CN117338823A - 一种动物酵素发酵液及其制备方法与应用 - Google Patents

一种动物酵素发酵液及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及蛋白发酵产品技术领域，具体涉及一种动物酵素发酵液及其制备方法与应用；所述动物酵素发酵液是由畜禽肉经食用发酵菌剂发酵而成，富含大量活性代谢产物；所述制备方法工艺生产流程简单及成本低；将所述动物酵素发酵液稀释500倍时，可以完全灭活绿脓杆菌，且对常见致病性真菌、革兰氏阳性菌及阴性菌均具有良好的灭活作用，具有广谱抑菌杀菌作用；所述动物酵素发酵液能够促进鼠尾鳞片颗粒层形成，改变表皮的角化过程，使得鼠尾鳞片从角化不全恢复到正常角化；所述动物酵素发酵液可用于制备治疗牛皮癣的涂抹药物，效果显著，功效持久，具有重要的应用价值。

Description

一种动物酵素发酵液及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及蛋白发酵产品技术领域，具体涉及一种动物酵素发酵液及其制备方法与应用。
背景技术
牛皮癣又称银屑病，是以鳞屑和红斑为临床症状的皮肤病。牛皮癣无传染性，但发病率较高、病程长，且易复发、很难根治，对患者的身体健康和精神影响很大，有皮肤科“不死的癌症”之称。牛皮癣发病机制较复杂，普遍认为是由于皮肤中的T细胞过度活跃，并错误地攻击人体自身皮肤细胞，引起细胞炎症和皮肤局部变厚及“鳞质化”，最终造成大量片屑状皮屑脱落。
目前用于治疗牛皮癣的药物种类很多，有中药制剂、合成西药制剂、生物制剂等，其中西药制剂大多数只能达到近期疗效、症状暂时缓解，不能解决复发问题，需要长期、反复乃至终身用药，易产生严重不良反应，甚至加重病情。与西药相比，中药制剂具有用药灵活、不良反应小等优点。但是中药治病讲究辩证治疗，很难有一种药物对所有患者都有效果，且市面上治疗牛皮癣的中药药物效果不一，给患者造成很大困扰。生物制剂具有不良反应小、无免疫抑制作用等特点，为牛皮癣的治疗提供了有效且安全的方案，临床应用前景广阔。因此发展一种无毒副作用、无耐药性的生物制剂，用于制备治疗牛皮癣的药物具有重要的应用价值。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种动物酵素发酵液，所述动物酵素发酵液可以有效抑制皮肤表面病原微生物，补充皮肤表皮细胞营养，维护皮肤表面微生态平衡的作用。
本发明的第二个目的在于提供上述动物酵素发酵液的制备方法，所述制备方法具有工艺生产流程简单及成本低等优点。
本发明的第三个目的在于提供上述动物酵素发酵液的应用，所述动物酵素发酵液可用于制备治疗牛皮癣的药物。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种动物酵素发酵液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
（1）、将畜禽肉破碎，加水，加热，沥水；
（2）、取步骤（1）得到的肉块，加入纯化水，绞磨，得到肉泥；
（3）、取步骤（2）得到的肉泥，加入十六烷基三甲基溴化铵，鲸蜡醇，纯化水，进行乳化灭菌，熬制，得到浆料；
（4）、取步骤（3）得到的浆料，加入葡萄糖，氯化钠，发酵菌剂，进行发酵，再经过滤得到所述动物酵素发酵液。
进一步地，步骤（1）中，所述加热的温度为95-100℃，时间为15-30 min。进一步地，步骤（2）中，所述肉块与纯化水的质量比为1：1。
进一步地，步骤（3）中，所述肉泥，十六烷基三甲基溴化铵，鲸蜡醇及纯化水的质量比为1：0.001：（0.015-0.03）：（0.5-0.7）。
进一步地，步骤（3）中，所述乳化灭菌的温度为115-125℃，时间为20-30 min，转速为300 r/min。
进一步地，步骤（3）中，所述熬制的温度为90℃，时间为6 h，转速为200 r/min。
进一步地，步骤（4）中，所述浆料，葡萄糖，氯化钠及发酵菌剂的质量比为100：（1-2）：（1-2）：（1-3）。
进一步地，所述发酵菌剂由解蛋白奇异球菌菌剂，植物乳杆菌菌剂，巨大芽孢杆菌菌剂，侧孢短芽孢杆菌菌剂，双歧杆菌菌剂及嗜热链球菌菌剂按照质量比（0.5-1）：（1-1.5）：（0.6-1）：0.5：2：（0.5-1）混合而成。
进一步地，所述解蛋白奇异球菌（Deinococcus proteolyticus）购自中国普通微生物保藏管理中心，保藏号为CGMCC1.3754。
进一步地，所述解蛋白奇异球菌菌剂，植物乳杆菌菌剂，巨大芽孢杆菌菌剂，侧孢短芽孢杆菌菌剂，双歧杆菌菌剂及嗜热链球菌菌剂的活菌数均为108-9 cfu/g。
进一步地，步骤（4）中，所述发酵包括以下步骤：先于35℃，发酵12 h，后将温度升至40℃，发酵6 h。
进一步地，所述发酵的转速为300 r/min。
进一步地，步骤（4）中，所述过滤采用0.22 μm滤膜进行。
本发明提供的动物酵素发酵液是由动物蛋白原料经过乳化，发酵等工艺制备而成，快速将畜禽肉制备成动物酵素发酵液，且整个生产制备过程无废水废气产生。与现有技术相比，本发明通过构建复合仿生态酵解菌种及发酵工艺，使得原料分解代谢更彻底，获得的代谢产物更丰富。
本发明在乳化灭菌过程中，加入了十六烷基三甲基溴化铵及鲸蜡醇，可以使得肉泥进行充分乳化，使得熬制得到的浆料中各物质分散均匀，从而通过进一步发酵得到更多活性产物。
本发明发酵过程中采用的发酵菌剂为复合菌剂，包括解蛋白奇异球菌菌剂，植物乳杆菌菌剂，巨大芽孢杆菌菌剂，侧孢短芽孢杆菌菌剂，双歧杆菌菌剂及嗜热链球菌菌剂，其中解蛋白奇异球菌，植物乳杆菌，巨大芽孢杆菌，侧孢短芽孢杆菌，双歧杆菌及嗜热链球菌联合使用能够产生多种活性物质，如蛋白酶、脂肪酶等，一方面可以促进发酵，另一方面可以充分分解浆料得到各类活性代谢产物。此外，解蛋白奇异球菌具有较强的分解蛋白的能力及其较强的发酵能力，可以产生各类功能性的多肽、小肽及氨基酸等物质，在35℃下，本发明所述的解蛋白奇异球菌，植物乳杆菌，巨大芽孢杆菌，侧孢短芽孢杆菌，双歧杆菌及嗜热链球菌的发酵能力显著上升，在40℃下，解蛋白奇异球菌达到最佳的发酵温度，其发酵能力进一步得到显著提升，通过不同发酵温度的设置，从而充分发挥各菌剂的分解能力。
一种上述方法制备的动物酵素发酵液。本发明所提供的动物酵素发酵液无毒副作用，能避免人体皮肤在频繁使用杀菌产品后出现过敏反应，避免造成皮肤发红、刺痛等情况的发生。
一种上述动物酵素发酵液的应用，所述动物酵素发酵液可用于制备治疗牛皮癣的药物。
本发明提供的动物酵素发酵液作为一类特殊的生命活性物质和生物催化剂，富含800余种对生命体细胞具有重要生理作用的小分子物质，包括197种小分子肽、109种多肽、7种核苷酸类、大量生物寡糖、功能氨基酸、短链脂肪酸、生物有机酸、生物酶类及多种益生菌等活性小分子营养物质。这些复杂的活性代谢产物具有抗菌消炎、修复损伤细胞等功能，从而改善人体亚健康状态。同时动物酵素发酵液中的生物活性肽可调节细胞代谢活动及机体免疫活动，抑制免疫T细胞过度增殖，促进细胞恢复正常生命活动，因此可将其用于治疗和缓解牛皮癣症状。
有益效果：
1、本发明所提供的动物酵素发酵液是动物蛋白经复杂仿生态酵解菌剂经发酵制得，含有具有特定生物活性的天然小分子蛋白跨膜复合物，产物稳定性强，对生命体细胞具有重要的营养代偿与修复激活功能；本发明提供的制备方法具有工艺生产流程简单及成本低等优点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例1制备的动物酵素发酵液不同分子量的肽段的质量分布图；
图2是本发明实施例1制备的动物酵素发酵液不同长度的肽段的质量分布图；
图3为本发明实施例1制备的动物酵素发酵液的应用效果图，图3a为患者使用前的症状图，图3b为患者使用15 d后的应用效果图；
图4为本发明实施例1制备的动物酵素发酵液的应用效果图，图4a为患者使用15 d后的应用效果图，图4b为患者使用25 d后的应用效果图；
图5为本发明实施例1制备的动物酵素发酵液的应用效果图，图5a为患者使用前的症状图，图5b为患者使用45 d后的应用效果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
白条母鸡选用色泽正常、无异味、去头去尾的鸡肉。
本发明发酵菌剂所用各菌剂的制备方法采用以下步骤：
首先取-80℃冰箱中保存的解蛋白奇异球菌，巨大芽孢杆菌及侧孢短芽孢杆菌分别进行活化，活化后接种于经过灭菌的种子培养基上，在35-40℃左右、转速100 r/min的条件下培养18 h得到种子液；再将种子液，按2%接种量接种于经过灭菌的发酵培养基中，发酵条件为：35-40℃摇床培养，转速为200 r/min，发酵至各发酵液中的活菌数为108-9 cfu/g，得到各菌剂。所得腐熟菌剂其活性菌数不小于2×109 cfu/g。
其中，种子培养基的组成为：葡萄糖10 g/L，胰蛋白胨5 g/L，酵母浸膏5 g/L，氯化钠1 g/L，余量为水，总体积1 L。
发酵培养基的组成为：葡萄糖15 g/L，胰蛋白胨5 g/L，酵母浸膏5 g/L，氯化钠1g/L，余量为水，总体积1 L。
植物乳杆菌菌剂的制备参照文献《李娜等.植物乳杆菌ZJ316高密度发酵条件优化[J].中国酿造,2021,40(05):43-48.》。
双歧杆菌菌剂的制备参照文献《欧扬雯珊等.动物双歧杆菌A6小试高密度发酵培养基的优化研究[J].中国奶牛,2015(21):32-35.》。
嗜热链球菌菌剂的制备参照文献《张兴昌. 嗜热链球菌高密度培养及冷冻保护的研究[D].内蒙古农业大学,2011.》。
植物乳杆菌，双歧杆菌及嗜热链球菌均购买自郑州百益宝生物科技有限公司；巨大芽孢杆菌及侧孢短芽孢杆菌购买自山东益昊生物科技有限公司。
实施例1 动物酵素发酵液的制备：
（1）、取鸡肉，解冻，将解冻后的鸡肉投入破碎机中破碎成小块；
（2）、预先向漂烫锅内加水，设置加热温度为95℃，待水加热至95℃时，将步骤（1）得到的鸡肉块置于漂烫锅，于95℃下加热30 min，加热过程中进行搅拌，并去除肉、骨中的血水和油脂，漂烫完成后，捞出沥水；
（3）、将步骤（2）得到的鸡肉块投入绞磨机，加入纯化水，进行绞碎，得到肉泥；鸡肉块与纯化水的质量比为1：1；
（4）、将步骤（3）得到的肉泥投入乳化灭菌仓，加入十六烷基三甲基溴化铵，鲸蜡醇，纯化水，升温进行乳化灭菌处理，温度达到115℃以后，停止升温，于115℃以下灭菌30min，乳化灭菌的同时还需进行搅拌，搅拌的速率设置为300 r/min，肉泥，十六烷基三甲基溴化铵，鲸蜡醇及纯化水的质量比为1：0.001：0.015：0.7；
（5）、熬制：灭菌结束后，将物料温度控制在90℃，熬制6 h，熬制的同时还需进行搅拌，搅拌的速率为200 r/min；
（6）、发酵：将步骤（5）得到的浆料转移至发酵罐，待温度降至35℃，加入微量的葡萄糖及氯化钠，再加入发酵菌剂，进行发酵12 h，后将温度调至40℃，进行发酵6 h；发酵的转速为300 r/min；发酵完成后经0.22 μm滤膜过滤即得动物酵素发酵液。
发酵菌剂为解蛋白奇异球菌（Deinococcus proteolyticus）菌剂，植物乳杆菌菌剂，巨大芽孢杆菌菌剂，侧孢短芽孢杆菌菌剂，双歧杆菌菌剂及嗜热链球菌菌剂按照质量比0.5：1：1：0.5：2：0.5混合而成，解蛋白奇异球菌菌剂，植物乳杆菌菌剂，巨大芽孢杆菌菌剂，侧孢短芽孢杆菌菌剂，双歧杆菌菌剂及嗜热链球菌菌剂的活菌数均为108-9 cfu/g；浆料，葡萄糖，氯化钠及发酵菌剂的质量比为100：1：1：1。解蛋白奇异球菌购自中国普通微生物保藏管理中心，保藏号为CGMCC1.3754。
实施例2 动物酵素发酵液的制备：
（1）、取猪肉，解冻，将解冻后的猪肉投入破碎机中破碎成小块；
（2）、预先向漂烫锅内加水，设置加热温度为100℃，待水加热至100℃时，将步骤（1）得到的猪肉块置于漂烫锅，于100℃下加热15 min，加热过程中进行搅拌，并去除肉、骨中的血水和油脂，漂烫完成后，捞出沥水；
（3）、将步骤（2）得到的猪肉块投入绞磨机，加入纯化水，进行绞碎，得到肉泥；猪肉块与纯化水的质量比为1：1；
（4）、将步骤（3）得到的肉泥投入乳化灭菌仓，加入十六烷基三甲基溴化铵，鲸蜡醇，纯化水，升温进行乳化灭菌处理，温度达到125℃以后，停止升温，于125℃以下灭菌20min，乳化灭菌的同时还需进行搅拌，搅拌的速率设置为300 r/min，肉泥，十六烷基三甲基溴化铵，鲸蜡醇及纯化水的质量比为1：0.001：0.03：0.5；
（5）、熬制：灭菌结束后，将物料温度控制在90℃，熬制6 h，熬制的同时还需进行搅拌，搅拌的速率为200 r/min；
（6）、发酵：将步骤（5）得到的浆料转移至发酵罐，待温度降至35℃，加入微量的葡萄糖及氯化钠，再加入发酵菌剂，进行发酵12 h，后将温度调至40℃，进行发酵6 h；发酵的转速为300 r/min；发酵完成后经0.22μm滤膜过滤得到动物酵素发酵液。
发酵菌剂为解蛋白奇异球菌（Deinococcus proteolyticus）菌剂，植物乳杆菌菌剂，巨大芽孢杆菌菌剂，侧孢短芽孢杆菌菌剂，双歧杆菌菌剂及嗜热链球菌菌剂按照质量比1：1.5：0.6：0.5：2：1混合而成，解蛋白奇异球菌菌剂，植物乳杆菌菌剂，巨大芽孢杆菌菌剂，侧孢短芽孢杆菌菌剂，双歧杆菌菌剂及嗜热链球菌菌剂的活菌数均为108-9 cfu/g；浆料，葡萄糖，氯化钠及发酵菌剂的质量比为100：2：2：3。解蛋白奇异球菌购自中国普通微生物保藏管理中心，保藏号为CGMCC1.3754。
性能测试
一、抑菌作用
（一）、中国动物卫生与流行病学中心病原微生物检测实验室采用微生物孵育法，将发明产品倍比稀释后分别与白色念珠菌、曲霉菌、大肠杆菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌、单增李斯特菌9种常见致病菌共孵育培养12 h，验证动物酵素发酵液对常见致病微生物的抑菌效果。结果显示动物酵素发酵液对以上9种致病微生物均具有完全的抑制作用，上述九种致病微生物的来源包含了环境、皮肤及食物。因此，利用本发明产品对常见致病性真菌、革兰氏阳性菌及阴性菌均具有良好的抑制作用，具有广谱抑菌杀菌作用，可将其用在医疗环境与皮肤病外用消杀等产业领域，具有广阔应用前景。
（二）、在中国动物卫生与流行病学中心致病微生物检测室，将发明产品进行抗菌杀菌专项试验，将动物酵素发酵液分别65℃灭菌30 min、100℃灭菌10 min处理，进行不同梯度的稀释，分别稀释20倍、50倍、100倍、300倍及500倍，检测不同稀释倍数的动物酵素发酵液对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、单增李斯特菌、肠球菌、曲霉菌、真菌等常见病原微生物的灭活作用；结果表明，稀释500倍的动物酵素发酵液对绿脓杆菌、肠球菌具有完全灭活作用；其1：50至1：500稀释后，对金黄色葡萄球菌，有抑制作用。
（三）、抑菌稳定性检测
在中国动物卫生与流行病学中心致病微生物检测室进行稳定性检测，将动物酵素发酵液进行不同温度的处理后，与微生物共孵育培养检测抑菌作用，结果表明，不同温度对动物酵素发酵液的抑菌作用的影响较小，说明本发明制备的动物酵素发酵液适用于制粒、压片、喷雾干燥等短时灭菌加工工艺条件。
二、安全性检测
山东省食品药品检验研究院对本发明实施例1制备的动物酵素发酵液进行安全性检测，使用原子荧光光谱法进行元素含量的检测，使用涂片镜检法检测致病菌，结果显示：产品符合食品安全卫生标准，有毒物质砷、铅、汞、镉和致病菌沙门氏菌、李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌均未检出。山东省食品药品检验研究院对本发明实施例1制备的动物酵素发酵液进行多次皮肤刺激试验，结果显示：产品复合化妆品安全卫生标准，无刺激性。
三、成分检测
青岛亿信检测技术服务有限公司、上海阿趣生物科技有限公司对本发明实施例1制备的动物酵素发酵液使用高效液相色谱法、气相质谱法等进行成分检测，检测结果表明，动物酵素发酵液的主要成分为：197种小分子肽、109种多肽，多肽总量30%以上；生物寡糖（占总量9%）、功能氨基酸（占总量的质量比为24.5 g/100 g）、生物有机酸（占总量16%）、核苷酸类、生物酶类及多种益生菌等，所测得的成分的种类见表1：
本发明制备的动物酵素发酵液中的富含多种活性小分子肽，可游离于细胞间质和细胞内，可调节细胞代谢活动，快速促进受损伤细胞修复，对牛皮癣的治疗起主要作用；同时动物酵素发酵液中的益生元具有增强机体免疫功能，能避免T细胞过度增殖，对牛皮癣的治疗起重要作用。
图1是本发明实施例1制备的动物酵素发酵液不同分子量的肽段的质量分布图，结果表明食用动物酵素中分子量少于1000 Da的肽段在总肽段中的质量占比为42.2%，为小分子肽；分子量在1000~1500 Da之间的肽段在总肽段中的质量占比为37.6%；分子量在1500~2000 Da之间的肽段在总肽段中的质量占比为19.3%；其余分子量大于2000 Da的肽段在总肽段中的质量占比为0.9%。
图2是本发明实施例1制备的动物酵素发酵液不同长度的肽段的质量分布图，结果表明食用动物酵素中少于10个氨基酸的小肽在总肽中的质量占比最高，为46.79%；食用动物酵素中氨基酸数目在11~15个之间的肽段在总肽中的质量占比为25.69%；食用动物酵素中氨基酸数目在16~20个之间的肽段在总肽中的质量占比为24.77%；食用动物酵素中氨基酸数目大于20个的肽段在总肽中的质量占比为2.75%。由此可知，食用动物酵素发酵液中的肽段主要为小分子肽，所含蛋白的分子量也较小，易被人体消化吸收。
四、功效验证
（一）、生物材料
昆明种小鼠30只，随机分为5组，每组6只，雌雄不限，一级体质量18-22 g。
（二）、试剂
0.5～1％的伊红酒精溶液：称取伊红Y 0.5～1 g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以100 mL 95%酒精溶解。
苏木素染液配方：(配制3000 mL) 苏木精6 g，无水乙醇100 mL，硫酸铝钾150 g，蒸馏水2000 mL，碘酸钠1.2 g，冰醋酸120 mL，甘油900 mL。
苏木素染液配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99 mL 70%酒精中即可。
（三）、实验组设置
空白对照组：蒸馏水100 mL；
实验组1：实施例1制备的动物酵素发酵液；
实验组2：实施例2制备的动物酵素发酵液；
阳性对照组：市面上牛皮癣治疗药物——环孢素A；
（四）、实验步骤
1、取材方法：用棉签分别蘸取各组溶液，涂抹鼠尾，每日2次，14次为一疗程，末次涂抹后次日处死小鼠，在距鼠尾根部2 cm处切断。在尽量避免损伤的情况下，切开皮肤，剥离软骨，取一长方形皮片贴附在滤纸上，立即投入10%的福尔马林中固定，常规脱水，香柏油透明，石蜡包埋、切片，苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining，HE染色)。
2、测定标准：在光学显微镜下对每个标本逐个测定鳞片厚度并观察棘层和颗粒层。具体方法：用血球记数盘(板)校正目镜测微尺，使在20倍物镜下1 mm相当于50 μm。用目镜测微尺测定表皮基底层部至角化层底部即表皮的厚度(尾鳞片)。每个皮片连续记数10个鳞片，每个鳞片测量10处鳞片表皮的厚度，得出每只小鼠的皮片共计100个尾鳞片表皮厚度的数值，并求出每组小鼠尾鳞片表皮厚度平均值，如表2。
表2 小鼠尾鳞片表皮厚度(μm)的变化
3、统计学处理：各组表皮厚度数据均以均数±标准差表示。利用t检验分析，对照组、食用动物酵素发酵液、环孢素A呈现差异显著性(p<0.01)，所以使用不同产品对小鼠尾鳞片表皮厚度影响显著。
（五）、正常情况下小鼠尾部鳞片表皮角质层角朊细胞保留有细胞核，而颗粒层颗粒细胞缺失，仅在毛囊处有少量的颗粒细胞，表皮较薄。鼠尾鳞片因表皮正常角化缺乏颗粒层，故可模拟牛皮癣角化不全的特点。药物如能促进鼠尾鳞片颗粒层形成，说明其可能改变表皮的角化过程，从角化不全恢复到正常角化。本发明的动物酵素发酵液涂抹小鼠鼠尾后，促进了鼠尾鳞片颗粒层形成，使其表皮增厚，因此推测本发明产品对牛皮癣具有治疗作用效果。
五、应用
实验设置：选择确诊的牛皮癣患者，随机分为三组（实验组1，实验组2及对照组），每组30例患者，三组患者性别、年龄、病程及病情程度差异无显著性(p>0 .05)。实验组1的患者使用本发明实施例1制备的动物酵素发酵液；实验组2的患者使用本发明实施例2制备的动物酵素发酵液；对照组的患者使用本发明对比例制备的动物酵素发酵液；以上三组的使用方法均为：直接涂抹患病处，每天3次，发酵液的用量以刚好能覆盖发病处为准，连用45d。
疗效评价标准：①显效临床症状大部分消失，牛皮癣消失率≥75%；②有效：临床症状改善或部分消失，75%≥牛皮癣消失率≥30%；③无效：为牛皮癣症状无变化或消失率＜30%。
治疗结果如下表3所示：
表3 治疗效果统计图
数据统计结果表明，牛皮癣患者使用本发明实施例1制备的动物酵素发酵液后，有效率可达到93%。
图3为患者的症状及本发明实施例1制备的动物酵素发酵液的应用效果图，图3a为患者使用前的症状图，图3b为使用15 d后的应用效果图；结果表明，使用本发明实施例1制备的动物酵素发酵液15 d后，牛皮癣恢复情况：鳞屑减少，50%以上患病皮肤恢复正常代谢。
图4是北京一位64岁牛皮癣患者使用本发明实施例1制备的动物酵素发酵液的应用效果图，图4a为使用15 d后的应用效果图，图4b为使用25 d后的应用效果图；结果表明，使用本发明实施例1制备的动物酵素发酵液15 d后粗糙癣块脱落，25 d后肤色明显变浅。
图5是安徽的一位牛皮癣患者使用本发明实施例1制备的动物酵素发酵液的应用效果图，图5a为使用前的症状图，图5b为使用45 d后的应用效果图；结果表明，使用本发明实施例1制备的动物酵素发酵液45 d后皮肤表皮状态明显改善，患病面积减少，瘙痒减轻。
综上所述，本发明提供的动物酵素发酵液，具有皮肤杀菌剂作用，可对各类皮肤常见致病性真菌、革兰氏阳性菌及阴性菌，均具有明显抑制或灭活作用；所述动物酵素发酵液制备过程中发酵产生的大量生物活性肽，除了具有抑菌作用外还具有止痒、化瘀消肿，修复受损皮肤细胞、促进伤口愈合等作用，调节人体代谢与提高免疫机能的作用；所述动物酵素发酵液富含大量益生菌代谢产物及益生元，能改善皮肤微循环，增强皮肤光泽和弹性，可促进皮肤微生态平衡，维护皮肤健康；所述动物酵素发酵液可用于制备治疗牛皮癣的药物。

Claims (8)

1.一种动物酵素发酵液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
（1）、将畜禽肉破碎，加水，加热，沥水；
（2）、取步骤（1）得到的肉块，加入纯化水，绞磨，得到肉泥；
（3）、取步骤（2）得到的肉泥，加入十六烷基三甲基溴化铵，鲸蜡醇，纯化水，进行乳化灭菌，熬制，得到浆料；
（4）、取步骤（3）得到的浆料，加入葡萄糖，氯化钠，发酵菌剂，进行发酵，再经过滤得到所述动物酵素发酵液。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述发酵菌剂由解蛋白奇异球菌菌剂，植物乳杆菌菌剂，巨大芽孢杆菌菌剂，侧孢短芽孢杆菌菌剂，双歧杆菌菌剂及嗜热链球菌菌剂按照质量比（0.5-1）：（1-1.5）：（0.6-1）：0.5：2：（0.5-1）混合而成。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述解蛋白奇异球菌（Deinococcus proteolyticus）购自中国普通微生物保藏管理中心，保藏号为CGMCC1.3754；所述解蛋白奇异球菌菌剂，植物乳杆菌菌剂，巨大芽孢杆菌菌剂，侧孢短芽孢杆菌菌剂，双歧杆菌菌剂及嗜热链球菌菌剂的活菌数均为108-9 cfu/g。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述加热的温度为95-100℃，时间为15-30 min；
步骤（2）中，所述肉块与纯化水的质量比为1：1；
步骤（3）中，所述肉泥，十六烷基三甲基溴化铵，鲸蜡醇及纯化水的质量比为1：0.001：（0.015-0.03）：（0.5-0.7）。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述乳化灭菌的温度为115-125℃，时间为20-30 min，转速为300 r/min；所述熬制的温度为90℃，时间为6 h，转速为200 r/min。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述浆料，葡萄糖，氯化钠及发酵菌剂的质量比为100：（1-2）：（1-2）：（1-3）；所述发酵的条件为：先于35℃，发酵12 h，后将温度升至40℃，发酵6 h，转速为300 r/min；所述过滤采用0.22 μm滤膜进行。
7.一种权利要求1-6任一项所述的方法制备的动物酵素发酵液。
8.一种权利要求7所述的动物酵素发酵液的应用，其特征在于，所述动物酵素发酵液用于制备治疗牛皮癣的药物。
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