CN114213540B - 一组用于髓系肿瘤免疫分型的抗体组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抗体医药领域，尤其是涉及一组用于髓系肿瘤免疫分型的抗体组合物及其应用，所述抗体组合物包括一组22‑24种抗体组合。本发明优化抗体组合和对应抗体的荧光标记组合以及结果判读方法，只需要使用一管22种或24种抗体一管细胞一次上样，既可以全面、高效的对AML及慢性髓系肿瘤进行亚型分型，预判CML及部分重现型遗传学异常AML，并且对MDS诊断具有较高的敏感性。同时可以确定本组合中可用于治疗后微量残留病（MRD）监测的白血病相关的免疫表型（LAIP）。
Description
技术领域
本发明涉及抗体医药领域，尤其是涉及一组用于髓系肿瘤免疫分型的抗体组合物及其应用。
背景技术
急性和慢性髓系肿瘤是血液/淋巴系统肿瘤的一大部分，2017版WHO血液及淋巴系统肿瘤的分类书中对急性髓系肿瘤的分类包括急性髓细胞白血病及和相关的髓系前体细胞肿瘤，见表1，共分为7大类。从WHO的分类中可以看出，对血液/淋巴系统肿瘤的诊断突显了形态/病理（M）、免疫分型（I）、遗传学（C）及基因（M）检测在其中起的重要作用。
在AML的分类中，第一类AML伴重现型遗传学异常，是以细胞遗传学和基因作为最终诊断依据。但其中的部分亚型具有特征性免疫表型，可以大致推测属于哪种基因异常白血病。第二类AML伴MDS相关变化，需要形态或病理确定MDS病态造血特征；第五类髓系肉瘤，是指在骨髓以外形成的肿块，由成熟或不成熟的髓细胞组成，需要通过病理检测组织切片。第四类治疗相关的AML和第六类唐氏综合征相关的髓系增生，首先要确定AML，再结合病史进行诊断。这几类AML都需要免疫分型帮助确定髓系来源及急性分化阶段，在AML诊断的基础上，再结合上述的特性确定最终的MICM诊断。而AML的确定是离不开免疫分型。除去这几类，免疫分型在第四类 AML NOS和第7类BPDCN中起着关键的作用，可以达到根据免疫分型确定诊断目的。
表1. 2017版WHO关于急性髓细胞白血病（AML）和相关的髓系前体细胞肿瘤分类
2017版WHO血液及淋巴系统肿瘤的分类书中将慢性髓系肿瘤分为五大类，见表2。总体来说，免疫分型不是慢性髓系肿瘤诊断的主要依据，多数慢性髓系肿瘤的诊断不需要免疫分型确诊，但可以起到鉴别诊断的目的。
表 2. 2017版WHO关于慢性髓系肿瘤的分类
利用FCM对白血病/淋巴瘤进行免疫分型可以实现如下几层目的：
第一层：确定是否存在肿瘤及是哪类肿瘤。第二层：确定亚型。第三层：确定下一步微量残留病（MRD）检测的标志，寻找白血病相关免疫表型（LAIP）。第四层：筛选治疗靶点相关的标志是否表达。第五层：某些表型与特定基因异常高度相关，这些表型标志的检测，可以预测是否具有哪些基因异常。例如AML伴t(8;21)(q22;q22)；RUNX1-RUNX1T1、APL伴t(15;17)(q22;q12)；PML-RARα基因型白血病。免疫分型APL的提示非常重要，此类患者在疾病初期死亡率很高，需要尽快给予维甲酸或砷剂为基础的化疗，来挽救患者的生命。患者度过早期的危险期后，长期的疗效很好。因此，早期诊断至关重要。而免疫分型和形态学检测是目前白血病诊断方法中出结果最快的方法，基因检测和遗传学检测至少需要2-3周，均晚于免疫分型。因此，免疫分型和形态学检测均提示APL伴t(15;17)(q22;q12)；PML-RARα基因型白血病，临床马上开启针对性化疗，以减少早期死亡率。
目前，临床上要完成上述几项检测的目的，需要检测几十种抗体。2015年中华血液学杂志上介绍了四色抗体组合用于急性白血病免疫分型，其中，对于AML分型需要检测38个抗体共10管。四色共识只针对急性白血病，不包括慢性髓系肿瘤，特别是MDS检测。2012年欧洲Euroflow发布了8色抗体组合用于血液系统恶性肿瘤的免疫表型分析，经过初筛管检测后，进一步分析AML/MDS时使用抗体组合见表3，包括7管8色组合抗体，每管有重复性骨架抗体4个，共检测56个抗体，重复性抗体使用28个，有效抗体数只有32种。
表3. Euroflow用于AML/MDS抗体组合
目前现有抗体组合由于重复使用较多的设门抗体，致使用总体抗体较多，成本高。需要较多管的检测，难以精确分析不同管中所检测抗体之间的关系，影响了对细胞系别、分化阶段及良性和恶性细胞的判断。因此，迫切需要设计一种抗体组合物可以同时对急性和慢性髓系肿瘤进行全面免疫分型、亚型分型、MRD标志和治疗靶点筛查及预测基因分型。本领域技术人员设计上述的抗体组合需要解决的问题很多，包括抗体和荧光素的选择，抗体与荧光素的搭配使用等，以及对本领域技术人员的专业深度以及临床经验要求非常高。
另外，免疫分型在诊断单核细胞白血病（AML-M4/5）往往非常困难，主要是对标本中偏幼稚粒细胞、异常单核细胞及幼稚单核细胞的鉴别比较困难。而对幼稚单核细胞和幼稚粒细胞的鉴别决定患者被诊断为AML-M2还是AML-M4/5。其次，对单核细胞增多的患者，确定单核细胞是成熟还是幼稚，决定着患者属于CMML还是AML-M4。不同疾病治疗方法不同，因此鉴别诊断非常重要。另外在某些MDS的标本中，由于粒细胞脱颗粒，成熟粒细胞在CD45/SSC图中，SSC减小而位于单核细胞的位置上，与单核细胞很难鉴别，严重影响其对结果的判断。因此也迫切需要一种鉴别幼稚单核细胞的方法解决上述技术问题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明目的在于提供一种用于急性髓细胞白血病和相关的髓系前体细胞肿瘤（简称AML）及慢性髓系肿瘤免疫分型的抗体组合物，具体包括22或24种抗体的组合物，主要用于急性和慢性髓系肿瘤亚型分型，微量残留病标志和治疗靶点筛查及预测基因分型，实现对髓系肿瘤进行全面免疫分型。
应用申请号为2021110670743中所记载一管19种抗体组合进行血液肿瘤的初筛（第一步检测），将血液肿瘤划分AML、ALL-T、ALL-B、MPAL、NHL-B、NHL-T、NHL-NK、PCN及慢性髓系疾病9大类，并对AML、ALL-T、ALL-B、MPAL、NHL-B、NHL-T和PCN 7大类肿瘤明确诊断。再结合本申请一管22-24个抗体进行髓系肿瘤诊断（第二步检测），共2管抗体组合即可以对血液肿瘤进行全面免疫分型、亚型分型、MRD标志和治疗靶点筛查及预测基因分型等。
为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：
第一方面，本发明提供三种抗体组合物：第一种抗体组合物包括23色24种抗体，用于髓系肿瘤的免疫分型，所述髓系肿瘤包括AML和慢性髓系肿瘤；第二种抗体组合物包括21色22种抗体，用于急性髓细胞白血病的免疫分型；第三种抗体组合物包括22色22种抗体，用于慢性髓系肿瘤的免疫分型。
优选地，所述三种抗体组合物的抗体种类及配伍的荧光素见表4。
表4 本发明用于髓系肿瘤的抗体组合及配伍的荧光素
优选地，所述抗体均为单克隆抗体。
第二方面，本发明提供了一种用于髓系肿瘤免疫分型的试剂盒，所述试剂盒包括上述任一所述的抗体组合物。
优选地，所述试剂盒还包括红细胞裂解液、缓冲液。
第三方面，本发明提供了一种用于检测髓系肿瘤免疫分型的系统，该系统包括检测部分和分析部分，其中：
检测部分，用于通过1管流式细胞术检测待测样本的试剂，获取样本的检测结果；所述试剂包括上述任一项所述的抗体组合物；
分析部分，用于分析检测部分的检测结果，用于对髓系肿瘤的亚型判断，确定 MRD检测的LAIP标志，及筛查治疗靶点及预判基因分型。
优选地，所述系统用于检测AML和/或慢性髓系肿瘤免疫分型时，包括如下步骤：
利用所述的抗体组合物对待测样本进行处理后制备流式细胞上机样品；进行流式细胞上机检测；
其中流式细胞上机检测时按照以下方式设门：
设置R1活细胞门，去除碎片和死细胞，R1门内使用CD45/SSC设定淋巴细胞门，粒细胞门，单核细胞门，幼稚细胞门，有核红细胞门；分析不同细胞门内抗原表达情况；
对AML分析包括髓系幼稚细胞、粒细胞和单核细胞免疫表型分析;
对慢性髓系肿瘤分析包括髓系幼稚细胞、粒细胞、单核细胞和有核红细胞免疫表型分析。
优选地，所述分析粒细胞、单核细胞免疫表型包括使用CXCR4/CD36二维点图分析鉴别幼稚单核细胞与成熟单核细胞和/或鉴别幼稚单核细胞与幼稚粒细胞。优选地，幼稚单核细胞CXCR4的表达强于成熟单核细胞及粒细胞，同时CD36从阴性到阳性分布。
具体的，利用本发明的抗体组合中包含的单核细胞相关标志如CXCR4、CD33、CD64、CD14、CD300e、CD36、HLA-DR、CD15、CD11c、CD4、CD45和 SSC 分析单核细胞的成熟度，其中利用CXCR4和CD36二维图，对单核细胞分化轨迹进行确定，并帮助判断幼稚单核细胞。
第四方面，本发明提供了所述的抗体组合物或所述的试剂盒或所述的系统在制备髓系肿瘤诊断、靶向治疗靶点筛查及微量残留病监测标志的筛查的产品中的应用。
本发明中所述髓系肿瘤包括：急性髓细胞白血病和相关的髓系前体细胞肿瘤和慢性髓系肿瘤。
进一步地，所述的急性髓细胞白血病和相关的髓系前体细胞肿瘤，主要包括如下7类：1.AML伴重现性的遗传学异常；2.AML伴MDS相关的变化；3.治疗相关的髓系肿瘤；4. AML非特指型(NOS)；5.髓细胞肉瘤；6.唐氏综合征相关的髓系增生；7.原始浆细胞样的树突细胞肿瘤（BPDCN）。
本发明所述的抗体组合物用于对这7类疾病中MRD标志的筛查，对第1类和第4类AML 亚型的分型，对部分AML伴重现性的遗传学异常，进行基因分型的预判。
进一步地，所述的慢性髓系肿瘤包括：骨髓增殖性肿瘤（MPN）；肥大细胞增多症；伴嗜酸性粒细胞增多和伴基因重排髓系或淋系肿瘤；骨髓增生异常/骨髓增殖性肿瘤（MDS/MPN）；骨髓增生异常综合症（MDS）。
血液肿瘤患者经第一步初步检测后，已经除外急性AML，确定慢性髓系肿瘤，进行慢性髓系肿瘤的亚型分型（表2）。对临床怀疑MPN、MDS的患者，可以做出支持诊断、可疑诊断及不支持诊断三种结论。对CMML和JMML可以判断是否有单核细胞增多及主要是成熟及幼稚单核细胞从而帮助诊断。对MRD标志的筛查多数慢性髓系肿瘤不用免疫分型监测，主要用于MDS患者，原则同AML。治疗靶点和基因表型的筛查，主要集中于对CML BCR-ABL阳性患者，可以选用酪氨酸激酶抑制剂。免疫分型虽然不是此类病的确诊依据，但部分疾病具有典型的免疫表型特点，对诊断有所提示。
第五方面，本发明还提供了一种鉴别幼稚单核细胞与成熟单核细胞和/或幼稚单核细胞与幼粒细胞的分析方法，包括检测待测样本中细胞膜CXCR4/CD36表达分析幼稚单核细胞。
优选地，还包括检测CD33、CD64、CD14、CD300e、HLA-DR、CD15、CD10、CD11b、CD11c、CD4、CD16、CD45和SSC中的一种或两种以上其他单核细胞标志。
在一种具体实施方式中，稚单核细胞CXCR4的表达强于成熟单核细胞及粒细胞，同时CD36从阴性到阳性分布。再结合本发明抗体组合物中其他单核细胞相关的标志，如CD64+CD14-、CD11c+/-CD4+、CD33st+CD15-、CD14-CD300e-及在CD45/SSC 图中位于单核细胞R5下方，确定为幼稚单核细胞，进而将CXCR4+CD36dim+/-幼稚单核细胞与CXCR4-CD36-早幼粒细胞及CXCR4+（弱于幼单）CD36st+成熟单核细胞鉴别。
基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：
利用一组22-24种抗体组合，用于髓系肿瘤免疫分型的检测。与血液肿瘤的初筛管配套使用时，只需要2管抗体组合的检测，既可以全面的对血液恶性肿瘤进行免疫分型。目前临床普遍采用8-10色抗体组合对AML、CML和MDS进行传统流式细胞仪免疫分型检测，每种疾病均需要检测4-5管抗体组合（36-40种抗体），而本发明仅使用1管抗体组合（22-24个抗体）即可对急性或慢性髓系肿瘤进行亚型分型，因此减少了对标本量的需求及操作数量，减轻了劳动强度，节省了操作时间，同时减少了设门抗体的重复应用，增加了有效抗体的使用数量，能同时观察22-24种抗体是否同时表达，分析所述抗体相互组合的表型关系，增加对髓系肿瘤诊断的准确性、特异性和敏感性。另外本发明还公开了使用CXCR4/CD36二维图鉴别幼稚单核细胞与成熟单核细胞及幼粒细胞的分析方法；上述方法用于AMLM4/5与其他AML及与CMML鉴别。在MDS中粒细胞颗粒性减低时，往往与单核细胞很难鉴别，此方法也可用于单核细胞与异常粒细胞鉴别。
附图说明
图1显示利用CXCR4/CD36设定幼稚单核细胞的方法。如图1中A所示一例AML-M5患者结果；如图1中B所示一例CMML患者结果。
图2显示MDS设门分析方法。标本为一例正常骨髓。
图3显示一例AML-M2 检测结果。
图4显示一例AML-M5检测结果。
图5显示一例AML伴嗜碱粒细胞分化检测结果。
图6显示一例AML伴NPM1突变阳性。
图7显示一例AML-M2伴t(8;21)的检测结果。
图8显示一例APL伴t(15;17)的检测结果。
图9显示一例CMML检测结果。
图10显示一例MDS检测结果。
图11显示一例CML检测结果。
图12显示一例MPN-ET检测结果。
图13显示一例MDS/MPN UC的检测结果。
在图3-图9中，每个图均包括A图和B图, A图为使用本发明抗体组合检测结果；B图为前期初筛检测结果。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所有的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
本发明采用流式细胞术对临床患者的骨髓液、胸腹水、外周血等标本进行免疫表型分析，对经初筛确定为AML及慢性髓系肿瘤可能的标本进行第二步全面的免疫分型检测。所述初筛使用的19种抗体组合记载在申请号为2021110670743专利中。
实施例1 试剂的配制
本发明提供了三种适应症的抗体组合：
第一种抗体组合，共24种抗体23色荧光素，按照表4中的髓系肿瘤组合配置抗体组合。将上述抗体分别混合装于1个容器内，用于确定为髓系肿瘤（AML和慢性髓系疾病）的所有标本的免疫分型标记。
第二种抗体组合，共22种抗体21色荧光素，按照表4中的AML组合配置抗体组合，不加入抗CD105-SB436，和抗CD10-BV711，其余与髓系肿瘤组相同，分别混合装于1个容器内，用于确定为AML的标本的免疫分型标记。
第三种抗体组合，共22种抗体22色荧光素，按照表4中的慢性髓系肿瘤组合配置抗体组合，不加入抗CD41-FITC和抗CD61-FITC，将抗CD9-PerCP-eF710换为抗CD38-PerCP-eF710，其余与髓系肿瘤组同，分别混合装于1个容器内，用于判定为慢性髓系肿瘤的标本的免疫分型标记。
上述抗体均可直接商业购买获得，本发明实施例的抗体从BD公司，Biolegend、贝克曼、Thermo公司购买。
将上述三种抗体组合分别制备检测髓系疾病、AML和慢性髓系疾病的检测试剂盒。所述试剂盒还包括红细胞溶解液、PBS，所述红细胞溶解液可以自行配置也可以商业购买（如BD公司）。
实施例2 22-24种抗体组合流式细胞分析髓系肿瘤的免疫表型
一、实验主要材料及仪器
1. 材料：10×PBS缓冲液、流式细胞仪专用溶血素（BD公司）；
2. 仪器：CytekNL-3000型号全光谱流式细胞仪，配备405nm，488nm、635nm三根激光，38个荧光检测器。台式低速离心机、漩涡混匀器。
二、方法
1. 样本采集：
将取材到的人骨髓液1-3mL立即置于肝素抗凝管并迅速颠倒数次以防止标本凝固，胸腹水、灌洗液等各种细胞，采集后应尽快送往实验室，标本放置于4℃冷藏保存。必须在48小时内检测完成流式细胞术（FCM）检测，按说明书操作。
2. 样本制备过程：
（1）细胞计数：取骨髓10μl加入150μl PBS，混匀，利用迈瑞FCM计数每微升细胞数，根据检测结果，将细胞浓度调整为5~10x10^6/100µl，取50µl-100µl细胞加入流式管中。
（2）抗原染色：
a) 每管分别加入表4中相应荧光素标记的单克隆抗体预混液和骨髓标本充分混匀，室温避光孵育15 min；
b) 溶血：加入1×FACS溶血素2ml，低速涡流混匀，室温避光静置8～10min。300g离心洗涤5min，弃去上清。
c) 洗涤：加入1ml含有0.1% NaN3和1%-2% BSA的PBS洗液，300g离心洗涤5min，弃去上清。加入PBS 200μl悬浮细胞，待上机检测。
（3）上机检测：
a) 确定最适电压和补偿：按照光谱流式细胞仪的常规操作方法设定电压，参照本试剂盒的荧光配色制备单染样本，用于仪器设定。
b) 仪器设置、校正和质控：CytekNL-3000开机预热机器20min以上并上去离子水冲洗，检测内质控品，保证各检测值在控制范围内。调取AL-PANAL上样，采集数据。
c) 上机检测：按照设定好的仪器条件，每管获取5-10万细胞。如不能及时上机检测，则加入0.5ml 1%多聚甲醛，混匀后置于4℃冰箱内保存，24小时内完成检测。
三、数据分析：使用Kluzaa软件分析数据
(一) AML分析
1. 利用FSC/SSC 去除碎片、黏连细胞及死细胞，将活的单个细胞设门R1。
2. 显示R1门细胞，建立CD45/SSC图，根据CD45和SSC的分布不同，淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、有核红细胞和幼稚细胞进行设门并设定不同颜色。淋巴细胞（R2）：CD45最高/SSC最低、单核细胞（R5）：CD45比淋巴细胞低/SSC比淋巴细胞高比粒细胞低、粒细胞（R4）：CD45比单核细胞低/SSC最大、有核红细胞（R6）：CD45阴性/SSC低于淋巴细胞相同、幼稚细胞（R3）：CD45比淋巴细胞低/SSC比淋巴细胞高或相似。正常骨髓中，各群细胞具有正常比例范围：淋巴细胞20-40%，单核细胞2-8%，粒细胞40-60%，有核红细胞2-15%，幼稚细胞低于5%。观察各群细胞比例是否正常，幼稚细胞比例是否增加等。
3. 建立一系列2个抗体的二维点图，主要包括CD34/CD117、CD33/CD117、HLA-DR/CD123、CD13/CD11b、CD13/CD16、CD13/CD15、HLA-DR/CD11b、CD14/CD16、CD14/CD300e、CD36/CXCR4、CD64/CD15、CD64/CD14、CD33/CD15、CD11c/CD4等等。首先选定R1门细胞，观察这些图中抗原的表达。因不同群细胞被标以不同颜色，可以分析不同群细胞抗原表达的情况。在一些髓系肿瘤的标本中，幼稚细胞在CD45/SSC图中界限不清，此时利用CD34/CD117图将CD34+CD117+或CD34-CD117+细胞设门，可以更加清楚对幼稚髓细胞进行设门及分析。
4. 主要分析幼稚细胞、粒细胞和单核细胞门中本发明所述的抗原的表达情况。所述抗原的作用及在正常血细胞上的表达见表5。使用本发明中所述22-24种抗体对AML进行亚型分型的标准，如表6所示。
表5. 抗原的作用及在正常细胞上的表达
CXCR4/CD36用于鉴别幼稚单核细胞与幼稚粒细胞及成熟单核细胞：
有些AML或MDS标本采用常规设门方式如CD45/SSC及CD33/CD15或CD64/CD14不能有效的对单核细胞和粒细胞进行设门，经常粒细胞门中包括幼稚单核细胞，因此本发明使用CXCR4/CD36分析幼稚单核细胞，幼稚单核细胞CXCR4表达强于成熟单核细胞及粒细胞，同时CD36从阴性到阳性分布。再结合本组合中其他单核细胞相关的标志，如CD64+CD14-、CD11c+/-CD4+、CD33st+CD15-、CD14-CD300e-及在CD45/SSC 图中位于单核细胞R5下方，确定为幼稚单核细胞，用于鉴别幼稚单核细胞和幼稚粒细胞（图1）。
早幼粒细胞表型为CD64st+CD33st+CD14-CD300e-CD11c-CD4-，但不表达CXCR4，在CD45/SSC图中，位于R4门中的下缘且SSC比成熟粒细胞大，一些CMML标本中，粒细胞与单核细胞发生相互交叉，利用CD45/SSC和CD64/CD14均不能有效分开单核细胞与早幼粒细胞，因此本发明利用CD36/CXCR4图，将CXCR4-CD36-早幼粒细胞与CXCR4+CD36dim+/-幼稚单核细胞鉴别。用于鉴别诊断AML-M2与AML-M4、AML-M5及CMML。
表6. AML亚型特征
5. 判定LAIP标志：
白血病细胞上异常表达的抗原称为白血病异常免疫表型（LAIP）。LAIP是白血病细胞区别于正常造血细胞的重要特性之一，也是流式细胞术检测微小残留病（MRD）的基础。利用本发明的抗体组合筛查AML和慢性髓系肿瘤患者的异常免疫表型用于MRD监测。
所述LAIP主要包括：
（1）交叉系列抗原表达或跨系抗原表达，如AML细胞是否表达淋系相关抗原：CD19、CD7、CD56、CD5等。（2）早期与晚期抗原同步表达。正常情况下，不同系列不同分化阶段的细胞抗原的表达受基因严格控制，CD34与CD15或CD11b不会同时表达，有先后顺序，但白血病细胞不按照正常顺序表达，因此，CD34+CD15+或CD1b+这些标志即为LAIP。（3）抗原表达强度异常，正常情况每个系列每个阶段细胞抗原表达强度是一致的，AML细胞经常出现CD34、CD117、CD33、CD13、CD38、HLA-DR等抗原表达增强或减低，甚至不表达。
本发明包含的25种抗原均会逐一分析，判定是否为LAIP。
6. 筛查治疗靶点相关的标志，针对AML的靶向药有10余种，其中针对细胞表面抗原表型的药物只有吉妥珠单抗（Gemtuzumab Ozogamicin），是由化疗药物和单克隆抗体（人造免疫蛋白）偶联组成，靶向CD33蛋白质。因此，本发明可以提供CD33抗原的表达异常情况，为临床用药提供指导。
7. 预判基因型，某些表型与特定基因异常高度相关，这些标志的检测，可以预测是否具有哪些基因异常。表6中列举了几种具有典型表型特征的伴重现型遗传学异常的AML，其中，AML伴t(8;21)(q22;q22)；RUNX1-RUNX1T1在形态学和免疫分型上往往表现为AML-M2，免疫表型中幼稚髓细胞往往表达CD34，CD117，CD38和HLA-DR，CD33多弱表达，并且60%左右异常表达B系相关标志CD19和NK相关标志CD56，如果具有这些典型的免疫表型特征，与AML伴t(8;21)(q22;q22)；RUNX1-RUNX1T1这种基因型白血病有90%以上的相关性。对APL伴t(15;17)(q22;q12)；PML-RARα基因型白血病，典型的患者骨髓形态学往往出现早幼稚粒细胞明显增多，细胞具有较多颗粒；免疫分型表现为CD117+幼稚细胞比例明显增多，细胞侧向角光散射（SSC）值较大，最大特点是不表达CD34和HLA-DR，CD33表达较强，同时表达CD9、CD123、CD64（弱），出现此种表型特征往往提示APL伴t(15;17)(q22;q12)；PML-RARα基因型白血病。NPM1突变与APL有很大的相似性，但SSC低及MPO弱表达可以加以鉴别。
（二）MDS分析：
MDS属于慢性髓系肿瘤，因为分析方法复杂，将其单独列于此。设门方法如图2 所示，图2标本为正常骨髓。
1. 去除碎片和死细胞，对各群细胞进行设门，显示各群细胞的比例，具体参照上述AML分析的步骤1-2。
2. 对CD34+细胞设门，利用CD34/SSC和CD34/CD45图，连续设门方法去除非特异细胞，设定CD34+门，分析CD34+细胞门内CD13和HLA-DR的表达。
3. 对CD117+细胞设门：利用CD117/SSC和CD117/CD45图，连续设门方法设定CD117+门，将CD45st+及非特异细胞去掉。分析CD117+细胞CD33/CD13、CD13/HLADR的图形形状，图2中显示CD33与CD13为连续变化过程、CD13与HLADR图形为多群细胞分布，为正常表型。MDS时可出现CD13与CD33图形不连续或细胞集中分布，在CD13与HLADR图中，可以出现HLA-DR-细胞群的增多，为异常表现。
4. 分析粒细胞，利用CD45/SSC、CD33或CD64与CD15连续设门方法，对CD33和CD64弱，CD15强表达的粒细胞进行设门。根据CD13/CD11b、CD10/CD16大致将粒细胞分为li1至li5期，大致相当于早幼粒、中幼粒、晚幼粒、杆状粒和分叶粒细胞。正常骨髓li1+li2<10%。一些MDS可以出现li1+li2细胞比例的增加。图2显示正常粒细胞中CD13/CD11b、CD13/CD16、CD11b/CD16图形形状，CD13/CD16为对勾型。一些MDS时由于CD13,CD11b,CD16表达强度的变化，而出现图形的异常，如图13所示。
5. 分析单核细胞，利用CD45/SSC、CD33或CD64与CD15连续设门方法，对CD33和CD64强表达CD15弱表达的单核细胞进行设门，重点分析幼稚单核细胞比例，方法同AML。
6. 分析有核红细胞的表型，利用CD45/SSC、CD71或CD36连续设门方法对CD71+CD45弱表达或阴性的有核红细胞设门。观察CD71、CD36、CD105及CD117阳性细胞的比例及表达强度，图2和图12中CD71和CD36均较强，为正常表型。MDS时（图10），可以出现CD71、CD36、CD105表达强度减弱及CD105+细胞比例降低（正常>10%）。
7. 分析CD123/HLA-DR图，分析CD123st+HLA-DR+的浆样树突状细胞（pDC）和CD123st+HLA-DR-嗜碱粒细胞比例(正常<1%)。
再结合初筛管的结果做出如下诊断：（1）支持MDS：幼稚髓细胞比例增加>1%，或ogata计分>2分，或幼稚髓细胞表型异常如：CD34+CD38-%增加，或CD34st+/dim+或CD117st+/dim+或CD33st+/dim+和CD13st+/dim+和HLA-DRdim+。（2）怀疑MDS：只出现粒细胞或红细胞异常表现。（3）除外MDS：幼稚髓细胞、粒细胞及红细胞均未见明显异常。所述初筛管诊断分析方法参见申请号为2021110670743专利。
（三）慢性髓系肿瘤分析：
分析方法与MDS相同，利用kaluz分析软件，首先去除碎片，在CD45/SSC点图上设门分析，设定样本中淋巴细胞、单核细胞，粒细胞，有核红细胞、嗜酸细胞及幼稚细胞门并确定其比例。判断各群细胞比例及表型是否异常。再根据临床表现转入如下判断：
1. 慢性粒细胞白血病（CML）：如果粒细胞比例在79-90%，CD34+CD117+%正常或稍微增加，往往在5%以下，粒细胞中CD11b-粒细胞（li1和li2期，如图11所示）比例增加大于10%，CD10+成熟粒细胞比例减低（<40%），CD15弱表达，同时CD10-粒细胞表达CD56增加(>10%)（初筛管），CD123st+HLA-DR-嗜碱和SSC大CD16-CD13+的嗜酸性粒细胞往往增加(分别>1%和>5%)，这种表现，再结合WBC明显增加，甚至脾大，往往提示CML。需要临床进行染色体及基因检查以确诊。
2. 慢性中性粒细胞白血病（CNL），无CML的表型，主要表现为粒细胞比例增高，其中粒细胞主要为CD10+CD16+成熟粒细胞，CD34+CD117+比例正常，其余细胞无明显异常。
3. MPN-血小板增多症（ET），ET患者往往伴血小板明显增加，可以伴WBC轻度增加。在CD45/SSC图和CD34/CD117图中显示各群细胞比例无异常。粒细胞CD11b-偏幼稚细胞比例不高(正常<10%)，可能有CD11b表达稍弱。其余无明显异常。这是MPN-ET患者的特点。
4. MDS/MPN中的慢性粒单核细胞白血病（CMML），对外周血中单核细胞>1x109/L的患者，主要分析骨髓中单核细胞的比例，并注意鉴别是成熟单核细胞还是幼稚单核细胞，方法同AML。以成熟单核细胞增多为主，单核细胞>8%，如果表达CD14、CD300e、CD11b、CD36st，则为成熟单核细胞，其他单核细胞相关标志会呈阳性，HLA-DR、CD11b、CD13甚至CD15可以出现表达强度异常，部分患者还可以表达CD56。粒细胞也可以出现CD11b-细胞比例增加。同时CD34+CD117+%正常或稍微增加，幼稚单核细胞<20%，再结合外周血中单核细胞>1x109/L，可以判断为CMML。
5. 其他：
对骨髓纤维化（MF）患者，可能会出现幼稚细胞表型异常，如CD38dim+，其他细胞异常表现不明显，可以出现嗜碱粒细胞的增加。
肥大细胞分析：CD117st+，表达CD33，CD9。对肥大细胞增多症，本抗体组合可以发现CD117 st+肥大细胞的比例是否增加，及分析CD33、CD9表达是否异常。
嗜碱粒细胞分析：利用HLA-DR-CD123st+对嗜碱粒细胞设门，嗜碱粒细胞SSC较小，CD45弱+，还表达CD9st、CXCR4st、CD13、CD33、CD11b、CD11c，不表达CD15、CD10、CD16、CD64、CD14。本组合可分析其比例（正常<1%）及表型是否异常。
嗜酸粒细胞分析：SSC最大，CD45st+，表达CD33、CD13、CD11b，弱表达CD15，不表达CD16、CD10。嗜酸粒细胞的比例（正常<5%），表型是否异常，是否有幼稚嗜酸细胞。从而帮助判断嗜酸粒细胞的疾病。
四、结果：
利用本发明抗体组合，共检测了103例骨髓样本，均经过初筛管检测，其中27例证明AML，采用AML抗体组合进行检测。其余76例标本初筛检测除外淋巴肿瘤或可疑髓系肿瘤而采用慢性髓系肿瘤抗体组合进行检测。
结果显示，27例AML，检测后分型为：12例AML-M2，10例AML-M4/5，1例AML-嗜碱；4例AML伴重现性遗传学异常：包括1例AML伴NMP1突变，1例AML伴t(8;21)，2例APL伴t(15;17)。44例诊断为慢性髓系肿瘤，包括：15例支持MDS，5例可疑MDS，5例MPN，5例MDS/MPN（包括CMML3例）；6例可疑CML；4例嗜酸粒细胞增多；4例骨髓增生减低。32例标本大致正常。
103例标本均同时进行了常规的8-10色4-8管抗体组合免疫分型检测，2种方法的结果均一致。
对6例初步判断CML ，经基因检查证实6例为CML基因阳性，证实CML诊断。对5例可疑MDS的患者，经骨髓形态，基因及染色体综合检查，证实为MDS。上述结果说明本发明抗体组合物对MDS诊断具有很高的敏感性。
其中，图1显示CXCR4在单核细胞分析中的作用。如图1中A所示为一例AML-M5患者利用CXCR4/CD36鉴别幼稚单核细胞的结果。从CD45/SSC图中显示幼稚（R3）占5.26%，表达CD117。同时显示R5占31. 93%，表达CD64,CD14,CD36,CD300e,CXCR4dim, CD11c,CD4,为成熟单核细胞，比例明显增高。R4占42.28%，如图1中A所示下排选定R4门内细胞，在R4门内利用CXCR4+CD36dim+设门E,比例为23.33%，E门细胞表达CD64和CD4不表达CD14,CD300e。CD36和CD11c比正常单核细胞弱，而CXCR4比正常单核细胞强。E门细胞在CD45/SSC图中位于R5下面，且SSC较低，不似早幼粒细胞。综合以上结果提示为幼稚单核细胞特点，说明R4中包括23.47%的幼稚单核细胞。而仅通过CD45/SSC设门无法鉴别出幼稚单核细胞。结合形态结果，最后诊断为AML-M5。
如图1中B所示为一例CMML结果，从CD45/SSC图中可见单核、粒细胞及幼稚细胞之间界限不清，将其大致分为粒细胞（R4门）和单核细胞（R5门），但从CD33/CD15图中选定显示R4细胞，可见有3.48% CD33st+CD15dim+单核细胞（上排中）。而从CD33/CD15图中选定显示R5细胞，有13.42%细胞CD33+CD15st+粒细胞（下排左）。说明利用CD45/SSC无法清楚对粒细胞和单核细胞设门。利用CD64/CD14图，选定显示R1细胞，对CD64+CD14+/-细胞设门单3,将单3门细胞显示在CXCR4/CD36图中，可以将单3门内细胞分为三群： CD36st+CXCR4+成熟单核细胞,占46.47%；CD36dim+CXCR4+幼稚单核细胞，占26.04%；CD36-CXCR4-细胞占20.36%，此群细胞在CD45/SSC图中CD45dim+SSC较大，提示为早幼粒细胞，判断为CMML。说明此例标本利用CD45/SSC和CD64/CD14均不能很好设门。综上说明，利用CD36/CXCR4结合CD64/CD14、CD14/CD300e、CD11c/CD4等对幼稚单核细胞和早幼粒细胞的分辨能力得到增强，提高了免疫分型对CMML及AML-M4/5的诊断能力。
图3显示一例AML-M2检测结果，前期的初筛结果如图3中B所示，证明此病例为AML，非ALL。进一步，使用本发明抗体组合进行AML亚型分型，结果如图3中A所示，在CD45/SSC图中幼稚粒细胞占37.47%，表达CD117、CD34、CD33弱、CD13,其余抗原均阴性。在CD64/CD14图中，对CD64st+细胞设单核细胞门，单核细胞占5.48%，比例不高，在CXCR4/CD36图示，主要为CD36dim+CXCR4+幼稚单核细胞（O门）只占9.69%，其余均为成熟单核细胞，说明主要为成熟单核细胞。R4占37.17%，主要为幼稚粒细胞>20%，判断为AML-M2。LAIP:CD34+CD117+HLA-DR-。
图4显示一例AML-M5检测结果。前期的初筛结果如图4中B所示，证明此病例为AML，非ALL。进一步，使用本发明抗体组合进行AML亚型分型，如图4中A所示在CD45/SSC图示髓细胞（R4）占70.71%，不能确定是单核细胞还是粒细胞。但从CD64/CD14，HLA-DR/CD123图中，显示CD64st+CD14part+，HLA-DR+，可以判断为单核细胞。再利用CD33/CD15图对CD33+CD15-设门E，占66.18%，从CD36/CXCR4及CD14/CD300e图中，可见此群细胞CXCR4+CD36-/+，CD14部分+CD300e-，可以判断为幼稚单核细胞。同时表达CD64、CD33、HLA-DR、CD11c、CD4st，部分表达CD14、CD15，不表达CD300e，而CD13异常阴性，为表型异常幼稚单核细胞，判断AML-M5。LAIP：CD64+CD33+CD13-HLA-DR+CD56+。
图5显示一例AML伴嗜碱细胞分化的检测结果。前期的初筛结果如图5中B所示，证明此病例为AML，非ALL。进一步，使用本发明抗体组合进行AML亚型分型，如图5中A所示在CD45/SSC图示淋巴细胞占30.17%，单核细胞（R5）占2.96%，粒细胞（R4）占7.77%， 有核红细胞(R6)占5.30%。其余细胞分类不清楚。在CD34/CD117图中设定CD34+CD117+细胞（CD34+门）占21.88%。在CD13/CD11b中设CD13+CD11b- F门以去除CD11b+成熟粒细胞,在CD36/CXCR4中显示F门细胞，设CD36- Z门以去除CD36+单核细胞，在CD117/CD34中选择显示Z门细胞，设CD34-T门以去除CD34+原始粒细胞。在CD64/ HLA-DR图中选择显示T门细胞，将细胞分为三群：CD64+HLA-DR-早期粒细胞（V门）占10.96%；CD64+HLA-DR+单核细胞细胞（D门）占7.19%；CD64-HLA-DR-细胞（碱门），占81.70%，在R1细胞群内分析该群细胞其他抗原的表达，该群细胞表达CD13st、CD123，部分表达CD117、CD34、CXCR4、CD9，其中CD33和CD11b异常阴性,CXCR4和CD9异常表达减弱，其余标志均为阴性，为异常幼稚嗜碱粒细胞，在R1中占30.93%。判断为AML伴嗜碱细胞分化。LAIP：CD34+CD117+CD9part+HLA-DR-。
图6显示一例AML伴NPM1突变的检测结果。前期的初筛结果如图6中B所示，表达CD33，CD56，T，B特异标志阴性，初步诊断为AML，非ALL。进一步使用本发明抗体组合进行AML亚型分型，如图6中A所示在CD45/SSC图示幼稚粒细胞（R3）占88.70%，表达CD117、CD33、CD38，部分表达CD13，CD64，不表达CD34，HLA-DR，其余标志均阴性。CD64st+单核细胞占0.1%，粒细胞占3.11%，比例均减低。判定为AML-M2 伴NPM1突变。后经PCR检测证明为NPM1突变阳性。LAIP：CD117+CD34-HLA-DR-。
图7显示一例AML伴t(8;21)的检测结果。前期的初筛结果如图7中B所示，cMPO+CD33弱表达，部分表达CD19，CD56，少数表达CD79a，CD22阴性，T系特异性标志为阴性，为AML伴CD19，CD56表达，非ALL。进一步使用本发明抗体组合进行AML亚型分型，如图7中A所示在CD34/CD117图示CD34+CD117+幼稚髓细胞(34+门)占33.17%，还表达CD33dim、CD38、HLA-DR、CD13、部分表达CD71，其余标志均阴性。单核细胞占2.62%，比例不高，主要为CD64+CD14+CXCXR4+CD36-CD300e-幼稚单核细胞，但数量较低（比例<20%）。粒细胞（R4）占20.29%,比例减低。因幼稚粒细胞表型为CD33dim+CD19part+CD56part+，CD34+CD117+CD38+HLA-DR+，判定为AML-M2 伴t(8;21)。后经PCR证实为RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性，证实为AML伴t(8;21)(q22;q22)；RUNX1-RUNX1T1。LAIP：CD117+CD34+CD33-CD19part+CD56part+。
图8显示一例APL伴t(15;17)的检测结果。前期的初筛结果如图8中B所示，cMPO+CD33+cCD3-CD56part+CD5-CD7-CD19-CD79a-，为AML，非ALL。如图8中A所示R3占65.91%，SSC较大，表达CD117、CD33、CD13、CD9，部分表达CD64、CD123、CD4、CXCR4, 不表达HLA-DR和CD34，其余标志均阴性，无明显单核细胞和粒细胞。因CD34-HLA-DR-CD33+CD64dim+CD9+SSC大，判断为APL 伴t(15;17)。后经PCR证实为PML-RARα融合基因阳性，证实为APL伴t(15;17)(q22;q12)；PML-RARα。LAIP：CD117+CD34-HLA-DR-CD33+CD9+ CD64dim+SSC大。
图9显示一例CMML检测结果。如图9中B所示为前期的初筛结果，显示单核细胞高（E），CD34+CD117+幼稚髓细胞2.3%，可疑CMML。进一步利用本发明抗体组合进行明确诊断，结果如图9中A所示，在CD45/SSC图示幼稚细胞（R3）与其他组细胞分界不清楚，故在CD34/CD117图中对CD34+CD117+幼稚粒细胞设门（C），占3.16%。在CD64/CD15图中对CD64st+CD15dim+/-单核细胞设门mon，占21.56%，比例增高，表达CD33强、CD64、CD11c、CD4、CD14、CD300e、CD36、HLA-DR、CD11b，从CD36/CXCR4图中选择显示mon门细胞，可见CD36dim/-CXCR4st+幼稚单核细胞（O）占16.3%，其余单核细胞均为成熟单核细胞。CD123st+HLA-DR-嗜碱粒细胞占1.67%，比例增高。说明单核细胞明显增加，以成熟为主，判定CMML。LAIP：CD33+CD64+CD56+。
图10显示一例MDS患者的检测结果。在CD34/CD117图中示幼稚粒细胞（34+）占5.66%，比例增高（正常<1%），CD34表达异常减弱。CD117+细胞在CD33/CD34图中丧失环形形状，出现CD33+CD13-，CD13-HLA-DR+细胞，表型异常。粒细胞占40.13%，比例减低，li2期中幼粒细胞占23. 53%，比例增加（正常li1+li2<10%）。在CD33/CD15图中对CD33st+CD15dim/-细胞设门AM，占6.39%。从CD36/CXCR4图中选择显示AM门细胞，可见CD36dim/-CXCR4st+单核细胞（AQ）占28.3%，换算成在R1中比例为1.8%，比例偏低，其中多数细胞（68.4%）不表达CD14、CD300e、CD4，为幼稚单核细胞，提示细胞分化异常。CD71+CD45-有核红细胞占48.95%，比例明显增加，CD71和CD36弱表达，在CD105+细胞比例减低（正常>10%）。嗜碱粒细胞和PDC细胞比例正常。支持MDS诊断。LAIP：CD117+CD34dim+CD13-。
图11显示一例CML的检测结果。在CD45/SSC图示粒细胞（门粒）占83.79%，比例明显增加。在CD34/CD117图中显示CD34+CD117+细胞（门34+）占1.11%，比例稍高。粒细胞中CD15异常弱表达，其中li1期细胞占11.93%，比例明显增加(正常li1+li2<10%)。CD33st+单核细胞(门单)比例明显减低(0.79%)。CD123st+HLA-DR-嗜碱粒细胞(减)占7.98%，比例明显增高。从CD13/CD16图中显示一群细胞CD13+CD16-占15.21%，该群细胞在SSC/CD15图中示，有26.78%细胞为SSC大CD15弱，为嗜酸粒细胞，比例增加。该患者WBC为182X109/L，因此判定为CML。基因检测证明为CML基因P210+。
图12显示一例MPN-ET的检测结果。在CD45/SSC图和CD34/CD117图中显示各群细胞比例未见异常。粒细胞li1和li2偏幼稚细胞分别为3.0%和7.14%，比例稍高，CD11b表达稍弱。其余无明显异常。这是MPN-ET患者的特点。此病不适用用流式监测MRD，无需判断LAIP。
图13显示一例MDS/MPN UC的检测结果。在CD34/CD117图中显示CD34+CD117+幼稚髓细胞占5.08%，比例增高。粒细胞CD11b异常弱表达，li1和li2偏幼稚粒细胞比例明显增高，且CD13/CD11b和CD13/CD16图形与图2相比明显异常。单核细胞比例不高，表型正常。有核红细胞占50.86%，比例明显增高。该患者WBC增高，贫血及血小板减低。考虑MDS/MPN。LAIP：CD34+CD117+CD33dim+。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种用于髓系肿瘤免疫分型的抗体组合物，其特征在于，其包括以下抗体的组合：抗CXCR4抗体、抗CD105抗体、抗CD14抗体、抗CD45抗体、抗CD16抗体、抗HLA-DR抗体、抗CD33抗体、抗CD10抗体、抗CD4抗体、抗CD123抗体、抗CD11b抗体、抗CD41抗体、抗CD61抗体、抗CD15抗体、抗CD13抗体、抗CD71抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD9抗体、抗CD11c抗体、抗CD300e抗体、抗CD64抗体、抗CD36抗体、抗CD25抗体。
2.一种用于急性髓细胞白血病免疫分型的抗体组合物，其特征在于，其包括以下抗体的组合：抗CXCR4抗体、抗CD14抗体、抗CD45抗体、抗CD16抗体、抗HLA-DR抗体、抗CD33抗体、抗CD4抗体、抗CD123抗体、抗CD11b抗体、抗CD41抗体、抗CD61抗体、抗CD15抗体、抗CD13抗体、抗CD71抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD9抗体、抗CD11c抗体、抗CD300e抗体、抗CD64抗体、抗CD36抗体、抗CD25抗体。
3.一种用于慢性髓系肿瘤免疫分型的抗体组合物，其特征在于，其包括以下抗体的组合：抗CXCR4抗体、抗CD105抗体、抗CD14抗体、抗CD45抗体、抗CD16抗体、抗HLA-DR抗体、抗CD33抗体、抗CD10抗体、抗CD4抗体、抗CD123抗体、抗CD11b抗体、抗CD15抗体、抗CD13抗体、抗CD71抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD38抗体、抗CD11c抗体、抗CD300e抗体、抗CD64抗体、抗体CD36抗体、抗CD25抗体。
4.根据权利要求1~3任一项所述的抗体组合物，其特征在于，所述抗体均为单克隆抗体；所述抗体均为荧光素标记的抗体；所述抗体的荧光素标记如下所示，CXCR4- BV421、CD105- SB436、CD14- eFluor450、CD45- BV510、CD16- BV570、HLA-DR- BV605、CD33-BV650、CD10-BV711、CD4- BV750、CD123- BV785、CD11b- BB515、CD41- FITC、CD61- FITC、CD15- cFluor B548、CD13- PE、CD71- PE-Dazzle594、CD117- PE-Cy5、CD34- PerCP-Cy5.5、CD9- PerCP-eF710、CD38-PerCP-eF710、CD11c- PE-Cy7、CD300e- APC、CD64- AlexaFluor700、CD36- APC-Fire750、CD25- APC-Fire810。
5.一种用于髓系肿瘤免疫分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1~3任一项所述的抗体组合物。
6.一种用于检测髓系肿瘤免疫分型的系统，其特征在于，该系统包括检测部分和分析部分，其中：
检测部分，用于通过1管流式细胞术检测待测样本的试剂，获取样本的检测结果；所述试剂包括权利要求1~3任一项所述的抗体组合物；
分析部分，用于分析检测部分的检测结果。
7.根据权利要求6所述的系统，其特征在于，所述系统用于检测AML和/或慢性髓系肿瘤免疫分型时，包括如下步骤：
利用权利要求1-3任一项所述的抗体组合物对待测样本进行处理后制备流式细胞上机样品；进行流式细胞上机检测；
其中流式细胞上机检测时按照以下方式设门：
设置R1活细胞门，去除碎片和死细胞，R1门内使用CD45/SSC设定淋巴细胞门，粒细胞门，单核细胞门，幼稚细胞门，有核红细胞门；分析不同细胞门内抗原表达情况；
对AML分析包括髓系幼稚细胞、粒细胞和单核细胞免疫表型分析；
对慢性髓系肿瘤分析包括髓系幼稚细胞、粒细胞、单核细胞和有核红细胞免疫表型分析。
8.根据权利要求7所述的系统，其特征在于，所述分析粒细胞、单核细胞免疫表型包括使用CXCR4/CD36分析鉴别幼稚单核细胞与成熟单核细胞和/或鉴别幼稚单核细胞与幼稚粒细胞。
9.权利要求1~3任一项所述的抗体组合物或权利要求5所述的试剂盒或权利要求6~8任一所述的系统在制备髓系肿瘤诊断及白血病的微小残留病监测标志筛查的产品中的应用。
10.CXCR4抗体和CD36抗体在制备鉴别幼稚单核细胞的试剂中的用途，其特征在于，所述试剂检测待测样本中细胞膜CXCR4和CD36抗原表达分析幼稚单核细胞，所述CXCR4在幼稚单核细胞的表达强于成熟单核细胞及粒细胞，同时CD36在幼稚单核细胞中从阴性到阳性分布；所述试剂还包括检测CD45和SSC单核细胞标志的试剂。
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| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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