KR20220024915A - 튜불리신 유사체 대 세포-결합 분자의 접합체의 제형 - Google Patents

튜불리신 유사체 대 세포-결합 분자의 접합체의 제형 Download PDF

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KR20220024915A
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칭리앙 양
유안유안 후앙
슌 가이
?? 가이
항보 예
린야오 자오
후이후이 구오
루 바이
웬준 리
준시앙 지아
쯔시앙 구오
준 쥉
준 ??
샤오샤오 첸
시앙페이 콩
첸 린
용 두
위 장
레이 주오
시우젠 장
시우홍 쥉
시우홍 ??
빈빈 첸
얀레이 양
멩 다이
이팡 쑤
종리앙 판
샤오마이 주오
싱얀 지앙
먀오먀오 첸
링리 장
얀후아 리
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Abstract

화학식 (I)(식 중, T, L, m, n, -----, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12 및 R13은 본 명세서에 정의된 바와 같음)로 표현되는 구조를 갖는 세포-결합 분자와 튜불리신 유사체의 접합체의 제형은 본 명세서에 정의된 바와 같고, 암, 자가면역 질환 및 감염성 질환의 표적화 치료를 위해서 사용될 수 있다.

Description

튜불리신 유사체 대 세포-결합 분자의 접합체의 제형
본 발명은 표적화 요법을 위한 튜불리신(tubulysin) 유사체와 세포-표면 수용체 결합 분자(cell-surface receptor binding molecule)의 접합체의 제형에 관한 것이다. 본 발명은 또한 암, 자가면역 질환 및 감염성 질환의 치료를 위한 세포-결합 분자-튜불리신(tubulysin) 유사체 접합체를 포함하는 조성물의 용도에 관한 것이다.
인간 신체에서 질환의 특정 부위에 대한 항체 또는 다른 세포-표면 수용체 결합제에 의한 고도로 활성인 세포독성 약물의 표적화 전달(이는 세포독성 약물의 치료창을 극적으로 증가시킬 수 있음)은 표적화 치료에 대한 특히 유망한 접근법이라고 증명되었다(문헌[Van den Mooter, T. et al., Expert Opin Biol Ther. 2015, 15, 749-60]). 특히, US FDA가 2011년에 애드세트리스(Adcetris)(브렌툭시맙 베도틴)를 승인하였기 때문에, 거의 모든 주요 제약사 및 바이오테크사는 암의 표적화 치료를 위해서 항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate: ADC)의 적용을 채택하였다(문헌[Chari, R. et al., Angew. Chem., Int. Ed. 2014, 53, 3796-3827; Sievers, E. L. et al., Annu Rev Med. 2013, 64, 15-29; Mehrling, T. Future Oncol, 2015, 11, 549]). 지금까지 임상 평가에서 대부분의 ADC는 상당히 강력한 튜불린-상호작용제, 메이탄시노이드 또는 아우리스타틴(auristatin)을 사용한다. 임상에서 몇몇 ADC가 다른 강력한 효과기 분자, 예컨대, 토포아이소머라제 1 저해제, SN-38 또는 DNA 상호작용제인 칼리케아미신 및 피롤로벤조다이아제핀에 혼입되었다(문헌[Anderl, J. et al., Methods Mol Biol. 2013;1045:51-70; Thomas, A., et al., Lancet Oncol. 2016 Jun;17(6):e254-e262]).
생물학적 활성을 갖는다고 발견된 몇몇 짧은 펩타이드 화합물이 자연 공급원으로부터 단리되었다. 이들 중 하나인, Hofle 및 Reichenbach 등(GBF Braunschweig)에 의해서 아르칸기엄 게피라(Archangium gephyra)의 믹소박테리아 균주의 배양 브로쓰로부터 처음으로 단리된 튜불리신(하기에 도시된 구조)(문헌[F. Sasse et al., J. Antibiot. 2000, 53, 879-885]; WO9813375)은 분화하는 세포에서 튜불리신 중합을 저해하여 세포자멸사를 유도하는 항유사분열(antimitotic) 펩타이드의 군의 구성원이다. 빈블라스틴, 탁솔 및 에포틸론의 효력을 능가하는 탁월한 효력으로(문헌[Wipf, et al., Org. Lett. 2004, 6, 4057-60; Peltier, et al., J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 16018-9; Wipf, et al., Org. Lett., 2007 , 9, 1605-1607; Wang, et al., Chem. Biol. Drug Des. 2007, 70, 75-86; Pando, et al., Org. Lett. 2009, 11, 5567-9]), 이들 항유사분열 펩타이드는 표적화 요법을 위한 흥미로운 리드(lead)이다. 구조적으로, 테트라펩타이드 튜불리신은 N-말단 N-메틸피페콜산(Mep), 제2 잔기로서의 아이소류신(Ile), 제3 잔기로서의 고유한 티아졸-함유 튜부발린(tubuvaline: Tuv) 및 C-말단에 2개의 가능한 γ-아미노산(튜부타이로신(tubutyrosine: Tut) 또는 튜부페닐알라닌(tubuphenylalanine: Tup))을 포함한다.
Figure pct00001
몇몇 튜불이신이 최근 합성되었지만, 치료 효과를 달성하는 데 필요한 용량에서의 기존의 튜불리신의 상당한 일반 독성(동물 체중의 20% 초과의 감소)은 이의 효능을 손상시킨다(미국 특허 출원 제2010/0048490호). 본 발명자들은 특히 유의하게 더 낮은 일반 독성을 갖지만, 유용한 치료 효율을 갖기 위해서 튜불리신 유도체를 갖는 접합체 대 항체를 사용하는, 세포 표면 결합 리간드의 접합체 분야에 관심을 가져왔다. 자연 튜불리신은 다수의 세포주에 대해서 10피코몰 범위의 IC50 값의 높은 효력을 갖는 ADC에 대한 이상적인 페이로드이지만, 본 발명자들은 자연 튜불리신 접합체가 동물 간에서 거의 대사되지 않아서, 심각한 간 독성을 초래하였다는 것을 발견하였다. 자연 튜불리신 구조의 먼 좌측 부분에서 1-메틸피페라진-2-카복실산을 대체하기 위해서 2-(다이메틸아미노)-2-메틸프로판산을 사용하는 것과 같은 더 간단한 유사체는 항체에 접합된 화합물의 효력을 크게 변화시키지는 않았지만, 접합체의 간 독성을 유의하게 감소시켰다.
크고 복잡한 분자인 항체-약물 접합체 및 다른 단백질 기반 분자는 소화 시스템에 의한 후속 파괴로 인해 경구 투여될 수 없으며, 따라서 일반적으로 비경구로, 예를 들어, 정맥내 또는 피하 투여된다. 따라서 이러한 단백질 기반 약제는 액체 형태로 투여되어야 한다. 그러나 ADC 및 다수의 기타의 큰 복합 단백질 분자는 보통 수성 환경에서 불량한 안정성을 가져서, 약제의 저장 수명을 단축시켜 시장 가치를 수용할 수 없을 정도로 단축시킬 수 있다. 따라서, 환자에게 투여되기 직전에 용매로 재구성될 수 있는, ADC의 약제학적 조성물의 고체 형태를 제조하는 것이 안정성, 저장 및 운송 용이성 측면에서 보다 유리할 수 있다. 단백질 기반 약제학적 조성물의 고체 형태는 분말, 냉동-건조(또는 동결건조) 조성물, 분무-건조, 분무-냉동 건조, 진공 건조 또는 초임계 유체 건조 조성물을 포함한다.
본 명세서에서 본 출원은 더 긴 안정성 및 저장성뿐만 아니라 운송 용이성을 위한 튜불리신 유사체와 세포 표면 결합 리간드의 접합체의 약제학적 조성물, 암 및 면역 장애를 치료하기 위해서 환자에게 투여하기 직전에 물로 재구성하기 위해서 이러한 접합체의 조성물을 사용하는 것을 개시한다.
하기 조성을 갖는 동결건조용 액체 제형 또는 제형화된 동결건조된 분말 또는 동결건조 고체로부터의 재구성된 제형이 제공된다: 제형의 주성분으로서 0.01% 내지 99중량%의 하기 화학식 (I)의 튜불리신 유사체 대 세포-결합제의 접합체; 0.0% 내지 20.0%의 1종 이상의 폴리올; 0.0% 내지 2.0%의 1종 이상의 계면활성제; 0.0% 내지 5.0%의 1종 이상의 보존제; 0.0% 내지 30%의 1종 이상의 아미노산; 0.0% 내지 5.0%의 1종 이상의 항산화제; 0.0% 내지 0.3%의 1종 이상의 금속 킬레이팅제; 0.0% 내지 30.0%의, 제형의 pH를 pH 4.5 내지 7.5로 조정하기 위한 1종 이상의 완충제 염; 및 0.0% 내지 30.0%의, 환자에게 투여하기 위해서 재구성되는 경우 삼투압을 약 250 내지 350mOSm으로 조정하기 위한 1종 이상의 등장제.
예시적인 실시형태에서, 하기 화학식 (I)을 갖는 튜불리신 접합체 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체가 제공된다:
Figure pct00002
식 중, T는 표적화 또는 결합 리간드이고; L은 해방 가능한 링커이며;
Figure pct00003
는 L이 독립적으로 괄호 안의 원자에 연결되는 링키지 결합이고; n은 1 내지 20이며, m은 1 내지 10이고;
괄호 안은 강력한 튜불리신 유사체이되, R1, R2 , R3 및 R4는 독립적으로 선형 또는 분지형 C1-C8의 알킬, 알킬알코올; C2-C8의 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬 에터, 알킬 카복실레이트, 알킬 아민, 알킬 에스터, 알킬 아마이드; C3-C8의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐이거나; 2개의 R, 즉, R1R2 , R3R4, R5R6 또는 R12R13은 함께 3 내지 7원의 탄소환식, 사이클로알킬, 복소환식, 헤테로사이클로알킬, 방향족 또는 헤테로방향족 고리 시스템을 형성하며; Y는 N 또는 C이며; 또한, R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 존재하지 않을 수 있고;
R5 , R6, R8 및 R10은 H 및 선형 또는 분지형 C1-C4의 알킬 또는 C2-C4의 헤테로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
R7은 H, R14 또는 -R14C(=O)X1R15; -R14X1R15로부터 선택되되; X1은 O, S, S-S, NH 또는 NR14로부터 선택되고;
R9는 H, -O-, -OR14, -OC(=O)R14-, -OC(=O)NHR14-, -OC(=O)NR14R15-, -OC(=O) R14SSR15-, OP(=O)(OR14)- 또는 OR14OP(=O)(OR15)이며;
R11은 H, R14, -R14C(=O)R16, -R14C(=O)X2R16, -R14X2R16, -R14C(=O)X2이되, X2는 -O-, -S-, -NH-, -NHS(O2), -N(R14)-, -O-R14-, -S-R14-, -S(=O)-R14- 또는 -NHR14-이고;
R12는 H, R14, -O-, -S-, -N-, =N-, =NNH-, -OH, -SH, -NH2, =NH, =NNH2, -NH(R14), -OR14, -C(O)O-, -C(O)OR16-, -COR16, -COOR14-, C(O)NH-, C(O)NH2, C(O)NHR14, -SR14, -S(=O)R14, -P(=O)(OR16)2, -OP(=O)(OR16)2, -CH2OP(=O)(OR16)2, -SO2R16이며;
R13은 선형 또는 분지형 C1-C10의 알킬, 알킬산, 알킬 아마이드, 알킬 아민; 또는 C2-C10의 헤테로알킬; 또는 C3-C10의 Ar이고, Ar은 4개 내지 10개의 탄소 원자, 바람직하게는 4개 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 1개 또는 수개의 고리로 구성된 방향족 또는 헤테로 방향족을 지칭하고, 헤테로 방향족기의 용어는 헤테로 원자에 의해서 대체된 1개 또는 수개의 탄소 원자, 바람직하게는 O, N, Si, Se, P 또는 S, 보다 바람직하게는 O, S, N에 의해서 대체된 1개, 2개 또는 3개의 탄소 원자를 갖는 방향족기를 지칭하고, 용어 아릴 또는 Ar은 또한 방향족기를 지칭하되, 1개 또는 수개의 H 원자는 R17, F, Cl, Br, I, OR16, SR16, NR16R17, N=NR16, N= R16, NR16 R17, NO2, SOR16R17, SO2R16, SO3R16 , OSO3R16, PR16R17, POR16R17, PO2R16R17, OP(O)(OR17)2, OCH2OP(O)(OR17)2, OC(O)OP(O)(OR17)2, PO(OR16)(OR17), OP(O)(OR17)OP(O)(OR17)2, OC(O)R17 또는 OC(O)NHR17에 의해서 독립적으로 대체될 수 있고;
R14 및 R15는 독립적으로 H; 선형 또는 분지형 C1-C8의 알킬; C2-C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬, 복소환식, 탄소환식; C3-C8의 아릴, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐이며;
R14가 2가인 경우, R14는 1개 내지 4개의 아미노산 단위 또는 (CH2CH2O)r(r은 0 내지 12의 범위의 정수임) 또는 C4-C12의 글리코사이드 또는 C1-C8의 카복실산의 추가 작용기에 추가로 연결되고;
R16은 H, OH, R14 또는 1개 내지 4개의 아미노산 단위이며;
R17은 H, 선형 또는 분지형 C1-C8의 알킬; C2-C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬, 복소환식; C3-C8의 아릴, 탄소환식, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 알킬카보닐 또는 C4-C12의 글리코사이드 또는 약제학적 염이다.
또 다른 실시형태에서, 강력한 튜불리신 유사체-결합 분자 접합체의 링커 L은 화학식 --Ww―(Aa)r--Vv―를 갖되; --W--는 스트레처 단위이고; w는 0 또는 1이며; 각각의 --Aa--는 독립적으로 아미노산 단위이고; r은 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이며; --V--는 스페이서 단위이며; v는 0, 1 또는 2이며, 스트레처 단위 W는 자기-희생 스페이서(self-immolative spacer), 펩티딜 단위, 하이드라존 결합, 다이설파이드 또는 티오에터 결합을 독립적으로 함유할 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 세포 결합 분자 T는 현재 공지되어 있거나 공지된 세포 결합 리간드, 예컨대, 펩타이드 및 비-펩타이드의 임의의 부류일 수 있다. 일반적으로, 결합 분자 T는 항체; 단일 쇄 항체; 표적 세포에 결합하는 항체 단편; 단클론성 항체; 단일 쇄 단클론성 항체; 또는 표적 세포에 결합하는 단클론성 항체 단편; 키메라 항체; 표적 세포에 결합하는 키메라 항체 단편; 도메인 항체; 표적 세포에 결합하는 도메인 항체 단편; 항체를 모방하는 어드넥틴(adnectin); DARPin; 림포카인; 호르몬; 비타민; 성장 인자; 집락 자극 인자; 또는 영양분-수송 분자(트랜스페린); 알부민, 중합체, 덴드리머, 리포솜, 나노입자, 소낭(vesicle), 또는 (바이러스성) 캡시드 상에 부착된 결합 펩타이드 또는 단백질 또는 항체 또는 소분자이다. 바람직하게는 결합 분자 T는 단클론성 항체이다.
추가의 또 다른 양상에서, 화학식 (I)의 조성물 및 이의 하위 화학식 (II) 내지 (VII)은 인간 또는 동물에서 암, 자가면역 질환 또는 감염성 질환의 치료를 위해서 사용된다.
도 1은 튜불리신 유사체의 Tuv 성분의 일반적인 합성을 도시한 도면.
도 2는 튜불리신 성분의 합성을 도시한 도면.
도 3은 튜불리신 성분의 합성을 도시한 도면.
도 4는 튜불리신 유사체의 성분의 합성을 도시한 도면.
도 5는 튜불리신 유사체의 성분의 합성을 도시한 도면.
도 6은 튜불리신 유사체의 성분의 합성을 도시한 도면.
도 7은 튜불리신 유사체의 성분의 합성을 도시한 도면.
도 8은 접합체 링커를 함유하는 튜불리신 유사체의 성분의 합성을 도시한 도면.
도 9는 튜불리신 유사체의 성분의 합성 및 항체에 대한 이의 접합을 도시한 도면.
도 10은 링커의 성분의 합성을 도시한 도면.
도 11은 링커를 함유한 튜불리신 유사체의 합성 및 항체에 대한 이의 접합을 도시한 도면.
도 12는 링커를 함유한 튜불리신 유사체의 합성 및 항체에 대한 이의 접합을 도시한 도면.
도 13은 링커를 함유한 튜불리신 유사체의 합성 및 항체에 대한 이의 접합을 도시한 도면.
도 14는 링커를 함유한 튜불리신 유사체의 합성 및 항체에 대한 이의 접합을 도시한 도면.
도 15는 링커의 성분 및 링커를 함유하는 튜불리신 유사체에 대한 이의 링키지의 합성 및 항체에 대한 접합을 도시한 도면.
도 16은 Tup 및 Tuv 유사체의 성분의 합성을 도시한 도면.
도 17은 Tuv 유사체의 성분의 합성을 도시한 도면.
도 18은 링커를 함유하는 튜불리신 유사체의 합성 및 항체에 대한 이의 접합을 도시한 도면.
도 19는 링커를 함유하는 튜불리신 유사체의 합성 및 항체에 대한 이의 접합을 도시한 도면.
도 20은 링커를 함유하는 튜불리신 유사체의 합성 및 항체에 대한 이의 접합을 도시한 도면.
도 21은 링커를 함유하는 튜불리신 유사체의 합성 및 항체에 대한 이의 접합을 도시한 도면.
도 22는 링커를 함유하는 튜불리신 유사체의 합성 및 항체에 대한 이의 접합을 도시한 도면.
도 23은 접합체 C-166a, C-719, C-720, C-723 및 T-DM1의 경우 6㎎/㎏의 용량으로 i.v.로 1회 주사하여 인간 위 종양 N87 세포 모델을 사용하여 접합체 화합물 C-166a, C-719, C-720 및 C-723와 T-DM1의 항종양 효과를 비교한 것을 도시한 도면. 본 명세서에서 시험된 4개의 접합체는 T-DM1보다 더 양호한 항종양 활성을 나타내었다. 화합물 C-166a, C-719, C-720 및 C-723의 군에서 6마리 동물 중 6마리 모두는 제22일에서 제36일까지 측정 가능한 종양이 완벽하게 존재하지 않았고, 이들 모두는 48일에 걸쳐서 종양 성장을 저해할 수 있었다. 이에 반해서, 6mg/㎏의 용량의 T-DM1은 종양을 제거할 수 없었고, 31일 동안 종양 성장을 단지 저해하였다.
도 24(a) 및 도 24(b)는 12일 동안 75mg/㎏(도 24a) 및 150mg/㎏(도 24b)의 용량으로 처리한 마우스의 체중(BW) 변화를 관찰한 ADC 접합체 T-DM1, C-166a, C-719, C-720 및 C-723에 대한 급성 독성 연구를 도시한 도면. 체중 변화는 접합체 C-723이 T-DM1보다 두 용량 모두에서 더 독성이 있고; 접합체 C-720은 75mg/㎏의 용량에서는 T-DM1과 독성이 유사하였고, 150mg/㎏의 용량에서는 T-DM1보다 독성이 적었고; 접합체 C-166a 및 접합체 C-719 둘 다는 시험된 용량 모두에서 T-DM1보다 독성이 훨씬 더 낮았다는 것을 입증하였다.
도 25는 제5일에 PBS 완충액과 비교하여 75mg/㎏의 접합체 화합물 T-DM1, C-166a, C-719, C-720 및 C-723으로 처리된 마우스의 간 병원체를 도시한 도면. 사진을 40배 확대하였다. 사진이 나타내는 바와 같이, (1). T-DM1 군(도 25(a)), T-DM1 75mg/㎏ 군의 병리는 간세포 종창 및 다초점 괴사를 나타내었다. 소엽 구조는 명확하지 않았다. 중앙 세정맥은 부은 간세포, 적혈구를 함유하였고, 붉은 색이 남아 있었다. 간세포의 핵은 크기 및 얼룩이 상이하였다. 간세포는 경계가 흐릿하였고, 부피가 증가하였고, 호산구성으로 염색된 혈장이 나타났다. 간 핵의 일부가 사라졌다. 명백한 증식 단계가 인지되었다; (2) C-723군(도 25(b))에서, 산재된 단세포 괴사 및 수분 변성이 주요 병리학적 거동이다. 부종 부위에서, 간소엽 구조가 소실되고, 중심세정맥에 다수의 적혈구가 밀집된다. 간세포는 비대하였고, 경계가 불명확하며, 호산구성 염색이 존재한다. 핵은 크기 및 색상이 다양하다. 경미한 증식이 관찰된다 (3). C-720 군의 병리학(도 25(c))은 소엽의 중심 정맥의 삼출물, 간세포의 판 배열의 장애 및 간세포 비대를 나타낸다. 쿠퍼 세포의 비대가 때때로 관찰되었다. (4). C-719((도 25(e)) 및 C-166a(도 25(f)) 군 둘 다에서, 간 소엽 구조는 약간 무질서하였다. 간 부비동이 보였다. 담관의 벽에서 염증 세포 침윤이 관찰되었다. 쿠퍼 세포의 비대는 드물었다. 간세포는 약간 비대하였다. 현미경적 구조는 대조군 PBS군에서 관찰된 것과 유사하다(도 25(g)).
도 26은 nanoDSF 기술을 통한 조성물 S7, S8, S9, S10, S11 및 S12의 단백질 용융 온도(Tm) 측정을 도시한 도면. 결과는 조성물 S10이 나머지 조성물보다 더 안정적이었고, 조성물 S7, S8, S9, S11 및 S12 사이의 열적 안정성은 거의 차이가 없음을 입증하였다.
도 27은 nanoDSF 기술을 통한 조성물 S7, S8, S9, S10, S11 및 S12의 응집 개시(Tagg onset)의 측정을 도시한 도면. 결과는 조성물 S10이 나머지 조성물보다 더 안정적이었고, 조성물 S7, S8, S9 및 S11 사이의 열적 안정성은 거의 차이가 없었고, S12는 시험된 나머지 조성물보다 약간 덜 안정적임을 입증하였다.
도 28은 nanoDSF 기술을 통한 조성물 S12, S18 및 S24의 단백질 용융 온도(Tm) 측정을 도시한 도면. 결과는 조성물 S24가 다른 두 조성물보다 가장 안정적이고, 조성물 S12가 다른 두 조성물보다 가장 불량하게 안정적임을 입증하였다.
도 27은 nanoDSF 기술을 통한 조성물 S12, S18, 및 S24의 응집 개시(Tagg onset)의 측정을 도시한 도면. 결과는 조성물 S24가 다른 두 조성물보다 가장 안정적이고, 조성물 S12가 다른 두 조성물보다 가장 불량하게 안정적임을 입증하였다.
정의
"알킬"은 지방족 탄화수소기 또는 탄소 원자로부터의 1개 또는 2개의 수소 원자의 제거에 의해서 알칸으로부터 유래된 1가 기를 지칭한다. 이것은 쇄 내에 C1-C8(1 내지 8개의 탄소 원자)을 갖는 선형 또는 분지형일 수 있다. "분지형"은 메틸, 에틸 또는 프로필과 같은 하나 이상의 저급 C 알킬기가 선형 알킬 쇄에 부착된 것을 의미한다. 예시적인 알킬기는 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, t-부틸, n-펜틸, 3-펜틸, 옥틸, 노닐, 데실, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 2,2-다이메틸부틸, 2,3-다이메틸부틸, 2,2-다이메틸펜틸, 2,3-다이메틸펜틸, 3,3-다이메틸펜틸, 2,3,4-트라이메틸펜틸, 3-메틸-헥실, 2,2-다이메틸헥실, 2,4-다이메틸헥실, 2,5-다이메틸헥실, 3,5-다이메틸헥실, 2,4-다이메틸펜틸, 2-메틸헵틸, 3-메틸헵틸, n-헵틸, 아이소헵틸, n-옥틸 및 아이소옥틸을 포함한다. C1-C8 알킬기는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 기로 치환되거나 또는 비치환될 수 있고; 여기서 각각의 R'는 -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"할로겐"은 플루오린, 염소, 브로민 또는 아이오딘 원자; 바람직하게는 플루오린 및 염소 원자를 지칭한다.
"헤테로알킬"은 1 내지 4개의 탄소 원자가 O, S 및 N으로 이루어진 군으로부터의 헤테로원자로 독립적으로 대체된 C2-C8 알킬을 지칭한다.
"탄소환"은 모노사이클로서 3 내지 8개의 탄소 원자 또는 바이사이클로서 7 내지 13개의 탄소 원자를 갖는 포화 또는 불포화 고리를 지칭한다. 단환식 탄소환은 3 내지 6개의 고리 원자, 보다 전형적으로 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는다. 이환식 탄소환은 바이사이클 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로서 배열된 7 내지 12개의 고리 원자, 또는 바이사이클 [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로서 배열된 9 또는 10개의 고리 원자를 갖는다. 대표적인 C3-C8 탄소환은 -사이클로프로필, -사이클로부틸, -사이클로펜틸, -사이클로펜타다이엔일, -사이클로헥실, -사이클로헥센일, -1,3-사이클로헥사다이엔일, -1,4-사이클로헥사다이엔일, -사이클로헵틸, -1,3-사이클로헵타다이엔일, -1,3,5-사이클로헵타트라이엔일, -사이클로옥틸 및 -사이클로옥타다이엔일을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
"C3-C8 탄소환"은 3-, 4-, 5-, 6-, 7- 또는 8-원의 포화 또는 불포화 비방향족 탄소환식 고리를 지칭한다. C3-C8 탄소환기는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -S(O)R',-S(O)2R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 기로 치환되거나 또는 비치환될 수 있고; 여기서 각각의 R'는 -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"알켄일"은 쇄 내에 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형일 수 있는 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 지방족 탄화수소기를 지칭한다. 예시적인 알켄일기는 에텐일, 프로펜일, n-부텐일, i-부텐일, 3-메틸부트-2-엔일, n-펜텐일, 헥실렌일, 헵텐일, 옥텐일을 포함한다.
"알킨일"은 쇄 내에 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형일 수 있는 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 지방족 탄화수소기를 지칭한다. 예시적인 알킨일기는 에틴일, 프로핀일, n-부틴일, 2-부틴일, 3-메틸부틴일, 5-펜틴일, n-펜틴일, 헥실린일, 헵틴일 및 옥틴일을 포함한다.
"알킬렌"은 1 내지 18개의 탄소 원자를 갖는 포화, 분지형 또는 직쇄형 또는 환식 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 모 알칸의 동일하거나 상이한 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유래된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알킬렌 라디칼은 메틸렌(-CH2-), 1,2-에틸(-CH2CH2-), 1,3-프로필(-CH2CH2CH2-), 1,4-부틸(-CH2CH2CH2CH2-) 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
"알켄일렌"은 2 내지 18개의 탄소 원자의 불포화, 분지형 또는 직쇄형 또는 환식 탄화수소 라디칼을 지칭하며, 모 알켄의 동일하거나 상이한 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유래된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알켄일렌 라디칼은 1,2-에틸렌(-CH=CH-)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
"알킨일렌"은 2 내지 18개의 탄소 원자의 불포화, 분지형 또는 직쇄형 또는 환식 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 모 알킨의 동일하거나 상이한 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유래된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알킨일렌 라디칼은 아세틸렌, 프로파길 및 4-펜틴일을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
"아릴" 또는 "Ar"은 3 내지 14개의 탄소 원자, 바람직하게는 6 내지 10개의 탄소 원자를 포함하는, 하나 또는 수 개의 고리로 구성된 방향족 또는 헤테로 방향족기를 지칭한다. "헤테로 방향족기"의 용어는 방향족기 상의 하나 또는 수 개의 탄소를 지칭하고, 바람직하게는 1, 2, 3 또는 4개의 탄소 원자가 O, N, Si, Se, P 또는 S로, 바람직하게는 O, S 및 N으로 대체된다. 용어 아릴 또는 Ar은 또한 하나 또는 수 개의 H 원자는 -R', -할로겐, -OR', 또는 -SR', -NR'R", -N=NR', -N=R', -NR'R", -NO2, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2OR', -OS(O)2OR', -PR'R", -P(O)R'R", -P(OR')(OR"), -P(O)(OR')(OR") 또는 -OP(O)(OR')(OR")에 의해서 독립적으로 대체된 방향족 기를 지칭하고, 여기서 R', R"는 독립적으로 H, 알킬, 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬, 아릴, 아릴알킬, 카보닐, 또는 약제학적 염이다.
"헤테로사이클"은 1 내지 4개의 고리 탄소 원자가 O, N, S, Se, B, Si 및 P의 군으로부터의 헤테로원자로 독립적으로 대체된 고리 시스템을 지칭한다. 바람직한 헤테로원자는 O, N 및 S이다. 헤테로사이클은 또한 문헌[The Handbook of Chemistry and Physics, 78th Edition, CRC Press, Inc., 1997-1998, p. 225 to 226]에 기술되어 있고, 이의 개시내용은 참고로 포함된다. 바람직한 비방향족 헤테로환식은 에폭시, 아지리딘일, 티란일, 피롤리딘일, 피라졸리딘일, 이미다졸리딘일, 옥시란일, 테트라하이드로퓨란일, 다이옥솔란일, 테트라하이드로피란일, 다이옥산일, 다이옥솔란일, 피페리딘일, 피페라진일, 모폴린일, 피란일, 이미다졸린일, 피롤린일, 피라졸린일, 티아졸리딘일, 테트라하이드로티오피란일, 다이티안일, 티오모폴린일, 다이하이드로피란일, 테트라하이드로피란일, 다이하이드로피란일, 테트라하이드로피리딜, 다이하이드로피리딜, 테트라하이드로피리미딘일, 다이하이드로티오피란일, 아제판일, 뿐만 아니라 페닐기와의 축합으로부터 생성된 융합 시스템을 포함한다.
용어 "헤테로아릴" 또는 방향족 헤테로사이클은 3 내지 14, 바람직하게는 5 내지 10원의 방향족 헤테로, 모노-, 이환식 또는 다환식 고리를 지칭한다. 예는 피롤릴, 피리딜, 피라졸릴, 티엔일, 피리미딘일, 피라진일, 테트라졸릴, 인돌릴, 퀴놀린일, 퓨린일, 이미다졸릴, 티엔일, 티아졸릴, 벤조티아졸릴, 퓨란일, 벤조퓨란일, 1,2,4-티아디아졸릴, 아이소티아졸릴, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 아이소퀴놀릴, 벤조티엔일, 아이소벤조퓨릴, 피라졸릴, 카바졸릴, 벤즈이미다졸릴, 아이속사졸릴, 피리딜-N-옥사이드, 뿐만 아니라 페닐기와의 축합으로부터 생성된 융합 시스템을 포함한다.
"알킬", "사이클로알킬", "알켄일", "알킨일", "아릴", "헤테로아릴", "헤테로환식" 등은 또한 2개의 수소 원자의 제거에 의해서 형성된 상응하는 "알킬렌", "사이클로알킬렌", "알켄일렌", "알킨일렌", "아릴렌", "헤테로아릴렌", "헤테로사이클렌"을 지칭한다.
"아릴알킬"은 탄소 원자, 전형적으로 말단 또는 sp3 탄소 원자에 결합된 수소 원자 중 하나가 아릴 라디칼로 대체된 비환식 알킬 라디칼을 지칭한다. 전형적인 아릴알킬기는 벤질, 2-페닐에탄-1-일, 2-페닐에텐-1-일, 나프틸메틸, 2-나프틸에탄-1-일, 2-나프틸에텐-1-일, 나프토벤질, 2-나프토페닐에탄-1-일 등을 포함한다.
"헤테로아릴알킬"은 탄소 원자, 전형적으로 말단 또는 sp3 탄소 원자에 결합된 수소 원자 중 하나가 헤테로아릴 라디칼로 대체된 비환식 알킬 라디칼을 지칭한다. 헤테로아릴알킬기의 예는 2-벤즈이미다졸릴메틸, 2-퓨릴에틸이다.
"하이드록실 보호기"의 예는 메톡시메틸 에터, 2-메톡시에톡시메틸 에터, 테트라하이드로피란일 에터, 벤질 에터, p-메톡시벤질 에터, 트라이메틸실릴 에터, 트라이에틸실릴 에터, 트라이아이소프로필실릴 에터, t-부틸다이메틸실릴 에터, 트라이페닐메틸실릴 에터, 아세테이트 에스터, 치환된 아세테이트 에스터, 피발로에이트, 벤조에이트, 메탄설폰에이트 및 p-톨루엔설폰에이트를 포함한다.
"이탈기"는 또 다른 작용기에 의해서 치환될 수 있는 작용기를 지칭한다. 이러한 이탈기는 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 예는 할라이드(예를 들어, 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드), 메탄설폰일(메실), p-톨루엔설폰일(토실), 트라이플루오로메틸설폰일(트라이플레이트) 및 트라이플루오로메틸설폰에이트를 포함한다. 바람직한 이탈기는 나이트로페놀; N-하이드록시석신이미드(NHS); 페놀; 다이나이트로페놀; 펜타플루오로페놀; 테트라플루오로페놀; 다이플루오로페놀; 모노플루오로페놀; 펜타클로로페놀; 트라이플레이트; 이미다졸; 다이클로로페놀; 테트라클로로페놀; 1-하이드록시벤조트라이아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐아이속사졸륨-3'-설폰에이트, 그 자체에 의해서 형성되거나 또는 다른 무수물과 함께 형성된 무수물, 예를 들어, 아세틸 무수물, 폼일 무수물; 또는 펩타이드 커플링 반응 또는 미츠노부 반응을 위한 축합 시약을 사용하여 생성된 중간체 분자로부터 선택된다.
하기 약어가 본 명세서에서 사용될 수 있고, 제시된 정의를 갖는다: Boc, tert-부톡시 카보닐; BroP, 브로모트리스피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트; CDI, 1,1'-카보닐다이이미다졸; DCC, 다이사이클로헥실카보다이이미드; DCE, 다이클로로에탄; DCM, 다이클로로메탄; DEAD, 다이에틸아조다이카복실레이트; DIAD, 다이아이소프로필아조다이카복실레이트; DIBAL-H, 다이아이소부틸-알루미늄 하이드라이드; DIPEA 또는 DEA, 다이아이소프로필에틸아민; DEPC, 다이에틸 포스포로사이아나이데이트; DMA, N,N-다이메틸 아세트아마이드; DMAP, 4-(N,N-다이메틸아미노)피리딘; DMF, N,N-다이메틸폼아마이드; DMSO, 다이메틸설폭사이드; DTPA, 다이에틸렌트라이아민펜타아세트산; DTT, 다이티오트레이톨; EDC, 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카보다이이미드 염산염; ESI-MS, 전자분무 질량분석; EtOAc, 에틸 아세테이트; Fmoc, N-(9-플루오렌일메톡시카보닐); HATU, O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트; HOBt, 1-하이드록시벤조트라이아졸; HPLC, 고압 액체 크로마토그래피; NHS, N-하이드록시석신이미드; MeCN,.아세토나이트릴; MeOH, 메탄올; MMP, 4-메틸모폴린; PAB, p-아미노벤질; PBS, 인산염-완충 염수(pH 7.0 내지 7.5); Ph, 페닐; phe, L-페닐알라닌; PyBrop, 브로모-트리스-피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트; PEG, 폴리에틸렌 글리콜; SEC, 크기 배제 크로마토그래피; TCEP, 트리스(2-카복시에틸)포스핀; TFA, 트라이플루오로아세트산; THF, 테트라하이드로퓨란; Val, 발린; TLC, 박막 크로마토그래피; UV, 자외선.
"아미노산(들)"은 자연 및/또는 비자연 아미노산, 바람직하게는 알파-아미노산일 수 있다. 자연 아미노산은 유전자 암호에 의해서 암호화된 것이며, 이것은 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파트산, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 아이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 타이로신. 트립토판 및 발린이다. 비자연 아미노산은 단백질생성 아미노산의 형태로 유래된다. 예는 하이드록시프롤린, 란티오닌, 2-아미노아이소부티르산, 데하이드로알라닌, 감마-아미노부티르산(신경 전달 물질), 오르니틴, 시트룰린, 베타 알라닌 (3-아미노프로판산), 감마-카복시글루타메이트, 셀레노시스테인(대부분의 진핵 생물뿐만 아니라 많은 비진핵 생물에 존재하지만, DNA에 의해 직접 암호화되지는 않음) 피롤리신(일부 고등어와 하나의 박테리아에서만 발견됨) N-폼일메티오닌(종종 박테리아, 미토콘드리아 및 엽록체 내의 단백질의 초기 아미노산임), 5-하이드록시트립토판, L-다이하이드록시페닐알라닌, 트라이아이오도타이로닌, L-3,4-다이하이드록시페닐알라닌(DOPA) 및 O-포스포세린을 포함한다. 용어 아미노산은 또한 아미노산 유사체 및 모방체를 포함한다. 유사체는 R기가 자연 아미노산에서 발견되는 것이 아닌 것을 제외하고는, 자연 아미노산의 동일한 일반식 H2N(R)CHCO2H 구조를 갖는 화합물이다. 유사체의 예는 호모세린, 노르류신, 3-아미노프로판산, 4-아미노부탄산, 5-아미노펜탄산, 6-아미노헥산산, 7-아미노헵탄산, 메티오닌-설폭사이드 및 메티오닌 메틸 설포늄을 포함한다. 바람직하게는, 아미노산 모방체는 알파-아미노산의 일반적인 화학 구조식과 상이한 구조식을 갖지만 그것과 유사한 방식으로 작용하는 화합물이다. 용어 "비자연 아미노산"은 "D" 입체화학 형태를 나타내도록 의도되며, 자연 아미노산은 "L"형이다. 1 내지 8개의 아미노산이 본 특허 출원에서 사용되는 경우, 아미노산 서열은 바람직하게는 프로테아제에 대한 절단 인식 서열이다. 다수의 절단 인식 서열이 관련 기술 분야에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Matayoshi et al., Science 247: 954 (1990); Dunn et al., Meth. Enzymol. 241: 254 (1994); Seidah et al., Meth. Enzymol. 244: 175(1994); Thornberry, Meth. Enzymol. 244: 615(1994); Weber et al., Meth. Enzymol. 244: 595(1994); Smith et al., Meth. Enzymol. 244: 412 (1994); 및 Bouvier et al., Meth. Enzymol. 248: 614 (1995)] 참고; 이들의 개시 내용은 본 명세서에 참고로 포함됨). 특히, 그러한 서열은 Val-Cit, Ala-Val, Ala-Ala, Val-Val, Val-Ala-Val, Lys-Lys, Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Cit-Cit, Val-Lys, Ala-Ala-Asn, Asp-Lys, Asp-Glu, Glu-Lys, Lys, Cit, Ser 및 Glu로 이루어진 군으로부터 선택된다.
"글리코사이드"는 당기가 글리코사이드 결합을 통해서 또 다른 기에 애노머 탄소를 통해서 결합된 분자이다. 글리코사이드는 O-(O-글리코사이드), N-(글리코실아민), S-(티오글리코사이드), 또는 C-(C-글리코사이드) 글리코사이드 결합에 의해서 연결될 수 있다. 이의 코어 실험식은 Cm(H2O)n(식 중, m은 n과 상이할 수 있고, m 및 n은 36 미만임)이다. 본 명세서에서 글리코사이드는 글루코스(덱스트로스), 프럭토스(레불로스) 알로스, 알트로스, 만노스, 글로스, 아이오도스, 갈락토스, 탈로스, 갈락토사민, 글루코사민, 시알산, N-아세틸글루코사민, 설포퀴노보스(6-데옥시-6-설포-D-글루코피라노스), 리보스, 아라비노스, 자일로스, 릭소스, 솔비톨, 만니톨, 수크로스, 락토스, 말토스, 트레할로스, 말토덱스트린, 라피노스, 글루코쿠론산(글루쿠로나이드) 및 스타키오스를 포함한다. 이것은 D형 또는 L형, 5 원자 환식 퓨라노즈 형태, 6 원자 환식 피라노즈 형태, 또는 비환식 형태, α-이성질체(하워쓰(Haworth) 투영의 탄소 원자의 평면 아래의 애노머 탄소의 -OH) 또는 β-이성질체(하워쓰 투영면 위의 애노머 탄소의 -OH)일 수 있다. 본 명세서에서 단당류, 이당류, 폴리올 또는 3 내지 6개의 당 단위를 함유하는 올리고당이 사용된다.
용어 "항체"는 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 전장 면역글로불린 분자 또는 전장 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉, 관심대상 표적의 항원에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자 또는 이의 부분을 지칭하고, 이러한 표적은 암 세포 또는 자가면역 질환과 연관된 자가면역 항체를 생산하는 세포를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 개시된 면역글로불린은 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 서브클래스일 수 있다. 면역글로불린은 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 그러나, 바람직하게는, 면역글로불린은 인간, 뮤린 또는 토끼 기원이다. 본 발명에 유용한 항체는 바람직하게는 단클론성이고, 다클론성, 단클론성, 이중특이적 인간, 인간화된 또는 키메라 항체, 단일 쇄 항체, Fv, Fab 단편, F(ab') 단편, F(ab')2 단편, Fab 발현 라이브러리에 의해서 생산된 단편, 항-이디오타입(항-Id) 항체, CDR 및 이들의 임의의 에피토프-결합 단편(이들은 암세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역특이적으로 결합함)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
"광학 이성질체"로서도 공지된 "거울상이성질체"는 왼손과 오른손이 하나의 축을 따라서 반대인 것을 제외하고 동일한 것처럼(손은 방향전환에 의해서 단순히 동일하게 보이게 될 수 없음), 중첩되지 않는(동일하지 않은) 서로의 거울상인 2개의 입체이성질체 중 하나이다. 화합물 내의 단일 카이럴 원자 또는 유사한 구조 특징부는, 화합물이 서로의 거울상 각각에 중첩하지 않는 2개의 가능한 구조를 갖도록 한다. 주어진 화합물 내의 다수의 카이럴 특징부의 존재는, 일부 완벽한-거울-상 쌍이 존재할 수 있지만, 가능한 기하 형태의 수를 증가시킨다. 순수한 거울상이성질체(enantiopure) 화합물은 검출 한계 내에서 단지 하나의 카이럴성의 분자를 갖는 샘플을 지칭한다. 대칭 환경으로 존재하는 경우, 거울상이성질체는 동일한 양이지만, 반대 방향으로 평면 편광(+/-)을 회전시키는 능력을 제외하고는, 동일한 화학 특성 및 물성을 갖는다(편광은 비대칭 매질이라고 간주될 수 있음). 이것은 때로는 이러한 이유로 인해서 광학 이성질체라고 불린다. 동일한 부의 광학 활성 이성질체 및 이의 거울상 이성질체의 혼합물은 라세믹이라고 지칭되고, 0의 순 회전(zero net rotation)의 편면 편광을 갖는데, 그 이유는 각각의 (+) 형태의 양회전이 (-) 형태의 음회전에 의해서 정확히 상쇄되기 때문이다. 거울상이성질체 구성원은 보통 다른 거울상이성질체 물질과 상이한 화학 반응을 갖는다. 다수의 생물 분자는 거울상이성질체이기 때문에, 생물 유기체에 대한 두 거울상이성질체의 효과가 때로는 뚜렷하게 상이하다. 약물에서, 예를 들어, 보통 약물 거울상이성질체 중 단지 하나가 목적하는 생리학적 효과에 대한 책임이 있는 반면, 나머지 거울상이성질체는 덜 활성이거나, 불활성이거나 때로는 심지어는 부작용을 나타낸다. 이러한 발견으로 인해서, 약물학적 효능을 향상시키고, 때로는 일부 부작용을 제거하기 위해서 단지 하나의 거울상이성질체("순수한 거울상이성질체")로 구성된 약물을 개발할 수 있다.
동위원소는 중성자수가 상이한 특정 화학 원소의 변이체이다. 주어진 원소의 모든 동위원소는 각각의 원자 내에 동일한 양성자수를 갖는다. 각각의 원자 번호는 구체적인 원소를 식별하지만, 동위원소를 식별하지 못하며; 주어진 원소의 원자는 중성자의 수에서 다양한 범위를 가질 수 있다. 핵 내에서 핵자(nucleon)(양성자 및 중성자 둘 다)의 수는 원자의 질량수이고, 주어진 원소의 각각의 동위원소는 상이한 질량수를 갖는다. 예를 들어, 탄소-12, 탄소-13 및 탄소-14는 각각 12, 13 및 14의 질량수를 갖는 탄소 원소의 3개의 동위원소이다. 탄소의 원자수는 6인데, 이것은 모든 탄소 원자가 6개의 양성자를 갖는다는 것을 의미하여, 이들 동위원소의 중성자수는 각각 6, 7 및 8이다. 수소 원자는 경수소(1H), 중수소(2H) 및 삼중수소(3H)의 3개의 동위원소를 가지며, 여기서 중수소는 경수소의 질량의 2배이고, 삼중수소는 경수소의 질량의 3배이다. 동위원소 치환을 사용하여 화학 반응의 기전 및 동적 동위원소 효과를 결정할 수 있다. 동위원소 치환을 사용하여 (예를 들어, 대사 효소, 예컨대, 사이토크롬 P450 또는 글루쿠로노실트랜스퍼라제 효소에 의한) 신체 내에서 물질의 대사 변화뿐만 아니라 흡수 및 분포의 기전을 통해서 투여 후 신체가 특정 제노바이오틱/화학물질에 영향을 미치는 방법 및 약물의 대사산물의 효과 및 경로를 연구할 수 있다. 이러한 연구를 약동학(PK)이라고 부른다. 동위원소 치환을 사용하여 약물의 생화학적 효과 및 생리학적 효과를 연구할 수 있다. 이러한 효과는 동물(인간 포함), 미생물 또는 유기체의 조합(예를 들어, 감염) 내에서 메니페스트된(manifested) 것을 포함할 수 있다. 이러한 연구는 약력학(PD)이라고 부른다. 이러한 효과는 동물(인간 포함), 미생물 또는 유기체의 조합(예를 들어, 감염) 내에서 메니페스트된 것을 포함할 수 있다. 둘 다는 함께 약물의 투여, 이익 및 부작용에 영향을 미친다. 동위원소는 안정적인 원소(비-방사성) 또는 불안정적인 원소를 함유할 수 있다. 약물의 동위원소 치환은 기원 약물의 상이한 치료 효능을 가질 수 있다.
"약제학적으로" 또는 "약제학적으로 허용 가능한"은 동물, 또는 인간에게 적절하게 투여되는 경우, 유해한, 알레르기성 또는 다른 부적절한 반응을 일으키지 않는 분자 실체 및 조성물을 지칭한다.
"약제학적으로 허용 가능한 용매화물" 또는 "용매화물"은 하나 이상의 용매 분자 및 개시된 화합물의 회합을 지칭한다. 약제학적으로 허용 가능한 용매화물을 형성하는 용매의 예는 물, 아이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸 아세테이트, 아세트산 및 에탄올아민을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
"약제학적으로 허용 가능한 부형제"는 임의의 담체, 희석제, 보조제 또는 비히클, 예컨대, 보존제 또는 항산화제, 충전제, 붕해제, 습윤제, 유화제, 현탁제, 용매, 분산 매질, 코팅제, 항박테리아 및 항진균제, 등장제 및 흡수지연제 등을 포함한다. 약제학적 활성 물질을 위한 그러한 매질 및 작용제의 사용은 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 작용제가 활성 성분과 비혼화성인 경우를 제외하고, 치료 조성물에서의 그의 사용이 고려된다. 보충 활성 성분은 또한 적합한 치료 조합물로서 조성물에 혼입될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "약제학적 염"은 모 화합물이 그의 산 또는 염기염을 제조함으로써 변형된 개시된 화합물의 유도체를 지칭한다. 약제학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어, 비독성 무기산 또는 유기산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 무독성 염 또는 4차 암모늄 염을 포함한다. 예를 들어, 그러한 통상적인 무독성 염은 무기산, 예컨대, 염산, 브로민산, 황산, 설팜산, 인산, 질산 등; 유기산, 예컨대, 아세트산, 프로피온산, 석신산, 타타르산, 시트르산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산, 글루쿠론산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 톨루엔설폰산, 옥살산, 퓨마르산, 말레산, 락트산 등으로부터 제조된 염을 포함한다. 추가의 부가염은 암모늄염, 예컨대, 트로메타민, 메글루민, 에포라민 등, 금속염, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 아연 또는 마그네슘을 포함한다.
본 발명의 약제학적 염은 통상적인 화학적 방법에 의해서 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산성 또는 염기성 형태를 물 또는 유기 용매 또는 이들 둘의 혼합물 중에서 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 비수성 매질, 예컨대, 에터, 에틸 아세테이트, 에탄올, 아이소프로판올 또는 아세토나이트릴이 바람직하다. 적합한 염의 목록은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418]에서 발견되며, 이의 개시내용은 참고로 포함된다.
"투여하는" 또는 "투여"는 대상체에게 약제학적 약물 또는 기타 작용제를 전송, 전달, 도입 또는 수송하는 임의의 모드를 지칭한다. 이러한 모드는 경구 투여, 국소 접촉, 정맥내, 복강내, 근육내, 병변내, 비강내, 피하 또는 척추강내 투여를 포함한다. 작용제의 투여 시 장치 또는 장비를 사용하는 것이 또한 본 발명에서 고려된다. 이러한 장치는 능동적 또는 수동적 수송을 이용할 수 있고, 느린-방출 또는 신속-방출 전달 장치일 수 있다.
암의 맥락에서, 용어 "치료하는"은 종양 세포 또는 암세포의 성장의 예방, 종양 세포 또는 암세포의 복제 예방, 전체 종양 부하의 경감 및 질환과 연관된 하나 이상의 증상의 개선 중 임의의 것 또는 모두를 포함한다.
자가면역 질환의 맥락에서, 용어 "치료하는"은 자가면역 항체를 생산할 수 있는 세포를 포함하지만 이들로 제한되지 않은 자가면역 질환 상태와 연관된 세포의 복제 예방, 자가면역 항체 부하의 경감 및 자가면역 질환의 하나 이상의 증상의 개선 중 임의의 것 또는 모두를 포함한다.
감염 질환의 맥락에서, 용어 "치료하는"은 감염 질환을 유발하는 병원체의 성장, 증식 또는 복제의 예방 및 감염 질환의 하나 이상의 증상의 개선 중 임의의 것 또는 모두를 포함한다.
"포유동물" 또는 "동물"의 예는 인간, 래트, 마우스, 기니피그, 원숭이, 돼지, 염소, 소, 말, 개, 고양이 새 및 가금류를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
튜불리신 유사체와 세포-결합 리간드의 접합체를 함유하는 조성물
상기에 언급된 바와 같이 본 발명은 하기 조성을 갖는 동결건조용 액체 제형 또는 제형화된 동결건조된 분말 또는 동결건조 고체로부터의 재구성된 용액이 제공된다: 제형의 주성분으로서 0.01% 내지 99중량%의 하기 화학식 (I)의 튜불리신 유사체 접합체; 0.0% 내지 20.0%의 1종 이상의 폴리올; 0.0% 내지 2.0%의 1종 이상의 계면활성제; 0.0% 내지 5.0%의 1종 이상의 보존제; 0.0% 내지 30%의 1종 이상의 아미노산; 0.0% 내지 5.0%의 1종 이상의 항산화제; 0.0% 내지 0.3%의 1종 이상의 금속 킬레이팅제; 0.0% 내지 30.0%의, 제형의 pH를 pH 4.5 내지 8.5로 조정하기 위한 1종 이상의 완충제 염; 및 0.0% 내지 30.0%의, 환자에게 투여하기 위해서 재구성되는 경우 삼투압을 약 250 내지 350mOSm으로 조정하기 위한 1종 이상의 등장제.
화학식 (I)의 튜불리신 유사체 접합체 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체는 하기와 같이 도시된다:
Figure pct00004
식 중, T는 표적화 또는 결합 리간드이고; L은 해방 가능한 링커이며;
Figure pct00005
는 L이 독립적으로 괄호 안의 원자에 연결되는 링키지 결합이고; n은 1 내지 20이며, m은 1 내지 10이고;
괄호 안은 강력한 튜불리신 유사체이되, R1, R2 , R3 및 R4는 독립적으로 선형 또는 분지형 C1-C8의 알킬, 알킬 알코올; C2-C8의 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬 에터, 알킬 카복실레이트, 알킬 아민, 알킬 에스터, 알킬 아마이드; C3-C8의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐이거나; 2개의 R, 즉, R1R2, R3R4, R5R6, 또는 R12R13은 함께 3 내지 7원의 탄소환식, 사이클로알킬, 복소환식, 헤테로사이클로알킬, 방향족 또는 헤테로방향족 고리 시스템을 독립적으로 형성하며; Y는 N 또는 C이며; 또한, R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 존재하지 않을 수 있고;
R5 , R6, R8 및 R10은 H 및 선형 또는 분지형 C1-C4의 알킬 또는 C2-C4의 헤테로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
R7은 H, R14 또는 -R14C(=O)X1R15; -R14X1R15로부터 선택되되; X1은 O, S, S-S, NH 또는 NR14로부터 선택되고;
R9는 H, -O-, -OR14, -OC(=O)R14-, -OC(=O)NHR14-, -OC(=O)NR14R15-, -OC(=O) R14SSR15-, OP(=O)(OR14)- 또는 OR14OP(=O)(OR15)이며;
R11은 H, R14, -R14C(=O)R16, -R14C(=O)X2R16, -R14X2R16, -R14C(=O)X2이되, X2는 -O-, -S-, -NH-, -NHS(O2), -NHS(O), -N(R14)-, -O-R14-, -S-R14-, -S(=O)-R14- 또는 -NHR14-이고;
R12는 H, R14, -O-, -S-, -N-, =N-, =NNH-, -OH, -SH, -NH2, =NH, =NNH2, -NH(R14), -OR14, -C(O)O-, -C(O)OR16-, -COR16, -COOR14-, C(O)NH-, C(O)NH2, C(O)NHR14, -SR14, -S(=O)R14, -P(=O)(OR16)2, -OP(=O)(OR16)2, -CH2OP(=O)(OR16)2, -SO2R16이며;
R13은 선형 또는 분지형 C1-C10의 알킬, 알킬산, 알킬 아마이드, 알킬 아민; 또는 C2-C10의 헤테로알킬; 또는 C3-C10의 Ar이고, Ar은 4개 내지 10개의 탄소 원자, 바람직하게는 4개 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 1개 또는 수개의 고리로 구성된 방향족 또는 헤테로 방향족을 지칭하고, 헤테로 방향족기의 용어는 헤테로 원자에 의해서 대체된 1개 또는 수개의 탄소 원자, 바람직하게는 O, N, Si, Se, P 또는 S, 보다 바람직하게는 O, S, N에 의해서 대체된 1개, 2개 또는 3개의 탄소 원자를 갖는 방향족기를 지칭하고, 용어 아릴 또는 Ar은 또한 방향족기를 지칭하되, 1개 또는 수개의 H 원자는 R17, F, Cl, Br, I, OR16, SR16, NR16R17, N=NR16, N= R16, NR16 R17, NO2, SOR16R17, SO2R16, SO3R16 , OSO3R16, PR16R17, POR16R17, PO2R16R17, OP(O)(OR17)2, OCH2OP(O)(OR17)2, OC(O)OP(O)(OR17)2, PO(OR16)(OR17), OP(O)(OR17)OP(O)(OR17)2, OC(O)R17 또는 OC(O)NHR17에 의해서 독립적으로 대체될 수 있고;
R14 및 R15는 독립적으로 H; 선형 또는 분지형 C1-C8의 알킬; C2-C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬, 복소환식, 탄소환식; C3-C8의 아릴, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐이며;
R14가 2가인 경우, R14는 1개 내지 4개의 아미노산 단위 또는 (CH2CH2O)r(r은 0 내지 12의 범위의 정수임) 또는 C4-C12의 글리코사이드 또는 C1-C8의 카복실산의 추가 작용기에 추가로 연결되고;
R16은 H, OH, R14 또는 1개 내지 4개의 아미노산 단위이며;
R17은 H, 선형 또는 분지형 C1-C8의 알킬; C2-C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬, 복소환식; C3-C8의 아릴, 탄소환식, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 알킬카보닐 또는 C4-C12의 글리코사이드 또는 약제학적 염이고;
R1R3은 R13이 하기 기인 경우 함계 C3-C7의 복소환식 또는 알킬 복소환식을 형성하며:
Figure pct00006
식 중, Z1은 H, CH2OP(O)(OR18)2, C(O)OP(O)(OR18)2, PO(OR18)2, C(O)R18, P(O)(OR18)OP(O)(OR18)2, C(O)NHR18, SO2(OR18), C5-C12의 글리코사이드 또는 C1-C4의 알킬 또는 알킬카보닐이며; R18는 H, C1-C8의 알킬 또는 알킬카보닐이고; R19는 H, OH, NH2, OSO2(OR18), XCH2OP(O)(OR18)2, XPO(OR18)2, XC(O)OP(O)(OR18)2, XC(O)R18, XC(O)NHR18, C1-C4의 알킬, 알킬카보닐, 카복실산 또는 약제학적 염이며; X는 O, S 또는 NH이고; Y1 및 Y2는 독립적으로 N 또는 CH이며;
Figure pct00007
는 탄소 원자 부착점이고;
제형 중의 적합한 완충제는 유기산염, 예컨대, 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 탄산, 타타르산, 석신산, 아세트산 또는 프탈산의 나트륨, 칼륨, 암모늄 또는 트라이하이드록시에틸아미노염; Tris, 트로메타민 염산염, 황산염 또는 인산염 완충액을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 또한, 아미노산 양이온 성분이 또한 완충제로서 사용될 수 있다. 이러한 아미노산 성분은 아르기닌, 글리신, 글리실글리신 및 히스티딘을 비제한적으로 포함한다. 아르기닌 완충액은 아르기닌 아세테이트, 아르기닌 클로라이드, 아르기닌 포스페이트, 아르기닌 설페이트, 아르기닌 석신에이트 등을 포함한다. 일 실시형태에서, 아르기닌 완충액은 아르기닌 아세테이트이다. 히스티딘 완충액의 예는 히스티딘 클로라이드-아르기닌 클로라이드, 히스티딘 아세테이트-아르기닌 아세테이트, 히스티딘 포스페이트-아르기닌 포스페이트, 히스티딘 설페이트-아르기닌 설페이트, 히스티딘 석신에이트-아르기닌 석신에이트 등을 포함한다. 완충액의 제형은 4.5 내지 pH 8.5, 바람직하게는 약 4.5 내지 약 7.0, 보다 바람직하게는 약 5.0 내지 약 6.2의 pH를 갖는다. 일부 실시형태에서, 완충액 중의 유기산염의 농도는 약 10mM 내지 약 500mM이며;
제형 중에 선택적으로 포함될 수 있는 "폴리올"은 다수의 하이드록실기를 갖는 물질이다. 폴리올은 액체 제형 및 동결건조 제형 둘 모두에서 부형제 및/또는 등장제를 안정화시키기 위해서 사용될 수 있다. 폴리올은 생물약제를 물리적 분해 경로 및 화학적 분해 경로 둘 모두로부터 보호할 수 있다. 우선적으로, 제외된 공용매는 단백질 계면에서 용매의 유효 표면 장력을 증가시키고, 이에 의해서 가장 에너지 선호되는 구조 입체배좌는 가장 작은 표면적을 갖는 것이다. 폴리올은 당(환원당 및 비환원당), 당 알코올 및 당 산을 포함한다. "환원당"은 금속 이온을 환원시킬 수 있거나 또는 단백질 내의 라이신 및 다른 아미노기와 공유 반응할 수 있는 헤미아세탈기를 함유하는 것이고, "비환원당"은 환원당의 특성을 갖지 않는 것이다. 환원당의 예는 프럭토스, 만노스, 말토스, 락토스, 아라비노스, 자일로스, 리보스, 람노스, 갈락토스 및 글루코스이다. 비환원당은 수크로스, 트레할로스, 소보스, 멜레지토스 및 라피노스를 포함한다. 당 알코올은 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 말티톨, 락티톨, 에리트리톨, 트레이톨, 솔비톨 및 글리세롤로부터 선택된다. 당 산은 L-글루코네이트 및 이의 금속염을 포함한다. 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 고체 중의 폴리올은 0.0% 내지 20중량%일 수 있다. 바람직하게는, 약 0.1% 내지 15%의 농도의 비환원당, 수크로스 또는 트레할로스가 제형에서 선택되는데, 여기서 트레할로스의 용액 안정성으로 인해서, 트레할로스가 수크로스보다 바람직하며;
제형 중의 계면활성제는 선택적으로 폴리솔베이트(폴리솔베이트 20, 폴리솔베이트 40, 폴리솔베이트 65, 폴리솔베이트 80, 폴리솔베이트 81, 폴리솔베이트 85 등); 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188, 폴리(에틸렌 옥사이드)-폴리(프로필렌 옥사이드), 폴록사머 407 또는 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜 등); 트리톤; 소듐 도데실 설페이트(SDS); 소듐 라우렐 설페이트; 소듐 옥틸 글리코사이드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일-, 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사코신; 리놀레일-, 미리스틸-, 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코카미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 아이소스테아르아미도프로필-베타인(예를 들어, 라우로아미도프로필); 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 아이소스테아르아미도프로필-다이메틸아민; 소듐 메틸 코코일-, 또는 다이소듐 메틸 올레일-타우레이트; 도데실 베타인, 도데실 다이메틸아민 옥사이드, 코카미도프로필 베타인 및 코코 암포 글리시네이트; 및 MONAQUATTM 시리즈(예를 들어, 아이소스테아릴 에틸이미도늄 에토설페이트); 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜 및 에틸렌과 프로필렌 글리콜의 공중합체(예를 들어, 플루로닉(Pluronic), PF68 등) 등으로부터 선택된다. 바람직한 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 솔비탄 지방산 에스터 예를 들어, 폴리솔베이트 20, 40, 60 또는 80(Tween 20, 40, 60 또는 80)이다. 제형 중의 계면활성제의 농도는 0.0% 내지 약 2.0%의 범위이다. 특정 실시형태에서, 계면활성제 농도는 약 0.01% 내지 약 0.2%이다. 일 실시형태에서, 계면활성제 농도는 약 0.02%이다.
제형 중의 "보존제"는 선택적으로 그 내에서 박테리아 작용을 본질적으로 감소시키는 화합물이다. 가능한 보존제의 예는 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤즈알코늄 클로라이드(알킬기가 장쇄 화합물인 알킬벤질다이메틸염화암모늄의 혼합물) 및 벤즈에토늄 클로라이드를 포함한다. 다른 유형의 보존제는 방향족 알코올 예컨대, 페놀, 부틸 및 벤질 알코올, 알킬 파라벤, 예컨대, 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레소르시놀, 사이클로헥산올, 3-펜탄올 및 m-크레졸을 포함한다. 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 분말 중의 보존제는 0.0중량% 내지 5.0중량%일 수 있다. 일 실시형태에서, 본 명세서에서 보존제는 벤질 알코올이다.
제형에서 벌크 물질 또는 등장제 또는 삼투압 조절제로서 적합한 유리 아미노산은 아르기닌, 시스틴, 글리신, 라이신, 히스티딘, 오르니틴, 아이소류신, 류신, 알라닌, 글리신, 글루탐산 또는 아스파트산 중 하나 이상으로부터 선택되지만 이들로 제한되지 않는다. 염기성 아미노산, 즉 아르기닌, 라이신 및/또는 히스티딘의 포함이 바람직하다. 조성물이 히스티딘을 포함하는 경우, 이것은 완충제 및 유리 아미노산 둘 모두로서 작용할 수 있지만, 히스티딘 완충액이 사용되는 경우, 그것은 비-히스티딘 유리 아미노산을 포함하도록, 예를 들어, 히스티딘 완충액 및 라이신을 포함하는 것이 전형적이다. 아미노산은 D-형 및/또는 L-형으로 존재할 수 있지만, L-형이 전형적이다. 아미노산은 임의의 적합한 염, 예를 들어, 염산염, 예컨대, 아르기닌-HCl으로서 존재할 수 있다. 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 분말 중의 아미노산은 0.0중량% 내지 30중량%일 수 있으며;
제형 중의 항산화제는 액체 제형 중에는 최대 약 5㎎/㎖ 또는 제형화된 동결건조 분말 중에는 0.0% 내지 5.0중량%의 농도의 메티오닌, 글루타티온, 시스테인, 시스틴 또는 아스코르브산으로부터 선택적으로 선택될 수 있고;
제형은 금속 킬레이팅제, 예를 들어, EDTA, EGTA 등을 액체 제형 중에 최대 약 2mM의 농도로 또는 제형화된 동결건조 분말 중에 0.0중량% 내지 0.3중량%의 농도로 선택적으로 포함할 수 있고;
최종 제형은 완충액 조정제(예를 들어, 산, 예컨대, HCl, H2SO4, 아세트산, H3PO4, 시트르산 등 또는 염기, 예컨대, NaOH, KOH, NH4OH, 에탄올아민, 다이에탄올아민 또는 트라이에탄올 아민, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산삼나트륨, 트로메타민 등)를 사용하여 바람직한 pH로 조정될 수 있고, 제형은 "등장성"이도록 제어되어야 하는데, 이는 관심대상 제형이 인간 혈액과 본질적으로 동일한 삼투압을 갖는다는 것을 의미한다. 등장성 제형은 일반적으로 약 250 내지 350mOsm의 삼투압을 갖는다. 등장성은 예를 들어, 증기압 또는 얼음 동결 유형 삼투압계를 사용하여 측정될 수 있다. 등장제는 만니톨, 솔비톨, 아세트산나트륨, 염화칼륨, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산삼나트륨 또는 NaCl로부터 선택된다. 일반적으로, 완충제 염 및 등장제는 제형에서 30중량%를 차지할 수 있고;
본 특허 출원의 액체 또는 동결건조된 제형에서 유용할 수 있는 기타 부형제는 예를 들어, 푸코스, 셀로비오스, 말토트리오스, 멜리비오스, 옥툴로스, 리보스, 자일리톨, 아르기닌, 히스티딘, 글리신, 알라닌, 메티오닌, 글루탐산, 라이신, 이미다졸, 글리실글리신, 만노실글리세레이트, 트리톤 X-100, 플루로닉 F-127, 셀룰로스, 사이클로덱스트린, (2-하이드록시프로필)-β-사이클로덱스트린, 덱스트란(10, 40 및/또는 70kD), 폴리덱스트로스, 말토덱스트린, 피콜, 젤라틴, 하이드록시프로필메트, 인산나트륨, 인산칼륨, ZnCl2, 아연, 산화아연, 시트르산나트륨, 시트르산삼나트륨, 트로메타민, 구리, 피브로넥틴, 헤파린, 인간 혈청 알부민, 프로타민, 글리세린, 글리세롤, EDTA, 메타크레졸, 벤질 알코올, 페놀, 다가 알코올, 또는 폴리알코올, 1차 또는 2차 하이드록실기로 환원된 카보닐기를 갖는 탄수화물의 수소화 형태를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 제형 중의 튜불리신 유사체의 접합체는 하기 화학식 (II) 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00008
식 중, T，L, n, m, Y, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R8, R10, R13 , R14, R15, R16 및 R17은 화학식 (I)에서와 동일하게 정의되고;
R7은 H, R14 또는 -R14C(=O)X1R15; -R14X1R15로부터 선택되고; X1은 O, S, S-S, NH 또는 NR14로부터 선택되며;
R9는 H, -OH, -OR14, -OC(=O)R14, -OC(=O)NHR14, -OC(=O)NR14R15, -OC(=O) R14SSR15, OP(=O)(OR14)2 또는 OR14OP(=O)(OR15)이고;
R11은 H, R14, -R14C(=O)R16, -R14C(=O)X2R16, -R14X2R16, -R14C(=O)X2이되, X2는 -O-, -S-, -NH-, -NHS(O2), -N(R14)-, -O-R14-, -S-R14-, -S(=O)-R14- 또는 -NHR14-이며;
R12는 H, R14, -O-, -S-, -N-, =N-, =NNH-, -OH, -SH, -NH2, =NH, =NNH2, -NH(R14), -OR14, -C(O)O-, -C(O)OR16-, -COR16, -COOR14-, C(O)NH-, C(O)NH2, C(O)NHR14, -SR14, -S(=O)R14, -P(=O)(OR16)2, -OP(=O)(OR16)2, -CH2OP(=O)(OR16)2, -SO2R16이다.
하기 화학식 (II)의 괄호 안의 예시적인 화합물은 하기 바람직한 구조 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
R20은 H; C1-C8의 선형 또는 분지형 알킬, 헤테로알킬 또는 아실(-C(O)R17); C2-C8의 선형 또는 분지형 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18); 또는 1 내지 8개 탄소 원자의 카복실레이트, 에스터, 에터 또는 아마이드; 또는 1 내지 8개 아미노산; 또는 화학식 (OCH2CH2)p의 폴리에틸렌옥시 단위 또는 (OCH2CH(CH3))p(식 중, p는 0 내지 약 1000의 정수임)이거나; R20은 존재하지 않고, 산소가 케톤을 형성하고, 또는 이들의 조합이고; R21은 H, C1-C8의 선형 또는 분지형 알킬이고;
Z3 및 Z3은 독립적으로 H, OH, NH2, OR17, NHR17, COOH, COOR17, C(O)R17, C(O)NHR17, C(O)NHNHR17, C(O)NH2, R18, OCH2OP(O)(OR18)2, OC(O)OP(O)(OR18)2, OPO(OR18)2, NHPO(OR18)2, OP(O)(OR18)OP(O)(OR18)2, OC(O)R18, OC(O)NHR18, OSO2(OR18), O-(C4-C12-글리코사이드), C1-C8의 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8의 선형 또는 분지형 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이며; R17 및 R18는 독립적으로 H, C1-C8 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8의 선형 또는 분지형 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8선형 또는 분지형의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이고; R19는 H, OH, NH2, OSO2(OR18), XCH2OP(O)(OR18)2, XPO(OR18)2, XC(O)OP(O)(OR18)2, XC(O)R18, XC(O)NHR18, C1~C8 알킬 또는 카복실레이트; C2~C8 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3~C8 아릴 또는 알킬카보닐; 또는 약제학적 염이며; X는 O, S, NH, NHNH, NHR17 또는 CH2이고; R7은 상기와 동일하게 정의되고；
Figure pct00020
는 (II)의 링커 L에 연결된 부위이다.
또 다른 실시형태에서, 제형 중의 튜불리신 유사체의 접합체는 하기 화학식 (III) 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00021
식 중, T, L, m, Y, R1, R2 , R3 , R4, R5 , R6 , R8 , R9 , R10 , R11 , R12 , R13 및 n은 화학식 (I) 및 (II)에서와 동일하게 정의되고;
R7은 -R14- 또는 -R14C(=O)X1R15- 또는 -R14X1R15-로부터 독립적으로 선택되되, R14 및 R15는 독립적으로 선형 또는 분지형 C1~C8의 알킬, 헤테로알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일; C3~C8의 아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아르알킬 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐이고; X1은 O, S, S-S, NH 또는 NR14로부터 선택된다.
화학식 (III)의 괄호 안의 예시적인 화합물은 하기 구조 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
식 중, R20은 H; C1-C8의 선형 또는 분지형 알킬, 헤테로알킬 또는 아실(-C(O)R17); C2-C8의 선형 또는 분지형 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18); 또는 1 내지 8개 탄소 원자의 카복실레이트, 에스터, 에터 또는 아마이드; 또는 1 내지 8개 아미노산; 또는 화학식 (OCH2CH2)p의 폴리에틸렌옥시 단위 또는 (OCH2CH(CH3))p(식 중, p는 0 내지 약 1000의 정수임)이거나; R20은 존재하지 않고, 산소가 케톤을 형성하고, 또는 이들의 조합이고;
R21 및 R22는 독립적으로 H, C1-C8의 선형 또는 분지형 알킬이며;
Z3 및 Z3은 독립적으로 H, OH, NH2, OR17, NHR17, COOH, COOR17, C(O)R17, C(O)NHR17, C(O)NHNHR17, C(O)NH2, R18, OCH2OP(O)(OR18)2, OC(O)OP(O)(OR18)2, OPO(OR18)2, NHPO(OR18)2, OP(O)(OR18)OP(O)(OR18)2, OC(O)R18, OC(O)NHR18, OSO2(OR18), O-(C4-C12-글리코사이드), C1-C8의 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8의 선형 또는 분지형 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이고; R17 및 R18는 독립적으로 H, C1-C8 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8의 선형 또는 분지형 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이고; R19는 H, OH, NH2, OSO2(OR18), XCH2OP(O)(OR18)2, XPO(OR18)2, XC(O)OP(O)(OR18)2, XC(O)R18, XC(O)NHR18 , C1~C8 알킬 또는 카복실레이트; C2~C8 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3~C8 아릴 또는 알킬카보닐; 또는 약제학적 염이고; X, X1 및 X2는 독립적으로 O, S, NH, NHNH 또는 CH2이다.
또 다른 실시형태에서, 제형 중의 튜불리신 유사체의 접합체는 하기 화학식 (IV) 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00033
식 중, T, L, m, R1, R2 , R3 , R4, R5 , R6 , R7 , R8 , R10 , R11 , R12 , R13 및 n은 화학식 (II)에서와 동일하게 정의되고;
R9는 독립적으로 H, -O-, -OR14-, -OC(=O)R14-, -OC(=O)NHR14-, -OC(=O)NR14R15-, -OC(=O)R14SSR15-, -OP(=O)(OR14)O-이되, R14, R15는 독립적으로 H, C1~C8의 알킬, 헤테로알킬; C3~C8의 아릴, 헤테로아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 알킬카보닐 또는 약제학적 염이다.
화학식 (IV)의 괄호 안의 예시적인 화합물은 하기 구조 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
식 중,
Figure pct00045
, R7 , R20 , R21 , R22 , Z2 , Z3 및 X2는 상기와 동일하게 정의된다.
또 다른 실시형태에서, 제형 중의 튜불리신 유사체의 접합체는 하기 화학식 (V) 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00046
식 중, T, L, m, Y, R1, R2 , R3 , R4 , R5 , R6 , R7 , R8 , R9 , R10 , R12 , R13 및 n은 화학식 (II)에서와 동일하게 정의되고;
R11은 -R14-, -R14C(=O)R17-, -R14C(=O)X2R17-, -R14X2R17-, - R14C(=O)X2-이되, R17은 독립적으로 H, OH, C1~C8의 알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬; C3~C8의 아릴, 아릴렌, 복소환식, 탄소환식, 헤테로사이클로알킬; 또는 아미노산 또는 2개의 아미노산 단위이고; X2는 -O-, -S-, -NH-, -NHS(O2)-, -NHS(O)-, -N(R14)-, -O-R14-, -S-R14-, -S(=O)-R14- 또는 -NHR14-이며; R14는 H, C1~C8의 알킬, 헤테로알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일; C3~C8의 아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 알킬카보닐이다.
화학식 (V)의 괄호 안의 예시적인 화합물은 하기 구조 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
Figure pct00050
Figure pct00051
Figure pct00052
Figure pct00053
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
식 중,
Figure pct00059
, R7 , R20 , R21 , R22 , Z2 , Z3 및 X2는 상기와 동일하게 정의된다.
또 다른 실시형태에서, 제형 중의 튜불리신 유사체의 접합체는 화학식 (VI) 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00060
식 중, T, L, m, Y, R1, R2 , R3 , R4 , R5 , R6 , R7 , R8 , R9 , R11 , R13 및 n은 화학식 (II)에서와 동일하게 정의되고;
R12는 독립적으로 R14, -O-, -S-, -NH-, =N-, =NNH-, -N(R14)-, -OR14-, C(O)O-, C(O)NH-, C(O)NR14-, -SR14-, -S(=O)R14-, -NHR14-, -CH2OP(=O)(OR15)-, -P(=O)(OR15)-, -OP(=O)(OR15)O-, -SO2R14이되, R14, R15는 독립적으로 C1~C8의 알킬, 헤테로알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일; C3~C8의 아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐이다.
화학식 (VI)의 괄호 안의 예시적인 화합물은 하기 구조 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00061
Figure pct00062
Figure pct00063
식 중, R7, R17, R20, R21, Z2, Z3 및 X2는 상기와 동일하게 정의된다.
또 다른 실시형태에서, 제형 중의 튜불리신 유사체의 접합체는 하기 화학식 (VII) 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00064
식 중, T，L, n, m, Y, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R8, R10, R11 및 R12는 화학식 (II)에서와 동일하게 정의되고;
R13은 C1~C10의 알킬, 헤테로알킬, 알킬산, 알킬 아마이드, 알킬 아민 또는 Ar이되; Ar은 4개 내지 10개의 탄소 원자, 바람직하게는 4개 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 1개 또는 수개의 고리로 구성된 방향족 또는 헤테로 방향족을 지칭하고, 헤테로 방향족기의 용어는 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 탄소 원자가 O, N, Si, Se, P 또는 S, 바람직하게는 O, S, N에 의해서 대체된 방향족기 상의 1개 또는 수개의 탄소를 지칭하며, 용어 아릴 또는 Ar은 또한 방향족기를 지칭하고, 1개 또는 수개의 H 원자는 R18, F, Cl, Br, I, OR16, SR16, NR16R18, N=NR16, N=R16 , NR16R18 , NO2, SOR16R18, SO2R16, SO3R16 , OSO3R16, PR16R18, POR16R18, PO2R16R18, OPO3R16R18 또는 PO3R16R18에 의해서 독립적으로 대체되고, 식 중, R16, R18은 독립적으로 H, C1~C8의 알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬; C3~C8의 아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐; 또는 C4~C12 글리코사이드; 또는 약제학적 염이다.
화학식 (VII)의 괄호 안의 예시적인 화합물의 예는 하기 구조 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 갖는다:
Figure pct00065
Figure pct00066
Figure pct00067
Figure pct00068
Figure pct00069
Figure pct00070
Figure pct00071
Figure pct00072
Figure pct00073
Figure pct00074
Figure pct00075
Figure pct00076
Figure pct00077
식 중,
Figure pct00078
, R7, R20, Z2, Z3 및 X2는 상기와 동일하게 정의되고; X, X1 및 X3은 독립적으로 O, S, NH, NHNH, NHR17, CH2이거나 존재하지 않고; P1은 H, R17, P(O)(OH)2, P(O)(X1R17)2, CH2P(O)(OH)2, S(O2)(X1R17), C6H12O5(글리코사이드), (CH2CH2O)pR17이되, p는 0 내지 100으로부터 선택되고, R17은 상기에 정의되어 있고; 또한 X1P1은 존재하지 않을 수 있다(함께 H임).
또 다른 실시형태에서, 튜불리신 유사체 및 본 발명의 세포-표면 수용체 결합 분자에 대한 이의 접합을 제조하기 위한 합성 경로를 도 1 내지 도 22에 도시된 바와 같이 예시하지만, 이들로 제한되지 않는다.
또 다른 실시형태에서, 해방 가능한 링커 (L)은 세포-표면 결합 리간드 (T)를 강력한 튜불리신 유사체에 공유 연결하는 C, N, O, S, Si 및 P로부터 선택된 원자의 쇄이다. 링커는 약 2 내지 약 100개 원자 범위와 같이 광범위한 길이를 가질 수 있다. 링커의 형성에 사용되는 원자는 모두 화학적으로 관련된 방식으로, 예컨대, 알킬렌, 알켄일렌 및 알킨일렌, 에터, 폴리옥시알킬렌, 에스터, 아민, 이민, 폴리아민, 하이드라진, 하이드라존, 아마이드, 유레아, 세미카바자이드, 카바자이드, 알콕시아민, 알콕실아민, 우레탄, 아미노산, 아실옥실아민, 하이드록삼산 및 다수의 다른 것을 형성하는 방식으로 조합될 수 있다. 또한, 해방 가능한 링커 (L)을 형성하는 원자는 포화되거나 불포화될 수 있거나 라디칼일 수 있거나 서로 고리화되어 링커에서 사이클로 알칸, 환식 에터, 환식 아민, 아릴렌, 헤테로아릴렌 등을 비롯한 2가 환식 구조를 형성할 수 있다고 이해되어야 한다.
용어 해방 가능한 링커는 생리 조건 하에서 파괴될 수 있는 적어도 하나의 결합: pH-불안정한, 산-불안정한, 염기-불안정한, 산화적으로 불안정한, 대사적으로 불안정한, 생화학적으로 불안정한 또는 효소-불안정한 결합을 포함하는 링커를 지칭한다. 결합 파괴를 초래하는 이러한 생리 조건은 생물학적 또는 대사 과정을 반드시 포함하는 것은 아니며, 대신 표준 화학 반응, 예컨대, 가수분해 또는 치환 반응, 예를 들어, 사이토솔 pH보다 더 낮은 pH를 갖는 엔도솜 및/또는 세포내 티올, 예컨대 악성 세포 내부의 1밀리몰 범위의 풍부한 글루타티온과의 다이설파이드 결합 교환 반응을 포함할 수 있다는 것이 인지된다.
접합체의 해방 가능한 링커 L은 화학식 --Ww―(Aa)r--Vv--를 가질 수 있되, --W--는 스트레처 단위이고; w는 0 또는 1이며; 각각의 --Aa--는 독립적으로 아미노산 단위이고; r은 독립적으로 0 내지 12의 범위의 정수이며; --V--는 스페이서 단위이고; v는 0, 1 또는 2이다.
스트레처 단위 (--W--)는, 존재하는 경우, 표적화 결합 분자 단위(T)를 아미노산 단위 (--Aa--)에 연결하거나 또는 Aa가 존재하지 않는 경우 V에 연결한다. 스트레처 단위 W는 독립적으로 자기-희생 스페이서, 펩티딜 단위, 하이드라존 결합, 다이설파이드 또는 티올에터 결합을 함유할 수 있다. 이와 관련하여 결합 분자 (T)는 스트레처의 작용기와 결합을 형성할 수 있는 작용기를 갖고, 자연적으로 또는 화학적 조작을 통해서, 결합 분자 상에 존재할 수 있는 상기 작용기는 설프하이드릴(--SH), 아미노, 하이드록실, 카보닐, 탄수화물의 아노머 하이드록실기 및 카복실을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 바람직한 작용기는 설프하이드릴, 카복시 및 아미노이다. 설프하이드릴기는 리간드의 분자내 다이설파이드 결합의 환원에 의해서 생성될 수 있다. 대안적으로, 설프하이드릴기는 2-이미노티올란(트라우트 시약(Traut's reagent)) 또는 티올아세톤 또는 또 다른 설프하이드릴 생성 시약을 사용하여 결합 분자의 라이신 모이어티의 아미노기의 반응에 의해서 생성될 수 있고, 예컨대, 다이설파이드 결합 링커 또는 티올 에스터로 T를 변형시키고, 그 다음 각각 환원 또는 가수분해시킨다.
T에 연결된 W의 예시적인 예는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00079
Figure pct00080
식 중, R20 및 R21은 -C1~C9 알킬렌-, -C1~C7 카보사이클로-, -O-( C1~C8 알킬)-, -아릴렌-, -C1~C9 알킬렌-아릴렌-, -아릴렌, -C1~C9 알킬렌-, -C1~C9 알킬렌-(C1~C8 카보사이클로)-, -(C3~C7 카보사이클로)-C1~C9 알킬렌-, -C3~C8 헤테로사이클로-, -C1~C10 알킬렌-(C3~C8 헤테로사이클로)-, -(C3~C8 헤테로사이클로)- C1~C9 알킬렌-, -(CH2CH2O)k-, -(CH(CH3)CH2O)k- 및 -(CH2CH2O)k-CH2-로부터 독립적으로 선택되고; k는 1 내지 20의 범위의 정수이며.; R' 및 R"는 독립적으로 H 또는 CH3이다.
또 다른 실시형태에서, 상기에 도시된 바와 같이 공유적인 W 대 T의 접합은 다양한 화학 반응을 통해서 일어날 수 있다.
아마이드 링키지의 형성의 예는 다음과 같다:
Figure pct00081
식 중, 스트레처 단위는 E의 반응성 부위를 함유하는데, 이것은 리간드의 1차 또는 2차 아미노기와 아마이드 결합을 형성할 수 있다. 반응성 E의 예는 예컨대, 하이드록시석신이미딜 에스터(NHS, 설포-NHS 등), 4-나이트로페닐 에스터, 펜타플루오로페닐 에스터, 테트라플루오로페닐(설포-테트라플루오로페닐 포함), 에스터, 무수물, 산 클로라이드, 설폰일 클로라이드, 아이소사이아네이트 및 아이소티오사이아네이트를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
티올 에터 또는 다이설파이드 결합 링키지의 예는 다음과 같다:
Figure pct00082
식 중, 스트레처 단위는 설프하이드릴 반응성 부위를 함유하는데, 이것은 티올 에터 또는 티올기를 갖는 다이설파이드 결합을 형성할 수 있으며, 이것은 결합 리간드 T의 세포내 다이설파이드 결합의 환원에 의해서 생성되거나 결합 리간드 T 상의 화학 변형에 의해서 생성된다.
본 발명의 추가의 또 다른 양상에서, 스트레처의 반응성 기는 결합 분자 T 상에서 화학적으로 변형될 수 있는 알데하이드(--CHO) 또는 케톤(-C(=O)R)기에 반응성인 반응성 부위를 함유한다. 예를 들어, 결합 분자 T 상의 탄수화물은 소듐 퍼아이오데이트와 같은 시약을 사용하여 약하게 환원되어 알데하이드 또는 케톤(-C(=O)R)기를 생성시킬 수 있거나; 항체(또는 단백질 또는 펩타이드)의 N-말단에서 아미노산 상의 아민은 완충 용액에서 피리독살 5'-포스페이트(PLP)와 반응하여 케톤기를 도입할 수 있다(문헌[Scheck & Francis, ACS Chem. Biol. 2007, 2, 247-251]). 생성된 (--C=O) 단위는 작용기, 예컨대, 하이드라자이드, 옥심, 1차 또는 2차 아민, 하이드라진, 티오세미카바존, 하이드라진 카복실레이트 및 아릴하이드라자이드를 함유하는 스트레처와 축합될 수 있다.
하이드라존 또는 옥심 또는 이민 링키지의 접합의 예는 다음과 같다:
Figure pct00083
식 중, R20 및 R21은 상기에 기재되어 있고, R25는 아미노산의 유기 치환체이다.
본 발명의 또 다른 양상에서, 스트레처(이것은 스페이서 V 및/또는 아미노산을 함유할 수 있음)는 결합 분자 (T)에 연결되고, 그 다음 수성 완충 용액 중에서 강력한 튜불리신 유사체 대 결합 분자-스트레처의 접합이 일어날 수 있다. 이러한 부류의 2단계 접합(여기서 R16에 연결된 약물은 생략됨)의 예는 다음과 같다:
Figure pct00084
Figure pct00085
식 중, E는 예컨대, 하이드록시석신이미딜 에스터(NHS, 설포-NHS 등), 4-나이트로페닐 에스터, 펜타플루오로페닐 에스터, 테트라플루오로페닐(설포-테트라플루오로페닐을 포함함) 에스터, 무수물, 산 클로라이드, 설폰일 클로라이드, 아이소사이아네이트 및 아이소티오사이아네이트를 포함한다. R' 및 R"는 독립적으로 H 또는 CH3이고; R20, R16 및 Ar은 본 발명 전체의 다양한 실시형태에 정의되어 있고; R26은 독립적으로 H 또는 F 또는 NO2이며; J는 독립적으로 F, Cl, Br, I, 토실레이트(TsO) 또는 메실레이트(MsO)이되,
Figure pct00086
은 적어도 하나의 튜불리신 유사체/약물
Figure pct00087
을 보유한다.
본 발명의 또 다른 양상에서, 스트레처는 먼저 강력한 튜불리신 유사체에 연결되고, 그 다음 최대 50%의 유기 공용매를 함유하는 수성 pH 3 내지 10(바람직하게는 pH 5 내지 8.5) 완충 용액 중에서의 결합 분자 (T)의 접합이 일어날 수 있다. 이러한 부류의 2단계 접합의 예는 다음과 같다:
Figure pct00088
Figure pct00089
식 중, E는 예컨대, 하이드록시석신이미딜 에스터(NHS, 설포-NHS 등), 4-나이트로페닐 에스터, 펜타플루오로페닐 에스터, 테트라플루오로페닐(설포-테트라플루오로페닐 포함), 에스터, 무수물, 산 클로라이드, 설폰일 클로라이드, 아이소사이아네이트 및 아이소티오사이아네이트를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. R' 및 R"는 독립적으로 H 또는 CH3이고; R20, R16 및 Ar은 본 발명 전체의 다양한 실시형태에 정의되어 있고; R26은 독립적으로 H 또는 F 또는 NO2이며; J는 독립적으로 F, Cl, Br, I, 토실레이트(TsO) 또는 메실레이트(MsO)이되,
Figure pct00090
은 적어도 하나의 튜불리신 유사체를 보유한다.
아미노산 단위 (--Aa--)는 존재하는 경우 스트레처 단위를 스페이서 단위가 존재하는 경우 스페이서 단위에 연결하고, 스페이서 단위가 존재하지 않는 경우 스트레처 단위를 튜불리신 유사체에 연결하고, 스트레처 단위 및 스페이서 단위가 존재하지 않는 경우 결합 분자 (T) 단위를 튜불리신 유사체 단위에 연겨한다. --(Aa)r--는 자연 또는 비자연 아미노산, 다이펩타이드, 트라이펩타이드, 테트라펩타이드, 펜타펩타이드, 헥사펩타이드, 헵타펩타이드, 옥타펩타이드, 노나펩타이드, 데카펩타이드, 운데카펩타이드 또는 도데카펩타이드 단위이고, r은 0 내지 12의 범위의 정수이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 아미노산은 일반적으로 아미노알킬카복실레이트를 지칭하며, 여기서 알킬 라디칼은 예를 들어, 알킬, 아실, 하이드록시 알킬, 설프하이드릴알킬, 아미노알킬, 카복시알킬 등으로 선택적으로 치환되고, 자연 및 비자연아미노산 및 펩타이드의 구조는 문헌[G. C. Barrett and D. T. Elmore, "Amino Acid and Peptide", Cambridge University Press, 2004]에 기재되어 있다. 또한, 아미노산은 쇄 내에 베타, 감마 및 메틸, 벤질, 하이드록시메틸, 티오메틸, 카복실, 카복실메틸, 구아니디노프로필 등을 함유하는 더 긴 아미노산을 지칭한다. 보다 바람직하게는 아미노산은 아스파라긴, 아스파라긴산, 시스테인, 글리신, 글루탐산, 라이신, 글루타민, 아르기닌, 세린, 오르니틴, 트레오닌 등으로부터 선택된다.
아미노산 단위는 종양-연관 프로테아제를 포함하는 1종 이상의 효소에 의해 효소적으로 절단되어 튜불리신 유사체를 해방시킬 수 있으며, 일 실시형태에서 이것은 방출 시 생체내에서 양성자화되어 튜불리신 유사체를 제공한다.
존재하는 경우 스페이서 단위 (--V--)는 아미노산 단위가 존재하는 경우 아미노산 단위를 튜불리신 유사체에 연결한다. 대안적으로, 스페이서 단위는 아미노산 단위가 존재하지 않는 경우 스트레처 단위를 튜불리신 유사체에 연결한다. 스페이서 단위는 또한 아미노산 단위 및 스트레처 단위 둘 다가 존재하지 않는 경우 튜불리신 유사체를 결합 분자(T)에 연결한다. 스페이서 링커는 본 명세서에 기재된 접합체의 수 용해도, 생물학적 수송, 우선적인 신장 청소율, 흡수율(uptake), 흡수(absorption), 생체분포(biodistribution) 및/또는 생체이용률을 실질적으로 증가시키는 작용기를 함유할 수 있다. 스페이서 단위는 2개의 일반적인 유형, 즉, 자기-희생 및 비-자기-희생이다. 비-자기-희생 스페이서 단위는 스페이서 단위 중 일부 또는 전부가 튜불리신 유사체-링커-결합 분자 접합체 또는 튜불리신 유사체-링커 화합물의 절단, 특히 효소적 절단 후 튜불리신 유사체에 결합된 채로 유지되는 것이다. 자기-희생 단위는 파라-아미노벤질카바모일(PAB)기, 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체, 복소환식 PAB 유사체, 베타-글루쿠로나이드 및 오쏘 또는 파라-아미노벤질아세탈과 전기적으로(electronically) 유사한 방향족 화합물 또는 하기 구조 중 하나를 포함하되:
Figure pct00091
식 중, (*) 원자는 추가 스페이서 또는 해방 가능한 링커 단위, 항유사분열제 및/또는 결합 분자(T)의 부착점이고; X, Y 및 Z3은 독립적으로 NH, O 또는 S이며; Z2는 독립적으로 H, NH, O 또는 S이고. v는 0 또는 1이며; Q는 독립적으로 H, OH, C1~C6 알킬, (OCH2CH2)n F, Cl, Br, I, OR17, 또는 SR17, NR17R18, N=NR17, N=R17 , NR17R18 , NO2, SOR17R18, SO2R17, SO3R17 , OSO3R17, PR17R18, POR17R18, PO2R17R18, OPO(OR17)(OR18), 또는 OCH2PO(OR17(OR18)이되, R17 , R18은 독립적으로 H, C1~C8의 알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬; C3~C8의 아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 알킬카보닐; 또는 약제학적 양이온 염이고;
비-자기-희생 스페이서 링커의 예는 다음과 같다:
Figure pct00092
Figure pct00093
Figure pct00094
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
Figure pct00099
또는 1 내지 20개의 동일하거나 상이한 아미노산을 함유하는 L- 또는 D-, 자연 또는 비자연 펩타이드;
"*" 및
Figure pct00100
원자는 추가 스페이서 또는 해방 가능한 링커, 튜불리신 유사체 및/또는 결합 분자의 부착점이고; m은 1 내지 10이며; n은 1 내지 20이고; X2, X3, X4, X5 또는 X6은 NH; NHNH; N(R12); N(R12)N(R12'); O; S; C1-C6의 알킬; C2-C6의 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴; CH2OR12, CH2SR12, CH2NHR12 또는 1 내지 8개의 아미노산으로부터 독립적으로 선택되고; R12 및 R12'는 독립적으로 H;C1-C8의 알킬; C2-C8의 헤테로-알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴;또는 1 내지 8개 탄소 원자의 에스터, 에터 또는 아마이드; 또는 화학식 (OCH2CH2)p의 폴리에틸렌옥시 단위 또는 (OCH2CH(CH3))p(식 중, p 및 p'는 독립적으로 0 내지 약 1000으로부터 선택된 정수임) 또는 이들의 조합물이고;
L에서의 적어도 하나의 결합인 링커 L의 해방 가능한 성분은 하기 구조 중 하나를 갖는, 생리 조건 하에서 파괴될 수 있는 적어도 하나의 결합: pH-불안정한, 산-불안정한, 염기-불안정한, 산화적으로 불안정한, 대사적으로 불안정한, 생화학적으로 불안정한 또는 효소-불안정한 결합일 수 있고:
-(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n(OCH2CH2)t-, -(CR15R16)m(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -(Aa)r-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)t-, -(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-, -(CR15R16)m(CR17=CR18)(CR19R20)n(Aa) t(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(Aa)t(NR21CO)(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(OCO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m-(CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(NR21CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m-(OCO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m-페닐-CO(Aa)t-(CR17R18)n-, -(CR15R16)m-퓨릴-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -(CR15R6)m-옥사졸릴-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -(CR15R16)m-티아졸릴-CO(Aa)t(CCR17R18)n-, -(CR15R16)t-티엔일-CO(CR17R18)n-, -(CR15R16)t-이미다졸릴-CO-(CR17R18)n-, -(CR15R16)t-몰폴리노-CO(Aa)t-(CR17R18)n-, -(CR15R16)t-피페라지노-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -(CR15R16)t-N-메틸피페라진-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -(CR15R16)m-(Aa)t페닐-, -(CR15R16)m-(Aa)t퓨릴-, -(CR15R16)m-옥사졸릴(Aa)t-, -(CR15R16)m-티아졸릴(Aa)t-, -(CR15R16)m-티엔일-(Aa)t-, -(CR15R16)m-이미다졸릴(Aa)t-, -(CR15R16)m-몰폴리노-(Aa)t-, -(CR15R16)m-피페라지노-(Aa)t-, -(CR15R16)m-N-메틸피페라지노-(Aa)t-, -K(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n(OCH2CH2)t-, -K(CR15R16)m(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -K(Aa)r-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)t-, -K(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-, -K(CR15R16)m-(CR17=CR18)(CR19R20)n(Aa)t(OCH2CH2)r, -K(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(Aa)t(NR21CO)(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m(OCO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m(CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m(NR21CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m-(OCO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K-(CR15R16)m(CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m-페닐-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -K-(CR15R16)m-퓨릴-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -K(CR15R16)m-옥사졸릴-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -K(CR15R16)m-티아졸릴-CO(Aa)t-(CR17R18)n-, -K(CR15R16)t-티엔일-CO(CR17R18)n-, -K(CR15R16)t이미다졸릴-CO-(CR17R18)n-, -K(CR5R6)t몰폴리노-CO(Aa)t-(CR17R18)n-, -K(CR15R16)t-피페라지노-CO(Aa)t-(CR17R18)n-, -K(CR15R16)t-N-메틸피페라진-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -K(CR15R16)m-(Aa)t페닐, -K-(CR15R16)m-(Aa)t퓨릴-, -K(CR15R16)m-옥사졸릴-(Aa)t-, -K(CR15R16)m-티아졸릴(Aa)t-, -K(CR15R16)m-티엔일-(Aa)t-, -K(CR15R16)m-이미다졸릴(Aa)t-, -K(CR15R16)m-몰폴리노(Aa)t-, -K(CR15R16)m-피페라지노(Aa)tG, -K(CR5R6)m-N-메틸-피페라지노(Aa)t-(식 중, m, Aa, m, n, R13, R14 및 R15는 상기에 기재된 바와 같고; t 및 r은 독립적으로 0 내지 100이며; R16, R17, R18, R19 및 R20은 H; 할라이드; C1~C8의 알킬 또는 헤테로알킬, C2~C8의 아릴, 알켄일, 알킨일, 에터, 에스터, 아민 또는 아마이드, C3~C8의 아릴로부터 독립적으로 선택되되, 이들은 하나 이상의 할라이드, CN, NR12R12', CF3, OR12, 아릴, 헤테로사이클, S(O)R12, SO2R12, -CO2H, -SO3H, -OR12, -CO2R12, -CONR12, -PO2R12R13, -PO3H 또는 P(O)R12R12'R13에 의해서 선택적으로 치환되고; K는 NR12, -SS-, -C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)O-, -C=NH-O-, -C=N-NH-, -C(=O)NH-NH-, O, S, Se, B, Het(C3-C12를 갖는 복소환식 또는 헤테로방향족 고리임); 또는 동일하거나 상이한 1 내지 20개의 아미노산을 함유하는 펩타이드임);
결합 분자 (T)는 치료적으로 또는 달리 생물학적으로 변형되도록 추구된 세포 집단의 모이어티에 결합하거나, 이와 복합체를 이루거나, 이와 반응하는 현재 공지되어 있거나 공지될 임의의 부류의 분자일 수 있다. 결합 분자 단위는 튜불리신 유사체를 결합 분자 (T)가 반응하는 특정 표적 세포 집단으로 전달하는 작용을 한다.
세포-결합제, T는 고분자량 단백질, 예를 들어, 전장 항체(다클론성 항체 및 단클론성 항체); 단일 쇄 항체; 항체의 단편, 예컨대, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, [Parham, J. Immunol. 131, 2895-2902 (1983)], Fab 발현 라이브러리에 의해서 생산된 단편, 항이디오타입(항-Id) 항체, CDR 및 암 세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역 특이적으로 결합하는 상기 중 임의의 것의 에피토프-결합 단편; 인터페론(예컨대, 타입 I, II, III); 펩타이드; 림포카인, 예컨대, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, GM-CSF, 인터페론-감마(IFN-γ); 호르몬, 예컨대, 인슐린, TRH(갑상선 방출 호르몬), MSH(멜라닌세포-자극 호르몬), 스테로이드 호르몬, 예컨대, 안드로겐 및 에스트로겐, 멜라닌세포-자극 호르몬(MSH); 성장 인자 및 집락 -자극 인자, 예컨대, 표피 성장 인자(EGF), 과립구 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF), 형질전환 성장 인자(TGF), 예컨대, TGFα, TGFβ, 인슐린 및 인슐린 유사 성장 인자(IGF-I, IGF-II) G-CSF, M-CSF 및 GM-CSF[문헌[Burgess, Immunology Today, 5, 155-158 (1984)]]; 백시니아 성장 인자(VGF); 섬유모세포 성장 인자(FGF); 더 작은 분자량의 단백질, 폴리-펩타이드, 펩타이드 및 펩타이드 호르몬, 예컨대, 봄베신, 가스트린, 가스트린-방출 펩타이드; 혈소판-유래 성장 인자; 인터류킨 및 사이토카인, 예컨대, 인터류킨-2(IL-2), 인터류킨-6(IL-6), 백혈병 저해 인자, 과립구 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF); 비타민, 예컨대, 엽산염; 아포단백질 및 당단백질, 예컨대, 트랜스페린{문헌[O'Keefe et al., 260 J. Biol. Chem. 932-937 (1985)]}; 당-결합 단백질 또는 지질단백질, 예컨대, 렉틴; 세포 영양분-수송 분자; 및 소분자 저해제, 예컨대, 전립선-특이적 막 항원(PSMA) 저해제 및 소분자 타이로신 키나제 저해제(TKI), 비-펩타이드 또는 임의의 다른 세포 결합 분자 또는 물질, 예컨대, 생체활성 중합체(문헌[Dhar, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 2008, 105, 17356-61)]; 덴드리머(문헌[Lee, et al., Nat. Biotechnol. 2005, 23, 1517-26; Almutairi, et al; Proc. Natl. Acad. Sci. 2009, 106, 685-90]); 나노입자(문헌[Liong, et al., ACS Nano, 2008, 19, 1309-12; Medarova, et al., Nat. Med. 2007, 13, 372-7; Javier, et al., Bioconjugate Chem. 2008, 19, 1309-12]; 리포솜(문헌[Medinai, et al., Curr. Phar. Des. 2004, 10, 2981-9]); 바이러스성 캡시드(문헌[Flenniken, et al., Viruses Nanotechnol. 2009, 327, 71-93])를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일반적으로, 적절하게 입수 가능한 경우 단클론성 항체가 세포-표면 결합제로서 바람직하다.
바람직하게는, T는 항체, 단일 쇄 항체, 표적 세포에 결합하는 항체 단편, 단클론성 항체, 단일 쇄 단클론성 항체, 표적 세포에 결합하는 단클론성 항체 단편, 키메라 항체, 표적 세포에 결합하는 키메라 항체 단편, 도메인 항체, 표적 세포에 결합하는 도메인 항체 단편, 항체를 모방하는 어드넥틴(adnectin), DARPin, 림포카인, 호르몬; 비타민; 성장 인자, 집락 자극 인자; 또는 영양분-수송 분자(트랜스페린) 및 알부민, 중합체, 덴드리머, 리포솜, 나노입자, 소낭(vesicle), 또는 (바이러스성) 캡시드 상에 부착된 결합 펩타이드, 단백질, 소분자로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가로 바람직하게는, 세포 결합제/분자, T는 종양 세포, 바이러스 감염 세포, 미생물 감염 세포, 기생충 감염 세포, 자가면역 질환 세포, 활성화된 종양 세포, 골수 세포, 활성화된 T-세포, 영향을 미치는(affecting) B 세포, 또는 멜라닌세포 또는 하기 항원 또는 수용체 중 임의의 하나를 발현하는 임의의 세포: CD1, CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, CD1e,CD2, CD3, CD3d, CD3e, CD3g, CD4, CD5,CD6, CD7, CD8, CD8a, CD8b, CD9, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CD12w, CD13, CD14, CD15, CD16, CD16a, CD16b, CDw17, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD30, CD31,CD32,CD32a, CD32b, CD33, CD34, CD35, CD36, CD37, CD38, CD39, CD40, CD41,CD42,CD42a, CD42b, CD42c, CD42d, CD43, CD44, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49b, CD49c, CD49c, CD49d, CD49f, CD50, CD51, CD52, CD53, CD54, CD55,CD56, CD57, CD58, CD59, CD60, CD60a, CD60b, CD60c, CD61,CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD64, CD65, CD65s, CD66, CD66a, CD66b, CD66c, CD66d, CD66e, CD66f, CD67, CD68, CD69, CD70, CD71, CD72, CD73, CD74, CD75, CD75s, CD76, CD77, CD78, CD79, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85, CD85a, CD85b, CD85c, CD85d, CD85e, CD85f, CD85g, CD85g, CD85i, CD85j, CD85k, CD85m, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91,CD92, CD93, CD94, CD95, CD96, CD97, CD98, CD99, CD100, CD101, CD102, CD103, CD104, CD105, CD106, CD107, CD107a, CD107b, CD108, CD109, CD110, CD111, CD112, CD113, CD114, CD115, CD116, CD117, CD118, CD119, CD120,CD120a, CD120b, CD121, CD121a, CD121b, CD122, CD123, CD123a, CD124, CD125, CD126, CD127, CD128, CD129, CD130, CD131, CD132, CD133, CD134, CD135, CD136, CD137, CD138, CD139, CD140, CD140a, CD140b, CD141, CD142, CD143, CD144, CD145, CDw145, CD146, CD147, CD148, CD149, CD150, CD151, CD152, CD153, CD154, CD155, CD156, CD156a, CD156b, CD156c, CD156d, CD157, CD158, CD158a, CD158b1, CD158b2, CD158c, CD158d, CD158e1, CD158e2, CD158f2, CD158g, CD158h, CD158i, CD158j, CD158k, CD159, CD159a, CD159b, CD159c, CD160, CD161, CD162, CD163, CD164, CD165, CD166, CD167, CD167a, CD167b, CD168, CD169, CD170, CD171, CD172, CD172a, CD172b, CD172g, CD173, CD174, CD175, CD175s, CD176, CD177, CD178, CD179, CD179a, CD179b, CD180, CD181, CD182, CD183, CD184, CD185, CD186, CDw186, CD187, CD188, CD189, CD190, CD191, CD192, CD193, CD194, CD195, CD196, CD197, CD198, CD199, CDw198, CDw199, CD200, CD201, CD202, CD202(a,b), CD203, CD203c, CD204, CD205, CD206, CD207, CD208, CD209, CD210, CDw210a, CDw210b, CD211, CD212, CD213, CD213a1, CD213a2, CD214, CD215, CD216, CD217, CD218, CD218a, CD218, CD21b9, CD220, CD221, CD222, CD223, CD224, CD225, CD226, CD227, CD228, CD229, CD230, CD231, CD232, CD233, CD234, CD235, CD235a, CD235b, CD236, CD237, CD238, CD239, CD240, CD240ce, CD240d, CD241, CD242, CD243, CD244, CD245, CD246, CD247, CD248, CD249, CD250, CD251, CD252, CD253, CD254,CD255, CD256, CD257, CD258, CD259, CD260, CD261, CD262, CD263, CD264, CD265, CD266, CD267, CD268, CD269, CD270, CD271, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD277, CD278, CD279, CD281, CD282, CD283, CD284, CD285, CD286, CD287, CD288, CD289, CD290, CD291, CD292, CD293, CD294, CD295, CD296, CD297, CD298, CD299, CD300, CD300a, CD300b, CD300c, CD301, CD302, CD303, CD304, CD305, CD306, CD307, CD307a, CD307b, CD307c, CD307d, CD307e, CD307f, CD308, CD309, CD310, CD311, CD312, CD313, CD314, CD315, CD316, CD317, CD318, CD319, CD320, CD321, CD322, CD323, CD324, CD325, CD326, CD327, CD328, CD329, CD330, CD331, CD332, CD333, CD334, CD335, CD336, CD337, CD338, CD339, CD340, CD341, CD342, CD343, CD344, CD345, CD346, CD347, CD348, CD349, CD350, CD351, CD352, CD353, CD354, CD355, CD356, CD357, CD358, CD359, CD360, CD361, CD362, CD363, CD364, CD365, CD366, CD367, CD368, CD369, CD370, CD371, CD372, CD373, CD374, CD375, CD376, CD377, CD378, CD379, CD381, CD382, CD383, CD384, CD385, CD386, CD387, CD388, CD389, CRIPTO, CRIPTO, CR, CR1, CRGF, CRIPTO, CXCR5, LY64, TDGF1, 4-1BB, APO2, ASLG659, BMPR1B, 4-1BB, 5AC, 5T4(영양아층 당단백질, TPBG, 5T4, Wnt-활성화 저해인자 1 또는 WAIF1), 선암 항원, AGS-5, AGS-22M6, 액티빈 수용체-유사 키나제 1, AFP, AKAP-4, ALK, 알파 인테그린, 알파 v 베타6, 아미노-펩티다제 N, 아밀로이드 베타, 안드로겐 수용체, 안지오포이에틴 2, 안지오포이에틴 3, 아넥신 A1, 탄저균 독소 예방 항원, 항-트랜스페린 수용체, AOC3(VAP-1), B7-H3, 바실루스 안트라시스 안트랙스(Bacillus anthracis anthrax), BAFF(B-세포 활성화 인자), BCMA, B-림프종 세포, 브크라블(bcrabl), 봄베신(Bombesin), BORIS, C5, C242 항원, CA125(탄수화물 항원 125, MUC16), CA-IX(또는 CAIX, 탄산 탈수효소 9), CALLA, CanAg, 카니스 루프스 파밀리아리스(Canis lupus familiaris) IL31, 탄산 탈수효소 IX, 심장 마이오신, CCL11(C-C 모티프 케모카인 11), CCR4(C-C 케모카인 수용체 타입 4), CCR5, CD3E(엡실론), CEA(암배아 항원), CEACAM3, CEACAM5(암배아 항원), CFD(인자 D), Ch4D5, 콜레시스토키닌 2(CCK2R), CLDN18(클라우딘-18), CLDN18.1(클라우딘-18.1), CLDN18.2(클라우딘-18.2), 클럼핑(Clumping) 인자 A, cMet, CRIPTO, FCSF1R(집락 자극 인자 1 수용체), CSF2(집락 자극 인자 2, 과립구 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF)), CSP4, CTLA4(세포독성 T-림프구 연관 단백질 4), CTAA16.88 종양 항원, CXCR4, C-X-C 케모카인 수용체 타입 4, 환식 ADP 리보스 가수분해효소, 사이클린(Cyclin) B1, CYP1B1, 사이토메갈로바이러스, 사이토메갈로바이러스 당단백질 B, 다비가트란(Dabigatran), DLL3(델타-유사-리간드 3), DLL4(델타-유사-리간드 4), DPP4(다이펩티딜-펩티다제 4), DR5(사멸 수용체 5), 이. 콜라이 시가(shiga) 독소 타입-1, 이. 콜라이 시가 독소 타입-2, ED-B, EGFL7(EGF-유사 도메인-함유 단백질 7), EGFR, EGFRII, EGFRvIII, 엔도글린, 엔도텔린 B 수용체, 엔도톡신, EpCAM(상피 세포 접착 분자), EphA2, 에피시알린, ERBB2(표피 성장 인자 수용체 2), ERBB3, ERG(TMPRSS2 ETS 융합 유전자), 에쉐리키아 콜라이(Escherichia coli), ETV6-AML, FAP(섬유모세포 활성화 단백질 알파), 섬유모세포 표면 항원, FCGR1, 알파-페토프로테인, 피브린 II, 베타 쇄, 피브리노넥틴 엑스트라 도메인-B, FOLR(엽산염 수용체), 엽산염 수용체 알파, 엽산염 가수분해효소, 호흡기 융합 바이러스의 포스-관련(Fos-related) 항원 1F 단백질, 프리즐드(Frizzled) 수용체, 푸코실 GM1, GD2 강글리오사이드, G-28(세포 표면 항원 당지질), GD3 이디오타입, GloboH, 글리피칸 3, N-글리콜릴뉴라민산, GM3, GMCSF 수용체 α-쇄, 성장 분화 인자, GP100, GPNMB(막관통 당단백질 NMB), GUCY2C(구아닐레이트 고리화효소 2C, 구아닐릴 고리화효소 C(GC-C), 장내 구아닐레이트 고리화효소, 구아닐레이트 고리화효소-C 수용체, 열-안정성 엔테로톡신 수용체(hSTAR)), 열 충격 단백질, 헤마글루티닌, B형 간염 표면 항원, B형 간염 바이러스, HER1(인간 표피 성장 인자 수용체 1), HER2, HER2/neu, HER3(ERBB-3), IgG4, HGF/SF(간세포 성장 인자/산란 인자), HHGFR, HIV-1, 히스톤 복합체, HLA-DR(인간 백혈구 항원), HLA-DR10, HLA-DRB, HMWMAA, 인간 융모성 성선 자극 호르몬, HNGF, 인간 산란 인자 수용체 키나제, HPV E6/E7, Hsp90, hTERT, ICAM-1(세포간 접착 분자 1), 이디오타입, IGF1R(IGF-1, 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체), IGHE, IFN-γ, 인플루엔자 헤마글루티닌, IgE, IgE Fc 영역, IGHE, 인터류킨(IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-6R, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-17A, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, 또는 IL-28 포함), IL31RA, ILGF2(인슐린-유사 성장 인자 2), 인테그린(α4, αIIbβ3, αvβ3, α4β7, α5β1, α6β4, α7β7, αllβ3, α5β5, αvβ5), 인터페론 감마-유도된 단백질, ITGA2, ITGB2, KIR2D, 카파 Ig, LCK, Le, 레구마인, 루이스-Y 항원, LFA-1(림프구 기능-연관 항원 1, CD11a), LHRH, LINGO-1, 리포테이코산, LIV1A, LMP2, LTA, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE A1, MAGE A3, MAGE 4, MART1, MCP-1, MIF(대식세포 이동 저해 인자, 또는 글리코실화-저해 인자(GIF)), MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A 구성원 1), MSLN(메소텔린), MUC1(뮤신 1, 세포 표면 연관된(MUC1) 또는 다형성 상피 뮤신(PEM)), MUC1-KLH, MUC16(CA125), MCP1(단핵구 화학주성 단백질 1), MelanA/MART1,ML-IAP, MPG, MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A), MYCN, 미엘린-연관 당단백질, 미오스타틴, NA17, NARP-1, NCA-90(과립구 항원), 넥틴-4(ASG-22ME), NGF, 신경 세포자멸-조절 프로테이나제 1, NOGO-A, 노치 수용체, 뉴클레오린, Neu 종양유전자 산물, NY-BR-1, NY-ESO-1, OX-40, OxLDL(산화된 저밀도 지질단백질), OY-TES1, P21, p53 비돌연변이체, P97, Page4, PAP, 항-(N-글리콜릴뉴라민산)의 파라토프, PAX3, PAX5, PCSK9, PDCD1(PD-1, 세포 예정사 단백질 1), PDGF-Rα(알파형 혈소판-유래 성장 인자 수용체), PDGFR-β, PDL-1, PLAC1, PLAP-유사 고환 알칼리 포스파타제, 혈소판-유래 성장 인자 수용체 베타, 포스페이트-나트륨 공동 수용체, PMEL 17, 폴리시알산, 프로테이나제 3(PR1), 전립선 암종, PS(포스파티딜세린), 전립선 암종 세포, 슈도모나스 녹농균, PSMA, PSA, PSCA, 광견병 바이러스 당단백질, RHD(Rh 폴리펩타이드 1(RhPI)), 레서스(Rhesus) 인자, RANKL, RhoC, Ras 돌연변이체, RGS5, ROBO4, 호흡기 융합 바이러스, RON, ROR1, 육종 전위 파단점(Sarcoma translocation breakpoint), SART3, 스클레로스틴, SLAMF7(SLAM 패밀리 구성원 7), 셀렉틴 P, SDC1(신데칸 1), sLe(a), 소마토메딘 C, SIP(스핑고신-1-포스페이트), 소마토스타틴, 정자 단백질 17, SSX2, STEAP1(전립선의 6-막관통 상피 항원 1), STEAP2, STn, TAG-72(종양 연관 당단백질 72), 서바이빈, T-세포 수용체, T 세포 막관통 단백질, TEM1(종양 내피 마커 1), TENB2, 테나신 C(TN-C), TGF-α, TGF-β(형질전환 성장 인자 베타), TGF-β1, TGF-β2(형질전환 성장 인자-베타 2), 타이(Tie)(CD202b), 타이2, TIM-1(CDX-014), Tn, TNF, TNF-α, TNFRSF8, TNFRSF10B (종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 10B), TNFRSF-13B(종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 13B), TPBG(영양아층 당단백질), TRAIL-R1(종양 괴사 세포사멸 유도 리간드 수용체 1), TRAILR2(사멸 수용체 5(DR5)), 종양-연관 칼슘 신호 변환기 2, MUC1의 종양 특이적 글리코실화, TWEAK 수용체, TYRP1(당단백질 75), TRP-1(Trop1), TRP-2(Trop2), 타이로시나제, VCAM-1, VEGF, VEGF-A, VEGF-2, VEGFR-1, VEGFR2, 또는 비멘틴, WT1, XAGE 1; 또는 임의의 인슐린 성장 인자 수용체 또는 임의의 표피 성장 인자 수용체를 발현하는 세포에 대해 표적화할 수 있다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 세포-결합 분자는 하기로부터 선택되는 리간드 또는 수용체 효능제일 수 있다: 엽산염 유도체(엽산염 수용체에 결합함, 난소암 및 기타 악성종양에서 과발현되는 단백질)(문헌[Low, P. S. et al., 2008, Acc. Chem. Res. 41, 120-9]); 글루탐산 유레아 유도체(전립선 특이적 막 항원에 결합함, 전립선암 세포의 표면 마커)(문헌[Hillier, S. M.et al, 2009, Cancer Res. 69, 6932-40]); 소마토스타틴(성장 호르몬-저해 호르몬(GHIH) 또는 소마토트로핀 방출-저해 인자(SRIF)) 또는 소마토트로핀 방출-저해 호르몬이라고도 공지됨) 및 이의 유사체, 예컨대, 옥트레오타이드(Sandostatin) 및 란레오타이드(Somatuline)(특히, 신경내분비 종양, GH-생산 뇌하수체 선종, 부신경절종, 비기능성 뇌하수체 선종, 크롬친화성세포종)(문헌[Ginj, M., et al., 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 16436-41]); GH-분비 뇌하수체 선종에서의 소마토스타틴 수용체 하위유형(sst1, sst2, sst3, sst4 및 sst5)(문헌[Reubi J. C., Landolt, A. M. 1984 J. Clin. Endocrinol Metab 59: 1148-51; Reubi J. C., Landolt A. M. 1987 J Clin Endocrinol Metab 65: 65-73; Moyse E, et al., J Clin Endocrinol Metab 61: 98-103]), 위장관췌장 종양(문헌[Reubi J. C., et al., 1987 J Clin Endocrinol Metab 65: 1127-34; Reubi, J. C, et al., 1990 Cancer Res 50: 5969-77]), 크롬친화성세포종(문헌[Epel-baum J, et al., 1995 J Clin Endocrinol Metab 80:1837-44; Reubi J. C., et al., 1992 J Clin Endocrinol Metab 74: 1082-9]), 신경모세포종(문헌[Prevostg, 1996 Neuroendocrinology 63:188-197; Moertel, C. L, et al., 1994 Am J Clin Path 102:752-756]), 갑상선 수질암(문헌[Reubi, J. C, et al., 1991 Lab Invest 64:567-573]) 소세포 폐암(문헌[Sagman U, et al., 1990 Cancer 66:2129-2133]), 수막종, 수모세포종 또는 신경교종(문헌[Reubi J. C., et al., 1986 J Clin Endocrinol Metab 63: 433-8; Reubi J. C., et al., 1987 Cancer Res 47: 5758-64; Fruhwald, M. C, et al., 1999 Pediatr Res 45: 697-708]), 유방 암종(문헌[Reubi J. C., et al., 1990 Int J Cancer 46: 416-20; Srkalovicg, et al., 1990 J Clin Endocrinol Metab 70: 661-669]), 림프종(문헌[Reubi J. C., et al., 1992, Int J Cancer 50: 895-900]), 신장 세포 암(문헌[Reubi J. C., et al., 1992, Cancer Res 52: 6074-6078]), 간충직 종양(문헌[Reubi J. C., et al., 1996 Cancer Res 56: 1922-31]), 전립선(문헌[Reubi J. C., et al., 1995, J. Clin. Endocrinol Metab 80: 2806-14; et al., 1989, Prostate 14:191-208; Halmos G, et al., J. Clin. Endo-crinol Metab 85: 2564-71]), 난소(문헌[Halmos, G, et al., 2000 J Clin Endocrinol Metab 85: 3509-12; Reubi J. C., et al., 1991 Am J Pathol 138:1267-72]), 위(문헌[Reubi J. C., et al., 1999, Int J Cancer 81: 376-86; Miller, G. V, 1992 Br J Cancer 66: 391-95]), 간세포(문헌[Kouroumalis E, et al., 1998 Gut 42: 442-7; Reubi J. C., et al., 1999 Gut 45: 66-774]) 및 비인두 암종(문헌[Loh K. S, et al., 2002 Virchows Arch 441: 444-8]); 방향족 설폰아마이드(탄산 탈수효소 IX에 특이적임)(저산소증 및 신장 세포 암종의 마커)에 특이적인(문헌[Neri, D., et al., Nat. Rev. Drug Discov. 2011, 10, 767-7]); 크롬친화성세포종 및 부신경절종에 대한 뇌하수체 아데닐산 고리화효소 활성화 펩타이드(PACAP)(PAC1); 혈관활성 장내 펩타이드(VIP) 및 이들의 수용체 하위유형(VPAC1, VPAC2); α-멜라닌세포-자극 호르몬(α-MSH) 수용체; 콜레시스토키닌(CCK)/가스트린 수용체 및 이들의 수용체 하위유형(CCK1(이전 CCK-A) 및 CCK2; 봄베신(Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2)/가스트린-방출 펩타이드(GRP) 및 이들의 수용체 하위유형(BB1, GRP 수용체 하위유형(BB2), BB3 및 BB4)(문헌[Ohlsson, B., et al., 1999, Scand. J. Gastroenterology 34 (12): 1224-9; Weber, H. C., 2009, Cur. Opin. Endocri. Diab. Obesity 16(1): 66-71, Gonzalez N, et al., 2008, Cur. Opin. Endocri. Diab. Obesity 15(1), 58-64]); 뉴로텐신 수용체 및 이의 수용체 하위유형(NTR1, NTR2, NTR3); 기질 P 수용체 및 이들의 수용체 하위유형(예컨대, 신경교 종양에 대한 NK1 수용체(문헌[Hennig I. M., et al., 1995 Int. J. Cancer 61, 786-792]); 신경펩타이드 Y(NPY) 수용체 및 수용체 하위유형(Y1-Y6); 호밍 펩타이드는 이량체 및 다량체 환식 RGD 펩타이드(예를 들어, cRGDfV)인 RGD(Arg-Gly-Asp), NGR(Asn-Gly-Arg)를 포함함(문헌[Laakkonen P, Vuorinen K. 2010, Integr Biol (Camb). 2(7-8): 326-337; Chen K, Chen X. 2011, Theranostics. 1:189-200; Garanger E, et al., Anti-Cancer Agents Med Chem. 7(5): 552-558; Kerr, J. S. et al., AntiCancer Research, 19(2A), 959-968; Thumshirn,g, et al., 2003 Chem. Eur. J. 9, 2717- 2725]) 및 TAASGVRSMH 또는 LTLRWVGLMS(콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 NG2 수용체) 및 F3 펩타이드(세포 표면-발현된 뉴클레오린 수용체에 결합하는 31 아미노산 펩타이드)(문헌[Zitzmann, S., 2002 Cancer Res., 62, 18, pp. 5139-5143, Temminga, K., 2005, Drug Resistance Updates, 8, 381-402; P. Laakkonen and K. Vuorinen, 2010 Integrative Biol, 2(7-8), 326-337; M. A. Burg, 1999 Cancer Res., 59(12), 2869-2874; K. Porkka, et al., 2002, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 99(11), 7444-9]); 세포 침투성 펩타이드(CPP)(문헌[Nakase I, et al., 2012, J. Control Release. 159(2), 181-188]); 펩타이드 호르몬, 예컨대, 황체형성 호르몬-방출 호르몬(LHRH) 효능제 및 길항제 및 고나도트로핀-방출 호르몬(GnRH) 효능제는 난포 호르몬(FSH) 및 황체형성 호르몬(LH), 뿐만 아니라 테스토스테론 생산을 표적으로 함으로써 작용함, 예를 들어, 부세렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 고나도렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 고세렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2), 히스트렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-벤질)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 류프롤라이드(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt), 나파렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 트라이프토렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 나파렐린, 데슬로렐린, 아바렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-아이소프로필Lys-Pro-DAla-NH2), 세트로렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로-Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2), 데가렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-4-아미노Phe(L-하이드로오로틸)-D-4-아미노Phe(카바모일)-Leu-아이소프로필Lys-Pro-D-Ala-NH2) 및 가니렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-Tyr-D-(N9,N10-다이에틸)-호모Arg-Leu-(N9, N10-다이에틸)-호모Arg-Pro-D-Ala-NH2)(문헌[Thundimadathil, J., J. Amino Acids, 2012, 967347, doi:10.1155/2012/967347; Boccon-Gibod, L.; et al., 2011, Therapeutic Advances in Urology 3(3): 127-140; Debruyne, F., 2006, Future Oncology, 2(6), 677-696; Schally A. V; Nagy, A. 1999 Eur J Endocrinol 141:1-14; KoppanM, et al., 1999 Prostate 38:151-158]); 및 소분자(이미퀴모드, 구아니신 및 아데노신 유사체)에서 큰 복합체 생물거대 분자, 예컨대, 지질다당류(LPS), 핵산(CpG DNA, 폴리I:C) 및 지질펩타이드(Pam3CSK4)(문헌[Kasturi, S. P., et al., 2011, Nature 470, 543-547; Lane, T., 2001, J. R. Soc. Med. 94, 316; Hotz, C., and Bourquin, C., 2012, Oncoimmunology 1, 227-228; Dudek, A. Z., et al., 2007, Clin. Cancer Res. 13, 7119-25])까지의 크기 범위인 패턴 인식 수용체(PRR), 예컨대, 톨-유사 수용체(TLR), C-타입 렉틴 및 노드유사 수용체(NLR)(문헌[Fukata, M., et al., 2009, Semin. Immunol. 21, 242-253; Maisonneuve, C., et al., 2014, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111, 1-6; Botos, I., et al., 2011, Structure 19, 447-459; Means, T. K., et al., 2000, Life Sci. 68, 241-258]); 파골세포 및 신장에 대한 효과를 통해서 칼슘 수준을 조절하는 데 상당히 관여되는 32-아미노산 신경펩타이드인 칼시토닌 수용체(문헌[ZaidiM, et al., 1990 Crit Rev Clin Lab Sci 28, 109-174; Gorn, A. H., et al., 1995 J Clin Invest 95:2680-91]); 및 일반적으로 혈관신생에 중요한 역할을 하고, 다양한 세포, 특히 파골세포, 내피 세포 및 종양 세포의 표면 상에서 발현되는 인테그린 수용체 및 이들의 수용체 하위유형(예컨대, αVβ1, αVβ3, αVβ5, αVβ6, α6β4, α7β1, αLβ2, αIIbβ3 등)(문헌[Ruoslahti, E. et al., 1994 Cell 77, 477-8; Albelda, S. M. et al., 1990 Cancer Res., 50, 6757-64])에서 발견되었다. 짧은 펩타이드, GRGDSPK 및 환식 RGD 펜타펩타이드, 예컨대, 사이클로(RGDfV)(L1) 및 이의 유도체[사이클로(-N(Me)R-GDfV), 사이클로(R-Sar-DfV), 사이클로-(RG-N(Me)D-fV), 사이클로(RGD-N(Me)f-V), 사이클로(RGDf-N(Me)V-)(실렌지타이드)]는 인테그린 수용체의 높은 결합 친화성을 나타내었다(문헌[Dechantsreiter, M. A. et al., 1999 J. Med. Chem. 42, 3033-40, Goodman, S. L., et al., 2002 J. Med. Chem. 45, 1045-51]).
세포-결합 분자/리간드 또는 세포 수용체 효능제는 Ig-기반 및 비-Ig-기반 단백질 스캐폴드 분자일 수 있다. Ig-기반 스캐폴드는 나노바디(VHH(카멜리드 Ig)의 유도체)(문헌[Muyldermans S., 2013 Annu Rev Biochem. 82, 775-97]); 도메인 항체(dAb, VH 또는 VL 도메인의 유도체)(문헌[Holt, L. J, et al., 2003, Trends Biotechnol. 21, 484-90]); 이중특이적 T 세포 인게이저(BiTE, 이중특이적 다이아바디)(문헌[Baeuerle, P. A, et al., 2009, Curr. Opin.mol. Ther. 11, 22-30]); 이중 친화성 재표적화(DART, 이중특이적 다이아바디)(문헌[Moore P. A. P, et al., 2011, Blood 117(17), 4542-51]); 삼중특이적 항체, 4가 탠덤 항체(TandAb, 이량체화된 이중특이적 다이아바디)(문헌[Cochlovius, B, et al., 2000, Cancer Res. 60(16):4336-4341]) 및 바이파라토프(biparatopic) 항체(문헌[Li, J. Y., et al., 2016, Cancer Cell 29(1):117-29; Roovers, R. C., et al., 2011, Int J Cancer, 129(8): 2013-24])로부터 선택될 수 있지만 이들로 제한되지 않는다. 비-Ig 스캐폴드는 안티칼린(리포칼린의 유도체)(문헌[Skerra A. 2008, FEBS J., 275(11): 2677-83; Besteg, et al., 1999 Proc. Nat. Acad. USA. 96(5):1898-903; Skerra, A. 2000 Biochim Biophys Acta, 1482(1-2): 337-50; Skerra, A. 2007, Curr Opin Biotechnol. 18(4): 295-304; Skerra, A. 2008, FEBS J. 275(11):2677-83]); 어드넥틴(제10 FN3(피브로넥틴))(문헌[Koide, A, et al., 1998 J.mol. Biol., 284(4):1141-51; Batori V, 2002, Protein Eng. 15(12): 1015-20; Tolcher, A. W, 2011, Clin. Cancer Res. 17(2): 363-71; Hackel, B. J, 2010, Protein Eng. Des. Sel. 23(4): 211-19]); 설계된 안크린 반복 단백질(DARPin)(안크린 반복(AR) 단백질의 유도체)(문헌[Boersma, Y.L, et al., 2011 Curr Opin Biotechnol. 22(6): 849-57]), 예를 들어, DARPin C9, DARPin Ec4 및 DARPin E69_LZ3_E01(문헌[Winkler J, et al., 2009 Mol Cancer Ther. 8(9), 2674-83; Patricia M-K. M., et al., Clin Cancer Res. 2011; 17(1):100-10; Boersma Y. L, et al., 2011 J. Biol. Chem. 286(48), 41273-85]); 아비머(도메인 A/저밀도 지질단백질(LDL) 수용체)(문헌[Boersma Y. L, 2011 J. Biol. Chem. 286(48): 41273-41285; Silverman J, et al., 2005 Nat. Biotechnol., 23(12):1556-61])로부터 선택될 수 있지만 이들로 제한되지 않는다.
소분자 자체 또는 단백질, 나노입자, 중합체, 마이셀 또는 지질 상에 코팅되거나, 이에 공유 연결되고, 그 다음 본 발명의 세포독성제에 연결되는 소분자가 본 발명의 세포-결합제를 위해서 사용될 수 있다. 소분자 구조의 예를 하기에 도시한다: 하기 구조식에 나타낸 LB01(엽산염), LB02(PMSA 리간드), LB03(PMSA 리간드), LB04(PMSA 리간드), LB05(소마토스타틴), LB06(소마토스타틴), LB07(옥트레오타이드, 소마토스타틴 유사체), LB08(란레오타이드, 소마토스타틴 유사체), LB09(바프레오타이드(Sanvar), 소마토스타틴 유사체), LB10(CAIX 리간드), LB11(CAIX 리간드), LB12(가스트린 방출 펩타이드 수용체(GRPr), MBA), LB13(황체형성 호르몬-방출 호르몬(LH-RH) 리간드 및 GnRH), LB14(황체형성 호르몬-방출 호르몬(LH-RH) 및 GnRH 리간드), LB15(GnRH 길항제, 아바렐릭스), LB16(코발라민, 비타민 B12 유사체), LB17(코발라민, 비타민 B12 유사체), LB18(αvβ3 인테그린 수용체의 경우, 환식 RGD 펜타펩타이드), LB19(VEGF 수용체의 경우 이종-2가 펩타이드 리간드), LB20(뉴로메딘 B), LB21(G-단백질 커플드 수용체의 경우 봄베신), LB22(톨-유사 수용체의 경우 TLR2), LB23(안드로겐 수용체의 경우), LB24(αv 인테그린 수용체의 경우 실렌지타이드/사이클로(-RGDfV-)), LB23(플루드로코티손), LB25(리파부틴 유사체), LB26(리파부틴 유사체), LB27(리파부틴 유사체), LB28(플루드로코티손), LB29(덱사메타손), LB30(플루티카손 프로피오네이트), LB31(베클로메타손 다이프로피오네이트), LB32(트라이암시놀론 아세토나이드), LB33(프레드니손), LB34(프레드니솔론), LB35(메틸프레드니솔론), LB36(베타메타손), LB37(이리노테칸 유사체), LB38(크리조티닙 유사체), LB39(보르테조밉 유사체), LB40(카필조밉 유사체), LB41(카필조밉 유사체), LB42(류프롤라이드 유사체), LB43(트립토렐린 유사체), LB44 (클린다마이신), LB45(리라글루타이드 유사체), LB46(세마글루타이드 유사체), LB47(레타파물린 유사체), LB48(인디불린 유사체), LB49(빈블라스틴 유사체), LB50(릭시세나타이드 유사체), LB51(오시머티닙 유사체), LB52(뉴클레오사이드 유사체), LB53(에를로티닙 유사체) 및 LB54(라파티닙 유사체):
Figure pct00101
Figure pct00102
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Figure pct00104
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Figure pct00109
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식 중, "
Figure pct00111
"는 본 특허의 측쇄 링커를 연결하기 위한 부위이고; X4 및 Y1은 독립적으로 O, NH, NHNH, NR1, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH2, C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1이며; X1은 H, CH2, OH, O, C(O), C(O)NH, C(O)N(R1), R1, NHR1, NR1, C(O)R1 또는 C(O)O이고; X5는 H, CH3, F 또는 Cl이고; M1 및 M2는 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, N(R1R1'R2R3)이고; R1 , R1' , R2 및 R3은 화학식 (I)에 정의되어 있다.
접합 공정에서, 본 발명의 튜불리신 유사체와의 접합 이전에, 세포-결합 분자는 보다 특이적인 펩타이드, 단백질 또는 약물 또는 헤테로 이작용성 가교제, 예를 들어, 아민-대-비선택적(석신이미딜(NHS)-다이아지린(SDA), NHS 에스터/아자이드), 아민-대-설프하이드릴(NHS 에스터/말레이미드, NHS 에스터/피리딜다이티올, NHS 에스터/할로아세틸), 설프하이드릴-대-탄수화물(말레이미드/하이드라자이드, 피리딜다이티올/하이드라자이드), 하이드록실-대-설프하이드릴(아이소사이아네이트/말레이미드), 아민-대-DNA(NHS 에스터/소랄렌(Psoralen)), 아민-대-카복실(카보다이이미드)를 갖는 다른 기능성 분자의 부착을 통해서 변형될 수 있다.
SDA 링키지 변형에서, SDA 링커의 NHS 에스터를 pH 6 내지 9 완충액에서 결합 분자 골격의 1차 아민기와 반응시켜 NHS의 방출 시 안정적인 아마이드 결합을 형성한다. 그 다음 장파 UV광(330 내지 370nm)을 사용한 다이아지린의 광활성화는 반응성 카벤 중간체를 생성시키는데 이것을 보다 특이적인 펩타이드 또는 단백질 또는 다른 기능성 분자의 아민기와 반응시킬 수 있다. 이 두 단계의 순서는 다음과 같이 다를 수 있다: 기능성 분자의 아민기를 먼저 SDA 링커와 반응시키고, 그 다음 장파 UV광(330 내지 370nm)을 사용하여 결합 분자를 광활성 반응시킨다. SDA 가교제는 절단될 수 있다(SDAD 링커와 같이 내부에 이황화 결합이 있음).
Figure pct00112
NHS 에스터/아자이드 변형에서, 링커의 NHS 에스터를 pH 6 내지 9 완충액에서 결합 분자 골격의 1차 아민기와 반응시켜 안정적인 아마이드 결합을 형성한다. 그 다음 보다 특이적인 펩타이드 또는 단백질 또는 다른 기능성 분자 상의 알킨일기를 아자이드-알킨 후이젠 고리화첨가(Azide-Alkyne Huisgen Cycloaddition)를 통해서 링커 반대편 상의 아자이드와 반응시켜 1,2,3-트라이아졸 링키지를 형성시킨다(클릭 화학). 또한 링커의 NHS에스터를 pH 6 내지 9 완충액에서 기능성 분자의 1차 작용기와 반응시켜 안정적인 아마이드를 형성시킨다. 그 다음 결합 분자 상에 연결된 알킨일기를 5 아자이드-알킨 후이젠 고리화첨가를 통해 링커의 반대편 상의 아자이드와 반응시켜 1,2,3-트라이아졸 링키지를 형성시킨다.
Figure pct00113
아민-대-설프하이드릴 링키지 변형에서, 링커의 NHS 에스터를 pH 6 내지 9 완충액에서 결합 분자 골격의 1차 아민기와 반응시켜 안정적인 아마이드 결합을 형성한다. 그 다음 보다 특이적인 펩타이드 또는 단백질 또는 다른 기능성 분자 상의 설프하이드릴을 pH 4.5 내지 8.5에서 보다 특이적인 펩타이드 또는 단백질 또는 다른 기능성 분자 상의 설프하이드릴을 아민-대-설프하이드릴 링커의 반대편의 말레이미드, 피리딜다이티올 또는 할로아세틸과 반응시켜 티오에터 또는 이황화 결합을 형성한다. 아민-대-설프하이드릴 링커와의 접합은 상이한 순서로 수행될 수 있다. 예를 들어, 먼저 작용성 분자의 아민기를 링커와 반응시켜 아마이드 결합을 형성하고, 그 다음 결합 분자 상의 설프하이드릴과 반응시킬 수 있다. 또한 먼저 기능성 분자의 설프하이드릴기를 pH 4.5 내지 7에서 링커와 반응시켜 티오에터 또는 다이설파이드 결합을 형성하고, 그 다음 pH 6 내지 9에서 결합 분자 상의 아민기와 반응시켜 아마이드 결합을 형성할 수 있다>
Figure pct00114
설프하이드릴-대-탄수화물 링키지 변형에서, 먼저 결합 분자의 설프하이드릴기를 링커 상의 말레이미드 또는 피리딜다이티올과 반응시켜 pH 4.5 내지 8에서 티오에터 또는 이황화 결합을 형성할 수 있다. 그 다음 기능성 분자 상의 카보닐(알데하이드/케톤)기를 하이드라자이드와 반응시켜 하이드라존 결합을 형성시킨다. 또한, 기능성 분자 상의 설프하이드릴기를 먼저 링커와 반응시켜 pH 4.5 내지 8에서 티오에터 또는 다이설파이드 결합을 형성하고, 그 다음 결합 분자 상의 탄수화물 또는 산화된 탄수화물 또는 카보닐(알데하이드/케톤)기와 반응시켜 하이드라존 결합을 형성할 수 있다.
Figure pct00115
하이드록실-대-설프하이드릴 링키지 변형에서, 결합 분자의 설프하이드릴기를 먼저 링커 상의 말레이미드 또는 피리딜다이티올과 반응시켜 pH 6 내지 8에서 티오에터 또는 다이설파이드 결합을 형성할 수 있다. 그 다음 기능성 분자의 하이드록시기를 링커 상의 아이소사이아네이트와 반응시켜 pH 8 내지 9에서 카바메이트 결합을 형성한다. 또한 기능성 분자 상의 설프하이드릴기를 먼저 링커와 반응시켜 pH 6 내지 8에서 티오에터 또는 다이설파이드 결합을 형성하고, 그 다음 결합 분자 상의 하이드록시와 반응시켜 pH 8 내지 9에서 카바메이트를 형성할 수 있다.
Figure pct00116
본 발명의 또 다른 추가 양상에서, 본 발명에서 사용되는 항체의 생산은 생체내 또는 시험관내 절차 또는 이들의 조합을 포함한다. 다클론성 항-수용체 펩타이드 항체를 생산하는 방법은 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 예컨대, 미국 특허 제4,493,795호(Nestor 등)에 공지되어 있다. 단클론성 항체는 전형적으로 목적하는 항원으로 면역화된 마우스의 비장 세포와 골수종 세포를 융합시킴으로써 제조된다(문헌[Koehler, G.; Milstein, C. (1975). Nature 256: 495-497]). 상세한 절차는 "항체-실험실 매뉴얼"(문헌[Harlow and Lane, eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1988)])에 기술되어 있으며, 이것은 본 명세서에 참고로 포함된다. 특히 단클론성 항체는 무손상 표적 세포, 표적 세포로부터 단리된 항원, 전체 바이러스, 약독화된 전체 바이러스 및 바이러스성 단백질과 같은 관심대상 항원으로 마우스, 래트, 햄스터 또는 임의의 다른 포유동물을 면역화시킴으로써 생산된다. 비장세포는 전형적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 6000을 사용하여 골수종 세포와 융합된다. 융합된 혼성체는 HAT(hypoxanthine-aminopterin-thymine)에 대한 민감도에 의해 선택된다. 본 발명을 실시하는데 유용한 단클론성 항체를 생산하는 하이브리도마는 특정 수용체와 면역 반응하거나 표적 세포 상의 수용체 활성도를 저해하는 능력에 의해 식별된다.
본 발명에 사용되는 단클론성 항체는 적절한 항원 특이성의 항체 분자를 분비하는 하이브리도마를 함유하는 영양 배지를 포함하는 단클론성 하이브리도마 배양물을 개시함으로써 제조될 수 있다. 배양물은 하이브리도마가 항체 분자를 배지에 분비하기에 충분한 시간 및 조건 하에서 유지된다. 이어서, 항체-함유 배지를 수집한다. 이어서, 단백질-A 친화성 크로마토그래피; 음이온, 양이온, 소수성 또는 크기 배제 크로마토그래피(특히 단백질 및 이후의 특정 항원에 대한 친화성 및 사이징 칼럼 크로마토그래피); 원심 분리, 차동 용해도, 또는 단백질 정제를 위한 다른 표준 기술과 같은 널리 알려진 기술에 의해 항체 분자를 추가로 단리시킬 수 있다.
이들 조성물의 제조에 유용한 배지는 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 상업적으로 입수 가능하고, 합성 배양 배지를 포함한다. 예시적인 합성 배지는 둘베코 최소 필수 배지(DMEM; 문헌[Dulbecco et al., Virol. 8, 396(1959)])이며, 이 배지에는 4.5gm/ℓ 글루코스, 20mM 글루타민, 20% 우태아 혈청 및 소포제, 예컨대, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 블록 공중합체가 보충된다.
또한, 항체-생산 세포주는 발암성 DNA로 B 림프구를 직접 형질전환시키거나, 온코바이러스(oncovirus), 예컨대, 엡스타인-바르 바이러스(EBV, 인간 헤르페스 바이러스 4(HHV-4)라고도 부름) 또는 카포시 육종 연관 헤르페스 바이러스(KSHV)로의 형질주입과 같은 융합 이외의 기술로 생성될 수 있다(미국 특허 제4,341,761호; 제4,399,121호; 제4,427,783호; 제4,444,887호; 제4,451,570호; 제4,466,917호; 제4,472,500호; 제4,491,632호; 제4,493,890호 참고). 단클론성 항체는 또한 관련 기술 분야에 널리 공지된 기술된 바와 같은 카복실 말단을 함유하는 항-수용체 펩타이드 또는 펩타이드를 통해서 생산될 수 있다(문헌[Niman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80: 4949-4953 (1983); Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 178-182 (1985); Lei et al., Biochemistry 34(20): 6675-6688, (1995)] 참고). 전형적으로, 항-수용체 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 항-수용체 펩타이드 단클론성 항체를 생산하기 위한 면역원으로서 단독으로 또는 면역원성 담체에 접합되어 사용된다.
또한, 본 발명에서 결합 분자로서의 단클론성 항체를 제조하기 위한 다른 널리 공지된 다수의 기술이 존재한다. 완전 인간 항체를 제조하는 방법이 특히 유용하다. 하나의 방법은 친화성 강화 방법을 사용하여 항원에 특이적으로 결합하는 다양한 인간 항체를 선택하는데 사용될 수 있는 파지 디스플레이 기술이다. 파지 디스플레이는 문헌에 완벽하게 기술되어 있고, 파지 디스플레이 라이브러리의 작제 및 스크리닝은 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Dente et al., Gene. 148(1):7-13 (1994); Little et al., Biotechnol Adv. 12(3): 539-55(1994); Clackson et al., Nature 352: 264-628 (1991); Huse et al., Science 246: 1275-1281 (1989)] 참고).
인간 이외의 또 다른 종, 예컨대, 마우스로부터의 하이브리도마 기술에 의해 유래된 단클론성 항체는 인간에게 주입될 때, 인간 항-마우스 항체를 회피하기 위해서 인간화될 수 있다. 항체의 인간화의 보다 일반적인 방법에는 상보성 결정 영역 이식 및 리서페이싱(resurfacing)이 있다. 이러한 방법은 광범위하게 기술되어 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,859,205호 및 제6,797,492호; 문헌[Liu et al., Immunol Rev. 222:9-27 (2008); Almagro et al., Front Biosci. 1;13:1619-33 (2008); Lazar et al., Mol Immunol. 44(8):1986-98 (2007); Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 103(10):3557-62 (2006)] 참고, 각각은 본 명세서에 참고로 포함됨). 완전 인간 항체는 또한 면역원으로 인간 면역 글로불린 중쇄 및 경쇄의 상당 부분을 운반하는 트랜스제닉 마우스, 토끼, 원숭이 또는 다른 포유동물을 면역화시킴으로써 제조될 수 있다. 이러한 마우스의 예는 Xenomouse(아브제닉스사(Abgenix, Inc), HuMAb-mouse(마다렉스사(Medarex)/BMS), Velocimouse(레제너론사(Regeneron))이다(예를 들어, 미국 특허 제6,596,541호, 제6,207,418호, 제6,150,584호, 제6,111,166호, 제6,075,181호, 제5,922,545호, 제5,661,016호, 제5,545,806호, 제5,436,149호 및 제5,569,825호 참고). 인간 요법에서, 뮤린의 가변 영역 및 인간 불변 영역은 또한 뮤린 mAb보다 사람에서 면역원성이 훨씬 낮은 "키메라 항체"라고 불리는 작제물에 융합될 수 있다(문헌[Kipriyanov et al,mol Biotechnol. 26: 39-60 (2004); Houdebine, Curr Opin Biotechnol. 13: 625-9 (2002)], 각각은 본 명세서에 참고로 포함됨). 또한, 항체의 가변 영역에서 부위-지향된 돌연변이유발(site-directed mutagenesis)은 항원에 대한 친화도 및 특이성이 보다 높은 항체를 생성할 수 있고(문헌[Brannigan et al., Nat Revmol Cell Biol. 3: 964-70, (2002)); Adams et al., J Immunol Methods. 231: 249-60 (1999)]), mAb의 불변 영역의 교환은 결합 및 세포독성도 효과기 기능을 매개하는 능력을 개선시킬 수 있다.
악성 세포 항원에 대한 면역특이적 항체는 또한 상업적으로 획득되거나 예를 들어 화학적 합성 또는 재조합 발현 기술과 같은 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 악성 세포 항원에 대한 면역특이적인 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 상업적으로, 예를 들어 유전자 데이터베이스 또는 그것과 유사한 데이터베이스, 문헌 간행물 또는 통상적인 클로닝 및 서열결정으로부터 획득될 수 있다.
항체와 별개로, 표적화된 세포 상의 에피토프 또는 상응하는 수용체와 결합/차단/표적화하거나 일부 다른 방식으로 상호작용하는 펩타이드 또는 단백질이 결합 분자로서 사용될 수 있다. 이들 펩티드 또는 단백질은 에피토프 또는 상응하는 수용체에 대해 친화성을 갖는 임의의 펩타이드 또는 단백질일 수 있으며, 반드시 면역 글로불린 패밀리일 필요는 없다. 이러한 펩타이드는 파지 디스플레이 항체와 유사한 기술로 단리될 수 있다(문헌[Szardenings, J Recept Signal transduct Res. 2003, 23(4): 307-49)]). 이러한 무작위 펩타이드 라이브러리로부터의 펩타이드의 사용은 항체 및 항체 단편과 유사할 수 있다. 펩타이드 또는 단백질의 결합 분자는 그러한 부착이 펩타이드 또는 단백질이 그의 항체 결합 특이성을 유지하도록 허용하는 한, 큰 분자 또는 물질, 예컨대, 비제한적으로 알부민, 중합체, 리포솜, 나노입자 상에 접합 또는 연결될 수 있다.
암, 자가면역 질환 및 감염성 질환을 치료하기 위한 이러한 예방에서 튜불리신 유사체의 접합을 위해서 사용되는 항체의 예는, 3F8(항-GD2), 아바고보맙(항-CA-125), 아브식시맙(항 CD41(인터그린 알파-IIb), 아달리무맙(항-TNF-α), 아데카투무맙(항-EpCAM, CD326), 아펠리모맙(항-TNF-α), 아퓨투즈맙(항-CD20), 알라시주맙 페골(항-VEGFR2), ALT518(항-IL-6), 알렘투즈맙(Campath, MabCampath, 항-CD52), 알트모맙(항-CEA), 아나투모맙(항 TAG-72), 안루킨주맙(IMA-638, 항 IL-13), 아폴리주맙(항-HLA-DR), 아르시투모맙(항-CEA), 아셀리주맙(항-L-셀렉틴(CD62L), 아틀리주맙(토실리주맙, 악템라, 로악템라, 항-IL-6 수용체), 아토롤리무맙(항-레서스 인자), 바피뉴주맙(항-베타 아밀로이드), 바실릭시맙(Simulect, 항CD25(IL-2 수용체의 α 쇄), 바비툭시맙(항-포스파티딜세린), 벡투모맙(LymphoScan, 항-CD22), 벨리무맙(Benlysta, LymphoStat-B, 항-BAFF), 벤랄리주맙(항-CD125), 베르틸리무맙(항-CCL11(에오탁신-1), 베실레소맙(Scintimun, 항-CEA 관련 항원), 베바시주맙(Avastin, 항 VEGF-A), 비시로맙(FibriScint, 항-피브린 Ⅱ 베타 쇄), 비바투주맙(항-CD44 v6), 블리나투모맙(BiTE, 항-CD19), 브렌툭시맙(cAC10, 항-CD30 TNFRSF8), 브리아키누맙(항 IL-12, IL-23), 카나키누맙(Ilaris, 항-IL-1), 칸투주맙(C242, 항-CanAg), 카프로맙, 카투막소맙(Removab, 항-EpCAM, 항-CD3), CC49(항-TAG-72), 세델리주맙(항-CD4), 세르톨리주맙 페골(Cimzia, 항-TNF-알파), 세툭시맙(Erbitux, IMC-C225, 항-EGFR), 시타투주맙 보가톡스(항-EpCAM), 식수투무맙(항-IGF-1), 클레놀릭시맙(항-CD4), 클리바투주맙(항-MUC1), 코나투무맙(항-TRAIL-R2), CR6261(항-인플루엔자 및 헤마글루티닌), 다세투주맙(항-CD40), 다클리주맙(Zenapax, 항-CD25 (IL-2 수용체의 α 쇄)), 다라투무맙(항-CD38(환식 ADP 리보스 가수분해효소), 데노수맙(Prolia, 항-RANKL), 데투모맙(항-B-림프종 세포), 도르리모맙, 도르릭시주맙, 에크로멕시맙(항-GD3 강글리오사이드), 에쿨리주맙(Soliris, 항-C5), 에도바코맙(항-엔도톡신), 에드레코로맙(Panorex, MAb17-1A, 항-EpCAM), 에팔리주맙(Raptiva, 항-LFA-1(CD11a), 에펀구맙(Mycograb, 항-Hsp90), 엘로투주맙(항-SLAMF7), 엘실리모맙(항-IL-6), 엔리모맙 페골(항-ICAM-1(CD54)), 에피투모맙(항-에피시알린), 에프라투주맙(항-CD22), 에를리주맙(항-ITGB2(CD18)), 에르투막소맙(Rexomun, 항-HER2/neu, CD3), 에타라시주맙(Abegrin, 항-인터그린 αvβ3), 엑스비비루맙(항-B형 간염 표면 항원), 파놀레소맙(NeutroSpec, 항-CD15), 파랄리모맙(항-인터페론 수용체), 파를레투주맙(항-엽산 수용체 1), 펠비주맙(항-호흡기 융합 바이러스), 페자키누맙(항-IL-22), 피지투무맙(항-IGF-1 수용체), 폰토리주맙(항-IFN-γ), 포아비루맙(항-광견병 바이러스 당 단백질), 프레솔리무맙(항-TGB-β), 갈릭시맙(항-CD80), 간테네루맙(항-베타 아밀로이드), 가빌리모맙(항-CD147(asigin)), 젬투주맙(항-CD33), 지렌툭시맙(항-탄산 탈수효소 9), 글렘바투무맙(CR011, 항-GPNMB), 골리무맙(Simponi, 항-TNF-α), 고밀릭시맙(항-CD23(IgE 수용체)), 항-HLA-DR 항체, 이발리주납(항-CD4), 이브리투모맙(항-CD20), 이고보맙(Indimacis-125, 항-CA-125), 임시로맙(Myoscint, 항-심장 마이오신), 인플릭시맙(Remicade, 항-TNF-α), 인테투무맙(항-CD51), 인올리모맙(항-CD25(IL-2 수용체의 α 쇄), 이노투주맙(항-CD22), 이필리무맙(항-CD152), 이라투무맙(항-CD30(TNFRSF8)), 켈릭시맙(항-CD4), 라베투주맙(CEA-Cide, 항-CEA), 레브리키주맙(항-IL-13), 레말레소맙(항-NCA-90(과립구 항원)), 레르델리무맙(항-TGF 베타 2), 렉사투무맙(항-TRAIL-R2), 리비비루맙(항-B형 간염 표면 항원), 린투주맙(항-CD33), 루카투무맙(항-CD40), 루밀릭시맙(항-CD23(IgE 수용체), 마파투무맙(항-TRAIL-R1), 마슬리모맙(항-T-세포 수용체), 마투주맙(항-EGFR), 메폴리주맙(Bosa트라이아, 항-IL-5), 메텔리무맙(항-TGF 베타 1), 밀라투주맙(항-CD74), 민레투모맙(항-TAG-72), 미투모맙(BEC-2, 항-GD3 강글리오사이드), 모롤리무맙(항-레서스 인자), 마타비주맙(Numax, 항-호흡기 융합 바이러스), 무로모납-CD3(오쏘클론 OKT3, 항-CD3), 나콜로맙(항-C242), 납투모맙(항-5T4), 나탈리주맙(Tysabri, 항-인테그린 α4), 네바쿠맙(항-엔도톡신), 네시투무맙(항-EGFR), 네릴리모맙(항-TNF-α), 니모투주맙(Theracim, Theraloc, 항-EGFR), 노페투모맙, 오크렐리주맙(항-CD20), 오둘리모맙(아폴리모맙, 항-LFA-1(CD11a)), 오파투무맙(Arzerra, 항-CD20), 올라투맙(항-PDGF-Rα), 오말리주맙(Xolair, 항-IgE Fc 영역), 오포르투주맙(항-EpCAM), 오레고보맙(OVaRex, 항-CA-125), 오텔릭시주맙(항-CD3), 파기박시맙(항-리포테이코산), 팔리비주맙(Synagis, Abbosynagis, 항-호흡기 융합 바이러스), 판니누무납(Vectibix, ABX-EGF, 항-EGFR), 파노바쿠맙(항-슈도모나스 아레루기노사), 파스콜리주맙(항-IL-4), 펨투모맙(Theragyn, 항-MUC1), 퍼투주맙(Omnitarg, 2C4, 항-HER2/neu), 페셀리주맙(항-C5), 핀투모맙(항-선암 항원), 프릴릭시맙(항-CD4), 피투무맙(항-비멘틴), PRO 140(항-CCR5), 라코투모맙(1E10, 항-(N-글리콜릴뉴라민산(NeuGc, NGNA)-강글리오사이드 GM3)), 라피비루맙(항-광견병 바이러스 당단백질), 라무시루맙(항-VEGFR2), 라니비주맙(Lucentis, 항-VEGF-A), 락시바쿠맙(항-탄저균 독소, 보호 항원), 레가비루맙(항-사이토메갈로바이러스 당단백질 B), 레슬리주맙(항-IL-5), 리로투무맙(항-HGF), 리툭시맙(MabThera, 리툭산맙, 항-CD20), 로바투무맙(항-IGF-1 수용체), 론탈리주맙(항-IFN-α), 로벨리주맙(LeukArrest, 항-CD11, Cd18), 루플리주맙(Antova, 항-CD154(CD40L)), 사투모맙(항-TAG-72), 세비루맙(항-사이토메갈로바이러스), 시브로투주맙(항-FAP), 시팔리무맙(항-IFN-α), 실툭시맙(항-IL-6), 시플리주맙(항-CD2), (스마트)MI95(항-CD33), 솔라네주맙(항-베타 아밀로이드), 소넵시주맙(항-스핀고신-1-포스페이트), 손투주맙(항-에피시알린), 스탐울루맙(항-마이오스타틴), 술레소맙(LeukoScan, (항-NCA-90(과립구 항원), 타카투주맙(항-알파-페토프로테인), 타도시주맙(항-인터그린αIIbβ3), 탈리주맙(항-IgE), 타네주맙(항-NGF), 탑리투모맙(항-CD19), 테피바주맙(Aurexis,(항-클럼핑 인자 A), 텔리모맙, 테나투모맙(항-테나신 C), 테넬릭시맙(항-CD40), 테플리주맙(항-CD3), TGN1412(항-CD28), 티실이무맙(트레멜리무맙,(항-CRLA-4), 티가투주맙(항-TRAIL-R2), TNX-650(항-IL-13), 토실리주맙(아틀리주맙, 악템라, 로악템라, (항-IL-6-수용체), 토랄리주맙(항-CD154(CD40L)), 토시투모맙(항-CD20), 트라스투주맙(허셉틴,(항-HER2/neu), 트레멜리무맙(항-CTLA-4), 투코투주맙 셀몰루킨(항-EpCAM), 투비루맙(항-B형 간염 B 바이러스), 우르톡사주맙(에쉐리키아 콜라이), 우스테키누맙(Stelara, 항-IL-12, IL-23), 바팔리시맙(항-AOC3(VAP-1)), 베돌리주맙, (항-인테그린 α4β7), 벨투주맙(항-CD20), 베팔리모맙(항-AOC3(VAP-1)), 비실리주맙(Nuvion, 항-CD3), 비탁신(항-혈관 인테그린 avb3), 볼록시시맙(항-인테그린 α5β1), 보투무맙(HumaSPECT, 항-종양 항원 CTAA16.88), 잘루투무맙(HuMax-EGFr,(항-EGFR), 자놀리무맙(HuMax_CD4, 항-CD4), 지랄리무맙(항-CD147(basigin)), 졸리모맙(항-CD5), 에타네르셉트(Enbrel®), 알레파셉트(Amevive®), 아바타셉트(Orencia®), 릴오나셉트(Arcalyst), 14F7[항-IRP-2(철 단백질 2)], 14G2a(항-GD2 강글리오사이드, 흑색종 및 고형 종양의 경우 국립 암 기관으로부터), J591(항-PSMA, 전립선 암의 경우 웨일 코넬 메디컬 스쿨(Weill Cornell Medical School)), 225.28S[항-HMW-MAA(고분자량-흑색종-연관 항원), 흑색종의 경우 소린 라디오파르마시사(Sorin Radiofarmaci S.R.L.)(이태리 밀란 소재)], COL-1(항-CEACAM3, CGM1, 결장직장 및 위암의 경우 국립 암 기관), CYT-356(Oncoltad®, 전립선암의 경우), HNK20(호흡기 융합 바이러스의 경우 오라박스사(OraVax Inc.)), ImmuRAIT(NHL의 경우 이뮤노메딕스사(Immunomedics)로부터), Lym-1(항-HLA-DR10, 암의 경우 페레그린 팜사(Peregrine Pharm.)), MAK-195F(항-TNF(종양 괴사 인자; TNFA, TNF-알파: TNFSF2), 패혈증 독성 쇼크의 경우 애봇사(Abbott)/크놀사(Knoll)로부터), MEDI-500[T10B9, 항-CD3, TRαβ(T 세포 수용체 알파/베타), 복합체[이식편대 숙주병의 경우 메드이뮨사(MedImmune Inc)로부터], 고리 SCAN[항-TAG 72(종양 연관 당단백질 72), 유방암, 결장 및 직장암의 경우 네오프로브사(Neoprobe Corp)로부터], 아비시딘(항-EPCAM)(상피 세포 접착 분자), 항-TACSTD1(종양-연관 칼슘 신호 변환기 1), 항-GA733-2(위장내 종양-연관 단백질 2), 항-EGP-2(상피 당단백질 2); 항-KSA; KS1/4항원; M4S; 종양 항원 17-1A; CD326[결장암, 난소암, 전립선암 및 NHL의 경우 네옥스사(NeoRx Corp.)로부터]; 항-Trop-2-인간화 항체hRS7, 림포사이드(이뮤노메딕스사(Immunomedics), 미국 뉴저지주 소재), 스마트 ID10(프로테인 디자인 랩(Protein Design Lab)), 온코림(테크니클론사(Techniclone Inc), 미국 캘리포니아주 소재), 알로문(바이오트랜스플랜트사(BioTransplant), 미국 캘리포니아주 소재), 항-VEGF(제넨테크사(Genentech), 미국 캘리포니아주 소재); CEAcide(이뮤노메딕스사, 미국 뉴저지주 소재), IMC-1C11(임클론 시스템즈사(ImClone Systems)) 및 세툭시맙(임클론사)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
결합 리간드로서의 다른 항체는 하기 항원에 대한 항체: 아미노펩티다제 N(CD13), 아넥신 A1, B7-H3(CD276, 각종 암), CA125(난소), CA15-3(암종), CA19-9(암종), L6(암종), 루이스 Y(암종), 루이스 X(암종), 알파 페토프로테인(암종), CA242(결장직장), 태반 알칼린 포스파타제(암종), 전립선 특이적 항원(전립선), 전립선산 포스파타제(전립선), 표피 성장 인자(암종), CD2(호지킨병, NHL 림프종, 다발성 골수종), CD3 엡실론 T 세포 림프종, 폐암, 유방암, 위암, 난소암, 자가면역 질환, 악성 복수), CD19(B 세포 악성종양), CD20(비호지킨 림프종), CD22(백혈병, 림프종, 다발성 골수종, SLE), CD30(호지킨 림프종), CD33(백혈병, 자가면역 질환), CD38(다발성 골수종), CD40(림프종, 다발성 골수종, 백혈병 (CLL)), CD51(전이성 흑색종, 육종), CD52(백혈병), CD56(소세포 폐암, 난소암, 마켈(Merkel) 세포 암종 및 액상 종양, 다발성 골수종), CD66e(암), CD70(전이성 신장 세포 암종 및 비호지킨 림프종), CD74(다발성 골수종), CD80(림프종), CD98(암), 뮤신(암종), CD221(고형 종양), CD227(유방암, 난소암), CD262 (NSCLC 및 기타 암), CD309(난소암), CD326(고형 종양), CEACAM3(결장직장, 위암), CEACAM5(암배아 항원; CEA, CD66e)(유방암, 결장직장암 및 폐암), DLL4(Δ-유사-4), EGFR(표피 성장 인자 수용체, 각종 암), CTLA4(흑색종), CXCR4(CD184, 헴-종양학(Heme-oncology), 고형 종양), 엔도글린(CD105, 고형 종양), EPCAM(상피 세포 접착 분자, 방광암, 두부암, 경부암, 결장암, NHL 전립선암 및 난소암), ERBB2(표피 성장 인자 수용체 2; 폐암, 유방암, 전립선암), FCGR1(자가면역 질환), FOLR(엽산염 수용체, 난소암), GD2 강글리오사이드(암), G-28(세포 표면 항원 글리볼리피드, 흑색종), GD3 이디오타입(암), 열 충격 단백질(암), HER1(폐암, 위암), HER2(유방암, 폐암 및 난소암), HLA-DR10(NHL), HLA-DRB(NHL, B 세포 백혈병), 인간 융모성 성선 자극 호르몬(암종), IGF1R(인슐린-유사 성장 인자 1 수용체, 고형 종양, 혈액 암), IL-2 수용체(인터류킨 2 수용체, T-세포 백혈병 및 림프종), IL-6R(인터류킨 6 수용체, 다발성 골수종, RA, 캐슬맨병, IL6 의존성 종양), 인테그린(각종 암의 경우 αvβ3, α5β1, α6β4, αllβ3, α5β5, αvβ5), MAGE-1(암종), MAGE-2(암종), MAGE-3(암종), MAGE 4(암종), 항-트랜스페린 수용체(암종), p97(흑색종), MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 및 구성원 1, 비호지킨 B 세포 림프종, 백혈병), MUC1 또는 MUC1-KLH(유방암, 난소암, 자궁경부암, 기관지암 및 위장내 암), MUC16(CA125)(난소암), CEA(결장직장), gp100(흑색종), MART1(흑색종), MPG(흑색종), MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A, 소세포 폐암, NHL), 뉴클레오린, Neu 종양유전자 산물(암종), P21(암종), 항-(N-글리콜릴뉴라민산의 파라토프(유방암, 흑색종암), PLAP-유사 고환 알칼리 포스파타제(난소암, 고환암), PSMA(전립선 종양), PSA(전립선), ROBO4, TAG 72(종양 연관 당단백질 72, AML, 위암, 결장직장암, 난소암), T 세포 막관통 단백질(암), 타이(Tie)(CD202b), TNFRSF10B(종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 10B, 암), TNFRSF13B(종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 13B, 다발성 골수종, NHL, 기타 암, RA 및 SLE), TPBG(영양아층 당단백질, 신장 세포 암종), TRAIL-R1(종양 괴사 세포사멸 유도 리간드 수용체 1, 림프종, NHL, 결장직장암, 폐암), VCAM-1(CD106, 흑색종), VEGF, VEGF-A, VEGF-2(CD309)(각종 암)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 항체에 의해서 인식되는 일부 다른 종양 연관 항원은 문헌[Gerber, et al., mAbs 1:3, 247-253 (2009); Novellino et al., Cancer Immunol Immunother. 54(3), 187-207 (2005). Franke, et al., Cancer Biother Radiopharm. 2000, 15, 459-76]에 검토되어 있다. 항체에 대한 이들 항원의 예는 다음과 같다: 다수의 다른 분화 클러스터(Cluster of Differentiation)(CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD9, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD12w, CD14, CD15, CD16, CDw17, CD18, CD21, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD31, CD32, CD34, CD35, CD36, CD37, CD41, CD42, CD43, CD44, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49b, CD49c, CD53, CD54, CD55, CD58, CD59, CD61, CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD68, CD69, CD71, CD72, CD79, CD81, CD82, CD83, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD95, CD96, CD100, CD103, CD105, CD106, CD109, CD117, CD120, CD127, CD133, CD134, CD135, CD138, CD141, CD142, CD143, CD144, CD147, CD151, CD152, CD154, CD156, CD158, CD163, CD166, .CD168, CD184, CDw186, CD195, CD202(a, b), CD209, CD235a, CD271, CD303, CD304), 아넥신 A1, 뉴클레올린, 엔도글린(CD105), ROBO4, 아미노-펩티다제 N, Δ-유사-4(DLL4), VEGFR-2(CD309), CXCR49CD184), Tie2, B7-H3, WT1, MUC1, LMP2, HPV E6 E7, EGFRvIII, HER-2/neu, Idiotype, MAGE A3, p53 비돌연변이체, NY-ESO-1, GD2, CEA, MelanA/MART1, Ras 돌연변이체, gp100, p53 돌연변이체, 프로테이나제3(PR1), bcr-abl, 타이로시나제, 서바이빈, hTERT, 육종 전위 파단점(Sarcoma translocation breakpoint), EphA2, PAP,㎖-IAP, AFP, EpCAM, ERG(TMPRSS2 ETS 융합 유전자), NA17, PAX3, ALK, 안드로겐 수용체, 사이클린 B1, 폴리시알산, MYCN, RhoC, TRP-2, GD3, 푸코실 GM1, 메소텔린, PSCA, MAGE A1, sLe(a), CYP1B1, PLAC1, GM3, BORIS, Tn, GloboH, ETV6-AML, NY-BR-1, RGS5, SART3, STn, 탄산 탈수효소 IX, PAX5, OY-TES1, 정자 단백질 17, LCK, HMWMAA, AKAP-4, SSX2, XAGE 1, B7H3, 레구마인 Tie 2, Page4, VEGFR2, MAD-CT-1, FAP, PDGFR-β, MAD-CT-2, Fos-관련 항원 1.
또 다른 실시형태에서, 본 발명의 동결건조용 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 분말은 하기 특정 조성을 갖는다: 제형 중의 주성분으로서 1중량% 내지 95중량%의 화학식 (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) 또는 (VII)의 접합체, 0.0% 내지 15.0%의 폴리올; 0.0% 내지 0.5%의 1종 이상의 계면활성제; 0.0% 내지 10%의 1종 이상의 아미노산, 0.0% 내지 5%의 보존제 및 0.0% 내지 10%의 pH 4.5 내지 8.5로 조정하기 위한 완충제 염.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 동결건조용 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 분말은 하기 특정 조성을 갖는다: 제형 중의 주성분으로서 10중량% 내지 85중량%의 화학식 (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) 또는 (VII)의 접합체, 0.0% 내지 10.0%의, 예를 들어, 수크로스 또는 트레할로스 이수화물로부터 선택된 폴리올; 0.1% 내지 0.25%의 예를 들어, 폴리솔베이트 20 또는 폴리솔베이트 80으로부터 선택된 1종 이상의 계면활성제; 0.0% 내지 10%의, 예를 들어, 시스틴, 글리신, 라이신, 히스티딘, 오르니틴, 아이소류신, 류신, 알라닌, 글리신, 글루탐산 또는 아스파트산으로부터 선택된 1종 이상의 아미노산; 0.5% 내지 5%의, 예를 들어, 벤질 알코올로부터 선택되는 보존제 및 1% 내지 10%의, pH 5 내지 7로 조정하기 위한 예를 들어, 시트르산나트륨 또는 시트르산 일수화물로부터 선택된 완충제 염.
추가의 구체적인 실시형태에서, 동결건조용 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 분말은 하기 특정 조성을 갖는다: 제형 중의 주성분으로서 15중량% 내지 85중량%의 화학식 (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) 또는 (VII)의 접합체, 3% 내지 8%의, 예를 들어, 수크로스 또는 트레할로스 이수화물로부터 선택된 폴리올; 0.1% 내지 0.25%의, 예를 들어, 폴리솔베이트 20 또는 폴리솔베이트 80으로부터 선택된 1종 이상의 계면활성제; 0.0% 내지 8.0%의, 예를 들어, 아르기닌, 글리신, 히스티딘, 오르니틴 또는 알라닌으로부터 선택된 1종 이상의 아미노산; 2.0% 내지 10.0%의, 예를 들어, pH 5 내지 6으로 조정하기 위한 예를 들어, 시트르산나트륨 또는 시트르산 일수화물로부터 선택된 완충제 염.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 본 발명의 튜불리신 유사체와 세포-결합 분자의 접합체는 암의 치료를 위한 본 발명의 조성물 및 방법에 따라서 사용된다. 암은 부신피질 암종, 항문암, 방광암, 뇌종양(성인, 뇌 줄기 세포종, 유년기, 소뇌 성상 세포종, 대뇌 성상 세포종, 뇌실막종, 수아종, 원시 신경 외배엽 및 송과체 종양, 시각 경로 및 시상하부 신경교종), 유방암, 카르시노이드 종양, 위장내, 미지의 원발성 암종, 경부암, 결장암, 자궁내막암, 식도암, 간외 담관암, 유잉(Ewing) 패밀리의 종양(PNET), 두개외 배아 세포 종양, 안구암, 안내 흑색종, 담낭암, 위암(위), 배아 세포 종양, 생식선외, 임신성 영양아층 종양, 두경부암, 하인두암, 도 세포 암종, 신장암(신장세포암), 후두암, 백혈병(급성 림프구성, 급성 골수성, 만성 림프구성, 만성 골수성, 털 세포), 입술 및 구강암, 간암, 폐암(비소세포, 소세포, 림프종(AIDS-관련, 중추 신경계, 피층 T-세포, 호지킨병, 비호지킨병, 악성 중피종, 흑색종, 머켈 세포 암종, 잠복 원발성 다발성 골수종을 동반한 전이성 편평 두부암 및 기타 형질 세포 신생물, 균상식육종, 골수이형성 증후군, 척수 증식성 장애, 비인두암, 신경모세포종, 구강암, 구강인두암, 골육종, 난소암(상피, 배아 세포 종양, 저 악성 잠재성 종양), 췌장암(외분비, 도세포 암종), 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 크롬친화성세포종 암, 뇌하수체암, 형질 세포 신생물, 전립선암, 횡문근 육종, 직장암, 신장 세포 암(신장암), 신장 골반 및 폐렴(이행세포), 침샘 암, 세자리 증후군, 피부암, 피부암(피부 T-세포 림프종, 카포시 육종, 흑색종), 소장암, 연조직 육종, 위암, 고환암, 흉선종(악성), 갑상선암, 요도암, 자궁암(육종), 유년기의 특이한 암, 질암, 불바르(Vulvar)암, 빌름스(Wilms) 종양을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 본 발명의 튜불리신 유사체-세포-결합 분자 접합체는 자가면역 질환의 치료 또는 예방을 위한 본 발명의 조성물 및 방법에 따라서 사용된다. 자가면역 질환은 아클로히드라(Achlorhydra) 자가면역 활성 만성 감염, 급성 파종 뇌척수염, 급성 출혈성 뇌백질염, 애디슨병, 무감마글로불린혈증, 원형 탈모증, 경화증, 강직성 척추염, 항-GBM/TBM 신염, 항인지질 증후군, 항합성효소 증후군, 관절염, 아토피성 알레르기, 아토피성 피부염, 자가면역성 재생불량성 빈혈, 자가면역성 심근증, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역성 간염, 자가면역성 내이병, 자가면역성 림프증식 증후군, 자가면역성 말초 신경병증, 자가면역성 췌장염, 자가면역성 다선 증후군 타입 I, II 및 III, 자가면역성 프로게스테론 피부염, 자가면역성 혈소판감소성 자반증, 자가면역성 포도막염, 발로병/발로 동심성 경화증, 바체트 증후군, 버거병, 비커스태프 뇌염, 블라우 증후군, 수포성 유사천포창, 캐슬맨병, 사가스병, 만성 피로 면역 이상 증후군, 만성 염증성 탈수초성 다발성신경병증, 만성 재발성 다병소성 골수염, 만성 라임병, 만성 폐쇄성 폐 질환, 척 슈트라우스 증후군, 흉터유사천포창, 실리악병, 코간 증후군, 한냉 응집 질환, 보체 성분 2 결핍, 두개 동맥염, CREST 증후군, 크론병(특발성 염증성 장질환의 유형), 쿠싱 증후군, 피부 백혈구파괴성 혈관염, 데고병, 더쿰병, 포진형 피부염, 피부근육염, 1형 당뇨병, 광범위 피부 전신 경화증, 드레슬러 증후군, 원판상 홍반성 낭창, 습진, 자궁내막증, 착부염-관련 관절염, 호산구성 근막염, 후천성 표피 수포증, 결절성 홍반, 필수 혼합 한랭글로불린혈증, 에반 증후군, 진행성 골화성 섬유이형성증, 섬유근육통, 섬유근염, 섬유화 아베올리티스, 위염, 위장 천포창, 거대 세포 동맥염, 사구체 신염, 굿파스처 증후군, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군(GBS), 하시모토 뇌염, 하시모토 갑상선염, 용혈성 빈혈, 헤노흐-숀라인 자반증, 임신성 포진, 화농성 한선염, 휴게스 증후군(항 인지질 증후군 참조), 저감마글로불린혈증, 특발성 염증성 탈수초성 질환, 특발성 폐섬유증, 특발성 혈소판 감소성 자반증(자가면역 혈소판 감소성 자반증 참조), IgA 신증(또한 버거병), 인클루전 바디 근염, 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 간질성 방광염, 과민성 대장 증후군(IBS), 청소년 특발성 관절염, 청소년 류마티스 관절염, 가와사키병, 램버트-이튼 근무력 증후군, 백혈구파괴 혈관염, 편평 태선, 경화성 태선, 선형 IgA 질환(LAD), 루게릭병(또한 루게릭 경화증), 루포이드 간염, 홍반성 낭창, 마지드 증후군, 메니에르병, 현미경 다발성 맥관염, 밀러-피셔 증후군, 혼합 결합 조직 질환, 경화증, 무차-하버만병, 머클-웰스 증후군, 다발성 골수종, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 근염, 기면증, 시신경척수염(또한 데빅병), 신경근육기장증, 안구 반흔 천포창, 안구간대경련-근간대경련 증후군, 오드 갑상선염, 재발성 류마티스, PANDAS(스트렙토코쿠스 연관 소아 면역 신경 정신 장애), 부신생물 소뇌 변성, 발작성 야간 혈색소뇨증, 패리 롬베르그 증후군, 파르소니지-터너 증후군, 중간부 포도막염, 천포창, 심상성 천포창, 악성 빈혈, 정맥주위 뇌척수염, POEMS 증후군, 결절성 다발 동맥염, 다발성 근육통, 다발성 근염, 원발성 담즙 간경변, 원발성 경화성 담관염, 진행성 염증성 신경병증, 건선, 건선 관절염, 괴저성 농피증, 순수 적혈구 무형성증, 라스무센 뇌염, 레이노 현상, 재발성 다발 연골염, 라이터 증후군, 하지불안 증후군, 후복막 섬유증, 류마티스 관절염, 류마티스 열, 사르코이드증, 정신분열증, 슈미트 증후군, 슈니츨러 증후군, 공막염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 척추 관절증, 점착성 혈액 증후군, 스틸병, 강직인간 증후군, 아급성 세균성 심내막염(SBE), 수사크 증후군, 스위트 증후군, 시데남무도병, 교감 안염, 타카야수 동맥염, 측두 동맥염(거대 세포 동맥염함), 톨로사-헌트 증후군, 횡단성 척수염, 궤양성 대장염(특발성 염증성 장 질환의 유형), 미분화 결합 조직 질환, 미분화 척추 관절병증, 혈관염, 백반증, 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 윌슨 증후군(Wilson's syndrome) 및 위스코트-아드리치 증후군(Wiskott-Aldrich syndrome)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 자가면역 질환의 치료 또는 예방을 위한 접합체를 위해서 사용되는 세포-결합 분자는, 항-엘라스틴 항체; 상피 세포 항체에 대한 Abys; 항-기저막 콜라겐 타입 IV 단백질 항체; 항-핵 항체; 항 ds DNA; 항 ss DNA, 항 카디올리핀 항체 IgM, IgG; 항-셀리악 항체; 항 인지질 항체 IgK, IgG; 항 SM 항체; 항 미토콘드리아 항체; 갑상선 항체; 마이크로솜 항체, T-세포 항체; 티로글로불린 항체, 항 SCL-70; 항-Jo; 항-U.sub.1RNP; 항-La/SSB; 항 SSA; 항 SSB; 항 페리탈(Perital) 세포 항체; 항 히스톤; 항 RNP; C-ANCA; P-ANCA; 항 동원체; 항-피브릴라린 및 항 GBM 항체, 항-강글리오사이드 항체; 항-데스모게인 3 항체; 항-p62 항체; 항-sp100 항체; 항-미토콘드리아(M2) 항체; 류마티스 인자 항체; 항-MCV 항체; 항-토포아이소머라제 항체; 항-호중구 세포질(cANCA) 항체를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
특정 바람직한 실시형태에서, 본 발명에서 접합체를 위한 세포-결합 분자는 자가면역 질환과 연관된 활성화된 림프구 상에서 발현되는 수용체 또는 수용체 복합체 둘 다에 결합할 수 있다. 수용체 또는 수용체 복합체는 면역글로불린 유전자 슈퍼패밀리 구성원(예를 들어, CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD22, CD28, CD79, CD90, CD152/CTLA-4, PD-1 또는 ICOS), TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원(예를 들어, CD27, CD40, CD95/Fas, CD134/OX40, CD137/4-1BB, INF-R1, TNFR-2, RANK, TACI, BCMA, 오스테오프로테게린, Apo2/TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRAIL-R3, TRAIL-R4 및 APO-3), 인테그린, 사이토카인 수용체, 케모카인 수용체, 주조직 적합성 단백질, 렉틴(C-타입, S-타입, 또는 I-타입), 또는 보체 대조군 단백질을 포함할 수 있다.
또 다른 구체적인 실시형태에서, 바이러스 또는 미생물 항원에 면역특이적인 유용한 세포 결합 리간드는 인간화 또는 인간 단클론성 항체이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "바이러스 항원"은 면역 반응을 도출할 수 있는 임의의 바이러스성 펩타이드, 폴리펩타이드 단백질(예를 들어, HIV gp120, HIV nef, RSV F 당단백질, 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제, 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌, HTLV tax, 단순 포진 바이러스 당단백질(예를 들어, gB, gC, gD 및 gE) 및 B형 간염 표면 항원)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "미생물 항원"은 면역 반응을 도출할 수 있는 임의의 미생물 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 당류, 다당류, 또는 지질 분자(예를 들어, 박테리아, 진균, 병원성 원생동물 또는 효모 폴리펩타이드, 예를 들어, LPS 및 협막 다당류 5/8 포함)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 바이러스 또는 미생물 감염에 사용 가능한 항체의 예는 RSV 감염의 치료를 위한 인간화된 항-호흡기 융합 바이러스 단클론성 항체인 팔리비주맙; HIV 감염의 치료를 위한 CD4 융합 항체인 PRO542; B형 간염 바이러스의 치료를 위한 인간 항체인 오스타비어; 사이토메갈로바이러스의 치료를 위한 인간화된 IgG.sub.1 항체인 PROTVIR; 및 항-LPS 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 발명의 튜불리신 유사체-세포-결합 분자 접합체는 감염성 질환의 치료에 사용될 수 있다. 이들 감염성 질환은 아시네토박터(Acinetobacter) 감염, 방선균증(Actinomycosis), 아프리카 수면병(아프리카 트리파노소마증(African trypanosomiasis)), AIDS(후천성 면역결핍증), 아메바증, 아나플라즈마증(Anaplasmosis), 탄저병, 용혈성 아카노박테리아균 감염(Arcanobacterium haemolyticum infection), 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증(Aspergillosis), 아스트로바이러스 감염(Astrovirus infection), 바베시아증, 바실루스 세레우스 감염(Bacillus cereus infection), 세균성 폐렴, 세균성 질염, 박테로이데스 감염, 발란티듐증, 바일리사스카리스 감염(Baylisascaris infection), BK 바이러스 감염, 흑색사모증, 블라스토시스티스 호미니스 감염, 분아진균증, 볼리비아 출혈열, 보렐리아 감염, 보툴리누스증(및 영아 보툴리누스증), 브라질 출혈열, 브루셀라증, 버크홀데리아 감염(Burkholderia infection), 부룰리 궤양(Buruli ulcer), 칼리시바이러스 감염(Calicivirus infection)(노로바이러스(Norovirus) 및 사포바이러스(Sapovirus)), 캠필로박테리아증(Campylobacteriosis), 칸디다증(모닐리아증; 아구창), 고양이 할큄병(Cat-scratch disease), 봉와직염, 샤가스병(아메리카 수면병), 무른 궤양, 수두, 클라미디아, 클라미마이도필라 폐렴균 감염(Chlamydophila pneumoniae infection), 콜레라, 클로모블라스트진균증(Chromoblastomycosis), 간흡충증(Clonorchiasis), 클로스트리디움 디피실 감염(Clostridium difficile infection), 콕시디오이데스 진균증(Coccidioidomycosis), 콜로라도 진드기열(Colorado tick fever), 통상의 감기(급성 바이러스 비인두염; 급성 비염), 크로이츠펠트-야콥병(Creutzfeldt-Jakob disease), 크리민-콩고 출혈열(Crimean-Congo hemorrhagic fever), 크립토코커스증(Cryptococcosis), 크립토스포리디움증(Cryptosporidiosis), 피부 유충이행증(Cutaneous larva migrans), 원포자증, 낭미충증, 사이토메갈로바이러스 감염, 댕기열, 이핵아메바증, 디프테리아, 광절열두조충, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증(Echinococcosis), 에를리히아증(Ehrlichiosis), 요충증(Enterobiasis)(요충 감염), 엔테로코쿠스 감염(Enterococcus infection), 엔테로바이러스 감염(Enterovirus infection), 발진 티푸스(Epidemic typhus), 전염성 홍반(Erythema infectiosum)(제5 질환(Fifth disease)), 돌발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움 퍼프린겐스에 의한 식중독(Food poisoning by Clostridium perfringens), 자유 생존 아메바 감염(Free-living amebic infection), 푸소박테리움 감염(Fusobacterium infection), 가스괴사병(크로스티리디아성 근괴사(Clostridial myonecrosis)), 게오트리쿰증, 게르스트만-슈트로이슬러-샤인커 증후군(Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome), 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종(도노바니아증), 군 A 스트렙토코쿠스 감염(streptococcal infection), 군 B 스트렙토코쿠스 감염, 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae) 감염, 수족구병(hand, foot and mouse disease: HFM), 한타바이러스 폐 증후군, 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori) 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염(Hookworm infection), 인간 보카바이러스 감염(Human bocavirus infection), 인간 에윈기 에를리히아증(Human ewingii ehrlichiosis), 인간 과립구성 아나플라마증(Human granulocytic anaplasmosis), 인간 메타뉴모바이러스 감염(Human metapneumovirus infection), 인간 단핵구성 에를리히아증(Human monocytic ehrlichiosis), 인간 파필로마 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증(Hymenolepiasis), 엡스타인-바르 바이러스 전염성 단핵증(Mononucleosis: Mono), 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨개(Kingella kingae) 감염, 구루병, 라사열, 레지오넬라증(재향군인병), 레지오넬라증(폰티악열병), 리슈만편모충증, 한센병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병(라임 보렐리아증(Lyme borreliosis)), 림프성 사상충증(상피병), 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 유비저(휘트모어병(Whitmore's disease)), 뇌수막염(Meningitis), 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 유행성 이하선염, 발진열(전염성 티푸스), 마이코플라스마 폐렴(Mycoplasma pneumonia), 진균종, 구더기증, 신생아 결막염(신생아 안염), (신규) 변종 크로이츠펠트-야콥병(vCJD, nvCJD), 노카르디아증, 회선사상충층(사상충증), 파라콕시디오이데스 진균증(Paracoccidioidomycosis)(남아메리카 분아균증(South American blastomycosis)), 폐흡충증, 파스투렐라병, 머리이 기생증(머릿니), 몸니 기생증(몸니), 사면발이 기생증(사면발이(Pubic lice, Crab lice)), 골반 염증성 질병, 백일해(Pertussis, Whooping cough), 흑사병, 폐렴구균 감염, 주폐포자충 폐렴, 폐렴, 소아마비, 프레보텔라 감염, 원발성 아메바성 수막뇌염, 진행성 다병소성 백질뇌증, 앵무새병(Psittacosis), Q 열, 광견병(Rabies), 서교증, 호흡기 융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케차 감염, 리케차두창, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, SARS(중증 급성 호흡기 증후군), 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 세균성 이질(Shigellosis, Bacillary dysentery), 대상포진(Shingles, Herpes zoster), 천연두(Smallpox, Variola), 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 매독, 조충증, 파상풍(Tetanus, Lockjaw), 수염백선증(Tinea barbae, Barber's itch), 머리백선증(Tinea capitis, Ringworm of Scalp), 몸백선증(Tinea corporis, Ringworm of Body), 샅백선증(Tinea cruris, Jock itch), 수부백선(Tinea manuum, Ringworm of Hand), 흑색백선증, 무좀(Tinea pedis, Athlete's foot), 손발톱백선증(Tinea unguium, Onychomycosis), 어루르기(Tinea versicolor, Pityriasis versicolor), 톡소카라증(안구유충이행증), 톡소카라증(내장유충이행증), 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증(편충 감염), 폐결핵, 산토끼병, 유레아플라스마 감염, 베네수엘라 마뇌염, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색사모증(백색 윤선), 가성 결핵균 감염, 예시니아증, 황열 및 접합균증을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
세포-결합 분자,본 특허에 기재된 바람직한 항체는 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii), 악티노마이세스 이스라엘리(Actinomyces israelii), 악티노마이세스 제렌세리애(Actinomyces gerencseriae) 및 프로피온니박테리움 프로피오니쿠스(Propionibacterium propionicus), 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), HIV(인간 면역결핍 바이러스), 이질아메바(Entamoeba histolytica), 안나플라즈마 속(Anaplasma genus), 바실루스 안트라시스(Bacillus anthracis), 용혈성 아카노박테리아균(Arcanobacterium haemolyticum), 주닌 바이러스, 아카리스 루브리코이데스(Ascaris lumbricoides), 아스페르길루스 속(Aspergillus genus), 아스트로비리대 패밀리(Astroviridae family), 바베시아 속(Babesia genus), 바실루스 세레우스(Bacillus cereus), 멀티플 박테리아(multiple bacteria), 박테로이데스 속(Bacteroides genus), 발란티디움 콜라이(Balantidium coli), 배이리사스카리스 속(Baylisascaris genus), BK 바이러스, 피에드라이아 호르태(Piedraia hortae), 블라스토시스티스 호미니스(Blastocystis hominis), 블라스토마이세스 더마티티데스(Blastomyces dermatitides), 마추포(Machupo) 바이러스, 보렐리아 속(Borrelia genus), 클로스트리디움보툴리늄(Clostridium botulinum), 사비아(Sabia), 브루셀라 속(Brucella genus), 통상 부르크홀데리아 세파시아(usually Burkholderia cepacia) 및 기타 부르크홀데리아 종, 마이코박테리움 울세란스(Mycobacterium ulcerans), 칼리시비리대 패밀리(Caliciviridae family), 캄필로박터 속(Campylobacter genus), 통상 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 및 기타 칸디다 종, 바르토넬라 헨셀래(Bartonella henselae), 군 A 스트렙토코쿠스 및 스타필로코쿠스, 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 헤모필루스 듀크레이(Haemophilus ducreyi), 바리셀라 조스터(Varicella zoster) 바이러스(VZV), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 클라미도필라 뉴모니애(Chlamydophila pneumoniae), 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae), 포세카애 페드로소이(Fonsecaea pedrosoi), 클로노치스 시엔시스(Clonorchis sinensis), 클로스트리듐 디피실(Clostridium difficile), 콕시디오이데스임미티스(Coccidioides immitis) 및 콕시디오이데스 포사다시(Coccidioides posadasii), 콜로라도 진드기 열 바이러스, 리노바이러스, 코로나바이러스, CJD 프리온, 크리민-콩고 출혈열 바이러스, 크립토코쿠스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 크립토스포르디움 속(Cryptosporidium genus), 안사이클로토마 브라질리엔스(Ancylostoma braziliense); 멀티플 기생충, 사이클로스포라 카이에타넨시스(Cyclospora cayetanensis), 태니아 솔리움(Taenia solium), 사이토메갈로바이러스, 뎅기 바이러스(DEN-1, DEN-2, DEN-3 및 DEN-4) - 플라비바이러스(Flavivirus), 장관기생아메바(Dientamoeba fragilis), 코리네박테리움 디프테리애(Corynebacterium diphtheriae), 디필로보트륨(Diphyllobothrium), 드라쿤쿨루스 메디엔시스(Dracunculus medinensis), 에볼라바이러스, 에치노코쿠스 속(Echinococcus genus), 에를리히아속(Ehrlichia genus), 엔테로비우스 버미쿨라리스(Enterobius vermicularis), 엔테로코쿠스 속(Enterococcus genus), 엔테로바이러스 속, 리케치아 프로와제키(Rickettsia prowazekii), 파보바이러스(Parvovirus) B19, 인간 헤르페스바이러스 6 및 인간 헤르페스바이러스 7, 파실로롭시스 부스키(Fasciolopsis buski), 파시올라 헤파티카(Fasciola hepatica) 및 파시올라 지간티카(Fasciola gigantica), FFI 프리온(prion), 필라리오데 슈퍼패밀리(Filarioidea superfamily), 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 푸소박테륨 속(Fusobacterium genus), 클로스트리디움 퍼프리젠스(Clostridium perfringens); 기타 클로스트리듐 종, 게오트리쿰 칸디둠(Geotrichum candidum), GSS 프리온, 지아디아 인테스티날리스(Giardia intestinalis), 부르크홀데리아 말레이(Burkholderia mallei), 그나토스토마 스피니게룸(Gnathostoma spinigerum) 및 그나토마스토마 히스피둠(Gnathostoma hispidum), 니세리아 고노호애(Neisseria gonorrhoeae), 클레브시엘라 그라눌로마티스(Klebsiella granulomatis), 스트렙토코쿠스 파이오제네스(Streptococcus pyogene), 스트렙토코쿠스 아갈락티애(Streptococcus agalactiae), 해모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae), 엔테로바이러스, 주로 콕사키(Coxsackie) A 바이러스 및 엔테로바이러스 71, 신 놈브레(Sin Nombre) 바이러스, 헬리코박터 파일로리, 에쉐리키아 콜라이(Escherichia coli) O157:H7, 부니아비리대 패밀리(Bunyaviridae family), A형 간염 바이러스, B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, D형 간염 바이러스, E형 간염 바이러스, 단순 포진 바이러스 1, 단순 포진 바이러스 2, 히스토플라스마 캡슐라툼(Histoplasma capsulatum), 십이지장충(Ancylostoma duodenale) 및 아메리카 구충(Necator americanus), 헤모필루스 인플루엔자(Hemophilus influenzae), 인간 보카바이러스(Human bocavirus), 에를리히아 유잉이(Ehrlichia ewingii), 아나플라즈마 파고시토필륨(Anaplasma phagocytophilum), 인간 메타뉴모바이러스(metapneumovirus), 에를리히아 샤펜시스(Ehrlichia chaffeensis), 인간 파필로마바이러스, 인간 파라인플루엔자 바이러스, 소형조충(Hymenolepis nana) 및 쥐조충(Hymenolepis diminuta), 엡스테인-바르 바이러스, 오르토믹소비리대 패밀리(Orthomy-xoviridae family), 이소스포라 벨리(Isospora belli), 킨젤라 킨가에(Kingella kingae), 클레브시엘라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae), 클레브시엘라 오자에나스(Klebsiella ozaenas), 클레브시엘라 리노스클레로모티스(Klebsiella rhinoscleromotis), 크루 프리온(Kuru prion), 라사(Lassa) 바이러스, 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila), 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila), 레이쉬마니아 속(Leishmania genus), 마이코박테리움 레프래(Mycobacterium leprae) 및 마이코박테리움 레프로마토시스(Mycobacterium lepromatosis), 렙토스피라 속(Leptospira genus), 리스테리아 모노시토제네스(Listeria monocytogenes), 보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi) 및 기타 보렐리아 종(Borrelia species), 반크로프트사상충(Wuchereria bancrofti) 및 말레이사상충(Brugia malayi), 림프구성 맥낙 뇌막염 바이러스(Lymphocytic choriomeningitis virus: LCMV), 플라스모디움 속(Plasmodium genus), 마버그(Marburg) 바이러스, 메슬레스(Measles) 바이러스, 부르콜데리아 슈도말레이(Burkholderia pseudomallei), 나이세리아 메닝지티데스(Neisseria meningitides), 메타고니무스 요카가와이(Metagonimus yokagawai), 마이코플라스마 문(Microsporidia phylum), 감염성 연속종 바이러스(Molluscum contagiosum virus: MCV), 볼거리(Mumps) 바이러스, 리케치아 티피(Rickettsia typhi), 마이코플라스마 뉴모니애, 다수중 종의 박테리아(악티노마이세토마) 및 진균(에우미세토마(Eumycetoma)), 기생충 날개 달린 파리 유충(parasitic dipterous fly larvae), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis) 및 임균(Neisseria gonorrhoeae), vCJD 프리온, 노카디아 아스테로이드(Nocardia asteroides) 및 기타 노카르디아 종(Nocardia species), 회선사상충(Onchocerca volvulus), 파라콕시디오이데스 브라질리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis), 폐흡충(Paragonimus westermani) 및 기타 폐흡충 종, 파스테우렐라 속(Pasteurella genus), 머리이(Pediculus humanus capitis), 몸니(Pediculus humanus corporis), 사면발이(Phthirus pubis), 보르데텔라 퍼투시스(Bordetella pertussis), 에르시니아 페스티스), 스트렙토콕쿠스 뉴모니애(Streptococcus pneumoniae), 뉴모사이스티스 지로베시(Pneumocystis jirovecii), 폴리오바이러스(Poliovirus), 프레보텔라 속(Prevotella genus), 내글러리아 파울레리(Naegleria fowleri), JC 바이러스, 클라미도필라 프시타시(Chlamydophila psittaci), 콕시엘라 부르네티(Coxiella burnetii), 광견병 바이러스, 스트렙토바실루스 모닐리포르미스(Streptobacillus moniliformis) 및 스피리룸 미너스(Spirillum minus), 호흡기 융합 바이러스, 리노스포리듐 시베리(Rhinosporidium seeberi), 리노바이러스, 리케치아 속(Rickettsia genus), 리케차 아카리(Rickettsia akari), 리프트 밸리 열 바이러스(Rift Valley fever virus), 리케차 리케트시(Rickettsia rickettsii), 로타 바이러스, 루벨라 바이러스, 살모넬라 속(Salmonella genus), SARS 코로나바이러스, 사르콥테스 스카비에이(Sarcoptes scabiei), 스치스토소마 속(Schistosoma genus), 시겔라 속(Shigella genus), 바리셀라 조스터(Varicella zoster) 바이러스, 바리올라 메이저(Variola major) 또는 바리올라 마이너(Variola minor), 스포로트릭스 셴키(Sporothrix schenckii), 스타필로코쿠스 속, 스타필로코쿠스 속, 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스트렙토코쿠스 피오제네스(Streptococcus pyogenes), 분선충(Strongyloides stercoralis), 매독트레포네마(Treponema pallidum), 태니아 속(Taenia genus), 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani), 트리코피톤 속(Trichophyton genus), 트리코피톤 토수란스(Trichophyton tonsurans), 트리코피톤 속, 에피더모피톤 플록코섬(Epidermophyton floccosum), 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrum) 및 트리코피톤 메타그로피테스(Trichophyton mentagrophytes), 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrum), 호르태아 웨넥키(Hortaea werneckii), 트리코피톤 속(Trichophyton genus), 말라세지아 속(Malassezia genus), 톡소카라 카니스(Toxocara canis) 또는 톡소카라 카티(Toxocara cati), 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii), 트리키넬라 스피랄리스(Trichinella spiralis), 트리코모나스 바지날리스(Trichomonas vaginalis), 트리처리스 트리치우라(Trichuris trichiura), 마이코박테리움 투버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 프란시셀라 투라렌시스(Francisella tularensis), 유레아플라즈마 우레알리티쿰(Ureaplasma urealyticum), 베네수엘라마뇌염(Venezuelan equine encephalitis) 바이러스, 비브리오 콜레라, 구아나리토(Guanarito) 바이러스, 웨스트 나일(West Nile) 바이러스, 트리초스포론 베이겔리(Trichosporon beigelii), 예러시니아 슈도투벨르큘로시스(Yersinia pseudotuberculosis), 예르시니아 엔테로코리티카(Yersinia enterocolitica), 황열병 바이러스, 무코랄레스 오더(Mucorales order)(털곰팡이증(Mucormycosis)) 및 엔토프토랄레스 목(Entomophthorales order)(엔토모프토라증(Entomophthoramycosis), 슈도모나스 녹농균, 캄필로박터(Campylobacter)(비브리오) 태아, 아에로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila), 에드워드시엘라 타르다(Edwardsiella tarda), 에르시니아 페스티스(Yersinia pestis), 시겔라 디센테리애(Shigella dysenteriae), 시겔라 플렉스네리(Shigella flexneri), 시겔라 손네이(Shigella sonnei), 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium), 트레포네마 페르테누에(Treponema pertenue), 트레포네마 카르테움(Treponema carateneum), 보렐리아 빈센티(Borrelia vincentii), 보렐리아 부르고도리페리(Borrelia burgdorferi), 렙토스피라 이시테로헤모르하지애(Leptospira icterohemorrhagiae), 뉴모시스티스 카리니(Pneumocystis carinii), 브루셀라 아보르투스(Brucella abortus), 브루셀라 수이스(Brucella suis), 브루셀라 멜리텐시스(Brucella melitensis), 마이코플라스마 종(Mycoplasma spp.), 리케차 프로와제키(Rickettsia prowazeki), 리케차 츠츠구무쉬(Rickettsia tsutsugumushi), 클라미디아 종(Clamydia spp.); 병원성 진균(pathogenic fungi)(아스페르질루스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 히스토플라스마 캅술라툼(Histoplasma capsulatum); 원생동물(이질 아메바, 트리초모나스 테나스(Trichomonas tenas), 트리초모나스 호미니스(Trichomonas hominis), 트리오아노소마 감비엔스(Tryoanosoma gambiense), 트리파노소마 로데시엔세(Trypanosoma rhodesiense), 레이시마니아 도노바니(Leishmania donovani), 레이시마니아 트로피카(Leishmania tropica), 레이시마니아 브라질리엔시스(Leishmania braziliensis), 뉴모사이스티스 뉴모니아(Pneumocystis pneumonia), 플라스모디움 비백스(Plasmodium vivax), 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum), 플라스모디움 말라리아(Plasmodium malaria)); 또는 헬미니스(Helminith)(쉬스토소마 자포니쿰(Schistosoma japonicum), 쉬스토소마 만소니(Schistosoma mansoni), 쉬스토소마 해바토비움(Schistosoma haematobium) 및 십이지장충(hookworm)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 병원성 균주에 대항한다.
바이러스 질환의 치료를 위한 본 발명에서의 세포-결합 리간드로서의 다른 항체는 예로서 그리고 제한이 아닌 방식으로 하기를 포함하는, 병원성 바이러스의 항원에 대한 항체를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: 폭시리대(Poxyiridae), 헤르페스비리대(Herpesviridae), 아데노비리대(Adenoviridae), 파포바비리대(Papovaviridae), 엔테로비리대(Enteroviridae), 피코르나비리대(Picornaviridae), 파르보비리대(Parvoviridae), 레오비리대(Reoviridae), 레트로비리대(Retroviridae), 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리, 홍역, 호흡기 융합 바이러스, 풍진, 아르보비리대(Arboviridae), 라브도비리대(Rhabdoviridae), 아레나비리대(Arenaviridae), 비-A형/비-B형 간염 바이러스, 리노비리대(Rhinoviridae), 코로나비리대(Coronaviridae), 로토비리대(Rotoviridae), 온코바이러스[예컨대, HBV(간세포 암종), HPV(경부암, 항문암), 카포시 육종 연관 포진 바이러스(카포시 육종), 엡스타인-바르 바이러스(비인두 암종, 버킷 림프종, 원발 중추 신경계 림프종), MCPyV(머켈 세포암), SV40(시미안 바이러스 40), HCV(간세포 암종), HTLV-I(성인 T-세포 백혈병/림프종)], 면역 장애 유발된 이러스: [예컨대, 인간 면역결핍바이러스(AIDS)]; 중추 신경계 바이러스: [예컨대, JCV(진행성 다병소성 백혈구증), MeV(아급성 경화성 뇌막염), LCV(림프구성 맥락수막염), 아르보바이러스(Arbovirus) 뇌염, 오쏘믹소비리대(Orthomyxoviridae)(가능성)(기면성 뇌염), RV(광견병), 헤르페스바이러스 수막염, 램지 헌트 증후군 유형 II; 폴리오 바이러스(소아마비, 소아마비후 증후군), HTLV-I(열대성 경성 대마비)]; 사이토메갈로바이러스(사이토메갈로 바이러스 망막염, HSV(포진성 각막염)); 심혈관계 바이러스[예컨대, CBV(심막염, 심근염)]; 호흡기/급성 바이러스성 비인두염/바이러스성 폐렴: [엡스테인-바르 바이러스(EBV 감염/감염성 단핵구증), 사이토메갈로바이러스; SARS 코로나바이러스(중증 급성 호흡기 증후군), 오쏘믹소비리대: 인플루엔자 A/B/C(인플루엔자/조류 인플루엔자), 파라믹소바이러스(Paramyxovirus): 인간 파라인플루엔자 바이러스(파라인플루엔자), RSV(인간 호흡기 신티알바이러스(syncytialvirus), hMPV]; 소화계 바이러스[MuV(볼거리), 사이토메갈로바이러스(사이토메갈로바이러스 에소파지티스(esophagitis); 아데노바이러스(아데노바이러스 감염); 로타바이러스, 노보바이러스, 아스트로바이러스, 코로나바이러스; HBV(B형 간염 바이러스), CBV, HAV(A형 간염 바이러스), HCV(C형 간염 바이러스), HDV(D형 간염 바이러스), HEV(E형 간염 바이러스), HGV(G형 간염 바이러스)]; 비뇨생식기 바이러스[예컨대, BK 바이러스, MuV(볼거리)].
추가 목적에 따라서, 본 발명은 또한 암 및 자가면역 장애의 치료를 위한, 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께, 본 발명의 접합체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 암 및 자가면역 장애의 치료 방법은 시험관내, 생체내 또는 생체외에서 수행될 수 있다. 시험관내 사용의 예는 표적 항원을 발현하지 않는 목적하는 변이체를 제외한 모든 세포를 사멸시키거나, 또는 목적하지 않은 항원을 발현하는 변이체를 사멸시키기 위한 세포 배양물의 처리를 포함한다. 생체외 사용의 예는 병에 걸린 세포 또는 악성 세포를 사멸시키기 위해 동일한 환자에게 이식(HSCT)을 수행하기 전에, 조혈 줄기세포(HSC)를 처리하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 암 치료 또는 자가면역 질환의 치료에서 자가유래 이식 이전에, 골수로부터 종양 세포 또는 림프 세포를 제거하는 생체외 처리, 또는 이식편대숙주병을 예방하기 위해서 동종이계 골수로부터 이식 이전에 T 세포 및 다른 림프구 세포를 제거하는 생체외 처리는 하기와 같이 수행될 수 있다. 골수를 환자 또는 다른 개체로부터 수거하고, 이어서 약 37℃에서 약 15분 내지 약 48시간 동안, 약 1pM 내지 0.1mM의 농도 범위의 본 발명의 접합체가 첨가된 혈청을 함유하는 배지에서 인큐베이션시킨다. 정확한 농축 조건 및 인큐베이션 시간(=용량)은 숙련된 임상의에 의해 쉽게 결정된다. 인큐베이션 후, 골수 세포를 혈청을 함유하는 배지로 세척하고, 공지된 방법에 따라 i.v. 주입에 의해서 환자에게 다시 제공한다. 환자가 골수 수거와, 처리된 세포의 재주입 사이에 절제(ablative) 화학 요법 또는 전신 방사선 조사의 과정과 같은 다른 치료를 받는 상황에서, 처리된 골수 세포는 표준 의료 장비를 사용하여 액체 질소에 냉동 보관된다.
제형의 제조 및 적용
본 발명의 동결건조 조성물은 조성물로부터 물을 제거하기 위해 당업자에게 일반적으로 공지된 수단에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 샘플을 적합한 시간 동안 적합한 온도까지 가열시킴으로써 탈수될 수 있다. 조성물은 또한 임의의 적합한 온도에서 감압 분위기 하에 탈수될 수 있다. 감압 분위기는 대기압보다 낮은 임의의 압력일 수 있다. 감압 분위기는 실온 초과의 온도까지 가열되거나, 대략 실온으로 유지되거나, 또는 실온 미만의 온도까지 냉각될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 감압 분위기 하에서 실온 미만의 온도까지 냉각될 수 있다. 적합한 온도는 실온 미만, 또는 20℃, 15℃, 10℃, 5℃, 0℃, -5℃, -10℃, -15℃, -20℃, -25℃, -30℃, -40℃, -50℃, -60℃ 미만 또는 -65℃ 미만을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 감압 분위기가 사용되는 경우, 감압 분위기는 대기압보다 낮거나 100torr(mmHg), 50, 25, 10, 5, 4.58(물의 삼중점), 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.1, 0.05 또는 0.01torr 미만일 수 있다. 조성물은 4.58torr(611Pascal 또는 0.006 기압) 미만의 감압 분위기 하에서 0.01℃ 미만의 온도로 냉각될 수 있다.
본 발명의 조성물은 당업자에게 일반적으로 공지된 수단에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 동결건조 조성물은 튜불리신 유사체의 접합체의 정제된 용액에 부형제를 용해시키고, 혼합물을 특정 pH 값, 예컨대, pH 5.0, 5.5 또는 6.0으으로 조정하고, 필요에 따라 용액에 물을 첨가하여, 접합체 및 부형제가 특정 농도로 존재하는 혼합물을 형성하고, 그 다음 바이알에 채우고, 0℃ 미만의 온도로 냉각시키고, 혼합물을 동결건조시킴으로써 제조될 수 있다.
일반적으로, 동결건조 전 액체 제형은 높은 수준의 항체 응집 없이 환자에게 전달하기 위한 0.1g/ℓ 내지 300g/ℓ의 농도의 접합체 활성 성분을 포함하며, 1종 이상의 폴리올(예를 들어, 당), pH를 4.5 내지 7.5로 조정하는 완충제, 계면활성제(예를 들어, 폴리솔베이트 20 또는 80), 항산화제(예를 들어, 아스코르브산 및/또는 메티오닌), 등장제(예를 들어, 만니톨, 솔비톨 또는 NaCl), 킬레이팅제, 예컨대, EDTA; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 생분해성 중합체, 예컨대, 폴리에스터; 보존제(예를 들어, 벤질 알코올) 및/또는 유리 아미노산을 포함할 수 있다.
제형에 사용하기에 적합한 완충제는 유기산염, 예컨대, 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 탄산, 타타르산, 석신산, 아세트산 또는 프탈산의 나트륨, 칼륨, 암모늄 또는 트라이하이드록시에틸아미노염; Tris, 트로메타민 염산염, 황산염 또는 인산염 완충액을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 또한, 아미노산 성분이 또한 완충제로서 사용될 수 있다. 이러한 아미노산 성분은 비제한적으로 아르기닌, 글리신, 글리실글리신 및 히스티딘을 포함한다. 아르기닌 완충액은 아르기닌 아세테이트, 아르기닌 클로라이드, 아르기닌 포스페이트, 아르기닌 설페이트, 아르기닌 석신에이트 등을 포함한다. 일 실시형태에서, 아르기닌 완충액은 아르기닌 아세테이트이다. 히스티딘 완충액의 예는 히스티딘 클로라이드-아르기닌 클로라이드, 히스티딘 아세테이트-아르기닌 아세테이트, 히스티딘 포스페이트-아르기닌 포스페이트, 히스티딘 설페이트-아르기닌 설페이트, 히스티딘 석신에이트-아르기닌 석신에이트 등을 포함한다. 완충액의 제형은 4.5 내지 pH 7.5, 바람직하게는 약 4.5 내지 약 6.5, 보다 바람직하게는 약 5.0 내지 약 6.2의 pH를 갖는다. 일부 실시형태에서, 완충액 중의 유기산염의 농도는 약 10mM 내지 약 500mM이다.
제형 중에 선택적으로 포함될 수 있는 "폴리올"은 다수의 하이드록실기를 갖는 물질이다. 폴리올은 액체 제형 및 동결건조 제형 둘 모두에서 부형제 및/또는 등장제를 안정화시키기 위해서 사용될 수 있다. 폴리올은 생물약제를 물리적 분해 경로 및 화학적 분해 경로 둘 모두로부터 보호할 수 있다. 우선적으로, 제외된 공용매는 단백질 계면에서 용매의 유효 표면 장력을 증가시키고, 이에 의해서 가장 에너지 선호되는 구조 입체배좌는 가장 작은 표면적을 갖는 것이다. 폴리올은 또한 조성물에 부피를 추가하거나, 특히 동결건조 펠릿을 인지하기 어려웠을 상황에서, 조성물의 가시화를 돕기 위해서 동결건조 조성물에 증량제로서 사용될 수 있다. 이것은 또한 약제학적 조성물의 활성 성분(들)(튜불리신 유사체의 접합체)의 누출(blowout)을 방지하는 것을 도울 수 있고/있거나 조성물의 동결보호를 도울 수 있다. 폴리올은 당(환원당 및 비환원당), 당 알코올 및 당 산을 포함한다. "환원당"은 금속 이온을 환원시킬 수 있거나 또는 단백질 내의 라이신 및 다른 아미노기와 공유 반응할 수 있는 헤미아세탈기를 함유하는 것이고, "비환원당"은 환원당의 특성을 갖지 않는 것이다. 환원당의 예는 프럭토스, 만노스, 말토스, 락토스, 아라비노스, 자일로스, 리보스, 람노스, 갈락토스 및 글루코스이다. 비환원당은 수크로스, 트레할로스, 소보스, 멜레지토스 및 라피노스를 포함한다. 당 알코올은 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 말티톨, 락티톨, 에리트리톨, 트레이톨, 솔비톨 및 글리세롤로부터 선택된다. 당 산은 알돈산, 우론산, 알다르산, 글루콘산, 아이소아스코르브산, 아스코르브산, 글루카르산, 글루쿠론산, 글루콘산, 글루카르산, 갈락투론산, 만누론산, 뉴라민산, 펙틴산 및 알긴산, L-글루코네이트 및 이들의 금속염을 포함한다. 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 고체 중의 폴리올은 0.0% 내지 20중량%일 수 있다. 바람직하게는, 0.1% 내지 15%의 농도의 비환원당: 수크로스 또는 트레할로스가 제형에서 선택되는데, 여기서 트레할로스의 용액 안정성으로 인해서, 트레할로스가 수크로스보다 바람직하다.
제형 중의 계면활성제는 선택적으로 폴리솔베이트(폴리솔베이트 20, 폴리솔베이트 40, 폴리솔베이트 65, 폴리솔베이트 80, 폴리솔베이트 81, 폴리솔베이트 85 등); 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188, 폴리(에틸렌 옥사이드)-폴리(프로필렌 옥사이드), 폴록사머 407 또는 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜 등); 지질다당류, 폴리에틸렌 글리콜(예를 들어, PEG 400 및 PEG 3000), 폴록사며(즉, 플루오닉(pluronic)), 에틸렌 옥사이드 및 폴리에틸렌 옥사이드(예를 들어,트리톤); 소듐 도데실 설페이트(SDS); 소듐 라우렐 설페이트; 소듐 옥틸 글리코사이드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일-, 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사코신; 리놀레일-, 미리스틸-, 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코카미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 아이소스테아르아미도프로필-베타인(예를 들어, 라우로아미도프로필); 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 아이소스테아르아미도프로필-다이메틸아민; 소듐 메틸 코코일-, 또는 다이소듐 메틸 올레일-타우레이트; 도데실 베타인, 도데실 다이메틸아민 옥사이드, 코카미도프로필 베타인 및 코코 암포 글리시네이트; 및 MONAQUATTM 시리즈(예를 들어, 아이소스테아릴 에틸이미도늄 에토설페이트); 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜, 및 에틸렌과 프로필렌 글리콜의 공중합체(예를 들어, 플루로닉(Pluronic), PF68 등) 등으로부터 선택된다. 바람직한 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 솔비탄 지방산 에스터 예를 들어, 폴리솔베이트 20, 40, 60 또는 80(Tween 20, 40, 60 또는 80)이다. 제형 중의 계면활성제의 농도는 0.0% 내지 약 2.0%의 범위이다. 특정 실시형태에서, 계면활성제 농도는 약 0.01% 내지 약 0.2%이다. 일 실시형태에서, 계면활성제 농도는 약 0.02%이다.
제형 중의 "보존제"는 선택적으로 그 내에서 박테리아 작용을 본질적으로 감소시키는 화합물이다. 가능한 보존제의 예는 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤즈알코늄 클로라이드(알킬기가 장쇄 화합물인 알킬벤질다이메틸염화암모늄의 혼합물) 및 벤즈에토늄 클로라이드를 포함한다. 다른 유형의 보존제는 방향족 알코올 예컨대, 페놀, 부틸 및 벤질 알코올, 알킬 파라벤, 예컨대, 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레소르시놀, 사이클로헥산올, 3-펜탄올 및 m-크레졸을 포함한다. 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 분말 중의 보존제는 0.0중량% 내지 5.0중량%일 수 있다. 일 실시형태에서, 본 명세서에서 보존제는 벤질 알코올이다.
제형에서 벌크 물질 또는 등장제 또는 삼투압 조절제로서 적합한 유리 아미노산은 아르기닌, 시스틴, 글리신, 라이신, 히스티딘, 오르니틴, 아이소류신, 류신, 알라닌, 글리신 글루탐산 또는 아스파트산 중 하나 이상으로부터 선택되지만 이들로 제한되지 않는다. 염기성 아미노산, 즉 아르기닌, 라이신 및/또는 히스티딘의 포함이 바람직하다. 조성물이 히스티딘을 포함하는 경우, 이것은 완충제 및 유리 아미노산 둘 모두로서 작용할 수 있지만, 히스티딘 완충액이 사용되는 경우, 그것은 비-히스티딘 유리 아미노산을 포함하도록, 예를 들어, 히스티딘 완충액 및 라이신을 포함하는 것이 전형적이다. 아미노산은 D-형 및/또는 L-형으로 존재할 수 있지만, L-형이 전형적이다. 아미노산은 임의의 적합한 염, 예를 들어, 염산염, 예컨대, 아르기닌-HCl으로서 존재할 수 있다. 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 분말 중의 아미노산은 0.0중량% 내지 30중량%일 수 있다.
제형은 선택적으로 액체 제형 중에 최대 약 5㎎/㎖의 농도로 또는 제형화된 동결건조 분말 중에 0.0중량% 내지 5.0중량%의 농도로 항산화제로서 메티오닌, 글루타티온, 시스테인, 시스틴 또는 아스코르브산을 포함할 수 있고; 제형은 금속 킬레이팅제, 예를 들어, EDTA, EGTA 등을 액체 제형 중에 최대 약 2mM의 농도로 또는 제형화된 동결건조 분말 중에 0.0중량% 내지 0.3중량%의 농도로 선택적으로 포함할 수 있다.
최종 제형은 완충액 조정제(예를 들어, 산, 예컨대, HCl, H2SO4, 아세트산, H3PO4, 시트르산 등 또는 염기, 예컨대, NaOH, KOH, NH4OH, 에탄올아민, 다이에탄올아민 또는 트라이에탄올 아민, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산삼나트륨, 트로메타민 등)를 사용하여 바람직한 pH로 조정될 수 있고, 제형은 "등장성"이도록 제어되어야 하는데, 이는 관심대상 제형이 인간 혈액과 본질적으로 동일한 삼투압을 갖는다는 것을 의미한다. 등장성 제형은 일반적으로 약 250 내지 350mOsm의 삼투압을 갖는다. 등장성은 예를 들어, 증기압 또는 얼음 동결 유형 삼투압계를 사용하여 측정될 수 있다. 등장제는 만니톨, 솔비톨, 아세트산나트륨, 염화칼륨, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산삼나트륨 또는 NaCl로부터 선택된다. 일반적으로, 완충제 염 및 등장제는 제형에서 30중량%를 차지할 수 있다. 본 발명의 재구성된 제형 및 주사 조성물의 pH는 제형 또는 조성물에 바람직한 특성을 제공하는 임의의 pH일 수 있다. 바람직한 특성은 예를 들어, 튜불리신 유사체의 접합체의 안정성 및 개선된 여과 효율을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 재구성된 제형 및 주사 조성물의 pH는 약 3.5 내지 약 9.0, 예를 들어, 약 5.0 내지 약 7.0일 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 재구성된 제형 및 주사 조성물의 pH는 5.0 ± 0.1, 5.1 ± 0.1, 5.2 ± 0.1, 5.3 ± 0.1, 5.4 ± 0.1, 5.5 ± 0.1, 5.6 ± 0.1, 5.7 ± 0.1, 5.8 ± 0.1, 5.9 ± 0.1, 6.0 ± 0.1, 6.1 ± 0.1, 6.2 ± 0.1, 6.3 ± 0.1, 6.4 ± 0.1 또는 6.5 ± 0.1일 수 있다.
일부 실시형태에서, 조성물에 1종 이상의 완충액을 포함시킴으로써 pH를 완충시키는 것이 이로울 수 있다. 특정 실시형태에서, 완충액은 예를 들어, 약 5.5, 약 6.0 또는 약 6.5의 pKa를 가질 수 있다. 당업자는 본 발명의 조성물에 포함시키기 위해서 적절한 완충액이 이의 pKa 및 다른 특성에 기초하여 선택될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 완충액은 당업계에 널리 공지되어 있다. 따라서, 완충액은 전체 목록을 구성하도록 의도되지 않으며, 본 발명의 제형 또는 조성물에 사용될 수 있는 예시적인 완충액으로서만 제공된다. 특정 실시형태에서, 완충액은 Tris, Tris HCl, 인산칼륨, 인산나트륨, 시트르산나트륨, 아스코르브산나트륨, 인산나트륨과 인산칼슘의 조합물, Tris/Tris HCl, 중탄산나트륨, 아르기닌 인산염, 아르기닌 염산염, 히스티딘 염산염, 카코딜레이트, 석신에이트, 2-(N-몰폴리노)에탄설폰산(MES), 말레에이트, 비스-tris, 인산염, 탄산염 및 임의의 약제학적으로 허용 가능한 염 및/또는 이들의 조합물을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
본 특허 출원의 액체 또는 동결건조된 제형에서 유용할 수 있는 기타 부형제는 예를 들어, 푸코스, 셀로비오스, 말토트리오스, 멜리비오스, 옥툴로스, 리보스, 자일리톨, 아르기닌, 히스티딘, 글리신, 알라닌, 메티오닌, 글루탐산, 라이신, 이미다졸, 글리실글리신, 만노실글리세레이트, 트리톤 X-100, 플루로닉 F-127, 셀룰로스, 사이클로덱스트린, (2-하이드록시프로필)-β-사이클로덱스트린, 덱스트란(10, 40 및/또는 70kD), 폴리덱스트로스, 말토덱스트린, 피콜, 젤라틴, 하이드록시프로필메트, 인산나트륨, 인산칼륨, ZnCl2, 아연, 산화아연, 시트르산나트륨, 시트르산삼나트륨, 트로메타민, 구리, 피브로넥틴, 헤파린, 인간 혈청 알부민, 프로타민, 글리세린, 글리세롤, EDTA, 메타크레졸, 벤질 알코올, 페놀, 다가 알코올, 또는 폴리알코올, 1차 또는 2차 하이드록실기로 환원된 카보닐기를 갖는 탄수화물의 수소화 형태를 포함한다.
본 특허 출원의 수성 약제학적 조성물에서 사용될 수 있는 다른 고려되는 부형제는 예를 들어, 착향료, 항미생물제, 감미료, 항산화제, 정전기방지제, 지질, 예컨대, 인지질 또는 지방산, 스테로이드, 예컨대, 콜레스테롤, 단백질 부형제, 예컨대, 혈청 알부민(인간 혈청 알부민), 재조합 인간 알부민, 젤라틴, 카제인, 염-형성 반대 이온, 예컨대, 나트륨 등을 포함한다. 본 발명의 제형에 사용하기에 적합한 이러한 및 추가적인 공지된 약제학적 부형제 및/또는 첨가제는 관련 기술 분야에 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌[The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th edition, Rowe et al., Eds., American Pharmaceuticals Association (2003); 및 Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 21th edition, Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005)]에 열거되어 있다. 당업자는 임의의 하나의 부형제의 선택이 임의의 다른 부형제의 선택에 영향을 미칠 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, 특정 부형제의 선택은 부형제의 조합이 바람직하지 않은 효과를 생성할 것이기 때문에 추가 부형제의 사용을 배제할 수 있다. 당업자는 존재하는 경우 어느 부형제를 본 발명의 제형 또는 조성물에 포함시킬 것인지를 경험적으로 결정할 수 있을 것이다.
약제학적 컨테이너 또는 용기는 본 특허 출원의 접합체 중 임의의 것의 약제학적 제형을 보유하기 위해서 사용된다. 용기는 바이알, 병, 사전 충전 주사기, 사전 충전 또는 자동-주입 주사기이다. 액체 제형은 바람직하게는 보로실리케이트 바이알 또는 소다 석회 유리 바이알에서 케이크 또는 분말의 형태로 동결 건조 또는 드럼 건조된다. 고체 분말은 또한 효율적인 분무 건조에 의해서 제조되고, 이어서 저장 및 배포를 위해서 바이알 또는 약제학적 컨테이너에 보유될 수 있다.
추가 실시형태에서, 본 발명은 (a) 접합체, 부형제 및 완충액 시스템을 포함하는 제형을 동결건조시키는 단계; 및 (b) 단계 (a)의 동결건조된 혼합물을, 재구성된 제형이 안정적이도록 재구성 매질 중에 재구성하는 단계를 포함하는, 제형의 제조 방법을 제공한다. 단계 (a)의 제형은, 상기에 기술된 바와 같은 벌킹제, 염, 계면활성제 및 보존제를 포함하는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 부형제 및 안정화제를 추가로 포함할 수 있다. 재구성 매질로서, 몇몇 희석된 유기산 또는 완충 용액 또는 물, 즉, 멸균수, 주사용 정균수(BWFI)가 사용될 수 있다. 재구성 매질은 물, 즉, 멸균수, 주사용 정균수(BWFI) 또는 아세트산, 프로피온산, 석신산, 염화나트륨, 염화마그네슘, 염화나트륨의 산성 용액, 염화마그네슘의 산성 용액 및 아르기닌의 산성 용액(약 10 내지 약 250mM의 양)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 특허 출원의 접합체의 액체 약제학적 제형은 다양한 미리 정의된 특징을 나타내야 한다. 액체 약물 생성물에서 주요 문제점 중 하나는 안정성인데, 그 이유는 단백질/항체는 저장 동안 용해성 및 불용성 응집물을 형성하는 경향이 있기 때문이다. 또한, 다양한 화학 반응이 용액 중에서 일어나서(탈아마이드화, 산화, 클립핑, 이성질체화 등) 생성물 분해 수준의 증가 및/또는 생물활성도의 손실로 이어질 수 있다. 바람직하게는, 액체 또는 동결건조 제형의 접합체는 25℃에서 6개월 초과의 저장 수명을 나타내야 한다. 보다 바람직하게는, 액체 또는 동결건조 제형 중의 접합체는 25℃에서 12개월 초과의 저장 수명을 나타내야 한다. 가장 바람직하게는 액체 제형은 2 내지 8℃에서 24개월 내지 36개월의 저장 수명을 나타내야 하고, 동결건조 제형은 2 내지 8℃에서 대략 바람직하게는 최대 60개월의 저장 수명을 나타내야 한다. 액체 제형 및 동결건조 제형 둘 모두는 -20℃ 또는 -70℃에서 적어도 2년 동안의 반감기를 나타내야 한다.
특정 실시형태에서, 제형은 제형의 동결(예를 들어, -20℃, 또는 -70℃) 및 해동, 예를 들어, 1, 2 또는 3주기의 동결 및 해동 이후에 안정적이다. 안정성은 약물/항체(단백질)비 및 응집물 형성(예를 들어, UV, 크기 배제 크로마토그래피의 사용, 탁도의 측정에 의해서 그리고/또는 육안 검사에 의해서)의 평가; 양이온 교환 크로마토그래피, 상 모세관 이성질체 전기 포커싱(image capillary isoelectric focusing: icIEF) 또는 모세관 구역 전기영동을 사용한 전하 불균질성의 평가; 아미노-말단 또는 카복시-말단 순서 분석; 질량 분석기 분석 또는 매트릭스-도움 레이저 탈착 이온화/비행시간 질량 분석기(matrix-assisted laser desorption ionization/time-of-flight mass spectrometry: MALDI/TOF MS) 또는 HPLC-MS/MS; 환원된 항체 및 무손상 항체를 비교하기 위한 SDS-PAGE; 펩타이드 맵(예를 들어, 트립틱 또는 LYS--C) 분석; 항체의 생물학적 활성도 또는 항원 결합 기능의 평가 등을 비롯한, 다양한 상이한 방식으로 정성적 및/또는 정량적으로 평가될 수 있다. 불안정성은 하기 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다: 응집, 탈아마이드화(예를 들어, Asn 탈아마이드화), 산화(예를 들어, Met 산화), 이성질체화(예를 들어, Asp 이성질체화), 클립핑/가수분해/단편화(예를 들어, 힌지 영역 단편화), 석신이미드 형성, 비짝지움 시스테인(들), N-말단 연장, C-말단 가공, 글리코실화 차이 등.
안정적인 접합체는 또한 약제학적 제형 중에서 "생물학적 활성도를 유지"해야 하고, 예를 들어, 항원 결합 검정 및/또는 시험관내 세포독성 검정에서 결정되는 경우, 접합체의 생물학적 활성도는, 주어진 시간, 예를 들어, 12개월에, 약제학적 제형이 제조된 시간에 나타낸 생물학적 활성도의 약 20%, 바람직하게는 약 10%(검정의 오차 이내) 이내의 차이를 가져야 한다.
생체내 임상 사용을 위해서, 접합체의 제형은 용액으로서 또는 주사용 멸균수 중에 재용해될 수 있는 동결건조 고체로서 공급될 것이다. 임의의 경우에, 접합체 조성물의 고체 형태를 재구성하기 위한 가장 통상적인 수동 공정은 전형적으로 다음 단계를 필요로 한다: 제1 컨테이너로부터 용매, 예컨대, 물을 취하고, 그것을 접합체 조성물의 고체 형태를 함유하는 제2 용기에 주입하고, 거품 및/또는 건조 응집체가 없도록 제2 용기 내의 액체를 균질화하고, 이것을 투여용 염화나트륨 주사액을 함유하는 주입 백에 보유된 생리학적 완충액/염 용액에 투여 또는 주입하기 위해서 재구성된 접합체 조성물을 제2 용기로부터 회수한다. 상기에 언급된 단계 자체 각각은 바늘이나 스파이크를 포함한 여러 대상 조작 및 정의된 과정의 달성이 필요할 수 있다. 올바른 재구성을 보장하고 약제학적 조성물에 대한 사용자 간 재구성 편차를 줄이기 위해서, 의약품 제조업체는 재구성 과정에서 사용자를 안내하는 "사용 지침" 전단지를 사용자에게 제공한다.
적용된 조작 단계 및 접합체 조성에 따라서, 재구성 과정은 긴 재구성 시간, 용매가 거의 도달할 수 없는 포획된 건조 덩어리 또는 겔 구역의 존재, 전체 부피 내의 또는 공기/액체 계면에서의 고리에 한정된 포획된 기포 또는 거품의 존재 및/또는 재구성 시간의 큰 변화(각각은 접합체 조성물의 재구성에 대해 허용되지 않을 수 있음)로 이어질 수 있다. 대부분의 경우 이 공정은 일반적인 용매 전달 단계를 포함하며, 균질화를 위한 몇몇 인터우븐(interwoven) 교반/소용돌이 및 고체를 적시기 위한 침강 단계 및 최종 회수 전에 완전한 용해가 달성될 때까지 재수화 관찰을 포함한다. "해야 할 일" 또는 "하지 말아야 할 일"에 대한 권장 사항이 존재할 수 있다. 또한, 의약품 제조업체는 사용자, 전문가 또는 환자 또는 관련인을 교육하도록 권장할 수 있거나 재구성을 전문가로 제한할 수 있다. 일부 동결건조 약제학적 조성물의 경우, 전체 재구성 시간은 30분이 소요될 수 있다.
일부 실시형태에서, 재구성된 제형 중의 튜불리신 유사체의 접합체 농도는 생리 완충액 또는 식염수를 함유하는 주입 백에 전달되기 전에 약 1㎎/㎖ 내지 약 30㎎/㎖, 예를 들어 약 5㎎/㎖ 내지 약 25㎎/㎖이다. 특정 실시형태에서, 재구성된 제형 중의 튜불리신 유사체의 접합체 농도는 생리 완충액 또는 염 용액을 함유하는 주입 백으로 전달되기 전에 약 15 내지 25㎎/㎖이다.
접합체 투여의 적합한 프로토콜은 다음과 같다. 접합체는 일 단위, 주 단위, 격주 단위, 3주 단위, 8 내지 54주 동안 4주 1회 또는 개월 단위로 i.v. 볼러스(bolus)로서 제공된다. 볼러스 용량은 인간 혈청 알부민(예를 들어, 인간 혈청 알부민의 농축된 용액 0.5 내지 1㎖, 100㎎/㎖)이 선택적으로 첨가될 수 있는 50 내지 1000㎖의 식염수 중에 제공된다. 투여량은 약 50㎍ 내지 20㎎/체중 ㎏/주의 접합체, i.v.(주사당 10㎍ 내지 200㎎/㎏ 범위)일 것이다. 치료 후 4 내지 54주에, 환자에게 제2 과정의 치료를 제공할 수 있다. 투여 경로, 부형제, 희석제, 투여량, 시간 등에 관한 구체적인 임상 프로토콜은 숙련된 의사에 의해서 결정될 수 있다.
선택된 세포 집단을 사멸시키는 생체내 또는 생체외 방법에 따라서 치료될 수 있는 의학적 병태의 예는 암, 자가면역 질환, 이식 거부 및 감염(바이러스성, 박테리아성 또는 기생충)의 임의의 유형의 악성 상태를 포함한다.
목적하는 생물학적 효과를 달성하는 데 필요한 접합체의 양은 접합체의 화학적 특징, 효력, 생체이용률, 질환의 유형, 환자가 속한 종, 환자의 질환 상태, 투여 경로, 요구되는 투여량, 전달 및 투여될 요법을 설명하는 모든 인자를 비롯하여, 다수의 인자에 따라 달라질 것이다.
일반적으로, 본 발명의 접합체 제형은 비경구 투여의 경우 0.1 내지 10% w/v의 접합체를 함유하는 수성 생리 완충액으로 제공될 수 있다. 전형적인 용량 범위는 주 단위; 격주 단위; 3주 단위 또는 개월 단위로 1㎎/체중 ㎏ 내지 0.1g/체중이고; 바람직한 용량 범위는 인간에게 동등한 용량으로, 주 단위; 격주 단위; 3주 단위 또는 개월 단위로 0.01㎎/체중 ㎏ 내지 20㎎/체중 ㎏이다. 투여될 약물의 바람직한 투여량은 질환 또는 장애의 유형 및 진행 정도, 특정 환자의 전반적인 건강 상태, 선택된 화합물의 상대적인 생물학적 효능, 화합물의 제형, 투여 경로(정맥내, 근육내 등), 선택된 전달 경로에 의한 접합체의 약동학 특성 및 투여 속도(볼러스 또는 연속적 주입) 및 스케줄(주어진 시간 기간 동안의 반복 횟수)과 같은 변수에 좌우될 것이다.
본 발명의 접합체는 또한 단위 투여형으로 투여될 수 있는데, 여기서 용어 "단위 투여"는 환자에게 투여될 수 있고, 쉽게 취급 및 포장될 수 있고, 활성 접합체 자체 또는 하기에 기술된 바와 같은 약제학적으로 허용 가능한 조성물을 포함하는 물리학적으로 그리고 화학적으로 안정적인 단위 용량으로 유지되는 단일 용량을 의미한다. 이와 같이, 전형적인 전체 일 단위/주 단위/격주 단위/개월 단위 용량 범위는 0.01 내지 100㎎/체중 ㎏이다. 일반적인 가이드라인에 의해서, 인간의 경우 단위 용량은 일, 주, 2주(격주), 3주 또는 개월당 1㎎ 내지 3000㎎의 범위이다. 바람직하게는 단위 용량 범위는 1개월에 1 내지 4회 투여되는 1 내지 500㎎이고, 보다 더 바람직하게는 1주 1회 또는 격주 1회 또는 3주 1회의 1㎎ 내지 100㎎이다. 본 명세서에 제공된 접합체는 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 혼합함으로써 약제학적 조성물 중에 제형화될 수 있다. 이러한 단위 용량 조성물은 경구 투여, 특히 정제, 단순 캡슐 또는 연질 젤 캡슐의 형태; 또는 비강내, 특히 분말, 비강 점적액 또는 에어로졸의 형태; 또는 피부, 예를 들어, 연고, 크림, 로션, 젤 또는 스프레이 또는 경피 패치를 통한 국소 사용을 위해서 제조될 수 있다. 조성물은 단위 투여 형태로 편리하게 투여될 수 있고, 제약 분야에 널리 공지된 방법, 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21th ed.; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005]에 기재된 방법 중 임의의 것에 의해서 제조될 수 있다.
바람직한 제형은 본 발명의 화합물이 경구 또는 비경구 투여를 위해서 제형화된 약제학적 조성물을 포함한다. 경구 투여의 경우, 정제, 환제, 분말, 캡슐, 트로키 등은 다음 성분 중 하나 이상, 또는 유사한 특성의 화합물; 결합제, 예컨대, 미세결정질 셀룰로스, 트라거캔쓰검; 희석제, 예컨대, 전분 또는 락토스; 붕해제, 전분 및 셀룰로스 유도체; 윤활제, 예컨대, 스테아르산마그네슘; 활택제, 예컨대, 콜로이드성 이산화규소; 감미제, 예컨대, 수크로스 또는 사카린; 또는 향료. 예컨대, 페퍼민트 또는 메틸 살리실레이트를 함유할 수 있다. 캡슐은 경질 캡슐 또는 연질 캡슐의 형태일 수 있으며, 이는 일반적으로 가소제와 선텍적 블렌딩된 젤라틴 블렌드 및 전분 캡슐로부터 제조된다. 또한, 투여 단위 형태는 투여 단위의 물리적 형태를 변형시키는 다양한 다른 물질, 예를 들어 설탕, 셸락 또는 장용제의 코팅을 함유할 수 있다. 다른 경구 투여 형태 시럽 또는 엘릭서가 감미료, 보존제, 염료, 착색제 및 향료를 포함할 수 있다. 또한, 활성 화합물은 신속 용해형, 변형 방출형 또는 지속 방출형 제제 및 제형에 혼입될 수 있고, 이러한 지속 방출형 제형은 바람직하게는 이중 모드(bi-modal)이다. 바람직한 정제는 락토스, 옥수수 전분, 규산마그네슘, 크로스카르멜로스 나트륨, 포비돈, 스테아르산마그네슘 또는 활석을 임의의 조합으로 함유한다.
비경구 투여용 액체 제제는 멸균 수성 또는 비수성 용액, 현탁액 및 에멀션을 포함한다. 액체 조성물은 또한, 결합제, 완충액, 보존제, 킬레이팅제, 감미료, 향료 및 착색제 등을 포함할 수 있다. 비수성 용매는 알코올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물유, 예컨대, 올리브유 및 유기 에스터, 예컨대, 에틸 올레에이트를 포함한다. 수성 담체는 알코올과 물의 혼합물, 완충 매질 및 식염수를 포함한다. 특히, 생체적합성, 생분해성 락타이드 중합체, 락타이드/글리콜라이드 공중합체 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체가 활성 화합물의 방출을 제어하기 위한 유용한 부형제일 수 있다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양 보충제, 전해질 보충제, 예컨대, 링거 덱스트로스를 기재로 하는 것을 포함할 수 있다. 이러한 활성 화합물을 위한 다른 잠재적으로 유용한 비경구 전달 시스템은 에틸렌-바이닐 아세테이트 공중합체 입자, 삼투 펌프, 이식 가능한 주입 시스템 및 리포솜을 포함한다.
대체 투여 모드는 건조 분말, 에어로졸 또는 점적제와 같은 수단을 포함하는 흡입용 제형을 포함한다. 이들은 예를 들어, 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에터, 글리코콜레이트 및 데옥시콜레이트를 함유하는 수성 용액, 또는 점비제(nasal drop) 형태 또는 비강내로 적용되는 겔로서 투여하기 위한 유성 용액일 수 있다. 협측 투여를 위한 제형은 예를 들어, 로젠지 또는 알약(pastille)을 포함하고, 항료 베이스, 예컨대, 수크로스 또는 아카시아 및 기타 부형제, 예컨대, 글리코콜레이트를 포함할 수 있다. 직장 투여에 적합한 제형은 바람직하게는 고체 기반 담체, 예컨대, 코코아 버터와 함께 단위 용량 좌제로 제공되며, 살리실레이트를 포함할 수 있다. 피부에 국소 적용하기 위한 제형은 바람직하게는 연고, 크림, 로션, 페이스트, 겔, 스프레이, 에어로졸 또는 오일의 형태를 취한다. 사용될 수 있는 담체는 바셀린, 라놀린, 폴리에틸렌 글리콜, 알코올 또는 이들의 조합물을 포함한다. 경피 투여에 적합한 제형은 별개의 패치로 제공될 수 있으며, 중합체 또는 접착제에 용해 및/또는 분산된 친유성 에멀션 또는 완충된 수용액일 수 있다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 다른 공지되거나 공지될 치료제, 예컨대, 화학치료제, 방사선 요법, 면역치료제, 자가면역 장애 치료제(autoimmune disorder agent), 항감염제 또는 기타 항체-약물과 동시에 투여되어, 상승작용 효과를 초래한다. 또 다른 특정 실시형태에서, 상승작용 약물 또는 방사선 요법은 일 양상에서는 접합체를 투여 적어도 1시간, 12시간, 1일, 1주, 2주, 3주, 1개월 전 또는 후, 추가 양상에서는 본 발명의 접합체의 투여 수개월 전 또는 후에 투여된다.
다른 실시형태에서, 상승작용 약물은 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다:
(1) 화학치료제: a) 알킬화제: 예컨대, 질소 머스타드: 클로람부실, 클로르나파진, 사이클로포스파마이드, 다카바진, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 만노머스틴, 미토브로니톨, 멜팔란, 미토락톨, 피포브로만, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 티오테파, 트로포스파마이드, 우라실 머스타드; CC-1065(이의 아데젤레신, 카젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 듀오카마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CBI TMI 포함); 벤조다이아제핀 이량체(예를 들어, 피롤로벤조다이아제핀(PBD) 또는토마이마이신 이량체, 인돌리노벤조다이아제핀, 이미다조벤조티아다이아제핀 또는 옥사졸리디노벤조다이아제핀의 이량체); 나이트로소유레아: (카무스틴, 로무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 니무스틴, 라니무스틴); 알킬설폰에이트: (부설판, 트레오설판, 임프로설판 및 피포설판); 트라이아젠: (다카바진); 백금 함유 화합물(카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴); 아지리딘, 예컨대, 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 알트레타민, 트라이에틸렌멜라민, 트라이에틸렌포스포아마이드, 트라이에틸렌티오포스포아마이드 및 트라이메틸올로멜라민을 비롯한 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; b) 식물 알칼로이드: 예컨대, 빈카 알칼로이드: (빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈, 나벨빈); 탁소이드(Taxoid): (파클리탁셀, 도세탁솔) 및 이들의 유사체, 메이탄시노이드(DM1, DM2, DM3, DM4, 메이탄신 및 안사미토신) 및 이들의 유사체, 크립토파이신(특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); 에포틸론, 엘레우테로빈, 디스코더몰리드, 브리오스타틴, 돌로스타틴, 아우리스타틴, 마마톡신, 세팔로스타틴; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰지스타틴; c) DNA 토포이소머라제 저해제: 예컨대 [에피포도필린스: (9-아미노캄프토테신, 캄프토테신, 크리나톨, 다우노마이신, 에토포사이드, 에토포사이드 포스페이트, 이리노테칸, 미토산트론, 노반트론, 레티노산(레티놀), 테니포사이드, 토포테칸, 9-나이트로캄토테신(RFS 2000)); 미토마이신(미토마이신 C]; d) 항대사제: 예컨대, {[항-엽산염: DHFR 저해제: (메토트렉세이트, 트라이메트렉세이트, 데노프테린, 프테로프테린, 아미노프테린(4-아미노프테르산) 또는 기타 엽산 유사체); IMP 탈수소효소 저해제: (마이코페놀산, 티아조퓨린, 리바비린, EICAR); 리보뉴클레오타이드 환원효소 저해제: (하이드록시유레아, 데페록사민)]; [피리미딘 유사체: 우라실 유사체: (안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카페시타빈(Xeloda), 카모퍼, 시타라빈, 다이데옥시 우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 5-플루오로우라실, 플록스우리딘, 래티트렉세드(Tomudex)); 사이토신 유사체: (시타라빈, 사이토신 아라비노사이드, 플루다라빈); 퓨린 유사체: (아자티오프린, 플루다라빈, 메르캅토퓨린, 티아민프린, 티오구아닌)]; 엽산 보충제, 예컨대, 프롤린산}; e) 호르몬 요법: 예컨대, {수용체 길항제: [항-에스트로겐: (메제스트롤, 랄록시펜, 타목시펜); LHRH 효능제: (고스크르클린(goscrclin), 류프롤라이드 아세테이트); 항-안드로겐: (비칼루타마이드, 플루타마이드, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 고세렐린, 류프롤라이드, 메피티오스탄, 닐루타마이드, 테스토락톤, 트릴로스탄 및 기타 안드로겐 저해제)]; 레티노이드/델토이드: [비타민 D3 유사체: (CB 1093, EB 1089, KH 1060, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤); 광역학 요법: (베르트포르핀, 프탈로시아닌, 광민감제 Pc4, 데메톡시하이포크렐린 A); 사이토카인: (인터페론-알파, 인터페론-감마, 종양 괴사 인자(TNF), TNF 도메인을 함유하는 인간 단백질)]}; f) 키나제 저해제: 예컨대, BIBW 2992(항-EGFR/Erb2), 이마티닙, 제피티닙, 페갑타닙, 소라페닙, 다사티닙, 수니티닙, 에를로티닙, 닐로티닙, 라파티닙, 액시티닙, 파조파닙, 반데타닙, E7080(항-VEGFR2), 무브리티닙, 포나티닙(AP24534), 바페티닙(INNO-406), 보수티닙SKI-606），카보잔티닙, 비스모데집, 이니파립, 룩솔리티닙, CYT387, 악시티닙, 티보자닙, 소라페닙, 베바시주맙, 세툭시맙, 트라스투주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 이스피네십; g) 폴리(ADP-리보스) 중합효소(PARP) 저해제: 예컨대, 올라파립, 니라파립, 이니파립, 탈라조파립, 벨리파립, CEP 9722(세팔론사(Cephalon)), E7016(에이자이사(Eisai)), BGB-290(베이젠사(BeiGene)) 또는 3-아미노벤즈아마이드;
h) 항생제, 예컨대, 에네다이인 항생제(예를 들어, 칼리케아미신, 특히, 칼리케아미신 γ1, δ1, α1 또는 β1(예를 들어, 문헌[J. Med. Chem., 39 (11), 2103-2117 (1996), Angew Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186 (1994)] 참고); 다이네미신 A 및 데옥시다이네미신을 비롯한 다이네미신; 에스페라미신, 케다르시딘, C-1027, 마두로펩틴뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 크로모프로테인 에네다이인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 액티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린; 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-다이아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 모폴리노-독소루비신, 사이아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 니토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 폿퍼로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투버시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; i) 기타: 예컨대, 폴리케타이드(아세토게닌), 특히, 불라타신 및 불라타시논, 겜시타빈, 에폭소미신(예를 들어, 카필조밉), 보르테조밉, 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 토세도스타트, 지브레스타트, PLX4032, STA-9090, 스티무박스, 알로벡틴-7, 엑세게바(Xegeva), 프로벤지, 에르보이(Yervoy), 단백지질화 저해제(예컨대, 로바스타틴), 도파민성 신경독(예컨대, 1-메틸-4-페닐피리디늄 이온), 세포 사이클 저해제(예컨대, 스타우로스포린), 악티노마이신(예컨대, 악티노마이신 D, 닥티노마이신), 블레오마이신(예컨대, 블레오마이신 A2, 블레오마이신 B2, 페플로마이신), 안트라사이클린(예컨대, 다우노루비신, 독소루비신(아드리아마이신), 이다루비신, 에피루비신, 피라루비신, 조루비신, 엠톡산트론, MDR 저해제(예컨대, 베라파밀), Ca2+ ATPase 저해제(예컨대, 탑시가르긴), 히스톤 데아세틸라제 저해제(보리노스타트, 로미뎁신, 파노비노스타트, 발프로산, 모세티노스타트(MGCD0103), 벨리노스타트, PCT-24781, 엔티노스타트, SB939, 레스미노스타트, 지비노스타트, AR-42, CUDC-101, 설포라판, 트리초스타틴 A); 탑시가르긴, 셀레콕시브, 글리타존, 에피갈로카테킨 갈레이트, 다이설피람, 살리노스포라마이드 A; 항-아드레날, 예컨대, 아미노글루트티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 아세글라톤; 알도포스파마이드 글리코사이드; 아미노레불린산; 암사크린; 아라비노사이드, 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 에플로니틴(DFMO), 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트, 에토글루시드; 갈륨 나이트레이트, 가사이토신, 하이드록시유레아; 이반드로네이트, 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나멧; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸하이드라자이드; 프로카바진; PSK®; 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트라이아지쿠온; 2,2',2"-트라이클로로트라이에틸아민; 트리초테센(특히, T-2 톡신, 버루카린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄, siRNA, 안티센스 약물; 및 핵산분해 효소.
2) 항-자가면역 질환제는 사이클로스포린, 사이클로스포린 A, 아미노카프로 산, 아자티오프린, 브로모크립틴, 클로람부실, 클로로퀸, 사이클로포스파마이드, 코르티코스테로이드(예를 들어, 암시노나이드, 베타메타손, 부데소나이드, 하이드로코르티손, 플루니솔리드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루코톨론 다나졸, 덱사메타손, 트라이암시놀론 아세토나이드, 베클로메타손 다이프로피오네이트), DHEA, 에나너셉트, 하이드록시클로로퀸, 인플릭시맙, 메록시캄, 메토트렉세이트, 모페틸, 마이코페닐레이트, 프레드니손, 시롤리무스, 타크롤리무스를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
3) 항-감염성 질환제는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: a) 아미노글리코사이드: 아미카신, 아스트로미신, 젠타미신(네틸미신, 시소미신, 이세파미신), 하이그로마이신 B, 카나마이신(아미카신, 아르베카신, 베카나마이신, 디베카신, 토브라마이신), 네오마이신(프라마이세틴, 파로모마이신, 리보스타마이신), 네틸미신, 스펙티노마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다미신; b) 암페니콜: 아지다페니콜, 클로람페니콜, 플로페니콜, 티암페니콜; c) 안사마이신: 젤다나마이신, 헤르비마이신; d) 카바페넴: 비아페넴, 도리페넴, 에르타페넴, 이미페넴/실라스타틴, 메로페넴, 파니페넴; e) 세펨: 카바세펨(로라카르베프), 세파세트릴, 세파클로, 세프라딘, 세파드록실, 세팔로늄, 세팔로리딘, 세팔로틴 또는 세팔로씬, 세팔렉신, 세팔로글리신, 세파만돌, 세파피린, 세파트리진, 세파자플루, 세파제돈, 세파졸린, 세프부페라존, 세프카펜, 세프달록심, 세페핌, 세프미녹스, 세폭시틴, 세프프로질, 세프록사딘, 세프테졸, 세푸록심, 세픽심, 세프디니어, 세프디토렌, 세페핌, 세페타메트, 세프메녹심, 세포디짐, 세포니시드, 세포페라존, 세포라나이드, 세포탁심, 세포티암, 세포조프란, 세팔렉신, 세프피미졸, 세프피라마이드, 세프피롬, 세프포독심, 세프프로질, 세프퀴놈, 세프술로딘, 세프타지딤, 세프테람, 세프티부텐, 세프티올렌, 세프티족심, 세프토비프롤, 세프트리악손, 세푸록심, 세푸조남, 세파마이신(세폭시틴, 세폭테탄, 세프메타졸), 옥사세펨(플로목세프, 라타목세프); f) 글리코펩타이드: 블레오마이신, 반코마이신(오리타반신, 텔라반신), 테이코플라닌(달바반신), 라모플라닌; g) 글리실사이클린: 예를 들어, 티게사이클린; g) β-락타마제 저해제: 페남(설박탐, 타조박탐), 클라밤(클라불란산); i) 린코사마이드: 클린다마이신, 린코마이신; j) 리포펩타이드: 답토마이신, A54145, 칼슘-의존 항체(CDA); k) 마크롤리드: 아지트로마이신, 세트로마이신, 클라리트로마이신, 디리스트로마이신, 에리트로마이신, 플루리트로마이신, 요사마이신, 케톨리드(텔리트로마이신, 세트로마이신), 미데카마이신, 미오카마이신, 올레안도마이신, 리파마이신(리팜피신, 리팜핀, 리파부틴, 리파펩틴), 로키타마이신, 록시트로마이신, 스펙티노마이신, 스피라마이신, 타크롤리무스(FK506), 트롤레안도마이신, 텔리트로마이신; l) 모노박탐: 아즈트레오남, 티게모남; m) 옥사졸리디논: 리네졸리드; n) 페니실린: 아목시실린, 암피실린(피밤피실린, 헤타실린, 바캄피실린, 메탐피실린, 탈람피실린), 아지도실린, 아즐로실린, 벤질페니실린, 벤자틴 벤질페니실린, 벤자틴 페녹시메틸페니실린, 클로메토실린, 프로카인 벤질페니실린, 카르베니실린(카린다실린), 클록사실린, 디클록사실린, 에피실린, 플루클록사실린, 메실리남(피브메실리남), 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페나메실린, 페니실린, 페네티실린, 페녹시메틸페니실린, 피페라실린, 프로피실린, 설베니실린, 테모실린, 티카르실린; o) 폴리펩타이드: 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B; p) 퀴놀론: 알라트로플록사신, 발로플록사신，시프로플록사신, 클리나플록사신, 다노플록사신, 디플록사신, 에녹사신, 엔로플록사신, 플로신, 가레녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 그레파플록사신, 카노트로바플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 마보플록사신, 목시플록사신, 나디플록사신, 노르플록사신, 오르비플록사신, 오플록사신, 페플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 시타플록사신, 스파플록사신, 테마플록사신, 토수폴록사신, 트로바플록사신; q) 스트렙토그라민: 프리스티나마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴; r) 설폰아마이드: 마페나이드, 프론토실, 설파세타마이드, 설파메티졸, 설파닐이미드, 설파살라진, 설프아이속사졸, 트라이메토프림, 트라이메토프림-설파메톡사졸(코-트리목사졸); s) 스테로이드 항균제: 푸시드산; t) 테트라사이클린: 독시사이클린, 클로르테트라사이클린, 클로모사이클린, 데메클로사이클린, 라임사이클린, 메클로사이클린, 메타사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 페니메피사이클린, 롤리테트라사이클린, 테트라사이클린, 글리실사이클린(예를 들어, 티게사이클린 포함); u) 기타 유형의 항생제: 안노나신, 아스페나민, 박토프레놀 저해제(바시트라신), DADAL/AR 저해제(사이클로세린), 딕티오스타틴, 디스코더몰리드, 엘레우테로빈, 에포틸론, 에탐부톨, 에토포사이드, 파로페넴, 푸시드산, 푸라졸리돈, 이소니아자이드, 라울리말리드, 메트로니다졸, 무피로신, 마이코락톤, NAM 합성 저해제(예를 들어, 포스포마이신), 나이트로푸란토인, 파클리탁셀, 플래텐시마이신, 피라진아마이드, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 리팜피신(리팜핀), 타조박탐 티니다졸, 우바리신.
4) 항-바이러스성 약물: a) 유입/융합 저해제： 아프라비록, 마라비록, 비크리비록, gp41(엔푸비어타이드), PRO 140, CD4(이발리주납); b) 인테그라제 저해제: 랄테그라비어, 엘비테그라비어, 글로보이드난 A; c) 성숙 저해제: 베비리마트, 비베콘; d) 뉴라미니다제 저해제: 오셀타미비어, 자나미비어, 페라미비어; e) 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드: 아바카비어, 아시클로비어, 아데포비어, 암독소비어, 아프리시타빈, 브리부딘, 시도포비어, 클레부딘, 덱셀부시타빈, 디다노신(ddI), 엘부시타빈, 엠트리시타빈(FTC), 엔테카비어, 팜사이클로비어, 플루오로우라실(5-FU), 3'-플루오로-치환된 2',3'-다이데옥시뉴클레오사이드 유사체(예를 들어, 3'-플루오로-2',3'-다이데옥시티미딘(FLT) 및 3'-플루오로-2',3'-다이데옥시구아노신(FLG)), 포미비르센, 간시클로비어, 이독스우리딘, 라미부딘(3TC), 1-뉴클레오사이드(β-1-티미딘 및 β-1,2'-데옥시사이티딘), 펜시클로비어, 라시비어, 리바비린, 스탬피딘, 스타부딘(d4T), 타리바비린(비라미딘), 텔비부딘, 테노포비어, 트리플루리딘, 발라시클로비어, 발간시클로비어, 잘시타빈(ddC), 지도부딘(AZT); f) 비-뉴클레오사이드: 아만타딘, 아테비리딘, 캡라비린, 다이아릴피리미딘(에트라비린, 릴피비린), 델라비르딘, 도코사놀, 에미비린, 에파비렌즈, 포스카르넷(포스포노폼산), 이미퀴모드, 인터페론 알파, 로비라이드, 로데노신, 메티사존, 네비라핀, NOV-205, 페그인터페론 알파, 포도필로톡신, 리팜피신, 리만타딘, 레시퀴모드(R-848), 트로만타딘; g) 프로테아제 저해제: 암프레나비어, 아타자나비어, 보세프레비어, 다루나비어, 포삼프레나비어, 인디나비어, 로피나비어, 넬피나비어, 플레코나릴, 리토나비어, 사퀴나비어, 텔라프레비어(VX-950), 팁라나비어; h) 기타 유형의 항-바이러스 약물: 아브자임, 아르비돌, 칼라놀라이드 a, 세라게닌, 사이아노비린-n, 다이아릴피리미딘, 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG), 포스카르넷, 그리피쓰신, 타리바비린(비라미딘), 하이드록시유레아, KP-1461, 밀테포신, 플레코나릴, 포트만테우(portmanteau) 저해제, 리바비린, 셀리시클립.
5) 방사선요법을 위한 방사성동위원소. 방사성동위원소(방사성핵종)의 예는 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At 또는 213Bi이다. 방사성동위원소 표지된 항체는 수용체 표적화 영상화 실험에 유용하거나 또는 예컨대, 항체-방사성동위원소 접합체를 사용한 표적화 치료에 유용할 수 있다(Wu et al., (2005) Nature Biotechnology 23(9): 1137-46). 세포 결합 분자, 예를 들어, 항체는 문헌[Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, Pubs. (1991)]에 기술된 기술을 사용하여, 방사성동위원소 금속에 결합하거나, 이와 킬레이팅하거나 또는 달리 복합체를 이루는 리간드 시약으로 표지될 수 있다. 금속 이온과 복합체를 이룰 수 있는 킬레이팅 리간드는 DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA 및 TETA(마이크로사이클릭스사(Macrocyclics), 미국 텍사스주 달라스 소재).
6). 상승작용 요법으로서의 또 다른 세포-결합 분자-약물 접합체. 바람직한 상승작용 접합체는 튜불리신 유사체, 메이탄시노이드 유사체, 탁사노이드(탁산) 유사체, CC-1065 유사체, 다우노루비신 및 독소루비신 화합물, 아마톡신 유사체, 벤조다이아제핀 이량체(예를 들어, 피롤로벤조다이아제핀(PBD), 토마이마이신, 안트라마이신, 인돌리노벤조다이아제핀, 이미다조벤조티아다이아제핀, 또는 옥사졸리디노벤조다이아제핀의 이량체), 칼리케아미신 및 에네다이인 항생제 화합물, 악티노마이신, 아자세린, 블레오마이신, 에피루비신, 타목시펜, 이다루비신, 돌라스타틴, 아우리스타틴(예를 들어, 모노메틸 아우리스타틴 E, MMAE, MMAF, 아우리스타틴 PYE, 아우리스타틴 TP, 아우리스타틴 2-AQ, 6-AQ, EB (AEB) 및 EFP(AEFP)), 듀오카마이신, 젤다나마이신 또는 메토트렉세이트, 티오테파, 빈데신, 빈크리스틴, 헤미아스테를린, 나줌아마이드, 마이크로기닌, 라디오수민, 토포아이소머라제 I 저해제, 알테로박틴, 마이크로스클레로더민, 테오넬라마이드, 에스페라미신, PNU-159682; 및 이들의 유사체 및 유도체의 세포독성제를 갖는 접합체일 수 있다.
(7) 다른 면역요법 약물: 예를 들어, 이미퀴모드, 인터페론(예를 들어, α 또는 β), 과립구 집락-자극 인자, 사이토카인, 인터류킨(IL-1 내지 IL-35), 항체(예를 들어, 트라스투주맙, 퍼투주맙, 베바시주맙, 세툭시맙, 파니투무맙, 인플릭시맙, 아달리무맙, 바실릭시맙, 다클리주맙, 오말리주맙(PD-1 또는 PD-L1), 단백질-결합 약물(예를 들어, 아브락산), 칼레케아미신 유도체, 메이탄신 유도체(DM1 및 DM4), CC-1065, SN-38, 엑사테칸, 토포테칸, 토포아이소머라제 I 저해제, 듀오카마이신, PBD 또는 IGN 마이너 그루브 바인더(minor groove binder), 강력한 탁솔 유도체, 독소루비신, 아우리스타틴 항유사분열 약물(예를 들어, 트라스투주맙-DM1, 트라스투주맙, 데룩스테칸(DS-8201a), 이노투주맙 오조가미신, 브렌툭시맙 베도틴, 사시투주맙 고비테칸, 글렘바투무맙 베도틴, 로보투주맙 메르탄신, AN-152 LMB2, TP-38, VB4-845, 칸투주맙 메르탄신, AVE9633, SAR3419, CAT-8015(항-CD22), IMGN388, 미르베툭시맙 소라브탄신(IMGN853), 엔포투맙 베도틴, 밀라투주맙-독소루비신, SGN-75(항-CD70), 항-Her3-엑세탄, 항-Trop2-엑세탄, 항-CD79b-MMAE, 항-Her2-MMAE, 항-trop2-MMAE, 항-Her2-MMAF, 항-trop2-MMAF, 항-CD22-칼리케아미신 유도체, 항-CD22-MMAE, 항-Her2-아우리스타틴 유도체, 항-Muc1-아우리스타틴 유도체, 항-cMet- 아우리스타틴 유도체, 또는 항-클라우딘 18.2-아우리스타틴 유도체)로부터 선택된 약물과 접합된 항체;
(8) 이들 약물 중 임의의 것의 약제학적으로 허용 가능한 염, 산 또는 유도체.
또 다른 상승작용 면역요법에서, 면역관문 저해제(checkpoint inhibitor)의 항체, TCR(T　세포 수용체) T 세포 또는 CAR(키메라 항원 수용체) T 세포 또는 B 세포 수용체(BCR), 자연 살해(NK) 세포 또는 세포독성 세포 또는 항- CD3, CD4, CD8, CD16(FcγRIII), CD19, CD20, CD22, CD25, CD27, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40L, CD45RA, CD45RO, CD56, CD57, CD57bright, CD70, CD79, CD79b, CD123, CD125, CD138, TNFβ Fas 리간드, MHC 클래스 I 분자(HLA-A, B, C), VEGF 또는 NKR-P1 항원의 항체가 상승작용 요법을 위해서 본 특허의 접합체와 함께 사용하기에 바람직하다.
추가의 또 다른 실시형태에서, 치료적 유효량의 화학식 (I) 내지 (VII)의 접합체 또는 임의의 본 명세서에 기술된 접합체를 포함하는 약제학적 조성물은 암, 자가면역 질환 또는 감염성 질환의 상승작용적으로 효과적인 치료 또는 예방을 위해서 다른 치료제, 예컨대, 화학치료제, 방사선 요법, 면역치료제, 자가면역 장애 치료제, 항감염제 또는 다른 접합체와 동시에 투여될 수 있다. 상승작용적 작용제는 보다 바람직하게는 하기 약물 중 하나 또는 몇몇으로부터 선택된다: 아바타셉트, 아베마시클립, 아비라테론 아세테이트, 아브락산, 아세트아미노펜/하이드로코돈, 아칼라브루티닙, 아두카누맙, 아달리무맙, ADXS31-142, ADXS-HER2, 아파티닙 다이말레에이트, 알데스류킨, 알렉티닙, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 알펠리십, 아도트라스투주맙 엠탄신, 암페타민/덱스트로암페타민, 아날로티닙, 아나스트로졸, 아팔루타마이드, 아리피프라졸, 안트라사이클린, 아리피프라졸, 아타자나비어, 아테졸리주맙, 아토바스타틴, 아벨루맙, 악시캅타젠 실로루셀(Axicabtagene ciloleucel), 악시티닙, 벨리노스타트, BCG(생), 베바시주맙, 벡사로텐, 블리나투모맙, 보르테조밉, 보수티닙, 브렌툭시맙 베도틴, 브리가티닙, 부데소나이드, 부데소나이드/포르모테롤, 부프레노핀, 카바지탁셀, 카보잔티닙, 캠렐리주맙, 캡마티닙, 카페시타빈, 카필조밉, 키메라 항원 수용체-조작 T(CAR-T) 세포, 셀레콕시브, 세리티닙, 세툭시맙, 시다마이드, 사이클로스포린, 시나칼세트, 크리조티닙, 코비메티닙, 코센틱스(Cosentyx), 크리조티닙, CTL019, 다비가트란, 다브라페닙, 다카바진, 다클리주맙, 다코미티닙, 다코모티닙, 댑토마이신, 다라투무맙, 다르베포에틴 알파, 다롤루타마이드, 다루나비어, 다사티닙, 데니류킨 디프티톡스, 데노수맙, 데파코테, 덱슬란소프라졸, 덱스메틸페니데이트, 덱사메타손, 디그니캡 쿨링 시스템, 디누툭시맙, 독시사이클린, 둘록세틴, 두벨리십, 두발루맙, 엘로투주맙, 엠트리시타빈/릴피비린/테노포비어 디소프록실 퓨마레이트, 엠트리시트빈/테노포비어/에파비렌즈, 엔포투납 베도틴-ejfv, 엔옥사파린, 엔사티닙, 엔트렉티닙, 엔자루타마이드, 에포에틴 알파, 에를로티닙, 에르다피티닙, 에소메프라졸, 에스조피클론, 에타너셉트, 에베롤리무스, 엑세메스탄, 에버롤리무스, 엑세나타이드 ER, 에제티미베, 에제티미베/심바스타틴, fam-트라스투주맙 데룩스테칸, 페노피브레이트, 필그라스팀, 핀골리모드, 플루마티닙, 플루티카손 프로피오네이트, 플루티카손/살메테롤, 풀베스트란트, 가지바, 게피티닙, 글라티라머, 고세렐린 아세테이트, 이코티닙, 이마티닙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이브루티닙, 이델라리십, 이포스파마이드, 인플릭시맙, 이미퀴모드, ImmuCyst, 이뮤노 BCG, 이니파립, 인슐린 아스파르트, 인슐린 데테미어, 인슐린 글라르긴, 인슐린 리스프로, 인터페론 알파, 인터페론 알파-1b, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 인터페론 베타, 인터페론 베타 1a, 인터페론 베타 1b, 인터페론 감마-1a, 라파티닙, 이필리무맙, 이프라트로피움 브로마이드/살부타몰, 익사조밉, 카누마, 란레오타이드 아세테이트, 레날리도마이드, 레날리오마이드, 렌바티닙 메실레이트, 레트로졸, 레보티록신, 레보티록신, 리도카인, 리네졸리드, 리라글루타이드, 리스덱삼페타민, LN-144, 로라티닙, 메만틴, 메틸페니데이트, 메토프롤롤, 메킨니스트, 머리시타빈/릴피비린/테노포비어, 모달피닐, 모메타손, 미시댁(Mycidac)-C, 네시투무맙, 네라티닙, 닐로티닙, 니라파립, 니볼루맙, 오파투무맙, 오비누투주맙, 올라파립, 올메사탄, 올메사탄/하이드로클로로티아자이드, 오말리주맙, 오메가-3 지방산 에틸 에스터, 온코린, 오셀타미비어, 오시머티닙, 옥시코돈, 팔보시클립, 팔리비주맙, 파니투무맙 파노비노스타트, 파조파닙, 펨브롤리주맙, 펙시다티닙 염산염, PD-1 항체, PD-L1 항체, 페메트렉세드, 페투주맙, 뉴모코칼 접합체 백신(Pneumococcal conjugate vaccine), 폴라투주맙 베도틴, 포말리도마이드, 프레가발린, 프로스카박스, 프로프라놀올, 퀘티아핀, 라베프라졸, 라듐 223 클로라이드, 랄록시펜, 랄테그라비어, 라무시루맙, 라니비주맙, 렐루골릭스, 레고라페닙, 리툭시맙, 리바옥사반, 로미뎁신, 로수바스타틴, 룩소리티닙 포스페이트, 살부타몰, 사볼리티닙, 세마글루타이드, 셀리넥소, 세베라머, 실데나필, 실툭시맙, 시풀류셀-T, 시타글립틴, 시타글립틴/메트포민, 솔리페나신, 솔라네주맙, 소니데깁, 소라페닙, 수니티닙, 타크롤리무스, 타크리무스, 타달라필, 타목시펜, 타핀라르, 탈리모진 라헤르파렙벡(Talimogene laherparepvec), 탈라조파립, 텔라프레비어, 탈라조파립, 테모졸로마이드, 템시롤리무스, 테노포비어/엠트리시타빈, 테노포비어 다이아이소프록실 퓨마레이트, 테스토스테론 젤, 탈리도마이드, TICE BCG, 티오트로피움 브로마이드, 티사겐레클류셀(Tisagenlecleucel), 토레미펜, 트라메티닙, 트라스투주맙, 트라스투주맙/하이알루로니다제-oysk, 트라벡테딘(엑테이나시딘(ecteinascidin) 743), 트라메티닙, 트레멜리무맙, 트라이플루리딘/티피라실, 트레티노인, 티슬레리주맙, Uro-BCG, 우스테키누맙, 발사탄, 벨리파립, 반데타닙, 베무라페닙, 베네토클락스, 보리노스타트, 자누브루티닙, 지브-아플리베르셉트, 조스타박스 및 이들의 유사체, 유도체, 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 담체, 희석제 또는 부형제 또는 이들의 조합물.
더 추가의 목적에 따르면, 본 발명은 또한 본 발명의 접합체의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 접합체 및 방법은 당업자에게 널리 공지된 다양한 방식으로 제조될 수 있다. 접합체에 사용되는 튜불리신 유사체는 예를 들어, 하기에 기재된 방법의 적용 또는 개작 또는 당업자에 의해 인식되는 변형에 의해 합성될 수 있다. 적절한 변형 및 치환은 과학 문헌으로부터 당업자에게 쉽게 명백하고, 널리 공지되어 있거나, 쉽게 얻을 수 있을 것이다. 특히, 이러한 방법은 문헌[R.C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, 2nd Edition, Wiley-VCH Publishers, 1999]에서 찾아볼 수 있다.
하기에 기재된 반응에서, 반응에 원치 않는 참여를 회피하기 위해서, 반응성 작용기, 예를 들어, 하이드록시, 아미노, 이미노, 티오 또는 카복실기를 보호하는 것이 필요할 수 있다. 통상적인 보호기는 표준 관행에 따라 사용될 수 있으며, 예를 들어 문헌[P. G. Wuts and T.W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley-Interscience; 4th edition (2006)]을 참고한다. 일부 반응은 염기, 산 또는 적합한 용매의 존재 하에 수행될 수 있다. 이 반응에 사용될 염기, 산 및 용매의 특성은 특별한 제한되지 않고, 분자의 다른 부분에 역효과를 갖지 않는 한, 이러한 유형의 반응에 통상적으로 사용되는 염기, 산 또는 용매가 본 명세서에서 동등하게 사용할 수 있다. 반응은 광범위한 온도에서 수행될 수 있다. 본 발명자들은 일반적으로 -80℃ 내지 150℃(보다 바람직하게는 대략 실온 내지 100℃)의 온도에서 반응을 수행하는 것이 편리하다는 것을 발견하였다. 반응에 필요한 시간은 많은 요인, 특히 반응 온도와 시약의 특성에 따라 크게 달라질 수 있다. 그러나, 반응이 상기에 요약된 바람직한 조건 하에서 수행되는 한, 일반적으로 3시간 내지 20시간의 기간이 충분할 것이다.
반응의 후처리는 통상적인 수단에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 반응 생성물은 반응 혼합물로부터 용매를 증류 제거하거나, 필요한 경우 반응 혼합물로부터 용매를 증류 제거한 후, 잔류물을 물에 붓고, 그 다음 수-비혼화성 유기 용매로 추출하고, 추출물로부터 용매를 증류시킴으로서 회수될 수 있다. 또한, 바람직한 경우 생성물을 널리 공지된 기술, 예컨대, 재결정화, 재침전 또는 다양한 크로마토그래피 기술, 특히 칼럼 크로마토그래피 또는 분취용 박층 크로마토그래피에 의해 추가로 정제시킬 수 있다. 본 발명의 튜불리신 유사체 및 이의 접합체의 합성을 도 1 내지 도 22에 예시한다.
강력한 튜불리신 유사체를 갖는 세포 결합 분자의 접합체가 추가로 예시되지만 하기 실시예의 설명에 의해 제한되지는 않는다.
실험 물질:
질량 스펙트럼은 Bruker Esquire 3000 시스템을 사용하여 얻었다. NMR 스펙트럼은 Bruker AVANCE300 분광계에서 기록하였다. 화학적 이동은 내부 표준으로서 TMS에 대해 ppm 단위로 기록하였다. 자외선 스펙트럼은 Hitachi U1200 분광광도계에서 기록하였다. 분획 수집기 및 가변 파장 검출기가 장착된 Agilent 1100 HPLC 시스템을 사용하여 HPLC를 수행하였다. Analtech GF 실리카겔 TLC 플레이트에서 박막 크로마토그래피를 수행하였다. 아민알산(aminal acid) 및 이의 유도체뿐만 아니라 미리 로딩된 수지는 머크 케미컬 인터내널사(Merck Chemicals International Co.), 신테테크사(Synthetech Co.), 펩타이드 인터내셔널사(Peptides International Inc.) 또는 켐브리지 인터네셔널사(Chembridge International Co.) 또는 시그마-알드리치사(Sigma-Aldrich Co.)로부터 입수하였다. 링커 중 일부, NHS 에스터/말레이미드(AMAS, BMPS, GMBS, MBS, SMCC, EMCS 또는 설포-EMCS, SMPB, SMPH, LC-SMCC, 설포-KMUS, SM(PEG)4, SM(PEG)6, SM(PEG)8, SM(PEG)12, SM(PEG)24); NHS 에스터/피리딜다이티올(SPDP, LC-SPDP 또는 설포-LC-SPDP, SMPT, 설포-LC-SMPT); NHS 에스터/할로아세틸(SIA, SBAP, SIAB 또는 설포-SIAB); NHS 에스터/다이아지린(SDA 또는 설포-SDA, LC-SDA 또는 설포-LC-SDA, SDAD 또는 설포-SDAD); 말레이미드/하이드라자이드(BMPH, EMCH, MPBH, KMUH); 피리딜다이티올/하이드라자이드(PDPH); 아이소사이아네이트/말레이미드(PMPI)의 링커는 써모 피셔 사이언티픽사(Thermo Fisher Scientific Co.)로부터 구입하였다. SPDB, SPP 링커는 참고문헌(문헌[Cumber, A. et al., Bioconjugate Chem., 1992, 3, 397-401])에 따라서 제조하였다. T-DM1 및 트라스투주맙은 제넨테크사(Genentech)로부터 구입하였다. 모든 다른 화학물질 또는 무수 용매는 시그마-알드리치 인터내셔널사 또는 알라딘 케미컬사(상하이)(Aladdin Chemical (Shanghai) Ltd.)로부터 구입하였다.
실시예 1. 다이-tert-부틸 1,2-비스(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)하이드라진-1,2-다이카복실레이트의 합성.
Figure pct00117
DMF(150㎖) 중의 다이-tert-부틸 하이드라진-1,2-다이카복실레이트(8.01g, 34,4m㏖)에 NaH(오일 중의 60%, 2.76g, 68.8m㏖)를 첨가하였다. RT에서 30분 동안 교반한 후, tert-부틸 2-브로모아세테이트(14.01g, 72.1m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 메탄올(3㎖)을 첨가하여 반응정지시키고, 농축시키고, EtOAc(100㎖) 및 물(100㎖)로 희석시키고, 분리시키고, 수성층을 EtOAc(2×50㎖)로 추출하였다. 유기층을 합하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 증발시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(EtOAc/헥산 1:5에서 1:3)에 의해서 정제시켜 표제 화합물(12.98g, 82% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. C22H41N2O8 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 461.28, 실측치 461.40.
실시예 2. 2,2'-(하이드라진-1,2-다이일)다이아세트산의 합성.
Figure pct00118
1,4-다이옥산(40㎖) 중의 다이-tert-부틸 1,2-비스(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)하이드라진-1,2-다이카복실레이트(6.51g, 14.14m㏖)에 HCl(12M, 10㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, 다이옥산(20㎖) 및 톨루엔(40㎖)으로 희석시키고, 증발시키고, 다이옥산(20㎖) 및 톨루엔(40㎖)과 함께 건조물로 공증발시켜 추가로 제조하지 않고 다음 단계를 위한 조 표제 생성물(2.15g, 103% 수율, 약 93% 순도)을 수득하였다. C4H9N2O4 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 149.05, 실측치 149.40.
실시예 3. 2,2'-(1,2-비스((E)-3-브로모아크릴로일)하이드라진-1,2-다이일)다이아세트산의 합성.
Figure pct00119
THF(50㎖) 및 NaH2PO4(0.1M, 80㎖, pH 6.0)의 혼합물 중의 2,2'-(하이드라진-1,2-다이일)다이아세트산(1.10g, 7.43m㏖)의 용액에 (E)-3-브로모아크릴로일 브로마이드(5.01g, 23.60m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 6시간 동안 교반하고, 농축시키고, 3% 폼산을 함유하는 H2O/CH3CN(1:9)로 용리시키는 SiO2 칼럼 상에서 정제시켜 표제 화합물(2.35g, 77% 수율, 약 93% 순도)을 수득하였다. C10H11Br2N2O6 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 412.89, 실측치 413.50.
실시예 4. 2,2'-(1,2-비스((E)-3-브로모아크릴로일)하이드라진-1,2-다이일)다이아세틸 클로라이드의 합성.
Figure pct00120
다이클로로에탄(15㎖) 중의 2,2'-(1,2-비스((E)-3-브로모아크릴로일)하이드라진-1,2-다이일)다이아세트산(210㎎, 0.509m㏖)에 (COCl)2(505㎎, 4.01m㏖), 그 다음 0.040㎖의 DMF를 첨가하였다. RT에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, 다이클로로에탄(2×20㎖) 및 톨루엔(2×15㎖)과 건조물로 공증발시켜 추가로 정제하지 않고 다음 단계를 위한 표제 조 생성물(이것은 안정적이지 않음)(245㎎, 107% 수율)을 수득하였다. C10H9Br2Cl2N2O4 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 448.82, 450.82, 452.82, 454.82, 실측치 448.60, 450.60, 452.60, 454.60.
실시예 5. tert-부틸 2,8-다이옥소-1,5-옥사조칸-5-카복실레이트의 합성.
Figure pct00121
4℃에서 1.0M NaOH(300㎖) 중의 3,3'-아잔다이일다이프로판산(10.00g, 62.08m㏖)의 용액에 1시간 동안 200㎖ THF 중의 다이-tert-부틸 다이카보네이트(22.10g, 101.3m㏖)를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 2시간 동안 4℃에서 교반하였다. 혼합물을 0.2M H3PO4로 조심스럽게 pH ~4까지 산성화시키고, 진공 하에서 농축시키고, CH2Cl2로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시키고, AcOH/MeOH/CH2Cl2(0.01:1:5)로 용리시키는 플래쉬 SiO2 크로마토그래피로 정제시켜 3,3'-((tert-부톡시카보닐)아잔다이일)다이프로판산(13.62g, 84% 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z C11H19NO6 [M+H] +, 계산치 262.27, 실측치 262.40.
0℃에서 CH2Cl2(500㎖) 중의 3,3'-((tert-부톡시카보닐)아잔다이일)다이프로판산(8.0g, 30.6m㏖)의 용액에 오산화인(8.70g, 61.30m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안, 이어서 r.t.에서 1시간 동안 교반하고, 짧은 SiO2 칼럼으로 여과시키고, 칼럼을 EtOAc/CH2Cl2(1:6)로 헹궜다. 여과액을 농축시키고, EtOAc/헥산으로 배산처리(triturated)하여 표제 화합물(5.64g, 74% 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z C11H17NO5 [M+H] +, 계산치 244.11, 실측치 244.30.
실시예 6. 2,5-다이옥소피롤리딘-1-일 프로피올레이트의 합성.
Figure pct00122
CH2Cl2(150㎖) 및 DIPEA(5㎖, 28.7m㏖) 중의 프로피올산(5.00g, 71.4m㏖), NHS(9.01g, 78.3m㏖) 및 EDC(20.0g, 104.1m㏖)를 밤새 교반하고, 증발시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(EtOAc/헥산 1:4)로 정제시켜 무색 오일로서 표제 화합물(9.30g, 79% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2.68 (s, 1H), 2.61 (s, 4H). C7H5NaNO4 [M+Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 190.02, 실측치 190.20.
실시예 7. tert-부틸 2-프로피올로일하이드라진카복실레이트의 합성.
Figure pct00123
CH2Cl2(150㎖) 및 DIPEA(5㎖, 28.7m㏖) 중의 프로피올산(5.00g, 71.4m㏖), tert-부틸 하이드라진카복실레이트(9.45g, 71.5m㏖) 및 EDC(20.0g, 104.1m㏖)를 밤새 교반하고, 증발시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(EtOAc/헥산 1:5)로 정제시켜 무색 오일로서 표제 화합물(7.92g, 84% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.76 (m, 2H),2.68 (s, 1H), 1.39 (s, 9H). C5H12NaN2O2[M+Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 155.09, 실측치 155.26.
실시예 8. 프로피올로하이드라자이드, HCl 염의 합성.
Figure pct00124
1,4-다이옥산(12㎖)에 용해시킨 tert-부틸 2-프로피올로일하이드라진카복실레이트(4.01g, 30.35m㏖)를 4℃에서 4㎖의 HCl(진한)로 처리하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, 다이옥산(30㎖) 및 톨루엔(30㎖)으로 희석시키고, 진공 하에서 농축시켰다. 조 혼합물을 용리액으로서 메틸렌 클로라이드 중의 메탄올(5%에서 10%) 및 1% 폼산의 혼합물을 사용하여 실리카겔 상에서 정제시켜 표제 화합물(2.11g, 83% 수율)을 제공하였다, ESI MS m/z C3H5N2O [M+H]+, 계산치 85.03, 실측치 85.30.
실시예 9. 화합물 2의 합성
Figure pct00125
10-ℓ 반응기에서 2,2-다이에톡시아세토나이트릴(1.00㎏, 7.74㏖, 1.0eq.)을 실온에서 메탄올(6.0ℓ)에서 (NH4)2S(48% 수성 용액, 1.41㎏, 9.29㏖, 1.2eq.)와 혼합하였다. 내부 온도가 33℃까지 증가되고, 이어서 r.t로 떨어졌다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트(5ℓ)로 취하고, 포화 NaHCO3 용액(4×1.0ℓ)으로 세척하였다. 수성층을 에틸 아세테이트(5×1.0ℓ)로 재추출하였다. 유기상을 합하고, 염수(3ℓ)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 고체를 진공 여과로 수집하고, 석유 에터로 세척하였다. 여과액을 농축시키고, 석유 에터로 배산처리하여 약간의 크롭(crop)의 백색 또는 밝은 황색 고체를 수득하였다. 모든 크롭을 합하여 1.1㎏의 목적하는 생성물을 제공하였다(87% 수율). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.81 (d, J = 71.1 Hz, 2H), 5.03 (s, 1H), 3.73 (dq, J = 9.4, 7.1 Hz, 2H), 3.64 (dq, J = 9.4, 7.0 Hz, 2H), 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 6H).
실시예 10. 화합물 3의 합성
Figure pct00126
환류 응축기 및 첨가 깔때기가 장치된 5-ℓ 3구 둥근 병 플라스크에, 에틸 브로모피루베이트(80% 순도, 404㎖, 2.57㏖, 1.2eq.)를 3ℓ EtOH 중의 분자체(3Å, 500g) 및 티오아마이드(350g, 2.14㏖, 1.0eq.)의 혼합물에 30분에 걸쳐서 첨가하였다. 첨가 중에, 내부 온도가 약간 증가되었다. 이어서 반응 혼합물을 환류까지 가열시키고, 30분 동안 교반하였다. r.t.까지 냉각시키고, 반응 혼합물을 셀라이트 상에서 여과시키고, 여과 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 진공 하에서 농축시켰다. 2개 배취의 조 생성물을 합하고, 실리카겔(1.5㎏)과 혼합하고, 실리카겔(10㎏ 패킹됨) 칼럼 상에 로딩하고, 에틸 아세테이트/석유 에터(10-20%)로 용리시켜 티아졸 카복실레이트를 갈색 오일로서 제공하였다(509g, 92% 수율).
실시예 11. 화합물 4의 합성
Figure pct00127
아세톤(3.0ℓ) 중의 아세탈(300g, 1.16㏖)의 용액을 환류까지 가열시키고, 4N HCl(250㎖)을 환류 용액에 1.0시간에 걸쳐서 첨가하였다. TLC 분석이 출발 물질의 완전한 소모를 나타내었다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 상을 분리시켰다. 유기상을 에틸 아세테이트(1.5ℓ)로 희석시키고, 포화 NaHCO3 용액(1.0ℓ), 물(1.0ℓ) 및 염수(1.0ℓ)로 세척하고, 이어서 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 수성 상 모두를 합하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기 용액을 감압 하에서 여과 및 농축시켰다. 조 생성물을 석유 에터 및 다이에틸 에터(5:1)로 배산처리하고, 생성된 고체를 진공 여과로 수집하고, 석유 에터 및 에틸 아세테이트(10:1)로 세척하였다. 여과액을 농축시키고, 0-15% 에틸 아세테이트/석유 에터를 사용하여 크로마토그래피시켜 또 다른 크롭의 목적하는 생성물을 제공하였다. 모든 백색 내지 밝은 황색 고체를 합하고, 40g으로 칭량되었다(43% 수율).1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.08 - 10.06 (m, 1H), 8.53 - 8.50 (m, 1H), 4.49 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.44 (t, J = 7.1 Hz, 3H). C7H8NO3S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 186.01; 실측치 186.01.
실시예 12. 화합물 6의 합성
Figure pct00128
NaN3(740g, 11.4㏖)를 물(2.0ℓ)에 용해시키고, 다이클로로메탄(2.0ℓ)을 첨가하고, 0℃에서 냉각시키고, 이것에 Tf2O(700㎖, 4.10㏖, 1.8eq.)를 1.5시간에 걸쳐서 첨가하였다. 첨가가 끝난 후, 반응물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 유기상을 분리시키고 수성상을 다이클로로메탄(2×500㎖)으로 추출하였다. 합한 유기상을 포화 NaHCO3 용액(3×1.0ℓ)으로 세척하였다. 이러한 트라이플릴 아자이드(triflyl azide)의 다이클로로메탄 용액을 r.t.에서 물(3.0ℓ) 및 메탄올(3.0ℓ) 중의 (L)-아이소류신(300g, 2.28㏖, 1.0eq.), K2CO3(472g, 3.42㏖, 1.5eq.), CuSO4 . 5H2O(5.7g, 22.8m㏖, 0.01eq.)의 혼합물에 첨가하였고, 첨가 중에, 내부 온도가 약간 증가되었다. 그리고 이어서 혼합물을 r.t.에서 16시간 동안 교반하였다. 유기 용매를 감압 하에서 제거하고, 수성상을 진한 HCl(약 280㎖ 첨가)로 pH 6-6.5까지 산성화시키고, 이어서 포스페이트 완충액(0.25M, pH 6.2, 6.0ℓ)으로 희석시키고, EtOAc(6×2.0ℓ)로 세척하여 설폰아마이드 부산물을 제거하였다. 용액을 진한 HCl(약 400㎖ 첨가)로 pH 3까지 산성화시키고, EtOAc(4×2.0ℓ)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(2.0ℓ)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축시켜 생성물 6(320g, 89% 수율)을 밝은 황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 12.01 (s, 1H), 3.82 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 2.00 (ddd, J = 10.6, 8.6, 5.5 Hz, 1H), 1.54 (dqd, J = 14.8, 7.5, 4.4 Hz, 1H), 1.36 - 1.24 (m, 1H), 1.08 - 0.99 (m, 3H), 0.97 - 0.87 (m, 3H).
실시예 13. 화합물 10의 합성
Figure pct00129
1ℓ THF 중의 (S)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드(100g, 0.825㏖, 1.0eq.)의 용액에 Ti(OEt)4(345㎖, 1.82㏖, 2.2eq.) 및 3-메틸-2-부탄온(81㎖, 0.825㏖, 1.0eq.)을 N2 하에서 첨가하고, r.t.에서 반응 혼합물을 16시간 동안 환류시키고, 이어서 r.t.까지 냉각시키고, 빙수(1ℓ)에 부었다. 혼합물을 여과시키고, 여과 케이크를 EtOAc로 세척하였다. 유기층을 분리시키고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 제공하였고, 이것을 진공 증류(15-20torr, 95℃)로 정제시켜 생성물 10(141g, 90% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2.54 - 2.44 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.17 (s, 9H), 1.06 (dd, J = 6.9, 5.1 Hz, 6H). C9H19NaNOS [M+Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 212.12; 실측치 212.11.
실시예 14. 화합물 11의 합성
Figure pct00130
-78℃에서 N2 하에서 무수 THF(1ℓ) 중의 다이아이소프로필아민(264㎖, 1.87㏖, 1.65eq.)의 용액에 n-부틸리튬(2.5M, 681㎖, 1.70㏖, 1.5eq.)을 첨가하고, 반응 혼합물을 30분에 걸쳐서 0℃까지 가온시키고, 이어서 다시 -78℃까지 냉각시켰다. 화합물 10(258g, 1.36㏖, 1.2eq.)을 첨가하고, THF(50㎖)로 헹궜다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 그 후 THF(1.05ℓ) 중의 ClTi(O i Pr)3(834g, 3.17㏖, 2.8eq.)를 적가하였다. 1시간 동안 교반한 후, THF(500㎖)에 용해시킨 화합물 4(210g, 1.13㏖, 1.0eq.)를 약 1시간 동안 적가하고, 생성된 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. TLC 분석이 반응의 완결을 나타내었다. 반응을 아세트산 및 THF(v/v 1:1, 300㎖)의 혼합물로 반응정지시키고, 이어서 염수(2ℓ)에 붓고, EtOAc(8×1ℓ)로 추출하였다. 유기상을 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(DCM/EtOAc/PE 2:1:2)로 정제시켜 화합물 11(298g, 74% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.13 (s, 1H), 6.63 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.20 - 5.11 (m, 1H), 4.43 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.42 - 3.28 (m, 2H), 2.89 (dt, J = 13.1, 6.5 Hz, 1H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.33 (s, 9H), 1.25 - 1.22 (m, 6H). C16H26NaN2O4S2 [M+Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 397.13, 실측치 397.11.
실시예 15. 화합물 12의 합성
Figure pct00131
THF(200㎖)에 용해시킨 화합물 11(509g, 1.35㏖, 1.0eq.)의 용액을 -78℃까지 냉각시켰다. Ti(OEt)4(570㎖, 2.72㏖, 2.0eq.)를 서서히 첨가하였다. 첨가를 완결한 후 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 그 다음 NaBH4(51.3g, 1.36㏖, 1.0eq.)를 90분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 3시간 동안 교반하였다. TLC 분석이 출발 물질이 여전히 남아있음을 나타내었다. EtOH(50㎖)를 서서히 첨가하고, 반응물을 1.5시간 동안 교반하고, 이어서 염수(2ℓ, 250㎖ HOAc 함유)에 붓고, r.t.까지 가온시켰다. 셀라이트 상에서 여과시킨 후, 유기상을 분리시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(EtOAc/PE 1:1)로 정제시켜 생성물 12(364g, 71% 수율)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.10 (s, 1H), 5.51 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.23 - 5.15 (m, 1H), 4.41 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.48 - 3.40 (m, 1H), 3.37 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.29 (t, J = 13.0시간z, 1H), 1.95 - 1.87 (m, 1H), 1.73 - 1.67 (m, 1H), 1.40 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.29 (s, 9H), 0.93 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 7.2 Hz, 3H). C16H28NaN2O4S2 [M+Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 399.15, 실측치 399.14.
실시예 16. 화합물 13의 합성
Figure pct00132
0℃에서 에탄올(590㎖) 중의 화합물 12(600g, 1.60㏖, 1.0eq.)의 용액에 다이옥산 중의 4N HCl(590㎖)을 서서히 첨가하였다. 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 2.5시간 동안 교반하였다. 백색 침전물을 부수고, 여과로 수집하고, EtOAc로 세척하였다. 여과액을 농축시키고, EtOAc로 배산처리하였다. 2개 크롭의 백색 고체를 합하고, 446g(90% 수율)으로 칭량되었다.
실시예 17. 화합물 14의 합성
Figure pct00133
화합물 10: 아지도-Ile-OH(6, 153g, 0.97㏖, 2.0eq.)를 THF(1.5ℓ)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시키고, 이것에 NMM(214㎖, 1.94㏖, 4.0eq.) 및 아이소부틸클로로폼에이트(95㎖, 0.73㏖, 2.0eq.)를 순서대로 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1.0시간 동안 교반하였다. 화합물 13(150g, 0.49m㏖, 1.0eq.)을 나누어 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 0℃에서 물을 첨가하여 반응을 반응정지시키고, 생성된 혼합물을 EtOAc로3회 동안 추출하였다. 합한 유기층을 1N HCl, 포화 NaHCO3 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(0-30% EtOAc/PE)로 정제시켜 백색 고체(140g, 70% 수율)를 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.14 (s, 1H), 6.57 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 13.2, 6.3 Hz, 2H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 2.21 (dd, J = 24.4, 11.5 Hz, 2H), 1.90 - 1.79 (m, 3H), 1.42 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 1.37 - 1.27 (m, 2H), 1.11 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.01 - 0.94 (m, 9H). C18H30N5O4S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 412.19, 실측치 412.19.
실시예 18. 화합물 15의 합성
Figure pct00134
화합물 11: 0℃에서 CH2Cl2(50㎖) 중의 화합물 14(436g, 1.05㏖, 1.0eq.)의 용액에 이미다졸(94g, 1.37m㏖, 1.3eq.), 그 다음 클로로트라이에틸실란(222㎖, 1.32㏖, 1.25eq.)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.까지 1시간에 걸쳐 가온시키고, 추가 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 염수를 첨가하고, 유기층을 분리시키고, 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에서 농축시키고, 석유 에터 중의 15-35% EtOAc의 구배로 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜로 생성물 15(557.4g, 95% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.20 - 5.12 (m, 1H), 4.44 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.06 - 3.97 (m, 1H), 3.87 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 2.14 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 2.01 - 1.91 (m, 3H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.34 - 1.25 (m, 2H), 1.06 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.00 - 0.93 (m, 18H), 0.88 (dd, J = 19.1, 6.8 Hz, 6H). C24H44N5O4SSi [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 526.28, 실측치 526.28.
실시예 19. 화합물 16의 합성
Figure pct00135
0℃에서 THF(4ℓ) 중의 15(408g, 0.77㏖, 1.0eq.) 및 메틸 아이오다이드(145㎖, 2.32㏖, 3.0eq.)의 용액에 소듐 하이드라이드(광유 중의 60% 분산물, 62.2g, 1.55㏖, 2.0eq.)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 밤새 교반하고 이어서 격렬하게 교반하면서 빙수 냉각된 포화 염화암모늄(5ℓ)에 부었다. 이어서 혼합물을 EtOAc로 추출(3×500㎖)하고, 유기층을 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, 석유 에터 중의 15-35% EtOAc의 구배로 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 생성물 16(388g, 93% 수율)을 밝은 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H), 4.95 (d, J = 6.6 Hz, 1H),4.41 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.56 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.27 - 2.06 (m, 4H), 1.83 - 1.70 (m, 2H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.29 (ddd, J = 8.9, 6.8, 1.6 Hz, 3H), 1.01 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.96 (dt, J = 8.0, 2.9 Hz, 15H), 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.7 Hz,3H). C25H46N5O4SSi [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 540.30, 실측치 540.30.
실시예 20. 화합물 17의 합성
Figure pct00136
중성 pH에 도달될 때까지 메탄올(15㎖) 중의 화합물 16(1.01g, 1.87m㏖)의 용액에 0.1N HCl을 적가하였다. Pd/C(10 wt%, 583㎎)의 첨가 후, 혼합물을 H2(1atm) 하에서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서 필터 패드를 메탄올로 세척하면서 Pd/C를 여과로 제거하였다. 여과액을 감압 하에서 농축시키고, 잔류물을 EtOAc(50㎖)에 다시 용해시키고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축시켜 화합물 17(900㎎, 94% 수율)을 연한 황색 오일로서 수득하였다.
실시예 21. 화합물 22의 합성
Figure pct00137
메탄올(100㎖) 중의 D-피페콜린산(10.0g, 77.4m㏖, 1.0eq.)의 용액에 폼알데하이드(37% 수성 용액, 30.8㎖, 154.8m㏖, 2.0eq.), 그 다음 Pd/C(10 wt%, 1.0g)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2(1atm) 하에서 밤새 교반하고, 이어서 필터 패드를 메탄올로 세척하면서 셀라이트로 여과시켰다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 22(10.0g, 90% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 22. 화합물 23의 합성
Figure pct00138
EtOAc(50㎖) 중의 D-N-메틸 피페콜린산(2.65g, 18.5m㏖)의 용액에 펜타플루오로페놀(3.75g, 20.4m㏖) 및 DCC(4.21g, 20.4m㏖)룰 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 16시간 동안 교반하고, 이어서 셀라이트 상에서 여과시켰다. 필터 패드를 로 10㎖의 EtOAc로 세척하였다. 여과액을 추가로 정제 또는 농축시키지 않고 즉시 사용하였다.
실시예 23. 화합물 28의 합성
Figure pct00139
2-아미노-2-메틸프로판산(500g, 4.85㏖, 1.0eq.), 수성 폼알데하이드(37%, 1.0ℓ, 12.1㏖, 2.5eq.) 및 폼산(1.0ℓ)의 혼합물을 3.0시간 동안 환류까지 가열(80℃)시켰다. 이어서 6N HCl(850㎖)을 r.t.에서 첨가하고, 반응 혼합물을 농축시켰다. 생성된 고체를 에틸 아세테이트로 3회 동안(1.0ℓ) 세척하면서 여과로 수집하였다. 고체를 물(1.5ℓ)에 용해시키고, 4N NaOH(약 1.0ℓ 용액)로 pH 7.0까지 중화시켰다. 용액을 농축시키고, 에탄올(2.0ℓ)과 공동 증발시켜 남아있는 물을 제거하였다. MeOH(2.0ℓ)를 잔류물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 세척하면서 고체(NaCl)를 여과시켰다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 백색 고체 639.2g을 제공하였고, 이것은 약간의 NaCl을 함유하였고, 추가 처리하지 않고 사용하였다.
실시예 24. 화합물 29의 합성
Figure pct00140
EtOAc(1ℓ) 중의 2-(다이메틸아미노)-2-메틸프로판산(97g, 0.74㏖)의 용액에 펜타플루오로페놀(163g, 0.88㏖) 및 DIC(126㎖, 0.81㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 24시간 동안 교반하고, 이어서 셀라이트 상에서 여과시켰다. 필터 패드를 10㎖의 EtOAc로 세척하였다. 여과액을 추가로 정제 또는 농축시키지 않고 즉시 사용하였다.
실시예 25. 화합물 30의 합성
Figure pct00141
건조 Pd/C(10 wt%, 300㎎) 및 아자이드 화합물 16(3.33g, 6.61m㏖)을 EtOAc 중의 펜타플루오로페닐 에스터 23에 첨가하였다. 반응 혼합물을 27시간 동안 수소 분위기 하에서 교반하고, EtOAc로 필터 패드를 세척하면서 셀라이트 플러그로 여과시켰다. 합한 유기 분획을 농축시키고, EtOAc 중의 0-5% 메탄올의 구배로 크로마토그래피로 정제시켜 화합물 30(3.90g, 86% 수율)을 제공하였다. C32H59N4O5SSi [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 639.39, 실측치 639.39.
실시예 26. 화합물 31의 합성
Figure pct00142
커플링된 생성물 화합물 30(3.90g, 6.1m㏖)을 AcOH/물/THF(v/v/v 3:1:1, 100㎖)에 용해시키고, r.t.에서 48시간 동안 교반하였다. 이어서 반응물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(2:98 내지 15:85 MeOH/EtOAc)로 정제시켜 화합물 31(2.50g, 2단계에 걸쳐서 72% 수율)을 수득하였다. C26H45N4O5S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 525.30, 실측치 525.33.
실시예 27. 화합물 32의 합성
Figure pct00143
0℃에서 LiOH(0.4N, 47.7㎖, 19.1m㏖, 4.0eq.)의 수성 용액을 다이옥산(47.7㎖) 중의 화합물 31(2.50g, 4.76m㏖, 1.0eq.)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(100% CH2Cl2 내지 CH2Cl2/MeOH/NH4OH 80:20:1)시켜 화합물 32(2.36g, 99% 수율)를 비정질 고체로서 수득하였다. C24H41N4O5S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 497.27, 실측치 497.28.
실시예 28. 화합물 33의 합성
Figure pct00144
0℃에서 피리딘(50㎖) 중의 화합물 32(2.36g, 4.75m㏖)의 용액에, 아세트산 무수물(2.25㎖, 24m㏖)을 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간에 걸쳐서 r.t.까지 가온시키고, r.t.에서 24시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시키고, 이어서 다이옥산/물(v/v 1:1, 10㎖)로 1시간 동안 처리하여 가능한 무수물을 파괴시켰다. 농축 후 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜(100% CH2Cl2에서 CH2Cl2/MeOH/NH4OH 50:50:1) 화합물 33(2.25g, 88% 수율)을 비정질 백색 고체로서 수득하였다. C26H43N4O6S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 539.28, 실측치 539.28.
실시예 29. 화합물 38의 합성
Figure pct00145
펜타플루오로페닐 에스터 29의 EtOAc 용액에, 화합물 16(200g, 0.37㏖) 및 건조 Pd/C(10 wt%, 10g)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기(1atm) 하에서 27시간 동안 교반하고, 이어서 필터 패드를 EtOAc로 세척하면서 셀라이트 플러그로 여과시켰다. 합한 유기 분획을 농축시키고, EtOAc 중의 0-5% 메탄올의 구배로 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 화합물 38(184g, 79% 수율)을 제공하였다. C31H58N4O5SSi [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 627.39, 실측치 627.39.
실시예 30. 화합물 39의 합성
Figure pct00146
화합물 38(200g, 0.32m㏖)을 AcOH/물/THF(v/v/v 3:1:1, 638㎖)에 용해시키고, r.t.에서 4일 동안 교반하였다. 반응물을 농축시키고, 톨루엔을 첨가하고, 다시 농축시키고; 이 단계를 2회 반복하여 화합물 39를 수득하였고, 이것을 다음 단계에 직접 사용하였다. C25H45N4O5S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 513.30, 실측치 513.30.
실시예 31. 화합물 40의 합성
Figure pct00147
0℃에서 LiOH(0.4N, 600㎖, 2.55㏖, 8.0eq.)의 수성 용액을 MeOH(1.2ℓ) 중의 화합물 39(160g, 0.319㏖, 1.0eq.)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(순수한 CH2Cl2에서 80:20:1 CH2Cl2/MeOH/NH4OH)시켜 화합물 40(140g, 91% 수율, 2단계에 대해서)을 비정질 고체로서 얻었다. C23H40N4O5S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 485.27, 실측치 485.27.
실시예 32. 화합물 41의 합성
Figure pct00148
무수 THF(1.4ℓ) 및 무수 DMF(75㎖) 중의 화합물 27(143g, 0.30㏖, 1.0eq.) 및 DMAP(0.36g, 2.95m㏖, 0.01eq.)의 용액을 0℃까지 냉각시키고, 이것에 TEA(82.2㎖, 0.59m㏖, 2.0eq.) 및 아세트산 무수물(56㎖, 0.59m㏖, 2.0eq.)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.까지 가온시키고, 24시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(5-50% MeOH/DCM)는 화합물 41(147g, 95% 수율)을 비정질 고체로서 제공하였다. C25H44N4O6S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 527.28, 실측치 527.28.
실시예 33. 화합물 41a의 합성
Figure pct00149
N2 하에서 실온에서 무수 DCM(100㎖) 중의 화합물 41(5.0g, 9.5m㏖, 1.0 eq)의 용액에 EDC(4.6g, 23.8m㏖, 2.5 eq) 및 펜타플루오로페놀(4.4g, 23.8m㏖, 2.5 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 DCM(100㎖)에 희석시키고, 물(2×200㎖) 및 염수(200㎖)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(50% EtOAc/PE)로 정제시켜 화합물 41a를 백색 고체로서 제공하였다(5.2g, 79% 수율). C31H42F5N4O6S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치: 693.27, 실측치:693.27.
실시예 34. 화합물 95의 합성
Figure pct00150
자석 교반 막대가 장치된 500㎖ 둥근 바닥 플라스크 내에, 트라이페닐포스핀(100g, 381m㏖, 1.0eq.) 및 에틸 2-브로모프로피오네이트(100㎖, 762m㏖, 2.0eq.)를 첨가하였다. 이어서 혼합물을 N2 분위기 하에서 밤새 50℃까지 가열하였다. 백색 고체(PPh3)를 용해시킨 후, 다량의 백색 고체가 생성되었다. 석유 에터/EtOAc로의 배산처리 및 여과는 화합물 95를 백색 고체로서 제공하였다(135g, 80% 수율). C23H24O2P [M-Br]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 363.15, 실측치 363.13.
실시예 35. 화합물 96의 합성
Figure pct00151
격렬하게 교반하면서 다이클로로메탄(500㎖) 중의 화합물 95(135.42g, 305.7m㏖)의 용액을 10% NaOH 용액(450㎖)에 서서히 첨가하였다. 유기 용액이 신속하게 밝은 황색으로 변했다. 30분 후, TLC 분석이 반응이 완결되었음을 나타내었다. 층을 분리시키고, 수성층을 추가로 CH2Cl2(2×200㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 황색 고체 96(104g, 94% 수율)을 제공하였다. C23H24O2P [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 362.14, 실측치 363.13. 조 생성물을 다음 단계에 직접 사용하였다.
실시예 36. 화합물 98의 합성
Figure pct00152
아세톤(3ℓ) 중의 Boc-L-Tyr-OMe(670g, 2.27㏖, 1.0eq.), K2CO3(358g, 2.5㏖, 1.1eq.) 및 KI(38g, 0.227㏖, 0.1eq.)의 혼합물에 벤질 브로마이드(283㎖, 2.38㏖, 1.05eq.)를 서서히 첨가하였다. 이어서 혼합물을 밤새 환류시켰다. 물(6ℓ)을 첨가하고, 반응 혼합물을 EtOAc(5×100ℓ)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(2ℓ)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(4:1 헥산/EtOAc)로 정제시켜 백색 고체 98(795g, 91% 수율)를 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.43 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.32 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.04 (s, 2H), 4.55 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.03 (qd, J = 14.0, 5.8 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H). ESI: m/z: C22H28NO5 [M+H]+에 대한 계산치: 386.19, 실측치 386.19.
실시예 37. 화합물 99의 합성
Figure pct00153
-78℃에서 무수 다이클로로메탄(1ℓ) 중의 에스터 98(380g, 987m㏖, 1.0eq.)의 용액에 DIBAL(헥산 중의 1.0M, 2.9ℓ, 2.9eq.)을 3시간에 걸쳐서 첨가하였다. 첨가를 완료한 후 혼합물을 3ℓ의 에탄올로 반응정지시켰다. pH 4에 도달될 때까지 1N HCl을 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃까지 가온시켰다. 층을 분리시키고, 수성층을 추가로 EtOAc(3×3ℓ)로 추출하였다. T합한 유기 용액을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. PE/EtOAc로의 배산처리 및 여과는 백색 고체 99(263g, 75% 수율)를 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.65 (s, 1H), 7.45 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.35 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.07 (s, 2H), 4.42 (dd, J = 12.4, 6.1 Hz, 1H), 3.09 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H). ESI: m/z: C21H26NO4 [M+H]+에 대한 계산치: 356.18, 실측치 356.19.
실시예 38. 화합물 100의 합성
Figure pct00154
실온에서 무수 다이클로로메탄(800㎖) 중의 알데하이드 99(81.4g, 229m㏖, 1.0eq.)의 용액에 무수 다이클로로메탄(800㎖) 중의 일리드(ylide) 96(2.0eq.)를 30분에 걸쳐서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(6:1 석유 에터/EtOAc)로 정제시켜 백색 고체 100(63.4g, 63% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.45 - 7.41 (m, 2H), 7.40 - 7.35 (m, 2H), 7.33 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.10 - 7.06 (m, 2H), 6.92 - 6.88 (m, 2H), 6.50 (dd, J = 8.8, 1.3 Hz, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.57 (s, 2H), 4.18 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.86 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 2.72 (dd, J = 13.6, 6.8 Hz, 1H), 1.71 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.41 (d, J = 2.2 Hz, 9H), 1.28 (td, J = 7.5, 5.1 Hz, 4H). C26H33NaNO5 [M+Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 462.24, 실측치 462.22.
실시예 39. 화합물 101의 합성
Figure pct00155
수소화 병 내에, Pd/C(1.83g, 10 wt%, 50% 물)를 THF(100㎖) 및 메탄올(300㎖) 중의 화합물 100(30.2g, 68.9m㏖)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 1atm H2 하에서 밤새 진탕하고, 셀라이트(여과 보조제)로 여과시키고, 여과액을 농축시켜 화합물 101(25.0g, 이론 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.99 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 6.72 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.39 (s, 1H), 4.18 - 4.04 (m, 2H), 3.82 (s, 1H), 2.60 (dd, J = 37.2, 20.9 Hz, 4H), 1.95 - 1.81 (m, 1H), 1.39 (s, 11H), 1.24 (dd, J = 9.5, 4.3 Hz, 3H), 1.13 (t, J = 8.9 Hz, 3H). C19H31NO5 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 352.20, 실측치 352.19.
실시예 40. 화합물 102의 합성
Figure pct00156
실온에서 무수 다이클로로메탄(200㎖) 중의 화합물 101(5.96g, 35.9m㏖, 1.0eq.)의 용액에 Ac2O(3.2㎖, 33.9m㏖, 2.0eq.) 및 HNO3(65%-68%, 3.5㎖, 50.79m㏖, 3.0eq.)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하고, TLC 분석이 반응이 완결되었음을 나타내었다. 반응 용액을 물(3×200㎖)로 세척하고, 수성층을 다이클로로메탄(3×100㎖)으로 재추출하였다. 합한 다이클로로메탄 용액을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(5:1 헥산/EtOAc)로 정제시켜 화합물 102를 황색 고체로서 제공하였다(4.18g, 72% 수율). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.49 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.12 (dd, J = 14.0, 7.0 Hz, 2H), 3.80 (s, 1H), 2.76 (dd, J = 13.0, 6.8 Hz, 2H), 2.59 (s, 1H), 1.88 (s, 1H), 1.37 (t, J = 8.7 Hz, 9H), 1.25 (dd, J = 13.5, 6.9 Hz, 4H), 1.16 (t, J = 8.0 Hz, 3H). C19H28NaN2O7 [M+Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 419.19, 실측치 419.17.
실시예 41. 화합물 103의 합성
Figure pct00157
실온에서 THF(100㎖) 및 메탄올(100㎖) 중의 에스터 102(15.3g, 38.6m㏖, 1.0eq.)의 용액에 물(190㎖) 중의 LiOH . H2O(16.3g, 389m㏖, 10.0eq.)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하고, 이어서 물(400㎖)로 희석시키고, pH 3 내지 4에 도달할 때까지 1N KHSO4 적가하였다. EtOAc(3×300㎖)로의 추출 후, 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 103을 황색 고체로서 제공하였다(14.4g, 이론 수율). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.48 (s, 1H), 7.98 - 7.88 (m, 1H), 7.42 (dd, J = 18.4, 8.2 Hz, 1H), 7.14 - 7.03 (m, 1H), 4.48 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.90 (s, 1H), 2.82 - 2.53 (m, 3H), 1.97 - 1.82 (m, 2H), 1.42 - 1.27 (m, 10H), 1.21 (d, J = 6.7 Hz, 4H). C17H23N2O7 [M-H]-에 대한 MS ESI m/z 계산치 367.16, 실측치 367.14.
실시예 42. 화합물 104의 합성
Figure pct00158
수소화 병에서, Pd/C(2.60g, 10 wt%, 50% 물)를 메탄올(260㎖) 중의 화합물 103(26.0g, 70.6m㏖, 1.0eq.)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 1atm H2 하에서 밤새 진탕하고, 이어서 셀라이트(여과 보조제)로 여과시키고, 여과액을 농축시켜 화합물 104를 녹색 오일로서 수득하였다(24.0g, >100 % 수율).
실시예 43. 화합물 106의 합성
Figure pct00159
무수 아세토나이트릴(1ℓ) 중의 tert-부틸-2-브로모프로판오에이트(255g, 1.22㏖, 1.0eq.) 및 트라이페닐 포스핀(320g, 1.22㏖, 1.0eq.)의 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 아세토나이트릴을 감압 하에서 제거하고, 톨루엔을 첨가하여 백색 침전물을 부쉈다. 이어서 톨루엔을 따라내고, 백색 고체를 다이클로로메탄(1ℓ)에 용해시키고, 첨가 깔때기로 옮겼다. 10% NaOH(1ℓ)를 깔때기에 첨가하고, 진탕 후 유기층이 즉시 황색으로 변했다. 유기층을 분리시키고, 수성층을 다이클로로메탄(1ℓ)으로 1회 추출하였다. 다이클로로메탄층을 합하고, 염수(400㎖)로 1회 세척하고, 이어서 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜, 일리드 106을 황색 고체로서 수득하였다(280g, 58%).
실시예 44. 화합물 107의 합성
Figure pct00160
알데하이드 99(450g, 1.27㏖, 1.0eq.)를 무수 다이클로로메탄(3ℓ)에 용해시키고, 이것에 tert-부틸 에스터 일리드 106(546g, 1.40m㏖, 1.1eq.)을 첨가하고, TLC에 의해서 완결이 결정될 때까지 용액을 r.t.에서 밤새 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피(10-50% EtOAc/헥산)에 의한 정제는 화합물 107(444g, 75% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. C28H38NO5 [M+H]+ 에 대한 ESI m/z 계산치: 468.27, 실측치 468.22.
실시예 45. 화합물 108의 합성
Figure pct00161
화합물 107(63g, 0.13㏖)을 메탄올(315㎖)에 용해시키고, Pd/C 촉매(10 wt%, 6.3g)로 r.t.에서 밤새 수소화시켰다(1atm H2). 촉매를 여과시키고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 108(45.8g, 93% 수율)을 수득하였다.
실시예 46. 화합물 109의 합성
Figure pct00162
THF(4ℓ) 중의 화합물 108(390g, 1.03㏖, 1.0eq.)의 용액에 tert-부틸 나이트라이트(1.06 ㎏, 10.3㏖, 10eq.)를 r.t.에서 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하였다. THF의 제거 후, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(10-50% EtOAc/헥산)로 정제시켜 화합물 109(314g, 72% 수율)를 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
실시예 47. 화합물 110의 합성
Figure pct00163
EtOAc(500㎖) 중의 109(166g, 0.392㏖, 1.0eq.)의 용액에 질소 하에서 Pd/C(10 wt%, 16g)를 첨가하고, 반응 플라스크를 진공화시키고, 수소로 3회 퍼징하였다. 반응 혼합물을 수소(1atm) 하에서, r.t.에서 16시간 동안 교반하고, 이어서 셀라이트 상에서 여과시키고, 농축시켜 생성물 110(146g, 97% 수율)을 밝은 황색 발포체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.62 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 6.43 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.39 (dd, J = 53.0, 44.2 Hz, 1H), 3.77 (s, 4H), 2.72 - 2.29 (m, 3H), 1.83 - 1.58 (m, 1H), 1.40 (d, J = 7.6 Hz, 18H), 1.24 (s, 1H), 1.06 (t, J = 5.7 Hz, 3H). C21H35N2O5 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 394.25, 실측치 395.25.
실시예 48. 화합물 114의 합성
Figure pct00164
N2 하에서 -78℃에서 무수 THF(200㎖) 중의 (S)-4-아이소프로필옥사졸리딘-2-온(5.00g, 38.7m㏖, 1.0eq.)의 용액에 30분 동안 n-BuLi(헥산 중 2.5M, 17.0㎖, 1.2eq.)을 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 프로피온일 클로라이드(4.0㎖, 42.58m㏖, 1.1eq.)를 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 추가 1시간 동안 교반한 후, TLC 분석이 반응이 완결되었음을 나타내었다. 포화 염화암모늄 용액(250㎖)을 첨가하고, EtOAc(3×100㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 1N NaOH 용액(200㎖) 및 염수(300㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜(7:1 헥산/EtOAc) 화합물 114를 무색 오일로서 제공하였다(6.36g, 89% 수율). C9H16NO3 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 186.10, 실측치 186.10. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.48 - 4.39 (m, 1H), 4.27 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 9.1, 3.1 Hz, 1H), 3.06 - 2.82 (m, 2H), 2.38 (dtd, J = 14.0, 7.0, 4.0 Hz, 1H), 1.17 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.90 (dd, J = 17.0, 7.0 Hz, 6H).
실시예 49. 화합물 115의 합성
Figure pct00165
N2 하에서 0℃에서 무수 다이클로로메탄(20㎖) 중의 (S)-4-아이소프로필-3-프로피온일옥사졸리딘-2-온(2.00g, 11.9m㏖, 1.1eq.)의 용액에 DIPEA(2.3㎖, 12.9m㏖, 1.2eq.) 및 n-Bu2BOTf(다이클로로메탄 중의 1.0M, 12.0㎖, 1.1eq.)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 45분 동안 교반하고, 이어서 -78℃까지 냉각시키고, 이것에 다이클로로메탄 중의 화합물 99(4.24㎖, 10.8m㏖, 1.0eq.)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 서서히 실온까지 가온시켰다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, PBS(0.1M, pH 7.0, 100㎖)를 첨가하였다. 상 분리 후, 수성상을 추가로 다이클로로메탄(3×50㎖)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고(200㎖), 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 메탄올(100㎖)에 다시 용해시키고, 0℃에서 3시간 동안 H2O2(30% 수성 용액, 26㎖, 23eq.)로 처리하였다. 메탄올을 회전식 증발기로 제거하고, 물(100㎖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 추출하였다(3×100㎖). 합한 유기층을 염수(300㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(3:1 헥산/EtOAc)로 정제시켜 화합물 115를 발포성 고체로서 제공하였다(2.70g, 49% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.52 - 7.26 (m, 5H), 7.15 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 5.05 (s, 2H), 4.69 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.47 (s, 1H), 4.36 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.17 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.93 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 3.85 (s, 2H), 2.84 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 2.31 (s, 1H), 1.40 - 1.37 (m, 9H), 1.31 (s, 3H), 0.92 (dd, J = 13.4, 6.6 Hz,6H). C30H41N2O7 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 541.28, 실측치 541.30.
실시예 50. 화합물 116의 합성
Figure pct00166
무수 THF(46㎖) 중의 화합물 115(2.50g, 4.63m㏖, 1.0eq.) 및 1,1'-티오카보닐다이이미다졸(2.48g, 13.89m㏖, 3.0eq.)의 혼합물을 밤새 환류시켰다. 물(100㎖)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 EtOAc로 추출하였다(3×50㎖). 합한 유기층을 염수(200㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(3:1 헥산/EtOAc)로 정제시켜 화합물 116 황색 발포체로서 제공하였다(2.33g, 77% 수율).1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.41 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.36 (dt, J = 16.0, 6.9 Hz, 6H), 7.09 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.32 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.01 (s, 2H), 4.56 - 4.43 (m, 2H), 4.32 (ddd, J = 16.2, 15.6, 7.8 Hz, 3H), 4.19 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 2.96 (dd, J = 14.6, 4.4 Hz, 1H), 2.49 (dd, J = 14.5, 10.5 Hz, 1H), 2.29 (td, J = 13.4, 6.7 Hz, 1H), 1.31 (s, 3H), 1.29 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 13.9, 6.9 Hz, 6H). C34H43N4O7S[M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 651.27, 실측치 651.39.
실시예 51. 화합물 117의 합성
Figure pct00167
무수 톨루엔(30㎖) 중의 화합물 116(1.90g, 2.92m㏖, 1.0eq.)의 용액에 n-Bu3SnH(1.6㎖, 5.84m㏖, 2.0eq.) 및 아조다이아이소부티로나이트릴(0.05g, 0.584m㏖, 0.1eq.)을 순서대로 첨가하였다. 혼합물을 2.5시간 동안 환류시키고, 이어서 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(5:1 헥산/EtOAc)로 정제시켜 화합물 117을 백색 발포체로서 제공하였다(1.21g, 79% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 (ddd, J = 24.5, 14.5, 7.1 Hz, 5H), 7.08 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 5.04 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.33 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.81 (s, 2H), 2.73 (dd, J = 14.1, 5.9 Hz, 1H), 2.61 (dd, J = 14.0, 7.2 Hz, 1H), 2.29 (dq, J = 13.5, 6.8 Hz, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.20 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.89 (dd, J = 14.0, 6.9 Hz, 6H). C30H41N2O6 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 525.28, 실측치 525.37.
실시예 52. 화합물 118의 합성
Figure pct00168
THF(30㎖) 중의 화합물 117(1.20g, 2.29m㏖, 1.0 eq)의 용액에 물(6㎖) 중의 LiOH(0.192g, 4.58m㏖, 2.0eq.) 및 H2O2(30% 수성 용액, 1.4㎖, 6.0eq.)를 첨가하였다. 0℃에서 3시간 교반 후, 중아황산나트륨 용액(1.5M, 30㎖)을 첨가하여 반응을 반응정지시켰다. 30분 후, pH 4에 도달될 때까지 1N KHSO4를 적가하였다. 이어서 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다(3×50㎖). EtOAc 용액을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(3:1 헥산/EtOAc, 1% HOAc 함유)로 정제시켜 화합물 118을 백색 고체로서 제공하였다(0.78g, 82% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.46 - 7.28 (m, 5H), 7.07 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 4.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 41.8 Hz, 1H), 2.82 - 2.43 (m, 3H), 1.85 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.17 (d, J = 6.9 Hz, 3H). C24H32NO5 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 414.22, 실측치 414.21.
실시예 53. 화합물 119의 합성
Figure pct00169
메탄올(15㎖) 중의 화합물 118(0.77g, 1.86m㏖, 1.0eq.) 및 Pd/C(10%, 0.25g)의 혼합물을 1atm H2 압력 하에서 16시간 동안 수소화시키고, 이어서 셀라이트(여과 보조제)로 여과시키고. 여과액을 농축시켜 화합물 119를 백색 고체로서 수득하였다(0.58g, 96% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.00 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.80 (s, 2H), 4.51 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.88 (s, 1H), 2.66 (dd, J = 65.6, 22.6 Hz, 4H), 1.88 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.14 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C17H26NO5 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치: 324.17, 실측치 324.16.
실시예 54. 화합물 120의 합성
Figure pct00170
0℃에서 THF(10㎖) 중의 화합물 119(0.57g, 1.76m㏖, 1.0eq.)의 용액에 t-BuONO(0.63㎖, 5.28m㏖, 3.0eq.)를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안, 이어서 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 물(50㎖)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다(3×30㎖). 합한 유기층을 염수(100㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(2:1 헥산/EtOAc, 1% HOAc 함유)로 정제시켜 화합물 120을 황색 고체로서 제공하였다(0.50g, 77% 수율). 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ7.92 (s, 1H), 7.47 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.73 (s, 1H), 2.78 (dd, J = 13.6, 5.3 Hz, 1H), 2.69 - 2.47 (m, 2H), 1.87 (t, J = 11.9 Hz, 1H), 1.47 - 1.37 (m, 1H), 1.32 (s, 9H), 1.17 (d, J = 7.2 Hz, 3H). C17H25N2O7 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 369.15, 실측치 369.14.
실시예 55. 화합물 121의 합성
Figure pct00171
메탄올(10㎖) 중의 화합물 120(0.50g, 1.36m㏖, 1.0eq.) 및 Pd/C(10 wt%, 0.02g)의 혼합물을 r.t.에서 1시간 동안 수소화시키고(1atm H2), 이어서 셀라이트(여과 보조제)로 여과시키고. 여과액을 농축시켜 화합물 121을 백색 발포체로서 수득하였다(0.43g, 93% 수율). C17H27N2O5 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 339.18, 실측치 339.17. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 6.60 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.44 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.71 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 2.62 - 2.37 (m, 3H), 1.83 (ddd, J = 13.7, 9.9, 3.7 Hz, 1H), 1.39 (s, 9H), 1.13 (d, J = 7.1 Hz, 3H).
실시예 56. 화합물 124의 합성
Figure pct00172
아세트산(1ℓ) 중의 말레산 무수물(268g, 2.73㏖)의 용액에 4-아미노부탄산(285g, 2.76㏖)을 첨가하였다. r.t.에서 30분 동안 교반한 후, 반응물을 1.5시간 동안 환류시키고, r.t.까지 냉각시키고, 진공 하에서 증발시켜 잔류물을 제공하였고, 이것을 EA로 취하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 EtOAc 및 PE로부터 결정화시켜 백색 고체(400g, 80 % 수율)를 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.71 (s, 2H), 3.60 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.38 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.00 - 1.84 (m, 2H).
실시예 57. 화합물 125의 합성
Figure pct00173
화합물 124(400g, 2.18㏖, 1.0eq.)를 CH2Cl2(1.5ℓ)에 용해시키고, 이것에 N-하이드록시석신이미드(276g, 2.40m㏖, 1.1eq.) 및 DIC(303g, 2.40㏖, 1.1eq.)를 r.t.에서 첨가하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜(1:2 석유 에터/EtOAc) NHS 에스터 125를 백색 고체로서 제공하였다(382g, 63% 수율). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.74 (s, 2H), 3.67 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.85 (s, 4H), 2.68 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.13 - 2.03 (m, 2H).
실시예 58. 화합물 126의 합성
Figure pct00174
0℃에서 교반하면서 THF(600㎖) 중의 124(60g, 328m㏖, 1.3eq.)의 용액에 NMM(85.3㎖, 984m㏖, 3.0eq.)을 첨가하고, 그 다음 아이소부틸 클로로폼에이트(44.6㎖, 426m㏖, 1.3eq.)를 적가하였다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 온도를 0℃로 유지시키면서 생성된 혼합물을 THF(400㎖) 중의 104(102g, 259m㏖, 1.0eq.)의 용액에 적가하였다. 첨가를 완료한 후 반응물을 추가 30분 동안 교반하고, 이어서 물(300㎖)로 반응정지시키고, EtOAc로 추출하였다(3×300㎖). 합한 유기층을 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, 9-35% EtOAc/PE의 구배로 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 화합물 126(104g, 73% 수율)을 밝은 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.86 (s, 1H), 8.40 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 6.87 (s, 3H), 6.70 (s, 2H), 4.53 - 4.16 (m, 0H), 3.79 (s, 1H), 3.62 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 2.63 (s, 1H), 2.40 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 2.12 - 1.88 (m, 4H), 1.84 - 1.64 (m, 1H), 1.38 (t, J = 9.6 Hz, 6H), 1.06 (t, J = 6.0 Hz, 3H).
실시예 59. 화합물 127의 합성
Figure pct00175
CH2Cl2(20㎖)에 용해시킨 화합물 126(12.7g, 22.7m㏖)을 0℃에서 TFA(40㎖)로 처리하고, 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 톨루엔과 3회 공동 증발시켰다. 잔류물을 다이에틸 에터로 배산처리하고, 밝은 황색 고체 127를 수집하였다(11.4g, 이론 수율).
실시예 60. 화합물 128의 합성
Figure pct00176
EtOAc 중의 카복실산 33(40㎎, 0.074m㏖, 1.0eq.)의 용액에 펜타플루오로페놀(27㎎, 0.148m㏖, 2.0eq.) 및 DCC(23㎎, 0.111m㏖, 1.5eq.)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 16시간 동안 교반하고, 이어서 EtOAc로 패드를 세척하면서 셀라이트 패드 상에서 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, DMA(6㎖)에 다시 용해시키고, 이어서 화합물 127(56.6㎎, 0.13m㏖) 및 DIPEA(47.4㎕, 0.18m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 24시간 동안 교반하고, 이어서 농축시키고, 역상 HPLC(C18 칼럼, 10-100% 아세토나이트릴/물)로 정제시켜 화합물 128(43㎎, 63% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. C46H66N7O11S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 924.45, 실측치 924.45.
실시예 61. 화합물 132의 합성
Figure pct00177
0℃에서 DMF(100㎖) 중의 화합물 41a(11g, 15.9m㏖, 1.0eq.) 및 화합물 127(12.3g, 23.8m㏖, 1.5eq.)의 용액에 DIPEA(6.9㎖, 39.7m㏖, 2.5eq.)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.까지 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에서 농축시키고, 실리카겔 칼럼(100% DCM에서 10% MeOH/DCM) 상에서 정제시켜 화합물 132(10g, 69% 수율)를 비정질 고체로서 제공하였다. C45H65N7O11S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 912.45, 실측치 912.45.
실시예 62. 화합물 204의 합성
Figure pct00178
-78℃에서 N2 하에서 무수 THF(1150㎖) 중의 (R)-4-아이소프로필옥사졸리딘-2-온(203)(25.0g, 0.194㏖, 1.0eq)의 용액에 n-BuLi(85.0㎖, 0.213㏖, 1.1eq)를 첨가하고, 혼합물을 동일한 온도에서 1시간 동안 교반하고, 다량의 백색 고체가 형성되었다. 이어서 프로피온일 클로라이드(20.0㎖, 0.232㏖, 1.2eq)를 -78℃에서 첨가하고, 혼합물을 동일한 온도에서 1시간 동안 교반하였다. (S)-4-아이소프로필옥사졸리딘-2-온의 소모를 TLC에 의해서 모니터링한 후, 용액을 포화 염화암모늄 용액(1.2ℓ)에 붓고, 혼합물을 EA(700㎖, 350㎖×2)로 추출하였다. 유기 추출물을 1.0N NaOH 용액(1.0ℓ) 및 염수(1.0ℓ)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에서 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 10:1)로 정제시켜 표제 화합물을 무색 오일로서 제공하였다(32.6g, 90.8%). ESI m/z: C9H17NO3 [M+H]+에 대한 계산치: 186.1, 실측치 186.1. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.48 - 4.37 (m, 1H), 4.27 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 9.1, 3.1 Hz, 1H), 3.04 - 2.82 (m, 2H), 2.45 - 2.30 (m, 1H), 1.17 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.90 (dd, J = 17.1, 7.0 Hz, 6H).
실시예 63. 화합물 205의 합성.
Figure pct00179
0℃에서 N2 하에서, 무수 DCM(200㎖) 중의 (R)-4-아이소프로필-3-프로피온일옥사졸리딘-2-온(18.4g, 99.5m㏖, 1.1 eq)의 용액에 Bu2BOTf(1M 다이클로로메탄 용액, 100㎖, 100m㏖, 1.1eq) 및 DIPEA(19㎖, 108.6m㏖, 1.2eq)를 첨가하고, 혼합물을 동일한 온도에서 45분 동안 교반하였다. 다이클로로메탄(320㎖) 중의 알데하이드 99(32.2g, 90.5m㏖, 1.0 eq)의 용액을 -78℃에서 첨가하고, 동일한 온도에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 용액을 15시간 동안 서서히 실온까지 가온시켰다. 혼합물을 700㎖의 인산칼륨 완충액(pH 7.0)에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 이어서 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 메탄올(730㎖)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시키고, 이어서 30% H2O2 수성 용액(225㎖)을 서서히 첨가하고, 혼합물을 동일한 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 물(750㎖) 첨가 후, 혼합물을 진공 하에서 농축시켜 메탄올을 제거하였다. 생성된 수성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고(500㎖, 150㎖×2), 유기 추출물을 5% 중탄산나트륨 용액 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에서 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 3:1)로 정제시켜 표제 화합물을 백색 발포체로서 제공하였다(31.7g, 64.8%). ESI m/z: C30H41N2O7 [M+H]+에 대한 계산치: 541.3, 실측치 541.3. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.49 - 7.29 (m, 5H), 7.17 (t, J = 10.7 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 5.06 (s, 2H), 4.28 (dd, J = 44.4, 36.4 Hz, 3H), 4.04 - 3.52 (m, 3H), 3.11 - 2.73 (m, 2H), 2.35 (s, 1H), 1.41 (t, J = 16.3 Hz, 9H), 0.91(dd, J=15.6,6.4Hz,5H).
실시예 64. 화합물 206의 합성.
Figure pct00180
무수 THF(350㎖) 중의 화합물 205(28.3g, 52.3m㏖, 1.0 eq)의 용액에 1,1-티오카보닐 다이이미다졸(TCDI)(35.1g, 157.0m㏖, 3.0 eq)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 환류 하에서 가열시켰다. TLC로 출발 물질의 소모를 모니터링한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 3:1)로 정제시켜 연한 황색 발포체로서 표제 화합물을 제공하였다(26.1g, 76.8 %). ESI m/z: C34H43N4O7S [M+H]+에 대한 계산치: 651.3, 실측치 651.3. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.21 (s, 1H), 7.43 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 7.42 - 7.28 (m, 5H), 7.06 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.01 (s, 1H), 6.80 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.17 (dd, J = 8.5, 2.9 Hz, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.42 - 4.04 (m, 5H), 2.83 (dd, J = 14.2, 6.2 Hz, 1H), 2.69 (dd, J = 14.2, 7.1 Hz, 1H), 2.32 (dd, J = 6.8, 4.2 Hz, 1H), 1.37 (s, 9H), 1.30 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.87 (dd, J = 9.9, 7.0 Hz, 6H).
실시예 65. 화합물 207의 합성.
Figure pct00181
N2 하에서 무수 톨루엔(350㎖) 중의 화합물 206(26.0g, 40.0m㏖, 1.0 eq)의 용액에 n-Bu3SnH(21.5㎖, 80.0m㏖, 2.0 eq) 및 2,2'-아조비스(2-메틸프로피오나이트릴)(AIBN)(0.066g, 0.01 eq)을 첨가하고, 혼합물을 환류 하에서 1시간 동안 가열시켰다. TLC로 출발 물질의 소모를 모니터링한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 5:1)로 정제시켜 표제 화합물을 백색 발포체로서 제공하였다(6.0g, 37.3 %). ESI m/z: C30H41N2O6 [M+H]+에 대한 계산치: 525.3, 실측치 525.3. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (ddd, J = 25.1, 15.1, 7.1 Hz, 5H), 7.08 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.03 (s, 2H), 4.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.40 (s, 1H), 4.32 - 4.08 (m, 2H), 3.91 - 3.66 (m, 2H), 2.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.60 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 2.33 (s, 1H), 1.71 (s, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.15 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.87 (dd, J = 17.0, 7.0 Hz, 6H).
실시예 66. 화합물 208의 합성
Figure pct00182
0℃에서 THF(90㎖) 및 물(30㎖) 중의 화합물 207(7.84g, 15.0m㏖, 1.0 eq)의 용액에 30% H2O2 수성 용액(11.4㎖, 112.5m㏖, 7.5eq) 중의 LiOH·H2O(1.57g, 37.5m㏖, 2.5eq)를 첨가하고, 혼합물을 동일한 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 0℃에서 1.5M Na2SO3 용액(160㎖)의 첨가 후, 혼합물을 동일한 온도에서 30분 동안 교반하였다. 이어서 pH 4까지 1N KHSO4를 서서히 첨가하였다. 생성된 수성 용액을 로 EA(200㎖, 75㎖×2)로 추출하고, 유기 추출물을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에서 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 2:1)로 정제시켜 표제 화합물을 백색 고체로서 제공하였다(6.18g, 100%). ESI m/z: C24H32N1O5 [M+H]+에 대한 계산치: 414.2, 실측치 414.2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39 (ddd, J = 24.5, 15.0, 7.2 Hz, 5H), 7.11 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.93 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 5.06 (s, 2H), 4.44 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 3.83 (d, J = 69.4 Hz, 1H), 2.85 - 2.61 (m, 2H), 2.61 - 2.40 (m, 1H), 1.99 - 1.70 (m, 1H), 1.39 (d, J = 26.1 Hz, 9H), 1.19 (s, 3H).
실시예 67. 화합물 209의 합성
Figure pct00183
수소화 병 내에서, MeOH(50㎖) 중의 화합물 208(6.18g, 15.0m㏖, 1.0 eq)의 용액에 Pd/C(0.6g, 10% Pd/C)를 첨가하였다. 혼합물을 1atm 수소 분위기 하에서 밤새 진탕하고, 이어서 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 표제 화합물을 무색 오일로서 제공하였다(4.8g, 99% 수율). ESI m/z: C17H26N1O5 [M+H]+에 대한 계산치: 324.2, 실측치 324.2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.97 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 6.74 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.93 - 3.66 (m, 1H), 2.58 (tdd, J = 19.5, 12.9, 7.4 Hz, 3H), 1.75 (ddd, J = 20.1, 16.3, 7.7 Hz, 1H), 1.37 (d, J = 21.5 Hz, 9H), 1.11 (d, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 68. 화합물 210의 합성
Figure pct00184
0℃에서 N2 하에서 무수 THF(75㎖) 중의 화합물 209(4.8g, 15.0m㏖, 1.0 eq)의 용액에 t-BuONO(18.0㎖, 150m㏖, 10.0 eq)를 서서히 첨가하고, 혼합물을 동일한 온도에서 3시간 동안 교반하였다. TLC로 출발 물질의 소모를 모니터링한 후, 1N KHSO4를 pH 4까지 혼합물에 서서히 첨가하였다. 생성된 수성 용액을 EA(150㎖, 75㎖×2)로 추출하고, 유기 추출물을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에서 농축시키고, 잔류물을 SiO2 칼럼 크로마토그래피(PE:EA=3:1)로 정제시켜 표제 화합물을 황색 고체로서 제공하였다(3.6g, 65.4%). ESI m/z: C17H25N2O7 [M+H]+에 대한 계산치: 369.2, 실측치 369.2. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.83 - 3.71 (m, 1H), 2.82 (dd, J = 13.6, 5.0 Hz, 1H), 2.66 - 2.41 (m, 2H), 1.84 (ddd, J = 14.0, 10.6, 5.6 Hz, 1H), 1.65 - 1.51 (m, 1H), 1.28 (d, J = 24.9 Hz, 9H), 1.15 (d, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 69. 화합물 211의 합성
Figure pct00185
수소화 병 내에서, MeOH(20㎖) 중의 화합물 210(3.2g, 7.74m㏖, 1.0 eq)의 용액에 Pd/C(0.2g, 10% Pd/C)를 첨가하였다. 혼합물을 1atm H2 분위기 하에서 3시간 동안 진탕하였다. TLC로 출발 물질의 소모를 모니터링한 후, 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켜 표제 화합물을 백색 발포체로서 제공하였다(2.3g, 92.0% 수율). ESI m/z: C17H27N2O5 [M+H]+에 대한 계산치: 339.2, 실측치 339.2. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 6.61 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.45 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 3.72 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 2.68 - 2.34 (m, 3H), 1.81 - 1.66 (m, 1H), 1.56 - 1.45 (m, 1H), 1.36 (d, J = 29.0 Hz, 9H), 1.08 (d, J = 6.9 Hz, 3H).
실시예 70. 화합물 390의 합성
Figure pct00186
-25℃에서 아세토나이트릴(10㎖) 중의 화합물 102(1.00g, 2.52m㏖)의 용액에 CCl4(2.2㎖, 22.7m㏖, 9.0eq.)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 다이아이소프로필에틸아민(0.88㎖, 5.04m㏖, 2.0eq.) 및 DMAP(0.03g, 0.252m㏖, 0.1eq.)를 첨가하고, 그 다음 다이벤질 포스파이트(0.84㎖, 3.78m㏖, 1.5eq.)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1.5시간에 걸쳐서 r.t.에 도달시키고, 이어서 KH2PO4(0.5M, 50㎖)의 용액으로 반응정지시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다(3×50㎖). 합한 유기 추출물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피(10-50% EtOAc/PE)로 정제시켜 화합물 390(1.60g, 96% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. C33H41N2O10P [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 657, 실측치 657.
실시예 71. 화합물 391의 합성
Figure pct00187
메탄올(20㎖) 중의 화합물 390(1.60g, 2.43m㏖)의 용액에 Pd/C(10 wt%, 160㎎)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 분위기(1atm) 하에서 r.t.에서 3시간 동안 교반하고, 이어서 셀라이트로 여과시키고, 감압 하에서 농축시켜 화합물 391(1.00g, 91% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. C19H31N2O8P [M-H]-에 대한 MS ESI m/z 계산치 447, 실측치 447.
실시예 72. 화합물 392의 합성
Figure pct00188
에탄올(10㎖) 중의 화합물 391(730㎎, 1.63m㏖)의 용액을 1 N NaOH(16㎖, 16.3m㏖, 10eq.)로 r.t.에서 밤새 처리하고, 이어서 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 물(20㎖)로 취하고, 1N HCl로 pH 6까지 산성화시켰다. 수성 용액을 감압 하에서 농축시키고, 잔류물을 MeOH/EtOAc(80:20, 5㎖)로 배산처리하여, 화합물 392(0.68g, 99% 수율)를 여과로부터 백색 고체로서 수집하였다. C17H27N2O8P [M-H]-에 대한 MS ESI m/z 계산치 417, 실측치 417.
실시예 73. 화합물 399의 합성
Figure pct00189
아세토나이트릴(350㎖) 중의 2-(2-아미노에톡시)에탄올(21.00g, 200m㏖, 1.0eq.) 및 K2CO3(83.00g, 600m㏖, 3.0eq.)를 BnBr(57.0㎖, 480m㏖, 2.4eq.)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 환류시켰다. 물(1ℓ)을 첨가하고, EtOAc로 추출하였다(3×300㎖). 합한 유기층을 염수(1000㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(4:1 헥산/EtOAc)로 정제시켜 무색 오일을 제공하였다(50.97g, 89.2% 수율). C18H23NO2Na [M + Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 309.17, 실측치 309.19.
실시예 74. 화합물 400의 합성
Figure pct00190
DCM(560㎖) 중의 2-(2-(다이벤질아미노)에톡시)에탄올(47.17g, 165.3m㏖, 1.0eq.), tert-부틸 아크릴레이트(72.0㎖, 495.9m㏖, 3.0eq.) 및 n-Bu4NI(6.10g, 16.53m㏖, 0.1eq.)의 혼합물에 수산화나트륨 용액(300㎖, 50%)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하였다. 유기층을 분리시키고, 수층을 EtOAc로 추출하였다(3×100㎖). 유기층을 물(3×300㎖) 및 염수(300㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(7:1 헥산/EtOAc)로 정제시켜 무색 오일(61.08g, 89.4% 수율)을 제공하였다. C25H36NO4 [M + H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 414.2566, 실측치 414.2384.
실시예 75. 화합물 401의 합성
Figure pct00191
수소화 병 내에서 THF(30㎖) 및 MeOH(60㎖) 중의 tert-부틸 3-(2-(2-(다이벤질아미노)에톡시)에톡시) 프로판오에이트 (20.00g, 48.36m㏖, 1.0eq.)의 용액에 Pd/C(2.00g, 10 wt%, 50% 습식)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 진탕하고, 셀라이트(여과 보조제)로 여과시키고, 여과액을 농축시켜 무색 오일(10.58g, 93.8% 수율)을 수득하였다. C11H24NO4 [M + H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 234.1627, 실측치 234.1810.
실시예 76. 화합물 402의 합성
Figure pct00192
DCM(10㎖) 중의 (E)-3-브로모아크릴산(0.15g, 1m㏖), DMAP(0.15g, 1.2m㏖) 및 DCC(0.21g, 1m㏖)의 용액에, 0℃에서 화합물 401(0.23g, 1m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 조 생성물을 농축시키고, EA/DCM의 구배로 SiO2 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 표제 생성물 402(0.31g, 85% 수율)를 제공하였다. ESI MS m/z: C14H25BrNO5 [M+H]+에 대한 계산치: 366.08, 실측치 366.08.
실시예 77. 화합물 403의 합성
Figure pct00193
0℃에서 화합물 402(0.31g, 0.84m㏖)를 폼산(4㎖)에 용해시키고, 이어서 H2O(2㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 조 생성물을 농축시키고, 추가로 정제하지 않고 다음 단계를 위해서 사용하였다. ESI MS m/z: C10H17BrNO5 [M+H]+에 대한 계산치: 310.02, 실측치 310.03.
실시예 78. 화합물 404의 합성
Figure pct00194
화합물 303(0.12g, 0.39m㏖), NHS(0.067g, 0.58m㏖) 및 EDCI(0.11g, 0.58m㏖)를 DCM(10㎖)에 용해시키고, 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 표제 생성물 404(0.13g, 82% 수율)를 제공하였다. ESI MS m/z: C14H20BrN2O7 [M+H]+에 대한 계산치: 407.04, 실측치 407.04.
실시예 79. 화합물 426의 합성
Figure pct00195
H2O(40㎖) 중의 4-아미노부티르산(7.5g, 75m㏖) 및 NaOH(6g, 150m㏖)의 용액을 0℃까지 냉각시키고, THF(32㎖) 중의 CbzCl(16.1g, 95m㏖)의 용액의 적가로 처리하였다. 1시간 후, 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 3시간 동안 교반하였다. THF를 진공 하에서 제거하고, 6N HCl을 첨가하여 수성 용액의 pH를 1.5로 조정하였다. 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축시켜 화합물 426(16.4g, 92% 수율)을 제공하였다. C12H16NO5 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 238.10, 실측치 238.08.
실시예 80. 화합물 427의 합성
Figure pct00196
DMAP(0.8g, 6.56m㏖) 및 DCC(17.1g, 83m㏖)를 DCM(100㎖) 중의 4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)부탄산(16.4g, 69.2m㏖) 및 t-BuOH(15.4g, 208m㏖)의 용액에 첨가하였다. r.t.에서 밤새 교반한 후, 반응물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시키고, 1N HCl, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 농축 및 칼럼 크로마토그래피에 의한 정제(10에서 50% EtOAc/헥산)는 화합물 427(7.5g, 37% 수율)을 제공하였다. C16H23NO4Na [M+Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 316.16, 실측치 316.13.
실시예 81. 화합물 428의 합성
Figure pct00197
tert-부틸 4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)부탄오에이트(560㎎, 1.91m㏖)를 MeOH(50㎖)에 용해시키고, Pd/C 촉매(10 wt%, 100㎎)와 혼합하고, 이어서 r.t.에서 3시간 동안 수소화시켰다(1atm). 촉매를 여과시키고, 모든 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하고, 화합물 428(272㎎, 90% 수율)을 수득하였다. C8H18NO2 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 160.13, 실측치 160.13.
실시예 82. 화합물 430의 합성
Figure pct00198
tert-부틸 4-아미노부탄오에이트(477㎎, 3m㏖) 및 2,3-다이브로모석신산(414㎎, 1.5m㏖)을 DCM(35㎖)에 용해시키고, 이것에 DIPEA(1.16g, 9m㏖) 및 EDC(0.86g, 4.5m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 r.t.에서 밤새 교반하고, 이어서 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과, 농축 및 칼럼 크로마토그래피에 의한 정제(순수한 DCM에서 10% MeOH/DCM)는 화합물 430(160㎎, 22% 수율)을 제공하였다. C20H34BrN2O6 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 477.15, 실측치 477.16.
실시예 83. 화합물 431의 합성
Figure pct00199
화합물 430(80㎎, 0.168m㏖)을 DCM(5㎖)에 용해시키고, 38℃에서 밤새 폼산(8㎖)으로 처리하였다. 모든 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하여, 화합물 431(61㎎, 99% 수율)을 수득하였다. C12H18BrN2O6 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 365.03, 실측치 365.05.
실시예 84. 화합물 432의 합성
Figure pct00200
NHS(60㎎, 0.504m㏖) 및 EDCI(97㎎, 0.504m㏖)를 DCM(10㎖) 중의 화합물 431(61㎎, 0.168m㏖)의 용액에 첨가하였다. r.t.에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜(0에서 10% MeOH/DCM) 화합물 432(72㎎, 77% 수율)를 수득하였다. C20H24BrN4O10 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 559.06, 실측치 559.78.
실시예 85. 화합물 433의 합성
Figure pct00201
NaH2PO4(물 중의 0.1M, 1㎖)를 EtOH(5㎖) 중의 화합물 432(36㎎, 0.065m㏖) 및 화합물 110(25㎎, 0.063m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 r.t.에서 밤새 교반하였다. 모든 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜(0에서 10% MeOH/DCM) 화합물 433(19.7㎎, 41% 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z 741.35 ([M+H]+).
실시예 86. 화합물 435의 합성
Figure pct00202
화합물 433(18㎎, 0.024m㏖)을 DCM(2㎖)에 용해시키고, r.t.에서 2시간 동안 TFA(2㎖)로 처리하였다. 모든 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하여, 화합물 435(14㎎, 98% 수율)를 수득하였고, 이것을 다음 단계에 직접 사용하였다. MS ESI m/z 585.22 ([M+H]+).
실시예 87. 화합물 437의 합성
Figure pct00203
화합물 435(14㎎, 0.0239m㏖) 및 퍼플루오로페닐 에스터 33a(18㎎, 0.0255m㏖)를 DMA(5㎖)에 용해시켰다. 혼합물에, DIPEA(10㎎, 0.077m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하고, 농축시키고, 정제용 HPLC(C18 칼럼, 10-90% MeCN/H2O)로 정제시켜 화합물 437(12.8㎎, 48% 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z 1105.50 ([M+H]+).
실시예 88. 화합물 441의 합성
Figure pct00204
무수 THF(200㎖) 중의 2,2'-(에탄-1,2-다이일비스(옥시))다이에탄올(55.0㎖, 410.75m㏖, 3.0eq.)의 용액에 소듐(0.1g)을 첨가하였다. Na가 사라질 때까지 혼합물을 교반하고, 이어서 tert-부틸 아크릴레이트(20.0㎖, 137.79m㏖, 1.0eq.)를 적가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 이어서 0℃에서 HCl 용액(20.0㎖, 1N)로 반응정지시켰다. THF를 회전식 증발기로 제거하고, 염수(300㎖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 EtOAc로 추출하였다(3×100㎖). 유기층을 염수로 세척(3×300㎖)하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축시켜 무색 오일(30.20g, 79.0% 수율)을 수득하였고, 이것을 추가로 정제하지 않고 사용하였다. C13H27O6 [M + H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 278.1729, 실측치 278.1730.
실시예 89. 화합물 442의 합성
Figure pct00205
0℃에서 무수 DCM(220㎖) 중의 tert-부틸 3-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시) 프로판오에이트(30.20g, 108.5m㏖, 1.0eq.) 및 TsCl(41.37g, 217.0m㏖, 2.0eq.)의 용액에 TEA(30.0㎖, 217.0m㏖, 2.0eq.)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 물(3×300㎖) 및 염수(300㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(3:1 헥산/EtOAc)로 정제시켜 무색 오일(39.4g, 84.0% 수율)을 제공하였다. C20H33O8S [M + H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 433.1818, 실측치 433.2838.
실시예 90. 화합물 443의 합성
Figure pct00206
무수 DMF(100㎖) 중의 tert-부틸 3-(2-(2-(2-(토실옥시)에톡시)에톡시)에톡시) 프로판오에이트(39.4g, 91.1m㏖, 1.0eq.)의 용액에 NaN3(20.67g, 316.6m㏖, 3.5eq.)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물(500㎖)을 첨가하고, EtOAc로 추출하였다(3×300㎖). 합한 유기층을 물(3×900㎖) 및 염수(900㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(5:1 헥산/EtOAc)로 정제시켜 밝은 황색 오일을 제공하였다(23.8g, 85.53% 수율). C13H25O3N5Na [M + Na]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 326.2, 실측치 326.2.
실시예 91. 화합물 444의 합성
Figure pct00207
라니-Ni(7.5g, 물에 현탁됨)을 물(3회), 아이소프로필 알코올(3회)로 세척하고, 아이소프로필 알코올에서 화합물 443(5.0g, 16.5m㏖)과 혼합하였다. 혼합물을 H2 풍선 하에서 r.t.에서 16시간 동안 교반하고, 이어서 아이소프로필 알코올로 패드를 세척하면서 셀라이트 패드 상에서 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜(5-25% MeOH/DCM) 밝은 황색 오일을 제공하였다(2.60g, 57% 수율). C13H28NO5 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 279.19; 실측치 279.19.
실시예 92. 화합물 445의 합성
Figure pct00208
아세틸렌다이카복실산(0.35g, 3.09m㏖, 1.0eq.)을 NMP(10㎖)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시키고, 이것에 화합물 444(2.06g, 7.43m㏖, 2.4eq.)를 첨가하고, 그 다음 DMTMM(2.39g, 8.65m㏖, 2.8eq.)을 나누어 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 6시간 동안 교반하고, 이어서 에틸 아세테이트로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 용액을 농축시키고, 에틸 아세테이트와 석유 에터의 혼합물 용매로 배산처리하였다. 고체를 여과시키고, 여과액을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜(80-90% EA/PE) 밝은 황색 오일을 제공하였고(2.26g, >100% 수율), 이것을 추가로 정제하지 않고 사용하였다. C30H53N2O12 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 633.35; 실측치 633.30.
실시예 93. 화합물 446의 합성
Figure pct00209
화합물 445(2.26g)을 다이클로로메탄(15㎖)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시키고 이어서 TFA(15㎖)로 처리하였다. 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 45분 동안 교반하고, 이어서 용매 및 잔류하는 TFA를 회전식 증발기에서 제거하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜(0-15% MeOH/DCM) 밝은 황색 오일을 제공하였다(1.39g, 2단계에 대해서 86% 수율). C22H37N2O12 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 521.23; 실측치 521.24.
실시예 94. 화합물 480의 합성
Figure pct00210
화합물 110(68㎎, 0.17m㏖), 화합물 124(94.5㎎, 0.52m㏖) 및 HATU(162㎎, 0.425m㏖)를 DCM(50㎖)에 용해시켰다. 이어서 TEA(73ul, 0.52m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하였다. 이어서 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 SiO2 칼럼으로 정제시켜 표제 생성물 480(98㎎, 80% 수율)을 제공하였다. C37H49N4O11 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 725.33, 실측치 725.34.
실시예 95. 화합물 481의 합성
Figure pct00211
DCM(1.0㎖)에 용해시킨 화합물 480(98㎎, 0.135m㏖)을 r.t.에서 2시간 동안 TFA(1.0㎖)로 처리하고, 이어서 농축시키고, DMA(1㎖)에 재용해시키고, 이것에 펜타플루오로페닐 에스터 41a(44㎎, 0.06m㏖) 및 DIPEA(45.8㎕, 0.27m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 교반하고, 이어서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN/H2O의 구배를 사용하여 정제용-HPLC로 정제시켜 표제 생성물 481(37㎎, 55% 수율)을 제공하였다. C53H73N8O14S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1077.49, 실측치 1077. 50.
실시예 96. 화합물 484의 합성
Figure pct00212
0℃에서 메탄올(120㎖) 중의 (S)-2-아미노-3-(4-나이트로페닐)프로판산(13.2g, 62.8m㏖)의 용액에 티오닐 클로라이드(9㎖, 125.6m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류까지 가열시키고, 1시간 동안 교반하고, 이어서 진공 하에서 농축시키고, 에틸 아세테이트(50㎖)에 현탁시켰다. 이어서 혼합물을 여과시켜 백색 고체로서 표제 화합물(14.5g, 91% 수율)을 수득하였다. C10H13N2O4 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 225.08, 실측치 225.08.
실시예 97. 화합물 485의 합성
Figure pct00213
THF(200㎖) 중의 화합물 484(9.5g, 36.4m㏖)의 용액에 트라이에틸아민 (12.6㎖, 91.1m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반한 후, 다이-tert-부틸 다이카보네이트(12.5㎖, 54.7m㏖)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이어서 에틸 아세테이트(200㎖)로 희석시키고, 1N HCl(30㎖), 물(30㎖)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에서 농축시켜 백색 고체로서 표제 화합물(11.4g, 97% 수율)을 수득하였다. C15H21N2O6 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 325.13, 실측치 325.13.
실시예 98. 화합물 486의 합성
Figure pct00214
-78℃에서 무수 다이클로로메탄(150㎖) 중의 화합물 485(14g, 43.2m㏖)의 용액에 DIBAL-H(108㎖, 108m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하고, 이어서 빙수에(200㎖) 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다(3×80㎖). 합한 유기상을 1N HCl(2×50㎖), 물(50㎖)로 세척하였다, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에서 농축시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(8.6g, 68% 수율)을 수득하였다. C14H19N2O5 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 295.12, 실측치 295.12.
실시예 99. 화합물 487의 합성
Figure pct00215
0℃에서 DCM(100㎖) 중의 화합물 106(8.1g, 20.8m㏖)의 용액에 화합물 486(5.2g, 17.8m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.까지 가온시키고, 30분 동안 교반하였다. 이어서 진공 하에서 농축시키고, 실리카겔 칼럼으로 정제시켜 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다(5.9g, 82% 수율). C21H31N2O6 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 406.21, 실측치 406.21.
실시예 100. 화합물 488의 합성
Figure pct00216
수소화 병 내에서 MeOH(40㎖) 중의 화합물 487(4g, 9.85m㏖)의 용액에 Pd/C(0.4g, 10 wt%)를 첨가하였다. 혼합물을 1atm H2 하에서 밤새 교반하고, 셀라이트(여과 보조제)로 여과시키고, 여과액을 농축시켜 화합물 488(3.6g, 수율 약 100%)을 수득하였다. ESI m/z: C21H35N2O4 [M+H]+에 대한 계산치: 379.25, 실측치 379.25.
실시예 101. 화합물 489의 합성
Figure pct00217
0℃에서 다이클로로메탄(50㎖) 중의 화합물 488(3.6g, 9.52m㏖) 및 트라이에틸아민(1.3㎖, 9.52m㏖)의 용액에 4-나이트로벤젠설포닐 클로라이드(2.1g, 9.52m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.까지 가온시키고, 1시간 동안 교반하고, 이어서 DCM(50㎖)으로 희석시키고, 1N HCl(20㎖), 물(20㎖)로 세척하였고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에서 농축시키고, 이어서 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다(4g, 75% 수율). C27H38N3O8S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 564.23, 실측치 564.23.
실시예 102. 화합물 490의 합성
Figure pct00218
아세토나이트릴(40㎖) 중의 화합물 489(3.6g, 6.39m㏖)의 용액에 tert-부틸 나이트라이트(2.29㎖, 19.1m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 45℃까지 가온시키고, 6시간 동안 교반하였다. 이어서 반응물을 진공 하에서 농축시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(3g, 79% 수율)을 수득하였다. C27H37N4O10S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 609.22, 실측치 609.22.
실시예 103. 화합물 491의 합성
Figure pct00219
아세토나이트릴/DMSO(30㎖/1㎖) 중의 화합물 490(3.0g, 4.92m㏖)의 용액에 4-메톡시 티오페놀(2.76g, 19.7m㏖) 및 탄산칼륨(2.7g, 19.7m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 에틸 아세테이트(100㎖)로 희석시키고, 물(20㎖), 염수(20㎖)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에서 농축시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(1.7g, 85% 수율)을 수득하였다. C21H34N3O6 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 424.24, 실측치 424.24.
실시예 104. 화합물 492의 합성
Figure pct00220
수소화 병 내에서 MeOH(4㎖) 중의 화합물 491(100㎎, 0.236m㏖)의 용액에 Pd/C(10㎎, 10 wt%)를 첨가하였다. 혼합물을 1atm H2 하에서 밤새 교반하고, 셀라이트(여과 보조제)로 여과시키고, 여과액을 농축시켜 표제 화합물(92.9㎎, 약 100% 수율)을 수득하였다. C21H36N3O4 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 394.26, 실측치 394.26.
실시예 105. 화합물 493의 합성
Figure pct00221
화합물 492(66㎎, 0.17m㏖), 화합물 124(94.5㎎, 0.52m㏖) 및 HATU(162㎎, 0.425m㏖)를 DCM(50㎖)에 용해시켰다. 이어서 TEA(73ul, 0.52m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하고, 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 SiO2 칼럼으로 정제시켜 표제 생성물 493(98㎎, 80% 수율)을 제공하였다. C37H50N5O10 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 724.35, 실측치 724.35.
실시예 106. 화합물 494의 합성
Figure pct00222
r.t.에서 2시간 동안 DCM(1.0㎖)에 용해시킨 화합물 493(98㎎, 0.135m㏖)을 TFA(1.0㎖)로 처리하고, 이어서 농축시켜 화합물 494를 제공하였고, 이것을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
실시예 107. 화합물 495의 합성
Figure pct00223
DMA(1㎖) 중의 화합물 494(76.9㎎, 0.135m㏖)의 용액에 펜타플루오로페닐 에스터 41a(44㎎, 0.06m㏖) 및 DIPEA(45.8㎕, 0.27m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 교반하고, 이어서 농축시키고, 잔류물을 MeCN/H2O의 구배로 정제용-HPLC로 정제시켜 표제 생성물 495(37㎎, 55% 수율)를 제공하였다. C53H74N9O13S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1076.50, 실측치 1076.50.
실시예 108. 화합물 509의 합성
Figure pct00224
0℃에서 EtOAc(120㎖) 중의 말레이미드(6.35g, 65.4m㏖, 1.0eq.)의 용액에 N-메틸 모르폴린(8.6㎖, 78.5m㏖, 1.2eq.) 및 메틸 클로로폼에이트(6.0㎖, 78.5m㏖, 1.2eq.)를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 30분 동안, r.t.에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 잔류물을 CH2Cl2에 용해시키고, 실리카겔 플러그로 여과시키고, CH2Cl2로 용리시켜 색상을 제거하였다. 적절한 분획을 농축시키고, 생성된 고체를 10% EtOAc/PE로 배산처리하여 백색 고체(9.00g, 89% 수율)를 제공하였다.
실시예 109. 화합물 510의 합성
Figure pct00225
화합물 401(8.16g, 35.0m㏖, 1.0eq.) 및 포화 NaHCO3(40㎖)의 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 이것에 화합물 509(5.43g, 35.0m㏖, 1.0eq.)를 나누어 첨가하였다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM(3×100㎖)으로 추출하고, 유기 추출물을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 백색 고체(6.76g, 62% 수율)를 제공하였다. C15H23NO6 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 314.15, 실측치 314.15.
실시예 110. 화합물 511의 합성
Figure pct00226
화합물 510(1.85g, 5.9m㏖)의 용액을 DCM(20㎖)에 용해시키고, r.t.에서 16시간 동안 TFA(7㎖)로 처리하고, 이어서 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(11:1 DCM/MeOH)로 정제시켜 백색 발포체(1.47g, 97% 수율)를 제공하였다. C11H15NO6 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 258.09, 실측치 258.09.
실시예 111. 화합물 519의 합성
Figure pct00227
N-Boc-에틸렌다이아민(5.6㎖, 35.4m㏖, 1.1eq.) 및 포화 NaHCO3(60㎖)의 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 이것에 화합물 509(5.00g, 32.2m㏖, 1.0eq.)를 나누어 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과로 수집하고, 차가운 물로 세척하고, 이어서 EtOAc에 용해시키고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 백색 고체(6.69g, 87% 수율)를 제공하였다.
실시예 112. 화합물 520의 합성
Figure pct00228
고압 튜브 내의 톨루엔(120㎖) 중의 화합물 519(6.00g, 25.0m㏖), 퓨란(18.0㎖)의 용액을 환류까지 가열시키고, 16시간 동안 교반하였다. 무색 용액이 반응 동안 황색으로 변했다. 이어서 혼합물을 r.t.까지 냉각시키고, 농축시켰다. 생성된 백색 고체를 에틸 에터로 배산처리하여 화합물 520(6.5g, 84% 수율)을 제공하였다.
실시예 113. 화합물 521의 합성
Figure pct00229
화합물 520(9.93g, 32.2m㏖)의 용액을 다이옥산(15㎖)에 용해시키고, 진한 HCl(15㎖)로 r.t.에서 3시간 동안 처리하였다. 반응물을 농축시키고, EtOAc로 여과 케이크를 세척하면서 생성된 고체를 여과로 수집하였다. 고체를 오븐(50℃)에서 밤새 건조시켜 화합물 521(6.94g, 88% 수율)을 제공하였다.
실시예 114. 화합물 522의 합성
Figure pct00230
-10℃ THF(10㎖) 중의 화합물 521(0.85g, 3.47m㏖)의 용액에 POCl3(162㎕, 1.73m㏖), 그 다음 TEA(966㎕, 6.95m㏖)첨가하였다. 반응물을 -10℃에서 3시간 동안 교반하고, 이어서 용액을 DCM(20㎖)으로 희석시키고, 셀라이트 상에서 여과시켰다, 여과액을 농축시켜 화합물 522를 제공하였고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용하였다. C20H23ClN4O7P [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 497.09, 실측치 497. 09.
실시예 115. 화합물 523의 합성
Figure pct00231
화합물 522(0.50g, 1.0m㏖) 및 DIPEA(0.4㎖, 2.4m㏖)를 0℃에서 DCM(5.0㎖)에 용해시키고, 이어서 화합물 401(0.23g, 1.0m㏖)을 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 2.5시간 동안 교반하고, 이어서 농축시키고, SiO2 칼럼으로 정제시켜 표제 생성물 523(0.30g, 43%)을 제공하였다. C31H45N5O11P [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 694.28, 실측치 694.28.
실시예 116. 화합물 524의 합성
Figure pct00232
화합물 523(0.30g, 0.5m㏖)을 DCM(3㎖)에 용해시키고, r.t.에서 2시간 동안 TFA(3㎖)로 처리하고, 이어서 농축시켜 화합물 524를 제공하였고, 이것을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
실시예 117. 화합물 525의 합성
Figure pct00233
화합물 524(40㎎, 0.063m㏖), 화합물 110(40㎎, 0.10m㏖), HATU(24㎎, 0.063m㏖)를 DCM(5㎖)에 용해시키고, 이어서 TEA(27.8㎕, 0.2m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하였다. 이어서 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 SiO2 칼럼으로 정제시켜 표제 생성물 525(53.4㎎, 84% 수율)를 제공하였다. C48H69N7O15P [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1014.45, 실측치 1014.45.
실시예 118. 화합물 526의 합성
Figure pct00234
화합물 525(53.4㎎, 0.053m㏖)를 DCM(2㎖)에 용해시키고, TFA (2㎖)로 r.t.에서 2시간 동안 처리하고, 이어서 농축시켜 화합물 526을 제공하였고, 이것을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
실시예 119. 화합물 527의 합성
Figure pct00235
DMA(1㎖) 중의 화합물 526(45.0㎎, 0.053m㏖)의 용액에 펜타플루오로페닐 에스터 41a(37.0㎎, 0.053m㏖) 및 DIPEA(17㎕, 0.1m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 MeCN/H2O의 구배로 정제용-HPLC로 정제시켜 표제 생성물 527(26.2㎎, 36% 수율)을 제공하였다. C64H93N11O18PS [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1366.61, 실측치 1366. 61.
실시예 120. 화합물 528의 합성
Figure pct00236
화합물 527(8.0㎎, 0.0058m㏖)을 톨루엔(5.0㎖)에 용해시키고, 밤새 환류까지 가열하고, 이어서 농축시키고, MeCN/H2O의 구배로 정제용-HPLC로 정제시켜 표제 생성물 528(6.4㎎, 90% 수율)을 제공하였다. C56H85N11O16PS [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1230.56, 실측치 1230. 56.
실시예 121. 화합물 529의 합성
Figure pct00237
10㎖ DCM 중의 tert-부틸 3-(2-(2-(다이벤질아미노)에톡시)에톡시)프로판오에이트(5.00g, 12.1m㏖)의 용액에 5㎖의 TFA를 첨가하였다. 혼합물을 r.t.에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 농축시켰다. 조 생성물을 DCM(50㎖)에 용해시키고, 이것에 NHS(4.25g, 37m㏖) 및 EDCI(7.10g, 37m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하고, 그 다음 농축시키고, DCM/MeOH의 구배로 SiO2 칼럼으로 정제시켜 표제 화합물 529(5.00g, 91%)를 제공하였다. C25H31N2O6 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 455.21, 실측치 455.21.
실시예 122. 화합물 530의 합성
Figure pct00238
EtOH(10㎖) 중의 화합물 110(1.00g, 2.5m㏖, 1.0eq.)의 용액에 화합물 529(1.80g, 3.9m㏖, 1.5eq.) 및 0.1M NaH2PO4(2㎖)를 r.t.에서 첨가하였다. 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하고, 그 다음 농축시켰다. 잔류물을 H2O(100㎖)로 희석시키고, 그 다음 EtOAc(3×50㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, DCM/MeOH의 구배로 SiO2 칼럼으로 정제시켜 표제 화합물 530(0.93g, 50%)을 제공하였다. C42H60N3O8 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 734.43, 실측치 734.43.
실시예 123. 화합물 531의 합성
Figure pct00239
수소화 병에서, Pd/C(0.093g, 10 wt%)를 EtOAc(20㎖) 중의 화합물 530(0.93g, 1.27m㏖)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 1atm H2 하에서 밤새 진탕하고, 그 다음 셀라이트(필터 에이드)여과하였다, 여과액을 농축시키고 화합물 531(0.57g, 81%)을 제공하였고, 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. C28H48N3O8 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 554.34, 실측치 554.34.
실시예 124. 화합물 537의 합성
Figure pct00240
HATU(39.9g, 105m㏖)를 DMF(300㎖) 중의 4-(((벤질옥시)카보닐)아미노) 부탄산(26.1g, 110m㏖)의 용액에 첨가하였다. r.t.에서 30분 동안 교반한 후, 혼합물을 DMF(300㎖) 중의 화합물 110(39.4g, 100m㏖) 및 TEA(20.2g, 200m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 r.t.에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하고, 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 칼럼 크로마토그래피(20%에서 70% EA/PE)에 의한 정제는 표제 생성물을 백색 고체로서 제공하였다(45g, 73% 수율). C33H48N3O8 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 614.34, 실측치 614.15.
실시예 125. 화합물 538의 합성
Figure pct00241
화합물 537(100g, 163m㏖)을 메탄올(500㎖)에 용해시키고, Pd/C 촉매(10 wt%, 10g)로 r.t.에서 밤새 수소화시켰다(1atm). 촉매를 여과시키고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 538(75.8g, 97% 수율)을 갈색 발포성 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.11 (s, 1H), 6.83 (d, J = 10.3 Hz, 2H), 5.04 - 4.52 (m, 6H), 3.90 - 3.56 (m, 1H), 2.81 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 2.63 (dd, J = 12.5, 6.1 Hz, 2H), 2.54-2.26 (dd, J = 14.0, 7.6 Hz, 4H), 1.94-1.64 (m, 3H), 1.44 - 1.36 (m, 18H), 1.08 (d, J = 6.9 Hz, 3H). C25H42N3O6 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 480.30, 실측치 480.59.
실시예 126. 화합물 539의 합성
Figure pct00242
1㎖ DCM 중의 화합물 537(1.00g, 1.63m㏖)의 용액에 2㎖ TFA를 첨가하고, 혼합물을 r.t.에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 농축시켰다. 생성된 조생성물 539를 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. C24H32N3O6 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 458.22, 실측치 458.22.
실시예 127. 화합물 540의 합성
Figure pct00243
DMF(3㎖) 중의 화합물 539(0.42g, 0.92m㏖)를 펜타플루오로페닐 에스터 41a(0.63g, 0.91m㏖) 및 DIPEA(0.46㎖, 2.73m㏖)에 첨가하고. 반응물을 r.t.에서 밤새 교반하고, 그 다음 농축시키고, DCM/MeOH의 구배로 SiO2 칼럼으로 정제시켜 표제 화합물 540(0.67g, 75% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. C49H72N7O11S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 966.49, 실측치 966.49.
실시예 128. 화합물 541의 합성
Figure pct00244
수소화 병에서, MeOH(15㎖) 중의 화합물 540(0.40g, 0.41m㏖)의 용액에 Pd/C(0.02g, 10 wt%)를 첨가하였다. 그 다음 1N HCl 한방울을 첨가하여 pH를 대략 4로 조정하였다. 혼합물을 1atm H2 하에서 밤새 진탕하고, 그 다음 셀라이트(필터 에이드)로 여과하고, 여과액을 농축시켜 화합물 541을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. C41H66N7O9S [M+H]+ 에 대한 ESI m/z 계산치:832.46, 실측치 832.46.
실시예 129. 화합물 587의 합성
Figure pct00245
화합물 110(0.30g, 0.76m㏖), 화합물 Z-L-Ala-OH(0.17g, 0.76m㏖) 및 HATU(0.29g, 0.76m㏖)를 DCM(20㎖)에 용해시키고, 이것에 TEA(110㎕, 0.8m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하였다. 그 다음 용매를 감암 ㅎ하에서 제거하고, 잔류물을 SiO2 칼럼으로 정제시켜 표제 화합물 587(0.43g, 95% 수율)을 제공하였다. C32H46N3O8 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 600.32, 실측치 600.32.
실시예 130. 화합물 627의 합성
Figure pct00246
r.t.에서 EtOH(16㎖) 중의 H-Lys(Boc)-OH(1.00g, 3.8m㏖, 1.0eq.)의 용액에 화합물 125(1.00g, 5.6m㏖, 1.5eq.)를 첨가하였다. 0.1M NaH2PO4(3㎖)를 첨가한 후, 반응 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하였다. 반응물을 진공 하에서 농축시키고, 잔류물을 DCM/MeOH의 구배로 SiO2 칼럼으로 정제시켜 표제 화합물 627(1.62g, 이론 수율)을 제공하였다. C19H30N3O7 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 412.20, 실측치 412.20.
실시예 131. 화합물 628의 합성
Figure pct00247
EtOAc(10㎖) 중의 카복실산 627(0.24g, 0.58m㏖)의 용액에 펜타플루오로페놀(0.21g, 1.17m㏖) 및 DCC(0.24g, 1.17m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하고, 이어서 EtOAc로 여과 케이크를 세척하면서 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 생성된 PFP-에스터(32㎎, 0.056m㏖)를 1㎖ DMF에 용해시키고, 이것에 화합물 531(50㎎, 0.056m㏖) 및 i-Pr2EtN(29㎕, 0.168m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 2시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 MeCN/H2O의 구배로 HPLC로 정제시켜 표제 화합물 628(3㎎, 4% 수율)을 제공하였다. C63H99N10O17S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1299.68, 실측치 1299.68.
실시예 132. 화합물 629의 합성
Figure pct00248
0.5㎖ DCM 중의 화합물 628(3㎎, 0.002m㏖)의 용액에 1㎖ TFA를 첨가하고, 반응 혼합물을 r.t.에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켰다. 조 생성물을 MeCN/H2O의 구배로 HPLC로 정제시켜 표제 화합물 629(1.43㎎, 52% 수율)를 제공하였다. C58H91N10O15S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1199.63, 실측치 1199.62.
실시예 133. 화합물 632의 합성
Figure pct00249
화합물 627의 펜타플루오로페닐 에스터(0.11g, 0.19m㏖)를 1㎖ DMF에 용해시키고, 이것에 화합물 541(0.21g, 0.25m㏖) 및 i-Pr2EtN(86㎕, 0.5m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 2시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 MeCN/H2O의 구배로 정제용-HPLC로 정제시켜 표제 생성물 632(20㎎, 9%)를 제공하였다. C60H93N10O15S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1225.65, 실측치 1225.66.
실시예 134. 화합물 633의 합성
Figure pct00250
1㎖ DCM 중의 화합물 632(20㎎, 0.016m㏖)의 용액에 2㎖ TFA를 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 농축시키고, 조 생성물을 MeCN/H2O의 구배로 정제용-HPLC로 정제시켜 표제 화합물 633(8.9㎎, 18% 수율)을 제공하였다. C55H85N10O13S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치:1125.59, 실측치 1125.59.
실시예 135. 화합물 636의 합성
Figure pct00251
r.t.에서 EtOH(30㎖) 중의 H-Dap(Boc)-OH(1.00g, 4.9m㏖, 1.0eq.)의 용액에 화합물 125(2.00g, 7.3m㏖, 1.5eq.)를 첨가하고, 이어서 0.1M NaH2PO4(6㎖)를 첨가하고, 반응 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하였다. 용매를 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 DCM/MeOH의 구배로 SiO2 칼럼으로 정제시켜 표제 화합물 636(1.41g, 78%)을 제공하였다. C16H24N3O7 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 370.15, 실측치 370.15.
실시예 136. 화합물 637의 합성
Figure pct00252
2㎖ DCM 중의 화합물 636(1.41g, 3.8m㏖)의 용액에 5㎖ TFA를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켰다. 조 생성물 637을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. C11H16N3O5 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 270.10, 실측치 270.10.
실시예 137. 화합물 638의 합성
Figure pct00253
EtOH(20㎖) 중의 상기 화합물 637의 용액에 화합물 125(1.90g, 6.9m㏖, 1.5eq.)를 r.t.에서 첨가하고, 이어서 0.1M NaH2PO4(4㎖)를 첨가하고, 반응 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하였다. 용매를 진공 하에서 제거하고, 이어서 잔류물을 H2O/MeCN의 구배로 HPLC로 정제시켜 표제 화합물 638(0.45g, 22% 수율)을 제공하였다. C19H23N4O8 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 435.14, 실측치 435.14.
실시예 138. 화합물 639의 합성
Figure pct00254
DMF(2㎖) 중의 화합물 638(0.15g, 0.34m㏖), 화합물 538(0.17g, 0.34m㏖) 및 HATU(0.16g, 0.41m㏖)의 용액에, TEA(95㎕, 0.68m㏖)를 첨가하였다. r.t.에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 감압 하에서 농축시키고, 잔류물을 MeCN/H2O의 구배로 정제용-HPLC로 정제시켜 표제 화합물 639(34㎎, 11% 수율)를 제공하였다. C44H62N7O13 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 896.43, 실측치 896.42.
실시예 139. 화합물 640의 합성
Figure pct00255
0.5㎖ DCM 중의 화합물 639(34㎎, 0.04m㏖)의 용액에 1㎖ TFA를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켜 표제 화합물 640을 수득하였고, 이것을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. C35H46N7O11 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 740.30, 실측치 740.32.
실시예 140. 화합물 641의 합성
Figure pct00256
DMA(2㎖) 중의 화합물 640의 용액에 펜타플루오로페닐 에스터 41a(28㎎, 0.04m㏖), 그 다음 DIPEA(21㎕, 0.12m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 교반하고, 이어서 농축시키고, MeCN/H2O의 구배로 정제용-HPLC로 정제시켜 표제 화합물 641(14.4㎎, 29%)을 제공하였다. C60H86N11O16S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1248.59, 실측치 1248.60.
실시예 141. 화합물 644의 합성
Figure pct00257
무수 DCM(30㎖) 중의 화합물 132(0.300g, 0.329m㏖, 1.0eq.) 및 tert-부틸 (2-아미노에틸)카바메이트 염산염(0.063g, 0.395m㏖, 1.2eq.)의 용액에 0℃에서 EDCI(0.189g, 0.988m㏖, 3.0eq.)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 반응물을 실온까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 반응물을 DCM으로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(DCM /MeOH)로 정제시켜 화합물 644를 황색 발포성 고체(0.132g, 54% 수율)로서 제공하였다. C52H80N9O12S[M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1054.6, 실측치:1054.6.
실시예 142. 화합물 645의 합성
Figure pct00258
r.t.에서 DCM(4.5㎖) 중의 화합물 644(0.132g, 0.125m㏖, 1.0eq.)의 용액에 TFA(1.5㎖)를 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 무수 톨루엔으로 희석시키고, 농축시키고, 이 작업을 3회 동안 반복하여 황색 오일을 제공하였고, 이것을 정제용-HPLC(C18 칼럼, 이동상 A: 물, 이동상 B: 아세토나이트릴, 60분 동안 10%의 B에서 80%의 B로)상에서 정제시켰다. 분획을 풀링(pooled)시키고, 동결건조시켜 화합물 645(111㎎, 93% 수율)를 제공하였다. C47H72N9O10S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 954.5, 실측치: 954.5.
실시예 143. 화합물 648의 합성
Figure pct00259
0℃에서 무수 DCM(10㎖) 중의 화합물 645(0.050g, 0.0549m㏖,1.0eq.) 및 tert-부틸 (2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(0.024g, 0.0824m㏖, 1.5eq.)의 용액에 EDCI(0.032g, 0.1647m㏖, 3.0eq.)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 이어서 혼합물을 DCM으로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)로 정제시켜 표제 화합물을 황색 발포성 고체로서 제공하였다(0.030g, 46% 수율). C58H92N9O15S　[M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1186.6, 실측치:1186.6.
실시예 144. 화합물 649의 합성
Figure pct00260
r.t.에서 DCM(3.0㎖) 중의 화합물 648(0.030g, 0.0253m㏖, 1.0eq.)의 용액에 TFA(1.0㎖)를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 이어서 무수 톨루엔으로 희석시키고, 농축시키고, 이 작업을 3회 반복하여 황색 오일을 제공하였고, 이것을 정제용-HPLC(C18 칼럼, 이동상 A: 물, 이동상 B: 아세토나이트릴, 60분 동안 10%의 B에서 80%의 B) 상에서 정제시켰다. 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 화합물 649(11.7㎎, 43% 수율)를 제공하였다. C53H84N9O13S　[M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1086.6, 실측치:1086.6.
실시예 145. 화합물 652의 합성
Figure pct00261
0℃에서 무수 DCM(350㎖) 중의 N-(2-아미노에틸)에탄-1,2-다이아민(28.7g, 275m㏖, 10.0eq.) 및 DMAP(0.034g, 0.000275m㏖, 0.01eq.)의 용액에 무수 DCM(100㎖) 중의 Boc2O(6.0g, 0.0275m㏖, 1.0eq.)를 3시간에 걸쳐서 첨가하였다. 이어서 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 밤새 교반하고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)로 정제시켜 표제 화합물을 황색 오일로서 제공하였다(4.5g, 80% 수율). C9H22N3O2 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 204.2, 실측치:204.2.
실시예 146. 화합물 653의 합성
Figure pct00262
0℃에서 무수 DCM(6㎖) 중의 화합물 645(0.060g, 0.0658m㏖, 1.0eq.) 및 tert-부틸 (2-((2-아미노에틸)아미노)에틸)카바메이트(0.016g, 0.0790m㏖, 1.2eq.)의 용액에 EDCI(0.038g, 0.1974m㏖, 3.0eq.)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 정제용-HPLC(C18 칼럼, 이동상 A: 물, 이동상 B: 아세토나이트릴, 60분 동안 10%의 B에서 80%의 B) 상에서 정제시켰다. 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 표제 화합물 653(48㎎, 66% 수율)을 제공하였다. C54H85N10O12S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1097.6, 실측치:1097.6.
실시예 147. 화합물 654의 합성
Figure pct00263
r.t.에서 DCM(3.0㎖) 중의 화합물 653(0.048g, 0.0437m㏖, 1.0eq.)의 용액에 TFA(1.0㎖)를 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 무수 톨루엔으로 희석시키고, 농축시키고, 이 작업을 3회 반복하여 황색 오일을 제공하였고, 이것을 정제용-HPLC(C18 칼럼, 이동상 A: 물, 이동상 B: 아세토나이트릴, 60분 동안 10%의 B에서 80%의 B)상에서 정제시켰다. 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 표제 화합물 654(111㎎, 93% 수율)를 제공하였다. C49H77N10O10S[M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 997.5, 실측치: 997.5.
실시예 148. 화합물 658의 합성
Figure pct00264
0℃에서 무수 DCM(40㎖) 중의 화합물 645(0.400g, 0.439m㏖, 1.0eq.) 및 H-Lys(Boc)-O t Bu·HCl(0.135g, 0.528m㏖, 1.2eq.)의 용액에 EDCI(0.189g, 1.317m㏖, 3.0eq.)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)로 정제시켜 화합물 658을 황색 오일로서 제공하였다(0.43g, 82% 수율). C60H94N9O14S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1196.7, 실측치:1196.7.
실시예 149. 화합물 559의 합성
Figure pct00265
r.t.에서 DCM(6.0㎖) 중의 화합물 658(0.230g, 0.192m㏖, 1.0eq.)의 용액에 TFA(2.0㎖)를 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 교반하고, 이어서 톨루엔으로 희석시키고, 농축시키고, 이 작업을 3회 반복하여 황색 오일을 제공하였고, 이것을 정제용-HPLC(C18칼럼, 이동상 A: 물, 이동상 B: 아세토나이트릴, 60분 동안 10%의 B에서 80%의 B) 상에서 정제시켰다. 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다(153㎎, 76% 수율). C51H78N9O12S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1040.5, 실측치:1040.5.
실시예 150. 화합물 662의 합성
Figure pct00266
0℃에서 무수 DCM(10㎖) 중의 화합물 658(0.200g, 0.167m㏖,1.0eq.) 및 Boc-L-Lys(Boc)-OH(0.070g, 0.200m㏖, 1.2eq.)의 용액에 HATU(0.095g, 0.250m㏖, 1.5eq.) 및 TEA(46㎕, 0.334m㏖, 2.0eq.)를 첨가하였다. 반응물을 10분 동안 0℃에서 교반하고, 10분 동안 교반하고, 이어서 r.t.까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)로 정제시켜 화합물 662를 무색 오일로서 제공하였다(0.270g, 이론 수율). C76H122N11O19S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1524.9, 실측치:1524.9.
실시예 151. 화합물 663의 합성
Figure pct00267
r.t.에서 DCM(6.0㎖) 중의 화합물 662(0.270g, 0.177m㏖, 1.0eq.)의 용액에 TFA(2.0㎖)를 첨가하고, 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 무수 톨루엔으로 희석시키고, 농축시키고, 이 작업을 3회 반복하여 황색 오일을 제공하였고, 이것을 정제용-HPLC(C18 칼럼, 이동상 A: 물, 이동상 B: 아세토나이트릴, 60분 동안 10%의 B에서 80%의 B) 상에서 정제시켰다. 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다(172㎎, 83% 수율). C57H90N11O13S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1168.6, 실측치:1168.6.
실시예 152. 화합물 666의 합성
Figure pct00268
0℃에서 무수 DCM(500㎖) 중의 에탄-1,2-다이아민(30.0g, 0.5㏖, 10.0eq.)의 용액에 7시간에 걸쳐서 무수 DCM(250㎖) 중의 CbzCl(8.53g, 0.050㏖, 1.0eq.)을 첨가하였다. 이어서 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 벤질 (2-아미노에틸)카바메이트를 백색 고체로서 제공하였다(7.0g, 94% 수율). C10H14N2O2 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 195.1, 실측치:195.2.
실시예 153. 화합물 667의 합성
Figure pct00269
0℃에서 MeOH(120㎖) 중의 화합물 666(7.0g, 35.8m㏖, 1.0eq.) 및 37% HCHO(aq)(14㎖, 0.1772m㏖, 5.0eq.)의 용액에 NaBH3CN(3.9g, 0.0620㏖, 1.6eq.)을 첨가하고, 이어서 HOAc(3㎖)를 첨가하여 pH 약 7.0으로 조정하였다. 혼합물을 r.t.까지 가온시키고, 밤새 교반하고, 이어서 농축시켰다. 잔류물을 DCM(200㎖)에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)로 정제시켜 표제 화합물을 밝은 황색 오일로서 제공하였다(6.4g, 80% 수율). ESI m/: C12H18N2O2 [M+H]+에 대한 계산치: 224.1, 실측치:224.1.
실시예 154. 화합물 668의 합성
Figure pct00270
화합물 667(3.0g, 13.4m㏖, 1.0eq.) 및 Pd/C(0.3g, 10% Pd/C, 50% 습식)를 수소화 병 내에서 HCl(3㎖) 및 MeOH(100㎖)와 혼합하고, 100psi H2 분위기에서 5시간 동안 진탕하였다. 이어서 혼합물을 셀라이트 상에서 여과시키고, 여과액을 농축시켜 표제 화합물을 황색 고체로서 제공하였다(2.1g, 98% 수율). 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 3.33 (d, J = 4.6 Hz, 2H), 3.27 (s, 2H), 2.79 (s, 6H).
실시예 155. 화합물 669의 합성
Figure pct00271
0℃에서 무수 DMF(10㎖) 중의 화합물 103(0.58g, 1.58m㏖, 1.0eq.) 및 화합물 668(0.051g, 3.15m㏖, 2.0eq.)의 용액에 HATU(0.090g, 2.37m㏖, 1.5eq.) 및 TEA(0.656㎖, 4.74m㏖, 3.0eq.)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 반응물을 r.t.까지 가온시키고, 90분 동안 교반하고. 혼합물을 H2O로 희석시키고, EA(3×100㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물을 황색 발포성 고체로서 제공하였다(0.67g, 97% 수율). C21H35N4O6 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 439.2, 실측치:439.2.
실시예 156. 화합물 670의 합성
Figure pct00272
Pd/C(0.2g, 10% Pd/C, 50% 습식)를 EA(10㎖) 중의 화합물 669(0.60g, 13.7m㏖, 1.0eq.)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 100psi H2 분위기에서 4시간 동안 진탕하였다. 이어서 혼합물을 셀라이트 상에서 여과시키고, 여과액을 농축시켜 표제 화합물을 녹색 오일로서 제공하였다(5.50g, 98% 수율). C21H37N4O64 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 409.3, 실측치:409.3.
실시예 157. 화합물 671의 합성
Figure pct00273
95% EtOH(10㎖) 및 0.1M NaH2PO4(2㎖) 중의 화합물 670(0.50g, 1.22m㏖, 1.0eq.)의 용액에 화합물 125(0.683g, 2.44m㏖, 2.0eq.)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하고, 이어서 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)로 정제시켜 표제 화합물을 밝은 황색 오일로서 제공하였다(0.624g, 89% 수율). C29H44N5O7 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 574.3, 실측치:574.3.
실시예 158. 화합물 672의 합성
Figure pct00274
r.t.에서 DCM(6.0㎖) 중의 화합물 671(0.20g, 0.349m㏖, 1.0eq)의 용액에 TFA(2.0㎖)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하고, 이어서 무수 톨루엔으로 희석시키고, 농축시키고, 이 작업을 3회 반복하여 표제 화합물을 황색 오일로서 제공하였다(165㎎, 이론 수율). C24H36N5O5 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 474.3, 실측치:474.3.
실시예 159. 화합물 673의 합성
Figure pct00275
0℃에서 무수 DMF(2㎖) 중의 화합물 672(0.165g, 0.349m㏖,1.0eq.)의 용액에 무수 DMF(3㎖) 중의 화합물 41a(0.290g, 1.047m㏖, 1.2eq.)를 첨가하고, 반응물을 10분 동안 교반하고, 이어서 r.t.까지 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 정제용-HPLC(C18 칼럼, 이동상 A: 물, 이동상 B: 아세토나이트릴, 60분 동안 10%의 B에서 80%의 B) 상에서 정제시켰다. 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 표제 화합물(58㎎, 17% 수율)을 밝은 황색 발포성 고체로서 제공하였다. C49H76N9O10S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 982.5, 실측치: 982.5.
실시예 160. 화합물 704의 합성
Figure pct00276
(S)-2-((tert-부톡시카보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄산(33㎎, 0.14m㏖), DCC(32㎎, 0.154m㏖) 및 펜타플루오로페놀(39㎎, 0.21m㏖)을 에틸 아세테이트(20㎖)에 용해시키고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서 반응물을 건조물로 농축시켜 화합물 (S)-퍼플루오로페닐 2-((tert-부톡시카보닐) (메틸)아미노)-3-메틸부탄오에이트를 제공하였고, 이것을 2㎖의 DMA에 용해시키고, 3㎖의 DMA 중의 화합물 2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-2-아미노-N,3-다이메틸펜탄아미도)-1-하이드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카복실산(52㎎, 0.14m㏖)의 용액 및 DIPEA(48.5㎕, 0.28m㏖를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 농축시켰다. 잔류물을 1㎖의 아세토나이트릴로 희석시키고, MeCN/H2O의 구배로 역상 HPLC로 정제시켜 화합물 704(40.2㎎, 49％ 수율)를 수득하였다. ESI: m/z: C28H49N4O7S [M+H]+에 대한 계산치: 585.32, 실측치 585.32.
실시예 161. 화합물 705의 합성
Figure pct00277
0℃에서 피리딘(8㎖) 중의 화합물 704(40㎎, 0.069m㏖)의 용액에 아세트산 무수물(20.4㎎, 0.2m㏖)을 첨가하고, 반응물을 실온까지 가온시키고, 밤새 교반하고, 이어서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(MeOH/DCM)로 정제시켜 표제 화합물 705(48.1㎎, 약 100% 수율)를 수득하였다. ESI: m/z: C30H51N4O8S [M+H]+에 대한 계산치: 627.33, 실측치 627.33.
실시예 162. 화합물 708의 합성
Figure pct00278
화합물 705(48.1㎎, 0.077m㏖), DCC(17.4㎎, 0.085m㏖) 및 펜타플루오로페놀(21.2㎎, 0.115m㏖)을 에틸 아세테이트(10㎖)에 용해시키고, 반응물을 밤새 실온에서 교반하고, 이어서 건조물로 농축시켜 화합물 2-((6S,9S,12R,14R)-9-((S)-sec-부틸)-6,12-다이아이소프로필-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10,16-테트라옥소-3,15-다이옥사-5,8,11-트라이아자헵타데칸-14-일)티아졸-4-카복실레이트를 제공하였고, 이것을 4㎖의 DMA에 용해시키고, 3㎖의 DMA 중의 화합물 (4R)-4-아미노-2-메틸-5-페닐펜탄산, 트라이플루오로아세트산염(20.7㎎, 0.1m㏖)의 용액 및 DIPEA(26.8㎕, 0.154m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 농축시켰다. 잔류물을 1㎖의 아세토나이트릴로 희석시키고, MeCN/H2O의 구배로 역상 HPLC로 정제시켜 화합물 708(33㎎, 84％ 수율)을 수득하였다. ESI: m/z: C42H66N5O9S [M+H]+에 대한 계산치: 816.45, 실측치 816.45.
실시예 163. 화합물 709의 합성
Figure pct00279
이전 단계로부터의 화합물 708을 DCM(1㎖)에 용해시키고, TFA(1㎖)로 r.t.에서 2시간 동안 처리하였다. 반응물을 농축시키고, 잔류물을 EtOH(20㎖)에 용해시켰다. 화합물 125(30.8㎎, 0.11m㏖) 및 0.1M NaH2PO4(4㎖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하고, 이어서 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(MeOH/DCM)로 정제시켜 표제 화합물 709(28.5㎎, 42％ 수율)를 수득하였다. ESI m/z: C45H65N6O10S [M+H]+에 대한 계산치: 881.44, 실측치 881.44.
실시예 164. 화합물 712의 합성
Figure pct00280
DCM(1㎖) 중의 화합물 708(63㎎, 0.077m㏖)의 용액을 실온에서 2시간 동안 TFA(1㎖)로 처리하고, 이어서 농축시키고, 잔류물을 DMA(4㎖)에 용해시켰다. 화합물 711(65.8㎎, 0.11m㏖) 및 DIPEA(27㎕, 0.154m㏖)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 농축시키고, 잔류물을 MeCN/H2O의 구배로 역상 HPLC로 정제시켜 화합물 712(14㎎, 16％ 수율)를 수득하였다. ESI: m/z: C55H84N7O16S [M+H]+에 대한 계산치: 1130.56, 실측치 1130.57.
실시예 165. tert-부틸 17-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-옥소-4,7,10-트라이옥사-13-아자헵타데칸-1-오에이트(화합물 157a)의 합성.
Figure pct00281
화합물 444(27.92g, 0.1 mol) 및 화합물 124(18.3g, 0.1 mol)를 DCM(300㎖)에 용해시키고, 이것에 DIPEA(12.9g, 0.1 mol) 및 EDC(38.6g, 0.2 mol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 r.t.에서 밤새 교반하고, 그 다음 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과시키고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(5% EtOAc/DCM에서 20% EtOAc/DCM)로 정제시켜 화합물 157a(38.03g, 86% 수율)를 수득하였다. C21H35N2O8 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 443.2394, 실측치 443.2412.
실시예 166. 17-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-옥소-4,7,10-트라이옥사-13-아자헵타데칸-1-산(화합물 158a)의 합성.
Figure pct00282
150㎖ DCM 중의 화합물 157a(38.0g, 85.9m㏖)의 용액에 50㎖ TFA를 첨가하였다. 혼합물을 r.t.에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 톨루엔(50㎖)으로 희석시키고, 진공에서 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(10% MeOH/DCM to 20% MeOH/DCM)로 정제시켜 화합물 158a(27.53g, 83% 수율)를 수득하였다. C17H27N2O8 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 387.1768, 실측치 387.1792.
실시예 167. 2,5-다이옥소피롤리딘-1-일 17-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-옥소-4,7,10-트라이옥사-13-아자헵타데칸-1-오에이트(화합물 159a)의 합성.
Figure pct00283
NHS(3.20g, 27.82m㏖) 및 EDCI(9.70g, 50.4m㏖)를 DCM(80㎖) 중의 화합물 158a(10.10g, 26.15m㏖)의 용액에 첨가하였다. r.t.에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(5에서 20% EtOAc/DCM)로 정제시켜 화합물 159a(10.73g, 85% 수율)를 제공하였다. C21H30N3O10 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 484.1942, 실측치 484.1978.
실시예 168. (2S,5S)-23-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5-다이메틸-4,7,20-트라이옥소-10,13,16-트라이옥사-3,6,19-트라이아자트라이코산-1-산(화합물 162a)의 합성.
Figure pct00284
에탄올(100㎖)과 pH 7.5 완충액(0.1M NaH2PO4/Na2HPO4, 100㎖) 중의 혼합물 중의 화합물 161((S)-Ala-(S)-Ala, 5.01g, 31.2m㏖)을 화합물 159a(15.08g, 31.20m㏖)에 4개의 분획을 2시간 동안 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 4시간 동안 계속 교반하고, 진공에서 첨가하고, 칼럼 크로마토그래피(10에서 20% MeOH/DCM)로 정제시켜 화합물 162a(13.18g, 80% 수율)를 제공하였다. C23H37N4O10 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 529.2511, 실측치 529.2545.
실시예 169. (2S,5S)-2,5-다이옥소피롤리딘-1-일 23-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5-다이메틸-4,7,20-트라이옥소-10,13,16-트라이옥사-3,6,19-트라이아자트라이코산-1-오에이트(163a)의 합성
Figure pct00285
NHS(1.60g, 13.91m㏖) 및 EDCI(5.90g, 30.7m㏖)를 DCM(70㎖) 중의 화합물 162a(6.50g, 12.30m㏖)의 용액에 첨가하였다. r.t.에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(5에서 20% EtOAc/DCM)로 정제시켜 화합물 163a(6.61g, 86% 수율)를 제공하였다. C27H40N5O12 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 626.2672, 실측치 626.2698.
실시예 170. (2S,4R)-4-((tert-부톡시카보닐)아미노)-5-(3-((2S,5S)-23-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5-다이메틸-4,7,20-트라이옥소-10,13,16-트라이옥사-3,6,19-트라이아자트라이코산아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(164a)의 합성
Figure pct00286
에탄올(70㎖)과 pH 7.5 완충액(0.1M NaH2PO4/Na2HPO4, 60㎖) 중의 혼합물 중의 화합물 121(3.57g, 10.55m㏖)에 화합물 163a(6.60g, 10.55m㏖)를 4개의 분획으로 2시간 동안 첨가하엿다. 첨가 후, 혼합물을 4시간 동안 계속 교반하고, 진공에서 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(15에서 25% MeOH/DCM)로 정제시켜 화합물 164a(7.25g, 81% 수율)를 제공하였다. C40H61N6O14 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 849.4267, 실측치 849.4295.
실시예 171. (2R,4S)-4-카복스y-1-(3-((2S,5S)-23-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5-다이메틸-4,7,20-트라이옥소-10,13,16-트라이옥사-3,6,19-트라이아자트라이코산아미도)-4-하이드록시페닐)펜탄-2-암모늄, 트라이플루오로아세테이트(165a)의 합성.
Figure pct00287
r.t.에서 DCM(6.0㎖) 중의 화합물 164a(0.20g, 0.349m㏖, 1.0eq)의 용액에 TFA(2.0㎖)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하고, 그 다음 무수 톨루엔으로 희석시키고, 농축시키고, 이 작업을 3회 동안 반복하여 표제 화합물을 황색 오일(165㎎, 이론 수율)로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. C35H54N6O12 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 750.3795, 실측치: 750.3825.
실시예 172. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-아이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트라이옥소-12-옥사-2,5,8-트라이아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카복스아미도)-5-(3-((2S,5S)-23-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5-다이메틸-4,7,20-트라이옥소-10,13,16-트라이옥사-3,6,19-트라이아자트라이코산아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(166a)의 합성.
Figure pct00288
화합물 165a(45㎎, 0.0600m㏖) 및 퍼플루오로페닐 에스터 41a(45㎎, 0.0650m㏖)를 DMA(5㎖)에 용해시켰다. 혼합물에, DIPEA(20㎎, 0.154m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하고, 농축시키고, 분취용 HPLC(C18 칼럼, 10-90% MeCN/H2O)으로 정제시켜 화합물 166a(49.1㎎, 65% 수율)를 제공하였다. C60H93N10O17S [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 1256.6442, 실측치: 1256.6510.
실시예 173. 퍼플루오로페닐 2-메틸-2-(피롤리딘-1-일)프로판오에이트 713의 합성
Figure pct00289
2-메틸-2-(피롤리딘-1-일)판산 25(401㎎, 2.50m㏖), EDC(654㎎, 3.40m㏖) 및 펜타플루오로페놀(480㎎, 2.60m㏖)을 다이클로로메탄(45㎖)에 용해시키고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 농축 건조시켜 화합물 퍼플루오로페닐 2-메틸-2-(피롤리딘-1-일)프로판오에이트 713(662㎎, 82% 수율)을 제공하였다. C14H15F5NO2 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 324.1024, 실측치 324.1045.
실시예 174. 에틸 2-((5R,7R,10S)-10-((S)-sec-부틸)-3,3-다이에틸-7-아이소프로필-8,13-다이메틸-9,12-다이옥소-13-(피롤리딘-1-일)-4-옥사-8,11-다이아자-3-실라테트라데칸-5-일)티아졸-4-카복실레이트 714의 합성
Figure pct00290
펜타플루오로페닐 에스터 713(650㎎, 2.01m㏖)의 EtOAc 용액(40㎖)에, 화합물 16(1.085g, 2.01m㏖) 및 무수 Pd/C(10 wt%, 100㎎)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 분위기(1atm) 하에서 24시간 동안 교반하고, 그 다음 EtOAc로 필터를 세척하면서 셀라이트 플러그로 여과하였다. 합한 유기 부분을 농축시키고, CH2Cl2 중의 0-5% 메탄올의 구배로 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜 화합물 714(1.10g, 84% 수율)를 전달하였다. C33H61N4O5SSi [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 653.4133, 실측치 653.4148.
실시예 175. 에틸 2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-다이메틸-2-(2-메틸-2-(피롤리딘-1-일)프로판아미도)펜탄아미도)-1-하이드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카복실레이트, 715의 합성
Figure pct00291
화합물 714(1.10g, 1.68m㏖)를 AcOH/물/THF(v/v/v 3:1:1, 25㎖)에 용해시키고, r.t.에서 2일 동안 교반하였다. 반응물을 농축시킨 후, 톨루엔을 첨가하고, 다시 농축시키고; 이 단계를 2회 반복하여 화합물 715를 제공하였고, 이것을 직접 다음 단계에 사용하였다. C27H47N4O5S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 539.3268, 실측치 539.3295.
실시예 176. 2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-다이메틸-2-(2-메틸-2-(피롤리딘-1-일)프로판아미도)펜탄아미도)-1-하이드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카복실산, 716의 합성
Figure pct00292
0℃에서 LiOH(0.4 N, 5㎖)의 수성 용액을 MeOH(20㎖) 중의 화합물 715(0.85g, 1.65m㏖)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 r.t.에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(순수한 CH2Cl2에서 80:20:1 CH2Cl2/MeOH/NH4OH)시켜 화합물 716(773㎎, 2단계 90% 수율)을 무정형 고체로서 제공하였다. C25H43N4O5S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 511.2955, 실측치 511.2980.
실시예 177. 2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-다이메틸-2-(2-메틸-2-(피롤리딘-1-일)프로판아미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카복실산, 717의 합성
Figure pct00293
무수 THF(30㎖) 및 무수 DMF(15㎖) 중의 화합물 716(765㎎, 1.50m㏖) 및 DMAP(180㎎, 1.48m㏖)의 용액을 0℃까지 냉각시키고, 이것에 DIPEA(3.0㎖, 17.2m㏖) 및 아세트산 무수물(1.0g, 9.79m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 r.t.까지 가온되게 하고, 4시간 동안 교반하고, 그 다음 농축시키고. 칼럼 크로마토그래피(5-50% MeOH/DCM)시켜 화합물 717(785㎎, 95% 수율)을 무정형 고체로서 제공하였다. C27H45N4O6S [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 553.3061, 실측치 553.3095.
실시예 178. 퍼플루오로페닐 2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-다이메틸-2-(2-메틸-2-(피롤리딘-1-일)프로판아미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카복실레이트, 718의 합성
Figure pct00294
무수 DCM(10㎖) 중의 화합물 717(775㎎, 1.40m㏖)의 용액에 EDC(805㎎, 4.19m㏖) 및 펜타플루오로페놀(276㎎, 1.50m㏖)를 N2 하에서 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 그 다음 DCM(100㎖)으로 희석시키고, 물(2×200㎖) 및 염수(200㎖)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(50% EtOAc/PE)로 정제시켜 화합물 718을 백색 고체로서 제공하였다(815㎎, 81% 수율). C33H44F5N4O6S [M+H]+ 에 대한 MS ESI m/z 계산치: 719.2901, 실측치: 719.2945.
실시예 179. (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-다이메틸-2-(2-메틸-2-(피롤리딘-1-일)프로판아미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카복스아미도)-5-(3-((2S,5S)-23-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5-다이메틸-4,7,20-트라이옥소-10,13,16-트라이옥사-3,6,19-트라이아자트라이코산아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산의 합성
Figure pct00295
7㎖의 DMA 중의 화합물 718(153㎎, 0.213m㏖) 및 화합물 165a(160㎎, 0.213m㏖)의 용액에, DIPEA(100㎕, 0.575m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 농축시키고. 잔류물을 1㎖의 아세토나이트릴로 희석시키고, MeCN/H2O(10% MeCN에서 40% MeCN, 45분 동안, d2㎝×L25㎝, C-18 칼럼, 8㎖/min)의 구배로 역상 HPLC로 정제시켜 화합물 719(166.1㎎, 61% 수율)를 제공하였다. ESI: m/z: C62H95N10O17S [M+H]+에 대한 계산치: 1282.6598, 실측치 1282.6630.
실시예 180. (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-다이메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카복스아미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카복스아미도)-5-(3-((2S,5S)-23-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5-다이메틸-4,7,20-트라이옥소-10,13,16-트라이옥사-3,6,19-트라이아자트라이코산아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산, 720의 합성
Figure pct00296
화합물 33(30.2㎎, 0.056m㏖), EDC(25.0㎎, 0.130m㏖) 및 펜타플루오로페놀(11㎎, 0.060m㏖)을 다이클로로메탄(4㎖)에 용해시키고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 농축 건조시켜 화합물 퍼플루오로페닐 2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-다이메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카복스아미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카복실레이트, 33a를 제공하였고, 이것을 4㎖의 DMA에 용해시키고, 3㎖의 DMA 중의 화합물 165a(160㎎, 0.213m㏖)의 용액 및 DIPEA(26.8㎕, 0.154m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 농축시키고. 잔류물을 1㎖의 아세토나이트릴로 희석시키고, MeCN/H2O의 구배(10% MeCN에서 40% MeCN, 45분 동안, d2㎝×L25㎝, C-18 칼럼, 8㎖/분)로 역상 HPLC로 정제시켜 화합물 720(133.1㎎, 48% 수율)을 제공하였다. ESI: m/z: C61H93N10O17S [M+H]+에 대한 계산치: 1269.6442, 실측치 1282.6630.
실시예 181. (2S,4R)-tert-부틸 4-((tert-부톡시카보닐)아미노)-5-(4-((2S,5S)-23-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5-다이메틸-4,7,20-트라이옥소-10,13,16-트라이옥사-3,6,19-트라이아자트라이코산아미도)페닐)-2-메틸펜탄오에이트, 721의 합성
Figure pct00297
에탄올(70㎖)과 pH 7.5 완충액(0.1 M NaH2PO4/Na2HPO4, 60㎖)의 혼합물 중의 화합물 488(310㎎, 0.82m㏖)에 화합물 163a(660㎎, 1.055m㏖)를 4개의 분획으로 2시간 동안 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 4시간 동안 계속 교반하고, 진공에서 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(15에서 25% EtOAc/DCM)로 정제시켜 화합물 714(604,5㎎, 83% 수율)를 제공하였다. C44H69N6O13 [M+H]+에 대한 MS ESI m/z 계산치 889.4923, 실측치 889.4965.
실시예 182. (2S,4R)-4-아미노-5-(4-((2S,5S)-23-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5-다이메틸-4,7,20-트라이옥소-10,13,16-트라이옥사-3,6,19-트라이아자트라이코산아미도)페닐)-2-메틸펜탄산, 트라이플루오로아세트산염의 합성.
Figure pct00298
r.t.에서 DCM(6.0㎖) 중의 화합물 721(0.20g, 0.225m㏖, 1.0eq)의 용액에 TFA(2.0㎖)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하고, 그 다음 무수 톨루엔으로 희석시키고, 농축시키고, 이 작업을 3회 동안 반복하여 표제 화합물을 황색 오일(165㎎, 이론 수율)로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. C35H53N6O11 [M+H]+에 대한 ESI m/z 계산치: 732.3773, 실측치: 732.3795.
실시예 183. (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-다이메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카복스아미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카복스아미도)-5-(4-((2S,5S)-23-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5-다이메틸-4,7,20-트라이옥소-10,13,16-트라이옥사-3,6,19-트라이아자트라이코산아미도)페닐)-2-메틸펜탄산 (723, 참조 대조군으로서)의 합성.
Figure pct00299
화합물 33(30.2㎎, 0.056m㏖), EDC(25.0㎎, 0.130m㏖) 및 펜타플루오로페놀(11㎎, 0.060m㏖)을 다이클로로메탄(4㎖)에 용해시키고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 농축 건조시켜 화합물 퍼플루오로페닐 2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-다이메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카복스아미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카복실레이트를 제공하였고, 이것을 4㎖의 DMA에 용해시키고, 3㎖의 DMA 중의 화합물 722(160㎎, 0.213m㏖)의 용액 및 DIPEA(26.8㎕, 0.154m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 농축시켰다. 잔류물을 1㎖의 아세토나이트릴로 희석시키고, MeCN/H2O(10% MeCN에서 40% MeCN, 45분 동안, d2㎝×L25㎝, C-18 칼럼, 8㎖/분)의 구배로 역상 HPLC로 정제시켜 화합물 723(47.7㎎, 68% 수율)을 제공하였다. ESI: m/z: C61H93N10O16S [M+H]+에 대한 계산치: 1253.6492, 실측치 1253.6540.
실시예 184. 화합물 128, 132, 437, 481, 495, 528, 629, 633, 641, 645, 649, 654, 659, 663, 673, 709, 712, 166a, 719, 720 및 723의 항체 접합체의 일반적인 제조 방법.
pH 6.0 내지 8.0에서 20.0㎖의 10㎎/㎖ 허셉틴의 혼합물에, 100mM NaH2PO4, pH 6.5 내지 8.5 완충액의 7.0 내지 20.0㎖의 PBS 완충액, TCEP(140 내지 350㎕, 물 중의 20mM) 및 독립적으로 화합물 128, 132, 437, 481, 495, 528, 629, 633, 641, 645, 649, 654, 659, 663, 673, 709, 712, 166a, 719, 720 및 723(140 내지 280㎕, DMA 중의 20mM)를 첨가하고, 그 다음 4-(아지도메틸)벤조산(140 내지 500㎕, pH 7.5, PBS 완충액 중의 20mM)을 첨가하였다. 혼합물을 RT에서 4 내지 18시간 동안 인큐베이션시키고, 이어서 DHAA(1.35㎖, 50mM)를 첨가하였다. RT에서 밤새 연속 인큐베이션시킨 후, 혼합물을 100mM NaH2PO4, 50mM NaCl pH 6.0~7.5 완충액으로 용리시키는 G-25 칼럼 상에서 정제시켜 134.5 내지 158.2㎖의 NaH2PO4, 완충액 중의 125 내지 186.8㎎의 접합체 화합물 C-128, C-132, C-437, C-481, C-495, C-528, C-629, C-633, C-641, C-644, C-645, C-649, C-654, C-659, C-663, C-673, C-709, C-712, C-166a, C-719, C-720 및 C-723(80% 내지 93% 수율)을 수득하였다. 약물/항체 비율(drug/antibody ratio: DAR)은 접합체에 대해서 3.4 내지 3.9였는데, 여기서 DAR은 UPLC-QTOF 질량 스펙트럼을 통해서 결정되었다. 그것은 SEC HPLC(토쉬 바이오사이언스사(Tosoh Bioscience), Tskgel G3000SW, 7.8㎜ ID×30㎝, 0.5㎖/분, 100분)에 의해서 94 내지 99% 단량체라고 분석되었고, SDS-PAGE 겔에 의해서 단일 밴드로 측정되었다.
실시예 185. T-DM1과 비교한, 접합체 C-128, C-132, C-437, C-481, C-495, C-528, C-629, C-633, C-641, C-644, C-645, C-649, C-654, C-659, C-663, C-673, C-709, C-712, C-166a, C-719, C-720 및 C-723의 시험관내 세포독성 평가:
세포 독성도 검정에 사용된 세포주는 인간 위 암종 세포주인 NCI-N87이었고: 세포를 10% FBS가 함유된 RPMI-1640에서 성장시켰다. 검정을 실행하기 위해, 세포(180㎕, 6000개 세포)를 96웰 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 5% CO2와 함께 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 그 다음, 적절한 세포 배양 배지(총 부피, 0.2㎖)에서 다양한 농도의 시험 화합물(20㎕)로 세포를 처리하였다. 대조군 웰은 세포와 배지를 함유하지만, 시험 화합물이 결핍되었다. 플레이트를 5% CO2와 함께 37℃에서 120시간 동안 인큐베이션시켰다. 이어서, MTT(5mg/㎖)를 웰(20㎕)에 첨가하고, 플레이트를 1.5시간 동안 37℃에서 인큐베이션시켰다. 배지를 조심스럽게 제거하고, DMSO(180㎕)를 이후에 첨가하였다. 15분 동안 진탕한 후, 620㎚의 표준 필터를 사용하여 490㎚ 및 570㎚에서의 흡광도를 측정하였다. 저해%는 하기 식에 따라 계산되었다: 저해% = [1-(검정-블랭크)/(대조군-블랭크)]×100. 결과를 표 1에 열거한다.
Figure pct00300
Figure pct00301
Figure pct00302
Figure pct00303
실시예 186. 생체내 항종양 활성도(NCI-N87 이종이식 종양을 갖는 BALB/c 누드 마우스).
T-DM1과 함께 접합체 C-166a, C-719, C-720, C-723의 생체내 효능을 인간 위 암종 N-87 세포주 종양 이종 이식 모델로 평가하였다. 5주령 암컷 BALB/c 누드 마우스(40마리 동물)에게 무혈청 배지 0.1㎖ 중의 N-87 암종 세포(5×106개 세포/마우스)를 우측 어깨 아래 면적에 피하 주사하였다. 종양은 7일 동안 125㎣의 평균 크기로 자랐다. 이어서 동물을 무작위로 6개 군으로 나누었다(군당 6마리의 동물). 제1 군의 마우스를 대조군으로 제공하고, 인산염 완충 염수(PBS) 비히클로 처리하였다. 5개의 군을 정맥 내 투여되는 6㎎/㎏의 용량의 각각의 접합체 C-166a, C-719, C-720, C-723 및 T-DM1로 처리하였다. 종양의 3차원 치수를 3 또는 4일마다(주 2회) 측정하고, 종양 부피를 수학식 종양 부피 = 1/2(길이×폭×높이)를 사용하여 계산하였다. 동물의 중량을 또한 동시에 측정하였다. 다음의 기준 중 임의의 하나가 충족될 때 마우스를 희생시켰다: (1) 처리전 중량에서 20% 초과의 체중 감소, (2) 종양 체적 1500㎣ 초과, (3) 병에 걸려 음식물 및 물에 접근하지 못함, 또는 (4) 피부 괴사. 종양이 발견되지 않으면 마우스는 종양이 없는 것으로 간주되었다. 결과를 도 23에 플로팅하였다.
실시예 187.
접합체 C-166a, C-719, C-720, C-723 및 T-DM1과 비교한 접합체의 독성 연구. 6 내지 7주령의 암컷 ICR 마우스 66마리를 11개의 군으로 분리시켰다. 각각의 군은 간 독성 연구를 위해 6마리의 마우스를 포함하였다. 제1 군의 마우스를 대조군으로 사용하였고, 인산염 완충 식염수(PBS) 비히클로 처리하였다. 10개 군을 접합체 C-166a, C-719, C-720, C-723 및 T-DM1 각각 75㎎/㎏ 및 150㎎/㎏의 용량의 정맥내 투여로 처리하였다. 각각의 동물의 체중 변화를 12일 동안 매일 측정하였다. 혈액 수집은 NCI의 설치류 혈액 수집 지침을 따랐다. 기본적으로 마우스의 안구뒤 부비동(retro-orbital sinuses)을 통해 혈액 샘플을 채취하고, 투여 후 제5일에 원심분리시켜 혈청을 얻었다. 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제(AST), 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT) 및 알칼리성 포스파타제(ALP)의 수준을 상업용 키트를 사용하여 PUS-2018 반자동 생화학 분석기를 사용하여 분석하였다(각각 아스파테이트 및 알라닌을 기질로 사용). 참조값은 제조업체의 권장 사항에 따라 반응성 역학에 따라 설정되었다. 혈액 수집 후, 마우스를 희생시켰고, 병원체 연구를 위해 마우스 간을 절단하였다. AST와 ALT의 평균 결과를 표 2에 제시하고, 동물의 평균 체중 변화 결과 및 병원체 사진을 각각 도 24 및 도 25에 도시하였다.
간 독성 및 체중 변화의 결과는 75㎎/㎏ 및 150㎎/㎏의 훨씬 더 높은 용량에서, 접합체 C-166a 및 C-719가 T-DM1보다 독성이 더 낮았고, 접합체 C- 720은 T-DM1과 어느 정도 유사한 독성을 가졌고, 접합체 C-723은 T-DM1보다 독성이 훨씬 더 높다는 것을 나타내었다. 시험된 용량에서 독성 순서는 C-723 > T-DM1 ≥ C-720 > C-719 > C-166a > PBS였다. 접합체 C-166a, C-719, C-720 및 C-723은 도 23에 나타난 바와 같이 유사한 생체내 활성을 갖고, 모두 T-DM1보다 생체내 활성이 더 우수하기 때문에, 접합체 C-166a 및 C-719에 대한 치료창은 T-DM1보다 훨씬 더 우수하다. 요약하면, 튜불리신의 좌측에 있는 N-알킬-피페리딘-2-카복실기를 2-N-알킬-2,2-다이알킬-아세트산기로 대체하면 튜불리신 유사체의 생체내 활성을 유지시키면서 동물 부작용을 극적으로 감소시킬 수 있다.
Figure pct00304
실시예 188. 화합물 C-166a 및 C-719의 접합체의 동결건조 조성물의 제조 및 접합체의 안정성 연구
시트르산 완충 용액 중의 20㎎/㎖ 농도의 C-166a 및 C-719의 정제된 접합체에, 다양한 부형제(폴리솔베이트 80, 수크로스, 트레할로스, 벤질 알코올 및 NaCl)를 상이한 설계 농도로 첨가하였다. 혼합물을 상이한 설계된 pH 값(pH 4.5 내지 7.0)으로 조정하고, 약 80㎎의 접합체를 함유하는 10㎖ 보로실리케이트 바이알에 채운 다음, 감압(5 내지 10torr)에서 -65℃ 내지 0℃의 온도 및 실온에서 동결건조시켜 건조 케이크를 형성하였다. 케이크 화합물을 설계된 조건에서 저장한 다음 4㎖의 멸균수로 재구성하여 안정성을 분석하였다.
단백질 용융 온도(Tm)는 생물학적 약물의 구조적 열 안정성을 반영하는 중요한 지표이기 때문에, 일반적으로 Tm이 높을수록 생물분자의 변성 및 응집 온도가 높고, 단백질 입체배좌가 더 안정적이며, 따라서 실제 저장 조건(예를 들어, 2 내지 8℃ 또는 실온)에서 생물분자의 안정성이 더 양호하다. Tm을 나노 DSF 스캐닝으로 측정하고 pr.control 소프트웨어(나노템퍼 테크놀로지즈사(NanoTemper Technologies GmbH), 독일 81369 무니히 플로에가세 4 소재)로 분석하였다. 응집 개시(Tag onset)는 응집이 시작되는 온도이다. 응집 강도(Tag int)는 전체 응집도에 대한 정성적 측정값이다.
일부 조성 및 저장 조건 분석을 표 3에 요약하였다.
Figure pct00305
Figure pct00306
조성물의 열안정성 결과는, 조성물의 pH 값이 생성물의 열 안정성 및 응집에 상당한 영향을 미치는 것으로 나타났고, pH 값이 높을수록 생성물의 열안정성이 우수하였고(pH 5.0 내지 6.0); 동일한 pH 값에서, 설계된 조성물 간의 상이한 부형제는 생성물의 열안정성에 약간의 영향을 미쳤지만, 동일한 pH 값(예를 들어 S4 → S6, S7 → S24, S25 → S36)으로부터, 수크로스 또는 트레할로스 및 폴리솔베이트 80 또는 20 둘 다를 함유한 조성물은 모두 생성물의 열 안정성을 향상시킬 수 있다.
Figure pct00307
Figure pct00308
Figure pct00309
표 4의 결과는, 설계된 조성물이 6개월 동안 25℃에서 C-166a 및 C-719의 안정성을 유지시킬 수 있다는 것을 입증하였다.

Claims (21)

  1. 동결건조 전 액체 조성물 또는 제형화된 동결건조 고체 또는 상기 동결건조 고체로부터의 재구성된 제형으로서,
    상기 제형의 주성분으로서 0.01% 내지 99중량%의 하기 화학식 (I)의 튜불리신(tubulysin) 유사체 대 세포-결합제(cell-binding agent)의 접합체; 0.0% 내지 20.0%의 1종 이상의 폴리올; 0.0% 내지 2.0%의 1종 이상의 계면활성제; 0.0% 내지 5.0%의 1종 이상의 보존제; 0.0% 내지 30%의 1종 이상의 아미노산; 0.0% 내지 5.0%의 1종 이상의 항산화제; 0.0% 내지 0.3%의 1종 이상의 금속 킬레이팅제; 0.0% 내지 30.0%의, 제형의 pH를 pH 4.5 내지 8.5로 조정하기 위한 1종 이상의 완충제 염; 및 0.0% 내지 30.0%의, 환자에게 투여하기 위해서 재구성된 후 삼투압을 약 250 내지 350mOSm으로 조정하기 위한 1종 이상의 등장제의 조성을 갖되,
    화학식 (I)의 튜불리신(tubulysin) 유사체 접합체는 하기 구조의 화합물 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체이며,
    Figure pct00310

    [식 중, T는 표적화 또는 세포-결합 분자이고; L은 해방 가능한 링커이며;
    Figure pct00311
    는 L이 독립적으로 괄호 안의 원자에 연결되는 링키지 결합이고; n은 1 내지 20이며, m은 1 내지 10이고;
    T는 항체; 단일 쇄 항체; 표적 세포에 결합하는 항체 단편; 단클론성 항체; 단일 쇄 단클론성 항체; 또는 표적 세포에 결합하는 단클론성 항체 단편; 키메라 항체; 표적 세포에 결합하는 키메라 항체 단편; 도메인 항체; 표적 세포에 결합하는 도메인 항체 단편; 항체를 모방하는 어드넥틴(adnectin); DARPin; 림포카인; 호르몬; 비타민; 성장 인자; 집락 자극 인자; 또는 영양분-수송 분자(트랜스페린); 알부민, 중합체, 덴드리머, 리포솜, 나노입자, 소낭(vesicle), 또는 (바이러스성) 캡시드 상에 부착된 결합 펩타이드 또는 단백질 또는 항체 또는 소분자이고;
    링커 L은 화학식 --Ww―(Aa)r--Vv―를 갖되; --W--는 스트레처(Stretcher) 단위이고; w는 0 또는 1이며; 각각의 --Aa--는 독립적으로 아미노산 단위이고; r은 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이며; --V--는 스페이서 단위이며; v는 0, 1 또는 2이며, 스트레처 단위 W는 자기-희생 스페이서(self-immolative spacer), 펩타이드 단위, 하이드라존 결합, 다이설파이드 또는 티오에터 결합을 독립적으로 함유할 수 있고, 스트레처 단위(--W--)는 존재하는 경우, 표적화 결합 분자 단위(T)를 아미노산 단위(--Aa--)에 연결하거나, 또는 Aa가 존재하지 않는 경우 V를 연결하며, 스트레처 단위 W는 자기-희생 스페이서, 펩타이드 단위, 하이드라존 결합, 다이설파이드 또는 티오에터 결합을 독립적으로 함유할 수 있고, T에 연결된 W는 하기의 구조를 갖되:
    Figure pct00312

    Figure pct00313

    R20 및 R21은 -C1~C9 알킬렌-, -C1~C7 카보사이클로-, -O-( C1~C8 알킬)-, -아릴렌-, -C1~C9 알킬렌-아릴렌-, -아릴렌, -C1~C9 알킬렌-, -C1~C9 알킬렌-(C1~C8 카보사이클로)-, -(C3~C7 카보사이클로)-C1~C9 알킬렌-, -C3~C8 헤테로사이클로-, -C1~C10 알킬렌-(C3~C8 헤테로사이클로)-, -(C3~C8 헤테로사이클로)-C1~C9 알킬렌-, -(CH2CH2O)k-, -(CH(CH3)CH2O)k- 및 -(CH2CH2O)k-CH2-로부터 독립적으로 선택되고; k는 1 내지 20의 범위의 정수이며.; R' 및 R"는 독립적으로 H 또는 CH3이며,
    존재하는 경우 스페이서 단위 (--V--)는 아미노산 단위가 존재하는 경우 아미노산 단위를 항유사분열제(antimitotic agent)에 연결하고, 대안적으로, 스페이서 단위는 아미노산 단위가 존재하지 않는 경우 스트레처 단위를 항유사분열제에 연결하고, 스페이서 단위는 또한 아미노산 단위 및 스트레처 단위 둘 다가 존재하지 않는 경우 항유사분열제를 결합 분자(T)에 연결하며, 스페이서 링커는 본 명세서에 기재된 접합체의 수 용해도, 생물학적 수송, 우선적인 신장 청소율, 흡수율(uptake), 흡수(absorption), 생체분포(biodistribution) 및/또는 생체이용률을 실질적으로 증가시키는 작용기를 함유할 수 있으며, 스페이서 단위는 2개의 일반적인 유형, 즉, 자기-희생 및 비-자기-희생이며, 비-자기-희생 스페이서 단위는 스페이서 단위 중 일부 또는 전부가 항유사분열제-링커-결합 분자 접합체 또는 항유사분열제-링커 화합물로부터의 아미노산 단위의 절단, 특히 효소적 절단 후 항유사분열제에 결합된 채로 유지되는 것이며, 자기-희생 단위는 파라-아미노벤질카바모일(PAB)기, 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체, 복소환식 PAB 유사체, 베타-글루쿠로나이드 및 오쏘 또는 파라-아미노벤질아세탈과 전기적으로(electronically) 유사한 방향족 화합물 또는 하기 구조 중 하나를 포함하되:
    Figure pct00314

    식 중, (*) 원자는 추가 스페이서 또는 해방 가능한 링커 단위, 항유사분열제 및/또는 결합 분자(T)의 부착점이고; X, Y 및 Z3은 독립적으로 NH, O 또는 S이며; Z2는 독립적으로 H, NH, O 또는 S이고. v는 0 또는 1이며; Q는 독립적으로 H, OH, C1~C6 알킬, (OCH2CH2)n F, Cl, Br, I, OR17, 또는 SR17, NR17R18, N=NR17, N=R17 , NR17R18 , NO2, SOR17R18, SO2R17, SO3R17 , OSO3R17, PR17R18, POR17R18, PO2R17R18, OPO(OR17)(OR18), 또는 OCH2PO(OR17(OR18)이되, R17, R18은 독립적으로 H, C1~C8의 알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬; C3~C8의 아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 알킬카보닐; 또는 약제학적 양이온 염이고;
    비-자기-희생 스페이서 링커는 하기 구조를 갖고:
    Figure pct00315

    Figure pct00316

    Figure pct00317

    Figure pct00318

    Figure pct00319

    또는 1 내지 20개의 동일하거나 상이한 아미노산을 함유하는 L- 또는 D-, 자연 또는 비자연 펩타이드;
    "*" 및
    Figure pct00320
    원자는 추가 스페이서 또는 해방 가능한 링커, 항유사분열제 및/또는 결합 분자의 부착점이고; m은 1 내지 10이며; n은 1 내지 20이고; X2, X3, X4, X5 또는 X6은 NH; NHNH; N(R12); N(R12)N(R12'); O; S; C1-C6의 알킬; C2-C6의 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴; CH2OR12, CH2SR12, CH2NHR12 또는 1 내지 8개의 아미노산으로부터 독립적으로 선택되고; R12 및 R12'는 독립적으로 H;C1-C8의 알킬; C2-C8의 헤테로-알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴;또는 1 내지 8개 탄소 원자의 에스터, 에터 또는 아마이드; 또는 화학식 (OCH2CH2)p의 폴리에틸렌옥시 단위 또는 (OCH2CH(CH3))p(식 중, p 및 p'는 독립적으로 0 내지 약 1000으로부터 선택된 정수임) 또는 이들의 조합물이고;
    L에서의 적어도 하나의 결합인 링커 L의 해방 가능한 성분은 하기 구조 중 하나를 갖는, 생리 조건 하에서 파괴될 수 있는 pH-불안정한, 산-불안정한, 염기-불안정한, 산화적으로 불안정한, 대사적으로 불안정한, 생화학적으로 불안정한 또는 효소-불안정한 결합일 수 있고:
    -(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n(OCH2CH2)t-, -(CR15R16)m(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -(Aa)r-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)t-, -(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-, -(CR15R16)m(CR17=CR18)(CR19R20)n(Aa) t(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(Aa)t(NR21CO)(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(OCO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m-(CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(NR21CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m-(OCO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m(CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -(CR15R16)m-페닐-CO(Aa)t-(CR17R18)n-, -(CR15R16)m-퓨릴-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -(CR15R6)m-옥사졸릴-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -(CR15R16)m-티아졸릴-CO(Aa)t(CCR17R18)n-, -(CR15R16)t-티엔일-CO(CR17R18)n-, -(CR15R16)t-이미다졸릴-CO-(CR17R18)n-, -(CR15R16)t-몰폴리노-CO(Aa)t-(CR17R18)n-, -(CR15R16)t-피페라지노-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -(CR15R16)t-N-메틸피페라진-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -(CR15R16)m-(Aa)t페닐-, -(CR15R16)m-(Aa)t퓨릴-, -(CR15R16)m-옥사졸릴(Aa)t-, -(CR15R16)m-티아졸릴(Aa)t-, -(CR15R16)m-티엔일-(Aa)t-, -(CR15R16)m-이미다졸릴(Aa)t-, -(CR15R16)m-몰폴리노-(Aa)t-, -(CR15R16)m-피페라지노-(Aa)t-, -(CR15R16)m-N-메틸피페라지노-(Aa)t-, -K(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n(OCH2CH2)t-, -K(CR15R16)m(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -K(Aa)r-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)t-, -K(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-, -K(CR15R16)m-(CR17=CR18)(CR19R20)n(Aa)t(OCH2CH2)r, -K(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(Aa)t(NR21CO)(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m(OCO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m(CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m(NR21CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m-(OCO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K-(CR15R16)m(CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-, -K(CR15R16)m-페닐-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -K-(CR15R16)m-퓨릴-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -K(CR15R16)m-옥사졸릴-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -K(CR15R16)m-티아졸릴-CO(Aa)t-(CR17R18)n-, -K(CR15R16)t-티엔일-CO(CR17R18)n-, -K(CR15R16)t이미다졸릴-CO-(CR17R18)n-, -K(CR5R6)t몰폴리노-CO(Aa)t-(CR17R18)n-, -K(CR15R16)t-피페라지노-CO(Aa)t-(CR17R18)n-, -K(CR15R16)t-N-메틸피페라진-CO(Aa)t(CR17R18)n-, -K(CR15R16)m-(Aa)t페닐, -K-(CR15R16)m-(Aa)t퓨릴-, -K(CR15R16)m-옥사졸릴-(Aa)t-, -K(CR15R16)m-티아졸릴(Aa)t-, -K(CR15R16)m-티엔일-(Aa)t-, -K(CR15R16)m-이미다졸릴(Aa)t-, -K(CR15R16)m-몰폴리노(Aa)t-, -K(CR15R16)m-피페라지노(Aa)tG, -K(CR5R6)m-N-메틸-피페라지노(Aa)t-(식 중, m, Aa, m, n, R13, R14 및 R15는 상기에 기재된 바와 같고; t 및 r은 독립적으로 0 내지 100이며; R16, R17, R18, R19 및 R20은 H; 할라이드; C1~C8의 알킬 또는 헤테로알킬, C2~C8의 아릴, 알켄일, 알킨일, 에터, 에스터, 아민 또는 아마이드, C3~C8의 아릴로부터 독립적으로 선택되되, 이들은 하나 이상의 할라이드, CN, NR12R12', CF3, OR12, 아릴, 헤테로사이클, S(O)R12, SO2R12, -CO2H, -SO3H, -OR12, -CO2R12, -CONR12, -PO2R12R13, -PO3H 또는 P(O)R12R12'R13에 의해서 선택적으로 치환되고; K는 NR12, -SS-, -C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)O-, -C=NH-O-, -C=N-NH-, -C(=O)NH-NH-, O, S, Se, B, Het(C3-C12를 갖는 복소환식 또는 헤테로방향족 고리임); 또는 동일하거나 상이한 1 내지 20개의 아미노산을 함유하는 펩타이드임);
    화학식 (I)의 괄호 안은 튜불리신 유사체이되, R1, R2 , R3 및 R4는 독립적으로 선형 또는 분지형 C1-C8의 알킬, 알킬 알코올; C2-C8의 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬 에터, 알킬 카복실레이트, 알킬 아민, 알킬 에스터, 알킬 아마이드; C3-C8의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐이거나; 2개의 R, 즉, R1R2, R3R4, R5R6, 또는 R12R13은 함께 3 내지 7원의 탄소환식, 사이클로알킬, 복소환식, 헤테로사이클로알킬, 방향족 또는 헤테로방향족 고리 시스템을 형성하며; Y는 N 또는 C이며; 또한, R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 존재하지 않을 수 있고;
    R5 , R6, R8 및 R10은 H 및 선형 또는 분지형 C1-C4의 알킬 또는 C2-C4의 헤테로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
    R7은 H, R14 또는 -R14C(=O)X1R15; -R14X1R15로부터 선택되되; X1은 O, S, S-S, NH 또는 NR14로부터 선택되고;
    R9는 H, -O-, -OR14, -OC(=O)R14-, -OC(=O)NHR14-, -OC(=O)NR14R15-, -OC(=O) R14SSR15-, OP(=O)(OR14)- 또는 OR14OP(=O)(OR15)이며;
    R11은 H, R14, -R14C(=O)R16, -R14C(=O)X2R16, -R14X2R16, -R14C(=O)X2이되, X2는 -O-, -S-, -NH-, -NHS(O2), -NHS(O), -N(R14)-, -O-R14-, -S-R14-, -S(=O)-R14- 또는 -NHR14-이고;
    R12는 H, R14, -O-, -S-, -N-, =N-, =NNH-, -OH, -SH, -NH2, =NH, =NNH2, -NH(R14), -OR14, -C(O)O-, -C(O)OR16-, -COR16, -COOR14-, C(O)NH-, C(O)NH2, C(O)NHR14, -SR14, -S(=O)R14, -P(=O)(OR16)2, -OP(=O)(OR16)2, -CH2OP(=O)(OR16)2, -SO2R16이며;
    R13은 선형 또는 분지형 C1-C10의 알킬, 알킬산, 알킬 아마이드, 알킬 아민; 또는 C2-C10의 헤테로알킬; 또는 C3-C10의 Ar이고, Ar은 4개 내지 10개의 탄소 원자, 바람직하게는 4개 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 1개 또는 수개의 고리로 구성된 방향족 또는 헤테로 방향족을 지칭하고, 헤테로 방향족기의 용어는 헤테로 원자에 의해서 대체된 1개 또는 수개의 탄소 원자, 바람직하게는 O, N, Si, Se, P 또는 S, 보다 바람직하게는 O, S, N에 의해서 대체된 1개, 2개 또는 3개의 탄소 원자를 갖는 방향족기를 지칭하고, 용어 아릴 또는 Ar은 또한 방향족기를 지칭하되, 1개 또는 수개의 H 원자는 R17, F, Cl, Br, I, OR16, SR16, NR16R17, N=NR16, N= R16, NR16 R17, NO2, SOR16R17, SO2R16, SO3R16 , OSO3R16, PR16R17, POR16R17, PO2R16R17, OP(O)(OR17)2, OCH2OP(O)(OR17)2, OC(O)OP(O)(OR17)2, PO(OR16)(OR17), OP(O)(OR17)OP(O)(OR17)2, OC(O)R17 또는 OC(O)NHR17에 의해서 독립적으로 대체될 수 있고;
    R14 및 R15는 독립적으로 H; 선형 또는 분지형 C1-C8의 알킬; C2-C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬, 복소환식, 탄소환식; C3-C8의 아릴, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐이며;
    R14가 2가인 경우, R14는 1개 내지 4개의 아미노산 단위 또는 (CH2CH2O)r(r은 0 내지 12의 범위의 정수임) 또는 C4-C12의 글리코사이드 또는 C1-C8의 카복실산의 추가 작용기에 추가로 연결되고;
    R16은 H, OH, R14 또는 1개 내지 4개의 아미노산 단위이며;
    R17은 H, 선형 또는 분지형 C1-C8의 알킬; C2-C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬, 복소환식; C3-C8의 아릴, 탄소환식, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 알킬카보닐 또는 C4-C12의 글리코사이드 또는 약제학적 염임];
    상기 제형 중의 적합한 완충제는 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 탄산, 타타르산, 석신산, 아세트산 또는 프탈산의 나트륨, 칼륨, 암모늄 또는 트라이하이드록시에틸아미노염; Tris, 트로메타민 염산염, 황산염 또는 인산염 완충액을 포함하고, 또한, 아미노산 양이온 성분이 또한 완충제로서 또한 사용될 수 있고, 상기 아미노산 성분은 아르기닌, 글리신, 글리실글리신 및 히스티딘을 포함하며, 아르기닌 완충액은 아르기닌 아세테이트, 아르기닌 클로라이드, 아르기닌 포스페이트, 아르기닌 설페이트, 아르기닌 석신에이트를 포함하고, 히스티딘 완충액은 히스티딘 클로라이드-아르기닌 클로라이드, 히스티딘 아세테이트-아르기닌 아세테이트, 히스티딘 포스페이트-아르기닌 포스페이트, 히스티딘 설페이트-아르기닌 설페이트, 히스티딘 석신에이트-아르기닌 석신에이트를 포함하고, 상기 완충액의 제형은 4.5 내지 pH 8.5, 바람직하게는 약 4.5 내지 약 6.5, 보다 바람직하게는 약 5.0 내지 약 6.2의 pH를 가지며, 상기 완충액 중의 상기 유기산염의 농도는 약 10mM 내지 약 500mM이며;
    상기 폴리올은 프럭토스, 만노스, 말토스, 락토스, 아라비노스, 자일로스, 리보스, 람노스, 갈락토스, 글루코스, 수크로스, 트레할로스, 소보스, 멜레지토스, 라피노스, 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 말티톨, 락티톨, 에리트리톨, 트레이톨, 솔비톨, 글리세롤 또는 L-글루코네이트 및 이들의 금속염으로부터 선택되고;
    선택적으로 상기 제형 중의 계면활성제는 폴리솔베이트(폴리솔베이트 20, 폴리솔베이트 40, 폴리솔베이트 65, 폴리솔베이트 80, 폴리솔베이트 81, 폴리솔베이트 85); 폴록사머(폴록사머 188, 폴리(에틸렌 옥사이드)-폴리(프로필렌 옥사이드), 폴록사머 407 또는 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜 등 포함); 트리톤; 소듐 도데실 설페이트(SDS); 소듐 라우렐 설페이트; 소듐 옥틸 글리코사이드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일-, 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사코신; 리놀레일-, 미리스틸-, 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코카미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 아이소스테아르아미도프로필-베타인; 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 아이소스테아르아미도프로필-다이메틸아민; 소듐 메틸 코코일-, 또는 다이소듐 메틸 올레일-타우레이트; 도데실 베타인, 도데실 다이메틸아민 옥사이드, 코카미도프로필 베타인 및 코코 암포 글리시네이트; 및 아이소스테아릴 에틸이미도늄 에토설페이트); 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜, 및 에틸렌과 프로필렌 글리콜의 공중합체로부터 선택되고;
    선택적으로 상기 제형 중의 "보존제"는 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤즈알코늄 클로라이드(알킬기가 장쇄 화합물인 알킬벤질다이메틸염화암모늄의 혼합물) 및 벤즈에토늄 클로라이드페놀, 부틸 알코올, 벤질 알코올, 알킬 파라벤, 예컨대, 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레소르시놀, 사이클로헥산올, 3-펜탄올, 및 m-크레졸로부터 선택되며;
    상기 제형에서 벌크 물질 또는 등장제 또는 삼투압 조절제로서 적합한 유리 아미노산은 아르기닌, 시스틴, 글리신, 라이신, 히스티딘, 오르니틴, 아이소류신, 류신, 알라닌, 글리신, 글루탐산 또는 아스파트산 중 하나 이상으로부터 선택되며;
    상기 제형 중의 항산화제는 메티오닌, 글루타티온, 시스테인, 시스틴 또는 아스코르브산으로부터 선택적으로 선택될 수 있고;
    상기 제형은 EDTA, EGTA로부터 선택된 금속 킬레이팅제를 선택적으로 포함할 수 있으며;
    상기 최종 제형은 HCl, H2SO4, 아세트산, H3PO4, 시트르산, NaOH, KOH, NH4OH, 에탄올아민, 다이에탄올아민 또는 트라이에탄올 아민, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산삼나트륨, 트로메타민으로부터 선택된 완충액 조정제를 사용하여 바람직한 pH로 조정되고
    등장제는 상기 제형을 갖는 최종 주입 용액의 약 250 내지 350mOsm의 삼투압을 유지시키기 위해서 만니톨, 솔비톨, 아세트산나트륨, 염화칼륨, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산삼나트륨 또는 NaCl로부터 선택되는, 동결건조 전 액체 조성물 또는 제형화된 동결건조 고체 또는 상기 동결건조 고체로부터의 재구성된 제형.
  2. 하기 특정 화학식 (II)를 갖는, 제1항에 따른 화학식 (I)의 튜불리신 유사체와 세포-결합제의 접합체 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체:
    Figure pct00321

    식 중, T，L, n, m, Y, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R8, R10, R13 , R14, R15, R16 및 R17은 화학식 (I)에서와 동일하게 정의되고;
    R7은 H, R14 또는 -R14C(=O)X1R15; -R14X1R15로부터 선택되고; X1은 O, S, S-S, NH 또는 NR14로부터 선택되며;
    R9는 H, -OH, -OR14, -OC(=O)R14, -OC(=O)NHR14, -OC(=O)NR14R15, -OC(=O) R14SSR15, OP(=O)(OR14)2 또는 OR14OP(=O)(OR15)이고;
    R11은 H, R14, -R14C(=O)R16, -R14C(=O)X2R16, -R14X2R16, -R14C(=O)X2이되, X2는 -O-, -S-, -NH-, -NHS(O2), -N(R14)-, -O-R14-, -S-R14-, -S(=O)-R14- 또는 -NHR14-이며;
    R12는 H, R14, -O-, -S-, -N-, =N-, =NNH-, -OH, -SH, -NH2, =NH, =NNH2, -NH(R14), -OR14, -C(O)O-, -C(O)OR16-, -COR16, -COOR14-, C(O)NH-, C(O)NH2, C(O)NHR14, -SR14, -S(=O)R14, -P(=O)(OR16)2, -OP(=O)(OR16)2, -CH2OP(=O)(OR16)2, -SO2R16이다.
  3. 하기 화학식 (III)을 갖는 제1항에 따른 튜불리신 유사체의 접합체 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체;
    Figure pct00322

    식 중, T, L, m, Y, R1, R2 , R3 , R4, R5 , R6 , R8 , R9 , R10 , R11 , R12 , R13 및 n은 화학식 (I) 및 (II)에서와 동일하게 정의되고;
    R7은 -R14- 또는 -R14C(=O)X1R15- 또는 -R14X1R15-로부터 독립적으로 선택되되, R14 및 R15는 독립적으로 선형 또는 분지형 C1~C8의 알킬, 헤테로알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일; C3~C8의 아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아르알킬 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐이고; X1은 O, S, S-S, NH 또는 NR14로부터 선택된다.
  4. 하기 화학식 (IV)를 갖는 제1항에 따른 튜불리신 유사체의 접합체 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체:
    Figure pct00323

    식 중, T, L, m, R1, R2 , R3 , R4, R5 , R6 , R7 , R8 , R10 , R11 , R12 , R13 및 n은 화학식 (II)에서와 동일하게 정의되며;
    R9는 독립적으로 H, -O-, -OR14-, -OC(=O)R14-, -OC(=O)NHR14-, -OC(=O)NR14R15-, -OC(=O)R14SSR15-, -OP(=O)(OR14)O-이되, R14, R15는 독립적으로 H, C1~C8의 알킬, 헤테로알킬; C3~C8의 아릴, 헤테로아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 알킬카보닐 또는 약제학적 염이다.
  5. 하기 화학식 (V)를 갖는 제1항에 따른 튜불리신 유사체의 접합체 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체:
    Figure pct00324

    식 중, T, L, m, Y, R1, R2 , R3 , R4 , R5 , R6 , R7 , R8 , R9 , R10 , R12 , R13 및 n은 화학식 (II)에서와 동일하게 정의되고;
    R11은 -R14-, -R14C(=O)R17-, -R14C(=O)X2R17-, -R14X2R17-, - R14C(=O)X2-이되, R17은 독립적으로 H, OH, C1~C8의 알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬; C3~C8의 아릴, 아릴렌, 복소환식, 탄소환식, 헤테로사이클로알킬; 또는 아미노산, 또는 2개의 아미노산 단위이며; X2는 -O-, -S-, -NH-, -NHS(O2)-, -NHS(O)-, -N(R14)-, -O-R14-, -S-R14-, -S(=O)-R14- 또는 -NHR14-이되; R14는 H, C1~C8의 알킬, 헤테로알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일; C3~C8의 아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 알킬카보닐이다.
  6. 하기 화학식 (VI)을 갖는 제1항에 따른 튜불리신 유사체의 접합체 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체:
    Figure pct00325

    식 중, T, L, m, Y, R1, R2 , R3 , R4 , R5 , R6 , R7 , R8 , R9 , R11 , R13 및 n은 화학식 (II)에서와 동일하게 정의되고;
    R12는 독립적으로 R14, -O-, -S-, -NH-, =N-, =NNH-, -N(R14)-, -OR14-, C(O)O-, C(O)NH-, C(O)NR14-, -SR14-, -S(=O)R14-, -NHR14-, -CH2OP(=O)(OR15)-, -P(=O)(OR15), -OP(=O)(OR15)O-, -SO2R14이되, R14 , R15는 독립적으로 C1~C8의 알킬, 헤테로알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일; C3~C8의 아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐이다.
  7. 하기 화학식 (VII)을 갖는 제1항에 따른 튜불리신 유사체의 접합체 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체:
    Figure pct00326

    식 중, T, L, n, m, Y, R1, R1', R2, R3, R4, R5, R6, R8, R10, R11 및 R12는 화학식 (II)에서와 동일하게 정의되고;
    R13은 C1~C10의 알킬, 헤테로알킬, 알킬산, 알킬 아마이드, 알킬 아민 또는 Ar이되; Ar은 4개 내지 10개의 탄소 원자, 바람직하게는 4개 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 1개 또는 수개의 고리로 구성된 방향족 또는 헤테로 방향족을 지칭하고, 헤테로 방향족기의 용어는 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 탄소 원자가 O, N, Si, Se, P 또는 S, 바람직하게는 O, S, N에 의해서 대체된 방향족기 상의 1개 또는 수개의 탄소를 지칭하며, 용어 아릴 또는 Ar은 또한 방향족기를 지칭하되, 1개 또는 수개의 H 원자는 R18, F, Cl, Br, I, OR16, SR16, NR16R18, N=NR16, N=R16 , NR16R18 , NO2, SOR16R18, SO2R16, SO3R16 , OSO3R16, PR16R18, POR16R18, PO2R16R18, OPO3R16R18 또는 PO3R16R18에 의해서 독립적으로 대체되고, 식 중, R16, R18은 독립적으로 H, C1~C8의 알킬; C2~C8의 알켄일, 알킨일, 헤테로알킬; C3~C8의 아릴, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아르알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐; 또는 C4~C12 글리코사이드; 또는 약제학적 염이다.
  8. 하기 화학식 II-01 내지 II-73으로 표현되는 구조를 갖는 제1항에 따른 화학식 (I)의 괄호 안의 튜불리신 유사체 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 이들의 동위원소, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체;
    Figure pct00327

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    식 중, R20은 H; C1-C8의 선형 또는 분지형 알킬, 헤테로알킬 또는 아실(-C(O)R17); C2-C8의 선형 또는 분지형 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18); 또는 1 내지 8개 탄소 원자의 카복실레이트, 에스터, 에터 또는 아마이드; 또는 1 내지 8개 아미노산; 또는 화학식 (OCH2CH2)p의 폴리에틸렌옥시 단위 또는 (OCH2CH(CH3))p(식 중, p는 0 내지 약 1000의 정수임)이거나; R20은 존재하지 않고, 산소가 케톤을 형성하고, 또는 이들의 조합이고; R21은 H, C1-C8의 선형 또는 분지형 알킬이고; X, X1, X2 및 X3은 독립적으로 O, S, NH, NHNH, NHR17, CH2이거나 존재하지 않으며; P1은 H, R17, P(O)(OH)2, P(O)(X1R17)2, CH2P(O)(OH)2, S(O2)(X1R17), C6H12O5(글리코사이드), (CH2CH2O)pR17이되 p는 0 내지 100으로부터 선택되고, R17은 상기에 정의되어 있고; 또한 X1P1은 존재하지 않을 수 있으며(함께 H임);
    Z3 및 Z3은 독립적으로 H, OH, NH2, OR17, NHR17, COOH, COOR17, C(O)R17, C(O)NHR17, C(O)NHNHR17, C(O)NH2, R18, OCH2OP(O)(OR18)2, OC(O)OP(O)(OR18)2, OPO(OR18)2, NHPO(OR18)2, OP(O)(OR18)OP(O)(OR18)2, OC(O)R18, OC(O)NHR18, OSO2(OR18), O-(C4-C12-글리코사이드), C1-C8의 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8의 선형 또는 분지형 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이며; R17 및 R18는 독립적으로 H, C1-C8 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8의 선형 또는 분지형 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8선형 또는 분지형의 아릴, Ar-알킬, 복소환식, 탄소환식, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이고; R19는 H, OH, NH2, OSO2(OR18), XCH2OP(O)(OR18)2, XPO(OR18)2, XC(O)OP(O)(OR18)2, XC(O)R18, XC(O)NHR18, C1~C8 알킬 또는 카복실레이트; C2~C8 알켄일, 알킨일, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3~C8 아릴 또는 알킬카보닐; 또는 약제학적 염이며; X는 O, S, NH, NHNH, NHR17 또는 CH2이고; R7은 상기와 동일하게 정의되고；
    Figure pct00380
    는 링커 L에 연결된 부위이다.
  9. 하기 구조를 갖는 제1항에 따른 튜불리신 유사체의 접합체:
    Figure pct00381

    Figure pct00382

    Figure pct00383

    Figure pct00384

    Figure pct00385

    Figure pct00386

    식 중, mAb는 세포-결합제, 바람직하게는 항체이고; n은 1 내지 20이며; p는 0 내지 100이다.
  10. 제9항에 있어서, 하기 구조식으로부터 제조된, 튜불리신 유사체의 접합체:
    Figure pct00387

    Figure pct00388

    Figure pct00389

    Figure pct00390

    Figure pct00391

    Figure pct00392

    Figure pct00393
    .
  11. 제1항 내지 제7항 및 제9항 중 어느 한 항에 따른 세포-결합제로서, 나노바디(VHH(카멜리드 Ig)의 유도체), 도메인 항체(dAb, VH 또는 VL 도메인의 유도체), 이중특이적 T 세포 인게이저(BiTE, 이중특이적 다이아바디), 이중특이적 항체, 삼중특이적 항테, 이중 친화성 재표적화(DART, 이중특이적 다이아바디; 4가 탠덤 항체(TandAb, 이량체화된 이중특이적 다이아바디); 바이파라토프(biparatopic) 항체로부터 선택된 Ig-기반 단백질 스캐폴드 분자; 안티칼린(리포칼린의 유도체), 어드넥틴(제10 FN3(피브로넥틴)), 설계된 안크린 반복 단백질(DARPin)(안크린 반복(AR) 단백질의 유도체), DARPin C9, DARPin Ec4 및 DARPin E69_LZ3_E01, 아비머(도메인 A/저밀도 지질단백질(LDL) 수용체); 하기 LB01 내지 LB54의 구조를 갖는 이의 소분자 자체 또는 단백질, 나노입자, 중합체, 마이셀 또는 지질 상에 코팅된 소분자로부터 선택된 비-Ig-기반 단백질 스캐폴드 분자일 수 있는, 세포-결합제:
    Figure pct00394

    Figure pct00395

    Figure pct00396

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    Figure pct00400

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    Figure pct00402

    Figure pct00403

    식 중,
    Figure pct00404
    는 본 특허의 링커 L을 연결하는 부위이고; X4 및 Y1은 독립적으로 O, NH, NHNH, NR1, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH2, C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1이며; X1은 H, CH2, OH, O, C(O), C(O)NH, C(O)N(R1), R1, NHR1, NR1, C(O)R1 또는 C(O)O이고; X5는 H, CH3, F 또는 Cl이며; M1 및 M2는 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, N(R1R1'R2R3)이고; R1, R1', R2 및 R3은 제1항의 화학식 (I)에 정의된 바와 같다.
  12. 제1항 내지 제7항 및 제9항 중 어느 한 항에 따른 튜불리신 유사체와 세포-결합제의 접합체로서, 상기 세포 결합제는 종양 세포, 바이러스 감염 세포, 미생물 감염 세포, 기생충 감염 세포, 자가면역 질환 세포, 활성화된 종양 세포, 골수 세포, 활성화된 T-세포, 영향을 미치는(affecting) B 세포, 또는 멜라닌세포 또는 하기 항원 또는 수용체 중 임의의 하나를 발현하는 임의의 세포: CD2, CD2R, CD3, CD3gd, CD3e, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD8a, CD8b, CD9, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD12, CD12w, CD13, CD14, CD15, CD15s, CD15u, CD16, CD16a, CD16b, CD17, CDw17, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD30, CD31, CD32, CD33, CD34, CD35, CD36, CD37, CD38, CD39, CD40, CD41, CD42, CD42a, CD42b, CD42c, CD42d, CD43, CD44, CD44R, CD45, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD46, CD47, CD47R, CD48, CD49a, CD49b, CD49c, CD49e, CD49f, CD50, CD51, CD52, CD53, CD54, CD55,CD56, CD57, CD58, CD59, CD60, CD60a, CD60b, CD60c, CD61, CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD64, CD65, CD65s, CD66, CD66a, CD66b, CD66c, CD66d, CD66e, CD66f, CD67, CD68, CD69, CD70, CD71, CD72, CD73, CD74, CD74, CD75, CD75s, CD76, CD77, CD78, CD79, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CDw84, CD85, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD92, CDw92, CD93, CD94, CD95, CD96, CD97, CD98, CD99, CD99R, CD100, CD101, CD102, CD103, CD104, CD105, CD106, CD107, CD107a, CD107b, CD108, CD109, CD110, CD111, CD112, CD113, CDw113, CD114, CD115, CD116, CD117, CD118, CD119, CDw119, CD120a, CD120b, CD121a, CD121b, CDw121b, CD122, CD123, CDw123, CD124, CD125, CDw125, CD126, CD127, CD128, CDw128, CD129, CD130, CD131, CDw131, CD132, CD133, CD134, CD135, CD136, CDw136, CD137, CDw137, CD138, CD139, CD140a, CD140b, CD141, CD142, CD143, CD144, CD145, CDw145, CD146, CD147, CD148, CD149, CD150, CD151, CD152, CD153, CD154, CD155, CD156a, CD156b, CDw156c, CD157, CD158a, CD158b, CD159a, CD159b, CD159c, CD160, CD161, CD162, CD162R, CD163, CD164, CD165, CD166, CD167, CD167a, CD168, CD169, CD170, CD171, CD172a, CD172b, CD172g, CD173, CD174, CD175, CD175s, CD176, CD177, CD178, CD179, CD180, CD181, CD182, CD183, CD184, CD185, CD186, CDw186, CD187, CD188, CD189, CD190, Cd191, CD192, CD193, CD194, CD195, CD196, CD197, CD198, CDw198, CD199, CDw199, CD200, CD200a, CD200b, CD201, CD202, CD202b, CD203, CD203c, CD204, CD205, CD206, CD207, CD208, CD209, CD210, CDw210, CD212, CD213a1, CD213a2, CDw217, CDw218a, CDw218b, CD220, CD221, CD222, CD223, CD224, CD225, CD226, CD227, CD228, CD229, CD230, CD231, CD232, CD233, CD234, CD235a, CD235ab, CD235b, CD236, CD236R, CD238, CD239, CD240, CD240CE, CD240D, CD241, CD242, CD243, CD244, CD245, CD246, CD247, CD248, CD249, CD252, CD253, CD254, CD256, CD257, CD258, CD261, CD262, CD263, CD265, CD266, CD267, CD268, CD269, CD271, CD273, CD274, CD275, CD276 (B7-H3), CD277, CD278, CD279, CD280, CD281, CD282, CD283, CD284, CD289, CD292, CDw293, CD294, CD295, CD296, CD297, CD298, CD299, CD300a, CD300c, CD300e, CD301, CD302, CD303, CD304, CD305, CD306, CD309, CD312, CD314, CD315, CD316, CD317, CD318, CD319, CD320, CD321, CD322, CD324, CDw325, CD326, CDw327, CDw328, CDw329, CD331, CD332, CD333, CD334, CD335, CD336, CD337, CDw338, CD339, CD340, CD341, CD342, CD343, CD344, CD345, CD346, CD347, CD348, CD349, CD350, CD351, CD352, CD353, CD354, CD355, CD356, CD357, CD358, CD359, CD360, CD361, CD362, CD363, CD364, CD365, CD366, CD367, CD368, CD369, CD370, CD371, CD372, CD373, CD374, CD375, CD376, CD377, CD378, CD379, CD381, CD382, CD383, CD384, CD385, CD386, CD387, CD388, CD389, CRIPTO, CRIPTO, CR, CR1, CRGF, CRIPTO, CXCR5, LY64, TDGF1, 4-1BB, APO2, ASLG659, BMPR1B, 4-1BB, 5AC, 5T4(영양아층 당단백질, TPBG, 5T4, Wnt-활성화 저해인자 1 또는 WAIF1), 선암 항원, AGS-5, AGS-22M6, 액티빈 수용체-유사 키나제 1, AFP, AKAP-4, ALK, 알파 인테그린, 알파 v 베타6, 아미노-펩티다제 N, 아밀로이드 베타, 안드로겐 수용체, 안지오포이에틴 2, 안지오포이에틴 3, 아넥신 A1, 탄저균 독소 예방 항원, 항-트랜스페린 수용체, AOC3(VAP-1), B7-H3, 바실루스 안트라시스 안트랙스(Bacillus anthracis anthrax), BAFF(B-세포 활성화 인자), BCMA, B-림프종 세포, 브크라블(bcrabl), 봄베신(Bombesin), BORIS, C5, C242 항원, CA125(탄수화물 항원 125, MUC16), CA-IX(또는 CAIX, 탄산 탈수효소 9), CALLA, CanAg, 카니스 루프스 파밀리아리스(Canis lupus familiaris) IL31, 탄산 탈수효소 IX, 심장 마이오신, CCL11(C-C 모티프 케모카인 11), CCR4(C-C 케모카인 수용체 타입 4), CCR5, CD3E(엡실론), CEA(암배아 항원), CEACAM3, CEACAM5(암배아 항원), CFD(인자 D), Ch4D5, 콜레시스토키닌 2(CCK2R), CLDN18(클라우딘-18), CLDN18.1(클라우딘-18.1), CLDN18.2(클라우딘-18.2), 클럼핑(Clumping) 인자 A, cMet, CRIPTO, FCSF1R(집락 자극 인자 1 수용체), CSF2(집락 자극 인자 2, 과립구 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF)), CSP4, CTLA4(세포독성 T-림프구 연관 단백질 4), CTAA16.88 종양 항원, CXCR4, C-X-C 케모카인 수용체 타입 4, 환식 ADP 리보스 가수분해효소, 사이클린(Cyclin) B1, CYP1B1, 사이토메갈로바이러스, 사이토메갈로바이러스 당단백질 B, 다비가트란(Dabigatran), DLL3(델타-유사-리간드 3), DLL4(델타-유사-리간드 4), DPP4(다이펩티딜-펩티다제 4), DR5(사멸 수용체 5), 이. 콜라이 시가(shiga) 독소 타입-1, 이. 콜라이 시가 독소 타입-2, ED-B, EGFL7(EGF-유사 도메인-함유 단백질 7), EGFR, EGFRII, EGFRvIII, 엔도글린, 엔도텔린 B 수용체, 엔도톡신, EpCAM(상피 세포 접착 분자), EphA2, 에피시알린, ERBB2(표피 성장 인자 수용체 2), ERBB3, ERG(TMPRSS2 ETS 융합 유전자), 에쉐리키아 콜라이(Escherichia coli), ETV6-AML, FAP(섬유모세포 활성화 단백질 알파), 섬유모세포 표면 항원, FCGR1, 알파-페토프로테인, 피브린 II, 베타 쇄, 피브리노넥틴 엑스트라 도메인-B, FOLR(엽산염 수용체), 엽산염 수용체 알파, 엽산염 가수분해효소, 호흡기 융합 바이러스의 포스-관련(Fos-related) 항원 1F 단백질, 프리즐드(Frizzled) 수용체, 푸코실 GM1, GD2 강글리오사이드, G-28(세포 표면 항원 당지질), GD3 이디오타입, GloboH, 글리피칸 3, N-글리콜릴뉴라민산, GM3, GMCSF 수용체 α-쇄, 성장 분화 인자, GP100, GPNMB(막관통 당단백질 NMB), GUCY2C(구아닐레이트 고리화효소 2C, 구아닐릴 고리화효소 C(GC-C), 장내 구아닐레이트 고리화효소, 구아닐레이트 고리화효소-C 수용체, 열-안정성 엔테로톡신 수용체(hSTAR)), 열 충격 단백질, 헤마글루티닌, B형 간염 표면 항원, B형 간염 바이러스, HER1(인간 표피 성장 인자 수용체 1), HER2, HER2/neu, HER3(ERBB-3), IgG4, HGF/SF(간세포 성장 인자/산란 인자), HHGFR, HIV-1, 히스톤 복합체, HLA-DR(인간 백혈구 항원), HLA-DR10, HLA-DRB, HMWMAA, 인간 융모성 성선 자극 호르몬, HNGF, 인간 산란 인자 수용체 키나제, HPV E6/E7, Hsp90, hTERT, ICAM-1(세포간 접착 분자 1), 이디오타입, IGF1R(IGF-1, 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체), IGHE, IFN-γ, 인플루엔자 헤마글루티닌, IgE, IgE Fc 영역, IGHE, 인터류킨(IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-6R, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-17A, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, 또는 IL-28 포함), IL31RA, ILGF2(인슐린-유사 성장 인자 2), 인테그린(α4, αIIbβ3, αvβ3, α4β7, α5β1, α6β4, α7β7, αllβ3, α5β5, αvβ5), 인터페론 감마-유도된 단백질, ITGA2, ITGB2, KIR2D, 카파 Ig, LCK, Le, 레구마인, 루이스-Y 항원, LFA-1(림프구 기능-연관 항원 1, CD11a), LHRH, LINGO-1, 리포테이코산, LIV1A, LMP2, LTA, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE A1, MAGE A3, MAGE 4, MART1, MCP-1, MIF(대식세포 이동 저해 인자, 또는 글리코실화-저해 인자(GIF)), MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A 구성원 1), MSLN(메소텔린), MUC1(뮤신 1, 세포 표면 연관된(MUC1) 또는 다형성 상피 뮤신(PEM)), MUC1-KLH, MUC16(CA125), MCP1(단핵구 화학주성 단백질 1), MelanA/MART1,ML-IAP, MPG, MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A), MYCN, 미엘린-연관 당단백질, 미오스타틴, NA17, NARP-1, NCA-90(과립구 항원), 넥틴-4(ASG-22ME), NGF, 신경 세포자멸-조절 프로테이나제 1, NOGO-A, 노치 수용체, 뉴클레오린, Neu 종양유전자 산물, NY-BR-1, NY-ESO-1, OX-40, OxLDL(산화된 저밀도 지질단백질), OY-TES1, P21, p53 비돌연변이체, P97, Page4, PAP, 항-(N-글리콜릴뉴라민산)의 파라토프, PAX3, PAX5, PCSK9, PDCD1(PD-1, 세포 예정사 단백질 1), PDGF-Rα(알파형 혈소판-유래 성장 인자 수용체), PDGFR-β, PDL-1, PLAC1, PLAP-유사 고환 알칼리 포스파타제, 혈소판-유래 성장 인자 수용체 베타, 포스페이트-나트륨 공동 수용체, PMEL 17, 폴리시알산, 프로테이나제 3(PR1), 전립선 암종, PS(포스파티딜세린), 전립선 암종 세포, 슈도모나스 녹농균, PSMA, PSA, PSCA, 광견병 바이러스 당단백질, RHD(Rh 폴리펩타이드 1(RhPI)), 레서스(Rhesus) 인자, RANKL, RhoC, Ras 돌연변이체, RGS5, ROBO4, 호흡기 융합 바이러스, RON, ROR1, 육종 전위 파단점(Sarcoma translocation breakpoint), SART3, 스클레로스틴, SLAMF7(SLAM 패밀리 구성원 7), 셀렉틴 P, SDC1(신데칸 1), sLe(a), 소마토메딘 C, SIP(스핑고신-1-포스페이트), 소마토스타틴, 정자 단백질 17, SSX2, STEAP1(전립선의 6-막관통 상피 항원 1), STEAP2, STn, TAG-72(종양 연관 당단백질 72), 서바이빈, T-세포 수용체, T 세포 막관통 단백질, TEM1(종양 내피 마커 1), TENB2, 테나신 C(TN-C), TGF-α, TGF-β(형질전환 성장 인자 베타), TGF-β1, TGF-β2(형질전환 성장 인자-베타 2), 타이(Tie)(CD202b), 타이2, TIM-1(CDX-014), Tn, TNF, TNF-α, TNFRSF8, TNFRSF10B (종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 10B), TNFRSF-13B(종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 13B), TPBG(영양아층 당단백질), TRAIL-R1(종양 괴사 세포사멸 유도 리간드 수용체 1), TRAILR2(사멸 수용체 5(DR5)), 종양-연관 칼슘 신호 변환기 2, MUC1의 종양 특이적 글리코실화, TWEAK 수용체, TYRP1(당단백질 75), TRP-1(Trop1), TRP-2(Trop2), 타이로시나제, VCAM-1, VEGF, VEGF-A, VEGF-2, VEGFR-1, VEGFR2, 또는 비멘틴, WT1, XAGE 1; 또는 임의의 인슐린 성장 인자 수용체 또는 임의의 표피 성장 인자 수용체를 발현하는 세포에 대해 표적화할 수 있는, 튜불리신 유사체와 세포-결합제의 접합체.
  13. 제12항에 있어서, 상기 종양 세포는 림프종 세포, 골수종 세포, 신장 세포, 유방암 세포, 전립선암 세포, 난소암 세포, 결장직장암 세포, 위암 세포, 편평세포암 세포, 소세포 폐암 세포, 비소세포 폐암 세포, 고환암 세포, 악성 세포, 또는 조절되지 않는 신속한 속도로 성장 및 분화되어 암을 유발하는 임의의 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 튜불리신 유사체와 세포-결합제의 접합체.
  14. 암 또는 자가면역 질환 또는 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한, 치료적 유효량의 제1항 내지 제9항 및 제9항 중 어느 한 항의 접합체 화합물 및 이들 접합체의 약제학적으로 허용 가능한 염, 담체, 희석제 또는 부형제 또는 조합물을 포함하는, 약제학적 조성물.
  15. 제1항에 있어서, 상기 제형 중의 주성분으로서 1% 내지 95중량%의 화학식 (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) 또는 (VII)의 접합체, 0.0% 내지 15.0%의 폴리올; 0.0% 내지 0.5%의 1종 이상의 계면활성제; 0.0% 내지 10%의 1종 이상의 아미노산, 0.0% 내지 5%의 보존제 및 0.0% 내지 10%의 pH 4.5 내지 8.5로 조정하기 위한 완충제 염, 또는 상기 제형 중의 주성분으로서 1% 내지 95중량%의 화학식 (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) 또는 (VII)의 접합체, 0.0% 내지 15.0%의 폴리올; 0.0% 내지 0.5%의 1종 이상의 계면활성제; 0.0% 내지 10%의 1종 이상의 아미노산, 0.0% 내지 5%의 보존제 및 0.0% 내지 10%의, pH 4.5 내지 8.5로 조정하기 위한 완충제 염 및 0.0% 내지 30.0%의, 환자에게 투여하기 위해서 재구성된 후 삼투압을 약 250 내지 350mOSm으로 조정하기 위한 1종 이상의 등장제를 포함하는 것을 추가로 특징으로 하고,
    상기 폴리올은 프럭토스, 만노스, 말토스, 락토스, 아라비노스, 자일로스, 리보스, 람노스, 갈락토스, 글루코스, 수크로스, 트레할로스, 소보스, 멜레지토스, 라피노스, 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 말티톨, 락티톨, 에리트리톨, 트레이톨, 솔비톨, 글리세롤 또는 L-글루코네이트 및 이들의 금속염으로부터 선택되고;
    상기 계면활성제는 폴리솔베이트 20, 폴리솔베이트 40, 폴리솔베이트 65, 폴리솔베이트 80, 폴리솔베이트 81 또는 폴리솔베이트 85, 폴록사머, 폴리(에틸렌 옥사이드)-폴리(프로필렌 옥사이드) 또는 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜; 트리톤; 소듐 도데실 설페이트(SDS); 소듐 라우렐 설페이트; 소듐 옥틸 글리코사이드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일-, 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사코신; 리놀레일-, 미리스틸-, 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코카미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 아이소스테아르아미도프로필-베타인(라우로아미도프로필); 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 아이소스테아르아미도프로필-다이메틸아민; 소듐 메틸 코코일-, 또는 다이소듐 메틸 올레일-타우레이트; 도데실 베타인, 도데실 다이메틸아민 옥사이드, 코카미도프로필 베타인 및 코코 암포 글리시네이트; 또는 아이소스테아릴 에틸이미도늄 에토설페이트; 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜 및 에틸렌과 프로필렌 글리콜의 공중합체로부터 선택되고;
    상기 보존제는 벤질 알코올, 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 페놀, 부틸 알코올, 알킬 파라벤, 예컨대, 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레소르시놀, 사이클로헥산올, 3-펜탄올, 또는 m-크레졸로부터 선택되며;
    상기 아미노산은 아르기닌, 시스테인, 글리신, 라이신, 히스티딘, 오르니틴, 아이소류신, 류신, 알라닌, 글리신, 글루탐산 또는 아스파트산으로부터 선택되고;
    상기 완충제 염은 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 탄산, 타타르산, 석신산, 아세트산 또는 프탈산의 나트륨, 칼륨, 암모늄 또는 트라이하이드록시에틸아미노염; Tris 또는 트로메타민 염산염, 인산염 또는 황산염; 음이온성 아세테이트, 클로라이드, 포스페이트, 설페이트 또는 석시네이트염을 갖는 아르기닌, 글리신, 글리실글리신 또는 히스티딘으로부터 선택되며;
    상기 등장제는 만니톨, 솔비톨 또는 아세트산나트륨, 염화칼륨, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산삼나트륨 또는 염화나트륨으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  16. 제1항에 있어서, 상기 제형 중의 주성분으로서 10% 내지 85중량%의 화학식 (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) 또는 (VII)의 접합체, 0.0% 내지 10.0%의 수크로스 또는 트레할로스로부터 선택된 폴리올; 0.1% ~0.25%의 폴리솔베이트 20 또는 폴리솔베이트 80으로부터 선택된 계면활성제; 0.0% 내지 8.0%의 아르기닌, 히스티딘, 오르니틴, 글리신 또는 알라닌으로부터 선택된 1종 이상의 아미노산; 0.0% 내지 5%의 벤질 알코올로부터 선택된 보존제; 및 1% 내지 10%의, pH 5.0 내지 6.5로 조정하기 위한 시트르산나트륨 또는 시트르산 일수화물로부터 선택된 완충제 염을 포함하는 것을 추가로 특징으로 하는, 약제학적 조성물.
  17. 제1항, 제15항 및 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 액체 또는 동결건조 고체의 형태로, 바이알, 병, 사전 충전 주사기 또는 사전 충전 자동 주입 주사기에 보유되는, 약제학적 조성물.
  18. 시험관내, 생체내 또는 생체외 세포 사멸 활성도를 갖는 제1항 내지 제7항, 제9항, 제15항 및 제16항 중 어느 한 항에 따른 접합체.
  19. 제1항 내지 제7항, 제9항, 제15항 및 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 암 또는 자가면역 질환 또는 감염성 질환의 상승작용적 치료 또는 예방을 위해서 화학치료제, 방사선 요법, 면역치료제, 자가면역 장애 치료제, 항감염제 또는 다른 접합체로부터 선택된 상승작용제와 동시에 투여되는, 약제학적 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 상승작용제는 하기 작용제 중 1종 이상으로부터 선택되는, 약제학적 조성물:
    (1) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학 치료제:
    a) 알킬화제: 질소 머스타드: 클로람부실, 클로르나파진, 사이클로포스파마이드, 다카바진, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 만노머스틴, 미토브로니톨, 멜팔란, 미토락톨, 피포브로만, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 티오테파, 트로포스파마이드, 우라실 머스타드; CC-1065 및 아데젤레신, 카젤레신 및 비젤레신 또는 이의 합성 유사체; 듀오카마이신 이의 합성 유사체, KW-2189, CBI-TMI 또는 CBI 이량체; 벤조다이아제핀 이량체 또는 피롤로벤조다이아제핀(PBD) 이량체, 또는 토마이마이신 이량체, 인돌리노벤조다이아제핀 이량체, 이미다조벤조티아다이아제핀 이량체 또는 옥사졸리디노벤조다이아제핀의 이량체; 나이트로소유레아: 카무스틴, 로무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 니무스틴, 라니무스틴 포함; 알킬설폰에이트: 부설판, 트레오설판, 임프로설판 및 피포설판 포함; 트라이아젠 또는 다카바진; 백금 함유 화합물: 카보플라틴, 시스플라틴 및 옥살리플라틴 포함; 아지리딘, 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파, 또는 우레도파; 알트레타민, 트라이에틸렌멜라민, 트라이에틸렌포스포아마이드, 트라이에틸렌티오포스포아마이드 및 트라이메틸올로멜라민을 비롯한 에틸렌이민 및 메틸라멜라민으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    b) 식물 알칼로이드: 빈카 알칼로이드: 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈 및 나벨빈을 포함함; 탁소이드(Taxoid): 파클리탁셀, 도세탁솔 및 이들의 유사체, DM1, DM2, DM3, DM4, DM5, DM6, DM7, 메이탄신 및 안사미토신 및 이들의 유사체를 포함하는 메이탄시노이드, 크립토파이신(크립토파이신 1 및 크립토파이신 8로 이루어진 군을 포함함)을 포함함; 에포틸론, 엘레우테로빈, 디스코더몰리드, 브리오스타틴, 돌로스타틴, 아우리스타틴(auristatin), 튜불리신, 세팔로스타틴; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰지스타틴으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    c) DNA 토포이소머라제 저해제: 에피포도필린스: 9-아미노캄프토테신, 캄프토테신, 크리나톨, 다우노마이신, 에토포사이드, 에토포사이드 포스페이트, 이리노테칸, 미토산트론, 노반트론, 레티노산(또는 레티놀), 테니포사이드, 토포테칸, 9-나이트로캄토테신 또는 RFS 2000을 포함함; 미토마이신 및 이들의 유사체로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    d) 항대사제: {[항-엽산염: (DHFR 저해제: 메토트렉세이트, 트라이메트렉세이트, 데노프테린, 프테로프테린, 아미노프테린(4-아미노프테르 산) 또는 엽산 유사체 포함); IMP 탈수소효소 저해제: (마이코페놀산, 티아조퓨린, 리바비린, EICAR 포함); 리보뉴클레오타이드 환원효소 저해제: (하이드록시유레아, 데페록사민 포함)]; [피리미딘 유사체: 우라실 유사체: (안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카페시타빈(Xeloda), 카모퍼, 시타라빈, 다이데옥시 우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 5-플루오로우라실, 플록스우리딘, 래티트렉세드(Tomudex) 포함); 사이토신 유사체: (시타라빈, 사이토신 아라비노사이드, 플루다라빈 포함); 퓨린 유사체: (아자티오프린, 플루다라빈, 메르캅토퓨린, 티아민프린, 티오구아닌 포함)]; 엽산 보충제, 프롤린 산}으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    e) 호르몬 요법: 수용체 길항제: [항-에스트로겐: (메제스트롤, 랄록시펜, 타목시펜 포함); LHRH 효능제: (고스크르클린(goscrclin), 류프롤라이드 아세테이트 포함); 항-안드로겐: (비칼루타마이드, 플루타마이드, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 고세렐린, 류프롤라이드, 메피티오스탄, 닐루타마이드, 테스토락톤, 트릴로스탄 및 기타 안드로겐 저해제 포함)]; 레티노이드/델토이드: [비타민 D3 유사체: (CB 1093, EB 1089, KH 1060, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤 포함); 광역학 요법: (베르트포르핀, 프탈로시아닌, 광민감제 Pc4, 데메톡시하이포크렐린 A 포함); 사이토카인: (인터페론-알파, 인터페론-감마, 종양 괴사 인자(TNF), TNF 도메인을 함유하는 인간 단백질 포함)]로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    f) 키나제 저해제: BIBW 2992(항-EGFR/Erb2), 이마티닙, 제피티닙, 페갑타닙, 소라페닙, 다사티닙, 수니티닙, 에를로티닙, 닐로티닙, 라파티닙, 액시티닙, 파조파닙, 반데타닙, E7080(항-VEGFR2), 무브리티닙, 포나티닙(AP24534), 바페티닙(INNO-406), 보수티닙(SKI-606)，카보잔티닙, 비스모데집, 이니파립, 룩솔리티닙, CYT387, 악시티닙, 티보자닙, 소라페닙, 베바시주맙, 세툭시맙, 트라스투주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 이스피네십으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    g) 폴리(ADP-리보스) 중합효소(PARP) 저해제: 올라파립, 니라파립, 이니파립, 탈라조파립, 벨리파립, CEP 9722(세팔론사(Cephalon)), E7016(에이자이사(Eisai)), BGB-290(베이젠사(BeiGene)) 또는 3-아미노벤즈아마이드로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    h) 항생제: 에네다이인 항생제(칼리케아미신, 칼리케아미신 γ1, δ1, α1 또는 β1; 다이네미신 A 및 데옥시다이네미신을 비롯한 다이네미신; 에스페라미신, 케다르시딘, C-1027, 마두로펩틴 또는 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 크로모프로테인 에네다이인 항생제 발색단으로 이루어진 군으로부터 선택됨), 아클라시노마이신, 액티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린; 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-다이아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 모폴리노-독소루비신, 사이아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에리불린, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 니토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 폿퍼로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투버시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    i) 폴리케타이드(아세토게닌), 불라타신 및 불라타시논, 겜시타빈, 에폭소미신 및 카필조밉, 보르테조밉, 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 토세도스타트, 지브레스타트, PLX4032, STA-9090, 스티무박스, 알로벡틴-7, 엑세게바(Xegeva), 프로벤지, 에르보이(Yervoy), 단백지질화(Isoprenylation) 저해제 및 로바스타틴, 도파민성 신경독 및 1-메틸-4-페닐피리디늄 이온, 세포 사이클 저해제(스타우로스포린으로부터 선택됨), 악티노마이신(악티노마이신 D, 닥티노마이신 포함), 아마니틴, 블레오마이신(블레오마이신 A2, 블레오마이신 B2, 페플로마이신 포함), 안트라사이클린(다우노루비신, 독소루비신(아드리아마이신), 이다루비신, 에피루비신, 피라루비신, 조루비신, 엠톡산트론, MDR 저해제 또는 베라파밀, Ca2+ ATPase 저해제 또는 탑시가르긴, 히스톤 데아세틸라제 저해제(보리노스타트, 로미뎁신, 파노비노스타트, 발프로산, 모세티노스타트(MGCD0103), 벨리노스타트, PCT-24781, 엔티노스타트, SB939, 레스미노스타트, 지비노스타트, AR-42, CUDC-101, 설포라판, 트리초스타틴 A 포함); 탑시가르긴, 셀레콕시브, 글리타존, 에피갈로카테킨 갈레이트, 다이설피람, 살리노스포라마이드 A; 아미노글루트티미드, 미토탄, 트릴로스탄으로 이루어진 군으로부터 선택된 항-아드레날; 아세글라톤; 알도포스파마이드 글리코사이드; 아미노레불린산; 암사크린; 아라비노사이드, 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 에플로니틴(DFMO), 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트, 에토글루시드; 갈륨 나이트레이트, 가사이토신, 하이드록시유레아; 이반드로네이트, 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나멧; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸하이드라자이드; 프로카바진; PSK®; 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트라이아지쿠온; 2,2',2"-트라이클로로트라이에틸아민; 트리초테센(T-2 톡신, 버루카린 A, 로리딘 A 및 안구이딘으로 이루어진 군 포함); 우레탄, siRNA, 안티센스 약물;
    (2) 항-자가면역 질환제: 사이클로스포린, 사이클로스포린 A, 아미노카프로 산, 아자티오프린, 브로모크립틴, 클로람부실, 클로로퀸, 사이클로포스파마이드, 코르티코스테로이드(암시노나이드, 베타메타손, 부데소나이드, 하이드로코르티손, 플루니솔리드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루코톨론 다나졸, 덱사메타손, 트라이암시놀론 아세토나이드, 베클로메타손 다이프로피오네이트로 이루어진 군 포함), DHEA, 에나너셉트, 하이드록시클로로퀸, 인플릭시맙, 메록시캄, 메토트렉세이트, 모페틸, 마이코페닐레이트, 프레드니손, 시롤리무스, 타크롤리무스;
    (3) 하기 a) 내지 u)를 포함하는 항-감염성 질환제:
    a) 아미노글리코사이드: 아미카신, 아스트로미신, 젠타미신(네틸미신, 시소미신, 이세파미신), 하이그로마이신 B, 카나마이신(아미카신, 아르베카신, 베카나마이신, 디베카신, 토브라마이신), 네오마이신(프라마이세틴, 파로모마이신, 리보스타마이신), 네틸미신, 스펙티노마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다미신;
    b) 암페니콜: 아지다페니콜, 클로람페니콜, 플로페니콜, 티암페니콜;
    c) 안사마이신: 젤다나마이신, 헤르비마이신;
    d) 카바페넴: 비아페넴, 도리페넴, 에르타페넴, 이미페넴, 실라스타틴, 메로페넴, 파니페넴;
    e) 세펨: 카바세펨(로라카르베프), 세파세트릴, 세파클로, 세프라딘, 세파드록실, 세팔로늄, 세팔로리딘, 세팔로틴 또는 세팔로씬, 세팔렉신, 세팔로글리신, 세파만돌, 세파피린, 세파트리진, 세파자플루, 세파제돈, 세파졸린, 세프부페라존, 세프카펜, 세프달록심, 세페핌, 세프미녹스, 세폭시틴, 세프프로질, 세프록사딘, 세프테졸, 세푸록심, 세픽심, 세프디니어, 세프디토렌, 세페핌, 세페타메트, 세프메녹심, 세포디짐, 세포니시드, 세포페라존, 세포라나이드, 세포탁심, 세포티암, 세포조프란, 세팔렉신, 세프피미졸, 세프피라마이드, 세프피롬, 세프포독심, 세프프로질, 세프퀴놈, 세프술로딘, 세프타지딤, 세프테람, 세프티부텐, 세프티올렌, 세프티족심, 세프토비프롤, 세프트리악손, 세푸록심, 세푸조남, 세파마이신(세폭시틴, 세폭테탄, 세프메타졸), 옥사세펨(플로목세프, 라타목세프);
    f) 글리코펩타이드: 블레오마이신, 반코마이신(오리타반신, 텔라반신), 테이코플라닌(달바반신), 라모플라닌;
    g) 글리실사이클린: 티게사이클린;
    h) β-락타마제 저해제: 페남(설박탐, 타조박탐), 클라밤(클라불란 산)
    i) 린코사마이드: 클린다마이신, 린코마이신;
    j) 리포펩타이드: 답토마이신, A54145, 칼슘-의존 항체(CDA);
    k) 마크롤리드: 아지트로마이신, 세트로마이신, 클라리트로마이신, 디리스트로마이신, 에리트로마이신, 플루리트로마이신, 요사마이신, 케톨리드(텔리트로마이신, 세트로마이신), 미데카마이신, 미오카마이신, 올레안도마이신, 리파마이신(리팜피신, 리팜핀, 리파부틴, 리파펩틴), 로키타마이신, 록시트로마이신, 스펙티노마이신, 스피라마이신, 타크롤리무스(FK506), 트롤레안도마이신, 텔리트로마이신;
    l) 모노박탐: 아즈트레오남, 티게모남;
    m) 옥사졸리디논: 리네졸리드;
    n) 페니실린: 아목시실린, 암피실린, 피밤피실린, 헤타실린, 바캄피실린, 메탐피실린, 탈람피실린, 아지도실린, 아즐로실린, 벤질페니실린, 벤자틴 벤질페니실린, 벤자틴 페녹시메틸페니실린, 클로메토실린, 프로카인 벤질페니실린, 카르베니실린(카린다실린), 클록사실린, 디클록사실린, 에피실린, 플루클록사실린, 메실리남(피브메실리남), 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페나메실린, 페니실린, 페네티실린, 페녹시메틸페니실린, 피페라실린, 프로피실린, 설베니실린, 테모실린, 티카르실린;
    o) 폴리펩타이드: 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B;
    p) 퀴놀론: 알라트로플록사신, 발로플록사신，시프로플록사신, 클리나플록사신, 다노플록사신, 디플록사신, 에녹사신, 엔로플록사신, 플로신, 가레녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 그레파플록사신, 카노 트로바플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 마보플록사신, 목시플록사신, 나디플록사신, 노르플록사신, 오르비플록사신, 오플록사신, 페플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 시타플록사신, 스파플록사신, 테마플록사신, 토수폴록사신, 트로바플록사신;
    q) 스트렙토그라민: 프리스티나마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴;
    r) 설폰아마이드: 마페나이드, 프론토실, 설파세타마이드, 설파메티졸, 설파닐이미드, 설파살라진, 설프아이속사졸, 트라이메토프림, 트라이메토프림-설파메톡사졸(코-트리목사졸);
    s) 스테로이드 항균제: 푸시드산으로부터 선택됨;
    t) 테트라사이클린: 독시사이클린, 클로르테트라사이클린, 클로모사이클린, 데메클로사이클린, 라임사이클린, 메클로사이클린, 메타사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 페니메피사이클린, 롤리테트라사이클린, 테트라사이클린, 글리실사이클린(티게사이클린 포함);
    u) 기타 항생제: 안노나신, 아스페나민, 박토프레놀 저해제(바시트라신), DADAL/AR 저해제(사이클로세린), 딕티오스타틴, 디스코더몰리드, 엘레우테로빈, 에포틸론, 에탐부톨, 에토포사이드, 파로페넴, 푸시드산, 푸라졸리돈, 이소니아자이드, 라울리말리드, 메트로니다졸, 무피로신, 마이코락톤, NAM 합성 저해제(포스포마이신), 나이트로푸란토인, 파클리탁셀, 플래텐시마이신, 피라진아마이드, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 리팜피신(리팜핀), 타조박탐 티니다졸, 우바리신으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    (4) 하기 a) 내지 h)를 포함하는 항-바이러스성 약물:
    a) 유입/융합 저해제： 아프라비록, 마라비록, 비크리비록, gp41(엔푸비어타이드), PRO 140, CD4(이발리주납);
    b) 인테그라제 저해제: 랄테그라비어, 엘비테그라비어, 글로보이드난 A;
    c) 성숙 저해제: 베비리마트, 비베콘;
    d) 뉴라미니다제 저해제: 오셀타미비어, 자나미비어, 페라미비어;
    e) 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드: 아바카비어, 아시클로비어, 아데포비어, 암독소비어, 아프리시타빈, 브리부딘, 시도포비어, 클레부딘, 덱셀부시타빈, 디다노신(ddI), 엘부시타빈, 엠트리시타빈(FTC), 엔테카비어, 팜사이클로비어, 플루오로우라실(5-FU), 3'-플루오로-치환된 2',3'-다이데옥시뉴클레오사이드 유사체(3'-플루오로-2',3'-다이데옥시티미딘(FLT) 및 3'-플루오로-2',3'-다이데옥시구아노신(FLG)로 이루어진 군 포함), 포미비르센, 간시클로비어, 이독스우리딘, 라미부딘(3TC), 1-뉴클레오사이드(β-1-티미딘 및 β-1,2'-데옥시사이티딘으로 이루어진 군 포함), 펜시클로비어, 라시비어, 리바비린, 스탬피딘, 스타부딘(d4T), 타리바비린(비라미딘), 텔비부딘, 테노포비어, 트리플루리딘, 발라시클로비어, 발간시클로비어, 잘시타빈(ddC), 지도부딘(AZT);
    f) 비-뉴클레오사이드: 아만타딘, 아테비리딘, 캡라비린, 다이아릴피리미딘(에트라비린, 릴피비린), 델라비르딘, 도코사놀, 에미비린, 에파비렌즈, 포스카르넷(포스포노폼산), 이미퀴모드, 인터페론 알파, 로비라이드, 로데노신, 메티사존, 네비라핀, NOV-205, 페그인터페론 알파, 포도필로톡신, 리팜피신, 리만타딘, 레시퀴모드(R-848), 트로만타딘;
    g) 프로테아제 저해제: 암프레나비어, 아타자나비어, 보세프레비어, 다루나비어, 포삼프레나비어, 인디나비어, 로피나비어, 넬피나비어, 플레코나릴, 리토나비어, 사퀴나비어, 텔라프레비어(VX-950), 팁라나비어;
    h) 기타 유형의 항-바이러스 약물: 아브자임, 아르비돌, 칼라놀라이드 a, 세라게닌, 사이아노비린-n, 다이아릴피리미딘, 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG), 포스카르넷, 그리피쓰신, 타리바비린(비라미딘), 하이드록시유레아, KP-1461, 밀테포신, 플레코나릴, 포트만테우(portmanteau) 저해제, 리바비린, 셀리시클립;
    (5) 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At 또는 213Bi로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있는 방사선요법을 위한 방사성동위원소;
    (6) 튜불리신 유사체, 메이탄시노이드 유사체, 탁사노이드(탁산) 유사체, CC-1065 유사체, 다우노루비신 및 독소루비신 화합물, 아마톡신 유사체, 벤조다이아제핀 이량체(예를 들어, 피롤로벤조다이아제핀(PBD), 토마이마이신, 안트라마이신, 인돌리노벤조다이아제핀, 이미다조벤조티아다이아제핀, 또는 옥사졸리디노벤조다이아제핀의 이량체), 칼리케아미신 및 에네다이인 항생제 화합물, 악티노마이신, 아자세린, 블레오마이신, 에피루비신, 타목시펜, 이다루비신, 돌라스타틴, 아우리스타틴(예를 들어, 모노메틸 아우리스타틴 E, MMAE, MMAF, 아우리스타틴 PYE, 아우리스타틴 TP, 아우리스타틴 2-AQ, 6-AQ, EB (AEB) 및 EFP(AEFP)), 듀오카마이신, 젤다나마이신, 메토트렉세이트, 티오테파, 빈데신, 빈크리스틴, 헤미아스테를린, 나줌아마이드, 마이크로기닌, 라디오수민, 알테로박틴, 마이크로스클레로더민, 테오넬라마이드, 에스페라미신, PNU-159682; 및 이들의 유사체 및 유도체의 세포독성제를 갖는 또 다른 세포-결합 분자-약물 접합체;
    (7) 다른 면역요법 약물: 이미퀴모드, 인터페론(α 또는 β), 과립구 집락-자극 인자, 사이토카인, 인터류킨(IL-1 내지 IL-35), 항체(트라스투주맙, 퍼투주맙, 베바시주맙, 세툭시맙, 파니투무맙, 인플릭시맙, 아달리무맙, 바실릭시맙, 다클리주맙, 오말리주맙(PD-1 또는 PD-L1), 단백질-결합 약물(아브락산), 트라스투주맙-DM1, 트라스투주맙, 데룩스테칸(DS-8201a), 이노투주맙 오조가미신, 브렌툭시맙 베도틴, 사시투주맙 고비테칸, 글렘바투무맙 베도틴, 로보투주맙 메르탄신, AN-152 LMB2, TP-38, VB4-845, 칸투주맙 메르탄신, AVE9633, SAR3419, CAT-8015, IMGN388, 미르베툭시맙 소라브탄신(IMGN853), 엔포투맙 베도틴, 밀라투주맙-독소루비신, SGN-75(항-CD70), 항-Her3-엑세탄, 항-Trop2-엑세탄, 항-CD79b-MMAE, 항-Her2-MMAE, 항-trop2-MMAE, 항-Her2-MMAF, 항-trop2-MMAF, 항-CD22-칼리케아미신 유도체, 항-CD22-MMAE, 항-Her2-아우리스타틴 유도체, 항-Muc1-아우리스타틴 유도체, 항-cMet- 아우리스타틴 유도체, 또는 항-클라우딘 18.2-아우리스타틴 유도체로부터 선택된 약물과 접합된 항체;
    (8) 이들 약물 중 임의의 것의 약제학적으로 허용 가능한 염, 산 또는 유도체.
  21. 제20항에 있어서, 상기 상승작용제는 아바타셉트, 아베마시클립, 아비라테론 아세테이트, 아브락산, 아세트아미노펜/하이드로코돈, 아칼라브루티닙, 아두카누맙, 아달리무맙, ADXS31-142, ADXS-HER2, 아파티닙 다이말레에이트, 알데스류킨, 알렉티닙, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 알펠리십, 아도트라스투주맙 엠탄신, 암페타민/덱스트로암페타민, 아날로티닙, 아나스트로졸, 아팔루타마이드, 아리피프라졸, 안트라사이클린, 아리피프라졸, 아타자나비어, 아테졸리주맙, 아토바스타틴, 아벨루맙, 악시캅타젠 실로루셀(Axicabtagene ciloleucel), 악시티닙, 벨리노스타트, BCG(생), 베바시주맙, 벡사로텐, 블리나투모맙, 보르테조밉, 보수티닙, 브렌툭시맙 베도틴, 브리가티닙, 부데소나이드, 부데소나이드/포르모테롤, 부프레노핀, 카바지탁셀, 카보잔티닙, 캠렐리주맙, 캡마티닙, 카페시타빈, 카필조밉, 키메라 항원 수용체-조작 T(CAR-T) 세포, 셀레콕시브, 세리티닙, 세툭시맙, 시다마이드, 사이클로스포린, 시나칼세트, 크리조티닙, 코비메티닙, 코센틱스(Cosentyx), 크리조티닙, CTL019, 다비가트란, 다브라페닙, 다카바진, 다클리주맙, 다코미티닙, 다코모티닙, 댑토마이신, 다라투무맙, 다르베포에틴 알파, 다롤루타마이드, 다루나비어, 다사티닙, 데니류킨 디프티톡스, 데노수맙, 데파코테, 덱슬란소프라졸, 덱스메틸페니데이트, 덱사메타손, 디그니캡 쿨링 시스템, 디누툭시맙, 독시사이클린, 둘록세틴, 두벨리십, 두발루맙, 엘로투주맙, 엠트리시타빈/릴피비린/테노포비어 디소프록실 퓨마레이트, 엠트리시트빈/테노포비어/에파비렌즈, 엔포투납 베도틴-ejfv, 엔옥사파린, 엔사티닙, 엔트렉티닙, 엔자루타마이드, 에포에틴 알파, 에를로티닙, 에르다피티닙, 에소메프라졸, 에스조피클론, 에타너셉트, 에베롤리무스, 엑세메스탄, 에버롤리무스, 엑세나타이드 ER, 에제티미베, 에제티미베/심바스타틴, fam-트라스투주맙 데룩스테칸, 페노피브레이트, 필그라스팀, 핀골리모드, 플루마티닙, 플루티카손 프로피오네이트, 플루티카손/살메테롤, 풀베스트란트, 가지바, 게피티닙, 글라티라머, 고세렐린 아세테이트, 이코티닙, 이마티닙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이브루티닙, 이델라리십, 이포스파마이드, 인플릭시맙, 이미퀴모드, ImmuCyst, 이뮤노 BCG, 이니파립, 인슐린 아스파르트, 인슐린 데테미어, 인슐린 글라르긴, 인슐린 리스프로, 인터페론 알파, 인터페론 알파-1b, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 인터페론 베타, 인터페론 베타 1a, 인터페론 베타 1b, 인터페론 감마-1a, 라파티닙, 이필리무맙, 이프라트로피움 브로마이드/살부타몰, 익사조밉, 카누마, 란레오타이드 아세테이트, 레날리도마이드, 레날리오마이드, 렌바티닙 메실레이트, 레트로졸, 레보티록신, 레보티록신, 리도카인, 리네졸리드, 리라글루타이드, 리스덱삼페타민, LN-144, 로라티닙, 메만틴, 메틸페니데이트, 메토프롤롤, 메킨니스트, 머리시타빈/릴피비린/테노포비어, 모달피닐, 모메타손, 미시댁(Mycidac)-C, 네시투무맙, 네라티닙, 닐로티닙, 니라파립, 니볼루맙, 오파투무맙, 오비누투주맙, 올라파립, 올메사탄, 올메사탄/하이드로클로로티아자이드, 오말리주맙, 오메가-3 지방산 에틸 에스터, 온코린, 오셀타미비어, 오시머티닙, 옥시코돈, 팔보시클립, 팔리비주맙, 파니투무맙 파노비노스타트, 파조파닙, 펨브롤리주맙, 펙시다티닙 염산염, PD-1 항체, PD-L1 항체, 페메트렉세드, 페투주맙, 뉴모코칼 접합체 백신(Pneumococcal conjugate vaccine), 폴라투주맙 베도틴, 포말리도마이드, 프레가발린, 프로스카박스, 프로프라놀올, 퀘티아핀, 라베프라졸, 라듐 223 클로라이드, 랄록시펜, 랄테그라비어, 라무시루맙, 라니비주맙, 렐루골릭스, 레고라페닙, 리툭시맙, 리바옥사반, 로미뎁신, 로수바스타틴, 룩소리티닙 포스페이트, 살부타몰, 사볼리티닙, 세마글루타이드, 셀리넥소, 세베라머, 실데나필, 실툭시맙, 시풀류셀-T, 시타글립틴, 시타글립틴/메트포민, 솔리페나신, 솔라네주맙, 소니데깁, 소라페닙, 수니티닙, 타크롤리무스, 타크리무스, 타달라필, 타목시펜, 타핀라르, 탈리모진 라헤르파렙벡(Talimogene laherparepvec), 탈라조파립, 텔라프레비어, 탈라조파립, 테모졸로마이드, 템시롤리무스, 테노포비어/엠트리시타빈, 테노포비어 다이아이소프록실 퓨마레이트, 테스토스테론 젤, 탈리도마이드, TICE BCG, 티오트로피움 브로마이드, 티사겐레클류셀(Tisagenlecleucel), 토레미펜, 트라메티닙, 트라스투주맙, 트라스투주맙/하이알루로니다제-oysk, 트라벡테딘(엑테이나시딘(ecteinascidin) 743), 트라메티닙, 트레멜리무맙, 트라이플루리딘/티피라실, 트레티노인, 티슬레리주맙, Uro-BCG, 우스테키누맙, 발사탄, 벨리파립, 반데타닙, 베무라페닙, 베네토클락스, 보리노스타트, 자누브루티닙, 지브-아플리베르셉트, 조스타박스 및 이들의 유사체, 유도체, 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 담체, 희석제 또는 부형제 또는 이들의 조합물 중 하나 또는 몇몇으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
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