UA110691C2 - Одержана з моноциту людини стовбурова клітина для терапевтичного застосування і спосіб її індукції - Google Patents

Одержана з моноциту людини стовбурова клітина для терапевтичного застосування і спосіб її індукції Download PDF

Info

Publication number
UA110691C2
UA110691C2 UAA201107956A UAA201107956A UA110691C2 UA 110691 C2 UA110691 C2 UA 110691C2 UA A201107956 A UAA201107956 A UA A201107956A UA A201107956 A UAA201107956 A UA A201107956A UA 110691 C2 UA110691 C2 UA 110691C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
stem cells
monocytes
water
active ingredient
plant extract
Prior art date
Application number
UAA201107956A
Other languages
English (en)
Inventor
Хісанобу Хірано
Ясусі Охкубо
Кендзіро Сасакі
Хіронобу Ісіяма
Original Assignee
Оцука Фармасьютікал Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Оцука Фармасьютікал Ко., Лтд. filed Critical Оцука Фармасьютікал Ко., Лтд.
Publication of UA110691C2 publication Critical patent/UA110691C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0645—Macrophages, e.g. Kuepfer cells in the liver; Monocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/76—Undefined extracts from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/22—Colony stimulating factors (G-CSF, GM-CSF)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)

Abstract

Винахід належить до стовбурових клітин, одержаних культивуванням моноцитів в присутності (і) M-CSF і (іі) щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді екстракту рослинного походження, за допомогою цього дедиференціюючи моноцити; до терапевтичного засобу для лікування пошкоджених клітин, тканин або органів; до клітинного лікарського засобу; до способу одержання стовбурових клітин, культурального середовища для дедиференціації моноцитів; засобу, що викликає дедиференціацію; до набору клітинного лікарського засобу; до набору для одержання дедиференційованих клітин; і до фармацевтичної композиції.

Description

Галузь техніки, якої стосується винахід
Даний винахід належить до способу одержання клітин для застосування в клітинних лікарських засобах завдяки клітинам, що швидко диференціюються, які належно диференційовані в живому організмі. Даний винахід також належить до засобу для лікування захворювань, пов'язаних з клітинними пошкодженнями, пошкодженнями тканин або органів.
Даний винахід, крім того, належить до клітинного лікарського засобу, способу одержання стовбурових клітин, культурального середовища для моноцитів, що диференціюються, засобу, що індукує дедиференціювання, набору клітинного лікарського засобу, набору для одержання дедиференційованих клітин і фармацевтичної композиції, які ефективно індукують клітинну дедиференціацію, і до стовбурових клітин.
Попередній рівень техніки
Деякий час тому увага дослідників було привернута до медичних процедур, направлених на сприяння регенерації тканин для заміщення клітин, втрачених з будь-якої причини, як основне лікування захворювань. В останні роки, подальший розвиток отримала концепція клітинних лікарських засобів, які призначені для регенерації і відновлення тканин в патологічній ділянці за допомогою взаємодії міжклітинних біологічно активних речовин шляхом ін'єкції стовбурових клітин або клітин-попередників клітин тканини.
У зв'язку з цим, було багато повідомлень про те, що диференційовані клітини в тканині, наприклад, моноцити, що походять з периферичної крові, диференціюються в стовбурові клітини при культивуванні в присутності специфічних цитокінів.
Однак, коли стовбурові клітини або тканинні клітини-попередники вводять в живий організм у вигляді клітинного лікарського засобу, то процентна частка клітин, що надходять в мішеневу пошкоджену ділянку, не завжди висока і непостійна. Для розв'язання цієї проблеми потрібне одержання великої кількості клітин. Крім того, поведінка клітин, які розподіляються в ділянках, які відрізняються від ділянки-мішені, ще не була детально досліджена, і залишається питання побічних ефектів. Крім того, хоча для посиленого терапевтичного ефекту необхідне введення великої кількості клітин, одержання аутологічних клітин за короткий період часу представляється складним.
Недавно стало зрозуміло, що відбувається феномен, який називається "хомінгом". При
Зо цьому феномені відбувається експресія ЗОЕ1 (що походить з клітин строми фактор 1) або МЕСЕ (судинний ендотеліальний клітинний фактор росту) пошкодженої ділянки в умовах ішемії; як частини системи біологічної репарації ці фактори служать як молекули, що індукуються; і клітини, що експресують рецептори, які відповідають цим молекулам, що індукуються, примусово направляються в пошкоджену ділянку. Рецепторами цих факторів є СХСОК4А для
ЗОЕ1 і МЕСЕК для МЕСЕ. Наприклад, в непатентному документі 1 повідомляється, що рана не заживає, якщо 5ОЕ1 блокується в ішемічній ділянці, або коли клітини, що експресують СХСОКА, видаляються з крові.
Еапагісй (непатентний документ 2), Нирепгтап (непатентний документ 3), Її т. д., повідомляють про способи одержання плюрипотентних стовбурових клітин з моноцитів людини шляхом індукції дедиференціації. У цих способах для інкубації використовуються різні цитокіни, включаючи М-С5Е (фактор, що стимулює колонії макрофагів). Кожний спосіб культивування показав, що деякі недиференційовані маркери ставали позитивними. Крім того, Кижмапа еї аї. (непатентний документ 4) повідомляють, що мультипотентні стовбурові клітини (МОМС) можуть бути індуковані з мононуклеарних клітин людини з використанням культурального планшета, на який наноситься фібронектин.
Список посилань
Непатентний документ 1: Маї. Меа. 2004 Ацо; 10 (8): 858-64
Непатентний документ 2: КиппКе М, Рапагісп Е, "Оїйегепіайоп ої іп міго-тодіїйєей питап регірпега! Біосд топосуїез іпіо пераїйосуїе-Їїке апа рапстгеаїс івіеї-ЇїїКе сеїІв", СавігоеєпіегоЇоаду, 128 (2005) 1774
Непатентний документ 3: Хопд 2пао, ЕПелег Нибегтап, "А питап регірпега! ріоой топосуїе- дегімейд 5ибБзеї асів аз рішгіроїепі 5ієт сеїЇв", РМАБЗ 100 (2003) 2426
Непатентний документ 4: Кимапа М. еї аї., "Нитап сігсціайпуд СО14-топосуїез аз а зоцйгсе ої ргодепіюгвз ІНаї ехпібії тезепспутаї сеї! ашетепіайоп", У. І ейКос. Віо!., 74 (2003) 833
Непатентний документ 5: ЕБоїЇсп у., Їее5 М., Біоапе-Зіапіву 0. Н., "А зітріе теїШйой їог Ше івоїайіоп апа ритпіїсайоп ої юїаї Ігріав тот апітаї іів5!йев", у. Віої. Спет., 226, 497-509 (1957)
Короткий опис суті винаходу
Технічне завдання
Одержання стовбурових клітин, які ефективно поступають в ділянку-мішень, вважалося бо проблематичним в галузі клітинних лікарських засобів. Метою даного винаходу є одержання таких стовбурових клітин, спосіб масового одержання стовбурових клітин за короткий термін, і фармацевтична композиція для індукції стовбурових клітин.
Іншою метою винаходу є одержання засобу для лікування захворювань, пов'язаних з пошкодженими клітинами, тканинами або органами.
Ще однією метою винаходу є одержання культурального середовища, що індукує дедиференціацію, засобу, що індукує дедиференціацію, набору клітинного лікарського засобу, набору для одержання дедиференційованих клітин і стовбурових клітин.
Вирішення завдання
Як вирішення вказаних вище завдань, заявники виявили, що культивування моноцитів периферичної крові протягом короткого періоду часу в присутності індукуючого дедиференціацію засобу за даним винаходом продукує велику кількість дедиференційованих клітин. Заявники також виявили, що безпосереднє введення фармацевтичної композиції за даним винаходом в живий організм значно ефективне для лікування пов'язаних з пошкодженням захворювань. Заявники, крім того, виявили, що введення щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, викликає дедиференціацію моноцитів в клітини, здатні відновлювати пошкоджені тканини або органи, такі як стовбурові клітини, можливо, в кооперації з інтравітальним М-С5Е.
Таким чином, даний винахід належить до терапевтичного засобу для лікування захворювань, пов'язаних з пошкодженими клітинами, тканинами або органами.
Зокрема, даний винахід належить до наступних аспектів.
Пункт 1. Стовбурові клітини, одержані культивуванням моноцитів в присутності (ї) М-С5БЕ |і (ії) щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, за допомогою цього дедиференціюючи моноцити.
Пункт 2. Стовбурові клітини за п. 1, де активний інгредієнт розчинного у воді рослинного екстракту являє собою цукор або комплекс, що містить цукор, причому активний інгредієнт дедиференціює моноцити.
Пункт 3. Стовбурові клітини за п. 1, де активний інгредієнт розчинного у воді рослинного екстракту має молекулярну масу від 1000 до 500000, причому активний інгредієнт дедиференціює моноцити.
Зо Пункт 4. Стовбурові клітини за п. 1, де активний інгредієнт розчинного у воді рослинного екстракту адсорбований на колонці Соп А, причому активний інгредієнт дедиференціює моноцити.
Пункт 5. Стовбурові клітини за п. 1, де активний інгредієнт розчинного у воді рослинного екстракту адсорбований на аніонообмінній смолі, причому активний інгредієнт дедиференціює моноцити.
Пункт 6. Стовбурові клітини за п. 1, де активний інгредієнт розчинного у воді рослинного екстракту являє собою фракцію водної фази рослинного походження, екстраговану методом
Еоїси, або її очищений продукт.
Пункт 7. Стовбурові клітини за п. 1, де моноцити являють собою моноцити людини.
Пункт 8. Стовбурові клітини за будь-яким з пп. 1-7, де експресований щонайменше один представник недиференціойованих маркерів Мапод, Мевііп, с-КИ, СОУ і ОсіЗ/4, і експресія гена
СХСР4 є значущою, в порівнянні зі стовбуровими клітинами, одержаними культивуванням моноцитів в присутності тільки М-С5Е.
Пункт 9. Стовбурові клітини, в яких експресований щонайменше один представник недиференційованих маркерів Мапод, Мевііп, с-КИї, СОУ ії ОсІЗ/4, і експресія гена СХСКА є значущою.
Пункт 10. Спосіб одержання стовбурових клітин, що включає культивування моноцитів в присутності () М-С5Е і (її щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту.
Пункт 11. Спосіб за п. 10, де культивування виконується протягом від 7 до 14 днів.
Пункт 12. Культуральне середовище для дедиференціації моноцитів, що містить (ї) М-С5БЕ і (ї) щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту.
Пункт 13. Фармацевтична композиція, що містить стовбурові клітини за будь-яким з пп. 1-9 як активний інгредієнт.
Пункт 14. Клітинний лікарський засіб, що містить стовбурові клітини за будь-яким з пп. 1-9 як активний інгредієнт.
Пункт 15. Засіб, що викликає дедиференціацію, який містить (ї) М-С5Е і (ї) щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді бо рослинного екстракту, як активні інгредієнти.
Пункт 16. Засіб для лікування захворювань, пов'язаних з пошкодженими клітинами, тканинами або органами, що містить щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, як активний інгредієнт.
Пункт 17. Засіб для лікування захворювань, пов'язаних з пошкодженими клітинами, тканинами або органами, за п. 16, де захворювання вибрані з групи, що складається із зовнішніх травм, запальних захворювань, пошкоджень кісток або хрящів, серцево-судинних захворювань, неврологічних розладів, захворювань печінки, ниркових захворювань, діабету, атопічного дерматиту і ЗМНО (хвороби трансплантат проти хазяїна).
Пункт 18. Засіб для лікування захворювань, пов'язаних з пошкодженими клітинами, тканинами або органами, за п. 16, де захворювання вибрані з групи, що складається із зовнішніх травм, панкреатиту, променевого пошкодження, дерматоміозиту, множинного міозиту, некротичного фасціїту, хронічного бронхіту, перелому кісток, остеопорозу, кістково-хрящових переломів, остеохондриту, дилятаційної кардіоміопатії, інфаркту міокарда, ішемічної кардіоміопатії, серцевої недостатності, гіпертрофії міокарда, застійної серцевої недостатності, рестенозу, аритмії, атеросклерозу, васкуліту, периферичної нейропатії, нейропатичного болю, інсульту, енцефаліту, менінгіту, діабетичної нейропатії, розладу з дефіцитом уваги, аутизму, хвороби Альцгеймера, хвороби Паркінсона, хвороби Крейцфелдта-Якоба, зовнішніх пошкоджень або ішемії мозку або хребта, цирозу печінки, хронічного гепатиту, хронічної ниркової недостатності, гломерулонефриту, ниркової ішемії, діабету, атопічного дерматиту і аУнОо.
Пункт 19. Набір клітинного лікарського засобу, що містить щонайменше стовбурові клітини за будь-яким з пп. 1-9 як суттєвий інгредієнт.
Пункт 20. Набір для одержання дедиференційованих клітин, що містить (ї) М-С5БЕ і (ії) щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, як суттєвих інгредієнтів.
Пункт 21. Набір за п. 20, що додатково містить моноцити як компонент.
Пункт 22. Стовбурові клітини, спосіб одержання стовбурових клітин, культуральне середовище для дедиференціації моноцитів, клітинний лікарський засіб, засіб для лікування захворювань, засіб, що викликає дедиференціацію, набір клітинного лікарського засобу або набір для одержання дедиференційованих клітин за пунктами 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 або 21, де гангліозид являє собою щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з зО1а, 016, 502, 503, МІ, М2, СМ3, СТЬ і СО.
Переваги винаходу
Використовуючи моноцити, даний винахід забезпечує масове одержання за короткий період часу стовбурових клітин, що поступають в пошкоджені тканини. Даний винахід також належить до засобу для індукції стовбурових клітин. Таким чином, очікується, що даний винахід вносить внесок в ділянку створення клітинних лікарських засобів.
Крім того, було доведено, що гангліозид і розчинний у воді екстракт рослинного походження, такий як фракція водної фази рослинного походження, екстрагована методом Роїсп, або її очищений продукт, служать як лікарський засіб для лікування захворювань, пов'язаних з пошкодженими клітинами, тканинами або органами.
Короткий опис креслень
На Фіг. 1 показані криві росту стовбурових клітин, індукованих з моноцитів, культивуванням в середовищах 1-5.
На Фіг. 2 показані результати генної експресії з використанням КТ-РСК (полімеразної ланцюгової реакції із зворотною транскрипцією).
На Фіг. З представлені ефекти дедиференціації в стовбурові клітини додаванням гангліозидів.
Фіг. 4 ілюструє форми клітин після додавання гангліозидів.
На Фіг. 5 показана індукуюча дедиференціацію активність кожної екстрагованої з рослини фракції.
На Фіг. б показані результати активності фракцій одержаного з екстракту плодоніжки солодкої картоплі індукуючого дедиференціацію компонента, одержаного хроматографією.
На Фіг. 7 представлені зображення забарвлених анти-колагенових антитіл в мишачій печінковій тканині.
Найкращий спосіб здійснення винаходу
У даному винаході використовуються моноцити, такі як моноцити периферичної крові, як клітини, що піддаються дедиференціації.
У даному винаході використовуються моноцити ссавця, одержані у людей, коней, корів, 60 мавп, таких як шимпанзе, свиней, овець, кроликів, мишей, щурів, собак, кішок і подібних ссавців.
Серед них, переважні люди, мавпи, включаючи шимпанзе, і тому подібні примати. Особливо переважні моноцити людини. Моноцити одержують з кісткового мозку або крові. Переважне використання моноцитів, одержаних з крові, зокрема, моноцитів, одержаних з периферичної крові.
Спосіб виділення моноцитів із зразка крові або тому подібного матеріалу добре відомий.
Наприклад, існує спосіб, що передбачає спочатку виділення мононуклеарних клітин з крові з використанням розчину для сепарації клітин крові " Утрпоргер "М (Созто Віо Со. Ца.), а потім обробку одержаних мононуклеарних клітин покритими антитілами магнітними кульками (Мікепуї
Віоїес), здатними розпізнавати поверхневий антиген СО14, за допомогою цього відділяючи моноцити-мішені. Мононуклеарні клітини можуть також безпосередньо використовуватися як джерело для одержання моноцитів за даним винаходом.
Моноцити людини можуть бути вибрані з продуктів, які є комерційно доступними, таких як
РТОЗ8 (І опга).
Відповідно до даного винаходу, здійснюється дедиференціація моноцитів в стовбурові клітини, і одержані клітини проліферують перед введенням випробуваному індивіду, такому як людина. У цьому випадку, моноцити одержують у пацієнта, і тому необхідне одержання як можна більшої кількості стовбурових клітин з мінімальної кількості моноцитів. Даний винахід має перевагу дедиференціації стовбурових клітин 3 моноцитів 3 високою ефективністю проліферації, за допомогою чого продукується велика кількість стовбурових клітин з невеликої кількості моноцитів.
Приклади моноцитів включають клітини типу моноцитів (моноцити, мононуклеарні клітини, монобласти), що мають рецептор М-С5Е (с-пт5). Оскільки моноцити проліферують, тільки якщо і моноцити, ії мононуклеарні клітини використовуються в один і той самий час, даний винахід належить до можливості використання мононуклеарних клітин як дедиференційованих клітини, на додаток до моноцитів.
У даному описі термін "стовбурова клітина" означає клітину, що експресує недиференційований маркер і має ауторепродуктивну властивість. Шляхом використання моноцитів, може бути одержана велика кількість стовбурових клітин за даним винаходом.
Стовбурові клітини за даним винаходом можуть викликати диференціацію і, переважно, мають
Зо властивість плюрипотентної диференціації. Стовбурові клітини, одержані в даному винаході, є
Ср14- і Сб045-позитивними.
Стовбурові клітини за даним винаходом характеризуються значною експресією генів
СХСМ4; вони також відрізняються тим, що експресований щонайменше один представник, переважно, щонайменше два представники, переважніше, щонайменше три представники, ще переважно, щонайменше чотири представники, особливо переважно, експресовані всі представники Мапод, Мезійіп, с-Кії, СВО ї ОсіІЗ/4.
У переважній формі стовбурової клітини за даним винаходом, ген СХСКА значно сильніше експресований, ніж ген в стовбурових клітинах, одержаних культивуванням моноцитів в присутності тільки М-С5Е, і експресований щонайменше один представник, переважно, щонайменше два представники, переважніше, щонайменше три представники, ще переважніше, щонайменше чотири представники, особливо переважно, експресовані всі п'ять представників з Мапод, Мевзііп, с-Кії, СОУ і ОсСІЗ/А.
Нижче представлені ознаки стовбурових клітин за даним винаходом в більш переважному варіанті здійснення: () ген СХСМК4 значно сильніше експресований, ніж в стовбурових клітинах, одержаних культивуванням моноцитів в присутності тільки М-С5Е; (і) експресований с-КІї і (ії) еккпресований щонайменше один недиференційований маркер, вибраний з групи, що складається з Мапод, Мевзійп, СОО ї ОсСІЗ/4.
Ознака, яка диференціює одержані з моноцитів стовбурові клітини за даним винаходом від інших диференційованих стовбурових клітин, являє собою значну експресію гена СХСКА, який бере участь в хомінгу клітин. У стовбурових клітинах за даним винаходом, гени СХСКА значно сильніше експресовані, ніж гени СХСМК4 в стовбурових клітинах, одержаних культивацією моноцитів в присутності тільки М-С5Е. Наприклад, в переважному варіанті здійснення стовбурових клітин за даним винаходом, кількість експресії гена СХСК4, що аналізується КТ-
РСК або тому подібним способом, більше ніж в З або 4 рази більше, ніж кількість експресії внаслідок культивації моноцитів в присутності тільки М-С5Е, або в присутності М-С5Е--НІ -3, М-
СЕН -68 ПЕ і т. д. Крім того, в переважному варіанті здійснення стовбурових клітин за даним винаходом, гени СХСК4А значно сильніше експресовані, ніж гени СХСК4 в мезенхімальних бо стовбурових клітинах, одержаних з кісткового мозку; конкретніше, кількість експресії гена
СХСР4, що аналізується КТ-РСК або тому подібним способом, більше ніж в 2 або 3 рази більше, ніж експресія гена СХСКА в кістковому мозку.
Моноцити, одержані з стовбурових клітин за даним винаходом, як і інші дедиференційовані стовбурові клітини, характеризуються експресією с-Кії, який являє собою маркер стовбурових клітин.
Відомо, що 5ОЕ1, ліганд рецептора СХСК4, експресований в тканинах, які пошкоджені внаслідок перелому кісток і циркуляторних захворювань, в пошкоджених частинах нервової тканини або тому подібних. Тому, клітини забезпечують ще кращий ефект хомінгу клітин відносно пошкоджених ділянок, коли він служить як клітинний лікарський засіб.
Стовбурові клітини, одержані за даним винаходом, можуть використовуватися для лікування захворювань шляхом введення/ін'єкції їх в уражені ділянки. Перед ін'єкцією, переважно, культивування стовбурових клітин у відповідному культуральному середовищі для проліферації клітин. Потім клітини безпосередньо вводять/ін'єктують в уражені ділянки. Стовбурові клітини можна культивувати в загальному середовищі для клітинної культури; однак, переважно, культивувати стовбурові клітини в культуральному середовищі, що викликає дедиференціацію, за даним винаходом.
Відповідно до одного варіанту здійснення даного винаходу, стовбурові клітини за даним винаходом можуть використовуватися для лікування зовнішніх травм, запальних захворювань (панкреатиту, променевого пошкодження, дерматоміозиту, множинного міозиту, некротичного фасціїту, хронічного бронхіту), пошкодження кісток або хрящів (перелому кісток, остеопорозу, кістково-хрящових переломів, остеохондриту), серцево-судинних захворювань (наприклад, дилятаційної кардіоміопатії, інфаркту міокарда, ішемічної кардіоміопатії, серцевої недостатності, гіпертрофії міокарда, застійної серцевої недостатності, рестенозу, аритмії, атеросклерозу, васкуліту і т. д.), неврологічних розладів (наприклад, периферичної нейропатії, нейропатичного болю, інсульту, енцефаліту, менінгіту, діабетичної нейропатії, розладу з дефіцитом уваги, аутизму, хвороби Альцгеймера, хвороби Паркінсона, хвороби Крейтцфельдта-
Якоба, зовнішніх пошкоджень або ішемії мозку або хребта і т. д.), захворювань печінки (цирозу печінки, хронічного гепатиту), ниркових захворювань (хронічної ниркової недостатності, гломерулонефриту, ниркової ішемії і т. д.), діабету, атопічного дерматиту, ЗМНО або тому
Ко) подібних.
Дедиференційовані стовбурові клітини за даним винаходом були депоновані в Депозитарії
Міжнародної Патентної Організації Національного Інституту Передової Науки і Технології (Сепіга! 6, 1-1, Нідавні 1-споте ТеиКиба-з5нНі, Ібагакі-Кеп 305-8566 дарап) 30 вересня, 2009 р, під номером доступу АВР-11184.
Як вказано вище, моноцити перетворюються на стовбурові клітини при культивуванні моноцитів в присутності (ї) М-С5БЕ і (її) щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту.
У даному описі "розчинний у воді рослинний екстракт" означає екстракт всієї рослини або його частини рослини (наприклад, листя, стебла/стовбура/плодоніжки, підземного стебла, кореневищ, бульб, витких рослин, коріння, квітів, бруньок, пелюсток, зав'язей, плодів, коробочок, капсул, насіння, волокон, насінних зачатків і т. д.). Приклади екстрагентів включають воду, водний розчинник (наприклад, водний спирт, такий як водний метанол, водний етанол або водний пропанол; водний ТНЕ (тетрагідрофуран); водний ацетон) і полярні розчинники, такі як
ОМЕ (диметилформамід), ОМ5О (диметилсульфоксид) або диметилацетамід. "Розчинний у воді рослинний екстракт" являє собою речовину, екстраговану з такого розчинника, тобто, води, водного розчинника або полярного розчинника, здатного розчиняти полярну речовину у великій кількості. Розчинний у воді рослинний екстракт може бути одержаний таким чином. Спочатку рослину екстрагують з використанням хлорованих вуглеводнів, таких як хлороформ або метиленхлорид; спиртів, таких як метанол, етанол або пропанол; ароматичних вуглеводнів, таких як бензол або толуол; складного ефіру, такого як етилацетат; простого ефіру, такого як
ТНЕ або простий діетиловий ефір; кетон, такі як ацетон і метилетилкетон; аліфатичні або аліциклічні вуглеводні, такі як гексан або циклогексан. Потім рослинний екстракт обробляють водою або водним розчинником для одержання мішеневої розчинної у воді речовини. Таким чином, розчинна у воді речовина, одержана з використанням води, водного розчинника або полярного розчинника, може, якщо потрібно, крім того, бути оброблена хлорованими вуглеводнями, такими як хлороформ або метиленхлорид; ароматичними вуглеводнями, такими як бензол або толуол; складним ефіром, таким як етилацетат; простим ефіром, таким як ТНЕ або простий діетиловий ефір; аліфатичними або аліциклічними вуглеводнями, такими як гексан або циклогексан, з тим, щоб відмити ліпофільний компонент. Розчинний у воді рослинний екстракт являє собою переважно екстраговану за РоЇсп з рослини фракцію водної фази або її очищений продукт.
Екстракт за Роїспй означає фракцію, що залишається у водній фазі, внаслідок процесу екстракції рослини з використанням розчинника хлороформ:метанол-2:1 і промивання змішаного розчинника водою. Замість хлороформу можуть використовуватися інші хлоровані вуглеводні, такі як метиленхлорид, тетрахлорид вуглецю або 1,2-дихлоретан. Замість метанолу можуть використовуватися нижчі спирти, такі як етанол, н-пропанол, ізопропанол або бутанол.
Відношення хлорованого вуглеводню до спирту не обмежується співвідношенням 2:1. Може використовуватися широкий діапазон співвідношень. У даному описі змішаний розчинник з хлорованого вуглеводню і спирту має властивість високого розчинення, за допомогою цього сприяючи екстракції Відношення хлорованого вуглеводню до спирту, переважно, встановлюється на величину, яка може забезпечити розділення на водну фазу і органічну фазу при додаванні води, за допомогою цього екстрагуючи активну речовину у водній фазі. Якщо фаза не ділиться додаванням води, то додається органічний розчинник для розділення розчинника на два шари. У даному описі, водна фаза, одержана внаслідок розділення на два шари додаванням води, називається "фракція водної фази, екстрагованої з рослини за Еоїсп".
Фракція водної фази, екстрагована іншим способом, також включена в діапазон "фракції водної фази, екстрагованої з рослини за Еоїсп", поки вона має таку ж активну речовину.
Розчинний у воді рослинний екстракт за даним винаходом містить подібну гліколіпіду речовину (що містить один або обидва з гліколіпіду і цукру) як активний інгредієнт. Оскільки така подібна до гліколіпіду речовина має низьку розчинність в органічному розчиннику, розчинний у воді рослинний екстракт переважно виділяють у вигляді фракції водної фази. Крім того, розчинний у воді рослинний екстракт може далі бути очищений з використанням різних видів хроматографії, таких як іонообмінна хроматографія або афінна хроматографія. Очищений продукт може також використовуватися як активний інгредієнт.
Активний інгредієнт в розчинному у воді рослинному екстракті може складатися тільки з цукру або може містити і цукор, і інші компоненти (ліпіди і т. д.). Приклади цукрових компонентів включають глюкозу, арабінозу, ксилозу, рибозу, рамнозу, фукозу, деоксирибозу, манозу, фруктозу, галактозу, мальтозу, лактозу, целобіозу, сахарозу, тригалозу, рафінозу, мелібіозу,
Зо мальтотриозу, мелезитозу, туранозу, глюкуронову кислоту, галактуронову кислоту, мануронову кислоту, ідуронову кислоту, глюкозамін, галактозамін, манозамін, М-ацетилглюкозамін, М- ацетилгалактозамін, М-ацетилманозамін, нейрамінову кислоту, М-ацетилнейрамінову кислоту і тому подібні. Ці компоненти можуть бути сульфатованими. Переважно, вони можуть бути присутніми в формі олігосахаридів, полісахаридів, глікозидів або гліколіпідів. Конкретні приклади полісахаридів включають глікозаміноглікан, с-глюкан, ДрД-глюкан, леван, фруктан, галактан, манан, ксилан, арабінан, пектинову кислоту, альгінову кислоту, пектинові речовини, гуаран, сульфатований полісахарид, полісахарид, в якому один або більше видів цукрових залишків зв'язані, полісахариди, утворені з структурних одиниць одного або більше членів вказаних вище цукрових залишків, і полісахарид, в якому множинні цукрові залишки складно зв'язані. Переважно, розчинний у воді рослинний екстракт оброблений катіонообмінною смолою після екстрагування. В одному з варіантів варіанті здійснення, розчинний у воді рослинний екстракт за даним винаходом, переважно, містить компонент, який адсорбований на аніонообмінній смолі (компонент, що має аніонну групу у воді) як активний інгредієнт. В іншому варіанті здійснення, розчинний у воді рослинний екстракт за даним винаходом, переважно, містить компонент, який зв'язується з агарозою Соп А (конкавалін А) як активний інгредієнт. У переважному варіанті здійснення даного винаходу розчинний у воді рослинний екстракт адсорбований на аніонообмінній смолі і містить компонент, який зв'язується з агарозою конкаваліну А як активний інгредієнт. Як активний інгредієнт, що зв'язується з агарозою конкаваліну А, переважні полісахариди або цукор (включаючи комплекси, що містять цукор, такі як гліколіпіди), що містить залишок глюкози і/або манози, зокрема, залишок манози. У переважному варіанті здійснення розчинний у воді рослинний екстракт містить компонент, що має залишок цукру і розчинний в холодній воді або гарячій воді (що екстрагується). Компонент, переважно, являє собою полісахарид або комплекс, що містить цукор, в якому нижня межа молекулярної маси становить приблизно 500, 1000, 2000, 3000, 4000 або 5000, і вище за приблизно 500000, 300000, 200000, 100000, 80000, 60000, 50000, 40000, 30000 або 20000.
Індукція до стовбурових клітин може виконуватися культивуванням моноцитів в присутності щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту.
Оскільки М-С5Е вже існує в живому організмі (наприклад, в організмі людини), один бо представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, може служити як індуктор для викликання перетворення з моноцитів на стовбурові клітини. Стовбурові клітини поступають в уражену ділянку і, за допомогою цього, служать як терапевтичний засіб для лікування різних видів захворювань. Терапевтичний засіб, що містить як активний інгредієнт щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, ефективний для лікування зовнішніх травм, запальних захворювань (панкреатиту, променевого пошкодження, дерматоміозиту, множинного міозиту, некротичного фасціїту, хронічного бронхіту), пошкодження кісток або хрящів (перелому кісток, остеопорозу, кістково-хрящових переломів, остеохондриту), серцево- судинних захворювань (наприклад, дилятаційної кардіоміопатії, інфаркту міокарда, ішемічної кардіоміопатії, серцевої недостатності, гіпертрофії міокарда, застійної серцевої недостатності, рестенозу, аритмії, атеросклерозу, васкуліту і т. д.), неврологічних розладів (наприклад, периферичної нейропатії, нейропатичного болю, інсульту, енцефаліту, менінгіту, діабетичної нейропатії, розладу з дефіцитом уваги, аутизму, хвороби Альцгеймера, хвороби Паркінсона, хвороби Крейтцифельдта-Якоба, зовнішніх пошкоджень або ішемії мозку або хребта і т. д.), захворювань печінки (цирозу печінки, хронічного гепатиту), ниркових захворювань (хронічної ниркової недостатності, гломерулонефриту, ниркової ішемії і т. д.), діабету, атопічного дерматиту, ОМНО або тому подібних.
Ефективна доза терапевтичного засобу, що містить щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту як активний інгредієнт, залежить, наприклад, від застосування, віку і статі пацієнта, тяжкості захворювання або тому подібних станів. Зазвичай, кількість активного використовуваного інгредієнта складає для дорослого приблизно від 0,0001 до 100 мг, переважно, приблизно від 0,001 до 10 мг, а переважніше, приблизно від 0,01 до 5 мг на 1 кг масу тіла. Добова доза терапевтичного засобу може ділитися на 1-4 прийоми. "Фракція водної фази, екстрагованої з рослини за БоЇсп" включає широкий діапазон рослинних екстрактів, одержаних аналогічними способами. Крім того, активний інгредієнт розчинного у воді рослинного екстракту, що містить фракцію водної фази, екстрагованої з рослини за ЕоЇсп, може комбінуватися з аніонообмінними смолами і агарозою конкаваліну А; і його активність може збільшуватися пропусканням через катіонообмінну смолу.
Зо При застосуванні як лікарського препарату, терапевтичний засіб або фармацевтична композиція за даним винаходом може формуватися в звичайну лікарську форму шляхом використання фармацевтичного носія разом з активним інгредієнтом, який містить щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту і, якщо потрібно, М-С5Е. Терапевтичний носій вибирається залежно від бажаної лікарської форми, дозування і способу введення. Приклади терапевтичних носіїв включають різні розріджувачі і ексципієнти, такі як наповнювачі, агенти для збільшення об'єму, зв'язувальні агенти, змочувальні агенти, розпушувачі, поверхнево-активні речовини, мастильні речовини і т. д.
Лікарська форма за даним винаходом може бути вибрана з різних форм, залежно від мети лікування. Характерні приклади лікарських форм включають таблетки, пілюлі, порошки, рідини, розчини, суспензії, емульсії, гранули, капсули, супозиторії, ін'єкційні лікарські форми (рідини, суспензії і т. д.), мазі і т. д. Лікарський засіб одержують у вигляді відповідної лікарської форми звичайним способом з використанням придатного носія. Таблетка може являти собою таблетку, що має звичайне покриття, таку як таблетки з цукровим покриттям, таблетки, покриті желатином, таблетки з ентеросолюбільним покриттям, таблетки з плівковим покриттям, двошарові таблетки або багатошарові таблетки і т. д. Коли лікарські засоби за даним винаходом одержують у вигляді ін'єкційних препаратів в формі рідини, емульсії або суспензії, то лікарський засіб переважно стерилізується і є, переважно, ізотонічним відносно крові. Тому, фармацевтична композиція за даним винаходом може містити сіль, глюкозу або гліцерин в кількості, достатній для одержання ізотонічного розчину. Фармацевтична композиція за даним винаходом може також містити звичайний солюбілізувальний агент, буфер, пом'якшувальний агент і т. д. Крім того, фармацевтична композиція за даним винаходом може також містити барвний агент, консервант, ароматизатор, віддушку, підсолоджувач і т. д., або інші лікарські засоби. При введенні і М-С5Е, і щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, вони можуть вводитися одночасно або окремо.
Щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, може прийматися всередину у вигляді харчового продукту, наприклад, напоїв, батончиків (батончиків з харчовою добавкою) і т. д. Така харчова бо композиція може бути одержана відповідно до звичайного способу з використанням інших доцільних загальновідомих харчових матеріалів (сировинних матеріалів), ексципієнтів, розріджувачів і т. д.
Дедиференційовані стовбурові клітини можуть бути одержані шляхом індукування дедиференціації шляхом культивуванні вказаного вище клітинного матеріалу в комбінації (ї) М-
С5БЕ і (ії) щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, протягом заданого періоду.
Існують зв'язані з мембраною М-С5Е, молекулярна маса яких становить приблизно 22000, і секреторні М-С5Е, молекулярна маса яких становить приблизно 42000. З дисульфидним місточковим зв'язком їх молекулярна маса стає приблизно 45000 (димер М-С5Е з молекулярною масою 22000) і приблизно 85000 (димер М-СЗЕ з молекулярною масою 42000), відповідно. Існує також тип М-С5Е з високою молекулярною масою, в якому протеоглікан, крім того, зв'язаний з М-СЗЕ 85 кДа. Може використовуватися будь-який з цих різних типів М-С5Е; однак переважні секреторні М-С5Е, молекулярна маса яких становить приблизно 42000, і М-
С5Е, молекулярна маса яких становить приблизно 85000 (димер М-С5Е з молекулярною масою 42000), тип М-С5Е з високою молекулярною масою, в якому протеоглікан, крім того, зв'язаний з
М-С5Е 85 кДа. М-С5Е переважно одержаний у людей, коней, корів, мавп, зокрема, шимпанзе, свиней, овець, кроликів, мишей, щурів, собак, кішок і тому подібних ссавців. Серед них, переважні люди, мавпи, зокрема, шимпанзе, і подібні примати. Особливо переважні людські моноцити. М-С5Е може бути одержаний очищенням натурального продукту; однак переважний рекомбінантний М-С5Е. Наприклад, переважне використання рекомбінанта, що експресується
Е. соїї, без цукрового ланцюга, тому що відомо, що М-С5Е має питому активність, аналогічну натуральному продукту, коли він має амінокислоти, щонайменше, від М-кінця до 153-й амінокислоти.
Гангліозид конкретно не обмежується, поки він вибраний з наступного списку, що включає
СМ, Ота, СТІ, і т. д. Безліч з цих гангліозидів можуть 17 комбінуватися. Крім того, рослинний екстракт (подібна до гліколіпіду речовина рослинного походження) може також викликати значну дедиференціацію. Може також використовуватися екстракт, одержаний з тканини тварини (подібна до гліколіпіду речовина тваринного
Зо походження). Екстракт може бути одержаний в умовах, звичайних для екстрагування подібної до гліколіпіду речовини. Активний інгредієнт лікарського засобу за даним винаходом являє собою гангліозид або розчинний у воді екстракт рослинного походження. Можуть використовуватися будь-які екстракти рослинного походження або екстракти, одержані з тканини тварин, що містять гангліозид або розчинний у воді екстракт рослинного походження.
Наприклад, гангліозид у великій кількості міститься в мозку/нервовій тканини тварини, і екстракти, одержані з мозку і нервових тканин тварини, можуть використовуватися як гангліозид. Екстрагований гангліозид може бути очищений. Оскільки фракція містить гангліозид, то ступінь очищення може варіюватися. Як правило, як компонент екстракції можна використовувати фракцію, одержану в умовах, за яких можлива екстракція гліколіпід-подібних речовин. Приклади фракцій натуральних екстрактів включають екстраговану за РЕоїсп (непатентна
Джерела інформації: 5) фракцію водної фази. Переважні приклади тварин включають ссавців (корів, свиней, кроликів, овець, коней і т. д.), і гангліозид з мозку або нервових тканин свиней особливо переважний. Може також використовуватися гангліозид, одержаний з молока ссавців, такого як коров'яче молоко.
Переважні приклади гангліозидів або розчинних у воді екстрактів рослинного походження, що підлягають використанню як матеріал подібної до гліколіпіду речовини, включають солодку картоплю виду Іротеа Ваїйаїах, іпомею (тогпіпу діогу), болотяної іпомею (5м/атр тогпіпу діогу), іпомею плющоподібну (Іму-Іеахед топіпд діогу), іпомею гострозубчасту (Ппдегієаї тогпіпу діогу), кардинал виткий (сагаїіпаї! сіїтбег), синю іпомею (Біце тогпіпд діогу), індійську іпомею, ЗМІНЕНА
СТОРІНКА і тому подібні березкові (СопмоЇмціасеаевз); лотос горіхоносний (Меїштбро писігега) (корінь лотоса), лотос жовтий (Меіштбро Ішеа) і подібні лотоси; соланум американський (5оїапит атегісапит), томати (Боїапит Іусорегвісцт), паслін сосочковий (5оїапит таттозит), баклажан (Зоіапит теїіопдепа), паслін чорний (оїапит підгит), бульба картоплі (5оїапит їмрегозит), перець солодкий (Сарзісит аппиит), перець кайєнський (Сарзісит їгшевсепв), дурман індійський (ЮОайшга теїе!)), дурман волотевидний (Оаїшга тегеїоіде5), дурман звичайний (Оайшга 5ігатопішт), бругмансію деревоподібну (Вгидтапвіа агрогеа), бругмансію з бо строкатими стрічками (Вгидтапвзіа 5цамеоїеп5), фізаліс звичайний (РПузаїї5 аїКеКепаді маг.
їтапспеїй), кремена широка (Р. іаропісшт), петунію гібридну (Реїшпіа х Пубгіда) і подібні зЗоЇІапасеоизе5. Крім наведених вище прикладів, може використовуватися широкий діапазон гангліозидів або розчинних у воді екстрактів рослинного походження, що містять гліколіпід.
Рослина може являти собою листя, стебло, стовбури, плодоніжки, підземне стебло, кореневище, бульби, виткі рослини, коріння, квіти, бруньки, пелюстки, зав'язі, плоди, коробочки, капсули, насіння, волокна, насінні зачатки, трави і т. д. Екстракт може бути одержаний з будь- якої з цих частин.
Наприклад, може використовуватися бульбоцибулинна частина картоплі або солодкої картоплі, на додаток до інших частин картоплі або солодкої картоплі, таких як листя, стебло, стовбури, плодоніжки, підземне стебло, кореневища, бульби, виткі рослини, коріння, квіти, бруньки, пелюстки, зав'язі, плоди, коробочки, капсули, насіння, волокна, насінні зачатки, трави і т.д.
Наприклад, можливе використання трансгенної рослини, яка переробляється або для введення необхідних генів, або для нокдауну непотрібних генів, з тим, щоб збільшити продукцію гангліозиду або подібних до гліколіпідів речовин. "Гангліозид" являє собою загальну назву глікофінголіпіду, що має сіалову кислоту, такого як сорта, 016, 502, 603, МІ, М2, ОМ3, СТ16 або СО16.
Гангліозиди мають наступні структури. арта-аМмеибзАс(2-3)ррСаїр(1-3)рОсСаіМмАс(1--ГамМеибАс(2-3ДЬОсСзаІр(1-3БОраїср(1-1)Сег аріб-рОосСаїр(1-3)БрСаіМмАс(1-4-ГамМмеибАс(2-8)даМмеи5Ас(2-3ДЬОсСзаІр(1-3БОраїср(1-1)Сег арг-ррсаірмАс(1--ГаМеиб5Ас(2-8)даМмеизАс(2-3ДЬО СзаІр(1-ДрОсіср(1-1)Сег ,аорзЗ-аМеибАс(2-8)даМеи5Ас(2-3)рОсСзар(1-БОаіср(1-1)Сег ам1-рОсСа!їр(1-3)рОСаІМАсІіаМмеи5Ас(2-3ДЬОсСа!Ір(1-9БОаСіср(1-1)Сег сем2г-рОосСаІрмАс(1-4ЦГамМмеибАс(2-3ДЬОсСар(1-ДрОсіср(1-1)Сег амМ3-аМеиб5Ас(2-3)рОСар(1-ДрОсСіср(1-1)Сег ат1р-аМеи5Ас(2-3)рОсСзар(1-3)рОрСаіМмАс(1-4ГамМмеибзАс(2-8)аМеи5Ас(2-3ДЬОсСа!р(1- а4)рраїср(1-1)Сег ,О1р-аМеибАс(2-8)аМмеибАс(2-3)рОСзаІр(1-3)рОСіаМАс(1-4ЦГаМеибАс(2-8)аМеи5Ас(г2-
ЗпЬОсСа!р(1-УБОсСіср(1-1)Сег
Зо амМмеибАс-5-ацетил-а-нейрамінова кислота амМмеибАс9Ас-5,9-діацетил-а-нейрамінова кислота рОсаїр - В-О-галактопіраноза росаІрмМмАс-М-ацетил-В-О-галактопіраноза рОаїср - В-О-глюкопіраноза
Сег - церамід (загальний М-ацилований сфінгоїд)
Може використовуватися будь-яке культуральне середовище для ссавців. Наприклад, культивування може виконуватися з використанням середовища, такого як КРМІ 1640, ОМЕМ,
Еачіе МЕМ, асМЕМ, ІМЕМ або М199, що містить, наприклад, приблизно від 1 до 2095 сироваткового компонента, такого як ЕВ5, ЕС5, С5 або Н5. Культивування переважно виконується, без обмеження, в середовищі ОМЕМ, що містить приблизно 10 95 ЕВ5. Може також використовуватися безсироваткова культура, така як Ойга СОЇ ТОВЕ"М (середовище для типів клітин ссавців). Безсироваткове культуральне середовище конкретно не обмежується.
Дедиференційовані стовбурові клітини можуть бути одержані культивуванням моноцитів в середовищі, що містить (ї) М-С5БЕ і, (ї) щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді екстракту рослинного походження, при 377 протягом приблизно від 7 до 14 днів в присутності 595 СО». Протягом цього періоду культивування, відбувається дедиференціація, і одержуються специфічні стовбурові клітини за даним винаходом, що експресують недиференційований маркер. Крім того, під час даного періоду культивування, значно збільшується експресія гена СХСКА, який є ознакою стовбурових клітин за даним винаходом. Навіть якщо період культивування продовжується, стовбурові клітини за даним винаходом можуть бути одержані, доки є значущий рівень експресії гена
Ссхева.
Коли клітинний матеріал культивується в таких умовах, кінцева кількість одержаних стовбурових клітин приблизно в 5 разів більше їх кількості, одержаної культивуванням з використанням тільки М-С5Е або комбінації з іншими цитокінами.
Можливе використання комплексу ковалентного зв'язку або нековалентного зв'язку М-С5БЕ і щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді екстракту рослинного походження як засіб, що викликає дедиференціацію.
До цього часу в деяких повідомленнях було показане одержання стовбурових клітин шляхом бо культивування моноцитів з використанням тільки М-С5Р. Навпаки, даний винахід комбінує (ії) М-
С5Е ії (ї) щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді екстракту рослинного походження, для одержання стовбурових клітин, що мають особливо значну експресію гена СХСК4. Культивування виконують з використанням М-
С5Е в концентрації 5-100 нг/мл, більш переважно 25 нг/мл. Гангліозид може являти собою суміш екстрактів, одержаних з рослин або тварин, матеріал, одержаний очищенням натурального продукту, що містить гангліозид, або хімічну композицію.
Гангліозид може міститися в культуральному середовищі в кінцевій концентрації приблизно 1-100 мкг/мл. Розчинний у воді екстракт рослинного походження може міститися в культуральному середовищі в кінцевій концентрації приблизно 0,1-100 мкг/мл.
Кінцева концентрація щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді екстракту рослинного походження, становить приблизно 1-100 мкг/мл. У даному описі, "гангліозид" означає окремий гангліозид, такий як зОта, ОТ, с02, 503, МІ, СМ2, ОМ3, СТ16 або 5016, або суміш цих гангліозидів. "Вміст гангліозидів" означає їх загальний вміст при використанні множинних гангліозидів.
Набір
Даний винахід також належить до набору клітинного лікарського засобу, який містить стовбурові клітини за даним винаходом як суттєвий інгредієнт; і до набору для одержання дедиференційованих клітин, який містить (ї) М-С5Е і (ії) гангліозид розчинного у воді екстракту рослинного походження як основні інгредієнти.
Набір клітинного лікарського засобу містить стовбурові клітини моноцитарного походження за даним винаходом і, якщо потрібно, культуральне середовище, що містить (ї) М-С5Е і (ії) щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді екстракту рослинного походження, контейнер для культури і т. д. Набір може являти собою шприц для ін'єкції, заповнений стовбуровими клітинами моноцитарного походження.
Кількість стовбурових клітин моноцитарного походження в наборі клітинного лікарського засобу складає, наприклад, приблизно від їх107 до 1х107 на набір.
Набір для одержання дедиференційованих клітин за даним винаходом містить (ї) М-С5БЕ і (ії) щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді екстракту рослинного походження; культуральне середовище, контейнер для культури, моноцити і т. д.
Промислова застосовність
Галузь техніки, в якій може застосовуватися винахід
Даний винахід може застосовуватися у всіх галузях, в яких застосовуються стовбурові клітини, зокрема, в галузі клітинних лікарських засобів, яка привертає увагу в останні роки. При застосуванні в даній галузі, клітини повинні бути одержані і надані в межах короткого періоду часу. Крім того, з урахуванням імунологічного відторгнення, важливе одержання дедиференційованих стовбурових клітин з клітин, взятих з організму пацієнта, і введення одержаних стовбурових клітин в організм того ж пацієнта з метою безпеки. Тому, важливо одержати певну кількість стовбурових клітин в межах короткого періоду часу, після того як клітинний матеріал взятий з організму пацієнта. Даний винахід значущий в цьому відношенні.
Один з варіантів здійснення даного винаходу являє собою внутрішньовенне введення дедиференційованих клітин.
Клітини можуть бути введені пацієнту звичайним способом після одержання мішеневих клітин шляхом культивування. Наприклад, після обробки трипсином, клітини збирають центрифугуванням і диспергують у відповідному ізотонічному розчині перед внутрішньовенним введенням. Крім того, можливе додавання відповідного фармацевтично прийнятного носія для стабілізації клітин. Коли є інтервал часу між виділенням клітин з культурального розчину і введенням культивованих клітин, то клітини можуть бути консервовані звичайним способом при -80 "С або в присутності рідкого азоту. Більш переважно клітини збирають для використання з метою лікування через 7-14 днів після початку культивування для дедиференціації моноцитів, а потім одразу використовують для цільового лікування, тому що протягом цього періоду існує імовірність найвищого рівня експресії гена СХСКА. Відповідно, період використання клітин може визначатися залежно від рівня експресії маркерного гена, а не обмежуватися періодом культивування.
Галузь техніки, в якій може застосовуватися терапевтичний засіб/лікарський компонент
Згідно з даним винаходом проводиться введення щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді екстракту рослинного походження, і, якщо потрібно, М-С5Е, ссавцем, таким як люди, для лікування за допомогою цього різних захворювань, таких як зовнішні травми, запальні захворювання, пошкодження бо кісток або хрящів, серцево-судинні захворювання, неврологічні розлади, печінкові захворювання і ниркові захворювання, діабет, атопічний дерматит або ОСМНО. Щонайменше один представник вибирають з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді екстракту рослинного походження, для дедиференціації моноцитів тестованого індивіда в стовбурові клітини, здатні вилікувати захворювання. Стовбурові клітини переміщаються в уражену ділянку і функціонують як терапевтичний засіб. В іншому варіанті щонайменше один представник, вибраний з групи, що складається з гангліозиду і екстрагованої за БоЇсп фракції водної фази рослинного походження, може безпосередньо або непрямо діяти на клітини, відмінні від моноцитів.
Використання набору
Дедиференційовані стовбурові клітини, одержані з використанням засобу, що викликає дедиференціацію, можуть використовуватися у вигляді набору, після того як вони зазнають відповідної консервуючої обробки.
Аналогічним чином, засіб, що викликає дедиференціацію, може використовуватися у вигляді набору, який містить засіб як суттєвий інгредієнт.
Нижче описані приклади даного винаходу для більш конкретного опису винаходу. Однак даний винахід не обмежується наведеними прикладами.
Приклади
Даний винахід більш детально пояснений нижче на основі прикладів. Однак даний винахід не обмежується даними прикладами.
Приклад 1
Відповідно до даного винаходу, людські моноцити (РТО38; ГОМА2А) культивували з додаванням наступних добавок 1-5 до основного культурального середовища (концентрації виражені у вигляді кінцевої концентрації, що далі іменується в даному описі "ЕС"). На Фіг. 1 показані результати. По вертикальній осі на Фіг. 1 вказана кількість життєздатних клітин, а по горизонтальній осі показана кількість днів культивування. Результати демонструють, що стовбурові клітини моноцитарного походження за даним винаходом мають дуже високу проліферативну активність, в порівнянні з клітинами, одержаними способами, описаними
ЕРапагісп, Нибетгтангп, і т. д.
Добавка 1: М-С5Е (ЕС: 25 нг/мл) ж гангліозиди (5з01а коров'ячого мозку; ЗБІСМА) (ЕС: 100 мкг/мл)
Зо Добавка 2: М-СЗЕ (ЕС: 5 нг/мл) «ІІ -3 (ЕС: 0,5 нг/мл) (непатентний документ 2)
Добавка 3: М-С5Е (ЕС: 25 нг/мл) ж- І/-6 (ЕС: 20 нг/мл) 5 ПІБ (ЕС: 1000 одиниць/мл) (непатентний документ 3)
Добавка 4: М-С5Е (ЕС: 25 нг/мл)
Добавка 5: М-С5Е (ЕС: 25 нг/мл) «т гліколіпід (одержаний розчиненням екстрагованої за ЕоЇсп фракції водної фази, одержаної з 1 г рослини (солодкої картоплі) на основі сухої маси в 500 мл культурального середовища)
Екстраговану за БоЇїспй фракцію водної фази, використану в добавці 5, одержували таким чином. Сублімовані клітини (з тканини солодкої картоплі) ретельно гомогенізували у придатній кількості фізіологічного сольового розчину і потім енергійно змішували з еквівалентною кількістю розчину хлороформу-метанолу (2:11). Після розділення суміші центрифугуванням на фазу органічного розчинника, фазу модифікованого білка і водну фазу, використовували екстракт в розчинній у воді фракції верхнього шару.
Додавання всіх добавок до середовища ЮОМЕМ (2095 фетальна теляча сироватка), культивування моноцитів людини починали в концентрації 1,5х109 клітин/мл (200 мкл/ямку, 96- ямковий планшет). Кількість життєздатних клітин визначали з використанням люмінесцентного аналізу життєздатності клітин Рготеда Сеї/Піег-Спіо"М. Конкретніше, ямку промивали фізіологічним сольовим розчином З рази на кожний день культивування для видалення неприкріплених клітин, і потім визначали кількість прикріплених і вирощених клітин.
Тим часом, рівні генної експресії стовбурових клітин, одержаних способами культивування відповідно до даного винаходу і попереднього рівня техніки, аналізували ЕТ-РСВ.
Культивування моноцитів людини починали у вказаних вище умовах і в концентрації 1,5х105 клітин/мл (6 мл/чашка діаметром 6 см). На 14-й день, мРНК збирали з використанням набору
Місго Раві Тгаск 2.0 Кії (Іпиїгодеп). В подальшому, аналіз рівня експресії виконували КТ-РСВ.
Нижче ідуть параметри і інформація про послідовність праймерів: 711111 |в5-ТТСТОАСТобОАсССтТТоТоУ(5ЕОЮМОг).7777777777777771 711111 |ВА5-ОАСОСТОАСАСТТАСАСААТ У (ЗБОЮ МОЮ 77777771
1 (в5-ттстстттсобасстосСАСУ(5ЕОІЮ МОЄ 77777771 11111 |В5-СТТАСАТОАОТТТТСТТТСАС-З (ЗБОЮ МОВ) 77777771 11111111 |А5АТССАСАСОССААСАТАСАССАССТІТТСА-З(ЗЕОІО МО10) :://С
Структура смуги (величини концентрації виражені у вигляді кінцевої концентрації, що далі називається "ЕС") 1: М-С5Е (ЕС: 25 нг/мл) т гангліозиди (5О01а коров'ячого мозку; БІЗОМА) (ЕС: 100 мкг/мл) 2: М-С5Е (ЕС: 5 нг/мл) «я 1-3 (ЕС: 0,5 нг/мл) (непатентний документ 2)
З: М-С5Е (ЕС: 25 нг/мл) ж І/-6 (ЕС: 20 нг/мл) ї- ІЕЕ (ЕС: 1000 одиниць/мл) (непатентний документ 3) 4: М-С5Е (ЕС: 25 нг/мл) 5: М-С5Е (ЕС: 25 нг/мл) жї- екстрагована за Боїспй фракція водної фази рослинного походження 6: Без культури 7: Без культури 1-6: Моноцити людини, 7: КкКДНК кісткового мозку людини (Нитап Вопе Маїтом/ Магаїйоп-
Веаду сОМА; Сіопіесн)
Фіг. 2 демонструє, що стовбурові клітини, одержані за даним винаходом (смуга 1 або 5), мали дуже високий рівень експресії СХСКА.
У подальшому проводили порівняння величин індукуючої стовбурові клітини активності різних гангліозидів.
Конкретніше, гангліозиди додавали до культурального середовища в кінцевій концентрації 100 мкг/мл і культивували моноцити периферичної крові.
До неї додавали гпМ-С5Е в кінцевій концентрації 25 нг/мл. Потім кількість життєздатних клітин визначали на другому тижні культивування у вигляді активності люциферази з використанням набору СеїїТіетг-Сіо (Рготеда). У результаті, всі культури з використанням ЗМІ, сорта, СТБ і суміші виявили однаково сильну індукуючу стовбурові клітини активність (Фіг. 3).
Крім того, не спостерігали відмінності морфології клітин (Фіг. 4; фотографії ілюструють клітинну морфологію на другому тижні культивування).
Нижче на Фіг. З представлені структури смуг (величини концентрації виражені у вигляді кінцевої концентрації, що далі іменується "ЕС"): 1: ОМ (ЕС: 25 нг/мл)
Зо 2: 601а (ЕС: 25 нг/мл) 3: СТБ (ЕС: 25 нг/мл) 4: Суміш рівних кількостей СМ1, зО11а і ЗТ165 (ЕС: 25 нг/мл (загальна концентрація)) 5: Тільки М-С5Е 6: Тільки плазма
Величини індукуючої стовбурові клітини активності різних екстрактів рослинного походження
Екстракти і стовбурів кореня лотоса, і іпомеї плющоподібної одержували в таких самих умовах, як і з плодоніжки вказаної вище солодкої картоплі. Порівняння величин активності стандартизували на основі величин сухої маси рослин, використаних для екстракції. Питома активність була основана на активності відносно проліферації клітин екстракту плодоніжки солодкої картоплі, прийнятій за 100. Як ясно з Фіг. 5, аналогічні величини індукуючої стовбурові клітини активності спостерігалися у екстрактів з стовбурів кореня лотоса і іпомеї плющоподібної.
Однією ознакою активного інгредієнта розчинного у воді екстракту рослинного походження є екстракція головним чином у водну фазу способом екстракції за ЕРоЇсп. Розчинний у воді рослинний екстракт може бути фракціонований, відділений або очищений пропусканням через різні колонки. Активний інгредієнт характеризується зв'язуванням з аніонообмінними смолами (О-Сефарозою, ОЕАЕ-Сефарозою і т. д.) і зв'язуючими лектин смолами (Конкаваліном А і т. д.) в широкому діапазоні рн.
На Фіг. б показані результати оцінки активності протокової фракції після нанесення екстрактів на смоли, що мають спорідненість зв'язування з активним інгредієнтом. Результати виявили, що протокові фракції втратили активність в зв'язку з зв'язуванням активного інгредієнта з аніонообмінній смолою і Соп А агарозою. Результати також свідчать про те, що інгібітор віддалявся за допомогою катіонообмінною смоли, таким чином, підвищуючи активність.
Розрахунок був оснований на активності екстракту плодоніжки солодкої картоплі, прийнятої за 100. Підвищена активність в проточній фракції в катіонообмінній смолі вказує на видалення інгібітору. Протокові фракції аніонообмінної смоли і зв'язуючої лектин Соп А смоли втратили активність, свідчачи про утримування активного фактора.
Приклад 2
Загоювальний ефект на експериментальній моделі з введенням стовбурових клітин (приклад терапевтичного випробування з використанням мишачої моделі цирозу печінки)
Тетрахлорид вуглецю (1 мл/кг (маса тіла)) вводили лабораторним мишам двічі на тиждень протягом 12 послідовних тижнів для штучної індукції цирозу печінки. Людські дедиференційовані стовбурові клітини моноцитарного походження (ПМОЮ5С) за даним винаходом вводили двічі мишам з моделлю цирозу печінки через хвостову вену (друге введення проводили через один тиждень після першого введення; 1х10»9 клітин на індивіда). Через один тиждень після другого введення (через 2 тижні після першого введення), у всіх мишей виймали печінку і виконували патоморфологічний і біохімічний аналіз зрізів тканини. При гепатиті, що викликається тетрахлоридом вуглецю, повідомляють про високу експресію БОЕ1 (фактора-1, що походить з стромальних клітин) в запаленій ділянці, як при вірусному гепатиті (дипо еї аї!., 2006). Оскільки пяМОО5ЗС за даним винаходом виявляє високу експресію СХСКА, який є рецептором для 501, очікується, що ПМОЮО5С накопичується в запаленій ділянці за допомогою зв'язку між АМООЗС і
СХСКА4 для надання загоювального ефекту на оточуючі тканини (Коїеї еї а!., 2003; Мегмі еї аї., 2006).
Відносно функції печінки, що виявляється маркерами крові, величини СОТ (глутамат- оксалацетат трансамінази) і СОРТ (глутамат-піруват трансамінази) одразу знижувалися і поверталися до нормальних рівнів після завершення введення тетрахлориду вуглецю.
Відповідно, ці величини виявили майже нормальні рівні після двотижневого курсу лікування, і не спостерігалися великі відмінності величин, що вимірюються серед тестованих груп. Однак, як показано нижче, 12-тижневе медикаментозне лікування викликало важкий фіброз в тканині печінки, що призводить до цирозу печінки. ПМОЮО5С за даним винаходом надавав виражений ефект на зниження і видалення фіброзної тканини, що розрослася в печінці. 1. Гістопатологічний аналіз
Залиті в парафін зрізи одержували з вийнятої і імобілізованої печінки мишей і виявляли колагенові волокна, які являють собою антитіло проти колагену І і основний компонент
Зо фіброзної структури (Фіг. 7, темно-коричневе забарвлення). У той самий час, ядро забарвлювалося в синій колір (фарбування гематоксиліном).
На верхніх зображеннях показані три приклади контрольної групи, в якій вводили сольовий розчин, а НЯМОО5ЗС не вводився, після індукції цирозу печінки, а на нижніх зображеннях показані три приклади, в яких двічі внутрішньовенно вводили ПМООЗС. Введення ПМОЮЗС призвело до очевидного видалення товстих пучків волокон (вказаних стрілками на верхніх зображеннях), виявленого анти-колагеновими антитілами.
Крім того, фарбування за Алап-МаїЇогу виконували на тих самих зрізах печінки, і площу забарвленої в синій колір фіброзної тканинної частини розраховували з використанням аналізуючого зображення мікроскопа (Кеуепсе В2-9000) (таблиця 1).
Таблиця 1
Результати аналізу зображень фіброзних частин фарбуванням за Алап-МаїІог 11111111 |Сольовийрозчин. |йМОО5С 0 |Нормальна.:4777/7/7/:"У"НИ
У групи, що одержувала ПМОЮ5С (пПМОО5с), виявилася величина, що більше ніж в 5 разів перевищує величину в нормальній контрольній групі (Нормальна), якій не вводили тетрахлорид вуглецю; однак зменшення кількості фіброзної тканини в групі, якій вводили ПМОЮ5С, досягало 2396, в порівнянні з такою в групі, якій вводили фізіологічний сольовий розчин (Сольовий розчин). 2. Біохімічний аналіз
А) Пептид проколагену ІІІ типу
Рівень пептиду проколагену ІІЇ типу в крові вимірювали в експерименті з лікування цирозу печінки з використанням аналогічної мишачої моделі. Пептид проколагену ПІ типу (РІПР) являє собою кінцевий пептид, присутній в попередникові колагену, і знаходиться у вільній формі в крові і тканині у вигляді пептиду після розщеплення під час одержання колагену. Тому, РІПР використовується як маркер, що відображає продукцію колагену (Сіаппіпі еї аїЇ., 2001). Кров брали з хвостової вени мишей одразу після експерименту двотижневого лікування, і рівень РІПР в плазмі вимірювали способом ЕГІ5ЗА (СОБАВІО С5ЗВ-ЕО8095) (таблиця 2).
Таблиця 2
Кількість пептиду проколагену ІІІ типу в крові 11111111 |Сольовийрозчинд фИМОО5С /// |Нормальна.7/77/7/7/:УЗ"К7
У контрольній групі (Сольовий розчин), якій вводили фізіологічний сольовий розчин після індукції цирозу печінки, виявилася величина, приблизно в 5 разів вище, ніж в здоровій контрольній групі (Нормальна), хоча кількість проколагену в крові вказувала на різке зменшення внаслідок введення ПМООЗС; була одержана величина, близька до величини у здорової миші.
У зв'язку з тим, що у групи, що одержувала фізіологічний сольовий розчин, була одержана висока величина, незвичайно висока продукція молекул колагену, ймовірно, продовжувалася протягом тривалого часу індукції цирозу печінки після припинення стимуляції тетрахлоридом вуглецю. Однак виявлено, що незвичайно висока продукція колагену негайно пригнічувалася введенням ЯНІМООЗС, і кількість проколагену в крові знизилася майже до нормальних рівнів.
В) Гідроксипролін
З метою визначення загальної кількості волокон в тканині печінки безпосередньо за тканиною, вимірювали вміст в печінковій тканині гідроксипроліну, який є інгредієнтом колагену.
Тканину печінки, вийнятої у миші після двотижневого курсу лікування, руйнували і гомогенізували, і білок, що міститься, руйнували обробкою гідроксидом натрію. Концентрацію гідроксипроліну вимірювали специфічною для гідроксипроліну кольоровою реакцією Хлораміну-
Т і диметиламінобензальдегіду (таблиця 3, Кедау еї а!., 1996).
Таблиця З
Кількість гідроксипроліну в тканині печінки 11111111 |Сольовийрозчин. (йМОО5С 0 |Нормальна./777/7/7/:УЗзО
Хоча в групі, що одержувала ПМОЮЗС (пПМОО5С), ще виявлялася надто висока величина, яка була в 3 рази вище, ніж величина в нормальній контрольній групі (Нормальна), вона виявляла зменшення, що досягає 22,6 95, в порівнянні з групою, якій вводили фізіологічний розчин (Сольовий розчин). Іншими словами, зменшення фіброзу печінки було виявлене в групі, якій вводили ПМОЮО5С.
Після введення екстрагованої за БоЇсп фракції водної фази плодоніжки солодкої картоплі вказаним вище мишам з цирозом печінки через хвостову вену в кількості 6,6 мг/кг, заявники
Зо підтвердили зменшення цирозу печінки. 3. Висновок
Таким чином, моделі лікування цирозу печінки у мишей з використанням НМООЗС за даним винаходом відрізняються тим, що продукція волокон значно пригнічується, і фіброзна тканина видаляється або її кількість зменшується простим і короткочасним лікуванням (лише двома введеннями за два тижні). У результаті, це лікування ефективне для швидкого полегшення плину цирозу печінки і для відновлення печінкової тканини до нормального стану. Таким чином, дане лікування є інноваційною терапевтичною системою, яка сприяє регенерації печінкової тканини. 4. Посилання
Уипа ХУ, Вуи КН, Спо 5, Моо 5У, Зеоп УМ, Спип СН, Моо К, Мооп ІН, апа Нап Н5. "Зупдепіс ропе таїтом/ сеїІв гевіоге Пераїйс Типсіоп іп сатоп Іеігаспіогіде-іпдисей тоиве Іїмег іпішгу", 5іет
Сеїї5 Оєм., 2006, 15, 687-695
КоПеї ПРО, ЗПіміеї! 5, Спеп МО, Зигіаміпайа 9, Тпипуд ЗМ, ЮОабема МО, Капп У, Зріедеї А, Ваг
А, Батіга 5, Соіспрегу Р, КаїїпКоміспй А, Агеплапа-бЗеізаєдовз Е, МадієгА, Нагаап І, Вемеї М,
Зпаїйтії БА, І арідої Т. "НОЕ, 5ОБ-1, апа ММР-9 аге іпмоїмей іп віге55-іпдисед питап СОЗ4 віт сеїЇ гестийтепі ю Пе Іїмег", / Сіїп Іпмеві. 2003, 112, 160-169.
Мегмі В, ок ОС, ОіРегвіо УГ. "СуюКіпе5 апа Ппетаїйороїеїіс 5іет сеїЇ торбіїї:аноп. у Сеї
Віоспет", 2006, 99, 690-705.
Сіаппіпі Е, Садіїєгіз 5, Серра Р, Ківззо О, І апііегі РВ, Тевіа К. "Бегит рго-соПадеп І! реріїде
Іемеі5 аге геїа(беа їо Іобшіаг песгоб5іб5 іп ипігеайїєй райепібє м/йй сПпгопіс Ппераїйі С", Еицг У
Савзігоепієгої! Нераїйо!. 2001, 13, 137-141.
Кедау СК, ЕпугетеКа С5. "А 5ітрійей теїпоа ог Ше апаїухів5 ої пуагохургоїїпе іп Біоіодісаї їіз5цев", Сіїп Віоспет. 1996, 29, 225-229. список пОослІБОВНОСтЕИ «Зб» ОТБИКА РНАНМАСКОТІСАЄ СО,, ПТО. «їі2аз ОПЕРЖАНА 18 МОПОЦИТУ ЛЮДИНИ СТОВЕУРОВА КЛІТИНа ДЛЯ ТЕБеПЕВТИчЧНОГО
ЗвстТОСУВАННЯ ї шпОСІВ 11 ІНДУКШИТІ «130 БОВ-8у «ї50з шо 2008-2835 «МХБі» 2308-11-55 «БО 16 «170: Рабевтїп уеквіст 5.4 «Ві1Окх Ух «Аз те «и» ДК «ВХ» Шеучна «080» «ий» праймер лля Мапод «400 4
Февгчеська ссссдваатся, 76 «ШО» у «Вл ода чита дяк «ДЗ» 0 пвучНнА «Вт «ше3З» праймер щля Магоц «жа птЕсерчастя чоасоссоскс 25 ках» 3 її» 20 «лу» ЕК «ха» Штучна «ВК чав!» празммер дя МеВ жов З сксецдатекя ссадазоває 20 «1 ев» ло сейм дик -2ї3з» бітучна чех кий праймер дкя Мезуи «400» 4 часчсюксаса сптвсаучяве 30
«ій 5 «й» їз «й дик «каз Штучма квайх «У Ви првимет для Сея «3005 В чЧадсвавааєт спавосаці 38 «80» 5 кої» 15 «уза НЕ «вже МрУучмна «аз «стаз» пПраймхве слля ОстЗ/й «ай в сЕстеввеся ЧесСесясао 35 «вій «Мт то. хеїйа ДВК «вії» тучяя дей» «лек Преажеерв для СОМ соекЯ є «аб сставсксаєт сбеЕдсаравт 7 «ВО В «вшів йхх «вій ЕЕ «ВІЗ» ЧтУучна вай «ВЗ» Пуреймеро для СПЛІУ сек «каш я стувазсцаяч сСоКЕсЕвосв с р «дій» З «11» ло «21853 ДВК «13» с бтучма «205 «3 ДПраймер для СЖОНЯ «бохо асесеЕссорус ссасосабєстя сіссвеваєс 30 «МО Ло «11 30 «йТ2» ДЕК «вій» штучна чив каска» Праймеу для СХСВа «Оз 10 зібсазасце савдсаєздчає сасебЕвеса 0

Claims (20)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Стовбурові клітини, одержані культивуванням моноцитів в присутності (і) М-С5Е і (ії) щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, екстрагованого методом екстракції ЕБоЇсй, за допомогою цього дедиференціюючи моноцити, де експресія гена СХСК4 вказаних стовбурових клітин більш ніж в три або чотири рази більша в порівнянні з експресією стовбуровими клітинами, одержаними шляхом культивування моноцитів у присутності М-С5Е і 1І/-3, ї експресія гена СХСР4 вказаних стовбурових клітин більш ніж в два або три рази більша в порівнянні з експресією мезенхімальними стовбуровими клітинами, одержаними з кісткового мозку.
2. Стовбурові клітини за п. 1, де активний інгредієнт розчинного у воді рослинного екстракту являє собою цукор або комплекс, що містить цукор, причому активний інгредієнт дедиференціює моноцити.
3. Стовбурові клітини за п. 1, де активний інгредієнт розчинного у воді рослинного екстракту має молекулярну масу від 1000 до 500000, причому активний інгредієнт дедиференціює моноцити.
4. Стовбурові клітини за п. 1, де активний інгредієнт розчинного у воді рослинного екстракту адсорбований на колонці Соп А, причому активний інгредієнт дедиференціює моноцити.
5. Стовбурові клітини за п. 1, де активний інгредієнт розчинного у воді рослинного екстракту адсорбований на аніонообмінній смолі, причому активний інгредієнт дедиференціює моноцити.
6. Стовбурові клітини за п. 1, де активний інгредієнт розчинного у воді рослинного екстракту являє собою фракцію водної фази рослинного походження, екстраговану методом Роїсі, або її очищений продукт.
7. Стовбурові клітини за п. 1, де моноцити являють собою моноцити людини.
8. Стовбурові клітини за будь-яким з пп. 1-7, де експресований щонайменше один представник недиференційованих маркерів Мапод, Мебійп, с-КИї, СОУ ії ОсСІЗ/4, і експресія гена СХСКА є значущою в порівнянні зі стовбуровими клітинами, одержаними культивуванням моноцитів в присутності тільки М-С5Е.
9. Спосіб одержання стовбурових клітин, що включає культивування моноцитів в присутності (ії) М-С5Е і (її) щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, екстрагованого методом екстракції Ео!сп.
10. Спосіб за п. 9, де культивування виконують протягом від 7 до 14 днів.
11. Застосування культурального середовища для дедиференціації моноцитів, де культуральне середовище містить (ії) М-С5ЗЕ і (ії) розчинний у воді рослинний екстракт, екстрагований методом екстракції Еоїсп.
12. Фармацевтична композиція, що містить стовбурові клітини за будь-яким з пп. 1-8 як активний інгредієнт.
13. Клітинний лікарський засіб, що містить стовбурові клітини за будь-яким з пп. 1-8 як активний інгредієнт.
14. Засіб, що викликає дедиференціацію моноцитів, що містить (ї) М-С5Е і (ї) щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, екстрагованого методом екстракції Роси, як активні інгредієнти.
15. Засіб для лікування захворювань, пов'язаних з пошкодженими клітинами, тканинами або органами, що містить (ї) М-СО5БЕ і (ї) щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді рослинного екстракту, екстрагованого методом екстракції ЕоїЇср, як активний інгредієнт.
16. Засіб для лікування захворювань, пов'язаних з пошкодженими клітинами, тканинами або органами, за п. 15, де захворювання вибрані з групи, що складається із зовнішніх травм, запальних захворювань, пошкоджень кісток або хрящів, серцево-судинних захворювань, неврологічних розладів, захворювань печінки, ниркових захворювань, цукрового діабету, атопічного дерматиту Її ЗМНО (хвороби трансплантат проти хазяїна).
17. Засіб для лікування захворювань, пов'язаних з пошкодженими клітинами, тканинами або органами, за п. 15, де захворювання вибрані з групи, що складається із зовнішніх травм, панкреатиту, променевого пошкодження, дерматоміозиту, множинного міозиту, некротичного фасціїту, хронічного бронхіту, перелому кісток, остеопорозу, кістково-хрящових переломів, остеохондриту, дилятаційної кардіоміопатії, інфаркту міокарда, ішемічної кардіоміопатії, серцевої недостатності, гіпертрофії міокарда, застійної серцевої недостатності, рестенозу, аритмії, атеросклерозу, васкуліту, периферичної нейропатії, нейропатичного болю, інсульту, енцефаліту, менінгіту, діабетичної нейропатії, розладу з дефіцитом уваги, аутизму, хвороби Альцгеймера, хвороби Паркінсона, хвороби Крейцфелдта-Якоба, зовнішніх пошкоджень або ішемії мозку або хребта, цирозу печінки, хронічного гепатиту, хронічної ниркової недостатності, гломерулонефриту, ниркової ішемії, діабету, атопічного дерматиту і ЗУНО.
18. Набір клітинного лікарського засобу, що містить щонайменше стовбурові клітини за будь- яким з пп. 1-8 як суттєвий інгредієнт.
19. Набір для одержання дедиференційованих клітин, що містить (ї) М-С5БЕ і (ії) щонайменше одного представника, вибраного з групи, що складається з гангліозиду і розчинного у воді бо рослинного екстракту, екстрагованого методом екстракції Роси, як суттєві інгредієнти.
20. Набір за п. 19, що додатково містить моноцити як компонент. о о . Т0б0Ю. пехтутттях х що т ФО с нн ші ан А ЩО зшю нен в в ля гене Не они ня ЕН ша с у нн и ав й ВВ ИН збова кет ер о ен в ак ее в ОВ в НОВ калі ЗОН повне М: Я Дін ие ша НН НЯ На прокіекн ня ЕВ: М Ек З 7 12 Кількість дин кулюгивування пні
Фіг. . Со Я 7 1234567 ПЕ он Ен нн т и НК ням : ОО Со ати он нн оо КН: коні Беснх не ох не ФЕТУ В Фа в ВО00О. ги сонету тік трр тр нн кн ін вікі зо пбіанун нкинї "3 Пен о: НИ т т «ув и спи НН ов пи а «м ром Я НИ З МНК ЗИ ти: ВВ ТИ мк и и т БОЮВО те пове Шк ке ВОМ шН они -Ж- ГО: МНН МЕ Шк с о Я и І Ше ше: НО СН рН - й м тн НЕК АНА с аа о с ох ши панна щш ОО ко винне з: ВДЕ. Бах: ВОНА п В ЩЕ ше. МН: ВОВНИ НН - я «З с о ев і ЕН НЯ АК це се ЗОВ еВ ват с квт ВО ен ок певкриін ен я ри е я св Не с мн ОНИ о Еш п КУ Вк сс вве: З: ВЕН Я зи и у - Я о: ВАН с КАК ВЕН ЗОН БИКНИ що Мине: они пи кошеня У я с сотнанн с: снн с х О ВВЯБН ОТ ще Бе І Би В в: Мр ВОМ я НН Я ш А Ве В В: ОКО НО ННЯ що 000 Редер еВ Ввррнитненя в "кас М 0 БО, о ем з с ДЕН о. Я а БИ. 0. ВН КЕ, ня Бен: с ВН у г й 3 2 3 й 5 5 ТнНг З
ФІГ. Пр В ве оком овтовютт нта ТЕТ палнк ке р елесісв і кіст во Косово оон Ме св п НИ ие ЗУ Штани ев рес КИМ нсх М не НКИ ни и ТЕТ п М В ВИ о р Кв и и М А я одн КН МНН о нях ВЕК пам и и АВ и КОМИ Кв КД НК и ІТ ЕВКАЖИ Ж вв ДК НН о ни В в нн А НН МОВ я ВО А в п Ен В вн В В А КА п Ан КН о НИ Ко и р и І ВИ о В В МИ ни в НИ ока и МОН ня ШО АХ ДК М, АТ З, ПОПИ под нм А Ж р ен ни а и нн в ДЕ нн р ИН нн НВ и ооо о у НИ МН В м нон Ен Пи НА В они Кроки о М и В В А АХ ван м и и В и и В а Вер и Кн а ве В в нн ПО ве КА КК в АВМ ОН и В ни м я ПН и ни М В а в я ть ни ВВ в КК ШЕ ря и М жд ПОКдіинни о ММ оун и ти й р: і ту Ен няних Суми и ие он в ТАЛЬКИ тА о НЕ ки ЕК МЕН а в ви ИН В НН Би и в в ж ВОК нини и рн А я ВО ов в о и ВО Кн в. р я Ве в во о НН Мн о в в У о аа НЕ ИН ОХ ЕКОН НН НИВА в Я НАВ ун Кок нн я В ОВ та ви мок ДС р В ни А и в В ик ЕК НК о вн НА я БІВ Ор А МАКВІН ння НИ ВН и с ен ва а и и о Во в в НЯ ЗК и их Би и в не о в в в ЕН м в Ех КЕ Ен и КК дв ПК и ем КИ п в ККУ и дав не в Бе Он и и Кв о ап СЮ з МИ У Еф МЛ, ЕНН се Оки ЕНН с Ве ВН ОО о І ок я М нн в с ЕЕ и КК М ВЕС НО о мн ВО В В ОК ККНЕ з 4
Фіг.
іо зда ше РО КОВО пов Фе 300 Биосюоввя ОЕМ Пи хе о «ШО ша ШЕ Б жо еВ у вна - Ши НИ о вин я ЕЖАЖЕА ОС КУЦ тиви І КО х Ка ин ОЕМ ТОЙ - Ор динею рОлКТ еВ - ще Б в в ке Х м - . ни "т з КИ Е ШВИ ШК - ВК г СИНЯ. Б сх ШЕ і 2 о ОБО 5 о ВИ с Я 1 2 З 1 Нлопопіжка солодкої карти 2 о Стовбур кореня лотоса З я Зпемея площепалібня Я
Фіг. що пе о не он ВК
Ж. шк ее я тела в Б я ди с ТЕКИ ОБГ Кар ЕК Б жі 3 п НН ме и й ЩЕ ОО п. ІС зов у б й : ВИ КУ В еВ : со Он тво о Є а ЯН Ву А і 7 З 4 І я азкетракі падшщнижеи солодкої карт 2» Проочне фрвеція БРефарізи Б Прегачна фракшя пАлеваризу З «Драма дунюія блю А агарозів х 6, Фі: 6
7 Пе -к хі, про ж оту тож и че ве аи ПН ни -, дІоЖИи он нн нн в АВМ НА ов ВО ПВ и ен и ва шт МН у риття Ж ри нс НН ОН ВИТ - п УМ Я не ПО УюлЮх. дують вки ни я ее нн С чо Я дв ее НН гоже тк нос о о НН кі Ве ко Сх Є те й зЯ РО, Ба з і щити МН я жу я, ни ЄТН кто хобю п нн п а НН Лад жиТ Мото китаю Тл КАК таж й УЮ лих ша ох ри шааннн н н ни ННИ ж чи т так то М. толк ик ю С Ти дя жк ме ЗршижищоО : кож мн Ки Н я и АР Н М й М о ТЕ щея Рх адек ня ян ту х. ри о чи ХУ ик ми и п ня ВО КУ Й к ри що я аа о о пас міру БИ ув КЗ ІБ СтЕ паж" ча ше зов Кл дик, му х бив ях й рек НЕ МВА ве ин нн на а СпОоДилони А и и Бе ен шани з НИМ 3: пн с в в а нн А не о ван кА п о НН З НА п и нах Що БЕ ем в ек о ЗВО ВК бук мине пе Ен се п ке СВ З ВА а зол я п а о нн в С пн я кр пи ЕК и НО МИ а ме ше м а ЧА а о Кр в ва і о Я й У ЗИ КО а В вача ЗА ЖИ ; ен ПНО шо КЕ мОщ Да м дв ЗМО ор вн АН ях ук Ех ри ие НО о нове и а а ан ни В ВА пн а а ков а па ко ек ан яки хх пола кн Ди В о и НН Я Ново о КН В АНЯ на ни о а ни и НК о в А ОК и ЗИ дому ска НИ БУЛИ СТ: су тд й ВА КН т ее не а и о в В и ар в Км ятки : сла кн В о в ОН се я те шли Долма а у во в В а ши я пря лю кт - лан ес не а а аа На ЗБОРИ кА НН НН КО нич и ит туя яму их мийки рон о п На и НИ НИ ПЕНЯ м Не 7 аг Ж ю д С окр арт ю т Ки о я С оо 7 чан м нн З НА Ан я о о Ко и міх Кан обкті тки. тей, м Аа Са а пом ни ЦИ ДИ ТУ в ин ВО о вна о ОК по. м вка п р кн м нн тн о ВК ЗК. тони кан с НН В о НН НН о и А п по о п ка о в и ОН а ВИ «Ай ІМ ЗХ ще ОМ и І А Ол о ВН НА а в иа ен и Мая шик окт т пн а а п п на п В о я п п і В о В Ва ооо ВЕНИ МО
Фіг. У
UAA201107956A 2008-11-25 2009-11-19 Одержана з моноциту людини стовбурова клітина для терапевтичного застосування і спосіб її індукції UA110691C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2008299359 2008-11-25
PCT/JP2009/069648 WO2010061781A1 (ja) 2008-11-25 2009-11-19 ヒト単球由来治療用幹細胞およびその誘導方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA110691C2 true UA110691C2 (uk) 2016-02-10

Family

ID=42225657

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201107956A UA110691C2 (uk) 2008-11-25 2009-11-19 Одержана з моноциту людини стовбурова клітина для терапевтичного застосування і спосіб її індукції

Country Status (17)

Country Link
US (2) US9169463B2 (uk)
EP (1) EP2365061A4 (uk)
JP (1) JP5800505B2 (uk)
KR (1) KR101682731B1 (uk)
CN (1) CN102245757B (uk)
AR (1) AR074406A1 (uk)
AU (1) AU2009320881B2 (uk)
BR (1) BRPI0921371A2 (uk)
CA (3) CA2977823A1 (uk)
CO (1) CO6341484A2 (uk)
IL (1) IL212638A (uk)
MX (1) MX336067B (uk)
RU (1) RU2573906C2 (uk)
TW (1) TWI539000B (uk)
UA (1) UA110691C2 (uk)
WO (1) WO2010061781A1 (uk)
ZA (1) ZA201103268B (uk)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102399741A (zh) * 2010-09-19 2012-04-04 林雄斌 逆向分化体细胞产生造血干细胞的培养液、方法及用途
JPWO2018052082A1 (ja) * 2016-09-14 2019-06-24 株式会社Ｔｅｓホールディングス Ｌｉｎ２８ａ活性化剤及びその使用
CN107904202B (zh) * 2017-11-22 2018-11-20 北京恩诺生物科技有限公司 一种制备多能干细胞样细胞的方法、组合物和应用
JP6375076B1 (ja) * 2018-02-19 2018-08-15 株式会社 バイオミメティクスシンパシーズ 間葉系幹細胞を用いたアトピー性皮膚炎治療における治療効果予測判定法
JP6574292B2 (ja) * 2018-07-21 2019-09-11 株式会社 バイオミメティクスシンパシーズ 間葉系幹細胞を用いたアトピー性皮膚炎治療における治療効果予測判定法

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4778787A (en) * 1985-12-20 1988-10-18 Trustees Of Boston University Method for treatment of angina and myocardial infarctions with omental lipids
US5272138A (en) * 1988-02-12 1993-12-21 The Biomembrane Institute Naturally occurring gangliosides containing de-N-acetyl-sialic acid and their applications as modifiers of cell physiology
US6084060A (en) * 1996-12-09 2000-07-04 Imclone Systems Incorporated Composition and method for preserving progenitor cells
DE19651443A1 (de) * 1996-12-11 1998-06-18 Hoechst Ag Selbstverstärkende, pharmakologisch kontrollierbare Expressionssysteme
EP0893493A3 (de) * 1997-07-21 2002-12-04 Aventis Pharma Deutschland GmbH Genetisch veränderte Zellen und deren Verwendung in der Prophylaxe oder Therapie von Erkrankungen
US20030157113A1 (en) * 1999-12-28 2003-08-21 Terman David S. Compositions and methods for treatment of neoplastic disease
DE10214095C1 (de) * 2002-03-28 2003-09-25 Bernd Karl Friedrich Kremer Dedifferenzierte, programmierbare Stammzellen monozytären Ursprungs, sowie deren Herstellung und Verwendung
TWI288779B (en) * 2002-03-28 2007-10-21 Blasticon Biotech Forschung Dedifferentiated, programmable stem cells of monocytic origin, and their production and use
CA2519803A1 (en) * 2003-03-27 2004-10-14 Janssen Pharmaceutica N.V. Use of erythropoietin in stroke recovery
CA2547570A1 (en) * 2003-12-02 2005-06-23 Celgene Corporation 4-(amino)-2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))-isoindoline-1,3-dione for induction of fetal hemoglobin in individuals having anemia
US20050260748A1 (en) * 2004-02-27 2005-11-24 Michigan State University Adult stem cells and uses thereof
BRPI0720596B1 (pt) 2006-12-29 2017-10-24 Dow Agrosciences Llc Methods for producing and transforming a single plant cell

Also Published As

Publication number Publication date
CA2977820A1 (en) 2010-06-03
TW201024415A (en) 2010-07-01
JP5800505B2 (ja) 2015-10-28
US20110223143A1 (en) 2011-09-15
BRPI0921371A2 (pt) 2014-11-18
CA2744289A1 (en) 2010-06-03
RU2011126165A (ru) 2013-01-10
IL212638A (en) 2017-08-31
CO6341484A2 (es) 2011-11-21
MX336067B (es) 2016-01-06
EP2365061A1 (en) 2011-09-14
KR20110094084A (ko) 2011-08-19
AU2009320881B2 (en) 2015-01-22
ZA201103268B (en) 2012-07-25
KR101682731B1 (ko) 2016-12-05
WO2010061781A1 (ja) 2010-06-03
JPWO2010061781A1 (ja) 2012-04-26
AR074406A1 (es) 2011-01-12
US9169463B2 (en) 2015-10-27
CA2977823A1 (en) 2010-06-03
TWI539000B (zh) 2016-06-21
CN102245757B (zh) 2014-11-26
MX2011005480A (es) 2011-06-20
AU2009320881A1 (en) 2010-06-03
EP2365061A4 (en) 2013-03-13
RU2573906C2 (ru) 2016-01-27
CN102245757A (zh) 2011-11-16
IL212638A0 (en) 2011-07-31
US20160008434A1 (en) 2016-01-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
You et al. Isolation of cabbage exosome-like nanovesicles and investigation of their biological activities in human cells
EP2313772B1 (de) Isolierung und/oder identifizierung von stammzellen mit adipozytärem, chondrozytärem und pankreatischem differenzierungspotential
EP2745840B1 (en) Composition including stem cell-derived microvesicles for use in promoting neurogenesis
US20060069064A1 (en) Methods for facilitating recovery of functions of endogenous or implanted or transplanted stem cells using hyaluronic acid
US10251824B2 (en) Method for inducing pluripotent stem cells and pluripotent stem cells prepared by said method
UA110691C2 (uk) Одержана з моноциту людини стовбурова клітина для терапевтичного застосування і спосіб її індукції
EP4219686A1 (en) Composition for promoting production of stem cell-derived exosomes and increasing stemness
Aizman et al. Cell injury-induced release of fibroblast growth factor 2: relevance to intracerebral mesenchymal stromal cell transplantations
KR102095696B1 (ko) 밀의 당류 분획물, 이의 분리방법 및 사용방법
Reyner et al. Effect of recombinant equine interleukin-1β on function of equine endothelial colony-forming cells in vitro
AU2020244911A2 (en) Method of culturing cell population and use thereof
DE102009041885B4 (de) Separation von Mesenchymalen Stammzellen
DEMİRHAN et al. THE EFFECTS OF PLANT ORIGIN EXOSOME EXTRACTS ON A549 AND HCT116 CANCER CELL LINES
Urzi et al. LEMON-DERIVED EXTRACELLULAR VESICLES EXERT ANTI-INFLAMMATORY EFFECTS BY INHIBITING THE ERK/NF-KB PATHWAY
EP1133990A1 (en) Anti-tumor composition consisting of a fraction of gravid uterus or mammalian placenta
KR20120135451A (ko) 흑마늘 추출물을 유효성분으로 포함하며 단백질 생산용 세포를 배양하는 배지에 첨가하기 위한, 배지 첨가용 조성물
JP2019196332A (ja) まつ毛増殖作用及び育毛作用を呈するポリフェノール誘導体
Dimitrova et al. SESSION C