TWI785334B - 一種細胞結合分子-tubulysin衍生物偶聯物及其製備方法 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及以含支鏈(側鏈)連接體偶聯Tubulysin衍生物（同系物）與細胞結合分子，產生的偶聯物具有更好的藥代動力學性質、從而能更精確地靶向殺死異常細胞。本發明還涉及Tubulysin同系物與細胞結合劑的偶聯及其所含分子的合成方法，以及使用該偶聯物靶向治療癌症、感染和自身免疫疾病的方法。以及使用該偶聯物靶向治療癌症、感染和自身免疫疾病的方法。本發明中的含有長支鏈連接體的Tubulysin偶聯物在靶向傳送期間半衰期增加，在血液迴圈中對非靶細胞、組織或器官的暴露最小，導致脫靶毒性降低。

Description

一種細胞結合分子-TUBULYSIN衍生物偶聯物及其製備方法
本發明涉及以含支鏈(側鏈)連接體偶聯Tubulysin衍生物(同系物)與細胞結合分子，產生的偶聯物具有更好的藥代動力學性質、從而能更精確地靶向殺死異常細胞。本發明還涉及Tubulysin同系物與細胞結合劑的及其所含分子的合成方法，以及使用該偶聯物靶向治療癌症、感染和自身免疫疾病的方法。
Adcetris治療復發或難治性霍奇金淋巴瘤的臨床成功(Okeley,N.等Hematol Oncol.Clin.North.Am,2014,28,13-25；Gopal,A.，等，Blood 2015,125,1236-43)和Kadcyla用於治療復發的HER2陽性乳腺癌的成功(Peddi,P.,Hurvitz,S.,Ther.Adv.Med.Oncol.2014,6(5),202-9；Lambert,J.和Chari,R.,J.Med.Chem.2014,57,6949-64)證明了抗體藥物偶聯物(ADC)是一種非常有前景的癌症靶向治療方法。ADC成功的重要因素包括其中的三個重要組成部分，即單克隆抗體、細胞毒性分子和連接體，以及連接體-細胞毒性分子的連接位點(L.Ducry和B Stump,Bioconjugate Chem.,2010,21,5-13；GS Hamilton,Biologicals 2015,43,318-32)。對於ADC各組分的研究已持續有三十年的歷史。連接體需 要滿足可以和藥物上特定的反應性官能團反應，在人體血液循環系統具有穩定性，並且在與抗原結合和細胞內吞後要容易釋放藥物，尤其重要的是連接體-細胞毒性分子一旦在血液迴圈中脫靶後不能損害正常組織，現有的連接技術仍然有限(Ponte,J.等，Bioconj.Chem.,2016,27(7),1588-98；Dovgan,I.等Sci.Rep.2016,6,30835；Ross,P.L.和Wolfe,J.L.,J Pharm.Sci.105(2),391-7；Chen,T.等J.Pharm.Biomed.Anal.,2016,117,304-10)。
早期ADC主要用於靶向治療液體腫瘤，使用的連接體很不穩定，游離藥物在血液迴圈中被釋放和進而出現脫靶毒性(Bander N.H.等，Clin.Adv.Hematol.Oncol.,2012,10,1-16)。當前一代ADC上的連接體更穩定，細胞毒性劑地活性也更高(Behrens,C.R.和Liu,B.,mAbs,2014.6,46-53)。然而，脫靶毒性目前仍然是ADC藥物開發中的主要挑戰之一(Roberts,S.A.等，Regul.Toxicol.Pharmacol.2013,67,382-91)。例如在臨床實踐中T-DM1(Kadcyla®)使用了穩定的(不可切割的)MCC連接體，它對HER2陽性患有轉移性乳腺癌(mBC)或已經接受了相應治療或在輔助治療的六個月內HER2腫瘤復發的患者有很大益處(Peddi,P.和Hurvitz,S.,Ther.Adv.Med.Oncol.2014,6(5),202-209；Piwko C.等，Clin Drug Investig.2015,35(8),487-93；Lambert,J.和Chari,R.,J.Med.Chem.2014,57,6949-64)。但是，在臨床試驗中T-DM1作為HER2陽性無法切除的局部晚期或轉移性乳腺癌患者的一線治療藥物已經失敗，作為HER2陽性晚期胃癌的二線治療藥物，與其產生的毒副作用相比，它對患者的益處不大(Ellis,PA，等，J.Clin.Oncol.2015,33(2015 ASCO會議摘要507)；Shen,K.等，Sci Rep.2016,6,23262；de Goeij,B.E.和 Lambert,J.M.Curr Opin Immunol 2016,40,14-23；Barrios,C.H.等，J Clin Oncol 2016,34,(2016 ASCO會議摘要593)。
為了解決脫靶毒性的問題，ADC化學研發的一個方向就是，將連接體-細胞毒性劑組分和偶聯化學擴展，而不僅僅應用單個的細胞毒性劑，同時還解決了ADC的連接體-細胞毒性劑對目標疾病的活性問題(Lambert,JM Ther Deliv 2016,7,279-82；Zhao,RY等，2011,J.Med.Chem.54,3606-23)。許多藥物的研發者和學術機構都集中力量來開發新型的可靠的特異偶聯連接體，定點ADC偶聯方法，似乎這些ADC的迴圈半衰期更長，療效更高，能降低脫靶毒性，ADC具有窄的體內藥代動力學(PK)特性，生產工藝的批間一致性更好(Hamblett,K.J.等Clin.Cancer Res.2004,10,7063-70；Adem,Y.T.等，Bioconjugate Chem.2014,25,656-664；Boylan,N.J.Bioconjugate Chem.2013,24,1008-1016；Strop,P.等，Chem.Biol.2013,20,161-67；Wakankar,A.mAbs,2011,3,161-172)。已見報導的這些定點偶聯方法包括：抗體中引入經改造的半胱胺酸(Junutula,J.R.等，Nat.Biotechnol.2008,26,925-32；Junutula,JR，等2010 Clin.Cancer Res.16,4769；US專利8,309,300；7,855,275；7,521,541；7,723,485,WO2008/141044)，硒代半胱胺酸(Hofer,T.等，Biochemistry 2009,48,12047-57；Li,X.等，Methods 2014,65,133-8；US專利8,916,159)，含全氟芳香族試劑標籤的半胱胺酸(Zhang,C.等，Nat.Chem.2015,8,1-9)，硫代海藻糖(Okeley,N.M.等，Bioconjugate Chem.2013,24,1650)，非天然胺基酸(Axup,J.Y.等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA.2012,109,16101-6；Zimmerman,E.S.等，2014,Bioconjug.Chem.25,351-361；Wu,P.，等，2009 Proc.Natl. Acad.Sci.106,3000-5；Rabuka,D.，等，Nat.Protoc.2012,7,1052-67；美國專利8,778,631和美國專利申請號20100184135,WO2010/081110；WO2006/069246,2007/059312；美國專利7,332,571,7,696,312和7,638,299；WO2007/130453，美國專利7,632,492和7,829,659)；分子間雙硫鍵被還原後通過下列基團再成橋：二溴馬來醯胺(Jones,MW等.J.Am.Chem.Soc.2012,134,1847-52)，雙碸試劑(Badescu,G.等.Bioconjug.Chem.2014,25,1124-36；WO2013/190272,WO2014/064424)和雙溴噠嗪二酮(Maruani,A.等.Nat.Commun.2015,6,6645)；半乳糖和唾液酸轉移酶(Zhou,Q.等.Bioconjug.Chem.2014,25,510-520；美國專利申請號20140294867 for Sanofi-Genzyme)，甲醯甘胺酸生成酶(FGE)(Drake,PM等.Bioconj.Chem.2014,25,1331-41；Carrico,IS等美國專利7,985,783；8,097,701；8,349,910，和美國專利申請號20140141025,20100210543)，磷酸泛醯巰基乙胺基轉移酶(PPTases)(Grünewald,J.等.Bioconjug.Chem.2015,26,2554-62)，分選酶A(Beerli,RR，等.PLoS One 2015,10,e0131177)，用茂原鏈輪絲菌轉穀胺醯胺酶引入的穀胺醯胺標籤(mTG)(Strop,P.,Bioconj.Chem.,2014,25,855-62；Strop,P.，等.,Chem.Biol.2013,20,161-7；美國專利8,871,908)，或是用微生物轉穀胺醯胺酶(MTGase)引入的穀胺醯胺標籤(Dennler,P.，等，2014,Bioconjug.Chem.25,569-78；Siegmund,V.等.Angew.Chemie-Int.Ed.2015,54,13420-4；美國專利申請號20130189287；美國專利7,893,019)，通過酶或細菌在蛋白質主鏈外形成異肽鍵-肽鍵(Kang,HJ，等.Science 2007,318,1625-8；Zakeri,B.等.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2012,109,E690-7；Zakeri,B.& Howarth, MJ Am.Chem.Soc.2010,132,4526-7)。
我們已經公開了幾種偶聯方法，重新橋接天然抗體鏈間二硫化物被還原產生的一對硫醇，例如使用溴馬來醯亞胺和二溴馬來醯亞胺連接體(WO2014/009774)，2,3-二取代琥珀酸/2-單取代/2,3-二取代富馬酸或馬來酸連接體(WO2015/155753,WO20160596228)，乙炔二羧基連接體(WO2015/151080,WO20160596228)或肼連接體(WO2015/151081)。相較於與抗體上的半胱胺酸或賴胺酸殘基偶聯的傳統非選擇性方法相比，用這些連接體和偶聯方法製備的ADC的治療視窗更大。在此我們公開一種含有長支鏈連接體的Tubulysin偶聯物。長支鏈連接體可以防止抗體藥物偶聯物被水解酶如蛋白酶或酯酶等水解，使偶聯物在循環系統中更加穩定。
Tubulysin是一類高效的細胞毒性劑，它在本領域廣為熟知，可以基於已知方法從天然產物中分離或通過有機合成的方法製備(如Balasubramanian,R.，等.J.Med.Chem.,2009,52,238-40；Wipf,P.，等.Org.Lett.,2004,6,4057-60；Pando,O.，等.J.Am.Chem.Soc.,2011,133,7692-5；Reddy,J.A.，等.Mol.Pharmaceutics,2009,6,1518-25；Raghavan,B.，等.J.Med.Chem.,2008,51,1530-33；Patterson,A.W.,等.J.Org.Chem.,2008,73,4362-9；Pando,O.，等.Org.Lett.,2009,11(24),5567-9；Wipf,P.，等.Org.Lett.,2007,9(8),1605-7；Friestad,G.K.,Org.Lett.,2004,6,3249-52；Peltier,H.M.，等.J.Am.Chem.Soc.,2006,128,16018-9；Chanrasekhar,S.，等J.Org.Chem.,2009,74,9531-4；Liu,Y.，等.Mol.Pharmaceutics,2012,9,168-75；Friestad,G.K.，等.Org.Lett.,2009,11,1095-8；Kubicek,K.，等.,Angew Chem Int Ed Engl,2010.49：4809-12；Chai,Y.，等.,Chem Biol,2010,17：296-309；Ullrich,A.，等.,Angew Chem Int Ed Engl,2009,48,4422-5；Sani,M.,等.Angew Chem Int Ed Engl,2007,46,3526-9；Domling,A.，等.,Angew Chem Int Ed Engl,2006,45,7235-9；Zanda,M.，等，Can.Pat.Appl.CA 2710693(2011)；Chai,Y.，等.Eur.Pat.Appl.2174947(2010),WO 2010034724；Leamon,C.等，WO2010033733,WO 2009002993；Ellman,J.，等，PCT WO2009134279；WO 2009012958；美國專利申請20110263650,20110021568；Matschiner,G.，等，WO2009095447；Vlahov,I.，等，WO2009055562,WO 2008112873；Low,P.，等，WO2009026177；Richter,W.,WO2008138561；Kjems,J.，等，WO 2008125116；Davis,M.；等，WO2008076333；Diener,J.；等，美國專利申請20070041901,WO2006096754；Matschiner,G.，等，WO2006056464；Vaghefi,F.，等，WO2006033913；Doemling,A.,Ger.Offen.DE102004030227,WO2004005327,WO2004005326,WO2004005269；Stanton,M.，等，美國專利申請20040249130；Hoefle,G.，等，Ger.Offen.DE10254439,DE10241152,DE10008089；Leung,D.,等，WO2002077036；Reichenbach,H.，等，Ger.Offen.DE19638870；Wolfgang,R.,US20120129779；Chen,H.，美國專利申請20110027274。我們先前公開了用於靶向治療癌症，感染和自身免疫疾病的Tubulysin偶聯物(PCT/IB2012/053554)的構建。本發明中的含有長支鏈連接體的Tubulysin偶聯物在靶向傳送期間半衰期增加，在血液迴圈中對非靶細胞、組織或器官的暴露最小，導致脫靶毒性降低。
本發明涉及以含支鏈(側鏈)連接體偶聯Tubulysin同系物與細胞結合分子，產生的偶聯物具有更好的藥代動力學性質、從而能更精確地靶向殺死異常細胞。本發明還涉及Tubulysin同系物與細胞結合劑的偶聯及其所含分子的合成方法，以及使用該偶聯物靶向治療癌症、感染和自身免疫疾病的方法。
在一個方面，本發明涉及一種抗體-Tubulysin B衍生物偶聯物，其特徵在於，所述偶聯物具有如下式(I)所示的結構：
Figure 109116404-A0305-02-0009-1
或者以具有式I所示結構為母體的藥學上可接受的鹽、水合物或水合鹽，具有式I所示結構的多晶型物，式I所示結構的光學異構體，式I所示結構的一個或多個氘(2H)原子代替氫(1H)原子，或式I所示結構的一個或多個13C原子代替12C原子；其中，P1是H、COCH3、COH、PO(OH)2、CH2OPO(OH)2、SO2CH3、C6H11O5(糖苷)、CONHCH3、CON(CH3)2、CON(CH2CH2)2NCH3、CON(CH2CH3)2或CON(CH2CH2)2CHN(CH2CH2)2CH2；R1、R2、R3和R4分別獨立地是H、C1-C6烷烴基、C1-C6烯烴基、C1-C6烷醚基(R1OR2)、C1-C6烷羰基(R1COR2)、C1-C6烷酯基(R1COOR2)、C1-C6烷羧基((R1COOH)或C1-C6烷醯胺基((R1CONHR2)；或者，R1和R2一起，R1和R3一起，R2和R3一起，或R3和R4一起構成C2-C7雜環基或C2-C7環烷基結構；R5是H、O-C1-C6烷烴基、C(O)-H、C(O)-C1-C6(直鏈或支鏈)烷烴 基、C(O)-NH-C1-C6(直鏈或支鏈)烷基或C(O)-N(C1-C6(直鏈或支鏈)烷基)2；R6、R7和R8分別獨立地是H、C1-C6烷烴基、C1-C6烷醚基(R1OR2)、C1-C6烷羰基(R1COR2)、C1-C6烷酯基(R1COOR2)、C1-C6烷羧基((R1COOH)或C1-C6烷醯胺基((R1CONHR2)；優選R6、R7和R8分別獨立地是H或CH3；mAb是抗體、抗體片段、單克隆抗體、多克隆抗體、納米抗體、前藥抗體(probody)，或者用合成分子或蛋白進行修飾過的抗體及抗體片段；L是含有親水支鏈的連接體，其主要構架是C2-C100的肽單元(1~12個天然或非天然胺基酸)、腙鍵基團、二硫化物基團、酯基團、肟基團、醯胺基團或硫醚鍵基團構成。
在一個方面，在本發明的偶聯物中，L的結構為：
Figure 109116404-A0305-02-0010-2
 其中Aa是L-或D-天然或非天然胺基酸；r是0-12之間的整數；當r不是0時，(Aa)r是由相同或不同的胺基酸構成的肽單元；m1=1-18之間的整數；m2=1-100之間的整數；m3=1-8之間的整數；m4=0-8之間的整數；m5=1-8之間的整數；Y是NHC(=O)、NHS(O2)、NH(SO)、NHS(O2)NH、NHP(O)(OH)NH或C(O)NH；R9是H、(O=)CR1、(O=)CNHR1、R1COOH、R1(COCH2NH)m2H、 R1(Aa)r或R1(COCH2NCH3)m2H，以及R1、m2和(Aa)r定義如請求項1和上述定義所述。
此外，所述細胞表面受體結合分子mAb可以為任何形式的細胞結合體，包括肽或類似肽的結構：抗體，單鏈抗體，可以與目標細胞結合的抗體片段，單克隆抗體，單鏈單克隆抗體，可以與目標細胞結合的單克隆抗體片段，嵌合抗體，可以與目標細胞結合的嵌合抗體片段，功能區抗體，可以與目標細胞結合的功能區抗體片段，仿抗體的基因工程蛋白質，纖連蛋白結合體adnectin，預設計錨蛋白重複蛋白(DARPin)，淋巴因數，激素，維他命，生長因數，集落刺激因數，營養傳送分子，轉鐵蛋白，細胞表面小分子配體，或連接有細胞結合體的白蛋白、高分子、或樹枝高分子，表面含有細胞結合分子(結合肽、蛋白、抗體或細胞表面小分子配體)的高分子材料、蛋白、脂質體、納米顆粒、泡饢或(病毒)微囊。
細胞結合分子-Tubulysin B衍生物偶聯物的製備
在一具體實施例中，所述細胞結合分子-Tubulysin B衍生物偶聯物的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0011-4
其中結構式(II)中的P1、“
Figure 109116404-A0305-02-0011-541
”、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8以及mAb如結構式(I)中所述；L’的結構為(II-0)和(II-00)：
Figure 109116404-A0305-02-0012-538
Figure 109116404-A0305-02-0012-539
 其中m1、m2、m3、m4、m5、Aa、r、Y和R9如結構式(I)所述。
具體理想的L’的結構是：
Figure 109116404-A0305-02-0012-9
Figure 109116404-A0305-02-0012-10
Figure 109116404-A0305-02-0012-11
Figure 109116404-A0305-02-0012-12
Figure 109116404-A0305-02-0013-15
或
Figure 109116404-A0305-02-0013-16
 其中m1、m2、m3、m4、m5、Aa、r和R9如請求項1至2中任一項所述。
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，進行偶連的mAb-SH的製備方法包括以下a)~c)中的任一個：
a).由還原劑(優選，三(2-羧基乙基)膦(TCEP)、二硫蘇糖醇(DTT)、二硫季戊四醇(DTE)、L-谷胱甘肽(GSH)、2-巰基乙胺(β-MEA)或/和β-巰基乙醇(β-ME，2-ME))還原抗體、抗體片段、單克隆抗體、多克隆抗體、納米抗體、前藥抗體(probody)或用合成分子或蛋白進行修飾過的抗體及抗體片段重輕鏈間、重重鏈間或自身鏈間的二硫鍵來獲取；
b).通過Traut試劑或硫內酯與抗體分子的胺反應形成硫醇來製備：
Figure 109116404-A0305-02-0013-17
c).在緩衝體系條件下，通過生化反應，在抗體上引入較易還原的二硫鍵基團，然後用TCEP、DTT、GSH、β-MEA、β-ME還原：
Figure 109116404-A0305-02-0014-18
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，偶聯物的合成中使用的緩衝體系是：pH 5.0~9.5，濃度為1mM~1000mM的磷酸、醋酸、檸檬酸、硼酸、碳酸、巴比妥酸、Tris(三羥甲基胺基甲烷)、苯甲酸或三乙醇胺、或它們的混合物緩衝溶液，並含有體積比為0%~35%的水溶性有機溶劑：甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、乙腈、丙酮、DMF、DMA或DMSO，偶聯反應溫度控制在0℃~45℃，偶聯反應是5分鐘~96小時。
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，在偶聯反應完成後，採用超濾或柱層析法進行純化獲得結構式為(I)的偶聯物。常用的柱層析包括分子篩柱、陽離子柱、陰離子柱、疏水(HIC)柱、反相柱或者蛋白A或G親和柱。
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式為(II)的合成由結構式為(III)的Tubulysin B衍生物和結構式為(L’)的化合物縮合反應獲得：
Figure 109116404-A0305-02-0015-19
 其中X是OH、鹵素(F、Cl、Br、或I)、苯酚、五氯酚、三氟甲基磺酸、咪唑、二氯苯酚、四氯苯酚、1-羥基苯並三氮唑、對甲苯磺酸、甲磺 酸、2-乙基-5-苯基異噁唑-3'-磺酸、
Figure 109116404-A0305-02-0015-20
Figure 109116404-A0305-02-0015-21
Figure 109116404-A0305-02-0015-22
或
Figure 109116404-A0305-02-0015-24
、自我酸酐或與其他酸酐如乙醯酐、甲酸酐形成的酸酐；或多肽縮合反應中間體或Mitsunobu反應中間體；其中，縮合反應是在含有體積比為1%-100%的吡啶、三乙胺或二異 丙基乙胺的有機溶劑二氯甲烷、二氯乙烷、DMF、DMA、四氫呋喃(THF)、DMSO、丙酮、異丙醇、正丁醇或乙腈中，或上面二種或三種以上溶劑的混合溶劑，或有或無惰性氣體(氮氣、氬氣、氦氣)保護下，溫度控制在-20℃-150℃條件下，反應時長5分鐘-120小時完成；或者，縮合反應在如下緩衝體系及如下條件下進行，所述緩衝體系是：pH 5.0~9.5，濃度為1mM~1000mM的磷酸、醋酸、檸檬酸、硼酸、碳酸、巴比妥酸、Tris(三羥甲基胺基甲烷)、苯甲酸或三乙醇胺、或它們的混合物緩衝溶液，並含有體積比為0%~35%的水溶性有機溶劑：甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、乙腈、丙酮、DMF、DMA或DMSO，偶聯反應溫度控制在0℃~45℃，偶聯反應是5分鐘~96小時。
另外，結構式(III)中的NH2基團理想地是以三氟乙酸鹽、鹽酸鹽、甲酸鹽、醋酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、檸檬酸鹽、丁二酸鹽、苯甲酸、磺酸鹽形式進行縮合反應。
當X是OH時，上述縮合反應需借助縮合試劑，通常縮合試劑可選擇地是：1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，二環己基碳二亞胺(DCC)，N,N'-二異丙基碳二醯亞胺(DIC)，1-環己基-2-嗎啉乙基碳二亞胺對甲苯磺酸鹽(CMC或CME-CDI)，羰基二咪唑(CDI)，O-苯並三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)，O-苯並三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，苯並三氮唑-1-基氧基三(二甲基胺基)磷鎓六氟磷酸鹽(BOP)，六氟磷酸苯並三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)，焦碳酸二乙酯(DEPC)，N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸鹽，2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)，1-[(二甲胺)(嗎啉基)亞甲 基]-1[1,2,3]三唑並[4,5-b]1-吡啶-3-氧六氟磷酸鹽(HDMA)，2-氯-1,3-二甲基咪唑鎓六氟磷酸鹽(CIP)，氯代三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(PyCloP)，雙(四亞甲基)氟代甲醯胺(BTFFH)，N,N,N',N'-四甲基-硫-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲鎓六氟磷酸鹽，2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TPTU)，硫-(1-氧代-2-吡啶基)-N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸鹽，O-[(乙氧基羰基)氰基甲胺]-N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸鹽(HOTU)，(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亞乙基胺基氧基)二甲基胺基-嗎啉-碳鎓六氟磷酸鹽(COMU)，(苯並三氮唑-1-基氧基)二吡咯烷碳六氟磷酸鹽(HBPyU)，N-苄基-N'-環己基碳二亞胺(或荷載在聚合物上)，二吡咯烷基(N-琥珀醯亞胺氧基)碳鎓六氟磷酸鹽(HSPyU)，1-(氯-1-吡咯烷基亞甲基)吡咯烷六氟磷酸鹽(PyClU)，2-氯-1,3-二甲基咪唑四氟硼酸鹽(CIB)，(苯並三氮唑-1-基氧基)二呱啶碳六氟磷酸鹽(HBPipU)，6-氯苯並三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TCTU)，溴化三(二甲基胺基)膦六氟磷酸(BrOP)，1-正丙基磷酸酐(PPACA，T3P®)，2-異氰基乙基嗎啉(MEI)，N,N,N',N'-四甲基脲-氧-(N-琥珀酸亞胺基)六氟磷酸鹽(HSTU)，2-溴-1-乙基吡啶四氟硼酸鹽(BEP)，氧-[(乙氧基羰基)氰基甲胺]-N,N,N',N'-四甲基硫尿四氟硼酸鹽(TOTU)，4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽(MMTM,DMTMM)，2-琥珀醯亞胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TSTU)，N,N,N',N'-四甲基-O-(3,4-二氫-4-氧代-1,2,3-苯並三嗪-3-基)脲四氟硼酸鹽(TDBTU)，偶氮二甲醯二呱啶(ADD)，雙(4-氯苄基)偶氮二甲酸酯(DCAD)，偶氮二甲酸二叔丁酯(DBAD)，偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD)或偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)。
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特 徵在於，結構式(III)的Tubulysin B衍生物的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0018-26
Figure 109116404-A0305-02-0019-27
其中R5’是H、C1-C6烷烴基、C1-C6烷烴基、或C1-C6(直鏈或支鏈)胺烷基；其他基團的定義如前述。
理想條件下，結構式(III)的Tubulysin B衍生物的合成包括下列步驟中的一種或多種；
步驟1. 將二乙氧基乙腈與硫化銨的水溶液在室溫攪拌，得到化合物1即2,2-二乙氧基硫代乙醯胺；
Figure 109116404-A0305-02-0019-28
步驟2. 將化合物1與溴丙酮酸酯在無水溶劑(如無水四氫呋喃、二氯甲烷、乙腈、N,N-二甲基甲醯胺、甲醇、異丙醇)中加熱，縮合得化合物2；
Figure 109116404-A0305-02-0019-29
步驟3. 將化合物2溶解在溶劑(如四氫呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯、正 庚烷、二氧六環、乙腈)中，用路易士酸或質子酸(包括鹽酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、甲酸、草酸、乙酸、對甲苯磺酸、對甲苯磺酸吡啶、AlCl3、FeCl3、ZnCl2、BF3、BCl3、BBr3、TiCl4、ZnBr2、LiBF4)水解，得到化合物3；
Figure 109116404-A0305-02-0020-30
步驟4. 不飽和亞磺醯胺在低溫條件下(如-45℃至-78℃)被正丁基鋰等鹼脫氫，然後在路易士酸存在的條件下與化合物3發生加成反應，得到化合物4；
Figure 109116404-A0305-02-0020-32
路易士酸選擇為包括鹽酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、甲酸、草酸、乙酸、對甲苯磺酸、對甲苯磺酸吡啶、AlCl3、FeCl3、ZnCl2、BF3、BCl3、BBr3、TiCl4、ZnBr2、LiBF4；
步驟5. 化合物4在低溫條件(如-45℃至-78℃)被下被還原劑(如NaBH4、LiBH4、Na(OAc)3BH、Na(CN)BH3等)選擇性地還原，通過加入路易士酸(如Ti(Oet)4)，控制其立體化學，得到化合物5；
Figure 109116404-A0305-02-0020-33
步驟6. 將化合物5溶解在溶劑(如甲醇、乙醇、異丙醇、四氫呋喃、乙腈)中，被鹽酸、硫酸和磷酸等酸脫去叔丁基亞磺醯基，得到化合物6；
Figure 109116404-A0305-02-0021-34
步驟7. 將化合物6和疊氮酸溶解在溶劑(如正庚烷、四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺)中，在縮合試劑(如DIC/HOBt、DCC/HOBt、EDC/HOBt、HATU、BOP、T3P、BrOP)存在下，或通過縮合反應路線，發生縮合反應，得到化合物7；或者，疊氮酸與氯甲酸異丁酯在有機鹼(如三乙胺、二異丙基乙胺、N-甲基嗎啡啉等)存在時在THF中反應，得到混合酸酐，再和化合物6的鹽酸鹽發生縮合，得到化合物7；或者，疊氮酸在溶劑(如正庚烷、正己烷、二氯甲烷、四氫呋喃)中與草醯氯、三乙胺和催化劑量的DMF反應，被轉換成醯氯，再和化合物6的鹽酸鹽發生縮合，得到化合物7；
Figure 109116404-A0305-02-0021-35
步驟8. 在溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃、乙腈)中，化合物7上的羥基與羥基保護試劑(如TESCl)，在有機鹼(如咪唑、三乙胺、吡啶)的作用下得到化合物8；
Figure 109116404-A0305-02-0021-39
步驟9. 化合物8被溶解在溶劑(如四氫呋喃、二氯甲烷、乙腈)中，在鹼(如KHMDS，LiHMDS，NaHMDS，KOtBu，NaH，KH)的作用下，醯胺發生去質子化，然後與碘甲烷、溴甲烷、硫酸二甲酯、三氟甲磺酸甲酯 或碘乙烷等發生烷基化反應，得到化合物9；
Figure 109116404-A0305-02-0022-40
步驟10. 化合物9被溶解在溶劑(如四氫呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯)中，其中的疊氮基在一定的條件下，如在氫氣和鈀碳催化劑、三苯基膦和水(Staudinger反應)的存在下，被還原成胺基，然後與酸或者具有反應活性的酸衍生物發生縮合，得到化合物10；
Figure 109116404-A0305-02-0022-41
步驟11. 化合物10中的羥基保護基PG1在適當的條件(如TES保護基團可以在鹽酸、THF/MeOH/AcOH、nBu4NF或吡啶氫氟酸鹽的THF溶液中被脫保護)下被脫保護，得到化合物11；
Figure 109116404-A0305-02-0022-42
步驟12. 化合物11中的酯基在鹼(如LiOH、NaOH、KOH)的作用下，或其他適當條件(如甲酯可以在LiCl、LiI、Me3SiOK等試劑的作用下被轉化成羧酸)下被轉化成酸化合物12；
Figure 109116404-A0305-02-0022-540
步驟13. 在鹼(如三乙胺、N,N-二異丙基乙胺、吡啶)和催化劑(如DMAP)存在時，一定的溫度條件(如0℃至23℃)下，化合物12與乙酸酐， 丙酸酐、異丙酸酐等酸酐、乙醯鹵、丙酸鹵、丙酸鹵、甲醯胺鹵、異醯胺鹵、二甲醯胺鹵等酸鹵作用，得到化合物13，該反應也可不使用鹼或者催化劑；
Figure 109116404-A0305-02-0023-45
步驟14. 化合物13與適當的含羥基的化合物如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺在縮合試劑(如EDC、DIC、DCC、HATU、HBTU)存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯化合物14；
Figure 109116404-A0305-02-0023-47
步驟15. 化合物15與化合物14，在水相、一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相、存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物16；反應也任選不使用任何鹼，條件是需要控制一定的反應溫度(如0℃至23℃)和反應時間(如30分鐘至18小時)；
Figure 109116404-A0305-02-0023-49
步驟16. 化合物16中的硝基在還原條件下，如在氫氣和鈀碳催化劑、 水合肼和FeCl3、鐵粉和醋酸等的存在的條件下，被還原成胺基，得到化合物III；
Figure 109116404-A0305-02-0024-50
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式為(L’)的化合物的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0024-51
理想條件下，結構式為(L’)的化合物的合成包括下列步驟中的一種或多種：
步驟1. 化合物1-1和化合物1-2在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)的作用下縮合，或者經過縮合反應路線發生縮合反應(如化合物1-2在縮合試劑如DIC和EDC的作用下與五氟苯酚、硝基苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺發生縮合反應，生產相應的活性酯，然後再與化合物1-1反應)，得到化合物物1a；或者，化合物1-3和化合物1-4在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)的作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物1b；
Figure 109116404-A0305-02-0025-58
Figure 109116404-A0305-02-0025-59
步驟2. 化合物1中的羧基保護基PG2在脫保護試劑作用下(如叔丁酯基在酸的作用下)，被去除，得到化合物2；
Figure 109116404-A0305-02-0025-55
步驟3. 含羧基的化合物2和含胺基的化合物3在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物4；
Figure 109116404-A0305-02-0025-57
Figure 109116404-A0305-02-0026-60
步驟4. 化合物4上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物5；
Figure 109116404-A0305-02-0026-61
步驟5. 含羧基化合物6和含胺基的化合物5在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物7；
Figure 109116404-A0305-02-0026-67
Figure 109116404-A0305-02-0026-68
步驟6. 化合物7上的羧基保護基團PG3在去保護條件下被去除(如羧基上的叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除)，得到化合物8；
Figure 109116404-A0305-02-0026-69
步驟7. 化合物8與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)存在時，發生縮合反應，得到 具有反應活性的酯化合物，或與其他酸活化基團反應得到具有縮合反應活性的化合物L’；
Figure 109116404-A0305-02-0027-70
16.如請求項9至13中任一項的偶聯物，其特徵在於，結構式為(L’)的化合物的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0027-72
理想條件下，結構式為(L’)的化合物的合成包括下列步驟中的一種或多種：
步驟1. 化合物1上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物2；
Figure 109116404-A0305-02-0028-73
步驟2. 含胺基的化合物2和含羧基的化合物3在縮合試劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物4；
Figure 109116404-A0305-02-0028-74
步驟3. 化合物4上的羧基保護基團PG2在去保護條件下被去除，如羧基上的叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除，得到化合物5；
Figure 109116404-A0305-02-0028-75
步驟4. 含羧基化合物5和含胺基的化合物6在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物7；
Figure 109116404-A0305-02-0028-76
步驟5. 化合物7上的羧基保護基團PG3在去保護條件下被去除，如羧基上的叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除，得到化合物8；
Figure 109116404-A0305-02-0029-79
步驟6. 化合物8與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯化合物，或與其他酸活化基團反應得到具有縮合反應活性的化合物9；
Figure 109116404-A0305-02-0029-80
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式為(II)化合物的合成由結構式(IV)和結構式(V)縮合反應獲得：
Figure 109116404-A0305-02-0029-82
其中X定義及縮合反應條件如前面所述；結構式(V)中的NH2基團優選地是以三氟乙酸鹽、鹽酸鹽、甲酸鹽、醋酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、檸檬酸鹽、丁二酸鹽、苯甲酸或磺酸鹽形式進行縮合反應。
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式(IV)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0030-84
理想條件下，結構式(IV)的合成包括下列步驟中的任一種：羧酸化合物1與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑(如EDC、DIC、DCC、HATU、HBTU)存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯；或者，羧酸化合物1與氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯等，在有機鹼(如N-甲基嗎啡啉、三乙胺、二異丙基乙胺等有機鹼)存在下反應，得到具有反應活性的混合酸酐；或者，羧酸化合物1與草醯氯，在三乙胺等有機鹼和催化劑量(如0.01當量至0.5當量)的DMF存在條件下，反應得到醯氯。
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式(V)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0031-86
理想條件下，結構式(V)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
步驟1. 化合物1與化合物2，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物3；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
Figure 109116404-A0305-02-0031-88
Figure 109116404-A0305-02-0032-89
步驟2. 化合物3上的胺基保護基團PG4在去保護條件下被去除(如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物V；
Figure 109116404-A0305-02-0032-90
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，化合物2的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0032-92
 其中，該合成步驟中得到的化合物8(化合物XIVa)即為所述目標化合物2；PG4是胺基保護基團。
理想條件下，化合物2的合成包括下列步驟中的一種或多 種：步驟1. 將L-酪胺酸的酯類衍生物1溶解於適當的溶劑，如丙酮、四氫呋喃、乙腈、二氯甲烷等，或者這些溶劑與水的混合溶劑，與苄基氯、苄基溴或其它苄基化合物，在0至60℃反應，可在反應體系中加入適當的有機或無機鹼，如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙胺、DBU、氫化鈉等，也可在體系內加入適當的添加劑如碘化鈉或相轉移催化劑，如苄基三乙基氯化銨(TEBA)、四丁基溴化銨(TBAB)、四丁基氯化銨、四丁基硫酸氫銨、三辛基甲基氯化銨、十二烷基三甲基氯化銨、十四烷基三甲基氯化銨等，得到化合物2；步驟2. 將化合物2溶解於有機溶劑如二氯甲烷、四氫呋喃、甲醇、乙醇、乙醚等，用還原劑，如氫化鋁鋰、DIBAL、硼氫化鈉、硼氫化鋰、二氫雙(2-甲氧乙氧基)鋁酸鈉(Red-Al)、乙硼烷等還原，可在反應體系中加入添加劑，如I2、三氯化鐵、氯化鋅、氯化鎂、氯化鋰、氯化鈣等控制還原劑的活性，得到化合物3；步驟3. 醇類化合物3在適當的氧化條件下，如swern氧化(草醯氯、DMSO、三乙胺)、Parikh-Doering氧化(三氧化硫吡啶氧化)、Dess-Martin氧化等，被氧化成醛4；步驟4. 醛4與磷酸酯反應(Horner-Wadsworth-Emmons反應)或者磷葉立德反應(Wittig反應)，進行碳鏈延長，得到化合物5；步驟5. 化合物5中的雙鍵在均相或兩相催化劑的作用下被氫化還原，其中的苄基也同時被脫去，得到立體結構單一的手性化合物，或者兩個非對映異構體的混合物；催化劑包括Pd/C、Pd(OH)2/C、Pd/BaSO4、PtO2、Pt/Al2O3、Ru/C、Raney鎳等兩相催化劑，均相不對稱氫化催化 劑，如Crabtree催化劑、[Ru(II)-(BINAP)]類催化劑、[(Ph3P)CuH]6催化劑等；步驟6. 將化合物6溶解在有機溶劑中，如四氫呋喃、乙腈、二氯甲烷，在硝化反應條件下被硝化，硝化試劑包括硝酸、硝酸/醋酸、硝酸鉀/硫酸、亞硝基叔丁酯、硝酸/三氟乙酸酐、NO2BF4、硝基吡啶鎓鹽等；步驟7. 在以下條件下化合物7中的硝基被還原成胺基，這些條件包括H2/Pd/C，Fe或Zn/HOAc，SnCl2/HCl。
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，化合物2的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0034-93
其中，該合成步驟中得到的化合物8(化合物XIVb)即為所述目標化合物2。
理想條件下，化合物2的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 化合物1在-78℃至-45℃條件下，與Evans手性N-醯基噁唑烷酮或硫酮2，其中X=O或S，R16=H、甲基、苯基、R17=H、甲基、異 丙基、苯基、苄基等，進行Aldol反應，得到立體構型單一的化合物3；步驟2. 化合物3上的羥基在以下條件下被脫去，這些條件包括Barton-McCombie去氧反應，即醇首先轉化為硫代醯基衍生物，如烷基黃原酸鹽、硫代氯甲酸苯酯、硫代羰基咪唑酯，然後用Bu3SnH處理，發生自由基斷裂得到脫羥基產物；自由基斷鍵的條件包括：n-Bu3SnH/AIBN,N-Bu3SnH/AIBN/n-BuOH/PMHS，(Bu4N)2S2O8/HCO2Na；步驟3. 將化合物4溶解在四氫呋喃中，Evans手性輔基在LiOH/H2O2的條件下被切斷得到相應的酸5；步驟4. 化合物5被溶解在有機溶劑中，如乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇或乙酸等，其中的苄基在鈀碳催化劑存在下被催化氫解，得到化合物6；步驟5. 將化合物6溶解在有機溶劑中，如四氫呋喃、乙腈、二氯甲烷，在硝化反應條件下被硝化，硝化試劑包括硝酸、硝酸/醋酸、硝酸鉀/硫酸、亞硝基叔丁酯、硝酸/三氟乙酸酐、NO2BF4、硝基吡啶鎓鹽等；步驟6. 在以下條件下化合物7中的硝基被還原成胺基，這些條件包括H2/Pd/C，Fe或Zn/HOAc，SnCl2/HCl等，得到立體構型單一的手性化合物8。
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式為(II)的合成由結構式(VI)和結構式(VII)縮合反應獲得：
Figure 109116404-A0305-02-0036-94
其中X定義及縮合反應條件如請求項9至11中任一項所述。
具體實施例中，結構式(VI)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0036-97
Figure 109116404-A0305-02-0037-99
理想條件下，結構式(VI)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
步驟1. 化合物1與適當的含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酸的衍生物化合物2；
Figure 109116404-A0305-02-0037-100
步驟2. 化合物2與化合物3，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物4；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
Figure 109116404-A0305-02-0037-101
Figure 109116404-A0305-02-0037-102
步驟3. 化合物4上的胺基保護基團PG4在去保護條件下被選擇性地去除(如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物5；
Figure 109116404-A0305-02-0038-103
步驟4. 化合物5與結構式(IV)，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物6；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
Figure 109116404-A0305-02-0038-104
步驟5. 化合物6上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除(如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物VI；
Figure 109116404-A0305-02-0038-106
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式(VII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0038-107
理想條件下，結構式(VII)的合成包括下列步驟中的一種或多種： 步驟1. 羧酸化合物1與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯；或者，羧酸化合物1與氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯等，在有機鹼(如N-甲基嗎啡啉、三乙胺、二異丙基乙胺等有機鹼)存在下反應，得到具有反應活性的混合酸酐；或者，羧酸化合物1與草醯氯，在三乙胺等有機鹼和催化劑量(如0.01當量至0.5當量)的DMF存在條件下，反應得到醯氯；
Figure 109116404-A0305-02-0039-109
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式為(II)的合成由結構式(VIII)和結構式(IX)縮合反應獲得：
Figure 109116404-A0305-02-0039-111
其中X定義及縮合反應條件如上面所述。結構式(VIII)中的NH2基團理想地是以三氟乙酸鹽、鹽酸鹽、甲酸鹽、醋酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、檸檬酸鹽、丁二酸鹽、苯甲酸或磺酸鹽形式進行縮合反應。
具體實施條件下，結構式(VIII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0040-112
Figure 109116404-A0305-02-0041-113
理想實施條件下，結構式(VIII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
步驟1. 化合物1上的羧基保護基PG3在去保護條件下被去除(如羧基上的叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除)，得到化合物2；
Figure 109116404-A0305-02-0041-114
步驟2. 化合物2與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯化合物3；
Figure 109116404-A0305-02-0041-115
步驟3. 化合物3與化合物4，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物5；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
Figure 109116404-A0305-02-0042-116
步驟4. 化合物5上的胺基保護基團PG3在去保護條件下被去除(如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物6；
Figure 109116404-A0305-02-0042-117
步驟5. 化合物6與結構式(IV)，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物7；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
Figure 109116404-A0305-02-0042-118
步驟6. 化合物7上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物VIII；
Figure 109116404-A0305-02-0043-119
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式(IX)的合成包括下列步驟中的一種或多種：羧酸化合物1與適當的含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯IX；或者，羧酸化合物1與氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯等，在有機鹼(如N-甲基嗎啡啉、三乙胺、二異丙基乙胺等有機鹼)存在下反應，得到具有反應活性的混合酸酐IX；或者，羧酸化合物1與草醯氯，在三乙胺等有機鹼和催化劑量的DMF存在條件下，反應得到醯氯IX；
Figure 109116404-A0305-02-0043-121
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式為(II)的合成由結構式(X)和結構式(XI)縮合反應獲得：
Figure 109116404-A0305-02-0044-122
其中Y1和Y2基團縮合構成Y基團；Y1和Y2分別是NH2、-+NH3、COOH、COX、SO2Cl、P(O)Cl2、NHCOX、NHSO2Cl、NHP(O)Cl2、NHP(O)(OH)Cl、
Figure 109116404-A0305-02-0044-123
(NHS)、
Figure 109116404-A0305-02-0044-124
(PFP)、
Figure 109116404-A0305-02-0044-568
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，結構式(X)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0045-130
理想條件下，結構式(X)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
步驟1. 含羧基的化合物1和化合物VI在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線，發生縮合反應，得到化合物2；其中Z1為Y1的前體，如經過適當基團保護的胺基、羧基、醯胺基、磷醯胺基和磺醯胺基、羧酸酯、磷酸酯、膦酸酯等；
Figure 109116404-A0305-02-0046-131
Figure 109116404-A0305-02-0046-132
步驟2. 化合物2上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物3；
Figure 109116404-A0305-02-0046-133
步驟3. 含羧基化合物4和含胺基的化合物3在縮合劑作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物5；
Figure 109116404-A0305-02-0046-135
Figure 109116404-A0305-02-0046-136
步驟4. 化合物5中的官能團Z1經過適當的化學轉換，如羧基和胺基的脫保護等操作，生成官能團Y1，得到化合物X；
Figure 109116404-A0305-02-0046-137
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特 徵在於，結構式(XI)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0047-138
理想條件下，結構式(XI)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
步驟1. 將化合物1溶解在有機溶劑，如四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、二甲亞碸中，用鹼，如氫化鈉、鈉、氫氧化鈉等拔氫，然後與化合物2(其中X為氯、溴、碘等鹵素或者其他離去基團)在一定的溫度下攪拌，反應得到化合物3；
步驟2. 化合物3上的羧基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除，得到化合物XIa-1；
步驟3. 將化合物1溶解在有機溶劑，如四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、二甲亞碸中，用鹼，如氫化鈉、鈉、氫氧化鈉等拔氫，然後與化合物4(在一定的溫度下攪拌，反應得到化合物5；
步驟4. 化合物5上的羧基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除，得到化合物XIa-2；
步驟5. 將化合物6溶解在有機溶劑中，如四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、二甲亞碸等，加入適當的有機鹼，如三乙胺、N,N-二異丙基乙胺、吡啶等，與甲基磺醯氯、4-甲苯磺醯氯等在0-5℃反應，得到化合物7；
步驟6. 化合物7與氨水在水相或有機溶劑中，如甲醇、乙醇、乙腈、四氫呋喃、環氧六環等，發生反應，反應可適當加熱，得到化合物XIb。
步驟7. 化合物7與疊氮化鈉在有機溶劑中，如四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、二甲亞碸等，發生反應，得到化合物8；
步驟8. 疊氮化合物8在鈀碳催化劑存在的條件下被氫化還原，或者三苯基膦和水的作用下被還原，得到化合物XIb；
步驟9. 化合物7與二苄胺在有機溶劑中，如四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、二甲亞碸等，優選N,N-二甲基甲醯胺，在100℃發生反應，得到化合物9；
步驟10. 將化合物9溶解在溶劑中，如乙酸乙酯、甲醇、乙醇、乙酸、四氫呋喃等，在一定的氫氣壓力下，在鈀碳催化劑上被還原，反應可適當加熱至45℃，得到化合物XIb。
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式為(II)的合成由結構式(XII)和結構式(XIII)縮合反應獲得：
Figure 109116404-A0305-02-0049-139
其中X定義及縮合反應條件如前面所述。
理想條件下，結構式(XII)中的NH2基團是以三氟乙酸鹽、鹽酸鹽、甲酸鹽、醋酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、檸檬酸鹽、丁二酸鹽、苯甲酸或磺酸鹽形式進行縮合反應。
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式(XII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0050-140
理想條件下，結構式(XII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
步驟1. 化合物1與適當的含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酸的衍生物化合物2；
Figure 109116404-A0305-02-0050-143
步驟2. 化合物2與化合物3，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物4；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時 間；
Figure 109116404-A0305-02-0051-144
Figure 109116404-A0305-02-0051-146
步驟3. 化合物4上的胺基保護基團PG4在去保護條件下被選擇性地去除(如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物5；
Figure 109116404-A0305-02-0051-147
步驟4. 化合物5與結構式(IV)(即請求項18至21中任一項所述的結構式(IV))，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物6；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
Figure 109116404-A0305-02-0051-148
步驟5. 化合物6上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除(如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc 保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物XII；
Figure 109116404-A0305-02-0052-151
在另一具體實施例製備上面所述的偶聯物的過程中，其特徵在於，結構式(XIII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
Figure 109116404-A0305-02-0052-152
優選條件下，結構式(XIII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
步驟1. 含羧基化合物1和含胺基的化合物2在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物3；
Figure 109116404-A0305-02-0052-567
Figure 109116404-A0305-02-0053-154
步驟2. 化合物3上的羧基保護基團PG1在去保護條件下被去除(如羧基上的叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除)，得到化合物4；
Figure 109116404-A0305-02-0053-155
步驟3. 羧酸化合物4與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯結構式(XIII)；或者，羧酸化合物4與氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯等，在有機鹼如N-甲基嗎啡啉、三乙胺、二異丙基乙胺等有機鹼存在下反應，得到具有反應活性的混合酸酐結構式(XIII)；或者，羧酸化合物4與草醯氯，在三乙胺等有機鹼和催化劑量的DMF存在條件下，反應得到醯氯結構式(XIII)，
Figure 109116404-A0305-02-0053-156
所述式(II)化合物的優選結構如下：
Figure 109116404-A0305-02-0054-157
在另一具體實施例中，一種藥物組合物，其包含上述任一項所述的偶聯物或以上面所述含有連結體的化合物同細胞結合分子反應構成的偶聯物，以及藥學上可接受的輔料。上面任一項所述的偶聯物在用於製備治療癌症、感染或自身免疫疾病的藥物中用途。
圖1. 顯示合成Tubulysin衍生物片段13和18。
圖2. 顯示合成Tubulysin衍生物片段34。
圖3. 顯示合成Tubulysin衍生物片段37，38和45。
圖4. 顯示合成Tubulysin衍生物片段57。
圖5. 顯示合成Tubulysin衍生物片段71。
圖6. 顯示合成可偶聯Tubulysin衍生物72。
圖7. 顯示偶連物在荷載NCI-N87異種移植腫瘤的BALB/c裸鼠上的體內抗腫瘤活性。
圖8. 顯示Tubulysin衍生物的Her2抗體偶聯物的毒性研究(與T-DM1對照)。
相關術語解釋：
烷基指含有1至8個碳原子的線性或者環狀直鏈或者支鏈脂肪烴。支鏈指在線性的烷基上有一個或者多個低級烷基，比如甲基，乙基或者丙基相連接。烷基實施例包括甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，正戊烷基，3-戊烷基，辛烷基，壬烷基，癸烷基，環戊烷基，環己烷基，2,2-二甲基丁基，2,3-二甲基丁基，2,2-二甲基戊基，2,3-二甲基戊基，3,3-二甲基戊基，2,3,4-三甲基戊基，3-甲基己基，2,2-二甲基己基，2,4-二甲基己基，2,5-二甲基己基，3,5-二甲基己基，2,4-二甲基戊基，2-甲基庚基，3-甲基庚基，正庚基，異庚基，正辛烷基和異辛烷基。C1-C8烷基既可以未被取代也可以被以下但不限於以下的一個或者多個基團取代：C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，芳基，醯基，醯氧基，酯基，-C(O)NH2，-C(O)NHR’，-C(O)N(R’)2，-NHC(O)R’，-S(O)2R’，-S(O)R’，-OH，鹵素(-F,-Cl,-Br,-I)，-N3，-NH2，-NHR’，-N(R’)2及-CN；其中R’指C1-C8烷基或者芳基。
C3-C8碳環指含3，4，5，6，7，或8個碳原子的飽和或不飽和的非芳烴環狀化合物。典型的C3-C8碳環包括但不限於環丙基，環丁基，環戊基，環戊二烯基，環己基，環己烯基，1,3-環己二烯基，1,4-環己二烯基，環庚基，1,3-環庚二烯基，1,3,5-環庚三烯基，環辛基及環辛二烯基。C3-C8碳環既可以未被取代，也可以被以下但不限於以下的一個或者多個基團取代：C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，芳基，醯基，醯氧基，酯 基，-C(O)NH2，-C(O)NHR’，-C(O)N(R’)2，-NHC(O)R’，-S(O)2R’，-S(O)R’，-OH，鹵素(-F,-Cl,-Br,-I)，-N3，-NH2，-NHR’，-N(R’)2及-CN；其中R’是C1-C8烷基或者芳基。
C3-C8碳環基指上述C3-C8碳環上的一個氫原子被化學鍵所取代而產生的基團。
烯烴基指含有一個碳碳雙鍵的直鏈或者支鏈脂肪烴，碳鏈上有2至8個碳原子。烯烴基的實施例包括乙烯基，丙烯基，正丁烯基，異丁烯基，3-甲基-2-丁烯基，正戊烯基，己烯基，庚烯基和辛烯基。
炔烴基指含有一個碳碳三鍵的直鏈或者支鏈脂肪烴，碳鏈上有2至8個碳原子。炔烴基的實施例包括乙炔基，丙炔基，正丁炔基，2-丁炔基，3-甲基丁炔基，正戊炔基，己炔基，庚炔基和辛炔基。
雜烷基指含2至8個碳原子而且有1至4個碳原子被O，S或者N所取代的烷基。
芳基或者芳香基指含有一個或者多個環的由3至14個碳原子(多數的情形是6至10個碳原子)組成的芳香烴或者雜芳香烴基團。雜芳香烴基團指有一個或多個碳原子(多數的情形是1，2，3或4個碳原子)被O,N,Si,Se,P或者S(最好是O,S,N)所取代所產生的芳香烴基團。芳基或者芳香基也指一個或多個氫原子被取代的芳香烴基團，這些取代基團有：R13,F,Cl,Br,I,OR13,SR13,NR13R14,N=NR13,N=R13,NR13R14,NO2,SOR13R14,SO2R13,SO3R13,OSO3R13,PR13R14,POR13R14,PO2R13R14,OPO3R13R14或者PO3R13R14。其中R13和R14分別為H，烷基，烯烴基，炔烴基，雜烷基，芳基，芳烷基，羰基或者可以藥用的鹽。
鹵素原子指氟，氯，溴，碘原子，最好是氟和氯。
雜環指含2至8個碳原子的芳香，非芳香性環或雜環的環上有1至4個碳原子被雜元素所取代。這些雜元素為O,N,S,Se和P，最好為O,N和S。可用的雜環亦可參見《The Handbook of Chemistry and Physics》，第78版，CRC Press,1997-1998，第225至226頁。適合的非雜芳基包括但不限於環氧基，環氮乙烷基，環硫乙烷基，吡咯烷基，吡唑烷基，咪唑烷基，環氧乙烷基，四氫呋喃基，二氧戊環基，四氫吡喃基，二氧雜環己烷基，呱啶基，呱嗪基，嗎啉基，吡喃基，咪唑啉基，吡咯啉基，吡唑啉基，噻唑烷基，四氫硫吡喃基，二噻烷基，硫嗎啉基，二氫吡喃基，四氫吡喃基，四氫吡啶基，二氫吡啶基，四氫嘧啶基，二氫硫吡喃基，氮雜環庚烷基以及它們與苯基生成的稠環。
雜芳基指含3至14個(最好為5至10個)原子的芳香性雜單環，二環或多環結構。例如吡咯基，吡啶基，吡唑基，噻吩基，嘧啶基，吡嗪基，四氮唑基，吲哚基，喹啉基，嘌呤基，咪唑基，噻吩基，噻唑基，苯並噻唑基，呋喃基，苯並呋喃基，1,2,4-噻二唑基，異噻唑基，三氮唑基，四氮唑基，異喹啉基，苯並噻吩基，異苯並呋喃基，吡唑基，哢唑基，苯並咪唑基，異噁唑基，N-氧吡啶基以及他們與苯基生成的稠環。
烷基，環烷基，烯烴基，炔烴基，芳基，雜芳基和雜環基等術語也指由相應的烴失去兩個氫原子生成的亞烷基，環亞烷基，亞烯基，亞炔基，亞芳基，雜亞芳基和雜亞環等。
“芳烷基”指的是一個非環狀的烷基自由基的一個氫原子連接的碳原子，通常是一個終端或sp3雜化的碳原子由一個芳基取代。典型的芳基烷基包括苄基，2-苯乙烷基，2-苯乙烯基，萘甲基，2-萘乙烷基，2-萘乙烯基，萘苄基，2-萘苯乙烷基等。
“雜芳烷基”指非環型烷基自由基的一個氫原子連結到一個碳原子上，通常是一個終端或sp3雜化的碳原子由一個雜芳基取代。雜芳烷基代表如2-苯並咪唑甲基，2-呋喃乙基。
“羥基保護集團”是指，甲基氧甲基醚(MOM)，2-甲基氧乙基氧甲基醚(2-MOEOM)，四氫吡喃醚，苄醚，對甲基氧苄醚，三甲基矽醚，三乙基矽醚，三異丙基矽醚，叔丁基二甲基矽醚，三苯基甲基矽醚，乙酸乙酯，含取代基的乙酸乙酯，苯甲酸酯，甲酸苄酯，氯代乙酸酯，甲氧基乙酸酯，苯氧基乙酸酯，特戊酸酯(pivaloate)，金剛烷酸酯，三甲基苯甲酸酯(mesitoate)，甲基磺酸酯和甲苯磺酸鹽。
胺基酸可以是天然的和/或非自然的胺基酸，常是L型或D型，優選是α胺基酸。天然胺基酸是由基因編碼的編排，它們是丙胺酸、精胺酸、天門冬醯胺、天門冬胺酸、半胱胺酸、谷胺酸、穀胺醯胺、甘胺酸、組胺酸、異亮胺酸、亮胺酸、賴胺酸、蛋胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、色胺酸和纈胺酸。非天然胺基酸是蛋白胺基酸衍生的形式。例如羥脯胺酸、羊毛硫胺酸、2-胺基異丁酸，脫氫丙胺酸、γ-胺基丁酸(神經傳遞分子)、鳥胺酸、瓜胺酸、β-丙胺酸(3-胺基丙酸)、γ-羧基谷胺酸鹽、硒代半胱胺酸(目前在許多非真核生物以及大多數真核生物中，而不是直接由DNA編碼構成)、吡咯賴胺酸(僅在一些古細菌和細菌中發現的)、N-甲醯甲硫胺酸(它是細菌，線粒體和葉綠體蛋白最初的胺基酸)、5-羥基色胺酸、L-二羥基苯丙胺酸、三碘甲腺原胺酸、L-3,4-二羥基苯丙胺酸(DOPA)，和O-磷酸絲胺酸。胺基酸的術語還包括胺基酸類似物和近似物。類似物具有相同的H2N(R)CHCO2H天然胺基酸的結構，但R基團在天然胺基酸未發現。例如類似物包括類絲胺酸、 己胺酸、蛋胺酸亞碸，和蛋胺酸甲基鋶鹽。優選地，類胺基酸具有與α胺基酸的常規化學結構不同的結構，但其功能類似。術語“非天然胺基酸”以“D”的立體形態、天然胺基酸的以“L”立體形態。在本專利申請中使用1~12個胺基酸時，胺基酸序列最好能被蛋白酶的識別和裂解。許多識別和切割胺基酸序列已被熟知(如Matayoshi et al.Science 247：954(1990)；Dunn et al.Meth.Enzymol.241：254(1994)；Seidah et al.Meth.Enzymol.244：175(1994)；Thornberry,Meth.Enzymol.244：615(1994)；Weber et al.Meth.Enzymol.244：595(1994)；Smith et al.Meth.Enzymol.244：412(1994)；and Bouvier et al.Meth.Enzymol.248：614(1995)，其中文獻中還含帶引述文獻)，特別是，胺基酸序列選擇為Val-Cit,Ala-Val,Ala-Lys,Gly-Lys,Ala-Ala,Val-Val,Val-Ala-Val,Lys-Lys,Ala-Asn-Val,Val-Leu-Lys,Cit-Cit,Val-Lys,Asp-Lys,Glu-Lys,Ala-Ala-Asn,Lys,Cit,Ser，和Glu的分子。
“肽”是由兩個或多個胺基酸通過一個胺基酸的胺基與另一個胺基酸的羧基以肽鍵(即醯胺鍵)結合而成。兩個胺基酸以肽鍵相連的化合物稱為二肽；三個胺基酸以肽鍵相連的化合物稱為三肽，以此類推，三十個胺基酸以肽鍵相連的化合物稱為三十肽。完全以天然α胺基酸構成的肽為天然肽(天然蛋白)。含有一個或多個非天然胺基酸或胺基酸類似物的肽為非天然肽(類肽化合物)。兩個或以上胺基酸的肽為一個肽單元。
“糖苷”是通過其糖基鍵將糖基團通過其端基異構體碳鍵連接到另一基團的分子。糖苷可以通過O-(O-糖苷)，N-(糖胺)，S-(硫代糖苷)或C-(C-糖苷)糖苷鍵連接。其核心是經驗公式為C m (H2O) n (其中m可以不同於n，m和n是<36)，本文中的糖苷包括葡萄糖(葡萄糖)，果糖(levulose)阿洛糖，阿卓糖，甘露糖，古洛糖，艾杜糖，半乳糖，托洛糖，半乳糖胺，葡糖胺，唾液酸，N-乙醯葡糖胺，磺基喹諾酮(6-去氧-6-磺基-D-吡喃葡萄糖)，核糖，阿拉伯糖，木糖，溶血糖，山梨醇，甘露醇，蔗糖，乳糖，麥芽糖，海藻糖，麥芽糖糊精，棉子糖，葡萄糖醛酸(葡糖苷酸)和水蘇糖。糖苷可以是D型式或L型式，5個原子環狀呋喃糖形式，6個原子環狀吡喃糖形式，或非環形式，α-異構體(Haworth投影的碳原子下方的端基異碳的-OH)或β-異構體(在Haworth投影平面上方的端基異構碳的-OH)。其在本文中常用糖苷是單糖，二糖，多元醇或寡糖(含有3-6個糖單元)。
“抗體”，這裡所用的是用在最廣泛的意義上，具體涵蓋完整的單克隆抗體，多克隆抗體，特異性抗體，多特異性抗體(例如，雙特異性抗體和抗體片段)，具有理想的生物活性，抗體片段的藥物結合位點的必要數量的連結。一種抗體的原生形態是一個四聚體，由兩個相同的免疫球蛋白鏈對，每對有一個輕鏈和重鏈。在每一對中，輕鏈和重鏈可變區(VL和VH)共同負責與抗原結合。輕鏈和重鏈可變區由一個框架區三高變區中斷，也被稱為“互補決定區”或“服務”。不斷的區域可能是公認的，與免疫系統的相互作用。一種抗體可以是任何類型(如IgG、IgE、IgM、IgD、和IgA)、大類(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或子類。抗體可以從任何合適的物種中獲得。在某些方面，抗體是人或鼠的起源。抗體可以是人的，人源化的或嵌合的。
術語“特異結合”和“特異結合”意味著抗體或抗體衍生物會以高度選擇性的方式與其相應的靶抗原結合，而不是與許多其他抗原結 合。通常情況下，抗體或抗體具有至少約1x10-7M的親和性衍生物結合。最好是1x10-8M到10-9M、10-10M、10-11M或10-12M結合。預定抗原的親和力至少是兩倍大於結合的非特異性抗原的親和性(如牛血清白蛋白，酪蛋白)。
“藥用”或“可以藥用”指相應的化合物或化合物組成在動物或人體上不產生有害的，過敏性的或其他不良反應。
藥學上可接受的輔料包括所有載體，稀釋劑，助劑或者成形劑，比如防腐劑，抗氧化劑，填料，崩解劑，潤濕劑，乳化劑，懸浮劑，溶劑，分散介質，塗層，抗菌劑，抗真菌劑，等滲和吸收延緩劑等等。在醫藥領域，在具有活性的藥物成分中加入這些輔料是十分常見的做法。可以說，除非輔料與藥物活性組分並不相容，在藥物成分中加入輔料並不是沒有道理。為取得好的結果，具有活性的輔助組分也可以被加入藥物成分中。
在本發明中，可以藥用的鹽指本發明化合物的鹽類衍生物。經過適當的修飾，本發明化合物可以形成相應的酸鹽或鹼鹽。可以藥用的鹽包括常見的沒有毒性的鹽或季銨鹽，這些鹽可以用本發明化合物和相應的沒有毒性的無機酸或有機酸製成。例如，用無機酸包括鹽酸，氫溴酸，硫酸，胺基磺酸，磷酸以及硝酸等和有機酸包括乙酸，丙酸，丁二酸，酒石酸，檸檬酸，甲磺酸，苯磺酸，葡萄糖醛酸，谷胺酸，苯甲酸，水楊酸，甲苯磺酸，草酸，富馬酸以及乳酸等都可以做成藥用鹽。其它的鹽包括胺基丁三醇，胺基三乙醇，甲葡胺，吡咯乙醇等銨鹽以及鈉，鉀，鈣，鋅，鎂等金屬鹽。
本發明可以藥用的鹽可以用常規的化學方法製成。一般地 說，這些鹽可以通過在本發明化合物的游離酸或鹼的水溶液或有機溶液或兩者的混合溶液中加入其它適當的等當量的鹼或酸而形成。非水相的反應介質一般為乙醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇或者乙腈。可以適用鹽的列表可參見《Remington’s Pharmaceutical Sciences》，第17版Mack Publishing Company,Easton,PA,1985，第1418頁。
術語“藥學上可接受的鹽”是指配體藥物偶聯物或接頭藥物綴合物的藥學上可接受的有機或無機鹽。綴合物可以含有至少一個胺基，因此可以與胺基形成酸加成鹽。硝酸鹽，硫酸氫鹽，磷酸鹽，酸式磷酸鹽，異煙酸鹽，乳酸鹽，水楊酸鹽，酸式檸檬酸鹽，酒石酸鹽，油酸鹽，鞣酸鹽，泛酸鹽，酒石酸鹽，抗壞血酸鹽，琥珀酸鹽，馬來酸鹽，龍膽酸鹽，富馬酸鹽，葡萄糖酸鹽，葡糖醛酸鹽，糖酸鹽，甲酸鹽，苯甲酸鹽，谷胺酸鹽，甲磺酸鹽，乙磺酸鹽，苯磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽和雙羥萘酸鹽(即1,1'-亞甲基雙-(2-羥基萘甲酸鹽))。藥學上可接受的鹽可以包括另外的分子，例如乙酸根離子，琥珀酸根離子或其他抗衡離子。抗衡離子可以是使母體化合物上的電荷穩定的任何有機或無機部分。此外，藥學上可接受的鹽在其結構中可以具有多於一個的帶電原子。多個帶電原子是藥學上可接受的鹽的一部分的實施例可以具有多個抗衡離子。因此，藥學上可接受的鹽可以具有一個或多個帶電原子和/或一個或多個抗衡離子。
短語“藥學上可接受的溶劑合物”或“溶劑合物”是指一種或多種溶劑分子和配體藥物偶聯物或接頭藥物綴合物的締合。形成藥學上可接受的溶劑合物的溶劑的實施例包括但不限於水，異丙醇，乙醇，丁醇，叔丁醇，丙酮、甘油，DMSO，乙酸乙酯，甲酸，乙酸，三乙醇胺和乙醇胺。
水合物(Hydrate)指的是含有水的化合物。其中水可以以配位元鍵與其他部分相連，如金屬離子水合配體形成絡合物，也可以是以共價鍵相結合，如水合三氯乙醛。也可以指是某些化合物與水分在一定溫度、壓力條件下形成的晶體或液體分子。水合物中的水是以確定的量存在的，例如無水硫酸鈉Na2SO4的水合物的組成為Na2SO4．10H2O。水合物中的水有幾種不同的結合方式：一種是作為配體，配位元在金屬離子上，稱為配位結晶水；另一種則結合在陰離子上，稱為陰離子結晶水。水也可以不直接與陽離子或陰離子結合而依一定比例存在於晶體內，在晶格中佔據一定的部位。這種結合形式的水稱為晶格水，一般含有12個水分子。有些晶形化合物也含水，但無一定比例。水合物的鹽是指在此水合物基礎上形成的藥學上可接受的鹽。
旋光異構體又稱對映異構體，對掌異構物、光學異構物、鏡像異構物、對映異構體或手性異構體，不能與彼此立體異構體鏡像完全重疊的分子。含有一個物質含一個手性碳原子時，有兩個旋光異構體，它們具有互為實物和鏡像的關係，故也稱對映體。對映異構體具有相等的旋光能力，但旋轉方向相反，其物理和化學性質極可能相似。含有兩個相同屬性碳原子的分子，有3個旋光異構體。分子中當含有幾個不同的手性原子時，其旋光異構體的數目為2 n ，n為不同手性原子的個數。等量互為旋光異構體的兩種物質均勻混合，光性互相抵消，就組成了外消旋體。
“患者”或“受試者”的實施例包括但不限於人，大鼠，小鼠，豚鼠，猴，豬，山羊，牛，馬，狗，貓，鳥和家禽。在示例性實施例中，患者或受試者是人。
“給藥”是指將藥物或其他藥劑轉移，輸送，引入或運送給 受試者的任何方式，包括口服，局部接觸，靜脈內，腹膜內，肌肉內，病灶內，鼻內，皮下或鞘內給藥本發明也考慮了使用裝置或器械來施用藥劑，這種裝置可以利用主動或被動的運輸，並且可以是緩釋或快速釋放遞送裝置。
本文可以使用以下縮寫，並具有指定的定義：Boc，叔丁氧基羰基；BroP，溴代三吡咯烷鏻六氟磷酸鹽；CDI，1,1'-羰基二咪唑；DCC，二環己基碳二亞胺；DCE，二氯乙烷；DCM，二氯甲烷；DIAD，偶氮二羧酸二異丙酯；DIBAL-H，二異丁基氫化鋁；DIPEA，二異丙基乙胺；DEPC，二氰基磷酸二乙酯；DMA，N,N-二甲基乙醯胺；DMAP，4-(N,N-二甲基胺基)吡啶；DMF，N,N-二甲基甲醯胺；DMSO，二甲亞碸；DTT，二硫蘇糖醇；EDC，1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；ESI-MS，電噴霧質譜；HATU，O-(7-氮雜苯並三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽；HOBt，1-羥基苯並三唑；HPLC，高壓液相色譜；NHS，N-羥基琥珀醯亞胺；MMP，4-甲基嗎啉；PAB，對胺基苄基；PBS，磷酸鹽緩衝鹽水(pH 7.0~7.5)；PEG，聚乙二醇；SEC，大小排阻色譜法；TCEP，三(2-羧乙基)膦；TFA，三氟乙酸；THF，四氫呋喃；Val，纈胺酸。
具體實施方式
下面將參照附圖更詳細地描述本發明的具體實施例。雖然附圖和後面實施例中顯示了本發明的具體實施例子，然而應當理解，可以以各種形式實現本發明而不應被這裡闡述的實施例所限制。相反，提供這些實施例是為了能夠更透徹地理解本發明，並且能夠將本發明的範圍完整的傳達給本領域的技術人員。
本公開主題可以以許多不同的形式來體現，並且不應該被解釋為限於本文闡述的實施方案。實際上，對於本公開主題所屬領域的技術人員來說，將會想到具有本文所包括的描述中給出的教導的益處的本公開主題的許多修改和其他實施方案。因此，應該理解的是，本公開主題不限於所公開的具體實施方案，並且修改和其他實施方案意在被包括在所公開的主題的範圍內。
儘管本文使用了特定的術語，但它們僅用於一般性和描述性的意義，而不是為了限制的目的。除非另有定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本公開描述的主題所屬領域的普通技術人員通常理解的相同的含義。
使用標準命名法來描述化合物。除非另有定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的技術人員通常理解的相同的含義。
術語“一”不表示數量的限制，而是表示存在至少一個所引用的專案。數值範圍的敘述僅僅意在作為單獨提及落入該範圍內的每個單獨值的速記方法，除非本文另有指出，並且每個單獨值被合併到說明書中，就好像其在本文中單獨列舉一樣。所有範圍的終點都包括在範圍內並且可以獨立組合。本文描述的所有方法可以以合適的循序執行，除非本文另有指示或者與上下文明顯矛盾。除非另有聲明，否則實例或示例性語言(如“例如”)的使用僅意在更好地說明本發明，並且不構成對本發明範圍的限制。
本發明包括具有至少一個期望的原子同位素取代，其量高於同位素的天然豐度(即富集)的式(I)化合物以及化合物的用途。同位素是 具有相同原子序數但不同質量數，即相同數量的質子但不同數量的中子的原子。同位素取代，例如氘取代，可以是部分的或完全的。部分氘取代是指至少一個氫被氘取代。在某些實施方案中，同位素在感興趣的任何位置富集90%、95%或99%或更多。在一個實施方案中，氘在所需位置富集90%、95%或99%。
需要說明的是，在說明書及申請專利範圍當中使用了某些詞彙來指稱特定元件。本領域技術人員應可以理解，技術人員可能會用不同名詞來稱呼同一個元件。本說明書及申請專利範圍並不以名詞的差異來作為區分元件的方式，而是以元件在功能上的差異來作為區分的準則。如在通篇說明書及申請專利範圍當中所提及的“包含”或“包括”為一開放式用語，故應解釋成“包含但不限定於”。說明書後續描述為實施本發明的較佳實施方式，然所述描述乃以說明書的一般原則為目的，並非用以限定本發明的範圍。本發明的保護範圍當視所附申請專利範圍所界定者為準。
術語“C1-C6”表示含1~6個碳的基團。
術語“含有親水支鏈的連接體”表示主要構架是C2-C100的肽單元(1~12個天然或非天然胺基酸)、腙鍵基團、二硫化物基團、酯基團、肟基團、醯胺基團或硫醚鍵基團構成。
術語“藥學上可接受的鹽”意味著適用於藥物製劑的化合物的鹽。在化合物具有一個或多個鹼性基團的情況下，鹽可以是酸加成鹽，例如硫酸鹽、氫溴酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、馬來酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽，撲酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、鹽酸鹽、乳酸鹽、甲基硫酸鹽、富馬酸鹽、苯甲酸鹽、琥珀酸鹽、甲磺酸鹽、乳糖酸鹽、辛二酸鹽、甲苯磺酸鹽等等。在化合物具有一個或多個酸性基團的情況下，鹽可以是 下列鹽，諸如鈣鹽、鉀鹽、鎂鹽、葡甲胺鹽、銨鹽、鋅鹽、呱嗪鹽、胺基丁三醇鹽、鋰鹽、膽鹼鹽、二乙胺鹽、4-苯基環己胺鹽、苄星(benzathine)鹽、鈉鹽、四甲基銨鹽等等。多晶型結晶形式和溶劑化物也包含在本發明的範圍內。
本發明藥學上可接受的鹽可以用常規的化學方法製成。一般地說，這些鹽可以通過在本發明化合物的游離酸或鹼的水溶液或有機溶液或兩者的混合溶液中加入其它適當的等當量的鹼或酸而形成。非水相的反應介質一般為乙醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇或者乙腈。可以適用鹽的列表可參見《Remington’s Pharmaceutical Sciences》，第17版.Mack Publishing Company,Easton,PA,1985，第1418頁。
藥學上可接受的輔料包括所有載體，稀釋劑，助劑或者成形劑，比如防腐劑，抗氧化劑，填料，崩解劑，潤濕劑，乳化劑，懸浮劑，溶劑，分散介質，塗層，抗菌劑，抗真菌劑，等滲和吸收延緩劑等等。在醫藥領域，在具有活性的藥物成分中加入這些輔料是十分常見的做法。可以說，除非輔料與藥物活性組分並不相容，在藥物成分中加入輔料並不是沒有道理。為取得好的結果，具有活性的輔助組分也可以被加入藥物成分中。
在本文中，式(I)中的“
Figure 109116404-A0305-02-0067-542
”表示手性碳原子位點，可選擇為純R，純S或R/S不同比例的混合結構。
除非特別指出特定的立體異構體(例如，通過結構式中相關立構中心處的粗或虛線鍵、通過描述結構式中的雙鍵為具有E或Z構型、或通過使用立體化學指定命名法)，所有立體異構體都作為純化合物及其混合物包括在本發明的範圍內。除非另有說明，個別的對映異構體、非對 映異構體、幾何異構體及其組合和混合物都被本發明包含。
本領域技術人員將理解，化合物可具有互變異構形式(例如，酮和烯醇形式)、共振形式和兩性離子形式，其等同於本文中使用的結構式中所描繪的那些，並且該結構式包括這種互變異構、共振或兩性離子形式。
本發明的另一方面內容是抗體的生產製備。其中包括其在生物體內、體外的產生過程或者組合過程。抗受體肽段的的多克隆抗體的生產方法已是眾所周知，如美國專利編號4,493,795(Nestor等)。製備單克隆抗體的經典方法是採用特定抗原免疫小鼠，分離得到的小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合(Kohler,G；Milstein,C.1975.Nature 256：495-497)。詳細的操作步驟見antibodies-A Laboratory Manual,Harlow and Lane,eds.,cold spring harbor laboratory press,new York(1988)，此方法移收入本文所引用的文獻。特別地，可通過運用目的抗原免疫小鼠，大鼠，倉鼠或者其他哺乳動物的方法來獲得特殊的單克隆抗體。其中目的抗原包括：完整的細胞，從細胞中分離得到的抗原，完整的病毒，弱化的完整病毒以及病毒蛋白。採用PEG6000將脾細胞與骨髓瘤細胞融合。融合後得到的雜交瘤，利用其對HAT的敏感性，對其進行篩選。雜交瘤細胞產生的單克隆抗體通過其與特定的靶細胞受體發生免疫反應或者抑制受體活性，這在實施這項發明中起作用。
融合後得到的單克隆雜交瘤細胞可分泌針對特定抗原的單克隆抗體。目前，發明中使用的單克隆抗體，正是通過在營養豐富的培養基中培養單克隆雜交瘤細胞從而富集抗體。培養條件需確保雜交瘤細胞有足夠的時間將產生的抗體分泌進入培養基中。將含抗體的培養上清收集 後，通過人們所熟知的技術對抗體進行純化。分離方法包括：蛋白A親和層析法；陰離子交換層析法，陽離子交換層析法，疏水層析法以及分子篩層析法(特別是運用抗原交聯蛋白A的親和層析法以及分子篩層析法運用較為廣泛)；離心法；沉澱法或其它標準的純化方法。
雜交瘤培養所需有效培養基以及人工合成培養基可以通過技術合成或者商業途徑獲取。其中，典型的人工合成培養基：DMEM(Dulbecco等Virol 8：396(1959))加入4.5mg/L葡萄糖，20mM穀胺醯胺，20%胎牛血清以及消泡劑，如：聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物。
除細胞融合技術外，構建生產抗體的細胞系還可以通過其它方法，如：直接將腫瘤原性DNA轉染B淋巴細胞，或者將致癌病毒基因(如：EBV又稱HHV-4或KSHV)導入B淋巴細胞，詳見美國專利編號4341761；4399121；4427783；4444887；4451570；4466917；4472500；4491632；4493890。單克隆抗體還可以通過抗受體多肽或者含羧基末端的多肽來製備。詳見Niman等Proc.Natl.Acad.Sci.USA,80：4949-4953(1983)；Geysen等Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82：178-182(1985)；Lei等Biochemistry 34(20)：6675-6688(1995)。通常，抗受體多肽或者多肽類似物可以單獨使用或者交聯免疫原性載體來作為免疫原製備抗受體多肽的單克隆抗體。
發明中作為結合分子的抗體還有其它成熟的生產方法。其中特別受關注的是生產全人源抗體的工藝方法。噬菌體展示技術通過親和篩選從全人源抗體文庫中獲得與已知抗原特異性結合的全人源抗體。噬菌體展示技術本身，載體構建以及文庫篩選都在文獻中有詳盡的記錄。詳見Dente等Gene.148(1)：7-13(1994)；Little等Biotechnol Adv.12(3)：539- 55(1994)；Clackson等Nature 352：264-628(1991)；Huse等Science 246：1275-1281(1989)。
運用雜交瘤技術通過其它種屬(如：小鼠)獲得的單克隆抗體需對其進行人源化改造。經過改造的抗體可以大大減少異源抗體對人類機體造成的免疫副反應。其中，抗體的人源化較為常見的方法是互補決定域的移植與重塑。詳見：美國專利編號5859205及6797492；Liu等，Immunol Rev.222：9-27(2008)；Almagro等，Front Biosci.1；13：1619-33(2008)；Lazar等Mol Immunol.44(8)：1986-98(2007)；Li等Proc.Natl.Acad.Sci.USA.103(10)：3557-62(2006)上述文章作為參考文獻併入本文。全人源抗體也可以通過抗原免疫攜帶大量人免疫球蛋白輕鏈及重鏈的轉基因小鼠，兔子，猴子等其它哺乳動物來製備。以小鼠為例：Xenomouse(Abgenix，Inc.),HuMab-Mouse(Medarex/BMS),VelociMouse(Regeneron)，詳見：美國專利編號：6596541,6207418,6150584,6111166,6075181,5922545,5661016,5545806,5436149以及5569825。人類治療過程中，將鼠源抗體可變區基因與人源抗體恆定區基因整合構建的嵌合抗體在人體中所產生的免疫源性反應要大大低於鼠抗(Kipriyanov等，Mol Biotechnol.26：39-60(2004)；Houdebine,Curr Opin Biotechnol.13：625-9(2002)上述文章作為參考文獻併入本文。此外，對抗體可變區的部分位元點進行定點突變可以有效提高抗體的親和力和特異性(Brannigan等，Nat Rev Mol Cell Biol.3：964-70(2002)；Adams等，J Immunol Methods.231：249-60(1999))。對抗體恆定區進行部分替換也可以有效增進其與免疫效應因數的親和力從而增強細胞毒性作用。
對惡性細胞抗原有免疫特異性的抗體，可以通過商業途徑 或者一些成熟的技術方法來獲得，如：化學合成或者重組表達技術。這類抗體的編碼基因同樣可以通過一些商業途徑，如GenBank資料庫或者其它類似的資料庫，出版文獻，或者常規的克隆測序方法來獲得。
除抗體以外，多肽或者蛋白也同樣可以作為結合分子來結合，阻斷、進攻或通過其它方式與靶細胞表面相對應的受體或者表位相互作用。只要這些多肽或者蛋白能特異結合特定表位或其對應受體，那麼它們不一定要屬於免疫球蛋白家族。這些多肽也可以通過類似噬菌體展示抗體的技術來進行分離(Szardenings,J Recept Signal Transduct Res.2003；23(4)：307-49)。從隨機的多肽文庫獲取的肽段與抗體及抗體片段的應用相似。多肽或蛋白分子可通過其結合分子與一些大分子或介質連接來保持其抗原結合的特異性。這些大分子及介質包括：白蛋白、聚合物、脂質體、納米顆粒或者樹狀聚合物。
在癌症、自身免疫性疾病和感染性疾病的治療中，用於偶聯的抗體舉例如下(但不限於此)：3F8(抗GD2抗體)，阿巴伏單抗(抗CA-125抗體)，阿昔單抗(抗CD41抗體(整合素α-IIB)，阿達木單抗(抗-TNF-α抗體)，阿德木單抗(抗-EpCAM抗體，CD326)，阿非莫單抗(抗-TNF-α)；阿夫土珠(抗-CD20抗體)，Alacizumab pegol(抗VEGFR2抗體)，ALD518(抗-IL-6抗體)，阿侖單抗(別名：Campath，MabCampath，坎帕斯，抗CD52抗體)，阿妥莫單抗(抗CEA抗體)，Anatumomab(抗-TAG-72抗體)，Anrukinzumab(別名：IMA-638，抗-IL-13抗體)，阿泊珠單抗(抗-HLA-DR抗體)，阿西莫單抗(抗CEA抗體)，阿塞珠單抗(抗-L-選擇素(CD62L)抗體，Atlizumab(別名：托珠單抗，Actemra，RoActemra，抗-IL-6受體抗體)，Atorolimumab(抗恆河猴因數抗體)， bapineuzumab(抗β-澱粉樣蛋白抗體)，巴厘昔單抗(舒萊，antiCD25(IL-2受體的α鏈)抗體，巴維昔單抗(抗磷脂醯絲胺酸抗體)，貝妥莫單抗(別名：LymphoScan，抗-CD22抗體)，貝利木單抗(別名：Benlysta，LymphoStat-B，抗BAFF抗體)，Benralizumab(抗CD125抗體)，柏替木單抗(抗CCL11(嗜酸性粒細胞趨化因數-1)抗體)，貝索單抗(別名：Scintimun，抗CEA-相關抗原抗體)，貝伐單抗(別名：阿瓦斯丁，抗VEGF-A抗體)比西單抗(別名：FibriScint，抗血纖維蛋白Ⅱ β鏈抗體)，Bivatuzumab(抗CD44 v6抗體)，blinatumomab(別名：BiTE，抗CD19抗體)，Brentuximab(CAC10，抗-CD30 TNFRSF8抗體)，Briakinumab(抗-IL-12，IL-23抗體)，康納單抗(別名：Ilaris，抗-IL-1抗體)，Cantuzumab(別名：C242，抗CanAg抗體)，卡羅單抗，卡妥索單抗(別名：removab，抗EpCAM，抗-CD3抗體)，CC49(抗-TAG-72抗體)，Cedelizumab(抗CD4抗體)，賽妥珠單抗(別名Cimzia抗TNF-α抗體)，西妥昔單抗(別名：愛必妥，IMC-C225，抗-EGFR抗體)，西他土珠(抗-EpCAM抗體)，Cixutumumab(抗-IGF-1抗體)，克立昔單抗(抗CD4抗體)，Clivatuzumab(抗MUC1抗體)，Conatumumab(抗-TRAIL-R2抗體)，CR6261(抗A型流感血凝素抗體)，Dacetuzumab(抗-CD40抗體)，達利珠單抗(別名：賽尼呱，抗CD25(IL-2受體的α鏈)抗體)，Daratumumab(抗-CD38(環化ADP核糖水解酶)抗體)，狄諾塞麥(別名：Prolia，抗RANKL抗體)，地莫單抗(抗B-淋巴瘤細胞抗體)，阿托度單抗，Dorlixizumab，Ecromeximab(抗-GD3神經節苷脂抗體)，依庫麗單抗(別名：Soliris，抗-C5抗體)，埃巴單抗(抗內毒素抗體)，依決洛單抗(別名：Panorex，MAb17-1A，抗-EpCAM抗體)，依法利珠單抗(別名： Raptiva，抗LFA-1(CD11a)抗體)，依芬古單抗(別名：Mycograb，抗Hsp90抗體)，Elotuzumab(抗SLAMF7抗體)，伊斯利莫(抗IL-6抗體)，恩莫單抗(抗ICAM-1(CD54)抗體)，Epitumomab(抗episialin抗體)，依帕珠單抗(抗-CD22抗體)，Erlizumab(抗ITGB2(CD18)抗體)，Ertumaxomab(別名：Rexomun，抗HER2/neu，CD3抗體)，伊瑞西珠(別名：Abegrin，抗整合素αvβ3抗體)，艾韋單抗(抗乙型肝炎表面抗原抗體)，Fanolesomab(別名：NeutroSpec，抗CD15抗體)，法拉莫單抗(抗干擾素受體抗體)，Farletuzumab(抗葉酸受體1抗體)，Felvizumab(抗呼吸道合胞病毒抗體)，Fezakinumab(抗IL-22抗體)，Figitumumab(抗IGF-1受體抗體)，Fontolizumab(抗IFN-γ抗體)，夫瑞韋如(抗狂犬病毒糖蛋白抗體)，Fresolimumab(抗TGF-β抗體)，加利昔單抗(抗CD80抗體)，Gantenerumab(抗-β澱粉樣蛋白抗體)，Gavilimomab(抗-CD147(basigin)抗體)，吉妥單抗(抗CD33抗體)，Girentuximab(抗碳酸酐酶9抗體)，Glembatumumab(別名：CR011，抗GPNMB抗體)，戈利木單抗(別名：SIMPONI，抗TNF-α抗體)，Gomiliximab(抗CD23(IgE受體)抗體)，Ibalizumab(抗CD4抗體)，替伊莫單抗(抗CD20抗體)，伊戈伏單抗(別名：Indimacis-125，抗CA-125抗體)，英西單抗(別名：Myoscint，抗心肌肌球蛋白抗體)，英夫利昔單抗(別名：英利昔單抗，抗TNF-α抗體)，Intetumumab(抗CD51抗體)，伊諾莫單抗(抗CD25(IL-2受體α鏈)抗體)，Inotuzumab(抗CD22抗體)，易普利姆瑪(抗CD152抗體)，Iratumumab(抗CD30(TNFRSF8)抗體)，Keliximab(抗CD4抗體)，Labetuzumab(別名：CEA-Cide，抗CEA抗體)，Lebrikizumab(抗IL-13抗體)，Lemalesomab(抗NCA-90(粒細胞抗原)抗體)，樂德木單抗(抗 TGF β-2抗體)，來沙木單抗(抗TRAIL-R2抗體)，利韋單抗(抗乙型肝炎表面抗原抗體)，林妥珠單抗(抗CD33抗體)，Lucatumumab(抗CD40抗體)，魯昔單抗(抗CD23(IgE受體)抗體)，Mapatumumab(抗TRAIL-R1抗體)，馬司莫單抗(抗T-細胞受體抗體)，馬妥珠單抗(抗-EGFR抗體)，美泊利單抗(別名：Bosatria，抗IL-5抗體)，Metelimumab(抗TGFβ-1抗體)，Milatuzumab(抗CD74抗體)，Minretumomab(抗TAG-72抗體)，米妥莫單抗(別名BEC-2，抗-GD3神經節苷脂抗體)，Morolimumab(抗恆河猴因數抗體)，莫維珠單抗(別名：NUMAX，抗呼吸道合胞病毒抗體)，莫羅單抗-CD3(別名：OKT3 ORTHOCLONE，抗CD3抗體)，他那可單抗(抗C242抗體)，他那莫單抗(抗5T4抗體)，那他珠單抗(別名：Tysabri，抗整合素α4抗體)，奈巴庫單抗(抗內毒素抗體)，Necitumumab(抗EGFR抗體)，Nerelimomab(抗TNF-α抗體)，尼妥珠單抗(別名：Theracim，Theraloc，抗EGFR抗體)，Nofetumomab，ocrelizumab(抗CD20抗體)，奧度莫單抗(別名：Afolimomab，抗LFA-1(CD11A)抗體)，木單抗(別名：Arzerra，抗CD20抗體)，Olaratumab(抗PDGF-R α抗體)，奧馬珠單抗(別名：索雷爾，抗IgE Fc區抗體)，Oportuzumab(抗EpCAM抗體)，奧戈伏單抗(別名：OvaRex，抗CA-125抗體)，Otelixizumab(抗CD3抗體)，帕吉昔單抗(抗脂磷壁酸抗體)，帕利珠單抗(別名：Synagis，Abbosynagis，抗呼吸道合胞病毒抗體)，帕尼單抗(別名：維克替比，ABX-EGF，抗-EGFR抗體)，Panobacumab(抗綠膿桿菌抗體)，Pascolizumab(抗IL-4抗體)，Pemtumomab(別名：Theragyn，抗MUC1抗體)，帕妥珠單抗(別名：OMNITARG，2C4，抗HER2/neu抗體)，培克珠單抗(抗C5抗體)，Pintumomab(抗腺癌抗原抗體)，普立昔單抗(抗CD4 抗體)，普托木單抗(抗波形蛋白抗體)，PRO140(抗CCR5抗體)，Racotumomab(別名：1E10，抗-(N-羥乙醯神經胺酸(NeuGc，NGNA)-神經節苷脂GM3)抗體)，瑞非韋魯(抗狂犬病毒糖蛋白抗體)，Ramucirumab(抗VEGFR2抗體)，雷珠單抗(別名：Lucentis，抗VEGF-A抗體)，瑞西巴庫(抗炭疽毒素，保護性抗原抗體)，瑞加韋單抗(抗巨細胞病毒的糖蛋白B抗體)，Reslizumab(抗IL-5抗體)，Rilotumumab(抗HGF抗體)，利妥昔單抗(別名：美羅華，Rituxanmab，抗CD20抗體)，Robatumumab(抗IGF-1受體抗體)，Rontalizumab(抗IFN-α抗體)，Rovelizumab(別名：LeukArrest，抗CD11，CD18抗體)，Ruplizumab(別名：Antova，抗CD154(CD40L)抗體)，沙妥莫單抗(抗TAG-72抗體)，司韋單抗(抗巨細胞病毒抗體)，Sibrotuzumab(抗FAP抗體)，Sifalimumab(抗IFN-α抗體)，Siltuximab(抗IL-6抗體)，Siplizumab(抗CD2抗體)，(Smart)MI95(抗CD33抗體)，Solanezumab(抗β-澱粉樣蛋白抗體)，Sonepcizumab(抗神經鞘胺醇-1-磷酸抗體)，索土珠單抗(抗episialin抗體)，司他莫魯(抗肌肉生長抑制素抗體)，硫索單抗(別名：LeukoScan，(抗-NCA-90(粒細胞抗原)抗體)))，Tacatuzumab(抗α-甲胎蛋白抗體)，他度珠單抗(抗整合素αIIbβ3抗體)，他利珠單抗(抗IgE抗體)，他尼珠(抗NGF抗體)，Taplitumomab(抗CD19抗體)，Tefibazumab(別名：Aurexis，抗聚集因數A抗體)，阿替莫單抗，Tenatumomab(抗固生蛋白C抗體)，替奈昔單抗(抗CD40抗體)，Teplizumab(抗CD3抗體)，TGN1412(抗CD28抗體)，Ticilimumab(別名：Tremelimumab(抗CTLA-4抗體)，Tigatuzumab(抗TRAIL-R2抗體)，TNX-650(抗IL-13抗體)，托珠單抗(別名Atlizumab，Actemra，RoActemra，(抗IL-6受體抗 體)，Toralizumab(抗CD154(CD40L)抗體)，托西莫單抗(抗CD20抗體)，曲妥珠單抗(赫賽汀，(抗HER2/neu蛋白抗體)，Tremelimumab(抗CTLA-4抗體)，Tucotuzumab celmoleukin(抗EpCAM抗體)，妥韋單抗(抗B型肝炎病毒抗體)，Urtoxazumab(抗大腸桿菌抗體)，優斯它單抗(別名：Stelara，抗IL-12，IL-23抗體)，伐利昔單抗(抗AOC3(VAP-1)抗體)，Vedolizumab，(抗整合素α4β7抗體)，Veltuzumab(抗CD20抗體)，維帕莫單抗(抗AOC3(VAP-1)抗體，Visilizumab(別名：Nuvion，抗CD3抗體)，Vitaxin(抗血管整合素avb3抗體)，Volociximab(抗整合素α5β1)，伏妥莫單抗(別名：HumaSPECT，抗腫瘤抗原CTAA16.88抗體)，紮妥木單抗(別名：HUMAX-EGFR，(抗EGFR抗體)，Zanolimumab(別名：HUMAX-CD4，抗CD4抗體)，Ziralimumab(抗CD147(基礎免疫球蛋白)抗體)，阿佐莫單抗(抗CD5抗體)，依那西普(ENBREL ®)，阿法賽特(AMEVIVE ®)，阿巴西普(ORENCIA ®)，利納西普(ARCALYST)，14F7[抗IRP-2(鐵離子調節蛋白2)抗體]，14G2a(抗GD2神經節苷脂抗體，治療黑色素瘤和實體瘤，from nat.cancer inst.)，J591(抗PSMA抗體，治療前列腺癌，威爾康乃爾醫學院)，225.28S[抗HMW-MAA(高分子量黑色素瘤相關抗原)抗體，索林Radiofarmaci SRL(義大利米蘭)治療黑色素瘤]，COL-1(抗CEACAM3抗體，CGM1，nat.cancer inst.。治療大腸癌和胃癌)，CYT-356(Oncoltad ®，治療前列腺癌)，HNK20(OraVax公司，用於治療呼吸道合胞病毒)，ImmuRAIT(來自IMMUNOMEDICS治療非霍奇金淋巴瘤)，Lym-1(抗HLA-DR10抗體，百富勤醫藥，用於癌症)，MAK-195F[抗TNF抗體(又稱：腫瘤壞死因數；TNFA，腫瘤壞死因數-α；TNFSF2)，阿伯特/諾爾，用於治療敗血 症中毒性休克]，MEDI-500[別名：T10B9，抗CD3抗體，TRαβ(T細胞受體α/β)，複合物，MedImmune公司用於治療移植物抗宿主病]，RING SCAN[抗TAG72(腫瘤相關糖蛋白72抗體)，Neoprobe集團，用於治療乳腺癌、結腸癌和直腸癌。Avicidin(抗-EpCAM抗體(上皮細胞黏附分子)，抗TACSTD1抗體(腫瘤相關鈣信號轉導1)，抗GA733-2(胃腸腫瘤相關蛋白2)，抗EGP-2抗體(上皮糖蛋白2)；抗KSA抗體；KS1/4抗原；M4S；腫瘤抗原17-1A；CD326，來自NeoRx公司用於治療結腸癌，卵巢癌，前列腺癌和非霍奇金淋巴瘤；LymphoCide(IMMUNOMEDICS公司，NJ)，smart ID10(Protein Design Labs)，Oncolym(Techniclone公司，加利福尼亞州)，Allomune(BioTransplant，CA)，抗VEGF抗體(Genentech公司，CA)；CEAcide(IMMUNOMEDICS公司，NJ)，IMC-1C11(ImClone，NJ)和西妥昔單抗(ImClone公司，新澤西州)。
用於結合抗原的其它抗體包括(但不僅限於此)：胺肽酶N(CD13)，膜聯蛋白A1，B7-H3(CD276，各種癌症)，CA125，CA15-3(癌)，CA19-9(癌)，L6(癌)，Lewis Y(癌)，Lewis X(癌)，甲胎蛋白(癌)，CA242，胎盤鹼性磷酸酶(癌)，前列腺特異性抗原(前列腺癌)，前列腺酸性磷酸酶(前列腺)，表皮生長因數(癌)，CD2(霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤的淋巴瘤，多發性骨髓瘤)，CD3的ε(T細胞淋巴瘤，肺癌，乳腺癌，胃癌，卵巢癌，自身免疫性疾病，惡性腹水)，CD19(B細胞惡性腫瘤)，CD20(非霍奇金淋巴瘤)，CD22(白血病，淋巴瘤，多發性骨髓瘤，系統性紅斑狼瘡)，CD30，CD33，CD37,CD38(多發性骨髓瘤)，CD40(淋巴瘤，多發性骨髓瘤，白血病)，CD51(轉移性黑素瘤，肉瘤)，CD52，CD56(小細胞肺癌癌，卵巢癌，Merkel細胞癌，以及液體腫瘤，多發性骨髓瘤)， CD66e(癌症)，CD70(轉移性腎細胞癌和非霍奇金淋巴瘤)，CD74(多發性骨髓瘤)，CD79,CD80(淋巴瘤)，CD98(癌症)，黏蛋白(癌)，CD221(實體瘤)，CD227(乳腺癌，卵巢癌)，CD262(非小細胞肺癌和其他癌)，CD309(卵巢癌)，CD326(實體瘤)，CEACAM3(大腸癌，胃癌)，CEACAM5(癌胚抗原；CEA，CD66e)(乳腺癌，結腸直腸癌和肺癌)，DLL4(△狀-4)，EGFR(表皮生長因數受體，各種癌症)，CTLA4(黑色素瘤)，CXCR4(CD184，血紅素腫瘤，實體腫瘤)，內皮糖蛋白(CD105，實體瘤)，EPCAM(上皮細胞黏附分子，膀胱癌，頭，頸，結腸，前列腺非霍奇金淋巴瘤，和卵巢癌)，ERBB2(表皮生長因數受體2；肺癌，乳腺癌，前列腺癌)，FCGR1(自身免疫性疾病)，FOLR(葉酸受體，卵巢癌)，GD2神經節苷脂(癌症)，G-28(一種細胞表面抗原glyvolipid，黑素瘤)，獨特型GD3(癌症)，熱休克蛋白(癌症)，HER1(肺，胃癌)，HER2(乳腺癌，肺癌和卵巢癌)，HLA-DR10(NHL)，HLA-DRB(非霍奇金淋巴瘤，B細胞白血病)，人絨毛膜促性腺激素(癌)，IGF1R(胰島素樣生長因數1受體，實體瘤，血液癌症)，IL-2受體(白細胞介素2受體，T-細胞白血病和淋巴瘤)，IL-6R(白細胞介素6受體，多發性骨髓瘤，類風濕性關節炎，Castleman病，IL6依賴性腫瘤)，整合素(素αvβ3，α5β1，α6β4，αllβ3，α5β5，αvβ5細胞附著因數，對各種癌症)，MAGE-1(癌)，MAGE-2(癌)，MAGE-3(癌)，MAGE 4(癌)，抗轉鐵蛋白受體(癌)，P97(黑色素瘤)，MS4A1(跨膜域4亞科A成員1，非霍奇金B細胞淋巴瘤，白血病)，MUC1或MUC1-KLH(乳腺癌，卵巢癌，子宮頸癌，支氣管和胃腸道癌症)，MUC16(CA125)(卵巢癌)，CEA(大腸)，GP100(黑色素瘤)，MART1(黑色素瘤)MPG(黑色素瘤)，MS4A1(跨膜域4蛋白 A，小細胞肺癌，非霍奇金淋巴瘤)，核仁，神經癌基因產物(癌)，P21(癌)，抗(N-羥乙醯神經胺酸，乳腺癌，黑色素瘤的癌症)，PLAP樣睾丸鹼性磷酸酶(卵巢癌，睾丸癌)，PSMA(前列腺腫瘤)，PSA(前列腺)，ROBO4，TAG 72(腫瘤相關糖蛋白72，白血病，胃癌，結腸直腸癌，卵巢癌)中，T細胞的跨膜蛋白(癌症)，Tie(CD202b)，TNFRSF10B(腫瘤壞死因數受體超家族成員10B，癌症)，TNFRSF13B(腫瘤壞死因數受體超家族成員13B，多發性骨髓瘤，非霍奇金淋巴瘤，以及其他癌症，類風濕性關節炎和系統性紅斑狼瘡)，TPBG(滋養層糖蛋白，腎細胞癌)，TRAIL-R1(腫瘤壞死凋亡誘導配體受體1，淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，大腸癌，肺癌)，VCAM-1(CD106，黑色素瘤)，血管內皮生長因數，血管內皮生長因數-A，VEGF-2(CD309)(各種癌症)。通過抗體識別的一些其他的腫瘤相關抗原已審閱(Gerber等，mAbs 1：3，247-253(2009)；Novellino等，cancer immunol immunother.54(3),187-207(2005)Franke等，cancer biother radiopharm.2000，15，459-76)。還有許多其他的抗原是：其他不同的集群(CD1,CD1a,CD1b,CD1c,CD1d,CD1e,CD2,CD3,CD3d,CD3e,CD3g,CD4,CD5,CD6,CD7,CD8,CD8a,CD8b,CD9,CD10,CD11a,CD11b,CD11c,CD11d,CD12w,CD14,CD15,CD16,CD16a,CD16b,CDw17,CD18,CD19,CD20,CD21,CD22,CD23,CD24,CD25,CD26,CD27,CD28,CD29,CD30,CD31,CD32,CD32a,CD32b,CD33,CD34,CD35,CD36,CD37,CD38,CD39,CD40,CD41,CD42,CD42a,CD42b,CD42c,CD42d,CD43,CD44,CD45,CD46,CD47,CD48,CD49b,CD49c,CD49c,CD49d,CD49f,CD50,CD51,CD52,CD53,CD54,CD55,CD56,CD57,CD58, CD59,CD60,CD60a,CD60b,CD60c,CD61,CD62E,CD62L,CD62P,CD63,CD64,CD65,CD65s,CD66,CD66a,CD66b,CD66c,CD66d,CD66e,CD66f,CD67,CD68,CD69,CD70,CD71,CD72,CD73,CD74,CD75,CD75s,CD76,CD77,CD78,CD79,CD79a,CD79b,CD80,CD81,CD82,CD83,CD84,CD85,CD85a,CD85b,CD85c,CD85d,CD85e,CD85f,CD85g,CD85g,CD85i,CD85j,CD85k,CD85m,CD86,CD87,CD88,CD89,CD90,CD91,CD92,CD93,CD94,CD95,CD96,CD97,CD98,CD99,CD100,CD101,CD102,CD103,CD104,CD105,CD106,CD107,CD107a,CD107b,CD108,CD109,CD110,CD111,CD112,CD113,CD114,CD115,CD116,CD117,CD118,CD119,CD120,CD120a,CD120b,CD121,CD121a,CD121b,CD122,CD123,CD123a,CD124,CD125,CD126,CD127,CD128,CD129,CD130,CD131,CD132,CD133,CD134,CD135,CD136,CD137,CD138,CD139,CD140,CD140a,CD140b,CD141,CD142,CD143,CD144,CD145,CDw145,CD146,CD147,CD148,CD149,CD150,CD151,CD152,CD153,CD154,CD155,CD156,CD156a,CD156b,CD156c,CD156d,CD157,CD158,CD158a,CD158b1,CD158b2,CD158c,CD158d,CD158e1,CD158e2,CD158f2,CD158g,CD158h,CD158i,CD158j,CD158k,CD159,CD159a,CD159b,CD159c,CD160,CD161,CD162,CD163,CD164,CD165,CD166,CD167,CD167a,CD167b,CD168,CD169,CD170,CD171,CD172,CD172a,CD172b,CD172g,CD173,CD174,CD175,CD175s,CD176,CD177,CD178,CD179,CD179a,CD179b,CD180,CD181,CD182,CD183,CD184,CD185,CD186, CDw186,CD187,CD188,CD189,CD190,CD191,CD192,CD193,CD194,CD195,CD196,CD197,CD198,CD199,CDw198,CDw199,CD200,CD201,CD202,CD202(a,b),CD203,CD203c,CD204,CD205,CD206,CD207,CD208,CD209,CD210,CDw210a,CDw210b,CD211,CD212,CD213,CD213a1,CD213a2,CD214,CD215,CD216,CD217,CD218,CD218a,CD218,CD21b9,CD220,CD221,CD222,CD223,CD224,CD225,CD226,CD227,CD228,CD229,CD230,CD231,CD232,CD233,CD234,CD235,CD235a,CD235b,CD236,CD237,CD238,CD239,CD240,CD240ce,CD240d,CD241,CD242,CD243,CD244,CD245,CD246,CD247,CD248,CD249,CD250,CD251,CD252,CD253,CD254,CD255,CD256,CD257,CD258,CD259,CD260,CD261,CD262,CD263,CD264,CD265,CD266,CD267,CD268,CD269,CD270,CD271,CD272,CD273,CD274,CD275,CD276,CD277,CD278,CD279,CD281,CD282,CD283,CD284,CD285,CD286,CD287,CD288,CD289,CD290,CD291,CD292,CD293,CD294,CD295,CD296,CD297,CD298,CD299,CD300,CD300a,CD300b,CD300c,CD301,CD302,CD303,CD304,CD305,CD306,CD307,CD307a,CD307b,CD307c,CD307d,CD307e,CD307f,CD308,CD309,CD310,CD311,CD312,CD313,CD314,CD315,CD316,CD317,CD318,CD319,CD320,CD321,CD322,CD323,CD324,CD325,CD326,CD327,CD328,CD329,CD330,CD331,CD332,CD333,CD334,CD335,CD336,CD337,CD338,CD339,CD340,CD341,CD342,CD343,CD344,CD345,CD346,CD347, CD348,CD349,CD350,CD351,CD352,CD353,CD354,CD355,CD356,CD357,CD358,CD359,CD360,CD361,CD362,CD363,CD364,CD365,CD366,CD367,CD368,CD369,CD370,CD371,CD372,CD373,CD374,CD375,CD376,CD377,CD378,CD379,CD381,CD382,CD383,CD384,CD385,CD386,CD387,CD388,CD389,CRIPTO,CR,CR1,CRGF,CRIPTO,CXCR5,LY64,TDGF1,4-1BB,APO2，ASLG659，BMPR1B,4-1BB,5AC,5T4)，APO2，ASLG659，BMPR1B(骨形態發生蛋白受體)，CRIPTO，膜聯蛋白A1，核仁，內皮糖蛋白(CD105)，ROBO4，胺基肽酶N，△-樣3(DLL3)，△-樣4(DLL4)，VEGER-2(CD309)，CXCR4 9CD184)，Tie2，B7-H3，WT1，MUC1，LMP2，HPV E6 E7，EGFRvIII，HER-2/neu，個體基因型，MAGE A3，P53 nonmutant，NY-ESO-1，GD2，CEA，MelanA/MART1，Napi3b(NAPI-3B，NPTIIb，SLC34A2，溶質載體家族34，成員2，II型鈉依賴的磷轉運3b)，Ras突變，gp100，p53突變體，Proteinase3(PR1)，BCR-abl，Tetratocarcinoma衍生的生長因數)，EphA受體，EphB受體，EGFR，EGFRvIII，ETBR(內皮素)，HER2/neu，HER3，HLA-DOB(MHC II類分子IA抗原)，整合素，IRTA2，MPF(MPF，MSLN，SMR，巨核細胞強化因數，間皮素)，CRIPTO，Sema 5b(FLJ10372，KIAA1445，Mm42015，SEMA5B，5EMAG，semaphoring 5 bHlog，sdema域，七個血小板重複序列，胞漿區)，PSCA，STEAP1(6個跨膜上皮前列腺抗原)，和STEAP2(HGNC 8639，IPCA-1，PCANP1，STAMP1，STEAP2，STMP，前列腺)，酪胺酸酶，生存素，hTERT，肉瘤易位中斷點，EphA2，PAP，ML-IAP， AFP，EpCAM，ERG(TMPRSS2 ETS融合基因)，NA17，PAX3，ALK，雄激素受體，細胞週期素B1，聚唾液酸，MYCN，RhoC，TRP-2，GD3，岩藻糖神經節苷脂，間皮素，PSMA，MAGE A1，sLe(a)，CYP1B1，PLAC1，GM3，BORIS，Tn，GloboH，ETV6-AML，NY-BR-1，RGS5，SART3，STn，碳酸酐酶IX，PAX5，OY-TES1，精子蛋白17，LCK，HMWMAA，AKAP-4，SSX2，XAGE 1，B7H3，豆莢蛋白，Tie 2，Trop2,Page4，VEGFR2，MAD-CT-1，FAP，PDGFR-β，MAD-CT-2，Fos蛋白相關抗原1。
本發明的偶聯物適用於癌症治療。這些癌症包含，並不限於，腎上腺皮質癌，直腸癌，膀胱癌，腦腫瘤(成人：腦幹膠質瘤，兒童，小腦星形細胞瘤，星形細胞瘤，室管膜瘤，髓母細胞瘤，幕上原始神經外胚層腫瘤，松果體，視覺通路和下丘腦膠質瘤)，乳腺癌，類癌腫瘤，胃腸道，未知原發癌，宮頸癌，結腸癌，子宮內膜癌，食管癌，肝外膽管癌，尤文家族腫瘤(PNET)，顱外惡性生殖細胞腫瘤，眼癌，眼內黑色素瘤，膽囊癌，胃癌(胃)，生殖細胞腫瘤，性腺外，妊娠滋養細胞腫瘤，頭頸部腫瘤，下嚥癌，胰島細胞癌，腎癌(腎細胞癌)，喉癌，白血病(急性淋巴細胞，急性髓細胞，慢性淋巴細胞，慢性髓細胞，多毛細胞)，唇和口腔癌，肝癌，肺癌(非小細胞，小細胞，淋巴瘤(愛滋病相關，中樞神經系統，皮膚T細胞，霍奇金病，非霍奇金病，惡性間皮瘤，黑色素瘤，默克爾細胞癌，原發性隱匿性鱗狀頸部轉移癌，多發性骨髓瘤和其他漿細胞腫瘤，蕈樣肉芽腫，骨髓增生異常綜合徵，骨髓增殖性疾病，鼻咽癌，神經母細胞瘤，口腔癌，口咽癌，骨肉瘤，卵巢癌(上皮細胞，生殖細胞瘤，低度惡性潛能腫瘤)，胰腺癌(外分泌，胰島細胞癌)，鼻竇和鼻 腔癌，甲狀旁腺癌，陰莖癌，嗜鉻細胞瘤癌，垂體腫瘤，漿細胞腫瘤，前列腺癌橫紋肌肉瘤，直腸癌，腎細胞癌(腎癌)，腎盂和輸尿管(移行細胞)，涎腺癌，塞紮綜合症，皮膚癌，皮膚癌(皮樣T細胞淋巴瘤，卡波西氏肉瘤，黑色素瘤)，小腸癌，軟組織肉瘤，胃癌，睾丸癌，胸腺瘤(惡性)，甲狀腺癌，尿道癌，子宮癌(肉瘤)，兒童異常腫瘤，陰道癌，外陰癌，腎母細胞瘤。
本發明的偶聯物適用於自身免疫疾病的預防和治療。自身免疫疾病包括，但不限於，胃酸缺乏自身免疫性慢性活動性肝炎，急性播散性腦脊髓炎，急性出血性腦白質炎，阿狄森氏病，丙種球蛋白血症，斑禿，肌萎縮性側索硬化症，強直性脊柱炎，抗腎小球基底膜/腎小管基底膜腎炎，抗磷脂綜合徵，抗合成酶綜合徵，關節炎，異位性過敏症，過敏性皮炎，自身免疫性再生障礙性貧血，自身免疫性心肌病，自身免疫性溶血性貧血，自身免疫性肝炎，自身免疫性內耳病，自身免疫性淋巴組織增生綜合徵，自身免疫性周圍神經系統疾病，自身免疫性胰腺炎自體免疫多內分泌症I,II,III型，自身免疫性孕酮皮炎，自身免疫性血小板減少性紫癜，自身免疫性色素層炎，巴羅病/巴羅同心性硬化，黑奇特綜合徵，Berger病，Bickerstaff腦幹腦炎，Blau綜合徵，大苞性類天苞瘡，巨淋巴結增生，美洲錐蟲病，慢性疲勞免疫功能紊亂綜合徵，慢性炎症性脫髓鞘性多發神經病，慢性復發性多病灶性骨髓炎，慢性萊姆病，慢性阻塞性肺疾病，變應性肉芽腫性血管炎，瘢痕性類天皰瘡，腹部疾病，耳蝸前庭綜合徵，冷凝集素病，補體C2缺乏症，顱動脈炎，肢端硬皮綜合徵，克隆氏病(一種特發性炎症性腸病)，柯興氏症，皮膚白細胞碎裂性血管炎，惡性萎縮性丘疹病，痛性肥胖病，皰疹樣皮炎，皮肌炎，1型糖尿病，彌漫 性皮膚硬皮病，心肌梗塞後綜合徵，盤狀紅斑狼瘡，濕疹，子宮內膜異位症，幼年特發性關節炎，嗜酸細胞性筋膜炎，嗜酸細胞性筋膜炎，結節性紅斑，特發性混合性冷球蛋白血症，埃文斯綜合徵，漸進性骨化性纖維組織結構不良，纖維肌痛，纖維肌炎，纖維性肺泡炎，胃炎，胃腸類天皰瘡，巨細胞動脈炎，腎小球腎炎，肺出血腎炎綜合徵，格雷夫斯氏病，格林-巴厘神經根炎，橋本腦炎，淋巴瘤性甲狀腺腫，溶血性貧血，過敏性紫癜多，妊娠期皰疹，化膿性汗腺炎，休斯綜合症(抗磷脂抗體綜合徵)，低丙球蛋白血症，特發性炎性脫髓鞘疾病，特發性肺纖維化，特發性血小板減少性紫癜(自身免疫性血小板減少性紫癜)，IgA腎病(Berger病)，包涵體肌炎，發炎性脫髓鞘病變，間質性膀胱炎，腸易激綜合徵，幼年特發性關節炎，幼兒型類風濕性關節炎，皮膚黏膜淋巴結綜合徵，蘭伯特肌無力綜合徵，白細胞分裂性血管炎，扁平苔蘚，硬化性苔蘚，線狀IgA病(LAD)，肌萎縮性側索硬化症，狼瘡樣肝炎，紅斑狼瘡，馬吉德綜合徵，美尼爾氏綜合症，顯微鏡下多血管炎，米勒．費希爾綜合徵，混合性結締組織病，硬斑病，穆哈二氏病，威爾斯綜合徵，多發性骨髓瘤，多發性硬化症，重症肌無力，肌炎，發作性睡病，視神經脊髓炎(德維克病)，神經性肌強直，眼部瘢痕性類天皰瘡，眼陣攣-肌陣攣綜合徵，奧德氏甲狀腺炎，復發性風濕病，熊貓症候群(合併鏈球菌感染的兒童自體免疫神經精神異常)，類腫瘤性小腦變性，陣發性睡眠性血紅蛋白尿症，進行性一側面萎縮，巴-特二氏綜合徵，睫狀體扁平部炎，天皰瘡，尋常型天皰瘡，惡性貧血，靜脈周圍炎，POEMS綜合徵，結節性多動脈炎，風濕性多肌痛，多發性肌炎，原發性膽汁性肝硬化，原發性硬化性膽管炎，進行性炎性神經病變，銀屑病，銀屑病關節炎，壞疽性膿皮，純紅細胞再生障礙性 貧血，羅斯默森氏腦炎，雷諾病，復發性多軟骨炎，萊特爾綜合徵，腿多動綜合徵，腹膜後纖維化，類風濕關節炎，類風濕發熱，結節病，精神分裂症，施密特綜合徵，施尼茨勒綜合徵，鞏膜炎，硬皮病，乾燥綜合徵，脊椎關節病，黏血綜合徵，斯蒂爾病，僵人綜合徵，亞急性細菌性心內膜炎，Susac氏綜合徵，急性熱性嗜中性皮膚病，西德納姆舞蹈病，交感性眼炎，高安氏動脈炎，顳動脈炎(巨細胞動脈炎)，痛性眼肌麻痹綜合徵，橫貫性脊髓炎，潰瘍性結腸炎(一種特發性炎症性腸疾病)，未分化的結締組織病，未分化脊柱關節病，血管炎，白癜風，韋格納氏肉芽腫病，威爾遜氏綜合徵，威斯科特-奧爾德里奇綜合徵。
在另一具體實施方案中，用於治療或預防自身免疫疾病的用於偶聯的抗原結合分子包括，但不限於：抗彈性蛋白抗體；Abys抗上皮細胞抗體；抗基底膜IV型膠原蛋白抗體；抗核抗體；抗雙鏈DNA抗體；抗單鏈DNA抗體，抗心肌磷脂抗體IgM，IgG；抗celiac(anti-celiac antibody)抗體；抗磷脂抗體IgK，IgG；抗核糖蛋白抗體；抗線粒體抗體；甲狀腺抗體；微粒體抗體，T-細胞抗體；甲狀腺球蛋白抗體，抗硬皮病-70抗體(anti-SCL-70)；人抗Jo抗體(anti-jo)；抗系統性紅斑狼瘡患者自身抗體；抗乾燥綜合症抗體(Anti-La/SSB)；抗系統性紅斑狼瘡抗體；抗壁細胞抗體；抗組蛋白抗體；抗核糖核蛋白抗體(anti-RNP)；中性粒細胞胞質抗體(C-ANCA)；細胞核周圍抗中性粒細胞抗體(P-ANCA)；抗著絲粒抗體；抗核纖維蛋白抗體，以及抗腎小球基底膜抗體(GBM)抗體，抗神經節苷脂(Anti-ganglioside)抗體；抗橋粒芯糖蛋白3抗體(anti-Desmogein 3)；抗人P62抗體；抗人sp100抗體；抗線粒體M2抗體；類風濕因數抗體；抗突變型瓜胺酸波形蛋白抗體(anti-MCV)；抗拓撲異構酶 抗體；抗中性粒細胞胞漿(CANCA)抗體。
在某些優選的實施方案中，本發明中用於共軛偶聯的結合分子，可以與自身免疫性疾病相關的活化淋巴細胞表達的受體或受體複合物結合。包括免疫球蛋白基因超家族成員(如CD2，CD3，CD4，CD8，CD19，CD20，CD22，CD28，CD30，CD33，CD37，CD38，CD70，CD79，CD79b，CD90，CD123，CD125，CD138，CD152/CTLA-4，PD-1，或ICOS)，TNF受體超家族成員(如CD27，CD40，CD95/Fas，CD134/OX40，CD137/4-1BB，INF-R1，TNFR-2，RANK，TACI，BCMA，骨保護素，Apo2/TRAIL-R1，TRAIL-R2，TRAIL-R3，TRAIL-R4，Trop2和30 APO-3)，整聯蛋白，細胞因數受體，趨化因數受體，主要組織相容性蛋白，凝集素(C型，S型或I型)或補體調控蛋白。
在另一具體實施方案中，對病毒性或細菌性抗原具有免疫特異性的有用的結合體是人源的或人單克隆抗體。如本文所用術語“病毒性抗原”包括，但不限於：任何能誘發免疫反應的病毒肽段，多肽蛋白(例如，HIVgp120，HIV nef，RSV F糖蛋白，流感病毒神經胺酸酶，流感病毒血凝素，人類T淋巴細胞病毒感染調節因數tax，單皰疹病毒糖蛋白(例如，gB，gC，gD和gE)和乙型肝炎表面抗原)。如本文所用的術語“細菌性抗原”包括，但不限於：任何能誘發免疫反應的微生物肽段，多肽蛋白，糖類，多糖，脂質分子(例如，細菌，真菌，致病性原生動物，酵母多肽包括，例如，脂多糖和莢膜多糖5/8)。可用於治療病毒性或細菌性感染的有用I型抗體包括，但不限於：帕利珠單抗，一種用於治療RSV感染的人源的抗呼吸道合胞體病毒單克隆抗體；PRO542，一種用於治療HIV感染的CD4融合抗體；Ostavir，一種治療乙肝病毒人源性抗體； PROTVIR，一種用於治療巨細胞病毒人源化抗體IgG.sub.1，還有抗脂多糖(anti-LPS)抗體。
本發明的偶聯物可以用於治療感染性疾病。這些傳染病包括，但不限於：不動桿菌感染，放線菌病，非洲昏睡病(非洲錐蟲病)，愛滋病(獲得性免疫缺陷綜合症)，阿米巴病，微粒孢子蟲病，炭疽，溶血隱秘桿菌感染，阿根廷出血熱，蛔蟲病，曲黴菌病，星狀病毒感染，巴貝蟲病，蠟樣芽胞桿菌感染，細菌性肺炎，細菌性陰道病，類桿菌感染，小袋蟲病，貝利蛔線蟲感染，BK病毒感染，黑色發結節病，人芽囊原蟲感染，芽生菌，玻利維亞出血熱，疏螺旋體感染，肉毒中毒(和嬰兒肉毒中毒)，巴西出血熱，布氏桿菌病，伯霍爾德桿菌感染，布魯裡潰瘍，感染杯狀病毒(諾羅病毒和札幌病毒)，彎麴菌病，念珠菌感染(念珠菌病，鵝口瘡)，貓抓病，蜂窩組織炎，查格斯病(美洲錐蟲病)，軟下疳，水痘，衣原體，肺炎衣原體感染，霍亂，著色真菌病，肝吸蟲病，難辨梭狀芽孢桿菌感染，球孢子菌病，科羅拉多蜱熱，普通感冒(急性病毒鼻咽炎；急性鼻炎)，克雅氏病，克裡米亞-剛果出血熱，隱球菌病，隱孢子蟲病，皮膚幼蟲移行症，環孢子蟲感染，囊蟲病，巨細胞病毒感染，登革熱，雙核阿米巴病，白喉，裂頭絛蟲，龍線蟲病，埃博拉出血熱，包蟲病，埃裡希體病，蟯蟲病(蟯蟲感染)，腸球菌感染，腸病毒感染，流行性斑疹傷寒，傳染性紅斑(第五病)，幼兒急疹，薑片蟲病，家族致命性失眠症，絲蟲病，產氣莢膜梭菌引起的食物中毒，非寄生阿米巴感染，梭桿菌感染，氣性壞疽(梭菌性肌壞死)，地絲菌病，吉斯特曼-施特勞斯綜合徵，賈第蟲病，馬鼻疽，齶口線蟲病，淋病，腹股溝肉芽腫，A組鏈球菌感染，B組鏈球菌感染，流感嗜血桿菌感染，手足口病(HFMD)，漢坦病毒肺綜合 徵，幽門螺桿菌感染，溶血性尿毒綜合徵，出血熱腎病綜合徵，甲型肝炎，乙型肝炎，丙型肝炎，丁型肝炎，戊型肝炎，單純皰疹，組織胞漿菌病，鉤蟲感染，人鮑坎病毒感染，人埃文氏埃立克體病，人粒細胞無形體病，人類偏肺病毒感染，人體單核細胞埃立克體病，人乳頭狀瘤病毒感染，人副流感病毒感染，膜殼絛蟲病，愛潑斯坦-巴爾病毒傳染性單核細胞增多症(單一)，流感，等孢子球蟲病，川崎病，角膜炎，金氏金氏桿菌感染，庫魯病，拉沙熱，軍團桿菌病(退伍軍人協會會員病)，軍團桿菌病(皮蒂亞克熱)，利什曼病，麻風病，鉤端螺旋體病，李氏桿菌病，萊姆病(萊姆疏螺旋體病)，淋巴絲蟲病(象皮腫)，淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎，瘧疾，瑪律堡出血熱，麻疹，類鼻疽(惠特莫爾氏病)，腦膜炎，腦膜炎球菌病，後殖吸蟲病，微孢子蟲病，傳染性軟疣，流行性腮腺炎，斑疹傷寒(地方性斑疹傷寒)，支原體肺炎，足菌腫，蠅蛆病，新生兒結膜炎(新生兒眼炎)，克-亞綜合徵(vCJD，nvCJD)，諾卡氏菌病，盤尾絲蟲病(河盲症)，副球孢子菌病(南美芽生菌病)，肺吸蟲病，巴氏桿菌病，頭蝨病(頭蝨)，體虱病(體虱)，陰虱病(陰虱)，盆腔炎，百日咳，鼠疫，肺炎球菌感染，肺孢子蟲性肺炎，肺炎，脊髓灰質炎，普氏菌感染，原發性阿米巴腦膜腦炎，進行性多病灶腦白質病，鸚鵡熱，Q熱，狂犬病，鼠咬熱，呼吸道合胞病毒感染，鼻孢子菌病，鼻病毒感染，立克次體感染，立克次氏體，裂谷熱，洛磯山斑疹熱，輪狀病毒感染，風疹，沙門氏菌病，SARS(嚴重急性呼吸系統綜合症)，疥瘡，血吸蟲病，敗血症，痢疾(菌痢)，帶狀皰疹(帶狀皰疹)，天花(天花)，孢子絲菌病，葡萄球菌食物中毒，葡萄球菌感染，線蟲，梅毒，絛蟲病，破傷風(牙關緊閉症)，須癬，頭癬，體癬，股癬，手癬，黑糠疹，足癬，甲癬，花斑癬，弓蛔蟲病(眼 幼蟲移行症)，弓蛔蟲病(內臟幼蟲移行症)，弓形體病，旋毛蟲病，滴蟲病，鞭蟲病(鞭蟲感染)，肺結核，兔熱病，尿素分解尿素支原體感染，委內瑞拉馬腦炎，委內瑞拉出血熱，病毒性肺炎，西尼祿熱，白色毛結節菌病(白色毛結節菌病)，假結核菌感染，耶爾森菌病，黃熱病，接合菌病。
本篇專利先前描述的抗體的結合分子可用於抗致病菌株，包括，但不限於：鮑曼不動桿菌，以色列放線菌，戈氏放線菌和丙酸丙酸鹽桿菌，布氏錐蟲，HIV(人類免疫缺陷病毒)，溶組織內阿米巴，無形體屬，炭疽桿菌，溶血隱秘桿菌，胡寧病毒，蛔蟲，麯黴屬，星狀病毒家庭，巴貝斯蟲屬，蠟樣芽胞桿菌，多桿菌，類桿菌屬，結腸小袋纖毛蟲，貝利蛔線蟲屬，BK病毒，何德毛結節菌，人芽囊原蟲，皮炎芽生菌，沙粒病毒，疏螺旋體屬，肉毒梭菌，清風藤，布魯菌屬，通常洋蔥伯克霍爾德菌和其他伯克霍爾德桿菌種，潰瘍分枝桿菌，杯狀病毒科家族，彎曲桿菌屬，通常是白色念珠菌和其他念珠菌屬，巴爾通體，A組鏈球菌和葡萄球菌，克氏錐蟲，杜克雷嗜血桿菌，水痘帶狀皰疹病毒(VZV)，沙眼衣原體，肺炎衣原體，霍亂弧菌，裴氏著色黴，華支睾吸蟲，難辨梭狀芽孢桿菌，粗球孢子菌和Coccidioides posadasii，科羅拉多蜱熱病毒，鼻病毒，冠狀病毒，朊病毒克雅氏病，克裡米亞-剛果出血熱病毒，新型隱球菌，隱孢子蟲屬，貓鉤蟲；multiple parasites，環孢子，豬帶絛蟲，巨細胞病毒，登革熱病毒(DEN-1，DEN-2，DEN-3和DEN-4)蟲媒病毒，脆弱雙核阿米巴，白喉棒狀桿菌，裂頭屬，麥迪那龍線蟲，埃博拉病毒，棘球屬，埃立克體屬，蟯蟲，腸球菌屬，腸道病毒屬，普氏立克次體，細小病毒B19，人類皰疹病毒6型和人類皰疹病毒7型，布氏薑片吸蟲，肝片吸蟲和大片吸蟲，FFI朊病毒，絲蟲目超家族，產氣莢膜桿菌，梭桿菌 屬，產氣莢膜梭菌，其他梭菌屬，白地黴，GSS朊病毒，腸賈第鞭毛蟲，鼻疽伯克霍爾德氏菌，棘顎口線蟲和剛棘顎口蟲，淋病奈瑟菌，肉芽腫桿菌，化膿性鏈球菌，無乳鏈球菌，流感嗜血桿菌，腸道病毒，大多數柯薩奇A病毒和腸病毒71型，辛諾瓦病毒，幽門螺旋桿菌，大腸桿菌O157：H7，布尼亞病毒科家族，甲型肝炎病毒，乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒，丁型肝炎病毒，戊型肝炎病毒，單純皰疹病毒1型，單純皰疹病毒2型，組織胞漿菌，十二指腸鉤蟲和美洲板口線蟲，流感嗜血桿菌，人類博卡病毒，埃文氏埃立克體，無形體科，人類偏肺病毒，沙費埃裡希體，人乳頭瘤病毒，人副流感病毒，微小膜殼絛蟲和縮小包膜絛蟲，EB病毒，正黏病毒科，貝利等孢球蟲，金氏金氏桿菌，肺炎克雷伯菌，Klebsiella ozaenas，庫魯病朊病毒，拉沙病毒，嗜肺軍團菌，嗜肺軍團菌，利什曼原蟲屬，麻風分枝桿菌和彌漫型痳瘋分枝桿菌，鉤端螺旋體屬，李斯特菌，博氏包柔螺旋體和其他疏螺旋體屬，班氏絲蟲和馬來絲蟲，淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)，瘧原蟲屬，瑪律堡病毒，麻疹病毒，類鼻疽伯克氏菌，腦膜炎奈瑟菌，橫川後殖吸蟲，微孢子蟲門，傳染性軟疣病毒(MCV)，腮腺炎病毒，立克次體桿菌，肺炎支原體，多種細菌(馬杜拉分枝菌病)和真菌(馬杜拉分枝菌病)，寄生雙翅目蠅蛆，沙眼衣原體和淋球菌，vCJD朊病毒，星狀諾卡氏菌和其他諾卡氏菌屬物種，旋盤尾絲蟲，巴西芽生菌，衛氏並殖吸蟲和其他並殖吸蟲屬，巴斯德氏菌屬，虱頭癬，體虱，陰虱，百日咳博多特氏菌，鼠疫耶爾森氏菌，肺炎鏈球菌，卡氏肺囊蟲，脊髓灰質炎病毒，普雷沃氏菌屬，福氏耐格裡阿米巴，JC病毒，鸚鵡熱衣原體，立克次體，狂犬病毒，念珠狀鏈桿菌和鼠咬熱螺旋體，呼吸道合胞病毒，西伯鼻孢子蟲，鼻病毒，立克次體屬，蟎立克次 體，立夫特山谷熱病毒，立氏立克次體，輪狀病毒，風疹病毒，沙門氏菌屬，非典型肺炎冠狀病毒，疥蟎，血吸蟲屬，志賀氏菌屬，水痘帶狀皰疹病毒，重型天花或類天花，申克孢子絲菌，葡萄球菌屬，金黃色葡萄球菌，化膿性鏈球菌，糞類圓線蟲，梅毒螺旋體，絛蟲屬，破傷風梭菌，毛癬菌屬，斷發毛癬菌，發癬菌屬，絮狀表皮癬菌，紅色毛癬菌和須癬毛癬菌，威尼克外瓶黴，毛癬菌屬，馬拉色菌屬，犬弓首蛔蟲或貓弓蛔蟲，弓形蟲，旋毛蟲，陰道毛滴蟲，鞭蟲，結核桿菌，土拉熱弗朗西絲菌，解脲支原體，委內瑞拉馬腦炎病毒，霍亂弧菌，瓜納瑞托病毒，西尼祿病毒，白色毛孢子菌，假結核耶爾森菌，小腸結腸炎耶爾森菌，黃熱病毒，毛黴目(毛黴菌病)和蟲黴目(蟲黴菌病)，銅綠假單胞菌，胎兒彎曲桿菌(弧菌)，嗜水氣單胞菌，遲緩愛德華氏菌，耶爾森菌，志賀痢疾桿菌，福氏痢疾桿菌，宋內志賀氏菌，鼠傷寒沙門氏菌，雅司螺旋體，Treponema carateneum，奮森疏螺旋體，博氏包柔螺旋體，出血性黃疸鉤端螺旋體，卡氏肺囊蟲，布魯氏菌，豬布魯氏菌，布氏桿菌，支原體屬，斑疹傷寒病原體，Rickettsia tsutsugumushi，披衣菌屬；病原真菌(麯黴，白色念珠菌，莢膜組織胞漿菌)；原生動物(溶組織內阿米巴，陰道毛滴蟲，人毛滴蟲，Tryoanosoma gambiense，羅得西亞錐蟲，杜氏利什曼原蟲，熱帶利什曼原蟲，巴西利什曼原蟲，肺囊蟲肺炎，間日瘧原蟲，惡性瘧原蟲，惡性瘧疾)；或蠕蟲(日本血吸蟲，曼氏血吸蟲，埃及血吸蟲和鉤蟲)。
其他抗體作為本發明結合配體用於治療病毒性疾病包括，但不限於：抗體作用於病原病毒的抗原包括以下例子但不限於：天花病毒，皰疹病毒，腺病毒，乳多空病毒科，腸道病毒科，細小RNA病毒科，細小病毒科，呼腸孤病毒，逆轉錄病毒科，流感病毒，副流感病毒， 腮腺炎，麻疹，呼吸道合胞病毒，風疹，蟲媒病毒，彈狀病毒，沙粒病毒科，Non-A/Non-B肝炎病毒，鼻病毒，冠狀病毒，輪狀病毒科，腫瘤病毒[例如，乙型肝炎病毒(肝細胞癌)，人乳頭狀瘤病毒(宮頸癌，肛門癌)，卡波西肉瘤相關皰疹病毒(卡波濟氏肉瘤)，EB病毒(鼻咽癌，伯基特淋巴瘤，原發性中樞神經系統淋巴瘤)，MCPyV(梅克爾細胞癌)，SV40(猿猴病毒40)，丙型肝炎病毒(肝癌)，人類嗜T淋巴細胞病毒1型(成人T細胞白血病/淋巴瘤)，免疫失調引起病毒：[如人類免疫缺陷病毒(愛滋病)]；中樞神經系統病毒：[如，JCV(進行性多病灶腦白質病)，MeV(亞急性硬化性全腦炎)，LCV(淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎)，蟲媒病毒性腦炎，正黏病毒科(可能的)(昏睡性腦炎)，RV(狂犬病)，水皰性口炎-印度病毒屬，疹病毒性腦膜炎，拉姆齊．亨特綜合徵II型；脊髓灰質炎(小兒麻痹症，後小兒麻痹症候群)，人類嗜T淋巴細胞病毒1型(熱帶痙攣性截癱)]；巨細胞病毒(巨細胞病毒性視網膜炎，HSV(皰疹性角膜炎))；心血管病病毒[如柯薩奇病毒(心包炎，心肌炎)]；呼吸系統/急性鼻咽炎病毒/病毒性肺炎：[非洲淋巴細胞瘤病毒(皰疹病毒4型感染/傳染性單核細胞增多)，巨細胞病毒；SARS冠狀病毒(嚴重急性呼吸器官綜合徵)正黏病毒：流感病毒A/B/C(流感/禽流感)，副黏病毒：人類副流感病毒(副流感)，呼吸道合胞病毒(人類呼吸道合胞病毒)，肺病毒]；消化系統病毒[MUV(腮腺炎)，巨細胞病毒(巨細胞病毒性食管炎)；腺病毒(腺病毒感染)；輪狀病毒，諾如病毒，星狀病毒，冠狀病毒；HBV(乙肝病毒)，柯薩奇病毒，甲型肝炎(甲肝病毒)，HCV(丙型肝炎病毒)，HDV(丁型肝炎病毒)，HEV(戊型肝炎病毒)，HGV(庚型肝炎病毒)]；泌尿生殖系統的病毒[如，BK病毒，MUV(腮腺炎)]。
按照更進一步的目標，本發明還包括上述偶聯物成分結合其它可行的藥物載體作為癌症和自身免疫疾病的治療藥物。本發明治療癌症和自身免疫疾病的方法包括體外，體內或間接體內療法。體外療法應用實例，包括藥物處理體外培養細胞，殺死除了沒有表達目標抗原的細胞以外的所有細胞；或者殺死表達非想要的抗原的細胞。作為間接體內療法的治療方法的一個示例：在體外處理造血幹細胞，殺死患病或惡性細胞後輸回原患者體內。例如，臨床上先通過間接體內治療除去骨髓中的腫瘤細胞或淋巴細胞然後輸回原患者來治療癌症和自體免疫疾病，或者在移植前去除骨髓中的T細胞和其它淋巴細胞以防止移植物的免疫拮抗反應。實施方法如下：從病人或其他個體獲取骨髓細胞，然後在加入本發明偶聯物的含血清培養基中37℃培養，藥物濃度範圍為1pM到0.1mM，培養時間為30分鐘左右到48小時左右。藥物具體濃度和培養時間由經驗豐富的臨床醫生決定。培養結束後，骨髓細胞用含血清培養基洗滌後通過靜脈注射輸回人體內。如果病人在獲取骨髓細胞和回輸處理前需要接受其它治療，比如燒蝕化療或全身放射療法的情況下，處理後的骨髓細胞可以保存在合格的液氮醫療設備中。
用於體內臨床應用時，本發明的偶聯物將以溶液或能被無菌水溶解後注射的凍乾固體的形式提供。合適的偶聯物給藥方法事例如下：偶聯物每星期通過靜脈注射一次，持續4~12星期。單次劑量通過溶解於50到500毫升的生理鹽水，生理鹽水可以加入人血清白蛋白(例如，0.5到1毫升的100mg/ml的濃縮人血清白蛋白)。藥物劑量大概在50μg到20mg每千克體重每星期，靜脈注射(每次注射10ug到200mg/kg體重)。4~12周的治療結束後，病人可以再接受新一輪的治療。詳細的治療方法 包括給藥途徑，賦形劑，稀釋劑，藥物劑量，治療時間等等可以由有經驗的外科醫生決定。
可以通過體內或間接體內的方法選擇性殺死細胞群來治療疾病的例子包括任何種類的惡性腫瘤，自體免疫疾病，移植排斥和感染(包括病毒，細菌或寄生蟲)。
達到理想的生物學效果而需要的偶聯物的量，將因多個因素而各異，這些因素包括化合物的性質特點，療效和偶聯物的生物利用度，疾病的類型，病人的種族，病人患病的狀態，給藥的途徑，所有這些因素共同決定給藥時間表和給藥方式。
概括的說，本發明中的偶聯物可以通過以0.1到10%品質體積比溶解在生理緩衝液中用於非腸道給藥。典型的藥物劑量範圍從1ug到0.1g每千克體重每天；推薦的藥物劑量範圍從0.01mg到20mg每千克體重每天或者等效劑量的兒童用量。推薦的給藥量取決於多個變數，包括疾病或功能紊亂的類型，病人個體的整體的健康狀態，偶聯藥物的相對生物學活性，化合物的劑型，給藥的方式(靜脈注射，肌肉注射，或其它)，在選中給藥方式下的藥物動力學特性，以及給藥的速度(單次注射或者連續滴注)和給藥的時間表(在一定時間內的給藥次數)。
本發明的偶聯物同樣可以以單位劑量的形式給藥，這裡的“單位劑量”是指一個病人一次給藥的劑量，單位劑量的藥物可以簡單方便的包裝和使用，單位劑量的藥物是保持物理和化學穩定的活性偶聯物本身，或者是像後面介紹的藥學上可接受的混合物。典型的一天的劑量範圍從0.01到100mg每千克體重。一般而言，人每天的單位劑量範圍從1到3000mg。推薦的單位劑量是1mg到500mg，每天給藥四次，或者10mg 到500mg，每天一次。本發明的偶聯物可以通過加入一種或多種藥學上可接受的輔料，製成藥物製劑。此單位劑量的藥物可以用於口服給藥，比如是片劑，簡單的膠囊或軟膠囊；或鼻內給藥，比如粉末狀，滴鼻劑，或噴霧劑；或者通過皮膚給藥，比如軟膏劑，乳膏劑，洗液，凝膠劑或噴霧劑或皮膚貼片。藥劑可以方便的以單位劑量的形式給藥，且以任何已知的製藥方法製得，比如Remington：The Science and Practice of Pharmacy,21th ed.；Lippincott Williams & Wilkins：Philadelphia,PA,2005年中所述的方法。
包含本發明的化合物的藥物劑型包括藥物組合物首選口服或非腸道給藥方式。對於口服給藥劑型，如片劑，粉劑，膠囊劑，片劑(錠劑)等等可以包含一種或多種以下原料或有類似性質的其它化合物：黏合劑，比如微晶纖維素或黃耆膠；稀釋劑，比如澱粉或乳糖；分散劑，比如澱粉和纖維素衍生物；潤滑劑，比如硬脂酸鎂；助流劑，比如二氧化矽膠體；甜味劑，比如蔗糖或糖精；增味劑，比如薄荷或水楊酸甲酯。膠囊可以是硬膠囊或軟膠囊的形式，一般由明膠混合物選擇性的與塑化劑混合，澱粉膠囊也是如此。另外，單位劑量的物理形式可以通過加入多種不同的原料而改變，例如，糖衣，蟲膠或腸溶劑。其它的口服劑型如糖漿或酏劑可以含有甜味劑，防腐劑，顏料，著色劑和調味劑。另外，活性化合物可以通過不同的處理和配方，使其成為可快速溶解的劑型，緩慢釋放劑型或緩釋劑，其中的緩釋劑是較好的劑型。片劑首選包含乳糖，玉米澱粉，矽酸鎂，交聯羧甲基纖維素鈉，聚乙烯吡咯酮，硬脂酸鎂，滑石等組合的劑型中。
非腸道給藥的液體藥劑包括無菌的水溶液或非水溶液，懸 浮液和乳劑。液體藥劑也可以含有黏合劑，緩衝液，防腐劑，螯合劑，甜味劑，調味劑和著色劑等等。非水溶劑包括乙醇，丙二醇，聚乙二醇，植物油比如橄欖油和有機脂類，比如油酸乙酯。水性溶劑包括了水，乙醇，緩衝試劑和鹽的混合物，特別是，生物相容性的，可降解的丙交酯聚合物，丙交酯/乙交酯聚合物或者聚乙二醇/聚丙三醇共聚物可作為控制活性藥物釋放的輔料。靜脈注射中的賦形劑可以包括液體和營養補充物，電解質補充物，以及基於林格氏葡萄糖的輔料，以及類似的輔料。對於本發明的活性藥物其它可行的非腸道給藥系統包括乙烯-醋酸乙烯酯共聚物微粒，植入式滲透泵和脂質體。
其它可行的給藥方式包括吸入劑，吸入劑包括乾粉劑，氣霧劑和水滴劑。吸入劑可以是含有如聚氧乙烯-9-月桂醚，甘膽酸鹽，去氧膽酸鹽或油質的溶液，可以通過滴鼻劑，鼻內膠體的形式給藥。口含藥劑包括如錠劑，糖果錠劑等，可含有調味劑如蔗糖，阿拉伯膠以及其它輔料如甘膽酸鹽等。栓劑適合於單位劑量的形式，以固體如可哥油為載體，也可以加入水楊酸。皮膚局部用藥劑型，以膏藥，乳劑，洗液，貼片，凝膠，噴霧劑，氣霧劑或油劑為首選。凡士林，羊毛脂，聚乙二醇，醇類以及它們的混合物可以作為藥物載劑。皮膚給藥的劑型可以是貼片，乳劑，緩衝溶液，溶解或分散在聚合物或黏合劑中。
特別地，本發明的偶聯物可以與其它的已知或未知的治療藥物，如化療藥物，放射療法，免疫療法藥物，自身免疫疾病藥物，抗感染藥物或其它抗體藥物偶聯物共同作用，達到協同效果。協同藥物或放射治療可以在本發明的偶聯物給藥之前或之後給藥或施行。可以是在服用本發明的偶聯物之前或之後1小時，12小時，一天，一星期，一個月，也可 以是幾個月。
在其它的實施方式中，起協同作用的藥物包括但不限於：
1).化療藥物：a).烷基化試劑：比如[氮芥：(苯丁酸氮芥，環磷醯胺，異環磷醯胺，氮芥，美法侖，氯乙環磷醯胺)；亞硝基脲：(卡莫司汀，洛莫司汀)；烷基磺酸鹽：(白消安，蘇消安)；三氮烯類：(達卡巴嗪)；含鉑化合物：(卡鉑，順鉑，奧沙利鉑)]；b).植物生物鹼：比如[長春花生物鹼：(長春鹼，長春新鹼，長春地辛，長春瑞濱)；紫杉烷類化合物：(紫杉醇，泰素帝)]；c).DNA拓撲異構酶抑制劑：比如[表鬼臼樹脂：(9-胺基喜樹鹼，喜樹鹼，克立那托，足葉乙甙，磷酸依託泊苷，伊立替康，替尼泊甙，拓撲替康)；絲裂黴素：(絲裂黴素C)]；d).抗代謝藥物：如{[抗葉酸：二氫葉酸還原酶抑制劑：(甲胺蝶呤，三甲曲沙)；IMP脫氫酶抑制劑(黴酚酸，甲醯胺基噻唑，利巴韋林，EICAR)；核糖核苷酸還原酶抑制劑(羥基脲，去鐵胺)]；[嘧啶類似物：尿嘧啶類似物：(5-氟尿嘧啶，去氧氟尿苷，雷替曲塞(拓優得))；胞嘧啶類似物：(阿糖胞苷，阿糖胞苷，氟達拉濱)；嘌呤類似物：(硫唑嘌呤，巰基嘌呤，鳥嘌呤)]}；e).激素類：如{受體拮抗劑：[抗雌激素：(甲地孕酮，雷洛昔芬，他莫昔芬)；LHRH激動劑：(戈舍瑞林，醋酸亮丙瑞林)；抗雄激素：(比卡魯胺，氟他胺)]；維甲酸/三角肌：[維生素D3類似物(CB 1093，EB 1089 KH 1060，膽鈣化醇，維生素D2)；光動力療法：(對此，酞菁光敏劑，PC4，去甲氧甲素)；細胞因數：(干擾素-α，干擾素-γ，腫瘤壞死因數(腫瘤壞死因數)，人類的蛋白質含TNF域)]}f).激酶抑制劑，如bibw 2992(抗EGFR/Erb2)，伊馬替尼，吉非替尼，呱加他尼，索拉非尼，達沙替尼，舒尼替尼，厄洛替尼，尼祿替尼，拉帕替尼，阿西替尼，帕唑帕尼，頗納替尼， 凡德他尼，氟馬替尼，e7080(抗VEGFR2)，莫立替尼，美迪替尼，普納替尼(ap24534)，HQP1351，巴非替尼(INNO-406)，波舒替尼(SKI-606)，蘇尼替尼，卡博替尼，沃利替尼，維莫德吉，Iniparib，盧梭利替尼，CYT387，阿西替尼，tivozanib，貝伐單抗，索拉非尼，曲妥珠單抗，西妥昔單抗，蘭尼單抗，帕尼單抗，ispinesib；g).其它類：如吉西他濱，epoxomicins(例如來那度胺)，硼替佐米沙利度胺，來那度胺，泊馬度胺，托舍多特，zybrestat，PLX4032，sta-9090，Stimuvax，allovectin-7，xegeva，Provenge，Yervoy，異戊二烯化抑制劑(如洛伐他汀)，多巴胺能神經毒素(如1-甲基-4-苯基吡啶離子)，細胞週期抑制劑(如星形孢菌素)，放線菌素(如放線菌素D，更生黴素)，平陽黴素(如博萊黴素博萊黴素A2，B2，培洛黴素)，蒽環類抗生素(如紅黴素，阿黴素(阿黴素)，伊達比星，表阿黴素，吡柔比星，佐柔比星，米托蒽醌，MDR抑制劑(如維拉帕米)，Ca2+ ATP酶抑制劑(如毒胡蘿蔔素)，組蛋白去乙醯化酶抑制劑(伏立諾他，羅米地辛，帕比司他，丙戊酸，莫提諾他(MGCD0103)，belinostat，PCI-24781，恩替諾特，SB939，resminostat，givinostat，AR-42，一種，蘿蔔硫素，曲古抑菌素A)；毒胡蘿蔔素，塞來昔布，格列酮類，表沒食子兒茶素沒食子酸酯，5雙硫侖，salinosporamide A.
2).抗自身免疫病劑包括，但不限於：環孢素，環孢素A，硫唑嘌呤，胺基己酸，溴隱亭，苯丁酸氮芥，氯喹，環磷醯胺，糖皮質激素(如激素類藥，倍他米松，布地奈德，氟尼縮松，氟替卡松丙酸酯，氫化可的松，地塞米松，氟可龍丹那唑，曲安奈德，丙酸倍氯米松)，脫氫表雄酮，依那西普，羥氯喹，英夫利昔單抗，美洛昔康，甲胺蝶呤，黴酚酸酯，西羅 莫司，他克莫司，強的松
3).抗傳染病劑包括，但不限於：a).胺基糖苷類：丁胺卡那黴素，武夷黴素，慶大黴素(奈替米星，西索米星，異帕米星)，潮黴素，卡那黴素(丁胺卡那黴素，阿貝卡星，胺基去氧卡那黴素，地貝卡星，妥布黴素)新黴素(新黴素B，巴龍黴素，核糖黴素)，奈替米星，大觀黴素，鏈黴素，妥布黴素，甲基姿蘇黴素；b).醯胺醇類：疊氮氯黴素，氯黴素，氟甲碸黴素，甲碸黴素；c).安沙黴素類：格爾德黴素，除莠黴素；d).碳青黴烯類：比阿培南，多尼培南，厄他培南，亞胺培南/西司他丁，美羅培南，帕尼培南；e).頭孢類：碳頭孢烯(氯碳頭孢)，頭孢乙腈，頭孢克洛，頭孢拉定，頭孢羥胺苄，頭孢羅寧，頭孢噻啶，頭孢噻吩或頭孢菌素，頭孢胺苄，頭孢來星，頭孢孟多，頭孢匹林，頭孢三嗪，頭孢氮氟，頭孢西酮，頭孢唑啉，頭孢拉宗，頭孢卡品，頭孢達肟，頭孢吡肟，頭孢米諾，頭孢西丁，頭孢丙烯，頭孢沙定，頭孢替唑，頭孢呋辛，頭孢克肟，頭孢地尼頭孢妥侖，頭孢吡肟，頭孢他美，頭孢甲肟，頭孢地嗪，頭孢尼西，頭孢呱酮，頭孢雷特，頭孢噻肟，頭孢替安，頭孢唑蘭，頭孢胺苄，頭孢咪唑，頭孢匹胺，頭孢匹羅，頭孢泊肟，頭孢丙烯，頭孢喹肟，頭孢磺啶，頭孢他啶，頭孢特侖，頭孢布烯，頭孢噻林，頭孢唑肟，頭孢，頭孢曲松，頭孢呋辛，頭孢唑喃，頭黴素(頭孢西丁，頭孢替坦，頭孢美唑)氧頭孢烯(氟氧頭孢，拉氧頭孢)；f).糖肽：博來黴素，萬古黴素(奧利萬星，特拉萬星)，替考拉甯(達巴萬星)雷莫拉甯，達托黴素；g).甘胺醯：如替加環素；h).β-內醯胺酶抑制劑：青黴烷(舒巴坦，他唑巴坦)，克拉維烷(克拉維酸)；i).林可醯胺類：克林黴素，林可黴素；j).脂肽：達托黴素，A54145，鈣依賴性抗生素(CDA)；k).大環內酯類：阿奇黴素，喹紅黴素 喹紅黴素喹紅黴素，克拉黴素，地紅黴素，紅黴素，氟紅黴素，交沙黴素，酮內酯類(泰利黴素，喹紅黴素喹紅黴素喹紅黴素喹紅黴素)麥迪黴素，美奧卡黴素，竹桃黴素，利福黴素(利福平，利福平，利福布汀，利福噴丁)，羅他黴素，羅紅黴素，壯觀黴素，螺旋黴素，他克莫司(FK506)，醋竹桃黴素，泰利黴素；l).單環β-內醯胺抗生素：胺曲南，替吉莫南；m).唑烷酮類：利奈唑胺；n).青黴素類：阿莫西林，胺苄西林(匹胺西林，海他西林，巴胺西林，美坦西林，酞胺西林)疊氮西林，阿洛西林，青黴素，苄星青黴素，苯氧基苄星青黴素，氯甲西林，普魯卡因青黴素，羧苄青黴素(卡茚西林)，鄰氯青黴素，雙氯青黴素，先鋒黴素，氟氯西林，美西林(氮卓脒青黴素雙酯)，美洛西林，甲氧西林，萘夫西林，苯唑西林，醋甲西林，青黴素，奈西林，青黴素，呱拉西林，苯丙西林，磺苄西林，替莫西林，替凱西林；o).多肽：桿菌肽，多黏菌素E，多黏菌素B；p).喹諾酮類藥物：阿拉沙星，巴羅沙星，環丙沙星，克林沙星，達氟沙星，二氟沙星，依諾沙星，恩諾沙星，Floxin，加雷沙星，加替沙星，吉米沙星，格帕沙星，曲伐沙星卡諾，左氧氟沙星，洛美沙星，麻保沙星，莫西沙星，那氟沙星，諾氟沙星，奧比沙星，氧氟沙星，培氟沙星，曲伐沙星，格帕沙星，西他沙星，司帕沙星，替馬沙星，妥舒沙星，曲伐沙星；q).菌素：普那黴素，奎奴普丁/達福普汀；r).磺胺類藥物：磺胺米隆，百浪多息，磺胺醋醯，磺胺甲，磺胺，柳氮磺胺吡啶，磺胺異噁唑，甲氧苄胺嘧啶，甲氧苄啶-磺胺甲基異噁唑(複方新諾明)；s).類固醇抗菌藥物：如夫西地酸；t).四環素類：強力黴素，金黴素，氯羥四環素，地美環素，賴甲環素，氯甲烯土黴素，美他環素，米諾環素，土黴素，青呱四環素，羅利環素，四環素，甘胺醯(如替加環素)；u).其他類型的抗生素： 番荔枝科，胂凡納明，細菌萜醇抑制劑(桿菌肽)，Dadal/AR抑制劑(環絲胺酸)，dictyostatin，海綿內酯，艾榴塞洛素，埃博黴素，乙胺丁醇，依託泊苷，法羅培南，夫西地酸，痢特靈，異煙肼，laulimalide，甲硝唑，莫匹羅星，mycolactones，NAM合成抑制劑(如磷黴素)，呋喃妥因，紫杉醇，平板黴素，吡嗪醯胺，奎奴普丁/達福普汀，利福平(利福平)，他唑巴坦替硝唑，番荔枝內酯；
4).抗病毒的藥物：a).進入/融合抑制劑：aplaviroc，馬拉韋羅，維立韋羅，gp41的(恩夫韋)，PRO140，CD4(Ibalizumab)；b).整合酶抑制劑：拉替拉韋，埃替拉韋，globoidnan A；c).成熟抑制劑：貝韋立馬，vivecon；d).神經胺酸酶抑制劑：奧司他韋，紮那米韋，帕拉米韋；e).核苷和核苷酸：阿巴卡韋，阿昔洛韋，阿德福韋，胺多索韋，apricitabine，溴夫定，西多福韋克拉夫定，右艾夫他濱，去羥肌苷(DDI)，艾夫他濱，恩曲他濱(FTC)，恩替卡韋，泛昔洛韋，氟脲嘧啶(5-FU)，3'-氟取代的2',3'-二去氧核苷類似物(例如，3'-氟-2',3'-二去氧胸苷(FLT)和3'-氟-2',3'-雙去氧(FLG)福米韋生，更昔洛韋，碘苷，拉米夫定(3TC)，L-核苷(如β-L-胸苷，β-L-2'-去氧胞苷)，噴昔洛韋，Racivir，利巴韋林，stampidine，司他夫定(d4T的)，他利韋林(偉拉咪定)，替比夫定，替諾福韋，伐昔洛韋三氟胸苷，纈更昔洛韋，紮西他濱(DDC)，齊多夫定(AZT)；f).非核苷類：金剛烷胺，ateviridine，卡普韋林，二芳基嘧啶(依曲韋林，利匹韋林)，地拉韋啶，二十二烷醇，乙米韋林，依法韋侖，膦甲酸(磷醯基甲酸)，咪喹莫特，干擾素α，洛韋胺，洛德腺苷，他巴唑，奈韋拉平，NOV-205，聚乙二醇干擾素α，鬼臼毒素，利福平，金剛乙胺，瑞喹莫德(R-848)，醋胺金剛烷；g).蛋白酶抑制劑：安普那韋， 阿紮那韋，博賽潑維，達蘆那韋，福沙那韋，茚地那韋，洛匹那韋，奈非那韋，pleconaril，利托那韋，沙奎那韋，特拉匹韋(VX-950)替拉那韋；h).其他類型的抗病毒的藥物：抗體酶，阿比朵爾，calanolides A，淺藍菌素，藍藻-N，二芳基嘧啶，表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)，膦甲酸鈉，格瑞弗森，他利韋林(偉拉咪定)，羥基脲，KP-1461，米替福新，普來可那立，合成抑制劑，利巴韋林，seliciclib；
5).其它免疫治療藥物：如咪喹莫特，干擾素(如α，β)，粒細胞集落刺激因數，細胞因數，白細胞介素(IL-1~IL-35)，抗體(例如曲妥單抗，帕妥珠單抗，貝伐單抗，西妥昔單抗，帕尼單抗，英夫利昔單抗，阿達木單抗，巴厘昔單抗，達克珠單抗，奧馬珠單抗)，蛋白結合藥物(例如，Abraxane)，一種抗體結合藥物選自卡奇黴素衍生物，美登素衍生物(DM1 and DM4),CC-1065和多卡黴素小溝劑，有效的紫杉醇衍生物，阿黴素，阿裡他汀抗有絲分裂藥物(如曲妥珠單抗-DM1，Inotuzumab單抗，brentuximab vedotin，Glembatumumab vedotin，lorvotuzumab mertansine，AN-152 LMB2，TP-38，VB4-845，Cantuzumabmertansine，AVE9633，SAR3419，CAT-8015(抗-CD22)，IMGN388，IMGN529，IMGN853，milatuzumab-阿黴素，SGN-75(抗CD70)，抗-CD22-MCC-DM1)。
作為本發明更進一步的目標，本發明還涉及其中的抗體藥物共軛體的製備過程。本發明的共軛體可以用多種該領域的熟知方法製備，例如，本發明共軛體中的抗有絲分裂劑可以按照下述方法或改進的下述方法合成。對於該領域的專業人士來說，這些改進方法都是很容易從科技文獻中獲得的、人所共知的、很明顯的方法。特別是，這些方法在 《Comprehensive Organic Transformations》(R.C.Larock著，1999，Wiley-VCH出版，第2版)一書中有很多的介紹。
在本文描述的反應過程中，有時會有必要保護可能參與反應的活性官能團，例如羥基、胺基、亞胺基、巰基和羧基，以避免副反應的發生。常規保護官能團的常見使用方法可參考P.G.Wuts和T.W.Greene所著的《Greene's Protective Groups in Organic Synthesis》(2006年，Wiley-Interscience出版，第4版)。有的反應可以在適當的含有酸或鹼的溶液中進行。這類反應的酸、鹼和溶劑並沒有特別的限制，只要沒有不利的影響，任何常規的酸、鹼以及溶劑都可以在這裡使用。而且，這些反應可以在廣泛的溫度範圍內進行。不過，總的來說，比較容易操作的反應溫度通常在-80℃至150℃之間(在室溫與100℃之間更好)。反應所需的時間同樣可以有很大的變化範圍，當然，這取決於多種因素，尤其是反應溫度和所用溶劑的性質。一般地說，對於比較理想的反應來說，3至20小時的反應時間比較合適。
反應結束後的操作處理可以按常規方法進行。例如，可以通過把溶劑從反應體系中蒸掉的方式回收反應產物。或者，如果必要的話，在把溶劑蒸出後，可以先把剩餘物倒入水中，再用與水不互溶的有機溶劑萃取。最後，在把萃取溶劑蒸走以後，就可以獲得反應產物。此外，如果有更高純度的需要，還可通過各種常見的方法進一步純化，例如重結晶、沉降或各種色譜層析的方法。一般地說，柱層析和製備薄板層析的方法更為常用。
實施例
本發明用下面的實施例進一步地說明，這些實施例的內容 並不旨在限制本發明的範圍。在實施例中細胞系，除了特殊說明之外，均是依據美國標準培養物保藏中心(ATCC)、德國菌種保藏中心(DSMZ)或中國科學院上海細胞培養中心規範的條件保存。除了特殊說明外，細胞培養試劑來自於Invitrogen公司。所有的無水試劑均由商業途徑獲得，並儲存於Sure-Seal密封瓶中。其他的試劑和溶劑均按照最高規格購買，使用時未經進一步的處理。用Varain PreStar HPLC進行製備HPLC分離。NMR譜在Bruker 500MHz儀器上獲得，化學位移以ppm為單位，四甲基矽烷為參考(0ppm)，耦合常數(J)的單位是Hz。質譜資料在Waters Xevo Q Tof質譜儀(連接Waters Acquity UPLC高效液相色譜儀和TUV檢測器)上獲得。
實施例1 化合物1的合成
Figure 109116404-A0305-02-0105-158
在10-L反應釜中將二乙氧基乙腈(1.00k g，7.74mol)溶解於甲醇(6.0L)，在室溫下加入(NH4)2S(48%水溶液，1.41k g，9.29mol)。釜內溫度升至33℃而後又降回室溫。攪拌過夜後，濃縮反應液。向殘留物中加入乙酸乙酯(5L)，用飽和NaHCO3溶液(4×1.0L)洗，水相用乙酸乙酯(5×1.0L)反萃。合併有機相，用飽和食鹽水(3L)洗，之後用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。粗品用石油醚打漿，真空抽濾，收集固體並用石油醚洗滌。濾液濃縮後再用石油醚打漿，合併收集所得固體，總共得到1.1k g(87%產率)目標產物，為白色或亮黃色固體。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.81(d，J=71.1Hz，2H)，5.03(s，1H)，3.73(dq，J=9.4，7.1Hz，2H)，3.64(dq，J=9.4，7.0Hz，2H)，1.25(t，J=7.1Hz，6H)。
實施例2 化合物2的合成
Figure 109116404-A0305-02-0106-160
在5-L三頸圓底瓶上裝備一個回流冷凝管和一個恆壓滴液漏斗。在其中加入分子篩(3Å，500g)和硫醯胺2(350g，2.14mol)的乙醇溶液(3L)，30分鐘內滴入3-溴丙酮酸乙酯(純度80%，404mL，2.57mol)。滴加過程中內溫稍有上升，隨後將反應液加熱至回流並攪拌30分鐘。將反應液冷卻至室溫後用矽藻土過濾除去不溶物，並用乙酸乙酯洗濾餅。濾液濃縮後的粗產物和矽膠(1.5k g)混合拌勻，通過矽膠柱(10k g)柱層析(10-20%乙酸乙酯/石油醚梯度洗脫)純化，得到棕色油狀物，為目標化合物(509g，92%產率)。
實施例3 化合物3的合成
Figure 109116404-A0305-02-0106-161
將縮醛(300g，1.16mol)的丙酮(3.0L)溶液加熱至回流，在1.0小時內滴加4N HCl溶液(250mL)。TLC顯示起始原料反應完全。反應液減壓濃縮後分離兩相。有機相加入乙酸乙酯稀釋(1.5L)，並依次用飽和NaHCO3水溶液(1.0L)、水(1.0L)和食鹽水(1.0L)洗，然後用無水硫酸鈉乾燥。合併所有的水相並用乙酸乙酯反萃，並用無水硫酸鈉乾燥有機相。濾出乾燥劑後濃縮有機相，所得粗產品用石油醚/乙酸乙酯(5：1)溶液打漿，析出的固體經真空過濾收集，並用石油醚/乙酸乙酯(10：1)溶液洗。濾液濃縮用柱層析純化(0-15%乙酸乙酯/石油醚)，所有固體合併，得目標產物40g(43%產率)，為白色或亮黃色固體。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 10.08-10.06(m，1H)，8.53-8.50(m，1H)，4.49 (q，J=7.1Hz，2H)，1.44(t，J=7.1Hz，3H)。MS ESI m/z C7H8NO3S[M+H]+：計算值186.01，實測值186.01。
實施例4 化合物4的合成
Figure 109116404-A0305-02-0107-162
在N2保護下室溫下向(S)-叔丁基亞磺酸胺(100g，0.825mol)的四氫呋喃(1L)溶液中加人Ti(OEt)4(345mL，1.82mol)和3-甲基-2-丁酮(81mL，0.825mol)。加熱反應液，回流16小時後冷卻至室溫，然後倒入冰水(1L)。過濾並且用乙酸乙酯洗濾餅。分離濾液中的有機相，無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，其殘留物減壓蒸餾(15-20torr，95℃)得目標產物4(141g，90%產率)，為黃色油狀物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 2.54-2.44(m，1H)，2.25(s，3H)，1.17(s，9H)，1.06(dd，J=6.9，5.1Hz，6H)。MS ESI m/z C9H19NaNOS[M+Na]+：計算值212.12，實測值212.11。
實施例5 化合物5的合成
Figure 109116404-A0305-02-0107-164
在N2保護下，於-78℃下向二異丙胺(264mL，1.87mol)的四氫呋喃溶液中加入正丁基鋰溶液(2.5M，681mL，1.70mol)。反應在30分鐘內升溫至0℃然後重新冷卻至-78℃，向其中加入化合物10(258g，1.36mol)並用四氫呋喃(50mL)沖洗。攪拌1小時後滴加ClTi(OiPr)3(834g，3.17mol)的四氫呋喃(1.0L)溶液。滴加完成1小時後再緩慢滴入化合物4(210g，1.13mol)的四氫呋喃(500mL)溶液，耗時1小時。所得溶液在-78℃繼續攪拌3小時。TLC監測反應進行完全後，用乙酸和四氫 呋喃(體積比1：1，300mL)的混合液淬滅反應，而後將反應液倒入鹽水(2L)，用乙酸乙酯萃取(8×1L)。有機相用水和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。殘留物經柱層析純化(二氯甲烷/乙酸乙酯/石油醚2：1：2)，得化合物5(298g，74%產率)，為無色油狀物。1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.13(s，1H)，6.63(d，J=8.2Hz，1H)，5.20-5.11(m，1H)，4.43(q，J=7.0Hz，2H)，3.42-3.28(m，2H)，2.89(dt，J=13.1，6.5Hz，1H)，1.42(t，J=7.1Hz，3H)，1.33(s，9H)，1.25-1.22(m，6H)。MS ESI m/z C16H26NaN2O4S2[M+Na]+：計算值397.13，實測值397.11。
實施例6 化合物6的合成
Figure 109116404-A0305-02-0108-166
將化合物5(509g，1.35mol)溶於四氫呋喃(200mL)，冷卻至-78℃，向其中緩慢加入Ti(OEt)4(570mL，2.72mol)，加完後攪拌1小時。然後在90分鐘內分批加入NaBH4(51.3g，1.36mol)，反應在-78℃攪拌3小時。TLC監測發現起始原料仍有剩餘。緩慢加入乙醇(50mL)，繼續攪拌1.5小時後將反應液倒入飽和食鹽水(2L，含250mL乙酸)，升至室溫。經過矽藻土過濾，分離有機相。水洗、飽和食鹽水洗、無水硫酸鈉乾燥有機相、過濾並濃縮。殘留物經柱層析(乙酸乙酯/石油醚1：1)純化得化合物6(364g，71%產率)，為白色固體。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.10(s，1H)，5.51(d，J=5.8Hz，1H)，5.23-5.15(m，1H)，4.41(q，J=7.0Hz，2H)，3.48-3.40(m，1H)，3.37(d，J=8.3Hz，1H)，2.29(t，J=13.0Hz，1H)，1.95-1.87(m，1H)，1.73-1.67(m，1H)，1.40(t，J=7.1Hz，3H)，1.29(s，9H)，0.93(d，J= 7.3Hz，3H)，0.90(d，J=7.2Hz，3H)。MS ESI m/z：計算值C16H28NaN2O4S2[M+Na]+：399.15，實測值399.14。
實施例7 化合物7的合成
Figure 109116404-A0305-02-0109-168
在0℃下於化合物6(600g，1.60mol)的乙醇(590mL)溶液中加入4N HCl的1，4-二氧六環(590mL)溶液。反應逐漸升至室溫後攪拌2.5小時。過濾收集析出的白色固體並用乙酸乙酯洗。濾液濃縮後用乙酸乙酯打漿。合併兩次獲得的白色固體，共446g(90%產率)。
實施例8 化合物8的合成
Figure 109116404-A0305-02-0109-169
將疊氮化鈉(740g，11.4mol)溶於水(2.0L)後加入二氯甲烷(2.0L)並冷卻至0℃，向該溶液中加入Tf2O(700mL，4.10mol)，歷時1.5小時。加完後在0℃下繼續攪拌3小時。分離出有機相，水相用二氯甲烷萃取(2×500mL)。合併有機相，用飽和NaHCO3(3×1.0L)洗。室溫下將此二氯甲烷溶液加入到(L)-異亮胺酸(300g，2.28mol)，碳酸鉀(472g，3.42mol)，五水硫酸銅(5.7g，22.8mmol)的混合甲醇/水(1：1 v/v，6.0L)溶液中。加料過程中反應體系內溫度會稍微升高。混合液在室溫下攪拌16小時，減壓蒸去溶劑，水相用濃鹽酸(大約280mL)酸化至pH 6-6.5(約280mL)，然後用磷酸鹽緩衝液稀釋(0.25M，pH 6.2，6.0L)，用乙酸乙酯(6×2.0L)洗去磺酸胺副產物。水相用濃鹽酸(大約400mL)酸化至pH 3後用乙酸乙酯(4×2.0L)萃取。合併有機相，飽和食鹽水洗(2.0L)，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮得產物8(320g，89%產率)，為 亮黃色油狀物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 12.01(s，1H)，3.82(d，J=5.9Hz，1H)，2.00(ddd，J=10.6，8.6，5.5Hz，1H)，1.54(dqd，J=14.8，7.5，4.4Hz，1H)，1.36-1.24(m，1H)，1.08-0.99(m，3H)，0.97-0.87(m，3H)。
實施例9 化合物9的合成
Figure 109116404-A0305-02-0110-172
將Azido-Ile-OH(8，153g，0.97mol)溶於四氫呋喃(1.5L)並冷卻至0℃，依次加入NMM(214mL，1.94mol)和氯甲酸異丁酯(95mL，0.73mol)。在0℃攪拌1小時後分批加入化合物7(150g，0.49mmol)。在0℃攪拌30分鐘後，逐漸升至室溫並繼續攪拌2小時。反應在0℃下加冰水淬滅並用乙酸乙酯萃取三遍。合併有機相用1N HCl洗，飽和NaHCO3洗和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥。過濾濃縮，殘留物經柱層析(0-30%乙酸乙酯/石油醚)純化得到白色固體(140g，70%產率)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.14(s，1H)，6.57(d，J=8.9Hz，1H)，4.91(d，J=11.1Hz，1H)，4.44(dd，J=13.2，6.3Hz，2H)，4.08-3.95(m，2H)，2.21(dd，J=24.4，11.5Hz，2H)，1.90-1.79(m，3H)，1.42(t，J=6.6Hz，3H)，1.37-1.27(m，2H)，1.11(d，J=6.4Hz，3H)，1.01-0.94(m，9H)。MS ESI m/z C18H30N5O4S[M+H]+：計算值412.19，實測值412.19。
實施例10 化合物10的合成
Figure 109116404-A0305-02-0110-174
在0℃下依次向化合物9(436g，1.05mol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入咪唑(94g，1.37mmol)和三乙基氯矽烷(222mL，1.32mol)。反應液歷時1小時升至室溫後，繼續攪拌1小時。加入飽和食鹽水淬滅，分出有機相，水相用乙酸乙酯萃取。合併後的有機相經乾燥、過濾、濃縮後用柱層析(15-35%乙酸乙酯/石油醚)純化得產物10(557.4g，95%產率)，為無色油狀物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.12(s，1H)，6.75(d，J=8.0Hz，1H)，5.20-5.12(m，1H)，4.44(q，J=7.0Hz，2H)，4.06-3.97(m，1H)，3.87(d，J=3.8Hz，1H)，2.14(d，J=3.8Hz，1H)，2.01-1.91(m，3H)，1.42(t，J=7.1Hz，3H)，1.34-1.25(m，2H)，1.06(d，J=6.8Hz，3H)，1.00-0.93(m，18H)，0.88(dd，J=19.1，6.8Hz，6H)。MS ESI m/z C24H44N5O4SSi[M+H]+：計算值526.28，實測值526.28。
實施例11 化合物11的合成
Figure 109116404-A0305-02-0111-175
在0℃下向化合物10(408g，0.77mol)和碘甲烷(145mL，2.32mol)的四氫呋喃(4L)溶液中加入氫化鈉(60%，62.2g，1.55mol)。將所得的反應液在0℃攪拌過夜，而後倒入激烈攪拌的冰水飽和氯化銨(5L)溶液中。用乙酸乙酯(3×500mL)萃取。合併後的有機相經乾燥、過濾、濃縮後用柱層析(15-35%乙酸乙酯/石油醚)純化得產物11(388g，93%產率)，為亮黃色油狀物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.09(s，1H)，4.95(d，J=6.6Hz，1H)，4.41(q，J=7.1Hz，2H)，3.56(d，J=9.5Hz，1H)，2.98(s，3H)，2.27-2.06(m，4H)，1.83- 1.70(m，2H)，1.41(t，J=7.2Hz，3H)，1.29(ddd，J=8.9，6.8，1.6Hz，3H)，1.01(d，J=6.6Hz，3H)，0.96(dt，J=8.0，2.9Hz，15H)，0.92(d，J=6.6Hz，3H)，0.90(d，J=6.7Hz，3H)。MS ESI m/z C25H46N5O4SSi[M+H]+：計算值540.30，實測值540.30。
實施例12 化合物12的合成
Figure 109116404-A0305-02-0112-569
將2-甲基丙胺酸(500g，4.85mol)，甲醛(37%水溶液，1.0L，12.1mol)和甲酸(1.0L)的混合液加熱至回流(80℃)。攪拌3.0小時後冷卻至室溫，加入6N HCl(850mL)，而後濃縮反應液。過濾收集所得的固體並用乙酸乙酯洗三遍(1.0L)。將固體溶於水(1.5L)並用4N NaOH(約1.0L)中和至pH 7。濃縮並用乙醇(2.0L)共沸以除水。殘留物用甲醇(2.0L)溶解，過濾除去NaCl固體，乙酸乙酯洗。濾液濃縮後得白色固體639.2g，包含有少量NaCl，可直接使用不用進一步純化。
實施例13 化合物13的合成
Figure 109116404-A0305-02-0112-177
向化合物12(97g，0.74mol)的乙酸乙酯(1L)溶液中加入五氟苯酚(163g，0.88mol)和DIC(126mL，0.81mol)。反應室溫攪拌24小時後用矽藻土過濾，用10mL乙酸乙酯洗。濾液不經進一步純化直接使用。
實施例14 化合物14的合成
Figure 109116404-A0305-02-0112-570
向上述五氟苯基酯13的乙酸乙酯溶液中加入化合物11(200g，0.37mol)和乾的Pd/C(10wt%，10g)。反應液在氫氣(1atm)環境中攪拌27小時。矽藻土過濾，乙酸乙酯洗。合併的有機相濃縮後經柱層析(0-5%甲醇/乙酸乙酯)純化得化合物14(184g，79%產率)。MS ESI m/z C31H58N4O5SSi[M+H]+：計算值627.39，實測值627.39。
實施例15 化合物15的合成
Figure 109116404-A0305-02-0113-179
將化合物14(200g，0.32mmol)溶於乙酸/水/四氫呋喃(v/v/v 3：1：1，638mL)混合溶液中，室溫攪拌4天。反應液濃縮後用甲苯共沸帶乾，此步驟重複兩遍後得化合物15，直接用於下一步反應。MS ESI m/z C25H45N4O5S[M+H]+：計算值513.30，實測值513.30。
實施例16 化合物16的合成
Figure 109116404-A0305-02-0113-180
在0℃下將氫氧化鋰(0.4N，600mL，2.55mol)的水溶液加入化合物15(160g，0.319mol，1.0eq.)的甲醇(1.2L)溶液中。反應在室溫攪拌2小時後濃縮。經柱層析(100%二氯甲烷至80：20：1二氯甲烷/甲醇/氨水)得化合物16(140g，兩步產率91%)為無定形白色固體。MS ESI m/z C23H40N4O5S[M+H]+：計算值485.27，實測值485.27。
實施例17 化合物17的合成
Figure 109116404-A0305-02-0113-181
將化合物16(143g，0.30mol)和DMAP(0.36g，2.95mmol)溶於無水四氫呋喃(1.4L)與無水DMF(75mL)的混合溶液中。冷卻至0℃，加入三乙胺(82.2mL，0.59mmol)和乙酸酐(56mL，0.59mmol)。反應逐漸升至室溫並攪拌24小時。濃縮後經柱層析(5-50%甲醇/二氯甲烷)純化得化合物17(147g，95%產率)，為無定形白色固體。1H NMR(500MHz，DMSO)δ 8.37(s，1H)，7.63(d，J=9.5Hz，1H)，5.54(dd，J=11.2，2.5Hz，1H)，4.64(dd，J=9.4，7.2Hz，1H)，4.34(s，1H)，2.95(s，3H)，2.27-2.19(m，1H)，2.19-2.12(m，1H)，2.11(s，6H)，2.08(s，3H)，1.82-1.66(m，2H)，1.54-1.42(m，1H)，1.10(s，3H)，1.06-0.95(m，1H)，0.99(s，3H)，0.91(d，J=6.5Hz，3H)，0.88(d，J=6.7Hz，3H)，0.83(t，J=7.4Hz，3H)，0.65(d，J=6.6Hz，3H)。13C NMR(126MHz，DMSO)δ 175.35，172.78，169.70，169.58，162.23，148.03，128.29，69.51，63.00，55.10，52.37，38.86，36.46，33.83，29.25，28.82，23.64，21.09，20.60，19.96，19.40，18.38，15.65，10.77。MS ESI m/z C25H44N4O6S[M+H]+：計算值527.3，實測值527.4。
實施例18 化合物18的合成
Figure 109116404-A0305-02-0114-182
在室溫下，向化合物17(41.0g，77.9mmol，1.0eq)的無水二氯甲烷(600mL)溶液中加入EDC．HCl(44.8g，233mmol，3.0eq)和五氟苯酚(35.9g，194mmol，2.5eq)。將混合物在室溫下攪拌2小時，用鹽水(300mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾、濃縮，並通過矽膠柱層 析法(25-100%乙酸乙酯/正己烷洗脫)純化，得到白色固體(43.0g，產率80%)。1H NMR(500MHz，DMSO)δ 9.06(s，1H)，7.65(d，J=9.4Hz，1H)，5.60(dd，J=11.0，2.8Hz，1H)，4.64(dd，J=9.4，7.2Hz，1H)，4.35(s，1H)，2.97(s，3H)，2.34-2.16(m，2H)，2.12(s，6H)，2.11(s，3H)，1.88-1.65(m，2H)，1.57-1.37(m，1H)，1.11(s，3H)，1.06-0.96(m，1H)，1.00(s，3H)，0.92(d，J=6.5Hz，3H)，0.88(d，J=6.7Hz，3H)，0.83(t，J=7.4Hz，3H)，0.66(d，J=6.6Hz，3H)。13C NMR(126MHz，DMSO)δ 175.24，172.78，171.75，169.81，156.32，141.69，141.56，139.71，138.59，136.60，134.68，69.49，63.11，55.16，52.41，38.83，36.40，33.64，29.42，28.82，23.62，21.01，20.55，19.93，19.39，18.35，15.62，10.73。MS ESI m/z C31H42F5N4O6S[M+H]+：計算值693.3，實測值693.3。
實施例19 化合物19的合成
Figure 109116404-A0305-02-0115-183
在室溫下將鈉氫(60%，8g，200mmol)加入HO-PEG9-OMe(42.8g，100mmol)的四氫呋喃(1L)的溶液中。攪拌30分鐘後，將溴乙酸叔丁酯(48.8g，250mmol)加入，在室溫下攪拌1小時，然後倒入冰水中，用二氯甲烷萃取，有機層用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥。矽膠柱層析純化(0-5%甲醇/二氯甲烷)得到化合物19，為黃色油狀物狀物(32g，59%產率)。
實施例20 化合物20的合成
Figure 109116404-A0305-02-0115-184
將化合物432(40g，73.8mmol)溶解在二氯甲烷(400mL)中，然後加入甲酸(600mL)，25℃攪拌過夜。減壓蒸餾除去所有的揮發物，得到黃色油狀物(36g，約100%產率)。ESI m/z C21H43O12[M+H]+：計算值487.27，實測值487.24。
實施例21 化合物21的合成
Figure 109116404-A0305-02-0116-186
將化合物20(36g，73.8mmol)溶解在二氯甲烷(640mL)中，依次加入草醯氯(100mL)和DMF(52g，0.74mmol)。將得到的溶液在室溫下攪拌4小時，減壓蒸餾除去所有的揮發物，得到黃色油狀物。
實施例22 化合物22的合成
Figure 109116404-A0305-02-0116-187
將Z-L-Lys-OH(41.4g，147.6mmol)、碳酸鈉(23.4g，221.4mmol)和NaOH(5.9g，147.6mmol)溶解於水(720mL)中，冷卻至0℃，然後加入化合物21(37.2g，73.8mmol)的四氫呋喃溶液(20mL)。得到的混合物在室溫下攪拌1小時，減壓蒸餾除去THF，在冰浴下用濃鹽酸調節至pH 3。溶液用二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，得到黃色油狀物(55g，99%產率)。ESI m/z C35H60N2O15[M+H]+：計算值749.40，實測值749.39。
實施例23 化合物23的合成
Figure 109116404-A0305-02-0116-188
向Boc-L-酪胺酸甲酯(2.2kg，7.45mol)，碳酸鉀(1.54kg，11.2mol)和碘化鉀(48g，0.29mol)的乙腈(8.8L)溶液中緩慢加入 苄基溴(1.33kg，7.78mol)。室溫攪拌過夜，加入水(8L)溶解固體，用乙酸乙酯(2×4L)萃取。合併後的有機相用水(4L)洗，飽和食鹽水(4L)洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮後用石油醚(20L)打漿，得白色固體98(2.73kg，95%產率)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.43(d，J=7.0Hz，2H)，7.38(t，J=7.4Hz，2H)，7.32(t，J=7.2Hz，1H)，7.04(d，J=8.5Hz，2H)，6.91(d，J=8.6Hz，2H)，5.04(s，2H)，4.55(d，J=6.9Hz，1H)，3.71(s，3H)，3.03(qd，J=14.0，5.8Hz，2H)，1.43(s，9H)。MS ESI m/z C22H28NO5[M+H]+：計算值386.19，實測值386.19。
實施例24 化合物24的合成
Figure 109116404-A0305-02-0117-189
向2.4L的乙醇和2.4L的二氯甲烷的混合溶劑中加入NaBH4(122g，3.2mol)和LiCl(136g，3.2mol)，冷卻至0℃。加入化合物23(616g，1.6mol)的二氯甲烷(2.4L)溶液，加畢，向反應液再加入2.4L的二氯甲烷，自然升至室溫，有大量氣泡產生，攪拌過夜。將反應液用水(6L)稀釋，攪拌30分鐘後，水相用二氯甲烷(2L×2)萃取，合併有機相，用水(2L)洗、鹽水(2L)洗，乾燥過濾，濃縮得白色固體542g(產率95%)。
實施例25 化合物25的合成
Figure 109116404-A0305-02-0117-190
將草醯氯(1.02kg，8.0mol)溶解在二氯甲烷(4L)中，冷 卻至-75℃，滴加DMSO(1.25kg，16mol)的二氯甲烷(400mL)溶液，維持溫度在-65℃以下，滴加完成後攪拌30分鐘，再滴加化合物24(1.90kg，5.33mol)的二氯甲烷(8L)溶液，滴加完成後溶液溫度升高至約-65℃，攪拌30分鐘後，繼續滴加三乙胺(1.62kg，16mol)，維持溫度在-50℃以下，滴加完成後攪拌15分鐘。讓反應緩慢升溫，持續攪拌約1小時，反應液升溫至約-30℃，TLC監測顯示反應完成。向反應液中加入水(6L)，攪拌後分層，將水層用二氯甲烷(2L)洗，合併有機層，用10%的HCl(4L)和鹽水(2L)各洗一次，乾燥，過濾濃縮。將濃縮液用5：1石油醚/乙酸乙酯打漿，真空抽濾，得淡黃色固體1.36kg(72%產率)。
實施例26 化合物26的合成
Figure 109116404-A0305-02-0118-191
將2-溴丙酸叔丁酯(255g，1.22mol)和三苯基膦(320g，1.22mol)的乾燥乙腈(1L)溶液在室溫攪拌18小時。減壓旋去乙腈後加入甲苯使白色固體析出。傾倒出甲苯後將白色固體溶於二氯甲烷(1L)並轉移至分液漏斗。加入10% NaOH水溶液(1L)，搖晃後有機相很快變黃。分出有機相，水相用二氯甲烷(1L)反萃一次。合併二氯甲烷相，飽和食鹽水(400mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮得葉立德26(280g，58%)，為一黃色固體。
實施例27 化合物27的合成
Figure 109116404-A0305-02-0118-193
向化合物25(450g，1.27mol)的乾燥二氯甲烷(3L)溶液中加入葉立德26(546g，1.40mmol)。室溫攪拌過夜。TLC監測反應完 全後，經柱層析(10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化得化合物27(444g，75%產率)，為一白色固體。ESI m/z C28H38NO5[M+H]+：計算值468.27，實測值468.22。
實施例28 化合物28的合成
Figure 109116404-A0305-02-0119-194
將化合物27(63g，0.13mol)溶於甲醇(315mL)，加入Pd/C(10wt%，6.3g)，在氫氣(1atm)環境下室溫攪拌過夜。過濾除去催化劑後，濃縮濾液得化合物28(45.8g，93%產率)。
實施例29 化合物29的合成
Figure 109116404-A0305-02-0119-195
在室溫下向化合物28(390g，1.03mol)的四氫呋喃(4L)溶液中加入亞硝酸叔丁酯(1.06kg，10.3mol)。攪拌過夜後減壓濃縮除去四氫呋喃，殘留物經柱層析(10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化得化合物29(314g，72%產率)，為一亮黃色固體。
實施例30 化合物30的合成
Figure 109116404-A0305-02-0119-196
在氮氣保護下向化合物30(166g，0.392mol)的乙酸乙酯(500mL)溶液中加入Pd/C(10wt%，16g)。通入氫氣，真空置換三次。反應液在氫氣(1atm)環境中於室溫攪拌16小時。矽藻土過濾，濃縮得化合物30(146g，97%產率)，為一黃色泡沫狀固體。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 6.62(d，J=7.9Hz，1H)，6.55(s，1H)，6.43(d，J= 7.3Hz，1H)，4.39(dd，J=53.0，44.2Hz，1H)，3.77(s，4H)，2.72-2.29(m，3H)，1.83-1.58(m，1H)，1.40(d，J=7.6Hz，18H)，1.24(s，1H)，1.06(t，J=5.7Hz，3H)。MS ESI m/z C21H35N2O5[M+H]+：計算值394.25，實測值395.25。
實施例31 化合物31的合成
Figure 109116404-A0305-02-0120-197
將HATU(39.9g，105mmol)加入到4-(((苄氧基)羰基)胺基)丁酸(26.1g，110mmol)的DMF(300mL)溶液。在室溫下攪拌30分鐘後，將該反應混合物加入到化合物30(39.4g，100mmol)和三乙胺(20.2g，200mmol)的DMF(300mL)溶液。反應在室溫攪拌2小時，用水稀釋，經乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，硫酸鈉乾燥。濃縮後通過矽膠柱層析純化(20-70%乙酸乙酯/石油醚)，得到白色固體(45g，產率73%)。ESI m/z C33H48N3O8[M+H]+：計算值614.34，實測值614.15。
實施例32 化合物32的合成
Figure 109116404-A0305-02-0120-198
將化合物31(100g，163mmol)溶解在甲醇(500mL)中，加入Pd/C催化劑(10wt%，10g)，在室溫氫化反應(1atm H2)過夜。將催化劑過濾掉後，濾液減壓濃縮，得到棕色泡沫狀固體32(75.8g，產率97%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.11(s，1H)，6.83(d，J=10.3Hz，2H)，5.04-4.52(m，6H)，3.90-3.56(m，1H)，2.81(d，J= 5.3Hz，2H)，2.63(dd，J=12.5，6.1Hz，2H)，2.54-2.26(dd，J=14.0，7.6Hz，4H)，1.94-1.64(m，3H)，1.44-1.36(m，18H)，1.08(d，J=6.9Hz，3H)。ESI m/z C25H42N3O6[M+H]+：計算值480.30，實測值480.59。
實施例33 化合物33的合成
Figure 109116404-A0305-02-0121-199
在0℃，向化合物22(130g，174mmol)的DMF(500mL)溶液中加入三乙胺(66mL，474mmol)和HATU(72g，190mmol)，然後將反應混合物升溫至室溫，攪拌2小時。將化合物32(75.8g，158mmol)的DMF(500mL)溶液在0℃下加入到上述溶液中，反應在室溫下攪拌1小時。將反應液倒入水(4L)中，用乙酸乙酯萃取(3×500mL)，合併有機層，用飽和食鹽水洗(2L)，硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後粗品33(190g)直接用於下一步反應。ESI m/z C60H100N5O20[M+H]+：計算值1210.69，實測值1210.69。
實施例34 化合物34的合成
Figure 109116404-A0305-02-0121-200
將上一步反應得到的粗品33(190g)溶解在甲醇(900mL)中，加入Pd/C催化劑(10wt%，19g)，和在室溫氫化(1atm H2)反應過夜。濾除催化劑，將濾液減壓濃縮，用矽膠柱純化(0-10%甲醇/二氯甲烷)得到一棕色油狀物(105g，兩步產率62%)。ESI m/z C52H95N5O18 [M+H]+：計算值1077.65，實測值1077.65。
實施例35 化合物35的合成
Figure 109116404-A0305-02-0122-201
室溫下在化合物34(105g，97.1mmol)的EtOH(5.3L)溶液中，加入化合物4-馬來醯亞胺基丁酸-N-琥珀醯亞胺酯(54.4g，194.2mmol)和0.1N磷酸二氫鈉溶液(1.1L)，反應在室溫下攪拌過夜。減壓蒸餾除去EtOH，殘留水溶液倒入水(3L)中，然後用乙酸乙酯萃取(4×500mL)，合併有機相，用飽和食鹽水洗(2L)，硫酸鈉乾燥、濃縮，粗產品用矽膠柱純化(0-10%甲醇/二氯甲烷)得到一黃色油狀物(100g，83%產率)。1H NMR(500MHz，DMSO)δ 9.53(s，0.7H)，9.52(s，0.3H)，9.22(s，0.7H)，9.21(s，0.3H)，7.95-7.87(m，2H)，7.65(t，J=5.9Hz，1H)，7.51-7.44(m，1H)，6.99(s，2H)，6.77-6.66(m，2H)，6.65-6.57(m，1H)，4.13(dt，J=5.4，8.1Hz，1H)，3.84(s，2H)，3.55(s，2H)，3.52(s，2H)，3.51-3.45(m，30H)，3.42(dd，J=5.8，3.7Hz，2H)，3.38(t，J=6.9Hz，2H)，3.23(s，3H)，3.14-3.01(m，4H)，2.64-2.44(m，1H)，2.41-2.22(m，4H)，2.16-2.04(m，2H)，1.76-1.64(m，4H)，1.64-1.52(m，2H)，1.52-1.35(m，2H)，1.37(s，3H)，1.35(s，6H)，1.31(s，9H)，0.97(t，J=8.5Hz，3H)。13C NMR(126MHz，DMSO)δ 175.35(次要)，174.88，171.69，171.42，171.29，171.10，169.04，155.19(次要)，155.05，145.97，134.47，129.36，126.00，125.20，122.92，115.69，79.32(次要)， 79.17，77.35(次要)，77.27，71.29，70.25，69.95，69.79，69.60，69.53，58.06，52.57，50.13，49.55(次要)，41.25，38.12，37.94，37.45，36.84，36.80(次要)，33.38，32.37，31.86，28.96，28.28，28.23，27.69，27.57，25.42，24.19，22.86，18.04，16.49(次要)。ESI m/z C60H101N6O21[M+H]+：計算值1241.7，實測值1241.8。
實施例36 化合物36的合成
Figure 109116404-A0305-02-0123-204
將化合物35(31.5g，25.4mmol)溶解在二氯甲烷(125mL)中，加入三氟乙酸(125mL)，加畢，室溫反應3小時。反應結束，將反應液在旋轉蒸發儀上濃縮至無溶劑蒸出。再在真空油泵上真空濃縮至重量基本不變，得粗品。於粗品中加入乙醚(200mL)萃洗，分出產物層，減壓濃縮至無溶劑蒸出。再在真空油泵上真空濃縮，直至其重量基本不變，得到化合物36(36.0g，含溶劑)。1H NMR(500MHz，DMSO)δ 9.18(s，1H)，7.97-7.87(m，2H)，7.79(s，2H)，7.71-7.61(m，2H)，7.00(s，2H)，6.85-6.73(d，J=5.4Hz，2H)，4.17-4.07(m，1H)，3.84(s，2H)，3.55(s，2H)，3.52(s，2H)，3.50(s，30H)，3.42(dd，J=5.8，3.7Hz，2H)，3.39(t，J=7.0Hz，2H)，3.32-3.23(m，1H)，3.23(s，3H)，3.14-3.01(m，4H)，2.82-2.71(m，1H)，2.71-2.61(m，1H)，2.58-2.50(m，1H)，2.38(t，J=7.3Hz，2H)，2.11(dt，J=7.8，3.0Hz，2H)，1.88-1.77(m，1H)，1.76-1.64(m，4H)，1.59(dt，J=15.1，5.8Hz，1H)，1.53-1.32(m，4H)，1.31-1.11(m， 2H)，1.05(d，J=7.0Hz，2.1H)，1.00(d，J=6.9Hz，0.9H)。13C NMR(126MHz，DMSO)δ 176.78(次要)，176.55，171.74，171.42，171.34，171.12，169.07，146.63(次要)，146.57，134.49，126.51，126.31，125.19，122.85，115.80，71.31，70.27，69.96，69.81，69.61，69.55，58.07，54.93(次要)，52.64，50.72，50.13(次要)，38.30(次要)，38.14，37.95，36.85，35.75，35.38(次要)，34.87，34.81(次要)，33.46，32.38，31.83，28.98，25.40，24.21，22.89，17.49，16.74(次要)。ESI m/z C51H85N6O19[M+H]+：計算值1085.6，實測值1085.4。
實施例37 化合物37的合成
Figure 109116404-A0305-02-0124-205
向反應瓶中投加化合物36(36.0g，以25.4mmol計)的DMF(60mL)溶液，冰水浴冷卻至5℃。加入化合物18(19.3g，27.9mmol)的DMF(150mL)溶液，然後滴加DIPEA(25mL，139mmol)。滴加完畢，撤冰水浴，升至室溫，攪拌18小時。反應結束後，將反應液真空油泵減壓濃縮至無溶劑蒸出，濃縮完畢，將濃縮液用二氯甲烷稀釋，冰水浴冷卻至5℃，緩慢滴加甲酸，調pH至3.0-4.0。之後，濃縮至無溶劑蒸出，將殘留物轉移至矽膠柱上，用正己烷/乙酸乙酯/甲酸和二氯甲烷/甲醇/甲酸洗脫，濃縮得到純化粗品。用水/甲醇/甲酸溶解純化粗品，用製備HPLC進一步純化，水/乙腈/甲酸洗脫，收集合適的洗脫液，濃縮後，用水稀釋濃縮液，平均分配至凍乾瓶中凍乾，得淡黃色泡沫狀固體(24g， 60%產率)。1H NMR(500MHz，DMSO)δ 9.60(bs，1H)，9.20(s，1H)，8.19(s，0.33H)，8.17(s，0.67H)，8.02(d，J=9.0Hz，0.33H)，7.98(d，J=9.0Hz，0.67H)，7.94-7.83(m，2H)，7.65(t，J=5.8Hz，1H)，7.63(s，1H)，7.56(s，0.33H)，7.55(s，0.67H)，6.99(s，2H)，6.82-6.74(m，1H)，6.74-6.67(m，1H)，5.62-5.54(m，1H)，4.69-4.59(m，1H)，4.39(s，1H)，4.25-4.05(m，2H)，3.85(s，2H)，3.55(s，2H)，3.52(s，2H)，3.50(s，30H)，3.44-3.36(m，4H)，3.23(s，3H)，3.14-3.02(m，4H)，2.96(s，3H)，2.83-2.71(m，1H)，2.71-2.57(m，1H)，2.44-2.32(m，3H)，2.32-2.14(m，2H)，2.14-2.05(m，2H)，2.12(s，6H)，2.09(s，3H)，1.99-1.65(m，7H)，1.64-1.53(m，2H)，1.53-1.32(m，5H)，1.31-1.14(m，2H)，1.11(s，3H)，1.05(d，J=7.2Hz，2H)，1.03(d，J=6.9Hz，1H)，0.99(s，3H)，0.93(d，J=6.4Hz，3H)，0.86(d，J=6.7Hz，3H)，0.82(t，J=7.3Hz，3H)，0.67(d，J=6.4Hz，3H)。13C NMR(126MHz，DMSO)δ 177.52(次要)，177.01，175.44，172.75，171.69，171.43，171.29，171.09，169.74，169.55(次要)，169.46，169.04，159.92(次要)，159.88，149.86，149.74(次要)，146.07，134.46，129.13(次要)，129.08，126.12(次要)，126.07，125.18，124.28(次要)，124.11，122.95，122.86(次要)，115.67，71.30，70.26，69.96，69.80，69.60，69.54，69.48，63.01，58.06，55.09，52.58，52.39，49.03，47.96(次要)，40.35，38.89，38.11，37.94，37.39，36.84，36.53，36.02，35.78(次要)，33.87，33.38，32.38，31.86，29.02，28.97，25.37，24.19，23.60，22.86，21.15，20.62， 19.99，19.41，18.34，18.11，16.17(次要)，15.69，10.81。ESI m/z C76H125N10O24S[M+H]+：計算值1593.9，實測值1593.8。
實施例38 化合物38的合成
Figure 109116404-A0305-02-0126-207
在在氮氣保護下，將(S)-4-異丙基噁唑烷-2-酮(400g，3.09mol)溶於無水四氫呋喃(8L)中，降溫至-70℃左右，將正丁基鋰(2.5M正己烷溶液，1.36L，3.4moL)滴加進反應釜中，滴加完成後在-70℃下反應1小時。然後滴加丙醯氯(315g，3.4mol)，滴加完畢後，在-70℃下反應1小時，緩慢升溫至室溫，將反應液倒入冰的飽和食鹽水溶液(7L)中，乙酸乙酯萃取(3×2L)，合併有機相，用水(2L)洗滌一次，飽和食鹽水溶液(2L)洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾，用矽膠柱純化(純石油醚至5：1石油醚/乙酸乙酯)，得到無色油狀物500g，產率87%。MS ESI m/z C9H16NO3[M+H]+：計算值186.10，實測值186.10。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.48-4.39(m，1H)，4.27(t，J=8.7Hz，1H)，4.21(dd，J=9.1，3.1Hz，1H)，3.06-2.82(m，2H)，2.38(dtd，J=14.0，7.0，4.0Hz，1H)，1.17(t，J=7.4Hz，3H)，0.90(dd，J=17.0，7.0Hz，6H)。
實施例39 化合物39的合成
Figure 109116404-A0305-02-0126-208
在氮氣保護下，將化合物38(92.6g，0.50mol)溶於無水二氯甲烷(1.5L)中，降溫至-10℃，將二異丙基乙基胺(70.5g，0.54 mol)和n-Bu2BOTf(1.0M二氯甲烷溶液，500mL，0.50mol)滴加進反應瓶中，0℃下反應1小時，再降溫至-78℃，將化合物25(161g，0.45mol)的二氯甲烷(1L)溶液滴加進反應瓶中，溶液溫度不超過-70℃，滴加完畢反應2小時，然後緩慢升溫至室溫，並反應過夜。次日，將磷酸鹽緩衝液(0.1N，pH 7.0，2L)加進反應瓶中，分液，水相用二氯甲烷(2×500mL)萃取，合併有機相，用飽和食鹽水溶液(200mL)洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。將粗品溶於甲醇(2L)中，降溫至0℃，將H2O2(30%水溶液，500mL)滴入，5℃下反應1小時，加水(3L)，用二氯甲烷萃取(3×800mL)，合併有機相，水(500mL)洗，飽和NaHCO3溶液(500mL)洗，飽和食鹽水(500mL)洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，矽膠柱純化(純石油醚至5：1石油醚/乙酸乙酯)，得到白色固體150g，產率60%。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.36(ddd，J=24.2，14.2，7.1Hz，5H)，7.12(d，J=8.4Hz，2H)，6.90(d，J=8.5Hz，2H)，5.02(s，2H)，4.69(d，J=9.0Hz，1H)，4.45(d，J=4.1Hz，1H)，4.33(t，J=8.4Hz，1H)，4.15(d，J=8.6Hz，1H)，3.90(dd，J=16.6，8.0Hz，1H)，3.85-3.77(m，2H)，2.81(d，J=7.6Hz，2H)，2.27(dd，J=11.4，6.7Hz，1H)，1.35(s，9H)，0.89(dd，J=14.3，6.9Hz，6H)。MS ESI m/z C30H41N2O7[M+H]+：計算值541.28，實測值541.30。
實施例40 化合物40的合成
Figure 109116404-A0305-02-0127-210
在氮氣保護下，將化合物39(200g，0.37mol)溶於無水四 氫呋喃(3.5L)中，加入二硫羰基咪唑(198g，1.11mol)，回流反應8小時，補加二硫羰基咪唑(65g，0.37mol)，反應過夜。次日冷卻反應至室溫，減壓濃縮除去溶劑，矽膠柱純化(純石油醚至5：1石油醚/乙酸乙酯)，得到油狀液體(170g，產率83%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 8.41(s，1H)，7.67(s，1H)，7.36(dt，J=16.0，6.9Hz，6H)，7.09(s，1H)，7.05(d，J=8.4Hz，2H)，6.86(d，J=8.4Hz，2H)，6.32(d，J=9.5Hz，1H)，5.01(s，2H)，4.56-4.43(m，2H)，4.32(ddd，J=16.2，15.6，7.8Hz，3H)，4.19(d，J=8.7Hz，1H)，2.96(dd，J=14.6，4.4Hz，1H)，2.49(dd，J=14.5，10.5Hz，1H)，2.29(td，J=13.4，6.7Hz，1H)，1.73(s，1H)，1.29(s，9H)，0.91(dd，J=13.9，6.9Hz，6H)。MS ESI m/z C34H43N4O7S[M+H]+：計算值651.27，實測值651.39。
實施例41 化合物41的合成
Figure 109116404-A0305-02-0128-211
在氮氣保護下，將化合物40(210g，323mmol)溶於無水甲苯(3L)中，在氮氣保護下加入三正丁基錫烷(182g，646mmol)和偶氮二異丁腈(0.5g，3.23mmol)，回流反應2小時，冷卻至室溫，旋乾，矽膠柱純化(純石油醚至5：1石油醚/乙酸乙酯)，得到油狀物(141g，83%產率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.36(ddd，J=24.5，14.5，7.1Hz，5H)，7.08(d，J=8.5Hz，2H)，6.90(d，J=8.5Hz，2H)，5.04(d，J=5.1Hz，2H)，4.48(d，J=4.2Hz，1H)，4.33(t，J=8.4Hz， 1H)，4.22(d，J=9.7Hz，1H)，4.15(d，J=8.8Hz，1H)，3.81(s，2H)，2.73(dd，J=14.1，5.9Hz，1H)，2.61(dd，J=14.0，7.2Hz，1H)，2.29(dq，J=13.5，6.8Hz，1H)，2.11-2.00(m，1H)，1.60(dd，J=15.2，6.2Hz，2H)，1.35(s，9H)，1.20(d，J=6.9Hz，3H)，0.89(dd，J=14.0，6.9Hz，6H)。MS ESI m/z C30H41N2O6[M+H]+：計算值525.28，實測值525.37。
實施例42 化合物42的合成
Figure 109116404-A0305-02-0129-212
將化合物41(208g，390mmol)溶於四氫呋喃(2.1L)和水(0.7L)的混合液中，冰浴下滴加LiOH(23.7g，0.99mol)的H2O2(30%水溶液，336mL，2.97mol)溶液，控制溫度不超過5℃，反應3小時後，滴加入亞硫酸鈉(1.5M，2L)溶液，用2N HCl調節pH至4，乙酸乙酯萃取(3×800mL)，合併有機相，水洗(500mL)和飽和食鹽水(500mL)洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，矽膠柱純化(純石油醚至3：1石油醚/乙酸乙酯)，得到油狀物(158g，產率96%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.46-7.28(m，5H)，7.07(d，J=7.7Hz，2H)，6.91(d，J=7.8Hz，2H)，5.04(s，2H)，4.52(d，J=8.5Hz，1H)，3.87(d，J=41.8Hz，1H)，2.82-2.43(m，3H)，1.85(t，J=12.2Hz，1H)，1.41(s，9H)，1.17(d，J=6.9Hz，3H)。MS ESI m/z C24H32NO5[M+H]+：計算值414.22，實測值414.21。
實施例43 化合物43的合成
Figure 109116404-A0305-02-0129-213
將化合物42(158g，0.38mmol)溶於甲醇(1.5L)中，加入Pd/C(10wt%，15g)，催化加氫(1atm H2)反應16小時，過濾，濃縮濾液得到油狀物(123g，產率100%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.00(d，J=7.5Hz，2H)，6.80(s，2H)，4.51(d，J=9.0Hz，1H)，3.88(s，1H)，2.66(dd，J=65.6，22.6Hz，4H)，1.88(t，J=12.2Hz，1H)，1.42(s，9H)，1.14(d，J=6.6Hz，3H)。MS ESI m/z C17H26NO5[M+H]+：計算值324.17，實測值324.16。
實施例44 化合物44的合成
Figure 109116404-A0305-02-0130-214
將化合物43(113g，0.35mol)溶於無水四氫呋喃(1.5L)中，滴加亞硝酸叔丁酯(360g，3.5mol)，室溫反應3小時，反應完成後，濃縮反應液，矽膠柱純化(純石油醚至2：1石油醚/乙酸乙酯)得到黃色固體(85g，產率61%)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ 12.00(s，1H)，10.68(s，1H)，7.67(s，1H)，7.34(d，J=8.4Hz，1H)，7.03(d，J=8.4Hz，1H)，6.69(d，J=8.9Hz，1H)，3.56(d，J=3.8Hz，1H)，2.67(dd，J=13.5，5.1Hz，1H)，2.41(dd，J=13.8，6.6Hz，1H)，1.78-1.65(m，1H)，1.27(s，9H)，1.18(s，1H)，1.05(d，J=7.1Hz，3H)。MS ESI m/z C17H25N2O7[M+H]+：計算值369.15，實測值369.14。
實施例45 化合物45的合成
Figure 109116404-A0305-02-0130-541
將化合物44(80g，217mmol)溶於甲醇(500mL)中，加入Pd/C(10wt%，2.0g)，催化加氫(1atm H2)反應1小時，過濾，旋乾得到白色固體(73g，產率93%)。MS ESI m/z C17H27N2O5[M+H]+：計算值339.18，實測值339.17。1H NMR(400MHz，MeOD)δ 6.60(d，J=7.9Hz，2H)，6.44(d，J=7.3Hz，1H)，3.71(d，J=6.3Hz，1H)，2.62-2.37(m，3H)，1.83(ddd，J=13.7，9.9，3.7Hz，1H)，1.39(s，9H)，1.13(d，J=7.1Hz，3H)。
實施例46 化合物46的合成
Figure 109116404-A0305-02-0131-218
將八甘醇單甲醚(115.2g，0.3mol)溶解於乾燥的四氫呋喃(3L)中。室溫下投入氫化鈉(60wt%，24g，0.6mol)，攪拌反應1小時後加入溴乙酸叔丁酯(146.3g，0.75mol)。室溫反應1小時，將反應液加至4L二氯甲烷中，攪拌下加入碎冰2kg，分出水相，用1L二氯甲烷萃取，合併有機相，水洗，濃縮，柱層析純化(20%乙酸乙酯/石油醚，然後0至5%甲醇/二氯甲烷)得產物108g(產率72%)。
實施例47 化合物47的合成
Figure 109116404-A0305-02-0131-219
向無水甲酸(1L)和二氯甲烷(500mL)的混合溶劑中投加化合物46(210g，0.422mol)。室溫攪拌過夜，濃縮得到產物200g(產率100%)。
實施例48 化合物48的合成
Figure 109116404-A0305-02-0131-220
將化合物48(198g，0.422mol)溶解於2.6L二氯甲烷中。室溫下滴入0.5mL的DMF和草醯氯(275mL)。攪拌反應3小時，濃縮得到產物210g。
實施例49 化合物49的合成
Figure 109116404-A0305-02-0132-221
將化合物Cbz-L-賴胺酸(236.3g，0.844mol)，碳酸鈉(89.5g，0.844mol)和氫氧化鈉(33.8g，0.844mol)在1.6L水中混合。冰鹽浴降溫至零度，滴加化合物48(210g，粗品，以0.422mol計)的四氫呋喃(160mL)溶液。加完，室溫反應1小時，加乙酸乙酯1L，攪拌後分出水相，濃鹽酸調pH至3至4，二氯甲烷萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濃縮得產物290g(產率97%)。
實施例50 化合物50的合成
Figure 109116404-A0305-02-0132-223
將化合物49(182.5g，0.26mol)溶於2L二氯甲烷中。室溫下加入五氟苯酚(95.4g，0.52mol)和DIC(131g，1.04mol)。攪拌反應1小時，濃縮得到產物粗品430g。
實施例51 化合物51的合成
Figure 109116404-A0305-02-0132-224
將4-胺基丁酸叔丁酯(62g，0.39mol)溶於1.5L的DMF中。冰水降溫，加入DIPEA(134.2g，1.04mol)，保持10度至20度下慢慢加入化合物50(430g，粗品，以0.26mol計)。室溫反應1小時，濃縮，加 二氯甲烷稀釋，水洗，水相用二氯甲烷萃取。合併有機相並用0.2N鹽酸洗，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。柱層析純化(25%-100%乙酸乙酯/石油醚，再0至5%甲醇/二氯甲烷)得到產物180g，產率82%。
實施例52 化合物52的合成
Figure 109116404-A0305-02-0133-225
將化合物51(78g，92.3mmol)，鈀碳(10wt%，13g)混合於500mL甲醇中。室溫下在氫氣球下反應過夜。過濾，濃縮濾液，柱層析純化(0至20%甲醇/二氯甲烷)，得產物70.2g(產率92%)。
實施例53 化合物53的合成
Figure 109116404-A0305-02-0133-226
將化合物52(17.3g，94.2mmol)溶解於500mL二氯甲烷中。室溫下依次加入五氟苯酚(34.7g，188.5mmol)和DIC(47.5g，377mmol)。攪拌反應1小時，濃縮得到粗產物105g。
實施例54 化合物54的合成
Figure 109116404-A0305-02-0133-227
將化合物52(67g，94.2mmol)溶於0.75L的DMF中，冰水降溫，加入DIPEA(48.6g，376.8mmol)，保持反應液在10度至20度，慢慢加入化合物53(105g，粗品，以94.2mmol計)。室溫反應1小時，濃 縮，加二氯甲烷稀釋，水洗，水相用二氯甲烷萃取。合併有機相，用0.2N鹽酸洗，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。柱層析純化(50%-100%乙酸乙酯/石油醚，再10%甲醇/二氯甲烷)得到產物80.5g，產率98%。
實施例55 化合物55的合成
Figure 109116404-A0305-02-0134-229
向無水甲酸(400mL)和二氯甲烷(200mL)的混合溶劑中投加化合物54(80.5g，91.9mmol)。室溫反應過夜，濃縮，加二氯甲烷稀釋，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，柱層析純化(0%至20%甲醇/二氯甲烷)，得到產物70g(產率93%)。
實施例56 化合物56的合成
Figure 109116404-A0305-02-0134-230
將化合物55(104g，0.127mol)溶於二氯甲烷(1000mL)中，在室溫下，依次加入N-羥基琥珀醯亞胺(16g，0.14mol)和EDC．HCl(37g，0.2mol)。室溫下反應1小時，將反應液用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到產物120g(產率100%)。
實施例57 化合物57的合成
Figure 109116404-A0305-02-0135-231
將化合物56(120g，127mmol)和化合物45(45.0g，133mmol)在1L四氫呋喃中混合。升溫至回流，過夜後濃縮，加二氯甲烷2L稀釋，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。在粗品中加水1.5L，乙酸乙酯1.5L，攪拌半小時，分出水相，乙酸乙酯層再用水萃取兩次(600mL×2)，合併水相，再用乙酸乙酯(700mL)洗去雜質。水相中加氯化鈉至飽和，用二氯甲烷萃取(1L×2)，合併二氯甲烷，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。柱層析純化(0%至20%甲醇/二氯甲烷)，得產物83.6g(產率58%)。1H NMR(600MHz，DMSO)δ 9.51(bs，1H)，9.23(s，1H)，7.97-7.83(m，1H)，7.64(t，J=5.8Hz，1H)，7.46(s，1H)，6.99(s，1H)，6.73(s，1H)，6.61(d，J=8.7Hz，0H)，4.14(dt，J=5.4，8.3Hz，1H)，3.84(s，2H)，3.55(s，2H)，3.52(s，2H)，3.51-3.46(m，26H)，3.42(dd，J=5.7，3.8Hz，2H)，3.39(t，J=7.0Hz，2H)，3.23(s，3H)，3.14-3.01(m，4H)，2.54(dd，J=13.5，7.0Hz，1H)，2.45(dd，J=13.5，7.0Hz，1H)，2.41-2.32(m，3H)，2.11(td，J=7.1，1.9Hz，2H)，1.75-1.64(m，4H)，1.64-1.54(m，1H)，1.52-1.43(m，1H)，1.43-1.35(m，2H)，1.32(s，9H)，1.32-1.15(m，4H)，1.02(d，J=7.1Hz，3H)。13C NMR(151MHz，DMSO)δ 177.18，171.68，171.43，171.28，171.08，169.02，155.15，145.99，134.45，129.41，125.91，125.30，123.04，115.71， 77.29，71.29，70.25，69.95，69.79，69.59，69.53，58.05，52.57，50.33，40.71，38.12，37.93，37.64，36.83，35.92，33.35，32.37，31.85，28.95，28.26，27.86(次要)，25.39，24.18，22.85，18.10。ESI m/z C54H89N6O20[M+H]+：計算值1141.6，實測值1141.9。
實施例58 化合物58的合成
Figure 109116404-A0305-02-0136-233
將化合物57(59.0g，51.7mmol)溶解在二氯甲烷(345mL)中，加入三氟乙酸(172mL)，加畢，室溫反應2小時。反應結束，將反應液在旋轉蒸發儀上濃縮至無溶劑蒸出。再在真空油泵上真空濃縮至重量基本不變，得粗品。於粗品中加入乙醚(600mL)萃洗，分出產物層，減壓濃縮至無溶劑蒸出。再在真空油泵上真空濃縮，直至其重量基本不變，得到化合物58(75.5g，含溶劑)。1H NMR(600MHz，DMSO)δ 9.82(s，1H)，9.18(s，1H)，7.95-7.88(m，2H)，7.83(s，2H)，7.67(s，1H)，7.66(t，J=6.1Hz，1H)，6.99(s，2H)，6.84-6.78(m，2H)，4.16-4.09(m，1H)，3.84(s，2H)，3.55(s，2H)，3.52(s，2H)，3.52-3.44(m，26H)，3.42(dd，J=5.6，3.9Hz，2H)，3.39(t，J=7.0Hz，2H)，3.33-3.25(m，1H)，3.23(s，3H)，3.14-3.02(m，4H)，2.76(dd，J=13.9，6.1Hz，1H)，2.65(dd，J=13.9，6.1Hz，1H)，2.55(dq，J=14.0，7.0Hz，1H)，2.38(t，J=7.3Hz，2H)，2.14- 2.08(m，2H)，1.82(ddd，J=14.1，8.7，5.5Hz，1H)，1.74-1.65(m，4H)，1.64-1.55(m，1H)，1.52-1.43(m，2H)，1.43-1.34(m，2H)，1.30-1.13(m，2H)，1.05(d，J=7.0Hz，3H)。13C NMR(151MHz，DMSO)δ 176.54，171.73，171.43，171.34，171.11，169.07，146.59，134.48，126.50，126.33，125.19，122.85，115.84，71.30，70.27，69.96，69.81，69.61，69.55，58.06，52.65，50.72，38.31，38.13，37.95，36.85，35.75，34.88，33.45，32.38，31.82，28.97，25.40，24.20，22.88，17.48。ESI m/z C49H81N6O18[M+H]+：計算值1041.6，實測值1041.7。
實施例59 化合物59的合成
Figure 109116404-A0305-02-0137-571
向反應瓶中投加化合物58(75.5g，以51.7mmol計)的DMF(160mL)溶液，冰水浴冷卻至5℃。加入化合物18(35.8g，51.7mmol)的DMF(240mL)溶液，然後滴加DIPEA(36.8g，285mmol)。滴加完畢，撤冰水浴，升至室溫，攪拌10小時。反應結束後，將反應液真空油泵減壓濃縮至無溶劑蒸出，濃縮完畢，將濃縮液用二氯甲烷稀釋，冰水浴冷卻至5℃，緩慢滴加甲酸，調pH至3.0-4.0。之後，在旋轉蒸發儀上濃縮至無溶劑蒸出，將殘留物轉移至矽膠柱上，用正己烷/乙酸乙酯/甲酸和二氯甲烷/甲醇/甲酸洗脫，濃縮得到純化粗品。用水/甲醇/甲酸溶解純化粗品，用製備HPLC進一步純化，水/乙腈/甲酸洗脫，收集合適的洗脫 液，濃縮後，用水稀釋濃縮液，平均分配至凍乾瓶中凍乾，得淡黃色泡沫狀固體(48g，60%產率)。1H NMR(600MHz，DMSO)δ9.20(s，1H)，8.17(s，1H)，8.03-7.95(m，1H)，7.95-7.86(m，2H)，7.77-7.61(m，2H)，7.55(s，1H)，6.98(s，2H)，6.77(d，J=8.1Hz，1H)，6.71(d，J=8.1Hz，1H)，5.58(d，J=10.7Hz，1H)，4.65(dd，J=9.3，7.1Hz，1H)，4.40(s，1H)，4.18-4.08(m，2H)，3.85(s，2H)，3.55(s，2H)，3.52(s，2H)，3.51-3.47(m，26H)，3.44-3.36(m，4H)，3.23(s，3H)，3.14-3.02(m，4H)，2.96(s，3H)，2.75(dd，J=13.5，6.7Hz，1H)，2.63(dd，J=13.5，6.7Hz，1H)，2.43-2.32(m，3H)，2.31-2.23(m，1H)，2.23-2.09(m，3H)，2.13(s，6H)，2.09(s，3H)，1.88-1.73(m，3H)，1.75-1.65(m，4H)，1.65-1.53(m，2H)，1.53-1.44(m，3H)，1.44-1.34(m，2H)，1.31-1.15(m，2H)，1.12(s，3H)，1.05(d，J=6.9Hz，3H)，1.01(s，3H)，0.93(d，J=6.4Hz，3H)，0.86(d，J=6.6Hz，3H)，0.82(t，J=7.3Hz，3H)，0.67(d，J=6.1Hz，3H)。13C NMR(151MHz，DMSO)δ 177.05，175.28，172.76，171.74，171.47，171.34，171.11，169.78，169.49，169.09，159.91，149.88，146.10，134.47，129.10，126.11，125.23，124.12，122.97，115.72，71.33，70.30，69.99，69.83，69.63，69.57，69.52，63.21，58.08，55.05，52.63，52.49，49.07，40.37，38.89，38.14，37.97，37.43，36.87，36.50，36.06，33.91，33.41，32.41，31.87，29.06，28.99，25.40，24.22，23.66，22.88，21.08，20.63，20.00，19.43，18.41，18.13，15.68，10.81。ESI m/z C74H121N10O23S[M+H]+：計算值1549.8，實測值 1550.2。
實施例60 化合物60的合成
Figure 109116404-A0305-02-0139-236
將八甘醇單甲醚(10g，26mmol，1.0eq)溶於100mL無水二氯甲烷，加入DMAP(32mg，0.26mmol，0.01eq)，冰浴下滴加三乙胺(10.5g，104mmol，4.0eq)和TsCl(14.9g，78mmol，3.0eq)固體，完畢，反應10min，升溫至室溫反應過夜。次日，將反應液用1N HCl洗滌(100mL)，水洗(100mL)，鹽水洗(100mL)，無水硫酸鈉乾燥，旋乾，用少量二氯甲烷溶解，上樣過柱，洗脫液為5%-100%石油醚/乙酸乙酯和1%-3%甲醇/二氯甲烷，得到11.6g黃色油狀物，產率83%。ESI m/z C24H43O11S[M+H]+：計算值539.2，實測值539.2。
實施例61 化合物61的合成
Figure 109116404-A0305-02-0139-237
將化合物60(11.6g，21.5mmol，1.0eq)溶於20mL無水DMF中，加入二苄胺(5.5g，27.8mmol，1.5eq)，100℃反應過夜。次日，用300mL二氯甲烷稀釋，水洗(300mL×3)，鹽水洗(300mL)，無水硫酸鈉乾燥，旋乾，用少量二氯甲烷溶解，上樣過柱，洗脫液為5%-100%石油醚/乙酸乙酯，得到8.2g淺黃色油狀物，產率66%。ESI m/z C31H50NO8[M+H]+：計算值564.3，實測值564.3。
實施例62 化合物62的合成
Figure 109116404-A0305-02-0139-572
將化合物61(8.6g，15.2mmol，1.0eq)溶於100mL無水甲醇中，加入乾鈀碳催化劑(0.9g，10wt%)，加熱至回流回流，反應過 夜。次日，過濾反應液，用甲醇洗滌，旋乾，得到5.3g無色油狀物，產率90%。ESI m/z C17H38NO8[M+H]+：計算值384.3，實測值384.3。
實施例63 化合物63的合成
Figure 109116404-A0305-02-0140-239
將Z-L-谷胺酸叔丁酯(0.96g，2.86mmol)和化合物62(1.1g，2.86mmol)溶於DMF(20mL)中，0℃下加入HATU(1.2g，3.15mmol)和DIPEA(1mL，6.3mmol)，加完慢慢升至室溫反應1小時。將反應液倒入冰水中，用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合併有機相，水洗(30mL)、飽和碳酸氫鈉洗(30mL)、飽和食鹽水洗(30mL)，硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，用矽膠柱純化(流動相為甲醇/二氯甲烷)得到產品63(1.5g，產率75%)。ESI m/z C34H59N2O13[M+H]+：計算值703.4，實測值703.4。
實施例64 化合物64的合成
Figure 109116404-A0305-02-0140-241
將化合物63(0.66g，0.93mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入Pd/C(10wt%，60mg)，氫氣球下反應2小時。過濾濃縮得到化合物64(450mg，85%產率)。ESI m/z C26H53N2O11[M+H]+：計算值569.4，實測值569.4。
實施例65 化合物65的合成
Figure 109116404-A0305-02-0140-243
將化合物64(0.45g，0.79mmol)和4-馬來醯亞胺基丁酸-N-琥珀醯亞胺酯(0.33g，1.18mmol)溶於乙醇(5mL)中，加入NaH2PO4(0.1N，1mL)，室溫反應過夜。減壓濃縮除去大部分乙醇後加水(20mL)，用二氯甲烷萃取(3×30mL)，合併有機相，水洗(20mL)、鹽水洗(20mL)、硫酸鈉乾燥、過濾濃縮，粗品用矽膠柱純化(流動相為甲醇/二氯甲烷)得到化合物65(380mg，65%產率)。ESI m/z C34H60N3O14[M+H]+：計算值734.4，實測值734.4。
實施例66 化合物66的合成
Figure 109116404-A0305-02-0141-246
將化合物65(230mg，0.31mmol)溶於二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室溫反應1小時。濃縮後再用二氯甲烷帶3次，並用油泵抽乾，得到化合物66(208mg，100%產率)。ESI m/z C30H52N3O14[M+H]+：計算值678.3，實測值678.3。
實施例67 化合物67的合成
Figure 109116404-A0305-02-0141-247
將化合物66(208mg，0.3mmol)溶於二氯甲烷(5mL)中，加入五氟苯酚(113mg，0.6mmol)和EDC．HCl(117mg，0.6mmol)，加完後在室溫反應過夜。用二氯甲烷(20mL)稀釋，水洗(5mL)、硫酸鈉乾燥、過濾濃縮得到化合物67(252mg，100%產率)。ESI m/z C36H51F5N3O14[M+H]+：計算值844.3，實測值844.3。
實施例68 化合物68的合成
Figure 109116404-A0305-02-0142-248
將化合物45(7.3g,21.7mmol)和N-Boc-丙胺酸羥基琥珀醯亞胺酯(7.2g,21.7mmol)溶於乙醇(300mL)中，加入0.1N NaH2PO4(150mL)，室溫反應過夜。將反應液濃縮，加水(100mL)，乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合併有機相，鹽水洗(50mL)、硫酸鈉乾燥、過濾濃縮，用矽膠柱純化(流動相為乙酸乙酯/石油醚)，得到化合物68(6.7g,55%產率)。ESI m/z C29H40N3O8[M+H]+：計算值558.3，實測值558.3。
實施例69 化合物69的合成
Figure 109116404-A0305-02-0142-249
將化合物68(6.7g,12mmol)溶於甲醇(100mL)中，加入Pd/C(10wt%，0.67g)，在氫氣球下反應2小時。過濾，濃縮濾液得到化合物69(5g,100%產率)。ESI m/z C21H34N3O6[M+H]+：計算值424.2，實測值424.2。
實施例70 化合物70的合成
Figure 109116404-A0305-02-0143-543
將化合物67(252mg，0.3mmol)和化合物69(190mg，0.45mmol)溶於DMF(5mL)中，冷卻至0℃，加入DIPEA(0.13mL，0.75mmol)，加完後慢慢升到室溫，反應1小時。加水(20mL)稀釋，用二氯甲烷萃取(3×10mL)，合併有機相，水洗(10mL)、1N HCl洗(10mL)、鹽水洗(10mL)、硫酸鈉乾燥、過濾濃縮，粗品用矽膠柱(流動相為甲醇/二氯甲烷)純化，得到化合物70(180mg，55%產率)。ESI m/z C51H83N6O19[M+H]+：計算值1083.6，實測值1083.6。
實施例71 化合物71的合成
Figure 109116404-A0305-02-0143-251
將化合物70(8.2g,7.6mmol)溶於二氯甲烷(56.8mL)，加入三氟乙酸(18.9mL)，室溫反應2小時，濃縮，並用二氯甲烷共濃縮兩遍，油泵抽乾。向殘留液體中加入乙醚(100mL)，劇烈攪拌1小時，靜置，棄去上清液，再重複操作兩次，將下層液體在旋轉蒸發儀上濃縮，並用油泵抽乾，得化合物71(9.2g，>100%產率)。ESI m/z C46H75N6O17[M+H]+：計算值983.51，實測值983.37。
實施例72 化合物72的合成
Figure 109116404-A0305-02-0144-252
將化合物71(8.2g,7.6mmol)溶於DMF(80mL)溶液，用冰水浴冷卻反應瓶至0-5℃，加入18(5.2g,7.6mmol)的DMF溶液(20mL)，慢慢滴加DIPEA(4mL,22.8mmol)至反應瓶中。控制滴加速度，使整個滴加過程中反應液溫度保持在5-10℃之間，滴加完成後，撤除冰水浴，讓反應升溫至室溫，攪拌1.5小時。濃縮，並加二氯甲烷(100mL)，冰浴下加入甲酸調節pH為3-4，濃縮，矽膠柱純化，洗脫液為20-100%乙酸乙酯/正己烷和0-20%甲醇/二氯甲烷(各含0.1%甲酸)，將矽膠柱純化所得的粗產品(11.44g)再用製備HPLC純化，洗脫液為20-30%乙腈/水(各含0.1%甲酸)，濃縮凍乾得到化合物72(6.8g，收率60%)。ESI m/z C71H115N10O22S[M+H]+：計算值1491.78，實測值1492.01。
實施例73 化合物73的合成
Figure 109116404-A0305-02-0144-253
向無水甲酸(500mL)和二氯甲烷(250mL)的混合溶劑中投加化合物63(22.4g，0.03mol)。室溫攪拌過夜，濃縮得到產物19g(產率100%)。
實施例74 化合物74的合成
Figure 109116404-A0305-02-0144-254
將化合物73(19.0g，0.03mol)溶於二氯甲烷(200mL) 中。室溫下加入五氟苯酚(11.0g，0.06mol)和DIC(15.1g，0.12mol)。攪拌反應1小時，濃縮得到產物粗品45g。
實施例75 化合物75的合成
Figure 109116404-A0305-02-0145-255
將4-胺基丁酸叔丁酯(6.40g，0.04mol)溶於500mL的DMF中。冰水降溫，加入DIPEA(15.5g，0.12mol)，保持10度至20度下慢慢加入化合物74(45g，粗品，以0.03mol計)。室溫反應1小時，濃縮，加二氯甲烷稀釋，水洗，水相用二氯甲烷萃取。合併有機相並用0.2N鹽酸洗，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。柱層析純化(25%-100%乙酸乙酯/石油醚，再0-5%甲醇/二氯甲烷)得到產物19.5g，產率83%。
實施例76 化合物76的合成
Figure 109116404-A0305-02-0145-256
將化合物75(19.5g，24.8mmol)，鈀碳(10wt%，5g)混合於200mL甲醇中。室溫下在氫氣球下反應過夜。過濾，濃縮濾液，得產物16.7g(產率100%)。
實施例77 化合物77的合成
Figure 109116404-A0305-02-0145-257
將化合物76(16.7g，24.8mmol)溶於200mL的DMF中，冰水降溫，加入DIPEA(12.9g，0.10mol)，保持反應液在10度至20度， 慢慢加入化合物53(30g，粗品，以24.8mmol計)。室溫反應1小時，濃縮，加二氯甲烷稀釋，水洗，水相用二氯甲烷萃取。合併有機相，用0.2N鹽酸洗，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。柱層析純化(50%-100%乙酸乙酯/石油醚，再10%甲醇/二氯甲烷)得到產物20g，產率98%。
實施例78 化合物78的合成
Figure 109116404-A0305-02-0146-259
將化合物77(16.8g,20.5mmol)溶於二氯甲烷(60mL)中，加入無水甲酸(120mL)。室溫反應過夜，濃縮，加乙酸乙酯(150mL)稀釋，用水(300mL)萃取，棄去有機相，水相加固體氯化鈉至飽和，然後用二氯甲烷(200ml×2)萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析純化(0-20%甲醇/二氯甲烷)，得到化合物78(16.4g，收率>100%，含有部分甲酸)。ESI m/z C34H59O15N4[M+H]+：計算值763.39，實測值763.29。
實施例79 化合物79的合成
Figure 109116404-A0305-02-0146-261
將化合物78(15.6g,20.5mol)溶於二氯甲烷(200mL)中，室溫下，依次加入N-羥基琥珀醯亞胺(NHS,3.7g,32.3mol)和EDC．HCl(8.3g,43mol)。室溫反應30分鐘，鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥， 過濾，濃縮得到化合物79(17.6g，收率100%)。ESI m/z C38H62O17N5[M+H]+：計算值860.41，實測值860.29。
實施例80 化合物80的合成
Figure 109116404-A0305-02-0147-263
方法一：將化合物79(8.8g,10.2mmol)和化合物45(3.5g,10.2mmol)溶於200mL四氫呋喃中。加熱至回流，攪拌過夜，濃縮，向粗品中加水(300mL)和乙酸乙酯(100mL)，攪拌，分出水相。向水相中加氯化鈉至飽和，用二氯甲烷(2×150mL)萃取，合併二氯甲烷，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。柱層析純(0-20%甲醇/二氯甲烷)，得化合物80(4.0g，收率36%)。ESI m/z C51H83O19N6[M+H]+：計算值1083.56，實測值1083.47。
方法二：將化合物79(4.4g,5.12mmol)和化合物45(1.73g,5.12mmol)溶於100mL EtOH中。然後加入0.1N NaH2PO4溶液(20mL)，攪拌過夜。濃縮，粗品中加水(200mL)和乙酸乙酯(100mL)，攪拌，分出水相。向水相中加氯化鈉至飽和，用二氯甲烷(2×100mL)萃取，合併二氯甲烷，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。柱層析純化(0-20%甲醇/二氯甲烷)，得化合物80(2.0g，收率36%)。
方法三： 將化合物79(4.4g,5.12mmol)和化合物45(1.73g,5.12mmol)溶於100mL乙腈中。然後加入0.1N NaH2PO4溶液(20mL)，攪拌過夜。濃縮，粗品中加水(200mL)和乙酸乙酯(100mL)，攪拌，分出水相。向水相中加氯化鈉至飽和，用二氯甲烷(2×100mL)萃取，合併二氯甲烷，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。柱層析純化(0-20%甲醇/二氯甲烷)，得化合物80(2.2g，收率40%)。
實施例81 化合物73的合成
Figure 109116404-A0305-02-0148-267
將化合物49(20g，28.4mmol，1.0eq.)溶解在350mL無水二氯甲烷中，並在冰水浴上冷卻。依次加入NHS(3.9g，34.1mmol，1.2eq.)和EDC(27g，142.0mmol，5.0eq.)。在室溫下攪拌反應物過夜，然後用水(200mL×2)，鹽水(200mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，濃縮。將殘餘物溶於少量二氯甲烷中，並載入到矽膠柱上，用2：49：49至4：48：48甲醇/乙酸乙酯/二氯甲烷洗脫。得到產物為黃色油狀物(14.2g，62%收率)。ESI m/z C37H60N3O16[M+H]+：計算值802.4，實測值：802.4。
實施例82 化合物74的合成.
Figure 109116404-A0305-02-0148-266
向化合物69(6.4g，15.1mmol，1.0eq)在40mL乙醇和10mL 0.1M NaH2PO4的混合物中加入化合物73(12.7g，15.9mmol， 1.05eq)。將反應混合物攪拌過夜，濃縮並溶解在二氯甲烷中，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，並通過矽膠柱(3-5%甲醇/二氯甲烷)純化，得到白色泡沫(11.7g，70%收率))。ESI m/z C54H88N5O19[M+H]+：計算值，實測值：1110.6，實測值：1110.6。
實施例83 化合物75的合成.
Figure 109116404-A0305-02-0149-268
將化合物74(4.2g，3.79mmol，1.0eq.)和鈀碳(0.4g，10wt%)混合於5mL甲醇中。室溫下在氫氣球下攪拌過夜，濾除催化劑並用甲醇洗滌，將濾液濃縮，得到0.32g粗產物，將其直接用於下一步驟(產率87%)。ESI m/z C46H82N5O17[M+H]+：計算值1997.1，實測值：1997.1。
實施例84 化合物76的合成.
Figure 109116404-A0305-02-0149-269
在500mL燒瓶中，將H2N-PEG4-CH2CH2CO2H(3.0g，11.3mmol，1.0eq.)和K2CO3(4.7g，33.93mmol，3.0eq.)溶解在50mL水中，並在冰水浴上冷卻。逐滴加入Boc2O(3.2g，14.7mmol，1.3)的50mL四氫呋喃溶液。將反應溫熱至室溫，然後攪拌過夜。用1N KHSO4將反應混合物調節至pH4-5，用二氯甲烷(200mL×1,100mL×3)萃取，用水(500mL×1)和鹽水(500mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥並且集中。將殘餘物溶於少量二氯甲烷中，然後載入到矽膠柱上，用2-4%甲醇/二氯甲烷洗脫，合併各組分並濃縮，得到3.8g無色油 狀物(收率93%)。ESI m/z C16H32NO8[M+H]+計算值：366.2，實測值：366.2。
實施例85 化合物77的合成
Figure 109116404-A0305-02-0150-271
在50mL單頸燒瓶中，混合BocHN-PEG4-CH2CH2CO2H(0.81g，2.22mmol，1.0eq.)，K2CO3(0.92g，6.66mmol，3.0eq.)和NaI(0.033g，0.222mmol，0.1eq.)在10mL DMF中，用冰水浴冷卻，滴加BnBr(0.57g，3.33mmol，1.5eq.)，將混合物溫熱至室溫並攪拌過夜。將反應混合物用100mL水稀釋，用二氯甲烷(100mL×2)萃取，用水(200mL×1)和鹽水(200mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，並濃縮。將殘餘物溶於少量二氯甲烷中，載入到矽膠柱上，用70-90%乙酸乙酯/石油醚洗脫，得到0.69g無色油狀物(69%收率)。ESI m/z C23H38NO8[M+H]+計算值：446.3，實測值：446.3。
實施例86 化合物78的合成
Figure 109116404-A0305-02-0150-273
將BocHN-PEG4-CH2CH2CO2Bn(0.69g，1.5mmol，1.0eq.)的6mL二氯甲烷和3mL TFA溶液在室溫下攪拌30分鐘。除去溶劑，將殘餘物與二氯甲烷共濃縮三次，置於高真空泵上粗產物直接用於下一反應。ESI m/z C18H30NO6[M+H]+：計算值356.2，實測值356.2。
實施例87 化合物79的合成
Figure 109116404-A0305-02-0150-274
向BocHN-PEG4-CH2CH2CO2H(3.8g，10.4mmol，1.0 eq.)在50mL無水二氯甲烷中的溶液中加入NHS(1.4g，12.5mmol，1.2eq.)和EDC(10.0g，52.0mmol，5.0eq.)，在室溫下攪拌過夜，然後用水(50mL×2)，鹽水(100mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，濃縮。粗產物直接用於下一步驟。ESI m/zC20H35N2O10[M+H]+：計算值463.2，實測值463.2。
實施例88 化合物80的合成
Figure 109116404-A0305-02-0151-275
在300mL燒瓶中，將H2N-PEG4-CH2CH2CO2H(2.8g，10.4mmol，1.0eq.)和K2CO3(4.3g，31.2mmol，3.0eq.)溶解在40mL水中，在冰水浴上冷卻，並且逐滴加入化合物79的四氫呋喃(40mL)溶液(3.8g，10.4mmol，1.0eq.)並將混合物溫熱至室溫並攪拌過夜。使用1N KHSO4將反應混合物調節至pH4-5，用二氯甲烷(150mL×1,100mL×2)萃取，用水(200mL×1)和鹽水(200mL×1)洗滌，乾燥無水硫酸鈉，濃縮。將殘餘物溶於少量二氯甲烷中，並載入到矽膠柱上，用4-6%甲醇/二氯甲烷洗脫，得到無色油狀物(5.18g，81%收率)。ESI m/z C27H53N2O13[M+H]+：計算值613.3，實測值613.3。
實施例89 化合物81的合成
Figure 109116404-A0305-02-0151-277
將H2N-PEG4-CH2CH2CO2Bn(來自前一步驟的粗產物)溶解在3mL DMF中，在冰/水浴上冷卻，滴加DIPEA(0.78g，6.0mmol，4.0eq.)，然後加入化合物80(0.93g，1.5mmol，1.0eq.)的DMF(7mL)溶液和HATU(1.72g，4.5mmol，3.0eq.)。將反應物在 冰浴上攪拌2小時，並用100mL水稀釋，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，用1N KHSO4(200mL×1)，飽和碳酸氫鈉(200mL×1)和鹽水(200mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，濃縮。將殘餘物溶於少量二氯甲烷中，載入到矽膠柱上，並用0-5%甲醇/二氯甲烷洗脫。合併濃縮，得到1.0g淡黃色油狀物(71%收率)。ESI m/z C45H80N3O18[M+H]+：計算值950.5，實測值950.5。
實施例90 化合物82的合成
Figure 109116404-A0305-02-0152-278
在11-胺基十一酸苄酯(2.91g，10.0mmol)和Boc-Glu(OBzl)-OH(3.37g，10.0mmol)的DMF(50mL)溶液中，加入EDC(1.91g，12.0mmol)和三乙胺(3.5mL，25.0mmol)。在室溫下攪拌8小時，用水(100mL)稀釋，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。將合併的有機相用100mL鹽水洗滌一次，然後經無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。通過矽膠柱色譜(乙酸乙酯/二氯甲烷，1：15)純化殘餘物，得到標題化合物，為無色油狀物(5.37g，88%收率)。
實施例91 化合物83的合成
Figure 109116404-A0305-02-0152-280
在室溫下，將化合物82(0.64g，1.05mmol，1.0eq.)在5mL二氯甲烷和2mL TFA的混合溶液中攪拌2小時，然後濃縮。將殘餘物與二氯甲烷共濃縮三次並置於高真空泵下。將上述粗產物重新溶解在3mL DMF中，並在冰水浴上冷卻。向其中加入化合物80(0.64g，1.05 mmol，1.0eq.)的DMF(7mL)溶液中，然後加入DIPEA(0.54g，4.20mmol，4.0eq.)和HATU(1.2g，3.15mmol，3.0eq.)。將反應物在冰浴上攪拌1小時，然後加入100mL水，並用二氯甲烷(150mL×1,100mL×1)萃取。將有機相用1N KHSO4(200mL×1)，飽和碳酸氫鈉(200mL×1)和鹽水(200mL×1)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。將粗產物溶於少量二氯甲烷中，並載入到矽膠柱上，然後用0-10%甲醇/二氯甲烷洗脫。合併組分並濃縮，得到0.94g淡黃色油狀物(81%收率)。ESI m/z C57H92N4O17[M+H]+：計算值1104.6，實測值：1104.6。
實施例92 化合物84的合成
Figure 109116404-A0305-02-0153-281
在0℃下，向4-胺基丁酸叔丁酯(1.03g，6.12mmol)和化合物49(3.91g，5.56mmol)的DMF(18mL)溶液中，加入HATU(2.32g，6.12mmol)和TEA(1.2mL，8.34mmol)。將反應攪拌1小時，然後用水(300mL)稀釋，並用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。將有機溶液用鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮並通過矽膠柱色譜法(32：1二氯甲烷/甲醇)純化，得到標題化合物(5.10g,99%產率)。ESI MS m/z 846.50([M+H]+)
實施例93 化合物85的合成
Figure 109116404-A0305-02-0153-282
將化合物84(1.0g，1.18mmol)和Pd/C(10wt%，0.10g)加入到含有甲醇(50mL)的氫化瓶中。將混合物振盪2小時， 通過矽藻土(助濾劑)過濾，濃縮濾液，得到化合物85(0.93g，產率>100%).ESI MS m/z 712.50([M+H]+).
實施例94 化合物86的合成
Figure 109116404-A0305-02-0154-283
將化合物85溶解在95%EtOH(50mL)和NaH2PO4溶液(0.1M，pH 5.0,10mL)中，加入N-琥珀醯亞胺基4-馬來醯亞胺基丁酸酯(0.50g，1.77mmol，1.5eq)，將混合物攪拌過夜，然後濃縮，用水(50mL)稀釋，用二氯甲烷(80mL×3)萃取，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，並通過矽膠柱色譜法(25：1二氯甲烷/甲醇)純化。得到標題化合物，為淺黃色油狀物(0.82g，80%)。
實施例95 化合物87的合成。
Figure 109116404-A0305-02-0154-284
將化合物86(0.82g，0.94mmol)溶解在HCOOH(50mL)中並在室溫下攪拌1小時。濃縮反應混合物並與甲苯共濃縮兩次，將殘餘物置於真空泵上，得到化合物87(0.80g，粗產物)。ESI MS m/z ([M+H]+)值：820.45。
實施例96 化合物88的合成
Figure 109116404-A0305-02-0154-286
向化合物87(0.80g，粗品，0.94mmol)的DMA(5.0mL)溶液中加入NHS(0.12g，1.03mmol)和EDC．HCl(0.27g，1.41mmol)，並將反應混合物攪拌2小時，然後用水(15mL)稀釋，並用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。將合併的有機相用鹽水(10mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。通過矽膠柱(10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到無色油狀化合物(0.67g，78%產率)。ESI MS m/z ([M+H]+)值：918.55
實施例97 化合物89的合成
Figure 109116404-A0305-02-0155-287
將N-Boc-乙二胺(5.6mL，35.4mmol，1.1eq.)和飽和NaHCO3(60mL)的混合物冷卻至0℃，向其中分批添加加入N-甲氧基羰基馬來醯亞胺(5.00g，32.2mmol，1.0eq.)。在0℃下攪拌30分鐘後，將反應溫熱至室溫，攪拌1小時。過濾收集沉澱物，用冷水洗滌，然後溶於乙酸乙酯中，用鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到白色固體(6.69g，87%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：241.12。
實施例98 化合物90的合成
Figure 109116404-A0305-02-0155-288
在高壓管中，將化合物89(6.00g，25.0mmol)，呋喃(18.0mL)的甲苯(120mL)溶液加熱至回流並攪拌16小時。無色溶液在反應過程中變黃，然後將混合物冷卻至室溫並且濃縮。將得到的白色固體用乙醚打漿，得到化合物90(6.5g，84%收率)。ESI MS m/z ([M+H]+)值：309.13。
實施例99 化合物91的合成
Figure 109116404-A0305-02-0156-289
在室溫下，將化合物90(9.93g，32.2mmol)的二噁烷(15mL)溶液與濃HCl(15mL)反應3小時，過濾收集所得固體，用乙酸乙酯洗滌濾餅。將固體在烘箱(50℃)中乾燥過夜，得到化合物91(6.94g，88%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：206.05。
實施例100 化合物92的合成
Figure 109116404-A0305-02-0156-290
在-10℃下，向化合物91(1.22g，5mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液中加入POCl3(0.47mL，5mmol)。攪拌10分鐘後，加入2,5,8,11,14,17,20,23,26-九氧二十八烷-28-胺(2.14g，5mmol)，然後加入DIPEA(0.87mL，5mmol)。將反應溫熱至0℃並攪拌3小時，然後濃縮。將殘餘物用二氯甲烷(10mL)稀釋，用矽藻土過濾，將濾液直接用於下一步驟。ESI MS m/z([M+H]+)值：716.29。
實施例101 化合物93的合成
Figure 109116404-A0305-02-0156-292
將琥珀酸二甲酯(20.0g，136.9mmol)和二羥乙胺(7.20g，68.7mmol)的無水甲苯(500mL)和吡啶(50mL)的混合物在150℃加熱28小時。濃縮混合物，在矽膠柱上純化，用5-25%乙酸乙酯/二氯甲烷洗脫，得到標題化合物(12.5g，83%收率)。ESI MS m/z ([M+Na]+)值：242.42。
實施例102 化合物94的合成
Figure 109116404-A0305-02-0157-293
向化合物93(12.0g，49.56mmol)的無水吡啶(350mL)溶液中加入甲磺醯氯(20.0g，175.4mmol)。攪拌過夜後，濃縮混合物，用乙酸乙酯(350mL)稀釋，用冷的1M NaH2PO4(2×300mL)洗滌，經MgSO4乾燥，過濾並濃縮，得到粗產物(18.8g，>100%產率))。粗產物無需進一步純化即可用於下一步驟。ESI MS m/z([M+H]+)值：376.06
實施例103 化合物95的合成
Figure 109116404-A0305-02-0157-544
向馬來醯亞胺(10.0g，103.0mmol)的甲苯(200mL)溶液中加入呋喃(10.0mL，137.4mmol)。將混合物在100℃下加熱8小時，冷卻至室溫，濃縮並在乙酸乙酯/己烷中結晶，用甲醇洗滌固體，得到16.7g(99%)標題化合物。1H NMR(CDC13)：11.12(s,1H),6.68~6.64(m,2H),5.18~5.13(m,2H),2.97~2.92(m,2H)。ESI MS m/z ([M+Na]+)值：188.04。
實施例104 化合物96的合成
Figure 109116404-A0305-02-0157-295
向化合物94(新鮮製備，90%純，8.5g，約20mmol)的 DMA(350mL)溶液中，加入化合物95(10.2g，61.8mmol)，碳酸鈉(8.0g，75.5mmol)和碘化鈉(0.3g，2.0mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜，濃縮，用乙酸乙酯(350mL)稀釋，用飽和NaHCO3溶液(300mL)，飽和NaCl溶液(300mL)和1M NaH2PO4(300mL)洗滌。用硫酸鈉乾燥有機層，過濾，濃縮，上樣於矽膠柱上，用10-30%乙酸乙酯/正己烷洗脫，得到標題化合物(7.9g，77%收率。ESI MS m/z([M+Na]+)值：536.4。
實施例105 化合物97的合成
Figure 109116404-A0305-02-0158-296
將化合物96(3.0g，5.8mmol)和三甲基甲錫烷醇(4.8g，26.4mmol)的1,2-二氯乙烷(150mL)溶液在80℃下回流8小時，然後冷卻至室溫，並使殘餘物通過短矽膠柱，用二氯甲烷/甲醇洗脫，除去過量的三甲基氫氧化錫。合併組分，濃縮後用DMA和甲苯稀釋，加熱至120℃並攪拌過夜。將反應混合物上樣到矽膠柱，用5-10%甲醇/二氯甲烷洗脫，得到標題化合物(1.62g，76%收率)。ESI MS m/z([M+Na]+)值：386.2。
實施例106 化合物98的合成
Figure 109116404-A0305-02-0158-297
向化合物97(1.62g，4.20mmol)和化合物85(2.71g，3.82mmol)的DMA(20mL)溶液中加入EDC．HCl(0.81g，4.20 mmol)。在室溫下攪拌反應。過夜，然後倒入水(50mL)中並用乙酸乙酯(3×40mL)萃取。將合併的有機相用鹽水(40mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。通過柱色譜(10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到無色油狀物(3.20g，80%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：1057.85。
實施例107 化合物99的合成
Figure 109116404-A0305-02-0159-298
將化合物98(3.20g，3.03mmol)的甲酸(10mL)溶液在室溫下攪拌過夜。然後將溶液濃縮並與甲苯共濃縮三次，得到無色油狀物(3.00g，粗品)，其無需進一步純化即可使用。ESI MS m/z([M+H]+)值：1001.50。
實施例108 化合物100的合成
Figure 109116404-A0305-02-0159-299
向化合物99(3.00g，粗產物，3.03mmol)的DMA(15.0mL)溶液中加入NHS(0.38g，3.33mmol)和EDC．HCl(0.87g，4.55mmol)，並將反應混合物室溫攪拌2小時，然後用水(50mL)稀釋，並用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。將合併的有機相用鹽水(30mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。通過矽膠柱(10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到無色油狀物(2.90g，90%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：1098.50。
實施例109 化合物101的合成
Figure 109116404-A0305-02-0160-300
向2,2'-(乙烷-1,2-二基雙(氧基))二乙醇(55.0mL，410.75mmol，3.0eq.)的無水四氫呋喃(200mL)溶液中加入鈉(0.1g)攪拌混合物直至Na消失，然後滴加丙烯酸叔丁酯(20.0mL，137.79mmol，1.0eq.)。將混合物攪拌過夜，然後在0℃下用HCl溶液(20.0mL，1N)淬滅。通過旋轉濃縮除去四氫呋喃，加入鹽水(300mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。將有機層用鹽水(3×300mL)洗滌有機相，經無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，得到無色油狀物(30.20g，79.0%產率)，其不經進一步純化而使用。MS ESI m/z([M+H]+)值：278.17。
實施例110 化合物102的合成
Figure 109116404-A0305-02-0160-301
在0℃下，向3-(2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(30.20g，108.5mmol，1.0eq.)無水二氯甲烷(220mL)溶液中，加入TsCl(41.37g，217.0mmol，2.0eq.)和TEA(30.0mL，217.0mmol，2.0eq.)。將混合物在室溫下攪拌過夜，然後用水(3×300mL)和鹽水(300mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮並通過矽膠柱色譜法(3：1己烷/乙基)純化。得到無色油狀物(39.4g，收率84.0%)。MS ESI m/z([M+H]+)值：433.28。
實施例111 化合物103的合成
Figure 109116404-A0305-02-0160-302
向3-(2-(2-(2-(甲苯磺醯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(39.4g，91.1mmol，1.0eq.)無水DMF(100mL)溶液中加入NaN3(20.67g，316.6mmol，3.5eq.)。將混合物在室溫下攪拌過夜。加入水(500mL)並用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。將合併的有機層用水(3×900mL)和鹽水(900mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮並通過矽膠柱色譜法(5：1己烷/乙酸乙酯)純化，得到無色黃色油狀物(23.8g，收率85.53%)。MS ESI m/z([M+Na]+)值：326.2。
實施例112 化合物104的合成
Figure 109116404-A0305-02-0161-303
將Raney-Ni(7.5g，懸浮在水中)用水(三次)和異丙醇(三次)洗滌，並與化合物103(5.0g，16.5mmol)在異丙醇中混合。將混合物在氫氣球下室溫下攪拌16小時，然後用矽藻土墊過濾，用異丙醇洗滌墊並濃縮濾液，通過柱色譜(5-25%甲醇/二氯甲烷)純化，得到淺黃色油狀物(2.60g，57%收率)。MS ESI m/z([M+H]+)值：279.19。
實施例113 化合物105的合成
Figure 109116404-A0305-02-0161-304
向十四烷二酸(2.06g，8mmol)的DMF(30mL)溶液中加入K2CO3(1.1g，8mmol)和苄基溴(1.36g，8mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜，然後濃縮並通過柱色譜(乙酸乙酯/石油醚)純化，得到標題化合物105(1.2g，45%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：349.23。
實施例114 化合物106的合成
Figure 109116404-A0305-02-0162-305
向化合物104(2.60g，9.35mmol)和化合物105(3.91g，11.2mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入EDC．HCl(2.15g，11.2mmol)和DIPEA(3.6mL，20.6mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，然後用50mL二氯甲烷稀釋，倒入含有50mL水的分液漏斗中。分離有機相，用鹽水(50mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。通過柱色譜(0-10%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到標題化合物(4.94g，87%產率)。ESI m/z([M+H]+)值：608.40。
實施例115 化合物107的合成
Figure 109116404-A0305-02-0162-308
向化合物106(4.94g，8.14mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入TFA(20mL)。將反應物在室溫下攪拌1小時，然後濃縮至乾燥並與二氯甲烷共濃縮兩次，並將殘餘物置於泵上，得到化合物107(4.50g，粗產物)。ESI MS m/z([M+H]+)值：552.35。
化合物116 化合物108的合成
Figure 109116404-A0305-02-0162-307
向化合物107(4.50g，粗產物，8.14mmol)和化合物104(1.95g，7.00mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加EDC．HCl(1.56g，8.14mmol)和DIPEA(2.7mL，15.4mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，然後用50mL二氯甲烷稀釋，倒入含有50mL水的分液漏斗中。分離有機相，用鹽水(50mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。通過柱色譜(0-10%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到標題 化合物108(5.22g，92%收率)。ESI m/z([M+H]+)值：811.52。
化合物117 化合物109的合成
Figure 109116404-A0305-02-0163-309
向化合物108(5.22g，6.44mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入TFA(5mL)。將反應物在室溫下攪拌1小時，然後濃縮至乾燥並與二氯甲烷共濃縮兩次，並將殘餘物置於泵上，得到化合物109(4.90g，粗產物。ESI MS m/z([M+H]+)值755.46。
實施例118 化合物110的合成
Figure 109116404-A0305-02-0163-310
向化合物109(4.90g，粗產物，6.44mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中添加NHS(0.81g，7.08mmol)，EDC．HCl(1.85g，9.66mmol)和DIPEA(2.8mL，16.1mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，然後用水(50mL)稀釋，並用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。將合併的有機相用鹽水(30mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。通過矽膠柱(10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到無色油236(4.90g，90%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：852.48。
實施例119 化合物111的合成
Figure 109116404-A0305-02-0163-312
在氫化瓶中，向化合物110(4.90g，5.75mmol)的四氫呋喃(20mL)溶液中加入Pd/C(10wt%，0.20g)。將混合物在1atm氫氣下攪拌過夜，通過矽藻土(助濾劑)過濾，並將過濾的溶液濃縮，得 到化合物111(4.50g，>100%產率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：762.44。
實施例120 化合物112的合成
Figure 109116404-A0305-02-0164-314
在0℃下，向化合物111(1.00g，1.32mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入HATU(0.50g，1.32mmol)和三乙胺(0.06mL，1.32mmol)。將反應在0℃下攪拌30分鐘，然後加入Z-Lys-OH(0.40g，1.43mmol)，在室溫下攪拌1小時，然後用水(20mL)稀釋，並用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。將合併的有機相用鹽水(30mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。通過矽膠柱(0-10%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到無色油狀物112(1.28g，95%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：1017.60。
實施例121 化合物113的合成
Figure 109116404-A0305-02-0164-545
向化合物112(1.28g，1.26mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入NHS(0.17g，1.51mmol)和EDC．HCl(0.29g，1.51mmol)，然後加入三乙胺(0.38mL，2.77mmol)。在室溫下攪拌反應2小時，然後用水(20mL)稀釋，並用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。將合併的有機相用鹽水(30mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。通過矽膠柱(0-10%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到無色油狀物113(1.28g，91%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：1114.62。
實施例122 化合物114的合成
Figure 109116404-A0305-02-0165-316
將丙烯酸叔丁酯(12.81g，0.10mmol)和乙基-1,2-二胺(24.3g，0.40mol)的四氫呋喃(150mL)溶液在45℃下攪拌24小時。將混合物濃縮並在Al2O3凝膠柱上純化，用甲醇/二氯甲烷(三乙胺)(5%：15%：80%)洗脫，得到標題化合物(17.50g，92%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)：值189.20。
實施例123 化合物115的合成
Figure 109116404-A0305-02-0165-319
將3-((2-胺基乙基)胺基)丙酸叔丁酯(17.00g，90.33mmol)的1,4-二噁烷(50mL)溶液與濃鹽酸(15毫升)在室溫下攪拌30分鐘，濃縮並用純水(150mL)和乙酸乙酯/己烷(40mL，1：5)稀釋。分離混合物，用水(2×10mL)萃取有機層。濃縮水層並經真空泵乾燥，得到標題化合物(18.70g，100%收率，通過LC-MS純度為96%)。ESI MS m/z([M+H]+)值：133.20。
實施例124 化合物116的合成
Figure 109116404-A0305-02-0165-320
在0℃下，向3-((2-胺基乙基)胺基)丙酸(18.70g，90.33mmol)的四氫呋喃(150mL)溶液中加入馬來酸酐(8.85g，90.33mmol)。將混合物在0-4℃下攪拌4小時，濃縮，得到(Z)-4-(2-((2-羧乙基)胺基)乙基)胺基)-4-氧代丁-2-烯酸，然後向混合物中加入甲苯(150mL)和DMA(50mL)，在90℃下攪拌，用Dean-Stark分 水器回流。在捕集器中收集30mL溶劑後，加入HMDS(六甲基二矽氮烷，9.0mL，43.15mmol)和ZnCl2(16mL，1.0M的乙醚溶液)。將混合物加熱至115-125℃，並通過Dean-Stark分水器收集甲苯。將反應混合物在120℃下加熱6小時。在此期間，加入2×40mL無水甲苯以保持混合物體積約50mL。然後冷卻混合物並加入1mL 1：10 HCl(濃)/甲醇。濃縮混合物，在矽膠柱上純化，用水/乙腈(1：15)洗脫，濃縮，真空泵乾燥，得到標題化合物14.75g(收率77.0%)。ESI MS m/z([M+H]+)值：213.10。
實施例125 化合物117的合成
Figure 109116404-A0305-02-0166-322
在四氫呋喃(300mL)，DIPEA(50mL)和HSAc(10.0g，0.131mol)的混合物中加入化合物60(57.30g，0.106mol)。將混合物攪拌過夜，濃縮並在矽膠柱上純化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：2至4：1)洗脫，濃縮，並經真空泵乾燥，得到標題化合物40.51g(86%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：443.35。
實施例126 化合物118的合成
Figure 109116404-A0305-02-0166-323
在乙酸(200mL)和30%H2O2(100mL)的混合物中加入化合物117(40.40g，0.091mol)。在35℃下攪拌過夜。濃縮混合物，用純水(200mL)和甲苯(150mL)稀釋，分離，有機層用水(2×25mL)萃取。合併水溶液，濃縮並經真空泵乾燥，得到標題化合物40.50g(收率99%，LC-MS純度95%)ESI MS m/z([M+H]+)值：449.30
實施例127 化合物119的合成
Figure 109116404-A0305-02-0167-324
向化合物118(20.0g，44.62mmol)的四氫呋喃(100mL)和二氯甲烷(100mL)的混合物中依次加入草醯氯(25.21g，200.19mmol)和DMF(0.015mL)。將混合物在室溫下攪拌2小時，濃縮，與二氯甲烷/甲苯(1：1,2×50mL)共濃縮，然後再溶於四氫呋喃(50mL)中。加入化合物116(7.50g，35.36mmol)的四氫呋喃(100mL)溶液。將混合物攪拌過夜，真空濃縮並在矽膠柱上純化，用甲醇/二氯甲烷(1：6至1：5)洗脫，並經真空泵乾燥，得到標題化合物14.76g(65%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：643.35。
實施例128 化合物120的合成
Figure 109116404-A0305-02-0167-326
將化合物119(7.50g，11.67mmol)，N-羥基琥珀醯亞胺(1.50g，13.04mmol)和EDC(10.10g，52.60mmol)的四氫呋喃(100mL)溶液攪拌過夜，真空濃縮並在矽膠柱上純化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：4至2：1)洗脫，並經真空泵乾燥，得到標題化合物6.30g(73%收率)。ESI MS m/z([M+H]+)值：740.40
實施例129 化合物121的合成
Figure 109116404-A0305-02-0167-546
在0℃下，向2-(2-(2-(2-胺基乙醯胺基)乙醯胺基)乙 醯胺基)乙酸(gly-gly-gly)(0.50g，2.03mmol)和化合物120(1.65g，2.22mmol)的DMF(15mL)溶液中加入DIPEA(3mL)。將反應混合物在0℃下攪拌0.5小時，然後在室溫下攪拌4小時。然後濃縮反應混合物，並通過矽膠色譜法(流動相：乙腈/水=95：5，含有0.1%甲酸)純化，得到標題化合物121(1.04g，63%收率)。MS-ESI m/z C32H56N5O17S[M+H]+計算值14.33，實測值814.46。
實施例130 化合物122的合成
Figure 109116404-A0305-02-0168-329
將化合物121(0.70g，0.86mmol)，N-羥基琥珀醯亞胺(0.20g，1.73mmol)和EDC(1.21g，6.36mmol)的四氫呋喃(20mL)溶液，室溫攪拌過夜，真空濃縮並在矽膠柱上純化。用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：4至2：1)洗脫，並經真空泵乾燥，得到標題化合物0.540g(69%收率)。MS-ESI m/z C36H59N6O19S[M+H]+：計算值911.34，實測值911.42。
實施例131 化合物123的合成
Figure 109116404-A0305-02-0168-331
在0℃下，(2S，4R)-5-(3-胺基-4-羥基苯基)-4-(2-((6S，9R，11R)-6-((S)-仲丁基)-9-異丙基的溶液-2,3,3,8-四甲基-4,7,13-三氧-12-氧雜-2,5,8-三氮雜十一烷-11-基)噻唑-4-甲醯胺基)-2-甲基戊酸(Tub-039,R.Zhao,et al,PCT/CN2017/120454；R.Zhao,et al,14th PEGS Boston,Boston,MA,USA,3rd May 2018)(83mg，0.106mmol)和化合物122(122mg，0.134mmol)的DMF(8mL)溶液中加入DIPEA(2mL)。將反應混合物在0℃下攪拌0.5小時，然後在室溫下攪拌4小時。然後濃縮反應混合物，並通過製備型HPLC(流動相：乙腈/水=10%至80%，含有0.1%甲酸)純化，得到化合物123(95.5mg，58%收率)。MS-ESI m/z C69H112N11O24S[M+H]+：計算值1542.72，實測值1542.76。
實施例132 化合物124的合成
Figure 109116404-A0305-02-0169-332
將(S)-1-苄基-5-叔丁基2-胺基戊二酸鹽酸鹽(8.70g，26.39mmol)，14-(苄氧基)-14-氧代十四烷酸(9.19mmol)，DIPEA(8.0mL，46.0mmol)和EDC(15.3g，80.50mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液在室溫下攪拌6小時。將混合物用水(100mL)稀釋並分離。用二氯甲烷(100mL)萃取水相。合併有機相，用鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮並在矽膠柱上純化(二氯甲烷/乙酸乙酯=20：1至5：1)，得到標題化合物314。MS-ESI m/z C37H54NO7[M+H]+：計算值624.38，實測值624.38。
實施例133 化合物125的合成
Figure 109116404-A0305-02-0169-333
在4℃下將化合物124(12.50g，20.05mmol)溶解在二 噁烷(30mL)中，並與鹽酸(10mL，36%)攪拌0.5小時。將反應混合物用甲苯(20mL)和DMF(20mL)稀釋，在15℃濃縮，得到標題化合物(11.26g，99%收率)。MS-ESI m/z C33H46NO7[M+H]+：計算值568.32，實測值568.34。
實施例134 化合物126的合成
Figure 109116404-A0305-02-0170-335
將化合物125(10.70g，18.86mmol)，1-胺基-15-氧代-3,6,9,12,19,22,25,28-辛氧基-16-氮雜三十烷-31-叔丁基酯鹽酸鹽(11.45g，18.93mmol)，EDC(9.51g，50.01mmol)和DIPEA(4.00mL，23.00mol)的二氯甲烷(200mL)溶液室溫攪拌過夜，用鹽水(100mL)稀釋並分離。用二氯甲烷(100mL)萃取水相。合併有機相，用鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮並在矽膠柱上純化(二氯甲烷/乙酸乙酯=10：1至4：1)，得到標題化合物(18.15g，86%收率)。MS-ESI m/z C59H96N3O17[M+H]+：計算值1118.67，實測值1118.80。
實施例135 化合物127的合成
Figure 109116404-A0305-02-0170-336
在4℃下將化合物126(10.50g，9.39mmol)溶解在二噁烷(45mL)中，並與鹽酸(15mL，36%)攪拌0.5小時。將反應混合物用甲苯(20mL)和DMF(20mL)稀釋，在15℃濃縮，並在矽膠柱上純化(二氯甲烷/甲醇=10：1至6：1)，得到標題化合物(8.67g，87%收率)。MS-ESI m/z C55H88N3O17[M+H]+：計算值1062.60，實測值 1062.68。
實施例136 化合物128的合成
Figure 109116404-A0305-02-0171-339
將化合物127(8.50g，8.01mmol)，N-羥基琥珀醯亞胺(3.20g，27.82mmol)，EDC(10.28g，54.10mmol)和DIPEA(6.00mL，34.51mmol)的四氫呋喃(150mL)溶液室溫攪拌6小時後，真空濃縮，得到NHS酯，無需純化即可用於下一步驟。向(S)-6-胺基-2-((叔丁氧基羰基)胺基)己酸鹽酸鹽(2.75g，9.73mmol)的DMF(100mL)和1.0M Na2PO4(pH 7.5,55mL)的混合溶液中，在1小時內分四份加入上面製備的N-琥珀醯亞胺酯。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。濃縮後，將殘餘物在矽膠柱上純化(二氯甲烷/甲醇=10：1至4：1)，得到標題化合物(8.16g，79%收率)。MS-ESI m/z C66H108N5O20[M+H]+：計算值1289.75，實測值1289.90。
實施例137 化合物129的合成
Figure 109116404-A0305-02-0171-340
在4℃下將化合物128(8.10g，6.28mmol)溶解在二噁烷(40mL)中，並與鹽酸(15mL，36%)攪拌0.5小時。將反應混合物用甲苯(20mL)和DMF(20mL)稀釋，在15℃濃縮，得到標題化合物(7.71g，100%收率)，其不經進一步純化用於下一步。MS-ESI m/z C61H88N3O17,[M+H]+：計算值1190.70，實測值1190.78。
實施例138 化合物130的合成
Figure 109116404-A0305-02-0172-341
在0℃下，向4-馬來醯亞胺-N-琥珀醯胺酯(7.10g，25.35mmol)和丙胺酸(3.01g，33.80mmol)的DMF(50mL)溶液中加入DIPEA(10mL)。將反應混合物在0℃下攪拌0.5小時，然後在室溫下攪拌1小時。然後將反應混合物濃縮並在矽膠柱(流動相：二氯甲烷/甲醇=10：1，含有0.1%甲酸)上純化，得到化合物130(5.21g，81%收率)。MS-ESI m/z C11H14N2O5[M+H]+：計算值255.09，實測值255.15。
實施例139 化合物131的合成
Figure 109116404-A0305-02-0172-342
將化合物130(5.15g，20.26mmol)，N-羥基琥珀醯亞胺(2.80g，24.34mmol)，EDC(10.28g，54.10mmol)和DIPEA(5.50mL，31.63mmol)的二氯甲烷(70mL)溶液室溫攪拌6小時，真空濃縮，在矽膠柱上純化(流動相：二氯甲烷/乙酸乙酯=10：1)，得到化合物131(5.83g，82%收率)。MS-ESI m/z C15H17N3O7[M+H]+：計算值351.11，實測值351.20。
實施例140 化合物132的合成
Figure 109116404-A0305-02-0172-343
在0℃下，向化合物129(7.61g，6.39mmol)和化合物131(2.90g，8.280mmol)的DMF(40mL)溶液中加入DIPEA(7mL)。將反應混合物在0℃下攪拌0.5小時，然後在室溫下攪拌1小時。然 後將反應混合物濃縮並在矽膠柱上純化(流動相：二氯甲烷/甲醇=10：1，含有0.1%甲酸)，得到化合物132(7.10g，78%收率)。MS-ESI m/z C11H14N2O5[M+H]+：計算值1426.7782，實測值1426.7820。
實施例141 化合物133的合成
Figure 109116404-A0305-02-0173-344
將化合物132(7.05g，4.94mmol)，N-羥基琥珀醯亞胺(0.92g，8.00mmol)，EDC(3.01g，15.84mmol)和DIPEA(1.00mL，5.75mmol)的四氫呋喃(50mL)溶液室溫攪拌6小時後，真空濃縮，得到NHS酯，無需純化即可用於下一步驟。
向2-(2-(2-胺基乙醯胺基)乙醯胺基)乙酸(gly-gly-gly)鹽酸鹽(1.67g，7.40mmol)的DMF(40mL)和1.0M Na2PO4(pH 7.5,15mL)的混合溶液中，在1小時內分四份加入上述化合物。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。濃縮後，將殘餘物在矽膠柱上純化(二氯甲烷/甲醇=14：1至7：1)，得到標題化合物(8.16g，79%收率)。MS-ESI m/z C11H14N2O5[M+H]+：計算值597.84，實測值1597.84。
實施例142 化合物134的合成
Figure 109116404-A0305-02-0173-345
向化合物133(150.3mg，0.0935mmol)，Tub-039 (60.2mg，0.0769mmol)和DIPEA(0.030mL，0.172mmol)在DMA(5mL)中的溶液，加入EDC(100mg，0.526mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌6小時，真空濃縮，再溶於甲醇/二氯甲烷(0.5mL：3mL)中，並通過短矽膠柱，甲醇/二氯甲烷(1：3)洗脫，真空濃縮，得到粗化合物，用於下一步驟。MS-ESI m/z值：2326.25。
將上述化合物的二氯甲烷(1mL)溶液與TFA(3mL)攪拌1小時。將反應混合物用甲苯(3mL)和DMF(3mL)稀釋，濃縮，並通過製備型HPLC(流動相：含有0.1%甲酸的2%至50%乙腈水溶液)純化，得到化合物134(69.0mg，72%收率)。MS-ESI m/z C11H14N2O5[M+H]+：計算值2146.1497，實測值2146.1588。
實施例143 化合物135的合成
Figure 109116404-A0305-02-0174-347
向(S)-30-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯胺基)-27-氧代-2,5,8,11,14,17，20,23-八氧雜-26-氮雜三十烷-31-酸(20mg，0.029mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入EDC(11mg，0.059mmol)和五氟苯酚(10.8mg，0.059mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，濃縮並在矽膠柱上純化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：4)洗脫，得到標題化合物(24mg，100%收率)。MS-ESI m/z C36H50F5N3O14[M+H]+：計算值844.32，實測值844.32。
實施例144 化合物136的合成
Figure 109116404-A0305-02-0174-348
將(S)-2-(((S)-2-(((苄氧基)羰基)胺基)丙醯胺基)丙酸叔丁酯(10g，0.028mol)的甲醇溶液(100mL)和10%鈀碳(1.0g)在氫氣(5psi)下攪拌3小時。濾出固體，濃縮過濾的溶液，得到無色油狀產物(6.1g，100%收率)。ESI m/z C10H20N2O3[M+H]+：計算值217.15，實測值217.15。
實施例145 化合物137的合成
Figure 109116404-A0305-02-0175-349
向(S)-30-(((苄氧基)羰基)胺基)-27-氧代-2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜-26-氮雜三十烷-31-酸(100mg，0.154mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入EDC(59mg，0.309mmol)和五氟苯酚(PFP)(57mg，0.309mmol)，將混合物在室溫下攪拌2小時，用二氯甲烷(20mL)稀釋，用水(5mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物重新溶解在DMF(5mL)中，然後加入化合物136(49mg，0.23mmol)和DIPEA(90mg，0.69mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時，濃縮，並在短矽膠柱上純化，用甲醇/二氯甲烷(1：10)洗脫，得到標題化合物137(80mg，61%收率)。ESI m/z C40H68N4O15[M+H]+：計算值845.47，實測值845.47。
實施例146 化合物138的合成
Figure 109116404-A0305-02-0175-350
將化合物137(80mg，0.094mmol)的甲醇(5mL)溶 液和10%鈀碳(10mg)在氫氣(5psi)下攪拌2小時。濾出固體，濃縮濾液，得到無色油狀產物(66mg，100%收率)，其不經進一步純化用於下一步。MS-ESI m/z C32H62N4O13[M+H]+：計算值711.43，實測值711.43。
實施例147 化合物139的合成
Figure 109116404-A0305-02-0176-352
向化合物138(66mg，0.094mmol)中加入乙醇(5mL)，2,5-二氧代吡咯烷-1-基4-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸酯(39mg，0.141mmol)和PBS(0.1M，pH 7.5,1.0mL)。將反應混合物攪拌過夜，濃縮並在矽膠柱上純化(二氯甲烷/甲醇=100：0至10：1)，得到標題化合物139(37mg，45%收率)。ESI m/z C40H69N5O=[M+H]+：計算值876.47，實測值876.47。
實施例148 化合物140的合成
Figure 109116404-A0305-02-0176-353
將化合物139(50mg，0.057mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液在室溫下與TFA(1mL)攪拌2小時。將反應混合物濃縮至乾，然後重新溶解在二氯甲烷(5mL)中，向其中加入EDC(16mg，0.084mmol)和五氟苯酚(15mg，0.084mmol)。將混合物在室溫下攪拌4小時，濃縮，並在矽膠柱上純化(二氯甲烷/乙酸乙酯=100：10至3：1)，得到標題化合物140(41mg，73%收率)。ESI m/z C42H60F5N5O16[M+H]+計算值：986.40，實測值986.42。
實施例149 化合物141的合成
Figure 109116404-A0305-02-0177-354
向4-(雙(2-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基)胺基)-4-氧代丁酸(100mg，0.27mmol)的二氯甲烷溶液中加入(5mL)EDC(210mg，1.10mmol)和五氟苯酚(101mg，0.55mmol)。將混合物在室溫下攪拌3小時，濃縮並在矽膠柱上純化(二氯甲烷/乙酸乙酯=20：1至5：1)，得到標題化合物141(114mg，80%收率)。MS-ESI m/z C22H16F5N3O7[M+H]+計算值：530.0，實測值530.09。
實施例150. 通過還原抗體二硫鍵同Tubulysin衍生物偶連而製備的偶連物的一般製備方法。
在2.0毫升10毫克/毫升pH值為6.0~8.0的HER2抗體的溶液中，加入0.70ml~2.0ml，100mM磷酸(PBS),pH值為6.5~8.5緩衝液，TCEP(16-20μl，20mM的水溶液)，室溫下~37.5℃孵育0.5~4小時，加入同當量的疊氮化合物(疊氮苯甲酸，或2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙氧基疊氮化合物)室溫~37.5℃下孵育1~4小時，隨後加入含能同巰基基團反應的Tubulysin衍生物分子(28-32μl，20mM的DMA溶液)(如化合物39,57,72,123，或134)。混合物在室溫~37.5℃下孵育2~18小時，然後DHAA(135μl，50毫米)加入。在RT隔夜連續培養後，混合物經G-25柱或陽離子層析柱或陰離子層析柱，用10~100mM磷酸， 或檸檬酸，50~200mM NaCl pH 6~7.5的緩衝溶液純化得到共軛體化合物(75%~99%收率)。該純化步驟也可以用滲析過濾方式，用10~100mM磷酸，或檸檬酸，50~200mM NaCl pH 6~7.5的緩衝溶液，以(3-30倍的被滲析液體積)，純化得到共軛體化合物(75%~99%收率)。通過液相色譜-質譜法質譜測定藥物/抗體比率(DAR)是3.1~4.9，HPLC分析為95~99%單體(Tosoh Bioscience，Tskgel G3000SW柱子，內徑7.8毫米x 30釐米，0.5毫升/分鐘，100分鐘)。用化合物39,57,72,123，或134製備的抗體偶連物的結構分別如下：
Figure 109116404-A0305-02-0178-547
Figure 109116404-A0305-02-0178-548
Figure 109116404-A0305-02-0178-549
Figure 109116404-A0305-02-0179-363
Figure 109116404-A0305-02-0179-364
實施例151. 偶聯物另外製備方法。
細胞結合分子，(抗體)可通過醯胺、硫醚或二硫鍵與本專利的化合物進行偶聯。用含50mM硼酸鈉的PBS緩衝液(pH8.0)稀釋抗體(>5mg/mL)，加入二硫蘇糖醇(終濃度為10mM)，35℃處理30分鐘，抗體可釋放自由巰基。用G-25柱凝膠過濾層析(PBS緩衝液中添加1mM EDTA)後，通過Ellman試劑[5,5’-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)]測定，每個抗體上大約偶聯8個巰基。抗體與Traut's試劑(2-亞胺基噻吩)(Jue,R.,et al.Biochem.1978,17(25)：5399-5405)也可釋放巰基，或在pH7~8條件下，與SATP(N-琥珀醯亞胺-S-乙醯硫代丙酸鹽)或N-琥珀醯亞胺-S-乙醯基(硫代四乙二酸)(SAT(PEG)4)等不同的連接物反應，後經羥胺作用，形成巰基(Duncan,R,et al,Anal.Biochem.1983,132,68-73,Fuji,N.et al,Chem.Pharm.Bull.1985,33,362-367)。基本上，每個抗體分子上連接5~9個巰基分子。
4℃條件下，向冰冷的含有自由巰基的抗體的二甲基乙醯胺(DMA)(2~20% v/v)中加入含有馬來醯亞胺或溴乙醯胺基團(需0.5M的硼酸鈉溶液(pH 9)促成抗體與溴乙醯胺的烷基化)的藥物(連接的藥 物與巰基的摩爾比應為1.2~1.5：1)。1~2小時後，添加過量半胱胺酸使反應終止；通過超濾、凝膠層析(G-25，緩衝液為PBS)、無菌過濾後得到濃縮的偶聯產物。通過測定280nm和252nm處的吸光度測定蛋白濃度和每個抗體所連接的藥物個數。分子排阻HPLC可用來測定連接物的單體形式所占的比重，而低於0.5%的未結合的藥物可用RP-HPLC用來測定。對於硫醚鍵連接形成的單體藥物而言，每個抗體分子平均會連接3.2-4.8個tubulysin衍生物。
連接接頭的種類可分為二甲基(苯基)甲矽烷基(DMPS),SMDP,4-琥珀醯亞胺基氧羰基-甲基-α(2-吡啶基二硫)甲苯(SMPT),N-琥珀醯亞胺-4-(2-吡啶硫)戊酸酯(SPP),N-琥珀醯亞胺-4-(2-吡啶硫)丙酸酯(SPDP),N-琥珀醯亞胺-4-(2-吡啶硫)丁酸酯(SPDB)，琥珀醯亞胺基4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-羧化酯(SMCC),N-羥基琥珀醯亞胺-(聚乙二醇)n-馬來醯亞胺(SM(PEG)n)等。抗體(>5mg/mL)稀釋於緩衝液(pH 6.5~7.5，5mM PBS,50mM NaCl,1mM EDTA)中，與連結反應2小時，而連結體與抗體的摩爾比為6~10倍以上。反應混合物可通過Sephadex G25凝膠層析分離，其分子量較低的分子會被除去。該純化步驟也可以用陽離子層析柱或陰離子層析柱，用10~100mM磷酸，或檸檬酸，50~200mM NaCl pH 6~7.5的緩衝溶液純化得到共軛體化合物(75%~99%收率)。該純化步驟也可以用滲析過濾方式，用10~100mM磷酸，或檸檬酸，50~200mM NaCl pH 6~7.5的緩衝溶液，以(3-30倍的被滲析液體積)，純化得到共軛體化合物(75%~99%收率)。抗體的濃度通過分光光度法測定，連接物包含吡啶硫基。抗體在280nm處的消光係數為2067550M-1 cm-1。修飾的抗體用過量的二硫蘇糖醇(20倍 以上當量)處理後，測定釋放的2-硫吡啶基團，在343、280nm處的消光係數分別為8080和5100M-1 cm-1)。向修飾抗體中加入1.2~1.5當量帶有巰基基團的Tubulysin衍生物分子。該反應在是室溫下進行5~18小時。反應混合物通過Sephadex G25凝膠層析，除去未連接的藥物或其他低分子量的物質。再通過測定280nm和252nm處的吸光度來測定連接產物的濃度。連接產物是單體形式，平均每個抗體分子連接3.2~4.8個藥物分子。
實施例152. Her2抗體偶聯物C-37、C-59、C-72、C-123和C-134的體外細胞毒性評價(與T-DM1對照)：用於細胞毒性測定的細胞系是人胃癌細胞系NCI-N87；細胞在含有10%FBS的RPMI-1640中生長。測定時，將細胞(180μL，6000個細胞)加入到96孔板的每個孔中，並在37℃，5%CO2下溫育24小時。接下來，在合適的細胞培養基(總體積，0.2mL)中，用不同濃度的測試化合物(20μL)處理細胞，對照孔含有細胞和培養基但不含測試化合物。將平板在37℃和5%CO2下溫育120小時，然後向孔中加入MTT(5mg/ml，20μL)，並將孔板在37℃下孵育1.5小時。小心去除培養基，然後加入DMSO(180μL)。震盪15分鐘，在490nm和570nm測量吸光度，620nm為參考。依照以下公式計算抑制率：抑制率%=[1-(分析值-空白對照值)/(控制值-空白對照值)]×100。化合物細胞毒性結果總結如表1。
Figure 109116404-A0305-02-0182-371
實施例153 在荷載NCI-N87異種移植腫瘤的BALB/c裸鼠上的體內抗腫瘤活性研究。
在人胃癌N-87細胞系腫瘤異種移植模型中評估偶聯物C-37,C-49,C-72,C-123,C-134和T-DM1的體內療效。五周齡的雌性BALB/c裸鼠(66只動物)在右肩下區域用0.1mL無血清培養基裡的N-87癌細胞(5×106個細胞/小鼠)進行皮下接種。腫瘤生長8天後長至平均大小140mm3。然後將動物隨機分成10組(每組6隻動物)。第一組小鼠用作對照組，並用以磷酸鹽緩衝的鹽水注射。剩餘的6組分別用偶聯物C-37,C-49,C-72,C-123,C-134和T-DM1以6mg/kg的劑量靜脈內注射。每3或者4天測量腫瘤的三維尺寸，並使用公式：腫瘤體積=1/2(長×寬×高)計算腫瘤體積，同時還測量動物的體重。當滿足下列任何一項標準時，處死小鼠：(1)體重減少超過注射前體重的20%，(2)腫瘤體積大於1500mm3，(3)病態嚴重至無法進食和進水或(4)皮膚壞死。如果腫瘤是未可感知的，則認為小鼠是無腫瘤的。
結果繪製在圖7中。在6.0mg/kg劑量，所有6種偶聯物都 未導致動物體重減輕。對照PBS溶液，所有偶聯物均顯示抗腫瘤活性。所有測試Tubulysin偶聯物均顯示比T-DM1優異的抗腫瘤活性。
實施例154. Tubulysin B衍生物的Her2抗體偶聯物的毒性研究(與T-DM1對照)。
動物的體重變化(通常是減小)是其對藥物的毒性的宏觀反映。將56隻6-7周齡的雌性ICR小鼠分為7組，每組包含8隻動物，分別靜脈注射給予150mg/kg劑量的藥物C-37,C-49,C-72,C-123,C-134和T-DM1。控制組(8隻動物)給予PBS緩衝的生理鹽水。如圖8顯示，在12天的實驗中，對照組和T-DM1之外的所有偶聯物組中的小鼠的體重均未降低超過5%。相反，T-DM1組中動物體重持續下降，最大減少給藥前的24%，並且在研究結束時沒有觀察到恢復趨勢。體重變化結果表明，動物對這些含有支鏈連接體的Tubulysin B衍生物的Her2抗體偶聯物，耐受性高於具有常規單連接體的T-DM1。
前面僅僅示出了本發明的原理，應理解，本發明的範圍不預期限制在本文所述的示例性方面，而應包括所有當前已知的和未來開發的等同物。另外，應當指出，在不脫離本發明技術原理的前提下，還可以作出若干改進和修改，這些改進和修改也應被視為本發明的範圍。
Figure 109116404-A0101-11-0002-1

Claims (53)

  1. 一種抗體-Tubulysin B衍生物(同系物)偶聯物，其特徵在於，所述偶聯物具有如下式(I)所示的結構：
    Figure 109116404-A0305-02-0184-372
     或者以具有式I所示結構為母體的藥學上可接受的鹽、水合物或水合鹽，具有式I所示結構的多晶型物，式I所示結構的光學異構體，式I所示結構的一個或多個氘(2H)原子代替氫(1H)原子，或式I所示結構的一個或多個13C原子代替12C原子；其中，P1是H、COCH3、COH、PO(OH)2、CH2OPO(OH)2、CONHCH3、CON(CH3)2、CON(CH2CH2)2NCH3、CON(CH2CH3)2或CON(CH2CH2)2CHN(CH2CH2)2CH2；R1、R2、R3和R4分別獨立地是H、C1-C6烷烴基、C1-C6烯烴基、C1-C6烷醚基、C1-C6烷羰基、C1-C6烷酯基、C1-C6烷羧基或C1-C6烷醯胺基；或者，R1和R2一起，R1和R3一起，R2和R3一起，或R3和R4一起構成C2-C7雜環基或C2-C7環烷基結構；R5是H、O-C1-C6烷烴基、C(O)-H、C(O)-C1-C6(直鏈或支鏈)烷烴基、C(O)-NH-C1-C6(直鏈或支鏈)烷基或C(O)-N(C1-C6(直鏈或支鏈)烷基)2；R6、R7和R8分別獨立地是H、C1-C6烷烴基、C1-C6烷醚基、C1-C6烷羰基、C1-C6烷酯基、C1-C6烷羧基或C1-C6烷醯胺基； mAb是抗體、抗體片段、單克隆抗體、多克隆抗體、納米抗體、前藥抗體，或者用合成分子或蛋白進行修飾過的抗體及抗體片段；L的結構為：
    Figure 109116404-A0305-02-0185-373
     其中Aa是L-或D-天然或非天然胺基酸；r是0-12之間的整數；當r不是0時，(Aa)r是由相同或不同的胺基酸構成的肽單元；m1=1-18之間的整數；m2=1-100之間的整數；m3=1-8之間的整數；m4=0-8之間的整數；m5=1-8之間的整數；Y是NHC(=O)、NHS(O2)、NH(SO)、NHS(O2)NH、NHP(O)(OH)NH或C(O)NH；R9是H、(O=)CR1、(O=)CNHR1、R1COOH、R1(COCH2NH)m2H、R1(Aa)r或R1(COCH2NCH3)m2H；R1、m2和(Aa)r定義如上述定義所述；以及n=1-30；其中，偶聯物不具有以下結構：
    Figure 109116404-A0305-02-0185-374
    Figure 109116404-A0305-02-0186-375
  2. 一種抗體-Tubulysin B衍生物(同系物)偶聯物的製備方法，其中所述偶聯物具有如下式(I)所示的結構：
    Figure 109116404-A0305-02-0187-378
     或者以具有式I所示結構為母體的藥學上可接受的鹽、水合物或水合鹽，具有式I所示結構的多晶型物，式I所示結構的光學異構體，式I所示結構的一個或多個氘(2H)原子代替氫(1H)原子，或式I所示結構的一個或多個13C原子代替12C原子；其中，P1是H、COCH3、COH、PO(OH)2、CH2OPO(OH)2、CONHCH3、CON(CH3)2、CON(CH2CH2)2NCH3、CON(CH2CH3)2或CON(CH2CH2)2CHN(CH2CH2)2CH2；R1、R2、R3和R4分別獨立地是H、C1-C6烷烴基、C1-C6烯烴基、C1-C6烷醚基、C1-C6烷羰基、C1-C6烷酯基、C1-C6烷羧基或C1-C6烷醯胺基；或者，R1和R2一起，R1和R3一起，R2和R3一起，或R3和R4一起構成C2-C7雜環基或C2-C7環烷基結構；R5是H、O-C1-C6烷烴基、C(O)-H、C(O)-C1-C6(直鏈或支鏈)烷烴基、C(O)-NH-C1-C6(直鏈或支鏈)烷基或C(O)-N(C1-C6(直鏈或支鏈)烷基)2；R6、R7和R8分別獨立地是H、C1-C6烷烴基、C1-C6烷醚基、C1-C6烷羰基、C1-C6烷酯基、C1-C6烷羧基或C1-C6烷醯胺基；mAb是抗體、抗體片段、單克隆抗體、多克隆抗體、納米抗體、前藥 抗體，或者用合成分子或蛋白進行修飾過的抗體及抗體片段；L的結構為：
    Figure 109116404-A0305-02-0188-381
     其中Aa是L-或D-天然或非天然胺基酸；r是0-12之間的整數；當r不是0時，(Aa)r是由相同或不同的胺基酸構成的肽單元；m1=1-18之間的整數；m2=1-100之間的整數；m3=1-8之間的整數；m4=0-8之間的整數；m5=1-8之間的整數；Y是NHC(=O)、NHS(O2)、NH(SO)、NHS(O2)NH、NHP(O)(OH)NH或C(O)NH；R9是H、(O=)CR1、(O=)CNHR1、R1COOH、R1(COCH2NH)m2H、R1(Aa)r或R1(COCH2NCH3)m2H；R1、m2和(Aa)r定義如上述定義所述；以及n=1-30；其中，所述偶聯物的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0188-382
     其中結構式(II)中的P1、“
    Figure 109116404-A0305-02-0188-565
    ”、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8以及mAb如上述定義所述；L’的結構為：
    Figure 109116404-A0305-02-0189-383
     其中m1、m2、m3、m4、m5、Aa、r和R9如上述定義所述。
  3. 如請求項2的製備方法，其特徵在於，L’的結構為：
    Figure 109116404-A0305-02-0189-385
    Figure 109116404-A0305-02-0189-386
    Figure 109116404-A0305-02-0189-392
    Figure 109116404-A0305-02-0189-390
    Figure 109116404-A0305-02-0190-393
    或
    Figure 109116404-A0305-02-0190-394
     其中m1、m2、m3、m4、m5、Aa、r和R9如請求項1中所述。
  4. 如請求項2至3中任一項的製備方法，其特徵在於，mAb-SH的製備方法包括以下a)~c)中的任一個：a).由還原劑還原抗體、抗體片段、單克隆抗體、多克隆抗體、納米抗體、前藥抗體(probody)或用合成分子或蛋白進行修飾過的抗體及抗體片段重輕鏈間、重重鏈間或自身鏈間的二硫鍵來獲取；b).通過Traut試劑或硫內酯與抗體分子的胺反應形成硫醇來製備：
    Figure 109116404-A0305-02-0190-395
     c).在緩衝體系條件下，通過生化反應，在抗體上引入較易還原的二硫鍵基團，然後用TCEP、DTT、GSH、β-MEA、β-ME還原：
    Figure 109116404-A0305-02-0191-396
  5. 如請求項2至3中任一項的製備方法，其特徵在於，偶聯物的合成中使用的緩衝體系是：pH 5.0~9.5，濃度為1mM~1000mM的磷酸、醋酸、檸檬酸、硼酸、碳酸、巴比妥酸、Tris(三羥甲基胺基甲烷)、苯甲酸或三乙醇胺、或它們的混合物緩衝溶液，並含有體積比為0%~35%的水溶性有機溶劑：甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、乙腈、丙酮、DMF、DMA或DMSO，偶聯反應溫度控制在0℃~45℃，偶聯反應是5分鐘~96小時。
  6. 如請求項2至3中任一項的製備方法，其特徵在於，在偶聯反應完成後，採用超濾或柱層析法進行純化獲得結構式為(I)的偶聯物。
  7. 如請求項6的製備方法，其特徵在於，所述柱層析包括分子篩柱、陽離子柱、陰離子柱、疏水(HIC)柱、反相柱或者蛋白A或G親和柱。
  8. 如請求項2至3中任一項的製備方法，其特徵在於，結構式為(II)的合成由結構式為(III)的Tubulysin B衍生物和結構式為(L’)的化合物縮合反應獲得：
    Figure 109116404-A0305-02-0192-397
     其中X是OH、鹵素(F、Cl、Br、或I)、苯酚、五氯酚、三氟甲基磺酸、咪唑、二氯苯酚、四氯苯酚、1-羥基苯並三氮唑、對甲苯磺酸、甲磺 酸、2-乙基-5-苯基異噁唑-3'-磺酸、
    Figure 109116404-A0305-02-0192-551
    Figure 109116404-A0305-02-0192-399
    Figure 109116404-A0305-02-0193-400
    或
    Figure 109116404-A0305-02-0193-402
    、自我酸酐或與其他酸酐如乙醯酐、甲酸酐形成的酸酐；或多肽縮合反應中間體或Mitsunobu反應中間體；其中，縮合反應是在含有體積比為1%-100%的吡啶、三乙胺或二異丙基乙胺的有機溶劑二氯甲烷、二氯乙烷、DMF、DMA、四氫呋喃(THF)、DMSO、丙酮、異丙醇、正丁醇或乙腈中，或上面二種或三種以上溶劑的混合溶劑，或有或無惰性氣體(氮氣、氬氣、氦氣)保護下，溫度控制在-20℃-150℃條件下，反應時長5分鐘-120小時完成；或者縮合反應在如下緩衝體系及如下條件下進行，所述緩衝體系是：pH 5.0~9.5，濃度為1mM~1000mM的磷酸、醋酸、檸檬酸、硼酸、碳酸、巴比妥酸、Tris(三羥甲基胺基甲烷)、苯甲酸或三乙醇胺、或它們的混合物緩衝溶液，並含有體積比為0%~35%的水溶性有機溶劑：甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、乙腈、丙酮、DMF、DMA或DMSO，偶聯反應溫度控制在0℃~45℃，偶聯反應是5分鐘~96小時。
  9. 如請求項8的製備方法，其特徵在於，結構式(III)中的NH2基團是以三氟乙酸鹽、鹽酸鹽、甲酸鹽、醋酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、檸檬酸鹽、丁二酸鹽、苯甲酸、磺酸鹽形式進行縮合反應。
  10. 如請求項8的製備方法，其特徵在於，當X是OH時，上述縮合反應需 借助縮合試劑，所述縮合試劑是：1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，二環己基碳二亞胺(DCC)，N,N'-二異丙基碳二醯亞胺(DIC)，1-環己基-2-嗎啉乙基碳二亞胺對甲苯磺酸鹽(CMC或CME-CDI)，羰基二咪唑(CDI)，O-苯並三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)，O-苯並三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，苯並三氮唑-1-基氧基三(二甲基胺基)磷鎓六氟磷酸鹽(BOP)，六氟磷酸苯並三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)，焦碳酸二乙酯(DEPC)，N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸鹽，2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)，1-[(二甲胺)(嗎啉基)亞甲基]-1[1,2,3]三唑並[4,5-b]1-吡啶-3-氧六氟磷酸鹽(HDMA)，2-氯-1,3-二甲基咪唑鎓六氟磷酸鹽(CIP)，氯代三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(PyCloP)，雙(四亞甲基)氟代甲醯胺(BTFFH)，N,N,N',N'-四甲基-硫-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲鎓六氟磷酸鹽，2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TPTU)，硫-(1-氧代-2-吡啶基)-N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸鹽，O-[(乙氧基羰基)氰基甲胺]-N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸鹽(HOTU)，(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亞乙基胺基氧基)二甲基胺基-嗎啉-碳鎓六氟磷酸鹽(COMU)，(苯並三氮唑-1-基氧基)二吡咯烷碳六氟磷酸鹽(HBPyU)，N-苄基-N'-環己基碳二亞胺(或荷載在聚合物上)，二吡咯烷基(N-琥珀醯亞胺氧基)碳鎓六氟磷酸鹽(HSPyU)，1-(氯-1-吡咯烷基亞甲基)吡咯烷六氟磷酸鹽(PyClU)，2-氯-1,3-二甲基咪唑四氟硼酸鹽(CIB)，(苯並三氮唑-1-基氧基)二呱啶碳六氟磷酸鹽(HBPipU)，6-氯苯並三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TCTU)，溴化三(二甲基胺基)膦六氟磷酸(BrOP)，1-正丙基磷酸酐(PPACA，T3P®)，2-異氰基乙基嗎啉(MEI)，N,N,N',N'-四甲基脲-氧-(N- 琥珀酸亞胺基)六氟磷酸鹽(HSTU)，2-溴-1-乙基吡啶四氟硼酸鹽(BEP)，氧-[(乙氧基羰基)氰基甲胺]-N,N,N',N'-四甲基硫尿四氟硼酸鹽(TOTU)，4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽(MMTM,DMTMM)，2-琥珀醯亞胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TSTU)，N,N,N',N'-四甲基-O-(3,4-二氫-4-氧代-1,2,3-苯並三嗪-3-基)脲四氟硼酸鹽(TDBTU)，偶氮二甲醯二呱啶(ADD)，雙(4-氯苄基)偶氮二甲酸酯(DCAD)，偶氮二甲酸二叔丁酯(DBAD)，偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD)或偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)。
  11. 如請求項8的製備方法，其特徵在於，結構式(III)的Tubulysin B衍生物的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0195-404
    Figure 109116404-A0305-02-0196-405
     R5’是H、C1-C6烷烴基、C1-C6烷烴基、或C1-C6(直鏈或支鏈)胺烷基。
  12. 如請求項11的製備方法，其特徵在於，結構式(III)的Tubulysin B衍生物的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 將二乙氧基乙腈與硫化銨的水溶液在室溫攪拌，得到化合物1即2,2-二乙氧基硫代乙醯胺；
    Figure 109116404-A0305-02-0196-553
     步驟2. 將化合物1與溴丙酮酸酯在無水溶劑(如無水四氫呋喃、二氯甲烷、乙腈、N,N-二甲基甲醯胺、甲醇、異丙醇)中加熱，縮合得化合物2；
    Figure 109116404-A0305-02-0197-407
     步驟3. 將化合物2溶解在溶劑(如四氫呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯、正庚烷、二氧六環、乙腈)中，用路易士酸或質子酸(包括鹽酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、甲酸、草酸、乙酸、對甲苯磺酸、對甲苯磺酸吡啶、AlCl3、FeCl3、ZnCl2、BF3、BCl3、BBr3、TiCl4、ZnBr2、LiBF4)水解，得到化合物3；
    Figure 109116404-A0305-02-0197-408
     步驟4. 不飽和亞磺醯胺在低溫條件下(如-45℃至-78℃)被正丁基鋰等鹼脫氫，然後在路易士酸存在的條件下與化合物3發生加成反應，得到化合物4；
    Figure 109116404-A0305-02-0197-409
     路易士酸選擇為包括鹽酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、甲酸、草酸、乙酸、對甲苯磺酸、對甲苯磺酸吡啶、AlCl3、FeCl3、ZnCl2、BF3、BCl3、BBr3、TiCl4、ZnBr2、LiBF4；步驟5. 化合物4在低溫條件(如-45℃至-78℃)被下被還原劑(如NaBH4、LiBH4、Na(OAc)3BH、Na(CN)BH3等)選擇性地還原，通過加入路易士酸(如Ti(Oet)4)，控制其立體化學，得到化合物5；
    Figure 109116404-A0305-02-0198-410
     步驟6. 將化合物5溶解在溶劑(如甲醇、乙醇、異丙醇、四氫呋喃、乙腈)中，被鹽酸、硫酸和磷酸等酸脫去叔丁基亞磺醯基，得到化合物6；
    Figure 109116404-A0305-02-0198-411
     步驟7. 將化合物6和疊氮酸溶解在溶劑(如正庚烷、四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺)中，在縮合試劑(如DIC/HOBt、DCC/HOBt、EDC/HOBt、HATU、BOP、T3P、BrOP)存在下，或通過縮合反應路線，發生縮合反應，得到化合物7；或者，疊氮酸與氯甲酸異丁酯在有機鹼(如三乙胺、二異丙基乙胺、N-甲基嗎啡啉等)存在時在THF中反應，得到混合酸酐，再和化合物6的鹽酸鹽發生縮合，得到化合物7；或者，疊氮酸在溶劑(如正庚烷、正己烷、二氯甲烷、四氫呋喃)中與草醯氯、三乙胺和催化劑量的DMF反應，被轉換成醯氯，再和化合物6的鹽酸鹽發生縮合，得到化合物7；
    Figure 109116404-A0305-02-0198-412
     步驟8. 在溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃、乙腈)中，化合物7上的羥基與羥基保護試劑(如TESCl)，在有機鹼(如咪唑、三乙胺、吡啶)的作用下得到化合物8；
    Figure 109116404-A0305-02-0199-413
     步驟9. 化合物8被溶解在溶劑(如四氫呋喃、二氯甲烷、乙腈)中，在鹼(如KHMDS、LiHMDS、NaHMDS、KOtBu、NaH、KH)的作用下，醯胺發生去質子化，然後與碘甲烷、溴甲烷、硫酸二甲酯、三氟甲磺酸甲酯或碘乙烷等發生烷基化反應，得到化合物9；
    Figure 109116404-A0305-02-0199-414
     步驟10. 化合物9被溶解在溶劑(如四氫呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯)中，其中的疊氮基在一定的條件下，如在氫氣和鈀碳催化劑、三苯基膦和水(Staudinger反應)的存在下，被還原成胺基，然後與酸或者具有反應活性的酸衍生物發生縮合，得到化合物10；
    Figure 109116404-A0305-02-0199-416
     步驟11. 化合物10中的羥基保護基PG1在適當的條件(如TES保護基團可以在鹽酸、THF/MeOH/AcOH、nBu4NF或吡啶氫氟酸鹽的THF溶液中被脫保護)下被脫保護，得到化合物11；
    Figure 109116404-A0305-02-0199-417
     步驟12. 化合物11中的酯基在鹼(如LiOH、NaOH、KOH)的作用下，或其他適當條件(如甲酯可以在LiCl、LiI、Me3SiOK等試劑的作用下被轉 化成羧酸)下被轉化成酸化合物12；
    Figure 109116404-A0305-02-0200-418
     步驟13. 在鹼(如三乙胺、N,N-二異丙基乙胺、吡啶)和催化劑(如DMAP)存在時，一定的溫度條件(如0℃至23℃)下，化合物12與乙酸酐，丙酸酐、異丙酸酐等酸酐、乙醯鹵、丙酸鹵、丙酸鹵、甲醯胺鹵、異醯胺鹵、二甲醯胺鹵等酸鹵作用，得到化合物13，該反應也可不使用鹼或者催化劑；
    Figure 109116404-A0305-02-0200-419
     步驟14. 化合物13與適當的含羥基的化合物如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺在縮合試劑(如EDC、DIC、DCC、HATU、HBTU)存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯化合物14；
    Figure 109116404-A0305-02-0200-420
     步驟15. 化合物15與化合物14，在水相、一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相、存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物16；反應也任選不使用任何鹼，條件是需要控制一定的反應溫度(如0℃至23℃)和反應時間(如30分鐘至18小時)；
    Figure 109116404-A0305-02-0201-554
     步驟16. 化合物16中的硝基在還原條件下，如在氫氣和鈀碳催化劑、水合肼和FeCl3、鐵粉和醋酸等的存在的條件下，被還原成胺基，得到化合物III；
    Figure 109116404-A0305-02-0201-425
  13. 如請求項8的製備方法，其特徵在於，結構式為(L’)的化合物的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0201-428
    Figure 109116404-A0305-02-0202-429
  14. 如請求項13的製備方法，其特徵在於，結構式為(L’)的化合物的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 化合物1-1和化合物1-2在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)的作用下縮合，或者經過縮合反應路線發生縮合反應(如化合物1-2在縮合試劑如DIC和EDC的作用下與五氟苯酚、硝基苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺發生縮合反應，生產相應的活性酯，然後再與化合物1-1反應)，得到化合物物1a；或者，化合物1-3和化合物1-4在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)的作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物物1b；
    Figure 109116404-A0305-02-0203-430
    Figure 109116404-A0305-02-0203-431
     步驟2. 化合物1中的羧基保護基PG2在脫保護試劑作用下(如叔丁酯基在酸的作用下)，被去除，得到化合物2；
    Figure 109116404-A0305-02-0203-432
     步驟3. 含羧基的化合物2和含胺基的化合物3在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物4；
    Figure 109116404-A0305-02-0203-433
    Figure 109116404-A0305-02-0203-434
     步驟4. 化合物4上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物5；
    Figure 109116404-A0305-02-0203-435
     步驟5. 含羧基化合物6和含胺基的化合物5在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得 到化合物7；
    Figure 109116404-A0305-02-0204-556
    Figure 109116404-A0305-02-0204-558
     步驟6. 化合物7上的羧基保護基團PG3在去保護條件下被去除(如羧基上的叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除)，得到化合物8；
    Figure 109116404-A0305-02-0204-439
     步驟7. 化合物8與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯化合物，或與其他酸活化基團反應得到具有縮合反應活性的化合物L’；
    Figure 109116404-A0305-02-0204-440
  15. 如請求項8的製備方法，其特徵在於，結構式為(L’)的化合物的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0205-441
  16. 如請求項15的製備方法，其特徵在於，結構式為(L’)的化合物的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 化合物1上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物2；
    Figure 109116404-A0305-02-0205-443
     步驟2. 含胺基的化合物2和含羧基的化合物3在縮合試劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物4；
    Figure 109116404-A0305-02-0206-444
     步驟3. 化合物4上的羧基保護基團PG2在去保護條件下被去除，如羧基上的叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除，得到化合物5；
    Figure 109116404-A0305-02-0206-445
     步驟4. 含羧基化合物5和含胺基的化合物6在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物7；
    Figure 109116404-A0305-02-0206-446
     步驟5. 化合物7上的羧基保護基團PG3在去保護條件下被去除，如羧基上的叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除，得到化合物8；
    Figure 109116404-A0305-02-0206-447
     步驟6. 化合物8與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺) 在縮合試劑存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯化合物，或與其他酸活化基團反應得到具有縮合反應活性的化合物9；
    Figure 109116404-A0305-02-0207-448
  17. 如請求項2至3中任一項的製備方法，其特徵在於，結構式為(II)化合物的合成由結構式(IV)和結構式(V)縮合反應獲得：
    Figure 109116404-A0305-02-0207-449
     其中X定義及縮合反應條件如請求項8至10中任一項所述。
  18. 如請求項17的製備方法，其特徵在於，結構式(V)中的NH2基團是以三氟乙酸鹽、鹽酸鹽、甲酸鹽、醋酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、檸檬 酸鹽、丁二酸鹽、苯甲酸或磺酸鹽形式進行縮合反應。
  19. 如請求項17的製備方法，其特徵在於，結構式(IV)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0208-451
  20. 如請求項19的製備方法，其特徵在於，結構式(IV)的合成包括下列步驟中的任一種：羧酸化合物1與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑(如EDC、DIC、DCC、HATU、HBTU)存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯；或者，羧酸化合物1與氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯等，在有機鹼(如N-甲基嗎啡啉、三乙胺、二異丙基乙胺等有機鹼)存在下反應，得到具有反應活性的混合酸酐；或者，羧酸化合物1與草醯氯，在三乙胺等有機鹼和催化劑量(如0.01當量至0.5當量)的DMF存在條件下，反應得到醯氯。
  21. 如請求項17的製備方法，其特徵在於，結構式(V)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0209-453
  22. 如請求項21的製備方法，其特徵在於，結構式(V)的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 化合物1與化合物2，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物3；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
    Figure 109116404-A0305-02-0209-454
    Figure 109116404-A0305-02-0210-455
     步驟2. 化合物3上的胺基保護基團PG4在去保護條件下被去除(如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物V；
    Figure 109116404-A0305-02-0210-457
  23. 如請求項21的製備方法，其特徵在於，化合物2的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0210-459
     其中，該合成步驟中得到的化合物8(化合物XIVa)即為所述目標化合物2。
  24. 如請求項23的製備方法，其特徵在於，化合物2的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 將L-酪胺酸的酯類衍生物1溶解於適當的溶劑，如丙酮、四氫呋喃、乙腈、二氯甲烷等，或者這些溶劑與水的混合溶劑，與苄基氯、苄基溴或其它苄基化合物，在0至60℃反應，可在反應體系中加入適當的有機或無機鹼，如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙胺、DBU、氫化鈉等，也可在體系內加入適當的添加劑如碘化鈉或相轉移催化劑，如苄基三乙基氯化銨(TEBA)、四丁基溴化銨(TBAB)、四丁基氯化銨、四丁基硫酸氫銨、三辛基甲基氯化銨、十二烷基三甲基氯化銨、十四烷基三甲基氯化銨等，得到化合物2；步驟2. 將化合物2溶解於有機溶劑如二氯甲烷、四氫呋喃、甲醇、乙醇、乙醚等，用還原劑，如氫化鋁鋰、DIBAL、硼氫化鈉、硼氫化鋰、二氫雙(2-甲氧乙氧基)鋁酸鈉(Red-Al)、乙硼烷等還原，可在反應體系中加入添加劑，如I2、三氯化鐵、氯化鋅、氯化鎂、氯化鋰、氯化鈣等控制還原劑的活性，得到化合物3；步驟3. 醇類化合物3在適當的氧化條件下，如swern氧化(草醯氯、DMSO、三乙胺)、Parikh-Doering氧化(三氧化硫吡啶氧化)、Dess-Martin氧化等，被氧化成醛4；步驟4. 醛4與磷酸酯反應(Horner-Wadsworth-Emmons反應)或者磷葉立德反應(Wittig反應)，進行碳鏈延長，得到化合物5；步驟5. 化合物5中的雙鍵在均相或兩相催化劑的作用下被氫化還原，其中的苄基也同時被脫去，得到立體結構單一的手性化合物，或者兩個非 對映異構體的混合物；催化劑包括Pd/C、Pd(OH)2/C、Pd/BaSO4、PtO2、Pt/Al2O3、Ru/C、Raney鎳等兩相催化劑，均相不對稱氫化催化劑，如Crabtree催化劑、[Ru(II)-(BINAP)]類催化劑、[(Ph3P)CuH]6催化劑等；步驟6. 將化合物6溶解在有機溶劑中，如四氫呋喃、乙腈、二氯甲烷，在硝化反應條件下被硝化，硝化試劑包括硝酸、硝酸/醋酸、硝酸鉀/硫酸、亞硝基叔丁酯、硝酸/三氟乙酸酐、NO2BF4、硝基吡啶鎓鹽等；步驟7. 在以下條件下化合物7中的硝基被還原成胺基，這些條件包括H2/Pd/C，Fe或Zn/HOAc，SnCl2/HCl。
  25. 如請求項21的製備方法，其特徵在於，化合物2的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0212-460
     其中，該合成步驟中得到的化合物8(化合物XIVb)即為所述目標化合物2。
  26. 如請求項25的製備方法，其特徵在於，化合物2的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 化合物1在-78℃至-45℃條件下，與Evans手性N-醯基噁唑烷酮或硫酮2，其中X=O或S，R16=H、甲基、苯基、R17=H、甲基、異丙基、苯基、苄基等，進行Aldol反應，得到立體構型單一的化合物3；步驟2. 化合物3上的羥基在以下條件下被脫去，這些條件包括Barton-McCombie去氧反應，即醇首先轉化為硫代醯基衍生物，如烷基黃原酸鹽、硫代氯甲酸苯酯、硫代羰基咪唑酯，然後用Bu3SnH處理，發生自由基斷裂得到脫羥基產物；自由基斷鍵的條件包括：n-Bu3SnH/AIBN,N-Bu3SnH/AIBN/n-BuOH/PMHS，(Bu4N)2S2O8/HCO2Na；步驟3. 將化合物4溶解在四氫呋喃中，Evans手性輔基在LiOH/H2O2的條件下被切斷得到相應的酸5；步驟4. 化合物5被溶解在有機溶劑中，如乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇或乙酸等，其中的苄基在鈀碳催化劑存在下被催化氫解，得到化合物6；步驟5. 將化合物6溶解在有機溶劑中，如四氫呋喃、乙腈、二氯甲烷，在硝化反應條件下被硝化，硝化試劑包括硝酸、硝酸/醋酸、硝酸鉀/硫酸、亞硝基叔丁酯、硝酸/三氟乙酸酐、NO2BF4、硝基吡啶鎓鹽等；步驟6. 在以下條件下化合物7中的硝基被還原成胺基，這些條件包括H2/Pd/C，Fe或Zn/HOAc，SnCl2/HCl等，得到立體構型單一的手性化合物8。
  27. 請求項2至3中任一項的製備方法，其特徵在於，結構式為(II)的合成 由結構式(VI)和結構式(VII)縮合反應獲得：
    Figure 109116404-A0305-02-0214-461
     其中X定義及縮合反應條件如請求項8至10中任一項所述。
  28. 如請求項27的製備方法，其特徵在於，結構式(VI)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0215-463
  29. 如請求項28的製備方法，其特徵在於，結構式(VI)的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 化合物1與適當的含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酸的衍生物化合物2；
    Figure 109116404-A0305-02-0215-464
     步驟2. 化合物2與化合物3，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物 4；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
    Figure 109116404-A0305-02-0216-465
    Figure 109116404-A0305-02-0216-466
     步驟3. 化合物4上的胺基保護基團PG4在去保護條件下被選擇性地去除(如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物5；
    Figure 109116404-A0305-02-0216-467
     步驟4. 化合物5與結構式(IV)，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物6；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
    Figure 109116404-A0305-02-0216-468
     步驟5. 化合物6上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除(如胺基 上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物VI；
    Figure 109116404-A0305-02-0217-470
  30. 如請求項27的製備方法，其特徵在於，結構式(VII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0217-471
  31. 如請求項30的製備方法，其特徵在於，結構式(VII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 羧酸化合物1與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯；或者，羧酸化合物1與氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯等，在有機鹼(如N-甲基嗎啡啉、三乙胺、二異丙基乙胺等有機鹼)存在下反應，得到具有反應活性的混合酸酐；或者，羧酸化合物1與草醯氯，在三乙胺等有機鹼和催化劑量(如0.01當量至0.5當量)的DMF存在條件下，反應得到醯氯；
    Figure 109116404-A0305-02-0218-472
  32. 請求項2至3中任一項的製備方法，其特徵在於，結構式為(II)的合成由結構式(VIII)和結構式(IX)縮合反應獲得：
    Figure 109116404-A0305-02-0218-473
     其中X定義及縮合反應條件如請求項8至10中任一項所述。
  33. 如請求項32的製備方法，其特徵在於，結構式(VIII)中的NH2基團是以三氟乙酸鹽、鹽酸鹽、甲酸鹽、醋酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、檸檬酸鹽、丁二酸鹽、苯甲酸或磺酸鹽形式進行縮合反應。
  34. 如請求項32的製備方法，其特徵在於，結構式(VIII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0219-474
  35. 如請求項34的製備方法，其特徵在於，結構式(VIII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 化合物1上的羧基保護基PG3在去保護條件下被去除(如羧基上 的叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除)，得到化合物2；
    Figure 109116404-A0305-02-0220-477
     步驟2. 化合物2與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯化合物3；
    Figure 109116404-A0305-02-0220-479
     步驟3. 化合物3與化合物4，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物5；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
    Figure 109116404-A0305-02-0220-481
     步驟4. 化合物5上的胺基保護基團PG3在去保護條件下被去除(如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物6；
    Figure 109116404-A0305-02-0220-482
     步驟5. 化合物6與結構式(IV)(即請求項17至20中任一項的結構式(IV))，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物7；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
    Figure 109116404-A0305-02-0221-483
     步驟6. 化合物7上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物VIII；
    Figure 109116404-A0305-02-0221-485
  36. 如請求項32的製備方法，其特徵在於，結構式(IX)的合成包括下列步驟中的一種或多種：羧酸化合物1與適當的含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯IX；或者，羧酸化合物1與氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯等，在有機鹼(如N-甲基嗎啡啉、三乙胺、二異丙基乙胺等有機鹼)存在下反應，得到具有反應活性的混合酸酐IX； 或者，羧酸化合物1與草醯氯，在三乙胺等有機鹼和催化劑量的DMF存在條件下，反應得到醯氯IX；
    Figure 109116404-A0305-02-0222-487
  37. 如請求項2至3中任一項的製備方法，其特徵在於，結構式為(II)的合成由結構式(X)和結構式(XI)縮合反應獲得：
    Figure 109116404-A0305-02-0222-489
     其中Y1和Y2基團縮合構成Y基團；Y1和Y2分別是NH2、-+NH3、COOH、COX、SO2Cl、P(O)Cl2、NHCOX、NHSO2Cl、NHP(O)Cl2、 NHP(O)(OH)Cl、
    Figure 109116404-A0305-02-0222-491
    (NHS)、
    Figure 109116404-A0305-02-0222-492
    (PFP)、
    Figure 109116404-A0305-02-0222-494
    Figure 109116404-A0305-02-0223-562
  38. 如請求項37的製備方法，其特徵在於，結構式(X)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0223-496
  39. 如請求項38的製備方法，其特徵在於，結構式(X)的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 含羧基的化合物1和化合物VI在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線，發生縮合反應，得到化合物2；其中Z1為Y1的前體，如經過適當基團保護的胺基、羧基、醯胺基、磷醯胺基和磺醯胺基、羧酸酯、磷酸酯、膦酸酯等；
    Figure 109116404-A0305-02-0224-497
    Figure 109116404-A0305-02-0224-498
     步驟2. 化合物2上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物3；
    Figure 109116404-A0305-02-0224-499
     步驟3. 含羧基化合物4和含胺基的化合物3在縮合劑作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物5；
    Figure 109116404-A0305-02-0224-559
    Figure 109116404-A0305-02-0225-501
     步驟4. 化合物5中的官能團Z1經過適當的化學轉換，如羧基和胺基的脫保護等操作，生成官能團Y1，得到化合物X；
    Figure 109116404-A0305-02-0225-502
  40. 如請求項37的製備方法，其特徵在於，結構式(XI)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0225-503
  41. 如請求項40的製備方法，其特徵在於，結構式(XI)的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 將化合物1溶解在有機溶劑，如四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、二甲亞碸中，用鹼，如氫化鈉、鈉、氫氧化鈉等拔氫，然後與化合物2(其中X為氯、溴、碘等鹵素或者其他離去基團)在一定的溫度下攪拌，反應得到化合物3；步驟2. 化合物3上的羧基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除，得到化合物XIa-1；步驟3. 將化合物1溶解在有機溶劑，如四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、二甲亞碸中，用鹼，如氫化鈉、鈉、氫氧化鈉等拔氫，然後與化合物4(在一定的溫度下攪拌，反應得到化合物5；步驟4. 化合物5上的羧基保護基團PG1在去保護條件下被去除，如叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除，得到化合物XIa-2；步驟5. 將化合物6溶解在有機溶劑中，如四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、二甲亞碸等，加入適當的有機鹼，如三乙胺、N,N-二異丙基乙胺、吡啶等，與甲基磺醯氯、4-甲苯磺醯氯等在0-5℃反應，得到化合物7；步驟6. 化合物7與氨水在水相或有機溶劑中，如甲醇、乙醇、乙腈、四氫呋喃、環氧六環等，發生反應，反應可適當加熱，得到化合物Xib；步驟7. 化合物7與疊氮化鈉在有機溶劑中，如四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、二甲亞碸等，發生反應，得到化合物8； 步驟8. 疊氮化合物8在鈀碳催化劑存在的條件下被氫化還原，或者三苯基膦和水的作用下被還原，得到化合物XIb；步驟9. 化合物7與二苄胺在有機溶劑中，如四氫呋喃、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、二甲亞碸等，在100℃發生反應，得到化合物9；步驟10. 將化合物9溶解在溶劑中，如乙酸乙酯、甲醇、乙醇、乙酸、四氫呋喃等，在一定的氫氣壓力下，在鈀碳催化劑上被還原，反應可適當加熱至45℃，得到化合物XIb。
  42. 如請求項2至3中任一項的製備方法，其特徵在於，結構式為(II)的合成由結構式(XII)和結構式(XIII)縮合反應獲得：
    Figure 109116404-A0305-02-0227-504
     其中X定義及縮合反應條件如請求項8至10中任一項所述。
  43. 如請求項42的製備方法，其特徵在於，結構式(XII)中的NH2基團是 以三氟乙酸鹽、鹽酸鹽、甲酸鹽、醋酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、檸檬酸鹽、丁二酸鹽、苯甲酸或磺酸鹽形式進行縮合反應。
  44. 如請求項42的製備方法，其特徵在於，結構式(XII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0228-505
  45. 如請求項44的製備方法，其特徵在於，結構式(XII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 化合物1與適當的含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酸的衍 生物化合物2；
    Figure 109116404-A0305-02-0229-506
     步驟2. 化合物2與化合物3，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物4；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
    Figure 109116404-A0305-02-0229-507
    Figure 109116404-A0305-02-0229-508
     步驟3. 化合物4上的胺基保護基團PG4在去保護條件下被選擇性地去除(如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物5；
    Figure 109116404-A0305-02-0229-509
     步驟4. 化合物5與結構式(IV)(即請求項17至20中任一項的結構式(IV))，在水相，一定的pH值條件(如pH=5.0-8.0)下，或者有機相，存在有機鹼(如TEA、DBU、DIPEA)或無機鹼(如Na2CO3、Cs2CO3、K2CO3、 NaHCO3)時，發生縮合反應，得到化合物6；反應也任選不使用任何鹼，但是需要控制合適的反應溫度和反應時間；
    Figure 109116404-A0305-02-0230-512
     步驟5. 化合物6上的胺基保護基團PG1在去保護條件下被去除(如胺基上的Cbz保護基可以在氫氣和鈀碳催化劑的作用下被切除)，胺基上的Boc保護基可以在酸性條件下被切除，得到化合物XII；
    Figure 109116404-A0305-02-0230-513
  46. 如請求項42的製備方法，其特徵在於，結構式(XIII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：
    Figure 109116404-A0305-02-0230-515
  47. 如請求項46的製備方法，其特徵在於，結構式(XIII)的合成包括下列步驟中的一種或多種：步驟1. 含羧基化合物1和含胺基的化合物2在縮合劑(如EDC、HATU、DIC、DCC)作用下，或者經過縮合反應路線發生縮合反應，得到化合物3；
    Figure 109116404-A0305-02-0231-516
    Figure 109116404-A0305-02-0231-518
     步驟2. 化合物3上的羧基保護基團PG1在去保護條件下被去除(如羧基上的叔丁基酯保護基可以在甲酸、乙酸、三氟乙酸、鹽酸、磷酸等的作用下被切除)，得到化合物4；
    Figure 109116404-A0305-02-0231-520
     步驟3. 羧酸化合物4與含羥基的化合物(如五氟苯酚或N-羥基琥珀醯亞胺)在縮合試劑存在時，發生縮合反應，得到具有反應活性的酯結構式(XIII)；或者，羧酸化合物4與氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯等，在有機鹼如N-甲基嗎啡啉、三乙胺、二異丙基乙胺等有機鹼存在下反應，得到具有反應活性的混合酸酐結構式(XIII)； 或者，羧酸化合物4與草醯氯，在三乙胺等有機鹼和催化劑量的DMF存在條件下，反應得到醯氯結構式(XIII)，
    Figure 109116404-A0305-02-0232-523
  48. 如請求項1的偶聯物，其特徵在於，所述式(I)化合物的結構如下：
    Figure 109116404-A0305-02-0232-564
    Figure 109116404-A0305-02-0232-560
    Figure 109116404-A0305-02-0232-528
    Figure 109116404-A0305-02-0232-529
  49. 一種化合物，其特徵在於，所述式(II)化合物結構如下：
    Figure 109116404-A0305-02-0233-531
    Figure 109116404-A0305-02-0233-532
    Figure 109116404-A0305-02-0233-533
    Figure 109116404-A0305-02-0233-535
  50. 一種藥物組合物，其包含請求項1及48中任一項的偶聯物或以請求項49的化合物構成的偶聯物，以及藥學上可接受的輔料。
  51. 一種如請求項1及48中任一項的偶聯物之用途，其係用於製備治療癌症、感染或自身免疫疾病之藥物。
  52. 一種如請求項49的化合物之用途，其係用於製備治療癌症、感染或自身免疫疾病之藥物。
  53. 一種如請求項50的藥物組合物之用途，其係用於製備治療癌症、感染或自身免疫疾病之藥物。
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