KR20220029725A - 세포-결합 분자-튜불리신 유도체 접합체 및 이의 제조 방법 - Google Patents

세포-결합 분자-튜불리신 유도체 접합체 및 이의 제조 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 분지형(측쇄) 링커를 사용한 튜불리신 유도체(유사체)와 세포-결합 분자의 접합을 포함하며, 생성된 접합체는 보다 양호한 약동학적 특성을 갖고, 따라서 비정상 세포를 보다 정확하게 표적화하여, 사멸시킬 수 있다. 본 발명은 또한 튜불리신 유사체 대 세포-결합 분자의 접합 및 이에 함유된 분자의 합성 방법 및 상기 접합체를 사용함으로써 암, 감염 및 자가면역 질환을 표적화 방식으로 치료하는 방법을 포함한다. 상기 긴 분지형 링커를 갖는 튜불리신 접합체는 표적화 전달 동안 증가된 반감기를 갖고, 혈액 순환 동안 비표적 세포, 조직 또는 기관에 최소한으로 노출되어, 표적외 독성을 감소시킨다.

Description

세포-결합 분자-튜불리신 유도체 접합체 및 이의 제조 방법
본 발명은 분지형(측쇄) 링커를 사용한 튜불리신(Tubulysin) 유도체(유사체(anolog))와 세포-결합 분자(cell-binding molecule)의 접합체에 관한 것이며, 생성된 접합체는 보다 양호한 약동학적 특성을 갖고, 따라서 비정상 세포를 보다 정확하게 표적화하여, 사멸시킬 수 있다. 본 발명은 또한 튜불리신 유도체(유사체) 대 세포-결합 분자의 접합 방법 및 소분자의 합성 방법 및 암, 감염 및 자가면역 질환을 위한 표적화 요법을 위해서 접합체를 사용하는 방법에 관한 것이다.
항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate: ADC)는 재발/불치성 호지킨 림프종의 경우 브렌툭시맙 베도틴(Adcetris)(문헌[Okeley, N., et al, Hematol Oncol. Clin. North. Am., 2014, 28, 13-25; Gopal, A., et al, Blood, 2015, 125, 1236-43]) 및 재발 HER2+ 유방암의 경우 아도트랜스투주맙 엠탄신(문헌[Peddi, P. and Hurvitz, S., Ther. Adv. Med. Oncol., 2014, 6(5), 202-9; Lambert, J. and Chari, R., J. Med. Chem., 2014, 57, 6949-64])의 임상적 성공에 의해서 입증된 바와 같이 암을 위한 가장 유망한 표적화된 요법 중 하나가 되었다. ADC의 3개의 중요한 성분인 단클론성 항체, 세포독성 페이로드(payload) 링키지 부위가 성공적인 ADC를 제조하기 위해서 모두 중요하다(문헌[L. Ducry and B Stump, Bioconj. Chem., 2010, 21, 5-13; G.S. Hamilton, Biologicals, 2015, 43, 318-32]). 각각의 성분의 연구가 30년 동안 진행되어 왔다. 링커의 경우, 그것은 페이로드의 특정 작용기에 대해서 반응성이어서, 전신 순환 동안 안정적인 접합체를 생성해야 하지만, 항원 결합 및 세포내 흡수 시에 페이로드를 쉽게 방출해야 하고, 중요하게는 링커-페이로드 모이어티가 순환 동안 오프-타깃(off-target)이 되는 경우 정상 조직에 유해하지 않아야 한다. 따라서, 기존의 링커 기술은 매우 제한적이다(문헌[Ponte, J. et al., Bioconj. Chem., 2016, 27(7), 1588-98; Dovgan, I., et al. Sci. Rep., 2016, 6, 30835; Ross, P. L. and Wolfe, J. L. J. Pharm. Sci., 105(2), 391-7; Chen, T. et al. J. Pharm. Biomed. Anal., 2016, 117, 304-10]).
특히 액상 종양의 치료를 위해서 사용된 초기 ADC의 경우, 링커는 매우 불안정적이어서, 순환 시에 페이로드를 조기에 방출하여 결과적으로 표적외 독성을 초래하였다(문헌[Bander, N. H. et al, Clin. Adv. Hematol. Oncol., 2012, 10, 1-16]). 현재 ADC의 생성의 경우, 링커는 보다 안정적이고, 세포독성제 또한 상당히 더 강력하다(문헌[Behrens, C. R. and Liu, B., mAbs, 2014. 6, 46-53]). 그러나, 지금까지 표적외 독성은 ADC 약물의 개발에서 여전히 중요한 도전이다(문헌[Roberts, S. A. et al, Regul. Toxicol. Pharmacol., 2013, 67, 382-91]). 예를 들어, 안정적인(비-절단성) MCC 링커를 사용하는 T-DM1(Kadcyla®)은 HER2-양성 전이성 유방암(mBC) 또는 mBC에 대해서 이미 치료된 환자 또는 보조 요법 6개월 이내에 종양 재발이 일어난 환자에게 임상에서 큰 이점을 나타내었다(문헌[Peddi, P. and Hurvitz, S., Ther. Adv. Med. Oncol., 2014, 6(5), 202 -209; Piwko C, et al, Clin. Drug Investig., 2015, 35(8), 487-93; Lambert, J. and Chari, R., J. Med. Chem., 2014, 57, 6949-64]). 그러나, T-DM1은 독성을 효능과 비교할 때 환자에 대한 제한된 이점으로 인해서, HER2 양성 국지적 진행성 비절제성 유방암 또는 전이성 유방암을 갖는 환자를 위한 1차 치료로서 또는 HER2-양성 진행성 위암을 갖는 환자를 위한 2차 치료로서의 임상 시험에서 실패하였다(문헌[Ellis, P. A., et al, J. Clin. Oncol., 2015, 33, (suppl; abstr 507 of 2015 ASCO Annual Meeting); Shen, K. et al, Sci Rep., 2016; 6: 23262; de Goeij, B. E. and Lambert, J. M. Curr. Opin. Immunol., 2016, 40, 14-23; Barrios, C. H. et al, J. Clin. Oncol., 2016, 34 (suppl; abstr 593 of 2016 ASCO Annual Meeting)]).
표적외 독성의 문제를 해결하기 위해서, ADC 화학 및 설계의 연구자들은 현제 링커, 페이로드 및 접합 방법의 범주를 예를 들어, 강력한 페이로드 단독을 사용할 뿐만 아니라. 특히 표적들/표적 질환에 대한 링커-페이로드의 활성을 다루는 것으로 확장하고 있다(문헌[Lambert, J. M. Ther. Deliv., 2016, 7, 279-82; Zhao, R. Y. et al, 2011, J. Med. Chem., 54, 3606-23]). 현재 산업 및 연구소에서의 다수의 약물 개발자들은 부위 특이적 접합을 위한 신규한 링커 및 방법을 개발하는데 상당히 초점을 맞추고 있는데, 이것은 더 긴 순환 반감기, 더 높은 효능, 잠재적으로 감소된 표적외 독성 및 더 양호한 생체내 약동학(PK) 특성뿐만 아니라 ADC 생산에서의 더 양호한 배취-대-배취 일관성을 가질 것이다(문헌[Hamblett, K. J. et al, Clin. Cancer Res., 2004, 10, 7063-70; Adem, Y. T. et al, Bioconj. Chem., 2014, 25, 656-664; BoylaN,N. J. Bioconj. Chem., 2013, 24, 1008-1016; Strop, P., et al, Chem. Biol., 2013, 20, 161-67; Wakankar, A. mAbs, 2011, 3, 161-172]). 이러한 특이적 접합 방법은 지금까지 조작된 시스테인(문헌[Junutula, J. R. et al. Nat. Biotechnol., 2008, 26, 925-32; Junutula, J. R., et al. Clin. Cancer Res., 2010, 16, 4769]; 미국 특허 제8,309,300호; 제7,855,275호; 제7,521,541호; 제7,723,485호, WO2008/141044), 셀레노시스테인(문헌[Hofer, T., et al. Biochemistry 2009, 48, 12047-57; Li, X., et al. Methods, 2014, 65, 133-8]; 미국 특허 제8,916,159호(US National Cancer Institute)), 퍼플루오로방향족 태그를 갖는 시스테인(문헌[Zhang, C. et al. Nat. Chem., 2015, 8, 1-9]), 티오푸코스(문헌[Okeley, N. M., et al. Bioconj. Chem.,2013, 24, 1650]), 비자연 아미노산(문헌[Axup, J. Y., et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA., 2012, 109, 16101-6; Zimmerman, E.S., et al., Bioconj. Chem., 2014, 25, 351-361; Wu, P., et al, Proc. Natl. Acad. Sci., 2009, 106, 3000-5; Rabuka, D., et al, Nat. Protoc., 2012, 7, 1052-67]; 미국 특허 제8,778,631호 및 미국 특허 출원 공개 제20100184135호, WO2010/081110; WO2006/069246, 2007/059312, 미국 특허 제7,332,571호, 제7,696,312호 및 제7,638,299호; WO2007/130453, 미국 특허 제7,632,492호 및 제7,829,659호); 다이브로모말레이미드에 의한 환원된 분자간 다이설파이드의 재브리징(re-bridging)(문헌[Jones, M. W. et al. J. Am. Chem. Soc., 2012, 134, 1847-52]), 비스-설폰 시약(문헌[Badescu, G. et al. Bioconj. Chem., 2014, 25, 1124-36]; WO2013/190272, WO2014/064424), 다이브로모피리다진다이온(문헌[Maruani, A. et al. Nat. Commun., 2015, 6, 6645]), 갈락토실트랜스퍼라제 및 시알릴트랜스퍼라제로의 N-글리칸의 변형(문헌[Zhou, Q. et al. Bioconj. Chem., 2014, 25, 510-520]; 미국 특허 출원 공개 제20140294867호(사노피-젠자임사(Sanofi-Genzyme)), 폼일글리신 생성 효소(formylglycine generating enzyme: FGE)를 사용한 효소적 생물접합(문헌[Drake, P. M. et al. Bioconj. Chem., 2014, 25, 1331-41]; Carrico, I. S. 등의 미국 특허 제7,985,783호; 제8,097,701호; 제8,349,910호, 및 미국 특허 출원 공개 제20140141025호, 제20100210543호), 포스포판테테이닐 트랜스퍼라제(PPTases)(문헌[Gruenewald, J. et al. Bioconj. Chem. 2015, 26, 2554-62]), 소타제(sortase) A(문헌[Beerli, R. R., et al. PLoS One 2015, 10, e0131177]), 스트렙토버티실리움 모바라엔스(Streptoverticillium mobaraense)로부터의 미생물 트랜스글루타미나제(mTG)(문헌[Strop, P., Bioconj. Chem. , 2014, 25, 855-62; Strop, P., et al., Chem. Biol. 2013, 20, 161-7]; 미국 특허 제8,871,908호) 또는 글루타민 태그를 인식하는 미생물 트랜스글루타미나제(문헌[Dennler, P., et al, 2014, Bioconj. Chem., 25, 569-78; Siegmund, V. et al. Angew. Chemie - Int. Ed., 2015, 54, 13420-4]; 미국 특허 출원 공개 제20130189287호; 미국 특허 제7,893,019호), 단백질 주쇄의 외부의 아이소펩타이드 결합의 형성을 촉매하는 효소/박테리아(문헌[Kang, H. J., et al. Science, 2007, 318, 1625-8; Zakeri, B. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2012, 109, E690-7; Zakeri, B. & Howarth, M. J. Am. Chem. Soc., 2010, 132, 4526-7])를 갖는 변형된 항체의 혼입을 포함한다.
본 발명자들은 예컨대, 브로모말레이미드 및 다이브로모말레이미드 링커(WO2014/009774), 2,3-이치환된 석신산/2-일치환된/2,3-이치환된 퓨마르산 또는 말레산 링커(WO2015/155753, WO20160596228), 아세틸렌다이카복실산 링커(WO2015/151080, WO20160596228) 또는 하이드라진 링커(WO2015/151081)를 사용하여 네이티브 항체의 환원된 쇄 간 다이설파이드 결합의 한 쌍의 티올을 재브리징시키는 몇몇 접합 방법을 개시하였다. 이러한 링커 및 방법으로 제조된 ADC는, 전통적인 비선택적인 시스테인 또는 라이신 접합 방법보다 더 양호한 치료 지수(therapeutic index)를 나타내었다. 본 명세서에서 본 발명자들은 긴 측쇄 링커를 함유하는 튜불리신 접합체의 부류를 개시한다. 긴 측쇄 링커는 항체-약물 접합체가 프로테이나제 또는 에스터라제에 의해서 가수분해되는 것을 예방하여, 순환계에서 접합체의 안정성을 개선시킬 수 있다.
강력한 세포독성제로서의 부류로서의 튜불리신은 당업계에 널리 공지되어 있고, 자연 공급원으로부터 단리될 수 있거나 공지된 방법에 따라서 합성에 의해서 제조되었다(예를 들어, 문헌[Balasubramanian, R., et al. J. Med. Chem., 2009, 52, 238-40; Wipf, P., et al. Org. Lett., 2004, 6, 4057-60; Pando, O., et al. J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 7692-5; Reddy, J. A., et al. Mol. Pharmaceutics, 2009, 6, 1518-25; Raghavan, B., et al. J. Med. Chem., 2008, 51, 1530-33; Patterson, A. W., et al. J. Org. Chem., 2008, 73, 4362-9; Pando, O., et al. Org. Lett., 2009, 11 (24), 5567-9; Wipf, P., et al. Org. Lett., 2007, 9 (8), 1605-7; Friestad, G. K., Org. Lett.,2004, 6, 3249-52; Peltier, H. M., et al. J. Am. Chem. Soc., 2006, 128, 16018-9; Chandrasekhar, S., et al J. Org. Chem., 2009, 74, 9531-4; Liu, Y., et al. Mol. Pharmaceutics, 2012, 9, 168-75; Friestad, G. K., et al. Org. Lett., 2009, 11, 1095-8; Kubicek, K., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2010.49: 4809-12; Chai, Y., et al., Chem Biol, 2010, 17: 296-309; Ullrich, A., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2009, 48, 4422-5; Sani, M., et al. Angew Chem Int Ed Engl, 2007, 46, 3526-9; Domling, A., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2006, 45, 7235-9]; 특허 출원: Zanda, M. 등의 캐나다 특허 출원 제CA 2710693호(2011); Chai, Y. 등의 유럽 특허 출원 제2174947호(2010), WO 2010034724; Leamon, C. 등의 WO2010033733, WO 2009002993; Ellman, J. 등의 PCT WO2009134279; WO 2009012958, 미국 출원 제20110263650호, 제20110021568호; Matschiner, G. 등의 WO2009095447; Vlahov, I. 등의 WO2009055562, WO 2008112873; Low, P. 등의 WO2009026177; Richter, W., WO2008138561; Kjems, J. 등의 WO 2008125116; Davis, M. 등의 WO2008076333; Diener, J. 등의 미국 특허 출원 제20070041901호, WO2006096754; Matschiner, G. 등의 WO2006056464; Vaghefi, F. 등의 WO2006033913; Doemling, A., Ger. Offen. DE102004030227, WO2004005327, WO2004005326, WO2004005269; Stanton, M. 등의 미국 특허 출원 공개 제20040249130호; Hoefle, G. 등의 Ger. Offen. DE10254439, DE10241152, DE10008089; Leung, D. 등의 WO2002077036; Reichenbach, H. 등의 독일 특허 제DE19638870호; Wolfgang, R., US20120129779; Chen, H.의 미국 출원 제20110027274호). 본 발명자들은 암, 감염 및 자가면역 질환의 표적화 치료를 위한 튜불리신 접합체의 구성을 개시하였다(PCT/IB2012/053554). 긴 분지형(측쇄) 링커를 함유하는 튜불리신 접합체의 본 발명은 표적화된 전달 동안 접합체의 반감기를 연장시키고, 혈액 순환 동안 비표적 세포, 조직 또는 기관에 대한 노출을 최소화시켜, 표적외 독성(off-target toxicity)을 감소시켰다.
본 발명은 분지형(측쇄) 링커를 사용한 튜불리신 유도체 대 세포-결합 분자의 접합에 관한 것이며, 이 접합체는 보다 양호한 약동학적 특성을 갖고, 따라서 비정상 세포를 보다 정확하게 표적화하여, 사멸시킬 수 있다. 본 발명은 또한 튜불리신 유사체와 세포 결합제의 접합 방법, 그 내에 사용된 튜불리신 분자의 합성 방법 및 접합체를 사용하는 표적화 방식으로 암, 감염 및 자가면역 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
일 양상에서 본 발명은 항체-튜불리신 B 유도체 접합체에 관한 것이며, 접합체는 하기 화학식 (I)의 구조 또는 하기 화학식 (I)로 표현되는 구조의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 화학식 (I)로 표현되는 구조의 다형성 결정질; 또는 화학식 (I)로 표현되는 구조의 광학 이성질체, 1개 이상의 수소(1H) 원자가 중수소(2H) 원자에 의해서 치환된 화학식 (I)의 구조, 또는 1개 이상의 12C 원자가 1개 이상의 13C 원자에 의해서 치환된 화학식 (I)의 구조이다:
Figure pct00001
식 중, P1은 H, COCH3, COH, PO(OH)2, CH2OPO(OH)2, SO2CH3, C6H11O5 (glycosides), CONHCH3, CON(CH3)2, CON(CH2CH2)2NCH3, CON(CH2CH3)2 또는 CON(CH2CH2)2CHN(CH2CH2)2CH2이고;
R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, C1-C6 알켄일, C1-C6 알킬에터(R1OR2), C1-C6 알킬카보닐(R1COR2), C1-C6 알킬에스터(R1COOR2), C1-C6 알킬카복시((R1COOH) 또는 C1-C6 알킬아미도기((R1CONHR2)이거나;
R1과 R2, R1과 R3, R2와 R3 또는 R3과 R4는 C2-C7 복소환식 또는 C2-C7 사이클로알킬 구조를 형성하며;
R5는 H, O-C1-C6 알킬, C(O)-H, C(O)-C1-C6 선형 또는 분지형 알킬, C(O)-NH-C1-C6 선형 또는 분지형 알킬 또는 C(O)-N(C1-C6 선형 또는 분지형 알킬)2이고;
R6, R7 및 R8은 독립적으로 H, C1-C6 알킬, C1-C6 알킬 에터(R1OR2), C1-C6 알킬카보닐(R1COR2), C1-C6 알킬 에스터(R1COOR2), C1-C6 알킬카복시(R1COOH) 또는 C1-C6 알킬아미도기(R1CONHR2)이고; 바람직하게는 R6, R7 및 R8은 독립적으로 H 또는 CH3이며;
mAb는 항체, 항체 단편, 단클론성 항체, 다클론성 항체, 나노바디, 전구약물 항체(프로바디) 또는 합성 분자 또는 단백질에 의해서 변형된 항체 또는 항체 단편이며;
L은 C2-C100 펩타이드 단위(1 내지 12개의 자연 또는 비자연 아미노산), 하이드라존, 다이설파이드, 에스터, 옥심, 아마이드 또는 티오에터 결합으로 구성된 친수성 분지형 쇄를 함유하는 링커이다.
또 다른 양상에서, 본 발명의 L은 하기와 같은 구조를 갖는다:
Figure pct00002
식 중, Aa는 L- 또는 D-자연 또는 비자연 아미노산이고;
r은 0 내지 12의 정수이며; r이 0이 아닌 경우, (Aa)r은 동일하거나 상이한 아미노산으로 구성된 펩타이드 단위이며;
m1은 1 내지 18의 정수이고; m2는 1 내지 100의 정수이며; m3은 1 내지 8의 정수이고; m4는 0 내지 8의 정수이며; m5는 1 내지 8의 정수이고;
Y는 NHC(=O), NHS(O2), NH(SO), NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH 또는 C(O)NH이며;
R9는 H, (O=)CR1, (O=)CNHR1, R1COOH, R1(COCH2NH)m2H, R1(Aa)r 또는 R1(COCH2NCH3)m2H이고;
R1, m2 및 (Aa)r은 상기와 동일하게 정의된다.
또한, 세포 표면 수용체 결합 분자 mAb는 펩타이드 또는 펩타이드-유사 구조를 포함하는 세포 결합 구조의 임의의 형태일 수 있다: 항체, 단일 쇄 항체, 표적 세포에 결합하는 항체 단편, 단클론성 항체, 단일 쇄 단클론성 항체 또는 표적 세포에 결합하는 단클론성 항체 단편, 키메라 항체, 표적 세포에 결합하는 키메라 항체 단편, 도메인 항체, 표적 세포에 결합하는 도메인 항체 단편, 항체를 모방하는 유전자 조작된 단백질; 피브로넥틴 결합제 어드넥틴(adnectin); 설계된 안키린 반복 단백질(DARPin); 림포카인; 호르몬; 비타민; 비타민; 성장 인자, 집락 자극 인자; 또는 영양분-수송 분자; 트랜스페린; 세포 표면 소분자 리간드; 또는 알부민, 중합체, 세포 결합 분자가 부착된 덴드리머; 또는 표면 상의 세포-결합 분자(결합 펩타이드, 단백질, 항체 또는 세포 표면 소분자 리간드)를 함유하는 중합체 물질, 단백질, 리포솜, 나노입자, 소낭(vesicle), 또는 (바이러스성) 캡시드.
세포-결합 분자-튜불리신 B 유사체 접합체의 제조
일 실시형태에서, 세포-결합 분자-튜불리신 B 유사체 접합체의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00003
식 중, 화학식 (II) 및 mAb에서 P1,
Figure pct00004
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 및 R8은 화학식 (I)에서와 동일하게 정의되고;
L'의 구조는 하기 (II-0) 및 (II-00)이며:
Figure pct00005
식 중, m1, m2, m3, m4, m5, Aa, r, Y 및 R9는 화학식 (I)에서와 동일하게 정의되고; 바람직하게는 L'의 구조는 하기와 같다:
Figure pct00006
Figure pct00007
식 중, m1, m2, m3, m4, m5, Aa, r 및 R9는 상기와 동일하게 정의된다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, mAb-SH의 제조 방법은 a) 내지 c)의 임의의 방법을 포함한다:
a) 항체, 항체 단편, 단클론성 항체, 다클론성 항체, 나노바디, 프로바디 또는 합성 분자 또는 단백질에 의해서 변형된 항체 또는 항체 단편의 중쇄와 경쇄, 중쇄와 중쇄들 간의 다이설파이드 결합 또는 다이설파이드내 결합의 환원제(바람직하게는, 트리스(2-카복시에틸) 포스핀(TCEP), 다이티오트레이톨(DTT), 다이티오에리트리톨(DTE), L-글루타티온(GSH), 2-머캅토에틸아민(β-MEA), 및/또는 β-머캅토에탄올(β-ME, 2-ME))에 의한 환원;
b) 항체의 아미노기와 트라우트 시약(Traut's reagent) 또는 티오락톤의 반응에 의한 설프하이드릴기의 제조;
Figure pct00008
c) 완충 시스템에서 생화학 반응에 의한 쉽게 환원되는 다이설파이드 결합의 항체 내로의 혼입, 그 다음 TCEP, DTT, GSH, β-MEA 또는 β-ME에 의한 환원:
Figure pct00009
.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 접합체의 합성에 사용되는 완충 시스템은 pH 5.0 내지 9.5, 1mM 내지 1000mM 인산, 아세트산, 시트르산, 붕산, 탄산, 바비투르산, 트리스(트라이메틸아미노메탄), 벤조산 또는 트라이에탄올아민 시스템 또는 이들의 혼합 완충 용액이고, 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 아이소프로판올, n-부탄올, 아이소부탄올, 아세토나이트릴, 아세톤, DMF, DMA 또는 DMSO의 0 내지 35% 수용성 유기 용매를 함유하며; 반응 온도는 0℃ 내지 45℃이고, 반응 온도는 5분 내지 96시간이다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (I)의 접합체는 접합 반응의 완결 후 한외여과 또는 칼럼 크로마토그래피 정제에 의해서 얻어진다. 정제 칼럼은 분자체 칼럼, 양이온성 칼럼, 음이온성 칼럼, 소수성(HIC) 칼럼, 역상 칼럼 또는 단백질 A 또는 G 친화성 칼럼을 포함한다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (II)의 화합물은 화학식 (III)의 튜불리신 B 유도체와 화학식 (L')의 화합물의 축합 반응에 의해서 얻어지고:
Figure pct00010
[식 중, X는 OH, 할로겐(F, Cl, Br 또는 I), 페녹시, 펜타클로로페녹시, 트라이플루오로메탄설폰일, 이미다졸, 다이클로로페녹시, 테트라클로로페녹시, 1-하이드록시벤조트라이아졸, p-톨루엔설폰일, 메탄설폰일, 2-에틸-5-페닐 아이속사졸-3'-설폰일기,
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
그 자체에 의해서 또는 다른 무수물과 함께 형성된 무수물, 예컨대, 아세트산 무수물 및 포름산 무수물; 또는 펩타이드 커플링 반응 중간체 또는 미츠노부 반응 중간체임];
축합 반응은 불활성 기체(질소, 아르곤, 헬륨) 보호와 함께 또는 보호 없이, -20 내지 150℃에서, 5분 내지 120시간 동안 1 내지 100% 피리딘, 트라이에틸아민 또는 다이아이소프로필에틸아민을 함유하는 다이클로로에탄, DMF, DMA, 테트라하이드로퓨란(THF), DMSO, 아세톤, 아이소프로판올, n-부탄올 또는 아세토나이트릴 또는 상기 2종 또는 3종의 혼합 용매에서 수행된다.
대안적으로, 완충 시스템은 0 내지 35%의 혼화성 유기 용매, 예컨대, 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 아이소프로판올, n-부탄올, 아이소부탄올, 아세토나이트릴, 아세톤, DMF, DMA 또는 DMSO를 함유하는 pH 5.0 내지 9.5, 1mM 내지 1000mM 인산, 아세트산, 시트르산, 붕산, 탄산, 바비투르산, Tris(트리스하이드록시메틸 아미노메탄), 벤조산 또는 트라이에탄올아민 시스템, 또는 이들의 혼합물이다. 반응 온도는 0 내지 45℃이고, 반응 시간은 5분 내지 96시간이다.
대안적으로, 화학식 (III)의 NH2기는 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 폼산, 아세트산, 황산, 인산, 질산, 시트르산, 석신산, 벤조산 또는 설폰산과의 염의 형태로 접합 반응에 참여한다.
X가 OH인 경우, 축합 반응의 진행은 (N-(3-다이메틸아미노프로필)-N'-에틸카보다이이미드)(EDC), 다이사이클로헥실카보다이이미드(DCC), N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC), N-사이클로헥실-N'-(2-몰폴리노-에틸)카보다이이미드 p-톨루엔설폰에이트(CMC 또는 CME-CDI), 카보닐다이이미다졸(CDI), O-벤조트라이아졸-N,N,N',N'-테트라메틸유레아 테트라플루오로보레이트(TBTU), O-벤조트라이아졸-테트라메틸유레아 헥사플루오로포스페이트(HBTU), (벤조트라이아졸-1-일옥시)트리스(다이메틸아미노)-포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP), (벤조트라이아졸-1-일옥시) 트라이피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP), 다이에틸 피로카보네이트(DEPC), N,N,N',N'-테트라메틸클로로벤즈아미딘 헥사플루오로포스페이트, 2-(7-옥소벤즈트라이아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU), 1-[(다이메틸아미노) (몰폴린일) 메틸렌]-1[1,2,3]트라이아졸로[4,5-b] 1-피리딘-3-옥시헥사플루오로포스페이트(HDMA), 2-클로로-1,3-다이메틸이미다졸륨 헥사플루오로포스페이트(CIP), 클로로트라이피롤리딘일포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyClOP), 비스(테트라메틸렌) 플루오로폼아마이드(BTFFH), N,N,N',N'-테트라메틸-설퍼-(1-옥소-2-피리딘일) 티우로늄 헥사플루오로포스페이트, 2-(2-피리돈-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유레아 테트라플루오로보레이트(TPTU), 설퍼-(1-옥소-2-피리딘일)-N,N,N',N'-테트라메틸티오유레아 헥사플루오로포스페이트, O-[(에톡시카보닐)사이안아마이드]-N,N,N',N'-테트라메틸티오유레아 헥사플루오로포스페이트(HOTU), (1-사이아노-2-에톡시-2-옥소이미노일옥시) 다이메틸아미노몰폴린카베늄 헥사플루오로포스페이트(COMU), O-(벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-비스(테트라메틸렌)우로늄 헥사플루오로포스페이트(HBPyU), N-벤질-N'-사이클로헥실 카보다이이미드(또는 고체 지지체에 존재함), 다이피롤리디노(N-석신이미딜옥시) 카베늄 헥사플루오로포스페이트(HSPyU), 1-(클로로-1-피롤리딘일메틸렌) 피롤리디늄 헥사플루오로포스페이트(PyClU), 2-클로로-1,3-다이메틸이미다졸륨 테트라플루오로보레이트(CIB), (벤조트라이아졸-1-일옥시) 다이피페리딘일카본 헥사플루오로포스페이트(HBPipU), (N,N,N',N'-테트라메틸-O-(6-클로로-1H-벤조트라이아졸-1-일)우로늄 테트라플루오로보레이트(TCTU), 브로모트리스(다이메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BrOP), 1-n-프로필포스포러스 무수물(PPACA, T3P®), 2-아이소사이아노에틸몰폴린(MEI), N,N,N',N'-테트라메틸유레아-옥시-(N-석신이미딜) 헥사플루오로포스페이트(HSTU), 2-브로모-1-에틸피리딘 테트라플루오로보레이트(BEP), 산소-[(에톡시카보닐) 사이아노메틸아민]-N,N,N',N'-테트라메틸티오유레아 테트라플루오로보레이트(TOTU), 4-(4,6-다이메톡시트라이아진-2-일)-4-메틸몰폴린 염산염(MMTM, DMTMM), 2-석신이미딜-1,1,3,3-테트라메틸유레아 테트라플루오로보레이트(TSTU), N,N,N',N'-테트라메틸-O-(3,4-다이하이드로-4-옥소-1,2)3-벤조트라이아진-3-일) 유레아 테트라플루오로보레이트(TDBTU), 아조다이카보닐다이피페리딘일(ADD), 비스(4-클로로벤질) 아조다이카복실레이트(DCAD), 다이-tert-부틸 아조다이카복실레이트(DBAD), 다이아이소프로필 아조다이카복실레이트(DIAD) 또는 다이에틸아조카복실레이트(DEAD)로부터 선택된 축합 시약을 필요로 한다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (III)의 튜불리신 B 유도체의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00014
Figure pct00015
식 중, R5'는 H, C1-C6 알킬, C1-C6 알켄일 또는 C1-C6 선형 또는 분지형 아미노알킬기이고; 다른 기는 상기와 동일하게 정의된다.
바람직하게는, 화학식 (III)의 튜불리신 B 유도체의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1: 다이에톡시아세토나이트릴 및 수성 암모늄 설파이드를 실온에서 교반하여 화합물 1, 2,2-다이에톡시티오아세트아마이드를 수득하는 단계:
Figure pct00016
단계 2: 무수 용매(예컨대, 무수 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, 아세토나이트릴, N,N-다이메틸폼아마이드, 메탄올 또는 아이소프로판올) 중의 화합물 1 및 브로모피루베이트를 가열시키고, 축합시켜 화합물 2를 수득하는 단계:
Figure pct00017
단계 3: 화합물 2를 용매(예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, 에틸 아세테이트, n-헵탄, 다이옥산, 아세토나이트릴)에 용해시키고, 루이스산(Lewis acid) 또는 양성자산(protonic acid)(예컨대, 염화수소산, 황산, 인산, 메탄설폰산, 폼산, 옥살산, 아세트산, p-톨루엔설폰산, 피리디늄 p-톨루엔설폰에이트, AlCl3, FeCl3, ZnCl2, BF3, BCl3, BBr3, TiCl4, ZnBr2 또는 LiBF4)의 존재 하에서 가수분해시켜 화합물 3을 수득하는 단계:
Figure pct00018
단계 4: 설핀아마이드를 저온(예컨대, -45 내지 -78℃) 하에서 n-부틸리튬에 의해서 탈양성자화시키고, 그 다음 루이스산의 존재 하에서 화합물 3과 축합시켜 화합물 4를 수득하는 단계(알돌 반응):
Figure pct00019
[산은 염화수소산, 황산, 인산, 메탄설폰산, 폼산, 옥살산, 아세트산, p-톨루엔설폰산, p-톨루엔설폰산 피리딘, AlCl3, FeCl3, ZnCl2, BF3, BCl3, BBr3, TiCl4, ZnBr2, LiBF4로부터 선택됨];
단계 5: 화합물 4를 저온(예를 들어, -45 내지 -78℃)에서 환원 시약(예컨대, NaBH4, LiBH4, Na(OAc)3BH, Na(CN)BH3 등)에 의해서 선택적으로 환원시켜 화합물 5를 수득하고, 루이스산(예를 들어 Ti(OEt)4)을 첨가하여 입체화학 결과를 제어하는 단계:
Figure pct00020
,
단계 6: 화합물 5를 용매(예컨대, 메탄올, 에탄올, 아이소프로판올, 테트라하이드로퓨란 또는 아세토나이트릴)에 용해시키고, tert-부틸설핀일기를 산, 예컨대, 염화수소산, 황산 및 인산에 의해서 제거하여 화합물 6을 수득하는 단계:
Figure pct00021
단계 7: 축합 시약(예컨대, DIC/HOBt, DCC/HOBt, EDC/HOBt, HATU, BOP, T3P 또는 BrOP)의 존재 하에서, 용매(예를 들어, n-헵탄, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드) 중의 화합물 6 및 아지도 산을 축합시켜 화합물 7을 수득하는 단계,
대안적으로, 아지도 산을 유기 염기(예컨대, 트라이에틸아민, 다이아이소프로필에틸아민, N-메틸몰폴린 등)의 존재 하에서 THF 중의 아이소부틸 클로로폼에이트와 반응시켜 혼합 무수물(mixed anhydride)을 수득하고, 이것을 화합물 6의 염산염과 축합시켜 7을 제공하는 단계;
대안적으로, 용매(예컨대, n-헵탄, n-헥산, 다이클로로메탄 또는 테트라하이드로퓨란) 중의 아지도 산을 트라이에틸아민 및 DMF(촉매량)의 존재 하에서 옥살릴 클로라이드와 반응시켜 아실 클로라이드를 생성시키고, 그 다음 이것을 화합물 6(염산염)과 축합시켜 7을 제공하는 단계:
Figure pct00022
단계 8: 용매(예컨대, 다이클로로메탄, 테트라하이드로퓨란 또는 아세토나이트릴) 중에서, 화합물 7의 하이드록실기를 유기 염기(예컨대, 이미다졸, 트라이에틸아민 또는 피리딘)의 존재 하에서 하이드록실 보호 시약(예컨대, TESCl 사용)과 반응시켜 보호된 화합물 8을 수득하는 단계:
Figure pct00023
단계 9: 용매(예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄 또는 아세토나이트릴) 중의 화합물 8을 염기(예컨대, KHMDS, LiHMDS, NaHMDS, KOtBu, NaH 또는 KH)를 첨가하여 탈양성자화시키고, 그 다음 아이오도메탄, 브로모메탄, 다이메틸 설페이트, 메틸 트라이플루오로메탄설폰에이트, 아이오도에탄 등으로 알킬화시켜, 화합물 9를 수득하는 단계:
Figure pct00024
단계 10: 화합물 9를 용매(예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄 또는 에틸 아세테이트)에 용해시키고, 아지도기를 특정 조건, 예컨대, H2 및 Pd/C, 트라이페닐포스핀 및 물(스타우딩거(Staudinger) 반응) 하에서 아미노기로 환원시키고, 그 다음 유사한 반응성을 갖는 산 또는 산 유도체와 축합시켜 화합물 10을 제공하는 단계:
Figure pct00025
단계 11: 화합물 10의 하이드록실 보호기 PG1을 적절한 조건(예를 들어, TES 보호기를 THF 중의 HCl, THF/MeOH/AcOH, n Bu4NF 또는 HF-피리딘에서 탈보호시킬 수 있음) 하에서 탈보호시켜 화합물 11을 수득하는 단계:
Figure pct00026
단계 12: 에스터 화합물 11을 염기(예컨대, LiOH, NaOH 또는 KOH) 또는 다른 적합한 조건(예컨대, 메틸 에스터는 LiCl, LiI, Me3SiOK 등에 의해서 카복실산으로 전환시킬 수 있음)에 적용시켜 산 12로 전환시키는 단계:
Figure pct00027
단계 13: 염기(예컨대, 트라이에틸아민, N,N-다이아이소프로필에틸아민 또는 피리딘) 및 촉매(예컨대, DMAP)의 존재 하에서, 화합물 12를 특정 온도(예컨대, 0℃ 내지 23℃)에서 무수물, 예컨대, 아세트산 무수물, 프로피온산 무수물, 아이소-프로피온산 무수물, 또는 아실 할라이드, 예컨대, 아세틸 할라이드, 프로피오닐 할라이드, 카바모일 할라이드, 메틸카바모일 할라이드, 에틸카바모일 할라이드, 다이메틸카바모일 할라이드와 반응시켜 화합물 13을 수득하는 단계이되, 상기 반응은 염기 또는 촉매 없이 수행될 수 있는, 상기 수득하는 단계:
Figure pct00028
단계 14: 화합물 13을 축합 시약, 예컨대, EDC, DIC, DCC, HATU, HBTU의 존재 하에서 하이드록실-함유 화합물, 예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드와 축합시켜 반응성 에스터 14를 수득하는 단계:
Figure pct00029
단계 15: 화합물 15 및 화합물 14를 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하에서 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액 또는 유기 용액에서 축합시켜 화합물 16을 수득하는 단계로서, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도(0℃ 내지 23℃) 및 반응 시간(30분 내지 18시간)이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계:
Figure pct00030
단계 16: 화합물 16의 나이트로기를 환원 조건, 예컨대, H2 및 Pd/C 촉매, 하이드라진 수화물 및 FeCl3, 철 분말 및 아세트산 등 하에서 아미노기로 환원시켜 화합물 III을 수득하는 단계:
Figure pct00031
.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (L')의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00032
Figure pct00033
바람직하게는, 화학식 (L')의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1: 화합물 1-1 및 화합물 1-2를 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 직접 축합시키거나, 화합물 1-2를 펜타플루오로페놀, 나이트로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드와 반응시켜 상응하는 활성 에스터를 수득하고, 그 다음 축합 시약, 예컨대, DIC 또는 EDC의 존재 하에서, 화합물 1-1과 반응시켜 1a를 수득하는 단계,
대안적으로, 화합물 1-3 및 화합물 1-4를 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서의 직접 축합시키거나 또는 다른 간접 축합 반응 경로를 통해서 축합시켜 화합물 1b를 수득하는 단계;
Figure pct00034
단계 2: 화합물 1의 카복실 보호기 PG2를 탈보호 시약(예컨대, 산에 의해서 tert-부틸 에스터를 제거함)에 의해서 제거하여 화합물 2를 수득하는 단계;
Figure pct00035
단계 3: 산 화합물 2 및 아민 화합물 3을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 또는 다른 간접 축합 반응 경로를 통해서 축합시켜 화합물 4를 수득하는 단계:
Figure pct00036
단계 4: 화합물 4의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여 화합물 5를 수득하는 단계:
Figure pct00037
단계 5: 카복실산 6 및 아민 5를 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 또는 다른 간접 축합 반응 경로를 통해서 축합시켜 화합물 7을 수득하는 단계:
Figure pct00038
단계 6: 화합물 7의 카복실 보호기 PG3을 탈보호 조건, 예컨대, tert-부틸 에스터 보호기의 경우에는 산(폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등) 하에서 제거하여 화합물 8을 수득하는 단계:
Figure pct00039
단계 7: 화합물 8을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 하이드록실기를 함유하는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀또는 N-하이드록시석신이미드)과 반응시키거나, 또는 다른 카복실산 활성화 화합물과 반응시켜, 반응성 에스터 L'를 수득하는 단계:
Figure pct00040
.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 화학식 (L')의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00041
바람직하게는, 화학식 (L')의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1: 화합물 1의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여 화합물 2를 수득하는 단계:
Figure pct00042
;
단계 2: 아미노 화합물 2 및 카복실산 3을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서, 또는 다른 간접 축합 반응 경로를 통해서 축합시켜, 화합물 4를 수득하는 단계:
Figure pct00043
;
단계 3: 화합물 4의 카복실 보호기 PG2를 tert-부틸 에스터 보호기의 절단을 위한 탈보호 조건, 예컨대, 산(폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등) 하에서 제거하여 화합물 5를 수득하는 단계:
Figure pct00044
;
단계 4: 카복실산 5 및 아민 6을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서, 또는 다른 간접 축합 반응 경로를 통해서 축합시켜 화합물 7을 수득하는 단계:
Figure pct00045
;
단계 5: 화합물 7의 카복실 보호기 PG3을 tert-부틸 에스터 보호기의 절단을 위한 탈보호 조건, 예컨대, 산(폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등) 하에서 제거하여 화합물 8을 수득하는 단계:
Figure pct00046
단계 6: 화합물 8을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 하이드록실기(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)를 함유하는 화합물과 반응시키거나 또는 다른 카복실산 활성화 화합물과 반응시켜 반응성 에스터 9를 수득하는 단계;
Figure pct00047
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (II)의 화합물의 합성은 화학식 (IV)의 화합물과 화학식 (V)의 화합물의 축합 반응에 의해서 달성된다:
Figure pct00048
식 중, X의 정의 및 축합 반응 조건은 상기와 동일하다.
화학식 (V)의 NH2기는 바람직하게는 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 폼산, 아세트산, 황산, 인산, 질산, 시트르산, 석신산, 벤조산 또는 설폰산과의 염의 형태로 접합 반응에 참여한다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (IV)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00049
바람직하게는, 화학식 (IV)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
카복실산 1 및 하이드록실기를 갖는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)을 축합 시약(예컨대, EDC, DIC, DCC, HATU 또는 HBTU)의 존재 하에서 축합시켜 반응성 에스터를 수득하는 단계;
대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기(예컨대, N-메틸몰폴린, 트라이에틸아민, 다이아이소프로필에틸아민 등)의 존재 하에서 에틸 클로로폼에이트, 아이소부틸 클로로폼에이트 등과 반응시켜 반응성 혼합 무수물을 수득하는 단계;
대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기, 예컨대, 트라이메틸아민, 및 촉매량의 DMF(예컨대, 0.01당량 내지 0.5당량)의 존재 하에서 옥살릴 클로라이드와 반응시켜 아실 클로라이드를 수득하는 단계.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (V)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00050
바람직하게는, 화학식 (V)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1. 화합물 1 및 화합물 2를 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액에서 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 3을 수득하는 단계이되,
선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계:
Figure pct00051
단계 2. 화합물 3의 아미노 보호기 PG4를 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여 화합물 V를 수득하는 단계:
Figure pct00052
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화합물 2의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00053
,
식 중, 화합물 8(화합물 XIVa)은 이전 실시형태에서의 화합물 2이고; PG4는 아미노 보호기이다.
바람직하게는, 화합물 2의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1. 0 내지 60℃에서 적절한 용매(예컨대, 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 아세토나이트릴, 클로로메탄 등) 또는 상기 임의의 용매와 물의 용매 혼합물 중의 L-타이로신(1)의 에스터 유도체에 벤질 클로라이드, 벤질 브로마이드 또는 다른 벤질 화합물을 첨가하고, 그 후에 유기 또는 무기 염기, 예컨대, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 중탄산나트륨, 중탄산칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 트라이에틸아민, DBU, 소듐 하이드라이드 등 및 선택적으로 적절한 첨가제, 예컨대, 소듐 아이오다이드 또는 상 전달(phase transfer) 촉매, 예컨대, 벤질트라이에틸암모늄 클로라이드(TEBA), 테트라부틸암모늄 브로마이드(TBAB), 테트라부틸암모늄 암모늄 클로라이드, 테트라부틸암모늄 바이설페이트, 트라이옥틸메틸암모늄 클로라이드, 도데실 트라이메틸 암모늄 클로라이드, 테트라데실 트라이메틸 암모늄 클로라이드 등을 첨가하여 화합물 2를 수득하는 단계;
단계 2. 화합물 2를 유기 용매(예컨대, 다이클로로메탄, 테트라하이드로퓨란, 메탄올, 에탄올, 에터 등)에 용해시키고, 그 다음 선택적으로 환원 시약의 활성을 조정하기 위한 첨가물(예컨대, I2, FeCl3, ZnCl2, MgCl2, LiCl 또는 CaCl2)의 존재 하에서 환원 시약, 예컨대, LiAlH4, DIBAL, NaBH4, LiBH4, 소듐 비스(2-메톡시에톡시)알루미늄하이드라이드(Red-Al), 다이보란 보로에탄 등과 반응시켜, 화합물 3을 수득하는 단계;
단계 3. 알코올 3을 산화 조건 예컨대, 스원(Swern) 산화(옥살릴 클로라이드, DMSO, 트라이에틸아민), 파리크-도어링(Parikh-Doering) 산화(설퍼 트라이옥사이드), 데스-마틴(Dess-Martin) 산화 등 하에서 산화시켜, 알데하이드 4를 수득하는 단계;
단계 4. 알데하이드 4를 포스페이트 에스터(호너-워즈워쓰-에몬스 반응(Horner-Wadsworth-Emmons reaction)) 또는 인 일리드(phosphorus ylide)(비티그 반응(Wittig reaction))와 반응시켜 탄소 쇄를 연장시켜 화합물 5를 수득하는 단계;
단계 5. 화합물 5의 이중 결합을 균질 또는 불균질 촉매의 존재 하에서 환원시키는 단계로서, 벤질기가 또한 제거되어, 입체화학적으로 순수한 화합물 또는 두 부분입체이성질체의 혼합물을 수득하는 단계이되; 상기 불균질 촉매는 Pd/C, Pd(OH)2/C, Pd/BaSO4, PtO2, Pt/Al2O3, Ru/C, 라니 Ni 등을 포함하고, 상기 균질 비대칭 수소화 촉매는 크랩트리(Crabtree) 촉매, [Ru (II)-(BINAP)]-유형 촉매, [(Ph3P)CuH]6 등을 포함하는, 상기 환원시키는 단계;
단계 6. 화합물 6을 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 아세토나이트릴, 다이클로로메탄에 용해시키고, 질화를 수행하는 단계로서, 상기 질화 시약은 질산, 질산/아세트산, 질산칼륨/황산, tert-부틸 나이트라이트, 질산/트라이플루오로아세트산 무수물, NO2BF4, 나이트로피리딘 등을 포함하는, 상기 질화를 수행하는 단계;
단계 7. 화합물 7의 나이트로기를 H2/Pd/C, Fe 또는 Zn/HOAc 또는 SnCl2/HCl을 포함하는 적합한 조건 하에서 아미노기로 환원시키는 단계.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화합물 2의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00054
식 중, 화합물 8(화합물 XIVb)은 화합물 2이다.
바람직하게는, 화합물 2의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1: 화합물 1을 -78℃ 내지 -45℃에서 에반스 카이럴(Evans' chiral) N-아실 옥소아졸리딘온 또는 티오케톤 2와 알돌 반응시켜, 입체화학적으로 순수한 화합물 3을 수득하는 단계로서, 식 중, X는 O 또는 S이고, R16은 H, 메틸, 페닐이며, R17은 H, 메틸, 아이소프로필, 페닐, 벤질 등인, 상기 수득하는 단계;
단계 2: 화합물 3의 하이드록실기를 바톤-맥콤비 탈산소화 조건(Barton-McCombie deoxygenation condition) 하에서 탈산소화시키는 단계이되, 즉, 알코올을 먼저 티오카보닐 유도체, 예컨대, 알킬 잔테이트, 페닐 카보티올레이트, 이미다졸 카보티올레이트로 전환시키고, 그 다음 Bu3SnH로 처리하여 라디칼 절단을 수행하고, 탈수소화 생성물을 제공하는 단계이며, 상기 라디칼 절단 조건은 n-Bu3SnH/AIBN,N-Bu3SnH/AIBN/n-BuOH/PMHS 및 (Bu4N)2S2O8/HCO2Na를 포함하는, 상기 탈산소화시키는 단계;
단계 3: 화합물 4를 테트라하이드로퓨란에 용해시키고, 에반스 카이럴 보조기(chiral auxiliary group)를 LiOH/H2O2에 의해서 절단하여 상응하는 산 5를 수득하는 단계;
단계 4: 화합물 5를 유기 용매(예컨대, 에틸 아세테이트, 메탄올, 다이클로로메탄, 에탄올 또는 아세트산 등)에 용해시키고, Pd/C 촉매의 존재 하에서 수소화시키는 단계이되, 상기 벤질기가 또한 제거되어, 화합물 6을 수득하는 단계;
단계 5: 화합물 6을 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 아세토나이트릴, 다이클로로메탄에 용해시키고, 질화시키는 단계이되, 상기 질화 시약은 질산, 질산/아세트산, 질산칼륨/황산, tert-부틸 나이트라이트, 질산/트라이플루오로아세트산 무수물, NO2BF4, 나이트로피리딘 등을 포함하는, 상기 질화시키는 단계;
단계 6: 화합물 7의 나이트로기를 적합한 조건, 예컨대, H2/Pd/C, Fe 또는 Zn/HOAc 또는 SnCl2/HCl 하에서 아미노기로 전환시켜, 입체화학적으로 순수한 화합물 8을 수득하는 단계.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (II)의 화합물은 화학식 (VI)의 화합물과 화학식 (VII)의 화합물의 축합 반응에 의해서 얻어진다:
Figure pct00055
식 중, X의 정의 및 축합 반응 조건은 상기와 동일하고;
화학식 (VI)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00056
바람직하게는, 화학식 (VI)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1: 축합 시약의 존재 하에서 화합물 1을 하이드록실기를 함유하는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)과 반응시켜, 반응성 카복실산 유도체 화합물 2를 수득하는 단계:
Figure pct00057
;
단계 2: 화합물 2와 화합물 3을 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액에서 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 4를 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계:
Figure pct00058
;
단계 3: 화합물 4의 아미노 보호기 PG4를 적절한 탈보호 조건, 적절한 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 선택적으로 제거하여, 화합물 5를 수득하는 단계:
Figure pct00059
;
단계 4: 화합물 5 및 화학식 (IV)의 화합물을 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액, 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 6을 수득하는 단계로서, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계:
Figure pct00060
;
단계 5: 화합물 6의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여, 화합물 VI을 수득하는 단계:
Figure pct00061
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (VII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00062
바람직하게는, 화학식 (VII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1: 카복실산 1과 하이드록실기를 갖는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 축합시켜 반응성 에스터를 수득하는 단계;
대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기(예컨대, N-메틸몰폴린, 트라이에틸아민, 다이아이소프로필에틸아민 등)의 존재 하에서 에틸 클로로폼에이트, 아이소부틸 클로로폼에이트 등과 반응시켜 반응성 혼합 무수물을 수득하는 단계;
대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기, 예컨대, 트라이메틸아민, 및 촉매량의 DMF(예컨대, 0.01당량 내지 0.5당량)의 존재 하에서 옥살릴 클로라이드와 반응시켜, 아실 클로라이드를 수득하는 단계;
Figure pct00063
.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (II)의 화합물은 화학식 (VIII)의 화합물과 화학식 (IX)의 화합물의 축합 반응에 의해서 얻어진다:
Figure pct00064
식 중, X의 정의 및 축합 반응 조건은 상기와 동일하고, 화학식 (VIII)의 NH2기는 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 폼산, 아세트산, 황산, 인산, 질산, 시트르산, 석신산, 벤조산 또는 설폰산과의 염의 형태로 접합 반응에 참여한다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 화학식 (VIII)의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00065
Figure pct00066
바람직하게는, 화학식 (VIII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1: 화합물 1의 카복실 보호기 PG3을 tert-부틸 에스터 보호기의 절단을 위한 탈보호 조건, 예컨대, 산(폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등) 하에서 제거하여, 화합물 2를 수득하는 단계:
Figure pct00067
단계 2: 화합물 2를 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 하이드록실기를 함유하는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)과 반응시켜, 반응성 에스터 3을 수득하는 단계:
Figure pct00068
단계 3: 화합물 3과 화합물 4를 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액, 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 5를 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계:
Figure pct00069
단계 4: 화합물 5의 아미노 보호기 PG4를 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매, 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여, 화합물 6을 수득하는 단계:
Figure pct00070
단계 5: 화합물 6 및 화학식 (IV)의 화합물을 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액, 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 7을 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계;
Figure pct00071
단계 6. 화합물 7의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여, 화합물 VIII을 수득하는 단계:
Figure pct00072
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (IX)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
카복실산 1과 하이드록실기를 갖는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)을 축합 시약의 존재 하에서 축합시켜 반응성 에스터 IX를 수득하는 단계;
대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기(예컨대, N-메틸몰폴린, 트라이에틸아민, 다이아이소프로필에틸아민 등)의 존재 하에서 에틸 클로로폼에이트, 아이소부틸 클로로폼에이트 등과 반응시켜 반응성 혼합 무수물 IX를 수득하는 단계;
대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기, 예컨대, 트라이메틸아민, 및 촉매량의 DMF의 존재 하에서 옥살릴 클로라이드와 반응시켜, 아실 클로라이드 IX를 수득하는 단계:
Figure pct00073
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (II)의 화합물은 화학식 (X)의 화합물과 화학식 (XI)의 화합물의 축합 반응에 의해서 얻어진다:
Figure pct00074
식 중, Y1과 Y2는 축합하고; Y1 및 Y2는 각각 NH2, -+NH3, COOH, COX, SO2Cl, P(O)Cl2, NHCOX, NHSO2Cl, NHP(O)Cl2, NHP(O)(OH)Cl,
Figure pct00075
.
Figure pct00076
Figure pct00077
이다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (X)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00078
바람직하게는, 화학식 (X)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1: 카복실산 1과 화합물 VI을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서, 또는 다른 간접 축합 반응 경로를 통해 축합시켜, 화합물 2를 수득하는 단계이되, Z1은 Y1의 전구체, 예컨대, 보호된 아민, 보호된 카복실산, 아마이드, 포스포아마이드, 설폰아마이드, 카복실레이트, 포스페이트, 포스포네이트 등인, 상기 수득하는 단계;
Figure pct00079
단계 2: 화합물 2의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여 화합물 3을 수득하는 단계;
Figure pct00080
단계 3: 카복실산 4와 아민 3을 축합 시약의 존재 하에서 또는 다른 간접 축합 반응 경로를 통해 축합시켜, 화합물 5를 수득하는 단계;
Figure pct00081
단계 4: 화합물 5의 작용기 Z1을 적절한 화학 조작, 예컨대, 카복실산 및 아민의 탈보호에 의해 작용기 Y1로 전환시켜, 화합물 X를 형성시키는 단계:
Figure pct00082
.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (XI)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00083
바람직하게는, 화학식 (XI)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1: 화합물 1을 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드, 다이메틸 설폭사이드에 용해시키고, 그 다음 염기, 예컨대, 소듐 하이드라이드, 나트륨, 수산화나트륨 등으로 탈양성자화시키고, 그 다음 적절한 온도에서 화합물 2(식 중, X는 염소, 브로민, 아이오딘 등 또는 이탈기임)와 반응시켜 화합물 3을 수득하는 단계;
단계 2: 화합물 3의 카복실 보호기 PG1을 탈보호 조건 하에서 제거하고, 예를 들어, tert-부틸 에스터 보호기를 폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등에 의해서 제거하여 화합물 XIa-1을 수득할 수 있는 단계;
단계 3: 화합물 1을 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드, 다이메틸 설폭사이드에 용해시키고, 그 다음 염기, 예컨대, 소듐 하이드라이드, 나트륨, 수산화나트륨 등으로 탈성자화시키고, 적절한 온도에서 화합물 4와 반응시켜 화합물 5를 수득하는 단계;
단계 4: 화합물 5의 카복실 보호기 PG1을 탈보호 조건 하에서 제거하고, 예를 들어, tert-부틸 에스터 보호기를 폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등에 의해서 제거하여, 화합물 XIa-2를 수득하는 단계;
단계 5: 화합물 6을 적절한 유기 염기, 예컨대, 트라이에틸아민, N,N-다이아이소프로필에틸아민, 피리딘 등의 존재 하에서 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드, 다이메틸 설폭사이드 등에 용해시키고, 그 다음 0 내지 5℃에서 메틸설폰일 클로라이드, 4-톨루엔설폰일 클로라이드 등과 반응시켜 화합물 7을 수득하는 단계;
단계 6: 화합물 7 및 암모니아를 선택적으로 가열 하에서 물 또는 유기 용매, 예컨대, 메탄올, 에탄올, 아세토나이트릴, 테트라하이드로퓨란, 다이옥산 등에서 반응시켜, 화합물 XIb를 수득하는 단계;
단계 7: 화합물 7 및 소듐 아자이드를 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드, 다이메틸 설폭사이드 등에서 반응시켜, 화합물 8을 수득하는 단계;
단계 8: 아자이드 8을 수소화 조건(Pd/C 사용) 또는 트라이페닐포스핀 및 물의 조건 하에서 환원시켜, 화합물 XIb를 제공하는 단계;
단계 9: 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드, 다이메틸 설폭사이드 등, 바람직하게는 N,N-다이메틸폼아마이드 중의 화합물 7 및 다이벤질아민을 100℃까지 가열시켜, 화합물 9를 수득하는 단계;
단계 10: 화합물 9를 유기 용매, 예컨대, 에틸 아세테이트, 메탄올, 에탄올, 아세트산, 테트라하이드로퓨란 등에 용해시키고, Pd/C 촉매의 존재 하에서 H2 하에서 수소화시켜, 화합물 XIb를 수득하는 단계이되, 선택적으로 반응은 45℃까지 가열될 수 있는, 상기 수득하는 단계.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (II)의 화합물은 화학식 (XII)의 화합물과 화학식 (XIII)의 화합물의 축합 반응에 의해서 얻어진다:
Figure pct00084
식 중, X의 정의 및 축합 반응 조건은 상기와 동일하다.
바람직하게는, 화학식 (XII)의 NH2기는 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 폼산, 아세트산, 황산, 인산, 질산, 시트르산, 석신산, 벤조산 또는 설폰산과의 염의 형태로 접합 반응에 참여한다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (XII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00085
바람직하게는, 화학식 (XII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1: 화합물 1을 축합 시약의 존재 하에서 하이드록실기를 함유하는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)과 반응시켜, 반응성 카복실산 유도체 2를 수득하는 단계:
Figure pct00086
단계 2: 화합물 2와 화합물 3을 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액, 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 4를 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계;
Figure pct00087
단계 3: 화합물 4의 아미노 보호기 PG4를 적절한 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 선택적으로 제거하여, 화합물 5를 수득하는 단계:
Figure pct00088
단계 4: 화합물 5와 화학식 (IV)의 화합물을 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액, 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 6을 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계;
Figure pct00089
단계 5: 화합물 6의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여, 화합물 XII를 수득하는 단계:
Figure pct00090
.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 접합체의 제조 방법에서, 화학식 (XIII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
Figure pct00091
바람직하게는, 화학식 (XIII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함한다:
단계 1: 카복실산 1과 아민 2를 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서, 또는 다른 간접 축합 반응 경로를 통해서 축합시켜, 화합물 3을 수득하는 단계;
Figure pct00092
단계 2: 화합물 3의 카복실 보호기 PG1을 tert-부틸 에스터 보호기의 절단을 위한 탈보호 조건, 예컨대, 산(폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등) 하에서 제거하여, 화합물 4를 수득하는 단계:
Figure pct00093
단계 3: 카복실산 4를 축합 시약의 존재 하에서 하이드록실기를 함유하는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)과 반응시켜, 반응성 에스터 (XIII)을 수득하는 단계,
대안적으로, 카복실산 4를 유기 염기(예컨대, N-메틸몰폴린, 트라이에틸아민, 다이아이소프로필에틸아민 등)의 존재 하에서 에틸 클로로폼에이트, 아이소부틸 클로로폼에이트 등과 반응시켜 반응성 혼합 무수물 XIII을 수득하는 단계,
대안적으로, 카복실산 4를 유기 염기, 예컨대, 트라이메틸아민, 및 촉매량의 DMF의 존재 하에서 옥살릴 클로라이드와 반응시켜, 아실 클로라이드 (XIII)을 수득하는 단계:
Figure pct00094
.
화학식 (II)의 화합물의 바람직한 구조는 다음과 같다:
Figure pct00095
또 다른 구체적인 실시형태에서, 약제학적 조성물은 상기에 언급된 접합체 중 임의의 하나 또는 상기 화합물과 세포-결합 분자에 의해서 제조된 접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함한다. 상기에 언급된 접합체 중 어느 하나는 암, 감염 또는 자가면역 질환의 치료를 위한 의약의 제조에 사용될 수 있다.
도 1은 튜불리신 유도체의 화합물 13 및 18의 합성을 도시한 도면.
도 2는 튜불리신 유도체의 중간체 화합물 34의 합성을 도시한 도면.
도 3은 튜불리신 유도체의 중간체 화합물 37, 38 및 45의 합성을 도시한 도면.
도 4는 튜불리신 유도체의 중간체 화합물 57의 합성을 도시한 도면.
도 5는 튜불리신 유도체의 중간체 화합물 71의 합성을 도시한 도면.
도 6은 튜불리신 유도체 72의 합성을 도시한 도면.
도 7은 BALB/c 누드 마우스에서 이종이식 종양에 대한 접합체의 생체내 항종양 활성을 도시한 도면.
도 8은 Her2-튜불리신 유사체 접합체의 세포독성 연구 및 T-DM1와의 비교를 도시한 도면.
정의
"알킬"은 1 내지 8개의 탄소 원자를 함유하는 선형 또는 환식 선형 또는 분지형 지방족 탄화수소를 지칭한다. 분지형 쇄는 1개 이상의 저급 알킬기, 예컨대, 메틸, 에틸 또는 프로필이 연결된 선형 알킬기를 지칭한다.
"알킬기"는 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, t-부틸, n-펜틸, 3-펜틸, 옥틸, 노닐, 데실, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 2,2-다이메틸부틸, 2,3-다이메틸부틸, 2,2-다이메틸펜틸, 2,3-다이메틸펜틸, 3,3-다이메틸펜틸, 2,3,4-트라이메틸펜틸, 3-메틸-헥실, 2,2-다이메틸헥실, 2,4-다이메틸헥실, 2,5-다이메틸헥실, 3,5-다이메틸헥실, 2,4-다이메틸펜틸, 2-메틸헵틸, 3-메틸헵틸, n-헵틸, 아이소헵틸, n-옥틸 및 아이소옥틸을 포함한다. C1-C8 알킬기는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 기로 치환되거나 또는 비치환될 수 있고; 여기서 각각의 R'는 -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"C3-C8 탄소환"은 3-, 4-, 5-, 6-, 7- 또는 8-원의 포화 또는 불포화 비방향족 탄소환식 고리를 지칭한다. C3-C8 탄소환기는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -S(O)R',-S(O)2R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 기로 치환되거나 또는 비치환될 수 있고; 여기서 각각의 R'는 -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"C3-C8 탄소환식기"는 C3-C8 탄소환식기의 하나의 수소 원자가 화학 결합으로 치환된 것을 지칭한다.
"알켄일"은 쇄 내에 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형일 수 있는 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 지방족 탄화수소기를 지칭한다. 예시적인 알켄일기는 에텐일, 프로펜일, n-부텐일, i-부텐일, 3-메틸부트-2-엔일, n-펜텐일, 헥실렌일, 헵텐일, 옥텐일을 포함한다.
"알킨일"은 쇄 내에 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형일 수 있는 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 지방족 탄화수소기를 지칭한다. 예시적인 알킨일기는 에틴일, 프로핀일, n-부틴일, 2-부틴일, 3-메틸부틴일, 5-펜틴일, n-펜틴일, 헥실린일, 헵틴일 및 옥틴일을 포함한다.
"헤테로알킬"은 2 내지 8개의 탄소 원자를 함유하고, 1 내지 4개의 탄소 원자가 O, S 또는 N으로 치환된 알킬기를 지칭한다.
"아릴" 또는 "Ar"은 3 내지 14개의 탄소 원자(바람직하게는 6 내지 10개의 탄소 원자)를 포함하는, 하나 또는 수 개의 고리로 구성된 방향족 또는 헤테로 방향족기를 지칭한다. "헤테로 방향족기"의 용어는 방향족기 상의 하나 또는 수 개의 탄소를 지칭하고, 바람직하게는 1, 2, 3 또는 4개의 탄소 원자가 O, N, Si, Se, P 또는 S로, 바람직하게는 O, S 및 N으로 대체된다. 용어 아릴 또는 Ar은 또한 하나 또는 수 개의 H 원자는 -R', -할로겐, -OR', 또는 -SR', -NR'R", -N=NR', -N=R', -NR'R", -NO2, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2OR', -OS(O)2OR', -PR'R", -P(O)R'R", -P(OR')(OR"), -P(O)(OR')(OR") 또는 -OP(O)(OR')(OR")에 의해서 독립적으로 대체된 방향족 기를 지칭하고, 여기서 R', R"는 독립적으로 H, 알킬, 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬, 아릴, 아릴알킬, 카보닐, 또는 약제학적 염이다.
"할로겐"은 플루오린, 염소, 브로민 또는 아이오딘 원자; 바람직하게는 플루오린 및 염소 원자를 지칭한다.
"헤테로사이클"은 2 내지 8개의 탄소 원자 Ar, 1 내지 4개의 고리 탄소 원자가 O, N, S, Se, B, Si 및 P의 군으로부터의 헤테로원자로 독립적으로 대체된 고리 시스템을 지칭한다. 바람직한 헤테로원자는 O, N 및 S이다. 헤테로사이클은 또한 문헌[The Handbook of Chemistry and Physics, 78th Edition, CRC Press, Inc., 1997-1998, p. 225 to 226]에 기술되어 있고, 이의 개시내용은 참고로 포함된다. 바람직한 비방향족 헤테로환식은 에폭시, 아지리딘일, 티란일, 피롤리딘일, 피라졸리딘일, 이미다졸리딘일, 옥시란일, 테트라하이드로퓨란일, 다이옥솔란일, 테트라하이드로피란일, 다이옥산일, 다이옥솔란일, 피페리딘일, 피페라진일, 모폴린일, 피란일, 이미다졸린일, 피롤린일, 피라졸린일, 티아졸리딘일, 테트라하이드로티오피란일, 다이티안일, 티오모폴린일, 다이하이드로피란일, 테트라하이드로피란일, 다이하이드로피란일, 테트라하이드로피리딜, 다이하이드로피리딜, 테트라하이드로피리미딘일, 다이하이드로티오피란일, 아제판일, 뿐만 아니라 페닐기와의 축합으로부터 생성된 융합 시스템을 포함한다.
용어 "헤테로아릴" 또는 방향족 헤테로사이클은 3 내지 14원(바람직하게는 5 내지 10원)의 방향족 헤테로, 모노-, 이환식 또는 다환식 고리를 지칭한다. 예는 피롤릴, 피리딜, 피라졸릴, 티엔일, 피리미딘일, 피라진일, 테트라졸릴, 인돌릴, 퀴놀린일, 퓨린일, 이미다졸릴, 티엔일, 티아졸릴, 벤조티아졸릴, 퓨란일, 벤조퓨란일, 1,2,4-티아디아졸릴, 아이소티아졸릴, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 아이소퀴놀릴, 벤조티엔일, 아이소벤조퓨릴, 피라졸릴, 카바졸릴, 벤즈이미다졸릴, 아이속사졸릴, 피리딜-N-옥사이드, 뿐만 아니라 페닐기와의 축합으로부터 생성된 융합 시스템을 포함한다.
"알킬", "사이클로알킬", "알켄일", "알킨일", "아릴", "헤테로아릴", "헤테로환식" 등은 또한 2개의 수소 원자의 제거에 의해서 형성된 상응하는 "알킬렌", "사이클로알킬렌", "알켄일렌", "알킨일렌", "아릴렌", "헤테로아릴렌", "헤테로사이클렌"을 지칭한다.
"아릴알킬"은 탄소 원자, 전형적으로 말단 또는 sp3 탄소 원자에 결합된 수소 원자 중 하나가 아릴 라디칼로 대체된 비환식 알킬 라디칼을 지칭한다. 전형적인 아릴알킬기는 벤질, 2-페닐에탄-1-일, 2-페닐에텐-1-일, 나프틸메틸, 2-나프틸에탄-1-일, 2-나프틸에텐-1-일, 나프토벤질, 2-나프토페닐에탄-1-일 등을 포함한다.
"헤테로아릴알킬"은 탄소 원자, 전형적으로 말단 또는 sp3 탄소 원자에 결합된 수소 원자 중 하나가 헤테로아릴 라디칼로 대체된 비환식 알킬 라디칼을 지칭한다. 헤테로아릴알킬기의 예는 2-벤즈이미다졸릴메틸, 2-퓨릴에틸이다.
"하이드록실 보호기"는 메톡시메틸 에터(MOM), 2-메톡시에톡시메틸 에터(2-MOEOM), 테트라하이드로피란일 에터, 벤질 에터, p-메톡시벤질 에터, 트라이메틸실릴 에터, 트라이에틸실릴 에터, 트라이아이소프로필실릴 에터, t-부틸다이메틸실릴 에터, 트라이페닐메틸실릴 에터, 아세테이트 에스터, 치환된 아세테이트 에스터, 벤조에이트, 벤질 폼에이트, 클로로아세테이트, 메톡시아세테이트, 페녹시아세테이트, 피발로에이트, 아다만탄오에이트, 메시토에이트, 메탄설폰에이트 및 토실레이트 및 p-톨루엔설폰에이트를 지칭한다.
"아미노산(들)"은 자연 및/또는 비자연 아미노산, L 또는 D 타입, 바람직하게는 알파-아미노산일 수 있다. 자연 아미노산은 유전자 암호에 의해서 암호화된 것이며, 이것은 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파트산, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 아이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 타이로신. 트립토판 및 발린이다. 비자연 아미노산은 단백질생성 아미노산의 형태로 유래된다. 예는 하이드록시프롤린, 란티오닌, 2-아미노아이소부티르산, 데하이드로알라닌, 감마-아미노부티르산(신경 전달 물질), 오르니틴, 시트룰린, 베타 알라닌(3-아미노프로판산), 감마-카복시글루타메이트, 셀레노시스테인(대부분의 진핵 생물뿐만 아니라 많은 비진핵 생물에 존재하지만, DNA에 의해 직접 암호화되지는 않음) 피롤리신(일부 고등어와 하나의 박테리아에서만 발견됨) N-폼일메티오닌(종종 박테리아, 미토콘드리아 및 엽록체 내의 단백질의 초기 아미노산임), 5-하이드록시트립토판, L-다이하이드록시페닐알라닌, 트라이아이오도타이로닌, L-3,4-다이하이드록시페닐알라닌(DOPA) 및 O-포스포세린을 포함한다. 용어 아미노산은 또한 아미노산 유사체 및 모방체를 포함한다. 유사체는 R기가 자연 아미노산에서 발견되는 것이 아닌 것을 제외하고는, 자연 아미노산의 동일한 일반식 H2N(R)CHCO2H 구조를 갖는 화합물이다. 유사체의 예는 호모세린, 노르류신, 메티오닌-설폭사이드 및 메티오닌 메틸 설포늄을 포함한다. 바람직하게는, 아미노산 모방체는 알파-아미노산의 일반적인 화학 구조식과 상이한 구조식을 갖지만 그것과 유사한 방식으로 작용하는 화합물이다. 용어 "비자연 아미노산"은 "D" 입체화학 형태를 나타내도록 의도되며, 자연 아미노산은 "L"형이다. 1 내지 8개의 아미노산이 본 특허 발명에서 사용되는 경우, 아미노산 서열은 바람직하게는 프로테아제에 대한 절단 인식 서열이다. 다수의 절단 인식 서열이 관련 기술 분야에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Matayoshi et al., Science 247: 954 (1990); Dunn et al., Meth. Enzymol. 241: 254 (1994); Seidah et al., Meth. Enzymol. 244: 175(1994); Thornberry, Meth. Enzymol. 244: 615(1994); Weber et al., Meth. Enzymol. 244: 595(1994); Smith et al., Meth. Enzymol. 244: 412 (1994); 및 Bouvier et al., Meth. Enzymol. 248: 614 (1995)] 참고; 이들의 개시 내용은 본 명세서에 참고로 포함됨). 특히, 그러한 서열은 Val-Cit, Ala-Val, Ala-Ala, Val-Val, Val-Ala-Val, Lys-Lys, Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Cit-Cit, Val-Lys, Ala-Ala-Asn, Asp-Lys, Asp-Glu, Glu-Lys, Lys, Cit, Ser 및 Glu로 이루어진 군으로부터 선택된다.
"펩타이드"는 펩타이드 결합(즉, 아마이드 결합)을 사용하여 2개 이상의 아미노산과 또 다른 아미노산의 카복실기를 조합함으로써 형성된다. 2개의 아미노산은 펩타이드에 결합에 의해서 다이펩타이드로서 지칭되고; 3개의 아미노산은 펩타이드 결합에 의해서 트라이펩타이드로서 지칭되고, 3개의 아미노산은 펩타이드 결합으로서 지칭되고, 펩타이드 결합에 의해서 연결된 화합물은 트라이펩타이드로서 지칭된다. 자연 α 아미노산으로만 이루어진 펩타이드는 자연 펩타이드(자연 단백질)이다. 하나 이상의 비자연 아미노산 또는 아미노산 유사체를 함유하는 펩타이드는 비자연 펩타이드(펩토이드 화합물)이다. 2개 이상의 아미노산의 펩타이드는 펩타이드 단일 단위이다.
"글리코사이드"는 당기가 글리코사이드 결합을 통해서 또 다른 기에 애노머 탄소를 통해서 결합된 분자이다. 글리코사이드는 O-(O-글리코사이드), N-(글리코실아민), S-(티오글리코사이드), 또는 C-(C-글리코사이드) 글리코사이드 결합에 의해서 연결될 수 있다. 이의 실험식은 Cm(H2O)n(식 중, m은 n과 상이할 수 있고, m 및 n은 36 미만임)이다. 본 명세서에서 글리코사이드는 글루코스(덱스트로스), 프럭토스(레불로스) 알로스, 알트로스, 만노스, 글로스, 아이오도스, 갈락토스, 탈로스, 갈락토사민, 글루코사민, 시알산, N-아세틸글루코사민, 설포퀴노보스(6-데옥시-6-설포-D-글루코피라노스), 리보스, 아라비노스, 자일로스, 릭소스, 솔비톨, 만니톨, 수크로스, 락토스, 말토스, 트레할로스, 말토덱스트린, 라피노스, 글루코쿠론산(글루쿠로나이드) 및 스타키오스를 포함한다. 이것은 D형 또는 L형, 5 원자 환식 퓨라노즈 형태, 6 원자 환식 피라노즈 형태, 또는 비환식 형태, α-이성질체(하워쓰(Haworth) 투영의 탄소 원자의 평면 아래의 애노머 탄소의 -OH) 또는 β-이성질체(하워쓰 투영면 위의 애노머 탄소의 -OH)일 수 있다. 본 명세서에서 단당류, 이당류, 폴리올 또는 3 내지 6개의 당 단위를 함유하는 올리고당이 사용된다.
용어 "항체"는 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 전장 면역글로불린 분자 또는 전장 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉, 관심대상 표적의 항원에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자 또는 이의 부분을 지칭하고, 이러한 표적은 암 세포 또는 자가면역 질환과 연관된 자가면역 항체를 생산하는 세포를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 개시된 면역글로불린은 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD 및 IgA), 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 서브클래스일 수 있다. 면역글로불린은 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 그러나, 바람직하게는, 면역글로불린은 인간, 뮤린 또는 토끼 기원이다. 항체는 인간, 인간화 또는 키메라 항체일 수 있다.
용어 "특이적 결합"은 항체 또는 항체 유도체가 다수의 다른 항원과 조합하기 보다는, 고도로 선택적인 방식으로 이의 상응하는 표적 항원에 결합할 것이라는 것을 의미한다. 일반적으로, 항체 또는 항체는 적어도 약 1×10-7M, 바람직하게는 1×10-8M 내지 10-9M, 10-10M, 10-11M 또는 10-12M의 친화도를 갖는다. 미리 결정된 항원의 친화도는 비특이적 항원(예컨대, 소 혈청 알부민, 카세인)의 친화도보다 적어도 2배이다.
"약제학적으로" 또는 "약제학적으로 허용 가능한"은 동물, 또는 인간에게 적절하게 투여되는 경우, 유해한, 알레르기성 또는 다른 부적절한 반응을 일으키지 않는 분자 실체 및 조성물을 지칭한다.
"약제학적으로 허용 가능한 부형제"는 임의의 담체, 희석제, 보조제 또는 비히클, 예컨대, 보존제 또는 항산화제, 충전제, 붕해제, 습윤제, 유화제, 현탁제, 용매, 분산 매질, 코팅제, 항박테리아 및 항진균제, 등장제 및 흡수지연제 등을 포함한다. 약제학적 활성 물질을 위한 그러한 매질 및 작용제의 사용은 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 작용제가 활성 성분과 비혼화성인 경우를 제외하고, 치료 조성물에서의 그의 사용이 고려된다. 보충 활성 성분은 또한 적합한 치료 조합물로서 조성물에 혼입될 수 있다.
본 발명에서, 약제학적으로 허용 가능한 염은 본 발명의 화합물의 염 유도체를 지칭한다. "약제학적 염"은 모 화합물이 그의 산 또는 염기염을 제조함으로써 변형된 개시된 화합물의 유도체를 지칭한다. 약제학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어, 비독성 무기산 또는 유기산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 무독성 염 또는 4차 암모늄 염을 포함한다. 예를 들어, 그러한 통상적인 무독성 염은 무기산, 예컨대, 염산, 브로민산, 황산, 설팜산, 인산, 질산 등; 유기산, 예컨대, 아세트산, 프로피온산, 석신산, 타타르산, 시트르산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산, 글루쿠론산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 톨루엔설폰산, 옥살산, 퓨마르산, 말레산, 락트산 등으로부터 제조된 염을 포함한다. 추가의 부가염은 암모늄염, 예컨대, 트로메타민, 메글루민, 에포라민 등, 금속염, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 아연 또는 마그네슘을 포함한다.
본 발명의 약제학적 염은 통상적인 화학적 방법에 의해서 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산성 또는 염기성 형태를 물 또는 유기 용매 또는 이들 둘의 혼합물 중에서 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 비수성 매질, 예컨대, 에터, 에틸 아세테이트, 에탄올, 아이소프로판올 또는 아세토나이트릴이 바람직하다. 적합한 염의 목록은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418]에서 발견되며, 이의 개시내용은 참고로 포함된다.
용어 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 리간드 약물 접합체 또는 링커 약물 접합체의 약제학적으로 허용 가능한 유기 또는 무기 염을 지칭한다. 접합체는 적어도 하나의 아미노기를 함유할 수 있고, 따라서 아미노기와 산부가염, 예컨대, 니트레이트, 하이드로겐 설페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 아이소니코틴산염, 락테이트, 살리실레이트, 산 시트레이트, 타트레이트, 올레에이트, 퍼클로레이트, 판토테네이트, 타트레이트, 아스코르베이트, 석신에이트, 말레에이트, 콜레이트, 퓨마레이트, 글루코네이트, 글루쿠론산염, 글루콘산염, 폼에이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메실레이트, 에탄설폰에이트, 벤젠설폰에이트, p-톨루엔설폰에이트 및 비스(2-하이드록시나프토에이트)(즉, 1,1'-메틸렌 비스-(2-하이드록시나프토에이트))를 형성할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 염은 추가 분자, 예컨대, 아세테이트 이온, 석신에이트 이온 또는 다른 반대 이온의 염을 포함할 수 있다. 반대 이온은 모 화합물 상의 전하를 안정화시키는 임의의 유기 또는 무기 모이어티일 수 있다. 추가로, 약제학적으로 허용 가능한 염은 구조 내에 하나 초과의 하전된 원자를 가질 수 있다. 복수의 하전된 원자의 약제학적으로 허용 가능한 염은 복수의 반대 이온을 가질 수 있다. 따라서, 약제학적으로 허용 가능한 염은 1개 이상의 하전된 원자 및/또는 1개 이상의 반대 이온을 가질 수 있다.
"약제학적으로 허용 가능한 용매화물" 또는 "용매화물"은 하나 이상의 용매 분자와 리간드 약물 접합체 또는 링커 약물 접합체의 회합을 지칭한다. 약제학적으로 허용 가능한 용매화물을 형성하는 용매의 예는 물, 아이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸 아세테이트, 아세트산 및 에탄올아민을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
수화물은 물을 함유하는 화합물을 지칭한다. 이러한 물은 배위 결합으로 다른 부분에 연결되어, 예컨대, 수화된 금속 이온 착물을 형성할 수 있거나, 또는 공유 결합으로, 예컨대, 수화된 트라이클로로아세트알데하이드를 형성할 수 있다. 그것은 특정 화합물 및 수분이 특정 온도, 압력 조건 하에서 결정 또는 액체 분자를 형성한다는 것을 지칭한다. 수화물 중의 물은 결정된 양으로 존재하고, 예를 들어, 무수 Na2SO4의 수화물은 Na2SO4·10H2O이다. 수화물 중의 물은 몇몇 상이한 결합 방식을 갖는다: 하나는 리간드이고, 배위 결정수라고 공지된 금속 이온에 연결되며; 다른 것은 음이온성 결정수라고 지칭되는 음이온에 결합된다. 물은 또한 양이온 또는 음이온에 직접 결합될 수 없지만, 특정 부분에 존재하고, 결정 내의 특정 부분을 점유한다. 물의 이러한 조합 형태는 전형적으로 12개의 물 분자를 함유하는 격자수라고 지칭된다. 일부 결정질 화합물 또한 물을 함유하지만, 특정 비율을 갖지는 않는다. 수화물의 염은 수화물을 기반으로 형성된 약제학적으로 허용 가능한 염을 지칭한다.
거울상이성질체, 거울상이성질체, 광학 이성질체, 거울 이성질체, 거울상이성질체 또는 카이럴 이성질체라고도 공지된 광학 이성질체는 서로와 완전히 중첩되는 분자를 투영할 수는 없다. 물질이 하나의 카이럴 탄소 원자를 함유하는 경우, 2개의 광학 이성질체가 존재하는데, 이것은 물리적상과 거울상 사이의 관계를 갖기 때문에, 거울상이성질체라고도 지칭된다. 거울상이성질체는 동일한 광학 스핀 능력을 갖지만, 회전 방향이 반대이고, 이의 물리적 특성 및 화학적 특성은 유사할 수 있다. 2개의 동일한 특성의 탄소 원자를 함유하는 분자는 3개의 광항 이성질체를 갖는다. 몇몇 상이한 카이럴 원자가 분자에 함유되는 경우, 이의 광학 이성질체의 수는 2n개이며, n은 상이한 카이럴 원자의 수이다. 동일한 양의 2개의 물질, 예컨대, 광학 이성질체를 균일하게 혼합하면, 광학 활성 성분은 서로 상쇄되어 라세미체를 형성할 수 있다.
"포유동물" 또는 "동물"의 예는 인간, 래트, 마우스, 기니피그, 원숭이, 돼지, 염소, 소, 말, 개, 고양이 새 및 가금류를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 예시적인 실시형태에서, 환자 또는 대상체는 인간이다.
"투여하는" 또는 "투여"는 대상체에게 약제학적 약물 또는 기타 작용제를 전송, 전달, 도입 또는 수송하는 임의의 모드를 지칭한다. 이러한 모드는 경구 투여, 국소 접촉, 정맥내, 복강내, 근육내, 병변내, 비강내, 피하 또는 척추강내 투여를 포함한다. 작용제의 투여 시 장치 또는 장비를 사용하는 것이 또한 본 발명에서 고려된다. 이러한 장치는 능동적 또는 수동적 수송을 이용할 수 있고, 느린-방출 또는 신속-방출 전달 장치일 수 있다.
하기 약어가 본 명세서에서 사용될 수 있고, 제시된 정의를 갖는다: Boc, tert-부톡시 카보닐; BroP, 브로모트리스피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트; CDI, 1,1'-카보닐다이이미다졸; DCC, 다이사이클로헥실카보다이이미드; DCE, 다이클로로에탄; DCM, 다이클로로메탄; DEAD, 다이에틸아조다이카복실레이트; DIAD, 다이아이소프로필아조다이카복실레이트; DIBAL-H, 다이아이소부틸-알루미늄 하이드라이드; DIPEA 또는 DEA, 다이아이소프로필에틸아민; DEPC, 다이에틸 포스포로사이아나이데이트; DMA, N,N-다이메틸 아세트아마이드; DMAP, 4-(N,N-다이메틸아미노)피리딘; DMF, N,N-다이메틸폼아마이드; DMSO, 다이메틸설폭사이드; DTPA, 다이에틸렌트라이아민펜타아세트산; DTT, 다이티오트레이톨; EDC, 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카보다이이미드 염산염; ESI-MS, 전자분무 질량분석; HATU, O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트; HOBt, 1-하이드록시벤조트라이아졸; HPLC, 고압 액체 크로마토그래피; NHS, N-하이드록시석신이미드; MeCN,.아세토나이트릴; MeOH, 메탄올; MMP, 4-메틸모폴린; PAB, p-아미노벤질; PBS, 인산염-완충 식염수(pH 7.0 내지 7.5); Ph, 페닐; phe, L-페닐알라닌; PyBrop, 브로모-트리스-피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트; PEG, 폴리에틸렌 글리콜; SEC, 크기 배제 크로마토그래피; TCEP, 트리스(2-카복시에틸)포스핀; TFA, 트라이플루오로아세트산; THF, 테트라하이드로퓨란; Val, 발린.
구체적인 실시형태
본 발명의 구체적인 실시형태는 도면을 참고하여 하기에 보다 상세하게 기재될 것이다. 본 발명의 구체적인 실시형태가 도면 및 하기 실시예에 도시되어 있지만, 본 발명은 다양한 형태로 구현될 수 있고, 본 명세서에 언급된 실시형태에 의해 제한되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다. 오히려, 이들 실시형태는 본 발명을 보다 철저하게 이해하고, 당업자에게 본 발명의 범주를 충분히 전달하기 위해 제공되는 것이다.
본 발명의 발명 주제는 다수의 상이한 형태로 구현될 수 있으며, 본 명세서에 언급된 실시형태에 제한되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 실제로, 본 명세서에 포함된 설명에 제공된 교시의 이점을 갖는 본 발명의 많은 변형 및 다른 실시형태는 본 개시내용이 속하는 기술 분야의 당업자에게 일어날 것이다. 따라서, 본 개시내용의 발명 주제는 개시된 특정 실시형태에 제한되지 않고, 이러한 변형 및 다른 실시형태는 개시된 요지의 발명 주제의 범주 내에 포함되도록 의도되는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에 특정 용어가 사용되었지만, 이는 일반적이고 설명적인 의미로만 사용되었으며, 제한의 목적이 아니다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
화합물은 표준 명명법을 사용하여 기재된다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
단수 표현은 그 수의 제한을 의미하는 것이 아니라, 언급된 항목이 적어도 하나 존재한다는 것을 나타낸다. 수치 범위의 언급은 본 명세서에 달리 명시되지 않는 한 범위 내에 속하는 각각의 개별 값을 개별적으로 참조하는 단축 방법으로서만 의도되며, 각각의 개별 값은 본 명세서에 개별적으로 인용된 것처럼 명세서에 포함된다. 최종점의 모든 범위가 그 범위 내에 포함되며, 독립적으로 조합될 수 있다. 본 명세서에 기재된 모든 방법은 본 명세서에 달리 표시되지 않거나 문맥에 의해 명확하게 모순되지 않는 한 적절한 순서로 수행될 수 있다. 사례 또는 예시적인 언어(예를 들어, "예컨대")의 사용은 달리 명시되지 않는 한 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것이며 본 발명의 범주를 제한하지 않는다.
본 발명은 화학식 I의 화합물 및 동위원소의 자연 존재비보다 많은 양으로(즉, 풍부) 적어도 하나의 목적하는 원자의 동위원소 치환을 갖는 화합물의 용도를 포함한다. 동위 원소는 동일한 원자 번호를 갖지만, 상이한 질량수를 갖는 원자, 즉, 양성자의 수는 동일하지만, 중성자의 수가 상이한 원자이다. 중수소 치환과 같은 동위원소 치환은 부분적이거나 완전할 수 있다. 부분 중수소 치환은 적어도 하나의 수소가 중수소로 대체된 것을 의미한다. 특정 실시형태에서, 동위원소는 임의의 바람직한 위치에서 90%, 95% 또는 99% 이상 풍부하다. 일 실시형태에서, 중수소는 필요한 위치에서 90%, 95% 또는 99% 풍부하다.
특정 성분을 지칭하기 위해 특정 용어가 설명 및 청구범위에 사용된다는 것을 주목해야 한다. 당업자는 동일한 성분을 상이한 명사로 지칭할 수 있음을 이해할 것이다. 본 명세서 및 청구범위는 용어의 차이로 성분을 구별하는 수단이 아니라 성분을 구별하는 기준으로 사용된다. 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 언급된 바와 같이, "포함하는" 또는 "포함하는"은 개방 용어이고, 따라서 "포함하지만 이들로 제한되지 않는"으로 해석되어야 한다. 본 명세서는 이후에 본 발명의 바람직한 실시형태를 구현하는 것으로 기재되며, 본 설명은 설명의 일반적인 원리를 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범주를 제한하도록 의도되지 않는다. 본 발명의 범주는 첨부된 청구범위에 의해 정의된다.
용어 "C1-C6"은 1 내지 6개의 탄소를 함유하는 기를 의미한다.
용어 "친수성 분지형 링커"는 주 프레임워크가 C2-C100의 펩타이드 단위(1 내지 12개의 자연 또는 비자연 아미노산), 하이드라존 결합기, 다이설파이드기, 에스터기, 옥심기, 아마이드기 또는 티오에터 결합기라는 것을 의미한다.
용어 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 약제학적 제형에서의 사용에 적합한 화합물의 염을 의미한다. 이 화합물은 1개 이상의 염기성 기를 갖고, 이 염은 산부가염, 예컨대, 설페이트, 하이드로브로메이트, 타트레이트, 메탄설폰에이트, 말레에이트, 시트레이트, 포스페이트, 아세테이트, 알기네이트, 하이드로아이오드산, 니트레이트, 염산염, 락테이트, 하이드로클로라이드, 락테이트, 메틸 설페이트, 퓨마레이트, 벤조에이트, 석신에이트, 메탄설폰에이트, 락토베이트, 옥탄오에이트, 토실레이트 등일 수 있다. 화합물은 1개 이상의 산성 기를 갖고, 이 염은 염, 예컨대, 칼슘염, 칼륨염, 마그네슘염, 메글루민염, 암모늄염, 아연염, 피페라진염, 아미노부탄트라이올염, 리튬염, 콜린염, 다이에틸아민염, 4-페닐사이클로헥실아민염, 벤자틴염, 나트륨염, 테트라메틸암모늄 염 등일 수 있다. 다형성 결정 형태 및 용매화물이 또한 본 발명의 범주에 포함된다.
본 발명의 약제학적으로 허용 가능한 염은 종래의 화학 방법에 의해서 제조될 수 있다. 일반적으로, 이들 염은 본 발명의 화합물의 유리 산 또는 염기의 혼합 용액 또는 유기 용액 또는 이들 둘 다에 다른 적합한 동일한 당량의 염기 또는 산을 첨가함으로써 형성될 수 있다. 비수성상 반응 매질은 일반적으로 다이에틸 에터, 에틸 아세테이트, 에탄올, 아이소프로판올 또는 아세토나이트릴이다. 적용 가능한 염의 목록은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed. Mack. Publishing Company, Easton, PA. 1985, p. 1418]에서 찾아볼 수 있다.
약제학적으로 허용 가능한 부형제는 모든 담체, 희석제, 아주반트 또는 형성제(forming agent), 예컨대, 보존제, 항산화제, 충전제, 붕해제, 습윤제, 유화제, 현탁화제, 용매, 분산 매질, 코팅제, 항박테리아제, 항진균제, 등장 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 의약 분야에서, 활성 약제학적 성분에 이러한 아주반트를 첨가하는 것은 매우 일반적인 관행이다. 보조제 물질이 약물의 활성 성분과 상용성이 아닌 한, 이러한 보조제 물질이 약제학적 성분에 첨가되고, 동일하지 않다. 이러한 양호한 결과를 달성하기 위해서, 활성 보조제 성분이 또한 약제학적 성분에 첨가될 수 있다.
본 발명에서, 화학식 (I)의
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는 카이럴 탄소 원자 부위를 지칭하며, 이것은 순수한 R, 순수한 S 또는 상이한 분율의 R/S로부터 선택된다.
특정 입체이성질체가 특별히 지적되지 않는 한 (예를 들어, 화학식의 관련 중심에 두꺼운 결합 또는 점선 결합에 의해서, E 또는 Z 배위를 갖는 화학식에서 이중 결합을 기재함으로써 또는 입체화학 명칭 명명법을 사용함으로써) 순수한 화합물 및 이들의 혼합물로서의 모든 입체이성질체가 본 발명의 범주에 포함된다. 달리 언급되지 않는 한, 개별 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 기하이성질체 및 이들의 조합물 및 혼합물이 본 발명에 포함된다.
당업자는 이 화합물이 호변이성질체 형태(예컨대, 케톤 및 엔올 형태), 공명 형태(resonant form) 및 쯔비터이온성 형태의 형태를 가질 수 있고, 이것이 본 명세서에 사용된 화학식에 기재된 것과 동일하고, 이 화학식이 이러한 호변이성질체, 공명 또는 쯔비터이온성 형태를 포함한다는 것을 이해할 것이다.
본 발명에 사용된 항체의 제조는 생체내 또는 시험관내 절차 또는 이들의 조합을 포함한다. 다클론성 항-수용체 펩타이드 항체를 생산하는 방법은 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 예컨대, 미국 특허 제4,493,795호(Nestor 등)에 공지되어 있다. 단클론성 항체는 전형적으로 목적하는 항원으로 면역화된 마우스의 비장 세포와 골수종 세포를 융합시킴으로써 제조된다(문헌[Koehler, G.; Milstein, C. Nature 1975, 256: 495-7]). 상세한 절차는 "항체-실험실 매뉴얼"(문헌[Harlow and Lane, eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1988)])에 기술되어 있으며, 이것은 본 명세서에 참고로 포함된다. 특히 단클론성 항체는 무손상 표적 세포, 표적 세포로부터 단리된 항원, 전체 바이러스, 약독화된 전체 바이러스 및 바이러스성 단백질과 같은 관심대상 항원으로 마우스, 래트, 햄스터 또는 임의의 다른 포유동물을 면역화시킴으로써 생산된다. 비장세포는 전형적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 6000을 사용하여 골수종 세포와 융합된다. 융합된 혼성체는 HAT(hypoxanthine-aminopterin-thymine)에 대한 민감도에 의해 선택된다. 본 발명을 실시하는데 유용한 단클론성 항체를 생산하는 하이브리도마는 특정 수용체와 면역 반응하거나 표적 세포 상의 수용체 활성도를 저해하는 능력에 의해 식별된다.
본 발명에 사용되는 단클론성 항체는 적절한 항원 특이성의 항체 분자를 분비하는 하이브리도마를 함유하는 영양 배지를 포함하는 단클론성 하이브리도마 배양물을 개시함으로써 제조될 수 있다. 배양물은 하이브리도마가 항체 분자를 배지에 분비하기에 충분한 시간 및 조건 하에서 유지된다. 이어서, 항체-함유 배지를 수집한다. 이어서, 단백질-A 친화성 크로마토그래피; 음이온, 양이온, 소수성 또는 크기 배제 크로마토그래피(특히 단백질 및 이후의 특정 항원에 대한 친화성 및 사이징 칼럼 크로마토그래피); 원심 분리, 차동 용해도, 또는 단백질 정제를 위한 다른 표준 기술과 같은 널리 알려진 기술에 의해 항체 분자를 추가로 단리시킬 수 있다.
이들 조성물의 제조에 사용되는 배양 배지는 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 상업적으로 입수 가능하고, 합성 배양 배지를 포함한다. 예시적인 합성 배지는 둘베코 최소 필수 배지(DMEM; 문헌[Dulbecco et al., Virol. 8, 396(1959)])이며, 이 배지에는 4.5gm/ℓ 글루코스, 20mM 글루타민, 20% 우태아 혈청 및 소포제, 예컨대, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 블록 공중합체가 보충된다.
또한, 항체-생산 세포주는 발암성 DNA로 B 림프구를 직접 형질전환시키거나, 온코바이러스(oncovirus), 예컨대, 엡스타인-바르 바이러스(EBV, 인간 헤르페스 바이러스 4(HHV-4)라고도 부름) 또는 카포시 육종 연관 헤르페스 바이러스(KSHV)로의 형질주입과 같은 융합 이외의 기술로 생성될 수 있다(미국 특허 제4,341,761호; 제4,399,121호; 제4,427,783호; 제4,444,887호; 제4,451,570호; 제4,466,917호; 제4,472,500호; 제4,491,632호; 제4,493,890호 참고). 단클론성 항체는 또한 관련 기술 분야에 널리 공지된 기술된 바와 같은 카복실 말단을 함유하는 항-수용체 펩타이드 또는 펩타이드를 통해서 생산될 수 있다(문헌[Niman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80: 4949-53 (1983); Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 178-82 (1985); Lei et al., Biochemistry 34(20): 6675-88, (1995)] 참고). 전형적으로, 항-수용체 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 항-수용체 펩타이드 단클론성 항체를 생산하기 위한 면역원으로서 단독으로 또는 면역원성 담체에 접합되어 사용된다.
또한, 본 발명에서 결합 분자로서의 단클론성 항체를 제조하기 위한 다른 널리 공지된 다수의 기술이 존재한다. 완전 인간 항체를 제조하는 방법이 특히 유용하다. 하나의 방법은 친화성 강화 방법을 사용하여 항원에 특이적으로 결합하는 다양한 인간 항체를 선택하는데 사용될 수 있는 파지 디스플레이 기술이다. 파지 디스플레이는 문헌에 완벽하게 기술되어 있고, 파지 디스플레이 라이브러리의 작제 및 스크리닝은 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Dente et al, Gene. 148(1):7-13 (1994); Little et al, Biotechnol Adv. 12(3): 539-55 (1994); Clackson et al., Nature 352: 264-8 (1991); Huse et al., Science 246: 1275-81 (1989)] 참고).
또 다른 종(예컨대, 마우스)로부터의 하이브리도마 기술에 의해 유래된 단클론성 항체는 인간화되어야 한다. 인간에게 주입될 때, 변형된 항체. 항체의 인간화의 보다 일반적인 방법에는 상보성 결정 영역 이식 및 리서페이싱(resurfacing)이 있다. 변형된 항체는 인간 신체에 대한 이종 항체의 면역 부반응을 상당히 감소시킬 수 있다. 이러한 방법은 광범위하게 기술되어 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,859,205호 및 제6,797,492호; 문헌[Liu et al., Immunol Rev. 222:9-27 (2008); Almagro et al., Front Biosci. 13:1619-33 (2008); Lazar et al., Mol Immunol. 44(8):1986-98 (2007); Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 103(10):3557-62 (2006)] 참고, 각각은 본 명세서에 참고로 포함됨). 완전 인간 항체는 또한 면역원으로 인간 면역 글로불린 중쇄 및 경쇄의 상당 부분을 운반하는 트랜스제닉 마우스, 토끼, 원숭이 또는 다른 포유동물을 면역화시킴으로써 제조될 수 있다. 이러한 마우스의 예는 Xenomouse(아브제닉스사/암젠사(Abgenix/Amgen)), HuMAb-mouse(마다렉스사(Medarex)/BMS), Velocimouse(레제너론사(Regeneron))이다(예를 들어, 미국 특허 제6,596,541호, 제6,207,418호, 제6,150,584호, 제6,111,166호, 제6,075,181호, 제5,922,545호, 제5,661,016호, 제5,545,806호, 제5,436,149호 및 제5,569,825호 참고). 인간 요법에서, 뮤린의 가변 영역 및 인간 불변 영역은 또한 뮤린 mAb보다 사람에서 면역원성이 훨씬 낮은 "키메라 항체"라고 불리는 작제물에 융합될 수 있다(문헌[Kipriyanov et al,mol Biotechnol. 26: 39-60 (2004); Houdebine, Curr Opin Biotechnol. 13: 625-9 (2002)], 각각은 본 명세서에 참고로 포함됨). 또한, 항체의 가변 영역에서 부위-지향된 돌연변이유발(site-directed mutagenesis)은 항원에 대한 친화도 및 특이성이 보다 높은 항체를 생성할 수 있고(문헌[Brannigan et al., Nat Revmol Cell Biol. 3: 964-70, (2002)); Adams et al., J Immunol Methods. 231: 249-60 (1999)]), mAb의 불변 영역의 교환은 결합 및 세포독성도 효과기 기능을 매개하는 능력을 개선시킬 수 있다.
악성 세포 항원에 대한 면역특이적 항체는 또한 상업적으로 획득되거나 예를 들어 화학적 합성 또는 재조합 발현 기술과 같은 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 악성 세포 항원에 대한 면역특이적인 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 상업적으로, 예를 들어 유전자 데이터베이스 또는 그것과 유사한 데이터베이스, 문헌 간행물 또는 통상적인 클로닝 및 서열결정으로부터 획득될 수 있다.
항체에 더하여, 펩타이드 또는 단백질이 또한 표적 세포의 표면에 상응하는 수용체 또는 에피토프를 차단하거나, 공격하거나, 이와 달리 상호작용하기 위한 결합 분자로서 사용될 수 있다. 이들 펩타이드 또는 단백질이 특정 에피토프 또는 이의 상응하는 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 한, 이들은 면역글로불린 패밀리에 속할 필요는 없다. 이들 펩타이는 또한 상 디스플레이 항체와 유사한 기술에 의해서 단리될 수 있다(문헌[Szardenings, J receive signal transfer res. 2003; 23 (4): 307-49]). 랜덤 펩타이드 라이브러리로부터 얻은 펩타이드는 본 발명의 항체 및 항체 단편과 유사하다. 폴리펩타이드 또는 단백질 분자는 이의 결합 분자를 일부 거대분자 또는 매개자와 연결함으로써 항원 결합의 특이성을 유지시킬 수 있다. 이들 거대분자 및 매질은 알부민, 중합체, 리포솜, 나노입자 또는 덴드리머를 포함한다.
암, 자가면역 질환 및 감염성 질환을 치료하기 위한 약물의 접합을 위해서 사용되는 항체의 예는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: 3F8(항-GD2), 아바고보맙(항-CA-125), 아브식시맙(항 CD41(인테그린 α-IIB), 아달리무맙(항-TNF-α), 아데카투무맙(항-EpCAM, CD326), 아펠리모맙(항-TNF-α), 아퓨투즈맙(항-CD20), 알라시주맙 페골(항-VEGFR2), ALT518(항-IL-6), 알렘투즈맙(Campath, MabCampath, 항-CD52), 알트모맙(항-CEA), 아나투모맙(항 TAG-72), 안루킨주맙(IMA-638, 항 IL-13), 아폴리주맙(항-HLA-DR), 아르시투모맙(항-CEA), 아셀리주맙(항-L-셀렉틴(CD62L), 아틀리주맙(토실리주맙, 악템라, 로악템라, 항-IL-6 수용체), 아토롤리무맙(항-레서스 인자), 바피뉴주맙(항-β 아밀로이드), 바실릭시맙(Simulect, 항CD25(IL-2 수용체의 α 쇄), 바비툭시맙(항-포스파티딜세린), 벡투모맙(LymphoScan, 항-CD22), 벨리무맙(Benlysta, LymphoStat-B, 항-BAFF), 벤랄리주맙(항-CD125), 베르틸리무맙(항-CCL11(에오탁신-1), 베실레소맙(Scintimun, 항-CEA 관련 항원), 베바시주맙(Avastin, 항 VEGF-A), 비시로맙(FibriScint, 항-피브린 Ⅱ β 쇄), 비바투주맙(항-CD44 v6), 블리나투모맙(BiTE, 항-CD19), 브렌툭시맙(cAC10, 항-CD30 TNFRSF8), 브리아키누맙(항 IL-12, IL-23), 카나키누맙(Ilaris, 항-IL-1), 칸투주맙(C242, 항-CanAg), 카프로맙, 카투막소맙(Removab, 항-EpCAM, 항-CD3), CC49(항-TAG-72), 세델리주맙(항-CD4), 세르톨리주맙 페골(Cimzia, 항-TNF-알파), 세툭시맙(Erbitux, IMC-C225, 항-EGFR), 시타투주맙 보가톡스(항-EpCAM), 식수투무맙(항-IGF-1), 클레놀릭시맙(항-CD4), 클리바투주맙(항-MUC1), 코나투무맙(항-TRAIL-R2), CR6261(항-인플루엔자 및 헤마글루티닌), 다세투주맙(항-CD40), 다클리주맙(Zenapax, 항-CD25 (IL-2 수용체의 α 쇄)), 다라투무맙(항-CD38(환식 ADP 리보스 가수분해효소), 데노수맙(Prolia, 항-RANKL), 데투모맙(항-B-림프종 세포), 도르리모맙, 도르릭시주맙, 에크로멕시맙(항-GD3 강글리오사이드), 에쿨리주맙(Soliris, 항-C5), 에도바코맙(항-엔도톡신), 에드레코로맙(Panorex, MAb17-1A, 항-EpCAM), 에팔리주맙(Raptiva, 항-LFA-1(CD11a), 에펀구맙(Mycograb, 항-Hsp90), 엘로투주맙(항-SLAMF7), 엘실리모맙(항-IL-6), 엔리모맙 페골(항-ICAM-1(CD54)), 에피투모맙(항-에피시알린), 에프라투주맙(항-CD22), 에를리주맙(항-ITGB2(CD18)), 에르투막소맙(Rexomun, 항-HER2/neu, CD3), 에타라시주맙(Abegrin, 항-인테그린 αvβ3), 엑스비비루맙(항-B형 간염 표면 항원), 파놀레소맙(NeutroSpec, 항-CD15), 파랄리모맙(항-인터페론 수용체), 파를레투주맙(항-엽산 수용체 1), 펠비주맙(항-호흡기 융합 바이러스), 페자키누맙(항-IL-22), 피지투무맙(항-IGF-1 수용체), 폰토리주맙(항-IFN-γ), 포아비루맙(항-광견병 바이러스 당 단백질), 프레솔리무맙(항-TGB-β), 갈릭시맙(항-CD80), 간테네루맙(항-β 아밀로이드), 가빌리모맙(항-CD147(asigin)), 젬투주맙(항-CD33), 지렌툭시맙(항-탄산 탈수효소 9), 글렘바투무맙(CR011, 항-GPNMB), 골리무맙(Simponi, 항-TNF-α), 고밀릭시맙(항-CD23(IgE 수용체)), 이발리주납(항-CD4), 이브리투모맙(항-CD20), 이고보맙(Indimacis-125, 항-CA-125), 임시로맙(Myoscint, 항-심장 마이오신), 인플릭시맙(Remicade, 항-TNF-α), 인테투무맙(항-CD51), 인올리모맙(항-CD25(IL-2 수용체의 α 쇄), 이노투주맙(항-CD22), 이필리무맙(항-CD152), 이라투무맙(항-CD30(TNFRSF8)), 켈릭시맙(항-CD4), 라베투주맙(CEA-Cide, 항-CEA), 레브리키주맙(항-IL-13), 레말레소맙(항-NCA-90(과립구 항원)), 레르델리무맙(항-TGF 베타 2), 렉사투무맙(항-TRAIL-R2), 리비비루맙(항-B형 간염 표면 항원), 린투주맙(항-CD33), 루카투무맙(항-CD40), 루밀릭시맙(항-CD23(IgE 수용체), 마파투무맙(항-TRAIL-R1), 마슬리모맙(항-T-세포 수용체), 마투주맙(항-EGFR), 메폴리주맙(Bosatria, 항-IL-5), 메텔리무맙(항-TGF β 1), 밀라투주맙(항-CD74), 민레투모맙(항-TAG-72), 미투모맙(BEC-2, 항-GD3 강글리오사이드), 모롤리무맙(항-레서스 인자), 마타비주맙(Numax, 항-호흡기 융합 바이러스), 무로모납-CD3(오쏘클론 OKT3, 항-CD3), 나콜로맙(항-C242), 납투모맙(항-5T4), 나탈리주맙(Tysabri, 항-인테그린 α4), 네바쿠맙(항-엔도톡신), 네시투무맙(항-EGFR), 네릴리모맙(항-TNF-α), 니모투주맙(Theracim, Theraloc, 항-EGFR), 노페투모맙, 오크렐리주맙(항-CD20), 오둘리모맙(아폴리모맙, 항-LFA-1(CD11a)), 오파투무맙(Arzerra, 항-CD20), 올라투맙(항-PDGF-Rα), 오말리주맙(Xolair, 항-IgE Fc 영역), 오포르투주맙(항-EpCAM), 오레고보맙(OVaRex, 항-CA-125), 오텔릭시주맙(항-CD3), 파기박시맙(항-리포테이코산), 팔리비주맙(Synagis, Abbosynagis, 항-호흡기 융합 바이러스), 판니누무납(Vectibix, ABX-EGF, 항-EGFR), 파노바쿠맙(항-슈도모나스 아레루기노사), 파스콜리주맙(항-IL-4), 펨투모맙(Theragyn, 항-MUC1), 퍼투주맙(Omnitarg, 2C4, 항-HER2/neu), 페셀리주맙(항-C5), 핀투모맙(항-선암 항원), 프릴릭시맙(항-CD4), 피투무맙(항-비멘틴), PRO 140(항-CCR5), 라코투모맙(1E10, 항-(N-글리콜릴뉴라민산(NeuGc, NGNA)-강글리오사이드 GM3)), 라피비루맙(항-광견병 바이러스 당단백질), 라무시루맙(항-VEGFR2), 라니비주맙(Lucentis, 항-VEGF-A), 락시바쿠맙(항-탄저균 독소, 보호 항원), 레가비루맙(항-사이토메갈로바이러스 당단백질 B), 레슬리주맙(항-IL-5), 리로투무맙(항-HGF), 리툭시맙(MabThera, 리툭산맙, 항-CD20), 로바투무맙(항-IGF-1 수용체), 론탈리주맙(항-IFN-α), 로벨리주맙(LeukArrest, 항-CD11, Cd18), 루플리주맙(Antova, 항-CD154(CD40L)), 사투모맙(항-TAG-72), 세비루맙(항-사이토메갈로바이러스), 시브로투주맙(항-FAP), 시팔리무맙(항-IFN-α), 실툭시맙(항-IL-6), 시플리주맙(항-CD2), (스마트)MI95(항-CD33), 솔라네주맙(항-베타 아밀로이드), 소넵시주맙(항-스핀고신-1-포스페이트), 손투주맙(항-에피시알린), 스탐울루맙(항-마이오스타틴), 술레소맙(LeukoScan, (항-NCA-90(과립구 항원), 타카투주맙(항-α-페토프로테인), 타도시주맙(항-인테그린αIIbβ3), 탈리주맙(항-IgE), 타네주맙(항-NGF), 탑리투모맙(항-CD19), 테피바주맙(Aurexis,(항-클럼핑 인자 A), 텔리모맙, 테나투모맙(항-테나신 C), 테넬릭시맙(항-CD40), 테플리주맙(항-CD3), TGN1412(항-CD28), 티실이무맙(트레멜리무맙,(항-CRLA-4), 티가투주맙(항-TRAIL-R2), TNX-650(항-IL-13), 토실리주맙(아틀리주맙, 악템라, 로악템라, (항-IL-6-수용체), 토랄리주맙(항-CD154(CD40L)), 토시투모맙(항-CD20), 트라스투주맙(허셉틴,(항-HER2/neu), 트레멜리무맙(항-CTLA-4), 투코투주맙 셀몰루킨(항-EpCAM), 투비루맙(항-B형 간염 B 바이러스), 우르톡사주맙(에쉐리키아 콜라이), 우스테키누맙(Stelara, 항-IL-12, IL-23), 바팔리시맙(항-AOC3(VAP-1)), 베돌리주맙, (항-인테그린 α4β7), 벨투주맙(항-CD20), 베팔리모맙(항-AOC3(VAP-1)), 비실리주맙(Nuvion, 항-CD3), 비탁신(항-혈관 인테그린 avb3), 볼록시시맙(항-인테그린 α5β1), 보투무맙(Humrespect, 항-종양 항원 CTAA16.88), 잘루투무맙(HuMax-EGFr,(항-EGFR), 자놀리무맙(HuMax_CD4, 항-CD4), 지랄리무맙(항-CD147(basigin)), 졸리모맙(항-CD5), 에타네르셉트(Enbrel®), 알레파셉트(Amevive®), 아바타셉트(Orencia®), 릴오나셉트(Arcalyst), 14F7[항-IRP-2(철 단백질 2)], 14G2a(항-GD2 강글리오사이드, 흑색종 및 고형 종양의 경우 국립 암 기관으로부터), J591(항-PSMA, 전립선 암의 경우 웨일 코넬 메디컬 스쿨(Weill Cornell Medical School)), 225.28S[항-HMW-MAA(고분자량-흑색종-연관 항원), 흑색종의 경우 소린 라디오파르마시사(Sorin Radiofarmaci S.R.L.)(이태리 밀란 소재)], COL-1(항-CEACAM3, CGM1, 결장직장 및 위암의 경우 국립 암 기관), CYT-356(Oncoltad®, 전립선암의 경우), HNK20(호흡기 융합 바이러스의 경우 오라박스사(OraVax Inc.)), ImmuRAIT(NHL의 경우 이뮤노메딕스사(Immunomedics)로부터), Lym-1(항-HLA-DR10, 암의 경우 페레그린 팜사(Peregrine Pharm.)), MAK-195F(항-TNF(종양 괴사 인자; TNFA, TNF-α: TNFSF2), 패혈증 독성 쇼크의 경우 애봇사(Abbott)/크놀사(Knoll)로부터), MEDI-500[T10B9, 항-CD3, TRαβ(T 세포 수용체 알파/베타), 복합체[이식편대 숙주병의 경우 메드이뮨사(MedImmune Inc)로부터], 고리 SCAN[항-TAG 72(종양 연관 당단백질 72), 유방암, 결장 및 직장암의 경우 네오프로브사(Neoprobe Corp)로부터], 아비시딘(항-EPCAM)(상피 세포 접착 분자), 항-TACSTD1(종양-연관 칼슘 신호 변환기 1), 항-GA733-2(위장내 종양-연관 단백질 2), 항-EGP-2(상피 당단백질 2); 항-KSA; KS1/4항원; M4S; 종양 항원 17-1A; CD326[결장암, 난소암, 전립선암 및 NHL의 경우 네옥스사(NeoRx Corp.)로부터]; 림포사이드(LymphoCide)(이뮤노메딕스사(Immunomedics), 미국 뉴저지주 소재), 스마트 ID10(프로테인 디자인 랩(Protein Design Lab)), 온코림(테크니클론사(Techniclone Inc), 미국 캘리포니아주 소재), 알로문(바이오트랜스플랜트사(BioTransplant), 미국 캘리포니아주 소재), 항-VEGF(제넨테크사(Genentech), 미국 캘리포니아주 소재); CEAcide(이뮤노메딕스사, 미국 뉴저지주 소재), IMC-1C11(임클론사(ImClone), 미국 뉴저지주 소재) 및 세툭시맙(임클론사, 미국 뉴저지주 소재).
항원에 결합하는 데 사용되는 다른 항체는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: 아미노펩티다제 N(CD13), 아넥신 A1, B7-H3(CD276, 각종 암), CA125(난소), CA15-3(암종), CA19-9(암종), L6(암종), 루이스 Y(암종), 루이스 X(암종), 알파 페토프로테인(암종), CA242(결장직장), 태반 알칼린 포스파타제(암종), 전립선 특이적 항원(전립선), 전립선산 포스파타제(전립선), 표피 성장 인자(암종), CD2(호지킨병, NHL 림프종, 다발성 골수종), CD3 ε(T 세포 림프종, 폐암, 유방암, 위암, 난소암, 자가면역 질환, 악성 복수), CD19(B 세포 악성종양), CD20(비호지킨 림프종), CD22(백혈병, 림프종, 다발성 골수종, SLE), CD30(호지킨 림프종), CD33(백혈병, 자가면역 질환), CD38(다발성 골수종), CD40(림프종, 다발성 골수종, 백혈병 (CLL)), CD51(전이성 흑색종, 육종), CD52(백혈병), CD56(소세포 폐암, 난소암, 마켈(Merkel) 세포 암종 및 액상 종양, 다발성 골수종), CD66e(암), CD70(전이성 신장 세포 암종 및 비호지킨 림프종), CD74(다발성 골수종), CD80(림프종), CD98(암), 뮤신(암종), CD221(고형 종양), CD227(유방암, 난소암), CD262 (NSCLC 및 기타 암), CD309(난소암), CD326(고형 종양), CEACAM3(결장직장, 위암), CEACAM5(암배아 항원; CEA, CD66e)(유방암, 결장직장암 및 폐암), DLL3(델타-유사-3), DLL4(델타-유사-4), EGFR(표피 성장 인자 수용체, 각종 암), CTLA4(흑색종), CXCR4(CD184, 헴 종양(heme tumor), 고형 종양), 엔도글린(CD105, 고형 종양), EPCAM(상피 세포 접착 분자, 방광암, 두부암, 경부암, 결장암, NHL 전립선암 및 난소암), ERBB2(표피 성장 인자 수용체 2; 폐암, 유방암, 전립선암), FCGR1(자가면역 질환), FOLR(엽산염 수용체, 난소암), GD2 강글리오사이드(암), G-28(세포 표면 항원 글리볼리피드, 흑색종), GD3 이디오타입(암), 열 충격 단백질(암), HER1(폐암, 위암), HER2(유방암, 폐암 및 난소암), HLA-DR10(NHL), HLA-DRB(NHL, B 세포 백혈병), 인간 융모성 성선 자극 호르몬(암종), IGF1R(인슐린-유사 성장 인자 1 수용체, 고형 종양, 혈액 암), IL-2 수용체(인터류킨 2 수용체, T-세포 백혈병 및 림프종), IL-6R(인터류킨 6 수용체, 다발성 골수종, RA, 캐슬맨병, IL6 의존성 종양), 인테그린(각종 암의 경우 αvβ3, α5β1, α6β4, αllβ3, α5β5, αvβ5), MAGE-1(암종), MAGE-2(암종), MAGE-3(암종), MAGE 4(암종), 항-트랜스페린 수용체(암종), p97(흑색종), MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 및 구성원 1, 비호지킨 B 세포 림프종, 백혈병), MUC1 또는 MUC1-KLH(유방암, 난소암, 자궁경부암, 기관지암 및 위장내 암), MUC16(CA125)(난소암), CEA(결장직장), gp100(흑색종), MART1(흑색종), MPG(흑색종), MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A, 소세포 폐암, NHL), 뉴클레오린, Neu 종양유전자 산물(암종), P21(암종), 항-(N-글리콜릴뉴라민산의 파라토프(유방암, 흑색종암), PLAP-유사 고환 알칼리 포스파타제(난소암, 고환암), PSMA(전립선 종양), PSA(전립선), ROBO4, TAG 72(종양 연관 당단백질 72, AML, 위암, 결장직장암, 난소암), T 세포 막관통 단백질(암), 타이(Tie)(CD202b), TNFRSF10B(종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 10B, 암), TNFRSF13B(종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 13B, 다발성 골수종, NHL, 기타 암, RA 및 SLE), TPBG(영양아층 당단백질, 신장 세포 암종), TRAIL-R1(종양 괴사 세포사멸 유도 리간드 수용체 1, 림프종, NHL, 결장직장암, 폐암), VCAM-1(CD106, 흑색종), VEGF, VEGF-A, VEGF-2(CD309)(각종 암). 항체에 의해서 인식되는 일부 다른 종양 연관 항원은 문헌[Gerber, et al, mAbs 1:3, 247-53 (2009); Novellino et al, Cancer Immunol Immunother. 54(3), 187-207 (2005) Franke, et al, Cancer Biother Radiopharm. 2000, 15, 459-76]에 검토되어 있다.
다른 상이한 클러스터를 포함하여 다수의 다른 항원이 존재한다: CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, CD1e, CD2, CD3, CD3d, CD3e, CD3g, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD8a, CD8b, CD9, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CD12w, CD14, CD15, CD16, CD16a, CD16b, CDw17, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD30, CD31, CD32, CD32a, CD32b, CD33, CD34, CD35, CD36, CD37, CD38, CD39, CD40, CD41, CD42, CD42a, CD42b, CD42c, CD42d, CD43, CD44, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49b, CD49c, CD49c, CD49d, CD49f, CD50, CD51, CD52, CD53, CD54, CD55, CD56, CD57, CD58, CD59, CD60, CD60a, CD60b, CD60c, CD61, CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD64, CD65, CD65s, CD66, CD66a, CD66b, CD66c, CD66d, CD66e, CD66f, CD67, CD68, CD69, CD70, CD71, CD72, CD73, CD74, CD75, CD75s, CD76, CD77, CD78, CD79, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85, CD85a, CD85b, CD85c, CD85d, CD85e, CD85f, CD85g, CD85g, CD85i, CD85j, CD85k, CD85m, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD92, CD93, CD94, CD95, CD96, CD97, CD98, CD99, CD100, CD101, CD102, CD103, CD104, CD105, CD106, CD107, CD107a, CD107b, CD108, CD109, CD110, CD111, CD112, CD113, CD114, CD115, CD116, CD117, CD118, CD119, CD120, CD120a, CD120b, CD121, CD121a, CD121b, CD122, CD123, CD123a, CD124, CD125, CD126, CD127, CD128, CD129, CD130, CD131, CD132, CD133, CD134, CD135, CD136, CD137, CD138, CD139, CD140, CD140a, CD140b, CD141, CD142, CD143, CD144, CD145, CDw145, CD146, CD147, CD148, CD149, CD150, CD151, CD152, CD153, CD154, CD155, CD156, CD156a, CD156b, CD156c, CD156d, CD157, CD158, CD158a, CD158b1, CD158b2, CD158c, CD158d, CD158e1, CD158e2, CD158f2, CD158g, CD158h, CD158i, CD158j, CD158k, CD159, CD159a, CD159b, CD159c, CD160, CD161, CD162, CD163, CD164, CD165, CD166, CD167, CD167a, CD167b, CD168, CD169, CD170, CD171, CD172, CD172a, CD172b, CD172g, CD173, CD174, CD175, CD175s, CD176, CD177, CD178, CD179, CD179a, CD179b, CD180, CD181, CD182, CD183, CD184, CD185, CD186, CDw186, CD187, CD188, CD189, CD190, CD191, CD192, CD193, CD194, CD195, CD196, CD197, CD198, CD199, CDw198, CDw199, CD200, CD201, CD202, CD202(a, b), CD203, CD203c, CD204, CD205, CD206, CD207, CD208, CD209, CD210, CDw210a, CDw210b, CD211, CD212, CD213, CD213a1, CD213a2, CD214, CD215, CD216, CD217, CD218, CD218a, CD218, CD21b9, CD220, CD221, CD222, CD223, CD224, CD225, CD226, CD227, CD228, CD229, CD230, CD231, CD232, CD233, CD234, CD235, CD235a, CD235b, CD236, CD237, CD238, CD239, CD240, CD240ce, CD240d, CD241, CD242, CD243, CD244, CD245, CD246, CD247, CD248, CD249, CD250, CD251, CD252, CD253, CD254, CD255, CD256, CD257, CD258, CD259, CD260, CD261, CD262, CD263, CD264, CD265, CD266, CD267, CD268, CD269, CD270, CD271, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD277, CD278, CD279, CD281, CD282, CD283, CD284, CD285, CD286, CD287, CD288, CD289, CD290, CD291, CD292, CD293, CD294, CD295, CD296, CD297, CD298, CD299, CD300, CD300a, CD300b, CD300c, CD301, CD302, CD303, CD304, CD305, CD306, CD307, CD307a, CD307b, CD307c, CD307d, CD307e, CD307f, CD308, CD309, CD310, CD311, CD312, CD313, CD314, CD315, CD316, CD317, CD318, CD319, CD320, CD321, CD322, CD323, CD324, CD325, CD326, CD327, CD328, CD329, CD330, CD331, CD332, CD333, CD334, CD335, CD336, CD337, CD338, CD339, CD340, CD341, CD342, CD343, CD344, CD345, CD346, CD347, CD348, CD349, CD350, CD351, CD352, CD353, CD354, CD355, CD356, CD357, CD358, CD359, CD360, CD361, CD362, CD363, CD364, CD365, CD366, CD367, CD368, CD369, CD370, CD371, CD372, CD373, CD374, CD375, CD376, CD377, CD378, CD379, CD381, CD382, CD383, CD384, CD385, CD386, CD387, CD388, CD389, CRIPTO, CR, CR1, CRGF, CRIPTO, CXCR5, LY64, TDGF1, 4-1BB, APO2,ASLG659,BMPR1B, 4-1BB, 5AC, 5T4), APO2, ASLG659, BMPR1B(골 형성 단백질 수용체), CRIPTO, 아넥신 A1, 인(nucleolus), 엔도글린(CD105), ROBO4, 아미노펩티다제 N, 델타-유사-3(DLL3), 델타-유사-4(DLL4), VEGFR-2(CD309), CXCR4(CD184), Tie2, B7-H3, WT1, MUC1, LMP2, HPV E6 E7, EGFRvIII, HER-2/neu, 이디오타입, MAGE A3, P53 비돌연변이(nonmutant), NY-ESO-1, GD2, CEA, MelanA/MART1, Napi3b(NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 담체 패밀리 34 구성원 2, 타입 II 나트륨-의존성 인 수송체 3b), Ras 돌연변이, gp100, p53 돌연변이, 프로테이나제 3(PR1), BCR-abl, 기형암종 유래 성장 인자, EphA 수용체, EphB 수용체, EGFR, EGFRvIII, ETBR(엔도텔린), HER2/neu, HER3, HLA-DOB(MHC 클래스 II 분자 IA 항원), 엔테그린, IRTA2, MPF(MPF, MSLN, SMR, 거핵세포 향상 인자, 메소텔린), CRIPTO, Sema 5b(FLJ10372, KIAA1445, Mm42015, SEMA5B, 5EMAG, 세마포링(semaphoring) 5 bHlog, 스데마 도메인(sdema domain), 7개의 혈소판 반복부, 세포질 영역), PSCA, STEAP1(6 막관통 상피 전립선 항원) 및 STEAP2(HGNC 8639, IPCA-1, PCANP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암), 타이로시나제, 서바이빈, hTERT, 육종 전위 파단점(Sarcoma translocation breakpoint), EphA2, PAP, ML-IAP, AFP, EpCAM, ERG(TMPRSS2 ETS 융합 유전자), NA17, PAX3, ALK, 안드로겐 수용체, 사이클린(cyclin) B1, 폴리시알산, MYCN, RhoC, TRP- 2, GD3, 푸코스 강글리오사이드, 메소텔린, PSMA, MAGE A1, sLe (a), CYP1B1, PLAC1, GM3, BORIS, Tn, GloboH, ETV6-AML, NY-BR-1, RGS5, SART3, STn, 카보닉 언하이드라제 IX, PAX5, OY-TES1, 정자 단백질(sperm protein) 17, LCK, HMWMAA, AKAP-4, SSX2, XAGE 1, B7H3, 레굼(legume) 단백질, Tie 2, Trop2, VEGFR2, MAD -CT-1, FAP, PDGFR-β, MAD-CT-2, fos 단백질-연관 항원 1.
본 발명의 접합체는 암의 표적화 치료에 사용된다. 표적 암은 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: 부신피질 암종, 항문암, 방광암, 뇌종양(성인, 뇌 줄기 세포종, 유년기, 소뇌 성상 세포종, 대뇌 성상 세포종, 뇌실막종, 수아종, 원시 신경 외배엽 및 송과체 종양, 시각 경로 및 시상하부 신경교종), 유방암, 카르시노이드 종양, 위장내, 미지의 원발성 암종, 경부암, 결장암, 자궁내막암, 식도암, 간외 담관암, 유잉(Ewing) 패밀리의 종양(PNET), 두개외 배아 세포 종양, 안구암, 안내 흑색종, 담낭암, 위암(위), 배아 세포 종양, 생식선외, 임신성 영양아층 종양, 두경부암, 하인두암, 도 세포 암종, 신장암(신장세포암), 후두암, 백혈병(급성 림프구성, 급성 골수성, 만성 림프구성, 만성 골수성, 털 세포), 입술 및 구강암, 간암, 폐암(비소세포, 소세포, 림프종(AIDS-관련, 중추 신경계, 피층 T-세포, 호지킨병, 비호지킨병, 악성 중피종, 흑색종, 머켈 세포 암종, 잠복 원발성 다발성 골수종을 동반한 전이성 편평 두부암 및 기타 형질 세포 신생물, 균상식육종, 골수이형성 증후군, 척수 증식성 장애, 비인두암, 신경모세포종, 구강암, 구강인두암, 골육종, 난소암(상피, 배아 세포 종양, 저 악성 잠재성 종양), 췌장암(외분비, 도세포 암종), 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 크롬친화성세포종 암, 뇌하수체암, 형질 세포 신생물, 전립선암, 횡문근 육종, 직장암, 신장 세포 암(신장암), 신장 골반 및 폐렴(이행세포), 침샘 암, 세자리 증후군, 피부암, 피부암(피부 T-세포 림프종, 카포시 육종, 흑색종), 소장암, 연조직 육종, 위암, 고환암, 흉선종(악성), 갑상선암, 요도암, 자궁암(육종), 유년기의 특이한 암, 질암, 불바르(Vulvar)암, 빌름스(Wilms) 종양.
본 발명의 접합체는 자가면역 질환의 치료 또는 예방에 사용된다. 자가면역 질환은 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: 아클로히드라(Achlorhydra) 자가면역 활성 만성 감염, 급성 파종 뇌척수염, 급성 출혈성 뇌백질염, 애디슨병, 무감마글로불린혈증, 원형 탈모증, 경화증, 강직성 척추염, 항-GBM/TBM 신염, 항인지질 증후군, 항합성효소 증후군, 관절염, 아토피성 알레르기, 아토피성 피부염, 자가면역성 재생불량성 빈혈, 자가면역성 심근증, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역성 간염, 자가면역성 내이병, 자가면역성 림프증식 증후군, 자가면역성 말초 신경병증, 자가면역성 췌장염, 자가면역성 다선 증후군 타입 I, II 및 III, 자가면역성 프로게스테론 피부염, 자가면역성 혈소판감소성 자반증, 자가면역성 포도막염, 발로병/발로 동심성 경화증, 바체트 증후군, 버거병, 비커스태프 뇌염, 블라우 증후군, 수포성 유사천포창, 캐슬맨병, 사가스병, 만성 피로 면역 이상 증후군, 만성 염증성 탈수초성 다발성신경병증, 만성 재발성 다병소성 골수염, 만성 라임병, 만성 폐쇄성 폐 질환, 척 슈트라우스 증후군, 흉터유사천포창, 실리악병, 코간 증후군, 한냉 응집 질환, 보체 성분 2 결핍, 두개 동맥염, CREST 증후군, 크론병(특발성 염증성 장질환의 유형), 쿠싱 증후군, 피부 백혈구파괴성 혈관염, 데고병, 더쿰병, 포진형 피부염, 피부근육염, 1형 당뇨병, 광범위 피부 전신 경화증, 드레슬러 증후군, 원판상 홍반성 낭창, 습진, 자궁내막증, 착부염-관련 관절염, 호산구성 근막염, 후천성 표피 수포증, 결절성 홍반, 필수 혼합 한랭글로불린혈증, 에반 증후군, 진행성 골화성 섬유이형성증, 섬유근육통, 섬유근염, 섬유화 아베올리티스, 위염, 위장 천포창, 거대 세포 동맥염, 사구체 신염, 굿파스처 증후군, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군(GBS), 하시모토 뇌염, 하시모토 갑상선염, 용혈성 빈혈, 헤노흐-숀라인 자반증, 임신성 포진, 화농성 한선염, 휴게스 증후군(항 인지질 증후군 참조), 저감마글로불린혈증, 특발성 염증성 탈수초성 질환, 특발성 폐섬유증, 특발성 혈소판 감소성 자반증(자가면역 혈소판 감소성 자반증 참조), IgA 신증(또한 버거병), 인클루전 바디 근염, 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 간질성 방광염, 과민성 대장 증후군(IBS), 청소년 특발성 관절염, 청소년 류마티스 관절염, 가와사키병, 램버트-이튼 근무력 증후군, 백혈구파괴 혈관염, 편평 태선, 경화성 태선, 선형 IgA 질환(LAD), 루게릭병(또한 루게릭 경화증), 루포이드 간염, 홍반성 낭창, 마지드 증후군, 메니에르병, 현미경 다발성 맥관염, 밀러-피셔 증후군, 혼합 결합 조직 질환, 경화증, 무차-하버만병, 머클-웰스 증후군, 다발성 골수종, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 근염, 기면증, 시신경척수염(또한 데빅병), 신경근육기장증, 안구 반흔 천포창, 안구간대경련-근간대경련 증후군, 오드 갑상선염, 재발성 류마티스, PANDAS(스트렙토코쿠스 연관 소아 면역 신경 정신 장애), 부신생물 소뇌 변성, 발작성 야간 혈색소뇨증, 패리 롬베르그 증후군, 파르소니지-터너 증후군, 중간부 포도막염, 천포창, 심상성 천포창, 악성 빈혈, 정맥주위 뇌척수염, POEMS 증후군, 결절성 다발 동맥염, 다발성 근육통, 다발성 근염, 원발성 담즙 간경변, 원발성 경화성 담관염, 진행성 염증성 신경병증, 건선, 건선 관절염, 괴저성 농피증, 순수 적혈구 무형성증, 라스무센 뇌염, 레이노 현상, 재발성 다발 연골염, 라이터 증후군, 하지불안 증후군, 후복막 섬유증, 류마티스 관절염, 류마티스 열, 사르코이드증, 정신분열증, 슈미트 증후군, 슈니츨러 증후군, 공막염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 척추 관절증, 점착성 혈액 증후군, 스틸병, 강직인간 증후군, 아급성 세균성 심내막염(SBE), 수사크 증후군, 스위트 증후군, 시데남무도병, 교감 안염, 타카야수 동맥염, 측두 동맥염(거대 세포 동맥염), 톨로사-헌트 증후군, 횡단성 척수염, 궤양성 대장염(특발성 염증성 장 질환의 유형), 미분화 결합 조직 질환, 미분화 척추 관절병증, 혈관염, 백반증, 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 윌슨 증후군(Wilson's syndrome) 및 위스코트-아드리치 증후군(Wiskott-Aldrich syndrome).
또 다른 구체적인 실시형태에서, 자가면역 질환의 치료 또는 예방을 위한 접합체를 위해서 사용되는 항원-결합 분자는, 항-엘라스틴 항체; 상피 세포 항체에 대한 Abys; 항-기저막 콜라겐 타입 IV 단백질 항체; 항-핵 항체; 항 ds DNA; 항 ss DNA, 항 카디올리핀 항체 IgM, IgG; 항-셀리악 항체; 항 인지질 항체 IgK, IgG; 항 SM 항체; 항 미토콘드리아 항체; 갑상선 항체; 마이크로솜 항체, T-세포 항체; 티로글로불린 항체, 항 SCL-70; 항-Jo; 항-전신 홍반성 루푸스 항체; 항-페리탈(Perital) 세포 항체; 항히스톤 항체; 항 RNP; C-ANCA; P-ANCA; 항 동원체; 항-피브릴라린 및 항 GBM 항체, 항-강글리오사이드 항체; 항-데스모게인 3 항체; 항-p62 항체; 항-sp100 항체; 항-미토콘드리아(M2) 항체; 류마티스 인자 항체; 항-MCV 항체; 항-토포아이소머라제 항체; 항-호중구 세포질(CANCA) 항체를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
특정 바람직한 실시형태에서, 본 발명에서 접합체를 위한 결합 분자는 자가면역 질환과 연관된 활성화된 림프구 상에서 발현되는 수용체 또는 수용체 복합체 둘 다에 결합할 수 있다. 수용체 또는 수용체 복합체는 면역글로불린 유전자 슈퍼패밀리 구성원(예를 들어, CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD28, CD30, CD33, CD37, CD38, CD56, CD70, CD79, CD79b, CD90, CD125, CD137, CD138, CD147, CD152/CTLA-4, PD-1 또는 ICOS), TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원(예를 들어, CD27, CD40, CD95/Fas, CD134/OX40, CD137/4-1BB, INF-R1, TNFR-2, RANK, TACI, BCMA, 오스테오프로테게린, Apo2/TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRAIL-R3, TRAIL-R4 및 30 APO-3), 인테그린, 사이토카인 수용체, 케모카인 수용체, 주조직 적합성 단백질, 렉틴(C-타입, S-타입, 또는 I-타입), 또는 보체 대조군 단백질을 포함할 수 있다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 바이러스 또는 미생물 항원에 면역특이적인 유용한 세포 결합 리간드는 인간화 또는 인간 단클론성 항체이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "바이러스 항원"은 면역 반응을 도출할 수 있는 임의의 바이러스성 펩타이드, 폴리펩타이드 단백질(예를 들어, HIV gp120, HIV nef, RSV F 당단백질, 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제, 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌, HTLV tax, 단순 포진 바이러스 당단백질(예를 들어, gB, gC, gD 및 gE) 및 B형 간염 표면 항원)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "미생물 항원"은 면역 반응을 도출할 수 있는 임의의 미생물 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 당류, 다당류, 또는 지질 분자(예를 들어, 박테리아, 진균, 병원성 원생동물 또는 효모 폴리펩타이드, 예를 들어, LPS 및 협막 다당류 5/8 포함)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 바이러스 또는 미생물 감염에 사용 가능한 항체의 예는 RSV 감염의 치료를 위한 인간화된 항-호흡기 융합 바이러스 단클론성 항체인 팔리비주맙; HIV 감염의 치료를 위한 CD4 융합 항체인 PRO542; B형 간염 바이러스의 치료를 위한 인간 항체인 오스타비어; 사이토메갈로바이러스의 치료를 위한 인간화된 IgG.sub.1 항체인 PROTVIR; 및 항-LPS 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 발명의 접합체는 감염성 질환의 치료에 사용될 수 있다. 이들 감염성 질환은 아시네토박터(Acinetobacter) 감염, 방선균증(Actinomycosis), 아프리카 수면병(아프리카 트리파노소마증(African trypanosomiasis)), AIDS(후천성 면역결핍증), 아메바증, 아나플라즈마증(Anaplasmosis), 탄저병, 용혈성 아카노박테리아균 감염(Arcanobacterium haemolyticum infection), 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증(Aspergillosis), 아스트로바이러스 감염(Astrovirus infection), 바베시아증, 바실루스 세레우스 감염(Bacillus cereus infection), 세균성 폐렴, 세균성 질염, 박테로이데스 감염, 발란티듐증, 바일리사스카리스 감염(Baylisascaris infection), BK 바이러스 감염, 흑색사모증, 블라스토시스티스 호미니스 감염, 분아진균증, 볼리비아 출혈열, 보렐리아 감염, 보툴리누스증(및 영아 보툴리누스증), 브라질 출혈열, 브루셀라증, 버크홀데리아 감염(Burkholderia infection), 부룰리 궤양(Buruli ulcer), 칼리시바이러스 감염(Calicivirus infection)(노로바이러스(Norovirus) 및 사포바이러스(Sapovirus)), 캠필로박테리아증(Campylobacteriosis), 칸디다증(모닐리아증; 아구창), 고양이 할큄병(Cat-scratch disease), 봉와직염, 샤가스병(아메리카 수면병), 무른 궤양, 수두, 클라미디아, 클라미마이도필라 폐렴균 감염(Chlamydophila pneumoniae infection), 콜레라, 클로모블라스트진균증(Chromoblastomycosis), 간흡충증(Clonorchiasis), 클로스트리디움 디피실 감염(Clostridium difficile infection), 콕시디오이데스 진균증(Coccidioidomycosis), 콜로라도 진드기열(Colorado tick fever), 통상의 감기(급성 바이러스 비인두염; 급성 비염), 크로이츠펠트-야콥병(Creutzfeldt-Jakob disease), 크리민-콩고 출혈열(Crimean-Congo hemorrhagic fever), 크립토코커스증(Cryptococcosis), 크립토스포리디움증(Cryptosporidiosis), 피부 유충이행증(Cutaneous larva migrans), 원포자증, 낭미충증, 사이토메갈로바이러스 감염, 댕기열, 이핵아메바증, 디프테리아, 광절열두조충, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증(Echinococcosis), 에를리히아증(Ehrlichiosis), 요충증(Enterobiasis)(요충 감염), 엔테로코쿠스 감염(Enterococcus infection), 엔테로바이러스 감염(Enterovirus infection), 발진 티푸스(Epidemic typhus), 전염성 홍반(Erythema infectiosum)(제5 질환(Fifth disease)), 돌발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움 퍼프린겐스에 의한 식중독(Food poisoning by Clostridium perfringens), 자유 생존 아메바 감염(Free-living amebic infection), 푸소박테리움 감염(Fusobacterium infection), 가스괴사병(크로스티리디아성 근괴사(Clostridial myonecrosis)), 게오트리쿰증, 게르스트만-슈트로이슬러-샤인커 증후군(Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome), 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종(도노바니아증), 군 A 스트렙토코쿠스 감염(streptococcal infection), 군 B 스트렙토코쿠스 감염, 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae) 감염, 수족구병(hand, foot and mouse disease: HFM), 한타바이러스 폐 증후군, 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori) 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염(Hookworm infection), 인간 보카바이러스 감염(Human bocavirus infection), 인간 에윈기 에를리히아증(Human ewingii ehrlichiosis), 인간 과립구성 아나플라마증(Human granulocytic anaplasmosis), 인간 메타뉴모바이러스 감염(Human metapneumovirus infection), 인간 단핵구성 에를리히아증(Human monocytic ehrlichiosis), 인간 파필로마 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증(Hymenolepiasis), 엡스타인-바르 바이러스 전염성 단핵증(Mononucleosis: Mono), 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨개(Kingella kingae) 감염, 구루병, 라사열, 레지오넬라증(재향군인병), 레지오넬라증(폰티악열병), 리슈만편모충증, 한센병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병(라임 보렐리아증(Lyme borreliosis)), 림프성 사상충증(상피병), 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 유비저(휘트모어병(Whitmore's disease)), 뇌수막염(Meningitis), 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 유행성 이하선염, 발진열(전염성 티푸스), 마이코플라스마 폐렴(Mycoplasma pneumonia), 진균종, 구더기증, 신생아 결막염(신생아 안염), 크로이츠펠트-야콥병(vCJD, nvCJD), 노카르디아증, 회선사상충층(사상충증), 파라콕시디오이데스 진균증(Paracoccidioidomycosis)(남아메리카 분아균증(South American blastomycosis)), 폐흡충증, 파스투렐라병, 머리이 기생증(머릿니), 몸니 기생증(몸니), 사면발이 기생증(사면발이(Pubic lice, Crab lice)), 골반 염증성 질병, 백일해(Pertussis, Whooping cough), 흑사병, 폐렴구균 감염, 주폐포자충 폐렴, 폐렴, 소아마비, 프레보텔라 감염, 원발성 아메바성 수막뇌염, 진행성 다병소성 백질뇌증, 앵무새병(Psittacosis), Q 열, 광견병(Rabies), 서교증, 호흡기 융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케차 감염, 리케차두창, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, SARS(중증 급성 호흡기 증후군), 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 세균성 이질(Shigellosis, Bacillary dysentery), 대상포진(Shingles, Herpes zoster), 천연두(Smallpox, Variola), 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 매독, 조충증, 파상풍(Tetanus, Lockjaw), 수염백선증(Tinea barbae, Barber's itch), 머리백선증(Tinea capitis, Ringworm of Scalp), 몸백선증(Tinea corporis, Ringworm of Body), 샅백선증(Tinea cruris, Jock itch), 수부백선(Tinea manuum, Ringworm of Hand), 흑색백선증, 무좀(Tinea pedis, Athlete's foot), 손발톱백선증(Tinea unguium, Onychomycosis), 어루러기(Tinea versicolor, Pityriasis versicolor), 톡소카라증(안구유충이행증), 톡소카라증(내장유충이행증), 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증(편충 감염), 폐결핵, 산토끼병, 유레아플라스마 감염, 베네수엘라 마뇌염, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색사모증(백색 윤선), 가성 결핵균 감염, 예시니아증, 황열 및 접합균증을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
병원성 균주에 대항하는 본 발명에 기재된 세포 결합 분자는 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii), 악티노마이세스 이스라엘리(Actinomyces israelii), 악티노마이세스 제렌세리애(Actinomyces gerencseriae) 및 프로피온니박테리움 프로피오니쿠스(Propionibacterium propionicus), 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), HIV(인간 면역결핍 바이러스), 이질아메바(Entamoeba histolytica), 안나플라즈마 속(Anaplasma genus), 바실루스 안트라시스(Bacillus anthracis), 용혈성 아카노박테리아균(Arcanobacterium haemolyticum), 주닌 바이러스, 아카리스 루브리코이데스(Ascaris lumbricoides), 아스페르길루스 속(Aspergillus genus), 아스트로비리대 패밀리(Astroviridae family), 바베시아 속(Babesia genus), 바실루스 세레우스(Bacillus cereus), 멀티플 박테리아(multiple bacteria), 박테로이데스 속(Bacteroides genus), 발란티디움 콜라이(Balantidium coli), 배이리사스카리스 속(Baylisascaris genus), BK 바이러스, 피에드라이아 호르태(Piedraia hortae), 블라스토시스티스 호미니스(Blastocystis hominis), 블라스토마이세스 더마티티데스(Blastomyces dermatitides), 마추포(Machupo) 바이러스, 보렐리아 속(Borrelia genus), 클로스트리디움보툴리늄(Clostridium botulinum), 사비아(Sabia), 브루셀라 속(Brucella genus), 통상 부르크홀데리아 세파시아(usually Burkholderia cepacia) 및 기타 부르크홀데리아 종, 마이코박테리움 울세란스(Mycobacterium ulcerans), 칼리시비리대 패밀리(Caliciviridae family), 캄필로박터 속(Campylobacter genus), 통상 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 및 기타 칸디다 종, 바르토넬라 헨셀래(Bartonella henselae), 군 A 스트렙토코쿠스 및 스타필로코쿠스, 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 헤모필루스 듀크레이(Haemophilus ducreyi), 바리셀라 조스터(Varicella zoster) 바이러스(VZV), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 클라미도필라 뉴모니애(Chlamydophila pneumoniae), 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae), 포세카애 페드로소이(Fonsecaea pedrosoi), 클로노치스 시엔시스(Clonorchis sinensis), 클로스트리듐 디피실(Clostridium difficile), 콕시디오이데스임미티스(Coccidioides immitis) 및 콕시디오이데스 포사다시(Coccidioides posadasii), 콜로라도 진드기 열 바이러스, 리노바이러스, 코로나바이러스, CJD 프리온, 크리민-콩고 출혈열 바이러스, 크립토코쿠스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 크립토스포르디움 속(Cryptosporidium genus), 안사이클로토마 브라질리엔스(Ancylostoma braziliense); 멀티플 기생충, 사이클로스포라 카이에타넨시스(Cyclospora cayetanensis), 태니아 솔리움(Taenia solium), 사이토메갈로바이러스, 뎅기 바이러스(DEN-1, DEN-2, DEN-3 및 DEN-4) - 플라비바이러스(Flavivirus), 장관기생아메바(Dientamoeba fragilis), 코리네박테리움 디프테리애(Corynebacterium diphtheriae), 디필로보트륨(Diphyllobothrium), 드라쿤쿨루스 메디엔시스(Dracunculus medinensis), 에볼라바이러스, 에치노코쿠스 속(Echinococcus genus), 에를리히아속(Ehrlichia genus), 엔테로비우스 버미쿨라리스(Enterobius vermicularis), 엔테로코쿠스 속(Enterococcus genus), 엔테로바이러스 속, 리케치아 프로와제키(Rickettsia prowazekii), 파보바이러스(Parvovirus) B19, 인간 헤르페스바이러스 6 및 인간 헤르페스바이러스 7, 파실로롭시스 부스키(Fasciolopsis buski), 파시올라 헤파티카(Fasciola hepatica) 및 파시올라 지간티카(Fasciola gigantica), FFI 프리온(prion), 필라리오데 슈퍼패밀리(Filarioidea superfamily), 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 푸소박테륨 속(Fusobacterium genus), 클로스트리디움 퍼프리젠스(Clostridium perfringens); 기타 클로스트리듐 종, 게오트리쿰 칸디둠(Geotrichum candidum), GSS 프리온, 지아디아 인테스티날리스(Giardia intestinalis), 부르크홀데리아 말레이(Burkholderia mallei), 그나토스토마 스피니게룸(Gnathostoma spinigerum) 및 그나토마스토마 히스피둠(Gnathostoma hispidum), 니세리아 고노호애(Neisseria gonorrhoeae), 클레브시엘라 그라눌로마티스(Klebsiella granulomatis), 스트렙토코쿠스 파이오제네스(Streptococcus pyogene), 스트렙토코쿠스 아갈락티애(Streptococcus agalactiae), 해모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae), 엔테로바이러스, 주로 콕사키(Coxsackie) A 바이러스 및 엔테로바이러스 71, 신 놈브레(Sin Nombre) 바이러스, 헬리코박터 파일로리, 에쉐리키아 콜라이(Escherichia coli) O157:H7, 부니아비리대 패밀리(Bunyaviridae family), A형 간염 바이러스, B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, D형 간염 바이러스, E형 간염 바이러스, 단순 포진 바이러스 1, 단순 포진 바이러스 2, 히스토플라스마 캡슐라툼(Histoplasma capsulatum), 십이지장충(Ancylostoma duodenale) 및 아메리카 구충(Necator americanus), 헤모필루스 인플루엔자(Hemophilus influenzae), 인간 보카바이러스(Human bocavirus), 에를리히아 유잉이(Ehrlichia ewingii), 아나플라즈마 파고시토필륨(Anaplasma phagocytophilum), 인간 메타뉴모바이러스(metapneumovirus), 에를리히아 샤펜시스(Ehrlichia chaffeensis), 인간 파필로마바이러스, 인간 파라인플루엔자 바이러스, 소형조충(Hymenolepis nana) 및 쥐조충(Hymenolepis diminuta), 엡스테인-바르 바이러스, 오르토믹소비리대 패밀리(Orthomy-xoviridae family), 이소스포라 벨리(Isospora belli), 킨젤라 킨가에(Kingella kingae), 클레브시엘라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae), 클레브시엘라 오자에나스(Klebsiella ozaenas), 클레브시엘라 리노스클레로모티스(Klebsiella rhinoscleromotis), 크루 프리온(Kuru prion), 라사(Lassa) 바이러스, 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila), 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila), 레이쉬마니아 속(Leishmania genus), 마이코박테리움 레프래(Mycobacterium leprae) 및 마이코박테리움 레프로마토시스(Mycobacterium lepromatosis), 렙토스피라 속(Leptospira genus), 리스테리아 모노시토제네스(Listeria monocytogenes), 보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi) 및 기타 보렐리아 종(Borrelia species), 반크로프트사상충(Wuchereria bancrofti) 및 말레이사상충(Brugia malayi), 림프구성 맥낙 뇌막염 바이러스(Lymphocytic choriomeningitis virus: LCMV), 플라스모디움 속(Plasmodium genus), 마버그(Marburg) 바이러스, 메슬레스(Measles) 바이러스, 부르콜데리아 슈도말레이(Burkholderia pseudomallei), 나이세리아 메닝지티데스(Neisseria meningitides), 메타고니무스 요카가와이(Metagonimus yokagawai), 마이코플라스마 문(Microsporidia phylum), 감염성 연속종 바이러스(Molluscum contagiosum virus: MCV), 볼거리(Mumps) 바이러스, 리케치아 티피(Rickettsia typhi), 마이코플라스마 뉴모니애, 다수중 종의 박테리아(악티노마이세토마) 및 진균(에우미세토마(Eumycetoma)), 기생충 날개 달린 파리 유충(parasitic dipterous fly larvae), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis) 및 임균(Neisseria gonorrhoeae), vCJD 프리온, 노카디아 아스테로이드(Nocardia asteroides) 및 기타 노카르디아 종(Nocardia species), 회선사상충(Onchocerca volvulus), 파라콕시디오이데스 브라질리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis), 폐흡충(Paragonimus westermani) 및 기타 폐흡충 종, 파스테우렐라 속(Pasteurella genus), 머리이(Pediculus humanus capitis), 몸니(Pediculus humanus corporis), 사면발이(Phthirus pubis), 보르데텔라 퍼투시스(Bordetella pertussis), 에르시니아 페스티스), 스트렙토콕쿠스 뉴모니애(Streptococcus pneumoniae), 뉴모사이스티스 지로베시(Pneumocystis jirovecii), 폴리오바이러스(Poliovirus), 프레보텔라 속(Prevotella genus), 내글러리아 파울레리(Naegleria fowleri), JC 바이러스, 클라미도필라 프시타시(Chlamydophila psittaci), 콕시엘라 부르네티(Coxiella burnetii), 광견병 바이러스, 스트렙토바실루스 모닐리포르미스(Streptobacillus moniliformis) 및 스피리룸 미너스(Spirillum minus), 호흡기 융합 바이러스, 리노스포리듐 시베리(Rhinosporidium seeberi), 리노바이러스, 리케치아 속(Rickettsia genus), 리케차 아카리(Rickettsia akari), 리프트 밸리 열 바이러스(Rift Valley fever virus), 리케차 리케트시(Rickettsia rickettsii), 로타 바이러스, 루벨라 바이러스, 살모넬라 속(Salmonella genus), SARS 코로나바이러스, 사르콥테스 스카비에이(Sarcoptes scabiei), 스치스토소마 속(Schistosoma genus), 시겔라 속(Shigella genus), 바리셀라 조스터(Varicella zoster) 바이러스, 바리올라 메이저(Variola major) 또는 바리올라 마이너(Variola minor), 스포로트릭스 셴키(Sporothrix schenckii), 스타필로코쿠스 속, 스타필로코쿠스 속, 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스트렙토코쿠스 피오제네스(Streptococcus pyogenes), 분선충(Strongyloides stercoralis), 매독트레포네마(Treponema pallidum), 태니아 속(Taenia genus), 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani), 트리코피톤 속(Trichophyton genus), 트리코피톤 토수란스(Trichophyton tonsurans), 트리코피톤 속, 에피더모피톤 플록코섬(Epidermophyton floccosum), 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrum) 및 트리코피톤 메타그로피테스(Trichophyton mentagrophytes), 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrum), 호르태아 웨넥키(Hortaea werneckii), 트리코피톤 속(Trichophyton genus), 말라세지아 속(Malassezia genus), 톡소카라 카니스(Toxocara canis) 또는 톡소카라 카티(Toxocara cati), 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii), 트리키넬라 스피랄리스(Trichinella spiralis), 트리코모나스 바지날리스(Trichomonas vaginalis), 트리처리스 트리치우라(Trichuris trichiura), 마이코박테리움 투버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 프란시셀라 투라렌시스(Francisella tularensis), 유레아플라즈마 우레알리티쿰(Ureaplasma urealyticum), 베네수엘라마뇌염(Venezuelan equine encephalitis) 바이러스, 비브리오 콜레라, 구아나리토(Guanarito) 바이러스, 웨스트 나일(West Nile) 바이러스, 트리초스포론 베이겔리(Trichosporon beigelii), 예러시니아 슈도투벨르큘로시스(Yersinia pseudotuberculosis), 예르시니아 엔테로코리티카(Yersinia enterocolitica), 황열병 바이러스, 무코랄레스 오더(Mucorales order)(털곰팡이증(Mucormycosis)) 및 엔토프토랄레스 목(Entomophthorales order)(엔토모프토라증(Entomophthoramycosis), 슈도모나스 녹농균, 캄필로박터(Campylobacter)(비브리오) 태아, 아에로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila), 에드워드시엘라 타르다(Edwardsiella tarda), 에르시니아 페스티스(Yersinia pestis), 시겔라 디센테리애(Shigella dysenteriae), 시겔라 플렉스네리(Shigella flexneri), 시겔라 손네이(Shigella sonnei), 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium), 트레포네마 페르테누에(Treponema pertenue), 트레포네마 카르테움(Treponema carateneum), 보렐리아 빈센티(Borrelia vincentii), 보렐리아 부르고도리페리(Borrelia burgdorferi), 렙토스피라 이시테로헤모르하지애(Leptospira icterohemorrhagiae), 뉴모시스티스 카리니(Pneumocystis carinii), 브루셀라 아보르투스(Brucella abortus), 브루셀라 수이스(Brucella suis), 브루셀라 멜리텐시스(Brucella melitensis), 마이코플라스마 종(Mycoplasma spp.), 리케차 프로와제키(Rickettsia prowazeki), 리케차 츠츠구무쉬(Rickettsia tsutsugumushi), 클라미디아 종(Clamydia spp.); 병원성 진균(pathogenic fungi)(아스페르질루스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 히스토플라스마 캅술라툼(Histoplasma capsulatum); 원생동물(이질 아메바, 트리초모나스 테나스(Trichomonas tenas), 트리초모나스 호미니스(Trichomonas hominis), 트리오아노소마 감비엔스(Tryoanosoma gambiense), 트리파노소마 로데시엔세(Trypanosoma rhodesiense), 레이시마니아 도노바니(Leishmania donovani), 레이시마니아 트로피카(Leishmania tropica), 레이시마니아 브라질리엔시스(Leishmania braziliensis), 뉴모사이스티스 뉴모니아(Pneumocystis pneumonia), 플라스모디움 비백스(Plasmodium vivax), 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum), 플라스모디움 말라리아(Plasmodium malaria)); 또는 헬미니스(Helminith)(쉬스토소마 자포니쿰(Schistosoma japonicum), 쉬스토소마 만소니(Schistosoma mansoni), 쉬스토소마 해바토비움(Schistosoma haematobium) 및 십이지장충(hookworm)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
바이러스 질환의 치료를 위해서 본 발명에서 사용되는 다른 항체는 하기 병원성 바이러스의 항원에 대한 항체를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: 폭시리대(Poxyiridae), 헤르페스비리대(Herpesviridae), 아데노비리대(Adenoviridae), 파포바비리대(Papovaviridae), 엔테로비리대(Enteroviridae), 피코르나비리대(Picornaviridae), 파르보비리대(Parvoviridae), 레오비리대(Reoviridae), 레트로비리대(Retroviridae), 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리, 홍역, 호흡기 융합 바이러스, 풍진, 아르보비리대(Arboviridae), 라브도비리대(Rhabdoviridae), 아레나비리대(Arenaviridae), 비-A형/비-B형 간염 바이러스, 리노비리대(Rhinoviridae), 코로나비리대(Coronaviridae), 로토비리대(Rotoviridae), 온코바이러스[예컨대, HBV(간세포 암종), HPV(경부암, 항문암), 카포시 육종 연관 포진 바이러스(카포시 육종), 엡스타인-바르 바이러스(비인두 암종, 버킷 림프종, 원발 중추 신경계 림프종), MCPyV(머켈 세포암), SV40(시미안 바이러스 40), HCV(간세포 암종), HTLV-I(성인 T-세포 백혈병/림프종)], 면역 장애 유발 바이러스: [예컨대, 인간 면역결핍바이러스(AIDS)]; 중추 신경계 바이러스: [예컨대, JCV(진행성 다병소성 백혈구증), MeV(아급성 경화성 뇌막염), LCV(림프구성 맥락수막염), 아르보바이러스(Arbovirus) 뇌염, 오쏘믹소비리대(Orthomyxoviridae)(가능성)(기면성 뇌염), RV(광견병), 헤르페스바이러스 수막염, 램지 헌트 증후군 유형 II; 폴리오 바이러스(소아마비, 소아마비후 증후군), HTLV-I(열대성 경성 대마비)]; 사이토메갈로바이러스(사이토메갈로 바이러스 망막염, HSV(포진성 각막염)); 심혈관계 바이러스[예컨대, CBV(심막염, 심근염)]; 호흡기/급성 바이러스성 비인두염/바이러스성 폐렴: [엡스테인-바르 바이러스(EBV 감염/감염성 단핵구증), 사이토메갈로바이러스; SARS 코로나바이러스(중증 급성 호흡기 증후군), 오쏘믹소비리대: 인플루엔자 A/B/C(인플루엔자/조류 인플루엔자), 파라믹소바이러스(Paramyxovirus): 인간 파라인플루엔자 바이러스(파라인플루엔자), RSV(인간 호흡기 신티알바이러스(syncytialvirus), hMPV]; 소화계 바이러스[MuV(볼거리), 사이토메갈로바이러스(사이토메갈로바이러스 에소파지티스(esophagitis); 아데노바이러스(아데노바이러스 감염); 로타바이러스, 노보바이러스, 아스트로바이러스, 코로나바이러스; HBV(B형 간염 바이러스), CBV, HAV(A형 간염 바이러스), HCV(C형 간염 바이러스), HDV(D형 간염 바이러스), HEV(E형 간염 바이러스), HGV(G형 간염 바이러스)]; 비뇨생식기 바이러스[예컨대, BK 바이러스, MUV(볼거리)].
추가 목적에 따르면, 본 발명은 암 및 자가면역 질환을 위한 치료 약물로서 다른 실현 가능한 약물 담체와 함께 상기 접합체 결합를 포함한다. 암 및 자가면역 질환의 치료 방법은 시험관내, 생체내 또는 생체외 요법을 포함한다. 시험관내 요법의 예는 약물에 의해서 배양 세포를 시험관내 처리하여 표적 항원을 발현하는 세포 이외의 모든 세포를 사멸시키거나 바람직하지 않은 항원을 발현하는 세포를 사멸시키는 것을 포함한다. 생체외 요법의 일례는 조혈 줄기세포를 시험관내에서 처리하고, 병에 걸린 세포 또는 악성 세포를 사멸시키고, 환자에게 다시 전달하는 것이다. 예를 들어, 암 또는 자가면역 질환을 치료하기 위해서 또는 이식편대숙주 반응을 예방하기 위해서 이식 전에 동종이계 골수 또는 조직으로부터 생체외에서 T 세포 및 다른 림프계 세포를 제거하기 위한 임상적인 실시가 하기와 같이 수행될 수 있다: 골수를 환자 또는 다른 개체로부터 수거하고, 이어서 약 37℃에서 약 15분 내지 약 48시간 동안, 약 1pM 내지 0.1mM의 농도 범위의 본 발명의 접합체가 첨가된 혈청을 함유하는 배지에서 인큐베이션시킨다. 정확한 농축 조건 및 인큐베이션 시간(=용량)은 숙련된 임상의에 의해 쉽게 결정된다. 인큐베이션 후, 골수 세포를 혈청을 함유하는 배지로 세척하고, 공지된 방법에 따라 i.v. 주입에 의해서 환자에게 다시 제공한다. 환자가 골수 수거와, 처리된 세포의 재주입 사이에 절제(ablative) 화학 요법 또는 전신 방사선 요법의 과정과 같은 다른 치료를 받는 상황에서, 처리된 골수 세포는 표준 의료 장비를 사용하여 액체 질소에 냉동 보관된다.
생체내 임상 사용을 위해서, 본 발명의 접합체는 용액으로서 또는 주사용 멸균수 중에 재용해될 수 있는 동결건조 고체로서 공급될 것이다. 접합체 투여의 적합한 프로토콜의 예는 다음과 같다. 접합체는 4 내지 12주 동안 주 단위로 i.v. 볼러스(bolus)로서 제공된다. 볼러스 용량은 인간 혈청 알부민(예를 들어, 인간 혈청 알부민의 농축된 용액 0.5 내지 1㎖, 100㎎/㎖)이 선택적으로 첨가될 수 있는 50 내지 500㎖의 식염수 중에 제공된다. 투여량은 약 50㎍ 내지 20㎎/체중㎏/주, i.v.(주사당 10㎍ 내지 200㎎/㎏ 범위)일 것이다. 치료 후 4 내지 12주에, 환자에게 제2 과정의 치료를 제공할 수 있다. 투여 경로, 부형제, 희석제, 투여량, 시간 등에 관한 구체적인 임상 프로토콜은 숙련된 의사에 의해서 결정될 수 있다.
선택된 세포 집단을 사멸시키는 생체내 또는 생체외 방법에 따라서 치료될 수 있는 의학적 병태의 예는 암, 자가면역 질환, 이식 거부 및 감염(바이러스성, 박테리아성 또는 기생충)의 임의의 유형의 악성 상태를 포함한다.
목적하는 생물학적 효과를 달성하는 데 필요한 접합체의 양은 접합체의 화학적 특징, 효력, 생체이용률, 질환의 유형, 환자가 속한 종, 환자의 질환 상태, 투여 경로, 요구되는 투여량, 전달 및 투여될 요법을 설명하는 모든 인자를 비롯하여, 다수의 인자에 따라 달라질 것이다.
일반적으로, 본 발명의 접합체는 비경구 투여의 경우 0.1 내지 10% w/v의 접합체를 함유하는 수성 생리 완충액으로 제공될 수 있다. 전형적인 용량 범위는 일단위로 1㎎/체중 ㎏ 내지 0.1g/체중 ㎏이고; 바람직한 용량 범위는 인간에게 동등한 용량으로, 일 단위로 0.01㎎/체중 ㎏ 내지 20㎎/체중 ㎏이다. 투여될 약물의 바람직한 투여량은 질환 또는 장애의 유형 및 진행 정도, 특정 환자의 전반적인 건강 상태, 선택된 화합물의 상대적인 생물학적 효능, 화합물의 제형, 투여 경로(정맥내, 근육내 등), 선택된 전달 경로에 의한 접합체의 약동학 특성 및 투여 속도(볼러스 또는 연속적 주입) 및 스케줄(주어진 시간 기간 동안의 반복 횟수)과 같은 변수에 좌우될 것이다.
본 발명의 접합체는 단위 투여형으로 투여될 수 있는데, 여기서 용어 "단위 투여"는 환자에게 투여될 수 있고, 쉽게 취급 및 포장될 수 있고, 활성 접합체 자체 또는 하기에 기술된 바와 같은 약제학적으로 허용 가능한 조성물을 포함하는 물리학적으로 그리고 화학적으로 안정적인 단위 용량으로 유지되는 단일 용량을 의미한다. 이와 같이, 전형적인 전체 일 단위 용량 범위는 0.01 내지 100㎎/체중 ㎏이다. 일반적인 가이드라인에 의해서, 인간의 경우 단위 용량은 일당 1㎎ 내지 3000㎎의 범위이다. 바람직하게는 단위 용량 범위는 1개월에 1 내지 4회 투여되는 1 내지 500㎎이고, 보다 더 바람직하게는 매일 10㎎ 내지 500㎎이다. 본 명세서에 제공된 접합체는 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 혼합함으로써 약제학적 조성물 중에 제형화될 수 있다. 이러한 단위 용량 조성물은 경구 투여, 특히 정제, 단순 캡슐 또는 연질 젤 캡슐의 형태; 또는 비강내, 특히 분말, 비강 점적액 또는 에어로졸의 형태; 또는 피부, 예를 들어, 연고, 크림, 로션, 젤 또는 스프레이 또는 경피 패치를 통한 국소 사용을 위해서 제조될 수 있다. 조성물은 단위 투여 형태로 편리하게 투여될 수 있고, 제약 분야에 널리 공지된 방법, 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21th ed.; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA]에 기재된 방법 중 임의의 것에 의해서 제조될 수 있다.
바람직한 제형은 본 발명의 화합물이 경구 또는 비경구 투여를 위해서 제형화된 약제학적 조성물을 포함한다. 경구 투여의 경우, 정제, 환제, 분말, 캡슐, 트로키 등은 다음 성분 중 하나 이상, 또는 유사한 특성의 화합물; 결합제, 예컨대, 미세결정질 셀룰로스, 트라거캔쓰검; 희석제, 예컨대, 전분 또는 락토스; 붕해제, 전분 및 셀룰로스 유도체; 윤활제, 예컨대, 스테아르산마그네슘; 활택제, 예컨대, 콜로이드성 이산화규소; 감미제, 예컨대, 수크로스 또는 사카린; 또는 향료. 예컨대, 페퍼민트 또는 메틸 살리실레이트를 함유할 수 있다. 캡슐은 경질 캡슐 또는 연질 캡슐의 형태일 수 있으며, 이는 일반적으로 가소제와 선텍적 블렌딩된 젤라틴 블렌드 및 전분 캡슐로부터 제조된다. 또한, 투여 단위 형태는 투여 단위의 물리적 형태를 변형시키는 다양한 다른 물질, 예를 들어 설탕, 셸락 또는 장용제의 코팅을 함유할 수 있다. 다른 경구 투여 형태 시럽 또는 엘릭서가 감미료, 보존제, 염료, 착색제 및 향료를 포함할 수 있다. 또한, 활성 화합물은 신속 용해형, 변형 방출형 또는 지속 방출형 제제 및 제형에 혼입될 수 있고, 이러한 지속 방출형 제형이 바람직한 투여 형태이다. 바람직한 정제는 락토스, 옥수수 전분, 규산마그네슘, 크로스카르멜로스 나트륨, 포비돈, 스테아르산마그네슘, 탈컴 또는 이들의 임의의 조합물을 함유한다.
비경구 투여용 액체 제제는 멸균 수성 또는 비수성 용액, 현탁액 및 에멀션을 포함한다. 액체 조성물은 또한, 결합제, 완충액, 보존제, 킬레이팅제, 감미료, 향료 및 착색제 등을 포함할 수 있다. 비수성 용매는 알코올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물유, 예컨대, 올리브유 및 유기 에스터, 예컨대, 에틸 올레에이트를 포함한다. 수성 담체는 알코올과 물의 혼합물, 완충 매질 및 식염수를 포함한다. 특히, 생체적합성, 생분해성 락타이드 중합체, 락타이드/글리콜라이드 공중합체 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체가 활성 화합물의 방출을 제어하기 위한 유용한 부형제일 수 있다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양 보충제, 전해질 보충제, 예컨대, 링거 덱스트로스를 기재로 하는 것을 포함할 수 있다. 이러한 활성 화합물을 위한 다른 잠재적으로 유용한 비경구 전달 시스템은 에틸렌-바이닐 아세테이트 공중합체 입자, 삼투 펌프, 이식 가능한 주입 시스템 및 리포솜을 포함한다.
대체 투여 모드는 건조 분말, 에어로졸 또는 점적제와 같은 수단을 포함하는 흡입용 제형을 포함한다. 이들은 예를 들어, 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에터, 글리코콜레이트 및 데옥시콜레이트를 함유하는 수성 용액, 또는 점비제(nasal drop) 형태 또는 비강내로 적용되는 겔로서 투여하기 위한 유성 용액일 수 있다. 협측 투여를 위한 제형은 예를 들어, 로젠지 또는 알약(pastille)을 포함하고, 항료 베이스, 예컨대, 수크로스 또는 아카시아 및 기타 부형제, 예컨대, 글리코콜레이트를 포함할 수 있다. 직장 투여에 적합한 제형은 바람직하게는 고체 기반 담체, 예컨대, 코코아 버터와 함께 단위 용량 좌제로 제공되며, 살리실레이트를 포함할 수 있다. 피부에 국소 적용하기 위한 제형은 바람직하게는 연고, 크림, 로션, 페이스트, 겔, 스프레이, 에어로졸 또는 오일의 형태를 취한다. 사용될 수 있는 담체는 바셀린, 라놀린, 폴리에틸렌 글리콜, 알코올 또는 이들의 조합물을 포함한다. 경피 투여에 적합한 제형은 별개의 패치로 제공될 수 있으며, 중합체 또는 접착제에 용해 및/또는 분산된 친유성 에멀션 또는 완충된 수용액일 수 있다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 암, 자가면역 질환 또는 감염성 질환의 효과적인 치료 또는 예방을 위해서 다른 공지되거나 공지될 치료제, 예컨대, 화학치료제, 방사선 요법, 면역치료제, 자가면역 장애 치료제(autoimmune disorder agent), 항감염제 또는 기타 항체-약물과 동시에 투여되어, 상승작용 효과를 초래한다. 또 다른 특정 실시형태에서, 상승작용 약물 또는 방사선 요법은 일 양상에서는 접합체 투여 적어도 1시간, 12시간, 1일, 1주, 1개월 전 또는 후, 추가 양상에서는 수개월 전 또는 후에 투여된다.
상승작용제는 바람직하게는 하기 약물 중 하나 또는 몇몇으로부터 선택된다:
1) 화학치료제: a) 알킬화제: 예컨대, [질소 머스타드(페닐부티르산 질소 머스타드, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 메클로레타민, 멜팔란, 에틸 사이클로포스파마이드); 나이트로소유레아(카무스틴, 로무스틴); 알킬설폰에이트(부설판, 트레오설판); 트라이아젠(다카바진); 백금 함유 화합물(카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴); b) 식물 알칼로이드, 예컨대, 빈카 알칼로이드(빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈); 탁산 화합물(파클리탁셀, 탁소테레); c) DNA 토포이소머라제 저해제, 예컨대,[에피포도필린스(9-아미노캄프토테신, 캄프토테신, 에토포사이드, 에토포사이드, 에토포사이드 포스페이트, 이리노테칸, 테니포사이드, 토포테칸); 미토마이신(미토마이신 c)]; d) 항대사제, 예컨대, [항-엽산염: DHFR 저해제(메토트렉세이트, 트라이메토에이트); IMP 탈수소효소 저해제(마이코페놀산, 카보스아미도티아졸, 리바비린, 에이카(eicar)); 리보뉴클레오타이드 환원효소 저해제(하이드록시유레아, 데페록사민)]; [피리미딘 유사체: 우라실 유사체(5-플루오로우라실, 독시플루리딘, 플록스우리딘, 래티트렉세드(Tomudex); 사이토신 유사체(시타라빈, 플루다라빈); 퓨린 유사체(아자티오프린, 머캅토퓨린, 티오구아닌)]; e) 호르몬 요법: 예컨대, 용체 길항제: [항-에스트로겐: (메제스트롤, 랄록시펜, 타목시펜)); LHRH 효능제(고스크르클린(goscrclin), 류프롤라이드 아세테이트); 항-안드로겐(비칼루타마이드, 플루타마이드)]; 레티노이드/델토이드: [비타민 D3 유사체(CB 1093, EB 1089 kh 1060, 비타민 D2); 광역학 요법(베르트포르핀, 프탈로시아닌, 광민감제 PC4, 데메톡시-하이포크렐린 A); 사이토카인(인터페론-알파, 인터페론-감마, 종양 괴사 인자(TNF), TNF 도메인을 함유하는 인간 단백질)]; f) 키나제 저해제, 예컨대, IBW 2992(항-EGFR/Erb2), 이마티닙, 제피티닙, 페갑타닙, 소라페닙, 다사티닙, 수니티닙, 에를로티닙, 닐로티닙, 라파티닙, 액시티닙, 파조파닙, 반데타닙, E7080(항-VEGFR2), 모리티닙, 메디티닙, 프라나티닙, 포나티닙(ap24534), HQP1351, 바피티닙(INNO-406), 보수티닙(SKI-606), 수니티닙, 카보티닙, 볼리티닙, 버모데크, 이니파립, 룩솔리티닙, CYT387, 악시티닙, 티보자닙, 소라페닙, 베바시주맙, 세툭시맙, 트라스투주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 이스피네십; g) 기타, 예컨대, 젬시타빈, 에폭소미신(예를 들어, 카필조밉), 보테조밉, 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 토세도스타트, 자이브레스타트, PLX4032, STA-9090, 스티무박스, 알로벡틴-7, 엑세게바(Xegeva), 프로벤지, 에르보이(Yervoy), 단백지질화(Isoprenylation) 저해제(예컨대, 로바스타틴), 도파민성 신경독(예컨대, 1-메틸-4-페닐피리디늄 이온), 세포 사이클 저해제(예컨대, 스타우로스포린), 악티노마이신(예컨대, 악티노마이신 D, 닥티노마이신), 블레오마이신(예컨대, 블레오마이신 A2, 블레오마이신 B2, 페플로마이신), 안트라사이클(예컨대, 다우노루비신, 독소루비신(아드리아마이), 이다루비신, 에피루비신, 피라루비신,조루비신, 엠톡산트론, MDR 저해제(예컨대, 베라파밀), Ca2+ ATPase 저해제(예컨대, 탑시가르긴), 히스톤 데아세틸라제 저해제(보리노스타트, 로미뎁신, 파노비노스타트, 발프로산, 모세티노스타트(MGCD0103), 벨리노스타트, PCI-24781, 엔티노스타트, SB939, 레스미노스타트, 지비노스타트, AR-42, 설포라판, 트리초스타틴 A, 탑시가르긴, 셀레콕시브, 글리타존, 에피갈로카테킨 갈레이트, 다이설피람, 살리노스포라마이드 A.
2) 항-자가면역 질환제: 사이클로스포린, 사이클로스포린 A, 아미노카프로 산, 아자티오프린, 브로모크립틴, 클로람부실, 클로로퀸, 사이클로포스파마이드, 글루코코티코이드(예를 들어, 호르몬 약물, 베타메타손, 부데소나이드, 하이드로코르티손, 플루니솔리드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루코톨론 다나졸, 덱사메타손, 트라이암시놀론 아세토나이드, 베클로메타손 프로피오네이트), 데하이드로에피안드로스테론, 에나너셉트, 하이드록시클로로퀸, 인플릭시맙, 메록시캄, 메토트렉세이트, 모페틸, 마이코페닐레이트, 시롤리무스, 타크롤리무스, 프레드니손.
(3) 하기 a) 내지 u)를 포함하는 항-감염성 질환제: a) 아미노글리코사이드: 아미카신, 아스트로미신, 젠타미신(네틸미신, 시소미신, 이세파미신), 하이그로마이신 B, 카나마이신(아미카신, 아르베카신, 베카나마이신, 디베카신, 토브라마이신), 네오마이신(프라마이세틴, 파로모마이신, 리보스타마이신), 네틸미신, 스펙티노마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다미신; b) 암페니콜: 아지다페니콜, 클로람페니콜, 플로페니콜, 티암페니콜; c) 안사마이신: 젤다나마이신, 헤르비마이신; d) 카바페넴: 비아페넴, 도리페넴, 에르타페넴, 이미페넴, 실라스타틴, 메로페넴, 파니페넴; e) 세펨: 카바세펨(로라카르베프), 세파세트릴, 세파클로, 세프라딘, 세파드록실, 세팔로늄, 세팔로리딘, 세팔로틴 또는 세팔로씬, 세팔렉신, 세팔로글리신, 세파만돌, 세파피린, 세파트리진, 세파자플루, 세파제돈, 세파졸린, 세프부페라존, 세프카펜, 세프달록심, 세페핌, 세프미녹스, 세폭시틴, 세프프로질, 세프록사딘, 세프테졸, 세푸록심, 세픽심, 세프디니어, 세프디토렌, 세페핌, 세페타메트, 세프메녹심, 세포디짐, 세포니시드, 세포페라존, 세포라나이드, 세포탁심, 세포티암, 세포조프란, 세팔렉신, 세프피미졸, 세프피라마이드, 세프피롬, 세프포독심, 세프프로질, 세프퀴놈, 세프술로딘, 세프타지딤, 세프테람, 세프티부텐, 세프티올렌, 세프티족심, 세프토비프롤, 세프트리악손, 세푸록심, 세푸조남, 세파마이신(세폭시틴, 세폭테탄, 세프메타졸), 옥사세펨(플로목세프, 라타목세프); f) 글리코펩타이드: 블레오마이신, 반코마이신(오리타반신, 텔라반신), 테이코플라닌(달바반신), 라모플라닌; g) 글리실사이클린: 티게사이클린; h) β-락타마제 저해제: 페남(설박탐, 타조박탐), 클라밤(클라불란 산) i) 린코사마이드: 클린다마이신, 린코마이신; j) 리포펩타이드: 답토마이신, A54145, 칼슘-의존 항체(CDA); k) 마크롤리드: 아지트로마이신, 세트로마이신, 퀴너리트로마이신, 클라리트로마이신, 디리스트로마이신, 에리트로마이신, 플루리트로마이신, 요사마이신, 케톨리드(텔리트로마이신, 세트로마이신, 퀴너리트로마이신), 미데카마이신, 미오카마이신, 올레안도마이신, 리파마이신(리팜피신, 리팜핀, 리파부틴, 리파펩틴), 로키타마이신, 록시트로마이신, 스펙티노마이신, 스피라마이신, 타크롤리무스(FK506), 트롤레안도마이신, 텔리트로마이신; l) 모노박탐: 아즈트레오남, 티게모남; m) 옥사졸리디논: 리네졸리드; n) 페니실린: 아목시실린, 암피실린, 피밤피실린, 헤타실린, 바캄피실린, 메탐피실린, 탈람피실린, 아지도실린, 아즐로실린, 벤질페니실린, 벤자틴 벤질페니실린, 벤자틴 페녹시메틸페니실린, 클로메토실린, 프로카인 벤질페니실린, 카르베니실린(카린다실린), 클록사실린, 디클록사실린, 에피실린, 플루클록사실린, 메실리남(피브메실리남), 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페나메실린, 페니실린, 페네티실린, 페녹시메틸페니실린, 피페라실린, 프로피실린, 설베니실린, 테모실린, 티카르실린; o) 폴리펩타이드: 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B; p) 퀴놀론: 알라트로플록사신, 발로플록사신，시프로플록사신, 클리나플록사신, 다노플록사신, 디플록사신, 에녹사신, 엔로플록사신, 플로신, 가레녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 그레파플록사신, 트로바플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 마보플록사신, 목시플록사신, 나디플록사신, 노르플록사신, 오르비플록사신, 오플록사신, 페플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 시타플록사신, 스파플록사신, 테마플록사신, 토수폴록사신, 트로바플록사신; q) 스트렙토그라민: 프리스티나마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴; r) 설폰아마이드: 마페나이드, 프론토실, 설파세타마이드, 설파메티졸, 설파닐이미드, 설파살라진, 설프아이속사졸, 트라이메토프림, 트라이메토프림-설파메톡사졸(박트림); s) 스테로이드 항균제: 푸시드산으로부터 선택됨; t) 테트라사이클린: 독시사이클린, 클로르테트라사이클린, 클로모사이클린, 데메클로사이클린, 라임사이클린, 메클로사이클린, 메타사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 페니메피사이클린, 롤리테트라사이클린, 테트라사이클린, 글리실사이클린(티게사이클린 포함); u) 기타 항생제: 안노나신, 아스페나민, 박토프레놀 저해제(바시트라신), DADAL/AR 저해제(사이클로세린), 딕티오스타틴, 디스코더몰리드, 엘레우테로빈, 에포틸론, 에탐부톨, 에토포사이드, 파로페넴, 푸시드산, 푸라졸리돈, 이소니아자이드, 라울리말리드, 메트로니다졸, 무피로신, 마이코락톤, NAM 합성 저해제(포스포마이신), 나이트로푸란토인, 파클리탁셀, 플래텐시마이신, 피라진아마이드, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 리팜피신(리팜핀), 타조박탐 티니다졸, 우바리신으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
(4) 하기 a) 내지 h)를 포함하는 항-바이러스성 약물: a) 유입/융합 저해제: 아프라비록, 마라비록, 비크리비록, gp41(엔푸비어타이드), PRO 140, CD4(이발리주납); b) 인테그라제 저해제: 랄테그라비어, 엘비테그라비어, 글로보이드난 A; c) 성숙 저해제: 베비리마트, 비베콘; d) 뉴라미니다제 저해제: 오셀타미비어, 자나미비어, 페라미비어; e) 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드: 아바카비어, 아시클로비어, 아데포비어, 암독소비어, 아프리시타빈, 브리부딘, 시도포비어, 클레부딘, 덱셀부시타빈, 디다노신(ddI), 엘부시타빈, 엠트리시타빈(FTC), 엔테카비어, 팜사이클로비어, 플루오로우라실(5-FU), 3'-플루오로-치환된 2',3'-다이데옥시뉴클레오사이드 유사체(3'-플루오로-2',3'-다이데옥시티미딘(FLT) 및 3'-플루오로-2',3'-다이데옥시구아노신(FLG)로 이루어진 군 포함), 포미비르센, 간시클로비어, 이독스우리딘, 라미부딘(3TC), 1-뉴클레오사이드(β-1-티미딘 및 β-1,2'-데옥시사이티딘으로 이루어진 군 포함), 펜시클로비어, 라시비어, 리바비린, 스탬피딘, 스타부딘(d4T), 타리바비린(비라미딘), 텔비부딘, 테노포비어, 트리플루리딘, 발라시클로비어, 발간시클로비어, 잘시타빈(ddC), 지도부딘(AZT); f) 비-뉴클레오사이드: 아만타딘, 아테비리딘, 캡라비린, 다이아릴피리미딘(에트라비린, 릴피비린), 델라비르딘, 도코사놀, 에미비린, 에파비렌즈, 포스카르넷(포스포노폼산), 이미퀴모드, 인터페론 알파, 로비라이드, 로데노신, 메티사존, 네비라핀, NOV-205, 페그인터페론 알파, 포도필로톡신, 리팜피신, 리만타딘, 레시퀴모드(R-848), 트로만타딘; g) 프로테아제 저해제: 암프레나비어, 아타자나비어, 보세프레비어, 다루나비어, 포삼프레나비어, 인디나비어, 로피나비어, 넬피나비어, 플레코나릴, 리토나비어, 사퀴나비어, 텔라프레비어(VX-950), 팁라나비어; h) 기타 유형의 항-바이러스 약물: 아브자임, 아르비돌, 칼라놀라이드 A, 세라게닌, 사이아노비린-N, 다이아릴피리미딘, 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG), 포스카르넷, 그리피쓰신, 타리바비린(비라미딘), 하이드록시유레아, KP-1461, 밀테포신, 플레코나릴, 포트만테우(portmanteau) 저해제, 리바비린, 셀리시클립;
5) 다른 면역요법 약물: 이미퀴모드, 인터페론(예를 들어, α 또는 β), 과립구 집락-자극 인자, 인터류킨(IL-1, IL-35), 항체(트라스투주맙, 퍼투주맙, 베바시주맙, 알툭시맙, 팍시맙, 다크릭시맙, 올라바진, 단백질-결합 약물(예를 들어, 아브락산), 칼리케아미신 유도체, 메이탄시노이드 유도체(DM 1 및 DM 4), CC-1065 및 두오카마이신으로부터 선택된 항체-결합 약물, 효과적인 파클리탁셀 유도체, 독소루비신 및 아우리스타틴 항-유사분열 약물(예컨대, 트라스투주맙-DM 1, 이노투주맙, 브렌툭시맙 베도틴, 글렘바투무맙 베도틴, 로보투주맙 머탄신, AN-152 LMB 2, TP-38, VB 4-845, 칸투주맙 머탄신, AVE 9633, SAR 3419, CAT-8015(항-CD22), IMGN 388, IMGN 529, IMGN 853, 밀라우주맙-독소루비신, SGN-75(항-CD70), 항-CD22-MCC-DM 1).
추가의 목적에 따르면, 본 발명은 또한 ADC의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 당업자에게 널리 공지된 다양한 방식으로 제조될 수 있다. 항유사분열 화합물은 예를 들어, 실시예에 기재된 방법 또는 당업자에게 인식되는 바와 같은 이의 변형에 의해 합성될 수 있다. 적절한 변형 및 치환은 과학 문헌으로부터 당업자에게 쉽게 명백하고, 널리 공지되어 있거나, 쉽게 얻을 수 있을 것이다. 특히, 이러한 방법은 문헌[Richard C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, 2nd Edition, Wiley Publishers, 1999]에서 찾아볼 수 있다.
본 발명의 합성 반응에서, 반응에 원치 않는 참여를 회피하기 위해서, 반응성 작용기, 예를 들어, 하이드록시, 아미노, 이미노, 티오 또는 카복실기를 보호하는 것이 필요할 수 있다. 통상적인 보호기는 표준 관행에 따라, 예를 들어 문헌[PP. G. Wuts and T.W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Edition, Wiley-Interscience, 2006]에서와 같이 사용될 수 있다.
일부 반응은 적합한 산성 또는 염기 용액에서 수행될 수 있다. 이러한 반응의 산, 염기, 및 용매는, 부작용이 없는 한 특별히 제한되지 않으며, 임의의 종래의 산, 염기 및 용매가 본 명세서에 사용될 수 있다. 또한 이러한 반응은 광범위한 온도에서 수행될 수 있다. 그러나, 작동이 비교적 용이한 반응 온도는 전형적으로 -80℃ 내지 150℃(바람직하게는 실온 내지 100℃)이다. 반응에 필요한 시간은 또한 다양한 인자, 특히 반응 온도, 사용되는 용매의 특성에 따라서 다양한 범위를 가질 수 있다. 일반적으로, 비교적 이상적인 반응의 경우, 3 내지 20시간의 반응 시간이 바람직하다.
반응 완결 후 작업은 종래의 방법에 따라서 수행될 수 있다. 예를 들어, 반응 시스템으로부터 용매를 증발시킴으로써 반응 생성물 회수할 수 있다. 대안적으로, 필요한 경우, 용매를 증발시킨 후, 잔류물을 물에 붓고, 그 다음 물과 비혼화성인 유기 용매로 추출한다. 마지막으로, 추출 용매를 증발시킨 후, 반응 생성물을 수득한다. 또한, 더 높은 순도가 필요한 경우, 추가 정제를 위해서 다양한 일반적인 방법, 예컨대, 재결정화, 침강 또는 다양한 크로마토그래피 방법을 사용할 수 있다. 일반적으로, 칼럼 크로마토그래피 및 분취용-TLC가 보다 일반적이다.
실시예
본 발명은 하기 실시예에서 추가로 기술되며, 이는 본 발명의 범주를 제한하도록 의도되지 않는다. 하기 실시예에 기술된 세포주는 달리 명시되지 않는 한, 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection: ATCC) 또는 독일 미생물 및 세포 배양 수집부(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, 독일 브라운슈바이크 소재)(DMSZ), 또는 중국 과학 아카데미 상해 세포 배양 연구소(The Shanghai Cell Culture Institute of Chinese Acadmy of Science)에 의해서 명시된 조건에 따라 배양물 중에서 유지되었다. 세포 배양 시약은 달리 명시되지 않는 한, 인비트로젠사로부터 입수하였다. 모든 무수 용매를 상업적으로 수득하고, 질소 하에 슈어-실(Sure-seal) 병에 저장하였다. 다른 모든 시약 및 용매는 입수 가능한 가장 높은 등급으로 구입하여 추가적인 정제 없이 사용하였다. 정제용 HPLC 분리는 Varain PreStar HPLC로 수행하였다. NMR 스펙트럼은 Bruker 500MHz Instrument 상에서 기록하였다. 화학 이동은 0ppm에서 테트라메틸실란을 기준으로 백만분율(ppm)로 기록되며, 커플링 상수(J)는 Hz로 기록된다. 질량 스펙트럼 데이터는 Waters Acquity UPLC 분리 모듈 및 Acquity TUV 검출기가 장착된 Waters Xevo Q Tof 질량 스펙트럼에서 획득되었다.
실시예 1 화합물 1의 합성
Figure pct00097
10ℓ 반응기에, 실온에서 메탄올(6.0ℓ) 중의 2,2-다이에톡시아세토나이트릴(1.00㎏, 7.74㏖, 1.0당량)을 (NH4)2S(48% 수성 용액, 1.41㎏, 9.29㏖, 1.2당량)와 혼합하였다. 내부 온도를 33℃까지 증가시키고, 그 다음 실온까지 떨어뜨렸다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트(5ℓ) 중에 취하고, 포화 NaHCO3 용액(4×1.0ℓ)으로 세척하였다. 수성층을 에틸 아세테이트(5×1.0ℓ)로 다시 추출하였다. 유기상을 합하고, 염수(3ℓ)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 고체를 진공 여과로 수집하고, 석유 에터로 세척하였다. 여과액을 농축시키고, 석유 에터로 배산처리하여 약간의 크롭(crop)의 백색 또는 밝은 황색 고체를 수득하였다. 모든 크롭을 합하여 1.1㎏의 목적하는 생성물을 제공하였다(87% 수율). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.81 (d, J = 71.1 Hz, 2H), 5.03 (s, 1H), 3.73 (dq, J = 9.4, 7.1 Hz, 2H), 3.64 (dq, J = 9.4, 7.0 Hz, 2H), 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 6H).
실시예 2 화합물 2의 합성
Figure pct00098
환류 응축기 및 첨가 깔때기가 장치된 5-ℓ 3구 둥근 병 플라스크에, 에틸 브로모피루베이트(80% 순도, 404㎖, 2.57㏖, 1.2당량)를 3ℓ EtOH 중의 분자체(3Å, 500g) 및 티오아마이드(350g, 2.14㏖, 1.0당량)의 혼합물에 30분에 걸쳐서 첨가하였다. 첨가 중에, 내부 온도가 약간 증가되었다. 이어서 반응 혼합물을 환류까지 가열시키고, 30분 동안 교반하였다. 실온까지 냉각시키고, 반응 혼합물을 셀라이트 상에서 여과시키고, 여과 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 진공 하에서 농축시켰다. 2개 배취의 조 생성물을 합하고, 실리카겔(1.5㎏)과 혼합하고, 실리카겔(10㎏ 패킹됨) 칼럼 상에 로딩하고, 에틸 아세테이트/석유 에터(10-20%)로 용리시켜 티아졸 카복실레이트를 갈색 오일로서 제공하였다(509g, 92% 수율).
실시예 3 화합물 3의 합성
Figure pct00099
아세톤(3.0ℓ) 중의 아세탈(300g, 1.16㏖)의 용액을 환류까지 가열시키고, 4N HCl(250㎖)을 환류 용액에 1.0시간에 걸쳐서 첨가하였다. TLC 분석이 출발 물질의 완전한 소모를 나타내었다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 상을 분리시켰다. 유기상을 에틸 아세테이트(1.5ℓ)로 희석시키고, 포화 NaHCO3 용액(1.0ℓ), 물(1.0ℓ) 및 염수(1.0ℓ)로 세척하고, 이어서 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 수성 상 모두를 합하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기 용액을 감압 하에서 여과 및 농축시켰다. 조 생성물을 석유 에터 및 다이에틸 에터(5:1)로 배산처리하고, 생성된 고체를 진공 여과로 수집하고, 석유 에터 및 에틸 아세테이트(10:1)로 세척하였다. 여과액을 농축시키고, 0-15% 에틸 아세테이트/석유 에터를 사용하여 크로마토그래피시켜 또 다른 크롭의 목적하는 생성물을 제공하였다. 모든 백색 내지 밝은 황색 고체를 합하고, 40g으로 칭량되었다(43% 수율). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.08 - 10.06 (m, 1H), 8.53 - 8.50 (m, 1H), 4.49 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.44 (t, J = 7.1 Hz, 3H). C7H8NO3S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 186.01; 실측치 186.01.
실시예 4 화합물 4의 합성
Figure pct00100
1ℓ THF 중의 (S)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드(100g, 0.825㏖)의 용액에 Ti(OEt)4(345㎖, 1.82㏖) 및 3-메틸-2-부탄온(81㎖, 0.825㏖)을 N2 하에서 첨가하고, 실온에서 반응 혼합물을 16시간 동안 환류시키고, 이어서 실온까지 냉각시키고, 빙수(1ℓ)에 부었다. 혼합물을 여과시키고, 여과 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 유기층을 분리시키고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 제공하였고, 이것을 진공 증류(15-20torr, 95℃)로 정제시켜 생성물 4(141g, 90% 수율)를 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2.54 - 2.44 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.17 (s, 9H), 1.06 (dd, J = 6.9, 5.1 Hz, 6H). C9H19NaNOS [M+Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 212.12; 실측치 212.11.
실시예 5 화합물 5의 합성
Figure pct00101
-78℃에서 N2 하에서 무수 THF(1ℓ) 중의 다이아이소프로필아민(264㎖, 1.87㏖)의 용액에 n-부틸리튬(2.5M, 681㎖, 1.70㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 30분에 걸쳐서 0℃까지 가온시키고, 이어서 다시 -78℃까지 냉각시켰다. 화합물 10(258g, 1.36㏖)을 첨가하고, 그 다음 THF(50㎖)로 헹궜다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 그 후 THF(1.05ℓ) 중의 ClTi(O i Pr)3(834g, 3.17㏖)를 적가하였다. 1시간 동안 교반한 후, THF(500㎖)에 용해시킨 화합물 4(210g, 1.13㏖)를 약 1시간 동안 적가하고, 생성된 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. TLC 분석이 반응의 완결을 나타내었다. 반응을 아세트산 및 THF(v/v 1:1, 300㎖)의 혼합물로 반응정지시키고, 이어서 염수(2ℓ)에 붓고, 에틸아세테이트(8×1ℓ)로 추출하였다. 유기상을 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메탄/에틸 아세테이트/석유 에터 2:1:2)로 정제시켜 화합물 5(298g, 74% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.13 (s, 1H), 6.63 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.20 - 5.11 (m, 1H), 4.43 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.42 - 3.28 (m, 2H), 2.89 (dt, J = 13.1, 6.5 Hz, 1H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.33 (s, 9H), 1.25 - 1.22 (m, 6H). C16H26NaN2O4S2 [M+Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 397.13, 실측치 397.11.
실시예 6 화합물 6의 합성
Figure pct00102
THF(200㎖)에 용해시킨 화합물 5(509g, 1.35㏖)의 용액을 -78℃까지 냉각시켰다. Ti(OEt)4(570㎖, 2.72㏖)를 서서히 첨가하였다. 첨가를 완결한 후 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 그 다음 NaBH4(51.3g, 1.36㏖, 1.0당량)를 90분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 3시간 동안 교반하였다. TLC 분석이 출발 물질이 여전히 남아있음을 나타내었다. EtOH(50㎖)를 서서히 첨가하고, 반응물을 1.5시간 동안 교반하고, 이어서 염수(2ℓ, 250㎖ HOAc 함유)에 붓고, 실온까지 가온시켰다. 셀라이트 상에서 여과시킨 후, 유기상을 분리시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트/석유 에터 1:1)로 정제시켜 생성물 6(364g, 71% 수율)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.10 (s, 1H), 5.51 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.23 - 5.15 (m, 1H), 4.41 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.48 - 3.40 (m, 1H), 3.37 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.29 (t, J = 13.0시간z, 1H), 1.95 - 1.87 (m, 1H), 1.73 - 1.67 (m, 1H), 1.40 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.29 (s, 9H), 0.93 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 7.2 Hz, 3H). C16H28NaN2O4S2 [M+Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 399.15, 실측치 399.14.
실시예 7 화합물 7의 합성
Figure pct00103
0℃에서 에탄올(590㎖) 중의 화합물 6(600g, 1.60㏖)의 용액에 다이옥산 중의 4 NHCl(590㎖)을 서서히 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온시키고, 2.5시간 동안 교반하였다. 백색 침전물을 부수고, 여과로 수집하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 농축시키고, 에틸 아세테이트로 배산처리하였다. 2개 크롭의 백색 고체를 합하고, 446g(90% 수율)으로 칭량되었다.
실시예 8 화합물 8의 합성
Figure pct00104
NaN3(740g, 11.4㏖)를 물(2.0ℓ)용해시키고, 다이클로로메탄(2.0ℓ)을 첨가하고, 0℃에서 냉각시키고, 이것에 Tf2O(700㎖, 4.10㏖)를 1.5시간에 걸쳐서 첨가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 유기상을 분리시키고, 수성상을 다이클로로메탄(2×500㎖)으로 추출하였다, 합한 유기상을 포화 NaHCO3 용액(3×1.0ℓ)으로 세척하였다. 실온에서 이러한 트라이플릴 아자이드의 다이클로로메탄 용액에 물(3.0ℓ) 및 메탄올(3.0ℓ) 중의 (L)-아이소류신(300g, 2.28㏖), K2CO3(472g, 3.42㏖), CuSO4 . 5H2O (5.7g, 22.8m㏖)의 혼합물을 첨가하였다. 첨가 동안, 내부 온도가 약간 증가하였다. 그 다음 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 유기 용매를 감압 하에서 제거하고, 수성상을 진한 HCl(약 280㎖ 첨가)을 사용하여 pH 6 내지 6.5로 산성화시키고, 그 다음 인산염 완충액(0.25M, pH 6.2, 6.0ℓ)으로 희석시키고, 에틸 아세테이트(6×2.0ℓ)로 세척하여 설폰아마이드 부산물을 제거하였다. 용액을 진한 HCl(약 400㎖ 첨가)을 사용하여 pH 3으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트(4×2.0ℓ)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(2.0ℓ)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 생성물 8(320g, 89% 수율)을 밝은 황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 12.01 (s, 1H), 3.82 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 2.00 (ddd, J = 10.6, 8.6, 5.5 Hz, 1H), 1.54 (dqd, J = 14.8, 7.5, 4.4 Hz, 1H), 1.36 - 1.24 (m, 1H), 1.08 - 0.99 (m, 3H), 0.97 - 0.87 (m, 3H)
실시예 9 화합물 9의 합성
Figure pct00105
아지도-Ile-OH(8, 153g, 0.97㏖, 2.0당량)를 THF(1.5ℓ)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시키고, 이것에 NMM(214㎖, 1.94㏖) 및 아이소부틸클로로폼에이트(95㎖, 0.73㏖)를 순서대로 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1.0시간 동안 교반하였다. 화합물 7(150g, 0.49m㏖)을 나누어 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응물을 실온까지 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 0℃에서 물을 첨가하여 반응을 반응정지시키고, 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 동안 추출하였다. 합한 유기층을 1N HCl, 포화 NaHCO3 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(0-30% 에틸 아세테이트/석유 에터)로 정제시켜 백색 고체(140g, 70% 수율)를 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.14 (s, 1H), 6.57 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 13.2, 6.3 Hz, 2H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 2.21 (dd, J = 24.4, 11.5 Hz, 2H), 1.90 - 1.79 (m, 3H), 1.42 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 1.37 - 1.27 (m, 2H), 1.11 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.01 - 0.94 (m, 9H). C18H30N5O4S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 412.19, 실측치 412.19.
실시예 10 화합물 10의 합성
Figure pct00106
0℃에서 CH2Cl2(50㎖) 중의 화합물 9(436g, 1.05㏖, 1.0당량)의 용액에 이미다졸(94g, 1.37m㏖, 1.3당량), 그 다음 클로로트라이에틸실란(222㎖, 1.32㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 1시간에 걸쳐 가온시키고, 추가 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 염수를 첨가하고, 유기층을 분리시키고, 수성층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에서 농축시키고, 15-35% 에틸 아세테이트/석유 에터의 구배로 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 생성물 10(557.4g, 95% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.20 - 5.12 (m, 1H), 4.44 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.06 - 3.97 (m, 1H), 3.87 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 2.14 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 2.01 - 1.91 (m, 3H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.34 - 1.25 (m, 2H), 1.06 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.00 - 0.93 (m, 18H), 0.88 (dd, J = 19.1, 6.8 Hz, 6H). C24H44N5O4SSi [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 526.28, 실측치 526.28.
실시예 11 화합물 11의 합성
Figure pct00107
0℃에서 THF(4ℓ) 중의 10(408g, 0.77㏖) 및 메틸 아이오다이드(145㎖, 2.32㏖)의 용액에 소듐 하이드라이드(광유 중의 60% 분산물, 62.2g, 1.55㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 밤새 교반하고 이어서 격렬하게 교반하면서 빙수 냉각된 포화 염화암모늄(5ℓ)에 부었다. 이어서 혼합물을 에틸아세테이트로 추출(3×500㎖)하고, 유기층을 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, 15-35% 에틸아세테이트/석유 에터의 구배로 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 생성물 11(388g, 93% 수율)을 밝은 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H), 4.95 (d, J = 6.6 Hz, 1H),4.41 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.56 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.27 - 2.06 (m, 4H), 1.83 - 1.70 (m, 2H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.29 (ddd, J = 8.9, 6.8, 1.6 Hz, 3H), 1.01 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.96 (dt, J = 8.0, 2.9 Hz, 15H), 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.7 Hz,3H). C25H46N5O4SSi [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 540.30, 실측치 540.30.
실시예 12 화합물 12의 합성
Figure pct00108
2-아미노-2-메틸프로판산(500g, 4.85㏖), 수성 폼알데하이드(37%, 1.0ℓ, 12.1㏖) 및 폼산(1.0ℓ)의 혼합물을 3.0시간 동안 환류까지 가열시켰다(80℃). 이어서 6N HCl(850㎖)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 농축시켰다. 생성된 고체를 에틸 아세테이트로 3회 동안(1.0ℓ) 세척하면서 여과로 수집하였다. 고체를 물(1.5ℓ)에 용해시키고, 4N NaOH(약 1.0ℓ 용액)로 pH 7.0까지 중화시켰다. 용액을 농축시키고, 에탄올(2.0ℓ)과 공동 증발시켜 남아있는 물을 제거하였다. MeOH(2.0ℓ)를 잔류물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 세척하면서 고체(NaCl)를 여과시켰다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 백색 고체 639.2g을 제공하였고, 이것은 약간의 NaCl을 함유하였고, 추가 처리하지 않고 사용하였다.
실시예 13 화합물 13의 합성
Figure pct00109
에틸 아세테이트(1ℓ) 중의 12(97g, 0.74㏖)의 용액에 펜타플루오로페놀(163g, 0.88㏖) 및 DIC(126㎖, 0.81㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하고, 이어서 셀라이트 상에서 여과시켰다. 필터 패드를 10㎖의 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 추가로 정제 또는 농축시키지 않고 즉시 사용하였다.
실시예 14 화합물 14의 합성
Figure pct00110
펜타플루오로페닐 에스터 13의 에틸 아세테이트 용액에, 화합물 11 (200g, 0.37㏖) 및 무수 Pd/C(10wt%, 10 g)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 27시간 동안 수소 분위기(1atm) 하에서 교반하고, EtOAc로 필터 패드를 세척하면서 셀라이트 플러그로 여과시켰다. 합한 유기 분획을 농축시키고, EtOAc 중의 0-5% 메탄올의 구배로 크로마토그래피로 정제시켜 화합물 14(184g, 79% 수율)을 제공하였다. C31H58N4O5SSi [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 627.39, 실측치 627.39.
실시예 15 화합물 15의 합성
Figure pct00111
화합물 14(200g, 0.32m㏖)을 AcOH/물/THF(v/v/v 3:1:1, 638㎖)에 용해시키고, 실온에서 4일 동안 교반하였다. 반응물을 농축시키고, 톨루엔을 첨가하고, 다시 농축시키고; 이 단계를 2회 반복하여 화합물 15를 수득하였고, 이것을 다음 단계에 직접 사용하였다. C25H45N4O5S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 513.30, 실측치 513.30.
실시예 16 화합물 16의 합성
Figure pct00112
0℃에서 LiOH(0.4N, 600㎖, 2.55㏖)의 수성 용액을 MeOH(1.2ℓ) 중의 화합물 15(160g, 0.319㏖, 1.0당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(순수한 CH2Cl2에서 80:20:1 CH2Cl2/MeOH/NH4OH)시켜 화합물 16(140g, 91% 수율, 2단계에 대해서)을 비정질 고체로서 얻었다. C23H40N4O5S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 485.27, 실측치 485.27.
실시예 17 화합물 17의 합성
Figure pct00113
무수 THF(1.4ℓ) 및 무수 DMF(75㎖) 중의 화합물 16(143g, 0.30㏖) 및 DMAP(0.36g, 2.95m㏖)의 용액을 0℃까지 냉각시키고, 이것에 TEA(82.2㎖, 0.59m㏖) 및 아세트산 무수물(56㎖, 0.59m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온시키고, 24시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(5-50% MeOH/다이클로로메탄)는 화합물 17(147g, 95% 수율)을 비정질 고체로서 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.37 (s, 1H), 7.63 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.54 (dd, J = 11.2, 2.5 Hz, 1H), 4.64 (dd, J = 9.4, 7.2 Hz, 1H), 4.34 (s, 1H), 2.95 (s, 3H), 2.27-2.19 (m, 1H), 2.19-2.12 (m, 1H), 2.11 (s, 6H), 2.08 (s, 3H), 1.82-1.66 (m, 2H), 1.54-1.42 (m, 1H), 1.10 (s, 3H), 1.06 - 0.95 (m, 1H), 0.99 (s, 3H), 0.91 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.65 (d, J = 6.6 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, DMSO) δ 175.35, 172.78, 169.70, 169.58, 162.23, 148.03, 128.29, 69.51, 63.00, 55.10, 52.37, 38.86, 36.46, 33.83, 29.25, 28.82, 23.64, 21.09, 20.60, 19.96, 19.40, 18.38, 15.65, 10.77. C25H44N4O6S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 527.28, 실측치 527.28.
실시예 18 화합물18의 합성
Figure pct00114
실온에서 N2 하에서 무수 다이클로로메탄(600㎖) 중의 화합물 17(41.0g, 77.9m㏖, 1.0당량)의 용액에 EDC·HCl(44.8g, 233m㏖, 3.0당량) 및 펜타플루오로페놀(35.9g, 194m㏖, 2.5당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 염수(300㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(25-100% 에틸 아세테이트/헥산)로 정제시켜 백색 고체(43.0g, 80% 수율)를 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 9.06 (s, 1H), 7.65 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.60 (dd, J = 11.0, 2.8 Hz, 1H), 4.64 (dd, J = 9.4, 7.2 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 2.97 (s, 3H), 2.34 - 2.16 (m, 2H), 2.12 (s, 6H), 2.11 (s, 3H), 1.88 - 1.65 (m, 2H), 1.57 - 1.37 (m, 1H), 1.11 (s, 3H), 1.06 - 0.96 (m, 1H), 1.00(s, 3H), 0.92 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.66 (d, J = 6.6 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, DMSO) δ 175.24, 172.78, 171.75, 169.81, 156.32, 141.69, 141.56, 139.71, 138.59, 136.60, 134.68, 69.49, 63.11, 55.16, 52.41, 38.83, 36.40, 33.64, 29.42, 28.82, 23.62, 21.01, 20.55, 19.93, 19.39, 18.35, 15.62, 10.73. C31H42F5N4O6S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치: 693.3, 실측치:693.3.
실시예 19 화합물 19의 합성
Figure pct00115
NaH(60%, 8.0g, 200m㏖)를 THF(1.0ℓ) 중의 HO-PEG9-OMe(42.8g, 100m㏖)의 용액에 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반한 후, tert-부틸 2-브로모아세테이트(48.8g, 250m㏖)를 혼합물에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 빙수에 붓고, 다이클로로메탄으로 추출하고, 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 칼럼 크로마토그래피(0%에서 5% MeOH:다이클로로메탄)로 정제시켜 화합물 19를 황색 오일(32 g,59% 수율)로서 수득하였다.
실시예 20 화합물 20의 합성
Figure pct00116
화합물 432(40.0g, 73.8m㏖)를 다이클로로메탄(400㎖)에 용해시키고, 그 다음 폼산(600㎖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 25℃에서 밤새 교반하였다. 모든 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하였고, 이것은 표제 생성물을 황색 오일(36.0g, 이론 수율)로 제공하였다. C21H43O12 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 487.27, 실측치 487.24.
실시예 21 화합물 21의 합성
Figure pct00117
다이클로로메탄(640㎖)에 용해시킨 화합물 20(36.0g, 73.8m㏖)의 용액에, (COCl)2(100㎖) 및 DMF(52g, 0.74m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 모든 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하여, 표제 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
실시예 22 화합물 22의 합성
Figure pct00118
Z-L-Lys-OH(41.4g, 147.6m㏖), Na2CO3(23.4g, 221.4m㏖) 및 NaOH(5.9g, 147.6m㏖)를 물(720㎖)에 용해시켰다. 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 이것에 THF(20㎖) 중의 화합물 21(37.2g, 73.8m㏖)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. THF를 진공 하에서 제거하고, pH 3에 도달할 때까지 얼음 냉각 하에서 진한 HCl을 수성 용액에 첨가하였다. 다이클로로메탄으로의 추출 후, 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 생성물을 황색 오일로서 제공하였다(55g, 99% 수율). C35H60N2O15 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 749.40, 실측치 749.39.
실시예 23 화합물 23의 합성
Figure pct00119
아세톤(8.8ℓ) 중의 Boc-L-Tyr-OMe(2.2㎏, 7.45㏖), K2CO3(1.54㎏, 11.2㏖) 및 KI(48g, 0.29㏖)의 혼합물에 벤질 브로마이드(1.33㎏, 7.78㏖)를 서서히 첨가하였다. 그 다음 혼합물을 밤새 환류시켰다. 물(8ℓ)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(2×4ℓ)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(4ℓ) 및 염수(4ℓ)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 석유 에터로 배산처리하여 백색 고체 98(2.73㎏, 95% 수율)를 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.43 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.32 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.04 (s, 2H), 4.55 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.03 (qd, J = 14.0, 5.8 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H). ESI: m/z: C22H28NO5 [M+H]+에 대한 계산치: 386.19, 실측치 386.19.
실시예 24 화합물 24의 합성
Figure pct00120
2.4ℓ의 에탄올 및 2.4ℓ의 다이클로로메탄의 혼합물에 NaBH4(122g, 3.2㏖) 및 LiCl(136g, 3.2㏖)을 첨가하고, 0℃까지 냉가시키고, 그 다음 다이클로로메탄(2.4ℓ) 중의 화합물 23(616g, 1.6㏖)을 첨가하였다. 첨가 완결 후, 2.4ℓ의 다이클로로메탄을 반응에 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온시키고, 다량의 거품이 생성되었고, 그 다음 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물(6ℓ)로 희석시키고, 30분 동안 교반하고, 수성층을 다이클로로메탄(2ℓ×2)으로 추출하고, 합한 유기상을 물(2ℓ) 및 염수(2ℓ)로 세척하고, 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 백색 고체 542 g(95% 수율)을 제공하였다.
실시예 25 화합물 25의 합성
Figure pct00121
(COCl)2(1.02㎏, 8.0㏖)를 CH2Cl2(4ℓ)에 용해시키고, -75℃까지 냉각시키고, 온도를 -65℃ 하에서 유지시키면서 다이클로로메탄(400㎖) 중의 DMSO(1.25㎏, 16㏖)를 적가하였다. 첨가 완결 후 혼합물을 30분 동안 교반하고, 그 다음 다이클로로메탄(8ℓ) 중의 화합물 24(1.90㎏, 5.33㏖)를 적가하였다. 첨가 완결 후, 용액의 온도를 약 -65℃까지 증가시켰다. 30분 동안 교반한 후, 온도를 -50℃ 미만으로 유지시키면서 트라이에틸아민(1.62㎏, 16㏖)을 적가하였다. 15분 동안 교반한 후, 반응물을 약 -30℃까지 약 1시간 동안 가온시켰고, TLC 모니터링이 반응이 완결되었다는 것을 나타내었다. 물(6ℓ)을 반응 혼합물에 첨가하고, 교반하고, 층을 분리시켰다. 수성층을 다이클로로메탄(2ℓ)으로 세척하였다. 합한 유기층을 10% HCl(4ℓ) 및 염수(2ℓ)로 세척하고, 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 농축시킨 용액을 5:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 배산처리하고, 진공 하에서 여과하여 1.36㎏(72% 수율)의 밝은 황색 고체를 수득하였다.
실시예 26 화합물 26의 합성
Figure pct00122
tert-부틸 2-브로모프로피오네이트(255g, 1.22㏖) 및 트라이페닐포스핀 (320g, 1.22㏖)의 용액을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 아세토나이트릴을 감압 하에서 제거한 후, 톨루엔를 첨가하여 백색 고체를 침전시켰다. 톨루엔을 부은 후, 백색 고체를 다이클로로메탄(1ℓ)에 용해시키고, 분별 깔때기로 옮겼다. 10% 수성 NaOH(1ℓ)를 깔때기에 첨가하고, 진탕 후 유기층이 즉시 황색으로 변했다. 유기층을 분리시키고, 수성층을 다이클로로메탄(1ℓ)으로 1회 추출하였다. 다이클로로메탄층을 합하고, 염수(400㎖)로 1회 세척하고, 그 다음 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 일리드 26을 황색 고체(280g, 58%)로서 제공하였다.
실시예 27 화합물 27의 합성
Figure pct00123
화합물 25(450g, 1.27㏖)를 무수 CH2Cl2(3ℓ)에 용해시키고, 이것에 tert-부틸 에스터 일리드 26(546g, 1.40m㏖)를 첨가하고, 용액을 실온에서 밤새 교반하고, TLC로 완결되었다고 결정되었다. 칼럼 크로마토그래피(10-50% 에틸 아세테이트/석유 에터)로의 정제는 화합물 27(444g,75% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. C28H38NO5 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 468.27, 실측치 468.22.
실시예 28 화합물 28의 합성
Figure pct00124
화합물 27(63 g,0.13㏖)을 메탄올(315㎖)에 용해시키고, Pd/C 촉매(10wt%, 6.3g)를 사용하여 실온에서 밤새 수소화시켰다(1atm H2). 촉매를 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 28(45.8g, 93% 수율)을 제공하였다.
실시예 29 화합물 29의 합성
Figure pct00125
THF(4ℓ) 중의 화합물 28(390 g,1.03㏖)의 용액에, tert-부틸 나이트라이트(1.06㎏,10.3㏖)를 실온에서 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하였다. THF 제거 후, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(10-50% 에틸 아세테이트/헥산)로 정제시켜 화합물 29(314g, 72% 수율)를 밝은 황색 고체로서 제공하였다.
실시예 30 화합물 30의 합성
Figure pct00126
질소 하에서 에틸 아세테이트(500㎖) 중의 30(166g, 0.392㏖)의 용액에 Pd/C(10wt%, 16g)를 첨가하고, 반응 플라스크를 진공화시키고, 수소를 퍼징하였다. 3회 사이클의 진공화 및 재충전 후, 반응 혼합물을 수소(1atm) 하의 실온에서 16시간 동안 교반하고, 그 다음 셀라이드 상에서 여과하고, 농축시켜 생성물 30(146g, 97% 수율)을 밝은 황색 발포체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.62 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 6.43 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.39 (dd, J = 53.0, 44.2 Hz, 1H), 3.77 (s, 4H), 2.72 - 2.29 (m, 3H), 1.83 - 1.58 (m, 1H), 1.40 (d, J = 7.6 Hz, 18H), 1.24 (s, 1H), 1.06 (t, J = 5.7 Hz, 3H). C21H35N2O5 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 394.25, 실측치 395.25.
실시예 31 화합물 31의 합성
Figure pct00127
HATU(39.9g, 105m㏖)를 DMF(300㎖) 중의 4-(((벤질옥시)카보닐)아미노) 부탄산(26.1g, 110m㏖)의 용액에 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반한 후, 혼합물을 DMF(300㎖) 중의 화합물 30(39.4g, 100m㏖) 및 TEA(20.2g, 200m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음 물을 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 칼럼 크로마토그래피(20%에서 70% 에틸 아세테이트/석유 에터)로 정제시켜 표제 생성물을 백색 고체로서 수득하였다(45g, 73% 수율). C33H48N3O8 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 614.34, 실측치 614.15.
실시예 32 화합물 32의 합성
Figure pct00128
화합물 31(100g, 163m㏖)을 메탄올(500㎖)용해시키고, Pd/C 촉매(10wt%, 10 g)와 혼합하고, 실온에서 밤새 수소화시켰다(1atm). 촉매를 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 32(75.8g, 97% 수율)를 갈색 발포성 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.11 (s, 1H), 6.83 (d, J = 10.3 Hz, 2H), 5.04 - 4.52 (m, 6H), 3.90 - 3.56 (m, 1H), 2.81 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 2.63 (dd, J = 12.5, 6.1 Hz, 2H), 2.54-2.26 (dd, J = 14.0, 7.6 Hz, 4H), 1.94-1.64 (m, 3H), 1.44 - 1.36 (m, 18H), 1.08 (d, J = 6.9 Hz, 3H). C25H42N3O6 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 480.30, 실측치 480.59.
실시예 33 화합물 33의 합성
Figure pct00129
0℃에서 DMF(500㎖) 중의 화합물 22(130g, 174m㏖)의 용액에 TEA(66㎖, 474m㏖) 및 HATU(72g, 190m㏖)를 차례로 첨가하였다. 그 다음 반응 혼합물을 실온까지 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 0℃에서 DMF(500㎖) 중의 화합물 32(75.8g, 158m㏖)의 용액을 상기 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(4ℓ)에 붓고, 수성층을 에틸 아세테이트(3×500㎖)로 추출하고, 유기층을 합하고, 염수(2ℓ)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰고, 조 생성물 33 190 g)을 다음 단계에 직접 사용하였다. ESI m/z: C60H100N5O20 [M+H]+에 대한 계산치: 1210.69, 실측치 1210.69.
실시예 34 화합물 34의 합성
Figure pct00130
이전 반응으로부터의 조 생성물 33(190 g)을 메탄올(900㎖)에 용해시키고, Pd/C 촉매(10wt%, 19 g)와 혼합하고, 실온에서 밤새 수소화시켰다(1atm). 촉매를 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시키고, 조 화합물을 (0-10% MeOH/다이클로로메탄)의 구배를 사용하는 SiO2 칼럼으로 정제시켜 갈색 오일 생성물(105g, 2단계 62% 수율)을 제공하였다. C52H95N5O18 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1077.65, 실측치 1077.65.
실시예 35 화합물 35의 합성
Figure pct00131
실온에서 EtOH(5.3ℓ) 중의 화합물 34(105g, 97.1m㏖)의 용액에 N-석신이미딜 4-말레이미도부티레이트 (54.4g, 194.2m㏖) 및 0.1M NaH2PO4 용액(1.1ℓ)을 첨가하였다. 그 다음 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 다음 EtOH를 진공 하에서 증발시키고, 잔류물을 물(3ℓ)에 부었다. 수성 용액을 에틸 아세테이트(4×500㎖)로 추출하고, 유기층을 합하고, 염수(2ℓ)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 조 생성물을 (0-10% MeOH/다이클로로메탄)의 구배를 사용하여 SiO2 칼럼으로 정제시켜 황색 오일(100g, 83% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 9.53 (s, 0.7H), 9.52 (s, 0.3H), 9.22 (s, 0.7H), 9.21 (s, 0.3H), 7.95-7.87 (m, 2H), 7.65 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.51-7.44 (m, 1H), 6.99 (s, 2H), 6.77 - 6.66 (m, 2H), 6.65-6.57 (m, 1H), 4.13 (dt, J = 5.4, 8.1 Hz, 1H), 3.84 (s, 2H), 3.55 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.51 - 3.45 (m, 30H), 3.42 (dd, J = 5.8, 3.7 Hz, 2H), 3.38 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.23 (s, 3H), 3.14 - 3.01 (m, 4H), 2.64 - 2.44 (m, 1H), 2.41 - 2.22 (m, 4H), 2.16 - 2.04 (m, 2H), 1.76 - 1.64 (m, 4H), 1.64 - 1.52 (m, 2H), 1.52 - 1.35 (m, 2H), 1.37 (s, 3H), 1.35 (s, 6H), 1.31 (s, 9H), 0.97 (t, J = 8.5 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, DMSO) δ 175.35 (소량), 174.88, 171.69, 171.42, 171.29, 171.10, 169.04, 155.19 (소량), 155.05, 145.97, 134.47, 129.36, 126.00, 125.20, 122.92, 115.69, 79.32 (소량), 79.17, 77.35 (소량), 77.27, 71.29, 70.25, 69.95, 69.79, 69.60, 69.53, 58.06, 52.57, 50.13, 49.55 (소량), 41.25, 38.12, 37.94, 37.45, 36.84, 36.80 (소량), 33.38, 32.37, 31.86, 28.96, 28.28, 28.23, 27.69, 27.57, 25.42, 24.19, 22.86, 18.04, 16.49 (소량). C60H101N6O21 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1241.7, 실측치 1241.8.
실시예 36 화합물 36의 합성
Figure pct00132
화합물 35(31.5g, 25.4m㏖)를 다이클로로메탄(15㎖)에 용해시키고, 그 다음 TFA(15㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 그 다음 회전식 증발기에서 그리고 진공 오일 펌프에서 농축시켰다. 조 생성물을 에터(200㎖)와 함께 교반하고, 생성수층을 분리시키고, 중량 변화가 없을 때까지 회전식 증발기 및 진공 오일 펌프에서 농축시켜 화합물 36(36.0g, 미량 용매 함유)을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 9.18 (s, 1H), 7.97-7.87 (m, 2H), 7.79 (s, 2H), 7.71 - 7.61 (m, 2H), 7.00 (s, 2H), 6.85-6.73 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 4.17 - 4.07 (m, 1H), 3.84 (s, 2H), 3.55 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.50 (s, 30H), 3.42 (dd, J = 5.8, 3.7 Hz, 2H), 3.39 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.32-3.23 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.14 - 3.01 (m, 4H), 2.82-2.71 (m, 1H), 2.71 - 2.61 (m, 1H), 2.58 - 2.50 (m, 1H), 2.38 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.11 (dt, J = 7.8, 3.0 Hz, 2H), 1.88 - 1.77 (m, 1H), 1.76 - 1.64 (m, 4H), 1.59 (dt, J = 15.1, 5.8 Hz, 1H), 1.53 - 1.32 (m, 4H), 1.31 - 1.11 (m, 2H), 1.05 (d, J = 7.0 Hz, 2.1H), 1.00 (d, J = 6.9 Hz, 0.9H). 13C NMR (126 MHz, DMSO) δ 176.78 (소량), 176.55, 171.74, 171.42, 171.34, 171.12, 169.07, 146.63 (소량), 146.57, 134.49, 126.51, 126.31, 125.19, 122.85, 115.80, 71.31, 70.27, 69.96, 69.81, 69.61, 69.55, 58.07, 54.93 (소량), 52.64, 50.72, 50.13 (소량), 38.30 (소량), 38.14, 37.95, 36.85, 35.75, 35.38 (소량), 34.87, 34.81(소량), 33.46, 32.38, 31.83, 28.98, 25.40, 24.21, 22.89, 17.49, 16.74 (소량). C51H85N6O19[M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1085.6, 실측치 1085.4.
실시예 37 화합물 37의 합성
Figure pct00133
DMF(60㎖) 중의 화합물 36(36.0g, 25.4m㏖)을 반응 플라스크에 첨가하고, 빙수욕에서 5℃까지 냉각시켰다. DMF(150㎖) 중의 화합물 18(19.3g, 27.9m㏖)의 용액을 첨가하고, 그 다음 DIPEA(25㎖, 139m㏖)를 적가하였다. 완결 후, 수욕을 제거하고, 반응 혼합물을 실온까지 가온시키고, 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 용매가 증류되지 않을 때까지 고 진공 오일 펌프에서 농축시키고, 잔류물을 다이클로로메탄으로 희석시키고, 빙수욕에서 5℃까지 냉각시키고, pH가 3.0 내지 4.0로 조정될 때까지 폼산을 적가하였다. 혼합물을 다시 농축시키고, 잔류물을 실리카겔 칼럼에 로딩하고, 헥산/에틸 아세테이트/폼산 및 다이클로로메탄/MeOH/폼산으로 용리시키고, 적절한 분획을 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 물/MeOH/폼산에 용해시키고, 그 다음 분취용 HPLC로 추가로 정제시키고, 물/아세토나이트릴/폼산으로 용리시켰다. 분획을 농축시키고, 물로 희석시키고, 동결건조기 플라스크로 동일하게 옮겼다. 동결건조 후, 밝은 황색 발포성 고체(24g, 60% 수율)를 얻었다. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 9.60 (bs, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.19 (s, 0.33H), 8.17 (s, 0.67H), 8.02 (d, J = 9.0 Hz, 0.33H), 7.98 (d, J = 9.0 Hz, 0.67H), 7.94 - 7.83 (m, 2H), 7.65 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.56 (s, 0.33H), 7.55 (s, 0.67H), 6.99 (s, 2H), 6.82 - 6.74 (m, 1H), 6.74 - 6.67 (m, 1H), 5.62 - 5.54 (m, 1H), 4.69 - 4.59 (m, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.25 - 4.05 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.55 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.50 (s, 30H), 3.44-3.36 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 3.14 - 3.02 (m, 4H), 2.96 (s, 3H), 2.83 - 2.71 (m, 1H), 2.71 - 2.57 (m, 1H), 2.44 - 2.32 (m, 3H), 2.32 - 2.14 (m, 2H), 2.14 - 2.05 (m, 2H), 2.12 (s, 6H), 2.09 (s, 3H), 1.99 - 1.65 (m, 7H), 1.64 - 1.53 (m, 2H), 1.53 - 1.32 (m, 5H), 1.31 - 1.14 (m, 2H), 1.11 (s, 3H), 1.05 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.03 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 0.99 (s, 3H), 0.93 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.82 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.67 (d, J = 6.4 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, DMSO) δ 177.52 (소량), 177.01, 175.44, 172.75, 171.69, 171.43, 171.29, 171.09, 169.74, 169.55 (소량), 169.46, 169.04, 159.92 (소량), 159.88, 149.86, 149.74 (소량), 146.07, 134.46, 129.13 (소량), 129.08, 126.12 (소량), 126.07, 125.18, 124.28 (소량), 124.11, 122.95, 122.86 (소량), 115.67, 71.30, 70.26, 69.96, 69.80, 69.60, 69.54, 69.48, 63.01, 58.06, 55.09, 52.58, 52.39, 49.03, 47.96 (소량), 40.35, 38.89, 38.11, 37.94, 37.39, 36.84, 36.53, 36.02, 35.78 (소량), 33.87, 33.38, 32.38, 31.86, 29.02, 28.97, 25.37, 24.19, 23.60, 22.86, 21.15, 20.62, 19.99, 19.41, 18.34, 18.11, 16.17 (소량), 15.69, 10.81. C76H125N10O24S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 1593.9, 실측치 1593.8.
실시예 38 화합물 38의 합성
Figure pct00134
무수 THF(8ℓ) 중의 (S)-4-아이소프로필옥소아졸리딘-2-온(400g, 3.09㏖, 1.0당량)의 용액에, 약 -70℃에서 n-BuLi(헥산 중의 2.5M, 1.36ℓ, 3.4㏖, 1.1당량)을 N2 하에서 첨가하였다. 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 프로피오닐 클로라이드(315g, 3.4㏖, 1.1당량)를 서서히 첨가하였다. 첨가가 완결된 후, 혼합물을 -70℃에서 추가로 1시간 동안 교반하고, 실온까지 서서히 가온시켰다. 반응 혼합물을 얼음 냉각된 포화 암모늄 클로라이드 용액(7ℓ)에 첨가하고, 에틸 아세테이트(3×2ℓ)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(2ℓ) 및 염수(2ℓ)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(3㎏ 실리카겔, 순수한 석유 에터 대 5:1 석유 에터/에틸 아세테이트)로 정제시켜 표제 화합물을 무색 오일(500g, 87% 수율)로서 제공하였다. C9H16NO3 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 186.10, 실측치 186.10.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.48 - 4.39 (m, 1H), 4.27 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 9.1, 3.1 Hz, 1H), 3.06 - 2.82 (m, 2H), 2.38 (dtd, J = 14.0, 7.0, 4.0 Hz, 1H), 1.17 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.90 (dd, J = 17.0, 7.0 Hz, 6H).
실시예 39 화합물 39의 합성
Figure pct00135
실온에서 무수 다이클로로메탄(1.5ℓ) 중의 화합물 38(92.6g, 0.50㏖)의 용액에 DIPEA(70.5g, 0.54㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 -10℃까지 냉각시키고, n-Bu2BOTf(다이클로로메탄 중의 1.0M, 500㎖)를 N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물의 온도를 첨가 동안 0℃ 미만으로 유지시켰다. 그 다음 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고 그 다음 -78℃까지 냉각시키고, 이것에 다이클로로메탄(1ℓ) 중의 화합물 25(161g, 0.45㏖)를 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 실온까지 서서히 가온시키고, 밤새 교반하였다. 인산염 완충액 용액(0.1M, pH 7.0, 2ℓ)을 첨가하였다. 상 분리 후, 수성상을 다이클로로메탄(2×500㎖)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 메탄올(2ℓ)에 재용해시키고, 0℃까지 냉각시키고, 그 다음 H2O2(30% 수성 용액, 500㎖)로 처리하고, 1시간 동안 교반하였다. 메탄올을 회전식 증발로 제거하고, 물(3ℓ)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 다이클로로메탄(3×800㎖)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물(500㎖), 포화 NaHCO3(500㎖) 및 염수(500㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 400 g 실리카겔과 혼합하고, 칼럼 크로마토그래피(순수한 석유 에터에서 5:1 석유 에터/에틸 아세테이트)로 정제시켜 표제 화합물을 발포성 고체(150g, 60% 수율)로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 (ddd, J = 24.2, 14.2, 7.1 Hz, 5H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 5.02 (s, 2H), 4.69 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 4.33 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.90 (dd, J = 16.6, 8.0 Hz, 1H), 3.85 - 3.77 (m, 2H), 2.81 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 2.27 (dd, J = 11.4, 6.7 Hz, 1H), 1.35 (s, 9H), 0.89 (dd, J = 14.3, 6.9 Hz, 6H). C30H41N2O7 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 541.28, 실측치 541.30.
실시예 40 화합물 40의 합성
Figure pct00136
화합물 39(200g, 0.37㏖)을 무수 THF(3.5ℓ)에 용해시키고, 그 다음 다이티오카보닐이미다졸(198g, 1.11㏖)을 첨가하고, N2 하에서 8시간 동안 환류시켰다. 다이티오카보닐이미다졸(65g, 0.37㏖)을 다시 첨가하고, 그 다음 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 다시 실온까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(순수한 석유 에터에서 5:1 석유 에터/에틸 아세테이트)로 정제시켜 오일(170g, 83% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.41 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.36 (dt, J = 16.0, 6.9 Hz, 6H), 7.09 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.32 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.01 (s, 2H), 4.56 - 4.43 (m, 2H), 4.32 (ddd, J = 16.2, 15.6, 7.8 Hz, 3H), 4.19 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 2.96 (dd, J = 14.6, 4.4 Hz, 1H), 2.49 (dd, J = 14.5, 10.5 Hz, 1H), 2.29 (td, J = 13.4, 6.7 Hz, 1H), 1.73 (s, 1H), 1.29 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 13.9, 6.9 Hz, 6H). C34H43N4O7S[M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 651.27, 실측치 651.39.
실시예 41 화합물 41의 합성
Figure pct00137
무수 톨루엔(30㎖) 중의 화합물 40(210g, 323m㏖)의 용액에 n-Bu3SnH(182g, 646m㏖) 및 아조다이아이소부티로나이트릴(0.5g, 3.23m㏖)을 차례대로 N2 하에서 첨가하였다. 혼합물을 2.5시간 동안 환류시키고, 실온까지 냉각시키고, 그 다음 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(순수한 석유 에터에서 5:1 석유 에터/에틸 아세테이트)로 정제시켜 무색 오일(141g, 83% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 (ddd, J = 24.5, 14.5, 7.1 Hz, 5H), 7.08 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 5.04 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.33 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.81 (s, 2H), 2.73 (dd, J = 14.1, 5.9 Hz, 1H), 2.61 (dd, J = 14.0, 7.2 Hz, 1H), 2.29 (dq, J = 13.5, 6.8 Hz, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.60 (dd, J = 15.2, 6.2 Hz, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.20 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.89 (dd, J = 14.0, 6.9 Hz, 6H). C30H41N2O6 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 525.28, 실측치 525.37.
실시예 42 화합물 42의 합성
Figure pct00138
THF(30㎖) 및 H2O(0.7ℓ) 중의 화합물 41(208g, 390m㏖)의 용액에 H2O2 (30% 수성 용액, 1.4㎖, 6.0당량) 중의 LiOH(0.192g, 4.58m㏖, 2.0당량)를 첨가하였다. 5℃ 미만의 온도에서 3시간 교반한 후, 소듐 바이설파이트 용액(1.5M, 2ℓ) 및 pH 4에 도달할 때까지 2N HCl을 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3×800㎖)로 추출하고, 합한 유기상을 물(500㎖) 및 염수(500㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(순수한 석유 에터에서 3:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제시켜 오일(158g, 96% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.46 - 7.28 (m, 5H), 7.07 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 5.04 (s, 2H), 4.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 41.8 Hz, 1H), 2.82 - 2.43 (m, 3H), 1.85 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.17 (d, J = 6.9 Hz, 3H). C24H32NO5 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 414.22, 실측치 414.21.
실시예 43 화합물 43의 합성
Figure pct00139
메탄올(1.5ℓ) 중의 화합물 42(158g, 0.38m㏖) 및 Pd/C(10%, 0.25 g)의 혼합물을 1atm H2 압력 하에서 16시간 동안 수소화시키고, 그 다음 셀라이트로 여과하였다. 여과액을 농축시켜 오일(123g, 100% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.00 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.80 (s, 2H), 4.51 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.88 (s, 1H), 2.66 (dd, J = 65.6, 22.6 Hz, 4H), 1.88 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.14 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C17H26NO5 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치: 324.17, 실측치 324.16.
실시예 44 화합물 44의 합성
Figure pct00140
THF(10㎖) 중의 화합물 43(113g, 0.35㏖)의 용액에 t-BuONO(360g, 3.5㏖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(순수한 석유 에터에서 2:1 석유 에터/에틸 아세테이트)로 정제시켜 황색 고체(85g, 61% 수율)를 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.00 (s, 1H), 10.68 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.56 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 2.67 (dd, J = 13.5, 5.1 Hz, 1H), 2.41 (dd, J = 13.8, 6.6 Hz, 1H), 1.78 - 1.65 (m, 1H), 1.27 (s, 9H), 1.18 (s, 1H), 1.05 (d, J = 7.1 Hz, 3H). C17H25N2O7 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 369.15, 실측치 369.14.
실시예 45 화합물 45의 합성
Figure pct00141
메탄올(500㎖) 중의 화합물 44(80g, 217m㏖) 및 Pd/C(10wt%, 2.0g)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 수소화시키고(1atm H2), 그 다음 셀라이트로 여과하였다. 여과액을 농축시켜 백색 고체를 제공하였다(73g, 93% 수율). C17H27N2O5 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 339.18, 실측치 339.17. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 6.60 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.44 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.71 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 2.62 - 2.37 (m, 3H), 1.83 (ddd, J = 13.7, 9.9, 3.7 Hz, 1H), 1.39 (s, 9H), 1.13 (d, J = 7.1 Hz, 3H)
실시예 46 화합물 46의 합성
Figure pct00142
옥타데칸올 모노메틸 에터(115.2g, 0.3㏖)를 무수 테트라하이드로퓨란(3ℓ)에 용해시키고, 소듐 하이드라이드(60wt%, 24g, 0.6㏖)를 실온에서 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, tert-부틸 브로마이드(146.3g, 0.75㏖)를 첨가하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4ℓ 다이클로로메탄에 붓고, 그 다음 2㎏의 부순 얼음과 혼합하고, 수성상을 분리시키고, 1ℓ 다이클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기상을 물로 세척하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(20% 석유 에터/에틸 아세테이트, 그 다음 0 내지 5% MeOH/다이클로로메탄)로 정제시켜 108 g의 표제 화합물(72% 수율)을 제공하였다.
실시예 47 화합물 47의 합성
Figure pct00143
무수 폼산(1ℓ)과 CH2Cl2(500㎖)의 혼합물에 화합물 46(210g, 0.422㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 농축시켜 200g의 생성물(100% 수율)을 제공하였다.
실시예 48 화합물 48의 합성
Figure pct00144
화합물 48(198g, 0.422㏖)을 2.6ℓ CH2Cl2에 용해시키고, 그 다음 0.5㎖의 DMF 및 옥살릴 클로라이드(275㎖)를 실온에서 적가하였다. 반응물을 3시간 동안 교반하고, 농축시켜 210g의 생성물을 제공하였다.
실시예 49 화합물 49의 합성
Figure pct00145
Cbz-L-라이신(236.3g, 0.844㏖), Na2CO3(89.5g, 0.844㏖) 및 NaOH(33.8g, 0.844㏖)를 1.6ℓ의 물과 혼합하고, 빙욕에서 0℃까지 냉각시켰다. THF(160㎖) 중의 화합물 48(210g, 조물질, 0.422㏖)을 적가하고, 그 다음 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 1ℓ의 에틸 아세테이트를 첨가하고, 수성상을 분리시키고, 진한 염화수소산을 사용하여 pH를 3 내지 4로 조정하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 생성물 290g(97% 수율)을 제공하였다.
실시예 50 화합물 50의 합성
Figure pct00146
화합물 49(182.5g, 0.26㏖)를 2ℓ 다이클로로메탄에 용해시켰다. 펜타플루오로페놀(95.4g, 0.52㏖) 및 DIC(131g, 1.04㏖)를 실온에서 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 생성물을 농축시켜 조 생성물 430g을 제공하였다.
실시예 51 화합물 51의 합성
Figure pct00147
Tert-부틸 4-아미노부티르산(62g, 0.39㏖)을 1.5ℓ DMF에 용해시키고, 빙수로 냉각시키고, DIPEA(134.2g, 1.04㏖)를 첨가하고, 그 다음 화합물 50(430g, 조물질, 0.26㏖)을 10℃ 내지 20℃에서 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시키고, 다이클로로메탄으로 희석시키고, 물로 세척하고, 다이클로로메탄으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 0.2N HCl, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(25%에서 100% 에틸 아세테이트/석유 에터, 0 내지 5% MeOH/다이클로로메탄)로 정제시켜 180g의 생성물을, 82% 수율로 제공하였다.
실시예 52 화합물 52의 합성
Figure pct00148
화합물 51(78g, 92.3m㏖) 및 Pd/C(10wt%, 13g)를 500㎖ 메탄올에서 혼합하였다. 혼합물을 H2 풍선 하에서 실온에서 밤새 교반하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(0 내지 20% MeOH/다이클로로메탄)로 정제시켜 70.2g의 생성물(92% 수율)을 제공하였다.
실시예 53 화합물 53의 합성
Figure pct00149
화합물 52(17.3g, 94.2m㏖)를 500㎖ 다이클로로메탄에 용해시켰다. 펜타플루오로페놀(34.7g, 188.5m㏖) 및 DIC(47.5g, 377m㏖)를 순서대로 실온에서 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 농축시켜 조 생성물(105 g)을 제공하였다.
실시예 54 화합물 54의 합성
Figure pct00150
화합물 52(67g, 94.2m㏖)를 0.75ℓ DMF에 용해시키고, 빙수로 냉각시키고, 그 다음 DIPEA(48.6g, 376.8m㏖)를 첨가하였다. 10℃ 내지 20℃에서 혼합물에 화합물 53(105g, 조물질, 94.2m㏖)을 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 그것을 농축시키고, 다이클로로메탄으로 희석시키고, 물로 세척하고, 수층을 다이클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기상을 0.2N HCl, 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(50%-100% 에틸 아세테이트/석유 에터, 10% MeOH/다이클로로메탄)로 정제시켜 생성물(80.5g, 98% 수율)을 제공하였다.
실시예 55 화합물 55의 합성
Figure pct00151
무수 폼산(400㎖)과 다이클로로메탄(200㎖)의 혼합물에 화합물 54(80.5g, 91.9m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 농축시키고, 다이클로로메탄으로 희석시키고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 칼럼 크로마토그래피(0%에서 20% MeOH/다이클로로메탄)로 정제시켜 70g의 생성물(93% 수율)을 수득하였다.
실시예 56 화합물 56의 합성
Figure pct00152
실온에서 다이클로로메탄(1000㎖) 중의 화합물 55(104g, 0.127㏖)의 용액에 N-하이드록시석신이미드(16g, 0.14㏖) 및 EDC·HCl(37g, 0.2㏖)을 순서대로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 생성물(120g, 100% 수율)을 제공하였다.
실시예 57 화합물 57의 합성
Figure pct00153
1ℓ 테트라하이드로퓨란 중의 화합물 56(120g, 127m㏖) 및 화합물 45 (45.0g, 133m㏖)의 혼합물을 가열시키고, 밤새 환류시키고, 다이클로로메탄(2ℓ)으로 희석시키고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 1.5ℓ 물 및 1.5ℓ 에틸 아세테이트를 조 생성물에 첨가하고, 30분 동안 교반하고, 수성층을 분리시키고, 에틸 아세테이트층을 물(600㎖×2)로 2회 추출하였다. 수성상을 합하고, 에틸 아세테이트(700㎖)로 세척하여 불순물을 제거하였다. 수성상에 염화나트륨을 포화 시까지 첨가하고, 생성된 수성 용액을 다이클로로메탄(1ℓ×2)으로 추출하고, 다이클로로메탄상을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(0%에서 20% MeOH/다이클로로메탄)로 정제시켜 83.6g의 생성물(58% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (600 MHz, DMSO ) δ 9.23 (s, 1H), 7.97-7.83 (m, 1H), 7.64 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.61 (d, J = 8.7 Hz, 0 H), 4.14 (dt, J = 5.4, 8.3 Hz, 1H), 3.84 (d, J = 5.4, 8.3 Hz, 1H), 3.84 (t, J = 5.4, 8.3 Hz, 1H), 3.51-3.46 (m, 26m), 3. 42 (dd, J = 5.7, 3.8 Hz, 2H), 3.39 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.23 (t, J = 13.5, 7.0 Hz, 1H), 2.45 (dd, J = 13.5, 7.0 Hz, 1H), 2.41-2.32 (m, 3), 2.11 (td, J = 7.1, 1.9 Hz, 2H), 1.75-1.64 (m, 4H), 1.64-1.54 (m, 1H), 1.52-1.43 (m, 1H), 1.43-1.35 (m, 2H), 1.32 (s, 9g), 1.32-1.15 (m, 4H), 1 02 (d, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 177.18, 171.68, 171.43, 171.28, 171.08, 169.02, 155.15, 145.99, 134.45, 129.41, 125.91, 125.30, 123.04, 1115.71, 77.29, 71.29, 70.25, 69.95, 69.79, 69.59, 69.53, 58.05, 52.57, 50.33, 40.71, 38.12, 37.93, 37.64, 36.83, 35.92, 33.35, 32 37 31.85, 28.95, 28.26, 27.86 (소량), 25.39, 24.18, 22.85, 18.10. C54H89N6O20 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 1141.6, 실측치 1141.9.
실시예 58 화합물 58의 합성
Figure pct00154
화합물 57(59.0g, 51.7m㏖)을 다이클로로메탄(345㎖)에 용해시키고, 이것에 트라이플루오로아세트산(172㎖)을 첨가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 용매가 증발되지 않을 때까지 회전식 증발기에서 농축시키고, 그 다음 중량 변화가 없을 때까지 오일 진공 펌프에서 농축시켜 조 생성물 58(75.5g, 용매 함유)을 제공하였다. 1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.82 (s, 1H), 9.18 (s, 1H), 7.95 - 7.88 (m, 2H), 7.83 (s, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.66 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 6.99 (s, 2H), 6.84 - 6.78 (m, 2H), 4.16 - 4.09 (m, 1H), 3.84 (s, 2H), 3.55 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.52 - 3.44 (m, 26H), 3.42 (dd, J = 5.6, 3.9 Hz, 2H), 3.39 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.33 - 3.25 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.14 - 3.02 (m, 4H), 2.76 (dd, J = 13.9, 6.1 Hz, 1H), 2.65 (dd, J = 13.9, 6.1 Hz, 1H), 2.55 (dq, J = 14.0, 7.0 Hz, 1H), 2.38 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.14 - 2.08 (m, 2H), 1.82 (ddd, J = 14.1, 8.7, 5.5 Hz, 1H), 1.74 - 1.65 (m, 4H), 1.64 - 1.55 (m, 1H), 1.52 - 1.43 (m, 2H), 1.43 - 1.34 (m, 2H), 1.30 - 1.13 (m, 2H), 1.05 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 176.54, 171.73, 171.43, 171.34, 171.11, 169.07, 146.59, 134.48, 126.50, 126.33, 125.19, 122.85, 115.84, 71.30, 70.27, 69.96, 69.81, 69.61, 69.55, 58.06, 52.65, 50.72, 38.31, 38.13, 37.95, 36.85, 35.75, 34.88, 33.45, 32.38, 31.82, 28.97, 25.40, 24.20, 22.88, 17.48. C49H81N6O18 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 1041.6, 실측치 1041.7.
실시예 59 화합물 59의 합성
Figure pct00155
DMF(160㎖) 중의 화합물 58(75.5g, in 51.7m㏖)을 반응 플라스크에 첨가하고, 빙수욕에서 5℃까지 냉각시켰다. DMF(240㎖) 중의 화합물 18(35.8g, 51.7m㏖)의 용액을 첨가하고, 그 다음 DIPEA(36.8g, 285m㏖)를 적가하였다. 완결 후, 수욕을 제거하고, 반응 혼합물을 실온까지 가온시키고, 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 용매가 증류되지 않을 때까지 고 진공 오일 펌프에서 농축시키고, 잔류물을 다이클로로메탄으로 희석시키고, 빙수욕에서 5℃까지 냉각시키고, pH가 3.0 내지 4.0로 조정될 때까지 이것에 폼산을 적가하였다. 혼합물을 다시 농축시키고, 잔류물을 실리카겔 칼럼에 로딩하고, 헥산/에틸 아세테이트/폼산 및 다이클로로메탄/MeOH/폼산으로 용리시키고, 적절한 분획을 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 물/MeOH/폼산에 용해시키고, 그 다음 물/아세토나이트릴/폼산으로 용리시키는 분취용 HPLC로 추가로 정제시켰다. 분획을 농축시키고, 물로 희석시키고, 동결건조기 플라스크로 동일하게 옮겼다. 동결건조 후, 밝은 황색 발포성 고체(48g, 60% 수율)를 얻었다. 1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.20 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.03-7.95 (m, 1H), 7.95 - 7.86 (m, 2H), 7.77-7.61 (m, 2H), 7.55 (s, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.77 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 4.65 (dd, J = 9.3, 7.1 Hz, 1H), 4.40 (s, 1H), 4.18 - 4.08 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.55 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.51 - 3.47 (m, 26H), 3.44 - 3.36 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 3.14 - 3.02 (m, 4H), 2.96 (s, 3H), 2.75 (dd, J = 13.5, 6.7 Hz, 1H), 2.63 (dd, J = 13.5, 6.7 Hz, 1H), 2.43 - 2.32 (m, 3H), 2.31 - 2.23 (m, 1H), 2.23 - 2.09 (m, 3H), 2.13 (s, 6H), 2.09 (s, 3H), 1.88 - 1.73 (m, 3H), 1.75 - 1.65 (m, 4H), 1.65 - 1.53 (m, 2H), 1.53 - 1.44 (m, 3H), 1.44 - 1.34 (m, 2H), 1.31 - 1.15 (m, 2H), 1.12 (s, 3H), 1.05 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.93 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.82 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.67 (d, J = 6.1 Hz, 3H). 13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 177.05, 175.28, 172.76, 171.74, 171.47, 171.34, 171.11, 169.78, 169.49, 169.09, 159.91, 149.88, 146.10, 134.47, 129.10, 126.11, 125.23, 124.12, 122.97, 115.72, 71.33, 70.30, 69.99, 69.83, 69.63, 69.57, 69.52, 63.21, 58.08, 55.05, 52.63, 52.49, 49.07, 40.37, 38.89, 38.14, 37.97, 37.43, 36.87, 36.50, 36.06, 33.91, 33.41, 32.41, 31.87, 29.06, 28.99, 25.40, 24.22, 23.66, 22.88, 21.08, 20.63, 20.00, 19.43, 18.41, 18.13, 15.68, 10.81. C74H121N10O23S[M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 1549.8, 실측치 1550.2.
실시예 60 화합물 60의 합성
Figure pct00156
옥타데칸올 모노메틸 에터(10g, 26m㏖, 1.0당량)를 100㎖의 무수 다이클로로메탄에 용해시키고, DMAP(32㎎, 0.26m㏖, 0.01당량)를 첨가하고, 그 다음 트라이에틸아민(10.5g, 104m㏖, 4.0당량) 및 TSCL(14.9g, 78m㏖, 3.0당량)을 빙욕에서 적가하였다. 10분 동안 교반한 후, 반응물을 실온까지 가온시키고, 밤새 교반하고, 1N HCl(100㎖), 물(100㎖) 및 염수(100㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 회전식 증발기에서 농축시켰다. 잔류물을 소량의 다이클로로메탄으로 용해시키고, 그 다음 칼럼에 로딩하고, 5%-100% 에틸 아세테이트/석유 에터 및 1%-3% MeOH/다이클로로메탄으로 용리시켜 황색 오일(11.6g, 83% 수율)을 제공하였다. C24H43O11S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 539.2, 실측치539.2.
실시예 61 화합물 61의 합성
Figure pct00157
화합물 60(11.6g, 21.5m㏖, 1.0당량)을 20㎖의 무수 DMF에 용해시키고, 다이벤질아민(5.5g, 27.8m㏖, 1.5당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하고, 300㎖의 다이클로로메탄으로 희석시키고, 물(300㎖×3) 및 염수(300㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 회전식 증발기 상에서 농축시켰다. 잔류물을 소량의 다이클로로메탄으로 용해시키고, 칼럼에 로딩하고, 5%-100% 에틸 아세테이트/석유 에터로 용리시켜 밝은 황색 오일(8.2, 66% g)을 제공하였다. C31H50NO8 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 564.3, 실측치 564.3.
실시예 62 화합물 62의 합성
Figure pct00158
100㎖의 무수 MeOH 중의 화합물 61(8.6g, 15.2m㏖, 1.0당량)의 용액에 Pd/C(0.9g, 10wt%)를 첨가하고, 혼합물을 수소 하에서 환류까지 가열시키고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 메탄올로 세척하고, 회전식 증발기에서 농축시켜 5.3g의 무색 오일을, 90% 수율로 제공하였다. C17H38NO8 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 384.3, 실측치 384.3.
실시예 63 화합물 63의 합성
Figure pct00159
0℃에서 DMF(201㎖) 중의 Z-L-글루탐산 tert-부틸 에스터(0.96g, 2.86m㏖) 및 화합물 62(1.1g, 2.86m㏖)의 용액에 HATU(1.2g, 3.15m㏖) 및 DIPEA(1㎖, 6.3m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온까지 가온시키고, 1시간 동안 교반하고, 그 다음 빙수에 붓고, 다이클로로메탄(3×50㎖)으로 추출하고, 합한 유기상을 물(30㎖), 포화 중탄산나트륨(30㎖), 염수(30㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼(이동상: MeOH/CH2Cl2)으로 정제시켜 생성물 63(1.5g, 75% 수율)을 제공하였다. C34H59N2O13 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 703.4, 실측치 703.4.
실시예 64 화합물 64의 합성
Figure pct00160
메탄올(10㎖) 중의 화합물 63(0.66g, 0.93m㏖)의 용액에 Pd/C(10wt%, 60 ㎎)를 첨가하고, 반응물을 H2 풍선 하에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 여과시키고, 농축시켜 화합물 64(450㎎, 85% 수율)를 제공하였다. C26H53N2O11 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 569.4, 실측치 569.4.
실시예 65 화합물 65의 합성
Figure pct00161
에탄올(5㎖) 중의 화합물 64(0.45g, 0.79m㏖) 및 N-석신이미딜 4-말레이미도부티레이트 (0.33g, 1.18m㏖)의 용액에 NaH2PO4(0.110m㏖)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 에탄올 대부분을 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 물(20㎖)로 희석시키고, 다이클로로메탄(3×30㎖)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 물(20㎖) 및 염수(20㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 조 생성물을 실리카겔 칼럼(이동상: MeOH/다이클로로메탄)으로 정제시켜 화합물 65(380㎎, 65% 수율)를 제공하였다. C34H60N3O14 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 734.4, 실측치734.4.
실시예 66 화합물 66의 합성
Figure pct00162
다이클로로메탄(2㎖) 중의 화합물 65(230㎎, 0.31m㏖)의 용액에 트라이플루오로아세트산(2㎖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 그 다음 다이클로로메탄과 함께 3회 공증발시키고, 오일 펌프에서 건조시켜 화합물 66(208㎎, 100% 수율)을 제공하였다. C30H52N3O14 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 678.3, 실측치 678.3.
실시예 67 화합물 67의 합성
Figure pct00163
다이클로로메탄(5㎖) 중의 화합물 66 (208㎎, 0.3m㏖)의 용액에 펜타플루오로페놀(113㎎, 0.6m㏖) 및 EDC·HCl(117㎎, 0.6m㏖)를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 다이클로로메탄(20㎖)으로 희석시키고, 물(5㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 화합물 67(252㎎, 100% 수율)을 제공하였다. C36H51F5N3O14 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 844.3, 실측치 844.3.
실시예 68 화합물 68의 합성
Figure pct00164
에탄올(300㎖) 중의 화합물 45(7.3g, 21.7m㏖) 및 N-Boc-알라닌 하이드록시석신이미드 에스터 (7.2g, 21.7m㏖)의 용액에 0.1N의 NaH2PO4(150㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 농축시키고, 물(100㎖)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3×50㎖)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(50㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼(이동상: 에틸 아세테이트/PE)으로 정제시켜 화합물 68(6.7g, 55% 수율)을 제공하였다. C29H40N3O8[M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 558.3, 실측치 558.3.
실시예 69 화합물 69의 합성
Figure pct00165
메탄올(100㎖) 중의 화합물 68(6.7g, 12m㏖)의 용액에 Pd/C(10wt%, 0.67 g)를 첨가하고, 혼합물을 H2 풍선 하에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 여과시키고, 농축시켜 화합물 69(5g, 100% 수율)를 제공하였다. C21H34N3O6 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 424.2, 실측치 424.2.
실시예 70 화합물 70의 합성
Figure pct00166
0℃에서 DMF(5㎖) 중의 화합물 67(252㎎, 0.3m㏖) 및 화합물 69(190㎎, 0.45m㏖)의 용액에 DIPEA(0.13㎖, 0.75m㏖)를 첨가하였다. 완결 후, 혼합물을 실온까지 서서히 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석시키고, 다이클로로메탄(3×10㎖)으로 추출하고, 그 다음 합한 유기상을 물(10㎖), 1 N HCl(10㎖) 및 염수(10㎖)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 칼럼(이동상: MeOH/다이클로로메탄)으로 정제시켜 화합물 70(180㎎, 55% 수율)을 제공하였다. C51H83N6O19 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 1083.6，실측치 1083.6.
실시예 71 화합물 71의 합성
Figure pct00167
다이클로로메탄(56.8㎖) 중의 화합물 70(8.2g, 7.6m㏖)의 용액에 트라이플루오로아세트산(18.9㎖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 다이클로로메탄과 함께 2회 공증발시키고, 오일 펌프에서 건조시켰다. 잔류물에 에터(100㎖)를 첨가하고, 혼합물을 격렬하게 1시간 동안 교반하고, 침강시키고, 상부층을 버렸다. 잔류물을 취하고, 이 과정을 2회 반복하고, 그 다음 회전식 증발기에서 농축시키고, 오일 펌프에서 건조시켜 화합물 71(9.2g, >100% 수율)을 제공하였다. C46H75N6O17 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 983.51, 실측치 983.37.
실시예 72 화합물 72의 합성
Figure pct00168
화합물 71(8.2g, 7.6m㏖)을 DMF(80㎖)에 용해시키고, 반응 플라스크를 빙수욕에서 0 내지 5℃까지 냉각시키고, DMF(201㎖) 중의 화합물 18(5.2g, 7.6m㏖)의 용액을 첨가하고, 그 다음 DIPEA(4㎖, 22.8m㏖)를 서서히 첨가하였다. 반응 온도를 5℃ 내지 10℃로 유지시키기 위해서 DIPEA의 첨가 속도를 제어해야 했다. 그 후, 빙수욕을 제거하고, 반응물을 실온까지 가온시키고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 다이클로로메탄으로 희석시키고, 빙수욕에서 냉각시키고, pH가 3.0 내지 4.0으로 조정될 때까지 폼산을 적가하였다. 혼합물을 다시 농축시키고, 20-100% 에틸 아세테이트/석유 에터 및 0-20% MeOH/다이클로로메탄(0.1% 폼산 함유)으로 용리시키는 실리카겔 칼럼 상에서 정제시켜 조 생성물(11.44 g)을 제공하였다. 조 생성물을 분취용 HPLC(20-30% 아세토나이트릴/물(각각 0.1% 폼산 함유)) 상에서 정제시키고, 분획을 농축시키고, 동결건조시켜 화합물 72(6.8g, 수율 60%)를 제공하였다. C71H115N10O22S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 1491.78, 실측치 1492.01.
실시예 73 화합물 73의 합성
Figure pct00169
무수 폼산(500㎖) 및 다이클로로메탄(250㎖)의 혼합물에 화합물 63(22.4g, 0.03㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 농축시켜 생성물(19g, 100% 수율)을 제공하였다.
실시예 74 화합물 74의 합성
Figure pct00170
화합물 73(19.0g, 0.03㏖)을 다이클로로메탄(200㎖)에 용해시키고, 이것에 펜타플루오로페놀(11.0g, 0.06㏖) 및 DIC(15.1g, 0.12㏖)를 실온에서 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 농축시켜 조 생성물 45g을 제공하였다.
실시예 75 화합물 75의 합성
Figure pct00171
Tert-부틸 4-아미노부티르산(6.40g, 0.04㏖)을 500㎖ DMF에 용해시키고, 빙수로 냉각시키고, DIPEA(15.5g, 0.12㏖)를 첨가하고, 그 다음 화합물 74(45g, crude, 0.03㏖)를 10℃ 내지 20℃에서 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시키고, 다이클로로메탄으로 희석시키고, 물로 세척하고, 수성상을 다이클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기상을 0.2N HCl, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 그 다음 칼럼 크로마토그래피(25%-100% 에틸 아세테이트/석유 에터, 0-5% MeOH/다이클로로메탄)로 정제시켜 생성물(19.5g, 83% 수율)을 제공하였다.
실시예 76 화합물 76의 합성
Figure pct00172
화합물 75(19.5g, 24.8m㏖) 및 Pd/C(10wt%, 5g)를 200㎖ 메탄올에 첨가하고, 혼합물을 H2 풍선 하에서 실온에서 밤새 교반하였다, 그 다음 여과하고, 농축시켜 16.7g의 생성물(100% 수율)을 제공하였다.
실시예 77 화합물 77의 합성
Figure pct00173
화합물 76(16.7g, 24.8m㏖)을 200㎖ DMF에 용해시키고, 빙수로 냉각시키고, DIPEA(12.9g, 0.10㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 10℃ 내지 20℃에서 유지시키고, 이것에 화합물 53(30g, 조물질, 24.8m㏖)을 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시키고, 다이클로로메탄으로 희석시키고, 물로 세척하고, 수성상을 다이클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기상을 0.2N HCl, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(50%-100% 에틸 아세테이트/석유 에터, 10% MeOH/다이클로로메탄)로 정제시켜 생성물(20g, 98% 수율)을 제공하였다.
실시예 78 화합물 78의 합성
Figure pct00174
화합물 77(16.8g, 20.5m㏖)을 다이클로로메탄(60㎖)에 용해시키고, 무수 폼산(120㎖)을 첨가하였다. 반응물을 밤새 교반하고, 농축시키고, 에틸 아세테이트(150㎖)로 희석시키고, 물(300㎖)로 추출하였다. 유기상을 버리고, 고체 염화나트륨을 수성상에 포화 시까지 첨가하였다. 그 다음 수성 용액을 다이클로로메탄(200㎖×2)으로 추출하고, 다이클로로메탄상을 수집하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(0-20% 메탄올/다이클로로메탄)로 정제시켜 화합물 78(16.4g, 수율 100% 초과, 폼산 함유)을 제공하였다. C34H59O15N4 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 763.39, 실측치 763.29.
실시예 79 화합물 79의 합성
Figure pct00175
실온에서 화합물 78(15.6g, 20.5㏖)을 다이클로로메탄(200㎖)에 용해시키고, 이것에 N-하이드록시석신이미드(NHS, 3.7g, 32.3㏖) 및 EDC·HCl(8.3g, 43㏖)를 차례대로 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 화합물 79(17.6g, 100% 수율)를 제공하였다. C38H62O17N5 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치 860.41, 실측치 860.29.
실시예 80 화합물 80의 합성
Figure pct00176
방법 I
화합물 79 (8.8g, 10.2m㏖) 및 화합물 45(3.5g, 10.2m㏖)를 200㎖의 테트라하이드로퓨란에 용해시켰다. 혼합물을 환류까지 가열시키고, 밤새 교반하고, 농축시키고, 그 다음 물(300㎖) 및 에틸 아세테이트(100㎖)를 조 생성물에 첨가하고, 교반하고, 수성상을 분리시켰다. 수성상에 염화나트륨을 포화에 도달할 때까지 첨가하고, 용액을 다이클로로메탄(2×150㎖)으로 추출하였다. 합한 다이클로로메탄을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(0-20% MeOH/다이클로로메탄)로 정제시켜 화합물 80(4.0g, 수율 36%)을 제공하였다. ESI m/z: C51H83O19N6[M+H]+에 대한 계산치 1083.56, 실측치 1083.47.
방법 II
화합물 79(4.4g, 5.12m㏖) 및 화합물 45(1.73g, 5.12m㏖)를 100㎖의 EtOH에 용해시켰다. 그 다음 0.1N NaH2PO4 용액(20㎖)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 교반하였다. 농축 후, 물(200㎖) 및 에틸 아세테이트(100㎖)를 잔류물에 첨가하고, 교반하고, 수성상을 분리시켰다. 수성상에 포화에 도달할 때까지 염화나트륨을 첨가하고, 용액을 다이클로로메탄(2×100㎖)으로 추출하였다. 합한 다이클로로메탄을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(0-20% MeOH/다이클로로메탄)로 정제시켜 화합물 80(2.0g, 수율 36%)을 제공하였다.
방법 III
화합물 79(4.4g, 5.12m㏖) 및 화합물 45(1.73g, 5.12m㏖)를 100㎖의 아세토나이트릴에 용해시켰다. 그 다음 0.1N NaH2PO4 용액(20㎖)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 교반하였다. 농축 후, 물(200㎖) 및 에틸 아세테이트(100㎖)를 잔류물에 첨가하고, 교반하고, 수성상을 분리시켰다. 수성상에 염화나트륨을 포화에 도달할 때까지 첨가하고, 용액을 다이클로로메탄(2×100㎖)으로 추출하였다. 합한 다이클로로메탄을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(0-20% MeOH/다이클로로메탄)로 정제시켜 화합물 80(2.2g, 수율 40%)을 제공하였다.
실시예 81 화합물 73의 합성
Figure pct00177
화합물 49(20g, 28.4m㏖, 1.0당량)를 350㎖의 무수 다이클로로메탄에 용해시키고, 빙수욕에서 냉각시켰다. NHS(3.9g, 34.1m㏖, 1.2당량) 및 EDC(27g, 142.0m㏖, 5.0당량)를 차례대로 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 물(200㎖×2), 염수(200㎖×1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 소량의 다이클로로메탄에 용해시키고, 실리카겔 칼럼에 로딩하고, 2:49:49에서 4:48:48 MeOH/에틸 아세테이트/다이클로로메탄으로 용리시켰다. 생성물을 황색 오일(14.2g, 62% 수율)로서 얻었다. C37H60N3O16 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치:802.4, 실측치: 802.4.
실시예 82 화합물 74의 합성
Figure pct00178
40㎖의 에탄올 및 10㎖의 0.1M NaH2PO4 중의 화합물 69(6.4g, 15.1m㏖, 1.0당량)의 용액에 화합물 73(12.7g, 15.9m㏖, 1.05당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 농축시키고, 다이클로로메탄에 재용해시키고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼(3-5% 메탄올/다이클로로메탄)으로 정제시켜 백색 발포체(11.7g, 70% 수율)를 제공하였다. C54H88N5O19 [M + H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1110.6, 실측치: 1110.6.
실시예 83 화합물 75의 합성
Figure pct00179
화합물 74(4.2g, 3.79m㏖, 1.0당량) 및 Pd/C(0.4g, 10wt%)를 5㎖의 메탄올에서 혼합하였다. 혼합물을 H2 풍선 하에서 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 촉매를 여과하고, 메탄올로 로 세척하였다. 여과액을 농축시켜 0.32g의 조 생성물을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다(87% 수율). C46H82N5O17 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1997.1, 실측치:1997.1.
실시예 84 화합물 76의 합성
Figure pct00180
500㎖ 플라스크에서, H2N-PEG4-CH2CH2CO2H(3.0g, 11.3m㏖, 1.0당량) 및 K2CO3(4.7g, 33.93m㏖,3.0당량)를 50㎖의 물에 용해시키고, 빙수욕에서 냉각시키고, 그 다음 50㎖의 테트라하이드로퓨란 중의 Boc2O(3.2g, 14.7m㏖, 1.3)를 적가하였다. 반응물을 실온까지 가열시키고, 밤새 교반하고, pH 4 내지 5에 도달할 때까지 1N KHSO4를 첨가하였다. 혼합물을 다이클로로메탄(200㎖×1, 100㎖×3)으로 추출하고, 물(500㎖×1) 및 염수(500㎖×1)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 소량의 다이클로로메탄에 용해시키고, 그 다음 실리카겔 칼럼에 로딩하고, 2-4% 메탄올/다이클로로메탄으로 용리시키고, 합하고, 농축시켜 무색 오일 3.8g(93% 수율)을 제공하였다. C16H32NO8 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 366.2，실측치: 366.2
실시예 85 화합물 77의 합성
Figure pct00181
50㎖ 단구 플라스크에서, BocHN-PEG4-CH2CH2CO2H(0.81g, 2.22m㏖, 1.0당량), K2CO3(0.92 g,6.66m㏖,3.0당량), NaI(0.033 g,0.222m㏖,0.1당량)를 10㎖ DMF에서 혼합하고, 빙수욕 위에서 냉각시켰다. BnBr(0.57g, 3.33m㏖, 1.5당량)을 적가하고, 혼합물을 실온까지 가온시키고, 밤새 교반하고, 100㎖의 물로 희석시키고, 다이클로로메탄(100㎖×2)으로 추출하고, 물(200㎖×1) 및 염수(200㎖×1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 소량의 다이클로로메탄에 용해시키고, 실리카겔 칼럼에 로딩하고, 70-90% 에틸 아세테이트/석유 에터로 용리시켜 0.69g의 무색 오일(69% 수율)을 제공하였다. C23H38NO8 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 446.3, 실측치: 446.3.
실시예 86 화합물 78의 합성
Figure pct00182
6㎖ 다이클로로메탄 및 3㎖ TFA 중의 BocHN-PEG4-CH2CH2CO2Bn(0.69g, 1.5m㏖, 1.0당량)의 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 다이클로로메탄과 함께 3회 동안 공증발시키고, 고진공 펌프 상에 두었다. 생성물을 다음 반응 단계를 위해 직접 사용하였다. C18H30NO6 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치:356.2, 실측치 356.2.
실시예 87 화합물 79의 합성
Figure pct00183
50㎖ 무수 다이클로로메탄 중의 BocHN-PEG4-CH2CH2CO2H(3.8g, 10.4m㏖, 1.0당량)의 용액에 NHS(1.4g, 12.5m㏖, 1.2당량) 및 EDC(10.0g, 52.0m㏖, 5.0당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 물(50㎖×2), 염수(100㎖×1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물 다음 단계를 위해서 직접 사용하였다. C20H35N2O10[M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 463.2, 실측치 463.2.
실시예 88 화합물 80의 합성
Figure pct00184
300㎖ 플라스크에서, H2N-PEG4-CH2CH2CO2H(2.8g, 10.4m㏖, 1.0당량) 및 K2CO3(4.3g, 31.2m㏖, 3.0당량)를 40㎖ 물에 용해시키고, 빙수욕에서 냉각시키고, 이것에 테트라하이드로퓨란(40㎖) 중의 화합물 79(3.8g, 10.4m㏖, 1.0당량)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 실온까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. pH 4 내지 5에 도달할 때까지 1N KHSO4를 첨가하고, 혼합물을 다이클로로메탄(150㎖×1, 100㎖×2)으로 추출하고, 물(200㎖×1) 및 염수(200㎖×1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 소량의 다이클로로메탄에 용해시키고, 실리카겔 칼럼에 로딩하고, 4-6% 메탄올/다이클로로메탄으로 용리시켜 무색 오일(5.18g, 81% 수율)을 제공하였다. C27H53N2O13 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 613.3, 실측치 613.3.
실시예 89 화합물 81의 합성
Figure pct00185
H2N-PEG4-CH2CH2CO2Bn(이전 단계로부터의 조 생성물)을 3㎖ DMF에 용해시키고, 빙수욕에서 냉각시키고, DIPEA(0.78g, 6.0m㏖, 4.0당량)를 적가하고, 그 다음 DMF(7㎖) 용액 중의 화합물 80(0.93g, 1.5m㏖, 1.0당량) 및 HATU(1.72g, 4.5m㏖, 3.0당량)를 첨가하였다. 혼합물을 빙욕에서 2시간 동안 교반하고, 100㎖의 물로 희석시키고, 다이클로로메탄(100㎖×3)으로 추출하고, 1N KHSO4(200㎖×1), 포화 중탄산나트륨(200㎖×1), 및 염수(200㎖×1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 소량의 다이클로로메탄에 용해시키고, 실리카겔 칼럼에 로딩하고, 0-5% 메탄올/다이클로로메탄으로 용리시켰다. 분획을 합하고, 농축시켜 밝은 황색 오일(1.0 g,71% 수율)을 제공하였다. C45H80N3O18 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 950.5，실측치 950.5.
실시예 90 화합물 82의 합성
Figure pct00186
DMF(50㎖) 중의 11-아미노운데칸오에이트(2.91g, 10.0m㏖) 및 Boc-Glu (OBzl)-OH(3.37g, 10.0m㏖)의 용액에 EDC(1.91g, 12.0m㏖) 및 트라이에틸아민(3.5㎖, 25.0m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 8시간 동안 교반하고, 물(100㎖)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3×100㎖)로 추출하였다. 합한 유기상을 100㎖의 염수로 1회 세척하고, 그 다음 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트/다이클로로메탄, 1:15)으로 정제시켜 표제 화합물을 무색 오일(5.37g, 88% 수율)로서 제공하였다.
실시예 91 화합물 83의 합성
Figure pct00187
화합물 82(0.64g, 1.05m㏖, 1.0당량)를 5㎖ 다이클로로메탄 및 2㎖ TFA와 혼합하고, 실온에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 농축시켰다. 잔류물을 다이클로로메탄과 함께 3회 공증발시키고, 고진공 펌프에 두었다. 조 생성물을 3㎖ DMF에 재용해시키고, 빙수욕에서 냉각시켰다. 그 다음 DMF(7㎖) 중의 화합물 80(0.64g, 1.05m㏖, 1.0당량)을 첨가하고, 그 다음 DIPEA(0.54g, 4.20m㏖, 4.0당량) 및 HATU(1.2g, 3.15m㏖, 3.0당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 빙욕에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 100㎖의 물로 희석시키고, 다이클로로메탄(150㎖×1, 100㎖×1)으로 추출하였다. 유기상을 1N KHSO4(200㎖×1), 포화 중탄산나트륨(200㎖×1) 및 염수(200㎖×1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 소량의 다이클로로메탄으로 용해시키고, 실리카겔 칼럼에 로딩하고 그 다음 0-10% MeOH/다이클로로메탄으로 용리시켰다. 분획을 합하고, 농축시켜 0.94g의 밝은 황색 오일(81% 수율)을 제공하였다. C57H92N4O17 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1104.6, 실측치: 1104.6.
실시예 92 화합물 84의 합성
Figure pct00188
0℃에서 DMF(18㎖) 중의 tert-부틸 4-아미노부티르산(1.03g, 6.12m㏖) 및 화합물 49(3.91g, 5.56m㏖)의 용액에 HATU(2.32g, 6.12m㏖) 및 TEA(1.2㎖, 8.34m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 그 다음 물(300㎖)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3×250㎖)로 추출하였다. 유기 용액을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(32:1 다이클로로메탄/메탄올)로 정제시켜 표제 화합물(5.10g, 99% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z 846.50 ([M+H]+).
실시예 93 화합물 85의 합성
Figure pct00189
수소화 병에서, 화합물 84(1.0g, 1.18m㏖) 및 Pd/C(10wt%, 0.10 g)를 메탄올(50㎖)에 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 진탕하고, 그 다음 셀라이트(필터 에이드)로 여과시키고, 여과액을 농축시켜 화합물 85(0.93g, 수율 100% 초과)를 제공하였다. ESI MS m/z 712.50 ([M+H]+).
실시예 94 화합물 86의 합성
Figure pct00190
95% EtOH(50㎖) 중의 화합물 85의 용액 및 NaH2PO4(0.1M, pH 5.0, 10㎖)에 N-석신이미딜 4-말레이미도부티레이트(0.50g, 1.77m㏖, 1.5당량)를 첨가하고, 혼합물을 밤새 교반하고, 그 다음 농축시키고, 물(50㎖)로 희석시키고, 다이클로로메탄(80㎖×3)으로 추출하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(25:1 다이클로로메탄/메탄올)로 정제시켜 표제 화합물을 밝은 황색 오일로서 제공하였다(0.82g, 80%).
실시예 95 화합물 87의 합성
Figure pct00191
화합물 86(0.82g, 0.94m㏖)을 HCOOH(50㎖)에 용해시키고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 톨루엔과 함께 2회 공증발시켰다. 잔류물을 진공 펌프에 넣어 화합물 87(0.80g, 조 생성물)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 820.45.
실시예 96 화합물 88의 합성
Figure pct00192
DMA(5.0㎖) 중의 화합물 87(0.80g, 조 생성물, 0.94m㏖)의 용액에 NHS(0.12g, 1.03m㏖) 및 EDC·HCl(0.27g, 1.41m㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 그 다음 물(15㎖)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3×10㎖)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(10㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(10-50% 에틸 아세테이트/석유 에터)으로 정제시켜 무색 오일 화합물(0.67g, 78% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 918.55.
실시예 97 화합물 89의 합성
Figure pct00193
N-Boc-에틸렌다이아민(5.6㎖, 35.4m㏖, 1.1당량) 및 포화 NaHCO3(60㎖)의 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, N-메톡시카보닐 말레이미드(5.00g, 32.2m㏖, 1.0당량)를 한 번에 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응물을 실온까지 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과로 수집하고, 차가운 물로 세척하고, 그 다음 에틸 아세테이트에 용해시키고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 백색 고체(6.69g, 87% 수율)를 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 241.12.
실시예 98 화합물 90의 합성
Figure pct00194
고압 튜브에서, 톨루엔(120㎖) 중의 화합물 89(6.00g, 25.0m㏖), 퓨란(18.0㎖)의 용액을 환류까지 가열시키고, 16시간 동안 교반하였다. 무색 용액이 반응 동안 황색이 되었고, 그 다음 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 농축시켰다. 생성된 백색 고체를 에터로 배산처리하여 화합물 90(6.5g, 84% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 309.13.
실시예 99 화합물 91의 합성
Figure pct00195
실온에서, 다이옥산(15㎖) 중의 화합물 90(9.93g, 32.2m㏖)을 진한 HCl(15㎖)로 3시간 동안 처리하였다. 생성된 고체를 여과로 수집하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 그 다음 오븐(50℃)에서 밤새 건조시켜 화합물 91(6.94g, 88% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 206.05.
실시예 100 화합물 92의 합성
Figure pct00196
-10℃에서 테트라하이드로퓨란(10㎖) 중의 화합물 91(1.22g, 5m㏖)의 용액에 POCl3(0.47㎖, 5m㏖)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 2,5,8,11,14, 17,20,23,26-논옥시다이옥타데칸-28-아민(2.14g, 5m㏖) 및 DIPEA(0.87㎖, 5m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 0℃까지 가온시키고, 3시간 동안 교반하고, 그 다음 농축시켰다. 잔류물을 다이클로로메탄(10㎖)으로 희석시키고, 셀라이트로 여과하고, 여과액을 다음 단계를 위해 직접 사용하였다. ESI MS m/z ([M+H]+) :716.29.
실시예 101 화합물 93의 합성
Figure pct00197
무수 톨루엔(500㎖) 및 피리딘(50㎖) 중의 다이메틸 석신에이트(20.0g, 136.9m㏖) 및 다이하이드록시에틸 아민(7.20g, 68.7m㏖)의 혼합물을 150℃에서 28시간 동안 가열시켰다. 혼합물을 농축시키고, 5-25% 에틸 아세테이트/다이클로로메탄으로 용리시키는 실리카겔 칼럼 상에서 정제시켜 표제 화합물(12.5g, 83% 수율)를 제공하였다. ESI MS m/z ([M+Na]+):242.42.
실시예 102 화합물 94의 합성
Figure pct00198
무수 피리딘(350㎖) 중의 화합물 93(12.0g, 49.56m㏖)의 용액에 메탄설폰일 클로라이드(20.0g, 175.4m㏖)를 첨가하였다. 밤새 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, 에틸 아세테이트(350㎖)로 희석시키고, 차가운 1M NaH2 PO4(2×300㎖)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 조 생성물(18.8g, 100% 초과 수율)을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계를 위해 사용하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 376.06.
실시예 103 화합물 95의 합성
Figure pct00199
톨루엔(200㎖) 중의 말레이미드(10.0g, 103.0m㏖)의 용액에 퓨란(10.0㎖, 137.4m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 8시간 동안 가열시키고, 실온까지 냉각시키고, 그 다음 농축시키고, 에틸 아세테이트/헥산에서 결정화시키고, 생성된 고체를 메탄올로 세척하여 16.7g의 표제 화합물(99%)을 제공하였다. 1H NMR (CDCl3): 11.12 (s, 1H), 6.68~6.64 (m, 2H), 5.18~5.13 (m, 2H), 2.97 ~2.92 (m, 2H). ESI MS m/z ([M+Na]+): 188.04.
실시예 104 화합물 96의 합성
Figure pct00200
DMA(350㎖) 중의 화합물 94(새로 제조됨, 90% 순도, 8.5g, 약 20m㏖)의 용액에 화합물 95(10.2g, 61.8m㏖), 탄산나트륨(8.0g, 75.5m㏖) 및 소듐 아이오다이드(0.3g, 2.0m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 농축시키고, 에틸 아세테이트(350㎖)로 희석시키고, 포화 NaHCO3 용액(300㎖), 포화 NaCl 용액(300㎖) 및 1M NaH2PO4(300㎖)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼에 로딩하고, 10-30% 에틸 아세테이트/헥산으로 용리시켜 표제 화합물(7.9g, 77% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M + Na]+): 536.4.
실시예 105 화합물 97의 합성
Figure pct00201
1,2-다이클로로에탄(150㎖) 중의 화합물 96(3.0g, 5.8m㏖) 및 트라이메틸스탄(4.8g, 26.4m㏖)을 80℃에서 8시간 동안 환류시키고, 그 다음 실온까지 냉각시키고, 짧은 실리카겔 칼럼에 로딩하고, 다이클로로메탄/메탄올로 용리시켜 과량의 트라이메틸암모늄 하이드록사이드를 제거하였다. 분획을 합하고, 농축시키고, DMA 및 톨루엔으로 희석시키고, 그 다음 120℃까지 가열시키고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카겔 칼럼에 로딩하고, 5-10% 메탄올/다이클로로메탄으로 용리시켜 표제 화합물(1.62g, 76% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M + Na]+): 386.2.
실시예 106 화합물 98의 합성
Figure pct00202
DMA(201g, 3.82m㏖) 중의 화합물 97(1.62g, 4.20m㏖) 및 화합물 85(2.71g, 3.82m㏖)의 용액에 EDC·HCl(0.81 g,4.20m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 물(50㎖)에 붓고, 에틸 아세테이트(3×40㎖)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(40㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(10-50% 에틸 아세테이트/석유 에터)로 정제시켜 무색 오일(3.20g, 80% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 1057.85.
실시예 107 화합물 99의 합성
Figure pct00203
폼산(10㎖) 중의 화합물 98(3.20g, 3.03m㏖)의 용액을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 톨루엔과 함께 3회 동안 공증발시켜 무색 오일(3.00g, 조물질)을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. ESI MS m/z ([M+H]+) : 1001.50.
실시예 108 화합물 100의 합성
Figure pct00204
DMA(15.0㎖) 중의 화합물 99(3.00g, 조 생성물, 3.03m㏖)의 용액에 NHS(0.38g, 3.33m㏖) 및 EDC(0.87g, 4.55m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 물(50㎖)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3×30㎖)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(30㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(10-50% 에틸 아세테이트/석유 에터)으로 정제시켜 무색 오일(2.90g, 90% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 1098.50.
실시예 109 화합물 101의 합성
Figure pct00205
무수 THF(200㎖) 중의 2,2'-(에탄-1,2-다이일비스(옥시))다이에탄올(55.0㎖, 410.75m㏖, 3.0당량)의 용액에 나트륨 조각(0.1g)을 첨가하였다. 나트륨이 사라질 때까지 혼합물을 교반하고, 그 다음 tert-부틸 아크릴레이트(20.0㎖, 137.79m㏖, 1.0당량)를 적가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 그 다음 0℃에서 HCl 용액(20.0㎖, 1N)으로 반응정지시켰다. THF를 회전식 증발로 제거하고, 염수(300㎖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(3×100㎖)로 추출하였다. 유기층을 염수(3×300㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 무색 오일(30.20g, 79.0% 수율)을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. MS ESI m/z ([M+H]+): 278.17.
실시예 110 화합물 102의 합성
Figure pct00206
0℃에서 무수 다이클로로메탄(220㎖) 중의 tert-부틸 3-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)프로피오네이트(30.20g, 108.5m㏖, 1.0당량)의 용액에, TSCl(41.37g, 217.0m㏖, 2.0당량) 및 TEA(30.0㎖, 217.0m㏖, 2.0당량)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 물(3×300㎖) 및 염수(300㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(3:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제시켜 무색 오일(39.4g, 수율 84.0%)을 제공하였다. MS ESI m/z ([M+H]+): 433.28.
실시예 111 화합물 103의 합성
Figure pct00207
DMF(100㎖) 중의 tert-부틸 3-(2-(2-(2-(톨루엔설폰일옥시)에톡시)에톡시)에톡시)프로피오네이트(39.4g, 91.1m㏖, 1.0당량)의 용액에 NaN3(20.67g, 316.6m㏖, 3.5당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 물(500㎖)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3×300㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(3×900㎖) 및 염수(900㎖)로 세척하, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(5: 1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제시켜 무색 황색 오일(23.8g, 85.53％ 수율)을 제공하였다. MS ESI m/z ([M + Na]+): 326.2.
실시예 112 화합물 104의 합성
Figure pct00208
라니-Ni(7.5g, 물에 현탁됨)을 물(3회) 및 아이소프로판올(3회)로 세척하고, 아이소프로판올 중의 화합물 103(5.0g, 16.5m㏖)과 혼합하였다. 혼합물을 H2 풍선 하에서 실온에서 16시간 동안 교반하고, 그 다음 셀라이트 패드로 여과하고, 아이소프로필 알코올로 세척하고, 여과액을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(5-25% 메탄올/다이클로로메탄)로 정제시켜 밝은 황색 오일(2.60g, 57% 수율)을 제공하였다. MS ESI m/z ([M+H]+): 279.19.
실시예 113 화합물 105의 합성
Figure pct00209
DMF(30㎖) 중의 테트라데칸다이산(2.06g, 8m㏖)의 용액에 K2CO3(1.1g, 8m㏖) 및 벤질 브로마이드(1.36g, 8m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트/석유 에터)로 정제시켜 표제 화합물 105(1.2g, 45% 수율)를 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 349.23.
실시예 114 화합물 106의 합성
Figure pct00210
다이클로로메탄(50㎖) 중의 화합물 104(2.60g, 9.35m㏖) 및 화합물 105(3.91g, 11.2m㏖)의 용액에 EDC·HCl(2.15g, 11.2m㏖) 및 DIPEA(3.6㎖, 20.6m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 50㎖ 다이클로로메탄으로 희석시키고, 50㎖의 물을 함유하는 분별 깔때기에 부었다. 유기상을 분리시키고, 염수(50㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(0-10% 메탄올/다이클로로메탄)로 정제시켜 표제 화합물(4.94g, 87% 수율)을 제공하였다. ESI m/z ([M+H]+): 608.40.
실시예 115 화합물 107의 합성
Figure pct00211
다이클로로메탄(20㎖) 중의 화합물 106(4.94g, 8.14m㏖)의 용액에 TFA(20㎖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 농축 건조시키고, 다이클로로메탄과 함께 2회 공증발시키고, 잔류물을 진공 펌프에 넣어, 화합물 107(4.50g, 조 생성물)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 552.35.
실시예 116 화합물 108의 합성
Figure pct00212
다이클로로메탄(50㎖) 중의 화합물 107(4.50g, crude 생성물, 8.14m㏖) 및 화합물 104(1.95g, 7.00m㏖)의 용액에 EDC·HCl(1.56g, 8.14m㏖) 및 DIPEA(2.7㎖, 15.4m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 50㎖ 다이클로로메탄으로 희석시키고, 50㎖의 물을 함유하는 분별 깔때기에 부었다. 유기상을 분리시키고, 염수(50㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(0-10% 메탄올/다이클로로메탄)로 정제시켜 표제 화합물 108(5.22g, 92% 수율)을 제공하였다. ESI m/z ([M+H]+): 811.52.
실시예 117 화합물 109의 합성
Figure pct00213
다이클로로메탄(20㎖) 중의 화합물 108(5.22g, 6.44m㏖)의 용액에 TFA(5㎖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 농축 건조시키고, 다이클로로메탄과 함께 2회 공증발시키고, 잔류물을 진공 펌프에 넣어 화합물 109(4.90g, 조물질)를 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+) 755.46.
실시예 118 화합물 110의 합성
Figure pct00214
다이클로로메탄(30M) 중의 화합물 109(4.90g, 조 생성물, 6.44m㏖)의 용액에 NHS(0.81g, 7.08m㏖), EDC·HCl(1.85g, 9.66m㏖) 및 DIPEA(2.8㎖, 16.1m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 물(50㎖)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3×30㎖)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(30㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(10-50% 에틸 아세테이트/석유 에터)으로 정제시켜 무색 오일 110(4.90g, 90% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 852.48.
실시예 119 화합물 111의 합성
Figure pct00215
수소화 병에, Pd/C(10wt%, 0.20g)를 테트라하이드로퓨란(20㎖) 중의 화합물 110(4.90g, 5.75m㏖)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 밤새 H2(1atm) 하에서 교반하고, 셀라이트(필터 에이드)로 여과시키고, 여과액을 농축시켜 화합물 111(4.50g, > 100% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 762.44.
실시예 120 화합물 112의 합성
Figure pct00216
0℃에서 다이클로로메탄(10㎖) 중의 화합물 111(1.00g, 1.32m㏖)의 용액에 HATU(0.50g, 1.32m㏖) 및 트라이에틸아민(0.06㎖, 1.32m㏖)을 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 Z-Lys-OH(0.40g, 1.43m㏖)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20㎖)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3×20㎖)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(30㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(0-10% 메탄올/다이클로로메탄)으로 정제시켜 무색 오일 112(1.28g, 95% 수율)를 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 1017.60.
실시예 121 화합물 113의 합성
Figure pct00217
다이클로로메탄(10㎖) 중의 화합물 112(1.28g, 1.26m㏖)의 용액에 NHS(0.17g, 1.51m㏖) 및 EDC·HCl(0.29g, 1.51m㏖), 그 다음 트라이에틸아민(0.38㎖, 2.77m㏖)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 물(20㎖)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3×15㎖)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(30㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(0-10% MeOH/다이클로로메탄)으로 정제시켜 무색 오일 113(1.28g, 91% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z([M+H]+): 1114.62.
실시예 122 화합물 114의 합성
Figure pct00218
테트라하이드로퓨란(150㎖) 중의 tert-부틸 아크릴레이트(12.81g, 0.10m㏖) 및 에틸-1,2-다이아민(24.3g, 0.40㏖)의 용액을 45℃에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 메탄올/다이클로로메탄(트라이에틸아민)(5%-15% - 80%)으로 용리시키는 Al2O3 겔 칼럼 상에서 정제시켜 표제 화합물(17.50g, 92% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 189.20.
실시예 123 화합물 115의 합성
Figure pct00219
1,4-다이옥산 중의 tert-부틸 3-((2-아미노에틸)아미노)프로피오네이트(17.00g, 90.33m㏖) 및 진한 HCl(15㎖)의 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 농축시키고, 순수한 물(150㎖) 및 에틸 아세테이트/헥산(40㎖, 1:5)으로 희석시켰다. 혼합물을 분리시키고, 유기층을 물(2×10㎖)로 추출하였다. 수성층을 농축시키고, 진공 펌프에서 건조시켜 표제 화합물(18.70g, 100% 수율, LC-MS에 의해서 96% 순도)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 133.20.
실시예 124 화합물 116의 합성
Figure pct00220
0℃에서 테트라하이드로퓨란(150㎖) 중의 3-((2-아미노에틸)아미노)프로피온산(18.70g, 90.33m㏖)의 용액에 말레산 무수물(8.85g, 90.33m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 0 내지 4℃에서 4시간 동안 교반하고, 농축시켜 (Z)-4-(2-((2-카복시에틸)아미노)에틸)아미노)-4-옥소-2-엔산을 제공하고, 이것에 톨루엔(150㎖) 및 DMA(50㎖)를 첨가하였다. 그 다음 혼합물을 90℃에서 교반하고, 딘-스탁 트랩 하에서 환류시켰다. 30㎖의 용매가 트랩에 수집된 후, HMDS(헥사메틸다이실라잔, 9.0㎖, 43. 15m㏖) 및 ZnCl2(16㎖, 1.0M 에터 용액)를 첨가하고, 혼합물을 115 내지 125℃까지 추가로 가열시키고, 톨루엔을 딘-스탁 트랩으로 수집하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 6시간 동안 가열시키고, 2×40㎖의 무수 톨루엔을 첨가하여 약 50㎖의 부피를 유지시켰다. 그 다음 반응 혼합물을 냉각시키고, 1㎖의 1:10 진한 HCl/MeOH를 첨가하였다. 혼합물을 농축시키고, 실리카겔 칼럼 상에서 정제시키고, 물/아세토나이트릴(1:15)로 용리시켰다. 분획을 농축시키고, 진공 펌프 하에서 건조시켜 14.75g의 표제 화합물(77.0% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 213.10.
실시예 125 화합물 117의 합성
Figure pct00221
테트라하이드로퓨란(300㎖), DIPEA(50㎖) 및 HSAc(10.0g, 0.131㏖)의 혼합물에 화합물 60(57.30g, 0.106㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 농축시키고, 에틸 아세테이트/MeOH(1:2에서 4:1)로 용리시키는 실리카겔 칼럼 상에서 정제시키고, 농축시키고, 진공 펌프 하에서 건조시켜 표제 화합물(40.51g, 86% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 443.35.
실시예 126 화합물 118의 합성
Figure pct00222
화합물 117(40.40g, 0.091㏖)을 아세트산(200㎖) 및 30% H2O2(100㎖)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 35℃에서 밤새 교반하고, 그 다음 농축시키고, 순수한 물(200㎖) 및 톨루엔(150㎖)으로 희석시켰다. 상 분리 후, 유기층을 물(2×25㎖)로 추출하였다. 수성 용액을 합하고, 농축시키고, 진공 펌프 상에서 건조시켜 표제 화합물 40.50g(99% 수율, LC-MS에 의해 95% 순도)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M + H]+): 449.30.
실시예 127 화합물 119의 합성
Figure pct00223
테트라하이드로퓨란(100㎖) 및 다이클로로메탄(100㎖) 중의 화합물 118(20.0g, 44.62m㏖)의 혼합물에 옥살릴 클로라이드(25.21g, 200.19m㏖) 및 DMF(0.0151m㏖)를 차례대로 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 농축시키고, 다이클로로메탄/톨루엔(1:1, 2×50㎖)과 함께 공증발시키고, 그 다음 테트라하이드로퓨란(50㎖)에 용해시켰다. 테트라하이드로퓨란(100㎖) 중의 화합물 116(7.50g, 35.36m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 교반하고, 진공에서 농축시키고, MeOH/다이클로로메탄(1:6에서 1:5)으로 용리시키는 실리카겔 칼럼 상에서 정제시키고, 농축시키고, 진공 펌프 하에서 건조시켜 표제 화합물(14.76g, 65% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 643.35.
실시예 128 화합물 120의 합성
Figure pct00224
테트라하이드로퓨란(100㎖) 중의 화합물 119(7.50g, 11.67m㏖), N-하이드록시석신이미드(1.50g, 13.04m㏖) 및 EDC(10.10g, 52.60m㏖)의 용액을 밤새 교반하고, 진공에서 농축시키고, 에틸 아세테이트/다이클로로메탄(1:4에서 2:1)으로 용리시키는 실리카겔 칼럼 상에서 정제시키고, 농축시키고, 진공 펌프 하에서 건조시켜 표제 화합물(6.30g, 73% 수율)을 제공하였다. ESI MS m/z ([M+H]+): 740.40.
실시예 129 화합물 121의 합성
Figure pct00225
0℃에서 DMF(15㎖) 중의 2-(2-(2-(2-아미노아세트아미도)아세트아미도)아세트아미도)아세트산(Gly-Gly-Gly)(0.50g, 2.03m㏖) 및 화합물 120(1.65g, 2.22m㏖)의 용액에 DIPEA를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 그 다음 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 그 다음 반응 혼합물을 농축시키고, 실리카겔 크로마토그래피(이동상: 아세토나이트릴/물=95:5, 0.1% 폼산 함유)로 정제시켜 표제 화합물 121(1.04g, 63% 수율)을 제공하였다. C32H56N5O17S [M+H]+에 대한 MS-ESI m/z 계산치 14.33, 실측치 814.46.
실시예 130 화합물 122의 합성
Figure pct00226
테트라하이드로퓨란(201㎖) 중의 화합물 121(0.70g, 0.86m㏖), N-하이드록시석신이미드(0.20g, 1.73m㏖) 및 EDC(1.21g, 6.36m㏖)를 실온에서 밤새 교반하고, 진공에서 농축시키고, 실리카겔 칼럼 상에서 정제시키고, 그 다음 에틸 아세테이트/다이클로로메탄(1:4에서 2:1)로 용리시키고, 진공 펌프 하에서 건조시켜 0.540g(69% 수율)의 표제 화합물을 제공하였다. C36H59N6O19S[M+H]+에 대한 MS-ESI m/z 계산치: 911.34, 실측치 911.42.
실시예 131 화합물 123의 합성
Figure pct00227
DMF(82㎎) 중의 (2S,4R)-5-(3-아미노-4-하이드록시페닐)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-아이소프로필-용액-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트라이옥시-12-옥사-2,5,8-트라이아자-운데칸-11-일)티아졸-4-폼아미도)-2-메틸펜타산(Tub-039, 문헌[R Zhao, et al. PCT CN 2017/120454; R Zhao, et al. 14th PEGS Boston, Boston, Mass. USA, 3 rd May 2018])(83㎎, 0.106m㏖) 및 화합물 122(122㎎, 0.134m㏖)의 용액에 DIPEA(2㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 그 다음 실온에서 4시간 교반하였고, 그 다음 농축시키고, 분취용 HPLC(이동상: 아세토나이트릴/물 = 10%에서 80%, 0.1% 폼산 함유)로 정제시켜 화합물 123(95.5㎎, 58% 수율)을 제공하였다. MS-ESI m/z: C69H112N11O24S에 대한 [M+H]+ 계산치, 1542.72; 실측치, 1542.76.
실시예 132 화합물 124의 합성
Figure pct00228
CH2Cl2(200㎖) 중의 (S)-1-벤질 5-tert-부틸 2-아미노펜탄다이오에이트 염산염(8.70g, 26.39m㏖), 14-(벤질옥시)-14-옥소테트라데칸산(9.19m㏖), DIPEA(8.0㎖, 46.0m㏖) 및 EDC(15.3g, 80.50m㏖)의 용액을 실온에서 6시간 동안 교반하고, 그 다음 물(100㎖)로 희석시키고, 상을 분리시켰다. 수성상을 CH2Cl2(100㎖)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼(다이클로로메탄/에틸 아세테이트 = 20:1에서 5:1) 상에서 정제시켜 표제 화합물 314(13.65g, 83% 수율)를 제공하였다. MS ESI m/z: C37H54NO7에 대한 [M+H]+ 계산치, 624.38; 실측치, 624.38.
실시예 133 화합물 125의 합성
Figure pct00229
4℃에서 화합물 124(12.50g, 20.05m㏖)를 다이옥산(30㎖)에 용해시키고, 염화수소산(10㎖, 진한 36%)으로 0.5시간 동안 처리하였다. 반응 혼합물을 톨루엔(20㎖) 및 DMF(20㎖)로 희석시키고, 15℃에서 농축시켜 표제 화합물(11.26g, 99% 수율)을 제공하였다. MS-ESI m/z: C33H46NO7에 대한 [M+H]+ 계산치, 568.32; 실측치, 568.34.
실시예 134 화합물 126의 합성
Figure pct00230
CH2Cl2(200㎖) 중의 화합물 215(10.70g, 18.86m㏖), tert-부틸 1-아미노-15-옥소-3,6,9,12,19,22,25,28-옥타옥사-16-아자헨트라이아콘탄-31-오에이트 염산염(11.45g, 18.93m㏖), EDC(9.51g, 50.01m㏖) 및 DIPEA(4.00㎖, 23.00㏖)의 혼합물을 밤새 교반하고, 염수(100㎖)로 희석시키고, 상을 분리시켰다. 수성상을 CH2Cl2(100㎖)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼(다이클로로메탄/에틸 아세테이트 = 10:1에서 4:1)상에서 정제시켜 표제 화합물 316(18.15g, 86% 수율)을 제공하였다. MS-ESI m/z: C59H96N3O17에 대한 [M+H]+ 계산치, 1118.67; 실측치, 1118.80.
실시예 135 화합물 127의 합성
Figure pct00231
화합물 126(10.50g, 9.39m㏖)을 4℃에서 다이옥산(45㎖)에 용해시키고, 염화수소산(15㎖, 진한 36%)으로 0.5시간 동안 처리하였다. 반응 혼합물을 톨루엔(20㎖) 및 DMF(20㎖)로 희석시키고, 15℃에서 농축시키고, 실리카겔 칼럼(다이클로로메탄/MeOH= 10:1에서 6:1) 상에서 정제시켜 표제 화합물(8.67g, 87% 수율)을 제공하였다. MS-ESI m/z: C55H88N3O17에 대한 [M+H]+ 계산치, 1062.60; 실측치, 1062.68.
실시예 136 화합물 128의 합성
Figure pct00232
THF(150㎖) 중의 화합물 127(8.50g, 8.01m㏖), N-하이드록시석신이미드(3.20g, 27.82m㏖), EDC(10.28g, 54.10m㏖) 및 DIPEA(6.00㎖, 34.51m㏖)의 용액을 6시간 동안 교반하고, 진공에서 증발시켜 조물질 N-석신이미딜 에스터를 제공하였고, 이것을 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. DMF(100㎖) 및 1.0M Na2PO4(pH 7.5, 55㎖) 중의 (S)-6-아미노-2-((tert-but옥시카보닐)아미노)헥산산 염산염(2.75g, 9.73m㏖)의 용액에, 상기에서 제조한 N-석신이미딜 에스터를 4개의 분획으로 1시간 동안 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 농축 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼(다이클로로메탄/MeOH = 10:1에서 4:1) 상에서 정제시켜 표제 화합물(8.16g, 79% 수율)을 제공하였다. MS-ESI m/z: C66H108N5O20에 대한 [M+H]+ 계산치, 1289.75; 실측치, 1289.90.
실시예 137 화합물 129의 합성
Figure pct00233
화합물 128(8.10g, 6.28m㏖)을 4℃에서 다이옥산(40㎖)용해시키고, 염화수소산(15㎖, 진한 36%)으로 0.5시간 동안 처리하였다. 반응 혼합물을 톨루엔(20㎖) 및 DMF(20㎖)로 희석시키고, 15℃에서 농축시켜 조 표제 화합물(7.71g, 100% 수율)을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. MS-ESI m/z: C61H88N3O17에 대한 [M+H]+ 계산치, 1190.70; 실측치, 1190.78.
실시예 138 화합물 130의 합성
Figure pct00234
0℃에서 DMF(50㎖) 중의 4-말레이미드-부티르산-N-석신아마이드 에스터(7.10g, 25.35m㏖) 및 알라닌(3.01g, 33.80m㏖)의 용액에 DIPEA(10㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시키고, 그 다음 SiO2 칼럼(이동상: 다이클로로메탄/MeOH=10:1, 0.1% 폼산 함유) 상에서 정제시켜 화합물 130(5.21g, 81% 수율)을 제공하였다. MS-ESI m/z: C11H14N2O5에 대한 [M+H]+ 계산치, 255.09; 실측치, 255.15.
실시예 139 화합물 131의 합성
Figure pct00235
다이클로로메탄(70㎖) 중의 화합물 130(5.15g, 20.26m㏖), N-하이드록시석신이미드(2.80g, 24.34m㏖), EDC(10.28g, 54.10m㏖) 및 DIPEA(5.50㎖, 31.63m㏖)의 용액을 6시간 동안 교반하고, 진공에서 농축시키고, SiO2 칼럼(이동상: 다이클로로메탄/에틸 아세테이트 = 10:1) 상에서 정제시켜 화합물 131(5.83g, 82% 수율)을 제공하였다. MS-ESI m/z: C15H17N3O7에 대한 [M+H]+ 계산치, 351.11; 실측치, 351.20.
실시예 140 화합물 132의 합성
Figure pct00236
0℃에서 DMF(40㎖) 중의 화합물 129(7.61g, 6.39m㏖) 및 화합물 131(2.90g, 8.280m㏖)의 용액에, DIPEA(7㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안, 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시키고, SiO2 칼럼(이동상: 다이클로로메탄/MeOH = 10:1, 0.1% 폼산 함유) 상에서 정제시켜 화합물 132(7.10g, 78% 수율)를 제공하였다. MS-ESI m/z: C72H112N7O22에 대한 [M+H]+ 계산치, 1426.7782; 실측치, 1426.7820.
실시예 141 화합물 133의 합성
Figure pct00237
THF(50㎖) 중의 화합물 132(7.05g, 4.94m㏖), N-하이드록시석신이미드(0.92g, 8.00m㏖), EDC(3.01g, 15.84m㏖) 및 DIPEA(1.00㎖, 5.75m㏖)의 용액을 6시간 동안 교반하고, 진공에서 증발시켜 NHS 에스터를 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다.
DMF(40㎖) 및 1.0M Na2PO4(pH 7.5, 15㎖) 중의 2-(2-(2-아미노아세트아미도)아세트아미도)아세트산(gly-gly-gly) 염산염(1.67g, 7.40m㏖)의 용액에, 상기 화합물을 1시간 동안 4개의 분획을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 농축 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼(다이클로로메탄/MeOH = 10:1에서 7:1) 상에서 정제시켜 표제 화합물(8.16g, 79% 수율)을 제공하였다. MS-ESI m/z: C78H121N10O25에 대한 [M+H]+ 계산치, 1597.8426; 실측치, 1597.8495.
실시예 142 화합물 134의 합성
Figure pct00238
DMA(5㎖) 중의 화합물 133(150.3㎎, 0.0935m㏖), Tub-039(60.2㎎, 0.0769m㏖) 및 DIPEA(0.030㎖, 0.172m㏖)의 용액에, EDC(100㎎, 0.526m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하고, 진공에서 농축시키고, MeOH/다이클로로메탄(0.5㎖:3㎖)에 재용해시키고, MeOH/다이클로로메탄(1:3)으로 용리시키면서 짧은 실리카겔 칼럼에 통과시키고, 진공에서 농축시켜 다음 단계를 위한 조 화합물을 제공하였다. MS-ESI m/z: 2326.25.
상기 조 화합물을 다이클로로메탄(1㎖)에 용해시키고, TFA(3㎖)로 1시간 동안 처리하고, 톨루엔(3㎖) 및 DMF(3㎖)로 희석시키고, 농축시키고, 분취용-HPLC(이동상: 물 중의 2%에서 50%의 아세토나이트릴, 0.1% 폼산 함유)로 정제시켜 화합물 322(69.0㎎, 72% 수율)를 제공하였다. MS-ESI m/z: C88H128FN13O28에 대한 [M+H]+ 계산치, 2146.1497; 실측치, 2146.1588.
실시예 143 화합물 135의 합성
Figure pct00239
다이클로로메탄(5㎖) 중의 (S)-30-(4-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-27-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-26-아자헨트라이아콘탄-31-산(20㎎, 0.029m㏖)의 용액에, EDC(11㎎, 0.059m㏖) 및 펜타플루오로페놀(10.8㎎, 0.059m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 농축시키고, 에틸 아세테이트/다이클로로메탄(1:4)으로 용리시키면서 SiO2 칼럼 상에서 정제시켜 표제 화합물 246(24㎎, 100% 수율)을 제공하였다. MS-ESI m/z: C36H50F5N3O14에 대한 [M+H]+ 계산치, 844.32; 실측치, 844.32.
실시예 144 화합물 136의 합성
Figure pct00240
메탄올(100㎖) 중의 (S)-tert-부틸 2-((S)-2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)프로판아미도)프로판오에이트(10g, 0.028㏖)의 용액 및 10% Pd/C(1.0 g)를 H2(5 psi) 하에서 3시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 여과액을 농축시켜 무색 오일(6.1g, 100% 수율)을 제공하였다. ESI m/z: [M+H]+에 대한 계산치 C10H20N2O3, 217.15; 실측치, 217.15.
실시예 145 화합물 137의 합성
Figure pct00241
다이클로로메탄(5㎖) 중의 (S)-30-(((벤질옥시)카보닐)아미노)-27-옥소- 2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-26-아자헨트라이아콘탄-31-산(250)(100㎎, 0.154m㏖)의 용액에, EDC(59㎎, 0.309m㏖) 및 펜타플루오로페놀(PFP)(57㎎, 0.309m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 다이클로로메탄(20㎖)으로 희석시키고, 물(5㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 DMF(5㎖)에 재용해시키고, 화합물 136(49㎎, 0.23m㏖) 및 DIPEA(90㎎, 0.69m㏖)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시키고, MeOH/CH2Cl2(1:10)로 용리시키는 짧은 SiO2 칼럼 상에서 정제시켜 표제 화합물 137(80㎎, 61% 수율)을 제공하였다. ESI m/z: C40H68N4O15에 대한 [M+H]+ 계산치, 845.47; 실측치, 845.47.
실시예 146 화합물 138의 합성
Figure pct00242
메탄올(5㎖) 중의 화합물 137(80㎎, 0.094m㏖)의 용액 및 10% 팔라듐 카본(10 ㎎)을 H2(5psi) 하에서 2시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 여과액을 농축시켜 추가로 정제시키지 않고 다음 단계를 위한 무색 오일(66㎎, 100% 수율)을 제공하였다. MS-ESI m/z: C32H62N4O13에 대한 [M+H]+ 계산치, 711.43; 실측치, 711.43.
실시예 147 화합물 139의 합성
Figure pct00243
에탄올(5㎖) 중의 화합물 138(66㎎, 0.094m㏖)의 용액에, 2,5-다이옥소피롤리딘-1-일 4-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)부탄오에이트(39㎎, 0.141m㏖) 및 PBS(0.1M, pH 7.5, 1.0㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼(다이클로로메탄/MeOH = 100:0 내지 10:1)상에서 정제시켜 표제 화합물 139(37㎎, 45% 수율)를 제공하였다. ESI m/z: C40H69N5O16에 대한 [M+H]+ 계산치, 876.47; 실측치, 876.47.
실시예 148 화합물 140의 합성
Figure pct00244
다이클로로메탄(3㎖) 중의 화합물 139(50㎎, 0.057m㏖)를 실온에서 2시간 동안 TFA(1㎖)로 처리하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 그 다음 다이클로로메탄(5㎖)에 재용해시키고, 이것에 EDC(16㎎, 0.084m㏖) 및 펜타플루오로페놀(15㎎, 0.084m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼(다이클로로메탄/에틸 아세테이트 = 100:10 내지 3:1) 상에서 정제시켜 표제 화합물 140(41㎎, 73% 수율)제공하였다. ESI m/z: C42H60F5N5O16에 대한 [M+H]+ 계산치, 986.40; 실측치, 986.42.
실시예 149 화합물 141의 합성
Figure pct00245
디이클로로메탄(5㎖) 중의 4-(비스(2-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)에틸) 아미노)-4-옥소부탄산(100㎎, 0.27m㏖)의 용액에, EDC(210㎎, 1.10m㏖) 및 펜타플루오로페놀(101㎎, 0.55m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 농축시키고, 실리카겔 칼럼(다이클로로메탄/에틸 아세테이트 = 20:1 to 5:1) 상에서 정제시켜 표제 화합물 141(114㎎, 80% 수율)을 제공하였다. MS-ESI m/z: C22H16F5N3O7에 대한 [M+H]+ 계산치, 530.09; 실측치, 530.09.
실시예 150 환원된 항체 다이설파이드 결합과 튜불리신 유도체의 일반적인 접합 방법
HER2 항체(2.0㎖, 10㎎/㎖, pH of 6.0 내지 8.0)에 0.70㎖ 내지 2.0㎖, 100mM, pH 6.5 내지 8.5 인산염 완충액(PBS) 및 TCEP(16 내지 20㎕, 20mM 수성 용액)를 첨가하였다. 실온 내지 37.5℃에서 0.5 내지 4시간 동안 인큐베이션시킨 후, 동일한 양의 아자이드 화합물(아지도 벤조산, 또는 2-(2-(2-하이드록시에톡시) 에톡시) 에톡시 아자이드)를 실온 내지 37.5℃에서 첨가하고, 실온 내지 37.5℃에서 1 내지 4시간 동안 인큐베이션시켰다. 티올-반응성기를 갖는 튜불리신 유도체(28 내지 32㎕, 20mM DMA 용액)(예를 들어 화합물 39, 57, 72, 123 또는 134)를 첨가하고, 실온 내지 37.5℃에서 2 내지 18시간 동안 인큐베이션시키고, 그 다음 DHAA(135㎕, 50 mm)를 첨가하고, 실온에서 밤새 인큐베이션시켰다. 혼합물을 G-25 칼럼, 양이온 또는 음이온 크로마토그래피 칼럼으로 정제시키고, 50 내지 200mM NaCl을 함유하는 pH 6 내지 7.5, 10 내지 100mM 인산 또는 시트르산 완충 시스템으로 용리시켜 접합체를 제공하였다(75% 내지 99% 수율). 혼합물을 또한 50 내지 200mM NaCl을 함유하는 pH 6 내지 7.5, 10 내지 100mM 인산 또는 시트르산 완충 시스템을 사용하여 한외여롸고 정제시킬 수 있다. 부피는 샘플 부피의 3 내지 30배이고, 접합체(75% 내지 99% 수율)를 수득하였다. 약물/항체 비율(drug/antibody ratio: DAR)은 HPLC-MS에 의해서 결정되는 경우 3.1 내지 4.9였고; HPLC 분석은 95 내지 99% 단량체를 나타내었다(토쉬 바이오사이언스사(Tosoh Bioscience), Tskgel G3000SW, 7.8㎜ ID×30㎝, 0.5㎖/분, 100분). 접합체 39, 57, 72, 123 또는 134의 구조를 하기에 나타낸다.
Figure pct00246
Figure pct00247
실시예 151. 접합체의 다른 제조 방법
세포 결합 분자(항체)는 아마이드, 티오에터 또는 다이설파이드 결합에 의해서 본 발명의 화합물과 접합될 수 잇다. 항체(5㎎/㎖ 초과)를 50mM 소듐 메타보레이트를 함유하는 pH 8.0 PBS 완충액으로 희석시키고, 35℃에서 30분 동안 다이티오트레이톨(최종 농도 10mM)로 처리하여, 유리 티올기를 생성시켰다. 혼합물을 G-25 겔 투과 크로마토그래피(PBS 완충액 중의 1mM EDTA)로 정제시켰다. 엘만스 시약(Ellman's reagent)[5,5'-다이티오비스(2-나이트로벤조산)]에 의해서 항체당 약 8개의 티올기가 검출되었다. 항체를 트라우트 시약(2-이미노티오펜) 또는 SATP(N-석신이미도-S-아세틸티오프로피오네이트) 또는 N-석신이미드-S-아세틸(티오테트라아세트산)(SAT(PEG) 4)와 pH 7 내지 8 하에서 반응시켜(문헌[Jue, R., et al. Biochem. 1978, 17 (25): 5399-5405]), 티올기를 형성할 수 있다(문헌[Duncan, R, et al, Anal. Biochem. 1983, 132, 68-73; Fuji, N. et al, Chem. Pharm. Bull. 1985, 33, 362-367]). 일반적으로 5 내지 9개의 티올기가 하나의 항체 분자에 생성될 수 있다.
4℃에서, 유리 티올기(2 내지 20% v/v)를 함유하는 항체의 차가운 다이메틸아세트아마이드(DMA) 용액에 말레이미드 또는 브로모아세트아마이드기를 갖는 약물 분자(약물 대 티올기의 몰비는 1.2 내지 1.5:1)임)(항체와 브로모아세트아마이드 간의 알킬화 반응은 보통 0.5M의 소듐 보레이트 용액(pH 9이 필요함))를 첨가하였다. 1 내지 2시간 후, 과량의 시스테인을 첨가하여 반응을 반응정지시키고; 한외여과, 겔 크로마토그래피(G-25, PBS 완충 용액), 멸균 여과시켜 농축된 접합 생성물을 제공하였다. 단백질 농도 및 각각의 항체에 연결된 약물의 수는 280nm 내지 252nm에서 흡광도를 측정함으로써 결정되었다. 분자 배제 HPLC를 사용하여 접합체의 단량체 형태의 비율을 결정하고, 0.5% 미만의 유리 약물이 RP-HPLC에 의해서 결정되었다. 티오에터 결합 링키지에 의해서 형성된 단량체 접합체의 경우, 각각의 항체 분자는 평균 3.2 내지 4.8개의 튜불리신 유도체와 연결된다.
링커의 유형은 다이메틸(페닐)실릴(DMPS), SMDP, 4-석신이미딜-메틸-α(2-피리딜 다이설파이드)톨루엔(SMPT), N-석신이미딜-4-(2-피리딜다이티오)프로피오네이트(SPP), N-석신이미딜-4-(2-피리딜다이티오)부티레이트(SPDP), N-석신이미드-4-(2-피리딜다이티오)부티레이트(SMCC), N-하이드록시석신이미드-(폴리에틸렌 글리콜)N-말레이미드(SM(PEG)n) 등을 포함한다. 항체(5㎎/㎖ 초과)를 완충액(pH 6.5 내지 7.5，5mM PBS, 50mM NaCl, 1mM EDTA)에 용해시키고, 링커와 2시간 동안 반응시켰는데, 링커 대 항체의 비는 6 내지 10 또는 그 초과였다. 반응 혼합물을 Sephadex G25 겔 크로마토그래피로 정제시키고, 저분자량 분자를 제거하였다. 혼합물을 또한 pH 6 내지 7.5, 10 내지 100mM 인산 또는 시트르산 완충액, 50 내지 200mM NaCl의 완충액으로 양이온성 크로마토그래피 또는 음이온 크로마토그래피로 정제시켜 접합체(75% 내지 99% 수율)를 생성시킬 수 있다. 혼합물을 또한 pH 6 내지 7.5, 10 내지 100mM 인산 또는 시트르산 완충액, 50 내지 200mM NaCl을 사용한 한외여과로 정제시킬 수 있다. 부피는 샘플 부피의 3 내지 30배이고, 접합체를 산출하였다(75% 내지 99% 수율). 항체의 농도를 분광측정법으로 결정하였고, 링커는 피리딜다이티올기를 포함한다. 항체의 흡광 계수는 280 nm에서 2067550M-1cm-1였다. 변형된 항체를 과량의 다이티오트레이톨(20당량 초과)로 처리하였고, 343 및 280nm에서 방출된 2-티오피리딜의 흡광 계수는 각가 8080 및 5100M-1cm-1였다. 변형된 항체의 대해서, 1.2 내지 1.5당량의 티올기를 갖는 튜불리신 유도체 분자를 첨가하였다. 반응을 실온에서 5 내지 18시간 진행시킨 후, 반응 혼합물을 Sephadex G 25에서 크로마토그래피시켜 연결되지 않은 약물 또는 다른 저분자량 물질을 제거하였다. 그 다음 280nm 및 252nm에서의 흡광도를 측정함으로써 생성물의 농도를 결정하였다. 생성물은 단량체 형태였고, 각각의 항체 분자는 3.2 내지 4.8개의 약물 분자에 연결되어 있었다.
실시예 152. T-DM1과 비교한 Her2 접합체 C-37, C-59, C-72, C-123 및 C-134의 시험관내 세포독성 평가
세포 독성도 검정에 사용된 세포주는 인간 위 암종 세포주인 NCI-N87이었다: 세포를 10% FBS가 함유된 RPMI-1640에서 성장시켰다. 검정을 실행하기 위해, 세포(180㎕, 6000개 세포)를 96웰 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 5% CO2에서 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 그 다음, 적절한 세포 배양 배지(총 부피, 0.2㎖)에서 다양한 농도의 시험 화합물(20㎕)로 세포를 처리하였다. 대조군 웰은 세포와 배지를 함유하지만, 시험 화합물이 존재하지 않았다. 플레이트를 5% CO2에서 37℃에서 120시간 동안 인큐베이션시켰다. 이어서, MTT(5㎎/㎖)를 웰(20㎕)에 첨가하고, 플레이트를 1.5시간 동안 37℃에서 인큐베이션시켰다. 배지를 조심스럽게 제거하고, DMSO(180㎕)를 이후에 첨가하였다. 플레이트를 15분 동안 진탕한 후, 620㎚의 표준품을 사용하여 490㎚ 및 570㎚에서의 흡광도를 측정하였다. 저해%를 하기 식에 따라 계산하였다: 저해% = [1-(검정-블랭크)/(대조군-블랭크)]×100.
결과를 표 1에 열거한다.
Figure pct00248
실시예 153 NCI-N87 이종이식 종양을 보유하는 BALB/c 누드 마우스에서 생체내 항종양 활성도의 연구
T-DM1와 함께 접합체 C-37, C-49, C-72, C-123 및 C-134의 생체내 효능을 인간 위암종 N-87 세포주 종양 이종이식 모델에서 평가하였다. 5주령의 암컷 BALB/c 누드 마우스(60마리 동물)에게 무 혈청 배지 0.1㎖의 N-87 암종 세포(5×106개 세포/마우스)를 우측 어깨 아래 면적에 피하 주사하였다. 종양은 8일 동안 140㎣의 평균 크기로 자랐고, 이어서 동물을 무작위로 10개 군으로 나누었다(군당 6마리의 동물). 제1 군의 마우스를 대조군으로 제공하고, 인산염 완충 염수(PBS) 비히클로 처리하였다. 6개의 군에게 6㎎/㎏의 용량의 각각 접합체 C-37, C-49, C-72, C-123, C-134 및 T-DM1을 정맥내로 투여하였다. 종양의 3차원 치수를 3 또는 4일마다 측정하고, 종양 부피를 수학식: 종양 부피 = 1/2(길이×폭×높이)를 사용하여 계산하였다. 동물의 중량을 또한 동시에 측정하였다. 다음의 기준 중 임의의 하나가 충족될 때 마우스를 희생시켰다: (1) 처리전 중량에서 20% 초과의 체중 감소, (2) 종양 부피 1500㎣ 초과, (3) 병에 걸려 음식물 및 물에 접근하지 못함, 또는 (4) 피부 괴사. 종양이 발견되지 않으면 마우스는 종양이 없는 것으로 간주되었다.
결과를 도 7에 도시하였다. 모든 6개의 접합체는 동물의 체중 손실을 유발하지 않았다. PBS 대조군과 비교할 때, 모든 접합체는 항종양 활성을 나타내었다. 모든 시험된 튜불리신 접합체는 또한 T-DM1보다 더 양호한 항종양 활성을 나타내었다.
실시예 154 T-DM1과 비교한 Her2-튜불리신 B 유도체 접합체의 세포독성 평가
동물의 체중 변화(일반적으로 감소)는 약물의 독성을 반영한다. 6 내지 7주령의 암컷 ICR 마우스 56마리를 7개 군으로 분리시켰다. 각각의 군은 8마리의 마우스를 포함하였고, 각각의 동물에게 단일 I.V. 주사로 150㎎/㎏의 C-37, C-49, C-72, C-123, C-134 및 T-DM1을 제공하였다. 대조군(8마리 동물)에게 인산염 완충 식염수(PBS) 비히클을 투여하였다. 도 8에서 인지되는 바와 같이, 12일 실험에서 대조군과 T-DM1군을 제외한 모든 군에서 마우스의 체중 감소는 5% 미만이었다. 이에 반해서, T-DM1 군의 동물 체중은 최대 24% 감소로 지속적으로 감소하였고, 연구 종료 시 회복 경향은 관찰되지 않았다. 체중 변화 결과는, 동물에서 분지형 링커를 함유하는 Her2-튜불리신 B 유도체 접합체는 종래의 단일 링커를 갖는 T-DM 1보다 내약성이 더 양호하다는 것을 나타낸다.
상기 실시예는 본 발명의 원리만을 나타내고, 본 발명의 범주는 본 명세서에 기재된 실시예에 제한되도록 의도되지 않고, 현재 공지되어 있고 미래에 개발될 균등물을 모두 포함해야 한다는 것을 이해해야 한다. 또한, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위에서 개선 및 변형이 가능하며, 이러한 개선 및 변형 또한 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 간주되어야 한다.

Claims (54)

  1. 항체-튜불리신 B 유도체(antibody-Tubulysin B derivative)(유사체(analog)) 접합체로서, 상기 접합체는 하기 화학식 (I)의 구조를 갖거나 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 화학식 (I)로 표현되는 다형성 결정질 구조; 또는 화학식 (I)로 표현되는 구조의 광학 이성질체; 또는 1개 이상의 수소(1H) 원자가 1개 이상의 중수소(2H) 원자에 의해서 치환된 이의 유도체 또는 1개 이상의 12C 원자가 1개 이상의 13C 원자에 의해서 치환된 이의 유도체인, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00249

    식 중, P1은 H, COCH3, COH, PO(OH)2, CH2OPO(OH)2, CONHCH3, CON(CH3)2, CON(CH2CH2)2NCH3, CON(CH2CH3)2 또는 CON(CH2CH2)2CHN(CH2CH2)2CH2이고;
    R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, C1-C6 알켄일, C1-C6 알콕시, C1-C6 알킬카보닐, C1-C6 알킬에스터, C1-C6 알킬카복시 또는 C1-C6 알킬아미도기이거나;
    R1과 R2, R1과 R3, R2와 R3 또는 R3과 R4는 C2-C7 복소환식 또는 C2-C7 사이클로알킬 구조를 형성하고;
    R5는 H, O-C1-C6 알킬, C(O)-H, C(O)-C1-C6 선형 또는 분지형 알킬, C(O)-NH-C1-C6 선형 또는 분지형 알킬 또는 C(O)-N(C1-C6 선형 또는 분지형 알킬)2이며;
    R6, R7 및 R8은 독립적으로 H, C1-C6 알킬, C1-C 알콕시, C1-C6 알킬카보닐, C1-C6 알킬 에스터, C1-C6 알킬카복시 또는 C1-C6 알킬아미도기이고; 바람직하게는 R6, R7 및 R8은 독립적으로 H 또는 CH3이고;
    mAb는 항체, 항체 단편, 단클론성 항체, 다클론성 항체, 나노바디, 전구약물 항체 또는 합성 분자 또는 단백질에 의해서 변형된 항체 및 항체 단편이며;
    L은 C2-C100 펩타이드 단위(1 내지 12개의 자연 또는 비자연 아미노산), 하이드라존, 다이설파이드, 에스터, 옥심, 아마이드 또는 티오에터 결합으로 구성된 친수성 분지형 쇄를 함유하는 링커이고;
    n은 1 내지 30이다.
  2. 제1항에 있어서, L은 하기 구조를 갖는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00250

    식 중, Aa는 L- 또는 D-자연 또는 비자연 아미노산이고;
    r은 0 내지 12의 정수이며; R이 0이 아닌 경우, (Aa)r은 동일하거나 상이한 아미노산으로 구성된 펩타이드 단위이며;
    m1은 1 내지 18의 정수이고; m2는 1 내지 100의 정수이며; m3은 1 내지 8의 정수이고; m4는 0 내지 8의 정수이며; m5는 1 내지 8의 정수이고;
    Y는 NHC(=O), NHS(O2), NH(SO), NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH 또는 C(O)NH이며;
    R9는 H, (O=)CR1, (O=)CNHR1, R1COOH, R1(COCH2NH)m2H, R1(Aa)r 또는 R1(COCH2NCH3)m2H이고;
    R1, m2 및 (Aa)r은 제1항에서와 동일하게 정의된다.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 접합체의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00251

    식 중, 화학식 (II) 및 mAb에서 P1,
    Figure pct00252
    , R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 및 R8은 제1항 또는 제2항에서와 동일하게 정의되고;
    L'의 구조는 하기와 같되:
    Figure pct00253

    식 중, m1, m2, m3, m4, m5, Aa, r 및 R9는 제1항 또는 제2항에서와 동일하게 정의된다.
  4. 제3항에 있어서, L'의 구조는 하기와 같이 표현되는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00254

    Figure pct00255

    식 중, m1, m2, m3, m4, m5, Aa, r 및 R9는 제1항 또는 제2항에서와 동일하게 정의된다.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, mAb-SH의 제조 방법은 하기 중 어느 하나의 방법을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    a) 항체, 항체 단편, 단클론성 항체, 다클론성 항체, 나노바디, 프로바디 또는 합성 분자 또는 단백질에 의해서 변형된 항체 및 항체 단편의 중쇄와 경쇄, 중쇄와 중쇄들 간의 다이설파이드 결합 또는 다이설파이드내 결합의 환원제(바람직하게는, 트리스 (2-카복시에틸) 포스핀(TCEP), 다이티오트레이톨(DTT), 다이티오에리트리톨(DTE), L-글루타티온(GSH), 2-머캅토에틸아민(β-MEA), 및/또는 β-머캅토에탄올(β-ME, 2-ME))에 의한 환원;
    b) 항체의 아미노기와 트라우트 시약(Traut's reagent) 또는 티오락톤의 반응에 의한 설프하이드릴기의 생성;
    Figure pct00256

    c) 완충 시스템에서 생화학 반응에 의한 쉽게 환원되는 다이설파이드 결합의 항체 내로의 혼입, 그 다음 TCEP, DTT, GSH, β-MEA 또는 β-ME에 의한 환원:
    Figure pct00257
  6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체의 합성에 사용되는 완충 시스템은 pH 5.0 내지 9.5, 1mM 내지 1000mM 인산, 아세트산, 시트르산, 붕산, 탄산, 바비투르산, 트리스(트라이메틸아미노메탄), 벤조산 또는 트라이에탄올아민 시스템 또는 이들의 혼합 완충 용액이고, 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 아이소프로판올, n-부탄올, 아이소부탄올, 아세토나이트릴, 아세톤, DMF, DMA 또는 DMSO의 0 내지 35% 수용성 유기 용매를 함유하되; 상기 반응 온도는 0℃ 내지 45℃이고, 반응 온도는 5분 내지 96시간인, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체.
  7. 제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (I)의 접합체는 상기 접합 반응이 완결된 후 한외여과 또는 칼럼 크로마토그래피 정제에 의해서 수득되는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체.
  8. 제7항에 있어서, 상기 정제 칼럼은 분자체 칼럼, 양이온성 칼럼, 음이온성 칼럼, 소수성(HIC) 칼럼, 역상 칼럼 또는 단백질 A 또는 G 친화성 칼럼을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체.
  9. 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (II)의 구조는 화학식 (III)의 튜불리신 B 유도체와 화학식 (L')의 화합물의 축합 반응에 의해서 수득되되,
    Figure pct00258

    [식 중, X는 OH, 할로겐(F, Cl, Br 또는 I), 페녹시, 펜타클로로페녹시, 트라이플루오로메탄설폰일, 이미다졸, 다이클로로페녹시, 테트라클로로페녹시, 1-하이드록시벤조트라이아졸, p-톨루엔설폰일, 메탄설폰일, 2-에틸-5-페닐 아이속사졸-3'-설폰일기,
    Figure pct00259

    Figure pct00260

    Figure pct00261
    그 자체에 의해서 또는 다른 무수물과 함께 형성된 무수물, 예컨대, 아세트산 무수물 및 포름산 무수물; 또는 펩타이드 커플링 반응 중간체 또는 미츠노부 반응 중간체임];
    상기 축합 반응은 불활성 기체(질소, 아르곤, 헬륨) 보호와 함께 또는 보호 없이, -20 내지 150℃에서, 5분 내지 120시간 동안 1 내지 100% 피리딘, 트라이에틸아민 또는 다이아이소프로필에틸아민을 함유하는 다이클로로에탄, DMF, DMA, 테트라하이드로퓨란(THF), DMSO, 아세톤, 아이소프로판올, n-부탄올 또는 아세토나이트릴 또는 상기 2종 또는 3종의 혼합 용매에서 수행되고;
    대안적으로, 상기 축합 반응은 하기 완충 시스템에서 그리고 하기 조건 하에서 수행되되, 상기 완충 시스템은 0 내지 35%의 혼화성 유기 용매, 예컨대, 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 아이소프로판올, n-부탄올, 아이소부탄올, 아세토나이트릴, 아세톤, DMF, DMA 또는 DMSO를 함유하는 pH 5.0 내지 9.5, 1mM 내지 1000mM 인산, 아세트산, 시트르산, 붕산, 탄산, 바비투르산, Tris(트리스-하이드록시메틸 아미노메탄), 벤조산 또는 트라이에탄올아민 시스템, 또는 이들의 혼합물이고, 상기 반응 온도는 0 내지 45℃이고, 반응 시간은 5분 내지 96시간인, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체.
  10. 제9항에 있어서, 화학식 (III)의 NH2기는 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 폼산, 아세트산, 황산, 인산, 질산, 시트르산, 석신산, 벤조산 또는 설폰산과의 염의 형태로 접합 반응에 참여하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, X가 OH인 경우, 상기 축합 반응의 진행은 (N-(3-다이메틸아미노프로필)-N'-에틸카보다이이미드)(EDC), 다이사이클로헥실카보다이이미드(DCC), N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC), N-사이클로헥실-N'-(2-몰폴리노-에틸)카보다이이미드 메토-p-톨루엔설폰에이트(CMC 또는 CME-CDI), 카보닐다이이미다졸(CDI), O-벤조트라이아졸-N,N,N',N'-테트라메틸 유레아 테트라플루오로보레이트(TBTU), O-벤조트라이아졸-테트라메틸 유레아 헥사플루오로포스페이트(HBTU), (벤조트라이아졸-1-일옥시)트리스(다이메틸아미노)-포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP), (벤조트라이아졸-1-일옥시)트라이피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP), 다이에틸 피로카보네이트(DEPC), N,N,N',N'-테트라메틸클로로벤즈아미딘 헥사플루오로포스페이트, 2-(7-옥소벤즈트라이아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU), 1-[(다이메틸아미노) (몰폴린일) 메틸렌]-1[1,2,3]트라이아졸로[4,5-b]-1-피리딘-3-옥시헥사플루오로포스페이트(HDMA), 2-클로로-1,3-다이메틸이미다졸륨 헥사플루오로포스페이트(CIP), 클로로트라이피롤리딘일포스포늄 헥사플루오로포스페이트 비스(테트라메틸렌) 플루오로폼아마이드(BTFFH), N,N,N',N'-테트라메틸-설퍼-(1-옥소-2-피리딘일) 티우로늄 헥사플루오로포스페이트, 2-(2-피리돈-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸 유레아 테트라플루오로보레이트(TPTU), 설퍼-(1-옥소-2-피리딘일)-N,N,N',N'-테트라메틸티오유레아 헥사플루오로포스페이트, O-[(에톡시카보닐) 사이안아마이드]-N,N,N',N'-테트라메틸티오유레아 헥사플루오로포스페이트(HOTU), (1-사이아노-2-에톡시-2-옥소이미노일옥시) 다이메틸아미노-몰폴린-카베늄 헥사플루오로포스페이트(COMU), 벤질-N'-사이클로헥실카보다이이미드(또는 고체 지지체에 존재함), N-벤질-N'-사이클로헥실 카보다이이미드(또는 고체 지지체에 존재함), 다이-피롤리딘일(N-석신이미도-메틸) 피롤리딘 헥사플루오로포스페이트(CIB), 2-클로로-1,3-다이메틸이미다졸륨 테트라플루오로보레이트(CIB), (벤조트라이아졸-1-일옥시) 다이피페리딘일 카본 헥사플루오로포스페이트(TCTU), 트리스(다이메틸아미노) 포스핀 헥사플루오로포스페이트(RRHA), 1-n-프로필포스포러스 무수물(PPACA, T3P®), 2-아이소사이아노에틸몰폴린 (MEI), N,N,N',N'-테트라메틸유레아-옥시-(N-석신이미딜) 헥사플루오로포스페이트(HSTU), 2-브로모-1-에틸피리딘 테트라플루오로보레이트(BEP), 산소-[(에톡시카보닐)사이아노메틸아민]-N,N,N',N'-테트라메틸티오유레아 테트라플루오로보레이트(TOTU), 4-(4,6-다이메톡시트라이아진-2-일)-4-메틸몰폴린 염산염(MMTM, DMTMM), 2-석신이미딜-1,1,3,3-테트라메틸 유레아 테트라플루오로보레이트(TSTU), N,N,N',N'-테트라메틸-O-(3,4-다이하이드로-4-옥소-1,2)3-벤조트라이아진-3-일) 유레아 테트라플루오로보레이트(TDBTU), 아조다이카보닐다이피페리딘일(ADD), 비스(4-클로로벤질) 아조다이카복실레이트(DCAD), 다이-tert-부틸 아조다이카복실레이트(DBAD), 다이아이소프로필 아조다이카복실레이트(DIAD) 또는 다이에틸 아조다이카복실레이트(DEAD)로부터 선택된 축합 시약을 필요로 하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (III)의 튜불리신 B 유도체의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00262

    식 중, R5'는 H, C1-C6 알킬기, C1-C6 알켄일기 또는 C1-C6 선형 또는 분지형 아미노알킬기이다.
  13. 제12항에 있어서, 상기 화학식 (III)의 튜불리신 B 유도체의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1: 다이에톡시아세토나이트릴 및 수성 암모늄 설파이드를 실온에서 교반하여 화합물 1, 2,2-다이에톡시티오아세트아마이드를 수득하는 단계:
    Figure pct00263

    단계 2: 무수 용매(예컨대, 무수 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, 아세토나이트릴, N,N-다이메틸폼아마이드, 메탄올 또는 아이소프로판올) 중의 화합물 1 및 브로모피루베이트를 가열시키고, 축합시켜 화합물 2를 수득하는 단계:
    Figure pct00264

    단계 3: 화합물 2를 용매(예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, 에틸 아세테이트, n-헵탄, 다이옥산, 아세토나이트릴)에 용해시키고, 루이스산(Lewis acid) 또는 양성자산(protonic acid)(예컨대, 염화수소산, 황산, 인산, 메탄설폰산, 폼산, 옥살산, 아세트산, p-톨루엔설폰산, 피리디늄 p-톨루엔설폰에이트, AlCl3, FeCl3, ZnCl2, BF3, BCl3, BBr3, TiCl4, ZnBr2 또는 LiBF4)의 존재 하에서 가수분해시켜 화합물 3을 수득하는 단계:
    Figure pct00265

    단계 4: 설핀아마이드를 저온(예컨대, -45 내지 -78℃) 하에서 n-부틸리튬에 의해서 탈양성자화시키고, 그 다음 루이스산의 존재 하에서 화합물 3과 축합시켜 화합물 4를 수득하는 단계(알돌 반응):
    Figure pct00266

    단계 5: 화합물 4를 저온(예를 들어, -45 내지 -78℃)에서 환원 시약(예컨대, NaBH4, LiBH4, Na(OAc)3BH, Na(CN)BH3 등)에 의해서 선택적으로 환원시켜 화합물 5를 수득하고, 반응에 루이스산(예를 들어 Ti(OEt)4)을 첨가하여 입체화학 결과를 제어하는 단계:
    Figure pct00267
    ,
    단계 6: 화합물 5를 용매(예컨대, 메탄올, 에탄올, 아이소프로판올, 테트라하이드로퓨란 또는 아세토나이트릴)에 용해시키고, tert-부틸설핀일기를 산, 예컨대, 염화수소산, 황산 및 인산에 의해서 제거하여 화합물 6을 수득하는 단계:
    Figure pct00268

    단계 7: 축합 시약(예컨대, DIC/HOBt, DCC/HOBt, EDC/HOBt, HATU, BOP, T3P 또는 BrOP)의 존재 하에서, 용매(예를 들어, n-헵탄, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드) 중의 화합물 6 및 아지도 산을 축합시켜 화합물 7을 수득하는 단계,
    대안적으로, 아지도 산을 유기 염기(예컨대, 트라이에틸아민, 다이아이소프로필에틸아민, N-메틸몰폴린 등)의 존재 하에서 THF 중의 아이소부틸 클로로폼에이트와 반응시켜 혼합 무수물(mixed anhydride)을 수득하고, 이것을 화합물 6의 염산염과 축합시켜 7을 제공하는 단계;
    대안적으로, 용매(예컨대, n-헵탄, n-헥산, 다이클로로메탄 또는 테트라하이드로퓨란) 중의 아지도 산을 트라이에틸아민 및 DMF(촉매량)의 존재 하에서 옥살릴 클로라이드와 반응시켜 아실 클로라이드를 생성시키고, 그 다음 이것을 화합물 6의 염산염과 축합시켜 7을 제공하는 단계:
    Figure pct00269

    단계 8: 용매(예컨대, 다이클로로메탄, 테트라하이드로퓨란 또는 아세토나이트릴) 중에서, 화합물 7의 하이드록실기를 유기 염기(예컨대, 이미다졸, 트라이에틸아민 또는 피리딘)의 존재 하에서 하이드록실 보호 시약(예컨대, TESCl 사용)과 반응시켜 보호된 화합물 8을 수득하는 단계:
    Figure pct00270

    단계 9: 용매(예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄 또는 아세토나이트릴) 중의 화합물 8을 염기(예컨대, KHMDS, LiHMDS, NaHMDS, KOtBu, NaH 또는 KH)를 첨가하여 탈양성자화시키고, 그 다음 아이오도메탄, 브로모메탄, 다이메틸 설페이트, 메틸 트라이플루오로메탄설폰에이트, 아이오도에탄 등으로 알킬화시켜, 화합물 9를 수득하는 단계:
    Figure pct00271

    단계 10: 화합물 9를 용매(예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄 또는 에틸 아세테이트)에 용해시키고, 아지도기를 특정 조건, 예컨대, H2 및 Pd/C, 트라이페닐포스핀 및 물(스타우딩거(Staudinger) 반응) 하에서 아미노기로 환원시키고, 그 다음 유사한 반응성을 갖는 산 또는 산 유도체와 축합시켜 화합물 10을 제공하는 단계:
    Figure pct00272

    단계 11: 화합물 10의 하이드록실 보호기 PG1을 적절한 조건(예를 들어, TES 보호기를 THF 중의 HCl, THF/MeOH/AcOH, n Bu4NF 또는 HF-피리딘에서 탈보호시킬 수 있음) 하에서 탈보호시켜 화합물 11을 수득하는 단계:
    Figure pct00273

    단계 12: 에스터 화합물 11을 염기(예컨대, LiOH, NaOH 또는 KOH) 또는 다른 적합한 조건(예컨대, 메틸 에스터는 LiCl, LiI, Me3SiOK 등을 사용하여 카복실산으로 전환시킬 수 있음)에 적용시켜 산 12로 전환시키는 단계:
    Figure pct00274

    단계 13: 염기(예컨대, 트라이에틸아민, N,N-다이아이소프로필에틸아민 또는 피리딘) 및 촉매(예컨대, DMAP)의 존재 하에서, 화합물 12를 특정 온도(예컨대, 0℃ 내지 23℃)에서 무수물, 예컨대, 아세트산 무수물, 프로피온산 무수물, 아이소-프로피온산 무수물, 또는 아실 할라이드, 예컨대, 아세틸 할라이드, 프로피오닐 할라이드, 카바모일 할라이드, 메틸카바모일 할라이드, 에틸카바모일 할라이드, 다이메틸카바모일 할라이드와 반응시켜 화합물 13을 수득하는 단계이되, 상기 반응은 염기 또는 촉매 없이 수행될 수 있는, 상기 수득하는 단계:
    Figure pct00275

    단계 14: 화합물 13을 축합 시약, 예컨대, EDC, DIC, DCC, HATU, HBTU의 존재 하에서 하이드록실-함유 화합물, 예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드와 축합시켜 반응성 에스터 화합물 14를 수득하는 단계:
    Figure pct00276

    단계 15: 화합물 15 및 화합물 14를 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하에서 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액 또는 유기 용액에서 축합시켜 화합물 16을 수득하는 단계로서, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도(0℃ 내지 23℃) 및 반응 시간(30분 내지 18시간)이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계:
    Figure pct00277

    단계 16: 화합물 16의 나이트로기를 환원 조건, 예컨대, 수소 및 Pd/C 촉매, 하이드라진 수화물 및 FeCl3, 철 분말 및 아세트산 등 하에서 아미노기로 환원시켜 화합물 III을 수득하는 단계:
    Figure pct00278
    .
  14. 제9항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (L')화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00279
  15. 제14항에 있어서, 화학식 (L')의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1: 화합물 1-1 및 화합물 1-2를 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 직접 축합시키거나, 화합물 1-2를 펜타플루오로페놀, 나이트로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드와 반응시켜 상응하는 활성 에스터를 수득하고, 그 다음 축합 시약, 예컨대, DIC 또는 EDC의 존재 하에서, 화합물 1-1과 반응시켜 1a를 수득하는 단계,
    대안적으로, 화합물 1-3 및 화합물 1-4를 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서의 직접 축합시키거나 또는 다른 간접 축합 반응 경로에 의해서 축합시켜 화합물 1b를 수득하는 단계;
    Figure pct00280

    단계 2: 화합물 1의 카복실 보호기 PG2를 탈보호 시약(예컨대, 산에 의해서 tert-부틸 에스터를 제거함)에 의해서 제거하여 화합물 2를 수득하는 단계;
    Figure pct00281

    단계 3: 산 화합물 2 및 아민 화합물 3을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 또는 다른 간접 축합 반응 경로에 의해서 축합시켜 화합물 4를 수득하는 단계:
    Figure pct00282

    단계 4: 화합물 4의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여 화합물 5를 수득하는 단계:
    Figure pct00283

    단계 5: 카복실산 6 및 아민 5를 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 또는 다른 간접 축합 반응 경로에 의해서 축합시켜 화합물 7을 수득하는 단계:
    Figure pct00284

    단계 6: 화합물 7의 카복실 보호기 PG3을 탈보호 조건, 예컨대, tert-부틸 에스터 보호기의 경우에는 산(폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등) 하에서 제거하여 화합물 8을 수득하는 단계:
    Figure pct00285

    단계 7: 화합물 8을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 하이드록실기를 함유하는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀또는 N-하이드록시석신이미드)과 반응시키거나, 또는 다른 카복실산 활성화 화합물과 반응시켜, 반응성 에스터 화합물 L'를 수득하는 단계:
    Figure pct00286
    .
  16. 제9항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (L')의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00287
    .
  17. 제16항에 있어서, 화학식 (L')의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1: 화합물 1의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여 화합물 2를 수득하는 단계:
    Figure pct00288
    ;
    단계 2: 아미노 화합물 2 및 카복실산 3을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서, 또는 다른 간접 축합 반응 경로에 의해서 축합시켜, 화합물 4를 수득하는 단계:
    Figure pct00289
    ;
    단계 3: 화합물 4의 카복실 보호기 PG2를 tert-부틸 에스터 보호기의 절단을 위한 탈보호 조건, 예컨대, 산(폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등) 하에서 제거하여 화합물 5를 수득하는 단계:
    Figure pct00290
    ;
    단계 4: 카복실산 5 및 아민 6을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서, 또는 다른 간접 축합 반응 경로에 의해서 축합시켜 화합물 7을 수득하는 단계:
    Figure pct00291
    ;
    단계 5: 화합물 7의 카복실 보호기 PG3을 tert-부틸 에스터 보호기의 절단을 위한 탈보호 조건, 예컨대, 산(폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등) 하에서 제거하여 화합물 8을 수득하는 단계:
    Figure pct00292

    단계 6: 화합물 8을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 하이드록실기(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)를 함유하는 화합물과 반응시키거나 또는 다른 카복실산 활성화 화합물과 반응시켜 반응성 에스터 화합물 9를 수득하는 단계:
    Figure pct00293
  18. 제3항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (II)의 화합물의 합성은 화학식 (IV)의 화합물과 화학식 (V)의 화합물의 축합 반응에 의해서 달성되는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00294

    식 중, X의 정의 및 축합 반응 조건은 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에서와 동일하다.
  19. 제18항에 있어서, 화학식 (V)의 NH2기는 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 폼산, 아세트산, 황산, 인산, 질산, 시트르산, 석신산, 벤조산 또는 설폰산과의 염의 형태로 접합 반응에 참여하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 화학식 (IV)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00295
  21. 제20항에 있어서, 화학식 (IV)의 화합물의 합성은 하기 단계를 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    카복실산 1 및 하이드록실기를 갖는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)을 축합 시약(예컨대, EDC, DIC, DCC, HATU 또는 HBTU)의 존재 하에서 축합시켜 반응성 에스터를 수득하는 단계;
    대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기(예컨대, N-메틸몰폴린, 트라이에틸아민, 다이아이소프로필에틸아민 등)의 존재 하에서 에틸 클로로폼에이트, 아이소부틸 클로로폼에이트 등과 반응시켜 반응성 혼합 무수물을 수득하는 단계;
    대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기, 예컨대, 트라이메틸아민, 및 촉매량의 DMF(예컨대, 0.01당량 내지 0.5당량)의 존재 하에서 옥살릴 클로라이드와 반응시켜 아실 클로라이드를 수득하는 단계.
  22. 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (V)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00296

    Figure pct00297
    .
  23. 제22항에 있어서, 화학식 (V)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1. 화합물 1 및 화합물 2를 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액에서 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 3을 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계:
    Figure pct00298

    단계 2. 화합물 3의 아미노 보호기 PG4를 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여 화합물 V를 수득하는 단계:
    Figure pct00299
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, 화합물 2의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00300

    식 중, 화합물 8(화합물 XIVa)은 제23항에서와 같은 화합물 2이다.
  25. 제24항에 있어서, 화합물 8의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1. 0 내지 60℃에서 적절한 용매(예컨대, 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 아세토나이트릴, 메틸렌 클로라이드 등) 또는 상기 임의의 용매와 물의 용매 혼합물 중의 L-타이로신(1)의 에스터 유도체에 벤질 클로라이드, 벤질 브로마이드 또는 다른 벤질 화합물을 첨가하고, 그 후에 유기 또는 무기 염기, 예컨대, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 중탄산나트륨, 중탄산칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 트라이에틸아민, DBU, 소듐 하이드라이드 등 및 선택적으로 적절한 첨가제, 예컨대, 소듐 아이오다이드 또는 상 전달(phase transfer) 촉매, 예컨대, 벤질트라이에틸암모늄 클로라이드(TEBA), 테트라부틸암모늄 브로마이드(TBAB), 테트라부틸암모늄 암모늄 클로라이드, 테트라부틸암모늄 바이설페이트, 트라이옥틸메틸암모늄 클로라이드, 도데실 트라이메틸 암모늄 클로라이드, 테트라데실 트라이메틸 암모늄 클로라이드 등을 첨가하여 화합물 2를 수득하는 단계;
    단계 2. 화합물 2를 유기 용매(예컨대, 다이클로로메탄, 테트라하이드로퓨란, 메탄올, 에탄올, 에터 등)에 용해시키고, 그 다음 선택적으로 환원 시약의 활성을 조정하기 위한 첨가물(예컨대, I2, FeCl3, ZnCl2, MgCl2, LiCl 또는 CaCl2)의 존재 하에서 환원 시약, 예컨대, LiAlH4, DIBAL, NaBH4, LiBH4, 소듐 비스(2-메톡시에톡시)알루미늄하이드라이드(Red-Al), 다이보란 보로에탄 등과 반응시켜, 화합물 3을 수득하는 단계;
    단계 3. 알코올 3을 산화 조건 예컨대, 스원(Swern) 산화(옥살릴 클로라이드, DMSO, 트라이에틸아민), 파리크-도어링(Parikh-Doering) 산화(설퍼 트라이옥사이드), 데스-마틴(Dess-Martin) 산화 등 하에서 산화시켜, 알데하이드 4를 수득하는 단계;
    단계 4. 알데하이드 4를 포스페이트 에스터(호너-워즈워쓰-에몬스 반응(Horner-Wadsworth-Emmons reaction)) 또는 인 일리드(phosphorus ylide)(비티그 반응(Wittig reaction))와 반응시켜 탄소 쇄를 연장시켜 화합물 5를 수득하는 단계;
    단계 5. 화합물 5의 이중 결합을 균질 또는 불균질 촉매의 존재 하에서 환원시키는 단계로서, 벤질기가 또한 제거되어, 입체화학적으로 순수한 화합물 또는 두 부분입체이성질체의 혼합물을 수득하는 단계이되; 상기 불균질 촉매는 Pd/C, Pd(OH)2/C, Pd/BaSO4, PtO2, Pt/Al2O3, Ru/C, 라니 Ni 등을 포함하고, 상기 균질 비대칭 수소화 촉매는 크랩트리(Crabtree) 촉매, [Ru (II)-(BINAP)]-유형 촉매, [(Ph3P)CuH]6 등을 포함하는, 상기 환원시키는 단계;
    단계 6. 화합물 6을 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 아세토나이트릴, 다이클로로메탄에 용해시키고, 질화를 수행하는 단계로서, 상기 질화 시약은 질산, 질산/아세트산, 질산칼륨/황산, tert-부틸 나이트라이트, 질산/트라이플루오로아세트산 무수물, NO2BF4, 나이트로피리딘 등을 포함하는, 상기 질화를 수행하는 단계;
    단계 7. 화합물 7의 나이트로기를 H2/Pd/C, Fe 또는 Zn/HOAc, SnCl2/HCl을 포함하는 조건 하에서 아미노기로 환원시키는 단계.
  26. 제22항 또는 제23항에 있어서, 화합물 2의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00301

    식 중, 화합물 8(화합물 XIVb)은 제22항 또는 제23항의 화합물 2이다.
  27. 제26항에 있어서, 화합물 2의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1: 화합물 1을 -78℃ 내지 -45℃에서 에반스 카이럴(Evans' chiral) N-아실 옥소아졸리딘온 또는 티오케톤 2과 알돌 반응시켜, 입체화학적으로 순수한 화합물 3을 수득하는 단계이되, 식 중, X는 O 또는 S이고, R16은 H, 메틸, 페닐이며, R17은 H, 메틸, 아이소프로필, 페닐, 벤질 등인, 상기 수득하는 단계;
    단계 2: 화합물 3의 하이드록실기를 바톤-맥콤비 탈산소화 조건(Barton-McCombie deoxygenation condition) 하에서 탈산소화시키는 단계이되, 즉, 알코올을 먼저 티오카보닐 유도체, 예컨대, 알킬 잔테이트, 페닐 카보티올레이트, 이미다졸 카보티올레이트로 전환시키고, 그 다음 Bu3SnH로 처리하여 라디칼 절단을 수행하고, 탈수소화 생성물을 제공하는 단계이며, 상기 라디칼 절단 조건은 n-Bu3SnH/AIBN,N-Bu3SnH/AIBN/n-BuOH/PMHS 및 (Bu4N)2S2O8/HCO2Na를 포함하는, 상기 탈산소화시키는 단계;
    단계 3: 화합물 4를 테트라하이드로퓨란에 용해시키고, 에반스 카이럴 보조기(chiral auxiliary group)를 LiOH/H2O2에 의해서 절단하여 상응하는 산 5를 수득하는 단계;
    단계 4: 화합물 5를 유기 용매(예컨대, 에틸 아세테이트, 메탄올, 다이클로로메탄, 에탄올 또는 아세트산 등)에 용해시키고, Pd/C 촉매의 존재 하에서 수소화시키는 단계이되, 상기 벤질기가 또한 제거되어, 화합물 6을 수득하는 단계;
    단계 5: 화합물 6을 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 아세토나이트릴, 다이클로로메탄에 용해시키고, 질화시키는 단계이되, 상기 질화 시약은 질산, 질산/아세트산, 질산칼륨/황산, tert-부틸 나이트라이트, 질산/트라이플루오로아세트산 무수물, NO2BF4, 나이트로피리딘 등을 포함하는, 상기 질화시키는 단계;
    단계 6: 화합물 7의 나이트로기를 H2/Pd/C, Fe 또는 Zn/HOAc 또는 SnCl2/HCl의 조건 하에서 아미노기로 전환시켜, 입체화학적으로 순수한 화합물 8을 수득하는 단계.
  28. 제3항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (II)의 화합물은 화학식 (VI)의 화합물과 화학식 (VII)의 화합물의 축합 반응에 의해서 수득되는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00302

    식 중, X의 정의 및 축합 반응 조건은 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에서와 동일하다.
  29. 제28항에 있어서, 화학식 (VI)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00303
  30. 제29항에 있어서, 화학식 (VI)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1: 축합 시약의 존재 하에서 화합물 1을 하이드록실기를 함유하는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)과 반응시켜, 반응성 카복실산 유도체 화합물 9를 수득하는 단계:
    Figure pct00304
    ;
    단계 2: 화합물 2와 화합물 3을 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액에서 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 4를 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계:
    Figure pct00305
    ;
    단계 3: 화합물 4의 아미노 보호기 PG4를 적절한 탈보호 조건, 적절한 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 선택적으로 제거하여, 화합물 5를 수득하는 단계:
    Figure pct00306
    ;
    단계 4: 화합물 5 및 화학식 (IV)의 화합물을 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액, 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 6을 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계:
    Figure pct00307
    ;
    단계 5: 화합물 6의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여, 화합물 VI을 수득하는 단계:
    Figure pct00308
  31. 제28항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (VII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00309
  32. 제31항에 있어서, 화학식 (VII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    카복실산 1과 하이드록실기를 갖는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 축합시켜 반응성 에스터를 수득하는 단계;
    대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기(예컨대, N-메틸몰폴린, 트라이에틸아민, 다이아이소프로필에틸아민 등)의 존재 하에서 에틸 클로로폼에이트, 아이소부틸 클로로폼에이트 등과 반응시켜 반응성 혼합 무수물을 수득하는 단계;
    대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기, 예컨대, 트라이메틸아민, 및 촉매량의 DMF(예컨대, 0.01당량 내지 0.5당량)의 존재 하에서 옥살릴 클로라이드와 반응시켜, 아실 클로라이드를 수득하는 단계;
    Figure pct00310
    .
  33. 제3항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (II)의 화합물은 화학식 (VIII)의 화합물과 화학식 (IX)의 화합물의 축합 반응에 의해서 수득되는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00311

    식 중, X의 정의 및 축합 반응 조건은 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에서와 동일하다.
  34. 제33항에 있어서, 화학식 (VIII)의 NH2기는 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 폼산, 아세트산, 황산, 인산, 질산, 시트르산, 석신산, 벤조산 또는 설폰산과의 염의 형태로 접합 반응에 참여하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 화학식 (VIII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00312
    .
  36. 제35항에 있어서, 화학식 (VIII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1: 화합물 1의 카복실 보호기 PG3을 tert-부틸 에스터 보호기의 절단을 위한 탈보호 조건, 예컨대, 산(폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등) 하에서 제거하여, 화합물 2를 수득하는 단계:
    Figure pct00313

    단계 2: 화합물 2를 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서 하이드록실기를 함유하는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)과 반응시켜, 반응성 에스터 화합물 3을 수득하는 단계:
    Figure pct00314

    단계 3: 화합물 3과 화합물 4를 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액, 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 5를 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계:
    Figure pct00315

    단계 4: 화합물 5의 아미노 보호기 PG4를 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매, 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여, 화합물 6을 수득하는 단계:
    Figure pct00316

    단계 5: 화합물 6 및 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화학식 (IV)의 화합물을 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액, 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 7을 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계;
    Figure pct00317

    단계 6. 화합물 7의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여, 화합물 VIII을 수득하는 단계:
    Figure pct00318
  37. 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IX)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    카복실산 1과 하이드록실기를 갖는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)을 축합 시약의 존재 하에서 축합시켜 반응성 에스터 IX를 수득하는 단계;
    대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기(예컨대, N-메틸몰폴린, 트라이에틸아민, 다이아이소프로필에틸아민 등)의 존재 하에서 에틸 클로로폼에이트, 아이소부틸 클로로폼에이트 등과 반응시켜 반응성 혼합 무수물 IX를 수득하는 단계;
    대안적으로, 카복실산 1을 유기 염기, 예컨대, 트라이메틸아민, 및 촉매량의 DMF(예컨대, 0.01당량 내지 0.5당량)의 존재 하에서 옥살릴 클로라이드와 반응시켜, 아실 클로라이드 IX를 수득하는 단계:
    Figure pct00319
  38. 제3항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (II)의 화합물은 화학식 (X)의 화합물과 화학식 (XI)의 화합물의 축합 반응에 의해서 수득되는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00320

    식 중, Y1과 Y2를 축합시켜 Y기를 형성하고; Y1 및 Y2는 각각 NH2, -+NH3, COOH, COX, SO2Cl, P(O)Cl2, NHCOX, NHSO2Cl, NHP(O)Cl2, NHP(O)(OH)Cl,
    Figure pct00321
    .
    Figure pct00322

    Figure pct00323
    이다.
  39. 제38항에 있어서, 화학식 (X)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00324
    .
  40. 제39항에 있어서, 화학식 (X)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1: 카복실산 1과 화합물 VI을 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서, 또는 다른 간접 축합 반응 경로에 의해서 축합시켜, 화합물 2를 수득하는 단계이되, Z1은 Y1의 전구체, 예컨대, 보호된 아미노, 보호된 카복실산, 아마이드, 포스포아마이드, 설폰아마이드, 카복실레이트, 포스페이트, 포스포네이트 등인, 상기 수득하는 단계;
    Figure pct00325

    단계 2: 화합물 2의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여 화합물 3을 수득하는 단계;
    Figure pct00326

    단계 3: 카복실산 4와 아민 3을 축합 시약의 존재 하에서 또는 다른 간접 축합 반응 경로에 의해서 축합시켜, 화합물 5를 수득하는 단계;
    Figure pct00327

    단계 4: 화합물 5의 작용기 Z1을 적절한 화학 조작, 예컨대, 카복실산 및 아민의 탈보호에 의해 작용기 Y1로 전환시켜, 화합물 X를 형성시키는 단계:
    Figure pct00328
    .
  41. 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (XI)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00329
    .
  42. 제41항에 있어서, 화학식 (XI)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1: 화합물 1을 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드, 다이메틸 설폭사이드에 용해시키고, 그 다음 염기, 예컨대, 소듐 하이드라이드, 나트륨, 수산화나트륨 등으로 탈양성자화시키고, 그 다음 적절한 온도에서 화합물 2(식 중, X는 염소, 브로민, 아이오딘 등 또는 이탈기임)와 교반하여 화합물 3을 수득하는 단계;
    단계 2: 화합물 3의 카복실 보호기 PG1을 탈보호 조건 하에서 제거하고, 예를 들어, tert-부틸 에스터 보호기를 폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등에 의해서 제거하여 화합물 XIa-1을 수득할 수 있는 단계;
    단계 3: 화합물 1을 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드, 다이메틸 설폭사이드에 용해시키고, 그 다음 염기, 예컨대, 소듐 하이드라이드, 나트륨, 수산화나트륨 등으로 탈성자화시키고, 적절한 온도에서 화합물 4와 교반하여 화합물 5를 수득하는 단계;
    단계 4: 화합물 5의 카복실 보호기 PG1을 탈보호 조건 하에서 제거하고, 예를 들어, tert-부틸 에스터 보호기를 폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등에 의해서 제거하여, 화합물 XIa-2를 수득하는 단계;
    단계 5: 화합물 6을 적절한 유기 염기, 예컨대, 트라이에틸아민, N,N-다이아이소프로필에틸아민, 피리딘 등의 존재 하에서 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드, 다이메틸 설폭사이드 등에 용해시키고, 0 내지 5℃에서 메틸설폰일 클로라이드, 4-톨루엔설폰일 클로라이드 등과 반응시켜 화합물 7을 수득하는 단계;
    단계 6: 화합물 7 및 암모니아 용액을 선택적으로 가열 하에서 물 또는 유기 용매, 예컨대, 메탄올, 에탄올, 아세토나이트릴, 테트라하이드로퓨란, 다이옥산 등에서 반응시켜, 화합물 XIb를 수득하는 단계;
    단계 7: 화합물 7 및 소듐 아자이드를 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드, 다이메틸 설폭사이드 등에서 반응시켜, 화합물 8을 수득하는 단계;
    단계 8: 아자이드 8을 수소화 조건(Pd/C 사용) 또는 트라이페닐포스핀 및 물의 조건 하에서 환원시켜, 화합물 XIb를 제공하는 단계;
    단계 9: 유기 용매, 예컨대, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드, 다이메틸 설폭사이드 등, 바람직하게는 N,N-다이메틸폼아마이드 중의 화합물 7 및 다이벤질아민을 100℃까지 가열시켜, 화합물 9를 수득하는 단계;
    단계 10: 화합물 9를 유기 용매, 예컨대, 에틸 아세테이트, 메탄올, 에탄올, 아세트산, 테트라하이드로퓨란 등에 용해시키고, Pd/C 촉매의 존재 하에서 H2 하에서 수소화시켜, 화합물 XIb를 수득하는 단계이되, 선택적으로 반응은 45℃까지 가열될 수 있는, 상기 수득하는 단계.
  43. 제3항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 (II)의 화합물은 화학식 (XII)의 화합물과 화학식 (XIII)의 화합물의 축합 반응에 의해서 수득되는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00330

    식 중, X의 정의 및 축합 반응 조건은 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에서와 동일하다.
  44. 제43항에 있어서, 화학식 (XII)의 NH2기는 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 폼산, 아세트산, 황산, 인산, 질산, 시트르산, 석신산, 벤조산 또는 설폰산과의 염의 형태로 접합 반응에 참여하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
  45. 제43항 또는 제44항에 있어서, 화학식 (XII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00331
    .
  46. 제45항에 있어서, 화학식 (XII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1: 화합물 1을 축합 시약의 존재 하에서 하이드록실기를 함유하는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)과 반응시켜, 반응성 카복실산 유도체 화합물 2를 수득하는 단계:
    Figure pct00332

    단계 2: 화합물 2와 화합물 3을 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액, 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 4를 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계;
    Figure pct00333

    단계 3: 화합물 4의 아미노 보호기 PG4를 적절한 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 선택적으로 제거하여, 화합물 5를 수득하는 단계:
    Figure pct00334

    단계 4: 화합물 5와 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화학식 (IV)의 화합물을 적합한 pH(예컨대, pH = 5.0 내지 8.0)의 수성 용액, 또는 유기 염기(예컨대, TEA, DBU 또는 DIPEA) 또는 무기 염기(예컨대, Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3 또는 NaHCO3)의 존재 하의 유기 용액에서 축합시켜, 화합물 6을 수득하는 단계이되, 선택적으로 염기는 반응을 진행시키는 데에는 필요하지 않지만, 반응 온도 및 반응 시간이 엄격하게 제어될 필요가 있는, 상기 수득하는 단계;
    Figure pct00335

    단계 5: 화합물 7의 아미노 보호기 PG1을 탈보호 조건, 예컨대, Cbz 보호기의 경우에는 H2 및 Pd/C 촉매 및 Boc 보호기의 경우에는 산성 조건 하에서 제거하여, 화합물 XIII을 수득하는 단계:
    Figure pct00336
    .
  47. 제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (XIII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00337
  48. 제47항에 있어서, 화학식 (XIII)의 화합물의 합성은 하기 단계 중 1개 이상을 포함하는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    단계 1: 카복실산 1과 아민 2를 축합 시약(예컨대, EDC, HATU, DIC 또는 DCC)의 존재 하에서, 또는 다른 간접 축합 반응 경로에 의해서 축합시켜, 화합물 3을 수득하는 단계;
    Figure pct00338

    단계 2: 화합물 3의 카복실 보호기 PG1을 tert-부틸 에스터 보호기의 절단을 위한 탈보호 조건, 예컨대, 산(폼산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 염화수소산, 인산 등) 하에서 제거하여, 화합물 4를 수득하는 단계:
    Figure pct00339

    단계 3: 카복실산 4를 축합 시약의 존재 하에서 하이드록실기를 함유하는 화합물(예컨대, 펜타플루오로페놀 또는 N-하이드록시석신이미드)과 반응시켜, 반응성 에스터 화합물 XIII을 수득하는 단계,
    대안적으로, 카복실산 4를 유기 염기(예컨대, N-메틸몰폴린, 트라이에틸아민, 다이아이소프로필에틸아민 등)의 존재 하에서 에틸 클로로폼에이트, 아이소부틸 클로로폼에이트 등과 반응시켜 반응성 혼합 무수물 XIII을 수득하는 단계,
    대안적으로, 카복실산 4를 유기 염기, 예컨대, 트라이메틸아민, 및 촉매량의 DMF(예컨대, 0.01당량 내지 0.5당량)의 존재 하에서 옥살릴 클로라이드와 반응시켜, 아실 클로라이드 XIII을 수득하는 단계:
    Figure pct00340
    .
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 구조를 갖는, 항체-튜불리신 B 유도체(유사체) 접합체:
    Figure pct00341

    Figure pct00342
    .
  50. 하기 구조를 갖는, 화학식 (II)의 화합물:
    Figure pct00343

    Figure pct00344
    .
  51. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항의 접합체 또는 제50항의 화합물로부터 유래된 접합체 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  52. 암, 감염 또는 자가면역 질환의 치료를 위한 약물의 제조에서의, 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 따른 접합체의 용도.
  53. 암, 감염 또는 자가면역 질환의 치료를 위한 약물의 제조에서의, 제50항에 따른 화합물의 용도.
  54. 암, 감염 또는 자가면역 질환의 치료를 위한 약물의 제조에서의, 제51항에 따른 약제학적 조성물의 용도.
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