TWI794189B - 用作神經胜肽ｙ受體之調節劑的與抗體偶合之環狀酪胺酸酪胺酸胜肽化合物 - Google Patents

用作神經胜肽ｙ受體之調節劑的與抗體偶合之環狀酪胺酸酪胺酸胜肽化合物 Download PDF

Info

Publication number
TWI794189B
TWI794189B TW106136950A TW106136950A TWI794189B TW I794189 B TWI794189 B TW I794189B TW 106136950 A TW106136950 A TW 106136950A TW 106136950 A TW106136950 A TW 106136950A TW I794189 B TWI794189 B TW I794189B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
fmoc
peptide
cyclic pyy
seq
conjugate
Prior art date
Application number
TW106136950A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201827456A (zh
Inventor
馬克 馬希雷格
雷蒙 派契
張瑞
馬丁 凱斯
沙米那 朗瓦拉
詹姆斯 雷歐納德
勞爾 卡馬喬
麥可 杭特
凱薩琳 達基諾
威爾森 愛德華茲
羅納德 史旺森
蹇文嬰
越梅 章
馬克 沃
友善 戚
Original Assignee
比利時商健生藥品公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 比利時商健生藥品公司 filed Critical 比利時商健生藥品公司
Publication of TW201827456A publication Critical patent/TW201827456A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI794189B publication Critical patent/TWI794189B/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6845—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a cytokine, e.g. growth factors, VEGF, TNF, a lymphokine or an interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0052—Small organic molecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C07K1/1072—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/12—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by hydrolysis, i.e. solvolysis in general
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/57545—Neuropeptide Y
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本發明包含接合物，該接合物包含接合至環狀PYY胜肽之單株抗體。本發明亦關於醫藥組成物及使用該醫藥組成物之方法。該新穎之接合物用於預防、治療或改善在本文中揭示之疾病及病症。

Description

用作神經胜肽Y受體之調節劑的與抗體偶合之環狀酪胺酸酪胺酸胜肽化合物
本發明大致上關於新穎的抗體偶合環狀酪胺酸酪胺酸胜肽(PYY)接合物，其係神經胜肽Y2受體調節劑。本發明亦關於醫藥組成物及使用該醫藥組成物之方法。新穎的抗體偶合化合物可用於預防、治療或改善疾病及病症，諸如肥胖、第2型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性、及異常血脂症等其他者。
【相關申請案之交互參照】
本申請案主張美國臨時專利申請案62/413,613(申請日2016年10月27日)及美國臨時專利申請案62/413,586(申請日2016年10月27日)之優先權。各揭示內容全文以引用方式併入本文中。
【電子提交序列表之參照】
本申請案含有序列表，該序列表已以ASCII格式序列表經EFS-Web電子提交，檔案名稱為「PRD3436 Sequence Listing」，創建日期2017年10月23日，檔案大小135kb。經EFS-Web提交之序列表係本說明書之一部分，其全文以引用方式併入本文中。若在本文中描述之關於SEQ ID NO：1至156結構之資訊與經EFS-Web以檔案名稱「PRD3436 Sequence Listing」電子提交之序列 表之間有任何不一致，以本文中之資訊為主。
神經胜肽Y(NPY)受體係由一群密切相關稱為「NPY家族」的胜肽促效劑活化，NPY家族對於各受體亞型具有不同親和性。NPY、酪胺酸-酪胺酸胜肽(PYY)及胰多胜肽(PP)的長度皆為36個胺基酸，係NPY受體家族之促效劑。NPY係一種神經傳導物，與正腎上腺素及腎上腺素一起合成、共儲存及釋放。NPY係含量最豐富且廣泛分布於人類及齧齒動物中樞神經系統(CNS)的胜肽之一，表現於與進食及壓力有關之腦部區域。在周邊神經系統中，含有NPY之神經元大多為交感神經性。PYY主要由腸內分泌細胞合成及釋放。NPY及PYY受到內皮絲胺酸蛋白酶(二-胜肽基胜肽酶IV(DPP-IV))切割產生NPY3-36及PYY3-36，其等係NPY受體家族Y2及Y5亞型之選擇性配體。PP主要見於胰島細胞，但與儲存胰島素、升糖素或體抑素之胰島細胞不同。
到目前為止已識別出五種不同的NPY受體，理解其中四種與人類生理學相關。受體Y1、Y2及Y5優先結合NPY及PYY，然而Y4受體優先結合PP。Y2及Y5受體亦受到NPY3-36及PYY3-36的有效活化。一般來說，NPY配體家族對於各種NPY受體異構體具有可變選擇性，先前報告PYY3-36對於Y2異構體具有中至強度選擇性。這些受體之各者經由百日咳毒素敏感性Gαi之偶合以抑制腺苷酸環化酶。
PYY係由內分泌L-細胞回應於食物而分泌，特別是在脂肪攝入之後。PYY1-36主要存在於空腹狀態，PYY3-36則為人類餐後可見的主要形式，血漿濃度與攝取的卡路里數呈現負相關。已證明PYY3-36可減少人類、猴、大鼠、兔、及小鼠的攝食(Batterham RL等人Nature 2002 Aug 8；418(6898)：650-4；Batterham RL等人N Engl J Med 2003 Sep 4；349(10)：941-8；Challis BG等人，Biochem Biophys Res Commun 2003 Nov 28；311(4)：915-9)。PYY3-36的厭食 效果一般相信是由Y2所媒介，此係基於優先結合此受體及Y2缺損小鼠喪失進食效果(Batterham RL，等人Nature 2002 Aug 8；418(6898)：650-4)。弓狀核注射PYY3-36減少大鼠及小鼠的攝食(Batterham等人Nature 2002 Aug 8；418(6898)：650-4)，建議下視丘Y2受體之參與可媒介這些效應。對進食之急性效應亦顯示轉移成對ob/ob小鼠、DIO小鼠及Zucker fa/fa小鼠體重的劑量依賴性效應(Pittner RA等人Int J Obes relat Metab Disord 2004 Aug；28(8)：963-71)。此外，PYY3-36亦顯示改善DIO齧齒動物中胰島素媒介之葡萄糖清除及胰島素敏感性(Vrang N等人，Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol Aug；291(2)：R367-75)。減重手術導致增加的循環PYY免疫反應性(le Roux CW等人，Ann Surg 2006 Jan；243(1)；108-14)，其似乎在術後體重減輕上發揮作用。
鑒於其在控制食慾及攝食上之作用以及其在哺乳動物胃腸道中的抗分泌及促吸收效應，PYY3-36可能有效治療肥胖及相關病況以及一些胃腸病症。然而，PYY3-36本身作為治療劑的治療效用受限於其快速代謝及所導致之短循環半衰期(Torang等人，Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.310：R866-R874(2016))。
因此，獲得具有相對於PYY3-36改善的代謝穩定性及藥物動力學特性的PYY類似物或其衍生物係為所欲。該等具有延長體內半衰期之衍生物將提供較長作用期間之Y2受體調節，使彼等適合作為需要該調節之個體的治療劑。
前述討論僅供針對相關技藝面臨之問題本質提供較佳理解，且不應以任何方式視為對先前技術之承認，而且文中所引用之任一參考文獻亦不應視為承認該等參考文獻構成本申請案之「先前技術」。
在一通常態樣中，本發明關於新穎的抗體偶合環狀酪胺酸酪胺酸胜肽(PYY)化合物，其係神經胜肽Y2受體調節劑。
在本文中提供接合物，其包含偶合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其抗原結合片段，其中該環狀PYY胜肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示：
Figure 106136950-A0202-12-0004-608
 其中p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時係1；橋(BRIDGE)係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-；Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K；Z9係G或K；Z11係D或K；Z22係A或K；Z23係S或K；Z26係A或H；Z30係L、W、不存在、或K；但Z30只有在q係1時不存在； Z34係
Figure 106136950-A0202-12-0004-606
或
Figure 106136950-A0202-12-0004-607
； Z35係
Figure 106136950-A0202-12-0005-609
、
Figure 106136950-A0202-12-0005-610
、
Figure 106136950-A0202-12-0005-611
、或
Figure 106136950-A0202-12-0005-612
； 其中該衍生物係經一或多個選自由醯胺化、醣化、胺甲醯化(carbamylation)、硫酸化、磷酸化、環化、脂化、及聚乙二醇化所組成之群組之過程修飾的式I之化合物。在某些實施例中，該環狀PYY胜肽係式I之化合物或經一或多個選自由醯胺化、脂化、及聚乙二醇化所組成之群組之過程修飾的該式I之環狀PYY胜肽之衍生物、或其醫藥上可接受之鹽。
在某些實施例中，該環狀PYY胜肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時係1；橋係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH2-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-；Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經
Figure 106136950-A0202-12-0005-613
取代，其中i係0至24之整數，且X=Br、 I或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z9係G或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經
Figure 106136950-A0202-12-0005-614
取代，其中i係0至24之整數，且X=Br、 I或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl； Z11係D或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經
Figure 106136950-A0202-12-0006-615
取代，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z22係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經
Figure 106136950-A0202-12-0006-616
取代，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z23係S或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經
Figure 106136950-A0202-12-0006-617
取代，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z26係A或H；Z30係L或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0006-618
或
Figure 106136950-A0202-12-0006-619
取代； Z34係
Figure 106136950-A0202-12-0006-620
或
Figure 106136950-A0202-12-0006-621
；且 Z35係
Figure 106136950-A0202-12-0006-622
、
Figure 106136950-A0202-12-0006-623
、
Figure 106136950-A0202-12-0006-624
、或
Figure 106136950-A0202-12-0006-625
。
在某些實施例中，該環狀PYY胜肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中： p係0或1；m係0、1、2、3、或5；n係1、2、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時可能係1；橋係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-；Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0007-626
取代， Z9係G或K，Z11係D或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0007-632
Figure 106136950-A0202-12-0007-627
、-C(O)CH2Br取代， Z22係A或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0007-628
取代， Z23係S或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0007-629
取代， Z26係A或H，Z30係L或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0007-630
或
Figure 106136950-A0202-12-0007-631
取代， Z34係
Figure 106136950-A0202-12-0008-633
或
Figure 106136950-A0202-12-0008-634
； Z35係
Figure 106136950-A0202-12-0008-635
、
Figure 106136950-A0202-12-0008-636
、
Figure 106136950-A0202-12-0008-637
、或
Figure 106136950-A0202-12-0008-638
。
在某些實施例中，該環狀PYY胜肽係選自由SEQ ID NO：1、73至100、及147至156所組成之群組、或其醫藥上可接受之鹽。
在某些實施例中，該單株抗體或其抗原結合片段經由連接子在該環狀PYY胜肽的離胺酸殘基處共價連接至該環狀PYY胜肽。連接子可例如包含選自由下列所組成之群組中之連接子：聚乙二醇(PEG)8-三唑基-CH2CH2CO-PEG4、2至24個PEG單元之PEG鏈、含有2至10個碳原子之烷基鏈、(Gly4Ser)j其中j=1至4、(AlaPro)u其中u=1至10、及鍵(bond)。
在某些實施例中，式I中之Z7、Z9、Z11、Z22及Z23只有一者係離胺酸，且該離胺酸經由該連接子共價連接至該單株抗體或其抗原結合片段之工程改造半胱胺酸殘基。
亦提供包含偶合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其抗原結合片段之接合物，其中該接合物包含選自由SEQ ID NO：102至127所組成之群組之序列或其醫藥上可接受之鹽，其中mAb代表該單株抗體或其抗原結合片段，且]2代表1或2個該環狀PYY胜肽共價接合至該mAb。
在某些實施例中，該單株抗體或其抗原結合片段包含分別具有SEQ ID NO：141、142、143、144、145、及146之多胜肽序列的重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、及輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3。在某些實施例中，該單離單 株抗體包含具有SEQ ID NO：137之多胜肽序列的重鏈可變域(VH)、及具有SEQ ID NO：139之多胜肽序列的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，該單離單株抗體進一步包含Fc部分。在某些實施例中，該單離單株抗體包含具有SEQ ID NO：138之多胜肽序列的重鏈(HC)、及具有SEQ ID NO：140之多胜肽序列的輕鏈(LC)。
亦提供包含偶合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其抗原結合片段之接合物，其中該單株抗體或其抗原結合片段包含分別具有SEQ ID NO：141、142、143、144、145、及146之多胜肽序列的重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、及輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，較佳地該單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：137之多胜肽序列的重鏈可變域(VH)、及具有SEQ ID NO：139之多胜肽序列的輕鏈可變域(VL)，且更佳地該單株抗體包含具有SEQ ID NO：138之多胜肽序列的重鏈(HC)及具有SEQ ID NO：140之多胜肽序列的輕鏈(LC)；該環狀PYY胜肽包含選自由SEQ ID NO：1、73至100、及147至156所組成之群組的多胜肽序列、或其醫藥上可接受之鹽；且該單株抗體或其抗原結合片段直接或經由連接子在該環狀PYY胜肽的殘基7、9、11、22或23處、較佳地在該環狀PYY胜肽的離胺酸殘基11處接合至該環狀PYY胜肽。
亦提供製造本發明之接合物之方法。該等方法包含使導入該環狀PYY胜肽之側鏈上的親電子劑與該單株抗體或其抗原結合片段之SEQ ID NO：143的半胱胺酸殘基之巰基反應，藉以在該環狀PYY胜肽與該單株抗體或其抗原結合片段之間建立共價鍵結，該環狀PYY胜肽之側鏈較佳的是該環狀PYY胜肽之離胺酸殘基的側鏈，該親電子劑較佳的是溴乙醯胺或順丁烯二醯亞胺。
亦提供醫藥組成物，其包含本發明之接合物及醫藥上可接受之載劑。
亦提供用於治療或預防有需要之對象的疾病或病症之方法，其中該疾病或病症係選自由下列所組成之群組：肥胖、第I型或第II型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良、高血糖 症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及其他心血管風險因子諸如高血壓及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及濕疹。該等方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之醫藥組成物。
亦提供減少有需要之對象的攝食之方法。該等方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之醫藥組成物。
亦提供調節有需要之對象的Y2受體活性之方法。該等方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之醫藥組成物。
在某些實施例中，該醫藥組成物係經由注射投予。在某些實施例中，該醫藥組成物係與至少一種抗糖尿劑組合投予。該抗糖尿劑可為例如類升糖素胜肽-1受體調節劑。在某些實施例中，該醫藥組成物係與利拉魯肽(liraglutide)組合投予。
亦提供包含本發明之接合物之套組，較佳地進一步包含利拉魯肽及用於注射之裝置。
亦提供製造本發明之醫藥組成物之方法。該等方法包含組合該接合物與醫藥上可接受之載劑以獲得該醫藥組成物。
本發明之進一步態樣、特色及優點將藉由閱讀下列本發明之實施方式及申請專利範圍更佳地理解。
前述發明內容以及下文中本申請案之較佳實施例的實施方式在結合附圖閱讀時可更有利理解。然而應理解的是，本申請案並不受限於圖式中所示確切實施例。
圖1：顯示根據本發明之一實施例的通用胜肽-mAb接合策略。X代表導入治療胜肽側鏈上的親電子劑，諸如溴乙醯胺或順丁烯二醯亞胺，該親電子劑與經工程改造至半衰期延長mAb之CDR中的Cys殘基的巰基定點反應，產生胜肽與mAb之間的共價鍵結。
圖2：在PH9H5_VH(SEQ ID NO：129)及PH9L3_VL(SEQ ID NO：128)中經選定以供取代之CDR殘基摘要。經Cys取代之殘基係以粗體且畫底線表示。
圖3：化合物1在飲食誘導肥胖小鼠(DIO)小鼠中之藥物動力學。
圖4：化合物1在石蟹獼猴中之藥物動力學。
圖5：化合物1處理之DIO小鼠之攝食量：急性給藥。
圖6：化合物1處理之DIO小鼠之體重減輕：急性給藥。
圖7：化合物1處理之DIO小鼠之攝食量：慢性給藥。
圖8：化合物1處理之DIO小鼠之體重減輕：慢性給藥。
圖9：化合物1與利拉魯肽組合處理之DIO小鼠之體重減輕：慢性給藥。
圖10：顯示展現出開始利拉魯肽之前3週、利拉魯肽治療1週、及利拉魯肽投予後2週的平均每週攝食量的圖。指示治療之平均每週攝食量減少百分比對3週基線平均值。
圖11A至11D：顯示展現出化合物1加上利拉魯肽對肥胖恆河獼猴之葡萄糖、胰島素、及三酸甘油酯之效應的圖。圖11A顯示展現出化合物1單一療法(PYY)及利拉魯肽組合療法(PYY+Lira)對葡萄糖水準之效應的圖。圖11B顯示展現出化合物1單一療法(PYY)及利拉魯肽組合療法(PYY+Lira)對胰島素水準之效應的圖。圖11C顯示展現出化合物1單一療法(PYY)及利拉魯肽組合療法(PYY+Lira)對HOMA-IR之效應的圖。圖11D顯示展現出化合物1單一療法(PYY)及利拉魯肽組合療法(PYY+Lira)對三酸甘油酯水準之效應的圖。
圖12A至12D：顯示化合物1加上利拉魯肽對肥胖恆河獼猴之膽固醇及肝臟酶之效應的圖。圖12A顯示展現出化合物1單一療法(PYY)及利拉魯肽組合療法(PYY+Lira)對膽固醇水準之效應的圖。 圖12B顯示展現出化合物1單一療法(PYY)及利拉魯肽組合療法(PYY+Lira)對HDL水準之效應的圖。圖12C顯示展現出化合物1單一療法(PYY)及利拉魯肽組合療法(PYY+Lira)對ALT水準之效 應的圖。圖12D顯示展現出化合物1單一療法(PYY)及利拉魯肽組合療法(PYY+Lira)對AST水準之效應的圖。
各篇公開案、論文、及專利已於先前技術及整份說明書引用或描述；此等參考文獻之各者全文係以引用方式併入本文中。在本說明書中所包括之對於文件、行動、材料、裝置、物品、或其類似物的論述，目的在於提供關於本發明的脈絡。此等論述並非承認，任一或所有此等情事形成了關於任何所揭示或請求之發明的先前技術部分。
除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術及科學用語，均與本發明有關技術領域中具有通常知識者所通常了解之意義相同。在其他方面，在本文中所使用的某些用語具有如本說明書所闡述之意義。
必須注意的是，本文及附加之申請專利範圍中所使用之單數形式「一(a/an)」及「該(the)」皆包括複數指稱，除非上下文另有明確說明。
除非以其他方式說明，在本文中描述之任何數值諸如濃度或濃度範圍應理解為在所有情況下皆受到用語「約(about)」之修飾。因此，數值一般包括記載值之±10%。例如，濃度1mg/mL包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同樣地，濃度範圍1%至10%(w/v)包括0.9%(w/v)至11%(w/v)。如本文中所使用，明示使用之數值範圍包括所有可能的子範圍、在該範圍內之所有個別數值，包括在該等範圍內之整數及數值之分數，除非上下文以其他方式清楚指示。
除非以其他方式指示，在一系列元件之前的用語「至少(at least)」應理解為係指該序列中的每一元件。所屬技術領域中具有通常知識者將認可或僅使用例行實驗即可確定本文所述之本發明的特定實施例的許多等效物。該等等效物意欲涵蓋於本發明中。
如本文中所使用，用語「包含(comprises、comprising)」、「包括(includes、including)」、「具有(has、 having)」、「含有(contains或containing)」或彼等之任何其他變體將理解為隱含包括所述整體或整體之群，但不排除任何其他整體或整體之群，且意欲為非排他性或開放式的。例如，包含表列元件之組成物、混合物、過程、方法、物品、或設備未必局限於僅該些元件，但可包括未明示表列或為該組成物、混合物、過程、方法、物品、或設備所固有之其他元件。進一步地，除非明示相反說明，「或(or)」係指包括性的「或」而非排他性的「或」。例如，下列任一者皆滿足條件A或B：A為真(或存在)且B為偽(或不存在)、A為偽(或不存在)且B為真(或存在)、及A及B兩者皆為真(或存在)。
亦應理解的是，在本文中使用之用語「約(about)」、「大約(approximately)」、「通常(generally)」、「實質上(substantially)」及類似用語當用於較佳發明之組分的尺寸或特徵時，指示所述尺寸/特徵並非嚴格邊界或參數，且不排除將為所屬技術之技術領域中具有通常知識者所理解的彼等之功能上相同或類似的微小變異。在最小限度上，包括數值參數之該等指稱將包括使用所屬技術領域中已接受之數學及工業原理(例如，四捨五入、測量或其他系統誤差、製造公差、等)不會改變最低有效數位(least significant digit)之變異。
在二或更多個核酸或多胜肽序列(例如，環狀PYY3-36多胜肽序列、抗體輕鏈或重鏈序列)上下文中之用語「同一(identical)」或「同一性(identity)百分比」，係指將二或更多個序列或子序列比較及對準以達最大對應性時，如使用下列序列比較演算法之一或使用本揭露所屬技術領域中已知方法目視檢查測量，二或更多個序列或子序列相同或具有特定百分比的相同胺基酸殘基或核苷酸。
為進行序列比較，一般將一個序列當作參考序列，並使測試序列與其比較。當使用序列比較演算法時，將測試及參考序列輸入電腦中，指定子序列座標(若有需要)，並指定序列演算法程式參數。序列比較演算法接著基於指定程式參數，計算(多個)測試序列相對於參考序列之序列同一性百分比。
序列比較之最佳比對可藉由例如Smith & Waterman,Adv.Appl.Math.2：482(1981)之局部同源性演算法、Needleman & Wunsch,J.Mol.Biol.48：443(1970)之同源性比對演算法、Pearson & Lipman,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85：2444(1988)之搜尋相似性方法、這些演算法的電腦化實施(Wisconsin Genetics Software Package,Genetics Computer Group,575 Science Dr.,Madison,WI中之GAP、BESTFIT、FASTA、及TFASTA)、或目視檢查(通常見Current Protocols in Molecular Biology,F.M.Ausubel等人，eds.,Current Protocols,a joint venture between Greene Publishing Associates,Inc.and John Wiley & Sons,Inc.,(1995 Supplement)(Ausubel))進行。
適合用於判定序列同一性及序列相似性百分比之演算法實例為BLAST及BLAST 2.0演算法，彼等分別描述於Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215：403-410及Altschul等人(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-3402。執行BLAST分析之軟體由美國國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information)供大眾使用。
二個核酸序列或多胜肽係實質上同一的進一步指示在於第一核酸編碼之多胜肽及第二核酸編碼之多胜肽具有如下所述之免疫交叉反應性。因此，例如當二個胜肽只有保守性取代之差異時，多胜肽一般係實質上與第二多胜肽同一。二個核酸序列係實質上同一的另一個指示在於二個分子在如下述之嚴謹條件下彼此雜交。
如本文中所使用之「對象(subject)」意指任何動物，較佳的是哺乳動物，最佳的是人類。如本文中所使用的用語「哺乳動物(mammal)」，其涵蓋任何哺乳動物。哺乳動物之實例包括(但不限於)牛、馬、羊、豬、貓、狗、小鼠、兔、天竺鼠、猴、人類等，更佳的是人類。
與本發明之方法有關的用語「投予(administering)」，係指一種藉由使用本發明之接合物或其形式、組成物或藥劑來治療性地或預防性地預防、治療或改善如本文中所述之症候群、病症或疾病 的方法。該等方法包括在療程期間的不同時間投予有效量的該接合物、其形式、組成物或藥劑，或者以組合之形式同時投予有效量的該接合物、其形式、組成物或藥劑。本發明之方法應被理解為包括所有習知的治療性治療方案。
用語「有效量(effective amount)」意指能在組織系統、動物或人類中引發生物或醫學反應之活性接合物或藥劑的量，該反應為研究者、獸醫師、醫師、或其他臨床醫師所尋求，且包括預防、治療或改善欲治療之症候群、病症、或疾病、或欲治療之症候群、病症、或疾病的症狀。
本文中所使用之用語「組成物(composition)」意欲涵蓋包含特定量之特定成分的產品，以及任何由特定成分以特定量組合所直接或間接形成之產品。
如本文中所使用，用語「偶合(coupled)」係指將二或更多個物件接合或連接在一起。當用於化學或生物化合物時，偶合可指二或更多個化學或生物化合物之間的共價連接。舉非限制性實例來說，本發明之抗體可與受到關注的胜肽偶合以形成抗體偶合胜肽。抗體偶合胜肽可經由經設計以將抗體接合至胜肽的特定化學反應形成。在某些實施例中，本發明之抗體可與本發明之胜肽經由連接子共價偶合。連接子可例如先共價連接至抗體或胜肽，接著再共價連接至胜肽或抗體。
本文中所使用之用語「連接子(linker)」係指包含將抗體共價連接至胜肽之共價或原子鏈的化學分子。連接子可例如包括但不限於胜肽連接子、烴連接子、聚乙二醇(PEG)連接子、聚丙二醇(PPG)連接子、多醣連接子、聚酯連接子、由PEG及埋置雜環組成之混成連接子、及烴鏈。
本文中所使用之用語「接合物(conjugate)」係指共價偶合至醫藥活性部份之抗體或其片段。用語「接合至(conjugated to)」係指本發明之抗體或其片段直接或經由連接子間接共價連結至或共價連接至醫藥活性部份，較佳地治療胜肽。舉非限制性實例來說，抗體可 為本發明之單株抗體且醫藥活性部份可為治療胜肽，諸如受到關注之環狀PYY胜肽。
在本文中描述之胜肽序列係根據通常慣例書寫，其中胜肽之N端區域寫在左側，且C端區域寫在右側。雖然已知胺基酸具有異構形式，但除非以其他方式明示指示，否則以L型胺基酸表示。
抗體
在一通常態樣中，本發明關於新穎抗體，其經工程改造成非靶向性且含有能夠用於以定點方式化學接合(即偶合)醫藥活性部份諸如治療胜肽(例如，環狀PYY胜肽)之半胱胺酸殘基，以使得抗體偶合胜肽相較於單獨胜肽具有延長/增加半衰期。本文中所使用之在抗體上下文中之用語「非靶向性(non-targeting)」係指不特異性結合至任何體內標靶之抗體。如本文中所使用，「特異性結合至標靶(specifically binds to a target)」的抗體係指以1×10-8M或更小、較佳地5×10-9M或更小、1×10-9M或更小、5×10-10M或更小、或1×10-10M或更小之KD結合至標靶抗原之抗體。用語「KD」係指解離常數，此常數獲自Kd對Ka之比例(即Kd/Ka)，並以莫耳濃度(M)表示。抗體之KD值可使用本揭露所屬技術領域中之方法判定。例如，抗體之KD可藉由使用表面電漿共振(諸如使用生物感測器系統例如Biacore®系統)、或使用生物層干涉技術(諸如Octet RED96系統)判定。抗體之KD的值越小，抗體結合至標靶抗原的親和性越高。
單株抗體(完整或其片段)可用來作為半衰期延長部份。單株抗體係廣為研究的蛋白質，已被利用及表徵於體內用途，因此能使彼等具有延長體內半衰期之機制及彼等體內之排除機制係廣為理解。此外，單株抗體之二個「臂(arm)」的空間分離及呈現可有利地用於有效雙價呈現治療部份(即治療胜肽)。已發展其中有毒素或其他小分子藥物經化學連結至單株抗體之治療劑，但一般利用的單株抗體結合至特定抗原且使抗體-藥物接合物靶向至優先表現抗原之受到關 注之組織/細胞，且藥物/小分子一般以不影響抗體之抗原結合之方式連接至抗體。
就治療胜肽-mAb接合物而言，半衰期延長單株抗體之抗原特異性結合並非所欲。因此，使用不預期特異性結合任何標靶之重鏈(HC)及輕鏈(LC)可變(V)結構域對來製備本發明之可偶合、非靶向性單株抗體。為了獲得可偶合、非靶向性單株抗體，半胱胺酸殘基係經工程改造至選定非靶向性抗體之互補決定區(CDR)之一。醫藥活性部份(例如治療胜肽/化合物)可含有適當化學部份以允許醫藥活性部份接合至非靶向性單株抗體的工程改造半胱胺酸殘基。根據本發明之實施例之胜肽-單株抗體常規接合策略係顯示於圖1。
本文中使用之用語「抗體(antibody)」為廣義上的用意且包括非人類(例如鼠類、大鼠)、人類、人類調適(human-adapted)、人化及嵌合單株抗體、抗體片段、雙特異性或多特異性抗體、二聚體、四聚體或多聚體抗體、及單鏈抗體。
任何脊椎動物物種的抗體輕鏈可分派為兩種截然不同類型(即kappa(κ)及lambda(λ))之一者，視其等恆定域的胺基酸序列而定。因此，本發明之抗體可含有κ或λ輕鏈恆定域。根據具體實施例，本發明之抗體包括來自小鼠或人類抗體之重鏈及/或輕鏈恆定區。除了重鏈及輕鏈恆定域之外，抗體含有抗原結合區，其係由輕鏈可變區及重鏈可變區構成，該輕鏈可變區及重鏈可變區各含有三個結構域(即互補決定區1至3；(CDR1、CDR2、及CDR3))。輕鏈可變區結構域替代地稱為LCDR1、LCDR2、及LCRD3，且重鏈可變區結構域替代地稱為HCDR1、HCRD2、及HCDR3。
免疫球蛋白可分為五大類，即IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，取決於重鏈恆定域(constant domain)胺基酸序列。IgG係五種免疫球蛋白中最穩定的一種，在人類的血清半衰期約為23天。IgA及IgG係進一步次分為下列同型(isotype)：IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。四種IgG亞型各具有不同的生物功能稱為效應功能。這些效應功能通常經由與Fc受體(FcγR)交互作用或藉由結合C1q及固 定補體所媒介。結合至FcγR可導致抗體依賴性細胞媒介性細胞溶解，然而結合至補體因子可導致補體媒介性細胞溶解。為了延長治療胜肽半衰期之能力而利用之本發明之抗體不具有或具有最少效應功能，但保留其結合FcRn之能力，與FcRn之結合可為抗體藉以具有延長體內半衰期之主要手段。
在一實施例中，本發明關於單離抗體或其抗原結合片段，該單離抗體或其抗原結合片段包含具有完整人類Ig生殖系V基因序列之輕鏈可變區、及除了具有SEQ ID NO：143之胺基酸序列之HCDR3外具有完整人類Ig生殖系V基因序列之重鏈可變區，其中該抗體或其抗原結合片段不特異性結合至任何人類體內抗原。在某些實施例中，本發明關於接合物，該接合物包含單離抗體或其抗原結合片段及與該單離抗體或其抗原結合片段接合之醫藥活性部份(例如本發明之環狀PYY胜肽)，該單離抗體或其抗原結合片段包含具有完整人類Ig生殖系V基因序列之輕鏈可變區、及除了具有SEQ ID NO：143之胺基酸序列之HCDR3外具有完整人類Ig生殖系V基因序列之重鏈可變區，其中該抗體或其抗原結合片段不特異性結合至任何人類體內抗原。在本揭露中，關於根據本發明之實施例之抗體或其抗原結合片段之用語「包含抗體或其抗原結合片段及與該抗體或其抗原結合片段接合之醫藥活性部份的接合物(a conjugate comprising an antibody or antigen binding fragment thereof and a pharmaceutically active moiety conjugated thereto)」可與用語「接合至醫藥活性部份之抗體或其抗原結合片段(an antibody or antigen binding fragment thereof conjugated to a pharmaceutically active moiety)」交換使用。
本文中所使用之用語「抗原結合片段(antigen-binding fragment)」係指抗體片段諸如例如雙體抗體(diabody)、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、雙硫鍵穩定性Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、雙特異性dsFv(dsFv-dsFv')、雙硫鍵穩定性雙體抗體(ds雙體抗體)、單鏈抗體分子(scFv)、單結構域抗體(sdab)、scFv二聚體(雙價雙體抗體)、由包含包含一或多個CDRs之抗體的一部分形成之多特異性抗體、駱 駝化單結構域抗體、奈米抗體、結構域抗體、雙價結構域抗體、或任何其他結合至抗原但不包含完整抗體結構之抗體片段。抗原結合片段能夠結合至親本抗體(parent antibody)或親本抗體片段所結合之相同抗原。根據具體實施例，抗原結合片段包含輕鏈可變區、輕鏈恆定區、及Fd區段(即包括在Fab片段中之重鏈部分)。根據其他具體實施例，抗原結合片段包含Fab及F(ab')。
本文中所使用之用語「單鏈抗體(single-chain antibody)」係指所屬技術領域中習知之單鏈抗體，其包含由約15至約20個胺基酸之短胜肽連接的重鏈可變區及輕鏈可變區。本文中所使用之用語「單結構域抗體(single domain antibody)」係指所屬技術領域中習知之單結構域抗體，其包含重鏈可變區及重鏈恆定區或其僅包含重鏈可變區。
用語「經單離之抗體或抗體片段(isolated antibody or antibody fragment)」係指實質上不含其他具有不同抗原特異性之抗體的抗體或抗體片段(例如，特異性結合標靶抗原的經單離之抗體實質上不含不特異性結合標靶抗原的抗體)。此外，經單離之抗體或抗體片段可實質上不含其他細胞材料和/或化學物。
抗體可變區係由被三個「抗原結合部位(antigen binding site)」中斷的「架構(framework)」區所組成。該等抗原結合部位係使用各種用語定義：(i)互補決定區(CDR)(三個在VH(HCDR1,HCDR2,HCDR3)，且三個在VL(LCDR1,LCDR2,LCDR3))係基於序列變異性(Wu and Kabat J Exp Med 132：211-50,1970；Kabat等人Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991)。(ii)「高度變異區(Hypervariable region)」、「HVR」、或「HV」，三個在VH(H1,H2,H3)且三個在VL(L1,L2,L3)，其係指如Chothia及Lesk所定義般在結構上係高度變異之抗體可變域中的區域(Chothia and Lesk Mol Biol 196：901-17,1987)。其他用語包括「IMGT-CDR」(Lefranc等人，Dev Comparat Immunol 27：55-77,2003)及「特異 性決定殘基用途(Specificity Determining Residue Usage,SDRU)」(Almagro Mol Recognit 17：132-43,2004)。國際免疫遺傳學(International ImMunoGeneTics,IMGT)資料庫(http：//www_mgt_org)提供了標準化編號及抗原結合部位的定義。CDR、HV及IMGT描繪之間的對應性係描述於Lefranc等人，Dev Comparat Immunol 27：55-77,2003。
「架構(framwork)」或「架構序列(framwork sequence)」為可變區中被定義為抗原結合部位以外的其餘序列。因為抗原結合部位可用如上所述之各種用語來定義，架構之確切胺基酸序列取決於如何定義抗原結合部位。
在本發明之一實施例中，單離抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區及重鏈可變區，該輕鏈可變區具有胺基酸序列分別為SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145及SEQ ID NO：146之LCDR1、LCDR2及LCDR3，且該重鏈可變區具有胺基酸序列分別為SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：142及SEQ ID NO：143之HCDR1、HCDR2及HCDR3。
在另一實施例中，單離抗體進一步包含衍生自人類IgG4 Fc區之Fc區。人類IgG4 Fc區相較於其他IgG亞型具有減少之結合FcγR及補體因子的能力。較佳地，Fc區含有具有消除效應功能之取代的人類IgG4 Fc區。因此，單離抗體進一步包含具有經修飾的人類IgG4 Fc區的Fc區，該經修飾的人類IgG4 Fc區含有一或多個下列取代：以脯胺酸取代殘基233處之麩胺酸、以丙胺酸或纈胺酸取代殘基234處之苯丙胺酸、及以丙胺酸或麩胺酸取代殘基235處之白胺酸(EU編號，Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.U.S.Dept.of Health and Human Services,Bethesda,Md.,NIH Publication no.91-3242)。藉由以Ala 取代殘基297處(EU編號)之Asn移除IgG4 Fc區中之N-連結的醣化部位係另一種確保消除殘基效應活性之方法。
較佳地，本發明之抗體以藉由雙硫鍵及各種非共價交互作用連接在一起的二聚體形式存在。因此，可用於本發明之抗體之Fc部可為含有取代諸如絲胺酸取代位置228(EU編號)之脯胺酸，以穩定重鏈二聚體形成且防止半-IgG4 Fc鏈形成的取代的人類IgG4 Fc區。
在另一實施例中，重鏈中之C端Lys殘基係經移除，如同在重組生產單株抗體中常見的情況。
「人類抗體(human antibody)」係指具有重鏈及輕鏈可變區的抗體，其中架構及抗原結合部位兩者皆衍生自人源序列。若該抗體含有恆定區，則該恆定區亦衍生自人源序列。
如果該抗體的可變區係得自使用人類生殖系免疫球蛋白或重排(rearranged)免疫球蛋白基因的系統，則人類抗體包含「衍生自(derived from)」人源序列的重或輕鏈可變區。該等系統包括經展示在噬菌體上的人類免疫球蛋白基因庫(gene library)、及基因轉殖非人類動物(諸如帶有人類免疫球蛋白基因位點的小鼠)，如本文中所述。「人類抗體」在與人類生殖系或重排免疫球蛋白序列比較時可能含有胺基酸差異，此係由於例如天然發生之體細胞突變或在架構或抗原結合部位中刻意引入取代所致。一般而言，「人類抗體」係在胺基酸序列上與由人類生殖系或重排免疫球蛋白基因所編碼的胺基酸序列具有至少約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性。在一些情況下，「人類抗體」可能含有自人類架構序列分析衍生出的共有架構序列，例如Knappik等人所述(J Mol Biol 296：57-86,2000)，或合併至經展示在噬菌體上的人類免疫球蛋白基因庫的合成HCDR3，例如Shi等人(J Mol Biol 397：385-96,2010)及國際專利公開號WO2009/085462中所述。抗原結合部位衍生自非人類物種的抗體不包括在「人類抗體」的定義中。
經單離之人化抗體可為合成的。人類抗體若衍生自人類免疫球蛋白序列，則可使用諸如合併有合成CDR之噬菌體展示(phage display)及/或合併有合成架構的系統來產生，或者可在體外進行基因突變以改良抗體性質，從而得到在體內(in vivo)人類抗體生殖系貯庫(repertoire)內不會天然存在的抗體。
本文中所使用之用語「重組抗體(recombinant antibody)」包括所有藉由重組手段製備、表現、創建或單離之抗體，諸如自經過人類免疫球蛋白基因之基因轉殖或染色體轉殖的動物(如小鼠)或由其製備的融合瘤單離之抗體，自經轉形(transform)以表現抗體之宿主細胞單離之抗體，自重組的組合抗體庫單離之抗體，及藉由任何涉及將人類免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的其他手段製備、表現、創建、或單離之抗體，或在體外使用Fab臂交換所產生的抗體。
本文中使用之用語「單株抗體(monoclonal antibody)」係指由單一分子組成之抗體分子的製劑。本發明之單株抗體可藉由融合瘤方法、嗜菌體展示技術、單淋巴細胞基因選殖技術、或藉由重組DNA方法製備。例如，單株抗體可藉由融合瘤生產，該融合瘤包括獲自基因轉殖非人類動物(諸如基因轉殖小鼠或大鼠)的B細胞，該B細胞具有包含人類重鏈轉殖基因及輕鏈轉殖基因的基因體。
在某些實施例中，用語「mAb」係指具有包含SEQ ID NO：137之可變重鏈(VH)序列及包含SEQ ID NO：139之可變輕鏈(VL)序列的單株抗體。在某些實施例中，mAb係具有包含SEQ ID NO：138之重鏈(HC)序列及包含SEQ ID NO：140之輕鏈(LC)序列的全人類單株抗體。在某些實施例中，SEQ ID NO：138的位置446之離胺酸殘基係可選地漏失。
本文中所使用之用語「嵌合抗體(chimeric antibody)」係指其中免疫球蛋白分子之胺基酸序列係衍生自二或更多個物種之抗體。輕鏈及重鏈二者之可變區通常對應具有所欲特異性、親和性及能力之衍生自一個哺乳動物物種(例如小鼠、大鼠、兔等)的抗體可變區，然而恆定區對應衍生自另一個哺乳動物物種(例如人類)的抗體序列以避免在該物種引發免疫反應。
本文中所使用之用語「多特異性抗體(multispecific antibody)」係指包含複數個免疫球蛋白可變域序列的抗體，其中複數個中的第一免疫球蛋白可變域序列具有對第一表位的結合特異性或包含缺乏任何已知結合特異性的生殖系序列，且複數個中的第二免疫球蛋白可變域序列具有對第二表位的結合特異性或包含缺乏任何已知結合特異性的生殖系序列，且其中第一及/或第二免疫球蛋白可變域可選地包括接合醫藥活性部份(例如，治療胜肽)。在一實施例中，第一及第二表位係在相同抗原例如相同蛋白質(或多聚體蛋白質的次單元)上。在一實施例中，第一及第二表位重疊或實質上重疊。在一實施例中，第一及第二表位不重疊或實質上不重疊。在一實施例中，第一及第二表位係在不同抗原例如不同蛋白質(或多聚體蛋白質的不同次單元)上。在一實施例中，第一及第二免疫球蛋白可變域包括相同的接合醫藥活性部份。在一實施例中，第一及第二免疫球蛋白可變域包括不同的接合醫藥活性部份。在一實施例中，只有第一免疫球蛋白可變域包括接合醫藥活性部份。在一實施例中，只有第二免疫球蛋白可變域包括接合醫藥活性部份。在一實施例中，多特異性抗體包含第三、第四、或第五免疫球蛋白可變域。在一實施例中，多特異性抗體係雙特異性抗體分子、三特異性抗體、或四特異性抗體分子。
本文中所使用之用語「雙特異性抗體(bispecifc antibody)」係指結合不多於二個表位或二個抗原且/或包含二個接合醫藥活性部份(例如，相同或不同醫藥活性部份)的多特異性抗體。雙特異性抗體之特徵在於第一免疫球蛋白可變域序列具有對第一表位的結合特異性或包含缺乏任何已知結合特異性的生殖系序列，且第二免疫球蛋白可變域序列具有對第二表位的結合特異性或包含缺乏任何已知結合特異性的生殖系序列，且其中第一及/或第二免疫球蛋白可變域可選地包括接合醫藥活性部份。在一實施例中，第一及第二表位係在相同抗原例如相同蛋白質(或多聚體蛋白質的次單元)上。在一實施例中，第一及第二表位重疊或實質上重疊。在一實施例中，第一及第二表位係在不同抗原例如不同蛋白質(或多聚體蛋白質的不同次單 元)上。在一實施例中，第一及第二免疫球蛋白可變域包括相同的接合醫藥活性部份。在一實施例中，第一及第二免疫球蛋白可變域包括不同的接合醫藥活性部份。在一實施例中，只有第一免疫球蛋白可變域包括接合醫藥活性部份。在一實施例中，只有第二免疫球蛋白可變域包括接合醫藥活性部份。在一實施例中，雙特異性抗體包含第一重鏈可變域序列及輕鏈可變域序列及第二重鏈可變域序列及輕鏈可變域序列，該第一重鏈可變域序列及輕鏈可變域序列具有對第一表位的結合特異性或包含缺乏任何已知結合特異性的生殖系序列，該第二重鏈可變域序列及輕鏈可變域序列具有對第二表位的結合特異性或包含缺乏任何已知結合特異性的生殖系序列，且其中第一及/或重鏈可變域可選地包括接合醫藥活性部份。在一實施例中，第一及第二重鏈可變域包括相同的接合醫藥活性部份。在一實施例中，第一及第二重鏈可變域包括不同的接合醫藥活性部份。在一實施例中，只有第一重鏈可變域包括接合醫藥活性部份。在一實施例中，只有第二重鏈可變域包括接合醫藥活性部份。
本文中所用之「全長抗體(full length antibody)」係指具有兩個全長抗體重鏈及兩個全長抗體輕鏈之抗體。全長抗體重鏈(HC)由廣為周知之重鏈可變域及恆定域VH、CH1、CH2、及CH3組成。全長抗體輕鏈(LC)由廣為周知之輕鏈可變域及恆定域VL及CL組成。全長抗體可在任一或兩個重鏈中缺乏C端離胺酸(K)。
用語「Fab臂(Fab-arm)」或「半分子(half molecule)」係指特異性結合抗原之一個重鏈-輕鏈對。
全長雙特異性抗體可使用例如兩個單特異性雙價抗體之間的Fab臂交換(或半分子交換)來製造，其於各半分子中之重鏈CH3介面引入取代以利於兩個具有不同特異性之抗體半分子的異二聚體在活體外無細胞環境中或者使用共表現形成。該Fab臂交換反應係雙硫鍵異構化反應及CH3域之解離-締合的結果。親本單特異性抗體的絞鏈區(hinge region)中的重鏈雙硫鍵被還原。其中一個親本單特異性抗體所生成的游離半胱胺酸與第二親本單特異性抗體分子之半胱胺 酸殘基形成重鏈間雙硫鍵，同時該等親本抗體之CH3域藉由解離-締合而釋出及重新形成。該等Fab臂之CH3域可經工程改造以利於異二聚化而非同二聚化。所生成之產物係具有兩個Fab臂或半分子之雙特異性抗體，這兩個Fab臂或半分子可各自結合不同表位。
本文中關於抗體所用之「同二聚化(homodimerization)」係指具有相同CH3胺基酸序列之兩個重鏈的交互作用。本文中關於抗體所用之「同二聚體(homodimer)」係指具有兩個有相同CH3胺基酸序列之重鏈的抗體。
本文中關於抗體所用之「異二聚化(heterodimerization)」係指具有不同CH3胺基酸序列之兩個重鏈的交互作用。本文中關於抗體所用之「異二聚體(heterodimer)」係指具有兩個有不同CH3胺基酸序列之重鏈的抗體。
「鈕扣結構」策略(見例如PCT國際專利申請案公開號WO 2006/028936)可用於產生全長雙特異性抗體。簡言之，在人類IgG中形成CH3域介面之選定胺基酸可在影響CH3域交互作用的位置處突變以促進異二聚體形成。將具有小側鏈之胺基酸(孔)引入特異性結合第一抗原之抗體的重鏈中，並將具有大側鏈之胺基酸(鈕)引入特異性結合第二抗原之抗體的重鏈中。在共表現這兩個抗體之後，具有「孔」之重鏈與具有「鈕」之重鏈優先交互作用而導致異二聚體形成。形成鈕和孔之例示性CH3取代對係(表現為第一重鏈之第一CH3域中的經修飾位置/第二重鏈之第二CH3域中的經修飾位置)：T366Y/F405A、T366W/F405W、F405W/Y407A、T394W/Y407T、T394S/Y407A、T366W/T394S、F405W/T394S及T366W/T366S_L368A_Y407V。
可使用其他策略，諸如使用靜電交互作用促進重鏈異二聚化，其取代一個CH3表面之帶正電荷殘基及第二CH3表面之帶負電荷殘基，如在美國專利公開號US2010/0015133；美國專利公開號US2009/0182127；美國專利公開號US2010/028637或美國專利公開號US2011/0123532中所述。在其他策略中，異二聚化可藉由下列取 代來促進(表現為第一重鏈之第一CH3域中的經修飾位置/第二重鏈之第二CH3域中的經修飾位置)：L351Y_F405A_Y407V/T394W、T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V、T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V、L351Y_Y407A/T366A_K409F、L351Y_Y407A/T366V_K409F、Y407A/T366A_K409F、或T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W，如在美國專利公開號US2012/0149876或美國專利公開號US2013/0195849中所述。
除了上述方法之外，雙特異性抗體可在無細胞環境中體外產生，此係藉由在兩個單特異性同二聚體抗體之CH3區中引入非對稱突變，且在還原條件中(以讓雙硫鍵異構化)自兩個親本單特異性同二聚體抗體形成雙特異性異二聚體抗體，其係根據描述於以下文獻中之方法：國際專利公開號WO2011/131746。在該等方法中，第一單特異性雙價抗體及第二單特異性雙價抗體係經工程改造以在CH3域具有某些促進異二聚體穩定性之取代；該等抗體係在足以讓絞鏈區中之半胱胺酸進行雙硫鍵異構化的還原條件下一起培養；從而藉由Fab臂交換來產生該雙特異性抗體。培養條件可最佳地被回復為非還原性(non-reducing)。可使用之例示性還原劑係2-巰基乙胺(2-MEA)、二硫蘇糖醇(dithiothreitol,DTT)、二硫赤蘚醇(dithioerythritol,DTE)、麩胱甘肽、參(2-羧乙基)膦(TCEP)、L-半胱胺酸、及β-巰基乙醇，還原劑較佳係選自由下列所組成之群組：2-巰基乙胺、二硫蘇糖醇、及參(2-羧乙基)膦。舉例而言，可使用在至少20℃之溫度且有至少25mM之2-MEA存在下或於至少0.5mM之二硫蘇糖醇存在且在5至8之pH下(例如在7.0之pH下或在7.4之pH下)培養至少90min。
整個說明書中抗體恆定區中的胺基酸殘基編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)中所述的EU索引(EU index)實施，除非另有明確說明。
接合物
在另一通常態樣中，本發明關於接合物，其包含以定點方式共價接合至醫藥活性部份諸如合成的治療胜肽(例如，環狀PYY胜肽)之本發明之抗體，以使得抗體偶合胜肽相較於單獨胜肽具有延長/增加半衰期。本發明亦關於醫藥組成物及使用該醫藥組成物之方法。接合物可用於預防、治療、或改善疾病或病症，諸如肥胖、第2型糖尿病、代謝症候群(即X症候群)、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良(例如，葡萄糖不耐)、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及其他心血管風險因子諸如高血壓及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及濕疹等其他者。
在某些實施例中，本發明之抗體經修飾以包含至少一個能夠接合至醫藥活性部份以延長/增加該醫藥活性部份之半衰期的半胱胺酸殘基取代。在某些實施例中，至少一個半胱胺酸殘基取代包含在抗體的互補決定區中。在某些實施例中，至少一個半胱胺酸殘基取代位在重鏈互補決定區(HCDR)中。在某些實施例中，至少一個半胱胺酸殘基取代位在HCDR3中，其中HCDR3包含SEQ ID NO：143之胺基酸序列。在某些實施例中，包含HCDR3(包含SEQ ID NO：143之胺基酸序列)之抗體具有至少一個能夠接合至醫藥活性部份之額外半胱胺酸取代。
在某些實施例中，醫藥活性部份可包含連接子。連接子可經化學修飾以允許抗體與醫藥活性部份之接合。連接子可例如包括但不限於胜肽連接子、烴連接子、聚乙二醇(PEG)連接子、聚丙二醇(PPG)連接子、多醣連接子、聚酯連接子、由PEG及埋置雜環組成之混成連接子、或烴鏈。PEG連接子可例如包含2至24個PEG單元。
在某些實施例中，本發明之單株抗體接合至一、二、三、四、五、或六個受到關注之醫藥活性部份(例如，(多個)治療胜肽)。在較佳實施例中，非靶向單株抗體接合至二個受到關注之醫藥活性部份。在其中單株抗體接合至至少二個受到關注之醫藥活性部份之某些實施例中，受到關注之醫藥活性部份可為相同醫藥活性部份或可為不同醫藥活性部份。
接合本發明之抗體與本發明之醫藥活性部份之方法係所屬技術領域中已知。簡言之，本發明之抗體可經還原劑(例如，TCEP(參(2-羧基乙基)膦)還原、經純化(例如，藉由蛋白質A吸附或凝膠過濾)、並與醫藥活性部份接合(例如，藉由在允許接合之條件下提供冷凍乾燥胜肽至經還原抗體)。在接合反應後，接合物可藉由離子交換層析法或疏水性交互作用層析法(HIC)與蛋白質A吸附之最終純化步驟純化。在某些實施例中，本發明之抗體可在還原之前利用HIC方法純化。有關接合方法更詳細的說明，見例如實例103及Dennler等人，Antibodies 4：197-224(2015)。
在本文中提供接合物，其包含偶合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其抗原結合片段，其中該環狀PYY胜肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示：
Figure 106136950-A0202-12-0028-639
 其中p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時係1； 橋(BRIDGE)係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-；Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K；Z9係G或K；Z11係D或K；Z22係A或K；Z23係S或K；Z26係A或H；Z30係L、W、不存在、或K；但Z30只有在q係1時不存在； Z34係
Figure 106136950-A0202-12-0029-640
或
Figure 106136950-A0202-12-0029-641
； Z35係
Figure 106136950-A0202-12-0029-642
、
Figure 106136950-A0202-12-0029-643
、
Figure 106136950-A0202-12-0029-644
、或
Figure 106136950-A0202-12-0029-645
； 其中該衍生物係經一或多個選自由醯胺化、醣化、胺甲醯化(carbamylation)、硫酸化、磷酸化、環化、脂化、及聚乙二醇化所組成之群組之過程修飾的式I之化合物。
在某些實施例中，該環狀PYY胜肽係經一或多個選自由醯胺化、脂化、及聚乙二醇化所組成之群組之過程修飾的式I之環狀PYY胜肽之衍生物、或其醫藥上可接受之鹽。
在某些實施例中，該環狀PYY胜肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5； n係1、2、3、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時係1；橋(BRIDGE)係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-；Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經
Figure 106136950-A0202-12-0030-647
Figure 106136950-A0202-12-0030-646
取代，其中i係0至24之整數，且X=Br、 I或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z9係G或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 106136950-A0202-12-0030-648
 其中t係0、1、或2；u係0或1；且v係14、16、或18；
Figure 106136950-A0202-12-0030-649
Figure 106136950-A0202-12-0031-651
Figure 106136950-A0202-12-0031-650
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或 Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z11係D或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 106136950-A0202-12-0031-652
 其中w係0、1、2、或4；x為0或1；且y係14、16、或18；
Figure 106136950-A0202-12-0032-655
Figure 106136950-A0202-12-0032-653
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或 Cl、
Figure 106136950-A0202-12-0032-656
Figure 106136950-A0202-12-0032-654
、-C(O)CH2I、 -C(O)CH2Cl或-C(O)CH2Br；Z22係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 106136950-A0202-12-0032-657
Figure 106136950-A0202-12-0033-660
 或
Figure 106136950-A0202-12-0033-658
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I 或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z23係S或K；其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 106136950-A0202-12-0033-661
 或
Figure 106136950-A0202-12-0033-659
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I 或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z26係A或H；Z30係L、W、不存在、或K，但Z30只有在q係1時不存在，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 106136950-A0202-12-0033-662
Figure 106136950-A0202-12-0034-663
 其中r係0、1、或2；s係0或1；且q係14、16、或18；或
Figure 106136950-A0202-12-0034-664
Figure 106136950-A0202-12-0035-670
 Z34係
Figure 106136950-A0202-12-0035-665
或
Figure 106136950-A0202-12-0035-666
； Z35係
Figure 106136950-A0202-12-0035-667
、
Figure 106136950-A0202-12-0035-668
、
Figure 106136950-A0202-12-0035-669
、或
Figure 106136950-A0202-12-0035-671
在某些實施例中，該環狀PYY胜肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3、或5；n係1、2、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時係1；橋(BRIDGE)係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-； Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0036-674
Figure 106136950-A0202-12-0036-672
取代； Z9係G或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0036-673
取代， 其中t係0；u係1；且v係14；Z11係D或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 106136950-A0202-12-0036-675
 其中w係0、或4；x係1；且y係14；
Figure 106136950-A0202-12-0036-676
Figure 106136950-A0202-12-0037-679
Figure 106136950-A0202-12-0037-677
、-C(O)CH2Br、
Figure 106136950-A0202-12-0037-682
 Z22係A或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0037-680
Figure 106136950-A0202-12-0037-678
取代； Z23係S或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0037-681
Figure 106136950-A0202-12-0038-683
取代； Z26係A或H；Z30係L或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：
Figure 106136950-A0202-12-0038-684
 其中r係0、或2；s係1；且q係14、16、或18；或
Figure 106136950-A0202-12-0038-685
Figure 106136950-A0202-12-0039-692
 Z34係
Figure 106136950-A0202-12-0039-686
或
Figure 106136950-A0202-12-0039-687
； Z35係
Figure 106136950-A0202-12-0039-688
、
Figure 106136950-A0202-12-0039-689
、
Figure 106136950-A0202-12-0039-690
、或
Figure 106136950-A0202-12-0039-691
。
在某些實施例中，接合物包含接合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其片段，其中環狀PYY胜肽係選自由SEQ ID NO：1至100及SEQ ID NO：147至156所組成之群組。在一較佳實施例中，接合物包含接合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其片段，其中環狀PYY胜肽係選自由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：73至100、及SEQ ID NO：147至156所組成之群組。
在某些實施例中，單株抗體或其抗原結合片段經由連接子在該環狀PYY胜肽的離胺酸殘基處共價連接至該環狀PYY胜肽。連接子可例如包含選自由下列所組成之群組中之連接子：聚乙二醇(PEG)8-三唑基-CH2CH2CO-PEG4、2至24個PEG單元之PEG鏈、 含有2至10個碳原子之烷基鏈、(Gly4Ser)j其中j=1至4、(AlaPro)u其中u=1至10、或鍵(bond)。
根據本發明之實施例之單株抗體或其抗原結合片段可使用所屬技術領域中已知之方法在環狀PYY的一或多個胺基酸位置處(諸如PYY之胺基酸殘基4、7、9、10、11、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、30、或31)接合至環狀PYY胜肽。胺基酸殘基編號遵循hPYY3-36之編號。在某些實施例中，式I中之Z7、Z9、Z11、Z22及Z23只有一者係離胺酸，且該離胺酸經由該連接子共價連接至該單株抗體或其抗原結合片段之工程改造半胱胺酸殘基。在一較佳實施例中，根據本發明之實施例之單株抗體或其抗原結合片段在環狀PYY之殘基11處接合至環狀PYY胜肽。在另一較佳實施例中，親電子劑(諸如溴乙醯胺或順丁烯二醯亞胺)經導入環狀PYY之側鏈上(諸如環狀PYY胜肽之殘基11的離胺酸之胺基側鏈)，且親電子劑與經工程改造至單株抗體或其片段之CDR(較佳地HCDR3)中的Cys殘基之巰基定點反應，藉以在環狀PYY胜肽與單株抗體或其片段之間建立共價鍵結。更佳的是，環狀PYY胜肽係選自由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：73至100、及SEQ ID NO：147至156所組成之群組。在一實施例中，親電子劑係直接導入環狀PYY之側鏈上。在另一實施例中，親電子劑係經由連接子間接導入環狀PYY之側鏈上。
亦提供醫藥組成物，其包含本發明之接合物且進一步包含醫藥上可接受之載劑。
亦提供包含偶合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其抗原結合片段之接合物，其中接合物分別以式IIIa至b、IVa至b、Va至b、及/或VIa至b表示。
Figure 106136950-A0202-12-0041-693
Figure 106136950-A0202-12-0041-694
Figure 106136950-A0202-12-0041-695
Figure 106136950-A0202-12-0041-696
Figure 106136950-A0202-12-0042-697
Figure 106136950-A0202-12-0042-698
Figure 106136950-A0202-12-0042-699
Figure 106136950-A0202-12-0042-700
在式IIIa至b、IVa至b、Va至b、及VIa至b中，x可為例如1、2、3、4、5、或6，較佳的是2。
link 1可為例如G、βA、-COCH2OCH2CH2OCH2CH2NH-、γ-胺基丁醯基、GG、-CO(CH2)mSCH2-(但當Link 2=-NH-，m=1、2)或鍵；link 2可為例如-CH2-、苄基、乙基三唑基、-NH-、或鍵；n可為例如1、2、或3；X可為例如-S-或-CH2-；Z3可為例如I或鍵；Z4可為例如K、S、或R；Z30可為例如L、W、K(mPEG16)、或K(mPEG12)；Z34可為例如Q，其中該Q的α-醯胺氮可選地經N-甲基化；Z35可為例如R，其中該R的α-醯胺氮可選地經N-甲基化、或R經去羰基化導致psi-(Z35Z36)醯胺鍵、或R的α-醯胺氮經N-甲基化同時經去羰基化導致psi-(Z35Z36)醯胺鍵；Z36可為例如Y(Tyr)、Cha(β-環己基丙胺酸)、Aic(2-胺基茚烷-2-羧酸)或F(Phe)，其中該F可選地經氟(4-F-Phe)、氯(4-Cl-Phe)、溴(4-Br-Phe)、碘(4-I-Phe)、胺基(4-NH2-Phe)對位取代；且Link 3可例如包含任何下列對離胺酸側鏈之醯胺化：聚乙二醇(PEG)8-三唑基-CH2CH2CO-PEG4(包括
Figure 106136950-A0202-12-0043-701
)、2至24個PEG單元之 PEG鏈(包括
Figure 106136950-A0202-12-0043-702
)、含有2至10個碳原子之烷基鏈 (包括
Figure 106136950-A0202-12-0043-703
)、(Gly4Ser)j其中j=1至4、(AlaPro)u其中u=1至10，或-NH-Link 3-可經鍵取代。
亦提供包含經由連接子(L)偶合至環狀PYY胜肽(cPYY)之單株抗體或其抗原結合片段(mAb)之接合物：cPYY-L]2-mAb，其中 該接合物包含選自由SEQ ID NO：102至127所組成之群組之環狀PYY序列或其醫藥上可接受之鹽，mAb代表根據本發明之實施例之單株抗體或其抗原結合片段，且]2代表1或2個環狀PYY胜肽共價接合至該mAb。
在本文中亦提供與人類PYY3-36(hPYY3-36)具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、或99%序列同一性之PYY的N端至側鏈環狀類似物。判定二個類似物之間的序列同一性之方法實例，係將二個胜肽
Figure 106136950-A0202-12-0044-705
 (SEQ ID 1)及hPYY3-36
Figure 106136950-A0202-12-0044-704
(SEQ ID NO：101)對準。類似物相對於hPYY(3-36)之序列同一性係藉由將對準殘基總數減去不同殘基數(即，對準的同一殘基數)除以hPYY3-36中之殘基總數計算。在此實例中，不同殘基係D11(其經交換成經取代的K11)、隨後V31(經hC31交換)、且最終R35經去羰基化。因此，在該實例中，序列同一性係(34-3)/34×100。
環狀PYY胜肽
PYY3-36係由遠端腸道L細胞分泌之內源性激素，其係Y2受體促效劑，具有抑制攝食之作用。鑒於其在控制食慾及攝食上之作用以及其在哺乳動物胃腸道中的抗分泌及促吸收效應，PYY3-36可能有效治療肥胖及相關病況以及一些胃腸病症。然而，PYY3-36本身作 為治療劑的治療效用受限於其快速代謝及短循環半衰期。因此，本發明大致上關於經修飾之PYY3-36接合物，其延長PYY3-36胜肽之半衰期且減少胜肽於體內之代謝。
在本發明之某些實施例中，經修飾的PYY3-36胜肽係環狀PYY胜肽。用語「環狀(cyclic)PYY胜肽(peptide)」、「環狀PYY3-36類似物(analog)」及「環狀PYY3-36胜肽類似物(peptide analog)」可交換使用。可用於接合物之環狀PYY胜肽實例係描述於美國專利申請案62/413,613(申請日2016年10月27日)及美國專利申請案號______標題「Cyclic peptide tyrosine tyrosine compounds as modulators of neuropeptide receptors」(申請日與本申請案同一天，代理人案號為PRD3411)，二案之內容全文特此以引用方式併入本文中。
本文中所使用之用語「NTSC-PYY」意欲描述PYY之N端-至-側鏈環狀類似物。
在本文中描述之胜肽序列係根據通常慣例書寫，其中胜肽之N端區域寫在左側，且C端區域寫在右側。雖然已知胺基酸具有異構形式，但除非以其他方式明示指示，否則以L型胺基酸表示。為了方便描述本發明之分子，使用各種胺基酸(包括單字母及三字母代碼二者)及官能性部份之習知及非習知縮寫。這些縮寫係所屬技術領域中具有通常知識者所熟知，但為了清晰列出如下：A=Ala=丙胺酸；R=Arg=精胺酸；N=Asn=天冬醯胺酸；D=Asp=天冬胺酸；βA=βAla=β-丙胺酸；C=Cys=半胱胺酸；hC=hCys=升半胱胺酸；E=Glu=麩胺酸；Q=Gln=麩醯胺酸；G=Gly=甘胺酸；H=His=組胺酸；I=Ile=異白胺酸；L=Leu=白胺酸；K=Lys=離胺酸；Nle=正白胺酸；F=Phe=苯丙胺酸；P=Pro=脯胺酸；S=Ser=絲胺酸；T=Thr=蘇胺酸；W=Trp=色胺酸；Y=Tyr=酪胺酸且V=Val=纈胺酸。
為求方便，用於命名本發明之NTSC-PYY胜肽的胺基酸殘基編號規則遵循hPYY3-36之規則。經導入NTSC-PYY胜肽之相 對於在hPYY3-36對應位置之天然殘基的特定胺基酸代替，係以適當胺基酸代碼後接取代位置來指示。因此，NTSC-PYY胜肽中之「S4」係指其中絲胺酸代替hPYY3-36之對應天然lys4殘基之胜肽。類似地，NTSC-PYY胜肽中之「hC31」係指其中升半胱胺酸代替hPYY3-36之對應天然val31殘基之胜肽。發生在NTSC-PYY胜肽內之額外胺基酸代替係根據此慣例描述，且將為所屬技術領域中具有通常知識者所認可。
亦為求方便，本發明之NTSC-PYY胜肽所使用之命名慣例從環中涉及之N端殘基開始，以左至右的方向併入環中涉及之胺基殘基連同彼等之間的(多個)鍵聯基。在所有情況中，環之N端胺基酸殘基藉由其α-胺基官能基連結至鍵聯基，其進而連接至NTSC-PYY胜肽位置31處之胺基酸的側鏈殘基。因此，「環-(I3-m-COPhCH2-hC31)」係用於描述NTSC-PYY胜肽之環，其中Ile3之α-胺基官能基係經間甲苯甲酸殘基醯基化，其甲基進一步藉由硫醚鍵連結至hCys31殘基之側鏈。類似地，「環-(K4-CO(CH2)2NHCOCH2-hC31)」係用於描述NTSC-PYY胜肽之環，其中天然Ile3殘基經刪除且其lys4(目前成為N端)之α-胺基官能基經3-乙醯胺基丙醯基醯基化，其乙醯胺基亞甲基碳藉由硫醚鍵連接至hCys31殘基之側鏈。
離胺酸殘基可併入hPYY3-36序列之不同位置，以提供方便的官能性柄(functional handle)以供進一步衍生。離胺酸殘基可經修飾以供直接或間接偶合至單株抗體。在間接偶合至單株抗體時，離胺酸殘基可經修飾以包含允許環狀PYY胜肽偶合至單株抗體之連接子。所屬技術領域中具有通常知識者將認可相關同源物亦可如此被有效採用且在本文中考慮。
胜肽序列中出現的用語「K(γ-Glu)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經麩胺酸之γ-羧基醯基化。
用語「K(γ-Glu-Pal(棕櫚醯基))」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經N-十六-1-醯基麩胺酸之γ-羧基醯基化。
用語「K(γ-Glu-Stear(硬脂醯基))」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經N-十八-1-醯基麩胺酸之γ-羧基醯基化。
用語「K(γ-Glu-Arach(花生醯基))」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經N-十二-1-醯基麩胺酸之γ-羧基醯基化。
用語「K(OEG)(8-胺基-3,6-二氧雜辛醯基)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經8-胺基-3,6-二氧雜辛酸醯基化。
用語「(OEG)2」表示二個OEG單元經由醯胺鍵結連續連結在一起(即17-胺基-10-側氧基-3,6,12,15-四氧雜-9-氮十七酸)。
用語「K(OEG)2」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經17-胺基-10-側氧基-3,6,12,15-四氧雜-9-氮十七酸醯基化。
用語「K((OEG)2-γ-Glu」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由(22S)-22-胺基-10,19-二側氧基-3,6,12,15-四氧雜-9,18-二氮二十三烷二酸之1-羧酸官能基醯基化。
用語「K((OEG)2-γ-Glu-Stear)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由(22S)-10,19-二側氧基-22-硬脂醯胺基-3,6,12,15-四氧雜-9,18-二氮二十三烷二酸之1-羧酸官能基醯基化。
用語「K((OEG)2-γ-Glu-COC16CO2H)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由(21S)-9,18,23-三側氧基-2,5,11,14-四氧雜-8,17,22-三氮三十九烷-1,21,39-三羧酸之1-羧酸官能基醯基化。
類似地，用語「K((OEG)2-γ-Glu-COC18CO2H)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由(21S)-9,18,23-三側氧基-2,5,11,14-四氧雜-8,17,22-三氮四十一烷-1,21,41-三羧酸之1-羧酸官能基醯基化。
用語「K((OEG)2-COC16CO2H)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由10,19-二側氧基-3,6,12,15-四氧雜-9,18-二氮三十六二酸之1-羧酸官能基醯基化。
用語「K(PEG24-AcBr)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由N-溴乙醯基-75-胺基- 4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73-二十四氧雜七十五酸之1-羧酸官能基醯基化。
用語「K(PEG12-AcBr)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由N-溴乙醯基-39-胺基-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37-十二氧雜三十九酸之1-羧酸官能基醯基化。
用語「K(PEG6-AcBr)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由N-溴乙醯基-3-[(17-胺基-3,6,9,12,15-五氧雜十七-1-基)氧基]-丙酸之1-羧酸官能基醯基化。
用語「K(PEG8-三唑基-CH2CH2CO-PEG4-AcBr)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由27-[4-[2-[3-[2-[2-[3-(N-溴乙醯基胺基)丙氧基]乙氧基]乙氧基]丙基胺基羰基]乙基]四唑-1-基]-4,7,10,13,16,19,22,25-八氧雜二十七酸之1-羧酸官能基醯基化。
用語「K(mPEG16)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49-十六氧雜五十酸之1-羧酸官能基醯基化。
用語「K(mPEG12)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37-十二氧雜三十八酸之1-羧酸官能基醯基化。
用語「VitE」表示分子中的α-生育酚醯基單元。
用語「AcVitE」表示α-生育酚醯基單元，其酚基帶有醚連結的亞甲基羧基官能基。
用語「K-γ-Glu-AcVitE」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由(2-(((2R)-2,5,7,8-四甲基-2-((4R,8R)-4,8,12-三甲基十三基)
Figure 106136950-A0202-12-0048-238
唍-6-基)氧基)乙醯基)-L-麩胺酸之γ-羧酸官能基醯基化。
許多本發明之化合物/接合物在序列的C端殘基Y36與其相鄰殘基R35之間併入還原的醯胺鍵。此還原的醯胺鍵結以用語「psi-(R35,Y36)」表示。
各種包含本發明之某些序列的胺基酸殘基含有經甲基化的α-胺基。因此，用語「N-Me-Q34」或「N-Me-R35」分別表示在序 列的位置34之α-N-甲基化麩醯胺酸，及在序列的位置35之α-N-甲基化精胺酸。
在序列說明中之用語「N-Me-Q34,psi-(R35,Y36)」係指同時含有在位置34處之α-甲基麩醯胺酸殘基以及在殘基R35與Y36之間的還原醯胺鍵之序列。
類似地，在序列說明中之用語「N-Me-R35,psi-(R35,Y36)」係指同時含有在位置35處之α-甲基精胺酸殘基以及在此殘基與Y36之間的還原醯胺鍵之序列。
半衰期延長部分(half-life extending moiety)
除本發明之抗體或其抗原結合片段之外，本發明之接合物可例如經由共價交互作用併入一或多個其他用於延長醫藥活性部份(例如，環狀PYY胜肽)之半衰期之部份。例示性的其他半衰期延長部份包括但不限於白蛋白、白蛋白變體、白蛋白結合蛋白質及/或結構域、轉鐵蛋白及其片段及類似物。可併入本發明之接合物的額外半衰期延長部份包括例如聚乙二醇(PEG)分子(諸如PEG5000或PEG20,000)、不同鏈長之脂肪酸及脂肪酸酯(例如月桂酸酯、肉豆蔻酸酯、硬脂酸脂、花生酸酯(arachidate)、二十二酸酯、油酸酯、花生四烯酸酯(arachidonate)、辛二酸(octanedioic acid)、十四烷二酸(tetradecanedioic acid)、十八烷二酸(octadecanedioic acid)、二十二烷二酸(docosanedioic acid)及類似物)、聚離胺酸、辛烷、或具有所欲性質之碳水化合物(葡聚糖、纖維素、寡醣或多醣)。這些部份可以直接與蛋白質支架編碼序列融合，且可藉由標準選殖及表現技術產生。替代地，可使用習知的化學偶合方法，將該等部份連接至重組及化學產生的本發明之接合物。
聚乙二醇基(pegyl)部份可例如藉由使用已知方法將半胱胺酸殘基併入分子C端且將聚乙二醇基連接至半胱胺酸來添加至本發明之胜肽分子。
併入額外部份的本發明之胜肽分子可藉由幾種習知的檢 定法就功能性進行比較。例如，受到關注之治療胜肽單獨或在根據本發明之接合物中的生物或藥物動力學活性可使用已知體外或體內檢定分析及比較。
醫藥組成物
在另一通常態樣中，本發明係關於一種醫藥組成物，該醫藥組成物包含本發明之接合物及化合物及醫藥上可接受之載劑。如本文中所使用之用語「醫藥組成物(pharmaceutical composition)」意指包含本發明之接合物與醫藥上可接受之載劑之產品。本發明之接合物及化合物及包含彼等之組成物亦可用於製造用於在本文中提及之治療應用的藥劑。
本文中所使用之用語「載劑(carrier)」係指任何賦形劑、稀釋劑、填充料、鹽、緩衝劑、穩定劑、助溶劑、油、脂質、含脂質囊泡、微球、脂質體包封、或其他所屬技術領域中已知用於醫藥配方之材料。將理解載劑、賦形劑或稀釋劑之特徵將取決於特定應用之投予途徑而定。本文中所使用之用語「醫藥上可接受之載劑(pharmaceutically acceptable carrier)」係指不干擾根據本發明之組成物的有效性或根據本發明之組成物的生物活性之非毒性材料。根據鑒於本揭露之具體實施例，任何適合用於抗體醫藥組成物之醫藥上可接受之載劑皆可用於本發明。
用於本發明中之醫藥上可接受之酸性/陰離子性鹽包括但不限於：乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、依地酸鈣(calcium edetate)、樟腦磺酸鹽(camsylate)、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二氫氯化物、依地酸鹽(edetate)、乙二磺酸鹽(edisylate)、丙酸酯十二烷硫酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽(esylate)、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽(glyceptate)、葡萄糖酸鹽(gluconate)、麩胺酸鹽(glutamate)、羥乙醯胺基苯砷酸鹽(glycollylarsanilate)、己基間苯二酚鹽(hexylresorcinate)、海巴明(hydrabamine)、氫溴酸鹽、氫氯酸鹽、羥基萘甲酸鹽(hydroxynaphthoate)、碘化物、2-羥乙磺酸鹽 (isethionate)、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、苯乙醇酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、黏酸鹽(mucate)、萘磺酸鹽(napsylate)、硝酸鹽、巴摩酸鹽(pamoate)、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、次乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽(teoclate)、甲苯磺酸鹽以及三碘化物。有機或無機酸亦包括但不限於：氫碘酸、過氯酸、硫酸、磷酸、丙酸、乙醇酸、甲磺酸、羥乙基磺酸、草酸、2-萘磺酸、對甲苯磺酸、環己磺醯胺酸、醣酸或三氟乙酸。
醫藥上可接受之鹼性/陽離子性鹽包括且不限於鋁、2-胺基-2-羥甲基-丙烷-1,3-二醇(亦稱為參(羥基甲基)胺基甲烷、托美滇(tromethane)或「TRIS」)、氨、苯札辛(benzathine)、三級丁胺、鈣、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽鹼、環己胺、二乙醇胺、乙二胺、鋰、L-離胺酸、鎂、美古明(meglumine)、N-甲基-D-還原葡糖胺、哌啶、鉀、普魯卡因(procaine)、奎寧、鈉、三乙醇胺、或鋅。
在本發明之一些實施例中，提供包含自約0.001mg/ml至約100mg/ml、自約0.01mg/ml至約50mg/ml、或自約0.1mg/ml至約25mg/ml之量的本發明之接合物的醫藥配方。醫藥配方可具有自約3.0至約10，例如自約3至約7、或自約5至約9之pH。配方可進一步包含至少一種選自由緩衝劑系統、(多種)保存劑、(多種)張力劑、(多種)螫合劑、(多種)穩定劑及(多種)界面活性劑所組成之群組之成分。
醫藥活性成分與醫藥上可接受之載劑的調製係所屬技術領域中已知，例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy(例如第21版(2005)、及任何之後的版本)。額外成分之非限制性實例包括：緩衝劑、稀釋劑、溶劑、張力調節劑、保存劑、穩定劑、及螯合劑。一或多種醫藥上可接受之載劑可用於調製本發明之醫藥組成物。
在本發明之一實施例中，醫藥組成物係液體配方。液體 配方之較佳實例係水溶液配方，即包含水之配方。液體配方可包含溶液、懸浮液、乳液、微乳液、凝膠、及類似物。水溶液配方一般包含至少50% w/w水、或至少60%、70%、75%、80%、85%、90%、或至少95% w/w的水。
在一實施例中，醫藥組成物可調製成可例如經由注射裝置(例如注射器或輸注泵)注射之注射用劑。例如，注射可經皮下、肌內、腹膜內、或靜脈內傳遞。
在另一實施例中，醫藥組成物係固體配方，例如冷凍乾燥或噴霧乾燥組成物，其可照原樣使用，或在使用前由醫師或患者添加溶劑、及/或稀釋劑至其中。固體劑型可包括錠劑(諸如壓製錠及/或包衣錠)及膠囊(例如硬質或軟質明膠膠囊)。醫藥組成物亦可呈例如囊劑(sachet)、糖衣錠、粉劑、顆粒劑、口含錠(lozenge)、或重構用粉劑之形式。
劑型可為可包含水溶性或分散性載劑之立即釋放劑型，或者可為可包含水不溶性聚合物以調節劑型在胃腸道中之溶解速率的延緩釋放、持續釋放、或修飾釋放劑型。
在其他實施例中，醫藥組成物可經鼻內、頰內、或舌下傳遞。
水溶液配方中之pH可介於pH 3與pH 10之間。在本發明之一實施例中，配方pH係自約7.0至約9.5。在本發明之另一實施例中，配方pH係自約3.0至約7.0。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含緩衝劑。緩衝劑之非限制性實例包括：精胺酸、天冬胺酸、二羥乙基甘胺酸(bicine)、檸檬酸、磷酸氫二鈉、反丁烯二酸、甘胺酸、甘胺醯甘胺酸、組胺酸、離胺酸、順丁烯二酸、蘋果酸、乙酸鈉、碳酸鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鈉、琥珀酸鹽、酒石酸、三羥甲基甘胺酸(tricine)、及參(羥甲基)-胺基甲烷、及其混合物。緩衝劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃 度存在。包含這些特定緩衝劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含保存劑。緩衝劑之非限制性實例包括：氯化本索寧、苯甲酸、苄醇、溴硝丙二醇(bronopol)、丁基4-羥基苯甲酸酯、氯丁醇、氯甲苯酚、氯己定、氯菲那辛、鄰甲酚、間甲酚、對甲酚、乙基4-羥基苯甲酸酯、咪唑啶基脲(imidurea)、甲基4-羥基苯甲酸酯、苯酚、2-苯氧乙醇、2-苯乙醇、丙基4-羥基苯甲酸酯、去氫乙酸鈉、硫柳汞(thiomerosal)、及其混合物。保存劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定保存劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含等張劑。實施例之非限制性實例包括鹽(諸如氯化鈉)、胺基酸(諸如甘胺酸、組胺酸、精胺酸、離胺酸、異白胺酸、天冬胺酸、色胺酸、及蘇胺酸)、醛醣醇(諸如甘油、1,2-丙二醇(丙二醇(propyleneglycol))、1,3-丙二醇、及1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)、及其混合物。等張劑之另一實例包括糖。糖之非限制性實例可為單醣、雙醣、或多醣、或水溶性葡聚糖包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、普魯蘭(pullulan)、糊精、環糊精、α及β-HPCD、可溶性澱粉、羥乙基澱粉、及鈉羧甲基纖維素。等張劑的另一實例係糖醇，其中用語「糖醇(sugar alcohol)」定義為具有至少一個-OH基團之C(4-8)烴。糖醇之非限制性實例包括甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、甜醇(dulcitol)、木糖醇、及阿拉伯糖醇。包含此段列出之各種等張劑的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。等張劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定等張劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含螫合劑。螯合劑之非限制性實例包括檸檬酸、天冬胺酸、伸乙二胺四乙酸(EDTA) 之鹽、及其混合物。螯合劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定螯合劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含穩定劑。穩定劑之非限制性實例包括一或多種聚集抑制劑、一或多種氧化抑制劑、一或多種界面活性劑、及/或一或多種蛋白酶抑制劑。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含穩定劑，其中該穩定劑係羧基-/羥基纖維素及其衍生物(諸如HPC、HPC-SL、HPC-L及HPMC)、環糊精、2-甲基硫代乙醇、聚乙二醇(諸如PEG 3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯啶酮、鹽(諸如氯化鈉)、含硫物質諸如單硫代甘油)、或巰乙酸。穩定劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定穩定劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之進一步實施例中，醫藥組成物包含一或多種界面活性劑，較佳地一種界面活性劑、至少一種介面活性劑、或二種不同界面活性劑。用語「界面活性劑(surfactant)」係指任何包含水溶性(親水性)部分及脂溶性(親脂性)部分的分子或離子。界面活性劑可例如選自由陰離子界面活性劑、陽離子界面活性劑、非離子界面活性劑、及/或兩性離子界面活性劑所組成之群組。界面活性劑可個別地或總體地以自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定界面活性劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之一進一步實施例中，醫藥組成物包含一或多種蛋白酶抑制劑，諸如例如EDTA、及/或苯甲脒鹽酸(HCl)。蛋白酶抑制劑可個別地或總體地以自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定蛋白酶抑制劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
本發明之醫藥組成物可包含足以降低組成物儲存期間多胜肽聚集體形成之量的胺基酸鹼。用語「胺基酸鹼(amino acid base)」係指一或多種胺基酸(諸如甲硫胺酸、組胺酸、咪唑、精胺酸、離胺酸、異白胺酸、天冬胺酸、色胺酸、蘇胺酸)、或其類似物。任何胺基酸可以其游離鹼形式或其鹽形式存在。胺基酸鹼之任何立體異構物(即L、D、或其混合物)皆可存在。胺基酸鹼可個別地或與其他胺基酸鹼組合以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定胺基酸鹼中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
對於所屬領域中具有通常知識者亦為顯而易見的是，本發明之接合物或其醫藥組成物的治療有效劑量將隨所欲效果而變化。因此，所欲投予之最佳劑量可由所屬領域中具有通常知識者輕易決定，並且將隨所使用之特定接合物、投予模式、製劑強度、及病況進程而變化。此外，與接受治療之特定對象相關的因素，包括對象年齡、體重、飲食及投予時間，將導致需要將劑量調整至適當的治療水準。
對所有適應症而言，本發明之接合物較佳地以每天約1μg至約5mg單一或多次劑量(例如，單一劑量可分成2、3、4、5、6、7、8、9、或10個子劑量)、或以每劑量約0.01μg/kg至約500μg/kg、更佳的是約0.05μg/kg至約250μg/kg、最佳的是低於約50μg/kg之劑量經周邊投予。這些範圍中之劑量當然將隨各促效劑之效力而異，且由所屬領域中具有通常知識者輕易判定。因此，上述劑量為平均情況的示例。當然，個別情況下需要較高或較低劑量範圍皆為可行的，該等範圍也包含於本發明之範疇中。
在某些實施例中，本發明之接合物以約1μg至約5mg之劑量、或以約0.01μg/kg至約500μg/kg之劑量、更佳的是以約0.05μg/kg至約250μg/kg之劑量、最佳的是以低於約50μg/kg之劑量，加上一劑第二治療劑(例如利拉魯肽)以約1μg至約5mg之劑量、或以約0.01μg/kg至約500μg/kg之劑量、更佳的是以約0.05μg/kg至約250μg/kg之劑量、最佳的是以低於約50μg/kg之劑量投予。
本發明之接合物之醫藥上可接受之鹽包括習用的無毒性鹽或四級銨鹽，其係形成自無機或有機的酸或鹼。此等酸加成鹽的例子包括乙酸鹽、己二酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、十二烷基硫酸鹽、氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、三甲基乙酸鹽(pivalate)、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽以及酒石酸鹽。鹼鹽包括銨鹽、鹼金屬鹽如鈉鹽和鉀鹽、鹼土金屬鹽包括鈣鹽和鎂鹽、有機鹼之鹽如二環己基胺基鹽、以及胺基酸如精胺酸之鹽。此外，鹼性含氮之基團可經例如鹵化烷基之四級化。
本發明之醫藥組成物可藉由任何可達成其預期目的之手段來投予。實例包括透過非經腸(parenteral)、皮下、靜脈、肌肉內、腹膜內、經皮、經頰(buccal)或經眼(ocular)途徑投予。投予可透過經口途徑進行。用於非經腸投予之合適配方包括水溶性形式之活性接合物的水溶液，例如水溶性鹽、酸性溶液、鹼溶液、葡萄糖水溶液、等張碳水化合物溶液以及環糊精包容錯合物。
本發明亦包含一種製造醫藥組成物之方法，其包含混合醫藥上可接受之載劑與任何本發明之接合物。此外，本發明包括藉由混合一或多種醫藥上可接受之載劑與任何本發明之接合物所製成之醫藥組成物。
再者，本發明之接合物可具有一或多種多形體或非晶形式，並且意欲將彼等包括於本發明之範疇中。此外，接合物可與例如水(即水合物)或常見的有機溶劑形成溶劑合物。本文中所使用之用語「溶劑合物(solvate)」意指本發明之接合物與一或多個溶劑分子的物理性締合。此物理性締合包含不同程度的離子性或共價性鍵結，包括氫鍵。在某些情況下可單離該溶劑合物，例如當一或多個溶劑分子係結合於結晶固體之晶格中時。用語「溶劑合物(solvate)」意欲涵括溶液相和可單離之溶劑合物兩者。非限定之合適溶劑合物的實例包括乙醇合物(ethanolate)、甲醇合物(methanolate)及類似者。
本發明意欲將本發明之接合物的多形體及溶劑合物包括 在其範疇內。因此，在本發明的治療方法中，用語「投予(administering)」應包含使用本發明之接合物或其多形體或溶劑合物來治療、改善或預防本文中所述之症候群、病症或疾病的手段，該手段儘管未經具體揭露，但明顯將被包括於本發明的範疇中。
在另一實施例中，本發明係關於本發明之接合物用作為藥劑之用途。
本發明的範疇包括本發明之接合物的前藥。一般而言，此等前藥將為接合物的功能性衍生物，其可於體內輕易轉換為所需之接合物。因此，在本發明中的治療方法中，用語「投予(administering)」應包含使用具體揭露之接合物，或者使用可能未具體揭露但在投予至病患後在體內轉換為特定接合物之接合物，來治療所述之各種病症。選擇及製備合適前藥衍生物之習用程序係描述於例如「Design of Prodrugs」,Ed.H.Bundgaard,Elsevier,1985。
此外，所意欲者為在本發明之範疇中，任何元素(尤其是在涉及本發明之接合物而提及時)應包含該元素的所有同位素及同位素混合物，無論是天然存在或合成產生，無論是具有天然豐度或呈同位素富集形式。例如，提及氫時，其範疇包括1H、2H(D)、及3H(T)。同樣地，提及碳及氧時，其範疇分別包括12C、13C和14C及16O和18O。該等同位素可具放射性或不具放射性。本發明之放射性標示接合物可包含選自3H、11C、18F、122I、123I、125I、131I、75Br、76Br、77Br及82Br之群組的放射性同位素。較佳地，放射性同位素係選自3H、11C及18F之群組。
本發明的一些接合物可能以阻轉異構物(atropisomer)存在。阻轉異構物係由於相對於單鍵之轉動受阻所產生的立體異構物，其中旋轉的立體應變障壁高到足以讓構型異構物能夠單離出來。應理解的是所有此類構型異構物及其混合物皆涵括於本發明的範疇中。
本發明之接合物具有至少一個立體中心，它們可因此存在為鏡像異構物或非鏡像異構物。應理解的是所有此類異構物以及其混合物皆涵括於本發明的範疇中。
若用於製備根據本發明之接合物的方法產生立體異構物之混合物，則這些異構物可藉由習用技術如製備型層析法來分離。接合物可經製備為外消旋形式，或是個別之鏡像異構物可藉由鏡像特定合成(enantiospecific synthesis)或離析法(resolution)來製備。接合物可藉由例如標準技術來離析為其組分鏡像異構物，諸如藉由與具光學活性酸(諸如(-)-二-對甲苯甲醯基-D-酒石酸及/或(+)-二-對甲苯甲醯基-L-酒石酸)進行鹽形成以形成非鏡像異構物對，接著進行分段結晶(fractional crystallization)與游離鹼再生。接合物亦可藉由形成非鏡像異構酯或醯胺，接著使用層析法分離並移除掌性助劑而離析。替代地，接合物可使用掌性管柱經由高效液相層析(HPLC)或SFC來離析。在一些情況中，接合物之旋轉異構體可能存在，藉由1H NMR可觀察到其導致1H NMR譜中之複雜多重峰及峰整合。
在任何製備本發明接合物的方法中，對於任何相關分子上的敏感或反應性基團加以保護可能為必要及/或所欲的。此可藉由習用保護基來達成，諸如以下文獻所述者：Protective Groups in Organic Chemistry,ed.J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973；及T.W.Greene & P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,1991，其各者全文以引用方式併入本文中以符合所有目的。保護基可在便利的後續階段中利用該項技術習知的方法去除。
使用方法
本發明係關於一種用於預防、治療或改善有需要之對象之Y2受體媒介之症候群、病症或疾病的方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量之本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。
本發明亦提供一種用於預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象之病症、疾病、或病況或該病症、疾病、或病況之任一或多個症狀的方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量之本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。
根據具體實施例，疾病、病症、或病況係選自由下列所 組成之群組：肥胖、第I或II型糖尿病、代謝症候群(即X症候群)、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良(例如，葡萄糖不耐)、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及其他心血管風險因子諸如高血壓及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及/或濕疹。
根據具體實施例，治療有效量係指足以達成一、二、三、四、或更多個下列效應之療法之量：(i)減少或改善所欲治療之疾病、病症、或病況或與其相關之症狀的嚴重性；(ii)減少所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的期間；(iii)預防所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的進展；(iv)造成所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的消退；(v)預防所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的發展或發生；(vi)預防所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的復發；(vii)減少具有所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的對象的住院；(viii)減少具有所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的對象的住院期長度；(ix)增加具有所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的對象的存活；(xi)抑制或減少對象的所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀；及/或(xii)增強或改善另一療法的(多種)疾病預防或治療效應。
治療有效量或劑量可根據各種因子變化，諸如所欲治療之疾病、病症或病況、投予手段、標靶部位、對象之生理狀態(包括例如年齡、體重、健康)、對象係人類抑或動物、其他投予藥物、及治療係疾病預防性抑或治療性。治療劑量經最佳地滴定以最佳化安全性及療效。
本文中所使用之用語「治療(treat、treating及treatment)」皆意欲指稱改善或逆轉至少一個與疾病、病症、或病況有關的可測量物理參數，該物理參數未必可在對象中覺察，但可在對象中覺察。用語「治療」亦可指造成疾病、病症、或病況消退、預防疾 病、病症、或病況進展、或至少延緩疾病、病症、或病況之進展。在一具體實施例中，「治療」係指減輕一或多個與疾病、病症、或病況相關之症狀、預防一或多個與疾病、病症、或病況相關之症狀的發展或開始、或減少一或多個與疾病、病症、或病況相關之症狀的期間。在一具體實施例中，「治療」係指預防疾病、病症、或病況之復發。在一具體實施例中，「治療」係指增加具有疾病、病症、或病況之對象的存活。在一具體實施例中，「治療」係指排除對象之疾病、病症、或病況。
在一實施例中，本發明提供一種用於預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象之肥胖、或肥胖之任一或多個症狀的方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量之本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。在一些實施例中，對象之體重減少例如介於約0.01%至約0.1%、介於約0.1%至約0.5%、介於約0.5%至約1%、介於約1%至約5%、介於約2%至約3%、介於約5%至約10%、介於約10%至約15%、介於約15%至約20%、介於約20%至約25%、介於約25%至約30%、介於約30%至約35%、介於約35%至約40%、介於約40%至約45%、或介於約45%至約50%，該減少係相對於在對象投予任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、醫藥組成物、形式、或藥劑之前的體重，或相較於未接受任何本文中描述之本發明之接合物、組成物、形式、藥劑、或組合之對照對象。
在一些實施例中，體重減少維持例如約1週、約2週、約3週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年、約1.5年、約2年、約2.5年、約3年、約3.5年、約4年、約4.5年、約5年、約6年、約7年、約8年、約9年、約10年、約15年、或約20年。
本發明提供一種預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象之症候群、病症或疾病、或該症候群、病症、或疾病之任一或多個症狀的方法，其中該症候群、病症或疾病係選自由下列所組成之 群組：肥胖、第I型或第II型糖尿病、代謝症候群(即X症候群)、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良(例如，葡萄糖不耐)、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及其他心血管風險因子諸如高血壓及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及濕疹，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。
如本文中所使用，代謝症候群係指具有下列任一或多者之對象：高血糖(例如高空腹血糖)、高血壓、異常膽固醇水準(例如低HDL水準)、異常三酸甘油酯水準(例如高三酸甘油酯)、大腰線(即腰圍)、腹部區域脂肪增加、胰島素抗性、葡萄糖不耐、C-反應性蛋白質水準升高(即促發炎狀態)、及血漿纖維蛋白溶酶原活化物抑制劑-1及纖維蛋白原水準增加(即促血栓狀態)。
本發明提供一種減少有需要之對象的攝食之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。在一些實施例中，對象之攝食減少例如介於約0.01%至約0.1%、介於約0.1%至約0.5%、介於約0.5%至約1%、介於約1%至約5%、介於約2%至約3%、介於約5%至約10%、介於約10%至約15%、介於約15%至約20%、介於約20%至約25%、介於約25%至約30%、介於約30%至約35%、介於約35%至約40%、介於約40%至約45%、或介於約45%至約50%，該減少係相對於在對象投予任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、或組合之前的攝食，或相較於未接受任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、或組合之對照對象。
在一些實施例中，攝食減少維持例如約1週、約2週、約3週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年、約1.5年、約2年、約2.5年、約3年、約3.5年、約4年、 約4.5年、約5年、約6年、約7年、約8年、約9年、約10年、約15年、或約20年。
本發明提供一種減少有需要之對象的糖化血色素(A1C)之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。在一些實施例中，對象之A1C減少例如介於約0.001%與約0.01%之間、介於約0.01%與約0.1%之間、介於約0.1%與約0.2%之間、介於約0.2%與約0.3%之間、介於約0.3%與約0.4%之間、介於約0.4%與約0.5%之間、介於約0.5%與約1%之間、介於約1%與約1.5%之間、介於約1.5%與約2%之間、介於約2%與約2.5%之間、介於約2.5%與約3%之間、介於約3%與約4%之間、介於約4%與約5%之間、介於約5%與約6%之間、介於約6%與約7%之間、介於約7%與約8%之間、介於約8%與約9%之間、或介於約9%與約10%之間，該減少係相對於在對象投予任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、或組合之前的A1C，或相較於未接受任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、或組合之對照對象。
在其他實施例中，提供用於減少有需要之對象的空腹血糖水準之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。空腹血糖水準可減少至小於約140至約150mg/dL、小於約140至約130mg/dL、小於約130至約120mg/dL、小於約120至約110mg/dL、小於約110至約100mg/dL、小於約100至約90mg/dL、或小於約90至約80mg/dL，該減少係相對於在對象投予任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、或組合之前的空腹血糖水準，或相較於未接受任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、或組合之對照對象。
本發明提供一種調節有需要之對象的Y2受體活性之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化 合物、或醫藥組成物。如本文中所使用，「調節(modulating)」係指增加或降低受體活性。
在一些實施例中，有效量的本發明之接合物或化合物或其形式、組成物或藥劑係向有需要之對象投予一天一次、一天二次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次、一天七次、或一天八次。在其他實施例中，有效量的本發明之接合物或化合物或其形式、組成物或藥劑係向有需要之對象投予每二天一次、每週一次、每週二次、每週三次、每週四次、每週五次、每週六次、每月二次、每月三次、或每月四次。
本發明之另一實施例包含一種預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象之疾病、病症或症候群、或任何該疾病、病症、或症候群之一或多個症狀的方法，該方法包含在組合療法中向該有需要之對象投予有效量之本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。在某些實施態樣中，組合療法係第二治療劑。在某些實施態樣中，組合療法係外科療法。
本文中所使用之在向對象投予二或更多種療法上下文中之用語「組合(in combination)」係指使用超過一種療法。
如本文中所使用，組合療法係指向有需要之對象投予有效量的本發明之接合物或化合物或其形式、組成物或藥劑的同時投予一或多種額外治療劑、或一或多種外科療法。在一些實施例中，一或多種額外治療劑或外科療法可在投予有效量的本發明之接合物的同一天投予，且在其他實施例中，一或多種額外治療劑或外科療法可在投予有效量的本發明之接合物或化合物的同一週或同一月投予。
在某些實施例中，其中該疾病或病症係選自由肥胖、第II型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性、及異常血脂症所組成之群組，該第二治療劑可為抗糖尿劑。在某些實施例中，抗糖尿劑可為類升糖素胜肽-1(GLP-1)受體調節劑。
本發明亦考慮以組合療法預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象的任何本文描述之疾病、病症、症候群、或症狀，該 組合療法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物與下列治療劑之任一或多者的組合：二胜肽基胜肽酶-4(DPP-4)抑制劑(例如西他列汀(sitagliptin)、沙格列汀(saxagliptin)、利拉利汀(linagliptin)、阿格列汀(alogliptin)、等)；GLP-1受體促效劑(例如，短效型GLP-1受體促效劑諸如艾塞那肽(exenatide)及利西拉來(lixisenatide)；中效型GLP-1受體促效劑諸如利拉魯肽；長效型GLP-1受體促效劑諸如艾塞那肽緩釋型、阿必魯肽(albiglutide)、度拉魯肽(dulaglutide))；鈉-葡萄糖共轉運子-2(SGLT-2)抑制劑(例如卡格列淨(canaglifozin)、達格列淨(dapaglifozin)、安帕列淨(empaglifozin)、等)；膽酸扣押劑(例如考來維崙(colesevelam)、等)；多巴胺受體促效劑(例如溴麥角環肽(bromocriptine)速效型)；雙胍(例如二甲雙胍(metformin)、等)；胰島素；調酸素；磺醯脲(例如氯磺丙脲(chlorpropamide)、格列美脲(glimepiride)、格列甲嗪(glipizide)、優降糖(glyburide)、優降糖(glibenclamide)、格列波脲(glibornuride)、格列派特(glisoxepide)、格列吡脲(glyclopyramide)、甲磺氮卓脲(tolazamide)、甲苯磺丁脲(tolbutamide)、乙醯苯磺醯環己脲(acetohexamide)、磺胺丁脲(carbutamide)、等)；及四氫噻唑二酮(例如；吡格列酮(pioglitazone)、羅格列酮(rosiglitazone)、洛貝格列酮(lobeglitazone)、環格列酮(ciglitazone)、達格列酮(darglitazone)、恩格列酮(englitazone)、萘格列酮(netoglitazone)、利格列酮(rivoglitazone)、曲格列酮(troglitazone)、等)。在一些實施例中，(多種)額外治療劑之劑量當與本發明之接合物或化合物組合給予時減少。在一些實施例中，當與本發明之接合物或化合物組合使用時，(多種)額外治療劑可以相較於各者單獨使用時較低之劑量使用。
在某些實施例中，其中疾病或病症係選自由下列所組成之群組：肥胖、第I型或第II型糖尿病、代謝症候群(即X症候群)、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良(例如，葡萄糖不耐)、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI) 所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及其他心血管風險因子諸如高血壓及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及濕疹，第二治療劑可為利拉魯肽。
本發明考慮以組合療法預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象的任何本文描述之疾病、病症、症候群、或症狀，該組合療法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物與外科療法之組合。在某些實施例中，外科療法可為減重手術(例如胃繞道手術，諸如Roux-en-Y胃繞道手術；袖狀胃切除術；可調整胃束帶手術；膽胰分流與十二指腸轉位；胃內氣球；胃摺疊術；及其組合)。
在其中一或多種額外治療劑或外科療法係與有效量的本發明之接合物或化合物在同一天投予的實施例中，本發明之接合物或化合物可在額外治療劑或外科療法之前、之後或同時投予。用語「組合」之使用並不限制向對象投予療法之順序。例如，第一療法(例如本文描述之組成物)可在向對象投予第二療法之前(例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、16小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週以前)、之同時或之後(例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、16小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週之後)投予。
實施例
本發明亦提供以下非限制性實施例。
實施例1係一種接合物，其包含偶合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其抗原結合片段，其中該環狀PYY胜肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示：
Figure 106136950-A0202-12-0066-708
 其中p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時係1；橋(BRIDGE)係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-；Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K；Z9係G或K；Z11係D或K；Z22係A或K；Z23係S或K；Z26係A或H；Z30係L、W、不存在、或K；但Z30只有在q係1時不存在； Z34係
Figure 106136950-A0202-12-0066-706
或
Figure 106136950-A0202-12-0066-707
； Z35係
Figure 106136950-A0202-12-0067-709
、
Figure 106136950-A0202-12-0067-710
、
Figure 106136950-A0202-12-0067-711
、或
Figure 106136950-A0202-12-0067-712
； 其中該衍生物係經一或多個選自由醯胺化、醣化、胺甲醯化、硫酸化、磷酸化、環化、脂化、及聚乙二醇化所組成之群組之過程修飾的式I之化合物。
實施例2係如實施例1之接合物，其中該環狀PYY胜肽係經一或多個選自由醯胺化、脂化、及聚乙二醇化所組成之群組之過程修飾的式I之環狀PYY胜肽之衍生物、或其醫藥上可接受之鹽。
實施例3係如實施例1之接合物，其中該環狀PYY胜肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時係1；橋係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH2-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-；Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K，Z9係G或K，Z11係D或K，Z22係A或K，Z23係S或K，Z26係A或H；Z30係L或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0067-713
或
Figure 106136950-A0202-12-0067-714
取代； Z34係
Figure 106136950-A0202-12-0068-715
或
Figure 106136950-A0202-12-0068-716
；且 Z35係
Figure 106136950-A0202-12-0068-717
、
Figure 106136950-A0202-12-0068-718
、
Figure 106136950-A0202-12-0068-719
、或
Figure 106136950-A0202-12-0068-720
。
實施例4係如實施例1之接合物，其中該環狀PYY胜肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3、或5；n係1、2、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時可能係1；橋係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH2-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-；Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K，Z9係G或K，Z11係D或K，Z22係A或K，Z23係S或K，Z26係A或H；Z30係L或K，其中該K之胺基側鏈係經
Figure 106136950-A0202-12-0068-723
 Z34係
Figure 106136950-A0202-12-0068-721
或
Figure 106136950-A0202-12-0068-722
；且 Z35係
Figure 106136950-A0202-12-0069-724
、
Figure 106136950-A0202-12-0069-725
、
Figure 106136950-A0202-12-0069-726
、或
Figure 106136950-A0202-12-0069-727
實施例5係一種包含偶合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其抗原結合片段之接合物，其中該接合物以式IIIa至b、IVa至b、Va至b、及/或VIa至b表示，其中在式IIIa至b、IVa至b、Va至b、及VIa至b中，x可為例如1、2、3、4、5、或6，較佳的是2。
link 1可為例如G、βA、-COCH2OCH2CH2OCH2CH2NH-、γ-胺基丁醯基、GG、-CO(CH2)mSCH2-(但當Link 2=-NH-，m=1、2)或鍵；link 2可為例如-CH2-、苄基、乙基三唑基、-NH-、或鍵；n可為例如1、2、或3；X可為例如-S-或-CH2-；Z3可為例如I或鍵；Z4可為例如K、S、或R；Z30可為例如L、W、K(mPEG16)、或K(mPEG12)；Z34可為例如Q，其中該Q的α-醯胺氮可選地經N-甲基化；Z35可為例如R，其中該R的α-醯胺氮可選地經N-甲基化、或R經去羰基化導致psi-(Z35Z36)醯胺鍵、或R的α-醯胺氮經N-甲基化同時經去羰基化導致psi-(Z35Z36)醯胺鍵；Z36可為例如Y(Tyr)、Cha(β-環己基丙胺酸)、Aic(2-胺基茚烷-2-羧酸)或F(Phe)，其中該F可選地經氟(4-F-Phe)、氯(4-Cl-Phe)、溴(4-Br-Phe)、碘(4-I-Phe)、胺基(4-NH2-Phe)對位取代；且 Link 3可例如包含任何下列對離胺酸側鏈之醯胺化：聚乙二醇(PEG)8-三唑基-CH2CH2CO-PEG4(包括
Figure 106136950-A0202-12-0070-728
)、2至24個PEG單元之 PEG鏈(包括
Figure 106136950-A0202-12-0070-729
)、含有2至10個碳原子之烷基鏈 (包括
Figure 106136950-A0202-12-0070-730
)、(Gly4Ser)j其中j=1至4、(AlaPro)u其中u= 1至10，或-NH-Link 3-可經鍵取代。
實施例6係如實施例1之接合物，其中該環狀PYY胜肽係選自由SEQ ID NO：1至100所組成之群組。
實施例7係如實施例1至6中任一者之接合物，其中該單株抗體或其抗原結合片段經由連接子在該環狀PYY胜肽的離胺酸殘基處共價連接至該環狀PYY胜肽。
實施例8係如實施例7之接合物，其中該連接子包含選自由下列所組成之群組中之一者：聚乙二醇(PEG)8-三唑基-CH2CH2CO-PEG4、2至24個PEG單元之PEG鏈、含有2至10個碳原子之烷基鏈、(Gly4Ser)j其中j=1至4、(AlaPro)u其中u=1至10、及鍵(bond)。
實施例9係如實施例8之接合物，其中式I中之Z7、Z9、Z11、Z22及Z23只有一者係離胺酸，且該離胺酸經由該連接子共價連接至該單株抗體或其抗原結合片段之工程改造半胱胺酸殘基。
實施例10係一種接合物，其包含偶合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其抗原結合片段，其中該接合物包含選自由SEQ ID NO：102至127所組成之群組之結構或其醫藥上可接受之鹽，其中mAb代表該單株抗體或其抗原結合片段，且]2代表1或2個該環狀PYY胜肽共價接合至該mAb。
實施例11係實施例1至10中任一者之接合物，其中該單株抗體或其抗原結合片段包含分別具有SEQ ID NO：141、142、 143、144、145、及146之多胜肽序列的重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、及輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3。
實施例12係如實施例11之接合物，其中該單離單株抗體包含具有SEQ ID NO：137之多胜肽序列的重鏈可變域(VH)、及具有SEQ ID NO：139之多胜肽序列的輕鏈可變域(VL)。
實施例13係如實施例12之接合物，其進一步包含Fc部分。
實施例14係如實施例13之接合物，其包含具有SEQ ID NO：138之多胜肽序列的重鏈(HC)及具有SEQ ID NO：140之多胜肽序列的輕鏈(LC)。
實施例15係一種製造如實施例1至14中任一者之接合物之方法，其包含使導入該環狀PYY胜肽之側鏈上的親電子劑與該單株抗體或其抗原結合片段之SEQ ID NO：143的半胱胺酸殘基之巰基反應，藉以在該環狀PYY胜肽與該單株抗體或其抗原結合片段之間建立共價鍵結，該環狀PYY胜肽之側鏈較佳的是該環狀PYY胜肽之離胺酸殘基的胺基側鏈，該親電子劑較佳的是溴乙醯胺或順丁烯二醯亞胺。
實施例16係一種醫藥組成物，其包含如實施例1至14中任一者之接合物及醫藥上可接受之載劑。
實施例17係一種用於治療或預防有需要之對象的肥胖之方法，其包含向該有需要之對象投予有效量的如實施例16之醫藥組成物。
實施例18係如實施例17之方法，其中向有需要之對象投予有效量的醫藥組成物導致體重相較於該對象投予該醫藥組成物之前的體重減少約5%至約10%、約10%至約15%、約15%至約20%、或約20%至約25%。
實施例19係一種用於治療或預防有需要之對象的疾病或病症之方法，其中該疾病或病症係選自由下列所組成之群組：肥 胖、第I型或第II型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及其他心血管風險因子諸如高血壓及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及濕疹，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的如實施例16所述之醫藥組成物。
實施例20係如實施例19之方法，其中該疾病或病症係肥胖。
實施例21係如實施例19之方法，其中該疾病或病症係第I型糖尿病。
實施例22係如實施例19之方法，其中該疾病或病症係第II型糖尿病。
實施例23係如實施例19之方法，其中該疾病或病症係代謝症候群。
實施例24係如實施例19之方法，其中該疾病或病症係腎疾病。
實施例25係如實施例19之方法，其中該疾病或病症係非酒精性脂肪肝炎(NASH)。
實施例26係如實施例19之方法，其中該疾病或病症係非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)。
實施例27係一種減少有需要之對象的攝食之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的如實施例16之醫藥組成物。
實施例28係如實施例27之方法，其中向有需要之對象投予有效量的醫藥組成物導致攝食相較於該對象投予該醫藥組成物之前的攝食減少約5%至約10%、約10%至約15%、約15%至約20%、約20%至約25%、約25%至約30%、約30%至約35%、約35%至約40%、約40%至約45%、或約45%至約50%。
實施例29係一種調節有需要之對象的Y2受體活性之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的如實施例16之醫藥組成物。
實施例30係如實施例17至29中任一者之方法，其中該醫藥組成物係經由注射投予。
實施例31係如實施例30之方法，其中該注射經皮下、肌內、腹膜內、或靜脈內傳遞。
實施例32係如實施例17至31中任一者之方法，其中該醫藥組成物係與第二治療劑組合投予。
實施例33係如實施例32之方法，其中該疾病或病症係選自由肥胖、第2型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性、及異常血脂症所組成之群組，且該第二治療劑係至少一種抗糖尿劑。
實施例34係如請求項33之方法，其中該抗糖尿劑係類升糖素胜肽-1受體調節劑。
實施例35係如實施例32之方法，其中該第二治療劑係利拉魯肽。
實施例36係如實施例17至35中任一者之方法，其中該醫藥組成物係每天、每週、或每月向有需要之對象投予。
實施例37係如實施例36之方法，其中該醫藥組成物係每天投予一次、二次、三次、四次、五次、或六次。
實施例38係如實施例36之方法，其中該醫藥組成物係每週投予一次、二次、三次、四次、五次、或六次。
實施例39係如實施例36之方法，其中該醫藥組成物係每月投予一次、二次、三次、或四次。
實施例40係一種套組，其包含如實施例1至14中任一者之接合物、或如實施例16之醫藥組成物，較佳的是該套組進一步包含有效量的第二治療劑，更佳的是該套組進一步包含有效量的利拉魯肽。
實施例41係如實施例40之套組，其中該套組進一步包含注射裝置。
實施例42係一種製造包含如實施例1至14中任一者之接合物的醫藥組成物之方法，其包含將該接合物與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
實例 合成
本發明之化合物或接合物可根據所屬領域中具有通常知識者所習知之一般合成方法來合成。下列合成說明係例示性目的，並無意作為本發明之限制。
本發明之NTSC環狀PYY(NTSC-PYY)類似物或衍生物可藉由多種在胺基酸之間形成連續胜肽鍵結的已知、習知程序合成，且優先藉由固相胜肽合成(SPPS)進行，大致上如Merrifield(J.Am.Chem.Soc.,1963,85,2149-2154)所述，使用自動化胜肽合成器、傳統實驗室合成(bench synthesis)、或兩種方式之組合進行。胜肽合成的習知程序涉及一個胺基酸殘基之游離胺基(彼之其他反應性官能基已經適當保護)與另一胺基酸之游離羧基(彼之反應性官能基亦已經適當保護)之間的縮合。一般利用於胜肽鍵形成之縮合劑的實例包括二異丙基碳二亞胺(DIC)加或不加1-羥基苯并三唑(HOBT)或乙基氰基(羥基亞胺基)乙酸酯(Oxyma Pure)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基胺鎓六氟磷酸鹽(HBTU)、2-(1H-7-氮苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基胺鎓六氟磷酸鹽(HATU)、2-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基胺鎓六氟磷酸鹽(HCTU)、1-氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺基氧基-參-吡咯啶-鏻六氟磷酸鹽(PyOxim)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基胺鎓四氟硼酸鹽(TBTU)、溴-參-吡咯啶-鏻六氟磷酸鹽(PyBroP)、及類似物。
自動化胜肽合成方法可在室溫下(rt)、或在高溫下較佳地通過施用微波加熱進行，如Yu(J.Org.Chem.,1992,57,4781-4784)所述且最近經Palasek(J.Pept.Sci.,2007,13,143-148)改進。
本發明之化合物(C端醯胺)可方便地使用N-α-FMOC(9-茀基甲基氧基羰基)保護胺基酸方法製備，藉以將經適當保護之N-α-FMOC保護胺基酸的羧基端使用合適偶合劑偶合至習知固相樹脂上。合適的習知市售固相樹脂包括Rink醯胺MBHA樹脂、Rink醯胺AM樹脂、Tentagel S RAM樹脂、FMOC-PAL-PEG PS樹脂、SpheriTide Rink醯胺樹脂、ChemMatrix Rink樹脂、Sieber醯胺樹脂、TG Sieber樹脂及類似物。接著可將樹脂結合FMOC-胺基酸藉由暴露至20%於N,N-二甲基甲醯胺(DMF)或1-甲基-2-吡咯啶酮(NMP)中之哌啶進行去保護處理，以選擇性移除FMOC保護基。隨後將額外FMOC保護胺基酸依序偶合及去保護，藉以產生所欲之樹脂結合保護胜肽。在某些例子中，胜肽序列中的另一個胺可能必須利用可承受FMOC去保護條件的正交反應性保護基。保護基如4-甲基三苯甲基(Mtt)或4-甲氧基三苯甲基(Mmt)(兩者皆可藉由1%三氟乙酸(TFA)/二氯甲烷(DCM)處理移除)、或較佳地烯丙基氧基羰基(烯丙氧羰基；可藉由Pd(PPh3)4(四(三苯基膦)鈀(0))/PhSiH3(苯基矽烷)處理移除)、1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基環己-1-亞基)乙基(Dde；可藉由2至3%肼/DMF處理移除)及1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基環己-1-亞基)-3-甲基丁基(ivDde；可藉由2至3%肼/DMF處理移除)可有效用於這類例子中。
在習知胜肽合成方法中，α胺基酸的反應性側鏈在整個合成中通常以合適保護基保護，以使彼等對偶合及去保護方案無反應。雖然多個用於胺基酸側鏈之保護基係所屬技術領域中已知，在本文中下列保護基係最佳者：用於絲胺酸、蘇胺酸、麩胺酸、天冬胺酸及酪胺酸之三級丁基(t-Bu)；用於天冬醯胺酸、麩醯胺酸、半胱胺酸、升半胱胺酸及組胺酸之三苯甲基(Trt)；用於色胺酸及離胺酸ε-胺基之三級丁基氧基羰基(Boc)；及用於精胺酸之2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并 呋喃-5-磺醯基(Pbf)。這些保護基在強酸處理諸如高濃度三氟乙酸(TFA)後移除。
在完成SPPS後，使用主要由(TFA)與各種碳陽離子清除劑組合諸如三異丙基矽烷(TIPS)、水、苯酚及大茴香醚組成之切割雞尾酒(cleavage cocktail)，將樹脂結合、側鏈保護胜肽去保護同時自樹脂切割。接著藉由冷醚沉澱胜肽/雞尾酒濾液來單離粗固體胜肽。在Sieber樹脂結合保護胜肽之特殊案例中，藉由以1至2%於DCM中之TFA重複處理，可有利地自樹脂切割保護胜肽而不造成側鏈去保護。保護胜肽經單離後可在溶液相的反應中進一步操作。最後，可將保護胜肽使用切割雞尾酒另行處理以全面去保護並如上述沉澱。接著將如此獲得之粗製胜肽以低濃度(約<4mg/mL)溶解於含有機共溶劑諸如乙腈或乙醇之大致水溶液(aq)溶劑系統。將溶液pH升高至>5後，接著將胜肽進行分子內環化反應以形成對應之本發明之粗製NTSC PYY類似物。如此形成之NTSC PYY類似物可使用所屬技術領域中通常已知之純化技術純化。在本文中使用之較佳胜肽純化方法係逆相高效液相層析法(HPLC)。純化胜肽接著藉由液相層析/質譜法(LC/MS)表徵。
應瞭解本文中所述之下列實例及實施例僅用於說明性之目的，並且根據該等實例及實施例之各式修飾或變化將為所屬領域中具有通常知識者所推知且應被納入本申請案之精神與範圍及隨附之權利要求的範疇內。所有在本文中引用之出版物、專利及專利申請案全文特此以引用方式併入本文中以符合所有目的。
一般方案
合成C端醯胺NTSC-PYY胜肽之常規合成程序係描述於美國臨時專利申請案62/413,613(申請日2016年10月27日)及美國專利申請案號_____，標題「Cyclic peptide tyrosine tyrosine compounds as modulators of neuropeptide receptors」(申請日與本申 請案同一天，代理人案號為PRD3411)。兩申請案之內容特此以引用方式全文併入本文中。
實例1：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：1
Figure 106136950-A0202-12-0077-731
方案14：合成Fmoc- psi-[Arg(Pbf)-(N-Boc)Tyr(tBu)]-OH 1.合成Fmoc-psi-[Arg(Pbf)-(N-Boc)Tyr(tBu)]-OH A. 合成H 2N-Tyr(tBu)-OAll
在Fmoc-Tyr(tBu)-O(69g,150.15mmol)及K2CO3(62g,445.36mmol)於DMF(500mL)中之冰冷溶液中，添加烯丙基溴化物(72g,595.16mmol)，並將所得混合物攪拌3h。接著添加冰/水(1L)並將混合物以EtOAc萃取。將合併之有機萃取物乾燥(Na2SO4)並在減壓下濃縮以提供呈黃色油狀物之Fmoc-Tyr(tBu)-OAll。在Fmoc-Tyr(tBu)-OAll(70g,140.1mmol)於DMF(600mL)中之冰冷溶液中，以逐滴方式在20min期間添加哌啶(150mL)。在3h後，將反應溶液倒入水/冰(1L)中，並以EtOAc(2×2L)萃取。將合併之有機萃取物乾燥(Na2SO4)並在減壓下濃縮。將如此獲得之殘餘物藉由矽膠層析法純化，用EtOAc/石油醚(10：1)洗提以提供34g呈黃色油狀物之H2N-Tyr(tBu)-OAll。
B.合成F合成Fmoc-Arg(Pbf)-N(Me)OMe( 2)
在Fmoc-Arg(Pbf)-OH(1)(64.8g,99.88mmol)、N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(20g,206.2mmol)與HATU(57g,149.91mmol)於DCM(500mL)中之冰冷混合物中，以逐滴方式在10min期間添加DIEA(52g,402.2mmol)，並允許所得混合物在室溫下攪拌整夜。接著將反應倒入水/冰(1L)中並以DCM(1L)萃取。將有機萃取物乾燥(Na2SO4)並在減壓下濃縮以提供70g呈黃色固體之粗製Fmoc-Arg(Pbf)-N(Me)OMe(2)，其不經進一步純化即使用。
C.合成Fmoc-Arg( Pbf)-CHO( 3)
在LAH於THF(1M,107mL,0.107mmol)中之冷卻(-78℃)溶液中，在氮的惰性大氣下以逐滴方式在1h期間經由套管添加Fmoc-Arg(Pbf)-N(Me)OMe(2)(50g,72.3mmol)於THF(100mL)中之冷卻(-50℃)溶液。在-78℃下攪拌5h後，將混合物倒入1N HCl 溶液(300mL)中，並視需要添加額外1N HCl以調整pH至4，接著以EtOAc(2×2L)萃取。將合併之有機萃取物乾燥(Na2SO4)並在減壓下濃縮以提供45g呈黃色固體之粗製Fmoc-Arg(Pbf)-CHO(3)，其不經進一步純化即使用。
D.合成Fmoc- psi-[Arg(Pbf)-Tyr(tBu)]-OAll( 4)
在Fmoc-Arg(Pbf)-CHO(3)(來自步驟C，45g，71.12mmol)及H2N-Tyr(tBu)-OAll(來自步驟A，32g，115.37mmol)於THF(200mL)、MeOH(200mL)及HOAc(15mL)中之冰冷溶液中，在30min期間分批添加氰基硼氫化鈉(18.0g,286.4mmol)，並將所得溶液在室溫下攪拌整夜。將反應物藉由添加飽和NaHCO3水溶液(500mL)淬熄並將混合物以EtOAc(2×2L)萃取。將合併之有機萃取物乾燥(Na2SO4)並在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠層析法純化，用EtOAc/石油醚(10：1)洗提以提供40g呈黃色固體之Fmoc-psi-[Arg(Pbf)-Tyr(tBu)]-OAll(4)。
E.合成Fmoc- psi-[Arg(Pbf)-N(Boc)Tyr(tBu)]-OAll( 5)
在Fmoc-psi-[Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-OAll](4)(53g,59.28mmol)於MeCN(240mL)中之溶液中，添加二-三級丁基二碳酸酯(20g,91.3mmol)，並將所得溶液在50℃下攪拌整夜。接著將混合物在減壓下濃縮並將殘餘物藉由矽膠層析法純化，用EtOAc/石油醚(1：1)洗提以提供32g呈黃色固體之Fmoc-psi-[Arg(Pbf)-N(Boc)Tyr(tBu)]-OAll(5)。
F.合成Fmoc- psi-[Arg(Pbf)-N(Boc)Tyr(tBu)]-OH( 6)
在Fmoc-psi-[Arg(Pbf)-N(Boc)Tyr(tBu)]-OAll(5)(32g,32mmol)於DCM(600mL)中之冷卻(-30℃)溶液中，在氮的惰性大氣下添加Pd(PPh3)4(3.0g,4.33mmol)，隨後在30min期間逐滴添加N-甲基苯胺(10g,93mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌2h，接著 在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠層析法純化，用EtOAc/石油醚(1：1)洗提以提供26.8g呈微黃色固體之Fmoc-psi-[Arg(Pbf)-N(Boc)Tyr(tBu)]-OH(6)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ 7.75-7.77(2H,m),7.59-7.60(2H,m),7.32-7.33(4H,m),7.09-7.11(2H,m),6.87-7.00(2H,m),4.27-4.50(3H,m),3.30-3.50(4H,m),3.02-3.23(3H,m),2.75-2.98(3H,m),2.57(3H,s),2.48(3H,s),2.00(3H,s),1.31-1.41(28H,m)。LC/MS(ES,m/z)：C52H67N5O10S之計算質量為：953.46，測得為：954.55[M+H]+。
2.裝載二胜肽Fmoc-psi-(R35-N(Boc)-Y36)至Sieber樹脂上
在燒結微波反應容器(由CEM Corporation供應)中，將NovaSyn TG Sieber樹脂(由Novabiochem供應)(0.2mmol)用20%於DMF中之哌啶(10mL)處理並在50℃下之CEM微波反應器中加熱2.5min。將反應排出並將樹脂用DMF洗滌，且再次用20%於DMF中之哌啶在50℃下之CEM微波反應器中處理5min。在排出並用DMF洗滌樹脂後，再重複一次去保護處理。接著將樹脂用上述獲得之Fmoc-psi-[Arg(Pbf)-(N-Boc)Tyr(tBu)]-OH(3至5eq.)、HATU(2.75至4.8eq.)及DIEA(6至10eq.)於DMF(4mL)中之溶液處理並在rt下混合6至24h。將混合物排出並將樹脂用DMF充份洗滌，接著藉由20%於DMF中之Ac2O(5mL)在微波條件下在50℃下處理5min來加蓋。將反應排出並將樹脂用DMF及DCM充份洗滌。
3.合成Fmoc-βA-IKPEAPGEK(烯丙氧羰基)ASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
預先裝載(psi-R35,Y36)-Sieber樹脂(0.2mmol)上之胺基酸延伸係在CEM Liberty Blue微波胜肽合成器上進行。使用HBTU/DIEA作為偶合劑，將相對於初始樹脂裝載3.8倍過量之標準α-Fmoc保護胺基酸在50℃下雙偶合15min。Fmoc-Arg(Pbf)-OH係 使用二階段方案雙偶合：在rt下25min，隨後在50℃下15min，且Fmoc-His(Trt)-OH係使用二階段方案雙偶合：在rt下4min，隨後在50℃下8min。
4.合成Fmoc-βA-IKPEAPGEK(NH 2 )ASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂：烯丙氧羰基去保護
將來自上述之所得樹脂用苯基矽烷(25eq.)於去氧DCM(10mL)中之溶液處理。在攪拌約2min後，添加Pd(PPh3)4(0.5eq.)於DCM(10mL)中之溶液並將樹脂混合物在氬下攪拌30min。將反應排出並將樹脂用去氧DCM洗滌。用新鮮試劑重複去保護，之後將反應排出並將樹脂用DCM及DMF充份洗滌。
5.合成Fmoc-βA-IKPEAPGEK(NH-dPEG 12 -NHFmoc)ASPEELNRYY ASLRHYLNL(hC)TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂：將N-Fmoc dPEG 12 羧酸偶合至11K上
將來自上述之烯丙氧羰基去保護胜肽-Sieber樹脂用N-Fmoc-dPEG12-羧酸(5eq)、HBTU(4.8eq.)及DIEA(10eq.)於DMF(7mL)中之溶液在CEM微波反應器中在50℃下處理15min，此時反應顯示Kaiser測試陰性。將反應排出並將樹脂用DMF及DCM充份洗滌。
6.合成BrCH 2 COHN-βA-IKPEAPGEK(NH-dPEG 12 -NHCOCH 2 Br)ASPEEL NRYYASLRHYLNL(hC)TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂：在βA及dPEG 12 處進行雙-溴乙醯化
將上述樹脂使用新鮮20%於DMF中之哌啶在50℃下在CEM微波反應器中進行Fmoc-去保護5min。重複去保護兩次。將如此獲得之Fmoc去保護胜肽-樹脂用溴乙酐(20eq.)於DMF(5mL)中之溶液在CEM微波反應器中在50℃下處理10min，此時反應顯示 Kaiser測試陰性。將反應排出，並將樹脂用DMF及DCM充份洗滌、接著乾燥。
7.合成BrCH 2 COHN-βA-IKPEAPGEK(NH-dPEG 12 -NHCOCH 2 Br)ASPEEL NRYYASLRHYLNL(hC)TRQ(psi-R35Y36)-CONH 2 ：自樹脂切割及全面去保護
將乾燥樹脂用1.5% TFA於DCM(10mL)中之溶液處理並混合5至10min、接著過濾。重複此處理額外9次，每次處理使用新鮮雞尾酒。接著將合併之濾液合併並濃縮以提供呈黃色發泡體之粗製保護胜肽。將此發泡體用20mL的切割雞尾酒(TFA/酚/H2O/TIPS=88/5/5/2)在室溫下處理2.5h，接著在氮氣流下濃縮至約2.5mL之體積，接著添加冷醚(40mL)沉澱胜肽。將混合物離心(5min；5000rpm)然後傾析。將此過程再重複2次以給出呈灰白色粉末之粗製胜肽。
替代地，將樹脂用切割雞尾酒處理之前不用1至2%於DCM中之TFA處理以提供完全去保護胜肽。
8.環狀PYY類似物SEQ ID NO：1：環化程序A及純化
將來自上述之粗製胜肽溶解於去氧50% MeCN/水(5至10mg/mL)中，可選地添加EDTA(1mM)。接著將反應溶液之pH經由添加7.5 w/v% NaHCO3溶液升高至約8。將所得溶液在rt下攪拌0.5至2.5h，接著藉由添加TFA酸化至pH<1。接著將溶液在減壓下在rt下濃縮至約原體積的一半(約24mL)。將所得溶液藉由逆相製備型HPLC純化。純化係在Gilson HPLC 2020個人化純化系統上，使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30×250mm,100Å,5μm)進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度20% B至最終濃度50% B歷時36min。UV偵測係在220及254nm下監測。將含產物流份藉由分析型HPLC在Agilent 1100 HPLC系統上使用如上述相同管柱類型(4.6×250mm,5μm)分析。將純流份合併、接著冷凍乾燥以 給出呈棉花樣固體之產物。LCMS：在12.27min之產物尖峰為1225.5(M+4H)/4、1633.4(M+3H)/3及2450.0(M+2H)/2(LC：Atlantis T3 C18管柱，5um，4.6×250mm，1.0mL/min，15至60%梯度)。
實例2：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：2 1.合成H 2 N-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQRY-PAL-PEG樹脂
保護胜肽基樹脂係使用如上述Fmoc策略，在CEM Liberty Blue微波胜肽合成器上，使用低裝載Rink醯胺樹脂(較佳地Fmoc-PAL-PEG PS樹脂(約0.16至0.2meq/g，由Applied Biosystems供應)，以0.1mmol之規模如方案1中所述合成。使用DIC/Oxyma作為偶合劑，將相對於樹脂裝載5倍過量之標準Fmoc保護胺基酸在約90℃之反應溫度下偶合4min。Fmoc-Arg(Pbf)-OH係在90℃下雙偶合，每次4min，且Fmoc-His(Trt)-OH係使用二階段方案偶合：在rt下4min，隨後在50℃下8min。單一Fmoc去保護係使用20%於DMF中之哌啶(去保護溶液)在90℃下進行1.5min。
2.合成m-BrCH 2 PhCOHN-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQRY-PAL-PEG樹脂
將來自上述之Fmoc去保護胜肽-樹脂(0.1mmol)用間溴甲基苯甲酸(20eq.)及DIC(10eq.)於DMF(4mL)中之溶液在微波反應器中在75℃下處理15min，此時反應大致上判定為完全，如Kaiser茚三酮測試所示(Kaiser，等人，Anal.Biochem.,1970,34,595-598)。在其中偶合經判定為不完全之情況中，以新鮮試劑重複偶合。將反應排出並將樹脂用DMF及DCM充份洗滌。
3.合成m-BrCH 2 PhCOHN-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQRY-CONH 2 ：去保護及自樹脂切割
接著將來自上述之樹脂用由TFA/水/酚/TIPS(88：5：5：2)所組成的切割雞尾酒(10mL/0.1mmol規模)處理並在微波反應器中在38℃下加熱40min、接著過濾。將樹脂用TFA洗滌並將合併之濾液在氮氣流下濃縮至體積約2.5mL且將胜肽藉由添加冷二乙基醚(40mL)沉澱。將胜肽/醚懸浮液離心並將醚層傾析。將胜肽團塊再懸浮於醚中、離心並傾析，且將此過程重複第三次。將如此獲得之粗製胜肽在溫和氮氣流下乾燥。
4.環狀PYY類似物SEQ ID NO：2：環化程序A及純化
將來自上述之粗製胜肽以
Figure 106136950-A0202-12-0084-239
4mg/mL之濃度溶解於去氧MeCN/水(60% MeCN)中。接著將胜肽溶液之pH經由添加aq.NH4OAc(200mM,pH 8.4)升高至約7至9，並將所得溶液在rt下攪拌直到環化完成，如LCMS所示(一般而言，3至4h)。將環化反應混合物藉由添加TFA酸化至pH 1.5至3，並將溶液濃縮以移除大部分有機共溶劑，直到發生輕微混濁。視需要添加回最小量的MeCN以保持混合物的勻相，接著將所得溶液藉由製備型HPLC多次注射，使用C18 Varian Pursuit XRs C18(21×250mm,100Å,5μm)管柱直接純化。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度20% B至最終濃度40% B歷時45min。UV偵測係在220及254nm下監測。將含產物流份藉由分析型HPLC在Agilent 1100 HPLC系統上使用適當管柱分析。將純的流份合併、濃縮以移除大部分有機相、接著冷凍乾燥。
實例3：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：3 1.合成(H 2 N)-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNL-(疊氮基-norLeu)-TRQRYPAL-PEG樹脂
樹脂結合胜肽係以0.1mmol之規模根據實例2、步驟1所述之方法製備，以Fmoc-疊氮基norLeu-OH代替位置31之Fmoc-hCys(trt)-OH。
2.合成(HCCH(CH 2 ) 2 CONH)-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNL-(疊氮基-norLeu)-TRQRYPAL-PEG樹脂
將4-戊炔酸在微波條件下使用DIC/HOBT方案(75℃,10min)偶合至上述樹脂上。將反應排出並將樹脂用DMF及DCM充份洗滌。
3.合成(HCCH(CH 2 ) 2 CONH)-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNL-(疊氮基-norLeu)-TRQRYPAL-CONH 2
將上述樹脂用10mL由TFA/DODT/H2O/TIS(92.5：2.5：2.5：2.5)組成之切割雞尾酒在微波條件下(38℃,40min)處理。將反應排出並將樹脂用TFA(10mL)洗滌。接著將合併之濾液在氮氣流下濃縮至約2.5mL之體積。接著添加冷醚(40mL)沉澱胜肽，並將混合物離心(5min；5000rpm)然後傾析。將此過程再重複2次以給出呈灰白色粉末之粗製胜肽。
4.環狀PYY類似物SEQ ID NO：3
製備7mg的CuSO4於2mL去氧H2O中。製備30mg的TBTA於5.4mL的EtOH及0.6mL的MeCN中。預混0.94mL的CuSO4溶液與4.8mL TBTA溶液。製備30mg的抗壞血酸Na於3mL的去氧H2O中。
在來自步驟3之粗製含疊氮基胜肽(100mg)於20mL的去氧水中之溶液中，添加預混CuSO4/TBTA溶液，隨後添加2.4mL的抗壞血酸Na溶液(溶液立刻變成乳狀)。將混合物升溫至40℃並 攪拌1.5h，此時LCMS分析指示完全反應。將混合物用水(0.1% TFA)稀釋至約40mL；將混合物離心，並將上清液藉由逆相製備型HPLC純化。純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(21×250mm,100Å,5μm)在35℃下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度10% B至中間濃度18% B(21mpm)接著至最終濃度33% B(10.5mpm)歷時35min。UV偵測係在220及254nm下監測。將含產物流份藉由分析型HPLC在Agilent 1100 HPLC系統上使用如上述相同管柱類型(4.6×250mm,5μm)分析。將純流份合併、接著冷凍乾燥以給出呈棉花樣固體之產物。
實例4：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：4 1.合成(Dde)K(NH 2 )ASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQRY-PAL-PEG樹脂
樹脂結合胜肽係使用實例2、步驟1所述之方法製備。
2.合成(Dde)K(NH-Glu-(OtBu)NH 2 )ASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQRY-PAL-PEG樹脂
將Fmoc-Glu-OtBu(5eq.)在微波條件下使用DIC/Oxyma偶合方法(90℃,6min；dc)偶合至上述樹脂上。將樹脂排出並用DMF洗滌。接著使用20%於DMF中之哌啶進行Fmoc去保護，使用3階段方案(75℃進行0.5min；75℃進行3min；75℃進行3min)，每階段用DMF洗滌。
3.合成(Dde)K(NH-Glu-(OtBu)NH-Pal)ASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQRY-PAL-PEG樹脂
將棕櫚酸(5eq.)在微波條件下使用DIC/Oxyma偶合方法(90℃,5min)偶合至上述樹脂上。將樹脂排出並用DMF及DCM充份洗滌。
4.合成(H 2 N)K(NH-Glu-(OtBu)NH-Pal)ASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQRY-PAL-PEG樹脂
在用DMF洗滌上述樹脂後，將其用2%於DMF中之肼溶液(6mL/0.1mmol樹脂)在rt下處理5min，接著排出並用DMF洗滌。再重複處理5次。
5.合成(H 2 N)IKPEAPGEK(NH-Glu-(OtBu)NH-Pal)ASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQRY-PAL-PEG樹脂
其餘胺基酸偶合係使用實例2、步驟1所述之方法進行。
6.環狀PYY類似物SEQ ID NO：4
其餘合成係使用實例2、步驟2至4所述之方法進行。產物純化係使用Varian Pursuit XRS C18管柱(21×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自23% B至中間濃度33% B(21mpm)歷時5min，接著至最終濃度48% B(10.5mpm)歷時55min。
實例5：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：5
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，在步驟3中以α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)代替棕櫚酸。產物純化係使用Agilent 300SB C8管柱(21×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度35% B至中間濃度45% B (21mpm)歷時5min，接著至最終濃度60% B(10.5mpm)歷時60min。
實例6：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：6 1.合成(HCCH(CH 2 ) 2 CONH)-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNK(Dde)-(疊氮基-norLeu)-TRQRY-PAL-PEG樹脂
樹脂結合胜肽係如實例3、步驟1所述製備，以Fmoc-Lys(Dde)-OH代替位置30之Fmoc-Leu-OH，並在此步驟中在位置2併入4-戊炔酸(雙偶合)，隨後在位置3併入Fmoc-Ile-OH。
2.合成(HCCH(CH 2 ) 2 CONH)-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNK(NH 2 )-(疊氮基-norLeu)-TRQRY-PAL-PEG樹脂
將上述樹脂用3%於DMF中之肼(8mL/0.1mmol規模)在rt下處理5min，接著將混合物排出並用DMF洗滌。重複此程序約5x，之後將樹脂用DMF接著用DCM充份洗滌。
3.合成(HCCH(CH 2 ) 2 CONH)-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNK(NH-γ-Glu-AcVitE)-(疊氮基-norLeu)-TRQRY-PAL-PEG樹脂
將Fmoc-Glu-OtBu使用實例2、步驟1所述之偶合方案以5min偶合時間偶合至上述樹脂上。將樹脂藉由20%於DMF中之哌啶使用3階段微波方案(75℃,0.5min；75℃,3min；75℃,3min)處理來去保護，之後將樹脂用DMF及DCM充份洗滌。接著將α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)使用用於偶合Fmoc-Glu-OtBu之相同程序偶合至樹脂上。
4.合成(HCCH(CH 2 ) 2 CONH)-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNK(NH-γ-Glu-AcVitE)-(疊氮基-norLeu)-TRQRY-CONH 2
來自上述樹脂之胜肽的切割及沉澱係使用實例3、步驟3所述之程序進行。
5.環狀PYY類似物SEQ ID NO：6
標題化合物係使用實例3、步驟4所述之程序製備。產物純化係在Varian Pursuit XRs C8管柱(21×250mm,100Å,5μm)上在35℃下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度35% B至中間濃度48% B(21mpm)歷時5min，接著至最終濃度63% B(10.5mpm)歷時40min。
實例7：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：7
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，其中K(NH-γ-Glu-Pal)殘基安裝在位置9而非位置11。產物純化係使用Agilent 300SB C8管柱(21×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度23% B至中間濃度43% B(21mpm)接著至最終濃度43% B(10.5mpm)歷時40min。含不純產物流份在Waters T3 C18管柱(250×19mm,100Å,5μm)上在rt下使用自初始濃度25% B至中間濃度35% B(21mpm)接著至最終濃度45% B(10.5mpm)歷時80min之梯度再次純化。
實例8：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：8
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，其中K(NH-γ-Glu-Pal)殘基安裝在位置30而非位置11。產物純化係使用Agilent 300SB C8管柱(21×250mm,100Å,5μm)在35℃下進行。 動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度21% B至中間濃度31% B(21mpm)接著至最終濃度41% B(10.5mpm)歷時40min。含不純產物流份在Waters T3 C18管柱(250×19mm,100 Å,5μm)上在rt下使用自初始濃度21% B至中間濃度31% B(21mpm)接著至最終濃度40% B(10.5mpm)歷時80min之梯度再次純化。
實例9：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO 9 1.合成H 2 N-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
來自實例1、步驟2之預先裝載(psi-R35,Y36)-Sieber樹脂(0.1mmol)上之胺基酸延伸係如實例1、步驟3所述進行，且修改為使用5倍過量之保護胺基酸。
2.合成m-BrCH 2 PhCOHN-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNL(hC)TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
將間溴甲基苯甲酸根據實例1、步驟所述之程序偶合至上述樹脂上，且修改為在50℃下而非75℃下進行偶合。
3.環狀PYY類似物SEQ ID NO：9
標題化合物係依照實例1、步驟7及8所述之程序自上述樹脂製備。產物純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(21×250mm,100Å,5μm)在35℃下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度10% B至中間濃度18% B(21mpm)歷時10min，接著至最終濃度33% B(10.5mpm)歷時35min。
實例10：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO 10
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，以Dde-Lys(Fmoc)-OH代替位置30之Fmoc-Leu-OH且在步驟3中以α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)代替棕櫚酸。產物純化係使用Agilent 300SB C8管柱(21×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度30% B至中間濃度40% B(21mpm)歷時10min，接著至最終濃度55% B(21mpm)歷時35min。含不純產物流份使用自初始濃度35% B至中間濃度43% B(21mpm)歷時5min，接著至最終濃度58% B(10.5mpm)歷時40min之改良梯度再次純化。
實例11：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：11 1.合成(烯丙氧羰基)K(NH 2 )-(hC)-TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
上述樹脂係依照實例9、步驟1所述之程序製備，使用烯丙氧羰基-Lys(Fmoc)-OH代替位置30之Fmoc-Leu-OH。
2.合成(烯丙氧羰基)K(NH-γ-Glu-AcVitE)-(hC)-TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
將Fmoc-Glu-OtBu及α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)(各5eq.)依序偶合至上述樹脂上，使用HBTU/DIEA媒介之偶合在微波條件下在50℃下進行15至20min。
3.合成H 2 N-K(NH-γ-Glu-AcVitE)-(hC)-TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
烯丙氧羰基保護基係依照實例1、步驟4所述之程序移除。
4.環狀PYY類似物SEQ ID NO：11
標題化合物係依照實例9、步驟1至3所述之程序自上述樹脂製備，且修改為使用1M TRIS/HCl緩衝液pH 7.5代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(21×250mm,100Å,5μm)在35℃下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度10% B至中間濃度18% B(21mpm)歷時10min，接著至最終濃度33% B(10.5mpm)歷時35min。
實例12：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：12
標題化合物係根據如實例2所述之程序製備，在步驟1中以Fmoc-N-Me-Arg(pbf)-OH代替位置35之Fmoc-Arg(pbf)-OH，且修改為使用1M NaHCO3緩衝液代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自10至60% B(30mpm)歷時36min。
實例13：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：13
標題化合物係根據實例11所述之程序製備，在步驟2中使用棕櫚酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且修改為使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用sat’d aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度15% B至中間濃度20% B(100mpm)歷時5min，接著至最終濃度35% B(100mpm)歷時40min。
實例14：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：14
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，其中Lys(NH-γ-Glu-Pal)殘基安裝在位置30而非位置11，且在步驟1中以Fmoc-N-Me-Arg(pbf)-OH代替位置35之Fmoc-Arg(pbf)-OH，並修改為在步驟6中使用1M NaHCO3緩衝液代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30× 250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自20至70% B(30mpm)歷時36min。不純流份在Varian Pursuit XRs二苯基管柱(30×100mm,100Å,5μm)上在rt下使用30至50% B(30mpm)歷時25min之梯度再次純化。
實例15：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：15
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，其中Lys(NH-γ-Glu-Pal)殘基安裝在位置30而非位置11，以Fmoc-βAla-OH代替位置3之Fmoc-Ile-OH偶合，且修改為使用1M NaHCO3緩衝液代替NH4OAc緩衝液進行環化，並在步驟6(實例2之步驟2)中使用下列程序使用溴乙酐代替間溴甲基苯甲酸偶合：將Fmoc去保護胜肽-樹脂(0.1mmol)用溴乙酸酐(10eq.)於DMF(5mL)中之溶液在微波反應器中在50℃下處理5至10min，此時反應大致上判定為完全，如Kaiser茚三酮測試所示。在其中偶合經判定為不完全之情況中，以新鮮試劑重複偶合。產物純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自20至60% B(30mpm)歷時36min。不純流份在Varian Pursuit XRs二苯基管柱(30×100mm,100Å,5μm)上在rt下使用30至50% B(30mpm)歷時25min之梯度再次純化。
實例16：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：16
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，其中Lys(NH-γ-Glu-Pal)殘基安裝在位置30而非位置11，省略位置3之Fmoc-Ile-OH偶合，且在步驟6(實例2之步驟2)中使用對溴甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。此外，使用1M NaHCO3緩衝液代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自20至70% B(30mpm)歷時36min。不純流份在Varian Pursuit XRs二苯基管柱(30×100mm,100Å,5μm)上在rt下使用30至50% B(30mpm)歷時25min之梯度再次純化。
實例17：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：17
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，其中Lys(NH-γ-Glu-Pal)殘基安裝在位置30而非位置11，且在步驟1中使用Fmoc-Ala-OH代替位置4之Fmoc-Lys(Boc)-OH。在步驟6中使用TRIS/HCl緩衝液(1M,pH 7.5)代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Agilent Polaris C18-A管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度20% B至中間濃度35% B(40mpm)歷時5min，接著至最終濃度45% B(40mpm)歷時40min。
實例18：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：18
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，其中Lys(NH-γ-Glu-Pal)殘基安裝在位置30而非位置11，且在步驟1中使用Fmoc-Glu(OtBu)-OH代替位置4之Fmoc-Lys(Boc)-OH。在步驟6中使用TRIS/HCl緩衝液(1M,pH 7.5)代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Agilent Polaris C18-A管柱(30×250mm,100Å, 5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度20% B至中間濃度35% B(40mpm)歷時5min，接著至最終濃度45% B(40mpm)歷時40min。
實例19：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：19
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，其中Lys(NH-γ-Glu-Pal)殘基安裝在位置30而非位置11，在步驟1中以Fmoc-N-Me-Arg(pbf)-OH代替位置35之Fmoc-Arg(pbf)-OH，以Fmoc-Cys(trt)-OH代替Fmoc-hCys(trt)-OH，且在步驟6(實例2之步驟2)中使用對溴甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。
對步驟6(實例2之步驟3及4)進行下列修改：將環化前獲得之粗製胜肽使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30× 250mm,100Å,5μm)在rt下純化。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自20至70% B(30mpm)歷時36min。將含產物流份合併並用固體NaHCO3處理以升高pH至約7至8；將所得溶液在rt下攪拌4h，接著用TFA酸化至pH 4。將溶液濃縮至5至10mL之體積，並添加MeCN以溶解任何沉澱物。產物純化如上述以20至60% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例20：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：20
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，其中Lys(NH-γ-Glu-Pal)殘基安裝在位置30而非位置11，在步驟1中以Fmoc-N-Me-Arg(pbf)-OH代替位置35之Fmoc-Arg(pbf)-OH，且以Fmoc-Cys(trt)-OH代替Fmoc-hCys(trt)-OH。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化。最終產物純化使用20至60% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例21：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：21
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，其中Lys(NH-γ-Glu-Pal)殘基安裝在位置30而非位置11，使用Fmoc-Ala-OH代替位置26之Fmoc-His(trt)-OH，且在步驟1中使用Fmoc-Ala-OH代替位置4之Fmoc-Lys(Boc)-OH。在步驟6中使用TRIS/HCl緩衝液(1M,pH 7.5)代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Agilent Polaris C18-A管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度20% B至中間濃度35% B(40mpm)歷時5min，接著至最終濃度45% B(40mpm)歷時40min。
實例22：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：22
標題化合物係根據如實例4所述之程序製備，其中Lys(NH-γ-Glu-Pal)殘基安裝在位置30而非位置11，使用Fmoc-Ala-OH代替位置26之Fmoc-His(trt)-OH，且在步驟1中使用Fmoc-Glu(OtBu)-OH代替位置4之Fmoc-Lys(Boc)-OH。在步驟6中使用TRIS/HCl緩衝液(1M,pH 7.5)代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Agilent Polaris C18-A管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度20% B至中間濃度33% B(40mpm)歷時5min，接著至最終濃度43% B(40mpm)歷時40min。
實例23：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：23
標題化合物係根據實例11所述之程序製備，使用十八碳二酸單-三級丁基酯(可購自AstaTech,Inc.)代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，在步驟2中之偶合方案採用HATU/DIEA在50℃下進行30min且採用NMP作為溶劑代替DMF，並在步驟2中偶合 Fmoc-Glu-OtBu之前先串聯偶合二單元的Fmoc-OEG-OH。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至60% B之梯度。最終產物純化使用20至70% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例24：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：24
標題化合物係根據實例23所述之程序製備，使用20-(三級丁氧基)-20-側氧基二十酸(可購自Key Organics,Inc.)代替十八碳二酸單-三級丁基酯。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至60% B之梯度。最終產物純化使用20至60% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例25：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：25
標題化合物係根據實例11所述之程序製備，使用硬脂酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，在步驟2中之偶合方案採用HATU/DIEA在50℃下進行30min且採用NMP作為溶劑代替DMF。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至80% B之梯度。最終產物純化使用20至80% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例26：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：26
標題化合物係根據實例11所述之程序製備，使用花生酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，在步驟2中之偶合方案採用HATU/DIEA在50℃下進行30min且採用NMP作為溶劑代替DMF。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至90% B之梯度。最終產物純化使用20至90% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例27：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：27
標題化合物係根據實例23所述之程序製備，但在串聯Fmoc-OEG-OH偶合後省略Fmoc-Glu-OtBu之偶合。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至60% B之梯度。最終產物純化使用20至60% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例28：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：28
標題化合物係根據實例11所述之程序製備，使用棕櫚酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，省略位置3之Fmoc-Ile-OH偶合，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用對溴甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至60% B之梯度。最終產物純化使用20至60% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例29：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：29
標題化合物係根據實例11所述之程序製備，使用棕櫚酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，以Fmoc-βAla-OH代替位置3之Fmoc-Ile-OH，並在步驟4(實例9、步驟2)中使用實例15所述之修改以溴乙酐偶合代替間溴甲基苯甲酸偶合。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至60% B之梯度。最終產物純化使用20至60% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例30：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：30
標題化合物係根據實例11所述之程序製備，使用棕櫚酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，以Fmoc-Aβυ-OH代替位置3之Fmoc-Ile-OH，並在步驟4(實例9、步驟2)中使用實例15所述之修改以溴乙酐偶合代替間溴甲基苯甲酸偶合。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至60% B之梯度。最終產物純化使用20至60% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例31：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：31
標題化合物係根據實例23所述之程序製備，使用硬脂酸代替十八碳二酸單-三級丁基酯。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至60% B之梯度。最終產物純化使用20至60% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例32：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：32
標題化合物係根據如實例11所述之程序製備，在步驟2中使用棕櫚酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，使用Fmoc-Ala-OH代替位置26之Fmoc-His(trt)-OH，且在步驟4(實例9、步驟1)中使用Fmoc-Ala-OH代替位置4之Fmoc-Lys(Boc)-OH。在步驟6中使用TRIS/HCl緩衝液(1M,pH 7.5)代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Agilent Polaris C18-A管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度20% B至中間濃度35% B(40mpm)歷時5min，接著至最終濃度45% B(40mpm)歷時40min。
實例33：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：33
標題化合物係根據如實例11所述之程序製備，在步驟2中使用棕櫚酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟1)中使用Fmoc-N(Me)-Gln(trt)-OH代替位置34之Fmoc-Gln(trt)-OH。在此例中，偶合係在rt下使用NMP作為溶劑及HATU/DIEA方案(1h，單偶合)進行；Fmoc-N(Me)-Gln(trt)-OH及Fmoc-Arg(pbf)-OH係經雙偶合。整個製程使用二階段Fmoc去保護方案(20%哌啶於DMF中；rt；10min,15min)。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至70% B之梯度。最終產物純化使用20至70% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例34：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：34
標題化合物係根據實例11所述之程序製備，使用棕櫚酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，以Fmoc-Cys(trt)-OH代替位置31之Fmoc-hCys(trt)-OH，以6-Fmoc-胺基己酸代替位置3之Fmoc-Ile-OH，並在步驟4(實例9、步驟2)中使用實例15所述之修改以溴乙酐偶合代替間溴甲基苯甲酸偶合。使用aq.NaHCO3(2N)代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自20至70% B(30mpm)歷時36min。
實例35：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：35
標題化合物係根據實例9所述之程序製備，有下列修改：使用Fmoc-psi-[N-Me-Arg(Pbf)-N(Boc)Tyr(tBu)]-OH(根據實例1、步驟1所述之程序自Fmoc-N-Me-Arg(pbf)-OH代替Fmoc-Arg(Pbf)-OH製備)代替Fmoc-psi-[Arg(Pbf)-N(Boc)Tyr(tBu)]-OH(6)以製備在本文中使用之裝載Sieber樹脂；使用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(來自Active Peptide)代替位置30之Leu；在步驟2中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸；偶合係在rt下使用NMP作為溶劑並使用HATU/DIEA方案(1h，單偶合)進行；Fmoc-Arg(pbf)-OH係經雙偶合。整個製程使用二階段Fmoc去保護方案(20%哌啶於DMF中；rt；10min,15min)。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至70% B之梯度。最終產物純化使用20至70% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例36：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：36
標題化合物係根據實例35所述之程序製備，以Fmoc-βAla-OH代替位置3之Fmoc-Ile-OH，並在步驟4(實例9、步驟2) 中使用實例15所述之修改以溴乙酐偶合代替間溴甲基苯甲酸偶合。省略實例19進行之修改。Fmoc-βAla-OH係在微波條件下在50℃下偶合20min。使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自20至70% B(30mpm)歷時36min。
實例37：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：37
標題化合物係根據實例9所述之程序製備，以Fmoc-Cys(trt)-OH代替位置31之Fmoc-hCys(trt)-OH且以Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(來自Active Peptide)代替位置30之Fmoc-Leu-OH。此外，在步驟1中將Fmoc-Abu-OH附加至序列之位置2上，並在步驟2中使用實例15所述之修改使用溴乙酐代替間溴甲基苯甲酸偶合。在步驟3中使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自20至70% B(30mpm)歷時36min。
實例38：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：38
標題化合物係根據實例35所述之程序製備，有下列修改：將Fmoc-βAla-OH依照步驟1使用微波條件在50℃下附加至序列之位置2上20min，並在步驟2中使用實例15所述之修改使用溴乙酐代替間溴甲基苯甲酸偶合。使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自20至80% B(30mpm)歷時36min。
實例39：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：39
標題化合物係根據實例11所述之程序製備，在步驟2中使用花生酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)。在步驟4(實例9、步驟1)中使用Fmoc-Ser(tBu)-OH代替位置4之Fmoc-Lys(Boc)-OH，並在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度20% B至中間濃度25% B(100mpm)歷時5min，接著至最終濃度40% B(100mpm)歷時40min。
實例40：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：40 1.合成(HCCH(CH 2 ) 2 CONH)-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNK(Dde)-(疊氮基-norLeu)-TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
來自實例1、步驟2之預先裝載(psi-R35,Y36)-Sieber樹脂(0.1mmol)上之胺基酸延伸係在rt下進行，使用NMP作為溶劑、5倍過量之保護胺基酸及HATU/DIEA方案(1h，單偶合)；Fmoc-Arg(pbf)-OH及Fmoc-His(trt)-OH係經雙偶合。整個製程使用二階段Fmoc去保護方案(20%哌啶於DMF中；rt；10min,15min)。
2.合成(HCCH(CH 2 ) 2 CONH)-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNK(NH 2 )-(疊氮基-norLeu)-TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
將上述樹脂用2%於DMF中之肼(12mL/0.2mmol規模)在rt下處理2min，接著將混合物排出。重複此程序約4x，之 後將樹脂用DMF接著用DCM充份洗滌。
3.合成(HCCH(CH 2 ) 2 CONH)-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNK((OEG) 2 -γ-Glu-Pal)-(疊氮基-norLeu)-TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
將上述樹脂與(S)-10,19-二側氧基-22-棕櫚醯胺基-3,6,12,15-四氧雜-9,18-二氮二十三烷二酸(5eq,)[根據合成中間物3所述之程序製備，在步驟G中以棕櫚酸代替18-三級丁氧基-18-側氧基十八酸]偶合，使用HBTU/DIEA方案在rt下進行1.5h。將樹脂排出並用DMF及DCM充份洗滌。
4.合成(HCCH(CH 2 ) 2 CONH)-IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNK((OEG) 2 -γ-Glu-Pal)-(疊氮基-norLeu)-TRQ(psi-R35Y36)-CONH 2
將乾燥樹脂用2% TFA於DCM(20mL)中之溶液處理並混合20min、接著過濾。重複此處理額外2次，每次處理使用新鮮雞尾酒。接著將合併之濾液合併並濃縮以提供呈黃色發泡體之粗製保護胜肽。將此發泡體用20mL的切割雞尾酒(TFA/H2O/TIPS=95/2.5/2.5)在rt下處理2.5h，接著在氮氣流下濃縮至約2.5mL之體積。接著添加冷醚(40mL)沉澱胜肽，並將混合物離心(5min；5000rpm)然後傾析。將此過程再重複2次以給出呈灰白色粉末之粗製胜肽。
替代地，將樹脂用切割雞尾酒處理之前不用1至2%於DCM中之TFA處理，以直接提供完全去保護胜肽。將粗製胜肽藉由使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30×250mm,100Å,5μm)之逆相製備型HPLC純化。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自20至70% B歷時36min。UV偵測係在220及254nm下監測。將含產物流份藉由分析型HPLC在Agilent 1100 HPLC系統上使用如上述相同管柱類型 (4.6×250mm,5μm)分析。將純流份合併、接著冷凍乾燥以給出呈棉花樣固體之產物。LCMS：在16.87min之產物尖峰為1211.8(M+4H)/4、1615.4(M+3H)/3及2422.9(M+2H)/2(LC：Atlantis T3 C18管柱，5μm，4.6×250mm，1.0mL/min，30至60%梯度)。
5.環狀PYY類似物SEQ ID NO：40
製備5.1mg的CuSO4於1mL H2O中。製備10.4mg的TBTA於3mL的EtOH中。預混400μL的CuSO4溶液與3mL TBTA溶液。製備13mg的抗壞血酸Na於2mL的H2O中。
在來自步驟4之純化含疊氮基胜肽(37mg)於4mL的HEPES(0.1M,pH 7.4)中之溶液中，添加1.7mL的預混CuSO4/TBTA溶液，隨後添加1mL的抗壞血酸Na溶液。調整EtOH/H2O比例直到反應溶液轉為透明。將混合物在rt下攪拌，並藉由HPLC監測。在30min後，反應已完成。將混合物調整至ph 4，並藉由逆相製備型HPLC純化。純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30×250mm,100Å,5μm)進行。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自20至60% B歷時36min。UV偵測係在220及254nm下監測。將含產物流份藉由分析型HPLC在Agilent 1100 HPLC系統上使用如上述相同管柱類型(4.6×250mm,5μm)分析。將純流份合併、接著冷凍乾燥以給出呈棉花樣固體之產物。
實例41：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：41
標題化合物係根據實例40所述之程序製備，在步驟3中以L-麩胺酸、N-(1-側氧基十六基)-,1-(1,1-二甲基乙基)酯代替(S)-10,19-二側氧基-22-棕櫚醯胺基-3,6,12,15-四氧雜-9,18-二氮二十三烷二酸。
實例42：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：42
標題化合物係根據實例40所述之程序製備，在步驟3中以(S)-22-(三級丁氧基羰基)-43,43-二甲基-10,19,24,41-四側氧基-3,6,12,15,42-五氧雜-9,18,23-三氮四十四-1-酸(16)(中間物2)代替(S)-10,19-二側氧基-22-棕櫚醯胺基-3,6,12,15-四氧雜-9,18-二氮二十三烷二酸。
實例43：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：43 1.合成(烯丙氧羰基)Lys((OEG) 2 -γ-Glu-NH 2 )-(hC)-TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
來自實例1、步驟2之預先裝載(psi-R35,Y36)-Sieber樹脂(0.1mmol)上之胺基酸延伸係在rt下進行，使用NMP作為溶劑、5倍過量之保護胺基酸及HATU/DIEA方案(1h，單偶合)；Fmoc-Arg(pbf)-OH係經雙偶合。整個製程使用二階段Fmoc去保護方案(20%哌啶於DMF中；rt；10min,15min)。
2.合成(烯丙氧羰基)Lys((OEG) 2 -γ-Glu-Pal)-(hC)-TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
將棕櫚酸偶合至來自步驟1之樹脂上，使用微波條件採用HATU/DIEA在50℃下進行20至30min且採用NMP作為溶劑。
3.合成(H 2 N)Lys((OEG) 2 --γ-Glu-Pal)-(hC)-TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
上述樹脂之烯丙氧羰基保護基係依照實例1、步驟4所述之程序移除。
4.環狀PYY類似物SEQ ID NO：43
標題化合物係依照實例9、步驟1至3所述之程序自上述樹脂製備，在步驟2中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。 將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至60% B之梯度。最終產物純化使用20至60% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例44：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：44
標題化合物係根據實例43所述之程序製備，修改使得串聯Fmoc-OEG-OH單元及Fmoc-Glu-OtBu單元在步驟2中併入而非步驟1。在步驟2中使用十八碳二酸單-三級丁基酯(AstaTech,Inc.)代替棕櫚酸，並將連接子-脂質序列安裝在位置11而非位置30。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至70% B之梯度。最終產物純化使用20至70% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例45：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：45
標題化合物係根據實例43所述之程序製備，修改使得使用Fmoc-dPEG24-羧酸代替串聯Fmoc-OEG-OH單元，並在步驟2中連同棕櫚酸併入。連接子-脂質序列安裝在位置11而非位置30。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至90% B之梯度。最終產物純化使用20至90% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例46：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：46
標題化合物係根據實例9所述之程序製備，使用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(來自Active Peptide)代替位置30之Leu。此外，將Fmoc-βAla-OH依照步驟1使用微波條件在50℃下附加至序列之位置2上20min，並在步驟2中使用實例15所述之修改使用溴乙酐代替間溴甲基苯甲酸偶合。固體將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至70% B之梯度。最終產物純化使用20至70% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例47：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：47
標題化合物係根據實例44所述之程序製備，將連接子-脂質序列安裝在位置7而非位置11。產物純化係使用Varian Pursuit XRs C18管柱(30×250mm,100Å,5μm)在rt下進行。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至60% B之梯度。最終產物純化使用20至60% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例48：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：48
標題化合物係根據實例43所述之程序製備，在步驟2中使用十八碳二酸單-三級丁基酯(AstaTech,Inc.)代替棕櫚酸偶合時間30min，並將連接子-脂質序列安裝在位置22而非位置30。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至70% B之梯度。最終產物純化使用20至70% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例49：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：49
標題化合物係依照實例11所述之程序製備，在步驟2中以16-四氫哌喃-2-基氧基棕櫚酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度20% B至中間濃度10% B(100mpm)歷時5min，接著至最終濃度30% B(100mpm)歷時40min。
實例50：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：50
標題化合物係根據實例48所述之程序製備，並將連接子-脂質序列安裝在位置23而非位置30。
實例51：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：51
標題化合物係根據實例9所述之程序製備，在步驟1中使用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(來自Active Peptide)代替位置30之Fmoc-Leu-OH，並使用Fmoc-Ser(tBu)-OH代替位置4之Fmoc-Lys(Boc)-OH。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度10% B至中間濃度20% B(100mpm)歷時5min，接著至最終濃度30% B(100mpm)歷時40min。不純流份使用包含初始濃度10% B至中間濃度20% B(100mpm)歷時5min，接著至最終濃度30% B(100mpm)歷時60min之梯度再次層析。
實例52：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：52
標題化合物係根據實例43所述之程序製備，使用Fmoc-dPEG12-羧酸代替串聯Fmoc-OEG-OH單元，並在步驟2中將其連同Fmoc-Glu-OtBu與棕櫚酸併入。連接子-脂質序列安裝在位置11而非位置30。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至70% B之梯度。最終產物純化使用20至70% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例53：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：53
標題化合物係根據實例52所述之程序製備，串聯使用四單元的Fmoc-OEG-OH代替Fmoc-dPEG12-羧酸。
實例54：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：54
標題化合物係根據實例53所述之程序製備，串聯安裝二單元的Fmoc-OEG-OH而非二個。
實例55：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：55
標題化合物係根據實例43所述之程序製備，將連接子-脂質序列安裝在位置23而非位置30。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至70% B之梯度。最終產物純化使用20至70% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例56：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：56
標題化合物係使用實例11所述之方法製備，在步驟2中以(4’-氯聯苯-4-基)-乙酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自10至28% B(100mpm)歷時40min。
實例57：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：57
標題化合物係依照實例11所述之程序製備，在步驟2中以3-[(2,4-二氯苯氧基)苯-4-基]丙酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約 9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自10至30% B(80mpm)歷時40min。將含產物流份合併、用TFA酸化、濃縮並在Agilent Polaris C18-A管柱(30×250mm,100Å,5μm)上在rt下再次層析。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自初始濃度20% B至中間濃度15% B(40mpm)至最終濃度45% B(40mpm)歷時45min。
實例58：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：58
標題化合物係依照實例11所述之程序製備，在步驟2中以11-(4-氟苯基}十一酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自15至35% B(100mpm)歷時40min。
實例59：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：59
標題化合物係根據實例43所述之程序製備，省略步驟2且在步驟1中併入棕櫚酸偶合。連接子-脂質序列安裝在位置22而非位置11。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環化，使用20至70% B之梯度。最終產物純化使用20至70% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例60：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：60
標題化合物係根據實例53所述之程序製備，串聯併入二個FMOC-OEG-OH單元而非四個，並將連接子-脂質序列安裝在位置7而非位置11。將粗製線性胜肽根據實例19所述之修改純化及環 化，使用20至80% B之梯度。最終產物純化使用20至80% B(30mpm)歷時36min之梯度進行。
實例61：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：61
標題化合物係依照實例11所述之程序製備，在步驟2中以11-[(4-三氟甲基)苯基]十一酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自15至35% B(100mpm)歷時40min。
實例62：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：62
標題化合物係依照實例11所述之程序製備，在步驟2中以11,11,11-三氟十一酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自10至28% B(100mpm)歷時40min。
實例63：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：63
標題化合物係依照實例11所述之程序製備，在步驟2中以15,15,15-三氟十五酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使 用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自15至30% B(100mpm)歷時40min。
實例64：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：64
標題化合物係依照實例11所述之程序製備，在步驟2中以16-乙氧基棕櫚酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自15至30% B(100mpm)歷時40min。
實例65：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：65
標題化合物係依照實例11所述之程序製備，在步驟2中以13,13,14,14,15,15,16,16,16-D9-棕櫚酸(Cambridge Isotopes)代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自15至20% B(100mpm)歷時5min，接著至35% B(100mpm)歷時40min。
實例66：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：66
標題化合物係依照實例11所述之程序製備，在步驟2中以11-[(2,4-雙(三氟甲基)苯基]十一酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍自15至35% B(100mpm)歷時40min。
實例67：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：67
標題化合物係依照實例11所述之程序製備，在步驟2中以11-[(3,5-雙(三氟甲基)苯基]十一酸代替α-生育酚基氧基乙酸(AcVitE)(8)，且在步驟4(實例9、步驟2)中使用間氯甲基苯甲酸代替間溴甲基苯甲酸。在步驟4中使用60% EtOH/H2O作為溶劑代替MeCN/H2O，並使用飽和aq.NaHCO3代替NH4OAc緩衝液進行環化。產物純化係使用Waters XBridge C18 OBD管柱(50×250mm,5μm)在rt下進行。動相由緩衝液A(10mM NH4OH於水中，pH約9)及緩衝液B(MeCN)之梯度洗提組成，梯度範圍15至35% B(100mpm)歷時40min。
實例68：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：68 1.合成(Fmoc)-βA-IKPEAPGEK(烯丙氧羰基)ASPEELNRYYASLRHYLNCVTRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
來自實例1、步驟2之預先裝載( psi -R35,Y36)-Sieber樹脂(0.1mmol)上之胺基酸延伸係在rt下進行，使用DMF作為溶劑、6倍過量之保護胺基酸及HATU/DIEA方案(10min，雙偶合)。整 個製程使用二階段Fmoc去保護方案(20%哌啶於DMF中；rt；10min,15min)。
2.合成(Fmoc)-βA-IKPEAPGEK((OEG) 2 -γ-Glu-NHCO(CH 2 ) 16 CO 2 tBu)-ASPEELNRYYASLRHYLNCVTRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
上述樹脂之去保護係依照實例1、步驟4所述之方法進行，每個處理使用修改的反應時間10min。接著將樹脂與中間物2(15)(5eq.)使用HATU/DIEA方案於DMF中(1h,rt)偶合。
3.合成(BrAc)-βA-IKPEAPGEK((OEG) 2 -γ-Glu-NHCO(CH 2 ) 16 CO 2 tBu)-ASPEELNRYYASLRHYLNCVTRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
在Fmoc去保護(20%哌啶/DMF)後，將上述樹脂用溴乙酐(10eq.；rt,30min)處理以提供溴乙醯化樹脂。
4.合成(BrAc)-βA-IKPEAPGEK((OEG) 2 -γ-Glu-NHCO(CH 2 ) 16 CO 2 tBu)-ASPEELNRYYASLRHYLNCVTRQ(psi-R35Y36)-CONH 2
將上述樹脂用由TFA/H2O/TIPS(95：2.5：2.5)組成之切割雞尾酒在rt下處理1.5h。將粗製胜肽依照實例1、步驟7所述之程序用醚沉澱。
5.環狀PYY類似物SEQ ID NO：68
將上述獲得之粗製胜肽以10mg/mL之濃度溶解於10% MeCN/H2O中，並添加TEA以升高溶液pH至8至9。在rt下攪拌約20min後，添加TFA以降低pH至2，並將溶液藉由製備型HPLC在Kinetics C18 Evo管柱(30×100mm,100Å,5μm)上直接純化。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN 中)之梯度洗提組成，梯度範圍自20至60% B歷時22min。UV偵測係在220及254nm下監測。將純流份合併、接著冷凍乾燥以給出呈棉花樣固體之產物。
實例69：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：69 1.合成(Boc)-G-ISPEAPGEK(dde)ASPEELNRYYASLRHYLNLE(OAlly1)TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
來自實例1、步驟2之預先裝載(psi-R35,Y36)-Sieber樹脂(0.1mmol)上之胺基酸延伸係在rt下進行，使用DMF作為溶劑、6倍過量之保護胺基酸及HATU/NMM方案(10min，雙偶合)。整個製程使用二階段Fmoc去保護方案(20%哌啶於DMF中；rt；10min,15min)。
2.合成(Boc)-G-ISPEAPGEK(dde)ASPEELNRYYASLRHYLNLE(NHS)TRQ(psi-R35Y36)-Sieber樹脂
上述樹脂之烯丙氧羰基去保護係依照實例1、步驟4所述之方法進行，每個處理使用修改的反應時間10min。接著將樹脂與NHS(10eq.)使用HATU/DIEA方案於DMF中(1h，rt，雙偶合)偶合。
3.合成(NH 2 )-G-ISPEAPGEK(dde)ASPEELNRYYASLRHYLNLE(NHS)TRQ(psi-R35Y36)
將上述樹脂用由TFA/H2O/TIPS(95：2.5：2.5)組成之切割雞尾酒在rt下處理1.5h。將粗製胜肽依照實例1、步驟7所述之程序用醚沉澱。
4.環狀PYY類似物SEQ ID NO：69
將上述獲得之粗製胜肽以80mg/mL之濃度溶解於DMSO中，並添加TEA(25eq.)進行內醯胺化。在rt下攪拌約30min後，將反應用10% MeCN/水稀釋10倍，將pH調整至2，並將粗製胜肽藉由製備型HPLC在Kinetics C18 Evo管柱(30×100mm,100Å,5μm)上直接純化。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度組成，梯度範圍自10至60% B歷時22min。UV偵測係在220及254nm下監測。將純流份合併、接著冷凍乾燥以給出K(Dde)保護胜肽。將Dde保護基使用2%肼/DMF(10mg胜肽/ml)在rt下移除30mins。將反應用10% MeCN/水稀釋10倍，並將pH用TFA調整至2，且將粗製胜肽溶液如上述純化以給出呈棉花樣固體之產物。
實例70：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：70
標題化合物係根據實例69中之程序製備，以Fmoc-E(OAll)-OH取代位置30之Fmoc-Leu-OH並以Fmoc-Val-OH取代位置31之Fmoc-E(OAll)-OH。
實例71：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：71 1.合成(Boc)-G-ISPEAPGEK(dde)ASPEELNRYYASLRHYLN E(O烯丙基)VTRQ(N-Me-R)Y-NovaSyn TGR樹脂
NovaSyn TGR樹脂(0.1mmol)上之胺基酸延伸係使用實例69、步驟1所述之程序進行。
2.環狀PYY類似物SEQ ID NO：71
標題化合物係根據實例69、步驟2至4所述之程序自上述樹脂製備。
實例72：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：72 1.合成(S)-22-(三級丁氧基羰基)-43,43-二甲基-10,19,24,41-四側氧基-3,6,12,15,42-五氧雜-9,18,23-三氮四十四-1-酸N-羥基琥珀醯亞胺酯
在(S)-22-(三級丁氧基羰基)-43,43-二甲基-10,19,24,41-四側氧基-3,6,12,15,42-五氧雜-9,18,23-三氮四十四-1-酸(中間物2(16))(54.0mg,0.063mmol)、N-羥基琥珀醯亞胺(14.6mg,0.127mmol)、及HATU(24.1mg,0.063mmol)於1.0ml之DMF中之溶液中添加DIEA(0.022ml,0.127mmol)，並將混合物在RT下攪拌30mins且不經進一步純化直接用於下一步驟。
2.合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：72
在[環-(G2-E30),S4,K11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36(在實例70中製備)(4mg,0.96μmol)於DMF(0.2mL)中之溶液中，添加24μL之N-羥基酯溶液(在步驟1中製備)及TEA(0.66μL；5eq)並將混合物在rt下攪拌整夜。將反應用10% MeCN/水稀釋10倍，將pH用TFA調整至2，並將粗製胜肽藉由製備型HPLC在Kinetics C18 Evo管柱(30×100mm,100Å,5μm)上直接純化。動相由緩衝液A(0.1% TFA於水中)及緩衝液B(0.1% TFA於MeCN中)之梯度洗提組成，梯度範圍自10至60% B歷時22min。UV偵測係在220及254nm下監測。將純流份合併、接著冷凍乾燥以給出三級丁基酯保護胜肽。將三級丁基酯保護基使用TFA/H2O/TIPS(95：2.5：2.5)之混合物在rt下移除1.5h。將混合物濃縮，並將胜肽如上述純化以給出呈棉花樣固體之產物。
實例73：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：73
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，在步驟5中以N-Fmoc-dPEG6-羧酸取代N-Fmoc-dPEG12-羧酸。
實例74：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：74
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，但跳過步驟5中之PEG連接子偶合。
實例75：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：75
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，以Fmoc-C(trt)-OH取代位置31之Fmoc-hC(trt)-OH，並跳過步驟3中之Fmoc-βA-OH偶合步驟。
實例76：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：76
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，其中修改步驟3及步驟4。在步驟A中，Fmoc-K(烯丙氧羰基)-OH及Fmoc-K(dde)-OH分別用於位置30及位置11。在將位置30之烯丙氧羰基用Pd(PPh3)4-苯基矽烷去保護後，將mPEG16-羧酸與HATU-DIPEA偶合。在步驟4中，將位置11之dde用2%於DMF中之肼移除。
實例77：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：77
標題化合物係根據如實例76所述之程序製備，在步驟A中以mPEG12-羧酸取代mPEG16-羧酸，並跳過步驟5中之Fmoc-dPEG12-羧酸偶合步驟。
實例78：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：78
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，在步驟3中以Fmoc-N-Me-Q(trt)-OH取代Fmoc-Q(trt)-OH。
實例79：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：79
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，在步驟1B中以Fmoc-N-Me-R(pbf)-OH取代Fmoc-R(pbf)-OH。
實例80：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：80
標題化合物係根據如實例79所述之程序製備，在步驟3中以Fmoc-R(pbf)-OH取代位置4之Fmoc-K(Boc)-OH，並以Fmoc-W(Boc)-OH取代位置30之Fmoc-L-OH。
實例81：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：81
標題化合物係根據如實例80所述之程序製備，在步驟3中以Fmoc-C(trt)-OH取代位置31之Fmoc-hC(trt)-OH，並以Fmoc-γ-胺基丁酸取代Fmoc-βA-OH。
實例82：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：82
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，以Fmoc-PEG2-羧酸取代Fmoc-βA-OH並以Fmoc-C(trt)-OH取代位置31之Fmoc-hC(trt)-OH，同時跳過步驟3中之Fmoc-Ile-OH偶合。
實例83：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：83
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，在步驟3中以Fmoc-K(N3)-OH取代位置31之Fmoc-hC(trt)-OH，以戊-4-炔酸取代Fmoc-βA-OH，並依照下述之環化程序B。
環化程序B：在完全去保護胜肽(其中PEG12-AcBr安裝在位置11)(38mg,0.0067mmol)於2mL HEPES(pH 7.4)中之溶液中，添加1.7mL之預混CuSO4/TBTA溶液(溶液係藉由混合2.2mg CuSO4於水(0.4mL)中之溶液與11mg TBTA於EtOH中之溶液製備)，隨後添加含7mg抗壞血酸鈉之水(1mL)。將透明反應溶液留置在室溫下混合並藉由HPLC監測。在30min後，反應已完成，並將反應混合物使用TFA調整至pH 4且進行HPLC純化(Pursuit XRS 5 250×30mm C18管柱，以30mpm流速運行，監測214nM波長，梯度範圍自20至60% ACN-水/水，二者皆含0.1% TFA，歷時36分鐘)。將所欲流份收集並冷凍乾燥。
實例84：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：84
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，跳過Fmoc-βA-OH偶合步驟，在步驟5中以N3-PEG8-羧酸取代Fmoc-dPEG12-羧酸，並在步驟3中以3-(溴甲基)苯甲酸與DIC偶合取代溴乙酐醯基化，且依照下述之環化程序C進行。
環化程序C：在完全去保護胜肽(20mg,0.0035mmol)於5mL除氣水中之溶液中，添加aq.NaHCO3溶液以調整反應混合物至pH 6.4或更高。在20min後，LCMS顯示反應已完成，並將反應混合物使用TFA調整至pH 4且進行HPLC純化(Pursuit XRS 5 250×30mm C18管柱，以30mpm流速運行，監測214nM波長，梯度範圍自10至60% ACN-水/水，二者皆含0.1% TFA，歷時36分鐘)。將所欲流份收集並冷凍乾燥。
在環化後，將環化中間物藉由點擊化學(click chemistry)依照環化程序B以N-(1-溴-2-側氧基-7,10,13-三氧雜-3-氮十六-16-基)戊-4-炔醯胺(其係藉由將N-Boc-PEG4-NH2與戊-4-炔酸使用HATU-DIPEA偶合，隨後用TFA去保護Boc且在TEA存在下用溴乙酐醯基化製備)進行連接子延伸。
實例85：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：85
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，其中PEG12-AcBr連接子安裝在位置23而非位置11。
實例86：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：86
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，其中PEG12-AcBr連接子安裝在位置22而非位置11。
實例87：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：87
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，其中PEG12-AcBr連接子安裝在位置7而非位置11。
實例88：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：88
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，在步驟3中以Fmoc-V-OH取代位置31之Fmoc-hC(trt)-OH，以Fmoc-C(trt)-OH取代位置30之Fmoc-L-OH，並以Fmoc-G-OH取代Fmoc-βA-OH。
實例89：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：89
標題化合物係根據如實例88所述之程序製備，跳過步驟1以製備還原雙胜肽，並在步驟2中以Fmoc-Y(tBu)-OH裝載隨後與Fmoc-(N-Me)R-OH偶合取代Fmoc-psi-(R35-N(Boc)-Y36)-OH裝載。
實例90：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：90
標題化合物係根據如實例89所述之程序製備，在步驟3中以Fmoc-βA-OH取代Fmoc-G-OH。
實例91：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：91
標題化合物係根據如實例89所述之程序製備，在步驟3中以Fmoc-hC(trt)-OH取代位置30之Fmoc-C(trt)-OH。
實例92：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：92
標題化合物係根據如實例90所述之程序製備，在步驟3中以Fmoc-hC(trt)-OH取代位置31之Fmoc-V-OH，並以Fmoc-L-OH取代位置30之Fmoc-C(trt)-OH。
實例93：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：93
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，在步驟3中以Fmoc-V-OH取代位置31之Fmoc-hC(trt)-OH，以Fmoc-C(trt)-OH取代位置30之Fmoc-L-OH，並以Fmoc-G-OH取代N端之Fmoc-βA-OH。
實例94：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：94
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，在步驟3中以Fmoc-V-OH取代位置31之Fmoc-hC(trt)-OH，並以Fmoc-C(trt)-OH取代位置30之Fmoc-L-OH。
實例95：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：95
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備(0.05mmol規模)，在步驟3中以Fmoc-V-OH取代位置31之Fmoc-hC(trt)-OH、以Fmoc-Glu(O烯丙氧羰基)-OH取代位置30之Fmoc-L-OH、以Fmoc-Lys(dde)-OH取代位置11之Fmoc-Lys(烯丙氧羰基)-OH、以Fmoc-Ser(tBu)-OH取代位置4之Fmoc-K(Boc)-OH、並以Boc-G-OH取代N端之Fmoc-βA-OH。
在來自上述之所得樹脂中添加去氧DCM(10mL)、苯基矽烷(10eq.)及Pd(PPh3)4(0.2eq.)於DCM(1mL)中之溶液，並將混合物攪拌10mins。將反應排出並將樹脂用去氧DCM洗滌且重複去保護一次。
在來自上述之所得樹脂中添加DMF(10ml)、HATU(5eq)、及DIEA(10eq)，並將混合物攪拌5mins，接著添加N-羥基琥珀醯亞胺(10eq)於DMF中之溶液並攪拌額外20mins。將樹脂過濾並重複程序一次。
將來自上述之樹脂在RT下於TFA/TIPS/水(95/2.5/2.5)(10ml)中去保護2hrs。將切割雞尾酒濃縮至約1ml，接著添加至40ml之醚。將所得沉澱物藉由離心收集並在N2下乾燥。
將來自上述之所得材料溶解於9mL之DMSO中，向其中添加10eq之TEA並允許反應在RT下進行3hrs。將所得溶液用水稀釋至30ml，將pH調整至2並藉由RP-HPLC在30mm×250mmC18管柱上純化，用20至40% ACN於水(0.1% TFA)中之線性梯度洗提30mins。將含產物流份冷凍乾燥。
接著將來自上述之所得材料用1至2%肼/DMF(1mL)處理以將Dde自離胺酸移除。將所得混合物用水稀釋至10ml，將pH調整至2，接著藉由RP-HPLC如上述純化。
接著將所得產物溶解於10% ACN/水中，將pH調整至10，並添加溴乙酸N-羥基琥珀醯亞胺酯溶液(3eq之0.1M/DMF soln)且允許反應在RT下進行10mins。將所得混合物用水稀釋至10ml，將pH調整至2，接著藉由RP-HPLC如上述純化以給出標題產物。
實例96：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：96
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，在步驟5中以N-Fmoc-dPEG24-羧酸取代N-Fmoc-dPEG12-羧酸。
實例97：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：97
標題化合物係根據如實例1所述之程序製備，在步驟3中以Fmoc-G-OH取代Fmoc-βA-OH。
實例98：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：98
標題化合物係根據如實例89所述之程序製備，但跳過步驟5中之Fmoc-dPEG12-羧酸偶合步驟。
實例99：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：99
標題化合物係根據如實例90所述之程序製備，但跳過步驟5中之Fmoc-dPEG12-羧酸偶合步驟。
實例100：合成環狀PYY類似物SEQ ID NO：100
標題化合物係根據如實例94所述之程序製備，但跳過步驟5中之Fmoc-dPEG12-羧酸偶合步驟。
實例101：鑑定及生產mAb MSCB97 選擇PH9L3 VL及PH9H5 VH作為起始V區進行工程改造
選擇指定為PH9L3之抗體輕鏈可變區(VL)(SEQ ID NO：128)(Teplyakov等人，「Structural diversity in a human antibody germline library」，mAbs Aug-Sep 8(6)：1045-63(2016))及指定為PH9H5之抗體重鏈可變區(VH)(SEQ ID NO：129)(Teplyakov等人，「Structural diversity in a human antibody germline library」，mAbs Aug-Sep 8(6)：1045-63(2016))作為起始可變區，自此將mAb工程改造以使其能夠用於胜肽接合。PH9L3包含完全人類Ig生殖系V基因序列，因此不含有任何來自體內親和性成熟過程所導致高親和性、抗體特異性結合的序列突變。PH9H5之CDR3係在該VH中唯一不包含人類生殖系V基因序列的區段。PH9H5之CDR3係來自抗人類CCL2抗體CNTO 888且提供於SEQ ID NO：130。製造含有PH9H5/PH9L3 VH/VL對之Fab。
將PH9L3、PH9H5與彼等之最類似的人類Ig生殖系V區及J區序列對準，以判定與生殖系序列之序列同一性或類似性。將PH9H5與人類Ig生殖系基因IGHV3-23*01(PubMed ID：M99660)(SEQ ID NO：132)及人類IGHJ1*01(PubMed ID：J00256)(SEQ ID NO：133)之串連物(SEQ ID NO：131)對準，其中PH9H5胺基酸序列與串連人類IGHV3-23*01-IGHJ1*01序列之間的唯一差異在於VH CDR3，即PH9H5之SEQ ID NO：130。
將PH9L3與人類Ig生殖系基因IGKV3-11*01(PubMed ID：X01668)(SEQ ID NO：135)及IGKJ1*01(PubMed ID： J00242)(SEQ ID NO：136)之串連物(SEQ ID NO：134)對準，其中唯一差異於在於V基因/J基因連接處之一個偏差。
設計及製造PH9H5及PH9L3之Cys取代變體
設計、製造在V區之所有三個CDR中的選定CDR殘基處含有單一Cys取代之PH9H5 VH變體，並將其以具有人類IgG1恆定區之完整重鏈選殖至哺乳動物宿主表現載體中。利用PH9H5/PH9L3 Fab結構以幫助選擇在接合時看似更易於接近之CDR殘基以進行取代，且在一些變體中，將額外甘胺酸(Gly)殘基插入經導入Cys殘基的任一側，以潛在地增加Cys在接合時的可接近性。設計及製造PH9L3 VL之類似變體，惟這些變體以具有人類κ恆定區之完整輕鏈選殖至表現載體中。總共製造24個PH9H5單一Cys變體之表現建構體及22個PH9L3單一Cys變體之表現建構體。在PH9H5_VH(SEQID NO：129)及PH9L3_VL(SEQ ID NO：128)中經選定以供取代之殘基係摘述於圖2。
將製造之表現建構體用於表現Cys變體，各基於PH9H5之HC Cys變體建構體係與野生型PH9L3 LC建構體暫時共轉染，或各基於PH9L3之LC Cys變體建構體係與野生型PH9H5 HC建構體共轉染。初始測試轉染使用HEK衍生性Expi293作為表現宿主且規模為20ml。基於培養上清液之變體蛋白質定量得知，大部分的HC及LC Cys變體皆表現良好。
五個初始HC Cys變體MSCB33至MSCB37係以750ml之規模表現於Expi293中，並將變體蛋白質純化。純化變體之純化產率及品質特性相當類似，且足以將這些純化蛋白質用於初始胜肽接合反應。
評估胜肽接合至基於PH9H5之HC Cys變體
MSCB33蛋白質及其他變體蛋白質之分析質量判定，指示半胱胺酸加成物存在於經工程改造以供接合之Cys處(每個mAb二 個)，且HCC端Lys殘基係經移除(常見於重組生產之mAbs)。為了製備用於接合之變體mAbs，藉由經發展以維持mAb內之天然雙硫鍵的還原過程移除加成物(見實例103)。與人類調酸素(OXM)胜肽類似物(GCG Aib2,Glu16,24,Arg20,Leu27,Lys30-ε-(PEG12)-NH2)之初始測試接合，係使用順丁烯二醯亞胺化學在所有五個HC Cys變體mAbs上進行。在mAb變體之間有不同的接合效率，此藉由接合反應產物及各接合反應產物之相對百分比來定性評估。相較於其他含有側接Gly殘基之I102C變體，最高效率(以具有最高百分比的同二聚體產物測量)係在MSCB33觀察到，在Y103C變體MSCB35或MSCB37則觀察到很少或無接合。
數個在不同CDRs具有工程改造半胱胺酸取代的其他HC及LC Cys變體(PH9H5_VH(SEQID NO：129)中之T28C、S30C、及S54C取代、及PHpL3_VL(SEQ ID NO：128)中之S30C及S92C取代)係以大規模表現於Expi293中。自這些純化蛋白質還原移除Cys加成物極具挑戰，因此未進一步研究這些變體。由於在大部分Cys變體觀察到的挑戰，以及在I102C PH9H5變體mAb(MSCB33)觀察到的初始良好接合效率，製程開發及進一步的改造工程著重於此特定變體。
MSCB33之Fc工程改造
將MSCB33再工程改造為含有靜默、人類IgG4_PAA Fc以減少體內Fc功能。人類IgG4_PAA在人類IgG4異型nG4m(a)(基於如IMGT定義之IGHG4*01對偶基因)上具有突變S228P/F234A/L235A。製造具有MSCB33之VH與IgG4_PAA Fc融合之表現建構體，並與用於MSCB33表現之相同LC表現建構體一起使用，以生產MSCB33之IgG4_PAA變體，將其指定為MSCB97。MSCB97 VH、HC、VL、及LC之胺基酸序列分別提供於SEQ ID NO：137、138、139、及140。
MSCB97之測試表現係以20ml規模在Expi293細胞中 暫時進行，此mAb變體表現良好。自大規模Expi293表現運行純化MSCB97。MSCB97之純化產率係264.53mg/L，且品質經判定為85%單體物種。後續大規模表現運行及純化具有類似或較佳的產率及品質，指示此mAb可一致地生產。
評估胜肽接合至MSCB97及接合反應規模
IgG1與IgG4同型之間的LC-HC雙硫鍵連接性不同，因此使用TCEP還原及如上述與OXM-順丁烯二醯亞胺測試胜肽之接合，來測試並證實還原及順丁烯二醯亞胺接合可自IgG1 mAb MSCB33轉移至IgG4_PAA mAb MSCB97。已知順丁烯二醯亞胺接合所導致的鍵結係潛在可逆的，因此採用產生較為穩定鍵結的溴乙醯胺接合化學，並以10mg之規模基於起始MSCB97成功實施。
分析經由溴乙醯胺化學製造之MSCB97與OXM類似物GCG Aib2,Glu16,24,Arg20,Leu27,Lys30-ε-(PEG12)-NH2之接合物(MSCB97-OXM1)以判定體外GLP-1R及GCGR效力。效力相對於參考胜肽及參考未結構化多胜肽接合物為合理，且與相同胜肽與MSCB33(IgG1)所製造之接合物的效力類似。這證明MSCB97(IgG4_PAA)與MSCB33(IgG1)(此係同型)之間的單一差異對於含有相同胜肽之接合物的效力沒有影響。此外，這些資料顯示所欲的體外效力可保留於用溴乙醯胺化學(生產體內穩定鍵結)所製造的胜肽-mAb接合物中。亦將其他OXM類似物接合至MSCB97，並分析這些接合物的體外效力。這些接合物具有與MSCB97-OXM1類似的GLP-1R及GCGR效力，因此強調MSCB97接合多種胜肽同時保留胜肽效力的能力。
評估胜肽-MSCB97接合物與人類CCL2之結合
雖然MSCB97缺乏特異性抗原結合因而被選定來進行工程改造，但此mAb最可能結合的抗原(若有的話)係基於VH CDR3來源而為人類CCL2。使用具有OXM胜肽類似物或PYY胜肽 類似物之二個胜肽-MSCB97接合物來評估MSCB97是否具有任何特異性CCL2結合。
潛在CCL2結合直接藉由表面電漿共振(SPR)測量，其中使用抗Fc捕捉方法將接合物固定在表面。使用市售抗CCL2小鼠mAb作為陽性對照，二個非特異性人類抗體CNTO 9412及HH3B33作為陰性對照。將所有對照物類似地固定在表面，使重組人類CCL2以至多400nM之濃度流過經固定的接合物及對照物。基於預先建立之檢定標準，指示特異性抗原結合之CCL2累積見於陽性對照但不見於陰性對照或胜肽-MSCB97接合物。此證實MSCB97(為胜肽-mAb接合物之相關治療形式)缺乏人類CCL2結合。
實例102：表現與純化mAb
全人類單株抗體(mAb)可重組表現於哺乳動物表現宿主中，且使用該領域已知之標準方法自細胞培養上清液純化。例如，可使用標準分子生物學方法，將編碼mAb之輕鏈(LC)及重鏈(HC)的cDNA序列(各包括使能夠分泌的適當信號胜肽)選殖至不同的哺乳動物表現載體或單一表現載體中。使用的表現載體可為任何市售表現載體(諸如pEE12.4、pcDNATM3.1(+)或pIRESpuro3)、或任何具有類似功能之客製表現載體。在該等載體中，mAb之重鏈及輕鏈的轉錄各自受到任何已知有效啟動子諸如hCMV-MIE啟動子的驅動。轉染級質體DNA係使用標準方法諸如QIAGEN質體Midi套組製備，以用於不同的LC及HC表現建構體或表現LC及HC二者之單一建構體。
純化質體DNA係經製備以與基於脂質之轉染試劑諸如FreestyleTM Max轉染試劑依照廠商說明用於轉染，接著經轉染至標準哺乳動物表現宿主細胞系諸如CHO-S或HEK 293-F。若mAb LC及HC係由不同的表現建構體編碼，則同時轉染二個建構體。在轉染之前及之後，哺乳動物細胞依照標準細胞培養方法培養以用於維持或用於mAb表現，其中應維持的細胞密度範圍、應使用的培養介質、及遵照的其他細胞培養條件係由所利用的特定哺乳動物宿主細胞系而定。這 些參數一般由供應細胞系之供應商或在科學文獻中記載。例如，CHO-S細胞懸浮維持於CHO FreestyleTM介質中，以125RPM在設定37℃及8% CO2的增濕培養箱中震盪，且當細胞濃度介於每ml 1.5與2.0×106個細胞之間時繼代。
將來自表現mAb之暫時轉染哺乳動物細胞之細胞培養上清液在轉染後數天收集、藉由離心澄清並過濾。CHO-S細胞的表現期間一般係四天但可經調整，且不同的哺乳動物宿主細胞系可不同。大規模轉染(>10公升)係使用濃縮器諸如Centramate濃縮10倍。將mAb使用蛋白質A親和性管柱(諸如HiTrap MabSelect Sure)自澄清上清液純化，利用標準方法將mAb結合至蛋白質A樹脂、使用低pH緩衝液洗滌樹脂並洗提蛋白質。將蛋白質流份藉由洗提至含有pH 7緩衝液之試管中立即中和，並將尖峰流份彙集、過濾且用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)、pH 7.2在4℃下透析整夜。在透析後將mAb再次過濾(0.2μ過濾器)，並以在280nm之吸光度判定蛋白質濃度。利用SDS-聚丙醯胺凝膠電泳(PAGE)及分析性尺寸篩除HPLC評估經純化之mAb蛋白質品質，且使用鱟變形細胞溶解物(LAL)分析法測量內毒素水準。將純化mAb儲存在4℃下。
自暫時轉染CHO細胞表現及純化MSCB97
使MSCB97表現於ExpiCHO-STM細胞(ThermoFisher Scientific,Waltham,MA；Cat # A29127)中，其中以MSCB97表現建構體之純化質體DNA依照廠商建議進行細胞暫時轉染。簡言之，將ExpiCHO-STM細胞懸浮維持於設定37℃、8% CO2及125RPM之震盪培養箱中之ExpiCHOTM表現介質(ThermoFisher Scientific,Cat # A29100)中。將細胞繼代以使得在轉染當天可達成稀釋至每ml 6.0×106個細胞，維持98%或更佳之細胞存活性。使用ExpiFectamineTM CHO轉染套組(ThermoFisher Scientific Cat # A29131)進行暫時轉染。每ml待轉染的稀釋細胞使用一微克的質體DNA，且質體DNA係經稀釋於OptiPROTM SFM錯和介質中。ExpiFectamineTM CHO試劑 係以1：3比例(v/v，DNA：試劑)使用，且亦稀釋於OptiPROTM中。將稀釋的DNA及轉染試劑合併一分鐘，允許DNA/脂質錯合物形成，接著添加至細胞。在整夜培養後，將ExpiCHOTM feed及ExpiFectamineTM CHO增強子添加至細胞。使細胞在32℃下震盪培養五天，之後收集培養上清液。
來自暫時轉染ExpiCHO-STM細胞之培養上清液係藉由離心澄清(30min,6000rpm)隨後過濾(0.2μ PES膜，Corning)來收集。大規模轉染(5至20公升)首先係使用Pall Centramate切向流過濾系統濃縮10倍。將10x DPBS(Dulbecco’s磷酸鹽緩衝鹽水)pH7.2添加至上清液至1x最終濃度，之後裝載至平衡(DPBS,pH 7.2)HiTrap MabSelect Sure蛋白質A管柱(GE Healthcare；Little Chalfont,United Kingdom)上，相對濃度為每ml樹脂約20mg蛋白質，使用AKTA FPLC層析系統。在裝載後，將管柱用10倍管柱體積之DPBS,pH7.2洗滌。將蛋白質用10倍管柱體積之0.1M Na-乙酸酯pH 3.5洗提。將蛋白質流份藉由洗提至含有20%洗提流份體積之2.0M Tris,pH 7之試管中立即中和。將尖峰流份彙集，並將pH用額外的Tris調整至約5.5(若有需要)。將純化蛋白質過濾(0.2μ)，並在BioTek SynergyHT TM 分光光度計上以在280nm之吸光度判定濃度。利用SDS-PAGE與分析性尺寸篩除HPLC(Dionex HPLC系統)，評估經純化之蛋白質品質。利用濁度LAL分析法(Pyrotell®-T,Associates of Cape Cod)，測量內毒素水準。
實例103：接合mAb與環狀PYY類似物 方法A：TCEP部分還原mAb
將mAb於tris-乙酸酯緩衝液(20mL，1mM於EDTA中)中之10mg/mL溶液用3當量的TCEP處理。將溶液調整至pH 6且在rt下1hr後，高壓液相層析串聯質譜分析(LCMS)顯示位置C102之雙硫鍵加成物已完全還原。將還原mAb藉由蛋白質A吸附及洗提(4 CV的100mM乙酸)純化，以提供180mg之還原mAb。
接合還原mAb與環狀PYY類似物
將冷凍乾燥胜肽(5eq相較於mAb)添加至上述還原mAb。添加EDTA至最終濃度1mM，並將pH調整至7。將濃度調整至8mg/mL並允許反應在輕微攪動下在rt下進行16h。添加TCEP(0.5eq相較於mAb)，且允許反應在rt下在輕微攪動下進一步進行4hr，之後高分子量(MW)物種減少至小於3%。
將反應混合物調整至pH 5.5並藉由離子交換層析法在CaptoSP樹脂上純化，在20 CV內使用梯度100% A(100mM TRIS-乙酸酯，pH 5.5)至100% B(100mM TRIS-乙酸酯，pH 5.5；0.5M NaCl)。將含所欲接合物之流份彙集，並回收140mg之接合物，共洗提出小量未反應胜肽。最終純化藉由蛋白質A吸附及洗提(4 CV的100mM乙酸)進行。將產物之pH調整至6以給出120mg之接合物(60%產率)，其純度>90%且含有<3%高MW物種。
方法B 疏水性交互作用層析法(HIC)純化mAb
將mAb於tris-乙酸酯緩衝液中之20mg/mL溶液裝載在疏水性交互作用管柱(TOSOH TSKgel苯基7.5×21cm)上並用線性梯度(0至70% B/A，溶劑A：5% iPrOH，1M(NH4)2SO4，100mM磷酸鹽緩衝液，pH 6.0；溶劑B：20% iPrOH，100mM磷酸鹽緩衝液)洗提。將mAb單體尖峰彙集、濃縮(5至10mg/mL)並用3-(N-嗎啉基)丙磺酸(MOPS)緩衝液(100mM,pH 5.5)透析。
TCEP部分還原及接合還原mAb與環狀PYY類似物
向純化mAb(27mL,9.28mg/mL)添加4eq.TCEP，隨後添加EDTA(1mM)。在室溫下2hr後，LCMS顯示位置C102之雙硫鍵加成物已完全還原。將還原mAb用Zebra去鹽離心管柱(7×10mL，7K MWCO，用MOPS 100mM pH 5.5預先平衡)處理，以移除經釋放之半胱胺酸/GSH。在還原mAb之合併流份(28mL)中添加 PYY胜肽於Milli Q等級水中之溶液(6.5eq相較於mAb，15至20mg/mL)隨後添加EDTA(1mM)。將反應pH藉由逐滴添加1N NaOH調整至7.2至7.4。允許反應在室溫下在輕微攪動下進行18h。使反應在另外添加0.5當量TCEP後再繼續12h以還原在反應進程期間形成的mAb-mAb二聚體，且允許轉化成所欲之mAb同二聚體。將反應之pH藉由添加2M乙酸降低至pH 5.5，並將粗製接合物藉由疏水性交互作用層析法純化，且用線性梯度(0至100% B/A，溶劑A：5% iPrOH，1M(NH4)2SO4，100mM磷酸鹽緩衝液，pH 6.0；溶劑B：20% iPrOH，100mM磷酸鹽緩衝液)洗提。最終純化藉由蛋白質A吸附(PBS)及洗提(NaOAc,pH 3.5)。將產物的pH調整至6並用PBS透析以給出最終樣本(56%)。
替代地，mAb用GSH及/或Cys還原。在藉由切向流過濾(TFF)移除還原劑後，將過量的胜肽在可選地0.2至0.5當量之TCEP存在下添加至還原mAb。
實例104：mAb接合物表徵
PYY-mAb接合物之分析表徵係使用(i)疏水性交互作用層析法(HIC)、(ii)藉由LC-ESIMS之完整質量測量、(iii)尺寸篩除層析法(SEC)進行。PYY-mAb接合物之分析表徵結果及接合方法顯示於表1。
Figure 106136950-A0202-12-0132-732
Figure 106136950-A0202-12-0133-733
實施例105：體外檢定
評估化合物1在表現人類、大鼠、小鼠及恆河猴Y2受體、及人類Y1、Y4及Y5受體之純株細胞(HEK或CHO)中體外活化NPY受體的能力。PYY3-36、NPY及PP係包括於這些檢定中作為試驗對照組。
細胞系
發展表現NPY受體之穩定轉染純株細胞系以用於cAMP檢定。簡言之，將HEK293細胞系用攜帶人類Y2受體(寄存編號：NM_000910.2)、人類Y5受體(寄存編號：NM_006174.2)、小鼠Y2受體(寄存編號：NM_008731)及恆河猴Y2受體(寄存編號：NM_001032832)編碼序列之表現質體轉染，其中使用Lipofectamine 2000套組(Invitrogen)根據其方案進行。在轉染四十八小時後，將細胞以選擇介質(DMEM高葡萄糖含10%胎牛血清(FBS)、50I.U.青黴素、50μg/ml鏈黴素、2mML-麩醯胺酸、1mM丙酮酸鈉及600μg/ml G418)再接種。使細胞保持在選擇介質中2週，接著使用有限稀釋方法挑選單一細胞株。轉染細胞後續藉由培養 於補充有10%胎牛血清、1% L-麩醯胺酸、1%丙酮酸鈉、1%青黴素/鏈黴素及600μg/ml G418之DMEM-高葡萄糖介質(Cellgro)中維持。
此外，自DiscoverX Corporation獲得表現人類Y1受體(目錄編號：93-0397C2)及人類Y4受體(目錄編號：95-0087C2)之CHO-K1細胞系。DiscoverX細胞培養於補充有10% FBS且在G418選擇(800μg/mL)下之F12介質(Gibco)中。大鼠Y2受體表現於自Promega Corporation獲得之Glo-Sensor CHO-Kl細胞系。這些細胞經pGloSensorTM-23F cAMP質體轉染以進行基於發光之cAMP檢定，但結果使用Perkin-Elmer LANCE cAMP檢定進行測試及驗證。大鼠Y2細胞生長於補充有10% FBS及800μg/ml G418之F12介質(Gibco)中。
將所有細胞系存庫於小瓶(4×106個細胞/小瓶)並儲存於液體氮中直到使用。在檢定前一天，將小瓶解凍並添加15mls適當介質。將細胞以450×g離心5min、吸出上清液、並將細胞以0.2×106個細胞/ml之密度再懸浮於不含G418之介質中。將細胞分配(25μl/孔)至Biocoat膠原蛋白塗佈白色384孔板中，最終密度為5000個細胞/孔。將細胞板在37℃增濕組織培養培養箱中、在5% CO2/90% O2大氣下培養整夜。
實驗方案
各種受體檢定之cAMP檢定皆相同。所有實驗使用LANCE cAMP套組(Perkin Elmer Corporation；Waltham,MA)定量細胞內cAMP水準。在檢定當天，將細胞介質自細胞傾析並將6μl之胜肽(2X濃度)添加至孔。將胜肽以刺激緩衝液配製成11點劑量反應(始於100nM或10μM經連續1：3稀釋)。刺激緩衝液由5mM HEPES(4-(2-羥乙基)-1-哌
Figure 106136950-A0202-12-0134-240
乙磺酸)、500μM IBMX及0.1%牛血清白蛋白(BSA)於HBSS(Hank’s平衡鹽溶液)中組成。接下來將6μl之含有弗斯可林(forskolin)(2X，5μM最終濃度)及LANCE cAMP抗體(1：100)的刺激緩衝液添加至細胞。在rt下培養25分鐘 後，將12μl之檢定偵測混合物添加至各孔。LANCE cAMP套組所提供之偵測混合物係藉由將生物素-cAMP(1：750)及銪-W8044(1：2250)稀釋於偵測緩衝液中製備。將板在rt下培養2小時，接著以TR-FRET檢定在Envision板讀取儀上讀取(激發320nm，發射615nm及665nm)。通道1螢光(在615nm之相對螢光單位)及通道2螢光(在665nm之相對螢光單位)連同彼等之比例輸出至Excel檔案。
數據分析
來自Envision板讀取儀之數據表現為相對螢光單位(RFU)，計算方式為(615nm/665nm)×10,000。所有樣本皆以三重複測量。數據分析使用Eudean Shaw設計的Crucible內部資料分析軟體。各孔內未知的cAMP濃度係自包括於各板內之已知cAMP濃度之參考標準物內插計算。參數諸如EC50、Log(EC50)、HillSlope(nH)、頂部(top)、及底部(bottom)係藉由將cAMP濃度值對對數化合物濃度作圖衍生而來，以4-P模型擬合，使用在R環境內之非線性加權最小平方法應用程式(開放來源http：//cran.us.r-project.org/)，由楊森研發(Janssen R&D)公司之非臨床統計及計算(Non-Clinical Statistics & Computing)部門實施。
Figure 106136950-A0202-12-0135-734
Figure 106136950-A0202-12-0135-735
Figure 106136950-A0202-12-0136-736
實例106：體內小鼠穩定性檢定
雄性C57BL/6N小鼠(9至12週齡)獲自Taconic Laboratory。小鼠係以每籠一隻小鼠飼養，鼠籠鋪有AlphaDri墊料且置於12-h光/暗循環之溫控室中。允許小鼠任意採食水與飼料(5001,Lab Diet)。
小鼠經皮下給藥1mg/kg化合物。在t=4、24、及48小時，自3隻動物經由剪尾收集大約100μL之血液。在t=4、24及48小時的每個時間點，亦自2至3隻動物經由心臟穿刺收集血液(大約600μL)。血液樣本收集於含有4%比例的完全蛋白酶抑制劑溶液及1%比例的DPPIV抑制劑的K3E(EDTA)試管。在各時間點收集後30分鐘內，將血液樣本放置在濕冰上，接著以10,000rpm在冷藏條件下(約5℃)離心10分鐘以移除細胞，並將所有獲得之血漿轉移至96孔板。將孔板儲存於-80℃冷凍庫。使用下述之LCMS方法測量化合物水準。數據顯示於表4。
質譜檢定判定完整接合物的剩餘%
將血漿樣本使用抗人類Fc抗體進行免疫親和性捕捉處理，隨後在三重TOF(飛行時間)質譜儀上進行逆相LC-高解析全掃描MS分析。將粗MS譜圖解摺積以闡明注射樣本中之組分的分子量。使用完整接合物之分子離子尖峰定量未改變的完整接合物。在不同檢定中，將血漿樣本使用抗人類Fc抗體進行免疫親和性捕捉處理，隨後進行胰蛋白酶消化並在三重四極質譜儀上進行逆相LC-MSMS分析。監測位於mAb之Fc上的胜肽以定量總mAb。兩種檢定皆藉由將參考標準加入血漿中並與檢測樣本(incurred sample)在相同時間使用相同程序處理，以製備標準曲線及品質管制樣本。完整接合物濃度對總mAb濃度之比例係經計算為剩餘%。
Figure 106136950-A0202-12-0137-737
實例107：藥物動力學(PK) DIO小鼠PK
雄性DIO C57BL/6N小鼠(20週齡，14週採食高脂肪飲食)獲自Taconic Laboratory。小鼠係以每籠一隻小鼠飼養，鼠籠鋪有AlphaDri墊料且置於12-h光/暗循環之溫控室中。允許小鼠任意採食水與高脂肪飼料(D12492,Research Diet)。
小鼠經皮下(s.c.)給藥1mg/kg化合物1，在t=4、8、24、48、72、120、及168小時各時間點犧牲3隻動物並收集血液。亦收集來自3隻未用藥動物之血液。在以70% CO2及30% O2混合物誘導氣體麻醉下施行斷頭術後，自各動物經由頸靜脈收集大約300μL的血液。血液樣本(大約300μL)收集於含有12μl(4%比例)的完全蛋白酶抑制劑溶液及3μL(1%比例)的DPP-IV抑制劑的K3E(EDTA)塗佈Sarstedt Microvette®試管。在各時間點收集後30分鐘內，將血液樣本放置在濕冰上，接著以10,000rpm在冷藏條件下(約5℃)離心約4分鐘以移除細胞，並將所有獲得之血漿轉移至96孔板。將孔板儲存在乾冰上直到放置於-80℃冷凍庫。數據顯示於表5及圖3。
大鼠PK
將化合物1以1.0mg/kg於PBS中(pH 7.0至7.6)之劑量水準經皮下及靜脈內投予至雄性Sprague-Dawley大鼠(Charles River Laboratories,Wilmington,MA)。每個時間點自三隻動物經由隱靜脈收集大約500μL的血液(t=給藥後1、4、24、48、72、96、168、及240小時)。在以70% CO2及30% O2混合物誘導氣體麻醉下施行斷頭術後，經由頸靜脈收集給藥後336小時的血液樣本。血液樣本收集於含有20μl(4%比例)的完全蛋白酶抑制劑溶液及5μL(1%比例)的DPPIV抑制劑的K3E(EDTA)塗佈Sarstedt Microvette®試管。在各時間點收集後60分鐘內，將血液樣本放置在濕冰上，接著以 10,000rpm在冷藏條件下(約5℃)離心約4分鐘以移除細胞，並將所有獲得之血漿轉移至96孔板。使用下述之LCMS方法測量化合物1水準。數據顯示於表6。
石蟹獼猴(Cyno)PK
所有動物在給藥前空腹至少八小時且空腹直到血液樣本收集的第一個四小時。三隻動物接受單一IV劑量的1mg/kg化合物1且三隻動物接受單一SC劑量的1mg/kg化合物1。在給藥前收集血液，並在給藥後1、6、10、24、36、48、72、120、168、240、336、432、及504小時收集血液。IV組在給藥後0.5小時收集額外樣本。自各動物收集大約1ml的血液於含有4%比例的完全蛋白酶抑制劑溶液及1%比例的DPPIV抑制劑的K3E(EDTA)塗佈Sarstedt Microvette®試管。在各時間點收集後30分鐘內，將血液樣本放置在濕冰上接著離心，並將所得血漿分成三份且轉移至三重複96孔板。將孔板儲存在乾冰上直到放置於-80℃冷凍庫。數據顯示於表7及圖4。
完整質譜檢定判定血漿水準
將血漿樣本使用抗人類Fc抗體進行免疫親和性捕捉處理，隨後在三重TOF(飛行時間)質譜儀上進行逆相LC-高解析全掃描MS分析。將粗MS譜圖解摺積以闡明注射樣本中之組分的分子量。使用完整接合物之分子離子尖峰進行定量。藉由將參考標準加入血漿中並與檢測樣本在相同時間使用相同程序處理，以製備標準曲線及品質管制樣本。DIO小鼠、大鼠、及cyno之PK數據分別顯示於表5、表6、及表7。DIO小鼠及Cyno之PK數據亦分別顯示於圖3及4。
Figure 106136950-A0202-12-0139-738
Figure 106136950-A0202-12-0140-739
Figure 106136950-A0202-12-0140-740
實例108：體內療效試驗 飲食誘導肥胖(DIO)小鼠中之體重減輕：急性給藥
雄性DIO C57B1/6小鼠經過單次給藥後，評估化合物1對於降低攝食量及體重的能力。雄性DIO C57BL/6N小鼠(20週齡，14週採食高脂肪飲食)獲自Taconic Laboratory。小鼠係以每籠一隻小鼠飼養，鼠籠鋪有AlphaDri墊料且置於12-h光/暗循環之溫控室中。允許小鼠任意採食水與高脂肪飼料(D12492,Research Diet)。使動物適應環境至少一週，然後才開始實驗。
在給藥前一天，將小鼠基於個別體重分組為每組八隻動物。在隔天3：00至4：00pm，將動物秤重並經由皮下(s.c.)投予媒劑(dPBS,pH 7.2)、化合物1(劑量0.1、0.3、1.0、3.0、或7.5nmol/kg)、或度拉魯肽(0.3nmol/kg)處理。給藥後24h、48h及72h測量體重及攝食量，並計算體重減輕及攝食量減少百分比。統計分析使用二因子重複測量ANOVA與杜凱(Tukey)事後檢定在Prism中進行。所有數據以平均值±SEM(圖5及圖6)表示。
飲食誘導肥胖小鼠中之體重減輕：慢性給藥
雄性DIO之C57B1/6小鼠在8天期間經過重複給藥，評估化合物1對於減少攝食量與體重且改善葡萄糖恆定的能力。雄性 DIO C57BL/6N小鼠(20週齡，14週採食高脂肪飲食)獲自Taconic Laboratory。小鼠係以每籠一隻小鼠飼養，鼠籠鋪有AlphaDri墊料且置於12-h光/暗循環之溫控室中。允許小鼠任意採食水與高脂肪飼料(D12492,Research Diet)。使動物適應環境至少一週，然後才開始實驗。
在給藥前一天，將小鼠基於個別體重分組。接下來8天每天3：00至4：00pm，將動物及攝食量秤重。將動物經由皮下每天投予媒劑(dPBS,pH 7.2)或度拉魯肽(0.3nmol/kg)或經由皮下每三天投予化合物1(劑量0.1、0.3、1.0、3.0nmol/kg)處理。在8天後，使小鼠空腹5小時，接著在t=0時經口給予2g/kg推注葡萄糖。在t=葡萄糖挑戰後0、30、60、90、及120分鐘測量血液葡萄糖並在t=0、30、及90分鐘時抽血測量血漿胰島素。統計分析使用單因子ANOVA或雙因子重複測量ANOVA與杜凱事後檢定在Prism中進行。所有數據以平均值±SEM(圖7、圖8、及表8至11)表示。
Figure 106136950-A0202-12-0141-741
Figure 106136950-A0202-12-0142-742
Figure 106136950-A0202-12-0142-743
Figure 106136950-A0202-12-0142-744
Figure 106136950-A0202-12-0143-745
飲食誘導肥胖小鼠中與利拉魯肽組合之體重減輕：慢性給藥
雄性DIO之C57B1/6小鼠在9天期間經過重複給藥，評估化合物1與長效型GLP-1促效劑利拉魯肽組合，對於減少攝食量與體重且改善葡萄糖恆定的能力。
雄性DIO C57BL/6N小鼠(20週齡，14週採食高脂肪飲食)獲自Taconic Laboratory。小鼠係以每籠一隻小鼠飼養，鼠籠鋪有AlphaDri墊料且置於12-h光/暗循環之溫控室中。允許小鼠任意採食水與高脂肪飼料(D12492,Research Diet)。使動物適應環境至少一週，然後才開始實驗。
在給藥前一天，藉由MRI測量身體組成並將小鼠基於個別體重分組。在第0天的3：00至4：00pm，將動物及攝食量秤重。單一治療組中之動物經由皮下每天投予媒劑(dPBS,pH 7.2)或利拉魯肽(10nomol/kg)或經由皮下每三天投予化合物1(劑量0.1、或1.0nmol/kg)處理。組合組中之動物每天接受利拉魯肽(10nmol/kg)且每三天接受化合物1(劑量0.1或1.0nmol/kg)。在第8天，藉由MRI測量身體組成。在第9天，使小鼠空腹5小時，並測量空腹血糖及胰島素。統計分析使用單因子ANOVA或雙因子重複測量ANOVA與杜凱事後檢定在Prism中進行。所有數據以平均值±SEM(圖9及表12至17)表示。
表12：化合物1、利拉魯肽、及化合物1與利拉魯肽之組合在9天治
Figure 106136950-A0202-12-0144-746
Figure 106136950-A0202-12-0144-747
Figure 106136950-A0202-12-0145-748
Figure 106136950-A0202-12-0145-749
Figure 106136950-A0202-12-0145-750
Figure 106136950-A0202-12-0146-751
Figure 106136950-A0202-12-0146-752
實例109：化合物1的單次給藥對Sprague-Dawley大鼠攝食量及體重之效應
Sprague-Dawley經過單次給藥後，評估化合物1對於降低攝食量及體重的能力。該等動物是在體重200至225g時獲自Charles River Labs(Wilmington,MA)，且在到達一週內使用。彼等係以每籠一隻飼養於溫控空間內，且提供12小時光暗循環，籠內鋪上ALPHA-dri墊草，且設有馴養用塑膠管。允許彼等任意採食水與實驗室嚙齒動物飼料；該飼料即照射過的Certified PicoLab® Rodent Diet 20,5K75*(由Purina Mills,St.Louis,MO經由ASAP Quakertown,PA供應)。給藥前，為各別大鼠測量體重並加以記錄。
在給藥前一天，將大鼠基於個別體重分組為每組八隻動物。隔天，將動物秤重並經由皮下投予媒劑(dPBS,pH 7.2)、化合物1(劑量0.1、0.3、1.0、或3.0nmol/kg)、或度拉魯肽(0.3 nmol/kg)處理。給藥後1、2及3天測量體重及攝食量，並計算體重減輕及攝食量減少百分比。統計分析使用二因子重複測量ANOVA與杜凱(Tukey)事後檢定在Prism中進行。所有數據以平均值±SEM(表18至20)表示。
Figure 106136950-A0202-12-0147-753
Figure 106136950-A0202-12-0147-754
 數值代表取自每組每時間點8隻動物的數據之平均值±SEM *p<0.05，與媒劑比較；二因子ANOVA、杜凱多重比較檢定
Figure 106136950-A0202-12-0148-755
實例110：單獨或與利拉魯肽組合之化合物1在肥胖恆河獼猴之效應
評估化合物1減少肥胖恆河獼猴攝食量的能力。亦評估當利拉魯肽與有效劑量之化合物1共投予時所觀察到之額外療效。首先，進行簡短的劑量範圍測量試驗以判定利拉魯肽在共投予期間的使用劑量。六隻動物接受單一每日sc投予鹽水達三週。每日測量攝食量，並將基線攝食量設定為三週媒劑治療期間的平均每日攝食量。接著將六隻動物分成二組；0.01mg/kg(n=3)及0.02mg/kg(n=3)。各接受利拉魯肽每日皮下劑量一週，以判定對攝食量相對於基線之效應並找出最大耐受劑量。亦在中止利拉魯肽治療後測量二週的攝食量。所有數據以平均每週攝食量±SEM(圖10)表示。
使用十隻(10)肥胖恆河獼猴評估化合物1之療效。在2週基線期後，每日s.c.投予化合物1達4週。動物以0.01mg/kg給藥7天、接著以0.03mg/kg給藥7天、接著以0.015mg/kg給藥9天， 且最終5天共給藥0.015mg/kg的化合物1與0.01mg/kg的利拉魯肽之組合。每日監測攝食量，且每週測量體重。葡萄糖、胰島素、總膽固醇、HDL、LDL、ALT及AST水準係在基線、在化合物1治療後及在組合治療後評估。所有數據以平均值±SEM(表21至22及圖11及12)表示。
Figure 106136950-A0202-12-0149-756
Figure 106136950-A0202-12-0149-757
所屬技術領域中具有通常知識者將領會的是，能夠對以上所述的實施例進行變更而不違背其廣義的發明概念。因此，應了解本發明並未受限於揭示之具體實施例，而是意欲涵蓋如本實施方式所定義之屬於本發明之精神及範疇內的修改。
本文中所引用之全部文件均以引用方式併入本文中。
本發明之例示性環狀PYY序列或其接合物包括：
SEQ ID NO：1名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12-AcBr)11,psi-(35R,36Y)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0150-758
SEQ ID NO：2名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0150-759
SEQ ID NO：3名稱：[環-(I3-CO(CH2)2三唑基-Nle31)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0150-760
SEQ ID NO：4名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)11]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0151-761
SEQ ID NO：5名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-AcVitE)11]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0151-762
SEQ ID NO：6名稱：[環-(I3-CO(CH2)2三唑基-Nle31),K(γ-Glu-AcVitE)11]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0152-763
SEQ ID NO：7名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)9]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0152-764
SEQ ID NO：8名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0153-765
SEQ ID NO：9名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),psi-(R35Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0153-766
SEQ ID NO：10名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-AcVitE)30]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0153-767
SEQ ID NO：11名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-AcVitE)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0154-768
SEQ ID NO：12名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31)、(N-Me-R35)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0154-769
SEQ ID NO：13名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0155-770
SEQ ID NO：14名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30,(N-Me-R35)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0155-771
SEQ ID NO：15名稱：[環-(K4-CO(CH2)2NHCOCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30]-PYY4-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0156-772
SEQ ID NO：16名稱：[環-(K4-p-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30]-PYY4-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0156-773
SEQ ID NO：17名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),A4,K(γ-Glu-Pal)30]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0157-774
SEQ ID NO：18名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),E4,K(γ-Glu-Pal)30]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0157-775
SEQ ID NO：19名稱：[環-(I3-p-COPhCH2-C31),K(γ-Glu-Pal)30,(N-Me-R35)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0158-776
SEQ ID NO：20名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-C31),K(γ-Glu-Pal)30,(N-Me-R35)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0158-777
SEQ ID NO：21名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),A4,A26,K(γ-Glu-Pal)30]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0159-778
SEQ ID NO：22名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),E4,A26,K(γ-Glu-Pal)30]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0159-779
SEQ ID NO：23名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-COC16CO2H)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0160-780
SEQ ID NO：24名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-COC18CO2H)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0160-781
SEQ ID NO：25名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-Stear)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0161-782
SEQ ID NO：26名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-Arach)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0161-783
SEQ ID NO：27名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-COC16CO2H)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0162-784
SEQ ID NO：28名稱：[環-(K4-p-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY4-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0162-785
SEQ ID NO：29名稱：[環-(K4-CO(CH2)2NHCOCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY4-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0163-786
SEQ ID NO：30名稱：[環-(K4-CO(CH2)3NHCOCH2-C31),K(γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY4-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0163-787
SEQ ID NO：31名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-Stear)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0164-238
SEQ ID NO：32名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),A4,A26,K(γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0164-239
SEQ ID NO：33名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30,(N-Me-Q34),psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0165-240
SEQ ID NO：34名稱：[環-(K4-CO(CH2)5NHCOCH2-C31),K(γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY4-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0165-241
SEQ ID NO：35名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30,(N-Me-R35),psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0166-243
SEQ ID NO：36名稱：[環-(K4-CO(CH2)2NHCOCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30,(N-Me-R35),psi-(R35,Y36)]-PYY4-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0166-242
SEQ ID NO：37名稱：[環-(I3-CO(CH2)3NHCOCH2-C31),K(γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0167-244
SEQ ID NO：38名稱：[環-(I3-CO(CH2)2NHCOCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30,(N-Me-R35),psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0167-245
SEQ ID NO：39名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),S4,K(γ-Glu-Arach)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0168-247
SEQ ID NO：40名稱：[環-(I3-CO(CH2)2三唑基-Nle31),K((OEG)2-γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0168-246
SEQ ID NO：41名稱：[環-(I3-CO(CH2)2三唑基-Nle31),K(γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0169-248
SEQ ID NO：42名稱：[環-(I3-CO(CH2)2三唑基-Nle31),K((OEG)2-γ-Glu-COC16CO2H)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0169-249
SEQ ID NO：43名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0170-251
SEQ ID NO：44名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-COC16CO2H)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0170-250
SEQ ID NO：45名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(COCH2CH2(OCH2CH2)24NH-γ-Glu-Pal)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0171-252
SEQ ID NO：46名稱：[環-(I3-CO(CH2)2NHCOCH2-hC31),K(γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0171-253
SEQ ID NO：47名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-COC16CO2H)7,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0172-255
SEQ ID NO：48名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-COC16CO2H)22,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0172-254
SEQ ID NO：49名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-(Pal-16-OH))30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0173-256
SEQ ID NO：50名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-COC16CO2H)23,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0173-257
SEQ ID NO：51名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),S4,K(γ-Glu-Pal)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0174-259
SEQ ID NO：52名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(COCH2CH2(OCH2CH2)12NH-γ-Glu-Pal)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0174-258
SEQ ID NO：53名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)4-γ-Glu-Pal)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0175-260
SEQ ID NO：54名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-Pal)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0175-261
SEQ ID NO：55名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-Pal)23,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0176-263
SEQ ID NO：56名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-COCH2Ph-(4-ClPh)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0176-262
SEQ ID NO：57名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-CO(CH2)2PhO-(2,4-Cl2Ph)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0177-264
SEQ ID NO：58名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-CO(CH2)10-(4-F-Ph))30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0177-265
SEQ ID NO：59名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-Pal)22,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0178-267
SEQ ID NO：60名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K((OEG)2-γ-Glu-Pal)7,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0178-266
SEQ ID NO：61名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-CO(CH2)10-(4-F3C-Ph))30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0179-268
SEQ ID NO：62名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-CO(CH2)10-CF3)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0179-269
SEQ ID NO：63名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-CO(CH2)13-CF3)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0180-270
SEQ ID NO：64名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-(Pal-16-OEt))30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0180-271
SEQ ID NO：65名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-CO(CH2)11(CD2)3CD3)30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0181-272
SEQ ID NO：66名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-CO(CH2)10-(2,4-(CF3)2-Ph))30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0181-273
SEQ ID NO：67名稱：[環-(I3-m-COPhCH2-hC31),K(γ-Glu-CO(CH2)10-(3,5-(CF3)2-Ph))30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0182-275
SEQ ID NO：68名稱：[環-(I3-CO(CH2)2NHCOCH2-C30),K((OEG)2-γ-Glu-COC16CO2H)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0182-274
SEQ ID NO：69名稱：[環-(G2-E31),S4,K11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0183-276
SEQ ID NO：70名稱：[環-(G2-E30),S4,K11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0183-277
SEQ ID NO：71名稱：[環-(G2-E30),S4,K11,(N-Me-R35)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0183-279
SEQ ID NO：72名稱：[環-(G2-E30),S4,K((OEG)2-γ-Glu-COC16CO2H)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0184-280
SEQ ID NO：73名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG6-AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0184-281
SEQ ID NO：74名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0185-282
SEQ ID NO：75名稱：[環-(I3-COCH2-C31),K(PEG12-AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0185-283
SEQ ID NO：76名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12-AcBr)11,K(mPEG16)30,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0185-284
SEQ ID NO：77名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(AcBr)11,K(mPEG12)20,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0186-286
SEQ ID NO：78名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12-AcBr)11,(N-Me)Q34,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0186-285
SEQ ID NO：79名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12-AcBr)11,N-Me-R35,psi-(R35,36Y)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0187-287
SEQ ID NO：80名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),R4,K(PEG12-AcBr)11,W30,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0187-288
SEQ ID NO：81名稱：[環-(3I-COCH2CH2CH2NHCOCH2-C31),R4,K(PEG12-AcBr)11,W30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0187-289
SEQ ID NO：82名稱：[環-(K4-OEG-COCH2-C31),K(PEG12-AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY4-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0188-291
SEQ ID NO：83名稱：[環-(I3-COCH2CH2三唑基Nle31),K(PEG12-AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構
Figure 106136950-A0202-12-0188-290
SEQ ID NO：84名稱：[環-(I3-m-CO-苄基-hC31),K(PEG8-三唑基-CH2CH2CO-PEG4-AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0189-292
SEQ ID NO：85名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12-AcBr)23,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36，結構：
Figure 106136950-A0202-12-0189-293
SEQ ID NO：86名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12-AcBr)22,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0189-294
SEQ ID NO：87名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12-AcBr)7,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0190-296
SEQ ID NO：88名稱：[環-(G2-COCH2-C30),K(PEG12-AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0190-295
SEQ ID NO：89名稱：[環-(G2-COCH2-C30),K(PEG12-AcBr)11,N-Me-R35]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0191-298
SEQ ID NO：90名稱：[環-(βA2-COCH2-C30),K(PEG12-AcBr)11,N-Me-R35]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0191-299
SEQ ID NO：91名稱：[環-(G2-COCH2-hC30),K(PEG12-AcBr)11,N-Me-R35]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0191-300
SEQ ID NO：92名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12-AcBr)11,N-Me-R35]PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0192-302
SEQ ID NO：93名稱：[環-(G2-COCH2-hC30),K(PEG12-AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0192-303
SEQ ID NO：94名稱：[環-(βA2-COCH2-C30),K(PEG12-AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0193-304
SEQ ID NO：95名稱：[環-(G2-E30),S4,K(AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0193-305
SEQ ID NO：96名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG24-AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0193-306
SEQ ID NO：97名稱：[環-(G2-Ac-hC31),K(PEG12-AcBr)11,psi-(R35-Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0194-308
SEQ ID NO：98名稱：[環-(G2-COCH2-C30),K(AcBr)11,N-Me-R35]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0194-307
SEQ ID NO：99名稱：[環-(βA2-COCH2-C30),K(AcBr)11,N-Me-R35]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0195-309
SEQ ID NO：100名稱：[環-(βA2-COCH2-C30),K(AcBr)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0195-310
SEQ ID NO：101 hPYY3-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0195-312
SEQ ID NO：102名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12)11,psi-(35R,36Y)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物1)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0196-314
SEQ ID NO：103名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG6)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物2)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0196-313
SEQ ID NO：104名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物3)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0197-315
SEQ ID NO：105名稱：[環-(I3-COCH2-C31),K(PEG12)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36 mAb同二聚體接合物(化合物4)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0197-316
SEQ ID NO：106名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12)11,K(mPEG16)30,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物5)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0197-317
SEQ ID NO：107名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K11,K(mPEG12)20,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物6)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0198-319
SEQ ID NO：108名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12)11,(N-Me)Q34,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物7)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0198-318
SEQ ID NO：109名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12)11,N-Me-R35,psi-(R35,36Y)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物8)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0199-320
SEQ ID NO：110名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),R4,K(PEG12)11,W30,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物9)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0199-321
SEQ ID NO：111名稱：[環-(3I-COCH2CH2CH2NHCOCH2-C31),R4,K(PEG12)11,W30,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36 mAb同二聚體接合物(化合物10)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0199-322
SEQ ID NO：112名稱：[環-(K4-OEG-COCH2-C31),K(PEG12)11,psi-(R35,Y36)]-PYY4-36 mAb同二聚體接合物(化合物11)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0200-324
SEQ ID NO：113名稱：[環-(I3-COCH2CH2三唑基Nle31),K(PEG12)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36 mAb同二聚體接合物(化合物12)結構
Figure 106136950-A0202-12-0200-323
SEQ ID NO：114名稱：[環-(I3-m-CO-苄基-hC31),K(PEG8-三唑基-CH2CH2CO-PEG4)11,psi-(R35,Y36)]-PYY3-36 mAb同二聚體接合物(化合物13)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0201-325
SEQ ID NO：115名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12)23,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物14)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0201-326
SEQ ID NO：116名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12)22,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物15)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0201-328
SEQ ID NO：117名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12)7,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物16)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0202-330
SEQ ID NO：118名稱：[環-(G2-COCH2-C30),K(PEG12)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物17)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0202-329
SEQ ID NO：119名稱：[環-(G2-COCH2-C30),K(PEG12)11,N-Me-R35]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物18)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0203-331
SEQ ID NO：120名稱：[環-(βA2-COCH2-C30),K(PEG12)11,N-Me-R35]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物19)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0203-332
SEQ ID NO：121名稱：[環-(G2-COCH2-hC30),K(PEG12)11,N-Me-R35]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物20)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0203-333
SEQ ID NO：122名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG12)11,N-Me-R35]PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物21)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0204-335
SEQ ID NO：123名稱：[環-(G2-COCH2-hC30),K(PEG12)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物22)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0204-334
SEQ ID NO：124名稱：[環-(βA2-COCH2-C30),K(PEG12)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物23)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0205-336
SEQ ID NO：125名稱：[環-(G2-E30),S4,K11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36同二聚體接合物(化合物24)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0205-337
SEQ ID NO：126名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K(PEG24)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物25)
Figure 106136950-A0202-12-0205-338
SEQ ID NO：127名稱：[環-(G2-Ac-hC31),K(PEG12)11,psi-(R35-Y36)]-PYY2-36 mAb同二聚體接合物(化合物26)結構：
Figure 106136950-A0202-12-0206-341
SEQ ID NO：147名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0206-340
SEQ ID NO：148名稱：[環-(βA2-COCH2-hC31),K11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0206-339
SEQ ID NO：149名稱：[環-(G2-E30),S4,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0207-342
SEQ ID NO：150名稱：[環-(G2-E30),S4,K11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0207-343
SEQ ID NO：151名稱：[環-(G2-COCH2-C30),N-Me-R35]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0207-344
SEQ ID NO：152名稱：[環-(G2-COCH2-C30),K11,N-Me-R35]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0208-347
SEQ ID NO：153名稱：[環-(βA2-COCH2-C30),N-Me-R35]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0208-346
SEQ ID NO：154名稱：[環-(βA2-COCH2-C30),K11,N-Me-R35]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0208-345
SEQ ID NO：155名稱：[環-(βA2-COCH2-C30),psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0209-348
SEQ ID NO：156名稱：[環-(βA2-COCH2-C30),K11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36結構：
Figure 106136950-A0202-12-0209-351
<110> 比利時商健生藥品公司(Janssen Pharmaceutica NV)
<120> 用作神經胜肽Y受體之調節劑的與抗體偶合之環狀酪胺酸酪胺酸胜肽化合物
<130> PRD3436
<150> US62/413,613
<151> 2016-10-27
<150> US62/413,586
<151> 2016-10-27
<160> 156
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中Cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 1
Figure 106136950-A0202-12-0210-352
Figure 106136950-A0202-12-0211-353
<210> 2
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cyse，其中Cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 2
Figure 106136950-A0202-12-0211-354
<210> 3
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Leu
<222> (29)..(29)
<223> Leu，其中Leu係具有如說明書描述之化學修飾的正白胺酸
<400> 3
Figure 106136950-A0202-12-0212-356
<210> 4
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 4
Figure 106136950-A0202-12-0212-355
<210> 5
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 5
Figure 106136950-A0202-12-0213-357
<210> 6
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Leu
<222> (29)..(29)
<223> Leu，其中leu係具有如說明書描述之化學修飾的正白胺酸
<400> 6
Figure 106136950-A0202-12-0214-359
<210> 7
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (7)..(7)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 7
Figure 106136950-A0202-12-0214-358
<210> 8
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 8
Figure 106136950-A0202-12-0215-360
<210> 9
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 9
Figure 106136950-A0202-12-0216-362
<210> 10
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 10
Figure 106136950-A0202-12-0216-361
<210> 11
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 11
Figure 106136950-A0202-12-0217-363
<210> 12
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 12
Figure 106136950-A0202-12-0218-365
<210> 13
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 13
Figure 106136950-A0202-12-0218-364
<210> 14
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 14
Figure 106136950-A0202-12-0219-366
<210> 15
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Lys
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (27)..(27)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 15
Figure 106136950-A0202-12-0220-368
<210> 16
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Lys
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (27)..(27)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 16
Figure 106136950-A0202-12-0220-367
<210> 17
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 17
Figure 106136950-A0202-12-0221-369
<210> 18
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 18
Figure 106136950-A0202-12-0222-371
<210> 19
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 19
Figure 106136950-A0202-12-0222-370
Figure 106136950-A0202-12-0223-372
<210> 20
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 20
Figure 106136950-A0202-12-0223-373
<210> 21
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 21
Figure 106136950-A0202-12-0224-375
<210> 22
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 22
Figure 106136950-A0202-12-0224-374
Figure 106136950-A0202-12-0225-376
<210> 23
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 23
Figure 106136950-A0202-12-0225-377
<210> 24
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 24
Figure 106136950-A0202-12-0226-378
<210> 25
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 25
Figure 106136950-A0202-12-0227-379
<210> 26
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如申請案描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如申請案描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如申請案描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如申請案描述之化學修飾的Arg
<400> 26
Figure 106136950-A0202-12-0227-380
Figure 106136950-A0202-12-0228-382
<210> 27
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 27
Figure 106136950-A0202-12-0228-381
<210> 28
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Lys
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (27)..(27)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (32)..(32)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 28
Figure 106136950-A0202-12-0229-383
<210> 29
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Lys
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (27)..(27)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (32)..(32)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 29
Figure 106136950-A0202-12-0230-385
<210> 30
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Lys
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (27)..(27)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (32)..(32)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 30
Figure 106136950-A0202-12-0230-384
Figure 106136950-A0202-12-0231-386
<210> 31
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 31
Figure 106136950-A0202-12-0231-387
<210> 32
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 32
Figure 106136950-A0202-12-0232-388
<210> 33
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Gln
<222> (32)..(32)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gln
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 33
Figure 106136950-A0202-12-0233-389
<210> 34
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Lys
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (27)..(27)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (32)..(32)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 34
Figure 106136950-A0202-12-0234-392
<210> 35
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 35
Figure 106136950-A0202-12-0234-391
<210> 36
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Lys
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (27)..(27)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (32)..(32)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 36
Figure 106136950-A0202-12-0235-393
<210> 37
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 37
Figure 106136950-A0202-12-0236-394
<210> 38
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 38
Figure 106136950-A0202-12-0237-395
<210> 39
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 39
Figure 106136950-A0202-12-0237-396
Figure 106136950-A0202-12-0238-398
<210> 40
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Leu
<222> (29)..(29)
<223> Leu，其中leu係具有如說明書描述之化學修飾的正白胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 40
Figure 106136950-A0202-12-0238-397
<210> 41
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Leu
<222> (29)..(29)
<223> Leu，其中leu係具有如說明書描述之化學修飾的正白胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 41
Figure 106136950-A0202-12-0239-399
<210> 42
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Leu
<222> (29)..(29)
<223> Leu，其中leu係具有如說明書描述之化學修飾的正白胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 42
Figure 106136950-A0202-12-0240-401
<210> 43
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 43
Figure 106136950-A0202-12-0240-400
Figure 106136950-A0202-12-0241-402
<210> 44
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 44
Figure 106136950-A0202-12-0241-403
<210> 45
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 45
Figure 106136950-A0202-12-0242-404
<210> 46
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 46
Figure 106136950-A0202-12-0243-405
<210> 47
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (5)..(5)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 47
Figure 106136950-A0202-12-0243-406
Figure 106136950-A0202-12-0244-408
<210> 48
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (20)..(20)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 48
Figure 106136950-A0202-12-0244-407
<210> 49
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 49
Figure 106136950-A0202-12-0245-409
<210> 50
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (21)..(21)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 50
Figure 106136950-A0202-12-0246-410
<210> 51
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 51
Figure 106136950-A0202-12-0246-412
Figure 106136950-A0202-12-0247-413
<210> 52
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 52
Figure 106136950-A0202-12-0247-414
<210> 53
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 53
Figure 106136950-A0202-12-0248-415
<210> 54
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 54
Figure 106136950-A0202-12-0249-416
<210> 55
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (21)..(21)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 55
Figure 106136950-A0202-12-0249-417
Figure 106136950-A0202-12-0250-419
<210> 56
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 56
Figure 106136950-A0202-12-0250-418
<210> 57
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<400> 57
Figure 106136950-A0202-12-0251-420
<210> 58
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 58
Figure 106136950-A0202-12-0252-422
<210> 59
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (20)..(20)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 59
Figure 106136950-A0202-12-0252-421
<210> 60
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (5)..(5)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 60
Figure 106136950-A0202-12-0253-423
<210> 61
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 61
Figure 106136950-A0202-12-0254-424
<210> 62
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 62
Figure 106136950-A0202-12-0255-425
<210> 63
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 63
Figure 106136950-A0202-12-0255-426
<210> 64
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 64
Figure 106136950-A0202-12-0256-427
<210> 65
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 65
Figure 106136950-A0202-12-0257-428
<210> 66
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 66
Figure 106136950-A0202-12-0258-430
<210> 67
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 67
Figure 106136950-A0202-12-0258-429
<210> 68
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 68
Figure 106136950-A0202-12-0259-431
<210> 69
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Glu
<222> (30)..(30)
<223> 具有說明書描述之化學修飾的Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 69
Figure 106136950-A0202-12-0260-432
<210> 70
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Glu
<222> (29)..(29)
<223> 具有說明書描述之化學修飾的Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 70
Figure 106136950-A0202-12-0260-437
Figure 106136950-A0202-12-0261-434
<210> 71
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Glu
<222> (29)..(29)
<223> 具有說明書描述之化學修飾的Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 71
Figure 106136950-A0202-12-0261-435
<210> 72
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Glu
<222> (29)..(29)
<223> 具有說明書描述之化學修飾的Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 72
Figure 106136950-A0202-12-0262-436
<210> 73
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 73
Figure 106136950-A0202-12-0263-438
<210> 74
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 74
Figure 106136950-A0202-12-0263-439
<210> 75
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 75
Figure 106136950-A0202-12-0264-440
<210> 76
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 76
Figure 106136950-A0202-12-0265-441
<210> 77
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (19)..(19)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 77
Figure 106136950-A0202-12-0266-442
<210> 78
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Gln
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gln
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 78
Figure 106136950-A0202-12-0267-443
<210> 79
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 79
Figure 106136950-A0202-12-0267-444
<210> 80
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 80
Figure 106136950-A0202-12-0268-445
<210> 81
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 81
Figure 106136950-A0202-12-0269-446
<210> 82
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Lys
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (8)..(8)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (32)..(32)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 82
Figure 106136950-A0202-12-0270-448
<210> 83
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Leu
<222> (29)..(29)
<223> Leu，其中leu係具有如說明書描述之化學修飾的正白胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 83
Figure 106136950-A0202-12-0270-447
<210> 84
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 84
Figure 106136950-A0202-12-0271-449
<210> 85
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (22)..(22)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 85
Figure 106136950-A0202-12-0272-450
<210> 86
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (21)..(21)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 86
Figure 106136950-A0202-12-0273-452
<210> 87
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (6)..(6)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 87
Figure 106136950-A0202-12-0273-453
Figure 106136950-A0202-12-0274-454
<210> 88
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 88
Figure 106136950-A0202-12-0274-455
<210> 89
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 89
Figure 106136950-A0202-12-0275-456
<210> 90
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 90
Figure 106136950-A0202-12-0276-457
<210> 91
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 91
Figure 106136950-A0202-12-0276-458
Figure 106136950-A0202-12-0277-459
<210> 92
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 92
Figure 106136950-A0202-12-0277-460
<210> 93
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 93
Figure 106136950-A0202-12-0278-461
<210> 94
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 94
Figure 106136950-A0202-12-0279-462
<210> 95
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Glu
<222> (29)..(29)
<223> 具有說明書描述之化學修飾的Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 95
Figure 106136950-A0202-12-0279-463
Figure 106136950-A0202-12-0280-465
<210> 96
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 96
Figure 106136950-A0202-12-0280-464
<210> 97
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 97
Figure 106136950-A0202-12-0281-466
<210> 98
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 98
Figure 106136950-A0202-12-0282-468
<210> 99
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 99
Figure 106136950-A0202-12-0282-467
Figure 106136950-A0202-12-0283-469
<210> 100
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 100
Figure 106136950-A0202-12-0283-470
<210> 101
<211> 34
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 101
Figure 106136950-A0202-12-0283-471
Figure 106136950-A0202-12-0284-473
<210> 102
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物1
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 102
Figure 106136950-A0202-12-0284-472
<210> 103
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物2
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 103
Figure 106136950-A0202-12-0285-474
<210> 104
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物3
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<500>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 104
Figure 106136950-A0202-12-0286-475
<210> 105
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物4
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 105
Figure 106136950-A0202-12-0287-476
<210> 106
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物5
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 106
Figure 106136950-A0202-12-0287-477
Figure 106136950-A0202-12-0288-479
<210> 107
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物6
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (19)..(19)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 107
Figure 106136950-A0202-12-0288-478
<210> 108
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物7
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Gln
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gln
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 108
Figure 106136950-A0202-12-0289-480
<210> 109
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物8
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 109
Figure 106136950-A0202-12-0290-481
<210> 110
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物9
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 110
Figure 106136950-A0202-12-0291-482
<210> 111
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物10
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 111
Figure 106136950-A0202-12-0291-483
<210> 112
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物11
<220>
<221> Lys
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Lys
<222> (8)..(8)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (32)..(32)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 112
Figure 106136950-A0202-12-0292-484
<210> 113
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物12
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Leu
<222> (29)..(29)
<223> Leu，其中leu係具有如說明書描述之化學修飾的正白胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 113
Figure 106136950-A0202-12-0293-485
<210> 114
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物13
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ile
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 114
Figure 106136950-A0202-12-0294-487
<210> 115
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物14
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (22)..(22)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 115
Figure 106136950-A0202-12-0294-486
<210> 116
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物15
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (21)..(21)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 116
Figure 106136950-A0202-12-0295-488
<210> 117
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物16
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (6)..(6)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 117
Figure 106136950-A0202-12-0296-489
<210> 118
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物17
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 118
Figure 106136950-A0202-12-0297-490
<210> 119
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物18
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 119
Figure 106136950-A0202-12-0297-491
<210> 120
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物19
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 120
Figure 106136950-A0202-12-0298-492
<210> 121
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物20
<200>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 121
Figure 106136950-A0202-12-0299-493
<210> 122
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物21
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 122
Figure 106136950-A0202-12-0300-494
<210> 123
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物22
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 123
Figure 106136950-A0202-12-0300-495
Figure 106136950-A0202-12-0301-496
<210> 124
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物23
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 124
Figure 106136950-A0202-12-0301-497
<210> 125
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物24
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Glu
<222> (29)..(29)
<223> 具有說明書描述之化學修飾的Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 125
Figure 106136950-A0202-12-0302-498
<210> 126
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物25
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 126
Figure 106136950-A0202-12-0303-499
<210> 127
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接合物26
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 127
Figure 106136950-A0202-12-0303-500
Figure 106136950-A0202-12-0304-502
<210> 128
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 128
Figure 106136950-A0202-12-0304-503
<210> 129
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 129
Figure 106136950-A0202-12-0304-501
Figure 106136950-A0202-12-0305-504
<210> 130
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 130
Figure 106136950-A0202-12-0305-505
<210> 131
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGHV3-23*01及IGHJ1*01之串連物
<400> 131
Figure 106136950-A0202-12-0305-506
Figure 106136950-A0202-12-0306-508
<210> 132
<211> 98
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 132
Figure 106136950-A0202-12-0306-507
<210> 133
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 133
Figure 106136950-A0202-12-0307-509
<210> 134
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGKV3-11*01及IGKJ1*01之串連物
<400> 134
Figure 106136950-A0202-12-0307-510
<210> 135
<211> 95
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 135
Figure 106136950-A0202-12-0307-511
Figure 106136950-A0202-12-0308-513
<210> 136
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 136
Figure 106136950-A0202-12-0308-514
<210> 137
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MSCB97 VH
<400> 137
Figure 106136950-A0202-12-0308-515
Figure 106136950-A0202-12-0309-516
<210> 138
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MSCB97 HC
<400> 138
Figure 106136950-A0202-12-0309-518
Figure 106136950-A0202-12-0310-519
Figure 106136950-A0202-12-0311-520
<210> 139
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MSCB97 VL
<400> 139
Figure 106136950-A0202-12-0311-521
Figure 106136950-A0202-12-0312-522
<210> 140
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MSCB97 LC
<400> 140
Figure 106136950-A0202-12-0312-523
Figure 106136950-A0202-12-0313-524
<210> 141
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MSCB97 HCDR1
<400> 141
Figure 106136950-A0202-12-0313-526
<210> 142
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MSCB97 HCDR2
<400> 142
Figure 106136950-A0202-12-0313-525
<210> 143
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MSCB97 HCDR3
<400> 143
Figure 106136950-A0202-12-0314-527
<210> 144
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MSCB97 LCDR1
<400> 144
Figure 106136950-A0202-12-0314-528
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MSCB97 LCDR2
<400> 145
Figure 106136950-A0202-12-0314-529
<210> 146
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MSCB97 LCDR3
<400> 146
Figure 106136950-A0202-12-0314-530
<210> 147
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 147
Figure 106136950-A0202-12-0315-531
<210> 148
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有如說明書描述之化學修飾的升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 148
Figure 106136950-A0202-12-0316-532
<210> 149
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Glu
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 149
Figure 106136950-A0202-12-0316-533
<210> 150
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Glu
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 150
Figure 106136950-A0202-12-0317-534
<210> 151
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 151
Figure 106136950-A0202-12-0318-535
<210> 152
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 152
Figure 106136950-A0202-12-0318-536
Figure 106136950-A0202-12-0319-539
<210> 153
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 153
Figure 106136950-A0202-12-0319-537
<210> 154
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 154
Figure 106136950-A0202-12-0320-540
<210> 155
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 155
Figure 106136950-A0202-12-0320-541
Figure 106136950-A0202-12-0321-543
<210> 156
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY胜肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Ala
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有如說明書描述之化學修飾的Arg
<400> 156
Figure 106136950-A0202-12-0321-542
Figure 106136950-A0202-11-0002-605

Claims (23)

  1. 一種接合物，其包含偶合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其抗原結合片段，其中該單株抗體或其抗原結合片段包含分別具有SEQ ID NO：141、142、143、144、145、及146之多胜肽序列的重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、及輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，以及其中該環狀PYY胜肽係以式I或醫藥上可接受之鹽表示：
    Figure 106136950-A0305-02-0324-1
     其中p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時係1；橋(BRIDGE)係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-；Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K；Z9係G或K；Z11係D或K；Z22係A或K； Z23係S或K；Z26係A或H；Z30係L、W、不存在、或K；但Z30只有在q係1時不存在； Z34係
    Figure 106136950-A0305-02-0325-2
    或
    Figure 106136950-A0305-02-0325-3
    ； Z35係
    Figure 106136950-A0305-02-0325-5
    、
    Figure 106136950-A0305-02-0325-6
    、
    Figure 106136950-A0305-02-0325-7
    、或
    Figure 106136950-A0305-02-0325-8
    ； 其中式I之該環狀PYY胜肽於至少一離胺酸(K)殘基之側鏈之胺基經醯化，以提供醯化環狀PYY胜肽，其進一步直接或藉由連接子偶合至該單株抗體或其抗原結合片段的該HCDR3之半胱胺酸部份。
  2. 如請求項1所述之接合物，其中該醯化環狀PYY胜肽之特徵在於：p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時係1；橋係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH2-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-；Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經
    Figure 106136950-A0305-02-0326-9
    取代，其中i係0至24之整數，且X=Br、I 或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z9係G或K，其中該K之側鏈之胺基係可選地經
    Figure 106136950-A0305-02-0326-10
    醯化，其中i係0至24之整數，且X=Br、I 或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z11係D或K，其中該K之側鏈之胺基係可選地經
    Figure 106136950-A0305-02-0326-12
    醯化，其中i係0至24之整數，且X=Br、I 或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z22係A或K，其中該K之側鏈之胺基係可選地經
    Figure 106136950-A0305-02-0326-13
    醯化，其中i係0至24之整數，且X=Br、I 或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z23係S或K，其中該K之側鏈之胺基係可選地經
    Figure 106136950-A0305-02-0326-14
    醯化，其中i係0至24之整數，且X=Br、I 或Cl、-C(O)CH2Br、-C(O)CH2I、或-C(O)CH2Cl；Z26係A或H；Z30係L或K，其中該K之側鏈之胺基係可選地經
    Figure 106136950-A0305-02-0327-15
    或
    Figure 106136950-A0305-02-0327-16
    醯化； Z34係
    Figure 106136950-A0305-02-0327-17
    或
    Figure 106136950-A0305-02-0327-19
    ；且 Z35係
    Figure 106136950-A0305-02-0327-21
    、
    Figure 106136950-A0305-02-0327-22
    、
    Figure 106136950-A0305-02-0327-23
    、或
    Figure 106136950-A0305-02-0327-25
    。
  3. 如請求項1所述之接合物，其中該環狀PYY胜肽之特徵在於：p係0或1；m係0、1、2、3、或5；n係1、2、或4；q係0或1；但q只有在Z30不存在時可能係1；橋係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-、或-CH2S-；Z4係K、A、E、S、或R；Z7係A或K，其中該K之側鏈之胺基係可選地經
    Figure 106136950-A0305-02-0327-29
    醯化， Z9係G或K，Z11係D或K，其中該K之側鏈之胺基係可選地經
    Figure 106136950-A0305-02-0327-30
    Figure 106136950-A0305-02-0328-31
    、-C(O)CH2Br醯化， Z22係A或K，其中該K之側鏈之胺基係可選地經
    Figure 106136950-A0305-02-0328-32
    醯化， Z23係S或K，其中該K之側鏈之胺基係可選地經
    Figure 106136950-A0305-02-0328-33
    醯化， Z26係A或H，Z30係L或K，其中該K之側鏈之胺基係可選地經
    Figure 106136950-A0305-02-0328-34
    或
    Figure 106136950-A0305-02-0328-36
    醯化， Z34係
    Figure 106136950-A0305-02-0328-37
    或
    Figure 106136950-A0305-02-0328-39
    ； Z35係
    Figure 106136950-A0305-02-0328-40
    、
    Figure 106136950-A0305-02-0328-41
    、
    Figure 106136950-A0305-02-0328-42
    、或
    Figure 106136950-A0305-02-0328-43
    。
  4. 如請求項1所述之接合物，其中該環狀PYY胜肽係選自由SEQ ID NO：1及73至100所組成之群組、或其醫藥上可接受之鹽。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之接合物，其中該單株抗體或其抗原結合片段經由連接子在該環狀PYY胜肽的離胺酸(K)殘基處共價偶合至該環狀PYY胜肽。
  6. 如請求項5所述之接合物，其中該連接子包含選自由下列所組成之群組中之一者：聚乙二醇(PEG)8-三唑基-CH2CH2CO-PEG4、2至24個PEG單元之PEG鏈、含有2至10個碳原子之烷基鏈、(Gly4Ser)j其中j=1至4、(AlaPro)u其中u=1至10、及鍵(bond)。
  7. 如請求項6所述之接合物，其中式I中之Z7、Z9、Z11、Z22及Z23只有一者係離胺酸，且該離胺酸經由該連接子共價連接至該單株抗體或其抗原結合片段之工程改造半胱胺酸殘基。
  8. 一種接合物，其包含偶合至1或2個環狀PYY胜肽之單株抗體或其抗原結合片段，其中該接合物包含選自由SEQ ID NO：102至127所組成之群組之序列或其醫藥上可接受之鹽，其中該單株抗體或其抗原結合片段具有二個重鏈，各該重鏈包含分別具有SEQ ID NO：141、142及143之多胜肽序列的重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，該單株抗體或其抗原結合片段進一步包含分別具有SEQ ID NO：144、145、及146之多胜肽序列的輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，且1或2個該環狀PYY胜肽分別共價接合至一或二個該重鏈的HCDR3的半胱胺酸。
  9. 如請求項1或8所述之接合物，其中該單株抗體包含具有SEQ ID NO：137之多胜肽序列的重鏈可變域(VH)、及具有SEQ ID NO：139之多胜肽序列的輕鏈可變域(VL)。
  10. 如請求項9所述之接合物，其進一步包含Fc部分。
  11. 如請求項10所述之接合物，其包含具有SEQ ID NO：138之多胜肽序列的重鏈(HC)及具有SEQ ID NO：140之多胜肽序列的輕鏈(LC)。
  12. 一種接合物，其包含偶合至環狀PYY胜肽之單株抗體或其抗原結合片段，其中：該單株抗體或其抗原結合片段包含分別具有SEQ ID NO：141、142、143、144、145、及146之多胜肽序列的重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、及輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3；該環狀PYY胜肽包含選自由SEQ ID NO：1、及73至100所組成之群組的多胜肽序列、或其醫藥上可接受之鹽；且該單株抗體或其抗原結合片段直接或經由連接子在該環狀PYY胜肽的殘基7、9、11、22或23處。
  13. 一種製造如請求項1至12中任一項所述之接合物之方法，該方法包含使導入該環狀PYY胜肽之離胺酸殘基之側鏈上的親電子劑與該單株抗體或其抗原結合片段之SEQ ID NO：143的半胱胺酸殘基之巰基反應，藉以在該環狀PYY胜肽與該單株抗體或其抗原結合片段之間建立共價鍵結。
  14. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至12中任一項所述之接合物及醫藥上可接受之載劑。
  15. 一種如請求項14所述之醫藥組成物之用途，其用於製造治療或預防有需要之對象的疾病或病症之醫藥品，其中該疾病或病症係選自由下列所組成之群組：肥胖、第I型或第II型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及包括高血壓之其他心血管風險因子及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及濕疹。
  16. 一種如請求項14所述之醫藥組成物之用途，其用於製造減少有需要之對象的攝食之醫藥品。
  17. 一種如請求項14所述之醫藥組成物之用途，其用於製造調節有需要之對象的Y2受體活性之醫藥品。
  18. 如請求項15至17中任一項所述之用途，其中該醫藥品係經由注射投予。
  19. 如請求項15至17中任一項所述之用途，其中該醫藥品係與至少一種抗糖尿劑組合投予。
  20. 如請求項19所述之用途，其中該抗糖尿劑係類升糖素胜肽-1受體調節劑。
  21. 如請求項19所述之用途，其中該醫藥品係與利拉魯肽(liraglutide)組合投予。
  22. 一種套組，其包含如請求項1至12中任一項所述之接合物，可選地進一步包含利拉魯肽，及用於注射之裝置。
  23. 一種製造包含如請求項1至12中任一項所述之接合物的醫藥組成物之方法，該方法包含將該接合物與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
TW106136950A 2016-10-27 2017-10-26 用作神經胜肽ｙ受體之調節劑的與抗體偶合之環狀酪胺酸酪胺酸胜肽化合物 TWI794189B (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662413586P 2016-10-27 2016-10-27
US201662413613P 2016-10-27 2016-10-27
US62/413,586 2016-10-27
US62/413,613 2016-10-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201827456A TW201827456A (zh) 2018-08-01
TWI794189B true TWI794189B (zh) 2023-03-01

Family

ID=62020814

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW106136948A TWI773699B (zh) 2016-10-27 2017-10-26 免疫球蛋白及其用途
TW106136950A TWI794189B (zh) 2016-10-27 2017-10-26 用作神經胜肽ｙ受體之調節劑的與抗體偶合之環狀酪胺酸酪胺酸胜肽化合物
TW111126993A TW202304972A (zh) 2016-10-27 2017-10-26 免疫球蛋白及其用途
TW106136953A TWI781118B (zh) 2016-10-27 2017-10-26 作為神經肽ｙ受體調節劑之環狀酪酪肽化合物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW106136948A TWI773699B (zh) 2016-10-27 2017-10-26 免疫球蛋白及其用途

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111126993A TW202304972A (zh) 2016-10-27 2017-10-26 免疫球蛋白及其用途
TW106136953A TWI781118B (zh) 2016-10-27 2017-10-26 作為神經肽ｙ受體調節劑之環狀酪酪肽化合物

Country Status (37)

Country Link
US (14) US10640544B2 (zh)
EP (4) EP3532092A4 (zh)
JP (6) JP7387431B2 (zh)
KR (6) KR20240046290A (zh)
CN (4) CN110036022A (zh)
AU (5) AU2017348175B2 (zh)
BR (3) BR112019008500A2 (zh)
CA (3) CA3041672A1 (zh)
CL (3) CL2019001110A1 (zh)
CO (3) CO2019003938A2 (zh)
CR (3) CR20190210A (zh)
CY (1) CY1124732T1 (zh)
DK (1) DK3532486T3 (zh)
DO (3) DOP2019000107A (zh)
EC (3) ECSP19029835A (zh)
ES (1) ES2897480T3 (zh)
HR (1) HRP20211626T1 (zh)
HU (1) HUE056442T2 (zh)
IL (4) IL301843A (zh)
JO (3) JOP20190097A1 (zh)
LT (1) LT3532486T (zh)
MA (3) MA46665B1 (zh)
MD (1) MD3532486T2 (zh)
MX (4) MX2019004955A (zh)
NI (2) NI201900044A (zh)
PE (3) PE20191079A1 (zh)
PH (3) PH12019500723A1 (zh)
PL (1) PL3532486T3 (zh)
PT (1) PT3532486T (zh)
RS (1) RS62677B1 (zh)
SA (3) SA519401642B1 (zh)
SG (4) SG11201902873RA (zh)
SI (1) SI3532486T1 (zh)
TW (4) TWI773699B (zh)
UY (3) UY37455A (zh)
WO (3) WO2018081367A1 (zh)
ZA (1) ZA202200648B (zh)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3912986B1 (en) 2013-12-18 2023-12-13 President and Fellows of Harvard College Crp capture/detection of bacteria
JOP20190097A1 (ar) * 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv الجلوبولينات المناعية واستخداماتها
TW202014433A (zh) 2018-04-25 2020-04-16 比利時商健生藥品公司 類升糖素肽１（ｇｌｐ－１）融合肽偶合環狀酪酪肽接合物及其用途
US11780900B2 (en) 2018-04-25 2023-10-10 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Glucagon like peptide 1 (GLP-1) fusion peptide coupled cyclic peptide tyrosine tyrosine conjugates and uses thereof
WO2020262590A1 (ja) * 2019-06-28 2020-12-30 味の素株式会社 環状ペプチドの製造方法
JP2023500895A (ja) 2019-11-11 2023-01-11 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｎｐｙ２受容体アゴニスト
CN111494606B (zh) * 2020-04-24 2021-12-14 广州医科大学 神经肽y的新应用
KR20230045088A (ko) 2020-08-07 2023-04-04 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 가용성 npy2 수용체 작용제
CN115073556A (zh) * 2021-03-12 2022-09-20 上海天慈生命科学发展有限公司 一类阿片/神经肽ff受体多靶点环肽分子及其制备和应用
US20230015478A1 (en) * 2021-06-14 2023-01-19 Resolute Bio, Inc. Glp-1 receptor agonists having improved pharmacological and drug delivery properties
WO2023097363A1 (en) * 2021-11-30 2023-06-08 Garvan Institute Of Medical Research Improved binding proteins and uses thereof
CN115028551B (zh) * 2022-07-15 2024-01-05 成都普康生物科技有限公司 一种叠氮-九甘醇-丙酸的制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150258209A1 (en) * 2012-07-04 2015-09-17 Hoffmann-La Roche Inc. Covalently linked antigen-antibody conjugates
WO2015197735A1 (en) * 2014-06-26 2015-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag HUMANIZED ANTI-Tau(pS422) ANTIBODY BRAIN SHUTTLES AND USE THEREOF

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2434149A1 (fr) 1978-06-22 1980-03-21 Parcor Nouveaux derives de la l-cysteine
US5393669A (en) * 1993-02-05 1995-02-28 Martek Biosciences Corp. Compositions and methods for protein structural determinations
US7166575B2 (en) 2002-12-17 2007-01-23 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of peptide YY and methods for treating and preventing obesity
EP1789440A4 (en) 2004-02-11 2008-03-12 Amylin Pharmaceuticals Inc REASONS FOR THE FAMILY OF PANCREATIC POLYPEPTIDES AND POLYPEPTIDES CONTAINING THEM
EP1718671A2 (en) 2004-02-23 2006-11-08 Rheoscience A/S Peptide yy analogues
MXPA06010347A (es) * 2004-03-17 2007-06-19 7Tm Pharma As Agonistas de receptor selectivo de y2 para intervenciones terapeuticas.
CA2577082A1 (en) 2004-09-02 2006-03-16 Genentech, Inc. Heteromultimeric molecules
JP5620626B2 (ja) 2005-03-31 2014-11-05 中外製薬株式会社 会合制御によるポリペプチド製造方法
DE102005028778A1 (de) 2005-06-22 2006-12-28 SUNJÜT Deutschland GmbH Mehrlagige Folie mit einer Barriere- und einer antistatischen Lage
JP5412273B2 (ja) * 2006-03-21 2014-02-12 アミリン・ファーマシューティカルズ，リミテッド・ライアビリティ・カンパニー ペプチド−ぺプチダーゼ阻害剤及びその使用
JP2009541275A (ja) 2006-06-22 2009-11-26 ノボ・ノルデイスク・エー／エス 二重特異性抗体の生産
EP2068920A2 (en) 2006-10-05 2009-06-17 Centocor Ortho Biotech, Inc. Ccr2 antagonists for treatment of fibrosis
JP2008169195A (ja) * 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
EP2185592B1 (en) * 2007-09-13 2013-01-23 University Of Zurich Prorektorat Forschung Monoclonal amyloid beta (abeta)-specific antibody and uses thereof
AU2008343589A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Design and generation of human de novo pIX phage display libraries via fusion to pIX or pVII, vectors, antibodies and methods
KR20110091720A (ko) 2008-11-04 2011-08-12 얀센 파마슈티카 엔.브이. Ｃｒｈｒ2 펩티드 작용제 및 이의 용도
WO2010052144A2 (en) * 2008-11-05 2010-05-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Neuropeptide-2-receptor (y-2r) agonists and uses thereof
EP2424567B1 (en) 2009-04-27 2018-11-21 OncoMed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
PL2454282T3 (pl) 2009-07-13 2015-08-31 Zealand Pharma As Acylowane analogi glukagonu
EP2477643A1 (en) 2009-09-18 2012-07-25 Novo Nordisk A/S Long-acting y2 receptor agonists
US9150663B2 (en) 2010-04-20 2015-10-06 Genmab A/S Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof
CN103429616B (zh) 2010-09-27 2016-08-10 詹森生物科技公司 结合人胶原ii的抗体
US8906649B2 (en) 2010-09-27 2014-12-09 Janssen Biotech, Inc. Antibodies binding human collagen II
RU2604490C2 (ru) 2010-11-05 2016-12-10 Займворкс Инк. ДИЗАЙН УСТОЙЧИВОГО ГЕТЕРОДИМЕРНОГО АНТИТЕЛА С МУТАЦИЯМИ В Fc ДОМЕНЕ
EP2668212B1 (en) * 2011-01-28 2018-03-21 Sanofi Biotechnology Human antibodies to pcsk9 for use in methods of treating particular groups of subjects
AU2012270366C1 (en) 2011-06-17 2017-07-13 Hanmi Science Co., Ltd. A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
KR102052774B1 (ko) 2011-11-04 2019-12-04 자임워크스 인코포레이티드 Ｆｃ 도메인 내의 돌연변이를 갖는 안정한 이종이합체 항체 설계
MX2015005698A (es) 2012-11-06 2015-08-20 Hanmi Pharm Co Tld Formulacion liquida del conjugado de proteina que comprende la oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina.
PE20151603A1 (es) 2012-12-27 2015-11-20 Sanofi Sa Anticuerpos anti-lamp1 y conjugados anticuerpo farmaco, y usos de estos
EP2943512A4 (en) 2013-01-11 2016-06-01 California Inst Biomedical Res FUSION BOVINE ANTIBODIES
ES2732291T3 (es) 2013-05-02 2019-11-21 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Péptidos terapéuticos
LT3129406T (lt) 2014-04-11 2019-04-10 Medimmune, Llc Konjuguoti junginiai, apimantys inžineriniu būdu sukonstruotus cisteino antikūnus
PE20170771A1 (es) 2014-07-30 2017-07-04 Ngm Biopharmaceuticals Inc Composiciones y metodos de uso para tratar trastornos metabolicos
CA3003899A1 (en) 2015-11-02 2017-05-11 Janssen Pharmaceutica Nv Anti-il1rap antibodies, bispecific antigen binding molecules that bind il1rap and cd3, and uses thereof
JOP20190097A1 (ar) 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv الجلوبولينات المناعية واستخداماتها
TW202014433A (zh) * 2018-04-25 2020-04-16 比利時商健生藥品公司 類升糖素肽１（ｇｌｐ－１）融合肽偶合環狀酪酪肽接合物及其用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150258209A1 (en) * 2012-07-04 2015-09-17 Hoffmann-La Roche Inc. Covalently linked antigen-antibody conjugates
WO2015197735A1 (en) * 2014-06-26 2015-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag HUMANIZED ANTI-Tau(pS422) ANTIBODY BRAIN SHUTTLES AND USE THEREOF

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
期刊 Germain, Natacha, et al. "Analogs of pancreatic polypeptide and peptide YY with a locked PP-fold structure are biologically active." Peptides, vol. 39, Elsevier Inc. (2013), p 6-10 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017348172B2 (en) 2021-10-07
CO2019004186A2 (es) 2019-05-10
UY37455A (es) 2018-04-30
IL266202A (en) 2019-06-30
UY37457A (es) 2018-04-30
AU2017348175B2 (en) 2021-08-26
IL266202B1 (en) 2023-05-01
SG10202107777XA (en) 2021-08-30
KR102573684B1 (ko) 2023-09-04
CA3041672A1 (en) 2018-05-03
KR20230129194A (ko) 2023-09-06
US10858413B2 (en) 2020-12-08
SG11201902873RA (en) 2019-05-30
AU2021269420A1 (en) 2021-12-16
TWI773699B (zh) 2022-08-11
JP2019534281A (ja) 2019-11-28
EP3532486B1 (en) 2021-09-22
US10968264B2 (en) 2021-04-06
BR112019008500A2 (pt) 2019-07-09
CA3041674A1 (en) 2018-05-03
JP7387431B2 (ja) 2023-11-28
KR102653376B1 (ko) 2024-04-02
SA519401647B1 (ar) 2022-01-26
US20190298849A1 (en) 2019-10-03
CY1124732T1 (el) 2022-07-22
US10428134B2 (en) 2019-10-01
ECSP19029942A (es) 2019-05-31
UY37456A (es) 2018-04-30
JP2023012467A (ja) 2023-01-25
AU2022200089A1 (en) 2022-02-03
JOP20190096A1 (ar) 2019-04-28
EP3532092A4 (en) 2020-07-01
CR20190208A (es) 2019-05-27
US20210094998A1 (en) 2021-04-01
CO2019003938A2 (es) 2019-04-30
HRP20211626T1 (hr) 2022-02-04
BR112019008417A2 (pt) 2019-09-03
US11732019B2 (en) 2023-08-22
EP3534928A1 (en) 2019-09-11
EP3532486A1 (en) 2019-09-04
PH12019500723A1 (en) 2019-11-11
US20240018208A1 (en) 2024-01-18
KR102653381B1 (ko) 2024-04-02
MX2023005465A (es) 2023-05-22
MA46665B1 (fr) 2021-09-30
DOP2019000107A (es) 2019-09-30
PE20191079A1 (es) 2019-08-20
WO2018081370A1 (en) 2018-05-03
MX2019004952A (es) 2019-06-24
EP3534928A4 (en) 2020-08-12
CR20190210A (es) 2019-05-27
SG11201902879SA (en) 2019-05-30
JP2024020405A (ja) 2024-02-14
RS62677B1 (sr) 2021-12-31
MD3532486T2 (ro) 2022-01-31
CN109890410A (zh) 2019-06-14
US10961293B2 (en) 2021-03-30
US20190367577A1 (en) 2019-12-05
AU2021269420B2 (en) 2023-11-23
US20200385439A1 (en) 2020-12-10
TW201827456A (zh) 2018-08-01
US10787495B2 (en) 2020-09-29
TW201829455A (zh) 2018-08-16
AU2022200089B2 (en) 2023-11-16
EP3532486A4 (en) 2020-06-24
EP3988123A1 (en) 2022-04-27
JP2019534283A (ja) 2019-11-28
IL266202B2 (en) 2023-09-01
PL3532486T3 (pl) 2022-01-31
AU2017348172A1 (en) 2019-04-18
PT3532486T (pt) 2021-11-19
US10640544B2 (en) 2020-05-05
JP2022137031A (ja) 2022-09-21
DOP2019000106A (es) 2019-09-30
US20180127476A1 (en) 2018-05-10
TW201827081A (zh) 2018-08-01
TWI781118B (zh) 2022-10-21
CO2019004203A2 (es) 2019-05-10
NI201900044A (es) 2019-09-09
JP7090077B2 (ja) 2022-06-23
MA46672A (fr) 2019-09-04
CL2019001136A1 (es) 2019-07-05
JOP20190095A1 (ar) 2019-04-28
DOP2019000178A (es) 2020-02-16
KR20240046290A (ko) 2024-04-08
IL266206A (en) 2019-06-30
SA519401646B1 (ar) 2021-12-26
CN110036022A (zh) 2019-07-19
TW202304972A (zh) 2023-02-01
HUE056442T2 (hu) 2022-02-28
US20200283491A1 (en) 2020-09-10
NI201900043A (es) 2019-10-25
EP3532486B8 (en) 2022-01-12
LT3532486T (lt) 2021-11-10
US20190345214A1 (en) 2019-11-14
CN110099692A (zh) 2019-08-06
CN110099692B (zh) 2024-03-12
BR112019008351A2 (pt) 2019-10-01
KR20190073492A (ko) 2019-06-26
SI3532486T1 (sl) 2021-12-31
US20180125998A1 (en) 2018-05-10
JOP20190096B1 (ar) 2023-09-17
US20210163566A1 (en) 2021-06-03
KR20240046621A (ko) 2024-04-09
US20230365644A1 (en) 2023-11-16
WO2018081375A1 (en) 2018-05-03
AU2017348180A1 (en) 2019-04-18
US10968265B2 (en) 2021-04-06
CR20190209A (es) 2019-08-21
PH12019500906A1 (en) 2020-01-20
PE20190917A1 (es) 2019-06-26
US11591379B2 (en) 2023-02-28
CL2019001129A1 (es) 2019-07-05
ES2897480T3 (es) 2022-03-01
MA46718A (fr) 2019-09-11
SA519401642B1 (ar) 2022-03-07
PH12019500749A1 (en) 2019-11-11
PE20190916A1 (es) 2019-06-26
IL301843A (en) 2023-06-01
JOP20190097A1 (ar) 2019-04-28
MA46665A (fr) 2019-09-04
KR20190072615A (ko) 2019-06-25
US11767354B2 (en) 2023-09-26
US20180117170A1 (en) 2018-05-03
MX2019004955A (es) 2019-06-24
AU2017348175A1 (en) 2019-04-18
DK3532486T3 (da) 2021-10-18
MX2019004954A (es) 2019-06-24
CN118085061A (zh) 2024-05-28
WO2018081367A1 (en) 2018-05-03
ZA202200648B (en) 2024-02-28
ECSP19029835A (es) 2019-05-31
EP3532092A1 (en) 2019-09-04
ECSP19029995A (es) 2019-05-31
US20210206822A1 (en) 2021-07-08
IL266204A (en) 2019-06-30
JP7231539B2 (ja) 2023-03-01
US20190263879A1 (en) 2019-08-29
CL2019001110A1 (es) 2019-07-05
SG11201902886SA (en) 2019-05-30
CA3041046A1 (en) 2018-05-03
JP2020510606A (ja) 2020-04-09
KR20190072616A (ko) 2019-06-25
US11401315B2 (en) 2022-08-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI794189B (zh) 用作神經胜肽ｙ受體之調節劑的與抗體偶合之環狀酪胺酸酪胺酸胜肽化合物
WO2019207427A2 (en) Thioether cyclic peptide amylin receptor modulators
EA044997B1 (ru) Конъюгат антител, связанный с циклическим пептидом, фармацевтическая композиция и набор, содержащие конъюгат, способы их получения и применения