KR102095696B1 - 밀의 당류 분획물, 이의 분리방법 및 사용방법 - Google Patents

Abstract

물에 불려 발아시킨 밀 종자로부터 추출한 것으로서 3 내지 30 킬로달톤의 분자량을 갖는 분획물에 대해 개시한다.

Description

밀의 당류 분획물, 이의 분리방법 및 사용방법 {SACCHARIDE FRACTION FROM WHEAT, ISOLATION PROCESS AND FIELD OF USE OF THE INVENTION}

본 발명은 천연 추출물 분야, 특히, 곡류로부터의 추출물 및 이의 분리방법에 관한 것이다.

단백질형(예, 성장인자 등) 또는 글리신형(예, 히알우론산, 가공되지 않은 전분이나 가수분해 전분 및 이들의 분획물, 기타 GAGs, 글리코사미노글리칸 등) 거대분자 또한 각종 식물(예, 알로에베라, 센텔라아시아티카 등)로부터 수득한 화학적으로 정의되지 않은 추출물의 임상적 용도 및 화장품 용도는 현재 광범위하게 분포하며, 이들 산물은 예를 들어 외피조직의 질병(예컨대, 상처나 궤양)이나 화장품을 목적으로 널리 이용되고 있다.

EP 743 323 (본원과 동일한 출원인의)는, 예를 들어, 상술한 전분으로부터 수득한 당류 분획물에 관하여 기술하고 있다.

몇가지 연구, 예를 들어, D'Agostino 등은 "트리티쿰불가르(Triticumvulgare)에서 정제한 분획물이 CaCO-2에 대한 자극 효과를 갖는다" 고 개시하였고[GASTROENTEROLOGY, ELSEVIER, PHILADELPHIA, vol. 104, n°4, Suppl, 1 January 1993, pp. 819], 또한 피오레 등은 "마우스의 섬유아세포에서 트리티쿰불가르 추출물 및 이의 분획물들이 갖는 다양한 활성" [ACTA THERAPEUTICA Vol. 19, No.2, 1993, 151 내지 162 페이지]에서 당류 분획물을 기술하였으며, 이들 분획물은 식물의 발아 및 성장에 이용되는 불특정의 방법에 따라 수득되고 펩티드 분획물, 헥소스 및 헥소스아민을 함유한다.

이들 추출물은, 연화제 등 피부 자극에 대한 진정제와 같이 외피 재생단계 및 이에 따른 흉터 형성의 자극제로 이용되며, 일반적으로 피부 및 점막의 모든 비염증성 질환에 사용할 수 있다.

상술한 유형의 신규 화합물의 분리방법, 상기 목적에 이용할 산물의 유효성 확대, 고활성 화합물의 분리, 또한 과도한 비용 없이 산물, 예컨대, 성장인자 및 상술한 바와 같은 다수의 글루코스 물질을 수득하는 것에 관하여 아직도 연구조사가 이루어지고 있다.

그러나 기술된 바와 같이, 상기의 천연 추출물 (밀 추출물 포함)은 다양한 종류 및/또는 거대분자형의 불확실한 다수의 물질로 이루어지며, 이들 대부분이 현재 미확인 물질이다. 또한, 확인된 성분들이 반드시 상기 활성을 갖는다고 주장할 수도 없다.

이 때문에 현재 식물성 물질 및 선택적으로 이로부터 정제되는 분획물들을 수득하는 수단을 표준화된 방식으로 충분히 기술하지 못하고 있는 실정이다.

반면에 본 발명의 연구 대상으로서 현재 확인되고 화학적으로 특징화된 분획물은 전체 추출물의 모든 활성을 나타내며 따라서 전체 추출물의 작용에 관한 원리를 납득할 수 있게 해준다.

본 명세서는 물에 불린 밀싹으로부터 추출한 분획물들에 대해 개시하며 이 분획물들은 3 내지 30 킬로달톤 범위의 분자량을 갖는다.

본 발명은, 동물에서 기원하는 동시에 식물성인 점을 제외하고는 성장인자의 다수의 전형적인 생물학적 성질을 갖고 또한 단백질이 아닌 다당류(폴리사카라이드)의 화학 구조를 가진 것으로서, 물에 불린 밀싹으로부터 수득한 추출물의 분획물에 관한 것이며; 상기의 예상치 못한 특징들 때문에 특히 약물 및 상처와 궤양의 치료에 유용한 산물의 조제 측면에서 이 분획물에 관심을 갖게 된다.

좀더 구체적으로, 본 발명은 종래기술에 대해 상기 개시한 바와 같이, 3 내지 30 킬로달톤 범위의 분자량을 가진 것으로서 통상적으로 이미 공지되어 있는 유사 추출물을 수득하는데 적용되는 동일한 조건에서 발아한 밀의 종자로부터 수득한 분획물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 분획물은 발아하지 않은 종자에는 함유되어 있지 않으며, 오로지 혹은 근본적으로, 이 분획물(예, 3 내지 30 킬로달톤 범위의)만 상술한 특성들을 갖는다는 점을 명심해야 한다.

도 1은 각각 무처리된 기준물질(물), 본 발명에 따른 분획물(도면에서 CP 분확물로 표식화한 부분), 및 본 발명에 따른 방법의 단계 (d)에서 수득한 분획물과 서로 분리된 것으로서 도면에서 TVE로 표기한 분획물을 각각 분석하여 얻은 크로마토그램을 나타낸다.

본 발명에 따르면, 본 방법은 공지 방법에 따라 발아한 밀로부터 얻은 원료 추출물의 조제 및 활성 분획물의 후속 정제처리 방법을 제공한다.

상술한 방법은 다음의 단계들을 포함한다:

a) 빛 (바람직하게는 어두운 곳), 습도 (바람직하게는 60% 이상의 습도) 및 온도 (바람직하게는 5 내지 20℃)의 조건에서 밀 종자를 발아시켜, 물 및 불활성 천연 또는 인공 성장 담지체 내에서 바람직하게는 3 내지 15 cm의 길이로 자란 싹을 수득하고;

b) 85 내지 125 ℃범위의 온도에서 수득하고 (선택적으로, 예방차원에서 더 작은 크기로 부수고 물을 첨가하여 수득하고), 선택적으로 물을 첨가하여 얻은 식물성 재료를 가열하여 후속 단계를 준비하고 미생물 성장을 방지하며;

c) 수득한 재료를 물에 넣고 (바람직하게는 pH 2 내지 4에서), 선택적으로 저온(최대 10℃)에 두어 물에 붇도록 하는 재료 불림을 수행하고;

d) 여과, 압착 혹은 추출기 등 이에 상당하는 장치를 이용하여 압착시켜 고형 잔사를 제거한 뒤 1차 투명액 (원료 추출물로 판단됨)을 수득하고 이를 멸균처리하며;

e) 상술한 용액에서 3,000 내지 30,000 달톤의 분자량을 갖는 분획물을 정제하여 활성 성분의 백분율 함량이 증가한 2차 용액을 제공하고;

f) 3,000 내지 30,000 달톤의 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 정제된 활성 성분을 상기 2차 용액으로부터 분리하며, 필요한 경우, 상기의 단계 (a)에 앞서서 종자를 정제수로 습윤처리 할 수 있다.

단계 (b) 및 단계 (d)에서 언급한 멸균처리는 종래 기술에 따라 바람직하게는 오토클레이브를 이용하여 수행한다.

단계 (c)는 바람직하게 pH 2 내지 4에서 바람직하게는 1 내지 72시간 동안 수행한다.

단계 (c) 및 단계 (d)에서의 고형 잔사 제거는 컬링(curling)법에 따라 수행될 수 있다. 이 경우, 단계 (d)에서 수득한 용액을 단계 (b)에 따라 발아된 새로운 묘종(seedling)에 단계 (c)의 물 대신 첨가하며, 상기의 단계 (c) 및 (d)를 반복한다. 이 방식으로 더 큰 수율을 달성할 수 있다,

3,000 달톤 미만 및 30,000 달톤 초과의 분자량을 갖는 분획물의 제거 (단계 (e))는 당해 분야의 지식을 가진 자에게 공지된 종래의 방법, 예를 들어, 겔 여과법이나 한외 여과법에 따라 수행될 수 있다.

유사하게, 대상이 되는 분획물을 상기의 기술에 따라 분리한다.

위에서 언급한 분자량은 본 발명의 대상인 분획물을 정제하는데 이용하는 한외여과막을 적용하기 위한 한도까지이고; 이러한 값은 구형 단백질과 관계가 있으므로 이로부터 분리된 분획물의 참 분자량을 가리키는 것으로 간주한다. 그러므로, 당류 형태와 직쇄 및 분지쇄 구조를 갖는 상기 분획물을 검토대상으로 선택하며 따라서 구형만을 대상으로 한다.

이것의 최종 형태에서, 본 발명의 대상인 분획물은 종래의 방법을 이용하여 건조 또는 동결건조하거나 또는, 바람직하게는, 공지의 사전설정된 농도로 수성액 내에 유지되며; 경우에 따라 방부제를 첨가하거나 및/또는 멸균처리한다.

전반적으로 상술한 본 방법을 다음의 구체적인 실시예에서 더욱 명확히 예시하기로 한다.

실시예

1. 발아

5 kg의 습윤 목질 셀룰로오스를 일련의 적절한 강재 탱크에 분배하였으며; 이곳에 미리 물로 적셔둔 2.4 kg의 밀싹을 다시 분배하고; 5 내지 15 cm의 길이로 자란 묘종을 수득할 때까지 챔버 내에 종자를 수일간 (4일 내지 10일간) 어둠 속에서 발아되도록 한다. 생육과정에서 충분한 양의 물을 가하여 담지체를 매일 습윤 상태로 한다.

챔버의 온도는 5 내지 20℃ 범위에서 유지되며; 상대습도는 약 60% 이상이다.

2. 가열

탱크 내용물을 적절한 밀폐용기에 담고 1 기압에서 1시간 동안 오토클레이브 처리한다 (

121℃).

3. 불림 및 추출

다음, 이 물질을 적정 용량의 강재 용기에 옮겨 담고, 120 ml의 10% v/v 황산 및 60 ml의 10% v/v 염산을 함유한 100 리터의 정제수를 가한다. 불림 처리는 1 내지 72시간 동안 수행할 수 있다. 다음, 수성상을 300 기압의 압력하에 추출하고 배출된 고체상은 제거한다.

수득된 액체 ("1차 압착"으로 정의함)에 120 ml의 10% v/v 황산 및 60 ml의 10% v/v 염산을 보충하고 같은 수의 다른 탱크에 들어있는 내용물과 혼합한다. "1차 압착"이라고 기술한 방법을 반복 실시하여 "2차 압착"의 결과물을 수득한다.

동일한 조작을 반복하여 "3차 압착" 및 "4차 압착"의 결과물을 또한 수득한다.

식물성 재료와 접촉시켜 추출물을 얻고, 액상을 강하게 혼합하여 차가운 곳(5 내지 9℃)에 24 내지 72시간 동안 놓아둔다.

최종 결과물인 액체를 역시 차가운 곳(5 내지 9℃)에 대략 24 내지 72시간 동안 놓아둔다.

4. 여과 및 멸균

4차 압착 결과로 나온 액체를 적절한 용기에서 종래의 방법에 따라 여과한 뒤 1기압에서 1시간에 해당하는 주기로 오토클레이브 처리한다.

5. 한외여과

3 킬로달톤의 컷오프를 가진 카트리지가 설치된 적절한 한외여과 설비를 이용하여, 상기와 같이 수득한 액체를 설비에 허용된 최대 한도까지 한외여과하고, 저류액에 물을 첨가한 뒤 다시 한외여과를 2 내지 3회 반복하여 용리상에 함유된 저분자량의 물질을 제거한다.

다음, 사용한 카트리지를 30 킬로달톤의 컷오프를 갖는 카트리지로 교체한 것 외에 동일한 방법을 적용하여, 3,000 달톤 초과의 분자량을 가진 잔사를 또다시 한외여과 처리한다: 그러나 이 경우의 저류 잔사는 30,000 킬로달톤을 넘는 분자량을 나타내어 제거되는 반면, 용리상은 3,000 내지 30,000 달톤 범위의 분자량을 갖는 활성 성분을 함유한다.

이에, 활성 성분 함유 용액은 그대로 또는 적절한 담지체 상에서 동결건조 (혹은 건조)하거나; 또는 멸균처리 한다 (그대로 또는, 예컨대, 2% w/v의 페녹시 에탄올 등의 방부제를 첨가하여).

A. 활성 성분에 관한 화학 데이타

1. 분획물의 크로마토그래피 분석

고입 음이온교환(HPAE) 크로마토그래피 장치를 선택하여, 특히, 카르보히드레이트 분석 결과를 표시하기 위한 PAD 검출기 (펄스화 전류측정 검출기)와 연결시켰다.

크로마토그래피 장치는 다음과 같은 특징이 있다:

- 2원 구배의 1차 용액을 이용하는 펌프 장치;

제1 용리제: 0.5M Na0H

제2 용리제: 0.5M Na0H에 녹인 1M 아세트산 나트륨

상기의 구배는 다음의 선형 프로그램 (1.0 ml/분에 상당하는 소정의 유량을 수반하는)에 의해 제공되며 여기서 제2 용리제의 %는 혼합물 총량에 대한 제2 펌프 관련 용리제의 백분율을 나타낸다.

- 크로마토그래피 컬럼:

35 ℃의 온도로 유지한, 카르보팩 PA1 가드 프리-컬럼 (10-32) 또는 이의 등가물을 수반하는 카르보팩 PA1 (4 x 250 mm):

- 하기의 운전 조건하에 작동하는 금 전극이 탑재된 PAD 검출기:

* 표준 용액의 조제

10 ml의 탈이온수에 녹인 4 내지 12 mg 범위의 농도를 가진 일련의 활성 성분 용액은 순수 활성 분획물의 농축액을 기초로 조제하며, 이를 규격 표준으로 간주하거나 또는 대안적으로 규격 표준에 대해 보상처리한 실제 표준을 이용한다.

* 절차

100 μl의 무처리액을 주입하여, 용리계의 구배에 있어 급변동(jump)에 기인한 수개의 피크점을 제외하고 관련 로마토그램이 실질적으로 평면 형태인 것을 입증한다.

그 뒤 100 μl의 각 시험용액을 주입한다.

정제된 활성 분획물 시료의 크로마토그램은 Rt

44분에서 단일 피크점을 가지며 이는 활성 분획물에 정확히 일치한다 (도 1 참조, "CP 분획물"로 표y식화한 시료).

정제 혹은 부분정제된 추출물 시료의 크로마토그램은 1군의 피크점을 포함하는 특징적인 과정을 보여주며, 이들 중 Rt

44분 일 때의 피크점이 활성 분획물에 관련한 것이다.

2. 열분해에 따른 분획물의 크로마토그래피 분석

이 대조 검사는 시험 대상 분획물의 올리고당 구조를 구성하는 각 단당류의 특성을 확인하기 위하여 시행한다.

고성능 및 이온교환 (HPA) 크로마토그래피를 가수분해된 시료에 적용한다.

설비의 유형은 미가공의 분획물, 예컨대 가수분해되지 않은 분획물을 위한 상기 설비와 대등한 것이다.

절차:

0.35% (v/v) HCl을 분획물에 첨가하고, 100 ℃에서 20시간 동안 5 내지 75 mg/100 ml 범위의 활성 분획물 농도의 시료 상에서 가수분해를 실시함으로써, 가수분해를 달성한다.

HPA 분석조건은 다음과 같다:

카보팩 PA1, 4 x 250 mm 컬럼

등용매 용리제 0.017 N NaOH

1 ml/분의 일정 유동

PED 검출

주입 용적: 가수분해된 시료를 물로 1 내지 100 배 희석한 75 μl 의 용액.

표준으로서 더 일반적인 단당류를 이용하여 동등한 분석을 수행한다.

연구 결과 시료에는 글루코스가 주요 물질로서 대량 함유되어 있는 것으로 확인되었으며, 이때의 다른 피크점들 (다른 단당류나 유사물; 만노스, 갈락토스, 글루코사민, 펜토스 등)은 존재하지 않거나 흔적만이 존재한다.

가수분해 이전에 실시한 동일한 분석에서도 유사하게 단당류 부재라는 결과를 수득했으며, 이는 분획물이 올리고당 구조로 이루어졌음을 증명하는 것이다.

B. 분획물의 생물학적 활성

본 발명에 따른 분획물은, 동물 기원의 성장인자와 유사하게, 어떤 유형의 상처 및/또는 궤양에 대해서도 치료 활성 및 체내의 현저한 상피세포 재생 효력을 보유하고 있음이 입증되었으며 따라서 상처 및 궤양 치료 의약품의 제조에 이용할 수 있다.

이는 또한 시험관 내에서 두드러진 섬유아세포내 세포성장 활성화 및 ODC 활성을 보여준다.

전형적인 성장인자인 이노시톨 인지질 가수분해 메카니즘의 활성화 역시 확인되었다.

다양한 약학 분야의 연구에서 치료 활성이 예시되고 있다.

1. 섬유아세포의 세포성장 자극 시험

섬유아세포는 조직 회복 메카니즘에서 기본 역할을 하는 섬유이다. 따라서 본 시험은, 유기체의 세포성장 자극 메카니즘의 결과로써 산물의 치료 효과가 관측되는지 여부를 입증하기 위한 것이다.

절차

3T3 마우스 섬유아세포 배양물을 10% v/v 소 혈청(CS) 및 페니실린(10 U/ml)을 보충한 DMV 배지에 넣는다. 이 배양물을 5% CO2를 함유하는 습윤 분위기 하에 37 ℃의 25 ml 팰컨 보틀에서 배양하고 4 내지 6일마다 계대 배양한다. 이들 배양물을 합쳐 3 ml PBS로 세척하고 37 ℃에서 0.25% 트립신을 이용하여 트립신 처리한다. 트립신을 비활성화하기 위해, 2 ml DME를 가하고, 원심분리 후 수득한 세포 펠릿은 보급하기 적절한 밀도에 도달할 때까지 신선한 배양 배지로 희석한다.

팔레이트의 자극제 효과를, 저농도의 SC를 함유하는 배지에서 휴지 상태로 유지된 섬유아세포에 대해 시험한다. 세포를 5% CS가 보충된 DME에서 약 2000 내지 4000개 세포/플레이트의 밀도로 시드한다. 18시간 후 배지를 신선한 0.6% CS 함유 배지로 교체하고, 세포는 각 후속 활성시험 전에 추가로 48시간 동안 계속 성장하도록 한다. 이 시험에서, 산물(20 mg/100 ml의 농도로 물에 희석한)은 성장기간 전체에 걸쳐 매일 2 내지 20% v/v로 농도를 증가시키면서 첨가한다.

제5일 종료시, 배양물을 트립신 처리하고 콜터 계수기로 세포수를 세어 세포의 수를 자극시킨다.

결과

언급한 희석도로 산물을 첨가하여 세포성장의 뚜렷한 용량 의존형 자극을 일으킨다. 이 효과는 (상기와 같이 희석된) 산물이, 균등한 농도의 CS가 나타낸 것보다는 약간 적지만 최고점에서 대조군보다 적어도 4배를 초과하는 양에서, 5% 백분율일 때 유의성을 갖기 시작하고 10 내지 20%일 때 최대가 된다.

2. ODC (오르니틴 디카르복실라제 ) 활성화 시험

오르니틴 디카르복실라제는 스페르미딘-폴리아민 합성에 핵심이 되는 효소로서, 오르니틴 아미노산에서 푸트레신으로의 변환에 촉매화 반응한다. 이 폴리아민은 세포 증식 공정을 제어하는데 함께 수반된다. 이 시험은 생성된 섬유아세포의 성장을 자극하는 작용이 ODC 활성의 증가와 상관관계가 있는지 확인함으로써 수행된다.

절차

0.6% CS (소 혈청)을 함유한 배지에서 성장하고 섬유아세포 성장 자극 시험에서 상술한 바와 같이 조제한 3T3 세포에서 ODC 활성을 시험한다.

ODC 활성은 산물(20 mg/100 ml의 농도로 물에 희석한)을 첨가하고 6시간 후, 1% 내지 10% v/v으로 양을 증가시키며 러셀 [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 60 1420 (1968)]에서 설명한 방법을 이용하여 측정한다.

결과

시험 조건하에 해당 농도에서, 산물이 - 첨가 6시간 후 및 용량 의존적으로 - 대조군의 약 4배 초과하고 및 균등한 농도의 CS와 유사한 정도의 현저한 ODC 자극을 나타낸다.

3. 이노시톨-인지질 가수분해의 자극 시험

물질이 활성화 및 세포 증식에 관련한 공정을 활성화할 수 있는 기본 생화학 메카니즘 중 하나가 막 이노시톨 인지질의 특정 자극에 존재하며, 따라서 제2 메신저, 이노시톨 트리포스페이트 (InsP3) 및 디아실글리세롤을 증가시킨다는 사실이 널리 보고되어 있다. 이 메카니즘은 특히 신호 변환, 예컨대, 외피 성장인자(EGF), 인슐린 및 인슐린 유사 인자의 작용과 관련된 티로신 키나제의 활성화와 밀접한 관계가 있다.

따라서 양측 조건 즉, 기준 조건 및 섬유아세포내 인지질 대사의 활성화제로 공지된 CS 혈청을 이용한 자극 후에, 3T3 세포내 이노시톨 포스페이트 (특정의 포스포이노시티드 가수분해 지수로서) 축적에 대한 산물의 영향을 평가하는 것이 유리하다고 간주된다.

절차

이노시톨 인지질의 가수분해는 0.6% CS (소 혈청) 함유의 배지에서 성장하고 섬유아세포 성장 자극 시험에서 상술한 바와 같이 조제한 3T3 세포에서 시험한다.

휴지시, Ham F-10 배지 (저농도 이노시톨 함유)로 세포를 세척하고, 0.6% CS 및 0.6 μmol 2-[3H] 미오이노시톨을 24시간 동안 첨가하여 37 ℃에서 24시간 동안 배양하여 막 이노시톨 인지질을 표식화한다. 배양 종료시 세포를 10 mmol LiCl 및 0.1% BSA 함유의 Krebs-Henseleit 완충액으로 세척한다. 다음, 10% CS가 있거나 없이 (4 mg/100 ml 농도의 수성액 내) 산물의 양을 0 내지 20% (v/v)로 증가시키면서 세포를 24시간 동안 배양한다.

이후 이노시톨 포스페이트는 다음의 기술을 이용하여 측정한다: 배양 배지는 흡출 제거하고 세포는 원심분리를 통해 클로로포름/메탄올/물의 1/1/1 (v/v) 혼합물로 추출하며, 수성상을 포름산 형태의 1 ml의 도웩스-1 컬럼 상에 포집 담지하고, 이 컬럼을 24 ml의 물로 세척하여 함입되지 않은 표식화 이노시톨을 제거한다; 다음, 이노시톨 포스페이트를 0.2 m 포름산 암모늄 및 0.1 M 포름산을 이용하여 세척하여 용리한다. 이후 방사선 활성도는 섬광 분광법으로 측정한다.

결과

시험 조건하에 해당 농도에서 산물은, 대조군의 약 4배 초과하고 균등한 농도의 CS와 유사한 정도의, 이노시톨 인지질 가수분해에 관한 현저한 용량 의존적인 자극을 나타낸다. 산물 및 CS의 자극 효과는 CS 단독일 때보다 (및 산물이 단독으로 존재할 때보다) 더 큰 활성화를 유도한다는 점을 주목하며, 이는 상기 두 성분간에 유리한 상승효과가 존재함을 시사한다.

4. 실험용 상처에 대한 체내 회복시험

체내 회복시험은 국소 도포를 통해 동물을 대상으로 수행하며 이 결과, 상처 치료에 대한 본 산물의 효능이 확인된다.

절차

본 시험은 위스터 균주를 220 내지 250 g 범위의 양으로 사용하여 수컷 래트에 대해 수행한다. 시험 1주일 전, 동물을 온도, 습도 및 광의 대조군 조건에서 물과 먹이에 자유롭게 접근하도록 한다. 동물을 각 그룹당 10마리의 동물로 이루어진 균등한 실험그룹들로 세분하며; 이 중 한 그룹을 대조군으로 이용하여 위약으로 치료하고, 다른 그룹은 본 발명의 산물로 치료한다.

시험 제1일의 오전에, 모든 동물에게 외과적 처치를 하여 다음의 방식대로 표준 상처를 만든다: 가볍게 마취하고 (10 mg/kg 용량의 10% 에틸 우레탄을 사용),각 동물의 요추 부위를 정확하게 면도하고 소독한 뒤, 국소치료의 경우, 2.5 cm 직경의 금속 디스크의 모서리를 따라 피부를 8.5 cm 만큼 절제한다. 또한, 커브형 집게를 이용하여 피부와 피하 조직을 제거한다. 모든 동물에 대해 실질적으로 동일한 상처를 만든다.

매일 치료 후, 상처를 적절히 덮은 후 동물을 각각의 우리에 넣어둔다.

상처 정도는 9일간 (국소치료의 경우 5일간) 매일 플래니미터(구적계: 투명지에 상처를 추적하는)로 측정한다.

국소 도포에 따른 일일치료

대조군 동물의 상처는 생리학적 용액 (0.9% NaCl)으로 이루어진 위약이 침투한 멸균 거즈로 치료한다.

다른 그룹 동물의 상처는 물에 용해시킨 20 mg/100 ml 농도의 본 발명의 산물이 침투한 멸균 거즈로 치료한다.

결과

본 발명의 산물로 치료한 동물에서, 회복 과정이 빨라지는 것으로 관측되며 대조군과 비교하여, 치료 종료시 상처 면적이 평균 20 내지 30%의 현저히 감소하는 것으로 확인된다.

약제학적 및/또는 화장품 용도의 산물의 제조

본 발명의 대상인 활성 분획물을 이용하여 약제학적 활성 및 미용 효능을 가진 제품을 제조한다.

용량은 치료할 조직의 질병 및 유형, 확대 정도, 환자의 변수 (연령, 성별, 체중), 및 약제학적 또는 화장품 조성물의 종류에 따라 달라질 수 있다. 활성 분획물의 용량은 또한 사용되는 분획물의 정제도에 대한 함수로서 변화할 수 있다.

본 발명의 대상인 분획물은 당해 분야의 지식을 가진 자에게 공지된 부형제 및 종래의 담지체 물질과 혼합한 상기 분획물을 유효량으로 함유하는 조성물 형태로 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은 공지의 방법 및 종래 기술에 따라 제조할 수 있다.

기타의 활성 성분들이 최종 조제물에 포함될 수 있다.

약제학적 및 화장품 조성물의 예를 들면, 물약, 로션, 크림, 연고, 겔, 용액, 약물, 좌제, 질제, 비누, 발포체, 태블릿, 분말, 및 유액 등을 들 수 있다.

Claims (12)

1. 3,000 내지 30,000 달톤 범위의 분자량을 갖는 발아된 밀 종자로부터 수득한 분획물을 제조하는 방법으로서:
   a) 모종을 얻을 때까지 물 또는 천연이나 인공 담지체 상에서 수행하는 밀 종자의 발아;
   b) 모종의 열처리;
   c) 수성 용액 내에서 수득된 재료의 불림 처리;
   d) 1차 투명액을 수득할 때까지 고체 잔사의 제거 및 멸균; 및
   e) 3,000 달톤 미만 및 30,000 달톤 초과의 분획물을 제거하여 달성된 3,000 내지 30,000 달톤 범위의 분자량을 갖는 분획물의 정제를 포함하고,
   단계 (a)는 어두운 곳, 60% R.H 이상의 습도 및 5 내지 20 ℃의 온도 조건하에 물이나 불활성의 인공성장 담지체 상에서 수행하여 3 내지 15 cm의 길이까지 성장한 모종을 수득하는 단계이고,
   단계 (b)는 85 내지 150 ℃에서, 선택적으로는, 물의 첨가하에 25 내지 120분간 수행하며 또한 상기 단계는 수득된 그대로 또는 작게 파쇄한 식물성 물질에서 수행되고, 그리고
   단계 (c)는 pH 2 내지 7 및 2 내지 10 ℃에서 수행되는, 것을 특징으로 하는 제조방법.
2. 제1항에 있어서,
   단계 (d)는 합성막, 종이필터, 프레스 또는 액-고 추출기를 이용하여 수행하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
3. 제1항에 따른 방법으로 수득한 정제된 수준의 당류 분획물.
4. 제3항에 따라 수득한 분획물을 피부나 점막에 대한 궤양, 상처 또는 피부 질환의 치료를 위한 기본적인 활성 요소로 사용하는 분획물.
5. 제3항에 따른 분획물, 부형제, 및 종래의 담체물질의 혼합물을 유효량으로 함유하는 피부나 점막에 대한 궤양, 상처, 또는 피부 질환의 치료용 약제학적 조성물.
6. 제5항에 있어서,
   상기 약제학적 조성물은 물약, 로션, 크림, 연고, 겔, 용액, 약물, 좌제, 질제, 비누, 발포체, 태블릿, 분말, 또는 유액의 형태로 제공되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
7. 제3항에 따른 분획물, 부형제, 및 종래의 담체물질의 혼합물을 유효량으로 함유하는 피부질환 개선용 화장품 조성물.
8. 제7항에 있어서,
   상기 화장품 조성물은 물약, 로션, 크림, 연고, 겔, 용액, 약물, 좌제, 질제, 비누, 발포체, 태블릿, 분말, 또는 유액의 형태로 제공되는 것을 특징으로 하는 화장품 조성물.
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