JP7001663B2 - 補体ｂ因子発現を調節するための組成物及び方法 - Google Patents

補体ｂ因子発現を調節するための組成物及び方法 Download PDF

Info

Publication number
JP7001663B2
JP7001663B2 JP2019228789A JP2019228789A JP7001663B2 JP 7001663 B2 JP7001663 B2 JP 7001663B2 JP 2019228789 A JP2019228789 A JP 2019228789A JP 2019228789 A JP2019228789 A JP 2019228789A JP 7001663 B2 JP7001663 B2 JP 7001663B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
certain embodiments
compound
nucleoside
antisense
nucleic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2019228789A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2020058368A (ja
JP2020058368A5 (ja
Inventor
プラカシュ，タジャ・ピー
セス，プニット・ピー
スウェイジ，エリック・イー
グロスマン，タマル・アール
マッカレブ，マイケル・エル
ワット，アンドリュー・ティー
フレアー，スーザン・エム
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ionis Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Ionis Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ionis Pharmaceuticals Inc filed Critical Ionis Pharmaceuticals Inc
Publication of JP2020058368A publication Critical patent/JP2020058368A/ja
Publication of JP2020058368A5 publication Critical patent/JP2020058368A5/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7001663B2 publication Critical patent/JP7001663B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/555—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound pre-targeting systems involving an organic compound, other than a peptide, protein or antibody, for targeting specific cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21047—Alternative-complement-pathway C3/C5 convertase (3.4.21.47), i.e. properdin factor B
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

配列表
本願は、電子形式の配列表とともに出願されている。この配列表は、２０１５年４月２８日に作成されたサイズ２０４ｋｂのＢＩＯＬ０２５１ＷＯＳＥＱ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名称のファイルとして提供される。この配列表の電子形式の情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本実施形態は、補体Ｂ因子（ＣＦＢ）特異的阻害剤を対象に投与することによって、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置し、防止し、または改善するための方法、化合物、及び組成物を提供する。
補体系は、外来細胞の溶解、抗原貪食の強化、抗原保持因子の凝集、ならびにマクロファージ及び好中球の誘引に関与する宿主自然免疫系の一部である。補体系は３つの初期経路－古典経路、レクチン経路、及び代替経路－に分類され、それらは、成分Ｃ３に収束して、Ｃ３コンバターゼとして知られる酵素複合体を生成させ、それがＣ３をＣ３ａとＣ３ｂとに切断する。Ｃ３ｂはＣＦＢに媒介されてＣ３コンバターゼと会合し、Ｃ５コンバターゼの生成をもたらす。Ｃ５コンバターゼはＣ５をＣ５ａとＣ５ｂとに切断し、そのＣ５ｂが膜侵襲経路を開始して、成分Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、及びＣ９を含む膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成をもたらす。膜侵襲複合体（ＭＡＣ）は膜貫通チャネルを形成して標的細胞のリン脂質二重層を破壊し、それが細胞溶解につながる。
ホメオスタシス状態では、Ｃ３の自発的加水分解とＣ３ｂの生成とによる代替経路の活性化の結果として、代替経路が低い「アイドリング（ｔｉｃｋｏｖｅｒ）」レベルで絶えず活性化されて、Ｃ５コンバターゼを生成している。
概要
補体系は自然免疫を媒介し、傷害に対する正常な炎症応答に重要な役割を果たすが、その調節異常は重度の傷害を引き起こしうる。代替補体経路がその構成的「アイドリング」レベルを超えて活性化すると、無制限な機能亢進が起こり、補体調節異常の疾患として顕在化しうる。
ここに提供する特定の実施形態は、補体Ｂ因子（ＣＦＢ）特異的阻害剤の投与によって、対象における補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置し、防止し、または改善する方法に関する。ここに提供するいくつかの実施形態は、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象におけるＣＦＢの発現を、前記対象にＣＦＢ特異的阻害剤を投与することによって阻害する方法に向けられる。特定の実施形態では、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の眼におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法には、前記対象にＣＦＢ特異的阻害剤を投与することが含まれる。いくつかの実施形態では、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の腎臓におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法には、前記対象にＣＦＢ特異的阻害剤を投与することが含まれる。
詳細な説明
前記一般的な説明及び以下の詳細な説明はどちらも例示的かつ説明的であるにすぎず、本願に係る発明を限定するものではないと理解すべきである。本明細書において、単数形の使用は、別段の明示がある場合を除き、複数形を含む。本明細書において「または（ｏｒ）」の使用は、別段の言明がある場合を除き、「及び／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味する。さらに、「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定的ではない。また、「要素」または「成分」などの用語は、別段の明示がある場合を除き、１つのユニットを含む要素及び成分と２つ以上のサブユニットを含む要素及び成分をどちらも包含する。
本明細書において使用する見出しには構成上の目的しかなく、記載される主題を限定するものと解釈してはならない。本願において引用する文書または文書の一部は、すべて、例えば限定するわけではないが特許、特許出願、記事、書籍、及び論文を含めて、その文書のうちの本明細書において論じる部分も、その全体も、参照により明確に組み込まれる。
特別な定義が与えられない限り、本明細書に記載する分析化学、合成有機化学、ならびに医化学及び製薬化学に関連して用いられる術語、ならびにそれらの手順及び技法は、周知であり、当技術分野で一般に使用されるものである。化学合成及び化学分析には、標準的技法を使用することができる。そのような技法及び手順のうち特定のものは、例えば「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」Ｓａｎｇｖｉ及びＣｏｏｋ編，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｓｏｃｉｅｔｙ，ワシントンＤ．Ｃ．，１９９４、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，ペンシルベニア州イーストン，第２１版，２００５、及び「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」Ｓｔａｎｌｅｙ Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ編，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，フロリダ州ボカラトン、ならびにＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９に見いだすことができ、これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。許容される場合、本開示の全体を通して言及する特許、出願、公開された出願、及び他の出版物、ならびに他のデータはすべて、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
別段の表示がある場合を除き、以下の用語は、以下の意味を有する。
「２’－Ｆヌクレオシド」とは、２’位にフッ素を含む糖を含むヌクレオシドを指す。別段の表示がある場合を除き、２’－Ｆヌクレオシドにおけるフッ素は（天然リボースのＯＨを置き換える）リボ位に存在する。
「２’－Ｏ－メトキシエチル」（２’－ＭＯＥ及び２’－Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３ともいう）は、フラノース環の２’位にあるＯ－メトキシエチル修飾を指す。２’－Ｏ－メトキシエチル修飾糖は、修飾糖である。
「２’－ＭＯＥヌクレオシド」（２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドともいう）は、２’－ＭＯＥ修飾糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「２’－置換ヌクレオシド」とは、フラノシル環の２’位にＨまたはＯＨ以外の置換基を含むヌクレオシドを意味する。特定の実施形態において、２’置換ヌクレオシドは、二環式糖修飾を有するヌクレオシドを含む。
「３’標的部位」とは、ある特定アンチセンス化合物の最も３’側のヌクレオチドに相補的な標的核酸のヌクレオチドを指す。
「５’標的部位」とは、ある特定アンチセンス化合物の最も５’側のヌクレオチドに相補的な標的核酸のヌクレオチドを指す。
「５－メチルシトシン」とは、５位に取り付けられたメチル基で修飾されたシトシンを意味する。５－メチルシトシンは修飾核酸塩基である。
「約」とは、ある値の±１０％以内を意味する。例えば、「ＣＦＢの少なくとも約７０％阻害を達成する化合物」と言明した場合、それは、ＣＦＢレベルが６０％～８０％の範囲内で阻害されることを含意する。
「投与」または「投与すること」とは、ここに提供するアンチセンス化合物を、意図したその機能を果たすように対象に導入する経路を指す。使用することができる投与経路の一例として、非経口投与、例えば皮下、静脈内、または筋肉内への注射または注入が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書にいう「アルキル」とは、最大２４個の炭素原子を含有する飽和直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味する。アルキル基の例として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、ｎ－ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、典型的には、１～約２４個の炭素原子、より典型的には、１～約１２個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ１２アルキル）を含み、１～約６個の炭素原子がより好ましい。
本明細書にいう「アルケニル」とは、最大２４個の炭素原子を含有し、かつ少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖炭化水素鎖ラジカルを意味する。アルケニル基の例として、エテニル、プロペニル、ブテニル、１－メチル－２－ブテン－１－イル、１，３－ブタジエンなどのジエンなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルケニル基は、典型的には、２～約２４個の炭素原子、より典型的には、２～約１２個の炭素原子を含み、２～約６個の炭素原子がより好ましい。本明細書にいうアルケニル基は、場合によっては、１つ以上のさらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「アルキニル」とは、最大２４個の炭素原子を含有し、かつ少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有する直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味する。アルキニル基の例として、エチニル、１－プロピニル、１－ブチニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル基は、典型的には、２～約２４個の炭素原子、より典型的には、２～約１２個の炭素原子を含み、２～約６個の炭素原子がより好ましい。本明細書にいうアルキニル基は、場合によっては、１つ以上のさらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「アシル」とは、有機酸からヒドロキシル基を除去することによって形成されるラジカルを意味し、一般式－Ｃ（Ｏ）－Ｘを有し、式中、Ｘは、典型的には、脂肪族、脂環式、または芳香族である。例として、脂肪族カルボニル、芳香族カルボニル、脂肪族スルホニル、芳香族スルフィニル、脂肪族スルフィニル、芳香族ホスフェート、脂肪族ホスフェートなどが挙げられる。本明細書にいうアシル基は、さらなる置換基を場合によっては含みうる。
本明細書にいう「脂環式」とは、環式環系を意味し、前記環は、脂肪族である。前記環系は、１つ以上の環を含むことができ、少なくとも１つの環は脂肪族である。好ましい脂環式基は、環内に約５～約９個の炭素原子を有する環を含む。本明細書にいう脂環式基は
、場合によっては、さらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「脂肪族」とは、最大２４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味し、任意の２つの炭素原子の間の飽和度は、一重、二重、または三重結合である。脂肪族基は、好ましくは、１～約２４個の炭素原子、より典型的には、１～約１２個の炭素原子を含有し、１～約６個の炭素原子がより好ましい。脂肪族基の直鎖または分岐鎖は、窒素、酸素、硫黄、及びリンを含む１つ以上のヘテロ原子で中断されていてもよい。ヘテロ原子によって中断されているそのような脂肪族基には、ポリアルコキシ、例えば、ポリアルキレングリコール、ポリアミン、及びポリイミンが含まれるが、これらに限定されない。本明細書にいう脂肪族基は、場合によっては、さらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「アルコキシ」とは、アルキル基と酸素原子とで形成されるラジカルを意味し、アルコキシ基は前記酸素原子を使って親分子に取り付けられる。アルコキシ基の例として、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ－ブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ｎ－ペントキシ、ネオペントキシ、ｎ－ヘキソキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書にいうアルコキシ基は、場合によっては、さらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「アミノアルキル」とは、アミノ置換されたＣ１～Ｃ１２アルキルラジカルを意味する。前記ラジカルのアルキル部分は、親分子と共有結合を形成する。アミノ基は、任意の位置に位置することができ、アミノアルキル基は、アルキル部分及び／またはアミノ部分を、さらなる置換基で置換することができる。
本明細書にいう「アラルキル」及び「アリールアルキル」とは、Ｃ１～Ｃ１２アルキルラジカルに共有結合で連結されている芳香族基を意味する。結果として生じるアラルキル（またはアリールアルキル）基のアルキルラジカル部分は、親分子と共有結合を形成する。例として、ベンジル、フェネチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書にいうアラルキル基は、場合によっては、当該ラジカル基を形成するアルキル基、アリール基、またはそれら両方の基に取り付けられたさらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「アリール」及び「芳香族」とは、１つ以上の芳香族環を有する単環式または多環式炭素環式環系ラジカルを意味する。アリール基の例として、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。好ましいアリール環系は、１つ以上の環内に約５～約２０個の炭素原子を有する。本明細書にいうアリール基は、場合によっては、さらなる置換基を含みうる。
「改善」とは、関連する疾患、障害、または状態の少なくとも１つの指標、徴候、または症状の軽減を指す。特定の実施形態では、改善は、状態または疾患の１つ以上の指標の進行の遅延または減速を包含する。指標の重症度は、当業者に知られている主観的尺度または客観的尺度によって決定することができる。
「動物」とは、ヒトまたはヒト以外の動物を指し、これには、例えばマウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、及び非ヒト霊長類（サル及びチンパンジーを含むが、これらに限定されない）が含まれるが、これらに限定されない。
「アンチセンス活性」とは、アンチセンス化合物によるその標的核酸へのハイブリダイゼーションに起因する任意の検出可能な活性または測定可能な活性を意味する。特定の実施形態では、アンチセンス活性が、標的核酸またはそのような標的核酸がコードするタンパク質の量または発現の減少である。
「アンチセンス化合物」とは、水素結合によって標的核酸へのハイブリダイゼーションを起こすことができるオリゴマー化合物を意味する。アンチセンス化合物の例として、一本鎖化合物及び二本鎖化合物、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及び占有に基づく（ｏｃｕｐａｎｃｙ－ｂａｓｅｄ）化合物が挙げられる。
「アンチセンス阻害」とは、アンチセンス化合物が存在しない場合の標的核酸レベルとの比較で、標的核酸に相補的なアンチセンス化合物の存在下での標的核酸レベルの低減を意味する。
「アンチセンス機序」とは、化合物と標的核酸とのハイブリダイゼーションを伴うすべての機序をいう。前記ハイブリダイゼーションの結果または効果は、標的の分解または標的の占有であり、これに付随して、例えば転写またはスプライシングに関わる細胞機構の停止が起こる。
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、標的核酸の対応する領域または対応するセグメントへのハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。
「塩基相補性」とは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基が標的核酸中の対応する核酸塩基と正確な塩基対合（すなわちハイブリダイゼーション）を起こす能力を指し、これは、対応する核酸塩基間のワトソン－クリック型、フーグスティーン型または逆フーグスティーン型水素結合によって媒介される。
「二環式糖部分」とは、４～７員環の２つの原子をつないで第２の環を形成することで二環式構造をもたらす橋を含む４～７員環（フラノシルを含むが、これに限定されない）を含む修飾糖部分を意味する。特定の実施形態では、前記４～７員環が糖環である。特定の実施形態では、前記４～７員環がフラノシルである。特定のそのような実施形態では、前記橋が、フラノシルの２’－炭素と４’－炭素とをつなぐ。
「二環式核酸」または「ＢＮＡ」または「ＢＮＡヌクレオシド」とは、ヌクレオシド糖単位の４’位と２’位の間の２つの炭素原子をつないで二環式糖を形成する橋を有する核酸モノマーを意味する。そのような二環式糖の例として、以下に図示するＡ）α－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＬＮＡ、（Ｂ）β－Ｄ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＬＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’）ＬＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’）ＬＮＡ及び（Ｅ）オキシアミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’）ＬＮＡが挙げられるが、これらに限定されない。
Figure 0007001663000001
本明細書にいうＬＮＡ化合物には、糖の４’位と２’位との間に少なくとも１つの橋を有する化合物であって、橋のそれぞれが、－［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ－、－Ｃ（Ｒ１）＝Ｃ（Ｒ２）－、－Ｃ（Ｒ１）＝Ｎ－、－Ｃ（＝ＮＲ１）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝
Ｓ）－、－Ｏ－、－Ｓｉ（Ｒ１）２－、－Ｓ（＝Ｏ）ｘ－及び－Ｎ（Ｒ１）－［ここで、ｘは０、１、または２であり、ｎは１、２、３、または４であり、各Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、Ｃ５－Ｃ２０アリール、置換Ｃ５－Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５－Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５－Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）－Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２－Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）－Ｊ１）であり、各Ｊ１及び Ｊ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、Ｃ５－Ｃ２０アリール、置換Ｃ５－Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）－Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１－Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１－Ｃ１２アミノアルキルまたは保護基である］から独立して選択される１つまたは２～４つの連結基を、独立して含むものが含まれるが、これらに限定されない。
ＬＮＡの定義に包含される４’－２’架橋基の例として、次式の１つが挙げられるが、これらに限定されない：－［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ－、－［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ－Ｏ－、－Ｃ（Ｒ１Ｒ２）－Ｎ（Ｒ１）－Ｏ－または－Ｃ（Ｒ１Ｒ２）－Ｏ－Ｎ（Ｒ１）－。さらに、ＬＮＡの定義に包含される他の架橋基には、４’－ＣＨ２－２’、４’－（ＣＨ２）２－２’、４’－（ＣＨ２）３－２’、４’－ＣＨ２－Ｏ－２’、４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’、４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ１）－２’及び４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ１）－Ｏ－２’－橋があり、ここで、各Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、保護基またはＣ１－Ｃ１２アルキルである。
本発明のＬＮＡの定義には、リボシル糖環の２’－ヒドロキシル基が糖環の４’炭素原子につながれてメチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）橋を形成し、よって二環式糖部分を形成しているＬＮＡも含まれる。橋は、２’酸素原子と４’炭素原子とをつなぐメチレン（－ＣＨ２－）基であってもよく、これにはメチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＬＮＡという用語が使用される。さらに、この位置にエチレン架橋基を有する二環式糖部分の場合は、エチレンオキシ（４’－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－２’）ＬＮＡという用語が使用される。メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＬＮＡの異性体であるα－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）も、本明細書にいうＬＮＡの定義に包含される。
「キャップ構造」または「末端キャップ部分」とは、アンチセンス化合物のどちらかの末端に組み込まれた化学修飾を意味する。
「炭水化物」とは、天然に存在する炭水化物、修飾炭水化物、または炭水化物誘導体を意味する。
「炭水化物クラスター」とは、足場基またはリンカー基に取り付けられた１つ以上の炭水化物残基を有する化合物を意味する（例えば、炭水化物共役クラスターの例として、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｍａｉｅｒ ｅｔ ａｌ．「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｔｏ ａ Ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｌｕｓｔｅｒ ｆｏｒ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ」Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，（１４）：１８－２９、またはＲｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．「Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ－Ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ
Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，（４７）：５７９８－５８０８を参照のこと）。
「炭水化物誘導体」とは、出発物質または中間体として炭水化物を用いて合成されうる任意の化合物を意味する。
「ｃＥｔ」または「拘束エチル」とは、４’－炭素と２’－炭素とをつなぐ橋を含む二環式糖部分を意味し、この橋は４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’という式を有する。
「化学修飾」とは、天然に存在する対応物と比較した場合の化合物の化学的相違を意味する。オリゴヌクレオチドの化学修飾は、ヌクレオシド修飾（糖部分修飾及び核酸塩基修飾を含む）ならびにヌクレオシド間連結部修飾を含む。オリゴヌクレオチドの場合、核酸塩基配列だけの相違は、化学修飾には含まれない。
「切断可能な結合」とは、開裂されうる任意の化学結合を意味する。特定の実施形態では、切断可能な結合は、アミド、ポリアミド、エステル、エーテル、ホスホジエステルの一方もしくは両方のエステル、リン酸エステル、カルバメート、ジスルフィド、またはペプチドのなかから選択される。
「切断可能部分」とは、生理学的条件下で開裂されうる結合または基を意味する。特定の実施形態では、切断可能部分が、細胞の内部またはリソソームなどの細胞内コンパートメントの内部で切断される。特定の実施形態では、切断可能部分が、ヌクレアーゼなどの内在性酵素によって切断される。特定の実施形態では、切断可能部分が、１個、２個、３個、４個、または５個以上の切断可能な結合を有する原子団を含む。
「共役体」または「共役基」とは、オリゴヌクレオチドまたはオリゴマー化合物に結合される原子または原子団を意味する。概して、共役基は、それらが取り付けられた化合物の１つ以上の特性、例えば限定するわけではないが、薬力学的特性、薬物動態学的特性、結合特性、吸収特性、細胞分布特性、細胞取り込み特性、電荷特性、及び／またはクリアランス特性などを修飾する。
共役基に関連して「共役リンカー」または「リンカー」とは、任意の原子または原子団を含む共役基の一部分であって、（１）オリゴヌクレオチドを共役基の別の部分と共有結合で連結するか、または（２）共役基の２つ以上の部分を共有結合で連結するものを意味する。
共役基は、本明細書においてはラジカルとして示され、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴマー化合物への共有結合を形成するための結合を提供する。特定の実施形態では、オリゴマー化合物における結合点が、オリゴマー化合物の３’末端ヌクレオシドの３’－ヒドロキシル基の３’－酸素原子である。特定の実施形態では、オリゴマー化合物における結合点が、オリゴマー化合物の５’末端ヌクレオシドの５’－ヒドロキシル基の５’－酸素原子である。特定の実施形態では、オリゴマー化合物への結合を形成するための結合は、切断可能な結合である。特定のそのような実施形態において、そのような切断可能な結合は、切断可能部分のすべてまたは一部を構成する。
特定の実施形態では、共役基が、切断可能部分（例えば、切断可能な結合または切断可能なヌクレオシド）と、ＧａｌＮＡｃクラスター部分などの炭水化物クラスター部分とを含む。そのような炭水化物クラスター部分は、標的部分と、場合によっては、共役リンカーとを含む。ある特定の実施形態では、炭水化物クラスター部分が、リガンドの数及びそ
の実体によって特定される。例えば、ある特定の実施形態では、炭水化物クラスター部分が３個のＧａｌＮＡｃ基を含み、「ＧａｌＮＡｃ３」と表記される。ある特定の実施形態では、炭水化物クラスター部分が４個のＧａｌＮＡｃ基を含み、「ＧａｌＮＡｃ４」と表記される。具体的な炭水化物クラスター部分（具体的なテザー基、分岐基、及び共役リンカー基を有するもの）を、本明細書では、ローマ数字と、それに続く下付き文字「ａ」で説明し、表記する。したがって、「ＧａｌＮａｃ３－１ａ」とは、３個のＧａｌＮａｃ基、ならびに具体的に特定されたテザー基、分岐基、及び連結基を有する共役基の具体的炭水化物クラスター部分を指す。そのような炭水化物クラスター断片は、切断可能な結合または切断可能なヌクレオシドなどの切断可能部分を介してオリゴマー化合物に取り付けられる。
「共役化合物」とは、共役基としての使用に好適な任意の原子、原子団、または連結された原子団を意味する。ある特定の実施形態では、共役化合物は、１つ以上の特性、例えば限定するわけではないが、薬力学的特性、薬物動態学的特性、結合特性、吸収特性、細胞分布特性、細胞取り込み特性、電荷特性、及び／またはクリアランス特性などを有しうるか、または付与しうる。
「拘束エチルヌクレオシド」（ｃＥｔヌクレオシドともいう）は、４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「補体Ｂ因子（ＣＦＢ）」とは、ＣＦＢの任意の核酸またはタンパク質を意味する。「ＣＦＢ核酸」とは、ＣＦＢをコードする任意の核酸を意味する。例えば特定の実施形態において、ＣＦＢ核酸は、ＣＦＢをコードするＤＮＡ配列、ＣＦＢをコードするＤＮＡ（イントロンとエクソンとを含むゲノムＤＮＡを含む）から転写されたＲＮＡ配列（これには非タンパク質コード（すなわちノンコーディング）ＲＮＡ配列と、ＣＦＢをコードするｍＲＮＡ配列とが含まれる）を包含する。「ＣＦＢ ｍＲＮＡ」とはＣＦＢタンパク質をコードするｍＲＮＡを意味する。
「ＣＦＢ特異的阻害剤」とは、ＣＦＢ ＲＮＡ及び／またはＣＦＢタンパク質の発現または活性を分子レベルで特異的に阻害することができる任意の薬剤を指す。例えばＣＦＢ特異的阻害剤には、ＣＦＢ ＲＮＡ及び／またはＣＦＢタンパク質の発現を阻害することができる核酸（アンチセンス化合物を含む）、ペプチド、抗体、小分子その他の薬剤が含まれる。
「化学的に異なる領域」とは、同じアンチセンス化合物の別の領域と何らかの形で異なっているアンチセンス化合物の領域を指す。例えば、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾を持たないヌクレオチドを有する領域とは化学的に異なる。
「キメラアンチセンス化合物」とは、少なくとも２つの化学的に異なる領域を有するアンチセンス化合物を意味し、それぞれの位置は複数のサブユニットを有する。
「相補性」とは、第１核酸と第２核酸の核酸塩基間で対合する能力を意味する。
「を含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｅ、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、及びｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）は、明言したステップもしくは要素またはステップ群もしくは要素群の包含を含意するが、他の任意のステップもしくは要素またはステップ群もしくは要素群の排除を含意しないと理解されるであろう。
「連続する核酸塩基」とは、互いに直接隣り合っている核酸塩基を意味する。
「デオキシヌクレオシド」とは、天然に存在するデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）に見られる２’－Ｈフラノシル糖部分を含むヌクレオシドを意味する。特定の実施形態において、２’－デオキシヌクレオシドは修飾核酸塩基を含むか、またはＲＮＡ核酸塩基（例えばウラシル）を含みうる。
「デオキシリボヌクレオチド」とは、ヌクレオチドの糖部分の２’位に水素を有するヌクレオチドを意味する。デオキシリボヌクレオチドは、さまざまな置換基のいずれでも修飾することができる。
「設計」または「設計された」とは、選ばれた核酸分子と特異的にハイブリダイズするオリゴマー化合物を設計するプロセスを指す。
「異なる修飾がなされた」とは、修飾の不在を含めて、互いに異なる化学修飾または化学置換基を意味する。したがって、例えば、ＭＯＥヌクレオシドと無修飾ＤＮＡヌクレオシドは、ＤＮＡヌクレオシドが修飾されていなくても、「異なる修飾がなされている」という。同様に、ＤＮＡとＲＮＡは、たとえそのどちらもが天然に存在する無修飾ヌクレオシドであったとしても、「異なる修飾がなされている」という。異なる核酸塩基を含んでいる点以外は同じであるヌクレオシドは、異なる修飾がなされているとは言わない。例えば、２’－ＯＭｅ修飾糖及び無修飾アデニン核酸塩基を含むヌクレオシドと、２’－ＯＭｅ修飾糖及び無修飾チミン核酸塩基を含むヌクレオシドとは、異なる修飾がなされているとは言わない。
「二本鎖」とは、互いにハイブリダイズしている２つの別個のオリゴマー化合物を指す。そのような二本鎖化合物は、生理的に妥当な条件下でハイブリダイゼーションを維持するのに十分な相補性が存在するのであれば、一方もしくは両方の鎖の一方もしくは両方の末端に１つ以上のハイブリダイズしていないヌクレオシド（オーバーハング）及び／または１つ以上のハイブリダイズしていない内部ヌクレオシド（ミスマッチ）を有しうる。
「有効量」とは、ある活性医薬剤を必要とする個体において所望する生理学的結果を実現するのに十分な前記活性医薬剤の量を意味する。有効量は、処置される個体の健康状態及び身体状態、処置される個体の分類群、組成物の製剤、個体の医学的状態の評価、及び他の関連因子に依存して個体間で変動しうる。
「効力」とは、所望の効果を生じさせる能力を意味する。
「発現」には、遺伝子にコードされている情報を、細胞中に存在し細胞中で作動する構造物へと変換する機能のすべてが含まれる。そのような構造物として、転写産物及び翻訳産物が挙げられるが、これらに限定されない。
「完全に相補的」または「１００％相補的」とは、第１核酸の各核酸塩基が第２核酸中に相補的核酸塩基を有することを意味する。特定の実施形態では、第１核酸がアンチセンス化合物であり、標的核酸が第２核酸である。
「フラノシル」とは、４つの炭素原子と１つの酸素原子とを含む５員環を含む構造を意味する。
「ギャップマー」とは、キメラアンチセンス化合物であって、ＲＮａｓｅ Ｈ切断を支持する複数のヌクレオシドを有する内側領域が、１つ以上のヌクレオシドを有する外側領域の間に配置されており、内側領域を構成するヌクレオシドが、外側領域を構成する１ま
たは複数のヌクレオシドと化学的に異なっているものを意味する。前記内側領域を「ギャップ」と呼び、前記外側領域を「ウイング」と呼ぶことができる。
「ハロ」及び「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素から選択される原子を意味する。
「ヘテロアリール」及び「ヘテロ芳香族」とは、単環式もしくは多環式芳香族環、環系、または縮合環系を含むラジカルであって、前記環のうちの少なくとも１つが芳香族であり、かつ１つ以上のヘテロ原子を含むものを意味する。ヘテロアリールは、縮合環のうちの１つ以上がヘテロ原子を含有していない系を含む縮合環系も包含するものとする。ヘテロアリール基は、典型的には、硫黄、窒素、または酸素から選択される１つの環原子を含む。ヘテロアリール基の例として、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールラジカルは、親分子に直接取り付けるか、または脂肪族基もしくはヘテロ原子などの連結部分を介して取り付けることができる。本明細書にいうヘテロアリール基は、場合によっては、さらなる置換基を含みうる。
「ハイブリダイゼーション」とは、相補的核酸分子のアニーリングを意味する。特定の実施形態では、相補的核酸分子に、アンチセンス化合物と核酸標的が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、相補的核酸分子に、アンチセンスオリゴヌクレオチドと核酸標的が含まれるが、これらに限定されない。
「ある疾患、障害及び／または状態を有するか、またはそれらを有するリスクがある動物を同定する」とは、前記疾患、障害及び／または状態と診断された動物を同定すること、あるいは前記疾患、障害及び／または状態を発症する素因を有する動物を同定することを意味する。そのような同定は、個体の病歴を評価することや標準的な臨床検査または臨床評価を含む任意の方法によって達成することができる。
「直接隣り合っている」とは、直接隣り合っている要素の間に介在する要素が存在しないことを意味する。
「個体」とは、処置または治療のために選ばれたヒトまたはヒト以外の動物を意味する。
「発現または活性を阻害する」とは、発現または活性の低減、遮断を指し、必ずしも発現または活性の完全な排除を示すわけではない。
「ヌクレオシド間連結部」とは、ヌクレオシド間の化学結合を指す。
「ヌクレオシド間中性連結基」とは、２つのヌクレオシドを直接連結する中性連結基を意味する。
「ヌクレオシド間リン連結基」とは、２つのヌクレオシドを直接連結するリン連結基を意味する。
「延長された」アンチセンスオリゴヌクレオチドは、本明細書に開示するアンチセンスオリゴヌクレオチドとの比較で、１つ以上の追加ヌクレオシドを有するものである。
「連結部モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその一領域における連結部修飾のパターンを意味する。そのようなオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは修飾されていても無修飾でもよい。別段の表示がある場合を除き、連結部の説明しかない本明細書におけるモチーフは、連結部モチーフであるものとする。したがって、そのような事例では、ヌクレオシドは限定されない。
「連結されたデオキシヌクレオシド」とは、デオキシリボースで置換された核酸塩基（Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ、Ｕ）が、リン酸エステルで連結されているものを意味する。
「連結されたヌクレオシド」とは、ヌクレオシド間連結部によって一つに連結された隣り合うヌクレオシドを意味する。
「ロックト核酸ヌクレオシド」または「ＬＮＡ」とは、４’－ＣＨ２－Ｏ－２’橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「ミスマッチ」または「非相補的核酸塩基」とは、第１核酸の核酸塩基が第２核酸または標的核酸の対応する核酸塩基と対合できない場合を指す。
「修飾ヌクレオシド間連結部」とは、天然に存在するヌクレオシド間結合（すなわちホスホジエステルヌクレオシド間結合）からの置換または何らかの改変を指す。
「修飾核酸塩基」とは、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、またはウラシル以外の任意の核酸塩基を意味する。「無修飾核酸塩基」とは、プリン塩基で（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を意味する。
「修飾ヌクレオシド」とは、修飾糖部分及び／または修飾核酸塩基を独立して有するヌクレオシドを意味する。
「修飾ヌクレオチド」とは、修飾糖部分、修飾ヌクレオチド間連結部、または修飾核酸塩基を独立して有するヌクレオチドを意味する。
「修飾オリゴヌクレオチド」とは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結部、修飾糖、及び／または修飾核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドを意味する。
「修飾糖」とは、天然糖部分からの置換及び／または何らかの改変を意味する。
「調節する」とは、細胞、組織、器官または生物における特徴を変化させまたは調整することを指す。例えば、ＣＦＢ ｍＲＮＡを調節するとは、細胞、組織、器官、または生物におけるＣＦＢ ｍＲＮＡ及び／またはＣＦＢタンパク質のレベルを増加または減少させることを意味しうる。「調節因子」は、細胞、組織、器官または生物における変化をもたらす。例えばＣＦＢアンチセンス化合物は、細胞、組織、器官または生物におけるＣＦＢ ｍＲＮＡ及び／またはＣＦＢタンパク質の量を減少させる調節因子であることができる。
「モノマー」とはオリゴマーの一単位を指す。モノマーとしては、天然に存在するものか修飾体かを問わず、ヌクレオシド及びヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。
「単環式または多環式の環系」という用語は、単環式または縮合されもしくは連結され
た多環式のラジカル環系から選択されるすべての環系を包含するものとし、脂肪族、脂環式、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アリールアルキル、複素環式、ヘテロアリール、ヘテロ芳香族、及びヘテロアリールアルキルから個別に選択される単一の環系及び混成環系を包含するものとする。そのような単環式及び多環式の構造は、それぞれが同一のレベルの飽和を有する環を含有するか、またはそれぞれが独立して、完全飽和、部分飽和、もしくは完全不飽和を含むさまざまな飽和度を有する環を含有することができる。各環は、複素環式環が生じるように、そしてまた、例えば一方の環が炭素環原子のみを有しかつ縮合している環が２つの窒素原子を有するベンズイミダゾールなどの混合モチーフに存在しうるＣ環原子のみを含む環が生じるように、Ｃ、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される環原子を含むことができる。単環式または多環式の環系は、例えば一方の環に２つの＝Ｏ基が取り付けられているフタルイミドのように、さらに置換基で置換することができる。単環式または多環式の環系は、環原子を介した直接結合、複数の環原子を介した縮合、置換基を介した結合、または二機能性連結部分を介した結合などといったさまざまな戦略を用いて、親分子に取り付けることができる。
「モチーフ」とは、アンチセンス化合物における無修飾ヌクレオシドと修飾ヌクレオシドのパターンを意味する。
「天然糖部分」とは、ＤＮＡ（２’－Ｈ）またはＲＮＡ（２’－ＯＨ）に見いだされる糖部分を意味する。
「天然に存在するヌクレオシド間連結部」とは、３’→５’ホスホジエステル連結部を意味する。
「中性連結基」とは、荷電していない連結基を意味する。中性連結基には、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ＭＭＩ（－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｏ－）、アミド－３（－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－）、アミド－４（－ＣＨ２－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（＝Ｏ）－）、ホルムアセタール（－Ｏ－ＣＨ２－Ｏ－）、及びチオホルムアセタール（－Ｓ－ＣＨ２－Ｏ－）などがあるが、これらに限定されない。さらに、中性連結基には、シロキサン（ジアルキルシロキサン）、カルボン酸エステル、カルボキサミド、硫化物、スルホン酸エステル、及びアミドを含む非イオン性連結部も含まれる（例えば「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」Ｙ．Ｓ．Ｓａｎｇｈｖｉ及びＰ．Ｄ．Ｃｏｏｋ編，ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ５８０；Ｃｈａｐｔｅｒ ３及び４（ｐｐ．４０－６５）を参照されたい）。さらに、中性連結基には、混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＣＨ２成分パーツを含む非イオン性連結部も含まれる。
「非相補的核酸塩基」とは、互いに水素結合を形成せず、他のいかなる形でもハイブリダイゼーションを支持することのない、一対の核酸塩基を指す。
「非ヌクレオシド間中性連結基とは、２つのヌクレオシドを直接連結しない中性連結基を意味する。特定の実施形態では、非ヌクレオシド間中性連結基が、ヌクレオシドをヌクレオシド以外の基に連結する。特定の実施形態では、非ヌクレオシド間中性連結基は、どちらもヌクレオシドではない２つの基を連結する。
「非ヌクレオシド間リン連結基」とは、２つのヌクレオシドを直接連結しないリン連結基を意味する。特定の実施形態では、非ヌクレオシド間リン連結基がヌクレオシドをヌクレオシド以外の基に連結する。特定の実施形態では、非ヌクレオシド間リン連結基が、どちらもヌクレオシドではない２つの基を連結する。
「核酸」とは、モノマー型ヌクレオチドで構成された分子を指す。核酸には、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸、及び二本鎖核酸などがあるが、これらに限定されない。
「核酸塩基」とは、もう一つの核酸の塩基と対合することができる複素環式部分を意味する。
「核酸塩基相補性」とは、もう一つの核酸塩基と塩基対合することができる核酸塩基を指す。例えばＤＮＡでは、アデニン（Ａ）がチミン（Ｔ）と相補的である。例えばＲＮＡでは、アデニン（Ａ）がウラシル（Ｕ）と相補的である。特定の実施形態では、相補的核酸塩基とは、アンチセンス化合物の核酸塩基であって、その標的核酸の核酸塩基と塩基対合することができるものを指す。例えば、あるアンチセンス化合物の特定の位置にある核酸塩基が標的核酸の特定の位置にある核酸塩基と水素結合することができるなら、前記オリゴヌクレオチドと前記標的核酸の間の水素結合の位置は、それら核酸塩基対において相補的であるとみなされる。
「核酸塩基修飾モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドに沿った核酸塩基への修飾のパターンを意味する。別段の表示がある場合を除き、核酸塩基修飾モチーフは、核酸塩基配列に依存しない。
「核酸塩基配列」とは、連続する核酸塩基の順序を意味し、糖、連結部、及び／または核酸塩基修飾には依存しない。
「ヌクレオシド」とは、糖に連結された核酸塩基を意味する。
「ヌクレオシド模倣物」には、例えばモルホリノ、シクロヘキセニル、シクロヘキシル、テトラヒドロピラニル、ビシクロまたはトリシクロ糖模倣物、例えば非フラノース糖単位を有するヌクレオシド模倣物などといった、オリゴマー化合物の１つ以上の位置において糖または糖及び塩基を置き換えるため（連結部は必ずしも置き換えられない）に使用される構造が含まれる。ヌクレオチド模倣物には、例えばペプチド核酸またはモルホリノ（－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－または他の非ホスホジエステル連結部によって連結されたモルホリノ）などといった、オリゴマー化合物の１つ以上の位置においてヌクレオシド及び連結部を置き換えるために使用される構造が含まれる。糖代用物は、わずかに広い意味を持つ用語であるヌクレオシド模倣物と一部重複するが、糖単位（フラノース環）のみの置き換えを示すものとする。ここに提供するテトラヒドロピラニル環は、フラノース糖基がテトラヒドロピラニル環系で置き換えられた糖代用物の一例を例示するものである。「模倣物」とは、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間連結部の代わりに使用される基を指す。一般的には、模倣物は、糖または糖－ヌクレオシド間連結部の組み合わせの代わりに使用され、核酸塩基は、選ばれたターゲットへのハイブリダイゼーションのために維持される。
「ヌクレオシドモチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその一領域におけるヌクレオシド修飾のパターンを意味する。そのようなオリゴヌクレオチドの連結部は修飾されていても無修飾であってもよい。別段の表示がある場合を除き、ヌクレオシドの説明しかない本明細書におけるモチーフは、ヌクレオシドモチーフであるものとする。したがって、そのような事例では、連結部は限定されない。
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分にリン酸基が共有結合で連結されているヌクレオシドを意味する。
「オリゴマー化合物」とは、連結されたモノマー型サブユニットのポリマーであって、核酸分子の少なくとも一領域にハイブリダイズすることができるものを意味する。
「オリゴヌクレオシド」とは、ヌクレオシド間連結部がリン原子を含有しないオリゴヌクレオチドを意味する。
「オリゴヌクレオチド」とは、連結されたヌクレオシドのポリマーを意味し、ヌクレオシドのそれぞれは互いに依存することなく修飾されていても無修飾でもよい。
「非経口投与」とは、注射または注入による投与を意味する。非経口投与には、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または頭蓋内投与、例えば髄腔内投与もしくは脳室内投与が含まれる。
「医薬組成物」とは、個体への投与に適した物質の混合物を意味する。例えば医薬組成物は１つ以上の活性医薬剤と滅菌水溶液とを含みうる。
「医薬上許容される塩」とは、アンチセンス化合物の生理学的かつ医薬的に許容される塩、すなわち、親オリゴヌクレオチドの望ましい生物学的活性を保持しており、しかも望ましくない毒性効果をそこに付与しない塩を意味する。
「ホスホロチオエート連結部」とは、ホスホジエステル結合が非架橋酸素原子の１つを硫黄原子で置き換えることによって修飾されているヌクレオシド間の連結部を意味する。ホスホロチオエート連結部は修飾ヌクレオシド間連結部である。
「リン連結基」とは、リン原子を含む連結基を意味する。リン連結基には、以下の式を有する基が含まれるが、これに限定されない：
Figure 0007001663000002
式中、
Ｒａ及びＲｄはそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、ＮＨ、またはＮＪ１であり、Ｊ１は、Ｃ１～Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｒｂは、ＯまたはＳであり、
Ｒｃは、ＯＨ、ＳＨ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、アミノ、または置換アミノであり、
Ｊ１は、Ｒｂは、ＯまたはＳである。
リン連結基には、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、ホスホラミデート、ホスホロチオアミデート、チオノアルキルホスホネート、ホスホトリエステル、チオノアルキルホスホトリエステル、及びボラノホスフェートが含まれるが、これらに限定されない。
「一部分（ｐｏｒｔｉｏｎ）」とは、核酸の、所定の数の連続する（すなわち連結された）核酸塩基を意味する。特定の実施形態では、一部分が、標的核酸の、所定の数の連続する核酸塩基である。特定の実施形態では、一部分が、アンチセンス化合物の、所定の数の連続する核酸塩基である。
「防止」とは、数分から無限までのある期間にわたって、疾患、障害、または状態の発症、発生または進行を遅延させまたは未然に防ぐことを指す。防止は、疾患、障害、または状態が発生するリスクを低減することも意味する。
「プロドラッグ」とは、不活性な形態または活性が低い形態の化合物であって、対象に投与した場合に、代謝されることで活性なまたはより活性な化合物（例えば薬物）を形成するものを意味する。
「予防有効量」とは、動物に予防的利益または防止的利益を与える医薬剤の量を指す。
「保護基」とは、当業者に知られている任意の化合物または保護基を意味する。保護基の非限定的な例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，ＩＳＢＮ０－４７１－６２３０１－６，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ
＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ，ニューヨークに見いだすことができる。
「領域」は、少なくとも１つの同定可能な構造、機能、または特徴を有する標的核酸の一部分と定義される。
「リボヌクレオチド」とは、ヌクレオチドの糖部分の２’位にヒドロキシを有するヌクレオチドを意味する。リボヌクレオチドはさまざまな置換基のいずれでも修飾することができる。
「ＲＩＳＣベースのアンチセンス化合物」とは、当該アンチセンス化合物のアンチセンス活性の少なくとも一部がＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に起因するアンチセンス化合物を意味する。
「ＲＮａｓｅ Ｈベースのアンチセンス化合物」とは、当該アンチセンス化合物のアンチセンス活性の少なくとも一部が、標的核酸へのアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションと、それに続くＲＮａｓｅ Ｈによる標的核酸の切断に起因する、アンチセンス化合物を意味する。
「セグメント」は、標的核酸内の領域の、さらに小さな一部分または下位部分と定義される。
「別個の領域」とは、オリゴヌクレオチドの複数の部分であって、任意の隣接する部分の化学修飾または化学修飾のモチーフが、当該別個の領域を互いに区別することを可能にする少なくとも１つの相違点を含むものを意味する。
「配列モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその一部分に沿って配置された核酸塩基のパターンを意味する。別段の表示がある場合を除き、配列モチーフは化学修飾には依存しないので、化学修飾なしを含めて、化学修飾の任意の組み合わせを有しうる。
「副作用」とは、処置に起因する所望の効果以外の生理学的疾患及び／または状態を意味する。特定の実施形態では、副作用に、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能検査異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、ミオパシー、及び倦怠感が含まれる。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの増加は、肝毒性または肝機能異常を示しうる。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性及び肝機能異常を示しうる。
本明細書にいう「部位」は、標的核酸内のユニークな核酸塩基位置と定義される。
「進行を減速する」とは、該疾患の発達の減少を意味する。
「特異的にハイブリダイズ可能」とは、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸との間に、特異的結合が望まれる条件下で、すなわちインビボアッセイや治療的処置の場合は生理的条件下で、所望の効果を誘導すると共に非標的核酸には最小限の効果しか呈さないかまたは効果を全く呈さないような、十分な相補度を有するアンチセンス化合物を指す。「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」または「ストリンジェントな条件」とは、オリゴマー化合物がそのターゲット配列にはハイブリダイズするが、他の配列にはごくわずかな数の配列にしかハイブリダイズしないような条件を指す。
「対象」とは、処置または治療のために選択されたヒトまたはヒト以外の動物を意味する。
「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」及び「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ ｇｒｏｕｐ）」とは、指名された親化合物の原子または基を置換する原子または基を意味する。例えば、修飾ヌクレオシドの置換基は、天然に存在するヌクレオシドに見られる原子または基とは異なる任意の原子または基である（例えば修飾２’－置換基はヌクレオシドの２’位にあるＨまたはＯＨ以外の任意の原子または基である）。置換基は、保護されていても保護されていなくてもよい。特定の実施形態では、本開示の化合物は、親化合物の１つの位置または２つ以上の位置に置換基を有する。置換基は、他の置換基でさらに置換されていてもよく、親化合物に直接取り付けるか、またはアルキル基もしくはヒドロカルビル基などの連結基を介して取り付けることができる。
同様に、本明細書において使用する場合、化学官能基に関して「置換基」とは、指名された官能基に通常存在する原子または原子団とは異なる原子または原子団を意味する。特定の実施形態では、置換基が官能基の水素原子を置き換える（例えば特定の実施形態では、置換メチル基の置換基は、無置換メチル基の水素原子のうちの１つを置き換える水素以外の原子または基である）。別段の表示がある場合を除き、置換基としての使用に適する基には、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル（－Ｃ（Ｏ）Ｒａａ）、カルボキシル（－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｒａａ）、脂肪族基、脂環式基、アルコキシ、置換オキシ（－Ｏ－Ｒａａ）、アリール、アラルキル、複素環式ラジカル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アミノ（Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、イミノ（＝ＮＲｂｂ）、アミド（Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）またはＮ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒａａ）、アジド（－Ｎ３）、ニトロ（ＮＯ２）、シアノ（－ＣＮ）、カルバミド（ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）またはＮ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａａ）、ウレイド（Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、チオウレイド（Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、グアニジニル（Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、アミジニル（Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）またはＮ（Ｒｂｂ）Ｃ（＝ＮＲｂｂ）（Ｒａａ））、チオール（－ＳＲｂｂ）、スルフィニル（Ｓ（Ｏ）Ｒｂｂ）、スルホニル（－Ｓ（Ｏ）２Ｒｂｂ）、及びスルホンアミジル（－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）またはＮ（Ｒｂｂ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｂｂ）が含まれるが、これらに限定されない。式中、各Ｒａａ、Ｒｂｂ、及びＲｃｃは、独立して、Ｈ、場合によっては連結された化学官能基、またはさらなる置換基であり，好ましいものとしては、アルキル、アルケニル、アルキニル、脂肪族、アルコキシ、アシル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、脂環式、複素環式、及びヘテロアリールアルキルが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載する化合物内の選ばれた置換基は、再帰的に（ｔｏ ａ ｒｅｃｕｒｓｉｖｅ ｄｅｇｒｅｅ）存在する。
「置換糖部分」とは、天然に存在する糖部分ではないフラノシルを意味する。置換糖部
分には、２’位、３’位、５’位及び／または４’位に置換基を含むフラノシルなどがあるが、これらに限定されない。特定の置換糖部分は二環式糖部分である。
「糖部分」とは、ヌクレオシドの天然に存在する糖部分または修飾糖部分を意味する。
「糖モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその一領域における糖修飾のパターンを意味する。
「糖代用物」とは、フラノシルを含まない構造であって、しかも、結果として生じるヌクレオシドサブユニットを一つに連結しかつ／または他のヌクレオシドに連結することで相補的なオリゴマー化合物にハイブリダイズすることができるオリゴマー化合物を形成することができるように、ヌクレオシドの天然に存在する糖部分を置き換えることができる構造を意味する。そのような構造には、フラノシルとは異なる数の原子を含むか（例えば４、６、または７員環）、または非酸素原子（例えば炭素、硫黄、もしくは窒素）によるフラノシルの酸素の置き換え、または原子数の変化と酸素の置き換えとの両方が含まれる。そのような構造は、置換糖部分（例えば場合によってはさらなる置換基を含む６員炭素環式二環式糖代用物）について記載したものに対応する置換も含みうる。糖代用物は、さらに複雑な糖の代替物（例えばペプチド核酸の非環系）も包含する。糖代用物には、モルホリノ、シクロヘキセニル及びシクロヘキシトールなどがあるが、これらに限定されない。
「標的」とは、調節することが望まれるタンパク質を指す。
「標的遺伝子」とは、標的をコードする遺伝子を指す。
「ターゲティング」とは、標的核酸に特異的にハイブリダイズして所望の効果を誘導することになるアンチセンス化合物を設計及び選択するプロセスを意味する。
「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」、「標的ＲＮＡ転写産物」及び「核酸標的」は、いずれも、アンチセンス化合物の標的となりうる核酸を意味する。
「標的領域」とは、標的核酸のうち、１つ以上のアンチセンス化合物の標的となる部分を意味する。
「標的セグメント」とは、標的核酸のうち、アンチセンス化合物が標的とするヌクレオチドの配列を意味する。「５’標的部位」とは、標的セグメントの最も５’側のヌクレオチドを指す。「３’標的部位」とは、標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを指す。
「末端基」とは、オリゴヌクレオチドの３’末端もしくは５’末端のいずれか、またはそれらの両方に取り付けられた１つ以上の原子を意味する。特定の実施形態では、末端基が共役基である。特定の実施形態では、末端基が１つ以上の末端基ヌクレオシドを含む。
「末端ヌクレオシド間連結部」とは、オリゴヌクレオチドまたはその所定の領域の少なくとも２つのヌクレオシド間の連結部を意味する。
「治療有効量」とは、個体に治療的利益を与える医薬剤の量を意味する。
「処置する」とは、動物における疾患、障害、または状態の改変または改善を達成するために、前記動物に医薬組成物を投与することを指す。特定の実施形態では、１つ以上の
医薬組成物を前記動物に投与することができる。
「無修飾」核酸塩基とは、プリン塩基であるアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を意味する。
「無修飾ヌクレオチド」とは、天然に存在する核酸塩基、糖部分及びヌクレオシド間連結部で構成されるヌクレオシドを意味する。特定の実施形態では、無修飾ヌクレオチドがＲＮＡヌクレオチド（すなわちβ－Ｄ－リボヌクレオシド）またはＤＮＡヌクレオチド（すなわちβ－Ｄ－デオキシリボヌクレオシド）である。
特定の実施形態
特定の実施形態は、補体Ｂ因子（ＣＦＢ）発現を阻害するための方法、化合物及び組成物を提供する。
特定の実施形態は、ＣＦＢ核酸を標的とするアンチセンス化合物を提供する。特定の実施形態では、前記ＣＦＢ核酸が、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１７１０．５（配列番号１として本明細書に組み込まれる）、ヌクレオチド３１８５２０００から３１８６１０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００７５９２．１５（配列番号２として本明細書に組み込まれる）、ヌクレオチド５３６０００から５４５０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＷ＿００１１１６４８６．１（配列番号３として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＸＭ＿００１１１３５５３．２（配列番号４として本明細書に組み込まれる）、またはＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００８１９８．２（配列番号５として本明細書に組み込まれる）に示される配列を有する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号６～８０８の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有するものを提供する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号６～８０８の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも９個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有するものを提供する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号６～８０８の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも１０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有するものを提供する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号６～８０８の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも１１個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有するものを提供する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号６～８０８の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有するものを提供する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号６～８０８のいずれか一つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有するものを提供する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号６～８０８のいずれか一つの核酸塩基配列からなるものを提供する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１の核酸塩基３０～４９、４８～６３、１５０～１６９、１５１～１７０、１５２～１７１、１５４～１６９、１５４～１７３、１５６～１７１、１５６～１７５、１５７～１７６、１５８～１７３、１５８～１７７、４８０～４９９、６００～６１９、６３８～６５７、６４４～６６３、７３８～７５７、１０８９～１１０８、１１３５～１１５４、１１４１～１１６０、１１４７～１１６６、１１５０～１１６９、１１５３～１１７２、１１５９～１１７８、１１６２～１１８１、１１６５～１１８４、１１７１～１１８６、１１７１～１１９０、１１７３～１１８８、１１７３～１１９２、１１７５～１１９０、１１７５～１１９４、１１７７～１１９６、１１８３～１２０２、１２０８～１２２７、１２３５～１２５４、１２９８～１３１７、１３０４～１３２３、１３１０～１３２９、１３１６～１３３５、１３１９～１３３８、１３２２～１３４１、１３２８～１３４７、１３４９～１３６８、１３５５～１３７４、１３９３～１４１２、１３９６～１４１５、１３９９～１４１８、１４０５～１４２４、１４２１～１４４０、１６２１～１６４０、１６４６～１６６５、１６４６～１６６５、１６４７～１６６６、１６８９～１７０８、１７４９～１７６８、１７６３～１７８２、１９１２～１９３１、２０７３～２０９２、２０８５～２１０４、２１６６～２１８５、２１７２～２１９１、２１８９～２２０８、２１９１～２２１０、２１９３～２２１２、２１９５～２２１０、２１９５～２２１４、２１９６～２２１５、２１９７～２２１２、２１９７～２２１６、２２０２～２２２１、２２２３～２２３８、２２２３～２２４２、２２２５～２２４０、２２２６～２２４５、２２２７～２２４２、２２２７～２２４６、２２３８～２２５７、２２４１～２２６０、２２６７～２２８６、２３６１～２３８０、２３８８～２４０７、２３９７～２４１６、２４４８～２４６７、２４５３～２４７２、２４５５～２４７４、２４５７～２４７２、２４５７～２４７６、２４５９～２４７４、２４５９～２４７８、２４６１～２４７６、２４６１～２４８０、２５３２～２５５１、２５５０～２５６９、２５５１～２５６６、２５５１～２５７０、２５５２～２５６８、２５５２～２５７０、２５５２～２５７１、２５５３～２５６８、２５５３～２５７０、２５５３～２５７１、２５５３～２５７２、２５５４～２５７１、２５５４～２５７２、２５５４～２５７３、２５５５～２５７０、２５５５～２５７２、２５５５～２５７４、２５５６～２５７３、２５５６～２５７４、２５５６～２５７５、２５５７～２５７３、２５５７～２５７４、２５５７～２５７５、２５５７～２５７６、２５５８～２５７５、２５５８～２５７６、２５５８～２５７７、２５５９～２５７６、２５５９～２５７７、２５５９～２５７８、２５６０～２５７７、２５６０～２５７８、２５６０～２５７９、２５６１～２５７６、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６１～２５８０、２５６２～２５７７、２５６２～２５７９、２５６２～２５８１、２５６３～２５７８、２５６３～２５８０、２５６３～２５８２、２５６４～２５８１、２５６４～２５８３、２５６５～２５８４、２５６６～２５８３、２５６６～２５８５、２５６７～２５８２、２５６７～２５８４、２５６７～２５８６、２５６８～２５８３、２５６８～２５８５、２５６８～２５８７、２５６９～２５８６、２５６９～２５８８、２５７０～２５８５、２５７０～２５８７、２５７０～２５８９、２５７１～２５８６、２５７１～２５８８、２５７１～２５９０、２５７２～２５８９、２５７２～２５９０、２５７２～２５９１、２５７３～２５９０、２５７３～２５９２、２５７４～２５９０、２５７４～２５９１、２５７４～２
５９３、２５７５～２５９０、２５７５～２５９１、２５７５～２５９２、２５７５～２５９４、２５７６～２５９３、２５７６～２５９５、２５７７～２５９４、２５７７～２５９５、２５７７～２５９６、２５７８～２５９４、２５７８～２５９６、２５７８～２５９７、２５７９～２５９８、２５８０～２５９６、２５８０～２５９７、２５８０～２５９８、２５８０～２５９９、２５８１～２５９７、２５８１～２５９８、２５８１～２５９９、２５８１～２６００、２５８２～２５９８、２５８２～２５９９、２５８２～２６００、２５８２～２６０１、２５８３～２５９９、２５８３～２６００、２５８３～２６０１、２５８３～２６０２、２５８４～２６００、２５８４～２６０１、２５８４～２６０２、２５８４～２６０３、２５８５～２６０１、２５８５～２６０３、２５８５～２６０４、２５８６～２６０１、２５８６～２６０２、２５８６～２６０４、２５８６～２６０５、２５８７～２６０２、２５８７～２６０３、２５８７～２６０５、２５８７～２６０６、２５８８～２６０３、２５８８～２６０４、２５８８～２６０５、２５８８～２６０６、２５８８～２６０７、２５８９～２６０４、２５８９～２６０５、２５８９～２６０６、２５８９～２６０７、２５８９～２６０８、２５９０～２６０５、２５９０～２６０６、２５９０～２６０７、２５９０～２６０８、２５９０～２６０９、２５９０～２６０９、２５９１～２６０７、２５９１～２６０８、２５９１～２６０９、２５９１～２６１０、２５９２～２６０７、２５９２～２６０８、２５９２～２６０９、２５９２～２６１０、２５９２～２６１１、２５９３～２６０８、２５９３～２６０９、２５９３～２６１０、２５９３～２６１２、２５９４～２６０９、２５９４～２６１０、２５９４～２６１１、２５９４～２６１２、２５９４～２６１３、２５９５～２６１０、２５９５～２６１１、２５９５～２６１２、２５９５～２６１３、２５９５～２６１４、２５９６～２６１１、２５９６～２６１２、２５９６～２６１３、２５９６～２６１４、２５９６～２６１５、２５９７～２６１２、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７～２６１４、２５９７～２６１５、２５９７～２６１６、２５９８～２６１３、２５９８～２６１４、２５９８～２６１５、２５９８～２６１６、２５９８～２６１７、２５９９～２６１４、２５９９～２６１５、２５９９～２６１６、２５９９～２６１７、２５９９～２６１８、２６００～２６１５、２６００～２６１６、２６００～２６１７、２６００～２６１８、２６００～２６１９、２６０１～２６１６、２６０１～２６１７、２６０１～２６１８、２６０１～２６１９、２６０１～２６２０、２６０２～２６１７、２６０２～２６１８、２６０２～２６１９、２６０２～２６２０、２６０２～２６２１、２６０３～２６１８、２６０３～２６１９、２６０３～２６２０、２６０３～２６２１、２６０３～２６２２、２６０４～２６１９、２６０４～２６２０、２６０４～２６２１、２６０４～２６２２、２６０４～２６２３、２６０５～２６２０、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２３、２６０５～２６２４、２６０６～２６２１、２６０６～２６２２、２６０６～２６２３、２６０６～２６２４、２６０６～２６２５、２６０７～２６２２、２６０７～２６２３、２６０７～２６２４、２６０７～２６２５、２６０７～２６２６、２６０８～２６２３、２６０８～２６２４、２６０８～２６２５、２６０８～２６２６、２６０８～２６２７、２６０９～２６２４、２６０９～２６２５、２６０９～２６２６、２６０９～２６２７、２６０９～２６２８、２６１０～２６２５、２６１０～２６２６、２６１０～２６２７、２６１０～２６２８、２６１０～２６２９、２６１１～２６２６、２６１１～２６２７、２６１１～２６２８、２６１１～２６２９、２６１１～２６３０、２６１２～２６２７、２６１２～２６２８、２６１２～２６２９、２６１２～２６３０、２６１２～２６３１、２６１３～２６２８、２６１３～２６２９、２６１３～２６３０、２６１３～２６３１、２６１４～２６２９、２６１４～２６３０、２６１４～２６３１、２６１５～２６３０、２６１５～２６３１、または２６１６～２６３１内で相補的な１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ該修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的であるものを提供する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修
飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１の核酸塩基３０～４９、４８～６３、１５０～１６９、１５１～１７０、１５２～１７１、１５４～１６９、１５４～１７３、１５６～１７１、１５６～１７５、１５７～１７６、１５８～１７３、１５８～１７７、４８０～４９９、６００～６１９、６３８～６５７、６４４～６６３、７３８～７５７、１０８９～１１０８、１１３５～１１５４、１１４１～１１６０、１１４７～１１６６、１１５０～１１６９、１１５３～１１７２、１１５９～１１７８、１１６２～１１８１、１１６５～１１８４、１１７１～１１８６、１１７１～１１９０、１１７３～１１８８、１１７３～１１９２、１１７５～１１９０、１１７５～１１９４、１１７７～１１９６、１１８３～１２０２、１２０８～１２２７、１２３５～１２５４、１２９８～１３１７、１３０４～１３２３、１３１０～１３２９、１３１６～１３３５、１３１９～１３３８、１３２２～１３４１、１３２８～１３４７、１３４９～１３６８、１３５５～１３７４、１３９３～１４１２、１３９６～１４１５、１３９９～１４１８、１４０５～１４２４、１４２１～１４４０、１６２１～１６４０、１６４６～１６６５、１６４６～１６６５、１６４７～１６６６、１６８９～１７０８、１７４９～１７６８、１７６３～１７８２、１９１２～１９３１、２０７３～２０９２、２０８５～２１０４、２１６６～２１８５、２１７２～２１９１、２１８９～２２０８、２１９１～２２１０、２１９３～２２１２、２１９５～２２１０、２１９５～２２１４、２１９６～２２１５、２１９７～２２１２、２１９７～２２１６、２２０２～２２２１、２２２３～２２３８、２２２３～２２４２、２２２５～２２４０、２２２６～２２４５、２２２７～２２４２、２２２７～２２４６、２２３８～２２５７、２２４１～２２６０、２２６７～２２８６、２３６１～２３８０、２３８８～２４０７、２３９７～２４１６、２４４８～２４６７、２４５３～２４７２、２４５５～２４７４、２４５７～２４７２、２４５７～２４７６、２４５９～２４７４、２４５９～２４７８、２４６１～２４７６、２４６１～２４８０、２５３２～２５５１、２５５０～２５６９、２５５１～２５６６、２５５１～２５７０、２５５２～２５６８、２５５２～２５７０、２５５２～２５７１、２５５３～２５６８、２５５３～２５７０、２５５３～２５７１、２５５３～２５７２、２５５４～２５７１、２５５４～２５７２、２５５４～２５７３、２５５５～２５７０、２５５５～２５７２、２５５５～２５７４、２５５６～２５７３、２５５６～２５７４、２５５６～２５７５、２５５７～２５７３、２５５７～２５７４、２５５７～２５７５、２５５７～２５７６、２５５８～２５７５、２５５８～２５７６、２５５８～２５７７、２５５９～２５７６、２５５９～２５７７、２５５９～２５７８、２５６０～２５７７、２５６０～２５７８、２５６０～２５７９、２５６１～２５７６、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６１～２５８０、２５６２～２５７７、２５６２～２５７９、２５６２～２５８１、２５６３～２５７８、２５６３～２５８０、２５６３～２５８２、２５６４～２５８１、２５６４～２５８３、２５６５～２５８４、２５６６～２５８３、２５６６～２５８５、２５６７～２５８２、２５６７～２５８４、２５６７～２５８６、２５６８～２５８３、２５６８～２５８５、２５６８～２５８７、２５６９～２５８６、２５６９～２５８８、２５７０～２５８５、２５７０～２５８７、２５７０～２５８９、２５７１～２５８６、２５７１～２５８８、２５７１～２５９０、２５７２～２５８９、２５７２～２５９０、２５７２～２５９１、２５７３～２５９０、２５７３～２５９２、２５７４～２５９０、２５７４～２５９１、２５７４～２５９３、２５７５～２５９０、２５７５～２５９１、２５７５～２５９２、２５７５～２５９４、２５７６～２５９３、２５７６～２５９５、２５７７～２５９４、２５７７～２５９５、２５７７～２５９６、２５７８～２５９４、２５７８～２５９６、２５７８～２５９７、２５７９～２５９８、２５８０～２５９６、２５８０～２５９７、２５８０～２５９８、２５８０～２５９９、２５８１～２５９７、２５８１～２５９８、２５８１～２５９９、２５８１～２６００、２５８２～２５９８、２５８２～２５９９、２５８２～２６００、２５８２～２６０１、２５８３～２５９９、２５８３～２６００、２５８３～２６０１、２５８３～２６０２、２５８４～２６００、２５８４～２６０１、２５８４～２６０２、２５８４～２６０３、２５８５～２６０１、２５８５～２６０３、２５８５～２６０４、２５８６～２６０１、２５８６～２６０２、２５８６～２６０４、２５８６～２
６０５、２５８７～２６０２、２５８７～２６０３、２５８７～２６０５、２５８７～２６０６、２５８８～２６０３、２５８８～２６０４、２５８８～２６０５、２５８８～２６０６、２５８８～２６０７、２５８９～２６０４、２５８９～２６０５、２５８９～２６０６、２５８９～２６０７、２５８９～２６０８、２５９０～２６０５、２５９０～２６０６、２５９０～２６０７、２５９０～２６０８、２５９０～２６０９、２５９０～２６０９、２５９１～２６０７、２５９１～２６０８、２５９１～２６０９、２５９１～２６１０、２５９２～２６０７、２５９２～２６０８、２５９２～２６０９、２５９２～２６１０、２５９２～２６１１、２５９３～２６０８、２５９３～２６０９、２５９３～２６１０、２５９３～２６１２、２５９４～２６０９、２５９４～２６１０、２５９４～２６１１、２５９４～２６１２、２５９４～２６１３、２５９５～２６１０、２５９５～２６１１、２５９５～２６１２、２５９５～２６１３、２５９５～２６１４、２５９６～２６１１、２５９６～２６１２、２５９６～２６１３、２５９６～２６１４、２５９６～２６１５、２５９７～２６１２、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７～２６１４、２５９７～２６１５、２５９７～２６１６、２５９８～２６１３、２５９８～２６１４、２５９８～２６１５、２５９８～２６１６、２５９８～２６１７、２５９９～２６１４、２５９９～２６１５、２５９９～２６１６、２５９９～２６１７、２５９９～２６１８、２６００～２６１５、２６００～２６１６、２６００～２６１７、２６００～２６１８、２６００～２６１９、２６０１～２６１６、２６０１～２６１７、２６０１～２６１８、２６０１～２６１９、２６０１～２６２０、２６０２～２６１７、２６０２～２６１８、２６０２～２６１９、２６０２～２６２０、２６０２～２６２１、２６０３～２６１８、２６０３～２６１９、２６０３～２６２０、２６０３～２６２１、２６０３～２６２２、２６０４～２６１９、２６０４～２６２０、２６０４～２６２１、２６０４～２６２２、２６０４～２６２３、２６０５～２６２０、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２３、２６０５～２６２４、２６０６～２６２１、２６０６～２６２２、２６０６～２６２３、２６０６～２６２４、２６０６～２６２５、２６０７～２６２２、２６０７～２６２３、２６０７～２６２４、２６０７～２６２５、２６０７～２６２６、２６０８～２６２３、２６０８～２６２４、２６０８～２６２５、２６０８～２６２６、２６０８～２６２７、２６０９～２６２４、２６０９～２６２５、２６０９～２６２６、２６０９～２６２７、２６０９～２６２８、２６１０～２６２５、２６１０～２６２６、２６１０～２６２７、２６１０～２６２８、２６１０～２６２９、２６１１～２６２６、２６１１～２６２７、２６１１～２６２８、２６１１～２６２９、２６１１～２６３０、２６１２～２６２７、２６１２～２６２８、２６１２～２６２９、２６１２～２６３０、２６１２～２６３１、２６１３～２６２８、２６１３～２６２９、２６１３～２６３０、２６１３～２６３１、２６１４～２６２９、２６１４～２６３０、２６１４～２６３１、２６１５～２６３０、２６１５～２６３１、または２６１６～２６３１のうちの長さが等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続する核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的であるものを提供する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号２の核酸塩基１６０８～１６２７、１６８５～１７０４、１６８６～１７０５、１７５１～１７７０、１７６９～１７８４、１８７１～１８９０、１８７２～１８９１、１８７３～１８９２、１８７５～１８９０、１８７５～１８９４、１８７７～１８９２、１８７７～１８９６、１８７８～１８９７、１８７９～１８９４、１８７９～１８９８、２２８８～２３０７、２８０８～２８２７、２８４６～２８６５、２８５２～２８７１、２９４６～２９６５、３７７３～３７９２、３８１９～３８３８、３８２５～３８４４、３８３１～３８５０、３８３４～３８５３、３８３７～３８５６、３８４３～３８６２、４１５１～４１６６、４１５１～４１７０、４１５３～４１７２、４１５９～４１７８、４１８４～４２０３、４２１１～４２３０、４６０９～４６２
８、４６１２～４６３１、４６１５～４６３４、４６２１～４６４０、４６４２～４６６１、４６４８～４６６７、４６８６～４７０５、４６８９～４７０８、４６９２～４７１１、４６９８～４７１７、４７１４～４７３３、５２７０～５２８９、５２９５～５３１４、５２９６～５３１５、５８３０～５８４９、５８９０～５９０９、５９０４～５９２３、６４０６～６４２５、６６６２～６６８１、６６７４～６６９３、６９５４～６９７３、６９６０～６９７９、６９７７～６９９６、６９７９～６９９８、６９８１～７０００、６９８３～６９９８、６９８３～７００２、６９８４～７００３、６９８５～７０００、６９８５～７００４、６９９０～７００９、７１２２～７１４１、７１２５～７１４４、７１５１～７１７０、７３５３～７３７２、７３６２～７３８１、７６８３～７７０２、７６８８～７７０７、７６９０～７７０９、７６９２～７７０７、７６９２～７７１１、７６９４～７７０９、７６９４～７７１３、７６９６～７７１１、７６９６～７７１５、７７６７～７７８６、７７８５～７８０４、７７８６～７８０１、７７８７～７８０３、７７８７～７８０５、７７８７～７８０６、７７８８～７８０３、７７８８～７８０５、７７８８～７８０６、７７８８～７８０７、７７８９～７８０６、７７８９～７８０７、７７８９～７８０８、７７９０～７８０５、７７９０～７８０７、７７９０～７８０９、７７９１～７８０８、７７９１～７８０９、７７９１～７８１０、７７９２～７８０８、７７９２～７８０９、７７９２～７８１０、７７９２～７８１１、７７９３～７８１０、７７９３～７８１１、７７９３～７８１２、７７９４～７８１１、７７９４～７８１２、７７９４～７８１３、７７９５～７８１２、７７９５～７８１３、７７９５～７８１４、７７９６～７８１１、７７９６～７８１３、７７９６～７８１４、７７９６～７８１５、７７９７～７８１２、７７９７～７８１４、７７９７～７８１６、７７９８～７８１３、７７９８～７８１５、７７９８～７８１７、７７９９～７８１６、７７９９～７８１８、７８００～７８１９、７８０１～７８１８、７８０１～７８２０、７８０２～７８１７、７８０２～７８１９、７８０２～７８２１、７８０３～７８１８、７８０３～７８２０、７８０３～７８２２、７８０４～７８２１、７８０４～７８２３、７８０５～７８２０、７８０５～７８２２、７８０５～７８２４、７８０６～７８２１、７８０６～７８２３、７８０６～７８２５、７８０７～７８２４、７８０７～７８２５、７８０７～７８２６、７８０８～７８２５、７８０８～７８２７、７８０９～７８２５、７８０９～７８２６、７８０９～７８２８、７８１０～７８２５、７８１０～７８２６、７８１０～７８２７、７８１０～７８２９、７８１１～７８２８、７８１１～７８３０、７８１２～７８２９、７８１２～７８３０、７８１２～７８３１、７８１３～７８２９、７８１３～７８３１、７８１３～７８３２、７８１４～７８３３、７８１５～７８３１、７８１５～７８３２、７８１５～７８３３、７８１５～７８３４、７８１６～７８３２、７８１６～７８３３、７８１６～７８３４、７８１６～７８３５、７８１７～７８３３、７８１７～７８３４、７８１７～７８３５、７８１７～７８３６、７８１８～７８３４、７８１８～７８３５、７８１８～７８３６、７８１８～７８３７、７８１９～７８３５、７８１９～７８３６、７８１９～７８３７、７８１９～７８３８、７８２０～７８３６、７８２０～７８３８、７８２０～７８３９、７８２１～７８３６、７８２１～７８３７、７８２１～７８３９、７８２１～７８４０、７８２２～７８３７、７８２２～７８３８、７８２２～７８４０、７８２２～７８４１、７８２３～７８３８、７８２３～７８３９、７８２３～７８３９、７８２３～７８４０、７８２３～７８４１、７８２３～７８４２、７８２４～７８３９、７８２４～７８４０、７８２４～７８４０、７８２４～７８４１、７８２４～７８４２、７８２４～７８４３、７８２５～７８４０、７８２５～７８４１、７８２５～７８４２、７８２５～７８４３、７８２５～７８４４、７８２６～７８４２、７８２６～７８４３、７８２６～７８４４、７８２６～７８４５、７８２７～７８４２、７８２７～７８４３、７８２７～７８４４、７８２７～７８４５、７８２７～７８４６、７８２８～７８４３、７８２８～７８４４、７８２８～７８４５、７８２８～７８４７、７８２９～７８４４、７８２９～７８４５、７８２９～７８４６、７８２９～７８４７、７８２９～７８４８、７８３０～７８４５、７８３０～７８４６、７８３０～７８４７、７８３０～７８４８、７８３０～７８４９、７８３１～７８４６、７８３１～７８４７、７８３１～７８４
８、７８３１～７８４９、７８３１～７８５０、７８３２～７８４７、７８３２～７８４８、７８３２～７８４９、７８３２～７８５０、７８３２～７８５１、７８３３～７８４８、７８３３～７８４９、７８３３～７８５０、７８３３～７８５１、７８３３～７８５２、７８３４～７８４９、７８３４～７８５０、７８３４～７８５１、７８３４～７８５２、７８３４～７８５３、７８３５～７８５０、７８３５～７８５１、７８３５～７８５２、７８３５～７８５３、７８３５～７８５４、７８３６～７８５１、７８３６～７８５２、７８３６～７８５３、７８３６～７８５４、７８３６～７８５５、７８３７～７８５２、７８３７～７８５３、７８３７～７８５４、７８３７～７８５５、７８３７～７８５６、７８３８～７８５３、７８３８～７８５４、７８３８～７８５５、７８３８～７８５６、７８３８～７８５７、７８３９～７８５４、７８３９～７８５５、７８３９～７８５６、７８３９～７８５７、７８３９～７８５８、７８４０～７８５５、７８４０～７８５６、７８４０～７８５７、７８４０～７８５８、７８４０～７８５９、７８４１～７８５６、７８４１～７８５７、７８４１～７８５８、７８４１～７８５９、７８４１～７８６０、７８４２～７８５７、７８４２～７８５８、７８４２～７８５９、７８４２～７８６０、７８４２～７８６１、７８４３～７８５８、７８４３～７８５９、７８４３～７８６０、７８４３～７８６１、７８４３～７８６２、７８４４～７８５９、７８４４～７８６０、７８４４～７８６１、７８４４～７８６２、７８４５～７８６０、７８４５～７８６１、７８４５～７８６２、７８４６～７８６１、または７８４６～７８６２内で相補的な１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、該修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号２に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的であるものを提供する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号２の核酸塩基１６０８～１６２７、１６８５～１７０４、１６８６～１７０５、１７５１～１７７０、１７６９～１７８４、１８７１～１８９０、１８７２～１８９１、１８７３～１８９２、１８７５～１８９０、１８７５～１８９４、１８７７～１８９２、１８７７～１８９６、１８７８～１８９７、１８７９～１８９４、１８７９～１８９８、２２８８～２３０７、２８０８～２８２７、２８４６～２８６５、２８５２～２８７１、２９４６～２９６５、３７７３～３７９２、３８１９～３８３８、３８２５～３８４４、３８３１～３８５０、３８３４～３８５３、３８３７～３８５６、３８４３～３８６２、４１５１～４１６６、４１５１～４１７０、４１５３～４１７２、４１５９～４１７８、４１８４～４２０３、４２１１～４２３０、４６０９～４６２８、４６１２～４６３１、４６１５～４６３４、４６２１～４６４０、４６４２～４６６１、４６４８～４６６７、４６８６～４７０５、４６８９～４７０８、４６９２～４７１１、４６９８～４７１７、４７１４～４７３３、５２７０～５２８９、５２９５～５３１４、５２９６～５３１５、５８３０～５８４９、５８９０～５９０９、５９０４～５９２３、６４０６～６４２５、６６６２～６６８１、６６７４～６６９３、６９５４～６９７３、６９６０～６９７９、６９７７～６９９６、６９７９～６９９８、６９８１～７０００、６９８３～６９９８、６９８３～７００２、６９８４～７００３、６９８５～７０００、６９８５～７００４、６９９０～７００９、７１２２～７１４１、７１２５～７１４４、７１５１～７１７０、７３５３～７３７２、７３６２～７３８１、７６８３～７７０２、７６８８～７７０７、７６９０～７７０９、７６９２～７７０７、７６９２～７７１１、７６９４～７７０９、７６９４～７７１３、７６９６～７７１１、７６９６～７７１５、７７６７～７７８６、７７８５～７８０４、７７８６～７８０１、７７８７～７８０３、７７８７～７８０５、７７８７～７８０６、７７８８～７８０３、７７８８～７８０５、７７８８～７８０６、７７８８～７８０７、７７８９～７８０６、７７８９～７８０７、７７８９～７８０８、７７９０～７８０５、７７９０～７８０７、７７９０～７８０９、７７９１～７８０８、７７９１～７８０９、７７９１～７８１０、７７９２～７８０８、７７９２～７８０９、７７９２～７８１０、７７９２～７８１１、７７９３～７８１０、７７９３～７８１１、７７９３～７８１２、７７９４～７８１１、７７９４～７８１
２、７７９４～７８１３、７７９５～７８１２、７７９５～７８１３、７７９５～７８１４、７７９６～７８１１、７７９６～７８１３、７７９６～７８１４、７７９６～７８１５、７７９７～７８１２、７７９７～７８１４、７７９７～７８１６、７７９８～７８１３、７７９８～７８１５、７７９８～７８１７、７７９９～７８１６、７７９９～７８１８、７８００～７８１９、７８０１～７８１８、７８０１～７８２０、７８０２～７８１７、７８０２～７８１９、７８０２～７８２１、７８０３～７８１８、７８０３～７８２０、７８０３～７８２２、７８０４～７８２１、７８０４～７８２３、７８０５～７８２０、７８０５～７８２２、７８０５～７８２４、７８０６～７８２１、７８０６～７８２３、７８０６～７８２５、７８０７～７８２４、７８０７～７８２５、７８０７～７８２６、７８０８～７８２５、７８０８～７８２７、７８０９～７８２５、７８０９～７８２６、７８０９～７８２８、７８１０～７８２５、７８１０～７８２６、７８１０～７８２７、７８１０～７８２９、７８１１～７８２８、７８１１～７８３０、７８１２～７８２９、７８１２～７８３０、７８１２～７８３１、７８１３～７８２９、７８１３～７８３１、７８１３～７８３２、７８１４～７８３３、７８１５～７８３１、７８１５～７８３２、７８１５～７８３３、７８１５～７８３４、７８１６～７８３２、７８１６～７８３３、７８１６～７８３４、７８１６～７８３５、７８１７～７８３３、７８１７～７８３４、７８１７～７８３５、７８１７～７８３６、７８１８～７８３４、７８１８～７８３５、７８１８～７８３６、７８１８～７８３７、７８１９～７８３５、７８１９～７８３６、７８１９～７８３７、７８１９～７８３８、７８２０～７８３６、７８２０～７８３８、７８２０～７８３９、７８２１～７８３６、７８２１～７８３７、７８２１～７８３９、７８２１～７８４０、７８２２～７８３７、７８２２～７８３８、７８２２～７８４０、７８２２～７８４１、７８２３～７８３８、７８２３～７８３９、７８２３～７８３９、７８２３～７８４０、７８２３～７８４１、７８２３～７８４２、７８２４～７８３９、７８２４～７８４０、７８２４～７８４０、７８２４～７８４１、７８２４～７８４２、７８２４～７８４３、７８２５～７８４０、７８２５～７８４１、７８２５～７８４２、７８２５～７８４３、７８２５～７８４４、７８２６～７８４２、７８２６～７８４３、７８２６～７８４４、７８２６～７８４５、７８２７～７８４２、７８２７～７８４３、７８２７～７８４４、７８２７～７８４５、７８２７～７８４６、７８２８～７８４３、７８２８～７８４４、７８２８～７８４５、７８２８～７８４７、７８２９～７８４４、７８２９～７８４５、７８２９～７８４６、７８２９～７８４７、７８２９～７８４８、７８３０～７８４５、７８３０～７８４６、７８３０～７８４７、７８３０～７８４８、７８３０～７８４９、７８３１～７８４６、７８３１～７８４７、７８３１～７８４８、７８３１～７８４９、７８３１～７８５０、７８３２～７８４７、７８３２～７８４８、７８３２～７８４９、７８３２～７８５０、７８３２～７８５１、７８３３～７８４８、７８３３～７８４９、７８３３～７８５０、７８３３～７８５１、７８３３～７８５２、７８３４～７８４９、７８３４～７８５０、７８３４～７８５１、７８３４～７８５２、７８３４～７８５３、７８３５～７８５０、７８３５～７８５１、７８３５～７８５２、７８３５～７８５３、７８３５～７８５４、７８３６～７８５１、７８３６～７８５２、７８３６～７８５３、７８３６～７８５４、７８３６～７８５５、７８３７～７８５２、７８３７～７８５３、７８３７～７８５４、７８３７～７８５５、７８３７～７８５６、７８３８～７８５３、７８３８～７８５４、７８３８～７８５５、７８３８～７８５６、７８３８～７８５７、７８３９～７８５４、７８３９～７８５５、７８３９～７８５６、７８３９～７８５７、７８３９～７８５８、７８４０～７８５５、７８４０～７８５６、７８４０～７８５７、７８４０～７８５８、７８４０～７８５９、７８４１～７８５６、７８４１～７８５７、７８４１～７８５８、７８４１～７８５９、７８４１～７８６０、７８４２～７８５７、７８４２～７８５８、７８４２～７８５９、７８４２～７８６０、７８４２～７８６１、７８４３～７８５８、７８４３～７８５９、７８４３～７８６０、７８４３～７８６１、７８４３～７８６２、７８４４～７８５９、７８４４～７８６０、７８４４～７８６１、７８４４～７８６２、７８４５～７８６０、７８４５～７８６１、７８４５～７８６２、７８４６～７８６１、及び７８４６～７８６２のうちの長さが
等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続する核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号２に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的であるものを提供する。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とする。特定の実施形態では、ＣＦＢ核酸の一領域を標的とするそのような化合物またはオリゴヌクレオチドが、前記領域のうちの長さが等しい核酸塩基部分に相補的な連続する核酸塩基部分を有する。例えば前記部分は、本明細書に示す領域のうちの長さが等しい部分に相補的な、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の連続する核酸塩基部分であることができる。特定の実施形態では、化合物が、共役体と配列番号１の以下のヌクレオチド領域を標的とする修飾オリゴヌクレオチドとを含むか、またはそれらからなる：３０～４９、４８～６３、１５０～１６９、１５１～１７０、１５２～１７１、１５４～１６９、１５４～１７３、１５６～１７１、１５６～１７５、１５７～１７６、１５８～１７３、１５８～１７７、４８０～４９９、６００～６１９、６３８～６５７、６４４～６６３、７３８～７５７、１０８９～１１０８、１１３５～１１５４、１１４１～１１６０、１１４７～１１６６、１１５０～１１６９、１１５３～１１７２、１１５９～１１７８、１１６２～１１８１、１１６５～１１８４、１１７１～１１８６、１１７１～１１９０、１１７３～１１８８、１１７３～１１９２、１１７５～１１９０、１１７５～１１９４、１１７７～１１９６、１１８３～１２０２、１２０８～１２２７、１２３５～１２５４、１２９８～１３１７、１３０４～１３２３、１３１０～１３２９、１３１６～１３３５、１３１９～１３３８、１３２２～１３４１、１３２８～１３４７、１３４９～１３６８、１３５５～１３７４、１３９３～１４１２、１３９６～１４１５、１３９９～１４１８、１４０５～１４２４、１４２１～１４４０、１６２１～１６４０、１６４６～１６６５、１６４６～１６６５、１６４７～１６６６、１６８９～１７０８、１７４９～１７６８、１７６３～１７８２、１９１２～１９３１、２０７３～２０９２、２０８５～２１０４、２１６６～２１８５、２１７２～２１９１、２１８９～２２０８、２１９１～２２１０、２１９３～２２１２、２１９５～２２１０、２１９５～２２１４、２１９６～２２１５、２１９７～２２１２、２１９７～２２１６、２２０２～２２２１、２２２３～２２３８、２２２３～２２４２、２２２５～２２４０、２２２６～２２４５、２２２７～２２４２、２２２７～２２４６、２２３８～２２５７、２２４１～２２６０、２２６７～２２８６、２３６１～２３８０、２３８８～２４０７、２３９７～２４１６、２４４８～２４６７、２４５３～２４７２、２４５５～２４７４、２４５７～２４７２、２４５７～２４７６、２４５９～２４７４、２４５９～２４７８、２４６１～２４７６、２４６１～２４８０、２５３２～２５５１、２５５０～２５６９、２５５１～２５６６、２５５１～２５７０、２５５２～２５６８、２５５２～２５７０、２５５２～２５７１、２５５３～２５６８、２５５３～２５７０、２５５３～２５７１、２５５３～２５７２、２５５４～２５７１、２５５４～２５７２、２５５４～２５７３、２５５５～２５７０、２５５５～２５７２、２５５５～２５７４、２５５６～２５７３、２５５６～２５７４、２５５６～２５７５、２５５７～２５７３、２５５７～２５７４、２５５７～２５７５、２５５７～２５７６、２５５８～２５７５、２５５８～２５７６、２５５８～２５７７、２５５９～２５７６、２５５９～２５７７、２５５９～２５７８、２５６０～２５７７、２５６０～２５７８、２５６０～２５７９、２５６１～２５７６、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６１～２５８０、２５６２～２５７７、２５６２～２５７９、２５６２～２５８１、２５６３～２５７８、２５６３～２５８０、２５６３～２５８２、２５６４～２５８１、２５６４～２５８３、２５６５～２５８４、２５６６～２５８３、２５６６～２５８５、２５６７～２５８２、２５６７～２５８４、２５６７～２５８６、２５６８～２５８３、２５６８～２５８５、２５６８～２５８７、２５６９～２５８６、２５６９～２５８８、２５７０～２５８５、２５７０～２５８７、２５７０～２５８９、２５７１～２５８６、２５７１～２５８８、２５７１～２
５９０、２５７２～２５８９、２５７２～２５９０、２５７２～２５９１、２５７３～２５９０、２５７３～２５９２、２５７４～２５９０、２５７４～２５９１、２５７４～２５９３、２５７５～２５９０、２５７５～２５９１、２５７５～２５９２、２５７５～２５９４、２５７６～２５９３、２５７６～２５９５、２５７７～２５９４、２５７７～２５９５、２５７７～２５９６、２５７８～２５９４、２５７８～２５９６、２５７８～２５９７、２５７９～２５９８、２５８０～２５９６、２５８０～２５９７、２５８０～２５９８、２５８０～２５９９、２５８１～２５９７、２５８１～２５９８、２５８１～２５９９、２５８１～２６００、２５８２～２５９８、２５８２～２５９９、２５８２～２６００、２５８２～２６０１、２５８３～２５９９、２５８３～２６００、２５８３～２６０１、２５８３～２６０２、２５８４～２６００、２５８４～２６０１、２５８４～２６０２、２５８４～２６０３、２５８５～２６０１、２５８５～２６０３、２５８５～２６０４、２５８６～２６０１、２５８６～２６０２、２５８６～２６０４、２５８６～２６０５、２５８７～２６０２、２５８７～２６０３、２５８７～２６０５、２５８７～２６０６、２５８８～２６０３、２５８８～２６０４、２５８８～２６０５、２５８８～２６０６、２５８８～２６０７、２５８９～２６０４、２５８９～２６０５、２５８９～２６０６、２５８９～２６０７、２５８９～２６０８、２５９０～２６０５、２５９０～２６０６、２５９０～２６０７、２５９０～２６０８、２５９０～２６０９、２５９０～２６０９、２５９１～２６０７、２５９１～２６０８、２５９１～２６０９、２５９１～２６１０、２５９２～２６０７、２５９２～２６０８、２５９２～２６０９、２５９２～２６１０、２５９２～２６１１、２５９３～２６０８、２５９３～２６０９、２５９３～２６１０、２５９３～２６１２、２５９４～２６０９、２５９４～２６１０、２５９４～２６１１、２５９４～２６１２、２５９４～２６１３、２５９５～２６１０、２５９５～２６１１、２５９５～２６１２、２５９５～２６１３、２５９５～２６１４、２５９６～２６１１、２５９６～２６１２、２５９６～２６１３、２５９６～２６１４、２５９６～２６１５、２５９７～２６１２、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７～２６１４、２５９７～２６１５、２５９７～２６１６、２５９８～２６１３、２５９８～２６１４、２５９８～２６１５、２５９８～２６１６、２５９８～２６１７、２５９９～２６１４、２５９９～２６１５、２５９９～２６１６、２５９９～２６１７、２５９９～２６１８、２６００～２６１５、２６００～２６１６、２６００～２６１７、２６００～２６１８、２６００～２６１９、２６０１～２６１６、２６０１～２６１７、２６０１～２６１８、２６０１～２６１９、２６０１～２６２０、２６０２～２６１７、２６０２～２６１８、２６０２～２６１９、２６０２～２６２０、２６０２～２６２１、２６０３～２６１８、２６０３～２６１９、２６０３～２６２０、２６０３～２６２１、２６０３～２６２２、２６０４～２６１９、２６０４～２６２０、２６０４～２６２１、２６０４～２６２２、２６０４～２６２３、２６０５～２６２０、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２３、２６０５～２６２４、２６０６～２６２１、２６０６～２６２２、２６０６～２６２３、２６０６～２６２４、２６０６～２６２５、２６０７～２６２２、２６０７～２６２３、２６０７～２６２４、２６０７～２６２５、２６０７～２６２６、２６０８～２６２３、２６０８～２６２４、２６０８～２６２５、２６０８～２６２６、２６０８～２６２７、２６０９～２６２４、２６０９～２６２５、２６０９～２６２６、２６０９～２６２７、２６０９～２６２８、２６１０～２６２５、２６１０～２６２６、２６１０～２６２７、２６１０～２６２８、２６１０～２６２９、２６１１～２６２６、２６１１～２６２７、２６１１～２６２８、２６１１～２６２９、２６１１～２６３０、２６１２～２６２７、２６１２～２６２８、２６１２～２６２９、２６１２～２６３０、２６１２～２６３１、２６１３～２６２８、２６１３～２６２９、２６１３～２６３０、２６１３～２６３１、２６１４～２６２９、２６１４～２６３０、２６１４～２６３１、２６１５～２６３０、２６１５～２６３１、及び２６１６～２６３１。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とする。特定の実施形態では、ＣＦＢ核酸の一領域を標的とする
そのような化合物またはオリゴヌクレオチドが、前記領域のうちの長さが等しい核酸塩基部分に相補的な連続する核酸塩基部分を有する。例えば前記部分は、本明細書に示す領域のうちの長さが等しい部分に相補的な、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の連続する核酸塩基部分であることができる。特定の実施形態では、化合物が、共役体と配列番号２の以下のヌクレオチド領域を標的とする修飾オリゴヌクレオチドとを含むか、またはそれらからなる：１６０８～１６２７、１６８５～１７０４、１６８６～１７０５、１７５１～１７７０、１７６９～１７８４、１８７１～１８９０、１８７２～１８９１、１８７３～１８９２、１８７５～１８９０、１８７５～１８９４、１８７７～１８９２、１８７７～１８９６、１８７８～１８９７、１８７９～１８９４、１８７９～１８９８、２２８８～２３０７、２８０８～２８２７、２８４６～２８６５、２８５２～２８７１、２９４６～２９６５、３７７３～３７９２、３８１９～３８３８、３８２５～３８４４、３８３１～３８５０、３８３４～３８５３、３８３７～３８５６、３８４３～３８６２、４１５１～４１６６、４１５１～４１７０、４１５３～４１７２、４１５９～４１７８、４１８４～４２０３、４２１１～４２３０、４６０９～４６２８、４６１２～４６３１、４６１５～４６３４、４６２１～４６４０、４６４２～４６６１、４６４８～４６６７、４６８６～４７０５、４６８９～４７０８、４６９２～４７１１、４６９８～４７１７、４７１４～４７３３、５２７０～５２８９、５２９５～５３１４、５２９６～５３１５、５８３０～５８４９、５８９０～５９０９、５９０４～５９２３、６４０６～６４２５、６６６２～６６８１、６６７４～６６９３、６９５４～６９７３、６９６０～６９７９、６９７７～６９９６、６９７９～６９９８、６９８１～７０００、６９８３～６９９８、６９８３～７００２、６９８４～７００３、６９８５～７０００、６９８５～７００４、６９９０～７００９、７１２２～７１４１、７１２５～７１４４、７１５１～７１７０、７３５３～７３７２、７３６２～７３８１、７６８３～７７０２、７６８８～７７０７、７６９０～７７０９、７６９２～７７０７、７６９２～７７１１、７６９４～７７０９、７６９４～７７１３、７６９６～７７１１、７６９６～７７１５、７７６７～７７８６、７７８５～７８０４、７７８６～７８０１、７７８７～７８０３、７７８７～７８０５、７７８７～７８０６、７７８８～７８０３、７７８８～７８０５、７７８８～７８０６、７７８８～７８０７、７７８９～７８０６、７７８９～７８０７、７７８９～７８０８、７７９０～７８０５、７７９０～７８０７、７７９０～７８０９、７７９１～７８０８、７７９１～７８０９、７７９１～７８１０、７７９２～７８０８、７７９２～７８０９、７７９２～７８１０、７７９２～７８１１、７７９３～７８１０、７７９３～７８１１、７７９３～７８１２、７７９４～７８１１、７７９４～７８１２、７７９４～７８１３、７７９５～７８１２、７７９５～７８１３、７７９５～７８１４、７７９６～７８１１、７７９６～７８１３、７７９６～７８１４、７７９６～７８１５、７７９７～７８１２、７７９７～７８１４、７７９７～７８１６、７７９８～７８１３、７７９８～７８１５、７７９８～７８１７、７７９９～７８１６、７７９９～７８１８、７８００～７８１９、７８０１～７８１８、７８０１～７８２０、７８０２～７８１７、７８０２～７８１９、７８０２～７８２１、７８０３～７８１８、７８０３～７８２０、７８０３～７８２２、７８０４～７８２１、７８０４～７８２３、７８０５～７８２０、７８０５～７８２２、７８０５～７８２４、７８０６～７８２１、７８０６～７８２３、７８０６～７８２５、７８０７～７８２４、７８０７～７８２５、７８０７～７８２６、７８０８～７８２５、７８０８～７８２７、７８０９～７８２５、７８０９～７８２６、７８０９～７８２８、７８１０～７８２５、７８１０～７８２６、７８１０～７８２７、７８１０～７８２９、７８１１～７８２８、７８１１～７８３０、７８１２～７８２９、７８１２～７８３０、７８１２～７８３１、７８１３～７８２９、７８１３～７８３１、７８１３～７８３２、７８１４～７８３３、７８１５～７８３１、７８１５～７８３２、７８１５～７８３３、７８１５～７８３４、７８１６～７８３２、７８１６～７８３３、７８１６～７８３４、７８１６～７８３５、７８１７～７８３３、７８１７～７８３４、７８１７～７８３５、７８１７～７８３６、７８１８～７８３４、７８１８～７８３５、７８１８～７８３６、７８１８～７８３７、７８１９～７８３５、７８１９～７８３
６、７８１９～７８３７、７８１９～７８３８、７８２０～７８３６、７８２０～７８３８、７８２０～７８３９、７８２１～７８３６、７８２１～７８３７、７８２１～７８３９、７８２１～７８４０、７８２２～７８３７、７８２２～７８３８、７８２２～７８４０、７８２２～７８４１、７８２３～７８３８、７８２３～７８３９、７８２３～７８３９、７８２３～７８４０、７８２３～７８４１、７８２３～７８４２、７８２４～７８３９、７８２４～７８４０、７８２４～７８４０、７８２４～７８４１、７８２４～７８４２、７８２４～７８４３、７８２５～７８４０、７８２５～７８４１、７８２５～７８４２、７８２５～７８４３、７８２５～７８４４、７８２６～７８４２、７８２６～７８４３、７８２６～７８４４、７８２６～７８４５、７８２７～７８４２、７８２７～７８４３、７８２７～７８４４、７８２７～７８４５、７８２７～７８４６、７８２８～７８４３、７８２８～７８４４、７８２８～７８４５、７８２８～７８４７、７８２９～７８４４、７８２９～７８４５、７８２９～７８４６、７８２９～７８４７、７８２９～７８４８、７８３０～７８４５、７８３０～７８４６、７８３０～７８４７、７８３０～７８４８、７８３０～７８４９、７８３１～７８４６、７８３１～７８４７、７８３１～７８４８、７８３１～７８４９、７８３１～７８５０、７８３２～７８４７、７８３２～７８４８、７８３２～７８４９、７８３２～７８５０、７８３２～７８５１、７８３３～７８４８、７８３３～７８４９、７８３３～７８５０、７８３３～７８５１、７８３３～７８５２、７８３４～７８４９、７８３４～７８５０、７８３４～７８５１、７８３４～７８５２、７８３４～７８５３、７８３５～７８５０、７８３５～７８５１、７８３５～７８５２、７８３５～７８５３、７８３５～７８５４、７８３６～７８５１、７８３６～７８５２、７８３６～７８５３、７８３６～７８５４、７８３６～７８５５、７８３７～７８５２、７８３７～７８５３、７８３７～７８５４、７８３７～７８５５、７８３７～７８５６、７８３８～７８５３、７８３８～７８５４、７８３８～７８５５、７８３８～７８５６、７８３８～７８５７、７８３９～７８５４、７８３９～７８５５、７８３９～７８５６、７８３９～７８５７、７８３９～７８５８、７８４０～７８５５、７８４０～７８５６、７８４０～７８５７、７８４０～７８５８、７８４０～７８５９、７８４１～７８５６、７８４１～７８５７、７８４１～７８５８、７８４１～７８５９、７８４１～７８６０、７８４２～７８５７、７８４２～７８５８、７８４２～７８５９、７８４２～７８６０、７８４２～７８６１、７８４３～７８５８、７８４３～７８５９、７８４３～７８６０、７８４３～７８６１、７８４３～７８６２、７８４４～７８５９、７８４４～７８６０、７８４４～７８６１、７８４４～７８６２、７８４５～７８６０、７８４５～７８６１、７８４５～７８６２、７８４６～７８６１、及び７８４６～７８６２。
特定の実施形態では、化合物が、共役体とＣＦＢ核酸の３’ＵＴＲを標的とする修飾オリゴヌクレオチドとを含むか、またはそれらからなる。特定の態様では、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１の核酸塩基配列を有するＣＦＢ核酸のヌクレオチド２５７４～２６２６内を標的とする。特定の態様では、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１の核酸塩基配列を有するＣＦＢ核酸のヌクレオチド２５７４～２６２６内の長さが等しい部分に相補的な少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の連続する核酸塩基部分を有する。
特定の実施形態では、化合物が、共役体と、配列番号１の核酸塩基配列を有するＣＦＢ核酸のうち核酸塩基２４５７～２６３１、２４５７～２４７２、２４５７～２４７４、２４５７～２４７６、２４５７～２５６６、２４５７～２５７０、２４５７～２５７１、２４５７～２５７２、２４５７～２５７３、２４５７～２５７４、２４５７～２５７５、２４５７～２５７６、２４５７～２５７７、２４５７～２５７８、２４５７～２５７９、２４５７～２５８０、２４５７～２５８１、２４５７～２５８２、２４５７～２５８３、２４５７～２５８４、２４５７～２５８５、２４５７～２５８６、２４５７～２５８７、２４５７～２５８８、２４５７～２５８９、２４５７～２５９０、２４５７～２５９１、２４５７～２５９２、２４５７～２５９３、２４５７～２５９４、２４５７～２５９５、２
４５７～２５９６、２４５７～２５９７、２４５７～２５９８、２４５７～２５９９、２４５７～２６００、２４５７～２６０１、２４５７～２６０２、２４５７～２６０３、２４５７～２６０４、２４５７～２６０５、２４５７～２６０６、２４５７～２６０７、２４５７～２６０８、２４５７～２６０９、２４５７～２６１０、２４５７～２６１１、２４５７～２６１２、２４５７～２６１３、２４５７～２６１４、２４５７～２６１５、２４５７～２６１６、２４５７～２６１７、２４５７～２６１８、２４５７～２６１９、２４５７～２６２０、２４５７～２６２１、２４５７～２６２２、２４５７～２６２３、２４５７～２６２４、２４５７～２６２５、２４５７～２６２６、２４５７～２６２７、２４５７～２６２８、２４５７～２６２９、２４５７～２６３０、２４５７～２６３１、２４５９～２４７４、２４５９～２４７６、２４５９～２５６６、２４５９～２５７０、２４５９～２５７１、２４５９～２５７２、２４５９～２５７３、２４５９～２５７４、２４５９～２５７５、２４５９～２５７６、２４５９～２５７７、２４５９～２５７８、２４５９～２５７９、２４５９～２５８０、２４５９～２５８１、２４５９～２５８２、２４５９～２５８３、２４５９～２５８４、２４５９～２５８５、２４５９～２５８６、２４５９～２５８７、２４５９～２５８８、２４５９～２５８９、２４５９～２５９０、２４５９～２５９１、２４５９～２５９２、２４５９～２５９３、２４５９～２５９４、２４５９～２５９５、２４５９～２５９６、２４５９～２５９７、２４５９～２５９８、２４５９～２５９９、２４５９～２６００、２４５９～２６０１、２４５９～２６０２、２４５９～２６０３、２４５９～２６０４、２４５９～２６０５、２４５９～２６０６、２４５９～２６０７、２４５９～２６０８、２４５９～２６０９、２４５９～２６１０、２４５９～２６１１、２４５９～２６１２、２４５９～２６１３、２４５９～２６１４、２４５９～２６１５、２４５９～２６１６、２４５９～２６１７、２４５９～２６１８、２４５９～２６１９、２４５９～２６２０、２４５９～２６２１、２４５９～２６２２、２４５９～２６２３、２４５９～２６２４、２４５９～２６２５、２４５９～２６２６、２４５９～２６２７、２４５９～２６２８、２４５９～２６２９、２４５９～２６３０、２４５９～２６３１、２４６１～２４７６、２４６１～２５６６、２４６１～２５７０、２４６１～２５７１、２４６１～２５７２、２４６１～２５７３、２４６１～２５７４、２４６１～２５７５、２４６１～２５７６、２４６１～２５７７、２４６１～２５７８、２４６１～２５７９、２４６１～２５８０、２４６１～２５８１、２４６１～２５８２、２４６１～２５８３、２４６１～２５８４、２４６１～２５８５、２４６１～２５８６、２４６１～２５８７、２４６１～２５８８、２４６１～２５８９、２４６１～２５９０、２４６１～２５９１、２４６１～２５９２、２４６１～２５９３、２４６１～２５９４、２４６１～２５９５、２４６１～２５９６、２４６１～２５９７、２４６１～２５９８、２４６１～２５９９、２４６１～２６００、２４６１～２６０１、２４６１～２６０２、２４６１～２６０３、２４６１～２６０４、２４６１～２６０５、２４６１～２６０６、２４６１～２６０７、２４６１～２６０８、２４６１～２６０９、２４６１～２６１０、２４６１～２６１１、２４６１～２６１２、２４６１～２６１３、２４６１～２６１４、２４６１～２６１５、２４６１～２６１６、２４６１～２６１７、２４６１～２６１８、２４６１～２６１９、２４６１～２６２０、２４６１～２６２１、２４６１～２６２２、２４６１～２６２３、２４６１～２６２４、２４６１～２６２５、２４６１～２６２６、２４６１～２６２７、２４６１～２６２８、２４６１～２６２９、２４６１～２６３０、２４６１～２６３１、２５５１～２５６６、２５５１～２５７０、２５５１～２５７１、２５５１～２５７２、２５５１～２５７３、２５５１～２５７４、２５５１～２５７５、２５５１～２５７６、２５５１～２５７７、２５５１～２５７８、２５５１～２５７９、２５５１～２５８０、２５５１～２５８１、２５５１～２５８２、２５５１～２５８３、２５５１～２５８４、２５５１～２５８５、２５５１～２５８６、２５５１～２５８７、２５５１～２５８８、２５５１～２５８９、２５５１～２５９０、２５５１～２５９１、２５５１～２５９２、２５５１～２５９３、２５５１～２５９４、２５５１～２５９５、２５５１～２５９６、２５５１～２５９７、２５５１～２５９８、２５５１～２５９９、２５５１～２６００、２５５１～２６０１、２５５１～２６０２、２５５１～２６０３、２
５５１～２６０４、２５５１～２６０５、２５５１～２６０６、２５５１～２６０７、２５５１～２６０８、２５５１～２６０９、２５５１～２６１０、２５５１～２６１１、２５５１～２６１２、２５５１～２６１３、２５５１～２６１４、２５５１～２６１５、２５５１～２６１６、２５５１～２６１７、２５５１～２６１８、２５５１～２６１９、２５５１～２６２０、２５５１～２６２１、２５５１～２６２２、２５５１～２６２３、２５５１～２６２４、２５５１～２６２５、２５５１～２６２６、２５５１～２６２７、２５５１～２６２８、２５５１～２６２９、２５５１～２６３０、２５５１～２６３１、２５５３～２５７０、２５５３～２５７１、２５５３～２５７２、２５５３～２５７３、２５５３～２５７４、２５５３～２５７５、２５５３～２５７６、２５５３～２５７７、２５５３～２５７８、２５５３～２５７９、２５５３～２５８０、２５５３～２５８１、２５５３～２５８２、２５５３～２５８３、２５５３～２５８４、２５５３～２５８５、２５５３～２５８６、２５５３～２５８７、２５５３～２５８８、２５５３～２５８９、２５５３～２５９０、２５５３～２５９１、２５５３～２５９２、２５５３～２５９３、２５５３～２５９４、２５５３～２５９５、２５５３～２５９６、２５５３～２５９７、２５５３～２５９８、２５５３～２５９９、２５５３～２６００、２５５３～２６０１、２５５３～２６０２、２５５３～２６０３、２５５３～２６０４、２５５３～２６０５、２５５３～２６０６、２５５３～２６０７、２５５３～２６０８、２５５３～２６０９、２５５３～２６１０、２５５３～２６１１、２５５３～２６１２、２５５３～２６１３、２５５３～２６１４、２５５３～２６１５、２５５３～２６１６、２５５３～２６１７、２５５３～２６１８、２５５３～２６１９、２５５３～２６２０、２５５３～２６２１、２５５３～２６２２、２５５３～２６２３、２５５３～２６２４、２５５３～２６２５、２５５３～２６２６、２５５３～２６２７、２５５３～２６２８、２５５３～２６２９、２５５３～２６３０、２５５３～２６３１、２５５４～２５７３、２５５４～２５７４、２５５４～２５７５、２５５４～２５７６、２５５４～２５７７、２５５４～２５７８、２５５４～２５７９、２５５４～２５８０、２５５４～２５８１、２５５４～２５８２、２５５４～２５８３、２５５４～２５８４、２５５４～２５８５、２５５４～２５８６、２５５４～２５８７、２５５４～２５８８、２５５４～２５８９、２５５４～２５９０、２５５４～２５９１、２５５４～２５９２、２５５４～２５９３、２５５４～２５９４、２５５４～２５９５、２５５４～２５９６、２５５４～２５９７、２５５４～２５９８、２５５４～２５９９、２５５４～２６００、２５５４～２６０１、２５５４～２６０２、２５５４～２６０３、２５５４～２６０４、２５５４～２６０５、２５５４～２６０６、２５５４～２６０７、２５５４～２６０８、２５５４～２６０９、２５５４～２６１０、２５５４～２６１１、２５５４～２６１２、２５５４～２６１３、２５５４～２６１４、２５５４～２６１５、２５５４～２６１６、２５５４～２６１７、２５５４～２６１８、２５５４～２６１９、２５５４～２６２０、２５５４～２６２１、２５５４～２６２２、２５５４～２６２３、２５５４～２６２４、２５５４～２６２５、２５５４～２６２６、２５５４～２６２７、２５５４～２６２８、２５５４～２６２９、２５５４～２６３０、２５５４～２６３１、２５５５～２５７２、２５５５～２５７３、２５５５～２５７４、２５５５～２５７５、２５５５～２５７６、２５５５～２５７７、２５５５～２５７８、２５５５～２５７９、２５５５～２５８０、２５５５～２５８１、２５５５～２５８２、２５５５～２５８３、２５５５～２５８４、２５５５～２５８５、２５５５～２５８６、２５５５～２５８７、２５５５～２５８８、２５５５～２５８９、２５５５～２５９０、２５５５～２５９１、２５５５～２５９２、２５５５～２５９３、２５５５～２５９４、２５５５～２５９５、２５５５～２５９６、２５５５～２５９７、２５５５～２５９８、２５５５～２５９９、２５５５～２６００、２５５５～２６０１、２５５５～２６０２、２５５５～２６０３、２５５５～２６０４、２５５５～２６０５、２５５５～２６０６、２５５５～２６０７、２５５５～２６０８、２５５５～２６０９、２５５５～２６１０、２５５５～２６１１、２５５５～２６１２、２５５５～２６１３、２５５５～２６１４、２５５５～２６１５、２５５５～２６１６、２５５５～２６１７、２５５５～２６１８、２５５５～２６１９、２５５５～２６２０、２５５５～２６２１、２５５５～２６２２、２
５５５～２６２３、２５５５～２６２４、２５５５～２６２５、２５５５～２６２６、２５５５～２６２７、２５５５～２６２８、２５５５～２６２９、２５５５～２６３０、２５５５～２６３１、２５５６～２５７３、２５５６～２５７４、２５５６～２５７５、２５５６～２５７６、２５５６～２５７７、２５５６～２５７８、２５５６～２５７９、２５５６～２５８０、２５５６～２５８１、２５５６～２５８２、２５５６～２５８３、２５５６～２５８４、２５５６～２５８５、２５５６～２５８６、２５５６～２５８７、２５５６～２５８８、２５５６～２５８９、２５５６～２５９０、２５５６～２５９１、２５５６～２５９２、２５５６～２５９３、２５５６～２５９４、２５５６～２５９５、２５５６～２５９６、２５５６～２５９７、２５５６～２５９８、２５５６～２５９９、２５５６～２６００、２５５６～２６０１、２５５６～２６０２、２５５６～２６０３、２５５６～２６０４、２５５６～２６０５、２５５６～２６０６、２５５６～２６０７、２５５６～２６０８、２５５６～２６０９、２５５６～２６１０、２５５６～２６１１、２５５６～２６１２、２５５６～２６１３、２５５６～２６１４、２５５６～２６１５、２５５６～２６１６、２５５６～２６１７、２５５６～２６１８、２５５６～２６１９、２５５６～２６２０、２５５６～２６２１、２５５６～２６２２、２５５６～２６２３、２５５６～２６２４、２５５６～２６２５、２５５６～２６２６、２５５６～２６２７、２５５６～２６２８、２５５６～２６２９、２５５６～２６３０、２５５６～２６３１、２５５７～２５７４、２５５７～２５７５、２５５７～２５７６、２５５７～２５７７、２５５７～２５７８、２５５７～２５７９、２５５７～２５８０、２５５７～２５８１、２５


５７～２５８２、２５５７～２５８３、２５５７～２５８４、２５５７～２５８５、２５５７～２５８６、２５５７～２５８７、２５５７～２５８８、２５５７～２５８９、２５５７～２５９０、２５５７～２５９１、２５５７～２５９２、２５５７～２５９３、２５５７～２５９４、２５５７～２５９５、２５５７～２５９６、２５５７～２５９７、２５５７～２５９８、２５５７～２５９９、２５５７～２６００、２５５７～２６０１、２５５７～２６０２、２５５７～２６０３、２５５７～２６０４、２５５７～２６０５、２５５７～２６０６、２５５７～２６０７、２５５７～２６０８、２５５７～２６０９、２５５７～２６１０、２５５７～２６１１、２５５７～２６１２、２５５７～２６１３、２５５７～２６１４、２５５７～２６１５、２５５７～２６１６、２５５７～２６１７、２５５７～２６１８、２５５７～２６１９、２５５７～２６２０、２５５７～２６２１、２５５７～２６２２、２５５７～２６２３、２５５７～２６２４、２５５７～２６２５、２５５７～２６２６、２５５７～２６２７、２５５７～２６２８、２５５７～２６２９、２５５７～２６３０、２５５７～２６３１、２５５８～２５７５、２５５８～２５７６、２５５８～２５７７、２５５８～２５７８、２５５８～２５７９、２５５８～２５８０、２５５８～２５８１、２５５８～２５８２、２５５８～２５８３、２５５８～２５８４、２５５８～２５８５、２５５８～２５８６、２５５８～２５８７、２５５８～２５８８、２５５８～２５８９、２５５８～２５９０、２５５８～２５９１、２５５８～２５９２、２５５８～２５９３、２５５８～２５９４、２５５８～２５９５、２５５８～２５９６、２５５８～２５９７、２５５８～２５９８、２５５８～２５９９、２５５８～２６００、２５５８～２６０１、２５５８～２６０２、２５５８～２６０３、２５５８～２６０４、２５５８～２６０５、２５５８～２６０６、２５５８～２６０７、２５５８～２６０８、２５５８～２６０９、２５５８～２６１０、２５５８～２６１１、２５５８～２６１２、２５５８～２６１３、２５５８～２６１４、２５５８～２６１５、２５５８～２６１６、２５５８～２６１７、２５５８～２６１８、２５５８～２６１９、２５５８～２６２０、２５５８～２６２１、２５５８～２６２２、２５５８～２６２３、２５５８～２６２４、２５５８～２６２５、２５５８～２６２６、２５５８～２６２７、２５５８～２６２８、２５５８～２６２９、２５５８～２６３０、２５５８～２６３１、２５５９～２５７６、２５５９～２５７７、２５５９～２５７８、２５５９～２５７９、２５５９～２５８０、２５
５９～２５８１、２５５９～２５８２、２５５９～２５８３、２５５９～２５８４、２５５９～２５８５、２５５９～２５８６、２５５９～２５８７、２５５９～２５８８、２５５９～２５８９、２５５９～２５９０、２５５９～２５９１、２５５９～２５９２、２５５９～２５９３、２５５９～２５９４、２５５９～２５９５、２５５９～２５９６、２５５９～２５９７、２５５９～２５９８、２５５９～２５９９、２５５９～２６００、２５５９～２６０１、２５５９～２６０２、２５５９～２６０３、２５５９～２６０４、２５５９～２６０５、２５５９～２６０６、２５５９～２６０７、２５５９～２６０８、２５５９～２６０９、２５５９～２６１０、２５５９～２６１１、２５５９～２６１２、２５５９～２６１３、２５５９～２６１４、２５５９～２６１５、２５５９～２６１６、２５５９～２６１７、２５５９～２６１８、２５５９～２６１９、２５５９～２６２０、２５５９～２６２１、２５５９～２６２２、２５５９～２６２３、２５５９～２６２４、２５５９～２６２５、２５５９～２６２６、２５５９～２６２７、２５５９～２６２８、２５５９～２６２９、２５５９～２６３０、２５５９～２６３１、２５６０～２５７７、２５６０～２５７８、２５６０～２５７９、２５６０～２５８０、２５６０～２５８１、２５６０～２５８２、２５６０～２５８３、２５６０～２５８４、２５６０～２５８５、２５６０～２５８６、２５６０～２５８７、２５６０～２５８８、２５６０～２５８９、２５６０～２５９０、２５６０～２５９１、２５６０～２５９２、２５６０～２５９３、２５６０～２５９４、２５６０～２５９５、２５６０～２５９６、２５６０～２５９７、２５６０～２５９８、２５６０～２５９９、２５６０～２６００、２５６０～２６０１、２５６０～２６０２、２５６０～２６０３、２５６０～２６０４、２５６０～２６０５、２５６０～２６０６、２５６０～２６０７、２５６０～２６０８、２５６０～２６０９、２５６０～２６１０、２５６０～２６１１、２５６０～２６１２、２５６０～２６１３、２５６０～２６１４、２５６０～２６１５、２５６０～２６１６、２５６０～２６１７、２５６０～２６１８、２５６０～２６１９、２５６０～２６２０、２５６０～２６２１、２５６０～２６２２、２５６０～２６２３、２５６０～２６２４、２５６０～２６２５、２５６０～２６２６、２５６０～２６２７、２５６０～２６２８、２５６０～２６２９、２５６０～２６３０、２５６０～２６３１、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６１～２５８０、２５６１～２５８１、２５６１～２５８２、２５６１～２５８３、２５６１～２５８４、２５６１～２５８５、２５６１～２５８６、２５６１～２５８７、２５６１～２５８８、２５６１～２５８９、２５６１～２５９０、２５６１～２５９１、２５６１～２５９２、２５６１～２５９３、２５６１～２５９４、２５６１～２５９５、２５６１～２５９６、２５６１～２５９７、２５６１～２５９８、２５６１～２５９９、２５６１～２６００、２５６１～２６０１、２５６１～２６０２、２５６１～２６０３、２５６１～２６０４、２５６１～２６０５、２５６１～２６０６、２５６１～２６０７、２５６１～２６０８、２５６１～２６０９、２５６１～２６１０、２５６１～２６１１、２５６１～２６１２、２５６１～２６１３、２５６１～２６１４、２５６１～２６１５、２５６１～２６１６、２５６１～２６１７、２５６１～２６１８、２５６１～２６１９、２５６１～２６２０、２５６１～２６２１、２５６１～２６２２、２５６１～２６２３、２５６１～２６２４、２５６１～２６２５、２５６１～２６２６、２５６１～２６２７、２５６１～２６２８、２５６１～２６２９、２５６１～２６３０、２５６１～２６３１、２５６２～２５７７、２５６２～２５７８、２５６２～２５７９、２５６２～２５８０、２５６２～２５８１、２５６２～２５８２、２５６２～２５８３、２５６２～２５８４、２５６２～２５８５、２５６２～２５８６、２５６２～２５８７、２５６２～２５８８、２５６２～２５８９、２５６２～２５９０、２５６２～２５９１、２５６２～２５９２、２５６２～２５９３、２５６２～２５９４、２５６２～２５９５、２５６２～２５９６、２５６２～２５９７、２５６２～２５９８、２５６２～２５９９、２５６２～２６００、２５６２～２６０１、２５６２～２６０２、２５６２～２６０３、２５６２～２６０４、２５６２～２６０５、２５６２～２６０６、２５６２～２６０７、２５６２～２６０８、２５６２～２６０９、２５６２～２６１０、２５６２～２６１１、２５６２～２６１２、２５６２～２６１３、２５６２～２６１４、２５６２～２６１５、２５６２～２６１６、２５
６２～２６１７、２５６２～２６１８、２５６２～２６１９、２５６２～２６２０、２５６２～２６２１、２５６２～２６２２、２５６２～２６２３、２５６２～２６２４、２５６２～２６２５、２５６２～２６２６、２５６２～２６２７、２５６２～２６２８、２５６２～２６２９、２５６２～２６３０、２５６２～２６３１、２５６３～２５８０、２５６３～２５８１、２５６３～２５８２、２５６３～２５８３、２５６３～２５８４、２５６３～２５８５、２５６３～２５８６、２５６３～２５８７、２５６３～２５８８、２５６３～２５８９、２５６３～２５９０、２５６３～２５９１、２５６３～２５９２、２５６３～２５９３、２５６３～２５９４、２５６３～２５９５、２５６３～２５９６、２５６３～２５９７、２５６３～２５９８、２５６３～２５９９、２５６３～２６００、２５６３～２６０１、２５６３～２６０２、２５６３～２６０３、２５６３～２６０４、２５６３～２６０５、２５６３～２６０６、２５６３～２６０７、２５６３～２６０８、２５６３～２６０９、２５６３～２６１０、２５６３～２６１１、２５６３～２６１２、２５６３～２６１３、２５６３～２６１４、２５６３～２６１５、２５６３～２６１６、２５６３～２６１７、２５６３～２６１８、２５６３～２６１９、２５６３～２６２０、２５６３～２６２１、２５６３～２６２２、２５６３～２６２３、２５６３～２６２４、２５６３～２６２５、２５６３～２６２６、２５６３～２６２７、２５６３～２６２８、２５６３～２６２９、２５６３～２６３０、２５６３～２６３１、２５６４～２５８１、２５６４～２５８２、２５６４～２５８３、２５６４～２５８４、２５６４～２５８５、２５６４～２５８６、２５６４～２５８７、２５６４～２５８８、２５６４～２５８９、２５６４～２５９０、２５６４～２５９１、２５６４～２５９２、２５６４～２５９３、２５６４～２５９４、２５６４～２５９５、２５６４～２５９６、２５６４～２５９７、２５６４～２５９８、２５６４～２５９９、２５６４～２６００、２５６４～２６０１、２５６４～２６０２、２５６４～２６０３、２５６４～２６０４、２５６４～２６０５、２５６４～２６０６、２５６４～２６０７、２５６４～２６０８、２５６４～２６０９、２５６４～２６１０、２５６４～２６１１、２５６４～２６１２、２５６４～２６１３、２５６４～２６１４、２５６４～２６１５、２５６４～２６１６、２５６４～２６１７、２５６４～２６１８、２５６４～２６１９、２５６４～２６２０、２５６４～２６２１、２５６４～２６２２、２５６４～２６２３、２５６４～２６２４、２５６４～２６２５、２５６４～２６２６、２５６４～２６２７、２５６４～２６２８、２５６４～２６２９、２５６４～２６３０、２５６４～２６３１、２５６５～２５８４、２５６５～２５８５、２５６５～２５８６、２５６５～２５８７、２５６５～２５８８、２５６５～２５８９、２５６５～２５９０、２５６５～２５９１、２５６５～２５９２、２５６５～２５９３、２５６５～２５９４、２５６５～２５９５、２５６５～２５９６、２５６５～２５９７、２５６５～２５９８、２５６５～２５９９、２５６５～２６００、２５６５～２６０１、２５６５～２６０２、２５６５～２６０３、２５６５～２６０４、２５６５～２６０５、２５６５～２６０６、２５６５～２６０７、２５６５～２６０８、２５６５～２６０９、２５６５～２６１０、２５６５～２６１１、２５６５～２６１２、２５６５～２６１３、２５６５～２６１４、２５６５～２６１５、２５６５～２６１６、２５６５～２６１７、２５６５～２６１８、２５６５～２６１９、２５６５～２６２０、２５６５～２６２１、２５６５～２６２２、２５６５～２６２３、２５６５～２６２４、２５６５～２６２５、２５６５～２６２６、２５６５～２６２７、２５６５～２６２８、２５６５～２６２９、２５６５～２６３０、２５６５～２６３１、２５６６～２５８３、２５６６～２５８４、２５６６～２５８５、２５６６～２５８６、２５６６～２５８７、２５６６～２５８８、２５６６～２５８９、２５６６～２５９０、２５６６～２５９１、２５６６～２５９２、２５６６～２５９３、２５６６～２５９４、２５６６～２５９５、２５６６～２５９６、２５６６～２５９７、２５６６～２５９８、２５６６～２５９９、２５６６～２６００、２５６６～２６０１、２５６６～２６０２、２５６６～２６０３、２５６６～２６０４、２５６６～２６０５、２５６６～２６０６、２５６６～２６０７、２５６６～２６０８、２５６６～２６０９、２５６６～２６１０、２５６６～２６１１、２５６６～２６１２、２５６６～２６１３、２５６６～２６１４、２５６６～２６１５、２５６６～２６１６、２５
６


６～２６１７、２５６６～２６１８、２５６６～２６１９、２５６６～２６２０、２５６６～２６２１、２５６６～２６２２、２５６６～２６２３、２５６６～２６２４、２５６６～２６２５、２５６６～２６２６、２５６６～２６２７、２５６６～２６２８、２５６６～２６２９、２５６６～２６３０、２５６６～２６３１、２５６７～２５８４、２５６７～２５８５、２５６７～２５８６、２５６７～２５８７、２５６７～２５８８、２５６７～２５８９、２５６７～２５９０、２５６７～２５９１、２５６７～２５９２、２５６７～２５９３、２５６７～２５９４、２５６７～２５９５、２５６７～２５９６、２５６７～２５９７、２５６７～２５９８、２５６７～２５９９、２５６７～２６００、２５６７～２６０１、２５６７～２６０２、２５６７～２６０３、２５６７～２６０４、２５６７～２６０５、２５６７～２６０６、２５６７～２６０７、２５６７～２６０８、２５６７～２６０９、２５６７～２６１０、２５６７～２６１１、２５６７～２６１２、２５６７～２６１３、２５６７～２６１４、２５６７～２６１５、２５６７～２６１６、２５６７～２６１７、２５６７～２６１８、２５６７～２６１９、２５６７～２６２０、２５６７～２６２１、２５６７～２６２２、２５６７～２６２３、２５６７～２６２４、２５６７～２６２５、２５６７～２６２６、２５６７～２６２７、２５６７～２６２８、２５６７～２６２９、２５６７～２６３０、２５６７～２６３１、２５６８～２５８５、２５６８～２５８６、２５６８～２５８７、２５６８～２５８８、２５６８～２５８９、２５６８～２５９０、２５６８～２５９１、２５６８～２５９２、２５６８～２５９３、２５６８～２５９４、２５６８～２５９５、２５６８～２５９６、２５６８～２５９７、２５６８～２５９８、２５６８～２５９９、２５６８～２６００、２５６８～２６０１、２５６８～２６０２、２５６８～２６０３、２５６８～２６０４、２５６８～２６０５、２５６８～２６０６、２５６８～２６０７、２５６８～２６０８、２５６８～２６０９、２５６８～２６１０、２５６８～２６１１、２５６８～２６１２、２５６８～２６１３、２５６８～２６１４、２５６８～２６１５、２５６８～２６１６、２５６８～２６１７、２５６８～２６１８、２５６８～２６１９、２５６８～２６２０、２５６８～２６２１、２５６８～２６２２、２５６８～２６２３、２５６８～２６２４、２５６８～２６２５、２５６８～２６２６、２５６８～２６２７、２５６８～２６２８、２５６８～２６２９、２５６８～２６３０、２５６８～２６３１、２５６９～２５８６、２５６９～２５８７、２５６９～２５８８、２５６９～２５８９、２５６９～２５９０、２５６９～２５９１、２５６９～２５９２、２５６９～２５９３、２５６９～２５９４、２５６９～２５９５、２５６９～２５９６、２５６９～２５９７、２５６９～２５９８、２５６９～２５９９、２５６９～２６００、２５６９～２６０１、２５６９～２６０２、２５６９～２６０３、２５６９～２６０４、２５６９～２６０５、２５６９～２６０６、２５６９～２６０７、２５６９～２６０８、２５６９～２６０９、２５６９～２６１０、２５６９～２６１１、２５６９～２６１２、２５６９～２６１３、２５６９～２６１４、２５６９～２６１５、２５６９～２６１６、２５６９～２６１７、２５６９～２６１８、２５６９～２６１９、２５６９～２６２０、２５６９～２６２１、２５６９～２６２２、２５６９～２６２３、２５６９～２６２４、２５６９～２６２５、２５６９～２６２６、２５６９～２６２７、２５６９～２６２８、２５６９～２６２９、２５６９～２６３０、２５６９～２６３１、２５６９～２５８６、２５６９～２５８７、２５６９～２５８８、２５６９～２５８９、２５６９～２５９０、２５６９～２５９１、２５６９～２５９２、２５６９～２５９３、２５６９～２５９４、２５６９～２５９５、２５６９～２５９６、２５６９～２５９７、２５６９～２５９８、２５６９～２５９９、２５６９～２６００、２５６９～２６０１、２５６９～２６０２、２５６９～２６０３、２５６９～２６０４、２５６９～２６０５、２５６９～２６０６、２５６９～２６０７、２５６９～２６０８、２５６９～２６０９、２５６９～２６１０、２５６９～２６１１、２５６９～２６１２、２５６９～２６１３、２５６９～２６１４、２５６９～２６１５、２５６９～２６１６、２５６９～２６１７、２５６
９～２６１８、２５６９～２６１９、２５６９～２６２０、２５６９～２６２１、２５６９～２６２２、２５６９～２６２３、２５６９～２６２４、２５６９～２６２５、２５６９～２６２６、２５６９～２６２７、２５６９～２６２８、２５６９～２６２９、２５６９～２６３０、２５６９～２６３１、２５７１～２５８８、２５７１～２５８９、２５７１～２５９０、２５７１～２５９１、２５７１～２５９２、２５７１～２５９３、２５７１～２５９４、２５７１～２５９５、２５７１～２５９６、２５７１～２５９７、２５７１～２５９８、２５７１～２５９９、２５７１～２６００、２５７１～２６０１、２５７１～２６０２、２５７１～２６０３、２５７１～２６０４、２５７１～２６０５、２５７１～２６０６、２５７１～２６０７、２５７１～２６０８、２５７１～２６０９、２５７１～２６１０、２５７１～２６１１、２５７１～２６１２、２５７１～２６１３、２５７１～２６１４、２５７１～２６１５、２５７１～２６１６、２５７１～２６１７、２５７１～２６１８、２５７１～２６１９、２５７１～２６２０、２５７１～２６２１、２５７１～２６２２、２５７１～２６２３、２５７１～２６２４、２５７１～２６２５、２５７１～２６２６、２５７１～２６２７、２５７１～２６２８、２５７１～２６２９、２５７１～２６３０、２５７１～２６３１、２５７２～２５８９、２５７２～２５９０、２５７２～２５９１、２５７２～２５９２、２５７２～２５９３、２５７２～２５９４、２５７２～２５９５、２５７２～２５９６、２５７２～２５９７、２５７２～２５９８、２５７２～２５９９、２５７２～２６００、２５７２～２６０１、２５７２～２６０２、２５７２～２６０３、２５７２～２６０４、２５７２～２６０５、２５７２～２６０６、２５７２～２６０７、２５７２～２６０８、２５７２～２６０９、２５７２～２６１０、２５７２～２６１１、２５７２～２６１２、２５７２～２６１３、２５７２～２６１４、２５７２～２６１５、２５７２～２６１６、２５７２～２６１７、２５７２～２６１８、２５７２～２６１９、２５７２～２６２０、２５７２～２６２１、２５７２～２６２２、２５７２～２６２３、２５７２～２６２４、２５７２～２６２５、２５７２～２６２６、２５７２～２６２７、２５７２～２６２８、２５７２～２６２９、２５７２～２６３０、２５７２～２６３１、２５７３～２５９０、２５７３～２５９１、２５７３～２５９２、２５７３～２５９３、２５７３～２５９４、２５７３～２５９５、２５７３～２５９６、２５７３～２５９７、２５７３～２５９８、２５７３～２５９９、２５７３～２６００、２５７３～２６０１、２５７３～２６０２、２５７３～２６０３、２５７３～２６０４、２５７３～２６０５、２５７３～２６０６、２５７３～２６０７、２５７３～２６０８、２５７３～２６０９、２５７３～２６１０、２５７３～２６１１、２５７３～２６１２、２５７３～２６１３、２５７３～２６１４、２５７３～２６１５、２５７３～２６１６、２５７３～２６１７、２５７３～２６１８、２５７３～２６１９、２５７３～２６２０、２５７３～２６２１、２５７３～２６２２、２５７３～２６２３、２５７３～２６２４、２５７３～２６２５、２５７３～２６２６、２５７３～２６２７、２５７３～２６２８、２５７３～２６２９、２５７３～２６３０、２５７３～２６３１、２５７４～２５９１、２５７４～２５９２、２５７４～２５９３、２５７４～２５９４、２５７４～２５９５、２５７４～２５９６、２５７４～２５９７、２５７４～２５９８、２５７４～２５９９、２５７４～２６００、２５７４～２６０１、２５７４～２６０２、２５７４～２６０３、２５７４～２６０４、２５７４～２６０５、２５７４～２６０６、２５７４～２６０７、２５７４～２６０８、２５７４～２６０９、２５７４～２６１０、２５７４～２６１１、２５７４～２６１２、２５７４～２６１３、２５７４～２６１４、２５７４～２６１５、２５７４～２６１６、２５７４～２６１７、２５７４～２６１８、２５７４～２６１９、２５７４～２６２０、２５７４～２６２１、２５７４～２６２２、２５７４～２６２３、２５７４～２６２４、２５７４～２６２５、２５７４～２６２６、２５７４～２６２７、２５７４～２６２８、２５７４～２６２９、２５７４～２６３０、２５７４～２６３１、２５７５～２５９２、２５７５～２５９３、２５７５～２５９４、２５７５～２５９５、２５７５～２５９６、２５７５～２５９７、２５７５～２５９８、２５７５～２５９９、２５７５～２６００、２５７５～２６０１、２５７５～２６０２、２５７５～２６０３、２５７５～２６０４、２５７５～２６０５、２５７５～２６０６、２５７５～２６０７、２５７
５～２６０８、２５７５～２６０９、２５７５～２６１０、２５７５～２６１１、２５７５～２６１２、２５７５～２６１３、２５７５～２６１４、２５７５～２６１５、２５７５～２６１６、２５７５～２６１７、２５７５～２６１８、２５７５～２６１９、２５７５～２６２０、２５７５～２６２１、２５７５～２６２２、２５７５～２６２３、２５７５～２６２４、２５７５～２６２５、２５７５～２６２６、２５７５～２６２７、２５７５～２６２８、２５７５～２６２９、２５７５～２６３０、２５７５～２６３１、２５７６～２５９３、２５７６～２５９４、２５７６～２５９５、２５７６～２５９６、２５７６～２５９７、２５７６～２５９８、２５７６～２５９９、２５７６～２６００、２５７６～２６０１、２５７６～２６０２、２５７６～２６０３、２５７６～２６０４、２５７６～２６０５、２５７６～２６０６、２５７６～２６０７、２５７６～２６０８、２５７６～２６０９、２５７６～２６１０、２５７６～２６１１、２５７６～２６１２、２５７６～２６１３、２５７６～２６１４、２５７６～２６１５、２５７６～２６１６、２５７６～２６１７、２５７６～２６１８、２５７６～２６１９、２５７６～２６２０、２５７６～２６２１、２５７６～２６２２、２５７６～２６２３、２５７６～２６２４、２５７６～２６２５、２５７６～２６２６、２５７６～２６２７、２５７６～２６２８、２５７６～２６２９、２５７６～２６３０、２５７６～２６３１、２５７７～２５９４、２５７７～２５９５、２５７７～２５９６、２５７７～２５９７、２５７７～２５９８、２５７７～２５９９、２５７７～２６００、２５７７～２６０１、２５７７～２６０２、２５７７～２６０３、２５７７～２６０４、２５７７～２６０５、２５７７～２６０６、２５７７～２６０７、２５７７～２６０８、２５７７～２６０９、２５７７～２６１０、２５７７～２６１１、２５７７～２６１２、２５７７～２６１３、２５７７～２６１４、２５７７～２６１５、２５７７～２６１６、２５７７～２６１７、２５７７～２６１８、２５７７～２６１９、２５７７～２６２０、２５７７～２６２１、２５７７～２６２２、２５７７～２６２３、２５７７～２６２４、２５７７～２６２５、２５７７～２６２６、２５７７～２６２７、２５７７～２６２８、２５７７～２６２９、２５７７～２６３０、２５７７～２６３１、２５７８～２５９７、２５７８～２５９８、２５７８～２５９９、２５７８～２６００、２５７８～２６０１、２５７８～２６０２、２５７８～２６０３、２５７８～２６０４、２５７８～２６０５、２５７８～２６０６、２５７８～２６０７、２５７８～２６０８、２５７８～２６０９、２５７８～２６１０、２５７８～２６１１、２５７８～２６１２、２５７８～２６１３、２５７８～２６１４、２５７８～２６１５、２５７８～２６１６、２５７８～２６１７、２５７８～２６１８、２５７８～２６１９、２５７８


～２６２０、２５７８～２６２１、２５７８～２６２２、２５７８～２６２３、２５７８～２６２４、２５７８～２６２５、２５７８～２６２６、２５７８～２６２７、２５７８～２６２８、２５７８～２６２９、２５７８～２６３０、２５７８～２６３１、２５７９～２５９８、２５７９～２５９９、２５７９～２６００、２５７９～２６０１、２５７９～２６０２、２５７９～２６０３、２５７９～２６０４、２５７９～２６０５、２５７９～２６０６、２５７９～２６０７、２５７９～２６０８、２５７９～２６０９、２５７９～２６１０、２５７９～２６１１、２５７９～２６１２、２５７９～２６１３、２５７９～２６１４、２５７９～２６１５、２５７９～２６１６、２５７９～２６１７、２５７９～２６１８、２５７９～２６１９、２５７９～２６２０、２５７９～２６２１、２５７９～２６２２、２５７９～２６２３、２５７９～２６２４、２５７９～２６２５、２５７９～２６２６、２５７９～２６２７、２５７９～２６２８、２５７９～２６２９、２５７９～２６３０、２５７９～２６３１、２５８０～２５９８、２５８０～２５９９、２５８０～２６００、２５８０～２６０１、２５８０～２６０２、２５８０～２６０３、２５８０～２６０４、２５８０～２６０５、２５８０～２６０６、２５８０～２６０７、２５８０～２６０８、２５８０～２６０９、２５８０～２６１０、２５８０～２６１１、２５８０～２６１２、２５８０～２６１３、２５８０～２６１４、２５８０～２６１５、２５８０
～２６１６、２５８０～２６１７、２５８０～２６１８、２５８０～２６１９、２５８０～２６２０、２５８０～２６２１、２５８０～２６２２、２５８０～２６２３、２５８０～２６２４、２５８０～２６２５、２５８０～２６２６、２５８０～２６２７、２５８０～２６２８、２５８０～２６２９、２５８０～２６３０、２５８０～２６３１、２５８１～２５９７、２５８１～２５９８、２５８１～２５９９、２５８１～２６００、２５８１～２６０１、２５８１～２６０２、２５８１～２６０３、２５８１～２６０４、２５８１～２６０５、２５８１～２６０６、２５８１～２６０７、２５８１～２６０８、２５８１～２６０９、２５８１～２６１０、２５８１～２６１１、２５８１～２６１２、２５８１～２６１３、２５８１～２６１４、２５８１～２６１５、２５８１～２６１６、２５８１～２６１７、２５８１～２６１８、２５８１～２６１９、２５８１～２６２０、２５８１～２６２１、２５８１～２６２２、２５８１～２６２３、２５８１～２６２４、２５８１～２６２５、２５８１～２６２６、２５８１～２６２７、２５８１～２６２８、２５８１～２６２９、２５８１～２６３０、２５８１～２６３１、２５８２～２６００、２５８２～２６０１、２５８２～２６０２、２５８２～２６０３、２５８２～２６０４、２５８２～２６０５、２５８２～２６０６、２５８２～２６０７、２５８２～２６０８、２５８２～２６０９、２５８２～２６１０、２５８２～２６１１、２５８２～２６１２、２５８２～２６１３、２５８２～２６１４、２５８２～２６１５、２５８２～２６１６、２５８２～２６１７、２５８２～２６１８、２５８２～２６１９、２５８２～２６２０、２５８２～２６２１、２５８２～２６２２、２５８２～２６２３、２５８２～２６２４、２５８２～２６２５、２５８２～２６２６、２５８２～２６２７、２５８２～２６２８、２５８２～２６２９、２５８２～２６３０、２５８２～２６３１、２５８３～２６０１、２５８３～２６０２、２５８３～２６０３、２５８３～２６０４、２５８３～２６０５、２５８３～２６０６、２５８３～２６０７、２５８３～２６０８、２５８３～２６０９、２５８３～２６１０、２５８３～２６１１、２５８３～２６１２、２５８３～２６１３、２５８３～２６１４、２５８３～２６１５、２５８３～２６１６、２５８３～２６１７、２５８３～２６１８、２５８３～２６１９、２５８３～２６２０、２５８３～２６２１、２５８３～２６２２、２５８３～２６２３、２５８３～２６２４、２５８３～２６２５、２５８３～２６２６、２５８３～２６２７、２５８３～２６２８、２５８３～２６２９、２５８３～２６３０、２５８３～２６３１、２５８５～２６０３、２５８５～２６０４、２５８５～２６０５、２５８５～２６０６、２５８５～２６０７、２５８５～２６０８、２５８５～２６０９、２５８５～２６１０、２５８５～２６１１、２５８５～２６１２、２５８５～２６１３、２５８５～２６１４、２５８５～２６１５、２５８５～２６１６、２５８５～２６１７、２５８５～２６１８、２５８５～２６１９、２５８５～２６２０、２５８５～２６２１、２５８５～２６２２、２５８５～２６２３、２５８５～２６２４、２５８５～２６２５、２５８５～２６２６、２５８５～２６２７、２５８５～２６２８、２５８５～２６２９、２５８５～２６３０、２５８５～２６３１、２５８６～２６０４、２５８６～２６０５、２５８６～２６０６、２５８６～２６０７、２５８６～２６０８、２５８６～２６０９、２５８６～２６１０、２５８６～２６１１、２５８６～２６１２、２５８６～２６１３、２５８６～２６１４、２５８６～２６１５、２５８６～２６１６、２５８６～２６１７、２５８６～２６１８、２５８６～２６１９、２５８６～２６２０、２５８６～２６２１、２５８６～２６２２、２５８６～２６２３、２５８６～２６２４、２５８６～２６２５、２５８６～２６２６、２５８６～２６２７、２５８６～２６２８、２５８６～２６２９、２５８６～２６３０、２５８６～２６３１、２５８７～２６０５、２５８７～２６０６、２５８７～２６０７、２５８７～２６０８、２５８７～２６０９、２５８７～２６１０、２５８７～２６１１、２５８７～２６１２、２５８７～２６１３、２５８７～２６１４、２５８７～２６１５、２５８７～２６１６、２５８７～２６１７、２５８７～２６１８、２５８７～２６１９、２５８７～２６２０、２５８７～２６２１、２５８７～２６２２、２５８７～２６２３、２５８７～２６２４、２５８７～２６２５、２５８７～２６２６、２５８７～２６２７、２５８７～２６２８、２５８７～２６２９、２５８７～２６３０、２５８７～２６３１、２５８８～２６０６、２５８８～２６０７、２５８８
～２６０８、２５８８～２６０９、２５８８～２６１０、２５８８～２６１１、２５８８～２６１２、２５８８～２６１３、２５８８～２６１４、２５８８～２６１５、２５８８～２６１６、２５８８～２６１７、２５８８～２６１８、２５８８～２６１９、２５８８～２６２０、２５８８～２６２１、２５８８～２６２２、２５８８～２６２３、２５８８～２６２４、２５８８～２６２５、２５８８～２６２６、２５８８～２６２７、２５８８～２６２８、２５８８～２６２９、２５８８～２６３０、２５８８～２６３１、２５８９～２６０７、２５８９～２６０８、２５８９～２６０９、２５８９～２６１０、２５８９～２６１１、２５８９～２６１２、２５８９～２６１３、２５８９～２６１４、２５８９～２６１５、２５８９～２６１６、２５８９～２６１７、２５８９～２６１８、２５８９～２６１９、２５８９～２６２０、２５８９～２６２１、２５８９～２６２２、２５８９～２６２３、２５８９～２６２４、２５８９～２６２５、２５８９～２６２６、２５８９～２６２７、２５８９～２６２８、２５８９～２６２９、２５８９～２６３０、２５８９～２６３１、２５９０～２６０６、２５９０～２６０７、２５９０～２６０８、２５９０～２６０９、２５９０～２６１０、２５９０～２６１１、２５９０～２６１２、２５９０～２６１３、２５９０～２６１４、２５９０～２６１５、２５９０～２６１６、２５９０～２６１７、２５９０～２６１８、２５９０～２６１９、２５９０～２６２０、２５９０～２６２１、２５９０～２６２２、２５９０～２６２３、２５９０～２６２４、２５９０～２６２５、２５９０～２６２６、２５９０～２６２７、２５９０～２６２８、２５９０～２６２９、２５９０～２６３０、２５９０～２６３１、２５９１～２６１０、２５９１～２６１１、２５９１～２６１２、２５９１～２６１３、２５９１～２６１４、２５９１～２６１５、２５９１～２６１６、２５９１～２６１７、２５９１～２６１８、２５９１～２６１９、２５９１～２６２０、２５９１～２６２１、２５９１～２６２２、２５９１～２６２３、２５９１～２６２４、２５９１～２６２５、２５９１～２６２６、２５９１～２６２７、２５９１～２６２８、２５９１～２６２９、２５９１～２６３０、２５９１～２６３１、２５９２～２６１１、２５９２～２６１２、２５９２～２６１３、２５９２～２６１４、２５９２～２６１５、２５９２～２６１６、２５９２～２６１７、２５９２～２６１８、２５９２～２６１９、２５９２～２６２０、２５９２～２６２１、２５９２～２６２２、２５９２～２６２３、２５９２～２６２４、２５９２～２６２５、２５９２～２６２６、２５９２～２６２７、２５９２～２６２８、２５９２～２６２９、２５９２～２６３０、２５９２～２６３１、２５９３～２６０８、２５９３～２６１２、２５９３～２６１３、２５９３～２６１４、２５９３～２６１５、２５９３～２６１６、２５９３～２６１７、２５９３～２６１８、２５９３～２６１９、２５９３～２６２０、２５９３～２６２１、２５９３～２６２２、２５９３～２６２３、２５９３～２６２４、２５９３～２６２５、２５９３～２６２６、２５９３～２６２７、２５９３～２６２８、２５９３～２６２９、２５９３～２６３０、２５９３～２６３１、２５９４～２６１２、２５９４～２６１３、２５９４～２６１４、２５９４～２６１５、２５９４～２６１６、２５９４～２６１７、２５９４～２６１８、２５９４～２６１９、２５９４～２６２０、２５９４～２６２１、２５９４～２６２２、２５９４～２６２３、２５９４～２６２４、２５９４～２６２５、２５９４～２６２６、２５９４～２６２７、２５９４～２６２８、２５９４～２６２９、２５９４～２６３０、２５９４～２６３１、２５９５～２６１１、２５９５～２６１２、２５９５～２６１３、２５９５～２６１４、２５９５～２６１５、２５９５～２６１６、２５９５～２６１７、２５９５～２６１８、２５９５～２６１９、２５９５～２６２０、２５９５～２６２１、２５９５～２６２２、２５９５～２６２３、２５９５～２６２４、２５９５～２６２５、２５９５～２６２６、２５９５～２６２７、２５９５～２６２８、２５９５～２６２９、２５９５～２６３０、２５９５～２６３１、２５９６～２６１４、２５９６～２６１５、２５９６～２６１６、２５９６～２６１７、２５９６～２６１８、２５９６～２６１９、２５９６～２６２０、２５９６～２６２１、２５９６～２６２２、２５９６～２６２３、２５９６～２６２４、２５９６～２６２５、２５９６～２６２６、２５９６～２６２７、２５９６～２６２８、２５９６～２６２９、２５９６～２６３０、２５９６～２６３１、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７
～２６１４、２５９７～２６１５、２５９７～２６１６、２５９７～２６１７、２５９７～２６１８、２５９７～２６１９、２５９７～２６２０、２５９７～２６２１、２５９７～２６２２、２５９７～２６２３、２５９７～２６２４、２５９７～２６２５、２５９７～２６２６、２５９７～２６２７、２５９７～２６２８、２５９７～２６２９、２５９７～２６３０、２５９７～２６３１、２５９８～２６１３、２５９８～２６１４、２５９８～２６１５、２５９８～２６１６、２５９８～２６１７、２５９８～２６１８、２５９８～２６１９、２５９８～２６２０、２５９８～２６２１、２５９８～２６２２、２５９８～２６２３、２５９８～２６２４、２５９８～２６２５、２５９８～２６２６、２５９８～２６２７、２５９８～２６２８、２５９８～２６２９、２５９８～２６３０、２５９８～２６３１、２５９９～２６１４、２５９９～２６１５、２５９９～２６１６、２５９９～２６１７、２５９９～２６１８、２５９９～２６１９、２５９９～２６２０、２５９９～２６２１、２５９９～２６２２、２５９９～２６２３、２５９９～２６２４、２５９９～


２６２５、２５９９～２６２６、２５９９～２６２７、２５９９～２６２８、２５９９～２６２９、２５９９～２６３０、２５９９～２６３１、２６００～２６１５、２６００～２６１６、２６００～２６１７、２６００～２６１８、２６００～２６１９、２６００～２６２０、２６００～２６２１、２６００～２６２２、２６００～２６２３、２６００～２６２４、２６００～２６２５、２６００～２６２６、２６００～２６２７、２６００～２６２８、２６００～２６２９、２６００～２６３０、２６００～２６３１、２６０１～２６１６、２６０１～２６１７、２６０１～２６１８、２６０１～２６１９、２６０１～２６２０、２６０１～２６２１、２６０１～２６２２、２６０１～２６２３、２６０１～２６２４、２６０１～２６２５、２６０１～２６２６、２６０１～２６２７、２６０１～２６２８、２６０１～２６２９、２６０１～２６３０、２６０１～２６３１、２６０２～２６１８、２６０２～２６１９、２６０２～２６２０、２６０２～２６２１、２６０２～２６２２、２６０２～２６２３、２６０２～２６２４、２６０２～２６２５、２６０２～２６２６、２６０２～２６２７、２６０２～２６２８、２６０２～２６２９、２６０２～２６３０、２６０２～２６３１、２６０３～２６２０、２６０３～２６２１、２６０３～２６２２、２６０３～２６２３、２６０３～２６２４、２６０３～２６２５、２６０３～２６２６、２６０３～２６２７、２６０３～２６２８、２６０３～２６２９、２６０３～２６３０、２６０３～２６３１、２６０４～２６１９、２６０４～２６２０、２６０４～２６２１、２６０４～２６２２、２６０４～２６２３、２６０４～２６２４、２６０４～２６２５、２６０４～２６２６、２６０４～２６２７、２６０４～２６２８、２６０４～２６２９、２６０４～２６３０、２６０４～２６３１、２６０５～２６２０、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２３、２６０５～２６２４、２６０５～２６２５、２６０５～２６２６、２６０５～２６２７、２６０５～２６２８、２６０５～２６２９、２６０５～２６３０、２６０５～２６３１、２６０６～２６２１、２６０６～２６２２、２６０６～２６２３、２６０６～２６２４、２６０６～２６２５、２６０６～２６２６、２６０６～２６２７、２６０６～２６２８、２６０６～２６２９、２６０６～２６３０、２６０６～２６３１、２６０７～２６２２、２６０７～２６２３、２６０７～２６２４、２６０７～２６２５、２６０７～２６２６、２６０７～２６２７、２６０７～２６２８、２６０７～２６２９、２６０７～２６３０、２６０７～２６３１、２６０８～２６２３、２６０８～２６２４、２６０８～２６２５、２６０８～２６２６、２６０８～２６２７、２６０８～２６２８、２６０８～２６２９、２６０８～２６３０、２６０８～２６３１、２６０９～２６２４、２６０９～２６２５、２６０９～２６２６、２６０９～２６２７、２６０９～２６２８、２６０９～２６２９、２６０９～２６３０、２６０９～２６３１、２６１０～２６２５、２６１０～２６２６、２６１０～２６２７、２６１０～２６２８、２６１０～２６２９、２６１０～２６３０、２６１０～２６３１、２６１１～２６２６、２６１１～２６２７、２６１１～２６２８、２６１１～２６２９、２６１１～
２６３０、２６１１～２６３１、２６１２～２６２７、２６１２～２６２８、２６１２～２６２９、２６１２～２６３０、２６１２～２６３１、２６１３～２６２８、２６１３～２６２９、２６１３～２６３０、２６１３～２６３１、２６１４～２６２９、２６１４～２６３０、２６１４～２６３１、２６１５～２６３０、２６１５～２６３１、または２６１６～２６３１内の一領域を標的とする修飾オリゴヌクレオチドとを含むか、またはそれらからなる。特定の態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドが、前述の核酸塩基領域内の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の連続する核酸塩基を標的とする。
特定の実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域が、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的となった時に、少なくとも５０％の阻害を示す：３０～４９、４８～６３、１５０～１６９、１５１～１７０、１５２～１７１、１５４～１６９、１５４～１７３、１５６～１７１、１５６～１７５、１５７～１７６、１５８～１７３、１５８～１７７、４８０～４９９、６００～６１９、６３８～６５７、６４４～６６３、７３８～７５７、１０８９～１１０８、１１３５～１１５４、１１４１～１１６０、１１４７～１１６６、１１５０～１１６９、１１５３～１１７２、１１５９～１１７８、１１６２～１１８１、１１６５～１１８４、１１７１～１１８６、１１７１～１１９０、１１７３～１１８８、１１７３～１１９２、１１７５～１１９０、１１７５～１１９４、１１７７～１１９６、１１８３～１２０２、１２０８～１２２７、１２３５～１２５４、１２９８～１３１７、１３０４～１３２３、１３１０～１３２９、１３１６～１３３５、１３１９～１３３８、１３２２～１３４１、１３２８～１３４７、１３４９～１３６８、１３５５～１３７４、１３９３～１４１２、１３９６～１４１５、１３９９～１４１８、１４０５～１４２４、１４２１～１４４０、１６２１～１６４０、１６４６～１６６５、１６４６～１６６５、１６４７～１６６６、１６８９～１７０８、１７４９～１７６８、１７６３～１７８２、１９１２～１９３１、２０７３～２０９２、２０８５～２１０４、２１６６～２１８５、２１７２～２１９１、２１８９～２２０８、２１９１～２２１０、２１９３～２２１２、２１９５～２２１０、２１９５～２２１４、２１９６～２２１５、２１９７～２２１２、２１９７～２２１６、２２０２～２２２１、２２２３～２２３８、２２２３～２２４２、２２２５～２２４０、２２２６～２２４５、２２２７～２２４２、２２２７～２２４６、２２３８～２２５７、２２４１～２２６０、２２６７～２２８６、２３６１～２３８０、２３８８～２４０７、２３９７～２４１６、２４４８～２４６７、２４５３～２４７２、２４５５～２４７４、２４５７～２４７２、２４５７～２４７６、２４５９～２４７４、２４５９～２４７８、２４６１～２４７６、２４６１～２４８０、２５３２～２５５１、２５５０～２５６９、２５５１～２５６６、２５５１～２５７０、２５５２～２５６８、２５５２～２５７０、２５５２～２５７１、２５５３～２５６８、２５５３～２５７０、２５５３～２５７１、２５５３～２５７２、２５５４～２５７１、２５５４～２５７２、２５５４～２５７３、２５５５～２５７０、２５５５～２５７２、２５５５～２５７４、２５５６～２５７３、２５５６～２５７４、２５５６～２５７５、２５５７～２５７３、２５５７～２５７４、２５５７～２５７５、２５５７～２５７６、２５５８～２５７５、２５５８～２５７６、２５５８～２５７７、２５５９～２５７６、２５５９～２５７７、２５５９～２５７８、２５６０～２５７７、２５６０～２５７８、２５６０～２５７９、２５６１～２５７６、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６１～２５８０、２５６２～２５７７、２５６２～２５７９、２５６２～２５８１、２５６３～２５７８、２５６３～２５８０、２５６３～２５８２、２５６４～２５８１、２５６４～２５８３、２５６５～２５８４、２５６６～２５８３、２５６６～２５８５、２５６７～２５８２、２５６７～２５８４、２５６７～２５８６、２５６８～２５８３、２５６８～２５８５、２５６８～２５８７、２５６９～２５８６、２５６９～２５８８、２５７０～２５８５、２５７０～２５８７、２５７０～２５８９、２５７１～２５８６、２５７１～２５８８、２５７１～２５９０、２５７２～２５８９、２５７２～２５９０、２５７２～２５９１、２５７３～２５９０、２５７３～２５９２、２５７４～２
５９０、２５７４～２５９１、２５７４～２５９３、２５７５～２５９０、２５７５～２５９１、２５７５～２５９２、２５７５～２５９４、２５７６～２５９３、２５７６～２５９５、２５７７～２５９４、２５７７～２５９５、２５７７～２５９６、２５７８～２５９４、２５７８～２５９６、２５７８～２５９７、２５７９～２５９８、２５８０～２５９６、２５８０～２５９７、２５８０～２５９８、２５８０～２５９９、２５８１～２５９７、２５８１～２５９８、２５８１～２５９９、２５８１～２６００、２５８２～２５９８、２５８２～２５９９、２５８２～２６００、２５８２～２６０１、２５８３～２５９９、２５８３～２６００、２５８３～２６０１、２５８３～２６０２、２５８４～２６００、２５８４～２６０１、２５８４～２６０２、２５８４～２６０３、２５８５～２６０１、２５８５～２６０３、２５８５～２６０４、２５８６～２６０１、２５８６～２６０２、２５８６～２６０４、２５８６～２６０５、２５８７～２６０２、２５８７～２６０３、２５８７～２６０５、２５８７～２６０６、２５８８～２６０３、２５８８～２６０４、２５８８～２６０５、２５８８～２６０６、２５８８～２６０７、２５８９～２６０４、２５８９～２６０５、２５８９～２６０６、２５８９～２６０７、２５８９～２６０８、２５９０～２６０５、２５９０～２６０６、２５９０～２６０７、２５９０～２６０８、２５９０～２６０９、２５９０～２６０９、２５９１～２６０７、２５９１～２６０８、２５９１～２６０９、２５９１～２６１０、２５９２～２６０７、２５９２～２６０８、２５９２～２６０９、２５９２～２６１０、２５９２～２６１１、２５９３～２６０８、２５９３～２６０９、２５９３～２６１０、２５９３～２６１２、２５９４～２６０９、２５９４～２６１０、２５９４～２６１１、２５９４～２６１２、２５９４～２６１３、２５９５～２６１０、２５９５～２６１１、２５９５～２６１２、２５９５～２６１３、２５９５～２６１４、２５９６～２６１１、２５９６～２６１２、２５９６～２６１３、２５９６～２６１４、２５９６～２６１５、２５９７～２６１２、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７～２６１４、２５９７～２６１５、２５９７～２６１６、２５９８～２６１３、２５９８～２６１４、２５９８～２６１５、２５９８～２６１６、２５９８～２６１７、２５９９～２６１４、２５９９～２６１５、２５９９～２６１６、２５９９～２６１７、２５９９～２６１８、２６００～２６１５、２６００～２６１６、２６００～２６１７、２６００～２６１８、２６００～２６１９、２６０１～２６１６、２６０１～２６１７、２６０１～２６１８、２６０１～２６１９、２６０１～２６２０、２６０２～２６１７、２６０２～２６１８、２６０２～２６１９、２６０２～２６２０、２６０２～２６２１、２６０３～２６１８、２６０３～２６１９、２６０３～２６２０、２６０３～２６２１、２６０３～２６２２、２６０４～２６１９、２６０４～２６２０、２６０４～２６２１、２６０４～２６２２、２６０４～２６２３、２６０５～２６２０、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２３、２６０５～２６２４、２６０６～２６２１、２６０６～２６２２、２６０６～２６２３、２６０６～２６２４、２６０６～２６２５、２６０７～２６２２、２６０７～２６２３、２６０７～２６２４、２６０７～２６２５、２６０７～２６２６、２６０８～２６２３、２６０８～２６２４、２６０８～２６２５、２６０８～２６２６、２６０８～２６２７、２６０９～２６２４、２６０９～２６２５、２６０９～２６２６、２６０９～２６２７、２６０９～２６２８、２６１０～２６２５、２６１０～２６２６、２６１０～２６２７、２６１０～２６２８、２６１０～２６２９、２６１１～２６２６、２６１１～２６２７、２６１１～２６２８、２６１１～２６２９、２６１１～２６３０、２６１２～２６２７、２６１２～２６２８、２６１２～２６２９、２６１２～２６３０、２６１２～２６３１、２６１３～２６２８、２６１３～２６２９、２６１３～２６３０、２６１３～２６３１、２６１４～２６２９、２６１４～２６３０、２６１４～２６３１、２６１５～２６３０、２６１５～２６３１、及び２６１６～２６３１。
特定の実施形態では、配列番号２の以下のヌクレオチド領域が、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的となった時に、少なくとも５０％の阻害を示す：１６０８～１６２７、１６８５～１７０４、１６８６～１７０５、１７５１～１７７
０、１７６９～１７８４、１８７１～１８９０、１８７２～１８９１、１８７３～１８９２、１８７５～１８９０、１８７５～１８９４、１８７７～１８９２、１８７７～１８９６、１８７８～１８９７、１８７９～１８９４、１８７９～１８９８、２２８８～２３０７、２８０８～２８２７、２８４６～２８６５、２８５２～２８７１、２９４６～２９６５、３７７３～３７９２、３８１９～３８３８、３８２５～３８４４、３８３１～３８５０、３８３４～３８５３、３８３７～３８５６、３８４３～３８６２、４１５１～４１６６、４１５１～４１７０、４１５３～４１７２、４１５９～４１７８、４１８４～４２０３、４２１１～４２３０、４６０９～４６２８、４６１２～４６３１、４６１５～４６３４、４６２１～４６４０、４６４２～４６６１、４６４８～４６６７、４６８６～４７０５、４６８９～４７０８、４６９２～４７１１、４６９８～４７１７、４７１４～４７３３、５２７０～５２８９、５２９５～５３１４、５２９６～５３１５、５８３０～５８４９、５８９０～５９０９、５９０４～５９２３、６４０６～６４２５、６６６２～６６８１、６６７４～６６９３、６９５４～６９７３、６９６０～６９７９、６９７７～６９９６、６９７９～６９９８、６９８１～７０００、６９８３～６９９８、６９８３～７００２、６９８４～７００３、６９８５～７０００、６９８５～７００４、６９９０～７００９、７１２２～７１４１、７１２５～７１４４、７１５１～７１７０、７３５３～７３７２、７３６２～７３８１、７６８３～７７０２、７６８８～７７０７、７６９０～７７０９、７６９２～７７０７、７６９２～７７１１、７６９４～７７０９、７６９４～７７１３、７６９６～７７１１、７６９６～７７１５、７７６７～７７８６、７７８５～７８０４、７７８６～７８０１、７７８７～７８０３、７７８７～７８０５、７７８７～７８０６、７７８８～７８０３、７７８８～７８０５、７７８８～７８０６、７７８８～７８０７、７７８９～７８０６、７７８９～７８０７、７７８９～７８０８、７７９０～７８０５、７７９０～７８０７、７７９０～７８０９、７７９１～７８０８、７７９１～７８０９、７７９１～７８１０、７７９２～７８０８、７７９２～７８０９、７７９２～７８１０、７７９２～７８１１、７７９３～７８１０、７７９３～７８１１、７７９３～７８１２、７７９４～７８１１、７７９４～７８１２、７７９４～７８１３、７７９５～７８１２、７７９５～７８１３、７７９５～７８１４、７７９６～７８１１、７７９６～７８１３、７７９６～７８１４、７７９６～７８１５、７７９７～７８１２、７７９７～７８１４、７７９７～７８１６、７７９８～７８１３、７７９８～７８１５、７７９８～７８１７、７７９９～７８１６、７７９９～７８１８、７８００～７８１９、７８０１～７８１８、７８０１～７８２０、７８０２～７８１７、７８０２～７８１９、７８０２～７８２１、７８０３～７８１８、７８０３～７８２０、７８０３～７８２２、７８０４～７８２１、７８０４～７８２３、７８０５～７８２０、７８０５～７８２２、７８０５～７８２４、７８０６～７８２１、７８０６～７８２３、７８０６～７８２５、７８０７～７８２４、７８０７～７８２５、７８０７～７８２６、７８０８～７８２５、７８０８～７８２７、７８０９～７８２５、７８０９～７８２６、７８０９～７８２８、７８１０～７８２５、７８１０～７８２６、７８１０～７８２７、７８１０～７８２９、７８１１～７８２８、７８１１～７８３０、７８１２～７８２９、７８１２～７８３０、７８１２～７８３１、７８１３～７８２９、７８１３～７８３１、７８１３～７８３２、７８１４～７８３３、７８１５～７８３１、７８１５～７８３２、７８１５～７８３３、７８１５～７８３４、７８１６～７８３２、７８１６～７８３３、７８１６～７８３４、７８１６～７８３５、７８１７～７８３３、７８１７～７８３４、７８１７～７８３５、７８１７～７８３６、７８１８～７８３４、７８１８～７８３５、７８１８～７８３６、７８１８～７８３７、７８１９～７８３５、７８１９～７８３６、７８１９～７８３７、７８１９～７８３８、７８２０～７８３６、７８２０～７８３８、７８２０～７８３９、７８２１～７８３６、７８２１～７８３７、７８２１～７８３９、７８２１～７８４０、７８２２～７８３７、７８２２～７８３８、７８２２～７８４０、７８２２～７８４１、７８２３～７８３８、７８２３～７８３９、７８２３～７８３９、７８２３～７８４０、７８２３～７８４１、７８２３～７８４２、７８２４～７８３９、７８２４～７８４０、７８２４～７８４０、７８２４～７８４１、７８２４～７８４２、７８２４～７８４３、７８２５～７８４
０、７８２５～７８４１、７８２５～７８４２、７８２５～７８４３、７８２５～７８４４、７８２６～７８４２、７８２６～７８４３、７８２６～７８４４、７８２６～７８４５、７８２７～７８４２、７８２７～７８４３、７８２７～７８４４、７８２７～７８４５、７８２７～７８４６、７８２８～７８４３、７８２８～７８４４、７８２８～７８４５、７８２８～７８４７、７８２９～７８４４、７８２９～７８４５、７８２９～７８４６、７８２９～７８４７、７８２９～７８４８、７８３０～７８４５、７８３０～７８４６、７８３０～７８４７、７８３０～７８４８、７８３０～７８４９、７８３１～７８４６、７８３１～７８４７、７８３１～７８４８、７８３１～７８４９、７８３１～７８５０、７８３２～７８４７、７８３２～７８４８、７８３２～７８４９、７８３２～７８５０、７８３２～７８５１、７８３３～７８４８、７８３３～７８４９、７８３３～７８５０、７８３３～７８５１、７８３３～７８５２、７８３４～７８４９、７８３４～７８５０、７８３４～７８５１、７８３４～７８５２、７８３４～７８５３、７８３５～７８５０、７８３５～７８５１、７８３５～７８５２、７８３５～７８５３、７８３５～７８５４、７８３６～７８５１、７８３６～７８５２、７８３６～７８５３、７８３６～７８５４、７８３６～７８５５、７８３７～７８５２、７８３７～７８５３、７８３７～７８５４、７８３７～７８５５、７８３７～７８５６、７８３８～７８５３、７８３８～７８５４、７８３８～７８５５、７８３８～７８５６、７８３８～７８５７、７８３９～７８５４、７８３９～７８５５、７８３９～７８５６、７８３９～７８５７、７８３９～７８５８、７８４０～７８５５、７８４０～７８５６、７８４０～７８５７、７８４０～７８５８、７８４０～７８５９、７８４１～７８５６、７８４１～７８５７、７８４１～７８５８、７８４１～７８５９、７８４１～７８６０、７８４２～７８５７、７８４２～７８５８、７８４２～７８５９、７８４２～７８６０、７８４２～７８６１、７８４３～７８５８、７８４３～７８５９、７８４３～７８６０、７８４３～７８６１、７８４３～７８６２、７８４４～７８５９、７８４４～７８６０、７８４４～７８６１、７８４４～７８６２、７８４５～７８６０、７８４５～７８６１、７８４５～７８６２、７８４６～７８６１、及び７８４６～７８６２。
特定の実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域が、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的となった時に、少なくとも６０％の阻害を示す：４８～６３、１５０～１６９、１５２～１７１、１５４～１６９、１５４～１７３、１５６～１７１、１５６～１７５、１５８～１７３、１５８～１７７、６００～６１９、１１３５～１１５４、１１４１～１１６０、１１４７～１１６６、１１５３～１１７２、１１７１～１１８６、１１７３～１１８８、１１７５～１１９０、１７４９～１７６８、１７６３～１７８２、１７６３～１７８２、１９１２～１９３１、２１８９～２２０８、２１９１～２２１０、２１９３～２２１２、２１９５～２２１０、２１９５～２２１４、２１９７～２２１２、２１９７～２２１６、２２２３～２２３８、２２２５～２２４０、２２２７～２２４２、２２３８～２２５７、２４４８～２４６７、２４５３～２４７２、２４５５～２４７４、２４５７～２４７２、２４５７～２４７６、２４５９～２４７４、２４５９～２４７８、２４６１～２４７６、２４６１～２４８０、２５５０～２５６９、２５５１～２５６６、２５５２～２５７１、２５５３～２５６８、２５５３～２５７０、２５５３～２５７１、２５５３～２５７２、２５５４～２５７１、２５５４～２５７２、２５５４～２５７３、２５５５～２５７２、２５５５～２５７４、２５５６～２５７３、２５５６～２５７４、２５５６～２５７５、２５５７～２５７４、２５５７～２５７５、２５５７～２５７６、２５５８～２５７５、２５５８～２５７６、２５５８～２５７７、２５５９～２５７６、２５５９～２５７７、２５５９～２５７８、２５６０～２５７７、２５６０～２５７８、２５６０～２５７９、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６１～２５８０、２５６２～２５７７、２５６２～２５７９、２５６２～２５８１、２５６３～２５７８、２５６３～２５８０、２５６３～２５８２、２５６４～２５８１、２５６４～２５８３、２５６５～２５８４、２５６６～２５８３、２５６６～２５８５、２５６７～２５８２、２５６７～２５８４、２５６７～２５８６、２５６８～２５８３、
２５６８～２５８５、２５６８～２５８７、２５６９～２５８６、２５６９～２５８８、２５７０～２５８７、２５７０～２５８９、２５７１～２５８８、２５７２～２５９０、２５７２～２５９１、２５７３～２５９０、２５７３～２５９２、２５７４～２５９１、２５７４～２５９３、２５７５～２５９０、２５７５～２５９２、２５７５～２５９４、２５７６～２５９３、２５７６～２５９５、２５７７～２５９４、２５７７～２５９５、２５７７～２５９６、２５７８～２５９４、２５７８～２５９７、２５７９～２５９８、２５８０～２５９６、２５８０～２５９７、２５８０～２５９８、２５８０～２５９９、２５８１～２５９７、２５８１～２５９８、２５８１～２５９９、２５８１～２６００、２５８２～２５９８、２５８２～２５９９、２５８２～２６００、２５８２～２６０１、２５８３～２５９９、２５８３～２６００、２５８３～２６０１、２５８３～２６０２、２５８４～２６００、２５８４～２６０２、２５８４～２６０３、２５８５～２６０１、２５８５～２６０３、２５８５～２６０４、２５８６～２６０２、２５８６～２６０４、２５８６～２６０５、２５８７～２６０３、２５８７～２６０５、２５８７～２６０６、２５８８～２６０３、２５８８～２６０４、２５８８～２６０６、２５８８～２６０７、２５８９～２６０５、２５８９～２６０６、２５８９～２６０７、２５８９～２６０８、２５９０～２６０５、２５９０～２６０６、２５９０～２６０７、２５９０～２６０８、２５９０～２６０９、２５９１～２６０７、２５９１～２６０９、２５９１～２６１０、２５９２～２６０８、２５９２～２６０９、２５９２～２６１１、２５９３～２６０８、２５９３～２６０９、２５９３～２６１２、２５９４～２６０９、２５９４～２６１０、２５９４～２６１１、２５９４～２６１２、２５９４～２６１３、２５９５～２６１０、２５９５～２６１１、２５９５～２６１２、２５９５～２６１３、２５９５～２６１４、２５９６～２６１１、２５９６～２６１２、２５９６～２６１３、２５９６～２６１４、２５９６～２６１５、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７～２６１４、２５９７～２６１５、２５９７～２６１６、２５９８～２６１３、２５９８～２６１４、２５９８～２６１５、２５９８～２６１６、２５９８～２６１７、２５９９～２６１４、２５９９～２６１５、２５９９～２６１６、２５９９～２６１７、２５９９～２６１８、２６００～２６１５、２６００～２６１６、２６００～２６１７、２６００～２６１８、２６００～２６１９、２６０１～２６１６、２６０１～２６１７、２６０１～２６１８、２６０１～２６１９、２６０１～２６２０、２６０２～２６１７、２６０２～２６１８、２６０２～２６１９、２６０２～２６２０、２６０２～２６２１、２６０３～２６１８、２６０３～２６１９、２６０３～２６２０、２６０３～２６２１、２６０３～２６２２、２６０４～２６１９、２６０４～２６２０、２６０４～２６２１、２６０４～２６２２、２６０４～２６２３、２６０５～２６２０、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２３、２６０５～２６２４、２６０６～２６２１、２６０６～２６２２、２６０６～２６２３、２６０６～２６２４、２６０６～２６２５、２６０７～２６２２、２６０７～２６２３、２６０７～２６２４、２６０７～２６２５、２６０７～２６２６、２６０８～２６２３、２６０８～２６２４、２６０８～２６２５、２６０８～２６２５、２６０８～２６２６、２６０８～２６２７、２６０９～２６２４、２６０９～２６２５、２６０９～２６２６、２６０９～２６２７、２６０９～２６２８、２６１０～２６２５、２６１０～２６２６、２６１０～２６２７、２６１０～２６２８、２６１０～２６２９、２６１１～２６２６、２６１１～２６２６、２６１１～２６２７、２６１１～２６２８、２６１１～２６２９、２６１１～２６３０、２６１２～２６２７、２６１２～２６２８、２６１２～２６２９、２６１２～２６３０、２６１２～２６３１、２６１３～２６２８、２６１３～２６２９、２６１３～２６３０、２６１３～２６３１、２６１４～２６２９、２６１４～２６３０、２６１４～２６３１、２６１５～２６３０、２６１５～２６３０、２６１５～２６３１、２６１５～２６３１、及び２６１６～２６３１。
特定の実施形態では、配列番号２の以下のヌクレオチド領域が、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的となった時に、少なくとも６０％の阻害を示す：１６８５～１７０４、１６８６～１７０５、１７６９～１７８４、１８７１～１８９
０、１８７３～１８９２、１８７５～１８９０、１８７５～１８９４、１８７７～１８９２、１８７７～１８９６、１８７９～１８９４、１８７９～１８９８、２８０８～２８２７、３８１９～３８３８、３８２５～３８４４、３８３１～３８５０、３８３７～３８５６、４１５１～４１６６、５８９０～５９０９、５９０４～５９２３、５９０４～５９２３、６４０６～６４２５、６９７７～６９９６、６９７９～６９９８、６９８１～７０００、６９８３～６９９８、６９８３～７００２、６９８５～７０００、６９８５～７００４、７１２２～７１４１、７６８３～７７０２、７６８８～７７０７、７６９０～７７０９、７６９２～７７０７、７６９２～７７１１、７６９４～７７０９、７６９６～７７１１、７６９６～７７１５、７７８６～７８０１、７７８７～７８０６、７７８８～７８０３、７７８８～７８０５、７７８８～７８０６、７７８８～７８０７、７７８９～７８０６、７７８９～７８０７、７７８９～７８０８、７７９０～７８０７、７７９０～７８０９、７７９１～７８０８、７７９１～７８０９、７７９１～７８１０、７７９２～７８０９、７７９２～７８１０、７７９２～７８１１、７７９３～７８１０、７７９３～７８１１、７７９３～７８１２、７７９４～７８１１、７７９４～７８１２、７７９４～７８１３、７７９５～７８１２、７７９５～７８１３、７７９５～７８１４、７７９６～７８１３、７７９６～７８１４、７７９６～７８１５、７７９７～７８１２、７７９７～７８１４、７７９７～７８１６、７７９８～７８１３、７７９８～７８１５、７７９８～７８１７、７７９９～７８１６、７７９９～７８１８、７８００～７８１９、７８０１～７８１８、７８０１～７８２０、７８０２～７８１７、７８０２～７８１９、７８０２～７８２１、７８０３～７８１８、７８０３～７８２０、７８０３～７８２２、７８０４～７８２１、７８０４～７８２３、７８０５～７８２２、７８０５～７８２４、７８０６～７８２３、７８０６～７８２５、７８０７～７８２４、７８０７～７８２５、７８０７～７８２６、７８０８～７８２５、７８０８～７８２７、７８０９～７８２６、７８０９～７８２８、７８１０～７８２５、７８１０～７８２７、７８１０～７８２９、７８１１～７８２８、７８１１～７８３０、７８１２～７８２９、７８１２～７８３０、７８１２～７８３１、７８１３～７８２９、７８１３～７８３２、７８１４～７８３３、７８１５～７８３１、７８１５～７８３２、７８１５～７８３３、７８１５～７８３４、７８１６～７８３２、７８１６～７８３３、７８１６～７８３４、７８１６～７８３５、７８１７～７８３３、７８１７～７８３４、７８１７～７８３５、７８１７～７８３６、７８１８～７８３４、７８１８～７８３５、７８１８～７８３６、７８１８～７８３７、７８１９～７８３５、７８１９～７８３７、７８１９～７８３８、７８２０～７８３６、７８２０～７８３８、７８２０～７８３９、７８２１～７８３７、７８２１～７８３９、７８２１～７８４０、７８２２～７８３８、７８２２～７８４０、７８２２～７８４１、７８２３～７８３８、７８２３～７８３９、７８２３～７８４１、７８２３～７８４２、７８２４～７８４０、７８２４～７８４１、７８２４～７８４２、７８２４～７８４３、７８２５～７８４０、７８２５～７８４１、７８２５～７８４２、７８２５～７８４３、７８２５～７８４４、７８２６～７８４２、７８２６～７８４４、７８２６～７８４５、７８２７～７８４３、７８２７～７８４４、７８２７～７８４６、７８２８～７８４３、７８２８～７８４４、７８２８～７８４７、７８２９～７８４４、７８２９～７８４５、７８２９～７８４６、７８２９～７８４７、７８２９～７８４８、７８３０～７８４５、７８３０～７８４６、７８３０～７８４７、７８３０～７８４８、７８３０～７８４９、７８３１～７８４６、７８３１～７８４７、７８３１～７８４８、７８３１～７８４９、７８３１～７８５０、７８３２～７８４７、７８３２～７８４８、７８３２～７８４９、７８３２～７８５０、７８３２～７８５１、７８３３～７８４８、７８３３～７８４９、７８３３～７８５０、７８３３～７８５１、７８３３～７８５２、７８３４～７８４９、７８３４～７８５０、７８３４～７８５１、７８３４～７８５２、７８３４～７８５３、７８３５～７８５０、７８３５～７８５１、７８３５～７８５２、７８３５～７８５３、７８３５～７８５４、７８３６～７８５１、７８３６～７８５２、７８３６～７８５３、７８３６～７８５４、７８３６～７８５５、７８３７～７８５２、７８３７～７８５３、７８３７～７８５４、７８３７～７８５５、７８３７～７８５６、７８３８～７８５３、７８３８～７８５
４、７８３８～７８５５、７８３８～７８５６、７８３８～７８５７、７８３９～７８５４、７８３９～７８５５、７８３９～７８５６、７８３９～７８５７、７８３９～７８５８、７８４０～７８５５、７８４０～７８５６、７８４０～７８５７、７８４０～７８５８、７８４０～７８５９、７８４１～７８５６、７８４１～７８５７、７８４１～７８５８、７８４１～７８５９、７８４１～７８６０、７８４２～７８５７、７８４２～７８５８、７８４２～７８５９、７８４２～７８６０、７８４２～７８６１、７８４３～７８５８、７８４３～７８５９、７８４３～７８６０、７８４３～７８６１、７８４３～７８６２、７８４４～７８５９、７８４４～７８６０、７８４４～７８６１、７８４４～７８６２、７８４５～７８６０、７８４５～７８６１、７８４５～７８６２、７８４６～７８６１、７８４６～７８６２、及び７８４７～７８６２。
特定の実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域が、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的となった時に、少なくとも７０％の阻害を示す：４８～６３、１５０～１６９、１５２～１７１、１５４～１６９、１５４～１７３、１５６～１７１、１５６～１７５、１５８～１７３、１５８～１７７、１１３５～１１５４、１１４１～１１６０、１１４７～１１６６、１１７１～１１８６、１１７３～１１８８、１１７５～１１９０、１７４９～１７６８、１７６３～１７８２、１９１２～１９３１、２１９３～２２１２、２１９５～２２１０、２１９５～２２１４、２１９７～２２１２、２１９７～２２１６、２２２３～２２３８、２２２５～２２４０、２２２７～２２４２、２４５３～２４７２、２４５５～２４７４、２４５７～２４７２、２４５７～２４７６、２４５９～２４７４、２４６１～２４７６、２４６１～２４８０、２５５０～２５６９、２５５１～２５６６、２５５２～２５７１、２５５３～２５７０、２５５３～２５７１、２５５３～２５７２、２５５４～２５７１、２５５４～２５７２、２５５４～２５７３、２５５４～２５７３、２５５５～２５７２、２５５５～２５７４、２５５５～２５７４、２５５６～２５７３、２５５６～２５７４、２５５６～２５７５、２５５７～２５７４、２５５７～２５７６、２５５８～２５７５、２５５８～２５７６、２５５８～２５７７、２５５９～２５７６、２５５９～２５７７、２５５９～２５７８、２５６０～２５７７、２５６０～２５７８、２５６０～２５７９、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６１～２５８０、２５６２～２５７７、２５６２～２５７９、２５６２～２５８１、２５６３～２５７８、２５６３～２５８０、２５６３～２５８２、２５６４～２５８１、２５６４～２５８３、２５６５～２５８４、２５６６～２５８３、２５６６～２５８５、２５６７～２５８２、２５６７～２５８４、２５６７～２５８６、２５６８～２５８５、２５６８～２５８７、２５６９～２５８６、２５６９～２５８８、２５７０～２５８７、２５７０～２５８９、２５７１～２５８８、２５７１～２５９０、２５７２～２５８９、２５７２～２５９１、２５７３～２５９０、２５７３～２５９２、２５７４～２５９１、２５７４～２５９３、２５７５～２５９２、２５７５～２５９４、２５７６～２５９３、２５７６～２５９５、２５７７～２５９４、２５７７～２５９６、２５７８～２５９７、２５７９～２５９８、２５８０～２５９６、２５８０～２５９８、２５８０～２５９９、２５８１～２５９７、２５８１～２６００、２５８２～２５９８、２５８２～２６００、２５８２～２６０１、２５８３～２５９９、２５８３～２６０１、２５８３～２６０２、２５８４～２６００、２５８４～２６０２、２５８４～２６０３、２５８５～２６０１、２５８５～２６０３、２５８５～２６０４、２５８６～２６０５、２５８７～２６０６、２５８８～２６０４、２５８８～２６０６、２５８８～２６０７、２５８９～２６０５、２５８９～２６０６、２５８９～２６０７、２５８９～２６０８、２５９０～２６０５、２５９０～２６０６、２５９０～２６０７、２５９０～２６０９、２５９１～２６０７、２５９１～２６１０、２５９２～２６１１、２５９３～２６０８、２５９３～２６１２、２５９４～２６０９、２５９４～２６１０、２５９４～２６１２、２５９４～２６１３、２５９５～２６１０、２５９５～２６１１、２５９５～２６１２、２５９５～２６１３、２５９５～２６１４、２５９６～２６１１、２５９６～２６１４、２５９６～２６１５、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７～２６１４、２５９７～２６１
５、２５９７～２６１６、２５９８～２６１３、２５９８～２６１４、２５９８～２６１５、２５９８～２６１６、２５９８～２６１７、２５９９～２６１４、２５９９～２６１５、２５９９～２６１６、２５９９～２６１７、２５９９～２６１８、２６００～２６１５、２６００～２６１６、２６００～２６１７、２６００～２６１８、２６００～２６１９、２６０１～２６１６、２６０１～２６１７、２６０１～２６１８、２６０１～２６１９、２６０１～２６２０、２６０２～２６１７、２６０２～２６１８、２６０２～２６１９、２６０２～２６２０、２６０２～２６２１、２６０３～２６１９、２６０３～２６２０、２６０３～２６２１、２６０３～２６２２、２６０４～２６１９、２６０４～２６２０、２６０４～２６２１、２６０４～２６２２、２６０４～２６２３、２６０５～２６２０、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２３、２６０５～２６２４、２６０６～２６２１、２６０６～２６２２、２６０６～２６２３、２６０６～２６２４、２６０６～２６２５、２６０７～２６２２、２６０７～２６２３、２６０７～２６２４、２６０７～２６２５、２６０７～２６２６、２６０８～２６２３、２６０８～２６２４、２６０８～２６２５、２６０８～２６２６、２６０８～２６２７、２６０９～２６２４、２６０９～２６２５、２６０９～２６２６、２６０９～２６２７、２６０９～２６２８、２６１０～２６２５、２６１０～２６２６、２６１０～２６２７、２６１０～２６２８、２６１０～２６２９、２６１１～２６２６、２６１１～２６２７、２６１１～２６２９、２６１１～２６３０、２６１２～２６２７、２６１２～２６２８、２６１２～２６２９、２６１２～２６３０、２６１２～２６３１、２６１３～２６２８、２６１３～２６２９、２６１３～２６３０、２６１３～２６３１、２６１４～２６２９、２６１４～２６３０、２６１４～２６３１、２６１５～２６３０、２６１５～２６３０、２６１５～２６３１、及び２６１６～２６３１。
特定の実施形態では、配列番号２の以下のヌクレオチド領域が、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的となった時に、少なくとも７０％の阻害を示す：１６８５～１７０４、１６８６～１７０５、１７６９～１７８４、１８７１～１８９０、１８７３～１８９２、１８７５～１８９０、１８７５～１８９４、１８７７～１８９２、１８７７～１８９６、１８７９～１８９４、１８７９～１８９８、３８１９～３８３８、３８２５～３８４４、３８３１～３８５０、４１５１～４１６６、５８９０～５９０９、５９０４～５９２３、５９０４～５９２３、６４０６～６４２５、６９８３～６９９８、６９８３～７００２、６９８５～７０００、６９８５～７００４、７６８８～７７０７、７６９０～７７０９、７６９２～７７０７、７６９２～７７１１、７６９４～７７０９、７６９６～７７１１、７６９６～７７１５、７７８６～７８０１、７７８７～７８０６、７７８８～７８０５、７７８８～７８０６、７７８８～７８０７、７７８９～７８０６、７７８９～７８０７、７７８９～７８０８、７７９０～７８０７、７７９０～７８０９、７７９１～７８０８、７７９１～７８０９、７７９１～７８１０、７７９２～７８０９、７７９２～７８１１、７７９３～７８１０、７７９３～７８１１、７７９３～７８１２、７７９４～７８１１、７７９４～７８１２、７７９４～７８１３、７７９５～７８１２、７７９５～７８１３、７７９５～７８１４、７７９６～７８１３、７７９６～７８１４、７７９６～７８１５、７７９７～７８１２、７７９７～７８１４、７７９７～７８１６、７７９８～７８１３、７７９８～７８１５、７７９８～７８１７、７７９９～７８１６、７７９９～７８１８、７８００～７８１９、７８０１～７８１８、７８０１～７８２０、７８０２～７８１７、７８０２～７８１９、７８０２～７８２１、７８０３～７８２０、７８０３～７８２２、７８０４～７８２１、７８０４～７８２３、７８０５～７８２２、７８０５～７８２４、７８０６～７８２３、７８０６～７８２５、７８０７～７８２４、７８０７～７８２６、７８０８～７８２５、７８０８～７８２７、７８０９～７８２６、７８０９～７８２８、７８１０～７８２７、７８１１～７８２８、７８１１～７８３０、７８１２～７８２９、７８１２～７８３１、７８１３～７８３２、７８１４～７８３３、７８１５～７８３１、７８１５～７８３３、７８１５～７８３４、７８１６～７８３２、７８１６～７８３５、７８１７～７８３３、７８１７～７８３５、７８１７～７８３
６、７８１８～７８３４、７８１８～７８３６、７８１８～７８３７、７８１９～７８３５、７８１９～７８３７、７８１９～７８３８、７８２０～７８３６、７８２０～７８３８、７８２０～７８３９、７８２１～７８４０、７８２２～７８４１、７８２３～７８３９、７８２３～７８４１、７８２３～７８４２、７８２４～７８４０、７８２４～７８４１、７８２４～７８４２、７８２４～７８４３、７８２５～７８４０、７８２５～７８４１、７８２５～７８４２、７８２５～７８４４、７８２６～７８４２、７８２６～７８４５、７８２７～７８４６、７８２８～７８４３、７８２８～７８４７、７８２９～７８４４、７８２９～７８４５、７８２９～７８４７、７８２９～７８４８、７８３０～７８４５、７８３０～７８４６、７８３０～７８４７、７８３０～７８４８、７８３０～７８４９、７８３１～７８４６、７８３１～７８４９、７８３１～７８５０、７８３２～７８４７、７８３２～７８４８、７８３２～７８４９、７８３２～７８５０、７８３２～７８５１、７８３３～７８４８、７８３３～７８４９、７８３３～７８５０、７８３３～７８５１、７８３３～７８５２、７８３４～７８４９、７８３４～７８５０、７８３４～７８５１、７８３４～７８５２、７８３４～７８５３、７８３５～７８５０、７８３５～７８５１、７８３５～７８５２、７８３５～７８５３、７８３５～７８５４、７８３６～７８５１、７８３６～７８５２、７８３６～７８５３、７８３６～７８５４、７８３６～７８５５、７８３７～７８５２、７８３７～７８５３、７８３７～７８５４、７８３７～７８５５、７８３７～７８５６、７８３８～７８５４、７８３８～７８５５、７８３８～７８５６、７８３８～７８５７、７８３９～７８５４、７８３９～７８５５、７８３９～７８５６、７８３９～７８５７、７８３９～７８５８、７８４０～７８５５、７８４０～７８５６、７８４０～７８５７、７８４０～７８５８、７８４０～７８５９、７８４１～７８５６、７８４１～７８５７、７８４１～７８５８、７８４１～７８５９、７８４１～７８６０、７８４２～７８５７、７８４２～７８５８、７８４２～７８５９、７８４２～７８６０、７８４２～７８６１、７８４３～７８５８、７８４３～７８５９、７８４３～７８６０、７８４３～７８６１、７８４３～７８６２、７８４４～７８５９、７８４４～７８６０、７８４４～７８６１、７８４４～７８６２、７８４５～７８６０、７８４５～７８６１、７８４５～７８６２、７８４６～７８６１、７８４６～７８６２、及び７８４７～７８６２。
特定の実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域が、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的となった時に、少なくとも８０％の阻害を示す：１５２～１７１、１５４～１６９、１５６～１７１、１５８～１７３、１１３５～１１５４、１１７１～１１８６、１１７３～１１８８、１１７５～１１９０、１７６３～１７８２、１９１２～１９３１、２１９７～２２１２、２２２３～２２３８、２２２５～２２４０、２２２７～２２４２、２４５７～２４７２、２４５９～２４７４、２４６１～２４７６、２５５１～２５６６、２５５３～２５７０、２５５３～２５７１、２５５３～２５７２、２５５４～２５７３、２５５５～２５７２、２５５５～２５７４、２５５６～２５７３、２５５６～２５７４、２５５６～２５７５、２５５７～２５７４、２５５７～２５７６、２５５８～２５７５、２５５８～２５７６、２５５９～２５７７、２５５９～２５７８、２５６０～２５７７、２５６０～２５７８、２５６０～２５７９、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６１～２５８０、２５６２～２５７７、２５６２～２５７９、２５６２～２５８１、２５６３～２５８０、２５６３～２５８２、２５６４～２５８１、２５６４～２５８３、２５６５～２５８４、２５６６～２５８３、２５６７～２５８４、２５６７～２５８６、２５６８～２５８５、２５６８～２５８７、２５６９～２５８６、２５６９～２５８８、２５７０～２５８７、２５７１～２５８８、２５７１～２５９０、２５７２～２５８９、２５７２～２５９１、２５７３～２５９０、２５７３～２５９２、２５７４～２５９１、２５７４～２５９３、２５７５～２５９２、２５７６～２５９３、２５７６～２５９５、２５７７～２５９４、２５７７～２５９６、２５７８～２５９７、２５８０～２５９８、２５８０～２５９９、２５８１～２５９７、２５８１～２６００、２５８２～２６０１、２５８３～２６０２、２５８４～２６０３、２５８５～２
６０４、２５８６～２６０５、２５８７～２６０６、２５８８～２６０７、２５８９～２６０８、２５９０～２６０６、２５９０～２６０７、２５９０～２６０９、２５９１～２６１０、２５９２～２６１１、２５９３～２６０８、２５９３～２６１２、２５９４～２６１３、２５９５～２６１１、２５９５～２６１４、２５９６～２６１５、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７～２６１４、２５９７～２６１５、２５９７～２６１６、２５９８～２６１３、２５９８～２６１３、２５９８～２６１４、２５９８～２６１５、２５９８～２６１６、２５９８～２６１７、２５９９～２６１４、２５９９～２６１７、２５９９～２６１８、２６００～２６１５、２６００～２６１７、２６００～２６１８、２６００～２６１９、２６０１～２６１６、２６０１～２６１７、２６０１～２６１９、２６０１～２６２０、２６０２～２６１８、２６０２～２６２１、２６０３～２６２０、２６０３～２６２１、２６０３～２６２２、２６０４～２６１９、２６０４～２６２０、２６０４～２６２１、２６０４～２６２２、２６０４～２６２３、２６０５～２６２０、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２３、２６０５～２６２４、２６０６～２６２１、２６０６～２６２２、２６０６～２６２３、２６０６～２６２４、２６０６～２６２５、２６０７～２６２２、２６０７～２６２３、２６０７～２６２４、２６０７～２６２５、２６０７～２６２６、２６０８～２６２３、２６０８～２６２４、２６０８～２６２５、２６０８～２６２７、２６０９～２６２４、２６０９～２６２６、２６０９～２６２７、２６０９～２６２８、２６１０～２６２５、２６１０～２６２６、２６１０～２６２８、２６１０～２６２９、２６１１～２６２６、２６１１～２６２７、２６１１～２６２９、２６１１～２６３０、２６１２～２６２７、２６１２～２６２８、２６１２～２６３０、２６１２～２６３１、２６１３～２６２８、２６１３～２６２９、２６１３～２６３１、２６１４～２６２９、２６１４～２６３０、２６１４～２６３１、２６１５～２６３０、及び２６１６～２６３１。
特定の実施形態では、配列番号２の以下のヌクレオチド領域が、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的となった時に、少なくとも８０％の阻害を示す：１６８５～１７０４、１６８６～１７０５、１８７３～１８９２、１８７５～１８９０、１８７７～１８９２、１８７９～１８９４、３８１９～３８３８、４１５１～４１６６、５９０４～５９２３、６４０６～６４２５、６９８５～７０００、７６９２～７７０７、７６９４～７７０９、７６９６～７７１１、７７８６～７８０１、７７８８～７８０５、７７８８～７８０６、７７８８～７８０７、７７８９～７８０８、７７９０～７８０７、７７９０～７８０９、７７９１～７８０８、７７９１～７８０９、７７９１～７８１０、７７９２～７８０９、７７９２～７８１１、７７９３～７８１０、７７９３～７８１１、７７９４～７８１２、７７９４～７８１３、７７９５～７８１２、７７９５～７８１３、７７９５～７８１４、７７９６～７８１３、７７９６～７８１４、７７９６～７８１５、７７９７～７８１２、７７９７～７８１４、７７９７～７８１６、７７９８～７８１５、７７９８～７８１７、７７９９～７８１６、７７９９～７８１８、７８００～７８１９、７８０１～７８１８、７８０２～７８１９、７８０２～７８２１、７８０３～７８２０、７８０３～７８２２、７８０４～７８２１、７８０４～７８２３、７８０５～７８２２、７８０６～７８２３、７８０６～７８２５、７８０７～７８２４、７８０７～７８２６、７８０８～７８２５、７８０８～７８２７、７８０９～７８２６、７８０９～７８２８、７８１０～７８２７、７８１１～７８２８、７８１２～７８２９、７８１２～７８３１、７８１３～７８３２、７８１４～７８３３、７８１５～７８３４、７８１６～７８３２、７８１６～７８３５、７８１７～７８３６、７８１８～７８３７、７８１９～７８３８、７８２０～７８３９、７８２１～７８４０、７８２２～７８４１、７８２３～７８４２、７８２４～７８４３、７８２５～７８４１、７８２５～７８４２、７８２５～７８４４、７８２６～７８４５、７８２７～７８４６、７８２８～７８４３、７８２８～７８４７、７８２９～７８４８、７８３０～７８４６、７８３０～７８４９、７８３１～７８５０、７８３２～７８４７、７８３２～７８４８、７８３２～７８４９、７８３２～７８５０、７８３２～７８５１、７８３３～７８４８、７８３３～７８４９、７８３３～７８５
０、７８３３～７８５１、７８３３～７８５２、７８３４～７８４９、７８３４～７８５２、７８３４～７８５３、７８３５～７８５０、７８３５～７８５２、７８３５～７８５３、７８３５～７８５４、７８３６～７８５１、７８３６～７８５２、７８３６～７８５４、７８３６～７８５５、７８３７～７８５３、７８３７～７８５６、７８３８～７８５５、７８３８～７８５６、７８３８～７８５７、７８３９～７８５４、７８３９～７８５５、７８３９～７８５６、７８３９～７８５７、７８３９～７８５８、７８４０～７８５５、７８４０～７８５６、７８４０～７８５７、７８４０～７８５８、７８４０～７８５９、７８４１～７８５６、７８４１～７８５７、７８４１～７８５８、７８４１～７８５９、７８４１～７８６０、７８４２～７８５７、７８４２～７８５８、７８４２～７８５９、７８４２～７８６０、７８４２～７８６１、７８４３～７８５８、７８４３～７８５９、７８４３～７８６０、７８４３～７８６２、７８４４～７８５９、７８４４～７８６１、７８４４～７８６２、７８４５～７８６０、７８４５～７８６１、７８４６～７８６２、及び７８４７～７８６２。
特定の実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域が、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的となった時に、少なくとも９０％の阻害を示す：１５４～１６９、１５６～１７１、１５８～１７３、１１３５～１１５４、１１７１～１１８６、１１７３～１１８８、１７６３～１７８２、１９１２～１９３１、２２２３～２２３８、２２２７～２２４２、２４５９～２４７４、２４６１～２４７６、２５５４～２５７３、２５５５～２５７４、２５６０～２５７７、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６２～２５８１、２５６３～２５８０、２５６３～２５８２、２５６４～２５８１、２５６６～２５８３、２５６７～２５８４、２５６８～２５８５、２５６８～２５８７、２５６９～２５８６、２５７０～２５８７、２５７６～２５９３、２５７７～２５９４、２５７７～２５９６、２５７８～２５９７、２５８０～２５９９、２５８１～２６００、２５８２～２６０１、２５８３～２６０２、２５８４～２６０３、２５８６～２６０５、２５８７～２６０５、２５８７～２６０６、２５８８～２６０７、２５８９～２６０８、２５９０～２６０７、２５９０～２６０９、２５９２～２６１１、２５９５～２６１４、２５９６～２６１５、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７～２６１５、２５９７～２６１６、２５９８～２６１３、２５９８～２６１３、２５９８～２６１７、２５９９～２６１４、２５９９～２６１８、２６００～２６１５、２６００～２６１９、２６０１～２６１７、２６０１～２６２０、２６０２～２６２１、２６０３～２６２２、２６０４～２６２３、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２４、２６０６～２６２５、２６０７～２６２６、２６０８～２６２３、２６０８～２６２５、２６０９～２６２８、２６１１～２６２７、２６１１～２６３０、２６１２～２６２８、２６１２～２６３１、２６１３～２６２９、２６１４～２６２９、２６１５～２６３０、及び２６１６～２６３１。
特定の実施形態では、配列番号２の以下のヌクレオチド領域が、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的となった時に、少なくとも９０％の阻害を示す：１６８５～１７０４、１６８６～１７０５、１８７５～１８９０、１８７７～１８９２、１８７９～１８９４、３８１９～３８３８、５９０４～５９２３、６４０６～６４２５、７６９４～７７０９、７６９６～７７１１、７７８９～７８０８、７７９０～７８０９、７７９５～７８１２、７７９５～７８１３、７７９６～７８１３、７７９６～７８１４、７７９７～７８１４、７７９７～７８１６、７７９８～７８１５、７７９８～７８１７、７７９９～７８１６、７８０１～７８１８、７８０２～７８１９、７８０３～７８２０、７８０３～７８２２、７８０４～７８２１、７８０５～７８２２、７８１１～７８２８、７８１２～７８２９、７８１２～７８３１、７８１３～７８３２、７８１５～７８３４、７８１８～７８３７、７８１９～７８３８、７８２１～７８４０、７８２２～７８４０、７８２２～７８４１、７８２５～７８４２、７８３２～７８４７、７８３２～７８４８、７８３２～７８５０、７８３３～７８４８、７８３３～７８５２、７８３４～７８４
９、７８３４～７８５３、７８３５～７８５０、７８３６～７８５２、７８３６～７８５５、７８３７～７８５６、７８３８～７８５６、７８３９～７８５７、７８３９～７８５８、７８４０～７８５６、７８４０～７８５７、７８４０～７８５９、７８４３～７８５８、７８４３～７８６０、及び７８４６～７８６２。
特定の実施形態では、以下のアンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とし、少なくとも５０％のＣＦＢ ｍＲＮＡ阻害を達成する；ISIS番号：５１６３５０、５３２６１４、５３２６３２、５３２６３５、５３２６３８、５３２６３９、５３２６８６、５３２６８７、５３２６８８、５３２６８９、５３２６９０、５３２６９１、５３２６９２、５３２６９２、５３２６９３、５３２６９４、５３２６９５、５３２６９６、５３２６９７、５３２６９８、５３２６９９、５３２７００、５３２７０１、５３２７０２、５３２７０３、５３２７０４、５３２７０５、５３２７０６、５３２７０７、５３２７７０、５３２７７５、５３２７７８、５３２７８０、５３２７９１、５３２８００、５３２８０９、５３２８１０、５３２８１１、５３２９１７、５３２９５２、５８８５０９、５８８５１０、５８８５１１、５８８５１２、５８８５１３、５８８５１４、５８８５１５、５８８５１６、５８８５１７、５８８５１８、５８８５１９、５８８５２０、５８８５２２、５８８５２３、５８８５２４、５８８５２５、５８８５２７、５８８５２８、５８８５２９、５８８５３０、５８８５３１、５８８５３２、５８８５３３、５８８５３４、５８８５３５、５８８５３６、５８８５３７、５８８５３８、５８８５３９、５８８５４０、５８８５４１、５８８５４２、５８８５４３、５８８５４４、５８８５４５、５８８５４６、５８８５４７、５８８５４８、５８８５４９、５８８５５０、５８８５５１、５８８５５２、５８８５５３、５８８５５４、５８８５５５、５８８５５６、５８８５５７、５８８５５８、５８８５５９、５８８５６０、５８８５６１、５８８５６２、５８８５６３、５８８５６４、５８８５６５、５８８５６６、５８８５６７、５８８５６８、５８８５６９、５８８５７０、５８８５７１、５８８５７２、５８８５７３、５８８５７４、５８８５７５、５８８５７６、５８８５７７、５８８５８０、５８８５８１、５８８５８５、５８８５８６、５８８５８９、５８８５９０、５８８５９９、５８８６０３、５８８６０６、５８８６０８、５８８６１０、５８８６１４、５８８６１６、５８８６２８、５８８６３１、５８８６３２、５８８６３４、５８８６３６、５８８６３８、５８８６４０、５８８６４５、５８８６４６、５８８６５４、５８８６５６、５８８６５８、５８８６６０、５８８６６２、５８８６６４、５８８６７０、５８８６７２、５８８６７６、５８８６８２、５８８６８８、５８８６９６、５８８６９８、５８８８０７、５８８８０８、５８８８０９、５８８８１３、５８８８１４、５８８８１５、５８８８１９、５８８８２０、５８８８２２、５８８８２３、５８８８３８、５８８８３９、５８８８４０、５８８８４１、５８８８４２、５８８８４６、５８８８４７、５８８８４８、５８８８４９、５８８８５０、５８８８５１、５８８８５２、５８８８５３、５８８８５４、５８８８５５、５８８８５６、５８８８５７、５８８８５８、５８８８５９、５８８８６０、５８８８６１、５８８８６２、５８８８６３、５８８８６４、５８８８６５、５８８８６６、５８８８６７、５８８８６８、５８８８７０、５８８８７１、５８８８７２、５８８８７３、５８８８７４、５８８８７５、５８８８７６、５８８８７７、５８８８７８、５８８８７９、５８８８８０、５８８８８１、５８８８８２、５８８８８３、５８８８８４、５９８９９９、５９９０００、５９９００１、５９９００２、５９９００３、５９９００４、５９９００５、５９９００６、５９９００７、５９９００８、５９９００９、５９９０１０、５９９０１１、５９９０１２、５９９０１３、５９９０１４、５９９０１５、５９９０１８、５９９０１９、５９９０２３、５９９０２４、５９９０２５、５９９０２６、５９９０２７、５９９０２８、５９９０２９、５９９０３０、５９９０３１、５９９０３２、５９９０３３、５９９０３４、５９９０３５、５９９０５８、５９９０６２、５９９０６３、５９９０６４、５９９０６５、５９９０７０、５９９０７１、５９９０７２、５９９０７３、５９９０７４、５９９０７６、５９９０７７、５９９０７８、５９９０７９、５９９０８０、５９９０８１、５９９０８２、５９９０８
３、５９９０８４、５９９０８５、５９９０８６、５９９０８７、５９９０８８、５９９０８９、５９９０９０、５９９０９１、５９９０９２、５９９０９３、５９９０９４、５９９０９５、５９９０９６、５９９０９７、５９９０９８、５９９１０２、５９９１１９、５９９１２３、５９９１２４、５９９１２５、５９９１２６、５９９１２７、５９９１２８、５９９１３２、５９９１３３、５９９１３４、５９９１３５、５９９１３６、５９９１３７、５９９１３８、５９９１３９、５９９１４０、５９９１４１、５９９１４２、５９９１４３、５９９１４４、５９９１４５、５９９１４７、５９９１４８、５９９１４９、５９９１５０、５９９１５１、５９９１５２、５９９１５３、５９９１５４、５９９１５５、５９９１５６、５９９１５７、５９９１５８、５９９１５９、５９９１７８、５９９１７９、５９９１８０、５９９１８１、５９９１８２、５９９１８６、５９９１８７、５９９１８８、５９９１８９、５９９１９０、５９９１９１、５９９１９２、５９９１９３、５９９１９４、５９９１９５、５９９１９６、５９９１９７、５９９１９８、５９９１９９、５９９２００、５９９２０１、５９９２０２、５９９２０３、５９９２０４、５９９２０５、５９９２０６、５９９２０７、５９９２０８、５９９２０９、５９９２１０、５９９２１１、５９９２１２、５９９２１３、５９９２１４、５９９２１５、５９９２１６、５９９２１７、５９９２１８、５９９２１９、５９９２２０、５９９２２１、５９９２２１、５９９２２２、５９９２２３、５９９２２４、５９９２２５、５９９２２６、５９９２２７、５９９２２８、５９９２２９、５９９２３０、５９９２３１、５９９２３２、５９９２３３、５９９２３４、５９９２３５、５９９２３６、５９９２４１、５９９２４７、５９９２４８、５９９２４９、５９９２５５、５９９２５６、５９９２５７、５９９２５８、５９９２６０、５９９２６１、５９９２６２、５９９２６３、５９９２６４、５９９２６５、５９９２６６、５９９２６７、５９９２６８、５９９２６９、５９９２７０、５９９２７１、５９９２７２、５９９２７３、５９９２７４、５９９２７５、５９９２７６、５９９２７７、５９９２７８、５９９２７９、５９９２８０、５９９２９７、５９９２９９、５９９３０６、５９９３０７、５９９３０８、５９９３０９、５９９３１１、５９９３１２、５９９３１３、５９９３１４、５９９３１５、５９９３１６、５９９３１７、５９９３１８、５９９３１９、５９９３２０、５９９３２１、５９９３２２、５９９３２３、５９９３２４、５９９３２５、５９９３２６、５９９３２７、５９９３２８、５９９３２９、５９９３３０、５９９３３８、５９９３４９、５９９３５３、５９９３５４、５９９３５５、５９９３５６、５９９３５７、５９９３５８、５９９３５９、５９９３６０、５９９３６１、５９９３６２、５９９３６３、５９９３６４、５９９３６９、５９９３７１、５９９３７２、５９９３７３、５９９３７６、５９９３７８、５９９３７９、５９９３８２、５９９３８３、５９９３８４、５９９３８５、５９９３８６、５９９３８７、５９９３８８、５９９３８９、５９９３９０、５９９３９１、５９９３９２、５９９３９３、５９９３９４、５９９３９５、５９９３９６、５９９３９７、５９９３９８、５９９３９９、５９９４００、５９９４０１、５９９４０２、５９９４０３、５９９４０４、５９９４０５、５９９４０６、５９９４０７、５９９４０８、５９９４０９、５９９４１０、５９９４１２、５９９４１３、５９９４１４、５９９４１５、５９９４１６、５９９４１７、５９９４１８、５９９４１９、５９９４２０、５９９４２１、５９９４２２、５９９４２３、５９９４２４、５９９４２５、５９９４２６、５９９４３３、５９９４３４、５９９４３５、５９９４３６、５９９４３７、５９９４３８、５９９４３９、５９９４４０、５９９４４１、５９９４４２、５９９４４３、５９９４４４、５９９４４５、５９９４４６、５９９４４７、５９９４４８、５９９４５０、５９９４５４、５９９４５５、５９９４５６、５９９４６７、５９９４６８、５９９４６９、５９９４７１、５９９４７２、５９９４７３、５９９４７４、５９９４７５、５９９４７６、５９９４７７、５９９４７８、５９９４７９、５９９４８０、５９９４８１、５９９４８２、５９９４８３、５９９４８４、５９９４８５、５９９４８６、５９９４８７、５９９４８８、５９９４８９、５９９４９０、５９９４９１、５９９４９２、５９９４９３、５９９４９４、５９９４９５、５９９４９６、５９９４９７、５９９４９８、５９９４９９、５９９５００、５９９５０１、５９９５０２、５９９５０３、５９９５０４、５９９５０５、５９９
５０６、５９９５０７、５９９５０８、５９９５０９、５９９５１２、５９９５１５、５９９５１８、５９９５３１、５９９５４１、５９９５４１、５９９５４６、５９９５４７、５９９５４８、５９９５４９、５９９５５０、５９９５５２、５９９５５３、５９９５５４、５９９５５５、５９９５５７、５９９５５８、５９９５６１、５９９５６２、５９９５６３、５９９５６４、５９９５６５、５９９５６６、５９９５６７、５９９５６８、５９９５６９、５９９５７０、５９９５７７、５９９５７８、５９９５７９、５９９５８０、５９９５８１、５９９５８１、５９９５８２、５９９５８４、５９９５８５、５９９５８６、５９９５８７、５９９５８８、５９９５８９、５９９５９０、５９９５９１、５９９５９２、５９９５９３、５９９５９４、５９９５９５、６０１３２１、６０１３２２、６０１３２３、６０１３２５、６０１３２７、６０１３２８、６０１３２９、６０１３３０、６０１３３２、６０１３３３、６０１３３４、６０１３３５、６０１３３６、６０１３３７、６０１３３８、６０１３３９、６０１３４１、６０１３４２、６０１３４３、６０１３４４、６０１３４５、６０１３４６、６０１３４７、６０１３４８、６０１３４９、６０１３６２、６０１３６７、６０１３６８、６０１３６９、６０１３７１、６０１３７２、６０１３７３、６０１３７４、６０１３７５、６０１３７７、６０１３７８、６０１３８０、６０１３８１、６０１３８２、６０１３８３、６０１３８４、６０１３８５、６０１３８６、６０１３８７、及び６０１３８８。
特定の実施形態では、以下のアンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とし、少なくとも５０％のＣＦＢ ｍＲＮＡ阻害を達成する；配列番号：１２、３０、３３、３６、３７、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１９８、２０３、２０６、２０８、２１９、２２８、２３７、２３８、２３９、３１７、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６８、４７２、４７３、４７５、４７８、４７９、４８８、４９２、４９４、４９５、４９８、４９９、５００、５０２、５０３、５０９、５１０、５１１、５１２、５１３、５１４、５１５、５１７、５１８、５２２、５２３、５２４、５２５、５２９、５３０、５３１、５３４、５３５、５３７、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６３、５６４、５６５、５６９、５７０、５７２、５７３、５７７、５８８、５８９、５９０、５９１、５９２、５９４、５９５、５９６、５９７、５９８、５９９、６００、６０１、６０２、６０３、６０４、６０５、６０６、６０７、６０８、６０９、６１０、６１１、６１２、６１３、６１４、６１５、６１６、６１７、６１８、６１９、６２３、６４０、６４１、６４４、６４５、６４６、６４７、６４８、６４９、６５０、６５１、６５２、６５３、６５４、６５５、６５６、６５７、６５８、６５９、６６０、６６１、６６２、６６３、６６４、６６５、６６６、６６７、６６８、６６９、６７０、６７１、６７２、６７３、６７４、６７５、６７６、６７７、６７８、６７９、６８０、６８１、６８２、６８３、６８４、６８５、６８６、６８７、６８８、６８９、７００、７０４、７０５、７０６、７０７、７０８、７０９、７１１、７１２、７１３、７１４、７１５、７１６、７１７、７１８、７２０、７２１、７２２、７２３、７２４、７２５、７２６、７２７、７２８、７２９、７３０、７３１、７３２、７３３、７３４、７３５、７３６、７３７、７３８、７３９、７４０、７４１、７４２、７４３、７４４、７４５、７４５、７４６、７４７、７４８、７４９、７５０、７５１、７５２、７５３、７５４、７５５、７５６
、７５８、７５９、７６０、７６１、７６２、７６６、７６７、７６８、７６９、７７０、７７１、７７２、７７３、７７４、７７５、７７６、７７７、７７８、７７９、７８０、７８１、７８２、７８３、７８４、７８５、７８６、７８７、７８８、７８９、７９０、７９１、７９２、７９３、７９４、７９５、７９６、７９７、７９８、７９９、８１３、８３３、８３４、８４１、８４６、８４９、８５０、８６７、及び８７３
特定の実施形態では、以下のアンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とし、少なくとも６０％のＣＦＢ ｍＲＮＡ阻害を達成する；ISIS番号：５１６３５０、５３２６１４、５３２６３５、５３２６８６、５３２６８７、５３２６８８、５３２６８９、５３２７７０、５３２８００、５３２８０９、５３２８１０、５３２８１１、５３２９１７、５３２９５２、５８８５１２、５８８５１３、５８８５１４、５８８５１５、５８８５１６、５８８５１７、５８８５１８、５８８５１９、５８８５２２、５８８５２３、５８８５２４、５８８５２５、５８８５２７、５８８５２８、５８８５２９、５８８５３０、５８８５３１、５８８５３２、５８８５３３、５８８５３４、５８８５３５、５８８５３６、５８８５３７、５８８５３８、５８８５３９、５８８５４０、５８８５４１、５８８５４２、５８８５４３、５８８５４４、５８８５４５、５８８５４６、５８８５４７、５８８５４８、５８８５４９、５８８５５０、５８８５５１、５８８５５２、５８８５５３、５８８５５４、５８８５５５、５８８５５６、５８８５５７、５８８５５８、５８８５５９、５８８５６０、５８８５６１、５８８５６２、５８８５６３、５８８５６４、５８８５６５、５８８５６６、５８８５６７、５８８５６８、５８８５６９、５８８５７０、５８８５７１、５８８５７２、５８８５７３、５８８５７４、５８８５７５、５８８５７６、５８８５７７、５８８６３６、５８８６３８、５８８６４０、５８８６６４、５８８６７６、５８８６９６、５８８６９８、５８８８０７、５８８８０８、５８８８１４、５８８８１５、５８８８１９、５８８８２０、５８８８４０、５８８８４２、５８８８４６、５８８８４７、５８８８４８、５８８８４９、５８８８５０、５８８８５１、５８８８５２、５８８８５３、５８８８５４、５８８８５５、５８８８５６、５８８８５７、５８８８５８、５８８８５９、５８８８６０、５８８８６１、５８８８６２、５８８８６３、５８８８６４、５８８８６６、５８８８６７、５８８８６８、５８８８７０、５８８８７１、５８８８７２、５８８８７３、５８８８７４、５８８８７５、５８８８７６、５８８８７７、５８８８７８、５８８８７９、５８８８８０、５８８８８１、５８８８８２、５８８８８３、５８８８８４、５９８９９９、５９９０００、５９９００１、５９９００２、５９９００３、５９９００４、５９９００５、５９９００６、５９９００７、５９９００８、５９９００９、５９９０１０、５９９０１１、５９９０１２、５９９０１３、５９９０１４、５９９０１５、５９９０１９、５９９０２４、５９９０２５、５９９０２６、５９９０２７、５９９０２８、５９９０２９、５９９０３０、５９９０３１、５９９０３２、５９９０３３、５９９０３４、５９９０３５、５９９０６４、５９９０６５、５９９０７１、５９９０７２、５９９０７７、５９９０７８、５９９０７９、５９９０８０、５９９０８３、５９９０８４、５９９０８５、５９９０８６、５９９０８７、５９９０８８、５９９０８９、５９９０９０、５９９０９１、５９９０９２、５９９０９３、５９９０９４、５９９０９５、５９９０９６、５９９０９７、５９９１２５、５９９１２６、５９９１２７、５９９１３３、５９９１３４、５９９１３５、５９９１３６、５９９１３８、５９９１３９、５９９１４０、５９９１４１、５９９１４２、５９９１４８、５９９１４９、５９９１５０、５９９１５１、５９９１５２、５９９１５４、５９９１５５、５９９１５６、５９９１５７、５９９１５８、５９９１５９、５９９１７８、５９９１７９、５９９１８０、５９９１８１、５９９１８７、５９９１８８、５９９１９０、５９９１９２、５９９１９３、５９９１９４、５９９１９５、５９９１９６、５９９１９７、５９９１９８、５９９１９９、５９９２００、５９９２０１、５９９２０２、５９９２０３、５９９２０４、５９９２０５、５９９２０６、５９９２０７、５９９２０８、５９９２０９、５９９２１０、５９９２１１、５９９２１２、５９９２１３、５９９２１４、５９９２１５、５９９２１６、５９９２１７、５９９２１８、
５９９２１９、５９９２２０、５９９２２１、５９９２２２、５９９２２３、５９９２２４、５９９２２５、５９９２２６、５９９２２７、５９９２２８、５９９２２９、５９９２３０、５９９２３１、５９９２３２、５９９２３３、５９９２３４、５９９２３５、５９９２３６、５９９２４７、５９９２５５、５９９２５６、５９９２５７、５９９２６３、５９９２６４、５９９２６５、５９９２６６、５９９２７０、５９９２７１、５９９２７２、５９９２７３、５９９２７４、５９９２７５、５９９２７６、５９９２７７、５９９２７８、５９９２７９、５９９２８０、５９９３０６、５９９３０７、５９９３０８、５９９３１１、５９９３１２、５９９３１３、５９９３１４、５９９３１５、５９９３１６、５９９３１７、５９９３１８、５９９３１９、５９９３２０、５９９３２１、５９９３２２、５９９３２３、５９９３２４、５９９３２５、５９９３２７、５９９３２８、５９９３２９、５９９３３０、５９９３４９、５９９３５３、５９９３５５、５９９３５６、５９９３５７、５９９３５８、５９９３５９、５９９３６０、５９９３６１、５９９３６２、５９９３６３、５９９３６４、５９９３６９、５９９３７１、５９９３７２、５９９３７３、５９９３７６、５９９３７８、５９９３７９、５９９３８２、５９９３８４、５９９３８６、５９９３８７、５９９３８８、５９９３８９、５９９３９０、５９９３９１、５９９３９２、５９９３９３、５９９３９４、５９９３９５、５９９３９６、５９９３９７、５９９３９８、５９９３９９、５９９４００、５９９４０１、５９９４０２、５９９４０３、５９９４０４、５９９４０５、５９９４０６、５９９４０７、５９９４０８、５９９４０９、５９９４１０、５９９４１２、５９９４１３、５９９４１４、５９９４１５、５９９４１６、５９９４１７、５９９４１８、５９９４１９、５９９４２０、５９９４２１、５９９４２２、５９９４２３、５９９４２４、５９９４２５、５９９４３３、５９９４３４、５９９４３５、５９９４３６、５９９４３７、５９９４３８、５９９４３９、５９９４４０、５９９４４１、５９９４４２、５９９４４３、５９９４４４、５９９４４５、５９９４４６、５９９４４７、５９９４４８、５９９４５６、５９９４６７、５９９４６８、５９９４７１、５９９４７２、５９９４７３、５９９４７４、５９９４７５、５９９４７６、５９９４７７、５９９４７８、５９９４７９、５９９４８０、５９９４８１、５９９４８２、５９９４８３、５９９４８４、５９９４８５、５９９４８６、５９９４８７、５９９４８８、５９９４８９、５９９４９０、５９９４９１、５９９４９２、５９９４９３、５９９４９４、５９９４９５、５９９４９６、５９９４９７、５９９４９８、５９９４９９、５９９５００、５９９５０１、５９９５０２、５９９５０３、５９９５０４、５９９５０５、５９９５０６、５９９５０７、５９９５０８、５９９５１２、５９９５３１、５９９５４７、５９９５４８、５９９５４９、５９９５５２、５９９５５３、５９９５５４、５９９５５５、５９９５５７、５９９５５８、５９９５６２、５９９５６３、５９９５６４、５９９５６５、５９９５６６、５９９５６７、５９９５６８、５９９５６９、５９９５７０、５９９５７７、５９９５７８、５９９５７９、５９９５８０、５９９５８１、５９９５８２、５９９５８４、５９９５８５、５９９５８６、５９９５８７、５９９５８８、５９９５８９、５９９５９０、５９９５９１、５９９５９２、５９９５９３、５９９５９４、５９９５９５、６０１３２３、６０１３２７、６０１３２９、６０１３３２、６０１３３３、６０１３３３、６０１３３４、６０１３３５、６０１３３６、６０１３３８、６０１３３９、６０１３４１、６０１３４２、６０１３４３、６０１３４４、６０１３４５、６０１３４６、６０１３４７、６０１３４８、６０１３４９、６０１３６８、６０１３６９、６０１３７１、６０１３７２、６０１３７４、６０１３７５、６０１３７７、６０１３７８、６０１３８０、６０１３８１、６０１３８２、６０１３８３、６０１３８４、６０１３８５、６０１３８６、６０１３８７、及び６０１３８８。
特定の実施形態では、以下のアンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とし、少なくとも６０％のＣＦＢ ｍＲＮＡ阻害を達成する；配列番号：１２、３３、８４、８５、８６、８７、１９８、２２８、２３７、２３８、２３９、３１７、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４１０、４１１、４１２、４１３
、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４７２、４７３、５１３、５１４、５１５、５３１、５３７、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５６４、５６５、５６９、５７０、５７７、５９０、５９２、５９５、５９６、５９７、５９８、５９９、６００、６０１、６０２、６０３、６０４、６０５、６０６、６０７、６０８、６０９、６１０、６１１、６１２、６１３、６１４、６１５、６１６、６１７、６１８、６４４、６４５、６４６、６４７、６４８、６４９、６５０、６５１、６５２、６５３、６５４、６５５、６５６、６５７、６５８、６５９、６６０、６６１、６６２、６６３、６６４、６６５、６６６、６６７、６６８、６６９、６７０、６７１、６７２、６７３、６７４、６７５、６７６、６７７、６７８、６７９、６８０、６８２、６８３、６８４、６８５、６８６、６８７、６８８、６８９、７００、７０４、７０６、７０７、７０８、７０９、７１１、７１２、７１３、７１４、７１５、７１６、７１７、７２０、７２１、７２２、７２３、７２４、７２５、７２６、７２７、７２７、７２８、７２９、７３０、７３１、７３２、７３３、７３４、７３６、７３７、７３８、７３９、７４０、７４１、７４２、７４３、７４４、７４５、７４５、７４６、７４７、７４８、７４９、７５０、７５１、７５２、７５３、７５４、７５５、７５６、７５８、７５９、７６０、７６１、７６７、７６８、７７０、７７２、７７３、７７４、７７５、７７５、７７６、７７６、７７７、７７７、７７８、７７９、７８０、７８１、７８２、７８３、７８３、７８４、７８４、７８５、７８６、７８７、７８８、７８９、７９０、７９１、７９２、７９３、７９４、７９５、７９６、７９７、７９８、７９９、８１３、８３３、８３４、８４１、８４６、８４９、及び８５０。
特定の実施形態では、以下のアンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とし、少なくとも７０％のＣＦＢ ｍＲＮＡ阻害を達成する；ISIS番号：５１６３５０、５３２６１４、５３２６８６、５３２６８７、５３２６８８、５３２７７０、５３２８００、５３２８０９、５３２８１０、５３２８１１、５３２９１７、５３２９５２、５８８５１２、５８８５１３、５８８５１４、５８８５１５、５８８５１６、５８８５１７、５８８５１８、５８８５２４、５８８５２９、５８８５３０、５８８５３１、５８８５３２、５８８５３３、５８８５３４、５８８５３５、５８８５３６、５８８５３７、５８８５３８、５８８５３９、５８８５４０、５８８５４１、５８８５４２、５８８５４３、５８８５４４、５８８５４５、５８８５４６、５８８５４７、５８８５４８、５８８５４９、５８８５５０、５８８５５１、５８８５５２、５８８５５３、５８８５５４、５８８５５５、５８８５５６、５８８５５７、５８８５５８、５８８５５９、５８８５６０、５８８５６１、５８８５６２、５８８５６３、５８８５６４、５８８５６５、５８８５６８、５８８５６９、５８８５７０、５８８５７１、５８８５７２、５８８５７３、５８８５７４、５８８５７５、５８８５７７、５８８６３６、５８８６３８、５８８６４０、５８８６９６、５８８６９８、５８８８０７、５８８８１４、５８８８１５、５８８８１９、５８８８４２、５８８８４７、５８８８４８、５８８８４９、５８８８５０、５８８８５１、５８８８５２、５８８８５３、５８８８５６、５８８８５７、５８８８５８、５８８８５９、５８８８６０、５８８８６１、５８８８６２、５８８８６３、５８８８６６、５８８８６７、５８８８７０、５８８８７１、５８８８７２、５８８８７３、５８８８７４、５８８８７５、５８８８７６、５８８８７７、５８８８７８、５８８８７９、５８８８８０、５８８８８１、５８８８８２、５８８８８３、５８８８８４、５９９０００、５９９００１、５９９００３、５９９００４、５９９００５、５９９００８、５９９００９、５９９０１０、５９９０１１、５９９０１４、５９９０１５、
５９９０２４、５９９０２５、５９９０２７、５９９０２８、５９９０２９、５９９０３０、５９９０３１、５９９０３２、５９９０３３、５９９０３４、５９９０７２、５９９０７７、５９９０８０、５９９０８５、５９９０８６、５９９０８７、５９９０８８、５９９０８９、５９９０９０、５９９０９１、５９９０９３、５９９０９４、５９９０９５、５９９０９６、５９９０９７、５９９１２５、５９９１２６、５９９１３４、５９９１３８、５９９１３９、５９９１４８、５９９１４９、５９９１５０、５９９１５１、５９９１５２、５９９１５４、５９９１５５、５９９１５６、５９９１５７、５９９１５８、５９９１８７、５９９１８８、５９９１９３、５９９１９５、５９９１９６、５９９１９７、５９９１９８、５９９１９９、５９９２００、５９９２０１、５９９２０２、５９９２０３、５９９２０４、５９９２０５、５９９２０６、５９９２０７、５９９２０８、５９９２１０、５９９２１１、５９９２１２、５９９２１３、５９９２１４、５９９２１５、５９９２１６、５９９２１７、５９９２１８、５９９２１９、５９９２２０、５９９２２１、５９９２２２、５９９２２３、５９９２２４、５９９２２５、５９９２２６、５９９２２７、５９９２２８、５９９２２９、５９９２３０、５９９２３１、５９９２３２、５９９２３３、５９９２３４、５９９２３５、５９９２３６、５９９２６６、５９９２７２、５９９２７２、５９９２７３、５９９２７４、５９９２７５、５９９２７７、５９９２７８、５９９２７９、５９９２８０、５９９２８０、５９９３０６、５９９３１１、５９９３１２、５９９３１３、５９９３１４、５９９３１５、５９９３１６、５９９３１７、５９９３１８、５９９３１９、５９９３２０、５９９３２１、５９９３２２、５９９３２３、５９９３２５、５９９３２７、５９９３２８、５９９３２９、５９９３３０、５９９３５５、５９９３５７、５９９３５８、５９９３５９、５９９３６０、５９９３６１、５９９３６２、５９９３６３、５９９３６４、５９９３６９、５９９３７１、５９９３７２、５９９３７３、５９９３７８、５９９３７９、５９９３８２、５９９３８４、５９９３８６、５９９３８７、５９９３８８、５９９３８９、５９９３９０、５９９３９１、５９９３９２、５９９３９３、５９９３９４、５９９３９５、５９９３９６、５９９３９７、５９９３９８、５９９３９９、５９９４００、５９９４０１、５９９４０２、５９９４０３、５９９４０４、５９９４０５、５９９４０６、５９９４０７、５９９４０８、５９９４０９、５９９４１０、５９９４１３、５９９４１４、５９９４１５、５９９４１６、５９９４１７、５９９４１８、５９９４１９、５９９４２０、５９９４２１、５９９４２２、５９９４２３、５９９４２４、５９９４３３、５９９４３４、５９９４３５、５９９４３６、５９９４３７、５９９４３８、５９９４３９、５９９４４０、５９９４４１、５９９４４２、５９９４４３、５９９４４５、５９９４４６、５９９４４７、５９９４４８、５９９４７２、５９９４７３、５９９４７４、５９９４７５、５９９４７６、５９９４７７、５９９４７８、５９９４７９、５９９４８０、５９９４８１、５９９４８２、５９９４８３、５９９４８４、５９９４８５、５９９４８６、５９９４８７、５９９４８８、５９９４８９、５９９４９０、５９９４９１、５９９４９２、５９９４９３、５９９４９４、５９９４９５、５９９４９６、５９９４９７、５９９４９８、５９９４９９、５９９５００、５９９５０１、５９９５０２、５９９５０３、５９９５０４、５９９５０５、５９９５０６、５９９５０７、５９９５０８、５９９５１２、５９９５４７、５９９５４８、５９９５５２、５９９５５３、５９９５５４、５９９５５５、５９９５５８、５９９５６２、５９９５６３、５９９５６４、５９９５６６、５９９５６７、５９９５６８、５９９５６９、５９９５７０、５９９５７７、５９９５７８、５９９５７９、５９９５８０、５９９５８１、５９９５８２、５９９５８５、５９９５８６、５９９５８７、５９９５８８、５９９５８９、５９９５９０、５９９５９１、５９９５９２、５９９５９３、５９９５９４、５９９５９５、６０１３３２、６０１３３５、６０１３４１、６０１３４３、６０１３４４、６０１３４５、６０１３４６、６０１３４７、６０１３４８、６０１３４９、６０１３７１、６０１３７２、６０１３８０、６０１３８２、６０１３８３、６０１３８４、６０１３８５、６０１３８６、及び６０１３８７。
特定の実施形態では、以下のアンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とし、少なくとも７０％のＣＦＢ ｍＲＮＡ阻害を達成する；配列番号：１２、８４、８５、８６、１９８、２２８、２３７、２３８、２３９、３１７、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４０２、４０３、４０４、４０５、４０７、４０８、４１０、４１１、４１２、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６４、４６５、４７２、４７３、５１３、５１４、５１５、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５６４、５６５、５６９、５９２、５９５、５９６、５９７、５９８、５９９、６００、６０１、６０２、６０３、６０４、６０６、６０７、６０８、６０９、６１０、６１１、６１２、６１３、６１４、６１５、６１６、６１７、６１８、６４５、６４６、６４７、６４８、６４９、６５０、６５３、６５４、６５５、６５６、６５９、６６０、６６２、６６３、６６４、６６５、６６６、６６８、６６９、６７０、６７１、６７２、６７３、６７４、６７５、６７６、６７７、６７７、６７８、６７９、６８０、６８２、６８３、６８４、６８６、６８７、６８８、６８９、７０６、７０８、７０９、７１１、７１２、７１３、７１４、７１５、７２０、７２１、７２２、７２３、７２４、７２５、７２６、７２７、７２８、７２９、７３０、７３１、７３２、７３３、７３４、７３６、７３７、７３８、７３９、７４０、７４１、７４２、７４３、７４４、７４５、７４６、７４７、７４８、７４９、７５０、７５１、７５２、７５３、７５４、７５５、７５６、７６７、７６８、７７３、７７５、７７６、７７７、７７８、７７９、７８０、７８１、７８２、７８３、７８４、７８５、７８６、７８７、７８８、７８９、７９０、７９１、７９２、７９３、７９３、７９４、７９５、７９７、７９８、７９９、８１３、８３３、８３４、８４１、８４６、８４９、８６７、及び８７３。
特定の実施形態では、以下のアンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とし、少なくとも８０％のＣＦＢ ｍＲＮＡ阻害を達成する；ISIS番号：５３２６８６、５３２８０９、５３２８１０、５３２８１１、５３２９１７、５３２９５２、５８８５１２、５８８５１７、５８８５１８、５８８５３３、５８８５３４、５８８５３５、５８８５３６、５８８５３７、５８８５３８、５８８５３９、５８８５４０、５８８５４２、５８８５４３、５８８５４４、５８８５４５、５８８５４６、５８８５４７、５８８５４８、５８８５４９、５８８５５０、５８８５５１、５８８５５２、５８８５５３、５８８５５４、５８８５５５、５８８５５６、５８８５５７、５８８５５８、５８８５５９、５８８５６０、５８８５６１、５８８５６２、５８８５６３、５８８５６４、５８８５６５、５８８５７１、５８８６３８、５８８６４０、５８８６９６、５８８６９８、５８８８０７、５８８８１４、５８８８４９、５８８８５０、５８８８５１、５８８８５３、５８８８５７、５８８８５８、５８８８５９、５８８８６０、５８８８６１、５８８８６２、５８８８６３、５８８８６６、５８８８６７、５８８８７１、５８８８７２、５８８８７３、５８８８７４、５８８８７５、５８８８７６、５８８８７７、５８８８７８、５８８８７９、５８８８８０、５８８８８１、５８８８８２、５８８８８３、５９９００１、５９９０２４、５９９０２５、５９９０３３、５９９０８６、５９９０８７、５９９０８８、５９９０８９、５９９０９３、５９９０９４、５９９０９５、５９９０９６、５９９１３４、５９９１３９、５９９１４８、５９９１４９、５９９１５１、５９９１５４、５９９１５５、５９９１５６、５９９１５８、５９９１８８、５９９１９５、５９９１９６、５９９１９８、５９９２０１、５９９２０２、５９９２０３、５９９２０４、５９９２０５、５９９２０６、５９９２０７、５９９２１２、５９９２１３、５９９２１５、５９９２１６、５９９２１７、５９９２１８、５９９２１９、５９９２２０、５９９２２１、５９９２２２、５９９２２３、５９９２２４、５９９２２５、
５９９２２６、５９９２２７、５９９２２８、５９９２２９、５９９２３０、５９９２３１、５９９２３２、５９９２３３、５９９２３４、５９９２３５、５９９２３６、５９９２７２、５９９２７３、５９９２７５、５９９２７７、５９９２７８、５９９２７９、５９９２８０、５９９３１１、５９９３１３、５９９３１４、５９９３１６、５９９３１７、５９９３１８、５９９３２０、５９９３２１、５９９３２２、５９９３２３、５９９３２７、５９９３２８、５９９３２９、５９９３３０、５９９３５５、５９９３５７、５９９３５８、５９９３５９、５９９３６０、５９９３６１、５９９３６２、５９９３６３、５９９３６４、５９９３７１、５９９３７２、５９９３７３、５９９３７８、５９９３７９、５９９３８２、５９９３８４、５９９３８６、５９９３８７、５９９３８８、５９９３８９、５９９３９０、５９９３９１、５９９３９２、５９９３９３、５９９３９７、５９９３９８、５９９３９９、５９９４００、５９９４０１、５９９４０３、５９９４０４、５９９４０５、５９９４０７、５９９４０８、５９９４０９、５９９４１０、５９９４１３、５９９４１４、５９９４１５、５９９４１６、５９９４１７、５９９４１８、５９９４１９、５９９４２０、５９９４２１、５９９４２２、５９９４２３、５９９４２４、５９９４３３、５９９４３４、５９９４３５、５９９４３６、５９９４３７、５９９４３８、５９９４３９、５９９４４０、５９９４４１、５９９４４５、５９９４４６、５９９４４７、５９９４４８、５９９４７４、５９９４７６、５９９４７７、５９９４７９、５９９４８１、５９９４８２、５９９４８３、５９９４８５、５９９４８６、５９９４８７、５９９４８８、５９９４８９、５９９４９０、５９９４９１、５９９４９２、５９９４９４、５９９４９５、５９９４９６、５９９４９７、５９９４９８、５９９４９９、５９９５００、５９９５０２、５９９５０３、５９９５０４、５９９５０５、５９９５０６、５９９５０７、５９９５０８、５９９５４７、５９９５５２、５９９５５３、５９９５５４、５９９５５８、５９９５６３、５９９５６７、５９９５６８、５９９５６９、５９９５７０、５９９５７７、５９９５７８、５９９５８１、５９９５８２、５９９５８５、５９９５８７、５９９５８８、５９９５９０、５９９５９１、５９９５９２、５９９５９３、５９９５９４、６０１３３２、６０１３４４、６０１３４５、６０１３８２、６０１３８３、及び６０１３８５。
特定の実施形態では、以下のアンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とし、少なくとも８０％のＣＦＢ ｍＲＮＡ阻害を達成する；配列番号：８４、２３７、２３８、２３９、３１７、３９５、３９７、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２５、４２６、４２７、４２９、４３０、４３１、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４７２、４７３、５１４、５１５、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５６４、５９５、５９９、６００、６０１、６０２、６０３、６０６、６０７、６０８、６０９、６１０、６１１、６１２、６１３、６１４、６１５、６１６、６１７、６１８、６４６、６５５、６６０、６６２、６６３、６６６、６６９、６７０、６７１、６７２、６７３、６７５、６７６、６７７、６７８、６７９、６８２、６８４、６８６、６８７、６８８、６８９、７０６、７０８、７０９、７１１、７１２、７１３、７１４、７１５、７２０、７２２、７２３、７２４、７２５、７２６、７２７、７２９、７３０、７３１、７３２、７３３、７３６、７３７、７３８、７３９、７４０、７４１、７４２、７４３、７４４、７４５、７４６、７４７、７４８、７４９、７５０、７５１、７５２、７５３、７５４、７５５、７５６、７６８、７７５、７７６、７７８、７８１、７８２、７８３、７８４、７８５、７８７、７８８、７８９、７９０、７９１、７９２、７９３、７９４、７９９、８１３、８３３、８３４、８４１、８４９、８６７、及び８７３。
特定の実施形態では、以下のアンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とし、少なくとも９０％のＣＦＢ ｍＲＮＡ阻害を達成する；ISIS番号：５３２６８６、５３２８１１、５３２９１７、５８８５３６、５８８５３７、５８８５３８、５８８５３９、５８８５４４、５８８５４５、５８８５４６、５８８５４８、５８８５５１、５８８５５２、５８８５５３、５８８５５４、５８８５５５、５８８５５６、５８８５５７、５８８５５８、５８８５５９、５８８５６０、５８８５６１、５８８５６２、５８８５６４、５８８６３８、５８８６４０、５８８６９６、５８８６９８、５８８８４９、５８８８５０、５８８８５１、５８８８６０、５８８８６６、５８８８６７、５８８８７２、５８８８７３、５８８８７４、５８８８７６、５８８８７７、５８８８７８、５８８８７９、５８８８８１、５８８８８３、５９９１４９、５９９１８８、５９９２０３、５９９２０６、５９９２２０、５９９２２１、５９９２２２、５９９２２３、５９９２２４、５９９２２５、５９９２２６、５９９２２７、５９９２２８、５９９２２９、５９９２３５、５９９２３６、５９９２７９、５９９２８０、５９９３１４、５９９３２１、５９９３６２、５９９３７８、５９９３９０、５９９３９１、５９９３９８、５９９３９９、５９９４０４、５９９４１３、５９９４１４、５９９４１６、５９９４１９、５９９４２０、５９９４２２、５９９４３５、５９９４３７、５９９４３８、５９９４４１、５９９４８３、５９９４９４、５９９５０８、５９９５５２、５９９５５３、５９９５５４、５９９５６８、５９９５７０、５９９５７７、５９９５８１、５９９５９１、５９９５９２、及び５９９５９３。
特定の実施形態では、以下のアンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の一領域を標的とし、少なくとも９０％のＣＦＢ ｍＲＮＡ阻害を達成する；配列番号：８４、２３８、２３９、３１７、４１２、４１３、４２０、４２１、４２６、４３４、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４８、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６４、４６５、４７２、４７３、５１４、５１５、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５５１、５５３、５５５、５５６、５９９、６００、６０１、６０２、６１０、６１６、６１７、６１８、６６２、６６６、６７０、６７６、６７７、６７８、６８８、６８９、７１３、７２３、７２９、７３０、７４０、７４１、７４２、７４３、７４４、７４５、７４６、７４７、７４８、７４９、７５５、７５６、７６８、７８３、７９３、８３３、及び８６７。
特定の実施形態では、化合物が、本明細書に記載するＣＦＢを標的とする任意のオリゴヌクレオチドと共役基とを含むか、またはそれらからなることができる。
特定の実施形態では、化合物が修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオチド２１９３～２２１２、２１９５～２２１０、２４５７～２４７６、２５７１～２５９０、２５８４～２６０３、２５８８～２６０７、２５９２～２６１１、２５９４～２６１３、２５９７～２６１６、２６００～２６１９、または２５９６～２６１１内で相補的な１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなる。
特定の実施形態では、化合物が修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなる。
特定の実施形態では、化合物が修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つからなる核酸塩基配列を有する
。
特定の実施形態において、前述の化合物またはオリゴヌクレオチドは、いずれも、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結部、少なくとも１つの修飾糖、及び／または少なくとも１つの修飾核酸塩基を含むことができる。
特定の態様において、前述の化合物またはオリゴヌクレオチドはいずれも、少なくとも１つの修飾糖を含むことができる。特定の態様では、少なくとも１つの修飾糖が、２’－Ｏ－メトキシエチル基を含む。特定の態様では、少なくとも１つの修飾糖が二環式糖、例えば４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’基、４’－ＣＨ２－Ｏ－２’基、または４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’基である。
特定の態様では、前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結部、例えばホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。
特定の実施形態では、前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１、２、３、４、５、６、または７個のホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む。
特定の実施形態では、前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部が、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部及びホスホロチオエートヌクレオシド間連結部から選択される。
特定の実施形態では、前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部である。
特定の実施形態において、前述の化合物またはオリゴヌクレオチドは、いずれも、少なくとも１つの修飾核酸塩基、例えば５－メチルシトシンを含む。
特定の実施形態では、化合物が、共役基と、
連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び
連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含む修飾オリゴヌクレオチドとを含み、前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置されており、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは修飾糖を含む。特定の実施形態では、前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、または５９８に示す配列を含む核酸塩基配列を有する１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなる。
特定の実施形態では、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、もしくは４５５に示す配列を含むか、またはそれからなる核酸塩基配列を有し、前記修飾オリゴヌクレオチドは、
１０個の連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び
５個の連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置されており、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－Ｏ－メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、かつ各シトシンは５－メチルシトシンである。
特定の実施形態では、化合物が一本鎖修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むか、またはそれらからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドは配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、または４５５に示す配列からなる核酸塩基配列を有する２０個の連結されたヌクレオシドからなり、前記オリゴヌクレオチドは、
１０個の連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び
５個の連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置されており、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－Ｏ－メトキシエチル糖を含み；各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、各シトシンは５－メチルシトシンである。
特定の実施形態では、化合物がＩＳＩＳ５８８５４０と共役基とを含むか、またはそれらからなる。特定の実施形態では、ＩＳＩＳ５８８５４０が以下の化学構造を有する：
Figure 0007001663000003
特定の実施形態では、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５４９に示す配列を含むか、配列番号５４９に示す配列からなる核酸塩基配列を有し、前記修飾オリゴヌクレオチドは、
１０個の連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
３個の連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び
３個の連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセ
グメントの間に配置されており、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドはｃＥｔ糖を含み、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、かつ各シトシンは５－メチルシトシンである。
特定の態様では、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５９８に示す配列を含むか、配列番号５９８に示す配列からなる核酸塩基配列を有し、前記修飾オリゴヌクレオチドは
１０個の連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
３個の連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び
３個の連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置されており、前記５’ウイングセグメントは５’→３’方向に２’－Ｏ－メトキシエチル糖、２’－Ｏ－メトキシエチル糖、及びｃＥｔ糖を含み、前記３’ウイングセグメントは５’→３’方向にｃＥｔ糖、ｃＥｔ糖、及び２’－Ｏ－メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、かつ各シトシンは５－メチルシトシンである。
前述の実施形態のいずれにおいても、前記化合物またはオリゴヌクレオチドは、ＣＦＢをコードする核酸に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的であることができる。
前述の実施形態のいずれにおいても、前記化合物またはオリゴヌクレオチドは一本鎖であることができる。
特定の実施形態では、前記共役基が前記修飾オリゴヌクレオチドの５’端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結される。特定の実施形態では、前記共役基は、前記修飾オリゴヌクレオチドの３’端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結される。特定の実施形態では、前記共役基が少なくとも１つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、少なくとも２つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、または少なくとも３つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む。
特定の実施形態では、以下の化学構造を有する化合物が、５’－Ｘを伴うＩＳＩＳ５８８５４０を含むか、または５’－Ｘを伴うＩＳＩＳ５８８５４０からなり、ここでＸは本明細書に記載するＧａｌＮＡｃを含む共役基である：
Figure 0007001663000004
特定の実施形態では、化合物が、以下の化学構造によって表されるとおり、配列番号４４０、５’－ＧａｌＮＡｃ、及び化学修飾を含むか、またはそれらからなる：
Figure 0007001663000005
［式中、Ｒ１は－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３（ＭＯＥ）であり、かつＲ２がＨであるか、またはＲ１とＲ２とが全体として橋を形成し、その場合、Ｒ１は－Ｏ－であり、Ｒ２は－ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ３）－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であって、Ｒ１とＲ２は、結果として生じる橋が－Ｏ－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ３）－、及び－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－から選択されることになるように直接つながれている。
また、同じ環上のＲ３とＲ４の各ペアについては、環ごとに独立して、Ｒ３がＨ及び－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択され、かつＲ４がＨであるか、またはＲ３とＲ４とが全体として橋を形成し、その場合、Ｒ３は－Ｏ－、かつＲ４は－ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ３）－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であって、Ｒ３とＲ４は、結果として生じる橋が－Ｏ－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ３）－、及び－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－から選択されることになるように直接つながれている；
また、Ｒ５はＨ及び－ＣＨ３から選択され、
また、ＺはＳ－及びＯ－から選択される］。
特定の実施形態では、化合物がＩＳＩＳ６９６８４４を含む。特定の実施形態では、化合物がＩＳＩＳ６９６８４４からなる。特定の実施形態では、ＩＳＩＳ６９６８４４が以下の化学構造を有する：
Figure 0007001663000006
特定の実施形態では、化合物がＩＳＩＳ６９６８４５を含む。特定の実施形態では、化合物がＩＳＩＳ６９６８４５からなる。特定の実施形態では、ＩＳＩＳ６９６８４５が以下の化学構造を有する：
Figure 0007001663000007
特定の実施形態では、化合物がＩＳＩＳ６９８９６９を含む。特定の実施形態では、化合物がＩＳＩＳ６９８９６９からなる。特定の実施形態では、ＩＳＩＳ６９８９６９が以下の化学構造を有する：
Figure 0007001663000008
特定の実施形態では、化合物がＩＳＩＳ６９８９７０を含む。特定の実施形態では、化合物がＩＳＩＳ６９８９７０からなる。特定の実施形態では、ＩＳＩＳ６９８９７０が以下の化学構造を有する：
Figure 0007001663000009
特定の実施形態は、ＣＦＢを標的とする修飾オリゴヌクレオチドまたはその塩と共役基とを含む化合物またはそれらからなる化合物のいずれか、及び医薬上許容される担体もしくは希釈剤の少なくとも１つを含む組成物を提供する。
特定の実施形態では、本明細書に記載する化合物または組成物が、２５０ｎＭ未満、２００ｎＭ未満、１５０ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、９０ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、７０ｎＭ未満、６５ｎＭ未満、６０ｎＭ未満、５５ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、４５ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３５ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、または２０ｎＭ未満のインビトロＩＣ５０の少なくとも１つを有することから、有効である。
特定の実施形態において、本明細書に記載する化合物または組成物は、食塩水で処置した動物と比較してＡＬＴ値またはＡＳＴ値の増加が４倍以下、３倍以下、または２倍以下であること、または肝臓重量、脾臓重量もしくは腎臓重量の増加が３０％以下、２０％以下、１５％以下、１２％以下、１０％以下、５％以下、または２％以下であることのうちの少なくとも１つによって実証されるように、耐容性が高い。特定の実施形態において、本明細書に記載する化合物または組成物は、食塩水で処置した動物と比較してＡＬＴ値またはＡＳＴ値の増加がないことによって実証されるように、耐容性が高い。特定の実施形態において、本明細書に記載する化合物または組成物は、食塩水で処置した動物と比較して肝臓重量、膵臓重量または腎臓重量の増加がないことによって実証されるように、耐容性が高い。
特定の実施形態は、上述の実施形態のいずれかの化合物またはその塩と少なくとも１つの医薬上許容される担体または希釈剤とを含む組成物を提供する。特定の態様では、前記
組成物が、約４０センチポアズ（ｃＰ）未満、約３０センチポアズ（ｃＰ）未満、約２０センチポアズ（ｃＰ）未満、約１５センチポアズ（ｃＰ）未満、または約１０センチポアズ（ｃＰ）未満の粘度を有する。特定の態様では、上述した粘度のいずれかを有する前記組成物が、ここに提供する化合物を、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１７５ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２２５ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２７５ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬの濃度で含む。特定の態様では、上述した粘度及び／または化合物濃度のいずれかを有する前記組成物が、室温または約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、もしくは約３０℃の温度を有する。
特定の実施形態において、対象における補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置し、防止し、または改善する方法は、本明細書に記載する化合物または組成物を前記対象に投与し、それによって前記疾患を処置し、防止し、または改善することを含む。特定の態様では、補体代替経路が正常より強く活性化されている。特定の実施形態では、対象における補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置し、防止し、または改善する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８のいずれか一つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する。特定の実施形態では、対象における補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置し、防止し、または改善する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、対象における補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置し、防止し、または改善する方法が、ＩＳＩＳ６９６８４４、ＩＳＩＳ６９６８４５、ＩＳＩＳ６９８９６９、もしくはＩＳＩＳ６９８９７０を含むかまたはそれからなる化合物を前記対象に投与することを含む。
特定の実施形態において、対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）などの黄斑変性を処置し、防止し、または改善する方法は、本明細書に記載する化合物または組成物を前記対象に投与し、よってＡＭＤを処置し、防止し、または改善することを含む。特定の態様では、補体代替経路が正常より強く活性化されている。特定の態様では、前記ＡＭＤが滲出型ＡＭＤである。特定の態様では、前記ＡＭＤが地図状萎縮などの乾性ＡＭＤである。特定の実施形態では、対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、滲出型ＡＭＤ、乾性ＡＭＤ、または地図状萎縮などの黄斑変性を処置し、防止し、または改善する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８のいずれか一つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する。特定の実施形態では、対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、滲出型ＡＭＤ、乾性ＡＭＤ、または地図状萎縮などの黄斑変性を処置し、防止し、または改善する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、滲出型ＡＭＤ、乾性ＡＭＤ、または地図状萎縮などの黄斑変性を処置し、防止し、または改善する方法が、ＩＳＩＳ６９６８４４、ＩＳＩＳ６９６８４５、ＩＳＩＳ６９８９６９、もしくはＩＳＩＳ６９８９７０を含むかまたはそれからなる化合物を前記対象に投与することを含む。特定の態様では、前記化合物または組成物が、前記対象に非経口投与される。
特定の実施形態において、対象における補体代替経路の調節異常に関連する腎臓疾患を処置し、防止し、または改善する方法は、本明細書に記載する化合物または組成物を前記対象に投与し、よって前記腎臓疾患を処置し、防止し、または改善することを含む。特定の実施形態では、対象における補体代替経路の調節異常に関連する腎臓疾患を処置し、防止し、または改善する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８のいずれか一つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する。特定の実施形態では、対象における補体代替経路の調節異常に関連する腎臓疾患を処置し、防止し、または改善する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、対象における補体代替経路の調節異常に関連する腎臓疾患を処置し、防止し、または改善する方法が、ＩＳＩＳ６９６８４４、ＩＳＩＳ６９６８４５、ＩＳＩＳ６９８９６９、もしくはＩＳＩＳ６９８９７０を含むかまたはそれからなる化合物を前記対象に投与することを含む。特定の態様では、補体代替経路が正常より強く活性化されている。特定の態様では、前記腎臓疾患が、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、デンスデポジット病（ＤＤＤ）、Ｃ３糸球体腎炎（Ｃ３ＧＮ）、ＣＦＨＲ５ネフロパシー、もしくは非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、またはそれらの任意の組み合わせである。特定の態様では、前記腎臓疾患が、糸球体におけるＣ３沈着などといったＣ３沈着に関連する。特定の態様では、前記腎臓疾患が、正常値未満の循環Ｃ３レベル、例えば血清中または血漿中Ｃ３レベルに関連する。特定の態様では、前記化合物または組成物を投与することにより、Ｃ３タンパク質レベルなどの眼Ｃ３レベルの蓄積が低減し、または阻害される。特定の態様では、前記化合物または組成物を投与することにより、眼Ｃ３沈着のレベルが低減し、または眼Ｃ３沈着の蓄積が阻害される。特定の態様では、前記化合物または組成物が前記対象に非経口投与される。特定の態様では、前記化合物または組成物を投与することにより、腎臓におけるＣ３レベル、例えばＣ３タンパク質レベルの蓄積が低減し、または阻害される。特定の態様では、前記化合物または組成物を投与することにより、例えば糸球体におけるＣ３レベルなどの腎臓Ｃ３沈着のレベルが低減し、または腎臓Ｃ３沈着の蓄積が阻害される。特定の態様において、前記対象は、例えば対象の血中の補体レベルまたは膜侵襲複合体レベルを検出し、かつ／または補体代替経路の調節異常に関連する疾患に関連する補体因子の遺伝子突然変異に関する遺伝子検査を行うことによって、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するか、または前記疾患を有するリスクがあると同定される。
特定の実施形態において、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象における補体Ｂ因子（ＣＦＢ）の発現を阻害する方法は、本明細書に記載する化合物または組成物を前記対象に投与し、それによって前記対象におけるＣＦＢの発現を阻害することを含む。特定の実施形態では、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象における補体Ｂ因子（ＣＦＢ）の発現を阻害する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８のいずれか一つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する。特定の実施形態では、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象における補体Ｂ因子（ＣＦＢ）の発現を阻害する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する１０～３０個
の連結されたヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象における補体Ｂ因子（ＣＦＢ）の発現を阻害する方法が、ＩＳＩＳ６９６８４４、ＩＳＩＳ６９６８４５、ＩＳＩＳ６９８９６９、もしくはＩＳＩＳ６９８９７０を含むかまたはそれからなる化合物を前記対象に投与することを含む。特定の態様では、前記化合物または組成物を投与することにより、眼におけるＣＦＢの発現が阻害される。特定の態様において、前記対象は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、例えば滲出型ＡＭＤ及び乾性ＡＭＤを有するか、またはそれらを有するリスクがある。特定の態様では、乾性ＡＭＤが地図状萎縮でありうる。地図状萎縮は、網膜の変性を伴う進行した形態の乾性ＡＭＤとみなされる。特定の態様では、前記化合物または組成物を投与することにより、腎臓、例えば糸球体におけるＣＦＢの発現が阻害される。特定の態様において、前記対象は、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、デンスデポジット病（ＤＤＤ）、Ｃ３糸球体腎炎（Ｃ３ＧＮ）、ＣＦＨＲ５ネフロパシー、もしくは非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、またはそれらの任意の組み合わせを有するか、またはそれらを有するリスクがある。
特定の実施形態において、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の眼におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法は、本明細書に記載する化合物または組成物を前記対象に投与し、それによって前記対象の眼におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害することを含む。特定の実施形態では、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の眼におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８のいずれか一つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する。特定の実施形態では、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の眼におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の眼におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法が、ＩＳＩＳ６９６８４４、ＩＳＩＳ６９６８４５、ＩＳＩＳ６９８９６９、もしくはＩＳＩＳ６９８９７０を含むかまたはそれからなる化合物を前記対象に投与することを含む。特定の態様では、前記対象が、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、例えば滲出型ＡＭＤ及び乾性ＡＭＤを有するか、またはそれらを有するリスクがある。特定の態様では、乾性ＡＭＤが地図状萎縮でありうる。特定の態様では、前記化合物または組成物が前記対象に非経口投与される。
特定の実施形態において、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の腎臓におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法は、本明細書に記載する化合物または組成物を前記対象に投与し、それによって前記対象の腎臓におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害することを含む。特定の実施形態では、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の腎臓におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８のいずれか一つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する。特定の実施形態では、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の腎臓におけるＣ３沈着を低減
しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法が、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物を前記対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の腎臓におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法が、ＩＳＩＳ６９６８４４、ＩＳＩＳ６９６８４５、ＩＳＩＳ６９８９６９、もしくはＩＳＩＳ６９８９７０を含むかまたはそれからなる化合物を前記対象に投与することを含む。特定の態様では、前記対象が、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、デンスデポジット病（ＤＤＤ）、Ｃ３糸球体腎炎（Ｃ３ＧＮ）、ＣＦＨＲ５ネフロパシー、もしくは非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、またはそれらの任意の組み合わせを有するか、またはそれらを有するリスクがある。特定の態様において、前記化合物または組成物が前記対象に非経口投与される。
特定の実施形態は、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置するための、本明細書に記載する化合物または組成物の使用に向けられる。特定の実施形態は、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置するための、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物の使用であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８のいずれか一つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有するものに向けられる。特定の実施形態は、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置するための、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含むかまたはそれらからなる化合物の使用であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなるものに向けられる。特定の実施形態は、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置するための、ＩＳＩＳ６９６８４４、ＩＳＩＳ６９６８４５、ＩＳＩＳ６９８９６９、もしくはＩＳＩＳ６９８９７０を含むかまたはそれからなる化合物の使用に向けられる。特定の態様では、補体代替経路が正常より強く活性化されている。特定の態様では、前記疾患が黄斑変性、例えば加齢黄斑変性（ＡＭＤ）であり、これは滲出型ＡＭＤまたは乾性ＡＭＤでありうる。特定の態様では、乾性ＡＭＤが地図状萎縮でありうる。特定の態様では、前記疾患が、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、デンスデポジット病（ＤＤＤ）、Ｃ３糸球体腎炎（Ｃ３ＧＮ）、ＣＦＨＲ５ネフロパシー、もしくは非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、またはそれらの任意の組み合わせなどといった腎臓疾患である。特定の態様では、前記化合物または組成物が前記対象に非経口投与される。
特定の実施形態では、本明細書に記載する化合物または組成物が非経口投与される。例えば特定の実施形態では、前記化合物または組成物を、注射または注入によって投与することができる。非経口投与には、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または頭蓋内投与、例えば髄腔内投与または脳室内投与が含まれる。
アンチセンス化合物
オリゴマー化合物には、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模倣物、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡが含まれるが、これらに限定されない。オリゴマー化合物は、標的核酸に対して「アンチセンス」である（つまり、水素結合によって標的核酸にハイブリダイゼーションを起こす能力を有する）ことができる。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、５’→３’方向に記載した場合に、そのアンチセンス化合物が標的とする標的核酸の標的セグメントの逆相補鎖を含む核酸塩基配
列を有する。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１０～３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１２～３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１２～２２サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１４～３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１４～２０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１５～３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１５～２０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１６～３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１６～２０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１７～３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１７～２０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１８～３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１８～２１サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１８～２０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が２０～３０サブユニット長である。言い換えると、そのようなアンチセンス化合物は、それぞれ１２～３０個の連結されたサブユニット、１４～３０個の連結されたサブユニット、１４～２０個のサブユニット、１５～３０個のサブユニット、１５～２０個のサブユニット、１６～３０個のサブユニット、１６～２０個のサブユニット、１７～３０個のサブユニット、１７～２０個のサブユニット、１８～３０個のサブユニット、１８～２０個のサブユニット、１８～２１個のサブユニット、２０～３０個のサブユニット、または１２～２２個の連結されたサブユニットである。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１４サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１６サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１７サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１８サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が１９サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が２０サブユニット長である。別の実施形態では、アンチセンス化合物が、８～８０、１２～５０、１３～３０、１３～５０、１４～３０、１４～５０、１５～３０、１５～５０、１６～３０、１６～５０、１７～３０、１７～５０、１８～２２、１８～２４、１８～３０、１８～５０、１９～２２、１９～３０、１９～５０、または２０～３０個の連結されたサブユニットである。特定のそのような実施形態では、アンチセンス化合物が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０個の連結されたサブユニットの長さ、または上記の値のいずれか２つによって画定される範囲である。いくつかの実施形態では、前記アンチセンス化合物がアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、前記連結されたサブユニットがヌクレオチドである。
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドが短縮または切断されていてもよい。例えば、単一のサブユニットを５’端から欠失させるか（５’切断）、あるいは３’端から欠失させること（３’切断）ができる。ＣＦＢ核酸を標的とする短縮型または切断型アンチセンス化合物は、アンチセンス化合物の５’端から２つのサブユニットが欠失しているか、あるいは３’端から２つのサブユニットが欠失していてもよい。あるいは、欠失したヌクレオシドは、アンチセンス化合物全体に分散していてもよい（例えば１つのヌクレオチドが５’端から欠失し１つのヌクレオシドが３’端から欠失しているアンチセンス化合物）。
延長されたアンチセンス化合物中に単一の追加サブユニットが存在する場合、前記追加サブユニットはアンチセンス化合物の５’端にあっても、３’端にあってもよい。２つ以上のサブユニットが存在する場合、追加されたサブユニットは互いに隣り合っていてもよい（例えば２つのサブユニットがアンチセンス化合物の５’端に付加されているか（５’付加）、あるいは３’端に付加されている（３’付加）アンチセンス化合物）。あるいは、付加されたサブユニットは、アンチセンス化合物全体に分散していてもよい（例えば１つのサブユニットが５’端に付加され、１つのサブユニットが３’端に付加されているアンチセンス化合物）。
活性を排除することなく、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス化合物の長さを増加しもしくは減少させ、かつ／またはミスマッチ塩基を導入することができる。例えばＷｏｏｌｆら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７３０５－７３０９，１９９２）では、１３～２５核酸塩基長の一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、標的ＲＮＡの切断を誘導するその能力について、卵母細胞注入モデルで試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドの末端近くに８個または１１個のミスマッチ塩基を含む２５核酸塩基長のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミスマッチを含まないアンチセンスオリゴヌクレオチドほどではなかったものの、標的ｍＲＮＡの特異的切断を指示することができた。また、標的特異的切断が、１３核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチド（１つまたは３つのミスマッチを持つものを含む）を使って達成された。
Ｇａｕｔｓｃｈｉら（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９３：４６３－４７１，Ｍａｒｃｈ ２００１）は、ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡに対して１００％の相補性を有し、かつｂｃｌ－ｘＬ ｍＲＮＡに対して３つのミスマッチを有するオリゴヌクレオチドが、インビトロ及びインビボでｂｃｌ－２とｂｃｌ－ｘＬの発現をどちらも低減できることを実証した。さらにまた、このオリゴヌクレオチドはインビボで強力な抗腫瘍活性も示した。
ＭａｈｅｒとＤｏｌｎｉｃｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１６：３３４１－３３５８，１９８８）は、一連のタンデム１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチド、ならびにそれぞれ２つまたは３つの前記タンデムアンチオリゴヌクレオチドの配列で構成される２８核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチド及び４２核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ヒトＤＨＦＲの翻訳を停止させるその能力について、ウサギ網状赤血球アッセイで試験した。３つの１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドのそれぞれは単独で、２８核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは４２核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドよりもレベルは低かったものの、翻訳を阻害することができた。
特定のアンチセンス化合物モチーフ及び機序
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、強化された阻害活性、標的核酸に対する増加した結合アフィニティ、またはインビボヌクレアーゼによる分解に対する耐性などといった性質が前記アンチセンス化合物に付与されるようなパターンまたはモチーフで配置された化学修飾サブユニットを有する。
キメラアンチセンス化合物は、典型的には、ヌクレアーゼ分解に対する増加した耐性、増加した細胞取り込み、標的核酸に対する増加した結合アフィニティ、及び／または増加した阻害活性が付与されるように修飾された少なくとも１つの領域を含有する。キメラアンチセンス化合物の第２の領域は、例えばＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼＲＮａｓｅ Ｈの基質として役立つなどといった、もう一つの望ましい性質を付与しうる。
アンチセンス活性は、アンチセンス化合物（例えばオリゴヌクレオチド）と標的核酸と
のハイブリダイゼーションが関与し、そのハイブリダイゼーションが最終的に生物学的活性をもたらす機序であれば、どの機序に起因するものであってもよい。特定の実施形態では、標的核酸の量及び／または活性が調節される。特定の実施形態では、標的核酸の量及び／または活性が低減する。特定の実施形態では、標的核酸へのアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションが、最終的に、標的核酸分解をもたらす。特定の実施形態では、標的核酸へのアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションが、標的核酸分解をもたらさない。特定のそのような実施形態では、標的核酸とハイブリダイズしたアンチセンス化合物の存在（占有）が、アンチセンス活性の調節をもたらす。特定の実施形態では、ある特定の化学モチーフまたは化学修飾のパターンを有するアンチセンス化合物が、１つ以上の機序を活用するのに、特に適している。特定の実施形態では、２つ以上の機序によって、かつ／またはまだ解明されていない機序によって、アンチセンス化合物が機能する。したがって、本明細書に記載するアンチセンス化合物は、ある特定の機序に限定されるものではない。
アンチセンス機序には、ＲＮａｓｅ Ｈによるアンチセンス；ＲＮＡｉ機序（これはＲＩＳＣ経路を利用するもので、ｓｉＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ及びマイクロＲＮＡ機序がこれに含まれるが、これらに限定されない）；及び占有に基づく機序などがあるが、これらに限定されない。特定のアンチセンス化合物は、２つ以上のそのような機序によって、かつ／またはさらに他の機序によって、作用しうる。
ＲＮａｓｅ Ｈによるアンチセンス
特定の実施形態では、アンチセンス活性が、少なくとも部分的には、ＲＮａｓｅ Ｈによる標的ＲＮＡの分解に起因する。ＲＮａｓｅ Ｈは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼである。「ＤＮＡ様」の一本鎖アンチセンス化合物は哺乳動物細胞においてＲＮａｓｅ Ｈ活性を引き出すことが、当技術分野では知られている。したがって、ＤＮＡヌクレオシドまたはＤＮＡ様ヌクレオシドの少なくとも一部分を含むアンチセンス化合物は、ＲＮａｓｅ Ｈを活性化して、標的核酸の切断をもたらしうる。特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ Ｈを利用するアンチセンス化合物が、１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む。特定の実施形態では、そのようなアンチセンス化合物が、１～８個の修飾ヌクレオシドのブロックを少なくとも１つは含む。特定のそのような実施形態では、前記修飾ヌクレオシドがＲＮａｓｅ Ｈ活性を支持しない。特定の実施形態では、そのようなアンチセンス化合物が、本明細書に記載するギャップマーである。特定のそのような実施形態では、前記ギャップマーのギャップがＤＮＡヌクレオシドを含む。特定のそのような実施形態では、前記ギャップマーのギャップがＤＮＡ様ヌクレオシドを含む。特定のそのような実施形態では、前記ギャップマーのギャップがＤＮＡヌクレオシドとＤＮＡ様ヌクレオシドを含む。
ギャップマーモチーフを有する特定のアンチセンス化合物は、キメラアンチセンス化合物とみなされる。ギャップマーでは、ＲＮａｓｅＨ切断を支持する複数のヌクレオチドを有する内側領域が、内側領域のヌクレオシドとは化学的に異なる複数のヌクレオチドを有する外側領域の間に配置されている。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ギャップセグメントは一般にエンドヌクレアーゼ切断の基質として役立ち、一方、ウイングセグメントは修飾ヌクレオシドを含む。特定の実施形態では、ギャップマーの領域が、個々の異なる領域を構成する糖部分のタイプによって区別される。ギャップマーの領域を区別するために使用される糖部分のタイプとして、いくつかの実施形態では、β－Ｄ－リボヌクレオシド、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオシド、２’－修飾ヌクレオシド（そのような２’－修飾ヌクレオシドとして、例えば２’－ＭＯＥや２’－Ｏ－ＣＨ３などを挙げることができる）、及び二環式糖修飾ヌクレオシド（そのような二環式糖修飾ヌクレオシドとして拘束エチルを有するものを挙げることができる）が挙げられる。特定の実施形態では、ウイング中のヌクレオシドがいくつかの修飾糖部分、例えば
２’－ＭＯＥや、拘束エチルまたはＬＮＡなどの二環式糖部分を含む。特定の実施形態では、ウイングがいくつかの修飾糖部分と無修飾糖部分を含む。特定の実施形態では、ウイングが、２’－ＭＯＥヌクレオシド、拘束エチルヌクレオシドやＬＮＡヌクレオシドなどの二環式糖部分、及び２’－デオキシヌクレオシドのさまざまな組み合わせを含みうる。
異なる領域は、それぞれ一様な糖部分を含むか、異なった糖部分を含むか、または交互に並んだ糖部分を含みうる。ウイング－ギャップ－ウイングモチーフは、しばしば「Ｘ－Ｙ－Ｚ」と記載されるが、この場合、「Ｘ」は５’－ウイングの長さを表し、「Ｙ」はギャップの長さを表し、「Ｚ」は３’－ウイングの長さを表す。「Ｘ」と「Ｚ」は、一様な糖部分を含むか、異なった糖部分を含むか、または交互に並んだ糖部分を含みうる。特定の実施形態では、「Ｘ」と「Ｙ」が、１つ以上の２’－デオキシヌクレオシドを含みうる。「Ｙ」は２’－デオキシヌクレオシドを含みうる。本明細書において、「Ｘ－Ｙ－Ｚ」と記述されるギャップマーは、ギャップが５’－ウイング及び３’－ウイングのそれぞれと直接隣り合って配置されるような構成を有する。したがって、５’－ウイングとギャップの間にも、ギャップと３’－ウイングの間にも、介在ヌクレオチドは存在しない。本明細書に記載するアンチセンス化合物はいずれもギャップマーモチーフを有することができる。特定の実施形態では、「Ｘ」と「Ｚ」が同じであり、別の実施形態では、それらが異なる。特定の実施形態では、「Ｙ」が８～１５ヌクレオシドである。Ｘ、Ｙ、またはＺは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、もしくは３０ヌクレオシドまたはそれ以上のいずれであることもできる。
特定の実施形態において、ＣＦＢ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、ギャップが６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の連結されたヌクレオシドからなるギャップマーモチーフを有する。
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の式Ａによって記述される糖モチーフを有する：（Ｊ）ｍ－（Ｂ）ｎ－（Ｊ）ｐ－（Ｂ）ｒ－（Ａ）ｔ－（Ｄ）ｇ－（Ａ）ｖ－（Ｂ）ｗ－（Ｊ）ｘ－（Ｂ）ｙ－（Ｊ）ｚ
式中、
各Ａは独立して２’置換ヌクレオシドであり、
各Ｂは独立して二環式ヌクレオシドであり、
各Ｊは独立して２’－置換ヌクレオシドまたは２’－デオキシヌクレオシドであり、
各Ｄは２’－デオキシヌクレオシドであり、
ｍは０～４であり、ｎは０～２であり、ｐは０～２であり、ｒは０～２であり、ｔは０～２であり、ｖは０～２であり、ｗは０～４であり、ｘは０～２であり、ｙは０～２であり、ｚは０～４であり、ｇは６～１４である；
ただし、
ｍ、ｎ、及びｒのうちの少なくとも１つは０ではなく、
ｗ及びｙのうちの少なくとも１つは０ではなく、
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ、及びｔの和は２～５であり、かつ
ｖ、ｗ、ｘ、ｙ、及びｚの和は２～５であるものとする。
ＲＮＡｉ化合物
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が干渉ＲＮＡ化合物（ＲＮＡｉ）であり、これには、二本鎖ＲＮＡ化合物（短鎖干渉ＲＮＡまたはｓｉＲＮＡともいう）と一本鎖ＲＮＡｉ化合物（すなわちｓｓＲＮＡ）が含まれる。そのような化合物は、少なくとも部分的には、ＲＩＳＣ経路によって作動して、標的核酸を分解しかつ／または隔離する（したがってマイクロＲＮＡ／マイクロＲＮＡ模倣化合物を含む）。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、それらをそのような機序に特に適したものにする修飾を含む。
ｉ．ｓｓＲＮＡ化合物
特定の実施形態において、アンチセンス化合物（一本鎖ＲＮＡｉ化合物（ｓｓＲＮＡ）としての使用に特に適したものを含む）は、修飾５’末端を含む。特定のそのような実施形態では、前記５’末端が修飾ホスフェート部分を含む。特定の実施形態では、そのような修飾ホスフェートが安定化されている（例えば無修飾５’－ホスフェートと比較して分解／切断に対して耐性である）。特定の実施形態では、そのような５’末端ヌクレオシドが５’－リン部分を安定化する。当技術分野では、いくつかの修飾５’末端ヌクレオシドを、例えばＷＯ／２０１１／１３９７０２などに見いだすことができる。
特定の実施形態では、ｓｓＲＮＡ化合物の５’－ヌクレオシドが式ＩＩｃを有する：
Figure 0007001663000010
 式中、
Ｔ１は、保護されていてもよいリン部分であり、
Ｔ２は、式ＩＩｃの化合物をオリゴマー化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、
Ａは式：
Figure 0007001663000011
 の一つを有し；
Ｑ１及びＱ２は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたはＮ（Ｒ３）（Ｒ４）であり、
Ｑ３は、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｒ５）またはＣ（Ｒ６）（Ｒ７）であり、
各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキルまたはＣ１－Ｃ６アルコキシであり、
Ｍ３は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１４、Ｃ（Ｒ１５）（Ｒ１６）、Ｃ（Ｒ１５）（Ｒ１６）Ｃ（Ｒ１７）（Ｒ１８）、Ｃ（Ｒ１５）＝Ｃ（Ｒ１７）、ＯＣ（Ｒ１５）（Ｒ１６）またはＯＣ（Ｒ１５）（Ｂｘ２）であり、
Ｒ１４は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｂｘ１は複素環式塩基部分であるか；または
Ｂｘ２が存在する場合には、Ｂｘ２が複素環式塩基部分であり、かつＢｘ１がＨ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１
－Ｃ６アルコキシ、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｊ４、Ｊ５、Ｊ６及びＪ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルであるか；または
Ｊ４が、Ｊ５またはＪ７の一方と共に、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１９、Ｃ（Ｒ２０）（Ｒ２１）、Ｃ（Ｒ２０）＝Ｃ（Ｒ２１）、Ｃ［＝Ｃ（Ｒ２０）（Ｒ２１）］及びＣ（＝Ｏ）から選択される１～３個の連結されたビラジカル基を含む橋を形成し、かつＪ５、Ｊ６及びＪ７の残り２つが、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルであり、
各Ｒ１９、Ｒ２０及びＲ２１は、独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｇは、Ｈ、ＯＨ、ハロゲンまたはＯ－［Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）］ｎ－［（Ｃ＝Ｏ）ｍ－Ｘ１］ｊ－Ｚであり、
各Ｒ８及びＲ９は、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｘ１は、Ｏ、ＳまたはＮ（Ｅ１）であり、
Ｚは、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたはＮ（Ｅ２）（Ｅ３）であり、
Ｅ１、Ｅ２及びＥ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１－Ｃ６アルキルであり、
ｎは、１～約６であり、
ｍは、０または１であり、
ｊは、０または１であり、
各置換基は、ハロゲン、ＯＪ１、Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）、＝ＮＪ１、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＮ、ＯＣ（＝Ｘ２）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ２）Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）及びＣ（＝Ｘ２）Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）から独立して選択される１つ以上の置換されていてもよい置換基を含み、
Ｘ２は、Ｏ、ＳまたはＮＪ３であり、
各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立して、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｊが１である場合、ＺはハロゲンでもＮ（Ｅ２）（Ｅ３）でもなく、かつ
前記オリゴマー化合物は８～４０個のモノマー型サブユニットを含み、標的核酸の少なくとも一部分にハイブリダイズ可能である。
特定の実施形態では、Ｍ３が、Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、ＯＣＨ２またはＯＣ（Ｈ）（Ｂｘ２）である。特定の実施形態では、Ｍ３がＯである。
特定の実施形態では、Ｊ４、Ｊ５、Ｊ６及びＪ７がそれぞれＨである。特定の実施形態では、Ｊ４が、Ｊ５またはＪ７の一方と共に橋を形成する。
特定の実施形態では、Ａが、式：
Figure 0007001663000012
 の一方を有し、
式中、
Ｑ１及びＱ２は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシまたは置換Ｃ１－Ｃ６アルコキシである。特定の実施形態では、Ｑ１及びＱ２が、それぞれＨである。特定の実施形態では、Ｑ１及びＱ２が、それぞれ独立して、Ｈまたはハロゲンである。特定の実施形態では、Ｑ１及びＱ２がＨであり、Ｑ１及びＱ２の他方がＦ、ＣＨ３またはＯＣＨ３である。
特定の実施形態では、Ｔ１が式：
Figure 0007001663000013
を有し、
式中、
Ｒａ及びＲｃは、それぞれ独立して、保護ヒドロキシル、保護チオール、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、保護アミノまたは置換アミノであり、かつ
Ｒｂは、ＯまたはＳである。特定の実施形態では、ＲｂがＯであり、Ｒａ及びＲｃが、それぞれ独立して、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３またはＣＨ（ＣＨ３）２である。
特定の実施形態では、Ｇが、ハロゲン、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２Ｆ、ＯＣＨＦ２、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｆ、ＯＣＨ２ＣＨＦ２、ＯＣＨ２ＣＦ３、ＯＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２－ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＣＦ３、Ｏ（ＣＨ２）３－Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＮ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ（ＣＨ２）２－Ｏ（ＣＨ２）２－Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ１２）－（ＣＨ２）２－Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）またはＯ（ＣＨ２）２－Ｎ（Ｒ１２）－Ｃ（＝ＮＲ１３）［Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）］であり、式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルである。特定の実施形態では、Ｇが、ハロゲン、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＦ３、ＯＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２－Ｏ（ＣＨ２）２－Ｎ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－（ＣＨ２）２－Ｎ（ＣＨ３）２またはＯＣＨ２－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。特定の実施形態では、Ｇが、Ｆ、ＯＣＨ３またはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３である。特定の実施形態では、ＧがＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３である。
特定の実施形態では、前記５’末端ヌクレオシドが式ＩＩｅ：
Figure 0007001663000014
 を有する。
特定の実施形態において、アンチセンス化合物（ｓｓＲＮＡに特に適したものを含む）は、オリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って、所定のパターンまたは糖修飾モチーフで配置された、１タイプ以上の修飾糖部分及び／または天然に存在する糖部分を含む。そのようなモチーフは、本明細書で論じる糖修飾及び／または他の既知の糖修飾をどれでも含みうる。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、一様な糖修飾を有する領域を含むか、または一様な糖修飾を有する領域からなる。特定のそのような実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドが、同じＲＮＡ様糖修飾を含む。特定の実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドが２’－Ｆヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドが２’－ＯＭｅヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドが２’－ＭＯＥヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドがｃＥｔヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドがＬＮＡヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記一様な領域が、前記オリゴヌクレオチドの全部または本質的に全部を構成する。特定の実施形態では、前記領域が１～４個の末端ヌクレオシドを除くオリゴヌクレオシド全体を構成する。
特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、糖修飾が交互に並んだ１つ以上の領域を含み、前記ヌクレオシドは、第１タイプの糖修飾を有するヌクレオチドと、第２タイプの糖修飾を有するヌクレオチドとの間で交互する。特定の実施形態では、両タイプのヌクレオシドがＲＮＡ様ヌクレオシドである。特定の実施形態では、交互に並ぶヌクレオシドが、２’－ＯＭｅ、２’－Ｆ、２’－ＭＯＥ、ＬＮＡ、及びｃＥｔから選択される。特定の実施形態では、交互修飾が、２’－Ｆ及び２’－ＯＭｅである。そのような領域は連続していてもよいし、異なる修飾がなされたヌクレオシドまたは共役ヌクレオシドによって中断されていてもよい。
特定の実施形態では、交互修飾の交互領域が、それぞれ単一のヌクレオシドからなる（すなわち、パターンは（ＡＢ）ｘＡｙであり、ここでＡは第１タイプの糖修飾を有するヌクレオシドであり、Ｂは第２タイプの糖修飾を有するヌクレオシドである。また、ｘは１～２０であり、ｙは０または１である）。特定の実施形態では、交互モチーフで交互に並ぶ１つ以上の領域が、あるタイプのヌクレオシドを２つ以上含む。例えばオリゴヌクレオチドは、以下のヌクレオシドモチーフのいずれかの領域を１つ以上含みうる：
ＡＡＢＢＡＡ、
ＡＢＢＡＢＢ、
ＡＡＢＡＡＢ、
ＡＢＢＡＢＡＡＢＢ、
ＡＢＡＢＡＡ、
ＡＡＢＡＢＡＢ、
ＡＢＡＢＡＡ、
ＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ、
ＢＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ、または
ＡＢＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ
［式中、Ａは第１タイプのヌクレオシドであり、Ｂは第２タイプのヌクレオシドである］。特定の実施形態では、Ａ及びＢは、それぞれ２’－Ｆ、２’－ＯＭｅ、ＢＮＡ、及びＭＯＥから選択される。
特定の実施形態では、そのような交互モチーフを有するオリゴヌクレオチドが、修飾５’末端ヌクレオシド、例えば式ＩＩｃまたは式ＩＩｅに示すものも含む。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、２－２－３モチーフを有する領域を含む。そのような領域は、以下のモチーフを含む：
－（Ａ）２－（Ｂ）ｘ－（Ａ）２－（Ｃ）ｙ－（Ａ）３－
式中、Ａは第１タイプの修飾ヌクレオシドであり、
Ｂ及びＣは、Ａとは異なる修飾がなされたヌクレオシドであるが、ＢとＣとは互いに同じ修飾を有しても異なる修飾を有してもよく、
ｘ及びｙは１～１５である。
特定の実施形態では、Ａが２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態では、Ｂ及びＣがどちらも２’－Ｆ修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態では、Ａが２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオシドであり、かつＢとＣがどちらも２’－Ｆ修飾ヌクレオシドである。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオシドが、以下の糖モチーフを有する：
５’－（Ｑ）－（ＡＢ）ｘＡｙ－（Ｄ）ｚ
式中、
Ｑは、安定化されたホスフェート部分を含むヌクレオシドであり（特定の実施形態では、Ｑが、式ＩＩｃまたは式ＩＩｅを有するヌクレオシドである）、
Ａは、第１タイプの修飾ヌクレオシドであり、
Ｂは、第２タイプの修飾ヌクレオシドであり、
Ｄは、Ｄと隣り合うヌクレオシドとは異なる修飾を含む修飾ヌクレオシドであり（したがって、もしｙが０であれば、Ｄには、Ｂとは異なる修飾がなされていなければならず、ｙが１であれば、Ｄには、Ａとは異なる修飾がなされていなくてはならない。特定の実施形態では、Ｄが、ＡともＢとも異なる）、
Ｘは５～１５であり、
Ｙは０または１であり、
Ｚは０～４である。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオシドが次の糖モチーフを有する：
５’－（Ｑ）－（Ａ）ｘ－（Ｄ）ｚ
式中、
Ｑは、安定化されたホスフェート部分を含むヌクレオシドであり（特定の実施形態では、Ｑが式ＩＩｃまたは式ＩＩｅを有するヌクレオシドである）、
Ａは、第１タイプの修飾ヌクレオシドであり、
Ｄは、Ａとは異なる修飾を含む修飾ヌクレオシドであり、
Ｘは１１～３０であり、
Ｚは０～４である。
特定の実施形態では、上記モチーフ中のＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤが、２’－ＯＭｅ、２’－Ｆ、２’－ＭＯＥ、ＬＮＡ、及びｃＥｔから選択される。特定の実施形態では、Ｄが末端
ヌクレオシドを表す。特定の実施形態では、そのような末端ヌクレオシドが、標的核酸にハイブリダイズするようには設計されていない（ただし偶然ハイブリダイズするものは多少あるかもしれない）。特定の実施形態では、各Ｄヌクレオシドの核酸塩基が、標的核酸の対応する位置にある核酸塩基の実体には関わりなく、アデニンである。特定の実施形態では、各Ｄヌクレオシドの核酸塩基がチミンである。
特定の実施形態において、アンチセンス化合物（ｓｓＲＮＡとしての使用に特に適したものを含む）は、オリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って、所定のパターンまたは修飾ヌクレオシド間連結部モチーフで配置された修飾ヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、交互ヌクレオシド間連結部モチーフを有する領域を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、一様な修飾ヌクレオシド間連結部の領域を含む。特定のそのような実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部によって一様に連結された領域を含む。特定の実施形態では、前記オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部によって一様に連結されている。特定の実施形態では、前記オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部が、ホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択される。特定の実施形態では、前記オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択され、かつ少なくとも１つのヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートである。
特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも６つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも８つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個のホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも６つの連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも８つの連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１２個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定のそのような実施形態では、少なくとも１つのそのようなブロックが、前記オリゴヌクレオチドの３’端に位置する。特定のそのような実施形態では、少なくとも１つのそのようなブロックが、前記オリゴヌクレオチドの３’端から３ヌクレオシド以内に位置する。
本明細書に記載するさまざまな糖モチーフのいずれかを有するオリゴヌクレオチドは、任意の連結部モチーフを有しうる。例えばオリゴヌクレオチド（例えば上述のものが挙げられるが、それらに限定されない）は、以下の非限定的な表から選択される連結部モチーフを有しうる。
Figure 0007001663000015
ｉｉ．ｓｉＲＮＡ化合物
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が二本鎖ＲＮＡｉ化合物（ｓｉＲＮＡ）である。そのような実施形態では、一方の鎖または両方の鎖が、ｓｓＲＮＡについて上述した任意の修飾モチーフを含みうる。特定の実施形態において、ｓｓＲＮＡ化合物は無修飾ＲＮＡでありうる。特定の実施形態において、ｓｉＲＮＡ化合物は無修飾ＲＮＡヌクレオシドと修飾ヌクレオシド間連結部とを含みうる。
いくつかの実施形態は、二本鎖組成物であって、各鎖が１つ以上の修飾ヌクレオシドまたは無修飾ヌクレオシドの場所によって定義されるモチーフを含む、前記二本鎖組成物に関する。特定の実施形態では、完全にハイブリダイズするかまたは少なくとも部分的にハイブリダイズして二重鎖領域を形成する第１オリゴマー化合物と第２オリゴマー化合物とを含む組成物であって、核酸標的に相補的で核酸標的にハイブリダイズする領域をさらに含む、前記組成物が提供される。そのような組成物が、核酸標的に対する完全な相補性または部分的相補性を有するアンチセンス鎖である第１オリゴマー化合物と、第１オリゴマー化合物に対して相補的な１つ以上の領域を有し第１オリゴマー化合物と共に少なくとも１つの二重鎖領域を形成する第２オリゴマー化合物とを含むことは、適切である。
いくつかの実施形態の組成物は、核酸標的にハイブリダイズしてその正常な機能を失わせることにより、遺伝子発現を調節する。いくつかの実施形態では、標的核酸がＣＦＢである。特定の実施形態では、標的としたＣＦＢの分解が、本発明の組成物によって形成される活性化ＲＩＳＣ複合体によって助長される。
いくつかの実施形態は、二本鎖組成物であって、一方の鎖が、例えばＲＩＳＣ（または切断）複合体への反対鎖の優先ローディングに影響を及ぼすのに役立つ、前記二本鎖組成物に向けられる。これらの組成物は、選ばれた核酸分子を標的にし、１つ以上の遺伝子の発現を調節するのに有用である。いくつかの実施形態では、本発明の組成物が、標的ＲＮＡの一部分にハイブリダイズすることで、前記標的ＲＮＡの正常な機能を失わせる。
特定の実施形態は、二本鎖組成物であって、両方の鎖がヘミマー（ｈｅｍｉｍｅｒ）モチーフ、完全修飾モチーフ、位置修飾モチーフまたは交互モチーフを含む、前記二本鎖組成物に向けられる。本発明の組成物の各鎖は、例えばｓｉＲＮＡ経路において、ある特定の役割を果たすように、修飾することができる。各鎖に異なるモチーフを使用するか、各鎖に異なる化学修飾を持つ同じモチーフを使用することにより、アンチセンス鎖をＲＩＳＣ複合体に誘導すると同時に、センス鎖の組込みを阻害することができる。このモデルでは、各鎖を、その特定の役割が強化されるように、独立して修飾することができる。アンチセンス鎖は、ＲＩＳＣの一領域におけるその役割を強化するために、５’端を修飾することができ、一方、３’端には、ＲＩＳＣの異なる領域におけるその役割を強化するために、異なる修飾を加えることができる。
二本鎖オリゴヌクレオチド分子は、自己相補的なセンス領域とアンチセンス領域とを含み、前記アンチセンス領域は、標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、前記センス領域は標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を有する、二本鎖ポリヌクレオチド分子であることができる。二本鎖オリゴヌクレオチド分子は、一方の鎖がセンス鎖であり、他方がアンチセンス鎖である、２つの別個のオリゴヌクレオチドから組み立てることができ、前記アンチセンス鎖及びセンス鎖は自己相補的である（すなわち各鎖は、他方の鎖のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列であって、例えばアンチセンス鎖とセンス鎖は二重鎖構造または二本鎖構造を形成し、例えば前記二本鎖領域は約１５～約３０、例えば約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０塩基対である。また、アンチセンス鎖は標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス鎖は標的核酸配列またはその一部分に対応する
ヌクレオチド配列を含む（例えば、二本鎖オリゴヌクレオチド分子のうちの約１５～約２５ヌクレオチドまたはそれ以上が、標的核酸またはその一部分に相補的である）。あるいは、前記二本鎖オリゴヌクレオチドは単一のオリゴヌクレオチドから組み立てられ、この場合、ｓｉＲＮＡの自己相補的なセンス領域及びアンチセンス領域は、核酸系リンカーまたは非核酸系リンカーを利用して連結されている。
前記二本鎖オリゴヌクレオチドは、二重鎖、非対称二重鎖、ヘアピンまたは非対称ヘアピン二次構造を持ち、自己相補的センス領域とアンチセンス領域とを有する、ポリヌクレオチドであって、前記アンチセンス領域が、別個の標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、前記センス領域が前記標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を有するものであることができる。前記二本鎖オリゴヌクレオチドは、２つ以上のループ構造と、自己相補的なセンス領域及びアンチセンス領域を含むステムとを有する環状一本鎖ポリヌクレオチドであって、前記アンチセンス領域は標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、かつ前記センス領域は前記標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を有するものであることができ、前記環状ポリヌクレオチドは、インビボまたはインビトロでプロセシングを受けて、ＲＮＡｉを媒介する能力を有する活性なｓｉＲＮＡ分子を生成させることができる。
特定の実施形態では、前記二本鎖オリゴヌクレオチドが、別個のセンス配列またはセンス領域及びアンチセンス配列またはアンチセンス領域を含み、前記センス領域とアンチセンス領域は、当技術分野に知られているヌクレオチド連結分子または非ヌクレオチド連結分子によって共有結合的に連結されているか、あるいはイオン相互作用、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、及び／またはスタッキング相互作用によって非共有結合的に連結されている。特定の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドが、標的遺伝子のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含む。もう一つの実施形態では、前記二本鎖オリゴヌクレオチドが、標的遺伝子のヌクレオチド配列と、前記標的遺伝子の発現阻害を引き起こすような形で相互作用する。
本明細書にいう二本鎖オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡだけを含有する分子に限定される必要はなく、さらに化学修飾ヌクレオチド及び非ヌクレオチドも包含する。特定の実施形態において、短鎖干渉核酸分子は２’－ヒドロキシ（２’－ＯＨ）含有ヌクレオチドを欠く。特定の実施形態において、短鎖干渉核酸は、場合によっては、リボヌクレオチド（例えば２’－ＯＨ基を有するヌクレオチド）を一切含まない。しかし、ＲＮＡｉを支持するために分子内にリボヌクレオチドの存在を必要としないそのような二本鎖オリゴヌクレオチドには、２’－ＯＨ基を持つ１つまたは複数のヌクレオチドを含有する１つまたは複数のリンカーを取り付けておくか、２’－ＯＨ基を持つ１つまたは複数のヌクレオチドを含有する他の基、部分、または鎖を取り付けまたは会合させておくことができる。場合により、二本鎖オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド位置の約５、１０、２０、３０、４０、または５０％に、リボヌクレオチドを含むことができる。本明細書において使用する用語ｓｉＲＮＡは、配列特異的ＲＮＡｉを媒介する能力を有する核酸分子を記載するために使用される他の用語、例えば短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、短鎖干渉オリゴヌクレオチド、短鎖干渉核酸、短鎖干渉修飾オリゴヌクレオチド、化学修飾ｓｉＲＮＡ、転写後遺伝子サイレンシングＲＮＡ（ｐｔｇｓＲＮＡ）その他と等価であるものとする。加えて、本明細書において使用する用語ＲＮＡｉは、配列特異的ＲＮＡ干渉を記述するために使用される他の用語、例えば転写後遺伝子サイレンシング、翻訳阻害、またはエピジェネティクスなどと等価であるものとする。例えば、二本鎖オリゴヌクレオチドは、転写後レベルと転写前レベルのどちらでも、遺伝子をエピジェネティックにサイレンシングするために使用することができる。非限定的な一例において、本発明のｓｉＲＮＡ分子に
よる遺伝子発現のエピジェネティックな調整は、遺伝子発現を改変するためのクロマチン構造またはメチル化パターンのｓｉＲＮＡ媒介修飾に起因しうる（例えばＶｅｒｄｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６７２－６７６；Ｐａｌ－Ｂｈａｄｒａ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６６９－６７２；Ａｌｌｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８１８－１８１９；Ｖｏｌｐｅ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８３３－１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２１５－２２１８；及びＨａｌｌ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２３２－２２３７を参照されたい）。
ここに提供するいくつかの実施形態の化合物及び組成物は、例えば自己相補的配列を持つ一本のＲＮＡ鎖が二本鎖コンフォメーションをとる能力を持つ「ヘアピン」またはステム－ループ二本鎖ＲＮＡエフェクター分子や、２本の別個のＲＮＡ鎖を含む二重鎖ｄｓＲＮＡエフェクター分子などといったｄｓＲＮＡ媒介遺伝子サイレンシング機序またはＲＮＡｉ機序によって、ＣＦＢを標的にすることができると考えられる。さまざまな実施形態において、ｄｓＲＮＡはもっぱらリボヌクレオチドからなるか、またはリボヌクレオチドとデオキシリボヌクレオチドの混合物からなる（例えば２０００年４月１９日に出願されたＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日に出願された米国出願第６０／１３０，３７７号などに開示されているＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッド）。ｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡエフェクター分子は、前記分子の一セグメントが前記分子のもう一つのセグメントにあるヌクレオチドと塩基対を形成するように自己相補性領域を持つ単一の分子でありうる。さまざまな実施形態において、単一の分子からなるｄｓＲＮＡは、もっぱらリボヌクレオチドからなるか、またはデオキシリボヌクレオチドの領域に相補的なリボヌクレオチドの領域を含む。あるいは、ｄｓＲＮＡは、互いに相補性領域を有する２つの異なる鎖を含みうる。
さまざまな実施形態では、両方の鎖がもっぱらリボヌクレオチドからなるか、一方の鎖がもっぱらリボヌクレオチドからなり、かつ一方の鎖がもっぱらデオキシリボヌクレオチドからなるか、または一方もしくは両方の鎖がリボヌクレオチドとデオキシリボヌクレオチドの混合物を含有する。特定の実施形態では、相補性領域が、互いに、及び標的核酸配列に対して、少なくとも７０、８０、９０、９５、９８、または１００％相補的である。特定の実施形態では、二本鎖コンフォメーションで存在するｄｓＲＮＡの領域が、少なくとも１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、５０、７５、１００、２００、５００、１０００、２０００または５０００ヌクレオチドを含むか、ｄｓＲＮＡに表現されているｃＤＮＡまたは他の標的核酸配列中のヌクレオチドのすべてを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡが、一本鎖端などの一本鎖領域を一切含有しないか、またはｄｓＲＮＡがヘアピンである。別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが１つ以上の一本鎖領域またはオーバーハングを有する。特定の実施形態では、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドが、アンチセンス鎖またはアンチセンス領域である（例えば標的核酸に対して少なくとも７０、８０、９０、９５、９８、または１００％の相補性を有する）ＤＮＡ鎖またはＤＮＡ領域と、センス鎖またはセンス領域である（例えば標的核酸に対して少なくとも７０、８０、９０、９５、９８、または１００％の同一性を有する）ＲＮＡ鎖またはＲＮＡ領域とを含むか、またはその逆である。
さまざまな実施形態では、前記ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドが、酵素法または化学合成法、例えば本明細書に記載するもの、または２０００年４月１９日に出願されたＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日に出願された米国出願第６０／１３０，３７７号に記載されているものを使って、インビトロで作製される。別の実施形態では、インビトロで合成されたＤＮＡ鎖が、細胞への前記ＤＮＡ鎖の形質転換に先だって、またはその後に、またはそれと並行して、インビボまたはインビトロで作製されたＲＮＡ鎖と複合体を形成する。さらに別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが、センス領域とアンチセンス領域と
を含有する単一の環状核酸であるか、またはｄｓＲＮＡが、環状核酸と第二の環状核酸または線状核酸とを含む（例えば２０００年４月１９日に出願されたＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日に出願された米国出願第６０／１３０，３７７号を参照されたい）。例示的環状核酸として、ヌクレオチドの遊離５’ホスホリル基がもう一つのヌクレオチドの２’ヒドロキシル基に輪を描いて元に戻るように連結された状態になる、投げ縄（ｌａｒｉａｔ）構造が挙げられる。
別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが、糖の２’位にハロゲン（フッ素基など）を含有するか、アルコキシ基（メトキシ基など）を含有する修飾ヌクレオチドを１つ以上含有する。このハロゲンまたはアルコキシ基は、対応する２’位が水素またはヒドロキシル基を含有する対応するｄｓＲＮＡと比較して、ｄｓＲＮＡのインビトロまたはインビボでの半減期を増加させる。さらに別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが、隣接するヌクレオチド間に天然に存在するホスホジエステル連結部以外の連結部を１つ以上含む。そのような連結部の例として、ホスホルアミド、ホスホロチオエート、及びホスホロジチオエート連結部が挙げられる。ｄｓＲＮＡは、米国特許第６，６７３，６６１号に教示されているような化学修飾核酸分子であってもよい。別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが、例えば２０００年４月１９日に出願されたＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日に出願された米国出願第６０／１３０，３７７号に開示されているように、１本または２本のキャップ鎖を含有する。
別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが、ＷＯ ００／６３３６４に開示されている少なくとも部分的なｄｓＲＮＡ分子のいずれかであることも、米国仮特許出願第６０／３９９，９９８号及び米国仮特許出願第６０／４１９，５３２号ならびにＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３３４６６に記載のｄｓＲＮＡ分子のいずれかであることもでき、これらの文献の教示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。ｄｓＲＮＡはいずれも、本明細書に記載する方法を使って、または標準的方法、例えばＷＯ００／６３３６４に記載の方法を使って、インビトロまたはインビボで発現させることができる。
占有
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ＲＮａｓｅ Ｈによる標的核酸の切断をもたらすとも、ＲＩＳＣ経路による切断または隔離をもたらすとも予想されない。特定のそのような実施形態では、アンチセンス活性が占有に起因しうる。この場合は、ハイブリダイズしたアンチセンス化合物の存在が、標的核酸の活性を妨害する。特定のそのような実施形態では、アンチセンス化合物が、一様に修飾されていてもよいし、修飾物が混在し、かつ／または修飾ヌクレオシドと無修飾ヌクレオシドとが混在していてもよい。
標的核酸、標的領域及びヌクレオチド配列
補体Ｂ因子（ＣＦＢ）をコードするヌクレオチド配列には、次に挙げるものがあるが、これらに限定されない：ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１７１０．５（本明細書には配列番号１として組み込まれる）、ヌクレオチド３１８５２０００～３１８６１０００が切り出されたＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００７５９２．１５（本明細書には配列番号２として組み込まれる）、ヌクレオチド５３６０００～５４５０００が切り出されたＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＷ＿００１１１６４８６．１（本明細書には配列番号３として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＸＭ＿００１１１３５５３．２（本明細書には配列番号４として組み込まれる）、またはＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００８１９８．２（本明細書には配列番号５として組み込まれる）。
ハイブリダイゼーション
いくつかの実施形態では、本明細書に開示するアンチセンス化合物とＣＦＢ核酸との間
でハイブリダイゼーションが起こる。最もよくあるハイブリダイゼーションの機序は、核酸分子の相補的核酸塩基間での水素結合形成（例えばワトソン－クリック型、フーグスティーン型または逆フーグスティーン型水素結合形成）を必要とする。
ハイブリダイゼーションは、さまざまな条件下で起こりうる。ストリンジェントな条件は配列依存的であり、ハイブリダイズさせようとする核酸分子の性質及び組成によって決まる。
ある配列が標的核酸に特異的にハイブリダイズすることができるかどうかを決定する方法は、当技術分野では周知である。特定の実施形態において、ここに提供するアンチセンス化合物は、ＣＦＢ核酸と特異的にハイブリダイズすることができる。
相補性
アンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が、所望の効果（例えばＣＦＢ核酸などの標的核酸のアンチセンス阻害）が生じるような形で、標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合することができるのであれば、そのアンチセンス化合物と標的核酸とは互いに相補的である。
アンチセンス化合物が依然として標的核酸に特異的にハイブリダイズできるのであれば、アンチセンス化合物とＣＦＢ核酸の間の非相補的核酸塩基は許容されうる。さらにまた、アンチセンス化合物は、介在セグメントまたは隣接セグメントがハイブリダイゼーション事象に関与しないような形で、ＣＦＢ核酸の１つ以上のセグメントにハイブリダイズしてもよい（例えばループ構造、ミスマッチ、またはヘアピン構造）。
特定の実施形態において、ここに提供するアンチセンス化合物またはその指定部分は、ＣＦＢ核酸、その標的領域、標的セグメント、または指定部分に対して、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相同であるか、または少なくとも７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相同である。標的核酸に対するアンチセンス化合物の相補性パーセントは、常法を使って決定することができる。
例えば、アンチセンス化合物の２０核酸塩基中１８核酸塩基が標的領域に相補的であり、それゆえに特異的にハイブリダイズするであろうアンチセンス化合物は、９０パーセントの相補性に相当するであろう。この例では、残りの非相補的核酸塩基は一かたまりになって存在してもよいし、相補的核酸塩基の間に点在していてもよく、互いに連続している必要も、相補的核酸塩基と連続している必要もない。したがって、標的核酸と完全に相補的な２つの領域に挟まれた４つの非相補的核酸塩基を有する１８核酸塩基長のアンチセンス化合物は、標的核酸に対して７７．８％の総相補性を有し、したがって本発明の範囲に包含されるであろう。標的核酸の一領域に対するアンチセンス化合物の相補性パーセントは、当技術分野において知られているＢＬＡＳＴプログラム（ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ）及びＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３
４１０；Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｍａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９ ６５６）を使って、ルーチンに決定することができる。相同性パーセント、配列同一性パーセントまたは配列相補性パーセントは、例えばＳｍｉｔｈとＷａｔｅｒｍａｎのアルゴリズム（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，１９８１，２，４８２ ４８９）を使用するＧａｐプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍ
ｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，ウィスコンシン州マディソン、ユニバーシティ・リサーチ・パーク）により、デフォルト設定を使って決定することができる。
特定の実施形態では、ここに提供するアンチセンス化合物またはその指定部分が、標的核酸またはその指定部分に完全に相補的（すなわち１００％相補的）である。例えばアンチセンス化合物は、ＣＦＢ核酸、またはその標的領域、または標的セグメントもしくは標的配列に完全に相補的でありうる。本明細書にいう「完全に相補的」とは、アンチセンス化合物の各核酸塩基が、標的核酸の対応する核酸塩基と正確に塩基対合する能力を有することを意味する。例えば２０核酸塩基アンチセンス化合物は、そのアンチセンス化合物に完全に相補的な対応する２０核酸塩基部分が標的核酸中に存在するのであれば、４００核酸塩基長の標的配列に対して完全に相補的である。第１及び／または第２核酸の指定部分に関して完全に相補的という表現を使用することもできる。例えば３０核酸塩基アンチセンス化合物の２０核酸塩基部分は、４００核酸塩基長の標的配列に対して「完全に相補的」であることができる。３０核酸塩基オリゴヌクレオチドの２０核酸塩基部分は、標的配列が対応する２０核酸塩基部分（その各核酸塩基がアンチセンス化合物の前記２０核酸塩基部分に相補的であるもの）を有するのであれば、標的配列に対して完全に相補的である。同時に、前記３０核酸塩基アンチセンス化合物全体は、前記アンチセンス化合物の残りの１０核酸塩基も標的配列に相補的であるかどうかに依存して、標的配列に対して完全に相補的である場合も、そうでない場合もある。
非相補的核酸塩基の場所はアンチセンス化合物の５’端または３’端であることができる。あるいは、１つまたは複数の非相補的核酸塩基が、アンチセンス化合物の内部位置にあってもよい。２つ以上の非相補的核酸塩基が存在する場合、それらは連続して（すなわち連結されて）いてもよいし、不連続であってもよい。一実施形態では、非相補的核酸塩基が、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウイングセグメント中にある。
特定の実施形態において、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基長のアンチセンス化合物または１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基長までのアンチセンス化合物が、ＣＦＢ核酸またはその指定部分などの標的核酸との比較で含む非相補的核酸塩基は、４つ以下、３つ以下、２つ以下、または１つ以下である。
特定の実施形態において、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０核酸塩基長のアンチセンス化合物または１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０核酸塩基長までのアンチセンス化合物が、ＣＦＢ核酸またはその指定部分などの標的核酸との比較で含む非相補的核酸塩基は、６つ以下、５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、または１つ以下である。
ここに提供するアンチセンス化合物には、標的核酸の一部分に相補的なものも含まれる。ここでいう「一部分」とは、標的核酸の一領域または一セグメント内の所定の数の連続する（すなわち連結された）核酸塩基を指す。「一部分」は、アンチセンス化合物の、所定の数の連続する核酸塩基も意味しうる。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも８核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも９核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１０核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１１核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１２核酸塩基部分に相補的である。特定の
実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１３核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１４核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１５核酸塩基部分に相補的である。ある標的セグメントの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０核酸塩基部分もしくはそれ以上の核酸塩基部分、またはこれらの値のうちの任意の２つによって画定される範囲に相補的な、アンチセンス化合物も考えられる。
同一性
ここに提供するアンチセンス化合物は、ある特定ヌクレオチド配列、配列番号、もしくは具体的Ｉｓｉｓ番号によって表される化合物、またはその一部分に対して、所定の同一性パーセントも有しうる。本明細書にいうアンチセンス化合物は、それが同じ核酸塩基対合能を有するのであれば、本明細書に開示する配列と同一である。例えば、ウラシルとチミジンはどちらもアデニンと対合するので、開示したＤＮＡ配列中のチミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡは、前記ＤＮＡ配列と同一であるとみなされるであろう。本明細書に記載するアンチセンス化合物の短縮型及び延長型、ならびにここに提供するアンチセンス化合物と比較して非同一塩基を有する化合物も考えられる。非同一塩基は互いに隣り合っていてもよいし、アンチセンス化合物全体に散在していてもよい。アンチセンス化合物のパーセント同一性は、比較対象である配列との比較で同一塩基対合を有する塩基の数に従って計算される。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物またはその一部分が、本明細書に開示するアンチセンス化合物、配列番号、またはその一部分の１つ以上と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物の一部分を、標的核酸のうちの長さが等しい部分と比較する。特定の実施形態では、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５核酸塩基部分を、標的核酸のうちの長さが等しい部分と比較する。
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドの一部を、標的核酸のうちの長さが等しい部分と比較する。特定の実施形態では、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５核酸塩基部分を、標的核酸のうちの長さが等しい部分と比較する。
修飾
ヌクレオシドは塩基－糖の組み合わせである。ヌクレオシドの核酸塩基（塩基ともいう）部分は、通常、複素環式塩基部分である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合で連結されたリン酸基をさらに含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むヌクレオシドの場合は、リン酸基を、糖の２’、３’または５’ヒドロキシル部分に連結することができる。オリゴヌクレオチドは、互いに隣り合うヌクレオシドを共有結合で連結して、線状ポリマー状のオリゴヌクレオチドを形成させることによって形成される。オリゴヌクレオチド構造内では、リン酸基は、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間連結部を形成していると、一般に言われる。
アンチセンス化合物の修飾には、ヌクレオシド間連結部、糖部分、または核酸塩基の置換または改変が包含される。修飾アンチセンス化合物は、例えば強化された細胞取り込み、核酸標的に対する強化されたアフィニティ、ヌクレアーゼの存在下での増加した安定性、増加した阻害活性などといった望ましい性質ゆえに、ネイティブ型より好ましいことが
多い。
化学修飾ヌクレオシドは、短縮型または切断型アンチオリゴヌクレオチドの、その標的核酸に対する結合アフィニティを増加させるために使用することもできる。結果として、そのような化学修飾ヌクレオシドを有する短いアンチセンス化合物で、匹敵する結果を得ることができる場合が多い。
修飾ヌクレオシド間連結部
ＲＮＡ及びＤＮＡの天然に存在するヌクレオシド間連結部は、３’→５’ホスホジエステル連結部である。１つ以上の修飾（すなわち天然に存在しない）ヌクレオシド間連結部を有するアンチセンス化合物は、例えば強化された細胞取り込み、核酸標的に対する強化されたアフィニティ、及びヌクレアーゼの存在下での増加した安定性などといった望ましい性質ゆえに、天然に存在するヌクレオシド間連結部を有するアンチセンス化合物よりも選択されることが多い。
修飾ヌクレオシド間連結部を有するオリゴヌクレオチドには、リン原子が保たれているヌクレオシド間連結部と、リン原子を有さないヌクレオシド間連結部とが含まれる。代表的なリン含有ヌクレオシド間連結部には、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホラミデート、及びホスホロチオエートが含まれるが、これらに限定されない。リン含有連結部及び非リン含有連結部を調製する方法は、よく知られている。
特定の実施形態では、ＣＦＢ核酸を標的とするアンチセンス化合物が、１つ以上の修飾ヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物の各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートヌクレオシド間連結部である。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、前記オリゴヌクレオチドまたはその一領域に沿って、所定のパターンまたは修飾ヌクレオシド間連結部モチーフで配置された修飾ヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態では、ヌクレオシド間連結部が、ギャップモチーフ（ｇａｐｐｅｄ ｍｏｔｉｆ）で配置される。そのような実施形態では、２つのウイング領域のそれぞれにあるヌクレオシド間連結部が、ギャップ領域中のヌクレオシド間連結部とは異なる。特定の実施形態では、ウイング中のヌクレオシド間連結部はホスホジエステルであり、ギャップ中のヌクレオシド間連結部はホスホロチオエートである。ヌクレオシドモチーフは独立して選択されるので、ギャップヌクレオシド間連結部モチーフを有するオリゴヌクレオチドは、ギャップヌクレオシドモチーフを有しても有さなくてもよく、ギャップヌクレオシドモチーフを有する場合、ウイング長とギャップ長は同じであっても同じでなくてもよい。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、交互ヌクレオシド間連結部モチーフを有する領域を含む。特定の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドが、一様に修飾されたヌクレオシド間連結部の一領域を含む。特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部によって一様に連結された領域を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエートによって一様に連結されている。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部が、ホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択される。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択され、少なくとも１つのヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートである。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、少なくとも６つのホスホロチオエートヌ
クレオシド間連結部を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも８つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも１０個のホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも６つの連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも８つの連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも１０個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも１２個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定のそのような実施形態では、少なくとも１つの上述のブロックが、オリゴヌクレオチドの３’端に位置する。特定のそのような実施形態では、少なくとも１つの上述のブロックがオリゴヌクレオチドの３’端から３ヌクレオシド以内に位置する。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、１つ以上のメチルホスホネート連結部を含む。特定の実施形態では、ギャップマーヌクレオシドモチーフを有するオリゴヌクレオチドが、１つまたは２つのメチルホスホネート連結部を除くすべてがホスホロチオエート連結部である連結部モチーフを含む。特定の実施形態では、１つのメチルホスホネート連結部が、ギャップマーヌクレオシドモチーフを有するオリゴヌクレオチドの中央のギャップ中にある。
特定の実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部とホスホジエステルヌクレオシド間連結部の数を、ヌクレアーゼ耐性が維持されるように定めることが望ましい。特定の実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部の数と位置及びホスホジエステルヌクレオシド間連結部の数と位置を、ヌクレアーゼ耐性が維持されるように定めることが望ましい。特定の実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を減少させ、かつホスホジエステルヌクレオシド間連結部の数を増加させることができる。特定の実施形態では、ヌクレアーゼ耐性を維持したまま、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部の数を減少させ、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部を増加させることができる。特定の実施形態では、ヌクレアーゼ耐性を保ったまま、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部の数を減少させることが望ましい。特定の実施形態では、ヌクレアーゼ活性を保ったまま、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部の数を増加させることが望ましい。
修飾糖部分
アンチセンス化合物は、場合によっては、糖基が修飾されているヌクレオシドを１つ以上含有しうる。そのような糖修飾ヌクレオシドは、強化されたヌクレアーゼ安定性、増加した結合アフィニティ、または他の何らかの有益な生物学的性質を、アンチセンス化合物に付与しうる。特定の実施形態では、ヌクレオシドが化学修飾リボフラノース環部分を含む。化学修飾リボフラノース環の例には、置換基の付加（５’置換基、２’置換基、非ジェミナル環原子の架橋による二環式核酸（ＢＮＡ）の形成、Ｓ、Ｎ（Ｒ）、またはＣ（Ｒ１）（Ｒ２）（Ｒ、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキルまたは保護基である）によるリボシル環酸素原子の置き換え、及びそれらの組み合わせなどがあるが、これらに限定されない。化学修飾糖の例としては、２’－Ｆ－５’－メチル置換ヌクレオシド（開示されている他の５’，２’－ビス置換ヌクレオシドについては、ＰＣＴ国際出願ＷＯ２００８／１０１１５７（公開日２００８年８月２１日）を参照されたい）、またはＳによるリボシル環酸素原子の置き換えと２’位におけるさらなる置換（米国特許出願公開ＵＳ２００５－０１３０９２３（公開日２００５年６月１６日）参照）、あるいはＢＮＡの５’－置換（ＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１（公開日２００７年１１月２２日）参照、この場合はＬＮＡが例えば５’－メチル基または５’－ビニル
基で置換されている）などがある。
修飾糖部分を有するヌクレオシドの例には、５’－ビニル、５’－メチル（ＲまたはＳ）、４’－Ｓ、２’－Ｆ、２’－ＯＣＨ３、２’－ＯＣＨ２ＣＨ３、２’－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｆ及び２’－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含むヌクレオシドがあるが、これらに限定されない。２’位の置換基は、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ－アリル、Ｏ－Ｃ１－Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２Ｆ、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２－Ｏ－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、及びＯ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒｌ）－（ＣＨ２）２－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択することもできる（ここで、各Ｒｌ、Ｒｍ及びＲｎは、独立して、Ｈまたは置換もしくは無置換Ｃ１－Ｃ１０アルキルである）。
本明細書にいう「二環式ヌクレオシド」とは、二環式糖部分を含む修飾ヌクレオシドを指す。二環式ヌクレオシドの例には、４’リボシル環原子と２’リボシル環原子の間に橋を含むヌクレオシドなどがあるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ここに提供するアンチセンス化合物が、４’→２’橋を含む二環式ヌクレオシドを１つ以上含む。そのような４’→２’架橋二環式ヌクレオシドの例として、次式の一つが挙げられるが、これらに限定されない：４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’（ＬＮＡ）、４’－（ＣＨ２）－Ｓ－２’、４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’（ＥＮＡ）、４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’（拘束エチルまたはｃＥｔともいう）及び４’－Ｃ－Ｈ（ＣＨ２ＯＣＨ３）－Ｏ－２’（及びその類似体、２００８年６月１５日発行の米国特許第７，３９９，８４５号参照）、４’－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）－Ｏ－２’（及びその類似体、国際出願公開ＷＯ２００９／００６４７８（公開日２００９年１月８日）参照）；４’－ＣＨ２－Ｎ（ＯＣＨ３）－２’（及びその類似体、国際出願公開ＷＯ／２００８／１５０７２９（公開日２００８年１２月１１日）参照）、４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－２’（米国特許出願公開ＵＳ２００４－０１７１５７０（公開日２００４年９月２日）参照）、４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’（式中、Ｒは、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、または保護基である）（２００８年７月２３日発行の米国特許７，４２７，６７２号参照）、４’－ＣＨ２－Ｃ－（Ｈ）（ＣＨ３）－２’（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８－１３４参照）、及び４’－ＣＨ２－Ｃ－（＝ＣＨ２）－２’（及びその類似体、国際出願公開ＷＯ ２００８／１５４４０１（公開日２００８年１２月８日）参照）。
公表された文献には二環式ヌクレオシドに関する他の報告文も見いだすことができる（例えばＳｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５－４５６；Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７－３６３０；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３－５６３８；Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９－２２２２；Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５－１００３９；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６）８３６２－８３７９；Ｅｌａｙａｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８－５６１；Ｂｒａａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８，１－７；及びＯｒｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，３，２３９－２４３；米国特許第６，２６８，４９０号；同第６，５２５，１９１号；同第６，６７０，４６１号；同第６，７７０，７４８号；同第６，７９４，４９９号；同第７，０３４，１３３号；同第７，０５３，２０７号；同第７，３９９，８４５号；同第７，５４７，６８４号；同第８，５３０，６４０号；及び同第７，６９６，３４５号；米国特許出願公開番号ＵＳ２００８－００３９６１８；同ＵＳ２００９－００１２２８１；米国特許出願第６１／０２６，９９５号及び同第６１／０９７，７８７号；ＰＣＴ国際出願公開
ＷＯ２００９／０６７６４７；同ＷＯ２０１１／０１７５２１；同ＷＯ２０１０／０３６６９８；同ＷＯ１９９９／０１４２２６；同ＷＯ２００４／１０６３５６；同ＷＯ２００５／０２１５７０；同ＷＯ２００７／１３４１８１；同ＷＯ２００８／１５０７２９；同ＷＯ２００８／１５４４０１；及び同ＷＯ２００９／００６４７８参照。前述の二環式ヌクレオシドのそれぞれは、例えばα－Ｌ－リボフラノースとβ－Ｄ－リボフラノースなど、１つ以上の立体化学的糖配置を有するものを調製することができる（１９９９年３月２５日にＷＯ９９／１４２２６として公開されたＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３を参照されたい）。
特定の実施形態では、限定するわけではないが、ＢＮＡヌクレオシドの二環式糖部分として、ペントフラノシル糖部分の４’位と２’位の間に少なくとも１つの橋を有する化合物が挙げられ、その橋は、独立して、－［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲａ）－、－Ｃ（＝Ｓ）－、－Ｏ－、－Ｓｉ（Ｒａ）２－、－Ｓ（＝Ｏ）ｘ－、及び－Ｎ（Ｒａ）－から独立して選択される１つの基または２～４つの連結された基を含み、
式中、
ｘは、０、１、または２であり、
ｎは、１、２、３、または４であり、
各Ｒａ及びＲｂは、独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、Ｃ５－Ｃ２０アリール、置換Ｃ５－Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５－Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５－Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）－Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２－Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）－Ｊ１）であり、かつ
各Ｊ１及びＪ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、Ｃ５－Ｃ２０アリール、置換Ｃ５－Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）－Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１－Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１－Ｃ１２アミノアルキルまたは保護基である。
特定の実施形態では、二環式糖部分の橋が－［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ－、－［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ－Ｏ－、－Ｃ（ＲａＲｂ）－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－または－Ｃ（ＲａＲｂ）－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－である。特定の実施形態では、前記橋が、４’－ＣＨ２－２’、４’－（ＣＨ２）２－２’、４’－（ＣＨ２）３－２’、４’－ＣＨ２－Ｏ－２’、４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’、４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’及び４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’－であり、式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、保護基またはＣ１－Ｃ１２アルキルである。
特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドが、さらに異性立体配置によって定義される。例えば、４’－２’メチレン－オキシ橋を含むヌクレオシドは、α－Ｌ立体配置またはβ－Ｄ立体配置をとりうる。α－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡは、以前に、アンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれており、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドはアンチセンス活性を示した（Ｆｒｉｅｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５－６３７２）。
特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドとして、以下に図示する（Ａ）α－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β－Ｄ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’）Ｂ
ＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’）ＢＮＡ、及び（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’）ＢＮＡ、（Ｇ）メチレン－チオ（４’－ＣＨ２－Ｓ－２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン－アミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ３）－２’）ＢＮＡ、（Ｊ）プロピレン炭素環式（４’－（ＣＨ２）３－２’）ＢＮＡ、及び（Ｋ）ビニルＢＮＡが挙げられるが、これらに限定されない：
Figure 0007001663000016
式中、Ｂｘは塩基部分であり、かつＲは、独立して、Ｈ、保護基、Ｃ１－Ｃ１２アルキルまたはＣ１－Ｃ１２アルコキシである。
特定の実施形態では、式Ｉ：
Figure 0007001663000017
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
－Ｑａ－Ｑｂ－Ｑｃ－は、－ＣＨ２－Ｎ（Ｒｃ）－ＣＨ２－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒｃ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒｃ）－、－ＣＨ２－Ｎ（Ｒｃ）－Ｏ－または－Ｎ（Ｒｃ）－Ｏ－ＣＨ２であり、
Ｒｃは、Ｃ１－Ｃ１２アルキルまたはアミノ保護基であり、かつ
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けである］
を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
特定の実施形態では、式ＩＩ：
Figure 0007001663000018
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けであり、
Ｚａは、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオールまたは置換チオである］
を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
一実施形態では、前記置換基のそれぞれが、独立して、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪｃ、ＮＪｃＪｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊｃ、及びＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄから独立して選択される置換基で一置換または多置換されており、式中、各Ｊｃ、Ｊｄ及びＪｅは、独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１－Ｃ６アルキルであり、かつＸは、ＯまたはＮＪｃである。
特定の実施形態では、式ＩＩＩ：
Figure 0007001663000019
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けであり、
Ｚｂは、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたは置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）－）である］
を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
特定の実施形態では、式ＩＶ：
Figure 0007001663000020
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けであり、
Ｒｄは、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルであり、
各ｑａ、ｑｂ、ｑｃ及びｑｄは、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２－Ｃ６アルキニル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシル、置換Ｃ１－Ｃ６アルコキシル、アシル、置換アシル、Ｃ１－Ｃ６アミノアルキルまたは置換Ｃ１－Ｃ６アミノアルキルである］
を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
特定の実施形態では、式Ｖ：
Figure 0007001663000021
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けであり、
ｑａ、ｑｂ、ｑｅ及びｑｆは、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、Ｃ１－Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１－Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）－ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであるか、または
ｑｅ及びｑｆが全体として＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、
ｑｇ及びｑｈは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ１２アルキルまたは置換Ｃ１－Ｃ１２アルキルである］
を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡモノマーであるアデニン、シトシン、グアニン、５－メチル－シトシン、チミン及びウラシルの合成及び調製は、それらのオリゴマー化及び核酸認識特性と共に、既に記述されている（Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７－３６３０）。ＢＮＡとその調製はＷＯ９８／３９３５２及びＷＯ９９／１４２２６にも記述されている。
メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡ及び２’－チオ－ＢＮＡの類似体も既に調製されている（Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９－２２２２）。核酸ポリメラーゼの基質としてのオリゴデオキシリボヌクレオチド二重鎖を構成するロックトヌクレオシド類似体の調製も既に記述されている（Ｗｅｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＷＯ９９／１４２２６）。さらにまた、コンフォメーションが制限された新規高アフィニティオリゴヌクレオチド類似体である２
’－アミノ－ＢＮＡの合成も、当技術分野では既に記述されている（Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５－１００３９）。加えて、２’－アミノ－及び２’－メチルアミノ－ＢＮＡも調製されており、相補的なＲＮＡ鎖及び相補的ＤＮＡ鎖とのそれらの二重鎖の熱安定性が、以前に報告されている。
特定の実施形態では、式ＶＩ：
Figure 0007001663000022
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けであり、
各ｑｉ、ｑｊ、ｑｋ及びｑｌは、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルケニル、Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２－Ｃ１２アルキニル、Ｃ１－Ｃ１２アルコキシル、置換Ｃ１－Ｃ１２アルコキシル、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）－ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり、かつ
ｑｉとｑｊまたはｑｌとｑｋは、全体として、＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、式中、ｑｇ及びｑｈは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ１２アルキルまたは置換Ｃ１－Ｃ１２アルキルである］
を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
４’－（ＣＨ２）３－２’橋を有する炭素環式二環式ヌクレオシド及びアルケニル類似体橋４’－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－２’は既に記述されている（Ｆｒｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９－４４４３及びＡｌｂａｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１－７７４０）。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成及び調製も、それらのオリゴマー化及び生化学的研究と共に記述されている（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６），８３６２－８３７９）。
本明細書にいう「４’－２’二環式ヌクレオシド」または「４’→２’二環式ヌクレオシド」とは、フラノース環の２つの炭素原子をつなぐ橋を含むフラノース環を含み、前記橋が糖環の２’炭素原子と４’炭素原子をつなぐ、二環式ヌクレオシドを指す。
本明細書にいう「単環式ヌクレオシド」とは、二環式糖部分ではない修飾糖部分を含むヌクレオシドである。特定の実施形態では、ヌクレオシドの糖部分または糖部分類似体が、どの位置で修飾または置換されていてもよい。
本明細書にいう「２’－修飾糖」とは、２’位が修飾されたフラノシル糖を意味する。特定の実施形態では、そのような修飾が、ハライド、例えば限定するわけではないが、置換及び無置換アルコキシ、置換及び無置換チオアルキル、置換及び無置換アミノアルキル
、置換及び無置換アルキル、置換及び無置換アリル、及び置換及び無置換アルキニルから選択される置換基を含む。特定の実施形態では、２’修飾が、限定するわけではないが、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＦ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２などといった置換基（式中、ｎ及びｍは１～約１０である）から選択される。他の２’－置換基は、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリール、アラルキル、Ｏ－アルカリールまたはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリ－アルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、アンチセンス化合物の薬物動態特性を改良するための基または薬力学的性質を改良するための基、及び類似する性質を有する他の置換基から選択することもできる。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドが２’－ＭＯＥ側鎖を含む（Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２，１１９４４－１２０００）。そのような２’－ＭＯＥ置換は、無修飾ヌクレオシド及び他の修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチル、Ｏ－プロピル、及びＯ－アミノプロピルと比較して、改良された結合アフィニティを有すると記述されている。２’－ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドは、インビボ用途に有望な特徴を持つ遺伝子発現のアンチセンス阻害剤であることも示されている（Ｍａｒｔｉｎ，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６－５０４；Ａｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｉｍｉａ，１９９６，５０，１６８－１７６；Ａｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９９６，２４，６３０－６３７；及びＡｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，９１７－９２６）。
本明細書にいう「修飾テトラヒドロピランヌクレオシド」または「修飾ＴＨＰヌクレオシド」とは、通常のヌクレオシド中のペントフラノシル残基の代わりに六員テトラヒドロピラン「糖」（糖代用物）が使用されているヌクレオシドを意味する。修飾ＴＨＰヌクレオシドには、当技術分野においてヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アニトール（ａｎｉｔｏｌ）核酸（ＡＮＡ）、マニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）核酸（ＭＮＡ）（Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１－８５４）またはフルオロＨＮＡ（Ｆ－ＨＮＡ）と呼ばれ、以下に図解するようにテトラヒドロピラン環系を有するものが含まれるが、これらに限定されない。
Figure 0007001663000023
特定の実施形態では、式ＶＩＩ：
Figure 0007001663000024
 を有する糖代用物が選択され、
式中、前記少なくとも１つの式ＶＩＩのテトラヒドロピランヌクレオシド類似体のそれぞれについて、独立して、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であるか、またはＴａ及びＴｂのうちの一方がテトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｔａ及びＴｂのうちの他方がＨ、ヒドロキシル保護基、連結された共役基または５’もしくは３’末端基であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルであり、かつＲ１及びＲ２のそれぞれは、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、置換または無置換アルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２及びＣＮであり、ＸはＯ、ＳまたはＮＪ１であり、かつ各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立して、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルである。
特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７がそれぞれＨである、式ＶＩＩの修飾ＴＨＰヌクレオシドが提供される。特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７のうちの少なくとも１つがＨ以外である。特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７のうちの少なくとも１つがメチルである。特定の実施形態では、Ｒ１及びＲ２のうちの一方がフルオロである、式ＶＩＩのＴＨＰヌクレオシドが提供される。特定の実施形態では、Ｒ１がフルオロ、かつＲ２がＨであり、Ｒ１がメトキシ、かつＲ２がＨであり、そしてＲ１がメトキシエトキシ、かつＲ２がＨである。
特定の実施形態では、糖代用物が、６つ以上の原子及び２つ以上のヘテロ原子を有する環を含む。例えばモルホリノ糖部分を含むヌクレオシド、及びオリゴマー化合物におけるそれらの使用が、報告されている（例えばＢｒａａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４１，４５０３－４５１０；及び米国特許第５，６９８，６８５号；同第５，１６６，３１５号；同第５，１８５，４４４号；及び同第５，０３４，５０６号を参照されたい）。本明細書において使用する用語「モルホリノ」とは、以下の式を有する糖代用物を意味する：
Figure 0007001663000025
。特定の実施形態では、例えば上記モルホリノ構造にさまざまな置換基を付加するか、上記モルホリノ構造のさまざまな置換基を改変することによって、モルホリノが修飾されていてもよい。そのような糖代用物を本明細書では「修飾モルホリノ」という。
修飾の組み合わせ、例えば限定するわけではないが、２’－Ｆ－５’－メチル置換ヌクレオシド（開示されている他の５’，２’－ビス置換ヌクレオシドについてはＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００８／１０１１５７号（公開日２００８年８月２１日）参照）、及びＳによるリボシル環酸素原子の置き換えと２’位におけるさらなる置換（米国特許出願公開ＵＳ２００５－０１３０９２３（公開日２００５年６月１６日）参照）、あるいは二環式核酸の５’－置換（ＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１（公開日２００７年１１月２２日）参照、この場合は４’－ＣＨ２－Ｏ－２’二環式ヌクレオシドの５’位が５’－
メチル基または５’－ビニル基でさらに置換されている）なども提供される。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成及び調製も、それらのオリゴマー化及び生化学的試験と共に記載されている（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００７，１２９（２６），８３６２－８３７９を参照のこと）。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、天然に存在するヌクレオシド中のペントフラノシル残基の代わりに六員シクロヘキセニルを有するヌクレオシドである修飾シクロヘキセニルヌクレオシドを１つ以上含む。修飾シクロヘキセニルヌクレオシドとして、当技術分野に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない（例えば同一譲受人によるＰＣＴ出願公開ＷＯ２０１０／０３６６９６（公開日２０１０年４月１０日）、Ｒｏｂｅｙｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００８，１３０（６），１９７９－１９８４；Ｈｏｒｖａｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００７，４８，３６２１－３６２３；Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（３０），９３４０－９３４８；Ｇｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ， Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，２００５，２４（５－７），９９３－９９８；Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５，３３（８），２４５２－２４６３；Ｒｏｂｅｙｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ，Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｆ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００５，Ｆ６１（６），５８５－５８６；Ｇｕ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００４，６０（９），２１１１－２１２３；Ｇｕ ｅｔ ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，２００３，１３（６），４７９－４８９；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００３，６８，４４９９－４５０５；Ｖｅｒｂｅｕｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００１，２９（２４），４９４１－４９４７；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００１，６６，８４７８－８２；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，２００１，２０（４－７），７８５－７８８；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．，２０００，１２２，８５９５－８６０２；ＰＣＴ出願公開ＷＯ０６／０４７８４２；及びＰＣＴ出願公開ＷＯ０１／０４９６８７を参照されたい；また、各文献の本文は、参照によりそのまま本明細書に組み込まれる）。特定の修飾シクロヘキセニルヌクレオシドは、式Ｘを有する。
Figure 0007001663000026
式中、前記少なくとも１つの式Ｘのシクロヘキセニルヌクレオシド類似体のそれぞれについて、独立して、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔ３及びＴ４は、それぞれ独立して、シクロヘキセニルヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であるか、またはＴ３及びＴ４のうちの一方がテトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、かつＴ３及びＴ４のうちの他方がＨ、ヒドロキシル保護基、連結された共役基、または５’末端基もしくは３’末端基であり、かつ
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、ｑ７、ｑ８及びｑ９は、それぞれ独立して、Ｈ
、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２－Ｃ６アルキニルまたは他の糖置換基である。
本明細書にいう「２’－修飾」または「２’－置換」は、２’位にＨまたはＯＨ以外の置換基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。２’－修飾ヌクレオシドには、糖環の２つの炭素原子をつなぐ橋が糖環の２’炭素ともう一つの炭素とをつないでいる二環式ヌクレオシド；及び非架橋２’置換基、例えばアリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ－アリル、Ｏ－Ｃ１－Ｃ１０アルキル、－ＯＣＦ３、Ｏ－（ＣＨ２）２－Ｏ－ＣＨ３、２’－Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ－（ＣＨ２）２－Ｏ－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、またはＯ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）［式中、各Ｒｍ及びＲｎは、独立して、Ｈまたは置換または無置換Ｃ１－Ｃ１０アルキルである］を有するヌクレオシドなどがあるが、これらに限定されない。２’－修飾ヌクレオシドは、例えば糖の他の位置及び／または核酸塩基に、他の修飾をさらに含んでもよい。
本明細書にいう「２’－Ｆ」とは、糖環の２’位にフルオロ基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
本明細書にいう「２’－ＯＭｅ」または「２’－ＯＣＨ３」または「２’－Ｏ－メチル」とは、それぞれ、糖環の２’位に－ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
本明細書にいう「ＭＯＥ」または「２’－ＭＯＥ」または「２’－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３」または「２’－Ｏ－メトキシエチル」とは、それぞれ、糖環の２’位に－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
本明細書にいう「オリゴヌクレオチド」とは、複数の連結されたヌクレオシドを含む化合物を指す。特定の実施形態では、前記複数のヌクレオシドのうちの１つ以上が修飾されている。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、１つ以上のリボヌクレオシド（ＲＮＡ）及び／またはデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）を含む。
アンチセンス化合物に組み込むためのヌクレオシドの修飾に使用することができるビシクロ糖代用環系及びトリシクロ糖代用環系は、当技術分野では、他にも多数知られている（例えば総説Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１－８５４を参照されたい）。そのような環系には、活性を強化するために、さまざまな追加の置換を行うことができる。
修飾糖の調製方法は当業者にはよく知られている。そのような修飾糖の調製を教示する代表的米国特許の一部には、例えば限定するわけではないが、Ｕ．Ｓ．４，９８１，９５７；Ｕ．Ｓ．５，１１８，８００；Ｕ．Ｓ．５，３１９，０８０；Ｕ．Ｓ．５，３５９，０４４；Ｕ．Ｓ．５，３９３，８７８；Ｕ．Ｓ．５，４４６，１３７；Ｕ．Ｓ．５，４６６，７８６；Ｕ．Ｓ．５，５１４，７８５；Ｕ．Ｓ．５，５１９，１３４；Ｕ．Ｓ．５，５６７，８１１；Ｕ．Ｓ．５，５７６，４２７；Ｕ．Ｓ．５，５９１，７２２；Ｕ．Ｓ．５，５９７，９０９；Ｕ．Ｓ．５，６１０，３００；Ｕ．Ｓ．５，６２７，０５３；Ｕ．Ｓ．５，６３９，８７３；Ｕ．Ｓ．５，６４６，２６５；Ｕ．Ｓ．５，６７０，６３３；Ｕ．Ｓ．５，７００，９２０；Ｕ．Ｓ．５，７９２，８４７及びＵ．Ｓ．６，６００，０３２ならびに２００５年１２月２２日にＷＯ２００５／１２１３７１として公開された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ－２００５／０１９２１９（出願日２００５年６月２日）
などがあり、これらはそれぞれ参照により本明細書にそのまま組み込まれる。
修飾糖部分を有するヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分（天然、修飾またはそれらの
組み合わせ）は、適当な核酸標的とのハイブリダイゼーションのために維持される。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、修飾糖部分を有する１つ以上のヌクレオシドを含む。特定の実施形態では、修飾糖部分が２’－ＭＯＥである。特定の実施形態では、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドがギャップマーモチーフで配置される。特定の実施形態では、修飾糖部分が、（４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’）架橋基を有する二環式ヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記（４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’）修飾ヌクレオシドが、ギャップマーモチーフのウイング全体にわたって配置される。
修飾核酸塩基
核酸塩基（または塩基）の修飾または置換は、天然に存在する無修飾核酸塩基または合成無修飾核酸塩基とは構造上識別できるが、機能的には天然に存在する無修飾核酸塩基または合成無修飾核酸塩基と交換可能である。天然核酸塩基と修飾核酸塩基はどちらも水素結合に参加する能力を有する。そのような核酸塩基修飾は、ヌクレアーゼ安定性、結合アフィニティまたは他の何らかの有益な生物学的性質をアンチセンス化合物に付与することができる。修飾核酸塩基には、例えば５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）などの合成及び天然核酸塩基が含まれる。５－メチルシトシン置換などの特定の核酸塩基置換は、標的核酸に対するアンチセンス化合物の結合アフィニティを増加させるのに特に有用である。例えば５－メチルシトシン置換は、核酸二重鎖安定性を０．６～１．２℃増加させることが示されている（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．、Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．及びＬｅｂｌｅｕ，Ｂ．編「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，ボカラトン，１９９３，ｐｐ．２７６－２７８）。
他の修飾核酸塩基として、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６－メチル誘導体及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２－プロピル誘導体及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン及び２－チオシトシン、５－ハロウラシル及びシトシン、５－プロピニル（－ＣoＣ－ＣＨ３）ウラシル及びシトシンならびにピリミジン塩基の他のアル
キニル誘導体、６－アゾウラシル、シトシン及びチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシルならびに他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチルならびに他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、２－Ｆ－アデニン、２－アミノ－アデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、７－デアザグアニン及び７－デアザアデニンならびに３－デアザグアニン及び３－デアザアデニンが挙げられる。
複素環式塩基部分として、プリン塩基またはピリミジン塩基が他の複素環、例えば７－デアザ－アデニン、７－デアザグアノシン、２－アミノピリジン及び２－ピリドンで置き換えられているものも挙げることができる。アンチセンス化合物の結合アフィニティを増加させるのにとりわけ有用な核酸塩基として、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジンならびにＮ－２、Ｎ－６及びＯ－６置換プリン、例えば２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシル及び５－プロピニルシトシンが挙げられる。
特定の実施形態では、ＣＦＢ核酸を標的とするアンチセンス化合物が、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態では、ＣＦＢ核酸を標的とする短縮型またはギャップ拡幅型アンチセンスオリゴヌクレオチドが１つ以上の修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態では、修飾核酸塩基が５－メチルシトシンである。特定の実施形態では、各シトシンが５－メチルシトシンである。
共役アンチセンス化合物
特定の実施形態において、本開示は、共役アンチセンス化合物を提供する。特定の実施形態において、本開示は、核酸転写産物に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物を提供する。特定の実施形態において、本開示は、細胞を、核酸転写産物に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物と接触させることを含む方法を提供する。特定の実施形態において、本開示は、細胞を、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物と接触させること、及び細胞内の核酸転写産物の量または活性を低減させることを含む方法を提供する。
アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰ－Ｒ）は以前に記載されている。例えばＰａｒｋ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ｖｏｌ．１０２，Ｎｏ．４７，ｐｐ．１７１２５－１７１２９（２００５）を参照されたい。これらの受容体は、肝臓細胞、特に肝細胞上で発現する。さらに、３つのＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）リガンドのクラスターを含む化合物は、ＡＳＧＰ－Ｒに結合して細胞内への当該化合物の取り込みをもたらす能力を有することが示されている。例えばＫｈｏｒｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１６，９，ｐｐ．５２１６－５２３１（Ｍａｙ ２００８）を参照されたい。したがって、そのようなＧａｌＮＡｃクラスターを含む共役体が、肝臓細胞、具体的には肝細胞への特定化合物の取り込みを促進するために使用されている。例えば、特定のＧａｌＮＡｃ含有共役体は、インビボで肝臓細胞における二重鎖ｓｉＲＮＡ化合物の活性を増加させることが示されている。これらの例では、ＧａｌＮＡｃ含有共役体は、典型的には、ｓｉＲＮＡ位二重鎖のセンス鎖に取り付けられる。センス鎖はアンチセンス鎖が最終的に標的核酸とハイブリダイズする前に処分されてしまうため、共役体が活性を妨害する懸念はほとんどない。典型的には、共役体は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’端に取り付けられる。例えば米国特許第８，１０６，０２２号を参照されたい。本明細書に記載する特定の共役基は、今までに記載された共役基よりも活性が高く、かつ／または合成が容易である。
本発明の特定の実施形態において、共役体は、一本鎖アンチセンス化合物、例えば限定するわけではないが、ＲＮａｓｅ Ｈベースのアンチセンス化合物や、プレｍＲＮＡ標的核酸のスプライシングを改変するアンチセンス化合物に、取り付けられる。そのような実施形態では、共役体は、利益（細胞内への取り込みの改良）をもたらすのに十分な時間、アンチセンス化合物に取り付けられた状態にあるべきだが、その後は、切断されるか、または他の何らかの形で、活性に必要な後続ステップ、例えば標的核酸へのハイブリダイゼーション及びＲＮａｓｅ Ｈまたはスプライシングもしくはスプライシング調節に関連する酵素との相互作用などを妨害しないようにすべきである。この性質のバランスは、共役体を単にセンス鎖に取り付けるだけでよいｓｉＲＮＡ化合物の場合よりも、一本鎖アンチセンス化合物の場合に、より一層重要である。本明細書には、共役体を欠く同じアンチセンス化合物と比較して、インビボで肝臓細胞における力価が改良されている共役一本鎖アンチセンス化合物を開示する。これらの化合物に要求される性質のバランスを考えると、そのような力価の改良は驚くべきことである。
特定の実施形態において、本明細書における共役基は、切断可能部分を含む。機序に束縛されることは望まないが、上述のように、共役体が取り込みの強化をもたらすのに十分な時間、化合物上に残っているべきであることは必然だが、その後は、共役体の何らかの部分、理想的には共役体の全部が切断されて、親化合物（例えばアンチセンス化合物）をその最も活性な形態で放出することが望ましい。特定の実施形態では、切断可能部分が切断可能なヌクレオシドである。そのような実施形態では、共役体の残りの部分（クラスター）を、１つ以上の切断可能な結合、例えばホスホジエステル連結部のものによって、ヌクレオシドを介してアンチセンスオリゴヌクレオチドに取り付けることにより、細胞中の内在性ヌクレアーゼを利用する。特定の実施形態では、クラスターがホスホジエステル連結部を介して切断可能なヌクレオシドに結合される。特定の実施形態では、切断可能なヌ
クレオシドが、ホスホジエステル連結部によってアンチセンスオリゴヌクレオチド（アンチセンス化合物）に取り付けられる。特定の実施形態では、共役基が、２つまたは３つの切断可能なヌクレオシドを含みうる。そのような実施形態では、上述の切断可能なヌクレオシドが、切断可能な結合（ホスホジエステル連結部のもの）によって、互いに、アンチセンス化合物に、かつ／またはクラスターに連結される。本明細書における特定の共役体は、切断可能なヌクレオシドを含まず、代わりに切断可能な結合を含む。オリゴヌクレオチドからの共役体の十分な切離は、細胞内で切断を受けやすい少なくとも１つの結合（切断可能な結合）によってもたらされることを示す。
特定の実施形態では、共役アンチセンス化合物がプロドラッグである。そのようなプロドラッグは、動物に投与され、最終的には、より活性な形態に代謝される。例えば共役アンチセンス化合物は切断されることで、共役体の全部または一部を除去し、共役体の全部または一部を欠く活性な（またはより活性な）形態のアンチセンス化合物をもたらす。
特定の実施形態では、共役体がオリゴヌクレオチドの５’端に取り付けられる。特定のそのような５’共役体は、同様の共役基が３’端に取り付けられている対応物よりも効率よく切断される。特定の実施形態では、活性の改良が切断の改良と相関しうる。特定の実施形態では、５’端に共役体を含むオリゴヌクレオチドの有効性が、３’端に共役体を含むオリゴヌクレオチドの有効性よりも高い（例えば実施例５６、８１、８３、及び８４を参照のこと）。さらに、５’への取り付けの方が、簡単なオリゴヌクレオチド合成が可能である。オリゴヌクレオチドは、典型的には、３’→５’方向に固体支持体上で合成される。３’共役オリゴヌクレオチドを作製するには、典型的には、事前に共役基を結合しておいた３’ヌクレオシドを固体支持体に取り付けてから、オリゴヌクレオチドを通常どおりに構築する。しかし、その共役ヌクレオシドを固体支持体に取り付ける操作は、合成を複雑にする。さらに、このアプローチを使用した場合、共役体は、オリゴヌクレオチドの合成の間ずっと存在することになり、後続のステップ中に分解されてしまうか、使用できる反応と試薬の種類を制限することになりうる。５’共役オリゴヌクレオチドについて本明細書に記載する構造及び技法を用いることにより、標準的な自動化された技法を使ってオリゴヌクレオチドを合成し、最後（最も５’側）のヌクレオシドと共に共役体を導入するか、またはオリゴヌクレオチドを固体支持体から切り離してから共役体を導入することができる。
当分野の技術水準及び本開示を考慮すれば、当業者は、本明細書の共役体及び共役オリゴヌクレオチドをどれでも容易に作製することができる。さらに、本明細書に開示する特定のそのような共役体及び共役オリゴヌクレオチドの合成は、これまでに開示されていた共役体の合成よりも容易であり、かつ／または必要とするステップ数が少なく、それゆえに安価に行うことができるので、それらは製造上の利点になる。例えば、特定の共役基の合成は、これまでに記載された共役基と比較して、より少ない合成ステップからなり、収率の増加をもたらす。実施例４６のＧａｌＮＡｃ３－１０及び実施例４８のＧａｌＮＡｃ３－７などの共役基は、既述の共役体、例えば、より多くの化学中間体の組み立てを必要とするＵ．Ｓ．８，１０６，０２２またはＵ．Ｓ．７，２６２，１７７に記載されているものよりも、はるかに簡単である。したがって、本明細書に記載するこれらの共役体及び他の共役体には、一本鎖オリゴヌクレオチドや二本鎖オリゴヌクレオチド（例えばｓｉＲＮＡ）のどちらかの鎖などといった任意のオリゴヌクレオチドと一緒に使用する際に、既述の化合物に優る利点がある。
同様に、ＧａｌＮＡｃリガンドを１つまたは２つしか持たない共役基も、本明細書に開示する。ここに示すように、そのような共役基は、アンチセンス化合物の活性を改良する。そのような化合物は、３つのＧａｌＮＡｃリガンドを含む共役体よりも、調製がはるかに容易である。１つまたは２つのＧａｌＮＡｃリガンドを含む共役基は、一本鎖オリゴヌ
クレオチドや二本鎖オリゴヌクレオチド（例えばｓｉＲＮＡ）のどちらかの鎖などといった任意のアンチセンス化合物に取り付けることができる。
特定の実施形態では、本明細書の共役体が、耐容性の特定尺度を、実質的に変化させない。例えば、共役アンチセンス化合物の免疫原性は非共役親化合物より高くないことを、本明細書において示す。力価が改良されるので、耐容性が同じままである実施形態は（あるいは実際には力価の増加分と比較して耐容性が少しだけ悪化したとしても）、治療に関して改良された性質を有する。
特定の実施形態では、共役により、共役がなければ結果があまり思わしくないような方法で、アンチセンス化合物を改変することが可能になる。例えば、特定の実施形態では、全ホスホロチオエートアンチセンス化合物の１つ以上のホスホロチオエート連結部を、ホスホジエステル連結基で置き換えることにより、一部の耐容性尺度の改良が起こる。例えば、特定の事例では、１つ以上のホスホジエステルを有するそのようなアンチセンス化合物は、各連結部がホスホロチオエートである同じ化合物よりも、免疫原性が低い。しかし、特定の事例では、実施例２６に示すように、１つ以上のホスホロチオエート連結部をホスホジエステル連結部で置き換えると、細胞取り込みの低減及び／または力価の損失も起こる。特定の実施形態において、本明細書に記載する共役アンチセンス化合物は、共役全ホスホロチオエート対応物と比較して、取り込み及び力価をほとんどまたは全く失うことなく、そのような連結部の改変を許容する。事実、特定の実施形態では、例えば実施例４４、５７、５９、及び８６では、共役体と少なくとも１つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部とを含むオリゴヌクレオチドが、同様に同じ共役体を含む全ホスホロチオエート対応物と比較した場合でさえ、実際に、インビボで力価の増加を呈する。さらに、共役が取り込み／力価の実質的な増加をもたらすので、その実質的な増加分が少し失われても、耐容性の改良を達成するという目的には、許容できる。したがって、特定の実施形態では、共役アンチセンス化合物が、少なくとも１つのホスホジエステル連結部を含む。
特定の実施形態では、本明細書におけるアンチセンス化合物の共役が、肝細胞における送達、取り込み、及び活性の増加をもたらす。したがって、より多くの化合物が肝臓組織に送達される。しかし、特定の実施形態では、そのような送達の増加だけでは、活性の増加全体を説明できない。特定のそのような実施形態では、より多くの化合物が肝細胞に進入する。特定の実施形態では、そのような肝細胞取り込みの増加でも、活性の増加全体を説明することができない。そのような実施形態では、共役化合物の生産的取り込みが増加する。例えば、実施例１０２に示すように、ＧａｌＮＡｃ含有共役体の特定実施形態は、非実質細胞との対比で肝細胞におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃縮を増加させる。この濃縮は、肝細胞中で発現する遺伝子を標的とするオリゴヌクレオチドにとって有益である。
特定の実施形態では、本明細書における共役アンチセンス化合物が、腎臓曝露の低減をもたらす。例えば、実施例２０に示すように、ＧａｌＮＡｃ含有共役体の特定実施形態を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、腎臓では、ＧａｌＮＡｃ含有共役体を欠くアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度より低い。これは、いくつかの有益な治療的意味を有する。腎臓における活性が求められていない治療的適応の場合、腎臓への曝露には、腎毒性のリスクがあり、それに見合う利益がない。さらに、腎臓における高濃度は、典型的には、尿への化合物の損失をもたらし、その結果、クリアランスが速くなる。したがって、標的が腎臓でない場合、腎臓内での蓄積は望ましくない。
特定の実施形態において、本開示は、式：
Figure 0007001663000027
［式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは、切断可能部分であり、
Ｃは、共役リンカーであり、
Ｄは、分岐基であり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、かつ
ｑは、１～５の整数である］
によって表される共役アンチセンス化合物を提供する。
本明細書における上記の図及び同様の図において、分岐基「Ｄ」は、「ｑ」で示される数の（Ｅ－Ｆ）基に対応するのに必要な数だけ分岐している。したがって、ｑ＝１の場合、前記の式は、
Figure 0007001663000028
であり、ｑ＝２の場合、前記の式は、
Figure 0007001663000029
であり、ｑ＝３の場合、前記の式は
Figure 0007001663000030
であり、ｑ＝４の場合、前記の式は
Figure 0007001663000031
であり、ｑ＝５の場合、前記の式は
Figure 0007001663000032
である。
特定の実施形態では、次の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
Figure 0007001663000033
特定の実施形態では、次の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
Figure 0007001663000034
特定の実施形態では、次の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
Figure 0007001663000035
特定の実施形態では、次の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
Figure 0007001663000036
本開示は、非限定的な以下の番号付き実施形態を提供する。
実施形態１．テザーが、
Figure 0007001663000037
または
Figure 0007001663000038
［式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である］
から選択される構造を有する、実施形態１１７９～１１８２のいずれかの共役アンチセンス化合物。
実施形態２．テザーが、構造：
Figure 0007001663000039
 を有する、実施形態１１７９～１１８２のいずれかの共役アンチセンス化合物。
実施形態３．リンカーが
Figure 0007001663000040
 から選択される構造を有する、実施形態１１７９～１１８２または１６８８～１６８９のいずれかの共役アンチセンス化合物。
実施形態４．リンカーが
Figure 0007001663000041
 ［式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である］
から選択される構造を有する、実施形態１１７９～１１８２または１６８８～１６８９のいずれかの共役アンチセンス化合物。
実施例５．リンカーが構造：
Figure 0007001663000042
を有する、実施形態１１７９～１１８２または１６８８～１６８９のいずれかの共役アンチセンス化合物。
ある特定変数を２つ以上（例えば２つ以上の「ｍ」または２つ以上の「ｎ」を）有する実施形態では、別段の表示がある場合を除き、そのような特定変数のそれぞれは、独立して選択される。したがって、２つ以上のｎを有する構造の場合、各ｎは独立して選択されるため、それらは互いに同一である場合も、同一でない場合もありうる。
ｉ．特定の切断可能部分
特定の実施形態において、切断可能部分は、切断可能な結合である。特定の実施形態において、切断可能部分は、切断可能な結合を含む。特定の実施形態において、共役基は、切断可能部分を含む。特定のそのような実施形態において、切断可能部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに結合する。特定のそのような実施形態において、切断可能部分は、細胞ターゲティング部分に直接結合する。特定のそのような実施形態において、切断可能部分は、共役リンカーに結合する。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスフェートまたはホスホジエステルを含む。特定の実施形態において、切断可能部分は、切断可能なヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体である。特定の実施形態において、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体は、プリン、置換プリン、ピリミジン、または置換ピリミジンから選択される場合によっては保護された複素環式塩基を含む。特定の実施形態において、切断可能部分は、ウラシル、チミン、シトシン、４－Ｎ－ベンゾイルシトシン、５－メチルシトシン、４－Ｎ－ベンゾイル－５－メチルシトシン、アデニン、６－Ｎ－ベンゾイルアデニン、グアニン、及び２－Ｎ－イソブチリルグアニンから選択される、場合
によっては保護された複素環式塩基を含むヌクレオシドである。特定の実施形態では、切断可能部分が、ホスホジエステル連結部によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に取り付けられ、かつホスホジエステルまたはホスホロチオエート連結部によってリンカーに取り付けられた２’－デオキシヌクレオシドである。特定の実施形態では、切断可能部分が、ホスホジエステル連結部によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に取り付けられ、かつホスホジエステルまたはホスホロチオエート連結部によってリンカーに取り付けられた２’－デオキシアデノシンである。特定の実施形態では、切断可能部分が、ホスホジエステル連結部によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に取り付けられ、かつホスホジエステル連結部によってリンカーに取り付けられた２’－デオキシアデノシンである。
特定の実施形態において、切断可能部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に取り付けられる。特定の実施形態において、切断可能部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの５’位に取り付けられる。特定の実施形態において、切断可能部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの２’位に取り付けられる。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステル連結部によってアンチセンスオリゴヌクレオチドに取り付けられる。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステル連結部またはホスホロチオエート連結部のいずれかによってリンカーに取り付けられる。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステル連結部によってリンカーに取り付けられる。特定の実施形態において、共役基は、切断可能部分を含まない。
特定の実施形態において、切断可能部分は、複合体が動物に投与された後に、標的細胞によって内部に取り込まれて初めて切断される。細胞内で切断可能部分が切断され、それによって活性アンチセンスオリゴヌクレオチドが放出される。理論に束縛されることは望まないが、切断可能部分は細胞内で１つ以上のヌクレアーゼによって切断されると考えられる。特定の実施形態では、１つ以上のヌクレアーゼが切断可能部分とリンカーとの間のホスホジエステル連結部を切断する。特定の実施形態において、切断可能部分は、以下
Figure 0007001663000043
 のなかから選択される構造を有し、
式中、Ｂｘ、Ｂｘ１、Ｂｘ２、及びＢｘ３のそれぞれは、独立して複素環式塩基部分である。特定の実施形態において、切断可能部分は以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000044
ｉｉ．特定のリンカー
特定の実施形態において、共役基は、リンカーを含む。特定のそのような実施形態において、リンカーは、切断可能部分に共有結合される。特定のそのような実施形態において、リンカーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドに共有結合される。特定の実施形態において、リンカーは、細胞ターゲティング部分に共有結合される。特定の実施形態において、リンカーは、固体支持体への共有結合をさらに含む。特定の実施形態において、リンカーは、タンパク質結合部分への共有結合をさらに含む。特定の実施形態において、リンカーは、固体支持体への共有結合をさらに含み、タンパク質結合部分への共有結合もさらに含む。特定の実施形態において、リンカーは、係留される（ｔｅｔｈｅｒｅｄ）リガンドを取り付けるための位置を複数含んでいる。特定の実施形態において、リンカーは、係留されるリガンドを取り付けるための位置を複数含み、分岐基には取り付けられない。特定の実施形態において、リンカーは、１つ以上の切断可能な結合をさらに含む。特定の実施形態において、共役基は、リンカーを含まない。
特定の実施形態において、リンカーは、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル（－Ｓ－）、及びヒドロキシルアミノ（－Ｏ－Ｎ（Ｈ）－）基から選択される基を含む線状基を少なくとも１つは含む。特定の実施形態において、前記線状基は、アルキル、アミド、及びエーテル基から選択される基を含む。特定の実施形態において、前記線状基は、アルキル及びエーテル基から選択される基を含む。特定の実施形態において、前記線状基は、少なくとも１つのリン連結基を含む。特定の実施形態において、前記線状基は、少なくとも１つのホスホジエステル基を含む。特定の実施形態において、前記線状基は、少なくとも１つの中性連結基を含む。特定の実施形態において、前記線状基は、細胞ターゲティング部分及び切断可能部分に共有結合される。特定の実施形態において、前記線状基は、細胞ターゲティング部分及びアンチセンスオリゴヌクレオチドに共有結合される。特定の実施形態において、前記線状基は、細胞ターゲティング部分、切断可能部分、及び固体支持体に共有結合される。特定の実施形態において、前記線状基は、細胞ターゲティング部分、切断可能部分、固体支持体、及びタンパク質結合部分に共有結合される。特定の実施形態において、前記線状基は、１つ以上の切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、リンカーは、足場基に共有結合された線状基を含む。特定の実施形態において、前記足場は、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル、及びヒドロキシルアミノ基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。特定の実施形態において、前記足場は、アルキル、アミド、及びエーテル基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。特定の実施形態において、前記足場は、少なくとも１つの単環式または多環式環系を含む。特定の実施形態において、前記足場は、少なくとも２つの単環式または多環式環系を含む。特定の実施形態では、線状基が足場基に共有結合され、足場基は切断可能部分及びリンカーに共有結合される。特定の実施形態では、線状基が足場基に共有結合され、足場基は、切断可能部分、リンカー、及び固体支持体に共有結合される。特定の実施形態では、線状基が足場基に共有結合され、足場基は、切断可能部分、リンカー、及びタンパク質結合部分に共有結合される。特定の
実施形態では、線状基が足場基に共有結合され、足場基は、切断可能部分、リンカー、タンパク質結合部分、及び固体支持体に共有結合される。特定の実施形態において、前記足場基は１つ以上の切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、リンカーは、タンパク質結合部分を含む。特定の実施形態において、タンパク質結合部分は脂質、例えば限定するわけではないが、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）、ビタミン（例えば葉酸塩、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビオチン、ピリドキサール）、ペプチド、炭水化物（例えば単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、多糖）、エンドソーム溶解成分、ステロイド（例えばウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン）、テルペン（例えばトリテルペン、例えば、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸）、またはカチオン性脂質を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態において、タンパク質結合部分は、Ｃ１６～Ｃ２２長鎖飽和もしくは不飽和脂肪酸、コレステロール、コール酸、ビタミンＥ、アダマンタン、または１－ペンタフルオロプロピルである。
特定の実施形態において、リンカーは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000045
 式中、各ｎは、独立して、１～２０であり、ｐは、１～６である。
特定の実施形態において、リンカーは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000046
 式中、各ｎは、独立して、１～２０である。
特定の実施形態において、リンカーは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000047
 式中、ｎは、１～２０である。
特定の実施形態において、リンカーは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000048
 式中、各Ｌは、独立して、リン連結基または中性連結基であり、
各ｎは、独立して、１～２０である。
特定の実施形態において、リンカーは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000049
Figure 0007001663000050
特定の実施形態において、リンカーは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000051
特定の実施形態において、リンカーは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000052
特定の実施形態において、リンカーは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000053
 式中、ｎは、１～２０である。
特定の実施形態において、リンカーは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000054
特定の実施形態において、リンカーは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000055
特定の実施形態において、リンカーは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000056
特定の実施形態において、共役リンカーは以下の構造を有する。
Figure 0007001663000057
特定の実施形態において、共役リンカーは以下の構造を有する。
Figure 0007001663000058
特定の実施形態において、リンカーは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000059
特定の実施形態において、リンカーは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000060
 式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である。
ｉｉｉ．特定の細胞ターゲティング部分
特定の実施形態において、共役基は、細胞ターゲティング部分を含む。特定のそのような細胞ターゲティング部分は、アンチセンス化合物の細胞取り込みを増加させる。特定の実施形態において、細胞ターゲティング部分は、分岐基、１つ以上のテザー、及び１つ以上のリガンドを含む。特定の実施形態において、細胞ターゲティング部分は、分岐基、１つ以上のテザー、１つ以上のリガンド、及び１つ以上の切断可能な結合を含む。
１．特定の分岐基
特定の実施形態において、共役基は、分岐基及び少なくとも２つのテザーリガンドを含むターゲティング部分を含む。特定の実施形態において、分岐基は、共役リンカーを結合する。特定の実施形態において、分岐基は、切断可能部分を結合する。特定の実施形態において、分岐基は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを結合する。特定の実施形態において、分岐基は、リンカー及びテザーリガンドのそれぞれに共有結合される。特定の実施形態において、分岐基は、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル及びヒドロキシルアミノ基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。特定の実施形態において、分岐基は、アルキル、アミド、及びエーテル基から選択される基を含む。特定の実施形態において、分岐基は、アルキル及びエーテル基から選択される基を含む。特定の実施形態において、分岐基は、単環式または多環式環系を含む。特定の実施形態において、分岐基は、１つ以上の切断可能な結合を含む。特定の実施形態において、共役基は、分岐基を含まない。
特定の実施形態において、分岐基は、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000061
Figure 0007001663000062
 式中、各ｎは、独立して、１～２０であり、
ｊは、１～３であり、
ｍは、２～６である。
特定の実施形態において、分岐基は、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000063
 各ｎは、独立して、１～２０であり、
ｍは、２～６である。
特定の実施形態において、分岐基は以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000064
Figure 0007001663000065
特定の実施形態において、分岐基は、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000066
 式中、各Ａ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ、またはＮＨであり、
各ｎは、独立して、１～２０である。
特定の実施形態において、分岐基は、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000067
 式中、各Ａ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ、またはＮＨであり、
各ｎは、独立して、１～２０である。
特定の実施形態において、分岐基は、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000068
 式中、Ａ１は、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ、またはＮＨであり、
各ｎは、独立して、１～２０である。
特定の実施形態において、分岐基は以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000069
特定の実施形態において、分岐基は以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000070
特定の実施形態において、分岐基は以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000071
２．特定のテザー
特定の実施形態において、共役基は、分岐基に共有結合される１つ以上のテザーを含む。特定の実施形態において、共役基は、連結基に共有結合される１つ以上のテザーを含む。特定の実施形態において、各テザーは、アルキル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、アミド、及びポリエチレングリコール基から選択される１つ以上の基を任意の組み合わせで含む線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、アルキル、置換アルキル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、アミド、ホスホジエステル及びポリエチレングリコール基から選択される１つ以上の基を任意の組み合わせで含む線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、アルキル、エーテル、及びアミド基から選択される１つ以上の基を任意の組み合わせで含む線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、アルキル、置換アルキル、ホスホジエステル、エーテル、及びアミド基から選択される１つ以上の基を任意の組み合わせで含む線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、アルキル及びホスホジエステルから選択される１つ以上の基を任意の組み合わせで含む線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも１つのリン連結基または中性連結基を含む。
特定の実施形態において、テザーは、１つ以上の切断可能な結合を含む。特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、テザーは、ホスホジエステル基を介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、テザーは、リン連結基または中性連結基を介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介してリガンドに結合される。特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介してリガンドに結合される。特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介してリガンドに結合される。特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介してリガンドに結合される。
特定の実施形態において、各テザーは、リガンドと分岐基との間に約８～約２０原子の鎖長を含む。特定の実施形態において、各テザー基は、リガンドと分岐基との間に約１０～約１８原子の鎖長を含む。特定の実施形態において、各テザー基は、約１３原子の鎖長を含む。
特定の実施形態において、テザーは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000072
 各ｎは、独立して、１～２０であり、
各ｐは、１～約６である。
特定の実施形態において、テザーは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000073
特定の実施形態において、テザーは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000074
式中、各ｎは、独立して、１～２０である。
特定の実施形態において、テザーは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000075
 式中、Ｌは、リン連結基または中性連結基のいずれかであり、
Ｚ１は、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－Ｒ２であり、
Ｚ２は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、
各ｍ１は、独立して、０～２０であり、各テザーにつき少なくとも１つのｍ１は０より大きい。
特定の実施形態において、テザーは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000076
特定の実施形態において、テザーは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000077
 式中、Ｚ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
各ｍ１は、独立して、０～２０であり、各テザーにつき少なくとも１つのｍ１は０より大きい
特定の実施形態において、テザーは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000078
 式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である。
特定の実施形態において、テザーは、リン連結基を含む。特定の実施形態において、テザーは、いかなるアミド結合も含まない。特定の実施形態において、テザーは、リン連結基を含み、いかなるアミド結合も含まない。
３．特定のリガンド
特定の実施形態において、本開示は、各リガンドがテザーに共有結合されるリガンドを提供する。特定の実施形態において、各リガンドは、標的細胞において少なくとも１種類の受容体に対する親和性を有するように選択される。特定の実施形態において、哺乳類肝臓細胞の表面において少なくとも１種類の受容体に対する親和性を有するリガンドが選択される。特定の実施形態において、肝アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰ－Ｒ）に対する親和性を有するリガンドが選択される。特定の実施形態において、各リガンドは、炭水化物である。特定の実施形態において、各リガンドは、ガラクトース、Ｎ－アセチルガラクトースアミン、マンノース、グルコース、グルコサミン、及びフコースから独立して選択される。特定の実施形態において、各リガンドは、Ｎ－アセチルガラクトースアミン（ＧａｌＮＡｃ）である。特定の実施形態において、ターゲティング部分は２～６個のリガンドを含む。特定の実施形態において、ターゲティング部分は３個のリガンドを含む。特定の実施形態において、ターゲティング部分は３個のＮ－アセチルガラクトサミンリガンドを含む。
特定の実施形態において、リガンドは、炭水化物、炭水化物誘導体、修飾炭水化物、多価炭水化物クラスター、多糖、修飾多糖、または多糖誘導体である。特定の実施形態において、リガンドは、アミノ糖またはチオ糖である。例えばアミノ糖は、当技術分野で知られている多くの化合物、例えばグルコサミン、シアル酸、α－Ｄ－ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、２－アセトアミド－２－デオキシ－Ｄ－ガラクトピラノース（ＧａｌＮＡｃ）、２－アミノ－３－Ｏ－［（Ｒ）－１－カルボキシエチル］－２－デオキシ－β－Ｄ－グルコピラノース（β－ムラミン酸）、２－デオキシ－２－メチルアミノ－Ｌ－グルコピラノース、４，６－ジデオキシ－４－ホルムアミド－２，３－ジ－Ｏ－メチル－Ｄ－マンノピラノース、２－デオキシ－２－スルホアミノ－Ｄ－グルコピラノース、及びＮ－スルホ－Ｄ－グルコサミン、及びＮ－グリコロイル－α－ノイラミン酸から選択されうる。例えば、チオ糖は、５－チオ－β－Ｄ－グルコピラノース、メチル２，３，４－トリ－Ｏ－アセチル－１－チオ－６－Ｏ－トリチル－α－Ｄ－グルコピラノシド、４－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノース、及びエチル３，４，６，７－テトラ－Ｏ－アセチル－２－デオキシ－１，５－ジチオ－α－Ｄ－グルコ－ヘプトピラノシドからなる群から選択されうる。
特定の実施形態において、「ＧａｌＮａｃ」または「Ｇａｌ－ＮＡｃ」は、文献内で一般にＮ－アセチルガラクトサミンと称される２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－Ｄ－ガラクトピラノースを指す。特定の実施形態において、「Ｎ－アセチルガラクトサミン」は、２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－Ｄ－ガラクトピラノースを指す。特定の実施形態において、「ＧａｌＮａｃ」または「Ｇａｌ－ＮＡｃ」は、２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－Ｄ－ガラクトピラノースを指す。特定の実施形態において、「ＧａｌＮａｃ」または「Ｇａｌ－ＮＡｃ」は、β型：２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－β－Ｄ－ガラクトピラノースとα型：２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－Ｄ－ガラクトピラノースの両方を含む、２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－Ｄ－ガラクトピラノースを指す。特定の実施形態において、β型：２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－β－Ｄ－ガラクトピラノースとα型：２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－Ｄ－ガラクトピラノースはどちらも可換的に使用されうる。したがって一方の型が図示される構造において、これらの構造は、他方の型も同様に含むものとする。例えばα型：２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－Ｄ－ガラクトピラノースの構造が示される場合、この構造は他方の型も同様に含むものとする。特定の好ましい実施形態では、β型：２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－Ｄ－ガラクトピラノースが好ましい実施形態である。
Figure 0007001663000079
特定の実施形態において、１つ以上のリガンドは、以下のなかから選択される構造を有し、
Figure 0007001663000080
 式中、各Ｒ１は、ＯＨ及びＮＨＣＯＯＨから選択される。
特定の実施形態において、１つ以上のリガンドは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000081
特定の実施形態において、１つ以上のリガンドは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000082
特定の実施形態において、１つ以上のリガンドは以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000083
ｉ．特定の共役体
特定の実施形態において、共役基は、上述の構造的特徴を含む。特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000084
式中、各ｎは、独立して、１～２０である。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000085
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000086
式中、各ｎは、独立して、１～２０であり、
Ｚは、Ｈまたは結合固体支持体であり、
Ｑは、アンチセンス化合物であり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｂｘは、複素環式塩基部分である。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000087
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000088
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000089
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000090
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000091
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000092
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000093
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000094
特定の実施形態において、共役体はピロリジンを含まない。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000095
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000096
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000097
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000098
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000099
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000100
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000101
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000102
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000103
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000104
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000105
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000106
式中、Ｘは、６～１１個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーである。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000107
式中、Ｘは、１０個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーである。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000108
式中、Ｘは、４～１１個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーであり、前記テザーは、厳密に１個のアミド結合を含む。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000109
式中、Ｙ及びＺは、Ｃ１～Ｃ１２置換もしくは無置換アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル基、またはエーテル、ケトン、アミド、エステル、カルバメート、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、トリアゾール、ピロリジン、ジスルフィド、もしくはチオエーテルを含む基から独立して選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000110
式中、Ｙ及びＺは、Ｃ１～Ｃ１２置換もしくは無置換アルキル基、または厳密に１個のエーテルもしくは厳密に２個のエーテル、アミド、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、またはホスホロチオエートを含む基から独立して選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000111
式中、Ｙ及びＺは、Ｃ１～Ｃ１２置換または無置換アルキル基から独立して選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000112
式中、ｍ及びｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、及び１２から独立して選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000113
式中、ｍは、４、５、６、７、または８であり、ｎは、１、２、３、または４である。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000114
式中、Ｘは、４～１３個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーであり、Ｘは、エーテル基を含まない。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000115
式中、Ｘは、８個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーであり、Ｘは、エーテル基を含まない。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000116
式中、Ｘは、４～１３個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーであり、前記テザーは、厳密に１個のアミド結合を含み、Ｘはエーテル基を含まない。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000117
式中、Ｘは、４～１３個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーであり、前記テザーは、アミド結合及び置換または無置換Ｃ２～Ｃ１１アルキル基からなる。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000118
式中、Ｙは、Ｃ１～Ｃ１２置換もしくは無置換アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル基、またはエーテル、ケトン、アミド、エステル、カルバメート、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、トリアゾール、ピロリジン、ジスルフィド、もしくはチオエーテルを含む基から選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000119
式中、Ｙは、Ｃ１～Ｃ１２置換もしくは無置換アルキル基、またはエーテル、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、もしくはホスホロチオエートを含む基から選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000120
 式中、Ｙは、Ｃ１～Ｃ１２置換または無置換アルキル基から選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000121
式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２である。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000122
式中、ｎは、４、５、６、７、または８である。
特定の実施形態では、共役体はピロリジンを含まない。
ａ 特定の共役アンチセンス化合物
特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの２’、３’、または５’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000123
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは、切断可能部分であり、
Ｃは、共役リンカーであり、
Ｄは、分岐基であり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、
ｑは、１～５の整数である。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000124
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｃは、共役リンカーであり、
Ｄは、分岐基であり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、
ｑは、１～５の整数である。
特定のそのような実施形態において、共役リンカーは、少なくとも１つの切断可能な結合を含む。
特定のそのような実施形態において、分岐基は、少なくとも１つの切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも１つの切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの２’、３’、または５’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000125
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは、切断可能部分であり、
Ｃは、共役リンカーであり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、かつ
ｑは、１～５の整数である。
特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの２’、３’、または５’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000126
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｃは、共役リンカーであり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、かつ
ｑは、１～５の整数である。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000127
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは、切断可能部分であり、
Ｄは、分岐基であり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、かつ
ｑは、１～５の整数である。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造を有し、
Figure 0007001663000128
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｄは、分岐基であり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、かつ
ｑは、１～５の整数である。
特定のそのような実施形態において、共役リンカーは、少なくとも１つの切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも１つの切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000129
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000130
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下のなかから選択される構造を有する。
Figure 0007001663000131
上述の共役体、共役アンチセンス化合物、テザー、リンカー、分岐基、リガンド、切断可能部分、ならびに他の修飾のいくつかの調製を教示する代表的な米国特許、米国特許出願公開、及び国際特許出願公開には、ＵＳ５，９９４，５１７、ＵＳ６，３００，３１９、ＵＳ６，６６０，７２０、ＵＳ６，９０６，１８２、ＵＳ７，２６２，１７７、ＵＳ７，４９１，８０５、ＵＳ８，１０６，０２２、ＵＳ７，７２３，５０９、ＵＳ２００６／０１４８７４０、ＵＳ２０１１／０１２３５２０号、ＷＯ２０１３／０３３２３０、及びＷＯ２０１２／０３７２５４が含まれるが、これらに限定されず、これらの文献のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
上述の共役体、共役アンチセンス化合物、テザー、リンカー、分岐基、リガンド、切断可能部分、ならびに他の修飾のいくつかの調製を教示する代表的な出版物には、ＢＩＥＳＳＥＮ ｅｔ ａｌ．「Ｔｈｅ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ｏｆ
ａ Ｔｒｉａｎｔｅｎｎａｒｙ Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ ｗｉｔｈ Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ａ Ｐｏｔｅｎｔ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｌｏｗｅｒｉｎｇ
Ａｇｅｎｔ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）３８：１８４６－１８５２、ＢＩＥＳＳＥＮ ｅｔ ａｌ．「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｃｌｕｓｔｅｒ Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ ｗｉｔｈ Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）３８：１５３８－１５４６、ＬＥＥ ｅｔ ａｌ．「Ｎｅｗ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ ｇｌｙｃｏ－ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｏｆ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ」Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ（２０１１）１９：２４９４－２５００、ＲＥＮＳＥＮ ｅｔ ａｌ．「Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｐｐｅｒ Ｓｉｚｅ Ｌｉｍｉｔ ｆｏｒ Ｕｐｔａｋｅ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｔｈｅ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｏｎ Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ Ｖｉｖｏ」Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）２７６（４０）：３７５７７－３７５８４、ＲＥＮＳＥＮ ｅｔ ａｌ．「Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ－Ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００４）４７：５７９８－５８０８、ＳＬＩＥＤＲＥＧＴ ｅｔ ａｌ．「Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅｓ ｆｏｒ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９９）４２：６０９－６１８、及びＶａｌｅｎｔｉｊｎ ｅｔ ａｌ．「Ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｌｙｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ Ｃｌｕｓｔｅｒ ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９７，５３（２），７５９－７７０が含まれるが、これらに限定されず、これらの文献のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、ＲＮａｓｅ Ｈベースのオリゴヌクレオチド（ギャップマーなど）またはスプライス調節オリゴヌクレオチド（完全修飾オリゴヌクレオチドなど）、及び少なくとも１つ、２つ、または３つのＧａｌＮＡｃ基を含む任意の共役基を含む。特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の参考文献：Ｌｅｅ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ，１９７８，６７，５０９－５１４、Ｃｏｎｎｏｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９８２，２５７，９３９－９４５、Ｐａｖｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｐ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ，１９８３，２２，５３９－５４８、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９８４，２３，４２５５－４２６１、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ，１９８７，４，３１７－３２８、Ｔｏｙｏｋｕｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ，１９９０，３１，２６７３－２６７６、Ｂｉｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，１９９５，３８，１５３８－１５４６、Ｖａｌｅｎｔｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９７，５３，７５９－７７０、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ，１９９７，３８，３４８７－３４９０、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ，１９９７，８，７６２－７６５、Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ，２００１，１１，８２１－８２９、Ｒｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００１，２７６，３７５７７－３７５８４、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，２００３，３６２，３８－４３、Ｗｅｓｔｅｒｌｉｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ，２００４，２１，２２７－２４１、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ，２００６，１６（１９），５１３２－５１３５、Ｍａｉｅｒｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２００７，１５，７６６１－７６７６、Ｋｈｏｒｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２００８，１６，５２１６－５２３１、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２０１１，１９，２４９４－２５００、Ｋｏｒｎｉｌｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１２，４２５，４３－４６、Ｐｕｊｏｌ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ，２０１２，５１，７４４５－７４４８、Ｂｉｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，１９９５，３８，１８４６－１８５２
、Ｓｌｉｅｄｒｅｇｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，１９９９，４２，６０９－６１８、Ｒｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２００４，４７，５７９８－５８０８、Ｒｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ，２００６，２６，１６９－１７５、ｖａｎ Ｒｏｓｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ，２００４，１１，４５７－４６４、Ｓａｔｏ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，２００４，１２６，１４０１３－１４０２２、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ，２０１２，７７，７５６４－７５７１、Ｂｉｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ，２０００，１４，１７８４－１７９２、Ｒａｊｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ，１９９７，８，９３５－９４０、Ｄｕｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，２０００，３１３，２９７－３２１、Ｍａｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ，２００３，１４，１８－２９、Ｊａｙａｐｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｏｒｇ Ｌｅｔｔ，２０１０，１２，５４１０－５４１３、Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ，２００２，１２，１０３－１２８、Ｍｅｒｗｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ，１９９４，５，６１２－６２０、Ｔｏｍｉｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２０１３，２１，５２７５－５２８１、国際出願ＷＯ１９９８／０１３３８１；ＷＯ２０１１／０３８３５６；ＷＯ１９９７／０４６０９８；ＷＯ２００８／０９８７８８；ＷＯ２００４／１０１６１９；ＷＯ２０１２／０３７２５４；ＷＯ２０１１／１２００５３；ＷＯ２０１１／１００１３１；ＷＯ２０１１／１６３１２１；ＷＯ２０１２／１７７９４７；ＷＯ２０１３／０３３２３０；ＷＯ２０１３／０７５０３５；ＷＯ２０１２／０８３１８５；ＷＯ２０１２／０８３０４６；ＷＯ２００９／０８２６０７；ＷＯ２００９／１３４４８７；ＷＯ２０１０／１４４７４０；ＷＯ２０１０／１４８０１３；ＷＯ１９９７／０２０５６３；ＷＯ２０１０／０８８５３７；ＷＯ２００２／０４３７７１；ＷＯ２０１０／１２９７０９；ＷＯ２０１２／０６８１８７；ＷＯ２００９／１２６９３３；ＷＯ２００４／０２４７５７；ＷＯ２０１０／０５４４０６；ＷＯ２０１２／０８９３５２；ＷＯ２０１２／０８９６０２；ＷＯ２０１３／１６６１２１；ＷＯ２０１３／１６５８１６；米国特許４，７５１，２１９；８，５５２，１６３；６，９０８，９０３；７，２６２，１７７；５，９９４，５１７；６，３００，３１９；８，１０６，０２２；７，４９１，８０５；７，４９１，８０５；７，５８２，７４４；８，１３７，６９５；６，３８３，８１２；６，５２５，０３１；６，６６０，７２０；７，７２３，５０９；８，５４１，５４８；８，３４４，１２５；８，３１３，７７２；８，３４９，３０８；８，４５０，４６７；８，５０１，９３０；８，１５８，６０１；７，２６２，１７７；６，９０６，１８２；６，６２０，９１６；８，４３５，４９１；８，４０４，８６２；７，８５１，６１５；米国特許出願公開ＵＳ２０１１／００９７２６４；ＵＳ２０１１／００９７２６５；ＵＳ２０１３／０００４４２７；ＵＳ２００５／０１６４２３５；ＵＳ２００６／０１４８７４０；ＵＳ２００８／０２８１０４４；ＵＳ２０１０／０２４０７３０；ＵＳ２００３／０１１９７２４；ＵＳ２００６／０１８３８８６；ＵＳ２００８／０２０６８６９；ＵＳ２０１１／０２６９８１４；ＵＳ２００９／０２８６９７３；ＵＳ２０１１／０２０７７９９；ＵＳ２０１２／０１３６０４２；ＵＳ２０１２／０１６５３９３；ＵＳ２００８／０２８１０４１；ＵＳ２００９／０２０３１３５；ＵＳ２０１２／００３５１１５；ＵＳ２０１２／００９５０７５；ＵＳ２０１２／０１０１１４８；ＵＳ２０１２／０１２８７６０；ＵＳ２０１２／０１５７５０９；ＵＳ２０１２／０２３０９３８；ＵＳ２０１３／０１０９８１７；ＵＳ２０１３／０１２１９５４；ＵＳ２０１３／０１７８５１２；ＵＳ２０１３／０２３６９６８；ＵＳ２０１１／０１２３５２０；ＵＳ２００３／００７７８２９；ＵＳ２００８／０１０８８０１；及びＵＳ２００９／０２０３１３２のうちのいずれかにおいて見いだされる任意の共役基を含み、これらの文献のそれぞれは参照によりその全体が組み込まれる。
アンチセンスオリゴヌクレオチドのインビトロ試験
本明細書には、細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置するための方法を記載する。この方法には、他のアンチセンス化合物による処置のために、適宜変更を加えることができる。
細胞は、細胞が培養中で約６０～８０％コンフルエントに達した時に、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理することができる。
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するためによく使用される試薬の一つに、カチオン性脂質トランスフェクション試薬ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）がある。アンチセンスオリゴヌクレオチドをＯＰＴＩ－ＭＥＭ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮと混合することで、所望の最終アンチセンスオリゴヌクレオチド濃度と、１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２～１２μｇ／ｍＬの範囲に及びうるＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ濃度にする。
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用されるもう一つの試薬は、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）である。アンチセンスオリゴヌクレオチドをＯＰＴＩ－ＭＥＭ１還元血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥと混合することで、所望のアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度と、１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２～１２μｇ／ｍＬの範囲に及びうるＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮ濃度にする。
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用されるもう一つの技法に、エレクトロポレーションがある。
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用されるさらにもう一つの技法に、細胞によるオリゴヌクレオチド自由取り込みがある。
細胞は、常法により、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理される。細胞はアンチセンスオリゴヌクレオチド処理の１６～２４時間後に収集することができ、その時点で、標的核酸のＲＮＡレベルまたはタンパク質レベルが、当技術分野に知られておりかつ本明細書に記載する方法によって測定される。一般に、複数の複製試料で処理を行う場合は、複製試料処理の平均としてデータを表す。
使用するアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、細胞株ごとに異なる。ある特定細胞株に関して最適なアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度を決定するための方法は、当技術分野では周知である。ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥによるトランスフェクションの場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、典型的には、１ｎＭ～３００ｎＭの範囲の濃度で使用される。
エレクトロポレーションによるトランスフェクションの場合は、それより高い６２５ｎＭから２０，０００ｎＭまでの範囲の濃度で、アンチセンスオリゴヌクレオチドが使用される。
ＲＮＡ単離
ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡに関して行うことができる。ＲＮＡ単離の方法は当技術分野ではよく知られている。ＲＮＡは当技術分野において周知の方法を使って、例えばＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）を製造者が推奨するプロトコルに従って使用することによって、調製される。
特定の適応
ここに提供する特定の実施形態は、対象における補体代替経路の調節異常に関連する疾患を、ＣＦＢを標的とするアンチセンス化合物などのＣＦＢ特異的阻害剤の投与によって処置し、防止し、または改善する方法に関する。
ここに提供する方法で処置し、防止し、かつ／または改善することが可能な、補体代替経路の調節異常に関連する腎疾患の例として、Ｃ３糸球体症、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、デンスデポジット病（ＤＤＤ；ＩＩ型ＭＰＧＮまたはＣ３Ｎｅｐｈとも呼ばれている）、及びＣＦＨＲ５ネフロパシーが挙げられる。
ここに提供する方法で処置し、防止し、かつ／または改善することが可能な、補体代替経路の調節異常に関連する他の腎疾患には、ＩｇＡネフロパシー；メサンギウム毛細管性（膜性増殖性）糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）；ループス腎炎及び全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を含む自己免疫障害；感染誘発性糸球体腎炎（感染後糸球体腎炎とも呼ばれている）；及び腎虚血再灌流傷害、例えば移植後腎虚血再灌流傷害がある。
ここに提供する方法で処置しかつ／または防止することが可能な、補体代替経路の調節異常に関連する非腎臓障害の例として、黄斑変性、例えば加齢黄斑変性（ＡＭＤ）（滲出型ＡＭＤ及び地図状萎縮などの乾性ＡＭＤを含む）；視神経脊髄炎；角膜疾患、例えば角膜炎症；自己免疫性ぶどう膜炎；及び糖尿病性網膜症などの眼疾患が挙げられる。眼疾患には補体系が関与すると報告されている。Ｊｈａ Ｐ， ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００７）４４（１６）：３９０１－３９０８。ここに提供する方法で処置しかつ／または防止することが可能な、補体代替経路の調節異常に関連する非腎臓障害の他の例には、ＡＮＣＡ関連血管炎、抗リン脂質症候群（抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）とも呼ばれている）、喘息、関節リウマチ、重症筋無力症、及び多発性硬化症がある。
ここに提供する特定の実施形態は、対象における補体代替経路の調節異常に関連する腎疾患を、ＣＦＢを標的とするアンチセンス化合物などのＣＦＢ特異的阻害剤の投与によって、処置し、防止し、または改善する方法に関する。特定の態様では、腎疾患がループス腎炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、デンスデポジット病（ＤＤＤ）、Ｃ３糸球体腎炎（Ｃ３ＧＮ）、ＣＦＨＲ５ネフロパシー、もしくは非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、またはそれらの任意の組み合わせである。
ここに提供する特定の実施形態は、対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）などの黄斑変性を、ＣＦＢを標的とするアンチセンス化合物などのＣＦＢ特異的阻害剤の投与によって処置し、防止し、または改善する方法に関する。特定の態様では、ＡＭＤが滲出型ＡＭＤまたは乾性ＡＭＤである。特定の態様では、乾性ＡＭＤが地図状萎縮でありうる。補体代替経路の調節異常とＡＭＤとの関連は研究によって実証されている。補体成分は、ＡＭＤ患者の黄斑に蓄積する細胞外物質である眼ドルーゼの一般的構成要素である。さらにまた、ＣＦＨ及びＣＦＢ変異体は、北欧及び北米におけるＡＭＤ症例の７５％近くを占めると報告されている。特殊なＣＦＢ多型がＡＭＤからの防御を付与することも見いだされている。Ｐａｔｅｌ，Ｎ． ｅｔ ａｌ．， Ｅｙｅ（２００８）２２（６）：７６８－７６。加えて、ＣＦＢホモ接合ヌルマウスは補体経路活性が低く、レーザー光凝固後に小さな眼病変及び脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を呈する。Ｒｏｈｒｅｒ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．（２００９）５０（７）：３０５６－６４。さらにまた、ＣＦＢ ｓｉＲＮＡ処置は、レーザー誘発性ＣＮＶからマウスを防御する。Ｂｏｒａ，ＮＳ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００６）１７７（３）：１８７２－８。腎臓と眼が共通の発生経路及び構造上の特徴（基底膜コラーゲンＩＶプロモーター組成及び血管分布を含む）を有することも研究によって示されている。Ｓａ
ｖｉｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ．（２０１１）２２（８）：１４０３－１５。腎臓疾患と眼疾患に補体経路が関与することの証拠がある。例えば、遺伝性補体調節タンパク質欠損は、非典型溶血性尿毒症症候群及びＡＭＤに対する素因の原因になる。Ｒｉｃｈａｒｄｓ Ａ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００７）９６：１４１－７７。加えて、慢性腎臓疾患はＡＭＤに関連付けられている。Ｎｉｔｓｃｈ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．（２００９）１６（３）：１８１－６；Ｃｈｏｉ，Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．（２０１１）１８（６）：２５９－６３。補体代替経路の調節異常に関連する腎臓疾患であるデンスデポジット病（ＤＤＤ）は、急性腎炎症候群と眼ドルーゼを特徴とする。Ｃｒｕｚ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ， ＧｅｎｅＲｅｖｉｅｗｓ（２００７）Ｊｕｌ
２０。さらに、補体代替経路の構成要素の遺伝子欠失を保因するマウスでは、腎疾患表現型と眼疾患表現型が共存する。ＣＦＨホモ接合ヌルマウスはＤＤＤを発症し、網膜異常及び視覚機能障害を呈すると報告されている。Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．（２００２）３１（４）：４２４－８。補体代替経路の調節異常に関連する腎疾患のマウスモデルは、ＡＭＤのモデルとしても受け入れられている。Ｐｅｎｎｅｓｉ ＭＥ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ａｓｐｅｃｔｓ Ｍｅｄ（２０１２）３３：４８７－５０９。例えばＣＦＨヌルマウスはＤＤＤなどの腎疾患とＡＭＤのモデルとして受け入れられている。さらにまた、ＡＭＤが補体因子の全身性供給源に関連することも報告されており、これらの補体因子が眼に局所的に蓄積することで代替経路補体活性化を駆動する。Ｌｏｙｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．（２０１２）５３（１０）：６６２８－３７。
以下の実施例は、本開示の特定の実施形態を例証するものであり、限定するものではない。さらに、具体的実施形態を記載する場合、本発明者らは、それらの具体的実施形態の一般的応用を企図している。例えば、ある特定モチーフを有するオリゴヌクレオチドの開示は、そのモチーフまたは同様のモチーフを有する他のオリゴヌクレオチドの合理的裏付けになる。同様に、例えば、ある特定高親和性修飾がある特定位置に見られる場合は、別段の表示がある場合を除き、同じ位置での他の高親和性修飾も好適であるとみなされる。実施例１：ホスホラミダイト（化合物１、１ａ、及び２）の調製のための一般的方法
Figure 0007001663000132
化合物１、１ａ、及び２を、本明細書に記載する当技術分野で周知の手順どおりに調製した（Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，２１（４），１１２２－１１２５，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１０，７５（５），１５６９－１５８１，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ，２００８，５２（１），５５３－５５４）、ならびに公開されたＰＣＴ国際出願（国際公開第ＷＯ２０１１／１１５８１８号、同第ＷＯ２０１０／０７７５７８号、同第ＷＯ２０１０／０３６６９８号、同第ＷＯ２００９／１４３３６９号、同第ＷＯ２００９／００６４７８、及び同第ＷＯ２００７／０９００７１号）、ならびに米国特許第７，５６９，６８６号も参照のこと）。
実施例２：化合物７の調製
Figure 0007001663000133
化合物３（２－アセトアミド－１，３，４，６－テトラ－Ｏ－アセチル－２－デオキシ－β－Ｄガラクトピラノースまたはガラクトサミンペンタアセテート）は、市販のものである。化合物５を公開された手順（Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，３４，２６９２）に従って調製した。
実施例３：化合物１１の調製
Figure 0007001663000134
化合物８及び９は、市販のものである。
実施例４：化合物１８の調製
Figure 0007001663000135
化合物１１を実施例３に例証される手順どおりに調製した。化合物１４は、市販のものである。化合物１７を、Ｒｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００４，４７，５７９８－５８０８）によって報告された同様の手順を用いて調製した。
実施例５：化合物２３の調製
Figure 0007001663000136
化合物１９及び２１は、市販のものである。
実施例６：化合物２４の調製
Figure 0007001663000137
化合物１８及び２３を実施例４及び５に例証される手順どおりに調製した。
実施例７：化合物２５の調製
Figure 0007001663000138
化合物２４を実施例６に例証される手順どおりに調製した。
実施例８：化合物２６の調製
Figure 0007001663000139
化合物２４を実施例６に例証される手順どおりに調製する。
実施例９：３’末端にＧａｌＮＡｃ３－１を含む共役ＡＳＯ（化合物２９）の一般的調製
Figure 0007001663000140
Figure 0007001663000141
保護されたＧａｌＮＡｃ３－１は以下の構造を有する。
Figure 0007001663000142
共役基ＧａｌＮＡｃ３－１（ＧａｌＮＡｃ３－１ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ３－１ａは、以下の式を有する。
Figure 0007001663000143
固体支持体に結合された保護ＧａｌＮＡｃ３－１（化合物２５）を実施例７に例証される手順どおりに調製した。３’末端にＧａｌＮＡｃ３－１を含むオリゴマー化合物２９を、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準的手順を用いて調製した（Ｄｕｐｏｕｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００６，４５，３６２３－３６２７を参照のこと）。ホスホラミダイト構築ブロック（化合物１及び１ａ）を実施例１に例証される手順どおりに調製した。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて既定の配列及び組成を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定する意図はない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序及び量を調整して、本明細書に記載するギャップトオリゴマー化合物を調製することができる。そのようなギャップトオリゴマー化合物は、任意の所与の標的によって指示される既定の組成及び塩基配列を有しうる。
実施例１０：５’末端にＧａｌＮＡｃ３－１を含む共役ＡＳＯ（化合物３４）の一般的調製
Figure 0007001663000144
Ｕｎｙｌｉｎｋｅｒ（商標）３０は、市販のものである。５’末端にＧａｌＮＡｃ３－１クラスターを含むオリゴマー化合物３４を、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準的手順を用いて調製する（Ｄｕｐｏｕｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００６，４５，３６２３－３６２７を参照のこと）。ホスホラミダイト構築ブロ
ック（化合物１及び１ａ）を実施例１に例証される手順どおりに調製した。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて既定の配列及び組成を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定する意図はない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序及び量を調整して、本明細書に記載するギャップトオリゴマー化合物を調製することができる。そのようなギャップトオリゴマー化合物は、任意の所与の標的によって決まる既定の組成及び塩基配列を有しうる。
実施例１１：化合物３９の調製
Figure 0007001663000145
Figure 0007001663000146
化合物４、１３、及び２３を実施例２、４、及び５に例証される手順どおりに調製した。化合物３５をＲｏｕｃｈａｕｄ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，１２，２３４６－２３５３に公開された同様の手順を用いて調製する。
実施例１２：化合物４０の調製
Figure 0007001663000147
化合物３８を実施例１１に例証される手順どおりに調製する。
実施例１３：化合物４４の調製
Figure 0007001663000148
Figure 0007001663000149
化合物２３及び３６を実施例５及び１１に例証される手順どおりに調製する。化合物４１を、国際公開第ＷＯ２００９０８２６０７号に公開された同様の手順を用いて調製する。
実施例１４：化合物４５の調製
Figure 0007001663000150
化合物４３を実施例１３に例証される手順どおりに調製する。
実施例１５：化合物４７の調製
Figure 0007001663000151
化合物４６は、市販のものである。
実施例１６：化合物５３の調製
Figure 0007001663000152
化合物４８及び４９は、市販のものである。化合物１７及び４７を実施例４及び１５に例証される手順どおりに調製する。
実施例１７：化合物５４の調製
Figure 0007001663000153
化合物５３を実施例１６に例証される手順どおりに調製する。
実施例１８：化合物５５の調製
Figure 0007001663000154
化合物５３を実施例１６に例証される手順どおりに調製する。
実施例１９：固相技法による３’位にＧａｌＮＡｃ３－１を含む共役ＡＳＯの調製のための一般的方法（ＩＳＩＳ６４７５３５、６４７５３６、及び６５１９００の調製）
別段の明示がある場合を除き、オリゴマー化合物の合成に用いるすべての試薬及び溶液を商業的供給源から購入する。標準のホスホラミダイト構築ブロック及び固体支持体を、例えば、Ｔ、Ａ、Ｇ、及びｍＣ残基を含む、ヌクレオシド残基の組み込みのために用いる。無水アセトニトリル中のホスホラミダイトの０．１Ｍ溶液をb－Ｄ－２’－デオキシリ
ボヌクレオシド及び２’－ＭＯＥに用いた。
カラムに充填したＧａｌＮＡｃ３－１負荷ＶＩＭＡＤ固体支持体（１１０μｍｏｌ／ｇ、Ｇｕｚａｅｖ ｅｔ ａｌ．，２００３）でのホスホラミダイトカップリング法により、ＡＳＯ合成を、ＡＢＩ ３９４合成装置（１～２μｍｏｌの規模）またはＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＡｅＫＴＡオリゴパイロット合成装置（４０～２００μｍｏｌの規模）で実行した。このカップリングステップでは、固体支持体の負荷量に対して４倍量のホスホラミダイトを送達し、ホスホラミダイト縮合を１０分間行った。他のすべてのステップは、製造業者から提供された標準のプロトコルに従った。トルエン中の６％ジクロロ酢酸溶液を用いて、ヌクレオチドの５’－ヒドロキシル基からジメチルトリチル（ＤＭＴ）基を除去した。カップリングステップ中、無水ＣＨ３ＣＮ中の４，５－ジシアノイミダゾール（０．７Ｍ）を活性化剤として用いた。ホスホロチオエート連結部を、３分間の接触時間で、１：１のピリジン／ＣＨ３ＣＮ中のキサンタンヒドリドの０．１Ｍ溶液による硫化によって導入した。６％の水を含有するＣＨ３ＣＮ中の２０％のｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシドの溶液を酸化剤として用いて、１２分間の接触時間
で、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部を得た。
所望の配列が構築された後、シアノエチルホスフェート保護基を、４５分間の接触時間で、トリエチルアミンとアセトニトリルの１：１（ｖ／ｖ）の混合物を用いて脱保護した。固体支持体に結合されたＡＳＯをアンモニア水（２８～３０重量％）中に懸濁し、５５℃で６時間加熱した。
その後、非結合型ＡＳＯを濾過し、アンモニアを沸去した。残渣を強アニオン交換カラムでの高圧液体クロマトグラフィーによって精製した（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｏｕｒｃｅ ３０Ｑ、３０μｍ、２．５４×８ｃｍ、Ａ＝３０％ＣＨ３ＣＮ水溶液中１００ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ＝Ａ中１．５Ｍ ＮａＢｒ、６０分後０～４０％のＢ、流量１４ｍＬ／分－１、λ＝２６０ｎｍ）。残渣を逆相カラムでのＨＰＬＣにより脱塩して、固体支持体への初期負荷量に基づいて１５～３０％の単離収率で所望のＡＳＯを得た。ＡＳＯを、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＭＳＤシステムを用いたイオン対ＨＰＬＣ／ＭＳ分析によって特徴付けた。
当技術分野で周知の標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて共役体を含まないアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成した。
これらの方法を用いて、ＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とする３個の別個のアンチセンス化合物を調製した。以下の表１７に要約されるように、ＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とする３個のアンチセンス化合物のそれぞれは、同一の核酸塩基配列を有し、ＩＳＩＳ ３０４８０１は、すべてがホスホロチオエート連結部である５－１０－５ＭＯＥギャップマーであり、ＩＳＩＳ ６４７５３５は、ＧａｌＮＡｃ３－１をその３’末端で共役させたことを除いて、ＩＳＩＳ ３０４８０１と同一であり、ＩＳＩＳ ６４７５３６は、その化合物の特定のヌクレオシド間連結部がホスホジエステル連結部であることを除いて、ＩＳＩＳ ６４７５３５と同一であった。表１７にさらに要約されるように、ＳＲＢ－１を標的とする２つの別個のアンチセンス化合物を合成した。ＩＳＩＳ ４４０７６２は、すべてがホスホロチオエートヌクレオシド間連結部である２－１０－２ ｃＥｔギャップマーであり、ＩＳＩＳ ６５１９００は、その３’末端にＧａｌＮＡｃ３－１を含めたことを除いて、ＩＳＩＳ ４４０７６２と同一であった。
Figure 0007001663000155
下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’－（Ｓ）－ＣＨ３二環式ヌクレオシド（例えば、ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。上付き文字「ｍ」は、５－メチルシトシンを示す。「ＧａｌＮＡｃ３－１」は、先の実施例９に示された構造を有する共役基を示す。ＧａｌＮＡｃ３－１が、ＡＳＯを共役体の残りの部分に連結させる切断可能なアデノシンを含み、「ＧａｌＮＡｃ３－１ａ」と指定されることに留意されたい。上述の表ではこの命名法を用いて、共役体の一部であるアデノシンを含む全核酸塩基配列を示す。したがって、上述の表において、「Ａｄｏ」を省略して「ＧａｌＮＡｃ３－１」で終了する配列を列記することもできる。下付き文字「ａ」を用いて切断可能なヌクレオシドまたは切断可能部分を欠く共役基の部分を示すこの慣例をこれらの実施形態の全体を通して用いる。切断可能部分を欠く共役基のこの部分は、本明細書において「クラスター」または「共役クラスター」または「ＧａｌＮＡｃ３クラスター」と称される。特定の事例において、これは、そのクラスター及びその切断可能部分を別々に提供することによって共役基を説明するのに好都合である。
実施例２０：ｈｕＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩの用量依存的アンチセンス阻害
それぞれヒトＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とし、かつ上に記載されるＩＳＩＳ ３０４８０１及びＩＳＩＳ ６４７５３５を別々に試験し、用量依存的試験において、ヒトＡｐｏＣ
ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩを阻害するそれらの能力について評価した。
処理
ヒトＡｐｏＣＩＩＩトランスジェニックマウスを１２時間の明暗周期で維持し、Ｔｅｋｌａｄ実験食餌を不断給餌した。実験開始前に動物を研究施設で少なくとも７日間順化させた。ＡＳＯをＰＢＳ中に調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過して滅菌し
た。注入のためにＡＳＯを０．９％ＰＢＳ中に溶解した。
ヒトＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスに、ＩＳＩＳ ３０４８０１もしくは６４７５３５を、０．０８、０．２５、０．７５、２．２５、もしくは６．７５μｍｏｌ／ｋｇで、または対照としてＰＢＳを、週１回２週間、腹腔内に注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終用量の投与から４８時間後に血液を各マウスから採取し、マウスを屠殺し、組織を収集した。
ＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡ分析
標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いてマウスの肝臓におけるＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルを決定した。ＰＢＳ処理対照に対して標準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡとの比較で相対的に決定した。以下の結果は、ＰＢＳ処理対照に対して標準化された各処理群のＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示され、「％ＰＢＳ」で表示される。各ＡＳＯの半数効果濃度（ＥＤ５０）も以下の表１８に示される。
例証されるように、ＰＢＳ対照と比較して、両方のアンチセンス化合物がＡｐｏＣ ＩＩＩ ＲＮＡを減少させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３－１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３－１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりもはるかに強力であった。
Figure 0007001663000156
 ＡｐｏＣ ＩＩＩタンパク質分析（比濁アッセイ）
２０１３年３月２９日の出版前にオンラインで公開されたＧｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）によって報告された手順を用いて、血漿ＡｐｏＣ ＩＩＩタンパク質分析を行った。
マウスから単離した約１００μＬの血漿を、希釈することなく、Ｏｌｙｍｐｕｓ臨床分析器及び市販の比濁ＡｐｏＣ ＩＩＩアッセイ（Ｋａｍｉｙａ、カタログ番号ＫＡＩ－００６、Ｋａｍｉｙａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いて分析した。アッセイプロトコルを供給業者が説明するとおりに実行した。
以下の表１９に示されるように、ＰＢＳ対照と比較して、両方のアンチセンス化合物がＡｐｏＣ ＩＩＩタンパク質を減少させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３－１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３－１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりもはるかに強力であった。
Figure 0007001663000157
血漿トリグリセリド及びコレステロールを、Ｂｌｉｇｈ ａｎｄ Ｄｙｅｒの方法（Ｂｌｉｇｈ，Ｅ．Ｇ．ａｎｄ Ｄｙｅｒ，Ｗ．Ｊ．Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３７：９１１－９１７、１９５９）（Ｂｌｉｇｈ，Ｅ ａｎｄ Ｄｙｅｒ，Ｗ，Ｃａｎ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈｙｓｉｏｌ，３７，９１１－９１７，１９５９）（Ｂｌｉｇｈ，Ｅ ａｎｄ Ｄｙｅｒ，Ｗ，Ｃａｎ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈｙｓｉｏｌ，３７，９１１－９１７，１９５９）を用いて抽出し、Ｂｅｃｋｍａｎｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ臨床分析器及び市販の試薬を用いて測定した。
トリグリセリドレベルを、ＰＢＳを注入したマウスとの比較で相対的に測定し、「％ＰＢＳ」で表示する。結果が表２０に提示される。例証されるように、両方のアンチセンス化合物がトリグリセリドレベルを低下させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３－１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３－１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりも実質的にはるかに強力であった。
Figure 0007001663000158
血漿試料をＨＰＬＣによって分析して、総コレステロールの量及びコレステロールの異なる画分（ＨＤＬ及びＬＤＬ）の量を決定した。結果が表２１及び２２に提示される。例証されるように、両方のアンチセンス化合物が総コレステロールレベルを低下させ、ＬＤＬを低下させ、ＨＤＬを上昇させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３－１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３－１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりも実質的にはるかに強力であった。ＨＤＬレベルの増加及びＬＤＬレベルの減少は、ＡｐｏＣ ＩＩＩのアンチセンス阻害の心臓血管の有益な影響である。
Figure 0007001663000159
Figure 0007001663000160
 薬物動態分析（ＰＫ）
ＡＳＯのＰＫも評価した。肝臓及び腎臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出した。試料をＩＰ－ＨＰＬＣ－ＭＳを利用するＭＳＤ１で分析した。全長ＩＳＩＳ ３０４８０１及び６４７５３５の組織レベル（μｇ／ｇ）を測定し、結果が表２３に提供される。例証されるように、総全長アンチセンス化合物の肝臓濃度は、これら２つのアンチセンス化合物と同様であった。したがって、ＧａｌＮＡｃ３－１共役アンチセンス化合物が肝臓でより活性であるが（上のＲＮＡ及びタンパク質データによって実証されるように）、肝臓内で著しく高い濃度では存在しない。実際には、計算されたＥＣ５０（表２３に提供される）は、共役化合物の力価の観察された増加が蓄積の増加に完全に起因するわけではないことを裏付ける。この結果は、共役体が、肝臓蓄積単独以外の機構によって、おそらくアンチセンス化合物の細胞への生産的な取り込みを改善することによって、力価を改善したことを示唆する。
結果は、腎臓におけるＧａｌＮＡｃ３－１共役アンチセンス化合物の濃度が、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠くアンチセンス化合物の濃度よりも低いことも示す。これは、いくつかの有益な治療的意味を有する。腎臓における活性が要求されない治療的指標において、腎臓への曝露は、腎毒性の危険性を有し、それに見合う利益がない。さらに、腎臓における高濃度は、典型的には、尿への化合物の損失をもたらし、より迅速なクリアランスをもたらす。したがって、非腎臓標的の場合、腎臓蓄積は望ましくない。これらのデータは、ＧａｌＮＡｃ３－１共役が腎臓蓄積を減少させることを示唆する。
Figure 0007001663000161
ＩＳＩＳ ６４７５３５の代謝物も特定し、それらの質量を高分解能質量分析によって確認した。観察された代謝物の切断部位及び構造が以下に示される。標準的手順を用いて全長ＡＳＯの相対％を計算し、結果が表２３に提示される。ＩＳＩＳ ６４７５３５の主な代謝物は、全共役体を欠く全長ＡＳＯ（すなわち、ＩＳＩＳ ３０４８０１）であり、これは、以下に示される切断部位Ａでの切断に由来する。さらに、他の切断部位に由来するさらなる代謝物も観察された。これらの結果は、細胞内の酵素によって切断されうるか、またはサイトゾルの還元環境下で切断されうるか、またはエンドソーム及びリソソーム内の酸性ｐＨに対して不安定な、ＧａｌＮＡｃ３－１糖とＡＳＯとの間のエステル、ペプチド、ジスルフィド、ホスホラミデート、またはアシルヒドラゾンなどの他の切断可能な結合の導入も有用でありうることを示唆する。
Figure 0007001663000162
Figure 0007001663000163
Figure 0007001663000164
 実施例２１：単回投与試験におけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩのアンチセンス阻害
それぞれヒトＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とし、かつ表１７に記載されるＩＳＩＳ ３０４８０１、６４７５３５、及び６４７５３６を、単回投与試験において、ヒトＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩを阻害するそれらの能力についてさらに評価した。
処理
ヒトＡｐｏＣＩＩＩトランスジェニックマウスを１２時間の明暗周期に維持し、Ｔｅｋｌａｄ実験食餌を不断給餌した。実験開始前に動物を研究施設で少なくとも７日間順化させた。ＡＳＯをＰＢＳ中に調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過滅菌した。注入のためにＡＳＯを０．９％ＰＢＳ中に溶解した。
ヒトＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスに、ＩＳＩＳ ３０４８０１、６４７５３５、もしくは６４７５３６（上述のもの）、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、腹腔内注入した。処理群は、３匹の動物からなり、対照群は、４匹の動物からなった。治療前及び最終用量後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。
試料を収集し、分析して、肝臓におけるＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡ及びタンパク質レベル、血漿トリグリセリド、ならびにＨＤＬ及びＬＤＬ画分を含むコレステロールを決定し、上述（実施例２０）のように評価した。これらの分析からのデータは、以下の表２４～２８に提示される。血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。ＡＬＴ及びＡＳＴレベルは、アンチセンス化合物がすべての投与量で良好な耐性であったことを示した。
これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３－１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）と比較して、３’末端にＧａｌＮＡｃ３－１共役体を含むアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６４７５３５及び６４７５３６）の力価の改善を示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ３－１共役体及びいくつかのホスホジエステル連結部を含むＩＳＩＳ ６４７５３６は、同一の共役体を含むＩＳＩＳ ６４７５３５と同程度に強力であり、ＡＳＯ内のすべてのヌクレオシド間連結部は、ホスホロチオエート連結部である。
Figure 0007001663000165
Figure 0007001663000166
Figure 0007001663000167
Figure 0007001663000168
Figure 0007001663000169
これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３－１共役体がアンチセンス化合物の力価を改善することを裏付ける。これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３－１共役アンチセンス化合物の同等の力価も示し、これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、混成連結部（６個のホスホジエステル連結部を有するＩＳＩＳ ６４７５３６）及び同一のアンチセンス化合物の完全な
ホスホロチオエートバージョン（ＩＳＩＳ ６４７５３５）を有する。
ホスホロチオエート連結部は、アンチセンス化合物にいくつかの特性を提供する。例えば、これらは、ヌクレアーゼ消化に抵抗し、タンパク質に結合し、腎臓／尿ではなく肝臓における化合物の蓄積をもたらす。これらは、肝臓における徴候を治療する際に特に望ましい特性である。しかしながら、ホスホロチオエート連結部は、炎症性応答とも関連している。したがって、化合物におけるホスホロチオエート連結部の数を減少させることにより、炎症の危険性の減少が見込まれるが、肝臓中の化合物の濃度も低下させ、腎臓及び尿中の濃度を増加させ、ヌクレアーゼの存在下で安定性を低下させ、全体の力価を低下させる。これらの結果は、特定のホスホロチオエート連結部がホスホジエステル連結部に置換されたＧａｌＮＡｃ３－１共役アンチセンス化合物が、肝臓における標的に対して、完全なホスホロチオエート連結部を有する対応物と同程度に強力であることを示す。そのような化合物は、より炎症誘発性が低いと見込まれる（ＰＳの減少が炎症性効果の減少をもたらすことを示す実験を説明する実施例２４を参照のこと）。
実施例２２：生体内におけるＳＲＢ－１を標的とするＧａｌＮＡｃ３－１共役修飾ＡＳＯの影響
それぞれＳＲＢ－１を標的とし、かつ表１７に記載されるＩＳＩＳ ４４０７６２及び６５１９００を、用量依存的試験において、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＳＲＢ－１を阻害するそれらの能力について評価した。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ４４０７６２、６５１９００、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の４８時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを決定した。ＰＢＳ処理対照に対して標準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡとの比較で相対的に決定した。以下の結果は、ＰＢＳ処理対照に対して標準化された各処理群のＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示され、「％ＰＢＳ」で表示される。
表２９に例証されるように、両方のアンチセンス化合物がＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３－１共役体（ＩＳＩＳ ６５１９００）を含むアンチセンス化合物は、ＧａｌＮＡｃ３－１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ４４０７６２）よりもはるかに強力であった。これらの結果は、異なる標的に相補的であり、かつ異なる化学修飾ヌクレオシドを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて、ＧａｌＮＡｃ３－１共役体の力価利益が観察されることを実証し、この事例において、修飾ヌクレオシドは、拘束エチル糖部分（二環式糖部分）を含む。
Figure 0007001663000170
 実施例２３：ヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）アッセイプロトコル
ＢＤ Ｖａｕｔａｉｎｅｒ ＣＰＴチューブ法を用いてｈＰＢＭＣアッセイを実行した。ＵＳ ＨｅａｌｔｈＷｏｒｋｓ ｃｌｉｎｉｃ（Ｆａｒａｄａｙ ＆ Ｅｌ Ｃａｍｉｎｏ Ｒｅａｌ，Ｃａｒｌｓｂａｄ）においてインフォームドコンセントを得た志願ドナー由来の全血試料を得て、４～１５個のＢＤ Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ ＣＰＴ８ｍＬチューブ（ＶＷＲカタログ番号ＢＤ３６２７５３）内に収集した。ＰＢＭＣアッセイデータシートを用いて、各ドナーのＣＰＴチューブ内の開始合計全血量の近似値を記録した。
遠心分離の直前に、チューブを８～１０回、穏やかに反転させることによって、血液試料を再度混合した。ＣＰＴチューブを、水平（スイングアウト）ローター内で、室温（１８～２５℃）で３０分間、ブレーキオフで１５００～１８００ＲＣＦで遠心分離した（２７００ＲＰＭ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ａｌｌｅｇｒａ ６Ｒ）。細胞を（Ｆｉｃｏｌｌとポリマーゲル層との間の）バフィーコート界面から回収し、５０ｍＬの滅菌円錐チューブに移し、最大５個のＣＰＴチューブ／５０ｍＬの円錐チューブ／ドナーをプールした。その後、細胞をＰＢＳ（Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋を含まない；ＧＩＢＣＯ）で２回洗浄した。チューブを最大５０ｍＬまで満たし、数回反転させて混合した。その後、試料を、室温で１５分間、３３０×ｇで遠心分離し（１２１５ＲＰＭ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ａｌｌｅｇｒａ ６Ｒ）、ペレットを乱すことなくできるだけ多くの上澄みを吸引した。チューブを穏やかに回転させて細胞ペレットを取り除き、細胞をＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ（約１ｍＬ／１０ｍＬの開始全血量）中に再懸濁した。６０μＬの試料を、６００μＬのＶｅｒｓａＬｙｓｅ試薬（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、カタログ番号Ａ０９７７７）を有する試料バイアル（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）にピペット注入し、１０～１５秒間穏やかにボルテックスした。試料を室温で１０分間インキュベートし、計数前に再度混合した。ＰＢＭＣ細胞型を用いたＶｉｃｅｌｌ ＸＲ細胞生存率分析器（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で細胞懸濁液を計数した（１：１１の希釈係数を他のパラメータと共に保存した）。生細胞／ｍＬ及び生存率を記録した。細胞懸濁液をＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ中で１×１０７生ＰＢＭＣ／ｍＬに希釈した。
細胞を９６ウェル組織培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ）の５０μＬ／ウェル中に５×１０５でプレーティングした。ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ中で希釈した２倍濃度のオリゴ／対照の５０μＬ／ウェルを実験テンプレートに従
って添加した（合計１００μＬ／ウェル）。プレートを振盪器に設置し、約１分間混合させた。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、プレートを４００×ｇで１０分間遠心分離し、その後、ＭＳＤサイトカインアッセイ（すなわち、ヒトＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－８、及びＭＣＰ－１）のために上澄みを除去した。
実施例２４：ｈＰＢＭＣアッセイにおけるＧａｌＮＡｃ３－１共役ＡＳＯの炎症誘発作用の評価
表３０に列記されるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、実施例２３に記載されるプロトコルを用いたｈＰＢＭＣアッセイにおいて炎症誘発作用について評価した。ＩＳＩＳ ３５３５１２は、このアッセイにおいてＩＬ－６放出に関する高レスポンダーとして知られる内部標準物である。ｈＰＢＭＣを新鮮な志願ドナーから単離し、０、０．０１２８、０．０６４、０．３２、１．６、８、４０、及び２００μｍ濃度のＡＳＯで処理した。処理から２４時間後、サイトカインレベルを測定した。
ＩＬ－６のレベルを一次読み出しとして用いた。標準的手順を用いてＥＣ５０及びＥｍａｘを計算した。結果が２つのドナー由来のＥｍａｘ／ＥＣ５０の平均比率として表され、「Ｅｍａｘ／ＥＣ５０」で表示される。より低い比率は、炎症誘発応答の相対的減少を示し、より高い比率は、炎症誘発応答の相対的増加を示す。
試験化合物に関して、炎症誘発性が最も低い化合物は、ＰＳ／ＰＯ連結ＡＳＯ（ＩＳＩＳ ６１６４６８）であった。ＧａｌＮＡｃ３－１共役ＡＳＯ（ＩＳＩＳ ６４７５３５）は、その非共役対応物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりもわずかに炎症誘発性が低かった。これらの結果は、いくつかのＰＯ連結部の組み込みが炎症誘発反応を減少させ、ＧａｌＮＡｃ３－１共役体の添加が化合物の炎症誘発性を高めず、炎症誘発応答を減少させうることを示す。したがって、混成ＰＳ／ＰＯ連結部及びＧａｌＮＡｃ３－１共役体の両方を含むアンチセンス化合物が、完全ＰＳ連結アンチセンス化合物（ＧａｌＮＡｃ３－１共役体の有無にかかわらず）と比較して、より低い炎症誘発応答をもたらすことが予想されるであろう。これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３－１共役アンチセンス化合物、特に減少したＰＳ含有量を有するものの炎症誘発性がより低いことを示す。
総合して、これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３－１共役化合物、特にＰＳ含有量を減らしたものを、対応物であるＧａｌＮＡｃ３－１共役体を欠く完全ＰＳアンチセンス化合物よりも高い用量で投与することができることを示唆する。これらの化合物の半減期が実質的に異なることが予想されないため、そのようなより高い投与量は、結果として低頻度の投薬につながる。実際には、ＧａｌＮＡｃ３－１共役化合物の方が力価が高く（実施例２０～２２を参照のこと）、再投薬は化合物の濃度が所望のレベル未満に低下した時に必要になるが、その所望のレベルは力価に基づくことから、そのような投与の頻度はさらに低くなるだろう。
Figure 0007001663000171
下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’－（Ｓ）－ＣＨ３二環式ヌクレオシド（例えば、ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。上付き文字「ｍ」は、５－メチルシトシンを示す。「Ａｄｏ’－ＧａｌＮＡｃ３－１ａ」は、示されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドの３’末端に結合される、実施例９に示される構造ＧａｌＮＡｃ３－１を有する共役体を示す。
Figure 0007001663000172
 実施例２５：生体外におけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とするＧａｌＮＡｃ３－１共役修飾ＡＳＯの影響
上述のＩＳＩＳ ３０４８０１及び６４７５３５を生体外で試験した。トランスジェニックマウス由来の２５，０００細胞／ウェルの密度の初代肝細胞を、０．０３，０．０８、０．２４、０．７４、２．２２、６．６７、及び２０μｍ濃度の修飾オリゴヌクレオチ
ドで処理した。約１６時間の処理期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定し、ｈＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルをＲＩＢＯＧＲＥＥＮで測定された全ＲＮＡ含有量に従って調整した。
標準的方法を用いてＩＣ５０を計算し、結果が表３２に提示される。例証されるように、対照ＩＳＩＳ ３０４８０１と比較して、同程度の力価がＩＳＩＳ ６４７５３５で処理した細胞において観察された。
Figure 0007001663000173
この実験において、生体内で観察されるＧａｌＮＡｃ３－１共役の大きな力価利益は、生体外では観察されなかった。生体外での初代肝細胞におけるその後の自由取り込み実験は、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠くオリゴヌクレオチドと比較して、さまざまなＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドの力価の増加を示した（実施例６０、８２、及び９２を参照のこと）。
実施例２６：ＡｐｏＣ ＩＩＩ ＡＳＯ活性へのＰＯ／ＰＳ連結部の影響
ヒトＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスに、ＩＳＩＳ ３０４８０１もしくはＩＳＩＳ ６１６４６８（両方ともに上述のもの）またはＰＢＳ処理対照を、２５ｍｇ／ｋｇで週１回２週間、腹腔内注入した。処理群は、３匹の動物からなり、対照群は、４匹の動物からなった。治療前及び最終服用後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。
試料を収集し、分析して、上述のように肝臓におけるＡｐｏＣ ＩＩＩタンパク質レベルを決定した（実施例２０）。これらの分析からのデータが以下の表３３に提示される。
これらの結果は、完全ＰＳ（ＩＳＩＳ ３０４８０１）と比較して、ウイングにＰＯ／ＰＳを有するアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６１６４６８）の力価の減少を示す。
Figure 0007001663000174
 実施例２７：化合物５６
Figure 0007001663000175
化合物５６は、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈから市販されているか、またはＳｈｃｈｅｐｉｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７－４４５４によって報告された公開された手順に従って調製することができる。
実施例２８：化合物６０の調製
Figure 0007001663000176
化合物４を実施例２に例証される手順どおりに調製した。化合物５７は、市販のものである。化合物６０を構造分析で確認した。
他の単保護された置換または無置換アルキルジオール、例えば限定するわけではないが、本明細書に提示されるものを用いて既定の組成を有するホスホラミダイトを調製することができるため、化合物５７は、代表的なものであり、限定する意図はない。
実施例２９：化合物６３の調製
Figure 0007001663000177
化合物６１及び６２を、Ｔｏｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１３，３，５６６－５７７、及びＪｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００７，６３（１９），３９８２－３９８８によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
あるいは、化合物６３を、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．の科学文献及び特許文献（Ｓｙｎｌｅｔｔ，２００３，１２，１８３８－１８４０、及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．の公開されたＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００４０６３２０８号）に報告される手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例３０：化合物６３ｂの調製
Figure 0007001663000178
化合物６３ａを、Ｈａｎｅｓｓｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９６，７４（９），１７３１－１７３７によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例３１：化合物６３ｄの調製
Figure 0007001663000179
化合物６３ｃを、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９８，９（５），４５１－４５３によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例３２：化合物６７の調製
Figure 0007001663000180
実施例２に例証される手順どおりに化合物６４を調製した。化合物６５を、Ｏｒ ｅｔ
ａｌ．の公開されたＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００９００３００９号によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。他の保護基、例えば限定するわけではないが、本明細書に提示されるものを用いることができるため、化合物６５に用いた保護基は、代表的なものであり、限定する意図はない。
実施例３３：化合物７０の調製
Figure 0007001663000181
実施例２に例証される手順どおりに化合物６４を調製した。化合物６８は、市販のものである。他の保護基、例えば限定するわけではないが、本明細書に提示されるものを用いることができるため、化合物６８に用いた保護基は、代表的なものであり、限定する意図はない。
実施例３４：化合物７５ａの調製
Figure 0007001663000182
化合物７５をＳｈｃｈｅｐｉｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７－４４５４によって報告された公開された手順に従って調製する。
実施例３５：化合物７９の調製
Figure 0007001663000183
化合物７６をＳｈｃｈｅｐｉｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７－４４５４によって報告された公開された手順に従って調製した。
実施例３６：化合物７９ａの調製
Figure 0007001663000184
化合物７７を実施例３５に例証される手順どおりに調製する。
実施例３７：固体支持体による５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－２共役体を含む共役オリゴマー化合物８２の調製のための一般的方法（方法Ｉ）
Figure 0007001663000185
Figure 0007001663000186
ＧａｌＮＡｃ３－２が、以下の構造を有する：
Figure 0007001663000187
共役基ＧａｌＮＡｃ３－２（ＧａｌＮＡｃ３－２ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ３－２ａは、以下の式を有する：
Figure 0007001663000188
ＶＩＭＡＤ結合オリゴマー化合物７９ｂを、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準的手順を用いて調製した（Ｄｕｐｏｕｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００６，４５，３６２３－３６２７を参照のこと）。ホスホラミダイト化合物５６及び６０を、それぞれ、実施例２７及び２８にそれぞれ例証される手順どおりに調製した。他のホスホラミダイト構築ブロック、例えば限定するわけではないが、本明細書に提
示されるものを用いて、５’末端にホスホジエステル連結共役基を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定する意図はない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序及び量を調整して、任意の既定の配列及び組成を有する本明細書に記載するオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例３８：５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－２共役体を含むオリゴマー化合物８２の調製のための代替方法（方法ＩＩ）
Figure 0007001663000189
ＶＩＭＡＤ結合オリゴマー化合物７９ｂを、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準的手順を用いて調製した（Ｄｕｐｏｕｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００６，４５，３６２３－３６２７を参照のこと）。ＧａｌＮＡｃ３－２クラスターホスホラミダイト（化合物７９）を実施例３５に例証される手順どおりに調製した。この代替方法は、合成の最終ステップでのホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－２共役体のオリゴマー化合物への一段階導入を可能にする。他のホスホラミダイト構築ブロック、例えば限定するわけではないが、本明細書に提示されるものを用いて５’末端にホスホジエステル共役体を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホ
スホラミダイトは、代表的なものであり、限定する意図はない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序及び量を調整して、任意の既定の配列及び組成を有する本明細書に記載するオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例３９：固体支持体による５’末端にＧａｌＮＡｃ３－３共役体（５’末端結合のためにＧａｌＮＡｃ３－１修飾されたもの）を含むオリゴマー化合物８３ｈの調製のための一般的方法
Figure 0007001663000190
Figure 0007001663000191
化合物１８を実施例４に例証される手順どおりに調製した。化合物８３ａ及び８３ｂは、市販のものである。ホスホジエステル連結ヘキシルアミンを含むオリゴマー化合物８３ｅを標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて調製した。保護されたオリゴマー化合物をアンモニア水で処理することにより、５’－ＧａｌＮＡｃ３－３共役オリゴマー化合物（８３ｈ）を提供した。
ＧａｌＮＡｃ３－３が、以下の構造を有する：
Figure 0007001663000192
共役基ＧａｌＮＡｃ３－３（ＧａｌＮＡｃ３－３ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ３－３ａは、以下の式を有する：
Figure 0007001663000193
実施例４０：固体支持体による３’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－４共役体を含むオリゴマー化合物８９の調製のための一般的方法
Figure 0007001663000194
Figure 0007001663000195
ＧａｌＮＡｃ３－４が、以下の構造を有する：
Figure 0007001663000196
式中、ＣＭは、切断可能部分である。特定の実施形態において、切断可能部分は、以下のものである：
Figure 0007001663000197
共役基ＧａｌＮＡｃ３－４（ＧａｌＮＡｃ３－４ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ３－４ａは、以下の式を有する：
Figure 0007001663000198
保護されたＵｎｙｌｉｎｋｅｒ機能化固体支持体化合物３０は、市販のものである。化合物８４を、文献に報告される手順と同様の手順を用いて調製する（Ｓｈｃｈｅｐｉｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７－４４５４、Ｓｈｃｈｅｐｉｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９９，２７，３０３５－３０４１、及びＨｏｒｎｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５，４８４２－４８４９を参照のこと）。
ホスホラミダイト構築ブロック（化合物６０及び７９ａ）を実施例２８及び３６に例証される手順どおりに調製する。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて、既定の配列及び組成を有する３’末端にホスホジエステル連結共役体を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定する意図はない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序及び量を調整して、任意の既定の配列及び組成を有する本明細書に記載するオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例４１：固相技法による５’位にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－２（Ｂｘがアデニンである実施例３７を参照のこと）共役体を含むＡＳＯの調製のための一般的方法（ＩＳＩＳ ６６１１３４の調製）
別段の明示がある場合を除き、オリゴマー化合物の合成に用いるすべての試薬及び溶液
を商業的供給源から購入する。標準のホスホラミダイト構築ブロック及び固体支持体を、例えば、Ｔ、Ａ、Ｇ、及びｍＣ残基を含む、ヌクレオシド残基の組み込みのために用いる。ホスホラミダイト化合物５６及び６０を用いて、５’末端のホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－２共役体を合成した。無水アセトニトリル中のホスホラミダイトの０．１Ｍ溶液をb－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシド及び２’－ＭＯＥに用いた。
カラムに充填されたＶＩＭＡＤ固体支持体（１１０μｍｏｌ／ｇ、Ｇｕｚａｅｖ ｅｔ
ａｌ．，２００３）でのホスホラミダイトカップリング法により、ＡＳＯ合成を、ＡＢＩ ３９４合成装置（１～２μｍｏｌの規模）またはＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＡｅＫＴＡオリゴパイロット合成装置（４０～２００μｍｏｌの規模）で実行した。このカップリングステップについて、固体支持体の初期負荷量に対して４倍過剰のホスホラミダイトを送達し、ホスホラミダイトカップリングを１０分間行った。すべての他のステップは、製造業者から提供された標準のプロトコルに従った。トルエン中の６％ジクロロ酢酸溶液を用いて、ヌクレオチドの５’－ヒドロキシル基からジメトキシトリチル（ＤＭＴ）基を除去した。カップリングステップ中、無水ＣＨ３ＣＮ中の４，５－ジシアノイミダゾール（０．７Ｍ）を活性化剤として用いた。ホスホロチオエート連結部を、３分間の接触時間で、１：１のピリジン／ＣＨ３ＣＮ中のキサンタンヒドリドの０．１Ｍ溶液による硫化によって導入した。６％の水を含有するＣＨ３ＣＮ中の２０％のｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシドの溶液を酸化剤として用いて、１２分間の接触時間で、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部を提供した。
所望の配列が構築された後、シアノエチルホスフェート保護基を、４５分間の接触時間で、トルエン中の２０％ジエチルアミン（ｖ／ｖ）を用いて脱保護した。固体支持体に結合されたＡＳＯをアンモニア水（２８～３０重量％）中に懸濁し、５５℃で６時間加熱した。
その後、非結合型ＡＳＯを濾過し、アンモニアを沸去した。残渣を強アニオン交換カラムでの高圧液体クロマトグラフィーによって精製した（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｏｕｒｃｅ ３０Ｑ、３０μｍ、２．５４×８ｃｍ、Ａ＝３０％ＣＨ３ＣＮ水溶液中１００ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ＝Ａ中１．５Ｍ ＮａＢｒ、６０分後０～４０％のＢ、流量１４ｍＬ／分、λ＝２６０ｎｍ）。残渣を逆相カラムでのＨＰＬＣにより脱塩して、固体支持体への初期負荷量に基づいて１５～３０％の単離収率で所望のＡＳＯを得た。ＡＳＯを、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＭＳＤシステムを用いたイオン対ＨＰＬＣ／ＭＳ分析によって特徴付けた。
Figure 0007001663000199
下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’－（Ｓ）－ＣＨ３二環式ヌクレオシド（例えば、ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’
」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。上付き文字「ｍ」は、５－メチルシトシンを示す。ＧａｌＮＡｃ３－２ａの構造が実施例３７に示される。
実施例４２：固相技法による５’位にＧａｌＮＡｃ３－３共役体を含むＡＳＯの調製のための一般的方法（ＩＳＩＳ ６６１１６６の調製）
ＩＳＩＳ ６６１１６６の合成を、実施例３９及び４１に例証される手順と同様の手順を用いて実行した。
ＩＳＩＳ ６６１１６６は、５’位がＧａｌＮＡｃ３－３共役体を含む５－１０－５ＭＯＥギャップマーである。ＡＳＯを、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＭＳＤシステムを用いたイオン対ＨＰＬＣ／ＭＳ分析によって特徴付けた。
Figure 0007001663000200
下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。上付き文字「ｍ」は、５－メチルシトシンを示す。「５’－ＧａｌＮＡｃ３－３ａ」の構造が実施例３９に示される。
実施例４３：生体内におけるＳＲＢ－１を標的とする５’末端でのホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－２の用量依存的試験（Ｂｘがアデニンである実施例３７及び４１を参照のこと）
５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－２共役体を含むＩＳＩＳ ６６１１３４（実施例４１を参照のこと）を、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ ４４０７６２及び６５１９００（３’末端にＧａｌＮＡｃ３－１共役体、実施例９を参照のこと）を比較のために試験に含め、先の表１７に記載する。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ４４０７６２、６５１９００、６６１１３４、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを標準プロトコルに従って決定した。ＰＢＳ処理対照に対して標準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡとの比較で相対的に決定した。以
下の結果は、ＰＢＳ処理対照に対して標準化された各処理群のＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示され、「％ＰＢＳ」で表示される。前記方法と同様の方法を用いてＥＤ５０を測定し、以下に提示する。
表３５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－２共役体（ＩＳＩＳ ６６１１３４）または３’末端に連結されたＧａｌＮＡｃ３－１共役体（ＩＳＩＳ ６５１９００）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ４４０７６２）と比較して、力価の大幅な改善を示した。さらに、５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－２共役体を含むＩＳＩＳ ６６１１３４は、３’末端にＧａｌＮＡｃ３－１共役体を含むＩＳＩＳ ６５１９００と比較して、等効力であった。
Figure 0007001663000201
３’ＧａｌＮＡｃ３－１及び５’ＧａｌＮＡｃ３－２の構造は、先の実施例９及び３７に記載されている。
薬物動態分析（ＰＫ）
高用量群（７ｍｇ／ｋｇ）でのＡＳＯのＰＫを調べ、実施例２０に例証される方法と同一の方法で評価した。肝臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出した。６６１１３４（５’ＧａｌＮＡｃ３－２）及びＩＳＩＳ ６５１９００（３’ＧａｌＮＡｃ３－１）の全長代謝物を特定し、これらの質量を高分解能質量分析によって確認した。結果は、５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－２共役体を含むＡＳＯ（ＩＳＩＳ ６６１１３４）に対して検出された主な代謝物が、ＩＳＩＳ ４４０７６２であったこと
を示した（データ示されず）。検出可能なレベルでさらなる代謝物は観察されなかった。その対応物とは異なり、先の表２３ａに報告された代謝物と同様のさらなる代謝物が、３’末端にＧａｌＮＡｃ３－１共役体を有するＡＳＯ（ＩＳＩＳ ６５１９００）で観察された。これらの結果は、ホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－１またはＧａｌＮＡｃ３－２共役体を有することで、それらの力価を損なうことなくＡＳＯのＰＫプロファイルを改善しうることを示唆する。
実施例４４：ＳＲＢ－１を標的とする３’末端にＧａｌＮＡｃ３－１共役体（実施例９を参照のこと）を含むＡＳＯのアンチセンス阻害へのＰＯ／ＰＳ連結部の影響
それぞれＳＲＢ－１を標的とする、３’末端にＧａｌＮＡｃ３－１共役体を含むＩＳＩＳ ６５５８６１及び６５５８６２を、単回投与試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１を阻害するそれらの能力について試験した。親非共役化合物ＩＳＩＳ ３５３３８２を比較のために試験に含めた。
ＡＳＯは５－１０－５ＭＯＥギャップマーであり、ギャップ領域は、１０個の２’－デオキシリボヌクレオシドを含み、各ウイング領域は、５個の２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを含む。ＡＳＯを先の実施例１９に例証される方法と同様の方法を用いて調製し、以下の表３６に示す。
Figure 0007001663000202
下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。上付き文字「ｍ」は、５－メチルシトシンを示す。「ＧａｌＮＡｃ３－１」の構造が実施例９に示される。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ３５３３８２、６５５８６１、６５５８６２、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。治療前及び最終服用後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを決定した。ＰＢＳ
処理対照に対して標準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡとの比較で相対的に決定した。以下の結果は、ＰＢＳ処理対照に対して標準化された各処理群のＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示され、「％ＰＢＳ」で表示される。前記方法と同様の方法を用いてＥＤ５０を測定し、以下に報告する。
表３７に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、ＰＢＳ処理対照と比較して、用量依存的様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、３’末端にＧａｌＮＡｃ３－１共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５５８６１及び６５５８６２）は、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２）と比較して、力価の大幅な改善を示した。さらに、混成ＰＳ／ＰＯ連結部を有するＩＳＩＳ ６５５８６２は、完全ＰＳ（ＩＳＩＳ ６５５８６１）と比較して、力価の改善を示した。
Figure 0007001663000203
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。臓器重量も評価した。結果は、ＰＢＳ対照と比較して、ＡＳＯで処理したマウスにおいて、トランスアミナーゼレベル（表３８）の増加も臓器重量（データ示されず）の増加も観察されなかったことを示した。さらに、混成ＰＳ／ＰＯ連結部を有するＡＳＯ（ＩＳＩＳ ６５５８６２）は、完全ＰＳ（ＩＳＩＳ ６５５８６１）と比較して、同様のトランスアミナーゼレベルを示した。
Figure 0007001663000204
 実施例４５：ＰＦＰエステル（化合物１１０ａ）の調製
Figure 0007001663000205
Figure 0007001663000206
化合物４（９．５ｇ、２８．８ｍｍｏｌｅ）を化合物１０３ａまたは１０３ｂ（３８ｍｍｏｌｅ）で個別に処理し、ジクロロメタン（２００ｍＬ）中のＴＭＳＯＴｆ（０．５当量）及びモレキュラーシーブで処理し、室温で１６時間撹拌した。この時点で、セライトを通して有機層を濾過し、その後、重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で還元した。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→１０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、８０％超の収率で化合物１０４ａ及び１０４ｂを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０４ａ及び１０４ｂを化合物１００ａ～ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、９０％超の収率で化合物１０５ａ及び１０５ｂを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０５ａ及び１０５ｂを、化合物９０１ａ～ｄと同一の条件下、化合物９０で個別に処理して、化合物１０６ａ（８０％）及び１０６ｂ（２０％）を得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０６ａ及び１０６ｂを化合物９６ａ～ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、１０７ａ（６０％）及び１０７ｂ（２０％）を得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０７ａ及び１０７ｂを化合物９７ａ～ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、４０～６０％の収率で化合物１０８ａ及び１０８ｂを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮ
ＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０８ａ（６０％）及び１０８ｂ（４０％）を化合物１００ａ～ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、８０％超の収率で化合物１０９ａ及び１０９ｂを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０９ａを化合物１０１ａ～ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、３０～６０％の収率で化合物１１０ａを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。あるいは、化合物１１０ｂを化合物１０９ｂから開始して同様の方法で調製することができる。
実施例４６：ＰＦＰエステル（オリゴヌクレオチド１１１）との共役のための一般的手順；ＩＳＩＳ ６６６８８１（ＧａｌＮＡｃ３－１０）の調製
標準の固相オリゴヌクレオチド手順を用いて５’－ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチドを合成し、精製した。５’－ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチドを０．１Ｍ四ホウ酸ナトリウム（ｐＨ８．５、２００μＬ）中に溶解し、ＤＭＳＯ（５０μＬ）中に溶解した３当量の選択されたＰＦＰエステル化ＧａｌＮＡｃ３クラスターを添加した。ＡＳＯ溶液への添加時にＰＦＰエステルが沈殿した場合、すべてのＰＦＰエステルが溶解した状態になるまでＤＭＳＯを添加した。室温で約１６時間混合した後、反応が完了した。結果として生じた溶液を水で希釈して１２ｍＬにし、その後、質量カットオフが３０００Ｄａのスピンフィルター中、３０００ｒｐｍで沈降させた。このプロセスを２回繰り返して、小分子不純物を除去した。その後、この溶液を凍結乾燥乾固させ、濃縮アンモニア水中に再溶解し、室温で２．５時間混合し、その後、真空内で濃縮して、アンモニアの大部分を除去した。共役オリゴヌクレオチドを精製し、ＲＰ－ＨＰＬＣによって脱塩し、凍結乾燥させて、ＧａｌＮＡｃ３共役オリゴヌクレオチドを得た。
Figure 0007001663000207
オリゴヌクレオチド１１１をＧａｌＮＡｃ３－１０と共役する。共役基ＧａｌＮＡｃ３－１０（ＧａｌＮＡｃ３－１０ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、以下のＧａｌＮＡｃ３－１０で合成されたオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６６６８８１）に示される－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－１０（ＧａｌＮＡｃ３－１０ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000208
この一般的手順に従って、ＩＳＩＳ ６６６８８１を調製した。標準の固相オリゴヌクレオチド手順を用いて５’－ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６６０２５４）を合成し、精製した。ＩＳＩＳ ６６０２５４（４０ｍｇ、５．２μｍｏｌ）を０．１Ｍ四ホウ酸ナトリウムｐＨ８．５（２００μＬ）中に溶解し、ＤＭＳＯ（５０μＬ）中に溶解した３当量のＰＦＰエステル（化合物１１０ａ）を添加した。ＡＳＯ溶液への添加時にＰＦＰエステルが沈殿した場合、ＰＦＰエステルを完全に溶解するためにさらなるＤＭＳＯ（６００μＬ）が必要であった。室温で約１６時間混合した後、反応が完了した。この溶液を水で希釈して全体積１２ｍＬにし、質量カットオフが３０００Ｄａのスピンフィルター中、３０００ｒｐｍで沈降させた。このプロセスを２回繰り返して、小分子不純物を除去した。この溶液を凍結乾燥乾固させ、濃縮アンモニア水中に再溶解し、室温で２．５時間混合し、その後、真空内で濃縮して、アンモニアの大部分を除去した。共役オリゴヌクレオチドを精製し、ＲＰ－ＨＰＬＣによって脱塩し、凍結乾燥させて、９０重量％の収率でＩＳＩＳ ６６６８８１（４２ｍｇ、４．７μｍｏｌ）を得た。
Figure 0007001663000209
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５－メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。共役基は、太字で表示されている。
実施例４７：ＧａｌＮＡｃ３－８を含むオリゴヌクレオチド１０２の調製
Figure 0007001663000210
Figure 0007001663000211
Figure 0007001663000212
三酸９０（４ｇ、１４．４３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１２０ｍＬ）及びＮ，Ｎ－ジイソプ
ロピルエチルアミン（１２．３５ｍＬ、７２ｍｍｏｌｅ）中に溶解した。トリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル（８．９ｍＬ、５２ｍｍｏｌｅ）をアルゴン下で滴加し、反応物を室温で３０分間撹拌させた。Ｂｏｃ－ジアミン９１ａまたは９１ｂ（６８．８７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１２．３５ｍＬ、７２ｍｍｏｌｅ）とともに添加し、反応物を室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超、減量し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で減量して、油状物とした。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→１０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、約８０％の収率で化合物９２ａ及び９２ｂを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物９２ａまたは９２ｂ（６．７ｍｍｏｌｅ）を２０ｍＬのジクロロメタン及び２０ｍＬのトリフルオロ酢酸で、室温で１６時間処理した。結果として生じた溶液を蒸発させ、その後、メタノール中に溶解し、ＤＯＷＥＸ－ＯＨ樹脂で３０分間処理した。結果として生じた溶液を濾過し、減圧下で減量して油状物とすることで、８５～９０％の収率の化合物９３ａ及び９３ｂを得た。
化合物７または６４（９．６ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）中のＨＢＴＵ（３．７ｇ、９．６ｍｍｏｌｅ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５ｍＬ）で１５分間処理した。これに、化合物９３ａまたは９３ｂ（３ｍｍｏｌｅ）のいずれかを添加し、室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超、減量し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で減量して、油状物とした。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（５％→２０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、２０～４０％の収率で化合物９６ａ～ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物９６ａ～ｄ（０．７５ｍｍｏｌｅ）をラネーニッケル上で３時間、エタノール（７５ｍＬ）中で個別に水素化した。この時点で、セライトを通して触媒を濾去し、エタノールを減圧下で除去して、８０～９０％の収率で化合物９７ａ～ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物２３（０．３２ｇ、０．５３ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）中のＨＢＴＵ（０．２ｇ、０．５３ｍｍｏｌｅ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１９ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌｅ）で１５分間処理した。これに、化合物９７ａ～ｄ（０．３８ｍｍｏｌｅ）を個別に添加し、室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超、減量し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で減量して、油状物とした。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→２０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、３０～４０％の収率で化合物９８ａ～ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物９９（０．１７ｇ、０．７６ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（５０ｍＬ）中のＨＢＴＵ（０．２９ｇ、０．７６ｍｍｏｌｅ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．３５ｍＬ、２．０ｍｍｏｌｅ）で１５分間処理した。これに、化合物９７ａ～ｄ（０．５１ｍｍｏｌｅ）を個別に添加し、室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超、減量し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾
燥させ、濾過し、減圧下で減量して、油状物とした。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（５％→２０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、４０～６０％の収率で化合物１００ａ～ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１００ａ～ｄ（０．１６ｍｍｏｌｅ）を、１０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ上で３時間、メタノール／酢酸エチル（１：１、５０ｍＬ）中で個別に水素化した。この時点で、セライトを通して触媒を濾去し、有機物を減圧下で除去して、８０～９０％の収率で化合物１０１ａ～ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０１ａ～ｄ（０．１５ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）及びピリジン（０．０１６ｍＬ、０．２ｍｍｏｌｅ）中に個別に溶解した。トリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル（０．０３４ｍＬ、０．２ｍｍｏｌｅ）をアルゴン下で滴加し、反応物を室温で３０分間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超、減量し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で減量して、油状物とした。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→５％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、約８０％の収率で化合物１０２ａ～ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
Figure 0007001663000213
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－８共役基を含むオリゴマー化合物１０２を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－８（ＧａｌＮＡｃ３－８ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。好ましい一実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。
ＧａｌＮＡｃ３－８（ＧａｌＮＡｃ３－８ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000214
実施例４８：ＧａｌＮＡｃ３－７を含むオリゴヌクレオチド１１９の調製
Figure 0007001663000215
Figure 0007001663000216
文献（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，４７，５７９８－５８０８）に記載される手順に従って化合物１１２を合成した。
化合物１１２（５ｇ、８．６ｍｍｏｌ）を１：１メタノール／酢酸エチル（２２ｍＬ／２２ｍＬ）中に溶解した。炭素（０．５ｇ）上水酸化パラジウムを添加した。反応混合物を室温で１２時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、そのパッドを１：１メタノール／酢酸エチルで洗浄した。濾液と洗浄物を合わせ、濃縮乾固させて、化合物１０５ａ（定量的）を得た。この構造を、ＬＣＭＳによって確認した。
化合物１１３（１．２５ｇ、２．７ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３．２ｇ、８．４ｍｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（２．８ｍＬ、１６．２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１７ｍＬ）中に溶解し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。これに、無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物１０５ａ（３．７７ｇ、８．４ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応物を室温で６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、油状物を得た。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の１０～２０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１４（１．４５ｇ、３０％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。
化合物１１４（１．４３ｇ、０．８ｍｍｏｌ）を１：１メタノール／酢酸エチル（４ｍＬ／４ｍＬ）中に溶解した。パラジウム炭素（湿性、０．１４ｇ）を添加した。反応混合物を水素でフラッシュし、室温で１２時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過した。このセライトパッドをメタノール／酢酸エチル（１：１）で洗浄した。濾液と洗浄物を一つに合わせ、減圧下で蒸発させて、化合物１１５（定量的）を得た。この構造を、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。
化合物８３ａ（０．１７ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．３１ｇ、０．８３ｍ
ｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（０．２６ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。これに、無水ＤＭＦ中の化合物１１５（１．２２ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、反応物を室温で６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２中に溶解した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過した。有機層を濃縮乾固させ、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の３～１５％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１６（０．８４ｇ、６１％）を得た。この構造を、ＬＣ ＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。
Figure 0007001663000217
化合物１１６（０．７４ｇ、０．４ｍｍｏｌ）を１：１メタノール／酢酸エチル（５ｍＬ／５ｍＬ）中に溶解した。パラジウム炭素（湿性、０．０７４ｇ）を添加した。反応混合物を水素でフラッシュし、室温で１２時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過した。このセライトパッドをメタノール／酢酸エチル（１：１）で洗浄した。濾液と洗浄物を一つに合わせ、減圧下で蒸発させて、化合物１１７（０．７３ｇ、９８％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。
化合物１１７（０．６３ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解した。この溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７０μＬ、０．４ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル（７２μＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に注いだ。この混合物をジクロロメタンで抽出し、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。このジクロロメタン溶液を濃縮乾固させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ジクロロメタン中の５～１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１８（０．５１ｇ、７９％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳと、１Ｈならびに１Ｈ及び１９Ｆ ＮＭＲによって確認した。
Figure 0007001663000218
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－７共役基を含むオリゴマー化合物１１９を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－７（ＧａｌＮＡｃ３－７ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。
ＧａｌＮＡｃ３－７（ＧａｌＮＡｃ３－７ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000219
実施例４９：ＧａｌＮＡｃ３－５を含むオリゴヌクレオチド１３２の調製
Figure 0007001663000220
化合物１２０（１４．０１ｇ、４０ｍｍｏｌ）及びＨＢＴＵ（１４．０６ｇ、３７ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（８０ｍＬ）中に溶解した。トリエチルアミン（１１．２ｍＬ、８０．３５ｍｍｏｌ）を添加し、５分間撹拌した。反応混合物を氷浴中で冷却し、無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物１２１（１０ｇ、ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。さらなるトリエチルアミン（４．５ｍＬ、３２．２８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をアルゴン雰囲気下で１８時間撹拌した。ＴＬＣ（１：１の酢酸エチル：ヘキサン；Ｒｆ＝０．４７）によって反応を監視した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）中に取り込み、１Ｍ ＮａＨＳＯ４（３×１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×１５０ｍＬ）、及びブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。乾燥剤を濾去し、有機層を回転蒸発によって濃縮した。粗混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中の３５～５０％ＥｔＯＡｃを用いて溶出して、化合物１２２（１５．５０ｇ、７８．１３％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。質量（ｍ／ｚ）５８９．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
水（２０ｍＬ）及びＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（９２．１５ｍｍｏｌ）の溶液を、メタノール（１５ｍＬ）中に溶解した化合物１２２の冷溶液（７．７５ｇ、１３．１６ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で４５分間撹拌し、ＴＬＣ（１：１のＥｔＯＡｃ：ヘキサン）によって監視した。反応混合物を減圧下で濃縮して、半分の体積にした。残りの溶液を氷浴中で冷却して、濃縮ＨＣｌを添加して中和した。反応混合物を希釈し、ＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で抽出し、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。エマルジョンが生じたが、一晩静置すると濁りがなくなった。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、化合物１２３（８．４２ｇ）を得た。質量が大きすぎる原因はおそらく残留塩である。ＬＣＭＳは、この構造と一致した。この生成物をさらに精製することなく使用した。Ｍ．Ｗ．計算値：５７４．３６、Ｍ．Ｗ．実測値：５７５．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
Figure 0007001663000221
文献（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１１，１３３，９５８－９６３）に記載される手順に従って化合物１２６を合成した。
Figure 0007001663000222
Figure 0007001663000223
化合物１２３（７．４１９ｇ、１２．９１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．４９ｇ、２５．８２ｍｍｏｌ）、及び化合物１２６（６．３３ｇ、１６．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）中に溶解し、結果として生じた反応混合物を氷浴中で冷却した。これに、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４．４２ｍＬ、２５．８２ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（８．７ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）、続いて、Ｂｏｐカップリング試薬（１．１７ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で添加した。氷浴を除去し、溶液を室温まで温めた。１時間後に反応が完了したことを、ＴＬＣ（８９：１０：１のＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＡＡ）によって決定した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に溶解し、１Ｍ ＮａＨＳＯ４（３×１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×１００ｍＬ）、及びブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣を５０％ヘキサン／ＥｔＯＡＣ：１００％ＥｔＯＡｃの勾配でのシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、白色の泡状物として化合物１２７（９．４ｇ）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、その構造と一致した。質量（ｍ／ｚ）７７８．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
トリフルオロ酢酸（１２ｍＬ）をジクロロメタン（１２ｍＬ）中の化合物１２７（１．５７ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下でトルエン（３０ｍＬ）と共蒸発乾固させた。得られた残渣をアセトニトリル（３０ｍＬ）及びトルエン（４０ｍＬ）と２回共蒸発させて、トリフルオロ酢酸塩として化合物１２８（１．６７ｇ）を得て、さらに精製することなく次のステップで使用した。ＬＣＭＳ
及び１Ｈ ＮＭＲは、その構造と一致した。質量（ｍ／ｚ）４７８．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
丸底フラスコ内で、化合物７（０．４３ｇ、０．９６３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．３５ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）、及びＨＯＡｔ（０．０３５ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を一つに合わせ、減圧下、Ｐ２Ｏ５上で４時間乾燥させ、その後、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。これに無水ＤＭＦ（０．２ｍＬ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ）中の化合物１２８（０．２０ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物をアルゴン雰囲気下、室温で撹拌した。３０分間後に反応が完了したことを、ＬＣＭＳ及びＴＬＣ（７％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって決定した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ）中に溶解し、１Ｍ ＮａＨＳＯ４（３×２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×２０ｍＬ）、及びブライン（３×２０ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をジクロロメタン中の５～１５％ＭｅＯＨを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物１２９（９６．６ｍｇ）を得た。ＬＣ ＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、この構造と一致する。質量（ｍ／ｚ）８８３．４［Ｍ＋２Ｈ］＋。
２０ｍＬのシンチレーションバイアル内で化合物１２９（０．０９ｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）中に溶解した。これに、少量の１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０１５ｍｇ）を添加し、反応容器をＨ２ガスでフラッシュした。反応混合物を室温で１８時間、Ｈ２雰囲気下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、このセライトパッドをメタノールで洗浄した。濾液洗浄物を一つにプールし、減圧下で濃縮して、化合物１３０（０．０８ｇ）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、その構造と一致した。この生成物をさらに精製することなく使用した。質量（ｍ／ｚ）８３８．３［Ｍ＋２Ｈ］＋。
１０ｍＬの先の尖った丸底フラスコに、化合物１３０（７５．８ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）、０．３７Ｍピリジン／ＤＭＦ（２００μＬ）、及び撹拌子を添加した。この溶液に、０．７Ｍトリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル／ＤＭＦ（１００μＬ）を撹拌しながら滴加した。１時間後に反応が完了したことを、ＬＣ ＭＳによって決定した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（約１０ｍＬ）中に溶解した。有機層をＮａＨＳＯ４（１Ｍ、１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）、及びブライン（１０ｍＬ）にそれぞれ３回分配した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、化合物１３１（７７．７ｍｇ）を得た。ＬＣＭＳは、この構造と一致した。さらに精製することなく使用した。質量（ｍ／ｚ）９２１．３［Ｍ＋２Ｈ］＋。
Figure 0007001663000224
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－５共役基を含むオリゴマー化合物１３２を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－５（ＧａｌＮＡｃ３－５ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。
ＧａｌＮＡｃ３－５（ＧａｌＮＡｃ３－５ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000225
実施例５０：ＧａｌＮＡｃ４－１１を含むオリゴヌクレオチド１４４の調製
Figure 0007001663000226
Figure 0007001663000227
化合物１３４の合成。Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄフラスコに、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、及びアセトニトリルで洗浄したアミノメチルＶＩＭＡＤ樹脂（２．５ｇ、４５０μｍｏｌ／ｇ）を添加した。この樹脂は、アセトニトリル（４ｍＬ）中で膨潤した。２０（１．０ｍｍｏｌ、０．７４７ｇ）、ＴＢＴＵ（１．０ｍｍｏｌ、０．３２１ｇ）、アセトニトリル（５ｍＬ）、及びＤＩＥＡ（３．０ｍｍｏｌ、０．５ｍＬ）を添加して、化合物１３３を１００ｍＬの丸底フラスコ内で事前に活性化した。この溶液を５分間撹拌させ、その後、振盪しながらＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄフラスコに添加した。懸濁液を３時間振盪させた。反応混合物を排出し、樹脂をアセトニトリル、ＤＭＦ、及びＤＣＭで洗浄した。ＤＣＭ中５００ｎｍ（消光係数＝７６０００）でＤＭＴカチオンの吸光度を測定することにより新たな樹脂負荷量を定量化し、２３８μｍｏｌ／ｇであると決定した。無水酢酸溶液中で１０分間３回懸濁することにより、この樹脂をキャップした。
反復Ｆｍｏｃベース固相ペプチド合成法を用いて、固体支持体に結合された化合物１４１を合成した。少量の固体支持体を回収し、アンモニア水（２８～３０重量％）中に６時間懸濁した。切断された化合物をＬＣ－ＭＳによって分析した。観察された質量は、その構造と一致した。質量（ｍ／ｚ）１０６３．８［Ｍ＋２Ｈ］＋。
固相ペプチド合成法を用いて、固体支持体に結合された化合物１４２を合成した。
Figure 0007001663000228
ＤＮＡ合成装置において標準の固相合成を用いて、固体支持体に結合された化合物１４３を合成した。
固体支持体に結合された化合物１４３をアンモニア水（２８－３０重量％）中に懸濁し、５５℃で１６時間加熱した。溶液を冷却し、固体支持体を濾過した。濾液を濃縮し、残渣を水中に溶解し、強アニオン交換カラム上でＨＰＬＣによって精製した。全長化合物１４４を含有する画分を一つにプールし、脱塩した。結果として生じたＧａｌＮＡｃ４－１１共役オリゴマー化合物をＬＣ－ＭＳによって分析し、観察された質量は、その構造と一致した。
共役基ＧａｌＮＡｃ４－１１（ＧａｌＮＡｃ４－１１ａ）のＧａｌＮＡｃ４クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。
ＧａｌＮＡｃ４－１１（ＧａｌＮＡｃ４－１１ａ－ＣＭ）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000229
実施例５１：ＧａｌＮＡｃ３－６を含むオリゴヌクレオチド１５５の調製
Figure 0007001663000230
文献（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９５，２２９，５４－６０）に記載されるように、化合物１４６を合成した。
Figure 0007001663000231
化合物４（１５ｇ、４５．５５ｍｍｏｌ）及び化合物３５ｂ（１４．３グラム、５７ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）中に溶解した。活性化モレキュラーシーブ（４Å、２ｇ、粉末）を添加し、反応物を窒素雰囲気下で３０分間撹拌させた。ＴＭＳ－ＯＴｆを添加し（４．１ｍｌ２２．７７ｍｍｏｌ）、反応物を室温で一晩撹拌させた。完了した時点で、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５００ｍＬ）及び粉砕した氷（約１５０ｇ）を注いで反応物を反応停止処理した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮してオレンジ色の油状物を得た。粗物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２中の２～１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１２（１６．５３ｇ、６３％）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、予想した化合物と一致した。
化合物１１２（４．２７ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間バブリングして反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上の水酸化パラジウム、４００ｍｇ）を添加し、この溶液を通して水素ガスを３０分間バブリングした。完了した時点で（ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２中の１０％ＭｅＯＨ）及びＬＣＭＳ）、セライトパッドを通して触媒を濾去した。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１０５ａ（３．２８ｇ）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
化合物１４７（２．３１ｇ、１１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）中に溶解した。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、３．９ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）、続いて、ＨＢＴＵ（４ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素下で約１５分間撹拌させた。これに、乾燥ＤＭＦ中の化合物１０５ａ（３．３ｇ、７．４ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、窒素雰囲気下で２時間撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及びブラインで洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップ状物を得た。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中の２～５％ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物１４８（３．４４ｇ、７３％）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、予想した生成物と一致した。
化合物１４８（３．３ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間バブリングして反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上の水酸化パラジウム）を添加した（３５０ｍｇ）。この溶液を通して水素ガスを３０分間バブリングした。完了した時点で（ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）及びＬＣＭＳ）、セライトパッドを通して触媒を濾去した。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１４９（２．６ｇ）を得た。ＬＣＭＳは、所望の生成物と一致した。残渣を乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、次のステップで即座に使用した。
Figure 0007001663000232
化合物１４６（０．６８ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２０ｍＬ）中に溶解した。これに、ＤＩＥＡ（４５０μＬ、２．６ｍｍｏｌ、１．５当量）及びＨＢＴＵ（１．９６ｇ、０．５．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１５分間、窒素下で撹拌させた。無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物１４９（２．６ｇ）の溶液を添加した。ＤＩＥＡを添加することにより（必要に応じて）、反応物のｐＨをｐＨ＝９～１０に調整した。反応物を室温で２時間、窒素下で撹拌させた。完了した時点で、反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、続いて、ブラインで洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２中の２～１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１５０（０．６２ｇ、２０％）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
化合物１５０（０．６２ｇ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（５Ｌ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間バブリングして反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上の水酸化パラジウム）を添加した（６０ｍｇ）。この溶液を通して水素ガスを３０分間バブリングした。完了した時点で（ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）及びＬＣＭＳ）、触媒を濾去した（シリンジチップＴｅｆｌｏｎフィルター、０．４５μｍ）。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１５１（０
．５７ｇ）を得た。ＬＣＭＳは、所望の生成物と一致した。この生成物を４ｍＬの乾燥ＤＭＦ中に溶解し、次のステップで即座に使用した。
Figure 0007001663000233
化合物８３ａ（０．１１ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７５μＬ、１ｍｍｏｌ）及びＰＦＰ－ＴＦＡ（９０μＬ、０．７６ｍｍｏｌ）を添加した。接触時に反応混合物は赤紫色になり、その後３０分間かけて徐々にオレンジ色になった。ＴＬＣ及びＬＣＭＳによって反応の進行を監視した。完了した時点で（ＰＦＰエステルの形成）、化合物１５１（０．５７ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液を添加した。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンを添加することにより（必要に応じて）、反応物のｐＨをｐＨ＝９～１０に調整した。反応混合物を窒素下で約３０分間撹拌した。完了した時点で、溶媒の大部分を減圧下で除去した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、続いて、ブラインで洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップ状物を得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中の２～１０％ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物１５２（０．３５ｇ、５５％）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
化合物１５２（０．３５ｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間バブリングして反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上の水酸化パラジウム）を添加した（３５ｍｇ）。この溶液を通して水素ガスを３０分間バブリングした。完了した時点で（ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）及びＬＣＭＳ）、触媒を濾去した（シリンジチップＴｅｆｌｏ
ｎフィルター、０．４５μｍ）。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１５３（０．３３ｇ、定量的）を得た。ＬＣＭＳは、所望の生成物と一致した。
化合物１５３（０．３３ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を窒素下で撹拌しながら無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解した。これに、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６５μＬ、０．３７ｍｍｏｌ）及びＰＦＰ－ＴＦＡ（３５μＬ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素下で約３０分間撹拌した。接触時に反応混合物は赤紫色になり、徐々にオレンジ色になった。さらにＮ，－ジイソプロピルエチルアミンを添加することにより、反応混合物のｐＨをｐＨ＝９～１０で維持した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳによって反応の進行を監視した。完了した時点で、溶媒の大部分を減圧下で除去した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、その後、ブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップ状物を得た。残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２中の２～１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１５４（０．２９ｇ、７９％）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
Figure 0007001663000234
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－６共役基を含むオリゴマー化合物１５５を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－６（ＧａｌＮＡｃ３－６ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。
ＧａｌＮＡｃ３－６（ＧａｌＮＡｃ３－６ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000235
実施例５２：ＧａｌＮＡｃ３－９を含むオリゴヌクレオチド１６０の調製
Figure 0007001663000236
文献（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，４７，５７９８－５８０８）に記載される手順に従って化合物１５６を合成した。
化合物１５６（１８．６０ｇ、２９．２８ｍｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）中に溶解した。パラジウム炭素（６．１５ｇ、１０重量％、負荷量（乾燥ベース）、マトリックス炭素粉末、湿式）を添加した。反応混合物を室温で１８時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、このセライトパッドをメタノールで完全に洗浄した。合わせた濾液を洗浄し、濃縮乾固させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の５～１０％メタノールで溶出して、化合物１５７（１４．２６ｇ、８９％）を得た。質量（ｍ／ｚ）５４４．１［Ｍ－Ｈ］－。
化合物１５７（５ｇ、９．１７ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）中に溶解した。ＨＢＴＵ（３．６５ｇ、９．６１ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１３．７３ｍＬ、７８．８１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。これに、化合物４７（２．９６ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応物を室温で８時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に注いだ。この混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中の５０％酢酸エチルで溶出して、化合物１５８（８．２５ｇ、７３．３％）を得た。この構造を、ＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。
化合物１５８（７．２ｇ、７．６１ｍｍｏｌ）を減圧下でＰ２Ｏ５上で乾燥させた。乾
燥させた化合物を無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）中に溶解した。これに、１Ｈ－テトラゾール（０．４３ｇ、６．０９ｍｍｏｌ）及びＮ－メチルイミダゾール（０．３ｍＬ、３．８１ｍｍｏｌ）及び２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト（３．６５ｍＬ、１１．５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をアルゴン雰囲気下で４時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３及びブラインで洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中の５０～９０％酢酸エチルで溶出して、化合物１５９（７．８２ｇ、８０．５％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳ及び３１Ｐ ＮＭＲ分析によって確認した。
Figure 0007001663000237
標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－９共役基を含むオリゴマー化合物１６０を調製した。３単位の化合物１５９を固体支持体に、続いてヌクレオチドホスホラミダイトにカップリングした。保護されたオリゴマー化合物をアンモニア水で処理して、化合物１６０を得た。共役基ＧａｌＮＡｃ３－９（ＧａｌＮＡｃ３－９ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－９（ＧａｌＮＡｃ３－９ａ－ＣＭ）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000238
実施例５３：化合物１８（ＧａｌＮＡｃ３－１ａ及びＧａｌＮＡｃ３－３ａ）の調製のた
めの代替手順
Figure 0007001663000239
ラクトン１６１をジアミノプロパン（３～５当量）またはモノＢｏｃ保護ジアミノプロパン（１当量）と反応させて、アルコール１６２ａまたは１６２ｂを得た。非保護プロパンジアミンを上述の反応で用いた場合、過剰なジアミンを高真空下で蒸発させて除去し、ＣｂｚＣｌを用いて１６２ａ中の遊離アミノ基を保護して、カラムクロマトグラフィーによって精製した後に、白色の固体として１６２ｂを得た。アルコール１６２ｂをＴＭＳＯＴｆの存在下で化合物４とさらに反応させ１６３ａを得て、触媒水素化を用いてＣｂｚ基を除去することにより、これを１６３ｂに変換した。ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル１６４を、三酸１１３（実施例４８を参照のこと）をＤＭＦ（０．１～０．５Ｍ）中のＰＦＰＴＦＡ（３．５当量）及びピリジン（３．５当量）と接触させることによって調製した。トリエステル１６４をアミン１６３ｂ（３～４当量）及びＤＩＰＥＡ（３～４当量）と直接反応させて、化合物１８を得た。上述の方法は、中間体精製を大幅に促進し、実施例４に記載される手順を用いて形成される副生成物の形成を最小限に抑える。
実施例５４：化合物１８（ＧａｌＮＡｃ３－１ａ及びＧａｌＮＡｃ３－３ａ）の調製のための代替手順
Figure 0007001663000240
先の実施例５３に概説される手順を用いて酸１１３からトリＰＦＰエステル１６４を調製し、モノＢｏｃ保護ジアミンと反応させて、本質的に定量的な収率で１６５を得た。Ｂｏｃ基を塩酸またはトリフルオロ酢酸で除去して、トリアミンを得て、これをＤＩＰＥＡなどの好適な塩基の存在下でＰＦＰ活性化酸１６６と反応させて、化合物１８を得た。
ＤＭＦ中のＰＦＰＴＦＡ（１～１．２当量）及びピリジン（１～１．２当量）で処理することにより、ＰＦＰ保護Ｇａｌ－ＮＡｃ酸１６６を対応する酸から調製した。次いで、アセトニトリル及び水中のＴＥＭＰＯ（０．２当量）及びＢＡＩＢを用いて酸化することにより、前駆酸を対応するアルコールから調製した。先の実施例４７に記載される条件を用いて１，６－ヘキサンジオール（または１，５－ペンタンジオールもしくは他のｎ値の他のジオール）（２～４当量）及びＴＭＳＯＴｆと反応させることにより、前駆アルコールを糖中間体４から調製した。
実施例５５：生体内におけるＳＲＢ－１を標的とする３’－共役基または５’－共役基のいずれかを含むオリゴヌクレオチド（ＧａｌＮＡｃ３－１、３、８、及び９の比較）の用量依存的試験
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ ３５３３８２を標準物として含めた。さまざまなＧａｌＮＡｃ３共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’－デオキシアデノシンヌクレオシド（切断可能部分）によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端または５’末端のいずれかで結合された。
Figure 0007001663000241
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５－メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－９の構造は、先の実施例５２に示される。ＧａｌＮＡｃ３－３の構造は、先の実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－８の構造は、先の実施例４７に示される。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ３５３３８２、６５５８６１、６６４０７８、６６１１６１、６６５００１、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを標準プロトコルに従って決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表４０に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、３’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－１及びＧａｌＮＡｃ３－９共役体（ＩＳＩＳ ６５５８６１及びＩＳＩＳ ６６４０７８）ならびに５’末端に連結されたＧａｌＮＡｃ３－３及びＧａｌＮＡｃ３－８共役体（ＩＳＩＳ ６６１１６１及びＩＳＩＳ ６６５００１）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２）と比較して、力価の大幅な改善を示した。さらに、３’末端にＧａｌＮＡｃ
３－９共役体を含むＩＳＩＳ ６６４０７８は、３’末端にＧａｌＮＡｃ３－１共役体を含むＩＳＩＳ ６５５８６１と比較して、本質的に等効力であった。それぞれ、ＧａｌＮＡｃ３－３またはＧａｌＮＡｃ３－９を含む５’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドＩＳＩＳ ６６１１６１及びＩＳＩＳ ６６５００１は、３’共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５５８６１及びＩＳＩＳ ６６４０７８）と比較して、力価を増加させた。
Figure 0007001663000242
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表に示される。
Figure 0007001663000243
 実施例５６：生体内におけるＳＲＢ－１を標的とする３’－共役基または５’－共役基のいずれかを含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験（ＧａｌＮＡｃ３－１、２、３、５、６、７、及び１０の比較）
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ ３５３３８２を標準物として含めた。３’末端にＧａｌＮＡｃ３共役基を結合させたＩＳＩＳ ６５５８６１を除いて、さまざまなＧａｌＮＡｃ３共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’－デオキシアデノシンヌクレオシド（切断可能部分）によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に取り付けられた。
Figure 0007001663000244
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５－メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－２ａの構造は、先の実施例３７に示される。ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、先の実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－５ａの構造は、先の実施例４９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－６ａの構造は、先の実施例５１に示される。ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、先の実施例４８に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１０ａの構造は、先の実施例４６に示される。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ３５３３８２、６５５８６１、６６４５０７、６６１１６１、６６６２２４、６６６９６１、６６６９８１、６６６８８１、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表４３に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的
様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、共役アンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２）と比較して、力価の大幅な改善を示した。５’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドは、３’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドと比較して、力価のわずかな増加を示した。
Figure 0007001663000245
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプ
ロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表４４に示される。
Figure 0007001663000246
 実施例５７：生体内におけるＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とする３’－共役基を含むオリゴヌクレオチドの作用持続時間試験
マウスに以下に示される用量を１回注入し、ＡｐｏＣ－ＩＩＩ及び血漿トリグリセリド
（血漿ＴＧ）レベルを４２日間にわたって監視した。各群におけるヒトＡＰＯＣ－ＩＩＩを発現する３匹のトランスジェニックマウスを用いて、この試験を実行した。
Figure 0007001663000247
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５－メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示される。
Figure 0007001663000248
上の表に見られるように、作用持続時間は、非共役オリゴヌクレオチドと比較して、３’－共役基の付加によって増加した。共役完全ＰＳオリゴヌクレオチド６４７５３５と比較して、共役混成ＰＯ／ＰＳオリゴヌクレオチド６４７５３６の作用持続時間がさらに増加した。
実施例５８：生体内におけるＳＲＢ－１を標的とする３’－共役基を含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験（ＧａｌＮＡｃ３－１及びＧａｌＮＡｃ４－１１の比較）
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲ
Ｂ－１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ ４４０７６２を非共役標準物として含めた。共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’－デオキシアデノシンヌクレオシド（切断可能部分）によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端に取り付けられた。
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１１ａの構造は、先の実施例５０に示される。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ４４０７６２、６５１９００、６６３７４８、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表４７に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。３’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－１及びＧａｌＮＡｃ４－１１共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５１９００及びＩＳＩＳ ６６３７４８）は、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ４４０７６２）と比較して、力価の大幅な増加を示した。２つの共役オリゴヌクレオチド、すなわちＧａｌＮＡｃ３－１とＧａｌＮＡｃ４－１１は、等効力であった。
Figure 0007001663000249
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５－メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’－（Ｓ）－Ｃ
Ｈ３二環式ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。共役基は、太字で表示されている。
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表４８に示される。
Figure 0007001663000250
 実施例５９：生体内におけるＦＸＩを標的とするＧａｌＮＡｃ３－１共役ＡＳＯの影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、複数回投与試験においてマウスにおけるＦＸＩのアンチセンス阻害について試験した。ＩＳＩＳ ４０４０７１を非共役標準物として含めた。共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’－デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端に取り付けられた。
Figure 0007001663000251
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５－メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示される。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ４０４０７１、６５６１７２、６５６１７３、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で週２回３週間、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを決定した。ＥＬＩＳＡを用いて血漿ＦＸＩタンパク質レベルも測定した。ＰＢＳ処理対照に対して標準化する前に（ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）を用いて）ＦＸＩ ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡとの比較で相対的に決定した。以下の結果は、各処理群のＦＸＩ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。データをＰＢＳ処理対照に対して標準化し、「％ＰＢＳ」で表示する。前記方法と同様の方法を用いてＥＤ５０を測定し、以下に提示する。
Figure 0007001663000252
表５０に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＦＸＩ ｍＲＮＡレベルを低下させた。３’－ＧａｌＮＡｃ３－１共役基を含むオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ４０４０７１）と比較して、力価の大幅な増加を示した。これら２つの共役オリゴヌクレオチドの間では、ＰＳ連結部のうちのいくつかをＰＯ（ＩＳＩＳ ６５６１７３）と置き換えることによって、力価がさらに増加した。
表５０ａに例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＦＸＩタンパク質レベルを低下させた。３’－ＧａｌＮＡｃ３－１共役基を含むオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ４０４０７１）と比較して、力価の大幅な増加を示した。これら２つの共役オリゴヌクレオチドの間では、ＰＳ連結部のうちのいくつかをＰＯ（ＩＳＩＳ ６５６１７３）と置き換えることによって、力価がさらに増加した。
Figure 0007001663000253
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン、総アルブミン、ＣＲＥ、及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表に示される。
Figure 0007001663000254
 実施例６０：生体外におけるＳＲＢ－１を標的とする共役ＡＳＯの影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、複数回投与試験において初代マウス肝細胞におけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。ＩＳＩＳ ３５３３８２を非共役標準物として含めた。共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’－デオキシアデ
ノシンヌクレオシドの切断可能部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端または５’末端に取り付けられた。
Figure 0007001663000255
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５－メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、先の実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－８ａの構造は、先の実施例４７に示される。ＧａｌＮＡｃ３－９ａの構造は、先の実施例５２に示される。ＧａｌＮＡｃ３－６ａの構造は、先の実施例５１に示される。ＧａｌＮＡｃ３－２ａの構造は、先の実施例３７に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１０ａの構造は、先の実施例４６に示される。ＧａｌＮＡｃ３－５ａの構造は、先の実施例４９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、先の実施例４８に示される。
処理
上に列記されるオリゴヌクレオチドを、２５，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、かつ０．０３、０．０８、０．２４、０．７４、２．２２、６．６７、または２０ｎＭの修飾オリゴヌクレオチドで処理した初代マウス肝細胞において生体外で試験した。約１６時間の処理期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定し、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定された総ＲＮＡ含有量に従ってＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを調整した。
標準的方法を用いてＩＣ５０を計算し、結果を表５３に提示する。結果は、オリゴヌクレオチドの細胞への進入を人工的に促進するために試薬も電気穿孔技法も用いない自由取り込み条件下で、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を含まない親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２）よりも肝細胞において著しく強力であったことを示す。
Figure 0007001663000256
ａ複数回の実行の平均。
実施例６１：ＧａｌＮＡｃ３－１２を含むオリゴマー化合物１７５の調製
Figure 0007001663000257
Figure 0007001663000258
Figure 0007001663000259
Figure 0007001663000260
化合物１６９は、市販のものである。ベンジル（ペルフルオロフェニル）グルタレートを化合物１７１に添加することによって化合物１７２を調製した。ＰＦＰ－ＴＦＡ及びＤ
ＩＥＡをＤＭＦ中の５－（ベンジルオキシ）－５－オキソペンタン酸に添加することによって、ベンジル（ペルフルオロフェニル）グルタレートを調製した。実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－１２共役基を含むオリゴマー化合物１７５を化合物１７４から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－１２（ＧａｌＮＡｃ３－１２ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－１２（ＧａｌＮＡｃ３－１２ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000261
実施例６２：ＧａｌＮＡｃ３－１３を含むオリゴマー化合物１８０の調製
Figure 0007001663000262
Figure 0007001663000263
実施例２に示される一般的手順を用いて、化合物１７６を調製した。実施例４９に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－１３共役基を含むオリゴマー化合物１８０を化合物１７７から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－１３（ＧａｌＮＡｃ３－１３ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（
ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－１３（ＧａｌＮＡｃ３－１３ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000264
実施例６３：ＧａｌＮＡｃ３－１４を含むオリゴマー化合物１８８の調製
Figure 0007001663000265
化合物１８１及び１８５は、市販のものである。実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－１４共役基を含むオリゴマー化合物１８８を化合物１８７から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－１４（ＧａｌＮＡｃ３－１４ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－１４（ＧａｌＮＡｃ３－１４ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000266
実施例６４：ＧａｌＮＡｃ３－１５を含むオリゴマー化合物１９７の調製
Figure 0007001663000267
Figure 0007001663000268
化合物１８９は、市販のものである。実施例３１に示される一般的手順を用いて、化合物１９５を調製した。標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－１５共役基を含むオリゴマー化合物１９７を化合物１９４及び１９５から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－１５（ＧａｌＮＡｃ３－１５ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－１５（ＧａｌＮＡｃ３－１５ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000269
実施例６５：生体内におけるＳＲＢ－１を標的とする５’－共役基を含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験（ＧａｌＮＡｃ３－３、１２、１３、１４、及び１５の比較）
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ ３５３３８２を標準物として含めた。ＧａｌＮＡｃ３共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’－デオキシ
アデノシンヌクレオシド（切断可能部分）によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に取り付けられた。
Figure 0007001663000270
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５－メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、先の実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１２ａの構造は、先の実施例６１に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１３ａの構造は、先の実施例６２に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１４ａの構造は、先の実施例６３に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１５ａの構造は、先の実施例６４に示される。
処理
６～８週齢のＣ５７ｂｌ６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ３５３３８２、６６１１６１、６７１１４４、６７００６１、６７１２６１、６７１２６２、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回または２回、皮下注入した。２回投与されたマウスは、第１の投与の３日後に第２の投与を受けた。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠
殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを標準プロトコルに従って決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表５５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。単回用量を受けた動物と２回の用量を受けた動物との間で標的ノックダウンの著しい差は観察されなかった（ＩＳＩＳ ３５３３８２の投与量３０及び２×１５ｍｇ／ｋｇ、ならびにＩＳＩＳ ６６１１６１の投与量５及び２×２．５ｍｇ／ｋｇを参照のこと）。ホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３－３、１２、１３、１４、及び１５共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３３５３８２）と比較して、力価の大幅な増加を示した。
Figure 0007001663000271
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な差は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表５６に示される。
Figure 0007001663000272
 実施例６６：５’－ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含むＳＲＢ－１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害へのさまざまな切断可能部分の影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。ＧａｌＮＡｃ３共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結ヌクレオシド（切断可能部分（ＣＭ））によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に取り付けられた。
Figure 0007001663000273
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５－メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、先の実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３－１３ａの構造は、先の実施例６２に示した。
処理
６～８週齢のＣ５７ｂｌ６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ６６１１６１、６７０６９９、６７０７００、６７０７０１、６７１１６５、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表５８に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。さまざまな切断可能部分を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドはすべて、同様の力価を示した。
Figure 0007001663000274
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な差は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表５６に示される。
Figure 0007001663000275
 実施例６７：ＧａｌＮＡｃ３－１６を含むオリゴマー化合物１９９の調製
Figure 0007001663000276
実施例７及び９に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－１６共役基を含むオリゴマー化合物１９９を調製する。共役基ＧａｌＮＡｃ３－１６（ＧａｌＮＡｃ３－１６ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－１６（ＧａｌＮＡｃ３－１６ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000277
 実施例６８：ＧａｌＮＡｃ３－１７を含むオリゴマー化合物２００の調製
Figure 0007001663000278
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－１７共役基を含むオリゴマー化合物２００を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－１７（ＧａｌＮＡｃ３－１７ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－１７（ＧａｌＮＡｃ３－１７ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000279
実施例６９：ＧａｌＮＡｃ３－１８を含むオリゴマー化合物２０１の調製
Figure 0007001663000280
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－１８共役基を含むオリゴマー化合物２０１を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－１８（ＧａｌＮＡｃ３－１８ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－１８（ＧａｌＮＡｃ３－１８ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000281
実施例７０：ＧａｌＮＡｃ３－１９を含むオリゴマー化合物２０４の調製
Figure 0007001663000282
実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－１９共役基を含むオリゴマー化合物２０４を化合物６４から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－１９（ＧａｌＮＡｃ３－１９ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－１９（ＧａｌＮＡｃ３－１９ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000283
実施例７１：ＧａｌＮＡｃ３－２０を含むオリゴマー化合物２１０の調製
Figure 0007001663000284
ＰＦＰ－ＴＦＡ及びＤＩＥＡを、トリフリン酸無水物を６－アミノヘキサン酸に添加することによって調製したアセトニトリル中の６－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）ヘキサン酸に添加することによって、化合物２０５を調製した。反応混合物を８０℃に加熱し、その後、室温まで下げた。実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－２０共役基を含むオリゴマー化合物２１０を化合物２０８から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－２０（ＧａｌＮＡｃ３－２０ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－２０（ＧａｌＮＡｃ３－２０ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示
される：
Figure 0007001663000285
実施例７２：ＧａｌＮＡｃ３－２１を含むオリゴマー化合物２１５の調製
Figure 0007001663000286
化合物２１１は、市販のものである。実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－２１共役基を含むオリゴマー化合物２１５を化合物２１３から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３－２１（ＧａｌＮＡｃ３－２１ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－２１（ＧａｌＮＡｃ３－２１ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000287
実施例７３：ＧａｌＮＡｃ３－２２を含むオリゴマー化合物２２１の調製
Figure 0007001663000288
ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリドを用いて、化合物２２０を化合物２１９から調製した。実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－２１共役基を含むオリゴマー化合物２２１を化合物２２０から調製する。共役基ＧａｌＮＡｃ３－２２（ＧａｌＮＡｃ３－２２ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ａｄ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－である。ＧａｌＮＡｃ３－
２２（ＧａｌＮＡｃ３－２２ａ－ＣＭ－）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000289
実施例７４：５’－ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ－１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害へのさまざまな切断可能部分の影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。ＧａｌＮＡｃ３共役基のそれぞれは、それぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に取り付けられた。
Figure 0007001663000290
すべての表において、大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５－メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、先の実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３－１７ａの構造は、先の実施例６８に示し、ＧａｌＮＡｃ３－１８ａの構造は、実施例６９に示した。
処理
６～８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ
Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、表６０に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表６１に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の力価を示し、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
Figure 0007001663000291
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表６２に示される。
Figure 0007001663000292
 実施例７５：５’－共役基を含むオリゴヌクレオチドの薬物動態分析
実施例６５、６６、及び７４に記載される処理手順に従って得た肝臓試料を用いて、上の表５４、５７、及び６０におけるＡＳＯのＰＫを評価した。肝臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出し、内部標準とともにＩＰ－ＨＰＬＣ－ＭＳによって分析した。適切なＵＶピークを統合することによってすべての代謝物の合わせた組織レベル（μｇ／ｇ）を測定し、適切な抽出イオンクロマトグラム（ＥＩＣ）を用いて、共役体を欠く全長ＡＳＯ（この場合、ＩＳＩＳ番号３５３３８２の「親」）の組織レベルを測定した。
Figure 0007001663000293
上の表６３における結果は、特にＧａｌＮＡｃ３共役基を有するオリゴヌクレオチドとＧａｌＮＡｃ３共役基を有しないオリゴヌクレオチドとの間の投薬の違いを考慮に入れた場合、オリゴヌクレオチド投与の７２時間後に、ＧａｌＮＡｃ３共役基を含むオリゴヌクレオチドの肝臓組織レベルが、ＧａｌＮＡｃ３共役基を含まない親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２）の肝臓組織レベルよりも高かったことを示す。さらに、７２時間までに、ＧａｌＮＡｃ３共役基を含む各オリゴヌクレオチドの４０～９８％が親化合物に代謝され、ＧａｌＮＡｃ３共役基がオリゴヌクレオチドから切断されたことを示す。
実施例７６：ＧａｌＮＡｃ３－２３を含むオリゴマー化合物２３０の調製
Figure 0007001663000294
Figure 0007001663000295
化合物２２２は、市販のものである。４４．４８ｍＬ（０．３３ｍｏｌ）の化合物２２２をピリジン（５００ｍＬ）中の塩化トシル（２５．３９ｇ、０．１３ｍｏｌ）で１６時間処理した。その後、反応物を蒸発させて油状物とし、ＥｔＯＡｃ中に溶解し、水、飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。酢酸エチルを濃縮乾固させ、カラムクロマトグラフィーによって精製し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）、続いて、ＣＨ２Ｃｌ２中の１０％メタノールで溶出して、無色の油状物として化合物２２３を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。１０ｇ（３２．８６ｍｍｏｌ）の１－トシルトリエチレングリコール（化合物２２３）を、ＤＭＳＯ（１００ｍＬ）中のアジ化ナトリウム（１０．６８ｇ、１６４．２８ｍｍｏｌ）で、室温で１７時間処理した。その後、反応混合物を水上に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で３回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させて、５．３ｇの化合物２２４（９２％）を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。１－アジドトリエチレングリコール（化合物２２４、５．５３ｇ、２３．６９ｍｍｏｌ）及び化合物４（６ｇ、１８．２２ｍｍｏｌ）を、４Ａモレキュラーシーブ（５ｇ）及びジクロロメタン（１００ｍＬ）中のＴＭＳＯＴｆ（１．６５ｍＬ、９．１１ｍｍｏｌ）で、不活性雰囲気下で処理した。１４時間後、反応物を濾過して前記モレキュラーシーブを除去し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させ、カラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の２～４％メタノールの勾配で溶出して、化合物２２５を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２２５（１１．９ｇ、２３．５９ｍｍｏｌ）をパールマン触媒上で、ＥｔＯＡｃ／メタノール（４：１、２５０ｍＬ）中で水素化した。８時間後、触媒を濾去し、溶媒を除去乾固して、化合物２２６を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物２２７を生成するために、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のニトロメタントリスプロピオン酸（４．１７ｇ、１５．０４ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（１０．３ｍＬ、６０．１７ｍｍｏｌ）の溶液をペンタフルオロトリフルオロアセテート（９．０５ｍＬ、５２．６５ｍｍｏｌ）で液滴処理した。３０分間後、反応物を氷水上に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させ、その後、ヘプタンから再結晶化して、白色の固体として化合物２２７を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２２７（１．５ｇ、１．９３ｍｍｏｌ）及び化合物２２６（３．７ｇ、７．７４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）中で
、室温で２時間撹拌した。その後、反応物を蒸発乾固し、カラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の２～１０％メタノールの勾配で溶出して、化合物２２８を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２２８（１．７ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）をエタノール（１００ｍＬ）中のラネーニッケル（約２ｇ、湿性）で、水素雰囲気下で処理した。１２時間後、触媒を濾去し、有機層を蒸発させて固体にし、これを次のステップで直接使用した。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。この固体（０．８７ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）中のベンジルグルタル酸（０．１８ｇ、０．８ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．３ｇ、０．８ｍｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（２７３．７μＬ、１．６ｍｍｏｌ）で処理した。１６時間後、ＤＭＦを減圧下で６５℃で除去して油状物とし、この油状物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を蒸発させた後、化合物をカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の２～２０％メタノールの勾配で溶出して、カップリング生成物を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。ベンジルエステルをパールマン触媒で、水素雰囲気下で１時間脱保護した。その後、この触媒を濾去し、溶媒を除去乾固して、酸を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。酸（４８６ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解した。ピリジン（５３．６１μＬ、０．６６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をアルゴンでパージした。ペンタフルオロトリフルオロアセテート（４６．３９μＬ、０．４ｍｍｏｌ）を反応混合物に緩徐に添加した。反応物の色が淡黄色からワイン色に変化し、少しの煙を発し、この煙をアルゴン流で吹き飛ばした。反応物を室温で１時間撹拌させた（反応の完了をＬＣＭＳによって確認した）。この溶媒を減圧下（回転蒸発）で７０℃で除去した。残渣をＤＣＭで希釈し、１Ｎ ＮａＨＳＯ４、ブライン、飽和重炭酸ナトリウム、及び再度ブラインで洗浄した。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、黄色の脆い泡状物として２２５ｍｇの化合物２２９を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３－２３共役基を含むオリゴマー化合物２３０を化合物２２９から調製した。ＧａｌＮＡｃ３－２３共役基（ＧａｌＮＡｃ３－２３ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ３－２３（ＧａｌＮＡｃ３－２３ａ－ＣＭ）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000296
実施例７７：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ－１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。
Figure 0007001663000297
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－９ａは、実施例５２に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１９ａは、実施例７０に示され、ＧａｌＮＡｃ３－２０ａは、実施例７１に示され、ＧａｌＮＡｃ３－２３ａは、実施例７６に示される。
処理
６～８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ
Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）のそれぞれに、表６４に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．
Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表６５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。
Figure 0007001663000298
標準のプロトコルを用いて、血清中の肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）も測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表６６に示される。
Figure 0007001663000299
 実施例７８：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むアンギオテンシノーゲンを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験において正常血圧のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおけるアンギオテンシノーゲン（ＡＧＴ）のアンチセンス
阻害について試験した。
Figure 0007001663000300
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示した。
処理
６週齢の雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットのそれぞれに、表６７に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にラットを屠殺した。リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを決定した。全アンギオテンシノーゲンＥＬＩＳＡ（カタログ番号ＪＰ２７４１２、ＩＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，ＯＮ）を用いて、１：２０，０００で希釈したＡＧＴ血漿タンパク質レベルを測定した。以下の結果は、ＰＢＳ対照に対して標準化された各処理群の肝臓におけるＡＧＴ ｍＲＮＡレベルまたは血漿におけるＡＧＴタンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。
表６８に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるＡＧＴ ｍＲＮＡ及び血漿タンパク質レベルを低下させ、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
Figure 0007001663000301
標準のプロトコルを用いて、屠殺時に血漿中の肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、ならびに体重も測定した。結果が以下の表６９に示される。
Figure 0007001663000302
 実施例７９：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＡＰＯＣ－ＩＩＩを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
以下の表７０に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
Figure 0007001663000303
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－７ａは、実施例４８に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１３ａは、実施例６２に示される。
処理
ヒトＡＰＯＣ－ＩＩＩを発現する６～８週齢のトランスジェニックマウスのそれぞれに、表７０に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、３匹の動物からなった。投薬前に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後７２時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、及び６週間時点のレベルを決定した。実施例２０に記載されるように、血漿トリグリセリド及びＡＰＯＣ－ＩＩＩタンパク質レベルを測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の血漿トリグリセリド及びＡＰＯＣ－ＩＩＩレベルの平均パーセントとして提示され、親オリゴヌクレオチドの投与量がＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドの投与量の３倍であったにもかかわらず、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドが共役基を有しない親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりも長い作用持続時間を示したことを示す。
Figure 0007001663000304
Figure 0007001663000305
 実施例８０：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むα－１抗トリプシン（Ａ１ＡＴ）を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表７２に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおけるＡ１ＡＴの用量依存的阻害試験において試験した。
Figure 0007001663000306
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－７ａは、実施例４８に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１３ａは、実施例６２に示される。
処理
６週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）のそれぞれに、表７２に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＡ１ＡＴ ｍＲＮＡレベルを決定した。マウスα１－抗トリプシンＥＬＩＳＡ（カタログ番号４１－Ａ１ＡＭＳ－Ｅ０１、Ａｌｐｃｏ，Ｓａｌｅｍ，ＮＨ）を用いて、Ａ１ＡＴ血漿タンパク質レベルを決定した。以下の結果は、ＰＢＳ対照に対して標準化された各処理群の肝臓におけるＡ１ＡＴ
ｍＲＮＡ及び血漿タンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。
表７３に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるＡ１ＡＴ ｍＲＮＡ及びＡ１ＡＴ血漿タンパク質レベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、親（ＩＳＩＳ ４７６３６６）よりも著しく強力であった。
Figure 0007001663000307
標準のプロトコルを用いて、屠殺時に血漿中の肝臓トランスアミナーゼ及びＢＵＮレベルを測定した。体重及び臓器重量も測定した。結果が以下の表７４に示される。体重は、ベースラインと比較した％として示される。臓器重量は、ＰＢＳ対照群と比較した体重の％として示される。
Figure 0007001663000308
 実施例８１：生体内におけるＧａｌＮＡｃ３クラスターを含むＡ１ＡＴを標的とするオリゴヌクレオチドの作用持続時間
表７２に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
６週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスのそれぞれに、表７２に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。投薬の前日に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後５、１２、１９、及び２５日時点のレベルを決定した。ＥＬＩＳＡを用いて血漿Ａ１ＡＴタンパク質レベルを測定した（実施例８０を参照のこと）。以下の結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の血漿Ａ１ＡＴタンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドがＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ ４７６３
６６）よりも強力であり、かつより長い作用持続時間を有したことを示す。さらに、５’－ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６７８３８１、６７８３８２、６７８３８３、及び６７８３８４）は、概して、３’－ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５６３２６）よりもさらに強力であり、さらに長い作用持続時間を有した。
Figure 0007001663000309
 実施例８２：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ－１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体外におけるアンチセンス阻害
処理の２時間前に、初代マウス肝細胞を１５，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種した。表７６に列記されるオリゴヌクレオチドをウィリアムＥ培地に２、１０、５０、または２５０ｎＭで添加し、細胞を３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした
。オリゴヌクレオチド添加の１６時間後に細胞を溶解し、ＲＮｅａｓｅ ３０００ ＢｉｏＲｏｂｏｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて全ＲＮＡを精製した。リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、ＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを標準のプロトコルに従って決定した。Ｐｒｉｓｍ ４ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて、ＩＣ５０値を決定した。結果は、さまざまな異なるＧａｌＮＡｃ共役基及びさまざまな異なる切断可能部分を含むオリゴヌクレオチドが、生体外自由取り込み実験において、ＧａｌＮＡｃ共役基を欠く親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２及び６６６８４１）よりも著しく強力であることを示す。
Figure 0007001663000310
Figure 0007001663000311
Figure 0007001663000312
Figure 0007001663000313
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－５ａは、実施例４９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－６ａは、実施例５１に示され、ＧａｌＮＡｃ３－７ａは、実施例４８に示され、ＧａｌＮＡｃ３－８ａは、実施例４７に示され、ＧａｌＮＡｃ３－９ａは、実施例５２に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１２ａは、実施例６１に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１３ａは、実施例６２に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１４ａは、実施例６３に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１５ａは、実施例６４に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１７ａは、実施例６８に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１８ａは、実施例６９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１９ａは、実施例７０に示され、ＧａｌＮＡｃ３－２０ａは、実施例７１に示され、ＧａｌＮＡｃ３－２３ａは、実施例７６に示される。
実施例８３：ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含む、第ＸＩ因子を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表７７に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおける第ＸＩ因子の用量依存的阻害試験において試験した。
Figure 0007001663000314
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－７ａは、実施例４８に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１３ａは、実施例６２に示される。
処理
６～８週齢のマウスのそれぞれに、以下に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて肝臓における第ＸＩ因子ｍＲＮＡレベルを測定し、標準のプロトコルに従ってシクロフィリンに対して標準化した。肝臓トランスアミナーゼ、ＢＵＮ、及びビリルビンも測定した。以下の結果は、ＰＢＳ対照に対して標準化された各処理群の平均パーセントとして提示される。
表７８に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓における第ＸＩ因子ｍＲＮＡを低下させた。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ ４０４０７１）よりも強力であったことを示す。さらに、５’－ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６６３０８６、６７８３４７、６７８３４８、及び６７８３４９）は、３’－ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５６１７３）よりもさらに強力であった。
Figure 0007001663000315
 実施例８４：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含む第ＸＩ因子を標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
表７７に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
６～８週齢のマウスのそれぞれに、表７７に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。投薬の前日に尾採血によって血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後３、１０、及び１７日間時点のレベルを決定した。Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）の第ＸＩ因子捕捉及びビオチン化検出抗体（それぞれ、カタログ番号ＡＦ２４６０及びＢＡＦ２４６０）、ならびにＯｐｔＥＩＡ試薬セットＢ（カタログ番号５５０５３４、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて、第ＸＩ因子血漿タンパク質レベルをＥＬＩＳＡによって測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の第ＸＩ因子血漿タンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ ４０４０７１）よりも強力であり、より長い作用持続時間を有したことを示す。さらに、５’－ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６６３０８６
、６７８３４７、６７８３４８、及び６７８３４９）は、３’－ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５６１７３）よりもさらに強力であり、さらに長い作用持続時間を有した。
Figure 0007001663000316
 実施例８５：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含む、ＳＲＢ－１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表７６に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。
処理
６～８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスのそれぞれに、表７６に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の４８時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、ＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群の肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表８０及び８１に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用
量依存的様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。
Figure 0007001663000317
Figure 0007001663000318
標準のプロトコルを用いて、肝臓トランスアミナーゼレベル、総ビリルビン、ＢＵＮ、及び体重も測定した。各処理群の平均値が以下の表８２に示される。
Figure 0007001663000319
 実施例８６：ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含む、ＴＴＲを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表８３に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてヒトＴＴＲ遺伝子を発現するトランスジェニックマウスにおけるヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）のアンチセンス阻害について試験した。
処理
８週齢のＴＴＲトランスジェニックマウスのそれぞれに、以下の表に列記されるオリゴヌクレオチド及び投与量またはＰＢＳを、週１回３週間、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。この実験を通してさまざまな時点で尾採血を実行し、血漿ＴＴＲタンパク質、ＡＬＴ、及びＡＳＴレベルを測定し、表８５～８７に報告した。動物を屠殺した後、血漿ＡＬＴ、ＡＳＴ、及びヒトＴＴＲレベルを測定し、体重、臓器重量、及び肝臓におおけるヒトＴＴＲ ｍＲＮＡレベルも測定した。臨床分析器（ＡＵ４８０、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ
，ＣＡ）を用いて、ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるヒトＴＴＲ
ｍＲＮＡレベルを決定した。表８４～８７に提示される結果は、各処理群の平均値である。ｍＲＮＡレベルは、ＰＢＳ群の平均と比較した平均値である。血漿タンパク質レベルは、ベースラインでのＰＢＳ群の平均値と比較した平均値である。体重は、個々の処理群それぞれを屠殺するまでのベースラインからの平均体重変化率である。示される臓器重量は、動物の体重に対して標準化されており、各処理群の平均標準化臓器重量は、ＰＢＳ群の平均標準化臓器重量との比較で提示される。
表８４～８７において、「ＢＬ」は、第１の投与の直前に測定したベースラインを示す。表８４及び８５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＴＴＲ発現レベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ ４２０９１５）よりも強力であった。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体及び混成ＰＳ／ＰＯヌクレオシド間連結部を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体及び完全ＰＳ連結部を含むオリゴヌクレオチドよりもさらに強力であった。
Figure 0007001663000320
表８５の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３－１の構造は、実施例９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、実施例４８に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１０ａの構造は、実施例４６に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１３ａの構造は、実施例６２に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１９ａの構造は、実施例７０に示される。
Figure 0007001663000321
Figure 0007001663000322
Figure 0007001663000323
Figure 0007001663000324
 実施例８７：ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含むＴＴＲを標的とするオリゴヌクレオチドの単回投与による生体内における作用持続時間
ＩＳＩＳ番号４２０９１５及び６６０２６１（表８３を参照のこと）を、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。ＩＳＩＳ番号４２０９１５、６８２８８３、及び６８２８８５（表８３を参照のこと）も、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
ヒトＴＴＲを発現する８週齢の雄トランスジェニックマウスのそれぞれに、１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号４２０９１５または１３．５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号６６０２６１を１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。投薬前に尾採血を実行して、ベースライン、ならびに投与後３、７、１０、１７、２４、及び３９日目のレベルを決定した。実施例８６に記載されるように、血漿ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の血漿ＴＴＲレベルの平均パーセントとして提示される。
Figure 0007001663000325
 処理
ヒトＴＴＲを発現する雌トランスジェニックマウスのそれぞれに、１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号４２０９１５、１０．０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号６８２８８３、または１０．０ｍｇ／ｋｇの６８２８８５を１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。投薬前に尾採血を実行して、ベースライン、ならびに投与後３、７、１０、１７、２４、及び３９日目のレベルを決定した。実施例８６に記載されるように、血漿ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の血漿ＴＴＲレベルの平均パーセントとして提示される。
Figure 0007001663000326
表８８及び８９における結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠く親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ４２０９１５）よりも強力であり、より長い作用持続時間を有することを示す。
実施例８８：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＭＮを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるスプライシング調節
表９０に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおけるヒト運動ニューロン生存（ＳＭＮ）のスプライシング調節について試験した。
Figure 0007001663000327
ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、先の実施例４８に示した。「Ｘ」は、Ｇｅｎｅ Ｔｏｏｌｓ（Ｐｈｉｌｏｍａｔｈ，ＯＲ）によって生成された５’一次アミンを示し、ＧａｌＮＡｃ３－７ｂは、以下に示すように、リンカーの－ＮＨ－Ｃ６－Ｏ部分を欠くＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造を示す。
Figure 0007001663000328
ＩＳＩＳ番号７０３４２１及び７０３４２２は、モルホリノオリゴヌクレオチドであり、これら２つのオリゴヌクレオチドの各ヌクレオチドは、モルホリノヌクレオチドである。
処理
ヒトＳＭＮを発現する６週齢のトランスジェニックマウスに、表９１に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を１回皮下注入した。各処理群は、２匹の雄及び２匹の
雌からなった。投与の３日後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲを用いて、エキソン７を有する場合とエキソン７を有しない場合の肝臓におけるヒトＳＭＮ ｍＲＮＡレベルを決定した。Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎ試薬を用いて総ＲＮＡを測定した。ＳＭＮ ｍＲＮＡレベルを総ｍＲＮＡに対して標準化し、さらに生理食塩水処理群の平均に対して標準化した。結果として生じたエキソン７を含むＳＭＮ ｍＲＮＡとエキソン７を欠くＳＭＮ ｍＲＮＡとの平均比が、表９１に示される。結果は、スプライシングを調節し、かつＧａｌＮＡｃ共役体を含む完全修飾オリゴヌクレオチドが、ＧｌａＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも肝臓におけるスプライシングの改変に著しく強力であることを示す。さらに、この傾向は、２’－ＭＯＥ及びモルホリノ修飾オリゴヌクレオチドを含む複数の修飾化学でも維持される。
Figure 0007001663000329
 実施例８９：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むアポリポタンパク質Ａ（Ａｐｏ（ａ））を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表９２に列記されるオリゴヌクレオチドを、トランスジェニックマウスにおけるＡｐｏ（ａ）の用量依存的阻害に関する試験で試験した。
Figure 0007001663000330
ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、実施例４８に示される。
処理
８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）のそれぞれに、表９２に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、以下に示される投与量で週１回、合計６回の投与で、皮下注入した。各処理群は、３～４匹の動物からなった。第１の投与の前日に、かつ各投与後週１回、尾採血を実行して、血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルを決定した。最終投与の２日後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＡｐｏ（ａ）ｍＲＮＡレベルを決定した。ＥＬＩＳＡを用いてＡｐｏ（ａ）血漿タンパク質レベルを決定し、肝臓トランスアミナーゼレベルを決定した。表９３におけるｍＲＮＡ及び血漿タンパク質の結果は、ＰＢＳ処理群と比較した処理群の平均パーセントとして提示される。血漿タンパク質レベルをさらにＰＢＳ群のベースライン（ＢＬ）値に対して標準化した。平均絶対トランスアミナーゼレベル及び体重（ベースライン平均と比較した％）が表９４に報告される。
表９３に例証されるように、オリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるＡｐｏ（ａ）ｍＲＮＡ及び血漿タンパク質レベルを低下させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であり、より長い作用持続時間を有した。表９４に例証されるように、トランスアミナーゼレベル及び体重はオリゴヌクレオチドの影響を受けず、オリゴヌクレオチドが良好な耐容性を示したことを示す。
Figure 0007001663000331
Figure 0007001663000332
 実施例９０：ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含むＴＴＲを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表９５に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてヒトＴＴＲ遺伝子を発現するトランスジェニックマウスにおけるヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）のアンチセンス阻害について試験した。
処理
ＴＴＲトランスジェニックマウスのそれぞれに、表９６に列記されるオリゴヌクレオチド及び投与量またはＰＢＳを、週１回３週間、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。第１の投与の前に、尾採血を実行して、ベースライン（ＢＬ）での血漿ＴＴＲタンパク質レベルを決定した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。臨床分析器（ＡＵ４８０、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＣＡ）を用いて、ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるヒトＴＴＲ ｍＲＮＡレベルを決定した。表９６に提示される結果は、各処理群の平均値である。ｍＲＮＡレベルは、ＰＢＳ群の平均と比較した平均値である。血漿タンパク質レベルは、ベースラインでのＰＢＳ
群の平均値と比較した平均値である。「ＢＬ」は、第１の投与の直前に測定したベースラインを示す。表９６に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＴＴＲ発現レベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ ４２０９１５）よりも強力であり、ホスホジエステルまたはデオキシアデノシンの切断可能部分を含むオリゴヌクレオチドは、共役体を欠く親と比較して、力価の著しい改善を示した（ＩＳＩＳ番号６８２８８３及び６６６９４３対４２０９１５、ならびに実施例８６及び８７を参照のこと）。
Figure 0007001663000333
表９５の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、実施例４８に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１０ａの構造は、実施例４６に示される。ＧａｌＮＡｃ３－１３ａの構造は、実施例６２に示される。
Figure 0007001663000334
 実施例９１：非ヒト霊長類におけるＧａｌＮＡｃ３共役体を含む第ＶＩＩ因子を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表９７に列記されるオリゴヌクレオチドを、非終末用量増加試験（ｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ，ｄｏｓｅ ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ）においてサルにおける第ＶＩＩ因子のアンチセンス阻害について試験した。
処理
処置した（ｎｏｎ－ｎａｉｖｅ）サルのそれぞれに、増加用量の表９７に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、０、１５、及び２９日目に皮下注入した。各処理群は、４匹の雄及び１匹の雌からなった。第１の投与の前とその後のさまざまな時点で、血液採取を実行して、血漿第ＶＩＩ因子タンパク質レベルを決定した。ＥＬＩＳＡによって第ＶＩＩ因子タンパク質レベルを測定した。表９８に提示される結果は、第１の投与の直前に測定したベースライン（ＢＬ）でのＰＢＳ群の平均値と比較した各処理群の平均値である。表９８に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で第ＶＩＩ因子の発現レベルを低下させ、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、サルにおいてＧａｌＮＡｃ共役体を欠くオリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
Figure 0007001663000335
表９７の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３－１０ａの構造は、実施例４６に示される。
Figure 0007001663000336
 実施例９２：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＡｐｏ－ＣＩＩＩを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる初代肝細胞におけるアンチセンス阻害
初代マウス肝細胞を１５，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種し、マウスＡｐｏＣ－ＩＩＩを標的とする表９９に列記されるオリゴヌクレオチドを、０．４６、１．３７、４．１２、または１２．３５、３７．０４、１１１．１１、もしくは３３３．３３ｎＭまたは１．００μｍで添加した。オリゴヌクレオチドとともに２４時間インキュベートした後、細胞を溶解し、ＲＮｅａｓｙ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて全ＲＮＡを精製した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて、ＡｐｏＣ－ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルを決定した。Ｐｒｉｓｍ ４ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて、ＩＣ５０値を決定した。結果は、切断可能部分がホスホジエステルであるかホスホジエステル連結デオキシアデノシンであるかにかかわらず、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。
Figure 0007001663000337
ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－７ａは、実施例４８に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１３ａは、実施例６２に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１９ａは、実施例７０に示される。
実施例９３：混成ウイング及び５’－ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ－１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表１００に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。
Figure 0007001663000338
ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、先の実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、先の実施例４８に示される。下付き文字「ｅ」は、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’－（Ｓ）－ＣＨ３二環式ヌクレオシド（ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示す。上付き文字「ｍ」は、５－メチルシトシンを示す。
処理
６～８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ
Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、表１００に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、ＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルをシクロフィリンｍＲＮＡレベルに対して標準化した。結果は、生理食塩水対照群と比較した各処理群のＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。表１０１に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させ、ＧａｌＮＡｃ共役体を含み、かつ完全ｃＥｔまたは混成糖修飾のいずれかのウイングを有するギャップマーオリゴヌクレオチドは、共役体を欠き、かつ完全ｃＥｔ修飾ウイングを含む親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、及びＢＵＮも測定し、各処理群の平均値が表１０１に示される。体重は、オリゴヌクレオチド投与の直前に測定したベースライン体重（％ＢＬ）と比較した平均体重率として示される。
Figure 0007001663000339
 実施例９４：２’－糖修飾及び５’－ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ－１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表１０２に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。
Figure 0007001663000340
下付き文字「ｍ」は、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシドを示す。完全な表の説明文については、実施例７４を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、先の実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、先の実施例４８に示した。
処理
実施例９３に記載されるプロトコルを用いて試験を完了した。結果が以下の表１０３に示され、ＧａｌＮＡｃ共役体を含む２’－ＭＯＥ修飾オリゴヌクレオチドと２’－ＯＭｅ修飾オリゴヌクレオチドとが両方ともに、共役体を欠くそれぞれの親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、及びＢＵＮの測定結果は、これらの化合物がすべて良好な耐容性を示したことを示す。
Figure 0007001663000341
 実施例９５：二環式ヌクレオシド及び５’－ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ－１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表１０４に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。
Figure 0007001663000342
下付き文字「ｇ」は、フルオロ－ＨＮＡヌクレオシドを示し、下付き文字「ｌ」は、２’－Ｏ－ＣＨ２－４’橋を含むロックドヌクレオシドを示す。他の省略形については、実施例７４の表の説明文を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３－１ａの構造は、先の実施例９に示し、ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、先の実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、先の実施例４８に示した。
処理
実施例９３に記載されるプロトコルを用いて試験を完了した。結果が以下の表１０５に示され、ＧａｌＮＡｃ共役体及びさまざまな二環式ヌクレオシド修飾を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠くが二環式ヌクレオシド修飾を含む親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体及びフルオロ－ＨＮＡ修飾を含むオリゴヌクレオチドは、共役体を欠くがフルオロ－ＨＮＡ修飾を含む親よりも著しく強力であった。体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、及びＢＵＮの測定結果は、これらの化合物がすべて良好な耐容性であったことを示した。
Figure 0007001663000343
 実施例９６：ＧａｌＮＡｃ３共役基を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの血漿タンパク質結合
ＡｐｏＣ－ＩＩＩを標的とする表７０に列記されるオリゴヌクレオチド及びＡｐｏ（ａ）を標的とする表１０６におけるオリゴヌクレオチドを限外濾過アッセイにおいて試験して、血漿タンパク質結合を評価した。
Figure 0007001663000344
表の説明文については、実施例７４を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、先の実施例４８に示される。
Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ－ＭＣ限外濾過ユニット（３０，０００ＮＭＷＬ、低結合再生セルロース膜、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を３００μＬの０．５％Ｔｗｅｅｎ ８０で事前に条件付け、２０００ｇで１０分間遠心分離し、その後、Ｈ２Ｏ中の３００μＬの３００μｇ／ｍＬ対照オリゴヌクレオチド溶液で事前に条件付け、２０００ｇで１６分間遠心分離した。これらの試験で用いる表７０及び１０６の各試験オリゴヌクレオチドのフィルターへの非特異的結合を評価するために、３００μＬのＨ２Ｏ中の２５０ｎｇ／ｍＬ溶液オリゴヌクレオチド（ｐＨ７．４）を事前に条件付けたフィルターに設置し、２０００ｇで１６分間遠心分離した。ＥＬＩＳＡアッセイによって濾過していない試料及び濾過した試料を分析して、オリゴヌクレオチド濃度を決定した。３つの複製物を用いて各試料の平均濃度を得た。濾過していない試料と比較した濾過した試料の平均濃度を用いて、血漿の不在下でフィルターによって回収されたオリゴヌクレオチドの割合（％回収）を決定する。
薬物を使用していない健常なヒト志願者、カニクイザル、及びＣＤ－１マウス由来のＫ３－ＥＤＴＡ中に収集された凍結全血漿試料をＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ ＬＬＣ（Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ）から購入した。試験オリゴヌクレオチドを、２つの濃度（５μｇ／ｍＬ及び１５０μｇ／ｍＬ）で血漿の１．２ｍＬの一定分量に添加した。各スパイクした血漿試料の一定分量（３００μＬ）を事前に条件付けられたフィルターユニット内に設置し、３７°Ｃで３０分間インキュベートした直後に２０００ｇで１６分間遠心分離した。ＥＬＩＳＡによって、濾過してスパイクした血漿試料及び濾過していないスパイクした血漿試料の一定分量を分析して、各試料中のオリゴヌクレオチドの濃度を決定した。１つの濃度ごとに３つの複製物を用いて、各試料中の結合オリゴヌクレオチド及び非結合オリゴヌクレオチドの平均割合を決定した。濾過していない試料の濃度と比較した濾過した試料の平均濃度を用いて、血漿タンパク質に結合されていない血漿中のオリゴヌクレオチドの割合（％非結合）を決定する。各オリゴヌクレオチドの％非結合を％回収で割ることによって、最終非結合オリゴヌクレオチド値を非特異的結合に対して補正する。最終％非結合値を１００から差し引くことによって、最終％結合オリゴヌクレオチド値を決定する。各種の血漿において試験した２つの濃度のオリゴヌクレオチド（５μｇ／ｍＬ及び１５０μｇ／ｍＬ）の結果が表１０７に示される。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基が血漿タンパ
ク質結合に大きな影響を与えないことを示す。さらに、完全ＰＳヌクレオシド間連結部を有するオリゴヌクレオチドも混成ＰＯ／ＰＳ連結部を有するオリゴヌクレオチドも血漿タンパク質に結合し、完全ＰＳ連結部を有するオリゴヌクレオチドは、混合ＰＯ／ＰＳ連結部を有するオリゴヌクレオチドよりも若干高い程度に血漿タンパク質に結合する。
Figure 0007001663000345
 実施例９７：ＧａｌＮＡｃ３共役基を含むＴＴＲを標的とする修飾オリゴヌクレオチド
ＧａｌＮＡｃ共役体を含む表１０８に示されるオリゴヌクレオチドを、ＴＴＲを標的とするように設計した。
Figure 0007001663000346
表１０８の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３－１の構造は、実施例９に示した。ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、実施例４８にした。ＧａｌＮＡｃ３－１０ａの構造は、実施例４６に示した。ＧａｌＮＡｃ３－１３ａの構造は、実施例６２に示した。ＧａｌＮＡｃ３－１９ａの構造は、実施例７０に示した。
実施例９８：ｈＰＭＢＣアッセイにおけるＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドの炎症誘発作用の評価
表１０９に列記されるオリゴヌクレオチドを、実施例２３及び２４に記載されるようにｈＰＭＢＣアッセイにおいて炎症誘発作用について試験した（オリゴヌクレオチドの説明については、表３０、８３、９５、及び１０８を参照のこと）。ＩＳＩＳ ３５３５１２は、正の対照として用いられる高レスポンダーであり、他のオリゴヌクレオチドは、表８３、９５、及び１０８に記載されるものである。１人の志願ドナー由来の血液を用いて表１０９に示される結果を得た。結果は、混合ＰＯ／ＰＳヌクレオシド間連結部を含むオリゴヌクレオチドが、完全ＰＳ連結部を有する同一のオリゴヌクレオチドと比較して、著しく低い炎症誘発応答をもたらしたことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役基は、このアッセイにおいて大きく影響しなかった。
Figure 0007001663000347
 実施例９９：アシアロ糖タンパク質受容体に対するＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドの結合親和性
アシアロ糖タンパク質受容体に対する表１１０に列記されるオリゴヌクレオチド（オリゴヌクレオチドの説明については、表７６を参照のこと）の結合親和性を、競合的受容体結合アッセイにおいて試験した。競合相手のリガンドであるα１－酸性糖タンパク質（ＡＧＰ）を、５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）中で１Ｕノイラミニダーゼ－アガロースとともに３７℃で１６時間インキュベートし、シアル酸アッセイまたはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）のいずれかで９０％を超える脱シアル化を確認した。Ａｔｓｍａ ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．１９９１ Ｊａｎ；３２（１）：１７３－８１を参照のこと）の手順に従って、一塩化ヨウ素を用いてＡＧＰをヨウ素化した。この方法において、脱シアル化α１－酸性糖タンパク質（ｄｅ－ＡＧＰ）を、１０ｍＭ塩化ヨウ素、Ｎａ１２５Ｉ、及び０．２５Ｍ ＮａＯＨ中の１Ｍグリシンに添加した。室温で１０分間インキュベートした後、３ＫＤＭＷＣＯスピンカラムを利用してこの混合物を２回濃縮することによって、１２５Ｉ標識ｄｅ－ＡＧＰを遊離１２５Ｉから分離した。このタンパク質を、Ａｇｉｌｅｎｔ ＳＥＣ－３カラム（７．８×３００ｍｍ）及びβ－ＲＡＭカウンタを装備したＨＰＬＣシステムにおいて標識効率及び純度について試験した。１２５Ｉ標識ｄｅ－ＡＧＰ及びＡＳＯを含有するさまざまなＧａｌＮＡｃクラスターを利用した競合実験を以下のとおりに実行した。ヒトＨｅｐＧ２細胞（１０６細胞／ｍＬ）を、２ｍＬの適切な成長培地中の６ウェルプレートにプレーティングした。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、及び１０ｍＭ ＨＥＰＥＳを補充したＭＥＭ培地を用いた。細胞を、それぞれ、５％及び１０％ＣＯ２で、３７℃で１６～２０時間インキュベートした。実験前に細胞をＦＢＳを有しない培地で洗浄した。細胞を、２％ＦＢＳを有する適切な成長培地を含有する１ｍＬの競合混合物、１０－８Ｍ １２５Ｉ標識ｄｅ－ＡＧＰ、及び１０－１１～１０－５Ｍの範囲の濃度のＡＳＯを含有するＧａｌＮＡｃクラスターとともに、３７℃で３０分間インキュベートした。１０－２Ｍ ＧａｌＮＡｃ糖の存在下で非特異的結合を決定した。細胞をＦＢＳを有しない培地で２回洗浄して、非結合１２５Ｉ標識ｄｅ－ＡＧＰ及び競合相手であるＧａｌＮＡｃ ＡＳＯを除去した。１％β－メルカプトエタノールを含有するＱｉａｇｅｎのＲＬＴ緩衝液を用いて、細胞を溶解した。１０分間の短時間凍結／解凍サイクル後に溶解物を丸底アッセイチューブに移し、γ－カウンタでアッセイした。非特異的結合を差し引いた後に、１２５Ｉタンパク質カウントを最も低いＧａｌＮＡｃ－ＡＳＯ濃度カウントの値で割った。非線形回帰アルゴリズムを用いた単一部位競合結合等式に従って阻害曲線を当てはめて、結合親和性（ＫＤ）を計算した。
表１１０における結果を５つの異なる日に実行した実験から得た。上付き文字「ａ」の付いたオリゴヌクレオチドの結果は、２つの異なる日に実行した実験の平均である。結果は、５’末端にＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドがヒトＨｅｐＧ２細胞上のアシアロ糖タンパク質受容体に結合し、３’末端にＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌク
レオチドよりも１．５～１６倍高い親和性を有することを示す。
Figure 0007001663000348
 実施例１００：生体内におけるＡｐｏ（ａ）を標的とするＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表１１１ａに列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
Figure 0007001663000349
ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、実施例４８に示した。
処理
ヒトＡｐｏ（ａ）を発現する雌トランスジェニックマウスのそれぞれに、表１１１ｂに列記されるオリゴヌクレオチド及び投与量またはＰＢＳを、週１回、合計６回の投与で、皮下注入した。各処理群は、３匹の動物からなった。投薬の前日に血液を採取して、血漿中のＡｐｏ（ａ）タンパク質のベースラインレベル、ならびに第１の投与後７２時間、１週間、及び２週間時点のレベルを決定した。第１の投与後３週間、４週間、５週間、及び６週間時点でさらに血液を採取する。ＥＬＩＳＡを用いて血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルを測定した。表１１１ｂにおける結果は、ベースラインレベル（％ＢＬ）に対して標準化された各処理群の血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルの平均パーセントとして提示され、結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドがＡｐｏ（ａ）発現の強力な減少を示したことを示す。この強力な影響は、完全ＰＳヌクレオシド間連結部を含むオリゴヌクレオチド及び混成ＰＯ及びＰＳ連結部を含むオリゴヌクレオチドにおいて観察された。
Figure 0007001663000350
 実施例１０１：安定した部分を介して連結されたＧａｌＮＡｃクラスターを含むオリゴヌクレオチドによるアンチセンス阻害
表１１２に列記されるオリゴヌクレオチドを生体内におけるマウスＡＰＯＣ－ＩＩＩ発現の阻害について試験した。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスのそれぞれに、表１１２に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。ＩＳＩＳ ４４０６７０で処理した各マウスは、２、６、２０、または６０ｍｇ／ｋｇの投与を受けた。ＩＳＩＳ ６８０７７２または６９６８４７で処理した各マウスは、０．６、２、６、または２０ｍｇ／ｋｇを受けた。ＩＳＩＳ ６９６８４７のＧａｌＮＡｃ共役基は、安定した部分（容易に切断可能なホスホジエステル含有結合の代わりにホスホロチオエート連結部）を介して連結されている。投与の７２時間後に動物を屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて、肝臓におけるＡＰＯＣ－ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、ＡＰＯＣ－ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルをシクロフィリンｍＲＮＡレベルに対して標準化した。結果は、生理食塩水対照群と比較した各処理群のＡＰＯＣ－ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして表１１２に提示される。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドが、共役基を欠くオリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。さらに、切断可能部分を介してオリゴヌクレオチドに連結されたＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６８０７７２）は、安定した部分を介してオリゴヌクレオチドに連結されたＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６９６８４７）よりもさらに強力であった。
Figure 0007001663000351
ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、実施例４８に示した。
実施例１０２：ＧａｌＮＡｃ共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの肝臓における分布
ＧａｌＮＡｃ共役体を含まないＩＳＩＳ ３５３３８２（表３６を参照のこと）及びＧａｌＮＡｃ共役体を含むＩＳＩＳ ６５５８６１（表３６を参照のこと）の肝臓における分布を評価した。雄ｂａｌｂ／ｃマウスに、ＩＳＩＳ ３５３３８２または６５５８６１を、表１１３に列記される投与量で１回、皮下注入した。２匹の動物からなった１８ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ ６５５８６１群を除いて、各処理群は、３匹の動物からなった。投与の４８時間後に動物を屠殺して、オリゴヌクレオチドの肝臓における分布を決定した。１細胞あたりのアンチセンスオリゴヌクレオチド分子の数を測定するために、ルテニウム（ＩＩ）トリス－ビピリジン標識（ＭＳＤ ＴＡＧ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を、アンチセンスオリゴヌクレオチドを検出するために用いるオリゴヌクレオチドプローブに共役させた。表１１３に提示される結果は、１細胞あたり１００万オリゴヌクレオチド分子を１単位として表した各処理群のオリゴヌクレオチドの平均濃度である。結果は、等価用量で、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、全肝臓及び肝細胞において、ＧａｌＮＡｃ共役体を含まないオリゴヌクレオチドよりも高い濃度で存在したことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、非実質肝臓細胞において、ＧａｌＮＡｃ共役体を含まないオリゴヌクレオチドよりも低い濃度で存在した。１細胞あたりの肝細胞及び非実質肝臓細胞におけるＩＳＩＳ ６５５８６１の濃度が同様であった一方で、肝臓は、約８０体積％肝細胞であった。したがって、肝臓内に存在するＩＳＩＳ ６５５８６１オリゴヌクレオチドの大部分が肝細胞内に見られる一方で、肝臓内に存在するＩＳＩＳ ３５３３８２オリゴヌクレオチドの大部分は、非実質肝臓細胞内に見られた。
Figure 0007001663000352
 実施例１０３：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＡＰＯＣ－ＩＩＩを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
以下の表１１４に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
Figure 0007001663000353
ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３－１９ａは、実施例７０に示される。
処理
ヒトＡＰＯＣ－ＩＩＩを発現する雌トランスジェニックマウスのそれぞれに、表１１４に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、３匹の動物からなった。投薬前に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後３、７、１４、２１、２８、３５、及び４２日間のレベルを決定した。実施例２０に記載されるように、血漿トリグリセリド及びＡＰＯＣ－ＩＩＩタンパク質レベルを測定した。表１１５における結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の血漿トリグリセリド及
びＡＰＯＣ－ＩＩＩレベルの平均パーセントとして提示される。実施例７９の表７１における結果と以下の表１１５における結果の比較は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部及びホスホロチオエートヌクレオシド間連結部の両方を含むオリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のみを含む等価オリゴヌクレオチドよりも増加した作用持続時間を示したことを示す。
Figure 0007001663000354
 実施例１０４：５’－ＧａｌＮＡｃ２共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0007001663000355
化合物１２０は市販されており、化合物１２６の合成は実施例４９に記載されている。化合物１２０（１ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．３９ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）、及びＨＯＢｔ（１．６４ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．７５ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ）を添加した。約５分後、アミノヘキサン酸ベンジルエステル（１．３６ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）をこの反応物に添加した。３時間後、反応混合物を１００ｍＬの１Ｍ ＮａＨＳＯ４に注ぎ、２×５０ｍＬ酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、４０ｍＬ飽和ＮａＨＣＯ３で３回、ブラインで２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。この生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＥＡ：Ｈｅｘ＝１：１：１）によって精製して、化合物２３１を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２３１（１．３４ｇ、２．４３８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）中に溶解し、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を添加した。室温で２時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮し、トルエン（３×１０ｍＬ）と共蒸発させた。残渣を減圧下で乾燥させて、トリフルオロ酢酸塩として化合物２３２を得た。化合物１６６の合成は、実施例５４に記載される。化合物１６６（３．３９ｇ、５．４０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解した。化合物２３２（１．３ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）の溶液をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．５５ｍＬ）を添加した。反応物を室温で３０分間撹拌し、その後、水（８０ｍＬ）に注ぎ、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×８０ｍＬ）、１Ｍ ＮａＨＳＯ４（３×８０ｍＬ）、及びブライン（２×８０ｍＬ）で洗浄し、その後、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物２３３を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２３３（０．５９ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）をメタノール（２．２ｍＬ）及び酢酸エチル（２．２ｍＬ）中に溶解した。パラジウム炭素（１０重量％Ｐｄ／Ｃ、湿性、０．０７ｇ）を添加し、反応混合物を水素雰囲気下で３時間撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過
し、濃縮して、カルボン酸を得た。カルボン酸（１．３２ｇ、１．１５ｍｍｏｌ、クラスター遊離酸）をＤＭＦ（３．２ｍＬ）中に溶解した。これに、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．３ｍＬ、１．７３ｍｍｏｌ）及びＰＦＰＴＦＡ（０．３０ｍＬ、１．７３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で３０分間撹拌した後、反応混合物を水（４０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。上述のように標準の後処理を完了して、化合物２３４を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。実施例４６に記載される一般的手順を用いて、オリゴヌクレオチド２３５を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ２－２４のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ２－２４ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ２－２４（ＧａｌＮＡｃ２－２４ａ－ＣＭ）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000356
 実施例１０５：ＧａｌＮＡｃ１－２５共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0007001663000357
化合物１６６の合成は、実施例５４に記載される。実施例４６に記載される一般的手順を用いて、オリゴヌクレオチド２３６を調製した。
あるいは、以下に示されるスキームを用いてオリゴヌクレオチド２３６を合成し、実施例１０に記載される手順を用いて、化合物２３８を用いてオリゴヌクレオチド２３６を形成した。
Figure 0007001663000358
共役基ＧａｌＮＡｃ１－２５のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１－２５ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１－２５（ＧａｌＮＡｃ１－２５ａ－ＣＭ）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000359
実施例１０６：５’－ＧａｌＮＡｃ２または５’－ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ－１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表１１６及び１１７に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ－１のアンチセンス阻害について試験した。
処理
６週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、２、７、もしくは２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号４４０７６２；または０．２、０．６、２、６、もしくは２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号６８６２２１、６８６２２２、もしくは７０８５６１；または生理食塩水を１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて、肝臓におけるＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、ＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルをシクロフィリンｍＲＮＡレベルに対して標準化した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、用量依存的様式でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させ、ＥＤ５０結果が、表１１６及び１１７に提示される。以前の研究において、三価ＧａｌＮＡｃ共役オリゴヌクレオチドが二価ＧａｌＮＡｃ共役オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であり、これは、次いで、一価ＧａｌＮＡｃ共役オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことが示されたが（例えば、Ｋｈｏｒｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１６，５２１６－５２３１（２００８）を参照のこと）、表１１６及び１１７に示されるように、一価、二価、及び三価ＧａｌＮＡｃクラスターを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、同様の力価でＳＲＢ－１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。
Figure 0007001663000360
表の説明文については、実施例９３を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３－１３ａの構造は、実施例６２に示し、ＧａｌＮＡｃ２－２４ａの構造は、実施例１０４に示した。
Figure 0007001663000361
表の説明文については、実施例９３を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ１－２５ａの構造は、実施例１０５に示した。
実施例７５に記載される手順を用いて、表１１６及び１１７における肝臓中のオリゴヌクレオチドの濃度も評価した。以下の表１１７ａ及び１１７ｂに示される結果は、肝臓組織のオリゴヌクレオチド（μｇ）／ｇ単位のＵＶによって測定された各処理群の平均総アンチセンスオリゴヌクレオチド組織レベルである。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドがＧａｌＮＡｃ共役基を欠く同一の用量のオリゴヌクレオチドよりも著しく高いレベルで肝臓に蓄積したことを示す。さらに、それらのそれぞれの共役基に１、２、または３個のＧａｌＮＡｃリガンドを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドはすべて同様のレベルで肝臓に蓄積した。上記のＫｈｏｒｅｖ ｅｔ ａｌ．の文献参照を考慮すると、これは意外な結果であり、上の表１１６及び１１７に示される活性データと一致する。
Figure 0007001663000362
Figure 0007001663000363
 実施例１０７：ＧａｌＮＡｃ１－２６またはＧａｌＮＡｃ１－２７共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0007001663000364
ＤＭＦ中ＨＢＴＵ及びＤＩＥＡを用いて、オリゴヌクレオチド２３９を化合物４７（実施例１５を参照のこと）と酸６４（実施例３２を参照のこと）とのカップリングによって合成する。結果として生じたアミド含有化合物をホスフィチル化し、その後、実施例１０
に記載される手順を用いて、オリゴヌクレオチドの５’末端に付加する。共役基ＧａｌＮＡｃ１－２６のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１－２６ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１－２６（ＧａｌＮＡｃ１－２６ａ－ＣＭ）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000365
ＧａｌＮＡｃ１共役基をオリゴヌクレオチドの３’末端に付加するために、実施例７に記載される手順を用いて、化合物４７と６４の反応から形成されたアミドを固体支持体に付加する。その後、実施例９に記載される手順を用いて、オリゴヌクレオチド合成を完了して、オリゴヌクレオチド２４０を形成する。
Figure 0007001663000366
共役基ＧａｌＮＡｃ１－２７のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１－２７ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１－２７（ＧａｌＮＡｃ１－２７ａ－ＣＭ）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000367
実施例１０８：生体内におけるＡｐｏ（ａ）を標的とするＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表１１８に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおける単回投与試験において試験した。
Figure 0007001663000368
ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は、実施例４８に示される。
処理
ヒトＡｐｏ（ａ）を発現する雄トランスジェニックマウスのそれぞれに、表１１９に列記されるオリゴヌクレオチド及び投与量またはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。投薬の前日に血液を採取して、血漿中のＡｐｏ（ａ）タンパク質のベースラインレベル及び第１の投与後の１週間時点のレベルを決定した。週１回約８週間、さらに血液を採取する。ＥＬＩＳＡを用いて血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルを測定した。表１１９における結果は、ベースラインレベル（％ＢＬ）に対して標準化された各処理群の血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルの平均パーセントとして提示され、結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドがＡｐｏ（ａ）タンパク質の発現を低下させたことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドは、共役基を含まないオリゴヌクレオチドよりもさらに強力なＡｐｏ（ａ）発現の減少を示した。
Figure 0007001663000369
 実施例１０９：ＧａｌＮＡｃ１－２８またはＧａｌＮＡｃ１－２９共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0007001663000370
オリゴヌクレオチド２４１を実施例７１に記載される手順と同様の手順を用いて合成して、ホスホラミダイト中間体を形成し、続いて、実施例１０に記載される手順を用いてオリゴヌクレオチドを合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ１－２８のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１－２８ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１－２８（ＧａｌＮＡｃ１－２８ａ－ＣＭ）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000371
ＧａｌＮＡｃ１共役基をオリゴヌクレオチドの３’末端に付加するために、実施例７１に記載される手順と同様の手順を用いてヒドロキシル中間体を形成し、その後、実施例７に記載される手順を用いてこれを固体支持体に付加する。その後、実施例９に記載される手順を用いてオリゴヌクレオチド合成を完了させて、オリゴヌクレオチド２４２を形成する。
Figure 0007001663000372
共役基ＧａｌＮＡｃ１－２９のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１－２９ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１－２９（ＧａｌＮＡｃ１－２９ａ－ＣＭ）の構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000373
実施例１１０：ＧａｌＮＡｃ１－３０共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0007001663000374
ＧａｌＮＡｃ１－３０共役基を含むオリゴヌクレオチド２４６（式中、Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは無置換Ｃ１～Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される）を上に示されるように合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ１－３０のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１－３０ａ）を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、Ｙは、切断可能部分の一部である。特定の実施形態において、Ｙは、安定した部分の一部であり、切断可能部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。ＧａｌＮＡｃ１－３０ａの構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000375
実施例１１１：ＧａｌＮＡｃ２－３１またはＧａｌＮＡｃ２－３２共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0007001663000376
Figure 0007001663000377
ＧａｌＮＡｃ２－３１共役基を含むオリゴヌクレオチド２５０（式中、Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは無置換Ｃ１～Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される）を上に示されるように合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ２－３１のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ２－３１ａ）を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、切断可能部分の一部である。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、安定した部分の一部であり、切断可能部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。ＧａｌＮＡｃ２－３１ａの構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000378
ＧａｌＮＡｃ２－３２共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成は、以下に示される。
Figure 0007001663000379
ＧａｌＮＡｃ２－３２共役基を含むオリゴヌクレオチド２５２（式中、Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは無置換Ｃ１～Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される）を上に示されるように合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ２－３２のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ２－３２ａ）を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、切断可能部分の一部である。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、安定した部分の一部であり、切断可能部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。ＧａｌＮＡｃ２－３２ａの構造は、以下に示される：
Figure 0007001663000380
実施例１１２：ＧａｌＮＡｃ１共役体を含む修飾オリゴヌクレオチド
ＳＲＢ－１を標的とする表１２０のオリゴヌクレオチドをＧａｌＮＡｃ１共役基で合成して、ＧａｌＮＡｃリガンドを含有する共役基を含むオリゴヌクレオチドの力価をさらに試験した。
Figure 0007001663000381
Figure 0007001663000382
実施例１１３：ＣＦＢを標的とするオリゴヌクレオチドによるインビボでのアンチセンス阻害
表１２１に列挙するオリゴヌクレオチドを、マウスにおけるヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）のアンチセンス阻害について、用量依存的試験で調べた。
Figure 0007001663000383
 ＧａｌＮＡｃ３－３ａの構造は上記実施例３９で示した。
処置
ヒトＣＦＢを発現するトランスジェニックマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，メイン州バーハーバー）に、表１２２に列挙するオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を週に１回、３週にわたって皮下注射した（合計４回）。ＩＳＩＳ番号５８８５４０を投与した４つの処置群には、１回あたり６、１２、２５、または５０ｍｇ／ｋｇを与えた。ＩＳＩＳ番号６８７３０１を投与した４つの処置群には、１回あたり０．２５、０．５、２、または６ｍｇ／ｋｇを与えた。各処置群は４匹からなった。最後の投与の２日後にマウスを屠殺し、肝臓及び腎臓のヒトＣＦＢ及びシクロフィリンｍＲＮＡレベルを、リアルタイムＰＣＲを用いて標準的プロトコルに従って決定した。ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルをシクロフィリンレベルに対して標準化し、各処置群の平均を使って、ヒトＣＦＢ転写産物発現の５０％阻害を達成する用量（ＥＤ５０）を決定した。結果は、２つの異なるプライマープローブセットを使って実施した４回の実験の平均であり、これを表１２２に示す。
Figure 0007001663000384
血清中の肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準的プロトコルを使って、生理食塩水注射マウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン、ＢＵＮ、及び体重も評価した。その結果から、どの処置群にも生理食塩水処置群との比較で有意な変化がないことがわかった（データ省略）。これは、どちらのオリゴヌクレオチドも耐容性が非常に高かったことを示している。
実施例１１４：ＣＦＢを標的とするオリゴヌクレオチドによるインビボでのアンチセンス阻害
表１２３に列挙するオリゴヌクレオチドを、マウスにおけるヒトＣＦＢのアンチセンス阻害について、用量依存的試験で調べた。
処置
ヒトＣＦＢを発現するトランスジェニックマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，メイン州バーハーバー）に、０．６、１、６、または１８ｍｇ／ｋｇの表１２３に列挙したオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を１回皮下注射した。各処置群は４匹または５匹からなった。この投薬の７２時間後にマウスを屠殺し、肝臓のヒトＣＦＢ及びシクロフィリンｍＲＮＡレベルを、リアルタイムＰＣＲを用いて標準的プロトコルに従って決定した。ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルをシクロフィリンレベルに対して標準化し、各処置群の平均を使って、ヒトＣＦＢ転写産物発現の５０％阻害を達成する用量（ＥＤ５０）を決定した。結果を表１２３に示す。
Figure 0007001663000385
 ＧａｌＮＡｃ３－７ａの構造は上記実施例４８で示した。
実施例１１５：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐＧ２細胞におけるヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）のアンチセンス阻害
ヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、ＣＦＢ ｍＲＮＡに対するそれらの効果をインビトロで試験した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、培養条件が類似する一連の実験で試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。１ウェルあたり２０，０００細胞の密度の培養ＨｅｐＧ２細胞を、エレクトロポレーションにより、４，５００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約２４時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５９（フォワード配列ＡＧＴＣＴＣＴＧＴＧＧＣＡＴＧＧＴＴＴＧＧ，本明細書では配列番号８１０と呼ぶ；リバース配列ＧＧＧＣＧＡＡＴＧＡＣＴＧＡＧＡＴ
ＣＴＴＧ，本明細書では配列番号８１１と呼ぶ；プローブ配列ＴＡＣＣＧＡＴＴＡＣＣＡＣＡＡＧＣＡＡＣＣＡＴＧＧＣＡ，本明細書では配列番号８１２と呼ぶ）を使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
以下の表に示す新設計のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５－１０－５ＭＯＥギャップマーとして設計された。これらの５－１０－５ＭＯＥギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドと３’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドは２’－ＭＯＥ修飾を有する。ヌクレオシド間連結部は、各ギャップマーの全体を通して、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結部である。シトシン残基は、各ギャップマーの全体を通してすべて、５－メチルシトシンである。「開始部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も３’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示す各ギャップマーは、本明細書において配列番号１と呼ぶヒトＣＦＢ ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１７１０．５）もしくは本明細書において配列番号２と呼ぶヒトＣＦＢゲノム配列（ヌクレオチド３１８５２０００から３１８６１０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００７５９２．１５）、またはその両方を標的とする。「ｎ／ａ」は、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定遺伝子配列を１００％の相補性では標的としないことを示す。
Figure 0007001663000386
Figure 0007001663000387
Figure 0007001663000388
Figure 0007001663000389
Figure 0007001663000390
Figure 0007001663000391
Figure 0007001663000392
Figure 0007001663000393
Figure 0007001663000394
Figure 0007001663000395
Figure 0007001663000396
Figure 0007001663000397
Figure 0007001663000398
Figure 0007001663000399
Figure 0007001663000400
Figure 0007001663000401
Figure 0007001663000402
Figure 0007001663000403
実施例１１６：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐＧ２細胞におけるヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）のアンチセンス阻害
ヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）核酸を標的とする新たなアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、ＣＦＢ ｍＲＮＡに対するそれらの効果をインビトロで試験した。１ウェルあたり２０，０００細胞の密度の培養ＨｅｐＧ２細胞を、エレクトロポレーションにより、４，５００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約２４時間の処理期間後に、ＲＮＡを細胞から単離し、ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲで測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４６０＿ＭＧＢ（フォワード配列
ＣＧＡＡＧＣＡＧＣＴＣＡＡＴＧＡＡＡＴＣＡＡ，本明細書では配列番号８１３と呼ぶ；リバース配列ＴＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＴＴ，本明細書では配列番号８１４と呼ぶ；プローブ配列ＡＧＡＣＣＡＣＡＡＧＴＴＧＡＡＧＴＣ，本明細書では配列番号８１５と呼ぶ）を使って、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
以下の表に示す新設計のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５－１０－５ＭＯＥギャップマーとして設計された。これらの５－１０－５ＭＯＥギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドと３’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドは２’－ＭＯＥ修飾を有する。ヌクレオシド間連結部は、各ギャップマーの全体を通して、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結部である。シトシン残基は、各ギャップマーの全体を通してすべて、５－メチルシトシンである。「開始部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も３’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示す各ギャップマーは、本明細書において配列番号１と呼ぶヒトＣＦＢ ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１７１０．５）もしくは本明細書において配列番号２と呼ぶヒトＣＦＢゲノム配列（ヌクレオチド３１８５２０００から３１８６１０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００７５９２．１５）、またはその両方を標的とする。「ｎ／ａ」は、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定遺伝子配列を１００％の相補性では標的としないことを示す。
Figure 0007001663000404
Figure 0007001663000405
Figure 0007001663000406
Figure 0007001663000407
Figure 0007001663000408
Figure 0007001663000409
Figure 0007001663000410
実施例１１７：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐＧ２細胞におけるヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）のアンチセンス阻害
ヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）核酸を標的とする新たなアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、ＣＦＢ ｍＲＮＡに対するそれらの効果をインビトロで試験した。これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドを、培養条件が類似する一連の実験で試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。１ウェルあたり２０，０００細胞の密度の培養ＨｅｐＧ２細胞を、エレクトロポレーションにより、５，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約２４時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５９を使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
以下の表に示す新設計のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５－１０－５ＭＯＥギャップマーとして設計された。これらのギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドと３’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドは２’－ＭＯＥ修飾を有する。ヌクレオシド間連結部は、各ギャップマーの全体を通して、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結部である。シトシン残基は、各ギャップマーの全体を通してすべて、５－メチルシトシンである。「開始部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も３’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示す各ギャップマーは、本明細書において配列番号１と呼ぶヒトＣＦＢ ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１７１０．５）もしくは本明細書において配列番号２と呼ぶヒトＣＦＢゲノム配列（ヌクレオチド３１８５２０００から３１８６１０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００７５９２．１５）、またはその両方を標的とする。「ｎ／ａ」は、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定遺伝子配列を１００％の相補性では標的としないことを示す。ある特定の表において標的遺伝子に関する配列アラインメントが示されていない場合は、その表に掲載されたオリゴヌクレオチドはいずれも、その標的遺伝子と１００％の相補性では整列しないと理解される。
Figure 0007001663000411
Figure 0007001663000412
Figure 0007001663000413
Figure 0007001663000414
Figure 0007001663000415
Figure 0007001663000416
Figure 0007001663000417
Figure 0007001663000418
実施例１１８：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐＧ２細胞におけるヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）のアンチセンス阻害
ヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、ＣＦＢ ｍＲＮＡに対するそれらの効果をインビトロで試験した。これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドを、培養条件が類似する一連の実験で試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。１ウェルあたり２０，０００細胞の密度の培養ＨｅｐＧ２細胞を、エレクトロポレーションにより、３，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約２４時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５９を使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
以下の表に示す新設計のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、４－８－５ＭＯＥ、５－９－５ＭＯＥ、５－１０－５ＭＯＥ、３－１０－４ＭＯＥ、３－１０－７ＭＯＥ、６－７－６－ＭＯＥ、６－８－６ＭＯＥ、もしくは５－７－５ＭＯＥギャップマーとして、またはデオキシ、ＭＯＥ、及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドとして設計された。
４－８－５ＭＯＥギャップマーは１７ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは８個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ４個及び５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５－９－５ＭＯＥギャップマーは１９ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは９個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５－１０－５ＭＯＥギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５－７－５ＭＯＥギャップマーは１７ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは７個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。３－１０－４ＭＯＥギャップマーは１７ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ３個及び４個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。３－１０－７ＭＯＥギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ３個及び７個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。６－７－６ＭＯＥギャップマーは１９ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは７個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ６個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。６－８－６ＭＯＥギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは８個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ６個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。ヌクレオシド間連結部は、各ギャップマーの全体を通して、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結部である。シトシン残基は、各ギャップマーの全体を通してすべて、５－メチルシトシンである。
前記デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドは１６ヌクレオシド長であり、そのヌクレオシドはＭＯＥ糖修飾、（Ｓ）－ｃＥｔ糖修飾、またはデオキシ修飾のいずれかを有する。「化学的特徴」欄には各オリゴヌクレオチドの糖修飾を記載する。「ｋ」は（Ｓ）－ｃＥｔ糖修飾を示し、「ｄ」はデオキシリボースを示し、「ｅ」はＭＯＥ修飾を示す。
「開始部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も３’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示す各ギャップマーは、本明細書において配列番号１と呼ぶヒトＣＦＢ ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１７１０．５）もしくは本明細書において配列番号２と呼ぶヒトＣＦＢゲノム配列（ヌクレオチド３１８５２０００から３１８６１０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００７５９２．１５）、またはその両方を標的とする。「ｎ／ａ」は、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定遺伝子配列を１００％の相補性では標的としないことを示す。
Figure 0007001663000419
Figure 0007001663000420
Figure 0007001663000421
Figure 0007001663000422
Figure 0007001663000423
Figure 0007001663000424
Figure 0007001663000425
Figure 0007001663000426
Figure 0007001663000427
Figure 0007001663000428
Figure 0007001663000429
Figure 0007001663000430
Figure 0007001663000431
Figure 0007001663000432
Figure 0007001663000433
Figure 0007001663000434
Figure 0007001663000435
Figure 0007001663000436
Figure 0007001663000437
Figure 0007001663000438
Figure 0007001663000439
Figure 0007001663000440
Figure 0007001663000441
Figure 0007001663000442
Figure 0007001663000443
Figure 0007001663000444
Figure 0007001663000445
実施例１１９：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐＧ２細胞におけるヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）のアンチセンス阻害
ヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）核酸を標的とする新たなアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、ＣＦＢ ｍＲＮＡに対するそれらの効果をインビトロで試験した。これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドを、培養条件が類似する一連の実験で試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。１ウェルあたり２０，０００細胞の密度の培養ＨｅｐＧ２細胞を、エレクトロポレーションにより、２，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約２４時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプラ
イマープローブセットＲＴＳ３４５９を使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
以下の表に示す新設計のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、４－８－５ＭＯＥ、５－８－５ＭＯＥ、５－９－５ＭＯＥ、５－１０－５ＭＯＥ、６－７－６ＭＯＥ、３－１０－５ＭＯＥ、または６－８－６ＭＯＥギャップマーとして設計された。
４－８－５ＭＯＥギャップマーは１７ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは８個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ４個及び５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５－８－５ＭＯＥギャップマーは１８ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは８個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５－９－５ＭＯＥギャップマーは１９ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは９個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５－１０－５ＭＯＥギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。３－１０－５ＭＯＥギャップマーは１８ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ３個及び５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。６－７－６ＭＯＥギャップマーは１９ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは７個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ６個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。６－８－６ＭＯＥギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは８個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ６個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５’ウイングセグメント中の各ヌクレオシド及び３’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドは２’－ＭＯＥ修飾を有する。ヌクレオシド間連結部は、各ギャップマーの全体を通して、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結部である。シトシン残基は、各ギャップマーの全体を通してすべて、５－メチルシトシンである。
「開始部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も3’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示す各ギャップマーは、本明細書におい
て配列番号１と呼ぶヒトＣＦＢ ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１７１０．５）もしくは本明細書において配列番号２と呼ぶヒトＣＦＢゲノム配列（ヌクレオチド３１８５２０００から３１８６１０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００７５９２．１５）、またはその両方を標的とする。「ｎ／ａ」は、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定遺伝子配列を１００％の相補性では標的としないことを示す。
Figure 0007001663000446
Figure 0007001663000447
Figure 0007001663000448
Figure 0007001663000449
Figure 0007001663000450
Figure 0007001663000451
Figure 0007001663000452
Figure 0007001663000453
Figure 0007001663000454
Figure 0007001663000455
Figure 0007001663000456
実施例１２０：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐＧ２細胞におけるヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）のアンチセンス阻害
ヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）核酸を標的とする新たなアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、ＣＦＢ ｍＲＮＡに対するそれらの効果をインビトロで試験した。１ウェルあたり２０，０００細胞の密度の培養ＨｅｐＧ２細胞を、エレクトロポレーションにより、１，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約２４時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５９を使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
以下の表に示す新設計のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドとして設計された。前記デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドは１６ヌクレオシド長であり、そのヌクレオシドはＭＯＥ糖修飾、（Ｓ）－ｃＥｔ糖修飾、またはデオキシ修飾のいずれかを有する。「化学的特徴」欄には各オリゴヌクレオチドの糖修飾を記載する。「ｋ」は（Ｓ）－ｃＥｔ糖修飾を示し、「ｄ」はデオキシリボースを示し、「ｅ」はＭＯＥ修飾を示す。
「開始部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も３’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示す各ギャップマーは、本明細書において配列番号１と呼ぶヒトＣＦＢ ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１７１０．５）もしくは本明細書において配列番号２と呼ぶヒトＣＦＢゲノム配列（ヌクレオチド３１８５２０００から３１８６１０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００７５９２．１５）、またはその両方を標的とする。「ｎ／ａ」は、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定遺伝子配列を１００％の相補性では標的としないことを示す。
Figure 0007001663000457
Figure 0007001663000458
Figure 0007001663000459
Figure 0007001663000460
Figure 0007001663000461
実施例１２１：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐＧ２細胞におけるヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）のアンチセンス阻害
ヒト補体Ｂ因子（ＣＦＢ）核酸を標的とする新たなアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、ＣＦＢ ｍＲＮＡに対するそれらの効果をインビトロで試験した。これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドを、培養条件が類似する一連の実験で試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。１ウェルあたり２０，０００細胞の密度の培養ＨｅｐＧ２細胞を、エレクトロポレーションにより、５００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約２４時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５９を使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
以下の表に示す新設計のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドとして、または５－８－５ＭＯＥ、５－９－５ＭＯＥ、５－１０－５ＭＯＥ、６－７－６ＭＯＥ、３－１０－５ＭＯＥ、もしくは６－８－６ＭＯＥギャップマーとして設計された。
前記デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドは１６ヌクレオシド長であり、そのヌクレオシドはＭＯＥ糖修飾、（Ｓ）－ｃＥｔ糖修飾、またはデオキシ修飾のいずれかを有する。「化学的特徴」欄には各オリゴヌクレオチドの糖修飾を記載する。「ｋ」は（Ｓ）－ｃＥｔ糖修飾を示し、「ｄ」はデオキシリボースを示し、「ｅ」はＭＯＥ修飾を示す。
５－８－５ＭＯＥギャップマーは１８ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは８個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５－９－５ＭＯＥギャップマーは１９ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは９個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５－１０－５ＭＯＥギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。３－１０－５ＭＯＥギャップマーは１８ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ３個及び５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。６－７－６ＭＯＥギャップマーは
１９ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは７個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ６個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。６－８－６ＭＯＥギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは８個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ６個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５’ウイングセグメント中の各ヌクレオシド及び３’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドは２’－ＭＯＥ修飾を有する。ヌクレオシド間連結部は、各ギャップマーの全体を通して、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結部である。シトシン残基は、各ギャップマーの全体を通してすべて、５－メチルシトシンである。
「開始部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も３’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示す各ギャップマーは、本明細書において配列番号１と呼ぶヒトＣＦＢ ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１７１０．５）もしくは本明細書において配列番号２と呼ぶヒトＣＦＢゲノム配列（ヌクレオチド３１８５２０００から３１８６１０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００７５９２．１５）、またはその両方を標的とする。「ｎ／ａ」は、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定遺伝子配列を１００％の相補性では標的としないことを示す。
Figure 0007001663000462
Figure 0007001663000463
Figure 0007001663000464
Figure 0007001663000465
Figure 0007001663000466
Figure 0007001663000467
Figure 0007001663000468
Figure 0007001663000469
Figure 0007001663000470
Figure 0007001663000471
Figure 0007001663000472
Figure 0007001663000473
Figure 0007001663000474
Figure 0007001663000475
Figure 0007001663000476
Figure 0007001663000477
Figure 0007001663000478
Figure 0007001663000479
Figure 0007001663000480
Figure 0007001663000481
Figure 0007001663000482
Figure 0007001663000483
Figure 0007001663000484
Figure 0007001663000485
Figure 0007001663000486
Figure 0007001663000487
実施例１２２：５－１０－５ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＣＦＢの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＣＦＢ ｍＲＮＡのインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、ＨｅｐＧ２細胞において、さまざまな用量で試験した。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、以下の表に指定するとおり、０．３１３μＭ、０．６２５μＭ、１．２５μＭ、２．５０μＭ、５．００μＭ、または１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、ＲＮＡを細胞から単離し、ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５９を使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＣＦＢ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に低減した。
Figure 0007001663000488
実施例１２３：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＣＦＢの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＣＦＢ ｍＲＮＡのインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、ＨｅｐＧ２細胞において、さまざまな用量で試験した。類似する培養条件を使用するいくつかの実験でアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、以下の表に指定するとおり、０．０８μＭ、０．２５μＭ、０．７４μＭ、２．２２μＭ、６．６７μＭ、及び２０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、ＲＮＡを細胞から単離し、ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５９を使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＣＦＢ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に低減した。
Figure 0007001663000489
Figure 0007001663000490
Figure 0007001663000491
Figure 0007001663000492
Figure 0007001663000493
Figure 0007001663000494
実施例１２４：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＣＦＢの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＣＦＢ ｍＲＮＡのインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、ＨｅｐＧ２細胞において、さまざまな用量で試験した。類似する培養条件を使用するいくつかの実験でアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、以下の表に指定するとおり、０．０６μＭ、０．２５μＭ、１．００μＭ、及び４．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、ＲＮＡを細胞から単離し、ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５９を使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＣＦＢ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に低減した。
Figure 0007001663000495
Figure 0007001663000496
Figure 0007001663000497
Figure 0007001663000498
Figure 0007001663000499
実施例１２５：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＣＦＢの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＣＦＢ ｍＲＮＡのインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、ＨｅｐＧ２細胞において、さまざまな用量で試験した。加えて、もう一つのデオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドＩＳＩＳ５８８８７０と同じ配列（ＣＴＣＣＴＴＣＣＧＡＧＴＣＡＧＣ、配列番号５４９）及び標的領域（標的開始部位は配列番号１の２１９５と配列番号２の６９８３）を持つデオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドの一つ、ＩＳＩＳ５９４４３０を設計した。ＩＳＩＳ５９４４３０は３－１０－３（Ｓ）－ｃＥｔギャップマーである。
細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、以下の表に指定するとおり、０．０１μＭ、０．０４μＭ，０．１２μＭ、０．３７μＭ、１．１１μＭ、３．３３μＭ、及び１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、ＲＮＡを細胞から単離し、ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５９を使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＣＦＢ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に低減した。
Figure 0007001663000500
実施例１２６：ヒトＣＦＢを標的とするＭＯＥギャップマーのＣＤ１マウスにおける耐容性
ＣＤ１（登録商標）マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，マサチューセッツ州）は多目的マウスモデルであり、安全性及び効力の試験にはよく利用されている。このマウスを上述の試験から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、さまざまな血漿中化学マーカーのレベルの変化について評価した。
試験１（５－１０－５ＭＯＥギャップマーを使用）
７週齢雄ＣＤ１マウスの群に、週に１回、６週にわたって１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。１つの雄ＣＤ１マウス群には、週１回、６週にわたってＰＢＳを皮下注射した。１つのマウス群には、週１回、６週にわたって、１００ｍｇ／ｋｇの対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３（ＣＣＴＴＣＣＣＴＧＡＡＧＧＴＴＣＣＴＣＣ，本明細書では配列番号８０９と呼ぶ、既知のマウス標的がない５－１０－５ＭＯＥギャップマー）を皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にマウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000501
重量
４０日目にマウスの屠殺に先だってマウスの体重を測定した。肝臓、腎臓、及び膵臓の臓器重量もマウスの屠殺後に測定した。結果を以下の表に掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで重量を変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000502
試験２（５－１０－５ＭＯＥギャップマーを使用）
６～８週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週１回、６週にわたって１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。２つの雄ＣＤ１マウス群には、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。１つのマウス群には、週１回、６週にわたって、１００ｍｇ／ｋｇの対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３を皮下注射した。マウスを最後の投薬の４８時間後に安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、アルブミン、及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000503
重量
４２日目にマウスの体重を測定した。４５日目にマウスを屠殺した後、肝臓、腎臓、及び膵臓の臓器重量も測定した。結果を以下の表に掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで重量を変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000504
試験３（５－１０－５ＭＯＥギャップマーを使用）
６～８週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週１回、６週にわたって、１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。２つの雄ＣＤ１マウス群には、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。マウスを最後の投薬の４８時間後に安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、アルブミン、及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000505
重量
４２日目にマウスの体重を測定した。４２日目にマウスを屠殺した後、肝臓、腎臓、及び膵臓の臓器重量も測定した。結果を以下の表に掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで重量を変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000506
試験４（（Ｓ）ｃＥｔギャップマーならびにデオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドを使用）
１０週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、５０ｍｇ／ｋｇの、上述の試験で得たＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、週１回、６週にわたって、皮下注射した。加えて、２つのオリゴヌクレオチドＩＳＩＳ５９４４３１及びＩＳＩＳ５９４４３２を３－１０－３（Ｓ）－ｃＥｔギャップマーとして設計し、それらもこの試験で調べた。ＩＳＩＳ５９４４３１（ＡＣＣＴＣＣＴＴＣＣＧＡＧＴＣＡ、配列番号５５０）は、デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔギャップマーであるＩＳＩＳ５８８８７１と同じ領域（標的開始部位は配列番号１の２１９７及び配列番号２の６９８５）を標的とする。ＩＳＩＳ５９４４３２（ＴＧＧＴＣＡＣＡＴＴＣＣＣＴＴＣ、配列番号５４２）は、デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔギャップマーであるＩＳＩＳ５８８８７２と同じ領域（標的開始部位は配列番号１の１５４及び配列番号２の１８７５）を標的とする。
２つの雄ＣＤ１マウス群には、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。マウスを最後の投薬の４８時間後に安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、アルブミン、クレアチニン、及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000507
重量
３９日目にマウスの体重を測定した。４２日目にマウスを屠殺した後、肝臓、腎臓、及び膵臓の臓器重量も測定した。結果を以下の表に掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで重量を変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000508
試験５（ＭＯＥギャップマー、（Ｓ）ｃＥｔギャップマーならびにデオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドを使用）
８～９週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週１回、６週にわたって、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。２つの雄ＣＤ１マウス群には、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。マウスを最後の投薬の４８時間後に安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、アルブミン、クレアチニン、及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000509
重量
４０日目にマウスの体重を測定した。４２日目にマウスを屠殺した後、肝臓、腎臓、及び膵臓の臓器重量も測定した。結果を以下の表に掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで重量を変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000510
試験６（デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドを使用）
８～９週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週１回、６週にわたって、５０ｍｇ／ｋｇのデオキシ、ＭＯＥ、及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドを皮下注射した。２つの雄ＣＤ１マウス群には、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。マウスを最後の投薬の４８時間後に安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、アルブミン、クレアチニン、ビリルビン、及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000511
重量
４０日目にマウスの体重を測定した。４５日目にマウスを屠殺した後、肝臓、腎臓、及び膵臓の臓器重量も測定した。結果を以下の表に掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで重量を変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000512
試験７（ＭＯＥギャップマーならびにデオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドを使用）
８～９週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週１回、６週にわたって、１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。１つの雄ＣＤ１マウス群に、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。マウスを最後の投薬の４８時間後に安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、アルブミン、クレアチニン、及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000513
重量
４４日目にマウスの体重を測定した。４９日目にマウスを屠殺した後、肝臓、腎臓、及び膵臓の臓器重量も測定した。結果を以下の表に掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで重量を変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000514
試験８（ＭＯＥギャップマー、デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチド、ならびに（Ｓ）－ｃＥｔギャップマーを使用）
８～９週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週１回、６週にわたって、１００ｍｇ／ｋｇのＭＯＥギャップマー、または５０ｍｇ／ｋｇのデオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドもしくは（Ｓ）－ｃＥｔギャップマーを皮下注射した。１つの雄ＣＤ１マウス群には、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。マウスを最後の投薬の４８時間後に安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、アルブミン、クレアチニン、及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。
Figure 0007001663000515
重量
３６日目にマウスの体重を測定した。４３日目にマウスを屠殺した後、肝臓、腎臓、及び膵臓の臓器重量も測定した。臓器重量に関する結果を体重に対する比として表し、ＰＢＳ対照比に対して標準化した。
Figure 0007001663000516
サイトカインアッセイ
すべてのマウス群から得た血液を、ＩＬ－６、ＭＤＣ、ＭＩＰ１β、ＩＰ－１０、ＭＣＰ１、ＭＩＰ－１α、及びＲＡＮＴＥＳなどといったさまざまなサイトカインの測定のために、Ａｎｔｅｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓに送った。結果を表５４に掲載する。
Figure 0007001663000517
血液学的アッセイ
すべてのマウス群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）の測定、ならびにＷＢＣ、ＲＢＣ、及び血小板などのさまざまな血球及び総ヘモグロビン（Ｈｂ）含有量の測定のために、Ａｎｔｅｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓに送った。結果を表５５に掲載する。
Figure 0007001663000518
実施例１２７：ヒトＣＦＢを標的とするアンチオリゴヌクレオチドのスプレーグ・ドーリーラットにおける耐容性
スプレーグ・ドーリーラットは、安全性や効力の評価に使用される多目的モデルである。これらのラットを、上記実施例で述べた試験によって得たＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、さまざまな血漿中化学マーカーのレベルの変化を評価した。
試験１（５－１０－５ＭＯＥギャップマーを使用）
７～８週齢の雄スプレーグ・ドーリーラットを１２時間明／暗周期で飼育し、Ｐｕｒｉｎａ通常ラット用飼料ダイエット５００１を不断給餌した。スプレーグ・ドーリーラット各４匹の群に、週１回、６週にわたって、１００ｍｇ／ｋｇの５－１０－５ＭＯＥギャップマーを皮下注射した。ラット６匹の対照群１つには、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後に、ラットを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
肝臓機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼの血漿中レベルを測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）とＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中レベルを測定し、結果をＩＵ／Ｌの単位で表して、以下の表に掲載する。肝臓機能のいずれかのマーカーのレベルをアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000519
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、血中尿素窒素（ＢＵＮ）及びクレアチニンの血漿中レベルを測定した。結果をｍｇ／ｄＬの単位で表して、以下の表に掲載する。腎臓機能マーカーのいずれかのレベルをアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000520
重量
体重測定は３９日目に行った。４２日目の試験終了時に肝臓、心臓、脾臓及び腎臓の重量を測定した。それらを以下の表に掲載する。臓器重量をアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000521
試験２（デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドを使用）
９～１０週齢の雄スプレーグ・ドーリーラットを１２時間明／暗周期で飼育し、Ｐｕｒｉｎａ通常ラット飼料ダイエット５００１を不断給餌した。スプレーグ・ドーリーラット各４匹の群に、週１回、６週にわたって、１００ｍｇ／ｋｇのデオキシ、ＭＯＥ、及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドを皮下注射した。ラット各３匹の対照群２つには、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後に、ラットを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
肝臓機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、４２日目に、トランスアミナーゼの血漿中レベルを測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）とＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）及びアルブミンの血漿中レベルを測定し、それらの結果を以下の表に掲載する。肝臓機能のいずれかのマーカーのレベルをアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000522
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、血中尿素窒素（ＢＵＮ）及びクレアチニンの血漿中レベルを測定した。結果をｍｇ／ｄＬの単位で表して、以下の表に掲載する。腎臓機能マーカーのいずれかのレベルをアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000523
重量
体重測定は３９日目に行った。４２日目の試験終了時に肝臓、心臓、脾臓及び腎臓の重量を測定した。それらを以下の表に掲載する。臓器重量をアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000524
試験３（ＭＯＥギャップマーを使用）
９～１０週齢の雄スプレーグ・ドーリーラットを１２時間明／暗周期で飼育し、Ｐｕｒ
ｉｎａ通常ラット飼料ダイエット５００１を不断給餌した。スプレーグ・ドーリーラット各４匹の群に、週１回、６週にわたって、１００ｍｇ／ｋｇのＭＯＥギャップマーを皮下注射した。ラット６匹の対照群１つには、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後に、ラットを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
肝臓機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、４３日目に、トランスアミナーゼの血漿中レベルを測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）とＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中レベルを測定し、結果をＩＵ／Ｌの単位で表して、以下の表に掲載する。肝臓機能のいずれかのマーカーのレベルをアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000525
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、血中尿素窒素（ＢＵＮ）及びクレアチニンの血漿中レベルを測定した。結果をｍｇ／ｄＬの単位で表して、以下の表に掲載する。腎臓機能マーカーのいずれかのレベルをアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000526
重量
体重測定は３９日目に行った。４２日目の試験終了時に肝臓、心臓、脾臓及び腎臓の重量を測定した。それらを以下の表に掲載する。臓器重量をアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000527
試験４（ＭＯＥギャップマーを使用）
９～１０週齢の雄スプレーグ・ドーリーラットを１２時間明／暗周期で飼育し、Ｐｕｒｉｎａ通常ラット飼料ダイエット５００１を不断給餌した。スプレーグ・ドーリーラット各４匹の群に、週１回、６週にわたって、１００ｍｇ／ｋｇのＭＯＥギャップマーを皮下注射した。ラット６匹の対照群１つには、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後に、ラットを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
肝臓機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、４２日目に、トランスアミナーゼの血漿中レベルを測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）とＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中レベルを測定し、結果をＩＵ／Ｌの単位で表して、以下の表に掲載する。肝臓機能のいずれかのマーカーのレベルをアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000528
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、血中尿素窒素（ＢＵＮ）及びクレアチニンの血漿中レベルを測定した。結果をｍｇ／ｄＬの単位で表して、以下の表に掲載する。腎臓機能マーカーのいずれかのレベルをアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000529
重量
体重測定は３９日目に行った。４２日目の試験終了時に肝臓、心臓、脾臓及び腎臓の重量を測定した。それらを以下の表に掲載する。臓器重量をアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000530
試験５（ＭＯＥギャップマーならびにデオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドを使用）
９～１０週齢の雄スプレーグ・ドーリーラットを１２時間明／暗周期で飼育し、Ｐｕｒｉｎａ通常ラット飼料ダイエット５００１を不断給餌した。スプレーグ・ドーリーラット各４匹の群に、週１回、６週にわたって、１００ｍｇ／ｋｇのＭＯＥギャップマーまたは５０ｍｇ／ｋｇのデオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドを皮下注射した。ラット４匹の対照群１つには、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後に、ラットを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
肝臓機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、４２日目に、トランスアミナーゼの血漿中レベルを測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）とＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中レベルを測定し、結果をＩＵ／Ｌの単位で表して、以下の表に掲載する。肝臓機能のいずれかのマーカーのレベルをアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000531
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、血中尿素窒素（ＢＵＮ）及びクレアチニンの血漿中レベル及び尿中レベルを測定した。結果をｍｇ／ｄＬの単位で表して以下の表に掲載する。腎臓機能マーカーのいずれかのレベルをアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000532
Figure 0007001663000533
重量
体重測定は３９日目に行った。４２日目の試験終了時に肝臓、心臓、脾臓及び腎臓の重量を測定した。それらを以下の表に掲載する。臓器重量をアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000534
試験６（ＭＯＥギャップマー、デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチド、ならびに（Ｓ）－ｃＥｔギャップマーを使用）
雄ラットを１２時間明／暗周期で飼育し、Ｐｕｒｉｎａ通常ラット飼料ダイエット５００１を不断給餌した。ラット各４匹の群に、週１回、６週にわたって、１００ｍｇ／ｋｇのＭＯＥギャップマーまたは５０ｍｇ／ｋｇのデオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）－ｃＥｔオリゴヌクレオチドもしくは（Ｓ）－ｃＥｔギャップマーを皮下注射した。ラット４匹の対照群１つには、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後に、ラットを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
肝臓機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、４２日目に、トランスアミナーゼの血漿中レベルを測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）とＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中レベルを測定し、結果をＩＵ／Ｌの単位で表して、以下の表に掲載する。
Figure 0007001663000535
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、総タンパク質及びクレアチニンの尿中レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。腎臓機能マーカーのいずれかのレベルをアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
Figure 0007001663000536
重量
体重測定は３９日目に行った。４２日目の試験終了時に肝臓、心臓、脾臓及び腎臓の重量を測定した。それらを以下の表に掲載する。臓器重量に関する結果を体重に対する比として表し、ＰＢＳ対照比に対して標準化した。
Figure 0007001663000537
実施例１２８：ｈＣＦＢマウス中のＣＦＢ ｍＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの効力
選ばれた化合物を、ヒトＣＦＢトランスジェニックマウス樹立系統＃６における効力について試験した。ヒトＣＦＢ遺伝子は第６染色体の位置３１９１３７２１－３１９１９８６１に位置する。ヒトＣＦＢ遺伝子を発現するトランスジェニックマウスを作製するために、ＣＦＢ配列を含有するフォスミド（ＡＢＣ１４－５０９３３２００Ｃ２３）を選択した。Ｃｌａ Ｉ（３１９２６６１２）及びＡｇｅ Ｉ（３１９２６８１５）制限酵素を使って、ＣＦＢ遺伝子を含有する前核注入用の２２，１２７ｂｐフラグメントを生成させた。ＰｖｕＩを使った制限酵素解析によってＤＮＡを確認した。前記２２，１２７ｂｐのＤＮＡフラグメントをＣ５７ＢＬ／６ＮＴａｃ胚に注入した。６つの陽性ファウンダーを育てた。肝臓ヒトＣＦＢ ｍＲＮＡを発現するファウンダー＃６を第３世代まで交雑した。第３世代マウスからの子孫を使って、ヒトＣＦＢ ＡＳＯをヒトＣＦＢ ｍＲＮＡの低減について評価した。
処置
マウス各３匹の群に、第１週は週に２回、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射し、次に、さらに３週にわたって、週に１回、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを投与した。マウス４匹の対照群１つに、第１週は週に２回、その後さらに３週にわたって週に１回、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にマウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
ＲＮＡ分析
投薬期間の終了時に、ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルのリアルタイムＰＣＲ分析用に、肝臓と腎臓からＲＮＡを抽出した。ヒトＣＦＢ ｍＲＮＡレベルはヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５９を使って測定した。ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルをＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登
録商標）及びハウスキーピング遺伝子シクロフィリンに対して標準化した。結果は対照と比較したＣＦＢ ｍＲＮＡ発現の阻害パーセントとして算出した。すべてのアンチセンスオリゴヌクレオチドが肝臓においてヒトＣＦＢ ｍＲＮＡレベルの阻害を達成した。
Figure 0007001663000538
実施例１２９：マウスＣＦＢのインビボアンチセンス阻害
マウスＣＦＢ ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００８１９８．２，本明細書には配列番号５として組み込まれる）を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドをいくつか設計した。各オリゴヌクレオチドの標的開始部位と配列を以下の表に記載する。以下の表のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは５－１０－５ＭＯＥギャップマーとして設計された。これらのギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’－デオキシヌクレオシドで構成され、両側（５’側及び３’側）にそれぞれ５ヌクレオシドを含むウイングが隣接している。５’ウイングセグメント中の各ヌクレオシド及び３’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドは２’－ＭＯＥ修飾を有する。ヌクレオシド間連結部は、各ギャップマーの全体を通して、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結部である。シトシン残基は、各ギャップマーの全体を通してすべて、５－メチルシトシンである。
Figure 0007001663000539
処置
Ｃ５７ＢＬ／６マウス各４匹の群に、３週にわたる週１回の投与で、５０ｍｇ／ｋｇの
ＩＳＩＳ５１６２６９、ＩＳＩＳ５１６２７２、ＩＳＩＳ５１６３２３、ＩＳＩＳ５１６３３０、またはＩＳＩＳ５１６３４１を注射した。対照マウス群には、３週にわたる週１回の投与で、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を注射した。
ＣＦＢ ＲＮＡ分析
試験の最後に、プライマープローブセットＲＴＳ３４３０（フォワード配列ＧＧＧＣＡＡＡＣＡＧＣＡＡＴＴＴＧＴＧＡ，本明細書では配列番号８１６と呼ぶ；リバース配列ＴＧＧＣＴＡＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＴＧＴ，本明細書では配列番号８１７と呼ぶ；プローブ配列ＣＴＧＧＡＴＡＣＴＧＴＣＣＣＡＡＴＣＣＣＧＧＴＡＴＴＣＣＸ，本明細書では配列番号８１８と呼ぶ）を用いるＣＦＢのリアルタイムＰＣＲ分析用に、肝臓組織からＲＮＡを抽出した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）を使ってｍＲＮＡレベルを標準化した。以下の表に示すとおり、一部のアンチセンスオリゴヌクレオチドはＰＢＳ対照と比較してマウスＣＦＢの低減を達成した。結果を、対照と比較したＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
Figure 0007001663000540
タンパク質分析
ヤギ抗ＣＦＢ抗体（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いるウェスタンブロットによって、腎臓、肝臓、血漿、及び眼におけるＣＦＢタンパク質レベルを測定した。結果を、ＰＢＳ対照と比較したＣＦＢの阻害パーセントとして表す。「ｎ／ａ」は，当該試料では測定が行われなかったことを示す。以下の表に示すとおり、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによるＣＦＢのアンチセンス阻害は、さまざまな組織においてＣＦＢタンパク質の低減をもたらした。以下の表に示すとおり、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの全身性投与は、眼におけるＣＦＢレベルを低減するのに有効であった。
Figure 0007001663000541
実施例１３０：マウスＣＦＢの用量依存的アンチセンス阻害
Ｃ５７ＢＬ／６マウス各４匹の群に、６週にわたる週１回の投与で、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、または１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ５１６２７２、及びＩＳＩＳ５１６３２３を注射した。別の２つのマウス群に、６週にわたる週１回の投与で、１００ｍｇ／
ｋｇのＩＳＩＳ５１６３３０またはＩＳＩＳ５１６３４１を注射した。２つの対照マウス群には、６週にわたる週１回の投与で、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を注射した。
ＣＦＢ ＲＮＡ分析
プライマープローブセットＲＴＳ３４３０を用いるＣＦＢのリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓組織と腎臓組織からＲＮＡを抽出した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）を使ってｍＲＮＡレベルを標準化した。以下の表に示すとおり、アンチセンスオリゴヌクレオチドはＰＢＳ対照との比較でマウスＣＦＢの用量依存的低減を達成した。結果を、対照と比較したＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
Figure 0007001663000542
タンパク質分析
ヤギ抗ＣＦＢ抗体（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いるウェスタンブロットにより、血漿中のＣＦＢタンパク質レベルを測定した。以下の表に示すように、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによるＣＦＢのアンチセンス阻害は、ＣＦＢタンパク質の低減をもたらした。結果を、ＰＢＳ対照と比較したＣＦＢの阻害パーセントとして表す。「ｎ／ａ」は、当該試料で測定が行われなかったことを示す。
眼におけるＣＦＢタンパク質レベルもウェスタンブロットで測定した。すべての処置群が、９５％のＣＦＢ阻害を示し、一部の試料測定値はアッセイの検出レベル未満であった。
Figure 0007001663000543
実施例１３１：ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスモデルにおけるＣＦＢのアンチセンス阻害の効果
ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１は狼瘡の最も古い古典的モデルであり、これらのマウスは、狼瘡患者の表現型に匹敵する重度の狼瘡様表現型を発症する（Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ，Ａ．Ｎ． ａｎｄ Ｄｉｘｏｎ，Ｆ．Ｊ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．３７、ｐｐ．２６９－３９０，１９８５）．これらの狼瘡様表現型には、リンパ節腫脹、脾腫、抗ｄｓＤＮＡ ＩｇＧ（その大半はＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ３である）を含む血清中抗核自己抗体（ＡＮＡ）の上昇、及び５～６月齢で明白になり１０～１２月齢で腎不全及び死亡につながる免疫複合体媒介性糸球体腎炎（ＧＮ）が含まれる。
試験１
ＣＦＢを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置が、前記マウスモデルにおける腎臓病理を改善することを実証するための試験を行った。１７週齢の雌ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。マウス各１６匹の群に用量１００μｇ／ｋｇ／週のＩＳＩＳ５１６２７２またはＩＳＩＳ５１６３２３を２０週にわたって与えた。マウス１６匹のもう一つの群には、用量１００μｇ／ｋｇ／週の対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３を２０週にわたって与えた。マウス１０匹のもう一つの群にはＰＢＳを２０週にわたって投与し、それを対照群として、他のすべての群をこの対照群と比較した。最後の注射を行った４８時間後に、最終エンドポイントを収集した。
ＣＦＢ ＲＮＡ分析
プライマープローブセットＲＴＳ３４３０を用いるＣＦＢのリアルタイムＰＣＲ分析用に、肝臓組織と腎臓組織からＲＮＡを抽出した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）を使ってｍＲＮＡレベルを標準化した。以下の表に示すとおり、一部のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＰＢＳ対照に対してマウスＣＦＢの低減を達成した。結果を、対照と比較したＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
Figure 0007001663000544
タンパク尿
このマウスモデルでは６０％の動物にタンパク尿が予想される。臨床分析装置を使って総タンパク質対クレアチニン比を算出することにより、重症タンパク尿の累積発生率を測定した。結果を以下の表に掲載する。これらの結果は、ＣＦＢを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置が、ＰＢＳ対照マウス及び対照オリゴヌクレオチド処置マウスと比較して、マウスにおけるタンパク質尿の低減を達成したことを実証している。
Figure 0007001663000545
生存率
マウスの数を処置開始時に記録し、２０週目に再び記録することにより、マウスの生存率を監視した。結果を以下の表に掲載する。これらの結果は、ＣＦＢを標的とするアンチオリゴヌクレオチドによる処置が、マウスの生存率を、ＰＢＳ対照マウス及び対照オリゴヌクレオチド処置マウスと比較して増加させたことを実証している。
Figure 0007001663000546
糸球体沈着
腎臓の糸球体におけるＣ３沈着及びＩｇＧ沈着の量を、抗Ｃ３抗体を用いる免疫組織化学によって測定した。結果を以下の表に掲載する。これらの結果は、ＣＦＢを標的とするアンチオリゴヌクレオチドによる処置が、ＰＢＳ対照マウス及び対照オリゴヌクレオチド処置マウスと比較して、腎臓糸球体におけるＣ３沈着の低減とＩｇＧ沈着の低減をどちらも達成したことを実証している。
Figure 0007001663000547
試験２
１６週齢の雌ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。マウス１０匹の群に、用量１００μｇ／ｋｇ／週のＩＳＩＳ５１６３２３を１２週にわたって与えた。マウス１０匹のもう一つの群には、用量１００μｇ／ｋｇ／週の対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３を１２週にわたって与えた。マウス１０匹のもう一つの群には、ＰＢＳを１２週にわたって投与し、それを対照群として、他のすべての群をこの対照群と比較した。最後の注射を行った４８時間後に、最終エンドポイントを収集した。
ＣＦＢ ＲＮＡ分析
プライマープローブセットＲＴＳ３４３０を用いるＣＦＢのリアルタイムＰＣＲ分析用に、肝臓組織と腎臓組織からＲＮＡを抽出した。以下の表に示すように、ＩＳＩＳ５１６３２３による処置はＰＢＳ対照に対してマウスＣＦＢの低減を達成した。結果を、対照と比較したＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
Figure 0007001663000548
タンパク尿
尿中総タンパク質対クレアチニン比を測定すると共に、総ミクロアルブミンレベルを測定することにより、重症タンパク尿の累積発生率を評価した。結果を以下の表に掲載する。これらの結果は、ＣＦＢを標的とするアンチオリゴヌクレオチドによる処置が、ＰＢＳ対照マウス及び対照オリゴヌクレオチド処置マウスと比較して、マウスにおけるタンパク尿を低減したことを実証している。
Figure 0007001663000549
Figure 0007001663000550
生存率
マウスの数を処置開始時に記録し、1２週目に再び記録することにより、マウスの生存
率を監視した。結果を以下の表に掲載する。これらの結果は、ＣＦＢを標的とするアンチオリゴヌクレオチドによる処置が、マウスにおける生存率を、ＰＢＳ対照マウス及び対照オリゴヌクレオチド処置マウスと比較して増加させたことを実証している。
Figure 0007001663000551
実施例１３２：ＭＲＬマウスモデルにおけるＣＦＢのアンチセンス阻害の効果
ＭＲＬ／ｌｐｒループス腎炎マウスモデルは、二重陰性（ＣＤ４－ＣＤ８－）及びＢ２２０＋ Ｔ細胞の蓄積に起因するリンパ節腫脹を特徴とするＳＬＥ様表現型を発症する。これらのマウスは死亡率の増進を呈する。加えて、これらのマウスは循環免疫グロブリン濃度が高く、それらには、ＡＮＡ、抗ｓｓＤＮＡ、抗ｄｓＤＮＡ、抗Ｓｍ、及びリウマトイド因子などといった自己抗体レベルの上昇も含まれていて、多量の免疫複合体をもたらす（Ａｎｄｒｅｗｓ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１４８：１１９８－１２１５，１９７８）。
処置
ＣＦＢを標的とするアンチオリゴヌクレオチドによる処置が前記マウスモデルにおける腎病理を逆転させるかどうかを調べるための試験を行った。１４週齢の雌ＭＲＬ／ｌｐｒマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。マウス１０匹の１群に用量５０μｇ／ｋｇ／週のＩＳＩＳ５１６３２３を７週にわたって与えた。マウス１０匹のもう一つの群には用量５０μｇ／ｋｇ／週の対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３を７週にわたって与えた。マウス１０匹のもう一つの群にはＰＢＳを７週にわたって投与し、それを対照群として、他のすべての群をこの対照群と比較した。最後の注射を行った４８時間後に、最終エンドポイントを収集した。
ＣＦＢ ＲＮＡ分析
プライマープローブセットＲＴＳ３４３０を用いるＣＦＢのリアルタイムＰＣＲ用に、肝臓組織からＲＮＡを抽出した。以下の表に示すとおり、ＩＳＩＳ５１６３２３は、ＰＢＳ対照と比較してＣＦＢを低減した。結果を、対照と比較したＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
Figure 0007001663000552
腎病理
腎病理を２つの方法で評価した。腎臓の組織切片をヘマトキシリンとエオシンで染色した。ＰＢＳ対照は、糸球体硬化症の一症状である多数の糸球体半月体及び管状円柱（ｍｕｌｔｉｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｃｒｅｓｃｅｎｔｓ ｔｕｂｕｌａｒ ｃａｓｔｓ）の存在を示す。これに対し、ＩＳＩＳ５１６３２３で処置したマウスからの切片には、半月体及び管状円柱（ｃｒｅｓｃｅｎｔｓ ｔｕｂｕｌａｒ ｃａｓｔｓ）が存在せず、ボウマン嚢のごくわずかな線維性変化、中等度～重度の分節性メサンギウム細胞増殖及び糸球体基底膜肥厚を示した。
抗Ｃ３抗体を用いる免疫組織化学によって腎臓におけるＣ３の蓄積も評価した。１腎臓あたり１０個の糸球体をキャプチャし陽性Ｃ３染色の強度を算出することによって計算される強度スコア化システムにより、全腎臓Ｃ３免疫組織化学強度スコアを算出した。結果を以下の表に掲載する。これらの結果は、ＩＳＩＳ５１６３２３による処置が腎Ｃ３蓄積を対照群と比較して低減したことを実証している。
Figure 0007001663000553
血漿中Ｃ３レベル
ＣＦＢの低減は代替補体経路の活性化を阻害する。これは、Ｃ３消費を防止し、血漿中Ｃ３レベルの見掛け上の上昇につながる。終末採血により、臨床分析装置で血漿中Ｃ３レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。これらの結果は、ＩＳＩＳ５１６３２３による処置が血漿中のＣ３レベルを対照群と比較して増加させたこと（ｐ＜０．００１）を実証している。
Figure 0007001663000554
 これらの結果は、ＣＦＢを標的とするアンチオリゴヌクレオチドによる処置が狼瘡マウスモデルにおける腎病理を逆転させることを示している。
実施例１３３：ＣＦＨ ＨｅｔマウスモデルにおけるＣＦＢのアンチセンス阻害の効果
ＣＦＨヘテロ接合（ＣＦＨ Ｈｅｔ，ＣＦＨ＋／－）マウスモデルは、突然変異型Ｈ因子タンパク質を完全長マウスタンパク質と共に発現する（Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ，Ｍ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２００７．２０４：１２４９－５６）。これらのマウスでは、６月齢までは腎組織構造が正常な状態を保っている。
試験１
６週齢のＣＦＨ＋／－マウス各８匹の群に用量７５ｍｇ／ｋｇ／週のＩＳＩＳ５１６３２３またはＩＳＩＳ５１６３４１を６週にわたって与えた。マウス８匹のもう一つの群には用量７５ｍｇ／ｋｇ／週の対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３を６週にわたって与えた。マウス８匹のもう一つの群にはＰＢＳを６週にわたって投与し、それを対照群として、他のすべての群をこの対照群と比較した。最後の注射を行った４８時間後に、最終エンドポイントを収集した。
ＣＦＢ ＲＮＡ分析
プライマープローブセットＲＴＳ３４３０を用いるＣＦＢのリアルタイムＰＣＲ分析用に、肝臓組織と腎臓組織からＲＮＡを抽出した。以下の表に示すとおり、アンチセンスオ
リゴヌクレオチドは、ＰＢＳ対照と比較して、ＣＦＢを低減した。結果を、対照と比較したＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
Figure 0007001663000555
血漿中Ｃ３レベル
ＣＦＢの低減は代替補体経路の活性化を阻害する。これは、Ｃ３消費を防止し、血漿中Ｃ３レベルの見掛け上の上昇につながる。終末採血により、臨床分析装置で、血漿中Ｃ３レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。これらの結果は、ＩＳＩＳ５１６３２３による処置が血漿中のＣ３レベルを正常レベルまで増加させたことを実証している。
Figure 0007001663000556
試験２
ＣＦＨ＋／－マウス各５匹の群に、用量１２．５ｍｇ／ｋｇ／週、２５ｍｇ／ｋｇ／週、５０ｍｇ／ｋｇ／週、７５ｍｇ／ｋｇ／週、または１００ｍｇ／ｋｇ／週のＩＳＩＳ５１６３２３またはＩＳＩＳ５１６３４１を、６週にわたって与えた。マウス５匹のもう一つの群には用量７５μｇ／ｋｇ／週の対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３を６週にわたって与えた。マウス５匹のもう一つの群には、ＰＢＳを６週にわたって投与し、それを対照群として、他のすべての群をこの対照群と比較した。最後の注射を行った４８時間後に、最終エンドポイントを収集した。
ＣＦＢ ＲＮＡ分析
プライマープローブセットＲＴＳ３４３０を用いるＣＦＢのリアルタイムＰＣＲ分析用に、肝臓組織と腎臓組織からＲＮＡを抽出した。以下の表に示すとおり、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＣＦＢをＰＢＳ対照と比較して用量依存的に低減した。結果を、対照と比較したＣＦＢの阻害パーセントとして表す。
Figure 0007001663000557
血漿中Ｃ３レベル
ＣＦＢの低減は代替補体経路の活性化を阻害する。これは、Ｃ３消費を防止し、血漿中Ｃ３レベルの見掛け上の上昇につながる。終末血漿収集により、臨床分析装置で血漿中Ｃ３レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。これらの結果は、ＣＦＢを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる処置が、血漿中のＣ３レベルを増加させることを実証している。
Figure 0007001663000558
実施例１３４：ヒトＣＦＢを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの、カニクイザルにおける効果
カニクイザルを、上記実施例で述べた試験から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの効力と耐容性、ならびに肝臓
及び腎臓におけるそれらの薬物動態プロファイルを評価した。
この試験を企画した時点で、国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）データベースにカニクイザルゲノム配列がなかったので、カニクイザル遺伝子配列との交差反応性を確認することはできなかった。その代わりに、カニクイザルに使用するＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列を、ホモロジーについて、アカゲザル配列と比較した。アカゲザル配列に対してホモロジーを有するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドはカニクイザル配列とも十分に交差反応性であると予想される。試験したヒトアンチセンスオリゴヌクレオチドはアカゲザルゲノム配列（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＷ＿００１１１６４８６．１，ヌクレオチド５３６０００から５４５０００までを切り出したもの，本明細書では配列番号３と呼ぶ）と交差反応性である。ヒトオリゴヌクレオチドとアカゲザル配列の間の相補性が大きいほど、そのヒトオリゴヌクレオチドがアカゲザル配列と交差反応できる可能性は高くなる。以下の表には、配列番号３を標的とする各オリゴヌクレオチドの開始部位と終止部位を掲載する。「開始部位」とは、アカゲザル遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「ミスマッチ」は、アカゲザルゲノム配列とミスマッチしているヒトオリゴヌクレオチド中の核酸塩基の数を示す。
Figure 0007001663000559
処置
試験に先だって、サルを少なくとも３０日間にわたって隔離し続け、その期間中は全身の健康状態について動物を毎日観察した。サルは２～４歳で、体重は２～４ｋｇであった。ランダムに割り当てた雄カニクイザル各４～６匹の１１群に対し、背中の四ヶ所に時計回りに（すなわち左、上、右、及び下）、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、各回１部位ずつ、皮下注射した。最初の１週間はサルに初回負荷量のＰＢＳまたは４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ５３２８００、ＩＳＩＳ５３２８０９、ＩＳＩＳ５８８５４０、ＩＳＩＳ５８８５４４、ＩＳＩＳ５８８５４８、ＩＳＩＳ５８８５５０、ＩＳＩＳ５８８５５３、ＩＳＩＳ５８８５５５、ＩＳＩＳ５８８８４８、またはＩＳＩＳ５９４４３０を４回（１日目、３日目、５日目、及び７日目）与え、次にＰＢＳまたは４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、週１回、１２週にわたって投与した（１４日目、２１日目、２８日目、３５日目、４２日目、４９日目、５６日目、６３日目、７０日目、７７日目、及び８４日目）。ＩＳＩＳ５３２７７０は、２匹の雄カニクイザル及び２匹の雌カニクイザルを含む群による別個の試験において、類似する条件で調べた。
肝標的の低減
ＲＮＡ分析
８６日目に、肝臓試料及び腎臓試料を、二つ一組（それぞれ約２５０ｍｇ）にして、ＣＦＢ ｍＲＮＡ分析用に採取した。屠殺から約１０分以内の剖検時に試料を液体窒素中で急速冷凍した。
ＣＦＢのｍＲＮＡ発現量を測定するためのリアルタイムＰＣＲ分析用に、ＲＮＡを肝臓及び腎臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で標準化し、ＰＢＳ対照と比較した、ｍＲＮＡの変化率（パーセント）として掲載する。また、ハウスキーピング遺伝子であるシクロフィリンＡでも、ＲＮＡレベルを標準化した。ＲＮＡレベルは、上述のプライマープローブセットＲＴＳ３４５９、またはＲＴＳ４４４５＿ＭＧＢ（フォワード配列ＣＧＡＡＧＡＡＧＣＴＣＡＧＴＧＡＡＡＴＣＡＡ，本明細書では配列番号８１９と呼ぶ；リバース配列ＴＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＣＴＴ，本明細書では配列番号８２０と呼ぶ；プローブ配列ＡＧＡＣＣＡＣＡＡＧＴＴＧＡＡＧＴＣ，本明細書では配列番号８１５と呼ぶ）を使って測定した。
以下の表に示すとおり、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置は、ＰＢＳ対照との比較で、ＣＦＢ ｍＲＮＡの低減をもたらした。ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルの分析により、前記ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドのいくつかは、肝臓及び／または腎臓におけるＣＦＢレベルを低減することが明らかになった。ここで「０」は、発現レベルが阻害されなかったことを示す。「＊」は、当該オリゴヌクレオチドを類似する条件の別個の試験で調べたことを示す。
Figure 0007001663000560
Figure 0007001663000561
タンパク質分析
８５日目に利用可能なすべての動物から約１ｍＬの血液を採取して、ＥＤＴＡのカリウム塩が入っているチューブに入れた。その血液試料を氷またはＫｒｙｏｒａｃｋに直ちに入れ、遠心分離（３０００ｒｐｍ、４℃で１０分間）することにより、採取から６０分以内に血漿（約０．４ｍＬ）を得た。ポリクローナル抗Ｂ因子抗体を用いる放射状免疫拡散法（ＲＩＤ）により、ＣＦＢの血漿中レベルを血漿で測定した。結果を以下の表に掲載する。ＩＳＩＳ５３２７７０は別個の試験で調べ、その群では血漿中タンパク質レベルを９１日目または９２日目に測定した。
血漿中ＣＦＢの分析により、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドはタンパク質レベルを持続的に低減することが明らかになった。別個の試験で調べたＩＳＩＳ５３２７７０は、９１／９２日目に、ベースライン値と比較して、ＣＦＢタンパク質レベルを５０％低減した。血漿中ＣＦＢタンパク質レベルの低減は、対応する動物群における肝臓ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルの低減とよく相関している。
Figure 0007001663000562
耐容性試験
体重測定
動物の総合的健康に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、体重及び臓器重量を測定した。それを以下の表に掲載する。「＊」は、当該オリゴヌクレオチドが別個の試験において類似の条件で調べられたこと、そして雄サルと雌サルから得られた測定値の平均であることを示す。これらの結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置が体重及び臓器重量に及ぼす効果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲内であったことを示している。
Figure 0007001663000563
Figure 0007001663000564
肝臓機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、すべての試験群から血液試料を集めた。血液試料は、橈側皮静脈、伏在静脈、または大腿静脈から、投薬の４８時間後に集めた。採血に先だってサルを終夜絶食させた。血清を分離するために、抗凝固剤が入っていないチューブに血液（１．５ｍＬ）を集めた。そのチューブを最低９０分間室温に保ってから、遠心分離（約３，０００ｒｐｍで１０分間）することにより、血清を得た。東芝２００ＦＲ ＮＥＯ化学分析装置（東芝、日本）を使って、さまざまな肝臓機能マーカーのレベルを測定した。
ＡＬＴとＡＳＴの血漿中レベルを測定した。その結果をＩＵ／Ｌの単位で以下の表に掲載する。肝臓機能マーカーの一つであるビリルビンも同様に測定し、ｍｇ／ｄＬの単位で以下の表に掲載する。「＊」は、当該オリゴヌクレオチドが別個の試験において類似の条件で調べられたこと、そして雄サルと雌サルから得られた測定値の平均であることを示す。これらの結果は、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの大半が、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲から外れる影響を、肝臓機能に及ぼさなかったことを示している。
Figure 0007001663000565
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、すべての試験群から血液試料を集めた。血液試料は、橈側皮静脈、伏在静脈、または大腿静脈から、投薬の４８時間後に集めた。採血に先だってサルを終夜絶食させた。血清を分離するために、抗凝固剤が入っていないチューブに血液を集めた。そのチューブを最低９０分間室温に保ってから、遠心分離（約３，０００ｒｐｍで１０分間）することにより、血清を得た。東芝２００ＦＲ ＮＥＯ化学分析装置（東芝、日本）を使って、ＢＵＮ及びクレアチニンのレベルを測定した。結果をｍｇ／ｄＬの単位で表して、以下の表に掲載する。「＊」は、当該オリゴヌクレオチドが別個の試験において類似の条件で調べられたこと、そして雄サルと雌サルから得られた測定値の平均であることを示す。
尿検査のために、氷上の清浄なケージパンを使って、朝、すべての動物から新鮮尿を集めた。採尿の前日は終夜、飼料を除去したが、水は供給した。東芝２００ＦＲ ＮＥＯ化学分析装置（東芝、日本）を使って、尿試料（約１ｍＬ）をタンパク質対／クレアチニン（Ｐ／Ｃ）比について分析した。「ｎ．ｄ．」は、尿タンパク質レベルが分析装置の検出限界未満であったことを示している。
血漿及び尿の化学的データは、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの大半が、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲から外れる影響を、腎臓機能に及ぼさなかったことを示している。
Figure 0007001663000566
Figure 0007001663000567
血液学
カニクイザル中のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドが血液学的パラメータに及ぼす影響を評価するために、利用可能な試験動物のそれぞれから、血液約０．５ｍＬの血液試料を、Ｋ２－ＥＤＴＡが入っているチューブに集めた。ＡＤＶＩＡ１２０血液分析装置（Ｂａｙｅｒ、米国）を使って、試料を、赤血球（ＲＢＣ）数、白血球（ＷＢＣ）数、個別白血球数、例えば単球、好中球、リンパ球の数、ならびに血小板数、ヘモグロビン含量及びヘマトクリットについて分析した。データを以下の表に掲載する。「＊」は、当該オリゴヌクレオチドが別個の試験において類似の条件で調べられたこと、そして雄サルと雌サルから得られた測定値の平均であることを示す。
このデータは、前記オリゴヌクレオチドが、この用量では、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲から外れる変化を血液学的パラメータに引き起こさなかったこと
を示している。
Figure 0007001663000568
Figure 0007001663000569
オリゴヌクレオチド濃度の測定
腎臓組織及び肝臓組織における完全長オリゴヌクレオチドの濃度を測定した。使用した方法は、以前に公表された方法（Ｌｅｅｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６；Ｇｅａｒｙ ｅｔ ａｌ．，１９９９）の変法であり、フェノール－クロロホルム（液－液）抽出と、それに続く固相抽出からなる。組織試料中濃度は、定量下限（ＬＬＯＱ）が約１．１４μｇ／ｇである検量線を使って算出した。結果を、μｇ／ｇ－肝臓または腎臓組織の単位で、以下の表に掲載する。
Figure 0007001663000570
実施例１３５：ヒトＣＦＢを標的とする非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド及び５’－ＴＨＡ－ＧａｌＮＡｃ３共役アンチセンスオリゴヌクレオチドの、トランスジェニックマウスにおける６週間効力試験
同じ核酸塩基配列を有する２つのアンチセンスオリゴヌクレオチド、すなわち非共役アンチセンスオリゴヌクレオチドＩＳＩＳ５８８５４０と、５’－ＴＨＡ－ＧａｌＮＡｃ３－共役アンチセンスオリゴヌクレオチドＩＳＩＳ６９６８４４とを、ヒトＣＦＢトランスジェニックマウス（ｈＣＦＢ－Ｔｇマウス）で調べた。
マウスに、６週にわたって、ＩＳＩＳ６９６８４４を０．１、１．２５、０．５、２．０、６．０、または１２．０ｍｇ／ｋｇ／週の用量で皮下投与するか、ＩＳＩＳ５８８５４０を２、６、１２、２５、または５０ｍｇ／ｋｇ／週の用量で皮下投与した。対照マウス群には６週にわたってＰＢＳを皮下投与した。最後の投与の４８時間後にマウスを屠殺した。肝ｍＲＮＡレベルｓをｑＲＴ－ＰＣＲで分析した。
試験１
結果を以下の表に掲載する。これらの結果は、ＣＦＢを標的とする５’－ＴＨＡ－ＧａｌＮＡｃ３－共役アンチセンスオリゴヌクレオチドの方が同じ配列を持つ非共役アンチセンスオリゴヌクレオチドよりも強力であることを実証している。
Figure 0007001663000571
試験２
肝臓ｍＲＮＡレベルを、同ｍＲＮＡの異なる領域を標的とする２つの異なるプライマープローブセットで測定し、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）（ＲＧＢ）またはシクロフィリンのどちらかに対して標準化した。プライマープローブセットは上述のＲＴＳ３４５９、及びＲＴＳ３４６０（フォワード配列ＣＧＡＡＧＣＡＧＣＴＣＡＡＴＧＡＡＡＴＣＡＡ，本明細書では配列番号８１３と呼ぶ；リバース配列ＴＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣ
ＴＴ，本明細書では配列番号８１４と呼ぶ；プローブ配列ＡＧＡＣＣＡＣＡＡＧＴＴＧＡＡＧＴＣ，本明細書では配列番号８１５と呼ぶ）であった。結果を以下の表に掲載する。これらの結果は、使用したプライマープローブセットとは無関係に、ＣＦＢを標的とする５’－ＴＨＡ－ＧａｌＮＡｃ３－共役アンチセンスオリゴヌクレオチドの方が同じ配列を持つ非共役アンチセンスオリゴヌクレオチドより強力であることを実証している。
Figure 0007001663000572
 出願時の請求項
〔項１〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１の核酸塩基３０～４９、４８～６３、１５０～１６９、１５１～１７０、１５２～１７１、１５４～１６９、１５４～１７３、１５６～１７１、１５６～１７５、１５７～１７６、１５８～１７３、１５８～１７７、４８０～４９９、６００～６１９、６３８～６５７、６４４～６６３、７３８～７５７、１０８９～１１０８、１１３５～１１５４、１１４１～１１６０、１１４７～１１６６、１１５０～１１６９、１１５３～１１７２、１１５９～１１７８、１１６２～１１８１、１１６５～１１８４、１１７１～１１８６、１１７１～１１９０、１１７３～１１８８、１１７３～１１９２、１１７５～１１９０、１１７５～１１９４、１１７７～１１９６、１１８３～１２０２、１２０８～１２２７、１２３５～１２５４、１２９８～１３１７、１３０４～１３２３、１３１０～１３２９、１３１６～１３３５、１３１９～１３３８、１３２２～１３４１、１３２８～
１３４７、１３４９～１３６８、１３５５～１３７４、１３９３～１４１２、１３９６～１４１５、１３９９～１４１８、１４０５～１４２４、１４２１～１４４０、１６２１～１６４０、１６４６～１６６５、１６４６～１６６５、１６４７～１６６６、１６８９～１７０８、１７４９～１７６８、１７６３～１７８２、１９１２～１９３１、２０７３～２０９２、２０８５～２１０４、２１６６～２１８５、２１７２～２１９１、２１８９～２２０８、２１９１～２２１０、２１９３～２２１２、２１９５～２２１０、２１９５～２２１４、２１９６～２２１５、２１９７～２２１２、２１９７～２２１６、２２０２～２２２１、２２２３～２２３８、２２２３～２２４２、２２２５～２２４０、２２２６～２２４５、２２２７～２２４２、２２２７～２２４６、２２３８～２２５７、２２４１～２２６０、２２６７～２２８６、２３６１～２３８０、２３８８～２４０７、２３９７～２４１６、２４４８～２４６７、２４５３～２４７２、２４５５～２４７４、２４５７～２４７２、２４５７～２４７６、２４５９～２４７４、２４５９～２４７８、２４６１～２４７６、２４６１～２４８０、２５３２～２５５１、２５５０～２５６９、２５５１～２５６６、２５５１～２５７０、２５５２～２５６８、２５５２～２５７０、２５５２～２５７１、２５５３～２５６８、２５５３～２５７０、２５５３～２５７１、２５５３～２５７２、２５５４～２５７１、２５５４～２５７２、２５５４～２５７３、２５５５～２５７０、２５５５～２５７２、２５５５～２５７４、２５５６～２５７３、２５５６～２５７４、２５５６～２５７５、２５５７～２５７３、２５５７～２５７４、２５５７～２５７５、２５５７～２５７６、２５５８～２５７５、２５５８～２５７６、２５５８～２５７７、２５５９～２５７６、２５５９～２５７７、２５５９～２５７８、２５６０～２５７７、２５６０～２５７８、２５６０～２５７９、２５６１～２５７６、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６１～２５８０、２５６２～２５７７、２５６２～２５７９、２５６２～２５８１、２５６３～２５７８、２５６３～２５８０、２５６３～２５８２、２５６４～２５８１、２５６４～２５８３、２５６５～２５８４、２５６６～２５８３、２５６６～２５８５、２５６７～２５８２、２５６７～２５８４、２５６７～２５８６、２５６８～２５８３、２５６８～２５８５、２５６８～２５８７、２５６９～２５８６、２５６９～２５８８、２５７０～２５８５、２５７０～２５８７、２５７０～２５８９、２５７１～２５８６、２５７１～２５８８、２５７１～２５９０、２５７２～２５８９、２５７２～２５９０、２５７２～２５９１、２５７３～２５９０、２５７３～２５９２、２５７４～２５９０、２５７４～２５９１、２５７４～２５９３、２５７５～２５９０、２５７５～２５９１、２５７５～２５９２、２５７５～２５９４、２５７６～２５９３、２５７６～２５９５、２５７７～２５９４、２５７７～２５９５、２５７７～２５９６、２５７８～２５９４、２５７８～２５９６、２５７８～２５９７、２５７９～２５９８、２５８０～２５９６、２５８０～２５９７、２５８０～２５９８、２５８０～２５９９、２５８１～２５９７、２５８１～２５９８、２５８１～２５９９、２５８１～２６００、２５８２～２５９８、２５８２～２５９９、２５８２～２６００、２５８２～２６０１、２５８３～２５９９、２５８３～２６００、２５８３～２６０１、２５８３～２６０２、２５８４～２６００、２５８４～２６０１、２５８４～２６０２、２５８４～２６０３、２５８５～２６０１、２５８５～２６０３、２５８５～２６０４、２５８６～２６０１、２５８６～２６０２、２５８６～２６０４、２５８６～２６０５、２５８７～２６０２、２５８７～２６０３、２５８７～２６０５、２５８７～２６０６、２５８８～２６０３、２５８８～２６０４、２５８８～２６０５、２５８８～２６０６、２５８８～２６０７、２５８９～２６０４、２５８９～２６０５、２５８９～２６０６、２５８９～２６０７、２５８９～２６０８、２５９０～２６０５、２５９０～２６０６、２５９０～２６０７、２５９０～２６０８、２５９０～２６０９、２５９０～２６０９、２５９１～２６０７、２５９１～２６０８、２５９１～２６０９、２５９１～２６１０、２５９２～２６０７、２５９２～２６０８、２５９２～２６０９、２５９２～２６１０、２５９２～２６１１、２５９３～２６０８、２５９３～２６０９、２５９３～２６１０、２５９３～２６１２、２５９４～２６０９、２５９４～２６１０、２５９４～２６１１、２５９４～２６１２、２５９４～２６１３、２５９５～２６１０、２５９５～２６１１、２５９５～
２６１２、２５９５～２６１３、２５９５～２６１４、２５９６～２６１１、２５９６～２６１２、２５９６～２６１３、２５９６～２６１４、２５９６～２６１５、２５９７～２６１２、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７～２６１４、２５９７～２６１５、２５９７～２６１６、２５９８～２６１３、２５９８～２６１４、２５９８～２６１５、２５９８～２６１６、２５９８～２６１７、２５９９～２６１４、２５９９～２６１５、２５９９～２６１６、２５９９～２６１７、２５９９～２６１８、２６００～２６１５、２６００～２６１６、２６００～２６１７、２６００～２６１８、２６００～２６１９、２６０１～２６１６、２６０１～２６１７、２６０１～２６１８、２６０１～２６１９、２６０１～２６２０、２６０２～２６１７、２６０２～２６１８、２６０２～２６１９、２６０２～２６２０、２６０２～２６２１、２６０３～２６１８、２６０３～２６１９、２６０３～２６２０、２６０３～２６２１、２６０３～２６２２、２６０４～２６１９、２６０４～２６２０、２６０４～２６２１、２６０４～２６２２、２６０４～２６２３、２６０５～２６２０、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２３、２６０５～２６２４、２６０６～２６２１、２６０６～２６２２、２６０６～２６２３、２６０６～２６２４、２６０６～２６２５、２６０７～２６２２、２６０７～２６２３、２６０７～２６２４、２６０７～２６２５、２６０７～２６２６、２６０８～２６２３、２６０８～２６２４、２６０８～２６２５、２６０８～２６２６、２６０８～２６２７、２６０９～２６２４、２６０９～２６２５、２６０９～２６２６、２６０９～２６２７、２６０９～２６２８、２６１０～２６２５、２６１０～２６２６、２６１０～２６２７、２６１０～２６２８、２６１０～２６２９、２６１１～２６２６、２６１１～２６２７、２６１１～２６２８、２６１１～２６２９、２６１１～２６３０、２６１２～２６２７、２６１２～２６２８、２６１２～２６２９、２６１２～２６３０、２６１２～２６３１、２６１３～２６２８、２６１３～２６２９、２６１３～２６３０、２６１３～２６３１、２６１４～２６２９、２６１４～２６３０、２６１４～２６３１、２６１５～２６３０、２６１５～２６３１、または２６１６～２６３１内で相補的な８～８０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ該修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、前記化合物。
〔項２〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１の核酸塩基３０～４９、４８～６３、１５０～１６９、１５１～１７０、１５２～１７１、１５４～１６９、１５４～１７３、１５６～１７１、１５６～１７５、１５７～１７６、１５８～１７３、１５８～１７７、４８０～４９９、６００～６１９、６３８～６５７、６４４～６６３、７３８～７５７、１０８９～１１０８、１１３５～１１５４、１１４１～１１６０、１１４７～１１６６、１１５０～１１６９、１１５３～１１７２、１１５９～１１７８、１１６２～１１８１、１１６５～１１８４、１１７１～１１８６、１１７１～１１９０、１１７３～１１８８、１１７３～１１９２、１１７５～１１９０、１１７５～１１９４、１１７７～１１９６、１１８３～１２０２、１２０８～１２２７、１２３５～１２５４、１２９８～１３１７、１３０４～１３２３、１３１０～１３２９、１３１６～１３３５、１３１９～１３３８、１３２２～１３４１、１３２８～１３４７、１３４９～１３６８、１３５５～１３７４、１３９３～１４１２、１３９６～１４１５、１３９９～１４１８、１４０５～１４２４、１４２１～１４４０、１６２１～１６４０、１６４６～１６６５、１６４６～１６６５、１６４７～１６６６、１６８９～１７０８、１７４９～１７６８、１７６３～１７８２、１９１２～１９３１、２０７３～２０９２、２０８５～２１０４、２１６６～２１８５、２１７２～２１９１、２１８９～２２０８、２１９１～２２１０、２１９３～２２１２、２１９５～２２１０、２１９５～２２１４、２１９６～２２１５、２１９７～２２１２、２１９７～２２１６、２２０２～２２２１、２２２３～２２３８、２２２３～２２４２、２２２５～２２４０、２２２６～２２４５、２２２７～２２４２、２２２７～２２４６、２２３８～２２５７、２２４１～２２６０、２２６７～２２８６、２３６１～２３８０、２３８８～２４０７、２３９７～２４１６、２４４８～２４６７、２４５３～２４７２、２４５５～２４７４、２４５７～
２４７２、２４５７～２４７６、２４５９～２４７４、２４５９～２４７８、２４６１～２４７６、２４６１～２４８０、２５３２～２５５１、２５５０～２５６９、２５５１～２５６６、２５５１～２５７０、２５５２～２５６８、２５５２～２５７０、２５５２～２５７１、２５５３～２５６８、２５５３～２５７０、２５５３～２５７１、２５５３～２５７２、２５５４～２５７１、２５５４～２５７２、２５５４～２５７３、２５５５～２５７０、２５５５～２５７２、２５５５～２５７４、２５５６～２５７３、２５５６～２５７４、２５５６～２５７５、２５５７～２５７３、２５５７～２５７４、２５５７～２５７５、２５５７～２５７６、２５５８～２５７５、２５５８～２５７６、２５５８～２５７７、２５５９～２５７６、２５５９～２５７７、２５５９～２５７８、２５６０～２５７７、２５６０～２５７８、２５６０～２５７９、２５６１～２５７６、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６１～２５８０、２５６２～２５７７、２５６２～２５７９、２５６２～２５８１、２５６３～２５７８、２５６３～２５８０、２５６３～２５８２、２５６４～２５８１、２５６４～２５８３、２５６５～２５８４、２５６６～２５８３、２５６６～２５８５、２５６７～２５８２、２５６７～２５８４、２５６７～２５８６、２５６８～２５８３、２５６８～２５８５、２５６８～２５８７、２５６９～２５８６、２５６９～２５８８、２５７０～２５８５、２５７０～２５８７、２５７０～２５８９、２５７１～２５８６、２５７１～２５８８、２５７１～２５９０、２５７２～２５８９、２５７２～２５９０、２５７２～２５９１、２５７３～２５９０、２５７３～２５９２、２５７４～２５９０、２５７４～２５９１、２５７４～２５９３、２５７５～２５９０、２５７５～２５９１、２５７５～２５９２、２５７５～２５９４、２５７６～２５９３、２５７６～２５９５、２５７７～２５９４、２５７７～２５９５、２５７７～２５９６、２５７８～２５９４、２５７８～２５９６、２５７８～２５９７、２５７９～２５９８、２５８０～２５９６、２５８０～２５９７、２５８０～２５９８、２５８０～２５９９、２５８１～２５９７、２５８１～２５９８、２５８１～２５９９、２５８１～２６００、２５８２～２５９８、２５８２～２５９９、２５８２～２６００、２５８２～２６０１、２５８３～２５９９、２５８３～２６００、２５８３～２６０１、２５８３～２６０２、２５８４～２６００、２５８４～２６０１、２５８４～２６０２、２５８４～２６０３、２５８５～２６０１、２５８５～２６０３、２５８５～２６０４、２５８６～２６０１、２５８６～２６０２、２５８６～２６０４、２５８６～２６０５、２５８７～２６０２、２５８７～２６０３、２５８７～２６０５、２５８７～２６０６、２５８８～２６０３、２５８８～２６０４、２５８８～２６０５、２５８８～２６０６、２５８８～２６０７、２５８９～２６０４、２５８９～２６０５、２５８９～２６０６、２５８９～２６０７、２５８９～２６０８、２５９０～２６０５、２５９０～２６０６、２５９０～２６０７、２５９０～２６０８、２５９０～２６０９、２５９０～２６０９、２５９１～２６０７、２５９１～２６０８、２５９１～２６０９、２５９１～２６１０、２５９２～２６０７、２５９２～２６０８、２５９２～２６０９、２５９２～２６１０、２５９２～２６１１、２５９３～２６０８、２５９３～２６０９、２５９３～２６１０、２５９３～２６１２、２５９４～２６０９、２５９４～２６１０、２５９４～２６１１、２５９４～２６１２、２５９４～２６１３、２５９５～２６１０、２５９５～２６１１、２５９５～２６１２、２５９５～２６１３、２５９５～２６１４、２５９６～２６１１、２５９６～２６１２、２５９６～２６１３、２５９６～２６１４、２５９６～２６１５、２５９７～２６１２、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７～２６１４、２５９７～２６１５、２５９７～２６１６、２５９８～２６１３、２５９８～２６１４、２５９８～２６１５、２５９８～２６１６、２５９８～２６１７、２５９９～２６１４、２５９９～２６１５、２５９９～２６１６、２５９９～２６１７、２５９９～２６１８、２６００～２６１５、２６００～２６１６、２６００～２６１７、２６００～２６１８、２６００～２６１９、２６０１～２６１６、２６０１～２６１７、２６０１～２６１８、２６０１～２６１９、２６０１～２６２０、２６０２～２６１７、２６０２～２６１８、２６０２～２６１９、２６０２～２６２０、２６０２～２６２１、２６０３～２６１８、２６０３～２６１９、２６０３～２６２０、２６０３～２６２１、２６０３～２６２２、２６０４～
２６１９、２６０４～２６２０、２６０４～２６２１、２６０４～２６２２、２６０４～２６２３、２６０５～２６２０、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２３、２６０５～２６２４、２６０６～２６２１、２６０６～２６２２、２６０６～２６２３、２６０６～２６２４、２６０６～２６２５、２６０７～２６２２、２６０７～２６２３、２６０７～２６２４、２６０７～２６２５、２６０７～２６２６、２６０８～２６２３、２６０８～２６２４、２６０８～２６２５、２６０８～２６２６、２６０８～２６２７、２６０９～２６２４、２６０９～２６２５、２６０９～２６２６、２６０９～２６２７、２６０９～２６２８、２６１０～２６２５、２６１０～２６２６、２６１０～２６２７、２６１０～２６２８、２６１０～２６２９、２６１１～２６２６、２６１１～２６２７、２６１１～２６２８、２６１１～２６２９、２６１１～２６３０、２６１２～２６２７、２６１２～２６２８、２６１２～２６２９、２６１２～２６３０、２６１２～２６３１、２６１３～２６２８、２６１３～２６２９、２６１３～２６３０、２６１３～２６３１、２６１４～２６２９、２６１４～２６３０、２６１４～２６３１、２６１５～２６３０、２６１５～２６３１、または２６１６～２６３１のうちの長さが等しい部分に１００％相補的な少なくとも８個の連続する核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する８～８０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、前記化合物。
〔項３〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号２の核酸塩基１６０８～１６２７、１６８５～１７０４、１６８６～１７０５、１７５１～１７７０、１７６９～１７８４、１８７１～１８９０、１８７２～１８９１、１８７３～１８９２、１８７５～１８９０、１８７５～１８９４、１８７７～１８９２、１８７７～１８９６、１８７８～１８９７、１８７９～１８９４、１８７９～１８９８、２２８８～２３０７、２８０８～２８２７、２８４６～２８６５、２８５２～２８７１、２９４６～２９６５、３７７３～３７９２、３８１９～３８３８、３８２５～３８４４、３８３１～３８５０、３８３４～３８５３、３８３７～３８５６、３８４３～３８６２、４１５１～４１６６、４１５１～４１７０、４１５３～４１７２、４１５９～４１７８、４１８４～４２０３、４２１１～４２３０、４６０９～４６２８、４６１２～４６３１、４６１５～４６３４、４６２１～４６４０、４６４２～４６６１、４６４８～４６６７、４６８６～４７０５、４６８９～４７０８、４６９２～４７１１、４６９８～４７１７、４７１４～４７３３、５２７０～５２８９、５２９５～５３１４、５２９６～５３１５、５８３０～５８４９、５８９０～５９０９、５９０４～５９２３、６４０６～６４２５、６６６２～６６８１、６６７４～６６９３、６９５４～６９７３、６９６０～６９７９、６９７７～６９９６、６９７９～６９９８、６９８１～７０００、６９８３～６９９８、６９８３～７００２、６９８４～７００３、６９８５～７０００、６９８５～７００４、６９９０～７００９、７１２２～７１４１、７１２５～７１４４、７１５１～７１７０、７３５３～７３７２、７３６２～７３８１、７６８３～７７０２、７６８８～７７０７、７６９０～７７０９、７６９２～７７０７、７６９２～７７１１、７６９４～７７０９、７６９４～７７１３、７６９６～７７１１、７６９６～７７１５、７７６７～７７８６、７７８５～７８０４、７７８６～７８０１、７７８７～７８０３、７７８７～７８０５、７７８７～７８０６、７７８８～７８０３、７７８８～７８０５、７７８８～７８０６、７７８８～７８０７、７７８９～７８０６、７７８９～７８０７、７７８９～７８０８、７７９０～７８０５、７７９０～７８０７、７７９０～７８０９、７７９１～７８０８、７７９１～７８０９、７７９１～７８１０、７７９２～７８０８、７７９２～７８０９、７７９２～７８１０、７７９２～７８１１、７７９３～７８１０、７７９３～７８１１、７７９３～７８１２、７７９４～７８１１、７７９４～７８１２、７７９４～７８１３、７７９５～７８１２、７７９５～７８１３、７７９５～７８１４、７７９６～７８１１、７７９６～７８１３、７７９６～７８１４、７７９６～７８１５、７７９７～７８１２、７７９７～７８１４、７７９７～７８１６、７７９８～７８１３、７７９８～７８
１５、７７９８～７８１７、７７９９～７８１６、７７９９～７８１８、７８００～７８１９、７８０１～７８１８、７８０１～７８２０、７８０２～７８１７、７８０２～７８１９、７８０２～７８２１、７８０３～７８１８、７８０３～７８２０、７８０３～７８２２、７８０４～７８２１、７８０４～７８２３、７８０５～７８２０、７８０５～７８２２、７８０５～７８２４、７８０６～７８２１、７８０６～７８２３、７８０６～７８２５、７８０７～７８２４、７８０７～７８２５、７８０７～７８２６、７８０８～７８２５、７８０８～７８２７、７８０９～７８２５、７８０９～７８２６、７８０９～７８２８、７８１０～７８２５、７８１０～７８２６、７８１０～７８２７、７８１０～７８２９、７８１１～７８２８、７８１１～７８３０、７８１２～７８２９、７８１２～７８３０、７８１２～７８３１、７８１３～７８２９、７８１３～７８３１、７８１３～７８３２、７８１４～７８３３、７８１５～７８３１、７８１５～７８３２、７８１５～７８３３、７８１５～７８３４、７８１６～７８３２、７８１６～７８３３、７８１６～７８３４、７８１６～７８３５、７８１７～７８３３、７８１７～７８３４、７８１７～７８３５、７８１７～７８３６、７８１８～７８３４、７８１８～７８３５、７８１８～７８３６、７８１８～７８３７、７８１９～７８３５、７８１９～７８３６、７８１９～７８３７、７８１９～７８３８、７８２０～７８３６、７８２０～７８３８、７８２０～７８３９、７８２１～７８３６、７８２１～７８３７、７８２１～７８３９、７８２１～７８４０、７８２２～７８３７、７８２２～７８３８、７８２２～７８４０、７８２２～７８４１、７８２３～７８３８、７８２３～７８３９、７８２３～７８３９、７８２３～７８４０、７８２３～７８４１、７８２３～７８４２、７８２４～７８３９、７８２４～７８４０、７８２４～７８４０、７８２４～７８４１、７８２４～７８４２、７８２４～７８４３、７８２５～７８４０、７８２５～７８４１、７８２５～７８４２、７８２５～７８４３、７８２５～７８４４、７８２６～７８４２、７８２６～７８４３、７８２６～７８４４、７８２６～７８４５、７８２７～７８４２、７８２７～７８４３、７８２７～７８４４、７８２７～７８４５、７８２７～７８４６、７８２８～７８４３、７８２８～７８４４、７８２８～７８４５、７８２８～７８４７、７８２９～７８４４、７８２９～７８４５、７８２９～７８４６、７８２９～７８４７、７８２９～７８４８、７８３０～７８４５、７８３０～７８４６、７８３０～７８４７、７８３０～７８４８、７８３０～７８４９、７８３１～７８４６、７８３１～７８４７、７８３１～７８４８、７８３１～７８４９、７８３１～７８５０、７８３２～７８４７、７８３２～７８４８、７８３２～７８４９、７８３２～７８５０、７８３２～７８５１、７８３３～７８４８、７８３３～７８４９、７８３３～７８５０、７８３３～７８５１、７８３３～７８５２、７８３４～７８４９、７８３４～７８５０、７８３４～７８５１、７８３４～７８５２、７８３４～７８５３、７８３５～７８５０、７８３５～７８５１、７８３５～７８５２、７８３５～７８５３、７８３５～７８５４、７８３６～７８５１、７８３６～７８５２、７８３６～７８５３、７８３６～７８５４、７８３６～７８５５、７８３７～７８５２、７８３７～７８５３、７８３７～７８５４、７８３７～７８５５、７８３７～７８５６、７８３８～７８５３、７８３８～７８５４、７８３８～７８５５、７８３８～７８５６、７８３８～７８５７、７８３９～７８５４、７８３９～７８５５、７８３９～７８５６、７８３９～７８５７、７８３９～７８５８、７８４０～７８５５、７８４０～７８５６、７８４０～７８５７、７８４０～７８５８、７８４０～７８５９、７８４１～７８５６、７８４１～７８５７、７８４１～７８５８、７８４１～７８５９、７８４１～７８６０、７８４２～７８５７、７８４２～７８５８、７８４２～７８５９、７８４２～７８６０、７８４２～７８６１、７８４３～７８５８、７８４３～７８５９、７８４３～７８６０、７８４３～７８６１、７８４３～７８６２、７８４４～７８５９、７８４４～７８６０、７８４４～７８６１、７８４４～７８６２、７８４５～７８６０、７８４５～７８６１、７８４５～７８６２、７８４６～７８６１、または７８４６～７８６２内で相補的な８～８０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ該修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、前記化合物。
〔項４〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号２の核酸塩基１６０８～１６２７、１６８５～１７０４、１６８６～１７０５、１７５１～１７７０、１７６９～１７８４、１８７１～１８９０、１８７２～１８９１、１８７３～１８９２、１８７５～１８９０、１８７５～１８９４、１８７７～１８９２、１８７７～１８９６、１８７８～１８９７、１８７９～１８９４、１８７９～１８９８、２２８８～２３０７、２８０８～２８２７、２８４６～２８６５、２８５２～２８７１、２９４６～２９６５、３７７３～３７９２、３８１９～３８３８、３８２５～３８４４、３８３１～３８５０、３８３４～３８５３、３８３７～３８５６、３８４３～３８６２、４１５１～４１６６、４１５１～４１７０、４１５３～４１７２、４１５９～４１７８、４１８４～４２０３、４２１１～４２３０、４６０９～４６２８、４６１２～４６３１、４６１５～４６３４、４６２１～４６４０、４６４２～４６６１、４６４８～４６６７、４６８６～４７０５、４６８９～４７０８、４６９２～４７１１、４６９８～４７１７、４７１４～４７３３、５２７０～５２８９、５２９５～５３１４、５２９６～５３１５、５８３０～５８４９、５８９０～５９０９、５９０４～５９２３、６４０６～６４２５、６６６２～６６８１、６６７４～６６９３、６９５４～６９７３、６９６０～６９７９、６９７７～６９９６、６９７９～６９９８、６９８１～７０００、６９８３～６９９８、６９８３～７００２、６９８４～７００３、６９８５～７０００、６９８５～７００４、６９９０～７００９、７１２２～７１４１、７１２５～７１４４、７１５１～７１７０、７３５３～７３７２、７３６２～７３８１、７６８３～７７０２、７６８８～７７０７、７６９０～７７０９、７６９２～７７０７、７６９２～７７１１、７６９４～７７０９、７６９４～７７１３、７６９６～７７１１、７６９６～７７１５、７７６７～７７８６、７７８５～７８０４、７７８６～７８０１、７７８７～７８０３、７７８７～７８０５、７７８７～７８０６、７７８８～７８０３、７７８８～７８０５、７７８８～７８０６、７７８８～７８０７、７７８９～７８０６、７７８９～７８０７、７７８９～７８０８、７７９０～７８０５、７７９０～７８０７、７７９０～７８０９、７７９１～７８０８、７７９１～７８０９、７７９１～７８１０、７７９２～７８０８、７７９２～７８０９、７７９２～７８１０、７７９２～７８１１、７７９３～７８１０、７７９３～７８１１、７７９３～７８１２、７７９４～７８１１、７７９４～７８１２、７７９４～７８１３、７７９５～７８１２、７７９５～７８１３、７７９５～７８１４、７７９６～７８１１、７７９６～７８１３、７７９６～７８１４、７７９６～７８１５、７７９７～７８１２、７７９７～７８１４、７７９７～７８１６、７７９８～７８１３、７７９８～７８１５、７７９８～７８１７、７７９９～７８１６、７７９９～７８１８、７８００～７８１９、７８０１～７８１８、７８０１～７８２０、７８０２～７８１７、７８０２～７８１９、７８０２～７８２１、７８０３～７８１８、７８０３～７８２０、７８０３～７８２２、７８０４～７８２１、７８０４～７８２３、７８０５～７８２０、７８０５～７８２２、７８０５～７８２４、７８０６～７８２１、７８０６～７８２３、７８０６～７８２５、７８０７～７８２４、７８０７～７８２５、７８０７～７８２６、７８０８～７８２５、７８０８～７８２７、７８０９～７８２５、７８０９～７８２６、７８０９～７８２８、７８１０～７８２５、７８１０～７８２６、７８１０～７８２７、７８１０～７８２９、７８１１～７８２８、７８１１～７８３０、７８１２～７８２９、７８１２～７８３０、７８１２～７８３１、７８１３～７８２９、７８１３～７８３１、７８１３～７８３２、７８１４～７８３３、７８１５～７８３１、７８１５～７８３２、７８１５～７８３３、７８１５～７８３４、７８１６～７８３２、７８１６～７８３３、７８１６～７８３４、７８１６～７８３５、７８１７～７８３３、７８１７～７８３４、７８１７～７８３５、７８１７～７８３６、７８１８～７８３４、７８１８～７８３５、７８１８～７８３６、７８１８～７８３７、７８１９～７８３５、７８１９～７８３６、７８１９～７８３７、７８１９～７８３８、７８２０～７８３６、７８２０～７８３８、７８２０～７８３９、７８２１～７８３６、７８２１～７８３７、７８２１～７８３９、７８２１～７８４０、７８２２～７８３７、７８２２～７８３８、７８２２～７８４０、７８２２～７８４１、７８２３～７８３８、７８２３～７８３９、７８２３～７８３９、７８２３～７８
４０、７８２３～７８４１、７８２３～７８４２、７８２４～７８３９、７８２４～７８４０、７８２４～７８４０、７８２４～７８４１、７８２４～７８４２、７８２４～７８４３、７８２５～７８４０、７８２５～７８４１、７８２５～７８４２、７８２５～７８４３、７８２５～７８４４、７８２６～７８４２、７８２６～７８４３、７８２６～７８４４、７８２６～７８４５、７８２７～７８４２、７８２７～７８４３、７８２７～７８４４、７８２７～７８４５、７８２７～７８４６、７８２８～７８４３、７８２８～７８４４、７８２８～７８４５、７８２８～７８４７、７８２９～７８４４、７８２９～７８４５、７８２９～７８４６、７８２９～７８４７、７８２９～７８４８、７８３０～７８４５、７８３０～７８４６、７８３０～７８４７、７８３０～７８４８、７８３０～７８４９、７８３１～７８４６、７８３１～７８４７、７８３１～７８４８、７８３１～７８４９、７８３１～７８５０、７８３２～７８４７、７８３２～７８４８、７８３２～７８４９、７８３２～７８５０、７８３２～７８５１、７８３３～７８４８、７８３３～７８４９、７８３３～７８５０、７８３３～７８５１、７８３３～７８５２、７８３４～７８４９、７８３４～７８５０、７８３４～７８５１、７８３４～７８５２、７８３４～７８５３、７８３５～７８５０、７８３５～７８５１、７８３５～７８５２、７８３５～７８５３、７８３５～７８５４、７８３６～７８５１、７８３６～７８５２、７８３６～７８５３、７８３６～７８５４、７８３６～７８５５、７８３７～７８５２、７８３７～７８５３、７８３７～７８５４、７８３７～７８５５、７８３７～７８５６、７８３８～７８５３、７８３８～７８５４、７８３８～７８５５、７８３８～７８５６、７８３８～７８５７、７８３９～７８５４、７８３９～７８５５、７８３９～７８５６、７８３９～７８５７、７８３９～７８５８、７８４０～７８５５、７８４０～７８５６、７８４０～７８５７、７８４０～７８５８、７８４０～７８５９、７８４１～７８５６、７８４１～７８５７、７８４１～７８５８、７８４１～７８５９、７８４１～７８６０、７８４２～７８５７、７８４２～７８５８、７８４２～７８５９、７８４２～７８６０、７８４２～７８６１、７８４３～７８５８、７８４３～７８５９、７８４３～７８６０、７８４３～７８６１、７８４３～７８６２、７８４４～７８５９、７８４４～７８６０、７８４４～７８６１、７８４４～７８６２、７８４５～７８６０、７８４５～７８６１、７８４５～７８６２、７８４６～７８６１、及び７８４６～７８６２のうちの長さが等しい部分に１００％相補的な少なくとも８個の連続する核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する８～８０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列は、配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、前記化合物。
〔項５〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドがＣＦＢ核酸の３’ＵＴＲを標的とする、前記化合物。
〔項６〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１の核酸塩基配列を有するＣＦＢ核酸のヌクレオチド２５７４～２６２６内を標的とする、請求項５に記載の化合物。
〔項７〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１の核酸塩基配列を有するＣＦＢ核酸の核酸塩基２４５７～２６３１、２４５７～２４７２、２４５７～２４７４、２４５７～２４７６、２４５７～２５６６、２４５７～２５７０、２４５７～２５７１、２４５７～２５７２、２４５７～２５７３、２４５７～２５７４、２４５７～２５７５、２４５７～２５７６、２４５７～２５７７、２４５７～２５７８、２４５７～２５７９、２４５７～２５８０、２４５７～２５８１、２４５７～２５８２、２４５７～２５８３、２４５７～２５８４、２４５７～２５８５、２４５７～２５８６、２４５７～２５８７、２４５７～２５８８、２４５７～２５８９、２４５７～２５９０、２４５７～２５９１、２４５７～２５９２、２４５７～２５９３、２４５７～２５９４、２４５７～２５９５、２４５７～２５９６、２４５７～２５９７、２４５７～２５９８、２４５７～２５９９、２４５７～２６００、２４５７～２６０１、２
４５７～２６０２、２４５７～２６０３、２４５７～２６０４、２４５７～２６０５、２４５７～２６０６、２４５７～２６０７、２４５７～２６０８、２４５７～２６０９、２４５７～２６１０、２４５７～２６１１、２４５７～２６１２、２４５７～２６１３、２４５７～２６１４、２４５７～２６１５、２４５７～２６１６、２４５７～２６１７、２４５７～２６１８、２４５７～２６１９、２４５７～２６２０、２４５７～２６２１、２４５７～２６２２、２４５７～２６２３、２４５７～２６２４、２４５７～２６２５、２４５７～２６２６、２４５７～２６２７、２４５７～２６２８、２４５７～２６２９、２４５７～２６３０、２４５７～２６３１、２４５９～２４７４、２４５９～２４７６、２４５９～２５６６、２４５９～２５７０、２４５９～２５７１、２４５９～２５７２、２４５９～２５７３、２４５９～２５７４、２４５９～２５７５、２４５９～２５７６、２４５９～２５７７、２４５９～２５７８、２４５９～２５７９、２４５９～２５８０、２４５９～２５８１、２４５９～２５８２、２４５９～２５８３、２４５９～２５８４、２４５９～２５８５、２４５９～２５８６、２４５９～２５８７、２４５９～２５８８、２４５９～２５８９、２４５９～２５９０、２４５９～２５９１、２４５９～２５９２、２４５９～２５９３、２４５９～２５９４、２４５９～２５９５、２４５９～２５９６、２４５９～２５９７、２４５９～２５９８、２４５９～２５９９、２４５９～２６００、２４５９～２６０１、２４５９～２６０２、２４５９～２６０３、２４５９～２６０４、２４５９～２６０５、２４５９～２６０６、２４５９～２６０７、２４５９～２６０８、２４５９～２６０９、２４５９～２６１０、２４５９～２６１１、２４５９～２６１２、２４５９～２６１３、２４５９～２６１４、２４５９～２６１５、２４５９～２６１６、２４５９～２６１７、２４５９～２６１８、２４５９～２６１９、２４５９～２６２０、２４５９～２６２１、２４５９～２６２２、２４５９～２６２３、２４５９～２６２４、２４５９～２６２５、２４５９～２６２６、２４５９～２６２７、２４５９～２６２８、２４５９～２６２９、２４５９～２６３０、２４５９～２６３１、２４６１～２４７６、２４６１～２５６６、２４６１～２５７０、２４６１～２５７１、２４６１～２５７２、２４６１～２５７３、２４６１～２５７４、２４６１～２５７５、２４６１～２５７６、２４６１～２５７７、２４６１～２５７８、２４６１～２５７９、２４６１～２５８０、２４６１～２５８１、２４６１～２５８２、２４６１～２５８３、２４６１～２５８４、２４６１～２５８５、２４６１～２５８６、２４６１～２５８７、２４６１～２５８８、２４６１～２５８９、２４６１～２５９０、２４６１～２５９１、２４６１～２５９２、２４６１～２５９３、２４６１～２５９４、２４６１～２５９５、２４６１～２５９６、２４６１～２５９７、２４６１～２５９８、２４６１～２５９９、２４６１～２６００、２４６１～２６０１、２４６１～２６０２、２４６１～２６０３、２４６１～２６０４、２４６１～２６０５、２４６１～２６０６、２４６１～２６０７、２４６１～２６０８、２４６１～２６０９、２４６１～２６１０、２４６１～２６１１、２４６１～２６１２、２４６１～２６１３、２４６１～２６１４、２４６１～２６１５、２４６１～２６１６、２４６１～２６１７、２４６１～２６１８、２４６１～２６１９、２４６１～２６２０、２４６１～２６２１、２４６１～２６２２、２４６１～２６２３、２４６１～２６２４、２４６１～２６２５、２４６１～２６２６、２４６１～２６２７、２４６１～２６２８、２４６１～２６２９、２４６１～２６３０、２４６１～２６３１、２５５１～２５６６、２５５１～２５７０、２５５１～２５７１、２５５１～２５７２、２５５１～２５７３、２５５１～２５７４、２５５１～２５７５、２５５１～２５７６、２５５１～２５７７、２５５１～２５７８、２５５１～２５７９、２５５１～２５８０、２５５１～２５８１、２５５１～２５８２、２５５１～２５８３、２５５１～２５８４、２５５１～２５８５、２５５１～２５８６、２５５１～２５８７、２５５１～２５８８、２５５１～２５８９、２５５１～２５９０、２５５１～２５９１、２５５１～２５９２、２５５１～２５９３、２５５１～２５９４、２５５１～２５９５、２５５１～２５９６、２５５１～２５９７、２５５１～２５９８、２５５１～２５９９、２５５１～２６００、２５５１～２６０１、２５５１～２６０２、２５５１～２６０３、２５５１～２６０４、２５５１～２６０５、２５５１～２６０６、２５５１～２６０７、２５５１～２６０８、２５５１～２６０９、２
５５１～２６１０、２５５１～２６１１、２５５１～２６１２、２５５１～２６１３、２５５１～２６１４、２５５１～２６１５、２５５１～２６１６、２５５１～２６１７、２５５１～２６１８、２５５１～２６１９、２５５１～２６２０、２５５１～２６２１、２５５１～２６２２、２５５１～２６２３、２５５１～２６２４、２５５１～２６２５、２５５１～２６２６、２５５１～２６２７、２５５１～２６２８、２５５１～２６２９、２５５１～２６３０、２５５１～２６３１、２５５３～２５７０、２５５３～２５７１、２５５３～２５７２、２５５３～２５７３、２５５３～２５７４、２５５３～２５７５、２５５３～２５７６、２５５３～２５７７、２５５３～２５７８、２５５３～２５７９、２５５３～２５８０、２５５３～２５８１、２５５３～２５８２、２５５３～２５８３、２５５３～２５８４、２５５３～２５８５、２５５３～２５８６、２５５３～２５８７、２５５３～２５８８、２５５３～２５８９、２５５３～２５９０、２５５３～２５９１、２５５３～２５９２、２５５３～２５９３、２５５３～２５９４、２５５３～２５９５、２５５３～２５９６、２５５３～２５９７、２５５３～２５９８、２５５３～２５９９、２５５３～２６００、２５５３～２６０１、２５５３～２６０２、２５５３～２６０３、２５５３～２６０４、２５５３～２６０５、２５５３～２６０６、２５５３～２６０７、２５５３～２６０８、２５５３～２６０９、２５５３～２６１０、２５５３～２６１１、２５５３～２６１２、２５５３～２６１３、２５５３～２６１４、２５５３～２６１５、２５５３～２６１６、２５５３～２６１７、２５５３～２６１８、２５５３～２６１９、２５５３～２６２０、２５５３～２６２１、２５５３～２６２２、２５５３～２６２３、２５５３～２６２４、２５５３～２６２５、２５５３～２６２６、２５５３～２６２７、２５５３～２６２８、２５５３～２６２９、２５５３～２６３０、２５５３～２６３１、２５５４～２５７３、２５５４～２５７４、２５５４～２５７５、２５５４～２５７６、２５５４～２５７７、２５５４～２５７８、２５５４～２５７９、２５５４～２５８０、２５５４～２５８１、２５５４～２５８２、２５５４～２５８３、２５５４～２５８４、２５５４～２５８５、２５５４～２５８６、２５５４～２５８７、２５５４～２５８８、２５５４～２５８９、２５５４～２５９０、２５５４～２５９１、２５５４～２５９２、２５５４～２５９３、２５５４～２５９４、２５５４～２５９５、２５５４～２５９６、２５５４～２５９７、２５５４～２５９８、２５５４～２５９９、２５５４～２６００、２５５４～２６０１、２５５４～２６０２、２５５４～２６０３、２５５４～２６０４、２５５４～２６０５、２５５４～２６０６、２５５４～２６０７、２５５４～２６０８、２５５４～２６０９、２５５４～２６１０、２５５４～２６１１、２５５４～２６１２、２５５４～２６１３、２５５４～２６１４、２５５４～２６１５、２５５４～２６１６、２５５４～２６１７、２５５４～２６１８、２５５４～２６１９、２５５４～２６２０、２５５４～２６２１、２５５４～２６２２、２５５４～２６２３、２５５４～２６２４、２５５４～２６２５、２５５４～２６２６、２５５４～２６２７、２５５４～２６２８、２５５４～２６２９、２５５４～２６３０、２５５４～２６３１、２５５５～２５７２、２５５５～２５７３、２５５５～２５７４、２５５５～２５７５、２５５５～２５７６、２５５５～２５７７、２５５５～２５７８、２５５５～２５７９、２５５５～２５８０、２５５５～２５８１、２５５５～２５８２、２５５５～２５８３、２５５５～２５８４、２５５５～２５８５、２５５５～２５８６、２５５５～２５８７、２５５５～２５８８、２５５５～２５８９、２５５５～２５９０、２５５５～２５９１、２５５５～２５９２、２５５５～２５９３、２５５５～２５９４、２５５５～２５９５、２５５５～２５９６、２５５５～２５９７、２５５５～２５９８、２５５５～２５９９、２５５５～２６００、２５５５～２６０１、２５５５～２６０２、２５５５～２６０３、２５５５～２６０４、２５５５～２６０５、２５５５～２６０６、２５５５～２６０７、２５５５～２６０８、２５５５～２６０９、２５５５～２６１０、２５５５～２６１１、２５５５～２６１２、２５５５～２６１３、２５５５～２６１４、２５５５～２６１５、２５５５～２６１６、２５５５～２６１７、２５５５～２６１８、２５５５～２６１９、２５５５～２６２０、２５５５～２６２１、２５５５～２６２２、２５５５～２６２３、２５５５～２６２４、２５５５～２６２５、２５５５～２６２６、２５５５～２６２７、２５５５～２６２８、２
５５５～２６２９、２５５５～２６３０、２５５５～２６３１、２５５６～２５７３、２５５６～２５７４、２５５６～２５７５、２５５６～２５７６、２５５６～２５７７、２５５６～２５７８、２５５６～２５７９、２５５６～２５８０、２５５６～２５８１、２５５６～２５８２、２５５６～２５８３、２５５６～２５８４、２５５６～２５８５、２５５６～２５８６、２５５６～２５８７、２５５６～２５８８、２５５６～２５８９、２５５６～２５９０、２５５６～２５９１、２５５６～２５９２、２５５６～２５９３、２５５６～２５９４、２５５６～２５９５、２５５６～２５９６、２５５６～２５９７、２５５６～２５９８、２５５６～２５９９、２５５６～２６００、２５５６～２６０１、２５５６～２６０２、２５５６～２６０３、２５５６～２６０４、２５５６～２６０５、２５５６～２６０６、２５５６～２６０７、２５５６～２６０８、２５５６～２６０９、２５５６～２６１０、２５５６～２６１１、２５５６～２６１２、２５５６～２６１３、２５５６～２６１４、２５５６～２６１５、２５５６～２６１６、２５５６～２６１７、２５５６～２６１８、２５５６～２６１９、２５５６～２６２０、２５５６～２６２１、２５５６～２６２２、２５５６～２６２３、２５５６～２６２４、２５５６～２６２５、２５５６～２６２６、２５５６～２６２７、２５５６～２６２８、２５５６～２６２９、２５５６～２６３０、２５５６～２６３１、２５５７～２５７４、２５５７～２５７５、２５５７～２５７６、２５５７～２５７７、２５５７～２５７８、２５５７～２５７９、２５


５７～２５８０、２５５７～２５８１、２５５７～２５８２、２５５７～２５８３、２５５７～２５８４、２５５７～２５８５、２５５７～２５８６、２５５７～２５８７、２５５７～２５８８、２５５７～２５８９、２５５７～２５９０、２５５７～２５９１、２５５７～２５９２、２５５７～２５９３、２５５７～２５９４、２５５７～２５９５、２５５７～２５９６、２５５７～２５９７、２５５７～２５９８、２５５７～２５９９、２５５７～２６００、２５５７～２６０１、２５５７～２６０２、２５５７～２６０３、２５５７～２６０４、２５５７～２６０５、２５５７～２６０６、２５５７～２６０７、２５５７～２６０８、２５５７～２６０９、２５５７～２６１０、２５５７～２６１１、２５５７～２６１２、２５５７～２６１３、２５５７～２６１４、２５５７～２６１５、２５５７～２６１６、２５５７～２６１７、２５５７～２６１８、２５５７～２６１９、２５５７～２６２０、２５５７～２６２１、２５５７～２６２２、２５５７～２６２３、２５５７～２６２４、２５５７～２６２５、２５５７～２６２６、２５５７～２６２７、２５５７～２６２８、２５５７～２６２９、２５５７～２６３０、２５５７～２６３１、２５５８～２５７５、２５５８～２５７６、２５５８～２５７７、２５５８～２５７８、２５５８～２５７９、２５５８～２５８０、２５５８～２５８１、２５５８～２５８２、２５５８～２５８３、２５５８～２５８４、２５５８～２５８５、２５５８～２５８６、２５５８～２５８７、２５５８～２５８８、２５５８～２５８９、２５５８～２５９０、２５５８～２５９１、２５５８～２５９２、２５５８～２５９３、２５５８～２５９４、２５５８～２５９５、２５５８～２５９６、２５５８～２５９７、２５５８～２５９８、２５５８～２５９９、２５５８～２６００、２５５８～２６０１、２５５８～２６０２、２５５８～２６０３、２５５８～２６０４、２５５８～２６０５、２５５８～２６０６、２５５８～２６０７、２５５８～２６０８、２５５８～２６０９、２５５８～２６１０、２５５８～２６１１、２５５８～２６１２、２５５８～２６１３、２５５８～２６１４、２５５８～２６１５、２５５８～２６１６、２５５８～２６１７、２５５８～２６１８、２５５８～２６１９、２５５８～２６２０、２５５８～２６２１、２５５８～２６２２、２５５８～２６２３、２５５８～２６２４、２５５８～２６２５、２５５８～２６２６、２５５８～２６２７、２５５８～２６２８、２５５８～２６２９、２５５８～２６３０、２５５８～２６３１、２５５９～２５７６、２５５９～２５７７、２５５９～２５７８、２５５９～２５７９、２５５９～２５８０、２５５９～２５８１、２５５９～２５８２、２５５９～２５８３、２５５９～２５８４、２５５９～２５８５、２５５９～２５８６、２５
５９～２５８７、２５５９～２５８８、２５５９～２５８９、２５５９～２５９０、２５５９～２５９１、２５５９～２５９２、２５５９～２５９３、２５５９～２５９４、２５５９～２５９５、２５５９～２５９６、２５５９～２５９７、２５５９～２５９８、２５５９～２５９９、２５５９～２６００、２５５９～２６０１、２５５９～２６０２、２５５９～２６０３、２５５９～２６０４、２５５９～２６０５、２５５９～２６０６、２５５９～２６０７、２５５９～２６０８、２５５９～２６０９、２５５９～２６１０、２５５９～２６１１、２５５９～２６１２、２５５９～２６１３、２５５９～２６１４、２５５９～２６１５、２５５９～２６１６、２５５９～２６１７、２５５９～２６１８、２５５９～２６１９、２５５９～２６２０、２５５９～２６２１、２５５９～２６２２、２５５９～２６２３、２５５９～２６２４、２５５９～２６２５、２５５９～２６２６、２５５９～２６２７、２５５９～２６２８、２５５９～２６２９、２５５９～２６３０、２５５９～２６３１、２５６０～２５７７、２５６０～２５７８、２５６０～２５７９、２５６０～２５８０、２５６０～２５８１、２５６０～２５８２、２５６０～２５８３、２５６０～２５８４、２５６０～２５８５、２５６０～２５８６、２５６０～２５８７、２５６０～２５８８、２５６０～２５８９、２５６０～２５９０、２５６０～２５９１、２５６０～２５９２、２５６０～２５９３、２５６０～２５９４、２５６０～２５９５、２５６０～２５９６、２５６０～２５９７、２５６０～２５９８、２５６０～２５９９、２５６０～２６００、２５６０～２６０１、２５６０～２６０２、２５６０～２６０３、２５６０～２６０４、２５６０～２６０５、２５６０～２６０６、２５６０～２６０７、２５６０～２６０８、２５６０～２６０９、２５６０～２６１０、２５６０～２６１１、２５６０～２６１２、２５６０～２６１３、２５６０～２６１４、２５６０～２６１５、２５６０～２６１６、２５６０～２６１７、２５６０～２６１８、２５６０～２６１９、２５６０～２６２０、２５６０～２６２１、２５６０～２６２２、２５６０～２６２３、２５６０～２６２４、２５６０～２６２５、２５６０～２６２６、２５６０～２６２７、２５６０～２６２８、２５６０～２６２９、２５６０～２６３０、２５６０～２６３１、２５６１～２５７８、２５６１～２５７９、２５６１～２５８０、２５６１～２５８１、２５６１～２５８２、２５６１～２５８３、２５６１～２５８４、２５６１～２５８５、２５６１～２５８６、２５６１～２５８７、２５６１～２５８８、２５６１～２５８９、２５６１～２５９０、２５６１～２５９１、２５６１～２５９２、２５６１～２５９３、２５６１～２５９４、２５６１～２５９５、２５６１～２５９６、２５６１～２５９７、２５６１～２５９８、２５６１～２５９９、２５６１～２６００、２５６１～２６０１、２５６１～２６０２、２５６１～２６０３、２５６１～２６０４、２５６１～２６０５、２５６１～２６０６、２５６１～２６０７、２５６１～２６０８、２５６１～２６０９、２５６１～２６１０、２５６１～２６１１、２５６１～２６１２、２５６１～２６１３、２５６１～２６１４、２５６１～２６１５、２５６１～２６１６、２５６１～２６１７、２５６１～２６１８、２５６１～２６１９、２５６１～２６２０、２５６１～２６２１、２５６１～２６２２、２５６１～２６２３、２５６１～２６２４、２５６１～２６２５、２５６１～２６２６、２５６１～２６２７、２５６１～２６２８、２５６１～２６２９、２５６１～２６３０、２５６１～２６３１、２５６２～２５７７、２５６２～２５７８、２５６２～２５７９、２５６２～２５８０、２５６２～２５８１、２５６２～２５８２、２５６２～２５８３、２５６２～２５８４、２５６２～２５８５、２５６２～２５８６、２５６２～２５８７、２５６２～２５８８、２５６２～２５８９、２５６２～２５９０、２５６２～２５９１、２５６２～２５９２、２５６２～２５９３、２５６２～２５９４、２５６２～２５９５、２５６２～２５９６、２５６２～２５９７、２５６２～２５９８、２５６２～２５９９、２５６２～２６００、２５６２～２６０１、２５６２～２６０２、２５６２～２６０３、２５６２～２６０４、２５６２～２６０５、２５６２～２６０６、２５６２～２６０７、２５６２～２６０８、２５６２～２６０９、２５６２～２６１０、２５６２～２６１１、２５６２～２６１２、２５６２～２６１３、２５６２～２６１４、２５６２～２６１５、２５６２～２６１６、２５６２～２６１７、２５６２～２６１８、２５６２～２６１９、２５６２～２６２０、２５６２～２６２１、２５６２～２６２２、２５
６２～２６２３、２５６２～２６２４、２５６２～２６２５、２５６２～２６２６、２５６２～２６２７、２５６２～２６２８、２５６２～２６２９、２５６２～２６３０、２５６２～２６３１、２５６３～２５８０、２５６３～２５８１、２５６３～２５８２、２５６３～２５８３、２５６３～２５８４、２５６３～２５８５、２５６３～２５８６、２５６３～２５８７、２５６３～２５８８、２５６３～２５８９、２５６３～２５９０、２５６３～２５９１、２５６３～２５９２、２５６３～２５９３、２５６３～２５９４、２５６３～２５９５、２５６３～２５９６、２５６３～２５９７、２５６３～２５９８、２５６３～２５９９、２５６３～２６００、２５６３～２６０１、２５６３～２６０２、２５６３～２６０３、２５６３～２６０４、２５６３～２６０５、２５６３～２６０６、２５６３～２６０７、２５６３～２６０８、２５６３～２６０９、２５６３～２６１０、２５６３～２６１１、２５６３～２６１２、２５６３～２６１３、２５６３～２６１４、２５６３～２６１５、２５６３～２６１６、２５６３～２６１７、２５６３～２６１８、２５６３～２６１９、２５６３～２６２０、２５６３～２６２１、２５６３～２６２２、２５６３～２６２３、２５６３～２６２４、２５６３～２６２５、２５６３～２６２６、２５６３～２６２７、２５６３～２６２８、２５６３～２６２９、２５６３～２６３０、２５６３～２６３１、２５６４～２５８１、２５６４～２５８２、２５６４～２５８３、２５６４～２５８４、２５６４～２５８５、２５６４～２５８６、２５６４～２５８７、２５６４～２５８８、２５６４～２５８９、２５６４～２５９０、２５６４～２５９１、２５６４～２５９２、２５６４～２５９３、２５６４～２５９４、２５６４～２５９５、２５６４～２５９６、２５６４～２５９７、２５６４～２５９８、２５６４～２５９９、２５６４～２６００、２５６４～２６０１、２５６４～２６０２、２５６４～２６０３、２５６４～２６０４、２５６４～２６０５、２５６４～２６０６、２５６４～２６０７、２５６４～２６０８、２５６４～２６０９、２５６４～２６１０、２５６４～２６１１、２５６４～２６１２、２５６４～２６１３、２５６４～２６１４、２５６４～２６１５、２５６４～２６１６、２５６４～２６１７、２５６４～２６１８、２５６４～２６１９、２５６４～２６２０、２５６４～２６２１、２５６４～２６２２、２５６４～２６２３、２５６４～２６２４、２５６４～２６２５、２５６４～２６２６、２５６４～２６２７、２５６４～２６２８、２５６４～２６２９、２５６４～２６３０、２５６４～２６３１、２５６５～２５８４、２５６５～２５８５、２５６５～２５８６、２５６５～２５８７、２５６５～２５８８、２５６５～２５８９、２５６５～２５９０、２５６５～２５９１、２５６５～２５９２、２５６５～２５９３、２５６５～２５９４、２５６５～２５９５、２５６５～２５９６、２５６５～２５９７、２５６５～２５９８、２５６５～２５９９、２５６５～２６００、２５６５～２６０１、２５６５～２６０２、２５６５～２６０３、２５６５～２６０４、２５６５～２６０５、２５６５～２６０６、２５６５～２６０７、２５６５～２６０８、２５６５～２６０９、２５６５～２６１０、２５６５～２６１１、２５６５～２６１２、２５６５～２６１３、２５６５～２６１４、２５６５～２６１５、２５６５～２６１６、２５６５～２６１７、２５６５～２６１８、２５６５～２６１９、２５６５～２６２０、２５６５～２６２１、２５６５～２６２２、２５６５～２６２３、２５６５～２６２４、２５６５～２６２５、２５６５～２６２６、２５６５～２６２７、２５６５～２６２８、２５６５～２６２９、２５６５～２６３０、２５６５～２６３１、２５６６～２５８３、２５６６～２５８４、２５６６～２５８５、２５６６～２５８６、２５６６～２５８７、２５６６～２５８８、２５６６～２５８９、２５６６～２５９０、２５６６～２５９１、２５６６～２５９２、２５６６～２５９３、２５６６～２５９４、２５６６～２５９５、２５６６～２５９６、２５６６～２５９７、２５６６～２５９８、２５６６～２５９９、２５６６～２６００、２５６６～２６０１、２５６６～２６０２、２５６６～２６０３、２５６６～２６０４、２５６６～２６０５、２５６６～２６０６、２５６６～２６０７、２５６６～２６０８、２５６６～２６０９、２５６６～２６１０、２５６６～２６１１、２５６６～２６１２、２５６６～２６１３、２５６６～２６１４、２５６


６～２６１５、２５６６～２６１６、２５６６～２６１７、２５６６～２６１８、２５６６～２６１９、２５６６～２６２０、２５６６～２６２１、２５６６～２６２２、２５６６～２６２３、２５６６～２６２４、２５６６～２６２５、２５６６～２６２６、２５６６～２６２７、２５６６～２６２８、２５６６～２６２９、２５６６～２６３０、２５６６～２６３１、２５６７～２５８４、２５６７～２５８５、２５６７～２５８６、２５６７～２５８７、２５６７～２５８８、２５６７～２５８９、２５６７～２５９０、２５６７～２５９１、２５６７～２５９２、２５６７～２５９３、２５６７～２５９４、２５６７～２５９５、２５６７～２５９６、２５６７～２５９７、２５６７～２５９８、２５６７～２５９９、２５６７～２６００、２５６７～２６０１、２５６７～２６０２、２５６７～２６０３、２５６７～２６０４、２５６７～２６０５、２５６７～２６０６、２５６７～２６０７、２５６７～２６０８、２５６７～２６０９、２５６７～２６１０、２５６７～２６１１、２５６７～２６１２、２５６７～２６１３、２５６７～２６１４、２５６７～２６１５、２５６７～２６１６、２５６７～２６１７、２５６７～２６１８、２５６７～２６１９、２５６７～２６２０、２５６７～２６２１、２５６７～２６２２、２５６７～２６２３、２５６７～２６２４、２５６７～２６２５、２５６７～２６２６、２５６７～２６２７、２５６７～２６２８、２５６７～２６２９、２５６７～２６３０、２５６７～２６３１、２５６８～２５８５、２５６８～２５８６、２５６８～２５８７、２５６８～２５８８、２５６８～２５８９、２５６８～２５９０、２５６８～２５９１、２５６８～２５９２、２５６８～２５９３、２５６８～２５９４、２５６８～２５９５、２５６８～２５９６、２５６８～２５９７、２５６８～２５９８、２５６８～２５９９、２５６８～２６００、２５６８～２６０１、２５６８～２６０２、２５６８～２６０３、２５６８～２６０４、２５６８～２６０５、２５６８～２６０６、２５６８～２６０７、２５６８～２６０８、２５６８～２６０９、２５６８～２６１０、２５６８～２６１１、２５６８～２６１２、２５６８～２６１３、２５６８～２６１４、２５６８～２６１５、２５６８～２６１６、２５６８～２６１７、２５６８～２６１８、２５６８～２６１９、２５６８～２６２０、２５６８～２６２１、２５６８～２６２２、２５６８～２６２３、２５６８～２６２４、２５６８～２６２５、２５６８～２６２６、２５６８～２６２７、２５６８～２６２８、２５６８～２６２９、２５６８～２６３０、２５６８～２６３１、２５６９～２５８６、２５６９～２５８７、２５６９～２５８８、２５６９～２５８９、２５６９～２５９０、２５６９～２５９１、２５６９～２５９２、２５６９～２５９３、２５６９～２５９４、２５６９～２５９５、２５６９～２５９６、２５６９～２５９７、２５６９～２５９８、２５６９～２５９９、２５６９～２６００、２５６９～２６０１、２５６９～２６０２、２５６９～２６０３、２５６９～２６０４、２５６９～２６０５、２５６９～２６０６、２５６９～２６０７、２５６９～２６０８、２５６９～２６０９、２５６９～２６１０、２５６９～２６１１、２５６９～２６１２、２５６９～２６１３、２５６９～２６１４、２５６９～２６１５、２５６９～２６１６、２５６９～２６１７、２５６９～２６１８、２５６９～２６１９、２５６９～２６２０、２５６９～２６２１、２５６９～２６２２、２５６９～２６２３、２５６９～２６２４、２５６９～２６２５、２５６９～２６２６、２５６９～２６２７、２５６９～２６２８、２５６９～２６２９、２５６９～２６３０、２５６９～２６３１、２５６９～２５８６、２５６９～２５８７、２５６９～２５８８、２５６９～２５８９、２５６９～２５９０、２５６９～２５９１、２５６９～２５９２、２５６９～２５９３、２５６９～２５９４、２５６９～２５９５、２５６９～２５９６、２５６９～２５９７、２５６９～２５９８、２５６９～２５９９、２５６９～２６００、２５６９～２６０１、２５６９～２６０２、２５６９～２６０３、２５６９～２６０４、２５６９～２６０５、２５６９～２６０６、２５６９～２６０７、２５６９～２６０８、２５６９～２６０９、２５６９～２６１０、２５６９～２６１１、２５６９～２６１２、２５６９～２６１３、２５６９～２６１４、２５６９～２６１５、２５６９～２６１６、２５６９～２６１７、２５６９～２６１８、２５６９～２６１９、２５６９～２６２０、２５６９～２６２１、２５６９～２６２２、２５６９～２６２３、２５６
９～２６２４、２５６９～２６２５、２５６９～２６２６、２５６９～２６２７、２５６９～２６２８、２５６９～２６２９、２５６９～２６３０、２５６９～２６３１、２５７１～２５８８、２５７１～２５８９、２５７１～２５９０、２５７１～２５９１、２５７１～２５９２、２５７１～２５９３、２５７１～２５９４、２５７１～２５９５、２５７１～２５９６、２５７１～２５９７、２５７１～２５９８、２５７１～２５９９、２５７１～２６００、２５７１～２６０１、２５７１～２６０２、２５７１～２６０３、２５７１～２６０４、２５７１～２６０５、２５７１～２６０６、２５７１～２６０７、２５７１～２６０８、２５７１～２６０９、２５７１～２６１０、２５７１～２６１１、２５７１～２６１２、２５７１～２６１３、２５７１～２６１４、２５７１～２６１５、２５７１～２６１６、２５７１～２６１７、２５７１～２６１８、２５７１～２６１９、２５７１～２６２０、２５７１～２６２１、２５７１～２６２２、２５７１～２６２３、２５７１～２６２４、２５７１～２６２５、２５７１～２６２６、２５７１～２６２７、２５７１～２６２８、２５７１～２６２９、２５７１～２６３０、２５７１～２６３１、２５７２～２５８９、２５７２～２５９０、２５７２～２５９１、２５７２～２５９２、２５７２～２５９３、２５７２～２５９４、２５７２～２５９５、２５７２～２５９６、２５７２～２５９７、２５７２～２５９８、２５７２～２５９９、２５７２～２６００、２５７２～２６０１、２５７２～２６０２、２５７２～２６０３、２５７２～２６０４、２５７２～２６０５、２５７２～２６０６、２５７２～２６０７、２５７２～２６０８、２５７２～２６０９、２５７２～２６１０、２５７２～２６１１、２５７２～２６１２、２５７２～２６１３、２５７２～２６１４、２５７２～２６１５、２５７２～２６１６、２５７２～２６１７、２５７２～２６１８、２５７２～２６１９、２５７２～２６２０、２５７２～２６２１、２５７２～２６２２、２５７２～２６２３、２５７２～２６２４、２５７２～２６２５、２５７２～２６２６、２５７２～２６２７、２５７２～２６２８、２５７２～２６２９、２５７２～２６３０、２５７２～２６３１、２５７３～２５９０、２５７３～２５９１、２５７３～２５９２、２５７３～２５９３、２５７３～２５９４、２５７３～２５９５、２５７３～２５９６、２５７３～２５９７、２５７３～２５９８、２５７３～２５９９、２５７３～２６００、２５７３～２６０１、２５７３～２６０２、２５７３～２６０３、２５７３～２６０４、２５７３～２６０５、２５７３～２６０６、２５７３～２６０７、２５７３～２６０８、２５７３～２６０９、２５７３～２６１０、２５７３～２６１１、２５７３～２６１２、２５７３～２６１３、２５７３～２６１４、２５７３～２６１５、２５７３～２６１６、２５７３～２６１７、２５７３～２６１８、２５７３～２６１９、２５７３～２６２０、２５７３～２６２１、２５７３～２６２２、２５７３～２６２３、２５７３～２６２４、２５７３～２６２５、２５７３～２６２６、２５７３～２６２７、２５７３～２６２８、２５７３～２６２９、２５７３～２６３０、２５７３～２６３１、２５７４～２５９１、２５７４～２５９２、２５７４～２５９３、２５７４～２５９４、２５７４～２５９５、２５７４～２５９６、２５７４～２５９７、２５７４～２５９８、２５７４～２５９９、２５７４～２６００、２５７４～２６０１、２５７４～２６０２、２５７４～２６０３、２５７４～２６０４、２５７４～２６０５、２５７４～２６０６、２５７４～２６０７、２５７４～２６０８、２５７４～２６０９、２５７４～２６１０、２５７４～２６１１、２５７４～２６１２、２５７４～２６１３、２５７４～２６１４、２５７４～２６１５、２５７４～２６１６、２５７４～２６１７、２５７４～２６１８、２５７４～２６１９、２５７４～２６２０、２５７４～２６２１、２５７４～２６２２、２５７４～２６２３、２５７４～２６２４、２５７４～２６２５、２５７４～２６２６、２５７４～２６２７、２５７４～２６２８、２５７４～２６２９、２５７４～２６３０、２５７４～２６３１、２５７５～２５９２、２５７５～２５９３、２５７５～２５９４、２５７５～２５９５、２５７５～２５９６、２５７５～２５９７、２５７５～２５９８、２５７５～２５９９、２５７５～２６００、２５７５～２６０１、２５７５～２６０２、２５７５～２６０３、２５７５～２６０４、２５７５～２６０５、２５７５～２６０６、２５７５～２６０７、２５７５～２６０８、２５７５～２６０９、２５７５～２６１０、２５７５～２６１１、２５７５～２６１２、２５７５～２６１３、２５７
５～２６１４、２５７５～２６１５、２５７５～２６１６、２５７５～２６１７、２５７５～２６１８、２５７５～２６１９、２５７５～２６２０、２５７５～２６２１、２５７５～２６２２、２５７５～２６２３、２５７５～２６２４、２５７５～２６２５、２５７５～２６２６、２５７５～２６２７、２５７５～２６２８、２５７５～２６２９、２５７５～２６３０、２５７５～２６３１、２５７６～２５９３、２５７６～２５９４、２５７６～２５９５、２５７６～２５９６、２５７６～２５９７、２５７６～２５９８、２５７６～２５９９、２５７６～２６００、２５７６～２６０１、２５７６～２６０２、２５７６～２６０３、２５７６～２６０４、２５７６～２６０５、２５７６～２６０６、２５７６～２６０７、２５７６～２６０８、２５７６～２６０９、２５７６～２６１０、２５７６～２６１１、２５７６～２６１２、２５７６～２６１３、２５７６～２６１４、２５７６～２６１５、２５７６～２６１６、２５７６～２６１７、２５７６～２６１８、２５７６～２６１９、２５７６～２６２０、２５７６～２６２１、２５７６～２６２２、２５７６～２６２３、２５７６～２６２４、２５７６～２６２５、２５７６～２６２６、２５７６～２６２７、２５７６～２６２８、２５７６～２６２９、２５７６～２６３０、２５７６～２６３１、２５７７～２５９４、２５７７～２５９５、２５７７～２５９６、２５７７～２５９７、２５７７～２５９８、２５７７～２５９９、２５７７～２６００、２５７７～２６０１、２５７７～２６０２、２５７７～２６０３、２５７７～２６０４、２５７７～２６０５、２５７７～２６０６、２５７７～２６０７、２５７７～２６０８、２５７７～２６０９、２５７７～２６１０、２５７７～２６１１、２５７７～２６１２、２５７７～２６１３、２５７７～２６１４、２５７７～２６１５、２５７７～２６１６、２５７７～２６１７、２５７７～２６１８、２５７７～２６１９、２５７７～２６２０、２５７７～２６２１、２５７７～２６２２、２５７７～２６２３、２５７７～２６２４、２５７７～２６２５、２５７７～２６２６、２５７７～２６２７、２５７７～２６２８、２５７７～２６２９、２５７７～２６３０、２５７７～２６３１、２５７８～２５９７、２５７８～２５９８、２５７８～２５９９、２５７８～２６００、２５７８～２６０１、２５７８～２６０２、２５７８～２６０３、２５７８～２６０４、２５７８～２６０５、２５７８～２６０６、２５７８～２６０７、２５７８～２６０８、２５７８～２６０９、２５７８～２６１０、２５７８～２６１１、２５７８～２６１２、２５７８～２６１３、２５７８～２６１４、２５７８～２６１５、２５７８～２６１６、２５７８～２６１７、２５７８


～２６１８、２５７８～２６１９、２５７８～２６２０、２５７８～２６２１、２５７８～２６２２、２５７８～２６２３、２５７８～２６２４、２５７８～２６２５、２５７８～２６２６、２５７８～２６２７、２５７８～２６２８、２５７８～２６２９、２５７８～２６３０、２５７８～２６３１、２５７９～２５９８、２５７９～２５９９、２５７９～２６００、２５７９～２６０１、２５７９～２６０２、２５７９～２６０３、２５７９～２６０４、２５７９～２６０５、２５７９～２６０６、２５７９～２６０７、２５７９～２６０８、２５７９～２６０９、２５７９～２６１０、２５７９～２６１１、２５７９～２６１２、２５７９～２６１３、２５７９～２６１４、２５７９～２６１５、２５７９～２６１６、２５７９～２６１７、２５７９～２６１８、２５７９～２６１９、２５７９～２６２０、２５７９～２６２１、２５７９～２６２２、２５７９～２６２３、２５７９～２６２４、２５７９～２６２５、２５７９～２６２６、２５７９～２６２７、２５７９～２６２８、２５７９～２６２９、２５７９～２６３０、２５７９～２６３１、２５８０～２５９８、２５８０～２５９９、２５８０～２６００、２５８０～２６０１、２５８０～２６０２、２５８０～２６０３、２５８０～２６０４、２５８０～２６０５、２５８０～２６０６、２５８０～２６０７、２５８０～２６０８、２５８０～２６０９、２５８０～２６１０、２５８０～２６１１、２５８０～２６１２、２５８０～２６１３、２５８０～２６１４、２５８０～２６１５、２５８０～２６１６、２５８０～２６１７、２５８０～２６１８、２５８０～２６１９、２５８０～２６２０、２５８０～２６２１、２５８０
～２６２２、２５８０～２６２３、２５８０～２６２４、２５８０～２６２５、２５８０～２６２６、２５８０～２６２７、２５８０～２６２８、２５８０～２６２９、２５８０～２６３０、２５８０～２６３１、２５８１～２５９７、２５８１～２５９８、２５８１～２５９９、２５８１～２６００、２５８１～２６０１、２５８１～２６０２、２５８１～２６０３、２５８１～２６０４、２５８１～２６０５、２５８１～２６０６、２５８１～２６０７、２５８１～２６０８、２５８１～２６０９、２５８１～２６１０、２５８１～２６１１、２５８１～２６１２、２５８１～２６１３、２５８１～２６１４、２５８１～２６１５、２５８１～２６１６、２５８１～２６１７、２５８１～２６１８、２５８１～２６１９、２５８１～２６２０、２５８１～２６２１、２５８１～２６２２、２５８１～２６２３、２５８１～２６２４、２５８１～２６２５、２５８１～２６２６、２５８１～２６２７、２５８１～２６２８、２５８１～２６２９、２５８１～２６３０、２５８１～２６３１、２５８２～２６００、２５８２～２６０１、２５８２～２６０２、２５８２～２６０３、２５８２～２６０４、２５８２～２６０５、２５８２～２６０６、２５８２～２６０７、２５８２～２６０８、２５８２～２６０９、２５８２～２６１０、２５８２～２６１１、２５８２～２６１２、２５８２～２６１３、２５８２～２６１４、２５８２～２６１５、２５８２～２６１６、２５８２～２６１７、２５８２～２６１８、２５８２～２６１９、２５８２～２６２０、２５８２～２６２１、２５８２～２６２２、２５８２～２６２３、２５８２～２６２４、２５８２～２６２５、２５８２～２６２６、２５８２～２６２７、２５８２～２６２８、２５８２～２６２９、２５８２～２６３０、２５８２～２６３１、２５８３～２６０１、２５８３～２６０２、２５８３～２６０３、２５８３～２６０４、２５８３～２６０５、２５８３～２６０６、２５８３～２６０７、２５８３～２６０８、２５８３～２６０９、２５８３～２６１０、２５８３～２６１１、２５８３～２６１２、２５８３～２６１３、２５８３～２６１４、２５８３～２６１５、２５８３～２６１６、２５８３～２６１７、２５８３～２６１８、２５８３～２６１９、２５８３～２６２０、２５８３～２６２１、２５８３～２６２２、２５８３～２６２３、２５８３～２６２４、２５８３～２６２５、２５８３～２６２６、２５８３～２６２７、２５８３～２６２８、２５８３～２６２９、２５８３～２６３０、２５８３～２６３１、２５８５～２６０３、２５８５～２６０４、２５８５～２６０５、２５８５～２６０６、２５８５～２６０７、２５８５～２６０８、２５８５～２６０９、２５８５～２６１０、２５８５～２６１１、２５８５～２６１２、２５８５～２６１３、２５８５～２６１４、２５８５～２６１５、２５８５～２６１６、２５８５～２６１７、２５８５～２６１８、２５８５～２６１９、２５８５～２６２０、２５８５～２６２１、２５８５～２６２２、２５８５～２６２３、２５８５～２６２４、２５８５～２６２５、２５８５～２６２６、２５８５～２６２７、２５８５～２６２８、２５８５～２６２９、２５８５～２６３０、２５８５～２６３１、２５８６～２６０４、２５８６～２６０５、２５８６～２６０６、２５８６～２６０７、２５８６～２６０８、２５８６～２６０９、２５８６～２６１０、２５８６～２６１１、２５８６～２６１２、２５８６～２６１３、２５８６～２６１４、２５８６～２６１５、２５８６～２６１６、２５８６～２６１７、２５８６～２６１８、２５８６～２６１９、２５８６～２６２０、２５８６～２６２１、２５８６～２６２２、２５８６～２６２３、２５８６～２６２４、２５８６～２６２５、２５８６～２６２６、２５８６～２６２７、２５８６～２６２８、２５８６～２６２９、２５８６～２６３０、２５８６～２６３１、２５８７～２６０５、２５８７～２６０６、２５８７～２６０７、２５８７～２６０８、２５８７～２６０９、２５８７～２６１０、２５８７～２６１１、２５８７～２６１２、２５８７～２６１３、２５８７～２６１４、２５８７～２６１５、２５８７～２６１６、２５８７～２６１７、２５８７～２６１８、２５８７～２６１９、２５８７～２６２０、２５８７～２６２１、２５８７～２６２２、２５８７～２６２３、２５８７～２６２４、２５８７～２６２５、２５８７～２６２６、２５８７～２６２７、２５８７～２６２８、２５８７～２６２９、２５８７～２６３０、２５８７～２６３１、２５８８～２６０６、２５８８～２６０７、２５８８～２６０８、２５８８～２６０９、２５８８～２６１０、２５８８～２６１１、２５８８～２６１２、２５８８～２６１３、２５８８
～２６１４、２５８８～２６１５、２５８８～２６１６、２５８８～２６１７、２５８８～２６１８、２５８８～２６１９、２５８８～２６２０、２５８８～２６２１、２５８８～２６２２、２５８８～２６２３、２５８８～２６２４、２５８８～２６２５、２５８８～２６２６、２５８８～２６２７、２５８８～２６２８、２５８８～２６２９、２５８８～２６３０、２５８８～２６３１、２５８９～２６０７、２５８９～２６０８、２５８９～２６０９、２５８９～２６１０、２５８９～２６１１、２５８９～２６１２、２５８９～２６１３、２５８９～２６１４、２５８９～２６１５、２５８９～２６１６、２５８９～２６１７、２５８９～２６１８、２５８９～２６１９、２５８９～２６２０、２５８９～２６２１、２５８９～２６２２、２５８９～２６２３、２５８９～２６２４、２５８９～２６２５、２５８９～２６２６、２５８９～２６２７、２５８９～２６２８、２５８９～２６２９、２５８９～２６３０、２５８９～２６３１、２５９０～２６０６、２５９０～２６０７、２５９０～２６０８、２５９０～２６０９、２５９０～２６１０、２５９０～２６１１、２５９０～２６１２、２５９０～２６１３、２５９０～２６１４、２５９０～２６１５、２５９０～２６１６、２５９０～２６１７、２５９０～２６１８、２５９０～２６１９、２５９０～２６２０、２５９０～２６２１、２５９０～２６２２、２５９０～２６２３、２５９０～２６２４、２５９０～２６２５、２５９０～２６２６、２５９０～２６２７、２５９０～２６２８、２５９０～２６２９、２５９０～２６３０、２５９０～２６３１、２５９１～２６１０、２５９１～２６１１、２５９１～２６１２、２５９１～２６１３、２５９１～２６１４、２５９１～２６１５、２５９１～２６１６、２５９１～２６１７、２５９１～２６１８、２５９１～２６１９、２５９１～２６２０、２５９１～２６２１、２５９１～２６２２、２５９１～２６２３、２５９１～２６２４、２５９１～２６２５、２５９１～２６２６、２５９１～２６２７、２５９１～２６２８、２５９１～２６２９、２５９１～２６３０、２５９１～２６３１、２５９２～２６１１、２５９２～２６１２、２５９２～２６１３、２５９２～２６１４、２５９２～２６１５、２５９２～２６１６、２５９２～２６１７、２５９２～２６１８、２５９２～２６１９、２５９２～２６２０、２５９２～２６２１、２５９２～２６２２、２５９２～２６２３、２５９２～２６２４、２５９２～２６２５、２５９２～２６２６、２５９２～２６２７、２５９２～２６２８、２５９２～２６２９、２５９２～２６３０、２５９２～２６３１、２５９３～２６０８、２５９３～２６１２、２５９３～２６１３、２５９３～２６１４、２５９３～２６１５、２５９３～２６１６、２５９３～２６１７、２５９３～２６１８、２５９３～２６１９、２５９３～２６２０、２５９３～２６２１、２５９３～２６２２、２５９３～２６２３、２５９３～２６２４、２５９３～２６２５、２５９３～２６２６、２５９３～２６２７、２５９３～２６２８、２５９３～２６２９、２５９３～２６３０、２５９３～２６３１、２５９４～２６１２、２５９４～２６１３、２５９４～２６１４、２５９４～２６１５、２５９４～２６１６、２５９４～２６１７、２５９４～２６１８、２５９４～２６１９、２５９４～２６２０、２５９４～２６２１、２５９４～２６２２、２５９４～２６２３、２５９４～２６２４、２５９４～２６２５、２５９４～２６２６、２５９４～２６２７、２５９４～２６２８、２５９４～２６２９、２５９４～２６３０、２５９４～２６３１、２５９５～２６１１、２５９５～２６１２、２５９５～２６１３、２５９５～２６１４、２５９５～２６１５、２５９５～２６１６、２５９５～２６１７、２５９５～２６１８、２５９５～２６１９、２５９５～２６２０、２５９５～２６２１、２５９５～２６２２、２５９５～２６２３、２５９５～２６２４、２５９５～２６２５、２５９５～２６２６、２５９５～２６２７、２５９５～２６２８、２５９５～２６２９、２５９５～２６３０、２５９５～２６３１、２５９６～２６１４、２５９６～２６１５、２５９６～２６１６、２５９６～２６１７、２５９６～２６１８、２５９６～２６１９、２５９６～２６２０、２５９６～２６２１、２５９６～２６２２、２５９６～２６２３、２５９６～２６２４、２５９６～２６２５、２５９６～２６２６、２５９６～２６２７、２５９６～２６２８、２５９６～２６２９、２５９６～２６３０、２５９６～２６３１、２５９７～２６１２、２５９７～２６１３、２５９７～２６１４、２５９７～２６１５、２５９７～２６１６、２５９７～２６１７、２５９７～２６１８、２５９７～２６１９、２５９７
～２６２０、２５９７～２６２１、２５９７～２６２２、２５９７～２６２３、２５９７～２６２４、２５９７～２６２５、２５９７～２６２６、２５９７～２６２７、２５９７～２６２８、２５９７～２６２９、２５９７～２６３０、２５９７～２６３１、２５９８～２６１３、２５９８～２６１４、２５９８～２６１５、２５９８～２６１６、２５９８～２６１７、２５９８～２６１８、２５９８～２６１９、２５９８～２６２０、２５９８～２６２１、２５９８～２６２２、２５９８～２６２３、２５９８～２６２４、２５９８～２６２５、２５９８～２６２６、２５９８～２６２７、２５９８～２６２８、２５９８～２６２９、２５９８～２６３０、２５９８～２６３１、２５９９～２６１４、２５９９～２６１５、２５９９～２６１６、２５９９～２６１７、２５９９～２６１８、２５９９～２６１９、２５９９～２６２０、２５９９～２６２１、２５９９～２６２２、２５９９～


２６２３、２５９９～２６２４、２５９９～２６２５、２５９９～２６２６、２５９９～２６２７、２５９９～２６２８、２５９９～２６２９、２５９９～２６３０、２５９９～２６３１、２６００～２６１５、２６００～２６１６、２６００～２６１７、２６００～２６１８、２６００～２６１９、２６００～２６２０、２６００～２６２１、２６００～２６２２、２６００～２６２３、２６００～２６２４、２６００～２６２５、２６００～２６２６、２６００～２６２７、２６００～２６２８、２６００～２６２９、２６００～２６３０、２６００～２６３１、２６０１～２６１６、２６０１～２６１７、２６０１～２６１８、２６０１～２６１９、２６０１～２６２０、２６０１～２６２１、２６０１～２６２２、２６０１～２６２３、２６０１～２６２４、２６０１～２６２５、２６０１～２６２６、２６０１～２６２７、２６０１～２６２８、２６０１～２６２９、２６０１～２６３０、２６０１～２６３１、２６０２～２６１８、２６０２～２６１９、２６０２～２６２０、２６０２～２６２１、２６０２～２６２２、２６０２～２６２３、２６０２～２６２４、２６０２～２６２５、２６０２～２６２６、２６０２～２６２７、２６０２～２６２８、２６０２～２６２９、２６０２～２６３０、２６０２～２６３１、２６０３～２６２０、２６０３～２６２１、２６０３～２６２２、２６０３～２６２３、２６０３～２６２４、２６０３～２６２５、２６０３～２６２６、２６０３～２６２７、２６０３～２６２８、２６０３～２６２９、２６０３～２６３０、２６０３～２６３１、２６０４～２６１９、２６０４～２６２０、２６０４～２６２１、２６０４～２６２２、２６０４～２６２３、２６０４～２６２４、２６０４～２６２５、２６０４～２６２６、２６０４～２６２７、２６０４～２６２８、２６０４～２６２９、２６０４～２６３０、２６０４～２６３１、２６０５～２６２０、２６０５～２６２１、２６０５～２６２２、２６０５～２６２３、２６０５～２６２４、２６０５～２６２５、２６０５～２６２６、２６０５～２６２７、２６０５～２６２８、２６０５～２６２９、２６０５～２６３０、２６０５～２６３１、２６０６～２６２１、２６０６～２６２２、２６０６～２６２３、２６０６～２６２４、２６０６～２６２５、２６０６～２６２６、２６０６～２６２７、２６０６～２６２８、２６０６～２６２９、２６０６～２６３０、２６０６～２６３１、２６０７～２６２２、２６０７～２６２３、２６０７～２６２４、２６０７～２６２５、２６０７～２６２６、２６０７～２６２７、２６０７～２６２８、２６０７～２６２９、２６０７～２６３０、２６０７～２６３１、２６０８～２６２３、２６０８～２６２４、２６０８～２６２５、２６０８～２６２６、２６０８～２６２７、２６０８～２６２８、２６０８～２６２９、２６０８～２６３０、２６０８～２６３１、２６０９～２６２４、２６０９～２６２５、２６０９～２６２６、２６０９～２６２７、２６０９～２６２８、２６０９～２６２９、２６０９～２６３０、２６０９～２６３１、２６１０～２６２５、２６１０～２６２６、２６１０～２６２７、２６１０～２６２８、２６１０～２６２９、２６１０～２６３０、２６１０～２６３１、２６１１～２６２６、２６１１～２６２７、２６１１～２６２８、２６１１～２６２９、２６１１～２６３０、２６１１～２６３１、２６１２～２６２７、２６１２～２６２８、２６１２～２６２９、２６１２～２６３０、２６１２～
２６３１、２６１３～２６２８、２６１３～２６２９、２６１３～２６３０、２６１３～２６３１、２６１４～２６２９、２６１４～２６３０、２６１４～２６３１、２６１５～２６３０、２６１５～２６３１、または２６１６～２６３１のうちの長さが等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続する核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する８～８０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が配列番号１に相補的である、前記化合物。
〔項８〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１のヌクレオチド２１９３～２２１２、２１９５～２２１０、２４５７～２４７６、２５７１～２５９０、２５８４～２６０３、２５８８～２６０７、２５９２～２６１１、２５９４～２６１３、２５９７～２６１６、２６００～２６１９、または２５９６～２６１１内で相補的な８～８０個の連結されたヌクレオシドからなる、前記化合物。
〔項９〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する８～８０個の連結されたヌクレオシドからなる、前記化合物。
〔項１０〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つからなる核酸塩基配列を有する、前記化合物。〔項１１〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
〔項１２〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも９個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
〔項１３〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも１０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
〔項１４〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも１１個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
〔項１５〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
〔項１６〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号６～８０８のいずれ
か一つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
〔項１７〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号６～８０８のいずれか一つの核酸塩基配列からなる、前記化合物。
〔項１８〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号８４、２３８、２３９、３１７、４１２、４１３、４２０、４２１、４２６、４３４、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４８、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６４、４６５、４７２、４７３、５１４、５１５、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５５１、５５３、５５５、５５６、５９９、６００、６０１、６０２、６１０、６１６、６１７、６１８、６６２、６６６、６７０、６７６、６７７、６７８、６８８、６８９、７１３、７２３、７２９、７３０、７４０、７４１、７４２、７４３、７４４、７４５、７４６、７４７、７４８、７４９、７５５、７５６、７６８、７８３、７９３、８３３、及び８６７のいずれか一つの少なくとも８核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
〔項１９〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、４５５、５４９、及び５９８のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、
連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び
連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置されており、かつ各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが修飾糖を含む、前記化合物。
〔項２０〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１９８、２２８、２３７、４４０、４４４、４４８、４５０、４５３、または４５５に示す配列からなる核酸塩基配列を有する２０個の連結されたヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドが
１０個の連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び
５個の連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置されており、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－Ｏ－メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、かつ各シトシンが５－メチルシトシンである、前記化合物。
〔項２１〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５９８に示す配列からなる核酸塩基配列を有する１６個の連結されたヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドが
１０個の連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
３個の連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び
３個の連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置されており、前記５’ウイングセグメントは２’－Ｏ－メトキシエチル糖、２’－Ｏ－メトキシエチル糖、及びｃＥｔ糖を５’→３’方向に含み、前記３’ウイングセグメントはｃＥｔ糖、ｃＥｔ糖、及び２’－Ｏ－メトキシエチル糖を５’→３’方
向に含み、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、かつ各シトシンが５－メチルシトシンである、前記化合物。
〔項２２〕
修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５４９に示す配列からなる核酸塩基配列を有する１６個の連結されたヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドが
１０個の連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
３個の連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び
３個の連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置されており、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドはｃＥｔ糖を含み、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、かつ各シトシンが５－メチルシトシンである、前記化合物。
〔項２３〕
前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１または配列番号２に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または１００％相補的である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項２４〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結部、少なくとも１つの修飾糖、または少なくとも１つの修飾核酸塩基を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の化合物。
〔項２５〕
前記修飾ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートヌクレオシド間連結部である、請求項２４に記載の化合物。
〔項２６〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、請求項２５に記載の化合物。
〔項２７〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも２つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、請求項２５に記載の化合物。
〔項２８〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも３つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、請求項２５に記載の化合物。
〔項２９〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも４つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、請求項２５に記載の化合物。
〔項３０〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも５つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、請求項２５に記載の化合物。
〔項３１〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも６つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、請求項２５に記載の化合物。
〔項３２〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも７つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、請求項２５に記載の化合物。
〔項３３〕
前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部が、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部及びホスホロチオエートヌクレオシド間連結部から選択される、請求項２６～３２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項３４〕
前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む、請求項２５に記載の化合物。
〔項３５〕
前記修飾糖が二環式糖である、請求項２４～３４のいずれか一項に記載の化合物。
〔項３６〕
前記二環式糖が、４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’（ＬＮＡ）、４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’（ＥＮＡ）、及び４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’（ｃＥｔ）からなる群より選択される、請求項３５に記載の化合物。
〔項３７〕
前記修飾糖が２’－Ｏ－メトキシエチルである、請求項２４～３４のいずれか一項に記載の化合物。
〔項３８〕
前記修飾核酸塩基が５－メチルシトシンである、請求項２４～３７のいずれか一項に記載の化合物。
〔項３９〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが
（ａ）連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
（ｂ）連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び
（ｃ）連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメント及び前記３’ウイングセグメントに直接隣り合うように、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが修飾糖を含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の化合物。
〔項４０〕
一本鎖である、請求項１～３９のいずれか一項に記載の化合物。
〔項４１〕
二本鎖である、請求項１～３９のいずれか一項に記載の化合物。
〔項４２〕
リボヌクレオチドを含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の化合物。
〔項４３〕
デオキシリボヌクレオチドを含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の化合物。
〔項４４〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが１０～３０個の連結されたヌクレオシドからなる、請求項１～４３のいずれか一項に記載の化合物。
〔項４５〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが１２～３０個の連結されたヌクレオシドからなる、請求項１～４３のいずれか一項に記載の化合物。
〔項４６〕
前記修飾オリゴヌクレオチドが１５～３０個の連結されたヌクレオシドからなる、請求項１～４３のいずれか一項に記載の化合物。
〔項４７〕
ＩＳＩＳ５３２７７０、ＩＳＩＳ５３２８００、ＩＳＩＳ５３２８０９、ＩＳＩＳ５８８５４０、ＩＳＩＳ５８８５４４、ＩＳＩＳ５８８５４８、ＩＳＩＳ５８８５５０、ＩＳＩＳ５８８５５３、ＩＳＩＳ５８８５５５、ＩＳＩＳ５８８８４８、またはＩＳＩＳ５９４４３０と、共役基とからなる化合物。
〔項４８〕
前記共役基が前記修飾オリゴヌクレオチドの５’端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結されている、請求項１～４７のいずれか一項に記載の化合物。
〔項４９〕
前記共役基が前記修飾オリゴヌクレオチドの３’端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連
結されている、請求項１～４７のいずれか一項に記載の化合物。
〔項５０〕
前記共役基が厳密に１つのリガンドを含む、請求項１～４９のいずれか一項に記載の化合物。
〔項５１〕
前記共役基が厳密に２つのリガンドを含む、請求項１～４９のいずれか一項に記載の化合物。
〔項５２〕
前記共役基が３つ以上のリガンドを含む、請求項１～４９のいずれか一項に記載の化合物。
〔項５３〕
前記共役基が厳密に３つのリガンドを含む、請求項１～４９のいずれか一項に記載の化合物。
〔項５４〕
各リガンドが多糖、修飾多糖、マンノース、ガラクトース、マンノース誘導体、ガラクトース誘導体、Ｄ－マンノピラノース、Ｌ－マンノピラノース、Ｄ－アラビノース、Ｌ－ガラクトース、Ｄ－キシロフラノース、Ｌ－キシロフラノース、Ｄ－グルコース、Ｌ－グルコース、Ｄ－ガラクトース、Ｌ－ガラクトース、α－Ｄ－マンノフラノース、β－Ｄ－マンノフラノース、α－Ｄ－マンノピラノース、β－Ｄ－マンノピラノース、α－Ｄ－グルコピラノース、β－Ｄ－グルコピラノース、α－Ｄ－グルコフラノース、β－Ｄ－グルコフラノース、α－Ｄ－フルクトフラノース、α－Ｄ－フルクトピラノース、α－Ｄ－ガラクトピラノース、β－Ｄ－ガラクトピラノース、α－Ｄ－ガラクトフラノース、β－Ｄ－ガラクトフラノース、グルコサミン、シアル酸、α－Ｄ－ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、２－アミノ－３－Ｏ－［（Ｒ）－１－カルボキシエチル］－２－デオキシ－β－Ｄ－グルコピラノース、２－デオキシ－２－メチルアミノ－Ｌ－グルコピラノース、４，６－ジデオキシ－４－ホルムアミド－２，３－ジ－Ｏ－メチル－Ｄ－マンノピラノース、２－デオキシ－２－スルホアミノ－Ｄ－グルコピラノース、Ｎ－グリコロイル－α－ノイラミン酸、５－チオ－β－Ｄ－グルコピラノース、メチル２，３，４－トリ－Ｏ－アセチル－１－チオ－６－Ｏ－トリチル－α－Ｄ－グルコピラノシド、４－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノース、エチル３，４，６，７－テトラ－Ｏ－アセチル－２－デオキシ－１，５－ジチオ－α－Ｄ－グルコ－ヘプトピラノシド、２，５－アンヒドロ－Ｄ－アロノニトリル、リボース、Ｄ－リボース、Ｄ－４－チオリボース、Ｌ－リボース、Ｌ－４－チオリボースのなかから選択される、請求項５０～５３のいずれか一項に記載の化合物。
〔項５５〕
各リガンドがＮ－アセチルガラクトサミンである、請求項５４に記載の化合物。
〔項５６〕
前記共役基が
Figure 0007001663000573
を含む、請求項１～５５のいずれか一項に記載の化合物。
〔項５７〕
前記共役基が
Figure 0007001663000574
を含む、請求項１～５５のいずれか一項に記載の化合物。
〔項５８〕
前記共役基が
Figure 0007001663000575
を含む、請求項１～５５のいずれか一項に記載の化合物。
〔項５９〕
前記共役基が
Figure 0007001663000576
を含む、請求項１～５５のいずれか一項に記載の化合物。
〔項６０〕
前記共役基が
Figure 0007001663000577
を含む、請求項１～５５のいずれか一項に記載の化合物。
〔項６１〕
前記共役基が少なくとも１つのリン連結基または中性連結基を含む、請求項４９～６０のいずれか一項に記載の化合物。
〔項６２〕
前記共役基が
Figure 0007001663000578
Figure 0007001663000579
 ；
［式中、
ｎは１～１２であり、かつ
ｍは１～１２である］
のなかから選択される構造を含む、請求項１～６１のいずれか一項に記載の化合物。
〔項６３〕
前記共役基が、
Figure 0007001663000580
［式中、
Ｌは、リン連結基または中性連結基のどちらかであり、
Ｚ１は、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－Ｒ２であり、
Ｚ２は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１－Ｃ６アルキルであり、かつ
各ｍ１は、独立して、０～２０であって、各テザーにつき少なくとも１つのｍ１は０より大きい］
のなかから選択される構造を有するテザーを有する、請求項１～６２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項６４〕
前記共役基が、
Figure 0007001663000581
［式中、
Ｚ２は、ＨまたはＣＨ３であり、かつ
各ｍ１は、独立して、０～２０であって、各テザーにつき少なくとも１つのｍ１は０より大きい］
のなかから選択される構造を有するテザーを有する、請求項６３に記載の化合物。
〔項６５〕
前記共役基が
Figure 0007001663000582
［式中、
ｎは１～１２であり、かつ
ｍは１～１２である］
のなかから選択される構造を有するテザーを有する、請求項１～６４のいずれか一項に記載の化合物。
〔項６６〕
前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドに共有結合で取り付けられている、請求項１～６５のいずれか一項に記載の化合物。
〔項６７〕
式：
Figure 0007001663000583
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、請求項１～６６のいずれか一項に記載の化合物。
〔項６８〕
式：
Figure 0007001663000584
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、
各ｎは独立して０または１であり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、請求項１～６６のいずれか一項に記載の化合物。
〔項６９〕
式：
Figure 0007001663000585
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、請求項１～６６のいずれか一項に記載の化合物。
〔項７０〕
式：
Figure 0007001663000586
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、請求項１～６６のいずれか一項に記載の化合物。
〔項７１〕
式：
Figure 0007001663000587
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、請求項１～６６のいずれか一項に記載の化合物。
〔項７２〕
式：
Figure 0007001663000588
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、請求項１～６６のいずれか一項に記載の化合物。
〔項７３〕
式：
Figure 0007001663000589
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、請求項１～６６のいずれか一項に記載の化合物。
〔項７４〕
式：
Figure 0007001663000590
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、請求項１～６６のいずれか一項に記載の化合物。
〔項７５〕
前記共役リンカーが
Figure 0007001663000591
 ［式中、
各Ｌは、独立して、リン連結基または中性連結基であり、かつ
各ｎは、独立して、１～２０である］
のなかから選択される構造を有する、請求項１～７４のいずれか一項に記載の化合物。〔項７６〕
前記共役リンカーが
Figure 0007001663000592
のなかから選択される構造を有する、請求項１～７４のいずれか一項に記載の化合物。〔項７７〕
前記共役リンカーが以下の構造を有する、請求項１～７４のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000593
。
〔項７８〕
前記共役リンカーが
Figure 0007001663000594
のなかから選択される構造を有する、請求項１～７４のいずれか一項に記載の化合物。
〔項７９〕
前記共役リンカーが
Figure 0007001663000595
 のなかから選択される構造を有する、請求項１～７４のいずれか一項に記載の化合物。
〔項８０〕
前記共役リンカーが
Figure 0007001663000596
のなかから選択される構造を有する、請求項１～７４のいずれか一項に記載の化合物。
〔項８１〕
前記共役リンカーがピロリジンを含む、請求項１～８０のいずれか一項に記載の化合物。
〔項８２〕
前記共役リンカーがピロリジンを含まない、請求項１～８０のいずれか一項に記載の化合物。
〔項８３〕
前記共役リンカーがＰＥＧを含む、請求項１～８２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項８４〕
前記共役リンカーがアミドを含む、請求項１～８３のいずれか一項に記載の化合物。
〔項８５〕
前記共役リンカーが少なくとも２つのアミドを含む、請求項１～８４のいずれか一項に記載の化合物。
〔項８６〕
前記共役リンカーがアミドを含まない、請求項１～８３のいずれか一項に記載の化合物。
〔項８７〕
前記共役リンカーがポリアミドを含む、請求項１～８６のいずれか一項に記載の化合物。
〔項８８〕
前記共役リンカーがアミンを含む、請求項１～８７のいずれか一項に記載の化合物。
〔項８９〕
前記共役リンカーが１つ以上のジスルフィド結合を含む、請求項１～８８のいずれか一項に記載の化合物。
〔項９０〕
前記共役リンカーがタンパク質結合部分を含む、請求項１～８９のいずれか一項に記載の化合物。
〔項９１〕
前記タンパク質結合部分が脂質を含む、請求項９０に記載の化合物。
〔項９２〕
前記タンパク質結合部分が、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）、ビタミン（例えば葉酸、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビオチン、ピリドキサール）、ペプチド、炭水化物（例えば単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、多糖）、エンドソーム溶解成分、ステロイド（例えばウバオール、ヘシゲニン（ｈｅｃｉｇｅｎｉｎ）、ジオスゲニン）、テルペン（例えばトリテルペン、例えばサルササポゲニン、フリーデ
リン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸）、またはカチオン性脂質のなかから選択される、請求項９０に記載の化合物。
〔項９３〕
前記タンパク質結合部分が、Ｃ１６～Ｃ２２長鎖飽和または不飽和脂肪酸、コレステロール、コール酸、ビタミンＥ、アダマンタンまたは１－ペンタフルオロプロピルのなかから選択される、請求項９０に記載の化合物。
〔項９４〕
前記共役リンカーが
Figure 0007001663000597
［式中、各ｎは、独立して、１～２０であり、かつｐは１～６である］
のなかから選択される構造を有する、請求項１～９３のいずれか一項に記載の化合物。
〔項９５〕
前記共役リンカーが
Figure 0007001663000598
［式中、各ｎは、独立して、１～２０である］
のなかから選択される構造を有する、請求項１～９４のいずれか一項に記載の化合物。〔項９６〕
前記共役リンカーが
Figure 0007001663000599
のなかから選択される構造を有する、請求項１～９４のいずれか一項に記載の化合物。〔項９７〕
前記共役リンカーが
Figure 0007001663000600
［式中、ｎは１～２０である］
のなかから選択される構造を有する、請求項１～９４のいずれか一項に記載の化合物。〔項９８〕
前記共役リンカーが
Figure 0007001663000601

のなかから選択される構造を有する、請求項１～９４のいずれか一項に記載の化合物。〔項９９〕
前記共役リンカーが
Figure 0007001663000602
［式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である］
のなかから選択される構造を有する、請求項１～９４のいずれか一項に記載の化合物。〔項１００〕
前記共役リンカーが以下の構造を有する、請求項１～９４のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000603
。
〔項１０１〕
前記分岐基が以下の構造のうちの一つを有する、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000604
［式中、
各Ａ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝ＯまたはＮＨであり、かつ
各ｎは、独立して、１～２０である］。
〔項１０２〕
前記分岐基が以下の構造のうちの一つを有する、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000605
［式中、
各Ａ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝ＯまたはＮＨであり、かつ
各ｎは、独立して、１～２０である］。
〔項１０３〕
前記分岐基が以下の構造を有する、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000606
。
〔項１０４〕
前記分岐基が以下の構造を有する、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000607
。
〔項１０５〕
前記分岐基が以下の構造を有する、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000608
。
〔項１０６〕
前記分岐基が以下の構造を有する、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000609
。
〔項１０７〕
前記分岐基がエーテルを含む、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１０８〕
前記分岐基が以下の構造を有する、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000610
［各ｎは、独立して、１～２０であり、かつ
ｍは２～６である］。
〔項１０９〕
前記分岐基が以下の構造を有する、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000611
。
〔項１１０〕
前記分岐基が以下の構造を有する、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000612
。
〔項１１１〕
前記分岐基が
Figure 0007001663000613
、
Figure 0007001663000614
、
Figure 0007001663000615
、
Figure 0007001663000616
、または
Figure 0007001663000617
［式中、
各ｊは１～３の整数であり、かつ
各ｎは１～２０の整数である］
を含む、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１１２〕
前記分岐基が
Figure 0007001663000618
、
Figure 0007001663000619
、
Figure 0007001663000620
、
Figure 0007001663000621
、または
Figure 0007001663000622
を含む、請求項１～１００のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１１３〕
各テザーが
Figure 0007001663000623

［式中、
Ｌは、リン連結基及び中性連結基から選択され、
Ｚ１は、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－Ｒ２であり、
Ｚ２は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１－Ｃ６アルキルであり、かつ
各ｍ１は、独立して、０～２０であって、各テザーにつき少なくとも１つのｍ１は０より大きい］
のなかから選択される、請求項１～１１２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１１４〕
各テザーが
Figure 0007001663000624
［式中、
Ｚ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
各ｍ２は、独立して、０～２０であって、各テザーにつき少なくとも１つのｍ２は０より大きい］
のなかから選択される、請求項１～１１２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１１５〕
各テザーが
Figure 0007001663000625
［式中、
ｎは１～１２であり、かつ
ｍは１～１２である］
のなかから選択される、請求項１～１１２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１１６〕
少なくとも１つのテザーがエチレングリコールを含む、請求項１～１１２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１１７〕
少なくとも１つのテザーがアミドを含む、請求項１～１１６のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１１８〕
少なくとも１つのテザーがポリアミドを含む、請求項１～１１７のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１１９〕
少なくとも１つのテザーがアミンを含む、請求項１～１１８のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１２０〕
少なくとも２つのテザーが互いに異なる、請求項１～１１９のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１２１〕
すべてのテザーが互いに同じである、請求項１～１２０のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１２２〕
各テザーが
Figure 0007001663000626
［式中、
各ｎは、独立して、１～２０であり、かつ
各ｐは１～約６である］
のなかから選択される、請求項１～１２１のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１２３〕
各テザーが
Figure 0007001663000627
のなかから選択される、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１２４〕
各テザーが以下の構造を有する、請求項１～１２３のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000628
［式中、各ｎは、独立して、１～２０である］。
〔項１２５〕
各テザーが以下の構造を有する、請求項１～１２４のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000629
 。
〔項１２６〕
前記テザーが、
Figure 0007001663000630
、または
Figure 0007001663000631
［式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である］
のなかから選択される構造を有する、請求項１～１２５のいずれか一項に記載の化合物。〔項１２７〕
前記テザーが構造：
Figure 0007001663000632
 を有する、請求項１２６に記載の化合物。
〔項１２８〕
ｎが３である、請求項１２６に記載の化合物。
〔項１２９〕
前記リガンドがガラクトースである、請求項１～１２８のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１３０〕
前記リガンドがマンノース－６－ホスフェートである、請求項１～１２８のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１３１〕
各リガンドが、
Figure 0007001663000633
［式中、各Ｒ１はＯＨ及びＮＨＣＯＯＨから選択される］
のなかから選択される、請求項１～１２８のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１３２〕
各リガンドが、
Figure 0007001663000634
のなかから選択される、請求項１～１２８のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１３３〕
各リガンドが以下の構造を有する、請求項１～１２８のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000635
。
〔項１３４〕
各リガンドが以下の構造を有する、請求項１２４～１２７のいずれか一項に記載の共役アンチセンス化合物：
Figure 0007001663000636
。
〔項１３５〕
前記共役基が細胞ターゲティング部分を含む、請求項１～１３４のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１３６〕
前記共役基が以下の構造を有する細胞ターゲティング部分を含む、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000637
［式中、各ｎは、独立して、１～２０である］。
〔項１３７〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000638
。
〔項１３８〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000639
［式中、各ｎは、独立して、１～２０である］。
〔項１３９〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000640
。
〔項１４０〕
前記細胞ターゲティング部分が、
Figure 0007001663000641
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１４１〕
前記細胞ターゲティング部分が
Figure 0007001663000642
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１４２〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000643
。
〔項１４３〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000644
。
〔項１４４〕
前記細胞ターゲティング部分が
Figure 0007001663000645
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１４５〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000646
。
〔項１４６〕
前記細胞ターゲティング部分が
Figure 0007001663000647
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１４７〕
前記細胞ターゲティング部分が
Figure 0007001663000648
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１４８〕
前記細胞ターゲティング部分が
Figure 0007001663000649
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１４９〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000650
。
〔項１５０〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000651
。
〔項１５１〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000652
。
〔項１５２〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000653
。
〔項１５３〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000654
。
〔項１５４〕
前記細胞ターゲティング部分が
Figure 0007001663000655
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１５５〕
前記細胞ターゲティング部分が
Figure 0007001663000656
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１５６〕
前記細胞ターゲティング部分が
Figure 0007001663000657
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１５７〕
前記細胞ターゲティング部分が
Figure 0007001663000658
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１５８〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000659
。
〔項１５９〕
前記細胞ターゲティング部分が
Figure 0007001663000660
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１６０〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000661
。
〔項１６１〕
前記細胞ターゲティング部分が
Figure 0007001663000662
［式中、各Ｙは、Ｏ、Ｓ、置換または無置換Ｃ１－Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニルまたはアルキニルから選択される］
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１６２〕
前記共役基が
Figure 0007001663000663
［式中、各Ｙは、Ｏ、Ｓ、置換または無置換Ｃ１－Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニルまたはアルキニルから選択される］
を含む、請求項１３５に記載の化合物。
〔項１６３〕
前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、請求項１３５に記載の化合物：
Figure 0007001663000664
［式中、各Ｙは、Ｏ、Ｓ、置換または無置換Ｃ１－Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニルまたはアルキニルから選択される］。
〔項１６４〕
前記共役基が
Figure 0007001663000665
を含む、請求項１～１６３のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１６５〕
前記共役基が
Figure 0007001663000666
を含む、請求項１～１６４のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１６６〕
前記共役基が
Figure 0007001663000667
を含む、請求項１～１６４のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１６７〕
前記共役基が
Figure 0007001663000668
を含む、請求項１６６に記載の化合物。
〔項１６８〕
前記共役基が、ホスホジエステル、アミド、またはエステルから選択される切断可能部分を含む、請求項１～１６７のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１６９〕
前記共役基がホスホジエステル切断可能部分を含む、請求項１～１６８のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１７０〕
前記共役基が切断可能部分を含まず、かつ前記共役基が前記共役基と前記オリゴヌクレオチドとの間にホスホロチオエート連結部を含む、請求項１～１６９のいずれか一項に記
載の化合物。
〔項１７１〕
前記共役基がアミド切断可能部分を含む、請求項１～１７０のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１７２〕
前記共役基がエステル切断可能部分を含む、請求項１～１７１のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１７３〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000669
［式中、
各ｎは、独立して、１～２０であり、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１７４〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000670
［式中、
各ｎは、独立して、１～２０であり、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１７５〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000671
［式中、
各ｎは、独立して、１～２０であり、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｚは、Ｈまたは連結された固体支持体であり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１７６〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000672
［式中、
各ｎは、独立して、１～２０であり、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３；
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｚは、Ｈまたは連結された固体支持体であり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１７７〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000673
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１７８〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000674
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１７９〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000675
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１８０〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000676
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１８１〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000677
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１８２〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000678
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１８３〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000679
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１８４〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000680
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１８５〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000681
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１８６〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000682
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１８７〕
以下の構造を有する、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物：
Figure 0007001663000683
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
〔項１８８〕
前記共役基が
Figure 0007001663000684
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］
を含む、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項１８９〕
前記共役基が
Figure 0007001663000685
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］
を含む、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項２００〕
前記共役基が
Figure 0007001663000686
［式中、Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］
を含む、請求項１～１７２のいずれか一項に記載の化合物。
〔項２０１〕
Ｂｘが、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、またはシトシンもしくは５－メチルシトシンのなかから選択される、請求項１７３～２００のいずれか一項に記載の化合物。〔項２０２〕
Ｂｘがアデニンである、請求項１７３～２００のいずれか一項に記載の化合物。
〔項２０３〕
Ｂｘがチミンである、請求項１７３～２００のいずれか一項に記載の化合物。
〔項２０４〕
Ｑ１３がＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３である、請求項１７３～２００のいずれか一項に記載の化合物。
〔項２０５〕
Ｑ１３がＨである、請求項１７３～２００のいずれか一項に記載の化合物。
〔項２０６〕
ＩＳＩＳ６９６８４４、ＩＳＩＳ６９６８４５、ＩＳＩＳ６９８９６９、またはＩＳＩＳ６９８９７０を含む化合物。
〔項２０７〕
ＩＳＩＳ６９６８４４、ＩＳＩＳ６９６８４５、ＩＳＩＳ６９８９６９、またはＩＳＩＳ６９８９７０からなる化合物。
〔項２０８〕
請求項１～２０７のいずれか一項に記載の化合物またはその塩と、医薬上許容される担体または希釈剤の少なくとも１つとを含む組成物。
〔項２０９〕
請求項１～２０８のいずれか一項に記載の化合物を含むプロドラッグ。
〔項２１０〕
対象における補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置し、防止し、または改善する方法であって、前記対象に、請求項１～２０７のいずれか一項に記載の化合物、請求項２０８に記載の組成物、または請求項２０９に記載のプロドラッグを投与し、それによって前記疾患を処置し、防止し、または改善することを含む、前記方法。
〔項２１１〕
前記補体代替経路が正常より強く活性化されている、請求項２１０に記載の方法。
〔項２１２〕
前記疾患が黄斑変性である、請求項２１０または２１１に記載の方法。
〔項２１３〕
前記黄斑変性が加齢黄斑変性（ＡＭＤ）である、請求項２１２に記載の方法。
〔項２１４〕
前記ＡＭＤが滲出型ＡＭＤである、請求項２１３に記載の方法。
〔項２１５〕
前記ＡＭＤが乾性ＡＭＤである、請求項２１３に記載の方法。
〔項２１６〕
前記乾性ＡＭＤが地図状萎縮である、請求項２１５に記載の方法。
〔項２１７〕
前記疾患が腎臓疾患である、請求項２１０または２１１に記載の方法。
〔項２１８〕
前記腎臓疾患がループス腎炎である、請求項２１７に記載の方法。
〔項２１９〕
前記腎臓疾患が全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である、請求項２１７に記載の方法。
〔項２２０〕
前記腎臓疾患がデンスデポジット病（ＤＤＤ）である、請求項２１７に記載の方法。
〔項２２１〕
前記腎臓疾患がＣ３糸球体腎炎（Ｃ３ＧＮ）である、請求項２１７に記載の方法。
〔項２２２〕
前記腎臓疾患がＣＦＨＲ５ネフロパシーである、請求項２１７に記載の方法。
〔項２２３〕
前記腎臓疾患が非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）である、請求項２１７に記載の方法。
〔項２２４〕
前記ａＨＵＳが血栓性微小血管症を特徴とする、請求項２２３に記載の方法。
〔項２２５〕
前記腎臓疾患がＣ３沈着に関連する、請求項２１７～２２４のいずれか一項に記載の方法。
〔項２２６〕
前記腎臓疾患が糸球体におけるＣ３沈着に関連する、請求項２２５に記載の方法。
〔項２２７〕
前記腎臓疾患が正常値未満の循環Ｃ３レベルに関連する、請求項２１７～２２６のいずれか一項に記載の方法。
〔項２２８〕
前記循環Ｃ３レベルが血清中Ｃ３レベルまたは血漿中Ｃ３レベルである、請求項２２７に記載の方法。
〔項２２９〕
前記化合物または組成物を投与することによって、眼Ｃ３レベルが低減し、または眼Ｃ３レベルの蓄積が阻害される、請求項２１０～２１６のいずれか一項に記載の方法。
〔項２３０〕
前記Ｃ３レベルがＣ３タンパク質レベルである、請求項２２９に記載の方法。
〔項２３１〕
前記化合物または組成物を投与することによって、眼Ｃ３沈着のレベルが低減するか、眼Ｃ３沈着の蓄積が阻害される、請求項２１０～２１６のいずれか一項に記載の方法。
〔項２３２〕
前記化合物または組成物が前記対象に非経口投与される、請求項２２９～２３１のいずれか一項に記載の方法。
〔項２３３〕
前記化合物または組成物を投与することによって、腎臓におけるＣ３レベルが低減し、または腎臓におけるＣ３レベルの蓄積が阻害される、請求項２１７～２２８のいずれか一項に記載の方法。
〔項２３４〕
前記Ｃ３レベルがＣ３タンパク質レベルである、請求項２３３に記載の方法。
〔項２３５〕
前記化合物または組成物を投与することによって、腎臓Ｃ３沈着のレベルが低減するか、腎臓Ｃ３沈着の蓄積が阻害される、請求項２３３または２３４に記載の方法。
〔項２３６〕
腎臓における前記Ｃ３レベルが糸球体におけるＣ３レベルである、請求項２３３～２３５のいずれか一項に記載の方法。
〔項２３７〕
前記化合物または組成物が前記対象に非経口投与される、請求項２３３～２３６のいずれか一項に記載の方法。
〔項２３８〕
前記対象が、補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するか、または前記疾患を有するリスクがあると同定される、請求項２１０～２３７のいずれか一項に記載の方法。
〔項２３９〕
前記同定が、前記対象の血清における補体レベルまたは膜侵襲複合体レベルを検出することを含む、請求項２３８に記載の方法。
〔項２４０〕
前記同定が、前記疾患に関連する補体因子の遺伝子変異に関する遺伝子検査を実行することを含む、請求項２３８に記載の方法。
〔項２４１〕
補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象における補体Ｂ因子（ＣＦＢ）の発現を阻害する方法であって、請求項１～２０７のいずれか一項に記載の化合物、請求項２０８に記載の組成物、または請求項２０９に記載のプロドラッグを前記対象に投与し、それによって前記対象におけるＣＦＢの発現を阻害することを含む、前記方法。
〔項２４２〕
前記補体代替経路が正常より強く活性化されている、請求項２４１に記載の方法。
〔項２４３〕
前記化合物または組成物を投与することによって、眼におけるＣＦＢの発現が阻害される、請求項２４１または２４２に記載の方法。
〔項２４４〕
前記対象が加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を有するか、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を有するリスクがある、請求項２４３に記載の方法。
〔項２４５〕
前記化合物または組成物を投与することによって、腎臓におけるＣＦＢの発現が阻害される、請求項２４１または２４２に記載の方法。
〔項２４６〕
前記化合物または組成物を投与することによって、糸球体におけるＣＦＢの発現が阻害される、請求項２４５に記載の方法。
〔項２４７〕
前記対象が、ループス腎炎、デンスデポジット病（ＤＤＤ）、Ｃ３糸球体腎炎（Ｃ３ＧＮ）、ＣＦＨＲ５ネフロパシー、もしくは非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、またはそれらの任意の組み合わせを有するか、それらを有するリスクがある、請求項２４５または２４６に記載の方法。
〔項２４８〕
補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の眼におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法であって、請求項１～２０７のいずれか一項に記載の化合物、請求項２０８に記載の組成物、または請求項２０９に記載のプロドラッグを前記対象に投与し、それによって前記対象の眼におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害することを含む、前記方法。
〔項２４９〕
前記補体代替経路が正常より強く活性化されている、請求項２４８に記載の方法。
〔項２５０〕
前記対象が加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を有するか、または加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を有するリスクがある、請求項２４８または２４９に記載の方法。
〔項２５１〕
補体代替経路の調節異常に関連する疾患を有するかまたは前記疾患を有するリスクがある対象の腎臓におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害する方法であって、請求項１～２０７のいずれか一項に記載の化合物、請求項２０８に記載の組成物、または請求項２０９に記載のプロドラッグを前記対象に投与し、それによって前記対象の腎臓におけるＣ３沈着を低減しまたはＣ３沈着の蓄積を阻害することを含む、前記方法。
〔項２５２〕
前記補体代替経路が正常より強く活性化されている、請求項２５１に記載の方法。
〔項２５３〕
前記対象が、ループス腎炎、デンスデポジット病（ＤＤＤ）、Ｃ３糸球体腎炎（Ｃ３ＧＮ）、ＣＦＨＲ５ネフロパシー、もしくは非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、またはそれらの任意の組み合わせを有するか、またはそれらを有するリスクがある、請求項２５１または２５２に記載の方法。
〔項２５４〕
前記化合物または組成物が前記対象に非経口投与される、請求項２４１～２５３のいずれか一項に記載の方法。
〔項２５５〕
補体代替経路の調節異常に関連する疾患を処置し、防止し、または改善するための、請求項１～２０７のいずれか一項に記載の化合物、請求項２０８に記載の組成物、または請求項２０９に記載のプロドラッグの使用。
〔項２５６〕
前記補体代替経路が正常より強く活性化されている、請求項２５５に記載の使用。
〔項２５７〕
前記疾患が黄斑変性である、請求項２５５または２５６に記載の使用。
〔項２５８〕
前記黄斑変性が加齢黄斑変性（ＡＭＤ）である、請求項２５７に記載の使用。
〔項２５９〕
前記ＡＭＤが滲出型ＡＭＤである、請求項２５８に記載の使用。
〔項２６０〕
前記ＡＭＤが乾性ＡＭＤである、請求項２５８に記載の使用。
〔項２６１〕
前記乾性ＡＭＤが地図状萎縮である、請求項２６０に記載の使用。
〔項２６２〕
前記疾患が腎臓疾患である、請求項２５５または２５６に記載の使用。
〔項２６３〕
前記腎臓疾患が、ループス腎炎、デンスデポジット病（ＤＤＤ）、Ｃ３糸球体腎炎（Ｃ３ＧＮ）、ＣＦＨＲ５ネフロパシー、もしくは非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項２６２に記載の使用。

Claims (15)

  1. 以下の化学構造で表わされるオリゴマー化合物：
    Figure 0007001663000687
     （配列番号４４０）。
  2. 以下の化学構造で表わされるオリゴマー化合物：
    Figure 0007001663000688
     （配列番号４４０）。
  3. 以下の式：
    Figure 0007001663000689
     で表わされる修飾オリゴヌクレオチドとコンジュゲート基とを含むオリゴマー化合物であって、上記式中、
    Ａは、アデニンであり、
    ｍ Ｃは、５－メチルシトシンであり、
    Ｇは、グアニンであり、
    Ｔは、チミンであり、
    ｅは、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、
    ｄは、β－Ｄ－２’－デオキシリボヌクレオシドを示し、
    ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結を示し、
    ＧａｌＮＡｃ ３ －７ ａ-o’ は、
    Figure 0007001663000690
     で示され、式中、切断可能部分（ＣＭ）は、5’-P(OH)(=O)-O-3’である、
    前記オリゴマー化合物。
  4. 請求項１～３のいずれか一項に記載のオリゴマー化合物またはその塩と、医薬上許容される担体または希釈剤の少なくとも１つを含む組成物。
  5. 組成物が、４０センチポアズ（ｃＰ）未満、３０センチポアズ（ｃＰ）未満、２０センチポアズ（ｃＰ）未満、１５センチポアズ（ｃＰ）未満、または１０センチポアズ（ｃＰ）未満の粘度を有する、請求項４に記載の組成物。
  6. 対象における補体代替経路の調節異常に関連する疾患を治療するための医薬であって、請求項１～３のいずれか一項に記載のオリゴマー化合物または請求項４または５に記載の組成物を含む、前記医薬。
  7. 前記補体代替経路が正常より強く活性化されている、請求項６に記載の医薬。
  8. 前記疾患が黄斑変性、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、滲出型ＡＭＤ、乾性ＡＭＤまたは地図状萎縮である、請求項６に記載の医薬。
  9. 前記疾患が腎臓疾患である、請求項６に記載の医薬。
  10. 前記腎臓疾患がＩｇＡネフロパシー、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、デンスデポジット病（ＤＤＤ）、Ｃ３糸球体腎炎（Ｃ３ＧＮ）、ＣＦＨＲ５ネフロパシー、または非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）である、請求項９に記載の医薬。
  11. 補体代替経路の調節異常に関連する疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１～３のいずれか一項に記載のオリゴマー化合物または請求項４または５に記載の組成物の使用。
  12. 前記補体代替経路が正常より強く活性化されている、請求項１１に記載の医薬の製造におけるオリゴマー化合物または組成物の使用。
  13. 前記疾患が黄斑変性、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、滲出型ＡＭＤ、乾性ＡＭＤまたは地図状萎縮である、請求項１１に記載の医薬の製造におけるオリゴマー化合物または組成物の使用。
  14. 前記疾患が腎臓疾患である、請求項１１に記載の医薬の製造におけるオリゴマー化合物または組成物の使用。
  15. 前記腎臓疾患がＩｇＡネフロパシー、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、デンスデポジット病（ＤＤＤ）、Ｃ３糸球体腎炎（Ｃ３ＧＮ）、ＣＦＨＲ５ネフロパシー、または非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）である、請求項１４に記載の医薬の製造におけるオリゴマー化合物または組成物の使用。
JP2019228789A 2014-05-01 2019-12-19 補体ｂ因子発現を調節するための組成物及び方法 Active JP7001663B2 (ja)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461987471P 2014-05-01 2014-05-01
US61/987,471 2014-05-01
US201462076273P 2014-11-06 2014-11-06
US62/076,273 2014-11-06

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016565465A Division JP6637442B2 (ja) 2014-05-01 2015-05-01 補体ｂ因子発現を調節するための組成物及び方法

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2020058368A JP2020058368A (ja) 2020-04-16
JP2020058368A5 JP2020058368A5 (ja) 2020-05-28
JP7001663B2 true JP7001663B2 (ja) 2022-02-04

Family

ID=54359510

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016565465A Active JP6637442B2 (ja) 2014-05-01 2015-05-01 補体ｂ因子発現を調節するための組成物及び方法
JP2019228789A Active JP7001663B2 (ja) 2014-05-01 2019-12-19 補体ｂ因子発現を調節するための組成物及び方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016565465A Active JP6637442B2 (ja) 2014-05-01 2015-05-01 補体ｂ因子発現を調節するための組成物及び方法

Country Status (29)

Country Link
US (4) US10280423B2 (ja)
EP (3) EP4219718A3 (ja)
JP (2) JP6637442B2 (ja)
KR (1) KR102369736B1 (ja)
CN (2) CN106232804B (ja)
AU (1) AU2015252858C1 (ja)
BR (1) BR112016022593B1 (ja)
CA (1) CA2943894A1 (ja)
CL (2) CL2016002764A1 (ja)
CR (2) CR20200228A (ja)
DK (1) DK3137596T3 (ja)
DO (1) DOP2016000291A (ja)
EA (1) EA036496B1 (ja)
ES (2) ES2745825T3 (ja)
HR (1) HRP20191664T1 (ja)
HU (1) HUE046272T2 (ja)
IL (2) IL247883B (ja)
LT (1) LT3137596T (ja)
MX (1) MX380866B (ja)
PE (2) PE20170010A1 (ja)
PH (1) PH12016502062B1 (ja)
PL (2) PL3137596T3 (ja)
PT (1) PT3137596T (ja)
RS (1) RS59182B1 (ja)
RU (1) RU2701645C2 (ja)
SG (2) SG11201608502TA (ja)
SI (1) SI3137596T1 (ja)
UA (1) UA121656C2 (ja)
WO (1) WO2015168635A2 (ja)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2839006B1 (en) * 2012-04-20 2018-01-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
KR102482890B1 (ko) 2013-05-01 2022-12-30 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 아포지질단백질 (a) 발현을 조절하는 조성물 및 방법
EP3043827B1 (en) * 2013-09-13 2019-07-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of complement factor b
CN110903337A (zh) 2014-05-01 2020-03-24 Ionis制药公司 用于调节生长激素受体表达的组合物和方法
PE20170010A1 (es) 2014-05-01 2017-03-04 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para modular la expresion del factor b del complemento
KR20170068469A (ko) 2014-10-10 2017-06-19 에프. 호프만-라 로슈 아게 ＧａｌＮＡｃ 포스포라미다이트, 그의 핵산 컨쥬게이트 및 그의 용도
CA2999341A1 (en) 2015-11-06 2017-05-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulating apolipoprotein (a) expression
US10781175B2 (en) 2016-07-15 2020-09-22 Am Chemicals Llc Solid supports and phosphoramidite building blocks for oligonucleotide conjugates
JOP20190215A1 (ar) * 2017-03-24 2019-09-19 Ionis Pharmaceuticals Inc مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9
WO2020109343A1 (en) 2018-11-29 2020-06-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy for treatment of macular degeneration
WO2020264055A1 (en) * 2019-06-25 2020-12-30 Amgen Inc. Purification methods for carbohydrate-linked oligonucleotides
KR20220058578A (ko) 2019-09-03 2022-05-09 아크투루스 쎄라퓨틱스, 인크. 치료 활성 접합체의 아시알로당단백질 수용체 매개 전달
JP7676377B2 (ja) 2019-10-22 2025-05-14 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 補体成分Ｃ３ ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
MX2022006514A (es) 2019-12-26 2022-07-11 Eisai R&D Man Co Ltd Composicion farmaceutica que contiene un acido ribonucleico de doble hebra que inhibe la expresion de c5 de complemento.
KR20230017789A (ko) * 2020-04-30 2023-02-06 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 보체 인자 B (CFB) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법
CA3225937A1 (en) * 2021-07-17 2023-02-16 Dmitry Samarsky Products and compositions
MX2024002767A (es) 2021-09-02 2024-08-20 Silence Therapeutics Gmbh Ácidos nucleicos para inhibir la expresión del factor b del complemento (cfb) en una célula.
EP4423273A1 (en) * 2021-10-29 2024-09-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complement factor b (cfb) irna compositions and methods of use thereof
IL320604A (en) * 2022-11-02 2025-07-01 Ionis Pharmaceuticals Inc Methods for modulating complement factor B expression
EP4638743A2 (en) * 2022-12-19 2025-10-29 Sanegene Bio USA Inc. Small interfering rna targeting cfb and uses thereof
US12378558B2 (en) * 2023-03-21 2025-08-05 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. RNAi agents for inhibiting expression of complement factor B (CFB), pharmaceutical compositions thereof, and methods of use
TW202513799A (zh) * 2023-06-02 2025-04-01 大陸商維亞臻生物技術（蘇州）有限公司 用於免疫類疾病的雙鏈核苷酸化合物及其用途
CN118620964A (zh) * 2023-06-28 2024-09-10 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 一种cfb基因修饰的非人动物
TW202519657A (zh) * 2023-07-28 2025-05-16 大陸商蘇州炫景生物科技有限公司 Cfb抑制劑組合物及其應用
WO2025151250A2 (en) * 2024-01-09 2025-07-17 Adarx Pharmaceuticals, Inc. Complement factor b-modulating compositions and methods of use thereof

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005504522A (ja) 2001-06-21 2005-02-17 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド トランスフォーム増殖因子β受容体ＩＩ発現のアンチセンスモジュレーション
JP2006507841A (ja) 2002-11-14 2006-03-09 ダーマコン， インコーポレイテッド 機能的ｓｉＲＮＡおよび超機能的ｓｉＲＮＡ
JP2007505605A (ja) 2003-09-16 2007-03-15 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）を使用したＲＮＡ干渉により媒介される血管内皮増殖因子遺伝子発現および血管内皮増殖因子遺伝子受容体遺伝子発現のＲＮＡ干渉媒介性抑制
WO2012177947A2 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of expression of apolipoprotein c-iii (apoc3) genes
WO2013166121A1 (en) 2012-05-02 2013-11-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel tetragalnac containing conjugates and methods for delivery of oligonucleotides

Family Cites Families (292)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2699508A (en) 1951-12-21 1955-01-11 Selectronics Inc Method of mounting and construction of mounting for low frequency piezoelectric crystals
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
DE3329892A1 (de) 1983-08-18 1985-03-07 Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
USRE34036E (en) 1984-06-06 1992-08-18 National Research Development Corporation Data transmission using a transparent tone-in band system
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US4751219A (en) 1985-02-05 1988-06-14 Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
EP0260032B1 (en) 1986-09-08 1994-01-26 Ajinomoto Co., Inc. Compounds for the cleavage at a specific position of RNA, oligomers employed for the formation of said compounds, and starting materials for the synthesis of said oligomers
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
DE3851889T2 (de) 1987-06-24 1995-04-13 Florey Howard Inst Nukleosid-derivate.
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US5403711A (en) 1987-11-30 1995-04-04 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid hybridization and amplification method for detection of specific sequences in which a complementary labeled nucleic acid probe is cleaved
JP3019994B2 (ja) 1987-11-30 2000-03-15 ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション 新規なオリゴデオキシヌクレオチド、それを使用した標的遺伝子の発現をブロックする方法、及び新規なオリゴデオキシヌクレオチド並びにそれを使用した標的遺伝子の発現を阻止する方法
WO1989009221A1 (en) 1988-03-25 1989-10-05 University Of Virginia Alumni Patents Foundation Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5194599A (en) 1988-09-23 1993-03-16 Gilead Sciences, Inc. Hydrogen phosphonodithioate compositions
US5256775A (en) 1989-06-05 1993-10-26 Gilead Sciences, Inc. Exonuclease-resistant oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5721218A (en) 1989-10-23 1998-02-24 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides with inverted polarity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
DE69033495T2 (de) 1989-10-24 2000-07-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modifizierte nukleotide
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US7101993B1 (en) 1990-01-11 2006-09-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides containing 2′-O-modified purines
US5859221A (en) 1990-01-11 1999-01-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US6005087A (en) 1995-06-06 1999-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5623065A (en) 1990-08-13 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped 2' modified oligonucleotides
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
US5220007A (en) 1990-02-15 1993-06-15 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of RNA and production of encoded polypeptides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
EP0455905B1 (en) 1990-05-11 1998-06-17 Microprobe Corporation Dipsticks for nucleic acid hybridization assays and methods for covalently immobilizing oligonucleotides
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5386023A (en) 1990-07-27 1995-01-31 Isis Pharmaceuticals Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling
CA2088258C (en) 1990-07-27 2004-09-14 Phillip Dan Cook Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5378825A (en) 1990-07-27 1995-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5223618A (en) 1990-08-13 1993-06-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
KR100211552B1 (ko) 1990-08-03 1999-08-02 디. 꼬쉬 유전자 발현 억제용 화합물 및 방법
US5177196A (en) 1990-08-16 1993-01-05 Microprobe Corporation Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
JPH06505704A (ja) 1990-09-20 1994-06-30 ギリアド　サイエンシズ，インコーポレイテッド 改変ヌクレオシド間結合
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US6582908B2 (en) 1990-12-06 2003-06-24 Affymetrix, Inc. Oligonucleotides
US5948903A (en) 1991-01-11 1999-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 3-deazapurines
US5672697A (en) 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
DE59208572D1 (de) 1991-10-17 1997-07-10 Ciba Geigy Ag Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
CA2122365C (en) 1991-11-26 2010-05-11 Brian Froehler Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5792608A (en) 1991-12-12 1998-08-11 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
DK1695979T3 (da) * 1991-12-24 2011-10-10 Isis Pharmaceuticals Inc Gappede modificerede oligonukleotider
US5700922A (en) 1991-12-24 1997-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US20030206887A1 (en) * 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
WO1994002499A1 (en) 1992-07-27 1994-02-03 Hybridon, Inc. Oligonucleotide alkylphosphonothioates
NZ262254A (en) 1993-01-25 1997-10-24 Hybridon Inc Oligonucleotide analogue containing a ribonucleotide alkylphosphon(ate or thioate), gene repression
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304620D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Compounds
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
CA2159631A1 (en) 1993-03-30 1994-10-13 Sanofi Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them
WO1994022891A1 (en) 1993-03-31 1994-10-13 Sterling Winthrop Inc. Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5801154A (en) 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
KR100386337B1 (ko) 1993-12-09 2004-03-24 토마스 제퍼슨 대학교 진핵세포에서부위-특이적돌연변이를위한화합물과그방법
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US5646269A (en) 1994-04-28 1997-07-08 Gilead Sciences, Inc. Method for oligonucleotide analog synthesis
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5681940A (en) * 1994-11-02 1997-10-28 Icn Pharmaceuticals Sugar modified nucleosides and oligonucleotides
US6908903B1 (en) 1994-12-07 2005-06-21 Aletheon Pharmaceuticals, Inc. Cluster clearing agents
US6172045B1 (en) 1994-12-07 2001-01-09 Neorx Corporation Cluster clearing agents
US5652356A (en) 1995-08-17 1997-07-29 Hybridon, Inc. Inverted chimeric and hybrid oligonucleotides
EP0862439A4 (en) 1995-11-22 2001-01-10 O Paul O P Ts LIGANDS FOR INCREASING THE CELLULAR UPtake OF BIOMOLECULES
US20030119724A1 (en) 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
US5998203A (en) 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
EP0950665A4 (en) 1996-09-26 2004-05-06 Ajinomoto Kk PHYSIOLOGICALLY ACTIVE MODIFIED PROTEINS AND DRUG COMPOSITIONS CONTAINING THEM
USRE44779E1 (en) 1997-03-07 2014-02-25 Santaris Pharma A/S Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogues
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
KR100414936B1 (ko) 1997-09-12 2004-01-13 엑시콘 에이/에스 이환 및 삼환 뉴클레오시드, 뉴클레오타이드 및올리고뉴클레오타이드 동족체
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US20030228597A1 (en) 1998-04-13 2003-12-11 Cowsert Lex M. Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation
US6300319B1 (en) 1998-06-16 2001-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted oligonucleotide conjugates
US6043352A (en) 1998-08-07 2000-03-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides
US6166239A (en) 1998-09-04 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide protecting groups
AU1705100A (en) 1998-10-09 2000-05-01 Musc Foundation For Research Development Blocking factor b to treat complement-mediated immune disease
NZ513402A (en) 1999-02-12 2003-06-30 Sankyo Co Novel nucleosides and oligonucleotide analogues
US20030170249A1 (en) 1999-02-19 2003-09-11 Hakomori Sen-Itiroh Vaccines directed to cancer-associated carbohydrate antigens
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
WO2000063364A2 (en) 1999-04-21 2000-10-26 American Home Products Corporation Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences
PT1178999E (pt) 1999-05-04 2007-06-26 Santaris Pharma As Análogos de l-ribo-lna
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
US6383812B1 (en) 1999-05-28 2002-05-07 Academia Sinica Anti liver disease drug R-YEEE and method of synthesizing branched galactose-terminal glycoproteins
US8541548B2 (en) 1999-06-07 2013-09-24 Arrowhead Madison Inc. Compounds and methods for reversible modification of biologically active molecules
US20080281041A1 (en) 1999-06-07 2008-11-13 Rozema David B Reversibly Masked Polymers
JP4151751B2 (ja) 1999-07-22 2008-09-17 第一三共株式会社 新規ビシクロヌクレオシド類縁体
DE19935303A1 (de) * 1999-07-28 2001-02-08 Aventis Pharma Gmbh Oligonukleotide zur Inhibierung der Expression von humanem eg5
US20020082227A1 (en) * 1999-09-30 2002-06-27 Scott Henry Use of oligonucleotides for inhibition of complement activation
ES2261270T3 (es) 1999-12-30 2006-11-16 K.U. LEUVEN RESEARCH & DEVELOPMENT Acidos nucleicos que contienen ciclohexeno.
US7491805B2 (en) * 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US7833992B2 (en) 2001-05-18 2010-11-16 Merck Sharpe & Dohme Conjugates and compositions for cellular delivery
US7053199B2 (en) 2000-08-29 2006-05-30 Takeshi Imanishi Nucleoside analogs and oligonucleotide derivatives containing these analogs
US6426220B1 (en) 2000-10-30 2002-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of calreticulin expression
US6906182B2 (en) 2000-12-01 2005-06-14 Cell Works Therapeutics, Inc. Conjugates of glycosylated/galactosylated peptide, bifunctional linker, and nucleotidic monomers/polymers, and related compositions and method of use
WO2002087541A1 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid-based formulations for gene transfer
US20030158403A1 (en) 2001-07-03 2003-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20030175906A1 (en) 2001-07-03 2003-09-18 Muthiah Manoharan Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
CA2452458A1 (en) 2001-07-03 2003-01-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US6964950B2 (en) 2001-07-25 2005-11-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of C-reactive protein expression
US20030073623A1 (en) * 2001-07-30 2003-04-17 Drmanac Radoje T. Novel nucleic acid sequences obtained from various cDNA libraries
WO2003020739A2 (en) 2001-09-04 2003-03-13 Exiqon A/S Novel lna compositions and uses thereof
US7439043B2 (en) 2001-10-10 2008-10-21 Neose Technologies, Inc. Galactosyl nucleotide sugars
US20100240730A1 (en) 2002-02-20 2010-09-23 Merck Sharp And Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
EP1540004A4 (en) 2002-07-31 2007-10-03 Nucleonics Inc DOUBLE-STRING RNA STRUCTURES AND CONSTRUCTS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
WO2004014933A1 (en) * 2002-08-07 2004-02-19 University Of Massachusetts Compositions for rna interference and methods of use thereof
WO2004024757A2 (en) 2002-09-11 2004-03-25 Santaris Pharma A/S Modified pna molecules
AU2003284323A1 (en) 2002-10-18 2004-05-04 Alnylam Pharmaceuticals Inc Double-stranded rna structures and constructs, and methods for generating and using the same
CA2504694C (en) 2002-11-05 2013-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
EP1560840B1 (en) 2002-11-05 2015-05-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
US6673661B1 (en) 2002-12-20 2004-01-06 Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. Self-aligned method for forming dual gate thin film transistor (TFT) device
US20070015927A1 (en) 2003-01-09 2007-01-18 Kim Byeang H New phosphoramidite compounds
EP3450559A1 (en) 2003-03-07 2019-03-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic compositions
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
ES2702942T3 (es) 2003-04-17 2019-03-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc Agentes de ARNi modificados
US20070123466A1 (en) 2003-05-13 2007-05-31 New York Society For The Ruptured And Crippled Maintaining The Hospital For Special Surgery Method of treating recurrent miscarriages
WO2004101619A1 (ja) 2003-05-15 2004-11-25 Shionogi Co., Ltd. 機能的糖ペプチドの合理的設計および合成
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
JP4731324B2 (ja) 2003-08-28 2011-07-20 武 今西 Ｎ−ｏ結合性架橋構造型新規人工核酸
WO2005027962A1 (en) 2003-09-18 2005-03-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4’-thionucleosides and oligomeric compounds
US7959919B2 (en) 2003-11-19 2011-06-14 Novelmed Therapeutics, Inc. Method of inhibiting factor B-mediated complement activation
US20060019941A1 (en) 2003-12-23 2006-01-26 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Analogs of benzoquinone-containing ansamycins and methods of use thereof
JPWO2005061707A1 (ja) 2003-12-24 2007-07-12 協和醗酵工業株式会社 癌細胞のＥｇ５阻害剤に対する感受性を判定する方法
US20050244851A1 (en) 2004-01-13 2005-11-03 Affymetrix, Inc. Methods of analysis of alternative splicing in human
EP1713503B1 (en) 2004-02-10 2013-07-31 The Regents of the University of Colorado, a Body Corporate Inhibition of factor b, the alternative complement pathway and methods related thereto
US20050244869A1 (en) 2004-04-05 2005-11-03 Brown-Driver Vickie L Modulation of transthyretin expression
WO2005097155A1 (ja) 2004-04-08 2005-10-20 Takara Bio Inc. 神経突起伸長誘導剤
CA2568735A1 (en) 2004-06-03 2005-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation
EP2990410A1 (en) 2004-08-10 2016-03-02 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemically modified oligonucleotides
US20090203132A1 (en) 2004-09-09 2009-08-13 Swayze Eric E Pyrrolidinyl groups for attaching conjugates to oligomeric compounds
EP2397563A3 (en) 2004-09-17 2012-07-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced antisense oligonucleotides
WO2006047842A2 (en) 2004-11-08 2006-05-11 K.U. Leuven Research And Development Modified nucleosides for rna interference
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
JP2008527993A (ja) 2005-01-24 2008-07-31 アヴァリス・アクチエボラーグ 特異性及び送達の改善のためのｓｉＲＮＡ分子、ｓｈＲＮＡ分子又はアンチセンス分子及び機能的実体を含む複合体
CA2623772A1 (en) 2005-09-19 2007-03-29 Johnson & Johnson Pharmaceutical Research & Development, L.L.C. Modulation of glucocorticoid receptor expression
AU2006311966A1 (en) * 2005-11-02 2007-05-18 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Method evolved for recognition and testing of age related macular degeneration (MERT-ARMD)
ES2516815T3 (es) 2006-01-27 2014-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en la posición 6
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
WO2007136989A2 (en) * 2006-05-05 2007-11-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating expression of dgat2
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
CA2651453C (en) 2006-05-11 2014-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-modified bicyclic nucleic acid analogs
US8658211B2 (en) 2006-08-18 2014-02-25 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
BRPI0715375A2 (pt) 2006-08-18 2013-06-18 Hoffmann La Roche policonjugados para distribuiÇço in vivo de polinucleotÍdeos
EP2064223B1 (en) 2006-09-22 2013-04-24 Dharmacon, Inc. Duplex oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by RNA interference
JP5665317B2 (ja) 2006-10-18 2015-02-04 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド アンチセンス化合物
US20100190837A1 (en) 2007-02-15 2010-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-Substituted-2-F' Modified Nucleosides and Oligomeric Compounds Prepared Therefrom
EP2129402A2 (en) 2007-02-16 2009-12-09 KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH Receptor and antigen targeted prodrug
KR20090122465A (ko) 2007-03-01 2009-11-30 어드벤스드 비젼 테라피스, 인코포레이티드 염증성 질환의 치료
WO2009029293A2 (en) * 2007-03-02 2009-03-05 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting myc gene expression and uses thereof
WO2008131419A2 (en) 2007-04-23 2008-10-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of rna interference agents
WO2008150729A2 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
EP2173760B2 (en) 2007-06-08 2015-11-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
US20090004140A1 (en) 2007-06-26 2009-01-01 Yao-Ling Qiu 4-substituted pyrrolidine as anti-infectives
AU2008272918B2 (en) 2007-07-05 2012-09-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
EP2188298B1 (en) 2007-08-15 2013-09-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Tetrahydropyran nucleic acid analogs
US20090123928A1 (en) 2007-10-11 2009-05-14 The Johns Hopkins University Genomic Landscapes of Human Breast and Colorectal Cancers
US8546556B2 (en) 2007-11-21 2013-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc Carbocyclic alpha-L-bicyclic nucleic acid analogs
EP3705125B1 (en) 2007-12-04 2023-07-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides
EP2245039A4 (en) 2008-01-31 2012-06-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc OPTIMIZED METHODS FOR EXPORING DSRNA TO TARGET THE PCSK9 GEN
US8530640B2 (en) 2008-02-07 2013-09-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs
WO2009142822A2 (en) 2008-03-26 2009-11-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 2-f modified rna interference agents
AU2009234266B2 (en) 2008-04-11 2015-08-06 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
WO2009143369A2 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Method of preparing nucleosides and analogs thereof without using chromatography
SI2320925T1 (sl) 2008-07-10 2016-05-31 Regenesance B.V. Komplement antagonisti in njih uporaba
WO2010017509A1 (en) 2008-08-07 2010-02-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of transthyretin expression for the treatment of cns related disorders
WO2010039548A2 (en) 2008-09-23 2010-04-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition
WO2010036696A1 (en) 2008-09-24 2010-04-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Cyclohexenyl nucleic acid analogs
WO2010036698A1 (en) 2008-09-24 2010-04-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides
HRP20150796T1 (hr) 2008-10-20 2015-09-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Pripravci i postupci za inhibiciju ekspresije transtiretina
WO2010048585A2 (en) 2008-10-24 2010-04-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and methods
US8883752B2 (en) 2008-10-24 2014-11-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5′ and 2′ BIS-substituted nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
CN105152939A (zh) 2008-11-10 2015-12-16 阿尔尼拉姆医药品有限公司 用于递送治疗剂的脂质和组合物
EP3243504A1 (en) 2009-01-29 2017-11-15 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation
EP2669290A1 (en) 2009-03-02 2013-12-04 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Nucleic Acid Chemical Modifications
FR2943060B1 (fr) 2009-03-13 2013-01-04 Commissariat Energie Atomique Agents chelatants d'ions metalliques, leurs procedes de preparation et leurs applications
KR20210031549A (ko) 2009-05-05 2021-03-19 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 지질 조성물
KR20230098713A (ko) 2009-06-10 2023-07-04 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 향상된 지질 조성물
EP2442792A4 (en) 2009-06-15 2015-12-23 Alnylam Pharmaceuticals Inc TESTING GENE PCSK9 LIPID-FORMULATED DSRNA
WO2011005861A1 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide end caps
WO2011005860A2 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5' phosphate mimics
US9012421B2 (en) 2009-08-06 2015-04-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
WO2011038356A2 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Johns Hopkins University Novel liver-targeting agents and their synthesis
EP2512491B1 (en) 2009-10-16 2017-10-11 Glaxo Group Limited Hbv antisense inhibitors
TWI391144B (zh) 2009-10-26 2013-04-01 Iner Aec Executive Yuan 一種定量肝殘餘功能的檢驗方法與其新穎肝受體造影檢驗藥劑
TWI388338B (zh) 2009-10-26 2013-03-11 Iner Aec Executive Yuan 對聚合醣鏈進行放射標誌以作為肝受體造影劑之方法
WO2011072290A2 (en) 2009-12-11 2011-06-16 The Regents Of The University Of Michigan Targeted dendrimer-drug conjugates
US9198972B2 (en) 2010-01-28 2015-12-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
ES2562817T3 (es) 2010-02-24 2016-03-08 Arrowhead Research Corporation Composiciones para el suministro dirigido de ARNip
WO2011115818A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
US20130109817A1 (en) 2010-03-26 2013-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Modified Polymers for Delivery of Polynucleotides, Method of Manufacture, and Methods of Use Thereof
WO2011120053A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
US9102938B2 (en) 2010-04-01 2015-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 2′ and 5′ modified monomers and oligonucleotides
US9725479B2 (en) 2010-04-22 2017-08-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5′-end derivatives
WO2011133876A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
EP3173419A1 (en) 2010-04-28 2017-05-31 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modified nucleosides, analogs thereof and oligomeric compounds prepared therefrom
NZ603339A (en) 2010-04-29 2015-01-30 Isis Pharmaceuticals Inc Modulation of transthyretin expression
US20130236968A1 (en) 2010-06-21 2013-09-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
EP2616543A1 (en) 2010-09-15 2013-07-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. MODIFIED iRNA AGENTS
US8987377B2 (en) 2010-11-19 2015-03-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Poly(amide) polymers for the delivery of oligonucleotides
KR20130132475A (ko) 2010-12-17 2013-12-04 애로우헤드 리서치 코오포레이션 ｓｉＲＮＡ의 갈락토오스 클러스터-약동학적 조절제 표적 물질
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
RU2582235C2 (ru) 2010-12-29 2016-04-20 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Низкомолекулярные конъюгаты для внутриклеточной доставки нуклеиновых кислот
EP2673361B1 (en) 2011-02-08 2016-04-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
MY163004A (en) 2011-04-01 2017-07-31 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulation of signal transducer and activator of transcription 3 (stat3) expression
TW201303013A (zh) 2011-04-21 2013-01-16 Isis Pharmaceuticals Inc Ｂ型肝炎病毒（ｈｂｖ）表現之調節
JP6042871B2 (ja) 2011-04-21 2016-12-14 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． Ｂ型肝炎ウイルス（ｈｂｖ）発現の調節
AU2012272970A1 (en) 2011-06-21 2014-02-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (ANGPTL3) iRNA compositions and methods of use thereof
MX2014001971A (es) 2011-08-26 2014-03-31 Arrowhead Res Corp Polimeros de poli(vinilester) para suministro de acido nucleico in vivo.
EP2751270B1 (en) 2011-08-29 2018-08-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
MY167390A (en) * 2011-11-18 2018-08-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc Rnai agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (ttr) associated diseases
EP2812433A4 (en) 2012-02-08 2016-01-20 Isis Pharmaceuticals Inc METHOD AND COMPOSITIONS FOR MODULATING THE FACTOR VII EXPRESSION
EP2839006B1 (en) 2012-04-20 2018-01-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
EP3919620A1 (en) 2012-05-02 2021-12-08 Sirna Therapeutics, Inc. Short interfering nucleic acid (sina) compositions
WO2013173789A2 (en) 2012-05-17 2013-11-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide compositions
EP2906699A4 (en) 2012-10-11 2016-06-08 Ionis Pharmaceuticals Inc OLIGOMER COMPOUNDS WITH BICYCLIC NUCLEOSIDES AND USES THEREOF
SG11201503821YA (en) 2012-11-15 2015-06-29 Roche Innovation Ct Copenhagen As Oligonucleotide conjugates
RU2649367C2 (ru) 2013-01-30 2018-04-02 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Конъюгаты углевода и lna-олигонуклеотида
WO2014118272A1 (en) 2013-01-30 2014-08-07 Santaris Pharma A/S Antimir-122 oligonucleotide carbohydrate conjugates
PL2970974T3 (pl) * 2013-03-14 2018-01-31 Alnylam Pharmaceuticals Inc Kompozycje komponentu C5 dopełniacza iRNA i sposoby ich zastosowania
KR102482890B1 (ko) 2013-05-01 2022-12-30 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 아포지질단백질 (a) 발현을 조절하는 조성물 및 방법
AU2014284152B2 (en) * 2013-06-21 2020-01-23 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulation of target nucleic acids
DK3013959T3 (da) 2013-06-27 2020-02-17 Roche Innovation Ct Copenhagen As Antisense-oligomerer og konjugater målrettet pcsk9
DE102013106985A1 (de) * 2013-07-03 2015-01-22 Osram Oled Gmbh Optoelektronische Bauelementevorrichtung und Verfahren zum Herstellen einer optoelektronischen Bauelementevorrichtung
DK3019200T3 (da) * 2013-07-11 2022-06-20 Alnylam Pharmaceuticals Inc Oligonukleotid-ligand-konjugater og fremgangsmåde til fremstiling deraf
EP3043827B1 (en) * 2013-09-13 2019-07-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of complement factor b
KR102344559B1 (ko) * 2013-12-12 2021-12-31 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 보체 성분 ｉＲＮＡ 조성물 및 이의 이용 방법
PE20170010A1 (es) 2014-05-01 2017-03-04 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para modular la expresion del factor b del complemento

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005504522A (ja) 2001-06-21 2005-02-17 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド トランスフォーム増殖因子β受容体ＩＩ発現のアンチセンスモジュレーション
JP2006507841A (ja) 2002-11-14 2006-03-09 ダーマコン， インコーポレイテッド 機能的ｓｉＲＮＡおよび超機能的ｓｉＲＮＡ
JP2007505605A (ja) 2003-09-16 2007-03-15 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）を使用したＲＮＡ干渉により媒介される血管内皮増殖因子遺伝子発現および血管内皮増殖因子遺伝子受容体遺伝子発現のＲＮＡ干渉媒介性抑制
WO2012177947A2 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of expression of apolipoprotein c-iii (apoc3) genes
WO2013166121A1 (en) 2012-05-02 2013-11-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel tetragalnac containing conjugates and methods for delivery of oligonucleotides

Also Published As

Publication number Publication date
NZ763982A (en) 2023-11-24
RS59182B1 (sr) 2019-10-31
US20230357776A1 (en) 2023-11-09
EP4219718A3 (en) 2024-01-10
MX380866B (es) 2025-03-12
CA2943894A1 (en) 2015-11-05
EP3608406A1 (en) 2020-02-12
EP3137596A4 (en) 2017-09-20
AU2015252858A1 (en) 2016-10-06
ES2745825T3 (es) 2020-03-03
LT3137596T (lt) 2019-09-10
US11732265B2 (en) 2023-08-22
US20170159055A1 (en) 2017-06-08
JP2020058368A (ja) 2020-04-16
ES2941742T3 (es) 2023-05-25
BR112016022593A2 (pt) 2017-10-10
EA036496B1 (ru) 2020-11-17
CL2018001996A1 (es) 2019-03-08
PL3608406T3 (pl) 2023-05-22
PT3137596T (pt) 2019-09-27
PH12016502062B1 (en) 2023-01-27
NZ724366A (en) 2023-10-27
MX2016014294A (es) 2017-02-02
JP2017514489A (ja) 2017-06-08
KR102369736B1 (ko) 2022-03-02
CR20200228A (es) 2020-07-09
DK3137596T3 (da) 2019-09-02
HRP20191664T1 (hr) 2019-12-13
US20200048638A1 (en) 2020-02-13
CN106232804A (zh) 2016-12-14
IL271659A (en) 2020-02-27
RU2016147047A3 (ja) 2018-10-26
CN110724687A (zh) 2020-01-24
US20230057718A1 (en) 2023-02-23
US10280423B2 (en) 2019-05-07
BR112016022593B1 (pt) 2022-04-26
EP4219718A2 (en) 2023-08-02
PH12016502062A1 (en) 2016-12-19
WO2015168635A3 (en) 2016-01-07
IL247883A0 (en) 2016-11-30
WO2015168635A2 (en) 2015-11-05
CN110724687B (zh) 2023-10-13
EA201692204A1 (ru) 2017-04-28
SI3137596T1 (sl) 2019-08-30
SG11201608502TA (en) 2016-11-29
EP3137596A2 (en) 2017-03-08
EP3608406B1 (en) 2023-02-15
CL2016002764A1 (es) 2017-12-29
AU2015252858B2 (en) 2020-12-10
EP3137596B1 (en) 2019-07-10
PL3137596T3 (pl) 2019-11-29
UA121656C2 (uk) 2020-07-10
AU2015252858C1 (en) 2021-09-16
CR20160554A (es) 2017-03-07
IL247883B (en) 2021-03-25
CN106232804B (zh) 2019-10-25
KR20160147892A (ko) 2016-12-23
PE20190626A1 (es) 2019-04-26
PE20170010A1 (es) 2017-03-04
HUE046272T2 (hu) 2020-02-28
SG10201809953QA (en) 2018-12-28
JP6637442B2 (ja) 2020-01-29
RU2016147047A (ru) 2018-06-01
RU2701645C2 (ru) 2019-09-30
DOP2016000291A (es) 2017-02-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7001663B2 (ja) 補体ｂ因子発現を調節するための組成物及び方法
JP6882411B2 (ja) 成長ホルモン受容体発現を調節するための組成物及び方法
JP6665111B2 (ja) Ｐｋｋ発現を調節するための組成物及び方法
HK40022441A (en) Compositions and methods for modulating complement factor b expression
HK1234433A1 (en) Compositions and methods for modulating complement factor b expression
HK1234433B (en) Compositions and methods for modulating complement factor b expression

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20200117

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20200310

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20210201

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20210412

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210802

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20211206

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20211224

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7001663

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250