TWI821537B - 五環式雜環化合物 - Google Patents

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Abstract

本發明之式 (I)～(XVII) 所表示之化合物或其藥劑學上所容許之鹽具有膽鹼能神經細胞活化作用，具有用作認知功能障礙治療劑之可能性。 [化1]

Description

五環式雜環化合物
本發明係關於一種具有膽鹼能神經細胞活化作用之五環式雜環化合物或其藥劑學上所容許之鹽。又，本發明係關於一種含有上述化合物作為有效成分之醫藥組合物。
以乙醯膽鹼作為傳遞物質之膽鹼能神經細胞係於前腦自前腦基底部之梅納特（Meynert）基底核或中隔核廣泛投射至海馬體、扁桃體以及大腦皮質，擔負記憶、學習或認知、注意力之調節（非專利文獻1）。又，認為腦幹之腳橋被蓋核與背外側被蓋核之膽鹼能神經細胞投射至紋狀體、伏隔核、黑質或丘腦，參與形成動機或調節覺醒狀態（非專利文獻2～4）。
尤其關於前腦基底部之膽鹼能神經細胞之作用，藉由使用較多之障礙模型動物等之分析而明確。其中，於障礙模型動物中顯示膽鹼能神經細胞之功能障礙與記憶學習低下相關（非專利文獻5～7），顯示藉由膽鹼酯酶抑制劑而使乙醯膽鹼量增加並提高膽鹼能神經細胞之功能，藉此改善認知功能（非專利文獻8、9）。
進而，於伴隨認知功能障礙之較多之神經疾病中，可見膽鹼能神經細胞之功能障礙（非專利文獻10）。其中，已知於阿茲海默氏癡呆症或路易小體型癡呆症中，膽鹼能神經細胞之功能障礙與認知功能降低相關（非專利文獻11～13），顯示與障礙模型動物同樣地藉由膽鹼酯酶抑制劑而改善認知功能（非專利文獻14、15）。
因此，根據該等見解，藉由於臨床上亦達成膽鹼能神經細胞本身之功能活化，可期待改善由膽鹼能神經細胞之功能降低所引起之認知功能降低。
除上述疾病以外，作為報告有認知功能障礙與膽鹼能神經細胞之功能降低之關聯之疾病，亦可列舉：杭丁頓舞蹈症、唐氏綜合症、肌肉萎縮性側索硬化症（ALS）、帕金森氏症、重度抑鬱症、精神分裂症等。 [先前技術文獻] [非專利文獻]
[非專利文獻1] Everitt BJ et al. 「Central cholinergic systems and cognition.」 Annu. Rev. Psychol. 48 (1997) 649-684 [非專利文獻2] Gulledge AT. et al. 「Cholinergic inhibition of neocortical pyramidal neurons.」 J. Neurosci. 25 (2005) 10308-20 [非專利文獻3] Daniel Dautan D. et al. 「A major external source of cholinergic innervation of the striatum and nucleus accumbens originates in the brainstem.」 J. Neurosci. 34 (2014) 4509-18 [非專利文獻4] M Steriade M. et al. 「Neuronal activities in brain-stem cholinergic nuclei related to tonic activation processes in thalamocortical systems.」 J. Neurosci. 10 (1990) 2541-59 [非專利文獻5] Fischer W. et al. 「Progressive decline in spatial learning and integrity of forebrain cholinergic neurons in rats during aging.」 Neurobiol. Aging 13 (1992) 9-23 [非專利文獻6] Leanza G.et al. 「Selective lesioning of the basal forebrain cholinergic system by intraventricular 192 IgG-saporin: behavioural, biochemical and stereological studies in the rat.」 Eur. J. Neurosci. 7 (1995) 329-43 [非專利文獻7] Leanza G. et al. 「Selective immunolesioning of the basal forebrain cholinergic system disrupts short-term memory in rats.」Eur. J. Neurosci. 8 (1996) 1535-44 [非專利文獻8] Ogura H. et al. 「Donepezil, a centrally acting acetylcholinesterase inhibitor, alleviates learning deficits in hypocholinergic models in rats.」 Methods Find Exp Clin Pharmacol. 22 (2000) 89-95. [非專利文獻9] Spowart-Manning L. et al. 「 Spatial discrimination deficits by excitotoxic lesions in the Morris water escape task.」Behav Brain Res. 156 (2005) 269-76. [非專利文獻10] Mufson EJ. et al. 「Human cholinergic basal forebrain : chemoanatomy and neurologic dysfunction.」 J. Chem. Neuroanat. 26 (2003) 233-242 [非專利文獻11] Mufson EJ. et al. 「Cholinergic system during the progression of Alzheimer's disease : therapeutic implication.」 Expert. Rev. Neurother. 8 (2008) 1703-1718 [非專利文獻12] Schliebs R. et al. 「The significance of the cholinergic system in the brain during aging and in Alzheimer's disease.」 J. Neural. Transm 113 (2006) 1625-1644 [非專利文獻13] Bruce AP. et al. 「Choline acetyltransferase activity and cognitive domain score of Alzheimer's patients.」 Neurobiol. Aging. 21 (2000) 11-17 [非專利文獻14] Rogers SL. et al. 「The efficacy and safety of donepezil in patients with Alzheimer's disease: results of a US Multicentre, Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Trial.The Donepezil Study Group.」 Dementia. 7 (1996) 293-303 [非專利文獻15] Mori E. et al. 「Donepezil for dementia with Lewy bodies: a randomized, placebo-controlled trial.」 Ann Neurol. 72 (2012) 41-52
[發明所欲解決之問題]
本發明之課題在於提供一種具有膽鹼能神經細胞活化作用、具有用作認知功能障礙治療劑之可能性之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。 [解決問題之技術手段]
本發明人等為了解決上述問題，專心地反覆進行研究，結果發現了具有膽鹼能神經細胞活化作用之五環式雜環化合物或其藥劑學上所容許之鹽。
即，本發明係關於以下＜1＞至＜9＞。 ＜1＞一種化合物或其藥劑學上所容許之鹽，其選自以下之組： (3aS,14aR)-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮： [化1] (+)-7,7,12-三甲基-1,2,3,6,7,10,11,12,13,15b-十氫吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[2,1-c][1,4]二氮呯-5,9-二酮： [化2] (3aS,14aR)-10-氟-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮： [化3] (3aS,14aR)-5,8,10-三甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-環戊并[f]吡啶并[3'',2'':4',5']呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮: [化4] (3aR,14aR)-10-氟-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮： [化5] (3aR,14aR)-5-甲基-10-(三氟甲基)-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮： [化6] (3aS,14aR)-10-(2,2-二氟乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮： [化7] (3aS,14aR)-10-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮： [化8] (3aS,14aR)-10-(二氟甲基)-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮： [化9] (2R,15bR)-2-氟-7,7,12-三甲基-1,2,3,6,7,10,11,12,13,15b-十氫-5H,9H-吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[2,1-c][1,4]二氮呯-5,9-二酮： [化10] (+)-(3a,14a-順式)-5,10-二甲基-1,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫呋喃并[3,4-f]吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮： [化11] (3aS,14aS)-5-甲基-10-(三氟甲基)-2,3,3a,5,6,14a-六氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13-二酮： [化12] (-)-12-(2-甲氧基乙基)-7,7-二甲基-1,2,3,6,7,10,11,12,13,15b-十氫-5H,9H-吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[2,1-c][1,4]二氮呯-5,9-二酮： [化13] (3aR,14aR)-5,9-二甲基-2,3,3a,5,6,8,9,10,11,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[3'',4'':4',5']噻吩并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮： [化14] (3aR,10R,14aR)-10-氟-2,5-二甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-苯并[4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮： [化15] (3aS,14aS)-10-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮： [化16] 及 (-)-(3a,14a-反式)-2-(2-氟乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,14a-六氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮： [化17]。 ＜2＞一種醫藥組合物，其含有如＜1＞所記載之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。 ＜3＞如＜2＞所記載之醫藥組合物，其進而含有藥劑學上所容許之添加物。 ＜4＞如＜2＞或＜3＞所記載之醫藥組合物，其係神經細胞活化劑。 ＜5＞如＜2＞或＜3＞所記載之醫藥組合物，其用以治療認知功能障礙。 ＜6＞一種認知功能障礙之治療劑，其含有如＜1＞所記載之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。 ＜7＞一種認知功能障礙之治療方法，其係將如＜1＞所記載之化合物或其藥劑學上所容許之鹽投予至必需其之患者。 ＜8＞如＜1＞所記載之化合物或其藥劑學上所容許之鹽，其用於治療認知功能障礙。 ＜9＞一種如＜1＞所記載之化合物或其藥劑學上所容許之鹽之用途，其用以製造認知功能障礙之治療劑。 [發明之效果]
本發明之式 (I)～(XVII) 所表示之五環式雜環化合物（以下，稱為化合物 (I)～(XVII)）或其藥劑學上所容許之鹽如下述藥理試驗例中之活性資料所示具有神經細胞活化作用。本發明之化合物 (I)～(XVII) 藉由神經細胞活化作用而改善認知功能，故而具有用作認知功能障礙之治療劑之可能性。
以下，對本發明之內容詳細地進行說明。
於本說明書中，為方便起見，化合物之結構式有時表示一定之異構物，於本發明中，可包含化合物之結構上產生之旋轉異構物或互變異構物及該等之混合物，不限定於為方便起見之式之記載，可為任一異構物，亦可為以任意之比率包含各異構物之混合物。
又，亦有存在多晶型之情況，但同樣地亦不限定於任一者，可為任一晶型之單一物，亦可為混合物，又，本發明亦包含非晶質體，而且，本發明之化合物包含酐及溶劑合物（尤其是水合物）。
本發明亦包含化合物 (I)～(XVII) 經同位素標記之化合物。經同位素標記之化合物係1個或其以上之原子經具有與通常於自然界發現之原子質量或質量數不同之原子質量或質量數之原子取代，除此以外，與化合物 (I)～(XVII) 相同。可引入至本發明之化合物中之同位素例如為氫、碳、氮、氧、氟、磷、硫、碘及氯之同位素，包含2 H、3 H、11 C、14 C、15 N、18 O、18 F、32 P、35 S、123 I及125 I等。
上述同位素標記化合物、例如引入有3 H及/或14 C等放射性同位素之化合物對醫藥及/或受質之組織分佈分析有用。認為3 H與14 C容易製備及檢測該等，故而有用。認為同位素11 C及18 F於PET（正電子放射斷層攝影）中有用，認為同位素125 I於SPECT（單光子釋出電腦斷層攝影）中有用，於腦成像中均有用。認為藉由2 H等更重之同位素之取代產生某種治療上之優點、如增加由更高之代謝穩定性所帶來之活體內半衰期，或減少必需用量，因此，於某種狀況下有用。上述同位素標記化合物可藉由使用可容易地利用之經同位素標記之試劑代替未經同位素標記之試劑，進行以下之實施例所揭示之順序而同樣地製備。
本說明書中之「藥劑學上所容許之鹽」只要為可與本發明之化合物形成鹽者，則並無特別限定，具體而言，例如可列舉：無機酸鹽、有機酸鹽或酸性胺基酸鹽等酸加成鹽。
本說明書中之「藥劑學上所容許之鹽」只要無特別限定之記載，只要以適當之比形成鹽，則於所形成之鹽中，酸相對於該化合物1分子之分子數並無特別限定，較佳為相對於該化合物1分子，酸為約0.5～約2分子，更佳為相對於該化合物1分子，酸為約0.5、約1或約2分子。
作為無機酸鹽之較佳之例，例如可列舉：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽等，作為有機酸鹽之較佳之例，例如可列舉：乙酸鹽、丁二酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、硬脂酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、苯磺酸鹽等。
作為酸性胺基酸鹽之較佳之例，例如可列舉：天冬胺酸鹽、麩胺酸鹽等。
於本發明之化合物 (I)～(XVII) 以游離體之形式獲得之情形時，可按照常規方法轉換為上述化合物 (I)～(XVII) 可形成之鹽或該等之水合物之狀態。
於本發明之化合物 (I)～(XVII) 以化合物 (I)～(XVII) 之鹽或化合物 (I)～(XVII) 之水合物之形式獲得的情形時，可按照常規方法轉換為上述化合物 (I)～(XVII) 之游離體。
又，對本發明之化合物 (I)～(XVII) 所獲得之各種異構物（例如光學異構物、旋轉異構物、立體異構物等）可藉由使用通常之分離方法（例如再結晶、非鏡像異構物鹽法、酵素拆分法、各種層析法（例如薄層層析法、管柱層析法、氣相層析法等））而進行精製、單離。
製劑 本發明之醫藥組合物可藉由將藥劑學上所容許之添加物與選自化合物組 (I)～(XVII) 中之化合物或其藥劑學上所容許之鹽進行混合而製造。本發明之醫藥組合物例如可按照日本藥典第十七修訂版之製劑總則所記載之方法等已知之方法製造。
本發明之醫藥組合物可根據其劑型適當地投予至患者。
本發明之化合物 (I)～(XVII) 或其藥劑學上所容許之鹽之投予量根據症狀之程度、年齡、性別、體重、投予形態、鹽之種類、疾病之具體種類等而不同，通常於成人之情形時，每天若為經口投予則1次或分數次投予約30 μg～10 g、較佳為100 μg～5 g、進而較佳為100 μg～1 g，若為注射投予則1次或分數次投予約30 μg～1 g、較佳為100 μg～500 mg、進而較佳為100 μg～300 mg。
本發明之化合物可製成用以捕捉生理活性低分子化合物之靶蛋白質之化學探針。即，本發明之化合物可藉由利用J. Mass Spectrum. Soc. Jpn. Vol. 51, No. 5 2003, p492-498或WO 2007/139149等中所記載之方法將標記基、連接基等導入至該化合物之與活性表現所需之結構部分不同之部分，從而轉換為親和層析儀、光親和探針等。
化學探針所使用之標記基、連接基等例如可列舉以下之 (1) 至 (5) 所組成之組所示之基。 (1) 光親和性標記基（例如苯甲醯基、二苯甲酮基、疊氮基、羰基疊氮基、二氮丙啶基、烯酮基、重氮基及硝基等）、及化學親和性基（例如α碳原子經鹵素原子取代之酮基、胺甲醯基、酯基、烷硫基、α,β-不飽和酮、酯等麥可受體及環氧乙烷基等）等蛋白質標記基； (2) -S-S-、-O-Si-O-、單糖(葡萄糖基、半乳糖基等)或二糖(乳糖等)等可斷裂之連接基、及可藉由酵素反應而斷裂之寡肽連接基； (3) 生物素、3-(4,4-二氟-5,7-二甲基-4H-3a,4a-二氮雜-4-硼-s-苯并二茚-3-基)丙醯基等釣菌法標籤基（fishing tag group）； (4)125 I、32 P、3 H、14 C等放射性標記基；螢光素、若丹明、丹磺醯、傘形酮、7-硝基呋吖基、3-(4,4-二氟-5,7-二甲基-4H-3a,4a-二氮雜-4-硼-s-苯并二茚-3-基)丙醯基等螢光標記基；螢光素、發光胺等化學發光基；鑭系金屬離子、鐳離子等重金屬離子等可檢測之標記；或 (5) 與玻璃珠、玻璃床、微量滴定盤、瓊脂糖珠、瓊脂糖床、聚苯乙烯珠、聚苯乙烯床、尼龍珠、尼龍床等固相載體結合之基等。
依據上述文獻中所記載之方法等將選自由上述 (1) 至 (5) 所組成之組中之標記基等導入至本發明之化合物中而製備之探針可作為用以鑑定對新藥物開發目標之探索等有用之標記蛋白質的化學探針而使用。 實施例
本發明之化合物 (I)～(XVII) 例如可利用以下之實施例中所記載之方法製造，又，該化合物之效果可利用以下之試驗例中所記載之方法確認。但是，該等為例示者，本發明於任一情形時均不受以下之具體例限制，又，可於不脫離本發明範圍之範圍內進行變化。
記載有文獻名等之化合物表示按照該文獻等製造。
又，本說明書中所使用之縮寫係本領域技術人員所周知之慣用之縮寫。於本說明書中使用以下之縮寫。 DAST：二乙胺基三氟化硫 DCE：1,2-二氯乙烷 DCM：二氯甲烷 DIPEA：N,N-二異丙基乙基胺 DMF：N,N-二甲基甲醯胺 DMT-MM：4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三𠯤-2-基)-4-甲基𠰌啉鹽酸鹽 DMSO：二甲基亞碸 EDC：1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二醯亞胺鹽酸鹽 HATU：O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽 HOBT：1-羥基苯并三唑 n-：正 NMM：N-甲基𠰌啉 SFC：超臨界流體層析法 t-：第三 TBD：1,3,4,6,7,8-六氫-2H-嘧啶并[1,2-a]嘧啶 TBME：第三丁基甲醚 TEA：三乙胺 TFA：三氟乙酸 THF：四氫呋喃1 H-NMR：質子核磁共振譜 MS：質譜 HPLC：高效液相層析法
以下之實施例及製造例中之「室溫」通常表示約10℃至約35℃。%只要未特別記載，則表示重量百分比。
質子核磁共振譜之化學位移係以相對於四甲基矽烷之δ單位（ppm）記錄，耦合常數係以赫茲（Hz）記錄。圖案為s：單峰、d：雙峰、t：三重峰、q：四重峰、m：多重峰、br：寬峰、br.s：寬單峰。
於化合物之光學拆分中，使用Biotage公司製造之Parallex FlexTM （管柱：DAICEL公司製造之CHIRALPAKTM AD-H、IA、IB、IC、IF，DAICEL公司製造之CHIRALCELTM OD-H、OJ-H之任一者）。
製造例、參考例及實施例中使用微波反應裝置之反應係使用Biotage公司製造之initiatorTM 或initiator+TM 。
關於層析法，矽膠使用Merck公司製造之Silica Gel60（70～230目或230～400目ASTM）或富士矽化學公司製造之PSQ60B，或者使用預裝管柱{管柱：YAMAZEN公司製造之Hi-FlashTM Column（Silicagel），尺寸：S（16 × 60 mm）、M（20 × 75 mm）、L（26 × 100 mm）、2L（26 × 150 mm）、3L（46 × 130 mm）之任一者；或Biotage公司製造之BiotageTM SNAP Ultra Silica Cartridge，尺寸：10 g、25 g、50 g之任一者}。
NH矽膠使用富士矽化學公司製造之CHROMATOREX NH-DM2035，或者使用預裝管柱{管柱：YAMAZEN公司製造之Hi-FlashTM Column（Amino），尺寸：S（16 × 60 mm）、M（20 × 75 mm）、L（26 × 100 mm）、2L（26 × 150 mm）、3L（46 × 130 mm）之任一者；或和光純藥工業公司製造之PresepTM （（Luer Lock）NH2（HC），尺寸：M型（14 g/25 mL）、L型（34 g/70 mL）、2L型（50 g/100 mL）、3L型（110 g/200 mL）之任一者}。
關於以下所示之化合物之命名，除一般使用之試劑以外，亦使用「E-notebook」第12或13版（珀金埃爾默公司）所表示者。
製造例1 (5aS,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮之合成 [化18] (1)2-((1S,2R)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-N-甲基環戊烷甲醯胺)乙酸甲酯之合成 於冰浴冷卻下向(1S,2R)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)環戊烷-1-甲酸（CAS No.137170-89-9）（14.6 g、63.6 mmol）、肌胺酸甲酯鹽酸鹽（CAS No. 13515-93-0）（10.7 g、76.3 mmol）及THF（150 mL）之混合物中依序加入TEA（22.2 mL、159 mmol）、HOBT一水合物（11.7 g、76.3 mmol）及EDC（14.6 g、76.3 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌15小時後，加入乙酸乙酯及水，分離有機層。利用乙酸乙酯對水層進行萃取。利用飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和鹽水對合併之有機層依序進行清洗，於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，於減壓下進行濃縮。將所獲得之殘渣利用管柱層析法（矽膠、25%～30%乙酸乙酯/正庚烷）精製2次，獲得標記化合物（16.1 g）。 MS(ESI)m/z: 337[M＋Na]＋ (2) (5aS,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮之合成 於冰浴冷卻下向2-((1S,2R)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-N-甲基環戊烷甲醯胺)乙酸甲酯（16.1 g、51.3 mmol）中加入4 N之氯化氫/1,4-二㗁烷溶液（160 mL、640 mmol）。將反應混合物於同一溫度下攪拌30分鐘，繼而於室溫下攪拌45分鐘後，於減壓下進行濃縮。於水冷下向殘渣之甲醇（130 ml）溶液中加入TBD（8.57 g、61.6 mmol）。將反應混合物於水冷下攪拌3小時後，冷卻至0℃。濾取產生之固體，利用經冰浴冷卻之甲醇清洗3次，於減壓下進行乾燥而獲得標記化合物（5.22 g）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.41-1.59(m, 2H), 1.78-1.98(m, 2H), 2.00-2.15(m, 1H), 2.36-2.53(m, 1H), 3.08(s, 3H), 3.18-3.32(m, 1H), 3.49(dd, J=15.5, 1.7 Hz, 1H), 3.91-4.04(m, 1H), 4.51(d, J=15.4 Hz, 1H), 5.54(br. s, 1H)。 MS(ESI)m/z: 183[M＋H]＋
製造例2 2-胺基-6-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸甲酯之合成 [化19] 於室溫下於1-甲基-4-哌啶酮（CAS No.1445-73-4）（30.0 mL、257 mmol）、氰基乙酸甲酯（CAS No.105-34-0）（22.6 mL、257 mmol）、硫（CAS No.7704-34-9）（8.25 g、257 mmol）及甲醇（500 mL）之混合物中加入TEA（35.8 mL、257 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌3天後，濾取沈澱物，利用乙酸乙酯進行清洗。將所獲得之固體利用管柱層析法（NH矽膠、乙酸乙酯）進行精製。將所獲得之濃縮殘渣利用乙酸乙酯進行研磨。濾取沈澱物，利用乙酸乙酯進行清洗，獲得標記化合物（38.0 g）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 2.44(s, 3H), 2.59-2.71(m, 2H), 2.77-2.88(m, 2H), 3.37(t, J=2.0 Hz, 2H), 3.79(s, 3H), 5.94(br. s, 2H)。 MS(ESI)m/z: 227[M＋H]＋
製造例3 (R)-3,3-二甲基六氫-1H-吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-1,5(2H)-二酮之合成 [化20] (1)1-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)吡咯啶-2-甲酸(R)-第三丁酯之合成 於0℃下於3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-甲基丁酸（CAS No.129765-95-3）（1.5 g、6.90 mmol）、D-脯胺酸第三丁酯鹽酸鹽（CAS No.184719-80-0）（1.43 g、6.90 mmol）、TEA（3.85 mL、27.6 mmol）及THF（15.0 mL）之混合物中加入1-丙烷膦酸酐（環狀三聚物）（50%乙酸乙酯溶液、約1.7 mol/L）（6.09 mL、10.4 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌2天。於反應混合物中加入乙酸乙酯及水，分離有機層。利用飽和氯化銨水溶液、水、飽和碳酸氫鈉水溶液、水及飽和鹽水對有機層依序進行清洗，於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾。將濾液於減壓下進行濃縮，獲得標記化合物（2.67 g）。 MS(ESI)m/z: 371[M＋H]＋ (2) (R)-3,3-二甲基六氫-1H-吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-1,5(2H)-二酮之合成 於0℃下於1-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)吡咯啶-2-甲酸(R)-第三丁酯（2.67 g）及1,4-二㗁烷（10.0 mL）之混合物中加入4 N之氯化氫/1,4-二㗁烷溶液（20 mL、80 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌整夜後，於減壓下進行濃縮。於0℃下於殘渣、TEA（3.01 mL、21.6 mmol）、THF（30.0 mL）及DMF（30.0 mL）之混合物中加入1-丙烷膦酸酐（環狀三聚物）（50%乙酸乙酯溶液、約1.7 mol/L）（6.36 mL、10.8 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌整夜。將反應混合物注入至水中，加入乙酸乙酯，分離有機層。利用10%甲醇/氯仿對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將所獲得之殘渣利用管柱層析法（矽膠、0%-50%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（896 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.34(s, 3H), 1.36(s, 3H), 1.77-1.93(m, 2H), 2.10-2.24(m, 1H), 2.48(dd, J=14.1, 1.6 Hz, 1H), 2.60-2.73(m, 1H), 3.08(d, J=14.5 Hz, 1H), 3.44-3.55(m, 1H), 3.63(dt, J=11.6, 7.3 Hz, 1H), 4.43(dd, J=7.8, 4.7 Hz, 1H), 5.56(br. s, 1H)。 MS(ESI)m/z: 197[M＋H]＋
製造例4 3-胺基-6-氟苯并呋喃-2-甲酸乙酯之合成 [化21] 於0℃下於乙醇酸乙酯（CAS No.623-50-7）（0.408 mL、4.31 mmol）及1,4-二㗁烷（8 mL）之混合物中依序加入第三丁醇鉀（460 mg、4.10 mmol）及2,4-二氟苯甲腈（CAS No.3939-09-1）（300 mg、2.16 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌2天。向反應混合物中加入飽和氯化銨水溶液及乙酸乙酯，分離有機層。再次利用乙酸乙酯對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、30%-40%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（359 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.34-1.47(m, 3H), 4.43(q, J=7.0 Hz, 2H), 4.83-5.11(m, 2H), 6.93-7.06(m, 1H), 7.10-7.19(m, 1H), 7.42-7.56(m, 1H) MS(ESI)m/z: 224[M＋H]＋
製造例5 3-胺基-4,6-二甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯之合成 [化22] 於室溫下於乙醇酸乙酯（CAS No.623-50-7）（0.200 mL、2.11 mmol）及THF（4 mL）之混合物中依序加入第三丁醇鉀（356 mg、3.17 mmol）及2-氯-4,6-二甲基煙酸腈（CAS No.14237-71-9）（300 mg、1.80 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌1小時。向反應混合物中加入飽和氯化銨水溶液、水及乙酸乙酯，分離有機層。再次利用乙酸乙酯對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、60%-70%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（180 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.34-1.41(m, 3H), 2.56(s, 3H), 2.63(s, 3H), 4.38(q, J=7.6 Hz, 2H), 4.97-5.20(m, 2H), 6.83(s, 1H) MS(ESI)m/z: 235[M＋H]＋
製造例6 (5aR,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮之合成 [化23] (1)2-((1R,2R)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-N-甲基環戊烷甲醯胺)乙酸第三丁酯之合成 於室溫下向(1R,2R)-第三丁氧基羰基-2-胺基環戊烷甲酸（CAS No.245115-25-7）（1.00 g、4.36 mmol）、肌胺酸第三丁酯鹽酸鹽（CAS No.136088-69-2）（872 mg、4.80 mmol）及DCM（10 mL）之混合物中依序加入DIPEA（1.81 mL、10.5 mmol）及HATU（1.99 g、5.23 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌1小時後，直接利用管柱層析法（矽膠、30%-50%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（1.61 g）。 MS(ESI)m/z: 357[M＋H]＋ (2) (5aR,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮之合成 於室溫下向2-((1R,2R)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-N-甲基環戊烷甲醯胺)乙酸第三丁酯（1.61 g、4.52 mmol）中加入4 N之氯化氫/1,4-二㗁烷溶液（16 mL、64 mmol），攪拌20小時。將反應混合物於減壓下進行濃縮。於室溫下於殘渣中依序加入碳酸氫鈉（0.911 g、10.8 mmol）、甲醇（24 mL）、NMM（0.099 mL、0.90 mmol）及DMT-MM（12.3% H2 O，1.80 g、5.70 mmol），攪拌20小時。將反應混合物於減壓下進行濃縮，將殘渣利用DCM進行清洗。將清洗液於減壓下進行濃縮，將殘渣利用管柱層析法（矽膠、5%-20%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（745 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.56-1.88(m, 3H), 1.91-2.02(m, 1H), 2.13-2.23(m, 1H), 2.26-2.39(m, 1H), 3.07(s, 3H), 3.08-3.16(m, 1H), 3.51-3.62(m, 1H), 3.79(d, J=18.0 Hz, 1H), 4.58(d, J=18.0 Hz, 1H), 6.76(br. s, 1H)。 MS(ESI)m/z: 183[M＋H]＋
製造例7 3-胺基-6-(三氟甲基)苯并呋喃-2-甲酸乙酯之合成 [化24] 於室溫下於乙醇酸乙酯（CAS No.623-50-7）（0.150 mL、1.59 mmol）及THF（6 mL）之混合物中依序加入第三丁醇鉀（267 mg、2.38 mmol）及2-氟-4-(三氟甲基)苯甲腈（CAS No.146070-34-0）（0.242 mL、1.74 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌整夜。向反應混合物中加入飽和氯化銨水溶液、水及乙酸乙酯，分離有機層。再次利用乙酸乙酯對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、30%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（100 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.44(t, J=7.0 Hz, 3H), 4.32-4.57(m, 2H), 4.83-5.21(m, 2H), 7.43-7.57(m, 1H), 7.59-7.81(m, 2H) MS(ESI)m/z: 274[M＋H]＋
製造例8 2-胺基-6-(2,2-二氟乙基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯之合成 [化25] (1)2-胺基-4,5-二氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3,6(7H)-二甲酸6-第三丁酯3-乙酯之合成 於室溫下於1-(第三丁氧基羰基)-4-哌啶酮（CAS No.79099-07-3）（45.1 g、226 mmol）、氰基乙酸乙酯（CAS No.105-56-6）（25.6 g、226 mmol）、硫（CAS No.7704-34-9）（7.26 g、226 mmol）及乙醇（450 mL）之混合物中加入TEA（31.6 mL、226 mmol）。將反應混合物於80℃下攪拌4小時15分鐘後，冷卻至室溫。濾取沈澱物，利用乙醇進行清洗。將所獲得之固體於80℃下溶解於乙醇（350 mL）中，冷卻至室溫。濾取沈澱物，利用乙醇進行清洗。將所獲得之固體於減壓下進行乾燥而獲得標記化合物（56.0 g）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.34(t, J=7.2 Hz, 3H), 1.48(s, 9H), 2.80(br. s, 2H), 3.61(t, J=5.9 Hz, 2H), 4.26(q, J=7.0 Hz, 2H), 4.35(br. s, 2H), 6.00(br. s, 2H)。 MS(ESI)m/z: 327[M＋H]＋ (2)2-胺基-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯鹽酸鹽之合成 於2-胺基-4,5-二氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3,6(7H)-二甲酸6-第三丁酯3-乙酯（3.34 g、10.2 mmol）與1,4-二㗁烷（33 mL）之混合物中加入5 N之鹽酸（4.00 mL、20.0 mmol）。將反應混合物於80℃下攪拌15分鐘後，冷卻至室溫。濾取沈澱物，利用1,4-二㗁烷及乙酸乙酯依序進行清洗。將所獲得之固體於減壓下進行乾燥而獲得標記化合物（2.05 g）。1 H-NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 1.25(t, J=7.0 Hz, 3H), 2.88(t, J=6.1 Hz, 2H), 3.28(t, J=6.1 Hz, 2H), 4.02(s, 2H), 4.18(q, J=7.0 Hz, 2H), 7.46(s, 2H), 9.35(br. s, 2H) MS(ESI)m/z: 227[M＋H]＋ (3)2-胺基-6-(2,2-二氟乙基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯之合成 於室溫下於2-胺基-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯鹽酸鹽（53.0 mg、0.202 mmol）、1,1-二氟-2-碘乙烷（CAS No.598-39-0）（0.025 mL、0.282 mmol）及DMF（0.700 mL）之混合物中加入碳酸鉀（84.0 mg、0.605 mmol）。將反應混合物於50℃下攪拌3小時後，於80℃下攪拌16小時。恢復至室溫後，將反應混合物利用管柱層析法（NH矽膠、10%-50%乙酸乙酯/庚烷）進行精製，獲得標記化合物（40.0 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.24-1.37(m, 3H), 2.74-2.96(m, 6H), 3.49-3.68(m, 2H), 4.17-4.34(m, 2H), 5.74-6.17(m, 3H)。 MS(ESI)m/z: 291[M＋H]＋
製造例9 2-胺基-6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯之合成 [化26] 於室溫下於製造例8(2)中所獲得之2-胺基-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯鹽酸鹽（53.0 mg、0.202 mmol）、碳酸鉀（84.0 mg、0.605 mmol）及DMF（0.700 mL）之混合物中加入1-碘-2-甲氧基乙烷（CAS No.4296-15-5）（52.5 mg、0.282 mmol）。將反應混合物於50℃下攪拌3小時。恢復至室溫後，將反應混合物利用管柱層析法（NH矽膠、10%-50%乙酸乙酯/庚烷）進行精製，獲得標記化合物（34.8 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.30-1.36(m, 3H), 2.73-2.84(m, 6H), 3.38(s, 3H), 3.51(br. d, J=1.8 Hz, 2H), 3.54-3.61(m, 2H), 4.21-4.32(m, 2H), 5.94(br. s, 2H)。 MS(ESI)m/z: 285[M＋H]＋
製造例10 3-胺基-6-(二氟甲基)苯并呋喃-2-甲酸乙酯之合成 [化27] 於室溫下於2-氟-4-甲醯基苯甲腈（CAS No.101048-76-4）（300 mg、2.01 mmol）及DCM（9 mL）之混合物中依序加入DAST（0.395 mL、3.02 mmol）及一滴乙醇。將反應混合物於室溫下攪拌整夜。向反應混合物中加入水及乙酸乙酯，分離有機層。再次利用乙酸乙酯對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。於室溫下於殘渣（344 mg）、DMSO（6 mL）、乙醇酸乙酯（CAS No.623-50-7）（0.381 mL、4.02 mmol）之混合物中加入第三丁醇鉀（429 mg、3.82 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌整夜。向反應混合物中加入飽和氯化銨水溶液、水及乙酸乙酯，分離有機層。再次利用乙酸乙酯對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、40%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（256 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.44(t, J=7.3 Hz, 3H), 4.34-4.55(m, 2H), 4.80-5.11(m, 2H), 6.74(t, J=56.6 Hz, 1H), 7.35-7.45(m, 1H), 7.57-7.71(m, 2H) MS(ESI)m/z: 256[M＋H]＋
製造例11 (8R,9aS)-8-氟-3,3-二甲基六氫-1H-吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-1,5(2H)-二酮之合成 [化28] 於(2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-氟吡咯啶-2-甲酸（CAS No.203866-14-2）（5.00 g、21.4 mmol）之DMF（25.0 mL）之混合物中加入碳酸鉀（4.44 g、32.2 mmol）及碘甲烷（CAS No.74-88-4）（2.68 mL、42.9 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌3小時。將反應混合物利用管柱層析法（NH矽膠、20%-40%乙酸乙酯/正庚烷）進行粗精製。於室溫下向所獲得之粗產物（5.50 g）中加入4 N之氯化氫/1,4-二㗁烷溶液（55.0 mL、220 mmol）。將反應混合物於同一溫度下攪拌1小時後，於減壓下進行濃縮。於室溫下於濃縮殘渣、THF（55.0 ml）、3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-甲基丁酸（CAS No.129765-95-3）（4.83 g、22.2 mmol）、TEA（9.30 mL、66.7 mmol）之混合物中加入1-丙烷膦酸酐（環狀三聚物）（50%乙酸乙酯溶液、約1.6 mol/L）（20.9 mL、33.4 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌整夜。於反應混合物中加入乙酸乙酯及水，分離有機層。將有機層於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾。將濾液於減壓下進行濃縮。於所獲得之殘渣（5.50 g）及甲醇（32.1 mL）之混合物中加入1 N之氫氧化鈉水溶液（31.8 mL、31.8 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌3小時後，加入鹽酸而使液性為酸性。加入乙酸乙酯，分離有機層後，將有機層於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。於室溫下向所獲得之殘渣中加入4 N之氯化氫/1,4-二㗁烷溶液（39.7 mL、159 mmol）。將反應混合物於同一溫度下攪拌3小時後，於減壓下進行濃縮。向殘渣之THF（8 ml）溶液中加入TEA（6.64 mL、47.6 mmol）、1-丙烷膦酸酐（環狀三聚物）（50%乙酸乙酯溶液、約1.6 mol/L）（14.9 mL、23.8 mmol）。將反應混合物於60℃下攪拌3天。將反應混合物於減壓下進行濃縮。將所獲得之殘渣利用管柱層析法（矽膠、5%-25%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（950 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.24-1.42(m, 6H), 2.42-2.77(m, 3H), 2.97-3.17(m, 1H), 3.30-3.53(m, 1H), 4.09-4.36(m, 1H), 4.58-4.75(m, 1H), 5.03-5.32(m, 1H), 6.17(br. s, 1H)。 MS(ESI)m/z: 215[M＋H]＋
製造例12 (5aSR,8aRS)-4-甲基六氫-1H-呋喃并[3,4-e][1,4]二氮呯-2,5-二酮之合成 [化29] (1)2-((3SR,4RS)-4-((第三丁氧基羰基)胺基)-N-甲基四氫呋喃-3-甲醯胺)乙酸甲酯之合成 於室溫下向順式-4-第三丁氧基羰基胺基-四氫-呋喃-3-甲酸（CAS No.1414958-20-5）（500 mg、2.16 mmol）、2-(甲基胺基)乙酸甲酯鹽酸鹽（362 mg、2.60 mmol）及DCM（5 mL）之混合物中依序加入DIPEA（1.27 mL、7.35 mmol）及HATU（987 mg、2.60 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌1小時。將反應混合物直接利用管柱層析法（矽膠、40%-100%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（649 mg）。 MS(ESI)m/z: 317[M＋H]＋ (2) (5aSR,8aRS)-4-甲基六氫-1H-呋喃并[3,4-e][1,4]二氮呯-2,5-二酮之合成 於室溫下向2-((3SR,4RS)-4-((第三丁氧基羰基)胺基)-N-甲基四氫呋喃-3-甲醯胺)乙酸甲酯（649 mg、2.05 mmol）中加入4 N之氯化氫/1,4-二㗁烷溶液（7 mL）。將反應混合物於室溫下攪拌3小時。將反應混合物於減壓下進行濃縮。於室溫下向殘渣中加入THF（7 mL）及TBD（343 mg、2.46 mmol）。將反應混合物進行超音波處理後，於室溫下攪拌1小時。於反應混合物中加入乙酸（0.2 mL）後，將反應混合物於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、10%-40%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（178 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 3.07(s, 3H), 3.43(q, J=8.1 Hz, 1H), 3.51-3.63(m, 2H), 4.10-4.32(m, 3H), 4.38(dd, J=9.6, 7.2 Hz, 1H), 4.48(d, J=14.8 Hz, 1H), 5.54(br s, 1H)。 MS(ESI)m/z: 185[M＋H]＋
製造例13 3-胺基-6-(三氟甲基)苯并呋喃-2-甲酸乙酯之合成 [化30] 於室溫下於乙醇酸乙酯（CAS No.623-50-7）（1.02 mL、10.8 mmol）及DMSO（10 mL）之混合物中依序加入第三丁醇鉀（1.13 g、10.1 mmol）及2-氟-4-(三氟甲基）苯甲腈（CAS No.146070-34-0）（1.00 mL、7.19 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌8小時。向反應混合物中加入飽和氯化銨水溶液、水及乙酸乙酯，分離有機層。再次利用乙酸乙酯對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、30%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（949 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.40-1.48(m, 3H), 4.45(q, J=7.3 Hz, 2H), 4.98(br. s, 2H), 7.44-7.54(m, 1H), 7.61-7.78(m, 2H) MS(ESI)m/z: 274[M＋H]＋
製造例14 (5aS,8aS)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮之合成 [化31] (1) 2-((1S,2S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-N-甲基環戊烷甲醯胺)乙酸第三丁酯之合成 於室溫下向(1S,2S)-2-(第三丁氧基羰基胺基)環戊烷甲酸（CAS No.143679-80-5）（1.00 g、4.36 mmol）、肌胺酸第三丁酯鹽酸鹽（872 mg、4.80 mmol）、DIPEA（1.81 mL、10.5 mmol）及DCM（10 mL）之混合物中加入HATU（1.99 g、5.23 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌整夜後，直接利用管柱層析法（矽膠、30%-50%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（1.55 g）。 MS(ESI)m/z: 357[M＋H]＋ (2) (5aS,8aS)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮之合成 於室溫下向2-((1S,2S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-N-甲基環戊烷甲醯胺)乙酸第三丁酯（1.55 g、4.35 mmol）中加入4 N之氯化氫/1,4-二㗁烷溶液（16 mL、64 mmol），攪拌16小時。將反應混合物於減壓下進行濃縮。於室溫下於殘渣中依序加入碳酸氫鈉（0.877 g、10.4 mmol）、甲醇（24 mL）、NMM（0.096 mL、0.87 mmol）及DMT-MM（12.3%H2 O、1.73 g、5.48 mmol），攪拌3小時。將反應混合物於減壓下進行濃縮，將殘渣利用DCM進行清洗。將清洗液於減壓下進行濃縮，將殘渣利用管柱層析法（矽膠、0%-20%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（753 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.55-1.88(m, 3H), 1.91-2.02(m, 1H), 2.11-2.22(m, 1H), 2.25-2.40(m, 1H), 3.07(s, 3H), 3.07-3.16(m, 1H), 3.51-3.62(m, 1H), 3.78(d, J=18.0 Hz, 1H), 4.57(d, J=18.0 Hz, 1H), 6.54(br. s, 1H)。 MS(ESI)m/z: 183[M＋H]＋
製造例15 (S)-3,3-二甲基六氫-1H-吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-1,5(2H)-二酮之合成 [化32] 於0℃下於3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-甲基丁酸（CAS No.129765-95-3）（2.0 g、9.21 mmol）、L-脯胺酸第三丁酯（CAS No.2812-46-6）（1.58 g、9.21 mmol）、TEA（3.85 mL、27.6 mmol）及THF（15.0 mL）之混合物中加入1-丙烷膦酸酐（環狀三聚物）（50%乙酸乙酯溶液、約1.7 mol/L）（8.12 mL、13.8 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌3天。於反應混合物中加入乙酸乙酯及水，分離有機層。利用飽和氯化銨水溶液、水、飽和碳酸氫鈉水溶液、水及飽和鹽水對有機層依序進行清洗，於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾。將濾液於減壓下進行濃縮。於0℃下於所獲得之濃縮殘渣（3.03 g）及1,4-二㗁烷（10.0 mL）之混合物中加入4 N之氯化氫/1,4-二㗁烷溶液（20 mL、80 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌整夜後，於減壓下進行濃縮。於0℃下於殘渣、TEA（3.42 mL、24.5 mmol）、THF（50.0 mL）及DMF（30.0 mL）之混合物中加入1-丙烷膦酸酐（環狀三聚物）（50%乙酸乙酯溶液、約1.7 mol/L）（7.22 mL、12.3 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌2天。將反應混合物注入至冰水中，加入乙酸乙酯，分離有機層。利用氯仿及10%甲醇/氯仿對水層進行萃取。將所獲得之有機層於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將所獲得之殘渣利用管柱層析法（矽膠、0%-50%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（942 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.34(s, 3H), 1.36(s, 3H), 1.76-1.93(m, 2H), 2.09-2.25(m, 1H), 2.48(dd, J=14.3, 1.8 Hz, 1H), 2.61-2.74(m, 1H), 3.08(d, J=14.1 Hz, 1H), 3.45-3.56(m, 1H), 3.57-3.71(m, 1H), 4.43(dd, J=8.0, 4.9 Hz, 1H), 5.54(br. s, 1H)。
製造例16 3-胺基-5-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酸甲酯之合成 [化33] (1) 3-胺基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2,5(4H)-二甲酸5-苄酯2-甲酯之合成 將3-氰基-4-氧哌啶-1-甲酸苄酯（CAS No.916423-53-5）（868 mg、3.36 mmol）、TEA（0.937 mL、6.72 mmol）、4-二甲基胺基吡啶（41.1 mg、0.336 mmol）、甲磺醯氯（0.312 mL、4.03 mmol）及DCM（10 mL）之反應混合物於室溫下攪拌16小時。於反應混合物中加入水，分離有機層。利用DCM對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮，獲得反應殘渣（1.13 g）。於60%氫化鈉（537 mg）與THF（20 mL）之混合物中，於0℃、氮氣氛圍下緩慢滴下巰基乙酸甲酯（CAS No.2365-48-2）（1.05 mL、11.8 mmol），恢復至室溫，進而攪拌30分鐘。將該反應混合物再次於冰水浴下進行冷卻，於其中加入反應殘渣（1.13 g）與THF（10 mL）之混合物，直接攪拌1小時。使反應混合物恢復至室溫，進而攪拌17.5小時。 於反應混合物中加入水及乙酸乙酯，分離有機層。利用水對有機層進行清洗後，於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、1%-33%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（813 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 2.78(br. s, 2H), 3.74-3.83(m, 5H), 4.32(br. d, J=9.4 Hz, 2H), 5.11-5.23(m, 2H), 5.33(br. d, J=9.4 Hz, 2H), 7.30-7.43(m, 5H)。 MS(ESI)m/z: 347[M＋H]＋ (2) 3-胺基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酸甲酯之合成 將3-胺基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2,5(4H)-二甲酸5-苄酯2-甲酯（200 mg、0.577 mmol）、10%鈀碳（49.3%含水物）（20 mg）及甲醇（3 mL）之混合物於氫氣氛圍下於室溫下攪拌1小時。將反應混合物利用CeliteTM 進行過濾後將濾液於減壓下進行濃縮。於所獲得之殘渣中加入10%鈀碳（49.3%含水物）（200 mg）及甲醇（10 mL），將混合物於氫氣氛圍下於室溫下攪拌21.5小時。將反應混合物利用CeliteTM 進行過濾後將濾液於減壓下進行濃縮，獲得標記化合物（94.6 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 2.62-2.78(m, 2H), 3.13(t, J=5.7 Hz, 2H), 3.61-3.72(m, 2H), 3.76-3.88(m, 3H), 5.29(br. s, 2H)。 MS(ESI)m/z: 213[M＋H]＋ (3) 3-胺基-5-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酸甲酯之合成 於室溫下於3-胺基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酸甲酯（94 mg、0.443 mmol）、THF（4 mL）、甲醇（4 mL）之混合物中加入35%-38%甲醛液（0.036 mL），攪拌50分鐘。加入三乙醯氧基硼氫化鈉（188 mg、0.886 mmol），進而於室溫下攪拌26小時。 於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水及乙酸乙酯，分離有機層。將有機層於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（NH矽膠、5%-45%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（75 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 2.44-2.55(m, 3H), 2.68-2.77(m, 2H), 2.79-2.89(m, 2H), 3.19-3.31(m, 2H), 3.68-3.87(m, 3H), 5.17-5.41(m, 2H)。 MS(ESI)m/z: 227[M＋H]＋
製造例17 4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(5aRS,8aSR)-第三丁酯(反式體)及4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(5aSR,8aSR)-第三丁酯(順式體)之合成 [化34] (1) 反丁烯二酸苄基乙酯之合成 於室溫下於反丁烯二酸單乙酯（CAS No.2459-05-4）（32.0 g、222 mmol）、碳酸鉀（30.7 g、222 mmol）及DMF（900 mL）之混合物中加入苄基溴（CAS No.100-39-0）（24.0 mL、202 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌15分鐘。將反應混合物於55℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫。以反應混合物之體積成為約1/3之方式於減壓下進行濃縮。於殘渣中加入水（500 mL）及庚烷（500 mL）。分離有機層與水層，進而利用庚烷（300 mL）對水層進行萃取。利用飽和鹽水（200 mL）對合併之有機層進行清洗，於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、0%-10%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（42.9 g）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.26-1.35(m, 3H), 4.21-4.33(m, 2H), 5.23(s, 2H), 6.89(s, 2H), 7.29-7.42(m, 5H)。 MS(ESI)m/z: 235[M＋H]＋ (2) 1-苄基吡咯啶-3,4-二甲酸(3SR,4SR)-3-苄酯4-乙酯之合成 於0℃下於反丁烯二酸苄基乙酯（19.0 g、81.1 mmol）與DCM（200 mL）之混合物中加入N-(甲氧基甲基)-N-(三甲基矽烷基甲基)苄基胺（CAS No.93102-05-7）（21.9 mL、85.8 mmol）後，加入TFA（0.400 mL、5.19 mmol）與DCM（3.6 mL）之混合物。將反應混合物於0℃下攪拌15分鐘。將反應混合物於室溫下攪拌6小時30分鐘。於室溫下於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液（40 mL），攪拌10分鐘。分離有機層與水層，利用DCM（20 mL）對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、0%-14%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（28.5 g）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.22(t, J=7.2 Hz, 3H), 2.77(dd, J=9.4, 6.2 Hz, 1H), 2.84(dd, J=9.0, 6.6 Hz, 1H), 2.87-2.96(m, 2H), 3.43-3.54(m, 2H), 3.60(d, J=2.7 Hz, 2H), 4.14(q, J=7.0 Hz, 2H), 5.15(s, 2H), 7.26-7.38(m, 10H)。 MS(ESI)m/z: 368[M＋H]＋ (3) (3SR,4SR)-1-(第三丁氧基羰基)-4-(乙氧基羰基)吡咯啶-3-甲酸之合成 於1-苄基吡咯啶-3,4-二甲酸(3SR,4SR)-3-苄酯4-乙酯（28.5 g、77.5 mmol）與乙醇（380 mL）之混合物中加入20%氫氧化鈀碳（50%含水物、5.44 g、3.87 mmol）。將反應混合物於氫氣氛圍下於室溫下攪拌18小時。將反應混合物於氮氣氛圍下進行攪拌後，加入水（65 mL）。過濾混合物，利用乙醇/水（70 mL、6/1（v/v））對過濾物進行清洗。將濾液於減壓下進行濃縮，獲得殘渣（14.2 g）。於所獲得之殘渣、水（45 mL）及THF（100 mL）之混合物中加入碳酸氫鈉（14.2 g、169 mmol）與水（170 mL）之混合物。將混合物於室溫下攪拌5分鐘。於混合物中加入二碳酸二-第三丁酯（20.3 g、92.9 mmol）與THF（85 mL）之混合物，將反應混合物於室溫下攪拌2小時。將反應混合物於減壓下進行濃縮。於殘渣中加入TBME（150 mL）及水（150 mL），分離有機層與水層。利用水（50 mL）對有機層進行萃取。於合併之水層中於0℃下加入2 N鹽酸（85 mL）、乙酸乙酯（200 mL）。分離有機層與水層，利用乙酸乙酯（50 mL）對水層進行萃取。利用飽和鹽水對合併之有機層進行清洗，於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，於減壓下進行濃縮而獲得標記化合物（21.7 g）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.28(t, J=7.2 Hz, 3H), 1.46(s, 9H), 3.33-3.66(m, 4H), 3.79(br. s, 2H), 4.21(qd, J=7.1, 1.8 Hz, 2H)。 MS(ESI)m/z: 573[2M-H]- (4) 4-(((苄氧基)羰基)胺基)吡咯啶-1,3-二甲酸(3RS,4SR)-1-第三丁酯3-乙酯之合成 於室溫下於(3SR,4SR)-1-(第三丁氧基羰基)-4-(乙氧基羰基)吡咯啶-3-甲酸（4.98 g、17.3 mmol）與甲苯（150 mL）之混合物中加入三乙胺（2.90 mL、20.8 mmol）及疊氮基磷酸二苯酯（CAS No.26386-88-9）（4.47 mL、20.8 mmol）。將反應混合物於80℃下攪拌1小時。於反應混合物中加入苄醇（CAS No.100-51-6）（4.48 mL、43.3 mmol）。將反應混合物於80℃下攪拌6小時。將反應混合物冷卻至室溫。於反應混合物中加入水（50 mL），於室溫下攪拌5分鐘。分離有機層與水層。利用飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和鹽水對有機層依序進行清洗。將有機層於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、0%-50%TBME/正庚烷及50%-75%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（5.27 g）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.25(t, J=7.4 Hz, 3H), 1.45(s, 9H), 2.91-3.29(m, 2H), 3.56-3.88(m, 3H), 4.17(q, J=7.4 Hz, 2H), 4.42(br. s, 1H), 4.92(br. s, 1H), 5.11(s, 2H), 7.29-7.41(m, 5H)。 MS(ESI)m/z: 785[2M＋H]＋ (5) (3RS,4SR)-4-(((苄氧基)羰基)胺基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3-甲酸之合成 於25℃下於4-(((苄氧基)羰基)胺基)吡咯啶-1,3-二甲酸(3RS,4SR)-1-第三丁酯3-乙酯（21.0 g、53.4 mmol）與THF（250 mL）之混合物中加入2 N氫氧化鈉水溶液（125 mL、250 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌2小時30分鐘。於反應混合物中加入TBME（250 mL）及水（125 mL），分離有機層與水層。利用水（63 mL）對有機層進行萃取。於0℃下於合併之水層中加入5 N鹽酸（50 mL）、乙酸乙酯（200 mL）。分離有機層與水層，利用乙酸乙酯（50 mL）對水層進行萃取。利用飽和鹽水對合併之有機層進行清洗。將有機層於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，於減壓下進行濃縮而獲得標記化合物（18.3 g）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.46(s, 9H), 3.02-3.38(m, 2H), 3.62-3.86(m, 3H), 4.44(br. s, 1H), 5.12(br. s, 3H), 7.32-7.41(m, 5H). MS(ESI)m/z: 727[2M-H]- (6) 3-(((苄氧基)羰基)胺基)-4-((2-甲氧基-2-側氧乙基)(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸(3SR,4RS)-第三丁酯之合成 於25℃下於(3RS,4SR)-4-(((苄氧基)羰基)胺基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3-甲酸（13.1 g、36.0 mmol）、肌胺酸甲酯鹽酸鹽（CAS No.13515-93-0）（6.02 g、43.1 mmol）、HOBT（5.83 g、43.1 mmol）及DMF（150 mL）之混合物中依序加入三乙胺（12.5 mL、89.9 mmol）及EDC（8.27 g、43.1 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌5小時40分鐘。於反應混合物中加入乙酸乙酯（400 mL）及水（100 mL），分離有機層與水層。利用乙酸乙酯（100 mL）對水層進行萃取。利用飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和鹽水對合併之有機層依序進行清洗。將有機層於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、50%-75%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（14.9 g）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.45(s, 9H), 2.97(s, 1H), 3.13-3.28(m, 2H), 3.33-3.69(m, 5H), 3.70-3.83(m, 3H), 4.00-4.44(m, 3H), 4.97-5.19(m, 3H), 7.30-7.45(m, 5H)。 MS(ESI)m/z: 450[M＋H]＋ (7) 4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(5aRS,8aSR)-第三丁酯(反式體)及4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(5aSR,8aSR)-第三丁酯(順式體)之合成 於25℃下於3-(((苄氧基)羰基)胺基)-4-((2-甲氧基-2-側氧乙基)(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸(3SR,4RS)-第三丁酯（1.50 g、3.34 mmol）與乙醇（33 mL）之混合物中加入20%氫氧化鈀碳（50%含水物、234 mg、0.167 mmol）。將反應混合物於氫氣氛圍下於25℃下攪拌3小時。將反應混合物置於氮氣氛圍下。將反應混合物利用CeliteTM 進行過濾。將濾液於減壓下進行濃縮。於所獲得之殘渣中加入THF（66 mL）。於混合物中加入TBD（697 mg、5.01 mmol）。將反應混合物於25℃下攪拌5小時。將反應混合物於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、5%-20%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記反式體（369 mg）及標記順式體（274 mg）。 反式體1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.46(s, 9H), 3.09(s, 3H), 3.17(t, J=10.0 Hz, 1H), 3.42-3.55(m, 1H), 3.66-4.04(m, 5H), 4.58(d, J=17.6 Hz, 1H)。 MS(ESI)m/z: 284[M＋H]＋ 順式體1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.47(s, 9H), 3.12(s, 3H), 3.19-3.34(m, 1H), 3.48-3.72(m, 3H), 3.78(br. s, 1H), 3.93(br. s, 1H), 4.21(br. s, 1H), 4.56(d, J=16.0 Hz, 1H), 5.60(br. s, 1H)。 MS(ESI)m/z: 284[M＋H]＋
製造例18 4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(5aRS,8aSR)-(9H-茀-9-基)甲酯(反式體)之合成 [化35] 於25℃下於製造例17(7)中所獲得之4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(5aRS,8aSR)-第三丁酯（反式體）（369 mg、1.30 mmol）與DCM（8 mL）之混合物中加入TFA（2.00 mL、26.0 mmol）。將反應混合物於25℃下攪拌2小時。將反應混合物於減壓下進行濃縮。於殘渣中加入THF（6 mL）及飽和碳酸氫鈉水溶液（6.00 mL）。於反應混合物中加入碳酸9-茀基甲基丁二醯亞胺基酯（395 mg、1.17 mmol）。將反應混合物於25℃下攪拌17小時。於反應混合物中加入碳酸9-茀基甲基丁二醯亞胺基酯（21.9 mg、0.0651 mmol）。將反應混合物於25℃下攪拌1小時。於反應混合物中加入乙酸乙酯，分離有機層與水層。利用乙酸乙酯對水層萃取5次。將合併之有機層於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾。將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、5%-20%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（501 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 3.05-3.30(m, 4H), 3.40-3.63(m, 1H), 3.77-4.10(m, 5H), 4.19-4.29(m, 1H), 4.33-4.52(m, 2H), 4.54-4.66(m, 1H), 6.04-6.30(m, 1H), 7.29-7.36(m, 2H), 7.38-7.45(m, 2H), 7.54-7.63(m, 2H), 7.77(d, J=7.4 Hz, 2H)。 MS(ESI)m/z: 406[M＋H]＋
製造例19 4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(5aSR,8aSR)-(9H-茀-9-基)甲酯(順式體)之合成 [化36] 於25℃下於製造例17(7)中所獲得之4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(5aSR,8aSR)-第三丁酯（順式體）（247 mg、0.872 mmol）與DCM（8 mL）之混合物中加入TFA（2.00 mL、26.0 mmol）。將反應混合物於25℃下攪拌2小時。將反應混合物於減壓下進行濃縮。於殘渣中加入THF（6 mL）及飽和碳酸氫鈉水溶液（6.00 mL）。於反應混合物中加入碳酸9-茀基甲基丁二醯亞胺基酯（265 mg、0.784 mmol）。將反應混合物於25℃下攪拌17小時。於反應混合物中加入碳酸9-茀基甲基丁二醯亞胺基酯（14.7 mg、0.0436 mmol）。將反應混合物於25℃下攪拌1小時。於反應混合物中加入乙酸乙酯，分離有機層與水層。利用乙酸乙酯對水層萃取5次。將合併之有機層於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾。將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、5%-20%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（329 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 3.07-3.20(m, 3H), 3.25-3.97(m, 5H), 4.11-4.63(m, 6H), 5.69(br. s, 1H), 7.30 - 7.37(m, 2H), 7.37-7.47(m, 2H), 7.54-7.69(m, 2H), 7.77(d, J=7.4 Hz, 2H)。 MS(ESI)m/z: 406[M＋H]＋
製造例20 (5aR,8aR)-4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(9H-茀-9-基)甲酯之合成 [化37] 將製造例19中所獲得之4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(5aSR,8aSR)-(9H-茀-9-基)甲酯（順式體）（500 mg、1.23 mmol）利用HPLC（CHIRALPAKTM IB（2 cm× 25 cm）、溶出溶劑：乙醇、流速：11 ml/min.）反覆進行光學拆分，藉此獲得保持時間較短之標記化合物（224 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δppm: 3.10-3.17(m, 3H), 3.27-3.93(m, 5H), 4.14-4.61(m, 6H), 5.44-5.65(m, 1H), 7.29-7.36(m, 2H), 7.37-7.45(m, 2H), 7.61(br. dd, J=17.8, 10.0 Hz, 2H), 7.77(d, J=7.4 Hz, 2H)。 MS(ESI)m/z: 406[M＋H]＋ 利用HPLC之分析； （分析條件）管柱：CHIRALPAKTM IB（Daicel化學工業公司製造）（0.46 cm× 15 cm）、40℃、溶出溶劑：乙醇、流速：1 ml/min.、檢測：UV（254 nm） （分析結果）於上述分析條件下對所獲得之保持時間較短之標記化合物進行分析，結果保持時間為6.97分鐘，旋光性為(-)且對映體過量值為 ＞ 99%ee。
製造例21 2-胺基-6-氟-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-3-甲酸甲酯之合成 [化38] 於室溫下向4-氟環己酮（CAS No.68223-64-3）（2 g、17.2 mmol）及氰基乙酸甲酯（CAS No.105-34-0）（1.52 mL、17.2  mmol）之乙醇（20 mL）之混合物中依序加入硫（CAS No.7704-34-9）（0.552 g、17.2 mmol）及𠰌啉（1.51 mL、17.2 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌3天。濾取析出之粉末，利用乙醇進行清洗，然後於減壓下進行乾燥，獲得標記化合物（1.61 g）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.86-2.13(m, 2H), 2.69-3.00(m, 4H), 3.73-3.88(m, 3H), 4.89-5.16(m, 1H), 5.90-6.10(m, 2H)。 MS(ESI)m/z: 230[M＋H]＋
實施例1 (3aS,14aR)-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮之合成 [化39] 於室溫下向3-胺基苯并呋喃-2-甲酸乙酯（CAS No.39786-35-1）（169 mg、0.823 mmol）、製造例1中所獲得之(5aS,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（100 mg、0.549 mmol）及DCE（15 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.102 mL、1.10 mmol）。將反應混合物於80℃下攪拌6小時。於室溫下於反應混合物中加入乙醇鈉（20%乙醇溶液、1.70 mL、4.39 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌2小時。向反應混合物中加入水及乙酸乙酯，分離有機層。再次利用乙酸乙酯對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、0%-10%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（124 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.59-1.77(m, 2H), 1.90-2.24(m, 2H), 2.33-2.47(m, 1H), 2.54-2.66(m, 1H), 3.15(s, 3H), 3.50-3.63(m, 1H), 4.34(d, J=15.8 Hz, 1H), 4.85(d, J=15.8 Hz, 1H), 5.82-6.00(m, 1H), 7.42-7.49(m, 1H), 7.56-7.64(m, 1H), 7.65-7.72(m, 1H), 8.05(d, J=7.8 Hz, 1H) MS(ESI)m/z: 324[M＋H]＋
實施例2 (+)-7,7,12-三甲基-1,2,3,6,7,10,11,12,13,15b-十氫吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[2,1-c][1,4]二氮呯-5,9-二酮之合成 [化40] 於室溫下向製造例2中所獲得之2-胺基-6-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸甲酯（CAS No.303998-84-7）（86 mg、0.382 mmol）、製造例3中所獲得之(R)-3,3-二甲基六氫-1H-吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-1,5(2H)-二酮（50 mg、0.255 mmol)及DCE（3 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.047 mL、0.51 mmol）。將反應混合物於60℃下攪拌整夜。於室溫下於反應混合物中加入乙醇鈉（20%乙醇溶液、3 mL、7.76 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌2小時。向反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液及乙酸乙酯，分離有機層。利用飽和鹽水對有機層進行清洗後，於硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（NH矽膠、20%-100%乙酸乙酯/正庚烷及0%-5%甲醇/乙酸乙酯）、（矽膠、2%-80%甲醇/乙酸乙酯）依序進行精製，獲得標記化合物之外消旋體（42 mg）。 MS(ESI)m/z: 373[M＋H]＋ （分析條件）管柱：CHIRALPAKTM IA（Daicel化學工業公司製造）（0.46 cm× 15 cm）、40℃、溶出溶劑：乙醇/己烷 ＝ 20/80（v/v）、流速：1 ml/min.、檢測UV（254 nm） （分析結果）於上述分析條件下對所獲得之標記化合物進行分析，結果於保持時間5.96分鐘可見旋光性(+)之波峰，及於保持時間10.18分鐘可見旋光性(-)之波峰。 將所獲得之標記化合物之外消旋體（42 mg、0.113 mmol）利用HPLC（CHIRALPAKTM IA（2 cm× 25 cm）、溶出溶劑：乙醇/己烷 ＝ 20/80（v/v）、流速：10 ml/min.）進行光學拆分，獲得保持時間較短之手性體（14.6 mg）。 保持時間較短之手性體；1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.82(s, 3H), 1.84-1.99(m, 5H), 2.40-2.58(m, 5H), 2.76(t, J=5.9 Hz, 2H), 2.90-3.02(m, 1H), 3.12(t, J=5.9 Hz, 2H), 3.39(dt, J=11.6, 6.7 Hz, 1H), 3.47(d, J=14.8 Hz, 1H), 3.62(d, J=1.6 Hz, 2H), 3.80(dt, J=11.4, 6.8 Hz, 1H), 5.04(dd, J=7.2, 5.7 Hz, 1H)。 MS(ESI)m/z: 373[M＋H]＋ （分析條件）管柱：CHIRALPAKTM IA（Daicel化學工業公司製造）（0.46 cm× 15 cm）、40℃、溶出溶劑：乙醇/己烷 ＝ 20/80（v/v）、流速：1 ml/min.、檢測UV（254 nm） （分析結果）標記化合物之保持時間為5.91分鐘，光學純度為 ＞ 99%ee，旋光性為(+)。
實施例3 (3aS,14aR)-10-氟-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮之合成 [化41] 於室溫下向製造例4中所獲得之3-胺基-6-氟苯并呋喃-2-甲酸乙酯（58.8 mg、0.263 mmol）、製造例1中所獲得之（5aS,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（40.0 mg、0.220 mmol）及DCE（3 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.0307 mL、0.329 mmol）。將反應混合物於微波照射下於100℃下攪拌1小時。於室溫下於反應混合物中加入乙醇鈉（20%乙醇溶液、0.679 mL、1.76 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌2小時。向反應混合物中加入水及乙酸乙酯，分離有機層。再次利用乙酸乙酯對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、0%-30%甲醇/乙酸乙酯）進行精製。將所獲得之濃縮殘渣利用二乙醚進行研磨。濾取沈澱物，獲得標記化合物（22.8 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.60-1.75(m, 2H), 1.95-2.22(m, 2H), 2.34-2.46(m, 1H), 2.49-2.67(m, 1H), 3.14(d, J=0.9 Hz, 3H), 3.49-3.62(m, 1H), 4.31(d, J=15.4 Hz, 1H), 4.83(d, J=15.4 Hz, 1H), 5.76-5.99(m, 1H), 7.17-7.23(m, 1H), 7.34-7.39(m, 1H), 7.91-8.09(m, 1H) MS(ESI)m/z: 342[M＋H]＋
實施例4 (3aS,14aR)-5,8,10-三甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-環戊并[f]吡啶并[3'',2'':4',5']呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮之合成 [化42] 於室溫下向製造例5中所獲得之3-胺基-4,6-二甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯（93.0 mg、0.395 mmol）、製造例1中所獲得之（5aS,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（60.0 mg、0.329 mmol）及DCE（4.5 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.0460 mL、0.494 mmol）。將反應混合物於90℃下攪拌1.5小時。於室溫下於反應混合物中加入乙醇鈉（20%乙醇溶液、1.02 mL、2.63 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌整夜。向反應混合物中加入水及乙酸乙酯，分離有機層。再次利用乙酸乙酯對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、25%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（65.0 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.61-1.75(m, 2H), 1.95-2.23(m, 2H), 2.32-2.44(m, 1H), 2.52-2.61(m, 1H), 2.65(s, 3H), 2.81(s, 3H), 3.13(d, J=0.9 Hz, 3H), 3.48-3.63(m, 1H), 4.29(d, J=15.4 Hz, 1H), 4.81(d, J=15.4 Hz, 1H), 5.78-5.96(m, 1H), 7.00-7.14(m, 1H) MS(ESI)m/z: 353[M＋H]＋
實施例5 (3aR,14aR)-10-氟-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮之合成 [化43] 於室溫下向製造例4中所獲得之3-胺基-6-氟苯并呋喃-2-甲酸乙酯（33.7 mg、0.151 mmol）、製造例6中所獲得之(5aR,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（25.0 mg、0.137 mmol）及DCE（1.5 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.0256 mL、0.274 mmol）。將反應混合物於90℃下攪拌5小時。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液（1 mL），於90℃下攪拌整夜。將反應混合物冷卻至室溫，分離有機層。將有機層直接利用管柱層析法（矽膠、20%-30%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（18.2 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.40-1.46(m, 1H), 1.71-2.24(m, 4H), 3.12(s, 3H), 3.19-3.35(m, 1H), 3.45-3.62(m, 1H), 4.28-4.50(m, 2H), 5.38(d, J=17.2 Hz, 1H), 7.12-7.22(m, 1H), 7.31-7.41(m, 1H), 7.89-8.03(m, 1H) MS(ESI)m/z: 342[M＋H]＋
實施例6 (3aR,14aR)-5-甲基-10-(三氟甲基)-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮之合成 [化44] 於室溫下向製造例7中所獲得之3-胺基-6-(三氟甲基)苯并呋喃-2-甲酸乙酯（18.0 mg、0.0660 mmol）、製造例6中所獲得之(5aR,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（10.0 mg、0.0550 mmol）及DCE（3 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.0102 mL、0.110 mmol）。將反應混合物於90℃下攪拌15小時。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液（1 mL），於90℃下攪拌1天。將反應混合物冷卻至室溫，分離有機層。將有機層直接利用管柱層析法（矽膠、10%-20%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（13.3 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.37-1.50(m, 1H), 1.73-1.87(m, 1H), 1.90-2.26(m, 3H), 3.13(s, 3H), 3.19-3.36(m, 1H), 3.42-3.70(m, 1H), 4.36-4.50(m, 2H), 5.39(d, J=17.7 Hz, 1H), 7.65-7.76(m, 1H), 7.92(s, 1H), 8.08-8.20(m, 1H) MS(ESI)m/z: 392[M＋H]＋
實施例7 (3aS,14aR)-10-(2,2-二氟乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 [化45] 於室溫下向製造例1中所獲得之(5aS,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（123 mg、0.675 mmol）、製造例8中所獲得之2-胺基-6-(2,2-二氟乙基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯（120 mg、0.413 mmol）及DCE（5 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.262 mL、2.81 mmol）。將反應混合物於80℃下攪拌15小時。於室溫下向反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液（5 mL），於室溫下攪拌2小時，加入乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉水溶液後，分離有機層。利用乙酸乙酯對水層進行萃取。利用飽和碳酸氫鈉水溶液對合併之有機層進行清洗，於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（NH矽膠、30%-75%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（56.9 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.53-1.69(m, 2H), 1.95-2.16(m, 2H), 2.34(dt, J=12.6, 6.5 Hz, 1H), 2.46-2.57(m, 1H), 2.90-3.01(m, 4H), 3.07-3.15(m, 5H), 3.44-3.51(m, 1H), 3.85(s, 2H), 4.16(d, J=15.6 Hz, 1H), 4.73(d, J=15.6 Hz, 1H), 5.65-6.15(m, 2H)。 MS(ESI)m/z: 409[M＋H]＋
實施例8 (3aS,14aR)-10-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 [化46] 於室溫下向製造例1中所獲得之(5aS,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（123 mg、0.675 mmol）、製造例9中所獲得之2-胺基-6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯（160 mg、0.563 mmol）及DCE（5 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.262 mL、2.81 mmol）。將反應混合物於80℃下攪拌15小時。於室溫下向反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液（5 mL），於室溫下攪拌2小時，加入乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉水溶液後，分離有機層。利用乙酸乙酯對水層進行萃取。利用飽和碳酸氫鈉水溶液對合併之有機層進行清洗，於無水硫酸鎂上進行乾燥，進行過濾，於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（NH矽膠、30%-75%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（64.3 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.53-1.69(m, 2H), 1.97-2.05(m, 1H), 2.06-2.17(m, 1H), 2.29-2.39(m, 1H), 2.46-2.55(m, 1H), 2.79(t, J=5.3 Hz, 2H), 2.85-2.91(m, 2H), 3.08-3.15(m, 5H), 3.37(s, 3H), 3.47(td, J=10.8, 8.2 Hz, 1H), 3.58(t, J=5.5 Hz, 2H), 3.77(s, 2H), 4.15(d, J=15.6 Hz, 1H), 4.72(d, J=15.6 Hz, 1H), 5.64-5.82(m, 1H)。MS(ESI)m/z: 403[M＋H]＋
實施例9 (3aS,14aR)-10-(二氟甲基)-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮之合成 [化47] 於室溫下向製造例10中所獲得之3-胺基-6-(二氟甲基)苯并呋喃-2-甲酸乙酯（30.8 mg、0.121 mmol）、製造例1中所獲得之(5aS,8aR)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（20.0 mg、0.110 mmol）及DCE（1.5 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.0154 mL、0.165 mmol）。將反應混合物於90℃下攪拌2小時。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液（1 mL），於90℃下攪拌整夜。向反應混合物中加入乙酸乙酯，分離有機層。再次利用乙酸乙酯對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、20%甲醇/乙酸乙酯）進行精製。將所獲得之濃縮殘渣利用二乙醚進行研磨。濾取沈澱物，利用二乙醚進行清洗，獲得標記化合物（22.5 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.62-1.75(m, 2H), 1.99-2.21(m, 2H), 2.33-2.48(m, 1H), 2.54-2.69(m, 1H), 3.15(s, 3H), 3.48-3.62(m, 1H), 4.33(d, J=15.9 Hz, 1H), 4.84(d, J=15.4 Hz, 1H), 5.82-5.96(m, 1H), 6.81(t, J=56.2 Hz, 1H), 7.56-7.65(m, 1H), 7.82(s, 1H), 8.06-8.18(m, 1H) MS(ESI)m/z: 374[M＋H]＋
實施例10 (2R,15bR)-2-氟-7,7,12-三甲基-1,2,3,6,7,10,11,12,13,15b-十氫-5H,9H-吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[2,1-c][1,4]二氮呯-5,9-二酮之合成 [化48] 於室溫下向製造例2中所獲得之2-胺基-6-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸甲酯（634 mg、2.80 mmol）、製造例11中所獲得之(8R,9aS)-8-氟-3,3-二甲基六氫-1H-吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-1,5(2H)-二酮（500 mg、2.33 mmol）及DCE（25 mL）之混合物中加入磷醯氯（1.09 mL、11.7 mmol）。將反應混合物於50℃下攪拌15小時。於0℃下於反應混合物中加入飽和碳酸鈉水溶液及乙酸乙酯而分離有機層。將有機層於減壓下進行濃縮。於0℃下於所獲得之殘渣與甲醇（25.0 mL）之混合物中加入1 N氫氧化鈉水溶液（2.33 mL、2.33 mmol），將反應混合物於0℃下攪拌1小時。使反應混合物恢復至室溫後，加入1 N氫氧化鈉水溶液（2.33 mL、2.33 mmol），將反應混合物攪拌1小時。向反應混合物中加入鹽酸及乙酸乙酯，分離有機層，將有機層於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（NH矽膠、30%-50%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物之立體異構物（反式體）（200 mg）。於室溫下向同樣地獲得之自標記化合物之立體異構物混合物進行分離精製所獲得之反式體（50 mg）與合併之反式體（250 mg）之1,4-二㗁烷（30.0 mL）之混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液（30.0 mL）。將反應混合物於80℃下攪拌5小時。於室溫下於反應混合物中加入乙酸乙酯，分離有機層。將有機層於減壓下進行濃縮。利用SFC（CHIRALPAKTM IF/SFC（Daicel化學工業公司製造）（3 cm× 25 cm）、溶出溶劑：甲醇/二氧化碳 ＝ 40 : 60（v/v）、120 bar、40℃、流速：100 mL/min.）製備所獲得之殘渣，獲得保持時間較短之標記化合物（121.4 mg）。將標記化合物之X射線結晶結構示於圖1。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.79(s, 3H), 1.94(s, 3H), 2.42-2.60(m, 4H), 2.42-2.62(m, 1H), 2.65-2.83(m, 2H), 3.11(br. s, 2H), 3.46(br. d, J=14.6 Hz, 1H), 3.53-3.94(m, 5H), 5.13-5.32(m, 2H)。 MS(ESI)m/z: 391[M＋H]＋ 利用SFC之分析； （分析條件）管柱：CHIRALPAKTM IF-3/SFC（Daicel化學工業公司製造）（0.3 cm× 5.0 cm）、40℃、溶出溶劑：甲醇/二氧化碳 ＝ 40 : 60（v/v）、1500 psi、流速：1.2 mL/min.、檢測：UV（210-400 nm） （分析結果）標記化合物之保持時間為0.88分鐘，光學純度為 ＞ 99%ee。
實施例11 (+)-(3a,14a-順式)-5,10-二甲基-1,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫呋喃并[3,4-f]吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 [化49] 於室溫下向製造例12中所獲得之(5aSR,8aRS)-4-甲基六氫-1H-呋喃并[3,4-e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（43 mg、0.233 mmol）、製造例2中所獲得之2-胺基-6-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸甲酯（CAS No.303998-84-7）（79 mg、0.350 mmol）及DCE（3 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.087 mL、0.934 mmol）。將反應混合物於80℃下攪拌2小時。於冷卻至室溫之反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液（3 mL）。將反應混合物於室溫下攪拌16小時。將反應混合物直接利用管柱層析法（NH矽膠、50%-90%乙酸乙酯/庚烷）進行精製，獲得標記化合物之外消旋體。 MS(ESI)m/z: 361[M＋H]＋ 將該標記化合物之外消旋體利用SFC（CHIRALPAKTM OD-H/SFC（Daicel化學工業公司製造）（2 cm× 25 cm）、溶出溶劑：甲醇/二氧化碳 ＝ 20/80，流速：70 mL/min.）進行光學拆分，獲得保持時間較短之標記化合物（21.9 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm): 2.50(s, 3H), 2.70-2.85(m, 2H), 3.07-3.17(m, 5H), 3.64(s, 2H), 3.79(ddd, J=11.2, 8.9, 4.9 Hz, 1H), 3.87(dd, J=10.4, 4.1 Hz, 1H), 3.99(d, J=15.6 Hz, 1H), 4.18-4.33(m, 2H), 4.44(dd, J=10.2, 4.7 Hz, 1H), 5.27(d, J=16.0 Hz, 1H), 6.18(ddd, J=11.4, 7.5, 4.1 Hz, 1H)。
實施例12 (3aS,14aS)-5-甲基-10-(三氟甲基)-2,3,3a,5,6,14a-六氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 [化50] 於室溫下向製造例13中所獲得之3-胺基-6-(三氟甲基)苯并呋喃-2-甲酸乙酯（99.0 mg、0.362 mmol）、製造例14中所獲得之(5aS,8aS)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（60.0 mg、0.329 mmol）及DCE（3 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.0460 mL、0.494 mmol）。將反應混合物於90℃下攪拌2小時。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液（1 mL），於90℃下攪拌40小時。於反應混合物中於室溫下加入𠰌啉（0.430 mL、4.94 mmol），於70℃下攪拌4小時。於反應混合物中加入乙酸乙酯，分離有機層。再次利用乙酸乙酯對水層進行萃取。將合併之有機層於無水硫酸鈉上進行乾燥，進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（矽膠、0%-10%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（100 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.38-1.48(m, 1H), 1.73-1.88(m, 1H), 1.90-2.27(m, 3H), 3.08-3.20(m, 3H), 3.21-3.35(m, 1H), 3.45-3.65(m, 1H), 4.32-4.56(m, 2H), 5.29-5.53(m, 1H), 7.62-7.79(m, 1H), 7.84-8.00(m, 1H), 8.08-8.22(m, 1H) MS(ESI)m/z: 392[M＋H]＋
實施例13 (-)-12-(2-甲氧基乙基)-7,7-二甲基-1,2,3,6,7,10,11,12,13,15b-十氫-5H,9H-吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[2,1-c][1,4]二氮呯-5,9-二酮之合成 [化51] 於室溫下向製造例9中所獲得之2-胺基-6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯（500 mg、1.76 mmol）、製造例15中所獲得之(S)-3,3-二甲基六氫-1H-吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-1,5(2H)-二酮（449 mg、2.29 mmol）及DCE（25.0 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.819 mL、8.79 mmol）。將反應混合物於50℃下攪拌15小時。於0℃下於反應混合物中加入飽和碳酸鈉水溶液及乙酸乙酯而分離有機層。將有機層於減壓下進行濃縮。於0℃下於所獲得之殘渣之甲醇（25.0 mL）溶液中加入1 N氫氧化鈉水溶液（1.76 mL、1.76 mmol），將反應混合物於0℃下攪拌1小時。使反應混合物恢復至室溫後，加入1 N氫氧化鈉水溶液（1.76 mL、1.76 mmol），將反應混合物攪拌1小時。向反應混合物中加入鹽酸及乙酸乙酯，分離有機層，將有機層於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（NH矽膠、30%-50%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物之外消旋體。利用SFC（CHIRALPAKTM IA/SFC（Daicel化學工業公司製造）（3 cm× 25 cm）、溶出溶劑：甲醇/二氧化碳 ＝ 25 : 75（v/v）、120 bar、40℃、流速：100 mL/min.）製備所獲得之標記化合物之外消旋體，獲得保持時間較長之標記化合物（104 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.79(s, 3H), 1.82-1.96(m, 5H), 2.44(dq, J=13.6, 6.9 Hz, 1H), 2.53(d, J=15.1 Hz, 1H), 2.75-3.00(m, 5H), 3.09(br. t, J=5.3 Hz, 2H), 3.33-3.49(m, 5H), 3.58(t, J=5.5 Hz, 2H), 3.72-3.85(m, 3H), 5.01(t, J=6.4 Hz, 1H)。 MS(ESI)m/z: 417[M＋H]＋ 利用SFC之分析； （分析條件）管柱：CHIRALPAKTM IA-3/SFC（Daicel化學工業公司製造）（0.3 cm× 5.0 cm）、40℃、溶出溶劑：甲醇/二氧化碳 ＝ 25 : 75（v/v）、1500 psi、流速：1.2 mL/min.、檢測：UV（210-400 nm） （分析結果）標記化合物之保持時間為1.67分鐘，光學純度為 ＞ 99%ee。 利用HPLC之分析； （分析條件）管柱：CHIRALPAKTM IA（Daicel化學工業公司製造）（0.46 cm× 15 cm）、40℃、溶出溶劑：乙醇/己烷 ＝ 50/50（v/v）、流速：1 ml/min.、檢測UV（254 nm） （分析結果）標記化合物之保持時間為4.26分鐘，旋光性為(-)，光學純度為＞ 99%ee。
實施例14 (3aR,14aR)-5,9-二甲基-2,3,3a,5,6,8,9,10,11,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[3'',4'':4',5']噻吩并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 [化52] 於室溫下向製造例6中所獲得之(5aR,8aR,)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（0.100 g、0.549 mmol）、製造例16中所獲得之3-胺基-5-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酸甲酯（0.186 g、0.823 mmol）及DCE（9 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.153 mL、1.65 mmol）。將反應混合物於80℃下攪拌2小時。於冷卻至室溫之反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液（3 mL）。將反應混合物於室溫下攪拌2天。將反應混合物利用ISOLUTETM （Biotage公司） HM-N進行過濾，利用乙酸乙酯20 mL進行清洗。將所獲得之溶液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（NH矽膠、60%-90%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製。將所獲得之固體利用二乙醚進行研磨，濾取沈澱。將所獲得之固體利用二乙醚進行清洗，獲得標記化合物（104 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.33-1.49(m, 1H), 1.69-2.23(m, 4H), 2.54(s, 3H), 2.76-2.88(m, 2H), 2.98-3.03(m, 2H), 3.10(s, 3H), 3.15-3.24(m, 1H), 3.42-3.55(m, 1H), 3.55-3.71(m, 2H), 4.22-4.40(m, 2H), 5.32(d, J=17.2 Hz, 1H)。 MS(ESI)m/z: 359[M＋H]＋
實施例15 (3aR,10R,14aR)-10-氟-2,5-二甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-苯并[4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 [化53] (1) (3aR,14aR)-10-氟-5-甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-苯并[4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 於室溫下向製造例20中所獲得之(5aR,8aR)-4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(9H-茀-9-基)甲酯（224 mg、0.522 mmol）及製造例21中所獲得之2-胺基-6-氟-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-3-甲酸甲酯（190 mg、0.829 mmol）之DCE（6.5 mL）懸浮液中加入磷醯氯（144 mg、0.939 mmol）。 將反應混合物於80℃下攪拌3小時。使反應混合物恢復至室溫後，加入甲醇（0.782 mL、19.3 mmol），於室溫下攪拌20分鐘。繼而於室溫下向反應混合物中加入𠰌啉（0.967 mL、11.1 mmol），將反應混合物於60℃下攪拌2小時15分鐘。 使反應混合物恢復至室溫後，於減壓下進行濃縮。向殘渣中加入DCM（4 mL）。過濾去除沈澱物，利用DCM（6 mL）進行清洗。將濾液濃縮至半量。向殘渣中加入NH矽膠（2 g），濃縮混合物。將殘渣利用管柱層析法（NH矽膠、50%-100%乙酸乙酯/正庚烷及0%-5%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（126 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.95-2.13(m, 1H), 2.22(dq, J=13.6, 6.8 Hz, 1H), 2.82(dd, J=11.7, 7.8 Hz, 1H), 3.01-3.21(m, 7H), 3.38(dd, J=11.7, 7.8 Hz, 1H), 3.53-3.76(m, 4H), 4.07(dd, J=15.6, 2.7 Hz, 1H), 4.99-5.29(m, 2H), 5.86-6.00(m, 1H)。 MS(ESI)m/z: 363[M＋H]＋ (2) (3aR,10R,14aR)-10-氟-2,5-二甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-苯并[4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 向(3aR,14aR)-10-氟-5-甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-苯并[4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮（53 mg、0.146 mmol）之THF（3 mL）懸浮液中加入37%甲醛水溶液（119 mg、1.46 mmol）。將反應混合物於室溫下攪拌35分鐘。於室溫下向反應混合物中加入三乙醯氧基硼氫化鈉（37.2 mg、0.175 mmol），於室溫下攪拌55分鐘。 將反應混合物濃縮至三分之一之量。向殘渣中加入NH矽膠（1 g），濃縮混合物。將殘渣利用管柱層析法（NH矽膠、乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物之非對映混合物（47 mg）。藉由將所獲得之非對映混合物（47 mg）利用HPLC（CHIRALPAKTM IA（2 cm× 25 cm）、溶出溶劑：乙醇、流速：11 ml/min.）進行拆分，獲得保持時間較長之標記化合物（20.5 mg）。將標記化合物之X射線結晶結構示於圖2。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.95-2.13(m, 1H), 2.14-2.26(m, 1H), 2.37(s, 3H), 2.77(dd, J=10.5, 4.3 Hz, 1H), 2.92-3.03(m, 2H), 3.03-3.21(m, 7H), 3.25(dd, J=10.4, 4.9 Hz, 1H), 3.69(ddd, J=11.0, 8.9, 4.7 Hz, 1H), 3.89(d, J=15.2 Hz, 1H), 5.03-5.24(m, 1H), 5.92(d, J=15.2 Hz, 1H), 6.11(ddd, J=11.0, 8.3, 4.5 Hz, 1H)。 MS(ESI)m/z: 377[M＋H]＋
實施例16 (3aS,14aS)-10-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[4'',3'':4',5']噻吩并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 [化54] 於室溫下向製造例14中所獲得之(5aS,8aS)-4-甲基八氫環戊并[e][1,4]二氮呯-2,5-二酮（37.4 mg、0.205 mmol）、製造例9中所獲得之2-胺基-6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯（38.9 mg、0.137 mmol）及DCE（3 mL）之混合物中加入磷醯氯（0.051 mL、0.547 mmol）。將反應混合物於80℃下攪拌2小時。於冷卻至室溫之反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液（3 mL）。將反應混合物於70℃下攪拌48小時，於100℃下攪拌5小時，於70℃下攪拌16小時。將冷卻至室溫之反應混合物直接利用管柱層析法（NH矽膠、50%-70%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製。將所獲得之粗產物利用薄層層析法（NH矽膠、70%乙酸乙酯/正庚烷）進行精製，獲得標記化合物（19.6 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 1.31-1.46(m, 1H), 1.69-2.22(m, 4H), 2.81(t, J=5.4 Hz, 2H), 2.84-2.96(m, 2H), 3.05-3.20(m, 6H), 3.39(s, 3H), 3.44-3.52(m, 1H), 3.54-3.68(m, 2H), 3.78(d, J=2.3 Hz, 2H), 4.18-4.34(m, 2H), 5.30(d, J=17.2 Hz, 1H)。 MS(ESI)m/z: 403[M＋H]＋
實施例17 (-)-(3a,14a-反式)-2-(2-氟乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,14a-六氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 [化55] (1) (3aRS,14aSR)-5-甲基-2,3,3a,5,6,14a-六氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 於25℃下於製造例18中所獲得之4-甲基-2,5-二側氧八氫吡咯并[3,4-e][1,4]二氮呯-7(1H)-甲酸(5aRS,8aSR)-(9H-茀-9-基)甲酯（300 mg、0.740 mmol）、3-胺基苯并呋喃-2-甲酸乙酯（CAS No.39786-35-1）（228 mg、1.11 mmol）及DCE（6 mL）之混合物中加入磷醯氯（138 μL、1.48 mmol）。將反應混合物於60℃下攪拌17小時。將反應混合物冷卻至室溫，加入乙醇（1.30 mL、22.3 mmol)。將反應混合物於室溫下攪拌10分鐘後，於反應混合物中加入𠰌啉（2.00 mL、23.0 mmol）。將反應混合物於60℃下攪拌1小時。將反應混合物於減壓下進行濃縮。於殘渣中加入DCM（3 mL），進行過濾。利用DCM（1 mL）對過濾物進行清洗，將該操作進行5次。將合併之濾液於減壓下進行濃縮。將殘渣利用管柱層析法（NH矽膠、0%-20%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物（122 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 2.72-2.83(m, 1H), 3.16(s, 3H), 3.37(dd, J=10.5, 7.0 Hz, 1H), 3.56(t, J=10.4 Hz, 1H), 3.80-3.97(m, 1H), 4.46-4.64(m, 3H), 5.43(d, J=17.2 Hz, 1H), 7.41-7.51(m, 1H), 7.57-7.72(m, 2H), 7.97-8.09(m, 1H)。 MS(ESI)m/z: 325[M＋H]＋ (2) (-)-(3a,14a-反式)-2-(2-氟乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,14a-六氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮之合成 於25℃下於(3aRS,14aSR)-5-甲基-2,3,3a,5,6,14a-六氫-1H-苯并呋喃并[3',2':4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮（61 mg、0.188 mmol）與DMF（1.20 mL）之混合物中加入三乙胺（79.0 μL、0.564 mmol）及甲苯磺酸2-氟乙酯（CAS No.383-50-6）（48.1 μL、0.282 mmol）。將反應混合物於25℃下攪拌4天。於反應混合物中加入甲苯磺酸2-氟乙酯（CAS No.383-50-6）（16.0 μL、0.0939 mmol）。將反應混合物於25℃下攪拌1天。將反應混合物直接利用管柱層析法（NH矽膠、30%-100%乙酸乙酯/正庚烷及0%-15%甲醇/乙酸乙酯）進行精製，獲得標記化合物之外消旋體。藉由將所獲得之外消旋體利用HPLC（CHIRALPAKTM IG（3 cm× 25 cm）、溶出溶劑：乙醇、流速：12 mL/min.）進行光學拆分，獲得保持時間較短之標記化合物（7.81 mg）。1 H-NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ(ppm): 2.89-3.19(m, 7H), 3.38(dd, J=9.4, 6.3 Hz, 1H), 3.96(dd, J=10.9, 8.6 Hz, 1H), 4.01-4.11(m, 1H), 4.47(t, J=4.9 Hz, 1H), 4.53(d, J=18.7 Hz, 1H), 4.59(t, J=4.9 Hz, 1H), 4.67(dt, J=12.3, 8.5 Hz, 1H), 5.41(d, J=18.0 Hz, 1H), 7.43-7.50(m, 1H), 7.58-7.72(m, 2H), 8.03(d, J=8.2 Hz, 1H)。 MS(ESI)m/z: 371[M＋H]＋ 利用HPLC之分析； （分析條件）管柱：CHIRALPAKTM IG（Daicel化學工業公司製造）（0.46 cm× 15 cm）、40℃、溶出溶劑：乙醇、流速：2 ml/min.、檢測：UV（254 nm） （分析結果）於上述分析條件下分析標記化合物，結果保持時間為14.4分鐘，光學純度為 ＞ 99%ee，旋光性為(-)。
藥理試驗例 使用實施例1~17之化合物，進行以下之藥理試驗。
源自胎鼠腦之神經細胞培養系中之乙醯膽鹼（ACh）釋出量之測定 (1)大鼠初代神經細胞培養 自胎生18日齡之Sprague-Dawley系（SD）大鼠（Nihon Charles River公司）單離中隔區而供於培養。具體而言，於異氟醚麻醉下，自孕鼠無菌摘出胎鼠。自胎鼠摘出腦，將其浸於冰浴冷卻L-15培養基（11415-064，賽默飛世爾科技公司（Thermo Fisher Scientific））中。於立體顯微鏡下自該摘出腦採取中隔區。將採取之中隔區於含有0.25%胰蛋白酶（15050-065，賽默飛世爾科技公司）及0.01% DNA酶（D5025-150KU，西格瑪公司（Sigma））之酵素溶液中、於37℃下進行30分鐘之酵素處理，藉此使細胞分散。此時，酵素反應係藉由加入滅活過之馬血清（26050-088，賽默飛世爾科技公司）而終止。將該酵素處理溶液於1000 rpm下離心分離3分鐘，去除上清液。於所獲得之細胞塊中加入10 mL之培養基。作為培養基，於達爾伯克改良伊格爾培養基（044-29765，WAKO）中使用N2補充劑（17502-048，賽默飛世爾科技公司）、1 mM之丙酮酸鈉（11360-070，賽默飛世爾科技公司）及青黴素-鏈黴素（15140-1221，賽默飛世爾科技公司）。將加入有培養基之細胞塊藉由緩慢之移液操作而使細胞再次分散後，再次於1000 rpm下離心分離3分鐘，去除上清液。於所獲得之細胞塊中加入10 mL之培養基，利用40 μm尼龍網格（Cell Strainer）對該細胞分散液進行過濾，去除細胞塊，藉此獲得神經細胞懸浮液。利用培養基稀釋該神經細胞懸浮液，加入10%滅活過之牛血清（26140-079，賽默飛世爾科技公司）及10%滅活過之馬血清。其後，以初始培養密度成為1.2 × 105 cells/cm2 之方式以100 μL/孔接種於預先經聚D-離胺酸塗覆之96孔培養器（354461，康寧公司（CORNING））。將接種之細胞於5%CO2 -95%空氣下、於37℃培養箱中培養兩天後，將培養基全量更換為新培養基120 μL，繼續培養5天。 (2) 化合物添加 於培養第7天如下所述進行藥物添加。利用培養基將試驗化合物之DMSO液稀釋為最終濃度之10倍。將神經生長因子（450-01，派普泰克公司（PEPRO TECH, INC.））製備為0.3 ng/mL。分別以15 μL/孔添加該等2種溶液，並充分混合。最終DMSO濃度設為0.1%以下。又，於對照組僅添加DMSO及NGF。 (3) ACh釋出量測定 於添加藥物1天後，利用以下之方法藉由HPLC測定ACh釋出量。於培養基回收後之孔中以100 μL/孔加入溫緩衝液，立即去除緩衝液。其後，以120 μL/孔加入添加有10 μM之膽鹼、10 μM之毒扁豆鹼及6 mM之KCl之緩衝液。緩衝液係利用殺菌水製備為125 mM之NaCl、25 mM之4-(2-羥基乙基）-1-哌𠯤乙磺酸、1.2 mM之KH2 PO4 、1.2 mM之MgSO4 、2.2 mM之CaCl2 （2H2 O）、10 mM之葡萄糖，使溶液之最終pH為7.4。將加入有緩衝液之96孔培養器於5%CO2 -95%空氣下、於37℃培養箱中培養40分鐘後，回收80 μL。於回收之緩衝液中加入6 μL之內部標準液IPHC（5 × 10-7 M），將緩衝液轉移至HPLC測定用管中，供於HPLC測定。結果將於相對於對照組之緩衝液中ACh濃度之百分比（% of control）下顯示出化合物之作用且顯示出相對於對照組之緩衝液中ACh濃度上升20%的化合物濃度示於以下之表1。
[表1]
   實施例 相對於對照組之ACh量顯示出增加20%以上之作用之濃度（μM）
1 0.03
2 0.03
3 0.03
4 0.1
5 0.03
6 0.03
7 0.3
8 0.03
9 0.03
10 0.03
11 0.03
12 0.03
13 0.03
14 0.03
15 0.3
16 0.03
17 0.03
大鼠中隔區之膽鹼乙醯轉移酶（ChAT）mRNA表現量之測定 (1) 化合物投予 於本試驗中使用體重約250-350 g之Sprague-Dawley系雄性大鼠（Nihon Charles River公司）。試驗化合物溶解於0.01 N鹽酸中，進行經口投予。 (2) 取樣 於投予試驗化合物第24小時，於戊巴比妥麻醉下摘出腦組織。於冰浴冷卻下截斷中隔區，利用液態氮進行冷凍後於-80℃下保管。 (3) ChAT mRNA表現量之測定 於RNA精製中使用RNeasyTM Plus Mini Kit（#74136：德國凱傑公司（QIAGEN））。RNA精製係利用套組之附件中所記載之方法實施。於RNA精製後，總RNA濃度係利用QIAxpert Instrument（德國凱傑公司）進行測定。cDNA係使用SuperScriptTM VILOTM cDNA Synthesis Kit（#11754：賽默飛世爾科技公司）製備。cDNA之製備係利用套組之附件中所記載之方法實施。將製備之cDNA利用不含RNA酶的水稀釋4倍，將稀釋之cDNA溶液作為樣本。分別混合10 μl、1 μl、4 μl及5 μl之TaqmanTM 通用PCR反應混合物（＃4304437：賽默飛世爾科技公司）、TaqmanTM Gene Expression Assays, INVENTORIED（＃4331182：賽默飛世爾科技公司）、不含RNA酶的水及cDNA溶液，製成測定樣本溶液。定量聚合酶鏈反應（qPCR）係使用ABI PRISMTM 7900HT（賽默飛世爾科技公司），利用螢光探針法實施。分析係利用SDS2.4（賽默飛世爾科技公司）實施。結果以百分比算出試驗化合物投予組之ChAT mRNA表現量相對於媒劑投予組之ChAT mRNA表現量之增加量。將結果示於以下之表2。
[表2]
實施例 投予量 相對於媒劑投予組之ChAT mRNA表現量之增加量（%）
1 10 mg/kg 76.0
2 3 mg/kg 53.6
3 1 mg/kg 53.7
4 1 mg/kg 51.5
5 1 mg/kg 54.1
6 0.3 mg/kg 67.7
7 3 mg/kg 76.6
8 3 mg/kg 71.8
9 3 mg/kg 111.5
10 1 mg/kg 50.6
11 1 mg/kg 54.7
12 1 mg/kg 44.7
13 1 mg/kg 59.7
14 1 mg/kg 63.6
15 1 mg/kg 49.0
16 3 mg/kg 42.5
17 3 mg/kg 44.6
[圖1]係表示實施例10中所獲得之化合物之X射線結晶結構分析之結果的ORTEP圖。 [圖2]係表示實施例15中所獲得之化合物之X射線結晶結構分析之結果的ORTEP圖。

Claims (8)

  1. 一種化合物或其藥劑學上所容許之鹽，該化合物選自以下之組：(3aS,14aR)-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2'：4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0074-1
     (+)-7,7,12-三甲基-1,2,3,6,7,10,11,12,13,15b-十氫吡啶并[4",3"：4',5']噻吩并[2',3'：4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[2,1-c][1,4]二氮呯-5,9-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0074-2
     (3aS,14aR)-10-氟-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2'：4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0074-3
     (3aS,14aR)-5,8,10-三甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-環戊并[f]吡啶并[3",2"：4',5']呋喃并[3',2'：4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0075-4
     (3aR,14aR)-10-氟-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2'：4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0075-5
     (3aR,14aR)-5-甲基-10-(三氟甲基)-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2'：4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0075-6
     (3aS,14aR)-10-(2,2-二氟乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[4",3"：4',5']噻吩并[2',3'：4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0075-7
     (3aS,14aR)-10-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[4",3"：4',5']噻吩并[2',3'：4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0076-8
     (3aS,14aR)-10-(二氟甲基)-5-甲基-3,3a,5,6-四氫-1H-苯并呋喃并[3',2'：4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13(2H,14aH)-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0076-9
     (2R,15bR)-2-氟-7,7,12-三甲基-1,2,3,6,7,10,11,12,13,15b-十氫-5H,9H-吡啶并[4",3"：4',5']噻吩并[2',3'：4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[2,1-c][1,4]二氮呯-5,9-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0076-10
     (+)-(3a,14a-順式)-5,10-二甲基-1,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫呋喃并[3,4-f]吡啶并[4",3"：4',5']噻吩并[2',3'：4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0076-11
     (3aS,14aS)-5-甲基-10-(三氟甲基)-2,3,3a,5,6,14a-六氫-1H-苯并呋喃 并[3',2'：4,5]嘧啶并[1,2-a]環戊并[f][1,4]二氮呯-4,13-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0077-12
     (-)-12-(2-甲氧基乙基)-7,7-二甲基-1,2,3,6,7,10,11,12,13,15b-十氫-5H,9H-吡啶并[4",3"：4',5']噻吩并[2',3'：4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[2,1-c][1,4]二氮呯-5,9-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0077-15
     (3aR,14aR)-5,9-二甲基-2,3,3a,5,6,8,9,10,11,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[3",4"：4',5']噻吩并[3',2'：4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0077-16
     (3aR,10R,14aR)-10-氟-2,5-二甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-苯并[4',5']噻吩并[2',3'：4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮：[化15]
    Figure 109106904-A0305-02-0078-18
     (3aS,14aS)-10-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,9,10,11,12,14a-十氫-1H-環戊并[f]吡啶并[4",3"：4',5']噻吩并[2',3'：4,5]嘧啶并[1,2-a][1,4]二氮呯-4,13-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0078-19
     及(-)-(3a,14a-反式)-2-(2-氟乙基)-5-甲基-2,3,3a,5,6,14a-六氫-1H-苯并呋喃并[3',2'：4,5]嘧啶并[1,2-a]吡咯并[3,4-f][1,4]二氮呯-4,13-二酮：
    Figure 109106904-A0305-02-0078-20
  2. 一種醫藥組合物，其含有如請求項1之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。
  3. 如請求項2之醫藥組合物，其進而含有藥劑學上所容許之添加物。
  4. 如請求項2或3之醫藥組合物，其係神經細胞活化劑。
  5. 如請求項2或3之醫藥組合物，其用以治療認知功能障礙。
  6. 一種認知功能障礙之治療劑，其含有如請求項1之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。
  7. 如請求項1之化合物或其藥劑學上所容許之鹽，其用於治療認知功能障礙。
  8. 一種如請求項1之化合物或其藥劑學上所容許之鹽之用途，其用以製造認知功能障礙之治療劑。
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