАео Гео"Сев"Сев"Се РБ/РО ба а РО ваг 684057 соло деоеобов Те Товйо" СевЛез Товбавйсьйсойсо Тео Сов "Оев"Оеойо- РО/РО балоасе до вазі т а
Легенда для Таблиці 85 представлена в Прикладі 74. Структура СаіМАсз-1 показана у
Прикладі 9. Структура саіМАсз-3а показана у Прикладі 39. Структура СаІМАсз-7а показана у
Прикладі 48. Структура саіМАсз-10а показана у Прикладі 46. Структура СаІМАсз-1За показана у
Прикладі 62. Структура СаІМАсз-19а показана у Прикладі 70.
Таблиця 84
Антисмислове інгібування людського ТТК іп мімо - - віз Ме Доза (мг/кг) мРНК ттв (95 Рв) | Рілок Првазмі (5 | кластер саіМАс кою
РВБЇ нд. | -( 7О0 7 /177777777/7100 | 77 нд нд! 76 ЇЇ юЮщфщюьеве | 7795 2 ДЖ Ж Т 420915|. 20 | 48 | 6 | 842 60 | .ЮюЮЙрЛлл87|1117171717101281 06 | 5 юЮюжщ з | 787 2 2 25шщхк боб 17720001,1727.11.0| баМАста рл6ро в | щЮЙЮЙ68 | "
Таблиця 85
Антисмислове інгібування людського ТТК іп мімо
МРНК Білок ТТК у плазмі (95 РВ5 при ВІ.)
Івів Ме Доза ттв (9 17 день Кластер СМ ЗЕО І 7 (мг/кг) РВ5) о в З день / 10 день (після СаіМмАс МО усипляння)
РВБ | нд. | 7100 | 700 | 96 | 90 | 114 | нд |нд/ 6 | 74 | 106 | 86 | 76 | 83 420915| 20 | 43 | 7102 | 66 | 61 | 58 | 842 60 | 24 | 92 | 43 | 29 | 32 06 | 60 | 88 | 73 | 63 | 68 682883 СаїМАсз-За 842 6 | 710 | 80 | 35 | "| 9 бвгвви А ет 6 а 51 Замлсе та го ваг
Таблиця 85
Антисмислове інгібування людського ТТК іп мімо мРНК
Івів Ме Доза ттв (95 17 день Кластер СМ ЗЕО І 7 (мг/кг) РВ5) в З день / 10 день (після СаіМмАс МО усипляння) 6 | 15 | 82 | 35 | 21 | 24 06 | 60 | 92 | 77 | 68 | 76 6в2гвв5| 2 | 22 | 93 | 5 | 32 | 32 (СаїМАсз-1тба 842 6 | 17 | 85 | 37 | 25 | 20 06 | 57 | 91 | 70 | 64 | 695 6ввгввв| 2 | 21 | 89 | 5О | 31 | 30 (СаїМАсз-1тза 842 6 | 18 | 102. | 4 | 24 | 27 06 | 53 | 80 | 695 | 56 | 62 684057 | 2 | 21 | 92 | 55 | 34 | 30 СаімАсз-19а8) Аз | 843 6 | 11 | 82 | 50 | 718 | з
Таблиця 86
Рівні трансамінази, зміна маси тіла і відносні маси органів ств доза Маса Печінка епозінка НИРКИТ еБО не в дно в ект ву т ле день|день|день день|день|день (95 ВІ) РВ5) РВБ)
РВЗ |нд.| 33/34 | 33| 24|58| 62167 | 52| 105| 100 | 100 | 100 | нд. 6 |34/|33|27 21164591 73147 | 115 99 | 89 | 91 420915| 20/34 30|28|191|64|54|56 0 42) 111| 97 | 83 | 89 | 842 60 |34/|35| 31/24 16158) 71|58| 113 102 | 98 | 55 06|33/38|28 2670 71163159 | 111 96 | 99 | 92 ввозві 2 12913231 | 346160 6861 81001 92190 вуз 6 |29129|28)| 34158 591701|90| 114) 99 | 97 | 95 |331|32|28 3364/5468 95 | 114 | 101 | 06 | 92
Таблиця 87
Рівні трансамінази, зміна маси тіла і відносні маси органів сов доза Маса Печінка опезінкої Нирки ТЕО день|день|день день|день день /|(95 ВІ)І РВ5) РВ5) | МО
РВЗ | нд.|32|34|37|41| 62 | 78) 76 | 77 | 104 | 100 | 100 | 100 над. 6 |32|30|34|34| 61 | 71 | 72 | 66 | 102 | 103 | 102 | 105 420915) 20 |41|34|37|33| 80 | 76 63 | 54 | 106 | 107 | 135 | 101 | 842 60 |36|30|32|34| 58 | 81157 | 60 | 106 | 105 | 104 | 99 06|32|35|38|40| 53 | 81 | 74 | 76 | 104 | 101 | 112 | 95 682883) 2 |38|391|42 43| 71 | 84) 70 | 77 | 107 | 98 | 116 | 99 |842 6 |35|35|41|38)| 62 | 79 |103| 65 | 105 | 103 | 143 | 97 06|33|32|35)|34| 70 | 74/75 | 67 | 101 | 100 | 130 | 99 682884) 2 |31|32|38/38| 63 | 77 | 66 | 55| 104 | 103 | 122 | 100 | 842 6 |38|32|36|34| 65 | 85180 |62| 99 | 105 | 129 | 95 06|39|26|37|35| 63 | 631 77 | 59 | 100 | 109 | 109 | 112 682885) 2 |301|26|38/40| 54 | 56 | 71 | 72| 102 | 98 | 111 | 102 |842 6 |27|27|34|35| 46 | 52156 | 64| 102 98 | 13 | 96 06|301|40|34|36| 5887154 | 61| 1041 99 | 120 | 101 682886) 2 |27126|34 | 36| 51 | 551 55)|69)| 103 | 91 | 105 | 92 |842 6 |40|28|34|37|107| 54 | 61 | 69 | 109 | 100 | 102 | 995
Таблиця 87
Рівні трансамінази, зміна маси тіла і відносні маси органів
Доза АЇ Т (од./л) АЗТ (од./л) Маса Печінка(едезінка Нирки ІЗЕО
Ібіє Мо (мг/кг)! ВІ. З | 10 | 17 ві З 10 | 17 | тіла (90 (95 РВБ) (90 ІО день|день|день день|день день /|(95 ВІ)І РВ5) ? РВ5) | МО 061|35|26|33139)| 56 | 51 | 51 69104) 99 | 110 | 102 684057 843 6 |39|33|35140| 67 | 52155192) 98 | 104 | 21 | 108
Приклад 87: Тривалість дії іп мімо однократних доз олігонуклеотидів, спрямованих на ТТ, що містять кластер саІМАсз
ІБІЗ Мо 420915 і 660261 (див. Таблицю 83), випробували у дослідженні одноразової дози на тривалість дії у мишей. І5ІЗ Мо 420915, 682883 і 682885 (див. Таблицю 83) також випробували у дослідженні одноразової дози на тривалість дії у мишей.
Лікування
Восьмитижневим самцям трансгенних мишей, які експресують людський ТТК, ввели одноразову підшкірну ін'єкцію 100 мг/кг І5ІЗ Мо 420915 або 13,5 мг/кг І5І5 Мо 660261. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Зразки крові з хвостової вени брали до введення дози для визначення вихідних показників і на 3, 7, 10, 17, 24 і 39 день після введення дози. Рівні білка ТТК у плазмі виміряли так, як описано в Прикладі 86. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів ТТК у плазмі для кожної експериментальної групи, нормалізованих до вихідних рівнів.
Таблиця 88
Рівні білка в плазмі ТТЕ
Часові точки (дні б/у: .
І5ІВ Ме Доза після введення ТК (95 від вихідного Кластер СМ ЕО Ю МО (мг/кг) значення) СаімМАсз дози) нео то вл бвояві 1785 Замлста й т 739 | щ69 З Кю
Лікування
Восьмитижневим самкам трансгенних мишей, які експресують людський ТТК, ввели одноразову підшкірну ін'єкцію 100 мг/кг ІЗІ5 Мо 420915, 10,0 мг/кг ІБІ5 Мо 682883 або 10,0 мг/кг 682885. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Зразки крові з хвостової вени брали до введення дози для визначення вихідних показників і на 3, 7, 10, 17, 24 і 39 день після введення дози. Рівні білка ТТК у плазмі виміряли так, як описано в Прикладі 86. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів ТТК у плазмі для кожної експериментальної групи, нормалізованих до вихідних рівнів.
Таблиця 89
Рівні білка в плазмі ТТЕ
Часові точки (дні б/у: .
ІБІЗ Ме Доза після введення ТТА (5 від вихідного Кластер СМ ЗЕО І МО (мг/кг) значення) СаімМАсз дози) 420915| 100 842 71777116 2 2- 31117118 682883). 10,0 СаіМАсз-За 842 682885| 10,0 СаімАсз-1ба 842
Результати в Таблицях 88 і 89 демонструють, що олігонуклеотиди, які містять кон'югат саіМмАс, є більш ефективними та мають більш тривалу дію, ніж вихідний олігонуклеотид без кон'югату (І5І5 420915).
Приклад 88: Сплайсинг-модулювання іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на
ЗММ, що містять кон'югат саіМАсз
Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 90, випробували на сплайсинг-модулювання людських генів виживаності мотонейронів (ЗММ) у мишей.
Таблиця 90
Модифіковані АБО, спрямовані на 5ММ . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІВ Мо Послідовність (від 5' до 3) СаМАсз 387954 детеТеОеде СеТеТетТе" СедеТеделеТеби" Стенд ндо 844 е
СаіМмАсз-7а-оАев ев Гев'"СевАев'""Сев І ев І ез Гев'"СезАев І езЛАезАев ввеві9 ВІДО ТесолеТе» саМАс»-7а РО вад а а! МАсз-7а-оАеєТеоТео" СевойеоСео Гео Гео Тео? СеоАво ГеоДео 699821 Аео ГеобівотСео Г езСіе5(Зе баїмАсз-7а РОЇ вла
Аве Тез Ге5"СвеАев"Сев Ге Ге Гев"СеввАех ТезАезАев Гез(Зев "Ов Гев(Сев 700000 СтвоАвдо -СЗа!МАсз-ї а баімАсзта 703421 |Х-АТТ"СА"СТТТ"САТААТа"СТас нд. | нд.| 844 703422. | йаіМАсз-75-Х-АТТ"СА"СТТТ"САТААТа"СТОаСО СаМмАсз-7р| нд. | 844
Структура СаіМАсз-7а показана раніше в Прикладі 48. "Х" означає 5'-первинний амін, отриманий компанією Сепе Тооі5 (Филомат, штат Орегон), а саіМАсз-7ь означає структуру
СаіМАсз-7а, яка не містить частину -МН-Св-О лінкера, як показано нижче:
ноон о о ото
АснНМ о о о нотою їх пе
АснМ о нооНн г о но кто о
АснМ І
ІБІЗ Мо 703421 і 703422 являють собою морфоліно-олігонуклеотиди, при цьому кожен нуклеотид з двох олігонуклеотидів являє собою морфоліно-нуклеотид.
Лікування
Шоститижневим трансгенним мишам, які експресують людський ЗММ, ввели одноразову підшкірну ін'єкцію олігонуклеотиду, наведеного в Таблиці 91, або сольового розчину. Кожна експериментальна група складалася з 2 самців і 2 самок. Мишей приспали через З дні після введення дози для визначення рівнів МРНК людського ЗММ у печінці з екзоном 7 та без нього, використовуючи ПЛР у реальному часі за стандартними протоколами. Загальну РНК виміряли за допомогою реагенту Кіродгееп. Рівні МРНК 5ММ нормалізували до загальної мРНК, а потім нормалізували до середніх значень у групі, обробленої сольовим розчином. Отримані середні відносини МРНК ЗММ, що містить екзон 7, до МРНК 5ММ, що не містить екзон 7, представлені в
Таблиці 91. Результати демонструють, що повністю модифіковані олігонуклеотиди, які модулюють сплайсинг і містять кон'югат сСаіМАс, є значно більш ефективними для зміни сплайсингу в печінці, ніж вихідні олігонуклеотиди, що не містять кон'югат саїЇМАс. Крім того, ця тенденція зберігається для хімізму багаторазових модифікацій, включаючи 2'-МОЕ і морфоліно- модифіковані олігонуклеотиди.
Таблиця 91
Дія олігонуклеотидів, спрямованих на людський 5ММ, іп мімо
Кластер
Сольовий рш| аю | ва | но на 387954 | 32 2 ющ| - 765 - | нд. | нд. | 844 387954 | 288... | .юЮ/ 500 ..юЮюЮюЮюЮ | нд. | нд. | 844 699819 СамАсз--7та| РО | 844 699821 СамАсз--7та| РО | 844 700000 СаїМАсз-та 703421 | 32 | ...юЮюрюрюрюр/слтлььї111111111111нд. | нд | 844 703422 СаМАсз-70| нд. | 844
Приклад 89: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на аполіпопротеїн А (Арода)), що містять кон'югат саіМАсз
Олігонуклеотиди, наведені нижче в Таблиці 92, випробували в дослідженні дозозалежного інгібування Арод(а) у трансгенних мишей.
Таблиця 92
Модифіковані АБО, спрямовані на Арода) . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІВ Мо Послідовність (від 5' до 3") СсамаАсз
Тев(Зев'"Сев Гев'""Сев'"Сав(Сав Т ав Газа ав ГавСлав'""Сав
СаімАсз-7а-о Гез(Зео"Сео Гео" Сево"Сдв(СЯав Газ Газа Став 681257 Тавзав'"Сав Таз ГеоСіво Гез Гев'"Се бамАсз та Рот
Структура СаІМАсз-7а показана раніше в Прикладі 48.
Лікування
Восьмитижневим самкам мишей С57ВІ /6 (даскзоп І арогагу, Бар-Харбор, штат Мен) один раз на тиждень вводили підшкірну ін'єкцію дози, представленої нижче, в цілому шість доз олігонуклеотиду, наведеного в Таблиці 92, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 3-4 тварин. Зразки крові з хвостової вени брали за день до введення першої дози і щотижня після введення кожної дози для визначення рівнів білка Аро(а) у плазмі. Мишей приспали через два дні після останнього введення. Рівні мРНК Арода) у печінці визначили за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМФ (Моїесшціаг Ргобевзв, Іпс.,
Юджин, штат Орегон) за стандартними протоколами. Рівні білка Аро(а) у плазмі визначили за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу, і визначили рівні трансамінази печінки.
Результати аналізу мРНК та білка в плазмі в Таблиці 93 представлені як середнє процентне значення для експериментальної групи щодо групи, обробленої РВ5. Рівні білка в плазмі додатково нормалізували до вихідного значення (ВІ) для групи з РВ5. Середні абсолютні рівні трансамінази та маси тіла (95 щодо середнього вихідного значення) представлені в Таблиці 94.
Як показано в Таблиці 93, лікування олігонуклеотидами знижує рівні мРНК Арода) у печінці і рівні білка в плазмі дозозалежним чином. Крім того, олігонуклеотид, що містить кон'югат саіМАс, був значно ефективнішим з більш тривалою дією, ніж вихідний олігонуклеотид, що не містить кон'югат СсСаЇМАс. Як показано в Таблиці 94, представлені олігонуклеотиди не впливають на рівні трансамінази та маси тіла, що вказує на хорошу переносимість олігонуклеотидів.
Таблиця 93
Рівні мРНК Арода) у печінці і білка в плазмі
Білок Ард(а) у плазмі (95 РВ5) о
ІБІВ Мо Доза |мРНК Ароса) 6 Тиждень /Тиждень| Гиждень| Тиждень |Тиждень| Тиждень (мг/кг) РєРВБ) ВІ 4 2 З А 5 б
РВЗ | нд. | 100 2 |700/ 120 | 119 | 113 | 88 | 121 | 97 3 | 80 184| 89 | 91 | 98 | 87 | 87 | 79 494372 30 | 5 1921 54 | 28 | ло | 7 | 9 | 7 03 | 75 6юЮщ /79| 76 | 89 | 98 | 7 | 94 | 78 ввіову 111.19... 179 88 | 66 60 | 5. | 32 | 24 3 | 2 6 щ 182| 52 | 17 | 7 | 4 | 6 | 5 70 | 2 6 /79|17|6 |з | 2 | 4 | 5
Таблиця 94
ІВІВ Ме Доза(мг/кг) | А Т(од/лу | АБТ (од./л) Маса тіла (5 від вихідного
Й " ! значення)
РВ5 77777 нд. | 37 | (54 2 | щ-Б 73 28111117 28177717171716871777171717171717111111706С1С 494372
Таблиця 94
ІВІВ Ме Доза(мг/кг) | А Т(од/лу | АБТ (од./л) Маса тіла (5 від вихідного
Й " ! значення) 7777608. 90 1 ЮюЮюЮюЮюЮюД80 1 4 4юИ7И 17104 бвти5у
Приклад 90: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на
ТТЕ, що містять кластер СаІМАсз
Олігонуклеотиди, наведені нижче в Таблиці 95, випробували у дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування людського транстиретину (ТТК) у трансгенних мишей, що експресують людський ген ТТЕ.
Лікування
ТТК трансгенним мишам один раз на тиждень протягом трьох тижнів, в цілому три дози, вводили підшкірну ін'єкцію олігонуклеотиду і дози, наведених в Таблиці 96, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Перед введенням першої дози взяли зразок крові з хвостової вени для визначення рівнів білка ТТЕК у плазмі у вихідному стані (ВІ). Мишей приспали через 72 години після останнього введення. Рівні білка ТТЕ виміряли за допомогою клінічного аналізатора (АШШ480, ВесКтап СоцшМнег, штат Каліфорнія). За допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМО (МоїІесціаг Ргобезв, Іпс.
Юджин, штат Орегон) використовували за стандартними протоколами для визначення рівнів
МРНК людського ТТК у печінці. Результати, показані в Таблиці 96, являють собою середні значення для кожної експериментальної групи. Рівні МРНК являють собою середні значення щодо середнього значення для РВ:З групи. Рівні білка в плазмі являють собою середні значення щодо середнього значення для РВ5 групи у вихідному стані. "ВІ" означає початкове значення вимірювань, виконаних безпосередньо перед введенням першої дози. Як показано в Таблиці 96, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні експресії ТТК дозозалежним чином. Олігонуклеотид, що містить кон'югат саїІМАс, був більш ефективним, ніж вихідна сполука без кон'югату СаіМАс (І5І5 420915), а олігонуклеотиди, що містять фосфодіестерний або дезоксиаденозиновий фрагмент, що рощеплюється, демонстрували значне посилення ефективності, порівняно з вихідною сполукою, що не містить кон'югат (див. І5ІЗ5 Мо 682883 і 666943 порівняно з 420915, а також див. Приклади 86 і 87).
Таблиця 95
Олігонуклеотиди, спрямовані на людський ТТК . . . «о ' ' Кластер ЗЕО І
Тев"Сев Гез Гее(ЗевСав Газ ГавАсв"СдаєАва» ГаєСіавАсеАаз
СаімМАсз-За- 682883 о ТГев""Сео Т во ГеобСЗвоСЗав ІТ аз ГавАав"СавАдв РБ/РО СаіМАсз-За 842
Тав(ЗавАвзАвеАео Гео"Сев"Сев"Се
СаімМмАсз-За-ойАво Гев"Сео Гео ГеобіеоСав Г ав ГазАсів 666943 тіавАв» ГазСідвАваз Ав» Аео Гео"Сев"Сев"Се РБ/РО ба!МмАсз За
СаімМАсз-7а-ойАво Гев"Сео Гео ГеобліеоСав Г ав ГазАсів 682887 тіавАв» ГазСідвАваз Аве Аео Гео"Сев"Сев"Се РБ/РО ба!МмАсз Та
СваімАсз-1 Оз-оАво Гев"Сео Гео Ї еоСео(Зав І ав ГаєАва» 682888 тіавАв» ГазСідвАваз Аве Аео Гео"Сев"Сев"Се РБ/РО баїМмАсз 1ба
СваімАсз-1 За-оАво Гев"Сео Гео Ї еоСео(Зав І ав ГаєАва» 682889 тіавАв» ГазСідвАваз Аве Аео Гео"Сев"Сев"Се РБ/РО баїМмАсз 1За
Зо Легенда для Таблиці 95 представлена в Прикладі 74. Структура СаІМАсз-За показана у
Прикладі 39. Структура СаІМАсз-7а показана у Прикладі 48. Структура сСаІМАсз-104 показана у
Прикладі 46. Структура СаІМАсз-1За показана у Прикладі 62.
Таблиця 96
Антисмислове інгібування людського ТТК іп мімо
РВБ | нд. | - 700 | 7777777771/7124777777777/ | 7777 нд. | над. 76 ЇЇ 69 | щм4 4го915| 20177717 1111111111117186сСсС1С 60 Її 71117211 Ї1771111111111361 06 | щЩщф6 г !/ З 682883 СаМмАсз-За 6 1111718 ЇЇ 23сСс21С 06 | щ 74 | щЩщ 989 Ф 666943 СаМмАсз-За Ач 6 11117171 11111122 06 | ющ 6 г ю !/ щЩщК9 682887 СаМмАсз-7а Ач 6 ЇЇ 712 ЇЇ 19 г Щ 06 | ющ 6 !/|/ М» р Ж 682888 СаїМАсз-10а Ач 6 11117171 11111122 06 | щ 722 | 74 682889 СаїМАсз-1За Ач 76 ЇЇ 716 Її... 18 9 щЩ щЗЖжш
Приклад 91: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на фактор МІЇ, що містять кон'югат саїІМАсз, у приматів, які не Є людиною.
Олігонуклеотиди, наведені нижче в Таблиці 97, випробували в нетермінальному дослідженні підвищення дози на антисмислове інгібування фактора МІ! у мавп.
Лікування
Мавпам, раніше не схильним до експериментів, на 0, 15 та 29 день вводили підшкірні ін'єкції підвищених доз олігонуклеотидів, наведених у Таблиці 97, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 4 самців і 1 самки. Перед введенням першої дози та в різні тимчасові точки після неї брали зразки крові для визначення рівнів білка фактора Мі в плазмі. Рівні білка фактора МІ! визначали за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу. Результати, показані в Таблиці 98, являють собою середні значення для кожної експериментальної групи щодо середнього значення для групи РВ5 у вихідному стані (ВІ), вимірювання виконані безпосередньо перед введенням першої дози. Як показано в Таблиці 98, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні експресії фактора Мі! дозозалежним чином, і олігонуклеотид, що містить кон'югат (замМАс, був значно ефективнішим у мавп, ніж олігонуклеотид, що не містить кон'югату заіІМАс.
Таблиця 97
Олігонуклеотиди, спрямовані на фактор МІ . . . в , , Кластер ЗЕО І
Аег Ге«Сев'""СевАев ГавСлав(ав ГавСіавАсів ГавСлав'""Сав Пав отвори | нлооона вв
СаімАсз-1Оа-олАевз ГезСЗев"СевАез Газа Са Газ(Яав веввво тва тиви е |бамлота| го вав
Легенда для Таблиці 97 представлена в Прикладі 74. Структура СсСаІМАсз-104 показана у
Прикладі 46.
Таблиця 98
Рівні білка фактора МІ! в плазмі
ІБІЗ Мо 00000000 День | Доза (мг/кг) Фактор МІ! (95 ВІ) 7 011111111717771111нд.//7/1777777771111001 нини утнннннВЕИИВВТ ВООЗ ИН 707935 78611111117171111171717нд./////177777777711461
ПП а31171111111ндо///// 17777771 СС 01718111 2а1111111111ндо///// 1777777771171290 бвб8ч2 8611111117171111117171нд.///// 17777711 81717777 нд 17777771
Приклад 92: Антисмислове інгібування в первинних гепатоцитах під дією олігонуклеотидів, спрямованих на Аро-СІЇЇ, що містять кон'югат саіМмАсз
Первинні мишачі гепатоцити висівали у 9б-лункові планшети при 15000 клітин на лунку і додавали олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 99, спрямовані на мишачий АросС-ПШ в концентрації 0,46, 1,37, 4,12 або 12,35, 37,04, 111,11, або 333,33 нМ, або 1,00 мкМ. Після інкубації з олігонуклеотидами протягом 24 годин клітини лізирували та очистили загальну РНК за допомогою КМеавзу (Оіадеп). Рівні мРНК Арос-ІІ визначили за допомогою ПЛР у реальному часі і реагенту для кількісного визначення РНК КІВОСКЕЕМО (Моїесшціаг Ргоре5, Іпс.) за стандартними протоколами. Значення ІСво визначили за допомогою програми Ргізт 4 (СгарпРадй). Результати демонструють, що незалежно від наявності, фрагменту, що розщеплюється фосфодіестером або фосфодіестер-зв'язаним дезоксиаденозином, олігонуклеотиди, що містять кон'югат саМАс, були значно ефективнішими, ніж вихідний олігонуклеотид, що не містить кон'югату.
Таблиця 99
Інгібування експресії мишачого АРОС-І|І в первинних гепатоцитах мишей . . ов й ІСвю |ЗЕО І
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") 440670 тОСевАе«Сев" Сев Т ев Т ає Т авАвв Т ав Т авАсеСов Сід СідАвв"СеєАееСіеє"СевАе| Н.Д. | 13,20 тОевАез(СЗев"Сев ГТ ев Г ав ГавАвв Т ав ГазАвавСЗавСЗавСавАсв"Сев 661180 | додеспСесАсо Аво-ОаІМАса-12 680771 СаіМАсз-За-о"СевзАевСтев"Севз Г ев І ав ІТ авАвв Пав ГавАавСіавСіавСіавАав"Сев РО | оло| вав
АезСівв"СевАе 680772 СаіМАсз-7а-о"СевАевСев"Сев Г ев І ав ІТ авАвв Пав ГавАавСіавСіавСіавАав"Сев Ро | ло | вав
АезСівв"СевАе
СаіМАсз-10а4- 680773 о"СевАевСіев "Сев ев І ав ГавАвсв ТГ ав ГавАвавСіав(СЗавСЗавАсв"Сев 2,00 849
АезСівв"СевАе
СаіМАсз-13а- 680774 о"СевАевСіев "Сев ев І ав ГавАвсв ТГ ав ГавАвавСіав(СЗавСЗавАсв"Сев 1,50 849
АезСівв"СевАе сіамАсз-За- 681272 о"СевАвоСіво"Сео Гео І ав ГавАсв Т ав ГавАввСіав ав СіавАав"Сео - 0,46 849
АвоСіез""СевАе 681273 СаіМАсз-За-оАвдо"СевАезСівв"Сев Тег І ав ГазАвв Газ ГазАазСіавСЗавСіавАсв тОевАезСев"СевАе тОевАез(СЗев"Сев ГТ ев Г ав ГавАвв Т ав ГазАвавСЗавСЗавСавАсв"Сев 683733 | Дедес"СевАсодче -Са!МАса-19»
Структура СаІМАсз-13 показана раніше у Прикладі 9, СаіМАсз-3За показана у Прикладі 39,
СаіМАсз-7а показана у Прикладі 48, саїіМАсз-10аз показана у Прикладі 46, СаІМАсз-13а показана у
Прикладі 62 і СаІМАсз-19а показана уа Прикладі 70.
Приклад 93: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на
ЗВАВ-1, які містять змішані крила і 5'-баІМАсз та кон'югат
Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 100, випробували в дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування 5КВ-1 у мишей.
Таблиця 100
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1 . . ши , Кластер ЗЕО І 449093 |ТеТке"СкАс(ОчєТає"Ссє АоТоє Сов Абе" ТоєТк"Скв"Ск нд. | нд 852 ве СИФОН НАРЕАТ овлетю то ве. ав Гкв"ЄСка Ск вену ПИДдАТ век Гоажеть то те ав Гкв"ЄСка Ск нев ПОД ОД Же Гоанеть то те ав Гев"Сев'"Се вен ДДТ Кюн тт Гомель то! те ав Гкв"ЄСка Ск ето Прес тти оанжют то ве ав Т кв" вк "вени | отит оекобетасе кети сенс | бамянте то ве дв Тк" Се
Структура СаІМАсз-За показана ранее в Примере 39, а структура саІМАсз-7а показана ранее в Примере 48. Нижні індекси: "е" означає 2'-МОЕ модифікований нуклеозид; "а" означає В-О-2'- дезоксирибонуклеозид; "К" означає 6'-(5)-СНз біциклічний нуклеозид (СЕЮ); "5" означає тіофосфатні міжнуклеозидні лінкери (РБ5); "о" означає фосфодіестерні міжнуклеозидні лінкери (РО). Верхній індекс "т" означає 5-метилцитозини.
Лікування
Шости-восьмитижневим мишам С57БІ6 (даскзоп І арогаїогу, Бар-Харбор, штат Мен) ввели одноразову підшкірну ін'єкцію дози, представленого нижче, олігонуклеотиду, наведеного в
Таблиці 100, або сольового розчину. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин.
Мишей приспали через 72 години після останнього введення. Рівні МРНК 5КВ-1 у печінці виміряли за допомогою ПЛР у реальному часі. Рівні МРНК 5КВ-1 нормалізували до рівнів МРНК циклофіліну за стандартними протоколами. Результати, показані нижче, представлені як середній відсоток рівнів МРНК 5КВ-1 для кожної експериментальної групи, порівняно з контрольною групою, обробленою сольовим розчином. Як показано в Таблиці 101, лікування антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні МРНК 5КВ-1 дозозалежним чином, а гепмерні олігонуклеотиди, що містять кон'югат саіМАс і мають крила, які являють собою або повністю сЕЇ або змішані цукрові модифікації, були істотно більш ефективними, ніж вихідний олігонуклеотид, що не містить кон'югату і містить повністю СсЕЇ модифіковані крила.
Виміряли також маси тіла, рівні трансамінази печінки, загальний білірубін і АМК, а середні
Зо значення для кожної експериментальної групи представлені в Таблиці 101. Маса тіла показана як середній відсоток маси тіла відносно вихідної маси тіла (95 ВІ), виміряний безпосередньо перед введенням дози олігонуклеотиду.
Таблиця 101
Рівні мРНК 5ЕВ-1, АГ-Т, А5Т, АМК та загального білірубіну, а також маси тіла о, ї о
РВ5 | нд. | 100 | 31 | 84 | 05 | 28 | 102 Щ 449093 699806 699807 71.71 24 1 22 | 69 | 074 | 25 | 102 Щ / 699809 699811 71 ЇЇ 66 | 57 | 104 | 074 | 24 | 107 6в99813| 09 | (98 | 22 | 61 | 017 | 28 | 105 699815
Приклад 94: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на
ЗАВ-1, що містять 2'"-цукрові модифікації та 5'-баІМАсз кон'югат
Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 102, випробували в дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування 5КВ-1 у мишей.
Таблиця 102
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1 . . «ов , Кластер ЗЕО 353382 | Сеє"Сев Теє Те" СеєАсв(іав Тов" СовАвв ГаєСіввАвв"СаєТоєТеє"Сеє"СеєТеєТе| НД. (Н.Д.| 829 700989 | СтеСтвШтеШтеСтвАавСівв Тав'"СавАве Тов(іавАсв"Сав ГоєОтеСтєСтеМтеОт НД. (н.д. 853
СаіМмАсз-За-о(Зев"Сев Геє Гев'"СевАвазСав Гав'""СавАвв ГавСтазАвв вввоя тати бамаозаро| вго
СаімМАсз-7а-оСітвСтвОтетеСтвАвавСіав Гав'"СавАвв ГавСав
Товт сеанс 000000 бамаотаро| вва
Верхній індекс "т" означає 2'-О-метил-модифікований нуклеозид. Повна легенда до таблиці представлена в Прикладі 74. Структура сСаіМАсз-За показана ранеє в Примере 39, а структура
СаіМАсз-7а показана ранеє в Примере 48.
Лікування
Дослідження проводили за протоколом, описаним у Прикладі 93. Результати представлені нижче в Таблиці 103 і демонструють, що і 2'-МОЕ, і 2'-ОМе-модифіковані олігонуклеотиди, що містять кон'югат саІМАс, були значно ефективнішими, ніж відповідні вихідні олігонуклеотиди, що не містять кон'югату. Результати вимірювань маси тіла, трансамінази печінки, загального білірубіну та АМК демонструють, що ці сполуки добре переносяться.
Таблиця 103
МРНК ЗКВ-1 1 РВ5 ГГ Ї7777777171717171717171сндо С Ї777717171717171711111111001 353382 700989 т 9всссИсИс2Йс2 666904 700991
Приклад 95: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на
ЗВАВ-1, які містять біциклічні нуклеозиди і 5'-СаІМАсз кон'югат
Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 104, випробували в дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування 5КВ-1 у мишей.
Таблиця 104
Модифіковані АБО, спрямовані на 5КВ-1 . . в ' Кластер ЗЕ 440762 |Те"СкеАс«СаєТає"СоєАсєТає(СоєАсє"СаТоєТе"Ск | нд. нд. | 823 / 666905 | СаїМАсз-За-о Тке"СкеАввСівв Тав'"СавАвв ТаеСівеАсв"Соє ТаєТк"Ск | СайМАсз-За / РО | 823 699782 | баїМАсз-7а-оТке"СкеАввСівв Тав'"СавАвв ТаеСівеАсв"СоєТаєТке"Ск | СайМАсз-7а | РО | 823 / 699783 | СбаїМАсз-Зало Пе" СівАсеОов Та" СавАвв ТавСіввАсв" Сов Га ТетСІ | СбайМАсз-За РО | 823 439879 |То"СоєАсеСіоТає"СоєАоєТа СоАс"СеєТаєТеє"Ся | нд. нд. | 823 699789 | Сбаї/МАсз-За-о Тов "Сов АсеСівв Гає"СовАвв Та СіоєЛсв" Се Тає Тоє"Со | СайМАсз-За | РО | 823
Нижній індекс "д" означає фтор-ГНК нуклеозид, нижній індекс "І" означає закритий нуклеозид, що містить місток 2'-0-СНо-4". Інші скорочення представлені в легенді таблиці
Прикладу 74. Структура СаЇМАсз-144а показана раніше у Прикладі 9, структура СсаїЇМАсз-За показана раніше у Прикладі 39, а структура сСаіМАсз-7а показана раніше у Прикладі 48.
Лікування
Дослідження проводили за протоколом, описаним у Прикладі 93. Результати представлені нижче в Таблиці 105 і демонструють, що олігонуклеотиди, що містять кон'югат ЗаїІМАс і різні біциклічні нуклеозидні модифікації, були значно ефективнішими, ніж вихідний олігонуклеотид, що не містить кон'югату і містить біциклічні нуклеозидні модифікації. Крім того, олігонуклеотид, що містить кон'югат саїІМАс і фтор-ГНК модифікації, був істотно більш ефективним, ніж вихідна сполука, що не містить кон'югату і містить фтор-ГНК модифікації. Результати вимірювань маси тіла, трансамінази печінки, загального білірубіну та АМК демонструють, що ці сполуки добре переносяться.
Таблиця 105
Рівні мРНК 5ЕВ-1, АГ-Т, А5Т, АМК та загального білірубіну, а також маси тіла 1 РВ5 ГГ 17777777717171717171717171снді ЇЇ 440762 666905 699782 699783 653621 1111 всИсИсИЙИЙИЙ;Й;Й 439879 699789... ..77771717171710877777111111111711111111111111111691111111с1
Приклад 96: Зв'язування білка плазми антисмисловими олігонуклеотидами, що містять групу коньюгату саіМмАсз
Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 70, спрямовані на Арос- І, і олігонуклеотиди в Таблиці 106, спрямовані на Ародд(а), випробували в аналізі ультрафільтрації для оцінки зв'язування білка в плазмі.
Таблиця 106
Модифіковані олігонуклеотиди, спрямовані на Аро(а) . . ши , Кластер ЗЕО І ел осот тн та за Гм ве о и от як як ви е5 е ин ЕК рлдусннтьтьонсьтюнюн |сжет то ви 681251 | оТевСев"Сев Гев"Сев"Сав(лав Газ Газа Став ГавСав'"Сав СаіМАсз-7а 847
Таз ГезСЗев Г ев Гев'"Се вен в стидутнсьтиманнтсюсь | зянюет | зи 681257 | о ТевСео"Сео Гео"Сево" Сава» Гав ГавСіавСтав ГавСЯав" Св СаіМАсз-7а 847
Таз ГеоСіво Ге Гев'"Се
Легенда таблиці представлена в Прикладі 74. Структура СаІМАсз-7а показана раніше в
Прикладі 48.
Елементи для ультрафільтрації ОКгаїтее-МС (номінальна обмеження молекулярної маси 30000, слабкозв'язуюча регенерована целюлозна мембрана, Мійроге, Бедфорд, штат
Массачусетс) попередньо кондиціювали з 300 мкл 0,5 96 Пмуееп 80 і центрифугували при 2000 д протягом 10 хвилин, потім з 300 мкл 300 мкг/мл розчину контрольного олігонуклеотиду в Нео і центрифугували при 2000 д протягом 16 хвилин. Для оцінки неспецифічного зв'язування з фільтрами кожного досліджуваного олігонуклеотиду з Таблиць 70 і 106, що використовуються у випробуваннях, 300 мкл 250 нг/мл розчину олігонуклеотиду в НгО при рН 7,4 помістили в попередньо кондиціоновані фільтри і центрифугували при 2000 д протягом 16 хвилин.
Нефільтровані і фільтровані зразки аналізували твердофазним імуноферментним аналізом для визначення концентрацій олігонуклеотидів. Для отримання середньої концентрації для кожного зразка використовували три примірники. Середню концентрацію фільтрованого зразка щодо нефільтрованого зразка використовували для визначення відсотка олігонуклеотиду, що пройшов через фільтр без плазми (95 виділення).
Заморожені зразки цільної плазми, зібрані в КЗ-ЕДТК і отримані від здорових, які не приймають ліки людей-добровольців, яванських макак і мишей СО-1, придбали у компанії
Віогесіатайноп Г.С (Вестбері, штат Нью-Йорк). Досліджувані олігонуклеотиди додавали до 1,2 мл ал і квот плазми в двох концентраціях (5 і 150 мкг/мл). Аліквоту (300 мкл) кожного маркованого зразка плазми помістили на попередньо кондиційований фільтрувальний елемент і інкубували при 372С протягом 30 хвилин, потім відразу виконали центрифугування при 2000 д протягом 16 хвилин. Аліквоти фільтрованих і нефільтрованих маркованих зразків плазми аналізували твердофазним імуноферментним аналізом для визначення концентрації олігонуклеотиду у кожному зразку. Використовували три примірника кожної концентрації для визначення середнього відсотка зв'язаного і незв'язаного олігонуклеотиду у кожному зразку.
Середню концентрацію фільтрованого зразка щодо концентрації нефільтрованого зразка використовували для визначення відсотка олігонуклеотиду в плазмі, не зв'язаного з білками плазми (95 незв'язаного). Остаточні значення незв'язаного олігонуклеотиду коригували на неспецифічне зв'язування шляхом ділення 95 незв'язаного наб виділення для кожного олігонуклеотиду. Остаточні значення 96 зв'язаного олігонуклеотиду визначили відніманням остаточних значень 95 незв'язаного з 100. Результати показані в Таблиці 107 для двох концентрацій випробуваного олігонуклеотиду (5 і 150 мкг/мл) у плазмі кожного виду. Результати демонструють, що групи кон'югату саіМАс не роблять істотного впливу на зв'язування білка плазми. Крім того, олігонуклеотиди, що містять тільки Р5 міжнуклеозидні лінкери і змішані
РО/РЗ лінкери, - обидва варіанти зв'язують білки плазми, при цьому олігонуклеотиди, що містять тільки Р5 лінкери, зв'язують білки плазми в дещо більшійю мірі, ніж олігонуклеотиди, які
Зо містять змішані РО/РБ лінкери.
Таблиця 107
Відсоток модифікованого олігонуклеотиду, зв'язаного з білками плазми - 663083 | 97,8 | 909 | 9953 | 993 | 96,5 | 930
Приклад 97: Модифіковані олігонуклеотиди, спрямовані на ТТК, що містять групу кон'югату
СаімМАсз
Олігонуклеотиди, представлені в Таблиці 108, що містять кон'югат заїіМАс, призначені для впливу на ТТЕ.
Таблиця 108
Модифіковані олігонуклеотиди, спрямовані на ТК . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІВ Мо Послідовність (від 5' до 3") СсамаАсз
СаіМмАсз-За-ойАдо Теє "Се Теє Геє Сіеє Став Таз Гає Асв "Са 666941 Авз Т ав Сав Ав: Авз Аез Тез пев пев те бамАсзЗ ввводо | Тев тео Тео Тео Сео Сав Тав Тав Аде тав Ав Тав Сав Ав Ав самдо | Ах | 843 666942 Асо Тео "Се "Се "Сео Адо-СаМАсз-За СаіМАсз-1 Аа 843
СваіМмАсз-За-о Геє "Сев Ге Ге СЗев Слдв Тав Гає Ас "Сов Адв 682876 Та Став Аве Авз Аез Тев то ев то ев те баїМмАсз З Ро) ваг
СваімМАсз-7а-оГеє "Сев Ге Ге СЗев Слдв Тав Гає Асв "Сов Адв 682877 Та Став Аве Авз Аез Те тоев тоев те баїМАсз-7 Ро) ваг
СваіМмАсз-1Оа-о Тез "Се Тев Ге СЗе Св ТГав Газ Асв "Св Ада» 682878 Та Став Аве Авз Аез Тев то ев то ев те ба!мАсз-1 о Ро) ваг
СваіМмАсз-1 За-о Тез "Се Тев Гев СЗе Слдв ТГав Газ Асв "Св Ада» 682879 Та Став Аде Ав: Аез ев то ев пев тое бамАсз 13 Ро ваг.
СваіМмАсз-7а-ойАдо ТГеє "Се Теє Геє Сіеє Став Таз Гає Асв "Са 682880 Авз Т ав Сав Ав: Авз Аез Тез пев пев тое бамАсз 7
СваіМмАсз-1Оаз-ойАво Тез "Сев Тез Ге СЗев Св Га Газ Асв "Са 682881 Авз Т ав Сав Ав: Авз Аез Тез пев пев те баімАсз о
СваіМмАсз-1 За-ойАво Тез "Сев Тез Ге СЗев Слдв Га Газ Асв "Са 682882 Авз Та Сав Авз Авз Аез Тев пев пев те ба!МмАсз 13
Тев теє Тев Тев Сев Сав Тав Тав Аде тав Ав Тав Сав Ав Ав 684056 Аев Тез "Сев "Сев "Сево Адо -(3аіМАсз-19а баімАсз19
Легенда для Таблиці 108 представлена в Прикладі 74. Структура саІМАсз-1 показана у
Прикладі 9. Структура саіМАсз-3а показана у Прикладі 39. Структура сСаЇМАсз-7а показана у
Прикладі 48. Структура саіМАсз-10а показана у Прикладі 46. Структура СаІМАсз-1За показана у
Прикладі 62. Структура СаІМАсз-19а показана у Прикладі 70.
Приклад 98: Оцінка прозапальної дії олігонуклеотидів, що містять кон'югат сзаїЇМАс, в аналізі пРМВС
Олігонуклеотиди наведені в Таблиці 109, досліджували на прозапальну дію в аналізі
ПРМВС, описаному в Прикладах 23 і 24. (Див. Таблиці 30, 83, 95 і 108, де представлено опис олігонуклеотидів). ІЗІЗ 353512 має високу відповідь, і його використовували в якості позитивного контролю, а інші олігонуклеотиди описані в Таблицях 83, 95 і 108. Результати, представлені в Таблиці 109, отримані з використанням крові, отриманої від одного донора- добровольця. Результати демонструють, що олігонуклеотиди, які містять змішані РО/Р5 міжнуклеозидні лінкери, викликають значно слабші прозапальні реакції, порівняно з тими-саме олігонуклеотиди, що містять тільки РЗ5 лінкери. Крім того, в цьому аналізі група кон'югату саїЇМАс не має істотного впливу.
Таблиця 109
ІБІЗ Мо Етах/ЕСво Кластер СаІМАсз 353512 3630 нд | 7 Р | нд 420915 | 802 | ..юЮю0/онд. | РЗ | нд. 682881 1311 саМмАсз-10 682888 саМмАсз-10 РО/РЗ 684057 саМмАсз-19 РО/РЗ
Приклад 99: Зв'язуючі афінності олігонуклеотидів, що містять кон'югат саіМАс, щодо асіалоглікопротеїнового рецептору
Зв'язують афінності олігонуклеотидів, наведених в Таблиці 110 (див. Таблицю 76, в якій представлено опис олігонуклеотидів), щодо асіалоглікопротеїнового рецептору випробували в аналізі конкурентного зв'язування рецепторів. Конкуруючий ліганд, са1-кислий глікопротеїн (АСР), інкубували в 50 мМ ацетатно-натриєвому буфері (рН 5) з 1 од. нейрамінідази-агарози протягом 16 годин при 37 "С, а » 9095 дезаліліювання підтвердили аналізом з сиаловою кислотою або ексклюзивною хроматографією (5ЕС). Для йодування АГФ використовували монохлорид йоду способом, описаним авторами Аїсхта еї аІ. (У Ііріїй Ве5. дУапуагу 1991; 32(1):173-81.) У цьому способі дезалілірований с«1-кислий глікопротеїн (де-АСР) додавали до 10
ММ хлориду йоду, Ма!'2ч| і 1 М гліцину в 0,25 М Маон. Після інкубації протягом 10 хвилин при кімнатній температурі, 125 -мічений де-АСР овідокремили від вільного 725 дворазовим концентруванням суміші з використанням спін-колонки з номінальним відсіканням по молекулярній масі З кДа. Білок випробували на ефективність мічення і чистоту на системі ВЕРХ, оснащеній колонкою Адіїепі ЗЕС-3 (7,8 х 300 мм) і лічильником Б-КАМ. Конкуруючі дослідження з використанням /125| -міченого де-АОР і АБО, які містять різні сСаіМАс-кластери, виконали наступним чином. Людські клітини Нербса2 (105 клітин/мл) помістили на б-лункові планшети в 2 мл відповідної живильного середовища. Використовували середовище МЕМ з додаванням 10 95 фетальної бичачої сироватки (ФБС), 2 мМ І-глутаміну і 10 мМ НЕРЕЗ. Клітини вирощували протягом 16-20 годин при 37 "С з 5 95 і 10 95 СО», відповідно. Перед експериментом клітини промили середовищем без ФБС. Клітини вирощували протягом 30 хвилин при 37 С з 1 мл конкурентної суміші, що містить відповідне живильне середовище з 295 ФБС, 108 М "25 - міченим ае-АСР і АБО, що містить саіМАс-кластер в концентраціях в діапазоні від 10! 105 М.
Неспецифічне зв'язування визначили в присутності 102 М СаІМАс цукру. Клітини двічі промили середовищем без ФБС для видалення незв'язаного !"2»| -міченого де-АСР і конкуруючого саіМАс
АБО. Клітини лізирували з використанням буфера КІ Т виробництва компанії Оіадеп, що містить 1 95 ВД-меркаптоетанол. Лізати перенесли в круглодонні аналітичні пробірки після швидкого 10- хвилинного циклу заморожування/відтавання, і аналізували на У-лічильнику. Неспецифічне зв'язування відняли, а потім розділили імпульси білка 725| на значення імпульсів при самій низькій концентрації сзаіМмАс-АБО. Криві інгібування побудували за рівнянням моносайтового конкурентного зв'язування, використовуючи алгоритм нелінійної регресії для розрахунку зв'язуючої афінністі (Ко).
Результати в Таблиці 110 були отримані в експериментах, виконаних у п'ять різних днів.
Результати для олігонуклеотидів, зазначених верхнім індексом "а" являють собою середні значення експериментів, виконаних у два різних дні. Результати демонструють, що олігонуклеотиди, що містять групу кон'югату СаїІМАс у 5'-кінця, зв'язують асіалоглікопротеїновий
Зо рецептор людських клітин Нерб2 з афінністю, яка в 1,5-16 разів більша, ніж для олігонуклеотидів, що містять групу кон'югату саїІМАс у 3'-кінця.
Таблиця 110
Результати аналізу зв'язування рецептору асіалоглікопротеїнового рецептору
Кінець олігонуклеотиду,
ІБІЗ Мо Кон'югат саіМАс до якого приєднаний Ко (нм) кон'югат саіМАс 666981. | 2 СбаМАсз7 | -(х 56 г !| 60 г
Приклад 100: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, що містять групу кон'югату саіІМАс, спрямованих на Арода), іп мімо
Олігонуклеотиди, наведені нижче в Таблиці 111а, випробували у дослідженні одноразової дози на тривалість дії у мишей.
Таблиця 111а
Модифіковані АБО, спрямовані на АРФО(а) . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") СсамаАсз
СаіМАсз-7а-о Гев(Зев'"Сев Гев'"Сев'"Сав(Сав Пав ГазСЗавСав 681251 ТавСав" Свв Газ ГезСев Те Тев"Се баїмлсз та РО ват
СаіМАсз-7а-о Гев(Зео"Сео Гео"Сео" Сава Газ ГазСЗавСав 681257 ТавСтав" Свв Газ ГеоСтео Те Тев"Се баїмлсз та РО ват
Структура СаІМАсз-7а показана раніше в Прикладі 48.
Лікування
Кожній самці трансгенних мишей, що експресують людський Арод(а), один раз на тиждень, в цілому 6 доз, вводили підшкірну ін'єкцію олігонуклеотиду і дози, наведеної у Таблиці 1116, або
РВ5. Кожна експериментальна група складалася з З тварин. Зразки крові брали за день до введення дози для визначення вихідних рівнів білка Аро(а) у плазмі, а також через 72 години, 1 тиждень 2 тижні після введення першої дози. Додаткові проби крові брали через З тижні 4 тижні, 5 тижнів і б тижнів після введення першої дози. Рівні білка Аро(а) у плазмі вимірювали за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу. Результати в Таблиці 1116 представлені як середній відсоток від рівнів білка Аро(а) у плазмі для кожної експериментальної групи, нормалізованих до вихідних рівнів (96 ВІ). Результати показують, що олігонуклеотиди, що містять групу кон'югату зЗаіМмМАс, демонструють ефективне зниження експресії Аро(а). Цей потужний ефект спостерігали для олігонуклеотиду, містить тільки Р5 міжнуклеозидні лінкери, і для олігонуклеотиду, що містить змішані РО і РБ5 лінкери.
Таблиця 1116
Рівні білка Ародд(а) у плазмі
Арода) через 72 Арода) через 1 .
ІБІВ Мо Доза (мг/кг) години тиждень Ароца) В ТИЖНІ то ВІ то ВІ й
РВ5 | нд. | 7/7 116777 | 777771711710477 |777171717111107 бвТев 10791171 9811711111111541 би говю 07177777776614016
Приклад 101: Антисмислове інгібування олігонуклеотидами, що містять кластер саїЇМАс, зв'язаний через стабільний фрагмент
Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 112, випробували на інгібування експресії мишачого
АРОС-ШШ іп мімол Мишам С57ВІ/Є ввели одноразову підшкірну ін'єкцію олігонуклеотиду, наведеного в Таблиці 112, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин.
Кожній миші, обробленій ІБІ5 440670, вводили дозу 2, 6, 20 або 60 мг/кг. Кожній миші, обробленій 680772 або 696847, вводили 0,6, 2, 6 або 20 мг/кг. Група кон'югату сСаїІМАс в ІБ5І5 696847 зв'язана через стабільний фрагмент, тіофосфатний зв'язок, замість зв'язку (який легко розщеплюється), що містить фосфодіестер. Тварин приспали через 72 години після введення дози. Рівні МРНК АРОС-ІЇ в печінці виміряли за допомогою ПЛР у реальному часі. Рівні мРНК
АРОФС-ЇЇШ нормалізували до рівнів мРНК циклофіліном за стандартними протоколами.
Зо Результати представлені в Таблиці 112 як середній відсоток рівнів МРНК АРОС-ПЙ для кожної експериментальної групи, порівняно з контрольною групою, обробленою сольовим розчином.
Результати демонструють, що олігонуклеотиди, які містять групу кон'югату саїЇМАс, були істотно більш ефективними, ніж оолігонуклеотид, що не містить групу кон'югату. Крім того, олігонуклеотид, що містить групу кон'югату саіМАс, зв'язану з олігонуклеотидом через фрагмент, що розщеплюється (ІЗІ5 680772), був ще більш ефективним, ніж олігонуклеотид, що містить групу кон'югату саїЇМАс, зв'язану з олігонуклеотидом через стабільний фрагмент (І5І5 696847).
Таблиця 112
Модифіковані олігонуклеотиди, спрямовані на мишачий АРОС-ІЇ . . ов ' МРНК АРОС- | БЕО ІЮ тОевАез(Зев""Сев Т ев І ав ГавАвв Т ав ГазАсв 60001086 440670 СавСтавСзавАвв "Сев ЛезСівв "СезАе ВЗ 60 | 37 06 | 5 щ.79
СаіМАсз-7ао"СевАев(Зев'"Сев ев Га ГазАсів 680772 Тав ТавАвдеСтав Сід СідвАвав"Сев АевСТев""СевАе 60131 ВЗ 06 | щ83
СаімМАсз-7а-в""СевАевСЗев"Сев ев І ав ГавАвсв ав 696847 ТавАвзСіазСіавСіавАвав"Сев АезСТев'""СевАе н.д. (Р5) 601040 | ВЗ
Структура СаІМАсз-7а показана раніше в Прикладі 48.
Приклад 102: Розподіл у печінці антисмислових олігонуклеотидів, що містять кон'югат
СамМАс
Оцінили розподіл у печінці І5І5 353382 (див. Таблицю 36), який не містить кон'югату саїІМАс, і І5ІЗ5 655861 (див. Таблицю 36), який містить кон'югат сзаіМАс. Самцям мишей бБаїЇр/с ввели одноразову підшкірну ін'єкцію ІЗІЗ 353382 або 655861 у дозі, наведеній у Таблиці 113. Кожна експериментальна група складалася з З тварин, за винятком групи з дозою 18 мг/кг для ІЗІ5 655861, яка складалася з 2-х тварин. Тварин приспали через 48 годин після введення дози для визначення розподілу олігонуклеотидів у печінці Для вимірювання кількості молекул антисмислового олігонуклеотиду на клітину, мітку трис-біпиридину рутенію (І) (МБО ТАС, Мезо зсаіе Різсомегу) кон'юговані з олігонуклеотидним зразком, використовуваним для виявлення антисмислових олігонуклеотидів. Результати, представлені в Таблиці 113, являють собою середні концентрації олігонуклеотиду для кожної експериментальної групи в одиницях виміру мільйонів молекул олігонуклеотиду на клітку. Результати демонструють, що при рівних дозах олігонуклеотид, що містить кон'югат саїІМАс, містився в більш високих концентраціях в цілому в печінці і гепатоцитах, ніж оолігонуклеотид, не містить кон'югату саМАс. Крім того, олігонуклеотид, що містить кон'югат (сатМАс, містився в більш низьких концентраціях у непаренхіматозних клітинах печінки, ніж олігонуклеотид, що не містить кон'югату саІМАСс. І тоді як концентрації І5І5 655861 у гепатоцитах і непаренхіматозних клітинах печінки були однаковими в розрахунку на одну клітину, вміст гепатоцитів у печінці становить близько 80 95 за обсягом. Отже, основна частина олігонуклеотиду І5БІ5 655861, що міститься в печінці, перебувала в гепатоцитах, тоді як основна частина олігонуклеотиду ІЗІ5 353382, що міститься в печінці, перебувала в непаренхіматозних клітинах печінки.
Таблиця 113 . Концентрація в
Концентрація в печінці в Концентрація в непаренхіматозних центрац ц р
ІБІЗ Мо Доза ілому (молекул"10760 на гепатоцитах клітинах печінки ц У У. ха пл (мг/кг) : (молекул"10760 на кап клітину) : (молекул"10760 на клітину) : клітину) 201777771717171711236 |77771717171717171661111111171|11111111656сС1С 393882 60 1777771717117734 7 | 77771717171171487777777 77717171 9801 90 1 юЮюЮКБУЄл886 7777 ЇЇ771717171717110с185 7 | 77717171711991
Таблиця 113
К . Концентрація в
Концентрація в печінці в онцентрація в непаренхіматозних
Доза хонцентрац В гепатоцитах ар ;
ІБІЗ Мо цілому (молекул"10760 на при клітинах печінки (мг/кг) : (молекул"10760 на кап клітину) : (молекул"10760 на клітину) клітину) 655861 6 17711111 4871 | 55о0С1
Приклад 103: Тривалість дії іп мімо олігонуклеотидів, спрямованих на АРОС-ІЇ, що містять кон'югат СаІМАсз
Олігонуклеотиди, наведені нижче в Таблиці 114, випробували у дослідженні одноразової дози на тривалість дії у мишей.
Таблиця 114
Модифіковані АБО, спрямовані на АРОС-ПІ . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІВ Мо Послідовність (від 5' до 3") СаМАсз 304801 АеСтев"Сев Тез Гев'""Сав Газ ГавСзав Гав'"Сав"СавАвавСав'""Сав Т ев ев ооноондо| в
ТевАевз Ге
СаіМмАсз-За-оАвдоАезСТво"Сео Гео Гео" Сав Газ ГавСав Гав'"Сав б63овА тоавАввСтав" Св Т ео Гео ГеєАез Ге баїМмАсз За
АеСіво"Сео Гео Гео" Сав Газ ГазСав Гав'""Сав"СавАваеСіав"Сав Гео Гео 6792 | ТооДесТеодче-СаїМАсз-195 Са!млсз5а
Структура СаІМАсз-3а показана у прикладі 39, а саіМАсз-19а4 показана у Прикладі 70.
Лікування
Самкам трансгенних мишей, які експресують людський АРОС-Ї, ввели одноразову підшкірну ін'єкцію олігонуклеотиду, наведеного в Таблиці 114, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 3 тварин. Зразки крові брали до введення дози для визначення вихідних показників і на 3, 7, 14, 21, 28, 35 і 42 день після введення дози. Рівні тригліцеридів і білка АРОС-ІІ в плазмі вимірювали так, як описано в Прикладі 20. Результати в
Таблиці 115 представлені як середній відсоток рівнів тригліцеридів та АРОС-ІЇЇ в плазмі для кожної експериментальної групи, нормалізованих до вихідних рівнів. Порівняння результатів у
Таблиці 71 прикладу 79 із результатами, представленими нижче в таблиці 115, демонструє, що олігонуклеотиди, що містять суміш фосфодіестерних і тіофосфатних міжнуклеозидних лінкерів, мають збільшену тривалістю дії, ніж еквівалентні олігонуклеотиди, які містять тільки тіофосфатні міжнуклеозидні лінкери.
Таблиця 115
Рівні тригліцеридів і білка АРОС-І| в плазмі трансгенних мишей
Часові точки. Тругліцериди | Білок АРОС-ІЇ
ІБІЗ Мо | Доза (мг/кг) (дні після (95 від вихідного|(9о від вихідного Кластер СМ введення СаІМмАсз значення) значення) дози 73 | 96 | 01 77 | 88 | 9 Ф
РВ5 21 | 69 | 92 | 65 | 86 14. | 5 | 6 304801 30 663084 10 Са!МАсз-За Ав 679241 10 Са!МАсз-19а Аа
Приклад 104: Синтез олігонуклеотидів, що містять кон'югат 5'-СаІМАсе2 даріве за я У верх МУ ик ую оту Б ДК вер нтяКу ре
БУ 1 же жах Є о я ще я й ке вова дана
Є вовна з КЕ ківі . и стен ння
М Поділи НИЙ й х дове Щі . 2 В вет. дю» фр -ї . а?» «ой мости чут см кана ото с КА, шої ТУ ЩЕ 7 ков БО та а
КОД вче ноти ї поря ть Дж Ба де й і й 2
АЖ сю КЕ ли, ер КВ
Едавук шим. імя яю ж зак маш
Сполука 120 є у продажу, а синтез сполуки 126 описаний у Прикладі 49. Сполуку 120 (1 г, 2,89 ммоль), НВТИ (0,39 г, 2,89 ммоль) і НОВІ (1,64 м, 4,33 ммоль) розчинили в ДМФА (10 мл) і додали М, М-діїзопропілетиламін (1,75 мл, 10,1 ммоль). Приблизно через 5 хвилин в реакційну суміш додали бензиловий ефір аміногексанової кислоти (1,36 г, 3,46 ммоль). Через 3 години реакційну суміш вилили в 100 мл 1 М розчину Манзої та екстрагували 2 х 50 мл етилацетату.
Органічні шари об'єднали і промили З х 40 мл насиченого розчину МанНСОз 2 х насиченим сольовим розчином, висушили за допомогою Маг50», відфільтрували і концентрували. Продукт очистили сілікагелевою колонковою хроматографією (ДХМ'ЕА:гексани, 1:1:1) з отриманням сполуки 231. Дані РХМС і ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. Сполуку 231 (1,34 г, 2,438 ммоль) розчинили в дихлорметані (10 мл) і додали трифтороцтову кислоту (10 мл). Після перемішування при кімнатній температурі протягом 2 годин, реакційну суміш концентрували при зниженому тиску і випарували разом з толуолом (З х 10 мл). Залишок висушили при зниженому тиску з отриманням сполуки 232 у вигляді трифторацетатної солі. Синтез сполуки 166 описаний у Прикладі 54. Сполуку 166 (3,39 м, 5,40 ммоль) розчинили в ДМФА (3 мл). Розчин сполуки 232 (1,3 м, 2,25 ммоль) розчинили в ДМФА (3 мл) і додали М, М-ізопропілетиламін (1,55 мл).
Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 30 хвилин, потім вилили у воду (80 мл), а водний шар екстрагували ЕЮАс (2 х 100 мл). Органічну фазу відокремили і промили насиченим водним розчином МанНсоз (З х 80 мл), 1 М Манзох (З х 80 мл) і насиченим сольовим розчином (2 х 80 мл), потім висушили (Маг5О»4), відфільтрували і концентрували.
Залишок очистили сілікагелевою колонковою хроматографією з отриманням сполуки 233. Дані
РХМСОС ії ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. Сполуку 233 (0,59 г, 0,48 ммоль) розчинили в метанолі (2,2 мл) та етилацетаті (2,2 мл). Додали паладій на вуглеці (10 мас. Фо
Ра/С, вологий, 0,07 г) і реакційну суміш перемішували в атмосфері водню протягом З годин.
Реакційну суміш відфільтрували через шар целіту і концентрували з отриманням карбонової кислоти. Карбонову кислоту (1,32 г, 1,15 ммоль, яка не містить кластера) розчинили в ДМФА (3,2 мл). До неї додали М, М-діїізопропілетиламін (0,3 мл, 1,73 ммоль) і РЕР-ТФК (0,30 мл, 1,73 ммоль). Через 30 хвилин перемішування при кімнатній температурі реакційну суміш вилили у воду (40 мл) і екстрагували ЕОАс (2 х 50 мл). Виконали стандартну процедуру виділення
Зо продукту, як описано вище, з отриманням сполуки 234. Дані РХМС і ЯМР узгоджувалися із зазначеною структурою. Олігонуклеотид 235 отримали загальним способом, описаним у
Прикладі 46. Кластерна частина СаїЇМАсг (СаіМАс2-244) групи кон'югату СаІМАс2-24 може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється з отриманням різних груп кон'югату.
Структура саіМАсе-24 (СсаІМАс2о-244-СМ) представлена нижче: он он
Кв А
Ноти он
ОН он
ЗБ Но Н 4
Приклад 105: Синтез олігонуклеотидів, що містять кон'югат саіМмАс1і-25 а Ве
Олово й в ща о ра чонльнь до б о отри да і ЗК ши дит чно Й. уми 1. Бораткнин буфер, ДМСО, рН 8,5, кімн. т-ра
Кон З о КТ 188 Ж 2. йтпак води, кімн. т-ра нн З нт тя и й СМ Я ди ! ше ди ви Же М М ОЇ вснМ Й шля 3
Синтез сполуки 166 описаний у Прикладі 54. Олігонуклеотид 236 отримали загальним способом, описаним у Прикладі 46.
Альтернативно, олігонуклеотид 236 синтезували за схемою, зображеною нижче, а сполуку 238 використовували для отримання олігонуклеотиду 236 щодо способів, описаних у Прикладі 10. пдойда нат -к роне в Же о о шо пп сь пео 7
ХК ля що ! - ВЕР-ТЯК осот МЕД дк они Ше ; сх ТЯ
Мне я и он БЕБ-ТЖК ве нас це зерен - сно Я щ 7 ТЕХ, Ацетониттаяй Що н ! 237 дає
Тетразол, Ї-метипімідазол, ДМ ФА Се КЕ б 2-цнаноетиптетраіїзопропілфосфоротшамідит МНАс ко щити Те т
М Кк за п
СМ
Синтез он он опігонуклеотиду нок, Її ; ; песо і неон о т дити вв СМ | сцоо вені Гн. в нн
Кластерна частина сСаїіМАсі (СаіМАсі-254) групи кон'югату сбаіМАсі-25 може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється, присутнім в олігонуклеотиди, з отриманням різних груп кон'югату. Структура СаЇМАсі-25 (СаМАсі-254-СМ) представлена нижче: он он но о о о. хи А уиСем)-
М о
АСНМ Нв
Приклад 106: Антисмислове інгібування іп мімо олігонуклеотиди, спрямованими на 5КВ-1, що містять кон'югат 5'-СаІМАсг або 5'-сзаіМАсз
Олігонуклеотиди, наведені в Таблицях 116 і 117, випробували в дозозалежних дослідженнях антисмислового інгібування 5КВ-1 у мишей.
Лікування
Шоститижневим самцям мишей С57ВІ /6 (даскзхоп І арогагу, Бар-Харбор, штат Мен) ввели одноразову підшкірну ін'єкцію 2, 7 або 20 мг/кг ІБІЗ Мо 440762; або 0,2, 0,6, 2, 6 або 20 мг/кг ІЗІ5
Мо 686221, 686222 або 708561; або сольового розчину. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Мишей приспали через 72 години після останнього введення. Рівні
МРНК 5КВ-1 у печінці виміряли за допомогою ПЛР у реальному часі. Рівні мРНК 5КВ-1 нормалізували до рівнів мРНК циклофіліну за стандартними протоколами. Антисмислові олігонуклеотиди, знижують рівні МРНК 5КВ-1 дозозалежним чином, а також результати ЕДво представлені в Таблицях 116 і 117. Хоча у попередніх дослідженнях показано, що тривалентні
СаіМАс-сполучені олігонуклеотиди істотно більш ефективні, ніж двовалентні СаіІМАс-получені олігонуклеотиди, які в свою чергу суттєво ефективні, ніж одновалентні (саіМАс-сполучені олігонуклеотиди (, наприклад, Кпогем еї аї., Віоогд. 5 Мей. Спет., т. 16, 5216-5231 (2008)), обробка антисмисловими олігонуклеотидами, що містять одновалентні, двовалентні і тривалентні кластери саіМАс, призводить до зниження рівнів мРНК 5КВ-1 з однаковою ефективністю, як показано в Таблицях 116 і 117.
Таблиця 116
Модифіковані олігонуклеотиди, спрямовані на 5КВ-1
ІВІЗ Ме Послідовність (від 5' до 3) ато ЕдДзо (мг/кг) ЗЕО ІО Мо 440762 | Те"СкеАвеСіав Гав'"СавАв» ГазСтазАвав"Сав Газ Гк"Ск нд. | 47 | 823 б86221 | баїМАсо-24а-оАво Тк"СкеАвзСов Гав'"СавАвв Тов(СавАсв СаМмАсг- тав Гав Гке"Ск 24а б86222 | баїМАсз-13За-оАво Тк«"СкеАвзСов Гав'"СавАвв Тов(СавАсв СаМАсз- тав Гав Гке"Ск 1 За
Легенда до таблиці представлена в Прикладі 93. Структура СаЇМАсз-13а показана у
Прикладі 62, а структура СаІМАс2-24 показана у Прикладі 104.
Таблиця 117
Модифіковані олігонуклеотиди, спрямовані на 5АВ-1
ІВІЗ Ме Послідовність (від 5" до 3) ато ЕДво(мг/кг) | ЗЕОО Мо 440762 |Тке"СкеАсаеСаєТає"СозАсєТаєСіовзАаетлСаєТаєТкет"СЮ нд. ЇЇ 00050 | 0823
СаімМАсі-25а- 708561 | о Ткв"СкеАвазСав Гав'"СавАвв ГазСЗавзАав СаіМмАсі-25а 0,4 823 тав Таз Гкв"ЄСк
Легенда до таблиці представлена в Прикладі 93. Структура СсаЇМАсі-25а показана у
Прикладі 105.
Оцінили також концентрації олігонуклеотидів, представлених у Таблицях 116 і 117, печінки, використовуючи методи, описані в Прикладі 75. Результати, показані нижче в Таблицях 117а і 1176, являють собою середні значення загального вмісту антисмислових олігонуклеотидів у тканинах для кожної експериментальної групи, виміряні по УФ, в одиницях виміру мкг олігонуклеотиду на грам тканини печінки. Результати демонструють, що олігонуклеотиди, що містять групу коньюагата саїЇМАс, накопичуються в печінці в істотно більш високих кількостях, ніж при тій самій дозі олігонуклеотиду, що не містить групу кон'югату зЗаіМАс. Крім того, антисмислові олігонуклеотиди, що містять один, два або три ліганду саЇМАс у своїх відповідних групах кон'югату, накопичуються в печінці в рівних кількостях. Цей результат є несподіваним з урахуванням даних, представлених вище в літературному джерелі КпПпогем еї аї., і він узгоджується з даними активності, представленими вище в Таблицях 116 і 117.
Таблиця 117а
Концентрації в печінці олігонуклеотидів, що містять групу коньюгатасаІМАс» або саіМАсз
ІВІ5 Ме | Доза (мг/кг) ними отим) Кластер СаІМАС 440762
Таблиця 117а
Концентрації в печінці олігонуклеотидів, що містять групу коньюгатасаІМАс» або саіМАсз
ІВІ5 Ме | Доза (мг/кг) ними отим) Кластер СаІМАС бе | щк 09 Щ вввогі 33061117 сакмду А 7 й 762655 706 ЇЇ щЩщБмк 16 ДГ бевиля Заклсв тва те 76 7198 щЩщ
Таблиця 117р
Концентрації в печінці олігонуклеотидів, що містять групу кон'югату саімМАсі
ІВІ5 Ме | Доза (мг/кг) ними еотиді Кластер СаїМАС см 440762. | 7. | -.КЙ.77/7/7Д7/7л88 ДС н.д. н.д. 06 17111111 708561 СамАс:-25а РО 6 Її 71111123
Приклад 107: Синтез олігонуклеотидів, що містять кон'югат саіМАс1і-26 або саіМмАсі-27
З р см) но о
З сич но но о М
АснМ 239 5 он
Олігонуклеотид 239 синтезували шляхом зв'язування сполуки 47 (див. Приклад 15) з кислотою 64 (див. Приклад 32), використовуючи НВТИ і СОІЕА в ДМФА. Отриману сполуку, що містить амід фосфітилірували, потім приєднали до 5'-кінця олігонуклеотиду способами, описаними у Прикладі 10. Кластерна частина СаїІМАс: (СаІМАсі-26а) групи кон'югату саіМАсі-26 може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється, який містяться в олігонуклеотиді, з отриманням різних груп кон'югату. Структура СаІМАсі-26 (СаіМАсі-264-СМ) представлена нижче: й см
З ус о 0 но М
АснМ
ОН ,
Для приєднання групи кон'югату СаіМАсі до 3'-кінця олігонуклеотиду амід, утворений з реакції сполук 47 та 64, приєднали до твердої підкладки способами, описаними у Прикладі 7.
Потім виконали синтез олігонуклеотиду способами, описаними у Прикладі 9, з отриманням олігонуклеотиду 240.
но он о
З сич "он во М о
АСНМ
240 3 5 о-Ї см ) ( оїво
Кластерна частина сСаїіМАсі (СаіМАсі-274) групи кон'югату сбаіМАсі-27 може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється, який містяться в олігонуклеотиді, З отриманням різних груп кон'югату. Структура СаЇМАсі-27 (СаМАсі-274--СМ) представлена нижче: но ен о о си Ще ол о М
АснНМ 2-Ї см ) З
Приклад 108: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, що містять групу кон'югату СсаіІМАс, спрямованих на Арода), іп мімо
Олігонуклеотиди, наведені нижче в Таблиці 118, випробували у дослідженні одноразової дози на мишах.
Таблиця 118
Модифіковані АБО, спрямовані на АРФО(а) . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІВ Мо Послідовність (від 5' до 3") СаМАсз
Тев(Зев"Сев Гев'""Сев"Сав(ав Т ав Газа Павла" Сав
СваімАсз-7а-о Гев(Зев"Сев Гев'"Сев"С вав Газ Газа СТав 681251 Тавав"Сав Гав ГеєСев Те Тев"Се бамАсз та РО ват
СаіМмАсз-За-о Гез(Зео"Сео Гео" Сево"СвСав Газ Газа Став 681255 Тавав'"Сав Гав Геобслео ТеТев"Се бамАсз-За РО ват
СваіМмАсз-10Оа-оТГевСтво"Сео Гео" Сео"Сав(Зав Т ав Газа Сів 681256 Тавав'"Сав Гав Геобслео ТеТев"Се бамАсз 1ба РО ват
СаімАсз-7а-о Гез(Зео"Сео Гео" Сево"Сдв(СЯав Газ Газа Став 681257 Тавзав'"Сав Гав Геосіео Ге Гев'"Се бамАсз та РО ват
СваімАсз-1 За-о ГевСтво"Сео Гео" Сео"Сав(Зав Т ав Газа Сів 681258 Тавзав'"Сав Гав Геосіео Ге Гев'"Се бамАсз 1За РО ват
Тев(Зео"Сео Гео"Сео"Сав(Сав Т ав ГавСав Свв 681260 ТавСідв"Сов Таз ГеоСіво Тез Гез'"СевоАао-С1ІаїЇМАсз-19 баімАсз19а
Структура СаІМАсз-7а показана раніше в Прикладі 48.
Лікування
Самцям трансгенних мишей, які експресують людський Аро(а), ввели одноразову підшкірну ін'єкцію олігонуклеотиду і дози, наведеноих в Таблиці 119, або РВ5. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Зразки крові брали за день до введення дози для визначення вихідних рівнів білка Аро(а) у плазмі, а також через 1 тиждень після введення першої дози.
Зразки крові брали додатково щотижня протягом близько 8 тижнів. Рівні білка Аро(а) у плазмі вимірювали за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу. Результати в Таблиці 119 представлені як середній відсоток від рівнів білка Аро(а) в плазмі для кожної експериментальної групи, нормалізованих до вихідних рівнів (96 ВІ). Результати показують, що антисмислові олігонуклеотиди знижують експресію білка Арода). Крім того, олігонуклеотиди, що містять групу кон'югату СаіМАс, демонструють ще більш ефективне зниження експресії Аро(а), ніж олігонуклеотид, що не містить групу кон'югату.
Таблиця 119
Рівні білка Арод(а) в плазмі
ІІ Ме Доза (мг/кг) Ароа) череві тиждень 1 РВВ/ ОЇ 77777777771717ндо Її 494372 681251 681255 681256 681257 681258 681260
Приклад 109: Синтез олігонуклеотидів, що містять кон'югат саіМАс1і-28 або сСаіМАс1і-29 он У З о есе но кит А М ден тр 244 о Он
Олігонуклеотид 241 синтезували такими-саме способами, як описано в Прикладі 71, з отриманням фосфорамідитної проміжної сполуки, після чого виконали прийоми, описані в
Прикладі 10, для синтезу олігонуклеотиду. Кластерна частина саїЇМАсі (СаІМАсі-284) групи кон'югату СаІМАсі-28 може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється, який містяться в олігонуклеотиді, з отриманням різних груп кон'югату. Структура ЗаїЇМАс:і-28 (СаІМАсі-284-СМ) представлена нижче:
ОН б 0 Сон
Для приєднання групи кон'югату СсСаїІМАсі до 3'-кінця олігонуклеотиду використовували такі- саме способи, як описано в Прикладі 71, з отриманням гідроксильної проміжної сполуки, яку потім приєднали до твердої підкладки способами, описаними у Прикладі 7. Потім виконали синтез олігонуклеотиду способами, описаними у Прикладі 9, з отриманням олігонуклеотиду 242. он но ОН о у
АсНМ р з в мо "о Ссм) ов)
Кластерна частина сСаїіМАсі (СаіМАсі-294) групи кон'югату сСаіМАсі-29 може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється, який містяться в олігонуклеотиді, З отриманням різних груп кон'югату. Структура СаЇМАсі-29 (СаІМАсі-294--СМ) представлена нижче: но рн он о У ноя о... М
АСНМ тр еоо-С
Приклад 110: Синтез олігонуклеотидів, що містять кон'югат саіМмАс1-30
- Ас - САв
АС с АкО Є
Ї й . шви й тн ях ше і ч й соб ес те вк нн Щі А гУГІЗ За йо сення, ее ов де моти Здяи оди ти ТВО ке
М. мо денм он 24 й ї ож
Я ! 1. МнНУймасМ СОМ з. ОМС шк Й 1. ТВА
З. АБО, рУГ нн | сети 2. Фосфітилювання - СОМ вс, й іх ю 1. Зв'язування з 5" кінцем АВО де няння ми кт ин "р ЯКЕ упор ден а - Зняття захисту та очистка АБО деЕнМ ск Її ств З. ; 45 МІК " з використанням методів очистки в режимі ОМ Т-оп он ов о У З' но о. ит и ово 246
Олігонуклеотид 246, який містить групу кон'югату саіМАсі-30, де М обраний з 0, 5, заміщеного або незаміщеного С1-С1іо алкілу, аміно, заміщеного аміно, азидо, алкенілу або алкинілу, синтезували так, як показано вище. Кластерна частина саїМАс: (СаІМАс:і-З0а) групи кон'югату СаІМАсі1-30 може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється, який містяться в олігонуклеотиді, з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації У являє собою частину фрагмента, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації М являє собою частину стабільного фрагмента, а фрагмент, що розщеплюється знаходиться в олігонуклеотиді. Структура СаіМАсі-З0а представлена нижче: он но о но бити
АснМ
Приклад 111: Синтез олігонуклеотидів, що містять кон'югат саіМмАс2-31 або сСаіМмАс2-32
Мк 1 анефтеняювання 7 й ХЕ Вижеукання з Я" кіннем 50 - ДВО пееннмнннненннненеесосссочв рен полотоннтантнтнннннк них ІВ ; 5 хе МН)»
НО ПН огв я ко К жк . цк з. Ведалення гри КИНЕ їКИ Ше К У. Зв'язужинях знізянух Ж ній сад я
Ї Кк тан Ж зняття Яахвх ти инястка мМ ож Я чих зх с З : жмехнійттвноках меті пеокотки ман "ОВД Й з режі КМУ 2 т
ОВ що соболя .
ОК ло тон ио в . денМ її У ї. | ву х 1 К ак тик : я (ово)
Кей 0 пев нова но з б--й м 250
Неенм
Олігонуклеотид 250, який містить групу кон'югату саіМАс2-31, де М обраний з 0, 5, заміщеного або незаміщеного С1-С1іо алкілу, аміно, заміщеного аміно, азидо, алкенілу або алкинілу, синтезували так, як показано вище. Кластерна частина саЇМАсг (СаІМАс2-314) групи кон'югату СаІМАс2-31 може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється, який містяться в олігонуклеотиді, з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації група, яка містить У, і знаходиться безпосередньо біля 5'-кінця олігонуклеотиду, являє собою частину фрагмента, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації група, яка містить "У, і знаходиться безпосередньо біля 5'-кінця олігонуклеотиду, являє собою частину стабільного фрагмента, а фрагмент, що розщеплюється знаходиться в олігонуклеотиді. Структура саіІМАсег-
З12 представлена нижче:
ОН но о но о. пити риО й х
АСНМ О у о
Шк о
О-р.
У де
НОеНМ
Синтез олігонуклеотиду, що містить кон'югат заіМАс2-32, представлений нижче. злет й. СВК. Мао»; дк і. З жеканяж з кава аа
НО. 8. МЕН, ОБО. Зкновоенвх зн ЕН. і Ж. Вехфтихняакня са бін З. Ва'жкужваннх яміжнтих З -- ОМ ожини : шк . «хостес ооо о: ям А А Я Зкта тій кв еуче я пучку Я
ВС Ви Що Ве З ПЕЕВОПВЕТЬНІВНЯ зевтяуїв «УВІ «Я зві ЕВ в ранні БК ав. но С ват вд З 3 7 ж зов и бро
О-в,
Сл щ
МО ннАх
Олігонуклеотид 252, який містить групу кон'югату СаіМАс2-32, де М обраний з 0, 5, заміщеного або незаміщеного С1-С1іо алкілу, аміно, заміщеного аміно, азидо, алкенілу або алкинілу, синтезували так, як показано вище. Кластерна частина СаїІМАсг (СаІМАс2-3г2а) групи кон'югату СаІМАс2-32 може бути комбінована з будь-яким фрагментом, що розщеплюється, який містяться в олігонуклеотиді, з отриманням різних груп кон'югату. У деяких варіантах реалізації група, яка містить У, ї знаходиться безпосередньо біля 5'-кінця олігонуклеотиду, являє собою частину фрагмента, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації група, яка містить "У, і знаходиться безпосередньо біля 5'-кінця олігонуклеотиду, являє собою частину стабільного фрагмента, а фрагмент, що розщеплюється знаходиться в олігонуклеотиді. Структура саіМАсег-
Зг2а представлена нижче: но он о ово. оо
АСНМ бу о о У о-р он ут б У
НО МнАс
Приклад 112: Модифіковані олігонуклеотиди, що містять кон'югат саїІМАсі
Олігонуклеотиди в Таблиці 120, спрямовані на 5КВ-1, були синтезовані з групою кон'югату
СаМАс: для додаткової перевірки ефективності олігонуклеотидів, що містять групи кон'югату, які містять один ліганд заіМАс.
Таблиця 120 . . в ' Кластер ЗЕО І
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") самАс
СаіМмАсі-25Ба-сойАцво Се "Сев Теє Геє "Сев Аа Став Тав "Сов Адв тав Таз Сідв Аав "Сов Таз Тез "Сев "Сев Тев Те баїМмАстоба
СваіМмАсі-2Ба-олев "Сев Тез Тез "Сев Аде Став Тав "Сов Адв Тов 711462 Сіав Аа "Са Таз Те "Сев "Сев Тез Те ЗаїмАстеб» во | вго
СваіМмАсі-2Ба-олев "Сео Тео Гео "Сео Аа Став Тав "Сов Адв Тв 711463 Сіав Азв "Сав Таз Тео "Сво "Сев Тев Те Замлстова Ро вгв
СаіМмАсі-2басойАцво Се "Се Теє Геє "Сев Аа Став Тав "Сов Адв 711465 Таз Сідв Аав "Сов Таз Тез "Сев "Сев Тев Те баїмАст ва
СваіМмАсі-2баолев "Сев Тез Тез "Сев Аде Став Тав "Сов Адв Тов 711466 Став Азв "Сав Таз Тев "Сев "Сев Тев Те Заїмлстова Ро вгв
СваіМмАсі-2баолев "Сео Тео Гео "Сео Аа Став Тав "Сов Адв Тв 711467 Став Аав "Сов Тав Тео "Сво "Сев Те Те аїмАст оба во | вв
СаіМмАсі-28а-сойАво Се "Се Теє Геє "Сев Аа Став Тав "Сов Адв 711468 Таз Сідв Аав "Сов Таз Тез "Сев "Сев Тев Те ЗаїмАст Ва
СаіМмАсі-28а-олев "Сев Тез Тез "Сев Аде Став Тав "Сов Адв Тов 711469 Став Азв "Сав Таз Тев "Сев "Сев Тев Те Замлстава Ро вгв
СаіМмАсі-28а-олев "Сео Тео Гео "Сео Аа Став Тав "Сов Адв Тв 711470 Сіав Аяв "Св Тов Тео "Сео "Сев Тез Те ЗаїмАстгв» во | вго
Сев то ев Тев Тев теє Аде Сав Тав тав Аде Тав Сав Аде тав
ЛЗВАА | Та Тев "Свв "Сев Те Тео" СаїМАсІ-27а ЗаїмАста7» Ро вгв
Сев тео Тео Тео тео Аде Сав Тав тав Аде Тав Сав Аде тав 713845 | Тов Тео "Сео "Сев Те Тео ЗаїМАсі-27а ЗаїмАста7» Ро вгв
Сев тео Тео Тео тео Аде Сав Тав тав Аде Тав Сав Аде тав п 3846 Та Тео тео те Тев Тео Адо-СаіМАс1і-27а СаїМАст-27а
Сев т ев Тев Тев теє Аде Сав Тав тав Аде Тав Сав Аде тав
ЗВ | тав Тев "Сев "Сев Тев Тео" СаїМАст-295 Самлсегвь го | вв
Сев тео Тео Тео тео Аде Сав Тав тав Аде Тав Сав Аде тав 713848 Тав Тео "Сво "Сев Тез Гео-СаімАсі-29а ЗаїмАстг9» Ро вгв
Сев т ев Тев Тев теє Аде Сав Тав тав Аде Тав Сав Аде тав 713849 Таз Тез "Сев "Сев Тез Тео Адо-СіІа!іМАсі-29а СаїМАсі-29а
Сев тео Тео Тео тео Аде Сав Тав тав Аде Тав Сав Аде тав 719850 | Тв Тео "Сео "Сев Тех Тео Аво-СаїМАс:-29а баїмАст 2»
Приклад 113: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на
СЕВ
Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 121, випробували в дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування людського фактора комплементу В (СЕВ) у мишей.
Таблиця 121
Модифіковані АБО, спрямовані на СЕВ . . ши , Кластер ЗЕО І
ІБІЗ Мо Послідовність (від 5' до 3") самАсз СМ МО
АезТез"Сез"Сез"СезАаз"Сазцсавт"СавтОавтоав
СаіМмАсз-За-сАезТез"Сез"Сез"СезАаз"Савсав 687301 торавптОавтоавтоав Таз Гав"Сев "СевДезслез"Се СаїМмАсз-За Ро о
Структура СаІМАсз-За показана раніше в Прикладі 39.
Лікування
Кожній трансгенній миші, яка експресує людський СЕВ (дЧаскхоп І арогайїогу, Бар-Харбор, штат Мен), один раз на тиждень протягом З тижнів (загалом 4 дози) вводили підшкірну ін'єкцію олігонуклеотиду, наведеного в Таблиці 122, або сольового розчину. Чотирьом експериментальним групам, яким вводили І5ІЗ Мо 588540, вводили 6, 12, 25 або 50 мг/кг на дозу. Чотирьом експериментальним групам, яким вводили І5БІЗ Мо 687301, вводили 0,25, 0,5, 2 або 6 мг/кг на дозу. Кожна експериментальна група складалася з 4 тварин. Мишей приспали через 2 дні після останнього введення дози для визначення рівнів людського СЕВ і мРНК циклофіліном в печінці і нирках, використовуючи ПЛР у реальному часі за стандартними протоколами. Рівні МРНК СЕВ нормалізували до рівнів циклофіліном, а середні значення для кожної експериментальної групи використовували для визначення дози, яка забезпечує досягнення 50 95 інгібування експресії транскрипту людського СЕВ (ЕЮзо). Результати являють собою середині значення для чотирьох експериментів, проведених з двома різними наборами праймерних зондів, і представлені в Таблиці 122.
Таблиця 122
Ефективність олігонуклеотидів, спрямованих на людський СЕВ, іп мімо
ІІ Ме ЕОєо в печінці (мг/кг) ШИН Кластер СаІМАсз 588540 17171779 | 177 | нд | нд 687301 СамАсз-Зза | РО
Рівні трансамінази печінки, аланін-амінотрансферази (АТ) та аспартат-амінотрансферази (А5Т) у сироватці вимірювали щодо мишей, ін'єкованих сольовим розчином, використовуючи стандартні протоколи. Оцінили також загальний білірубін, азот сечовини крові (АМК) і масу тіла.
Результати демонструють, що експериментальні групи не мають істотних відмінностей від групи, обробленої сольовим розчином (дані не показані), що вказує на хорошу переносимість
Зо обох олігонуклеотидів.
Приклад 114: Антисмислове інгібування іп мімо під дією олігонуклеотидів, спрямованих на
СЕВ
Олігонуклеотиди, наведені в Таблиці 123, випробували в дозозалежному дослідженні антисмислового інгібування СЕВ у мишей.
Лікування
Кожній трансгенній миші, яка експресує людський СЕВ (даскхоп Іарогаїогу, Бар-Харбор, штат Мен), ввели одноразову підшкірну ін'єкцію 0,6, 1, б або 18 мг/кг олігонуклеотиду, наведеного в Таблиці 123, або сольового розчину. Кожна експериментальна група складалася з 4 або 5 тварин. Мишей приспали через 72 години після введення дози для визначення рівнів людського СЕВ ї мРНК циклофіліном в печінці, використовуючи ПЛР у реальному часі за стандартними протоколами. Рівні МРНК СЕВ нормалізували до рівнів циклофіліном, а середні значення для кожної експериментальної групи використовували для визначення дози, яка забезпечує досягнення 5095 інгібування експресії транскрипту людського СЕВ (ЕОрво).
Результати представлені в Таблиці 123.
Таблиця 123
Модифіковані АБО, спрямовані на СЕВ . . ши , Кластер ЕОво в печінці 5ЕО 10
СаіМАсз-7а-оАевє Гев"Сев"Сев'""СевАвдв"СавСтав нове т то то|яаннетя (| ов 1 о
СаіМАсз-7а-оАев Гео"Сево"Сео"СеойАав"СавСтав новив сс то са доо|яннся то ол
СаіМАсз-7а-оАев Гео"Сео"Сео"СевАвав"Сав(ав вовк бло. 00 емеле Ро о мо тав ГавСіав Гав"Сево"СеоАевСтев "Се
СаіМАсз-7а-оАевє Гев"Сео"Сево"СеойАав"Сав(Сав вою ис. 0 емаете Ро свв мо тав ГавСіав Гав"Сево"СеоАевСтев "Се
Структура СаІМАсз-7а показана раніше в Прикладі 48.
Приклад 115: Антисмислове інгібування людського фактора комплементу В (СЕВ) у Нерс2 клітинах МОЕ гепмерами
Були сконструйовані антисмислові олігонуклеотиди, спрямовані на нуклеїнову кислоту людського фактора комплементу В (СЕВ), і був протестований їх вплив іп міго на мРНК СЕВ.
Антисмислові олігонуклеотиди були протестовані в серії експериментів, які мали аналогічні умови культивування. Результати для кожного експерименту представлені в окремих таблицях, показаних нижче. Культивовані клітини Нерб2 з іщільністю 20000 клітин на лунку трансфецирували з використанням електропорації з 4500 нМ антисмислового олігонуклеотиду.
Після періоду обробки і протягом 24 годин, РНК виділяли з клітин і рівні МРНК СЕВ вимірювали методом кількісної ПЛР в реальному часі. Набір людських праймерних зондів КТ53459 (пряма послідовність АЗТСТСТОТОССАТОСТТТОО, зазначена в цьому документі як хЕО ІЮ МО: 810; зворотна послідовність ЗООСОААТОАСТОАСАТСТТО, зазначена в цьому документі як ЗЕО ІЮ
МО: 811; послідовність зонда ТАССОАТТАССАСААССААССАТОСОССА, зазначена в цьому документі як ЗЕО ІЮ МО: 812) був використаний для вимірювання рівнів мРНК. Рівні мРНК СЕВ були скоректовані в відповідності з змістом сумарної РНК, виміряних за допомогою
КІВОСКЕЕМФ) Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо необроблених контрольних клітин.
Вперше сконструйовані химерні антисмислові олігонуклеотиди, зазначені у поданих нижче таблицях, були сконструйовані як 5-10-5 МОЄ гепмери. Гепмери 5-10-5 МОЕ мають 20 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з десяти 2'-дезоксинуклеозидів та оточений крилами з 5' кінця і в З' кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Кожен нуклеозид 5 крила і нуклеозид З3' крила має 2'-МОЕ модифікації. Міжнуклеозидні зв'язки в кожному гепмері являють собою тіофосфатні (Р-5) зв'язки. Всі залишки цитозина в кожному гепмері являють собою 5-метилцитозини. "Сайт ініціації" позначає крайній 5 нуклеозид, на який спрямований
Зо гепмер к послідовності гена людини. "Сайт термінації" позначає крайній 3' нуклеозид, на який спрямований гепмер у послідовності гена людини. Кожен гепмер, наведений у поданих нижче таблицях, спрямований на мРНК СЕВ людини, зазначену в цьому описі як 5ЕО ІЮ МО: 1 (з номером доступу ЗЕМВАМК ММ 001710.5) чи на геномну послідовність СЕВ людини, зазначену в цьому документі як 5ЕС ІЮ МО: 2 (з номером доступу СЕМВАМК МТ 007592.15, усічену з нуклеотиду 31852000 до 31861000), або на обидві послідовності. "н/д" означає, що антисмисловий олігонуклеотид не спрямований на зазначену конкретну послідовність гена з 100 95 комплементарністю.
Таблиця 124
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 вво о оя | ЗЕОІО) во
ІБІЗ Мо Мо сайт. поласть: Послідовність інгібува мог МО: 2 сайт мою ініціації поміна ння ініціації термінації таке) о | 5 вот ССС з пн пе 5 тає) вовни ДОМА нов те в заи| |в Со вт тя 8 нення нн 1-2 зве) ке | ле воно СО о |в те
Таблиця 124
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2
БОЮ Мо а ЗБОЮ | БОЮ
ІБІВ Мо Мо сайт. поласть: Послідовність інгібува мог МО: 2 сайт мою ініціації терміна ння ініціації термінації 77711171 1СсАсААлосСА | | | || / пре нвятиян 2-3 зве) ою | бе воно СОСОЮ 7 ою и зиею| то | в» (вниз ЛОАМ|ств и зве) ою еовоно САЛО схе и ние нт
БзовБи| 75371 7791 сАстАССССоСТ 1571 до! нд 55
Таблиця 124
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 вво о оя | ЗЕОІО) во
ІБІВ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність інгібува МО:2 МО: 2 сайт ЗЕ о сайт . мішень сайт пи МО: 20-х | терміна ння |. ., .. | термінації ініціації | її ініціації
Зчленувані ТСОСО,ТТато ня екзонів 3-4
Зчленувані ГТТасАаСАатТА 3-4
Ассттосттата
СсТасссСАССТТо вастатстТсСАА сстасдатТаст ссссссастас ватАлассоссс
АсасАдацаатАА садассАсасА ссастасада
СААдпЧдаССАСС
ССастоСААСА тосатоссаст сАдвча7астосат тааСАа,аААсс
Зчленуванї САИТСТТааСА 4-5
Зчленуван| АТОаОДАСОСАСТСТ 4-5 сттсавпссСАСС ваАддасттса
ААСАСАСИААА
532675 ТСАСОСААСАС
Таблиця 124
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 вво о оя | ЗЕОІО) во
ІБІВ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність інгібува МО:2 МО: 2 сайт ЗЕ о сайт . мішень сайт ; щі МО: пре | терміна ння |... .. | термінації ініціації | її ініціації 11111111 АобАлАосСТ | (| | Її тсаїхгстостстТ
Зчленуванї СТІСТОТТатТто 5-6
ТТСсАТОССАСаССТ завте| 1055 1067 |Еконе | ТСАТОС зт | зт
ТАСАТОТТСАТО взовте| 074 | 1093 |Екосне | ТАСАТОТТ отв |з
АССАССТАСАТ
ТСТАаСАССАС
САТССАТСТАСС
5З2682| 1092 1111 Екон СТА 3776 3795 в
СстТатстТОАТССА
ССААТАИСТОатТСстТ ттаастостат 5326851| 1129 1148 Евоне | ААСОС 3813 3832
Таблиця 125
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 вес ОО з, 8ЕОІЮ 5ЕОЮ |8Е
ІБІЗ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність інгібуван МО: 2 МО: 2 о сайт , мішень сайт сайт ІО тих терміна ня водою од еЇкійх, ініціації ції ініціації |термінації Мо: 5З2686| 1135.) 1154 Екон | СТТТТТООСТОСТОТ в зві9 | 3838
БЗ2687 | 1141 | 1160 Еквоне ТОСТАСАСАСТТТТТОВО звоБ | 3844
БЗ2688| 1147 | 1166 вон | ОАСТАСАСАЄТТ 70 зв31 | 3850 вв.
БЗ2689| 1153.) 1172 Екон | ОТТОАСТАВ в 3837 | 3856
Зчлену- 532690| 1159.) 1178 | вання СдОСТТотовАТТАЛеТ Б | з8в4аз3 звв2 | 88 екзонів 6-7
Зчлену- , ТА екзонів 6-7
Зчлену- 532692| 1171) 1190 | вання ССАТААСТТОССАССТІІ ве . ст екзонів 6-7
Таблиця 125
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 вес ОО з, 8ЕОІЮ 5ЕОЮ |8Е
ІБІЗ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність інгібуван МО: 2 МО: 2 о сайт , мішень сайт сайт ІО с | терміна ня ср ЯК. ініціації її ініціації Ітермінації МО: 5З2696| 1235) 1254 конт | ЛСАСТТТОАСОСААА вв 4211.|. 4230
Зчлену- 532697 | 1298 | 1317 | вання Су СТТоАТААТТОАт 5З 95 екзонів 7-8
Зчлену- ня те екзонів 7-8
Зчлену- 5З2699| 1310 | 1329 | вання са оААсттатоотот Бо 97 екзонів 7-8 532700 | 1316 | 1335 Евонв СОС ОАСТТОААСТТОТ ва 4609 | 4628 вв! 532701 1322 | 1341 Екон | ДО СТСОСТОАСТТСА ва 4815 | 4634 99. 532703 | 1349 | 1368 Екон | ДОС ОССТОвАоО 4642. | 4661
Зчлену- екзонів 8-9 532711 | 1449 | 1468 о Еконе |ОСООООСАТОТТОТО 5023 | БОд2 532713 | 1461 | 1480 Екон | О6тоОоо 5ОЗБ 0 БОБА
Таблиця 125
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2
ЕОІО ко з, 8ЕОІЮ 5ЕОЮ |8Е
ІБІЗ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність інгібуван МО: 2 МО: 2 о сайт терміна мішень ня сайт сайт ІО ініціації її ініціації |термінації Мо: доле тоб | осно ТОООВСАТСТОКТОААТО 45. зов5| ота
Зчлену- вання |АСАТССАСАТААТОСТОС 532717 1533 | 1552 рана. СТ 46 115
Зчлену- вання | АСАТАСАСАТССАСАТАА взатів 0 1539 | 158 рання ТС 46 116 10
Зчлену- вання ССААДАСАСАТАСАСАТОСС 532719 1Б4Б | 1ББА ан до 46 117 10 532720 | 1582 | 1601 Еквонто ДОСАТТОАТОТТСАСТТО дв в231 | ОБО 532721| 1588... 1607 Евонто | МССААЛОСАТТОАТОТТ дв в237 | Б2Бб 5З2722| 1594 |. 1613 воно (А МОСАТ воАЗ | Боб 532723 | 1600 | 1619 Еквонло (ДОС СЛОВА дв во49 | БОВВ8 532724 | 1606 | 1625 воно (ОТТО ВА що воББ о | Б2ТА в32725| 1612. |. 1631 Евонто | ДТ ОСТОАТТОТОТТ вові | ВО 532726| 1618.) 1637 Еквонто |(СЛ САСАТОТТОСТСАТТ до вов7 | БОВЄ 5З2727 | 1624 | 1643 Еквонто (СТО ОААСАСАТОТТО 5О73 | 5292 532728 | 1630 | 1649 Еквонто |ДТОСТТОАСТТТОААСАС 3 вг79 | 5298 532729 | 1636 | 1655 Евонло | САТ ОСТТОАОТТ во8Б | 5ЗОЇ 532730 | 1642 | 1661 Еквонто |(САСОТТТТОСАТАТО ТТ да вгаї1 | БЗІО 532731 | 1686 | 1705 Евонтї ТО ОАСТОвоТТТо 5В27 | БВАЄ 532732 1692. 1711 Евонтї | ОАСТСАСАСАСТО 5833 | БВБ2
Бів252| 1698.) 1717 Евонтї | СЛОАСАСТоАЄ 5839 | 5858 зо лм пз | он ОМУОСКТОССАСААЄ р вояв воа 532734 1710.) 1729 Евонлт | ДА СОСАААОСАТООСА до БВБІ | 5В7О 5З2735| 1734 | 1753 Евонлт | СТИ ОТАЛТОВОТАСС 5ВБ | 5ВО4 532736 | 1740 | 1759 вон |ДСТ ОТО ТАТО 5881 | 5ООО
Таблиця 125
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2
ІБІЗ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність інгібуван МО: 2 МО: С сайт : мішень сайт сайт ІО ініціації топи ня ініціації |термінації Мо:
Зчлену- нене Денне ре 14
Таблиця 125
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 вес ОО з, 8ЕОІЮ 5ЕОЮ |8Е
ІБІЗ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність інгібуван МО: 2 МО: 2 о сайт . мішень сайт сайт ІО 2-х терміна ня тоді . ше ,
Ініціації її ініціації |термінації Мо:
Таблиця 126
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 вес ОО 3, ВЕТО
МО: 1 - |Область- й й ик | МО:2 - 7 ІЗЕОІЮ
ІБІВ Мо 5 сайт . Послідовність інгібу- 5 сайт , сайт . мішень сайт . МО: и: А, пермінац вання)... термін
ІнІЦІацЦіІї її ІнІЦІації ації 5З2812| нд. | н.д. | Екзон1 | ІССАОСТСАСТОСССТОТТОСЇ 19 | 1593 | 1612 532819| нд. | нд. | Екзонї |ІСТОСАСААСТОССАСССТІТ| 26 | 1713) 1732 | 169
Екзон 2 - ваовот ндо| нд Ебон? | АССТоТОСАСТСТОССТТО| 39 | 2абв 532822 нд нд інтроно СССТСАААССТСТОСАСТСТ 3 | 2974 2393 532823 нд нд інтроно ТСАТТОСССТСАААССТСТО| 19 2380) 2399 532824| нд. | н.д. |Інтрон2 |ССАСАСТСАТТОСССТСААДА 37 | 2386 | 2405 532828| нд. | н.д. | Інтрон2 | СТСАТССТАСТОСТОАССТІ 25 | 2442 | 24681 532829| нд. | н.д. | Інтрон 2 | ССТАЄТСТСАТССТАСТОСТ| 23 /| 2448 532830| нд. | н.д. |Інтрон2 |АСССТОССТАСТСТСАТОСТ 30 | 2454 532831 | нд. | н.д. | Інтрон2 |СТТаТСАСССТОССТАСТСТІ 34 | 2460 5З2833| нд. | н.д. | Інтрон2 | ССТААААСТОСТОСТАСТОСІЇ 9 | 2492 | 2511
Таблиця 126
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 вес ОО 3, ВЕТО
ІБІЗ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність інгібу- МО: 2 сайт ЗЕ о сайт , мішень сайт , МО: 25: «МГермінац вання |... .ї термін
ІнІЦІацЦіІї її ІнІЦІації ації 532835| н.д. | н.д. (Інтрон 11! СССТАСТОССАТТТСАССТТ 5990 532836 он ндо рон. ТОТТСТОСААТССТОСАСАА| 25 5Ої3 | 5032 532839 нд ондо |нтрони? довтлосАдостотттетов 6362 6381
Інтрон 1 -ї ТДаТаатсСАСАССТОаААСА
Зчленува ння | ОСАСОСАСсСАССТСТТОоСТ 532763 2133 2152 | екзонів |Т 40 191 14-15
Ба?764| 24139. 2158 Еквон 15) ОСТ ОТОСАОСОЛОСАОСТ 6946 532765! 2145.) 2164 Еквон 5 ДГ ОАТАТОСТОТОсАСОСА 6933 | 6952 532766 2151 АСАССТТТОАТАТоСТОТОС| 36 | 6939 | 6958 5З2767 АСААДАСАСАОСТТТОАТАТСІ 33 | 6945 | 6964 532768 2163 | 2182 |Екзон 15| ТТСАСАСАСААДАСАСАОСТТТІ 41 | 6951 532769 2169 | 2188 |Екзон 15| ТССТОСТСАСАСАСАААСАСІ 49 | 6957 | 6976 | 197 532770| 2193 | 2212 |Екзон 15 АССТОСТТОСОАСТСАОСТТІ 61 | 6981 532771 | 2199 | 2218 |Екзон 15 АТаТАСАССТОСТТССОАСТІ 39 | 6987 | 7006 |) 199 532772 2205 | 2224 | Екзон 15 | ТТСТТОАТОТАСАССТОСТТ 6993 5З32773| 2211 | 2230 |Екзон 15| ТССССАТТСТТОАТОТАСАСІ 31 | 6999
Зчленува 532774) 2217 | 2236 екзонів ТІСТТАТССССАТТСТТОАТ | 36 202 15-16
Зчленува 532775| 2223 | 2242 екзонів СТОаСсСтТТТСТТАТССССАТТ| 56 203 15-16
Зчленува 532776) 2229 | 2248 екзонів ТСАСАСОСТОССТТТСТТАТС! 33 204 15-16 2235 | 2254 |Екзон 16| ТСТСТСТСАСАССТОССТТТ 532778| 2241 | 2260 |Екзон 16| ТОАОСАТСТСТСТСАСАОСТІ 51 | 7125 | 7144 | 206 532779 2266 |Екзон 16 | ВСАТАТТОАССАТСТСТСТО 532780 2286 |Екзон 16 | ТЗАСТТТОТСАТАОССТОСОЇ 56 | 7151 | 7170 1 208 5З2781 2292. |Екзон 16 | ТатТССТТаАСТТТОТСАТАС
Таблиця 126
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2
ЕС Ю ко з; во То
ІБІЗ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність інгібу- МО: 2 сайт ЗЕ о сайт . мішень сайт . МО: 25: «МГермінац вання |... .ї термін
ІнІЦІацЦіІї її ІнІЦІації ації 532784| 2321 | 2340 ГЕкзон 16| ВЗАСТСАСТОСТССАСТАСАА 31 | 7205 7224 | 212
Зчленува 532787 | 2352 | 2371 екзонів ТСАССТСТОСААСТАТТОСОЇ 42 7236) 7255 | 215 16-17
Зчленува 5З2788| 2358 | 2377 екзонів ССАСААТСАССТСТОСААСТ 32 216 16-17
Зчленува 5зо789 озва | 2383 ння |СО0ССОССАСААТСАССТС| др 217 екзонів | Т 16-17 532790| 2382 | 2401 ГЕкзон 17 | СТСТТОТОААСТАТСААСО!С, 33 | 7347) 7366 | 218 532791 | 2388 СОаАСТТСТСТТОТОААСТАТ 532792| 2394 | 2413 ГЕкзон 17 || АТОАДАДАСаАСТТСТСТТата
Зчленува 5З2793| 2400 | 2419 екзонів АСТТОДАТОАААССАСТТСТ 45 | 7365 | 7384 | 221 17-18
Зчленува 5З2794| 2406 | 2425 екзонів АСАССААСТТОААТОАААСО 18 222 17-18 532795 2446 |Екзон 18| ТССАСТАСТОСССАССТОАТІ 30 | 7662 | 7681 1 223 532796| 2433 | 2452 |Екзон 18| САЯАСАТССАСТАСТССССА 38 | 7668 7687 | 224 532797 | 2439 | 2458 |Екзон 18 | ТТГТТТТОСАСАСАТССАСТАС 532798 2445 | 2464 |Екзон 18| ТТСТОСТТТТТасСАСАСАТС 532799 | 2451 тассасттстОатТТТасСА 532800 тасттттассасттстостт 532801 | 2463 | 2482 |Екзон 18| ОСТАССТасттттОосСсСОсСтТтІ 47 | 7698 | 7717 1 229 532802 2469 | 2488 |Екзон 18| ТОАОСАСОТАССТОаСТІТТОЇ 31 | 7704 | 77231 230 532805 2529 | 2548 |Екзон 18| ТАСАСТТТСТОСТТСАСССА| 46 | 7764 | 77831 233 532806 | 2535 | 2554 | Екзон 18| ТСАТСТТОСАСТТТСТОСТТ 532807 2541 | 2560 |Екзон 18 АААТССТСАТСТТОСАСТІТ 5З2808 2566 ААДАСССАААТССТСАТСТТОа 532811 | 2599 | 2618 |Екзон 18| АОСТаТТТТААТТСААТСоСС | 96 | 7834 | 7853 | 239
Таблиця 127
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2
БОЮ ЗЕО о во о | ЗО ТО Е , МО: 1 І МО: 2 на о/о
МО: 1 5 Область- . . МО: 2 на |... о
ІБІВ Мо 5 сайт . Послідовність -. сайті |інгібуван сайт терміна мішень сайті термінаці ня ІО ініціації її ініціації ї МО:
Інтрон 6 -Г ААСТТИССАССТОТОСОТ
Екзон 15 532843 ндо| нд Інтрон 11 СА ОТТТОАСААЛОСАО 6015 | 6034
Інтрон 16 | ССИССАСААТСАССТОС певн| на нки ДОССКОМТСКОСТО Є тор | лив з ро 532845 ндо| нд Інтрон 10 стр олАтолАвААоО 5БаЗІ1 | 5БО 532846 ндо| нд Інтрон 13 пот тостолоосАТоТ вБб1 | 6580
Інтрон 1 -І АСАССТОАДАСАСАдАСа вови| чл нку АЛОЕ КОМКОО ов сти в рю 532856 нд Екзон 8- АСАСОТСССТТСТОАССА др 4755 4 |оБ5 інтрон8 |ТС веви| нан |нтне ЗГОСОКОАСКО КАЄ зе | ге о ре 532859 ндо| нд Інтрон 10 дод осАалАтатосто вої | 5В8го 532861 нд до Інтрон 11 т СТ ТОАСАААОСАСО 6014 | 6033
Інтрон 6 - ССАССТИа Та сСатОаАОпОА
Екзон 17 17
Таблиця 127
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 во по| ЗБО о вЕОЮ | ЗБО ТО 5Е , МО: 1 І МО: 2 на о/о
МО: 1 5 Область- . . МО: 2 на |... о
ІБІВ Мо 5 сайт . Послідовність -. сайті |інгібуван сайт терміна мішень сайті термінаці ня ІО ініціації її ініціації ї МО:
Екзон 17 17 532871 ндо| нд Інтрон 10 то лаасластАвАост Баз2 | БАЗІ
Інтрон 17 | ССААССТаСАСАсСасСАС певю| ня вк тк ЩСЕЛАССТ КОН СК лю | же т рт
Екзон 9 - | СТАЙаСАСОТТАСТСАСС 52876 нд Інтрон 6 -|САССАТААСТТОССАССТІ ув 4167 41. |о75 екзон7 |СТ 532877 ндо| нд Інтрон 12 со отАссАсСТотттОт 6363 | 6382 532880 ндо| нд Інтрон 11 ТТОЛСАААССАОСАТОТОЇ воое | вогв вра
Екзон З - | ПТСТСАССТОСОТТатТсСА певи| на | на (нен; ДСТАССТОСЕ ТОК 532882 ндо| нд Інтрон 12 сот бтоосластопо 6225 | 6244 певю| няня нот |МДОСКООНАОСЕКНЄЄ зу | о
Екзон 4 - | ЛИ ТСАССТТаССАССИаАА пове ня | ня вен |ВОТСМОСТТ С СКОКА зив зх о ри 532889| н.д. | нд. (|Інтрон'5|ТАСАСТОССТОСТТАССА| 7035 | 7054 | 27 (288)
Таблиця 127
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 во р ЗЕСИО во о | ЗЕО о ЗЕ
ПОЇ Мо: МОгна 95
МО: 1 5 Область- . . МО:2 на |. о
ІБІВ Мо 5 сайт . Послідовність -. сайті |інгібуван сайт терміна мішень сайті термінаці ня ІО ініціації її ініціації ї МО: та 5З2891 ндо| нд Інтрон 10 сло АласАолАТОТО 5ВО4 | 5В2З
Інтрон 14 ГАСОСАССАССТСТТОСТ
Інтрон 5 -| ТОТТССССТОССТОСсСА лен ня ТК | тетеветк оре зт те 5З2894 ндо| нд Інтрон 10 соостаастаттттолао Бв12 | 5бЗ1 соово Інтрон 10 |САСТООСТТТСАТСТОССЇ квої | ва ов 294 - екзон 11 АС 5З2896 ндо| нд Інтрон 10 СТАТ ТослововА вата | 54З8
Екзон 17 17
Інтрон 16 ТААТСАССТОСААССАСА дих ня м ТК В ДкстеснЖенк т тт те 5З2900 ндо| нд Інтрон 12 слосттолеттасАтост ві83 | 6гог
ЕЕ НЯЕ піа ЕЕ НСС 5З2903 ндо| нд Інтрон 12 со птосстаАстаатот вгоБ | 6314 532907 ндо| нд Інтрон 10 доовостовотаттттоА 5бі4 | 5бЗЗ 532910 нд до Інтрон 10 пушннн БВО0 | 5ВІ9 о зов са Екзоні7 |(ССАСТСАСТТОААТСААА 571. | 7990 щи -інтрон |СС
Таблиця 127
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2
БОЮ ЗЕО о во о | ЗО ТО Е , МО: 1 І МО: 2 на о/о
МО: 1 5 Область- . . МО: 2 на |... о
ІБІВ Мо 5 сайт . Послідовність -. сайті |інгібуван сайт терміна мішень сайті термінаці ня ІО ініціації ке ініціації Р ї В МО: пл І Я ЕЕ ДЯ ПНЯ ООН КОНЯ КОН НОЯ
Інтрон 16 | НИССИаССАСААТСАССТ шен| чл нки ВОоОООСКоААТОС ее | ли з ро
Екзон 17 17 532916 ндо| нд Інтрон 13 дов остттосто в5бв9 | 6588 532918 ндо| нд Інтрон 12 сор етоссластот 6226 | 6245
Таблиця 128
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 112 вес ко о вва
ІБІВ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність МО: г сайт |інгібуван ЗЕО ТО сайт . мішень сайт . МО: 2.6, «терміна ря Ітермінац ня ініціації ції ініціації її пев ня | на нта | СМТ ТО зу 532928 Інтрон 17) ЛЯАССАСТТОСОСАТСТ | 7405) 7424 | 27 327
Сбосо
Інтрон 16 532929 -екзон ССТОСААССАСВАССОАСЇ 7314 | 7333. | 29 328
АДОС
17
Екзон 16 532930 сінтрон |(СТСТСАССТСТОСАЛО І 7239) 7258). Аа 329 16 ТАТТ 5З2931 Інтрон 1 | УСССААААООССААОО 514 | 2123. 21 330 даса
Таблиця 128
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 112 вес ко о вва
ІБІВ Мо мот сайт Сюоласть: Послідовність мое сайт інгібуван мою ініціації топи ініціації тертеняц ня то ня ля Цент ТОРС ех ям | як тов ня ня Цен ОУЛОМОТООАЕТ ще, ше тю | хе тоні няня (ово МТК зу ев то хв зов нлкл інтен лу ооо лу то) | ян тов няня ен СТоСоАССКТ вх яке г тв тот ня ня (в ОХ ОТЄТКОС тв то в хв тов няня ен КОКО зов и 5 т то ня ня ет ос ОСНО вки во. сив тю няня оо САН зе ев г хв тени| на ня нтоно АСКООАОКОАВОТЮ сно све| о | о тивна нт род ЖОАККО вну яке, тк зевн|нктя етно ДОДОСКОЗОТАКТО ву сит се | в тевн| на тя нти дМдАКОЄСТОСОо ие спе сг | з зевв| кл нл етно СОННА зу зше| сг | и тю ня ня ен ооо вв, вв св тні няня етно ОСЛОКОНАСОКОАК вк зх то в твн| на кя нт ІА ооо ОНА вит вхо св ті ня ня (о ОАЄ те тов т в зонд тло етно С ТОНСТТООО ве сте| сг | зв тні ня ня ен СТОСТОЄТОКОВОС вв вт 6 сю зо нлтл ет ОС СТОЕТОо ще ши я | в тов ня няно оНСОКЖАЖ шее ше тт тв ня ня Цен ОТТО ВЕК тв, яв тю св тео нлонл етно ТосоСАКСТНОЄ вит зво) со сн тет ня ня Кон оо тот вив | яву з зв
Таблиця 128
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 112
ЗЕОО ко Ні ЕС з з,
ІБІВ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність МО: 2 сайт |інгібуван ЗЕ о сайт , мішень сайт , МО: 27 терміна 20. гтермінаці ня
ІнІЦІацЦії її ІнІЦІації її дик тя т Тени, ЕНН ух
Екзон 9 І ТАСТСАСССАСАТААТС 532963 Інтрон 13) ГЯЄСТОСТСАССССАВТ І бо 6612 | 24 зві ссте
Інтрон 15 5З2964 -екзон | СТСАСАССТОССТТТО 7145 | 7134 | 25 362 тет 16
Екзон 17 532965 сінтрон ЯЛЛАСОСАСОАСТСАСІ 7379 | 7398... 11 363
Трон |ТТОА 532971 Інтрон 1 ЗАСАСАСОААЯСВАА! 5376 | 2095). 13 369 сетт
Інтрон 532972 13- екзон| ЗСАСАСАААТООООСТІ 8в4о | 6659 | 33 370 гкзон АТАА
ССАСССТОСОАСАСС пні тя пене
Інтрон 14 532980 -екзон СЗАССАОСТСТТОСТС 8917) 6936. 36 378 трон |ТосА
Таблиця 128
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 112 вес ко о вва
ІБІВ Мо МО: 1 сайт Область- Послідовність МО: 2 сайт |інгібуван ЗЕО Іо сайт . мішень сайт : МО: 2. я «терміна ся. термінац ня ініціації її ініціації її
Екзон З -і ТСТСАССТОСОЯТТатсА
Інтрон 4 - ТЕДААДСОСАСТСТас,ада
Інтрон 16 532985 -екзон СЛОЛАТСАССТОСАЛЯ | 7322 | 7341. | 20 383 ,АВА 17
Екзон 17 532986 сінтрон ЛОСАДАСОСАСОАСТІ 7382 | 7401 З зва 17 САСТ
Екзон 4 - АССТТОаССАСсСадАсас
ІНтрон. | зАсСАСАААТОССССТА 532988 13- екзон 6639 6658 15 386 14 ТААА
Екзон 9 - ТСАСССАСАТААТОСТО 532952| 2608 2627 тА СОСАОСТОТТІ 7843) 7вв2 ово | зе
Приклад 116: Антисмислове інгібування людського фактора комплементу В (СЕВ) у Нерс2 клітинах МОЕ гепмерами
Були сконструйовані додаткові антисмислові олігонуклеотиди, спрямовані на нуклеїнову кислоту людського фактора комплементу В (СЕВ), і був протестований їх вплив іп міго на мРНК
СЕВ. Культивовані клітини Нерб2 з щільністю 20000 клітин на лунку трансфецирували з використанням електропорації з 4500 нМ антисмислового олігонуклеотиду. Після періоду обробки і протягом 24 годин, РНК виділяли з клітин і рівні МРНК СЕВ вимірювали методом кількісної ПЛР в реальному часі. Набір людських праймерних зондів ЕТ53460 МОВ (пряма послідовність СЗААОСАОССТСААТОАДААТСАА, зазначена в цьому документі як 5БЕО ІЮ МО: 813; зворотна послідовність ТЗССТОСАСООССТтТТСТТт, зазначена в цьому документі як 5ЕО ІЮ МО: 814; послідовність зонда АВАССАСААСТТОААСТС, зазначена в цьому документі як ЗЕО ІЮ
МО: 815) був використаний для вимірювання рівнів мРНК. Рівні мРНК СЕВ були скоректовані в відповідності з змістом сумарної РНК, виміряних за допомогою КІВОСОКЕЕМФ). Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо необроблених контрольних клітин.
Вперше сконструйовані химерні антисмислові олігонуклеотиди, зазначені у поданих нижче таблицях, були сконструйовані як 5-10-5 МОЄ гепмери. Гепмери 5-10-5 МОЕ мають 20 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з десяти 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З3' кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Кожен нуклеозид 5 крила і нуклеозид З3' крила має 2'-МОЕ модифікації. Міжнуклеозидні зв'язки в кожному гепмері являють собою тіофосфатні (Р-5) зв'язки. Всі залишки цитозина в кожному гепмері являють собою 5-метилцитозини. "Сайт ініціації" позначає крайній 5 нуклеозид, на який спрямований гепмер к послідовності гена людини. "Сайт термінації" позначає крайній 3' нуклеозид, на який спрямований гепмер у послідовності гена людини. Кожен гепмер, наведений у поданих нижче таблицях, спрямований на мРНК СЕВ людини, зазначену в цьому описі як 5ЕО ІЮ МО: 1 (з номером доступу ЗЕМВАМК ММ 001710.5) чи на геномну послідовність СЕВ людини, зазначену в цьому документі як 5ЕС ІЮ МО: 2 (з номером доступу СОЕМВАМК МТ 007592.15, усічену з нуклеотиду 31852000 до 31861000), або на обидві послідовності. "н/д" означає, що антисмисловий олігонуклеотид не спрямований на зазначену конкретну послідовність гена з 100 95 комплементарністю.
Таблиця 129
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2
ЗЕО І
ЗК МО | область. 5 ГО вЕОо |8ЕО
ІБІЗ Мо с сайт . Послідовність інгібу- МО: 2 сайті ІЮ сайт . мішень сайт пиши рих | термі- вання |. .Ітермінації! МО: ініціації нації ініціації 532686 | 1135.) 1154 по зві9 | 3838 532687 | 1141.) 1160 ка 3825 | 3844 532688 | 1147.) 1166 стр стАоАсА зв31 | 3850 вв 532689 | 1153.) 1172 Асдо о ТтаАо з837 | 3856
Зчленування | САССТТСТСААТТАА 532690| 1159 1178 СтТТСА 3843 3862
Зчленування | АСТТаССАССТТСТО ват) пев тв МПАесЖоотте ня ня |.
Зчленування | АССАТААСТТаССАС тво плов ндААТсокю ун нок 532693 | 1177. | 1196 поССАОСАТААСТ 4153 | 4172 532694 | 1183) 1202 АС АОС во 4159.|.. 4178 532695| 1208 1227 Стас А ТАТО ву 4184 | 4203 532696 | 1235) 1254 ЗА ТАООО ва 4214. | 4230
Зчленування | ФИТСТТСАТААТТаА
Зчленування | АСТТатасаТтТсСТТ САТ лавок | но Мо те нкі ня |.
Зчленування | АСТТСААСТТатТтасатТ
ТОССТаАСТТСААСТ 532700| 1316 1335 тстес вв 4609 4628 вв 532701 | 1322 | 1341 Екзон8 тОгтАОтоссСтаАСТІ ве | дві5 | 4634
ТСАдДС 532702 | 1328 | 1347 Екзон8 тсттастеттАетос 4621. | 4640 | 100
СстТОаАС
Таблиця 129
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 не шко ен ВЕ
ІБІЗ Мо сайт сайт мішень Послідовність інгібу- сайт МО: 2 сайт ІО ініціації термі: вання ініціації термінації| МО: зето| мито меефеннне ХВАТ 5 зло) ст ту зето| зав мо |еененя СЕК вч нят, зетт| ово те (Мети МОСК оч нят затв тоне У ПАС оонК в ня ня те затв те тв ТУ ЛА КОАТЖО КК ня нят зето| нови фено ЗАСАЄКЄТТЄ зв зни) зве ток,
Таблиця 129
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2 не шко ен ВЕ
ІБІЗ Мо сайт сайт мішень Послідовність інгібу- сайт МО: 2 сайт ІО ініціації термі: вання ініціації термінації| МО:
Таблиця 129
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 і2
ЗЕО І
ЗК МО | область. 5 ГО вЕОо |8ЕО
ІБІЗ Мо с сайт . Послідовність інгібу- МО: 2 сайті ІЮ сайт . мішень сайт пи рих | термі- вання |. .Ітермінації! МО: ініціації / нації ініціації тадасСсТтаАТСАса 532752 | 2006 2025 толост 65006519 532753| 2012.) 2031 ТАСо ста 6506 | 6525
Зчленування | ВАСАААТИСИЇССТО
ОЗАТ5Е) 28 12067 екзонів 13-14 |ЇАТАСТС Бо ндоондо тво 532755| 2070 | 2089 вової дз 6659 | 6678 532756 | 2076 | 2095 оо ТО ТТОО ві 6665 | 6684
Баотет сов | ото! СТСАААССТОСАЄТТ 35 | 5710 бесо ваААаССТСААдаС 532758 2088 | 2107 волос 6677 | 6696 сттааАдапААасстТ 53275 2094 | 2113 влОвА ввв3 | 6702 стаатааттасАас 532760 2100 | 2119 тво ввве | 6708 532761| 2106) 2125 содвООТАО зд 6695 | 6714 татастаасСААаТ
Батвг 212 | з таттос 67011 стго
Приклад 117: Антисмислове інгібування людського фактора комплементу В (СЕВ) у Нерс2 клітинах МОЕ гепмерами
Були сконструйовані додаткові антисмислові олігонуклеотиди, спрямовані на нуклеїнову кислоту людського фактора комплементу В (СЕВ), і був протестований їх вплив іп міго на мРНК
СЕВ. Антисмислові олігонуклеотиди були протестовані в серії експериментів, які мали аналогічні умови культивування. Результати для кожного експерименту представлені в окремих таблицях, показаних нижче. Культивовані клітини Нерса2 з щільністю 20000 клітин на лунку були трансфецирували з використанням електропорації з 5000 нМ антисмислового олігонуклеотиду.
Після періоду обробки і протягом 24 годин, РНК виділяли з клітин і рівні МРНК СЕВ вимірювали методом кількісної ПЛР в реальному часі. Набір людських праймерів КТ53459 був використаний для вимірювання рівнів МРНК. Рівні мРНК СЕВ були скоректовані в відповідності з змістом сумарної РНК, виміряних за допомогою КІВОСКЕЕМФ). Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо необроблених контрольних клітин.
Вперше сконструйовані химерні антисмислові олігонуклеотиди, зазначені у поданих нижче таблицях, були сконструйовані як 5-10-5 МОЄ гепмери. Гепмери мають 20 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з десяти 2'-дезоксинуклеозидів та оточений крилами з 5' кінця і в 3' кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Кожен нуклеозид 5' крила і нуклеозид 3' крила має 2'-МОЕ модифікації. Міжнуклеозидні зв'язки в кожному гепмері являють собою тіофосфатні (Р-5) зв'язки. Всі залишки цитозина в кожному гепмері являють собою 5- метилцитозини. "Сайт ініціації" позначає крайній 5' нуклеозид, на який спрямований гепмер к послідовності гена людини. "Сайт термінації" позначає крайній 3 нуклеозид, на який спрямований гепмер у послідовності гена людини. Кожен гепмер, наведений у поданих нижче таблицях, спрямований на мРНК СЕВ людини, зазначену в цьому описі як 5ЕО ІЮ МО: 1 (з номером доступу СЕМВАМК ММ 001710.5) чи на геномну послідовність СЕВ людини, зазначену в цьому документі як 5ЕС ІЮ МО: 2 (з номером доступу СЕМВАМК МТ 007592.15, усічену з нуклеотиду 31852000 до 31861000), або на обидві послідовності. "н/д" означає, що антисмисловий олігонуклеотид не спрямований на зазначену конкретну послідовність гена з 100 95 комплементарністю. Якщо в певній таблиці не показано вирівнювання послідовності до гена-мішені, то слід розуміти, що жоден з олігонуклеотидів, представлених у зазначеній таблиці, не вирівнюється з 100 95 комплементарністю із зазначеним геном-мішенню.
Таблиця 130
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1
ЗЕОІО ІБЕОІЮ МО: с. ініціації | термінації І 588566| 2189 / 2208 |Екзоні5 |ССТІССсАстТсАОСтТІТТтТС | 60 | 400 532800| 2457 / 2476 |Еконі8в |тасттттоссосттстТастт | 69 | 228 588516| 2558 / 2577 |Екзоні8 )|ССССТТАТАСААДААСССААДА | 60 | 416 588527| 2569 / 2588 |Екзоні8 |ССАССАССАААССССТТАТА | 68 | 427 588534| 2578 2597 |Екзоні8 |СОССССтТатоСАОСАСОААА | 86 | 434 588535| 2579 / 2598 |Екзоні8 |АСОССССТОТССАССАСОАА | 86 | 435
Таблиця 130
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1
ЗЕОІЮ 5ЕО І МО: ЩІ
ІВІ5 Ме|МО: 1 сайт сайт 3/0 Область: Послідовність 5 інгібу. ЗО. т о мішень вання (ЦО МО: ініціації | термінації 588539| 2583 2602 ТОССАСОССССТатссСАССА 96 | 439 588540| 2584 2603 АТСССАСОССССТОТССАСС 588541| 2585 26804 ААТСССАСОССССТОТССАС 588542| 2586 2605 СААТСССАСОССССТОТССА 588543 26806 ТСААТСССАСОССССТОаТоС 86 | 443 588544| 2588 ТТСААТСССАСОЯССССТатТс 90 | 444 588545| 2589 2608 АТТСААТСССАСОССССТОТ 588546! 2590 2609 ААТТСААТСССАСОаССССстТО 588547| 2591 2810 ТААТТСААТСССАСОССССТ 588548| 2592 2811 ТТААТТСААТСССАСОСССС 588549| 2593 2812 ТТТААТТСААТСССАСОССС 588550| 2594 2813 ТТТТААТТСААТСССАСОСС 89 | 450 588551| 2595 2814 СТТТТААТТСААТСССАСаС 588552| 2596 2815 ТаТТТТААТТСААТСССАСО 588553 2816 СТатТтТтТААТТСААТСССАС 96 | 453 588554| 2598 ССтТатТтТТтААТТСААТСССА 98 | 454 5БЗ2811| 2599 2818 АССТОТТТТААТТСААТОСС 532811! 2599 2618 АССтТатТТТААТТСААТССС 588555| 2600 2819 САССТатТТТТААТТСААТСС 588556| 2601 2620 ССАССТОТТТТААТТСААТС 96 | 456 588557| 2802 2621 СОСАССТОТТТТААТТСААТ 98 | 457 588558| 2603 2622 ТСасластатТТААТТСАА 5З2917| 2604 2823 аТСасАдастатТТТААТТСА 588559| 2605 2624 татсасластатТААТТС 588560| 2606 2625 ТТОТСОСАССТОТТТТААТТ 588561 2626 СТТатсасСАОСТатТТТтТААТ 532952| 2608 таттатсасСАастатТТТтТАА
БВ85б2| 2609 2628 |Екзон 167. |ттоттатсослостоттттА овоаво 588563 2610 2629 повтор Г |тттеттетоесАостетттт ва | 463
БВ8564| 02611 2630 повтор Г |ттттеттотоосАОсТеТтт
БВ8565| 2612 2631 повтор Г |тттттсттотсосАостетт
Таблиця 131
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО І МО: 2 5ЕО І 5ЗЕО ІЮ | о/ ЗЕ і мол | ЗБО о МО: | область- що 6 | Моз: | МО:2 |ІзБО о
ІБІВ Мо - 1 сайт . Послідовність інгібува я сайт , сайт . ш мішень сайт . МО: ти; хи! термінації ння и: У терміна
ІніЦІіації Ініціації її
СОАТССАССТСАСТ
ААДАТААССАТССАО
САССАОАДААТААСС
588690 | нд. | нд. |Екзоні |СТТАСССАССАСАА| 45 )| 1614 | 1633
Таблиця 131
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2 5ЕОО вЕО р |ЗЕО о сайт 20. | мішень сайт : МО: ініціації термінації ння ініціації терміна 71117111 Ат |... |..7С7717777777177141Щ зве, нк яко вет ООН зв тю те с зво ня0вковеон ОСОВОАЄТОВ зо ато зв ня вяовео ОССООАЄТ зв тв зт законі нк онко вет (МОСК ов тв тв от зво я вяоовен АМОДЄМНКОТ 5 тле тв зно зве) з80050вен ЗИ ЯЮВОЄ о я ат прот шення ня 1-2 звело овюовено СОКИ зо скв| к при шинатннн ня 4-5 тт вве У
Таблиця 131
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2
ЗЕО І
ЗЕО І ЗЕО І а | зЕОЮ МО: о | МО:2
ІБІЗ Мо Мол 1 сайт Область- Послідовність інгібува МО 2: сайт ЗЕ Ю сайт 50. | мішень сайт : МО: сир, термінації ння |. 7, терміна ініціації ініціації її 11111111 утсттоА ниннншишшшни ши
ССАТСТАаСАССАС васссСААТасСтТа
ААТТАДИатТОаАСТА 588606 | 1150 1169 Еконе АС 3834 | 3853
Зчленувані ТАССАССТТСТСАА 588608 | 1162 1181 ня екзонів ТТААСТ 50 19 495 6-7
Зчленувані ТААСТТаССАССТТ 588578 | 1167 1186 ня екзонів СТСААТ 23 496 6-7
Зчленувані САТААСТТассСсАСС 588579 | 1169 1188 ня екзонів| ТТСТСА 23 497 6-7
Зчленувані АССАТААСТТасССА 532692 | 1171 1190 ня екзонів| ССТТСТ 15 6-7
Зчленувані АСАССАТААСТТаС 588580 | 1173 1192 ня екзонів САССТТ 16 498 6-7
Зчленувані ТСАСАССАТААСТТ 6-7 тАатТоССстТаАСТТо 588610 | 1319 1338 Евоне ЛОТ 4612 | 4631 таататтдатосст ссасасттсСАСССТТ
ТСАТОДОаСАТОАТО ссасссататтата 588618 | 1446 1465 Еконе |СОАЕОС 5О02го | 5039 астТААТТОСОаТОСОС
ААдатосСаспАТСТО
Зчленувані ААСАСАТАСАСАТО 9-10 588626 | 1585 1604 Екзон10 |СААДДОСАТТОАТОТ| 43 | 5234 | 5253
Таблиця 131
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2
ЗЕО І
ЗЕО І , о ЗЕО І . мо | ЗБО О МО: | область- що 6 | Моз: | МО:2 |ІзБО о
ІБІВ Мо - 1 сайт . Послідовність інгібува я сайт , сайт сш мішень сайт . МО: 5.0. -І термінації ння |. ., терміна ініціації ініціації її 11111111 тсАСТТ нн шишшшш
ТТТОААСАСАТИТТ
СсТосАаа7атос тест оСсАсатТтто
АСАСТСАаАсАСТа аоСТасСссСАТОС,ТТО тТОАСтТаАсаАТСТТа
ТПСТАТСТОСАСИТ
588640 | 1912 1931 Еквоніз | СОС 6406 | 6425
АСТСАТААДААТТСА сАататтоссто
А,ССТСААдОаСстТоа свадапАдДасСсСтТСА 588648 | 2091 2110 Евонія МАОСЯ 6680 | 6699 аталдаттааАасСАА
СААХсСтТасатАатТась
ТОСТСАСАСАСАДА
ПСТОСТОСТСАСА
ТтТАаАССТОоСТТоСа тадтатТАвАССтТо
Зчленува ння СТТТСТТАТССССА 588582 | 2219 2238 екзонів ттстте 19 526 15-16
Зчленува ння аСсССТТСТТАТОССС 588583 | 2221 2240 екзонів САТТСТ 14 527 15-16
Зчленува ння СсТасСсСтТсСтТтТАТС 532775 1| 2223 2242 екзонів СССАТТ З 203 15-16
Зчленува
Б88584| 2225) 2244 |ння достТосстттсттА| в 528 . ТОСОССА екзонів
Таблиця 131
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2
ЗЕО І
ЗЕО І ЗЕО І а | зЕОЮ МО: о | МО:2
Вів Мо | МОЛ 1 сайт Область- Послідовність інгібува МО 2: сайт |ЗЕО Ір сайт 50. | мішень сайт : МО: 25: д.хІ термінації ння |. ., терміна ініціації ініціації її вів Ї11111111111111111ї111Г1гг
Зчленува ння сда,астассттстт 588662 | 2226 2245 екзонів АТСССС 27 529 15-16
Зчлену- вання АСсСАССТаСсСтТТТотТ 588585 | 2227 2246 екзонів ТАТССС 59 530 15-16
ССАТСТСТСТСАСА зва | 2238 2257 сте пе | ли
АаАТатосСтТтТаАСТ 588666 | 2276 2295 ТТеТСА 7160 | 7179
СсАаСАТАСОССАСТО 588668 | 2330 2349 АСТССТ 7214 | 7233
Зчленува ння сСасСссСАСААТСАССО 588670 | 2361 2380 екзонів ТСТОСА АЗ 534 16-17
ТтТаААТаАААСИаАСТ вввєт2 | 2397| 2416 тОлАТе 7362 | 738!
АСАТССАСТАСТОС звеетя| 2а30 гато АСАТОС твб5 | тва сестстТааттт зввбт6 | зллв 246 бостіЄ вва | 7705 тттасса7асттота сСсАдсаатАссТа|астт 588680 | 2466 2485 ттессе 7701 7120 тоттаслатттсто зв 2532 ов! Тон пт | ттве дастТатТТтТААТТСО стсасСсдастаттт
Приклад 118: Антисмислове інгібування людського фактора комплементу В (СЕВ) у Нерс2 клітинах МОЕ гепмерами
Були сконструйовані антисмислові олігонуклеотиди, спрямовані на нуклеїнову кислоту людського фактора комплементу В (СЕВ), і був протестований їх вплив іп міго на мРНК СЕВ.
Антисмислові олігонуклеотиди були протестовані в серії експериментів, які мали аналогічні умови культивування. Результати для кожного експерименту представлені в окремих таблицях, показаних нижче. Культивовані клітини Нербс2 з щільністю 20000 клітин на лунку були трансфецирували з використанням електропорації з 3000 нМ антисмислового олігонуклеотиду.
Після періоду обробки і протягом 24 годин, РНК виділяли з клітин і рівні МРНК СЕВ вимірювали методом кількісної ПЛР в реальному часі. Набір людських праймерів КТ53459 був використаний для вимірювання рівнів МРНК. Рівні мРНК СЕВ були скоректовані в відповідності з змістом сумарної РНК, виміряних за допомогою КІВОСОКЕЕМФ). Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо необроблених контрольних клітин.
Вперше сконструйовані химерні антисмислові олігонуклеотиди у поданих нижче таблицях були сконструйовані як 4-8-5 МОЕ, 5-9-5 МОЕ, 5-10-5 МОЕ, 3-10-4 МОЕ, 3-10-7 МОЕ, 6-7-6-МОЕ,
6-8-6 МОЕ або 5-7-5 МОЕ гепмери, або як дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотиди.
Гепмери 4-8-5 МОЕ мають 17 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з восьми 2'"-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З3' кінця, що містять чотири і п'ять нуклеозидів відповідно. Гепмери 5-9-5 МОЕ мають 19 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з дев'яти 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З" кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Гепмери 5-10-5 МОЕ мають 20 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з десяти 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З' кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Гепмери 5-7-5 МОЕ мають 17 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з семи 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З' кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Гепмери 3-10-4
МОЄ мають 17 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з десяти 2'- дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З' кінця, містять три і чотири нуклеозиди відповідно. Гепмери 3-10-7 МОЕ мають 20 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з десяти 2'--дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в 3' кінця, містять три і сім нуклеозидів відповідно. Гепмери 6-7-6 МОЕ мають 19 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з семи 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в 3" кінця, що містять по шість нуклеозидів кожне. Гепмери 6-8-6 МОЕ мають 20 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з восьми 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З3' кінця, що містять по шість нуклеозидів кожне. Міжнуклеозидні зв'язки в кожному гепмері являють собою тіофосфатні (Р-5) зв'язки. Всі залишки цитозина в кожному гепмері являють собою 5-метилцитозини.
Дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотиди мають 16 нуклеозидів у довжину, причому нуклеозид містить або модифікацію цукру МОЕ, або модифікацію цукру (5)-СЕЇ, або дезокси модифікацію. У колонці "Хімізм' описані модифікації цукру для кожного олігонуклеотиду. "К" означає (5)-СЕЇ модифікацію цукру; "а" означає дезоксирибозу; і "е" означає модифікацію МОЕ. "Сайт ініціації" позначає крайній 5' нуклеозид, на який спрямований гепмер к послідовності гена людини. "Сайт термінації" позначає крайній 3' нуклеозид, на який спрямований гепмер у послідовності гена людини. Кожен гепмер, наведений у поданих нижче таблицях, спрямований на мРНК СЕВ людини, зазначену в цьому описі як БЕО ІЮО МО: 1 (з номером доступу СЕМВАМК
Зо ММ 001710.5) чи на геномну послідовність СЕВ людини, зазначену в цьому документі як ЗЕО ІЮ
МО: 2 (з номером доступу СЕМВАМК МТ 007592.15, усічену з нуклеотиду 31852000 до 31861000), або на обидві послідовності. "н/д" означає, що антисмисловий олігонуклеотид не спрямований на зазначену конкретну послідовність гена з 100 96 комплементарністю.
Таблиця 132
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 2 вва |бКО 5ЕО | 5ЕО
ІО МО: МО: ор ІО МОТО МО:
ІБІЗ Мо с 1 1 Область- Послідовність інгібу- 2 2. Мотив зЗЕО Іо айт - | мішень Сайт | Сайт МО: ініціаці сайт. вання ініціаці| термі- - термі І щі
Ї щ Ї нації нації дастТатТТтТААТТСО ееєвеаадада ваААСАТССАдаС евекададчада тТастСАСАТТОСС евекададчада сСстТаатТСАСАТТО евекададчада вАССТОаСТСАСАТ евекададчада
Зчлену- вання | ТААСТТаССАССТ евекададчада 588878) 1171 |1186 екзонів 6- ТТ 92 адакке 545 7
Таблиця 132
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 2 вва |бКО 5ЕО | 5ЕО
ІО МО: МО: ву ІО МОТО МО:
ІБІЗ Мо 1 1 Область- Послідовність інгібу- 2 2. Мотив ЗЕ о
Сайт - | мішень Сайт | Сайт МО: ініціаці сайт. вання ініціаці| термі- термі і с
Ї щ Ї нації нації
Зчлену- вання | САТААСТТассСАС евекададчада 588879| 1173 |1188 екзонів 6-. СТТ 94 ааакке 546 7
Зчлену- вання | АССАТААСТТОаССО евекададчада 588880) 1175 |1190 екзонів 6-. АСС 4151 | 4166 ааакке 547 7 сстоСаАатТСАсС евекададчада стосттоСсадатТо евекададчада
АССТоСТТоСОада евекададчада
Зчлену- вання СТТТСТТАТССССА евекададчада 588881) 2223 |2238 екзонів | ТТ 93 ааакке 551 15-16
Зчлену- вання ост сСтТТАТОС евекададчада 588882| 2225 |2240 екзонів /ССА 88 ааакке 552 15-16
Зчлену- вання СТасстТстТтТАТО евекададчада 588883) 2227 |2242 екзонів СС адакке 553 15-16 ттассасттста евекададчада сттассастто евекададчада тастттассаст евекададчада
АААСССАААТОСТ евекададчада
САДААСССАДАТС евекададчада
ТАСАДААСССАДА евекададчада
АТАСААДААСССАА евекададчада
СТТАТАСАДААСС евекададчада
ССТТАТАСАДААС евекададчада
СССТТАТАСАДАА евекададчада 588814! 2562 ССССТТАТАСААДА | 86 | 7797 | 7812 | єекададава
Таблиця 132
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕї олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або ЗЕО І МО: 2 5ЕО шк 5ЕО | 5ЕО
Іо МО: | МО. бу ПО МОЮ МО:
ІБІ5 Мо сайт 1 Соласть: Послідовність інгібу- сайт сайт Мотив мою со Тнації Ї нації 71777171 ФАСС. 71777171 17171111 1111 дбаакке звввоо овбв она конів тв 008 возив дю 5 звввов|овтв ов пюонів дос 0 |в дю в
Таблиця 132
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 5ЕО шк БО | 8ЕО
І МО: МО. ЛО МО: МО:
ІБІЗ Мо 1 1 Область- Послідовність інгібу- 2 2. Мотив ЗЕ о
Сайт - мішень Сайт | Сайт МО: ініціаці сайт. вання ініціаці| термі- 1 термі ї .
Ї й Ї нації нації
СССАСОССССТОТ секааааааа
ТОССАСОССССТе всекааааааа
АТСССАССССССТ всекааааааа
ААТСССАСОСССС всекааааааа
СААТСССАСОССС всекааааааа
ТСААТСССАСОСС всекааааааа
ТТСААТСССАССОС всекааааааа
АТТСААТСССАСО всекааааааа
ААТТСААТСССАС всекааааааа
ТААТТСААТСССА всекааааааа 588848) 2596 |2611) Екзон18 | ПЛАТТСААТСССА! 78 | 7831 | 7846 | ЯКО ов се ааакке 588849| 2597 2612 Екзон 18 | ГТААТТСААТСССІЇ 34 | 7832 | 7847 | еКООа | вод
АС ааакке 588850) 2598 2613) Екзон 18 | ПТТААТТСААТОСІ 83, | 7833 | 7в48 | геКООадаОЯ
СА ааакке 588851) 2599 |2614) Екзон 18 | ЗТТТТААТТСААТСІ 8 | 7834 | 7в49 | еКОООООЯ Оу сс ааакке 588852) 2600 |2615) Екзон 18 | ЛЯТТТТААТТСААТІ 78 | 7835 | 7850 | ЯКО водо сс ааакке 588853) 2601 |2616) Екзон 18 | СТОТТТТААТТСАА) 8 | 7836 | 7851 | ЯКО вод то ааакке пік в сон ТТ од 588855| 2603 |2618) Екзон 18 | МЯСТОТТТТААТТСІ вв | 7838 | 7853 | ЯКО ов
ДА ааакке
БаВя56|. 2604 2619) Екзон 18. САОСТОТТТТААТТІ 76 7839 т7вБ4 | еекааадчавча своє
СА адакке
ССАССТОСТТТТАА всекааааааа
СССАССТОТТТТА всекааааааа
ТОСССАССТОТТТТ всекааааааа
СТоСОСАССТОТТТ всекааааааа 588861! 2609 |2624 | Екзон 18 | ТОТСОСАОСТИттТ еекачааааа
Таблиця 132
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 2 вва |бКО 5ЕО | 5ЕО
ІО МО: МО: ву ІО МОТО МО:
ІБІЗ Мо 1 1 Область- Послідовність інгібу- 2 2. Мотив ЗЕ о
Сайт - | мішень Сайт | Сайт МО: ініціаці сайт. вання ініціаці| термі- термі і с
Ї нації Ї нації 11111111 0ТТА 17777717 171117117111111711111садакке7 | ( патсасаластат еекададчаада сттаатсасСсааста еекададчаада тататСсасдаст еекададчаада патта;атсасдас еекададчаада тптапатсасАс еекададчаада тптаттатсСасА еекададчаада тттаттатсасА еекададчаада
Таблиця 133
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2
ЗЕОЮ | ЗЕСЮ з, ко око. я
ІВІЗ Мо МО: 1 МО: 1 Область- Послідовність інгібу-| сайт | сайт ЗЕ сайт сайт мішень т. | МО: ініціації Ігермінації вання |ніціаціу термі" нації ваАТССАаСТСАСТ
АААТААДССАТОСАС вАССАСАААТААСО
СстАвадпАССАСАА
САСССАСТТАСИаСсА
АССАСССАСТТАСОа
АчдатоСА5асАСТОСТ
ААдсатоСАааАСТО
АААСТаСАСААСИТО саадасассоСаст тоосСаспААСАТОСА
Таблиця 133
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2
ЗЕОЮ | ЗЕСЮ з; ко око. я
ІБІЗ Мо мот мот Сюоласть: Послідовність інгібу- сайт | сайт ко ініціації Ігермінації вання мим па зи) хво оте Я ня няню. зе, ви | о |в ОЛЯ що ов ов) з зно, есе от (МОТО т няня яв. зи) сю ов (Во зе няня о. звенв| пе ото ПОАОЄТЕТК ої ня ня ве. зт, пев ошов АСЄНЄ т зе няня в. зе, пев оо Ме ооо ня нят зе тир нове (Є соК я | няня т зо поле кову (МАО т няня в.
Таблиця 133
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2
ІВІЗ Мо МО: 1 МО: 1 Область- Послідовність інгібу-| сайт | сайт ЗЕО Іо сайт сайт мішень си | МО: ініціації Ігермінації вання мим па зе, тео ото (МОЖ вовк ня ни
Таблиця 133
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2
ЗЕОІЮО | БЕО ІЮ о, КОЗУ
ІВІЗ Мо МО: 1 МО: 1 Область- Послідовність інгібу-| сайт | сайт ЗЕ сайт сайт мішень т. | МО: т ср вання |ініціаці!| термі- ініціації Ігермінації ї нації
Зчленування ІСТ ТСТТАТССССАТ
ОРЕ ПЕ 0 РР |екоонівівяв тстто он |на | вв
Зчленування. | ВССТТТСТТАТССС 588583 2221 | 22 екзонів15-16 |САТТСТ | на нд) вт
Зчленування |СТаСсСТТТсСТТАТОС о32775 | 2223 | 7217 екзонів15-16 |ССАТТ я | нд | на | 2ов
Зчленування | ДИСТассСтТТТсСтТТАТ
Зчленування |САИ,СТасстттстТтТ
Зчленування | АСДОСТОССТТТСТ 588585 2227 | 2246 | екзонів15-16 | ТАТССС заондо ня | 530.
ССАТСТСТСТСАСА звееея се 0 соб, Екон О1ОСАТОГ вв Гл ля
АВАТаТОСТТОАСТ 588666 22176 2295 конів СТО 7160 | 7179
САССАТАСОаСАСТО 588668 2330 2349 АСТССТ 7214 | 7233
Зчленування |ССасССАСААТСАСС
ТОдДАТОААДАСОАСТ зве озв, | ов (Екон! ОТОААТ тег | тав
АСАТССАСТАСТОС звееля со 0 со Бюснтв | АСАТОС тб5 | тва сесттотасттт зввбтв | ояяв | 2лвт |Еконів ОСТ тв | 770? тттассасттота аСАаатТАССТОСТТ 588680 2466 2485 конів ОС 7701 | 7720 тоттасдатттосто
Бз2ві1 02599. | 2618 конів (СТ во 7834 | 7853 стоасСАаСстТаттт
Таблиця 134
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 2 вЕОТоРЕОИО 5 вЕсІррЕС о
МО: 1 | МО: 1) область- в |Ммо:2МО:2 ЗЕО
ІБІЗ Мо с сайт . Послідовність інгібу- - сайт | Мотив | ІЮ сайт | мішень сайт . ініціації термі- вання ініціації термі- МО: нації нації 598973| 2552 | 2568 | Екзон 18 | ВААААСССАААТССТСА 7787 | 7803 | 3-10-4 599036! 2552 | 2568 | Екзон 18 | ВААААСССАААТССТСА 7787 | 7803 598974 2553 | 2569 | Екзон 18 | АСАДАДАСССАААТССТС 7788 | 7804 | 3-10-4 599037| 2553 | 2569 | Екзон 18 | АФАДДАСССАААТССТС 7788 | 7804
Таблиця 134
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 2 вЕО ТОР ЕО р вЕо об ЕО Ю
МО: 1 | МО: 1 | область- що оо 1Ммо:2 МО:2 5ЕО
ІБІВ Мо 5 сайт : Послідовність інгібу- 5 сайт | Мотив | І сайт - | мішень сайт . ініціації ТеРМі- вання | іціації ерМі МО: нації нації 598978| 2558 | 2574 |Екзон18 |ІСТТАТАСААААСССААА | 0 )| 7793) 7809 3-10-4 | 624 599041| 2558 | 2574 |Екзон18 |ІСТТАТАСААААСССААА | 0 )| 7793 | 7809 5-7-5 |624 598979| 2559 | 2575 |Екзон18 |(ССТТАТАСАДААСССАА | 8 ) 7794) 7810 3-10-4 | 625 598983| 2563 | 2579 |Екзон 18 ІЇДАССССТТАТАСААААС | 0 )| 7798) 7814 3-10-4 | 629 598984| 2564 | 2580 |Екзон 18 ІЇДДАССССТТАТАСАДАА | 0 )| 7799) 7815 3-10-4 | 630 598985| 2565 | 2581 |Екзон 18 |САААССССТТАТАСАДА | 0 )| 7800 | 7816 | 3-10-4 | 631 599048| 2565 | 2581 |Екзон 18 |САДААССССТТАТАСАДА | 9 )| 7800 | 7816 | 5-7-5 |691 598986| 2566 | 2582 |Екзон 18 |(ССАААССССТТАТАСАА | 0 )| 7801 | 7817 | 3-10-4 | 632 598988| 2567 | 2583 |Екзон 18 ІЇДССААДАССССТТАТАСА | 0 )| 7802 | 7818 3-10-4 | 633 599050| 2567 | 2583 |Екзон 18 (ЇДССАДАССССТТАТАСА | 8 )|7802| 7818 5-7-5 |633 598989| 2568 | 2584 |Екзон 18 |ЇІСАССАААССССТТАТАЄ | 0 )| 7803 | 7819 | 3-10-4 | 634 598990| 2569 | 2585 |Екзон 18 |(ССАССААДАССССТТАТА | 8 )| 7804 | 7820 | 3-10-4 | 635 599001| 2581 | 2597 |Екзон 18 |ІССССССтТОоТСсСАССАСОЇ| 80 | 7816 | 7832 | 3-10-4 | 646 599002| 2582 | 2598 | Екзон 18 (!АСОССССТОТоСАССАС| б8 | 7817 | 7833 | 3-10-4 | 647 599007| 2587 | 2603 | Екзон 18 (АТСССАСОССССТОТОС| бо | 7822 | 7838 | 3-10-4 | 652
Таблиця 134
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 2 ввооЕО о 3 ВЕС ИО
МО: 1 | МО: 1) область- в |Ммо:2МО:2 ЗЕО
ІБІЗ Мо с сайт . Послідовність інгібу- - сайт | Мотив | ІЮ саит - міШЄЕНЬ саит - ініціації термі- вання ініціації термі- МО: нації нації 5990121 2592. | 2608 | Екзон 18 | АТТГСААТСССАСОаСССС 7827 | 7843 | 3-10-4 599013 2593 | 2609 | Екзон 18 | ААТТСААТСССАСОаССС 7828 | 7844 | 3-10-4 5990141! 2594 | 2610 | Екзон 18 | ТААТТСААТСССАСОСС 7829 | 7845 | 3-10-4 599015) 2595 | 2611 | Екзон 18 | ТТААТТСААТСССАСОС 7830 | 7846 | 3-10-4 | 660 599016) 2596 | 2612 | Екзон 18 | ТТТААТТСААТСССАСО 7831 | 7847 | 3-10-4 599017 2597 | 2613 | Екзон 18 | ТТТТААТТСААТСССАС 7832 | 7848 | 3-10-4 5990181 2598 | 2614 | Екзон 18 | АСТТТТААТТСААТСССА 7833 | 7849 | 3-10-4 5990191 2599 | 2615 |Екзон 18 | ТАТТТТААТТСААТССС | 60 | 7834 | 7850 | 3-10-4 5990201 2600 | 2616 |(Екзон18 ІСТОТТТТААТТСААТОС | 00 | 7835 | 7851 | 3-10-4 5О90211| 2601 | 2617 | Екзон 18 | ВСТатТТТААТТСААТС 7836 | 7852 | 3-10-4 | 666) 5О9022! 2602. | 2618 | Екзон 18 | ААЯСТатТТТААТТСААТ 7837 | 7853 | 3-10-4 599023 2603 | 2619 | Екзон 18 | САаСТОТТТТААТТСАА 7838 | 7854 | 3-10-4 532917 2604 | 2623 Еквонів С ДООСАССТОТТТТААТТ вв | 7839 | 7858 | 5-10-5 5З9024| 2604 | 2620 | Екзон 18 | ГСАОСТОаТТТТААТТСА 7839 1 7855 | 3-10-4 | 669 5З9025| 2605 | 2621 | Екзон 18 | СОСАОСТатТТТААТТС 7840 1 7856 | 3-10-4 599026! 2606 | 2622 |Екзон 18 | ТСОСАСОСТОТТТТААТТ | 69 | 7841 | 7857 | 3-10-4 599027 2607 | 2623 | Екзон 18 | СТСОСАССТОТТТТААТ 7842 | 7858 | 3-10-4 59028! 2608 | 2624 | Екзон 18 | ТАТСОСАОСТатТТтТАА 7843 | 7859 | 3-10-4 5о9029| 2609 | 2625 | Екзон 18 | ГТЙТСаСАасСтТатТтТтТтТА 7844 | 7860 | 3-10-4 599030! 2610 | 2626 | Екзон 18 | СТТОТСОаСсАОСТаТатттт 7845) 7861 | 3-10-4 599031! 2611 | 2627 | Екзон 18 | ТаттТатсасСАастТаТттТтТ 7846 | 7862 | 3-10-4 599032 2612 | 2628 повтор ттаттатссесАостетт та | ндо| нд 3-10-4 599033 2613 | 2629 повтор ТТТОттотТСОосАССТСТ во ндо| нд 3-10-4 599034 2614 | 2630 | овтор | ТТТтоттатсосАосто тв | ндо| нд 3-10-4 599035 2615 | 2631 | овтор | ТТТттОттОтСОСАОСТ в | ндо| нд 3-10-4
Таблиця 135
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 во | ЗЕО о 5 | зво ЗБСИО мо:1 | МО: | область- 5 | мо:2 | МО:2 ЗЕО
ІБІЗ Мо с сайт . Послідовність |нгібува 5 сайт | Мотив | ІО саит - - міШЕНЬ саит - ініціації термінаці ння ініціації термі- МО: ї нації
СААААСССАА
59098 | 2552 2568 Еквонів СА 7787 | 7803
АВЙААААСССА
59099 | 2553 2569 конів АОС 77вв | 7804
ТАСААААССС вее100| 2554 2570 Еконів АОС 77ве | 7805
АТАСААААСС
БеЯ101 | 2555 00257 Еквонтв АТС 7790. | 7806
ТТАТАСАДАА ве9102| 2557 2573 Еквонів САМА 7792. | 7808
Таблиця 135
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ІБІЗ Мо сайт сайт Ї мішень Послідовність |нгібува сайт сайт Мотив | ІЮ ініціації термінаці ння ініціації термі: МО:
Таблиця 135
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 не нт ЖЕ пенні В
ІБІЗ Мо сайт сайт Ї мішень Послідовність |нгібува сайт сайт Мотив | ІЮ ініціації термінаці ння ініціації термі: МО:
Таблиця 135
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ІБІЗ Мо сайт сайт Ї мішень Послідовність |нгібува сайт сайт Мотив б ініціації теркінаці ння ініціації терм МО: зт хво зви (вен УС тло тео тв во зт о зво (вен ОМА волю теео тв во за аюі зву (вин СОЛО в, ле тег тв во заюве| ово зв (вин ССО вол, ткео тв во, захв) ово ово неон (03 |; вв во за) в сно (воно ОКСТОЄ св те тео тв о, за вис (вен ОЛОТОЮЄК тліє те 575 ов, захо от сю вон СТ зе няня тв от захв) оз сю рн (тес | няня тав, зно сет | око (рі сля тя |рня твірні, захотів | сви они (оно | ня твою
Таблиця 136
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ІБІЗ Мо сайт сайт мішень Послідовність інгібува сайт сайт Мотиві| І ініціації та ння ініціації Ши МО: зно зн | сю Івент МСАТ зв тв, т |вов вк зи ся ою веттв МЕСТО в | тет тив еле вк зем сте ов вотнте ЛРС ООМАНСООТ те тов | ти |хев в знет вв вв (ее ОСЛОКАКОЮЄТ 1 тоо | то вто,
Таблиця 136
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 вв о (ОБО 5 |ВЕСпЮр ЗЕСИО
МО:1 | МО: область- в |мо2) МОг2 ЗЕО
ІБІЗ Мо с сайт . Послідовність інгібува 5 сайт |Мотив| І сайт : мішень сайт : 25: Гперміна ння (|. 5. терміна МО: ініціації її ініціації її 11111111 СтТТАТА г
СсСАасСсАааАААСс вТсСАасСАСИААА вТсСАасСАСИААА сстатосАдасАаа сстатосАдасАаа сестатосдасАяа сестатосдасАяа соостТатссСАасСА соостТатссСАасСА сссостатссАас сссостатссАас са,асососСстТатосСА са,асососСстТатосСА ссАасасссстатс
СсоСсАсеосостаТат 599303 | 2586 | 2604 |Екзон 18 ІААТСССАСОССССТ| 35 | 7821 | 7839 | 6-7-6 | 712
Таблиця 136
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ІБІЗ Мо сайт сайт мішень Послідовність інгібува сайт сайт Мотиві| І ініціації терміна ння ініціації терміна МО: 1 717111111711111171|111111110бтосА11117 11171111 1 заг сю ово ветнте ЛООСоНСОЄ ев | тов | тю |вте пе) знов сю а (ее (МАСОЮ вв то те вте пт зно тю за ее |ВКВААТО зв | то те втето, знов сю зві (вен |ООИТАКОК во | ток тво вте тов, зни тям ово (ее ДОВСДОЄТЯТИТК | во тв вто то зво сно в (ее ІС ОСТ во | тю тов вте т зни свт | екв носив ПОДООСНОСТТ вв те тво |вте то (599327 | 2610 )| 2628 |Екзоні8/ттсттотСасАсст| 88 нд. |нд. | 6-7-6 | 736
Таблиця 136
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 вв о (ОБО 5 |ВЕСпЮр ЗЕСИО мо: | МО: 1 область- шо 6) Мох | МО:2 ЗЕО
ІБІЗ Мо с сайт . Послідовність інгібува 5 сайт |Мотив| І саит . мішень саит . 25: Гперміна ння (|. 5. терміна МО:
ІнІЦІацЦіІї її ІнІЦІації її 11111771 повтор. |СТТТ ни и Я ПНЯ ПИ
Екзон 18 / ТТТОТТСТоССАСС
Екзон 18 / ТГТТОТТОТСОСАС
Екзон 18 / ТГТТТСТТОТСОСА 599330 2613 | оба Ех 87 |ндо |ндо |етв| тво
Таблиця 137
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 вою ЗЕО о вЕсо | ЗЕОТО
ПОЇ Мо: 4 о; ПО | Мо: ЕО
МО: 1 2 Область- й й с. МО:2 Є
ІБІ5 Мо - сайт : Послідовність інгібуванн - сайт | Мотив | ІЮ сайт термінац мішень я сайт терміна МО: ініціації її ініціації її ц й
БУУБІ2 | 2552 | 2571 Еквонтв ДО ЛАЛОССАААТОСТ 7787 | 7вов | 3-10-7 5ОЯ449| 2553 | 2572 конів ТО ЛЛАСОСАААТОО 7788 | 7807 | 3-10-7 5БОЯ45О | 2554 | 2573 Еквонтв ДИТ АСАЛААСОСАВАТО 7789. | 7вов | 3-10-7
БОУ45І | 2555 | 2574 Екон АСОСАЛАТ 7790. | 7вое | 3-10-7
БОЯ4Б2 | 2556 | 2575 | Еконтв СОТ ТАТАСАААЛОССААА 7794. | 7віо | 3-10-7 5БОЯ453| 2557 | 2576 Екон ів СОСТТАТАСААААСОСАА 7792. 7811 | 8-10-7 5БОЯ454 | 2558 | 2577 Екон тв С ТА ТАСААЛАСОСА 7798. 7812 | 8-10-7
БОЯ455| 2559 | 2578 Екзонтв ДОС ОСТТАТАСААААСОС 7794 7813 | 3-10-7
БОЗ456 | 2560 | 2579 | Еконтв ЛАССОСТТАТАСААААОС ва 7795 7814 | 8-10-7 5БОЯ457 | 2561. | 2580 конів до ССОСТТАТАОААААС 7796. | 7в15 | 3-10-7 5БОЗ458 | 2562 | 2581 Еконтв ЗАЛЛССОСТТАТАСАААА о 7797. 7816 | 8-10-7 5БОЯ459 | 2563 | 2582 Екон 18, ЗСААЛОСОСТТАТАВАЛА 7798. 7817 | 8-10-7 5БОЗ460 | 2564 | 2583 Екон тв| ДО ОЛААСОССТТАТАВАА 7799. | 7ві8 | 3-10-7 5БОЯ461 | 2565 | 2584 конів ЗАССААЛОСОСТТАТАВА з 7800 | 7819 | 3-10-7 5БОЯ462| 2566 | 2585 ПОЛОСАААСОССТТАТАВІ з | 7801. | 7820 | 3-10-7 5БОЯ463| 2567 | 2586 конів оС ОСАААССССТТАТА! зв 7802. 7821 | 8-10-7 5БО9464| 2568 | 2587 ДА ОСАОСАААСОСОТТАТІ з | 7803 | 7822 | 3-10-7 5БОЯ465| 2569 | 2588 Со АОСАВОАААОСОСТТА дв | 7804 | 7823 | 3-10-7 5БОЗ466 | 2570 | 2589 ДЕСЛОСЛОВАВАСОССТІІ дв 7805 | 7824 | 3-10-7
Таблиця 137
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ІБІ5 Мо - сайт ласть:- Послідовність інгібуванн МО: 2 сайт ) Мотив | ІЮ ії теркінац мішень я и теркінац МО: тент яви ово | внентв О'ОСКОСКОВАЖАСЮот в то тов елот т зерен ов |еотв АТОССКО ооо зо | то ти зт в) сен еки ово |еонтв|у ТААЛКАТОСОКОЯЄ тв | т ти зт в сек ви| зо |вект| от тонктоск т | ке | то | вве | ка
Таблиця 137
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 5вО р ЗЕСИО зво о | ЗЕ о
ПОЇ Мо: 4 о; НО | Мо:2 ЕО
МО: 1 2 Область- й й с. МО:2 Є
ІБІ5 Мо - сайт : Послідовність інгібуванн - сайт | Мотив | ІЮ сайт термінац мішень я сайт терміна МО: ініціації її ініціації її ц й 5О9494| 2598 | 2617 конів ЗСТОТТТТААТТСААТОО во 7833 | 7852 | 3-10-7 5О9434| 2598 | 2617 конів ЗСТОТТТТААТТСААТОВО вв 7833 | 7852 5ОЯ495| 2599 |. 2618 конів МОСТОТТТТААТТСААТОС вв 7834 | 7853 | 3-10-7 5БОЯ435| 2599 |. 2618 Екон в| ДОСТОТТТТААТТСААТОСЇ в 7834 | 7853 5ОЯ496 | 2600 |. 2619 конів СЛОСТОТТТТААТТСААТО вв 7835 | 7854 | 3-10-7 5БОЯ436 | 2600 | 2619 конів СЛОСТОТТТТААТТСААТО вв 7835 | 7854 5УЯ497 | 2601. |. 2620 Екон ів| ССАССТОТТТТААТТСААТІ ва 7836 | 7855 | 3-10-7 5БОЯ437 | 2601. |. 2620 конів ЗСЛОСТОТТТТААТТСААТ в 7836 | 7855 5О9498| 2602 | 2621 | Еконів СОСАОСТОТТТТААТТСА 7837 | 7856 | 3-10-7 5БОЗ438 | 2602 | 2621 Екон в| ДОСЛОСТОТТТТААТТСА в 7837 | 7856 5ОЯ499| 2603 | 2622 конів ДОСАССТОТТТТААТТСА в 7838 | 7857 | 3-10-7 5ОЯ439 | 2603 | 2622 конів ДООСАССТОТТТТААТТСА вв 7838 | 7857 532917 | 2604 | 2623 Екон в Од ОСЛОСТОТТТТААТТ в 7839. | 7858 | Б-10-5
БУОБОЇ | 2604 | 2623 Еконтв ЗО САОСТОТТТТААТТ 7839. | 7858 | 3-10-7 5ОЯ440| 2604 | 2623 Еконтв ЗуООСАОСТОТТТТААТТ 7839 | 7858 5БУУБОЇ | 2605 | 2624 конів С СОСАОСТОТТТТААТІ тв 7840 | 7859 | 3-10-7
БОе441 | 2605 | 2624 конів ДО СЯСАЯСТОТТТТААТ во 7840 | 7859
БУЯБОг | 2606 | 2625 конів ТО ТООСАВСТОТТТТААТ ву 7841. 7860 | 3-10-7 5БОЯ442| 2606 | 2625 Екон ів| ТО ТООСАССТОТТТТААТ в 7841. 7860 5БУЯБОЗ | 2607 | 2626 Еконтв 0779 ООСАВСТОТТТТА 7842. 7861. 3-10-7
БОе443| 2607 | 2626 | Еконтв 07 7ОТООСАВОТОТТТТА 7842 | 7861 5БОЯБОї | 2608 | 2627 Еконв| ДИТ ОбСАВОТОТТТ в 7843 7862 | 3-10-7 59444 | 2608 | 2627 Еконтв ДУ о ТООСАОСТОТТТТ ва 7843. 7862 / повтор | ТА се9445| 2609 | обов | Екон 19| ТТОТТОТСССАОСТОТТТ | ве св с? / повтор | ТА
Екзон 19 ТТТатТатосесАОСсТатт / повтор | ТТ гееБО7| 2611. 26зо | Екон 19|ТТтТОотТОТСОСАОСТОТІ во 321071 464 / повтор | ТТ
Таблиця 137
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 вЕО р) ЗЕ вою | ЗБО о
МО: 1 МО: т Область- . . с. бе МО: 2 МО: г ЗЕО
ІБІ5 Мо - сайт : Послідовність інгібуванн - сайт | Мотив | ІЮ сайт о термінац мішень я сайт термінаці МО: ініціації ї ініціації ї
Екзон 19) ТТТПГИТТатТсСОаСАССТатТ сеи|яи| ню Тесс в | ча ня | вени свое сів сви (пери тскесте 1 ня на Гол я, повтор | ТТ свое яв | о тро тет есносте 71 ня | ня вв повтор | ТТ
Приклад 119: Антисмислове інгібування людського фактора комплементу В (СЕВ) у Нерб2 клітинах МОЕ гепмерами
Були сконструйовані додаткові антисмислові олігонуклеотиди, спрямовані на нуклеїнову кислоту людського фактора комплементу В (СЕВ), і був протестований їх вплив іп міго на мРНК
СЕВ. Антисмислові олігонуклеотиди були протестовані в серії експериментів, які мали аналогічні умови культивування. Результати для кожного експерименту представлені в окремих таблицях, показаних нижче. Культивовані клітини Нерса2 з щільністю 20000 клітин на лунку були трансфецирували з використанням електропорації з 2000 нм антисмислового олігонуклеотиду.
Після періоду обробки і протягом 24 годин, РНК виділяли з клітин і рівні МРНК СЕВ вимірювали методом кількісної ПЛР в реальному часі. Набір людських праймерів КТ53459 був використаний для вимірювання рівнів мРНК. Рівні мРНК СЕВ були скоректовані в відповідності з змістом сумарної РНК, виміряних за допомогою КІВОСОКЕЕМФ). Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо необроблених контрольних клітин.
Вперше сконструйовані химерні антисмислові олігонуклеотиди у поданих нижче таблицях були сконструйовані як 4-8-5 МОЕ, 5-8-5 МОЕ, 5-9-5 МОЕ, 5-10-5 МОЕ, 6-7-6-МОЕ, 3-10-5 МОЕ або 6-8-6 МОЕ гепмери.
Гепмери 4-8-5 МОЕ мають 17 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з восьми 2'"-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З3' кінця, що містять чотири і п'ять нуклеозидів відповідно. Гепмери 5-8-5 МОЕ мають 18 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з восьми 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З' кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Гепмери 5-9-5 МОЕ мають 19 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з дев'яти 2'--дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в 3' кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Гепмери 5-10-5 МОЕ мають 20 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається 3 десяти 2- дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З3' кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Гепмери 3-10-5 МОЕ мають 18 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з десяти 2'--дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в 3' кінця, містять три і п'ять нуклеозидів відповідно. Гепмери 6-7-6 МОЕ мають 19 нуклеозидів у довжину, причому
Зо центральний геп складається з семи 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З" кінця, що містять по шість нуклеозидів кожне. Гепмери 6-8-6 МОЄЕ мають 20 нуклеозидів довжину, причому центральний геп складається з восьми 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З' кінця, що містять по шість нуклеозидів кожне. Кожен нуклеозид 5' крила і нуклеозид 3' крила має 2'-МОЕ модифікації. Міжнуклеозидні зв'язки в кожному гепмері являють собою тіофосфатні (Р-5) зв'язки. Всі залишки цитозина в кожному гепмері являють собою 5- метилцитозини. "Сайт ініціації" позначає крайній 5' нуклеозид, на який спрямований гепмер к послідовності гена людини. "Сайт термінації" позначає крайній 3' нуклеозид, на який спрямований гепмер у послідовності гена людини. Кожен гепмер, наведений у поданих нижче таблицях, спрямований на мРНК СЕВ людини, зазначену в цьому описі як БЕО ІЮО МО: 1 (з номером доступу СЕМВАМК
ММ 001710.5) чи на геномну послідовність СЕВ людини, зазначену в цьому документі як ЗЕО ІЮ
МО: 2 (з номером доступу СЕМВАМК МТ 007592.15, усічену з нуклеотиду 31852000 до 31861000), або на обидві послідовності. "н/д" означає, що антисмисловий олігонуклеотид не спрямований на зазначену конкретну послідовність гена з 100 96 комплементарністю.
Зоо
Таблиця 138
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 2 5ЕО | ЗЕО вЕО | ЗЕО юю 5 |) мо: БО
ІБІВ Мо МО: 1 МО: 1 Область Послідовність інгібуван МО: 2 2 | Мотив| ІО сайт | сайт | -мішень сайт - 2, . ня «0 сайт МО: ініціа термі ініціа термі ції | нації ції нації 599165| 2566 2583 Екзон 18|ІДССАААССССТТАТАСАА | 0 7801 7818, 5-8-5 | 745 599133 2589 2605 Екзон 18|ІСААТоССАСОСССоСТОТ | 66 7824 7840) 4-8-5 | 654 599134| 2590 2606 Екзон 18|ІТСААТСССАСОССССтТО | 80 7825 7841| 4-8-5 | 655 599136| 2592 2608 Екзон 18ІАТТСААТСССАСОСССС | 68 7827 7843| 4-8-5 | 657 599192) 2594 2611 Екзон 18|ІТТААТТСААТСССАСОСС | 66 7829 7846| 5-85 | 772 59913912595 2611 Екзон 18|ТТААТТСААТоССАСОС | 80 7830 7846| 4-8-5 | 660 (599140|2596 (2612 (Екзон 18|ІТТТААТТСААТСССАСО | 66 )|7831)|7847| 4-8-5 | 786
Таблиця 138
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 2
ЗЕО | 8ЕО 5ЕО | ЗЕО юю | о юю . . Фр се| МО: 5ЗЕО
ІБІВ Мо МО: 1 МО: 1 Область Послідовність інгібуван МО: 2 2 | Мотив| ІО саиті саит | -мішень саит У 2, . ня 2. | сайт МО:
ІніцІіа| термі ІніІЦІіа термі ції | нації ції нації 599194 | 2596 | 2613 ТТТТААТТСААТСССАСО | 066 | 7831 | 7848 599141 | 2597 | 2613 ТТТТААТТСААТСССАС 7832. | 7848 599195 | 2597 | 2614 СТІТТААТТСААТСССАС | 86 | 7832 | 7849 599142 | 2598 | 2614 СТІТТААТТСААТСССА | 069 | 7833 7849 599196 | 2598 | 26815 ТОаТТТТААТТСААТСССА 7833 | 7850 599143 | 2599 | 2615 ТатТТТААТТСААТССС 7834 | 7850 599197 | 2599 | 2616 Стат ТТААТТСААТССС 7834 | 7851 599144 | 2600 | 2616 СТОаТТТТААТТСААТСС 7835 | 7851 5991981 2600 | 2617 ОСТОТТТТААТТСААТОС | 086 | 7835 7852 599145 | 2601 | 2617 ССтТатТТТААТТСААТС 7836 178521 4-8-5 | 666 599199 | 2601 | 2618 АССТОТТТТААТТСААТС 7836 | 7853 599146 | 2602 | 26818 АССТОТТТТААТТСААТ 7837 | 7853 599200 | 2602. | 2819 САаЙСТатТТТААТТСААТ 7837 | 7854 599147 | 2603 | 2619 САССТОИатТТТААТТСАА 7838 | 7854 599201) 2603 | 2620 | Екзон 18| ОСАССТОТТТТААТТСАА 7838 | 7855 532917 | 2604 | 2623 д'саослостаттттААто 7839 | 7858 | 5-10-5 599148 | 2604 | 2620 ССАОаСТОТТТТААТТСА 7839 178551 4-8-5 | 669 599202 2604 | 2621 |Екзон ІВ СОСАССТОТІТТААТТСА | 089 | 7839 | 7856 599149) 2605 | 2621 | Екзон 18| СОСАССТОаТТТТААТТС 7840 7856 599203) 2605 | 2622 | Екзон 18| ТСОСАОСТОТТТТААТТС | 090 | 7840 |7857 599150 | 2606 | 2622. ТСаслостаттТтТААТТ 7841 17857 599151 | 2607 | 2623 СТСОСАОСТОТТТТААТ | 080 | 7842 7858 599152 2608 | 2624 татсасдастатТТАА 7843 7859 599153 | 2609 | 2625 ттатсасАластТаттА 7844 |7860 599154 | 2610 | 2626 сттатосасСАастТатТтт 7845 | 7861 599155 2811 | 2627 таттотсасСАоСстаттТ | 89 | 7846 17862 599156. 2612 | 2628 повтор, ттаттатссесАостетт овзоондо|ндо| 485 | 813) 599157 2613 | 2629 повтор, ТТТОттотТСОосАССТСТ от78оондо|ндо| 4865 | 678) 599158 | 2614 | 2630 повтор, ТтТТОТТотТСОСсАСОСТО овзоондо|ндо| 4865 | 679) 599159 | 2615 | 2631 повтор, тттттотТТотТсосАОСТ овБоондо|ндо| 4865 | 680) 599204 | 2606 | 2623 СТСасАОастТаттТтТААТТ 7841 |7858
Таблиця 139
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 в нео 5 ВМ вро
ІБІЗ Мо Мо сайт Оеоласть Послідовність інгібува мой сайт Мотив | ІЮ ініціа терміна ння ініціа терміна МО: по її ції зно око) свт (вен ОРОС зе тв тв ото т. зате овег ввтв контро ТЕЖАЖАСВЕН с пво тво ве о зно сне ввто конт ЛОСОСЯ опо тя |вте о, знов овен внот екон дос опо) тив ето та
ЗОЗ
Таблиця 139
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 в нео 5 ВМ вро
ІБІЗ Мо Мо сайт Оеоласть Послідовність інгібува мой сайт Мотив | ІЮ ініціа терміна ння ініціа терміна МО: ції Чі ції ції зно ово онов кон т ЛОСАСОКАКООСЕТИ зве тот ото ле знос вто вно юс СТОСОоАСОКАЖОС т те тов ето т знов звіт онох конст СНОКО ВАК оті пов ето т, знов свв знов кет С ОССНССООТ ов. лк ето те. знооне оно овот вно КОААТООоНОВОО о |в те ото те. зно ово знов екон ДГО МАТОК то, ли ето т.
Таблиця 139
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 вка ЗЕОІО вка ОО .1МО: 1 оо іа МО:2 ЗЕО
ІБІЗ Мо МО: 1 сайт Область Послідовність інгібува МО:2 сайт Мотив | ІЮ саит . -міІШшень сайит . 2, | терміна ння 2, | терміна МО:
ІнІЦІіІа ш ІніІЦІіа шї ціні цій в 599253 | 2595 2612 С МТТолАТОСсАСо 7830 | 7847 | 3-10-5 599254 | 2596 |. 2613 Со лАттовАтосово 7831 | 7848 | 3-10-5 599255 2597 |. 2614 СТ ТТААТТОвАТОСсА 7832 | 7849 | 3-10-5 599256 | 2598 |. 2615 дО ТТААТтовАТоСо 7833 | 7850 | 3-10-5 599257 | 2599 |. 2616 СТ ЯТтттААттовАТоС 7834 | 7851 | 3-10-5 599258 | 2600. 2617 СОТаттттААТТОлАТО 7835 7852. | 3-10-5 599259 | 2601 |. 2618 достат тттААттовАТ 7836 | 7853 | 3-10-5 599260 | 2602 |. 2619 САОстОаттттААттолА 7837 | 7854 | 3-10-5 599261 | 2603 |. 2620 ДОЛОСТОТТТТААТТА вв | 7838 | 7855 | 3-10-5 532917 | 2604 | 2623 ПТАОСАОСТОТТТААТ вв | 7839 | 7858 | 5-10-5 599262 | 2604 |. 2621 ПОСАОСТОТТТТААТТС ва | 7839 | 7856 | 3-10-5 599263 | 2605| 2622 саслостоттттААт вв 7840 | 7857 | 3-10-5 599264 | 2606 |. 2623 ПТО САОСТО ТАТ дв 7841 | 7858 | 3-10-5 599265 2607. 2624 ТОТООСАОСТО ТАК дв 7842 | 7859 | 3-10-5 599205 2607 |. 2624 Екон тв ТО ООСАССТОТТТТАА в 7842 | 7859 599266 | 2608 | 2625 ДО ОТовоАОСТО ТА тв | 7843 | 7860 | 3-10-5 599206 | 2608 | 2625 Еквон їв ДОЛ СОСАОСТОТТТТА во 7843. 7860 599267 | 2609 | 2626 дтатовсластатт 7844 | 7861 | 3-10-5 599207 | 2609 |. 2626 Еквон від ОТ СОСАОСТО ТТ 7844 | 7861 599268 2610. 2627 тттатовслестат 7845) 7862. | 3-10-5 599208 2610. 2627 Екон ів ТО ТТОТОВСЛОСТОТ 78451 7862 сов?! 2611| обов Екон 18| ТТСТТОТСОСАССТОТ 58 31051 796 / повтор | Т со9?09|2611| обов Екон 18 ТТОТТОТСССАССТОТІ ро св 796 / повтор | Т 092701 2612 обла (Екон 18 ТТТОТТОТООСАССТЕТ 55 зло5| 797 / повтор | Т
Таблиця 139
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 вка ЗЕОІО вка ОО .1МО: 1 оо іа МО:2 ЗЕО
ІБІЗ Мо МО: 1 сайт Область Послідовність інгібува МО:2 сайт Мотив | ІЮ саит . -міІШшень саит . 2, | терміна ння 2, | терміна МО:
ІнІЦІіІа ш ІніІЦІіа - 7 ції 2 ції ції ції дитя зв ГЕЯ ТЕТ тевекеєте хх рве Ту повтор | Т 599274 | ов13 |. 2630 Екон 18 ГО Тоо СОТ ве нд нд 3-10-5 повтор | Т совг11|2613| 2630 Екон 18 ТТТТеттетоеСАОСТеЇ 8 св тов / повтор | Т сов272|2614| 2631 Екон 18 ТТТТТОТТОТООСАССТ 31051 799 / повтор повтор | Сі
Таблиця 140
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 шк ЗЕОІО 9ЕО ЗБОЮ
МО: 1 то ЩО МОЇ МО: 2 ЗЕО
ІБІВ Мо МО: 1 сайт Область Послідовність інгібуван|2 сайт| сайт |Мотиві ІЮ саит . -мішень 6. . 2. |терміна ня (ініціацітерміна МО: ініціа о Я й ції ції ії ції 599511 2552. 2571 вон | М ЛОАААЛОССАЛАТОСТ 7787 | 7806 599389 2553| 2572 вон |ПАТАВАААЛОССАААТОСТ во | 7788 7807 599390 2554 |. 2573 дон |ПТАТАВАААЛОССАААТОС ва | 7789 | 7808 599391|2555| 2574 дон |СТТАТАСААААСОСАЛАТО во | 7790 |. 7809 599392 2556 | 2575 ССТТАТАСААААСОСАААТ ви 7791 |. 7810 599393 2557| 2576 воно |ЗССТТАТАВАААЛОССВА 7792. 7811 599394|2558| 2577 зон |ООССТТАТАОААЛАСОСА 7793 | 7812 599395 2559| 2578 дон |АООССТТАТАСАААЛОСО 7794 | 7813 599396 2560| 2579 свзон |АДОСОСТТАТАСАЛААОС 77951. 7814 599397 2561 | 2580 дзен |АМАОСОСТТАТАВААААС ва 7796 |. 7815 599398 2562. 2581 Со ососттАТАОАААА во 7797 | 7816 599399 2563| 2582 дзон | ЗОААЛОСОСТТАТАСАЛА 77981. 7817 599400 2564|. 2583 вон А ОАААСОССТТАТАСАА 7799 | 7818 599401! 2565 2584 сдзоно |З АОСАЛЛОСОСТТАТАСА 7800 | 7819
Таблиця 140
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ЗЕ |вЕО о 5ЕО |5ЕОІО
ІБІЗ Мо МО: ! сайт Область Послідовність інгібуван о сайт сайт Мотив тв
Сан терміна "мішень ня ініціац|терміна МО: ції ції її ції зеноцнни они р АдСКоНАЖССЕЕТ зо то тов |в ев, знов свв р СААССКООАКАЮВОЄТТ то ток тов вве т. знтвте зв (р ОСТОТОКОСКО ОН ов тт тко (вве, ке. зовн ою р роЛОоООЄТ ОКО ти, кв Бо т. зовн ов р | СоЛСоОоСЕТ ТК тю, кв Без т. (599361|2586| 2604 |Екзон, |ААТСССАСОССССТОТоС| 89 )|7821| 7839 )|5-9-5| 712
Таблиця 140
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ЗЕ |вЕО о 5ЕО |5ЕОІО
ІБІЗ Мо МО: ! сайт Область Послідовність інгібуван о сайт сайт Мотив тв
Сан терміна "мішень ня ініціац|терміна МО: ції ції її ції 77717776 ФА 71711117 111171717111711 1 1 зневння ов р СК СоАОЕЕо от зв ти вве о. знов ов р (ЯМОК т то ти вве яв, зов
Таблиця 140
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ЗЕ |вЕО о 5ЕО 5ЕОІО
МО: 1 чо ПО МО МО: 2 ЗЕ
ІБІЗ Мо МО: 1 сайт Область Послідовність інгібуванІ2 сайт! сайт |Мотиві І сайт |-мішень пий . с. терміна ня ініціацітерміна МО: ініціа її її її ції ц ц 599375 2600| 2618 воно |АОСТОТТТТААТТСААТОС 26 78351 7853 599376) 2601| 2619 дон |сАОСТСТТТТААТТСААТС 62 7836 | 7854 599377 2602 2Бго ОСАОСТОТТТТААТТСААТ| 2107887 7оБ6 599378|2603| 2621 СОСАССТОТТТТААТТСАА 90 7838 | 7856 532917|2604| 2623 ДООСАССТОТТТТААТТО вв 7839 7858 5-10-5і 867 599379|2604| 2622 ТСОСАОСТОТТТТААТТСА| 88 7839 | 7857 599380| 2605| 2623 стоосАОСТОТТТТААТТО 37 7840 | 7858 599381) 2606| 2624 ТОТСОСАОСТОТТТТААТТІ 33 7841 | 7859 599382 2607 | 2625 ТТСТСОСАССТОТТТТААТІ 81 7842| 7860 599383) 2608 2626 сазон |ЯТТОтоосАВОТОТТТТА 7843 7861 599384| 2609| 2627 таттатоослостоттттА 85 | 7844 | 7862
Екзон 599385|2610| 2628 /|18/ паттатсасСсАастаттт о о59 5-9-51 736 повтор
Екзон 599386| 2611| 2629 |18/ ттататсасСАасСтТатТт 81 5-9-51 737 повтор
Екзон 599387| 2612| 2630 /|18/ тптпаттатсасаастатт 5-9-51 738 повтор
Екзон 599388| 2613| 2631 /)18/ тптаттатсасСсАастТатІ о /84 5-9-51 739 повтор
Приклад 120: Антисмислове інгібування людського фактора комплементу В (СЕВ) у Нерс2 клітинах МОЕ гепмерами
Були сконструйовані додаткові антисмислові олігонуклеотиди, спрямовані на нуклеїнову кислоту людського фактора комплементу В (СЕВ), і був протестований їх вплив іп міго на мРНК
СЕВ. Культивовані клітини Нерса2 з щільністю 20000 клітин на лунку були трансфецирували з використанням електропорації з 1000 нМ антисмислового олігонуклеотиду. Після періоду обробки і протягом 24 годин, РНК виділяли з клітин і рівні МРНК СЕВ вимірювали методом кількісної ПЛР в реальному часі. Набір людських праймерів ЕТ53459 був використаний для вимірювання рівнів мРНК. Рівні мРНК СЕВ були скоректовані в відповідності з змістом сумарної
РНК, виміряних за допомогою КІВОСОКЕЕМФ). Результати представлені як відсоток інгібування
СЕВ щодо необроблених контрольних клітин.
Вперше сконструйовані химерні антисмислові олігонуклеотиди у поданих нижче таблицях були сконструйовані як дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотиди. Дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотиди мають 16 нуклеозидів у довжину, причому нуклеозид містить або модифікацію цукру МОЕ, або модифікацію цукру (5)-СЕЇ, або дезокси модифікацію. У колонці "Хімізм" описані модифікації цукру для кожного олігонуклеотиду. "К" означає (5)-СЕЇ модифікацію цукру; "а" означає дезоксирибозу; і "е" означає модифікацію МОЕ. "Сайт ініціації" позначає крайній 5' нуклеозид, на який спрямований гепмер к послідовності гена людини. "Сайт термінації" позначає крайній 3' нуклеозид, на який спрямований гепмер у послідовності гена людини. Кожен гепмер, наведений у поданих нижче таблицях, спрямований на мРНК СЕВ людини, зазначену в цьому описі як БЕО ІЮО МО: 1 (з номером доступу СЕМВАМК
ММ 001710.5) чи на геномну послідовність СЕВ людини, зазначену в цьому документі як ЗЕО ІЮ
МО: 2 (з номером доступу СЕМВАМК МТ 007592.15, усічену з нуклеотиду 31852000 до 31861000), або на обидві послідовності. "н/д" означає, що антисмисловий олігонуклеотид не спрямований на зазначену конкретну послідовність гена з 100 9о комплементарністю.
Таблиця 141
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕїЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або БЕО ІО МО: 2
ЗЕО
Зою ЗЕО | 8ЕО мо: | МО: ні б о 5ЕО
ІВІЗ Мо! 1 1 Область- Послідовність бу- МО: 2 МО: 2 Мотив ІО - | сайт| мішень сайт | сайт , сайт ван-/|. 7. . МО: 2. | тер- ініціац | термі ініці-| ня в й - | міна її нації ації -ції 59951 256 АААСССАААТОСТО еккееккаададча 59951 256 САДААСССАААТОС еккееккаададча 59951 257 ТАСААДААСССАДАТ еккееккаададча 59951 257 СТТАТАСАДААССС еккееккаададча 59951 257 ССТТАТАСААДААСС еккееккаададча 59951 257 СССТТАТАСАДААС еккееккаададча 59951 257 ССССТТАТАСАДАА еккееккаададча 59952 257 АССССТТАТАСАДА еккееккаададча 59952 оББбА 257 ААССССТТАТАСАХ в 7799. 7814 еккоекков ода 59952 258 АААССССТТАТАСА еккееккаададча свя ев у Боонтв| ДАНО Ж 5 тю лив 59952 258 САДАССССТТАТАСЄ еккееккаададча тоже жо лю воокте ддАсссстттне в | тк ливе 59952 258 ваАААСССсСТТАТА еккееккаададча 59952 258 АСИ,АААССССТТАТ еккееккаададча свя ев у Боонтв | ДОСААНОСССТТ 5 тк лив 59952 258 САааАААССССТТА еккееккаададча 59952 258 ,аСАапАААСССсСтТТ еккееккаададча сере вн ли Ееонтв|донооААНООСт те лаб 59952 258 АаСсАспаАААСССсСтТ еккееккаададча свже ви р Ееонтв|пдокосАНАССТс 5 тя ло 59952 258 сАдасАаспАААСос еккееккаададча свое вт те Боонтв| СЛОСКОСЖНАСОЄ 5 тку лог 59953 2574 258 Екзон 18 ТоСАасСсАСИААДАСС 29 | 7809. 7824 еккееккаададча 576 0 9 со аакк
Таблиця 141
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕїЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2 5ЕО
ЗЕОІ| о 5ЕО | 8ЕО
ІВ Мо; »| юю | ю
МО: І інгі- , , ЗЕ
ІВІЗ Мо! 1 1 Область- Послідовність бу- МО: г МО: г Мотив ІО - саит мішень сайт сайт сайт ван-|. 7. . МО: 2: | тер- ІніцІіац | термі
ІнІЦІ-| ня . - - І! мІНВ "и нації ації -ції 5БО953 259 ПТССАПСАСОДААд еккееккадчааа 59953 259 СОТОСАССАВОААА еккоекков ода 5БО953 259 СТаТССАССАСИдА еккееккадчааа 5БО953 259 ССТатссСАасАса еккееккадчааа 5БО953 259 ССССТатссСАасСА еккееккадчааа 5БО953 259 сассостатосАа еккееккадчааа 5БО953 259 АСОССССТатосА еккееккадчааа 59953 оБВа 259 словоссстетосА еккоекков ода 5БО953 260 ССАСсасоссстатс еккееккадчааа 5БО954 260 СССАСОССССТат еккееккадчааа б99Ба 2во госсАСоССсстот еккоекков ода б99Би оБВВ 260 АТОосАСОССССТО еккоекков ода 5БО954 260 ААТСССАСасссост еккееккадчааа б9Ба 2590 260 сААТоссАСеоСоС еккоекков ода зовБа оБОЇ 260 ССААТООСАСОССС еккоекков ода зов 259? (ТОААТОССАОВСС еккоекков ода б95Би 2593 260 АТТСААТООСАСОС еккоекков ода вва оБОД 260 ААТТСААТоССАСе еккоекков ода 5995 оБОБ об (ААТТСААТООСАС еккоекков ода 59955 2596 щі (ТААТТОААТОССА еккоекков ода 59955 ові СТТААТТОААТОССА еккоекков ода 59957 | з5ау | 261 | єкзон 18 | !ТТТААТТСААТОСС 7832 | вав | ФФК | во 7 З АС ККеєе 59955 | зБав| 261 | єкзон 18 | ПТТТААТТСААТСССЇ 35 | 7833 | ував | "кКееккодааа 2 З А дакк
Таблиця 141
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕїЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2 5ЕО
ЗЕОІ| о 5ЕО | 8ЕО
ІВ Мо; »| юю | ю
МО: І інгі- , , ЗЕ
ІВІЗ Мо! 1 1 Область- Послідовність бу- МО: г МО: г Мотив ІО - саит міШЕНЬ сайт сайт сайт ван-|. 7. . МО: 2: | тер- Ініціац | термі
ІнІЦІ-| ня . - - І! мІНВ "и нації ації -ції 59957 | зБав| 261 | єкзон1в8 | ЗТТТТААТТСААТОСІ 88 | 7833 | увло | 2ФеККОООЯ | вра 8 4 СА ККеєе 59955 2599 щі СТТТТАДТТОЛАТОС ех | 7834 | 7849 еккоекков ода 59957 | з5аа| 261 | єкзон1в | ТЯТТТТААТТСААТС| 5 | 7834 | 785о ЄФЄККОООООВЯ | св 9 5 сс ККеєе 59955 2600 261 СОТТТТААТТСААТо во 7835 7850 еккоекков ода 59958 | 2600 261 | єкзон1в | СТОТТТТААТТСААТІ 9 | 7835 | увБ1 | ЗФеККОООЯ | сов 0 6 сс ККеєе 59955 2601 щі СТОТТТТААТТОААТ 7836 7851 еккоекков ода 59958 | 2601 | 261 | єкзон 18 | ЯСТОТТТТААТТСА 7836 | 7вво | гееККООаа 1 7 АТС ККеєе 59955 2602 щі ОСТОТТТТААТТСА 7837 | 7в5о еккоекков ода 59958 | 5602 | 261 | вкзон 18 | АЄСТОТТТТААТТО 7837 | 7в5з | ЗФеККОООЯ | во 2 8 ААТ ККеєе 5О955 281 АССТОТТТТААТТС еккееккадчааа 59958 | 2603 | 261 | єкзонів | САЯСТОТТТТААТТ | /9 | 7838 | 754 | ЄФеККОООЯ | сов
З 9 САА ККеєе 5З291 262 автсасластатттт еееееаааааса 5О955 281 САасСтТаттТТТААТТ еккееккадчааа 59958 | з6дд | 262 | єкзон 18 | ЗСАССТОттттТААТ 7839 | увв5 | гееККООаа 4 0 ТСА ККеєе 59955 2605 262 ОсАОСТОттттААТ 7840 7855 еккоекков ода 59958 | з60д5| 262 | вкзон 18 | СЯСАССТОТТТТАА 7840 | 7в5б | ФеККОООЯ | в70 1 тс ККеєе 59956 2606 262 овсластаттттАХ 7841. 7856 еккоекков ода 59958 2606 т?сасластТаттттА 7841 7в5у7 | ееекКаааада 6 2 АТТ ККеєе 59956 2807 252 гоеслестеттттА 7в42 | 7857 еккоекков ода 609. 59958 | 2607 | 262 | єкзонів/ ЯТСОСАССТОТТТТ | 84 | ув4о | увБв | ЗФеККОООЯ | сто 7 З ААТ ККеєе 58886 | з6ов| 262 | єкзонів | ЯТСОСАССТОТТТТ | до | 7843 | увБв | УеКООЧааЯ | 610 о З АД акке 5БО956 262 автсасластатттт еккееккадчааа 59958 | з6ов| 262 | єкзон1в | ТЯТСОСАССТОТТТ | 84 | 7843 | увБо | ЄФеККОООЯ | са 8 4 ТАА ККеєе
Таблиця 141
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕїЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або БЕО ІО МО: 2
ЗЕО ко о У, | 8ЕО | 5ЕО
МО | | область: інт Мо: МО: ЗЕО
ІЗВІЗ Ме| 1 - . Послідовність бу- о о Мотив ІО - |сайт| мішень сайт | сайт сайт ван-|. . МО: 2. | тер- ініціац | термі ініці-| ня в щ - | міна її нації ації -ції 59956 262 татсасдастатт екКееккачада 59958 2609 262 Екзон 18 татсаесдастатт 75 7ва4 | 7860 еееккаачаадаава 674 9 5 ТТА ККеве 59956 262 татсаесдастатт екКееккачада 59959 2810 262 Екзон 18 стта,атсасдастат 88 7845 | 7861 еееккаачаадаава 675 0 б ТТ ККеве 59956 2811 262 Екзон 18 стта,атсасдастат б6Б 7846 | 7881 екКееккачада 813 б ТТ аакк 59959 2811 262 Екзон 18 татти;тсасдаста 94 7846 | 7862 еееккаачаадаава 676 1 7 ТТ ККеве 59956 2612 22 таттатовслесто 7847 7862 еккоекков ода 59959 2812 262 | Екзон 18| ТТТтТсТСсС,ССАасСтТ еееккаачаадаава 677 2 8 | /повтор | СТТ ККеве 59956 262 | Екзон 18| ТТТтТсТСсС,ССАасСтТ екКееккачада 59959 262 | Екзон 18! ТІТТтТатоаСАсСо еееккаачаадаава 59956 262 | Екзон 18! ТІТТтТатоаСАсСо екКееккачада 59959 26814 263 | Екзон 18|! ТІ"ІТаИттТатТоасСАС еееккаачаадаава 679 4 О | / повтор | СТО ККеве 59956 2815 263 | Екзон 18|! ТІ"ІТаИттТатТоасСАС екКееккачада 617 9 О | /повтор | СТ аакк 59959 263 | Екзон 18| ТІТ"ТатТатСасА еееккаачаадаава 59957 263 | Екзон 18| ТІТ"ТатТатСасА екКееккачада
Приклад 121: Антисмислове інгібування людського фактора комплементу В (СЕВ) у Нерс2 клітинах МОЕ гепмерами
Були сконструйовані додаткові антисмислові олігонуклеотиди, спрямовані на нуклеїнову 5 кислоту людського фактора комплементу В (СЕВ), і був протестований їх вплив іп міго на мРНК
СЕВ. Антисмислові олігонуклеотиди були протестовані в серії експериментів, які мали аналогічні умови культивування. Результати для кожного експерименту представлені в окремих таблицях, показаних нижче. Культивовані клітини Нерс2 з щільністю 20000 клітин на лунку трансфецирували з використанням електропорації з 500 нМ антисмислового олігонуклеотиду.
Після періоду обробки і протягом 24 годин, РНК виділяли з клітин і рівні МРНК СЕВ вимірювали методом кількісної ПЛР в реальному часі. Набір людських праймерів КТ53459 був використаний для вимірювання рівнів МРНК. Рівні мРНК СЕВ були скоректовані в відповідності з змістом сумарної РНК, виміряних за допомогою КІВОСОКЕЕМФ). Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо необроблених контрольних клітин.
Вперше сконструйовані химерні антисмислові олігонуклеотиди у поданих нижче таблицях були сконструйовані як дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотиди або як 5-8-5 МОЕ, 5-9-5 МОЕ, 5-10-5 МОЕ, 6-7-6-МОЕ, 3-10-5 МОЕ або 6-8-6 МОЕ гепмери.
Дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотиди мають 16 нуклеозидів у довжину, причому нуклеозид містить або модифікацію цукру МОЕ, або модифікацію цукру (5)-СЕЇ, або дезокси модифікацію. У колонці "Хімізм' описані модифікації цукру для кожного олігонуклеотиду. "К" означає (5)-СЕЇ модифікацію цукру; "а" означає дезоксирибозу; і "е" означає модифікацію МОЕ.
Гепмери 5-8-5 МОЕ мають 18 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з восьми 2-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З' кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Гепмери 5-9-5 МОЕ мають 19 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з дев'яти 2'--"дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в 3' кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Гепмери 5-10-5 МОЕ мають 20 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з десяти 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З' кінця, що містять по п'ять нуклеозидів кожне. Гепмери 3-10-5 МОЕ мають 18 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з десяти 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З' кінця, містять три і п'ять нуклеозидів відповідно. Гепмери 6-7-6
МОЄ мають 19 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з семи 2- дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в 3' кінця, що містять по шість нуклеозидів кожне. Гепмери 6-8-6 МОЄ мають 20 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з восьми 2'-дезоксинуклеозидів і оточений крилами з 5' кінця і в З' кінця, що містять по шість нуклеозидів кожне. Кожен нуклеозид 5' крила і нуклеозид 3 крила має 2'-МОЕ модифікації. Міжнуклеозидні зв'язки в кожному гепмері являють собою тіофосфатні (Р-5) зв'язки. Всі залишки цитозина в кожному гепмері являють собою 5-метилцитозини. "Сайт ініціації" позначає крайній 5' нуклеозид, на який спрямований гепмер к послідовності гена людини. "Сайт термінації" позначає крайній 3' нуклеозид, на який спрямований гепмер у послідовності гена людини. Кожен гепмер, наведений у поданих нижче таблицях, спрямований на мРНК СЕВ людини, зазначену в цьому описі як БЕО ІЮО МО: 1 (з номером доступу СЕМВАМК
ММ 001710.5) чи на геномну послідовність СЕВ людини, зазначену в цьому документі як ЗЕО ІЮ
МО: 2 (з номером доступу СЕМВАМК МТ 007592.15, усічену з нуклеотиду 31852000 до 31861000), або на обидві послідовності. "н/д" означає, що антисмисловий олігонуклеотид не спрямований на зазначену конкретну послідовність гена з 100 96 комплементарністю.
Таблиця 142
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕїЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або БЕО ІО МО: 2
ЗЕО юю | БО в | бКО | БЕО ЗЕ
МО: | МО: інгіб , , о (вів Ме| 40 | сайт Область- Послідовність у- |МО:2 МО:2 Мотив Ю - : міШЕНЬ саит саит сайт | термін ван|..., . МО с, - ініціа | термі . ініціа | ації ня ї- - : ї ції нації 601152 | 2551 | 2566 АДАСССАААТССТСАТ 7786 7801 | веккадоваааакке 601218 2551 | 2566 АДАСССАААТССТСАТ 7786 | 7во1 | вкккоспаволакес 601153 2552 | 2567 ААААСССАААТССТСА 7787 | тво? | веккадаваааакке 601219 2552 | 2567 ААДААСССАААТССТСА 7787 | 7802 | вкккоспавалакес во1154 | 2553 | 2568 СААААСССАААТССТС 7788 7воз | веккааоваааакке во1220 | 2553 | 2568 СААААСССАААТССТС 7788 | 7воз | вкКкоспаволакес 601155 | 2554 | 2569 АСААААСССАААТССТ 7789 7804 | веккадоваааакке 601221 | 2554 | 2569 АСАДААСССАААТССТ о 7789 | 7804 вкккадвававакее 601156 2555 | 2570 ТАСААААСССАААТСС 7790) 7805 | веккааоваааакке 601222 | 2555 | 2570 ТАСААААСССАААТСС 7790) 7805 | ВККкОспаволакес 601157 |2556) 2571 АТАСААДААСССАДАТС в 7791 | 7806 векколаааааакке
Таблиця 142
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕїЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або 5ЕО І МО: 2 5ЗЕО
І | вЕО ор ше ше ЗЕ
МО: ПО МО: інгіб , , о
ІСІЯ Ме | 1 1 сайт Область- Послідовність у- МО:г МО:г Мотив ІО - . міШшЕеНЬ саит саит сайт | термін ван|. й МО 7 й ініціа | термі , ініціа| ації ня в о : ції ції | нації 601223 | 2556 | 2571 АТАСААДААСССАААТС о 7791 | 7806 вкккадвававакее 601158 | 2557 | 2572 ТАТАСАААДАСССАДАТ о 7792 | 7807 векколаааааакке 601224 | 2557 | 2572 ТАТАСАААДАСССАДАТ Я 7792 | 7807 вкккадвававакее 601159 2558 | 2573 ТТАТАСАДААСССАДА 7793 | 7808 векколаааааакке 601225 | 2558 | 2573 ТТАТАСААААСССАДА о 7793 | 7808 вкккадвававакее 601160 | 2559 | 2574 СТТАТАСААААСССАА Я 7794 | 7809 векколаааааакке 601226 | 2559 | 2574 СТТАТАСААААСССАА о 7794 | 7809 вкккадвававакее 601161 | 2560 | 2575 ССТТАТАСААААСССА 7795 | 7810 векколаааааакке 601227 | 2560 | 2575 ССТТАТАСААААСССА 7795 | 7810 вкккадвававакее 601162 2561 | 2576 СССТТАТАСААААССС в 7796 | 7811 векколаааааакке 601228 | 2561 | 2576 СССТТАТАСААААССС в 7796 | 7811 вкккадвававакее 601163 | 2562 | 2577 ССССТТАТАСААААСС Я 7797 | 7812 векколаааааакке 601164 2563 | 2578 АССССТТАТАСААААС 7798 7813 векколаааааакке 601165 2564 | 2579 ААССССТТАТАСАААА о 7799 | 7814 веккадоваааакке 601166 | 2565 | 2580 АААССССТТАТАСАДА Я 7800 | 7815 векколаааааакке 601167 | 2566 | 2581 СААДАССССТТАТАСАА о 7801. 7816 векколаааааакке 601168 2567 | 2582 ССАААССССТТАТАСА о 7802 | 7817 веккадоваааакке 601169 | 2568 | 2583 АСОАААССССТТАТАС Я 7803 | 7818 векколаааааакке 601170 2569 | 2584 САССАААССССТТАТА 7804) 7819 векколаааааакке 601171 2570 | 2585 ССАССАААССССТТАТ в 7805 | 7820 веккадоваааакке во1172 | 2571 | 2586 АССАССААДАССССТТА 7806 | 7821 векколаааааакке 601173 | 2572 | 2587 САССАСОАААССССТТ 7807 | 7822 векколаааааакке в01174 | 2573 | 2588 ССАССАССОАААССССТ 7808 7823 веккадоваааакке 601175 2574 | 2589 ТССАССАССАААСССС 7809 | 7824 векколаааааакке 601176 2575 | 2590 СТОСАССАССАААССС 7810 | 7825 векколаааааакке 601177 | 2576 | 2591 ТОТССАССАСОАААСС 7811 | 7826 веккадоваааакке 601178 | 2577 | 2592 СТатсСАССАСОАААС 7812 | 7827 | вееккадаададакке
Таблиця 142
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕїЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або БЕО ІО МО: 2 чо. Зо, | ЗЕ
ІБІ5 Мо Щі т сайт Сласть: Послідовність ще мое мое Мотив Ю ініца| ації. он | ініціа | термі Мо ції ції нації 111 вине| нь ово вин вості Гх вот |2ве5| 2600 | Еквонтв ОсАОсоСостотосАЄ 8 | 7620 7вз5 З'ОННОМ ву воиве обов 2613 конів ТТТТААТТСААТСОСА | вт | тво | тав | СНОМ 5 вотгов | овоз| 2вте | гкзонтв | достоттттААТТОМА | 69 | тзв | тв5з | з'МОМИОЯМ во,
Таблиця 142
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕїЇ олігонуклеотидами, спрямованими на 5ЕО ІЮ
МО: 1 або 5ХЕО ІЮ МО: 2
ЗЕО
І | вЕО ор ше ше ЗЕ
МО: ПО МО: інгіб , , о
ІСІЯ Ме | 1 1 сайт Область- Послідовність у- МО:г МО:г Мотив ІО - . міШшЕеНЬ саит саит сайт | термін ван|. й МО с, ше ініціа | термі , ініціа| ації ня с. як : ції ції нації 532917 | 2604 | 2623 | Екзоні8 | ЗТСОСАССТОТТТТААТІ 75 | 7839 | ув58 | сееееаоаааааа | 317
ТСА еееее 601205 | 2604 | 2619 САССТСТТТТААТТСА 7839 | 7854 векколаааааакке во. 601206 | 2605 | 2620 ССАССТОТТТТААТТС 7840 7855 векколаааааакке 601207 | 2606 | 2621 СССАССТОТТТТААТТ 7841 | 7856 векколаааааакке 601208 | 2607 | 2622 ТСССАССТСТТТТААТ 7842 | 7857 векколаааааакке во 588860 2608 2623 СТСОСАССТСТТТТАА 7843 7858 векодадаааавакк 601209 2608 | 2623 СТСОСАССТСТТТТАА 7843 | 7858 векколаааааакке 601210 | 2609 | 2624 ТОТСОСАССТСОТТТТА во 7844 | 7859 векколаааааакке 601211 2610 | 2625 ТТОТСОСАССТСТТТТ 7845 | 7860 векколаааааакке в01212 | 2611 | 2626 СтТТОоТСОСАССТОТТТ вв 7846 7881 векколаааааакке 601213 | 2812 | 2627 ТОоТТотТоОоСАССТСТТ 7847 | 7862 векколаааааакке 601214 | 2813 | 2628 повтор. ТТаттотсесАССТСТ ва|ндо нд векколаааааакке 601215 | 2614) 2629 повтор. тттаттатсослоста твіндо| нд. векколаааааакке 601216 2815 | 2630 Еквоно ТТТТОтТТОоТСОосАССТ тзіндо| нд. веккадоваааакке 601217 | 2616 | 2631 тттттТаттотТсОосАСС вв|ндо нд веккадосаасакке / повтор е
Таблиця 143
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2 ше ше 5ЕО | 8ЕО і і о МОСІЮ МО: ЗЕО
І8І5 ме | МО: 1 МО: 1| Область- Послідовність 75 інгібу-|2 сайт 2 сайт Мотив І сайт | саит мішень вання ініціа Цтермін МО: ініці- |Ітермі- х ц ації й ації | нації ц 601284 | 2551 | 2566 АДАСССАААТССТСАТ| 8 | 7786 | 7801 | еккадададааккеев | 557 601285 | 2552 | 2567 АДАДАСССАААТССТСА 7787 | 7802. | еккадададааккееєве | 800 601286 | 2553 | 2568 СААДААСССАААТССТС 7788 | 7803 | еккааааааааккеее | 558 601287 | 2554 | 2569 АСААДААСССАААТССТ! 9 | 7789 | 7804 | еккааадааааккеее | 801 601288 | 2555 | 2570 ТАСАААДАСССАААТОСІ 0 | 7790 | 7805 | еккададааадаккеее | 559 601289 | 2556 | 2571 АТАСАДААСССАААТС 7791 | 7806 | еккадададааккееєве | 560 601290 | 2557 | 2572 ТАТАСААДААСССАДАТ 7792 | 7807 | еккадааааааккеее | 802 601291 | 2558 | 2573 ТТАТАСААДААСССАДА 7793 | 7808 | еккааааааааккеее | 803 601292 | 2559 | 2574 СТТАТАСААДААСССАА 7794 | 7809 |еккададааааккеее | 561 601293 | 2560 | 2575 ССТТАТАСААААСССА 7795 | 7810 | еккаадададаккеєв | 562 601294 | 2561 | 2576 СССТТАТАСААААССС 7796 | 7811 |еккададааааккеее | 563
Таблиця 143
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або БЕО ІЮ МО: 2
СИН ооо сво . . с, Н Н " " вів ме | Кос МО: Область: Послідовність НБУ 2 сайт|2 сайт Мотив Тв 2, . ініціаціітермін МО: ініці- |термі- . ї. - Ї ації ації | нації 601296|2563|2578| Екзон'8 | АССССТТАТАСААААСІ 0 | 7798 | 7813 |еккайааааааккеєе | 565 601233|2566|2581| Екзон'8 | САААССССТТАТАСАА| 0 2 7| 7801 | 7816 Їекккайаааааакеее | 568 601299|2566|2581 Екзоні8 |САААССССТТАТАСАА | 0 | 7801 7816 | еккайадачаааккеее | 568 601234|2567|2582| Екзон'в | ОСАААССССТТАТАСА| 0 2 7| 7802 | 7817 |екккаасасасакеєе | 569 601300|2567|2582| Екзон'8 | ОСАААССССТТАТАСА| 9 | 7802 | 7817 |еккаасасасааккеєе | 569 601236 |2569|2584 Екзон'8 |САССАААССССТТАТА| 0 | 7804) 7819 | екккайдааааакеее | 571 601302|2569|2584| Екзон'8 | САССААДАССССТТАТА| 0 2 7| 7804 | 7819 |еккаасасааааккеєе | 571 601240|2573|2588| Екзон'8 |ССАССАССАААССССТІ 6 | 7808 | 7823 | екккададаааакеее | 575 /601248|2581 |2596| Екзон'8в (ОССССТотоСАсСАСО| 6 | 7816) 7831 |екккайаасасакеєе | 583 601253|2586|2601|Екзон'8 |ІСССАСОССсССтТатосА| 0 | 7821 | 7836 |екккадаасасакеєе | 588 /601265| 2598 |2613| Екзон'8| ТТТТААТТСААТСССА | 48 | 7833 | 7848 |екккададаааакеее | 600 601269 | 2602 |2617 | Екзон'8 | ССТОТТТТААТТСААТ | 66 | 7837 | 7852 |екккадададаакеее | 604
Таблиця 143
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або БЕО ІЮ МО: 2 ко |вЕо ЗО 5ЕО ) ) До МО: МО: ЕО
ІВІ5 Мо мог мо Сласть: Послідовність те інпбу 2 сайт |2 сайт Мотив І сайт ит | мішень ініціаціітермін МО: ініці- |термі- ї с
Й Ї ації ації | нації 532917 | 2604 | 2623 Екюонів |ССОСАССТВТТТТААТІ 8 7839 | 7858 веоеоо ов 317 601271 | 2604 | 2619 САаСТатТТТААТТСА 7839 | 7854 | екккададаааакеее | 606 601272 | 2605 | 2620 асАастТаттТТААТТС 7840 | 7855 | екккададаааакееве | 607 601273 | 2606 | 2621 СасСАОСТОатТТТТААТТ 7841 | 7856 | екккададаааакееве | 608 601274 | 2607 | 2622 ТСОСАССТаТттТТтТААТ 7842 | 7857 | екккаадададакеее | 609 588860 26081 2623 СТОССАССТОСТТТТАА 7843 1 7858 |еекадаааааааакке | 610 8012751 2608 2623 СТОССАССТОСТТТТАА 7843 17858 Гекккаадаааааакеее | 610 601276 | 2609 | 2624 татсасластаттттТА 7844 | 7859 | екккададаааакеее | 611 601277 | 2610 | 2625 ттатсасдастатттт 7845 | 7860 | екккаадададакеее | 612 601278 | 2611 | 2626 аттатсасСсА7астТаттт 7846 | 7861 | екккадаааааакеее | 613 601279 | 2612 | 2627 таттатоаслостатт 7847 | 7862. | екккадаааааакеее | 614 601280 | 2613. 2628 бквон в ТтТаттотсосАОСТСТ ото | нд нд екккачачаааекесе| 615. 601281. 2614 | 2629 пово. ТТТаттотоосАССТе тво | нд ндо окккаааоаакоее 616. 601282 | 2815. 2630 пово. ТТТТаттотсосАССТ вв ндо| нд екккачачаааакесе| 617. 601283 | 2616 | 2631 бквон в ТТТТТотТТОоТСОСАСС ово ндо| нд екккачачаааекесе| 618.
Таблиця 144
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або БЕО ІЮ МО: 2 5ЕОТ5ЕСТО 5ЕОТ5ЕСТО іо МО Мо: 1 | область 9, 0 МОЇ МО:2 ЕО
ІБІ5 Мо 1 сайт| сайт : Послідовність інгібуван(2 сайт! сайт Мотив ІО пе о |-мішень я . , ініціацітерміна ня Ініціацітерміна МО: її її її її в01306| 2573 2588 оно |ОСЛОСАОСАААСОСО 7808 7823 | еккааааааааккеве 601307 | 2574 2589 трон | ОСАОСАОсАААОСС 7809 7824. | еккадааааааккеве 601308 | 2575 2590 оно |СТОСАОСАООАААОС 7810. 7825 | еккадааааааккеве в01309| 2576. 2591 оно | ДОТОСАОСАОСАААС 7811. 7826. | еккадааааааккеве в01310| 2577) 2592 дон | СТОТОСАОСЛОвАДА 7812. 7827 | еккададааааккеве 601311 |2578| 2593 дон /ООТОТОСАОСАОСАХ 7813. 7828. | еккадааааааккеве в01312|2579 2594 оно |ОСТОТОСАВСАВСА 7814 7829 | еккадааааааккеве 601313| 2580). 2595 лоно /Восототослеслов 7815. 7830. | еккадааааааккеве в601314| 2581). 2596 дон ГбоостотослосАв В 7816. 7831. | еккададааааккеве в01315|2582 2597 он |СбОСОСТОТОСАОСА 7817. 7832. | еккададааааккеве в01316| 2583 2598 дон |АобосостотосАоо 7818. 7833 | еккадааааааккеве
Таблиця 144
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або БЕО ІЮ МО: 2
ЗЕО | 5БЕО ІЮ ЗЕО | БЕО ІЮ
ІО МО; МО: 1 Область | | | Що ІО МО; МмО:г ЗЕО
ІБІ5 Мо 1 сайт| сайт : Послідовність інгібуван(2 сайт! сайт Мотив ІО
ШІ ШІ ШІ ЩІ пот явною Пре лятоватосоновос се | тео | тона | нопонютсєе ев зокев| ен вет (ри тлятенятосеясв, ев | тот тоне | наван осо ню сви Про тлателятосонов| се | тот тоне |ноновнянонее тов
Таблиця 144
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або БЕО ІЮ МО: 2
ЗЕО | 5БЕО ІЮ ЗЕО | БЕО ІЮ
ІО МО; МО: 1 Область | | | Що ІО МО; МмО:г ЗЕО
ІБІ5 Мо 1 сайт| сайт : Послідовність інгібуван(2 сайт! сайт Мотив ІО -2505ИВ5385ИШВВщЩ-2ШН8./8 ' 52З2БВБ5Б8БКБ ЗШ8К-- поз зне се Про тпяктелтосек яв тео) тоне | опонютсєе ко ост зн се ре ттпяктелтосек я | тео) тоне |ноновнянонее ко ост сне свт Про ототттлятонят| св |тот| тобе |ноновнянонее о зон свою свв Трон ВТВСКОЄТОТТТ в | тео тов | осені т от свою св Про охостетттянтек в | тов) тя | оозоннютссе ов токтв|енон| ооо ре олоототттяятен| зе тво тех |на |в зоктв| рові зе ре (оволостетитят во. | тент тео. |еконновнансте в оз сот сво Про повоостатттяят| зо | тоне ту | опоннютссе оо ост сот сво Пре повокостатттят| зе |тне| тот |нкановняннее ко зокре, зи (ре етовслвютетття ев |твнн| тво |енавовнанкст т, ос сн свою Трон потовелостетття| св |тнн| то |нановнянонее ви,
Таблиця 144
Інгібування мРНК СЕВ дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або БЕО І МО: 2 5ЕО ЇЗЕО ІЮ 5ЕО ЇЗЕО І
Ю МО: МО: 1 власть 95 ДО МОЇ МО:2 5ЗЕО
ІБІ5 Мо 1 сайт| сайт : Послідовність інгібуван(2 сайт! сайт Мотив ІО б. . -міШшеНнь б. . ініціацітерміна ня Ініціацітерміна МО: її її її її 601382 | 2610| 2625 он ттатоосАестетттт| 84 7845| 7860 |кккаадаадаакееее 601344 | 2611 |. 2626 дюн сттатоосАостеттт| 87 7846| 7861 | екксадаададаккеєе 601383 | 2611 |. 2626 дюн сттстоосАостеттт| 85. 7846| 7861 |кккаадаадаакееее 601345 | 2612| 2627 он таттатсасАестеттІ 82 7847| 7862 | еккадаададаккеєе 601384 | 2612| 2627 дюн |тсттатоосаостетт| 79. 7847| 7862 | кккаадааддаакееее
Екзон 601346 | 2613| 2628 |18/ ттаттатсосластат| 73 еккаадададаккеее | 615 повтор
Екзон 601385 | 2613| 2628 |18/ ттаттатсОосАлОастТат| 84 кккааададаакееее | 615 повтор
Екзон 601347 | 2614 | 2629 |18/ тттоттатсосСАОосСтТа| 70 еккаадададаккеее | 616 повтор
Екзон 601386 | 2614 | 2629 |18/ тттаттатсасСАОасСтТа| 71 кккааададаакееее | 616 повтор
Екзон 601348 | 2615| 2630 |18/ ттттаттатсасАОст| 71 еккаадададаккеее | 617 повтор
Екзон 601387 | 2615| 2630 |18/ ттттаттатсасАдОостТ!| 76 кккааададаакееее | 617 повтор
Екзон 601349 | 2616 | 2631 |18/ тттттотТТатсасСАОосСі (71 еккаадададаккеее | 618 повтор
Екзон 601388 | 2616 | 2631 |18/ тттттаттТатсОосСАОсСіІ 67 кккааададаакееее | 618 повтор
Таблиця 145
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 5ЕО | ЗЕО ІЮ 5ЕО | ЗЕО І
ІЮО МО: МО: 1 о. І МО:| МО: 2 ЗЕО
ІЗІЗ Ме |/ сайт) сайт Соласть Послідовність зв інпбу: 2сайт| сайт | Мотив | ІЮ ініціацітермінаці ініціаці гермінаці МО: ; ї н ї 599357 | 2582 | 2600 |Екзон 18 | ССАСОССССтТатссСАасАс 7817 | 7835 599358 | 2583 | 2601 |Екзон 18 | СССАСОССССТатссСАасА 7818 | 7836 599359 | 2584 | 2602 |Екзон 18 | ТСССАСОЯССССТатссАас 7819 | 7837 599360 | 2585 | 2603 |Екзон 18 | АТСССАСОССССтТатссАа 7820 | 7838 599361 | 2586 | 2604 |Екзон 18 | ААТСССАСОаССССТатссСА 7821 | 7839 599362 | 2587 | 2605 |Екзон 18 | СААТСССАСОаССССстТатос 7822 | 7840 599363 | 2588 | 2606 |Екзон 18 | ТТСААТСССАСОССССТатс 7823 | 7841 599364 | 2589 | 2607 |Екзон 18 | ТТТААТСССАСаСССсСтТат 7824 | 7842 599365 | 2590 | 2608 |Екзон 18 | АТТГСААТСССАСОССССТа 7825 | 7843 599366 | 2591 | 2609 |Екзон 18 | ААТТСААТСССАСОССССТ 78265 | 7844
Таблиця 145
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ЗЕО | ЗЕО І ЗЕО Ї ЗЕО І
ІЮ МО: МО: 1 с, ІО МО:!Ї МО: 2 ЗЕО (ВІЗ Ме 1 сайт| сайт | Область- Послідовність Зв інгібу- 2 сайт! сайт Мотив 10 б. . . її міШшЕеНнЬь вання о. . . . ініціацітермінаці ініціацітермінаці МО: ї н ї 599367 | 2592| 2610 |Екзон 18 | ТААТТСААТСССАСОСССС 7827 | 7845 599368 | 2593 | 2611 |Екзон 18 | ТТААТТСААТСССАСаСОС 7828 | 7846 599369 | 2594 | 2612 |Екзон 18 | ТТГТААТТСААТСССАСОСС 7829 | 7847 599370 | 2595 | 2613 |Екзон 18 | ТТТТААТТСААТСССАСОС 7830 | 7848 599371 | 2596 | 2614 |Екзон 18 | АТТТТААТТСААТСССАСОа 7831 | 7849 599372 | 2597 | 2615 |Екзон 18 | ТатТ"ТТААТТСААТСССАС 7832 | 7850 599373 | 2598 | 2616 |Екзон 18 | СТатТтТТААТТСААТСССА 7833 | 7851 599374 | 2599 | 2617 |Екзон 18 | ОСТаТТТТААТТСААТССС 7834 | 7852 599375 | 2600 | 2618 |Екзон 18 | АаСТаТТТТААТТСААТСС 7835 | 7853 599376 | 2601 | 2619 |Екзон 18 | САаСТатТТТААТТСААТС 7836 | 7854 599377 | 2602 | 2620 |Екзон 18 | АЯСАОСТОаТТТТААТТСААТ 7837 | 7855 599378 | 2603 | 2621 |Екзон 18 | СОСАОСТаттТТААТТСАА 7838 | 7856 599511 | 2552| 2571 | Екзон 18 | АТАСААДДАСССААДАТСОСТСА 7787 | 7806 599389 | 2553 | 2572 | Екзон 18 | ТАТАФААДААСССАААТССТС 7788 | 7807 599390 | 2554 | 2573 | Екзон 18 | ТТАТАФААААСССАААТСОСТ 7789 | 7808 599391 | 2555| 2574 |Екзон 18 | СТТАТАБАДААСССАААТСС 7790 | 7809 599392 | 2556 | 2575 |Екзон 18 | ССТТАТАБААААСССАААТС 7791 | 7810 599393 | 2557 | 2576 |Екзон 18 | СССТТАТАСААДААСССАААТ 77921 7811 599394 | 2558 | 2577 | Екзон 18 | ССССТТАТАСААДААСССААДА 7793 | 7812 599395 | 2559 | 2578 |Екзон 18 | АССССТТАТАСААААСССАА 7794 | 7813 599396 | 2560 | 2579 |Екзон 18 | ААССССТТАТАСААДААСССА 7795| 7814 599397 | 2561 | 2580 |Екзон 18 | АААССССТТАТАСААААССС 7798 | 7815 599398 | 2562 | 2581 |Екзон 18 | ВАААССССТТАТАСААААСС 7797 | 7816 599399 | 2563 | 2582 |Екзон 18 | ОФАААССССТТАТАСААААС 7798 | 7817 599400 | 2564 | 2583 |Екзон 18 | АОЯАААССССТТАТАСААДАА 7799 | 7818 599401 | 2565 | 2584 |Екзон 18| САССАААССССТТАТАСААА!| 30 | 7800 | 7819 599402 | 2566 | 2585 |Екзон 18| ОСАССАААССССТТАТАСАА| 025 | 7801 | 7820 599403 | 2567 | 2586 |Екзон 18| АОСАССАААССССТТАТАСА| 17 | 7802| 7821 599404 | 2568 | 2587 |Екзон 18| САЯСАСОАААССССТТАТАСІ 20 | 7803| 7822 599405 | 2569 | 2588 |Екзон 18| ССАССАСОСАААССССТТАТА! 12 | 7804 | 7823 599406 | 2570 | 2589 |Екзон 18| ТССАССАСОСАААССССТТАТ! 51 | 7805| 7824 5О9407 | 2571 | 2590 |Екзон 18| ОТССАССАССАААССССТТА| 039 | 7806 | 7825 599408 | 2572 | 2591 |Екзон 18| ТАТССАССАССАААССССТТ! 053 | 7807 | 7826 599409 | 2573 | 2592 |Екзон 18| СТаТССАССАССАААССССТІ 065 | 7808| 7827 5БОЗА10 2574 | 2593 Екон тв ООТОТОСАССАССААЛОСО 7809 | 7828 5БУЯХ11 2575| 2594 Екон в| СОС ОТОСЛОСЛОСАААОС в 7810 | 7829 5БОЯ412 2576 | 2595 Екон ів| ССССТОТОСАОСАССАААС 78141 | 7830 5БОЯ413 2577 | 2596 Екон тв ДОСОСТОТОСЛОСАВСААА 7812 | 7831 5БОЯ414 2578 | 2597 Екон ів| ОССССТОТОСАОСАОСАА 7813 | 7832 5БОЯ415 2579 | 2598 Екон ів| ДООСОССТОТОСАВСАВСА 7814 | 7833 5БОЯ416 2580 | 2599 Екгонтв ЗАСОСОССТОТОСАССАСо 7815 | 7834 5БОЯ417 25ВІ| 2600 Екон в | ДС СОССОСТОТОСАОСАО 7816 | 7835 5БОЯ418 2582 | 2601 Екон 1в| ООСАСВСОССТОТОСАВСА 7817 | 7836 599419 | 2583 | 2602 |Екзон 18| ТСССАСОССССТОаТССАССА 054 | 7818| 7837 5О9420 | 2584 | 2603 |Екзон 18| АТСССАСОССССТатссСАсОсСІ 50 | 7819| 7838
Таблиця 145
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ЗЕО | ЗЕО І ЗЕО Ї ЗЕО І
ІЮ МО: МО: 1 с, ІО МО:!Ї МО: 2 ЗЕО (ВІЗ Ме 1 сайт| сайт | Область- Послідовність Зв інгібу- 2 сайт! сайт Мотив 10 б. . . її міШшеНнь вання о. . . . ініціацітермінаці ініціацітермінаці МО: й ї н ї 599421 | 2585 | 2604 |Екзон 18 | ААТСССАСОССССТОТСсСАСІ 048 | 7820 | 7839 5О9422 | 2586 | 2605 |Екзон 18| СААТСССАСОССССТаТоСА| 55 | 7821 | 7840 599423 | 2587 | 2606 |Екзон 18 | ТТААТСССАСОССССТатТосСІ 075 | 7822 | 7841 599424 | 2588 | 2607 |Екзон 18| ТТСААТСССАСОСССсСтТатТсС! 69 1 7823| 7842 599425 | 2589 | 2608 |Екзон 18! АТТСААТСССАСОССССТОаТ! 077 17824 | 7843 599426 | 2590 | 2609 |Екзон 18 | ААТТСААТСССАСОССССТО! 60 | 7825| 7844 599427 | 2591 | 2610 |Екзон 18 | ТААТТСААТСССАСОССССТ 7828 | 7845 599428 | 2592 | 2611 |Екзон 18 | ТТААТТСААТСССАСОСССС 7827 | 7846 599429 | 2593 | 2612 |Екзон 18| ТТТААТТСААТСССАСОССС | 68 | 7828| 7847 599430 | 2594 | 2613 |Екзон 18 | ТТТТААТТСААТСССАСОСС 7829 | 7848 599431 | 2595 | 2614 |Екзон 18 | ОІТТТТААТТСААТСССАСаС 7830 | 7849 599432 | 2596 | 2615 |Екзон 18 | ТатТ"ТТААТТСААТСССАСО 7831 | 7850 532917 | 2604 | 2623 СТСаСАССТатТТТААТТСА 7839 | 7858 |5-10-5 599379 | 2604 | 2622 |Екзон 18 | ТСаСАаСтТаттТТААТТСА 7839 | 7857 5О9380 | 2605 | 2623 атасдастатТТТААТТС 7840 | 7858 599381 | 2606 | 2624 |Екзон!8|ТаТСсОаСАСОСТОаТТТТААТТ | 069 | 7841 | 7859 599382 | 2607 | 2625 |Екзон 18 | ТТЕТСОСАССТаттТТААТ 7842| 7860 599383 | 2608 | 2626 ататсасСАасСтТатТТтТАА 7843 | 7861 599384 | 2609 | 2627 |Екзон 18 | ТатТТатТоОсСАастТаттТтТА 7844 | 7862
БОеЗ85 | 2610 | 2628 повтор. ТТОстТотТСесАСОСТОТТТТ ово |ндо|ндо | 595 736, 5БОЯЗ86 2611 | 2629 повтор. ТТТОттОотСосАОСТСТТТ ов ондо|ндо | 595737) 5БОеЗ87 | 2612 | 2630 Еквон ТВ ТТТТОТТОоТСОСАССТОТТ ов4оондо|ндо | 595 438
БОеЗ88 | 2613 | 2631 повтор. ТТТТТОтТОотТСОСАССТСТ ово |ндо|ндо | 595739)
Таблиця 146
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ЗЕО І | ЗЕО І Ї 5ЕОІЮ
І8І5 Ме МО: 1 бо в мо: Область- Послідовність со інгібу-І МО: 2 МО:2 Мотив ЗЕОІЮ 7 сайт . -| мішень д вання сайт сайт МО: піди | Термінації пило : не ініціації ініціації |термінації
Беегі3 | 2553 00 25ТО конів ДОТОААСОСАВАТ о 7788 | 7805 /3-10-5 5БОЯ?214 2554 | 25 Екон МОССАКА! | 7789 | 7вов |3-10-5
БОЯ2І5 о5ББО| 2572 Екон ДО ЛОССА 7790. | 7во7 |3-10-5
БОЯ?2І6 2556 | 2573 Еквонив| р МООСА в 7791. | 7вов |3-10-5
БОЯ217 25БУ | 2574 конів А АОААААСОС 7792 | тво |3-10-5
БОЯ2І8 2558 | 2575 Еквонтв ОО о 7793. | 7810 3105 790 5БОЯ219 255 | 2576 Екон Мо в 7794.| 7811 305791
БОЯ?2?О 2560 | 2577 конів | ССС ТАСААААЇ о 7795.| 7812 3105 740 5БУЯ?221 25 2578 Екон ОА 7796 | 7ві3 |3-10-5
Таблиця 146
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ІБІВ Мо то: т б сан Область- Послідовність п інгібу- то: з то: з Мотив ГЕО Іо о, її термінації Ме Шо о, її тар, її Що знезівхоко |вентв| МАЄ з те тв фетов| те. ем, сю хто венв АМСОЄТАТН 5 | те те (вт та. зенев, вев оо веее омот во | ти ле (ето тв ев, век ою венте ДОААОСЄСТ о | те те (хто тв. зов зе | св |соонтя ОЯМОоЄ о тою тег (ет тв ее, тво вен САНОЯАА 5 | те тех (хто т. звіт оно нентів т тт лев фетов| тв. ет оте | зв звонок олив | то (ето т зві вю сн фено з то то» |етов| тв.
Таблиця 146
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ІБІВ Мо то: т б сан Область- Послідовність п інгібу- то: з то: з Мотив ГЕО Іо ніц її термінації Мт» МАЯ ніціа її терміна її Що
ОО 11111С111111всос11 11 зни оке| оз |воентв ТАКТ о то ли |ело5 т нт тв | сів вентв|р то вв тою ле ето) тт зни ве | сви вентв|АИАААСОСНКХ о тт тов |575| вве знит св | сво вето о те тов |5т5| ви зни тв | свт вентв|роИЛСКАКН о те 0 тп |575 нив св | сво венв| МА о тою тив |втв| в
Таблиця 146
Інгібування мРНК СЕВ МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2
ЗЕОЮ ЗЕО І Ї 5ЕО ІЮ у ВЕС МО: с. ! ! (вів Ме 0 МО: сайт / Область- Послідовність 76 інгібуу МО: 2 МО:2 | Мотив ЗЕ саит . -| МІШЕНЬ вання саит саит МО: и | Термінації пило : не
ІнІіЦІіації Ініцшіації Ітермінації
Екзон 18 | ТТОТТаТСасАсСтТ
Екзон 18 | ТтТТОТТатсасАсас
Екзон 18 | ТТТТаттатсасСАа
Екзон 18 | ТТТТТОТТатТСасА
БОдгОВ | 2607. | 2624 конів АКТІ ва | 7842 | 7859
БОЗ?ОЄ | 2608 2625 Екон ТОК ООСАВСТОТТІ ва | 7843 | 7860
БОУ2ОЇ | 2609... 2626 конів ЯГА СОС ва 7844 | 7881
БОдгОгВ | 2610 2627 Еквонтв| ТТ ОСА вв | 7845 | 7862
Екзон 18 | ТТОТТаТСасАсСтТ
Екзон 18 | ТТТОТТатсасАсС
Екзон 18 | ТТТТаттатсасСАа
Екзон 18 | ТТТТТОТТатТСасА
Таблиця 147
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2
ЗЕОІЮ
ЗЕОІЮ МО: ЗЕ ЗО |МОї2 БО їй " -.. | Область- й й Зо МО: 2 й
ІБІ5 Мо 1 сайт МО: 1 сайт | 7. Послідовність не - сайт ІО ш . - | мішень інгібування саит . . ініціації термінації 2: | термінаці МО: ініціації ї
ТаатсСАСАТТОС
ССТОатТСАСАТТ
САССТОСТСАСА
ТАСАССТОСТСА
ССТАСАССТОСТ
ССТТССОАСТСА
588566 2189 2208 конів ОСТ вв 6977 6996
СсТоСТТоСОАстТ
АССТОСТТОСОА
АСАССТОСТТОС
588568 2195 2214 конів | оООЄ 6983 7002
ОТАСАССТОСТТ
588569 2197 2216 вони ОСА 6985 7004 тттассасттст 588574 2453 2472 сстттте 7688 7707 588575 2455 2474 |Екзон!8 |СсСТТТТОССсОСстт 7690 7709
Таблиця 147
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2 нен ДОР Вт рення Фени н
ІБІ5 Мо 1 сайт МО: 1 сайт мішень Послідовність інгібування | сайт сайт ІО ініціації термінації ініціації термінац МО: 11111111 ствосттт її 171 зве се | зт івент МММОСЄМІ 5 ве | лов | хо) ее. се | т нет АМОМАЄССЇ 5 | те | ток | кі зееті/ се | зт |нент ПДИСМААЄЇ сю | те | тюв | хе) ето се | вт івент ДАМ тю | те | те | нт зве сво | т івент Арі тю | те | тм |в) зве | стек хе |вент ЛОУМАСОЄТ волю | лив | ее, зви сне | си фнент САСООМАКОЯЇ 5 лою | те | хв)
Таблиця 147
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2 нг нн В НЕ
ІБІ5 Мо 1 сайт МО: 1 сайт мішень Послідовність інгібування | сайт сайт ІО ініціації термінації ініціації термінац МО: 71111111 фслААСсоС 111777 ||! Ї1 звю| сосен УС 01 тв тен) зеи| себто фен СОС влив | тов | ет
Таблиця 147
Інгібування мРНК СЕВ 5-10-5 МОЕ гепмерами, спрямованими на ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 2
ЗЕО І
ЗЕОІ0 МО: |8БОЮ об о ЗО |МО:2 /8БО їй " я ласть- й й о МО: 2 й
ІБІ5 Мо 1 сайт МО: 1 сайт | 7. Послідовність не - сайт ІО
Бір діиє . - | МІШЕеНЬ інгібування саит . . ініціації термінації ініціації термінац МО:
И
11111111 1ААТТСААТЛС/ її ЇЇ ї1 тсасСсдастаттт стсасдастатт татсасСдастат ттатсасдаста сттатсасСАдаст таттатсасСАдОас
Екзон 18/ | ГаТтТатТСаСАС
Екзон 18/ | ГТТаИТТатСсасСА
Екзон 18/ | ТТТТаЯТТаТСОаС
Екзон 18/ | ТТТТТаТТаТтСОС
Приклад 122: Дозозалежне антисмислове інгібування людського СЕВ у клітинах Нерса2 5-10-
МОЕ гепмерами
Гепмери з досліджень, описаних вище, які демонструють значне іп міїго інгібування мРНК 5 СЕВ, були обрані і випробувані в різних дозах в клітинах Нерс2. Клітиниз щільністю 20000 клітин на лунку були трансфецирували з використанням електропорації з концентраціями антисмислового олігонуклеотиду, рівними 0,313 мкМ, 0,625 мкМ, 1,25 мкМ, 2,50 мкМ, 5,00 мкм або 10,00 мкМ, як зазначено в наведеній нижче таблиці. Після періоду обробки і протягом 16 годин, РНК виділяли з клітин і рівні МРНК СЕВ вимірювали методом кількісної ПЛР у реальному часі. Набір людських праймерів КТ53459 був використаний для вимірювання рівнів мРНК. Рівні
МРНК СЕВ були скоректовані в відповідності з змістом сумарної РНК, виміряних за допомогою
ВІВОСВЕЕМУ. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо необроблених контрольних клітин.
Вказана також полумаксимальная інгібуюча концентрація (ІСво) кожного олігонуклеотиду.
Обробка антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні МРНК СЕВ у клітинах дозозалежним чином.
Таблиця 148
ІЗІЗ Мо 0,313 мкМ | 0,625 мкМ | 1,25 мкМ | 2,50 мкМ | 5,00 мкМ | 10,00 мкМ | ІСво (мкМ) 532614 532635 | 12 | 0 | з | 28 | 0 | 0 | мо / 532692 | 26 | 0 | южю 12 | 52 | 55 | 74 | 37 532770 532775 | 8 | 0 | 26 | 35 | 47 | 59 | 62 532800 | 0 | 5 | 30 | 65 | 50 | 75 | з 532809. | 12 | 30 | 28 | 40 | 46 | 66 | 46 532810 | 28 | 44 | 32 | 69 | 84 | 95 | т2г 532811 | 66 | 83 | 90 | 94 | 97 | 99 | «03 532917, | 64 | 85 | 88 | 96 | 97 | 99 | «03 532952. | 50 | 53 | 68 | 80 | 91 | 94 | 04
Приклад 123: Дозозалежне антисмислове інгібування людського СЕВ у клітинах Нерсг2
Гепмери з досліджень, описаних вище, які демонструють значне іп міго інгібування мРНК
СЕВ, були обрані і випробувані в різних дозах в клітинах Нерб2. Антисмислові олігонуклеотиди були протестовані в серії експериментів з аналогічними умовами культивування. Результати для кожного експерименту представлені в окремих таблицях, показаних нижче. Клітини були висіяні з щільністю 20000 клітин на лунку і трансфековані з використанням електропорації з концентраціями антисмислового олігонуклеотиду, рівними 0,08 мкМ, 0,25 мкМ, 0,74 мкМ, 2,22
МКМ, 6,67 мкМ і 20,00 мкМ, як зазначено в наведеній нижче таблиці. Після періоду обробки і протягом 16 годин, РНК виділяли з клітин і рівні МРНК СЕВ вимірювали методом кількісної ПЛР у реальному часі. Набір людських праймерів КТ53459 був використаний для вимірювання рівнів
МРНК. Рівні мРНК СЕВ були скоректовані у відповідності зі змістом сумарної РНК, виміряних за допомогою КІВОСКЕЕМУ. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо необроблених контрольних клітин.
Вказана також полумаксимальная інгібуюча концентрація (ІСво) кожного олігонуклеотиду.
Обробка антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні МРНК СЕВ у клітинах дозозалежним чином.
Таблиця 149 532811 | 19 | 5З- | 81 | 87 | 96 | 97 | 02 588834 | 7 | 42 | 64 | 92 | 98 | 98 | 05 / 588835 | 11 | 30 | 66 | 89 | 97 | 97 | 05 / 588837 | 6 | 39 | 67 | 89 | 96 | 97 | 05 / 588838 |. 0 | 27 | 41 | 81 | 87 | 97 | 0 588842 | 17 | 5 | 68 | 86 | 93 | 95 | 03 / 588843 | 21 | 38 | 72 | 90 | 95 | 96 | 04 / 588870 | 9 | 31 | 56 | 88 | 95 | 97 | 06 / (588872 | 18 | 28 | 59 | 84 | 92 | 97 | 06
Таблиця 150
БВ | 31 | 70 | 89 | 9 | 97 | 97 | ом 588844 | 31 | 60 | 77 | 9 | 95 | 96 | ом 588846 | 32 | 52 | 78 | 89 | 95 | 97 | 02 588848 | 20 | 40 | 73 | 9 | 96 | 98 | оз / 588854 | 17 | 55 | 5 | 84 | 94 | 96 | 04 588855 | 10 | 32 | 56 | 82 | 93 | 96 | 06 / 588856 | 13 | 46 | 75 | 90 | 96 | 97 | 03 / 588857 | 11 | 52 | 73 | 94 | 96 | 97 | 03 / (588858 | 19 | 48 | 75 | 94 | 97 | 98 | оз
Таблиця 151
БЗ2ВІ1 | 42 | 66 | 88 | 96 | 97 | 98 | ом 588859 18 | 46 | 66 | 90 | 96 | 97 | 04 588860 | 55 | 80 | 94 | 97 | 97 | 97 | «0 588861 | 24 | 61 | 86 | 93 | 96 | 97 | 02 588862 25 | 64 | 85 | 94 | 96 | 98 | 01 588863 | 50 | 73 | 89 | 96 | 96 | 98 | «01 588864 52 | 80 | 92 | 96 | 98 | 98 | «01 588865 | 46 | 72 | 91 | 96 | 96 | 99 | «01 (588866 | 47 | 76 | 88 | 96 | 97 | 98 | «0
Таблиця 151 588867 | 43 | 69 | 83 | 92 | 96 | 99 | 01
Таблиця 152 5280 0 | 714 | 38 | 72 | 89 | 96 | 12
БВ | 18 | 5 | 79 | 93 | 96 | 97 | оз / 532952 | 19 | 34 | 73 | 87 | 94 | 96 | 04 588534 | 17 | 13 | 44 | 7 | 9 | 97 | 09 / 588544 | 12 | 43 | 69 | 86 | 89 | 93 | 04 588545 | 17 | 55 | 67 | 86 | 9 | 93 | 03 / 588546 | 10 | 32 | 67 | 85 | 9 | 93 | 06 / 58852 | 27 | 5 | 76 | 90 | 9 | 97 | 02 588553 | 32 | 68 | 87 | 93 | 95 | 97 | 01 588560 | 16 | 5 | 76 | 90 | 94 | 96 | 03 / (588561 | 18 | 45 | 68 | 85 | 9 | 96 | 04
Таблиця 153
БВ 22 | 60 | 82 | 94 | 97 | 98 | 02 588536 | 2 | 38 | 65 | 90 | 96 | 97 | 06 / 588547 | 19 | 35 | 61 | 86 | 93 | 97 | 05 / 588548 | 19 | 36 | 75 | 88 | 95 | 96 | 04 / 588554 | 0 | 76 | 92 | 95 | 97 | 97 | «0 588555 | 31 | 61 | 89 | 96 | 97 | 98 | ом 588563 | 25 | 48 | 72 | 86 | 94 | 96 | 03 / (588564 | 15 | 33 | 63 | 89 | 9 | 97 | 05 /
Таблиця 154 5281 | 39 | 68 | 86 | 96 | 98 | 98 | 01 588538 | 0 | 40 | 82 | 94 | 97 | 98 | 03 / 588539, 34 | 65 | 88 | 95 | 98 | 98 | 01 588540 | 30 | 5 | 81 | 9 | 97 | 98 | 02 588549, | 31 | 5 | 82 | 95 | 96 | 98 | 01 588550 34 | 65 | 88 | 96 | 98 | 98 | 01 588551 | 47 | 66 | 87 | 96 | 98 | 99 | «01 588557 | 40 | 84 | 95 | 98 | 98 | 98 | «01 588558 | 45 | 73 | 93 | 97 | 98 | 99 | «01 588559 | 51 | 69 | 83 | 96 | 98 | 99 | «01 (588565 | 19 | 56 | 81 | 92 | 96 | 98 | 02
Приклад 124: Дозозалежне антисмислове інгібування людського СЕВ у клітинах Нерс2
Гепмери з досліджень, описаних вище, які демонструють значне іп міго інгібування мРНК
СЕВ, були обрані і випробувані в різних дозах в клітинах Нерб2. Антисмислові олігонуклеотиди були протестовані в серії експериментів з аналогічними умовами культивування. Результати для кожного експерименту представлені в окремих таблицях, показаних нижче. Клітини були висіяні з щільністю 20000 клітин на лунку і трансфековані з використанням електропорації з концентраціями антисмислового олігонуклеотиду, івними 0,06 мкМ, 0,25 мкМ, 1,00мкМ та4,00
МКМ, як зазначено в наведеній нижче таблиці. Після періоду обробки і протягом 16 годин, РНК виділяли з клітин і рівні МРНК СЕВ вимірювали методом кількісної ПЛР у реальному часі. Набір людських праймерів КТ53459 був використаний для вимірювання рівнів мРНК. Рівні мРНК СЕВ були скоректовані в відповідності з змістом сумарної РНК, виміряних за допомогою
ВІВОСВЕЕМУ. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо необроблених контрольних клітин.
Вказана також полумаксимальная інгібуюча концентрація (ІСво) кожного олігонуклеотиду.
Обробка антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні МРНК СЕВ у клітинах дозозалежним чином.
Таблиця 155 іі Ме | боОбмкм | 0б25мкм | їобмкм | 400мкМм | ІСво(мкМ) 50 | 16 | 28 2 (| 69 | 9 | 05 599004. | 14 2 | з3з2 | 74 | 9 | 04 5990205. | (0 .Ю.|Ї 2 ЮБжш2з | 56 | 92 | 07 5ОЗ3 | 28 | 46 | 80 | .ЮБх92 | 02 599077. | (8 | 20 | 5 | 80 | 08 5ОВО | юю |. рю з33 | 48 | 76 | 09 59086 | 77771 17771122 | 753 | 83 | 08 58 | 13 | 37 | 69 2 Щ | 82 | 05 504 | 19 2 ЮЩ | 29 | 75 | 89 | 04 599188. | (0 | юЮюжщф(21 | 62 | 85 | 08
Таблиця 156 іі Ме | боОбмкм | б25мкм | їобмкм | 400мкМм | ІСво(мкМ) 532917. | (Йо | юЮющ42 | 8 | 9 | 04 598 | щ--.,юЙЗ3 | 25 | 64 | 89 | 06 599202 | --. кКО.Г/: | ..ю44 6ЮЩ| 72 | 87 | 05 599316 | 7 | .з7 | 66 | 88 | 05 599317. | (8 1 | 5 | 83 | 10 5993201. | (8 | 33 | 7 | 85 | 05 599302. | 24 2 юЩщ | 38 | 66 | 87 | 04 5993207. | 22 2 щЩ | 32 | 66 | 89 | 04 5993208. | (0 | юЮющЬ 3 | 5 | 88 | 07 599374 | 23 2 щЩ | 42 | 80 | 9 | 03 599378. | (21 | .ЮИЙйЙб5 | 80 | 9 | 02
Таблиця 157 іі Ме | боОбмкм | 0б25мкм | їобмкм | 400мкМм | ІСво(мкМ) 588860 | 17 | 60 | 76 | 9 | 03 601282 | 48 | 68 | 8 | 88 | о 601269, | 18 | 5 | 80 2 | 9 | 02 601275 | 14 | 39 | 78 | 9 | 04 601383 | 53 | 81 2 щ | 86 | 94 | «006 601385 | 52 2 щЩ | 74 | 89 | 91 | «006 601332 | 4 | 69 | 86 | 9 | о 601345 | 936 2 Щщ | 75 | 86 | 95 | 0 601346 | 31 | 69 | 82 | 9 | о
Таблиця 158 іі Ме | боОбмкм | 0б25мкм | їобмкм | 400мкМм | ІСво(мкМ) 532917 | 31 | 66 | 86 | 9 | о 599208. | -,о4 | 50 | (7 | 89 | 03 599267. | 4 | 48 | 80 | 88 | 02 59941 | 24 | 57 | 80 2 5 Щ | 87 | 02 5994 | 13 | 55 | 86 | 94 | 03 599552. | 30 | 69 | 93 | 95 | 0 599553. | 34 | 7 | 93 | 9 | 0 599554 | 30 | 74 | 93 | 9 | о 599568. | (40 | 77 | 90 | 97 | о 599570 | 61 2 | щев82 2 юЮЩщ | 93 | 96 | «006 599581 | юЙ27 | 60 | що | 94 | 02 о 5Я9ЯБЯї | 49 | 74 2 щЩ | 93 | 96 | «006 о 59ЯБ92 | 46 | 76 2 ЮЩ | 90 | 9 | о
Таблиця 159 іі Ме | боОбмкм | 0б25мкм | їобмкм | 400мкМм | ІСво(мкМ) 588860 | 11777751 | 777780 | 2. .ЮюЮюЙ92 | 03 599547. | 23 2 щЩщ | 60 | 82 | 9 | 02 599578. | -., о) | 49 | 82 2 (| 89 | 02 о 59ЯБЯО | 24 | 62 2 | 80 2 5 Щ| 9 | 02
Таблиця 159 віз Ме | боОбмкм | 0б25мкм | їобмкм | 400мкМм | ІСво(мкМ) 601210 | 34 | 64 | 86 | 92 | о 601212 | 46 | 68 | 88 | 9 | о 601213. | 5 | (802 | Ююжюк"90 | 92 | «006 601216, | 452 ЮЩ| 57 | 76 | 89 | о 601264 | 29 2 Щщ | 58 | 86 | 9 | 02 601279. | 44 | 80 | 92 | 9 | о
Іоовбот2ві | 51 | 80 2 | 2 щ91 2 | 94 | «006
Приклад 125: Дозозалежне антисмислове інгібування людського СЕВ у клітинах Нерсг2
Гепмери з досліджень, описаних вище, які демонструють значне іп міїго інгібування мРНК
СЕВ, були обрані і випробувані в різних дозах в клітинах Нерс2. Додатково був сконструйований дезокси, МОЄ та (5)-СЕЇ олігонуклеотид, І5І5 594430, що має таку ж послідовність (СТССТТССОАСТСАСС, ЗЕБЕО ІО МО: 549) і область-мішень (цільовий сайт ініціації 2195 в 5БЕО ІО МО: 1 і цільової сайт ініціації 6983 в ЗЕО ІО МО: 2), як І5БІ5 588870, інший дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотид. І5ІЗ 594430 являє собою 3-10-3 (5)-СЕЇ гепмер.
Клітини були висіяні з щільністю 20000 клітин на лунку і трансфековані з використанням електропорації з концентраціями антисмислового олігонуклеотиду, рівними 0,01 мкМ, 0,04 мкМ, 0,12 мкМ, 0,37 мкМ, 1,11 мкМ, 3,33 мкМ і 10,00 мкМ, як зазначено в наведеній нижче таблиці.
Після періоду обробки і протягом 16 годин, РНК виділяли з клітин і рівні МРНК СЕВ вимірювали методом кількісної ПЛР у реальному часі. Набір людських праймерів КТ53459 був використаний для вимірювання рівнів МРНК. Рівні мРНК СЕВ були скоректовані в відповідності з змістом сумарної РНК, виміряних за допомогою ВІВОСРЕЕМУ. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо необроблених контрольних клітин.
Вказана також полумаксимальная інгібуюча концентрація (ІСво) кожного олігонуклеотиду.
Обробка антисмисловими олігонуклеотидами знижує рівні МРНК СЕВ у клітинах дозозалежним чином.
Таблиця 160 о 588536| 0 | 0 | 0 | 5 | 45 | 7 | 9 | 14 588548 | 0 | 0 | 0 | 719 | 52 | 78 | 90 | тег 588553 | 0 | 0 | 9 | 42 | 76 | 85 | 9 | 06 о БВ8555 | 0 | 52 | 23 | 5 | 78 | 83 | 95 | 03 588847 | 4 | 1 | 18 | 45 | 67 | 84 | 9 | 05 588848 | 0 | з | 13 | 38 | 67 | 83 | 95 | 06 (54430 | 0 | 0 | 10 | 34 | 50 | 55 | 84 | 14
Приклад 126: Переносимість МОЕ гепмерів, спрямованих на людський СЕВ, у мишей СО1
Миші СО1Ф (Чарльз Рівер, штат Массачусетс) являють собою багатоцільову мишачу модель, часто використовувану для випробувань безпеки і ефективності. Мишей лікували антисмисловими олігонуклеотидами І5І5, обраними з описаних вище досліджень, і оцінювали зміни рівнів різних хімічних маркерів у плазмі.
Випробування 1 (з 5-10-5 МОЕ гепмерами)
Групам семитижневих мишей СО1 один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг олігонуклеотиду ІЗІ5. Одній групі самців мишей СОЇ один раз на тиждень
Зо протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Одній групі мишей один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг контрольного олігонуклеотиду ІБІ5 141923 (ССТТСССТОААОССТТССТСС, у цьому документі позначений як 5ЕО ІЮО МО: 809, 5-10-5 МОЕ гепмер, не має відомої мишачої мішені). Мишей присипляли через 48 годин після введення останньої дози і збирали органи і плазму для подальших аналізів.
Хімічні маркери в плазмі
Для оцінки впливу олігонуклеотиду ІЗІЗ5 на функцію печінки і нирок вимірювали рівні трансаміназ і АМК у плазмі з використанням автоматичного клінічного аналізатора хімічного складу (Ніїаспі Оїутриз АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати представлені нижче в таблиці. Олігонуклеотиду ІБІ5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції печінки або нирок за межами очікуваного діапазону антисмислових олігонуклеотидів, не використовували для подальших досліджень.
Таблиця 161
Хімічні маркери в плазмі мишей СО1 на 40 день 11111111 АсСТоод/л// | АЗТ(од/лл | АМКу(мг/дл):
Маса
Перед приспанням мишей на 40 день виміряли також масу тіла мишей. Після усипляння мишей виміряли також масу органів, печінки, нирок та селезінки. Результати представлені нижче в таблиці. Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали зміни маси за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 162
Маса (г) мишей СО1 на 40 день 11111117 тло | Нирки | Печінка, | Селезінка:Й
РВ5 77777777 Ї717171717171447711717171717117108 111120 | о
І8ІЗ532770...ююЮюЮюЮюЮМЮЦ | 42 1... 06 | 23 | 02 віз 53280077 Ї777717114377717771711106 11128. | 03
І8ІЗ 532809... | 77777742 1777711106 | 22 | 0
ВІЗ 53281077 4377717771711106 11123 | 2 щЩ 02 "
ВІЗ 532952... | юю ю44 17777108 | 25 6ЮЖ56Б| 03
ВІЗ Я419239....Й.ЙюЙюЙЄСДУ(|.Ї....Ю..1741717171171171171171061 ЇЇ 20
Випробування 2 (з 5-10-5 МОЕ гепмерами)
Групам шости-восьмитижневих самців мишей СО1 один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг олігонуклеотиду ІЗІ5. Двом групам самців мишей СОТ один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Одній групі мишей один раз на тиждень протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг контрольного олігонуклеотиду
ІБІЗ 141923. Мишей присипляли через 48 годин після введення останньої дози і збирали органи і плазму для подальших аналізів.
Хімічні маркери в плазмі
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІЗ5 на функцію печінки і нирок вимірювали рівні трансаміназ, альбуміну та АМК у плазмі, використовували автоматизований клінічний аналізатор хімічного складу (Ніаспі Сіутрих АШ4Обе, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати представлені нижче в таблиці. Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції печінки або нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували для подальших досліджень.
Таблиця 163
Хімічні маркери в плазмі мишей СО1 на 45 день 11111111 | АТ (од/лу | АЗТ(од/л) |Альбумін(г/дл)| АМК (мг/дл)
ВІЗ 588536...777771Ї77711114877777177111116011 111129 | 3
ВІЗ 5885527 Ї777771761117111711111198 1111140 | 30 2 "
ВІЗ 588563...7777771Ї777171175011717717 17711199 | 44 | 28 Ф
Маса
Масу тіла мишей виміряли на 42 день. Після усипляння мишей на 45 день виміряли також масу органів, печінки, нирок та селезінки. Результати представлені нижче в таблиці.
Олігонуклеотиди І5ЗІ5, які викликали зміни маси за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 164
Маса (г) мишей СО1 на 40 день 11111117 тло | Нирки | Печінка, | Селезінка:Й
І8ВІЗ141923....юЮюЮюЮюЮюЮюЮЗ Ї 43 17777106 | 24 | 02
ВІЗ 53281 7 Ї7777711411111177111110611 1111119. | о
ВІЗ 532952... |... 43 17777106 | 24 | 02
ВІЗ 588539..Й.юЮюЮюЮююююЮюЮюЮ | ..77/л447177111106 11127 | 02г
ВІЗ 588545 .-:/ | 44 | 08 | 33 | 03
ВІЗ 588547,...-.:УКЮЙЙ | -(Ущ-ї2 1/7 / 06 | 33 | 03
ВІЗ 588548...-.-.:КК.::. ГЦ | 43 7 177777 06 | 28. | 2 щЩ 022 щ (
ВІЗ 588549,..С:КМ3/... | . юи42 17777 06 | щЩщ28 6 Щ | 03
ВІЗ БВ! 7 Ї77777173977177711106 | 22 0 | 02 2 -«
ВІЗ БВВ8Б52 ЇЇ 411111111111061 11122 | 2 щЩщ(02
Таблиця 164
Маса (г) мишей СО1 на 40 день 11111111 тіло | Нирки | Печінка, | Селезінка
ВІЗ 588559..Й.С:(:ДЙ Й... / | 77/43 17777106 11127 | 03
Випробування З (з 5-10-5 МОЕ гепмерами)
Групам шости-восьмитижневих самців мишей СО1 один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг олігонуклеотиду ІБІ5. Двом групам самців мишей СОМ один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Мишей присипляли через 48 годин після введення останньої дози і збирали органи і плазму для подальших аналізів.
Хімічні маркери в плазмі
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію печінки і нирок вимірювали рівні трансаміназ, альбуміну та АМК у плазмі, використовували автоматизований клінічний аналізатор хімічного складу (Нііаспі Оіутрих АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати представлені нижче в таблиці. Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції печінки або нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували для подальших досліджень.
Таблиця 165
Хімічні маркери в плазмі мишей СО1 на 42 день 11111111 АсТоод/л)у | АБТ(од/л) | Альбумін(г/дл)| АМК у(мг/дл)
Маса
Масу тіла мишей виміряли на 42 день. Після усипляння мишей на 42 день виміряли також масу органів, печінки, нирок та селезінки. Результати представлені нижче в таблиці.
Олігонуклеотиди І5ЗІ5, які викликали зміни маси за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 166
Маса (г) мишей СО1 на 40 день 11111117 тіло | Нирки | Печінка, | Селезінка:Й
І8ВІЗ588544...-.-.:УММ.иЕи. | ..ЮюЮюжл44 об 1119... | ЦО!
ВІЗ 588546...-.-.:КК5:/ ХНОЇ 437 17777106 | 240 | 02
Таблиця 166
Маса (г) мишей СО1 на 40 день 11111111 тіло | Нирки | Печінка, | Селезінка:
ВІЗ 588556.777777771Ї711113911171111106 11127 | 02г
ВІЗ 588557....ЮЮЮЮ.:К | ..ЮюИрПРрМ 177708 | 33 | 03
ВІЗ 58856071 Ї7771711381117171111106 1132 | 03
ВІЗ 58856277 411111711111106 1111128. | 2 щЩщ(02г
ВІЗ 588564... | 7 р 40177771 06 | 28 6 ЮЩ | 03
ВІЗ 588565... ЇЇ 7777397 177171106 | 22 0 | 02 6
Випробування 4 (з (5)-СЕЇ гепмерами і дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇї олігонуклеотидами)
Групам десятитижневих самців мишей СО1 один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції 50 мг/кг олігонуклеотиду ІЗБІЗ5 з досліджень, описаних вище. Крім того, були сконструйовані два олігонуклеотиди, ІЗІ5 594431 і ІБІЗ 594432, сконструйовані як 3-10-3 (5)-СЕЇ гепмери, і вони також були випробувані в цьому дослідженні. ІБІЗ 594431(АССТССТТССОАСТСА, ЗЕО ІЮ МО: 550) спрямований на ту саму область, що і І5І5 588871, дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ гепмер (цільовий сайт ініціації 2197 в 5ЕО ІО МО: 1 ї цільової сайт ініціації 6985 в 5ЕБЕО ІЮ МО: 2). ІБІ5Б 594432 (ТОСТСАСАТТСССТТС, БО ІЮ МО: 542) спрямований на ту саме область, що і І5І5 588872, дезокси, МОЕ та (5)-СЕїЇ гепмер (цільовий сайт ініціації 154 в ЗЕО ІЮО МО: 1 і цільової сайт ініціації 1875 в ЗЕО ІЮО МО: 2).
Двом групам самців мишей СО1 один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Мишей присипляли через 48 годин після введення останньої дози і збирали органи і плазму для подальших аналізів.
Хімічні маркери в плазмі
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІЗ5 на функцію печінки і нирок вимірювали рівні трансаміназ, альбуміну, креатиніну та АМК в плазмі за допомогою автоматизованого клінічного аналізатора хімічного складу (Нііаспі Оїутриз АО4Обе, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати представлені нижче в таблиці. Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції печінки або нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували для подальших досліджень.
Таблиця 167
Хімічні маркери в плазмі мишей СО1 на 42 день шо ринв ПОШИ од./л г/дл мг/дл мг/дл
РВЗ 17777717 177 | 27 | 02 | 29
РВ5 77/11 -1111111111Ї1130 | 36 | 27 | 02 | 26
І8І5 588835 Дезокси МОЕта(5)-сЕй! 70 | 98 | 30 | 02 | 27
І8І5 594430 3-10-3(5)сЕЇ | 89 | 99 | 24 | 01 | 28
Таблиця 167
Хімічні маркери в плазмі мишей СО1 на 42 день . АБТ |Альбумін | Креатинін | АМК хм тод оду дв мидяу | (од.
Маса
На 39 день виміряли масу тіла мишей. Після усипляння мишей на 42 день виміряли також масу органів, печінки, нирок та селезінки. Результати представлені нижче в таблиці.
Олігонуклеотиди І5ЗІ5, які викликали зміни маси за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 168
Маса (г) мишей СО1 11110071 хімізм | Тіло | Нирки | Печінка |Селезінка
Р Ї 77777771 Ї11137 | 06 | 21 | о
РО Ї 77777171 45 | 07 | 25 | 02
І8І5 588834 |Дезокси, МО» та(5)сЕЇ | 40 | 06 | 32 | 02
І8І5 588837 |Дезокси, МОЕ та(5)-сЕЇ | 38 | 06 | 24 | 03
І8І5 588846 |Дезокси, МО» та(5)-сЕЇ | 39 | 06 | 23 | 02
І8І5 588857 |Дезокси, МОЕ та(5)-сЕЇ | 39 | 06 | 33 | 02
І8І5 588858 |Дезокси, МОЕ та(5)сЕЇ | 37 | 06 | 34 | 02
І8І5 588861 |Дезокси, МОЕ та(5)сЕЇ | 39 | 06 | 26 | 04
І8І5 588862 |Дезокси, МО» та(5)сЕЇ | 34 | 06 | 25 | 04
І8І5 588863 |Дезокси, МОЕ та(5)сЕЇ | 40 | 06 | 27 | 03 і8ІЗ 594430 | 310-3(53сЕ, | 39 | 06 | 22 | 02 віз 594431 | 310-3(55сЕ, | 36 | 06 | з2 | 02
Випробування 5 (з МОЄ гепмерами, (5)-СЕЇ гепмерами і дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами)
Групам восьми-дев'ятитижневих самців мишей СО1 один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції 50 мг/кг олігонуклеотиду ІЗІ5. Двом групам самців мишей СОТ один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Мишей присипляли через 48 годин після введення останньої дози і збирали органи і плазму для подальших аналізів.
Хімічні маркери в плазмі
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІЗ5 на функцію печінки і нирок вимірювали рівні трансаміназ, альбуміну, креатиніну та АМК в плазмі за допомогою автоматизованого клінічного аналізатора хімічного складу (Нііаспі Оїутриз АО4Обе, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати представлені нижче в таблиці. Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції печінки або нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували для подальших досліджень.
Таблиця 169
Хімічні маркери в плазмі мишей СО1 на 42 день
ПОНИНІ АНА са НЯ (од./л) (од./л) (г/дл) (мг/дл) (мг/дл)
РВ5 17777771 11111111 733 | 84 1 29 | 02 | 28
РВ5 77/11 132 | 65 | 25 | 01 1 27
І8ІЗ 532770 | 5105МОЕ | 69 | 700 | 29 | 01 | 28
І8І5 532809 | 5105 МОЕ | 69 | 7127 | 28 | 01 | 26
І8І5 588540 | 5105МОЕ | 66 | 710 | 28 | 01 | 26
І8ІЗ 588870 /Дезокси МОЕта(5)сЕї | 48 | 695 | 24 | 01 | 3
Маса
На 40 день виміряли масу тіла мишей. Після усипляння мишей на 42 день виміряли також масу органів, печінки, нирок та селезінки. Результати представлені нижче в таблиці.
Олігонуклеотиди ІБІ5, які викликали зміни маси за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 170
Маса (г) мишей СО1 11111171 Хімам | Тло | Нирки | Печінка | Селезінка
Р ЇЇ 77777771 111146 | 07 | 23 | 02
РО Ї 77777177 11144 | 07 | 23 | 02
І8ІЗ 532692 | 5105МОЕ - | 44 | 06 | 28 | 02
І8ІЗ 532770 | 5105МОЕ - | 43 | 06 | 22 | 02
І8ІЗ 532775 | 5105МОЕ | 43 | 06 | 28 | 02
І8І5 588842 |Дезоксиь, МОЕта(5)сЕЇ | 41 | 06 | 26 | 02
І8І5 588851 |Дезокси, МОЕ та(5)сЕЇ | 46 | 06 | 26 | 02
Таблиця 170
Маса (г) мишей СО1 00711111 Хімам, | Тло | Нирки | Печінка | Селезінка
І8І5 588870 |Дезокси, МОЕ та(5)сЕЇ | 43 | 06 | 22 | 02
И8І5 588872 |Дезокси, МО» та(5)сЕЇ | 39 | 06 | 32 | 03
Випробування 6 (з дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами)
Групам восьми-дев'ятитижневих самців мишей СО1 один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції 50 мг/кг дезокси, МОЕ та (5)-СЕїЇ олігонуклеотидів. Двом групам самців мишей СО1 один раз на тиждень протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Мишей присипляли через 48 годин після введення останньої дози і збирали органи і плазму для подальших аналізів.
Хімічні маркери в плазмі
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІЗ5 на функцію печінки і нирок вимірювали рівні трансаміназ, альбуміну, креатиніну, білірубіну та АМК в плазмі, використовуючи автоматичний клінічний аналізатор хімічного складу (Ніаспі Оіутрих АШ400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк).
Результати представлені нижче в таблиці. Олігонуклеотиди ІБ5І5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції печінки або нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували для подальших досліджень.
Таблиця 171
Хімічні маркери в плазмі мишей СО1 на 45 день ше 3 реки Гретоки КОТ ж КО екон віз 599553..ЙДЦГЦ/ | 43 | 86 | 29 | 01 | 02 | 28 віз 601209... | 68 | 104 | 29 | 01 | 02 | з0 віз 601216. | 90 2 юю 125 | 29 | 0 | 02 | 29
Маса
На 40 день виміряли масу тіла мишей. Після усипляння мишей на 45 день виміряли також масу органів, печінки, нирок та селезінки. Результати представлені нижче в таблиці.
Олігонуклеотиди І5ЗІ5, які викликали зміни маси за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 172
Маса (г) мишей СО1 11111110 Тіло | Нирки | Печінка. | Селезінка:Й
РВ5 77777771 Ї71717171717142111711717171711108 | 23 | 02 щ
ВІЗ 599552..:КХК.. | ...ЮюЮЙ?8 | 06 | 23 | 02
ВІЗ 599578... | ....Юю37 1... 06 | 2 щЩщф20 | 02 2щ віз 599581... Ї777171711л407717177117111061 711125 (| 022 щ віз 599590..ьк.:РС(КЬКИЙ....ЙЮЙм34 1777777 06 | 35 | 02 2щ « віз 599591,.4..: | -:(Хх«Б 38/77/0827 | 02
ВІЗ 6021277 | 7777771738777771717171711106 7 | 29 | 022 щ
ВІЗ 60216771 Ї777171711л421717711711106 | 27 | 02
Випробування 7 (з МОЕ гепмерами і дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами)
Групами восьми-дев'ятитижневих самців мишей СО1 один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг олігонуклеотидів ІБІ5. Одній групі самців мишей СОТ один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Мишей присипляли через 48 годин після введення останньої дози і збирали органи і плазму для подальших аналізів.
Хімічні маркери в плазмі
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІЗ5 на функцію печінки і нирок вимірювали рівні трансаміназ, альбуміну, креатиніну та АМК в плазмі за допомогою автоматизованого клінічного аналізатора хімічного складу (Нііаспі Оїутриз АО4Обе, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати представлені нижче в таблиці. Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції печінки або нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували для подальших досліджень.
Таблиця 173
Хімічні маркери в плазмі мишей СО1 на 45 день с. АБТ Альбумін | Креатинін АМК жи тод од | ду мод | оідю.
РВ5 ЇЇ 77777717 -111111111111 1120 | 102 | 27 | 02 | 26
І8І5 588843 |Дезокси МОЕта(5)сЕ:| 98 | 194 | 27 | 01 | 24
І8І5 599267 | 3105МОЕ | 96 | 132 | 26 | 02 | 27
Таблиця 173
Хімічні маркери в плазмі мишей СО1 на 45 день с. АБТ Альбумін | Креатинін АМК хм тод од | ду мод | хід.
І8І5 599378 | 595МОЕ | 77 | 99 | 27 | 01 | 23
Маса
На 44 день виміряли масу тіла мишей. На 49 день після усипляння мишей, виміряли також масу органів, печінки, нирок та селезінки. Результати представлені нижче в таблиці.
Олігонуклеотиди І5ЗІ5, які викликали зміни маси за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 174
Маса (г) мишей СО1 11111171 Хімам | Тіло | Нирки | Печінка | Селезінка
РОЗ ЇЇ 77777171717171717171717-1111111111111111139 | 06 | 19 | о
І8І5 588843 | Дезокси МОЕта(5)сЕ! | 41 | 06 | 24 | 02
І8І5 588851 | Дезокси МОЕта(5)сЕ! | 42 | 06 | 22 | 02
І8ІЗ 599024 | З104МОЕ | 4 | 06 | 40 | 02
І8ІЗ 599087 | 5-75МОЕ | 44 | 08 | 26 | 03 віз 5990939 | 5-75МОЕ | 39 | 06 | 23 | 02 віз 599202 | 585МОЕ | 43 | 06 | 26 | 02 віз 599203 | 585МОЕ - | 42 | 06 | 26 | 02 віз 599208 | 585МОЕ | 40 | 06 | 21 | 02
І8ІЗ 599267 | З105МОЕ | 42 | 08 | 25 | 03
І8ІЗ 599322 | 6-76МОЕ | 43 | 06 | 22 | 02
І8ІЗ 599374 | 595МОЕ | 37 | 06 | 22 | 02 віз 599441 | 686МОЕ - | 42 | 06 | 25 | 03
Випробування 8 (з МОЕ гепмерами, дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами та (5)-СЕЇ гепмерами)
Групам восьми-дев'ятитижневих самців мишей СО1 один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг МОЄ гепмерів або 50 мг/кг дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ олігонуклеотидів, або (5)-СЕЇ гепмерів. Одній групі самців мишей СОЇ один раз на тиждень протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Мишей присипляли через 48 годин після введення останньої дози і збирали органи і плазму для подальших аналізів.
Хімічні маркери в плазмі
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІЗ5 на функцію печінки і нирок вимірювали рівні трансаміназ, альбуміну, креатиніну та АМК в плазмі за допомогою автоматизованого клінічного аналізатора хімічного складу (Нііаспі Оїутриз АО4Обе, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати представлені нижче в таблиці.
Таблиця 175
Хімічні маркери в плазмі мишей СО1 на 43 день
Доза . . с. А5Т Альбумін | Креатинін АМК рен днк т
РВ5 ЇЇ 777-711 -111711737 | 57 | 25 | ЮюД008 | 26
ІЗІЗ 532770 | 5-10-5 МОЕ
ІЗІЗ 532800 | 5-10-5 МОЕ
ІЗІЗ 532809 | 5-10-5 МОЕ
ІзІ5 588540 | 5-40-5МОЕ | 7100 | 106 | 702 | 27 | 009 | 27
ІзІ5 588544 | 5-40-5МОЕ | 100 | 66 | 62 | 26 | оо | 24
ІЗІ5 588548 | 5-10-5 МОЕ
ІЗІ5 588550 | 5-10-5 МОЕ
ІзІ5 588553 | 5-40-5МОЕ | 7100 | 78 | 90 1 26 | 009 | 25
ІБІ5 588555 | 5-40-5МОЕ | 100 | 94 | 89 | 25 | 008 | 23 та (5)-сЕЇ
ІЗІ5 594430 | 3-10-3 (8)-сЕЇ
Маса
Масу тіла мишей вимірювали на 36 день. Після усипляння мишей, на 43 день вимірювали також масу органів, печінки, нирок та селезінки. Результати вимірювань маси органів виражені як співвідношення маси тіла і нормалізовані до співвідношення контрольної групи з РВ5.
Таблиця 176
Маса органів/маса тіла (МТ) мишей СО1 .. Доза . .
Хімізм Нирки/мтТ Печінка/мт | Селезінка/мТ (мг/кг/гиждень)
РО ЇЇ 771117 -1117117111111-11111111110 | 710 | 10
ІЗІ5 532770 5-10-5 МОЕ
ІЗІ5 532800 5-40-5МОЕ | 700 | 75 | 11 | 098 «(
ІЗІ5 532809 5-40-5МОЕ | 700 | 73 | 12 | 098
ІЗІ5 588540 5-10-5 МОЕ
ІЗІ5 588544 5-10-5 МОЕ
ІЗІ5 588548 5-10-5 МОЕ
ІБІ5 588550 5-10-5 МОЕ
ІЗІ5 588553 5-40-6МОЕ | 700 | 75 | 10 | 08 (
ІВІ5 588555 5-10-5 МОЕ
ІЗІ5 594430 3-10-3(5)сЕ: | 50 | 14 | 7 | 098
Аналіз цитокінів
Кров, зібрану в усіх групах мишей, направили в компанію Апіеспй Оіадповіійс5 для вимірювання рівнів різних цитокінів, таких як ІЛ-6, МОСС, МІР1ВД, ІР-10, МСРІ, МІР-1с і КАМТЕЗ5.
Результати представлені в Таблиці 54.
Таблиця 177
Рівні цитокінів (пг/мл) в плазмі мишей СО1 7111... | Хімзам | Ілб | мосС | МіРІВ | ІР-т0 | МОРІ | МІР-їа | ВАМТЕБ
РВ5 | /- 1 70 | 16 | 23 | 20 | 17 | 6 | 2
І8ІЗ 532770 | 5-10-5МОЕ | 101 | 18 | 146 | 116 | 101 | 24 | 6
І8ІЗ 532809 | 5-10-5МОЕ | 66 | 19 | 60 | 32 | 55 | 20 | 4
І8І5 588548 | 5-10-5МОЕ | 164 | 12 | 90 | 66 | 84 | ло | 4
І8І5 588553 | 5-10-5МОЕ | 62 | 14 | 183 | 60 | 103 | 9 | 4
І8І5 588555 | 5-10-5МОЕ | 70 | 19 | 172 | 171 | 178 | 716 | 9
Дезокси, МОЕ
Гематологічний аналіз
Кров, зібрану в усіх групах мишей, направили в компанію Апіесп Оіадпобіїс5 для вимірювання гематокриту (НСТ), а також різних кров'яних клітин, таких як білі кров'яні тільця, червоні кров'яні тільця і тромбоцити, а також загального змісту гемоглобіну (НБ). Результати представлені в Таблиці 55.
Таблиця 178
Гематологічні маркери в плазмі мишей СО1 .. її Червоні
Білі кров'яні п.
Хімізм НСТ(з6) | Но(г/дл) / тільця кров'яні Тромбоцити (103/мкл) тільця (103/мкл) 106/мкл
РВ5 7 Ї 7777717 - 111 146 | 715 | юЮющм(уУ | 9 | 960
І8І5 532770 | 5105МОЕ | 45 | 14 | 5 | 9 | 879
І8І5 532800 | 5105МОЕ | 45 | 14 | 5 | 9 | 690 /
І8І5 532809 | 5105МОЕ | 46 | 14 | 6 | 9 | тоб
І8І5 588540 | 5105МОЕ | 49 | 15 | 6 | 10 | 790
І8І5 588548 | 5105МОЕ | 46 | 14 | 6 | 9 | 883
ВІЗ 58855 | 5105МОЕ | 42 | 13 | 8 | 8 | 721
ВІЗ 588553 | 5105МОЕ | 45 | 714 | 6 | 9 | 79
ВІЗ 588555 | 5105МОЕ | 43 | 13 | 8 | 9 | 838 вевин ДН є | в 1 1» | юю віз 594430 | 3-10-3(5)сЕ | 45 | 714 | 8 | 9 | 993
Приклад 127: Переносимість антисмислових олігонуклеотидів, спрямованих на людський
СЕВ, у щурів Спрег-Доулі
Щури Спрег-Доулі являють собою багатоцільову модель, використовувану для оцінки безпеки та ефективності. Щурів лікували антисмисловими олігонуклеотидами І5І5 з досліджень, описаних вище в Прикладі, і оцінювали на зміни рівнів різних хімічних маркерів у крові.
Випробування 1 (з 5-10-5 МОЕ гепмерами)
Самців щурів Спрег-Доулі віком від семи до восьми тижнів витримували при 12-годинному циклі освітлення/темряви і забезпечували вільний доступ до нормального корму для щурів
Ригіпа, раціон 5001. Групам по 4 щури Спрег-Доулі один раз на тиждень протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг 5-10-5 МОЕ гепмерів. Одній контрольній групі з 6 щурів один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Через сорок вісім годин після введення останньої дози щурів приспали і зібрали органи і плазму для подальших аналізів.
Функція печінки
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію печінки вимірювали рівні трансаміназ у плазмі за допомогою автоматизованого клінічного аналізатора хімічного складу (Ніаспі ОїІутрив
АЦ4Об0е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Виміряли рівні АТ (аланінтрансамінази) і А5Т (аспартаттрансамінази) і представили результати в наступній Таблиці, виражені в МЕ/л.
Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали в печінці зміни будь-яких маркерів функції печінки за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 179
Маркери функції печінки у щурів Спрег-Доулі 11111111 АстоОодллліі// | / АБт(од/лу/:
РВ5 777777771171717171717111111111111171Ї1111171717171717166111111171 11111134
ВІЗ БВВББО 77777777777771111111111111Ї11111111176911111111Ї11111111157сСсС
Функція нирок
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію нирок вимірювали рівні азоту сечовини крові (АМК) і креатиніну за допомогою автоматизованого клінічного аналізатора хімічного складу (Нііаспі Оїутрих АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати, виражені в мг/дл, представлені в наступній таблиці. Олігонуклеотиди ІБІ5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 180
Маркери функції печінки (мг/дл) у щурів Спрег-Доулі 11111111 АМК | 7 Креатинін//:
Маса
На 39 день вимірювали масу тіла. Масу печінки, серця, селезінки і нирок вимірювали після закінчення дослідження на 42 день, і результати представлені в наступній таблиці.
Олігонуклеотиди ІБІ5, які викликали зміни маси органів за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 181
Маса (г) 11111111 Тіло | Печінка, | Селезінкєа | Нирки
Випробування 2 (з дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами)
Самців щурів Спрег-Доулі віком від дев'яти до десяти тижнів витримували при 12-годинному циклі освітлення/темряви і забезпечували вільний доступ до нормального корму для щурів
Ригіпа, раціон 5001. Групам по 4 щури Спрег-Доулі один раз на тиждень протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидів. Двом контрольним групам по З щури один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Через сорок вісім годин після введення останньої дози щурів приспали і зібрали органи і плазму для подальших аналізів.
Функція печінки
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію печінки вимірювали рівні трансаміназ у плазмі на 42 день, використовуючи автоматизований клінічний аналізатор хімічного складу (Нікаспі Оіутрих АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Виміряли рівні АГ Т (аланінтрансамінази) і
АЗТ (аспартаттрансамінази), і альбуміну в сироватці, і результати представлені нижче в
Таблиці. Олігонуклеотиди ІЗІ5, які викликали в печінці зміни будь-яких маркерів функції печінки за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 182
Маркери функції печінки у щурів Спрег-Доулі 11111111 11111 АсСТоод/лу | АбТ(од/лу | Альбумін (г/дл)
Функція нирок
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію нирок вимірювали рівні азоту сечовини крові (АМК) і креатиніну за допомогою автоматизованого клінічного аналізатора хімічного складу (Нікаспі Оїутриз АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати, виражені в мг/дл, представлені в наступній таблиці. Олігонуклеотиди ІЗІ5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 183
Маркери функції печінки (мг/дл) у щурів Спрег-Доулі 11111111 АМК | 7 Креатинін///:
Маса
На 39 день вимірювали масу тіла. Масу печінки, серця, селезінки і нирок вимірювали після закінчення дослідження на 42 день, і результати представлені в наступній таблиці.
Олігонуклеотиди ІБІ5, які викликали зміни маси органів за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 184
Маса (г) 11111111 Тіло | Печінка, | Селезінка | Нирки0/
РВ5 77777777 17711466 | 16 | 09 2 ЮщЩщ | 38
РВ5 77777771 17711171485. | (16 | 2 щ-РО9 | 36
Випробування З (з МОЕ гепмерами)
Самців щурів Спрег-Доулі віком від дев'яти до десяти тижнів витримували при 12-годинному циклі освітлення/темряви і забезпечували вільний доступ до нормального корму для щурів
Ригіпа, раціон 5001. Групам по 4 щури Спрег-Доулі один раз на тиждень протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг МОЕ гепмерів. Одній контрольній групі з 6 щурів один раз на тиждень протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Через сорок вісім годин після введення останньої дози щурів приспали і зібрали органи і плазму для подальших аналізів.
Функція печінки
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію печінки вимірювали рівні трансаміназ у плазмі на 43 день, використовуючи автоматизований клінічний аналізатор хімічного складу (Ніаспі Оіутриз АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Виміряли рівні А! Т (аланінтрансамінази) і
А5Т (аспартаттрансамінази) і представили результати в наступній Таблиці, виражені в МЕ/л.
Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали в печінці зміни будь-яких маркерів функції печінки за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 185
Маркери функції печінки у щурів Спрег-Доулі 11111111 Хімам | АсТ(од/лу | А5Т (од./л) | Альбумін (г/дл)
РВ5 77117Ї1111711717-1111111152|ло | 37
І8ІЗ 599202. | 585МОЕ | 65 | 86 | 35
Функція нирок
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію нирок вимірювали рівні азоту сечовини крові (АМК) і креатиніну за допомогою автоматизованого клінічного аналізатора хімічного складу (Нііаспі Оїутрих АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати, виражені в мг/дл, представлені в наступній таблиці. Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 186
Маркери функції печінки (мг/дл) у щурів Спрег-Доулі 11111117 Хімам/////// | // АМК | Креатинін//
Р 71171Ї11111717117171717-11111111111111116 11111103
Маса
На 39 день вимірювали масу тіла. Масу печінки, серця, селезінки і нирок вимірювали після закінчення дослідження на 42 день, і результати представлені в наступній таблиці.
Олігонуклеотиди ІБІ5, які викликали зміни маси органів за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 187
Маса (г) 11111111 Хімам | Тіло | Печінка | Селезінка | Нирки.0/
РВС ЇЇ -111111111147 | 116 | 170 Їм
Таблиця 187
Маса (г) 11111111 Хімам | Тіло | Печінка | Селезінка | Нирки.0/
І8ІЗ 599261 | З105МОЕ | 277 | 10 | 09 | 32
Випробування 4 (з МОЕ гепмерами)
Самців щурів Спрег-Доулі віком від дев'яти до десяти тижнів витримували при 12-годинному циклі освітлення/темряви і забезпечували вільний доступ до нормального корму для щурів
Ригіпа, раціон 5001. Групам по 4 щури Спрег-Доулі один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг МОЕ гепмерів. Одній контрольній групі з 6 щурів один раз на тиждень протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Через сорок вісім годин після введення останньої дози щурів приспали і зібрали органи і плазму для подальших аналізів.
Функція печінки
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію печінки вимірювали рівні трансаміназ у плазмі на 42 день, використовуючи автоматизований клінічний аналізатор хімічного складу (Нікаспі Оіутрих АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Виміряли рівні АГ Т (аланінтрансамінази) і
А5Т (аспартаттрансамінази) і представили результати в наступній Таблиці, виражені в МЕ/л.
Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали в печінці зміни будь-яких маркерів функції печінки за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 188
Маркери функції печінки у щурів Спрег-Доулі 11111111 Хімам | АсТ(од/лу | А5Т (од./л) | Альбумін (г/дл)
РО 1 Ї11117117171717-11111111111171480 11777 | 398
І8ІЗ 532809. | 5105МОЕ | 59 2 Щ | 89 | 38
Функція нирок
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію нирок вимірювали рівні азоту сечовини крові (АМК) і креатиніну за допомогою автоматизованого клінічного аналізатора хімічного складу (Нікаспі Оїутриз АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати, виражені в мг/дл, представлені в наступній таблиці. Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 189
Маркери функції печінки (мг/дл) у щурів Спрег-Доулі 11111101 хХімам/////// | АМК | Креатинін//
Р 7111111Ї111111711171-111111111111115111111111104
Маса
На 39 день вимірювали масу тіла. Масу печінки, серця, селезінки і нирок вимірювали після закінчення дослідження на 42 день, і результати представлені в наступній таблиці.
Олігонуклеотиди ІБІ5, які викликали зміни маси органів за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 190
Маса (г) 11111111 Хімам | Тіло | Печінка | Селезінка | НиркиЙЩ
РВ5 77777711 -1111111|1111502 1711116 | 09 | 37
Випробування 5 (з МОЕ гепмерами і дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами)
Самців щурів Спрег-Доулі віком від дев'яти до десяти тижнів витримували при 12-годинному циклі освітлення/темряви і забезпечували вільний доступ до нормального корму для щурів
Ригіпа, раціон 5001. рупам по 4 щури Спрег-Доулі один раз на тиждень протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг МОЄ гепмеру або 50 мг/кг дезокси, МОЕ та (5)-сЕїЇ олігонуклеотидів. Одній контрольній групі з 4 щурів один раз на тиждень протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Через сорок вісім годин після введення останньої дози щурів приспали і зібрали органи і плазму для подальших аналізів.
Функція печінки
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію печінки вимірювали рівні трансаміназ у плазмі на 42 день, використовуючи автоматизований клінічний аналізатор хімічного складу (Нікаспі Оіутрих АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Виміряли рівні АГ Т (аланінтрансамінази) і
А5Т (аспартаттрансамінази) і представили результати в наступній Таблиці, виражені в МЕ/л.
Олігонуклеотиди І5БІ5, які викликали в печінці зміни будь-яких маркерів функції печінки за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
ЗБ2
Таблиця 191
Маркери функції печінки у щурів Спрег-Доулі
Хімізм А Т (од./л) ІА5Т (од./л))./льбумін і і (г/дл)
Р 7/1 Ї1117149 | 74 | з
ІБІ5 532770 5-10-5 МОЕ
ІЗІЗ 588851 Дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ
ІЗІЗ 588856 Дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ
ІЗІЗ 588865 Дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ
ІЗІЗ 588867 Дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ
ІЗІЗ 588868 Дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ
ІЗІЗ 588870 Дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ
Функція нирок
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію нирок вимірювали рівні азоту сечовини крові (АМК) і креатиніну у плазмі і сечі за допомогою автоматизованого клінічного аналізатора хімічного складу (Ніаспі СОіІутриз АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати, виражені в мг/дл, представлені нижче в Таблицях. Олігонуклеотиди ІЗІ5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 192
Маркери функції нирок (мг/дл) у плазмі щурів Спрег-Доулі 01111111 Хімам//////////////// | АМК | (Креатинін:
Р 17111118 | 03 2
ІБІ5 532770 5-10-5 МОЕ
ІЗІЗ 588851 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ
ІЗІЗ 588856 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ
ІЗІЗ 588865 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ
ІЗІЗ 588867 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ
ІЗІЗ 588868 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ
ІЗІЗ 588870 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ
Таблиця 193
Маркери функції нирок (мг/дл) в сечі щурів Спрег-Доулі шо 33322 о лл-о ( юено ілок
Р 117111111111111111111111-1111111111111111111801111192 2
ІБІ5 532770 5-10-5 МОЕ 466 |... 69
ІЗІЗ 588851 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ
ІЗІЗ 588856 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ 259 | юю 68 2 Фщ Ж ФЯг(
ІЗІЗ 588865 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ
ІЗІЗ 588867 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ 79371... 68 2 щ ж
ІЗІЗ 588868 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ
ІЗІЗ 588870 Дезокси, МОЕ та (5)-сЕЇ
Маса
На 39 день вимірювали масу тіла. Масу печінки, серця, селезінки і нирок вимірювали після закінчення дослідження на 42 день, і результати представлені в наступній таблиці.
Олігонуклеотиди ІБІ5, які викликали зміни маси органів за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 194
Маса (г) 11111111 Хімзм | Тіло | Печінка |Селезінка| Нирки
РВ5 7 Ї777777171717171717171717-11111111111111711489 | 716 | 09 | 35
Випробування 6 (МОЕ гепмерами, дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотидами та (5)-СЕЇ гепмерами)
Самців щурів витримували при 12-годинному циклі освітлення/темряви і забезпечували вільний доступ до нормального корму для щурів Ригіпа, раціон 5001. Групами по 4 щури Спрег-
Доулі один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили підшкірні ін'єкції 100 мг/кг МОЕ гепмерів або 50 мг/кг дезокси, МОЕ та (5)-СЕЇ олігонуклеотиду, або (5)-СЕЇ гепмеру. Одній контрольній групі з 4 щурів один раз на тиждень протягом б тижнів вводили підшкірні ін'єкції РВ5. Через сорок вісім годин після введення останньої дози щурів приспали і зібрали органи і плазму для подальших аналізів.
Функція печінки
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію печінки вимірювали рівні трансаміназ у плазмі на 42 день, використовуючи автоматизований клінічний аналізатор хімічного складу (Нііаспі Оіутриз АО400е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Виміряли рівні А! Т (аланінтрансамінази) і
АБ5Т (аспартаттрансамінази) і представили результати в наступній Таблиці, виражені в МЕ/л.
Таблиця 195
Маркери функції печінки я Гонбоеню (Ктовт регоче
РВС ЇЇ 77777717171717-1111111Ї111111717-11111711154 | 7 | аз
ВІЗ 588540 | 5105МОЕ | 100 | 89 | 202 | 44
ВІЗ 588550 | 510 5МОЕ | 100 | 80 | 133 | 36
Функція нирок
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІЗ на функцію нирок вимірювали рівні загального білка та креатиніну сечі, використовуючи автоматизований клінічний аналізатор хімічного складу (Нікаспі Оїутрих АО4О0е, Мелвілл, штат Нью-Йорк). Результати представлені нижче в Таблиці.
Олігонуклеотиди ІБ5І5, які викликали зміни будь-яких рівнів маркерів функції нирок за межами очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів, не використовували в подальших дослідженнях.
Таблиця 196
Співвідношення загального білка/креатиніну в сечі щурів я, Доза Співвідношення жи онко |ЙбрД М
Р С1Ї111111111111111-1111111111111-11м
ВІЗ 588548... | 5 ЛОБМОЕ 17777100 17771664
Маса
На 39 день вимірювали масу тіла. Масу печінки, серця, селезінки і нирок вимірювали після закінчення дослідження на 42 день, і результати представлені в наступній таблиці. Результати вимірювань маси органів виражені як співвідношення маси тіла і нормалізовані до співвідношення контрольної групи з РВ5.
Таблиця 197
Співвідношення маси органу/маси тіла (МТ) ге Таб няня Печнант ннинт (мг/кг/гиждень) т
РВС ЇЇ 77777171717-1111111Ї11111717-111170 11017110
Приклад 128: Ефективність антисмислових олігонуклеотидів проти МРНК СЕВ у мишей НСЕВ
Вибрані сполуки були протестовані на ефективність у трансгенних мишей з людським СЕВ, лінія-засновник Моб. Ген людського СЕВ розташований на хромосомі 6: положення 31913721- 31919861. Вибрали фосміду (АВС14-50933200С23), яка містить послідовність СЕВ, для отримання трансгенних мишей, що експресують ген людського СЕВ. Використовували рестрикційні ферменти Сіа І (31926612) і Аде І (31926815) для отримання фрагмента розміром 22127 п. 0о., що містить ген СЕВ, для пронуклеарної ін'єкції. ДНК підтвердили аналізом рестрикційного ферменту, використовуючи Рми І. Фрагмент ДНК розміром 22127 п. о. ін'єктували в ембріони С57ВІ /6МТас. Вивели б позитивних засновників. Засновник Моб експресували в
МРНК СЕВ печінки людини і схрестили з Зм поколінням. Потомство З покоління мишей використовували для оцінки впливу АБО людського СЕВ на відновленням мРНК людського СЕВ.
Лікування
Групам по З щури два рази на тиждень протягом першого тижня вводили підшкірні ін'єкції 50 мг/кг олігонуклеотидів І5БІ5, потім один раз на тиждень дозу 50 мг/кг олігонуклеотидів І5ІЗ ще протягом трьох тижнів. Одній контрольній групі 3 4 мишей два рази на тиждень протягом першого тижня вводили підшкірні ін'єкції РВ5, потім один раз на тиждень протягом додаткових трьох тижнів. Через сорок вісім годин після введення останньої дози мишей приспали і зібрали органи і плазму для подальших аналізів.
Аналіз РНК
По закінченні періоду введення доз виділили РНК з печінки і нирок для аналізу ПЛР у реальному часі для визначення рівнів МРНК СЕВ. Рівні мРНК людського СЕВ вимірювали за допомогою набору людських праймерних зондів КТ53459. Рівні МРНК СЕВ нормалізували до
КІВОСКЕЕМЕ», а також до конститутивного гену, циклофілину. Результати розраховували як відсоток інгібування експресії мРНК СЕВ порівняно з контролем. Всі антисмислові олігонуклеотиди викликали інгібування рівнів мРНК людського СЕВ у печінці.
Таблиця 198
Процентне зменшення рівнів МРНК СЕВ у мишей НСЕВ 1111532770 | 77717171786771111111111171111111111111171871 11111532809. | 777171717691111717171111111111111111111117169сСсСсСс2С 1111 588550 | .7777С78981171717171717171717111171Ї1111111111171171881сСс21С
Приклад 129: Іп мімо антисмислове інгібування мишачого СЕВ
Сконструювали кілька антисмислових олігонуклеотидів, спрямованих на мРНК мишачого
СЕВ (ЗСЕМВАМК номер доступу ММ 008198.2, включена в справжній документ як БЕО ІЮ МО: 5).
Цільові сайти ініціації і послідовності кожного олігонуклеотиду описані у поданих нижче таблицях. Химерні антисмислові олігонуклеотиди у поданій нижче таблиці сконструйовані як 5- 10-5 МОЄ гепмери. Гепмери мають 20 нуклеозидів у довжину, причому центральний геп складається з 10 2'"-дезоксинуклеозидів і з обох сторін (у напрямках 5' 3) оточений крилами, містять по 5 нуклеозидів кожне. Кожен нуклеозид 5' крила і нуклеозид 3' крила має 2'-МОЕ модифікації. Міжнуклеозидні зв'язки в кожному гепмері являють собою тіофосфатні (Р-5) зв'язки. Всі залишки цитозина в кожному гепмері являють собою 5-метилцитозини.
Таблиця 199
Гепмери, спрямовані на мишачий СЕВ
Цільовий сайт
МО: 5
Лікування
Групам по чотири миші С57ВІ /6 вводили підшкірні ін'єкції 50 мг/кг ІБІЗ 516269, ІБІ5 516272,
ІБІЗ 516323, ІБІ5 516330 або Іб5І5 516341, один раз на тиждень протягом З тижнів. Контрольній групі мишей вводили ін'єкцію з фосфатно-сольовим буферним розчином (РВ5) один раз на тиждень протягом З тижнів.
Аналіз РНК СЕВ
Після закінчення дослідження з печінкової тканини виділили РНК для аналізу СЕВ за допомогою ПЛР у реальному часі, використовуючи набір праймерних зондів КТ53430 (пряма послідовність ОООСАААСАССААТТТОТОА, зазначена в цьому документі як ЗЕО ІО МО: 816; зворотна послідовність ТЗОСТАСССАССТТСОСТТОТ, зазначена в цьому документі як ЗЕО ІЮ
МО: 817; послідовність зонда СТОСАТАСТОТСССААТСССОСТАТТСОССХ, зазначена в цьому документі як БЕО ІЮ МО: 818). Рівні мРНК нормалізували за допомогою КІВОСКЕЕМФ). Як показано в наведеній нижче таблиці, деякі антисмислові олігонуклеотиди забезпечували зниження мишачого СЕВ порівняно з контрольним зразком з РВ5. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо контрольного зразка.
Таблиця 200
Процентне інгібування мРНК мишачого СЕВ у мишей С57ВІ /6
Аналіз білка
Рівні білка СЕВ вимірювали в нирках, печінці, плазмі та очах за допомогою вестерн-блот, використовуючи козяче анти-СЕВ антитіло (Зідта-Аїагісп). Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо контрольного зразка з РВ5. "н. д.» означає, що для вказаного зразка вимірювання не проводили. Як показано в наведеній нижче таблиці, антисмислове інгібування
СЕВ олігонуклеотидами І5ІЗ призводить до зниження білка СЕВ у різних тканинах. Як показано в наведеній нижче таблиці, системне введення олігонуклеотидів ІЗІЗ ефективно для зниження рівнів СЕВ в очах.
Таблиця 201
Процентне інгібування білка мишачого СЕВ у мишей С57ВІ /6 11516269 | 77720777 171717171758 7 |нд./ |Ї77777170721С 11516272 |7771117487777717717171111747 (нд. 17777799 242 11156323. |... Юю73 7 171717171785...ЙЮЙЮЙ. | .Ю.ЮЙМБЛьгї7лИлс 2 11156330 | 7777. 1717171717171780 |нд.////7 Інд о 5Іб3А1 | 77778077 177171717171788. |... 768 4 |ндо
Приклад 130: Дозозалежне антисмислове інгібування мишачого СЕВ
Групами по чотири щури С57ВІ/6 один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили ін'єкції 25 мг/кг, 50 мг/кг або 100 мг/кг ІБІЗ 516272 і ІБІЗ 516323. Іншим двом групам мишей один раз на тиждень протягом б тижнів вводили ін'єкції 100 мг/кг І5І5 516330 або І5БІ5 516341. Двом контрольним групам мишей один раз на тиждень протягом 6 тижнів вводили ін'єкції фосфатно- сольового буферного розчину (РВ5Б).
Аналіз РНК СЕВ
Виділили РНК з тканин печінки та нирок для аналізу СЕВ за допомогою ПЛР у реальному часі з використанням набору праймерних зондів КТ53430. Рівні мРНК нормалізували за допомогою КІВОСКЕЕМФ. Як показано в наведеній нижче таблиці, антисмислові олігонуклеотиди забезпечували дозозалежне зниження мишачого СЕВ порівняно з контрольним зразком з РВ5. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо контрольного зразка.
Таблиця 202
Процентне інгібування мРНК мишачого СЕВ у мишей С57ВІ /6 516272 516323
Го5БІв3ЯТ | 7777777120077777717Ї77717171717171717881111171Ї111111165 СС
Аналіз білка
Рівні білю»а СЕВ вимірювали в плазмі за допомогою вестерн-блот, використовуючи козяче анти-СЕВ антитіло (Бідта-АїЇдгіс!й). Як показано в наведеній нижче таблиці, антисмислове інгібування СЕВ олігонуклеотидами ІЗІЗ призводить до зниження білка СЕВ. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо контрольного зразка з РВ5. "н. д.» означає, що для вказаного зразка вимірювання не проводили.
Рівні білка СЕВ в очах також вимірювали за допомогою вестерн-блот. Всі експериментальні групи демонстрували інгібування СЕВ на 95 95, при цьому значення деяких зразків були нижче межі виявлення аналізу.
Таблиця 203
Процентне інгібування білка мишачого СЕВ у мишей С57ВІ /6 516272 516323 005011111111111111111111111801111сСс1с1 у 40011119 111115І6330 | 7771717171717171717171711100777777771171717 інд 15168411 17111111111111111120011111111171711с інд
Приклад 131: Вплив антисмислового інгібування СЕВ у мишачій моделі МАВЛЛ/ Е1
МАВЛА Е1 являє собою найстарішу класичну модель вовчака, в якій у мишей розвивається важкий вовчаковий фенотип, порівнянний з фенотипом пацієнтів з аутоїмунними захворюваннями (ПеопПіороціо5, А. М. и Оіхоп, Е.). Адмапсез іп Іттипоїіоду, т. 37, сс. 269-390, 1985). Такий вовчаковий фенотип включає лімфаденопатії, спленомегалію, підвищений вміст антинуклеарних аутоантитіл в сироватці (АМА), включаючи анти-дднДНК Ідс, більшість з яких являють собою Ідсга і Ід3, і імунокомплексний гломерулонефрит (ГН), який стає очевидним у віці 5-6 місяців, що призводить до ниркової недостатності і загибелі у віці 10-12 місяців.
Випробування 1
Випробування проводили для демонстрації того, що лікування антисмисловими олігонуклеотидами, спрямованими на СЕВ, полегшує ниркову патологію в мишачої моделі.
Самок мишей МАВЛА/ Е1 віком 17 тижнів придбали у компанії Чдаскзоп І абогаюгіе5. Групам з 16 мишей вводили дози 100 мкг/кг/гиждень ІБІ5 516272 або ІБІ5 516323 протягом 20 тижнів. Іншій групі з 16 мишей вводили дози 100 мкг/кг/лиждень контрольного олігонуклеотиду ІБІЗ 141923 протягом 20 тижнів. Іншій групі з 10 мишей вводили дози РВ5 протягом 20 тижнів і використовували в якості контрольної групи, з якою порівнювали всі інші групи. Кінцеві значення отримали через 48 годин після введення останньої дози.
Аналіз РНК СЕВ
Виділили РНК з тканин печінки та нирок для аналізу СЕВ за допомогою ПЛР у реальному часі з використанням набору праймерних зондів КТ53430. Рівні мРНК нормалізували за допомогою РІВОСКЕЕМФ. Як показано в наведеній нижче таблиці, деякі антисмислові олігонуклеотиди забезпечували зниження мишачого СЕВ порівняно з контрольним зразком з
РВЗ5. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо контрольного зразка.
Таблиця 204
Процентне інгібування мРНК мишачого СЕВ у мишей МАВЛМ Е1
ІЗІЗ Ме 516272 516323 141923 оо
Протеїнурія
Протеїнурія очікується у 60 95 тварин у зазначеній мишачої моделі. Кумулятивну частоту випадків виникнення тяжкої протеїнурії вимірювали розрахунком співвідношення загального білка до креатиніну, використовуючи клінічний аналізатор. Результати представлені в наступній таблиці демонструють, що лікування антисмисловими олігонуклеотидами, спрямованими на
СЕВ, забезпечує зниження протеїнурії у мишей, порівняно з контрольною групою з РВЗ і мишами, обробленими контрольним олігонуклеотидом.
Таблиця 205
Процентна кумулятивна частота випадків тяжкої протеїнурії у мишей МАВЛЛ/ Е1 в
ІВІ5 516272 в
ІВІЗ 516323 ни п
ІВІВ 141923
Виживаність
Виживаність мишей контролювали, підраховуючи кількість мишей на початку лікування, потім на 20 тижні. Результати представлені в наступній таблиці демонструють, що лікування антисмисловими олігонуклеотидами, спрямованими на СЕВ, збільшує виживаність мишей, порівняно з контрольною групою з РВ5 і мишами, обробленими контрольним олігонуклеотидом.
Таблиця 206
Кількість мишей, що вижили і 95 виживаності 11111111 | Тижденьї | Тижденьго
РВ5 777777777771111111Ї111171101Ї17111117161111171111111111111160сссСс21С
ІЗІ5 516272
ІЗІЗ5 516323
ІЗІ5 141923
Гломерулярне відкладення
Кількість відкладення С3, а також відкладення Ідс у гломерулі вимірювали за допомогою иммуногістохімії з анти-СЗ3 антитілом. Результати представлені в наступній таблиці демонструють, що лікування антисмисловими олігонуклеотидами, спрямованими на СЕВ, забезпечує зниження відкладень СЗ і Їдо у гломерулі, порівняно з контрольним зразком з РВЗ і мишами, обробленими контрольним олігонуклеотидом.
Таблиця 207
Процентне інгібування відкладень в гломерулі у мишей МАВЛА Е1
ІЗІЗ Ме 516272 516323 141923 01110
Випробування 2
Самок мишей МАВЛЛ/ Е1 віком 16 тижнів придбали у компанії Чдаскзхоп І абогайгіе5. Групі з 10 мишей вводили дози 100 мкг/кг/тиждень ІБІ5 516323 протягом 12 тижнів. Іншій групі з 10 мишей вводили дози 100 мкг/кг/пгиждень контрольного олігонуклеотиду ІБІ5 141923 протягом 12 тижнів.
Іншій групі з 10 мишей вводили дози РВ5З5 протягом 12 тижнів і використовували в якості контрольної групи, з якою порівнювали всі інші групи. Кінцеві значення отримали через 48 годин після введення останньої дози.
Аналіз РНК СЕВ
Виділили РНК з тканин печінки та нирок для аналізу СЕВ за допомогою ПЛР у реальному часі з використанням набору праймерних зондів КТ53430. Як показано в наведеній нижче таблиці, лікування з І5І5 516323 забезпечує зниження мишачого СЕВ порівняно з контрольним зразком з РВ5. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо контрольного зразка.
Таблиця 208
Процентне інгібування мРНК мишачого СЕВ у мишей МАВЛАМ Е1
ІЗІЗ Ме 516323 141923 01111611
Протеїнурія
Кумулятивну частоту виникнення тяжкої протеїнурії оцінювали шляхом вимірювання співвідношення загального білка в сечі до креатиніну, а також шляхом вимірювання загального рівня мікроальбуміну. Результати представлені в наступних таблицях і демонструють, що лікування антисмисловими олігонуклеотидами, спрямованими на СЕВ, знижує протеїнурії у мишей, порівняно з контрольним зразком з РВ5 і мишами, обробленими контрольним олігонуклеотидом.
Таблиця 209
Протеїнурію у мишей МАВЛЛ/ Е1 вимірювали рівні мікроальбуміну в сечі (мг/дл)
ІЗІЗ Ме Тиждень 10 516323 20111110 54 1 (04 " 141923 7770 | 828 | 86 | 56
Таблиця 210
Протеїнурію у мишей М2ВЛЛ/ Е1 вимірювали як співвідношення загального білка до креатиніну
ІЗІЗ Ме Тиждень 10 516323 11755 6 ЮЩ | 78 | 86 | 72 141923 769 юЮщЩ | 100 | 135 | 72
Виживаність
Виживаність мишей контролювали шляхом підрахунку кількості мишей на початку лікування,
Зо а потім на 12 тижні. Результати представлені в наступній таблиці демонструють, що лікування антисмисловими олігонуклеотидами, спрямованими на СЕВ, збільшує виживаність мишей,
порівняно з контрольною групою з РВ5 і мишами, обробленими контрольним олігонуклеотидом.
Таблиця 211
Кількість мишей, що вижили 11111107 тижденьї/// | Тижденьї2///7/:
Р 71111110
ВІЗ Я41923.....77777771111111Ї111111111111110111111117111111111181
Приклад 132: Вплив антисмислового інгібування СЕВ у мишачій моделі МК.
У мишачій моделі вовчакового нефриту МКІЛрг розвивається вовчаковий фенотип, який характеризується лімфаденопатією в результаті накопичення подвійних негативних (С04-С083 і
В220-Т-клітин. Зазначені миші демонструють прискорену смертність. Крім того, миші мають більш високі концентрації циркулюючих імуноглобулінів, включаючи підвищені рівні аутоантитіл, таких як АМА, анти-олЛднНК, анти-ддднНК, антиі-Зт і ревматоїдні фактори, що призводить до великої кількості імунних комплексів (Апагему/5, В. еї аї., У. Ехр. Меа. 148: 1198-1215, 1978).
Лікування
Проводили випробування для вивчення того, чи викликає лікування антисмисловими олігонуклеотидами, спрямованими на СЕВ, регрес ниркової патології в мишачої моделі. Самок мишей МЕЇЛрг віком 14 тижнів придбали у компанії Чдаскзоп І арогайогіе5. Групі з 10 мишей вводили дози 50 мкг/кг/тиждень І5БІЗ 516323 протягом 7 тижнів. Іншій групі з 10 мишей вводили дози 50 мкг/кг/ тиждень контрольного олігонуклеотиду ІЗІ5 141923 протягом 7 тижнів. Іншій групі з 10 мишей вводили дози РВЗ5 протягом 7 тижнів і використовували в якості контрольної групи, з якою порівнювали всі інші групи. Кінцеві значення отримали через 48 годин після введення останньої дози.
Аналіз РНК СЕВ
Виділили РНК з тканин печінки для аналізу СЕВ за допомогою ПЛР у реальному часі з використанням набору праймерних зондів КТ53430. Як показано в наведеній нижче таблиці,
ІБІЗ 516323 забезпечує зниження СЕВ порівняно з контрольним зразком з РВ5. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо контрольного зразка.
Таблиця 212
Процентне інгібування мРНК мишачого СЕВ у мишей МКІ Лрг о 000001516383.7117Ї1111111111111111111111168111111ссСс2
Ниркова патологія
Ниркову патологію оцінювали двома способами. Гістологічні зрізи нирок фарбували гематоксилином та еозином. Контрольний зразок з РВБЗ демонстрував наявність
Зо мультигломерулярних серповидних трубчастих циліндрів, що є симптомом гломерулосклерозу.
Навпаки, зрізи від мишей, оброблених І5БІ5 516323, демонстрували відсутність серповидних трубчастих циліндрів з мінімальними фибротическими змінами боуменової капсули, від помірного до сильного розширення сегментарних мезангиальних клітин і потовщення гломерулярної базальної мембрани.
Накопичення С3 в нирках також оцінювали з допомогою иммуногістохімії з анти-СЗ3 антитілами. Иммуногістохімічну оцінку інтенсивності СЗ в цілій нирці розраховували за бальною системою інтенсивності, яку розраховували відбором 10 гломерул на нирку і підрахунком інтенсивності позитивного фарбування С3. Результати представлені в наступній таблиці демонструють, що лікування з І5БІ5 516323 знижує накопичення СЗ в нирках, порівняно з контрольними групами.
Таблиця 213
Накопичення СЗ в нирках мишей МЕ Лрг . . . не Кількісне визначення СЗ
Оцінка інтенсивності СЗ в цілій б ря ЕЕ середнього РВ5
ВІЗ 5І6323.777771Ї777777171111711161111111111711111111111111717168сСсСсСсСс20
ВІЗ Я419239,......../ Ї77777171717171717171717122111111111Ї1111111171711171891
Рівні в плазмі СЗ
Зниження СЕВ інгібує активацію альтернативного шляху комплементу, перешкоджаючи поглинання ССЗ і приводячи до помітного підвищення рівнів СЗ в плазмі. Рівні СЗ в плазмі термінальній крові вимірювали за допомогою клінічного аналізатора. Результати представлені в наступній таблиці демонструють, що лікування з ІБІ5 516323 підвищує рівні СЗ3 (р«0,001) в плазмі порівняно з контрольними групами.
Таблиця 214
Рівні СЗ в плазмі (мг/дл) мишей МК Лрг
Результати демонструють, що лікування антисмисловими олігонуклеотидами, спрямованими на СЕВ, реверсують ниркову патологію в мишачої моделі вовчака.
Приклад 133: Вплив антисмислового інгібування СЕВ в мишачої моделі СЕН Неї
СЕН гетерозиготна (СЕН Неї, СЕН) мишача модель експресує мутантний білок фактора Н в комбінації з мишачим білком повної довжини (РісКегіпуд, М. С. еї аї!., У. Ехр. Мед. 2007. 204: 1249-56). Ниркова гістологія у цих мишей залишається нормальною до шестимісячного віку.
Випробування 1
Групами по 8 мишей СЕН-" віком б тижнів вводили дози 75 мг/кг/ тиждень І5БІ5 516323 або
ІБІЗ 516341 протягом б тижнів. Іншій групі з 8 мишей вводили дози 75 мг/кг/тиждень контрольного олігонуклеотиду ІБІЗ5 141923 протягом 6 тижнів. Іншій групі з 8 мишей вводили дози РВЗ5 протягом 6 тижнів і використовували в якості контрольної групи, з якою порівнювали всі інші групи. Кінцеві значення отримали через 48 годин після введення останньої дози.
Аналіз РНК СЕВ
Виділили РНК з тканин печінки та нирок для аналізу СЕВ за допомогою ПЛР у реальному часі з використанням набору праймерних зондів ЕТ5З3430. Як показано в наведеній нижче таблиці, антисмислові олігонуклеотиди забезпечують зниження СЕВ порівняно з контрольним зразком з РВ5. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо контрольного зразка.
Таблиця 215
Процентне інгібування мРНК мишачого СЕВ у мишей СЕН-- 110105І63237171111111111111180111111111171Ї11111111111111881сСс21С 5БІб3А1111111190111111111Ї111111111111144
Го л493 11111011
Зо Рівні в плазмі СЗ
Зниження СЕВ інгібує активацію альтернативного шляху комплементу, перешкоджаючи поглинання ССЗ і приводячи до помітного підвищення рівнів СЗ3 в плазмі. Рівні СЗ в плазмі термінальній крові вимірювали за допомогою клінічного аналізатора. Результати представлені в наступній таблиці демонструють, що лікування з ІБІ5 516323 підвищує рівні СЗ в плазмі до нормальних рівнів.
Зб2
Таблиця 216
Рівні СЗ в плазмі (мг/дл) мишей СЕН-- о мияаі1Ї1111111111118
Випробування 2
Групам по 5 мишей СЕНе- вводили дози 12,5 мг/кг/тиждень, 25 мг/кг/тиждень, 50 мг/кг?/тиждень, 75 мг/кг/тиждень або 100 мг/кг/тиждень ІБІ5 516323 або І5БІ5 516341 протягом 6 тижнів. Іншій групі з 5; мишей вводили дози 75 мкг/кг/тиждень контрольного олігонуклеотиду ІБІ5 141923 протягом б тижнів. Іншій групі 3 5 мишей вводили дози РВ5 протягом б тижнів і використовували в якості контрольної групи, з якою порівнювали всі інші групи. Кінцеві значення отримали через 48 годин після введення останньої дози.
Аналіз РНК СЕВ
Виділили РНК з тканин печінки та нирок для аналізу СЕВ за допомогою ПЛР у реальному часі з використанням набору праймерних зондів КТ53430. Як показано в наведеній нижче таблиці, антисмислові олігонуклеотиди забезпечують зниження СЕВ порівняно з контрольним зразком з РВ5 дозозалежним чином. Результати представлені як відсоток інгібування СЕВ щодо контрольного зразка.
Таблиця 217
Процентне інгібування мРНК мишачого СЕВ в печінці мишей СЕН»- 516323 516341 50111111 11111111111111898111 60111119
Рівні в плазмі СЗ
Зниження СЕВ інгібує активацію альтернативного шляху комплементу, перешкоджаючи поглинання ССЗ і приводячи до помітного підвищення рівнів СЗ в плазмі. Рівні СЗ в плазмі термінальній крові вимірювали за допомогою клінічного аналізатора. Результати представлені в наступній таблиці демонструють, що лікування олігонуклеотидами І5І5, спрямованими на СЕВ, підвищує рівні СЗ в плазмі.
Таблиця 218
Рівні СЗ в плазмі (мг/дл) мишей СЕНЯ- 11111111 Доза(міислижден7//| 77 Сс3ССССсС2шС
Рв 11171111 516323
Таблиця 218
Рівні СЗ в плазмі (мг/дл) мишей СЕН-- 11111111 Доза(міислижден7// | 77777 с3ССССсС2шС 516341
Го л41983111111111111175111111171|111111111117188с1
Приклад 134: Вплив антисмислових олігонуклеотидів ІЗІ5, спрямованих на СЕВ людини, у яванських макаків
Яванських макаків лікували антисмисловими олігонуклеотидами ІбІ5, відібраними у дослідженнях, описаних у поданих вище прикладах. Оцінювали ефективність і переносимість антисмислових олігонуклеотидів, а також їх фармакокінетичний профіль у печінці та нирках.
Під час проведення випробувань геномна послідовність яванських макаків була відсутня у базі даних Національного центру біотехнологічної інформації (МСВІ) тому перехресна реактивність з послідовністю гена яванських макаків не може бути підтверджена. Замість цього послідовності антисмислової олігонуклеотидів І5І5, використані на яванських макаках, порівнювали з послідовністю резус-макак на предмет гомології. Передбачається, що олігонуклеотиди І5ІЗ з гомологією до послідовності резус-макаків, є також повністю перехресно реактивними з послідовністю яванських макаків. Випробувані людські антисмислові олігонуклеотиди є перехресно реактивними з геномної послідовністю резусу (ЗЕМВАМК номер доступу МУМ 001116486.1, усіченої за нуклеотидам з 536000 за 545000, зазначеній в цьому документі як БЕО ІЮ МО: 3). Чим вище комплементарність між людським олігонуклеотидом і послідовністю макаки резус, тим імовірніше, що людський олігонуклеотид може перехресно реагувати з послідовністю макак резус. Сайти ініціації і термінації кожного олігонуклеотиду, спрямованого на ЗЕО ІЮО МО: 3, представлені в наступній таблиці. "Сайт ініціації" позначає крайній 5' нуклеозид, на який спрямований гепмер у послідовності гена резус-макака. "Неузгодженість" вказує на кількість азотистих основ у людському олігонуклеотиді, які не відповідають геномної послідовності резусу.
Таблиця 219
Антисмислові олігонуклеотиди, комплементарні до геномної послідовності СЕВ резусу (ЗЕО ІЮ
МО: З) сайт ініціації МО 532770 | 6788. | -:(ЦЙ 0 | 57О5МОЕ | 198 532800 | 7500 | -:(КБК0 | --./(/// 57О5МОЕ | 228 532809 | 7614 | -:( 0 | 7/0 57О5МОЕ | 237 588555 | 7643. | -:К 0 | 5710О5МОЕ | 455 594430 | 6790 | (ГР 0 | 777/7/7//озлозсЕ | 549
Лікування
Перед початком дослідження мавп витримували на карантині протягом щонайменше 30 днів, протягом яких щодня стежили за загальним станом здоров'я тварин. Вік мавп становив 2-4 роки, а маса від 2 до 4 кг. Одинадцяти груп по 4-6 випадковим чином розподілених самців яванських макаків вводили підшкірні ін'єкції олігонуклеотиду ІЗІ5 або РВ5 у чотирьох місцях: на
Зо спині за годинниковою стрілкою (тобто зліва, зверху, справа і знизу), за одним місцем на дозу.
Мавпам вводили чотири насичують дози РВ5 або 40 мг/кг І5І5 532800, ІБІ5 532809, ІІ 588540, ІБІ5 588544, ІБІ5 588548, І5ЗІ5 588550, ІЗІЗ 588553, ІБІЗ 588555, ІБІЗ 588848 або І5ІЗ 594430 протягом першого тижня (1, 3, 5 і 7 день), а потім вводили дози один раз на тиждень протягом 12 тижнів (14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77 і 84 день) РВ5 або 40 мг/кг олігонуклеотидів ІЗІ5. ІБІЗ 532770 випробували в окремому дослідженні з аналогічними умовами на двох самцях і двох самках яванських макаків в одній групі.
Зниження печінкової мішені
Аналіз РНК
На 86 день зібрали зразки печінки і нирок у двох примірниках (приблизно по 250 мг кожен) для аналізу МРНК СЕВ. Після розтину зразки швидко заморозили в рідкому азоті протягом близько 10 хвилин після приспання.
Виділили РНК з тканин печінки та нирок для аналізу експресії МРНК СЕВ за допомогою ПЛР у реальному часі. Результати представлені як відсоткова зміна мРНК щодо контрольного зразка з РВ5, нормалізоване по КІВОСКЕЕМЄ. Рівні РНК нормалізували також за конститутивному гену, циклофілину А. Рівні РНК вимірювали за допомогою наборів праймерних зондів КТ53459, описаних вище, або КТ54445 МОВ (пряма послідовність. ССДАСАДАССТСАСТОАААТСАА, позначена в цьому документі як 5ЕО ОО МО: 819; зворотна послідовність
ТОССТОБАСОСОсССсСтТСтТт, зазначена в цьому документі як 5ЕО ІЮ МО: 820; послідовність зонда АВАССАСААСТТОААСТС, зазначена в цьому документі як ЗЕО ІО МО: 815).
Як показано у поданих нижче таблицях, лікування антисмисловими олігонуклеотидами ІЗІЗ призводить до зниження мРНК СЕВ порівняно з контрольним зразком з РВ5. Аналіз рівнів МРНК
СЕВ показав, що деякі олігонуклеотиди ІЗІ5 знижують рівні СЕВ в печінці та/або нирках. "0" означає, що рівні експресії не були інгібіровани. «"» означає, що олігонуклеотид відчували в окремому дослідженні з аналогічними умовами.
Таблиця 220
Процентне інгібування мРНК СЕВ в печінці яванського макака щодо контрольного зразка з РВ5 циклофілин А ВІВОСВЕЕМ циклофілин А ВІВОСВЕЕМ 588548 | - 68 2 щЩщ| 67 | 68 | 67 58555 | -/-:( 73 | 777 11117111 11111161 588848 | -: 9 | 0 | 6 !/ 0
Таблиця 221
Відсоткове інгібування мРНК СЕВ в нирках яванського макака щодо контрольного зразка з РВ5 - циклофілин А ВІВОСВЕЕМ циклофілин А ВІВОСВЕЕМ 588540 | -:( 70 | ..ЮюЮюЮЮ771171777171717176711 17171716 2 588553 | - 86 | (84 | -Х(М 86. | (КБ 85ЙЖМК 588848 | -:|(и 89. ЮЮЮЦ|7777СССЯ1ї1117177717171717871 11171190
Аналіз білка
Близько 1 мл крові взяли у всіх доступних тварин на 85 день і помістили у пробірки, що містять калієву сіль ЕДТА. Зразки крові відразу помістили на вологий лід або КгуогаскК і центрифугували (3000 об./мін. протягом 10 хвилин при 4 "С) з отриманням плазми (0,4 мл) протягом 60 хвилин після збору. Рівні СЕВ в плазмі вимірювали в плазмі за допомогою радіальної иммунодиффузії (КІС), використовуючи поліклональне антитіло анти-фактор В.
Результати представлені нижче в таблиці. ІЗІ5 532770 випробували в окремому дослідженні, і в цій групі рівні білка в плазмі вимірювали на 91 або 92 день.
Аналіз СЕВ у плазмі показав, що деякі олігонуклеотиди І5І5 стійко знижують рівні білка. І5І5 532770, який випробовували в окремому дослідженні, забезпечив зниження білка СЕВ на 91/92 день на 50 95 відносно вихідних значень. Зниження рівнів білка СЕВ у плазмі добре корелює зі зниженням рівнів МРНК СЕВ у печінці у відповідних групах тварин.
Таблиця 222
Рівні білка в плазмі (95 від вихідного значення) у яванських макаків 11111111... | Деньї | День3о | День58 | День72 | День8б
РВ5 77777771 17111113 17115 177171711795..ЮюЮЙ.17ЮЙЮЙ7И783 .рЮДБрИИиюИи86 ФС
І8ВІЗ 53280077 | 117 | 168 17171752 17777391 34
І8ІЗ 532809... | 7104 | 121177 7100 17778011
І8ІЗ 588848... | 116 | 95. 77.7Й.92..ЮюЮЙ1.7.ЮЙЙ.69 щЩщ|( 7 Чз
Дослідження переносимості
Вимірювання маси тіла
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на загальний стан здоров'я тварин вимірювали масу тіла та органів, і результати представлені в наступній таблиці. «"» означає, що олігонуклеотид відчували в окремому дослідженні з аналогічними умовами, і значення є середнім для вимірювань у самців і самок мавп. Результати демонструють, що вплив лікування антисмисловими олігонуклеотидами на масу тіла та органів знаходиться в межах очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів.
Таблиця 223
Кінцева маса тіла (г) яванських макаків 77171717... | Деньї | День14 | День28 | День42 | День5б | День 70 | День 84
Таблиця 224
Кінцева маса органів (г) яванських макаків 11111111... |Селезінка |Серце Нирки |Печіннїа.7//: віз 594430...-.юЙ | 39 | 119 | 1458 | 6959
Функція печінки
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІБІ5 на функцію печінки з усіх експериментальних груп взяли зразки крові. Зразки крові брали з головного, підшкірної або стегнової вени через 48 годин після введення дози. Мавпи не приймали їжу протягом ночі до збору крові. Кров (1,5 мл) збирали в пробірки без антикоагулянту для відділення сироватки. Пробірки витримували при кімнатній температурі протягом не менше 90 хвилин, а потім центрифугували (3000 об./мін. протягом 10 хвилин) для отримання сироватки. Рівні різних маркерів функції печінки вимірювали за допомогою аналізатора хімічного складу То5зпіра 200РК МЕО (Тозпіра Со.,
Японія).
Вимірювали рівні АЇГТ та А5Т у плазмі, і результати, виражені в МЕ/л, представлені в наступній таблиці. Таким-саме чином вимірювали білірубін, маркер функції печінки, і результати, виражені в мг/дл, представлені в наступній таблиці. «"» означає, що олігонуклеотид відчували в окремому дослідженні з аналогічними умовами, і значення є середнім для вимірювань у самців і самок мавп. Результати демонструють, що більшість антисмислових олігонуклеотидів не мають впливу на функцію печінки, що виходить за межі очікуваного діапазону для антисмислових олігонуклеотидів.
Таблиця 225
Рівні хімічних маркерів печінки в плазмі яванських макаків на день 86 11111111 АСТоод/л) | АБТ(од/л) | Білірубін(мг/дл):
ВІЗ 5328007777777777111111Ї71111717165111717171111111171861 11111101
ВІЗ 588848....7777777777717Ї7717171711691111111111111165 11171102 С
ВІЗ 594430......77///////С/|Ї77171717171С7Л861111711111111531 11111102
Функція нирок
Для оцінки впливу олігонуклеотидів ІЗІ5 на функцію нирок з усіх експериментальних груп взяли зразки крові. Зразки крові брали з головного, підшкірної або стегнової вени через 48 годин після введення дози. Мавпи не приймали їжу протягом ночі до збору крові. Кров збирали в пробірки без антикоагулянту для відділення сироватки. Пробірки витримували при кімнатній температурі протягом не менше 90 хвилин, а потім центрифугували (3000 об./мін. протягом 10 хвилин) для отримання сироватки. Рівні АМК і креатиніну вимірювали за допомогою аналізатора хімічного складу То5піра 200ЕК МЕО (Тозпіра Со., Японія). Результати, виражені в мг/дл, представлені в наступній таблиці. «"» означає, що олігонуклеотид відчували в окремому дослідженні з аналогічними умовами, і значення є середнім для вимірювань у самців і самок мавп.
Для аналізу сечі свіжу сечу всіх тварин збирали вранці, використовуючи чистий лоток для клітки на мокрому льоду. За день до збору сечі тваринам протягом ночі не давали їжу, залишивши тільки воду. Зразки сечі (близько 1 мл) аналізували на співвідношення білка до креатиніну (Р/С) за допомогою автоматизованого аналізатора хімічного складу Тозпіра 200ЕК
МЕО (Тов5піра Со., Японія). "н. д.» означає, що рівень білка в сечі нижче межі виявлення аналізатора.
Дані хімічного аналізу плазми і сечі показують, що більшість олігонуклеотидів ІБІЗ не робило якого-небудь впливу на ниркову функцію за межами очікуваного для антисмислових олігонуклеотидів діапазону.
Таблиця 226
Рівні хімічних маркерів нирок (мг/дл) у плазмі яванських макаків на день 86 11111111 АМК | Креатинін | Загальнийбілок
РВ5 77777777777771717171171171Ї11117171712877117177171717111711710917|11111117180
ВІЗ 5327707.ююЮюЮюЮюЮюЮюЮК«Ю«ЮНЦ | 7. 20...ї1.юЙюЙюЙМь 0687117 |1117171710168
ВІЗ 53280077777777771111171111125111111111111110091 11111175 С
ВІЗ 532809....777777777717Ї771717112311111111111100811 11111174
ВІЗ Б588540777777777771177111113011117111111111008111 11111175
ВІЗ 588544.....юююЮЮЮЮ/Ю/ЮСЮСС/С|77717171С1сл261111111111100911 11111174
ВІЗ 588548....777777771|771111125111111111111100911 11111176
ВІЗ БВВББО 777777777/Ї77717111л24111111111111100911 11111171
ВІЗ 588553 77777777777111Ї11111251111111111111008111 11111171
ВІЗ 588555 7777777777771Ї711111251111111111111008111 11111176
ВІЗ 588848...7777777771|711111л241111111111100911 11111175 СС
ВІЗ 594430......7777/Ї77717117251 171111111100811 11111171
Таблиця 227
Рівні хімічних маркерів нирок в сечі яванських макаків на 44 день і день 86 11111111 день44//// | День8б///:
РВ5 77777777717171717171717171711111111111111171710003 нд.
ВІЗ 532800 7777777771111111111111111111Ї111111100011111нді111111111С1С
ВІЗ 532809..77777777171717111111111111111111Ї11111110001111нді111111111С1С
ВІЗ БВВ8Б40777777777771111111111111111Ї1111111000311 нд
ВІЗ 588544.777777777111111111111111111Ї111111000111111111111111111100921щС
ВІЗ БВВБ5З7777777777111111111111111111Ї1111110005..777 нд
ВІЗ БВ8848.77777771771111111111111111111Ї1111111000911 нд
ВІЗ 594430...77777777771111111111111111Ї1111171710003 нд.
Гематологія
Щоб оцінити вплив олігонуклеотидів І5БІЗ на гематологічні параметри яванських макаків, зразки крові об'ємом близько 0,5 мл крові відбирали у кожного з доступних експериментальних тварин у пробірки, що містять К»-ЕДТА. Зразки аналізували на вміст червоних кров'яних тілець (ККТ), вміст білих кров'яних тілець (БКТ), кількість окремих білих кров'яних тілець, таких як моноцити, нейтрофіли, лімфоцити, а також на кількість тромбоцитів, вміст гемоглобіну і гематокриту, використовуючи аналізатор гематології АОМІА120 (Вауег, США). Дані представлені в наступних таблицях. «"» означає, що олігонуклеотид відчували в окремому дослідженні з аналогічними умовами, і значення є середнім для вимірювань у самців і самок мавп.
Дані показують, що олігонуклеотиди не викликали будь-яких змін гематологічних параметрів за межами очікуваного для антисмислових олігонуклеотидів діапазону.
Таблиця 228
Кількість кров'яних клітин у яванських макаків
Де РЕ нбя ат кватцЕНЯ (х 10б/мкл) | (х 105/мкл) | (х 103/мкл) (95 БКК) | (загальний 95) о/; віз 588550 | би | 343 | 99 | за | 67 | 46 ві 588555 | 51 | 41 | 96 | 451 | 497 | 35 /
Таблиця 229
Гематологічні параметри у яванських макаків 11111111 Гемоглобіні/длу//// | НС
Вимірювання концентрації олігонуклеотиду
Концентрацію олігонуклеотиду повної довжини вимірювали в тканинах нирок та печінки.
Використані способи являють собою модифікацію раніше опублікованих способів (І еєдз еї аї., 1996; Сеагу єї аї., 1999), які складаються з екстракції фенолом-хлороформом (рідина-рідина) з подальшою твердофазною екстракцією. Концентрації у зразку тканини розраховували за допомогою калібрувальних кривих, де нижня межа кількісного виявлення (ОС) становить близько 1,14 мкг/р. Результати, виражені в мкг/г тканини печінки або нирок, представлені в наступній таблиці.
Таблиця 230
Розподіл антисмислових олігонуклеотидів вени (рон еннеонни| НН нирки/печінка
Приклад 135: 6-Тижневе випробування ефективності несполучених та 5-ТНА-СаІМАсЗ сполучених антисмислових олігонуклеотидів, спрямованих на людський СЕВ, у трансгенних мишей
Два антисмислових олігонуклеотида, що мають однакову послідовність азотистих основ: несполучений антисмисловий олігонуклеотид І5І5 588540 і 5-ТНА-СаІМАсЗ-сполучений антисмисловий олігонуклеотид І5ІЗ5 696844, відчували у трансгенних мишей з людським СЕВ (НСЕВ-Т4 миші).
Мишам підшкірно вводили І5ІЗ5 696844 в дозах 0,1, 1,25, 0,5, 2,0, або 12,0 6,0 мг/кгн/тиждень або І5БІ5 588540 в дозах 2, 6, 12, 25 або 50 мг/кг/ тиждень, протягом 6 тижнів. Контрольній групі мишей підшкірно вводили РВ5 протягом б тижнів. Мишей приспали через 48 годин після введення останньої дози. Рівні мРНК у печінці аналізували за допомогою кількісної ПЛР у реальному часі.
Випробування 1
Результати представлені в наступній таблиці демонструють, що 5'-ТНА-СаІМАсЗ-сполучений антисмисловий олігонуклеотид, спрямований на СЕВ, є більш ефективним, ніж несполучений антисмисловий олігонуклеотид з такою-самою послідовністю.
Таблиця 231
Ефективність антисмислових олігонуклеотидів, спрямованих на СЕВ 11111111 ЕДю(миюю | 0 ЕДе(муюю З
Випробування 2
Рівні мРНК в печінці вимірювали з двома різними наборами праймерних зондів, спрямованими на різні області мРНК, і нормалізували за КІВОСКЕЕМО (БОВ) або циклофілину.
Набори праймерних зондів являли собою КТ53459, описаний вище, і КТ53460 (пряма послідовність СЗААОСАОССТСААТОАДААТСАА, зазначена в цьому документі як БЕО ІЮ МО: 813; зворотна послідовність ТЗССТОСАОООССсСТтТТСТТт, зазначена в цьому документі як зЕО ІЮ МО: 814; послідовність зонда АВАССАСААСТТОААСТС, зазначена в цьому документі як ЗЕО ІЮ
МО: 815). Результати представлені в наступній таблиці демонструють, що 5'-ТНА-СаІМАсз- сполучений антисмисловий олігонуклеотид, спрямований на СЕВ, є більш ефективним, ніж несполучений антисмисловий олігонуклеотид з такою-самою послідовністю, незалежно від використовуваного набору праймерних зондів.
Таблиця 231
Ефективність антисмислових олігонуклеотидів, спрямованих на СЕВ
ЕдДзво ЕдДво ЕД?» ЕД?»
ЕдДзво ЕДво ЕД?» ЕД?» вте3459 | ВТ53460 (ивлофіл (ивлофіл вте3459 | ВТ53460 (иклофіп (иклофіл (ВО) (ВО) (ВО) (ВО) ин ин ин ин
ІБІВ
ІБІВ
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105» Іві5 Рпагтасецгіса!Ї5 «1205 КОМПОЗИЦІЇ ТА СПОСОБИ МОДУЛЮВАННЯ ЕКСПРЕСІЇ ФАКТОРА КОМПЛЕМЕНТУ В «130» ВІОГ0251М/О «150» 62/076273 «151» 2014-11-06 «150» 61/987471 «151» 2014-05-01 «160» 854 «170» Раїтепнп версії 3.5 «21051 «211» 2646 «212» ДНК «213» Ното заріеп5е «400» 1 васнсірса внсівц ссцрасіре сарсісарсе веесссісссрвсцрвваїрі 60
ІссерРрааав Ірагріреорії аррасаресе ргерсрарссе саврірссав аасасавайй 120
Зо ріасааааре сігрРеРесіР рРІРрРеРарса рррргаарера агрірассав рісіаввісї 180 рравцшсар сПерасасі рарссаарса расаарсааа рсаарссаре асасассаїс 240 сівссссаре сссавсисі сіссівссії ссаасессаї єрерарсааг сісарссссс 300 аасісірссі ваїрсссції аїспрресс ІсНрісіре аррірірассассасіссаєї 360
РРІСШІеесС СссреСсссав ррассірсі сісіррарее рріараваїсаааресввсі 420 ссиссрасі (сіссаавав рессаррсас грраріасрі ріріссцсі врсисіасс 480 сріасссірі рсавасасрії ассірсараї стасрреріс сіррарсасс сіраарасіс 540 аарассаааа расірісаре ааррсававрі всарарсааї ссасірісса арассасасв 600 асксраваа серераатас грессссері сіссстасіа сааїрісарі ваїрараїстї 660 срнссасів сіаграсррі гасасісісс рересісірс сааїсрсассірссааріра 720 агрессраїр рарірресар асарсеасі рірасаасре арсрреріасірсіссаасс 780 7 срресаїссс сайеесаса арраарріре рсарссаріа ссрссЦраа расарсріса 840 сстассасір сарссерре» сцасссірс ріресіссса всррсраасе ірісарраар 900 віресісне рарсрррасе равссцссі рссааврасіс сісаїріас васассссіс 960 аараррівєес сеаавстццс сірісцнссс грасаравас сасгараареа рісваїєрсів 1020 арраїрррса сресссаре? раасаасава арсерраараї сріссіррас ссісаресі 1080 7 ссаггаасає стассіреїе сіарагрраї сарасарсаї Їгрерссаврсааснсасар 1140 вавссааааа рірістаріс ааснааня араарреіврс аарНагееї ріраарссаа 1200 вагас(евісії арісасасгаї вссасасасс ссааааців роісааарів їсіваарсав 1260 асавєсаріаа Ірсавасіве рісасраарс арсісааїра ааїсаанає аарассаса 1320 арірааріс арреасіаас ассаарааре сссіссарес арісіасарсагїрсаїсавсї 1380 7 вессаваїра срісссіссї гааресірра ассесасссе ссаїрісаїс аїссісаїга 1440 сігагсракні есасаасаєв гесрревасс саанасіві сайраграв аїссррвасі 1500 ївсіасгасаї Їсесаавваї сесааааасс саавевавва Нагсіввраї вістатєрівї 1560
ПреерісеР сс ері аассааріса асаїсааєес ШерсиНсс аарааараса 1620 аграрсааса грі Нсааа рісаарраса грграааассії яєраараїті Нстіассааа 1680 7 їраїсраїра аарссарісі сігарісісї рісесагері Чероаасасарваарятіта 1740 ссранасса саарсаасса Ісесаресса арагсісарі сайсесссі їсаааретас 1800 асвававсів гассерерсі ріерірісір артасіцеї всірасавса всасацен 1860
Ісасірірра Ірасаарраа сасісааїса аррісарсрі арраррррар аавсрррасс 1920 їрваврагава артарісста Щсасссса асіасаасає Тааєсерааа ааараавсав 1980 7 ваацссівга анцаграс гахсасене сссіраєсаа всісаарааєаавсігааає 2040 агрессавас таїсарессс ашгрісісс ссірсассра ррраасаасі сгавсіра 2100 веснНссісс аасіассасі гессарсаас аааарраара есірсісссі єсасаввата 2160 їсааавсісї «ЩІ рірісї варрарвава ааааврсівас Ісврааврвав вісіасаїса 2220 араагрероа гаарааарес арсірігара варагрсіса асасгесссса ресіаїсаса 2280 аарісаареа саїсісара»р вісрісассс сісееНссі Неіасірра врарівгаріс 2340 ссіаєесіра ссссаагасі їєсаравеів анйсівесер ссссНрага вНсасаавга 2400 ваарісв ц сансааринї рріеіаагса всіррорарі аріррагрісірсааааасс 2460 аваавсевса ааавсавеїа ссірсісасе сссваваси їсасаєсаас сіснісаав 2520 ївсірсссір всірааррає ааасіссаар аїгсарраці ген истаааввввін 2580 ссівсіврас арересріре вацраана ааасавсієс васаасаааа аааааааааа 2640 аааааа 2646 «2105» 2 «2115» 9001 «212» ДНК «213» Ното заріеп5е «400» 2 веавеіраре рісісавойї врерагрсів врагсссссі рірасарсіс ссарааїсіс 60
Зо
ІСісСнесИ сіссароіїсії вєесірсінс ісісісірас всерерісасс ссіссіссса 120 аврссісасаа ассірссіаре Ірісссіроо ісіссцан снннетірНанцевавє 180 агевавіси всісірісіс ссавресіврва рівсавівес асрассісав сісасівсаа 240 сцсірссіс сіре Ицсаа всрансісс тасцсавссісссвавіав сірарацас 300 аврірсссас сассасасса всіааннн птаншав їарарасевранцісвссаї 360 вНрессавр агеріснра асіссірасс їсаарірас іессівссісаассісссаа 420 авівсірара ЧНасаресеї вавссасівс асссасссее вісірсцакістассснс 480 їссіренс сассссівсії всавівваса авсірівссе аввНрісіс ссаавааааа 540 ассагенНсс ссааснеас арагрісаре вареісріга савассарі ссіаїрсарі 600 верасссаре арраграрар ісссірсаар вріваріссс ісассаїессіррацссса 660 авереааврес сассіріріс г(сіріврсса всагрсагос сараасасса ріссасірсс 720 сіаваграса сірісіссір Ісасссіте сіррсаррар ааісірррррарсавцис 780 сирарсрра гайсаррн Исаррір араарріара арсцрсарр асссареррі 840
Тасарраїсі сарссцей ререрраїра вррарвссц іравревраїставрваввне 900 веесНасар Прересірі ресарссісс сарссарнс ісіссниНсіссарріррв 960
Істрріравс грРеерісСНІ асаассссів ссцНеесісї всірасаааа асісссясаа 1020 7 аарРерссссії сріавсааре Ісссессрсс асравасіі сасаїсааєсіснНссесаї 1080 всаврсссіре сігаррсарс ассірррера ісіссірааї НЕЧассссіставссаєр 1140 вссасівавс ссісівсівс ссірссаваа (сівссессс сіссаєсис тассісіваа 1200
Ірессасссі тарасссірі рагссаїссії сісісстарс Ігаріааасєс серрісіса 1260 рраїрссара ресарсесас асаарсірее аааїссісар ресіссіассарсаррасів 1320 7 ссісесірсс ссассісссе сіссНеесс гріссссара ЦссцНсссі ярРНевасця 1380 асісаїєсії: я сасні сасагераає Нсссарна ггааанааєаааааєсааї 1440 вецшссаса (сісісавів ссісіаєсів вавессарвіавевсівесс ЦНерервавв 1500 реравессаєр ааграсісса арарсіасар гааррсаррі сарарассссасіррасааа 1560 сарівсесіве асісірсасс аїаасасаса аїсаасарее рарірарсія ваїсснан 1620 7 ІЇСсіеРісссії аарісерірв ШеросНа сірсрерарра всіаарессе варавраврі 1680 асіраареве аваріссіре ассіреса всааарееіе рраснсірсавнісіви 1740 їсснцвасів всавсісавс вевесссісс свсЦераїгв Цссеррааа віраївісре 1800 таррасарес ррресрарсс всаррівсса раасасавраї іріагаааар всіррерррсі 1860 врРІрреравс аррораарер аагрігасса ррісіаррісірравціса єсНреасас 1920 7 тварссаарс арасаарсаа арсаарссар расасассаї ссірссссар всссарсис 1980 і1сіссірссї гссаасесса грерогарсаа ісісарсссс саасісірссіраїрсссн 2040 їахсцееес сісНеїсів ваврріаарся арвріаасстісссцссів сірісіссає 2100 саєсссісст Їгессіцще ррессаресі їсаїсавссії цсіснНсав рірісассас 2160 сасіссаїре» ЕСЩщерссс рессссарре агссірсісі сірраррере їарараїсаа 2220 7 аресресісс Пссраснє іссаарарее ссарерсасів варіасеірі ріссцсірв 2280 снстасссе тасссірірс арасасеіас сірсараїсіасрерріссі рравсасссї 2340 раарасісаа рассаааара сірісарраа ресаврарівс арарріра ррясааїрав 2400 18івресаврі рессіаарес арааасарее саресеесав сааррісавре асіаррайрта 2460 васіаресаєв врірасааре Ірросірасс рераріарва всарішщар врірсрсавяс 2520 врааареере саарааааа» сегарнНаас сснасіаар сашфціасссі ярясНссав 2580 7 всарсссіре аарісаарає аасасісара ааїсрераре рараарсарі граааїссає 2640 агреяенвраєв варіаврятаа вагесівси сіссереррасі врраафрсесіріцсісавє 2700
Івасагеріс Іссвавасса ргавревагас ассіаареса вссцсссі сНваїврасі 2760 ії«аснеїс ссссснсїс ааарсаассс асіріссаар ассасасрас Нсраваасв 2820 врРрРаагасів вессссерісії сссіасіаса аїріраріса грарафсісі Нссасівсї 2880 7 аггасевнНа сасісіссре весісірсса аїсесассір ссааріраасеевссраївва 2940 рірерсавас арсрасірі гасаасерає ріравраарса гссссісссс стасацесі 3000 вісісссіва севсесссав сссварваві геесасісве сіссреасасіріаасісни 3060 всісістасс Несісасее рессісарес Нсарієст ассісрагрі сісаєгассіс 3120
Івсарсрррр гасірсісса асссрресаї ссссацерс асаарраарр ірресарсса 3180 7 віассессії гаарасаєсе їсасстасса сієсарссеяр веесНасссівсріресіс 3240 ссарсресра асрірісаре аарріресіс ПЦррарсере асрравссії ссірссааря 3300 ївассінва ссівтасссс саврісаваї ссірріснс сагссіасів (с(цсісісс 3360 ссассісаас ссірсістЕ ссісасіне Шааассіс ссіртасаасіаєсісаси 3420 сігавссін їагасссіре ааасссаїра гсссссрРісЕ сін ерісасіріатсссів 3480 7 асасісссав асашщіесасс їсаєнсіра сісісссара сіссцсаграсвасассс 3540 сісааравррі гессрааврсі НссіріснН сссірасара ргассагараа рравісваїр 3600 сіваррагро всасрессса грі раара сарараарее аррсаврееса врваасівве 3660 враааагреа раарррасар аасігНааї рсірварссі ваврссасісі ссірвсассос 3720 ареяраасаа сараарсера арагфсріссії грассснса весіссаєра асаїсіассї 3780 7 врРіІгставраї реаїсараса всацерерс сарсааснс асарравсса аааарівісї 3840 арісаасна акрарааре греаассіс сіагсссіра асісеррераагрвааїсіс 3900 всіраїснс сареастіарс ісссіраїса Чссавсссс ісіраасаасареессссавє 3960 ваааассісс аврісстац сіріссісст Їсссіпщцас Неваавсаві НсНвасівє 4020 віаанцссіс сагеаассіс арсссНеає ссісНасів арарссісссірісссарса 4080 аарісесівса аагсісссаа Ісасартац сстіаннсаа гессаїсесея ссцрнНсісС 4140 4
І сісасссаса грівесаарі гагеріріра арссаавраца гррістарів асатаєрсса 4200 саєассссаа аашерріс ааарісісіє аарсарасав саріаагрса васіреріса 4260 сваавсавсі сааїгаааєс аацаграав рісававвн аревраагреї вевраввицса 4320
Сер рріс арварецса веріррарое ррісаїрара стассрар рерсрасарят 4380 арвассасі гртарісааа агнНеаасар саррафсей реесааїсравеНарівсвр 4440 2
І аассірНее рресірраар рессасціе гІсрісаааре вааріссеіо їааграїтає 4500 їааснаааа аг рааара грірррані сарНесара НЦерісісір вро Наааат 4560 агевсцНевра авассавріве аврісагеої сісцсссіс їссасавассасаавнеяаа 4620 рісарррасі аасассаара арерсссісса ресаріртас арсаїраїра рсіррссара 4680
Івасрісссі ссірааресії граассесас ссессаїріс агсагссіса грасірсаєрт 4740 7 їсаваарера ссісісіссії рісссарссї ссссассцс ісарассавс аїрісесссї 4800 їааріссасі Ірїаасасіа тасссаїроії рреесссір аагрірасісагавсіввсі 4860 висагссісії ссірігассс Нсагаареа ацсинсста арсссіріва їсаасіаєсї 4920 сіаассснс сісааснНес їсасссірсс агріріаєсс сівєссщарв ссавінаїс 4980 псснагсі ссіасссіса геріссіріс ісцсірсар вацесасаа саїсресрря 5040 васссааца сірісацеа гсараїссе» васцесіаєасацерсаа єраїсясааа 5100 аасссаарее аєрацнагсі реріраріаа ссірссіаре асссавсасс ссаснссіс 5160 авгвесцева сссісаєссі їссНищаї сссісаваїе (сіасгвівНівррерісврв 5220 ссщеріга ассаарісаа саїсаагесі Чеесисса арааарасаа равсаасає 5280 рірнсааар (саареацає граааассія вааваєетц істассааає гаїсреіаря 5340 7 ваграгасаав ггаагааара асасаасісї ссісаренс сссісааріа айсансн 5400 ссістасасс Ігаарсіста еНессірра аарсснстї сайссіссткісістассіс 5460 арірісасіа НСНЦеННсС сіресасірі їсаснаасс Нарааїсасаравсісіва 5520 всаснсава гаєсціста савісстаса Шрасасеї ввааасаваа вссаааввав 5580 рісаарррас арсаарар саасаарерії гРесірааа асарссарес сісірасарс 5640
Неасссаа єнсінссс сарісс ассаєгарсав ННсСІсСсіаасасваввтаа 5700 7 асааасассс рігРісцс сспцсіссЕ ШЕреРеСсСсН грсіссссасавасісстасє 5760 ссааааресї єсірссаці регааггаар г Нссрарі Шсарсаса Цсісснцсї 5820 сірссавасе ааавссаріс ісівавісіс гріросагрея Шерреааса савраавввї 5880 ассрганасс асаарсаасс агресаресс аараїсісар Ісайреіаар сасарааїсс 5940 саріарірре враспрререо аррігарріс ааррігаааї ррраріаррр рааррааааа 6000 7 агрессагаа гарагроіре ШЩрірааав Неавснис ссісістасі еНеїріссс 6060 саврсесссії сааарераса сгаравсірі аїрсереесір гроірісіса віасіцнеїв 6120 сівгасавсав сасацейц сасісісваї вгасаареаас асісааїсаа веісавсвіа 6180 вРІаарваїе саасісааре Іссірерсівр сассіагесі сіссаррсаа сассісссас 6240 шеасава ісстасасіс сасссаїссії саагресаврсс ссацйсстцНе сассссавас 6300
Зо сарісаррра гер раара сріраарца ррааїрасас ррреяссарар рсарраарсі 6360 всссасааар аррірріасс тасісіссіа сисарраре? ррараарсер рассіррава 6420 тїаваартаві сстаєцнсас сссаастаса асацаасее ваааааараа всавваайціс 6480 сігаацна грасіаграс веНесссіра ісаарсісаа вааїаарсів ааасаєресс 6540 авасіаєсар рігарарсрії ссараїсссі гаррааарес іррраааррсірраррасір 6600 7 БРРіІсаррав сарессіррі НесісНсІ ссцрРІССН гагарессса ШІрісіссс 6660 сієсассрав враасаасіс гасі рвав вєсцссісса астассасі вссарсааса 6720 ааріаараса таснерсаа варрагааре агравраїссс ааравасаав іеревсаїва 6780 варераррір саагїареааєр араграстесс їррсссараа ссіарсісіа вааревсна 6840
Реррасаїсі асірарірас аааресааїе рерараїрас арірріррра всавсіргаав 6900 7 Івасесаріс їацсрісса гарраараєвс їесісссірс асарратаєсааарсісірї 6960
Нрірісіра ррарраврааа аарсігасіс ррааргваррі сіасаїсаар ааїреярата 7020 аррісарааа сересаїссії аарраресас Істаресссс ааїссцссіаарссаснс 7080 ївнсацас Ксіссаєрс цКсссассіс сссіасавраа аресавсірі вавававаєв 7140 сісаагаєрс сссаресіаї гасаааріса ареасаїсіс араврріррісассссісврї 7200 їссгетас гррарраврір арісссіаїв сісассссаа тасесара врірараваа 7260 4
І ївсіІсСщев Нрірстаса арірсссаар всссаасаві сс нНсістасавсинсіс 7320 сісТссНес аррігансії гесеессссіїрагавнса саарараарі сетйсацс 780 аавівавісс їсссццссії ассісревав агессааврів рісавсаїве вссссааавс 7440 арвааарсіс аагесагрів есіаріаайц сгарріаресавраврссірссісассНаря 7500 ассрсаїріс Нессівсрії рірісаараа сравесіврав сіреріссстарісівацс 7560 2
І сшШарріса ссіаарасас адаесарраас арссаїрсиї ссарргайцав гаанцстасі 7620 ваагеаїгсса їресасссса сівссісірс авеЦНерісі ааіїсарсіро рраріарірт 7680 аїрісірсаа ааассаваар серсаааарс ареіассірсісасесссва васнісаса 7740 їсаассісн Есаарівсів сссіресіра аррарааасі ссаараїрав вашіеввйн 7800 негагааря єецссірс їррасарере сріррраце аацааааса єсіссртасаа 7860 7 сассіріб ссараїссни Нерерсаар реаріреера асаресасір вссаїрнНеяї 7920 їасасіравра іІсааассіра савссе тн гааавейа ассссаафсс сааріссіва 7980 аааассавав всігавввав агрістаарс Кссассіса вірі щасі вавассавса 8040
Нерресага ггаресасаа граагссарс сів Нсссї араарссаїс сасаагенії 8100 їсснетавра срісаїсасі ріарасаагсіреріссісіїгрісссррівє всаасссна 8160
БРеСІРНСЇ ррасарсіар ррарррарва вгареаасарі гааррісіаа арраваїсаї 8220 авраасарасс сіраррсіра сіссірасса ссісасіссі ррссасіррс сссірраарс 8280 ссавінсса сесівсссіс Іврірессав вагеессіві спссНавсісстцвівс 8340 саасссаїре ссаараааар стагаарісвра сан саї» аа нн ет їсНараааа 8400 аєсссааасе їсаценНеа расасрісаа Ісаїтацаас ссастасна сарісаріаї 8460 рісараарсії ааааасіара ааассісірї авсссінн гІсасагесів рісаацеа 8520 внсосщсЕ Щщессіраа врессасірі арсігавссс НСЕОНсСІесісасіссн 8580 сссареаааа їсстасціса гегаааатся айансаса сіаарааате стасіарсіс 8640 сассаваасі сайсавевії ріавсіцве сссісассаї (сісісісаа вссіставсї 8700 вШЕсСНссс сСНссісСЦ ссісссісса ссарасагрі тасісіснс ассссаїсса 8760 аггрнссаї ссссассасс сирарсіас арараасіс іІсісасссасісссаїссів 8820 4
І їваїсісірі вессісаасас грсірестас ісссісСНніс ісааарірісіріссннце 8880 сисарівес ссарессссї єсеріссірс ісссарсссії ссрассссіс сіссірісїс 8940 сщщестаас вНавесіса асеНарссі аасагрісав васавсівре васаївірвя 9000 в 9001 «2105 З «2115» 9001 «212» ДНК «213» Масаса тишана «400» З ваївваафсгїрсісірісії сссасасіре аріссарівв сасваїсцНе всісасірся 60 асисірссії сссаваша арігансіс сіассісррос сісссааріа всіррраца 120 таррівсне ссассасаїв» сарсіаані прРіаниії аріарараса ррайссвсс 180
Зо агрНересса ррагррісії раасіссіра ссісааріва Нсерсссассісарссіссс 240 ааасірсір» гацасаррс рірарссай рсасссаріс аррісірст айснсссі 300
З5 ісісісіррі гссасссста сресарівра саарсірірс свраврісрісісссаарааа 360 ааассаїрії ссссаасне асараїріса рррарріррі гасарассав сіайрса 420 рірррассса ррарраграєр арісссірса аррріраріс ссісассаїв ссіррацсс 480 4
І сааарррраа вессассіврі рісісіріре ссарррірса грссарааса ссаріссасі 540 всссірРіагр асесірісіс сірісасссі Срсіррсар рарааісіре ррравсарій 600
ЦНесцнварс враврайсав ен сар рігаврааррі вєраавсіевсаррасссаре 660 веРНасарра грісарссії гПрррррра їраррраряс сціраррраїсіарррарт 720
НРерРРСМНа сарсіррарс грРіррсарсс ісссарссав Нсісісси Псіссавві 780 7 Рерісіррір арсірреріс Шасаассс сівссЦерс ісірсіраса аааасісссв 840 саааарресс ссісріаврса аррісссрсс рссасравас Шісасаїса аїсісійссв 900 саїесарссс Іррсіваррс арсассірре ррагріссі» ааши нас сссіцнавріс 960 агвессасів авсссісірс гріссівНа ваагссессс ссссіссаєс Нстассісї 1020 ваагесссас сснаврасіс грірасссаї всірісісставцраріаа асісеврісї 1080 сіарраїрсс аррресарсе сасасаарсі рераааїссі сарресісстассарсррра 1140 7 сівссісесії ессссассіс ссесіссце вссірісссс ааацссісс ссіреНрас 1200
Неасісаге сісансас гКсагаєре аашісссав НКаггааан аасаааааїс 1260 аврієвцсс асаїсірісї вірасістаї сієраресса ввіарввсів вссірвврвря 1320 аарррраррс сарааірасі ссаарарсса сарраареса ррісарарас сссасіррас 1380 ааасарірес Іррасісірі ассаєаасас асаарсааса рреравівав сірраїссії 1440 7 ансіреіс ссіаарірео Іерісіррос ЧЦеосіррора ррарсіраре ссараарравє 1500 віасігааре граваріссї єрассНрее сарсааарея Ігрраснсі єсарінсір 1560 снссцвас гврсавсіса всереесссії сссесЦева ге Нссеррра аавіваївав 1620 вРріаррасар гсерресаар сірсаррірс сараасасар айесасааа арессрррар 1680 сірріррере рсаррерраар рраагрісас сареісіаре ісісравні сарсЦерас 1740 7 асірарсіаа ріарасаарс аааасаарсс аррасасесс аїссівссссарвсссарсі 1800 ісісіссірс снстаасес сагерераєвс арісісарсс сссавсісіа ссіраєїрссс 1860
НсаїсНев вссіснас говарріаав гвавреріаас сцсссцсс іесівісссс 1920 аврсаїсссіс СНеРССЦІ Іррерссаре сцсаїсарс сінсісцсаврісірасс 1980 ассасіссаї гРісНсеес ссарссісаа ераїссірсі сісісрарер вріараваїс 2040 7 ааарріврсї ссиссрасі ісіссаарар вессаресас іераасасеї вірісснсї 2100 весиНстасс сріасссірі рсавасасеї ассірсаває ссасрерріс сіррарсасс 2160 сірсавасіс аараїсеааа аасірісаав аарвсававі всававвнці вавеесааєв 2220 арірірреса ріррссіаар грарааасар ресарагрес арсаарріса ррасіарваї 2280 вавасіарес арррісасаа врісоосіра ссарраріар гарсарнн аррвріав 2340 7 арерааарра аргераааааа ааареяреарі таассіцчар їаавсацшца сссірвясії 2400 ссасесарсс сіррааріса арараасасі сарсааїре? гарррарвав сарсррааас 2460 сссіагсері Їгаареріаєв ріаараєеса всцсірсав расісряаає всісівціс 2520 їсарівассі врісісівар ассарвавее ааасассіаа євсавсснї сссісцаає 2580 васнетасі гсіссссісі (сісааарса агссесіріс сасвассаса вваснсвав 2640 аасерерааї ассрессссе рісісссіас тасаагріса рісаїсараєсісніссас 2700 4
І Івсіаграсе рНасасісї ссерерсісї вссаагїсеса ссірссаарі вааїряссвя 2760
Іїрваріррес арасарсваї сірірасаас рраррівавра авсагссісі ссссссасаї 2820
Івсівісісс сірасавсес сіавссівав вавісевсаї Чесссссре асасівіаас 2880
Ісцесісіс тасснессс ісеееессіс авресисарс есНассіссагрісісаєт 2940 ссІСірсарс реРРІасірс Іссаасссар рсаїссссаї гррсасааре ааррірррса 3000 2
І вссрРіасся сс раарас арсрісассі ассасірсар ссррееесіц асссірсвів 3060 всісссарсе есраасаїві сареаареів всісЦрорар серрасеярав ссНссірсс 3120 аавеївассс Нрассіріта сссссавріс авагссіраї снесагсстасівіснсї 3180 сіссссассії саасссівсії сінссісас цсЕнааа ссцссіста ргаасісісіс 3240 аснсіргарс сЕНстасс сірсрааассс асааєссссі рісісцщіер ісасірісіс 3300
Зо ссірасасіс ссагасаці гассісаці сірасісісс савасісснН саїеіасвас 3360 ассссісаав авррісессва арсіцссір ІсСцсссіра серавассасараареяаріс 3420 ваївссраре аїрросасар сссарецНе ааресарава рррравресаа весаррраас 3480 1геррРеаааа гррараарея асаараїааї сеНсагесі рраврссіравісасісіссї 3540 ресасссаре рраасаасар аарсерарра (саїссіара сссіцсаррсіссаїрааса 3600 4
І ії«Чассіррії всіарагрра їсарасаврса Крееессрер сааснсаса вєравссаааа 3660 арірісіарі сааснаак вгараарреіре аріссіссіа гсссіраастірерррааєв 3720 ваасснцесії вгаїсцссав ваставсісс сігаїсанс савссссісі ваассвсавв 3780 вссссавеаа арісіссаре їсстацсів Іссіссцсс снетасне ацссіссаї 3840 ваассісірс Прарссісі Іссіааравс сісссірісс сарвсаасенН есігаарісї 3900 7 сссааїсаса ріансіасі Нсаагесса їеесессцНе ЧНсіссісас ссасарвісв 3960 сааврцагее грісаарсса аврагаєесіс гарірасаца грссасаєас сссавааці 4020 верісаааврії рісірассаа ваврарсарса агосавасів ррісасраар аарсісаріє 4080 аааєсаацна гсааррісав агвНарева агерівевав вісасіце рерісарвавє 4140 висарварі вНрірісра греррісаїр арасіассії гареесааса вррррассас 4200
Шетаріса аагеНеаас аврсареаїса Нересааїгт вареНарів враассівсї 4260 варерсірра ареессасц гріррісааа греаарісса таїраїсац ааснааааа 4320 вНеааваєе їгавгашіса реНесаврак ерісісісре рНаааараєвяесцрраав 4380 ассаврвівав всвагрсісї сцсссіссс сасавассас аарцраарі саррвасіаа 4440 сассаараре есссіссаре саріріасар саграграрі Терссаравр асаїсссісс 4500 ївааресіве аассесассс вессаїрісаї сагссісаї» ассраїррісараарярасс 4560 і1сісіссірі сссаврссісс ссасснсїс арассарсає рісрсссНа аріссасцея 4620 їаасасіаєса сссаїеріе геесссіраа грісасістаасіресіріїсаїсісісс 4680 ївІвасссі: саїаааваає тацссіааа всссіріваї саастассістаассснсс 4740 їсааснасі сасссівєсса сріріаєсасівссістарс сааштаєсі сагсісстас 4800 ссісагеріс ссрісіснс їссарраця сасаасаїре гсреяррасссаацасіріс 4860
Зо анегаггсавра іІссрррасиії рНагасагс вгесаареаїс ріааааассс варрварваї 4920
Іагсірерів аріаассірс стареассса рсасссіасі ссісаррес Неррассвіс 4980 асссцсси гнсісссіс авагрістаї вів щЩщеврев Церрассці рріввассаа 5040 ріраасаєса аїесінеес Нссаарааа гасаагравс аасагрієнН сааарісааб 5100 вагагесрааа ассіграара сенщснс саааїсацяе ріаресавасасаарерааї 5160 саараасеса асісіссіса єсНссссір аааєаацса Пси ссістассссіраав 5220 сіставНес сіграаарсс НсСисанс сісснегсі ассісаріаєссастанст 5280 вІссіввс асієШесі гсЧаассії арааєсасав авсісіаресасиНсавава 5340 іКшеван віссіасан ісасасаїрі ргеааасааар вссаааргав рісааррвяс 5400 арсаарсіар саасареесії єРесНрааа асавссарес сісірсаїарс Нраїсссаа 5460 вНнсцНссс сасісс ассасарсав КЕ НсСісста асасравєераа асаааїассі 5520 вІРессцісС сСсццсіссЕ ШЕееессіс грссссссас агаснстас ссаааресів 5580 сігссеще ррааїгаарі рнссаарії НсавсасаєсісіссНсісівссараїра 5640 аавссарісї сіварісісї ріресагврі Кресаасас авсааревіа ссвацасса 5700 саарсаасса гресаррсса арагсісаві сасіртаарс асараагсссаріаріраря 5760 асцрррера врірарріса аррірааагр ррартаррре аарррсаааа (ррссріаав 5820
7 авагревісрі Чрісааарі їгавнисс сцістасія ПсірНсссарсессснс 5880 ваареграсаї вгаравсіріаїререрсірі ррісісісаріасінріссірасавсарс 5940 асанеци асіріевасе асааврвааса сісаассаав вісаврсвіве віаавваєвс 6000 аасігаареї сссересівс ассіасессс Іссаресаас ассісссасі Нсіасавгає 6060 сссасасісс асісаїсісс ааїесаврссс саїсссНес ассссавасс арісаррваї 6120 вРереаавасі ггаарнаре ааграсаїре ррссарарес аараарсівс ссасааавар 6180 вігРтасста цсісстасі гЇсаарряаар аарсеяееасс іррарацара аааарісста 6240 шсассссв астасаасаї Тавсгавгааа адагаавсав ваацссівааннцаєас 6300 їаграсеНяе сссіраїсаа рсісаарааї аарнеаані агїрасссрасіаїсавріса 6360 ваврсаїссав аїсссіраре аааресіре? аааресірра ррасігрррі варравсаря 6420
7 ссавшщес івНнссії ссаїссіща гаресссац ірісіссссі ясассрарят 6480 аасаасісва єсінеарес Чссіссаас тассаснес сарсаасара ріаарасаєта 6540 сіарррррра врагаарраї варагсссра расаарівар всаїрараре врараїрсааї 6600 аррааврарас ваїрссірес ссараасста рсасіарраа гевсЦНаррр васаїсірсі 6660 варігасааа рісаагарев араграсарі ррірерарса всісааріга грсавісає 6720
7 Нріссаврав рааравсівєс ісссірсаса врагаєсааа всісіс (Не їрісігаряа 6780 ррараавраає; сігасісера аррарріста саїсаарааї грераїаарр ірараааєрт 6840 всаїссіаав гарвсасісї арвсссіаає ссцссіаав ссассісіртїсацассни 6900 ісіссагрсі єсссассісс сстасарааа ресавсірір араравагрсісаатаєрсс 6960 ссаресіаєе асааарісаа грасафсісе рареіреіса ссссісвенН сстцпетасі 7020
7 вравраріса рісссіагрос ігассссааї асцесараєв рігарараас есісісірвї 7080
ІрРірсіссаа рівсссваря вссаараріс СИНсСсСста савсиНсіссісіссцвса 7140 вРІрансів єсерссссу вагарнсас аарарааріс енсацса арівавіссї 7200 сссінсста гстереравра гвссаарівр їсаврсаєрое ссссааарса врааавсаса 7260 агесагріве стіартаанс раррівврса вавссівссі сасінаррва сірсаїрісї 7320 вессірірір грісаарааї гавресіраєвс грерісссіа вссірансс ШЩарвеісав 7380 сіаарасаса агсареааса рісаїесНс сарвацаре аацсіагра аграїссаєр 7440 всассссасії вессісірсар вНеріріса їсарсірроо аріарісраї рісірссаааа 7500 ассавраавсе всаааавсав втассіврсіс асесссвава сінсасвісаассіснсс 7560 аарівсівсс сіррсіраар гарааасісс аараїрарва ШеРе НИ сісіаарряв 7620
Шссірсів расареявся сеерацеаа Чаааасаврсірсвасааса спрівтсс 7680 араїссни ревесаарее арірорраас вресасівес саїрНенНа сасірараїс 7740 ааассівгаса сссаніча аареяснаас сссаафссса аріссісааа аассаргарес 7800
Іварегваваї агртааврсії ссассісавї вищцасіва вассаврсай ввввсаців 7860 аресасааре аагссарсіс г Нсссіар аарссаїсса саавецннс сНріавасв 7920 їсагсасірі агасаагсір рріссісНе гІсссеріресаасссНаре всівисівв 7980
Зо асавсіарер арераврава реаасарна аррісіааар вараїсагав аїсавасссії 8040 варесірасі ссірассасс ісаріссіре сієсірессс сіррааасссарінссасе 8100 сівсссісів рірессарва (еессірісі їссцнавсіс сіцрівєсса асссаїсвсс 8160 аареаграрір гаарісраса раграа гІщшщенНс Нарааааає сссаааїрсіс 8220 аненвавга гагаграасе атгацаассс астаснаца рісаріаїрі сараавсіаа 8280 ааастарааа ассісіртав сссщчакня асагесіррі саасістарііїіссщсНи 8340 ївссірааар вссасієНе сісірарісс ПЦСЕННсСівс ісасіссрцнї сссарваааа 8400 їєїасшса вріааасеве ЧНасісатас гаавваагес стасіаврсіссассараасіс 8460 аєссарсаїе тавсі Не рс ссісассак сісісісаар ссістарсів ШЩЕСНССосС 8520 нссісСНи ссісссісса ссарасагеі тасісіснс ассссаїсса ааранссаї 8580 ссссассасс снерассіав аравааїсіс ісссасссас Нсісаїссі ріраїсісів: 8640 їасснраса сірсіреста сісссісні сісааарсас рірсіссріс всНсарівв 8700 сссавесссс ісірріссів сісссарссс ісірассссі ссіссірісі ссіНесіаа 8760 сеЧавесіс аасенНаврсс гаасріріса ввававсівєв арасасвівсе весвіааввї 8820 врасаріссї єшссіаас агарісссів артанссіс аарісіаріс сірерісвн в880 щЕшсїсс рааагсаріс гсссісагра Ісереравсс асссірісаї єсараїрасі 8940 їааїстаєрі Нсацссі сассісасас сігарнсса рассссіааї Нсааатасі 9000
І 9001 «2105» 4 «211» 4086 «212» ДНК «213» Масаса тиана «400» 4 агараєагаг сарсаїсаве вавасареес ааарецсса сссицсавсі саріссссар 60 їсссієсНа нацсссії аасарааврас саїссссстії вссасісссі яв нинси 120 сісіресавс ааграарсав сівсівавсс авсісівв Нсерераарі саваїрассї 180
ЦЕссСіссс еСеРСісІсї вссісісрсї рісссіарре аррасассає врасссасів 240 асгрРцсиц ШЩессірсії вНссіртас ссарріссре сарасісеесіассіссівс 300
Зо ссісаваасе граагассіс Ісріврсасс Нсасссіса вссаїерсір врссссірвр 360 авсснсїса істасіссір іІссссарерс сіртасссаї ссссавсвісасеесівірс 420 аававсавсе васарівреса вассссаава вссасссевеї сісівасіаа весевісівс 480 ааассіресс асівєссссаа ссссресац ісесівресе сррівєсврасавресісссвс 540
ШЕеррісаге рерасаареї ссрсіагсес ірсіссісвра аїс/пріосі сасеереісї 600 всерравсеер арірссарее саасереріс їрраврісраа срраврсссає сівєссврссар 660 сссіасісі: аєгаснссс Іраррасеїв вссссівсссіврресассісстНсісссас 720 аїесЦНероре ссассаагсс сасссарарер асааареас аїсааааєре аасірврасі 780 аасассіаєр сарссстааа сарірісіаї сісаїсаєра асааїсаааєвсаасіссн 840 весаїраааа сваїррссівр всаррааас срасаїєесса їсаїссНсі васараїрва 900 ааріссаага грерісосіс Ісссааааса всівєНоасс ааагсавара ваїсірааї 960 аєсаассара арареаагра сіаєсіррас аїсіагесса їсерерірео саарсіртаї 1020 ріррасісра гараасісаа граврсісрро Іссаарааре аїргесраврар всаїрсснс 1080 ансірсаве асасааарес ісірсассав віспі еаас агасгесівєвра грісіссаав 1140 сісасараса ссагсірсее ррірррраас агрісарсаа асессісіра ссаарарарв / 1200 асасссіррс аїгрісасіаї гаарсссаар арссаарара ссірссррее арсссісаїс 1260 7 їссрассааї реріссірас арсеесісас ТесЦНссесе аїсесаасва ссасіссста 1320
Іїррареріса агрісрорара ссссааагсс саріррееса аагаанссі тацйсаваає 1380 всавіваці ссссарвакн (гаггісції вссааааавра ассареваає ссітввравинс 1440
І1агрріраїт асагсесссії всіраарсів есссарааар тааарагріс сасссаїрсс 1500 аресссагсії вессНсссів сассаїрвар ессааїсіве сісісєсерав ассісааряс 1560 7 аврсассіріа ревассаїра вааггаасів сігаасааас аварівНссірсісанн 1620 вісвссцеа агеррарсаа асігаасан аасснаара гсррарівра ріррасаавс 1680
Твівссваве гсрісіссса араааааасс аїеНсссса асірасава їрісарвевав 1740 віррірасавє ассавшцісї агосарісре асссарваре агсарарісс сіссаарярі 1800 вірассасса сіссацеїс Цсеесссар ссісаареаїг ссірсісісЇ грарряртта 1860 7 вагаїсаааєв рігесіссиї ссвасцсїс саарареесс аресасісра агасеірісї 1920 ссцсіррсі істасссеіа сссірієсар асасріассі єсарагссасереріссірв 1980 авсасссірс арасісаара ісрааааасі рісаарааре сарарірсав арсааїссвс 2040 іїріссасрас сасаррасії сеараасрре гаагассерс сссерісісс стасітасааєї 2100 віраріраєт арафісці ссасігсіає васееНаса сісіссерое сісірссааї 2160 7 сесассівсс аарігааіре ссрріврарі рррсарасар сраїсіріра саасррався 2220 веріасірсі ссаасссаре саїссссац ресасаарра арріреесар ссрріассвс 2280 сНвааваса всеісассіа ссасівсавс серевесца сссірсвівре сісссавсве 2340 сраасагріс арргаарріре сісцЦерарс рррасеррарс сцссірсса арасісснс 2400 агртасваса ссссісаара грірессваа всціссірі сисссірас еравассата 2460 7 раарравісе агоссрарра (рРресасарс ссарррраас аасараарсе варраїсаїс 2520 сіавасссії саресіссаї гаасаїстас сісріссіар аїсраїсара сарсайцреяв 2580 вссреСсаасі їсасареарс сааааарісі старісаасі Таанесараа вріресаарі 2640 їагеріріва авссаавата гесіставіе асагаєесса сасассссаваацшіввеїс 2700 ааарірісір ассаарарар сарсааїрса расіррріса сраараарсі сарірааайс 2760 аанаграар ассасаарії раарісарер асіаасасса арарресссі ссаресавів 2820 7 їасавсагра ІгавНевсс арареасаїс ссіссіраар рсірраассе сасссвссаї 2880 вісаїсаїсс Ісаїгассва Іграцесас аасаїрерсе рерасссааєтасісісан 2940 ваїгавагсс врвасцей агасаєсеес ааввагсвта аааасссвав ввавванцає зо000 сіррагфрісі аг цшвре врНерассі Черісрасс ааріраасаєсааєрсіне 3060 всцнссаара аарасааєра есаасаїрів Нсаааріса аррагагсра ааассірраа 3120 7 васрРіцшцсії Іссаааграє гсагсааарс сарісісіра рісісіріре саїсеЦіре 3180 раасасарса аррріассра Кассасаар саассаїррс аррссаарає сісарісасі 3240 сесссицсва авевасавра вавсівтасе рересівіво (рісірсавіа спвірсів 3300 асавєсавсас анкріщас ірісрасрас аареаасасі сааїсаареє сарсвістра 3360 веРрРаагааврс вррассірра гагарааааа рісстанціс ассссрасіа саасайавс 3420 7 ваграааааає аарсареааєіссіргаані гаграсіаєр асеНесссі гаїсаарсіс 3480 аагаагсаарі ггаанаєра сссрасіафєс аресссанії рісіссссір сассварята 3540 асаасісвав Ст ваввсі гссіссаасі ассасцЦесс авсаасаваа враававсів 3600 сісссівєсас арраїаєсаа арсісір (й рірісіраре арравраараа всірасістт 3660 аареаргрісї асаїсаараа грсероагаар аааресаврсі рігарараратрсісааєтай 3720 7 вссссавесі аїгасааарії сааргасаїс ісерарвріср ісассссісв внссцрї 3780 асірраврав граріссста грсісасссс ааїаснНеса вареісацсіресеврсссс 3840
Нрагавнс асаававаав Ес саці саавНевів їсаїсавсів ревавіавіє 3900 ваїрісірса аааассараа рсресаааар сарріассів сісасрссср арасіісас 3960 вісаассісі Іссааріссії рсссіресів ааррарааас іссаараїва враціреярі 4020 7 шесіаар гяещссір сіррасарре всесвррац раанНаааасавсівєсваса 4080 асасії 4086 «2105 5 «211» 2767 «2125 ДНК «213» Ми тивсиЇи5 «4005 5 рсіссаїсас асаріссаїв» гааарасіва сти цааагігрррріарірраврріррів 60 7 РІСірРівси рНаррарее рісігрррес їаарарррар Сі рРаааре вгаарйсірв 120 сссцерріса рісаарерір гросісасаї арцнсір й іссісарі» рсарійсарс 180 івересссіс сисаїрааї гНссереаа всарівесів срівсерсаве віаресіввс 240 саррсівсар агрссарарс арацесата аааррНаре ррасаріррр аааррррівї 300 авссараїсс арсашірре Шісарцір расарраррі сааайаррса сссававіга 360 7 ссіррараре все ресс асіррасісі сіррівсції ссаїрасаасррарарсссс 420 сарсісірсс ІсріссісИ ррісцаррс Цсіссісір раррірірар срсаасісса 480 вівсНваре сссеесссса арісіссівс ісісірраре варіаравраї сааарвсввс 540 їсспсаас Нсіссааре сррісаресс сірраріасс іагрісссісірвсистас 600 ссасассссе Ірсарасісе аассірсара іссасаррсі ссіррарсра ссірсарасс 660 7 срарассааа арайрісса вгааресрраа (есарарсаа гасесірсссасрассвсав 720 васшврааа агрррраац сірессссре гісссссисі асаассіравр ірассарай 780 нн сааї всіаграєре Насенцсіс срересісів сіааїсесассівссаарав 840 аагрессері ррраїрреса аасарсаац гріраїраїр рарсірраа сірісссаай 900 сссеРтацс сіайрерас ааррааррір рріарссаасассрссіра аграсацйецй 960 7 аснассасі єсавссерреяв асцеіссір сеісесіссс араарсвааа рірісаараа 1020 вРІРрсісаї ррарігеорас аварссцсс їессааран ссиНсаїеіаїрасавсссї 1080 саавааріве ссгаавсай ссіаєссісс сівсасавава ссаїсвааве авссваївсї 1140 варраїреррс асарсссаре араасарсар аарарраара Кріссіара ссссісрррс 1200 їссаїраага ісіассіррі всіарагрра ісарасарса Ісрраарсав саасцсаса 1260 7 вРРесіааврс врісссісас сааснрак вараареіре срарНасее врісаресса 1320 срагаєгрріс Ігссірасата грсіасаріс сссааарісі їсрісарарі рісісаїсавє 1380 арраріарсе агессрасір ррісасарар аарсісаасс аааїсарна їраарассас 1440 аавсігаарії саревассаа сассааравре всісіссаве сірісіасав саїваївавс 1500 їрресаврее аїессссесс Ірааресіве аагараассс вессаїгрісає саїсацає 1560 асірагросі ггсасаасаї серіссааас ссірісасів їсайсарва саїссвавсс 1620 7 Несіреаса ісерсарера ісссааааає сссарераве ацассірра грісіаївіс 1680
ШереРісе врссісіррі ррасіссрів аасагсааєе сснаврснс сааааарвас 1740 ааггаврсас агрієщаа арісаарваї аїераарасс грраваагві ШІстассаа 1800 агганеате ааассааас ісісарісіс грісесаїро грірераврса їааааагааряс 1860 аасеацнас агаарсаасс агїсесаарсс аарасісар іІсасісрсссісірааарва 1920 7 саєравассії ріагререрс сеіррірісї вартасцсе грсірасавсавсесасівс 1980
Нсагреїре аграїсараа асанссас аареісавср Ірерооріса раревсвррас 2040 сірваваце аавравессії вцссасссс ааасгасааса ЧСаагерваа ааагвсаваа до 2100 верраїсссів арнсіагєра Награгрів рссстаріса арсісаараа саарсісаає 2160 їагроссара сісісаресс саїсірісіс сссірсасер аррраассасасвавсснв 2220 7 арвсцссіс арасарссас сієсаарсав сасааргаас авнНесісссіріраарваї 2280 рісааарсісіяШріас грарсаарее аарарссіра сісераарва грісіасаїс 2340 ааваагррро асаарааарс саррірав араваїеста сааарессса аресіаїсав 2400 ааррісааар агессісіра рріррісасії ссасееНсс ісірсасаре аррерірваї 2460 сссіагесів ассссаасас аїесааарра ганссерре всссісісайсісиНсасаав 2520 7 аграаврссесі їсайсаарі грріріран арсіреррав таріараїрі сіссававас 2580 савраресеес аасарсіврі асссіснНаї гсссеррасіїссасаїєсаа ссісйссав 2640 вівсівсссї вестаааврва саавсісааа вгаїргаввакн терен исіагааававсії 2700
Іссірсарее арарірірар расаранаа арсарінаса агаасааааа аааааааааа. у 2760 ааааааа 2767 «2105 6 «211» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 6 всірарсівс сарісаареа 20 «2105 7 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 7 вессссесір авсірссарії 20 «2105» 8 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 8
Зо сегаасаєсс ааврсеввагвв 20 «2105 9 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 9 сінсссерра асаїссаарс 20 «2105» 10 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 10 агсірівНс гресассірс 20
«2105» 11 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 11 вісасацесс снссссіврс 20 «2105» 12 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 12 вассірріса санссснс 20 «2105» 13 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 13 вассіарасс герісасац 20 «210» 14 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 14 асіссарасс тавгассіреї 20 «2105» 15 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 15 всірааасіс сарассіара 20 «2105» 16 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 16 ріссаарсія ааасіссава 20 «2105» 17 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 17 сісарірісс аавсірааас 20 «2105» 18 «211» 20 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 18 арвараваав сірерссіре 20 «2105» 19 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 19 ваавресареа вараарсіве 20 «2105» 20 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «4005» 20 віррісріса сассіссара 20 2105 21 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 21 сссіссаврає арсареасс 20 «2105 22 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 22 ї«асссссї ссарагавса 20
Зо 2105 23 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 23
Неасіста сссссіссав 20 «2105 24 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005» 24
Іргаваавіс веаареавсс 20 «2105 25
«211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 25 сссіснНера гаарісеяраа 20 «2105» 26 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 26 вссівесссї сцрраваав 20 «2105 27 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 27 їссарієссї гесссісНе 20 «2105» 28 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 28 араарссава аррасасасе 20 «2105» 29 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 29 асееріараа вссараареа 20 «210» з0 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 30 срірісівса сареріасея 20 «2105» 31 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 31 арерівсісс арвассссеї 20 «2105» 32 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 32
Несісірса сісірссНс 20 «2105» 33 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 33 тїанссссрі сісрааріс 20 «210» 34 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 34 санетаріа греарассевя 20 2105 35 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 35 сасісасає ріаріарева 20 2105 36 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005» 36 ісісаєсасі сасанетає 20 2105 37 «2115» 20
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 37 ааграврайсіс агсасісаса 20 2105» 38 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 38 аріргааара ваїсісаїса 20 2105» 39 «2115» 20 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 39 сасарсарів ргааарагас 20 «210» 40 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 40 аассрісагта гсарісрааа 20 «210» 41 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 41 варіріаасс рісатавсав 20
Зо «210» 42 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 42 сссервававі віаассріса 20 210» 43 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 43 сававссссе раваріріаа 20
«210» 44 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 44 ваневсавра вссссврава 20 «210» 45 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 45 арвієстак весававссс 20 «210» 46 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 46 сцНеесареї єсрацерса 20 «210» 47 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 47 сансасняе всаррівсва 20 «210» 48 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 48 агсесірісї всссасісса 20 «210» 49 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 49 їсасавасе сірісірссс 20 «210» 50 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 50 сс рісас авагсесірії 20 «2105» 51 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 51 сссесіссвї грісасаває 20 «210» 52 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 52 саріассссе сіссе Ніс 20 «210» 53 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 53
Неравсарі ассссесісс 20 «2105 54 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005» 54 асснссцяе грссааївве 20 «2105 55 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 55 сівсссассі гссцнетесс 20 «2105 56
Зо «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 56 сесірРісСнНес ааресеріас 20 «2105 57 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 57 всівсаріре тареіграсес 20 2105 58 «2115» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 58 сссссеесір сарісвіаре 20 «2105» 59 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 59 вРІаавсссс сеесірсарії 20 «210» 60 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 60
Зо асесаревіа авсссссевс 20 «2105» 61 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 61 вравссасес аррятаарсс 20 «2105» 62 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 62 вссесірера вссасесаре 20
«210» 63 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 63 саарарссас сиссіраса 20 «210» 64 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 64 ссрсіссаав авссасснс 20 «2105» 65 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 65
Іссрісссес їссааравсс 20 «210» 66 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 66 ваавесіссе ісссесісса 20 «2105» 67 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 67
Іресареаар всіссріссс 20 «210» 68 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 68 варісЧЦевс аррааресіс 20 «210» 69 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 69 агваарвавії сперсавва 20 «2105» 70 «211» 20 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 70 сусрессас сіснрарея 20 «2105 71 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 71 врааавснє рессассісії 20 «2105 72 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 72 ааграсареаа аясцсерсс 20 «2105 73 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 73 їсарераара саргааарсії 20 «2105 74 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 74 їІсвасісси сіагееісіс 20
Зо «2105 75 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 75 снів Не гіссссіррес 20 «2105 76 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «4005 76
Нсагввравс сірааверіс 20 2105 77
«211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 77 їавгаїенса грраврссіра 20 «2105 78 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 78 ассаврітавра гг Нсаїрва 20 «2105 79 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 79 іїсчарсасса гетаван 20 «210» 80 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 80 вагссаїсіа всассарріа 20 «210» 81 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 81 сірісіраїс саїставсас 20 «2105» 82 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 82 ссааіесірі сігагссаїс 20 «2105» 83 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 83
Шересіссї ріраавняес 20 «210» 84 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 84 асаснщцце есіссіріра 20 «210» 85 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 85 вастарасас НЕТевесісС 20 «210» 86 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 86 їаавнНеасі агасастиє 20 2105 87 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 87 сісаанцаав Чеаставас 20 2105 88 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 88 сасснсїса анаарняа 20 2105» 89 «2115» 20
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 89 аснкессасс цсісааца 20 «2105 90 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 90 ассаєаасії вссасснсї 20 2105 91 «2115» 20 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 91 сінсасасса тааснесса 20 «210» 92 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 92 їсцерсце асассатаас 20 «210» 93 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 93 агріресага грісасіара 20
Зо «2105» 94 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 94 савасаснйї расссааає 20 «210» 95 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 95 вРіІСНСсага апраніса 20
«210» 96 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 96 аснкрірвіс Нсагаацне 20 «210» 97 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 97 аснсаасин рісріснса 20 «210» 98 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 98 їсссіргасі саасцеїре 20 «210» 99 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 99
ІРНавіссс їІгасисаас 20 «210» 100 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 100
ІсСЦНерісИ арісссірас 20 «2105» 101 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 101 їРтасасівс сіррарерсс 20 «210» 102 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 102 їсаїесірта сасієссіве 20 «210» 103 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 103 винссавссі їсавравегва 20 «210» 104 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 104 вРІєсСеРенНс савссцнсав 20 «210» 105 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
А1о
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 105 агеесеврів сер ссарвс 20 «210» 106 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 106 ваграсаєее срерівсееї 20 «210» 107 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 107 варвеаїграїе асагїсесрре 20 «210» 108
Зо «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 108 сссаїеНеї есаагссаїс 20 «210» 109 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 109 їссссессса І Нрірсаа 20 «210» 110 «2115» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 110 акневріссс сесссаїр 20 «2105» 111 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 111 асартаацяе еріссссесс 20 «210» 112 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 112
Зо їсааіргасав таайерріс 20 «210» 113 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 113 ассісагсаа грасарітааї 20 «210» 114 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 114 їсссрерасі саїсааграс 20
«210» 115 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 115 асаїссавраї аасссісссї 20 «210» 116 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 116 асагарасаї ссагагааіс 20 «210» 117 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 117 ссааасасаї агасаїссаб 20 «210» 118 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 118 аврсацеає Нсасцері 20 «210» 119 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
А13
«400» 119 арссааарса Краї нса 20 «210» 120 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 120 сцНераарсс ааарсацеа 20 «2105» 121 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 121 вісС(щсце раавссааав 20 «210» 122 «211» 20 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 122 сісанеісїЇ Нснераав 20 «210» 123 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 123 агенесіса НРІСЦНСЇ 20 «210» 124 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 124 ваасасаєрі їсстсацяї 20 «210» 125 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 125 васшщіегаас асатеНесі 20 «210» 126 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 126 аєсснеасї Чраасасає 20
Зо «210» 127 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 127
Нссагаєсс нраситнва 20 «210» 128 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 128 сагенинсс асгаїсснва 20 «210» 129
«211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 129 сісарагасі гесінсагс 20 «210» 130 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 130 сававасіса вавасівєвсі 20 «210» 131 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 131 агессасава вгасісарава 20 «210» 132 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 132 сааассаєрс сасаврагасі 20 «210» 133 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 133 їв Нсссааа ссагрссаса 20 «210» 134 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 134
ПрРІрРІаа сертассстї 20 «210» 135 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 135
ВРИРСНЯЇ ретаагсерії 20 «210» 136 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 136
Івссасгсвн всцеіерта 20 «210» 137 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 137
Перссірсс асернесн 20 «210» 138 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 138 ваваїсНер ссірссаїре 20 «210» 139 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 139 асавссссса тасавсісіс 20 «210» 140 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 140 васассасар сссссагаса 20 «210» 141 «2115» 20
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 141 їасісараса ссасавсссс 20 «210» 142 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 142 асаааріасі сарасассас 20 «210» 143 «2115» 20 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 143 рісаврсасаа аріасісара 20 «210» 144 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 144
Нрангарії я нсснес 20 «210» 145 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 145 сігасснва Крарівнс 20
Зо «210» 146 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 146
Іїаєсіссаре їсссвсцсї 20 «210» 147 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 147 ваацссівс ЦНСНННС 20
«210» 148 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 148 ансаввааї (ссірсцсі 20 «210» 149 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 149 саєаааанс аггаанссї 20 «210» 150 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 150 сасарісага ааайсареа 20 «210» 151 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 151 їгавснраї сарресаасе 20 «210» 152 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 152 їацсцра»р сцеаїсаря 20 «210» 153 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 153 васааасеее ссірагаріс 20 «210» 154 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 154 вНеРНСССІ серірсарре 20 «210» 155 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 155 всісваврняе Нсссісевї 20 «210» 156 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 156 сісааавсіс гаєнценсс 20 «210» 157 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 157 веаавссіса аавсісвавії 20 «210» 158 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 158 вНерарраа вссісааарс 20 «210» 159 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 159 віІгРТавня вареааврссії 20 «210» 160
Зо «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 160
Іїресааріре тарцНераря 20 «210» 161 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 161
І Несівес аарігртарії 20 «210» 162 «2115» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 162 їссавсісас Ессссір Не 20 «210» 163 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 163 їаареасса всісасіссс 20 «210» 164 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 164
Зо сагааагаа»в ваїссарсіс 20 «210» 165 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 165 арерассара аагааргаїс 20 «210» 166 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 166 ссаснареве ассарааата 20
«210» 167 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 167 їссавеасіс Ісссснсав 20 «210» 168 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 168 аарісссасс сіщесівсс 20 «210» 169 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 169 сігсараарії сссасссни 20 «210» 170 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 170 сарааасірс арааріссса 20 «2105» 171 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 171 аассісірса сісірссНс 20 «2105» 172 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 172 сссісааасс ісірсасісї 20 «210» 173 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 173 їсацесссії сааассісів 20 «210» 174 «211» 20 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 174 ссасасісаї гесссісааа 20 «210» 175 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 175 сасібсссас асісанесс 20 «210» 176 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 176
Навессасії всссасасіс 20 «210» 177 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 177 старіссіра сснцесірсс 20 «210» 178 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 178 сісаєссіав Іссігассн 20
Зо «210» 179 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 179 сстарісіса ісстаріссії 20 «210» 180 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 180 асссірсста рісісаїссі 20 «210» 181
«211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 181 сурісассс гесстарісії 20 «210» 182 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 182 всссассце гсасссірсс 20 «210» 183 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 183 ссіаааасіє сісстасісс 20 «210» 184 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 184 варісаврааа ггаррісааа 20 «210» 185 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 185 ссетасіссс агисассії 20 «210» 186 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 186
Ів Нрірсаа іссіссараа 20 «210» 187 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 187 аааресіраї гаарссірес 20 «210» 188 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 188 ссщрасса сааарівесс 20 «210» 189 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 189 аввіассасс Іст рірве 20 «210» 190 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 190
Ірріррісас ассісаарав 20 «210» 191 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 191 всаврввавса всісцссцї 20 «210» 192 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 192 їссірірсав гравсарсіс 20 «210» 193 «2115» 20
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 193
Неагасссії ріссареваєв 20 «210» 194 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 194 ававсінеа гагссірірс 20 «210» 195 «2115» 20 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 195 асааасарав січ саїаєс 20 «210» 196 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 196 їсавасасаа асагавсін: 20 «210» 197 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 197 їссіссісая асасааасає 20
Зо «210» 198 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 198 ассісснес ваврісавсії 20 «210» 199 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 199 агртавассії ссиссвравії 20
«210» 200 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 200 псиваїрі агассіссн 20 «2105» 201 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 201 їссссацсі грагріарас 20 «210» 202 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 202 нснассс сансцваї 20 «210» 203 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 203 сіесСсСННсЕ таїссссайц 20 «210» 204 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 204 їсасавсірс СІЧ сНас 20 «210» 205 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 205 іссісісас авсірссц 20 «210» 206 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 206 їравсагсіс ісісасарсі 20 «210» 207 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 207 всагацеає саїсісісіс 20 «210» 208 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 208 ївасінеіс агарссірре 20 «210» 209 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 209
ІРісснрас Шрісагав 20 «210» 210 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 210 саріасааар гаассрарря 20 «2105» 211 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 211 сіссіссарі асазаареаас 20 «210» 212
Зо «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 212 васісасісс іссаріасаа 20 «210» 213 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 213 сасаревасі сасіссісса 20 «210» 214 «2115» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 214 врРІіСавсаїа гргасісасі 20 «210» 215 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 215 їсассісібс ааріацере 20 «210» 216 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 216
Зо ссараасас сісівсаавії 20 «2105» 217 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 217 вРеСссессає ааїсассісї 20 «210» 218 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 218 сісцріваа стаїсаарев 20
«210» 219 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 219 срасцсісі гріраастаєї 20 «210» 220 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 220 аггааасеас ПСІСН ее 20 «2105» 221 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 221 аснраагса аасгаснсї 20 «2105» 222 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 222 асассаасії гааїгааасе 20 «210» 223 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 223 їссастасіс сссавсіваї 20 «210» 224 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 224 сарасаїсса стасісссса 20 «2105» 225 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 225
ШІ Несава саєссастас 20 «210» 226 «211» 20 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 226
НСІРВ НИ гссарасаїс 20 «2105» 227 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 227
ЇгесСеСНсСї г Неса 20 «210» 228 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 228 їв сс всцнсівв и 20 «210» 229 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 229 вРІассірсї ШЩеСссесН 20 «210» 230 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 230 їргавсарета ссірсі ще 20
Зо «210» 231 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 231
Нсарссавре всарсасцня 20 «210» 232 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 232 цеїссцоса вссаревсав 20 «210» 233
«211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 233 їІггавшцсї сснсавсса 20 «210» 234 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 234 їсаїсНева ві нсіссн 20 «210» 235 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 235 аааєссісає снергавш 20 «210» 236 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 236 ааасссааає ссісаїсНне 20 «210» 237 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 237 ріссавсаре ааассссна 20 «210» 238 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 238 вссссірісс арсаргааас 20 «210» 239 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 239 авсіріща ансаассс 20 «210» 240 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 240 аасцнессас сіріврвріга 20 «210» 241 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 241 їсассцаєс сссайсня 20 «210» 242 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 242 їсаасішса сааассасса 20 «210» 243 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 243 ссессаврааї сассірсаав 20 «210» 244 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 244 арвареаагр аараарвсії 20 «210» 245 «2115» 20
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 245 вссННссіс арерасіре 20 «210» 246 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 246 аааігрісіре рарірісаря 20 «210» 247 «2115» 20 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 247 вссіаварів ссіссНЦаре 20 «210» 248 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 248 весасіссс сарагаргаа 20 «210» 249 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 249 ареравсіав іссірраара 20
Зо «210» 250 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 250 асассіраав аваааверсів 20 «2105» 251 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 251 ссср асс асааарірес 20
«2105» 252 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 252 всссісааре тарісісаїв 20 «210» 253 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 253 аареярааррга реасараата 20 «210» 254 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 254 ааарессаав варевагрсі 20 «2105» 255 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 255 ававрісссі (сігассаїс 20 «2105» 256 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 256 всірерасар вгараваряіс 20 «2105» 257 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 257 їсаааїірісї регарісіса 20 «210» 258 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 258 арааргаваа грсівсіграаа 20 «210» 259 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 259
Ірсірассас Пересаїсіс 20 «210» 260 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 260 саасінсас ааассассай 20 «210» 261 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 261 авсісіріва Нсіааввн 20 «210» 262 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 262 ссассірів» ріраррараа 20 «210» 263 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 263 варгеасісас Чрааграаа 20 «210» 264
Зо «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 264 їрвааграсс арегавсіат 20 «210» 265 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 265 віссснсїс сайфгсссс 20 «210» 266 «2115» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 266 їсаасінн аарнаагса 20 «210» 267 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 267
БеРрРІсаррає аасааресес 20 «210» 268 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 268
Зо сцнссаавсс аїстцтаас 20 «210» 269 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 269 арвасісасі ггаагргааас 20 «210» 270 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 270
Нссаресаа стагавснс 20
«2105 271 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 271 саваріссав ссасів Ще 20 «2105 272 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 272 ссаассівса варесаріре 20 «2105» 273 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 273 ївсааргара враваарсів 20 «210» 274 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 274 старесаврі тасісассса 20 «2105 275 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 275 сассагтаасті тессассірії 20 «2105» 276 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 276 тїаветассас сісінеїре 20 «2105» 277 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 277 сцнрассіса ссісссссаа 20 «2105» 278 «211» 20 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 278 ссассісні ріреесавсі 20 «2105» 279 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 279
Нсасааасс ассаєсісн: 20 «210» 280 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 280
Негсассіс сеНеїгсаса 20 «210» 281 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 281 вааарісвра ярі Цессії 20 «2105» 282 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 282 асавєсаргаа гераарртна 20
Зо «210» 283 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 283 саєесірасс ас еесас 20 «210» 284 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 284 врісассце рсаврааврвс 20 «210» 285
«211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 285 віагарісйї асаарісвас 20 «210» 286 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 286 врасцсссі Чрассасаа 20 «2105» 287 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 287 їсассНеас сісассіссс 20 «210» 288 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 288 тїаварівссії сснареаїв 20 «210» 289 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 289 їІваснсаас Нрісрісів 20 «210» 290 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 290 саравраареа вааїрірсір 20 «2105» 291 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 291 ареравсаврс ісцссісів 20 «2105» 292 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 292 їв Нссссір реісссарга 20 «210» 293 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 293 вессівесів Нисаавсс 20 «210» 294 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 294 васігестн сагсіресав 20 «210» 295 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 295 вааввснис савесаасіа 20 «210» 296 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 296 їсаснеааї гааасгасн 20 «2105» 297 «2115» 20
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 297 вессссаааа гессаареаєт 20 «210» 298 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 298 ааєсассівс ааргаравва 20 «210» 299 «2115» 20 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 299 васснсарі гссаїссна 20 «210» 300 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 300 їраїгсаарсс Ірессссааа 20 «2105» 301 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 301 тїагааарісе ваврірнес 20
Зо «210» 302 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 302 сссаїсссів асіввісіре 20 «210» 303 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 303 ссагерятаї арірнНасаа 20
«210» 304 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 304 вІВНСІСЦ расцссаве 20 «210» 305 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 305 вессірсісс гсассссаврі 20 «210» 306 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 306 ваврессірес їн исаав 20 «210» 307 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 307 васісісссс Нсаріассі 20 «210» 308 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 308 сагререітага рісНасаав 20 «210» 309 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 309 ваареагааї ріссісаааа 20 «210» 310 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 310 їсассірріс Пссаарсса 20 «210» 311 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 311 сіссссаваї авгааарева 20 «210» 312 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 312 врасісасії грааїгааасе 20 «210» 313 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 313 вессвссавра агсассівса 20 «210» 314 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 314 сісаснеаа ггааасеасі 20 «210» 315 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 315 сісссавс сСіНссісав 20 «210» 316
Зо «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 316 аврааарірре аврісНесс 20 «210» 317 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 317 вісвсавсів нНаанса 20 «210» 318 «2115» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 318 ссареасісї сссси сарі 20 «210» 319 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 319 арерааррає расараатає 20 «210» 320 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 320
Зо ваааїравеї саааїрісів 20 «2105» 321 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 321 враварісає аааграрріс 20 «2105» 322 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 322 віавааарів рраряівце 20
«210» 323 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 323
Тагааарасс гісіраарівс 20 «210» 324 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 324 сівсіссіса ссссаріссії 20 «210» 325 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 325 стасіреваї (сіріссна 20 «210» 326 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 326 сссаааарес саареарега 20 «2105» 327 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 327 ївассасняе всаїсісссс 20 «210» 328 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 328 ссірсаарва гарргаврааврс 20 «210» 329 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 329 сісісассіс Ігсаартац. 20 «210» 330 «211» 20 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 330 ссссааааре ссааррарре 20 «210» 331 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 331 віснссаав ссаїсіна 20 «210» 332 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 332 вНасаарів гаснНаарея 20 «210» 333 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 333 сссаєеНеї есаагссівс 20 «210» 334 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 334 варрірераа всаїсрараа 20
Зо «210» 335 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 335 ївсісссасс асірісагсі 20 «210» 336 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 336 аврвсареНа сісасссава 20 «210» 337
«211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 337 їасіррван сісієснас 20 «210» 338 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 338 всснссса вссінссіс 20 «210» 339 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 339 рієсаагссії гсараарава 20 «210» 340 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 340 асареававра вргісссцсї 20 «210» 341 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 341 сссаааарга гааарервааа 20 «210» 342 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 342 ааврсссареве таааїрсна 20 «210» 343 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 343 ваграавєссії рессссаааа 20 «210» 344 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» зЗ44 їресараваа врагаарів 20 «210» 345 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 345 цесссавссї цссісарвев 20 «210» 346 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 346 весавараар гараагрівс 20 «210» 347 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 347 асавівєссар вааасаараа 20 «210» 348 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 348 тїавесарейн асісасссав 20 «210» 349 «2115» 20
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 349
Нпсіснеас нссаревсі 20 «210» 350 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 350 ссірсіссіс ассссарісс 20 «210» 351 «2115» 20 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 351 їсссасіаас сіссайесс 20 «210» 352 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 352
Нсссцвра ссасаааріє 20 «210» 353 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 353 сіррРісста весавянас 20
Зо «210» 354 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 354 їссавесаас тагавсиса 20 «210» 355 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 355 всссаївНе грсаассів 20
«210» 356 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 356 веисссасії аассіссає 20 «210» 357 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 357 аретаварав саагаєНас 20 «210» 358 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 358 ссасіаассі ссанессса 20 «210» 359 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 359 їсасааасса ссаїєсісна 20 «210» 360 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 360 їасісассса рагаагссіс 20 «210» 361 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 361 ївсіссісас сссаріссіс 20 «210» 362 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 362 іїсісасарсії єссінсірії 20 «210» 363 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 363 вааавергеаве асісасцва 20 «210» 364 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 364 ссаїстна ассссавара 20 «210» 365 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 365 їссісасссс аріссіссав 20 «210» 366 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 366 сігесавара ареараатрії 20 «210» 367 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 367 ісіссссара гаррааарея 20 «210» 368
Зо «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 368 аснсарсів сісссассас 20 «210» 369 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 369 васарсарва арргаарвйї 20 «210» 370 «2115» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 370 врагасаааї гресстаїаа 20 «2105» 371 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 371 сірсісссас сасірісаїс 20 «2105» 372 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 372
Зо арвааграавє аагвсінсс 20 «210» 373 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 373 врРРафсісає сснасгссіс 20 «210» 374 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 374 віесіврріс старесаряї 20
«2105» 375 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 375 сааааресса аррареграїв 20 «210» 376 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 376 ссагесісас саскеесаї 20 «2105» 377 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 377 ввавесівев асарвавава 20 «210» 378 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 378 вравсарсіс Нссісірва 20 «210» 379 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 379 ісісассісс вНесасав 20 «210» 380 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 380 саріссісса єссцнссса 20 «210» 381 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 381 авріссіссав ссіитсссав 20 «210» 382 «211» 20 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 382 їгааргавріс гсррараріс 20 «210» 383 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 383 сарааєсасс їесаареава 20 «210» 384 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 384 їаввааарее аргасісасі 20 «210» 385 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 385 асснеесав гааресіссь 20 «210» 386 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 386 вагасааате ргессіагааа 20
Зо «210» 387 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 387 сігаараваа аресіраїра 20 «210» 388 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 388 ааєраєсаре вгавставісс 20 «210» 389
«211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 389 сцКавсісас стааареааї 20 «210» 390 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 390
ІРерРіагавії вНасаарів 20 «210» 391 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 391 їгаарагааа весігсаграа 20 «210» 392 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 392 вігНасаав гггаснаав 20 «210» 393 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 393 ассіріреоі гаррарааса 20 «210» 394 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 394 їсасссаваї ааїссісссі 20 «210» 395 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 395 їв Нрісеса сірі шщаа 20 «210» 396 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 396
Іррісасаці сссицссссії 20 «210» 397 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 397 ссівррісаса Чсссцнссс 20 «210» 398 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 398 тїавассіреї сасансссії 20 «210» 399 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 399 сставассів вісасацес 20 «210» 400 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 400 ссцнссварії савсі. нс 20 «210» 401 «2115» 20
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 401 сіссцссва рісагстн 20 «210» 402 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 402 авассісстї ссварісавс 20 «210» 403 «2115» 20 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 403 віавассісс Кссраріса 20 «210» 404 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 404
ШессесН сін 20 «210» 405 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 405
СЕН ессес ПСігеН 20
Зо «210» 406 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 406 ссівсСНце ссесцсіве 20 «210» 407 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 407 їассівсц Іессесцсі 20
«210» 408 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 408 авраааассса аагссісаїс 20 «210» 409 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 409 тТагаааассс аааїссісає 20 «210» 410 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 410 агараааасс саааєссіса 20 «210» 411 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 411 тТаєараааас ссаааєссіс 20 «210» 412 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 412
Нагагаааа сссаааєссії 20 «210» 413 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 413 сКагарааа асссаааїсс 20 «210» 414 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 414 ссцНагараа аасссаааєс 20 «210» 415 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 415 сссЧагава ааасссаааї 20 «210» 416 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 416 ссссцнага»в аааасссааа 20 «210» 417 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 417 ассссцага ваааасссаа 20 «210» 418 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 418 аасссснає агаааассса 20 «210» 419 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 419 ааассссна гараааассс 20 «210» 420
Зо «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 420 вааассссії атараааасс 20 «210» 421 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 421 врааассссі Тахтараааас 20 «210» 422 «2115» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 422 арвааасссс Нагараааа 20 «210» 423 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 423 сареааассс скасгарааа 20 «210» 424 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 424
Зо всарвааасс сснасгараа 20 «210» 425 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 425 арсаррааас сссцагава 20 «210» 426 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 426 саврсаргааа ссссНагат 20
«210» 427 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 427 ссарсарраа асссснНаєа 20 «210» 428 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 428 їссавсарвга аасссснаї 20 «210» 429 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 429 і1ріссаврсар вааасссст 20 «210» 430 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 430 сіріссарвса ггааассссї 20 «210» 431 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 431 ссіріссарс аргааасссс 20 «210» 432 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 432 сссіріссар саргааассс 20 «210» 433 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 433 ссссірісса всарвааасс 20 «210» 434 «211» 20 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 434 сессссіріс сарсарвааа 20 «210» 435 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 435 асессссірії ссарсарраа 20 «210» 436 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 436 сасессссір Іссарсарва 20 «210» 437 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 437 ссасессссії ріссавсаре 20 «210» 438 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 438 сссасесссс Іріссавсав 20
Зо «210» 439 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 439 їсссасессс сіріссавса 20 «210» 440 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 440 аєсссасесс ссіріссавс 20 «210» 441
«211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 441 ааєсссасес сссіріссав 20 «210» 442 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 442 сааїгсссасе ссссірісса 20 «210» 443 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 443 їсаагсссас вссссірісс 20 «210» 444 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 444
Нсаассса сессссіріс 20 «210» 445 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 445 ансаагссс асессссірі 20 «210» 446 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 446 аансаасс сасессссір 20 «210» 447 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 447 їаайсаайс ссасессссї 20 «210» 448 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 448
Наансаайє сссасесссс 20 «210» 449 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 449
Шаайсаа ісссасевссс 20 «210» 450 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 450
Ішаанса агсссасесс 20 «210» 451 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 451 віишщаанс аагсссасес 20 «210» 452 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 452 1РЕшаак саагсссасе 20 «210» 453 «2115» 20
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 453 сін ааї гсаагсссас 20 «210» 454 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 454 всіріщшщаа Нсаагссса 20 «210» 455 «2115» 20 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 455 савсіст ні аансаасс 20 «210» 456 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 456 всаврсіє І гїаансаас 20 «210» 457 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 457 сесавсівн Наансааї 20
Зо «210» 458 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 458
Ісесавсірї Шаансаа 20 «210» 459 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 459
ІрРісесавсї гнштаанс 20
«210» 460 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 460
Нрісвсавс гнщаай 20 «210» 461 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 461 виНрРісесав сін ааї 20 «210» 462 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 462
НеНРІісес авсірішща 20 «210» 463 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 463
ШеНеІсе савсісї 20 «210» 464 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 464
Іще Неїс всарсі 20 «210» 465 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 465
Неї сесавсісн 20 «210» 466 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 466 враїссавсі сасіссссів 20 «210» 467 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 467 ааасгаавває ссавсісасі 20 «210» 468 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 468 вассаваааї аареаїссав 20 «210» 469 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 469 сцнавврасс арааасааве 20 «210» 470 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 470 сасссасна рерассараа 20 «210» 471 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 471 ассасссасі гарреассав 20 «210» 472
Зо «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 472 арвіссарра сісісссси 20 «210» 473 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 473 аарріссаре асісіссссії 20 «210» 474 «2115» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 474 ааасірсава арісссассс 20 «210» 475 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 475 врарресссс всіравсівс 20 «210» 476 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 476
Зо їсссреааса їссаарсеве 20 «210» 477 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 477 саєсасннс ссреаасатс 20 «210» 478 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 478 сіррісасає Їссснсссс 20
«210» 479 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 479 сіарассіре їсасацесс 20 «210» 480 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 480 вравіреіре їсасассісс 20 «210» 481 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 481 асссссісса гагарсарва 20 «210» 482 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 482 асістассс ссіссарава 20 «210» 483 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 483 вРІасееріа ргаарссараа 20 «210» 484 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 484 враваріріа ассрісатає 20 «210» 485 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 485
Івсвацевс ававссссвв 20 «210» 486 «211» 20 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 486 весаврівсв ацйерсараєв 20 «210» 487 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 487 веиссайцсас Пресаррір 20 «210» 488 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 488
Нрісасара ісесірісів 20 «210» 489 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 489 аареарісії ресаррааре 20 «210» 490 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 490 віасаграав гаріспнцерес 20
Зо «210» 491 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 491 ааврсцсерс сассіснеа 20 «210» 492 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 492 ссаєставса ссарвтаває 20 «210» 493
«211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 493 вессссаае сірісісаїс 20 «210» 494 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 494 аасаавня асіарасасі 20 «210» 495 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 495 ївссассне їсаанааврії 20 «210» 496 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 496 їааснесса сснсісааї 20 «210» 497 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 497 саєааснес сасснсїса 20 «210» 498 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 498 асассаєаас Кессассн 20 «210» 499 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 499 їсасассага аснессасс 20 «210» 500 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 500 їавісссіва снсаасня 20 «2105» 501 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 501
ІРРІвНавії сссірасцс 20 «2105» 502 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 502 всрРецссав ссцсареав 20 «210» 503 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 503 їсаїраврваї гаїгасаїре 20 «210» 504 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 504 ссесссагрі гріссаассс 20 «210» 505 «2115» 20
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 505 віаацереї ссссесссаї 20 «210» 506 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 506 аарісссера г(сісаїсааї 20 «210» 507 «2115» 20 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 507 аасасагара саїссараїта 20 «210» 508 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 508 сааавсане аїенсасн 20 «210» 509 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 509
Шеаасаса гснНесісаї 20
Зо «210» 510 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 510 снссавви: Цссагаєсс 20 «210» 511 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 511 їснссаврі ШЩссагаєс 20
«210» 512 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 512 авасісавав асігресінс 20 «210» 513 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 513 вссівссаїр вНесцврів 20 «210» 514 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 514
Івасігаває сневссірс 20 «210» 515 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 515 негагсісс аррісссесі 20 «210» 516 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 516 арісаєаааа Нсареяаації 20 «210» 517 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 517 сравненс ссісеррірса 20 «210» 518 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 518 аврссісааав сісгавняї 20 «210» 519 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 519 вравеаавсс їсааавсісе 20 «2105» 520 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 520 віавНераєв ваарссісаа 20 «2105» 521 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 521 саавівєвіав КрРерарваав 20 «2105» 522 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 522 їссісараса сааасаваєс 20 «210» 523 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 523
Нессіссї сагасасааа 20 «2105» 524
Зо «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 524
ІїавассісстІссварісат 20 «2105» 525 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 525
Неагртава ссіссцссе 20 «2105» 526 «2115» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 526 ситна сссансня 20 «2105» 527 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 527 вссшсна гссссансії 20 «2105» 528 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 528
Зо авсівсс сЧагсссса 20 «2105» 529 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 529 савсієсси ЕсНасссс 20 «210» 530 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 530 асавсівссї НсНассс 20
«2105» 531 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 531 всагсісісї сасавсірсс 20 «2105» 532 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 532 авагрРіссі гасітщеїса 20 «210» 533 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 533 сарсагарее асісасіссії 20 «210» 534 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 534 ссерссарааї сассісірса 20 «210» 535 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 535 їгааїсааас гаснсісн 20 «210» 536 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 536 асаїссасіа сіссссавсі 20 «2105» 537 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 537 свсцсіррРі КИ рсавас 20 «210» 538 «211» 20 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 538
І НесСсесСт ТСН 20 «210» 539 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 539 всаретассі всіщессе 20 «210» 540 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 540 іІсцерарн гсісснсав 20 «2105» 541 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 541 враасаєсса арсере 16 «2105» 542 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 542
Іррісасац сссицс 16
Зо «210» 543 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 543 ссіррісаса Нсссї 16 «2105» 544 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 544 вассівріса сацсс 16 «210» 545
«211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 545 їааснесса ссцнсї 16 «210» 546 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 546 саєааскес сассії 16 «2105» 547 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 547 ассаєаасії рссасс 16 «210» 548 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 548 ссцнссварі савсії 16 «210» 549 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 549 сіссцссвра рісаврс 16 «2105» 550 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 550 ассісснес враріса 16 «2105» 551 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 551 сшщснакс сссац 16 «2105» 552 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 552 вссіснНа гсссса 16 «210» 553 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 553 сівссНисЕ тагссс 16 «2105» 554 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 554
ШессесН сіре 16 «2105» 555 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 555 сНнНессвс сіре 16 «2105» 556 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 556 ївсішще сс всцсї 16 «2105» 557 2115» 16
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 557 ааасссааає ссісає 16 «2105» 558 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 558 ваааасссаа аїссіс 16 «2105» 559 2115» 16 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 559 тТагаааассс аааїсс 16 «210» 560 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 560 агараааасс саааїс 16 «2105» 561 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 561 сКагарааа асссаа 16
Зо «2105» 562 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 562 ссцНагараа аассса 16 «210» 563 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 563 сссНагава ааассс 16
«210» 564 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 564 ссссцнагав аааасс 16 «210» 565 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 565 асссснасга гаааас 16 «210» 566 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 566 аасссснаї араааа 16 «2105» 567 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 567 ааассссна гагааа 16 «210» 568 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 568 вааассссі аїараа 16 «210» 569 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 569 врааассссі таїара 16 «2105» 570 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 570 арвааасссс Нагав 16 «2105» 571 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 571 саврвааассс сага 16 «2105» 572 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 572 всареааасс сснаї 16 «2105» 573 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 573 аврсаврааас сссна 16 «2105» 574 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 574 саврсаргааа ссссн 16 «2105» 575 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 575 ссарсарраа ассссії 16 «2105» 576
Зо 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 576 їссавсарра аасссс 16 «2105» 577 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 577 ріссавсаре ааассс 16 «2105» 578 2115» 16
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 578
Іїріссарсар гааасс 16 «2105» 579 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 579 сіріссавса ргааас 16 «210» 580 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 580
Зо ссіріссарс арвааа 16 «2105» 581 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 581 сссіріссар сарргаа 16 «2105» 582 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 582 ссссірісса всарва 16
«210» 583 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 583 вссссірісс авсавре 16 «210» 584 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 584 сессссіріс савсав 16 «210» 585 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 585 асессссірії ссарса 16 «210» 586 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 586 сасессссір їссаврс 16 «2105» 587 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 587 ссасессссії ріссав 16 «210» 588 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 588 сссасесссс їрісса 16 «210» 589 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 589 їсссасвссс сірісс 16 «210» 590 «211» 16 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 590 аєсссасесс ссіріс 16 «2105» 591 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 591 ааєсссасес сссірії 16 «2105» 592 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 592 саагсссасе ссссів 16 «210» 593 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 593 їсаагсссас вссссї 16 «210» 594 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 594
Нсаассса сесссс 16
Зо «210» 595 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 595 ансаассс асессс 16 «210» 596 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 596 аансаасс сасесс 16 «210» 597
«2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 597 їаайсаас ссасес 16 «210» 598 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 598
Наансааї сссасе 16 «210» 599 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 599
Шаансаа «сссас 16 «210» 600 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 600 пицаанса асссса 16 «2105» 601 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 601 вІішщаанс аасссс 16 «210» 602 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 602 їРЕшаак саагсс 16 «210» 603 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 603 сгннцааг ісааіс 16 «210» 604 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 604 всірРіщшщаа псааї 16 «210» 605 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 605 авсівіщца ацсаа 16 «210» 606 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 606 савсісі щі аанса 16 «210» 607 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 607 всавсівщ їаацс 16 «210» 608 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 608 сесавсірн Наай 16 «210» 609 2115» 16
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 609 їсесавсірї ШЩаає 16 «210» 610 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 610 вісесавсів Наа 16 «210» 611 2115» 16 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 611
ІрРісесавсії гішща 16 «210» 612 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 612
Нрісесавсіг 16 «210» 613 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 613 виНрРісесав сів ЩІ 16
Зо «210» 614 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 614
Інесса всівї 16 «210» 615 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 615
НеНрІісесавсіві 16
«210» 616 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 616 внесе савсів 16 «210» 617 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 617
Ше Неїс всаврсі 16 «210» 618 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 618
Шен сесавс 16 «210» 619 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 619 ваааасссаа агссіса 17 «210» 620 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 620 араааассса аагссіс 17 «2105» 621 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 621 тТагаааассс аааїссі 17 «210» 622 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 622 аєгараааасс саааєсс 17 «210» 623 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 623
Нагаваааа сссааає 17 «210» 624 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 624 сКагарааа асссааа 17 «210» 625 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 625 ссцЧагараа аасссаа 17 «210» 626 2115 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 626 сссцНагавра ааассса 17 «210» 627 2115 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 627 сссснагав аааассс 17 «210» 628
Зо 2115 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 628 асссснасга гаааасс 17 «210» 629 2115 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 629 аасссснає агаааас 17 «210» 630 2115 17
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 630 ааассссна тараааа 17 «210» 631 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 631 вааассссн агарааа 17 «210» 632 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 632
Зо врааассссі тТахавгаа 17 «210» 633 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 633 арвааасссс Нагара 17 «210» 634 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 634 сареааассс снагав 17
«210» 635 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 635 всарвааасс сснаєа 17 «210» 636 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 636 арсавррааас ссснаї 17 «210» 637 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 637 сарсаррааа ссссНа 17 «210» 638 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 638 ссарсареаа ассссн 17 «210» 639 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 639 їссавсаррга аассссії 17 «210» 640 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 640 ріссавсаре ааасссс 17 «210» 641 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 641
Іріссавсає вааассс 17 «210» 642 «2115» 17 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 642 сіріссарса ргааасс 17 «210» 643 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 643 ссіріссарс аргааас 17 «210» 644 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 644 сссіріссар саргааа 17 «210» 645 2115 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 645 вссссірісс авсаргва 17 «210» 646 2115 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 646 сессссіріс сарсаре 17
Зо «210» 647 2115 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 647 асессссірі ссавсав 17 «210» 648 2115 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 648 сасессссір їссавса 17 «210» 649
«2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 649 ссасессссії ріссавс 17 «210» 650 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 650 сссасесссс ІрРіссав 17 «210» 651 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 651 їсссасессс сірісса 17 «210» 652 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 652 агсссасесс ссірісс 17 «210» 653 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 653 ааєсссасес сссіріс 17 «210» 654 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 654 саагсссасе ссссірії 17 «210» 655 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 655 їсааіїсссас вссссів 17 «210» 656 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 656
Нсаассса сессссї 17 «210» 657 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 657 ансаассс асесссс 17 «210» 658 «2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 658 аансаасс сасессс 17 «210» 659 2115 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 659 їаайсаакс ссасевсс 17 «210» 660 2115 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 660
Наансааї сссасес 17 «210» 661 2115 17
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 661
Шаайсаа іїсссасе 17 «210» 662 2115 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 662 пшщаанса ассссас 17 «210» 663 2115 17 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 663 вішщаанс аагссса 17 «210» 664 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 664 1РЕшаак саасссс 17 «210» 665 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 665 сін ааї саатсс 17
Зо «210» 666 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 666 всівіщшщаа псааїс 17 «210» 667 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 667 авсігіща ансаає 17
«210» 668 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 668 савсів ції аансаа 17 «210» 669 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 669 всарсієщ їаайнса 17 «210» 670 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 670 сесавсівн Наанс 17 «2105» 671 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 671 їсесавсірї Шаан 17 «2105» 672 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 672 вісвсавсів ЕЩааї 17 «210» 673 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 673
ІрРісесавсі гішщаа 17 «210» 674 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 674
Нрісесавсірішща 17 «2105» 675 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 675 вирісесав сіни 17 «210» 676 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 676 їв Нрісеса всі 17 «210» 677 «211» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 677
ПеНрІсес авсіви 17 «210» 678 2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 678
ШеНрісе савсірії 17 «210» 679 2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 679
Іще Неїс всарсів 17 «210» 680
Зо 2115» 17 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 680
Шен сесавсі 17 «210» 681 2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 681
Тагаааассс ааагссіса 19 «210» 682 2115» 19
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 682 аєгараааасс саааєссіс 19 «210» 683 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 683 тТаєараааас ссааатссі 19 «210» 684 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 684
Зо снагаврааа асссаааїс 19 «210» 685 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 685 ссцНагараа аасссааає 19 «210» 686 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 686 сссцНагава ааасссааа 19
«210» 687 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 687 сссснага»в аааасссаа 19 «210» 688 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 688 асссснага гаааассса 19 «210» 689 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 689 аасссснає араааассс 19 «210» 690 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 690 ааассссна гаргаааасс 19 «210» 691 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 691 вааассссі аєараааас 19 «210» 692 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 692 врааассссі Таїагаааа 19 «210» 693 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 693 арвааасссс Чагарааа 19 «210» 694 «2115» 19 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 694 сарвааассс сНагараа 19 «210» 695 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 695 всарвааасс сснагавра 19 «210» 696 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 696 арсаррааас сссНагав 19 «210» 697 2115 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 697 сарсаргааа сссснаєа 19 «210» 698 2115 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 698 ссарсареаа асссснає 19
Зо «210» 699 2115 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 699 їссавсаррга аасссснНа 19 «210» 700 2115 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 700 віссавсавре ааассссії 19 «2105» 701
«2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 701 і1ріссарсар вааассссії 19 «210» 702 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 702 ссіріссарс арвааассс 19 «210» 703 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 703 сссіріссар саргааасс 19 «210» 704 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 704 ссссірісса вєсареааас 19 «210» 705 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 705 вссссірісс авсаргааа 19 «210» 706 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 706 асессссірі ссарсарга 19 «210» 707 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 707 сасессссір їссавсаре 19 «210» 708 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 708 ссасессссії ріссавсає 19 «210» 709 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 709 сссасесссс Іріссавса 19 «210» 710 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 710 їсссасессс сіріссавс 19 «2105» 711 2115 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 711 аєсссасесс ссіріссав 19 «210» 712 2115 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 712 ааєсссасес сссірісса 19 «210» 713 2115 19
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 713 саагсссасе ссссірісс 19 «210» 714 2115 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 714 їсаагсссас вссссіріс 19 «210» 715 2115 19 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 715
Нсаассса сессссірі 19 «210» 716 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 716 ансаагссс асессссір 19 «2105» 717 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 717 аансаасс сасессссії 19
Зо «210» 718 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 718 їаайсаакс ссасесссс 19 «210» 719 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 719
Наансааї сссасессс 19
«2105» 720 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 720
Шаайсаа ісссасвсс 19 «2105 721 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 721
Ішаанса агсссасес 19 «2105 722 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 722 вІішщаанс аагсссасе 19 «2105» 723 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 723 їРЕшаак саагсссас 19 «2105» 724 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
БА
«400» 724 стнцаа: гсаагссса 19 «2105» 725 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 725 всіріщшщаа Нсааїссс 19 «2105» 726 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 726 авсігіщна ансаассс 19 «2105 727 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 727 савсів ци ааксаатс 19 «2105» 728 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 728 всаврсіє щі гаансаає 19 «2105» 729 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 729 сесавсівн Чаансаа 19 «210» 730 2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 730 їсесавсірї Шаанса 19 «2105» 731 2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 731 вісесаврсів гщаанс 19 «2105» 732
Зо 2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 732
ІРісесавсії гішщаан 19 «210» 733 2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 733
Нрісесавс гнщааї 19 «210» 734 2115» 19
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 734 виНрісесав сігіщаа 19 «210» 735 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 735 їв Нрісеса всіріща 19 «210» 736 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 736
Зо ПеНрІісвс авсівни 19 «2105» 737 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 737
ШеНерісе савсів 19 «210» 738 «211» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 738
Іще Неїс всарсіс 19
БА
«210» 739 «2115» 19 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 739
Неї сесавсісії 19 «210» 740 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 740 ссссцНага»в аааассса 18 «2105» 741 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 741 асссснага гаааассс 18 «2105» 742 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 742 аасссснає араааасс 18 «210» 743 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 743 ааассссна гагаааас 18 «210» 744 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 744 вааассссії аїараааа 18 «210» 745 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 745 арвааасссс Нагараа 18 «210» 746 «211» 18 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 746 сареааассс сКагава 18 «2105» 747 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 747 всарвааасс сснагав 18 «210» 748 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 748 арсаррааас сссЧата 18 «210» 749 2115» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 749 саврсаргааа сссснає 18 «2105» 750 2115» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 750 ссарсарраа асссснНа 18
Зо «2105» 751 2115» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 751 їссавсарга аассссн 18 «2105 752 2115» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 752 віссавсаве ааассссї 18 «2105» 753
«211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 753 і1ріссарсар вааасссс 18 «2105» 754 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 754 сіріссавса ггааассс 18 «2105» 755 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 755 ссіріссарс аргааасс 18 «2105» 756 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 756 сссіріссавр саргааас 18 «2105 757 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 757 ссссірісса всаргааа 18 «2105» 758 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 758 сессссіріс сарсарва 18 «2105» 759 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 759 асессссірі ссарсаре 18 «210» 760 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 760 сасессссір їссаврсат 18 «210» 761 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 761 ссасессссії ріссавса 18 «2105» 762 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 762 сссасесссс Іріссавс 18 «210» 763 2115» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 763 їсссасвссс сіріссав 18 «210» 764 2115» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 764 аєсссасесс ссірісса 18 «210» 765 2115» 18
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 765 ааєсссасес сссірісс 18 «210» 766 2115» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 766 сааїгсссасе ссссіріс 18 «2105» 767 2115» 18 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 767 їсааіїсссас вссссірії 18 «210» 768 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 768
Нсаассса сессссів 18 «210» 769 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 769 ансаагссс асессссії 18
Зо «2105» 770 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 770 аансаайсс сасесссс 18 «2105 771 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 771 їаайсаас ссасессс 18
«2105 772 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 772
Наансааї сссасесс 18 «2105» 773 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 773
Шаансаа ісссасес 18 «210» 774 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 774
Ішаанса агсссасе 18 «2105 775 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 775 вішщаанс аагсссас 18 «2105 776 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 776 їРЕшаак саагссса 18 «2105 777 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 777 сін аа:ї гсаатссс 18 «2105» 778 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 778 всіріщшщаа Нсааїсс 18 «2105» 779 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 779 авсіріща ацсааєс 18 «210» 780 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 780 савсіє ци аансаає 18 «210» 781 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 781 всавсівщ Гаансаа 18 «2105» 782 211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 782 сесавсівН Наанса 18 «210» 783 211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 783 їсесавсірї Шаанс 18 «210» 784
Зо 211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 784 вісвсавсіє НШ:аан 18 «210» 785 211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 785 тїагаааассс ааагссіс 18 «210» 786 211» 18
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 786 агараааасс саааєссії 18 «2105» 787 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 787 тїаєараааас ссааатсс 18 «210» 788 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 788
Зо Нагаваааа сссаааєс 18 «210» 789 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 789 сцкагарааа асссааає 18 «210» 790 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 790 ссцНагараа аасссааа 18
«2105» 791 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 791 сссНагава ааасссаа 18 «2105» 792 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 792
ІрРісесавсі гешщаає 18 «210» 793 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 793
Нрісесавс Рішщаа 18 «210» 794 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 794 виНрісесав сірішща 18 «210» 795 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 795 їв Нрісеса сірі 18 «210» 796 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 796
НеНеІісрс авсів щі 18 «2105» 797 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 797
ШРНеїсе савсівії 18 «210» 798 «211» 18 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 798
ІШеНеїс всарсівії 18 «210» 799 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 799
Неї сесавсів 18 «210» 800 «211» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 800 аааасссааа їссіса 16 «2105» 801 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 801 араааассса ааїссі 16 «210» 802 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 802
Таєараааас ссааає 16
Зо «210» 803 2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 803
Нагагаааа сссааа 16 «210» 804 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 804 всагаавраве віассарсів 20 «210» 805
«211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 805 віссшщаврс сареесавса 20 «210» 806 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 806 їссасссаїв Чеірсааврс 20 «210» 807 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 807 ссасассаєе ссасарагас 20 «210» 808 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 808
Нссраріса гесіснссс 20 «210» 809 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 809 ссцнессіра агенссісс 20 «210» 810 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Ргітег «400» 810 арісісірів всаїре ще в 21 «210» 811 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ргітег «400» 811
БрРеСсрРааїгра сісарафсн в 21 «210» 812 «2115» 27 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Ргобе «400» 812 тїассванас сасаарсаас сагїррса 27 «210» 813 «2115» 22 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Ргітег «400» 813 сраавсавсі сааграааїс аа 22 «210» 814 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
«223» Ргітег «400» 814
Івссірраре єсснсн 18 «210» 815 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Ргобе «400» 815 авассасаав сСеаавріс 18 «210» 816 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Ргітег «400» 816 врРесааасав саашщеїра 20 «210» 817 «211» 20
Зо «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Ргітег «400» 817 їРестассса ссцссНеї 20 «210» 818 «2115» 28 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Ргобе «400» 818 сіррагасір гсссаасссс рятацсс 28 «210» 819 «2115» 22 «2125» ДНК
«213» Штучна послідовність «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 819 срааваавсі сарігаааїтс аа 22 «210» 820 «211» 18 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 820
Івссірраре всссісн 18 «2105» 821 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 821 авснцсцяеї ссаєсічає 20
Зо «2105» 822 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 822 авсцсцяеї ссагсічаєа 21 «210» 823 «211» 14 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 823 їсарісаїра сис 14
«210» 824 «211» 15 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 824 їсавісаїрга сиса 15 «210» 825 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 825 всірацава гавраряіссс 20 «210» 826 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 826 їсссашщса рравассіре 20 «2105» 827 «211» 15 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 827 агсарісагр асис 15 «210» 828 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 828 серрРІєсааря снареаайї 20 «210» 829 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 829 всисаріса ггаснсси 20 «210» 830 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 830 всисаріса ггсаснссн а 21 «210» 831 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 831 авсинсавіс аїгаснссі ї 21 «210» 832 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 832 їРріааїсса сінсаравя 20 «210» 833 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 833
ІрРріааїсса сінсаравв а 21 «210» 834 «2115 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 834 ївсисавріс аїгаснцссі є 21 «210» 835 «2115» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 835 сасіганин гесссавваї 20 «210» 836
Зо «2115 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 836 сасігани грсссавваса 21 «210» 837 «2115 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 837 аавсцснНе іссавста є 21 «210» 838 «2115» 20
«2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 838 асссаацса ргаареаарва 20 «210» 839 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 839 асссаацса гааргаарва а 21 «210» 840 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 840
Зо аасссааце агаарвгаарва 21 «210» 841 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 841 агргятааєсс асінсараєв 21 «210» 842 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 842
ІсСгееНас аггааасссс 20
«210» 843 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 843 іІсцерНас аггааасссса 21 «210» 844 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 844 ансасцє агаасєесіря 20 «210» 845 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 845 ансасцєс агаагосірр а 21 «210» 846 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 846 агсснерна саггсааассс с 21 «210» 847 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид
«400» 847 1есіссеРце ріссНця НС 20 «210» 848 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 848 агесагроіїв агесцнсівса 20 «210» 849 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 849 савсщай арерасавса 20 «210» 850 «2115» 21 «2125» ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 850 савсщай арерасавсаа 21 «210» 851 «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 851 асавсінаї таррграсарса 21 «210» 852 «2115» 16 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 852
Нсарісаї» аснсс 16 «210» 853 «211» 20 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «220» «221» тівс Теайиге «222» (1)..(5) «223» Основи у цих позиціях являють собою РНК «220» «221» тівс Теайиге «222» (16)..(20) «223» Основи у цих позиціях являють собою РНК «400» 853 всиисаріса їгасіиссии 20 «210» 854
Зо «2115» 21 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний олігонуклеотид «400» 854 ївсіссеРНе рірсцеНнса 21

Claims (1)

  1. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
    1. Олігомерна сполука, в якій аніонна форма олігомерної сполуки має наступну хімічну структуру: о Мн Мн» ноон о о-в-о о зе о нюео ММ А, но тов о "Хе о Мо зучн о с о7 о. нон а лий и о сур 55.» о о Мн 8-рО 8-6-0 зе юка юр Осо сою чн Мото о. т о о н у У о нофи е 9 клаотег ввйо и вт ТОВ но но і зе о. мо МН о А, о те о. Мо о Ї бі бю М о 9 Мн. ЗРО ММ Ув-рно но о МО Ммна о. о. мо о о. о бв-в-о в се ? 0.7 мн о мо ву за о пеуу м о7 о о ся во воно 8-0 дл Б о. о о. «А 4 ХХ М о пре Же о Мне Ов-р-о М о 6 ! 8-р-о Ся о мо о. мо о пе ої о ж оо м Ов-рв-о Мем 5-Р-о0 г Ї Мн о г | А о. М ме мн» Мт 70 / о р о о о о о о о. М й вно Ї А 8-80 тр о, корт о. Мне о7 о бю ТО вибо о мото 8-0 Ся у о м о о 55 вих 8-Р-0 У он ол
    2. Олігомерна сполука, в якій аніонна форма олігомерної сполуки має наступну хімічну структуру:
    о? Мне Мне ноон о о-Р-О Тео за о нео ММ А ол олеом о мо ун сі о7 о.
    о. нон о Я, ооо о. о 80 Мне о о МН З-Р8-о в-во ся но- клю В о ще о но Мн Мо -о. / з о ву о о7 о ноен о о г оо Де "в-но й но осо оо за о мо Мн о | А, о 7 о Мо о хх вубеОН о о909 Мн в'юко ММ о-р-о во о МОмне о Ї о ру Ї й а о з о 8-8-0 Ї ед? 9.7 Мне о мо о-рно ся о еуу м о7 а о зе и. ве о-Р-О се о о о. М ща о7 о б о. мн, б МН» Уо-р-о зм а є І І А З'юго Го о Мо о А о й о 07 о о МН о 1 Ов-в-о ер Чорно о для 7 о с - о м ме нн, М є
    0. / о , ): Мне 5 о бв-Бо тм е. 9 М о І 8-Р-О Ка А ке) о ММ мн. о о по че су У о У Єв-вно тс 99 о МН» о- о хе! 8-0 зо о у о. о е о 07 вро он 0.
    о .
    З. Олігомерна сполука, в якій аніонна форма олігомерної сполуки має наступну хімічну структуру:
    о Мн» Мн» нон о о-й-о оз зм Би 2 Ї о нм о Мом А, но ов о "Хе о Мо ун с о7 о. о ін дльсиї. ло Дій той 55 о о МН 8-р-о в-й-0 за юю клону ше во МН мо о т о о о о7 о ноон о оо М ооо о, ій в-во зо но о ; зе о мо МН о, А, о тре о. м оо о о о7 оо М МН -р- С е о 9. кн в-во м тю о : тн о Ї о мо о о й е о С о 8-р-о ее? 0.7 кн о мо ото за о гу - о7 о о за вибо ле ве о 8-0 т о. о о. М ще о7 о 5 о. мн, б МН; Оо-р-о М о 5 ! 8-р-о за о м 1 | о о. мо о пе о о аж е 9 м Оо-рв-о МТ в-во отр тн 5 Га лі о м Ме мн» Мк
    -о. / о , о
    Мн. о 9 в оо о Кк о вкно Ї А 8-80 а о Мне» о7 в-во зо оо о Мн» о Мо 8-р-о зе у о м о о е 9 о7 в'юко он 04 о .
    4. Олігомерна сполука, в якій аніонна форма олігомерної сполуки має наступну хімічну структуру:
    о? Мне МН» ноон о о-р-о оз тез о нео мм А, но ов о "Хе о Мо ун с о7 о. о, ін дльсиї. ло Дій той 55. ле о о МН 8-р-о в-й-0 за ати Мосс А, Мн мосо о. т о о о о7 о нофи е. 9 лагу веж Ля во ТОВ но но і зе о Мо МН о, А, о те о. МОТО о 9 о оо М МН ор С е о 9. кн в-во м ее о 5 тв о. о. мо о о. о в-р-о С 59 о. мн б мо ото за о у х о7 о о за ек ве о о-р-о т о. о о. М ще о7 С 5 о. мн, б МН; Оо-р-о М о є ! ! А. в-во за о мо о А, о пу о 07 о т е 9 м Чо-рго кл зво А о СД З ММ мн, Мі о о / о о 9 о 5 о о. М о 8-в-0 о А вто о пр я 7 я щі Ше о.
    о. Мне» о7 зе о гео в о мо 8-р-о зе у ох о о е о еУх в'юко он 04 о. .
    5. Олігомерна сполука за будь-яким із пп. 1-4, в якій олігомерна сполука являє собою фармацевтично прийнятну сіль, і в якій катіон фармацевтично прийнятної солі являє собою натрій.
    5 6. Олігомерна сполука, що відповідає наступній хімічній структурі:
    кн» щ Б Мене . не но й з-8-3 2 М тр» щи дуття нка о. Мт Хіт ко-кдтмо ТК ото денну ЦО зи МН (щ У У лі іш І, о що ей х Мн. нон о о Зоо о ши о у я а о Д Га на-вно 00 А дей ОТ : Кт зро і ох Ох као- хі 4 о КА у 0 За пр в з о ї ке чі во т 50... вв у Фк що Арно ук ї о на-нно хек і 5 "ме МН В, А у ес 1 скит ї ї о х о сш "М во мм, у ні-рно як, в-ва Я у в. ро тн, й Ба у й 1 До І М . ї 87 х її тк Тан т ; нв-йго її во ом х 2 сто НВО и у з м що ВШ і пан о, ТО ї - в ф-но, М 8 хау о у с о Р Мне ї на-Р-о Й у нв-во 0000 й ї вих а й ; Я іш у а о мн, о чне у нано ер н-вно ек і о КА Що їх х т 5 я Зм7о х тий , пи у о о у ФО Мнх не-в-о в ме пло аж в ЕК: В денний ть ММмоснв, - й їй Й ї ди 2 Мне і о. І Ге ча - 5 У І о КІ нвойшвя Тези й ат к Ж налитю її і на-й-о г Пк Во м'о у ІЙ зх Ж. АЙ ї о. М'осм'тнну ім у і. яко 7 мк, у пт о зад і 2. чя-о Фе ї3н-. МО х на-в-й зм ие ; 2 с Ка - у шо з вт й ово з або її фармацевтично прийнятна сіль.
    7. Олігомерна сполука, що відповідає наступній хімічній структурі:
    Що Не МН он см ий носн о она ТЯ зр дешн иАИМ, нм, ом Мсц хр но-сия А Ві Її п тре су яння Й а
    -. В з 7 Ні таня ї зо З У : -4--, ноон о е З -о іх 0 ? у о ким, в « А. ві нЕ-й- ИЙ, , шо сон стр р Мово 1 ка-- и га й і З КЕ у В. мо М - Зд ї Се о се х и ? 4 а у СОЯ Он т т У о на а і ? ос Мне у в-во Ті ик но-тн М о оче зезк х 2. смт ем " о, КО А х ша її пе. Мо ї у о У ОК овуи х ни у ; Я ї Мк а х не- в к Е воЗо ох, х на-рно рун во--а й з 2 у а. 7 кон, й зак х І й в ї. Я і се а ., ем Св) ія х Т Її сих у т тю -ї т ч ї на-ао КК добою що ї зве до-й-о п х У - А З от г ї іншо ов. то 3 -ї ЗНе (ин с їх 5 зам Ї н ї кА ве Її З о ме , на-к-й с Я ей ви і 5 я на-нно Мом ї о У о ОК і см тов ; о іншо у до нн 2 Мне х Но-в-а Зв пеобштя 00 і В Ту напря х М і ке М Б о "нд і Бе Й Їли ; -ї а й їх вол Мне З Ї Й Нно--й ців вв-йчо ярої А ятрх У й д ї я рій З оо тн; ї о. Дт ш- щі ї нн, ення : ї - о а не Х щи 2 а ї ни-вео ко ї ее. в-еув г п Х ї не-в-о рот п "М чаду у 1 ж чех. ж ям 1 о мс свв, ши у ня ї р зв 8 о тер з ї 2.04 те рес «ач ма нв-в- ве їни і х. їх т- ї їл а нв-й-о і 7 не й оно з або її фармацевтично прийнятна сіль.
    8. Олігомерна сполука, що відповідає наступній хімічній структурі:
    ов їн мн зн молі З ноон ій п-вно т ЩІ тм «лох Ж мед їх див мкл о. Моск ви но- ня ТВ ож лади рин з - А І. М ет 7 дині То й Й І да б 54 у -44А-1їнь воон оо о ДІ -а ща 7 їі Ф кох а дич им Во ї не-йно ОВ наскатя Щ, В / в А й 5 мо зу 87 Зо Є зо ї Тв т я і - Кк п ОН - о7 ї й х т Ме ; 5 а тв, Х п-бнв рн о ше Шк л ї НЕ-и- ї ман То орто чик у 2 зо «МН о ОН у ши ЇЇ о Я У о о она ШИ ї Й с й З Ме» 1 У ї, «1 й о оби ї не-р-о мечем ва-вно ох А х у рок» І - У 7 о Ії М ї -В ве "ча х о Б У а - о7 і т сеть Ї дк х вра Ко о оси їх о, о 3-2- Беца х з Я но х іа! ті «в у ія ов. о у -юв м х ор і о вал Мч х не ь о зво н-к-а ра у - о А ; «Р М р-ни, о ча м ме і е р-н у Щоби вв В Мн М но-рно шк 1 оту. х лу з у явна ТК 5 У, зала ма жо у В, - х ви . я о у о мне о І п-ву Мо на-вно 00 дея воло Ф В я У мен М кс скн. х. ЯМ шен у з р-н х х -ї о о о тв х а б й нУ-в-3 М х ; М сюн г. Й ча у вв-но 1 твій у во Мотмосмя, - зн. і п З Зак х вай о б же о таб 3 вно зе Б у У А -7 х Тов. Або о у Че -- 1 х с шим й осно. з або її фармацевтично прийнятна сіль.
    9. Олігомерна сполука, що відповідає наступній хімічній структурі:
    на ме и Хе, дну з они, я М зна нот 4 7 У Яке о вій ї у т 2 КК дети МН Би й На-в-е с 7 зе в в.о і ни но з, ! ооо м х нео фе ко- Уоо 7 Ве т» Наук у о. чн Зо «МН ' о 5 Ах і и ї шу иа і а я у а в мн - б Мн. Й няно пер Натана А у 0. Ні я Я її у и Лв - то у 2 іч 1 х хх а ї й пром в оо мВ, ї НВ Кд ча, но-ото ум у Тра о с Мне у нк-нно Е да на-в-о в у - ре й т б х -ї бої 1-Й ї 4 вія ун 2 Мне у Ва-но зртв пвтно у Ше в то - ! За 3 пкт ск ще те х тя З ї 1 1 - а у а МН» г на-в-о Мате веб фу ще сту що воснетння ї х Ал ей ц по у й Мн; і В ї 2 а. -- З рт М а - А. зт р дв-бно Он У я й ха у ГА М - ем» мн. и х т-и п пеею ї о Мн. но 9 С пн. мб на-рео Зм нон у е ї А о у и 7 нка ! он ол або її фармацевтично прийнятна сіль.
    10. Олігомерна сполука за будь-яким із пп. 6-9, яка являє собою сіль натрію або сіль калію.
    11. Композиція, здатна інгібувати експресію фактора комплементу В (СЕВ), яка містить олігомерну сполуку за будь-яким з пп. 1-10 або її фармацевтично прийнятну сіль та щонайменше один фармацевтично прийнятний носій або розріджувач.
    12. Спосіб лікування захворювання, пов'язаного з порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу, у суб'єкта, який включає введення суб'єкту олігомерної сполуки за будь-яким з пп. 1-10 або композиції за п. 11, тим самим забезпечуючи лікування захворювання.
    13. Спосіб за п. 12, в якому захворювання являє собою дегенерацію жовтої плями, вікову дегенерацію жовтої плями (ВДМ), вологу ВДМ, суху ВДМ або географічну атрофію.
    14. Спосіб за п. 12, в якому захворювання являє собою хворобу нирок.
    15. Спосіб за п. 14, в якому хвороба нирок являє собою вовчаковий нефрит, системний червоний вовчак (СЧВ), хворобу густого осаду (000), ССЗ гломерулонефрит (СЗОМ), СЕНН5 нефропатію або атиповий гемолітико-уремічний синдром (аниз).
    16. Застосування олігомерної сполуки за будь-яким з пп. 1-10 або композиції за п. 11 для лікування захворювання, пов'язаного з порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу.
    17. Застосування за п. 16, де захворювання являє собою дегенерацію жовтої плями, вікову дегенерацію жовтої плями (ВДМ), вологу ВДМ, суху ВДМ або географічну атрофію.
    18. Застосування за п. 16, де захворювання являє собою хворобу нирок.
    19. Застосування за п. 18, де хвороба нирок являє собою вовчаковий нефрит, хворобу густого осаду (000), ССЗ гломерулонефрит (СЗОМ), СЕНК5 нефропатію або атипічний гемолітико- уремічний синдром (ани5Б).
    20. Олігомерна сполука за будь-яким з пп. 1-10 або композиція за п. 11 для застосування у способі лікування захворювання, пов'язаного з порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу.
    21. Олігомерна сполука або композиція для застосування за п. 20, де захворювання являє собою дегенерацію жовтої плями, вікову дегенерацію жовтої плями (ВДМ), вологу ВДМ, суху ВДМ або географічну атрофію.
    22. Олігомерна сполука або композиція для застосування за п. 20, де захворювання являє собою хворобу нирок.
    23. Олігомерна сполука або композиція для застосування за п. 22, де хвороба нирок являє собою вовчаковий нефрит, хворобу густого осаду (000), СЗ гломерулонефрит (СЗОМ), СЕНК5 нефропатію або атипічний гемолітико-уремічний синдром (аниз).
    24. Застосування олігомерної сполуки за будь-яким з пп. 1-10 або композиції за п. 11 при виготовленні лікарського засобу для лікування захворювання, пов'язаного з порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу.
    25. Застосування олігомерної сполуки або композиції при виготовленні лікарського засобу за п. 24, де захворювання являє собою дегенерацію жовтої плями, вікову дегенерацію жовтої плями (ВДМ), вологу ВДМ, суху ВДМ або географічну атрофію.
    26. Застосування олігомерної сполуки або композиції при виготовленні лікарського засобу за п. 24, де захворювання являє собою хворобу нирок.
    27. Застосування олігомерної сполуки або композиції при виготовленні лікарського засобу за п. Зо 26, де хвороба нирок являє собою вовчаковий нефрит, хворобу густого осаду (000), СЗ гломерулонефрит (СЗОМ), СЕНК5 нефропатію або атипічний гемолітико-уремічний синдром (анив). 0 КомпютернаверсткаЛ.Ціхановська.д (00000000 777 Міністерство розвитку економіки, торгівлітасільськогогосподарства України, (000000 вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП "Український інститут інтелектуальної власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601
UAA201612124A 2014-05-01 2015-05-01 Олігомерна сполука та спосіб лікування захворювання, пов'язаного з порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу UA121656C2 (uk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461987471P 2014-05-01 2014-05-01
US201462076273P 2014-11-06 2014-11-06
PCT/US2015/028916 WO2015168635A2 (en) 2014-05-01 2015-05-01 Compositions and methods for modulating complement factor b expression

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA121656C2 true UA121656C2 (uk) 2020-07-10

Family

ID=54359510

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201612124A UA121656C2 (uk) 2014-05-01 2015-05-01 Олігомерна сполука та спосіб лікування захворювання, пов'язаного з порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу

Country Status (29)

Country Link
US (4) US10280423B2 (uk)
EP (3) EP3137596B1 (uk)
JP (2) JP6637442B2 (uk)
KR (1) KR102369736B1 (uk)
CN (2) CN110724687B (uk)
AU (1) AU2015252858C1 (uk)
BR (1) BR112016022593B1 (uk)
CA (1) CA2943894A1 (uk)
CL (2) CL2016002764A1 (uk)
CR (2) CR20200228A (uk)
DK (1) DK3137596T3 (uk)
DO (1) DOP2016000291A (uk)
EA (1) EA036496B1 (uk)
ES (2) ES2941742T3 (uk)
HR (1) HRP20191664T1 (uk)
HU (1) HUE046272T2 (uk)
IL (2) IL247883B (uk)
LT (1) LT3137596T (uk)
MX (1) MX2016014294A (uk)
PE (2) PE20170010A1 (uk)
PH (1) PH12016502062A1 (uk)
PL (2) PL3608406T3 (uk)
PT (1) PT3137596T (uk)
RS (1) RS59182B1 (uk)
RU (1) RU2701645C2 (uk)
SG (2) SG11201608502TA (uk)
SI (1) SI3137596T1 (uk)
UA (1) UA121656C2 (uk)
WO (1) WO2015168635A2 (uk)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2839006B1 (en) * 2012-04-20 2018-01-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
PT2992098T (pt) 2013-05-01 2019-07-05 Ionis Pharmaceuticals Inc Composições e métodos para modular a expressão de hbv e ttr
EP3043827B1 (en) * 2013-09-13 2019-07-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of complement factor b
CA2942570A1 (en) 2014-05-01 2015-11-05 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating growth hormone receptor expression
PE20170010A1 (es) 2014-05-01 2017-03-04 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para modular la expresion del factor b del complemento
AU2015329974B2 (en) 2014-10-10 2019-06-20 F. Hoffmann-La Roche Ag GaINAc phosphoramidites, nucleic acid conjugates thereof and their use
AU2016349625B2 (en) * 2015-11-06 2022-07-07 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulating apolipoprotein (a) expression
IL291323B2 (en) 2016-07-15 2023-09-01 Am Chemicals Llc Solid non-nucleoside supports and phosphoramidite building blocks for oligonucleotide synthesis
JOP20190215A1 (ar) * 2017-03-24 2019-09-19 Ionis Pharmaceuticals Inc مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9
WO2020109343A1 (en) 2018-11-29 2020-06-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy for treatment of macular degeneration
US20210060168A1 (en) 2019-09-03 2021-03-04 Arcturus Therapeutics, Inc. Asialoglycoprotein receptor mediated delivery of therapeutically active conjugates
IL297680A (en) * 2020-04-30 2022-12-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc IRNA compounds complement factor b (cfb) and methods of using them
WO2023031359A1 (en) 2021-09-02 2023-03-09 Silence Therapeutics Gmbh Nucleic acids for inhibiting expression of complement factor b (cfb) in a cell
CN118302525A (zh) 2021-10-29 2024-07-05 阿尔尼拉姆医药品有限公司 补体因子B（CFB）iRNA组合物及其使用方法
WO2024097861A1 (en) * 2022-11-02 2024-05-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating complement factor b expression

Family Cites Families (297)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2699508A (en) 1951-12-21 1955-01-11 Selectronics Inc Method of mounting and construction of mounting for low frequency piezoelectric crystals
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
DE3329892A1 (de) 1983-08-18 1985-03-07 Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
USRE34036E (en) 1984-06-06 1992-08-18 National Research Development Corporation Data transmission using a transparent tone-in band system
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US4751219A (en) 1985-02-05 1988-06-14 Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
DE3788914T2 (de) 1986-09-08 1994-08-25 Ajinomoto Kk Verbindungen zur Spaltung von RNS an eine spezifische Position, Oligomere, verwendet bei der Herstellung dieser Verbindungen und Ausgangsprodukte für die Synthese dieser Oligomere.
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
AU598946B2 (en) 1987-06-24 1990-07-05 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Nucleoside derivatives
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US5403711A (en) 1987-11-30 1995-04-04 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid hybridization and amplification method for detection of specific sequences in which a complementary labeled nucleic acid probe is cleaved
WO1989005358A1 (en) 1987-11-30 1989-06-15 University Of Iowa Research Foundation Dna and rna molecules stabilized by modifications of the 3'-terminal phosphodiester linkage and their use as nucleic acid probes and as therapeutic agents to block the expression of specifically targeted genes
EP0406309A4 (en) 1988-03-25 1992-08-19 The University Of Virginia Alumni Patents Foundation Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5194599A (en) 1988-09-23 1993-03-16 Gilead Sciences, Inc. Hydrogen phosphonodithioate compositions
US5256775A (en) 1989-06-05 1993-10-26 Gilead Sciences, Inc. Exonuclease-resistant oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5721218A (en) 1989-10-23 1998-02-24 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides with inverted polarity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
DE69034150T2 (de) 1989-10-24 2005-08-25 Isis Pharmaceuticals, Inc., Carlsbad 2'-Modifizierte Oligonukleotide
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5623065A (en) 1990-08-13 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped 2' modified oligonucleotides
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5859221A (en) 1990-01-11 1999-01-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US7101993B1 (en) 1990-01-11 2006-09-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides containing 2′-O-modified purines
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US6005087A (en) 1995-06-06 1999-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
US5220007A (en) 1990-02-15 1993-06-15 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of RNA and production of encoded polypeptides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
EP0455905B1 (en) 1990-05-11 1998-06-17 Microprobe Corporation Dipsticks for nucleic acid hybridization assays and methods for covalently immobilizing oligonucleotides
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5386023A (en) 1990-07-27 1995-01-31 Isis Pharmaceuticals Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling
US5223618A (en) 1990-08-13 1993-06-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
BR9106702A (pt) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Inc Analogo de oligonucleotideos e processos para modular a producao de uma proteina por um organismo e para tratar um organismo
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5378825A (en) 1990-07-27 1995-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs
DE69115702T2 (de) 1990-08-03 1996-06-13 Sterling Winthrop Inc Verbindungen und verfahren zur unterdrückung der genexpression
US5177196A (en) 1990-08-16 1993-01-05 Microprobe Corporation Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
JPH06505704A (ja) 1990-09-20 1994-06-30 ギリアド　サイエンシズ，インコーポレイテッド 改変ヌクレオシド間結合
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US6582908B2 (en) 1990-12-06 2003-06-24 Affymetrix, Inc. Oligonucleotides
US5948903A (en) 1991-01-11 1999-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 3-deazapurines
US5672697A (en) 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
ES2103918T3 (es) 1991-10-17 1997-10-01 Ciba Geigy Ag Nucleosidos biciclicos, oligonucleotidos, procedimiento para su obtencion y productos intermedios.
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
AU3222793A (en) 1991-11-26 1993-06-28 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5792608A (en) 1991-12-12 1998-08-11 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
US5700922A (en) 1991-12-24 1997-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
ATE515510T1 (de) * 1991-12-24 2011-07-15 Isis Pharmaceuticals Inc Durch dna-abschnitte unterbrochene modifizierte oligonukleotide
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US20030206887A1 (en) * 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
AU678769B2 (en) 1992-07-27 1997-06-12 Hybridon, Inc. Oligonucleotide alkylphosphonothioates
ES2086997T3 (es) 1993-01-25 1996-07-01 Hybridon Inc Oligonucleotido-alquilfosfonatos y -alquilfosfonotioatos.
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304620D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Compounds
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
CA2159631A1 (en) 1993-03-30 1994-10-13 Sanofi Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them
WO1994022891A1 (en) 1993-03-31 1994-10-13 Sterling Winthrop Inc. Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5801154A (en) 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
CA2178729A1 (en) 1993-12-09 1995-06-15 Eric B. Kmiec Compounds and methods for site-directed mutations in eukaryotic cells
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US5646269A (en) 1994-04-28 1997-07-08 Gilead Sciences, Inc. Method for oligonucleotide analog synthesis
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5681940A (en) * 1994-11-02 1997-10-28 Icn Pharmaceuticals Sugar modified nucleosides and oligonucleotides
US6172045B1 (en) 1994-12-07 2001-01-09 Neorx Corporation Cluster clearing agents
US6908903B1 (en) 1994-12-07 2005-06-21 Aletheon Pharmaceuticals, Inc. Cluster clearing agents
US5652356A (en) 1995-08-17 1997-07-29 Hybridon, Inc. Inverted chimeric and hybrid oligonucleotides
US20030119724A1 (en) 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
CN1120707C (zh) 1995-11-22 2003-09-10 约翰斯·霍普金斯大学 增强生物分子的细胞摄取的配体
US5998203A (en) 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
US6620916B1 (en) 1996-09-26 2003-09-16 Ajinomoto Co., Inc. Modified physiologically active proteins and medicinal compositions containing the same
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
USRE44779E1 (en) 1997-03-07 2014-02-25 Santaris Pharma A/S Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogues
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
JP4236812B2 (ja) 1997-09-12 2009-03-11 エクシコン エ／エス オリゴヌクレオチド類似体
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US20030228597A1 (en) 1998-04-13 2003-12-11 Cowsert Lex M. Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation
US6300319B1 (en) 1998-06-16 2001-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted oligonucleotide conjugates
US6043352A (en) 1998-08-07 2000-03-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides
US6166239A (en) 1998-09-04 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide protecting groups
WO2000021559A2 (en) 1998-10-09 2000-04-20 Musc Foundation For Research Development Blocking factor b to treat complement-mediated immune disease
US20030064944A1 (en) * 2001-06-21 2003-04-03 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of transforming growth factor beta receptor II expression
CZ296576B6 (cs) 1999-02-12 2006-04-12 Sankyo Company Limited Nukleosidový analog a oligonukleotidový analog a farmaceutický prostredek, sonda a primer s jeho obsahem
US20030170249A1 (en) 1999-02-19 2003-09-11 Hakomori Sen-Itiroh Vaccines directed to cancer-associated carbohydrate antigens
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
KR20010112944A (ko) 1999-04-21 2001-12-22 이곤 이 버그 폴리뉴클레오티드 서열의 기능을 억제하기 위한 방법 및조성물
AU776362B2 (en) 1999-05-04 2004-09-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S L-ribo-LNA analogues
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
US6383812B1 (en) 1999-05-28 2002-05-07 Academia Sinica Anti liver disease drug R-YEEE and method of synthesizing branched galactose-terminal glycoproteins
US20080281041A1 (en) 1999-06-07 2008-11-13 Rozema David B Reversibly Masked Polymers
US8541548B2 (en) 1999-06-07 2013-09-24 Arrowhead Madison Inc. Compounds and methods for reversible modification of biologically active molecules
JP4151751B2 (ja) 1999-07-22 2008-09-17 第一三共株式会社 新規ビシクロヌクレオシド類縁体
DE19935303A1 (de) * 1999-07-28 2001-02-08 Aventis Pharma Gmbh Oligonukleotide zur Inhibierung der Expression von humanem eg5
US20020082227A1 (en) 1999-09-30 2002-06-27 Scott Henry Use of oligonucleotides for inhibition of complement activation
JP2003519231A (ja) 1999-12-30 2003-06-17 カー・ユ・ルーベン・リサーチ・アンド・ディベロップメント シクロヘキセン核酸
US7833992B2 (en) 2001-05-18 2010-11-16 Merck Sharpe & Dohme Conjugates and compositions for cellular delivery
US7491805B2 (en) * 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
AU2001282522A1 (en) 2000-08-29 2002-03-13 Takeshi Imanishi Novel nucleoside analogs and oligonucleotide derivatives containing these analogs
US6426220B1 (en) 2000-10-30 2002-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of calreticulin expression
KR20030074637A (ko) 2000-12-01 2003-09-19 셀 웍스 인크. 글리코실화/갈락토실화된 펩티드, 이관능기적 링커 , 및뉴클레오티드성 단량성/중합체의 접합체, 및 관련 조성물및 사용 방법
US20030077829A1 (en) 2001-04-30 2003-04-24 Protiva Biotherapeutics Inc.. Lipid-based formulations
US20030158403A1 (en) 2001-07-03 2003-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
WO2003004602A2 (en) 2001-07-03 2003-01-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20030175906A1 (en) 2001-07-03 2003-09-18 Muthiah Manoharan Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US6964950B2 (en) 2001-07-25 2005-11-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of C-reactive protein expression
US20030073623A1 (en) * 2001-07-30 2003-04-17 Drmanac Radoje T. Novel nucleic acid sequences obtained from various cDNA libraries
CA2459347C (en) 2001-09-04 2012-10-09 Exiqon A/S Locked nucleic acid (lna) compositions and uses thereof
US7439043B2 (en) 2001-10-10 2008-10-21 Neose Technologies, Inc. Galactosyl nucleotide sugars
US20100240730A1 (en) 2002-02-20 2010-09-23 Merck Sharp And Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
AU2003274906A1 (en) 2002-07-31 2004-02-16 Nucleonics, Inc. Double stranded rna structures and constructs, and methods for generating and using the same
US8729036B2 (en) * 2002-08-07 2014-05-20 University Of Massachusetts Compositions for RNA interference and methods of use thereof
WO2004024757A2 (en) 2002-09-11 2004-03-25 Santaris Pharma A/S Modified pna molecules
EP1572964A4 (en) 2002-10-18 2007-08-08 Nucleonics Inc STRUCTURES AND CONSTRUCTIONS OF DOUBLE STRANDED RNA AND METHODS FOR THEIR GENERATION AND USE
AU2003291755A1 (en) 2002-11-05 2004-06-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomers comprising modified bases for binding cytosine and uracil or thymine and their use
EP1562971B1 (en) 2002-11-05 2014-02-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
EP1560931B1 (en) * 2002-11-14 2011-07-27 Dharmacon, Inc. Functional and hyperfunctional sirna
US6673661B1 (en) 2002-12-20 2004-01-06 Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. Self-aligned method for forming dual gate thin film transistor (TFT) device
WO2004063208A1 (en) 2003-01-09 2004-07-29 Postech Foundation New phosphoramidite compounds
EP2239329A1 (en) 2003-03-07 2010-10-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic compositions
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
EP2669377A3 (en) 2003-04-17 2015-10-14 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Modified iRNA agents
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
WO2004103288A2 (en) 2003-05-13 2004-12-02 New York Society For The Ruptured And Crippled Maintaining The Hospital For Special Surgery Method of preventing recurrent miscarriages
WO2004101619A1 (ja) 2003-05-15 2004-11-25 Shionogi Co., Ltd. 機能的糖ペプチドの合理的設計および合成
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
ES2382807T3 (es) 2003-08-28 2012-06-13 Takeshi Imanishi Nuevos ácidos nucleicos artificiales del tipo de enlace N-O con reticulación
EP1664299B1 (en) * 2003-09-16 2009-05-13 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR AND VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
AU2004274021B2 (en) 2003-09-18 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-thionucleosides and oligomeric compounds
US7959919B2 (en) 2003-11-19 2011-06-14 Novelmed Therapeutics, Inc. Method of inhibiting factor B-mediated complement activation
US20060019941A1 (en) 2003-12-23 2006-01-26 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Analogs of benzoquinone-containing ansamycins and methods of use thereof
JPWO2005061707A1 (ja) 2003-12-24 2007-07-12 協和醗酵工業株式会社 癌細胞のＥｇ５阻害剤に対する感受性を判定する方法
US20050244851A1 (en) 2004-01-13 2005-11-03 Affymetrix, Inc. Methods of analysis of alternative splicing in human
CA2561531C (en) 2004-02-10 2017-05-02 The Regents Of The University Of Colorado Inhibition of factor b, the alternative complement pathway and methods related thereto
US20050244869A1 (en) 2004-04-05 2005-11-03 Brown-Driver Vickie L Modulation of transthyretin expression
JPWO2005097155A1 (ja) 2004-04-08 2008-02-28 タカラバイオ株式会社 神経突起伸長誘導剤
WO2005121372A2 (en) 2004-06-03 2005-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation
JP5192234B2 (ja) 2004-08-10 2013-05-08 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 化学修飾オリゴヌクレオチド
US20090203132A1 (en) 2004-09-09 2009-08-13 Swayze Eric E Pyrrolidinyl groups for attaching conjugates to oligomeric compounds
CA2580504C (en) 2004-09-17 2013-10-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced antisense oligonucleotides
US20080261905A1 (en) 2004-11-08 2008-10-23 K.U. Leuven Research And Development Modified Nucleosides for Rna Interference
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
EP1841867A1 (en) 2005-01-24 2007-10-10 Avaris AB COMPLEX CONTAINING SiRNA, ShRNA OR ANTISENSE MOLECULE AND FUNCTIONAL ENTITY, FOR IMPROVED SPECIFICITY AND DELIVERY
WO2007035759A1 (en) 2005-09-19 2007-03-29 Johnson & Johnson Pharmaceutical Research & Development L.L.C. Modulation of glucocorticoid receptor expression
CA2627686A1 (en) * 2005-11-02 2007-05-18 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Se Cretary Of Health And Human Services Method evolved for recognition and testing of age related macular degeneration (mert-armd)
CA2640171C (en) 2006-01-27 2014-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
AU2007258117B2 (en) * 2006-05-05 2013-05-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating gene expression
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
DK2066684T3 (da) 2006-05-11 2012-10-22 Isis Pharmaceuticals Inc 5´-Modificerede bicycliske nukleinsyreanaloge
CN101500548A (zh) 2006-08-18 2009-08-05 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于体内递送多核苷酸的多缀合物
US8658211B2 (en) 2006-08-18 2014-02-25 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
CA2663601C (en) * 2006-09-22 2014-11-25 Dharmacon, Inc. Duplex oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by rna interference
ATE540118T1 (de) 2006-10-18 2012-01-15 Isis Pharmaceuticals Inc Antisense-verbindungen
EP2125852B1 (en) 2007-02-15 2016-04-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted-2'-f modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
EP2604284A1 (en) 2007-02-16 2013-06-19 KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH Receptor And Antigen Targeted Prodrug
US20100120665A1 (en) 2007-03-01 2010-05-13 Advanced Vision Therapies, Inc. Treatment of diseases characterized by inflammation
JP2010519911A (ja) * 2007-03-02 2010-06-10 エムディーアールエヌエー，インコーポレイテッド Ｍｙｃ遺伝子の発現を抑制するための核酸化合物およびその使用
AU2008242583B2 (en) 2007-04-23 2013-10-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of RNA interference agents
EP2170917B1 (en) 2007-05-30 2012-06-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
EP2173760B2 (en) 2007-06-08 2015-11-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
WO2009003009A1 (en) 2007-06-26 2008-12-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrrolidine as anti-infectives
CA2692579C (en) 2007-07-05 2016-05-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
JP5572090B2 (ja) 2007-08-15 2014-08-13 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド テトラヒドロピラン核酸類似体
US20090123928A1 (en) 2007-10-11 2009-05-14 The Johns Hopkins University Genomic Landscapes of Human Breast and Colorectal Cancers
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
CA2910760C (en) 2007-12-04 2019-07-09 Muthiah Manoharan Targeting lipids
WO2009134487A2 (en) 2008-01-31 2009-11-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Optimized methods for delivery of dsrna targeting the pcsk9 gene
US8530640B2 (en) 2008-02-07 2013-09-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs
US20110130440A1 (en) 2008-03-26 2011-06-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Non-natural ribonucleotides, and methods of use thereof
WO2009126933A2 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
WO2009143369A2 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Method of preparing nucleosides and analogs thereof without using chromatography
EP2320925B1 (en) 2008-07-10 2015-12-23 Regenesance B.V. Complement antagonists and uses thereof
WO2010017509A1 (en) 2008-08-07 2010-02-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of transthyretin expression for the treatment of cns related disorders
EP3587434A1 (en) 2008-09-23 2020-01-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with click components for conjugation with ligands
DK2361256T3 (da) 2008-09-24 2013-07-01 Isis Pharmaceuticals Inc Cyclohexenyl-nukleinsyreanaloger
US8501805B2 (en) 2008-09-24 2013-08-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-L-bicyclic nucleosides
AU2009307677C1 (en) 2008-10-20 2022-09-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin
CN102264374B (zh) 2008-10-24 2015-01-07 Isis制药公司 5′和2′双取代的核苷和由其制备的低聚化合物
EP2358398A2 (en) 2008-10-24 2011-08-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and methods
KR102344392B1 (ko) 2008-11-10 2021-12-28 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 치료제 운반용 신규 지질 및 조성물
AU2010208035B2 (en) 2009-01-29 2016-06-23 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation for the delivery of nucleic acids
US8975389B2 (en) 2009-03-02 2015-03-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid chemical modifications
FR2943060B1 (fr) 2009-03-13 2013-01-04 Commissariat Energie Atomique Agents chelatants d'ions metalliques, leurs procedes de preparation et leurs applications
NZ621981A (en) 2009-05-05 2015-09-25 Tekmira Pharmaceuticals Corp Lipid compositions
EA201791744A3 (ru) 2009-06-10 2018-07-31 Арбутус Биофарма Корпорэйшн Улучшенная липидная композиция
US8273869B2 (en) 2009-06-15 2012-09-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated dsRNA targeting the PCSK9 gene
WO2011005860A2 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5' phosphate mimics
US9512164B2 (en) 2009-07-07 2016-12-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide end caps
WO2011017521A2 (en) 2009-08-06 2011-02-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
WO2011038356A2 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Johns Hopkins University Novel liver-targeting agents and their synthesis
AU2010306639B2 (en) 2009-10-16 2017-02-16 Glaxo Group Limited HBV antisense inhibitors
TWI388338B (zh) 2009-10-26 2013-03-11 Iner Aec Executive Yuan 對聚合醣鏈進行放射標誌以作為肝受體造影劑之方法
TWI391144B (zh) 2009-10-26 2013-04-01 Iner Aec Executive Yuan 一種定量肝殘餘功能的檢驗方法與其新穎肝受體造影檢驗藥劑
WO2011072290A2 (en) 2009-12-11 2011-06-16 The Regents Of The University Of Michigan Targeted dendrimer-drug conjugates
US9198972B2 (en) 2010-01-28 2015-12-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
EP3023495B1 (en) 2010-02-24 2019-05-08 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Compositions for targeted delivery of sirna
WO2011115818A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
JP2013528665A (ja) 2010-03-26 2013-07-11 メルサナ セラピューティックス， インコーポレイテッド ポリヌクレオチドの送達のための修飾ポリマー、その製造方法、およびその使用方法
US20130109817A1 (en) 2010-03-26 2013-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Modified Polymers for Delivery of Polynucleotides, Method of Manufacture, and Methods of Use Thereof
US9102938B2 (en) 2010-04-01 2015-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 2′ and 5′ modified monomers and oligonucleotides
WO2011133871A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5'-end derivatives
US10913767B2 (en) 2010-04-22 2021-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
JP6005628B2 (ja) 2010-04-28 2016-10-12 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 修飾ヌクレオシド、その類似体、およびこれらから調製されるオリゴマー化合物
MX343559B (es) 2010-04-29 2016-11-10 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulacion de la expresion de transtiretina.
US20130236968A1 (en) 2010-06-21 2013-09-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
US9290760B2 (en) 2010-09-15 2016-03-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
WO2012068187A1 (en) 2010-11-19 2012-05-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Poly(amide) polymers for the delivery of oligonucleotides
MX346144B (es) 2010-12-17 2017-03-09 Arrowhead Res Corp * Porcion activadora del modulador farmacocinetico del agregado de galactosa para arnsi.
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
CA3131967A1 (en) 2010-12-29 2012-07-05 F. Hoffman-La Roche Ag Small molecule conjugates for intracellular delivery of nucleic acids
EP3467109A1 (en) 2011-02-08 2019-04-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
PL2697243T3 (pl) 2011-04-01 2019-05-31 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulacja ekspresji przekaźnika sygnału i aktywatora transkrypcji 3 (stat3)
TW201303013A (zh) 2011-04-21 2013-01-16 Isis Pharmaceuticals Inc Ｂ型肝炎病毒（ｈｂｖ）表現之調節
SI3505528T1 (sl) 2011-04-21 2021-04-30 Glaxo Group Limited Modulacija izražanja virusa hepatitisa B (HBV)
CN112961855A (zh) 2011-06-21 2021-06-15 阿尔尼拉姆医药品有限公司 血管生成素样3(ANGPTL3)iRNA组合物及其使用方法
RU2631805C2 (ru) * 2011-06-21 2017-09-26 Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы ингибирования экспрессии генов аполипопротеина с-iii (арос3)
US8932572B2 (en) 2011-08-26 2015-01-13 Arrowhead Madison Inc. Poly(vinyl ester) polymers for in vivo nucleic acid delivery
DK2751270T3 (en) 2011-08-29 2018-10-29 Ionis Pharmaceuticals Inc OLIGOMER-CONJUGATE COMPLEXES AND THEIR USE
SI3301177T1 (sl) * 2011-11-18 2020-07-31 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Sredstva RNAi, sestavki in postopki njihove uporabe za zdravljenje s transtiretinom (TTR) povezanih bolezni
WO2013119979A1 (en) 2012-02-08 2013-08-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating factor vii expression
EP2839006B1 (en) 2012-04-20 2018-01-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
EP2844261B1 (en) 2012-05-02 2018-10-17 Sirna Therapeutics, Inc. SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) COMPOSITIONS
TWI595885B (zh) * 2012-05-02 2017-08-21 喜納製藥公司 包含四ｇａｌｎａｃ之新穎結合物及傳送寡核苷酸之方法
WO2013173789A2 (en) 2012-05-17 2013-11-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide compositions
EP2906699A4 (en) 2012-10-11 2016-06-08 Ionis Pharmaceuticals Inc OLIGOMER COMPOUNDS WITH BICYCLIC NUCLEOSIDES AND USES THEREOF
CN104884618A (zh) 2012-11-15 2015-09-02 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 寡核苷酸缀合物
CA2893801A1 (en) 2013-01-30 2014-08-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Lna oligonucleotide carbohydrate conjugates
WO2014118272A1 (en) 2013-01-30 2014-08-07 Santaris Pharma A/S Antimir-122 oligonucleotide carbohydrate conjugates
CN114015692A (zh) * 2013-03-14 2022-02-08 阿尔尼拉姆医药品有限公司 补体组分C5 iRNA组合物及其使用方法
PT2992098T (pt) 2013-05-01 2019-07-05 Ionis Pharmaceuticals Inc Composições e métodos para modular a expressão de hbv e ttr
US20160122761A1 (en) * 2013-06-21 2016-05-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulation of target nucleic acids
LT3013959T (lt) 2013-06-27 2020-03-10 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Priešprasmiai oligomerai ir konjugatai, nukreirti į pcsk9
DE102013106985A1 (de) * 2013-07-03 2015-01-22 Osram Oled Gmbh Optoelektronische Bauelementevorrichtung und Verfahren zum Herstellen einer optoelektronischen Bauelementevorrichtung
DK3019200T3 (da) * 2013-07-11 2022-06-20 Alnylam Pharmaceuticals Inc Oligonukleotid-ligand-konjugater og fremgangsmåde til fremstiling deraf
EP3043827B1 (en) * 2013-09-13 2019-07-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of complement factor b
CN105814205B (zh) * 2013-12-12 2019-11-19 阿尔尼拉姆医药品有限公司 补体成分iRNA组合物及其使用方法
PE20170010A1 (es) 2014-05-01 2017-03-04 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para modular la expresion del factor b del complemento

Also Published As

Publication number Publication date
JP6637442B2 (ja) 2020-01-29
RU2016147047A3 (uk) 2018-10-26
WO2015168635A3 (en) 2016-01-07
HUE046272T2 (hu) 2020-02-28
HRP20191664T1 (hr) 2019-12-13
AU2015252858B2 (en) 2020-12-10
CN110724687A (zh) 2020-01-24
ES2745825T3 (es) 2020-03-03
MX2016014294A (es) 2017-02-02
US20230057718A1 (en) 2023-02-23
WO2015168635A2 (en) 2015-11-05
CR20200228A (es) 2020-07-09
IL271659A (en) 2020-02-27
EP4219718A3 (en) 2024-01-10
IL247883A0 (en) 2016-11-30
SG11201608502TA (en) 2016-11-29
EP3608406B1 (en) 2023-02-15
CN110724687B (zh) 2023-10-13
PL3608406T3 (pl) 2023-05-22
US10280423B2 (en) 2019-05-07
EA036496B1 (ru) 2020-11-17
PE20190626A1 (es) 2019-04-26
PE20170010A1 (es) 2017-03-04
CA2943894A1 (en) 2015-11-05
EP3137596A2 (en) 2017-03-08
KR20160147892A (ko) 2016-12-23
EP3137596A4 (en) 2017-09-20
NZ763982A (en) 2023-11-24
JP2017514489A (ja) 2017-06-08
EP3137596B1 (en) 2019-07-10
US20170159055A1 (en) 2017-06-08
PL3137596T3 (pl) 2019-11-29
DK3137596T3 (da) 2019-09-02
CL2018001996A1 (es) 2019-03-08
ES2941742T3 (es) 2023-05-25
SG10201809953QA (en) 2018-12-28
IL247883B (en) 2021-03-25
US11732265B2 (en) 2023-08-22
NZ724366A (en) 2023-10-27
BR112016022593B1 (pt) 2022-04-26
AU2015252858A1 (en) 2016-10-06
RU2016147047A (ru) 2018-06-01
LT3137596T (lt) 2019-09-10
SI3137596T1 (sl) 2019-08-30
BR112016022593A2 (pt) 2017-10-10
CN106232804B (zh) 2019-10-25
CR20160554A (es) 2017-03-07
KR102369736B1 (ko) 2022-03-02
RS59182B1 (sr) 2019-10-31
US20230357776A1 (en) 2023-11-09
EP3608406A1 (en) 2020-02-12
JP2020058368A (ja) 2020-04-16
PH12016502062A1 (en) 2016-12-19
EP4219718A2 (en) 2023-08-02
JP7001663B2 (ja) 2022-02-04
EA201692204A1 (ru) 2017-04-28
US20200048638A1 (en) 2020-02-13
RU2701645C2 (ru) 2019-09-30
CL2016002764A1 (es) 2017-12-29
PT3137596T (pt) 2019-09-27
CN106232804A (zh) 2016-12-14
AU2015252858C1 (en) 2021-09-16
DOP2016000291A (es) 2017-02-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA121656C2 (uk) Олігомерна сполука та спосіб лікування захворювання, пов'язаного з порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу
UA121017C2 (uk) Композиція і спосіб моделювання експресії hbv
US11613752B2 (en) Compositions and methods for modulating PKK expression
CN104540948B (zh) 用于抑制alas1基因表达的组合物与方法
CN103890000B (zh) 血管生成素样3(ANGPTL3)iRNA组合物及其使用方法
CN104520310B (zh) SERPINC1 iRNA组合物及其使用方法
CN106459969B (zh) 用于调节生长激素受体表达的组合物和方法
CN108368507A (zh) 程序性细胞死亡1配体1(PD-L1)的iRNA组合物及其使用方法
EA029137B1 (ru) Модулирование экспрессии вируса гепатита в (hbv)
CN105408481A (zh) SERPINA1 iRNA组合物及其使用方法
CN103813810A (zh) 用于抑制tmprss6基因表达的组合物和方法
UA126266C2 (uk) ДВОНИТКОВИЙ ЗАСІБ ДЛЯ RNAi, ЗДАТНИЙ ІНГІБУВАТИ ЕКСПРЕСІЮ HAO1 (ОКСИДАЗИ 1 ГІДРОКСИКИСЛОТ (ГЛІКОЛАТОКСИДАЗИ)) В КЛІТИНІ
CN105452463A (zh) Tmprss6 irna组合物及其使用方法
CN103476932A (zh) Clec-2的核酸调节剂
CN109536493A (zh) 用于抑制lect2基因表达的组合物和方法
UA124961C2 (uk) ДВОНИТКОВА РИБОНУКЛЕЇНОВА КИСЛОТА (dsRNA) ДЛЯ ІНГІБУВАННЯ ЕКСПРЕСІЇ ALAS1
CA3128093A1 (en) Modulators of yap1 expression
NZ751385B2 (en) Complement component c5 irna compositions and methods of use thereof
NZ764037A (en) Compositions and methods for modulating growth hormone receptor expression
NZ764037B2 (en) Compositions and methods for modulating growth hormone receptor expression
NZ724366B2 (en) Compositions and methods for modulating complement factor b expression
NZ725538B2 (en) Compositions and methods for modulating apolipoprotein (a) expression